JPS61118400A - 成長ホルモン放出性因子類似体及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 生長ホルモン放出性因子（ｒ６１６ａｓｉｎｇ　　ｆａ
−ｃｔｏｒ）　（ＧＲＦ　）は最近人間の島細胞腫（ｉ
ｓｌｅｔｃｅｌｌ　　ｔｕｍｏｒ）から単離され、ソー
ク・インステ（ｆニー）　（Ｓａｌｋ　Ｉｎ５ｔｉｔｕ
ｔ６）でドクター・ギレミｙ　〔Ｄｒ、Ｇｕｉｌｌｅｍ
ｉｎ）　　及び共同研究者によって構造的に同定された
〔サイエンス（Ｓｃｉ−ｅｎｃｅ）　２１８．５８５−
５８７（１９８２年１１月５日）〕。ＧＲＦの単離及び
同趙は、１０年間考えられていたが、ＧＲＦの極く少量
の存在のためにこれまで不成功であった。人間の視床下
部生長ホルモン放出性因子（ｈＧＲＦ）は、島細胞腫か
ら単離されたＧＲＦと同一の構造を有することが見出さ
れた〔ペーレン（Ｂｉ５ｈｌｅｎ）等、バイオケミカル
・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュ＝ケー
ショｙ　（Ｂｉ；ｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒ＋ｅ
ｓ＋Ｃｏｍｍ、　１１４．９３０−９３６（１９８３）
）。

リビーア（Ｒ，１ｖｉｅｒ）等によりネイチャー（Ｎａ
ｔｕｒｅ）　３００．２７６−２７８（１９８２）及び
ギレミン（Ｇｕ　ｉ　Ｉ　Ｉ　６ｍ１ｎ　）等によりサ
イエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　２１８．５８５−５８７
　（１９８２）にそれぞれＧＲＦ（１−４０）及びＧＲ
，Ｆ（１−４４）の構造が記載されており、ＧＲＦが生
長ホルモノンの放出に対して特異的であることを示して
いる。ＧＲＦのこれらの２つの型はアミノ（ＮＨ２−）
末端で同一であるが、しかしカルボキシ（ＣＯＯＨ）末
端の終点において異なる。更にＧＲＦ（１−４４）はカ
ルボキシ末端にアミノ基を有することに特色がある。リ
ビーア等は、ＧＲＦの生物活性は分子のＮＨｔ−末端部
分にあり、全ての本質的な活性及び能力が試験管内にお
いてＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ，によって立証されるこ
とを示している。

ランス（Ｌａｎｃｅ）等はバイオケミカル・アンド・バ
イオフィジカルｅリサーチ・コミュニケーションズ（Ｂ
ｉｏｃｈ６ｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍ
ｍ、　）　１１９．２６５−２７２（１９８４）におい
て、位ｔ１．２及び３で選ばれたアミノ酸の置換による
ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ，は生体内でブタ及びラット
の双方、において生長ホルモン（ＧＨ）の放出増加をも
たらすことを示している。リビーア等は米国特許第４．
５１８．５８６号において、位置１５でＤ−Ａ　ｌ　ａ
の置換を含めて、種々なＧＲＦ合成ペプチドを開示して
いる。同様に、１９１’１５年７月９日発行の米国特許
第４．５２８．１９０号は位置１５でＤ−Ａｌａ−の置
換を含めて種々なＧＲＦ同族体を開示している。

動物の生長は生体−調節分子（ｂｉｏ−ｒｅｑｕｌａ−
ｔｏｒｙ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）のカスケード（ｃａｓ
ｃａｄ４）によって多分調節される。視床下部は生長ホ
ルモンの下垂体放出を誘発するＧＲＦを生産する。少量
のＧＲ，Ｆは血液中に生長ホルモンの実質的な下垂体放
出をもたらすことが見出された。例えばＯＲ，Ｆは下垂
体不全矯小発育症（ｈｙｐｏｐｉ　ｔｕｉｔａｒｙｄｗ
ａｒｆｉｓｍ）、生長ホルモン生産異常による糖尿病の
処置、けが治癒の促進、やけどの処置及び老へ 化過程の遅延において用いることができる。同様に、Ｇ
Ｒ；Ｆは農業の分野において効用を有する。

農業用途の例には、同一飼料供給期間でよシ早く市場に
出し得るか、より大きな動物を生産するか、または内封
脂肪の比を改善するために鶏またはブタ、ウシ等の如き
食用飼育動物の肉の生産増加が含まれる。またＧＲＦは
搾乳中のミルク生産及び鶏の卵生量を刺激する。

本発明は式 ％式％ 式中、Ｒ１はＴｙｒ、　Ｄ−Ｔｙｒ、　ｄｅｓＮＨ，−
Ｔｙｒ。

Ａｃ−ＴｙｒまたはＨｉｓを表わし；Ｒ１はＡ　１　ａ
、Ｄ−Ａ　１　ａまたはＮ−１＋ルーＤ−Ａｌａを表わ
し；Ｒ１はＬｙｓまたはＡｌａを表わし；Ｒ４はＡｌａ
、　Ｌｅｕ、　Ｖａ　Ｉ、　Ｉ　ｌｅ、　Ｎｌｅ、　Ｎ
ｖａｌ。

Ｉ−人１ａまたはα−Ａｉｂを表わし；Ｒ５はＭｅｔ、
　ＬｅｕＳＮｌｅまたはＩｌｅを表わし；Ｒ６Ｌ６ｕ及
びそのフラグメントから選ばれるアミノ酸配列を表わし
、該７ラグメントの配列はカルボキシル末端から１〜１
５個のアミノ酸残基だ行数が減ぜられておシ；そしてＸ
はＯＨまたはＮＨ，である、 の新規なペプチド、その製薬学的に許容し得る酸または
塩基付加塩及び核化合物を含有する薬剤組成物に関する
。

本発明における薬剤組成物は２９個から４４個までのア
ミノ酸残基を有するＧＲＦ−同族体及び無毒性の不活性
な製薬学的または獣医学的に許容し得る液体または固体
の担体を含有する。かかる薬剤組成物は治療及び／また
は診断目的に投与するために医薬及び獣医薬の双方に臨
床医薬として用いることができる。更に該化合物は定温
及び変温動物の生長を促進させるために用いることがで
きる。

本発明のペプチドは上記の処置に用いる際に、下垂体線
から生長ホルモンの放出を刺激するための方法に有用で
ある。

本明細書において用いるｒＧＲＦＪなる用語はヒト生長
ホルモン放出因子、アミノ酸配列を有するポリペプチド
〔サイｘ　ｙス（Ｓｃ　１ｅｎｃｅ）　２１８．５８５
．１９８２年１１月５日〕 Ｈ−Ｔｙｒ−人１ａ−Ａｓｐ−人１　ａ　−Ｉ　ｌ　ｅ
−Ｐｈ　ｅ−Ｔｈ　ｒ−ＡＳ　ｎ　−Ｓ　ｅ　ｒ−Ｔｙ
　ｒ−Ａｒ　ｇ−Ｌｙ　５−Ｖａ　１−Ｌｅ　ｕ−Ｇ　
ｌ　ｙ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ａｓｐ　−Ｉ　Ｉｅ−Ｍｅｔ−８
ｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｌ
ａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−ＮＨ，、または全ポリペプチドの
少なくとも最初の２９個のアミノ酸を有し且つ生長ホル
モン放出活性を示すその生物学的に活性なフラグメント
を意味する。

普通の表示に従えば、Ｎ−末端でのアミン基は左セして
Ｃ−末端でのカルボキシル基は右に現れる。

アミノ酸けＧｌ　ｙ、　Ａｌ　ａＳＶａ　ｌ、　Ｌｅｕ
、　−１Ｉｌｅ。

８ｅｒ、　Ｔｈｒ、　Ｌｙｓ、Ａｒｇ、　Ａｓｐ、　Ａ
ｓｎ、　Ｇｌｕ、　Ｇ１ｎ１Ｃｙｓ、　Ｍｅｔ、　Ｐｈ
ｅ、　Ｔｙｒ、　Ｐｒｏ、Ｔｒｐ及びＨｉｓからなる蛋
白質に典型的に見出される天然に存在するアミノ酸の１
つの意味を有する。Ｎｌｅ　　はノルロイシンを意味し
、セしてＮｖａｌはノルパリンヲ意味する。アミノ酸残
基が異性体型を有する場合、これは特記せぬ限り、アミ
ノ酸のＬ−型を表わす。

ｒＧＲＦＪＱ後の添え字ｒ−０１−ＩＪ及びｒ−ＮＨ２
Ｊはそれぞれポリペプチドの遊離酸及びアミド型を示す
。

添え字を用いなくても、この表示には双方の型が含まれ
るものとする。ＧＲＦの同族体はｒＧＲＦ」の前のかっ
こ内の置換されたアミノ酸を説明することによって示さ
れる；即ち、例えば［（ＡｌＢ１２）ＧＲ，Ｆ　ＪはＧ
）？、ＦＫ相轟するアミノ酸残基を有するポリペプチド
を示し、この場合、アラニン残基は位置１５でグリシン
と置換されている。ｒＧＲＦＪに続くかっこ内の数字は
アミノ酸残基の位置数を与えることによって全ポリペプ
チドのフラグメントを示す、例えばＯＲ・Ｆ（１−２９
）は全配列の最初の２９個のアミノ酸を有するフラグメ
ントを示す。

本発明はＧＲＦ分子の位置１５でのグリシン残基が、下
垂体から生長ホルモンの放出を刺激することによって高
められた生物学的能力を有する（）ＲＦ　同族体を生成
する異なる適当に選ばれるアミノ酸によって置換され得
ると云う発見に基ずくものである。位置１５で置換され
るアミノ酸は疎水性アミノ酸、例えばＡｌａＸＬｅｕ、
’Ｖａｌ、Ｉｌｅ。

Ｎ　Ｌ　ｅ及びＮｖａ　１の群から選ぶことができる。

またα−アミノイン酪酸（α−Ａｉｂ）及びβ−アラニ
ン（β−Ａｌａ）　　を位置１５で置換することができ
る。更に詳細には、疎水性アミノ酸、例えば位置１５に
置換されたアラニン、バリンまたはロイノンを有するＧ
　Ｌ（Ｆ同族体は、下垂体線から生長ホルモンの放出を
もたらす際に強められた生物活性を有することが示され
た。

当該分野においてよく知られた種々な方法を、特定の位
置でＧＲＦにおける置換に際し、特定のアミノ酸を選択
するために用いることができる。

かかる方法の１つは、ヘリシティ−（ｈｅｌｉｃｉｔｙ
）及びヒドロパスイシティー（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ
ｉｔｙ）分析によって、そして更に、生ずるポリペプチ
ドの蛋白質分解（ｐｒｏｔ６ｏ１ｙｔｉｃ　ｂｒｅａｋ
ｄｏｗｎ）の容易さを減じることによって立証される如
く、生ずるポリペプチドの第二構造を変更またはアムフ
イフイリツク特性（ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ　ｃｈａｒ
ａｃｔｅｒ）を変えるように置換アミノ酸を選ぶことで
ある。

ヘリシティ−及びヒドロバスイシティー分析は当該分野
において公知の普通の方法によって行われる。

更にまた、約２９個のアミノ酸から４４個以下までのア
ミノ酸の鎖長に変わるＧＲＦフラグメントに訃ける位置
１５の適当に選ばれるアミノ酸の置換は、下垂体ＧＨ放
出性を増加させることによって、強められた生物活性を
有することが示された。更な詳細には、ＧＲＦ（１−２
９）の位置１５で適当に選ばれるアミノ酸の置換は強め
られた生物活性を有することが示された。

ＧＲＦ分子の他の選ばれた位置で適当に選ばれるアミノ
酸の追加の置換は、下垂体線によってＧＨの放出をもた
らす際に生物学的効力を有するペプチドを与えた多置換
されたＧＲＦ同族体を生ずる１５位置での置換を相伴う
。第二の位置に対するＧＲＦペプチドの選ばれる位置は
１．２．１２または２７位置が含まれるが、しかしこれ
に限定されない。適当に選ばれた位置での置換に対して
選ばれるアミノ酸にはチロシン、ｄｅｓＮＨ２−チロシ
ン、ＡＣ−チロシン、ヒスチジン、リシン、アラニン、
β−アラニン及び上記アミノ酸のＤ−アミノ酸が含まれ
る。位置１５での置換に加えて、各々選ばれた位置での
置換によシ、二置換、三置換または四置換されたポリペ
プチドを生成させることができる。

更に、１５位置での置換に加えて、全鎖長ＧＲＦ（１−
４４）の酸またはアミド、２９個のアミノ酸ＧＲＦ（１
−２９”）または鎖長において約２９個より犬及び４４
個より小のアミノ酸ＧＲＦは強められた生物活性を有す
ることがわかった。殊に、１５位置で置換された適当に
選ばれたアミノ酸を有するＧＲＦ（１−４４）及びＧＦ
ＬＦ（１−２９）は強められた生物活性を有することが
示された。

本発明の代表的な化合物には次のものが含まれる： ［：Ａｌａ”ＩＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２〔λｌ　ａｌ
　２、Ａｌａ”ＩＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２（Ｌｅｕ”
ＩＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ。

［Ｖａｌ１５〕ＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２［Ｄ−Ａｌａ
２、人１ａ１５］ＧＲＦ（１−２９）ＮＨｔ〔β−Ａｌ
ａ１５〕ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ。

〔α−人１ｂＩ５］ＧＲ１Ｆ（１−２９）−ＮＨｔ［：
Ａｌａ”］ＩＧＲＦ１−２９）ＯＨ［Ｌｅｕ１′］ＧＲ
Ｆ（１−２９）−ＯＨ［”ＶａｌＬｓ、ＩＧＦＬＦ（１
−２９）−ＯＨ（ＡｌａＩｓ）ＧＲＦ（１−４４）−Ｎ
Ｈ。

［Ｌｅｕ１５〕ＧＲＦ（１−４４）−ＮＨ。

〔ＶａＩ１５〕ＧＲＦ（１−４４）−ＮＨ。

〔ｄｅｓＮＨ，−Ｔｙｒ’　、Ａｌ　ａ１′）ＧＲＦ（
１−２９）−ＮＨｔ［Ｄ−Ｔｙｒ１、ＡｌａＩｓ）ＧＲ
Ｆ（１−２９）−ＮＨ。

〔Ａｃ−Ｔｙｒ＋、ＡＪ　ａ、ｌｌ″ＩＧＲＦ（１−２
９）−ＮＨｔヒト生長ホルモン放出性因子（ｈＧＲ，Ｆ
）からなる配列に対する変更を述べたが、同様な変更を
ブタ生長ホルモン放出性因子−（ｐＧＲＦ）、ウシ生長
ホルモン放出性因子（ｂＧＲＦ）　、ヒツジ生長ホルモ
ン放出性因子（ｏＧＲＦ）及びヤギ生長ホルモン放出性
因子（ｃＧＲＦ’）に対して行うことができる。

本発明のポリペプチドは当該分野においてよく知られた
方法に従って、即ち、同相ペプチド合成法、液相ペプチ
ド合成法または組換えＤＮＡ法によって製造することが
できる。最近発展した組換ＤＮＡ法を、「普通」のアミ
ノ酸残基のみを含む同族体を製造するため、或いは「普
通」のアミノ酸残基のみを含む同族体の部分を製造する
ために用いることができ、次に後者を短いＮ−末端ペプ
チドにカップリングさせることができる。

ペプチド類を、メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ
）によりジャーナル・オプ・アメリカン・ケミカル・ソ
ｆｘ７−イ（Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、８ｏｃ、）　、８５
．２１４９（１９６３）に記載された如き固相合成法を
用いて製造することができるが、当該分野ＦＣ精通せる
者にとっては公知の他の同等の化学的合成法を用いるこ
とができる。固相台或は保護されたアミノ酸を適当な樹
脂にカップリングさせることにより、ペプチドのＣ−末
端から開始される。出発物質はアミノ−保護されたアミ
ノ酸をベンジルエステル結合を介してクロロメチル化さ
れた樹脂またはヒドロキシメチル樹脂に１或いはアミド
結合を介してベンズヒドリルアミン（ＢＥｉＡ）樹脂ま
たはメチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂に結
合させること忙よって製造することができる。この樹脂
は市販品であり、その製造は当該分野に精通せる者にと
っては公知である。

新規な同族体の酸型は、固体担体としてベンジルエステ
ル樹脂を用いて、同相ペプチド合成法によって製造する
ことができる。ポリペプチドを分取型高速液体クロマト
グラフィー（）ＩＰＬＣ）によって均質性に′ｎＩ製す
ることができ、次に２つの分析用Ｆ（ＰＬＣ系、等電点
及び高電圧薄層電気泳動によって均質性を示すことがで
きる。アミノ酸分析は予想したアミノ酸組成を確かめる
ために行うことができる。対応するアミドを、固相ペプ
チド合成に対する固体担体としてベンズヒドリルアミン
また社メチルベンズヒドリルアミン樹脂を用いて製造す
ることができる。当該分野に精通せる者には、Ｂ）ＪＡ
またはＭＢＨ人を用いる場合、固体担体からポリペプチ
ドを除去するために無水ＨＦで処理することにより、末
端アミド基全有するポリぴプチドを生ずることが窮めら
れよう。

Ｃ−末端アミノ酸、例えばＡｒｇ　は適当に選ばれる１
ｉ７４基、例えばｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ
）及びｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）にα よってそれぞれＮ　−アミノ及び側鎖グアニジノ位置で
保護される。次にＢｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）　−ＯＨを
ジシクロへキシルカルボジイミド〔ＤＣＣ）を用いて、
約２５℃で２時間攪拌しながら、ベンズヒドリルアミン
樹脂にカップリングさせることができる。Ｂｏｃ　保護
されたアミノ酸の樹脂担体へのカップリングに続いて、
α−アミノ保護基を塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸
（ＴＦＡ）またはＴＩ”Ａのみを用すて除去する。この
脱保護は約０℃乃至室温間の温度で行われる。

アミノ酸を暗合した樹脂担体からα−アミノ保護基を除
去した後、他のＢｏｃ−保護されたアミノ酸を所望の順
序で段階的にカップリングさせる。

各アミノ酸を別個に加える代りに、固相合成装置に加え
る前に適当な方法で２種またはそれ以上のアミノ酸を一
緒にカップリングさせることができる。適当なカップリ
ング試薬は当該分野に精通、せる者にとって公知のもの
である：殊１ｃＤｃｃが適当である。

各保護されたアミノ酸またはアミノ酸配列を過列置にお
いて固相合成装置に導入し、カップリングをジメチルホ
ルムアミド〔ＤＭＦ）または塩化メチレン（ＣＨｌＣＩ
、）或いはその混合物の媒質中で行うことができる。不
完全なカップリングを生ずる場合、次のアミノ酸のカッ
プリング前に、Ｎ　−アミノ保護基の除去以前にカップ
リング工程をくり返し行う。合成の各段階でカップリン
グ反応の成果を監視することができる。合成を監視する
好ましい方法はニンヒドリン反応である。カッブリによ
って行うことができる。

樹脂から完了したペプチドの開裂をペプチド化学にかい
てよく知られた方法を用いて、好ましくは無水液体フッ
化水素（）ＩＦ）を用いて行うことが　。

できる、、ｐ−クレゾール及びジメチルスルファイドの
存在下において０℃で１時間フッ化水素との反に続いて
、ｐ−クレゾールの存在下において０℃で２時間フッ化
水素との第二の反応を行わせることができる。

従って、また本発明は上に定義した如き式Ｉの生長ホル
モン放出性因子（ＧＲＦ’）化合物及びその製剤上許容
し得る酸または塩基付加塩の製造方法からなる。該方法
は、 （ａｌ　　液相ペプチド合成によって合成された対応す
るアミノ酸配列の正当に保護されたポリペプチドの保護
基を普通の方法を用いて開裂させるか、或いは （ｂｌ　　固相ペプチド合成によって合成された対応す
るアミノ酸配列のポリペプチドに結合した正当に側鎖の
保護姑れた樹脂を無水液体ＨＰと反応させ、 そして必要に応じて、得られる弐Ｉの化合物を製剤上許
容し得る酸または塩基付加塩に転化することを特徴とす
る。

本発明のポリペプチド類の精製はペプチド化学において
よく知られた方法を用いて行うことができる。すでに示
した如く、本ポリペプチド類は分取型ＨＰＬＣを用いて
精製することができる；　しかしながら、また他の公知
のクロマトグラフ法、例えばゲル浸透、イオン交換及び
分配クロマトグラフィーまたは向流分配を用いることも
できる。

本発明のポリペプチド類は生長ホルモン放出性活性を有
する。本発明による薬剤組成物は、製薬学的または獣医
学的に許容し得る液体または固体の担体に分散させた式
■のＧＲＦ同族体またはかかる化合物の無毒性塩を含有
する。かかる薬剤組成物は人間及び獣医薬の双方の臨床
医薬として治療または診断目的に用いることができる。

例えば本化合物は生長釦関連した障害、例えば下垂体不
全楼小発育症及び生長ホルモン生産異常による糖尿病の
処置において有用である。更に、また本化合物は肉を生
産するために飼育する動物の生長を刺激または飼料効率
を高めるため、ミルク生産を高めそして卵生増を刺激す
るために用いることができる。

投与する本発明のポリペプチド類の適当な投薬量は個々
の患者及び処置する。症状に応じて多少変えられよう。

当該分骨に精通せる者には、正常の生長に伴う生長ホル
モンの既知の循環レベル及びポリペプチドの生長ホルモ
ン放出性活性に基ずく適当な投薬量を決定することがで
きよう。

本発明の化合物は試験管内においてＧＲＦ（１−４４）
よりも５倍の生長ホルモン放出を誘発する。かぐして、
これらの同族体を、生長ホルモン放出性因子を同一目的
のために投与する場合よりも、顕著に少ない投薬量で投
与することができる。

当該分野ておいてはよく知られて込るように、生長に関
連した障害の処置には、生長ホルモン生産の不全症の程
度に応じて、個人個人の投薬量を変える必要がある。一
般に、生長ホルモ挨ンの放出を刺激するためて、患者の
体重に基ずき０，０４μｇ１ｋｇ７日〜約１．０μｇ／
ｋｇ１日の範囲の投薬量を用いることができる。家畜に
おいて生長活性を刺激するために用いる投薬量は、人間
における下垂体矯小発育症の如き生長ホルモン不全症の
場合に正常な生長を復活するためだ用いる投薬量よシも
、顕著に多い（疾、＠動物のｋｇ体重当り）。家畜にお
いては、一般に下垂体生長ホルモンの放出を刺激するた
めに、０．４μｊｊ／ｋｇ１日〜約１０μｙ／ｋｇ／日
の範囲の投薬量を皮下的に用いることができる。

かくして、本発明に従い、正常な生長に伴うレベルに生
長ホルモンの生産を刺激するために十分な９の本発明に
よる同族体を投与することからなる生長ホルモンの不完
全生産に特徴ずけられる生長関連障害を処１群する方法
が提供される。

生長ホルモンの正常レベルは個体間でかなり変化し、そ
して１個体でも、循環する生長ホルモンのレベル（ｄ：
１日中でかなり変化する。成人においては、生長ホルモ
ンの正常血清レベルは約Ｏ〜１０ｎ！！／ｄに変化する
ことが報告されている。

小供に分いては、生長ホルモンの正常血清レベルは約０
〜２０　ｎＥ　／　’に変化することが報告されている
。

下垂本不全倭小発育症を一ヒ記の同族体で効果的に処置
するために、正常な生長の期間中処置が行われる。女性
にお−では、この期間は一般だ月経の開始時程度迄であ
る。かくて、女性の処置は個体に応じて、はぼ１２〜１
６オまで行うべきである。男性においては、生長の刺激
は青春期を越えてかなり長期間可能である。従って、男
性の有効な処置は通常約１８〜１９才まで、そして成る
個体の場合には約２５才まで可能である。

また、正常な生長に伴うよりも大きいレベルで生長ホル
モンの生産を刺激するために十分な量の同族体を投与す
ることにより、動物の生長速度を増加させる方法を提供
する。

本発明のポリペプチドは人間または動物用の薬剤組成物
の形態で投与することができ、該組成物は普通の薬剤調
震物響法によって製造することができる。経口、静脈、
皮下、筋肉内、腹腔内または鼻内投与に適する組成物を
用いることができる。

薬剤としての用途に適する投与形態は本発明の化合物的
０．０１〜０．５１Ｑを含み、これを無菌の水または塩
水で再構成するために凍結乾燥することができる。同族
体の安定性を保持するために、組成物を約８．０以下の
ｐＨｉに保持すべきである。また処置する種族からの血
清アルブミン（例えば人間の場合にはヒト血清アルブミ
ン、牛の場合にはウシ血清アルブミン等）が他の公知の
製薬学的補助剤と共に存在することができる。

以下の実施例は本発明を説明するものであり、決して本
発明の範囲を限定するものとして解釈すべきでない。特
記７せぬ限り、全ての部及び壬は重量によるものであり
、全ての温度はセラ民度である。

実施例中、特記せぬ限り、Ｌ−立体配置における光学的
活性な保護されたアミノ酸を甲いた。保護されたアミノ
酸をシリカゲルＧプレート上で薄―クロマトグラフィー
により試験し、塩素／Ｎ。

Ｎ、Ｎ／、Ｎ’−テトラメチル−４，４′−ジアミノジ
フェニル−メタン（ＴＤＭ）で展開させた。融点をトー
マスーフーバ−（Ｔｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖ６ｒ　）装置
で測定しく未補正）、光学的回転を・く−キンーエルマ
ー・モデル１４１偏光計（Ｐｅｒｋ　ｉｎ−Ｆ３１ｍｅ
ｒＭｏｄｅｌ　　１４１　Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒ）に
よってジャケット付１−ｄｍセル中で測定し、一般に認
められた値に一致させた。アミノ酸分析はウォーターズ
・アミノ酸分折襞ｊｉｂ（Ｗａｔ６ｒｓ　Ａｍ１ｎｏ　
Ａｃ１ｄＡｎａｌｙｚｅｒ）で行った。

実施例中、種々な保護基及び試薬を指示するために、次
の略号を用いた： ＢＯＣ＝ｔ−ブチルオキシカルボニル Ｚ　　＝ベンジルオキシカルボニル ２ＣＩＺ＝ｚ−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｚｌ　　＝ベンジル ２　＊　６−ＣＩ、−Ｂｚ　Ｉ　　＝２　＋　６−’）
りｏ　ｏへｙシルＴ　ｏ　ｓ、　　＝　ｐ−トルエンス
ルホニルＤＣＣ＝ジシクロへキシルカルボジイミドＢＨ
Ａ　＝ベンズヒドリルアミン ＤＭＦ　＝ニジメチルホルムアミド ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸 ＴＧＡ　　＝チオグリコール酸 本発明の同族体を、市販の自動化された固相ペプチド合
成装置（Ｖｅｇａ　　２５０　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎ
−ｔｈｅｓｉｚｅｒ）を用いて、アミノ酸の逐次カップ
リングによって製造した。合成に際してＮ（：ｔ−Ｂｏ
ｃ−アミノ酸を用いた。

３官能性アミノ酸はＮ　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣＩＺ）
、Ｎｃｔ−Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚ　ｌ　）、Ｎａ−Ｂ
ｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚ　ｌ　）、Ｎｃｉ−Ｂｏ　ｃ　−
８６ｒ　（Ｂｚ　Ｉ　）、ＮｃＬ−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂ
ｚｌ）、Ｎｃｔ−Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（２，６−ＣＩ□−Ｂ
ｚｌ）及びＮ”−Ｂｏｃ−−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）として保
護した。

実施例Ｉ Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ベンズヒドリＡ／７ミｙ−
樹脂の製造 ＢＨＡ−樹脂（４０，４４！９．０．５ミリモル／ｇ、
２０、２２ミリモル）を、ＤＣＣ（１６，７８，ｐ。

８１６４ミリモル）を用いて、２時間２５壬ＤＭＦ−”
Ｈｔ”’ｔ　（２５０ａ／　）中ノＢｏｃ−Ａｒｇ（Ｔ
ｏｓ）−ＯＨ（３４，６ｇ、８０．７ミリモル）とカッ
プリングさせ、次いで１％ジイソプロピルエチルアミン
を添加し、０．５時間反応させた。生じた１３０ｃ−ｋ
ｒｇ（Ｔｏｓ　）−ＢＨＡ−樹脂をＣ）（２Ｃ１，（３
Ｘ２５０ｍ）、ＭｅＯＨ（３Ｘ２５０ｍｌ）、ＣＨ，Ｃ
ｌ２（３Ｘ２５０ＪＥ／）で洗浄し、そして乾燥した。

カップリング及び洗浄操作をくシ返し行い、部分標本を
加水分解した（１３０℃で２時間、６Ｍプロピオン酸／
ＭＣｌ１　ｍｌ　）。アミノ酸分析は樹脂１ｇ当りＡｒ
ｇＱ、３５ｍｍｏｌの＃換を示した。残りのアミノ基を
Ａｃ２０−ピリジンでアセチル化した。収ｔ：４８．８
１１０ 実施例２ ［Ａｌａ”］−ｈＧＲＦ（１−２９）ＢＨＡ−樹脂の製
造 実施例１における如くして製造したＢｏｃ−Ｊｒｇ（Ｔ
ｏｓ）−ＢＨＡ−樹脂（１５，ＯＪ？、　　５．２５ミ
リモル）をベガ２５０ペプチド合成装置の反応容器中に
入れ、固相合成を対称性無水物°法（ｓｙｍｍｅｔｒｉ
ｃａｎｈｙｄｒｉｄｅ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）によって
合成６循環行論、ｈＧＲＦ（２３−２９）−ＢＨＡ−樹
脂（２１，７４ｇ）を得た。λ５，９（０，６０ミリモ
ル）部分を取り出し、更に１０回の循環固相合成に付し
、ｈＧＲＦ（１３−２９）−ＢＨＡ−樹脂（′２．６１
ｇ）を得た。１．３　ｇ（０，３０ミリモル）部分を残
りの１２回の循環固相合成に付した。合成終了時に、Ｎ
−末端アミノ酸残基のｆ３０ｃ−基を除去しくＴＦＡ）
、ヘフチトー樹脂、（ＡＩａ”］ｈＧＲＦ（１−２９）
−ＢＨＡ−樹脂を乾燥し、１．６６、ｐを得た。

実施例３ ［Ａ１　ａ　１５〕ｈＧＲＦ　（１−２９）　−ＮＨ，
の製造、精製及び特徴化 実施例２において製造した如き［Ａｌ　ａ　１５　］ｈ
ＧＲＦ（１−２９）−樹脂（＋、６１）をＯＣにて１時
間、タム（Ｔａｍ）等〔テトラヘドロン・レターズ（Ｔ
６ｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　）　２３．２９３
９〜２９４２（１９８２）〕の変更条件を用いて、無水
液体ＨＦ、ｐ−クレゾール（１０幅）、ジメチルスル７
アイド（６５壬）、ＨＦ（２５チ）〔合計容１１２０　
Ｊｌ／　）で処理し、そして蒸発させた。このものを続
いて０℃で２時間、ｐ−クレゾール（１０チ）、ＰＩＦ
（９０チ）〔合計容量２０　ｍｌ　］と反応させた。Ｈ
Ｆを０℃で蒸発させ、粗製のペプチド及び樹脂混合物を
Ｅ　ｔ　ＯＡＣと共に砕解し、ＴＦＡで抽出し、蒸発さ
せ、残渣をエーテルと共に砕解し、そして乾燥した。ｆ
ｆｌ製の物質（１，０１ｇ）をＨ，０（ＴＦＡｏ、５％
含有）ｌｏｍに溶解し、濾過し［０，４５μタイプＨＡ
ミリポア（Ｍｔ　ｌ　ｌ　ｔ　−ｐｏｒｅ）フィルター
〕、ホワットマン・パーティジル（ＷｈａｔｍａｎＰａ
ｒｔｉｓＨ）Ｍ−２００ＤＳ　−３カラム（２×５０ｃ
ｒｎ）に詰めた。このカラムを、１２０分内に１０〜３
２係ＣＨ３ＣＮの直線グレデイエント法において、ＣＨ
，ＣＮ（ＴＦＡ０．２５係含有）及びＨ，０（ＴＦＡ　
　Ｏ，５０チ含有）からなる溶媒系で溶離しく６ｄ／分
）、３２％で更に６０分間保持した。次にカラムを９０
分内に３２％ＣＨ，ＣＮ　（０，２５チＴＦ’Ａ）−Ｈ
，Ｏ（０，５％ＴＦＡ）〜３８係ＣＨ５ＣＮ（０，２５
チＴＦＡ）−Ｈ，０（０，５チＴＦＡ）に移行する直線
グレデイエントで溶離した。

流速を６ｍｌ／分で続け、フラクションを捕集しく２分
／フラクション）、部分標本を分析用ＨＰＬＣで分析し
た。生成物がフラクション１３６〜１４０（２５２〜２
７０分）に現れ、このものを合液し、蒸発させ、凍結乾
燥し、純粋な〔Ａ１ａ１５〕ＧＲＦ（１２９）　ＮＨｔ
を得た；収量：　７１．３■（７，ｏｓｌ）。中心流出
前後のフラクションを合液し、蒸発させ、そして凍結乾
燥し、半純枠な生成物５３ｍ９が得られ、このものは更
に処理しなかつた。

この生成物は分析用ＨＰＬＣ及び高電圧薄層電気泳動（
ＲＡｒｇ＝０．３３　）により均質性であることがわか
った。分析用ＨＰＬＣにより、トリプシンの作用を有す
るペプチド地図は、予想した残基１２−２０及び１３−
２０を包含して、トリプシンの作用を有するフラグメン
トに対してわずかに異なる保持時間を有して、ＧＲＦ　
（１−２９）−ＮＨｔ　　と同様であった。アミノ酸分
析（チオグリコール酸１幅を含む６Ｎ　ＨＣＩ、　　１
１０℃、２４時間）：Ａｓｐ　、３．３０　：’ｒｈｒ
、ｔ、ｏ’ｙ　：８ｅｒ、２．８５　；Ｇｌｕ。

２．１０　：Ａｌａ１３．８２　；Ｖａｌ＃０．９０　
；　Ｍ６ｔ　、０．９８　：１１ｅ＋１．８７　；　Ｌ
ｅｕ＋４．１１　；　Ｔｙｒ＋１．９７　：Ｐｈｅ。

０．９０　：１ＬｙＳ、２．ｏ　２　：Ａｒｇ、３．１
２゜実施例４ ［Ａｌａ”、′５：］ｈＧＲＦ（１２９）−ＢＨＡ−樹
脂の製造 実施例１　ＯＢｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）−ＢＨＡ−樹
脂（５ｇ、１．７ｓミリモル）を固相ペプチド樹脂の４
回の循環に付しく実施例２における如く）、保護された
ｈＧＲＦ（２５−２９）−ＢＨＡ−樹脂６．１ｇを得た
。

２１部分を取り出し、固相合成の更に２４回の循環に付
した。末端アミノ酸残基のＢｏｃ　、ｌ！！：を除去し
くＴＦＡ）、側鎖を保護したペプチド樹脂、〔Ａｌ　ａ
”Ｉ１５］　ｈＧＲＦ−（１−２９）−ＢＨＡ−＠ｉ脂
を乾燥し、２．３４ｇを得た。

実施例５ （ＡｌａＩ！？１５）　ｈＧＲＦ　（１−２９）　−Ｎ
Ｈ，の製造、精製及び特徴化 実施例４　ノ（Ａｌａ　”＋　１５）　ｈＧＲＦ　（１
−２９）−ＢＨＡ−樹脂（２，，３４！ｑ）を無水液体
ＨＦで処理しく実施例３における如く）、粗製の（Ａｌ
ａ’″・１５〕ｈＧＲＦ　（１−２９）　−ＮＨ，１，
１５ｇが得られた。粗製の生成物をＨＰＬＣ精、製に付
しく実施例３における如くして）、所望の生成物がフラ
クション１３８〜１４１に現れ、このものを合液し、蒸
発させ、そして凍結乾燥した；収凌：　（Ａｌ　ａ　”
ｐ　１！〕−ｈＧＲＦ（１−２９）　−ＮＨ，５６１ｎ
９、このものは分析用ＨＰＬＣにより均質性であること
がわかった。アミノ酸組成（６Ｎ−チオグリコール酸中
で加水分解、１１０℃、２４時間）　：　ＡＳｐ１３．
１８　：Ｔｈｒ、０．９９：８ｅｒ　＋２．１５！　１
　；Ｇｌｕ＋２．１７　：　Ａｌａ、５．ｌ　８　；　
Ｖａｌ。

０．９２　：Ｍｅｔ　、１．０５　：　Ｉｌｅ、１．９
２　：Ｌｅｕ１４．２７　：Ｔｙｒ、２．０７　：Ｐｈ
ｅ＋０．９２　；Ｌｙｓ＋１．０４　：Ａｒｇ＋３．２
０゜ 実施例６ （Ｌｅｕ”　〕ｈＧＲ，Ｆ（１−２９）　−ＮＨ，の製
造実姉例４によるｈＧＲＦ（２５−２９）−ＢＨＡ−樹
脂の残り４．１ｇを同相ペプチド合成の９回の循環に付
し、保護されたｈＧＲＦ（１６−２９）−ＢＨＡ−樹脂
６．０．９　（１，１４ミリモル）を得た。一部（１，
５ｇ、０．２８ミリモル）を固相合成の１５回の循環に
付し、１２人で処理し、乾燥し、粗製の側鎖の保汚され
た（Ｌｅｕ”］ｈＧＲＦ（１−２９）−ＢＨＡ−樹脂０
．９Ｆ１ｇを得た。ＨＦ開裂（実施例３における如くし
て）、そして処理した後、粗製〔Ｄ　［Ｌｅｕ”：）　
ｈＧＲ，Ｆ　（１−２９）−ＮＨ，５３６ｍ９が得られ
た。この物質の２００　ｍ９を０．０２５４ＴＦＡ（Ｈ
２０）に溶解し、濾過し、二連の（直列）シンクロパッ
ク・カラム（Ｓｙｎｃｈｒｏｐａｋ　ｃｏｌｕｍｎｓ）
（ＲＰ−Ｐ、１ｘ２５ｃＩｒＬ）に詰め、カラムを、１
２０分内に２５〜４０チのＣＨ，ＣＮの直線グレディエ
ント法において、ＣＨ，ＣＮ（ＴＦＡ　０．０２５係含
有）及びＨ，Ｏ（ＴＦＡ　Ｏ，０２５壬含有）からなる
溶媒系で溶離した（２ｄ／分）。フラクション（２−／
フラクション）を捕集し、部分標本をＨＰＬＣによって
分析した。所望の生成物がフラクション２４〜２６に現
れ、これを合液し、蒸発させ、そして凍結乾燥した、収
１１：９．９ＩＱ。生成物［ＬｅｕＩ′］ｈＧＲＦ（１
−２９）−Ｎｌ−（２は分析用ＨＰＬＣにより均質性で
ちることが示された。アミノ酸組成（６Ｎ【和１−ＴＧ
Ａ中で加水分解、１１０℃、２４時間）　：　Ａ　Ｓｐ
＋　３−０１　：　Ｔ　ｈ　ｒ　、ｏ、　９６　：　Ｓ
　ｅ　ｒ　。

２．８２　：ｏｔｕ、２．Ｑ　９　：Ａ１ａ１３．１０
　：　Ｖａｌ　１０．９９　：Ｍｅ　ｔ＋　Ｌ　Ｏ２：
　Ｉ　ｌ　ｅ　＋　Ｌ　９１　；　Ｌ　ｅ　ｕ　１５．
１９　；　Ｔ　ｙ　ｒ　＋１．９３　：　Ｐｈｅ、０．
９２　；　ＬＹＳ、１．９８　；Ａｒｇ、３．０７゜実
施例７ （Ｖａｌ′５］ｈＧＲＦ（１−２９）　−ＮＨ２の製造
実施例６による保護されたｈＧＲ・Ｆ（１６−２９）−
ＢＨＡ−樹脂（１，５ｇ、０．２８ミリモル）を同相ペ
プチド合成の１５回の循環に付し、ＴＦＡで処理し、乾
燥し、側鎖の保護された（’Ｖａ　Ｉ　”　）　ｈＧＲ
，Ｆ（１−２９）−ＢＨＡ−樹脂１．３ｇを得た。無水
ＨＦ開裂（実施例３における如くして）、次いで処理シ
テ、粗製ノ［Ｖａ　Ｉ　１５］　ｈＧＲＦ　（１−２９
）　−ＮＨ２６２５ｍ９を得た。２００’ｎ９蔀分を）
ＩＰＬＣ精製に付しく実施例６に訃ける如くして）、ｒ
ＲＭされた（Ｖａｌ１５　：］ｈＧＲ，Ｆ（１−２９）
　−ＮＨ，７，０Ｉｎ９カ得うれた。この生成物は分析
用ＨＰＬＣにより均質であることが示された。アミノ酸
組成（６ＮＨＣ１−ＴＧＡ中で加水分解、１１０℃、２
４時間）：Ａ　ｓ　ｃ’　＋　２−９９　：　Ｔｈ’　
、０．９７　ｔ　Ｓ　ｅ　ｒ　、２．７８　＊　Ｇ　Ｉ
　ＬＪ　Ｔ２．０９　；Ａ１ａｔ３．ｏ　７　；Ｖａｌ
　＃１．９８　：Ｍｅｔ　、０．９７　：１１ｅ、１−
９３　；’Ｌｅｕｓ４．１６　；Ｔｙｒ＋２．０２　；
Ｐｈ６゜０．９６　：Ｌｙｓ、　１．９９　：Ａｒｇ、
３．０８゜実施例８ 〔Ｄ−人１ａ２．Ａｌａ１５］ｈＧＲＦ（１−２９）−
ＮＨ２の製造 実施例６による保護されたｈＧＲＦ　（１６−２９）−
ＢＨＡ−樹脂（３９Ｘ０．５７ミリモル）を固相ペプチ
ド合成の１３回の循環に付し、保護された［ＡＩａｌ′
］−ｈＧＲＦ（３−２９）−ＢＨＡ−樹脂３，６ｇを得
た。一部（１ｇ、０．１６４１３モル）を固相合成の２
回の循環に付し、ＴＦＡで処理し、〔Ｄ−Ａｌａ２、Ａ
Ｊａ”）ｈＧＲＦ（１−２９）−ＢＨＡ−樹脂１．’０
２，９を得た。実施例３における如くして、この樹脂を
無水ＨＦで開裂させ、次いで処理し、粗製の〔Ｄ−Ａｌ
ａ”　、Ａｌａ　１５］　ｈＧＲＦ　（１−２９）−Ｎ
Ｈ。

５７５ｍ９を得た。

２００ｍ９部分をＨＰＩ、Ｃ精製に付しく実施例６にお
ける如くして）、精製された〔Ｄ−Ａｌａ２゜Ａｌａ”
　］　ｈＧＲＦ　（１−２９）　−ＮＨ，１８，１ｍ９
が得られた。この生成物は分析用ＨＰＬＣにより均質で
あることが示された。アミノ酸組成（６ＮＨＣ１−ＴＧ
Ａ中テ加水分解、１１０℃、２４時間）：Ａｓｐ、＋ｔ
、０５　：Ｔｈｒ、０．９３　：　Ｓｅｒ、２．５７　
；Ｇｌｕ。

２．０４　：Ａｌ　ａ　、４．２７　：ｖａｌ　＋　０
．９９　：　Ｍｅｔ、０．９８　：Ｉ　’　ｅ　＊　１
．９３；、ＬｅＬｌ、４．１６：ＴＹｒ、１．９８：Ｐ
ｈｅ。

０．９７　：’Ｌｙｓ、２．００　：Ａｒｇ、３．０８
゜実施例９ （ＡｌａＩ５）ｈＧＲＦ（１−２９）−樹脂の製造Ｂｏ
ｃ−Ａｒｇ（ＴｏＳ）−樹脂〔バッケム（Ｂａｃｈｅｍ
）；３−０９　；　０．６１５ミリモル〕をイガ１００
０ペプチド合成装置の反応容器に入れ、固相ペプチド合
成を合計１３回の循環に対して対称性無水物法によって
行い、ｈＧＲＦ（１６−２９）−樹脂（４，４ｇ）を得
た。１ｇ部分（０，１３４１３モル）を同相合成の更に
１５回の循環に付した。合成終了時に、Ｎ−末端アミノ
酸残基のＢｏａ−基を除去しくＴＦＡ）、ペプチド樹脂
、（Ａｌａ１５）ｈＧＲＦ（１−２９）−樹脂を乾燥し
、１．６６ｇを得た。

実施例１０ 〔人１ａ　′′］　ｈＧＲＦ　（１−２９）−ＯＨ（Ｏ
Ｈ造、ｆｉ！及び特徴化 実Ｍ例’９による（ＡｌａＨ）ｈＧＲＦ（１−２９）−
樹脂（１，６６，９）を実施例３における如くして無水
）（Ｆで処理し、粗製（７）　（Ａｔ　ａ１５）　ｈＧ
ＲＦ　（１−２９）−ＯＨ２６２ｒｎ９が得られた。粗
製の物質を０．１チＴＦＡ（Ｈ２Ｏ）　４　ｍｌに溶解
し、濾過し、ヌクレオシル０１８カラム（１ｘ５０ｃＩ
ｒＬ）に詰めた。このカラムを、１８０分内に２０〜４
０　’％ＣＨ１ＣＮノ直線グレイディエンド法において
、ＣＨ，ＣＮ（ＴＦＡＯ，１チ含有）及びＨ，０（ＴＦ
ＡＯ，１チ含有）からなる溶媒系罠よって溶離した（３
ｄ／分）。フラクション（２分）を捕集し、ＨＰＬＣに
よって分析した。フラクション７６中に現れた所望の生
成物を蒸発させ、凍結乾燥した；収ｔ：　［ＡＩａ”　
］ｈＧＲ，Ｆ（１−２９）−ＯＨ２，４η、コノものは
分析用ＨＰＬＣにより均質でちることが示された。アミ
ノ酸分析（６ＮＨＣ１−チオグリコール酸中で加水分解
、１１０℃、２４時間及び７２時間）：Ａｓｐ。

２．９８　；Ｔｈｒ、０．９７　；８ｅｒ、２．８８　
；Ｇｌｕ、２．１５　：Ｌｅｕ、３．８５　：’ｒｙｒ
、１９３　：Ａｒｇ、２．９５　：Ａｌａ。

４．１７：Ｖａｌ、０．９９：Ｍｅｔ、１．０４；Ｉｌ
ｅ、１．９１：Ｐｈｅ、０．８６；ＬｙＳ、１０２゜ 実施例１１ （Ｌｅｕ１５）ｈＧＲＦ（１−２９）　−ＯＨの製造ｈ
ＧＲ，Ｆ　（１６−２９’）−樹脂（実施例９による）
１１部分を実施例９における如くして固相合成の更に１
５回の循環に付した。収量：側鎖の保護された（Ｌｅｕ
”］　ｈＧＲＦ　（１−２９）−樹脂１．１６．＠０無
水ＨＦ開裂（実施例における如くして）、次に処理した
後、−粗ｆｇｔｙ）　（Ｌｅｕｌ′）　ｈＧＲＦ　（１
−２９）−〇Ｈ３８８ｒｎ９が得られた。実施例１０に
おける如くして精製しくＨＰＬＣ）、半純粋な〔Ｌｅｕ
Ｉｓ〕−ｈＧＲＦ（ｘ−２９）−０）（４゜４ｍｇが得
られ、このものを実施例６における如くして更に精製し
た。所望の生成物はフラクション４０〜４２に現れた。

収ｔ：　（Ｌｅｕｆ’〕ｈＧＲＦ（１−２９）ＯＨＯ，
９Ｗ。

この生成物は分析用ＨＰＬＣによって均質であることが
示された。アミノ酸分析（６Ｎ　ＨＣＩ−ＴＧＡ中で加
水分解、１１０℃、２４時間及び７２時間）：ＡＳｐ１
３．０６　：　Ｔｈ’＃０．９４　；　８ｅｒ、＋９５
　；Ｇｌｕ。

１１１　：Ａｌａ、３．ｏ　５　；Ｖａｌ　、０．９９
　；Ｍｅｔ　ｔｏ、９４　；Ｌ　ｅ　ｕ＃　５．１５　
；　ＴＹ　’　＊　Ｌ　８１　：　Ａｒ　ｇ　、３．０
２　；　Ｉ　１　ｅ　＋２．０６；Ｐｈｅ、０．８５；
ＬｙＳ、２．０２゜実施例１２ （Ｖａｌ”　〕ｈＧＲＦ（１−２９）−ＯＨの製造ｈ（
）ｎ、Ｆ’　（１６−２９）−樹脂（実施例９による）
１ｇを、実施例９における如くして、固相ペプチド合成
の更に１５回の循環に付した。収量：側鎖の保護された
（Ｖａｌ”）ｈＧＲＦ（１−２９）−樹脂１、３０．９
゜無水液体ＨＦによって樹脂から開裂させ（実施例３に
おける如くして）、そして処理した後、粗製Ｏ（Ｖａ　
１　”）　ｈＧＲＦ　（１−２９）　−０Ｈ１５８Ｉｎ
９が得られた。精製により（実施例６における如くして
）、半純粋な生成物４．６りを得た。

この物質を実施例１０における如くして、更に精製した
。７ラクシヨン７８に現れる生成物を蒸発させ、そして
凍結乾燥した。収［：（Ｖａｌ”］ｈＧＲＦ（１−２９
）−０Ｈ１，Ｆｌダ。この生成物は分析用ＨＰＬＣによ
って均質であることが示された。アミノ酸分析（６Ｎ　
ＭＣＩ−ＴＧＡ中で加水分解、１１０℃、７２時間）　
：　Ａｓｐ＋２．９２　：ｏｔｕ、２．Ｑ　Ｏ：Ａ　１
　ａ　＋　２−９１　：　Ｎ’ａ　１　ｍ　２．０３　
：　Ｍｅ　ｔｏ　Ｏ−９８：　Ｐ　ｈ　ｅ　。

０．８７　；Ｌ３’Ｓ１２．１３　；Ｌｅｕ、４．１４
　：Ａｒｇ１３．０８（６Ｎ　ＭＣＩ−ＴＧＡ中で加水
分解、１５０℃、１時間）　：　Ｉｌｅ、１．９３　：
Ｔ）’ｒ、１．９１゜実施例１３ Ｂｏｃ−Ｌ６ｕ−ＭＢＨＡ−樹脂の製造実施例１におけ
る如くして、Ｂｏａ−Ｌｅｕ−ＯＨノ　（１７，６８ｇ
、８３ミリモル）をメチルベンズヒドリルアミン樹脂（
７０ｇ、０．２１’３　ｍｅｑ／ｇ）にカフブリングさ
せ、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＭＢＨＡ−樹脂を製造した。収ｉ
ニア２．８７ｇ。アミノ酸は０．２３ミリモル／ｇ樹脂
の置換を示した。

実施例１４ 〔入１ａ１５〕ｈＧＲＦ（１−４４）−ＭＢＨＡ−樹脂
の製造 実施例１３によるＢ　ｏ　ｃ　−Ｌ　６　ｕ−ＢＨＡ−
粛脂（７８，８７ｇ、１８．１ミリモル）をイガ２９６
ペプチド合成装置の反応容器に入れ、固相合成を合計１
６回の循環に付し、ｈＧＲＦ（２８−４４）−ＭＢＨＡ
−樹脂（３７，６５ｇ）を得た。この５ｇ（０，７５ミ
リモル）部分を取り出し、固相合成の更に１２回の循環
に付し、ｈＧＲＦ　（１６−４４）　−ＭＢＨＡ−樹脂
（５，１５９）を得た。合成の終了時に、Ｎ−末端アミ
ノ酸残基のＢｏｃ−基を除去しくＴＦＡ）、ペプチド−
樹脂、（Ａｌａ”］ｈＧＲＦ（１−４４）−ＭＢＨＡ−
樹脂を乾燥し、Ｌ７３ｉが得られた。

実施例１５ （Ａｌ　ａ　”　］　ｈＧＲＦ　（１−４４）　　ＮＨ
ｔの製造実施例１４の〔λｌａ′５）ｈＧＲＦ（１−４
４）−ＭＢＨＡ−樹脂（０，８５１）を実施例３におけ
る如くして無水液体ＨＦで処理した；収量：粗製の（Ａ
ｌａｌｌｌ）ｈＧＲＦ　（１４４）−ＮＨｚ　３８０Ｉ
ｎ９゜この１９０■部を実施例６における如くして（直
線クレデイエント１５〜３５チ）精製した。所望の生成
物がフラクション４２〜４３に現れ、このものを合液し
、蒸発させ、そして凍結乾燥した；収ｇ：　（Ａｌａ′
５：）−ｈＧＲＦ（１−４４）−ＮＨ４Ｉ　０．５ｍ２
゜この生成物は分析用ＨＰＬＣによって均質であること
が示された。アミノ酸組成（５Ｎ　ＨＣＩ−ＴＧＡ中で
加水分解、１１０℃、２４時間及び７２時間）：ＡＳＩ
）１４．００：Ｔｈｒｌｏ、９１：Ｓｅｒ。

３．６９：Ｇｌｕ、７．４０；ＧＩＭ、２．１６；Ａｌ
ａ、６．００；’１’ａｌ１０．９７：Ｍｅｔ、０．９
３：ＩＩｅ、１．８５　：Ｌｅｕ。

５．２５　；Ｔｙｒ　＋１．８３　；ｐＨｅ＋０．８５
　；Ｌｙｓ　＋１．９７　：Ａｒｇ　、６．１６　：Ｐ
ｈｅ　、０．９１゜実施例１６ （Ｌｅｕ”］ｈＧＲＦ（１−４４）　−ＮＨ，の合成実
施例１４によるｈＧＲＦ（１６−４４）ＭＢＨＡ−樹脂
１．７９ｇを実施例１４における如くして固相合成の更
に１５回の循環に付した；収−ｔ：側鎖の保護された［
Ｌｅｕ”）ｈＧＲＦ（１−４４）−ＭＢＨＡ−樹脂１．
６７　ｆｉ。この物質の半分を実施例３における如くし
て、無水液体ＨＦで処理した：収量：粗震ｆ）　［”Ｌ
ｅｕ１５〕ＧＲＦ　（１−４４）−ＮＨ，４００１Ｑ。

この２００ｍ９を実施例６及び１５における如くして）
（ＰＬＯ精製に付した。所望の生成物がフラクション４
３及び４４に現れ、これを合液し蒸発させ、そして凍結
乾燥した；収量：　（Ｌｅｕ”〕ｈＧＲＦ（１−４４）
　−ＮＨ，１１，０雫。この生成物は分析用ＨＰＬＣに
よって均質でちることが示された。アミノ酸組成（６Ｎ
　ＭＣＩ−ＴＧＡ中で加水分解；１１０℃：２４時間及
び７２時間）：Ａｓｐ。

３、Ｆ＋９　：Ｔｈｒ　、０．９３　：　８ｅｒ　ｔ３
．６７　：Ｇｌｕ　、７．４０：Ｇｌｙ、２．ｉｓ；Ａ
ｌａ、５．ｇｏ；Ｖａｌ、０１ｇ５；Ｍ６．ｔ。

０．９８：Ｐｈｅ、１．０２゜ 実施例１７ ｉ：ＡＩａ”ＩＧＲＦ（１−３８）−ＢＨＡ　−樹脂〔
ＤＢ造実施例１において製造した如きＢｏｃ−Ａｒｇ（
Ｔｏｓ）　−ＢＨＡ−樹脂をイガ２５０ペプチド合成装
置の反応容器中に入れ、固相合成を対称性無水物法によ
って合計１６回の循環によって行い、ＧＲＦ（２２−３
８）−ＢＨＡ−樹脂を得ることができた。この一部を取
シ出し、固相合成の６回の循環に付し、ＧＲＦ（１６７
３８）−ＢＨＡ−樹脂を得た。

次にこの一部を残りの１５回の循環の固相合成によって
転化した。合成の終了時に、Ｎ−末端アミノ酸残基のＢ
ｏｃ−基をＴＦＡを用いて除去し、得られた［：Ａｌａ
′′〕　ＧＲＦ（１−３８）−ＢＨＡ−樹脂を乾燥する
ことができた。

実施例１８ ［Ａｌａ１５〕ＧＲＦ（１−３８）ＮＨｔＯ製造、ｍｓ
及び特徴化 実Ｍ例７ＫＪ：る（Ａｌａ　■ＩＧＲＦ（１−３８）−
ＢＨＡ−４！を脂を実施例３における如くして無水液体
ＨＦで処理することができた。次にこの一部を実施例６
における如くして（直線グレデイエント１５〜３５チ）
精製に付した。所望の生成物を含むフラクションを合液
し、蒸発させ、そして凍結乾燥した。次に生成物を分析
用ＨＰＬＣによって均質性について評価し、アミノ酸分
析によって確証することができた。

実施例１９ （Ｌｅｕ　１５〕ＧＲＦ　（１−３８）　−ＮＨ，ノ合
成実施例１７によるＧＲＦ　（１６−３８）　−ＢＨＡ
　４脂の一部を実施例１７における如くして固相合成の
更に１５回の循環に付し、保護された［４．ｅｕｌ！：
］ＩＧＲＦ１−３８）−ＢＨＡ−樹脂を得ることができ
た。

この物質の一部を実施例３における如くして無水液体Ｈ
Ｆで処理し、粗製の（Ｌｅｕ″ＩＧＲＦ（１−３８）−
ＮＨ，を得ることができた。次にこの粗製の生成物の一
部を実施例６及び１５における如くしてＨＰＬＣ′ＦＰ
Ｉ製に付すことができた。所望の生成物を含むフラクシ
ョンを合流し、蒸発させ、そして凍結乾燥した。この生
成物は分析用ＨＰＬＣ’によって均質であることが示さ
れ、そしてアミノ酸分析によって確証することができた
。

実施例２０ （Ａｌａ”、Ｌｅｕ”　）　ＧＲＦ　（１−２９）　−
ＮＨ＊の合成実施例１において製造した如きＢｏｃ−Ａ
ｒｇ（Ｔｏｓ）−ＢＨＡ−樹脂をイガ２５０ペプチド合
成装置の反応容器に入れ、固相合成を対称無水法によっ
て合計２回の循環によって行い、ＧＦＬＦ（２８−２９
）−ＢＨＡ−樹脂を得ることができた。この一部を取り
出し、Ｂｏｃ−Ｌｅｕとカップリングさせ、次に固相合
成の更に１０回の循環に付し、〔Ｌｅｕ２７〕−ＧＲＦ
　（１６−２９）　−ＢＨＡ−を得ることができた。

次にこの一部を取り出し、Ｂｏｃ−Ａｌａとカップリン
グさせ、実施例３に述べた如くして、固相合成の残りの
１４回の循環に付すことができた。

実施例２１ 〔β−Ａｌａ”）ｈＧＲＦ（１−２９）　−ＮＨ，〔Ｄ
製造実施例６によるｈＧＲＦ”（１６−２９）ＢＨＡ−
樹脂１．６　ｓ９　（１，６８ｇ、　　０．３０ミリモ
ル）を固相ペプチド合成の１５回の循環に付し、ＴＦＡ
で処理し、そして乾燥し、側鎖の保護された〔β−Ａｌ
　ａ’〕ｈＧＲＦ（１−２９）ＢＨＡ−樹脂１．９３ｇ
を得た。この保護されたペプチド樹脂を無水ＨＦ開裂に
付しく実施例３における如くして）、そして処理した後
、ｆｆ１ｉｌ〔β−Ａｌａ”）ｈＧＲＦ（１−２９）Ｎ
Ｈｔｌ、２Ｉを得た。この２ｏｏｍ９（ｏ、ｏｓミリモ
ル）部分をＨＰＬＣｆｉ與に付し　（実施例６における
如りシテ）、〔β−Ａ　ｌ　ａ　”　）−ｈＧＲＦ　（
１−２９）−ＮＨｔ３５．５ｍ９を得た。この生成物は
分析用ＨＰＩ、Ｃによって均質であることが示された。

アミノ酸組成（６Ｎ　ＭＣＩ−ＴＧＡ中で加水分解、１
５０℃、１時間）：ＡＳｐ、３．１３：Ｔｈｒ、０．９
８：Ｓｅｒ。

Ｚ９５　：Ｇｌｕ＋２．１４　；Ａ１ａ＊３．１３　；
Ｍｅｔ　ｔｌ、０１：ＴＹｒ　、ｌ　３　；Ｌｙｓ、１
．９９　（６Ｎ　ＨＣＩ−ＴＧＡ中で加水分解、１１０
℃、２４時間）　：　Ｖｏｌ　、１．０９：Ｐ　ｈ　ｅ
　＋　１−１０　：β−Ａｌａ、０．８７：Ａｒｇ、Ｚ
９４゜実施例２２ ［：ｄｅｓＮＴ（２Ｔｙｒ’：］ｈＧＲＦ（１２９）　
ＮＨｔの製造 実施例８において製造した如き保護されたｈＧＲＦ（３
−２９）−ＢＨＡ−樹脂（１，０ｇ、０．１３ミリモル
）を固相ペプチド合成の２回の循環に付し、〔ｄｅｓＮ
Ｈ，−Ｔｙｒ’）ｈＧＲＦ（１−２９）−Ｂ）ｉＡ−樹
脂１．２６　ｊｊを得た。実施例３における如くして、
ＨＦによって樹脂から開裂させ、粗製の［ｄｅｓＮＨ，
−Ｔｙ　ｒ　’　）　ｈＧＲＦ　（１−２９）−ＮＨ。

０．７９．９を得た。この１２０９部分を実施例６にお
ける如くしてＨＰＬＣ精製に付し、〔ｄｅｓＮＨ２−Ｔ
ｙｒ’〕ｈＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ，１９，５ｑを得
た。

この生成物は分析用ＨＰＬＣによって均質であることが
示された。アミノ酸分析（６Ｎ　ＨＣＩ−ＴＧＡ中で加
水分解、１１０℃、２４時間）　：　ＡＳｐ　ｒ３．０
８；Ｔｈｒ、０．９Ｒ：Ｓｅ’ｅ２．．９４；Ｇｌｕ−
２，１３：Ｇｌｙ、１．１０：Ａｌａ、３．３１：Ｖａ
ｌｅｌ、０１；Ｍｅｔｅｌ、０１：１１ｅ、１．９７：
Ｌｅｕ、４．２９；Ｔｙｒ、１．０４；Ｐｈｅ　、０．
９８　：　］、ｙｓ　Ｉ　１．９９　；人ｒｇ、３．１
５゜実施例２３ ［ｄｅｓＮＨ２−Ｔｙｒ’　、Ｄ−Ａｌ　ａ’　、Ａｌ
　ａ”］ｈＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ，の製造 実施例６によるｈＧＲＦ（１６−２９）−ＢＨＡ−樹脂
の一部（３，２３ｇ、０．５８ミリモル）を固相ペプチ
ド合成の１３回の循環に付し、ＴＦＡで処理し、そして
乾燥し、（Ａｌ　ａ　”　］　ｈＧＲＦ　（３−２９）
−ＢＨＡ−樹脂を得た。この保護されたペプチド樹脂１
．７９８ｇを固相ペプチド合成の２回の循環に付し、そ
の際に厘次Ｄ−Ａｌａ及び３−（４−ヒドロキシフェニ
ル）−プロピオネートを加えた。保護されたペプチド樹
脂（１，ｓｓ、９）を実施例３における如ぐしてＨＦで
処理し、粗製の生成物を乾燥し、０．８２７９が得られ
た。この一部（２００ｍ９）を実施例６における如くし
て、ＨＰＬＣ精製に付し、［ｄｅｓＮＨ２−Ｔｙｒ　’
　、Ｄ−Ａｌ　ａ”　、Ａｌ　ａＩＳ）ｈＧＲＦ（１−
２９）−ＮＨ２（２２，２ｍ９、収率：９チ）を得た。

この生成物は分析用ＨＰＬＣによれば均質であった。ア
ミノ酸組成（６Ｎ　ＨＣＩ−ＴＧＡ中で加水分解、１１
０℃、２４時間及び７２時間）：Ｔｈｒｌｌ、０２　；
Ｓｅｒ、２．７９８　：Ｔ３’ｒ、１．ＯＯ；Ｌｙｓ。

２．０４　；Ａｒｇ、３．１３　：Ａｓ１）、２．８０
：Ｇｌｕ、２．１０；Ａｌａ１３．９＋’ｌ：Ｖａｌｌ
ｌ、０４；Ｍｅｔ、１．０３；Ｉｌｅ。

１．８５　：　Ｐｈｅ　、　０．９２゜実施例２４ （ｄｇｚＮＨ，−Ｔｙｒ１、ＡＬａ”′３ｈＧＲＦ（１
−２９１−ＮＨ，の製造 実施例２５から〔Ｄ　［：ＡＬａ”　）ｈＧＲＦ　（３
−２９１−ＢＢＡ−樹脂１，８２部分を実施例２３にお
ける如くシて、ＡＬａ及び３−（４−ヒドロキシフェニ
ル）−プロピオネートを順次加えて、ペプチド合成の２
回の循環に付した。この保護されたペプチド樹脂を実施
例３における如くしてＨＦで開裂させ、粗製のペプチド
Ｃ１，７９ｆを得た。この一部（２００岬）を実施例６
における如くしてＨＰＬＣ′精製に付し、［：　ｅＬ　
ｇ　ｔＮＨ，−Ｔ　ｙ　ｒ’　、　Ａ　Ｚ　ａ’ｓ　：
］んＧＲＦ（１−２９１−ＮＨ，１３■（収率５％）を
得た。この生成物は分析用ＨＰ　Ｌ　Ｃ’により均質で
あることが示された。アミノ酸組成（６ＮＨｃｔ−ＴＧ
Ａ中で加水分解、１５０℃、１時間及び７２時間）：”
Ｐ　、　５．００　：　Ｔｈｒ　、　１、ａＯ”、ｓｇ
ｒ、ｓ、ｏｏＨｒｙｒ。

０．９９；Ｌｙｚ、％９９；Ａｒｇ、１０４；Ｇｌｕ、
、２．０５：Ａｌａ、４．２５：メｔＬｌ、０．９９”
、Ｍａｔ、Ｑ、９２；ＩＬｇ。

１．８５：Ｌｇｕ、五９７：７’Ａｇ、Ｑ、９４゜実施
例２５ 〔α−Ａｉ　ｈＩ５〕ｈＧＲＦ　（１−２９１−ＮＨｚ
の製造実施例６によるｈＧＲＦ（１６−２９ｒＢＨＡ−
樹脂の一部（１，６８ｇ、０．３０ミリモル）を固相ペ
プチド合成の１５回の循環に付し、ＴＦＡで処理し、乾
ｆｉＬ、側鎖の保護されり〔α−Ａｉ　ｂ　Ｉ’　］ｈ
ＧＲＦ（１−２９）８８人−樹脂１．９３！ｊを得た。

この保護されたペプチド樹脂を実施例３における如くし
て無水ＨＦ開裂に付し、そして常法で処理した後、粗製
の〔α−Ａｉｂ”：ｊｈＧＲＦ（１２９）ＮＨｚを得た
。この２００Ｗ１９部分を実施例６における如くしてＨ
ＰＬＣｇ製に付し、〔α−Ａｉ　ｂ　］　ｈＧＲ，Ｆ　
（１−２９）−ＮＨ，が得られた。この生成物は分析用
ＨＰＩ、ＣＫよって均質であることが示された。

実施例２６　　。

本化合物の生物活性を合成ＧＲＦ（１−４４）−ＮＨ，
の活性と比較した。合成ＧＲＦ（１−４４）−ＮＨ，の
生物活性は、先端巨大症にかかった患者の膵ＩｉＩ！ｌ
雇から単離した天然ＧＲＦ（１−４４）ＮＨｔ（８ａｌ
ｋ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ６標準ｈＧＲＦ−ＮＨ，（ＮＬ−
Ａ−１０））と同一であった。組織培養においてラット
の下垂体細胞の生長ホルモンの生産を刺激する能力に基
ずく生物活性に対する効力検定を次の方法で行った： ３０〜４０匹の雄スプラーグードーレイ（ｆ９ｐｒａｇ
ｕｅ−Ｄａｗｌ　ｅｙ）ラット（体重１７５ｇ）から下
垂体を首切り後、無菌状態で除去した。下垂体前葉を補
集し、無菌のヘペス（Ｈｅｐｅｓ）緩衝　　−剤（０，
０２５Ｍ、　ｐＨ値７．３５　）で３回洗浄し、　゛′
膠原酵素（４〜／Ｒ１）及びデイスパーゼ〔Ｄｉｓ−ｐ
ａｓｅＸ蛋白酵素級■、２ｒｎ９／ｄ）を含有するヘペ
ス緩衝剤（ｐＨ値７．３５）２０〜３０ａ／に分散させ
た。パスツール（Ｐａｓｔ６ｕｒ）ピペットによって静
かに１００〜１１０分間、渦巻きそして砕解した後、分
散した細胞を遠心分離によって分離しく　１５　ｏｘ、
９．４分間）、ノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｉ
ｄａｓｅ）（８１１／　ｄ　）及びエチレンジアミンテ
トラ酢酸（ＥＤＴＡ）ニナトリウム塩２００ｇ／ｍｌを
含むヘマ入緩衝剤、ｌ）Ｈ値７．３５、に１０分間再懸
濁させた。平板培養媒質（ｐｌａ−ｔｉｎｇ　ｍ６ｄｉ
ｕｍ）で２回洗浄し、次の限定された娯質を用いて、マ
ルチウェル−プレー）（ｍｕｌ−ｔｉｗ６１１−ｐｌａ
ｔｅｓ　（１，５Ｘ１０’細胞／ｄ）上にプレイティン
グした：　２．！ｉＩ　Ｂ８Ａ／ｌ、λ３８Ｉｉヘペス
／１．５０Ｗ９　ＰＳＮ抗生物質混合物によるＦ−１２
／ＤＭＥＭ／ＢＧＪ（６：　３　：　１、ギブコ（Ｇｉ
ｂｃｏ）：　　４３０−１７００／４３０−１６００／
３２０−２５９１）（ギプコ・ラボラトリーズ（Ｇｉｂ
ｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））、１．８３ｇｍＮ
ａ　ｚＨｃｏ、　／　Ｉ　Ｃベイカー（Ｂａｋｅｒ）に
よる１０ｒｎ９／Ｌトランスフエリン〔シダーｒ　（８
ｉｇｍａ）　Ｔ　２２５２〕。各ウェル中の媒質を媒質
１ｄ当り０．８〜２００　ミＩＪモルの濃度範囲で、新
規なＧＲＦ同族体または天然ＧＲＦ（１−４４）−ＮＨ
，で補足した。対照ウェルは補足物を含まなかった。セ
ルの速い固定を確実にするために、２憾牛脂児血清を加
えたこの媒質でブレーティングを行った。第４８目に、
牛胎児血清を含まぬ上記の限定した媒質で細胞を２回洗
浄した。最後に１限定された媒質９００／Ｊｔを各ウェ
ルに加え、加えて各個々の処理物を含む同一媒質１００
μｔを三重に加えた。

４時間培養した後、媒質を捕集し、ラット生長ホルモン
に対してラジオイムノアッセイ（ｒａｄｉｏ−ｉｍｍｕ
ｎｏａｓｓａｙ）　（Ｒ＋ＩＡ）を行うために必要な濃
度に希釈した。ラット生長ホルそンに対するＲＩＡを、
スイカ（Ｓｉｎｈａ’ｓ）抗ネヅミＧＨ免疫血清を用い
て、そして抗体抗原結合体を沈殿させるために蛋白質入
を用いて、ナショナル・ピチューイタリ・エージエｙス
イ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　ＰｉｔｕｉｔａｒｙＡｇｅｎｃ
ｙ）による方法に従って行った。

効力検定ノ結果は、（ｉａ１５〕ＧＲＦ（１−２９）Ｎ
Ｈ，がＧＲＦ（１−２９）ＮＨｔに匹敵し、５．１倍の
効力を有することがわかった。ＧＲＦ　（１−４４）Ｎ
Ｈｔと比較した場合、（Ａｌａ”）ＧＲＰ（１−２９）
ＮＨｔａ重量／重量に基ずき４．１倍の効力を有するこ
とがわかった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 【遺伝子配列があります】 式中、Ｒ＾１はＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、ｄｅｓＮＨ＿２−
   Ｔｙｒ、Ａｃ−ＴｙｒまたはＨｉｓを表わし；Ｒ＾２は
   Ａｌａ、Ｄ−ＡｌａまたはＮ−メチル−Ｄ−Ａｌａを表
   わし；Ｒ＾３はＬｙｓまたはＡｌａを表わし；Ｒ＾４は
   Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｎｌｅ、Ｎｖａｌ、
   β−Ａｌａまたはα−Ａｉｂを表わし；Ｒ＾５はＭｅｔ
   、Ｌｅｕ、ＮｌｅまたはＩｌｅを表わし；Ｒ＾６はＡｒ
   ｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ
   −Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ−
   Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ及びそのフラグメントから選ば
   れるアミノ酸配列を表わし、該 フラグメントの配列はカルボキシル末端か ら１〜１５個のアミノ酸残基だけ数が減ぜ られており；そしてＸはＯＨまたはＮＨ＿２である、 の生長ホルモン放出性因子（ＧＲＦ）化合物及びその製
   薬学的に上許容し得る酸または塩基付加塩。 ２、式 【遺伝子配列があります】 式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３、Ｒ＾４、Ｒ＾５及びＸ
   は特許請求の範囲第１項記載の通りであ る、 の特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ３、〔Ａ１ａ＾１＾５〕ＧＲＦ（１−４４）−ＮＨ＿２
   である特許請求の範囲第２項記載の化合物。 ４、〔Ｖａｌ＾１＾５〕ＧＲＦ（１−４４）−ＮＨ＿２
   である特許請求の範囲第２項記載の化合物。 ５、〔Ｌｅｕ＾１＾５〕ＧＲＦ（１−４４）−ＮＨ＿２
   である特許請求の範囲第２項記載の化合物。 ６、Ｒ＾６がＡｒｇであり、そしてＲ＾１、Ｒ＾２、Ｒ
   ＾３、Ｒ＾４、Ｒ＾５及びＸが特許請求の範囲第１項記
   載の通りである特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ７、〔Ｌｅｕ＾１＾５〕ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ＿２
   である特許請求の範囲第６項記載の化合物。 ８、〔Ｖａｌ＾１＾５〕（１−２９）−ＮＨ＿２である
   特許請求の範囲第６項記載の化合物。 ９、〔Ｌｅｕ＾１＾５〕ＧＲＦ（１−２９）−ＯＨであ
   る特許請求の範囲第６項記載の化合物。 １０、〔Ｖａｌ＾１＾５〕ＧＲＦ（１−２９）−ＯＨで
   ある特許請求の範囲第６項記載の化合物。 １１、〔β−Ａｌａ＾１＾５〕ＧＲＦ（１−２９）−Ｎ
   Ｈ＿２である特許請求の範囲第６項記載の化合物。 １２、〔α−Ａｉｂ＾１＾５〕ＧＲＦ（１−２９）−Ｎ
   Ｈ＿２である特許請求の範囲第６項記載の化合物。 １３、Ｒ＾４がＡｌａであり、そしてＲ＾１、Ｒ＾２、
   Ｒ＾３、Ｒ＾５、Ｒ＾６及びＸが特許請求の範囲第１項
   記載の通りである特許請求の範囲第１項記載の化合物。 １４、〔Ａｌａ＾１＾５〕ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ＿
   ２である特許請求の範囲第１３項記載の化合物。 １５、〔Ａｌａ＾１＾２、Ａｌａ＾１＾５〕ＧＲＦ（１
   −２９）−ＮＨ＿２である特許請求の範囲第１３項記載
   の化合物。 １６、〔Ｄ−Ａｌａ＾２、Ａｌａ＾１＾５〕ＧＲＦ（１
   −２９）−ＮＨ＿２である特許請求の範囲第１３項記載
   の化合物。 １７、〔Ａｌａ＿１＿５〕ＧＲＦ（１−２９）−ＯＨで
   ある特許請求の範囲第１３項記載の化合物。 １８、〔ｄｅｓＮＨ＿２−Ｔｙｒ＾１、Ａｌａ＾１＾５
   〕ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ＿２である特許請求の範囲
   第１３項記載の化合物。 １９、〔Ｄ−Ｔｙｒ＾１、Ａｌａ＾１＾５〕ＧＲＦ（１
   −２９）−ＮＨ＿２である特許請求の範囲第１３項記載
   の化合物。 ２０、〔Ａｃ−Ｔｙｒ＾１、Ａｌａ＾１＾５）ＧＲＦ（
   １−２９）−ＮＨ＿２である特許請求の範囲第１３項記
   載の化合物。 ２１、〔ｄｅｓＮＨ＿２−Ｔｙｒ＾１、Ｄ−Ａｌａ＾２
   、Ａｌａ＾１＾５〕ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ＿２であ
   る特許請求の範囲第１３項記載の化合物。 ２２、〔Ｄ−Ｔｙｒ＾１、Ｄ−Ａｌａ＾２、Ａｌａ＾１
   ＾５〕ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ＿２である特許請求の
   範囲第１３項記載の化合物。 ２３、〔Ａｃ−Ｔｙｒ＾１、Ｄ−Ａｌａ＾２、Ａｌａ＾
   １＾５〕ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ＿２である特許請求
   の範囲第１３項記載の化合物。 ２４、〔ｄｅｓＮＨ＿２−Ｔｙｒ＾１、Ｄ−Ａｌａ＾２
   、Ａｌａ＾１＾２、Ａｌａ＾１＾５〕ＧＲＦ（１−２９
   ）−ＮＨ＿２である特許請求の範囲第１３項記載の化合
   物。 ２５、Ｒ＾４がＡｌａであり、Ｒ＾５がＬｅｕであり、
   Ｒ＾６がＡｒｇであり、そしてＲ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３
   及びＸが特許請求の範囲第１項記載の通りである特許請
   求の範囲第１項記載の化合物。 ２６、〔Ａｌａ＾１＾５、Ｌｅｕ＾２＾７〕ＧＲＦ（１
   −２９）−ＮＨ＿２である特許請求の範囲第２５項記載
   の化合物。 ２７、〔Ａｌａ＾１＾５、Ｌｅｕ＾２＾７〕ＧＲＦ（１
   −２９）−ＯＨである特許請求の範囲第２５項記載の化
   合物。 ２８、人間における生長ホルモン欠乏によつて特徴ずけ
   られる生長に関連した障害の処置のための特許請求の範
   囲第１〜２７項のいずれかに記載の化合物。 ２９、動物の生長を促進させるために該動物の処置に対
   する特許請求の範囲第１〜２７項のいずれかに記載の化
   合物。 ３０、（ａ）液相ペプチド合成によつて合成された対応
   するアミノ酸配列の正当に保護された ポリペプチドの保護基を通常の方法を用い て開裂させるか、或いは （ｂ）固相ペプチド合成によつて合成された対応するア
   ミノ酸配列のポリペプチドに結 合した正当に側鎖が保護された樹脂を無水 液体ＨＦと反応させ、 そして必要に応じて、得られる下記式 I の化合物を製
   薬学的に許容し得る酸または塩基付加塩に転化すること
   を特徴とする式 【遺伝子配列があります】 （ I ） 式中、Ｒ＾１はＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、ｄｅｓＮＨ＿２−
   Ｔｙｒ、Ａｃ−ＴｙｒまたはＨｉｓを表わし；Ｒ＾２は
   Ａｌａ、Ｄ−ＡｌａまたはＮ−メチル−Ｄ−Ａｌａを表
   わし；Ｒ＾３はＬｙｓまたはＡｌａを表わし；Ｒ＾４は
   Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｎｌｅ、Ｎｖａｌ、
   β−Ａｌａまたはα−Ａｉｂを表わし；Ｒ＾５はＭｅｔ
   、Ｌｅｕ、ＮｌｅまたはＩｌｅを表わし；Ｒ＾６はＡｒ
   ｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ
   −Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ−
   Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ及びそのフラグメントから選ば
   れるアミノ酸配列を表わし、該フラグメン トの配列はカルボキシル末端から１〜１５ 個のアミノ酸残基だけ数が減ぜられており；そしてＸは
   ＯＨまたはＮＨ＿２である、 の生長ホルモン放出性因子（ＧＲＦ）化合物及びその製
   薬学的に許容し得る酸または塩基付加塩の製造方法。 ３１、特許請求の範囲第１〜２７項のいずれかに記載の
   如き化合物の有効量及び無毒性の製薬学的に許容し得る
   液体または固体の担体を含有する薬剤組成物。 ３２、人間における生長ホルモン欠乏によつて特徴ずけ
   られる生長に関連した障害の処置或いは動物の生長を促
   進させるための該動物の処置における特許請求の範囲第
   １〜２７項のいずれかに記載の化合物の使用。