JP2012167112A - 腫瘍壊死因子−アルファに対する改良ナノボディ(商標) - Google Patents
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Abstract
【解決手段】前記のナノボディおよびポリペプチドをコードする核酸、前記のナノボディおよびポリペプチドの調製方法、前記のナノボディまたはポリペプチドを発現している、または発現可能な宿主細胞、前記のナノボディ、ポリペプチド、核酸、または宿主細胞を含む組成物、そして特に予防、治療、診断を目的とした前記のナノボディ、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、組成物。
【選択図】なし
Description
− 一価型、多価型(例、二価型)および/または多特異型(例、国際公開第04/041862号記載または後述の多特異型の1つ)のいずれかでのTNF‐アルファに対する親和性の増大;
− 多価型(例、二価型)でのフォーマッティングに対する適合性の改良;
− 多特異型(例、国際公開第04/041862号記載または後述の多特異型の1つ)でのフォーマッティングに対する適合性の改良;
− 「ヒト化」置換(本明細書で規定)における適合性または感受性の改善;および/または
− 一価型、多価型(例、二価型)および/または多特異型(例、国際公開第04/041862号記載または後述の多特異型の1つ)、一価型のいずれかにおける免疫原性の低下;
− 一価型、多価型(例、二価型)、および/または多特異型(例、国際公開第04/041862号記載または後述の多特異型の1つ)、一価型のいずれかにおける安定性の増大;
− 一価型、多価型(例、二価型)、および/または多特異型(例、国際公開第04/041862号記載または後述の多特異型の1つ)、一価型のいずれかにおけるTNF‐アルファに対する特異性の増大;
− 異なった種由来のTNF‐アルファとの交差感受性の低下、または必要に応じて、上昇;
および/または
− 一価型、多価型(例、二価型)、および/または多特異型(例、国際公開第04/041862号記載または後述の多特異型の1つ)のいずれかでの医薬用途(予防的使用または治療的使用を含む)および/または診断的用途(撮像目的での使用を含むが、これに限定されない)に好ましい1つ以上の特性の改善。
I)ナノボディ TNF1(配列番号:52)と同じTNF‐アルファの三量体上のエピトープに対して指向性を有するナノボディ。
II)ナノボディ TNF3(配列番号:60)と同じTNF‐アルファの三量体上のエピトープに対して指向性を有するナノボディ。
III)少なくとも以下のアミノ酸残基を含むTNF‐アルファの三量体のエピトープに対して指向性を有するナノボディ:単量体Aの88番目の位置がGln、単量体Aの90番目の位置がLys、単量体Bの146番目の位置がGlu。
IV)以下のアミノ酸残基を含むTNF‐アルファの三量体のエピトープに対して指向性を有するナノボディ:単量体Aの88番目の位置がGln、単量体Aの90番目の位置がLys、単量体Bの146番目の位置がGlu、TNF‐アルファの単量体Aの以下のアミノ酸残基本の少なくとも1つ、好ましくは2つ以上、より好ましくは5つ以上を少なくともさらに含む: 24番目の位置のGly、25番目の位置のGln、72番目の位置のThr、73番目の位置のHis、74番目の位置のVal、75番目の位置のLeu、77番目の位置のThr、79番目の位置のThr、83番目の位置のIle、89番目の位置のThr、91番目の位置のVal、92番目の位置のAsn、97番目の位置のIle、131番目の位置のArg、135番目の位置のGlu、136番目の位置のIle、137番目の位置のAsn、138番目の位置のArg、139番目の位置のPro、140番目の位置のAsp、そして単量体Bの以下の残基:20番目の位置のPro、32番目の位置のArg、65番目の位置のLys、112番目の位置のLys、115番目の位置のTyr、145番目の位置のAla、147番目の位置のSer。
V)以下のアミノ酸残基を含むTNF‐アルファの三量体のエピトープに対して指向性を有するナノボディ:単量体Aの88番目の位置のGln、単量体Aの90番目の位置のLys、単量体Bの146番目の位置のGlu、そしてTNF‐アルファ単量体Aの以下のアミノ酸残基の少なくとも1つ、好ましくは2つ以上、さらに好ましくは5つ以上をさらに含む:75番目の位置のLeu、77番目の位置のThr、79番目の位置のThr、80番目の位置のIle、81番目の位置のSer、87番目の位置のTyr、89番目の位置のThr、91番目の位置のVal、92番目の位置のAsn、95番目の位置のSer、97番目の位置のIle、135番目の位置のGlu、136番目の位置のIle、137番目の位置のAsn、そして単量体Bの以下の残基:33番目の位置のAla、145番目の位置のAla、147番目の位置のSer。
− 国際公開第04/041862号の実施例1、3)に記載のKYM細胞を使用した細胞ベース分析試験においてEC50値が、同じ分析試験で国際公開第04/041862号のナノボディ VHH 3E(配列番号:4)のEC50値よりも小さくなる上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。または該ナノボディのヒト化変異体。
− 国際公開第04/041862号の実施例1、3)に記載のKYM細胞を使用した細胞ベース分析試験においてEC50値が12nMよりも小さい上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
− 国際公開第04/041862号の実施例1、3)に記載のKYM細胞を使用した細胞ベース分析試験においてEC50値が5nMよりも小さい上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
− 国際公開第04/041862号の実施例1、3)に記載のKYM細胞を使用した細胞ベース分析試験においてEC50値が3nMよりも小さい上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。ヒト化ナノボディである上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
そしてこの実施態様のいくつかの好ましい態様は、
− GLEW‐クラスナノボディである上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディに関する。
− ヒト化GLEW‐クラスナノボディである上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− 103番目の位置にアルギニン残基(R)を含む上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− 103番目の位置にアルギニン残基(R)を含み、ヒト化されている上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− GLEW‐クラスナノボディであり、103番目の位置にアルギニン残基(R)を含み、ヒト化されている上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− 108番目の位置にロイシン残基(L)を含む上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− 配列番号:52(TNF1)、76(TNF13)、77(TNF14)、95(TNF29)、96(TNF30)のアミノ酸配列の1つと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有する上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
a)CDR1が
− アミノ酸配列DYWMY;または
− アミノ酸配列DYWMYと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列;または
− アミノ酸配 列DYWMYと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸
配列;
を含み、
b)CDR2が
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKG;または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと少なくとも80%、好ま
しくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましく
は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列;または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと2つ、または1つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列;
を含み、
c)CDR3が
− アミノ酸配列SPSGFN;または
− アミノ酸配列SPSGFNと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%
、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の
配列同一性を有するアミノ酸配列;または
− アミノ酸配列SPSGFNと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸
配列;
を含む、
上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGである上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR3がアミノ酸配列SPSGFNである上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み;CDR3がアミノ酸配列SPSG
FNを含み;または
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み;CDR2がアミノ酸配列EINT
NGLITKYPDSVKGを含み;または
− CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含み、CDR
3がアミノ酸配列SPSGFNを含み、
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み;CDR3がアミノ酸配列SPSGFNを
含む、上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み;CDR2がアミノ酸配列EINTNGL
ITKYPDSVKGを含み、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNを含む、上記の
I)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− 上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディにおいて、
a)CDR1が
− アミノ酸配列DYWMY;または
− アミノ酸配列DYWMYと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列;または
− アミノ酸配列DYWMYと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配
列;
であり、
b)CDR2が
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKG;または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと少なくとも80%、好ま
しくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましく
は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列;または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと2つ、または1つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列;
であり、
c)CDR3が
− アミノ酸配列SPSGFNである;または
− アミノ酸配列SPSGFNと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列;または
− アミノ酸配列SPSGFNと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸
配列;
であり、
− CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGである上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR3がアミノ酸配列SPSGFNである上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− 上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディにおいて、
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYであり、CDR3がアミノ酸配列SPSG
FNであり、または
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYであり、CDR2がアミノ酸配列EINT
NGLITKYPDSVKGであり、または
− CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGであり、CDR
3がアミノ酸配列SPSGFNであり、
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNを
含む、上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み、CDR2がアミノ酸配列EINTNGL
ITKYPDSVKGを含み、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNを含む、上記の
− 上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディにおいて、
− 任意のアミノ酸置換が保存アミノ酸の置換であり、および/または
− アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換を含むのみで
、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、
そしてこの実施態様のいくつかの他の好ましい態様は以下に関する:
− ヒト化KERE‐クラスナノボディである上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の
ナノボディ。
− 配列番号:50(TNF3)、83(TNF20)、85(TNF21)、85(TNF
22)、96(TNF23)あるいは98(TNF33)のアミノ酸配列の1つと少
なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、
さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有する上記
のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
a)CDR1が
− アミノ酸配列NYYMGである、または
− アミノ酸配列NYYMGと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列NYYMGと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配
列であり、
b)CDR2が
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGである、または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと少なくとも80%、好ま
しくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましく
は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと2つ、または1つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列であり、
c)CDR3が
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである、または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと少なくとも80%、好ましくは
少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少な
くとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと2つ、または1つだけアミノ酸
が異なるアミノ酸配列であり、
のナノボディ。
− CDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGである、上記のI)〜
V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである、上記のI)〜V)の
いずれか1つに記載のナノボディ。
− 上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディにおいて、
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGであり、CDR3がアミノ酸配列SILP
LSDDPGWNTYである、または
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGであり、CDR2がアミノ酸配列NISW
RGYNIYYKDSVKGである、または
− CDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGであり、CDR
3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである。
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGであり、CDR2がアミノ酸配列SILPLSD
DPGWNTYであり、CDR3がアミノ酸配列ILPLSDDPGWNTYである
、上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− 上記のI)〜V)のいずれか1つに記載のナノボディにおいて、
− 任意のアミノ酸置換が好ましくは保存アミノ酸の置換であり、および/または
− 該アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換を含むのみ
で、アミノ酸の欠失または挿入を含まない。
そしてさらに他の特に好ましいいくつかの態様では:
VII)上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含む、または主成分とするタンパク質またはポリペプチド。
VIII)上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含む、タンパク質またはポリペプチド。
IX)上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、タンパク質またはポリペプチドが、TNF三量体と結合時に、TNF三量体によって媒介されるTNF受容体の架橋および/または該受容体の架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害または低下させることができる、タンパク質またはポリペプチド。
X)上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、TNF三量体上の少なくとも2つのTNF受容体結合部位への分子内結合が可能である、タンパク質またはポリペプチド。
XI)適切なリンカーを介して連結した上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含む、タンパク質またはポリペプチド。
XII)適切なリンカーを介して連結した上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、ペグ化された、タンパク質またはポリペプチド。
XIII)上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対する少なくとも1つのナノボディをさらに含む、タンパク質またはポリペプチド。
XIV)上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対する少なくとも1つのナノボディをさらに含み、TNF三量体との結合時に該TNF三量体によって媒介されるTNF受容体の架橋および/または該受容体の架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害または低下させることができる、タンパク質またはポリペプチド。
XV)上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対する少なくとも1つのナノボディをさらに含み、TNF三量体上の少なくとも2つのTNF受容体結合部位への分子内結合が可能である、タンパク質またはポリペプチド。
XVI)上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対する1つのナノボディをさらに含み、上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディが任意で適切なリンカーを介してヒト血清アルブミンに対して指向性を有する1つのナノボディと結合する、タンパク質またはポリペプチド。
XVII)上記のI)〜V)のいずれか1項記載の2つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対する少なくとも1つのナノボディをさらに含み、上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのナノボディが任意で適切なリンカーを介してヒト血清アルブミンに対して指向性を有する1つのナノボディと結合し、TNF三量体との結合時に該TNF三量体によって媒介されるTNF受容体の架橋および/または該受容体の架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害または低下させることができる、タンパク質またはポリペプチド。
XVIII)上記のI)〜V)のいずれか1項記載の2つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対する1つのナノボディをさらに含み、上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つの各ナノボディが任意で適切なリンカーを介して、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する1つのナノボディと連結されており、TNF三量体上の少なくとも2つのTNF受容体結合部位への分子内結合が可能である、タンパク質またはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがナノボディ ALB 1 (配列番号:63)のヒト化変異体である、上記のVI)〜XVIII)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディが、ALB3(配列番号:87)、ALB4(配列番号:88)、ALB5(配列番号:89)、ALB6(配列番号:100)、ALB7(配列番号:101)、ALB8(配列番号:102)、ALB9(配列番号:103)、ALB10(配列番号:104)からなるグループから選択する、上記のVI)〜XVIII)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがALB8である、上記のVI)〜XVIII)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 上記のI)〜V)のいずれか1つに記載の2つのヒト化ナノボディ、そしてナノボディ ALB 1 (配列番号:63)の1つのヒト化変異体を含む、または主成分とする、上記のVI)〜XVIII)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
XIX)TNF三量体との結合時に、該TNF三量体によって媒介されるTNF受容体の架橋および/または該受容体の架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害または低下させることができるように、TNF三量体の受容体結合部位に位置する、および/または一部を形成する、それぞれTNF‐アルファ(特にTNF‐アルファ三量体)上のエピトープに対して指向性を有する2つ以上の免疫グロブリン可変領域(またはその適切な断片)を含む、または主成分とするタンパク質またはポリペプチドに関する。
XX)該ポリペプチドがTNF三量体上の少なくとも2つのTNF受容体結合部位に分子内結合できるように、TNF三量体の受容体結合部位に位置する、および/またはその一部を形成する、TNF‐アルファ(特にTNF‐アルファ三量体)上のエピトープをそれぞれターゲットとする2つ以上の免疫グロブリン可変領域(またはその適切な断片)を含む、または主成分とするタンパク質またはポリペプチド。
− 該免疫グロブリン可変領域がナノボディ TNF1 (配列番号:52)と同じエピトープに結合可能な、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 該免疫グロブリン可変領域が、以下のアミノ酸残基を少なくとも含むTNF三量体のTNF受容体結合部位内のエピトープに対して結合可能な、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド:単量体Aの88番目の位置がGln、単量体Aの90番目の位置がLys、単量体Bの146番目の位置がGlu。
該免疫グロブリン可変領域が、以下のアミノ酸残基を少なくとも含むTNF三量体のTNF受容体結合部位内のエピトープに対して結合可能な、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド:単量体Aの88番目の位置がGln、単量体Aの90番目の位置がLysおよび単量体Bの146番目の位置がGlu。そして、さらにTNF‐アルファ単量体Aの以下のアミノ酸残基の少なくとも1つ、好ましくは2つ以上、さらに好ましくは5つ以上、好ましくは全て、または実質的に全てをさらに含む:24番目の位置のGly、25番目の位置のGln、72番目の位置のThr、73番目の位置のHis、74番目の位置のVal、75番目の位置のLeu、77番目の位置のThr、79番目の位置のThr、83番目の位置のIle、89番目の位置のThr、91番目の位置のVal、92番目の位置のAsn、97番目の位置のIle、131番目の位置のArg、135番目の位置のGlu、136番目の位置のIle、137番目の位置のAsn、138番目の位置のArg、139番目の位置のPro、140番目の位置のAsp、そして単量体Bの以下の残基:20番目の位置のPro、32番目の位置のArg、65番目の位置のLys、112番目の位置のLys、115番目の位置のTyr、145番目の位置のAla、147番目の位置のSer。
− 第一の免疫グロブリン可変領域のN末端と第二の免疫グロブリン可変領域のC末端の距離が55〜200オングストロームになるような、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一の免疫グロブリン可変領域のN末端と第二の免疫グロブリン可変領域のC末端の距離が65〜150オングストロームになるような、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域がリンカーまたはスペーサーを介して連結する、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− リンカーまたはスペーサーがアミノ酸配列を有する、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− リンカーまたはスペーサーが少なくとも14個のアミノ酸残基を含む、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− リンカーまたはスペーサーが少なくとも17〜50個のアミノ酸残基を含む、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− リンカーまたはスペーサーがグリシンおよびセリン残基を主成分とする、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− リンカーまたはスペーサーがGS30 (配列番号:69)である、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が別の成分を介して互いに連結する、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 他の該成分がタンパク質またはポリペプチドの成分である、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 他の該成分がタンパク質またはポリペプチドに少なくとも1つの所望の特性を付与する、またはタンパク質またはポリペプチドの少なくとも1つの所望の特性を改善させる、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 他の該成分がタンパク質またはポリペプチドの半減期を向上させる、またはタンパク質またはポリペプチドの免疫原性を低下させる、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域がリンカーまたはスペーサーを介して他の該成分に連結する、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− リンカーまたはスペーサーが本質的にグリシンおよびセリン残基からなる、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 他の該成分がナノボディである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 他の成分がヒト血清アルブミンをターゲットとしている、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがヒト化ナノボディである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがナノボディALB1(配列番号:63)のヒト化変異体である、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがALB3(配列番号:87)、ALB4(配列番号:88)、ALB5(配列番号:89)、ALB6(配列番号:100)、ALB7(配列番号:101)、ALB 8(配列番号:102)、ALB9(配列番号:103)、ALB10(配列番号:104)からなるグループから選択される、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがALB 8である、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域がナノボディである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、TNFに対するKoff速度が2.10×10−3(1/s)よりも小さい、好ましくは1.10×10−3(1/s)よりも小さいナノボディである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド、または該ナノボディのヒト化変異体である、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、国際公開第04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が12nMよりも小さいナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体である、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、国際公開第04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が5nMよりも小さいナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体である、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のナノボディであり、ヒト化されている上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド
であり、この実施態様の特に好ましいいくつかの態様は、
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域がGLEW-クラスナノボディであり、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が103番目の位置にアルギニン残基(R)を有するナノボディである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が103番目の位置にアルギニン残基(R)を有するGLEW -クラスナノボディである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、配列番号52(TNF1)、76(TNF13)、77(TNF14)、95(TNF29)、または96(TNF30)のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有するナノボディである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
a)CDR1が
− アミノ酸配列DYWMY、または
− アミノ酸配列DYWMYと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列DYWMYと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配
列
を含み、
b)CDR2が
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKG、または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと少なくとも80%、好ま
しくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましく
は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと2つ、または1つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列
を含み、
c)CDR3が
− アミノ酸配列SPSGFN、または
− アミノ酸配列SPSGFNと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%
、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の
配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列SPSGFNと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸
配列
を含む、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディであり、ここでCDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含む、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディであり、ここでCDR3がアミノ酸配列SPSGFNを含む、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディにおいて
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNを含む、または
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み、CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含む、または
− CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含み、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNを含む、
上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディにおいて、CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含む、CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含む、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNを含む、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
a)CDR1が
− アミノ酸配列DYWMY、または
− アミノ酸配列DYWMYと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列DYWMYと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であり、
b)CDR2が
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKG、または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと少なくとも80%、好ま
しくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましく
は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であり、
c)CDR3が
− アミノ酸配列SPSGFN、または
− アミノ酸配列SPSGFNと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%
、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の
配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列SPSGFNと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸
配列である、
上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディであり、ここでCDR1がアミノ酸配列DYWMYである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディであり、ここでCDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディであり、ここでCDR3がアミノ酸配列SPSGFNである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYであり、CDR3がアミノ酸配列SPSG
FNである、または
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYであり、CDR2がアミノ酸配列EINT
NGLITKYPDSVKGである、または
− CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGであり、CDR
3がアミノ酸配列SPSGFNである、
上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディであり、ここでCDR1がアミノ酸配列DYWMYであり、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディであり、ここでCDR1がアミノ酸配列DYWMYであり、CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGであり、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 任意のアミノ酸置換が好ましくは保存アミノ酸の置換であり、および/または
− 該アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸
置換を含むのみで、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、
上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、ナノボディTNF1(配列番号:52)およびナノボディTNF1(配列番号:52)のヒト化変異体からなるグループから選択される、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、TNF13(配列番号:76)、TNF14(配列番号:77)、TNF29(配列番号:95)、TNF30(配列番号:96)からなるグループから選択される、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域がTNF30(配列番号:96)であり、
この実施態様の好ましいいくつかの態様は、
− 「第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、KERE-クラスナノボディである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、配列番号:50(TNF3)、83(TNF20)、85(TNF21)、85(TNF22)、96(TNF23)、98(TNF33)のアミノ酸の一つと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有するナノボディである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
a)CDR1が
− アミノ酸配列NYYMG、または
− アミノ酸配列NYYMGと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列NYYMGと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配
列
を含み、
b)CDR2が
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKG、または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと少なくとも80%、好ま
しくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましく
は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと2つ、または1つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列
を含み、
c)CDR3が
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTY、または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと少なくとも80%、好ましくは
少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少な
くとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと2つ、または1つだけアミノ酸
が異なるアミノ酸配列
を含む、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディであり、ここでCDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディであり、ここでCDR3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGを含み、CDR3がアミノ酸配列SILP
LSDDPGWNTYを含む、または
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGを含み、そしてCDR2がアミノ酸配列N
ISWRGYNIYYKDSVKGを含む、または
− CDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGを含み、CDR
3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYを含む、
上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディ であり、ここでCDR1がアミノ酸配列NYYMGを含み、CDR2がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYを含み、CDR3がアミノ酸配列ILPLSDDPGWNTY(配列番号:436)を含む、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
a)CDR1が
− アミノ酸配列NYYMG、または
− アミノ酸配列NYYMGと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列NYYMGと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であり、
b)CDR2が
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKG、または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと少なくとも80%、好ま
しくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましく
は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと2つ、または1つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列
であり、
c)CDR3が
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTY、または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと少なくとも80%、好ましくは
少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少な
くとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと2つ、または1つだけアミノ酸
が異なるアミノ酸配列
である、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディ であり、ここでCDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディ であり、ここでCDR3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGであり、CDR3がアミノ酸配列SILP
LSDDPGWNTYである、または
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGであり、CDR2がアミノ酸配列NISW
RGYNIYYKDSVKGである、または
− CDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGであり、CDR
3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである、
上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、XIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチドについて記載のナノボディにおいて、
− 任意のアミノ酸置換が好ましくは保存アミノ酸の置換であり;および/または
− 該アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸
置換を含むのみで、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、
上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、ナノボディTNF3(配列番号:60)およびナノボディ TNF3(配列番号:60)のヒト化変異体からなるグループから選択される、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− 第一、第二の免疫グロブリン可変領域が、83TNF20(配列番号:83)、TNF21(配列番号:84)、TNF22(配列番号:85)、TNF23(配列番号:86)、TNF33(配列番号:99)からなるグループから選択される、上記のXIX)〜XX)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
(i)CDR1は、配列番号:15〜21のCDR1配列からなるグループまたは配列番号:164〜197のCDR1配列からなるグループ、または配列番号:15〜21のCDR1配列からなるグループまたは配列番号:164〜197のCDR1配列からなるグループと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、ここで
(2)該アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸置換の欠失または挿入は含まず、
および/または配列番号:15〜21からなるグループからのCDR1配列または配列番号:164〜197からなるグループからのCDR1配列の少なくとも1つと、3つ、2つ、または1つだけ「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)があるアミノ酸配列からなるグループ、ここで
(2)該アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸置換の欠失または挿入は含まず、ここで
(ii)CDR2は、配列番号:22〜28のCDR2配列からなるグループまたは配列番号:232〜265のCDR2配列からなるグループ、または配列番号:22〜28のCDR2配列からなるグループまたは配列番号:232〜265のCDR2配列からなるグループと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるグループから選択され、ここで
(2)該アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸置換の欠失または挿入は含まず、
および/または配列番号:22〜28からなるグループからのCDR2配列または配列番号:232〜265からなるグループからのCDR2配列の少なくとも1つと、3つ、2つ、または1つだけ「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)があるアミノ酸配列からなるグループ、ここで
(2)該アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸置換の欠失または挿入は含まず、ここで
(iii)CDR3は、配列番号:29〜33のCDR3配列からなるグループまたは配列番号:300〜333のCDR3配列からなるグループ、または配列番号:29〜33のCDR3配列からなるグループまたは配列番号:300〜333のCDR3配列からなるグループと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるグループから選択され、ここで
(2)該アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸置換の欠失または挿入は含まず、
および/または配列番号:29〜33からなるグループからのCDR3配列または配列番号:300〜333からなるグループからのCDR3配列の少なくとも1つと、3つ、2つ、または1つだけ「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)があるアミノ酸配列からなるグループ、ここで
(2)該アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸置換の欠失または挿入は含まず、
または配列番号:34および35のCDR3配列からなるグループまたは配列番号:34および35のCDR3配列からなるグループと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるグループから選択され、ここで
(2)該アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸置換の欠失または挿入は含まず、
および/または配列番号:34および35からなるグループからのCDR3配列の少なくとも1つと、3つ、2つ、または1つだけ「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)があるアミノ酸配列からなるグループ、ここで
(2)該アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸置換の欠失または挿入は含まない。
(1)任意のアミノ酸置換は好ましくは保存アミノ酸の置換(本明細書で規定)であり、および/または
(2)該アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸置換の欠失または挿入は含まず、
および/または配列番号:34、35からなるグループからのCDR3配列の少なくとも1つと、3つ、2つ、または1つだけ「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)があるアミノ酸配列からなるグループ、ここで
(1)任意のアミノ酸置換は好ましくは保存アミノ酸の置換(本明細書で規定)であり、および/または
(2)該アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸置換の欠失または挿入は含まない。
IDは添付の配列表内の配列番号を示す。
CDR1について:配列番号:164は配列番号:15と一致する。:配列番号:167は配列番号:16と一致する。配列番号:172は配列番号:17と一致する。配列番号:165、166は配列番号:18と一致する。配列番号:170は配列番号:19と一致する。配列番号:171は配列番号:20と一致する。配列番号:168、169は配列番号:21と一致する。
CDR2について:配列番号:232、233は配列番号:22と一致する。:配列番号:235は配列番号:23と一致する。配列番号:240は配列番号:24と一致する。配列番号:234は配列番号:25と一致する。配列番号:236、237は配列番号:26と一致する。配列番号:238は配列番号:27と一致する。配列番号:239は配列番号:28と一致する。
CDR3について:配列番号:303は配列番号:29と一致する。配列番号:308は配列番号:30と一致する。配列番号:306は配列番号:31と一致する。配列番号:307は配列番号:32と一致する。配列番号:304、305は配列番号:33と一致する。配列番号:300は配列番号:34と一致する。配列番号:301、302は配列番号:35と一致する。
好ましくは、この実施態様において、存在する他の2つのCDR配列の少なくとも1つ、好ましくはいずれも、表I記載の対応するCDR配列の少なくとも1つと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有するCDR配列、および/または表I記載の対応する配列の少なくとも1つと3つ、2つ、または1つのアミノ酸の相違を有するCDR配列からなるグループから適切に選択される。
好ましくは、この実施態様において、存在するCDR1、CDR2配列の少なくとも1つ、好ましくはいずれも、表I記載の対応するCDR1、CDR2配列の少なくとも1つと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有するCDR1、CDR2配列のグループ、および/または表I記載のCDR1、CDR2配列の少なくとも1つと3つ、2つ、または1つのアミノ酸の相違を有するCDR1、CDR2配列からなるグループから適切に選択される。
i)任意のアミノ酸置換は好ましくは保存アミノ酸の置換(本明細書で規定)、
および/または
ii)アミノ酸配列は好ましくは、表I記載のCDR配列と比較して、アミノ酸置換のみを含み、アミノ酸置換の欠失または挿入は含まない。
XXI)TNFに対するKoff速度が2.10×10−3(1/s)よりも小さく、好ましくは1.10×10−3(1/s)よりも小さい、4つのフレームワーク領域(FR1〜FR4)および3つの相補性決定領域(CDR1〜CDR3)からなる、TNF‐アルファに対するナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
XXII)国際公開第04/041862号の実施例1、3)記載のKYM細胞を使用した細胞ベース分析試験においてEC50値が、同じ分析試験で国際公開第04/041862号のナノボディ VHH 3E(配列番号:4)のEC50値よりも小さい、4つのフレームワーク領域(FR1〜FR4)および3つの相補性決定領域(CDR1〜CDR3)からなる、TNF‐アルファに対するナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
XXIII)国際公開第04/041862号の実施例1、3)記載のKYM細胞を使用した細胞ベース分析試験においてEC50値が12nMよりも小さい、TNF‐アルファに対するナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
XXIV)国際公開第04/041862号の実施例1、3)記載のKYM細胞を使用した細胞ベース分析試験においてEC50値が5nMよりも小さい、TNF‐アルファに対するナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
XXV)国際公開第04/041862号の実施例1、3)記載のKYM細胞を使用した細胞ベース分析試験においてEC50値が3nMよりも小さい、TNF‐アルファに対するナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体であり;特に好ましいいくつかの態様が:
− GLEW-クラスナノボディである、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− 103番目の位置にアルギニン残基(R)を含む、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− ヒト化ナノボディである、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− 108番目の位置にロイシン残基(L)を含む、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− 配列番号:52(TNF1)、76(TNF13)、77(TNF14)、95(TNF29)または96(TNF30)のアミノ酸配列のいずれかの1つと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有する、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
a)CDR1が:
− アミノ酸配列DYWMYを含む、または
− アミノ酸配列DYWMYと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列DYWMYと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配
列を含み、
b)CDR2が:
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含む、または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと少なくとも80%、好ま
しくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましく
は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと2つ、または1つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列を含み、
c)CDR3が:
− アミノ酸配列SPSGFNを含み、または
− アミノ酸配列SPSGFNと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%
、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の
配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列SPSGFNと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸
配列を含む、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
のナノボディ。
− CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含む、XXI)〜
XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR3がアミノ酸配列SPSGFNを含む、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記
載のナノボディ。
− XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディであり、ここで:
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNを含む、または
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み、CDR2がアミノ酸配列EINT
NGLITKYPDSVKGを含む、または
− CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含み、CDR
3がアミノ酸配列SPSGFNを含む、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記
載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNを
含む、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み、CDR2がアミノ酸配列EINTNGL
ITKYPDSVKGを含みおよびCDR3がアミノ酸配列SPSGFNを含む、XXI) 〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
a)CDR1が:
− アミノ酸配列DYWMYである;または
− アミノ酸配列DYWMYと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列;または
− アミノ酸配列DYWMYと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配
列;であり
b)CDR2が:
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGである;または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと少なくとも80%、好ま
しくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましく
は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列;または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと2つ、または1つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列;であり
c)CDR3が:
− アミノ酸配列SPSGFNである、または
− アミノ酸配列SPSGFNと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%
、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の
配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列SPSGFNと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸
配列である、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
のナノボディ。
− CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGである、XXI)〜
XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR3がアミノ酸配列SPSGFNである、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記
載のナノボディ。
− XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディであり、ここで:
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYであり、CDR3がアミノ酸配列SPSG
FNである;または
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYであり、CDR2がアミノ酸配列EINT
NGLITKYPDSVKGである;または
− CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGであり、CDR
3がアミノ酸配列SPSGFNである、
− XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディであり、CDR1がアミノ酸配列DYWMYであり、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNである、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYであり、CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGであり、CDR3がアミノ酸配列SPSGFNである、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディであり、
− 任意のアミノ酸置換が好ましくは保存アミノ酸の置換であり、および/または
− 該アミノ酸置換は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸
置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、XXI)〜XXV)の
いずれか1つに記載のナノボディ。
− KERE-クラスナノボディである、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディである。
− 配列番号:50(TNF3)、83(TNF20)、85(TNF21)、85(TNF22)、96(TNF23)または98(TNF33)のアミノ酸配列のいずれかの1つと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有する、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディであり、
− XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディであり、
a)CDR1が
− アミノ酸配列NYYMGを含む、または
− アミノ酸配列NYYMGと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列NYYMGと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配
列を含み、
b)CDR2が
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGを含む、または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと少なくとも80%、好ま
しくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましく
は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと2つ、または1つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列を含み、
c)CDR3が、
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTY、または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと少なくとも80%、好ましくは
少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少な
くとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと2つ、または1つだけアミノ酸
が異なるアミノ酸配列を含む、ナノボディ。
− CDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGを含む、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYを含む、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディであり、
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGを含み、CDR3がアミノ酸配列SILP
LSDDPGWNTYを含む、または
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGを含み、CDR2がアミノ酸配列NISW
RGYNIYYKDSVKGを含む、または
− CDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGを含み、CDR
3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYを含む、ナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGを含む、CDR2がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYを含む、CDR3がアミノ酸配列ILPLSDDPGWNTYを含む、
− XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディであり、
a)CDR1が
− アミノ酸配列NYYMGである、または
− アミノ酸配列NYYMGと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、
より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列
同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列NYYMGと2つ、または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配
列であり、
b)CDR2が
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGである、または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと少なくとも80%、好ま
しくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましく
は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと2つ、または1つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列であり、
c)CDR3が
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである、または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと少なくとも80%、好ましくは
少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少な
くとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと2つ、または1つだけアミノ酸
が異なるアミノ酸配列である、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノ
ボディ。
のナノボディ。
− CDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGである、XXI)〜
XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− CDR3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである、XXI)〜XXV)の
いずれか1つに記載のナノボディ。
− XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディであり、
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGであり、CDR3がアミノ酸配列SILP
LSDDPGWNTYである、または
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGであり、CDR2がアミノ酸配列NISW
RGYNIYYKDSVKGである、または
− CDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGであり、CDR3がア
ミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである、ナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGであり、CDR2がアミノ酸配列SILPLSD
DPGWNTYであり、CDR3がアミノ酸配列ILPLSDDPGWNTYである
、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載のナノボディ。
− 任意のアミノ酸置換が好ましくは保存アミノ酸の置換であり、および/または
− 該アミノ酸置換は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸
置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、XXI)〜XXV)の
いずれか1つに記載のナノボディ。
および、さらに特に好ましい他のいくつかの態様は、
XXVI)XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の少なくとも1つのナノボディを含む、または主成分とする、タンパク質またはポリペプチド。
XXVII)XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含む、タンパク質またはポリペプチド。
XXVIII)XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、TNF三量体への結合時に該TNF三量体によって媒介されるTNF受容体の架橋、および/または受容体の該架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害または低下できる、タンパク質またはポリペプチド。
XXIX)XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、TNF三量体上において少なくとも2つのTNF受容体結合部位への分子内結合が可能な、タンパク質またはポリペプチド。
XXX)適切なリンカーを介して連結するXXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含む、タンパク質またはポリペプチド。
XXXI)適切なリンカーを介して連結するXXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、ペグ化された、タンパク質またはポリペプチド。
XXXII)XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディをさらに含む、タンパク質またはポリペプチド。
XXXIII)XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディをさらに含み、TNF三量体への結合時に該TNF三量体によって媒介されるTNF受容体の架橋、および/または受容体の該架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害または低下できる、タンパク質またはポリペプチド。
XXXV)XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する1つのナノボディをさらに含み、XXI)〜XXV)のいずれか1項記載の2つの各ナノボディが任意で適切なリンカーを介して、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する1つのナノボディに連結する、タンパク質またはポリペプチド。
XXXVI)XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する1つのナノボディをさらに含み、XXI)〜XXV)のいずれか1項記載の2つの各ナノボディが任意で適切なリンカーを介して、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する1つのナノボディに連結され、TNF三量体への結合時に該TNF三量体によって媒介されるTNF受容体の架橋、および/または受容体の該架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害または低下できる、タンパク質またはポリペプチド。
XXXVII)XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する1つのナノボディをさらに含み、XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つの各ナノボディが任意で適切なリンカーを介してヒト血清アルブミンに対して指向性を有する1つのナノボディに連結され、TNF三量体上において少なくとも2つのTNF受容体結合部位への分子内結合が可能なタンパク質またはポリペプチド。
ナノボディである、XXVI)〜XXXVII)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがナノボデ
ィ ALB1(配列番号:63)のヒト化変異体である、XXVI)〜XXXVII)
のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディが、ALB
3(配列番号:87)、ALB4(配列番号:88)、ALB5(配列番号:89)、A
LB6(配列番号:100)、ALB7(配列番号:101)、ALB 8(配列番号:
102)、ALB9(配列番号:103)、ALB10(配列番号:104)からなる
グループから選択する、XXVI)〜XXXVII)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがALB8
である、XXVI)〜XXXVII)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
− XXI)〜XXV)のいずれか1つに記載の2つのヒト化ナノボディおよびナノボディ
ALB 1(配列番号:63)の1つのヒト化変異体を含む、または主成分とする、
XXVI)〜XXXVII)のいずれか1つに記載のタンパク質またはポリペプチド。
XXXVIII) 四つのフレ−ムワ−ク領域(それぞれFR1からFR4まで)および三つの相補性決定領域(それぞれCDR1からCDR3まで)からなるTNF−アルファに
対するナノボディであって:
a)CDR1が:
− アミノ酸配列DYWMY;または
− アミノ酸配列DYWMYと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列DYWMYと1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列;を含み、
b)CDR2が:
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKG;または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと2またはただ1つのアミノ酸が異なるアミノ酸配列;を含み、
c)CDR3が:
− アミノ酸配列SPSGFN;または
− アミノ酸配列SPSGFNと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列SPSGFNと1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列、を含むナノボディ。
− CDR2が、アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含む、XXXVIII)に記載のナノボディ。
− CDR3が、アミノ酸配列SPSGFNを含む、XXXVIII)に記載のナノボディ。
− ナノボディであって:
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み;そしてCDR3が、アミノ酸配列SPSGFNを含み;または
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み;そしてCDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含み;または
− CDR2はアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含み;そしてCDR3が、アミノ酸配列SPSGFNを含む、XXXVIII)に記載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み;そしてCDR3が、アミノ酸配列SPSGFNを含む、XXXVIII)に記載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYを含み、CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGを含み、そしてCDR3がアミノ酸配列SPSGFNを含むXXXVIII)に記載のナノボディ。
− いずれのアミノ酸置換も保存的アミノ酸置換であり;および/または
− 前記アミノ酸配列は、上記アミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸欠失または挿入を含まない、XXXVIII)に記載のナノボディ。
− GLEWクラスのナノボディである、XXXVIII)に記載のナノボディ。
− アルギニン残基(R)を103の位置に含む、XXXVIII)に記載のナノボディ。
− ナノボディであって、配列番号:52(TNF1)、76(TNF13)、77(TNF14)、95(TNF29)または96(TNF30)のアミノ酸配列の一つ、と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有する、XXXVIII)に記載のナノボディ。
− ヒト化されたナノボディである、XXXVIII)に記載のナノボディ。
− ロイシン残基(L)を108の位置に含む、XXXVIII)に記載のナノボディ。
− ナノボディであって、TNFに対するKoff速度が、2.10×10−3(1/s)より小さく、好ましくは1.10×10−3(1/s)より小さい、XXXVIII)に記載のナノボディ;またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− ナノボディであって、国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、5nMよりも小さい、XXXVIII)に記載のナノボディ、またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− ナノボディであって、国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、3nMよりも小さい、XXXVIII)に記載のナノボディ、またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
対するナノボディであって:
a)CDR1が:
− アミノ酸配列DYWMY;または
− アミノ酸配列DYWMYと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を
有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列DYWMYと1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であり;
そして
b)CDR2が:
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKG;または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGと二またはただ1つのアミノ酸が異なるアミノ酸配列であり;
そして
c)CDR3が:
− アミノ酸配列SPSGFN;または
− アミノ酸配列SPSGFNと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列SPSGFNと1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であるナノボディ。
− CDR2が、アミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGである、XXXIX)に記載のナノボディ。
− CDR3が、アミノ酸配列SPSGFNである、XXXIX)に記載のナノボディ。
− ナノボディであって:
− CDR1はアミノ酸配列DYWMYであり;そしてCDR3が、アミノ酸配列SPSGFNであり;または
− CDR1はアミノ酸配列DYWMYをであり;そしてCDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGであり;または
− CDR2はアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGであり;そしてCDR3が、アミノ酸配列SPSGFNである、XXXIX)に記載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYであり;そしてCDR3が、アミノ酸配列SPSGFNである、XXXIX)に記載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列DYWMYであり、CDR2がアミノ酸配列EINTNGLITKYPDSVKGであり、そしてCDR3がアミノ酸配列SPSGFNであるXXXIX)に記載のナノボディ。
− XXXIX)に記載のナノボディであって、
− 任意のアミノ酸置換も好ましくは保存的アミノ酸置換であり;および/または
− 該アミノ酸配列は、上記アミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換の
みを含み、アミノ酸欠失または挿入を含まない、ナノボディ。
− GLEWクラスのナノボディである、XXXIX)に記載のナノボディ。
− アルギニン残基(R)を103の位置に含む、XXXIX)に記載のナノボディ。
− ナノボディであって、配列番号:52(TNF1)、76(TNF13)、77(TNF14)、95(TNF29)または96(TNF30)のアミノ酸配列の一つ、と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有する、XXXIX)に記載のナノボディ。
− ロイシン残基(L)を108の位置に含む、XXXIX)に記載のナノボディ。
− ナノボディであって、TNFに対するKoff速度が、2.10×10−10(1/s)より小さく、好ましくは1.10×10−3(1/s)より小さい、XXXIX)に記載のナノボディ;またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− ナノボディであって、国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、同じ分析試験で国際公開第 04/041862号のVHH 3E(配列番号:4)のEC50値よりも小さい、XXXIX)に記載のナノボディ、またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− ナノボディであって、国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、5nMよりも小さい、XXXIX)に記載のナノボディ、またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− ナノボディであって、国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、3nMよりも小さい、XXXIX)に記載のナノボディ、またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− TNF13(配列番号:76)、TNF14(配列番号:77)、TNF29(配列番号:95)およびTNF30(配列番号:96)からなる群から選択される、XXXIX)に記載のナノボディ。
XL) XXXVIII)またはXXXIX)に記載のナノボディを含み、もしくは本質的にそれから成る、タンパクまたはポリペプチドである。
XLI) XXXVIII)またはXXXIX)に記載のナノボディを少なくとも一つ含み、もしくは本質的にそれから成る、タンパクまたはポリペプチドである。
− XXXVIII)またはXXXIX)に記載の二つのナノボディを含む、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− タンパクまたはポリペプチドであって、XXXVIII)またはXXXIX)に記載の二つのナノボディを含み、前記タンパクまたはポリペプチドが、TNF三量体に結合すると、前記TNF三量体によって仲介されるTNFレセプタ−の架橋および/またはそのようなレセプタ−の架橋によって仲介されるシグナル伝達を、阻害または減少させることができる、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− XXXVIII)またはXXXIX)に記載の二つのナノボディを含み、そしてTNF三量体上の少なくとも二つのレセプタ−結合部位と分子内結合が可能な、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− XXXVIII)またはXXXIX)に記載の二つのナノボディを含み、それらは互いに直接連結しているかまたはリンカ−を介して互いに連結している、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− XXXVIII)またはXXXIX)に記載の二つのナノボディを含み、それらはアミノ酸配列を介して互いに連結している、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− XXXVIII)またはXXXIX)に記載の二つのナノボディを含み、それらは少なくとも14のアミノ酸、より好ましくは20−40アミノ酸のような(リンカ−GS30のような)、少なくとも17のアミノ酸を含むアミノ酸配列(例えば、制限すること無しに、グリシンおよびセリン残基を含むアミノ酸配列)を介して互いに連結している、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− ポリヌクレオチドTNF55(配列番号:419)またはTNF56(配列番号:420)を含む、もしくはそれから成る、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− ペグ化された、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− タンパクまたはポリペプチドであって、XXXVIII)またはXXXIX)に記載の二つのナノボディを含み、前記タンパクまたはポリペプチドが、TNF三量体に結合すると、前記TNF三量体によって仲介されるTNFレセプタ−の架橋および/またはそのようなレセプタ−の架橋によって仲介されるシグナル伝達を、阻害または減少させることができ、および/または前記タンパクまたはポリペプチドが、TNF三量体上の少なくとも二つのレセプタ−結合部位と分子内結合が可能であり、タンパクまたはポリペプチドが、さらにヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも一つのナノボディを含む、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− タンパクまたはポリペプチドであって、XXXVIII)またはXXXIX)に記載の二つのナノボディを含み、そのタンパクまたはポリペプチドは、さらにヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも一つのナノボディを含み、XXXVIII)またはXXXIX)に記載の二つのナノボディは、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも一つのナノボディに直接連結している、かまたはリンカ−を介してヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも一つのナノボディに連結しており、タンパクまたはポリペプチドが、TNF三量体に結合すると、前記TNF三量体によって仲介されるTNFレセプタ−の架橋および/またはそのようなレセプタ−の架橋によって仲介されるシグナル伝達を、阻害または減少させることができ;および/またはタンパクまたはポリペプチドが、TNF三量体上の少なくとも二つのレセプタ−結合部位と分子内結合が可能である、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも一つのナノボディが、ナノボディALB1(配列番号:63)のヒト化変異体である、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも一つのナノボディが、ALB3(配列番号:87)、ALB4(配列番号:88)、ALB5(配列番号:89)、ALB6(配列番号:100)、ALB7(配列番号:101)、ALB8(配列番号:102)、ALB9(配列番号:103)およびALB10(配列番号:104)からなる群から選択される、XL)またはXLI)のいずれか一項に記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも一つのナノボディがALB8である、XL)またはXLI)のいずれか1つに記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− XL)またはXLI)のいずれか1つに記載の二つのヒト化ナノボディおよびナノボディALB1(配列番号:63)のヒト化変異体を含む、もしくは本質的にそれらから成る、XL)またはXLI)のいずれか1つに記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− ナノボディTNF1およびナノボディALB1の両方がヒト化されている、ポリペプチドTNF24(配列番号:90)を含む、もしくは本質的にそれから成る、XL)またはXLI)のいずれか1つに記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− 二つのナノボディTNF30および一つのナノボディALB8を含む、もしくは本質的にそれらから成る、XL)またはXLI)のいずれか1つに記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
− ポリペプチドTNF60(配列番号:417)を含む、もしくは本質的にそれから成る、XL)またはXLI)のいずれか1つに記載されたタンパクまたはポリペプチドである。
a)FR1が、
− 配列番号:130のアミノ酸配列;または
− 配列番号:130のアミノ酸配列と、少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− 配列番号:130のアミノ酸配列と1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列
を含むあるいはその配列であり、
そして
b)FR2が
− 配列番号:198のアミノ酸配列;または
− 配列番号:198のアミノ酸配列と、少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− 配列番号:198のアミノ酸配列と1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列
を含むあるいはその配列であり、
そして
c)FR3が、
− 配列番号:266のアミノ酸配列;または
− 配列番号:266のアミノ酸配列と、少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− 配列番号:266のアミノ酸配列と1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列
を含むあるいはその配列であり、
そして
d)FR4が、
− 配列番号:334のアミノ酸配列;または
− 配列番号:334のアミノ酸配列と、少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− 配列番号:334のアミノ酸配列と1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列
を含むあるいはその配列であり;
ここでフレ−ムワ−ク配列に存在するアミノ酸の相違は、本明細書で記述されたとおりであることがより好ましい。
XLII) 四つのフレ−ムワ−ク領域(それぞれFR1からFR4まで)および三つの相補性決定領域(それぞれCDR1からCDR3まで)からなるTNF−アルファに対するナノボディであって:
a)CDR1が:
− アミノ酸配列NYYMG;または
− アミノ酸配列NYYMGと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列NYYMGと2または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列含み;
そして
b)CDR2が:
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKG;または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと2またはただ1つのアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含み;
そして
c)CDR3が:
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTY;または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと2または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含むナノボディ。
− CDR2が、アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGを含む、XLII)に記載のナノボディ。
− CDR3が、アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYを含む、XLII)に記載のナノボディ。
− ナノボディであって:
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGを含み;そしてCDR3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYを含み;または
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGを含み;そしてCDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGを含み;または
− CDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGを含み;そしてCDR3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYを含む、XLII)に記載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGを含み;そしてCDR2がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYを含む、XLII)に記載のナノボディ。
− XLII)に記載のナノボディであって、
− 任意のアミノ酸置換も好ましくは保存的アミノ酸置換であり;および/または
− 該アミノ酸配列は、上記アミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換の
みを含み、アミノ酸欠失または挿入を含まない、ナノボディ。
− KEREクラスのナノボディである、XLII)に記載のナノボディ。
− ナノボディであって、配列番号:50(TNF3)、83(TNF20)、85(TNF21)、85(TNF22)、96(TNF23)または99(TNF33)のアミノ酸配列の一つと、少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有する、XLII)に記載のナノボディ。
− TNFに対するKoff速度が2.10×10−3(1/s)より小さい、好ましくは1.10×10−3(1/s)より小さい、XLII)に記載のナノボディ;またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− ナノボディであって、国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、同じ分析試験で国際公開第 04/041862号のVHH 3E(配列番号:4)のEC50値よりも小さい、XLII)に記載のナノボディ;またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− ナノボディであって、国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、5nMよりも小さい、XLII)に記載のナノボディ、またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− ナノボディであって、国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、3nMよりも小さい、XLII)に記載のナノボディ、またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
a)CDR1が:
− アミノ酸配列NYYMG;または
− アミノ酸配列NYYMGと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列NYYMGと2または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であり;
そして
b)CDR2が:
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKG;または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGと2または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であり;
そして
c)CDR3が:
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTY;または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYと2または1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であるナノボディ。
− CDR2が、アミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGである、XLIII)に記載のナノボディ。
− CDR3が、アミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである、XLIII)に記載のナノボディ。
− ナノボディであって:
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGであり;そしてCDR3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYであり;または
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGであり;そしてCDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGであり;または
− CDR2がアミノ酸配列NISWRGYNIYYKDSVKGであり;そしてCDR3がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである、XLIII)に記載のナノボディ。
− CDR1がアミノ酸配列NYYMGであり;そしてCDR2がアミノ酸配列SILPLSDDPGWNTYである、XLIII)に記載のナノボディ。
− XLIII)に記載のナノボディであって、
− 任意のアミノ酸置換も好ましくは保存的アミノ酸置換であり;および/または
− 該アミノ酸配列は、上記アミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換の
みを含み、アミノ酸欠失または挿入を含まない、ナノボディ。
− KEREクラスのナノボディである、XLIII)に記載のナノボディ。
− ナノボディであって、配列番号:50(TNF3)、83(TNF20)、85(TNF21)、85(TNF22)または96(TNF23)または99(TNF33)のアミノ酸配列の一つと、少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有する、XLIII)に記載のナノボディ。
− TNFに対するKoff速度が2.10×10−3(1/s)より小さい、好ましくは1.10×10−3(1/s)より小さい、XLIIIに記載のナノボディ;またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− ナノボディであって、国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、同じ分析試験で国際公開第 04/041862号のVHH 3E(配列番号:4)のEC50値よりも小さい、XLIII)に記載のナノボディ;またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− ナノボディであって、国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、5nMよりも小さい、XLIII)に記載のナノボディ、またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− ナノボディであって、国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、3nMよりも小さい、XLIII)に記載のナノボディ、またはそのようなナノボディのヒト化変異体。
− 配列番号:83(TNF20)、85(TNF21)、85(TNF22)、96(TNF23)または98(TNF33)TNF13(配列番号:76)、TNF14(配列番号:77)、TNF29(配列番号:95)およびTNF30(配列番号:96)からなる群から選択される、XLIII)に記載のナノボディ、
いくつかの他の好ましい態様として次のものを伴う:
XLV) XLII)またはXLIII)に記載されたナノボディの少なくとも一つを含む、または本質的にそれから成るタンパクまたはポリペプチド。
XLVI) XLII)またはXLIII)に記載されたナノボディの二つを含む、タンパクまたはポリペプチド。
XLVII) XLII)またはXLIII)に記載されたナノボディの二つを含むタンパクまたはポリペプチドであって、前記タンパクまたはポリペプチドが、TNF三量体と結合すると、前記TNF三量体によって仲介されるTNFレセプタ−架橋および/またはそのようなレセプタ−架橋によって仲介されるシグナル伝達を阻害または減少させることができる、タンパクまたはポリペプチド。
XLVIII) XLII)またはXLIII)に記載されたナノボディの二つを含むタンパクまたはポリペプチドであって、TNF三量体上の少なくとも二つのTNFレセプタ−結合部位と分子内結合することができる、タンパクまたはポリペプチド。
− ペグ化されている、XLIV)またはXLVIII)のいずれか1つに記載されたタンパクまたはポリペプチド。
− XLII)またはXLIII)に記載されたナノボディの二つを含むタンパクまたはポリペプチドであって、前記タンパクまたはポリペプチドが、TNF三量体と結合すると、前記TNF三量体によって仲介されるTNFレセプタ−架橋および/またはそのようなレセプタ−架橋によって仲介されるシグナル伝達を阻害または減少させることができ;および/または前記タンパクまたはポリペプチドが、TNF三量体上の少なくとも二つのTNFレセプタ−結合部位と分子内結合することができ、さらにそのタンパクまたはポリペプチドが、ヒト血清アルブミンに対する指向性を有しているナノボディを少なくとも一つ含んでいる、タンパクまたはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対する指向性を有している少なくとも一つのナノボディが、ナノボディALB1(配列番号:63)のヒト化ナノボディである、XLIV)またはXLVIII)のいずれか1つに記載されたタンパクまたはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対する指向性を有している少なくとも一つのナノボディが、ALB3(配列番号:87)、ALB4(配列番号:88)、ALB5(配列番号:89)、ALB6(配列番号:100)、ALB7(配列番号:101)、ALB8(配列番号:102)、ALB9(配列番号:103)およびALB10(配列番号:104)からなる群から選択される、XLIV)またはXLVIII)のいずれか1つに記載されたタンパクまたはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対する指向性を有している少なくとも一つのナノボディがALB8である、XLIV)またはXLVIII)のいずれか1つに記載されたタンパクまたはポリペプチド。
− XLII)またはXLIII)に記載された二つのヒト化ナノボディおよびナノボディALB1 (配列番号:63)を含む、または本質的にそれらからなる、XLIV)またはXLVIII)のいずれか1つに記載されたタンパクまたはポリペプチド。
− その中でナノボディTNF3およびナノボディALB1がヒト化されている、ポリペプチドTNF26(配列番号:92)を含むまたは本質的にそれからなる、XLIV)またはXLVIII)のいずれか1つに記載されたタンパクまたはポリペプチド。
a)FR1は以下のアミノ酸配列を含むまたはその配列である:
− 配列番号:138のアミノ酸配列;または
− 配列番号:138のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− 配列番号:138のアミノ酸配列と1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列;
そして
b)FR2は以下のアミノ酸配列を含むまたはその配列である:
− 配列番号:206のアミノ酸配列;または
− 配列番号:206のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− 配列番号:206のアミノ酸配列と1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列;
そして
c)FR3は以下のアミノ酸配列を含むまたはその配列である:
− 配列番号:274のアミノ酸配列;または
− 配列番号:274のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− 配列番号:274のアミノ酸配列と1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列;
そして
d)FR4は以下のアミノ酸配列を含むまたはその配列である:
− 配列番号:342のアミノ酸配列;または
− 配列番号:342のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも99%の配列同一性を有する、アミノ酸配列;または
− 配列番号:342のアミノ酸配列と1つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列;
ここで、フレ−ムワ−ク配列に存在するアミノ酸の差は、本明細書に記載されたとおりであるのが、より好ましい。
TNFに関するKoff速度が、2.10×10−3(1/s)より小さい、好ましくは1.10×10−3(1/s)より小さい、ナノボディTNF1のヒト化変異体。
L) 国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、同じ分析試験で国際公開第 04/041862号のVHH 3E(配列番号:4)のEC50値よりも小さい、ヒト化ナノボディ。
L1) 国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が5nMよりも小さい、ナノボディTNF1のヒト化変異体。
LII) 国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が3nMよりも小さい、ナノボディTNF1のヒト化変異体。
LIII) XLIX)からLII)のいずれか1つに記載のナノボディTNF1のヒト化変異体である、少なくとも一つのナノボディを含むまたは本質的にそれから成るタンパクまたはポリペプチド。
LIV) XLIX)からLII)のいずれか1つに記載のナノボディTNF1のヒト化変異体である、二つのナノボディを含むまたは本質的にそれらから成るタンパクまたはポリペプチド(場合によってはリンカ−を介して連結してもよい)。
LV) XLIX)からLII)のいずれか1つに記載のナノボディTNF1のヒト化変異体である、二つのナノボディを含むまたは本質的にそれらから成るタンパクまたはポリペプチドであって、TNF三量体に結合すると、前記TNF三量体によって仲介されるTNFレセプタ−の架橋および/またはそのようなレセプタ−の架橋によって仲介されるシグナル伝達を、阻害または減少させることができる、タンパクまたはポリペプチド。
LVI) XLIX)からLII)のいずれか1つに記載のナノボディTNF1のヒト化変異体である、二つのナノボディを含むまたは本質的にそれらから成るタンパクまたはポリペプチドであって、TNF三量体上の少なくとも二つのTNFレセプタ−結合部位と分子内結合が可能である、タンパクまたはポリペプチド。
LVII) ナノボディTNF1の両方がヒト化されている、ポリペプチドTNF7(配列番号:73)を含むまたは本質的にそれから成るタンパクまたはポリペプチド。
LVIII) ナノボディTNF1の両方がヒト化され、およびペグ化されている、ポリペプチドTNF7(配列番号:73)を含むまたは本質的にそれから成るタンパクまたはポリペプチド。
LIX) XLIX)からLII)のいずれか1つに記載のナノボディTNF1のヒト化変異体である、二つのナノボディを含むまたは本質的にそれらから成るタンパクまたはポリペプチドであって、さらにヒト血清アルブミンに対する指向性を有する少なくとも一つのナノボディを含む、タンパクまたはポリペプチド。
LX) XLIX)からLII)のいずれか1つに記載のナノボディTNF1のヒト化変異体である、二つのナノボディを含むまたは本質的にそれらから成るタンパクまたはポリペプチドであって、ヒト血清アルブミンに対する指向性を有する一つのナノボディにそれぞれのナノボディが連結している(場合によってはリンカ−を介して連結されてもよい)、タンパクまたはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対する指向性を有する少なくとも一つのナノボディがナノボディALB1(配列番号:63)のヒト化された変種である、LIII)からLX)のいずれか1つに記載の、タンパクまたはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対する指向性を有する少なくとも一つのナノボディが、ALB3(配列番号:87)、ALB4(配列番号:88)、ALB5(配列番号:89)、ALB6(配列番号:100)、ALB7(配列番号:101)、ALB8(配列番号:102)、ALB9(配列番号:103)およびALB10(配列番号:104)からなる群から選択される、LIII)からLX)のいずれか1つに記載の、タンパクまたはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも一つのナノボディがALB8である、LIII)からLX)のいずれか1つに記載の、タンパクまたはポリペプチド。
− ナノボディTNF1およびナノボディALBTNF1の両方が、ヒト化されているポリペプチドTNF24(配列番号:90)を含む、もしくは本質的にそれらから成る、LIII)からLX)のいずれか1つに記載の、タンパクまたはポリペプチド。
− 二つのナノボディTNF30および一つのナノボディALB8を含む、もしくは本質的にそれらから成る、LIII)からLX)のいずれか1つに記載の、タンパクまたはポリペプチド。
LXI) TNFに対するKoff速度が2.10×10−3(1/s)より小さい、好ましくは1.10×10−3(1/s)より小さい、ナノボディTNF3のヒト化変異体。
LXII) 国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が、同じ分析試験で国際公開第04/041862号のVHH 3E(配列番号:4)のEC50値よりも小さい、ナノボディTNF3のヒト化変異体。
LXIII) 国際公開第 04/041862号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が5nMよりも小さい、ナノボディTNF3のヒト化変異体。
LXIV) 国際公開第 04/04186号の実施例1の3)に記載のKYM細胞を使用する細胞ベース分析試験においてEC50値が3nMよりも小さい、ナノボディTNF3のヒト化変異体。
LXV) LXI)からLXIV)のいずれか1つに記載のナノボディTNF3のヒト化変異体である、少なくとも一つのナノボディを含むまたは本質的にそれから成るタンパクまたはポリペプチド。
LXVI) LXI)からLXIV)のいずれか1つに記載のナノボディTNF3のヒト化変異体である、二つのナノボディを含むまたは本質的にそれらから成るタンパクまたはポリペプチド(場合によってはリンカ−を介して連結されてもよい)。
LXVII) LXI)からLXIV)のいずれか1つに記載のナノボディTNF3のヒト化変異体である、二つのナノボディを含むまたは本質的にそれらから成るタンパクまたはポリペプチドであって、TNF三量体に結合すると、前記TNF三量体によって仲介されるTNFレセプタ−の架橋および/またはそのようなレセプタ−の架橋によって仲介されるシグナル伝達を、阻害または減少させることができる、タンパクまたはポリペプチド。
LXVIII) LXI)からLXIV)のいずれか1つに記載のナノボディTNF3のヒト化変異体である、二つのナノボディを含むまたは本質的にそれらから成るタンパクまたはポリペプチドであって、TNF三量体上の少なくとも二つのTNFレセプタ−結合部位と分子内結合が可能である、タンパクまたはポリペプチド。
LXIX) ナノボディTNF3の両方がヒト化されている、ポリペプチドTNF6(配列番号:72)またはTNF9(配列番号:75)を含むまたは本質的にそれから成るタンパクまたはポリペプチド。
LXX) ナノボディTNF1の両方がヒト化され、およびペグ化されている、ポリペプチドTNF6(配列番号:72)またはTNF9(配列番号:75)を含むまたは本質的にそれから成るタンパクまたはポリペプチド。
LXXI) LXI)からLXIV)のいずれか1つに記載のナノボディTNF3のヒト化変異体である、二つのナノボディを含むまたは本質的にそれらから成るタンパクまたはポリペプチドであって、さらにヒト血清アルブミンに対する指向性を有する少なくとも一つのナノボディを含む、タンパクまたはポリペプチド。
LXXII) LXI)からLXIV)のいずれか1つに記載のナノボディTNF3のヒト化変異体である、二つのナノボディを含むまたは本質的にそれらから成るタンパクまたはポリペプチドであって、ヒト血清アルブミンに対する指向性を有する一つのナノボディにそれぞれのナノボディが連結している(場合によってはリンカ−を介して連結してもよい)、タンパクまたはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対する指向性を有する少なくとも一つのナノボディがナノボディALB1(配列番号:63)のヒト化された変種である、LXV)からLXXII)のいずれか1つに記載の、タンパクまたはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対する指向性を有する少なくとも一つのナノボディが、ALB3(配列番号:87)、ALB4(配列番号:88)、ALB5(配列番号:89)、ALB6(配列番号:100)、ALB7(配列番号:101)、ALB8(配列番号:102)、ALB9(配列番号:103)およびALB10(配列番号:104)からなる群から選択される、LXV)からLXXII)のいずれか1つに記載の、タンパクまたはポリペプチド。
− ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも一つのナノボディがALB8である、LXV)からLXXII)のいずれか1つに記載の、タンパクまたはポリペプチド。
− ナノボディTNF3およびナノボディALB1の両方が、ヒト化されているポリペプチドTNF26(配列番号:92)を含む、もしくは本質的にそれらから成る、LXV)からLXXII)のいずれか1つに記載の、タンパクまたはポリペプチド。
− Okayasuらによって記載された、通常のマウスおよびIL10ノックアウトマウスを用い
て、大腸炎のデキストラン硫酸ナトリウム("DSS")モデル(Gastroenterol 1990, 98(3): 694)
− Courtenayら. (Nature 1980, 283(5748): 666)によって記載された、通常のマ
ウスおよびIL10ノックアウトマウスを用いた、関節炎("RA)の、コラ−ゲンによって誘起された関節炎(「CIA」)モデル
− 例えば、Rennickら (Clin Immunol Immunopathol 1995, 76(3 Pt 2): S174)によって記載されたようなIBDのIL10ノックアウトマウスモデル
− 例えばKefferら(EMBO J 1991, 10(13): 4025)よって記載されたRAのKolliasモデル
− Elsonら(J Immunol 1996, 157(5): 2174)によって記載されたIBDの2,4,6−トリニトロベンゼンスルホン酸("TNBS")モデル
− Koppietersら(投稿準備中)によって記載されたRAのCIAモデル
− 滑膜由来線維芽細胞モデル(以下に記述);
− マウス空気嚢モデル。
一価TNF‐アルファナノボディ
a)他に断らない限り、または規定されない場合は、使用される全ての用語は、当業者には明らかである、当技術における通常の意味を有する。参照としては、例えばSambrookら 「Molecular Cloning: A Laboratory Manual」( 2nd.Ed.), Vols. 1−3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); F.Ausubelら編 「Current protocols inMolecular biology」, Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987); Lewin「Genes II」, John Wiley & Sons, New York, N.Y., (1985); Oldら「Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering」, 第2版, University of California Press, Berkeley, CA (1981); Roittら「Immunology」(6th. Ed.), Mosby/Elsevier, Edinburgh (2001); Roittら Roitt's Essential Immunology, 第10版 Blackwell Publishing, UK (2001); およびJanewayら「Immunobiology」(第6版.), Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York (2005) のような標準的ハンドブック、ならびに本明細書に引用する一般的な背景技術を用いる。
b)他に断らない限り、「免疫グロブリン配列」という用語は、本明細書では重鎖抗体を言う場合も、一般的な四鎖抗体を言う場合であっても、全長抗体、それの個々の鎖、およびそれの全部分、ドメインまたは断片(抗体結合ドメインまたはVHHドメインまたはVH/VLドメインのような断片を含むが、これらに限定されない)を含む一般的な用語として用いられる。加えるに、本明細書において用いられる「配列」という用語は(例えば「免疫グロブリン配列」、「抗体配列」、「変異ドメイン配列」、「 VHH配列」または「タンパク配列」のような用語)、前後関係が、より制限された解釈を要求しない限りは、関連したアミノ酸配列および核酸配列の両方、もしくはアミノ酸配列をコ−ドするヌクレオチド配列を含むと一般的に理解されたい。
c)他に断らない限り、詳細に具体的には説明していない、全ての方法、ステップ、技術および操作は、当業者には明らかであるような、それ自体知られている様式で行うことが可能であり、行われてきた。参照としては、例えば再び標準的なハンドブック、上に引用された一般的な背景技術およびそれらに引用される更なる参考文献を用いればよい。
d)表1に示したように、アミノ酸残基は、標準的な3文字または1文字のアミノ酸コ−ドに従って示される。
(1)時にはまた極性、非荷電アミノ酸と見なされる。
(2)時にはまた非極性。非荷電アミノ酸と見なされる。
(3)当業者にとっては明らかであるように、この表でアミノ酸残基がpH6.0から7.0において荷電あるいは非荷電であると記載している事実は、6.0よりも低いpHではおよび/または7.0よりも高いpHにおいて前記アミノ酸残基が有するかも知れない荷電に関しては、全く反映されない;表に記載しているアミノ酸残基は、当業者にとっては明らかなようにそのように高いまたは低いpHにおいて、荷電しているおよび/または荷電していない可能性がある。
(4)当技術において知られているように、ヒスチジン残基の荷電は、pHにおける小さな動きにさえ依存するが、約6.5のpHにおいては実質的には非荷電であると一般的に見なすことができる。
f)二つ以上のアミノ酸配列を比較する目的で、第一のアミノ酸配列と第二のアミノ酸配列の間の「配列同一性」の百分率は、[第二のアミノ酸配列において、対応する位置におけるアミノ酸残基と同一である第一のアミノ酸配列におけるアミノ酸数]を[第一のアミノ酸配列におけるアミノ酸の全数]で割り、[100%]を掛けることによって計算すれば良く、第二のアミノ酸配列におけるアミノ酸残基の、それぞれの欠失、挿入、置換または付加、 −第一のアミノ酸配列と比較して−、は一つのアミノ酸残基の相違(位置)と見なされる、すなわち下に規定したような「アミノ酸の相違」と見なされる。
:Phe、TyrおよびTrp。
h)二つのアミノ酸配列を比較する場合、「アミノ酸の相違」という用語は、第二の配列と比較して、第一の配列のある位置に一つのアミノ酸の、挿入、欠失または置換のことをいう;二つのアミノ酸配列は、そのようなアミノ酸の相違を一つ、二つ以上含むことができることを意味する;
i)核酸配列またはアミノ酸配列は、例えば、それらが得られる天然の生物源および/または反応培地または培養培地と比較して、前記生物源または培地中で通常随伴している他の成分、例えば他の核酸、他のタンパク/ポリペプチド、他の生物学的成分または高分子、もしくは少なくとも一つの混入物、不純物または微量成分のようなものの少なくとも一つから分離された時、「本質的に分離された(形態)」であると考えられる。特に、核酸配列またはアミノ酸配列は、少なくとも2倍、特に少なくとも10倍、さらに特定すれば、少なくとも100倍および1000倍以上まで精製されたとき、「本質的に分離された」と考えられる。「本質的に分離された形態」である核酸配列またはアミノ酸配列は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動のような、適切なクロマトグラフ技術のような、適切な技術を用いて決定される、本質的に均一であることが好ましい。
j)本明細書で用いている「ドメイン」という用語は、一般的に抗体鎖の球状の領域を言い、特に重鎖抗体の球状領域、もしくはそのような球状領域から本質的に成るポリペプチドを言う。通常そのようなドメインは、シ−トとしてまたはジスルフィド結合により安定化された、ペプチドル−プ(例えば3または4ペプチドル−プ)を含むであろう。
k)「抗原決定基」という用語は、抗原結合分子(例えば本発明のナノボディまたはポリペプチドのような)によって、より特定すれば、前記分子の抗原結合部位によって認識される抗原上のエピト−プを言う。本明細書においては、「抗原決定基」および「エピト−プ」はまた、相互に交換して用いてもよい。
m)「特異性」という用語は、特定の抗原結合分子または抗原結合タンパク(例えば、本発明のナノボディまたはポリペプチド)分子が結合できる、異なったタイプの抗原または抗原決定基の数を言う。ある抗原結合タンパクの特異性は、アフィニティーおよび/または結合活性に基づいて決定することができる。抗原と抗原結合タンパクとの解離の平衡定数(KD)によって表されるアフィニティーは、抗原決定基と抗原結合タンパク上の抗原結合部位の間の結合力の尺度である:KDの値が小さければ小さいほど、抗原決定基と抗原結合分子の間の結合力がより強い(代替法として、アフィニティーは1/KDである親和定数(KA)として表すこともできる)。当業者には明らかであるように(例えば、本明細書における更なる開示に基づいて)、アフィニティーは、関心ある特定の抗原に依存して、それ自体知られている様式で決定することができる。結合活性は、抗体結合分子(例えば、本発明のナノボディまたはポリペプチド)および関連した抗原の間の結合力の尺度である。結合活性は、抗原決定基および抗原結合分子の間のアフィニティーならびに抗原結合分子上に存在する関連した結合部位の数の両方に関連する。典型的には、抗原結合分子(例えば本発明のナノボディおよび/またはポリペプチド)は、解離定数(KD)10−5から10−12モル/リットル(M)または未満、好ましくは、10−7から10−12モル/リットル(M)または未満、および/または会合定数(KA)、少なくとも107M−1、好ましくは少なくとも108M−1、より好ましくは少なくとも1012M−1のように、少なくとも109M−1である。10−4Mより大きいいかなるKD値も、非特異的な結合を示すと一般的に考えられている。好ましくは、本発明のナノボディまたはポリペプチドは、希望する抗原と500nM未満、好ましくは200nM未満、より好ましくは、例えば500pM未満のように、10nM未満のKDで結合する。抗原結合タンパクの、抗原または抗原決定基との特異的な結合は、それ自体知られているいずれかの適切な方法で決定できるが、例えばScatchard分析および/または放射線免疫測定法(RIA)、酵素免疫測定法(EIA)およびサンドイッチ拮抗法のような拮抗結合測定法、ならびに当技術においてそれ自体知られているそれらの別の変法を含む。
o)さらに以下に説明するように、ナノボディにおけるアミノ酸残基の全数は、110〜120の領域、好ましくは112〜115、最も好ましくは113である。しかしながら、ナノボディの部分、断片またはアナログ(以下にさらに説明するように)が以下に概略した更なる要項に適い、また本明細書に記載の目的に適している限り、ナノボディの部分、断片またはアナログはそれらの長さおよび/またサイズに関しては特に限定されないことに留意されたい;
p)ナノボディのアミノ酸残基は、上に引用したRiechmannおよびMuyldermansの論文におけるラクダ科のVHHドメインに応用されたように(例えば前記の参考文献の図2を参照)、Kabatら.("Sequence of proteins of immunological interest"、US Public Health Services、NIH Bethesda、MD,Publication No.91)によって与えられたVHドメインに対する一般的な番号付けに従って番号を付けられる。この番号付けに従って、ナノボディのFRIはアミノ酸残基を1−30の位置に含み、ナノボディのCDR1はアミノ酸残基を31〜36の位置に含む、ナノボディFR2はアミノ酸残基を36〜49の位置に含み、ナノボディのCDR2はアミノ酸残基を50〜65の位置に含み、ナノボディのFR3はアミノ酸残基を66〜94の位置に含む、ナノボディのCDR3はアミノ酸残基を95−102の位置に含み、およびナノボディのFR4はアミノ酸残基を103〜113の位置に含む。[この点に関して、VHドメインおよびVHHドメインに関して、当技術においては良く知られているようにCDRのそれぞれにおけるアミノ酸残基の全数は、変化するかもしれず、Kabatの番号付けによって示されたアミノ酸残基の全数と一致しないかも知れない(すなわち、Kabatの番号付けによる一つ以上の位置が、実際の配列によって占められていない可能性もあり、または実際の配列はKabatの番号付けが許す数よりも多いアミノ酸残基を含んでいる可能性もある)。このことは、一般的にKabatによる番号付けは、実際のアミノ酸配列の実際の番号と一致する可能性もあるし、可能性がないかも知れないことを意味する。一般的にはしかし、Kabatの番号によって、およびCDRにおけるアミノ酸残基数に関係なく、Kabatの番号による1の位置はFR1の開始に相当し、逆も成り立ち、Kabat番号による36の位置はFR2の開始に相当し、逆も成り立ち、Kabat番号による66の位置はFR3の開始に相当し、逆も成り立ち、Kabat番号による103の位置はFR4の開始に相当し、逆も成り立つ。
q)図、配列表および実験部/実施例は、本発明をさらに例示するためのみに与えられるものであり、本明細書に明瞭に示されない限りは、本発明および/または付帯した請求項の範囲を制限するものと解釈したり理解したりすべきではない。
Hamers−Casterman et al., Nature 1993 June 3; 363 (6428): 446−8; Davies and Riechmann, FEBS Lett. 1994 Feb 21; 339(3): 285−90; Muyldermans et al., Protein Eng. 1994 Sep; 7(9): 1129−3; Davies and Riechmann, Biotechnology (NY) 1995 May; 13(5): 475−9; Gharoudi et al.,9th Forum of Applied Biotechnology, Med. Fac. Landbouw Univ. Gent. 1995; 60/4a part I: 2097−2100; Davies and Riechmann, Protein Eng. 1996 Jun; 9(6): 531−7; Desmyter et al., Nat Struct Biol. 1996 Sep; 3(9): 803−11; Sheriff et al., Nat Struct Biol. 1996 Sep; 3(9): 733−6; Spinelli et al., Nat Struct Biol. 1996 Sep; 3(9): 752−7; Arbabi Ghahroudi et al., FEBS Lett. 1997 Sep 15; 414(3): 521−6; Vu et al., Mol Immunol. 1997 Nov−Dec; 34(16−17): 1121−31; Atarhouch et al., Journal of Camel Practice and Research 1997; 4: 177−182; Nguyen et al., J. Mol. Biol. 1998 Jan 23; 275(3): 413−8; Lauwereys et al., EMBO J. 1998 Jul 1; 17(13): 3512−20; Frenken et al., Res Immunol. 1998 Jul−Aug;149(6):589−99; Transue et al., Proteins 1998 Sep 1; 32(4): 515−22; Muyldermans and Lauwereys, J. Mol. Recognit. 1999 Mar−Apr; 12 (2): 131−40; van der Linden et al., Biochim. Biophys. Acta 1999 Apr 12; 1431(1): 37−46.; Decanniere et al., Structure Fold. Des. 1999 Apr 15; 7(4): 361−70; Ngyuen et al., Mol. Immunol. 1999 Jun; 36(8): 515−24; Woolven et al., Immunogenetics 1999 Oct; 50 (1−2): 98−101; Riechmann and Muyldermans, J. Immunol. Methods 1999 Dec 10; 231 (1−2): 25−38; Spinelli et al., Biochemistry 2000 Feb 15; 39(6): 1217−22; Frenken et al., J. Biotechnol. 2000 Feb 28; 78(1): 11−21; Nguyen et al., EMBO J. 2000 Mar 1; 19(5): 921−30; van der Linden et al., J. Immunol. Methods 2000 Jun 23; 240 (1−2): 185−95; Decanniere et al., J. Mol. Biol. 2000 Jun 30; 300 (1): 83−91; van der Linden et al., J. Biotechnol. 2000 Jul 14; 80(3): 261−70; Harmsen et al., Mol. Immunol. 2000 Aug; 37(10): 579−90; Perez et al., Biochemistry 2001 Jan 9; 40(1): 74−83; Conrath et al., J. Biol. Chem. 2001 Mar 9; 276 (10): 7346−50; Muyldermans et al., Trends Biochem Sci. 2001 Apr;26(4):230−5; Muyldermans S., J. Biotechnol. 2001 Jun; 74 (4): 277−302; Desmyter et al., J. Biol. Chem. 2001 Jul 13 ;276 (28): 26285−90; Spinelli et al., J. Mol. Biol. 2001 Aug 3; 311 (1): 123−9; Conrath et al., Antimicrob Agents Chemother. 2001 Oct; 45 (10): 2807−12; Decanniere et al., J. Mol. Biol. 2001 Oct 26; 313(3): 473−8; Nguyen et al., Adv Immunol. 2001; 79: 261−96; Muruganandam et al., FASEB J. 2002 Feb; 16 (2): 240−2; Ewert et al., Biochemistry 2002 Mar 19; 41 (11): 3628−36; Dumoulin et al., Protein Sci. 2002 Mar; 11 (3): 500−15; Cortez−Retamozo et al., Int. J. Cancer. 2002 Mar 20; 98 (3): 456−62; Su et al., Mol. Biol. Evol. 2002 Mar; 19 (3): 205−15; van der Vaart JM., Methods Mol Biol. 2002; 178: 359−66; Vranken et al., Biochemistry 2002 Jul 9; 41 (27): 8570−9; Nguyen et al., Immunogenetics 2002 Apr; 54 (1): 39−47; Renisio et al., Proteins 2002 Jun 1; 47 (4): 546−55; Desmyter et al., J. Biol. Chem. 2002 Jun 28; 277 (26): 23645−50; Ledeboer et al., J. Dairy Sci. 2002 Jun; 85 (6): 1376−82; De Genst et al., J. Biol. Chem. 2002 Aug 16; 277 (33): 29897−907; Ferrat et al., Biochem. J. 2002 Sep 1; 366 (Pt 2): 415−22; Thomassen et al., Enzyme and Microbial Technol. 2002; 30: 273−8; Harmsen et al., Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002 Dec; 60 (4): 449−54; Jobling et al., Nat Biotechnol. 2003 Jan; 21 (1): 77−80; Conrath et al., Dev. Comp. Immunol. 2003 Feb; 27 (2): 87−103; Pleschberger et al., Bioconjug. Chem. 2003 Mar−Apr; 14 (2): 440−8; Lah et al., J. Biol. Chem. 2003 Apr 18; 278 (16): 14101−11; Nguyen et al., Immunology. 2003 May; 109 (1): 93−101; Joosten et al., Microb. Cell Fact. 2003 Jan 30; 2 (1): 1; Li et al., Proteins 2003 Jul 1; 52 (1): 47−50; Loris et al., Biol Chem. 2003 Jul 25; 278 (30): 28252−7; van Koningsbruggen et al., J. Immunol. Methods. 2003 Aug; 279 (1−2): 149−61; Dumoulin et al., Nature. 2003 Aug 14; 424 (6950): 783−8; Bond et al., J. Mol. Biol. 2003 Sep 19; 332 (3): 643−55; Yau et al., J. Immunol. Methods. 2003 Oct 1; 281 (1−2): 161−75; Dekker et al., J. Virol. 2003 Nov; 77 (22): 12132−9; Meddeb−Mouelhi et al., Toxicon. 2003 Dec; 42 (7): 785−91; Verheesen et al., Biochim. Biophys. Acta 2003 Dec 5; 1624 (1−3): 21−8; Zhang et al., J Mol Biol. 2004 Jan 2; 335 (1): 49−56; Stijlemans et al., J Biol Chem. 2004 Jan 9; 279 (2): 1256−61; Cortez−Retamozo et al., Cancer Res. 2004 Apr 15; 64 (8): 2853−7; Spinelli et al., FEBS Lett. 2004 Apr 23; 564 (1−2): 35−40; Pleschberger et al., Bioconjug. Chem. 2004 May−Jun; 15 (3): 664−71; Nicaise et al., Protein Sci. 2004 Jul; 13 (7): 1882−91; Omidfar et al., Tumour Biol. 2004 Jul−Aug; 25 (4): 179−87; Omidfar et al., Tumour Biol. 2004 Sep−Dec; 25(5−6): 296−305; Szynol et al., Antimicrob Agents Chemother. 2004 Sep;48(9):3390−5; Saerens et al., J. Biol. Chem. 2004 Dec 10; 279 (50): 51965−72; De Genst et al., J. Biol. Chem. 2004 Dec 17; 279 (51): 53593−601; Dolk et al., Appl. EnvironMicrobiol. 2005 Jan; 71(1): 442−50; Joosten et al., Appl Microbiol Biotechnol. 2005 Jan; 66(4): 384−92; Dumoulin et al., J. Mol. Biol. 2005 Feb 25; 346 (3): 773−88; Yau et al., J Immunol Methods. 2005 Feb; 297 (1−2): 213−24; De Genst et al., J. Biol. Chem. 2005 Apr 8; 280 (14): 14114−21; Huang et al., Eur. J. Hum. Genet. 2005 Apr 13; Dolk et al., Proteins. 2005 May 15; 59 (3): 555−64; Bond et al., J. Mol. Biol. 2005 May 6;348(3):699−709; Zarebski et al., J. Mol. Biol. 2005 Apr 21; [印刷前の電子出版]
− 高いアフィニティーと高い選択性を有する抗原に結合するためには、ただ単一のドメインが必要なだけであり、二つの分離したドメインが存在する必要も無いし、これらの二つのドメインが正しい空間配置および立体構造で存在することを保証する必要も無い(すなわち、scFvの場合のように、特別にデザインされたリンカ−を用いて):
− VHHドメインおよびナノボディは単一の遺伝子から発現させることができ、翻訳後の折りたたみまたは修飾も必要としない;
− VHHドメインおよびナノボディは多価および多重特異性の型に用意に操作することができる(本明細書でさらに考察するように);
− VHHドメインおよびナノボディは高度に可溶性であり、凝集する傾向は無い(Wardら、Nature,Vol.341,1989,p.544によって記述されたマウス由来の抗原結合ドメインのように);
− VHHドメインおよびナノボディは、熱、pH、プロテ−ア−ゼおよび他の変性剤または条件に対して高度に安定である(たとえば既出のEwertらを参照)。
− VHHドメインおよびナノボディは製造工程に要求される規模においてさえ、調製するには容易で比較的安価である。たとえば、VHHドメイン、ナノボディおよびそれを含むタンパク/ポリペプチドは、微生物の発酵(以下に説明するような)、を用いて製造することが可能であり、従来の抗体断片のように、哺乳動物発現システムの使用を必要としない;
− VHHドメインおよびナノボディは、従来の4鎖抗体およびその断片と比べると、比較的小さく(約15kDa、または従来のIgGよりも10分の1程度)、それ故、そのような従来の4鎖抗体およびその断片よりも組織(固形腫瘍および他の密な組織を含むが、限定されない)への浸透能が高い;
− VHHドメインおよびナノボディは、いわゆる空洞結合性(特に、通常のVHドメインに比較して、より伸びたCDR3ル−プにより)を示すことができ、それ故、従来の4鎖抗体およびその断片が接近できなかった標的およびエピト−プにも接近することができる。例えば、VHHドメインおよびナノボディは酵素を阻害することができる(例えば国際公開第 97/49805; Transue(1998)既出;Lauwereysら(1998)既出。
a)三つの相補体決定領域/配列によって中断される四つのフレームワーク領域/配列を含むアミノ酸配列であって、Kabatによる番号108の位置のアミノ酸残基がQであり;
および/または
b)三つの相補体決定領域/配列によって中断される四つのフレームワーク領域/配列を含むアミノ酸配列であって、Kabatによる番号44の位置のアミノ酸残基がEであり、またKabatによる番号45の位置のアミノ酸残基がRであり;
および/または
c)三つの相補体決定領域/配列によって中断される四つのフレームワーク領域/配列を含むアミノ酸配列であって、Kabatによる番号103の位置のアミノ酸残基がP、R、およびSからなる群から選択され、特に、RおよびSからなる群から選択される。
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しており、ここでFR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで
i)Kabatによる番号108の位置のアミノ酸残基がQであり;
および/または、そこで
ii)Kabatによる番号44の位置のアミノ酸残基がEであり、およびKabatによる番号45の位置のアミノ酸残基がRであり;
および/または
iii)Kabatによる番号103の位置のアミノ酸残基がP、R、およびSからなる群から選択され、特に、RおよびSからなる群から選択され;
iv)CDR1、CDR2およびCDR3は、上に規定したとおりであり、好ましくは、上の好ましい規定の一つに従って規定され、更に好ましくは上の更に好ましい規定の一つに従って規定されることがより好ましい。
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、ここでFR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで
i)Kabatによる番号108の位置のアミノ酸残基がQであり;
および/または、そこで
ii)Kabatによる番号44の位置のアミノ酸残基がEであり、およびKabatによる番号45の位置のアミノ酸残基がRであり;
および/または
iii)Kabatによる番号103の位置のアミノ酸残基がP、R、およびSからなる群から選択され、特に、RおよびSからなる群から選択され;
iv)CDR1、CDR2およびCDR3は、上に規定したとおりであり、好ましくは、上の好ましい規定の一つに従って規定され、更に好ましくは上の更に好ましい規定の一つに従って規定されることがより好ましい。
a−1)Kabatによる番号44の位置のアミノ酸残基が、G、E、D、G、Q、R、S、Lからなる群から選択され;好ましくはG、E、またはQからなる群から選択され;そして
a−2)Kabatによる番号45の位置のアミノ酸残基が、L、RまたはCからなる群から選択され;好ましくは、LまたはRからなる群から選択され;そして
a−3)Kabatによる番号103の位置のアミノ酸残基が、W、R、またはSからなる群から選択され;好ましくはWまたはRからなる群から選択され、そして最も好ましくはWであり;
a−4)Kabatによる番号108の位置のアミノ酸残基がQであり;
ここで
b−1)Kabatによる番号44の位置のアミノ酸残基が、EおよびQからなる群から選択され;そして
b−2)Kabatによる番号45の位置のアミノ酸残基がRであり;そして
b−3)Kabatによる番号103の位置のアミノ酸残基が、W、RおよびSからなる群から選択され;好ましくはWであり;
b−4)Kabatによる番号108の位置のアミノ酸残基が、QおよびLからなる群から選択され;好ましくはQであり;
もしくは
c−1)Kabatによる番号44の位置のアミノ酸残基が、G、E、D、Q、R、SおよびLからなる群から選択され;好ましくはG、EおよびQからなる群から選択され;そして
c−2)Kabatによる番号45の位置のアミノ酸残基が、L、RおよびCからなる群から選択され;好ましくは、LおよびRからなる群から選択され;そして
c−3)Kabatによる番号103の位置のアミノ酸残基が、P、R、およびSからなる群から選択され;特に、RおよびSからなる群から選択され、そして
c−4)Kabatによる番号108の位置のアミノ酸残基が、QおよびLからなる群から選択され;好ましくはQである。
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、
FR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで
i)Kabatによる番号44の位置のアミノ酸残基が、G、E、D、G、Q、R、S、Lからなる群から選択され;好ましくはG、EまたはQからなる群から選択され;
そして
ii)Kabatによる番号45の位置のアミノ酸残基が、L、RまたはCからなる群から選択され;好ましくはLまたはRからなる群から選択され
そして
iii)Kabatによる番号103の位置のアミノ酸残基が、W、RまたはSからなる群から選択され;好ましくはWまたはRであり;最も好ましくはWであり;
そして
iv)Kabatによる番号108の位置のアミノ酸残基が、Qであり;
そして
v)CDR1、CDR2およびCDR3は、上に規定したとおりであり、好ましくは、上の好ましい規定の一つに従って規定され、更に好ましくは上の更に好ましい規定の一つに従って規定されることがより好ましい。
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、
FR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで:
i)Kabatによる番号44の位置のアミノ酸残基が、EおよびQからなる群から選択され;
そして
ii)Kabatによる番号45の位置のアミノ酸残基が、Rであり;
iii)Kabatによる番号103の位置のアミノ酸残基が、W、RおよびSからなる群から選択され;好ましくWであり;
そして
iv)Kabatによる番号108の位置のアミノ酸残基が、Qであり;
そして
v)CDR1、CDR2およびCDR3は、上に規定したとおりであり、好ましくは、上の好ましい規定の一つに従って規定され、更に好ましくは上の更に好ましい規定の一つに従って規定されることがより好ましい。
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、
FR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで:
i)Kabatによる番号44の位置のアミノ酸残基が、G、E、D、Q、R、SおよびLからなる群から選択され;好ましくは、G、EおよびQからなる群から選択され;
そして
ii)Kabatによる番号45の位置のアミノ酸残基が、L、RおよびCからなる群から選択され;好ましくは、LおよびおRからなる群から選択され;
そして
iii)Kabatによる番号103の位置のアミノ酸残基が、P、RおよびSからなる群から選択され;特にRおよびSからなる群から選択され;
そして
iv)Kabatによる番号108の位置のアミノ酸残基が、QおよびLからなる群から選択され;好ましくはQであり;
そして
v)CDR1、CDR2およびCDR3は、上に規定したとおりであり、好ましくは、上の好ましい規定の一つに従って規定され、更に好ましくは上の更に好ましい規定の一つに従って規定されることがより好ましい。
a)Kabatによる番号44〜47の位置のアミノ酸残基がGLEW(または以下に規定するようなGLEW様配列)を形成し、および108の位置のアミノ酸残基がQであり;
または
b)Kabatによる番号43〜46の位置のアミノ酸残基がKERE配列またはKQRE(またはKERE様配列)を形成し、および108に位置のアミノ酸残基がQまたはLであり、好ましくはQである。
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、
FR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで:
i)Kabatによる番号44〜47の位置のアミノ酸残基がGLEW(または以下に規定するようなGLEW様配列)を形成し、および108の位置のアミノ酸残基がQであり;
そして:
ii)CDR1、CDR2およびCDR3は、上に規定したとおりであり、好ましくは、上の好ましい規定の一つに従って規定され、更に好ましくは上の更に好ましい規定の一つに従って規定されることがより好ましい。
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、
FR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで:
i)Kabatによる番号43〜46の位置のアミノ酸残基がKERE配列またはKQRE(またはKERE様配列)を形成し、および108に位置のアミノ酸残基がQまたはLであり、好ましくはQであり;
そして:
ii)CDR1、CDR2およびCDR3は、上に規定したとおりであり、好ましくは、上の好ましい規定の一つに従って規定され、更に好ましくは上の更に好ましい規定の一つに従って規定されることがより好ましい。
a)「GLEW群」:Kabatによる番号44〜47の位置にアミノ酸配列GLEWおよびKabatによる番号108の位置にQを有するナノボディ。更に本明細書で説明するように、この群のナノボディは通常Vを37の位置に有し、および103の位置にW、P、RまたはSを有することができ、好ましくは103の位置にWを有する。更にGLEW群はまた下の表2に言及されたようなGLEW様配列のいくつかを含む;
b)「KERE群」:Kabatによる番号43〜46の位置にアミノ酸配列KERE配列またはKQREを有しおよびKabatによる番号108の位置にQまたはLを有するナノボディ。更に本明細書で説明するように、この群のナノボディは通常Fを37の位置に有し、LまたはFを47の位置に;および103の位置にW、P、RまたはSを有することができ、好ましくは103の位置にWを有する。
c)「103P、R、S群」:103の位置にP、RまたはSを有するナノボディ。これらのナノボディは、Kabatによる番号44〜47の位置にアミノ酸配列GLEWもしくはKabatによる番号43−46の位置にアミノ酸配列KEREまたはKQREを有することができ、後者は最も好ましくは、37の位置のFおよび47の位置のLまたはFとの組み合わせであり(KERE群についての規定のように);ならびにKabatによる番号108の位置にQまたはLを有することができ、および好ましくはQを有する。
(1):特に、しかしそれだけではなく、43〜46の位置にKERE(配列番号:437)またはKQRE(配列番号:438)と組み合わせて。
(2):通常44〜47の位置にGLEW(配列番号:439)として。
(3):通常43〜46の位置にKEREまたはKQREとして、例えば43〜47の位置に、KEREL(配列番号:440)、KEREF(配列番号:441)、KQREL(配列番号:442)、KQREF(配列番号:443)またはKEREG(配列番号:444)として。代わりに、TERE(配列番号:445)(例えばTEREL(配列番号:446))、KECE(配列番号:447)(例えばKECEL(配列番号:448)またはKECER(配列番号:449))、RERE(配列番号:450)(例えばREREG(配列番号:451))、QERE(配列番号:452)(例えばQEREG(配列番号:453))、KGRE(配列番号:454)(例えばKGREG(配列番号:455))、KDRE(配列番号:456)(例えばKDREV(配列番号:457))は、可能である。他のいくつかの、可能ではあるが、好ましくない配列としては、DECKL(配列番号:458)およびNVCEL(配列番号:459)が挙げられる。
(4):44〜47の位置にGLEWおよび43〜46の位置にKEREまたはKQREの両方を有する。
(5):天然に存在するVHHドメインの83〜84の位置に、しばしばKPまたはEPとして。
(6):特に、しかしそれだけではなく、44〜47の位置にGLEWと組み合わせて。
(7):44−47の位置がGLEWであるという条件で、108の位置は常にQである。
(8):GLEW群は、また44〜47の位置に、例えばGVEW(配列番号:460)、EPEW(配列番号:461)、GLER(配列番号:462)、DQEW(配列番号:463)、DLEW(配列番号:464)、GIEW(配列番号:465)、ELEW(配列番号:466)、GPEW(配列番号:467)、EWLP(配列番号:468)、GPER(配列番号:469)、GLER(配列番号:470)およびELEWのようなGLEW様配列をも含む。
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、
FR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで:
i)特徴残基は上に規定されたとおりであり、
そして
ii)CDR1、CDR2およびCDR3は、上に規定したとおりであり、好ましくは、上の好ましい規定の一つに従って規定され、更に好ましくは上の更に好ましい規定の一つに従って規定されることがより好ましい。
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、
FR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで:
i)FR1は、アミノ酸配列:
[1]QVQLQESGGGXVQAGGSLRLSCAASG[26]
[配列番号:1]
からなる群から選択され、
または上記のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、更により好ましくは99%の配列同一性(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され;
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表4で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定したような)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表4で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
そして
[36]WXRQAPGKXXEXVA[49] [配列番号:2]
からなる群から選択され、
または上記のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、更により好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され;
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表5で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定したような)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表5で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
そして
[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSLXXEDTAVYYCAA[94]
[配列番号:3]
からなる群から選択され、
または上記のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、更により好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され;
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表6で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定したような)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表6で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
そして
[103]XXQGTXVTVSS[113] [配列番号:4]
からなる群から選択され、
または上記のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、更により好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され;
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表7で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定したような)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表7で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
そして
ここで、特徴残基は「X」によって示され、上に規定されたとおりであって、括弧内の数字はKabat番号によるアミノ酸残基の位置を言う。
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、
FR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで:
[1]QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASG[26]
[配列番号:5]
からなる群から選択され、
または上記のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、更により好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され;
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表4で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置は上の配列に示したとおりであり;
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表4で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置は上の配列に示したとおりであり;
そして
[36]WFRQAPGKERELVA[49] [配列番号:6]
[36]WFRQAPGKEREFVA[49] [配列番号:7]
[36]WFRQAPGKEREGA[49] [配列番号:8]
[36]WFRQAPGKQRELVA[49] [配列番号:9]
[36]WFRQAPGKQREFVA[49] [配列番号:10]
[36]WYRQAPGKGLEWA[49] [配列番号:11]
からなる群から選択され、
または上記のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、更により好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され;
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表5で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置37、44、45および47は上の配列に示したとおりであり;
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表5で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置、37、44、45および47は上のそれぞれの配列に示したとおりであり;
そして
[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA[94]
[配列番号:12]
からなる群から選択され、
または上記のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、更により好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され;そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表6で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置83および84は上の配列に示したとおりであり;
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定したような)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、そのアミノ酸配列において、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表6で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置83および84は上の配列に示したとおりであり;
そして
[103]WGQGTQVTVSS[113] [配列番号:13]
[103]WGQGTLVTVSS[113] [配列番号:14]
からなる群から選択され、
または上記のアミノ酸配列と少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、更により好ましくは少なくとも99%の配列同一性(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され;そのアミノ酸配列は
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表7で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置103、104および108は上の配列に示したとおりであり;
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、その配列は:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表7で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置103、104および108は上の配列に示したとおりであり;
そして
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、
FR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで:
[1]QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASG[26]
[配列番号:5]
からなる群から選択され、
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、その配列は:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表4で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置は上の配列に示したとおりであり;
そして
[36]WFRQAPGKERELVA[49] [配列番号:6]
[36]WFRQAPGKEREFVA[49] [配列番号:7]
[36]WFRQAPGKEREGA[49] [配列番号:8]
[36]WFRQAPGKQRELVA[49] [配列番号:9]
[36]WFRQAPGKQREFVA[49] [配列番号:10]
からなる群から選択され、
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、その配列は:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましく
は、保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表5で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置37、44、45および47は上の配列に示したとおりであり;
そして
[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA[94]
[配列番号:12]
からなる群から選択され、
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、その配列は:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表6で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置83および84は上の配列に示したとおりであり;
そして
[103]WGQGTQVTVSS[113] [配列番号:13]
[103]WGQGTLVTVSS[113] [配列番号:14]
からなる群から選択され、
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、その配列は:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表7で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置103、104および108は上の配列に示したとおりであり;
そして
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、
FR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで:
[1]QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASG[26]
[配列番号:5]
からなる群から選択され、
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、その配列は:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表4で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置は上の配列に示したとおりであり;
そして
[36]WYRQAPGKGLEWA[49] [配列番号:11]
からなる群から選択され、
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、その配列は:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましく
は、保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表5で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置37、44、45および47は上の配列に示したとおりであり;
そして
[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA[94]
[配列番号:12]
からなる群から選択され、
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、その配列は:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表6で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置83および84は上の配列に示したとおりであり;
そして
[103]WGQGTQVTVSS[113] [配列番号:13]
からなる群から選択され、
および/または上記のアミノ酸配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、その配列は:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表7で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置103、104および108は上の配列に示したとおりであり;
そして
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有しても良く、
FR1からFR4は、それぞれフレームワーク領域1から4を言い、CDR1からCDR3は、それぞれ相補体決定領域1から3を言い、ここで:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表4で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、FR1配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置は前記FR1配列に示したとおりであり;
および/または前記FR1配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の
相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され:その
配列では
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましく
は、保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表4で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置は前記FR1配列に示したとおりであり;
そして
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表5で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、FR2配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置37、44、45および47はFR2配列に示したとおりであり;
および/または前記FR2配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
そのアミノ酸配列では、
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表5で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、FR2配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置37、44、45および47はFR2配列に示したとおりであり:
そして
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表6で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、FR3配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置83および84はFR3配列に示したとおりであり;
および/または前記FR3配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
そのアミノ酸配列では:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表6で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、FR3配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置83および84はFR3配列に示したとおりであり;
そして
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表7で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、FR4配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;および
(3)特徴残基の位置103、104および108はFR4配列に示したとおりであり;
および/または前記FR3配列の一つと、3、2またはただ1つの「アミノ酸の相違」(本明細書で規定したような)を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、そのアミノ酸配列では:
(1)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表7で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(2)アミノ酸配列は、好ましくは、FR4配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まず;
(3)特徴残基の位置103、104および108はFR4配列に示したとおりであり;
そして
(1)特徴残基は、上記の表2に示すことができ;
(2)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表4〜7で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(3)アミノ酸配列は、好ましくは、上記アミノ酸配列と比較して、アミノ酸
の置換のみを含み、欠失または挿入を含まない。
(1)特徴残基は、配列番号:52から60、配列番号76から86または配列番号
95から99から選択される、妥当な配列で示されるような配列であり;
(2)特徴位置以外のいずれかの位置でのいかなるアミノ酸置換も、好ましくは、
保存的アミノ酸置換(本明細書で規定)および/または
表4〜7で規定されたアミノ酸置換であり;および/または
(3)アミノ酸配列は、好ましくは、配列番号:52から60、配列番号76か
ら86または配列番号95から99から選択される、妥当な配列と比較して、
アミノ酸の置換のみを含み、欠失または挿入を含まない。
− 上記のフレ−ムワ−ク配列における一つ以上のアミノ酸残基は、天然に存在するVHHドメインにおけると同じ位置に天然に存在する、一つ以上のアミノ酸残基と置換される。そのような置換の例は上の表4〜7に記載されている;
および/または
− 上記のフレ−ムワ−ク配列における一つ以上のアミノ酸残基は、上に記述された保存的アミノ酸置換と考えられる一つ以上のアミノ酸残基によって置換され;
および/または
− 上記のフレ−ムワ−ク配列における一つ以上のアミノ酸残基は、ヒトの天然に存在するVHドメインにおけると同じ位置に天然に存在する、一つ以上のアミノ酸残基と置換される。これは一般的に天然に存在するVHH/ナノボディ一般の、および特に前記位置の「ヒト化」と言われ、以下により詳細に考察する;
そして:
− 上の表4〜7ではVHドメインおよびVHHドメインの両方に関して、一つのアミノ酸残基のみが言及されている位置は、好ましくは置換されない。
a)例えば異種の宿主細胞または宿主器官における発現の結果、N−末端Met残基を含むことができる;
b)合成時に宿主細胞からのナノボディの分泌を導くシグナル配列またはリ−ダ−配列を形成してもよい。適切なリ−ダ−配列は当業者には明らかであろう、そして本明細書ではさらに記載されているとおりである。通常そのようなリ−ダ−配列はナノボディのN末端に連結されるであろうが、本発明の最も広い意味で、そこに限定されてはいない;
c)ナノボディを、特定の器官、組織、もしくは細胞の部分または区画に指向性を持たせおよび/またはそこへ透過、侵入させる、および/またはナノボディを、細胞膜のような生物学的障壁、上皮細胞層のような細胞層、固形癌を含む腫瘍または血液脳関門に、浸透、通過させる、シグナル配列を形成してもよい。そのようなアミノ酸配列の例は、当業者には明らかであろう。あるいくつかの非限定的な例としては、国際公開第 03/026700号およびTemsamaniら, Expert Opin. Biol.Ther., 1, 773 (2001); Temsamani およびVidal, Drug Discov. Today, 9, 1012 (004)および Rousselle, J. Pharmacol. Exp. Ther., 296, 124-131 (2001) に記載の「低分子ペプチドベクター」(「Pep-trans vectors」)およびZhao ら、 Apoptosis, 8, 631-637 (2003)によって記載された膜輸送体が挙げられる。抗体断片の細胞内標的指向化のためのC末端およびN末端アミノ酸配列は、例えばCardinale ら、Methods, 34, 171 (2004)に記載されている。他の適切な細胞内標的指向化のための技術は、上述のように、本発明のナノボディを含むいわゆる「細胞内抗体」の発現および/または使用に関する;
e)機能化され、および/または官能基の結合部位として役立つことのできる一つ以上のアミノ酸残基あってもよい。適切なアミノ酸残基および官能基は当業者には明らかであり、限定されないが、本発明のナノボディの誘導体に関して本明細書に記載するアミノ酸残基および官能基が挙げられる。
− 同じ抗原に対して指向性を有しても良く、すなわち前記抗原の同じ部分またはエピト−プに対して、または前記抗原の二つ以上の異なった部分またはエピト−プに対して;および/または
− 異なった抗原に対して指向性を有してもよい;
またはそれらの組み合わせ。
− 二つの同一のナノボディを含んでも良く;
− 第一のナノボディがある抗原の第一の部分またはエピト−プに指向性を有し、および第二のナノボディが前記抗原の同じ部分またはエピト−プ、もしくは前記抗原の別の部分またはエピト−プに指向性を有しており;
− または第一のナノボディが第一の抗原に指向性を有しており、第二のナノボディが、第一の抗原とは異なる第二の抗原に指向性を有しており;
一方本発明の三価ポリペプチドは、例えば:
− 同じ抗原の同じまたは異なった部分またはエピト−プに対して指向性を有する、三つの同じ、または異なったナノボディを含んでも良く;
− 第一の抗原上の、同じまたは異なった部分またはエピト−プに対して指向性を有する二つの同じまたは異なったナノボディ、および前記第一の抗原とは異なった第二の抗原に指向性を有する第三のナノボディを含んでも良く;または
− 第一の抗原に対して指向性を有する第一のナノボディ、前記第一の抗原とは異なった第二の抗原に対して指向性を有する第二のナノボディ、および前記第一の抗原および第二の抗原とは異なった第三の抗原に指向性を有する、第三のナノボディを含んでもよい。
少なくとも一つのナノボディは、第一の抗原に対して指向性を有し、また少なくとも一つのナノボディは第一の抗原とは異なった第二の抗原に対して指向性を有する、少なくとも二つのナノボディを含むポリペプチドは「多重特異的」とも呼ばれる。従って、「二重特異的ナノボディ」は、第一の抗原に対して指向性を有する少なくとも一つのナノボディ、および第二の抗原に対して指向性を有する少なくとも一つの更なるナノボディを含み、一方、「三重特異的」 ナノボディは、第一の抗原に対する指向性を有する少なくとも一つのナノボディ、第二の抗原に対する指向性を有する少なくとも一つの更なるナノボディ、および第三の抗原に対する指向性を有する少なくとも一つの更なるナノボディを含み;等。
− 適切な宿主細胞もしくは宿主生物(また、本明細書では「本発明の宿主」と呼ぶ)において、または本発明の該ナノボディまたはポリペプチド(また、本明細書では「本発明の核酸」と呼ぶ)をコードする核酸の適切な別の発現系において発現させ、場合により続いて:
− こうして得た本発明のナノボディまたはポリペプチドを単離かつ/または精製するステップからなる。
具体的には、こうした方法は、
− 本発明の宿主が本発明の少なくとも1個のナノボディおよび/またはポリペプチドを発現かつ/または生成するように、ある条件下で本発明の宿主を培養かつ/または維持し;場合により続いて:
− こうして得た本発明のナノボディまたはポリペプチドを単離および/または精製するステップを含むことができる。
a)本発明の少なくとも1種の核酸;但し、次のものに操作できるように接続されている
b)1種以上の調節要素、例えば、プロモーター、場合により適切なターミネーターなど;
c)および場合により、また、
d)それ自体が公知の遺伝学的構造物の1種以上の別の要素
を含み;ここでは、「調節要素」、「プロモーター」、「ターミネーター」、および「操作できるように接続」という用語は、当技術分野における通常の意味を有し(さらに以下に記載する通り);遺伝学的構造物に存在する該「別の要素」は、例えば、3’−もしくは5’−UTR配列、リーダー配列、選択マーカー、発現マーカー/レポーター遺伝子、および/または形質転換もしくは組込み(の効率)を促進もしくは増加させる可能性がある要素とすることができる。上記その他のこうした遺伝学的構造物に適した要素は、当業者に明らかであり、例えば、使用する構造物のタイプ、所期の宿主細胞もしくは宿主生物;対象とする本発明のヌクレオチド配列が発現されることになっている方法(例えば、構成的発現、一過性発現、または誘導性発現によって);および/または使用する形質転換技術に依存する可能性がある。
− 細菌株、グラム陰性菌株、例えば、大腸菌;プロテウス、例えばプロテウスミラビリス;シュードモナス、例えばシュードモナスフルオレッセンスの菌株など;およびグラム陽性菌株、例えば、バシラス、例えば枯草菌またはブレビス菌;ストレプトミセス、例えばストレプトミセスリビダンス;ブドウ球菌、例えばスタフィロコッカスカルノーサス;乳酸球菌、例えばラクトコッカスラクティスの菌株などが含まれるが、それらに限定されない;
− 真菌細胞、トリコデルマ種、例えばトリコデルマリーシエからの細胞;ニューロスポラ種、例えばアカパンカビからの細胞;ソルダリア種、例えばソルダリアマクロスポーラからの細胞;アスペルギルス種、例えば黒色コウジ菌もしくはアスペルギルスソーエからの細胞;またはその他の糸状菌からの細胞が含まれるが、それらに限定されない;
− 酵母細胞、サッカロミセス種、例えばサッカロミセスセレビシエからの細胞;シゾサッカロミセス種、例えばシゾサッカロミセスポンベからの細胞;ピキア種(Pichia)、例えばピキアパストリスまたはピキアメタノリカからの細胞;ハンゼヌラ種、例えばハンゼヌラポリモルファからの細胞;クリヴェロミセス種、例えばクリヴェロミセスラクティスからの細胞;アルクラ(Arxula)種、例えばアルクラアデニニボランス(adeninivorans)からの細胞;ヤロウイア種、例えばヤロウイアリポリティカからの細胞が含まれるが、それらに限定されない;
− 両生類細胞または細胞株、例えばツメガエルの卵母細胞など;
− 昆虫派生の細胞または細胞株、例えば鱗翅類由来の細胞/細胞株など、ヨトウガSF9およびSf21細胞またはショウジョウバエ由来の細胞/細胞株、例えばシュナイダーおよびKc細胞などが含まれるが、それらに限定されない;
− 植物または植物細胞、例えばタバコの細胞;および/または
− 哺乳動物細胞または細胞株、例えばヒト、哺乳動物由来の細胞または細胞株、CHO細胞、BHK細胞(例えばBHK−21細胞)、ならびにHeLa、COS(例えばCOS−7)、およびPER.C6細胞などのヒト細胞または細胞株が含まれるが、それらに限定されない;
ならびに当業者に明らかである、抗体および抗体断片の発現および産生に関するそれ自体が公知のその他の宿主または宿主細胞((単一)ドメイン抗体およびScFv断片を含むが、それらに限定されない)でもよい。上記に引用された一般的な背景技術、ならびに例えば国際公開第94/29457号;国際公開第96/34103号;国際公開第99/42077号;Frenkenら、(1998)、参照;RiechmannおよびMuyldermans、(1999)、参照;van der Linden、(2000)、参照;Thomassenら、(2002)、参照;Joostenら、(2003)、参照;Joostenら、(2005)、参照;ならびにさらに本明細書の引用文献を参照されたい。
−大腸菌における発現に関しては:lacプロモーター(およびその誘導体、例えばlacUV5プロモーターなど);アラビノースプロモーター;ラムダファージの左向き(PL)および右向きの(PR)プロモーター;trpオペロンのプロモーター;ハイブリッドのlac/trpプロモーター(tacおよびtrc);T7プロモーター(より具体的にはT7ファージ遺伝子10のプロモーター)および他のT系ファージプロモーター;Tn10テトラサイクリン耐性遺伝子のプロモーター;外来の調節用オペレータ配列の1個または複数のコピーを含む上記のプロモーターを操作した変異体;
−S.セレビシエにおける発現に関しては:構成的:ADH1(アルコールデヒドロゲナーゼ1)、ENO(エノラーゼ)、CYC1(シトクロムc iso−1)、GAPDH(グリセルアルデヒド−3−リン酸塩デヒドロゲナーゼ);PGK1(ホスホグリセリン酸キナーゼ)、PYK1(ピルビン酸キナーゼ);調節性:GAL1,10,7(ガラクトース代謝酵素)、ADH2(アルコールデヒドロゲナーゼ2)、PHO5(酸性ホスファターゼ)、CUP1(銅メタロチオネイン);異種性:CaMV(カリフラワーモザイクウイルス35Sプロモーター);
−ピキアパストリスにおける発現に関しては:AOX1プロモーター(アルコールオキシダーゼI)
−哺乳動物細胞における発現に関しては:ヒトサイトメガロウイルス(hCMV)即時初期エンハンサー/プロモーター;ヒトサイトメガロウイルス(hCMV)即時初期プロモーターがTetレプレッサーによって調節されうるように、2個のテトラサイクリンオペレータ配列を含む、ヒトサイトメガロウイルス(hCMV)即時初期プロモーターの変異体;単純疱疹ウイルスチミジンキナーゼ(TK)プロモーター;ラウス肉腫ウイルス末端反復配列(RSV LTR)エンハンサー/プロモーター;ヒト、チンパンジー、マウスまたはラットからの延長因子1α(hEF−1α)プロモーター;SV40初期プロモーター;HIV−1末端反復配列プロモーター;β−アクチンプロモーター。
−哺乳動物細胞における発現のためのベクター:pMAMneo(Clontech)、pcDNA3(Invitrogen)、pMC1neo(Stratagene)、pSG5(Stratagene)、EBO−pSV2−neo(ATCC 37593)、pBPV−1(8−2)(ATCC 37110)、pdBPV−MMTneo(342−12)(ATCC 37224)、pRSVgpt(ATCC37199)、pRSVneo(ATCC37198)、pSV2−dhfr(ATCC 37146)、pUCTag(ATCC 37460)、および1ZD35(ATCC 37565)、ならびに例えばアデノウイルスに基づく系などのウィルスベースの発現系;
−細菌細胞における発現のためのベクター:pETベクター(Novagen)およびpQEベクター(Qiagen);
−酵母または他の真菌細胞における発現のためのベクター:pYES2(Invitrogen)およびピキア発現ベクター(Invitrogen);
−昆虫細胞における発現のためのベクター:pBlueBacII(Invitrogen)および他のバキュロウイルスベクター
−植物または植物細胞における発現のためのベクター:例えばカリフラワーモザイクウイルスもしくはタバコモザイクウイルスに基づくベクター、アグロバクテリウム属の適切な菌株、またはTiプラスミドベースのベクター。
−例えば大腸菌などの細菌細胞における使用には:PelB、Bla、OmpA、OmpC、OmpF、OmpT、StII、PhoA、PhoE、MalE、Lpp、LamB、など;TATシグナルペプチド、溶血素C末端分泌シグナル
−酵母における使用には:α−接合因子プレプロ配列、ホスファターゼ(pho1)、インベルターゼ(Suc)など;
−哺乳動物細胞における使用には:標的タンパク質が真核生物起源である場合には、固有のシグナル;マウスIgκ−鎖V−J2−Cシグナルペプチドなど。
(a)ポリペプチドと標的との間の結合を可能にする条件下で、候補調節因子の存在下および非存在下において腫瘍壊死因子−アルファである標的と前述の抗TNF‐アルファポリペプチドとを接触させる工程、および
(b)同定した候補調節因子の非存在下での結合と比べて相対的に、前述の抗TNF‐アルファポリペプチドと腫瘍壊死因子−アルファとの結合を調節する薬剤として、同定された前記候補調節因子の存在下において結合が低下することにより、工程(a)のポリペプチドと標的との間の結合を測定する工程と
を含む方法。
(a)ポリペプチドと標的との間の結合を可能にする条件下で候補調節因子の存在下および非存在下における腫瘍壊死因子−アルファである標的と、前述の抗TNF‐アルファポリペプチドとを接触させる工程、および
(b)同定した候補調節因子の非存在下における結合と比べて相対的に、腫瘍壊死因子−アルファ介在疾患を治療する薬剤として、候補調節因子の存在下において結合が低下することにより、工程(a)のポリペプチドと標的との結合を測定する工程、
を含む方法。
(a)前記ポリペプチドと標的との間における結合を可能にする条件下で、候補調節因子の存在下および非存在下において腫瘍壊死因子−アルファである標的と、前述の抗TNF‐アルファポリペプチドとを接触させる工程、および
(b)前記候補調節因子の非存在下における結合と比べて相対的に、腫瘍壊死因子−アルファのその受容体に対する結合を調節する薬剤として、同定された前記候補調節因子の存在下において結合が低下することよる、前記候補調節因子が、工程(a)のポリペプチドと標的との間の結合を測定する工程
を含む方法である。
(a)前述の抗TNF‐アルファポリペプチドと標本とを接触させる工程と、
(b)前記ポリペプチドが標本と結合するのを検出する工程と、および
(c)工程(b)で検出した結合と標本に対して相対的に、結合の差異が腫瘍壊死因子−アルファの機能異常によって特徴付けられる疾患の診断となる、基準とを比較する工程
を含む方法である。
(a)腫瘍壊死因子−アルファを対象とするラクダ科動物のVHHをコードする二重鎖DNAを得る工程、
(b)工程(b)で選択したDNAをクローニングおよび発現させる工程、
とを含む方法。
(a)ポリペプチドの発現を可能にする条件下で、前述の抗TNF‐アルファポリペプチドをコードすることのできる核酸を含む宿主細胞を培養する工程、
(b)培地から産生されたポリペプチドを回収する工程、
とを含む方法。
(iv) CDR1が、以下からなる群から選択されたアミノ酸配列であり、
SFGMS [SEQ ID NO: 36]
LNLMG [SEQ ID NO: 37]
INLLG [SEQ ID NO: 38]
NYWMY; [SEQ ID NO: 39]
および/または前述のアミノ酸配列の1つを含む2つあるいは唯一の「アミノ酸の相違」(本明細書で規定のとおり)を含むアミノ酸配列からなる群から選択されたアミノ酸
配列であり、この配列では、
(1)アミノ酸置換が好ましくは、保存的アミノ酸置換(本明細書で規定のとおり)
であり、および/または、
(2)前記アミノ酸配列が好ましくはアミノ酸置換だけを含み、前述アミノ酸配列に
比べてアミノ酸欠失および挿入を含まないことが望ましく、
SISGSGSDTLYADSVKG [SEQ ID NO: 40]
TITVGDSTNYADSVKG [SEQ ID NO: 41]
TITVGDSTSYADSVKG [SEQ ID NO: 42]
SINGRGDDTRYADSVKG [SEQ ID NO: 43]
AISADSSTKNYADSVKG [SEQ ID NO: 44]
AISADSSDKRYADSVKG [SEQ ID NO: 45]
RISTGGGYSYYADSVKG [SEQ ID NO: 46]
あるいは少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、さらに好ましくは95%、
さらに好ましくは99%の、前述のアミノ酸配列の1つを含む配列同一性(本明細書
で規定のとおり)を含むアミノ酸配列からなる群から選択されたアミノ酸配列であっ
て、この配列では、
(1)アミノ酸置換が保存的アミノ酸置換(本明細書で規定のとおり)であることが
好ましく、および/または、
(2)前記アミノ酸配列が、前述のアミノ酸配列に比べアミノ酸置換しか含まず、ア
ミノ酸欠失あるいは挿入を含まないことが好ましく、
および/または前述のアミノ酸配列の1つを含む3、2あるいは唯一の「アミノ酸」
の差異(本明細書で規定のとおり)を含むアミノ酸配列からなる群から選択されたアミ
ノ酸配列であり、この配列では、
(1)任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存的アミノ酸置換(本明細書で規定のと
おり)であり、および/または、
(2)前記アミノ酸配列が前述のアミノ酸配列に比べアミノ酸置換だけを含んでおり
、アミノ酸欠失または挿入を含んでおらず、または、
DREAQVDTLDFDY [SEQ ID NO: 47]
あるいは、少なくとも80%、好ましくは90%、さらに好ましくは95%、きわめ
て好ましくは99%前述のアミノ酸の1つとの同一性を含むアミノ酸
(1)任意のアミノ酸が保存的アミノ酸置換(本明細書で規定のとおり)であり、さらに/または
(2)前記アミノ酸配列が、前述のアミノ酸配列に比べ、アミノ酸置換だけを含み、アミノ酸欠失あるいは挿入を含まないもの
からなる群から、さらには/または前述のアミノ酸の1つを含む3、2あるいは
唯一の「アミノ酸の相違」(本明細書で規定のとおり)を含む、
GGSLSR [SEQ ID NO: 48]
RRTWHSEL [SEQ ID NO: 49]
GRSVSRS [SEQ ID NO: 50]
GRGSP [SEQ ID NO: 51]
のアミノ酸配列からなる群から選択され、この配列では、
(1)任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存的アミノ酸置換(本明細書で規定のと
おり)であり、および/または、
(2)前記アミノ酸配列が、前述のアミノ酸配列に比べアミノ酸置換だけを含んでお
り、アミノ酸欠失または挿入を含まないことを特徴とする。
− CDR1: SFGMS; CDR2: SISGSGSDTLYADSVKG; CDR3: GGSLSR;
− CDR1: LNLMG; CDR2: TITVGDSTNYADSVKG; CDR3: RRTWHSEL;
− CDR1: INLLG; CDR2: TITVGDSTSYADSVKG; CDR3: RRTWHSEL;
− CDR1: SFGMS; CDR2: SINGRGDDTRYADSVKG; CDR3: GRSVSRS;
− CDR1: SFGMS; CDR2: AISADSSDKRYADSVKG; CDR3: GRGSP;
− CDR1: SFGMS; CDR2: AISADSSDKRYADSVKG; CDR3: GRGSP;
− CDR1: NYWMY; CDR2: RISTGGGYSYYADSVKG; CDR3: DREAQVDTLDFDY.
(1)任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存的アミノ酸置換(本明細書で規定のとお
り)であり、および/または、
(2)アミノ酸配列が、好ましくは前述のアミノ酸配列に比べアミノ酸置換だけを含
んでおり、アミノ酸欠失または挿入を含まないことを特徴とし、
および/または前述のアミノ酸配列のひとつである前述のCDRを含む「アミノ酸の相違」(本明細書で規定のとおり)3、2あるいは唯一の(前項に指摘)
を含むアミノ酸配列からなる群から選択されたCDRによって置き換えることができ
る。ここで、
(1)任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存的アミノ酸置換(本明細書で規定
のとおり)であり、および/または、
(2)アミノ酸配列が、好ましくは、前述のアミノ酸配列に比べアミノ酸置換だけを
含んでおり、アミノ酸欠失または挿入を含まない。
Ser、Thr、GlyおよびAsnによって置換されたSer;
Arg、His、Gln、LysおよびGluの1つによって置換されたArg;
Leu、Ile、Phe、Tyr、MetおよびValの1つによって置換されたLeu;
Pro、Gly、AlaおよびThrの1つによって置換されたPro;
Thr、Pro、Ser、Ala、Gly、HisおよびGlnの1つによって置換されたThr;
Ala、Gly、ThrおよびProの1つによって置換されたAla;
Val、Met、Tyr、Phe、IleおよびLeuの1つによって置換されたVal;
Gly、Ala、Thr、ProおよびSerの1つによって置換されたGly;
Ile、Met、Tyr、Phe、ValおよびLeuの1つによって置換されたIle;
Phe、Trp、Met、Tyr、Ile、ValおよびLeuの1つによって置換されたPhe;
Tyr、Trp、Met、Phe、Ile、ValおよびLeuの1つによって置換されたTyr;
His、Glu、Lys、Gln、ThrおよびArgの1つによって置換されたHis;
Gln、Glu、Lys、Asn、His、ThrおよびArgの1つによって置換されたGln;
Asn、Glu、Asp、GlnおよびSerの1つによって置換されたAsn;
Lys、Glu、Gln、HisおよびArgの1つによって置換されたLys;
Asp、GluおよびAsnの1つによって置換されたAsp;
Glu、Asp、Lys、Asn、Gln、HisおよびArgの1つによって置換されたGlu;
Met、Phe、Ile、Val、LeuおよびTyrの1つによって置換されたMet。
− FR1 の位置1、5、28および30と、
− FR2における位置44および45におけるホールマークアミノ酸と、
− FR3残基74、75、76、83、84、93および94と、
− FR4における位置103、104、108および111との
− 付番はすべて、Kabat の付番による
残基のいずれかを置き換える工程が含まれる。
括弧内は、疾患に侵される組織である。この自己免疫疾患の一覧は、包括するためではなく例示することを目的としている。
拮抗ナノボディは、週間隔で100μgのサイトカインを6回注入することで、ヒトTNF‐アルファで免疫化した2頭のラマ(Llama glama)で同定した。競合アッセイでスクリーニングを行い、標識TNF‐アルファのその受容体への結合の阻害能について個々のナノボディを分析した。アルブミン特異性ナノボディは、ヒト血清アルブミンで免疫化したラマから同定した。ヒト、アカゲザルおよびマウスアルブミンにおいて、ELISAで個々のナノボディをスクリーニングし、様々な種の血清アルブミンと交差反応するナノボディのパネルが得られた。
マトリックスをスコア化するBLOSUM62およびカットオフ値が≧60%である一致度を利用して、配列分析(図1)に基づいて、様々なクラスのナノボディ:クラスI(PMP1C2、PMP1G11、PMP1H6)、クラスII(PMP1G5、PMP1H2、PMP3G2)、クラスIIb(PMP1D2)、クラスIII(PMP3D10、PMP5F10)を同定した。表8には、これらのTNF‐アルファナノボディの配列(配列番号52〜60)が収載されている。
TNF‐アルファ
TNF‐アルファへのナノボディの結合を、Biacore3000の機器では表面プラズモン共鳴で特徴づけた。反応単位が250に達するまで、様々な種由来のTNFをアミン結合を介してCM5センサーチップ表面に共有結合させた。残留した反応群を不活性化した。ナノボディ結合を一種類の濃度(1/1000希釈)で評価した。チップ結合抗原に対する結合を可能にするために45μl/minの流速で4分間、各ナノボディを注入した。結合ナノボディの自然解離を可能にするために同じ流速で4時間、ナノボディを有しない結合バッファーをチップにて送った。様々なナノボディについて得たセンサグラムからKoff値を算出した。
結合を上述のようにアッセイした。その際例外として希釈は1/20とした。図3、4および5は、未精製タンパク質を使用した、アルブミン特異性TNF‐アルファナノボディ対ヒト、アカゲザルおよびマウス血清アルブミンのスクリーニングを説明している。
大腸菌発現ベクターの説明
pAX051はpUC19の誘導体である。それはIPTGを利用して発現の誘導の制御を可能にするLacZプロモーターを含む。ベクターはアンピシリンまたはカルベニシリンに対する耐性遺伝子を有する。マルチクローニングサイトはいくつかの制限部位を収容しており、制限部位のSfiIおよびBstEIIは頻繁にNanobody(商標)のクローニングに使用されている。NBをコードする配列を有するフレームでは、ベクターはC末端c‐mycタグおよび(His)6タグをコードする。シグナルペプチドは、発現したNanobody(商標)をペリプラズムに移動させるgen3リーダー配列である。
各ナノボディを発現するクローンの単一コロニーを植菌し、37℃でLuria培地、アンピシリン/カルベニシリン(100μg/ml)および2%グルコース中で前培養を開始し一晩行った。この前培養を利用し植菌を行った。植菌材料は1% (v/v)の生産培養物(TB培地+アンピシリン/カルベニシリン+0.1%グルコース)である。生産培養物は、600nm でのOD値が5〜10に到達するまで37℃で培養し、IPTG(1mMの終濃度)を添加してナノボディ発現を誘導した。タンパク質発現を、4時間37℃あるいは一晩28℃のいずれかで継続可能にし、その時点で細胞を遠心分離により回収し、湿細胞ペーストとして−20℃で保存する。
ヒト生殖系配列に対する相同性
表10に示されたとおり、ナノボディアミノ酸配列をヒト生殖系配列と比較した。ヒト配列に対する相同性の順序では、ナノボディは以下のような:TNF‐アルファナノボディについては、TNF1>TNF2>TNF3であり;血清アルブミンナノボディについては、ALB1>ALB2である。
発現レベルを算出し、表11に示した。収率の順序では、ナノボディは以下のような位置づけである:TNF‐アルファナノボディについては、TNF1>TNF2>TNF3であり;血清アルブミンナノボディについては、ALB1>ALB2である。
純度の決定には、タンパク質試料を15%のSDS−PAGEゲルで分析した。10μl のLaemmliサンプルバッファーを10μl(1ug)の精製タンパク質に添加し、試料は95℃で10分間加熱し、冷却し、15%のSDS−PAGEゲルに添加した。標準法にしたがってゲルを処理し、クマシーブリリアントブルー(CBB)で染色した。図6は、TNF‐アルファ特異性および血清アルブミン特異性ナノボディに関するSDS−PAGEを示す。
100ngの精製タンパク質をゲル上に添加した。SDS−PAGEに続いて、タンパク質を、Mini Trans-Blot(登録商標)電気泳動転写細胞(Biorad)を使用したニトロセルロース膜に移した。膜はPBS、1%カゼイン中で一晩4℃でブロッキングした。
構造物はすべてc−mycタグに融合したので、マウスモノクローナル抗myc抗体を検出ツールとして使用した。さらに、ウサギポリクローナル抗ナノボディ(R23)を検出ツールとして使用した。1/2000に希釈した抗myc抗体を含むPBSまたは1/2000に希釈した抗ナノボディ抗体を含むPBSおよび1%カゼイン中で、ブロットを攪拌しながら室温で1時間インキュベートした。膜をPBS中で5回洗浄し、その後二次抗体を添加した(1/1000に希釈したウサギ抗マウスIgGアルカリホスファターゼ複合体、Sigma、A1902を含むPBS、あるいはヤギ抗ウサギIgGアルカリホスファターゼ複合体、Sigma、A8025、および1%カゼイン)。室温で1時間軽く攪拌しながらインキュベートした後、膜をPBS中で5回洗浄した。ブロットをBCIP/NBT溶液を使用して展開し、バンドが鮮明に見えるようになったときに、ブロットをmilliQ水で洗浄することで反応を停止した。図7はウエスタンブロット分析を示している。
ELISAを行い、ヒトおよびアカゲザルTNF‐アルファへの結合を試験した。96ウェルのMaxisorpプレートを、2μg/mlのニュートラアビジンを含むPBS中で4℃で一晩、コーティングした。1%のカゼインで2時間、室温でプレートをブロッキングした。ビオチン化TNF‐アルファ(400ng/ml)をウェルに添加し、1時間、室温でインキュベートした。ナノボディ試料を、開始時は2μg/mlで、次いで1:3の希釈度で希釈した。マウス抗myc(1/2000希釈)およびウサギ抗マウスアルカリホスファターゼ(1/2000希釈、Sigma、A1902)ならびに基質としてpNPP(2mg/ml)を使用してナノボディを検出した。図9および10は、ヒトおよびアカゲザルTNF‐アルファに対するELISAにおける結合性を示している。
受容体‐リガンド相互作用の阻害能を、アカゲザルおよびヒトTNF‐アルファで分析した。96ウェルのMaxisorpプレートを、2μg/mlのエンブレルを含むPBS中で4℃で一晩、コーティングした。1%のカゼインで2時間、室温でプレートをブロッキングした。ナノボディ試料を、ビオチン化TNF‐アルファ(10ng/ml)とともに室温で30分間プレインキュベートし、この際開始時は濃度5μg/mlで、次いで1:2の希釈度で行った。試料はプレートに添加し、1時間、室温でインキュベートした。Extravidinアルカリホスファターゼ(1/2000希釈)および基質としてpNPP(2mg/ml)を使用してビオチン化TNF‐アルファを検出した。図11および12は、ヒトおよびアカゲザルTNF‐アルファに対する阻害ELISAを示している。結果を表13に要約する。TNF1およびTNF3についてリガンド/受容体結合の阻害は、ヒトおよびアカゲザルの両TNFで見られるのに対して、TNF2はヒトTNF‐アルファのみ阻害している。
TNF‐アルファ結合
実施例3に記載のとおり分析を行った。図13および14は、Biacore分析により、ヒトおよびアカゲザルTNF‐アルファへの結合性を説明している。結果を表14に要約する。Biacoreでの結合性実験はELISAの結果:TNF1およびTNF3についての交差反応結合を裏付けるものであり、一方TNF2はヒトTNF‐アルファにのみ顕著に結合する。
結合を上述のようにアッセイした。その際例外として一連の異なる濃度で行った。チップ結合抗原に対する結合を可能にするために45μl/minの流速で4分間、各濃度を注入した。結合ナノボディの解離を可能にするために同じ流速で、分析物を有しない結合バッファーをチップにて送った。15分後、再生液(25mMのNaOH)を注入して残存している結合分析物を除去した。
選択されたナノボディの抗TNF‐アルファ活性を測定するため、TNF‐アルファ感受性マウス線維芽細胞系L929を使用した。培養液中、TNF‐アルファが十分に高い濃度、すなわち毒性用量の場合、L929細胞は壊死する。TNF‐アルファとその受容体の相互作用の阻害は、細胞に混合物を添加する前に、一連の抗体希釈物を細胞毒性濃度のTNF‐アルファとともにプレインキュベートすることによって判定した。培養液がアクチノマイシンDを含んでいれば、細胞はTNF‐アルファに対してさらに感受性になり、遊離TNF‐アルファに対するバイオアッセイの感受性が高まる。
図14は、実施例12で記述したとおりBiacoreで分析したプロテインA結合を示している。陽性結合をTNF1、TNF2、ALB1について得た。TNF3およびALB2については、結合は存在しないか、あるいは弱いものであった。
試料を200μg/mlで希釈し、500μl の8つのアリコートに分注した。異なるバイアルをインキュベートし、各々室温から90℃まで所与の温度でインキュベートした。処理後、試料を室温で2時間冷却し、4℃で保った。沈殿物を14,000rpmで30分間遠心分離して除去した。SNを注意深く除去し、さらに分析した。
280nmでのODを測定し、濃度を算出した。結果を表17に要約する。TNF2およびTNF3については、80℃でタンパク質含有量の減少が始まり、一方ALB2については、70℃から減少が始まった。
2μgの処理タンパク質を15%のSDS‐PAGEで分離し、ニトロセルロース膜に写し、上述のように処理した。ポリクローナル抗ナノボディ(R23、1/2000希釈)および抗ウサギおよびウマのダイコンペルオキシダーゼ(DAKO、P0448、1/2000希釈)を使用し検出を行った。図15はウエスタンブロット分析を示す。70、80および90℃で処理したALB2について、タンパク質濃縮中で透明な液滴が見られた。70、80および90℃で処理したTNF1について;90℃で処理したTNF3について;90℃で処理したALB1について、凝集が依然として見られ、このことは、SNが依然として微量の沈殿物を含んでいることを意味し、280nmでのODの読み出しが高めになってしまうことになる。このことは、これら高めの温度で処理したTNF1、TNF3およびALB1について280nmでのODで測定したタンパク質濃度が何故減少しないかを説明している。
ヒトTNF‐アルファへの結合を検出するELISAを、実施例10に記述したとおりに基本どおりに行った。結果を図16に示す。TNF1、TNF2およびTNF3に対する、ヒトTNF‐アルファ結合は80℃で減少し始める。
実施例13に記述したとおりにバイオアッセイを行った。結果を表18に要約する。TNF1について、ナノボディの作用強度は70℃で減少し始め、TNF2およびTNF3については80℃で減少し始める。
実施例12に記述したとおりにヒト血清アルブミンへの結合を判定した。濃度は一定に固定した(1:50希釈)。結果を図17に示す。ALB1については、温度処理は血清アルブミンに対する結合に影響を及ぼしていない。ALB2については、70℃から処理はkonに影響し始めた。
二価TNF‐アルファ特異性ナノボディの設定
TNF1、TNF2およびTNF3を二価ナノボディに向くように設定した。2つの構成要素の間にあるスペーサーとして、9AA GlySer リンカー(表19 配列番号68)または30AA GlySer リンカー(表19 配列番号69)のいずれかを使用した。これは、表20に表される構造物を生成した。表19には、これら二価TNF‐アルファナノボディ(配列番号70〜75)の配列が収載されている。
実施例5に記述したとおりに発現を行った。His(6)‐タグ化ナノボディを固定化金属アフィニティクロマトグラフィー(IMAC)で精製した。Ni‐NTA樹脂(Qiagen)をメーカーの使用説明書にしたがって処理した。抽出物を樹脂とともにインキュベートし、ローテーター上で室温で30分間インキュベートした。樹脂をPBSで洗浄しカラムに移した。封入した樹脂をPBS(1:10希釈)で洗浄した。カラムを15mMのイミダゾールで事前に溶出した。ナノボディを25mMのクエン酸(pH=4)を用いてカラムから溶出した。溶出した画分をHybond 膜にスポットし、ポンソーで視覚化して分析した。タンパク質を含む画分を貯め、さらに陽イオン交換で精製し、その後サイズ排除を行った。精製したタンパク質を回収し、ろ過滅菌し、濃度を決定し−20℃でアリコートに保存した。
発現レベル
二価TNF‐アルファ特異性ナノボディの発現レベルを算出し、表21に示した。リンカーはナノボディの発現レベルに有意な影響を示さない。
実施例8に記述したとおりにSDS−Pageを行った。図18にSDS‐Pageの結果を示す。
実施例9に記述したとおりにウエスタンブロット分析を行った。図19にウエスタンブロットの結果を示す。
実施例11に記述したとおりにアッセイを行った。図20および表22に結果を示す。リガンド/受容体結合の阻害は、一価形態と比較してすべての二価ナノボディで促進されていた。
実施例13に記述したとおりにアッセイを行った。表23に結果を要約する。毒性活性を中和する作用強度に基づいて、TNF8、TNF7、TNF9およびTNF5は、エンブレルの範囲に作用強度を示している。
実施例15に記述したとおりに試料を分析した。
280nmでのODを測定し、濃度を算出した。表24に結果を要約する。TNF4およびTNF7では、タンパク質含有量は70℃から減少し始め、一方TNF5、TNF6、TNF8およびTNF9では80℃から減少し始めた。
実施例15に記述したとおりに、凝集物の有無について試料を分析した。
上述のとおりに、ヒトTNF‐アルファへの結合を検出するELISA を基本どおりに行った。図21に結果を示す。TNF5、TNF6、TNF8およびTNF9では、ヒトTNF‐アルファ結合は80℃から減少し始め、TNF4およびTNF7では、70℃から減少し始めた。
TNF‐アルファおよび血清アルブミン特異性ナノボディにおける非ヒトアミノ酸位置の同定
図22(TNF1)、図23(TNF2)図24(TNF3)および図25(ALB1)は、DP51、DP53、DP54およびDP29配列を有する複数配列アラインメント(Clustal W1.7)を表している。
ナノボディの全配列にわたってオリゴヌクレオチドを合成した。
実施例5に記述したとおりに発現を行った。
発現レベル
表26に算出した発現レベルを示す。3.5〜11.7mg/mlの範囲の収率で、発現を行った。誘導時間は収率に影響しなかった。
実施例8に記述したとおりにSDS−PAGEを行った。図26にSDS−PAGEゲルを示す。
実施例9に記述したとおりにウエスタンブロット分析を行った。図27にウエスタンブロットの結果を示す。
実施例13に記述したとおりにアッセイを行った。
実施例12に記述したとおりに分析を行った。図28および31にBiacoreの結果を示す。
実施例15に記述したとおりに試料を分析した。
280nmでのODを測定し、濃度を算出した。表28に結果を要約する。
実施例15に記述したとおりに、凝集物の有無について試料を分析した。
実施例15に記述したとおりに、ヒトTNF‐アルファへの結合を検出するELISAを基本どおりに行った。結果を図30に示す。
三価TNF‐アルファ特異性ナノボディの設定
TNF1、TNF2、TNF3およびALB1を三価ナノボディに向くように設定した。2つの構成要素の間にあるスペーサーとして、9AA GlySer リンカー(表19 配列番号68)または30AA GlySer リンカー(表19 配列番号69)のいずれかを使用した。これは、表30の構造物を生成した。表29には、三価TNF‐アルファナノボディ(配列番号91〜94)の配列が収載されている。
実施例5に記述したとおりに発現を行った。His(6)‐タグ化ナノボディを固定化金属アフィニティクロマトグラフィー(IMAC)で精製する。Ni‐NTA樹脂(Qiagen)をメーカーの使用説明書にしたがって処理する。抽出物を樹脂とともにインキュベートし、ローテーター上で室温で30分間インキュベートする。樹脂をPBSで洗浄しカラムに移す。封入した樹脂をPBS(1:10希釈)で洗浄する。15mMのイミダゾールで事前に溶出する。ナノボディを25mMのクエン酸(pH=4)を用いてカラムから溶出する。溶出した画分をHybond 膜にスポットし、ポンソーで視覚化して分析する。タンパク質を含む画分を貯め、さらに陽イオン交換で精製し、その後サイズ排除を行う。精製したタンパク質を回収し、ろ過滅菌し、濃度を決定し−20℃でアリコートに保存する。
発現レベル
発現レベルを算出し、表31に示した。
実施例8に記述したとおりにSDS−PAGEを行った。図31にSDS‐PAGEゲルを示す。
実施例9に記述したとおりにウエスタンブロット分析を行った。図32にウエスタンブロット分析を示す。
実施例13に記述したとおりにアッセイを行った。
結合を上述のようにアッセイした。その際例外として一連の異なる濃度で行った。チップ結合抗原に対する結合を可能にするために45μl/minの流速で4分間、各濃度を注入した。次いで、結合ナノボディの解離を可能にするために同じ流速で、分析物を有しない結合バッファーをチップにて送った。15分後、再生液(25mMのNaOH)を注入して残存している結合分析物を除去した。
実施例15に記述したとおりに試料を分析した。
280nmでのODを測定し、濃度を算出した。表34に結果を要約する。TNF24、TNF27およびTNF28では、タンパク質含有量は60℃で減少し初め、一方、TNF25およびTNF26では70℃から減少し始める。
実施例15に記述したとおりに、凝集物の有無について試料を分析した。
上述したとおりに、ヒトTNF‐アルファへの結合を検出するELISA を基本どおりに行った。結果を図33に示す。TNF24およびTNF27では、ヒトTNF‐アルファ結合は60℃から減少し初め、TNF25、TNF26およびTNF28では70℃で減少し始める。
TNF‐アルファおよび血清アルブミン特異性ナノボディにおける非ヒトアミノ酸位置の同定
図34(TNF1)、図35(TNF2)、図36(TNF3)および図37(ALB1)は、DP51、DP53、DP54およびDP29配列を有する複数配列アラインメント(Clustal W1.7)を表している。変異した分子を発現させ、上述のように精製し、表35の配列番号95〜104(それぞれTNF‐アルファおよびヒト血清アルブミンに対する)の配列を生成した。
発現レベル
表36に算出した発現レベルを示す。0.5〜2.7mg/mlの範囲の収率で、発現を実現した。
実施例8に記述したとおりにSDS−Pageを行った。図38にSDS−Pageゲルを示す。
実施例9に記述したとおりにウエスタンブロット分析を行った。図39にウエスタンブロットの結果を示す。
実施例13に記述したとおりにアッセイを行った。
実施例12に記述したとおりに分析を行った。図40にBiacoreの結果を示す。
実施例15に記述したとおりに試料を分析した。
280nmでのODを測定し、濃度を算出した。表38に結果を要約する。
実施例15に記述したとおりに、凝集物の有無について試料を分析した。
実施例15に記述したとおりに、ヒトTNF‐アルファへの結合を検出するELISA を基本どおりに行った。結果を図41に示す。
この比較例では、本発明の9つのナノボディを、それぞれ「VHH#1A」または「1A」、「VHH3E」または「3E」および「VHH#3G」または「3G」(国際公開第04/041862号での配列番号1、4および5)と呼ばれる国際公開第04/041862号から得られる3つのナノボディと比較した。使用のアッセイは、国際公開第04/41862号(例えば3欄での実施例1を参照)で参照されたKYM細胞を使用した、細胞ベースのアッセイであった。結果は下記の表39で述べられている。以上のように、本アッセイでは、本発明のナノボディのEC50値は3Eの18倍高く、この値は国際公開第04/041862号にしたがったナノボディを最大に機能させる。
三価の二重特異性ナノボディを設定し、最初に大腸菌発現ベクターpAX054にクローン化し、次いでPCRで増幅を助け、pPICZαA発現ベクターにクローン化した。
pAX54はpUC19の誘導体である。それは、IPTGを用いて発現の誘導を制御可能にするLacZプロモーターを含んでいる。そのベクターはアンピシリンまたはカルベニシリンに対する耐性遺伝子を有する。マルチクローニングサイトはいくつかの制限部位を収容し、制限部位のSfiIおよびBstEIIは頻繁にNanobody(商標)のクローニングに使用される。シグナルペプチドは、発現したNanobody(商標)をペリプラズムに移動させるgen3リーダー配列である。
pPICZαAは、大腸菌の増殖を可能にするpUC‐由来複製開始点を含んでいる。それはピキア・パストリスAOX1(アルコールオキシダーゼ1)遺伝子のプロモーターを含んでいる。この942bpのプロモーター領域は、(i)目的遺伝子の発現を、メタノール誘導可能で高レベルなものにすることが可能で、(ii)5'AOX1プロモーター領域内で直線化されたベクターDNAでピキアを形質転換した後、AOX1遺伝子座にプラスミドを組み込むことを目的にしている。pPICZαベクターは酵母複製開始点を含まず、したがって形質転換体は、組み換えがプラスミドとピキアゲノムの間で起こる場合、単離することしかできないということに留意されたい。ベクターは大腸菌およびピキア・パストリス宿主細胞の両方における抗生物質ゼオシン(Zeocin)への耐性を特定する。ベクターはS.セレビシエα接合因子の分泌シグナルを取り込み、大部分のタンパク質を培地に効率よく分泌させる。α因子シグナル配列の開始ATGは、AOX1遺伝子の未変性の開始ATGに相当する。マルチクローニングサイトはいくつかの制限部位を収容し、その部位のXho1/EcoR1またはXho1/Not1は、Nanobody(商標)をコードする配列を分泌シグナルに融合させるために使用される典型である。マルチクローニングサイトの次にはAOX1転写終結領域がある。この発現ベクターのさらに詳しい記載はInvitrogen のウェブサイトで閲覧できる(http://www.invitrogen.com/content/sfs/manuals/ppiczalpha_man.pdf)。
3つの別個のPCR反応を、WPA−0012に示されるオリゴの組み合わせを使用してN末端、中間およびC末端のNanobody(商標)サブユニットを増殖するように設定した。M13_rev/Rev_9GlySer_L108を使用しN末端Nanobody(商標)を増殖した;For_GlySer/ShortおよびRev_15BspEI_L108を使用して中間Nanobody(商標)を増殖した;For_BspEI/M13_forを使用してC末端Nanobody(商標)を増殖した。1μlのプラスミドDNA(50〜100ng)、1.5μlのフォワードプライマー(10μM→300nM)、1.5μlのリバースプライマー(10μM→300nM)、1μlのdNTP(10mM→0.2mM)、5μlのバッファー(10x→1x)、0.75μlの酵素(3.5U/μl→2.6U/μl)および39.25μlのH2OのPCR反応液を、総量50μlとして調製した。プライマー配列を表40に示す。PCRプログラムを開始し、94℃を2分間保った。94℃で30秒間、50℃で30秒間および72℃で1分間というサイクルを30回繰り返し、その後72℃を10分間保った。PCR反応液を5μlずつ2%アガロースゲル上で分離して増殖を検査した。PCR産物を、メーカーの使用説明書にしたがってQIAquick PCR精製キットを使用し精製した。カラムを1つ使用し、50μlのEBバッファーで溶出した。50μlのDNAおよび2μlのBamHI(10U/μl)をメーカーが推奨する適当なバッファー中で37℃ で2時間インキュベートし、N末端VHH断片を調製した。引き続き、2μlのSfiI(10U/μl)を添加し、その混合液を55℃で2時間インキュベートした。50μl のDNAおよび2μlのBamHI(10U/μl)ならびに2μlのBspEI(10U/μl)をメーカーが推奨する適当なバッファー中で37℃ で2時間インキュベートし、中間VHH断片を調製した。50μlのDNAおよび2μlのBspEI(10U/μl)をメーカーが推奨する適当なバッファー中で37℃で2時間インキュベートし、C末端VHH断片を調製した。引き続き、2μlのBspEII(10U/μl)を添加し、その混合液を60℃で1時間インキュベートした。予備消化反応液を2%アガロースゲルで分離した。VHHのバンド(350〜450bp)をゲルから切り取り、メーカーの使用説明書にしたがいQIAquick Gel Extractionキットを使用してDNAを精製した。カラム(カラム1つに最大400mgのアガロースゲルを含む)を1つ使用し、結合DNAを50μlのEBバッファーで溶出した。260nmでのOD(1ODユニット=50μg/ml)を測定し、DNA濃度を決定した。100ngのベクターpAX54、12ngのN末端VHH、12ngの中間VHH断片、12ngのC末端VHH断片、1μlのライゲーションバッファーおよび1μlのリガーゼ(3U)を含み、終量10μlのライゲーション混合液を調製し、室温で2時間インキュベートした。2μlのライゲーション混合液で大腸菌TG1の形質転換を行った。WPA−0010に記載のとおりにPCRでコロニーを分析する。陽性クローンで配列を分析する。メーカーの使用説明書にしたがって上述のとおり、Qiaprep spin Miniprep キット(Qiagen)を用いてプラスミドを調製した。VIBの配列研究施設(アントワープ、ベルギー)で配列を決定した。
pAX054大腸菌発現ベクター中でクローン化されたNanobody(商標)をコードする領域を、適当なプライマーペアを使用しPCRで増幅を助ける。未変性のN末端でNanobody(商標)の発現を確実にするために、分泌シグナルのKex2切断部位を含むフレーム中でコード配列をクローン化する。フォワードプライマーは、XhoI認識部位まで分泌シグナルのC末端部を、Nanobody(商標)をコードする領域に融合させる。1μlのプラスミドDNA(50〜100ng)、1.5μlのフォワードプライマー(10μM→300nM)、1.5μlのリバースプライマー(10μM→300nM)、1μlのdNTP(10mM→0.2mM)、5μlのバッファー(10x→1x)、0.75μlの酵素(3.5U/μl→2.6U)および39.25μlのH2OのPCR反応液を、総量50μlとして調製した。プライマー配列を表41に示す。PCRプログラムを開始し、94℃を2分間保った。94℃で30秒間、50℃で30秒間および72℃で2分間というサイクルを20回繰り返し、その後72℃を10分間保った。PCR反応液を5μlずつ2%アガロースゲル上で分離して増殖を検査した。PCR産物を、メーカーの使用説明書にしたがってQIAquick PCR精製キットを使用し精製した。カラムを1つ使用し、結合DNAを50μlのEBバッファーで溶出した。
NBならびにpPICZαA発現ベクターをコードするDNA断片を、適当な制限酵素(XhoI+NotI)で消化した。2μlのXhoI(10U/μl)および2μlのNotI(10U/μl)を含むメーカー推奨の適当なバッファーとともに37℃で3時間、50μlのPCR産物をインキュベートし、挿入部分を得る。制限酵素量をプラスミド量に合わせてベクターを同様に得る。ベクターおよびNBをコードする断片の両方を精製し、BioPhotometer(Eppendorf)を用いてDNA濃度を定量する。断片およびアクセプターベクターを、1ユニットのT4リガーゼ(Promega)を用いて等モル比で、室温で30分間または16℃で一晩ライゲーションする。DNA(20〜30ng)をTG1細胞へと形質転換する。3'AOX1 Rおよび5'AOX1 Fプライマーを使用しPCRでコロニーを分析する。陽性クローンで配列を分析する。TNF30、TNF33およびALB8を三価二重特異性Nanobody(商標)に向くように設定した。構成要素間のスペーサーとして、9AA GlySerリンカーを使用した。
プラスミドDNAを単離するために、クローンの単一コロニーを50mlのLuria培地+アンピシリンまたはカルベニシリン(100μg/ml)+2%グルコース中に植菌し前培養を開始し、37℃で一晩インキュベーションする。Plasmid Midiキット(Qiagen)を使用しメーカーの使用説明書にしたがってプラスミドDNAを調製する。30μgプラスミドDNAを、メーカーの使用説明書にしたがって適当なバッファー中で6μl のBstX1(10U/μl)とともに45℃で3時間インキュベートし、DNAを直線化する。消化したDNAを、メーカーの使用説明書にしたがってPCR Purificationキット(Qiagen)を使用し精製する。標準法にしたがってEtOH沈殿でDNAを濃縮する。X‐33エレクトロコンピテント細胞を10μgの直線化DNAで形質転換し、細胞を、ゼオシン含有選択YPD寒天プレート(100/250/500μg/ml)上で48時間培養する。X‐33は野生型ピキア・パストリス株である;その株自体ならびに誘導された組み換え株は未変性のAOX1遺伝子を含み、メタノールを代謝できる(Mut+)。
ピキア・パストリスにおける産生
バッファー、溶液およびその他の構成はInvitrogen のウェブサイトで閲覧できる(http://www.invitrogen.com/content/sfs/manuals/ppiczalpha_man.pdf)。
単一コロニーをプレートから5mlのYPDへ植菌し、前培養を開始した。培養液を30℃、180rpmで一晩培養した。翌日、前培養液を50mlのYPDへ溶出し、30℃、180rpmで一晩培養した。前培養液を植菌し、最終的に600nmでのODを0.04〜0.08になるように生産培養を開始した。培養液を30℃、180rpmで24時間BGCM中で培養し、4,500rpmで30分間遠心分離した。細胞を、初めの1/3の量のBGCM培地中に再懸濁し、最終的に600nmでのODを15〜20になるようにした。一定の時点で、典型的には3回/日、細胞をMeOHで誘導し、このときMeOHの含有量は1%を超えないようにした。誘導から50時間後、上清を回収する。
培養上清を、22μmのろ過膜、精密ろ過(Hydrosart、Sartorius)でろ過する。試料を10kDaの限外ろ過膜(Hydrosart、Sartorius)で透析ろ過を使用して濃縮し、0.5〜1Lになるまで濃縮する。
TNF60は363個のアミノ酸から成る。該タンパク質の分子量は38,441Daである。pIは8.71である。280nmでの吸光係数は1.736である。
標準法にしたがってESI‐MSで該タンパク質の質量を測定した。TNF60の理論的質量は38,441Daである。タンパク質は2つのS‐S 架橋を有し、それはESI‐MSで測定すると質量は38,435Daになることが好ましい。3つの異なるバッチ由来のTNF60の質量を実験的に測定すると、理論的質量と最大で0.005%異なり、38,433Da〜38,435Daの範囲である。
標準法にしたがってエドマン分解でN末端配列決定を行った。N末端配列決定により、最初の7個のアミノ酸に対するタンパク質配列はEVQLVESであることが分かった。これは理論的タンパク質配列と一致し、N末端処理が適切であることを示す。
試料(100μg)を高分解能のSuperdex75カラムで分析し、Nanobody(商標)の様々なバッチを特徴づけた。Nanobody(商標)のサイズ排除クロマトグラフィーでは、Superdex75では典型的に左右対称のピークが出現し、保持時間は11.5minである。吸光度は典型的に280、254および214nmで記録する。214nmでの測定では、検出感度はさらに高くなる。PBS中での分析的サイズ決定では、左右対称のピークが出現する。汚染物質は見られなかった。3つの異なるバッチに見られる保持時間は11.5〜11.55minである。代表的なプロファイルを図43に示す。
実施例10に記述したとおり、TNF60の機能性、すなわちヒトTHFαへの結合をELISAで分析した。結果は図44に要約してあり、ヒトTNF‐アルファへのTNF60の2つのバッチの用量依存および飽和可能な結合を明確に説明している。
TNF‐アルファの細胞毒性活性を中和する作用強度を、実施例13に記述したとおりに細胞ベースのアッセイで分析した。表42ならびに図45および46に結果を要約する。
ヒトおよびアカゲザル血清アルブミンへの結合を、実施例12に記述したとおりにBiacoreで分析した。KDのKonおよびKoff値は表43に示す。TNF60を、野生型構成要素を有する三価二重特異性親Nanobody(商標)であるTNF24と比較する。
動物
DBA1またはBALBcマウスを赤外線ランプで暖め、200μlのNanobody(商標)(マウス1匹につき100μg)を尾に静脈注射した。尾を小切開し、マイクロチューブに血液を回収し、異なる時点での血液試料を得た。典型的には、血液は、15分、2時間、4時間、6時間、1日、2日、3日、4日、7日、14日の時点でサンプリングした。血清を標準法にしたがって調製した。
マイクロタイタープレート(NUNC、Maxisorb)を2μg/mlニュートラアビジンで4°Cで一晩被覆した。プレートを、PBS/0.05%Tween-20で5回洗浄し、PBS/1%カゼインを使用し室温で2時間ブロッキングした。ビオチン化ヒトTNF‐アルファ(PBS/0.2%カゼイン中に1/2000の割合で;400ng/ml)をウェルに添加し、室温で1時間インキュベートした。濃度5μg/ml で開始し、1%のマウス血漿を含むPBS中に5倍希釈して、標準対照Nanobody(商標)を添加した。Nanobody(商標)を室温で2時間結合させた。プレートを5回洗浄し、ウサギポリクローナル抗ナノボディ(R23)を2000倍希釈で室温で1時間添加した。プレート洗浄後、ヤギポリクローナル抗ウサギHRP(DAKO)を用い、3000倍希釈で室温で1時間、結合を検出し、ABTS/H2O2で染色した。405nmでのODを測定した。
Nanobody(商標)をPBS中5μg/mlで、4°C で一晩被覆した。プレートを、PBS/0.05%Tween-20で5回洗浄し、PBS/1%カゼインを使用し室温で2時間ブロッキングした。血清試料を100倍希釈し、ウェルに添加し、室温で1時間インキュベートした。1000倍希釈ポリクローナルウサギ抗マウスHRP(DAKO、P0260)および基質としてABTSを用い検出を行った。
血清試料を50倍希釈し、マウス抗TNF60抗体の有無を分析した。TNF60では免疫原性が存在しないことが明らかになった。データを図48に示す。
ピキア・パストリス発現ベクターの説明
実施例48を参照されたい。
2つの別個のPCR反応を、WPA−0011に示される手順を使用してN末端およびC末端のNanobody(商標)サブユニットを増殖するように設定した。N末端Nanobody(商標)の増殖にはPiForLongおよびRev_30GlySer_L108をプライマーの組み合わせとして使用し;C末端Nanobody(商標)の増殖にはFor_GlySerおよびPiRevCys1humを使用し、あるいは、For_GlySerおよびPiRevCys2humを使用した。これらは設定に必要な制限部位およびC末端変性に必要な遊離システイン残基を誘導した。
実施例48を参照されたい。
ピキア・パストリスにおける産生
実施例49を参照されたい。
遠心分離および0.22μm のろ紙によるろ過で培地を無細胞状態にした。該滅菌培地を4℃で保存し、さらに処理した。低分子汚染物質を、10kDaの限外ろ過(UF)膜(HydroSart Sartocon Slice Cassette ,Sartorius)で以下のように限外ろ過することで削減した:4Lの培地を0.5〜1Lに濃縮し、次いで5LのPBSで希釈し、0.5Lに再度濃縮した。この作業を2回行った。
C末端システインの還元
ジチオスレイトール(DTT、Aldrich Cat 15,046−0)を中和画分に添加し、Nanobody(商標)(通常およそ20%)のカルボキシ末端システイン間に形成した潜在的なジスルフィド架橋を還元した。DTTの終濃度は10mM、およびインキュベートは4℃一晩が最適であることが分かった。分析的サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)で還元を評価した。したがって、25μlの還元Nanobody(商標)を75μlのD‐PBSに添加し、DulbeccoのPBS(D‐PBS、Gibco(商標)、REF 14190〜094)中で平衡化したSup75 10/300 GLカラムで注入した。
TNF56では:ε=1,83
Nanobody(商標)をペグ化するために、新しく調製した1mMのPEG40溶液の5倍モル濃度のものを還元Nanobody(商標)溶液に添加した。
Nanobody(商標)をビオチン化するために、10mMのストックソリューションから調製したビオチン(EZ-Link(登録商標)マレイミド‐PO2‐ビオチン、Pierce #21901)の5倍モル濃度のものを還元Nanobody(商標)に添加した(5.5.1を参照)。ビオチン‐Nanobody(商標)混合物を、室温で1時間軽く攪拌しながらインキュベートした後、4℃で保存した。
生化学的特徴づけ
TNF55は260個のアミノ酸から成る。タンパク質の分子量は、27,106Daである。pIは8.67である。280nmでの吸光係数は1.850である。
TNF55の理論的質量は27,106Daである。TNF55‐ビオチンタンパク質は2つのS‐S 架橋を有し、ビオチンを変性すると質量は、ESI‐MSの測定で27,627Daになることが好ましい。TNF55‐ビオチンの質量を実験的に測定すると、27,627Daである。
TNF56‐PEG40のN末端配列決定により、最初の7個のアミノ酸に対するタンパク質配列はEVQLVESであることが分かった。これは理論的タンパク質配列と一致し、N末端処理が適切であることを示す。
PBS中でのTNF56‐PEG40分析的サイズ決定では、左右対称のピークが出現する。汚染物質は見られなかった。観察された保持時間は、Superdex HR 75では8.5mlで、Superdex HR 200では10.32mlである。代表的なプロファイルを図51および52に示す。
TNF‐アルファの細胞毒性活性を中和する作用強度を、細胞ベースのアッセイで分析した。様々な濃度でNanobody(商標)ならびに市販のエンブレル、Humira およびレミケードの作用強度を、モルベースで試験した。EC50が増加するほど、化合物の活性は低下し、TNF‐アルファは中和される。
実施例54を参照されたい。
3'変性ヒト腫瘍壊死因子(hTNF−アルファ、カケクチン)導入遺伝子を担持し発現するトランスジェニックマウス系を、モデルとして使用し、関節炎の発症を予防する場合のTNF60(TNF60)の有効性を研究した(EMBO J. 10、4025〜4031)。これらのマウスは、4〜7週齢では100%の発症率で慢性多発性関節炎を発症することが分かった。
‐グループ1(陰性対照):リン酸緩衝生理食塩水(PBS)(処方バッファー)
‐グループ2(ナノボディ治療):30mg/kgの最終用量でのTNF60
‐グループ3(ナノボディ治療):10mg/kgの最終用量でのTNF60
‐グループ4(ナノボディ治療):3mg/kgの最終用量でのTNF60
‐グループ5(第一陽性対照):30mg/kgの最終用量でのエンブレル
‐グループ6(第一陽性対照):10mg/kgの最終用量でのエンブレル
‐グループ7(第二陽性対照):30mg/kgの最終用量でのレミケード
‐グループ8(第二陽性対照):10mg/kgの最終用量でのレミケード
‐グループ9(第二陽性対照):3mg/kgの最終用量でのレミケード
各グループに対して、注入のデータおよび注入量を記録した。
3'修飾ヒト腫瘍壊死因子(hTNF-アルファ、カケクチン)導入遺伝子を担持し発現するトランスジェニックマウス系を、モデルとして使用し、関節炎の治療処置をする場合のTNF60(TNF60)の有効性を研究した(EMBO J.10,4025-4031)。これらのマウスは、4〜7週齢では100%の発症率で慢性多発性関節炎を発症することが分かった。
‐グループ1(陰性対照):リン酸緩衝生理食塩水(PBS)(処方バッファー)
‐グループ2(ナノボディ治療):30mg/kgの最終用量でのTNF60
‐グループ3(ナノボディ治療):10mg/kgの最終用量でのTNF60
‐グループ4(第一陽性対照):30mg/kgの最終用量でのエンブレル
‐グループ5(第二陽性対照):30mg/kgの最終用量でのレミケード
各グループに対して、注入のデータおよび注入量を記録した。
3'修飾ヒト腫瘍壊死因子(hTNF-アルファ、カケクチン)導入遺伝子を担持し発現するトランスジェニックマウス系を、モデルとして使用し、慢性多発性関節炎を予防する場合の、様々な方法で設定された抗TNF-アルファナノボディの有効性を研究した(EMBO J. 10、4025〜4031)。これらのマウスは、4〜7週齢では100%の発症率で慢性多発性関節炎を発症することが分かった。
‐グループ1(陰性対照):リン酸緩衝生理食塩水(PBS)(処方バッファー)
‐グループ2(ナノボディ形式1):10mg/kgの最終用量でのTNF60
‐グループ3(ナノボディ形式1):2.5mg/kgの最終用量でのTNF60
‐グループ4(ナノボディ形式1):1mg/kgの最終用量でのTNF60
‐グループ5(ナノボディ形式2):10mg/kgの最終用量でのTNF56‐PEG40
‐グループ6(ナノボディ形式2):1.8mg/kgの最終用量でのTNF56‐PEG40
‐グループ7(ナノボディ形式2):0.7mg/kgの最終用量でのTNF56‐PEG40
‐グループ8(ナノボディ形式3):1.8mg/kgの最終用量でのTNF56‐biot
‐グループ9(ナノボディ形式4):1mg/kgの最終用量でのTNF30
‐グループ10(ナノボディ形式5):1mg/kgの最終用量でのTNF1
‐グループ11(第一陽性対照):10mg/kgの最終用量でのエンブレル
‐グループ12(第二陽性対照):10mg/kgの最終用量でのレミケード
各グループに対して、注入のデータおよび注入量を記録した。
結果を図60に示す。
捕獲繁殖したアカゲザル(Macaca mulatta)を使用し、TNF60およびTNF56‐PEG40の薬物導体プロファイルを判定する。
本研究では、RA‐滑膜由来線維芽細胞によるTNF‐アルファ誘導IL‐6産生を弱める抗TNF生物学的製剤であるALX0071およびエタネルセプトの能力を評価した。
同意RA患者から得た滑膜関節組織を、抗生物質を含むDMEMをベースとした培地中で、4℃で関節置換手術の96時間後まで保存した。37℃で2時間行ったコラゲナーゼ消化によって、切開した滑膜から滑膜細胞を単離した。その後、得られた細胞懸濁液を、一連の遠心分離および再懸濁のステップによって洗浄し、次いで得られた細胞を、10%FCS(v/v)が添加されたDMEMをベースとした培地中で37℃で培養した。得られた線維芽細胞を第2または第3継代で以下の実験に使用した。4人のドナーから得た細胞を個々の実験に使用した。96ウェル平底ポリスチレンプレートに、10%FCS(v/v)が添加された終量250μLのDMEMをベースとした培地中、1ウェルにつき1.5x104個の割合で線維芽細胞を播種し、一晩培養した。
その後細胞を、50ng/mL(3nM(R&D Systems 210-TA/CF)のTNF‐アルファを単独、あるいは漸増用量のALX0071(0.575〜1920ng/mL;0.015〜50nM)またはエタネルセプト(Wyeth Labs;3.75〜11250ng/mL;0.025〜75nM)の存在下で添加したDMEMベース培地中で、72時間インキュベートした。各ウェルで終量は250μLであり、各評価を三重に行った。72時間後、培地の上清を除去し、IL‐6ELISA(R&D Systems)による分析まで−40℃で保存した。TNFα誘導IL‐6産生の阻害を判定し、ALX0071およびエタネルセプトともに、IC50値を算出した。
4人のドナー全員から得たRA滑膜由来線維芽細胞によって、ALX10071およびエタネルセプトはともに用量依存的にTNFα誘導IL‐6産生を減少させた。これらのアッセイ条件下では2つの試薬間で同様の作用強度が見られた。
本研究では、マウス空気嚢へのTNF‐アルファ誘導細胞浸潤を弱める抗TNF生物学的製剤であるALX0071およびエタネルセプトの能力を評価した。
2.5mLの滅菌空気を麻酔した雄C57Bl/6/Jマウス(25〜30g、Harlan)の背面に皮下(s.c.)注射し、空気嚢を形成した。3日後に2.5mlの滅菌空気を注射し、嚢を再膨張させた。
空気嚢を最初に作製してから6日後、動物を麻酔し、嚢に、0.1 gの組み換えヒトTNF‐アルファ(R & D Systems、210-TA-050/CF)を含む0.5%カルボキシメチルセルロース(CMC)ビヒクルを1ml注射した。その他の3つの動物グループでは、TNF‐アルファの注射の19時間前にALX0071(0.0625、0.125および0.25mg/kg)を皮下注射した。第二の3つの動物グループに、TNF‐アルファの注射直前にエタネルセプト(Wyeth Labs、0.125、0.25および0.5mg/kg)を皮下注射した。
ALX0071およびエタネルセプトはともに、空気嚢へのTNF‐アルファ誘導WBC浸潤を弱めた(表)。この減弱が、0.125(P<0.01)および0.25mg/kg(P<0.05)ALX0071服用グループの両方で統計的有意性を示している場合でも、全てのエタネルセプト服用グループでは統計的有意性は見られなかった。
一価TNF‐アルファナノボディ
表8−1〜8−4:TNF‐アルファナノボディの配列リスト
表9:ヒトTNF‐アルファナノボディのKoff値
表10:ヒト生殖系配列に対するTNF‐アルファおよび血清アルブミンナノボディの相同性
表11:TNF‐アルファおよび血清アルブミンナノボディの発現レベル
表12:ELISAとヒトおよびアカゲザルTNF‐アルファとの結合
表13:TNF‐アルファナノボディの受容体阻害アッセイ
表14:TNF‐アルファナノボディのBiacore分析
表15:TNF‐アルファナノボディとTNF‐アルファとの結合(KD値)
表16:ヒト(a)およびアカゲザル(b)のTNF‐アルファを中和するTNF‐アルファナノボディの作用強度
表17:温度処理後のTNF‐アルファおよび血清アルブミンナノボディの280nmでのOD値
表18:温度処理後のTNF‐アルファナノボディの作用強度
二価TNF‐アルファナノボディ
表19−1:二価TNF‐アルファナノボディおよびリンカー配列の配列リスト
表19−2:二価TNF‐アルファナノボディおよびリンカー配列の配列リスト
表20:二価TNF‐アルファナノボディ構造物
表21:二価TNF‐アルファナノボディの発現レベル
表22:二価TNF‐アルファナノボディの受容体阻害アッセイ
表23:ヒト(a)およびアカゲザル(b)のTNF‐アルファを中和するTNF‐アルファナノボディの作用強度
表24:二価TNF‐アルファナノボディの280nmでのOD値
ヒト化一価TNF‐アルファナノボディ
表25−1〜25−3:ヒト化一価TNF‐アルファおよび血清アルブミンナノボディの配列リスト
表26:ヒト化TNF‐アルファおよび血清アルブミンナノボディの発現レベル
表27:ヒトTNF‐アルファを中和するTNF‐アルファナノボディの作用強度
表28:ヒト化TNF‐アルファおよび血清アルブミンナノボディの280nmでのOD値
三価TNF‐アルファナノボディ
表29−1〜29−3:三価TNF‐アルファナノボディの配列リスト
表30:三価TNF‐アルファナノボディ構造物
表31:三価TNF‐アルファナノボディの発現レベル
表32:ヒトTNF‐アルファを中和する三価TNF‐アルファナノボディの作用強度
表33:血清アルブミンへの三価ナノボディの結合(KD値)
表34:三価TNF‐アルファナノボディの280nmでのOD値
ヒト化一価TNF‐アルファナノボディ(二回目)
表35:二回目のヒト化三価TNF‐アルファナノボディの配列リスト
表36:ヒト化TNF‐アルファナノボディの発現レベル
表37:ヒトTNF‐アルファを中和するTNF‐アルファナノボディの作用強度
表38:ヒト化TNF‐アルファナノボディの280nmでのOD値
表39:ナノボディの生物活性の比較
追加表
表40:三価のNanobody(商標)を設定するのに使用するオリゴヌクレオチドの概要
表41:三価のNanobody(商標)をクローニングするのに使用するオリゴヌクレオチドの概要
表42:市販のコントロール(エンブレル、レミケード、Humira)と比較した、三価のNanobody(商標)TNF60を使用した毒性アッセイで得られたEC50値
表43:Biacoreにおけるヒト血清アルブミンへのTNF60およびTNF24のアフィ二ティー判定 Ndは未判定(not determined)を表す。
表44:二価のNanobody(商標)を設定するのに使用するオリゴヌクレオチドの概要
表45:市販のコントロール(エンブレル、レミケード、Humira)と比較した、二価のNanobody(商標)使用した毒性アッセイで得られたEC50値
表46:滑膜由来線維芽細胞の研究結果
表47:マウス空気嚢の研究結果
Claims (28)
- 四つのフレームワーク領域(それぞれFR1からFR4)及び三つの相補性決定領域(それぞれCDR1からCDR3)からなるヒト血清アルブミンに対するナノボディであって、
CDR1が、アミノ酸配列SFGMS(配列番号36)を含むか又はアミノ酸配列SFGMS(配列番号36)であり、
CDR2が、アミノ酸配列SISGSGSDTLYADSVKG(配列番号40)を含むか又はアミノ酸配列SFGMS(配列番号40)であり、及び
CDR3が、アミノ酸配列GGSLSR(配列番号48)を含むか又はアミノ酸配列GGSLSR(配列番号48)である、ナノボディ。 - ナノボディが、VHH、ヒト化VHH又はラクダ化VHである、請求項1に記載のナノボディ。
- ナノボディが、ALB3(配列番号87)、ALB4(配列番号88)、ALB5(配列番号89)、ALB6(配列番号100)、ALB7(配列番号101)、ALB8(配列番号102)、ALB9(配列番号103)及びALB10(配列番号104)からなる群から選択される、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ
- ナノボディがALB8(配列番号102)である、請求項3に記載のナノボディ。
- 四つのフレームワーク領域(それぞれFR1からFR4)及び三つの相補性決定領域(それぞれCDR1からCDR3)からなるヒト血清アルブミンに対するナノボディであって、
(i) CDR1が、アミノ酸配列SFGMS(配列番号36)を含むか若しくはアミノ酸配列SFGMS(配列番号36)であり、又は
CDR1が配列番号36に示されるアミノ酸配列と2つ若しくは1つの「アミノ酸の相違」を有するものであり、
(1)任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であり、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものであり、
及び
(ii) CDR2が、アミノ酸配列SISGSGSDTLYADSVKG(配列番号40)を含むか若しくはアミノ酸配列SFGMS(配列番号40)であり、又は
CDR2が、配列番号40に示されるアミノ酸配列と少なくとも80%、90%、95%若しくは99%の配列同一性を有するものであり、
(1)任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であり、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものであり、及び/又は
CDR2が配列番号40に示されるアミノ酸配列と2つ若しくは1つの「アミノ酸の相違」を有するものであり、
(1)任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であり、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものであり、
及び
(iii)CDR3が、アミノ酸配列GGSLSR(配列番号48)を含むか若しくはアミノ酸配列GGSLSR(配列番号48)であり、又は
CDR3が配列番号48に示されるアミノ酸配列と3つ、2つ若しくは1つの「アミノ酸の相違」を有するものであり、
(1)任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であり、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
ナノボディ。 - CDR1がアミノ酸配列SFGMS(配列番号36)であり、CDR2がアミノ酸配列SISGSGSDTLYADSVKG(配列番号40)であり及びCDR3がアミノ酸配列GGSLSR(配列番号48)である、請求項5に記載のナノボディ。
- (i) FR1が配列番号370、368、369、371、372、373及び374からなる群から選択されるアミノ酸配列であるか又は該アミノ酸配列を含む、
(ii) FR2が配列番号384、383及び385〜388からなる群から選択されるアミノ酸配列であるか又は該アミノ酸配列を含む、
(iii) FR3が配列番号398、396、397、399、400及び402からなる群から選択されるアミノ酸配列であるか又は該アミノ酸配列を含む、並びに
(iv) FR4が配列番号412、410、411及び413〜416からなる群から選択されるアミノ酸配列であるか又は該アミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする、請求項5又は6に記載のヒト血清アルブミンに対するナノボディ。 - (i) FR1は、アミノ酸配列:
[1]QVQLQESGGGXVQAGGSLRLSCAASG[26] (配列番号1)
及び
[1]QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASG[26] (配列番号5)
からなる群から選択される、又は
配列番号1若しくは5に示されるアミノ酸配列と少なくとも80%、90%、95%若しくは99%の配列同一性を有するアミノ酸配列であり、
(1)特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び/又は表4に示されるアミノ酸置換である、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び/又は
前記アミノ酸配列のいずれか1つのうち、3つ、2つ若しくは1つの「アミノ酸の相違」を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
(1)特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び/又は表4に示されるアミノ酸置換である、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び
(ii)FR2は、アミノ酸配列:
[36]WXRQAPGKXXEXVA[49] (配列番号2)
[36]WFRQAPGKERELVA[49] (配列番号6)
[36]WFRQAPGKEREFVA[49](配列番号7)
[36]WFRQAPGKEREGA[49](配列番号8)
[36]WFRQAPGKQRELVA[49](配列番号9)
[36]WFRQAPGKQREFVA[49](配列番号10)
[36]WYRQAPGKGLEWA[49](配列番号11)
からなる群から選択される、又は
配列番号2、6〜11に示されるアミノ酸配列と少なくとも80%、90%、95%若しくは99%の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群から選択される、
(1)特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び/又は表5に示されるアミノ酸置換である、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び/又は
前記アミノ酸配列のいずれか1つのうち、3つ、2つ若しくは1つの「アミノ酸の相違」を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
(1)特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び/又は表5に示されるアミノ酸置換である、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び
(iii)FR3は、アミノ酸配列:
[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSLXXEDTAVYYCAA[94] (配列番号3)
及び
[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA[94] (配列番号12)
からなる群から選択される、又は
配列番号3若しくは12に示されるアミノ酸配列と少なくとも80%、90%、95%若しくは99%の配列同一性を有するアミノ酸配列であり、
(1)特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び/又は表6に示されるアミノ酸置換である、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び/又は
前記アミノ酸配列のいずれか1つのうち、3つ、2つ若しくは1つの「アミノ酸の相違」を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
(1)特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び/又は表6に示されるアミノ酸置換である、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び
(iv)FR4は、アミノ酸配列:
[103]XXQGTXVTVSS[113] (配列番号4)
[103]WGQGTQVTVSS[113] (配列番号13)及び
[103]WGQGTLVTVSS[113](配列番号14)
からなる群から選択される、又は
配列番号4、13若しくは14に示されるアミノ酸配列と少なくとも80%、90%、95%若しくは99%の配列同一性を有するアミノ酸配列であり、
(1)特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び/又は表7に示されるアミノ酸置換である、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び/又は
前記アミノ酸配列のいずれか1つのうち、3つ、2つ若しくは1つの「アミノ酸の相違」を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
(1)特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び/又は表7に示されるアミノ酸置換である、及び/又は
(2)前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
ここで、上記アミノ酸配列において、角括弧中に該アミノ酸配列の最初と最後に対応するKabat番号によるアミノ酸位置を示す番号を付し、特徴残基はアミノ酸残基に下線を引いて示す、
請求項5〜7のいずれか1項に記載のヒト血清アルブミンに対するナノボディ。 - GLEW群に属するナノボディである、請求項5〜8のいずれか1項に記載のナノボディ。
- Kabat番号による103の位置にアルギニン残基(R)を含む、請求項5〜8のいずれか1項に記載のナノボディ。
- Kabat番号による108の位置にロイシン残基(L)を含む、請求項5〜10のいずれか1項に記載のナノボディ。
- 請求項1〜11のいずれか1項に記載のナノボディを含むか又は本質的に該ナノボディからなる、タンパク質又はポリペプチド。
- 請求項1〜11のいずれかに記載の少なくとも1つのナノボディを含むか又は本質的に該ナノボディからなる、請求項12に記載のタンパク質又はポリペプチド。
- タンパク質又はポリペプチドは2つ又は複数のナノボディを含み、任意でリンカーを介して連結されており、該タンパク質又はポリペプチドは請求項1〜11のいずれかに記載の少なくとも1つのナノボディを含む、タンパク質又はポリペプチド。
- タンパク質又はポリペプチドは請求項1〜11のいずれかに記載の2つのナノボディを含む、請求項14に記載のタンパク質又はポリペプチド。
- タンパク質又はポリペプチドは3つのナノボディを含み、任意でリンカーを介して連結されており、該タンパク質又はポリペプチドは請求項1〜11のいずれかに記載の少なくとも1つのナノボディを含む、タンパク質又はポリペプチド。
- タンパク質又はポリペプチドは請求項1〜11のいずれかに記載の2つ又は3つのナノボディを含む、請求項16に記載のタンパク質又はポリペプチド。
- 請求項1〜11のいずれか1項に記載の第一抗原に指向性を有する第一ナノボディ及び第一抗原とは異なる第二抗原に指向性を有する第二ナノボディを含み、任意で第一及び第二ナノボディはリンカーを介して連結されている、二価ポリペプチドであるタンパク質又はポリペプチド。
- 請求項1〜11のいずれか1項に記載の第一抗原に指向性を有する第一ナノボディ、第一抗原とは異なる第二抗原に指向性を有する第二ナノボディ並びに第一及び第二抗原とは異なる第三抗原に指向性を有する第三ナノボディを含み、任意で第一、第二及び第三ナノボディは1つ又は複数のリンカーを介して連結されていてもよい、三価ポリペプチドであるタンパク質又はポリペプチド。
- タンパク質又はポリペプチドは請求項1〜11のいずれかに記載の1つのナノボディ及びさらに少なくとも1つの他のナノボディを含み、これらのナノボディは互いに直接連結されているか又はリンカーを介して連結されている、タンパク質又はポリペプチド。
- リンカーがアミノ酸からなるリンカーである、請求項14〜20のいずれか1項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
- リンカーが少なくとも14個のアミノ酸、少なくとも17個のアミノ酸又は20〜40個のアミノ酸を含む、請求項21に記載のタンパク質又はポリペプチド。
- リンカーはグリシン及びセリン残基を含む、請求項21又は22に記載のタンパク質又はポリペプチド。
- ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがALB8(配列番号102)に存在するCDR配列を有するものである、請求項12〜23のいずれか1項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
- ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがヒト化ナノボディである、請求項12〜23のいずれか1項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
- ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがナノボディ ALB 1(配列番号63)のヒト化変異体である、請求項12〜23のいずれか1項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
- ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディが、ALB3(配列番号87)、ALB4(配列番号88)、ALB5(配列番号89)、ALB6(配列番号100)、ALB7(配列番号101)、ALB8(配列番号102)、ALB9(配列番号103)及びALB10(配列番号104)からなるグループから選択される、請求項12〜23のいずれか1項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
- ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも1つのナノボディがALB8(配列番号102)である、請求項12〜23のいずれか1項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
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Cited By (2)
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JP2019504822A (ja) * | 2015-11-27 | 2019-02-21 | アブリンクス エン.ヴェー. | Cd40lを阻害するポリペプチド |
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Families Citing this family (279)
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JP2005289809A (ja) * | 2001-10-24 | 2005-10-20 | Vlaams Interuniversitair Inst Voor Biotechnologie Vzw (Vib Vzw) | 突然変異重鎖抗体 |
US9321832B2 (en) * | 2002-06-28 | 2016-04-26 | Domantis Limited | Ligand |
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DE102005023617A1 (de) * | 2005-05-21 | 2006-11-23 | Aspre Ag | Verfahren zum Mischen von Farben in einem Display |
US20070269422A1 (en) * | 2006-05-17 | 2007-11-22 | Ablynx N.V. | Serum albumin binding proteins with long half-lives |
AU2007293614A1 (en) * | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Ablynx N.V. | Serum albumin binding proteins with long half-lives |
AU2007306340A1 (en) * | 2006-10-11 | 2008-04-17 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences that bind to serum proteins in a manner that is essentially independent of the pH, compounds comprising the same, and use thereof |
JP2010512734A (ja) * | 2006-12-13 | 2010-04-30 | アブリンクス エン.ヴェー. | Il−6/il−6受容体複合体等受容体介在性シグナル伝達に関与する複合体に特異的なポリペプチド |
US8907065B2 (en) * | 2006-12-15 | 2014-12-09 | Ablynx N.V. | Polypeptides that modulate the interaction between cells of the immune system |
US9512236B2 (en) | 2006-12-19 | 2016-12-06 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against GPCRS and polypeptides comprising the same for the treatment of GPCR-related diseases and disorders |
EP2102244A2 (en) * | 2006-12-19 | 2009-09-23 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against a metalloproteinase from the adam family and polypeptides comprising the same for the treatment of adam-related diseases and disorders |
AU2007336242B2 (en) | 2006-12-19 | 2012-08-30 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against GPCRs and polypeptides comprising the same for the treatment of GPCR-related diseases and disorders |
WO2008074868A1 (en) * | 2006-12-20 | 2008-06-26 | Ablynx N.V. | Oral delivery of polypeptides |
CA2678218A1 (en) * | 2007-02-21 | 2008-08-28 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against vascular endothelial growth factor and polypeptides comprising the same for the treatment of conditions and diseases characterized by excessive and/or pathological angiogenesis or neovascularization |
AU2008245696B2 (en) | 2007-04-27 | 2013-11-07 | Pelican Technology Holdings, Inc. | Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins |
US9580719B2 (en) | 2007-04-27 | 2017-02-28 | Pfenex, Inc. | Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins |
CA2687903C (en) | 2007-05-24 | 2016-09-13 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against rank-l and polypeptides comprising the same for the treatment of bone diseases and disorders |
US10214588B2 (en) | 2007-07-03 | 2019-02-26 | Ablynx N.V. | Providing improved immunoglobulin sequences by mutating CDR and/or FR positions |
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CN101970490A (zh) | 2007-11-27 | 2011-02-09 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 针对异二聚体细胞因子和/或其受体的氨基酸序列以及包括所述氨基酸序列的多肽 |
CA2717015A1 (en) | 2008-03-05 | 2009-09-11 | Ablynx Nv | Novel antigen binding dimer-complexes, methods of making and uses thereof |
GB0809069D0 (en) | 2008-05-19 | 2008-06-25 | Univ Leuven Kath | Gene signatures |
EP2260058A2 (en) | 2008-04-07 | 2010-12-15 | Ablynx N.V. | Single variable domains against the notch pathways |
WO2009127691A1 (en) * | 2008-04-17 | 2009-10-22 | Ablynx N.V. | Peptides capable of binding to serum proteins and compounds, constructs and polypeptides comprising the same |
US8444976B2 (en) | 2008-07-02 | 2013-05-21 | Argen-X B.V. | Antigen binding polypeptides |
US10407513B2 (en) | 2008-09-26 | 2019-09-10 | Ucb Biopharma Sprl | Biological products |
US9393304B2 (en) * | 2008-10-29 | 2016-07-19 | Ablynx N.V. | Formulations of single domain antigen binding molecules |
MX2011004558A (es) * | 2008-10-29 | 2011-06-01 | Wyeth Llc | Procedimientos para la purificacion de moleculas de union a antigeno de un unico dominio. |
AU2013202856B2 (en) * | 2008-10-29 | 2016-02-11 | Ablynx N.V. | Formulations of single domain antigen binding molecules |
US9265834B2 (en) * | 2009-03-05 | 2016-02-23 | Ablynx N.V. | Stable formulations of polypeptides and uses thereof |
WO2010100135A1 (en) | 2009-03-05 | 2010-09-10 | Ablynx N.V. | Novel antigen binding dimer-complexes, methods of making/avoiding and uses thereof |
JP5647222B2 (ja) | 2009-04-10 | 2014-12-24 | アブリンクス エン.ヴェー. | Il−6r関連疾患及び障害の治療のためのil−6rに指向性を有する改善されたアミノ酸配列及びこれを含むポリペプチド |
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DK2438087T3 (en) | 2009-06-05 | 2017-08-28 | Ablynx Nv | TRIVALENT NANOBODY CONSTRUCTIONS AGAINST HUMAN RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS (HRSV) FOR PREVENTION AND / OR TREATMENT OF AIR INFECTIONS |
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GB201005063D0 (en) | 2010-03-25 | 2010-05-12 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
UY32920A (es) | 2009-10-02 | 2011-04-29 | Boehringer Ingelheim Int | Moleculas de unión biespecíficas para la terapia anti-angiogénesis |
US20110195494A1 (en) | 2009-10-02 | 2011-08-11 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Dll4-binging molecules |
US9644022B2 (en) | 2009-11-30 | 2017-05-09 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against human respiratory syncytial virus (HRSV) and polypeptides comprising the same for the prevention and/or treatment of respiratory tract infections |
WO2011073180A1 (en) | 2009-12-14 | 2011-06-23 | Ablynx N.V. | Single variable domain antibodies against ox40l, constructs and therapeutic use |
WO2011083140A1 (en) | 2010-01-08 | 2011-07-14 | Ablynx Nv | Immunoglobulin single variable domain directed against human cxcr4 |
JP2013518853A (ja) | 2010-02-05 | 2013-05-23 | アブリンクス エン.ヴェー. | 血清アルブミンと結合することが可能なペプチド並びにこれを含む化合物、構築物及びポリペプチド |
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US9101674B2 (en) | 2010-03-29 | 2015-08-11 | Vib Vzw | Targeting and in vivo imaging of tumor-associated macrophages |
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WO2011144749A1 (en) | 2010-05-20 | 2011-11-24 | Ablynx Nv | Biological materials related to her3 |
WO2011161263A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Ablynx Nv | Pharmaceutical compositions for cutaneous administration |
EP2593476A2 (en) | 2010-07-16 | 2013-05-22 | Ablynx N.V. | Modified single domain antigen binding molecules and uses thereof |
US20120225081A1 (en) | 2010-09-03 | 2012-09-06 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Vegf-binding molecules |
WO2012042026A1 (en) | 2010-09-30 | 2012-04-05 | Ablynx Nv | Biological materials related to c-met |
US11644471B2 (en) | 2010-09-30 | 2023-05-09 | Ablynx N.V. | Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains |
EP3279214A1 (en) | 2010-10-29 | 2018-02-07 | Ablynx NV | Method for the production of immunoglobulin single variable domains |
EP3578568A3 (en) | 2010-11-08 | 2020-01-08 | Ablynx N.V. | Cxcr2 binding polypeptides |
JP6173216B2 (ja) | 2010-11-26 | 2017-08-02 | モレキュラー・パートナーズ・アーゲーMolecular Partners Ag | 設計アンキリンリピートタンパク質のための改善されたキャッピングモジュール |
CN103917560B (zh) * | 2011-03-28 | 2017-05-24 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 双特异性抗‑cxcr7免疫球蛋白单可变结构域 |
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WO2012131053A1 (en) | 2011-03-30 | 2012-10-04 | Ablynx Nv | Methods of treating immune disorders with single domain antibodies against tnf-alpha |
US20130078247A1 (en) * | 2011-04-01 | 2013-03-28 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Bispecific binding molecules binding to dii4 and ang2 |
US9527925B2 (en) * | 2011-04-01 | 2016-12-27 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Bispecific binding molecules binding to VEGF and ANG2 |
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WO2012152823A1 (en) | 2011-05-09 | 2012-11-15 | Ablynx Nv | Method for the production of immunoglobulin single variable domains |
AU2012264809B2 (en) | 2011-05-27 | 2017-05-04 | Ablynx Nv | Inhibition of bone resorption with RANKL binding peptides |
EP4350345A2 (en) | 2011-06-23 | 2024-04-10 | Ablynx N.V. | Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobin single variable domains |
CN108659121A (zh) | 2011-06-23 | 2018-10-16 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 用于预测、检测和减少涉及免疫球蛋白单可变结构域的测定法中的非特异性蛋白干扰的技术 |
AU2012271974B2 (en) * | 2011-06-23 | 2017-01-12 | Ablynx Nv | Serum albumin binding proteins |
EP3363812A1 (en) | 2011-06-23 | 2018-08-22 | Ablynx NV | Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobin single variable domains |
JP2014525736A (ja) | 2011-06-23 | 2014-10-02 | アブリンクス エン.ヴェー. | IgEに対する免疫グロブリン単一可変ドメイン |
SG10201504605RA (en) | 2011-09-23 | 2015-07-30 | Technophage Investigação E Desenvolvimento Em Biotecnologia Sa | Anti-Tumor Necrosis Factor-Alpha Agents And Uses Thereof |
EP2747782B1 (en) | 2011-09-23 | 2018-01-17 | Ablynx NV | Prolonged inhibition of interleukin-6 mediated signaling |
CA2850261C (en) | 2011-09-30 | 2021-04-20 | Ablynx Nv | C-met immunoglobulin single variable domains |
US9346884B2 (en) | 2011-09-30 | 2016-05-24 | Ablynx N.V. | Biological materials related to c-Met |
UA115781C2 (uk) | 2012-02-27 | 2017-12-26 | Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх | Cx3cr1-зв'язуючий поліпептид |
DK2831111T3 (en) | 2012-03-30 | 2019-04-29 | Boehringer Ingelheim Int | Ang2-binding molecules |
AU2013257848A1 (en) | 2012-05-07 | 2014-11-27 | The University Court Of The University Of Aberdeen | Single domain binding molecule |
US9328174B2 (en) | 2012-05-09 | 2016-05-03 | Novartis Ag | Chemokine receptor binding polypeptides |
CA3062003C (en) | 2012-05-17 | 2022-01-11 | Extend Biosciences, Inc. | Vitamin d as a targeting group for therapeutic peptides |
CA2874309C (en) | 2012-05-24 | 2021-06-15 | Vib Vzw | Anti-macrophage mannose receptor single variable domains for targeting and in vivo imaging of tumor-associated macrophages |
RU2530553C2 (ru) * | 2012-11-07 | 2014-10-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Рекомбинантное однодоменное антитело, способное специфически связывать фактор некроза опухолей человека, и его производные |
US9315280B2 (en) * | 2012-11-20 | 2016-04-19 | Lockheed Martin Corporation | Heat pipe with axial wick |
WO2014087010A1 (en) | 2012-12-07 | 2014-06-12 | Ablynx N.V. | IMPROVED POLYPEPTIDES DIRECTED AGAINST IgE |
EP3514175A1 (fr) | 2012-12-17 | 2019-07-24 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | Utilisation d'anticorps monoclonaux pour le traitement de l'inflammation et d'infections bacteriennes |
WO2014111550A1 (en) | 2013-01-17 | 2014-07-24 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Modified anti-serum albumin binding proteins |
CA2899693C (en) | 2013-01-30 | 2023-03-14 | Vib Vzw | Novel chimeric polypeptides for screening and drug discovery purposes |
DK2953973T3 (da) | 2013-02-05 | 2019-08-12 | Vib Vzw | Muskarine acetylcholinreceptor-bindemidler og anvendelser deraf |
EP2956480B1 (en) | 2013-02-13 | 2019-09-04 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | Highly galactosylated anti-tnf-alpha antibodies and uses thereof |
AR094781A1 (es) | 2013-02-13 | 2015-08-26 | Laboratoire Français Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Anticuerpos anti-her2 (receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano) altamente galactosilados y sus usos |
US20160002330A1 (en) | 2013-02-13 | 2016-01-07 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Cetuximab with modified glycosylation and uses thereof |
US9255262B2 (en) | 2013-03-06 | 2016-02-09 | Vision Global Holdings Ltd. | Albumin-binding arginine deminase and the use thereof |
USRE48805E1 (en) | 2013-03-06 | 2021-11-02 | Vision Global Holdings Ltd. | Method for cancer targeting treatment and detection of arginine using albumin-binding arginine deiminase fusion protein |
JP6457999B2 (ja) | 2013-03-14 | 2019-01-23 | ザ チルドレンズ メディカル センター コーポレーション | 処置に関してがんの対象を識別するためのcd36の使用 |
EP2968487B1 (en) | 2013-03-15 | 2019-01-30 | Vib Vzw | Anti-macrophage mannose receptor single variable domains for use in cardiovascular diseases |
CN105531370A (zh) | 2013-04-23 | 2016-04-27 | 阿伯丁大学理事会 | 治疗靶向特异性vnar结构域与icosl的分离 |
NL1040254C2 (en) | 2013-05-17 | 2014-11-24 | Ablynx Nv | Stable formulations of immunoglobulin single variable domains and uses thereof. |
IL293948A (en) | 2013-10-21 | 2022-08-01 | Dyax Corp | Diagnosis and treatment of autoimmune diseases |
US10233241B2 (en) | 2014-01-30 | 2019-03-19 | Vib Vzw | Opioid receptor binding agents and uses thereof |
RU2706551C2 (ru) * | 2014-03-26 | 2019-11-19 | Селл Медика Свитзерлэнд Аг | Связывающие элементы к фно-альфа |
CA2946887A1 (en) | 2014-04-24 | 2015-10-29 | Immusant, Inc. | Compositions comprising gluten peptides and uses thereof |
HUE050007T2 (hu) | 2014-05-16 | 2020-11-30 | Ablynx Nv | Immunglobulin variábilis domének |
US20170088896A1 (en) | 2014-05-16 | 2017-03-30 | Children's Hospital Medical Center d/b/a Cincinnati Children's Hospital, Medical Center | Methods for assessing responsiveness to asthma treatment based on vnn-1 expression and promoter methylation |
WO2015173342A1 (en) | 2014-05-16 | 2015-11-19 | Ablynx Nv | Methods for detecting and/or measuring anti-drug antibodies, in particular treatment-emergent anti-drug antibodies |
NL2013661B1 (en) | 2014-10-21 | 2016-10-05 | Ablynx Nv | KV1.3 Binding immunoglobulins. |
EP3194976B1 (en) | 2014-07-22 | 2020-04-01 | Vib Vzw | Methods to select agents that stabilize protein complexes |
ES2892525T3 (es) | 2014-10-07 | 2022-02-04 | Immunomedics Inc | Uso neoadyuvante de conjugados anticuerpo-fármaco |
EP3207048A4 (en) | 2014-10-17 | 2018-05-30 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods of treating muscular dystrophy |
US9789197B2 (en) | 2014-10-22 | 2017-10-17 | Extend Biosciences, Inc. | RNAi vitamin D conjugates |
US9616109B2 (en) | 2014-10-22 | 2017-04-11 | Extend Biosciences, Inc. | Insulin vitamin D conjugates |
EP3220961B1 (en) | 2014-10-22 | 2023-07-05 | Extend Biosciences, Inc. | Therapeutic vitamin d conjugates |
ES2731876T3 (es) | 2014-10-23 | 2019-11-19 | Singh Molecular Medicine Llc | Anticuerpos de dominio sencillo contra antígenos intracelulares |
US20170267784A1 (en) | 2014-10-23 | 2017-09-21 | Singh Molecular Medicine, Llc | Single domain antibodies directed against intracellular antigens |
WO2016094555A1 (en) | 2014-12-09 | 2016-06-16 | New York University | Clostridial neurotoxin fusion proteins, propeptide fusions, their expression, and use |
JP6862343B2 (ja) | 2014-12-19 | 2021-04-21 | アブリンクス エン.ヴェー. | システイン結合ナノボディダイマー |
EA035638B1 (ru) * | 2015-03-31 | 2020-07-20 | ВиЭйчСКВЕАРД ЛИМИТЕД | Полипептиды |
SG11201707606RA (en) | 2015-04-02 | 2017-10-30 | Molecular Partners Ag | Designed ankyrin repeat domains with binding specificity for serum albumin |
EP3286224A4 (en) | 2015-04-22 | 2018-11-14 | Immunomedics, Inc. | Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells |
LT3294768T (lt) | 2015-05-13 | 2019-11-11 | Ablynx Nv | T ląstelių rekrutingo polipeptidai tcr alfa/beta reaktyvumo pagrindu |
JP7163028B2 (ja) | 2015-05-13 | 2022-10-31 | アブリンクス エン.ヴェー. | Cd3反応性に基づくt細胞リクルートポリペプチド |
KR101997241B1 (ko) | 2015-05-21 | 2019-07-09 | 하푼 테라퓨틱스, 인크. | 삼중특이성 결합 단백질 및 사용 방법 |
GB201510758D0 (en) | 2015-06-18 | 2015-08-05 | Ucb Biopharma Sprl | Novel TNFa structure for use in therapy |
EP3313519B1 (en) | 2015-06-29 | 2023-05-31 | Children's Medical Center Corporation | Jak-stat inhibitors for the treatment of congenital myopathies |
EP3316885B1 (en) | 2015-07-01 | 2021-06-23 | Immunomedics, Inc. | Antibody-sn-38 immunoconjugates with a cl2a linker |
CA2998611A1 (en) | 2015-09-14 | 2017-03-23 | Leukemia Therapeutics, LLC | Identification of novel diagnostics and therapeutics by modulating rhoh |
TWI746473B (zh) | 2015-11-02 | 2021-11-21 | 美商辛分子醫藥有限公司 | 針對細胞內抗原之單域抗體 |
NO2768984T3 (ja) | 2015-11-12 | 2018-06-09 | ||
CA3005061A1 (en) | 2015-11-13 | 2017-05-18 | Ablynx Nv | Improved serum albumin-binding immunoglobulin variable domains |
CN108473564B (zh) * | 2015-11-18 | 2022-04-08 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 改进的血清白蛋白结合剂 |
MX2018006246A (es) | 2015-11-18 | 2018-08-01 | Merck Sharp & Dohme | Aglutinantes ctla4p. |
EP3377526A1 (en) | 2015-11-18 | 2018-09-26 | Merck Sharp & Dohme Corp. | PD1/CTLA4 Binders |
MY189018A (en) | 2015-11-18 | 2022-01-19 | Merck Sharp & Dohme | Pd1 and/or lag3 binders |
WO2017093478A1 (en) | 2015-12-04 | 2017-06-08 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Biparatopic polypeptides antagonizing wnt signaling in tumor cells |
GB201522394D0 (en) * | 2015-12-18 | 2016-02-03 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
WO2017134305A1 (en) | 2016-02-05 | 2017-08-10 | Orionis Biosciences Nv | Bispecific signaling agents and uses thereof |
US10465003B2 (en) * | 2016-02-05 | 2019-11-05 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes |
EP3426278B1 (en) | 2016-03-07 | 2024-01-03 | Vib Vzw | Cd20 binding single domain antibodies |
CA3022697A1 (en) | 2016-05-02 | 2017-11-09 | Ablynx Nv | Treatment of rsv infection |
CA3023881A1 (en) | 2016-05-13 | 2017-11-16 | Orionis Biosciences Nv | Therapeutic targeting of non-cellular structures |
US11623958B2 (en) | 2016-05-20 | 2023-04-11 | Harpoon Therapeutics, Inc. | Single chain variable fragment CD3 binding proteins |
US10100106B2 (en) * | 2016-05-20 | 2018-10-16 | Harpoon Therapeutics, Inc. | Single domain serum albumin binding protein |
US10544221B2 (en) | 2016-05-20 | 2020-01-28 | Harpoon Therapeutics, Inc. | Single chain variable fragment CD3 binding proteins |
BR112018076569A2 (pt) | 2016-06-23 | 2019-04-02 | Ablynx Nv | ensaios farmacocinéticos melhorados para domínios variáveis simples de imunoglobulina |
WO2018007442A1 (en) | 2016-07-06 | 2018-01-11 | Ablynx N.V. | Treatment of il-6r related diseases |
WO2018029182A1 (en) | 2016-08-08 | 2018-02-15 | Ablynx N.V. | Il-6r single variable domain antibodies for treatment of il-6r related diseases |
US11098113B2 (en) | 2016-09-15 | 2021-08-24 | Vib Vzw | Immunoglobulin single variable domains directed against macrophage migration inhibitory factor |
EP3519438A1 (en) | 2016-09-30 | 2019-08-07 | VHsquared Limited | Compositions |
EP3541846A1 (en) | 2016-11-16 | 2019-09-25 | Ablynx NV | T cell recruiting polypeptides capable of binding cd123 and tcr alpha/beta |
WO2018098354A1 (en) | 2016-11-23 | 2018-05-31 | Harpoon Therapeutics, Inc. | Prostate specific membrane antigen binding protein |
BR112019010602A2 (pt) | 2016-11-23 | 2019-12-17 | Harpoon Therapeutics Inc | proteínas trispecíficas para psma e métodos de uso |
WO2018099968A1 (en) | 2016-11-29 | 2018-06-07 | Ablynx N.V. | Treatment of infection by respiratory syncytial virus (rsv) |
AU2017373746A1 (en) * | 2016-12-07 | 2019-05-30 | Ablynx Nv | Improved serum albumin binding immunoglobulin single variable domains |
GB201621907D0 (en) | 2016-12-21 | 2017-02-01 | Ucb Biopharma Sprl And Sanofi | Antibody epitope |
CN107674122A (zh) * | 2016-12-28 | 2018-02-09 | 天津天锐生物科技有限公司 | 一种识别人血清白蛋白的单域抗体 |
SG11201906341XA (en) | 2017-01-17 | 2019-08-27 | Ablynx Nv | Improved serum albumin binders |
MX2019008496A (es) | 2017-01-17 | 2019-09-18 | Ablynx Nv | Aglutinantes de albumina serica mejorados. |
MX2019009255A (es) | 2017-02-06 | 2019-11-05 | Orionis Biosciences Nv | Proteínas quiméricas dirigidas y sus usos. |
US11028166B2 (en) | 2017-02-16 | 2021-06-08 | Sonnet Bio Therapeutics | Albumin binding domain fusion proteins |
WO2018160754A2 (en) | 2017-02-28 | 2018-09-07 | Harpoon Therapeutics, Inc. | Inducible monovalent antigen binding protein |
EP3589725A1 (en) | 2017-02-28 | 2020-01-08 | Vib Vzw | Means and methods for oral protein delivery |
CA3056727A1 (en) * | 2017-03-31 | 2018-10-04 | Ablynx N.V. | Improved immunogenicity assays |
WO2018206734A1 (en) | 2017-05-11 | 2018-11-15 | Vib Vzw | Glycosylation of variable immunoglobulin domains |
US10543271B2 (en) | 2017-05-12 | 2020-01-28 | Harpoon Therapeutics, Inc. | Mesothelin binding proteins |
US10730954B2 (en) | 2017-05-12 | 2020-08-04 | Harpoon Therapeutics, Inc. | MSLN targeting trispecific proteins and methods of use |
MX2019014331A (es) | 2017-05-31 | 2020-01-27 | Boehringer Ingelheim Int | Polipeptidos que antagonizan la se?alizacion wnt en celulas tumorales. |
US11198726B2 (en) | 2017-06-02 | 2021-12-14 | Boerhinger Ingelheim International Gmbh | Anti-cancer combination therapy |
AU2018278275A1 (en) | 2017-06-02 | 2019-12-19 | Ablynx N.V. | MMP13 binding immunoglobulins |
WO2018220236A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Merck Patent Gmbh | Polypeptides binding adamts5, mmp13 and aggrecan |
MX2019014400A (es) | 2017-06-02 | 2020-02-10 | Merck Patent Gmbh | Inmunoglobulinas que se unen a adamts. |
CA3065630A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Ablynx Nv | Aggrecan binding immunoglobulins |
GB201710973D0 (en) | 2017-07-07 | 2017-08-23 | Avacta Life Sciences Ltd | Scaffold proteins |
CA3070253A1 (en) | 2017-07-19 | 2019-01-24 | Vib Vzw | Serum albumin binding agents |
PE20201183A1 (es) | 2017-10-13 | 2020-11-03 | Harpoon Therapeutics Inc | Proteinas trispecificas y metodos de uso |
US10927180B2 (en) | 2017-10-13 | 2021-02-23 | Harpoon Therapeutics, Inc. | B cell maturation antigen binding proteins |
WO2019086548A1 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Vib Vzw | Novel antigen-binding chimeric proteins and methods and uses thereof |
US20210070854A1 (en) * | 2017-12-29 | 2021-03-11 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antimicrobial nanobodies |
MX2020008208A (es) | 2018-02-05 | 2020-11-09 | Orionis Biosciences Inc | Agentes de unión a fibroblastos y uso de estos. |
WO2019155041A1 (en) | 2018-02-12 | 2019-08-15 | Vib Vzw | Gβγ COMPLEX ANTIBODIES AND USES THEREOF |
WO2019165105A1 (en) * | 2018-02-26 | 2019-08-29 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Ligands of the urokinase receptor and their use in treating, detecting, and imaging cancer |
JP2021514649A (ja) | 2018-03-01 | 2021-06-17 | ブレイエ・ユニバージテイト・ブリュッセルVrije Universiteit Brussel | ヒトpd−l1結合免疫グロブリン |
WO2019204634A1 (en) * | 2018-04-20 | 2019-10-24 | Stc. Unm | Rap1-gtp, rac1-gtp and fms-like tyrosine kinase 3 ligand (flt3-l) as biomarkers for early detection of sepsis |
CN110613838A (zh) * | 2018-06-19 | 2019-12-27 | 姜石松 | 增强细胞通透性的多肽及其应用 |
DE102018122275A1 (de) | 2018-09-12 | 2020-03-12 | Osram Opto Semiconductors Gmbh | Lichtemittierendes bauteil und verfahren zum betreiben eines lichtemittierenden bauteils |
IL297931A (en) | 2018-09-25 | 2023-01-01 | Harpoon Therapeutics Inc | dll3 binding proteins and methods of use |
EP3636657A1 (en) | 2018-10-08 | 2020-04-15 | Ablynx N.V. | Chromatography-free antibody purification method |
CN111138536B (zh) * | 2018-11-06 | 2021-07-09 | 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 | 抗人血清白蛋白单域抗体的制备及其应用 |
CN111138537B (zh) * | 2018-11-06 | 2021-07-09 | 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 | 一种抗人血清白蛋白抗体片段、制备方法和应用 |
GB201818460D0 (en) * | 2018-11-13 | 2018-12-26 | Crescendo Biologics Ltd | Single domain antibodies that bind human serum albumin |
CN111423509B (zh) * | 2019-01-10 | 2021-07-09 | 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 | 抗hsa单域抗体及其融合蛋白的亲和层析纯化方法 |
CN109627334B (zh) * | 2019-01-29 | 2020-07-17 | 康元医疗科技(大连)有限公司 | 一种纳米抗体、以该纳米抗体为配基的吸附剂及其用途 |
GB201901306D0 (en) | 2019-01-30 | 2019-03-20 | Immunocore Ltd | Multi-domain binding molecules |
TW202108615A (zh) | 2019-03-29 | 2021-03-01 | 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 | 抗癌組合療法 |
EP3946617A1 (en) | 2019-03-29 | 2022-02-09 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Anticancer combination therapy |
CA3138028A1 (en) | 2019-04-29 | 2020-11-05 | Confo Therapeutics N.V. | Chimeric proteins and methods to screen for compounds and ligands binding to gpcrs |
US20220289837A1 (en) | 2019-04-30 | 2022-09-15 | Vib Vzw | Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Stabilizing Agents |
US20220228116A1 (en) | 2019-05-28 | 2022-07-21 | Vib Vzw | Cd8+ t-cells lacking plexins and their application in cancer treatment |
US20220220197A1 (en) | 2019-05-28 | 2022-07-14 | Vib Vzw | Cancer Treatment by Targeting Plexins in the Immune Compartment |
MX2021015762A (es) | 2019-06-21 | 2022-04-18 | Sorriso Pharmaceuticals Inc | Composiciones. |
CN114466864A (zh) | 2019-06-21 | 2022-05-10 | 索瑞索制药公司 | 多肽 |
CN114514243A (zh) | 2019-06-21 | 2022-05-17 | 索瑞索制药公司 | 多肽 |
CN112409480A (zh) * | 2019-08-20 | 2021-02-26 | 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 | 结合血清白蛋白的蛋白及其用途 |
WO2021039574A1 (ja) * | 2019-08-23 | 2021-03-04 | 株式会社カネカ | O結合型糖鎖修飾が抑制された重鎖抗体 |
CN110642946A (zh) * | 2019-09-30 | 2020-01-03 | 中国药科大学 | 一种人源化纳米抗体及其制备方法 |
TW202128775A (zh) | 2019-10-16 | 2021-08-01 | 英商阿法克塔生命科學有限公司 | PD-L1抑制劑-TGFβ抑制劑雙特異性藥物部分 |
WO2021078786A1 (en) | 2019-10-21 | 2021-04-29 | Vib Vzw | Nanodisc-specific antigen-binding chimeric proteins |
JP2023501004A (ja) | 2019-11-11 | 2023-01-17 | アイビーアイ-エージー イノベイティブ バイオ インセクティサイズ リミテッド | 昆虫防除ナノボディおよびその使用 |
US20220411495A1 (en) | 2019-11-27 | 2022-12-29 | Vib Vzw | Positive allosteric modulators of the calcium-sensing receptor |
IL293561A (en) | 2019-12-06 | 2022-08-01 | Ablynx Nv | Polypeptides comprising immunoglobulin with one variable domain targeting TNFa and IL-23 |
WO2021110817A1 (en) * | 2019-12-06 | 2021-06-10 | Ablynx Nv | Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting tnfa and ox40l |
TW202136302A (zh) | 2019-12-09 | 2021-10-01 | 比利時商艾伯霖克斯公司 | 包含靶向il-13及tslp之免疫球蛋白單可變域的多肽 |
GB201918279D0 (en) | 2019-12-12 | 2020-01-29 | Vib Vzw | Glycosylated single chain immunoglobulin domains |
CN110988361B (zh) * | 2019-12-13 | 2020-09-18 | 山东民康生物科技有限公司 | 人血清白蛋白去除试剂盒 |
US20240027467A1 (en) | 2019-12-20 | 2024-01-25 | Vib Vzw | Nanobody Exchange Chromatography |
CN112300289B (zh) * | 2019-12-30 | 2022-06-10 | 中国药科大学 | RGD4C融合抗TNFα纳米抗体蛋白、制备方法及其应用 |
WO2021140205A1 (en) | 2020-01-10 | 2021-07-15 | Confo Therapeutics N.V. | Methods for generating antibodies and antibody fragments and libraries comprising same |
WO2021156490A2 (en) | 2020-02-06 | 2021-08-12 | Vib Vzw | Corona virus binders |
JP2023527609A (ja) | 2020-02-21 | 2023-06-30 | ハープーン セラピューティクス,インク. | Flt3結合タンパク質および使用方法 |
IL295892A (en) | 2020-02-25 | 2022-10-01 | Vib Vzw | Leucine-rich repeat kinase 2 allosteric modulators |
CA3170750A1 (en) * | 2020-03-06 | 2021-09-10 | Yi Shi | Serum albumin binding nanobody compositions and methods for using the same |
JP2023523600A (ja) | 2020-04-22 | 2023-06-06 | マブウェル (シャンハイ) バイオサイエンス カンパニー リミテッド | ヒトプログラム細胞死リガンド1(pd-l1)を標的とする単一可変ドメイン抗体およびその誘導体 |
WO2021229104A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Université de Liège | Anti-cd38 single-domain antibodies in disease monitoring and treatment |
GB202101299D0 (en) | 2020-06-09 | 2021-03-17 | Avacta Life Sciences Ltd | Diagnostic polypetides and methods |
WO2022003156A1 (en) | 2020-07-02 | 2022-01-06 | Oncurious Nv | Ccr8 non-blocking binders |
CN114106190A (zh) * | 2020-08-31 | 2022-03-01 | 普米斯生物技术(珠海)有限公司 | 一种抗vegf/pd-l1双特异性抗体及其用途 |
WO2022063957A1 (en) | 2020-09-24 | 2022-03-31 | Vib Vzw | Biomarker for anti-tumor therapy |
CA3196737A1 (en) | 2020-09-24 | 2022-03-31 | Massimiliano Mazzone | Combination of p2y6 inhibitors and immune checkpoint inhibitors |
AU2021350156A1 (en) | 2020-09-25 | 2023-06-08 | Ablynx Nv | Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting il-13 and ox40l |
WO2022089435A1 (en) * | 2020-10-27 | 2022-05-05 | Beijing Ql Biopharmaceutical Co., Ltd. | Fusion proteins of gdf15 and use thereof |
WO2022098743A1 (en) | 2020-11-03 | 2022-05-12 | Indi Molecular, Inc. | Compositions, imaging, and therapeutic methods targeting folate receptor 1 (folr1) |
WO2022098745A1 (en) | 2020-11-03 | 2022-05-12 | Indi Molecular, Inc. | Compositions, delivery systems, and methods useful in tumor therapy |
WO2022117569A1 (en) | 2020-12-02 | 2022-06-09 | Oncurious Nv | A ccr8 antagonist antibody in combination with a lymphotoxin beta receptor agonist antibody in therapy against cancer |
US20240018248A1 (en) | 2020-12-02 | 2024-01-18 | Vib Vzw | An ltbr agonist in combination therapy against cancer |
KR20230123497A (ko) | 2020-12-18 | 2023-08-23 | 아블린쓰 엔.브이. | IL-6 및 TNF-α를 표적화하는 면역글로불린 단일 가변도메인을 포함하는 폴리펩티드 |
US20240092919A1 (en) | 2020-12-18 | 2024-03-21 | Ablynx N. V. | T cell recruiting polypeptides based on tcr alpha/beta reactivity |
US11932702B2 (en) | 2020-12-18 | 2024-03-19 | Ablynx N.V. | Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting glypican-3 and T cell receptor |
GB202020502D0 (en) | 2020-12-23 | 2021-02-03 | Vib Vzw | Antibody composistion for treatment of corona virus infection |
WO2022136650A1 (en) | 2020-12-24 | 2022-06-30 | Oncurious Nv | Murine cross-reactive human ccr8 binders |
EP4267617A1 (en) | 2020-12-24 | 2023-11-01 | Vib Vzw | Human ccr8 binders |
US20240052044A1 (en) | 2020-12-24 | 2024-02-15 | Vib Vzw | Non-blocking human ccr8 binders |
CN117794566A (zh) | 2021-02-05 | 2024-03-29 | Vib研究所 | 沙贝病毒结合剂 |
KR20230141853A (ko) | 2021-02-05 | 2023-10-10 | 브이아이비 브이지더블유 | 사베코바이러스 결합제 |
CA3211257A1 (en) | 2021-02-17 | 2022-08-25 | Vib Vzw | Inhibition of slc4a4 in the treatment of cancer |
IL305318A (en) | 2021-02-19 | 2023-10-01 | Vib Vzw | Cation-independent mannose-6-phosphate receptor binders |
WO2022199804A1 (en) | 2021-03-24 | 2022-09-29 | Vib Vzw | Nek6 inhibition to treat als and ftd |
WO2022234003A1 (en) | 2021-05-07 | 2022-11-10 | Avacta Life Sciences Limited | Cd33 binding polypeptides with stefin a protein |
WO2022242892A1 (en) | 2021-05-17 | 2022-11-24 | Université de Liège | Anti-cd38 single-domain antibodies in disease monitoring and treatment |
WO2022268993A1 (en) | 2021-06-23 | 2022-12-29 | Vib Vzw | Means and methods for selection of specific binders |
WO2023274183A1 (zh) | 2021-06-29 | 2023-01-05 | 江苏先声药业有限公司 | Cd16抗体及其应用 |
CN117586423A (zh) * | 2021-07-14 | 2024-02-23 | 北京质肽生物医药科技有限公司 | 用于代谢病症的融合多肽 |
CN113527502B (zh) * | 2021-07-20 | 2023-01-17 | 福建医科大学 | 一种用于治疗类风湿性关节炎的纳米抗体重组蛋白 |
AU2022320667A1 (en) | 2021-07-30 | 2024-03-14 | Shandong Simcere Biopharmaceutical Co., Ltd. | Anti-pvrig/anti-tigit bispecific antibody and application |
WO2023016828A2 (en) | 2021-07-30 | 2023-02-16 | Vib Vzw | Cation-independent mannose-6-phosphate receptor binders for targeted protein degradation |
TW202332694A (zh) | 2021-10-07 | 2023-08-16 | 英商阿凡克塔生命科學公司 | 血清半衰期延長之pd-l1結合多肽 |
WO2023057567A1 (en) | 2021-10-07 | 2023-04-13 | Avacta Life Sciences Limited | Pd-l1 binding affimers |
WO2023098846A1 (zh) | 2021-12-03 | 2023-06-08 | 江苏先声药业有限公司 | 抗bcma纳米抗体及其应用 |
CN113912730B (zh) * | 2021-12-14 | 2022-03-04 | 北京科诺信诚科技有限公司 | 缓释的抗FcRn抗体或抗原结合片段及其应用 |
TW202342508A (zh) | 2021-12-17 | 2023-11-01 | 比利時商艾伯霖克斯公司 | 包含靶向TCRαβ、CD33和CD123的免疫球蛋白單可變結構域的多肽 |
WO2023135198A1 (en) | 2022-01-12 | 2023-07-20 | Vib Vzw | Human ntcp binders for therapeutic use and liver-specific targeted delivery |
WO2023148397A1 (en) | 2022-02-07 | 2023-08-10 | Vib Vzw | Engineered stabilizing aglycosylated fc-regions |
CN116925215A (zh) * | 2022-03-31 | 2023-10-24 | 普米斯生物技术(珠海)有限公司 | 抗血清白蛋白纳米抗体及其衍生物 |
WO2023198848A1 (en) | 2022-04-13 | 2023-10-19 | Vib Vzw | An ltbr agonist in combination therapy against cancer |
WO2023218243A1 (en) | 2022-05-12 | 2023-11-16 | Avacta Life Sciences Limited | Lag-3/pd-l1 binding fusion proteins |
WO2023222825A1 (en) | 2022-05-18 | 2023-11-23 | Vib Vzw | Sarbecovirus spike s2 subunit binders |
CN115028719B (zh) * | 2022-05-27 | 2023-01-13 | 深圳市人民医院 | 血清白蛋白结合纳米抗体及其制备方法与应用 |
WO2023242247A1 (en) | 2022-06-14 | 2023-12-21 | Ablynx Nv | Immunoglobulin single variable domains targeting t cell receptor |
WO2024003873A1 (en) * | 2022-06-30 | 2024-01-04 | Intrexon Actobiotics Nv D/B/A Precigen Actobio | Single variable domain antibodies against tumor necrosis factor-alpha |
WO2024008755A1 (en) | 2022-07-04 | 2024-01-11 | Vib Vzw | Blood-cerebrospinal fluid barrier crossing antibodies |
WO2024023271A1 (en) | 2022-07-27 | 2024-02-01 | Ablynx Nv | Polypeptides binding to a specific epitope of the neonatal fc receptor |
WO2024038112A1 (en) | 2022-08-17 | 2024-02-22 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Improved anti-albumin nanobodies and their uses |
WO2024068744A1 (en) | 2022-09-27 | 2024-04-04 | Vib Vzw | Antivirals against human parainfluenza virus |
WO2024083843A1 (en) | 2022-10-18 | 2024-04-25 | Confo Therapeutics N.V. | Amino acid sequences directed against the melanocortin 4 receptor and polypeptides comprising the same for the treatment of mc4r-related diseases and disorders |
WO2024105091A1 (en) | 2022-11-15 | 2024-05-23 | Imec Vzw | Method and system for droplet manipulation |
US20240200085A1 (en) | 2022-12-15 | 2024-06-20 | Aarhus Universitet | Synthetic activation of multimeric transmembrane receptors |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004003019A2 (en) * | 2002-06-28 | 2004-01-08 | Domantis Limited | Immunoglobin single variant antigen-binding domains and dual-specific constructs |
WO2004041862A2 (en) * | 2002-11-08 | 2004-05-21 | Ablynx N.V. | Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor |
Family Cites Families (153)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US460167A (en) | 1891-09-29 | Car-mover | ||
DE321017C (ja) | 1917-05-15 | 1920-05-11 | Aloysius Petrus Van Leuven | |
SE307996B (ja) | 1965-11-30 | 1969-01-27 | Asea Ab | |
US4352678A (en) | 1978-10-02 | 1982-10-05 | Lever Brothers Company | Thickened abrasive bleaching compositions |
US4722896A (en) | 1981-01-26 | 1988-02-02 | The Beth Israel Hospital Association | Method for affinity purification of hybridoma antibodies |
US4559157A (en) | 1983-04-21 | 1985-12-17 | Creative Products Resource Associates, Ltd. | Cosmetic applicator useful for skin moisturizing |
LU84979A1 (fr) | 1983-08-30 | 1985-04-24 | Oreal | Composition cosmetique ou pharmaceutique sous forme aqueuse ou anhydre dont la phase grasse contient un polyether oligomere et polyethers oligomeres nouveaux |
US5672347A (en) | 1984-07-05 | 1997-09-30 | Genentech, Inc. | Tumor necrosis factor antagonists and their use |
US4735898A (en) | 1985-07-16 | 1988-04-05 | The University Of Virginia Alumini Patents Foundation | Monoclonal antibodies and method of identifying species using the same |
JPS62175426A (ja) | 1986-01-27 | 1987-08-01 | Kazufumi Shimizu | 抗体及びこれを有効成分とするスプレ−剤 |
EP0294703B1 (en) | 1987-06-10 | 1995-05-10 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Bifunctional antibody constructs and method for selectively destroying cell populations |
US4820508A (en) | 1987-06-23 | 1989-04-11 | Neutrogena Corporation | Skin protective composition |
US4992478A (en) | 1988-04-04 | 1991-02-12 | Warner-Lambert Company | Antiinflammatory skin moisturizing composition and method of preparing same |
US4938949A (en) | 1988-09-12 | 1990-07-03 | University Of New York | Treatment of damaged bone marrow and dosage units therefor |
ES2052027T5 (es) | 1988-11-11 | 2005-04-16 | Medical Research Council | Clonacion de secuencias de dominio variable de inmunoglobulina. |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
US5399346A (en) | 1989-06-14 | 1995-03-21 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Gene therapy |
SE509359C2 (sv) | 1989-08-01 | 1999-01-18 | Cemu Bioteknik Ab | Användning av stabiliserade protein- eller peptidkonjugat för framställning av ett läkemedel |
US6451983B2 (en) | 1989-08-07 | 2002-09-17 | Peptech Limited | Tumor necrosis factor antibodies |
CA2064915C (en) | 1989-08-07 | 2001-05-29 | Deborah A. Rathjen | Tumour necrosis factor binding ligands |
US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
NZ234246A (en) | 1990-03-16 | 1992-06-26 | Flexitech Consulting Services | Form filling powdered material packages using interleaved plastics/paper packaging |
GB9016299D0 (en) | 1990-07-25 | 1990-09-12 | Brien Caroline J O | Binding substances |
EP0542810A1 (en) | 1990-08-02 | 1993-05-26 | B.R. Centre Limited | Methods for the production of proteins with a desired function |
US5656272A (en) | 1991-03-18 | 1997-08-12 | New York University Medical Center | Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies |
WO1994004679A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
EP0590060B1 (en) | 1991-06-21 | 1997-09-17 | University Of Cincinnati | Orally administrable therapeutic proteins and method of making |
AU665025B2 (en) | 1991-09-23 | 1995-12-14 | Cambridge Antibody Technology Limited | Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach |
US5869619A (en) | 1991-12-13 | 1999-02-09 | Xoma Corporation | Modified antibody variable domains |
US5766886A (en) | 1991-12-13 | 1998-06-16 | Xoma Corporation | Modified antibody variable domains |
DE69325738T2 (de) | 1992-04-28 | 2000-01-27 | Sumitomo Rubber Ind | Fester Golfball |
DE69334095T2 (de) | 1992-07-17 | 2007-04-12 | Dana-Farber Cancer Institute, Boston | Verfahren zur intrazellulären Bindung von zielgerichteten Molekülen |
EP0584421A1 (en) | 1992-08-21 | 1994-03-02 | Cécile Casterman | Immunoglobulins devoid of light chains |
DK0656946T4 (da) | 1992-08-21 | 2010-07-26 | Univ Bruxelles | Immunoglobuliner uden lette kæder |
EP0585705B1 (en) | 1992-08-28 | 1998-11-04 | Bayer Corporation | Use of monoclonal antibodies to TNF to treat bacterial meningitis |
AU5152293A (en) | 1992-10-08 | 1994-05-09 | Kennedy Institute Of Rheumatology, The | Treatment of autoimmune and inflammatory disorders |
US5837242A (en) | 1992-12-04 | 1998-11-17 | Medical Research Council | Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use |
DE69411154T2 (de) | 1993-02-22 | 1998-10-22 | Alza Corp | Mittel zur oralen gabe von wirkstoffen |
AU6796094A (en) | 1993-04-29 | 1994-11-21 | Raymond Hamers | Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of (camelidae) |
EP0698097B1 (en) | 1993-04-29 | 2001-08-16 | Unilever N.V. | Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of camelidae |
GB9311454D0 (en) | 1993-06-03 | 1993-07-21 | Agricultural & Food Res | Pharmaceutical compositions |
JP3626187B2 (ja) | 1993-06-07 | 2005-03-02 | バイカル インコーポレイテッド | 遺伝子治療に適するプラスミド |
DK0702721T3 (da) | 1993-06-09 | 2001-05-21 | Unilever Nv | Fremgangsmåde til fremstilling af fusionsproteiner, der omfatter ScFv fragmenter, ved hjælp af en transformeret skimmelsvamp |
CA2168202A1 (en) | 1993-07-30 | 1995-03-16 | Joseph Dougherty | Efficient gene transfer into primary lymphocytes |
FR2708622B1 (fr) | 1993-08-02 | 1997-04-18 | Raymond Hamers | Vecteur recombinant contenant une séquence d'un gène de lipoprotéine de structure pour l'expression de séquences de nucléotides. |
US6091639A (en) | 1993-08-27 | 2000-07-18 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Non-volatile semiconductor memory device and data programming method |
WO1995007463A1 (en) | 1993-09-10 | 1995-03-16 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Uses of green fluorescent protein |
WO1995021191A1 (en) | 1994-02-04 | 1995-08-10 | William Ward | Bioluminescent indicator based upon the expression of a gene for a modified green-fluorescent protein |
EP0745134A1 (en) | 1994-02-22 | 1996-12-04 | Danafarber Cancer Institute | Nucleic acid delivery system, method of synthesis and uses thereof |
US5625048A (en) | 1994-11-10 | 1997-04-29 | The Regents Of The University Of California | Modified green fluorescent proteins |
AU4964896A (en) | 1995-01-19 | 1996-08-07 | Research Foundation Of The State University Of New York, The | Genes encoding an insect calcium channel |
EP0739981A1 (en) | 1995-04-25 | 1996-10-30 | Vrije Universiteit Brussel | Variable fragments of immunoglobulins - use for therapeutic or veterinary purposes |
US5693492A (en) | 1995-05-05 | 1997-12-02 | Merck & Co., Inc. | DNA encoding glutamate gated chloride channels |
CA2225460A1 (en) | 1995-06-23 | 1997-01-09 | Winston Campbell Patterson | Transcriptional regulation of genes encoding vascular endothelial growth factor receptors |
EP0851874B1 (en) | 1995-09-22 | 1999-09-15 | Novo Nordisk A/S | Novel variants of green fluorescent protein, gfp |
US7368111B2 (en) | 1995-10-06 | 2008-05-06 | Cambridge Antibody Technology Limited | Human antibodies specific for TGFβ2 |
US6027881A (en) | 1996-05-08 | 2000-02-22 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Mutant Aequorea victoria fluorescent proteins having increased cellular fluorescence |
ES2294799T3 (es) | 1996-06-27 | 2008-04-01 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw. | Moleculas de anticuerpos que interactuan especificamente con el sitio activo o hendidura de una molecula diana. |
US6124128A (en) | 1996-08-16 | 2000-09-26 | The Regents Of The University Of California | Long wavelength engineered fluorescent proteins |
US6417337B1 (en) | 1996-10-31 | 2002-07-09 | The Dow Chemical Company | High affinity humanized anti-CEA monoclonal antibodies |
WO1998021355A1 (en) | 1996-11-15 | 1998-05-22 | Life Technologies, Inc. | Mutants of green fluorescent protein |
WO1998022141A2 (en) | 1996-11-19 | 1998-05-28 | Sangstat Medical Corporation | Enhanced effects for hapten conjugated therapeutics |
US6262238B1 (en) | 1997-01-14 | 2001-07-17 | Roche Diagnostic, Gmbh | Process for modifying the stability of antibodies |
US6329516B1 (en) | 1997-04-28 | 2001-12-11 | Fmc Corporation | Lepidopteran GABA-gated chloride channels |
FR2766826B1 (fr) | 1997-08-04 | 2001-05-18 | Pasteur Institut | Vecteurs derives d'anticorps pour le transfert de substances dans les cellules |
US5895466A (en) | 1997-08-19 | 1999-04-20 | At&T Corp | Automated natural language understanding customer service system |
GB9722131D0 (en) | 1997-10-20 | 1997-12-17 | Medical Res Council | Method |
WO1999023221A2 (en) | 1997-10-27 | 1999-05-14 | Unilever Plc | Multivalent antigen-binding proteins |
AU3596599A (en) | 1998-01-26 | 1999-08-09 | Unilever Plc | Method for producing antibody fragments |
CA2321199A1 (en) | 1998-02-19 | 1999-08-26 | William A. Brady | Compositions and methods for regulating lymphocyte activation |
EP0967284A1 (en) | 1998-05-28 | 1999-12-29 | Pfizer Limited | Phosphodiesterases |
ES2192060T5 (es) | 1998-07-06 | 2009-05-01 | Perkinelmer Cellular Sciences Belgium Bvba | Ensayo de bioluminiscencia para agonistas o antagonistas de un receptor acoplado al calcio. |
WO2000009757A1 (en) | 1998-08-13 | 2000-02-24 | U.S. Genomics, Inc. | Optically characterizing polymers |
GB9824632D0 (en) | 1998-11-10 | 1999-01-06 | Celltech Therapeutics Ltd | Biological compounds |
IL127127A0 (en) | 1998-11-18 | 1999-09-22 | Peptor Ltd | Small functional units of antibody heavy chain variable regions |
AU3041100A (en) | 1999-01-05 | 2000-07-24 | Unilever Plc | Binding of antibody fragments to solid supports |
AU2291700A (en) | 1999-01-19 | 2000-08-07 | Unilever Plc | Method for producing antibody fragments |
EP1157119A1 (en) | 1999-02-05 | 2001-11-28 | Rijksuniversiteit Leiden | Method of modulating metabolite biosynthesis in recombinant cells |
CA2367955C (en) | 1999-03-15 | 2009-05-19 | University Of British Columbia | Abc1 polypeptide and methods and reagents for modulating cholesterol levels |
AU776824B2 (en) | 1999-04-22 | 2004-09-23 | Unilever Plc | Inhibition of viral infection using monovalent antigen-binding proteins |
EP1181058A2 (de) | 1999-05-27 | 2002-02-27 | Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin | Vakzine gegen konformationsabhängige antigene sowie gegen antigene, die keine oder nicht ausschliesslich proteine oder peptide sind |
CA2375781A1 (en) | 1999-06-18 | 2000-12-28 | Cv Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for increasing cholesterol efflux and raising hdl using atp binding cassette transporter protein abci |
WO2001009300A2 (en) | 1999-08-02 | 2001-02-08 | Keygene N.V. | Method for generating cgmmv resistant plants, genetic constructs, and obtained cgmmv-resistant plants |
GB9922124D0 (en) | 1999-09-17 | 1999-11-17 | Pfizer Ltd | Phosphodiesterase enzymes |
US6479280B1 (en) | 1999-09-24 | 2002-11-12 | Vlaams Interuniversitair Institutuut Voor Biotechnologie Vzw | Recombinant phages capable of entering host cells via specific interaction with an artificial receptor |
US6849425B1 (en) | 1999-10-14 | 2005-02-01 | Ixsys, Inc. | Methods of optimizing antibody variable region binding affinity |
DE19955408A1 (de) | 1999-11-18 | 2001-05-23 | Bayer Ag | GABA-B-Rezeptoren |
ATE440111T1 (de) | 1999-11-29 | 2009-09-15 | Bac Ip B V | Immobilisierte antigenbindende moleküle aus einer domäne |
DK1242460T3 (da) | 1999-11-29 | 2006-12-11 | Unilever Nv | Immobilisering af proteiner ved hjælp af et polypeptidsegment |
UA76708C2 (uk) * | 1999-12-08 | 2006-09-15 | Сінгента Патисипейшонс Аг | Антитіло, яке застосовується в імунологічному аналізі зразка для визначення неонікотиноїдного інсектициду, білковий кон'югат для одержання антитіла, спосіб визначення концентрації неонікотиноїдного інсектициду в зразку та набір для визначення кількості неонікотиноїдного інсектициду |
AU784285B2 (en) | 1999-12-24 | 2006-03-02 | Genentech Inc. | Methods and compositions for prolonging elimination half-times of bioactive compounds |
US7229619B1 (en) | 2000-11-28 | 2007-06-12 | Medimmune, Inc. | Methods of administering/dosing anti-RSV antibodies for prophylaxis and treatment |
EP1134231B1 (en) | 2000-03-14 | 2009-04-15 | Unilever N.V. | Antibody heavy chain variable domains against human dietary lipases, and their uses |
US7097840B2 (en) | 2000-03-16 | 2006-08-29 | Genentech, Inc. | Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates |
AU2001268855A1 (en) | 2000-05-26 | 2001-12-03 | National Research Council Of Canada | Single-domain antigen-binding antibody fragments derived from llama antibodies |
US6741957B1 (en) | 2000-07-21 | 2004-05-25 | Daimlerchrysler Corporation | Analytical tire model for vehicle durability and ride comfort analysis |
BR0107351B1 (pt) | 2000-10-20 | 2014-12-02 | Firmenich & Cie | Composição perfumante sem álcool |
ATE513854T1 (de) | 2000-12-13 | 2011-07-15 | Bac Ip B V | Proteinraster aus variablen domänen der schweren immunoglobulinkette von kamelen |
US7054297B1 (en) | 2000-12-28 | 2006-05-30 | Cisco Technology, Inc. | Distribution of packets to high data rate communications devices using multicast protocols |
US7829084B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-11-09 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding constructs and methods for use thereof |
EP1377306A1 (en) | 2001-03-09 | 2004-01-07 | Dyax Corp. | Serum albumin binding moieties |
US20050271663A1 (en) | 2001-06-28 | 2005-12-08 | Domantis Limited | Compositions and methods for treating inflammatory disorders |
EP1399484B1 (en) | 2001-06-28 | 2010-08-11 | Domantis Limited | Dual-specific ligand and its use |
US20100081792A1 (en) | 2001-06-28 | 2010-04-01 | Smithkline Beecham Corporation | Ligand |
WO2003005053A1 (de) | 2001-07-04 | 2003-01-16 | Siemens Aktiengesellschaft | Verfahren zur intensitätskorrektur eines magnetresonanzbildes |
WO2003014960A2 (en) | 2001-08-03 | 2003-02-20 | Medical Research Council | Method of identifying a consensus sequence for intracellular antibodies |
US7371849B2 (en) | 2001-09-13 | 2008-05-13 | Institute For Antibodies Co., Ltd. | Methods of constructing camel antibody libraries |
FR2829940A1 (fr) | 2001-09-27 | 2003-03-28 | Synt Em | Compositions pour la vectorisation d'anticorps a travers la barriere hematoencephalique et leur utilisation pour le diagnostic ou le traitement des maladies du systeme nerveux central |
US7084257B2 (en) | 2001-10-05 | 2006-08-01 | Amgen Inc. | Fully human antibody Fab fragments with human interferon-gamma neutralizing activity |
JP2005289809A (ja) * | 2001-10-24 | 2005-10-20 | Vlaams Interuniversitair Inst Voor Biotechnologie Vzw (Vib Vzw) | 突然変異重鎖抗体 |
US7524502B2 (en) | 2001-11-12 | 2009-04-28 | Merck Patent Gmbh | Modified anti-TNF alpha antibody |
US7365167B2 (en) | 2001-11-26 | 2008-04-29 | Cell Matrix, Inc. | Humanized collagen antibodies and related methods |
JP2005512181A (ja) | 2001-12-03 | 2005-04-28 | ダイアックス、コープ | ライブラリスクリーニング |
KR100599789B1 (ko) | 2001-12-03 | 2006-07-12 | 삼성에스디아이 주식회사 | 방열효율이 향상된 플라즈마 디스플레이 장치 및 그 제조방법 |
US7393648B2 (en) | 2001-12-03 | 2008-07-01 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid antibodies |
AU2002351896A1 (en) | 2001-12-11 | 2003-06-23 | Ablynx N.V. | Method for displaying loops from immunoglobulin domains in different contexts |
EP1456237A2 (en) | 2001-12-21 | 2004-09-15 | Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. | Method for cloning of variable domain sequences |
WO2003055527A2 (en) | 2002-01-03 | 2003-07-10 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw | Immunoconjugates useful for treatment of tumours |
DE10225567B4 (de) | 2002-06-10 | 2006-07-06 | Endress + Hauser Conducta Gesellschaft für Mess- und Regeltechnik mbH + Co. KG | Kommunikationsverfahren und System hierfür |
WO2004001064A2 (en) * | 2002-06-21 | 2003-12-31 | Dyax Corporation | Serum protein-associated target-specific ligands and identification method therefor |
US20060002935A1 (en) | 2002-06-28 | 2006-01-05 | Domantis Limited | Tumor Necrosis Factor Receptor 1 antagonists and methods of use therefor |
US20080008713A1 (en) | 2002-06-28 | 2008-01-10 | Domantis Limited | Single domain antibodies against tnfr1 and methods of use therefor |
EP1388571A1 (de) | 2002-08-08 | 2004-02-11 | Ciba Spezialitätenchemie Pfersee GmbH | Polyorganosiloxanzusammensetzung enthaltend quaternäre Ammoniumgruppen |
US7004940B2 (en) | 2002-10-10 | 2006-02-28 | Ethicon, Inc. | Devices for performing thermal ablation having movable ultrasound transducers |
US7521543B2 (en) | 2002-10-23 | 2009-04-21 | Ludwig Institute For Cancer Research | A34 and A33-like 3 DNA, proteins, antibodies thereto and methods of treatment using same |
AU2003286003B2 (en) | 2002-11-08 | 2011-05-26 | Ablynx N.V. | Stabilized single domain antibodies |
US20060034845A1 (en) | 2002-11-08 | 2006-02-16 | Karen Silence | Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor |
US20070178082A1 (en) | 2002-11-08 | 2007-08-02 | Ablynx N.V. | Stabilized single domain antibodies |
GB0230203D0 (en) | 2002-12-27 | 2003-02-05 | Domantis Ltd | Fc fusion |
DE60329627D1 (de) | 2002-12-31 | 2009-11-19 | Nektar Therapeutics Al Corp | Hydrolysestabile maleimidendgruppen-enthaltende polymere |
JP2006517789A (ja) | 2003-01-10 | 2006-08-03 | アブリンクス エン.ヴェー. | 治療用ポリペプチド、その相同物、その断片、および血小板媒介凝集の調節での使用 |
JP2008530626A (ja) | 2003-06-30 | 2008-08-07 | シーメンス アクチエンゲゼルシヤフト | マイクロコンピュータにおけるプログラムの実行を監視する方法 |
CA2529819A1 (en) | 2003-06-30 | 2004-09-23 | Domantis Limited | Pegylated single domain antibodies |
EP1512696A1 (en) | 2003-08-14 | 2005-03-09 | Diatos | Amino acid sequences facilitating penetration of a substance of interest into cells and/or cell nuclei |
ATE485307T1 (de) | 2003-11-07 | 2010-11-15 | Ablynx Nv | Camelidae schwere ketten antikörper vhhs gegen epidermalen wachstumfaktor rezeptor (egfr) und ihre verwendung |
US7432238B2 (en) | 2004-04-16 | 2008-10-07 | Stc.Unm | Human Kunitz-type inhibitor with enhanced antifibrinolytic activity |
US7180370B2 (en) | 2004-09-01 | 2007-02-20 | Micron Technology, Inc. | CMOS amplifiers with frequency compensating capacitors |
US7563443B2 (en) | 2004-09-17 | 2009-07-21 | Domantis Limited | Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof |
NZ555464A (en) | 2004-12-02 | 2010-03-26 | Domantis Ltd | Bispecific domain antibodies targeting serum albumin and glp-1 or pyy |
GB0521621D0 (en) | 2005-10-24 | 2005-11-30 | Domantis Ltd | Tumor necrosis factor receptor 1 antagonists for treating respiratory diseases |
CN103254309B (zh) | 2005-05-18 | 2017-09-26 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 针对肿瘤坏死因子α的改进的纳米体TM |
DE102005023617A1 (de) * | 2005-05-21 | 2006-11-23 | Aspre Ag | Verfahren zum Mischen von Farben in einem Display |
US20070269422A1 (en) | 2006-05-17 | 2007-11-22 | Ablynx N.V. | Serum albumin binding proteins with long half-lives |
JP2010528647A (ja) | 2007-06-06 | 2010-08-26 | ドマンティス リミテッド | ポリペプチド、抗体可変ドメインおよびアンタゴニスト |
GB0724331D0 (en) | 2007-12-13 | 2008-01-23 | Domantis Ltd | Compositions for pulmonary delivery |
KR20100018040A (ko) | 2007-06-06 | 2010-02-16 | 도만티스 리미티드 | 프로테아제 내성 폴리펩티드를 선택하는 방법 |
CN101970490A (zh) | 2007-11-27 | 2011-02-09 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 针对异二聚体细胞因子和/或其受体的氨基酸序列以及包括所述氨基酸序列的多肽 |
WO2010009391A1 (en) | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Compositions monovalent for cd28 binding and methods of use |
EP2595657A4 (en) | 2010-07-22 | 2015-09-23 | Univ California | ANTITUMOR ANTIBODY ANTIBODIES AND METHODS OF USING SAME |
EA035638B1 (ru) * | 2015-03-31 | 2020-07-20 | ВиЭйчСКВЕАРД ЛИМИТЕД | Полипептиды |
AU2017240190A1 (en) * | 2016-03-31 | 2018-09-20 | Sorriso Pharmaceuticals, Inc. | Compositions |
-
2006
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2007
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004003019A2 (en) * | 2002-06-28 | 2004-01-08 | Domantis Limited | Immunoglobin single variant antigen-binding domains and dual-specific constructs |
WO2004041862A2 (en) * | 2002-11-08 | 2004-05-21 | Ablynx N.V. | Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2019505564A (ja) * | 2015-11-13 | 2019-02-28 | アメリカ合衆国 | 抗bcmaポリペプチド及びタンパク質 |
US10925969B2 (en) | 2015-11-13 | 2021-02-23 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Service | Anti-BCMA polypeptides and proteins |
JP2019504822A (ja) * | 2015-11-27 | 2019-02-21 | アブリンクス エン.ヴェー. | Cd40lを阻害するポリペプチド |
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