JP2974254B2 - Ｇｒｆ類似体ｖｉｉａ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はヒトや他の動物の下垂体の機能に影響を及ぼ
すペプチドに関する。特に、本発明は下垂体からの成長
ホルモン（GH）の分泌を促進するペプチドに関する。

従来技術 長い間、生理学者らは視床下部で産生される特殊な物
質が下垂体ホルモンの分泌を刺激または抑制して下垂体
腺部の分泌機能を調節していることを認めてきた。視床
下部の抑制性因子は1972年にGHの分泌を抑制するソマト
スタチン（somatostatin）として同定された。1982年に
は、ヒト膵臓（腫瘍）GH放出因子（hpGRF）がヒトの膵
臓腫瘍の抽出物から単離され、精製、同定、合成および
試験が行われ、下垂体からのGHの分泌を促進することが
判明した。これらの下垂体因子はともに全合成により再
生産され、天然構造の類似体が合成されていた。ヒト視
床下部GH放出因子は完全に同一の構造を有しているた
め、以下これをhGRFという。

発明の概要 培養下垂体細胞からGHを分泌させる合成ペプチドが現
在合成され試験されているが、これは生体内での酵素に
よる分解が受けにくく実質的効力が極めて高いものであ
る。このような長所を有しているのは、ペプチドが安定
性の高いα−らせん形をしているためであると考えられ
る。これらのペプチドは、その５、17、23、26および27
位の残基の少なくとも１つのα−炭素原子上にメチル基
が置換されている（C²Me）のが好ましい。より好ましい
のは、これらの残基の複数がメチル基で置換されている
ペプチドである。α炭素がメチル基で置換されているAl
aは、CMAまたはAib（アミノ−イソブチル酸）と表記す
る。また、α炭素がメチル基で置換されているLeuは、C
MLと表記する。

さらにペプチドは、天然ホルモンに見られるような上
記以外のさまざまな残基の置換基を有していてもよい。
例えば、２位がＤ−Ala、N^aCH₃−Ｄ−Ala（Ｄ−NMA）ま
たはNMAで置換されていてもよい。また、27位のMetの代
わりにC^aMeLeu（CML）またはNleを有しているのが好ま
しい。しかし、Ｄ−MetまたはNvaまたはその他の残基を
存在させてもよい。ペプチドは、さらに１位の次の残基
を有していてもよい:Tyr、Ｄ−Tyr、Met、Phe、Ｄ−Ph
e、pCl−Phe、Leu、HisおよびＤ−Hisこれらの残基は、
αアミノ基上またはαアミノ基中にメチル基を有してい
てもよいし、あるいは、αアミノ基がなくてもよい（de
sアミノ）。また、この残基のαアミノ基はアシル化、
好ましくはアセチル（Ac）またはホルミル（For）化さ
れていてもよい。このペプチドは、当業者に知られてい
る置換基を有していてもよい。例えば、３位にＤ−Asp
および／または12位にArgおよび／または10位にPheまた
はＤ−Tyrおよび／または15位にAlaおよび／または28位
にAsnを有していてもよい。

本発明による医薬組成物は、薬学的にまたは獣医学的
に受容される液体または固体のキヤリアーに分散され
た、長さ約29から44残基の上記の類似体またはそれらの
いずれかの無毒性塩を含有する。これらの医薬組成物は
ヒトおよび動物の臨床医学の分野において使用され、治
療または診断目的のために投与される。さらにまたこれ
らの医薬組成物は鳥禽を含む温血動物の成長を促進する
のに用いることができる。

発明の詳細な説明および好適な実施態様 ペプチドを定義するために用いる命名法はシユレーダ
ー（Schroder）およびリユブケ（Lubke）の“ザ・ペプ
チド”アカデミツクプレス（1965）に明記されるもので
あり、その際慣用的表示に従つてＮ未満のアミノ基は左
に、そしてＣ末端のカルボキシル基は右に表わされる。
天然アミノ酸とは、Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Th
r、Lys、Arg、Asp、Asn、Glu、Gln、Cys、Met、Phe、Ty
r、Pro、TrpおよびHisからなるタンパク質中に見出され
る普通の自然界に存在するアミノ酸のうちの１種を意味
する。Nleはノルロイシンを意味し、Nvaはノルバリンを
意味する。アミノ酸残基が異性体を有する場合は、特に
指定しない限り、表示されるアミノ酸のＬ体を意味す
る。Ｄ−NMAはα−アミノ基がメチル置換されたアラニ
ンのＤ−異性体を意味する。

本発明は概して次のアミノ酸配列（Ｉ）を有する合成
ペプチドを提供する。

（Ｂ）R₁−R₂−R₃−Ala−（Q₁）R₅−Phe−Thr−R₈−S
er−（Q₂）R₁₀−Arg−R₁₂−（Q₃）R₁₃−Leu−R₁₅−Gln
−（Q₄）−Leu−R₁₈−（Q₅）Ala−Arg−R₂₁−（Q₆）R₂₂
−（Q₇）Leu−R₂₄−R₂₅−（Q₈）R₂₆−（Q₉）R₂₇−R₂₈−
Arg−Gln−Gln−Gly−Glu−R₃₄−Asn−Gln−Glu−R₃₈−
R₃₉−R₄₀−Arg−R₄₂−R₄₃−R₄₄（上式において、R₁はTy
r、Ｄ−Tyr、Met、Phe、Ｄ−Phe、pCl−Phe、Leu、His
またはＤ−His;BはＨ、C^aMe、N^aMe、desamino、Acまた
はFor;R₂はAla、Ｄ−Ala、NMAまたはＤ−NMA;R₃はAspま
たはＤ−Asp;R₅はIleまたはLeu;R₈はSer、Asn、Lys、Ar
g、AspまたはGlu;R₁₀はTyr、Ｄ−TyrまたはPhe;R₁₂はAr
gまたはLys;R₁₃はIle、Val、LeuまたはAla;R₁₅はGlyま
たはAla;R₁₈はSerまたはTyr;R₂₁はLys、Ｄ−Lys、Argま
たはＤ−Arg;R₂₂はLeu、Ile、AlaまたはVal;R₂₄はGlnま
たはHis;R₂₅はAspまたはGlu;R₂₆はIleまたはLeu;R₂₇はM
et、Ｄ−Met、Ala、Nle、Ile、Leu、NvaまたはVal;R₂₈
はAsnまたはSer;R₃₄はSerまたはArg;R₃₈はArgまたはGl
n;R₃₉はGlyまたはArg;R₄₀はAlaまたはSer;R₄₂はPhe、Al
aまたはVal;R₄₃はAsnまたはArg;R₄₄は天然アミノ酸;Q₁
〜Q₉はそれぞれＨまたはC^aMeである；ただし、R₃₀〜R₄₄
の残基のすべて、またはその一部の配列はＣ末端で始ま
る配列から削除されていてもよい；また、Q₁、Q₄、Q₇、
Q₈およびQ₉のうち１以上はC^aMeである。）好ましい実施
態様の１つでは、R₅はIle、R₁₈はSer、R₂₄はGln、R₂₅は
Asp、R₂₆はIle、R₃₄はSer、R₃₈はArg、R₃₉はGlyおよびR
₄₀はAlaである。ペプチドが44位までのびているとき
は、R₄₄はLeuまたはValであるのが好ましい。

他の好適な実施態様では、ペプチドは下記の配列を有
する： （Ｂ）R₁−R₂−R₃−Ala−（Q₁）Ile−Phe−Thr−R₈−Se
r−（Q₂）R₁₀−Arg−R₁₂−（Q₃）R₁₃−Leu−R₁₅−Gln−
（Q₄）Leu−Ser−（Q₅）Ala−Arg−R₂₁−（Q₆）R₂₂−
（Q₇）Leu−Gln−Asp−（Q₈）Ile−（Q₉）R₂₇−R₂₈−Ar
g−Gln−Gln−Gly−Glu−Ser−Asn−Gln−Glu−Arg−Gl
y−Ala−Arg−R₄₂−R₄₃−R₄₄（上式において、R₁はTy
r、Ｄ−Tyr、Met、Phe、Ｄ−Phe、pCl−Phe、Leu、His
またはＤ−His;BはＨ、C^aMe、N^aMe、desアミノ、Acまた
はFor;R₂はAla、Ｄ−Ala、NMAまたはＤ−NMA;R₃はAspま
たはＤ−Asp;R₈はSer、Asn、Lys、Arg、AspまたはGln;R
₁₀はTyr、Ｄ−TyrまたはPhe;R₁₂はArgまたはLys;R₁₃はI
le、Val、LeuまたはAla;R₁₅はGlyまたはAla;R₂₁はLys、
Ｄ−Lys、ArgまたはＤ−Arg;R₂₂はLeu、Ile、Alaまたは
Val;R₂₇はMet、Ｄ−Met、Ala、Nle、Ile、Leu、Nvaまた
はVal;R₂₈はAsnまたはSer;R₄₂はPhe、AlaまたはVal;R₄₃
はAsnまたはArg;R₄₄は天然アミノ酸;Q₁〜Q₉はそれぞれ
ＨまたはC^aMeである；ただし、R₃₀〜R₄₄の残基のすべ
て、またはその一部の配列はＣ末端で始まる配列から削
除されていてもよい；また、Q₁、Q₄、Q₇、Q₈およびQ₉の
うち１以上はC^aMeである。）これらのペプチドのいずれ
においても、Ｃ末端のアミノ酸残基のカルボキシル部分
は次の原子団になつていてもよい：−COOR、−CRO、−C
ONHNHR、−CON（Ｒ）（Ｒ′）または−CH₂OR（ここで、
ＲおよびＲ′は低級アルキル、フツ化低級アルキルまた
は水素である。）低級アルキルとして好ましいのはメチ
ル、エチルおよびプロピルである。−CONHR（ＲはＨま
たは低級アルキルである。）のが好ましい。

本発明のさらに他の好適な実施態様では、ペプチドは
下記の配列を有する。（Ｂ）R₁−R₂−Asp−Ala−（Q₁）
Ile−Phe−Thr−R₈−Ser−（Q₂）R₁₀−Arg−R₁₂−
（Q₃）R₁₃−Leu−R₁₅−Gln−（Q₄）Leu−R₁₈−（Q₅）Al
a−Arg−R₂₁−（Q₆）R₂₂−（Q₇）Leu−R₂₄−R₂₅−
（Q₈）R₂₆−（Q₉）R₂₇−R₂₈−Arg−Gln−Gln−Gly−Y w
herein R₁はTyr、Ｄ−Tyr、Phe、Ｄ−Phe、HisまたはＤ
−His;BはＨ、C^aMeまたはN^aMe;R₂はAla、Ｄ−Ala、NMA
またはＤ−NMR;R₈はSer、Asn、Lys、Arg、AspまたはGl
u;R₁₀はTyr、Ｄ−TyrまたはPhe;R₁₂はArgまたはLys;R₁₃
はIle、Val、LeuまたはAla;R₁₅はGlyまたはAla;R₁₈はSe
rまたはTyr;R₂₁はLys、Ｄ−Lys、ArgまたはＤ−Arg;R₂₂
はLeu、Ile、AlaまたはVal;R₂₄はGlnまたはHis;R₂₅はAs
pまたはGlu;R₂₇はMet、Ala、Nle、Ile、Leu、Nvaまたは
Val;R₂₈はAsnまたはSer;YはNHR（ここでＲはＨまたは低
級アルキル）;Q₁〜Q₉はそれぞれＨまたはC^aMeであり;Gl
y、Gln−GlyまたはGln−Gln−Glyは、Ｃ末端で削除され
ていてもよく;Q₁、Q₄、Q₇、Q₈およびQ₉のうち１以上はC
^aMeである。） 上で述べたように、Ｎ末端から29位の残基までのフラ
グメントは下垂体によるGH分泌に効果を及ぼす生物活性
を有しており、長さ29または32残基のＣ末端がアミドか
置換アミドである生物活性フラグメントであるのが最も
好ましい。このペプチドが40またはそれ以上の残基を有
する場合は、Ｃ末端部分に対する明確な好適性はない。

該ペプチドは、完全な固相法、部分的な固相法フラグ
メントカツプリングあるいは液相カツプリングのような
適当な方法により合成される。例えば、完全な固相合成
の技術は教科書「固相ペプチド合成（Solid−Phase Pep
tide Synthesis）」、スチユワート（Stewart）および
ヤング（Young）、Freembn ＆ Co.,サンフランシスコ
（1969）において述べられ、ヴエール（Vale）らによる
1978年８月８日付米国特許第4,105,603号に例示されて
いる。基本的な液相合成法は論文「Methoden dev Organ
ischen Chemie（Horben−Weyl）：ペプチド合成（Synth
ese von Peptiden）」、E.ブンシユ（Wunsch）編集、ゲ
オルグ・テイーム出版、シユトウツトガルト、西独（19
74）において詳述される。合成のフラグメント縮合法
は、1976年８月３日付米国特許第3,972,859号に例示さ
れる。他の適用可能な合成は1974年10月15日付米国特許
第3,842,067号および1975号１月28日付米国特許第3,86
2,925号に例示される。

種々のアミノ酸成分の不安定な側鎖基を適当な保護基
（その基が最終的に除去されるまで、その部位で化学反
応が起こるのを防ぐ）で保護することは、この種の合成
において一般的である。また、アミノ酸や断片がカルボ
キシル基の部位で反応する間その物質のα−アミノ基を
保護することも一般的であり、その後α−アミノ保護基
を選択的に除去してその位置で次の反応を行わせる。従
つて、合成の一段階として、ペプチド鎖中に意図する配
列で位置するアミノ酸残基を含み且つ適当なアミノ酸残
基に側鎖保護基を結合した中間体化合物が生成すること
は普通のことである。

この点から、本発明は次式（II）の中間体を与える。

X¹−（Ｂ）R₁（ＸまたはX²）−R₂−R₃（X³）−Ala−（Q
₁）R₅−Phe−Thr（X⁴）−R₈（X⁸）−Ser（X⁴）−（Q₂）
R₁₀（X²）−Arg（X⁶）−R₁₂（X⁶またはX⁷）−（Q₃）R₁₃
−Leu−R₁₅−Gln（X⁵−（Q₄）Leu−R₁₈（X²またはX⁴）
−（Q₅）Ala−Arg（X⁶）−R₂₁（X⁶またはX⁷）−（Q₆）R
₂₂−（Q₇）Leu−R₂₄（X⁵またはＸ）−R₂₅（X³）−
（Q₈）R₂₆−（Q₉）R₂₇−R₂₈（X⁴またはX⁵）−Arg（X⁶）
−Gln（X⁵）−Gln（X⁵）−Gly−Glu（X³）−R₃₄（X⁴ま
たはX⁶）−Asn（X⁵）−Gln（X⁵）−Glu（X³）−R₃₈（X⁶
またはX⁵）−R₃₉（X⁶）−R₄₀（X²）−Arg（X⁶）−R₄₂−
R₄₃（X⁵またはX⁶）−R₄₄（X⁸）−X⁹ 式中、X¹は水素またはα−アミノ保護基である。X¹に
包含されるα−アミノ保護基は、ポリペプチドの逐次合
成の分野において有用であると知られているものであ
る。X¹として使用しうるα−アミノ保護基の種類には
（１）芳香族ウレタン型保護基、例えばフルオレニルメ
チルオキシカルボニル（FMOC）、ベンジルオキシカルボ
ニル（Ｚ）、およびｐ−クロルベンジルオキシカルボニ
ル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロム
ベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキ
シカルボニルのような置換z;（２）脂肪族ウレタン型保
護基、例えばｔ−ブチルオキシカルボニル（BOC）、ジ
イソプロピルメチルオキシカルボニル、イソプロピルオ
キシカルボニル、エトキシカルボニル、およびアリルオ
キシカルボニル；および（３）シクロアルキルウレタン
型保護基、例えばシクロペンチルオキシカルボニル、ア
ダマンチルオキシカルボニル、およびシクロヘキシルオ
キシカルボニル；が含まれる。好適なα−アミノ保護基
は、たとえN^aMe−置換アミノ酸残基が１位に存在すると
きでも、BOCである。もちろんＢがdesNH₂のときX¹はＨ
である。

Ｘは水素原子またはHisのイミダゾール窒素のための
保護基（例えばTos）である。

X²はTyrのフエノール性ヒドロキシル基のための適当
な保護基であり、例えばテトラヒドロピラニル、ｔ−ブ
チル、トリチル、Bzl、CBZ、4Br−CBZおよび2,6−ジク
ロルベンジル（DCB）である。また、X²は水素原子であ
つてもよく、この場合はその位置のアミノ酸残基に側鎖
保護基が存在しないことを意味する。

X³は水素原子、もしくはAspまたはGluのカルボキシル
基のための適当なエステル形成保護基、例えばベンジル
（OBzl）、2,6−ジクロルベンジル、メチルおよびエチ
ルである。

X⁴はThrまたはSerのヒドロキシル基のための適当な保
護基であり、例えばアセチル、ベンゾイル、ｔ−ブチ
ル、トリチル、テトラヒドロピラニル、Bzl、2,6−ジク
ロルベンジルおよびCBZである。好適な保護基はBzlであ
る。X⁴はまた水素原子であつてもよく、この場合はヒド
ロキシル基に保護基が存在しないことを意味する。

X⁵は水素原子、もしくはAsnまたはGlnの側鎖アミド基
のための適当な保護基である。好ましくはそれはキサン
チル（Xan）である。

X⁶はArgのグアニジノ基のための適当な保護基、例え
ばニトロ、Tos、CBZ、アダマンチルオキシカルボニルお
よびBOCであり、またX⁶は水素原子でありうる。

X⁷は水素原子、もしくはLysの側鎖アミノ基のための
適当な保護基である。適当な側鎖アミノ保護基の例は２
−クロルベンジルオキシカルボニル（２−Cl−ｚ）、To
s、ｔ−アミルオキシカルボニルおよびBOCである。

X⁸は水素原子、もしくは一般的に先に示した適当な側
鎖保護基である。

Metは任意に酸素原子で保護しうるが、保護しない方
が好ましい。

側鎖アミノ保護基の選択は、一般に合成中のα−アミ
ノ保護基の除去の間に除去されないものを選ぶというこ
とを除いて限定的でない。しかしながら、いくつかのア
ミノ酸例えばHisの場合はカップリング完了後に一般に
保護を必要とせず、従つてαアミノ保護基と側鎖アミノ
保護基は同じものでありうる。

X⁹はエステル形成基X³のようなＣ−末端カルボキシル
基に対する適当な保護基あるいは固相合成において使用
される、固体樹脂支持体への連結のためのアンカー結合
あるいはdes−X⁹（この場合、残基はＣ−末端において
先に定義したカルボキシル部分Ｚを有する）である。固
体樹脂支持体が使用される場合、それは−Ｏ−CH₂−樹
脂支持体、−NH−ベンズヒドラミン（BHA）樹脂支持体
または−NH−パラメチルベンズヒドリラミン（MBHA）樹
脂支持体のように当業者に既知の担体のいずれかであり
うる。非置換アミドが望ましい場合にBHAあるいはMBHA
樹脂の使用が好適なのは、切断で直接該アミドを与える
からである。Ｎ−メチルアミドが望ましい場合はＮ−メ
チルBHAから得られうる。他の置換アミドが望ましい場
合は米国特許第4,569,967号の方法を用いることができ
る。また、Ｃ末端として遊離酸以外のなお他の基が望ま
しい場合はホウベン−ウエイル（Houben−Weyl）の教科
書にある基本的な方法を用いてペプチドを合成するのが
好ましい。

中間体に対する式においてＸ−基の少なくとも１つは
保護基でありX⁹は樹脂支持体を含む。このように本発明
はまた以下のような対象となるペプチド製造の方法を提
供する。

（ａ） 少なくとも１つの保護基と式（II）を有するペ
プチドを形成し〔ここでＸ、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶、
X⁷およびX⁸は各々水素あるいは保護基であり、X⁹は保護
基または樹脂支持体へのアンカー結合であるか、des−X
⁹（この場合、該残基はＣ−末端において望ましいカル
ボキシル基を有していてもよい）である〕； （ｂ） 式（II）のペプチドから保護基またはアンカー
結合を除去し；そして （ｃ） 望ましい場合には、結果としてできる配列
（Ｉ）のペプチドをその無毒性塩に転化する。

ペプチド合成において使用する個々の側鎖保護基を選
択する場合、次の一般規則に従う。

（ａ） 保護基はカツプリング条件下でその保護特性を
保持して切断されない。

（ｂ） 保護基は試薬に対して安定であるべきであり、
合成の各段階でα−アミノ保護基の除去のために選ばれ
た反応条件下でXanを除いて、安定であるのが好まし
い。

（ｃ） 側鎖保護基は、意図するアミノ酸配列を含む合
成の完了時点に、ペプチド鎖を変性させない反応条件下
で除去できなければならない。

ペプチドが組換えDNA技法を用いないで製造される場
合、それらは好ましくはメリーフイールド（Merrifiel
d）のJ.Am.Chem.Soc.,85、p2149（1963）に一般的に記
述されるような固相合成法を用いて製造される。しか
し、先に述べたように当分野で知られた他の同様の化学
合成法も使用しうる。固相合成法は保護したα−アミン
酸を適当な樹脂にカツプリングすることによつて、ペプ
チドのＣ末端から開始される。このような出発物質はα
−アミノ保護アミノ酸をクロルメチル化樹脂またはヒド
ロキシメチル樹脂へエステル結合によつて結合するか、
あるいはBHA樹脂またはMBHA樹脂へアミド結合すること
によつて製造しうる。ヒドロキシメチル樹脂の製法はボ
ダンスキー（Bodaosky）らのChem.Ind.（ロンドン）3
8、1597〜1598（1966）に開示されている。クロルメチ
ル化樹脂はカリフオルニア州リツチモンドのバイオラツ
ド研究所（Bio Rad Laboratories）およびラブシステム
社（Lab.Systems,Inc.）から市販されている。この種の
樹脂の製法はスチユワート（Stewart）らの「固相ペプ
チド合成（Solid Phase Septide Synthesis）」（Freem
an＆Co.,サンフランシスコ、1969）第１章１〜６頁に開
示されている。BHAおよびMBHA樹脂支持体は市販されて
おり、一般に合成しようとする目的ポリペプチドがその
Ｃ末端に未置換アミド基をもつときにだけ使用される。

Ｃ末端アミノ酸、例えばBOCおよびXanで保護されたAs
nは先ずK.ホリキらのChemistry Letters,165〜168（197
8）の方法に従つてクロルメチル化樹脂へカツプリング
される。即ち、例えばラツトGRF（rGRF）の43−残基遊
離酸類似体を合成するときには、約60℃でDMF中KFを用
いて24時間攪拌する。樹脂支持体へのBOC保護アミノ酸
のカツプリングに続いて、塩化メチレン中トリフルオロ
酢酸（TFA）またはTFA単独を用いてα−保護基が除去さ
れる。この脱保護は約０℃から室温の間の温度で行われ
る。ジオキサン中HClのような他の標準的な切断試薬や
特定のα−アミノ保護基の除去条件は、シユローダー
（Schroder）とリユーブク（Lubke）の「ザ・ペプチ
ド」第１巻72〜75頁（アカデミツクプレス1965年）に記
述されているように選んでもよい。

α−アミノ保護基の除去後、残りのα−アミノ−およ
び側差−保護アミノ酸を意図する順序で段階的にカツプ
リングさせて、先に定義した中間体化合物を得る。ある
いは各アミノ酸を別個に反応器へ加える代わりに、若干
のアミノ酸を互いにカツプリングさせてから固相反応器
へ添加してもよい。適当なカツプリング試薬の選択は当
分野の技術の範囲内である。カツプリング試薬として特
に適しているものはN,N′−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド（DCCI）である。

ペプチド固相合成に用いられる活性化試薬はペプチド
の分野においてよく知られている。適当な活性化試薬の
例はカルボジイミド類、例えばN,N′−ジイソプロピル
カルボジイミドおよびＮ−エチル−Ｎ′−（３′−ジメ
チルアミノプロピル）カルボジイミドである。その他の
活性化試薬ならびにペプチドカツプリングにおけるそれ
らの使用はシユレーダー＆リユプケの上記文献第III章
およびカプール（Kapoor）のJ.Phar.Sci.,59、１−27
（1970）に開示されている。

それぞれの保護アミノ酸またはアミノ酸配列は大体４
倍以上の過剰量で固相反応器へ導入され、カツプリング
反応はジメチルホルムアミド（DMF）:CH₂Cl₂（1:1）の
混合媒体中で、あるいはDMFまたはCH₂Cl₂単独中で行わ
れる。不完全なカツプリングが起つた場合は、α−アミ
ノ保護基を除去する前にそのカツプリング反応を繰り返
し、その後次のアミノ酸をカツプリングさせる。合成の
各段階でのカツプリング反応の成就は、もしその合成が
手動で行われるなら、カイザー（E.Kaiser）らのAnal.B
iochem.34、595（1970）に記載されるようなニンヒドリ
ン反応で監視するのが好ましい。カツプリング反応は自
動的に、例えばベツクマン990自動合成機で、リビエー
ル（Rivier）らのBiopolymers,1978、17、1927−1938頁
に報告されるようなプログラムを用いて行うことができ
る。

意図するアミノ酸配列が完了した後、液状フツ化水素
のような試薬で処理して中間体ペプチドを樹脂支持体か
ら切り離す。その際液状フツ化水素はペプチドを樹脂か
ら切り離すばかりでなく、残つている全ての側鎖保護基
Ｘ、X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、X⁸、アンカー結合X⁹およ
びもし使用するならα−アミノ保護基X¹をも切断して遊
離酸の形でペプチドを得る。配列中にMetが存在する場
合、BOC保護基は潜在的Ｓ−アルキル化を避けるためにH
Fを用いる樹脂からのペプチド切断の前にトリフルオロ
酢酸（TFA）／エタンジチオールを使用して好適にまず
除去される。切断のためにフツ化水素を使用する場合、
アニソールおよびメチルエチルスルフイドが反応容器中
にスキヤベンジヤーとして含有される。

次の実施例１は固相法によるペプチド合成の好適な方
法を示すものである。これと同じ方法でＣ末端に必要な
数のアミノ酸をつなげさえすれば対応する長いペプチド
を合成しうることは容易に理解されるであろう。Ｎ末端
へ残基をつなげるのは有益とは考えられておらず、現在
のところ生物活性フラグメントのＮ末端は所定の配列を
有するべきであると感じられる。

実施例 1. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln−Leu−Ser−Ala−A
rg−Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile−CML−Asn−Arg−N
H₂ で表わされる〔N^aMeTyr¹、Ala¹⁵、CML²⁷、Asn²⁸〕−hGR
F（１−29）−NH₂を、ベール（Vale）らの米国特許第4,
292,313号に概要が記載されるようにベツクマン990ペプ
チド合成機を使つて市販のMBHA樹脂上で段階的方法によ
り合成した。この樹脂へのBOC−Arg（Tos）のカツプリ
ングは、樹脂1gあたりArg約0.35mmolの置換をもたらし
た。

保護基を除去して中和した後、ペプチド鎖を樹脂上に
一段づつ付加していつた。保護基の除去、中和および各
アミノ酸の付加は一般にリビエール（J.Rivier）のJ.Am
er.Chem.Soc.,96、2986−2992（1974）に詳述される方
法に従つて行つた。使用する全ての溶剤は不活性ガス
（例えばヘリウムや窒素）を散布することによつて注意
してガス抜きしMet残基の硫黄を酸化するおそれのある
酸素を確実に除いた。

保護基の除去はスケジユールＡに従つて行つた： スケジユールＡ 試 薬 混合時間（分） 1. 60％TFA/2％エタンジチオール 10 2. 60％TFA/2％エタンジチオール 15 3. IPA/1％エタンジチオール 0.5 4. CH₂Cl₂中のEt₃N（10％） 0.5 5. MeOH 0.5 6. CH₂Cl₂中のEt₃N（10％） 0.5 7. MeOH （２回） 0.5 8. CH₂Cl₂（２回） 0.5 カツプリングは好ましくはスケジユールＢに記載され
るように行つた： スケジユールＢ 試 薬 混合時間（分） 9. DCCI − 10. Boc−アミノ酸 50〜90 11. MeOH （２回） 0.5 12. CH₂Cl₂ （２回） 0.5 13. CH₂Cl₂中Ac₂O（3M） 15.0 14. CH₂Cl₂ 0.5 15. MeOH 0.5 16. CH₂Cl₂ （２回） 0.5 簡単に述べれば、樹脂1gあたり塩化メチレン中のBOC
−保護アミノ酸１〜2mmolを使用し、塩化メチレン中の
1.0mol DCCI 1当量加えて２時間実施した。BOC−Arg（T
os）がカツプリングされつつあるとき、50％DMFと塩化
メチレンの混合物を使用した。SerおよびThrのヒドロキ
シル側鎖保護基としてBzlエーテルを使用した。AsnやGl
nのアミド基は、有利であるようにDCCカツプリングを使
用する場合、Xanで保護した。ｐ−ニトロフエニルエス
テル（ONp）はAsnやGlnのカルボキシル末端を活性化す
るために使用し、例えばBOC−Asn（ONp）はDMFと塩化メ
チレンの50％混合物中のHOBt1当量を用いて一晩カツプ
リングさせることができ、この場合はDCCを加えなかつ
た。２−クロル−ベンジルオキシカルボニル（2Cl−
ｚ）はLys側鎖の保護基として使用した。TosはArgのグ
アニド基およびHisのイミダゾール窒素を保護するため
に使用でき、GluまたはAspの側鎖カルボキシル基はOBzl
で保護した。Tyrのフエノール性ヒドロキシル基は2,6−
ジクロルベンジル（DCB）で保護した。合成終了時に次
の組成の中間体が得られた:BOC−N^aMeTyr（X²）−Ala−
Asp（X³）−Ala−Ile−Phe−Thr（X⁴）−Asn（X⁵）−Se
r（X⁴）−Tyr（X²）−Arg（X⁶）−Lys（X⁷）−Val−Leu
−Ala−Gln（X⁵）−Leu−Ser（X⁴）−Ala−Arg（X⁶）−
Lys（X⁷）−Leu−Leu−Gln（X⁵）−Asp（X³）−Ile−CM
L−Asn（X⁵）−Arg（X⁶）−X⁹（ここで、X²はDCB、X³は
OBzl、X⁴はBzl、X⁵はXan、X⁶はTos、X⁷は2Cl−ｚそして
X⁹はNH−MBHA−樹脂支持体である。Xanはα−アミノ保
護基を除去するために用いたTFA処理によつて部分的に
または完全に除去できた。

保護ペプチド−樹脂を切り離して保護基を除去するた
めに、ペプチド−樹脂1gあたりアニソール1.5ml、メチ
ルエチルスルフイド0.5mlおよびフツ化水素（HF）15ml
を用いて−20℃で30分および０℃で30分処理した。高真
空下でHFを除去した後、樹脂−ペプチド残留物を乾燥ジ
エチルエーテルおよびクロロホルムで交互に洗い、次い
でペプチドをガス抜きした2N水性酢酸で抽出し、過に
より樹脂から分離した。

その後、得られたペプチドを０−５％酢酸に溶解し、
セフアデツクスＧ−50微細ゲル過を含めた精製工程に
付した。

さらにペプチドはリビエールらのペプチド：構造およ
び生物学的機能、125−128（1979）およびマーキー（Ma
rki）らのJ.Am.Chem.Soc.103、3178（1981）に示される
ような調製用または半調製用HPLCで精製した。カートリ
ツジを備えたウオーターズ・アソシエーツ・プレプLC−
500（Waters Associates prep LC−500）はバイダツク
（Vydac）300Aからの15〜20μのC₁₈シリカを装填した。
リビエールのJ.Liq.Chromatography 1.343−367（197
8）に記載されるように、低圧エルデツクス（Eldex）勾
配製造機を使つて、TEAP中のCH₃CNの勾配をつくつた。
クロマトグラブ画分は注意してHPLCで監視し、実質的純
度を示す画分のみを集めた。それぞれ別個に純度を調べ
た精製画分の脱塩は0.1％TFA中のCH₃CNの勾配を用いて
行つた。その後センターカツト（centercut）を凍結乾
燥して目的とするペプチド（純度98％以上でありうる）
を得た。

精製ペプチドの比旋光度を、パーキンエルマー旋光計
を用いて測定したところ〔α〕_Ｄ＝−52.0゜±１（ｃ＝
1,1％酢酸）であつた。

実施例 2. 次式： Ｈ−C^aMeHis−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn
−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser
−Ala−Arg−Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile−CML−Ser
−Arg−Gln−Gln−Gly−Glu−Ser−Asn−Gln−Glu−Arg
−Gly−Ala−NH₂ で表わされる40アミン残基のペプチド〔C^aMeHis¹、Ｄ−
NMA²、CML²⁷〕−hGRF（１−40）−NH₂を、ベールらの米
国特許第4,292,313号に概要が記載されるように、ベツ
クマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上で段階的
方法により合成した。本ペプチドはTLCおよびHPLCを用
いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例 3. 次式： Ｈ−His−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Ser−Se
r−Tyr−Arg−Arg−Ile−Leu−Gly−Gln−Leu−Tyr−Al
a−Arg−Lys−Leu−Leu−His−Glu−Ile−CML−Asn−Ar
g−Gln−Gln−Gly−Glu−Arg−Asn−Gln−Glu−Gln−Ar
g−Ser−Arg−Phe−Asn−OH で表わされるペプチド〔Ｄ−NMA²、CML²⁷〕−rGRF（１
−43）−OHを、上述のChemistry Lettersに記載される
ように、ベツクマン990ペプチド合成機でクロルメチル
化樹脂を用いて最初のカツプリングをした後、実施例１
と同じように段階的方法により合成した。本ペプチドは
TLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明
した。

実施例 4. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Lys−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln−Leu−Ser−Ala−A
rg−Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile−CML−Asn−Arg−N
H₂ で表わされるhGRF類似体フラグメント〔N^aMeTyr¹、Ly
s⁸、Ala¹⁵、CML²⁷、Asn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH₂を実
施例１に記載されるように、ベツクマン990ペプチド合
成機を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。
本ペプチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であ
ることが判明した。

Ｎ末端残基をかえて合成を繰り返し、〔N^aMeHis¹、Ly
s⁸、Ala¹⁵、CML²⁷、Asn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH₂を得
た。

実施例 5. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser−Ala−A
rg−Ｄ−Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile−CML−Ser−Ar
g−NH₂ で表わされるhGRF類似体フラグメント〔N^aMeTyr¹、Ｄ−
Lys²¹、CML²⁷〕−hGRF（１−29）−NH₂を実施例１に記
載されるように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つ
てMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチド
はTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判
明した。

実施例 6. 次式： N^aMe−His−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Lys−
Ser−Tyr−Arg−Arg−Ile−Leu−Gly−Gln−Leu−Tyr−
Ala−Arg−Ｄ−Arg−Leu−Leu−His−Glu−Ile−CML−A
sn−Arg−NH₂ で表される〔N^aMeHis¹、Ｄ−NMA²、Lys⁸、Ｄ−Arg²¹、C
ML²⁷〕−rGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載され
るように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA
樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLC
およびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明し
た。

実施例 7. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−C
^aMe−Ｄ−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−S
er−Ala−Arg−Ｄ−Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile−CM
L−Ser−Arg−NH₂ で表される〔N^aMeTyr¹、C^aMe−Ｄ−Tyr¹⁰、Ｄ−Lys²¹、
CML²⁷〕−hGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載され
るように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA
樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLC
およびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明し
た。

実施例 8. 次式： Ｈ−His−Ｄ−NMA−Asp−Ala−CML−Phe−Thr−Asn−Se
r−Tyr−Arg−Arg−Ile−Leu−Gly−Gln−Leu−Tyr−Al
a−Arg−Ｄ−Lys−Leu−Leu−His−Glu−Ile−Nva−Asn
−Arg−NH₂ で表される〔Ｄ−NMA²、CML⁵、Ｄ−Lys²¹、Nva²⁷〕−rG
RF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載されるように、
ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上で段
階的方法により合成した。本ペプチドはTLCおよびHPLC
を用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例 9. 次式： Ｈ−Ｄ−Phe−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Glu
−Ser−C^aMeTyr−Arg−Lys−Ile−Leu−Gly−Gln−Leu
−Ser−Ala−Arg−Lys−Len−CML−Gln−Asp−Ile−Met
−Ser−Arg−Gln−Gln−Gly−NH₂ で表される〔Ｄ−Phe¹、Ｄ−NMA²、Glu⁸、C^aMeTyr¹⁰、I
le¹³、CML²³〕−hGRF（１−32）−NH₂を、ベールらの米
国特許第4,292,313号に記載されるように、ベツクマン9
90ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上で段階的方法によ
り合成した。本ペプチドはTLCおよびHPLCを用いて実質
的に純粋であることが判明した。

実施例 10. 次式： N^aMeHis−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Se
r−Tyr−Arg−Lys−C^aMeVal−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser
−Ala−Arg−Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile−CML−Ser
−Arg−NH₂ で表される〔N^aMeHis¹、Ｄ−NMA²、C^aMeVal¹³−CML²⁷〕
−hGRF（１−29）−NH₂を、ベールらの米国特許第4,29
2,313号に記載されるように、ベツクマン990ペプチド合
成機を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。
本ペプチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であ
ることが判明した。

実施例 11. 次式： For−Tyr−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−S
er−C^aMeTyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Se
r−CMA−Arg−Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile−CML−As
n−Arg−Gln−Gln−Gly−NH₂ で表されるhGRF類似体フラグメント〔For−Tyr¹、Ｄ−N
MA²、C^aMeTyr¹⁰、CMA¹⁹、CML²⁷、Asn²⁸〕−hGRF（１−3
2）＋NH₂を、実施例１に記載されるように、ベツクマン
990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上で段階的方法に
より合成した。本ペプチドはTLCおよびHPLCを用いて実
質的に純粋であることが判明した。

実施例 12. 次式： Ｈ−His−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Ser−Se
r−Tyr−Arg−Lys−C^aMeIle−Leu−Gly−Gln−Leu−Tyr
−CMA−Arg−Lys−Leu−Leu−His−Glu−Ile−CML−Asn
−Arg−NH₂ で表される〔Ｄ−NMA²、Lys¹²、C^aMeIle¹³、CMA¹⁹、CML
²⁷〕−rGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載される
ように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹
脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLCお
よびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例 13. 次式： Ｈ−Tyr−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Se
r−Tyr−Arg−Arg−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser−Al
a−Arg−Lys−Leu−CML−Gln−Asp−Ile−Ile−Ser−Ar
g−NH₂ で表されるhGRF類似体フラグメント〔Ｄ−NMA²、Ar
g¹²、CML²³、Ile²⁷〕−hGRF（１−29）−NH₂を、実施例
１に記載されるように、ベツクマン990ペプチド合成機
を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。本ペ
プチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であるこ
とが判明した。

実施例 14. 次式： Ｈ−Ｄ−Phe−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn
−Ser−Tyr−Arg−Lys−C^aMeVal−Leu−Ala−Gln−Leu
−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−CML−Gln−Asp−Ile−Ｄ
−Met−Ser−Arg−NH₂ で表される〔Ｄ−Phe¹、Ｄ−NMA²、C^aMeVal¹³、Ala¹⁵、
CML²³、Ｄ−Met²⁷〕−hGRF（１−29）−NH₂を、実施例
１に記載されるように、ベツクマン990ペプチド合成機
を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。本ペ
プチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であるこ
とが判明した。

実施例 15. 次式： Ｈ−Tyr−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Se
r−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser−Al
a−Arg−Ｄ−Arg−Leu−CML−Gln−Asp−Ile−Met−Ser
−Arg−Gln−Gln−Gly−NH₂ で表される〔DNMA²、Ｄ−Arg²¹、CML²³〕−hGRF（１−3
2）−NH₂を、実施例１に記載されるように、ベツクマン
990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上で段階的方法に
より合成した。本ペプチドはTLCおよびHPLCを用いて実
質的に純粋であることが判明した。

実施例 16. 次式： desNH₂−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Lys−Ser
−Tyr−Arg−Arg−Ile−Leu−Gly−Gln−Leu−Tyr−Ala
−Arg−Lys−Leu−Leu−His−Asp−CML−Met−Asn−Arg
−NH₂ で表される〔desaminoHis¹、Ｄ−NMA²、Lys⁸、Asp²⁵、C
ML²⁶〕−rGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載され
るように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA
樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLC
およびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明し
た。

実施例 17. 次式： Ac−Ｄ−His−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Arg
−Ser−C^aMeTyr−Arg−Arg−CMA−Leu−Gly−Gln−Leu
−Tyr−Ala−Arg−Lys−Leu−Leu−His−Glu−Ile−CML
−Asn−Arg−NH₂ で表される〔Ac−Ｄ−His¹、Ｄ−NMA²、Arg⁸、C^aMeTyr
¹⁰、CMA¹³、CML²⁷〕−rGRF（１−29）−NH₂を、実施例
１に記載されるように、ベツクマン990ペプチド合成機
を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。本ペ
プチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であるこ
とが判明した。

実施例 18. 次式： Ｈ−Tyr−Ｄ−Ala−Ｄ−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn
−Ser−C^aMeTyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu
−Ser−CMA−Arg−Lys−Leu−CML−Gln−Asp−Ile−CML
−Ser−Arg−Gln−Gln−Gly−NH₂ で表される〔Ｄ−Ala²、Ｄ−Asp³、C^aMeTyr¹⁰、CMA¹⁹、
CML²³、CML²⁷〕−hGRF（１−32）−NH₂を、実施例１に
記載されるように、ベツクマン990ペプチド合成機を使
つてMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチ
ドはTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であることが
判明した。

実施例 19. 次式： Ｈ−Ｄ−Tyr−Ｄ−NMA−Asp−Ala−CML−Phe−Thr−Lys
−Ser−C^aMe−Ｄ−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln
−Leu−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile
−Ｄ−Met−Ser−Arg−NH₂ で表される〔Ｄ−Tyr¹、Ｄ−NMA²、CML⁵、Lys⁸、C^aMe−
Ｄ−Tyr¹⁰、Ala¹⁵、Ｄ−Met²⁷〕−hGRF（１−29−NH
₂を、実施例１に記載されるように、ベツクマン990ペプ
チド合成機を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により合成
した。本ペプチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的に純
粋であることが判明した。

実施例 20. 次式： Ｈ−Ｄ−His−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Arg
−Ser−Tyr−Arg−Arg−Leu−Leu−Gly−Gln−Leu−Tyr
−CMA−Arg−Lys−Leu−Leu−His−Glu−Ile−CML−Asn
−Arg−Gln−Gln−Gly−NH₂ で表される〔Ｄ−His¹、Ｄ−NMA²、Arg⁸、Leu¹³、CM
A¹⁹、CML²⁷〕−rGRF（１−32）−NH₂を、実施例１に記
載されるように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つ
てMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチド
はTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判
明した。

実施例 21. 次式： desNH₂Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Ser−Ser
−Tyr−Arg−Arg−Ile−Leu−Gly−Gln−Leu−Tyr−Ala
−Arg−Lys−Leu−CML−His−Glu−Ile−Met−Asn−Arg
−NH₂ で表されるrGRF類似体フラグメント〔desaminoTyr¹、CM
L²³〕−rGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載される
ように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹
脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLCお
よびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例 22. 次式： Ac−Ｄ−Tyr−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn
−Ser−C^aMeTyr−Arg−Lys−C^aMeVal−Leu−Gly−Gln−
Leu−Ser−CMA−Arg−Lys−Leu−CML−Gln−Asp−Ile−
Nle−Ser−Arg−NH₂ で表される〔Ac−Ｄ−Tyr¹、Ｄ−NMA²、C^aMeTyr¹⁰、C^aM
eVal¹³、CMA¹⁹、CML²³、Nle²⁷〕−hGRF（１−29）−NH₂
を、ベールらの米国特許4292313号に記載されるよう
に、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上
で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLCおよびH
PLCを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例 23. 次式： Ｈ−CML−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Glu−Se
r−Tyr−Arg−Arg−Ile−Leu−Gly−Gln−Leu−Tyr−CM
A−Arg−Lys−Leu−Leu−His−Glu−Ile−CML−Asn−Ar
g−NH₂ で表される〔CML¹、Ｄ−NMA²、Glu⁸、CMA¹⁹、Glu²⁵、CM
L²⁷〕−rGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載される
ように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹
脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLCお
よびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例 24. 次式： For−Ｄ−Tyr−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−As
n−Ser−Tyr−Arg−Lys−C^aMeVal−Leu−Gly−Gln−Leu
−Ser−CMA−Arg−Arg−Leu−CML−Gln−Asp−Ile−Met
−Asn−Arg−NH₂ で表される〔For−Ｄ−Tyr¹、Ｄ−NMA²、C^aMeVal¹³、CM
A¹⁹、Arg²¹、CML²³、Asn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH
₂を、ベールらの米国特許第4,292,313号に記載されるよ
うに、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂
上で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLCおよ
びHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例 25. 次式： Ｈ−Tyr−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−C^aMeVal−Leu−Gly−Gly−Leu−Ser−Al
a−Arg−Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile−CML−Ser−Ar
g−NH₂ で表される〔NMA²、C^aMeVal¹³、CML²⁷〕−hGRF（１−2
9）−NH₂ を、ベールらの米国特許第4,292,313号に記載されるよ
うに、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂
上で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLCおよ
びHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明した。こ
のペプチドを水に溶解し、1N酢酸を加えた溶液を凍結乾
燥することによつて酢酸塩を調製した。

実施例 26. 次式： Ｈ−Tyr−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Arg−Se
r−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser−CM
A−Arg−Lys−Leu−CML−Gln−Asp−Ile−Nle−Ser−Ar
g−Gln−Gln−Gly−NH₂ で表されるhGRF類似体フラグメント〔Ｄ−NMA²、Arg⁸、
CMA¹⁹、CML²³、Nle²⁷〕−hGRF（１−32）−NH₂を、実施
例１に記載されるように、ベツクマン990ペプチド合成
機を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。本
ペプチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋である
ことが判明した。

実施例 27. 次式： Ｈ−His−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Ser−Ser−T
yr−Ser−Ser−Tyr−Arg−Arg−Ile−Leu−Gly−Gln−C
ML−Tyr−Ala−Arg−Arg−Leu−Leu−His−Glu−Ile−N
le−Asn−Arg−NH₂ で表される〔CML¹⁷、Arg²¹、Nle²⁷〕−rGRF（１−29）
−NH₂を、実施例１に記載されるように、ベツクマン990
ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により
合成した。本ペプチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的
に純粋であることが判明した。

実施例 28. 次式： having the formula:H−Tyr−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile
−Phe−Thr−Asn−Ser−Tyr−Arg−Lys−C^aMeVal−Leu
−Gly−Gln−Leu−Ser−CMA−Arg−Lys−Leu−CML−Gln
−Asp−Ile−Nle−Asn−Arg−NH₂ で表されるhGRF類似体フラグメント〔Ｄ−NMA²、C^aMeVa
l¹³、CMA¹⁹、CML²³、Nle²⁷、Asn²⁸〕−hGRF（１−29）
−NH₂を、実施例１に記載されるように、ベツクマン990
ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により
合成した。本ペプチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的
に純粋であることが判明した。

実施例 29. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln−Leu−Ser−Ala−A
rg−Lys−Leu−Leu−Gln−Glu−CML−Nle−Asn−Arg−N
H₂ で表される〔N^aMeTyr¹、Ala¹⁵、CML²⁶、Nle²⁷、Asn²⁸〕
−hGRF（１−29）−NH₂having the formula:を、実施例
１に記載されるように、ベツクマン990ペプチド合成機
を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。本ペ
プチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であるこ
とが判明した。〔α〕_Ｄ＝−43.5゜±１（ｃ＝１、１％
酢酸） 実施例 30. 次式： Ｈ−Met−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Ser−Ser−T
yr−Arg−Arg−Ile−Leu−Gly−Gln−Leu−Tyr−CMA−A
rg−Arg−Leu−Leu−His−Glu−Ile−CML−Asn−Arg−N
H₂ で表される〔Met¹、CMA¹⁹、Arg²¹、CML²⁷〕−rGRF（１
−29）−NH₂を、実施例１に記載されるように、ベツク
マン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上で段階的方
法により合成した。本ペプチドはTLCおよびHPLCを用い
て実質的に純粋であることが判明した。

実施例 31. 次式： Ｈ−pCl−Phe−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Se
r−Ser−C^aMeTyr−Arg−Arg−Ile−Leu−Gly−Gln−Leu
−Tyr−CMA−Arg−Arg−Leu−Leu−His−Asp−Ile−CML
−Asn−Arg−Gln−Gln−Gly−Glu−Arg−Asn−Gln−Glu
−Gln−Arg−Ser−Arg−Phe−Asn−OH で表される〔pCl−Phe¹、Ｄ−NMA²、C^aMeTyr¹⁰、CM
A¹⁹、Arg²¹、CML²⁷〕−rGRF（１−43）−OHを、実施例
３に記載されるように、ベツクマン990ペプチド合成機
を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。本ペ
プチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であるこ
とが判明した。

実施例 32. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln−Leu−Ser−Ala−A
rg−Lys−Leu−Leu−Gln−Glu−Ile−Nle−Asn−Arg−N
H₂ で表されるhGRF類似体フラグメント〔N^aMeTyr¹、Al
a¹⁵、CML²³、Nle²⁷、Asn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH
₂を、実施例１・ベールらの米国特許第4,292,313号に記
載されるように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つ
てMBHA樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチド
はTLCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判
明した。精製したペプチドの比旋光度を光電旋光計で測
定したところ〔α〕_Ｄ＝−44.0゜±１（ｃ＝１、１％酢
酸）であつた。

実施例 33. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−CML−Leu−Ala−Gln−Leu−Ser−Ala−A
rg−Lys−Leu−Leu−Gln−Glu−Ile−CML−Asn−Arg−N
H₂ で表されるhGRF類似体フラグメント〔N^aMeTyr¹、CM
L¹³、Ala¹⁵、CML²⁷、Asn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH
₂を、実施例１・ベールらの米国特許第4292313号に記載
されるように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてM
BHA樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはT
LCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明し
た。

実施例 34. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln−Leu−Ser−Ser−C
MA−Arg−Lys−Leu−Leu−Gln−Glu−Ile−Nle−Asn−A
rg−NH₂ で表される〔N^aMeTyr¹、Ala¹⁵、CMA¹⁹、Nle²⁷、Asn²⁸〕
−hGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載されるよう
に、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上
で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLCおよびH
PLCを用いて実質的に純粋であることが判明した。精製
したペプチドの比旋光度を光電比旋光計で測定したとこ
ろ〔α〕_Ｄ＝−45.5゜±１（ｃ＝1,1％酢酸）であつ
た。

実施例 35. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln−CML−Ser−Ala−A
rg−Lys−Leu−Leu−Gln−Glu−Ile−Nle−Asn−Arg−N
H₂ で表される〔N^aMeTyr¹、Ala¹⁵、CML¹⁷、Nle²⁷、Asn²⁸〕
−hGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載されるよう
に、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上
で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLCおよびH
PLCを用いて実質的に純粋であることが判明した。精製
したペプチドの比旋光度を光電旋光計で測定したとこ
ろ、〔α〕_Ｄ＝49.0゜±１（ｃ＝1,1％酢酸）であつ
た。

実施例 36. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln−Len−Ser−Ala−A
rg−Lys−Leu−CML−Gln−Glu−Ile−Nle−Asn−Arg−N
H₂ で表される〔N^aMeTyr¹、Ala¹⁵、CML²³、Nle²⁷、Asn²⁸〕
−hGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載されるよう
に、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上
で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLCおよびH
PLCを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例 37. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−CML−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln−Leu−Ser−Ala−A
rg−Lys−Leu−Leu−Gln−Glu−Ile−Nle−Asn−Arg−N
H₂ で表される〔N^aMeTyr¹、CML⁵、Ala¹⁵、Nle²⁷、Asn²⁸〕
−hGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載されるよう
に、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上
で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLCおよびH
PLCを用いて実質的に純粋であることが判明した。精製
したペプチドの比旋光度を光電旋光計を用いて測定した
ところ、〔α〕_Ｄ＝−45.0゜±（ｃ＝1,1％酢酸）であ
つた。

実施例 38. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−CML−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−CML−Leu−Ala−Gln−CML−Ser−CMA−A
rg−Lys−CML−Leu−Gln−Glu−Ile−CML−Asn−Arg−N
H₂ で表される〔N^aMeTyr¹、CML^{5,13,17,22,27}、Ala¹⁵、CMA
¹⁹、Asn²⁸〕−hGRF（１−９）−NH₂を、実施例１に記載
されるように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてM
BHA樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはT
LCおよびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明し
た。

実施例 39. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln−Leu−Ser−Ala−A
rg−Lys−CML−Leu−Gln−Glu−Ile−CML−Asn−Arg−N
H₂ で表される〔N^aMeTyr¹、Ala¹⁵、CML^22,27、Asn²⁸〕−hG
RF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載されるように、
ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上で段
階的方法により合成した。本ペプチドはTLCおよびHPLC
を用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例 40. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln−Leu−Ser−CMA−A
rg−Lys−Leu−CML−Gln−Glu−Ile−Nle−Asn−Arg−N
H₂ で表される〔N^aMeTyr¹、Ala¹⁵、CMA¹⁹、CMA²³、Nle²⁷、
Asn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載され
るように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA
樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLC
およびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明し
た。

実施例 41. 次式： N^aMeTyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn−Ser−T
yr−Arg−Lys−Val−Leu−Ala−Gln−CML−Ser−CMA−A
rg−Lrs−CML−Leu−Gln−Glu−Ile−CML−Asn−Arg−N
H₂ で表される〔N^aMeTyr¹、Ala¹⁵、CML^17,22,27、CMA¹⁹、A
sn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH₂を、実施例１に記載され
るように、ベツクマン990ペプチド合成機を使つてMBHA
樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはTLC
およびHPLCを用いて実質的に純粋であることが判明し
た。

実施例 42. 次式： Ｈ−C^aMeHis−Ｄ−NMA−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−Asn
−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser
−Ala−Arg−Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile−CML−Ser
−Arg−Gln−Gln−Gly−Glu−Ser−Asn−Gln−Glu−Arg
−Gly−Ala−Arg−Ala−Arg−Leu−NH₂ で表される40残基からなるペプチド〔C^aMeHis¹、Ｄ−NM
A²、CML²⁷〕−hGRF（１−44）−NH₂を、ベールらの米国
特許第4,292,313号に記載されるように、ベツクマン990
ペプチド合成機を使つてMBHA樹脂上で段階的方法により
合成した。本ペプチドはTLCおよびHPLCを用いて実質的
に純粋であることが判明した。

実施例で調製した合成ペプチドは、インビトロ検定に
よつて、合成hpGRF（１−40）−OHに比べて一般にGHの
分泌に対する影響が大きく本質的な活性は似ていること
が判明した。これらの合成ペプチドは全て生物学的に活
性であり、下垂体によるGHの分泌を効果的に刺激する有
用な化合物であると考えられる。

成長ホルモンの分泌を促進する代表的な合成ペプチド
の相対効力を決定するために、標品として合成hpGRF
（１−40）−OHを用いて等モル濃度の代表的な合成類似
体と並行比較することによりインビトロ検定を行つた。
ここでは、試験の３から５日前に摘出したラツト下垂体
細胞を含む培養物を使用した。比較試験のために成長ホ
ルモンの分泌が最適であると考えられる培養物を、ベー
ルらのEndocrinology，91、562−572（1972）に記載さ
れ、またベールらのEndocrionlogy，112、1553−1555
（1983）にさらに詳しく記載される一般的方法により使
用した。試験する物質とのインキユベーシヨンは３から
４時間行ない、培地アリコートをとり出して、それらの
免疫反応性GH（irGH）の含有地を周知のラジオイムオア
ツセイで測定するために処理した。

等モル濃度の比較試験の結果を表１に示す。

第 １ 表 ペプチド インビトロ効力 hGRF（１−40）−OH （標準） 1.0 〔N^aMeTyr¹,Ala¹⁵,CML²⁷, Asn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH₂・ 10.00（5.2−20.1） 〔N^aMeTyr¹,Ala¹⁵,CML²⁶, Nle²⁷,Asn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH₂・6.44（4.0−10.
3） 〔N^aMeTyr¹,Ala¹⁵,CML²³, Nle²⁷,Asn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH₂・ 1.96（1.1−3.
3） 〔N^aMeTyr¹,Ala¹⁵,CML¹⁷, Nle²⁷,Asn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH₂・ 5.41（3.5−8.
3） 〔N^aMeTyr¹,CML⁵,Ala¹⁵, Nle²⁷,Asn²⁸〕−hGRF（１−29）−NH₂・ 3.59（2.3−5.
5） 成長ホルモン分泌のインビトロ試験の他に、合成ペプ
チドをウレタンで麻酔した雄ラツトに静脈注射してイン
ビボ試験をしたところ、外因のGRFに対する反応は継続
しながら自発的なGH分泌は抑えられることが判明した。
血液サンプルは注射前、注射後10分、30分、60分後直ち
に採取し、血液中のGHレベルをラジオイムノアツセイで
測定した。かかるインビボ試験によつて、各々の合成ペ
プチドはhpGRF（１−40）−OHに比べて生物学的効力が
大きいことが判明した。これらの合成ペプチドは、静脈
注射から30分および60分後の血液中の下垂体GHのレベル
によつて示されるように、実質的な効果がより長く持続
する。GH分泌を検出するのに効果的なものとして知られ
る他のGRインビボ試験を、以上の結果を確認するために
行つた。GH分泌を促すのに効果的な上記ペプチドの投与
量は体重1kgあたり約500ナノグラムから約50ナノグラム
であると考えられる。

この種の合成hGRF類似体およびおそらくrGRF類似体は
医師がGH産生を高めることを望むヒトへ適用するのに有
用であろう。この種の類似体によるGH分泌の刺激は、内
因性GRFの産生低下に起因する完全または相対的GH欠乏
症を有する患者を対象としている。さらに、増大したGH
分泌およびそれに伴う成長増加は正常のGHレベルを有す
るヒトまたは動物に現われるであろう。また、投与は身
体の脂肪含量を変化させ、その他のGH依存性の代謝、免
疫および発生過程を変更させるであろう。例えば、これ
らの類似体は火傷を負つたような情況下にあるヒトの同
化過程を刺激する手段として有用でありうる。他の例と
してこれらの類似体は鶏、七面鳥、豚、ヤギ、牛および
羊のような商業用温血動物に、または魚や例えばウミガ
メやウナギのような冷血動物および両生類の養殖に、有
効量の本ペプチドを与えることにより成長をはやめ且つ
タンパク質対脂肪の比を高めるために使用しうる。

ヒトに投与する場合、これらの合成ペプチドは少なく
とも約93％、好ましくは少なくとも98％の純度をもつべ
きである。本明細書において純度とは意図するペプチド
が存在する全てのペプチドおよびペプチドフラグメント
の表示重量％を占めることを意味する。この種の合成ペ
プチドを商業用または他の動物に成長促進および脂肪含
量低下の目的で投与する場合は、低い純度も許容しうる
かも知れない。

これらの合成ペプチドまたはその無毒性塩は、医薬組
成物をつくるために薬学的または獣医学的に受容される
キヤリアーと混合されて、ヒトを含めた動物へ静脈内、
皮下、筋肉内、経皮内（例えば鼻控内）、または経口的
にさえ投与することができる。投与は治癒しようとする
受容者がこのような治療上の処置を必要とする場合にGH
の放出を刺激すべく医師により行われる。必要な投与量
は治癒しようとするそれぞれの症状、その症状の程度、
および治療の持続時間により変化するであろう。

この種のペプチドは無毒性塩、例えば酸付加塩または
亜鉛や鉄などとの金属錯体（本明細書においては金属錯
体も塩として考える）の形でしばしば投与される。酸付
加塩の例は塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、
酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、リンゴ
酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩などである。活性成
分を錠剤の形で経口的に投与する場合、錠剤はトラガカ
ント、トウモロコシでんぷんまたはゼラチンのような結
合剤；アルギン酸のような崩壊剤；およびステアリン酸
マグネシウムのような滑沢剤を含みうる。液体での投与
が望まれる場合は甘味料および／または風味料を使用す
ることができ、また等張塩水やリン酸緩衝液での静脈内
投与を行うこともできる。

本ペプチドは医師の指導のもとでヒトに投与されるべ
きであり、医薬組成物は通常薬学的に受容される慣用の
固体または液体キヤリアーと共にペプチドを含むだろ
う。一般に、非経口投与量は受容者の体重1kgあたりペ
プチド約0.01〜約１μｇであるだろう。

かかるペプチドを長時間（例えば単回投与で１週間か
ら１年）提供するのも好ましい。徐放性を有するデポー
製剤や埋込み製剤とすることができる。例えば、投与製
剤は、例えば高分子塩基酸の酸付加塩、多価金属カチオ
ンの塩またはこれらの塩の組み合わせたものなどの体液
における安定性が低い化合物の薬学的に受容し得る塩を
含有することができる。比較的不溶性の塩はゲル（例え
ばステアリン酸アルミニウムゲル）中で製剤してもよ
い。投与用として適切な徐放性デポー製剤は、例えば米
国特許第3,773,919号に記載されるようなポリ酢酸／ポ
リグリコール酸のような分解速度が遅い非毒性または非
抗原性のポリマー内に分散またはカプセル化したペプチ
ドを含有していてもよい。これらの化合物はまた、シラ
ステイツク埋込み製剤中に入れてもよい。

また、メイヤーら（Meyer,B,R.）、Clin.Pharm.＆The
rapeutics, 44、６、607−612（1988）に報告されている
ように、長時間電流を使用してヒトに経皮的にペプチド
を投与することも可能である。例えば、９ボルトのバツ
テリーを使用して0.2ミリアンペアーの電流をヒトの皮
膚に流し、それによつて表皮から血液中にペプチドを効
果的に入れるようにした経皮投与用器具を使用してもよ
い。

本発明を本発明者が認める最もよい方法である好適な
実施態様で説明してきたが、当分野での通常の知識を有
する者に明らかないろいろな変更および修飾が特許請求
の範囲に記載する本発明の範囲から逸脱することなくさ
れうることを理解すべきである。例えば、ペプチド鎖の
修飾、とりわけペプチドのカルボキシル末端から始まり
大体29位までの欠失は今までに知られた実験慣習に従つ
て行われ、それによりペプチドの生物学的効力の全てか
まさに本質的部分を保持するペプチドやペプチドフラグ
メントがつくり出され、この種のペプチドも本発明の範
囲内に含まれると考えられる。さらに、両末端あるいは
そのいずれかでの付加も行われ、かつ／またペプチド化
学の分野でよく知られるように自然界に存在する残基の
代わりにほぼ均等の残基を用いて、タンパク質の加水分
解に対して増強された抵抗性を有し、また本発明の範囲
を逸脱しない請求されたポリペプチドの効力の少なくと
も本質的部分を有する他の類似体を製造することができ
る。さらに現在の技術によつてＣ末端の好ましいNH₂基
に対する修飾を行つてもよい。例えば、Ｃ末端のアミノ
酸残基のカルボキシル部分は−COOR、−CRO、−CONHNH
R、−CON（Ｒ）（Ｒ′）または−CH₂OR（ここでＲおよ
びＲ′は低級アルキル、フルオロ低級アルキルまたは水
素である）とすることができる。このような修飾を行つ
ても合成ペプチドの効力は変わらないことから、かかる
修飾も本発明の範囲を逸脱するものではない。

本発明の様々な特徴は上述の特許請求の範囲において
強調される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ヴェール，ワイリー・ウォーカー・ジュ ニアー アメリカ合衆国カリフォルニア州92037, ラ・ホーラ，ヴァルデツ 1643 (72)発明者 リヴィア，キャサリン・ローレ アメリカ合衆国カリフォルニア州92037, ラ・ホーラ，ブラックゴールド・ロード 9674 (56)参考文献 特開 昭64−9999（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) ＣＡ（ＤＩＡＬＯＧ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】以下の式： [N^aMeTyr¹,Ala¹⁵,CML²⁷,Asn²⁸]−hGRF(1-29)−NH₂ で表される合成ペプチドまたはその無毒性塩。
2. 【請求項２】以下の式： [N^aMeTyr¹,Ala¹⁵,CML²⁶,Nle²⁷,Asn²⁸]-hGRF(１−29)-NH
   ₂ で表される合成ペプチドまたはその無毒性塩。