JPS59139347A - Ｇｒｆ類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はヒトおよび他の動物（特にＲＨ乳動物）の脳下
垂体の機能に影響を与えるペプチドに関する。より詳細
には、本発明は脳下垂体による成長−ホルモンの放出を
促進させるペプチドに関する。

発明の前景 生理学者は視床下部でつくられる脳下垂体ホルモンの分
泌を誘発させる特定のポリペプチドが腺下垂体の分泌の
全てを調節するということを長期にわたり認めてきてい
る。成長ホルモン（Ｇｌｉ）の分泌；￥１−阻害する阻
害因子も性状決定がなされておｐｌこれはンマトスタチ
ンと命名されている。

脳下垂体Ｇｌｉのための対応する視床下部の放出因子は
最近ヒトの膵臓腫瘍からの抽ｔｂ物から分離され、精製
され、性状決定がなされ、合成されて試験された。この
ペプチドの配列は矢のとおりである： Ｔｙｒ−Ａ１３ａ−Ａｓｐ−Ａ１３ａ−１１）ｅ−Ｐｈ
ｅ−Ｔｈｒ−Ａｓ　ｎ−８ｅ　ｒ−１’ｙ　ｒ−Ａｒ　
ｇ−Ｌｙ　ｓ　−Ｖａｌｌ−Ｌｅ　ｕ　−Ｇｌ；ｙ−Ｇ
ｌｌｎ−Ｌｅｌｂ−８ｅｒ−Ａ１３ａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ
　−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌｌｎ−Ａｓ　ｐ−１ｌｅ
　−Ｍ　ｅ　ｔ　−８ｅ　ｒ　−Ａｒ　ｇ−Ｇｌ３　ｎ
−Ｇ１１　ｎ−Ｇ１１　ｙ−Ｇｇ　ｖ、−８ｅ　ｒ　−
Ａ　８　ｎ−Ｇｅ　ｎ−Ｇ１　ｖ、−Ａｒ　ｇ−ＧＡ　
ｙ−Ａｔ３　ａ−Ａｒ　ｇ−Ａｔ３　ａ　−Ａｒｇ−Ｌ
ｅｕ。

このペプチドのアミド化体が存在すると考えられ、これ
は今後ｈｐＧＲＦ’＜ヒト膵臓腫瘍ＧＨ放出因子）と表
示する。

発明の概要 今や、培養した脳下垂体細胞からＧＨを放出させるペプ
チドがラットの視床下部抽出物から分離され、精製され
、性状決定がなされ、合成されて試験された。この４３
個のアミノ酸残基からなる天然に存在するペプチドの配
列は次のとおりである： １ｌ−ＩＦ　５−Ａｌａ−Ａｓ　ｐ−Ａｌ１　ａ−１１
３ｅ−Ｐｈ　ｅ　−Ｔｈｒ−８ｅｒ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−
Ａｒｇ−Ａｒｇ−１ｔ３ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌ３　ｙ−Ｇ１
３ｎ−Ｌｅ　ｕ−Ｔｙｒ　−Ａｌｌ　ａ−Ａｒ　ｇ−Ｌ
ｙ　ｓ　−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉ　ｓ−Ｇ、ｅｕ−Ｉｌ
ｌ　ｅ　−Ｍｅ　ｔ−Ａｓｎ　−Ａｒ　ｇ−Ｇｌｌ　ｎ
−Ｇ１；　ｎ−Ｇ１３　ｙ−Ｇｌｕ−Ａｒ　ｇ　−Ａ　
ｓ　ｎ　−ＧＩｎ−Ｇｌｌｕ−Ｇ（３ｎ−Ａｒｇ−８ｅ
ｒ−Ａｒｇ−Ｐｈ、ｅ−Ａ　ｓ　ｎ　ＯＩＩ　。

このペプチドは今後ｒｈＧＲＦ（ラット視床下部ＧＨ放
出因子）と表示する。

また、ｈｐＧＲＦそれ自体よりも効力が優れたｈｐＧＲ
Ｆ類似体（これらのうちの多くはその長さがｈｐＧＲＦ
よりも短かい）が合成されて試験された。これらの類似
体のいくつかはｒｈＧＲＦの式に−・致する置換を基準
にしているが、他の類似体は他の置換を基準にしている
。本発明による医薬組成物は薬学的に許容される液体ま
たは固体の担体中に分散されたこれらのｈｐにＲＦ類似
体またはその無毒性塩を含有する。このような医薬組成
物はヒトおよび家畜の治療目的のために投与される臨床
薬剤として、あるいは葦た診１す１用に使用される。

さらに、それらは温血動物（鶏を営む）の成長を促進さ
せるために、また冷血動物（例えば、魚やうなぎ）の養
殖用ｅこ使用される。

発明の開示 ペプチドを定義するのに使用する命名法は５ｃｌｙｒｏ
ｄｅｒおよびＬｕｂｋｅによる°’　Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔ
ｉ−ｄｅｓ”アカデミツクプレス（１９６５年）に規定
されたものであり、ここでは一般的表示に従ってＮ−末
端のアミン基は左に、そしてＣ−末端のカルボキシル基
は右に記載される。天然アミノ酸はＧ１１ｙ　、Ａ／！
′ａ　ｒＶａ／ｌ　＋Ｌｅｕ　、　ｌｅｅ　、Ｓｅｒ　
、Ｔｈｒ　＋Ｌｙｓ。

Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｅｗ、’Ｇ（ｌｎ、ｃｙｓ
、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ。

Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐおよび１ｆｉｓ　からなる蛋白
質中に見い出されて天然に存在する一般のアミノ酸のう
ちの一種を意味する。アミノ酸残基が異性体形をもつ場
合、もし他に特定して指示されなければＬ−型のアミノ
酸を意味する。本出願にとって、ｒｈＧＲＦ’はり、ｐ
ＧＲＦの類似体であると考えられる。

本発明は次式で示される合成り、ｐＧＲＦペプチド類似
体またばその無毒性塩を提供する。

Ｈ−ＲＩ−Ａｌａ　Ａｓｐ−Ａ１３ａ　　ｆｅｅ−Ｐｈ
ｅ−１’ｈｒ　−Ｒｓ　５ｅｒ−Ｅｒａ　Ａｔ’（ｌ　
Ａ’１２　　ＲＩ３Ｌｅｕ　　７ビ１．−Ｇ１４　ｎ−
Ｌ　ｅ　ｕ　−Ｒ＋ｓ’　Ａｌａ　−Ａ　ｒ　ｇ−Ｌ　
ｙ　ｓ　−Ｌ　ｅ　ｕ−Ｒ２４Ｒ２ｓ　ｌ１３ｅ　Ｒ２
７−１＋！２ａ　Ａｒｇ　Ｇ１３ｎ−Ｇ／３ｎ　Ｇ１３
ｙＧｌｈｂ−Ｒ３４Ａｓｎ　　　Ｇｌｊｎ−Ｇ／３ｕ、
−Ｒ２Ｈ１ｌｓｏ−ノビ。

Ａｒ（７１１４２Ｒ４３Ｒ４４Ｙ 式中、ＲＩはｉ’ｙｒ　、１ｖｌｅ　ｔ　＋Ｄ−Ｔｙｒ
　＋Ｐｈｅ　、Ｄ−Ｐｈ　ｅ　＋　Ｌｅ　ｗ　＋　Ｄ−
Ｈｉ　ｓまたはＨｉｓ：ＲｓはＳｅｒまたはＡｓｎ：Ｒ
ｒｏはＴＶｒ　＋ＰｈｅまたはＤ　Ｔ’ｌ／　ｒ　：　
ＲＩ２ばＡｒｇｌｆ、：はＬ１２：ＲＩｓばｌｅｅまた
はＶａｅ：ＲｓばＧ１３ｙ４ｆｓはＤ−Ａ１３　ａ　：
　Ｒ＋ｓはＴ１１ｒ”！ｆ、−はＳｅｒ：］？２４はＨ
ｉｓまたはＧＩ３ｎ：Ｒ２５はＧｅｕｊたはＡｓｐ：Ｒ
２゜はＡｅａ＋Ｎｅｅ　、ｌ１３ｅ　、Ｌｅｕ、ｉげｅ
ｔおよびＶａｌｌのＤ−およびＬ−異性体からなる群か
ら選択される；／＜、８はＳｅ　ｒ　＋　Ａｓ　ｎ　ま
たは１）−Ａ　Ｉｔ　ａ　；　Ｒ３４はＡｒｇまたはＳ
ｅｒ：Ｒ２ＨばＧｅｎまたはＡｒｇ　：　Ｉｔ、９はＡ
ｒｇまたはＧＩ３　ｙ　：　１１４ｏは５ｅｒｉたはＡ
ｅａ：Ｒ４２はＰｈｅまたはＡ　ｅ　ＣＬ　：　Ｒ４３
はＡｓｎ１たはＡｒｇ：Ｒ４，は天然アミノｍｔたはデ
ス−Ｒ４４；そしてＹばＣ−末端のアミノ酸残基のカル
ボキシル部分子ｉ味しかつ基−ＣＯＯＲ，−ＣＲＯ，−
ＣＯＮＨＮｌｉＲ，−ＣＯＮ（／ビ）（／ｌ”１または
−Ｃ１１２０Ｒであゃ、ここで１？およびｔｔ’ば１氏
級アルキル基、フルオロ低級アルキル基葦たは水素であ
る。但し、Ｒ１が７１　ｙ　ｒである時Ｒ２７１ａＭ　
ｅ　を以外のもの、Ｒ８はＳ　ｅ　７％　Ｒｓ２はＡｒ
ｇ、Ｒ１，は１（３ｅ−、Ｉｌ＋ａはｉ’ｙｒＸＲ２４
はＨｉｓ、〕１２５＆工ＧＩ３ｕ、、。

Ｒ２ｓはＡｓｎ−、Ｒ３４はＡｒｇ、　Ｒ３８はＧ１１
ｎ、　ＲｓｏはＡｒｇ、　Ｒ４０はＳｅ　ｒ　、　Ｒ４
２はＰｈｅそしてＲ，はＡｓｎである。また残基２８〜
４４のいずれかまたは全部を削除して生物学的に活性な
断片を提供することができる。メチル基、エチル基およ
びプロピル基が好ましい低級アルキル基である。前記の
ペプチド断片はまた生物学的活性を有しており、そして
一般にそのペプチドは少なくともＮ−末端から残基２７
葦で延びるべきものと考えられる。

ペプチド断片が残基２７および２８まで延びる場合には
ＹはＮＨ２または置換アミドであるべきであるが、その
断片が残基２９〜３９のうちの１つ１で延ひる場合には
Ｙは好１しくはアミドまたは置換アミドである。

２７−位のＭｅｔの代りに指定した置換基のうちの１つ
をもつり、ｐＧＲＦは、特に酸化条件にさらした時、実
質的により大きな安定性を示す。さらに、その置換基が
Ｄ−異性体である場合には酵素に対する抵抗性が高めら
れるかも知れない。それらは十分に生物学的活性を残し
ており、そしである種の類似体は試験管内で試験した時
篤くほどに増大した効力を示す。ｌ−位ｆ　Ｉｉｉ　ｓ
で置換すると非常に強い効力が得られる。その上、Ｄ−
異性体アミノ酸（例えは、Ｄ　７’ｙｒ）での置換は驚
くべき効能を保持しており、そしである棟の酵素による
分解に対してそのペプチドに抵抗性を句与することから
極めて価値があるものである。

これらのペプチドは、例えば固相法のみで、部分的固相
法で断片縮合で、古眞的な浴液カップ＋１ングで、１１
ごは最近開発された組み換えＤＮＡ法のような適当な方
法で合成される。例えば、固相法のみの合成法はＳｔｅ
ｗａｒｔおよび”１’ｏｕｎｇによる”　５ｏｌｉｄ−
Ｐｈ、ａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　
”、フリーマン社、サンフランシスコ（１９６９年）に
説明されており、そして１９７８年８月８日発行のＶａ
ｌｅ等による米国特許第４１０５６０３最明測置により
例示される。断片縮合法は米国特許第３９７２８５９号
明細書（１９７６年８月３日）に例示される。他の利用
可能な合成法は米国特許第３８４２０６７号（１９７４
年ｌＯ月１５日）および同第３８６２９２５号（１９７
５年１月２８日）の各町Ｋｍ　’ｔｔにより例示される
。

組み換えＤＮＡ法の使用による合成は、本出願にとって
、ｈｐＧＲＦ類似体またはその断片の所望形体をコード
化する構造遺伝子の適当な使用を包含すると理解される
べきである。合成り、ｐＧＲＩ”ペプチドはこのような
構造遺伝子と共にプロモーターおよびオペレーターを含
む発現ベクターを使用して微生物を形質転換し、こうし
て形質転換した微生物にｈｐＧＲＦペプチドを発現させ
ることによ！ｌｌ得ることができる。ヒト以外の動物も
また、このような構造遺伝子と米国特許第４２７６２８
２号明細書（１９８１年６月３０日）に記載されｆこ一
般方法を使用して、あるいは１９８３年５月２６日に発
行されたＷＯ３３１０１７８３および１９８２年１２月
２３日に発行きれたＷＯ３２１０４４４３に記載された
ような発生初期のを椎動物の顕微注入を使用して、遺伝
子操作することによジｈｐＧＲＦペプチドを産生させる
のに使用できるかも知れない。合成ｈｐａｔｔｐ’ペプ
チドはさらに２冊のＷＯ出版物に記載され１こ方法によ
り成長促進が意図される動物中で直接生産されてもよい
。

各糧アミノ酸部分の不安定な側鎖基を適当な保蝕基で保
護することは化学合成において一般的なことであり、そ
の保護基は保護基が最終的に１余去されるまでその部位
での化学反応の発生を妨げるだろう。アミノ酸または断
片がカルボキ７ル基φ）部位で反応する間これらのα−
アミノ基もま１こ通常保護され、続いてそのアミン基の
部位で；叉上己を行うためにα−アミン保護基は選択的
に除去される。従って、適当な残基に結合された側鎖保
護基をもつペプチド鎖中に所望の配列で位置するアミノ
酸残基を含む中間体化合物が、合成の一段階として、製
造されるということは一般的なことである。

次式の中間体は本発明の鍾、凹円であると考えられる。

Ｘ’−１ビｌ（、￥葦たはＡ２）　−Ａｌ１　ａ、−Ａ
ｓ　ｐ　＜Ａ３）　−Ａｅａ−Ｉ　ｌ　ｅ−Ｐｈ　ｅ−
１’ｈ　ｒ　（、￥’）−Ｒ８（、￥’またはＸ′）Ｓ
ｅｒ＜Ｘ’ｌ　　Ｚｅ、ｏ＜Ｘ２１　　Ａｒｇ（Ｘ’ｌ
　　／”＜＋２（Ａ”またはＡ７）−ＲＩ３−Ｌｅｕ−
Ｒ，、、−Ｇｅｎ　（ＸＪ　−Ｌｅｒｂ−Ｒ＋ｓ　ｔＸ
Ｊ　−Ａ１３ａ−Ａｒ　ｇ　（、￥’１）−Ｌｙ　ｓ　
（、Ａ７１−Ｌｅｒｂ”Ｌｅｕ−Ｒｕ（ＸまたはＡ５）
−Ｒ２５（Ｘ３１−１１：ｅ−１ビ２？　　Ｉビ２ｇ　
（Ｘ’　１　ｒｓはＸＪ−Ａｒｇ（Ｘ’１−Ｇｌｔｎ＜
ＸＪ−Ｇｅｎ　（ＸＪ−Ｇｅｙ−（Ｅｌ！ｕ（Ａ３）−
Ｒ，＋＜（Ａ４またはＸＪ−Ａｓｎ（Ｘ′：′）　−Ｇ
ｅｎ（ＸＪ　−Ｇｅｕ（Ｘ”）−Ｒ，，８（、￥″筐ｆ
は、￥”）−１１３ｏ（Ｘ”Ｊ　　Ｉビ。

（、￥’）−Ａｒｇ　（、￥’ｌ−Ｒ＋２−Ｒ４：ｌ（
Ｘ”−ｔたはＸ′）−ＩＩ、、　（Ｘ８Ｊ　−Ｘ’ 式中、Ｘｌは水素原子葦たはα−アミノ保楯基である。

Ｘｌにより意図さＦしるα−アミノ保護基はポリペプチ
ドの段階合成法の技術において有用であることが広く知
られている保護基である。Ｘｌとして使用してもよいα
−アミン保護基の部類には（１）芳香族ウレタン型保藤
基、例えはフルオレニルメチルオキ７カルボニルＭ（Ｆ
ＭＯＣＩ、ベンジルオキ７カルボニル基（Ｚ）およびｐ
−クロロベンジルオキ７カルボニル基、ｐ−ニトロヘン
シルオキシカルボニル基、ｐ−ブロモベンジルオキシカ
ルボニル基’Ｅ　Ｔ、−ばｐ−メトキシペンシルオキン
カルボニル基のような置換されたベンジルオキシカルボ
ニル基；（２）脂肪族ウレタン型保護基、例えばｔ−ブ
チルオキシカルボニル基（ＢＯＣ）、ジインブロビルメ
チルオキンカルボニル基、イソプロビルオキンカルボニ
ル基、エトキ７カルボニル基およびアリルオキシカルボ
ニル基；並びに（３１シクロアルキルウレタン型１呆護
基、例えばシク゛ロペンチルオキシ力ルボニル基、アダ
マンチルオキシカルボニル基およびンクロヘキノルオキ
シ力ルボニル基：が＠捷れる。好丑しいα−アミン保護
基はＢＯＣである。

Ｘは水素原子またはＴｏｓのようなＨｌｓのイミダノ゛
−ル窒素のための保護基である。

Ｘ２はＴｙすのフェノール性ヒドロキ／ル基のための適
当な保護基であってよく、例えばテトラヒドロピラニル
基、ｔ−ブチル基、トリチル基、Ｂｚ１３　、ＣＢＺ　
、　４１３ｒ−ＣＢＺおよび２，６−ジクロロベンジル
基＜１）ＣＢＩである。好テしい保護基は２．６−ジク
ロロベンジル基である。Ｘ２はその位置のアミノ酸残基
に側鎖保護基がないことを意味する水素原子でありうる
。

Ｘ３は水素原子またはＡｓｐもしくはＧＩ３ｕのカルボ
キシル基のための適当なエステル形成保護基、例えばベ
ンジル基（ＯＢｚｌｌ）、２　、６−ジクロロ・ベンジ
ル基、メチル基およびエチル基である。

Ｘ’　ハＴｈ、ｒ−ｑたはＳｅｒのヒドロキシル基のた
めの適当な保護基であってよく、例えばアセチル基、ベ
ンゾイル基、ｔ−ブチル基、トリチル基、テトラヒドロ
ピラニル基、１３ｚ１３．２．６−ジクロロベンジル基
およびＣＢＺである。好ましい保護基はＢｚｅである。

Ｘ４はヒドロキシル基に保護基がないことを意味する水
素原子でありうる。

Ｘ５は水素原子またはＡｓｎもしくはＧｅｎの側鎖アミ
ド基のための適当な保護基である。それは好壕しくけキ
サンチル基（Ｘａｎ）であ之。

Ｘ６はＡｒｇのグアニジノ基のための適当な保護基、例
えばニトロ基、Ｔｏｓ、ｃＢＺｚ　　アダマンチルオキ
シカルボニル基およびＢＯＣであるが、あるいは水素原
子である。

Ｘ７は水素原子またはＬｙｓの側鎖アミノ基のための過
当な保護基である。過当な側鎖アミン保護基の例は２−
クロロベンジルオキシカルボ手ル基（２−ＣＡ−Ｚ）、
Ｔｏｓ、ｔ−アミルオキシカルボニル基およびＢＯＣで
おる。

Ｘ８は水素原子またけ上で一般的に詳述した適当な側鎖
保護基である。

Ｍｅｔは場合によ！ｌｌ酸素で保護されうるが、好まし
くは保護されないままである。

側鎖アミノ保護基の選択は、一般に合成中のα−アミノ
基の保護基離脱の間に除去されない保護基が選ばれると
いうことを除いて、限定的ではない。しかしながら、い
くつかのアミノ酸（例えば、Ｈｉｌｌの場合にはカップ
リングが光子した後保護は一般に必要でなく、保護基は
同じであってもよい。

Ｘ９はエステル形成基Ｘ３のようなＣ−末端力ルボキシ
ル基のだめの適当な保護基であるか、またけ固体の樹脂
支持体に結合させるために固相合成法で使用する定着結
合であるか、もしくはテス−Ｘ９であり、テスーＸ９で
ある場合にＣ−末端の残基は先に定義したカルボキシル
部分Ｙをもつ。固体の樹脂支持体を使用する場合に、そ
れは当該技術分野で知られたもののいずれであってもよ
く、例えば−〇−Ｃ１ｆ２−樹脂支持体、−Ｎｌｉ−へ
ノスヒドリルアミン＜ＢＩＩＡ）樹脂支持体ブだは−Ｎ
ｌｉＮｌミーバラメチルベンズヒドリルアミンＨＡＬ［
脂支持体のような式を有するものである。未置換アミド
が重重れる場合にはＢＨＡまたはＭ　ＨＩ−ｆ　Ａの使
用が好１しく、その開裂は直接アミドを与える。Ｎ−メ
チルアミドが望１れる場合に、それはＮ−メチルＢ　Ｉ
ｉ　Ａ樹脂から得られる。Ｃ−末端において他の１１追
当なアミド１だは遊離酸以外の基が望１れる場合には、
１ｉｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌのテキストに記載されたよう
な古典的方法を使用してペプチドを合成することが適当
かも知れない。

中間体のだめの式において、Ｘ基のうちの少なくとも１
つは保護基であるが、または、Ｙ［ｌは樹脂支持体を含
む。こうして、本発明はまた興味のあるペプチドの製造
方法を提供し、その方法は（ａｌ　　式（ロ）で示され
る少なくとも１つの保護基を有するペプチドを形成し； ｘ’−Ｒ，（ｘ−！たは、￥２ｌ−ＡＩ３ａ−Ａｓｐ　
＜Ｘ３）　−Ａ１３　ａ−Ｉ　ＩＩ　ｅ−Ｐｈ　ｅ−１
’ｌＬｒ　ＬＹ”　）　−ＲＢ　（￥またはＸ′）−８
ｅ　ｒ　（、Ｙ’　ｌ　−１’ｙｒ　（、￥２１−Ａｒ
ｇ　＜Ｘ’）　−１１＋２（Ｘ６１だはλ勺−Ｒ＋５−
Ｌｅｕ−Ｇ／３ｙ−Ｇ１３ｎ　ＣＸＪ　−Ｌｅｕ−１１
，４ＣＸ２１−Ａ１３ａ−Ａｒｇ（、￥“）　−Ｌｙ　
ｓ　（Ｘ’）−Ｌ　ｅ　ｖ−Ｌ　ｅ　ｕ−１１２４（Ｘ
　”！たはＸ”）　−Ｒ２ａ　＜Ｘ３１−１１３　ｅ　
　Ｉｂ７　　Ｒｕ　（、￥”！たはＡ５）　−Ａｒ　ｇ
　（、￥’）　−ＧＩ４ｎＣＸＪ−Ｇ１３ｎ（、￥Ｊ−
Ｃ４ｕ−Ｇｔ３ｕ（Ａ３）−Ｒｕ（Ａ４またはＸ”）　
−Ａｓ　ｎ　（、￥５１−Ｇｅ　ｎ　（ＸＪ−Ｇｌｈｂ
（Ａ３）　　Ｒｓ８＜Ｘ″筐たはＸ”　）−ノンｓｏ　
（、￥’）　−Ｒ，ｕ。

（Ｘ”）　　Ａｒｇ（Ｘ”）　　Ｒ４２−Ｒ４３（、￥
”ＥだはＸｌ１）−／１’４４　（Ａ８）　　、￥” （式中ＸＸＸ１１Ｘ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ｘｌｌ、Ａ
７およびＡ８は各々水素原子または保護基であり、Ａ９
は保護基または樹脂支持体への定着結合もしくはデス−
Ｘ９であり、デス−Ｘ９である場合にＣ−末端の残基は
カルボキシルＩＢ分Ｙｉもつ） （ｂｌ　　式（ＩＪ）のペプチドから保護基１だは定着
結合を分離し；そして （ｃｌ　　所望により、生成したペプチドをその無毒性
塩に転化する： ことから成っている。

ペプチドの合成で使用する特電の側鎖保護基を選択する
場合、次の規則に従う、（α１保護基はその保護特性を
保有しなければならず、またカップリング条件下で分離
されてはならない；（ｂ１保護基は試薬に対して安定で
あるべきであり、またＸａｎを除いて、合成の各段階で
α−アミン保護基を除去するために選択された反応条件
下に安定であるべきである：そして（ｃｌ側鎖保護基は
、所望のアミノ酸配列を営む合成の完了時点で、ペプチ
ド鎖を変化させない反応条件下に除去されなければなら
ない。

ペプチドが組み換えＤＮＡ法を使用して製造されない場
合に、それらは好ましくはＭｅｒｒｉｆｉｅＬｄによる
Ｊ　−Ａｙｎ−Ｃｈｅｍ、Ｓａｃ　、　、　８５．２１
４９ページ（１９６３年ンに記載されたような固相合成
法を使用して製造されるが、当該技術分野において知ら
れた他の同様な化学合成法もまた先に述べたように使用
できる。固相合成法は保護されたα−アミノ酸を適当な
樹脂にカップリングすることによジペプチドのＣ−末端
から開始される。このような出発物質はα−アミノ−保
１急アミノｒＶ２’Ｅクロロメチル化樹脂またはヒドロ
キシメチル樹脂にエステル結合で結合させるか、あるい
はＢＨ’Ａ樹脂祉たはＭＢＨＡ４′ＩＪｉ脂にアミド結
合で結合させることにより製造することができる。メチ
ル、エチルまたはプロピルアミド勿生成されるポリ被ブ
チドに組み入れる場合にはクロロメチル化樹脂またはヒ
ドロキシメチル樹脂が使用され、そして開裂は適当なア
ミン、例えばエチルアミン、を使用して都合よく行われ
る。

例えば、４〇−残基ペプチド全一・＋＋名造する場合に
、ＢＯＣで保−されたＡｌａはＡ４ｏｎａｈａｎ　　お
よびに１ｌｏｎによるＢｉｏｐｏｌｙｍｅｒ、　１２　
、２５１８〜２５１９イージ（１９７８年）に記ｆ１１
’、された方法に従ってクロロメチル化樹脂にカップリ
ングされる。そのＢＯＣ−Ａｌａの樹脂支持体へのカッ
プリング後、α−アミノ保護基は塩化メチレン中のトリ
フルオロ酢酸（１’ｌ−’Ａ　）、ＴＦＡ単独またばジ
オキサン中の１１ＣＩ３を使用して除去される。この保
護基離脱反応は約０℃ないし室温で実施される。

特定のα−アミノ保護基を除去１−るための他の標準的
な開裂試薬および条件は５ｃｈｒｏｄｅｒおよびＬｕｂ
ｋｅによる’ｌｈｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ８″、１．７２〜
７５−！！−ジ、アカデミツクブレス（１９６５年）に
記載されたようなものが使用される。

Ｐｈｅのα−アミノ保護基の除去後、残っているα−ア
ミノ−および側鎖−保護アミンｖを所望の順序で一般ご
とにカンプリングさせて先に定義した中間体化合物を得
るか、あるいは谷アミノｒｆｌ　ｋ合成中別々に加える
代りに、いくつかのアミノ酸を同相反応器に添加する前
に互いにカップリングさせてもよい。適当なカンプリン
グ試薬の選択＆ま当該技術分野の技術の馳凹円である。

Ｎ　、　Ｎ’−ジノクロへキシルカルボジイミド＜ＤＣ
ＣＩ）はカップリング試薬として特に適している。

〈ブチドの同相合成法で使用ツーる活性化試薬はぜブチ
ド技術分野においてよく知られている。適当な活性化試
薬の例はＮ、＃’−ジイソプロピルカルボジイミドやＮ
−エチル−Ｎ’−（’８−ジメチルアミノプロピル）カ
ルボジイミドのようなカルポジイミド類である。他の活
性化試薬およびぺ゛ブチドカツブリングにおけるそれら
の使用は５ｃｈｒｏ−ｄｃｒおよびＬｕｂｋｅによる回
書第■章ならびにＫａｐｏｏｒによるＪ、　Ｐｈａｒ、
　Ｓｃｉ、　、　５９．１〜２７ページ（１９７０年）
に記載される。１保護されたアミノ酸１だはアミノ酸配
列は各々約４培もしくはそれ以−ヒの過剰量で固相反応
器中に導入され、そしてそのカップリングはツメチルホ
ルムアミド（ＤＭＦ）　：　ＣＨ２Ｃｌ３２　（１：　
１　）の混合媒体中で、あるいはＤＭＦ壕だはＣＨ２Ｃ
ｌ２単独中で実施される。不完全なカップリングが生ず
る場合には、次のアミノ酸のカップリングに先旦つα−
アミノ昧護基の除去以前にそのカップリング方法を繰り
返し行う。各合成段階でのカップリング反応の成功はＬ
“、ノ（α１ｓｅｒ等によるＡｎａｌ、ｆ３ｉ−ｏｃ）
Ｌｅｍ、＋　　３４．５９５ページ（１９７０年）に記
載されたようなニンヒドリン反応により監視される。カ
ップリング反応は、例えばＲｉ　ｖ　ｉ　ｅ　ｒ等によ
るＢｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、　１７．１９２７−１９３
８ページ（１９７８）に報告されたようなプログラムｌ
吏用して、ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）　　９９０　
自・助合成器で、自動的に行うことができる。

所望のアミノ酸配列が光子した後、中間体ペプチドはそ
のペプチドを樹脂から開裂させるはかりでなく残ってい
る全ての側鎖保護基Ｘ、Ｘ２．Ｘ”。

Ｘ’、Ｘｏ５．Ｘ６．Ｘ７およびＸ８、定着結ばＸｏな
らびにα−アミノ作護基Ｘ１を開裂させて遊離酸形のペ
プチドを与える試薬（例えば、液状弗化水素）で処理す
ることにより樹脂支持体から分離される。

Ｍｅｔがその配列に存在する場合、ＢＯＣ保護基はＳ−
アルキル化の可能性を除外するためにＨＦでペプチドを
樹脂から開裂させる前にトリフルオロ酢酸（ＴＥＡ）／
エタンジチオールを用いて最初に除去することが好まし
い。開裂させるために弗化水素を使用する場合、アニソ
ールおよびメチルエチルスルフィドが掃去剤として反応
容器中に加えられる。

合成ペプチドを組み換えＤＮＡ法で製造するための１つ
の試みとして、Ｍｅｔ残基はＮ−末端の追加のアミノ酸
残基として含有されるのが好ましく、しかもＡ４ｅｔは
ペプチドのその他のどこにも存在しない方がよい。寸だ
、ペプチドに１吏用するアミノ酸残基の全ては天然に存
在するＬ−異性体のアミノ酸まだはＧｅ７１でなければ
ならない。１つの結果として、次式Ｃ示される好適なペ
プチド中間体化ａ物が製造される。

１ｌ−１ｖｌ　ｅ　ｔ　−Ｒ＋−Ａｌａ　−Ａ　ｓ　ｐ
−Ａｌ３　ａ−１１１ｅ　−Ｐｈｅ−７゛ノＬｒ−１ビ
ｓ−８ｅ　　ｒ−Ｔｒ　ｙ−Ａｒ　ｇ−Ｒ，２−Ｒ＋３
−Ｌｅ　ｕ−Ｇ（３ｙ−Ｇ（ｌ　ｎ−Ｌｅ　ｕ−１１，
Ｂ−Ａｌｌ　ａ−Ａｒ　ｇ−Ｌｙｓ　−Ｌｅｕ　Ｌｅｕ
　ｆｌｕ　Ｒｎ　ｌ１３ｅ　　１ｌｑ７１ビ、Ｂ−Ａｒ
ｇ−Ｇ１３　ｎ−Ｇ１１ｎ−Ｇ（３ｙ−Ｇ１３ｖ、−Ｒ
３，−Ａｓ　ｎ−Ｇ（Ｉｎ　−Ｇｌｌｕ−１１３６−Ｒ
３ｏ−１ｂ。ＡｒｇＲ＋２ｉｌ１３ｆ１４４Ｙ式中、Ａ
’ｌはｉ’ｙｒ、　Ｌｅｕは１ｉｉｓ：ＲｓはＳｅｒま
たばＡｓｎ：Ｒ＋２はＡｒｇまたはＬｙｓ：ＲＨ３はＨ
３ｅ　またはＶａｌ３　：　Ｉビ＋ｓＴ／ＴＶたはＳｅ
ｒ：Ｒ２＜はＨｉｓまたハＧ１３　？ｂ　：　Ｒ２ｓ　
ハＧ（３ｉｂ　”！たはＡｓｐ：Ｒ２７はＡ１１ａ、Ｎ
ｌａ、、ｌ１ｌｅＸＬｅｕｉたはＶａｌ：Ｒｔｓは、４
８？＋、　”ＪたはＳｅｒ：Ｒ３４はＡｒｇｌたはＳ　
ｅ　ｒ　：　Ｒ３ｓはＧ１ｎ１たはＡｒ（１：Ｒ２Ｏは
Ａ　ｒ　ｇまだはＧ／３ｐ：Ｒ４０はＳｅｒ　ｉたはＡ
ｅａ：Ｒ４□はＰｈｅｌたばＡｌ３ａ：Ｒ４３はＡｓｎ
まだはＡｒｇ：Ｒ４４は天然アミノ酸またはテスー１ら
１そしてＹはＣ−末端アミノ酸残基のカルボキシル部分
を表わし、−ＣＯＯＩｉ−または−ＣＯＮＨ２である。

このペプチドが遺伝子的に変性された微生物により発現
されて既知方法を使用して回収および精製されると、そ
の中間体は臭化ノアンで処理されてＮ−末端のＭｅｔ残
基を開裂し、生物学的に活性なペプチドを生成する。上
で説明した式はペプチドが４３−位まだは４４〜位壕で
延びていることを示しているが、前にも述べたように、
実質的な生物学的活性は２７〜２９残基程度に少ない残
基をもつペプチドにより与えられる。そして、このよう
な短い断片は一般に多くの目的に対して同等であり、か
つ組み換えＤＮＡ法による製造が予定される本発明によ
り提供される好ましい中間体の範囲内に含まれると考え
られる。

次の実施例は固相法によりｈｐＧＲＦ類似体を合成する
だめの好ましい方法を説明する。対応するより短いペプ
チド断片の合成は単にＣ−末端から始する必要な数のア
ミノ酸を除外することにより同じ方法で行うことができ
ることは当然認識されるだろう。

実施例■ 式。

ＩＩ−Ｔｙ　ｒ−Ａ１３　ａ−Ａｓ　ｐ−Ａｌ）ａ−１
１ｅ−Ｐｈ　ｅ　−Ｔｈ　ｒ−Ａｓ　ｎ−８ｅ　ｒ−７
’ｙ　ｒ−Ａｒ　ｇ−Ｌｙ　５−Ｖａ／ｌ　−Ｌｅｖ、
−Ｇ／１ｙ−Ｇ／３ｎ＝Ｌｅｕ−８ｅｒ−ＡＩ３ａ−Ａ
ｒｇ　−Ｌｙｓ−Ｌｒｅｕ、−Ｌｅｒｂ−Ｇｌｎ−Ａｓ
ｐ−１１，ｅ−１１３ｅ　−８ｅ　ｒ−Ａｒ　ｇ−Ｇ１
３　ｎ−Ｇｌｎ−Ｇｅ１　ｙ−Ｇ１３　ｕ−８ｅ　ｒ　
−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇ１３ｗ−Ａｒｇ−ＧＩＮｔ　Ａｅ
ａ−Ｎｌｉ２で示される〔ｌ１３ｅ２７〕−ｈｐＧＲＦ
　（１４０）　　ＮＨ２ば、樹脂】２あたり約０．１〜
０−５ミ’Ｊモルの置換範囲をもつＢａｃｈｅｍ社から
入手可能なＡｌ　Ｂｎ　Ａ　＞ｘ酸塩樹脂上で、ベック
マン９９０ペプチド合成器を使用して段階法により合成
した。ＢＯＣ−Ａｅａの樹脂へのカップリングは合成の
間中使用される下記の表Ａおよび表Ｂにおいて説明した
一般方法により行われ、そしてそれは樹脂１１あた９約
０３５ミリモルのＡｅａの置換をもたらした。使用する
溶媒は、Ｍｅｔ残基の硫黄を酸化するかも知れない酸素
を排除するために、ヘリウムやｇ；そのような不活性カ
スを散布して注意深くガス抜きした。

保護基の離脱および中和後に、ペプチド鎖は樹脂−Ｌに
段階的に増成された。保護基の離脱、中和および各アミ
ノ酸の添加は一般にＶａｌｅ等による米国特許第４２９
２　：３１３号明細書に詳細に説明された方法に従って
行った。

保護基の離脱は次の表Ａに従って有利に実施された。

表　Ａ 試　　薬　　　　　　　　　　混合時間分）１、６０％
ＴＦＡ／２％エタンジチオール　　１０２、６０％ＴＦ
Ａ／２％エタンジチオール　　１５＆　　ＩＰＡ／１％
エタンジ５−オー／Ｌ＝　　　　　　　０．５４　　Ｃ
Ｈ２（＃２中Ｅｔ選（１０％）０．５５、　ＭｅＯＨＯ
，５ ６、ＣＨｚＣ１１２中Ｅｔ、Ｎ＜ＬＯ％）０．５７　　
ＭｅＯＨ＜２回）０．５ ８ＣＨ２Ｃ！３２（２回）０．５ カツプリングは次の衣Ｂに説明したように実施された。

弐　Ｂ 試　　薬　　　　　　　　　　混合時間（分）９、ＤＣ
ＣＩ　　　　　　　　　　　　　　　−１ａ　ＢＯＣ−
７ミ／酸　　　　　　　　　５Ｏ−９０ＩＬ　ＭｅＯＩ
ｉ（２回）０．５ １Ｚ　　ＣＨ２Ｃｌ３２　（２回）０．５１ａ　　ＣＩ
ｆ２ＣＴｏ中Ａｃ２０　（３Ｍ　）　　　　　　　　１
５−０１４、　　Ｃｌｌ２Ｃ／ｌ！２　　　　　　　　
　　　　　０．５１１ｈ　ＭｅＯＨＯ，５ １ｆｉ　ＣＨ２Ｃｌ３２　（２回）０．５簡単に君えは
、樹脂１２あたり、および塩化メチ２７９１．０モルＤ
ＣＣＩ　　１当量あたり塩化メチレン中のＢＯＣ−保護
アミノ酸１〜２ミリモルを２時間使用した。Ｂ　ＯＣ−
Ａｒ　ｇ　（’１’Ｏ８）をカップリングする場合、５
０％ＤＭＦおよび塩化メチレンの混合物を使用した。Ｂ
ｚ君エーテルばＳｅｒおよび１’ｈｒのためのヒドロキ
シル側鎖保護基として使用シタ。７）−＝）ロフェニル
エステルＣ０Ｎｐ）はＡｓｎ　４たけＧｌｎのカルボキ
シル端を活性化−するのに使用し、例えばＢＯＣ−Ａｓ
ｎ＜０Ｎｐ）はＤＭＦと塩化メチレンの５０％混合物中
でＨＯＢｔ　ｌ当量を使用して一晩カツブリングさせ、
この場合にＤＣＣＩは使用しなかった。ＡｓｎまたはＧ
１３ｎのアミド基は、活性エステル法の代りにＤＣＣＩ
カップリングを使用する場合、Ｘａｎで保護した。２−
クロロ−ベンジルオキシカルボニル基（２Ｇ＃−Ｚ）は
Ｌｙｓ側鎖のだめの保護基として使用した。

ｌ″ｏ８ばＡｒｇのグアニジ７基を保護するのに使用し
、Ｇ１３ｔｂまだはＡｓｐのカルボキシル基はＢｚｅエ
ステル（ＯＥｚｌｌＪとして保護した。Ｔｙｒのフェノ
ール性ヒドロキシル基は２，６−ジクロロベンジル基（
ＤＣＢＩで保護した。合成の終りに、次の組成のものが
得られた。

ＸヒＴｙｒ　（、￥２）−Ａｌａ−Ａｓｐ　（Ｘ３）−
Ａｌｌａ−ｕｅ　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（、￥’）−Ａ８ｎ
（ＸＪ−８ｅ’ｒ（Ｘ″）−’ｌ’ｙｒ（７勺−Ａｒ　
ａ　（、Ｙ’　）　−Ｌｙ　ｓ　（、￥７）　−Ｖａ　
ｌ；−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌｈｔ−Ｇｌｌ　ｎ　（Ｘ’）　−
Ｌｅ　ｕ　−８ｅ　ｒ　（１”）　−Ａｌ；　ａ＝Ａｒ
　ｇ（Ｘ６Ｊ−Ｌｙｓ（７勺−Ｌｅｖ、−Ｌｅｕ−Ｇｌ
ｌｎ　　ＣＸＪ　　　Ａｓｐ　　（、￥３ン−Ｉｇｅ−
１１３ｅ−８ｅｒ（、Ｙ’）−Ａｒｇ（、Ｙ’）−Ｇｌ
ｌｎ（ＸＪ−ＧＩＪｎ（、￥Ｊ−Ｇｅｙ−Ｇｔ３ｕ（、
￥”ｌ−８ｅｒ（Ｘ’）　−Ａｓｎ（、ＹＪ−Ｇｌｌｎ
（、￥Ｊ−Ｇｅｕ（、￥”’）　−Ａｒ（７＜Ｘ”）−
Ｇ１３１１−Ａｌａ−Ｘ８ 式中、ＸｌはＢＯＣＸＸ２はＩ）ＣＢＸＸ３はベン〉ル
エステル、Ｘ’はＢｚ１３ＸＸＳはＸａｎｚ　Ｘ６は’
ｌ’ｏｓ、　Ｘ７は２Ｃ／３−ＺそしてＸ８は−ＮＨ−
樹脂支持体である。Ｘａｎはα−アミノ保護基を離脱す
るのに使用される７’　Ｆ’　Ａ処理で部分的にもしく
は全部除去された。

最後のＴｙｒ残基が樹脂にカップリングした後、Ｂ　Ｏ
ＣハＣ１１２Ｃ／３２　中６０％ｉ’ＦＡ””Ｃ除去し
た。残存する保護ペプチド−樹脂を開裂させかつ保護基
の離脱を行わせるために、それをペプチド−園脂１１あ
たリア二ソール１．５　ｍＡ、メチルエチルスルフィド
０．５ｍ７！および弗化水素（ＨＦ）１５ｒｎｌＶを用
いて、−２０℃で３０分間および０℃で３０分間処理し
た。高真空下ＶＣＨＦを除いた後、樹脂−ペプチド残留
物を乾燥ジエチルエーテルおよびクロロホルムで交互に
洗浄し、次いでそのペプチドをカス抜きした２Ｎ酢酸水
溶液で抽出して濾過により１月脂から分離した。

樹脂から開裂させかつ保護基を離脱させたペプチドはそ
の後０〜５％酢酸に溶解して精製（Ｓｅｐｈａｄｅｘ　
Ｇ　−５０微細ゲルによる濾過を含む）にかけた。

そのペプチドはさらにＲｉτｉｅｒ等によるＰｅｐｔｉ
ｄｅｓ　：　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄＢｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌＦｕｎｃｔｉｏｎ、　１２５〜’１２８ページ
（１９７９年）およびＡ／ａｒ　ｋ　ｉ等によるＪ、　
Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　５ｏｃ−、１０３，３１７８ペー
ジ（１９８１年）に記載されたような調製用捷たは半調
装用高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で精製し
た。要約すると、Ｗａ　ｔ　ｅ　−ｒｓ　Ａｓ５ｏｃｉ
ａｔｅｓ　ｐｒｅｐ　ＬＣ−５００に合うカートリッジ
にＶｙｄａｃからの１５２０に＋ｓンリカ（３００Ａ）
を充填した。Ｔ　Ｅ　Ａ　Ｐ中のＣｌｌ３ＣＨの勾配は
ｌビ１ｖｉｅｒ、　Ｊ、によるＪ、　Ｌｉｑ、　Ｃｈｒ
ｏｍａｔｏ−ｇｒａｐｈｙ　１．３４３−３６７ページ
（１９７８年）に記載されたような低圧カエルテックス
グレジェントメーカー（Ｅｌｄｅｚ　ｇｒａｄｉｅｎｔ
　璽１ｃｅｒ）　　Ｋよりつくった。クロマトグラフィ
ーの分画は注意深＜ＨＰＬＣで監視して、実質的な純度
を示す分画のみを集めた。精製された分画（純１駆は別
に検青された）の脱塩は０．１％ＴＦＡ中ＣＩｉ、ＣＮ
の勾配ヲ使用して行った。その後、その中心部分（ｃｅ
ｎｔ−（３ｒｃｕｔ　）ｆ凍結乾燥して所望のペプチド
ｅ得、このペプチドの純度は９８％以上であった。

この合成はクロロメチル化樹脂を用いて繰り返し行い、
Ｒｉｖｉｅｒ、　Ｊ、によるＪ　−Ａｍｅｒ　、　Ｃｈ
ｅｍ。

Ｓｏｃ、、９６．２９８６〜２９９２ページ（１９７４
年）に一般的に記載された方法を使用して遊ＦＩＩＩ　
ｔｌ形の同じペプチド８製造した。

実施例１■ 式： ％式％ （１ −４０）−ＮＨ２の合成は実施例１に記載した方法でｌ
ｖｆ　Ｂ　Ｉｉ　Ａ　＜Ｅ脂上でベックマン９９０ペプ
チド合成器を使用して段階法により行われた。このペプ
チドはＴＬＣおよびＨＰＬＣを使用して実質的に純粋で
あることが判明した。

実施例ＩＩＩ 式： ％式％ ｈｐＧＲＦ（１３２）ＮＨ２は実施例Ｉに記載した万Ｌ
−”ＣＭＢＨＡｍ脂上でペックマン９９０ペプチド合成
器を使用して段階法により合成された。このペプチドは
ＴＬＣおよびＨＰＬＣ）ｉ使用して実質的に純粋である
ことが判明した。旋光性は光電偏光計で測定して〔α］
２２＝＝−６１．４°±１（Ｃ−Ｄ １．１％自′１酸、未補正）であった。

この合成はクロロメチル化樹脂を使用して繰り返し行い
、先に一般的に示したようにして遊ｌｌ１ｌ酸形の同じ
ペプチドを製造した。

実施例１〜１ 式゛ １ｌ−Ｔｙ　ｒ−Ａｅ　ａ−Ａ、ｓ　ｐ−Ａｌ　ａ−１
ｅ　ｅ−Ｐｈ　ｅ　−Ｔｈｒ−Ａｓ　ｎ−８ｅ　ｒ−Ｔ
ｙ　ｒ−Ａｒ　ｇ−Ｌｙ　ｓ　−Ｖａ　ｅ−Ｌｅ　ｗ−
Ｇｅｙ−Ｇ（３ｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−１３，ｅａ−Ａ７
！７−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇ（３ｎ−Ａｓｐ−１
（ｌｅ　−Ｎｌ　ｅ−８ｅｒ−Ａ　ｒ　ｇ−Ｇ　１４　
ｔＬ−Ｇ　１３　ｎ−Ｇ　Ｉｊ　ｙ−Ｎｆ１２で示され
る短縮されたｈｐＧＲＦ類似体の〔Ｎ１ｔｅ２７」−ｈ
ｐＧＲＦ　（１３２）　　Ｎ１１２は実施例１に記載し
た方法でＭ　Ｂ　ＩＩ　Ａ　樹脂上でベックマン９９０
ペプチド合成器を使用して段階法により合成された。こ
の類似体はＴＬＣおよびＨＩ）　Ｌ　Ｃｆｒ使用して実
質的に純粋であることが判明した。旋光性は光電偏光計
で測定して〔Ｇ３”＝−５７，８°±１（Ｃ＝１、１％
酢酸、未補正）であった。同じ一般合成法が〔Ｎ１１ｅ
　２７］　　ｈｐＧＲＦ　（１４４）　　Ｎ１１２を倣
するのに開用された。

実施例■ 式： ％式％ は実施例■に記載した方法でＭ　Ｂ　ＩＩ　Ａ　４ｍｍ
上上ヘソクマン９９０ペプチド合成器を使用して段階法
で合成された。このペプチドはｉ’　Ｌ　ＣおよびＨＰ
　Ｌ　Ｃ７，使用して実質的に純粋であることが判明し
た。

実施例ＶＩ 式： ％式％ 実施例■の最後に示した方法でクロロメチル化樹脂上で
ベックマン９９０ペプチド合成器を使用して段階法によ
り合成された。このペプチドは７“ＬＣおよびＩ−Ｉ　
Ｐ　Ｌ　Ｃを使用して実質的に純粋であることが判明し
た。旋光性は光電偏光計で側ボして〔α〕、＝−６１．
７°士１（（、’＝１．１％酢酸、未補正）であった。

この合成はＭ　Ｂ　ＨＡ　樹脂を使用して繰り返し行い
、同じペプチドのアミド化体・￥製造した。

実施例Ｖｌ１ 式： ％式％ ） Ｎ１１２は実施例Ｉに記載した方法でＭＢＩｉＡ樹脂上
でベックマン９９０ペプチド合成器を使用して段階法に
より合成された。このペプチドはＴＬＣおよびＨＰＬＣ
を使用して実質的に純粋であることが一刊明した。旋ｙ
ｔ性は光電偏光計で測定して［α］　　−−５４，５°
土１（ｃ−ｔ、ｉ％酢酸、未り 補、正）であった。

実施例１’ｌｌ１ 式。

Ｊｉ−Ｊｉｉ　ｓ−，４／ｌ！　ａ　−Ａ　ｓ　ｐ−Ａ
ｅ　ａ−１１１ｅ−Ｐｈ　ｅ　−Ｔｈ　ｒ−Ａ　、’Ｊ
　ｎ−８ｅ　ｒ−１’ｙ　ｒ−Ａｒ　ｇ−Ｌｙ　、９−
Ｖａ　ｅ　−Ｌｅ　ｕ−Ｇｅｌ　ｙ−Ｇ１３ｎ−Ｌｅ　
ｕ−Ｓ　ｅ　ｒ−Ａｔ３ａ−Ａｒ　ｇ　−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ１３ｎ−Ａｓｐ−１１４ｅ−Ｎｅ　ｔ　
−８ｅ　ｒ−Ａｒ　ｇ−ＧＩ３　ｎ−Ｇｔ３　ｎ−Ｇ１
３　ｙ　−Ｎｌｉ２で示されるＣＨｉ　ｓ’　］　−ｈ
　ｐＧＲＦ　（１−３２）　−Ｎｌｉ２は実施例■に記
載した方法でｔＷ　Ｂ　Ｉｉ　Ａ　樹脂上でベックマン
９９０ペプチドば取器を使用して段階法により合成され
た。このペプチドは７’　Ｌ　ＣおよびＨＰＬＣを使用
して実質的に純粋であることが判明した。旋光性は光電
偏光計で測定して〔α〕２２−−５８，７°土ｚｃ、’
＝ｉ、１％酢酸、未補正）であった。

この合成は最後のアミノ酸残基としてＰｈｅを使用して
繰り返し行い、しＰｈｅ１〕−ｈｐＧａＦ（１−３２）
−Ｎｌ−１２を製造した。旋光性は光電偏光Ｎ１で測定
して［α３．＝−５８，２°±１（、’＝ｌＸ　１％酢
酸、未補正）であった。

実施例■ 式； ％式％ は実施例Ｉに記載した方法でＭＢＨＡ樹脂上でベックマ
ン９９０ペプチド陰成器を使用して段階法により合成さ
れた。このペプチドは７’　Ｌ　Ｃおよび１１　Ｐ　Ｌ
　Ｃ’ｘ使用して実質的に純粋であることが判明した。

旋光性は光電偏光計で測定して（α〕ゎ＝−５９，５°
±１（Ｃ−１，１％酢酸、未補正）であった。

実施例Ｘ 式： ％式％ ） は実施例Ｉの最後に示した方法でクロロメチル化樹脂上
でベックマン９９０ペプチ２ド合成器を使用して段階法
により合成された。このペプチドはＴＬＣおよびＩｆ　
Ｐ　Ｌ　Ｃを使用して実質的に純粋であることが判明し
た。旋光性は光電偏光計で測定して〔α］、−−６２．
４°士１（Ｃ＝１．１％酢酸、未補正）であった。

実施例■ 式： ％式％ （ ＮＨ２は実施例■に記載した方法でベックマン９９０ペ
プチド合成器を使用してｕ　Ｂ　Ｍ　Ａ　向上上で段階
法によＶ合成された。このペプチドはＴＬＣおよびＨＰ
ＬＣを使用して実質的に純粋であることが判明した。旋
光性は光電偏光計で測定され、しα〕ゎ＝−５９，３°
＋１（Ｃ；＝１．１％酢酸、未補正）であった。

実施例Ｘｌ１ 式： ％式％ で示されるγｈＧＩンｐ’　（１−４３１−ＯＨは実施
例Ｖｌに示した方法でベックマン９９０ペプチド合成器
を使用して、樹脂１２あたり約０．１〜０．５６１７モ
ルの置換範囲をもつクロロメチル化樹脂上で段階法によ
り合成された。このペプチドはＴＬＣおよびＨＰＬＣを
使用して実質的に純粋であることが判明した。旋光性は
光電偏光計で測定され、〔α〕２２一−５０，８°±１
（（、’＝１．１％酢酸、未補正）であった。

この合成はＭＢＨ，４向上を使用して繰り返し行われ、
ＡｓｎをそのＭＢＨＡ４例脂に結合させるためにＶａｌ
ｅ等による米国特許第４２９２３１３号明細書に一般的
に記載された初期方法を使用してｒ　ｈＧＲＦ　（１−
４３）　　ＮＨｔを製造した。このペプチドはＴＬＣお
よびＨＰＬＣを使用して実質的に純粋であることが判明
した。旋光性は光電偏ブ１＝１テ選す定され、［”　）
　Ｄ　＝５　、１−７０士−１（ｃ−Ｉ　Ｎ１％１％酢
酸補正）であった。

実施例刈１ 式： Ｉｆ−Ｉｆ　ｉ　５−Ａｌａ、−Ａ　ｓ　ｐ−Ａｌａ−
１１ｅ−Ｐｈ　ｅ　−Ｔｈｒ−８ｅ　ｒ−８ｅ　ｒ−７
’、７／　ｒ−Ａｒ　ｇ−Ａｒ　ｇ−１１Ｊｅ　−Ｌｅ
ｌＬ−Ｇｌｌ　ｙ−Ｇｌｌ　ｎ−Ｌ　ｅ　ｕ−１’ｙ　
ｒ−Ａｌａ−Ａｒ　ｇ−Ｌｌｌ　ｓ　−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ
　ｕ−Ｈｉ　ｓ　−ＧＩＪ　ｕ−Ｊ　ｌｅ　−Ｍ　ｅ　
ｔ−Ａｓ　ｎ−Ａｒ　ｇ−Ｇｌｌ　ｎ−Ｇｌｎ　−（＃
　ｕ−Ｇｌｕ−Ａｒ　ｇ−Ａｓ　ｎ　−Ｇｌｌ　ｎ−Ｇ
ｌｕ−Ｇｌｌ　ｎ−Ａｒ　ｇ−８ｅ　ｒ　−Ｎｌｉ２で
示されるｒ　ｈＧＲＦ　（１４０１Ｎ１１２ば、寿施例
■に記載したようにしてベックマン９９０ペプチド合成
器を使用してＭ　Ｂ　ｊｉ’　Ａ樹脂上で段階法により
合成された。このペプチドは７′ＬＣおよびｌｉ　Ｐ　
Ｌ　Ｃを使用して実質的に純粋であることが判明した。

旋光性は元′祇偏元計で測定され、〔α］−−５６．５
゜±１（Ｃ−１，１％酢酸、未補正）であった。

実施例ＸＩｖ 式： ％式％ で示されるｈｐＧｌｔＦ類似体、すなわち〔ｈｌｅｔ’
。

Ｌｅ　ｕ”］−ｒｈＧｌｌＦ’　（１−４３１−０１１
は実施例Ｘｌｌに記載した方法で・＼ツクマン９９０ペ
プチド合成器を使用してクロロメチル化側脂上で段階法
により合成さ扛た。このペプチドばＴＬＣおよびｌｉ　
Ｐ　Ｌ　Ｃを使用して実質的に純粋であることが判明し
た。

実施例Ｗ 式 ％式％ で示されるｈｐＧＲＦ類似体、すなわち〔Ｎ（３ｅ２７
］−ｒ　ｈ　ＧＲＦ　（１−３２）−ＮＨ２は実施例Ｉ
のようにしてベックマン９９０ペプチド合成器を使用し
てＭＢＨＡ樹脂上で段階法により合成された。この類似
体はＴＬＣおよびＨＰＬＣを使用して実質的に純粋であ
ることが判明した。

実施例ＸＶＩ 式： ％式％ で示されるｈｐＧＲＦ類似体断片、すなわち〔Ｄ−Ｔｙ
　ｒ”〕−ｒ　ｈ、Ｇ１１Ｆ　（１−２９）−Ｎｌｉ２
は実施例■のようにしてベックマン９９０ペプチド片成
器ヲ使用してＭＢＨＡ樹脂上で段階法により合成された
。

このペプチドは７”　Ｌ　ＣおよびＩＩ　Ｐ　Ｌ　Ｃを
使用して実質的に純粋であることが判明した。

この合成はＮ−末端の１ｉｉｓの代りにＤ−１’ｙｒを
置換させて繰り返し行い、〔１）−Ｔｙ　ｒ’　、　”
］　−ｒノｂＧＲ１”　（１２９１Ｎ１ｆ２を製造した
。

実施例ＸＶＩＩ 式： ％式％ で示されるり、ｐＧＲＦ類似体断片、すなわちｒ　ｈＧ
ＲＦ　（１−２９）　　Ｎ＆は実施例ＩＩＩのようにし
てベックマン９９０ペプチド合成器を使用してＭ　Ｂ　
ＩＩ　Ａ樹脂上で段階法により合成された。このペプチ
ドはＴＬＣおよびＨＰＬｃを使用して実質的に純粋であ
ることが判明した。

実施例Ｘ・■ 式： ％式％ は実施例Ｉのようにしてベックマン９９０ペプチド合取
器を使用してＭ　Ｂ　ＨＡ樹脂上で段階法により合成し
た。このペプチドはＴ　Ｌ　ＣおよびＨＰＬＣを使用し
て実質的に純粋でめることが判明した。

旋光性は光電偏光計で測定され、〔α〕”−−５２，６
゜上１（Ｃ−１，１％ｍ酸、未補正）であった。

実施例ＸＩＸ 式： ％式％ で示されるｈ７ｙＧＲＦ類似体、すなわち〔Ｄ−Ｈｉｓ
ｌ。

Ｄ−Ｔｙｒｌｏ、Ｄ−Ａｌａ１５〕−ｒｈＧｌｌＦ　（
１−２９）　−ＮＨ２は実施例■のようにしてベックマ
ン９９０ペプチド合成器を使用してＭＢＨＡ樹脂上で段
階法により合成された。このペプチドはｉ’　Ｌ　Ｃお
よび１−Ｉ　Ｐ　Ｌ　Ｃを使用して実質的に純粋である
ことが判明した。

実施例豆 式： ％式％ で示されるｈｐＧＲＰ’類似体、すなわち〔７“ｙｒ”
〕−ｒｈ、ＧノビＰ’　（１−２９１−ＮＩＪ２　は実
施例■のよう（、こしてベックマン９９０ペプチド合成
器を使用してＭＢＨＡ樹脂上で段階法により合成された
。このペプチドは７”　Ｌ　ＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃｆ使
用して実質的に純粋であることが判明した。

実施例用 式： ％式％ で示されるｒ　ｈ　ＧＲＰ’−ＣＶ　ａ　ｌ”−ＮＨ２
〕は実施例１のようにしてベックマン９９０ペプチド合
成器を使用してＭＢＨＡ樹脂上で段階法により合成され
た。

このペプチドはＴＬＣおよびｌ１ＰＬＣｆ使用して実質
的に純粋であることが判明した。

前述の詳細に列挙した類似体に加えて、次の類似体が上
で説明したものと同じ同相合成法を使用して合成された
： ＣＩ　１ｅ２７〕−ｈｐＧＲＦ’　（１−２９）−ＮＨ
２゜ＣＩ　ｌ！　ｅ２７〕−ｈ　ｐＧＲＦ　（１−２９
）　−０１１。

ＣＤ−１１ｉｓ’　〕−ノＬｐＧＲＦ（１３２］　　　
Ｎ１１２　。

Ｃ−Ｄ−ＡＩＪａ”］−ｈｐＧＲＦ　（１−３２）　　
Ｎｉ１２゜〔Ｄ−Ｔｙｒ’　、　ＮＩＪ　ｅ２７〕−ｈ
ｐＧＲＦ’　（１−３２１−ＮＩＪ２　。

し’Ｄ−Ｔｙｒ’　、Ｎ１ｅ２７］−り、ｐＧＲＦ’＜
　１−３２）　−ＯＨ。

Ｃ１）−Ｐｈｅ’、Ｖａ１３２７〕　　ｈｐＧＲＦ（１
４０ン−０１１゜〔１ｉｉｓ’、Ｐｈｅ１０〕−ｈｐＧ
ＲＦ　（１−３２）−ＮＩＪ２゜（−Ｄ−１’ｙｒ’　
　、Ｎｌ　ｅ２７］−ｈｐＧノｔＦ’＜１−４０１　−
ＯＨ。

Ｃ１）−Ｔｙｒ’　、Ｎ１１　ｅ２７〕−ｈｐＧｉビＦ
（１−４Ｕ　Ｉ　−Ａｒ　ｇ　−Ａｌｌ　ａ−Ａｒ　ｇ
−Ｌｅ　ｕ−ＯＨ〔Ｐｈｅ’＋Ｐｈｅ１０．ＪＩＪｅ”
〕−ｈｐＧＲＦ（１−３２１−ＮＩＪ２゜〔Ｄ−１１ｉ
ｓ’＋Ｄ−Ａｌａ”、Ｎ１ｅ２７］−ｈｐＧＲＦ（１−
３２）−ＮＨ２。

ＣＤ−Ｐｈ、ｅ’　、Ｐｈｅｌｏ、　Ｄ−Ｍｅ　ｔ２７
〕−ｈｐＧｌｌＦ’＜１−４０）−０ｆ−１゜ 〔Ｉｌｌ　１１”］−ｈ　ｐＧＲＦ’　（１−４０）　
−Ａｒ　ｇ−Ａｌｌ　ａ−Ａｒｇ−Ｌ　ｅ　ｕ−Ｎｌ１
２゜ 〔Ｉｌｌ　ｅ２７〕−ｈｐＧＲＦ’　（１−４０）−Ａ
ｒｇ−ＡＩＪａ−Ａ　ｒ　ｇ　−Ｌ　ｅ　ｕ−Ｏｆｆ　
＋ＣＤ−Ｈ１ｓ’　、　Ｄ−Ａｌａ”、Ｄ−Ａ１３ａ２
８〕−ｈｐＧＲＦ（１−３２１ＮＨ２。

［Ｐｈｅ’、　　Ｌｅｕ２７＋　　Ｄ−Ａ　１ａ２８〕
−ｈｐＧｌｌＦ　（１−４０）　−０１１゜ Ｕｉ　ｉ　ｓ’　＋　Ｄ−Ｖａ　１２７．　Ｄ−Ａ／　
ａ２８］　−ｈ、　ｐＧＲＦ　（１−３２）　−ＮＨ２
。

ＣＤ−ＴｙｒＩ、　Ｐｈ　ｅｌｏ、　Ｄ−Ｉｌｌ　ｅ２
７〕−ｈｐＧＩＩＦ　（１−３９）−ＮＨ２゜ しＶａｌ１２７〕−ｈｐＧＲＦ＜１−４０）−ＯＨ。

〔Ｖａｌ！２７〕−ｈｐＧＲＦ（１−４０）−Ａｒｇ−
ＡＩＪａ　−Ａｒｇ−Ｌｅｕ、−ＯＨａｎｄ ［Ｄ−Ｐｈｅ’、Ｄ−Ａｌａ”、Ｄ−Ｎｌｅ２７．Ｄ−
Ａｌｌａ、”〕−ｈｐＧＩビＦ　（１３２１−ＮＨ２゜ 上記の実施例で製造した合成ペプチドは、成長ホルモン
の放出を促進するぞ）ｔらの有効性を卵ｊ定するために
１、精製された合成ｈｐＧＲＦ’　（１−４０）−ＯＩ
ｉ＝！たは精製された合成ｈｐＧＲＦ（１−４０）−Ｐ
ｈｅ−Ｇｌｎ−ＮＨ２と試験管内検定で比較された。

これらの合成類似体は全てＧＨの放出をうながす点で実
質的な効力・２有していた。

試験管内検定は標準として合成ｈｐＧｌｌＦを使用して
等モルａ度の檀々の合成類ＩＪ！体との並行比較により
実施した。培養物は４．５日前に敗り出したラットの脳
下垂体細胞を沈むものを使用した。

成長ホルモンの分泌に対して最適であると考えられる培
養物が比較試験用に、Ｖａｌｅ等によるＥｎｄｏｃｒｉ
ｎｏｌｏｇｙ、　９１．５６’２　５７２ページ（１９
７２年）に記載された一般方法で、使用された。試験さ
れるべき物質とのインキュベーションは３〜４時間行わ
れ、その培養培地のアリコートを取り出して、それらの
免疫反応性ＧＨ（ｉｒＧＩＩＩＯ量をよく識別する放射
線免疫検定法で測定するために処理した。

等モル＃度を使用した比較試験の結果を次の第１衣に示
す。

第１表 ＋　　ｈ、ｐＧ）ｌＦ’　（１−４０）　−Ｐｈ　ｅ　
−ＧＩＪ　ｎ−ＮＨ２に関して これらの合成ペプチドの試験管内試験はんＣ５０が２Ｏ
−ｔｏｏピコモルの間で変化し、そして最低有効濃度は
３〜８ピコモルであることを示した。

１ＬｐＧＲＦ　（１４０）　ＮＨ２ＶＣツいてノ最大有
効濃度は１ナノモルであった。

等モル濃度の各種のｈｐＧＲＦ類似体（ｒｈＧＲＦ’を
基準にしたもの）についてこの比較試験の結果を第Ｊ１
表に示す。

第■衣 ペプチド　　　　　　　　　　　比較％ｈ　ｐＧ１ｔ′
Ｆ’　（１−４０１−（Ｍｌ（この試１倹のための標準
）　　　　　　　　　１００％ｒｈＧｌｌＦ（１−４３
１−ＯＨ３００％ｒｈＧ）ＩＦ　（１２９１ＭＨ２１１
００％ＣＴｙｒ’〕−ｒｈＧＲＦ（１−２９１−ＮＨ２
９２０ＸＣＮｌｌｅ２７〕−ｒｈＧＲＦ（１−３２）　
　ＮＨ４Ｉ　３９０％ｒｈＧＲＦ　　ＣＶａｌＪ“−Ｎ
Ｈ２ＩＩ　　　　　　　　　６７０９０これらの合成ペ
プチドの試験管内試験はＥｃ。

が２０−１００ピコモルの間で変化し、かつ最低有効濃
度は３〜８ピコモルであることを示した。

ｒ　ｈＧＲＦ’　（１−４３）　−ＯＨについての最大
有効濃度は１ナノモルであった。

成長ホルモンの分泌に関する試験管内試１倹に加えて、
生体内実験が自由に走行する正常の雄ラットに導入され
たカテーテルを介してその合成ペプチドを注入すること
により行われた。動物は外因性のＧ　ＲＦへの応答に影
響そ及はすことなくＧＩＩの自然分泌を抑制するドパミ
ンヒドロキシラーゼ阻害剤のＦ’ＬＡ−６３で前処理き
れた。圧入直前および注入後５分と２０分に同じカテー
テルを介して部面試料を採取し、血液中のＧＩＩ量を放
射線免疫検定法で測定した。この結果は合成り、ｐＧＲ
Ｆ類似体が脳下垂体ＧＨの分泌の強力な刺激剤であるこ
とを示した。体重１　ｋｇあたり約２０ナノグラムない
し約２５マイクログラムの投与量がイＩ効であるとわか
った。

さらに、他の実施例で合成した他の合成ｈｐＧＲＦ類似
体も実質的な効能を示すことが見い出され、これらの試
験からいくつかの一般的結論が導き出された。

■、Ｃ−末端アミド化は３９アミノ酸残基よりも鎖の長
さが長いＧ　ＲＦペプチドの活性を増加させないらしい
が、鎖の長さが３９アミノ酸残基よりも短いペプチドの
効力を増加させる。例えば、Ｅｌｌｌｅ２７〕ｈｐＧＲ
Ｆ　（１３２）　Ｎ１１２はＣＩＩＪｅ２７〕−ｈｐＧ
ノ？Ｆ（１−３２Ｊ−ＯＨよりも効能があり、〔Ｄ−１
’ｙｒ’　　、Ｎ１３　ｅ　２７〕−ｈｐＧｌビＦ’　
　＜　　１−３　２　　）　−ＮＩＪ２はＣＤ−Ｔｙｒ
’　、Ｎ１１ｅ２７〕−ｈｐＧＲＦ　（１−３２）　−
ＯＨよりも効能があシ、葦た［　Ｉ　１ｅ２７］−ｈｐ
Ｇ１ビＦ゛（１−２９１−Ｎ１−１２はＣＩ　１．　ｅ
２７］−ｈ　ｐＧＲＦ　（１−２９）−ＯＨよりも効能
がある。しかしながら〔ＩＩＪｅ”〕−ｈｐＧＲＦ　（
１４４）　ＮＨ２は〔ｌ１ｅ２７〕−ｈｐＧｌｌＦ　（
１−４４）　　ＯＨと効能が同じである。

２、一連のアミド化ペプチドにおいて、３２アεノ酸残
基の類似体は対応するもっと鎖の長い類似体と実質的に
同じ効能であり、例えば、ＬＮＩ　ｅ”’Ｊ　　　ｈｐ
ＧＲＦ　（１３２〕　ＭＨ２はしＮ１ｅ２７〕ｈｐＧＲ
Ｆ　（１、４４）　　ＮＨ２とだいたい同じ効能をもつ
。

ａ　遊離のカルボキンル末端をもつ一連のペプチドにお
いて、３９以上のアミノ酸残基をもつ対応する類似体は
それぞれ効能が同じである。例えば、Ｃ−ＶａｌＪ２７
］−ｈｐＧＩｔ′Ｆ（１−４０）　−ＯＨおよび〔Ｖｃ
Ｌ１２７〕−ノｂｐＧノビｐ’　（１−４４）−ＯＨは
効能が等しく、〔１）−Ｔｙｒ’　、Ｎｌｅ”　〕−ｈ
ｐＧ　ノ＜ｐ’（１−４０１−０１１およびＣＤ−Ｔｙ
　ｒ’　、　ＮＩＪ　ｅ２７］　−Ａ　ｐＧｌｌＦ’　
（１−４４）　−０１１も同じである。

合成ｈｐＧＲＦ類似体は医者がＧＨの産生を高めること
を望む場合にそのような用途に対して有用であるだろう
。ｈｐＧＲＦ’Ｊ４似体によるＧＨ分泌の刺ａは内因性
Ｇ　１１　ｆｉ’の産生低下によりひきおこされる完全
なもしくは相対的ＧＨ不足の患者に対して興味がある。

その上に、おそら＜Ｇｆｉ分泌の増加およびそれに伴う
成長増加は止宿のＧＩＩ量を有するヒトまたは動物にも
あられれるだろう。さらに、ｈｐＧＩＩＦの投与は体内
の脂肪分を変化させかつ他のＧＨ依存性の代謝、免疫お
よび発生作用を改変するだろう。例えば、ｈｐＧｌｌＦ
Ｍ似体はやけど・２綴ったような状況下にあるヒトの同
１ヒ作用を刺激する手段として有用であるかも知れない
。他の例として、ｈ　ｐ　ＧＩＩＦ　Ｍ似体は鶏、七面
鳥、ブタ、ヤギ、牛およびヒツジのような商業動物に成
長を促進させかつ得られる蛋白質対脂肪の比を増加させ
るために投与してもよい。それらは魚や他の冷■旧毎住
動物（例えば、ラミカメやウナギ類）および水陸両生動
物を生産するための養殖に使用してもよい。ヒトへの投
与のために、合成り、ｐＧＩＩＦ類似体は少なくとも約
９３％、好壕しくけ少なくとも９８％、の純度を肩する
べきである。この純度は意図したペプチドが存在する全
部の類似したペプチドおよびペプチド断片の所定重量％
を購成することを意味する。

成長を促進させかつ脂肪分を低下きせるために商業動物
や他の動物に合成ｈｐＧｌｌＦ類似体を投与するに際し
て、約５％程度に低い純度、あるいは約（Ｊ、０（Ｊ１
％程度に低い純度さえも許容されるかも知れない。遺伝
子操作法で製造する場合、そのり、ｐＧＲＦ類似体は鰍
初非常に四い純度でありうる・医薬組成４５７Ｉを形成
するために薬学的もしくは獣医学的に許容される担体と
組み合わせた合成ｈｐＧＲＦ類似体またはその無毒性塩
は動物（ヒトを宮むンに静脈内に、皮下に、筋肉内に、
鼻腔内にまたは経口的に投与される。投与はＧＨの放出
を刺激するためにそのような治療部１疑を必要とする患
者に対して医者が行う。必要とされる投与量は処置され
るべき特定の症状、その症状の度合および希望する処置
期間により変化するだろう。

このようなペプチドはしばしば酸付加塩や金属錯体（例
えば、亜鉛、鉄またはこの用途の塩として考えられる同
様の金属ンのような薬学的にもしくは獣医学的に許容さ
れる無毒性塩の形で投与される。そのような酸付加塩の
例は塩ば塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、燐酸塩、マレイン
酸堰、酊ＩＶ塩、クエン酸塩、安息香酸基、コ・・りは
塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩および類
似の塩でめる。活性成分が錠剤の形体で経口的に投与さ
れる場合、その錠剤はトラガカント、とうもろこし澱粉
またはゼラチンのような結は剤；アルギン酸のような崩
壊剤；およびステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤
を含・スうる。液体での投与が望−止れる場合には甘味
剤および／またはＪ虱味剤を使用してもよく、萱だ等張
塩水、燐酸緩衝液または類似のものでの静脈内投与が行
われつる。

ペプチドは医者の指導の下でヒトに投与されるべきであ
り、そして医薬組成物は通常薬学的に許容される慣用担
体と共にペプチドを含むだろう。

非経口投与量は通常患者の体重１　ｋｇあたり約２０ナ
ノグラムないし約２５マイクログラムであるだろう。

本発明はその好適な実施態様（目下発明者が最もよい方
法であると認めるもの）に関して記載したが、当該分野
で通常の技術を有する者に明らかであるような種々の変
化ならびに改変が添付の特許請求の範囲で説明した本発
明の範囲から逸脱することなしになされるだろう。例え
ば、ペプチド鎖の改変（％にペプチドのカルボキシル末
端から始する削除ンはペプチドの効力の全部分または実
質的部分を保有する断片をつくるために今までに知られ
た実験上の慣行に従って行うことができ、このようなペ
プチドは本発明の範囲内であると考えられる。さらに、
アミノ酸残基の付加はいずれか一方の末端で、もしくは
両方の末端で行うことができ、そして／またペプチド化
学の全分野でよく知られるように、天然に存在するアミ
ノ酸残基の代りに同等のアε）酸残基で１４換して、本
発明の範囲から逸脱することなしに天然ポリペプチドの
効力の少なくとも実質的１ｆｌｓ分を有する類似体を製
造することが可能である。

特許出願人　　ザ・サルク・インステチューレフオー・
バイオロジカル・スタティーズ＋””’−”ｊ 代　　理　　人　　弁理士　　　湯　　浅　恭　　三Ｌ
′、；（外４名ｊ ■４８８７４８

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　次式で示される合成ペプチドまたはその無毒
   性塩。 Ｈ−Ｒ，−Ａｔ３ａ−Ａｓ　ｐ−ＡＩ！ａ−Ｉｌｌ　ｅ
   −Ｐｈｅ−１’ｈｒ−Ｒａ　Ｓ　ｅ　ｒ−ＲＩｏＡｒ　
   ｇ　Ｉｌ＋２ＩＩＩ３−Ｌｅ　ｗ−ＲＩ５−Ｇ１３ｎ−
   Ｌｅ　ｕ−Ｒ，８−Ａｌ　ａ−Ａｒ　ｇ−Ｌｙ　５−Ｌ
   ｅ　ｕ−Ｌｅｒｂ−Ｒｕ　Ｒｕ−１１３ｅ−Ｒ２７−Ｒ
   ｕ　Ａｒｇ−Ｇ１３ｎ−Ｇ１３　ｎ−Ｇｌｙ−Ｇ１３　
   ｕ−Ｒ３＋−Ａｓ　ｎ−Ｇ！３　ｎ−Ｇ１３　ｕ　−Ｒ
   ３ａ　Ｒｓｏ　Ｉ１４ｏＡｒｇ　Ｒｕ　Ｒ４３Ｒｕ　Ｙ
   式中、Ｒ１はｉ’ｙｒ　＋Ｍｅ　ｔ　、　Ｄ−Ｔｙｒ　
   、　ｐＨｅ　、Ｄ−Ｐｈ　ｅ　ｒ　Ｌｅ　ｕ　ｒ　Ｄ−
   Ｈｉ　ｓまたはＨｉｓであり；Ｒ８はＳｅｒまたはＡｓ
   ｎであ’）：ＲＩｓはＴ１１ｒ＋ＰｈｅまたはＤ−Ｔｙ
   ｒであ’）：Ｒ＋ｔは／４．ｒｇまたはＬｙｓ　であり
   ；Ｒ１３は１１３ｅまたはＶａｌｌであり；Ｒ１，はＧ
   Ｉ３ｐｌたは１）−Ａｌ；αであり　；　ＲＩｓはＴｙ
   ｒｅたは５ｅｒＣあり；Ｒ２４はＨｉｓまたはＧ！３ｎ
   であり；Ｒ２，はＧＩ３ｕまたはＡｓｐであり：　Ｒｎ
   はＡｔ３ａ、Ｎ１５ｅ＋ｌ１ｌｅ、Ｌｅｕ＋Ｍｅｔおよ
   びＶａ（ｌのＤ−およびＬ−異性体からなる群から選択
   され；Ｒ２８はＳｅ　ｒ　＋　Ａ　８　ｎまたはＤ−Ａ
   １３ａであ’）：ＲｕはＡｒｇまたはＳｅｒであり；Ｒ
   ３８はＧ（ＩｎまたはＡｒｇであり　；　ＲｓｏはＡｒ
   ｇまたはａｇｌｌで杉り　：　ＲｈｏはＳｅｒまたはＡ
   ｌａであり；Ｒ１２はＰｈｅまたはＡ１３ａであ’）　
   ；　ＩｋｓはＡｓｎ　またはＡｒｇであり；Ｒ４４は天
   然アミノ酸またはデス−Ｒ，４であり；そしてＹはＣ−
   末端のアミノ酸残基のカルボキシル部分を意味して基−
   ＣＯＯＲ。 −ＣＩビＯ，−ＣＯＮＨＮＨＲ，−ＣＯＮ（Ｒ）（Ｒ’
   ）または−ＣＨ２０Ｒ（ここでＲおよびＲ′は低級アル
   キル基、フルオロ低級アルキル基または水素原子である
   ）である；但し、Ｒ，が７＋、、、である時Ｒ２７はＭ
   ｅｔ以外のものであり、Ｒ８はＳｅｒであり、Ｒ１２は
   Ａ　ｒ　ｇであ’）、ＲＩｓばｌ１３ｅであり、ＲＩｓ
   はＴｙｒであり、Ｒ２４はＨｉｓであり、Ｒ２，はＧｌ
   ｗでアリ、Ｒ２８はＡｓｎであり、Ｒ３４はＡ　ｒ　ｇ
   であり、Ｒ３，はＧｌｅｎであり、Ｒ８９はＡｒｇであ
   ！ｌ）　、Ｒ４０＆’！、　Ｓ　ｅ　ｒであり、Ｒｕは
   Ｐｈｅであり、そしてＲ４３はＡｓｎである；またアミ
   ノ酸残基２８〜４４のうちいずれかもしくは全部は生物
   学的に活性な断片を提供するために削除されつる。 （２１ＲＩはＨｉｓである特許請求の範囲第１項に記載
   の合成ペプチド。 （３）ＹはＣ０ＮＩＩ２　である特許請求の範囲第１項
   でたけ第２川に記載の合成ペプチド。 （４１Ｒ２□はＮ１５ｅである特許請求の範囲第１〜３
   項のいずれかに記載の合成ペプチド。 （５１Ｒｈｏは７１　ｙ　ｒであり、Ｒ１５はＧｅｙで
   あり、１ｌｔｓはＳｅｒである％許請求の範囲第１〜４
   項のいずれかに記載の合成ペプチド。 （６１ＲｈｏはＴｙｒであ’）、ＲＩｓはＩ）−Ａｅａ
   であり、Ｒ２ＢはＤ−Ａ（ｊａである特許請求の範囲第
   １〜４項のいずれかに記載の合成ペプチド。 （７１ＲＩはＤ−Ｔｙｒであり、Ｒ２７はＮｅｅ、ＶＣ
   ＋、（ｌ　ｉたはｌｅｅである特許請求の範囲第１：Ｌ
   Ｊｉに記載の合成ペプチド。 （８１ＲＩ５はＤ−Ａｔ３ａであり、１７２８はＤ−Ａ
   ｌａである特許請求の範囲第１項または第７ｍに記載の
   合成ペプチド。 （９）次式の配列を有する特ｄ「１債求の範囲第１項に
   記載の合成ペプチド。 Ｈｉ　　ｓ　−Ａｌｊ　ａ　−Ａｓ　７ｙ−Ａｌｌ　ａ
   −１１ｊ　ｅ　−Ｐｈ　ｅ−７１’ｈ　ｒ　−８ｅ　　
   ｒ　−８ｅ　　ｒ−’Ｉ’ｙ　ｒ−Ａｒ　ｇ　−Ａｒ　
   ｇ−１１ｅ−Ｌｅ　？／　−Ｇｌｌｙ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ
   −Ｔｙｒ−ＡＵａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ　−Ｌｅｕ−Ｌｅ　
   ｕ−Ｈｉ　５−Ｇ（ｌｕ−１ｌｅ−Ｍｅ　ｔ−Ａｓ　ｎ
   　−Ａｒ　ｇ−Ｇ１７＋、−Ｇｌｎ−Ｇｅ　ｙ−Ｇ（２
   ｕ−Ａｒ　ｇ−Ａｓ　ｎ　−Ｇｌｌ　ｎ　−Ｃｄ３　ｕ
   −Ｇｌｌ　ｎ−Ａｒ　ｇ−８ｅ　ｒ−Ａｒ　ｇ　−Ｐ　
   〕Ｌｅ−，４ｓ　ｎ　。 （１０）アミノ酸残基３３〜４４は削除されている特許
   請求の範囲Ｊ１〜９項のいずれかに記載の合成ペプチド
   。 （１１）特許請求の範囲第１〜１０項のいずれかに記載
   のペプチドまたはその無毒性塩および獣医学的もしくは
   薬学的に許容される液体捷たは固体の担体そ含む、動物
   の成長ホルモンの放出を刺激する組成物。