JP2023527609A - Ｆｌｔ３結合タンパク質および使用方法 - Google Patents

Ｆｌｔ３結合タンパク質および使用方法 Download PDF

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Abstract

【解決手段】本明細書では、ＦＬＴ３結合タンパク質、上記タンパク質またはその断片を含む医薬組成物、ならびに上記ＦＬＴ３結合タンパク質を製造するための核酸、組換え発現ベクター、および宿主細胞が提供される。疾患、疾病、および障害の予防および／または処置において、開示されるＦＬＴ３結合タンパク質を使用する方法も開示される。【選択図】図３０

Description

相互参照
本出願は、２０２０年２月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／９８０，０５１号の利益を主張するものであり、これはその全体が引用により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は配列表を包含しており、これは、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体を引用することで本明細書に組み込まれる。２０２１年２月１９日に作成された前記ＡＳＣＩＩのコピーは、４７５１７－７４４＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、５３２，７２７バイトのサイズである。
引用による組み込み
本明細書で言及されるすべての公開物、特許、および特許出願は、あたかも個々の公開物、特許、または特許出願がそれぞれ参照により本明細書に具体的かつ個別に組み込まれるのと同じ程度にまで、参照により本明細書に組み込まれている。
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、正常な造血に必須の役割を果たすＩ型膜貫通タンパク質であり、ヒトでは正常な造血幹細胞（ＨＳＣ）、同様に、リンパ系、骨髄系、顆粒球／マクロファージ前駆細胞において生理的に発現し、初期造血に重要な役割を果たすと考えられている。成熟した造血細胞では、ＦＬＴ３発現は樹状細胞やナチュラルキラー細胞のサブセットで報告されている。ＦＬＴ３は造血細胞（Ｂ細胞およびＴ細胞）の生存、増殖、および分化を制御する重要な役割を担っているため、ＦＬＴ３の異常な活性は造血系の癌の発生および進行に関与している。例えば、ＦＬＴ３の内部タンデム重複は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に関連する最も一般的な変異である。ＦＬＴ３はＡＭＬの悪性芽球にも存在し、抗体や細胞性免疫療法の標的を提供する １。そのため、ＦＬＴ３を過剰発現する細胞を特異的に標的として破壊することができる抗体などの治療法が必要とされている。さらに、医師が個々の患者にとって最良の副作用プロファイルを有する治療を選択することを可能にする治療オプションのより大きな選択肢が必要とされている。本開示は、治療方法、とりわけ、ＦＬＴ３の異常発現に関連する状態の治療に有用な新規ポリペプチドおよびタンパク質治療剤を提供する。
１つの実施形態は、少なくとも３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含むＦＬＴ３結合ドメインを提供し、ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列、または、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
ＣＤＲ２は、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列、または、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
ＣＤＲ３は、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列、または、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）の以下のセットの少なくとも１つを含む請求項１のＦＬＴ３結合ドメイン：
配列番号７７、１０９、および１５５、
配列番号７８、１０９、および１５５、
配列番号７９、１１０、および１５６、
配列番号８０、１１１、および１５５、
配列番号８１、１１２、および１５５、
配列番号７７、１１３、および１５７、
配列番号８２、１１０、および１５６、
配列番号７７、１１４、および１５８、
配列番号８０、１１１、および１５５、
配列番号８３、１１５、および１５５、
配列番号８４、１１１、および１５５、
配列番号７９、１１６、および１５６、
配列番号８５、１１１、および１５５、
配列番号８６、１１０、および１５６、
配列番号８７、１１０、および１５６、
配列番号８８、１１７、および１５９、
配列番号８８、１１８、および１６０、
配列番号８８、１１９、および１６１、
配列番号８８、１２０、および１６２、
配列番号８８、１２１、および１６３、
配列番号８８、１２２、および１６４、
配列番号８８、１２１、および１６５、
配列番号８８、１２１、および１６６、
配列番号８８、１２２、および１６７、
配列番号８８、１２２、および１６８、
配列番号８８、１２１、および１６９、
配列番号８８、１１８、および１６５、
配列番号８８、１２３、および１７０、
配列番号８８、１２４、および１７１、
配列番号８８、１１７、および１７２、
配列番号８９、１２５、および１７３、
配列番号９０、１２６、および１７４、
配列番号９０、１２７、および１７５、
配列番号９０、１２５、および１７６、
配列番号９０、１２８、および１７５、
配列番号９０、１２８、および１７７、
配列番号９１、１２９、および１７８、
配列番号９１、１３０、および１７８、
配列番号９２、１３１、および１７８、
配列番号９３、１３２、および１７８、
配列番号９４、１３３、および１７９、
配列番号９１、１３４、および１７８、
配列番号９５、１３５、および１８０、
配列番号９６、１３６、および１８１、
配列番号９７、１３７、および１８２、
配列番号９７、１３８、および１８３、
配列番号９８、１３９、および１８４、
配列番号９９、１３９、および１８５、
配列番号１００、１４０、および１８６、
配列番号１０１、１４１、および１８７、
配列番号１０２、１４２、および１８８、
配列番号１０３、１４３、および１８９、
配列番号１０４、１４４、および１９０、
配列番号１０５、１４５、および１９１、
配列番号１０６、１４６、および１９２、
配列番号１０７、１４７、および１９３、
配列番号１０８、１４８、および１９４、
配列番号９１、１４９、および１９５、
配列番号９１、１５０、および１９５、
配列番号１００、１５１、および１８６、
配列番号９２、１５２、および１９５、
配列番号９３、１５３、および１９５、
配列番号９１、１５４、および１９５、
配列番号８９、３９３、および１７３、ならびに、
配列番号８９、３９４、および１７３。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）の以下のセットの少なくとも１つを含む：
配列番号８９、３９３、および１７３、
配列番号８９、３９４、および１７３、
配列番号１００、１５１、および１８６、ならびに、
配列番号９１、１４９、および１９５。
いくつかの実施形態では、結合ドメインは、フレームワーク領域１、フレームワーク領域２、フレームワーク領域３、およびフレームワーク領域４をさらに含み、ここで、フレームワーク領域１は、配列番号２７３－３０１からなる群から選択される配列を含み、フレームワーク領域２は、配列番号３０２－３２２、３９５、および４０６－４０７からなる群から選択される配列を含み、フレームワーク領域３は、配列番号３２３－３６５および３９６からなる群から選択される配列を含み、フレームワーク領域４は、配列番号３６６－３７１からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号１－７６および３８９－３９０からなる群から選択される配列に少なくとも約６０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号７１－７６および３８９－３９０からなる群から選択される配列に少なくとも約７０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは含み、ＦＬＴ３結合ドメインは抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、二重特異性抗体、三重特異性抗体、一価抗体、多価抗体、ｈｃＩｇＧ、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖＦｃ、ｓｃＦｖ－ジッパー、ジ－ｓｃＦｖ、タンデムｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ、ｓｄＡｂ、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＨドメイン、半抗体、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムダイアボディ、タンデム・ジ－ｓｃＦｖ、またはタンデム・トリ－ｓｃＦｖの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片の一部である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、二重特異性抗体、多特異性抗体、一価抗体、多価抗体、ｈｃＩｇＧ、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖＦｃ、ｓｃＦｖ－ジッパー、ジ－ｓｃＦｖ、タンデムｓｃＦｖ、半抗体、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムダイアボディ、タンデム・ジ－ｓｃＦｖ、またはタンデム・トリ－ｓｃＦｖの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは抗体またはその抗原結合断片の一部であり、抗体またはその抗原結合断片は二重特異性抗体を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは二重特異性抗体を含み、二重特異性抗体は（ｉ）ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）と（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインはＣＤ３を含み、ＣＤ３はヒトＣＤ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＬＴ３ドメインはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは抗体またはその抗原結合断片の一部であり、抗体またはその抗原結合断片は多特異性抗体を含む。いくつかの実施形態では、多特異性抗体は、（ｉ）ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）、（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメイン（抗ＣＤ３）、および、（ｉｉｉ）アルブミン結合ドメイン（抗ＡＬＢ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３はヒトＣＤ３を含む。いくつかの実施形態では、アルブミンは血清アルブミンを含む。いくつかの実施形態では、血清アルブミンはヒト血清アルブミンである。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）、ＣＤ３結合ドメイン（抗ＣＤ３）、およびアルブミン結合ドメイン（抗ＡＬＢ）は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のフォーマットの少なくとも１つにある：
抗ＡＬＢ：抗ＦＬＴ３：抗ＣＤ３、
抗ＣＤ３：抗ＦＬＴ３：抗ＡＬＢ、
抗ＦＬＴ３：抗ＣＤ３：抗ＡＬＢ、
抗ＡＬＢ：抗ＣＤ３：抗ＦＬＴ３、
抗ＦＬＴ３：抗ＡＬＢ：抗ＣＤ３、および、
抗ＣＤ３：抗ＡＬＢ：抗ＦＬＴ３。
いくつかの実施形態では、抗ＦＬＴ３ドメインはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＢドメインはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号３７３に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＢドメインは、配列番号３７２に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインはヒトＦＬＴ３およびカニクイザルＦＬＴ３に結合する。
１つの実施形態は、Ｔ細胞依存性細胞の細胞毒性アッセイにおいて、少なくとも約０．５ｐＭ～約６０００ｐＭの最大半量有効濃度（ＥＣ５０）を有するＦＬＴ３結合ドメインを提供し、ここで、上記アッセイは、ＦＬＴ－３発現細胞のＴ細胞媒介性死滅におけるＦＬＴ３結合ドメインのＥＣ５０を測定する。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ－３発現細胞は、白血病細胞である。いくつかの実施形態では、白血病細胞は細胞株由来であり、細胞株は、ＭＶ－４－１１、ＥＯＬ１、ＴＨＰ１、ＭＯＬＭ３、またはＨＬ６０である。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、少なくとも３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含み、ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号８９、９１、９２、９３、および１００からなる群から選択される配列、または配列番号８９、９１、９２、９３、および１００からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
ＣＤＲ２は、配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、３９３、および３９４からなる群から選択される配列、または配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、３９３、および３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
ＣＤＲ３は、配列番号１７３、１８６、および１９５からなる群から選択される配列、または配列番号１７３、１８６、および１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）の以下のセットの少なくとも１つを含む：
配列番号９１、１４９、および１９５、
配列番号９１、１５０、および１９５、
配列番号１００、１５１、および１８６、
配列番号９２、１５２、および１９５、
配列番号９３、１５３、および１９５、
配列番号９１、１５４、および１９５、
配列番号８９、３９３、および１７３、ならびに、
配列番号８９、３９４、および１７３。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号７１－７６また３８９－３９０からなる群から選択される配列に少なくとも約７０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは多特異性抗体の一部である。いくつかの実施形態では、多特異性抗体は、（ｉ）ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）、（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメイン（抗ＣＤ３）、および、（ｉｉｉ）アルブミン結合ドメイン（抗ＡＬＢ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３はヒトＣＤ３を含む。いくつかの実施形態では、アルブミンは血清アルブミンを含む。いくつかの実施形態では、血清アルブミンはヒト血清アルブミンである。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）、ＣＤ３結合ドメイン（抗ＣＤ３）、およびアルブミン結合ドメイン（抗ＡＬＢ）は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のフォーマットの少なくとも１つにある：
抗ＡＬＢ：抗ＦＬＴ３：抗ＣＤ３、
抗ＣＤ３：抗ＦＬＴ３：抗ＡＬＢ、
抗ＦＬＴ３：抗ＣＤ３：抗ＡＬＢ、
抗ＡＬＢ：抗ＣＤ３：抗ＦＬＴ３、
抗ＦＬＴ３：抗ＡＬＢ：抗ＣＤ３、および、
抗ＣＤ３：抗ＡＬＢ：抗ＦＬＴ３。
いくつかの実施形態では、抗ＦＬＴ３ドメインはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＢドメインはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号３７３に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＢドメインは、配列番号３７２に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインはヒトＦＬＴ３、カニクイザルＦＬＴ３、またはその両方に結合する。
一実施形態は、同一の親和性または最大で約５８倍異なる親和性でヒトＦＬＴ３およびカニクイザルＦＬＴ３に結合するＦＬＴ３結合ドメインを提供する。一実施形態は、
（Ａ）ヒトＣＤ３と結合する第１のドメイン、
（Ｂ）ヒト血清アルブミンタンパク質と結合する第２のドメイン、および
（Ｃ）ヒトＦＬＴ３またはカニクイザルＦＬＴ３と結合する第３のドメイン
を含むＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質を提供し、
ここで、ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の配向：Ｈ２Ｎ－（Ａ）－（Ｃ）－（Ｂ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｂ）－（Ａ）－（Ｃ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｃ）－（Ｂ）－（Ａ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｃ）－（Ａ）－（Ｂ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ａ）－（Ｂ）－（Ｃ）－ＣＯＯＨ、または、Ｈ２Ｎ－（Ｂ）－（Ｃ）－（Ａ）－ＣＯＯＨ、あるいは、Ｎ末端からＣ末端まで、リンカーＬ１およびＬ２を介して、Ｈ２Ｎ－（Ａ）－Ｌ１－（Ｃ）－Ｌ２－（Ｂ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｂ）－Ｌ１－（Ａ）－Ｌ２－（Ｃ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｃ）－Ｌ１－（Ｂ）－Ｌ２－（Ａ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｃ）－Ｌ１－（Ａ）－Ｌ２－（Ｂ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ａ）－Ｌ１－（Ｂ）－Ｌ２－（Ｃ）－ＣＯＯＨ、または Ｈ２Ｎ－（Ｂ）－Ｌ１－（Ｃ）－Ｌ２－（Ａ）－ＣＯＯＨのいずれか１つに従って連結される。
いくつかの実施形態では、第１のドメインは、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３を含む重鎖と、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、またはＬＣ ＣＤＲ３を含む軽鎖とを含むｓｃＦｖであり、ＨＣ ＣＤＲ１は配列番号３９７のアミノ酸配列、または配列番号３９７の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＨＣ ＣＤＲ２は配列番号３９８のアミノ酸配列、または配列番号３９８の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＨＣ ＣＤＲ３は、配列番号３９９のアミノ酸配列、または配列番号３９９の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＬＣ ＣＤＲ１は、配列番号４００のアミノ酸配列、または配列番号４００の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＬＣ ＣＤＲ２は、配列番号４０１のアミノ酸配列、または配列番号４０１の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；および、ＬＣ ＣＤＲ３は、配列番号４０２のアミノ酸配列、または配列番号４０２の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のドメインは、配列番号３７３に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。いくつかの実施形態では、第２のドメインは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むｓｄＡｂであり、ＣＤＲ１は配列番号４０３のアミノ酸配列、または配列番号４０３の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ２は、配列番号４０４のアミノ酸配列、または配列番号４０４の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；および、ＣＤＲ３は、配列番号４０５のアミノ酸配列、または配列番号４０５の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第２のドメインは、配列番号３７２に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、第３のドメインは、少なくとも３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含むｓｄＡｂであり、ここで、ＣＤＲ１は、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列、または、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み；ここで、ＣＤＲ２は、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列、または、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み；ＣＤＲ３は、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列、または、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。
いくつかの実施形態では、第３のドメインは、配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）の以下のセットの少なくとも１つを含む：
配列番号７７、１０９、および１５５、
配列番号７８、１０９、および１５５、
配列番号７９、１１０、および１５６、
配列番号８０、１１１、および１５５、
配列番号８１、１１２、および１５５、
配列番号７７、１１３、および１５７、
配列番号８２、１１０、および１５６、
配列番号７７、１１４、および１５８、
配列番号８０、１１１、および１５５、
配列番号８３、１１５、および１５５、
配列番号８４、１１１、および１５５、
配列番号７９、１１６、および１５６、
配列番号８５、１１１、および１５５、
配列番号８６、１１０、および１５６、
配列番号８７、１１０、および１５６、
配列番号８８、１１７、および１５９、
配列番号８８、１１８、および１６０、
配列番号８８、１１９、および１６１、
配列番号８８、１２０、および１６２、
配列番号８８、１２１、および１６３、
配列番号８８、１２２、および１６４、
配列番号８８、１２１、および１６５、
配列番号８８、１２１、および１６６、
配列番号８８、１２２、および１６７、
配列番号８８、１２２、および１６８、
配列番号８８、１２１、および１６９、
配列番号８８、１１８、および１６５、
配列番号８８、１２３、および１７０、
配列番号８８、１２４、および１７１、
配列番号８８、１１７、および１７２、
配列番号８９、１２５、および１７３、
配列番号９０、１２６、および１７４、
配列番号９０、１２７、および１７５、
配列番号９０、１２５、および１７６、
配列番号９０、１２８、および１７５、
配列番号９０、１２８、および１７７、
配列番号９１、１２９、および１７８、
配列番号９１、１３０、および１７８、
配列番号９２、１３１、および１７８、
配列番号９３、１３２、および１７８、
配列番号９４、１３３、および１７９、
配列番号９１、１３４、および１７８、
配列番号９５、１３５、および１８０、
配列番号９６、１３６、および１８１、
配列番号９７、１３７、および１８２、
配列番号９７、１３８、および１８３、
配列番号９８、１３９、および１８４、
配列番号９９、１３９、および１８５、
配列番号１００、１４０、および１８６、
配列番号１０１、１４１、および１８７、
配列番号１０２、１４２、および１８８、
配列番号１０３、１４３、および１８９、
配列番号１０４、１４４、および１９０、
配列番号１０５、１４５、および１９１、
配列番号１０６、１４６、および１９２、
配列番号１０７、１４７、および１９３、
配列番号１０８、１４８、および１９４、
配列番号９１、１４９、および１９５、
配列番号９１、１５０、および１９５、
配列番号１００、１５１、および１８６、
配列番号９２、１５２、および１９５、
配列番号９３、１５３、および１９５、
配列番号９１、１５４、および１９５、
配列番号８９、３９３、および１７３、ならびに、
配列番号８９、３９４、および１７３。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質は、配列番号１９６－２７２および３９１－３９２からなる群から選択される配列、または配列番号１９６－２７２および３９１－３９２からなる群から選択される配列と少なくとも約８０％同一である配列を含む。一実施形態は、非ＣＤＲループ、切断可能なリンカー、ＦＬＴ３結合ドメイン、およびＣＤ３結合ドメインを含む結合部分を含むＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質を提供し、ここで、非ＣＤＲループは、ＦＬＴ３結合ドメインに結合することができ、結合部分は、ＦＬＴ３結合ドメインのその標的に対する結合をマスキングすることができる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３を含む重鎖と、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、またはＬＣ ＣＤＲ３を含む軽鎖とを含むｓｃＦｖであり、ＨＣ ＣＤＲ１は配列番号３９７のアミノ酸配列、または配列番号３９７の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＨＣ ＣＤＲ２は配列番号３９８のアミノ酸配列、または配列番号３９８の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＨＣ ＣＤＲ３は、配列番号３９９のアミノ酸配列、または配列番号３９９の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＬＣ ＣＤＲ１は、配列番号４００のアミノ酸配列、または配列番号４００の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＬＣ ＣＤＲ２は、配列番号４０１のアミノ酸配列、または配列番号４０１の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；および、ＬＣ ＣＤＲ３は、配列番号４０２のアミノ酸配列、または配列番号４０２の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号３７３に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、少なくとも３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含むｓｄＡｂであり、ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列、または、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
ＣＤＲ２は、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列、または、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
ＣＤＲ３は、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列、または、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）の以下のセットの少なくとも１つを含む：
配列番号７７、１０９、および１５５、
配列番号７８、１０９、および１５５、
配列番号７９、１１０、および１５６、
配列番号８０、１１１、および１５５、
配列番号８１、１１２、および１５５、
配列番号７７、１１３、および１５７、
配列番号８２、１１０、および１５６、
配列番号７７、１１４、および１５８、
配列番号８０、１１１、および１５５、
配列番号８３、１１５、および１５５、
配列番号８４、１１１、および１５５、
配列番号７９、１１６、および１５６、
配列番号８５、１１１、および１５５、
配列番号８６、１１０、および１５６、
配列番号８７、１１０、および１５６、
配列番号８８、１１７、および１５９、
配列番号８８、１１８、および１６０、
配列番号８８、１１９、および１６１、
配列番号８８、１２０、および１６２、
配列番号８８、１２１、および１６３、
配列番号８８、１２２、および１６４、
配列番号８８、１２１、および１６５、
配列番号８８、１２１、および１６６、
配列番号８８、１２２、および１６７、
配列番号８８、１２２、および１６８、
配列番号８８、１２１、および１６９、
配列番号８８、１１８、および１６５、
配列番号８８、１２３、および１７０、
配列番号８８、１２４、および１７１、
配列番号８８、１１７、および１７２、
配列番号８９、１２５、および１７３、
配列番号９０、１２６、および１７４、
配列番号９０、１２７、および１７５、
配列番号９０、１２５、および１７６、
配列番号９０、１２８、および１７５、
配列番号９０、１２８、および１７７、
配列番号９１、１２９、および１７８、
配列番号９１、１３０、および１７８、
配列番号９２、１３１、および１７８、
配列番号９３、１３２、および１７８、
配列番号９４、１３３、および１７９、
配列番号９１、１３４、および１７８、
配列番号９５、１３５、および１８０、
配列番号９６、１３６、および１８１、
配列番号９７、１３７、および１８２、
配列番号９７、１３８、および１８３、
配列番号９８、１３９、および１８４、
配列番号９９、１３９、および１８５、
配列番号１００、１４０、および１８６、
配列番号１０１、１４１、および１８７、
配列番号１０２、１４２、および１８８、
配列番号１０３、１４３、および１８９、
配列番号１０４、１４４、および１９０、
配列番号１０５、１４５、および１９１、
配列番号１０６、１４６、および１９２、
配列番号１０７、１４７、および１９３、
配列番号１０８、１４８、および１９４、
配列番号９１、１４９、および１９５、
配列番号９１、１５０、および１９５、
配列番号１００、１５１、および１８６、
配列番号９２、１５２、および１９５、
配列番号９３、１５３、および１９５、
配列番号９１、１５４、および１９５、
配列番号８９、３９３、および１７３、ならびに、
配列番号８９、３９４、および１７３。
１つの実施形態は、本開示に係るＦＬＴ３結合ドメインと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。１つの実施形態は、この開示のＦＬＴ３結合ドメインを含む医薬組成物、および薬学的に許容可能な担体をもたらす。１つの実施形態は、本開示によるＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。
１つの実施形態は、本開示に係るＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。
１つの実施形態は、任意の本開示に係るＦＬＴ３結合ドメインの生成のためのプロセスを提供し、前記プロセスは、本開示に係るＦＬＴ３結合ドメインをコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトした宿主を、ＦＬＴ３結合ドメインの発現を可能にする条件下で培養する工程と、培養物から生成されたタンパク質を回収および精製する工程とを含む。
１つの実施形態は、本開示に係るＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質の生成のためのプロセスを提供し、前記プロセスは、本開示に係るＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質をコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトした宿主を、ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質の発現を可能にする条件下で培養する工程と、培養物から生成されたタンパク質を回収および精製する工程とを含む。１つの実施形態は、本開示に係るＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質の生成のためのプロセスを提供し、前記プロセスは、本開示に係るＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質をコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトした宿主を、ＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質の発現を可能にする条件下で培養する工程と、培養物から生成されたタンパク質を回収および精製する工程とを含む。
１つの実施形態は、増殖性疾患または腫瘍性疾患の処置または改善のための方法を提供し、上記方法は、本開示に係るＦＬＴ３結合ドメインまたは本開示に係る医薬組成物の対象への投与を含む。１つの実施形態は、増殖性疾患または腫瘍性疾患の処置または改善のための方法を提供し、上記方法は、本開示に係るＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質または本開示に係る医薬組成物の対象への投与を含む。１つの実施形態は、増殖性疾患または腫瘍性疾患の処置または改善のための方法を提供し、上記方法は、本開示に係るＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質または本開示に係る医薬組成物の対象への投与を含む。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、上記方法は、本開示に係るＦＬＴ３結合ドメイン、本開示に係るＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質、本開示に係るＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質、または本開示に係る医薬組成物と組み合わせた薬剤の投与をさらに含む。いくつかの実施形態では、腫瘍性疾患は血液悪性腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、血液悪性腫瘍は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群、または慢性骨髄単球性白血病を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍性疾患は、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病、未分化のＡＭＬ（ＭＯ）、骨髄芽球性白血病（Ｍ１）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞成熟を伴う）、前骨髄性白血病（Ｍ３またはＭ３変異体［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（Ｍ４または好酸球増加症を伴うＭ４変異体［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、単離された顆粒球性肉腫および緑色腫；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＥＩＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球性Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化（例えば、Ｋｉ １＋）大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸Ｔ細胞リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性；およびリンパ腫／白血病（Ｔ－Ｌｂｌｙ／Ｔ－ＡＬＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後のリンパ球増殖性疾患、組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ球系の造血器腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉症またはセザリー症候群とも呼ばれる）、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、Ｔ細胞／組織球が豊富な大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ｌｅｇタイプ）、高齢者のＥＢＶ陽性のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、炎症に関連するびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心キャッスルマン病で生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との間の中間の特徴を持つ分類不能のＢ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫リンパ形質細胞性リンパ腫との間の中間の特徴を持つ分類不能のＢ細胞リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無症候性骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞リンパ腫；骨髄系の造血器腫瘍、線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉系起原の腫瘍；セミノーマ、奇形癌腫、星細胞腫、神経鞘腫を含む中枢神経と末梢神経の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫、および骨肉腫を含む間葉系起原の腫瘍；ならびに、メラノーマ、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、セミノーマ、甲状腺濾胞癌および奇形癌腫、リンパ球系の造血器腫瘍、例えば、Ｔ細胞およびＢ細胞腫瘍、限定されないが、小細胞型および大脳細胞型を含むＴ－リンパ球性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）などのＴ細胞障害を含む他の腫瘍；好ましくは、Ｔ細胞型の大型顆粒リンパ球白血病（ＬＧＬ）；ａ／ｄ Ｔ－ＮＨＬ肝臓リンパ腫；末梢性／胸腺後のＴ細胞性リンパ腫（多形態性および免疫芽球性サブタイプ）；血管中枢性（鼻）Ｔ細胞リンパ腫；頭頸部癌、腎癌、直腸癌、甲状腺の癌；急性骨髄性リンパ腫、およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
１つの実施形態は、少なくとも３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含むＦＬＴ３結合ドメインを提供し、ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号８９、９１、および１００からなる群から選択される配列、または配列番号８９、９１、および１００からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
ＣＤＲ２は、配列番号１４９、１５１、３９３、および３９４からなる群から選択される配列、または配列番号１４９、１５１、３９３、および３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
ＣＤＲ３は、配列番号１７３、１８６、および１９５からなる群から選択される配列、または配列番号１７３、１８６、および１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）の以下のセットの少なくとも１つを含む：
配列番号８９、３９３、および１７３、
配列番号８９、３９４、および１７３、
配列番号１００、１５１、および１８６、ならびに、
配列番号９１、１４９、および１９５。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号７１、７３、３８９、および３９０からなる群から選択される配列に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号７１、７３、３８９、および３９０からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片の一部である。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは抗体またはその抗原結合断片の一部を含み、抗体またはその抗原結合断片の一部であり、抗体またはその抗原結合断片は二重特異性抗体を含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、（ｉ）ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）と（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメイン（抗ＣＤ３）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ドメインは単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３はヒトＣＤ３を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは抗体またはその抗原結合断片の一部であり、抗体またはその抗原結合断片は多特異性抗体を含む。いくつかの実施形態では、多特異性抗体は、（ｉ）ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）、（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメイン（抗ＣＤ３）、および、（ｉｉｉ）アルブミン結合ドメイン（抗ＡＬＢ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ドメインは、配列番号３７３の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３はヒトＣＤ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＢドメインはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＢドメインは、配列番号３７２の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アルブミンはヒト血清アルブミンを含む。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）、ＣＤ３結合ドメイン（抗ＣＤ３）、およびアルブミン結合ドメイン（抗ＡＬＢ）は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のフォーマットの少なくとも１つにある：
抗ＡＬＢ：抗ＦＬＴ３：抗ＣＤ３、
抗ＣＤ３：抗ＦＬＴ３：抗ＡＬＢ、
抗ＦＬＴ３：抗ＣＤ３：抗ＡＬＢ、
抗ＡＬＢ：抗ＣＤ３：抗ＦＬＴ３、
抗ＦＬＴ３：抗ＡＬＢ：抗ＣＤ３、および、
抗ＣＤ３：抗ＡＬＢ：抗ＦＬＴ３。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは多特異性抗体の一部であり、ここで、多特異性抗体は、配列番号２６７、２６９、３９１、および３９２からなる群から選択される配列に少なくとも８０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインはヒトＦＬＴ３に結合する。
一実施形態は、
（Ａ）ヒトＣＤ３と結合する第１のドメイン、
（Ｂ）ヒト血清アルブミンタンパク質と結合する第２のドメイン、および
（Ｃ）ヒトＦＬＴ３と結合する第３のドメイン
を含むＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質を提供し、
ここで、ＣＤＲ１は、配列番号８９、９１、および１００からなる群から選択される配列、または配列番号８９、９１、および１００からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み；ＣＤＲ２は、配列番号１４９、１５１、３９３、および３９４からなる群から選択される配列、または配列番号１４９、１５１、３９３、および３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み；ＣＤＲ３は、配列番号１７３、１８６、および１９５からなる群から選択される配列、または配列番号１７３、１８６、および１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のドメインは、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３を含む重鎖と、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、またはＬＣ ＣＤＲ３を含む軽鎖とを含むｓｃＦｖであり、ＨＣ ＣＤＲ１は配列番号３９７のアミノ酸配列、または配列番号３９７の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＨＣ ＣＤＲ２は配列番号３９８のアミノ酸配列、または配列番号３９８の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＨＣ ＣＤＲ３は、配列番号３９９のアミノ酸配列、または配列番号３９９の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＬＣ ＣＤＲ１は、配列番号４００のアミノ酸配列、または配列番号４００の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＬＣ ＣＤＲ２は、配列番号４０１のアミノ酸配列、または配列番号４０１の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；および、ＬＣ ＣＤＲ３は、配列番号４０２のアミノ酸配列、または配列番号４０２の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のドメインは、配列番号３７３に記載の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。いくつかの実施形態では、請求項２２のＤＬＬ３標的化三重特異性タンパク質であって、第２のドメインは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むｓｄＡｂであり、ＣＤＲ１は配列番号４０３のアミノ酸配列、または配列番号４０３の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ２は、配列番号４０４のアミノ酸配列、または配列番号４０４の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み；および、ＣＤＲ３は、配列番号４０５のアミノ酸配列、または配列番号４０５の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、請求項２５のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質であって、ここで、第２のドメインは、配列番号３７２に記載の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むｓｄＡｂである。
一実施形態は、血液悪性腫瘍を処置する方法であって、
（Ａ）ヒトＣＤ３と結合する第１のドメイン、
（Ｂ）ヒト血清アルブミンタンパク質と結合する第２のドメイン、および
（Ｃ）ヒトＦＬＴ３と結合する第３のドメイン
を含むＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質を、必要としている対象に投与する工程を含む方法を提供し、
ここで、ＣＤＲ１は、配列番号８９、９１、および１００からなる群から選択される配列、または配列番号８９、９１、および１００からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み；ＣＤＲ２は、配列番号１４９、１５１、３９３、および３９４からなる群から選択される配列、または配列番号１４９、１５１、３９３、および３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み；ＣＤＲ３は、配列番号１７３、１８６、および１９５からなる群から選択される配列、または配列番号１７３、１８６、および１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のドメインは、配列番号７１、７３、３８９、および３９０からなる群から選択される配列に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、三重特異性タンパク質は、配列番号２６７、２６９、３９１、および３９２からなる群から選択される配列に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、血液悪性腫瘍は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群、または慢性骨髄単球性白血病を含む。
本発明の新規な特徴は、とりわけ添付の請求項で説明される。本発明の特徴と利点をより良く理解するには、本発明の原理が用いられる例示的実施形態を説明する以下の詳細な説明と添付図面とを参照されたい。
１５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ２１、ＦＬＬ５７、ＦＬＬ６２、ＦＬＬ１、およびＦＬＬ１０３を含有する抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ１０７、ＦＬＬ１１２、ＦＬＬ１２５、ＦＬＬ１２９、およびＦＬＬ１３７を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ１４、ＦＬＬ１４１、ＦＬＬ１４２、ＦＬＬ１４３、およびＦＬＬ１４６を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ１５、ＦＬＬ１５４、ＦＬＬ１５８、ＦＬＬ１６０、およびＦＬＬ１６８を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ１７３、ＦＬＬ１７７、ＦＬＬ１７８、ＦＬＬ１７９、およびＦＬＬ１９０を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ２６、ＦＬＬ３２、ＦＬＬ３４、ＦＬＬ３８、およびＦＬＬ３９を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ４、ＦＬＬ４０、ＦＬＬ４３、ＦＬＬ４５、およびＦＬＬ５１を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ５３、ＦＬＬ５５、ＦＬＬ６、ＦＬＬ６１、およびＦＬＬ７５を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ７６、ＦＬＬ７７、ＦＬＬ７８、ＦＬＬ８２、およびＦＬＬ８２２を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ８３、ＦＬＬ９４、およびＦＬＬ９９を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用い、かつ、陰性対照分子標的化ＧＦＰを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ８、ＦＬＬ４１、ＦＬＬ７１、ＦＬＬ９２、ＦＬＬ１３４、およびＦＬＬ１５３を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ２１、ＦＬＬ５７、ＦＬＬ６２、ＦＬＬ１、およびＦＬＬ１０３を含有する抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ１０７、ＦＬＬ１１２、ＦＬＬ１２５、ＦＬＬ１２９、およびＦＬＬ１３７を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ１４、ＦＬＬ１４１、ＦＬＬ１４２、ＦＬＬ１４３、およびＦＬＬ１４６を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ１５、ＦＬＬ１５４、ＦＬＬ１５８、ＦＬＬ１６０、およびＦＬＬ１６８を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ１７３、ＦＬＬ１７７、ＦＬＬ１７８、ＦＬＬ１７９、およびＦＬＬ１９０を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ２６、ＦＬＬ３２、ＦＬＬ３４、ＦＬＬ３８、およびＦＬＬ３９を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ４、ＦＬＬ４０、ＦＬＬ４３、ＦＬＬ４５、およびＦＬＬ５１を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ５３、ＦＬＬ５５、ＦＬＬ６、ＦＬＬ６１、およびＦＬＬ７５を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ７６、ＦＬＬ７７、ＦＬＬ７８、ＦＬＬ８２、およびＦＬＬ８２２を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ８３、ＦＬＬ９４、およびＦＬＬ９９を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用い、かつ、陰性対照分子標的化ＧＦＰを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ８、ＦＬＬ４１、ＦＬＬ７１、ＦＬＬ９２、ＦＬＬ１３４、およびＦＬＬ１５３を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 非還元（第１および第３のパネル）条件下と還元（第２および第４パネル）条件下での精製したヒト化抗ＦＬＴ３／抗アルブミン／抗ＣＤ３多特異性タンパク質のＳＤＳ－ＰＡＧＥを例示する。レーン１～８の順：ＦＬＨ１４１、ＦＬＨ１０７、ＦＬＨ３４、ＦＬＨ４、ＦＬＨ７８、ＦＬＨ１９Ｃ、ＦＬＨ９２ａ、ＦＬＨ９２ｂ。分子量標準の移動量（ｋＤａ）は、各ゲル画像の左側の横線と数字で示されている。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ４、ＦＬＨ７８、ＦＬＨ１９Ｃ、ＦＬＨ１４１、ＦＬＨ１０７、およびＦＬＨ３４を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用い、かつ、陰性対照分子標的化ＧＦＰを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ４、ＦＬＨ７８、ＦＬＨ１９Ｃ、ＦＬＨ１４１、ＦＬＨ１０７、およびＦＬＨ３４を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用い、かつ、陰性対照分子標的化ＧＦＰを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＥＯＬ１細胞と、ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ４、ＦＬＨ７８、ＦＬＨ１９Ｃ、ＦＬＨ１４１、ＦＬＨ１０７、およびＦＬＨ３４を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用い、かつ、陰性対照分子標的化ＧＦＰを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。 ＥＯＬ１細胞と、ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ４、ＦＬＨ７８、ＦＬＨ１９Ｃ、ＦＬＨ１４１、ＦＬＨ１０７、およびＦＬＨ３４を含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用い、かつ、陰性対照分子標的化ＧＦＰを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。アッセイは１５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された。 本開示のＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質の様々なドメインの例示的な配置を提供する。図２８のバージョン１とバージョン２に描かれた標的ドメインは、本明細書に記載されるようなＦＬＴ３結合ドメインに相当する。 相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）、ならびにβ鎖を接続する非ＣＤＲループ（ＡＢ、ＣＣ’、Ｃ”Ｄ、ＥＦ、およびＤＥ）を含む、例示的な免疫グロブリンドメインの可変ドメインを例示する。 ＴＨＰ１細胞と、ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ１４１、ＦＬＨ１０７、ＦＬＨ３４、ＦＬＨ４、ＦＬＨ７８、ＦＬＨ１９Ｃ、ＦＬＨ９２ａ、ＦＬＨ９２ｂを含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用い、かつ、いかなる種類のアルブミンも加えないＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＴＨＰ１細胞と、ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ１４１、ＦＬＨ１０７、ＦＬＨ３４、ＦＬＨ４、ＦＬＨ７８、ＦＬＨ１９Ｃ、ＦＬＨ９２ａ、ＦＬＨ９２ｂを含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＯＬＭ１３細胞と、ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ１４１、ＦＬＨ１０７、ＦＬＨ３４、ＦＬＨ４、ＦＬＨ７８、ＦＬＨ１９Ｃ、ＦＬＨ９２ａ、ＦＬＨ９２ｂを含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用い、かつ、陰性対照分子標的化ＧＦＰを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＨＬ６０細胞と、ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ１４１、ＦＬＨ１０７、ＦＬＨ３４、ＦＬＨ４、ＦＬＨ７８、ＦＬＨ１９Ｃ、ＦＬＨ９２ａ、ＦＬＨ９２ｂを含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用い、かつ、陰性対照分子標的化ＧＦＰを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。 １０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、および１０００μｇ／ｋｇの単回ｉ．ｖ．投与後のカニクイザルにおける、ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ１９Ｃを含むＦＬＴ３多特異性タンパク質の薬物動態を例示する。プロットは、用量群ごとに２体の対象から集めた試料で測定した平均値である。 ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ１９Ｃを含むＦＬＴ３多特異性タンパク質を１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、および１０００μｇ／ｋｇの単回ｉ．ｖ．投与後にカニクイザルから集めた血清試料中に存在する可溶性のＦＬＴ３Ｌの量を例示する。プロットは、用量群ごとに２体の対象から収集した試料で測定した平均値である。 ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ１９Ｃを含むＦＬＴ３多特異性タンパク質を１００μｇ／ｋｇおよび１０００μｇ／の単回ｉ．ｖ．投与後にカニクイザルから集めた全血に由来するＲＮＡに存在するＦＬＴ３Ｌ転写物の量を例示する。プロットは技術的な複製である。データは各投与群で各個々の試験でプロットされる。 ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ１９Ｃを含むＦＬＴ３多特異性タンパク質を１００μｇ／ｋｇおよび１０００μｇ／の単回ｉ．ｖ．投与後にカニクイザルから集めた骨髄から調製されたＲＮＡに存在するＦＬＴ３Ｌ転写物の量を例示する。プロットは技術的な複製である。データは各投与群で各個々の試験でプロットされる。 １５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ４、ＦＬＨ７８、ＦＬＨ１９Ｃ、ＦＬＨ１４１、ＦＬＨ１０７、ＦＬＨ３４、ＦＬＨ９２ａ、およびＦＬＨ９２ｂを含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。このアッセイにおけるＴ細胞は図２４のアッセイと比較して、異なるドナーから得られた。 １５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で実行された、ＭＶ－４－１１細胞と、ヒト化抗ＦＬＴ３配列ＦＬＨ４、ＦＬＨ７８、ＦＬＨ１９Ｃ、ＦＬＨ１４１、ＦＬＨ１０７、ＦＬＨ３４、ＦＬＨ９２ａ、およびＦＬＨ９２ｂを含む抗ＣＤ３／抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質とを用いるＴＤＣＣアッセイの結果を例示する。Ｙ軸は癌細胞の生存率の正規化されたパーセンテージを示す。このアッセイにおけるＴ細胞は図２５のアッセイと比較して、異なるドナーから得られた。
特定の定義
本明細書で使用される用語は、特定の事例のみを記載することを目的としており、本発明を限定することを意図していない。本明細書で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が他に明白に示していない限り、複数形を同様に含むことが意図されている。さらに、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「とともに（ｗｉｔｈ）」という用語またはその変形が、詳細な記載および／または請求項のいずれかで使用される程度まで、そのような用語は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」に類似した方法で含まれるように意図されている。
「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」という用語は、当業者によって決定されるような特定の値の許容可能な誤差範囲内であることを意味し、これは、その値がどのように測定または決定されるかに、例えば、測定システムの制約に部分的に依存している。例えば、「約」とは、任意の値での実践につき１または１を超える標準偏差を意味し得る。特定の値が本出願と請求項に記載されている場合、特段の定めのない限り、「約」という用語は、特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味するものであると仮定されなければならない。
「個体」、「患者」、または「対象」という用語は互換的に使用される。いかなる用語も、保健従事者（例えば、医師、正看護婦、ナース－プラクティショナー、医師助手、用務係、またはホスピス職員）の監督（例えば、持続的または断続的）によって特徴付けられた状態を要求せず、またはそれに限定されない。
「抗体」とは典型的には、共有的なジスルフィド結合と非共有的な相互作用によって一緒に保持される、２つの重（Ｈ）ポリペプチド鎖および２つの軽（Ｌ）ポリペプチド鎖を含むＹ字型の四量体タンパク質を指す。ヒト軽鎖は可変ドメイン（ＶＬ）と定常ドメイン（ＣＬ）を含み、定常ドメインは、アミノ酸配列と遺伝子座位に基づいてカッパまたはラムダとして容易に分類され得る。各重鎖は１つの可変ドメイン（ＶＨ）と定常領域を含み、これは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤの場合には、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３と呼ばれる３つのドメインを含む（ＩｇＭとＩｇＥは第４のドメイン、ＣＨ４を有する）。ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤの分類において、ＣＨ１とＣＨ２のドメインは、可変長のプロリンおよびシステインリッチなセグメントである（通常ＩｇＧ中に約１０～約６０のアミノ酸）柔軟なヒンジ領域によって離されている。軽鎖と重鎖の両方の可変ドメインは、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって定常ドメインに結合され、重鎖はさらに約１０のさらなるアミノ酸の「Ｄ」領域を有する。抗体の各クラスは、対のシステイン残基によって形成された鎖間および鎖内のジスルフィド結合を含む。免疫グロブリン分子には２つのタイプの天然のジスルフィド架橋または結合：鎖間および鎖内のジスルフィド結合がある。鎖間のジスルフィド結合の位置と数は、免疫グロブリンのクラスと種によって変わる。鎖間のジスルフィド結合は、免疫グロブリンの表面に位置し、溶媒に利用可能であり、通常比較的容易に還元される。ヒトＩｇＧ１アイソタイプでは、４つの鎖間のジスルフィド結合があり、各重鎖から軽鎖まで１つ、および、重鎖間に２つある。鎖間のジスルフィド結合は鎖の会合には必要ではない。周知のように、重鎖のシステインリッチＩｇＧ１ヒンジ領域は一般に、３つの部分：上部ヒンジ、コアヒンジ、および下部ヒンジからなるように保持されている。当業者は、ＩｇＧ１ヒンジ領域が、鎖間のジスルフィド結合（２つの重／重、２つの重／軽）を含む重鎖内にシステインを含有しており、これがＦａｂの移動を促進する構造的な柔軟性をもたらすことを理解するであろう。ＩｇＧ１の軽鎖と重鎖との間の鎖間ジスルフィド結合は、カッパまたはラムダの軽鎖のＣ２１４と、重鎖の上部ヒンジ領域内のＣ２２０との間で形成される。重鎖間の鎖間ジスルフィド結合は、位置Ｃ２２６とＣ２２９にある（すべて、下のＫａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．に従ってＥＵの指標に基づき番号を付された）。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、マルチクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、脱免疫化抗体、ヒト化抗体および霊長類化抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト抗体、組換え産生抗体、イントラボディ、多特異性抗体、二重特異性抗体、一価抗体（例えば、一価ＩｇＧ）、多価抗体、抗イディオタイプ抗体、合成抗体（ムテインおよびその変異体を含む）、免疫特異的抗体断片、例えば、ｈｃＩｇＧ、Ｖ－ＮＡＲ、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３断片、単鎖断片（例えば、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖＦｃ、ｓｃＦｖ－ジッパー、ｓｃＦａｂ）、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、直鎖抗体、単一ドメイン抗体、例えば、ナノボディ、または、ｓｄＡｂなどの１つの可変ドメイン抗体（ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＶＨＨドメイン）のみを含む単一可変ドメイン抗体、「ｒ ＩｇＧ」（「ハーフ抗体」）、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムディアボディ（Ｔａｎｄａｂ’ｓ）、タンデム・ジ－ｓｃＦｖ、タンデム・トリ－ｓｃＦｖ、いくつかの例において、以下のような構造で例示される「ミニボディ」：（ＶＨ－ＶＬ－ＣＨ３）２、（ｓｃＦｖ－ＣＨ３）２、（（ｓｃＦｖ）２－ＣＨ３＋ＣＨ３）、（（ｓｃＦｖ）２－ＣＨ３）、または（ｓｃＦｖ－ＣＨ３－ｓｃＦｖ）２、マルチボディ、例えば、トリアボディあるいはテトラボディ；ならびに、Ｆｃ融合と他の改変を含むその誘導体、および、それがＦＬＴ３タンパク質との優先的な会合または結合のための結合部位を有するドメインを含む限り、任意の他の免疫反応性の分子を含む。さらに、文脈上の制約によって他の方法で指定されない限り、この用語はさらに、すべてのクラスの抗体（つまり、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ）とすべてのサブクラス（つまり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）を含む。様々なクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは典型的には、対応する小文字のギリシャ文字α、δ、ε、γ、およびμによってそれぞれ表示される。任意の脊椎動物種の抗体の軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる、２つの明らかに異なるタイプの１つに割り当てられ得る。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、ＶＨドメインまたはＶＨＨドメインなどの重鎖のみの抗体を含む。場合によっては、ＦＬＴ３結合タンパク質は、操作されたヒトＶＨドメインである重鎖のみの抗体を含む。いくつかの例では、操作されたヒトＶＨドメインは、ファージディスプレイライブラリのパニングに生成される。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質はＶＨＨを含む。「ＶＨＨ」という用語は、本明細書で使用されるように、軽鎖を欠いた単鎖抗体結合ドメインを指す。場合によっては、ＶＨＨは、軽鎖を生来欠いているラクダ科あるいは軟骨魚類で見られるタイプの抗体に由来し、または、それに応じて構築することができる合成の非免疫ＶＨＨに派生する。各重鎖は、Ｖ、Ｄ、およびＪのエクソンによってコードされた可変領域を含む。ＶＨＨは、場合によっては、天然のＶＨＨ、例えば、ラクダ科由来のＶＨＨ、または、重鎖可変ドメインを含む組換え型タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ラクダ、ラマ、ビクーニャ、グアナコ、および軟骨魚類（限定されないが、サメなど）からなる群から選択された種に由来する。別の実施形態では、ＶＨＨは、アルパカ（限定されないが、ワカヤ（Ｈｕａｃａｙａ Ａｌｐａｃａ）とスーリ（Ｓｕｒｉ ａｌｐａｃａ）など）に由来する。
本明細書で使用されるように、「可変領域」または「可変ドメイン」とは、可変ドメインの特定の部分が抗体中の配列で大きく異なり、その特定の抗原に対する各々の特定の抗体の結合と特異性に使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメイン全体に均一に分布していない。それは、軽鎖と重鎖の両方の可変ドメイン中の相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つのセグメントまたは超可変領域に集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖と軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、β－シート構造を接続し、場合によってはβ－シート構造の一部を形成するループを形成する、３つのＣＤＲにより接続された、β－シート構造を採用している４つのＦＲ領域を含む。各鎖のＣＤＲはＦＲ領域によって極めて近接して一緒に保持され、他の鎖からのＣＤＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照）。定常ドメインは抗体を抗原に結合することに直接関与しないが、抗体依存性の細胞毒性における抗体の関与などの様々なエフェクター機能を示す。各ドメイン、フレームワーク領域、およびＣＤＲに対するアミノ酸の割り当ては、いくつかの実施形態では、別段の定めのない限り、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ （５ｔｈ Ｅｄ．）， ＵＳ Ｄｅｐｔ． ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， ＰＨＳ， ＮＩＨ， ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ． ９１－３２４２； Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８７， ＰＭＩＤ： ３６８１９８１； Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８９， ＰＭＩＤ： ２６８７６９８； ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，１９９６， ＰＭＩＤ： ８８７６６５０； ｏｒ Ｄｕｂｅｌ， Ｅｄ． （２００７） Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， ３ｒｄ Ｅｄ．，Ｗｉｌｙ－ＶＣＨ Ｖｅｒｌａｇ ＧｍｂＨ ａｎｄ Ｃｏ ｏｒ ＡｂＭ （Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ／ＭＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ）によって提供される番号付与方法の１つに従う。本開示のいくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、ＶＨドメインまたはＶＨＨドメインなどの重鎖のみの抗体を含み、および、３つのＣＤＲを含む。そのような重鎖のみの抗体は、いくつかの実施形態では、最適な結合親和性のために、ＶＬ（可変の軽鎖）領域との二量体化に依存しない単量体としてＦＬＴ３を結合する。
「Ｋａｂａｔでのような可変ドメイン残基のナンバリング」または「Ｋａｂａｔでのようなアミノ酸位置のナンバリング」、およびその変更形態は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ．（１９９１）における抗体の編集物の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインのために使用されるナンバリングシステムを参照する。この番号付与システムを使用して、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲの省略、またはそれらへの挿入に対応する、より少数のまたは追加のアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入物（Ｋａｂａｔに係る残基５２ａ）を、重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔに従って残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃなど）を含んでもよい。残基のＫａｂａｔ式番号付与は、「標準の」Ｋａｂａｔ式番号付与を行った配列との、抗体の配列の相同領域におけるアライメントによって、所定の抗体について決定され得る。本開示のＣＤＲはＫａｂａｔの番号付与の慣習に必ず対応するということを意図するものではない。
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基（または領域）という用語は、本明細書で定義されるようなＣＤＲまたは超可変領域の残基以外の可変ドメイン残基を指す。「ヒト・コンセンサス・フレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択の際に最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。
本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域における特定の抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。１つの抗原が１つを超えるエピトープを有することもある。したがって、異なる抗体が、抗原上の異なる部位に結合し、異なる生物学的効果を有する可能性がある。エピトープは立体構造であっても線状であってもよい。立体構造のエピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメントの空間的に並置されたアミノ酸によって生じる。線状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接するアミノ酸残基によって生じるものである。特定の状況では、エピトープは、抗原上に糖類、リン酸基、またはスルホニル基の部分を含んでいてもよい。
本明細書で使用されるように、配列に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」という用語は、最大のパーセント配列同一性を達成するために、必要に応じて配列をアラインメントしてギャップを導入した後に、かつ、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮することなく、特定の配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の割合として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当該技術分野内の様々な方法で、例えば、ＥＭＢＯＳＳ ＭＡＴＣＨＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ ＷＡＴＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ ＳＴＲＥＴＣＨＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ ＮＥＥＤＬＥ、ＥＭＢＯＳＳ ＬＡＬＩＧＮ、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて達成可能である。当業者は、比較されている配列の完全長での最大のアラインメントを達成するために必要とされるあらゆるアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のアライメントは、例えば、公的に入手可能な配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を用いて達成することができる。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムのソースコードは、米国著作権局（ワシントンＤ．Ｃ．２０５５９）でユーザー文書とともに入手可能であり、ここで、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標） Ｖ４．０ＤなどのＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムで使用するためにコンパイルすることができる。すべての配列比較パラメータはＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定され、変化することはない。
本明細書で使用されるように、「消失半減期」は、ＧｏｏｄｍａｎとＧｉｌｌｍａｎのＴｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２１－２５（Ａｌｆｒｅｄ Ｇｏｏｄｍａｎ Ｇｉｌｍａｎ，Ｌｏｕｉｓ Ｓ．Ｇｏｏｄｍａｎ，ａｎｄ Ａｌｆｒｅｄ Ｇｉｌｍａｎ，ｅｄｓ．，６ｔｈ ｅｄ．１９８０）に記載されるように、その通常の意味で使用される。簡潔にいえば、この用語は、薬物消失の時間経過の定量的尺度を包含することを意味している。薬物濃度が通常、消失プロセスの飽和に必要な濃度に達しないため、ほとんどの薬物の消失は指数関数的である（すなわち、一次速度論に従う）。指数関数的なプロセスの速度は、時間単位当たりの分数変化率を表すその速度定数ｋによって、または、プロセスの５０％の完了に必要な時間であるその半減期ｔ１／２によって表され得る。これらの２つの定数の単位は、それぞれ時間－１および時間である。一次速度定数および反応の半減期は単純に関連づけられ（ｋ×ｔ１／２＝０．６９３）、適宜交換され得る。一次消失速度論は、薬物の一定の割合が時間単位ごとに失われることを規定するため、薬物濃度対時間の対数のプロットは、初期分布段階後（すなわち、薬物吸収と分布が完了した後）の全ての時間で直線状である。薬物消失半減期は、そのようなグラフから正確に判定され得る。
本明細書で使用されるように、「結合親和性」という用語は、結合標的に対する本開示に記載されたタンパク質の親和性を指し、「Ｋｄ」値を数的に使用して表現される。２つ以上のタンパク質が、それらの結合標的に対して同等の結合親和性を有すると示されている場合、その結合標的に対するそれぞれのタンパク質の結合に関するＫｄ値は、互いの±２倍以内である。２つ以上のタンパク質が単一の結合標的に対して同等の結合親和性を有すると示されている場合、上記の単一結合標的に対するそれぞれのタンパク質の結合に関するＫｄ値は、互いの±２倍以内である。タンパク質が同等の結合親和性で２つ以上の標的に結合すると示されている場合、２つ以上の標的に対する上記タンパク質の結合に関するＫｄ値は、互いの±２倍以内である。一般に、高いＫｄ値はより弱い結合に相当する。いくつかの実施形態では、「Ｋｄ」は、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－２０００またはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用して放射標識された抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）または表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される。特定の実施形態では、「オンレート（ｏｎ－ｒａｔｅ）」あるいは「会合速度（ｒａｔｅ ｏｆ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎまたはａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｒａｔｅ）」あるいは「ｋｏｎ」、および「オフレート（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）」あるいは「解離速度（ｒａｔｅ ｏｆ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）または（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｒａｔｅ）」、または「ｋｏｆｆ」も、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－２０００またはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用して、表面プラズモン共鳴技術で決定される。さらなる実施形態では、「Ｋｄ」、「ｋｏｎ」、および「ｋｏｆｆ」は、ＯＣＴＥＴ（登録商標）システムズ（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定される。ＯＣＴＥＴ（登録商標）Ｓｙｓｔｅｍｓを使用して、結合親和性を測定するための例示的な方法では、リガンド、例えば、ビオチン化されたヒトまたはカニクイザルのＦＬＴ３は、ＯＣＴＥＴ（登録商標）ストレプトアビジンキャピラリーセンサー先端表面に固定され、その後、約２０－５０μｇ／ｍｌのヒトまたはカニクイザルのＦＬＴ３タンパク質を使用して、ストレプトアビジンの先端が、メーカーの説明書に従って活性化される。ＰＢＳ／カゼインの溶液も遮断薬として導入される。会合反応速度測定に関して、ＦＬＴ３結合タンパク質変異体は、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１００μｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約５μｇ／ｍＬ、または約２ｎｇ／ｍＬ～約２０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で導入される。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合単一ドメインタンパク質は、約２ｎｇ／ｍＬ～約２０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で使用される。完全解離は、陰性対照である結合タンパク質を含まないアッセイ緩衝液の場合に観察される。その後、結合反応の速度論的パラメータは、適切なツール、例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏソフトウェアを使用して決定される。
本明細書で使用されるように、いくつかの実施形態では、「処置」または「処置すること」または「処置された」とは、望ましくない生理学的な疾病、障害、または疾患を遅らせる（和らげる）こと、あるいは、有益なまたは望ましい臨床結果を得ることを目的とする治療的処置を指す。本明細書に記載される目的のために、有益な、または望ましい臨床結果としては、限定されないが、症状の緩和；疾病、障害、または疾患の程度の減少；疾病、障害、または疾患の状態の安定化（つまり、悪化しないこと）；疾病、障害、または疾患の発症を遅らせること、あるいは進行を遅らせること；疾病、障害、または疾患状態の改善；および、検出可能であれ検出不可能であれ、緩解（部分的でも全体でも）、あるいは、疾病、障害、または疾患の亢進であれ改善を含む。処置は過剰なレベルの副作用のない臨床的に有意な反応を誘発することを含む。処置はさらに、処置を受けない場合の予想される生存時間と比較して、生存時間を延ばすことを含む。他の実施形態では、「処置」または「処置すること」または「処置された」とは、予防的な対策を指し、その目的は、例えば、疾患の素因のある人（例えば、乳癌などの疾患のための遺伝子マーカーをつけた個体）など、望ましくない生理的な疾病、障害、または疾患の発症を遅らせるか、あるいはその重症度を低下させることである。
「ＦＬＴ３標的化ＴｒｉＴＡＣ」または「ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質」は、本明細書で使用されるように、バルク血清タンパク質に特異的な結合部分、第１の標的抗原結合ドメイン、および第２の標的抗原結合ドメインを含む三重特異性結合タンパク質を指し、第１の標的抗原結合ドメインと第２の標的抗原結合ドメインの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようにＦＬＴ３結合タンパク質を含み、および、第１の標的抗原結合ドメインと第２の標的抗原結合ドメインの少なくとも１つは、ＣＤ３に結合するドメインを含む。
本明細書で使用されるように、「ＰｒｏＴｒｉＴＡＣ」または「ＦＬＴ３標的化三重特異性促進（ｐｒｏｔｒｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）タンパク質」は、条件付きで活性化され、かつ、（ｉ）切断可能リンカー；（ｉｉ）バルク血清タンパク質に特異的であり、およびその標的への第１の標的抗原結合ドメインまたは第２の標的抗原結合ドメインの結合を禁止するマスキング部分を含む二重結合部分を含む、三重特異性結合タンパク質を指し、第１の標的抗原結合ドメインと第２の標的抗原結合ドメインの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようにＦＬＴ３結合ドメインを含む。本開示のＰｒｏＴｒｉＴＡＣタンパク質は、場合によっては、例えば、腫瘍微小環境などのプロテアーゼリッチな環境において、切断可能なリンカーの切断によってマスキングされた状態から活性状態へと活性化される。
ＦＬＴ３結合タンパク質
胎児肝臓キナーゼ２（ＦＬＫ－２）、幹細胞チロシンキナーゼ１（ＳＴＫ－１）、およびＣＤ１３５としても知られているＦＬＴ３は、クラスＩＩＩ受容体チロシンキナーゼのメンバーである。通常、ＦＬＴ３は未熟な骨髄系リンパ球前駆細胞や樹状細胞前駆体上に発現するが、成熟した成体細胞上ではほとんど発現しない。ＦＬＴ３は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の約９０％、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の大部分、および慢性骨髄性白血病（ＢＣ－ＣＭＬ）の急性転化フェーズで過剰発現する。ＦＬＴ３リガンド（ＦＬ）による刺激は、白血病細胞の増殖と生存を亢進させる。ＦＬＴ３シグナル伝達が阻害されると、樹状細胞のアポトーシスが起こり、免疫反応が阻害される。ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ、およびＳｔａｔ５の経路は、活性化ＦＬＴ３の下流シグナル伝達に関与することが確認されている（例えば、Ｓｔｉｒｅｗａｌｔ Ｄ Ｌ ａｎｄ Ｊ Ｐ，Ｒａｄｉｃｈ，Ｊ Ｐ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ３：６５０－６６５（２００３）を参照されたい）。
ＦＬＴ３結合ドメインを含むタンパク質、その医薬組成物、同様にそのようなタンパク質を作るための核酸、組換え発現ベクター、および宿主細胞が本明細書に記載されている。さらに、疾患、疾病、および障害の予防および／または処置において、本開示のＦＬＴ３結合ドメインを含む開示されたタンパク質を使用する方法も提供される。いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインは、白血病などの疾患における野生型ＦＬＴ３、ならびにＭＰＫ、ＰＩ３Ｋ、およびＳＴＡＴ５経路の下流のキナーゼのＦＬ誘導性リン酸化を阻害する。いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）などの下流免疫エフェクター機能を活性化する能力が向上している。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号３８８（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ３６８８８）に記載されるような配列を含むヒトＦＬＴ３タンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号３８８（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ３６８８８）と比較して、切断された配列を含むタンパク質に結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＦＬＴ３結合ドメインは、完全長ＦＬＴ３（例えば、配列番号３８８（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ３６８８８）の配列を含むＦＬＴ３タンパク質）を認識する。特定の例では、本明細書に開示されるＦＬＴ３結合ドメインは、ＦＬＴ３内のエピトープを認識し、例えば、場合によっては、ＦＬＴ３結合タンパク質は、ヒトＦＬＴ３のドメイン内に見られる１つ以上のアミノ酸に相互作用する。抗体が結合するエピトープは、ＦＬＴ３（例えば、配列番号３８８（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ３６８８８）の配列を含むＦＬＴ３タンパク質）のドメイン内に位置する３つ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上）のアミノ酸の単一の連続配列からなることもある。代替的に、エピトープは、ＦＬＴ３（例えば、配列番号３８８（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤ：Ｐ３６８８８）の配列を含むＦＬＴ３タンパク質）のドメイン内に位置する複数の非連続アミノ酸（またはアミノ酸配列）からなることもある。
いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、完全長のＦＬＴ３タンパク質、またはその断片、例えば、上記のように完全長ＦＬＴ３タンパク質内のエピトープ含有断片に結合する。場合によっては、エピトープ含有断片は、ＦＬＴ３タンパク質の抗原性または免疫原性の断片およびその誘導体を含む。抗原性または免疫原性の断片を含むエピトープ含有断片は、いくつかの実施形態では、１２個のアミノ酸またはそれ以上、例えば、２０個のアミノ酸またはそれ以上、５０個あるいは１００個のアミノ酸またはそれ以上である。ＦＬＴ３断片は、いくつかの実施形態では、完全長タンパク質の９５％以上、完全長タンパク質の９０％以上、７５％または５０％または２５％または１０％以上を含む。いくつかの実施形態では、抗原性または免疫原性の断片を含むＦＬＴ３のエピトープ含有断片は、患者において関連する免疫応答を誘発することができる。ＦＬＴ３の誘導体は、いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３配列（例えば、配列番号３８８（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤ：Ｐ３６８８８）の配列を含むＦＬＴ３タンパク質）に１つ以上（例えば、１－２０、例えば、１５個のアミノ酸、またはタンパク質の全長に基づくアミノ酸の数だけ最大で２０％、例えば、１０％または５％または１％）の欠失、挿入、または置換がなされた配列上の変異体を含む。
いくつかの実施形態では、置換は保存的置換を含む。その誘導体および変異体は、いくつかの例では、それらが由来するタンパク質と本質的に同じ生物学的機能を有する。例えば、ＦＬＴ３の誘導体および変異体は、いくつかの例では、それらが由来するタンパク質に比較的抗原性または免疫原性であり、それらが由来するタンパク質のリガンド－結合活性または活性受容体－複合体形成能力のいずれか、あるいは好ましくはその両方を有し、ＦＬＴ３と同じ組織分布を有している。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、参照ＦＬＴ３結合タンパク質と同等またはそれ以上の親和性でＦＬＴ３を特異的に結合し、そのような実施形態におけるＦＬＴ３結合タンパク質は、親和性成熟ＦＬＴ３結合分子を含み、ＦＬＴ３結合親分子に由来し、ＦＬＴ３結合親分子に関して１つ以上のアミノ酸変異（例えば、安定化変異、不安定化変異）を含んでいる。いくつかの実施形態では、親和性成熟ＦＬＴ３結合分子は、参照のＦＬＴ３結合親分子と比較して、選択された不安定化剤に対して優れた安定性を持っている。いくつかの実施形態では、親和性成熟ＦＬＴ３結合分子は、ヒトＦＬＴ３タンパク質などのＦＬＴ３タンパク質に対してファージディスプレイライブラリで発現された１つ以上のＦＬＴ３結合親分子に由来する１つ以上の事前候補ＦＬＴ３結合分子のパニングを含むプロセスで同定される。事前候補ＦＬＴ３結合分子は、いくつかの実施形態では、親分子に対する、可変領域、ＣＤＲ、またはフレームワーク残基におけるアミノ酸置換を含む。
本明細書で使用されるように、「ファージディスプレイ」とは、ファージ、例えば、糸状ファージの粒子の表面にあるコートタンパク質の少なくとも一部に対する融合タンパク質として、変異型ポリペプチドが表示される技術である。ファージディスプレイの有用性は、ランダム化されたタンパク質変異体の大規模なライブラリが、標的分子に高い親和性で結合する配列について迅速かつ効率的に選択可能であるという事実にある。ペプチドやタンパク質のライブラリをファージに表示することは、数百万ものポリペプチドをスクリーニングして特定の結合特性を有するものを得るために使用されている。多価ファージディスプレイ方法は、糸状ファージの遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに融合することにより、小さなランダムペプチドおよび小さなタンパク質を表示するために使用されている。例えば、Ｗｅｌｌｓ ａｎｄ Ｌｏｗｍａｎ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ， ３：３５５－３６２ （１９９２）、および、その中で引用されている文献を参照されたい。一価ファージディスプレイでは、タンパク質またはペプチドライブラリーを遺伝子ＩＩＩまたはその一部に融合させ、野生型の遺伝子ＩＩＩタンパク質の存在下にて低レベルで発現させることにより、ファージ粒子が融合タンパク質の１つのコピーを表示するか、またはいかなる融合タンパク質も表示しない。多価ファージに比べてアビディティ効果が小さく、選択は内因性のリガンドとの親和性に基づいており、ファージミドベクターが使用され、これによりＤＮＡ操作が容易になる。例えば、Ｌｏｗｍａｎ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ： Ａ ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， ３：２０５－０２１６ （１９９１）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、パニングは、事前候補のＦＬＴ３結合分子から、オンレートが増加または減少したＦＬＴ３結合分子を特定するために、変動する結合時間と濃度を使用することを含む。いくつかの実施形態では、パニングは、事前候補のＦＬＴ３結合分子から、オンレートが増加または減少したＦＬＴ３結合分子を特定するために、変動する洗浄時間を使用することを含む。いくつかの実施形態では、パニングは、変動する結合時間と変動する洗浄時間を使用することを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の安定化変異は、例えば、そのような突然変異体から第２期のコンビナトリアルライブラリーを作製するためにシャッフルすること、および、パニングの第２ラウンドと、その後の結合選択を実施することによって、親和性成熟ＦＬＴ３結合分子の安定性を高めるために、組み合わされる。
いくつかの実施形態では、親和性成熟ＦＬＴ３結合分子は、ＦＬＴ３結合親分子と同等以上のＦＬＴ３タンパク質（ヒトＦＬＴ３タンパク質など）への親和性を有するが、それは、ＦＬＴ３結合親分子が特異的であるか、または特異的であるように設計されたＦＬＴ３エピトープ以外の選択された物質、例えば、リガンド、タンパク質、抗原などとの交差反応性が低減しているか、実施形態によっては、その交差反応性が増大している。後者に関して、親和性成熟ＦＬＴ３結合分子は、実施形態によっては、親和性成熟ＦＬＴ３結合分子を、ヒトＦＬＴ３と、動物モデルの対応する標的、例えば、マウスＦＬＴ３またはカニクイザルＦＬＴ３との両方と反応させる場合に、動物モデルの方でより成功裏に試験される。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、標的、例えば、疾患細胞上の標的、または疾患状態を支持する他の細胞上の標的、例えば、腫瘍の成長を支持する間質細胞上の標的、あるいは疾患を媒介とする免疫抑制を支持する免疫細胞上の標的に特異的に結合する抗原特異的結合ドメインポリペプチドを含む。いくつかの例では、抗原特異的結合ドメインは、抗体、単鎖抗体、Ｆａｂｓ、Ｆｖ、Ｔ細胞受容体結合ドメイン、リガンド結合ドメイン、受容体結合ドメイン、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体、ミニボディ、ナノボディ、ペプチボディ、または他のさまざまな抗体模倣体（アフィマー、アフィチン、アルファボディ、アトリマー、ＣＴＬＡ４ベースの分子、アドネクチン、アンチカリン、クニッツドメインベースのタンパク質、アビマー、ノッチン、フィノマー、ダーピン、アフィボディ、アフィリン、モノボディ、およびアルマジロリピートタンパク質ベースのタンパク質など）を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合断片、あるいは抗ＦＬＴ３またはその抗原結合断片の変異体である。本明細書で使用されるように、「変異体」という用語は、本明細書に記載されるように、抗体またはその抗原結合断片の変異体および誘導体を指す。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＦＬＴ３の抗体またはその抗原結合断片のアミノ酸配列変異体が企図されている。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合断片のアミノ酸配列変異体は、その結合親和性および／または他の生物学的特性を改善するように企図されている。アミノ酸変異体を調製するための例示的な方法は、限定されないが、抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列への、あるいはペプチド合成による、適切な改変を導入することを含む。そのような改変は、例えば、抗体またはその抗原結合断片のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／または上記残基への挿入および／または上記残基の置換を含む。
最終構築物に到達するために、欠失、挿入、および置換のあらゆる組み合わせを行うことができるが、ただし、最終構築物は所望の特徴（例えば、抗原－結合）を有する。特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する変異体が提供される。置換突然変異誘発の対象部位は、ＣＤＲとフレームワーク領域を含む。そのような置換の例が以下に記載される。アミノ酸置換は、関心対象の抗体またはその抗原結合断片に導入されてもよく、生成物は、所望の活性、例えば、保持された／改善された抗原結合、減少した免疫原性、変化した抗体依存性の細胞毒性（ＡＤＣＣ）、または改善されたＴ細胞媒介性の細胞毒性（ＴＤＣＣ）についてスクリーニングされてもよい。保存的および非保存的なアミノ酸置換が変異体の調製について企図されている。
変異体抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合断片を作製する置換の別の例では、親抗体またはその抗原結合断片の１つ以上の超可変領域残基が置換されている。概して、変異体は、親抗体と比較して、所望の特性の改善、例えば、親和性の増加、親和性の減少、免疫原性の減少、ｐＨ依存性の結合の増加に基づいて、選択される。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、例えば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ラマ由来のｓｄＡｂの可変ドメイン（ＶＨＨ）、ＦＬＴ３に特異的なペプチド、リガンド、または小分子実体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体由来のドメインを含むＦＬＴ３に結合する任意のドメインである。特定の実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは単一ドメイン抗体である。他の実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインはペプチドである。さらなる実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは小分子である。
一般に、単一ドメイン抗体という用語は、その最も広い意味で本明細書で使用されるように、特定の生体源または特定の調製方法に限定されないことに着目されたい。単一ドメイン抗体は、その相補性決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である抗体である。例としては、限定されないが、重鎖抗体、軽鎖を生来欠いている抗体、従来の４鎖状抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された抗体、および抗体由来のもの以外の単一足場が挙げられる。単一ドメイン抗体は、当該技術分野の任意のもの、または、将来の単一ドメイン抗体であり得る。単一ドメイン抗体は、限定されないが、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤギ、ウサギ、ウシを含む任意の種に由来し得る。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の単一ドメイン抗体は、（１）自然発生の重鎖抗体のＶＨＨドメインの単離；（２）自然発生のＶＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列の発現；（３）自然発生のＶＨＨドメインの「ヒト化」、またはそのようなヒト化されたＶＨＨドメインをコードする核酸の発現；（４）任意の動物種に由来する、および、とりわけ人間などの哺乳動物種に由来する、自然発生のＶＨドメインの「ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚａｔｉｏｎ）」、または、そのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現；（５）「ドメイン抗体」または「Ｄａｂ」の「ラクダ化」、あるいはそのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現；（６）タンパク質、ポリペプチド、または他のアミノ酸配列を調製するための合成技術または半合成技術の使用；（７）当該技術分野で知られている核酸合成の技術を使用した単一ドメイン抗体をコードする核酸の調製と、その後の上記のように得られた核酸の発現；ならびに／あるいは、（８）前述の１つ以上の任意の組み合わせ、によって得られる。
１つの実施形態では、単一ドメイン抗体は、ＦＬＴ３に対して向けられた自然発生重鎖抗体のＶＨＨドメインに対応する。本明細書にさらに記載されるように、そのようなＶＨＨ配列は通常、ＦＬＴ３でラマの種を適切に免疫化する（つまり、免疫応答、および／または、ＦＬＴ３に対して向けられた重鎖抗体を生じさせるために）ことによって、上記ラマ由来の適切な生体試料（血液試料、血清試料、またはＢ細胞の試料など）を得ることによって、および、あらゆる適切な技術を用いて上記試料から始まるＦＬＴ３に対して向けられたＶＨＨ配列を生成することにより、生成または入手することができる。
別の実施形態では、ＦＬＴ３に対するそのような自然発生ＶＨＨドメインは、ラクダ科のＶＨＨ配列の未処理のライブラリから、例えば、ＦＬＴ３を使用して、あるいは、当該技術分野で知られている１つ以上のスクリーニング技術を用いて、その少なくとも１つの部分、断片、抗原決定基、またはエピトープを使用して、そのようなライブラリをスクリーニングすることによって得られる。そのようなライブラリおよび技術は、例えば、ＷＯ９９／３７６８１、ＷＯ０１／９０１９０、ＷＯ０３／０２５０２０、およびＷＯ０３／０３５６９４に記載される。代替的に、未処理のＶＨＨライブラリに由来する改善された合成または半合成のライブラリが使用され、例えば、ＷＯ００／４３５０７に記載されるような、無作為の突然変異誘発および／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術によって、未処理のＶＨＨライブラリから得られたＶＨＨライブラリが使用される。
さらなる実施形態では、ＦＬＴ３に対して向けられたＶＨＨ配列を得るためのさらに別の技術は、重鎖抗体を発現することができる（つまり、ＦＬＴ３に対して向けられた免疫応答および／または重鎖抗体を生じさせるために）トランスジェニック哺乳動物を適切に免疫化すること、上記トランスジェニック哺乳動物から適切な生体試料（血液試料、血清試料、またはＢ細胞の試料など）を得ること、および、当該技術分野で知られているあらゆる適切な技術を使用して、上記試料から開始して、ＦＬＴ３に対して向けられたＶＨＨ配列を生成することを含む。例えば、この目的のために、重鎖抗体発現ラットまたはマウス、およびＷＯ０２／０８５９４５とＷＯ０４／０４９７９４に記載されるような方法と技術を使用することができる。
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体は、非ヒト抗体および／または自然発生のＶＨＨドメイン、例えば、ラマ抗ＦＬＴ３抗体のアミノ酸配列に対応するが、「ヒト化」、すなわち、前記非ヒト抗ＦＬＴ３および／または自然発生のＶＨＨ配列のアミノ酸配列中の１つ以上のアミノ酸残基（特にフレームワーク配列中）を、ヒト由来の従来の４鎖抗体からのＶＨドメイン中の対応する位置（複数）で生じるアミノ酸残基（例えば、上記に示したとおり）の１つ以上に置き換えることによってヒト化されているアミノ酸配列を有する単一ドメイン抗体を含んでいる。これは、例えば、さらに以下の記載に基づいて、当業者に明らかな当該技術分野で知られているやり方で実施可能である。再度、本開示のそのようなヒト化抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体がそれ自体で知られている任意の適切なやり方で得られ（つまり、上のポイント（１）－（８）で示されたように）、従って、出発物質として非ヒト抗ＦＬＴ３抗体および／または自然発生のＶＨＨ配列を含むポリペプチドを使用して得られたポリペプチドに厳密には限定されない。いくつかのさらなる実施形態では、単一ドメイン抗ＦＬＴ３抗体は、本明細書に記載されるように、自然発生のＶＨドメインのアミノ酸配列に対応するが、「ラクダ化している」、つまり、従来の４鎖抗体からの自然発生のＶＨドメインのアミノ酸配列中の１つ以上のアミノ酸残基を、重鎖抗体のＶＨＨドメイン中の対応する位置で生じるアミノ酸残基の１つ以上に置き換えることによって「ラクダ化している」、アミノ酸配列を有する単一ドメイン抗体を含む。このような「ラクダ化」置換は、好ましくは、ＶＨ－ＶＬ界面を形成するおよび／またはＶＨ－ＶＬ界面に存在するアミノ酸位置、および／またはいわゆるラクダ科の特徴的な残基において挿入される。例えば、ＷＯ９４／０４６７８およびＤａｖｉｅｓ ａｎｄ Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ（１９９４ ａｎｄ １９９６）を参照されたい。好ましくは、ラクダ化単一ドメインを作製または設計するための出発物質または出発点として使用されるＶＨ配列は、好ましくは哺乳動物からのＶＨ配列、より好ましくはＶＨ３配列などのヒトのＶＨ配列である。しかしながら、特定の実施形態では、本開示のそのようなラクダ化抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体は、当該技術分野で知られている適切なやり方（つまり、上のポイント（１）－（８）で示されように）で得られ、したがって、出発物質としての自然発生のＶＨドメインを含むポリペプチドを用いて得られたポリペプチドに厳密には限定されないということに注意されたい。例えば、本明細書にさらに記載されるように、「ヒト化」および「ラクダ化」の両方は、自然発生のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列を提供すること、および、その後、新しいヌクレオチド配列が「ヒト化」または「ラクダ化」単一ドメイン抗体をそれぞれコードするようなやり方で前記ヌクレオチド配列中の１つ以上のコドンを変えることによって実行される。その後、この核酸は、本開示の所望の抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体を提供するために発現可能である。代替的に、他の実施形態では、自然発生のＶＨＨドメインあるいはＶＨドメインのアミノ酸配列にそれぞれ基づいて、本開示の所望のヒト化またはラクダ化抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体のアミノ酸配列がそれぞれ設計され、その後、ペプチド合成の既知の技術を用いてデノボ合成される。いくつかの実施形態では、自然発生のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列にそれぞれ基づいて、本開示の所望のヒト化またはラクダ化抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体をコードするヌクレオチド配列がそれぞれ設計され、その後、核酸合成の既知の技術を用いてデノボ合成され、その後、本開示の所望の抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体を得るために、このように得られた核酸を、既知の発現技術を用いて発現させる。
自然発生のＶＨ配列またはＶＨＨ配列から始まる、本開示の抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体および／またはこの抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体をコードする核酸を得るための他の適切な方法および技術は、例えば、本開示のＦＬＴ３単一ドメイン抗体またはこの抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体をコードするヌクレオチド配列または核酸を提供するために、適切なやり方で、１つ以上の自然発生のＶＨ配列（１つ以上のフレームワーク（ＦＲ）配列および／または相補性決定領域（ＣＤＲ）配列など）の１つ以上の部分、１つ以上の自然発生のＶＨＨ配列（１つ以上のＦＲ配列またはＣＤＲ配列など）の１つ以上の部分、および／または、１つ以上の合成または半合成の配列を組み合わせることを含む。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、重鎖可変相補性決定領域ＣＤＲ１、重鎖可変ＣＤＲ２、重鎖可変ＣＤＲ３、軽鎖可変ＣＤＲ１、軽鎖可変ＣＤＲ２、および軽鎖可変ＣＤＲ３を含む抗ＦＬＴ３特異的抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、または抗原結合断片、例えば、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、およびＦｖ断片、１つ以上のＣＤＲで構成された断片、単鎖抗体（例えば、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ））、ジスルフィド安定化（ｄｓＦｖ）Ｆｖ断片、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体）、ｐＦｖ断片、重鎖単量体または二量体、軽鎖単量体または二量体、ならびに１つの重鎖と１つの軽鎖からなる二量体からのドメインを含むＦＬＴ３に結合する任意のドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体は、重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、式：ｆ１－ｒ１－ｆ２－ｒ２－ｆ３－ｒ３－ｆ４によって表わされるように、３つの相補性決定領域／配列によって中断された４つのフレームワーク領域／配列（ｆ１－ｆ４）で構成されるアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ここで、ｒ１、ｒ２、およびｒ３はそれぞれ、相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３であり、ｆ１、ｆ２、ｆ３、およびｆ４はフレームワーク残基である。本開示のＦＬＴ３結合タンパク質のフレームワーク残基は、例えば、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、または９４個のアミノ酸残基を含み、相補性決定領域は例えば、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６個のアミノ酸残基を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される結合タンパク質は、配列番号１－７６および３８９－３９０から選択された配列、そのサブ配列、およびその変異体を有するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、配列番号１－７６および３８９－３９０から選択された配列、そのサブ配列、およびその変異体に少なくとも６０％－９５％またはそれ以上の相同性を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、配列番号１－７６および３８９－３９０から選択された配列、そのサブ配列、およびその変異体に少なくとも６０％、６１％、６２％、６３％、６３％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の相同性を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、配列番号１－７６および３８９－３９０から選択された配列、そのサブ配列、およびその変異体に少なくとも６０％－９５％またはそれ以上の同一性を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、配列番号１－７６および３８９－３９０から選択された配列、そのサブ配列、およびその変異体に少なくとも６０％、６１％、６２％、６３％、６３％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の同一性を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１は、配列番号７７－１０８からなる群から選択されたアミノ酸配列、または、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２は、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択されたアミノ酸配列、または、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号１５５－１９５からなる群から選択されたアミノ酸配列、または、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２は、配列番号８９、９１、９２、９３、および１００からなる群から選択されたアミノ酸配列、または配列番号８９、９１、９２、９３、および１００からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２は、配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、３９３、および３９４からなる群から選択されたアミノ酸配列、または配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、３９３、および３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号１７３、１８６、または１９５からなる群から選択されたアミノ酸配列、あるいは配列番号１７３、１８６、または１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む。
様々な実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号１－７６および３８９－３９０から選択されたアミノ酸配列に少なくとも約６０％、約６１％、少なくとも約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一である。
様々な実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号１－７６および３８９－３９０から選択されたアミノ酸配列に少なくとも約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一である。
様々な実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインの相補性決定領域は、配列番号７７－１０８のいずれか１つで記載されるアミノ酸配列に少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一である。
様々な実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインの相補性決定領域は、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４で記載されるアミノ酸配列に少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一である。
様々な実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインの相補性決定領域は、配列番号１５５－１９５で記載されるアミノ酸配列に少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一である。
様々な実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインの相補性決定領域は、配列番号８９、９１、９２、９３、および１００のいずれか１つで記載されるアミノ酸配列に少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一であり、ＦＬＴ３結合ドメインはヒト化ＦＬＴ３結合ドメインを含む。
様々な実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインの相補性決定領域は、配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、および１５４のいずれか１つで記載されるアミノ酸配列に少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一であり、ＦＬＴ３結合ドメインはヒト化ＦＬＴ３結合ドメインを含む。
様々な実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインの相補性決定領域は、配列番号１７３、１８６、および１９５のいずれか１つで記載されるアミノ酸配列に少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一であり、ＦＬＴ３結合ドメインはヒト化ＦＬＴ３結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインは、表１で提供されるような３つのＣＤＲ配列のセットを含む。
Figure 2023527609000002
Figure 2023527609000003
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ）、およびマウスのＦＬＴ３と交差反応性である。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインはヒトＦＬＴ３に特異的である。特定の実施形態では、本明細書に開示されたＦＬＴ３結合ドメインは、ヒトＫｄ（ｈＫｄ）でヒトＦＬＴ３に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示されたＦＬＴ３結合ドメインは、カニクイザルＫｄ（ｃＫｄ）でカニクイザルＦＬＴ３に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示されたＦＬＴ３結合ドメインは、マウスＫｄ（ｍＫｄ）でマウスＦＬＴ３に結合する。特定の実施形態では、本明細書で開示されるＦＬＴ３結合ドメインは、それぞれカニクイザルＫｄ（ｃＫｄ）およびヒトＫｄ（ｈＫｄ）で、カニクイザルＦＬＴ３およびヒトＦＬＴ３の両方と結合する。特定の実施形態では、本明細書で開示されるＦＬＴ３結合ドメインは、それぞれカニクイザルＫｄ（ｃＫｄ）、マウスＫｄ（ｍＫｄ）、およびヒトＫｄ（ｈＫｄ）で、カニクイザルＦＬＴ３、マウスＦＬＴ３、およびヒトＦＬＴ３と結合する。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、同等の結合親和性（すなわち、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄ値が±１０％を超えて異ならない）でヒト、マウス、およびカニクイザルのＦＬＴ３に結合する。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．１ｎＭ～約５００ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．１ｎＭ～約４５０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．１ｎＭ～約４００ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．１ｎＭ～約３５０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．１ｎＭ～約３００ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．１ｎＭ～約２５０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．１ｎＭ～約２００ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．１ｎＭ～約１５０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．１ｎＭ～約１００ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．１ｎＭ～約９０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．２ｎＭ～約８０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．３ｎＭ～約７０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．４ｎＭ～約５０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．５ｎＭ～約３０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．６ｎＭ～約１０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．７ｎＭ～約８ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．８ｎＭ～約６ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約０．９ｎＭ～約４ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、ｈＫｄ、ｍＫｄ、およびｃＫｄは、約１ｎＭ～約２ｎＭの範囲である。
いくつかの実施形態では、前述のＦＬＴ３結合ドメインのいずれか（例えば、配列番号１－７６および３８９－３９０の抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体）は、精製を容易にするために親和性ペプチドでタグ付けされる。いくつかの実施形態では、親和性ペプチドタグは、６Ｘ－ｈｉｓ（配列番号３７４）とも呼ばれる６つの連続するヒスチジン残基である。特定の実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合ドメインは、可溶性のＦＬＴ３よりも膜結合ＦＬＴ３を優先的に結合する。膜結合ＦＬＴ３とは、ＦＬＴ３を発現する細胞膜表面内または細胞膜表面上でのＦＬＴ３の存在を指す。可溶性のＦＬＴ３は、ＦＬＴ３を発現するか、ＦＬＴ３を発現した細胞の細胞膜表面内または細胞膜表面上にもはや存在しないＦＬＴ３を指す。特定の例では、可溶性のＦＬＴ３は、対象の血液および／またはリンパ循環の中に存在する。１つの実施形態では、ＦＬＴ３結合ドメインは、可溶性のＦＬＴ３よりも少なくとも５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、１００倍、５００倍、または１０００倍以上、膜結合ＦＬＴ３に結合する。１つの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、可溶性のＦＬＴ３よりも３０倍以上、膜結合ＦＬＴ３に優先的に結合する。可溶性のＦＬＴ３よりも膜結合ＦＬＴ３に対する抗原結合タンパク質の優先的な結合の判定は、結合アッセイを使用して容易に判定され得る。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質はかなり小さく、実施形態によっては、２５ｋＤａ以下、２０ｋＤａ以下、１５ｋＤａ以下、または１０ｋＤａ以下であることが企図される。特定の例では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、ペプチドまたは小分子の実体である場合に５ｋＤａ以下である。
他の実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質は、ＦＬＴ３の小分子実体（ＳＭＥ）結合剤を含む。ＳＭＥ結合剤は、平均して約５００～２０００Ｄａのサイズの小分子であり、ソルターゼライゲーションまたはコンジュゲーションなどの既知の方法によってＦＬＴ３結合タンパク質に結合される。これらの例では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、ソルターゼ認識配列、例えば、ＬＰＥＴＧ（配列番号３７６）を含むドメインを含む。ソルターゼ認識配列を含むＦＬＴ３結合タンパク質にＳＭＥ結合剤を結合するために、タンパク質はソルターゼとＳＭＥ結合剤でインキュベートされ、それによってソルターゼはＳＭＥ結合剤を認識配列に結合する。さらに他の実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質は、ＦＬＴ３を結合するためのノッチンペプチドを含む。ノッチンはシステインノット足場を備えたジスルフィド安定ペプチドであり、約３．５ｋＤａの平均サイズを有する。ノッチンは、ＦＬＴ３などの特定の腫瘍分子への結合について企図されてきた。さらなる実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質は天然のＦＬＴ３リガンドを含む。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は１つを超えるドメインを含み、ドメインの柔軟な結合を伴う単一ポリペプチド設計である。これにより、ＦＬＴ３結合タンパク質の容易な産生と製造が可能になる。なぜなら、これらはベクターに容易に組み入れられる単一のｃＤＮＡ分子によってコード可能であるためである。さらに、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質が単量体の単一ポリペプチド鎖であるいくつかの実施形態では、鎖の対形成の問題がなく、二量体化のための要件もない。そのような実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質は、凝集する傾向が減少していることが企図される。
１つを超えるドメインを含むＦＬＴ３結合タンパク質において、ドメインは１つ以上の内部リンカーによって連結されている。特定の実施形態では、内部リンカーは「短い」、すなわち、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個のアミノ酸残基からなる。したがって、特定の例では、内部リンカーは約１２個以下のアミノ酸残基からなる。０個のアミノ酸残基の場合、内部リンカーはペプチド結合である。特定の実施形態では、内部リンカーは「長い」、つまり、１５、２０、または２５個のアミノ酸残基からなる。いくつかの実施形態では、内部リンカーは約３～約１５の、例えば、８、９、または１０個の連続アミノ酸残基からなる。内部リンカーとのアミノ酸組成物に関して、ペプチドは、ＦＬＴ３結合タンパク質に対して柔軟性を与え、結合ドメインに干渉せず、同様にプロテアーゼからの切断に抵抗しない特性によって選択される。例えば、グリシンとセリンの残基は一般にプロテアーゼ耐性を与える。ＦＬＴ３結合タンパク質においてドメインに連結するのに適切な内部リンカーの例としては、限定されないが、（ＧＳ）ｎ（配列番号３７７）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号３７８）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号３７９）、（ＧＧＳＧ）ｎ（配列番号３８０）、（ＧＧＳＧＧ）ｎ（配列番号３８１）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号３８２）、（ＧＧＧＧＧ）ｎ（配列番号３８３）、または（ＧＧＧ）ｎ（配列番号３８４）が挙げられ、ここで、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。１つの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）（配列番号３８５）、（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）（配列番号３８６）、または（ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ）（配列番号３８７）である。
場合によっては、ＦＬＴ３結合タンパク質が１つを超えるドメインを含む場合、ＦＬＴ３結合タンパク質内のドメインは、哺乳動物または細菌のトランスグルタミナーゼ酵素の使用を含む酵素的部位特異的コンジュゲーション法を用いてコンジュゲートされる。微生物由来のトランスグルタミナーゼ（ｍＴＧ）は、現代の研究やバイオテクノロジーにおいて汎用性の高いツールである。比較的純粋な酵素が大量に入手できること、使いやすいこと、カルシウムやグアノシン－５’－三リン酸（ＧＴＰ）による調節がないことなどから、ｍＴＧは食品産業やバイオテクノロジーの分野で使用される主要な架橋酵素となっている。現在、ｍＴＧは、タンパク質やペプチドを低分子、ポリマー、表面、ＤＮＡや他のタンパク質に結合させる多くの用途で使用されている。Ｐａｖｅｌ Ｓｔｒｐ，Ｖｅｒａｃｉｔｙ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２５，５，８５５－８６２を参照されたい。
いくつかの例では、１つを超えるドメインを含むＦＬＴ３結合タンパク質が提供され、ここで、ドメインの１つは定常領域にアクセプターグルタミンを含み、これは、リジンベースのリンカー（例えば、アルキルアミン、オキソアミンを含む、ＴＧａｓｅの基質である任意の一級アミン鎖）を介して別のドメインにコンジュゲート可能であり、ここで、コンジュゲーションは、抗原結合部位の外側（例えば、可変領域の外側、定常領域内）の標的化部分に存在する１つ以上のアクセプターグルタミン残基上でのみ起こる。したがって、可変領域内のグルタミン、例えば、少なくとも部分的に表面が露出されたグルタミン上では、コンジュゲーションは起こらない。ＦＬＴ３結合タンパク質は、いくつかの例では、ＴＧａｓｅの存在下でドメインの１つをリジンベースのリンカーと反応させることによって形成される。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質内の１つ以上のドメインが直接連結される場合、ハイブリッドベクターが作られ、直接連結されたドメインをコードするＤＮＡそれ自体が互いに直接ライゲートされる。リンカーが使用されるいくつかの実施形態では、１つのドメインをコードするＤＮＡがリンカー部分の一端をコードするＤＮＡにライゲートされ、別のドメインをコードするＤＮＡがリンカー部分の他端にライゲートされたハイブリッドベクターが作製される。
いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、例えば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、およびラクダ由来の単一ドメイン抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）である。他の実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、非Ｉｇ結合ドメイン、すなわち、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ）、アフィリン（ａｆｆｉｌｉｎｓ）、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）分子、アフィマー（ａｆｆｉｍｅｒｓ）、アフィチン（ａｆｆｉｔｉｎｓ）、アルファボディ（ａｌｐｈａｂｏｄｉｅｓ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒｓ）、ＤＡＲＰｉｎｓ、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒｓ）、クニッツドメインペプチド、およびモノボディなどの抗体模倣物である。さらなる実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質は、ＦＬＴ３に結合するか、またはＦＬＴ３に会合するリガンドまたはペプチドである。またさらなる実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質はノッチンである。またさらなる実施形態では、ＦＬＴ３に対する結合ドメインは小分子実体である。
特定の実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質に取り込まれ得る。いくつかの実施形態では、三重特異性タンパク質は、ＣＤ３結合ドメイン、半減期延長ドメイン、および本開示に係るＦＬＴ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３結合三重特異性タンパク質は三重特異性抗体を含む。
多特異性ＦＬＴ３標的化タンパク質、例えば、ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質（本明細書ではＦＬＴ３標的化ＴｒｉＴＡＣ（商標）タンパク質または分子とも呼ばれる）
１つの態様において、本開示に係るＦＬＴ３結合タンパク質を含む多特異性タンパク質または多価タンパク質が本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ＣＤ３に特異的に結合するドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ヒトＣＤ３に特異的に結合するドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ＣＤ３－ガンマに特異的に結合するドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ＣＤ３－デルタに特異的に結合するドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ＣＤ３－イプシロンに特異的に結合するドメインをさらに含む。
さらなる実施形態では、多特異性タンパク質は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に特異的に結合するドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ＴＣＲのアルファ鎖に特異的に結合するドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ＴＣＲのベータ鎖に特異的に結合するドメインをさらに含む。
特定の実施形態では、多特異性タンパク質のＣＤ３結合ドメインは、ヒトＣＤ３との有力なＣＤ３結合親和性を呈するだけではなく、それぞれのカニクイザルＣＤ３タンパク質との優れた交差反応性も示す。例によっては、多特異性タンパク質のＣＤ３結合ドメインは、カニクイザルからのＣＤ３と交差反応性である。特定の例では、ＣＤ３結合のヒトＫＤ：カニクイザルＫＤ（ｈＫｄ：ｃＫｄ）の比率は、２０：１～１：２である。
いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質のＣＤ３結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、あるいはＣＤ３結合抗体の抗原結合断片、例えば、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、１つ以上のＣＤＲで構成された断片、単鎖抗体（例えば、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド安定化（ｄｓＦｖ）Ｆｖ断片、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体）、ｐＦｖ断片、重鎖単量体または二量体、軽鎖単量体または二量体、ならびに１つの重鎖と１つの軽鎖からなる二量体からのドメインを含む、ＣＤ３に結合する任意のドメインである。いくつかの例において、本明細書に記載される単一ドメイン血清アルブミン結合タンパク質を含む多特異性タンパク質が最終的に使用される同じ種に由来することがＣＤ３結合ドメインにとっては有益である。例えば、ヒトで使用するためには、抗体または抗体断片の抗原結合ドメインからのヒトまたはヒト化残基を含めることが、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質を含む多特異性タンパク質のＣＤ３結合ドメインには有益なことがある。本開示の多特異性（例えば、三重特異性）ＦＬＴ３標的化タンパク質のＣＤ３結合ドメインのための例示的なアミノ酸配列は、配列番号３７３として提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質を含む多特異性タンパク質の血清アルブミン結合ドメイン（本明細書では半減期延長ドメインとも呼ばれる）は、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体からのドメインを含む血清アルブミンに結合する任意のドメインであり得る。いくつかの実施形態では、血清アルブミン結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、例えば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、およびラクダ科由来のｓｄＡｂの可変ドメイン（ＶＨＨ）、またはＨＳＡ結合抗体の抗原結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、１以上のＣＤＲで構成される断片、単鎖抗体（例えば、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ））、ジスルフィド安定化（ｄｓＦｖ）Ｆｖ断片、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体）、ｐＦｖ断片、重鎖単量体または二量体、軽鎖単量体または二量体、および１つの重鎖と１つの軽鎖からなる二量体、ペプチド、リガンド、または血清アルブミンに特異的な小分子実体である。特定の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは単一ドメイン抗体である。他の実施形態では、血清アルブミン結合ドメインはペプチドである。さらなる実施形態では、血清アルブミン結合ドメインは小分子である。単鎖可変断片ＣＤ３結合タンパク質を含む多特異性結合タンパク質の血清アルブミン結合ドメインはかなり小さく、いくつかの実施形態では、２５ｋＤ以下、２０ｋＤ以下、１５ｋＤ以下、または、１０ｋＤ以下であることが企図される。特定の例では、血清アルブミン結合がペプチドまたは小分子実体であれば、血清アルブミン結合は５ｋＤ以下である。本開示の多特異性（例えば、三重特異性）ＦＬＴ３標的化タンパク質の血清アルブミン結合ドメインの例示的なアミノ酸配列は、配列番号３７２として提供される。
単鎖可変断片ＣＤ３結合タンパク質を含む、本明細書に記載される多特異性結合タンパク質の半減期延長ドメインは、単鎖可変断片ＣＤ３結合タンパク質自体の変化した薬力学および薬物動態を提供する。上記のように、半減期延長ドメインは消失半減期を延長する。半減期延長ドメインはさらに、単鎖可変断片ＣＤ３結合タンパク質の組織分布、浸透、および拡散の変化を含む薬力学的な特性を変化させる。いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、半減期延長ドメインのないタンパク質と比較して、改善された組織（腫瘍を含む）標的化、組織分布、組織浸透、組織内での拡散、増強した有効性をもたらす。１つの実施形態では、治療方法は、単鎖可変断片ＣＤ３結合タンパク質を含む少ない量の多特異性結合タンパク質を有効かつ効率的に利用し、非腫瘍細胞の細胞毒性などのオフターゲットの減少などの副作用の減少を引き起こす。
ＦＬＴ３結合ドメインを含む本明細書に記載される多特異性結合タンパク質の半減期延長ドメインは、ＦＬＴ３結合ドメイン自体の変化した薬力学および薬物動態を提供する。上記のように、半減期延長ドメインは消失半減期を延長する。半減期延長ドメインは、ＦＬＴ３結合ドメインの組織分布、浸透、および拡散の変化を含む、薬物動態学的特性も変化させる。いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは、半減期延長ドメインのないタンパク質と比較して、改善された組織（腫瘍を含む）標的化、組織分布、組織浸透、組織内での拡散、増強した有効性をもたらす。１つの実施形態では、治療方法は、ＦＬＴ３結合ドメインを含む減少量の多特異性結合タンパク質を効果的かつ効率的に利用して、非腫瘍細胞の細胞毒性などのオフターゲットの減少などの副作用の減少を引き起こす。
さらに、半減期延長ドメインの結合親和性は、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質を含む多特異性結合タンパク質において、特定の消失半減期を標的とするように選択される。ゆえに、いくつかの実施形態では、半減期延長ドメインは高い結合親和性を有する。他の実施形態では、半減期延長ドメインは中程度の結合親和性を有する。さらに他の実施形態では、半減期延長ドメインは、低いまたは最低限の（ｍａｒｇｉｎａｌ）結合親和性を有する。典型的な結合親和性は、１０ｎＭ以下（高い）の、１０ｎＭ～１００ｎＭの間（中程度）の、および１００ｎＭを超える（低い）Ｋｄを含む。上記のように、血清アルブミンに対する結合親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）などの既知の方法によって決定される。
本開示のＦＬＴ３標的化多特異性タンパク質は、特定の実施形態では、（Ａ）ＣＤ３に結合する第１のドメイン、（Ｂ）半減期延長ドメインである第２のドメイン、および（Ｃ）本明細書に記載されるようなＦＬＴ３結合タンパク質である第３のドメインを含む。特定の実施形態では、第１のドメインは、ＣＤ３と特異的に結合するｓｃＦｖを含む。ＣＤ３タンパク質は、例えば、ヒトＣＤ３タンパク質を含む。特定の実施形態では、第２のドメインは、バルク血清タンパク質と特異的に結合するｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、バルク血清タンパク質は、アルブミン、例えば、血清アルブミン、例えば、ヒト血清アルブミンである。
ドメイン（Ａ）、（Ｂ）、および（Ｃ）は、いくつかの実施形態では、以下の配向：Ｈ２Ｎ－（Ａ）－Ｌ１－（Ｃ）－Ｌ２－（Ｂ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｂ）－Ｌ１－（Ａ）－Ｌ２－（Ｃ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｃ）－Ｌ１－（Ｂ）－Ｌ２－（Ａ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｃ）－Ｌ１－（Ａ）－Ｌ２－（Ｂ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ａ）－Ｌ１－（Ｂ）－（Ｃ）－Ｌ２－ＣＯＯＨ、またはＨ２Ｎ－（Ｂ）－（Ｃ）－（Ａ）－ＣＯＯＨのいずれか１つで、リンカーＬ１およびＬ２を介して連結される。
この開示のＦＬＴ３標的化多特異性タンパク質はいくつかの実施形態では、含む、少なくとも約７０％から少なくとも約１００％であるアミノ酸配列、配列番号１９６－２７２からなる群から選ばれた配列と３９１－３９２と同一。いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３標的化多特異性タンパク質は、いくつかの実施形態では、配列番号１９６－２７２および３９１－３９２からなる群から選択される配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のＦＬＴ３標的化多特異性タンパク質は、いくつかの実施形態では、白血病またはリンパ腫細胞などの細胞のＴ細胞媒介性死滅における多特異性タンパク質の効力を測定するＴ細胞依存性細胞の細胞毒性（ＴＤＣＣ）アッセイにおいて、約０．５ｐＭ～約６０００ｐＭのＥＣ５０、例えば、約０．５ｐＭ～約１５００ｐＭ、約１ｐＭ～約４０００ｐＭ、約１０ｐＭ～約２０００ｐＭ、約２０ｐＭ～約１０００ｐＭ、約３０ｐＭ～約４０ｐＭ～約５００ｐＭ、または約５０ｐＭ～約１００ｐＭのＥＣ５０を含む（例えば、表５および表６で提供されるＴＤＣＣ ＥＣ５０値を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ＴＤＣＣアッセイにおけるＥＣ５０は、約０．５ｐＭ～約６０００ｐＭ、例えば、約０．５ｐＭ～約３５ｐＭである。
条件付き活性多特異性ＦＬＴ３標的化タンパク質、例えば、条件付き活性ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質（本明細書では、ＦＬＴ３標的化ＰｒｏＴｒｉＴＡＣ（商標）または三重特異性促進タンパク質または分子とも呼ばれる）
本開示の一実施形態は、本明細書に開示されるＦＬＴ３結合ドメインを含む条件付き活性多特異性タンパク質を提供する（例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、本開示のＦＬＴ３結合ドメインを含むＦＬＴ３標的化三重特異性促進ＴＡＣ（商標）タンパク質を提供する）。例は図２８に示されている。いくつかの実施形態では、条件付き活性多特異性タンパク質はさらに、ＣＤ３に特異的に結合するドメインと、ヒト血清アルブミンなどのバルク血清タンパク質に特異的に結合する結合部分とを含む。いくつかの実施形態では、結合部分は、ＦＬＴ３結合ドメインまたはＣＤ３結合ドメインの、それらの標的との相互作用をマスキングすることができる。いくつかの実施形態では、本開示の結合部分は、マスキング部分と、プロテアーゼ切断可能リンカーなどの切断可能リンカーとを含む。いくつかの実施形態では、マスキング部分は、改変された非ＣＤＲループ配列および非切断可能なリンカーとを含む。結合部分は、立体的マスキングおよび特異的マスキングの両方により、条件付き活性ＦＬＴ３標的化三重特異性促進タンパク質の治療ウィンドウを相乗的に拡大することができる。いくつかの実施形態では、結合部分は、立体的マスキング（例えば、バルク血清アルブミンへの結合を介して）および特異的マスキング（例えば、抗ＦＬＴ３ドメインまたは抗ＣＤ３ｓｃＦｖドメインのＣＤＲに結合する非ＣＤＲループを介して）の両方を組み合わせる。場合によっては、結合部分内の非ＣＤＲループを改変しても、アルブミン結合に影響を与えない。プロテアーゼ切断可能なリンカーは、場合によっては、１回のタンパク質分解事象でＦＬＴ３標的化三重特異性促進タンパク質の活性化を可能にし、それによって腫瘍微小環境における三重特異性促進分子のより効率的な変換を可能にする。さらに、腫瘍関連タンパク質分解活性化は、場合によっては、活性化後の腫瘍外活性が最小限である活性なＴ細胞エンゲージャーを明らかにする。本開示は、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるようなＦＬＴ３結合部分を含む半減期延長Ｔ細胞エンゲージャーフォーマット（ＰｒｏＴｒｉＴＡＣ（商標））を提供し、これは、場合によっては、条件付き活性Ｔ細胞エンゲージを操作する新規かつ改良されたアプローチを意味する。
条件付き活性三重特異性促進フォーマットにおけるＦＬＴ３結合ドメインの半減期は、いくつかの実施形態では、安全スイッチとして作用する上記の結合部分を用いることによって全身循環中に延長され、上記安全スイッチは促進フォーマットの多糖タンパク質を、それがリンカーの切断によって条件付きで活性化され、その標的抗原と結合することができる腫瘍微小環境に到達するまで、不活性状態に保つ。安全スイッチは、特定の例では、いくつかの利点を提供する。いくつかの例は、（ｉ）条件付き活性ＦＬＴ３標的化タンパク質の治療ウィンドウを拡大すること、（ｉｉ）条件付き活性ＦＬＴ３標的化タンパク質を全身循環中に維持することにより、標的媒介性の薬物動態を低減すること、（ｉｉｉ）全身循環中の望ましくない活性化タンパク質の濃度を低減し、それによって化学、製造、および制御に関連する不純物、例えば、予備活性化薬品、内在性ウイルス、宿主細胞タンパク質、ＤＮＡ、浸出物、消泡剤、抗生物質、毒素、溶媒、重金属の拡散を最小限に抑えること、（ｉｖ）全身循環中の望ましくない活性化タンパク質の濃度を減少させ、それによって、製品関連不純物、凝集物、分解物、酸化、脱アミド化、変性、ＭＡｂｓのＣ末端Ｌｙｓの損失などによる製品変異体の拡散を最小限に抑えること、（ｖ）循環における異常な活性化を防止すること、（ｖｉ）疾患組織または他の病態生理学的状態、例えば、腫瘍、自己免疫疾患、炎症、ウイルス感染、組織改造事象（例えば、心筋梗塞、皮膚創傷治癒）、または外部損傷（例えば、Ｘ線、ＣＴスキャン、紫外線曝露）からの活性化種の漏出に関連する毒性を減少させること、および、（ｖｉｉ）条件付き活性ＦＬＴ３標的化タンパク質の非特異的結合を減少させることを含む。さらに、活性化後、言い換えれば、安全スイッチの破壊後、条件付き活性ＦＬＴ３標的化タンパク質は、半減期の延長をもたらした安全スイッチから分離され、したがって、循環から除去される。
いくつかの実施形態では、条件付き活性ＦＬＴ３標的化タンパク質フォーマットは、ＦＬＴ３結合ドメインに著しく長い血清半減期を与え、循環におけるその望ましくない活性化の可能性を低減し、それによって「バイオベター（ｂｉｏｂｅｔｔｅｒ）」バージョンを生成する。
本明細書に記載される結合部分は、少なくとも１つの非ＣＤＲループを含む。いくつかの実施形態では、非ＣＤＲループは、本開示のＦＬＴ３結合ドメインに結合部分を結合させるための結合部位を提供する。場合によっては、結合部分は、例えば、立体閉塞を介して、特異的分子間相互作用を介して、またはその両方の組み合わせで、ＦＬＴ３結合ドメインのその標的抗原との結合をマスクする。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される結合部分は、例えば、バルク血清タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）を結合するために特異的な相補性決定領域（ＣＤＲ）をさらに含む。いくつかの例では、本開示の結合部分は、免疫グロブリン分子（Ｉｇ分子）に由来するドメインである。Ｉｇは、任意のクラスまたはサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭなど）であってよい。Ｉｇ分子のポリペプチド鎖は、ループで連結された一連の平行なβ鎖に折り畳まれている。可変領域では、ループのうち３つが、分子の抗原結合特異性を決定する「相補性決定領域」（ＣＤＲ）を構成している。ＩｇＧ分子は、ジスルフィド結合により相互接続された少なくとも２つの重鎖（Ｈ）と２つの軽鎖（Ｌ）、またはその抗原結合断片を含んでいる。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと省略）と重鎖定常領域とで構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと省略）と軽鎖定常領域とで構成される。軽鎖定常領域はＣＬという１つのドメインで構成されている。ＶＨおよびＶＬ領域はさらに、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に細分化することができ、これは配列が超可変であり、および／または抗原認識に関与し、および／または通常は構造的に定義されたループを形成し、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在している。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成されている。本開示のいくつかの実施形態では、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４のアミノ酸配列の少なくとも一部または全部は、本明細書に記載される結合部分の「非ＣＤＲループ」の一部である。図２９に示すように、免疫グロブリン分子の可変ドメインは、２枚のシートに配置された複数のβ鎖を有する。軽免疫グロブリン鎖と重免疫グロブリン鎖の両方の可変ドメインは、３つの超可変ループ、または相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。Ｖドメインの３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３）は、βバレルの一端でクラスター化する。ＣＤＲは、免疫グロブリンフォールドのβ鎖Ｂ－Ｃ、Ｃ’－Ｃ”、およびＦ－Ｇを接続するループであり、一方で、免疫グロブリンフォールドのβ鎖ＡＢ、ＣＣ’、Ｃ”－Ｄ、およびＥ－Ｆを接続する下部ループ、ならびに免疫グロブリンフォールドのＤ－Ｅ鎖を接続する上部ループは、非ＣＤＲループである。本開示のいくつかの実施形態では、定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３の少なくとも一部のアミノ酸残基は、本明細書に記載される結合部分の「非ＣＤＲループ」の一部である。非ＣＤＲループは、いくつかの実施形態では、ＩｇまたはＩｇ様分子のＣ１－セットドメインのＡＢ、ＣＤ、ＥＦ、およびＤＥのループ；ＩｇまたはＩｇ様分子のＣ２－セットドメインのＡＢ、ＣＣ’、ＥＦ、ＦＧ、ＢＣ、およびＥＣ’のループ；ＩｇまたはＩｇ様分子のＩ（中間）セットドメインのＤＥ、ＢＤ、ＧＦ、Ａ（Ａ１Ａ２）Ｂ、およびＥＦのループの１つ以上を含む。
可変ドメイン内では、ＣＤＲは抗原の認識と結合に関与するが、ＦＲ残基はＣＤＲの足場と考えられている。しかし、場合によっては、ＦＲ残基の一部が抗原の認識と結合に重要な役割を果たすものもある。Ａｂ結合に影響を与えるフレームワーク領域残基は、２つのカテゴリーに分けられる。一つは、抗原に接触し、結合部位の一部となるＦＲ残基であり、これらの残基の中には配列がＣＤＲと近いものがある。もう一つは、配列ではＣＤＲから遠くても、分子の３次元構造上ではＣＤＲに近い残基、例えば、重鎖のループなどである。
いくつかの実施形態では、非ＣＤＲループは、アルブミンなどのバルク血清タンパク質に特異的な抗原結合部位を生成するように改変される。非ＣＤＲループを改変するために、様々な技術、例えば、部位特異的突然変異誘発、ランダム突然変異誘発、非ＣＤＲループアミノ酸配列に対して異質である少なくとも１つのアミノ酸の挿入、アミノ酸置換を使用できることが企図される。いくつかの例では、抗原ペプチドは、非ＣＤＲループに挿入される。いくつかの例では、抗原ペプチドは、非ＣＤＲループに置換される。抗原結合部位を生成するための改変は、場合によっては、１つの非ＣＤＲループのみにある。他の実施態様では、１つを超える非ＣＤＲループが改変される。例えば、改変は、図２９に示される非ＣＤＲループ、すなわち、ＡＢ、ＣＣ’、Ｃ”Ｄ、ＥＦ、およびＤ－Ｅのうちのいずれか１つにある。場合によっては、改変はＡＢ、ＣＣ’、Ｃ”Ｄ、Ｅ－Ｆループの４つすべてに存在する。特定の例では、本明細書に記載される結合部分は、それらのＡＢ、ＣＣ’、Ｃ”Ｄ、またはＥＦループを介してＦＬＴ３結合ドメインに結合し、それらのＢ－Ｃ、Ｃ’－Ｃ”、またはＦ－Ｇループを介してアルブミンなどのバルク－血清タンパク質に結合する。特定の例では、結合部分は、そのＡＢ、ＣＣ’、Ｃ”Ｄ、およびＥＦループを介してＦＬＴ３結合ドメインに結合し、そのＢＣ、Ｃ’Ｃ”、およびＦＧループを介してアルブミンなどのバルク－血清タンパク質に結合する。特定の例では、結合部分は、ＡＢ、ＣＣ’、Ｃ”Ｄ、およびＥ－Ｆループの１つ以上を介してＦＬＴ３結合ドメインに結合し、ＢＣ、Ｃ’Ｃ”、およびＦＧループの１つ以上を介してアルブミンなどのバルク－血清タンパク質に結合する。特定の例では、結合部分は、そのＡＢ、ＣＣ’、Ｃ”Ｄ、またはＥＦループを介してアルブミンなどのバルク血清タンパク質に結合し、そのＢＣ、Ｃ’Ｃ”、またはＦＧループを介してＦＬＴ３結合ドメインに結合する。特定の例では、結合部分は、そのＡＢ、ＣＣ’、Ｃ”Ｄ、およびＥＦループを介して、アルブミンなどのバルク血清タンパク質に結合し、そのＢＣ、Ｃ’Ｃ”、およびＦＧループを介してＦＬＴ３結合ドメインに結合する。特定の例では、第１の実施形態の結合部分は、ＡＢ、ＣＣ’、Ｃ”Ｄ、およびＥ－Ｆループの１つ以上を介して、アルブミンなどのバルク血清タンパク質に結合し、ＢＣ、Ｃ’Ｃ”、およびＦＧループの１つ以上を介して、ＦＬＴ３結合タンパク質に結合する。
バルク血清タンパク質は、例えば、アルブミン、フィブリノゲン、またはグロブリンを含む。いくつかの実施形態では、結合部分は、設計された足場である。設計された足場は、例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ＶＨＨ、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、免疫グロブリン様足場（Ｈａｌａｂｙ ｅｔ ａｌ．， １９９９． Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ １２（７）：５６３－５７１によって提案されているように）、ＤＡＲＰｉｎ、シスチンノットペプチド、リポカリン、３ヘリックスバンドル足場、タンパク質Ｇ関連アルブミン結合モジュール、あるいはＤＮＡまたはＲＮＡアプタマー足場を含む。
場合によっては、結合部分は、バルク血清タンパク質に対する結合部位を含む。いくつかの実施態様では、結合部分内のＣＤＲは、バルク血清タンパク質のための結合部位を提供する。バルク血清タンパク質は、いくつかの例では、グロブリン、アルブミン、トランスフェリン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、ＩｇＧ３、ＩｇＡモノマー、第ＸＩＩＩ因子、フィブリノゲン、ＩｇＥ、または五量体ＩｇＭである。いくつかの実施形態では、結合部分は、免疫グロブリン軽鎖のための結合部位を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、免疫グロブリン軽鎖のための結合部位を提供する。免疫グロブリン軽鎖は、いくつかの例では、Ｉｇκ遊離軽鎖またはＩｇλ遊離軽鎖である。
結合部分は任意の種類のポリペプチドである。例えば、特定の例では、結合部分は天然ペプチド、合成ペプチド、あるいはフィブロネクチン足場、または設計されたバルク血清タンパク質である。いくつかの例では、結合部分は、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体由来のドメインを含む任意の種類の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、結合部分は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、可溶性ＴＣＲ断片、単一ドメイン抗体、例えば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、およびラクダ由来のナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）である。他の実施形態では、結合部分は、非Ｉｇ結合ドメイン、すなわち、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ）、アフィリン（ａｆｆｉｌｉｎｓ）、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）分子、アフィマー（ａｆｆｉｍｅｒｓ）、アフィチン（ａｆｆｉｔｉｎｓ）、アルファボディ（ａｌｐｈａｂｏｄｉｅｓ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒｓ）、ＤＡＲＰｉｎｓ、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒｓ）、クニッツドメインペプチド、およびモノボディなどの抗体模倣物である。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）への組み込み
本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、特定の例では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）へと組み込むことができる。操作された免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、例えば、本明細書に記載されるような抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体を含有するＦＬＴ３結合タンパク質を含むＣＡＲを発現するために使用可能である。１つの実施形態では、本明細書に記載されるようなＦＬＴ３結合タンパク質を含むＣＡＲは、ヒンジ領域を介して膜貫通ドメインに、さらには共刺激ドメイン、例えば、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、または４－１ＢＢから得られる機能的シグナル伝達ドメインに接続される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲはさらに、４－１ＢＢおよび／またはＣＤ３ゼータなどの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする配列を含む。
ＦＬＴ３結合タンパク質の修飾
ＦＬＴ３結合ドメイン（例えば、本開示のＦＬＴ３結合ｓｄＡｂ）およびＦＬＴ３標的化多特異性タンパク質（例えば、本明細書に記載されるＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質）を含む本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質は、誘導体または類似体を包含しており、ここでは、（ｉ）アミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるものではないアミノ酸残基で置換され、（ｉｉ）成熟ポリペプチドは、ポリエチレングリコールなどの別の化合物と融合しており、あるいは、（ｉｉｉ）リーダー配列または分泌配列、タンパク質を精製するための配列など、追加のアミノ酸がタンパク質に融合される。
典型的な修飾は、限定されないが、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合の架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アミノ酸のタンパク質への転移ＲＮＡ媒介性の付加、例えば、アルギニル化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ）およびユビキチン化を含む。
修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、およびアミノ末端またはカルボキシル末端を含む、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質のあらゆる場所で行われる。ＦＬＴ３結合タンパク質の修飾に有用な特定の一般的なペプチド修飾は、グリコシル化、脂質結合、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ－カルボキシル化、ヒドロキシル化、共有結合性修飾によるポリペプチド中のアミノ基またはカルボキシル基、あるいはその両方の遮断、およびＡＤＰ－リボシル化を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質の誘導体は、１つ以上の修飾を含む免疫反応性モジュレーター誘導体および抗原結合分子を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、一価または多価（二価、三価など）である。本明細書で使用されるように、「価数」という用語は、抗体に関連する潜在的な標的結合部位の数を指す。各標的結合部位は、１つの標的分子、あるいは標的分子上の特定の位置または遺伝子座に特異的に結合する。抗体が一価の場合、分子の各結合部位は１つの抗原位置またはエピトープに特異的に結合する。抗体が１つを超える標的結合部位（多価）を含む場合、各標的結合部位は、同じ分子または異なる分子に特異的に結合することがある（例えば、異なるリガンドまたは異なる抗原、あるいは同じ抗原上の異なるエピトープまたは位置に結合することがある）。
いくつかの実施形態では、上記のようなＦＬＴ３結合タンパク質は、限定されないが、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ４などのヒト免疫グロブリンを含む任意の種からのＦｃ領域に融合されて、Ｆｃ融合ＦＬＴ３結合タンパク質を生成する。いくつかの実施形態では、本開示のＦｃ融合ＦＬＴ３結合タンパク質は、そうでなければ同一のＦＬＴ３結合タンパク質と比較して、拡張された半減期を有する。いくつかの実施形態では、本開示のＦｃ融合ＦＬＴ３結合タンパク質は、特に、例えば、Ｆｃ領域において１つ以上の追加のアミノ酸残基の置換、突然変異、および／または修飾を含み、これにより、限定されないが、薬物動態の変化、血清半減期の延長を含む好ましい特性を有する結合タンパク質が得られる。
いくつかの実施形態では、そのようなＦｃ融合ＦＬＴ３結合タンパク質は、５日超、１０日超、１５日超、２０日超、２５日超、３０日超、３５日超、４０日超、４５日超、２ヶ月超、３ヶ月超、４ヶ月超、または５ヶ月超の哺乳動物、例えば、ヒトにおける延長半減期を提供する。半減期の増加は、場合によっては、より高い血清力価をもたらし、これにより、ＦＬＴ３結合タンパク質の投与の頻度を減少させ、および／または投与される抗体の濃度を減少させる。ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのインビボでのヒトＦｃＲｎへの結合および血清半減期は、いくつかの例では、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスまたはトランスフェクトされたヒト細胞株、あるいは、変異体Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類においてアッセイされる。
ＦＬＴ３結合タンパク質は、場合によっては、製造中または製造後に、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、抗体分子または他の細胞リガンドへの連結などによって差動的に修飾されている。多数の化学修飾のいずれかは、限定されないが、臭化シアノゲン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼ、ＮａＢＨ４による特定の化学切断、アセチル化、ホルミル化、酸化、還元、ツニカマイシンの存在下の代謝合成などを含む技術により実施される。
本開示に包含されるＦＬＴ３結合タンパク質の種々の翻訳後修飾としては、例えば、Ｎ－結合型またはＯ－結合型糖鎖、Ｎ－末端またはＣ－末端の処理、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ－結合型またはＯ－結合型糖鎖の化学修飾、および原核宿主細胞の発現によるＮ末端メチオニン残基の付加または欠失が挙げられる。さらに、ＦＬＴ３結合タンパク質は、場合によっては、調節因子の検出および単離を可能にするために、酵素標識、蛍光標識、放射性同位体標識、または親和性標識などの検出可能な標識で修飾される。
ＦＬＴ３結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド分子も提供される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。他の実施形態では、ポリヌクレオチド分子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供される。
ポリヌクレオチド分子は、既知の方法によって、例えば、単一ドメインＦＬＴ３結合タンパク質をコードする遺伝子、または１つを超えるドメインを含むＦＬＴ３結合タンパク質の様々なドメインをコードする遺伝子を組み合わせるなどして構築される。いくつかの実施形態では、ドメインをコードする遺伝子は、ペプチドリンカーによって分離されるか、または、他の実施形態では、ペプチド結合によって、適切なプロモーター、および任意選択で適切な転写ターミネーターに動作可能に連結された単一の遺伝子構築物に直接結合され、細菌または他の適切な発現系、例えば、ＣＨＯ細胞においてそれを発現する。利用されるベクター系および宿主に依存して、構成的および誘導性のプロモーターを含む任意の数の適切な転写および翻訳要素が使用されてもよい。プロモーターは、それぞれの宿主細胞においてポリヌクレオチドの発現を促進するために選択される。
いくつかの実施形態では、上記のＦＬＴ３結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、さらなる実施形態を表すベクター、好ましくは発現ベクターへと挿入される。この組換えベクターは、既知の方法に従って構築され得る。とりわけ、関心対象のベクターは、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、ｖｉｒｉｉ（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、レンチウイルスなど）、およびコスミドを含む。
様々な発現ベクター／宿主系は、記載されたＦＬＴ３結合タンパク質のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、およびこのポリオヌクレオチドを発現するために利用され得る。Ｅ．ｃｏｌｉにおける発現のための発現ベクターの例は、哺乳動物細胞における発現のためのｐＳＫＫ（Ｌｅ Ｇａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２００４）２８５（１）：１１１－２７）またはｐｃＤＮＡ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）である．
ゆえに、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質は、いくつかの実施形態では、上記のようなタンパク質をコードするベクターを宿主細胞に導入することにより、および、タンパク質ドメインが発現され、分離され、任意選択でさらに精製され得る条件下において、上記宿主細胞を培養することにより、生成される。
医薬組成物
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質、ＦＬＴ３結合タンパク質のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むベクター、またはこのベクターにより形質転換される宿主細胞、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物も提供される。「薬学的に許容可能な担体」という用語は、限定されないが、成分の生物活性の有効性に干渉せず、および投与される患者に対して毒性ではない担体を含む。適切な薬学的担体の例は、当該技術分野で周知であり、リン酸緩衝食塩水、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、様々なタイプの湿潤剤、無菌液などを含む。そのような担体は、従来の方法によって製剤することができ、適切な用量で対象に投与することができる。好ましくは、組成物は滅菌される。これらの組成物は、防腐剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントを含有し得る。微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤を含めることによって確かなものとすることができる。さらなる実施形態は、凍結乾燥された形態で包まれるか、水性媒体で包まれた上記のＦＬＴ３結合タンパク質の１つ以上を提供する。
医薬組成物のいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質はナノ粒子に封入される。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、フラーレン、液晶、リポソーム、量子ドット、超常磁性ナノ粒子、デンドリマー、またはナノロッドである。医薬組成物の他の実施形態では、ＦＬＴ３結合タンパク質はリポソームに結合される。いくつかの例では、ＦＬＴ３結合タンパク質はリポソームの表面にコンジュゲートされる。いくつかの例では、ＦＬＴ３結合タンパク質はリポソームのシェル内に封入される。いくつかの例では、リポソームはカチオン性リポソームである。
本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質は、薬剤としての使用について企図されている。投与は、異なる方法、例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所、または皮内の投与により達成される。いくつかの実施形態では、投与経路は、治療の種類、および医薬組成物に含有される化合物の種類に依存する。投与レジメンは、主治医および他の臨床学的因子により決定される。１人の患者の投与量は、患者のサイズ、体表面積、年齢、性別、投与される特定の化合物、投与の時間と経路、治療の種類、健康状態、および同時に投与される他の薬物を含む多くの要因に依存する。「有効量」は、疾患の経過と重症度に影響を及ぼし、それによりそのような病状の減少または寛解を引き起こすのに十分な量の有効成分を指し、既知の方法を用いて決定され得る。
いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、週に一度の頻度で最大１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。場合によっては、用量は、約１ｎｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１ｎｇ／ｋｇ～約７０ｎｇ／ｋｇ、約１ｎｇ／ｋｇ～約１６０ｎｇ／ｋｇ、約１ｎｇ／ｋｇ～約２００ｎｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態では、投与は、約１ｎｇ／ｋｇ～約１０ｎｇ／ｋｇ、約５ｎｇ／ｋｇ～約１５ｎｇ／ｋｇ、約１２ｎｇ／ｋｇ～約２０ｎｇ／ｋｇ、約１８ｎｇ／ｋｇ～約３０ｎｇ／ｋｇ、約２５ｎｇ／ｋｇ～約５０ｎｇ／ｋｇ、約３５ｎｇ／ｋｇ～約６０ｎｇ／ｋｇ、約４５ｎｇ／ｋｇ～約７０ｎｇ／ｋｇ、約６５ｎｇ／ｋｇ～約８５ｎｇ／ｋｇ、約８０ｎｇ／ｋｇ～約１μｇ／ｋｇ、約０．５μｇ／ｋｇ～約５μｇ／ｋｇ、約２μｇ／ｋｇ～約１０μｇ／ｋｇ、約７μｇ／ｋｇ～約１５μｇ／ｋｇ、約１２μｇ／ｋｇ～約２５μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ～約５０μｇ／ｋｇ、約３５μｇ／ｋｇ～約７０μｇ／ｋｇ、約４５μｇ／ｋｇ～約８０μｇ／ｋｇ、約６５μｇ／ｋｇ～約９０μｇ／ｋｇ、約８５μｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．０９５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。場合によっては、用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約０．２ｍｇ／ｋｇ；約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．７５ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ～約４ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ～約６ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ～約７ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ～約９ｍｇ／ｋｇ、または約８．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇである。投与頻度は、いくつかの実施形態では、ほぼ毎日未満（ａｂｏｕｔ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ｄａｉｌｙ）、隔日、１日１回未満、週２回、毎週、７日に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、または１ヶ月に１回程度である。場合によっては、投与の頻度は毎週である。場合によっては、投与頻度は毎週であり、用量は最大１０ｍｇ／ｋｇである。場合によっては、投与の期間は、約１日～約４週間またはそれ以上である。
治療法
特定の実施形態では、対象においてＦＬＴ３を発現する悪性細胞に関連する疾病を処置する方法も提供され、上記方法は、本開示のＦＬＴ３結合ドメインを含む多特異性タンパク質（条件付き活性多特異性タンパク質を含む）、または、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質を含むＣＡＲ、またはそれらを含む医薬組成物を有効量で、それを必要とする対象に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、疾病は癌である。特定の実施形態では、疾病は、２つの主要な血液細胞系統のいずれかに由来する血液悪性腫瘍、すなわち、骨髄系細胞系（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージ、およびマスト細胞を産生する）またはリンパ系細胞系（Ｂ、Ｔ、ＮＫ、およびプラズマ細胞を産生する）、例えば、全てのタイプの白血病、リンパ腫、および骨髄腫、例えば、急性、慢性、リンパ球性、および／または骨髄性の白血病、例えば、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病、未分化ＡＭＬ（ＭＯ）、骨髄芽球性白血病（Ｍ１）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞成熟を伴う）、前骨髄球性白血病（Ｍ３またはＭ３変異型［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（Ｍ４または好酸球を伴うＭ４変異型［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤色白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、単離された顆粒球性肉腫、および緑色腫；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＥＩＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球性Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化（例えば、Ｋｉ １＋）大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸Ｔ細胞リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性；およびリンパ腫／白血病（Ｔ－Ｌｂｌｙ／Ｔ－ＡＬＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後のリンパ球増殖性疾患、組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ球系の造血器腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉症またはセザリー症候群とも呼ばれる）、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、Ｔ細胞／組織球が豊富な大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ｌｅｇタイプ）、高齢者のＥＢＶ陽性のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、炎症に関連するびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心キャッスルマン病で生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との間の中間の特徴を持つ分類不能のＢ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫リンパ形質細胞性リンパ腫との間の中間の特徴を持つ分類不能のＢ細胞リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無症候性骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞リンパ腫；骨髄系の造血器腫瘍、線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉系起原の腫瘍；セミノーマ、奇形癌腫、星細胞腫、神経鞘腫を含む中枢神経と末梢神経の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫、および骨肉腫を含む間葉系起原の腫瘍；ならびに、メラノーマ、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、セミノーマ、甲状腺濾胞癌および奇形癌腫、リンパ球系の造血器腫瘍、例えば、Ｔ細胞およびＢ細胞腫瘍、限定されないが、小細胞型および大脳細胞型を含むＴ－リンパ球性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）などのＴ細胞障害を含む他の腫瘍；好ましくは、Ｔ細胞型の大型顆粒リンパ球白血病（ＬＧＬ）；ａ／ｄ Ｔ－ＮＨＬ肝臓リンパ腫；末梢性／胸腺後のＴ細胞性リンパ腫（多形態性および免疫芽球性サブタイプ）；血管中枢性（鼻）Ｔ細胞リンパ腫；頭頸部癌、腎癌、直腸癌、甲状腺の癌；急性骨髄性リンパ腫、および上記癌の任意の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、疾病は骨髄異形成症候群（「ＭＤＳ」）であり、これは造血幹細胞障害の多様なグループを指す。ＭＤＳは、形態および成熟が損なわれた細胞骨髄（骨髄造血不全（ｄｙｓｍｙｅｌｏｐｏｉｅｓｉｓ））、末梢血血球減少症、および急性白血病への進行の変動リスクを特徴とし、効果的でない血液細胞の産生に起因する。
別の態様では、本開示は、ＦＬＴ３を発現する悪性細胞を有する対象における腫瘍の成長または進行を阻害する方法であって、本開示のＦＬＴ３結合ドメイン、またはＦＬＴ３結合ドメインを含む多特異性タンパク質、あるいは、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質を含むＣＡＲ、あるいはＦＬＴ３結合タンパク質を含む医薬組成物を有効量で、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、対象においてＦＬＴ３を発現する悪性細胞の転移を阻害する方法であって、本開示のＦＬＴ３結合ドメイン、またはＦＬＴ３結合ドメインを含む多特異性タンパク質、またはそれを含む医薬組成物を有効量で、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、ＦＬＴ３を発現する悪性細胞を抱える対象において腫瘍縮小を誘導する方法であって、本開示のＦＬＴ３結合ドメイン、またはＦＬＴ３結合ドメインを含む多特異性タンパク質、またはそれを含む医薬組成物を有効量で、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、有効量の第２の治療剤を投与する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療剤はバイオ治療剤、例えば、抗体である。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、サイトカイン、ＴＮＦａ（腫瘍壊死因子α）、ＰＡＰ（ホスファチジン酸ホスファターゼ）阻害剤、腫瘍崩壊ウイルス、キナーゼ阻害剤、ＩＤＯ（インドールアミン－ピロール２，３－ジオキシゲナーゼ）阻害剤、グルタミナーゼＧＬＳ１阻害剤、ＣＡＲ（キメラ抗原受容体）－Ｔ細胞またはＴ細胞療法、ＴＬＲ（トロール様受容体）アゴニスト（例えば、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９など）、または腫瘍ワクチンである。
いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、ＦＬＴ３を発現する腫瘍細胞を有する対象に投与されると、インビボで腫瘍細胞の増殖を減少させる。腫瘍細胞の増殖の抑制の測定は、当該技術分野で周知の複数の様々な方法によって判定することができる。非限定的な例は、腫瘍寸法の直接測定、切除された腫瘍塊の測定と対照対象との比較、解析を強化するために同位体または発光分子（例えば、ルシフェラーゼ）を使用することもあれば使用しないこともある画像処理技術（例えば、ＣＴまたはＭＲＩ）による測定などを含む。特定の実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質またはそれを含む医薬組成物の投与は、対照の抗原結合剤と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％の腫瘍細胞のインビボ増殖の減少をもたらし、腫瘍増殖の約１００％の減少は、完全寛解と腫瘍の消滅を示す。さらなる実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質またはそれを含む医薬組成物の投与は、対照抗原結合剤と比較して、約５０～１００％、約７５～１００％、または約９０～１００％の腫瘍細胞のインビボ増殖の減少をもたらす。さらなる実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質またはそれを含む医薬組成物の投与は、対照の抗原結合剤と比較して、約５０～６０％、約６０～７０％、約７０～８０％、約８０～９０％、または約９０～１００％の腫瘍細胞のインビボ増殖の減少をもたらす。
いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、腫瘍性状態を処置するために投与される。腫瘍性状態は、いくつかの実施形態では、良性または悪性であり；固形腫瘍または他の血液腫瘍症であり；いくつかの実施形態では、限定されないが、以下から選択される：副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞巣状軟部肉腫、星状細胞腫瘍、自律神経節腫瘍、膀胱癌（扁平上皮癌と移行上皮癌）、胞胚腔障害、骨癌（エナメル上皮腫、動脈瘤骨嚢胞、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳と脊髄の癌、転移性脳腫瘍、トリプルネガティブ乳癌を含む乳癌、頸動脈球腫瘍、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌、結腸癌、大腸癌、皮膚の良性線維組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、上皮障害、ユーイング腫瘍、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨性線維形成不全症（ ｆｉｂｒｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｍｐｅｒｆｅｃｔａ ｏｓｓｉｕｍ）、骨の線維性形成異常、胆嚢癌および胆管癌、胃癌、胃腸疾患、妊娠性絨毛性疾患、胚細胞性腫瘍、腺性障害、頭頚部癌、視床下部の癌、腸癌、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎癌（腎芽細胞腫、乳頭状の腎細胞癌）、白血病、脂肪腫／良性の脂肪腫性腫瘍、脂肪肉腫／悪性の脂肪腫性腫瘍、肝臓癌（肝芽腫、肝細胞癌）、リンパ腫、肺癌（小細胞癌、腺癌、扁平上皮癌、大細胞癌など）、マクロファージ障害、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腺腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、乳頭状の甲状腺癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、クロム親和性細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、まれな血液障害、腎転移性癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部肉腫、扁平上皮癌、胃癌、間質性障害、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌、および子宮癌（頚部癌、子宮内膜癌、および平滑筋腫）。
特定の実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、フロントライン治療として使用され、癌状態に対して以前に治療を受けていない対象に投与される。他の実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、以前に（本開示のＦＬＴ３結合タンパク質で、または他の抗癌剤で）治療され、再発し、または以前の治療に対して不応性であると判断された対象を処置するために使用される。いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、再発性腫瘍を有する対象を処置するために使用される。いくつかの態様では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、限定されないが、副腎、肝臓、腎臓、膀胱、乳房、胃、卵巣、子宮頸、子宮、食道、大腸、前立腺、すい臓、肺（小細胞および非小細胞の両方）、甲状腺、癌腫、肉腫、膠芽腫、および様々な頭頸部の腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、メラノーマに罹患している対象に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、メラノーマを診断、モニタリング、処置、または予防するために使用される。本明細書で使用する「黒色腫」という用語は、限定されないが、原発性黒色腫、悪性黒色腫、皮膚黒色腫、皮膚外黒色腫、表在拡大型黒色腫、ポリープ状黒色腫、悪性黒色腫、メラノ上皮腫、メラノ肉腫、インサイチュの黒色腫、結節型悪性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、黒子型黒色腫、粘膜黒子型黒色腫、粘膜黒色腫、末端黒子型黒色腫、軟組織黒色腫、眼黒色腫、侵襲性の黒色腫、家族性の非定型の黒子および黒色腫（ＦＡＭ－Ｍ）症候群、線維形成性悪性黒色腫またはブドウ膜黒色腫を含む全てのタイプの黒色腫を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質またはそれを含む医薬組成物の投与のための可能な適応症は、腫瘍性疾患、特に、上皮癌／癌、例えば、乳癌、結腸癌、前立腺癌、頭頸部癌、皮膚癌、泌尿生殖器癌、例えば、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、および腎臓癌、肺癌、胃癌、小腸の癌、肝臓癌、膵臓癌、胆嚢癌、胆管の癌、食道癌、唾液腺の癌、および甲状腺の癌を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質またはそれを含む医薬組成物の投与は、単細胞の生存によって引き起こされる腫瘍の局所的および非局所的な再発を特徴とする、初期固形腫瘍、進行性固形腫瘍、または転移性固形腫瘍などの最小残存病変に適応される。
選択された態様では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に組み込まれ、ＦＬＴ３ ＣＡＲは、以下のような癌の治療に有効なＣＡＲベースの治療において投与される：２つの主要な血液細胞系統のいずれかに由来する血液悪性腫瘍、すなわち、骨髄系細胞系（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージ、およびマスト細胞を産生する）またはリンパ系細胞系（Ｂ、Ｔ、ＮＫ、およびプラズマ細胞を産生する）、例えば、全てのタイプの白血病、リンパ腫、および骨髄腫、例えば、ＡＭＬ；上皮癌／細胞腫、例えば、乳癌；結腸癌、前立腺癌；頭頚部癌；皮膚癌；生泌尿生殖器癌、例えば、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮癌、腎癌；肺癌；胃癌；小腸癌、肝臓癌；膵臓癌；胆嚢癌；胆管癌；食道癌；唾液腺の癌と甲状腺の癌；小細胞肺癌；非小細胞肺癌（例えば、扁平細胞非小細胞肺癌または扁平細胞小細胞肺癌）および大細胞型神経内分泌癌（ＬＣＮＥＣ）。
キメラ抗原受容体は一般に、シグナル伝達ドメイン（例えば、Ｔ細胞シグナル伝達またはＴ細胞活性化ドメイン）に連結された抗体の抗原結合ドメインを含有するまたは含む、人工的に構築されたハイブリッドタンパク質またはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質を含むＣＡＲは、抗体またはその抗原結合断片の抗原結合特性を利用することによって、非ＭＨＣ制限的な方法で、感作リンパ球（例えば、Ｔ細胞）の特異性および反応性をＦＬＴ３陽性標的細胞に向けて再配向する能力を有している。非ＭＨＣ制限の抗原認識は、ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現するＴ細胞に、抗原処理とは無関係に腫瘍化ＦＬＴ３を認識する能力を与え、したがって腫瘍エスケープの主要な機構を回避することができる。さらに、Ｔ細胞で発現した場合、ＣＡＲは、内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖およびβ鎖と有利に二量化することはない。いくつかの実施形態では、開示されたＦＬＴ３結合タンパク質は、難治性患者（すなわち、初期療法のコースを完了する間またはその直後に疾患が再発する患者）に；感受性の患者（すなわち、再発が一次治療後２～３ヶ月よりも長い患者）に；または、白金系薬剤（例えば、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン）および／またはタキサン（例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、またはカバジタキセル）に対する耐性を示している患者に投与される。別の実施形態では、開示されたＦＬＴ３ ＣＡＲ治療法は、卵巣漿液性癌および卵巣乳頭状漿液性癌を含む卵巣癌を治療するのに有効である。
別の実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質、ＦＬＴ３ ＣＡＲ、またはＦＬＴ３感作リンパ球、またはそれらの任意の組み合わせは、疾患の最初の症状後の腫瘍再発の可能性を低減または排除するために維持療法で使用される。場合によっては、障害が処置され、最初の腫瘍塊が除去、減少、またはその他の方法で改善されたため、患者は無症状または寛解状態にある。そのような時、対象は、標準的な診断手順を用いた疾患の兆候がほとんどないか、またはまったくないかにかかわらず、本明細書の開示されたＦＬＴ３結合タンパク質、ＦＬＴ３ ＣＡＲ、またはＦＬＴ３感作リンパ球、あるいはそれらの任意の組み合わせの薬学的な有効量を１回以上投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質、ＦＬＴ３ ＣＡＲ、またはＦＬＴ３感作リンパ球、またはそれらの任意の組み合わせは、疾患の再発の可能性を低減させるために、一定期間、例えば、毎週、２週間ごと、毎月、６週間ごと、２ヶ月ごと、３ヶ月ごと、６ヶ月ごと、または毎年、規則的なスケジュールで投与される。さらに、そのような治療は、いくつかの実施形態では、患者の反応と臨床的パラメータおよび診断的パラメータに応じて、数週間、数ヶ月、数年、または無期限にさえ継続される。
さらに別の実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質、ＦＬＴ３ ＣＡＲ、またはＦＬＴ３感作リンパ球、またはそれらの任意の組み合わせは、デバルキング（ｄｅｂｕｌｋｉｎｇ ）処置後の腫瘍転移を防ぐか、またはその可能性を低減するために、予防的にまたはアジュバント療法として使用される。本開示で使用される「デバルキング処置」は、腫瘍または腫瘍増殖を除去、低減、治療、または改善する任意の処置、技術、または方法を意味する。例示的なデバルキング処置としては、限定されないが、手術、放射線治療（すなわち、ビーム放射線）、化学療法、免疫療法、またはアブレーションが挙げられる。いくつかの実施形態では、適切な時期に、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質、ＦＬＴ３ ＣＡＲ、またはＦＬＴ３感作リンパ球、またはそれらの任意の組み合わせは、腫瘍転移を低減させるために、臨床処置、診断処置、またはセラノスティック処置によって示唆されるように投与される。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、それを変更することを可能にする適切な診断技術またはモニタリング技術を伴う。
本開示のさらに他の実施形態は、無症状であるが増殖性障害を発症するリスクのある対象に、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質、ＦＬＴ３ ＣＡＲ、またはＦＬＴ３感作リンパ球、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む。すなわち、いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質、ＦＬＴ３ ＣＡＲ、またはＦＬＴ３感作リンパ球、またはそれらの任意の組み合わせは、予防的な意味で用いられ、検査または試験を受けて１つ以上の顕著なリスク因子（例えば、ゲノム表示、家族歴、インビボまたはインビトロの試験結果など）があるものの腫瘍症を発症していない患者に与えられる。そのような場合、当業者であれば、経験的観察または一般に認められた臨床的実践を通じて、有効な投与レジメンを決定することができるであろう。
本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるようなＦＬＴ３結合タンパク質または組成物が、特定の疾患、障害、または疾病の処置のための薬剤と組み合わせて投与される。薬剤は、限定されないが、抗体を含む治療薬、小分子（例えば、化学療法剤）、ホルモン（ステロイド、ペプチドなど）、放射線治療薬（γ線、Ｘ線、および／または、放射性同位体、マイクロ波、ＵＶ放射などの配向された送達）、遺伝子治療薬（例えば、アンチセンス、レトロウイルス治療など）、および他の免疫療法薬を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質は、止痢薬、制吐剤、鎮痛剤、オピオイド、および／または非ステロイド性抗炎症剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質は、抗癌剤と組み合わせて投与される。本開示の医薬組成物および剤形およびキットを含む本開示の様々な実施形態において使用することができる抗癌剤の非限定的な例は、アシビシン；アクラルビシン；塩酸アコダゾール；アクロニン；アドゼレシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アムボマイシン；アメタントロンアセテート；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アザシチジン；アゼテーパ；アズトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；塩酸ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；ビアンサフィド（ｂｉｓｎａｆｉｄｅ）ジメシレート；ビセレシン；硫酸ブレオマイシン；ブレキナーナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベティマー；カルボプラチン；カルムスチン；塩酸カルビシン；カルゼレシン；セデフィンガル；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリビン；クリスナトールメシレート；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；塩酸ダウノルビシン；デシタビン；デクソロマプラチン；デザグアミン；デザグアミンメシレート；ジアジコン；ドセタキセル；ドキソルビシン；塩酸ドキソルビシン；ドロロキシフェン；クエン酸ドロロキシフェン；プロピオン酸ドロモスタノロン；ドゥアゾマイシン；エダトレキセート；塩酸エフロルニチン；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロメイト；エピプロピジン；塩酸エピルビシン；エルブロゾール；塩酸エソルビシン；エストラムスチン；リン酸エストラムスチンナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン；塩酸ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；リン酸フルダラビン；フルオロウラシル；フルロオシタビン；ホスキドン；フォストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；塩酸ゲムシタビン；ヒドロキシ尿素；塩酸イダルビシン；イホスファミド；イルモフォシン；インターロイキンＩＩ（組換えインターロイキンＩＩまたはｒＩＬ２を含む）、インターフェロンα－２ａ；インターフェロンα－２ｂ；インターフェロンα－ｎ１インターフェロンα－ｎ３；インターフェロンβ－Ｉａ；インターフェロンγ－Ｉｂ；イプロプラチン；塩酸イリノテカン；ランレオチドアセタート；レトロゾール；レウプロリドアセタート；塩酸リアロゾール；ロメトレキソールナトリウム；ロムスチン；塩酸ロソキサントロン；マソプロコール；メイタンシン；塩酸メクロレタミン；メゲストロールアセテート；メレンゲスロロールアセテート；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；マイトジリン；ミトマルシン；マイトマイシン；ミトスペル；ミトタン；塩酸ミトザントロン；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オクシスラン；パクリタキセル；ペガスパルガーゼ；ペリオマイシン；ペンタムスチン；硫酸ペプロマイシン；ペルフォスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；塩酸ピロキサントロン；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；塩酸プロカルバジン；ピューロマイシン；塩酸ピューロマイシン；ピラゾフリン；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；塩酸サフィンゴール；セムスチン；シムトラゼーネ；スパルフォセートナトリウム；スパルソマイシン；塩酸スピロゲルマニウム；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェナール；タリソマイシン；テコガランナトリウム；テガフール；塩酸テロキサントロン；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；クエン酸トレミフェン；酢酸トレストロン；リン酸トリシビリン；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；塩酸ツブロゾール；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン；硫酸ビンブラスチン；硫酸ビンクリスチン；ビンデシン；硫酸ビンデシン；硫酸ビネピジン；硫酸ビングリシネート；硫酸ビンレウロジン；酒石酸ビノレルビン；硫酸ビンゾキジン；硫酸ビンゾキジン；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；塩酸ゾルビシンを含む。抗癌剤の他の例は、限定されないが、２０－ｅｐｉ－１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５－エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；アルデスロイキン；ＡＬＬ－ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アムバムスチン；アミドックス；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管形成阻害剤；アンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アンタレリックス；抗背側化形態形成タンパク質－１（ａｎｔｉ－ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ－１）；抗アンドロゲン、前立腺癌；抗エストロゲン；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィジコリングリシネート；アポトーシス遺伝子モジュレーター；アポトーシス調節因子；アプリン酸；ａｒａ－ＣＤＰ－ＤＬ－ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン；ベンゾイルスタウロスポリン；ベータラクタム誘導体；ベータ－アレチン；ベタクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビサジリジンイルスペルミン；ビアンサフィド；ビストラテンＡ；ビセレシン；ブレフレート；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カナリポックスＩＬ－２；カペシタビン；カルボキサミド－アミノ－トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ Ｍ３；ＣＡＲＮ ７００；軟骨由来の阻害剤；カルゼレシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリックス；クロリン；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；ｃｉｓ－ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェンアナログ；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチンアナログ；コナゲニン；クラムベシジン（ｃｒａｍｂｅｓｃｉｄｉｎ）８１６；クリスナトール；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタンチラキノーズ；シクロプラタム；シペマイシン；シタラビンオクホスファート；細胞傷害性因子；シトスタチン；ダクリズマブ；デシタビン；デヒドロジデミンＢ；デスロレリン；デキサメタゾン；デキシフォスファミド；デクスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジコン；ジデミンＢ；ジドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ－５－アザシチジン；ジヒドロタキソール，９－；ジオクサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ドセタキセル；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン；エデルフォシン；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン；エミテフール；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチンアナログ；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；リン酸エトポシド；エキセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン；塩酸フルオロダウノルニシン；フォルフェニメックス；ホルメスタン；フォストリエシン；ホテムスチン；ガドリニウムテクサピリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリックス；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ヒペリシン；イバンドロニック酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン（ｉｄｒａｍａｎｔｏｎｅ）；イルモフォシン；イルモスタット；イミダゾアクリドン；イミキモド；免疫賦活薬ペプチド；インスリン様成長因子Ｉ受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；イオベングアン；ヨードドキソルビシン；イポメアノール、４－；イロプラクト；イルソグラジン；イソベンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリドＦ；ラメラリン－Ｎトリアセテート；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病阻害因子；白血球アルファインターフェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；リュープロレリン；レバミソール；リアロゾール；直鎖ポリアミンアナログ；親油性二糖類ペプチド；親油性白金化合物；リクリナミド（ｌｉｓｓｏｃｌｉｎａｍｉｄｅ）７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメテレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤（例えば、限定されないが、ロバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、スタチン、シンバスタチン、およびアトルバスタチン）；ロクソリビン；ルルトテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン；細胞溶解ペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリリシン阻害剤；マトリクスメタロプロテイナーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン；メタレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミルテホシン；ミリモスチム；不適合な二重鎖ＲＮＡ；ミトグアゾン；ミトラクトール；マイトマイシンアナログ；ミトナファイド；マイトトキシン線維芽細胞増殖因子－サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体（ヒト胎盤性性腺刺激ホルモン）；モノホスホリル脂質Ａ＋ミオバクテリア細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；多発性腫瘍抑制遺伝子１ベースの治療；マスタード抗癌剤；ミカルオキシドＢ；マイコバクテリア細胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ－アセチルジナリン；Ｎ－置換ベンズアミド；ナファレリン；ナグレスチップ；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素モジュレーター；ニトロキシド抗酸化剤；ニトルリン；Ｏ６－ベンジルグアミン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘導因子；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキサウノマイシン；パクリタキセル；パクリタキセルアナログ；パクリタキセル誘導体；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン
；パラバクチン；パゼリプチン；ペガスパルガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリ硫酸ナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール；ペルフルブロン；ペルフォスファミド；ペリルアルコール；フェナジノマイシン；酢酸フェニル；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニール；塩酸ピロカルピン；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノゲンアクチベータ阻害剤；白金複合体；白金化合物；白金－トリアミン複合体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニゾン；プロピルビス－アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡベースの免疫モジュレーター；プロテインキナーゼＣ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤、微細藻類；プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化したヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ－ＧＡＰ阻害剤；脱メチル化レテリプチン；レニウムＲｅ １８６ エチドロネート；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチンアミド；ログレチミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメックス；ルビギノンＢ１；ルボキシル；サフィンゴール；セイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ１模倣物；セムスチン；セネスセンス由来阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達モジュレーター；一本鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン；ソブゾキサン；ボロカプテイトナトリウム；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール（ｓｏｌｖｅｒｏｌ）；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルフォシン酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンジスタチン１；スクワラミン；幹細胞阻害剤；幹細胞分割阻害剤；スティピアミド；ストロメリシン阻害剤；サルフィノジン；超活性血管作用性小腸ペプチドアンタゴニスト；スラジスタ；スラミン；スワインソニン；合成グリコサミノグリカン；タリムスチン；タモキシフェンメチオジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルロピリリウム；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テモゾロミド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；タリカルピン；チオコラリン；トロンボポイエチン；トロンボポイエチン模倣物；チマルファシン；チモポイエチン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；スズエチルエチオプロプリン；チラパザミン；チタノセン二塩化物；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシビリン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン；テュロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チルホスチン；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；尿生殖洞由来成長阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリンＢ；ベクター系、赤血球遺伝子治療；ベラレゾール；ベラミン；ベルディン（ｖｅｒｄｉｎｓ）；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン；Ｖｉｔａｘｉｎ（登録商標）；ボロゾール；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；および、ジノスタチンスチマラマーを含む。追加の抗癌剤は５－フルオロウラシルとロイコボリンである。これらの２つの薬剤は、サリドマイドおよびトポイソメラーゼ阻害剤を採用する方法において使用される場合、特に有用である。いくつかの実施形態では、本開示のＦＬＴ３結合タンパク質は、ゲムシタビンと組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質は、手術前、手術中、または手術後に投与される。
本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質（例えば、ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質）またはそれを含む医薬組成物の投与の様式は、いくつかの実施形態では、既知の方法、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、脳内、皮内、筋肉内、眼内、動脈内、髄腔内、または病巣内の経路による、あるいは、吸入による、あるいは、持続放出系による注射または注入と一致している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質（例えば、ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質）またはそれを含む医薬組成物は、注入によってまたはボーラス注射によって投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質（例えば、ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質）またはそれを含む医薬組成物は、鼻または肺を通して、例えば、液体または粉末エアロゾル（凍結乾燥）として、投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質（例えば、ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質）またはそれを含む医薬組成物は、必要に応じて静脈内、非経口、または皮下で投与される。全身投与される場合、本明細書に記載されるＦＬＴ３結合タンパク質（例えば、ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質）を含む医薬組成物は、例えば、無菌で、発熱物質を含んでおらず、ｐＨ、等張性、および安定性に十分配慮した非経口許容溶液中である。
ＦＬＴ３発現の検出方法およびＦＬＴ３関連癌の診断方法
本開示の別の実施形態によれば、インビトロまたはインビボでのＦＬＴ３の発現を検出するためのキットが提供される。キットは、前述のＦＬＴ３結合タンパク質（例えば、標識された抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体またはその抗原結合断片を含むＦＬＴ３結合タンパク質）、および標識を検出するための１つ以上の化合物を含む。いくつかの実施形態では、標識は、蛍光標識、酵素標識、放射性標識、核磁気共鳴活性標識、発光標識、および発色団標識からなる群から選択される。
場合によっては、ＦＬＴ３発現は、生体試料において検出される。試料は、限定されないが、生検、剖検、および病理学的検体からの組織を含む任意の試料であり得る。生体試料は、組織の切片、例えば、組織学的目的のために採取された凍結切片も含む。生体試料はさらに、血液、血清、血漿、喀痰、髄液、または尿などの体液も含んでいる。生体試料は通常、ヒトや非ヒト霊長類などの哺乳類から得られる。
一実施形態では、対象からの試料を本明細書に開示される抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体に接触させること、および、試料への単一ドメイン抗体の結合を検出することによって、対象が癌を有するかどうかを決定する方法が提供される。対照試料に対する抗体の結合と比較して、試料に対する抗体の結合が増加することにより、対象が癌を有することが特定される。
別の実施形態では、癌と診断された対象からの試料を、本明細書に開示される抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体と接触させること、および、試料への抗体の結合を検出することによって、対象における癌の診断を確認する方法が提供される。対照試料に対する抗体の結合と比較して、試料に対する抗体の結合が増加することにより、対象における癌の診断が確認される。
開示された方法のいくつかの例では、ＦＬＴ３単一ドメイン抗体は直接標識される。いくつかの例では、方法は、抗ＦＬＴ３単一ドメイン抗体に特異的に結合する第２の抗体を試料に接触させること、および、第２の抗体の結合を検出することをさらに含む。対照試料に対する第２の抗体の結合と比較して、試料に対する第２の抗体の結合が増加することにより、対象における癌の診断が確認される。場合によっては、状態は、２つの主要な血液細胞系統のいずれかに由来する血液悪性腫瘍、すなわち、骨髄系細胞系（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージ、およびマスト細胞を産生する）またはリンパ系細胞系（Ｂ、Ｔ、ＮＫ、およびプラズマ細胞を産生する）、例えば、全てのタイプの白血病、リンパ腫、および骨髄腫、例えば、ＡＭＬである。いくつかの実施形態では、癌は、神経内分泌癌、前立腺癌、肺癌、胃癌、扁平上皮癌、膵臓癌、胆管癌、トリプルネガティブ乳癌、または卵巣癌（上皮性卵巣癌など）、またはＦＬＴ３を発現する任意の他のタイプの癌である。いくつかの例では、対照試料は、癌を有しない対象からの試料である。特定の例では、試料は血液または組織試料である。
場合によっては、ＦＬＴ３と結合する（例えば、特異的に結合する）抗体は、検出可能な標識で直接標識される。別の実施形態では、ＦＬＴ３と結合する（例えば、特異的に結合する）抗体（第１の抗体）は非標識であり、ＦＬＴ３と特異的に結合する抗体と結合できる第２の抗体または他の分子は標識される。第２の抗体は、特定の種およびクラスの第１の抗体と特異的に結合できるように選択される。例えば、第１の抗体がラマＩｇＧである場合、第２の抗体は抗ラマＩｇＧであってもよい。抗体に結合することができる他の分子としては、限定されないが、プロテインＡおよびプロテインＧが挙げられ、これらはいずれも市販されている。抗体または第２の抗体のための適切な標識は上述されており、様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、磁性剤、および放射性材料を含む。適切な酵素の非限定的な例としては、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。適切な補欠分子族の非限定的な例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる。適切な蛍光材料の非限定的な例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリスリンが挙げられる。非限定的な例示的な蛍光材料は、ルミノールであり；非限定的な例示的な磁性剤はガドリニウムであり、非限定的な例示的な放射性標識は、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、または３Ｈを含む。
代替的な実施形態では、ＦＬＴ３は、検出可能な物質で標識されたＦＬＴ３標準物質およびＦＬＴ３と特異的に結合する非標識抗体を利用する競合免疫アッセイによって生体試料中でアッセイされることが可能である。このアッセイでは、生体試料、標識ＦＬＴ３標準物質、およびＦＬＴ３と特異的に結合する抗体を組み合わせて、非標識抗体に結合した標識ＦＬＴ３標準物質の量を決定する。生体試料中のＦＬＴ３の量は、ＦＬＴ３と特異的に結合する抗体に結合した標識ＦＬＴ３標準の量に反比例する。
本明細書で開示されるイムノアッセイおよび方法は、多くの目的に使用することができる。一実施形態では、ＦＬＴ３と特異的に結合する抗体は、細胞培養中の細胞におけるＦＬＴ３の産生を検出するために使用され得る。別の実施形態では、抗体は、組織試料あるいは血液または血清試料などの生体試料中のＦＬＴ３の量を検出するために使用することができる。いくつかの例では、ＦＬＴ３は細胞表面ＦＬＴ３である。他の例では、ＦＬＴ３は可溶性ＦＬＴ３である（例えば、細胞培養上清中のＦＬＴ３、あるいは血液または血清試料などの体液試料中の可溶性ＦＬＴ３）。
一実施形態では、血液試料または組織試料などの生体試料中のＦＬＴ３を検出するためのキットが提供される。例えば、対象中で癌診断を確認するために、組織学的検査のための組織試料を得るために、生検を実施することができる。代替的に、血液試料は可溶性のＦＬＴ３タンパク質または断片の存在を検出するために得ることができる。ポリペプチドを検出するためのキットは典型的には、ＦＬＴ３に特異的に結合する、本開示の単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ断片、ＶＨドメイン、またはＦａｂがキットに含まれる。さらなる実施形態では、抗体は（例えば、蛍光標識、放射性標識、または酵素標識で）標識される。
一実施形態では、キットは、ＦＬＴ３に結合する抗体の使用手段を開示する説明資料を含む。説明資料は、書面、電子形態（コンピュータディスケットまたはコンパクトディスクなど）、視覚的（ビデオファイルなど）であってもよく、または電子ネットワーク、例えば、インターネット、ワールドワイドウェブ、イントラネット、または他のネットワークを介して提供されてもよい。キットはさらに、キットが設計された特定の用途を容易にするために、追加の構成要素を含んでもよい。したがって、例えば、キットは、標識を検出する手段（例えば、酵素標識のための酵素基質、蛍光標識を検出するためのフィルターセット、二次抗体などの適切な二次標識など）を追加的に含んでいてもよい。キットは付加的に、緩衝剤、および特定の方法の実施に慣例的に使用される他の試薬を含んでもよい。 このようなキットおよび適切な内容は、当業者にはよく知られている。
一実施形態では、診断キットは、イムノアッセイを含んでいる。イムノアッセイの詳細は、採用される特定のフォーマットによって異なり得るが、生体試料中のＦＬＴ３を検出する方法は一般に、免疫学的に反応する条件下でＦＬＴ３ポリペプチドと特異的に反応する抗体に生体試料を接触させる工程を含む。抗体は、免疫学的に反応する条件下で特異的に結合して免疫複合体を形成し、その免疫複合体（結合抗体）の存在は直接または間接的に検出される。
細胞表面マーカーの存在または非存在を決定する方法は、当該技術分野でよく知られている。例えば、抗体は、限定されないが、酵素、磁気ビーズ、コロイド磁気ビーズ、ハプテン、蛍光色素、金属化合物、放射性化合物、または薬物を含む他の化合物にコンジュゲートされ得る。抗体はさらに、限定されないが、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ、または免疫組織化学アッセイなどのイムノアッセイに利用することができる。抗体は蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）にも使用することができる。ＦＡＣＳは、細胞を分離または選別するために、高度なレベルの検出の中でも、複数のカラーチャネル、低角度および鈍角の光散乱検出チャネル、およびインピーダンスチャネルを採用する。米国特許第５，０６１，６２０号を参照されたい。本明細書に開示されるようなＦＬＴ３と結合する単一ドメイン抗体のいずれかを、これらのアッセイに使用することができる。したがって、抗体は、限定されないが、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＦＡＣＳ、組織免疫組織化学、ウエスタンブロット、または免疫沈降を含む従来のイムノアッセイで使用することができる。
実施例１：ＦＬＴ３結合ドメインの特定のためのファージディスプレイライブラリのスクリーニング
ラマはＥｘｐｉ２９３細胞で発現した精製ＦＬＴ３タンパク質で免疫された。免疫したラマから単離させた循環Ｂ細胞から重可変抗体ドメインの発現のためのファージディスプレイライブラリを構築した（ｖａｎ ｄｅｒ Ｌｉｎｄｅｎ，ｄｅ Ｇｅｕｓ，Ｓｔｏｋ，Ｂｏｓ，ｖａｎ Ｗａｓｓｅｎａａｒ，Ｖｅｒｒｉｐｓ，ａｎｄ Ｆｒｅｎｋｅｎ．を参照されたい）。大腸菌においてラマ抗ＦＬＴ３タンパク質を発現させ、ペリプラズム抽出物を調製し、および比色ＥＬＩＳＡを行うことによって、ＦＬＴ３への結合についてファージクローンをスクリーニングした。ＦＬＴ３タンパク質を欠く対照ウェルと比較して、ヒトＦＬＴ３タンパク質によるＥＬＩＳＡスクリーニングにおいてシグナルを生成する７０の固有の重鎖のみの配列（配列番号１～７０）を同定した（データは表２に提供される）。これらの重可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列は、上記の表１に列挙されている。
Figure 2023527609000004
Figure 2023527609000005
実施例２：ＦＬＴ３結合重鎖のみの単一ドメイン抗体のＦＬＴ３標的化多特異性タンパク質への組み込みと、Ｔ細胞依存性細胞の細胞毒性アッセイ
抗ＦＬＴ３抗体配列を、組換え多特異性タンパク質（配列番号１９６－２６６）の発現用ＤＮＡ構築物にクローニングした。多特異性タンパク質のコード配列は、分泌細胞発現用のシグナルペプチド、抗ＦＬＴ３抗体可変ドメインの１つ（配列番号１－７０）、ヒト化単一ドメイン抗アルブミン抗体可変ドメイン（配列番号３７２）、ヒト化抗ＣＤ３抗体ｓｃＦｖ断片（配列番号３７３）、および６つのヒスチジン配列の繰り返し（配列番号３７４）を含有していた。抗体ドメイン間の接合部には、リンカー配列が挿入された（配列番号３７５）。これらの抗ＦＬＴ３／抗アルブミン／抗ＣＤ３多特異性タンパク質構築物をＥｘｐｉ２９３細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）にトランスフェクトした。トランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３細胞からの調整培地中の多特異性タンパク質の量は、標準として抗ＦＬＴ３／抗アルブミン／抗ＣＤ３タンパク質と同様の分子量の多特異性タンパク質を用いて、プロテインＡチップを備えたＯｃｔｅｔ装置により定量化された。
調整培地をＴ細胞依存性細胞の細胞毒性アッセイで試験した（Ｎａｚａｒｉａｎ ＡＡ，Ａｒｃｈｉｂｅｑｕｅ ＩＬ，Ｎｇｕｙｅｎ ＹＨ，Ｗａｎｇ Ｐ，Ｓｉｎｃｌａｉｒ ＡＭ，Ｐｏｗｅｒｓ ＤＡ．２０１５． Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ．２０：５１９－２７を参照されたい）。このアッセイでは、ＦＬＴ３を発現するルシフェラーゼ標識ＭＶ－４－１１細胞（混合型Ｂ型骨髄単球性白血病細胞株、ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－９５９１（商標））を、精製ヒトＴ細胞、および、抗ＦＬＴ３／抗アルブミン／抗ＣＤ３多特異性タンパク質の滴定と組み合わせた。もし、多特異性タンパク質がＴ細胞にＭＶ－４－１１細胞を殺すように指令を出すならば、実験開始後４８時間目に行ったルシフェラーゼアッセイでのシグナルは減少するはずである。図１－１１は、ＴＤＣＣ生存率の結果を示したグラフである。ＴＤＣＣアッセイからのＥＣ５０値を表３と表４に列挙する。最も効力のある分子のＥＣ５０値は３ｐＭであった。ＴＤＣＣアッセイの陰性対照は、抗ＧＦＰ／抗アルブミン／抗ＣＤ３タンパク質であり、このタンパク質は、試験した最高濃度でのわずかな活性を除いて、Ｔ細胞にＭＶ－４－１１細胞を殺すよう指示しなかった（例えば、図１０および２１）。多特異性タンパク質は抗アルブミンドメインを含有しているため、ＴＤＣＣアッセイも１５ｍｇ／ｍｌのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下で行って、アルブミンと結合している間の指示されたＴ細胞の死滅を測定した（図１２－２１）。試験したすべてのＦＬＴ３標的化多特異性タンパク質について、指示された細胞死滅のＥＣ５０値はＨＳＡの存在下で増加し（表３）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の存在下での指示されたＴ細胞死滅のＥＣ５０値と比較した（図１－１１、表３および４）。多特異性タンパク質中の抗アルブミンドメインはＢＳＡに結合しない（データは示していない）。
Figure 2023527609000006
Figure 2023527609000007
Figure 2023527609000008
実施例３：ヒト化抗ＦＬＴ３重鎖のみの単一ドメイン抗体およびそれを含有する多特異性タンパク質
抗体が活性を失わないようにいくつかのラマフレームワーク配列を保持しつつ、それらのＣＤＲ配列をヒト生殖細胞系配列に移植することにより、ラマ抗ＦＬＴ３抗体配列のうち７つをヒト化した（配列番号７１－７６；３８９－３９０）。これら８つのヒト化配列を、ＣＨＯ細胞における抗ＦＬＴ３／抗アルブミン／抗ＣＤ３多特異性タンパク質（配列番号２６７－２７２；３９１－３９２）の発現のための発現構築物にクローン化した。この構築物をＣＨＯ細胞に安定的にトランスフェクトし、安定したトランスフェクタントのプールを使用して、多特異性タンパク質を発現させた。アフィニティークロマトグラフィーとマルチモーダルクロマトグラフィーを用いて、ＣＨＯ調整培地から多特異性タンパク質を精製した。精製タンパク質のＳＤＳ－ＰＡＧＥ（図２３）から、タンパク質が９５％以上の純度で精製されたことがわかった。精製タンパク質は、分析的なサイズ排除クロマトグラフィーによっても分析され、９９％モノマーであることがわかった（データは示されていない）。これらの精製タンパク質を、ＦＬＴ３発現ＭＶ－４－１１（急性骨髄性白血病細胞株）およびＥＯＬ１細胞（急性骨髄性（好酸球性）白血病細胞株）を用いて実施例２に記載のようにＴＤＣＣアッセイで試験した。アッセイを１５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡまたは１５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で行い、アルブミンに結合している間の指示された細胞死滅を測定した。これらの多特異性タンパク質中の抗アルブミンドメインがＢＳＡと測定不能に結合するため、ＢＳＡはＨＳＡの付加のための陰性対照として機能した。これらのＴＤＣＣアッセイの結果を図２４－２７および図３８－３９にプロットし、指示されたＴ細胞死滅のＥＣ５０値を表５および表６に列挙する。図２４－２５および図３８－３９のＭＶ－４－１１データならびに表５および表６の対応するＥＣ５０値は、２つの異なるＴ細胞ドナーから単離したＴ細胞を用いて行ったアッセイの結果を表している。ＨＳＡ非存在下では両方の細胞株で強力な指示されたＴ細胞死滅が観察され、ＥＣ５０値は１．６ｐＭから２２ｐＭの範囲であった。ＨＳＡの付加によりＥＣ５０値は増加し、１０ｐＭから４０８ｐＭの範囲となった。精製タンパク質はさらに、１５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの非存在下または存在下でＦＬＴ３発現ＴＨＰ１細胞（急性単球性白血病）（図３０および３１）を用いて、１５ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下でＦＬＴ３発現ＭＯＬＭ１３細胞（急性脊髄性白血病）とＨＬ６０（ヒト白血病）細胞（図３２および３３）を用いてＴＤＣＣアッセイで試験された。これらのＴＤＣＣアッセイのデータから算出されたＥＣ５０値も表５に列挙される。ＴＨＰ１細胞では、ＥＣ５０値は、ＨＳＡの非存在下で２３ｐＭから２６８ｐＭ、ＨＳＡの存在下で４６ｐＭから８５６ｐＭの範囲であった。ＭＯＬＭ１３細胞では、ＨＳＡの存在下でＥＣ５０値は３０ｐＭから２２９ｐＭの範囲であり、ＨＬ６０細胞では、ＨＳＡの存在下でＥＣ５０値は５５１ｐＭから５４７８ｐＭの範囲であった。他のすべての細胞株と比較して、ＨＬ６０細胞を用いたＦＬＴ３ ＴｒｉＴＡＣ指示Ｔ細胞死滅の効力は低いものであった。もしＨＬ６０細胞の生存率が後の時点、例えば、７２時間または９６時間目で測定されていたならば、死滅の規模はより大きくなり、死滅はより強力であっただろうと予想される。陰性対照の抗ＧＦＰ／抗アルブミン／抗ＣＤ３タンパク質は、試験した最高濃度（＞１０ｎＭ）でわずかな量の死滅を除いて、これらのＴＤＣＣアッセイでは活性を示さなかった。
Figure 2023527609000009
Figure 2023527609000010
実施例４：抗ＦＬＴ３多特異性タンパク質の親和性決定
精製した多特異性タンパク質のヒトおよびカニクイザルのＦＬＴ３に対する親和性は、ストレプトアビジンチップにビオチン化したヒトまたはカニクイザルＦＬＴ３タンパク質を搭載したＯｃｔｅｔ装置で測定され、ストレプトアビジンチップにはビオチン化されたヒトまたはカニクイザルのＦＬＴ３タンパク質が載せられた。その後、チップを、５０、１６．７、５．６、または１．９ｎＭの多特異性タンパク質を含有する溶液でインキュベートした。表７に示す親和性（ＫＤ）は、抗ＦＬＴ３／抗アルブミン／抗ＣＤ３多特異性タンパク質の捕捉したビオチン化ＦＬＴ３タンパク質との結合のオンレートとオフレートを測定することによって算出した。多特異性タンパク質は、ヒトＦＬＴ３に０．７～８．１ｎＭの範囲の親和性で結合し、カニクイザルＦＬＴ３には２．７～２１４ｎＭの親和性で結合した。
Figure 2023527609000011
実施例２の調整培地を用いて、既知濃度の抗ＦＬＴ３／抗ＣＤ３多特異性タンパク質によって、追加の親和性決定を行った。試験した多特異性タンパク質は、ラマ抗ＦＬＴ３配列ＦＬＬ８、ＦＬＬ４１、ＦＬＬ７１、ＦＬＬ９２、ＦＬＬ１３４、またはＦＬＬ１５３を含む。ストレプトアビジンチップ付きのＯｃｔｅｔ装置にビオチン化したヒトまたはカニクイザルのＦＬＴ３タンパク質を載せ、ビオチン化ＦＬＴ３タンパク質に対する抗ＦＬＴ３／抗ＣＤ３多特異性タンパク質の結合のオンレートとオフレートを測定してＦＬＴ３結合に関するＫＤ値を算出した。親和性の測定は、５０ｎＭ濃度の抗ＦＬＴ３／抗ＣＤ３多特異性タンパク質を用いて行われ、これにより効力のランク付けを行うことができた。測定された相対的な親和性を表８に示す。多特異性タンパク質は、１．４～４１ｎＭの範囲のＫＤ値でヒトＦＬＴ３に結合し、２～１０２ｎＭの範囲のＫＤ値でカニクイザルＦＬＴ３に結合した。
Figure 2023527609000012
実施例５：同所性ＥＯＬ１異種移植モデルにおける腫瘍の縮小と阻害
本開示の例示的なＦＬＴ３標的化多特異性タンパク質のインビボの有効性試験は、ルシフェラーゼおよびＧＦＰを発現するＥＯＬ１、同所性モデルで実施される。ＥＯＬ１ ＬｕｃＧＦＰ細胞を、６～８週齢のメスのＮｏｄ／Ｓｃｉｄ／ＩＬ２Ｒｇ－／－（ＮＳＧ）動物に尾静脈から静脈内注射する。Ｄ－ルシフェリンの腹腔内注射と、その後のイソフルオランによる麻酔と、その後の全身生物発光イメージング（ＢＬＩ）は、腫瘍負荷のモニタリングを可能にするためのものである。腫瘍細胞によって発現されるルシフェラーゼとルシフェリンとの間の相互作用によって放出される生物発光シグナルをイメージングによって捕捉し、使用するトータルフラックス（光子／秒）として定量化する。トータルフラックスが全動物について平均１５Ｅ６に達したとき、動物にＰＢＭＣからの膨張Ｔ細胞をボーラス尾静脈から注射する。簡単に言うと、汎Ｔ細胞を、適切なヒトＴ細胞活性化／拡張キットを用いて活性化する。３日後、１１日目まで２日おきにＩＬ２を添加する。細胞を採取し、活性化／拡大ビーズを磁気的に除去し、細胞を洗浄し、ＰＢＳに再懸濁する。Ｔ細胞注入後２日目に、上記のようにマウスを画像化し、動物を群に無作為に割り当てる。
Ｔ細胞移植後３日目に、本開示のＦＬＴ３標的化多特異性タンパク質および陰性対照ＧＦＰ標的化多特異性タンパク質をボーラス尾静脈注射で単回投与する。ＡＭＬ同所性モデルのエンドポイントである後肢の麻痺を示した時点で、動物を屠殺する。ＦＬＴ３標的化多特異性タンパク質は、用量依存的に腫瘍の縮小を引き起こすことが期待される。
実施例６：カニクイザルにおけるＦＬＴ３ ＴｒｉＴＡＣｓの薬物動態および薬動力学
ＦＬＴ３ ＴｒｉＴＡＣ（配列番号２６９、ＦＬＴ３結合剤ＦＬＨ１９Ｃ、配列番号７３を含む）を、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、および１０００μｇ／ｋｇの用量で、投与群あたり２体の試験対象で、カニクイザルに単回ｉ．ｖボーラス投与した。このＦＬＴ３ ＴｒｉＴＡＣは、カニクイザルＦＬＴ３（表７参照）に結合し、カニクイザルＣＤ３およびカニクイザル血清アルブミンに結合し、バイオレイヤー干渉計を用いて決定されたように、親和性はそれぞれ３．３ｎＭおよび４．４ｎＭであった（データは示していない）。投与後の異なる時点で採取した血清試料中に存在するＦＬＴ３ ＴｒｉＴＡＣの量は、ＦＬＴ３ ＴｒｉＴＡＣ分子の抗ＡＬＢおよび抗ＣＤ３ドメインを認識する標識抗体を捕捉試薬および検出試薬として用いる電気化学発光ＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定された。測定された血清濃度対時間および用量が図３４でプロットされる。これらのデータから算出された薬物動態学的特性を表９に示す。
Figure 2023527609000013
ＦＬＴ３ ＴｒｉＴＡＣが、内因性のカニクイザルＦＬＴ３発現細胞を殺すようにカニクイザルＴ細胞に指示をしたかどうかを決定するために、上記の薬物動態試験から採取した試料において、血清中の可溶性ＦＬＴ３Ｌと全血中のＦＬＴ３ ＲＮＡを測定した。ＦＬＴ３発現細胞の枯渇は、可溶性ＦＬＴ３Ｌの増加をもたらすと予想された（Ｂｒａｕｃｈｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ２０２０；１９：１８７５－８８を参照されたい）。非ヒト霊長類ＦＬＴ３Ｌに特異的な電気化学発光ＥＬＩＳＡ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を用いて、異なる時点で採取した血清試料中のＦＬＴ３Ｌのレベルを測定した（図３５）。１００μｇ／ｋｇと１，０００μｇ／ｋｇの投与群では、可溶性ＦＬＴ３Ｌは試験の時間経過とともに増加した。１０μｇ／ｋｇ投与群の２体の対象のうち１体は、７２時間と１４４時間の時点でＦＬＴ３Ｌがわずかに増加し、３３６時間の時点では投与前のレベルに戻っていた。ＦＬＴ３発現細胞が全血または骨髄から枯渇した場合、全血または骨髄から精製したＲＮＡからＦＬＴ３転写産物が枯渇することが予想された。ＲＮＡはキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて全血または骨髄から精製され、ｃＤＮＡは逆転写酵素反応によって調製され、ｑＰＣＲを使用して、標準曲線ｑＰＣＲ法を用いてＦＬＴ３の存在量を測定した。ＦＮＴＡはハウスキーピング遺伝子としてｑＰＣＲ反応に使用された。図３６では、１００μｇ／ｋｇと１，０００μｇ／ｋｇの群から単離した血液試料についてＦＮＴＡに正規化したＦＴＬ３ ＲＮＡレベルをプロットした。図３７では、１００μｇ／ｋｇと１，０００μｇ／ｋｇの群から単離した骨髄試料についてＦＮＴＡに正規化したＦＴＬ３ ＲＮＡレベルをプロットした。投与前に採取した試料と比較して、ＦＬＴ３ ＲＮＡは、測定した全ての時点において大幅に減少している。ＦＬＴ３ＬとＦＬＴ３のＲＮＡデータを組み合わせると、ＦＬＴ３ ＴｒｉＴＡＣは、１００μｇ／ｋｇと１，０００μｇ／ｋｇで投与されると、カニクイザルにおいてＦＬＴ３発現細胞を除去することが示されている。
本発明の好ましい実施形態が本明細書中で示され、記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されているに過ぎないことが当業者に明らかであろう。当業者であれば、多くの変更、変化、および置換が、本発明から逸脱することなく思いつくだろう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代替案が、本発明の実施に際して利用され得ることを理解されたい。以下の請求項は本発明の範囲を定義するものであり、この請求項とその均等物の範囲内の方法、および構造体がそれによって包含されるものであるということが意図されている。
Figure 2023527609000014
Figure 2023527609000015
Figure 2023527609000016
Figure 2023527609000017
Figure 2023527609000018
Figure 2023527609000019
Figure 2023527609000020
Figure 2023527609000021
Figure 2023527609000022
Figure 2023527609000023
Figure 2023527609000024
Figure 2023527609000025
Figure 2023527609000026
Figure 2023527609000027
Figure 2023527609000028
Figure 2023527609000029
Figure 2023527609000030
Figure 2023527609000031
Figure 2023527609000032
Figure 2023527609000033
Figure 2023527609000034
Figure 2023527609000035
Figure 2023527609000036
Figure 2023527609000037
Figure 2023527609000038
Figure 2023527609000039
Figure 2023527609000040
Figure 2023527609000041
Figure 2023527609000042
Figure 2023527609000043
Figure 2023527609000044
Figure 2023527609000045
Figure 2023527609000046
Figure 2023527609000047
Figure 2023527609000048
Figure 2023527609000049
Figure 2023527609000050
Figure 2023527609000051
Figure 2023527609000052
Figure 2023527609000053
Figure 2023527609000054
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Figure 2023527609000057
Figure 2023527609000058
Figure 2023527609000059
Figure 2023527609000060
Figure 2023527609000061

Claims (74)

  1. 少なくとも３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含むＦＬＴ３結合ドメインであって、
    ここで、
    ＣＤＲ１は、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列、または、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
    ＣＤＲ２は、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列、または、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
    ＣＤＲ３は、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列、または、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む、ＦＬＴ３結合ドメイン。
  2. 配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）の以下のセット：
    配列番号７７、１０９、および１５５、
    配列番号７８、１０９、および１５５、
    配列番号７９、１１０、および１５６、
    配列番号８０、１１１、および１５５、
    配列番号８１、１１２、および１５５、
    配列番号７７、１１３、および１５７、
    配列番号８２、１１０、および１５６、
    配列番号７７、１１４、および１５８、
    配列番号８０、１１１、および１５５、
    配列番号８３、１１５、および１５５、
    配列番号８４、１１１、および１５５、
    配列番号７９、１１６、および１５６、
    配列番号８５、１１１、および１５５、
    配列番号８６、１１０、および１５６、
    配列番号８７、１１０、および１５６、
    配列番号８８、１１７、および１５９、
    配列番号８８、１１８、および１６０、
    配列番号８８、１１９、および１６１、
    配列番号８８、１２０、および１６２、
    配列番号８８、１２１、および１６３、
    配列番号８８、１２２、および１６４、
    配列番号８８、１２１、および１６５、
    配列番号８８、１２１、および１６６、
    配列番号８８、１２２、および１６７、
    配列番号８８、１２２、および１６８、
    配列番号８８、１２１、および１６９、
    配列番号８８、１１８、および１６５、
    配列番号８８、１２３、および１７０、
    配列番号８８、１２４、および１７１、
    配列番号８８、１１７、および１７２、
    配列番号８９、１２５、および１７３、
    配列番号９０、１２６、および１７４、
    配列番号９０、１２７、および１７５、
    配列番号９０、１２５、および１７６、
    配列番号９０、１２８、および１７５、
    配列番号９０、１２８、および１７７、
    配列番号９１、１２９、および１７８、
    配列番号９１、１３０、および１７８、
    配列番号９２、１３１、および１７８、
    配列番号９３、１３２、および１７８、
    配列番号９４、１３３、および１７９、
    配列番号９１、１３４、および１７８、
    配列番号９５、１３５、および１８０、
    配列番号９６、１３６、および１８１、
    配列番号９７、１３７、および１８２、
    配列番号９７、１３８、および１８３、
    配列番号９８、１３９、および１８４、
    配列番号９９、１３９、および１８５、
    配列番号１００、１４０、および１８６、
    配列番号１０１、１４１、および１８７、
    配列番号１０２、１４２、および１８８、
    配列番号１０３、１４３、および１８９、
    配列番号１０４、１４４、および１９０、
    配列番号１０５、１４５、および１９１、
    配列番号１０６、１４６、および１９２、
    配列番号１０７、１４７、および１９３、
    配列番号１０８、１４８、および１９４、
    配列番号９１、１４９、および１９５、
    配列番号９１、１５０、および１９５、
    配列番号１００、１５１、および１８６、
    配列番号９２、１５２、および１９５、
    配列番号９３、１５３、および１９５、
    配列番号９１、１５４、および１９５、
    配列番号８９、３９３、および１７３、ならびに、
    配列番号８９、３９４、および１７３
    の少なくとも１つを含む、請求項１に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  3. 配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）の以下のセット：
    配列番号８９、３９３、および１７３、
    配列番号８９、３９４、および１７３、
    配列番号１００、１５１、および１８６、ならびに、
    配列番号９１、１４９、および１９５
    の少なくとも１つを含む、請求項１または２に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  4. 前記ＦＬＴ３結合ドメインは、フレームワーク領域１、フレームワーク領域２、フレームワーク領域３、およびフレームワーク領域４をさらに含み、ここで、前記フレームワーク領域１は、配列番号２７３－３０１からなる群から選択される配列を含み、前記フレームワーク領域２は、配列番号３０２－３２２、３９５、および４０６－４０７からなる群から選択される配列を含み、前記フレームワーク領域３は、配列番号３２３－３６５および３９６からなる群から選択される配列を含み、前記フレームワーク領域４は、配列番号３６６－３７１からなる群から選択される配列を含む、請求項１－３のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  5. 配列番号１－７６および３８９－３９０からなる群から選択される配列に少なくとも約６０％同一である配列を含む、請求項１－４のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  6. 配列番号７１－７６および３８９－３９０からなる群から選択される配列に少なくとも約７０％同一である配列を含む、請求項５に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  7. 前記ＦＬＴ３結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片である、請求項１－６のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  8. 前記抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、二重特異性抗体、三重特異性抗体、一価抗体、多価抗体、ｈｃＩｇＧ、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖＦｃ、ｓｃＦｖ－ジッパー、ジ－ｓｃＦｖ、タンデムｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ、ｓｄＡｂ、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＨドメイン、半抗体、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムダイアボディ、タンデム・ジ－ｓｃＦｖ、またはタンデム・トリ－ｓｃＦｖの少なくとも１つを含む、請求項７に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  9. 前記ＦＬＴ３結合ドメインはｓｄＡｂである、請求項８に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  10. 前記ＦＬＴ３結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片の一部である、請求項１－６のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  11. 前記抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、二重特異性抗体、多特異性抗体、一価抗体、多価抗体、ｈｃＩｇＧ、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖＦｃ、ｓｃＦｖ－ジッパー、ジ－ｓｃＦｖ、タンデムｓｃＦｖ、半抗体、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムダイアボディ、タンデム・ジ－ｓｃＦｖ、またはタンデム・トリ－ｓｃＦｖの少なくとも１つを含む、請求項１０に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  12. 前記ＦＬＴ３結合ドメインは、前記抗体またはその抗原結合断片の一部であり、前記抗体またはその抗原結合断片は二重特異性抗体を含む、請求項１１に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  13. 前記二重特異性抗体は、（ｉ）ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）と（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメインを含む、請求項１２に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  14. ＣＤ３はヒトＣＤ３を含む、請求項１３に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  15. 抗ＦＬＴ３ドメインはｓｄＡｂである、請求項１３または１４に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  16. 抗ＣＤ３ドメインはｓｃＦｖである、請求項１３－１５のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  17. 前記ＦＬＴ３結合ドメインは、前記抗体またはその抗原結合断片の一部であり、前記抗体またはその抗原結合断片は多特異性抗体を含む、請求項１１に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  18. 前記多特異性抗体は、（ｉ）ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）、（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメイン（抗ＣＤ３）、および、（ｉｉｉ）アルブミン結合ドメイン（抗ＡＬＢ）を含む、請求項１７に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  19. ＣＤ３はヒトＣＤ３を含む、請求項１８に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  20. アルブミンは血清アルブミンを含む、請求項１８または１９に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  21. 前記血清アルブミンはヒト血清アルブミンである、請求項２０に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  22. 前記ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）、前記ＣＤ３結合ドメイン（抗ＣＤ３）、および前記アルブミン結合ドメイン（抗ＡＬＢ）は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のフォーマット：
    抗ＡＬＢ：抗ＦＬＴ３：抗ＣＤ３、
    抗ＣＤ３：抗ＦＬＴ３：抗ＡＬＢ、
    抗ＦＬＴ３：抗ＣＤ３：抗ＡＬＢ、
    抗ＡＬＢ：抗ＣＤ３：抗ＦＬＴ３、
    抗ＦＬＴ３：抗ＡＬＢ：抗ＣＤ３、および、
    抗ＣＤ３：抗ＡＬＢ：抗ＦＬＴ３
    の少なくとも１つにある、請求項１８－２１のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  23. 抗ＦＬＴ３ドメインはｓｄＡｂである、請求項１８－２２のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  24. 抗ＣＤ３ドメインはｓｃＦｖである、請求項１８－２３のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  25. 抗ＡＬＢドメインはｓｄＡｂである、請求項１８－２４のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  26. 抗ＣＤ３ドメインは、配列番号３７３に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１８－２５のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  27. 抗ＡＬＢドメインは、配列番号３７２に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１８－２６のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  28. 前記ＦＬＴ３結合ドメインはヒトＦＬＴ３およびカニクイザルＦＬＴ３に結合する、請求項１－２７のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  29. Ｔ細胞依存性細胞の細胞毒性アッセイにおいて、少なくとも約０．５ｐＭ～約６０００ｐＭの最大半量有効濃度（ＥＣ５０）を有するＦＬＴ３結合ドメインであって、
    ここで、前記細胞毒性アッセイは、ＦＬＴ－３発現細胞のＴ細胞媒介性死滅におけるＦＬＴ３結合ドメインのＥＣ５０を測定する、ＦＬＴ３結合ドメイン。
  30. 前記ＦＬＴ－３発現細胞は、白血病細胞である、請求項２９に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  31. 前記白血病細胞は細胞株由来であり、前記細胞株は、ＭＶ－４－１１、ＥＯＬ１、ＴＨＰ１、ＭＯＬＭ３、またはＨＬ６０である、請求項３０に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  32. 少なくとも３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含み、
    ここで、
    ＣＤＲ１は、配列番号８９、９１、９２、９３、および１００からなる群から選択される配列、または配列番号８９、９１、９２、９３、および１００からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
    ＣＤＲ２は、配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、３９３、および３９４からなる群から選択される配列、または配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、３９３、および３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
    ＣＤＲ３は、配列番号１７３、１８６、および１９５からなる群から選択される配列、または配列番号１７３、１８６、および１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む、請求項２９－３１のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  33. 配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）の以下のセット：
    配列番号９１、１４９、および１９５、
    配列番号９１、１５０、および１９５、
    配列番号１００、１５１、および１８６、
    配列番号９２、１５２、および１９５、
    配列番号９３、１５３、および１９５、
    配列番号９１、１５４、および１９５、
    配列番号８９、３９３、および１７３、ならびに、
    配列番号８９、３９４、および１７３
    の少なくとも１つを含む、請求項３２に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  34. 配列番号７１－７６および３８９－３９０からなる群から選択される配列に少なくとも約７０％同一である配列を含む、請求項２９－３３のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  35. 前記ＦＬＴ３結合ドメインは多特異性抗体の一部である、請求項２９－３４のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  36. 前記多特異性抗体は、（ｉ）ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）、（ｉｉ）ＣＤ３結合ドメイン（抗ＣＤ３）、および、（ｉｉｉ）アルブミン結合ドメイン（抗ＡＬＢ）を含む、請求項３５に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  37. ＣＤ３はヒトＣＤ３を含む、請求項３６に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  38. アルブミンは血清アルブミンを含む、請求項３６または３７に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  39. 前記血清アルブミンはヒト血清アルブミンである、請求項３８に記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  40. 前記ＦＬＴ３結合ドメイン（抗ＦＬＴ３）、前記ＣＤ３結合ドメイン（抗ＣＤ３）、および前記アルブミン結合ドメイン（抗ＡＬＢ）は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のフォーマット：
    抗ＡＬＢ：抗ＦＬＴ３：抗ＣＤ３、
    抗ＣＤ３：抗ＦＬＴ３：抗ＡＬＢ、
    抗ＦＬＴ３：抗ＣＤ３：抗ＡＬＢ、
    抗ＡＬＢ：抗ＣＤ３：抗ＦＬＴ３、
    抗ＦＬＴ３：抗ＡＬＢ：抗ＣＤ３、および、
    抗ＣＤ３：抗ＡＬＢ：抗ＦＬＴ３
    の少なくとも１つにある、請求項３６－３９のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  41. 前記抗ＦＬＴ３ドメインはｓｄＡｂである、請求項２９－４０のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  42. 前記抗ＣＤ３ドメインはｓｃＦｖである、請求項３６－４１のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  43. 前記抗ＡＬＢドメインはｓｄＡｂである、請求項３６－４２のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  44. 前記抗ＣＤ３ドメインは、配列番号３７３に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３６－４３のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  45. 前記抗ＡＬＢドメインは、配列番号３７２に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３６－４４のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  46. 前記ＦＬＴ３結合ドメインはヒトＦＬＴ３、カニクイザルＦＬＴ３、またはその両方に結合する、請求項３６－４５のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン。
  47. 同一の親和性または最大で約５８倍異なる親和性でヒトＦＬＴ３およびカニクイザルＦＬＴ３に結合するＦＬＴ３結合ドメイン。
  48. （Ａ）ヒトＣＤ３と結合する第１のドメイン、
    （Ｂ）ヒト血清アルブミンタンパク質と結合する第２のドメイン、および
    （Ｃ）ヒトＦＬＴ３またはカニクイザルＦＬＴ３と結合する第３のドメイン
    を含む、ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質であって、
    ここで、ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の配向：Ｈ２Ｎ－（Ａ）－（Ｃ）－（Ｂ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｂ）－（Ａ）－（Ｃ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｃ）－（Ｂ）－（Ａ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｃ）－（Ａ）－（Ｂ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ａ）－（Ｂ）－（Ｃ）－ＣＯＯＨ、または、Ｈ２Ｎ－（Ｂ）－（Ｃ）－（Ａ）－ＣＯＯＨ、あるいは、Ｎ末端からＣ末端まで、リンカーＬ１およびＬ２を介して、Ｈ２Ｎ－（Ａ）－Ｌ１－（Ｃ）－Ｌ２－（Ｂ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｂ）－Ｌ１－（Ａ）－Ｌ２－（Ｃ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｃ）－Ｌ１－（Ｂ）－Ｌ２－（Ａ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ｃ）－Ｌ１－（Ａ）－Ｌ２－（Ｂ）－ＣＯＯＨ、Ｈ２Ｎ－（Ａ）－Ｌ１－（Ｂ）－Ｌ２－（Ｃ）－ＣＯＯＨ、または、Ｈ２Ｎ－（Ｂ）－Ｌ１－（Ｃ）－Ｌ２－（Ａ）－ＣＯＯＨのいずれか１つに従って連結される、ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質。
  49. 前記第１のドメインは、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３を含む重鎖と、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、またはＬＣ ＣＤＲ３を含む軽鎖とを含むｓｃＦｖであり、ＨＣ ＣＤＲ１は、配列番号３９７のアミノ酸配列、または配列番号３９７の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、ＨＣ ＣＤＲ２は、配列番号３９８のアミノ酸配列、または配列番号３９８の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、ＨＣ ＣＤＲ３は、配列番号３９９のアミノ酸配列、または配列番号３９９の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、ＬＣ ＣＤＲ１は、配列番号４００のアミノ酸配列、または配列番号４００の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、ＬＣ ＣＤＲ２は、配列番号４０１のアミノ酸配列、または配列番号４０１の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、および、ＬＣ ＣＤＲ３は、配列番号４０２のアミノ酸配列、または配列番号４０２の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項４８に記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質。
  50. 前記第１のドメインは、配列番号３７３に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖである、請求項４８または４９に記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質。
  51. 前記第２のドメインは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むｓｄＡｂであり、ＣＤＲ１は、配列番号４０３のアミノ酸配列、または配列番号４０３の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は、配列番号４０４のアミノ酸配列、または配列番号４０４の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、および、ＣＤＲ３は、配列番号４０５のアミノ酸配列、または配列番号４０５の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項４８－５０のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質。
  52. 前記第２のドメインは、配列番号３７２に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むｓｄＡｂである、請求項４８－５１のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質。
  53. 前記第３のドメインは、少なくとも３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含むｓｄＡｂであり、ここで、
    ＣＤＲ１は、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列、または、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
    ＣＤＲ２は、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列、または、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
    ＣＤＲ３は、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列、または、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む、請求項４８－５２のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質。
  54. 前記第３のドメインは、配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）の以下のセット：
    配列番号７７、１０９、および１５５、
    配列番号７８、１０９、および１５５、
    配列番号７９、１１０、および１５６、
    配列番号８０、１１１、および１５５、
    配列番号８１、１１２、および１５５、
    配列番号７７、１１３、および１５７、
    配列番号８２、１１０、および１５６、
    配列番号７７、１１４、および１５８、
    配列番号８０、１１１、および１５５、
    配列番号８３、１１５、および１５５、
    配列番号８４、１１１、および１５５、
    配列番号７９、１１６、および１５６、
    配列番号８５、１１１、および１５５、
    配列番号８６、１１０、および１５６、
    配列番号８７、１１０、および１５６、
    配列番号８８、１１７、および１５９、
    配列番号８８、１１８、および１６０、
    配列番号８８、１１９、および１６１、
    配列番号８８、１２０、および１６２、
    配列番号８８、１２１、および１６３、
    配列番号８８、１２２、および１６４、
    配列番号８８、１２１、および１６５、
    配列番号８８、１２１、および１６６、
    配列番号８８、１２２、および１６７、
    配列番号８８、１２２、および１６８、
    配列番号８８、１２１、および１６９、
    配列番号８８、１１８、および１６５、
    配列番号８８、１２３、および１７０、
    配列番号８８、１２４、および１７１、
    配列番号８８、１１７、および１７２、
    配列番号８９、１２５、および１７３、
    配列番号９０、１２６、および１７４、
    配列番号９０、１２７、および１７５、
    配列番号９０、１２５、および１７６、
    配列番号９０、１２８、および１７５、
    配列番号９０、１２８、および１７７、
    配列番号９１、１２９、および１７８、
    配列番号９１、１３０、および１７８、
    配列番号９２、１３１、および１７８、
    配列番号９３、１３２、および１７８、
    配列番号９４、１３３、および１７９、
    配列番号９１、１３４、および１７８、
    配列番号９５、１３５、および１８０、
    配列番号９６、１３６、および１８１、
    配列番号９７、１３７、および１８２、
    配列番号９７、１３８、および１８３、
    配列番号９８、１３９、および１８４、
    配列番号９９、１３９、および１８５、
    配列番号１００、１４０、および１８６、
    配列番号１０１、１４１、および１８７、
    配列番号１０２、１４２、および１８８、
    配列番号１０３、１４３、および１８９、
    配列番号１０４、１４４、および１９０、
    配列番号１０５、１４５、および１９１、
    配列番号１０６、１４６、および１９２、
    配列番号１０７、１４７、および１９３、
    配列番号１０８、１４８、および１９４、
    配列番号９１、１４９、および１９５、
    配列番号９１、１５０、および１９５、
    配列番号１００、１５１、および１８６、
    配列番号９２、１５２、および１９５、
    配列番号９３、１５３、および１９５、
    配列番号９１、１５４、および１９５、
    配列番号８９、３９３、および１７３、ならびに、
    配列番号８９、３９４、および１７３
    の少なくとも１つを含む、請求項４８－５３のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質。
  55. 配列番号１９６－２７２および３９１－３９２からなる群から選択される配列、または配列番号１９６－２７２および３９１－３９２からなる群から選択される配列と少なくとも約８０％同一である配列を含む、請求項４８－５４のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質。
  56. 非ＣＤＲループ、切断可能なリンカー、ＦＬＴ３結合ドメイン、およびＣＤ３結合ドメインを含む結合部分を含む、ＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質であって、ここで、前記非ＣＤＲループは、ＦＬＴ３結合ドメインに結合することができ、前記結合部分は、ＦＬＴ３結合ドメインのその標的に対する結合をマスキングすることができる、ＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質。
  57. 前記ＣＤ３結合ドメインは、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３を含む重鎖と、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、またはＬＣ ＣＤＲ３を含む軽鎖とを含むｓｃＦｖであり、ＨＣ ＣＤＲ１は配列番号３９７のアミノ酸配列、または配列番号３９７の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、ＨＣ ＣＤＲ２は配列番号３９８のアミノ酸配列、または配列番号３９８の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、ＨＣ ＣＤＲ３は、配列番号３９９のアミノ酸配列、または配列番号３９９の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、ＬＣ ＣＤＲ１は、配列番号４００のアミノ酸配列、または配列番号４００の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、ＬＣ ＣＤＲ２は、配列番号４０１のアミノ酸配列、または配列番号４０１の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含み、および、ＬＣ ＣＤＲ３は、配列番号４０２のアミノ酸配列、または配列番号４０２の配列に１つ以上の置換を含むアミノ酸配列を含む、
    請求項５６に記載のＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質。
  58. 前記ＣＤ３結合ドメインは、配列番号３７３に記載の配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである、請求項５６または５７に記載のＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質。
  59. 前記ＦＬＴ３結合ドメインは、少なくとも３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含むｓｄＡｂであり、ここで、
    ＣＤＲ１は、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列、または、配列番号７７－１０８からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
    ＣＤＲ２は、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列、または、配列番号１０９－１５４および３９３－３９４からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含み、
    ＣＤＲ３は、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列、または、配列番号１５５－１９５からなる群から選択される配列に１つ以上のアミノ酸置換を含む配列を含む、請求項５６－５８のいずれかに記載のＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質。
  60. 前記ＦＬＴ３結合ドメインは、配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）の以下のセット：
    配列番号７７、１０９、および１５５、
    配列番号７８、１０９、および１５５、
    配列番号７９、１１０、および１５６、
    配列番号８０、１１１、および１５５、
    配列番号８１、１１２、および１５５、
    配列番号７７、１１３、および１５７、
    配列番号８２、１１０、および１５６、
    配列番号７７、１１４、および１５８、
    配列番号８０、１１１、および１５５、
    配列番号８３、１１５、および１５５、
    配列番号８４、１１１、および１５５、
    配列番号７９、１１６、および１５６、
    配列番号８５、１１１、および１５５、
    配列番号８６、１１０、および１５６、
    配列番号８７、１１０、および１５６、
    配列番号８８、１１７、および１５９、
    配列番号８８、１１８、および１６０、
    配列番号８８、１１９、および１６１、
    配列番号８８、１２０、および１６２、
    配列番号８８、１２１、および１６３、
    配列番号８８、１２２、および１６４、
    配列番号８８、１２１、および１６５、
    配列番号８８、１２１、および１６６、
    配列番号８８、１２２、および１６７、
    配列番号８８、１２２、および１６８、
    配列番号８８、１２１、および１６９、
    配列番号８８、１１８、および１６５、
    配列番号８８、１２３、および１７０、
    配列番号８８、１２４、および１７１、
    配列番号８８、１１７、および１７２、
    配列番号８９、１２５、および１７３、
    配列番号９０、１２６、および１７４、
    配列番号９０、１２７、および１７５、
    配列番号９０、１２５、および１７６、
    配列番号９０、１２８、および１７５、
    配列番号９０、１２８、および１７７、
    配列番号９１、１２９、および１７８、
    配列番号９１、１３０、および１７８、
    配列番号９２、１３１、および１７８、
    配列番号９３、１３２、および１７８、
    配列番号９４、１３３、および１７９、
    配列番号９１、１３４、および１７８、
    配列番号９５、１３５、および１８０、
    配列番号９６、１３６、および１８１、
    配列番号９７、１３７、および１８２、
    配列番号９７、１３８、および１８３、
    配列番号９８、１３９、および１８４、
    配列番号９９、１３９、および１８５、
    配列番号１００、１４０、および１８６、
    配列番号１０１、１４１、および１８７、
    配列番号１０２、１４２、および１８８、
    配列番号１０３、１４３、および１８９、
    配列番号１０４、１４４、および１９０、
    配列番号１０５、１４５、および１９１、
    配列番号１０６、１４６、および１９２、
    配列番号１０７、１４７、および１９３、
    配列番号１０８、１４８、および１９４、
    配列番号９１、１４９、および１９５、
    配列番号９１、１５０、および１９５、
    配列番号１００、１５１、および１８６、
    配列番号９２、１５２、および１９５、
    配列番号９３、１５３、および１９５、
    配列番号９１、１５４、および１９５、
    配列番号８９、３９３、および１７３、ならびに、
    配列番号８９、３９４、および１７３
    の少なくとも１つを含む、請求項５６－５９のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質。
  61. 請求項１－４７のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
  62. 請求項４８－５５のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
  63. 請求項５６－６０のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
  64. 請求項１－４７のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメインの生成のためのプロセスであって、前記プロセスは、請求項１－４７のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメインの発現を可能にする条件下で、前記ＦＬＴ３結合ドメインをコードする核酸配列を含むベクターを用いて形質転換されたかトランスフェクトされた宿主を培養する工程と、培養物から生成されたタンパク質を回収および精製する工程とを含む、プロセス。
  65. 請求項４８－５５のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質の生成のためのプロセスであって、前記プロセスは、請求項４８－５５のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質の発現を可能にする条件下で、前記ＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質をコードする核酸配列を含むベクターを用いて形質転換されたかトランスフェクトされた宿主を培養する工程と、培養物から生成されたタンパク質を回収および精製する工程とを含む、プロセス。
  66. 請求項５６－６０のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質の生成のためのプロセスであって、前記プロセスは、請求項５６－６０のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質の発現を可能にする条件下で、前記ＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質をコードする核酸配列を含むベクターを用いて形質転換されたかトランスフェクトされた宿主を培養する工程と、培養物から生成されたタンパク質を回収および精製する工程とを含む、プロセス。
  67. 増殖性疾患または腫瘍性疾患の処置または改善のための方法であって、請求項１－４７のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン、または請求項６１に記載の医薬組成物の、対象への投与を含む、方法。
  68. 増殖性疾患または腫瘍性疾患の処置または改善のための方法であって、請求項４８－５５のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質、または請求項６２に記載の医薬組成物の、対象への投与を含む、方法。
  69. 増殖性疾患または腫瘍性疾患の処置または改善のための方法であって、請求項５６－６０のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質、または請求項６３に記載の医薬組成物の、対象への投与を含む、方法。
  70. 前記対象はヒトである、請求項６７－６９のいずれか１つに記載の方法。
  71. 請求項１－４７のいずれか１つに記載のＦＬＴ３結合ドメイン、請求項４８－５５のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化三重特異性タンパク質、請求項５６－６０のいずれか１つに記載のＦＬＴ３標的化条件付き活性結合タンパク質、または請求項６１－６３のいずれか１つに記載の医薬組成物と組み合わせた薬剤の投与をさらに含む、請求項６９に記載の方法。
  72. 前記腫瘍性疾患は血液悪性腫瘍を含む、請求項６７－７１のいずれか１つに記載の方法。
  73. 前記血液悪性腫瘍は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群、または慢性骨髄単球性白血病を含む、請求項７２に記載の方法。
  74. 前記腫瘍性疾患は、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病、未分化のＡＭＬ（ＭＯ）、骨髄芽球性白血病（Ｍ１）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞成熟を伴う）、前骨髄性白血病（Ｍ３またはＭ３変異体［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（Ｍ４または好酸球増加症を伴うＭ４変異体［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、単離された顆粒球性肉腫および緑色腫；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＥＩＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球性Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化（例えば、Ｋｉ １＋）大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸Ｔ細胞リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性；およびリンパ腫／白血病（Ｔ－Ｌｂｌｙ／Ｔ－ＡＬＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後のリンパ球増殖性疾患、組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ球系の造血器腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉症またはセザリー症候群とも呼ばれる）、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、Ｔ細胞／組織球が豊富な大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ｌｅｇタイプ）、高齢者のＥＢＶ陽性のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、炎症に関連するびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心キャッスルマン病で生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との間の中間の特徴を持つ分類不能のＢ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫リンパ形質細胞性リンパ腫との間の中間の特徴を持つ分類不能のＢ細胞リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無症候性骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞リンパ腫；骨髄系の造血器腫瘍、線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉系起原の腫瘍；セミノーマ、奇形癌腫、星細胞腫、神経鞘腫を含む中枢神経と末梢神経の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫、および骨肉腫を含む間葉系起原の腫瘍；ならびに、メラノーマ、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、セミノーマ、甲状腺濾胞癌および奇形癌腫、リンパ球系の造血器腫瘍、例えば、Ｔ細胞およびＢ細胞腫瘍、限定されないが、小細胞型および大脳細胞型を含むＴ－リンパ球性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）などのＴ細胞障害を含む他の腫瘍；好ましくは、Ｔ細胞型の大型顆粒リンパ球白血病（ＬＧＬ）；ａ／ｄ Ｔ－ＮＨＬ肝臓リンパ腫；末梢性／胸腺後のＴ細胞性リンパ腫（多形態性および免疫芽球性サブタイプ）；血管中枢性（鼻）Ｔ細胞リンパ腫；頭頸部癌、腎癌、直腸癌、甲状腺の癌；急性骨髄性リンパ腫、およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項６７－７１のいずれか１つに記載の方法。
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