HU225649B1 - Isolable, water soluble, hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers to modify surfaces and molecules, process for producing thereof, biologically active conjugates thereof and process for producing said conjugates - Google Patents
Isolable, water soluble, hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers to modify surfaces and molecules, process for producing thereof, biologically active conjugates thereof and process for producing said conjugates Download PDFInfo
- Publication number
- HU225649B1 HU225649B1 HU9601253A HU9601253A HU225649B1 HU 225649 B1 HU225649 B1 HU 225649B1 HU 9601253 A HU9601253 A HU 9601253A HU 9601253 A HU9601253 A HU 9601253A HU 225649 B1 HU225649 B1 HU 225649B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- moiety
- sulfone
- polymer
- active
- activated
- Prior art date
Links
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 title claims abstract description 221
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 title claims abstract description 103
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 24
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 title claims description 113
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 23
- -1 poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 title description 15
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 claims abstract description 73
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 76
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 72
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 72
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 72
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical group C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 70
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 54
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 40
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- LUYAMNYBNTVQJG-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-(2-chloroethylsulfonyl)ethane Chemical compound ClCCS(=O)(=O)CCCl LUYAMNYBNTVQJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- MBDUIEKYVPVZJH-UHFFFAOYSA-N 1-ethylsulfonylethane Chemical compound CCS(=O)(=O)CC MBDUIEKYVPVZJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 25
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 25
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 23
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 21
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 19
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 claims description 18
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 17
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 16
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 16
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 15
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 14
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical group OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 13
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 13
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 13
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 claims description 13
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 claims description 12
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 10
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 claims description 7
- GHKCSRZBNZQHKW-UHFFFAOYSA-N 1-sulfanylethanol Chemical group CC(O)S GHKCSRZBNZQHKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 claims description 6
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 6
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 5
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 5
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 5
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 5
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Polymers OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 4
- FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N Sorbitol Polymers OCC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N 0.000 claims description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 4
- 150000002303 glucose derivatives Polymers 0.000 claims description 4
- 150000002304 glucoses Polymers 0.000 claims description 4
- 125000002791 glucosyl group Polymers C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 4
- 150000002314 glycerols Polymers 0.000 claims description 4
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 claims description 2
- 125000002603 chloroethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])Cl 0.000 claims description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 229920005604 random copolymer Polymers 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 229920001897 terpolymer Polymers 0.000 claims description 2
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 claims 14
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 3
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 claims 2
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 claims 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical class OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 16
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 10
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 10
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 10
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 9
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical class CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000002243 precursor Chemical group 0.000 description 8
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 7
- YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 4-toluenesulfonyl chloride Chemical compound CC1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 6
- 125000001174 sulfone group Chemical group 0.000 description 6
- 239000012359 Methanesulfonyl chloride Substances 0.000 description 5
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N fluorescamine Chemical compound C12=CC=CC=C2C(=O)OC1(C1=O)OC=C1C1=CC=CC=C1 ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N methanesulfonyl chloride Chemical compound CS(Cl)(=O)=O QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 3
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- CMPGARWFYBADJI-UHFFFAOYSA-L tungstic acid Chemical compound O[W](O)(=O)=O CMPGARWFYBADJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000000061 acid fraction Substances 0.000 description 2
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 2
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000002473 artificial blood Substances 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 2
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 2
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N cystine group Chemical group C([C@@H](C(=O)O)N)SSC[C@@H](C(=O)O)N LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- XGMDYIYCKWMWLY-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroethanesulfonic acid Chemical class OS(=O)(=O)CC(F)(F)F XGMDYIYCKWMWLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical class S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 description 1
- 201000010273 Porphyria Cutanea Tarda Diseases 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010047513 Vision blurred Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010533 azeotropic distillation Methods 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- ZFSLODLOARCGLH-UHFFFAOYSA-N isocyanuric acid Chemical compound OC1=NC(O)=NC(O)=N1 ZFSLODLOARCGLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical class C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-M methanesulfonate group Chemical group CS(=O)(=O)[O-] AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004170 methylsulfonyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003014 phosphoric acid esters Chemical class 0.000 description 1
- NUSQOFAKCBLANB-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine tetrasulfonic acid Chemical compound C12=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C2C(N=C2NC(C3=CC=C(C=C32)S(O)(=O)=O)=N2)=NC1=NC([C]1C=CC(=CC1=1)S(O)(=O)=O)=NC=1N=C1[C]3C=CC(S(O)(=O)=O)=CC3=C2N1 NUSQOFAKCBLANB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 229960001922 sodium perborate Drugs 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 150000003890 succinate salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-M toluene-4-sulfonate Chemical compound CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000005147 toluenesulfonyl group Chemical group C=1(C(=CC=CC1)S(=O)(=O)*)C 0.000 description 1
- 125000005490 tosylate group Chemical group 0.000 description 1
- TUQOTMZNTHZOKS-UHFFFAOYSA-N tributylphosphine Chemical compound CCCCP(CCCC)CCCC TUQOTMZNTHZOKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N triethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CC ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
- C08G65/334—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing sulfur
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/321—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds
- C08G65/326—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds containing sulfur
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
- Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
- Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
- Y10S530/816—Attached to the carrier via a bridging agent
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Polyethers (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
- Treatments Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)
Description
A találmány tárgyát polietilénglikol és rokon hidrofil polimerek aktív származékai képezik, valamint ezek előállítására szolgáló eljárás és alkalmazásuk felületek és molekulák jellemzőinek módosítására, nevezetesen bilógiailag aktív konjugátumok előállítására, valamint maguk a biológiailag aktív konjugátumok.
Vizsgálták a polietilénglikol (a továbbiakban „PEG”) alkalmazhatóságát gyógyszerekben, mesterséges implantátumokban és más olyan alkalmazási területeken, ahol a biológiai kompatibilitás jelentőséggel bír. A polietilénglikol különböző származékait („PEG-származékok”) javasolták, mint olyan aktív egységet tartalmazókat, amelyek lehetővé teszik a PEG-nek gyógyszerekhez és implantátumokhoz való kapcsolását, valamint molekulákhoz és felületekhez való kapcsolását általában a molekulák vagy felületek fizikai vagy kémiai jellemzőinek módosítására.
Például PEG-származékokat javasoltak a PEG-nek felületekhez való kapcsolására a nedvesíthetőség, a statikus feltöltődés és más molekulatípusoknak, köztük proteineknek vagy proteinmaradékoknak a felületekhez való kapcsolása szabályozása céljára. Közelebbről, PEG-származékokat javasoltak műanyag kontaktlencsék felületéhez való kapcsolásra annak érdekében, hogy csökkentsék a proteinek ezekre való rárakódását és a látás elhomályosítását. PEG-származékokat javasoltak mesterséges véredényekhez való kapcsolásra a proteinlerakódás csökkentésére, és ezáltal az elzáródás csökkentésére. PEG-származékokat javasoltak proteinek felületeken való rögzítésére, például kémiai reakciók enzimes katalízisénél való felhasználásra.
További példák PEG-származékokat javasoltak molekulákhoz, köztük proteinekhez való kapcsolásra annak érdekében, hogy megvédjék a molekulát a kémiai támadásoktól, korlátozzák a molekula káros mellékhatásait, vagy hogy növeljék a molekula méretét, és ezáltal az egyébként nem hasznos vagy esetleg az élő organizmusokra káros anyagot jótékony gyógyászati hatással bíró, hasznos anyaggá alakítsák. A szokásos körülmények között a veséken át kiválasztódó kis molekulák a véráramban maradnak, ha méretüket egy biológiailag kompatibilis PEG-származékkal való kapcsolással megnöveljük. A beinjektáláskor immunválaszt kiváltó proteinek és más anyagok bizonyos mértékig elrejthetők az immunrendszer elől a proteinnek PEG-molekulához való kapcsolásával.
PEG-származékokat javasoltak affinitás alapján való megosztásra is, például enzimeknek sejttömegből való elválasztására. Az affinitásmegosztás azon alapszik, hogy a PEG-származékok egy olyan funkciós csoportot tartalmaznak, amely a sejttömegben lévő enzimhez reverzibilisen kapcsolódik. A PEG/enzim konjugátumot a sejttömegből elválasztják, majd az enzimet kívánt esetben a PEG-származéktól elkülönítik.
A PEG-származékok proteinekhez való kapcsolásánál látható azon problémák némelyike, amelyekkel számolni kell a PEG-nek felületekhez és molekulákhoz való kapcsolásánál. Számos felületnél és molekulánál a PEG-származékkal való kapcsolási reakció számára hozzáférhető helyek száma némileg korlátozott. Például a proteinek jellemzően korlátozott számú, megkülönböztethető típusú kapcsolási reakció számára hozzáférhető hellyel bírnak. Még nagyobb problémát jelent, hogy a reakcióképes helyek némelyike a protein biológiai aktivitásáért lehet felelős, például egy enzim által katalizált bizonyos kémiai reakciókban lehet szerepe. Ha a PEG-származékok megfelelő számú ilyen helyhez kapcsolódnak, az károsan érintheti a protein aktivitását.
A PEG-származékoknak proteinekhez való kapcsolódásának helyéül szolgáló reakcióképes helyeket a protein szerkezete szabja meg. A proteinek, köztük az enzimek H2N-CHR-COOH általános szerkezetű alfa-aminosavak különböző szekvenciájából épülnek fel. Egy aminosav alfa-aminoegysége (H2N-) egy szomszédos aminosav karboxilegységéhez (-COOH) kapcsolódva -(NH-CHR-CO)n- általános képletű amidkötést képez, ahol n értéke több száz vagy több ezer lehet. Az R szimbólummal jelölt fragmentum a protein biológiai aktivitása szempontjából jelentős reakcióképes helyeket és a PEG-származékok kapcsolódását szolgáló helyeket tartalmazhat.
Például a lizin, amely egy, a legtöbb protein vázának felépülésében részt vevő aminosav, mind az ε-, mind az α-helyzetben -NH2 egységgel bír. Az ε-helyzetű aminocsoport bázikus pH esetén reakció számára szabad. A szakterület törekvéseinek jó része irányul olyan PEG-származékok kifejlesztésére, amelyek egy protein lizinfrakciójának ε-aminoegységéhez kapcsolódnak. Ezekben a PEG-származékokban közös, hogy a protein lizin aminosav frakcióját jellemzően inaktiválják, ami hátrány lehet olyan esetekben, amikor a lizin a protein aktivitása szempontjából fontos.
Az 5 122 614 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban Zalipsky azt ismerteti, hogy oxi-karbonil-N-díkarboximld funkciós csoporttal aktivált PEG-molekulák vizes, bázikus körülmények mellett egy polipeptid amincsoportjához uretánkötéssel kapcsolhatók. Az aktivált PEG-N-szukcinimid-karbonátot amincsoportokkal stabil, hidrolízisnek ellenálló uretánkötést alkotóként ismerik. Az amincsoport bázikus pH-értékeken, mintegy 8,0 és 9,5 között reakcióképesebbnek mutatkozik, alacsonyabb pH-értékeken a reakcióképesség élesen esik. Azonban a kapcsolatlan PEG-származékok hidrolízise is élesen megnövekszik pH 8,0 és 9,5 között. Zalipsky úgy kerüli meg a kapcsolatlan PEG-származékok vízzel való reakciója sebességének növekedését, hogy a protein felülethez való kötődéséhez szükségest meghaladó feleslegben alkalmazza a PEG-et. A felesleg alkalmazásával elegendő reakcióképes ε-aminohely kötődik a PEG-hez ahhoz, hogy módosítsa a proteint azt megelőzően, hogy a PEG-származéknak lehetősége lenne a hidrolizálódásra, és ezzel reakcióképességének elvesztésére.
Zalipsky eljárása alkalmas arra, hogy egy protein lizinfrakcióját egy PEG-származékhoz kösse annak egy aktív helyénél. Ha azonban a PEG-származék hidrolízisének sebessége lényeges, gondot okozhat a kapcsolódásnak a PEG-molekula egynél több aktív helyén
HU 225 649 Β1 való megvalósítása, mivel az egyszerű felesleg nem lassítja le a hidrolízissebességet.
Például egy mindkét végén aktív helyekkel rendelkező lineáris PEG csak egyik végén kapcsolódik a proteinhez, de ha a hidrolízis sebessége jelentős, a lánc másik végén a vízzel reagál, és egy viszonylag nem reakcióképes hidroxilegységet vesz fel, amely a szerkezetben -OH formában jelenik meg, sokkal inkább, mint hogy egy „súlyzó molekulaszerkezet jönne létre, ahol a lánc mindkét végéhez proteinek vagy más kívánt csoportok kapcsolódnak. Hasonló probléma merül fel, ha egy molekulát kívánunk egy felülethez kötni egy PEG kapcsolószerrel, mivel a PEG először a felülethez vagy molekulához kapcsolódik, és a PEG-származék ellentétes végének aktívnak kell maradnia egy ezt követő reakció számára. Ha a hidrolízis problémája felmerül, az ellentétes vég jellemzően Ínaktiválódik.
A WO 93/01498 szakirodalmi helyen vízoldható polimermolekulákon alapuló reagenseket és konjugátumokat ismertetnek, előnyösként jelölik meg a dextránt, amelyhez kovalens kötéssel reakcióképes divinil-szulfonból származó egységek kapcsolódnak. A molekulában általában keresztkötések vannak jelen. A fenti, divinil-szulfonnal módosított polimer hordozóanyag-molekula nem izolált és nem izolálható. Nincs lehetőség a reakciók olyan szabályozására, hogy egy fehérjét vagy más molekulát vagy felületet egyetlen kapcsolódási pontján hasznosan módosíthassanak. A fenti vegyületek fehérjékhez vagy más biológiailag aktív anyagokhoz való kapcsolódása többszörös kötődést eredményez, ami várhatóan károsan befolyásolja a biológiailag aktív anyag aktivitását. Továbbá az alkalmazott divinil-szulfon igen toxikus, ami mind az előállítási eljárás, mind a felhasználás szempontjából jelentőséggel bír. Ezeket a vegyületeket immunreaktív anyagok in vitro mennyiségi és minőségi meghatározására alkalmazzák.
Az 5 122 614 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban Zalipsky néhány más, korábbi szabadalmakból ismert PEG-származékot is leír. A PEG-szukcinoil-N-hidroxi-szukcinimid-észtert olyan észterkötések képzésére tartják alkalmasnak, amelyek vizes közegben korlátozottan stabilak, így az ilyen származékok nem kívánt módon rövid féléletidővel bírnak. A PEG-cianursav-kloridot nem kívánt toxikus hatással bírónak írják le, és azt ismertetik, hogy a protein sajátos funkciós csoportjaival nem fajlagos reakciót ad. Ezért a PEG-cianursav-klorid-származék nem kívánt mellékhatásokkal bírhat, és csökkentheti a protein aktivitását azáltal, hogy különböző reakcióképes helyeken számos különböző típusú aminosavhoz kapcsolódik. A PEG-fenil-karbonátot proteinek iránt affinitással bíró toxikus hidrofób fenolegységeket termelőnek mondják. A karbonil-diimidazollal aktivált PEG-ről azt tartják, hogy a protein funkciós csoportokkal túl lassan reagál, hosszú reakcióidő szükséges ahhoz, hogy a proteinek kielégítő módosítása elérhető legyen.
Még további PEG-származékokat javasolnak a lizin ε-aminocsoportjától eltérő aminosav funkciós csoportokhoz való kapcsolásra. A hisztidin egy reakcióképes iminoegységet tartalmaz, amelynek szerkezete —N(H)—, de számos származék, amely az ε-aminocsoporttal reagál, reagál az -N(H)- csoporttal is. A cisztein egy reakcióképes tiolegységet tartalmaz, amelynek szerkezete -SH, de az ezzel reakcióra képes PEG-maleimid-származék hidrolizálódik.
Amint a fenti rövid bemutatásból látható, jelentős kísérleteket tettek különféle olyan PEG-származékok kifejlesztésére, amelyek különösen a különféle proteinek lizin aminosav frakciójának -NH2 egységéhez kötődnek. Ezen származékok közül számosnak a szintézise és felhasználása gondot okozónak bizonyult. Egyesek hidrolízisre hajlamos instabil kötést képeznek a proteinnel, ezért vizes közegben, például a véráramban nem hosszú élettartamúak. Egyesek stabilabb kötéseket képeznek, de a kötés képzése előtt hidrolízisre hajlamosak, ami azt jelenti, hogy a PEG-származék reakcióképes csoportja inaktiválódhat a proteinhez való kapcsolódást megelőzően. Egyesek némileg toxikusak, és ezért in vivő alkalmazásra kevéssé alkalmasak. Mások túl lassan reagálnak ahhoz, hogy a gyakorlatban hasznosak legyenek. Egyesek a proteinaktivitás csökkenését okozzák azáltal, hogy a protein aktivitásáért felelős helyekhez kapcsolódnak. Mások nem fajlagosak kötődési helyüket tekintve, ami ugyancsak a kívánatos aktivitás veszteségéhez és reprodukálható eredmények hiányához vezethet.
A következőkben a találmány összefoglalását adjuk.
A találmány tárgyát vízben oldható és hidrolízissel szemben stabil polietilénglikol („PEG)-polimerek és rokon hidrofil polimerek képezik, amelyek egy vagy több aktív szulfonegységgel bírnak. Ezek az aktív szulfonegységekkel bíró polimerszármazékok igen szelektív kapcsolódásra képesek tiolegységekkel a molekulák és felületek aminoegységei helyett, amely kapcsolódás különösen mintegy 9 vagy ennél alacsonyabb pH-értékeken valósul meg. A szulfonegységek, a polimer és a szulfonegységek közötti, és a tiolegységek és szulfonegységek közötti kötés általában redukálókörülmények között nem reverzibilis, és vizes közegben 11 vagy annál alacsonyabb pH-értékek mellett hosszabb időn át hidrolízissel szemben stabil. Ennek folytán anyagok széles körének fizikai és kémiai jellemzői változtathatók meg vizes körülmények között az aktív szulfon-polimerszármazékokkal.
A biológiailag aktív anyagok módosításának körülményei például úgy optimalizálhatok, hogy azok biológiai aktivitásukat nagymértékben megőrizzék. Gyógyszerek, az aszpirintől a penicillinig hasznosan módosíthatók az aktív szulfon-polimerszármazékokkal való kapcsolás révén, ha ezeket a gyógyszereket úgy módosítjuk, hogy tiolegységeket tartalmazzanak. Ciszteinegységeket tartalmazó nagy proteinek, amelyek aktív tiolegységeket tartalmaznak, ugyancsak hasznosan módosíthatók. A protein kívánt helyére rekombináns DNS eljárással („génsebészet) vihető be a ciszteinegység. Ezek a ciszteinek kapcsolhatók az aktív szulfon-polimerszármazékokhoz, olyan proteinekkel képezve ezáltal hidrolízissel szemben stabil kötéseket, amelyek szokásosan nem tartalmaznak ciszteinegységeket.
HU 225 649 Β1
A találmány szerinti aktivált polimerek sajátos szulfonegységei azok, amelyekben az -SO2- szulfoncsoporthoz legalább két szénatom kapcsolódik, ahol a szulfoncsoporttól számított második szénatomon egy tiolfajlagos kapcsolási reakcióra alkalmas reakcióképes hely van.
Közelebbről, az aktív szulfonegységek körébe tartoznak a vinil-szulfon, az aktív etil-szulfonok, köztük a halogénezett etil-szulfonok, és ezen szulfonok tiolfajlagos aktív származékai. A vinil-szulfon-egység szerkezetileg az -SO2-CH=CH2 képlettel jellemezhető, az aktív etil-szulfon-egység szerkezetét az -SO2-CH2-CH2-Z képlet jellemzi, ahol Z jelentése halogénatom vagy más tiolcsoporttal helyettesíthető, így szulfont képző kilépőcsoport, és a tiolkötés az -SO^CH^CH^S-W szerkezeti képlettel jellemezhető, ahol W jelentése egy biológiailag aktív molekula, egy felület vagy valamely más anyag. A vinil- és etil-szulfon-származékok további helyettesítőket is tartalmazhatnak mindaddig, míg megmarad a vízoldhatóság, és a második szénatomon lévő reakcióképes hely tiolfajlagos reakcióképessége.
A találmány körébe tartoznak tiolegységekkel bíró anyagok aktív szulfonegységeket tartalmazó polimerszármazékokkal alkotott hidrolízissel szemben stabil konjugátumai. Például egy vízoídható, szulfonnal aktivált PEG-polimer egy biológiailag aktív molekulával kapcsolható egy reakcióképes tiolhelyen. Az a kötés, amellyel a PEG és a biológiailag aktív molekula kapcsolódik, egy tiolegységgel kapcsolt szulfonegységet foglal magában, és szerkezete a PEG-SO2-CH2-CH2-S-W általános képletnek megfelelő, ahol W jelentése a biológiailag aktív molekula, függetlenül attól, hogy a PEG kapcsolását megelőzően a szulfonegység egy vinil-szulfon vagy egy aktív etil-szulfon volt-e.
A találmány tárgyát képezi a találmány szerinti aktivált polimerek előállítása is. Egy kéntartalmú egységet közvetlenül a polimer egy szénatomjához kötünk, és ezt követően azt aktív szulfonegységgé alakítjuk. Más módon, a szulfonegység létrehozható úgy is, hogy a szokásos aktivált polimer egyik láncvégéhez egy szulfonegységet tartalmazó kapcsolószert kötünk, így a kapott polimer a szulfonegységet a láncvégen tartalmazza.
Közelebbről, egy legalább egy aktív hidroxilegységet tartalmazó vízben oldható polimer olyan reakción megy át, amelynek eredményeként egy reakcióképesebb egységgel bíró helyettesített polimer jön létre. A kapott helyettesített polimer olyan reakcióban vesz részt, amelyben a reakcióképesebb egységet egy olyan kéntartalmú egység helyettesíti, amely legalább két szénatommal bír, ahol a kéntartalmú egység kénatomja közvetlenül a polimer egy szénatomjához kapcsolódik. Ezután a kéntartalmú egység oxidációs reakcióban vesz részt, ahol a kénatom, -S-, szulfonná, —SO2—, oxidálódik, és egy elegendően reakcióképes hellyel bír a szulfontartalmú egységtől számított második szénatomon, amely reakcióképes hely tioltartalmú egységekkel való kötésképzésre képes.
Még közelebbről, a találmány szerinti aktivált polimerek szintézisére szolgáló eljárás abban áll, hogy polietilénglikolt egy hidroxilaktiváló csoporttal reagáltatva észterré alakítunk, vagy egy halogéntartalmú származékkal reagáltatva halogénnel helyettesített PEG-et állítunk elő. A kapott aktivált PEG-et ezután merkaptoetanollal reagáltatjuk, így az észter- vagy halogenidegység helyére merkaptoetanolegységet viszünk be. A merkaptoetanolegység kénatomját ezután szulfonná oxidáljuk. Az etanol-szulfont a hidroxilegység aktiválásával vagy a hidroxilegységnek egy aktívabb egységgel, például halogénegységgel való helyettesítésével aktiváljuk. A PEG aktív etil-szulfonját ezután kívánt esetben vinil-szulfonná alakíthatjuk az aktivált hidroxil vagy más aktív egység lehasításával és a szulfoncsoport -(SO2-) szomszédságába szén-szén kettős kötés bevitelével.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy eljárás egy anyagnak egy aktív szulfonegységgel bíró polimerszármazékkal való konjugátuma előállítására. Az eljárás magában foglal egy lépést a polimerszármazék és az anyag közötti olyan kötés létrehozására, amely kötés a szulfonegység és egy tiolegység közötti kötés lehet.
így a találmány tárgyát aktivált polimerek képezik, amelyek fajlagos reakcióképességűek, vízben stabilak, redukálókörnyezetben stabilak, és felületekkel és molekulákkal, köztük biológiailag aktív molekulákkal stabilabb kötéseket képeznek, mint a korábban elérhető kötések. Az aktivált polimer felületek és molekulák jellemzőinek módosítására használható olyan esetekben, amikor a biológiai kompatibilitás jelentőséggel bír. Mivel az aktivált polimer vizes körülmények mellett stabil, és tiolegységekkel stabil kötéseket képez, a legkedvezőbb reakciókörülmények választhatók meg a biológiailag aktív anyagok aktivitásának megőrzésére és a polimer kapcsolási reakció sebességének optimalizálására.
A következőkben a találmányt részleteiben ismertetjük.
A polietilénglikol és rokon polimerek aktív szifonjainak előállítására alkalmazott szintézisút legalább négy lépést foglal magában, amelyek során a polimermolekulához ként kapcsolunk, és ezt reakciók során át aktív szulfon funkciós csoporttá alakítjuk. A kiindulási PEG-polimermolekulának legalább egy olyan hidroxilegységet, -OH, kell tartalmaznia, amely kémiai reakciókban való részvételre hozzáférhető, és egy „aktív hidroxilegységnek tekinthető. A PEG-molekula tartalmazhat több, kémiai reakció számára hozzáférhető aktív hidroxilegységet, ennek magyarázatát az alábbiakban adjuk. Ezek az aktív hidroxilegységek valójában viszonylag nem reakcióképesek, és a szintézis első reakciólépése egy reakcióképesebb egységet tartalmazó PEG előállítása.
A reakcióképesebb egységet jellemzően két módon alakíthatjuk ki, hidroxilaktiválással vagy helyettesítéssel. Mint az szakember számára ismert, más módszerek is léteznek, de a két leggyakrabban alkalmazott módszer a hidroxilaktiválás és a helyettesítés. A hidroxilaktiválás során az -OH (hidroxil)-egység hidrogénatomját egy reakcióképesebb csoporttal helyettesítjük. Jellemzően egy savat vagy savszármazékot, például savhalogenidet reagáltatunk a PEG-gel, így olyan
HU 225 649 Β1 reakcióképes észtert alakítunk ki, amelyben a PEG és a savegység egy észterkötéssel kapcsolódik. A savegység általában reakcióképesebb, mint a hidroxilegység. Jellemző észterek a szulfonátok, karboxilátok és foszfát-észterek.
A találmány szerinti gyakorlatban megfelelő szulfonilsav-halogenidek körébe tartoznak a metánszulfonil-klorid és a p-toluolszulfonil-klorid. A metánszulfonil-klorid szerkezete a CH3SO2CI képlettel jellemezhető, ez a vegyület mezil-kloridként is ismert. A metánszulfonil-észtereket esetenként mint mezilátokat jelölik. A p-toluolszulfonil-klorid szerkezete a H3CC6H4SO2CI képlettel jellemezhető, ez a vegyület más néven tozil-kloridként is ismert. A toluolszulfonil-észtereket esetenként mint tozilátokat nevezik meg.
A helyettesítéses reakcióban a PEG-en lévő teljes -OH csoport helyére egy reakcióképesebb egység, jellemzően egy halogenid lép. Például az SOCI2 szerkezettel jellemezhető tionil-klorid reagálható PEG-gel egy reakcióképesebb klórral helyettesített PEG előállítására. A hidroxilegységnek egy más egységgel való helyettesítését a szakterületen esetenként mint hidroxilaktiválást említik. A „hidroxilaktiválás értelmezésünk szerint mind a helyettesítést, mint például az észterezést, mind a hidroxilcsoport más aktiválását jelenti.
A „csoport”, „funkciós csoport, „egység”, „aktív egység, „reakcióképes hely”, valamint „gyök” megjelölés a kémiai szakterületen használt szinonimák, amelyeket egy molekula elkülönült, meghatározható részeinek vagy egységeinek megjelölésére használnak, és olyan egységekre, amelyek valamiféle funkciót vagy aktivitást hordoznak, és más molekulákkal vagy azok részeivel reakciókra képesek. Ebben az értelemben egy protein vagy egy proteinegység úgy tekinthető, mint egy molekula vagy egy funkciós csoport vagy egység, ha egy polimerhez kapcsolódik.
A „PEG” megjelölésen a szakterületen, és itt különféle etilénglikol kondenzációs polimerek bármelyikét értjük, amelyek a H(OCH2CH2)nOH szerkezetnek megfelelő általános képlettel bírnak, amely képlet megjelölhető a következő módon is: HO-CH^H^-jOC^CH^n-OH. A PEG ismert mint poli(oxi-etilén), poli(etilén-oxid), poliglikol és poliéter-glikol. A PEG előállítható etilén-oxid és számos más monomer kopolimerjeként.
A polietilénglikolt biológiai felhasználási területeken alkalmazzák, mivel tulajdonságai igen kívánatosak, és általában biológiai vagy biotechnológiai alkalmazásra megengedettek. A PEG jellemzően tiszta, színtelen, szagtalan, vízben oldható, hőre stabil, számos kémiai szerrel szemben inért, nem hidrolizál vagy romlik, és nem toxikus. A polietilénglikolt biológiailag kompatíbilisnak tekintik, ami azt jelenti, hogy a PEG az élő szövetekkel vagy organizmusokkal azokban való kártétel nélküli együttlétre képes. Közelebbről, a PEG nem immunogén, ami azt jelenti, hogy nem hajlamos arra, hogy a szervezetből immunválaszt váltson ki. Ha olyan egységhez kapcsolódik, amely a szervezetben valamiféle kívánt funkciót tölt be, a PEG az egység maszkírozására hajlamos, és csökkenti vagy kiküszöböli az organizmus immunválaszát úgy, hogy az organizmus az egység jelenlétének elviselésére képes. Ennek megfelelően a találmány szerinti szulfonnal aktivált PEG-ek lényegében nem toxikusak, és nem hajlamosak arra, hogy lényeges immunválaszt váltsanak ki vagy rögképződést okozzanak vagy más, nem kívánt hatást keltsenek.
A szintézis második lépése a kénnek közvetlenül a polimerben lévő szénatomhoz való kötése, a kötés olyan formában történik, hogy a vegyület etil-szulfonná vagy hasonló reakciójellemzőjű etil-szulfon-származékká alakítható legyen. Az „etil megjelölés egy olyan egységre vonatkozik, amely két egymással kapcsolt szénatomot tartalmazó azonosítható csoporttal bír. Az aktív szulfon-PEG-származéknak olyannak kell lennie, hogy a láncban a szulfoncsoporttól számított második szénatomon egy reakcióképes kötőhely legyen tiolegységeknek a szulfonnal való kötéséhez. Ez az eredmény úgy érhető el, hogy az előbbiekben említett első lépésben létrehozott aktív egységet, amely jellemzően észtercsoporttal vagy halogénnel helyettesített PEG, egy alkohollal való szubsztitúciós reakcióba visszük, amely egy reakcióképes tiolegységet is tartalmaz egy etilcsoporthoz kötve, azaz egy tioetanolegységgel bír. A tiolegységet szulfonná oxidáljuk, az etilcsoporton a szulfontól számított második szénatomot reakcióképes hellyé alakítjuk.
Az -SH tiolegységeket tartalmazó vegyületek szerves vegyületek, amelyek az -OH hidroxilegységet tartalmazó alkoholokra emlékeztetnek, azzal az eltéréssel, hogy a tiolok az oxigén helyén legalább egy hidroxilegységben kénatomot tartalmaznak. Az első reakcióból származó PEG-származékról az aktiválóegységet, amely jellemzően egy halogenid vagy egy észter sav egysége, lehasítjuk a polimerről, és a tioetanolszármazék alkoholcsoportjával helyettesítjük. Az alkohol tiolegységében lévő kén közvetlenül kötődik a polimer szénatomjához.
Az alkoholnak olyannak kell lennie, amely biztosítja a polimer lánc szénatomjához közvetlenül kapcsolódó tioetanolegységet vagy könnyen tioetanolegységgé vagy hasonló reakciójellemzőkkel bíró helyettesített egységgé alakítható egységet. Az ilyen alkoholok egy példája a merkaptoetanol, amely a HSCH2CH2OH szerkezettel jellemezhető, ezt a vegyületet esetenként tioetanolnak is nevezik.
A szintézis harmadik lépésében egy oxidálószert alkalmazunk a szénatomhoz kapcsolódó kénnek -SO2 szulfoncsoporttá való alakítására. Számos ilyen oxidálószer létezik, köztük a hidrogén-peroxid és a nátrium-perborát. Hasznos lehet egy olyan katalizátor is, mint például a volfrámsav. A képződött szulfon azonban a tiolszelektív reakciók szempontjából nincs aktív formában, ezért szükséges az alkohol második lépés szubsztitúciós reakciójában bevitt viszonylag nem reakcióképes hidroxllegységének eltávolítása.
A negyedik lépésben az alkoholnak a második lépésben bevitt hidroxilegységét alakítjuk egy reakcióképesebb formára, amit végezhetünk a hidroxilcsoport aktiválásával vagy a hidroxilcsoport reakcióképesebb csoporttal való helyettesítésével a reakciósor első lépéséhez hasonlóan. A helyettesítést jellemzően egy
HU 225 649 Β1 halogénnel végezzük, hogy halogén-etil-szulfont vagy származékát hozzuk létre, amely a szulfonegységtől számított második szénatomon reakciöképes hellyel bír. Jellemzően az etilcsoporton lévő második szénatomot kloriddal vagy bromiddal aktiváljuk. A hidroxilaktiválással egy, a szulfonát-észterhez hasonló reakcióképességű helyet képezünk. A megfelelő reagensek körébe tartoznak savak, savhalogenidek és más, az előzőekben az első lépés reakciója kapcsán említett vegyületek, különösen a hidroxilcsoportnak klóratommal való helyettesítésére szolgáló tionil-klorid.
A kapott polimer aktivált etil-szulfon stabil, izolálható, és tiolszelektív kapcsolási reakciókra alkalmas. Amint azt a példákban bemutatjuk, a PEG-klóretil-szulfon vízben mintegy pH=7 vagy ez alatti értékeken stabil, de előnyösen használható tiolszelektív kapcsolási reakciókban bázikus körülmények mellett legalább mintegy pH=9 értékig.
A tiolkapcsolási reakciókban lehetséges, hogy a tiolegységet klorid helyettesítse, amint az a következő reakcióban látható:
PEG-SOr-CHy-CH^-CI+W-S-H^
PEG-SO2-CH2-CH2-S-W a képletben W jelentése az az egység, amelyhez az SH tiolegység kapcsolódik, és amely lehet egy biológiailag aktív molekula, egy felület vagy valamely más anyag. Bár nem kívánunk egy elmélethez kötődni, az észlelhető reakciókinetika alapján, amint azt a 3. példában bemutatjuk, feltételezzük, hogy a klór-etil, valamint más aktivált etil-szulfonok és reakcióképes származékaik PEG-vinil-szulfonná alakulnak, és a PEG-vinil-szulfon vagy származéka az, ami valójában a tiolegységhez kötődik. Mindazonáltal a kapott szulfon- és tiolkötés nem megkülönböztethető, akár aktív PEG-etil-szulfont, akár PEG-vinil-szulfont alkalmazunk, és így az aktív etil-szulfon használható pH 7 érték fölött tiolcsoportokhoz való kapcsolásra.
A PEG-vinil-szulfon ugyancsak stabil és izolálható, és tiolszelektív, hidrolízissel szemben stabil kötések képzésére képes, jellemzően sokkal rövidebb idő alatt, mint a halogénezett etil-szulfon vagy más aktivált etil-szulfonok, amint annak az alábbiakban magyarázatát adjuk.
Egy ötödik lépés is adható a szintézishez, amelyben az aktivált etil-szulfont különféle bázisok valamelyikével reagáltatjuk, például nátrium-hidroxiddal vagy trietil-aminnal, hogy PEG-vinil-szulfont vagy annak tiolszelektív kapcsolási reakciókban való felhasználásra aktív származékát hozzuk létre.
Amint azt az alábbi példákban, különösen a 3. példában bemutatjuk, a PEG-vinil-szulfon gyorsan reagál a tiolegységekkel, vízzel való hidrolízis iránt mintegy 11 alatti pH-értékeken legalább néhány napig stabil. A reakciót az alábbi egyenlettel írhatjuk le:
PEG-SOr-CH=CH2+W-S-H-+
PEG-SO^CHz-CHz-S-W.
A tiolegységet úgymond „a kettős kötés révén” adjuk a molekulához. A W-S egység a kettős kötést követő CH2 láncvéghez adódik, amely az -SO2 szulfoncsoporttól számított második szénatom. A hidrogén a kettős kötés CH egységéhez adódik. Mintegy pH=9 fölötti értéknél azonban a szulfonegység tiol iránti szelektivitása csökken, és a szulfonegység némileg reakcióképesebbé válik az aminocsoportokkal,
A fenti szintézissel alternatív módon a szulfonnal aktivált PEG-származékok előállíthatók úgy is, hogy egy szulfonegységgel bíró kapcsolószert kapcsolunk különféle funkciós csoportokkal aktivált PEG-hez. Például egy PEG-NH2 képletű aminoaktivált PEG-et reagáltatunk a megfelelő pH=mintegy 9 vagy alacsonyabb értéken egy kis molekulával, amely a láncvégen egy NHS-O2C- szukcinimidil aktív észterrel, és a másik láncvégen egy -SO2-CH=CH2 vinil-szulfon-egységgel bír. Az aminoaktivált PEG stabil kötést képez a szukcinimidil-észterrel. A kapott PEG a vinil-szulfon-egységgel a láncvégen aktivált, és hidrolízissel szemben stabil. A reakciót, és az ennek során kapott vinil-szulfonnal aktivált PEG-et az alábbi egyenletben mutatjuk be:
PEG-NH2+NHS-O2C-CH2-CHz-SO2-CH=CH2->
PEG-NH-OC-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
Hasonló aktivált PEG nyerhető egy aminaktivált PEG, például PEG-CO2-NHS szukcinimidil PEG aktív észter és egy olyan kis molekula reagáltatásával, amely egyik láncvégén egy aminegységgel, másik láncvégén egy vinil-szulfon-egységgel bír. A szukcinimidil-észter stabil kötést képez az aminegységgel az alábbiak szerint:
PEG-CO2-NHS+NH2-CH2-CH2-SO2-CH=CH2—> PEG-CO-NH-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
A találmány szerinti aktív PEG-szulfonok bármely molekulatömeggel bírhatnak, és lehetnek lineárisak vagy karok százaival elágazók. A PEG lehet helyettesített vagy helyettesítő nélküli mindaddig, míg legalább egy reakcióképes helye hozzáférhető a szulfonegységekkel való helyettesítés számára. A PEG molekulatömege jellemzően 200 és 100 000 közötti, biológiai jellemzői a molekulatömeggel változhatnak, és befolyásolhatják biológiai jellemzőiket az elágazások és helyettesítettség mértéke, így ezen származékok nem mindegyike hasznos biológiai vagy biotechnológiai felhasználás tekintetében. A legtöbb biológiai vagy biotechnológiai alkalmazásra lényegében lineáris, egyenes láncú PEG-vinil-szulfon vagy -bisz(vinil-szulfon) vagy aktivált -etil-szulfon alkalmas, amelyek lényegében helyettesítő nélküliek, kivéve a vinil-szulfon- vagy etil-szulfon-egységeket, és kívánt esetben más funkciós csoportokat. Számos biológiai és biotechnológiai alkalmazásra a helyettesítők jellemzően nem reakcióképes csoportok, például hidrogénatom és metilcsoport („m-PEG).
A PEG bírhat egynél több vinil-szulfon- vagy prekurzoregységgel, vagy a PEG egyik végén egy viszonylag nem reakcióképes egységgel, például egy -CH3 metilcsoporttal lezárt lehet. Ez a lezárt forma hasznos lehet például, ha egyszerűen azt kívánjuk, hogy a polimer lánc a proteinlánc mentén lévő különböző tiolhelyekhez kapcsolódjon. A PEG-molekuláknak egy biológiailag aktív molekulához, például proteinhez vagy más gyógyszerhez vagy egy felülethez való kapcsolását esetenként „PEGilálás” névvel jelölik.
HU 225 649 Β1
Egy mindkét végén aktív hidroxilcsoportokkal bíró lineáris PEG mindkét végén aktiválható vinil-szulfonnal vagy prekurzorával vagy hasonló reakcióképességü származékával, és így bifunkciós lesz. A bifunkciós szerkezet, például a PEG-bisz(vinil-szulfon) esetenként „súlyzó”-szerkezet megjelöléssel szerepel, ez a szerkezet alkalmazható például kapcsoló- vagy térkitöltő egységként egy biológiailag aktív molekulának egy felülethez való kötésére vagy egynél több biológiailag aktív molekulának a PEG-molekulához való kapcsolására. A szulfonegységet hidrolízissel szembeni stabilitása különösen alkalmassá teszi bifunkciós vagy heterobifunkciós alkalmazásra.
A PEG-vinil-szulfon és prekurzora másik alkalmazási területe a dendritesen aktivált PEG, ahol a PEG több karja kapcsolódik egy központi magszerkezethez. A dendrites PEG-szerkezetek igen erősen elágazóak lehetnek, és szokásosan mint „csillag”-molekulák ismertek. A csillagmolekulákat általában az 5 171 264 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban Merrill ismerteti, a leírás tartalmát leírásunkba referenciaként építjük be. A szulfonegységek alkalmazhatók a magtól kinyúló PEG-lánc végén aktív funkciós csoportként vagy egy funkciós csoportnak a csillagmolekula karjaihoz való kapcsolására.
A PEG-vinil-szulfon, prekurzorai és származékai alkalmazhatók tiolegységgel bíró felületekhez és molekulákhoz való közvetlen kapcsolásra. Jellemzőbben azonban egy, az egyik láncvégen egy szulfonegységgel és a másik láncvégen egy ettől eltérő funkciós egységgel bíró heterobifunkciós PEG-származék különböző egységek révén kapcsolódik a felülethez vagy molekulához. Az egyéb aktív egységek valamelyikével való helyettesítés esetén a heterobifunkciós PEG súlyzószerkezet használható például arra, hogy egy proteint vagy más biológiailag aktív molekulát hordozzon szulfonkötéssel az egyik végén, és egy másik, például aminkötéssel a másik végén, így két különböző aktivitással bíró molekulát képezve. Egy, az egyik végén egy szulfonegységgel, a másik végén egy amin fajlagos egységgel bíró heterobifunkciós PEG kapcsolódhat proteineknek mind cisztein-, mind lizinfrakcióihoz. Stabil aminkötés hozható létre, és ezt követően a hidrolízissel szemben stabil, reagálatlan szuifonegység hozzáférhető egy későbbi kívánt tiolfajlagos reakció számára.
A heterobifunkciós szulfonnal aktivált PEG-ek más aktív csoportjai a vegyületek széles köréből választhatók. Biológiai és biotechnológiai alkalmazásokra a helyettesítőket jellemzően a PEG-kémiában alkalmazott reakcióképes egységek köréből, például az aldehidek, trifluor-etil-szulfonátok, amelyeket trezilátként is említenek, n-hidroxil-szukcinimid-észter, cianursav-klorid, cianursav-fluorid, acil-azid, szukcinátok, p-diazo-benzil-csoport, 3-(p-diazo-fenil-oxi)-2-hidroxi-propil-oxi-csoport és más hasonlók köréből kell választani.
A szulfontól eltérő aktív csoportok példái a 4 179 373 számú (Davis és munkatársai), a 4 296 097 számú (Lee és munkatársai), a 4 430 260 számú (Lee és munkatársai), a 4 670 417 számú (Iwasaki és munkatársai), a 4 766 106, 4 917 888 és 4 931 544 számú (Katre és munkatársai), a 4 791 192 számú (Nakagawa és munkatársai), a 4 902 502 és 5 089 261 számú (Nitecki és munkatársai), az 5 080 891 számú (Saifer), az 5 122 614 számú (Zalipsky), az 5 153 265 számú (Shadle és munkatársai) és az 5 162 430 számú (Rhee és munkatársai) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban, a 0 247 860 számon közzétett európai szabadalmi bejelentésben és az US86/01252; GB89/01261; GB89/01262; GB89/01263; US90/03252; US90/06843; US91/06103; US92/00432 és US92/02047 számú PCT nemzetközi bejelentésekben találhatók, amelyek tartalmát leírásunkba referenciaként építjük be.
Szakember számára nyilvánvaló, hogy az előzőekben tárgyalt súlyzószerkezet a helyettesítők és a helyettesítő kombinációk széles körének hordozására alkalmazható. Gyógyszerek, például aszpirin, vitaminok, penicillin és más - a felsoroláshoz túl számos - hatóanyagok; polipeptidek vagy proteinek és különböző funkciós csoportokkal bíró, különböző molekulatömegű proteinfragmentumok, biológiai anyagok felületei, szinte minden anyag módosítható. A „protein megjelölésen itt a peptideket és polipeptideket is értjük, amelyek aminosavak polimerjei. A „bioanyag” megjelölésen jellemzően szintetikus anyagokat, esetenként műanyagokat értünk, amelyek alkalmasak arra, hogy az élő szervezetbe azok károsodott vagy megbetegedett részei javítására beültetésre kerüljenek. Az ilyen bioanyagok egy példája a mesterséges véredény.
Egy, a találmány szerinti, biológiai vagy biotechnológiai alkalmazásra alkalmas egyenes láncú PEG-származék az R-CH2CH2-(OCH2CH2)n-Y szerkezettel jellemezhető. A PEG -OCH2CH2- monomerje előnyösen lényegében helyettesítő nélküli és elágazás nélküli a polimer váz mentén. Az „n” index mintegy 5 és 3000 közötti értékű. Egy jellemzőbb tartomány a mintegy 5 és 2200 közötti, amely mintegy 220 és 100 000 közötti molekulatömegnek felel meg. Még jellemzőbb tartomány a mintegy 34 és 1100 közötti, amely mintegy 1500 és 50 000 közötti molekulatömegnek megfelelő. A legtöbb alkalmazásra 2000-5000 körüli molekulatömegű anyagot alkalmazunk, amely n=45-110 értéknek felel meg.
A fenti szerkezetben Y jelentése -SO2-CH=CH2 vagy -SO^CH^CH^X, ahol X jelentése halogénatom. R jelentése egy, az Y-nal azonos vagy attól különböző csoport. R lehet HO-, H3CO-, CH2=CH-SO2-, Cl-CH2-CH2-SO2-, vagy egy, a CH2=CH-SO2-, CI-CH2-CH2-SO2- csoportoktól eltérő polimeraktiváló csoport, ilyeneket ismertetnek az előbbiekben említett szabadalmi leírásokban és közzétett szabadalmi bejelentésekben.
Az aktív polimerszármazékok vízoldhatóak, hidrolízissel szemben stabilak, és tiolcsoportokkal vízoldható, hidrolízissel szemben stabil kötéseket képeznek. A származékok vízben korlátlan mértékben oldhatónak vagy ezt megközelítően oldhatónak tekinthetők, és más, egyébként oldhatatlan molekulák oldatba vitelére képesek, ha azokkal kapcsolódnak.
A származékok hidrolízissel szembeni stabilitása azt jelenti, hogy a polimer és a szuifonegység közötti
HU 225 649 Β1 kötés vízben stabil, és a vinil-szulfon-egység hosszabb időtartamon, legalább néhány napon át nem reagál vízzel mintegy 11 alatti pH-értékek esetén, esetleg korlátlan ideig sem reagál, mint azt az alábbi 3. példában bemutatjuk. Az aktivált etil-szulfon bázikus pH-viszonyok mellett vinil-szulfonná alakítható, a kapott stabilitás az előbbinek megfelelő. A tiolkötés hidrolízissel szembeni stabilitása azt jelenti, hogy az aktivált polimer és a tiolegységet tartalmazó anyag konjugátuma vizes környezetben mintegy pH=11 alatti közegben hosszabb időtartamon át stabil. A legtöbb protein várhatóan elveszíti az aktivitását pH=11 vagy ezt meghaladó lúgos közegben, így szakember számára nyilvánvaló, hogy az aktív szulfon-PEG-származékok számos felhasználási területe pH=11 vagy ez alatti környezetben valósul meg, függetlenül attól, hogy stabil-e a szulfonegység magasabb pH-értékeken.
Ahhoz, hogy proteinek és más anyagok módosítására alkalmas legyen, csak az szükséges, hogy a szulfon olyan időtartamon át stabil legyen, amely ahhoz szükséges, hogy a proteinen vagy más anyagon lévő reakclóképes tiolegységgel a szulfon reagáljon. A szulfonegységnek a tiollal való reakciósebessége a pH-tól függően változhat, amint azt a 2. példában bemutatjuk, a reakcióidő mintegy 2 perc és 30 perc közötti, ami jóval gyorsabb, mint a hidrolízis sebessége, ha hidrolízis egyáltalán bekövetkezik. A vinil-szulfon a tiollal várhatóan tágabb reakcióidő-tartományban reagálhat, mivel ez hosszú időtartamon át stabil. A klór-etil-szulfon még lúgos pH-körülmények mellett sem hidrolizál, amint az a 3. példában látható, hanem vinil-szulfonná alakul, amely néhány napon át stabil marad, és még reakcióképesebb tiolcsoportok iránt. Ennek megfelelően anyagok jellemzőinek módosítása céljára az aktív etil-szulfonok hosszú időtartamon át hidrolízissel szemben stabilnak tekinthetők széles pH-tartományban.
A PEG-től eltérő más vízoldható polimerek is alkalmasak lehetnek hasonló, aktív szulfonegységekkel való módosításra és aktiválásra. Ezen egyéb polimerek körébe tartoznak a poli(vinil-alkohol) („PVA); más poli(alkilén-oxid)-ok, például a polipropilénglikol („PPG”) és hasonlók; polietoxilezett poliolok, például a polietoxilezett glicerin, polietoxilezett szorbit és polietoxilezett glükóz és hasonlók. A polimerek lehetnek homopolimerek vagy random vagy blokk-kopolimerek és terpolimerek, amelyek az előbbi polimerek monomerjeiből épülnek fel, lehetnek egyenes vagy elágazó láncúak, helyettesítettek vagy helyettesítő nélküliek a PEG-hez hasonlóan, de legalább egy, a szulfonegység kialakításához szükséges reakció számára hozzáférhető aktív hellyel kell bírniuk.
A következő 1. példában polietilénglikol-klóretil-szulfon szintézisét, elkülönítését és jellemzőit mutatjuk be, amelyből klór-etil-szulfon alkalmazásával polietilénglikol-vinil-szulfont állítunk elő. Más, a szulfonegységtől számított második szénatomon reakcióképes hellyel bíró polimer szulfonok előállítása ehhez hasonló, az előállítás lépései az alábbi 1. példa és az előzőekben felsorolt polimerek ismeretében szakember számára nyilvánvalók.
1. példa: Szintézis
A reakciólépéseket az alábbi egyenletekkel mutatjuk be:
(1) PEG-OH+CH3SO2CI->PEG-OSO2CH3 (2) PEG-OSO2CH3+HSCH2CH2OH->
peg-sch2ch2oh (3) PEG-SCH2CH2OH+H2O2->PEG-SO2CH2CH2CI (4) PEG-SO2CH2CH2OH+SOCI2->
peg-so2ch2ch2ci (5) PEG-SO2-CH2CH2CI+NaOH—>
peg-so2-ch=ch2+hci
Az alábbiakban a fenti reakciók mindegyikét részleteiben mutatjuk be.
1. reakció
Az 1. reakció polietilénglikol-metánszulfonil-észter - amely nevezhető polietilénglikol-metánszulfonátnak vagy -mezilátnak is - előállítását mutatja be. A tozilát és a halogenidek hasonló eljárással állíthatók elő, ez szakember számára nyilvánvaló.
A mezilát előállítására 25 g 3400 molekulatömegű PEG-et 150 ml toluolban azeotrop desztillálással szárítunk. Körülbelül a toluol felét desztilláljuk le a PEG szárítására. A toluolt és PEG-et tartalmazó oldathoz 40 ml száraz diklór-metánt adunk, és az elegyet jégfürdőbe hűtjük. A lehűtött oldathoz 1,230 ml desztillált metánszulfonil-kloridot adunk, amely 1,06 ekvivalens tömegnek felel meg a PEG hidroxilcsoportjaira vonatkoztatva, és 2,664 ml száraz trietil-amint adagolunk, ami 1,3 ekvivalens tömeg a PEG hidroxilcsoportjaira vonatkoztatva. Az „ekvivalens tömeg megjelölésen a „vegyülő tömeg” értendő, és a vegyületnek arra a tömegére vonatkozik, amely a PEG hidroxilcsoportjainak ekvivalens tömegével reagál.
A reakcióelegyet éjszakán át állni hagyjuk, ez idő alatt az elegy szobahőmérsékletre melegszik. Az elegyből kicsapódott trietil-ammónium-hidrogén-kloridot kiszűrjük. A szűrlet térfogatát rotációs bepárlón 20 ml-re szűkítjük be. A visszamaradó anyaghoz 100 ml hideg száraz etil-étert adunk, ezzel a mezilátot kicsapjuk. Magmágneses rezonancia (NMR) analízis szerint a hidroxilcsoportok mezilátcsoportokká való átalakulása 100%-os.
2. reakció
A 2. reakcióban mezilát és merkaptoetanol reakciója lévén polietilénglikol-merkaptoetanolt nyerünk. A reakció révén a PEG metánszulfonátcsoportjai kicserélődnek. A merkaptoetanolcsoportban lévő kénatom közvetlenül kapcsolódik a PEG szénvázában levő szénatomhoz.
Az 1. reakcióban nyert 20 g mezilátot 150 ml desztillált vízben oldjuk. A vizes mezilátoldatot jégfürdőbe merítve hütjük. A lehűlt oldathoz 2,366 g merkaptoetanolt adunk, amely a PEG hidroxilcsoportjaira számítva 3 ekvivalens tömeget jelent. Ugyancsak hozzáadunk az elegyhez 16,86 ml 2 n nátrium-hidroxid-bázist. A reakcióelegyet 3 órán át visszafolyató hűtő alatt forraljuk, ami azt jelenti, hogy a reakcióból származó gőzök folytonosan kondenzálnak, és visszafolynak a reakcióelegybe.
HU 225 649 Β1
A polietilénglikol-merkaptoetanol-terméket diklór-metánnal háromszor extraháljuk, esetenként mintegy 25 ml diklór-metánt alkalmazunk. A szerves frakciókat összegyűjtjük, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, majd 20 ml-re besűrítjük, és a terméket 150 ml hideg száraz éter hozzáadásával kicsapjuk.
Az NMR-analízis (d6-DMSO, dimetil-szulfoxid) jellemző csúcsai PEG-SCH2CH2OH-ra: 2,57 ppm triplett, -CH^S-; 2,65 ppm, triplett, -S-CH^; 3,5 ppm, váz szingulett és 4,76 ppm, triplett, OH. A 4,76 ppm-nél jelentkező hidroxilcsúcs 81 %-os helyettesítettséget jelöl. A 2,65 ppm-nél jelentkező -S-CH2-csúcs azonban 100%-os helyettesítettséget jelöl. Megfigyeltük, hogy a hidroxilcsúcsok gyakorta alacsony értékeket adnak a százalékos helyettesítettségre vonatkozóan, és hogy a 2,65 ppm-nél mért -S-CH2- csúcs megbizhatóbbnak tekinthető, és megerősíti a 100%-os helyettesítettséget.
3. reakció
A 3. reakció a polietilénglikol-merkaptoetanol-termék peroxidos oxidációja, amelyben az S kénatomot SO2 szulfonná oxidáljuk. A termék PEG-etanolszulfon.
g PEG-SCHj-CH^OH-t 30 ml 0,123 mol/l-es volfrámsavoldatban oldunk, és jégfürdőbe hűtjük. A volfrámsavoldatot úgy készítjük, hogy a savat pH=11,5 értékű nátrium-hidroxid-oldatban oldjuk, majd az oldat pH-ját jégecettel 5,6-re állítjuk. Volfrámsavat és polietilénglikol-merkaptoetanolt tartalmazó oldathoz 20 ml desztillált vizet és 2,876 ml 30%-os hidrogén-peroxidot adunk, ami a hidroxilcsoportokra vonatkoztatva 2,5 ekvivalens tömegnek felel meg, és az elegyet éjszakán át hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni.
Az oxidált terméket diklór-metánnal háromszor extraháljuk, esetenként 25 ml diklór-metán alkalmazásával. Az összegyűjtött szerves frakciókat híg vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, majd 20 ml-re besűrítjük. A PEG-etanolszulfon-terméket hideg, száraz etil-éter adagolásával kicsapjuk.
NMR-analízis (d6-DMSO, dimetil-szulfoxid) szerint a fő csúcsok PEG-SO2CH2OH-ra: 3,25 ppm, triplett, -CH^SC^-; 3,37 ppm, triplett, -SO^-CH^; 3,50 ppm, váz; 3,77 ppm, triplett, -CH2OH; 5,04 ppm, triplett, -OH. Az 5,04 ppm-nél lévő hidroxilcsúcs 85%-os helyettesítettséget jelöl, azonban a 3,37 ppm-nél levő -SO^CH?- 100%-os helyettesítettséget jelöl, és ez tekinthető megbizhatóbbnak.
4. reakció
A 4. reakció képviseli a polietilénglikol-klóretil-szulfon szintézisének, elkülönítésének és jellemzésének utolsó lépését.
A termék előállítására 20 g PEG-SO2CH2CH2OH képletű polietilénglikol-etanolszulfont 100 ml frissen desztillált tionil-kloridban oldunk, és az oldatot éjszakán át visszafolyató hűtő alatt forraljuk. Kínolinról desztillált tionil-kloridot alkalmazunk. A tionil-klorid feleslegét desztillálással távolítjuk el, az elegyhez 50 ml toluolt és 50 ml diklór-metánt adunk, majd desztillálással eltávolítjuk.
A termék elkülönítésére a PEG-klór-etil-szulfont ml diklór-metánban oldjuk, és 100 ml hideg, száraz etil-éter hozzáadásával kicsapjuk. A csapadékot 50 ml etil-acetátból kristályosítva különítjük el a terméket.
A termék jellemzésére magmágneses rezonancia módszert alkalmazunk. A PEG-SO2-CH2CH2CI NMRanalízise (d6-DMSO, dimetil-szulfoxid) a következő csúcsokat adja: 3,50 ppm, váz; 3,64 ppm, triplett, -CH2SO2-; 3,80 ppm, triplett, -SOt-CH^. 3,94 ppm-nél kis hidroxilszennyeződést jelző triplett jelentkezik. A százalékos helyettesítettség számítása ennél a spektrumnál nehézségekbe ütközik a fontos csúcsoknak az igen nagy vázcsúcsokhoz való közelsége miatt.
5. reakció
Az 5. reakció a 4. reakcióból származó polietilénglikol-klór-etil-szulfon átalakítása vinil-szulfonná, és a vinil-szulfon-termék elkülönítése és jellemzése.
A PEG-vinil-szulfon könnyen előállítható a szilárd PEG-klór-etil-szulfon diklór-metánban történő oldásával, és 2 ekvivalens mennyiségű nátrium-hidroxid-bázis adagolásával. Az oldatot ezután a bázis eltávolítására szűrjük, és az oldószert lepárolva elkülönítjük a PEG-SO2-CH=CH2, vagyis PEG-vinil-szulfon-terméket.
A PEG-vinil-szulfont NMR-analízissel jellemezzük, a fő csúcsok (d6-DMSO, dimetil-szulfoxid): 3,50 ppm, váz; 3,73 ppm, triplett, -CH^SO^; 6,21 ppm, triplett, =CH2; 6,97 ppm, dublett dublettje, -SO2-CH-. A 6,97 ppm-nél jelentkező -SO2-CH- csúcs 84%-os helyettesítettséget jelöl. A 6,21 ppm-nél megjelenő =CH2 csúcs 94%-os helyettesítettséget jelöl. Merkaptoetanollal és 2,2’-ditiodipiridinnel való titrálás 95%-os helyettesítettséget jelöl.
2. példa
Tlolszelektív reakciókészség
A 2. példa azt mutatja be, hogy a PEG-vinil-szulfon és prekurzora, a PEG-klór-etil-szulfon jelentősen reakcióképesebbek tiolcsoportok (-SH) iránt, mint aminocsoportok (-NH2) vagy iminocsoportok (-NH-) iránt. A tiolcsoportot tartalmazó vegyületek alkoholokra emlékeztető olyan szerves vegyületek, amelyek a hidroxilcsoportok oxigénatomja helyén kénatomot tartalmaznak. A tiolokat esetenként szulfhidrileknek vagy merkaptánoknak is nevezik. A PEG-vinil-szulfon az -SO2-CH=CH2 vinil-szulfon-csoportot tartalmazza. A PEG-klór-etil-szulfon az -SO2CH2CH2CI klór-etil-szulfon-csoportot tartalmazza.
A tiolok iránti szelektivitás fontos a proteinek módosításánál, mivel ez azt jelenti, hogy a ciszteinegységek (amelyek -SH csoportokat tartalmaznak) módosítása előnyt élvez a lizinegységek (-NH2 csoportot tartalmazóak) és hisztidinegységek (-NH- csoportot tartalmazóak) módosításával szemben. A PEG-vinil-szulfon szelektivitása tiolok iránt azt jelenti, hogy a PEG szelektíven képes kapcsolódni a ciszteinegységekhez, így megőrződik a fajlagos proteinek proteinaktivitása, és szabályozott a proteinhez kapcsolódó PEG-molekulák száma.
A PEG-vinil-szulfon relatív reakcióképességét tiolok és aminocsoportok iránt a PEG-vinil-szulfonnak
HU 225 649 Β1
Ν-α-acetil-lizin-metil-észterrel és merkaptoetanollal való reakciója sebességének meghatározásával mérjük. Az Ν-α-acetil-lizin-metil-észter egy olyan lizinmodell, amely egy aminocsoportot tartalmaz, és rövidített jelölése Lys-NH2. A merkaptoetanol a cisztein modelljeként szolgál, ez tiolcsoportot tartalmaz, rövidített jelölése Cys-SH. A PEG-klór-etil-szulfon relatív reakciókészségét hasonló módon határozzuk meg. Ez a molekula a vinil-szulfon „védett” formájaként szolgálhat, mivel savban stabil, és lúg adagolásakor PEG-vinil-szulfonná alakul.
A PEG-vinil-szulfon és PEG-klór-etil-szulfon-prekurzora reakciókészségét pH=8,0, pH=9,0 és pH=9,5 értéknél vizsgáltuk. A pH szabályozására alkalmazott pufferek pH=8,0-nél 0,1 mol/l-es foszfátpuffer, pH=9,0-nél és pH=9,5-nél 0,1 mol/l-es borátpuffer. A merkaptoetanol reakcíókészségének mérésére mindkét pufferhez 5 mmol/l etilén-diamin-tetraecetsavat (EDTA) adunk, hogy visszatartsuk a tiol diszulfiddá való alakulását.
A találmány szerinti PEG-származékok Lys-NH2-vel való reagáltatására a PEG-származék 3 mmol/l-es oldatát adjuk keverés mellett 0,3 mmol/l-es, megfelelő pufferben lévő Lys-NH2 oldathoz a lúgos pH mindhárom előbb említett szintjén. A reakció lefolyását fluorescaminnak a reakcióelegyhez való adagolásával követjük nyomon, a fluorescamin a megmaradt aminocsoportokkal reagálva fluoreszcens származékot képez. A vizsgálati lépést úgy végezzük, hogy 50 μΙ reakcióelegyet 1,950 ml pH=8,0 értékű foszfátpufferhez adunk, majd ehhez az elegyhez 1,0 ml fluorescaminoldatot adunk erőteljes keverés mellett. A fluorescaminoldat 0,3 mg fluorescamint tartalmaz 1 ml acetonban.
A fluoreszcenciát 10 perces keverés után mérjük. 390 nm hullámhossznál gerjesztést észlelünk. 475 nm-nél fényemisszió történik. Nem észlelünk reakciót 24 órán belül sem PEG-vinil-szulfon, sem PEG-klór-etil-szulfon alkalmazásakor pH=8,0 értéknél. pH=9,5-nél a reakció lassú, de minden aminocsoport elreagál néhány nap alatt.
A PEG-vinil-szulfon és a PEG-klór-etil-szulfon-prekurzor Cys-SH-val való reagáltatására a PEG-származék 2 mmol/l-es oldatát Cys-SH megfelelő pufferben készült 0,2 mmol/l-es oldatához adjuk mindhárom előzőekben említett lúgos pH-értéken. A reakció lefolyását 4-ditiopiridinnek a reakcióelegyhez való adagolásával követjük nyomon. A 4-ditiopiridin a Cys-SH-val reagálva 4-tiopiridont képez, amely abszorbeálja az ultraibolya fényt.
A kimutatási lépést úgy végezzük, hogy 50 μΙ reakcióelegyet 0,950 ml 0,1 mol/l-es, pH=8,0 értékű, 5 mmol/l EDTA-t tartalmazó foszfátpufferhez adjuk, majd az elegyhez azonos pufferben készült 2 mmol/l-es 4-ditiopiridinoldatot adunk.
A 4-tiopiridon abszorpcióját 324 nm-nél mérjük. Mind a PEG-vinil-szulfon, mind a PEG-klór-etil-szulfon reakciókészséget mutat Cys-SH iránt, a nagyobb reakciókészséget a PEG-vinil-szulfon mutatja. pH=9,0-nél a reakció 2 perc alatt lejátszódik vinil-szulfon alkalmazásakor, és 15 perc alatt zajlik le klór-etil-szulfon alkalmazásakor. Ezek a reakciók azonban túlságosan gyorsak ahhoz, hogy a pontos reakció sebességi állandót meghatározzuk. pH=8,0-nél a reakciók lassúbbak, de még mindig 1 órán belül lejátszódnak vinil-szulfon alkalmazásakor, és 3 óra alatt klór-etil-szulfon alkalmazásakor. A klór-etil-szulfon vinil-szulfonná való átalakulása jelentősen lassabb, mint a vinil-szulfonnak Cys-SH-val való reakciója. így a klór-etil-szulfonnak Cys-SH-val való reakciósebessége a klór-etil-szulfon vinil-szulfonná való átalakulási sebességétől függőnek tűnik. Ezek a reakciósebességek azonban még mindig sokkal nagyobbak, mint a Lys-NH2-vel adott reakció sebessége.
A fenti kinetikai vizsgálatok a következő szempontokat igazolják. A PEG-vinil-szulfon reakciókészsége jóval nagyobb tiolcsoportok iránt, mint aminocsoportok iránt, jelezve, hogy a PEG-vinil-szulfon kapcsolódása a mind cisztein-, mind lizincsoportokat tartalmazó proteinekhez elsődlegesen a ciszteinnel való reakció révén játszódik le. Mivel az aminocsoportok reakciókészsége hasonló, mint az iminocsoportoké, a hisztidinalegységek reakciókészsége ugyancsak sokkal kisebb, mint a ciszteinalegységeké. A PEG-klór-etil-szulfon és PEG-vinil-szulfon tiolcsoportok iránti szelektivitása alacsonyabb pH-értékeken is érvényre jut, bár a PEG-klór-etil-szulfon iránti reakció némileg lassúbb.
Számos PEG-származék alkalmazhatósága korlátozott, mivel ezek gyorsan reagálnak vízzel, ez közrejátszik a származéknak molekulákhoz és felületekhez való kapcsolására irányuló kísérletekben vizes körülmények mellett. Az alábbi 3. példában azt mutatjuk be, hogy a PEG-vinil-szulfon és a PEG-klór-etil-szulfon vízben stabilak.
3. példa
Hidrolízissel szembeni stabilitás
PEG-vinil-szulfont D2O (deutérium-oxid) nehézvízben oldunk, és NMR-elemzéssel követjük nyomon. Nem következik be reakció. Boráttal pH=9,0-re pufferolt nehézvízben készített PEG-klór-etil-szulfonból PEG-vinil-szulfon képződött. NMR révén nyomon követve azt észleltük, hogy a már képződött PEG-vinil-szulfon nehézvízben 3 napon át stabil.
A PEG-klór-etil-szulfon vízben stabil, míg az oldat lúgossá nem válik, ekkor vinil-szulfonná alakul. A vinil-szulfonná való átalakulást PEG-klór-etil-szulfonnak pH=7 értékű és boráttal pH=9-re pufferolt vízben való oldásával mutattuk ki. A PEG-származékot metilén-kloridba extraháltuk. A metilén-klorid eltávolítása után végzett NMR-elemzés azt mutatta, hogy a PEG-klór-etil-szulfon semleges, pH=7,0 értéken stabil, bázissal reagálva PEG-vinil-szulfonná alakul.
A vinil-szulfon vízben még lúgos pH-értéken is néhány napig stabil. A PEG-vinil-szulfont és prekurzorát nagymértékű hidrolízissel szembeni stabilitásuk és tiolfajlagos reakciókészségük hasznossá teszi molekulák és felületek vizes körülmények melletti módosítására, amint azt a következő, 4. példában bemutatjuk.
4. példa
Proteinkapcsolás
A proteinmódosítást a PEG-származéknak marhaszérum-albuminhoz (BSA) való kötésével mutatjuk ki
HU 225 649 Β1 két különböző módszerrel. A BSA egy protein. A natív, módosítatlan BSA cisztincsoportokat tartalmaz, amely nem tartalmaz tiolcsoportokat. A cisztinegységek S-S diszulfidkötések révén kötöttek.
Az első módszer szerint 5000 molekulatömegű m-PEG-vinil-szulfont reagáltatunk módosítatlan BSA-val 24 órán át 0,1 mol/l-es, pH=9,5-es borátpufferben szobahőmérsékleten. Az oldat ml-enként 1 mg BSA-t és 1 mg 5000 molekulatömegű m-PEG-vinil-szulfont tartalmaz. A 2. példa modellvegyületeivel kapott eredmények azt jelezték, hogy a lizinalegységek (és esetleg a hisztidinalegységek) az ilyen viszonylag bázikus körülmények mellett és a reakció számára hozzáférhető szabad tiolcsoportok hiányában módosultak volna.
A lizinalegységek kapcsolását két módon mutattuk ki. Elsőként a méretkizárásos kromatográfiás eljárással, amely azt mutatta, hogy a protein molekulatömege mintegy 50%-kal megnövekedett, jelezve ezzel mintegy 10 PEG kapcsolódását a proteinhez. Második módszerként fluoreszcaminos analízist végeztünk, amely azt mutatta, hogy a lizincsoportok száma a BSA-molekulában mintegy 10-zel csökkent.
A második módszer szerint a BSA-t tributil-foszfinnal reagáltatjuk az S-S diszulfidkötések -SH tiolcsoportokká való redukálására, amelyek a reakció számára hozzáférhetők. A módosított BSA-t ezután PEG-klór-etil-szulfonnal reagáltatjuk pH=8,0 értéken 0,1 mol/l-es foszfátpufferben, szobahőmérsékleten, 1 órán át. Az oldat 1 mg módosított BSA-t és 1 mg 5000 molekulatömegű m-PEG-klór-etil-szulfont tartalmaz ml-enként. Az eredmények azt mutatják, hogy a lizincsoportok ilyen körülmények mellett nem képesek reakcióra. A tiolcsoportok azonban reagálnak.
A PEG-nek a proteinhez való kapcsolódását méretkizárásos kromatográfiás eljárással mutatjuk ki, amely azt mutatja, hogy a protein molekulatömege mintegy 25%-kal megnövekedett. A fluoreszcaminos analízis a protein lizinalegységeinek számában nem mutat változást, ami megerősíti azt, hogy a PEG-kapcsolódás nem a lizinalegységeken történt. Ezáltal a tiolcsoportok helyettesltettségét igazoltuk.
A találmányt az előzőekben sajátos megvalósítási módjainak példaként való bemutatásával ismertettük. A leírás azonban nem szolgál a találmány példákra való korlátozására, szakember számára nyilvánvaló, hogy a találmány szellemében, az előző leírás alapján számos variáció megvalósítható. A találmány minden olyan alternatívát, módosítást és ekvivalenst magában foglal, amely a találmány szellemén és oltalmi körén belül esik.
Claims (66)
1. Vízoldható és izolálható aktivált polimer, amely hidrolízissel szemben stabil, és amely polimer a legalább egy aktív szulfonegységgel bíró poli(alkilén-oxid)-ok, polietoxilezett poliolok és poliolefines alkoholok körébe tartozik.
2. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a legalább egy aktív szulfonegysége egy olyan szulfoncsoportot tartalmaz, amely legalább két szénatommal bír, és a szulfoncsoporttól számított második szénatomon egy reakcióképes hellyel bír.
3. A 2. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a legalább egy aktív szulfonegység egy vinil-szulfon, egy aktív etil-szulfon, egy vinil-szulfonból vagy etil-szulfonból származó aktív származék vagy ezek kombinációja.
4. A 3. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer egy polietilénglikol, és a legalább egy aktív szulfonegység egy vinil-szulfon- vagy egy halogénezett etil-szulfon-egység.
5. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer egy polietilénglikol-vinil-szulfon.
6. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer polietilénglikol, polipropilénglikol, polietoxilezett glicerin, polietoxilezett szorbit, polietoxilezett glükóz vagy poli(vinil-alkohol).
7. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer polietilénglikol.
8. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer egyenes láncú.
9. A 8. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy az egyenes láncú polimer helyettesítőként kizárólag az aktív szulfonegységet tartalmazza.
10. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer egy random vagy blokk-kopolimer vagy terpolimer.
11. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer súlyzószerkezetű, amely az aktív egységet a polimer váz legalább egyik végén tartalmazza, és olyan aktív egységgel bír, amely a polimer váz másik végén lévő aktív egységgel azonos vagy attól különböző.
12. A 11. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer váz két ellentétes végén különböző aktív egységeket tartalmaz, amelyek aminoegységekkel reakcióra képesek.
13. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer legalább egy elágazó molekulaszerkezetű kart tartalmaz.
14. A 13. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy az elágazó molekulaszerkezet dendrites.
15. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a legalább egy aktív szulfonegység egy felületen vagy egy molekulán lévő reakcióképes egységgel kötést képez.
16. A 15. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a reakcióképes egység egy tiolegység.
17. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy az említett aktív szulfonegység a polimerhez olyan kötéssel kapcsolódik, amely egy kötőegységet foglal magában, és ahol a polimer egy, az említett kötőegységgel kapcsolódó aktív szulfonegységtől eltérő aktív egységet tartalmaz.
HU 225 649 Β1
18. A 17. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a második aktív egység egy aminszelektív egység, és a kötőegység egy aktív aminoegységet foglal magában.
19. A 17. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer polietilénglikol, az említett második aktív egység egy aminoegység, a kötőegység szerkezete NHS-O2C-CH2-CH2-SO2-CH=CH2, és az aktivált polimer szerkezete
PEG-NH-CO-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
20. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer pH 11 vagy az alatti vizes környezetben stabil.
21. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy az aktivált polimer mintegy pH=9 vagy az alatti körülmények mellett szelektíven reagál a tiolegységekkel.
22. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy az aktivált polimer a legtöbb redukálókörnyezetben stabil.
23. Az 1. igénypont szerinti aktivált polimer, azzal jellemezve, hogy a polimer vízben korlátlanul oldódó.
24. Az R-CH2CH2-(OCH2CH2)n-Y szerkezettel jellemezhető izolálható aktivált polietilénglikol-származék - a képletben n értéke 5 és 3000 közötti, Y jelentése —SO^CH=CH2 vagy —SO^GH^GH^X, ahol X jelentése halogénatom és R jelentése HO-, H3CO-, CH2=GH-SO2- vagy X—CH2—CH2—SO2-.
25. A 24. igénypont szerinti aktivált polietilénglikol-származék, ahol n értéke 5 és 2200 közötti.
26. A 24. igénypont szerinti aktivált polietilénglikolszármazék, azzal jellemezve, hogy n értéke 34 és 1100 közötti.
27. A 24. igénypont szerinti aktivált polietilénglikol-származék, azzal jellemezve, hogy n értéke 45 és 110 közötti.
28. Hidrolízissel szemben stabil, biológiailag aktív konjugátum, amely egy reakcióképes tiolegységgel bíró biológiailag aktív molekulát és egy, a tiolegységgel kötést létrehozó aktív szulfonegységet tartalmazó, a poli(alkilén-oxid)-ok, polietoxilezett poliolok és poliolefines alkoholok körébe tartozó vízoldható polimerszármazékot foglal magában.
29. A 28. igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve, hogy biológiailag aktív molekulaként egy proteint és reakcióképes tiolegységként a proteinen belül egy ciszteinegységet tartalmaz.
30. A 28. igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve, hogy szerkezete a PEG-SO^CH^CH^S-W általános képletnek megfelelő, ahol W jelentése egy biológiailag aktív molekula.
31. Hidrolízissel szemben stabil, biológiailag aktív konjugátum, amely két, egymással azonos vagy egymástól különböző biológiailag aktív egységet tartalmaz, és ezen biológiailag aktív egységek közül legalább az egyik egy reakcióképes tiolegységet tartalmaz, és a konjugátum tartalmaz még egy vízoldható súlyzó polimerszármazékot, amely mindkét láncvégén reakcióképes egységgel bír, és ezen egységek közül legalább az egyik egy aktív szulfonegység, amely a legalább egy biológiailag aktív egység tiolegységével kötést képez, és a másik biológiailag aktív egység a polimer másik reakcióképes egységével alkot kötést.
32. A 31. igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve, hogy biológiailag aktív egysége a proteinek, gyógyszerek, vitaminok és ezek kombinációinak körébe tartozó.
33. A 31. igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve, hogy aktív szulfonegysége vinil-szulfon vagy halogénezett etil-szulfon, és a polimerszármazék másik reakcióképes egysége aminocsoporttal való reakcióra szelektív.
34. Egy biológiailag aktív konjugátum, amely egy, 18. igénypont szerinti aktivált, vízoldható polimert tartalmaz, amely legalább egy, tiolegységekkel való reakcióra szelektív aktív szulfonegységet és legalább egy, aminoegységekkel való reakció iránt szelektív másik egységet tartalmaz: és a konjugátum tartalmaz még egy első proteint, amely egy tiolegységet tartalmaz, ahol a tiolegység hidrolízissel szemben stabil kötést képez a polimer említett szulfonegységével, és egy második proteint, amely egy aminoegységgel bír, amely aminoegység a polimer említett második egységével képez kötést.
35. A 34. igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve, hogy az első protein ciszteinegységeket, a második protein lizinegységeket tartalmaz.
36. Eljárás olyan izolálható, vízoldható, aktivált, a poli(alkilén-oxid)-ok, polietoxilezett poliolok és poliolefines alkoholok körébe tartozó szerves polimer előállítására, amely egy olyan aktív szulfonegységgel bír, ahol a polimer és a szulfonegység közötti kötés hidrolízissel szemben stabil, azzal jellemezve, hogy egy kéntartalmú egységet a polimer egy szénatomjához kapcsolunk, és a kéntartalmú egységet aktív szulfonegységgé alakítjuk, majd az aktív szulfonegységgel bíró aktivált polimert izoláljuk.
37. A 36. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kéntartalmú egységet a polimer szénatomjához közvetlenül úgy kötjük, hogy a polimernek legalább egy aktiválható hidroxilegységét aktiváljuk, és a kapott vegyületet egy tiolegységet tartalmazó alkohollal reagáltatjuk, ezáltal a ként közvetlenül kötjük a polimer szénláncához.
38. A 37. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a legalább egy aktiválható hidroxilegység aktiválását a hidroxii halogénnel való helyettesítésével vagy a hidroxilcsoport hidrogénjének savval vagy savhalogeniddel való reagáltatása révén észtercsoport kialakításával végezzük.
39. A 37. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tiolegységet tartalmazó alkoholként merkaptoetanolt alkalmazunk.
40. A 37. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tiolegységet tartalmazó alkoholt a kéntartalmú egység kénatomjának szulfonná való oxidálásával alakítjuk aktív szulfonegységgé, és a kapott terméket egy savval, savhalogeniddel vagy halogénnel reagáltatjuk, hogy az aktiválható hidroxilegységek legalább egyikét aktiváljuk.
HU 225 649 Β1
41. A 40. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szulfonként egy aktív etil-szulfont alkalmazunk, és az eljárás egy további lépéseként a polimeren vinil-szulfon-egységet képezünk az aktív etil-szulfonnak erős bázissal való reagáltatásával.
42. Eljárás izolálható polietilénglikol-vinil-szulfon előállítására, azzal jellemezve, hogy (a) legalább egy aktív hidroxilegységet tartalmazó polietilénglikolt egy vegyülettel reagáltatva észterré vagy halogeniddé alakítunk;
(b) az (a) lépésben kapott észtert vagy halogénnel helyettesített polietilénglikolt merkaptoetanollal reagáltatva az észter- vagy halogenidegységet merkaptoetanolcsoporttal helyettesítjük;
(c) a (b) lépésben kapott merkaptoetanollal helyettesített polietilénglikolt egy oxidálószemei reagáltatva a merkaptoetanolegység kénatomját szulfonná oxidáljuk;
(d) a (c) lépésben kapott szulfont a merkaptoetanolegység hidroxilcsoportjának észtemé vagy halogeniddé való alakítására alkalmas vegyülettel reagáltatjuk;
(e) a (d) lépésben kapott etil-szulfont bázissal reagáltatva polietilénglikol-vinil-szulfont állítunk elő; és (f) a polietilénglikol-vinil-szulfont izoláljuk.
43. A 42. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (d) lépésben halogénként klórt alkalmazunk, és a (d) lépés termékeként polietilénglikol-klór-etil-szulfont nyerünk, és az eljárás további lépéseként a polietilénglikol-klór-etil-szulfont izoláljuk, az eljárást úgy végezzük, hogy a klór-etil-szulfont diklór-metánban oldjuk, és az oldatból a klór-etil-szulfont etil-étemel kicsapjuk, majd a csapadékot etil-acetátból átkristályosítjuk.
44. A 42. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a d) lépésben kapott polietilénglikol-klóretil-szulfon-kristályokat a bázissal való reagáltatást megelőzően további lépésként szerves oldószerben oldjuk, majd bázissal reagáltatjuk, így polietilénglikol-vinil-szulfont állítunk elő, és a kapott polietilénglikol-vinil-szulfon-terméket a bázis elkülönítésére szűrjük, és a szűrletről az oldószert lepároljuk.
45. Eljárás olyan izolálható, vízoldható, aktivált szerves polimer előállítására, amely egy olyan aktív szulfonegységet tartalmaz, ahol a polimer és a szulfonegység közötti kötés hidrolízis iránt stabil, azzal jellemezve, hogy egy aktív szulfonegységet tartalmazó kapcsolóegységet és egy másik egységet kapcsolunk egy polimerszármazékhoz, ahol a polimerszármazék egy, a szulfonegységtöl eltérő funkciós csoportot tartalmazó poli(alkilén-oxid), polietoxilezett poliol vagy poliolefines alkohol, és ahol a funkciós csoport szelektív a kapcsolóegység másik aktív egysége iránt.
46. A 45. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a polimerszármazékon lévő funkciós csoport aminoegységekkel való reakció iránt szelektív, és a kapcsolóegységen lévő másik csoport egy aktív aminoegységet tartalmaz.
47. A 45. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy polimerszármazékként PEG-szukcinimidil aktív észtert és kapcsolóegységként NH2-CH2-CH2-SO2-CH=CH2 szerkezetű egységet alkalmazunk.
48. Eljárás a polietilénglikol, polipropilénglikol, polietoxilezett glicerin, polietoxilezett szorbit, polietoxilezett glükóz és poli(vinil-alkohol) körbe tartozó, egy, az aminoegységek iránt szelektív funkciós csoporttal bíró polimerszármazék előállítására, azzal jellemezve, hogy egy olyan kapcsolóegységet készítünk, amely egy aminoegységet és egy szulfonegységet foglal magában, és a kapcsolóegységen lévő aminoegységet a polimerszármazék aminoszelektív egységéhez kapcsoljuk.
49. Eljárás egy, a fehérjék, gyógyszerek és vitaminok körébe tartozó anyag és egy vízoldható aktivált polimer konjugátumának előállítására, ahol az aktivált polimer legalább egy szulfonegységgel bíró poli(alkilén-oxid), polietoxilezett poliol vagy poliolefines alkohol, azzal jellemezve, hogy a fenti anyagot az aktivált szulfonegységet tartalmazó polimerrel reagáltatjuk, és az anyag és a polimerszármazék között kötést hozunk létre oly módon, hogy amennyiben a fenti anyag egy aktív tiolegységgel bír, a kötést e tiolegység és a polimer szulfonegysége között, vagy amennyiben a fenti anyag aktív aminoegységgel bír, és az aktivált polimer aminoegység iránt szelektív egységgel bír, a kötést az aminoegység és az ez iránt szelektív egység között hozzuk létre.
50. A 49. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy aktivált polimerként polietilénglikolt, polipropilénglikolt, polioxietilezett glicerint, polioxietilezett szorbitot, polioxietilezett glükózt vagy poli(vinil-alkohol)-t alkalmazunk.
51. Eljárás egy biológiailag aktív molekula és polietilénglikol aktív származékai konjugátumának előállitására, azzal jellemezve, hogy egy reakcióképes tiolegységgel bíró biológiailag aktív molekulát egy aktív szulfonegységet tartalmazó polietilénglikol-származékkal reagáltatunk, és a tiolegység és az aktív szulfonegység között kötést hozunk létre.
52. Az 51. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a biológiailag aktív molekulának a polietilénglikol-származókkal való reagáltatását mintegy pH 11 alatti értéken hajtjuk végre.
53. Az 51. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a biológiailag aktív molekulának a polietilénglikol-származékkal való reagáltatását mintegy pH=9 vagy az alatti hőmérsékleten hajtjuk végre.
54. Az 51. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy aktív szulfonegységként vinil-szulfont, aktív etil-szulfont vagy ezek aktív származékait alkalmazzuk.
55. A CH3-(OCH2CH2)n-SO2-CH=CH2 általános képlettel jellemezhető aktivált polietilénglikol-származék - a képletben n értéke 5 és 3000 közötti.
56. A
CH2=CH-SO2-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH=CH2 általános képlettel jellemezhető aktivált polietiléngtikolszármazék - a képletben n értéke 5 és 3000 közötti.
57. Egy hidrolízissel szemben stabil, biológiailag aktív konjugátum, 1. legalább egy W-SH szerkezetnek megfelelő biológiailag aktív molekula - ahol W jelentése egy biológiailag aktív egység és SH egy reakcióképes tiolegység, és 2. egy egy-három szulfonegységet tartalmazó, R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-Y szerkezetnek
HU 225 649 Β1 megfelelő aktivált polietilénglikol-származék - a képletben n értéke 5 és 3000 közötti, Y jelentése -SO2-CH=CH2 és R jelentése HO-, H3CO- vagy X-CH2-CH2-SO2-, ahol X jelentése halogénatom vagy CH2=CH-SO2- - reakciójának terméke, és ahol a reakcióképes tiolegység legalább egy aktív szulfonegységhez kötődik.
58. Az 57. igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve, hogy biológiailag aktív molekulaként egy proteint tartalmaz, és a reakcióképes tiolegység a protein egy ciszteinegységének része.
59. Az 57. igénypont szerinti, R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-W általános képletnek megfelelő szerkezetű konjugátum - a képletben n értéke 5 és 3000 közötti, R jelentése HOvagy H3CO-.
60. Az 57. igénypont szerinti, a W-S-CH2-CH2-SO2-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2CH^CH^S-W általános képletnek megfelelő biológiailag aktív konjugátum - a képletben n értéke 5 és 3000 közötti.
61. Az 57. igénypont szerinti, az R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-protein általános képletnek megfelelő biológiailag aktív konjugátum - a képletben n értéke 5 és 3000 közötti, R jelentése HO- vagy H3CO-.
62. Az 57. igénypont szerintinek megfelelő protein-S-CHz-CHz-SOz-CHj-CH^OCHzCHgjn-SOzCHz-CHz-S-protein általános képletű biológiailag aktív konjugátum, ahol n értéke 5 és 3000 közötti.
63. Eljárás legalább egy W-SH általános képletű biológiailag aktív molekulát tartalmazó - a képletben W jelentése egy biológiailag aktív egység, -SH jelentése egy aktív tiolegység - és egy aktivált, legalább egy aktív szulfonegységet tartalmazó polietilénglikol-származékot tartalmazó biológiailag aktív konjugátum előállítására, ahol az aktivált polietilénglikol-származék az R-CH2CH2-(OCH2CH2)n-Y általános képletnek megfelelő, ahol n értéke 5 és 3000 közötti, Y jelentése -SO2-CH=CH2, és R jelentése HO-, H3CO- vagy X-CH2-CH2-SO2-, ahol X jelentése halogénatom vagy CH2=CH-SO2~, azzal jellemezve, hogy a biológiailag aktív molekulát az aktivált polietilénglikol-származékkal reagáltatjuk, ezzel az aktív tiolegység és a polietilénglikol legalább egy aktív szulfonegysége között kötést hozunk létre.
64. A 63. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy W jelentése protein.
65. Eljárás proteinS-CH2-CH2-SO2-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2CHz-S-protein általános képletű biológiailag aktív konjugátum előállítására - a képletben n értéke 5 és 3000 közötti -, azzal jellemezve, hogy 1. legalább egy olyan proteint, amely egy aktív tiolegységet tartalmaz, egy R-CH2CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH=CH2 szerkezetű, szulfonnal aktivált polietilénglikol-származékkal reagáltatunk - a képletben R jelentése CH^CH-SO^ vagy X-CH2-CH2-SO2- csoport, ahol X jelentése halogénatom, és 2. a protein aktív tiolegysége és az aktivált polimer aktív szulfonegysége között kötést hozunk létre.
66. Eljárás
H3CO-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-protein általános képletű biológiailag aktív konjugátum előállítására - a képletben n értéke 5 és 3000 közötti -, azzal jellemezve, hogy 1. aktív tiolegységet tartalmazó proteint egy H3CO-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-S02-CH=CH2 általános képletű aktivált polietilénglikol-származékkal reagáltatunk, és 2. a protein aktív tiolegysége és az aktivált polimer aktív szulfonegysége között kötést hozunk létre.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/151,481 US5446090A (en) | 1993-11-12 | 1993-11-12 | Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules |
| PCT/US1994/013013 WO1995013312A1 (en) | 1993-11-12 | 1994-11-14 | Water soluble active sulfones of poly(ethylene glycol) |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9601253D0 HU9601253D0 (en) | 1996-07-29 |
| HUP9601253A2 HUP9601253A2 (en) | 2001-06-28 |
| HU225649B1 true HU225649B1 (en) | 2007-05-29 |
Family
ID=22538958
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9601253A HU225649B1 (en) | 1993-11-12 | 1994-11-14 | Isolable, water soluble, hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers to modify surfaces and molecules, process for producing thereof, biologically active conjugates thereof and process for producing said conjugates |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US5446090A (hu) |
| EP (2) | EP0728155B1 (hu) |
| JP (1) | JP3114998B2 (hu) |
| KR (1) | KR100225746B1 (hu) |
| CN (1) | CN1085689C (hu) |
| AT (1) | ATE215577T1 (hu) |
| AU (1) | AU687937B2 (hu) |
| BG (1) | BG63399B1 (hu) |
| BR (1) | BR9408048A (hu) |
| CA (1) | CA2176203C (hu) |
| CZ (1) | CZ295640B6 (hu) |
| DE (1) | DE69430317T2 (hu) |
| DK (1) | DK0728155T3 (hu) |
| EE (1) | EE03448B1 (hu) |
| ES (1) | ES2173943T3 (hu) |
| FI (1) | FI117441B (hu) |
| HK (1) | HK1042312A1 (hu) |
| HU (1) | HU225649B1 (hu) |
| NO (1) | NO315377B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ276313A (hu) |
| PL (1) | PL180149B1 (hu) |
| RO (2) | RO118434B1 (hu) |
| RU (1) | RU2176253C2 (hu) |
| SK (1) | SK284527B6 (hu) |
| UA (1) | UA58481C2 (hu) |
| WO (1) | WO1995013312A1 (hu) |
Families Citing this family (440)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6143866A (en) * | 1989-07-18 | 2000-11-07 | Amgen, Inc. | Tumor necrosis factor (TNF) inhibitor and method for obtaining the same |
| US6552170B1 (en) * | 1990-04-06 | 2003-04-22 | Amgen Inc. | PEGylation reagents and compounds formed therewith |
| US6057287A (en) | 1994-01-11 | 2000-05-02 | Dyax Corp. | Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof |
| US20010055581A1 (en) | 1994-03-18 | 2001-12-27 | Lawrence Tamarkin | Composition and method for delivery of biologically-active factors |
| US5583114A (en) | 1994-07-27 | 1996-12-10 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Adhesive sealant composition |
| US5672662A (en) * | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
| KR20040010739A (ko) | 1996-02-09 | 2004-01-31 | 암젠 인코포레이티드 | 인터루킨-1 수용체 길항물질을 포함하는 융합 단백질 및 이를 포함하는 제약학적 조성물 |
| US5747639A (en) * | 1996-03-06 | 1998-05-05 | Amgen Boulder Inc. | Use of hydrophobic interaction chromatography to purify polyethylene glycols |
| TW555765B (en) | 1996-07-09 | 2003-10-01 | Amgen Inc | Low molecular weight soluble tumor necrosis factor type-I and type-II proteins |
| US8003705B2 (en) * | 1996-09-23 | 2011-08-23 | Incept Llc | Biocompatible hydrogels made with small molecule precursors |
| AU4648697A (en) * | 1996-09-23 | 1998-04-14 | Chandrashekar Pathak | Methods and devices for preparing protein concentrates |
| US6566406B1 (en) | 1998-12-04 | 2003-05-20 | Incept, Llc | Biocompatible crosslinked polymers |
| AU4981897A (en) | 1996-10-15 | 1998-05-11 | Navix, Inc. | Stabilized conjugates of uncomplexed subunits of multimeric proteins |
| AU736876B2 (en) | 1996-12-06 | 2001-08-02 | Amgen, Inc. | Combination therapy using an IL-1 inhibitor for treating IL-1 mediated diseases |
| JP2001513754A (ja) | 1996-12-06 | 2001-09-04 | アムジェン インコーポレイテッド | Ｔｎｆ媒介疾患を処置するためのｔｎｆ結合タンパク質を使用する組み合わせ治療 |
| US6743248B2 (en) | 1996-12-18 | 2004-06-01 | Neomend, Inc. | Pretreatment method for enhancing tissue adhesion |
| US6371975B2 (en) | 1998-11-06 | 2002-04-16 | Neomend, Inc. | Compositions, systems, and methods for creating in situ, chemically cross-linked, mechanical barriers |
| US20040176801A1 (en) * | 1997-03-12 | 2004-09-09 | Neomend, Inc. | Pretreatment method for enhancing tissue adhesion |
| US20030191496A1 (en) * | 1997-03-12 | 2003-10-09 | Neomend, Inc. | Vascular sealing device with microwave antenna |
| AU7282698A (en) * | 1997-05-15 | 1998-12-08 | Theratech, Inc. | Targeted delivery to t lymphocytes |
| US6284246B1 (en) | 1997-07-30 | 2001-09-04 | The Procter & Gamble Co. | Modified polypeptides with high activity and reduced allergenicity |
| US6251866B1 (en) | 1997-08-05 | 2001-06-26 | Watson Laboratories, Inc. | Conjugates targeted to the interleukin-2 receptor |
| US6168784B1 (en) | 1997-09-03 | 2001-01-02 | Gryphon Sciences | N-terminal modifications of RANTES and methods of use |
| WO1999011202A1 (en) * | 1997-09-05 | 1999-03-11 | Icet, Inc. | Biomimetic calcium phosphate implant coatings and methods for making the same |
| US7229841B2 (en) * | 2001-04-30 | 2007-06-12 | Cytimmune Sciences, Inc. | Colloidal metal compositions and methods |
| US6407218B1 (en) * | 1997-11-10 | 2002-06-18 | Cytimmune Sciences, Inc. | Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs |
| US6066673A (en) * | 1998-03-12 | 2000-05-23 | The Procter & Gamble Company | Enzyme inhibitors |
| AU2903899A (en) | 1998-03-12 | 1999-09-27 | Shearwater Polymers Inc. | Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups |
| US6908757B1 (en) | 1998-03-26 | 2005-06-21 | The Procter & Gamble Company | Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions |
| AU2742499A (en) | 1998-03-26 | 1999-10-18 | Procter & Gamble Company, The | Serine protease variants having amino acid substitutions |
| US6495136B1 (en) | 1998-03-26 | 2002-12-17 | The Procter & Gamble Company | Proteases having modified amino acid sequences conjugated to addition moieties |
| US6632457B1 (en) * | 1998-08-14 | 2003-10-14 | Incept Llc | Composite hydrogel drug delivery systems |
| US6458147B1 (en) | 1998-11-06 | 2002-10-01 | Neomend, Inc. | Compositions, systems, and methods for arresting or controlling bleeding or fluid leakage in body tissue |
| US6994686B2 (en) * | 1998-08-26 | 2006-02-07 | Neomend, Inc. | Systems for applying cross-linked mechanical barriers |
| WO2000012587A2 (en) * | 1998-08-28 | 2000-03-09 | Gryphon Sciences | Polyamide chains of precise length, methods to manufacture them and their conjugates |
| US6551613B1 (en) * | 1998-09-08 | 2003-04-22 | Alza Corporation | Dosage form comprising therapeutic formulation |
| AU743363B2 (en) | 1998-09-22 | 2002-01-24 | Procter & Gamble Company, The | Personal care compositions containing active proteins tethered to a water insoluble substrate |
| US6660843B1 (en) * | 1998-10-23 | 2003-12-09 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
| US7279001B2 (en) * | 1998-11-06 | 2007-10-09 | Neomend, Inc. | Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites |
| US6899889B1 (en) * | 1998-11-06 | 2005-05-31 | Neomend, Inc. | Biocompatible material composition adaptable to diverse therapeutic indications |
| US6949114B2 (en) | 1998-11-06 | 2005-09-27 | Neomend, Inc. | Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites |
| US6830756B2 (en) | 1998-11-06 | 2004-12-14 | Neomend, Inc. | Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites |
| US6958212B1 (en) * | 1999-02-01 | 2005-10-25 | Eidgenossische Technische Hochschule Zurich | Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds |
| JP4954370B2 (ja) | 1999-02-01 | 2012-06-13 | エイドジェノシスク テクニスク ホクシューレ チューリッヒ | 共役不飽和基に対する求核付加反応によって作製される生体適合材料 |
| WO2000078285A1 (en) * | 1999-06-18 | 2000-12-28 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Controlled release of therapeutics by in-situ entrapment by matrix cross-linking |
| US6946128B1 (en) | 1999-07-22 | 2005-09-20 | The Procter & Gamble Company | Protease conjugates having sterically protected epitope regions |
| WO2001007578A2 (en) | 1999-07-22 | 2001-02-01 | The Procter & Gamble Company | Subtilisin protease variants having amino acid substitutions in defined epitope regions |
| EP1196548A2 (en) | 1999-07-22 | 2002-04-17 | The Procter & Gamble Company | Protease conjugates having sterically protected clip sites |
| KR20020021397A (ko) | 1999-07-22 | 2002-03-20 | 데이비드 엠 모이어 | 규정된 에피토프 영역에 아미노산 결실 및 치환을 갖는서브틸리신 프로테아제 변이체 |
| US7008635B1 (en) | 1999-09-10 | 2006-03-07 | Genzyme Corporation | Hydrogels for orthopedic repair |
| US6303119B1 (en) | 1999-09-22 | 2001-10-16 | The Procter & Gamble Company | Personal care compositions containing subtilisin enzymes bound to water insoluble substrates |
| US6348558B1 (en) | 1999-12-10 | 2002-02-19 | Shearwater Corporation | Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom |
| US7074878B1 (en) * | 1999-12-10 | 2006-07-11 | Harris J Milton | Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom |
| ATE435033T1 (de) | 2000-01-10 | 2009-07-15 | Maxygen Holdings Ltd | G-csf konjugate |
| EP2319541A1 (en) | 2000-02-11 | 2011-05-11 | Bayer HealthCare LLC | Factor VII or VIIA-like conjugates |
| JP2003533681A (ja) | 2000-05-15 | 2003-11-11 | テカン・トレーディング・アクチェンゲゼルシャフト | ミクロ流体装置および細胞ベースの分析を実行する方法 |
| DE60129432T2 (de) * | 2000-05-16 | 2008-04-17 | Bolder Biotechnology, Inc., Louisville | Verfahren zur rückfaltung von proteinen mit freien cysteinresten |
| US7291673B2 (en) * | 2000-06-02 | 2007-11-06 | Eidgenossiche Technische Hochschule Zurich | Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds |
| KR20030032977A (ko) * | 2000-07-12 | 2003-04-26 | 그리폰 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | 키모카인 수용체 조절제, 제조 및 사용 |
| JP2004518621A (ja) * | 2000-09-08 | 2004-06-24 | グリフォン セラピューティクス，インコーポレーテッド | 「擬似」天然型化学的ライゲーション |
| US7118737B2 (en) | 2000-09-08 | 2006-10-10 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Polymer-modified synthetic proteins |
| AU2002245205B2 (en) * | 2000-10-19 | 2007-07-19 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne | Block copolymers for multifunctional self-assembled systems |
| AU2000202A (en) | 2000-10-31 | 2002-05-15 | Pr Pharmaceuticals Inc | Methods and compositions for enhanced delivery of bioactive molecules |
| US7053150B2 (en) * | 2000-12-18 | 2006-05-30 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Segmented polymers and their conjugates |
| TW593427B (en) * | 2000-12-18 | 2004-06-21 | Nektar Therapeutics Al Corp | Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives |
| EP1366075B1 (en) | 2001-02-27 | 2009-05-27 | Maxygen Aps | New interferon beta-like molecules |
| WO2002074158A2 (en) * | 2001-03-20 | 2002-09-26 | Eidgenossische Technische Hochschule Zurich | Two-phase processing of thermosensitive polymers for use as biomaterials |
| US6538104B2 (en) * | 2001-04-27 | 2003-03-25 | Medical Analysis Systems, Inc. | Stabilization of cardiac troponin I subunits and complexes |
| US20040077835A1 (en) * | 2001-07-12 | 2004-04-22 | Robin Offord | Chemokine receptor modulators, production and use |
| WO2003018665A1 (en) * | 2001-08-22 | 2003-03-06 | Bioartificial Gel Technologies Inc. | Process for the preparation of activated polyethylene glycols |
| SG159381A1 (en) | 2001-10-10 | 2010-03-30 | Novo Nordisk As | Remodeling and glycoconjugation of peptides |
| US7173003B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-02-06 | Neose Technologies, Inc. | Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF |
| DK2279755T3 (da) | 2001-10-10 | 2014-05-26 | Ratiopharm Gmbh | Remodellering og glycokonjugering af fibroblastvækstfaktor (FGF) |
| US8008252B2 (en) | 2001-10-10 | 2011-08-30 | Novo Nordisk A/S | Factor VII: remodeling and glycoconjugation of Factor VII |
| US7795210B2 (en) | 2001-10-10 | 2010-09-14 | Novo Nordisk A/S | Protein remodeling methods and proteins/peptides produced by the methods |
| US7157277B2 (en) | 2001-11-28 | 2007-01-02 | Neose Technologies, Inc. | Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII |
| US7214660B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-05-08 | Neose Technologies, Inc. | Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin |
| EP2939696B1 (en) | 2001-10-18 | 2016-03-09 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of opioid antagonists |
| US8013134B2 (en) * | 2001-11-23 | 2011-09-06 | Olink Ab | Kit for proximity probing with multivalent proximity probes |
| CN1630530A (zh) * | 2002-01-18 | 2005-06-22 | 比奥根艾迪克Ma公司 | 聚亚烷基聚合物及其用途 |
| US20030179692A1 (en) * | 2002-03-19 | 2003-09-25 | Yoshitaka Ohotomo | Storage medium |
| US8282912B2 (en) * | 2002-03-22 | 2012-10-09 | Kuros Biosurgery, AG | Compositions for tissue augmentation |
| ES2528254T3 (es) * | 2002-06-07 | 2015-02-05 | Dyax Corp. | Polipéptidos de dominio Kunitz modificado y su uso para reducir la isquemia o el inicio de una respuesta inflamatoria sistémica asociada con un procedimiento quirúrgico |
| US7153829B2 (en) | 2002-06-07 | 2006-12-26 | Dyax Corp. | Kallikrein-inhibitor therapies |
| DE60336555D1 (de) | 2002-06-21 | 2011-05-12 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Pegylierte glykoformen von faktor vii |
| UA86744C2 (en) | 2002-06-21 | 2009-05-25 | Ново Нордиск Хэлс Кеа Аг | Pegylated factor vii glycoforms |
| US7034127B2 (en) * | 2002-07-02 | 2006-04-25 | Genzyme Corporation | Hydrophilic biopolymer-drug conjugates, their preparation and use |
| CN1691956A (zh) * | 2002-09-05 | 2005-11-02 | 通用医疗公司 | 去唾液酸干扰素和肝癌的治疗 |
| WO2004021993A2 (en) * | 2002-09-05 | 2004-03-18 | The General Hospital Corporation | Modified asialo-interferons and uses thereof |
| JP4959133B2 (ja) * | 2002-09-09 | 2012-06-20 | ネクター セラピューティックス | 末端カルボン酸またはそのエステルを有する水溶性ポリマー誘導体の調製方法 |
| CN1312279C (zh) * | 2002-11-07 | 2007-04-25 | 连云港新阳医药有限公司 | 聚乙二醇修饰门冬酰胺酶的制备方法 |
| BR0317752A (pt) * | 2002-12-26 | 2005-11-22 | Mountain View Pharmaceuticals | Conjugados poliméricos de citocinas, quimiocinas, fatores do crescimento, hormÈnios polipeptìdicos e seus antagonistas com atividade de ligação a receptores conservada |
| EP1667708B9 (en) * | 2002-12-26 | 2012-10-31 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | POLYETHYLENE GLYCOL CONJUGATES OF INTERFERON-BETA-1b WITH ENHANCED IN VITRO BIOLOGICAL POTENCY |
| EP1616003A4 (en) | 2002-12-30 | 2007-06-20 | Gryphon Therapeutics Inc | WATER-SOLUBLE THIOESTER AND SELENOESTER COMPOUNDS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF |
| US7553930B2 (en) * | 2003-01-06 | 2009-06-30 | Xencor, Inc. | BAFF variants and methods thereof |
| MXPA05007348A (es) * | 2003-01-06 | 2005-10-05 | Nektar Therapeutics Al Corp | Derivados de polimeros solubles en agua tiol-selectivos. |
| US20050221443A1 (en) * | 2003-01-06 | 2005-10-06 | Xencor, Inc. | Tumor necrosis factor super family agonists |
| US20060014248A1 (en) * | 2003-01-06 | 2006-01-19 | Xencor, Inc. | TNF super family members with altered immunogenicity |
| ES2352337T5 (es) * | 2003-01-06 | 2017-08-11 | Nektar Therapeutics | Derivados tiol-selectivos de un polimero soluble en agua |
| US20050130892A1 (en) * | 2003-03-07 | 2005-06-16 | Xencor, Inc. | BAFF variants and methods thereof |
| ES2911435T3 (es) | 2003-02-26 | 2022-05-19 | Nektar Therapeutics | Conjugados de polímero-resto de Factor VIII |
| US20060104968A1 (en) | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
| CA2517145C (en) * | 2003-03-05 | 2017-08-01 | Halozyme, Inc. | Soluble hyaluronidase glycoprotein (shasegp), process for preparing the same, uses and pharmaceutical compositions comprising thereof |
| US7871607B2 (en) | 2003-03-05 | 2011-01-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases |
| US20090123367A1 (en) * | 2003-03-05 | 2009-05-14 | Delfmems | Soluble Glycosaminoglycanases and Methods of Preparing and Using Soluble Glycosaminoglycanases |
| ES2420581T3 (es) | 2003-03-14 | 2013-08-26 | Biogenerix Gmbh | Polímeros solubles en agua ramificados y sus conjugados |
| US7642340B2 (en) | 2003-03-31 | 2010-01-05 | Xencor, Inc. | PEGylated TNF-α variant proteins |
| WO2004089421A2 (en) * | 2003-03-31 | 2004-10-21 | Xencor, Inc | Methods for rational pegylation of proteins |
| US7610156B2 (en) * | 2003-03-31 | 2009-10-27 | Xencor, Inc. | Methods for rational pegylation of proteins |
| US8791070B2 (en) | 2003-04-09 | 2014-07-29 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated factor IX |
| MXPA05010773A (es) | 2003-04-09 | 2005-12-12 | Neose Technologies Inc | Metodos de glicopegilacion y proteinas/peptidos producidos por los metodos. |
| US9040664B2 (en) | 2003-04-11 | 2015-05-26 | Antriabio, Inc. | Materials and methods for preparing protein-polymer conjugates |
| DE602004025799D1 (de) | 2003-04-15 | 2010-04-15 | Glaxosmithkline Llc | Humane il-18 substitutionsmutanten und deren konjugate |
| ATE540055T1 (de) | 2003-05-09 | 2012-01-15 | Biogenerix Ag | Zusammensetzungen und verfahren zur herstellung von glykosylierungsmutanten des menschlichen wachstumshormons |
| US20040249119A1 (en) * | 2003-06-05 | 2004-12-09 | Fox Martin Edward | Novel mPEG propionaldehyde precursor |
| GB0316294D0 (en) | 2003-07-11 | 2003-08-13 | Polytherics Ltd | Conjugated biological molecules and their preparation |
| PL1656410T3 (pl) | 2003-07-22 | 2010-08-31 | Nektar Therapeutics | Sposób wytwarzania sfunkcjonalizowanych polimerów z polimerycznych alkoholi |
| WO2005012484A2 (en) | 2003-07-25 | 2005-02-10 | Neose Technologies, Inc. | Antibody-toxin conjugates |
| DK1663281T3 (en) * | 2003-08-29 | 2014-03-17 | Dyax Corp | POLY-PEGYLED PROTEASE INHIBITORS |
| KR101200729B1 (ko) | 2003-09-17 | 2012-11-13 | 넥타르 테라퓨틱스 | 다분지형 고분자 전구약물 |
| WO2005035727A2 (en) * | 2003-10-09 | 2005-04-21 | Ambrx, Inc. | Polymer derivatives |
| CA2542353A1 (en) | 2003-10-10 | 2005-04-21 | Xencor, Inc. | Protein based tnf-alpha variants for the treatment of tnf-alpha related disorders |
| US7524813B2 (en) * | 2003-10-10 | 2009-04-28 | Novo Nordisk Health Care Ag | Selectively conjugated peptides and methods of making the same |
| CN102516386A (zh) | 2003-10-10 | 2012-06-27 | 诺沃挪第克公司 | Il-21衍生物 |
| EP2633866A3 (en) * | 2003-10-17 | 2013-12-18 | Novo Nordisk A/S | Combination therapy |
| EP1725572B1 (de) | 2003-11-05 | 2017-05-31 | AGCT GmbH | Makromolekulare nukleotidverbindungen und methoden zu deren anwendung |
| KR20060120141A (ko) * | 2003-11-24 | 2006-11-24 | 네오스 테크놀로지스, 인크. | 글리코페질화 에리트로포이에틴 |
| US8633157B2 (en) | 2003-11-24 | 2014-01-21 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated erythropoietin |
| US20080305992A1 (en) | 2003-11-24 | 2008-12-11 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin |
| CA2548179A1 (en) | 2003-12-02 | 2005-07-21 | Cytimmune Sciences, Inc. | Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies |
| US7956032B2 (en) | 2003-12-03 | 2011-06-07 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor |
| US20060040856A1 (en) * | 2003-12-03 | 2006-02-23 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated factor IX |
| WO2005070138A2 (en) | 2004-01-08 | 2005-08-04 | Neose Technologies, Inc. | O-linked glycosylation of peptides |
| WO2005072893A1 (en) * | 2004-01-28 | 2005-08-11 | Cytimmune Sciences, Inc. | Functionalized colloidal metal compositions and methods |
| BRPI0507169A (pt) * | 2004-02-02 | 2007-06-26 | Ambrx Inc | polipeptìdeos do hormÈnio de crescimento humano modificados e seu usos |
| KR100580644B1 (ko) * | 2004-02-16 | 2006-05-16 | 삼성전자주식회사 | 생물분자를 고체 기판상에 비공유적으로 고정화 하는 방법및 그에 의하여 제조되는 마이크로어레이 |
| US7351787B2 (en) * | 2004-03-05 | 2008-04-01 | Bioartificial Gel Technologies, Inc. | Process for the preparation of activated polyethylene glycols |
| US9446139B2 (en) * | 2004-03-15 | 2016-09-20 | Nektar Therapeutics | Polymer-based compositions and conjugates of HIV entry inhibitors |
| WO2005091944A2 (en) * | 2004-03-17 | 2005-10-06 | Eli Lilly And Company | Glycol linked fgf-21 compounds |
| US8470315B2 (en) * | 2004-04-13 | 2013-06-25 | Quintessence Biosciences, Inc. | Non-natural ribonuclease conjugates as cytotoxic agents |
| KR20070034512A (ko) | 2004-06-18 | 2007-03-28 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 신규 항원-결합 폴리펩티드 및 이의 용도 |
| US20080300173A1 (en) | 2004-07-13 | 2008-12-04 | Defrees Shawn | Branched Peg Remodeling and Glycosylation of Glucagon-Like Peptides-1 [Glp-1] |
| JP2008506703A (ja) | 2004-07-14 | 2008-03-06 | ユニバーシティ オブ ユタ リサーチ ファウンデーション | ネトリン関連化合物および用途 |
| MX2007000728A (es) * | 2004-07-21 | 2007-03-15 | Ambrx Inc | Polipeptidos biosinteticos que utilizan amino acidos no naturalmente codificados. |
| EP1799249A2 (en) | 2004-09-10 | 2007-06-27 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated interferon alpha |
| CA2581423A1 (en) | 2004-09-23 | 2006-03-30 | Vasgene Therapeutics, Inc. | Polipeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth |
| US7235530B2 (en) | 2004-09-27 | 2007-06-26 | Dyax Corporation | Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof |
| WO2006047419A2 (en) * | 2004-10-25 | 2006-05-04 | Intezyne Technologies, Incorporated | Heterobifunctional poly(ethylene glycol) and uses thereof |
| EP1814573B1 (en) | 2004-10-29 | 2016-03-09 | ratiopharm GmbH | Remodeling and glycopegylation of fibroblast growth factor (fgf) |
| WO2006069388A2 (en) | 2004-12-21 | 2006-06-29 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Stabilized polymeric thiol reagents |
| CA2594561C (en) * | 2004-12-22 | 2014-12-23 | Ambrx, Inc. | Formulations of human growth hormone comprising a non-naturally encoded amino acid |
| CA2594557C (en) | 2004-12-22 | 2016-04-26 | Ambrx, Inc. | Modified human growth hormone |
| AU2005323106B2 (en) | 2004-12-22 | 2010-07-29 | Ambrx, Inc. | Methods for expression and purification of recombinant human growth hormone |
| WO2006068802A2 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-29 | Ambrx, Inc. | COMPOSITIONS OF AMINOACYL-tRNA SYNTHETASE AND USES THEREOF |
| EP2399893B1 (en) | 2004-12-22 | 2018-08-15 | Ambrx, Inc. | Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides |
| JP4951527B2 (ja) | 2005-01-10 | 2012-06-13 | バイオジェネリックス アーゲー | 糖ｐｅｇ化顆粒球コロニー刺激因子 |
| US7402730B1 (en) | 2005-02-03 | 2008-07-22 | Lexicon Pharmaceuticals, Inc. | Knockout animals manifesting hyperlipidemia |
| CA2595633C (en) * | 2005-02-09 | 2013-11-19 | Ahmad R. Hadba | Synthetic sealants |
| US20100092505A1 (en) | 2005-04-05 | 2010-04-15 | Elisabetta Bianchi | Method for Shielding Functional Sites or Epitopes on Proteins |
| EP2386571B1 (en) | 2005-04-08 | 2016-06-01 | ratiopharm GmbH | Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants |
| EP1885403B1 (en) | 2005-04-12 | 2013-05-08 | Nektar Therapeutics | Poly(ethyleneglycol) conjugates of Lysostaphin |
| KR20080013878A (ko) | 2005-04-18 | 2008-02-13 | 노보 노르디스크 에이/에스 | Ｉｌ-21 변이체 |
| US7833979B2 (en) * | 2005-04-22 | 2010-11-16 | Amgen Inc. | Toxin peptide therapeutic agents |
| CN101166545B (zh) | 2005-05-13 | 2011-06-15 | 伊莱利利公司 | Glp-1聚乙二醇化的化合物 |
| WO2006127910A2 (en) | 2005-05-25 | 2006-11-30 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin formulations |
| EP2975135A1 (en) | 2005-05-25 | 2016-01-20 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated factor IX |
| EP1891141B1 (en) * | 2005-05-31 | 2016-11-16 | Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) | Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs |
| WO2006133089A2 (en) * | 2005-06-03 | 2006-12-14 | Ambrx, Inc. | Improved human interferon molecules and their uses |
| US8193206B2 (en) | 2005-06-14 | 2012-06-05 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Pyrimidine compounds |
| WO2006138304A2 (en) | 2005-06-14 | 2006-12-28 | Taigen Biotechnology | Pyrimidine compounds |
| WO2006134173A2 (en) | 2005-06-17 | 2006-12-21 | Novo Nordisk Health Care Ag | Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprising at least one non-native cysteine |
| US8568705B2 (en) * | 2005-07-18 | 2013-10-29 | Nektar Therapeutics | Method for preparing branched functionalized polymers using branched polyol cores |
| US8008453B2 (en) | 2005-08-12 | 2011-08-30 | Amgen Inc. | Modified Fc molecules |
| CN102703446B (zh) * | 2005-08-18 | 2014-05-28 | Ambrx公司 | tRNA组合物和其用途 |
| US20070105755A1 (en) | 2005-10-26 | 2007-05-10 | Neose Technologies, Inc. | One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides |
| US20090048440A1 (en) | 2005-11-03 | 2009-02-19 | Neose Technologies, Inc. | Nucleotide Sugar Purification Using Membranes |
| DK1954710T3 (da) * | 2005-11-08 | 2011-06-27 | Ambrx Inc | Acceleratorer til modifikation af unaturlige aminosyrer og unaturlige aminosyrepolypeptider |
| CN101454461A (zh) * | 2005-11-16 | 2009-06-10 | Ambrx公司 | 包括非天然氨基酸的方法和组合物 |
| KR101423898B1 (ko) * | 2005-12-14 | 2014-07-28 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드를 함유하는 조성물, 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드를 포함하는 방법, 및 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드의 용도 |
| EP2364735A3 (en) | 2005-12-16 | 2012-04-11 | Nektar Therapeutics | Branched PEG conjugates of GLP-1 |
| US7743730B2 (en) * | 2005-12-21 | 2010-06-29 | Lam Research Corporation | Apparatus for an optimized plasma chamber grounded electrode assembly |
| EP3363455A1 (en) * | 2005-12-30 | 2018-08-22 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Extended release of neuregulin for improved cardiac function |
| SI1984009T1 (sl) | 2006-01-18 | 2013-02-28 | Qps, Llc | Farmacevtski sestavki z izboljĺ ano stabilnostjo |
| EP1986695B1 (en) | 2006-02-21 | 2015-06-03 | Nektar Therapeutics | Segmented degradable polymers and conjugates made therefrom |
| CA2648582C (en) | 2006-04-07 | 2016-12-06 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Conjugates of an anti-tnf-alpha antibody |
| EP2573111A1 (en) | 2006-04-20 | 2013-03-27 | Amgen Inc. | GLP-1 compounds |
| US7560588B2 (en) | 2006-04-27 | 2009-07-14 | Intezyne Technologies, Inc. | Poly(ethylene glycol) containing chemically disparate endgroups |
| EP2213733A3 (en) | 2006-05-24 | 2010-12-29 | Novo Nordisk Health Care AG | Factor IX analogues having prolonged in vivo half life |
| WO2008002482A2 (en) * | 2006-06-23 | 2008-01-03 | Surmodics, Inc. | Hydrogel-based joint repair system and method |
| WO2007149594A2 (en) | 2006-06-23 | 2007-12-27 | Quintessence Biosciences, Inc. | Modified ribonucleases |
| WO2008010991A2 (en) * | 2006-07-17 | 2008-01-24 | Quintessence Biosciences, Inc. | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| EP2049144B8 (en) * | 2006-07-21 | 2015-02-18 | ratiopharm GmbH | Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences |
| KR20090051227A (ko) * | 2006-09-08 | 2009-05-21 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 척추동물 세포를 위한 하이브리드 서프레서 ｔＲＮＡ |
| JP5451390B2 (ja) * | 2006-09-08 | 2014-03-26 | アンブルックス，インコーポレイテッド | 脊椎動物細胞内におけるサプレッサーｔｒｎａの転写 |
| CN106008699A (zh) * | 2006-09-08 | 2016-10-12 | Ambrx公司 | 经修饰的人类血浆多肽或Fc骨架和其用途 |
| US7985783B2 (en) | 2006-09-21 | 2011-07-26 | The Regents Of The University Of California | Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification |
| JP2010505874A (ja) | 2006-10-03 | 2010-02-25 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | ポリペプチドコンジュゲートの精製方法 |
| ES2655734T3 (es) * | 2006-10-04 | 2018-02-21 | Novo Nordisk A/S | Glicopéptidos y azúcares pegilados unidos a glicerol |
| US7803769B2 (en) * | 2006-10-25 | 2010-09-28 | Amgen Inc. | OSK1 peptide analogs and pharmaceutical compositions |
| WO2008049920A2 (en) | 2006-10-26 | 2008-05-02 | Novo Nordisk A/S | Il-21 variants |
| KR20090110295A (ko) | 2006-11-22 | 2009-10-21 | 에드넥서스, 어 브리스톨-마이어스 스퀴브 알＆디 컴파니 | Ｉｇｆ-ｉｒ을 포함하는 티로신 키나제 수용체에 대한 공학처리된 단백질에 기반한 표적화 치료제 |
| WO2008066902A2 (en) | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Method for preparing a polymer conjugate |
| HUE033960T2 (hu) | 2006-12-08 | 2018-01-29 | Lexicon Pharmaceuticals Inc | Monoklonális antitestek ANGPTL3 ellen |
| US8617531B2 (en) | 2006-12-14 | 2013-12-31 | Bolder Biotechnology, Inc. | Methods of making proteins and peptides containing a single free cysteine |
| EP2117603A2 (en) | 2006-12-19 | 2009-11-18 | Bracco International B.V. | Targeting and therapeutic compounds and gas-filled microvesicles comprising said compounds |
| EP2097140B1 (en) | 2006-12-20 | 2012-09-26 | Arkema Inc. | Polymer encapsulation and/or binding |
| UA95996C2 (ru) | 2007-01-18 | 2011-09-26 | Эли Лилли Энд Компани | Пегилированный fab-фрагмент антитела, который специфически связывается с бета-амилоидным пептидом |
| PL2118123T3 (pl) | 2007-01-31 | 2016-06-30 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Stabilizowane peptydy p53 i ich zastosowania |
| ATE516814T1 (de) | 2007-02-02 | 2011-08-15 | Bristol Myers Squibb Co | 10fn3 domain zur behandlung von krankheiten begleitet von unerwünschter angiogenese |
| US20090227689A1 (en) * | 2007-03-05 | 2009-09-10 | Bennett Steven L | Low-Swelling Biocompatible Hydrogels |
| US20090227981A1 (en) * | 2007-03-05 | 2009-09-10 | Bennett Steven L | Low-Swelling Biocompatible Hydrogels |
| KR101476472B1 (ko) | 2007-03-30 | 2015-01-05 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 변형된 ｆｇｆ-21 폴리펩티드 및 그 용도 |
| EP2144923B1 (en) | 2007-04-03 | 2013-02-13 | BioGeneriX AG | Methods of treatment using glycopegylated g-csf |
| PT2136850E (pt) | 2007-04-13 | 2012-04-27 | Kuros Biosurgery Ag | Selante tecidual polimérico |
| MX2009011870A (es) * | 2007-05-02 | 2009-11-12 | Ambrx Inc | Polipeptidos de interferon beta modificados y usos de los mismos. |
| AU2008262490B2 (en) * | 2007-05-22 | 2011-11-17 | Amgen Inc. | Compositions and methods for producing bioactive fusion proteins |
| WO2008154639A2 (en) | 2007-06-12 | 2008-12-18 | Neose Technologies, Inc. | Improved process for the production of nucleotide sugars |
| US7968811B2 (en) * | 2007-06-29 | 2011-06-28 | Harley-Davidson Motor Company Group, Inc. | Integrated ignition and key switch |
| US9125807B2 (en) | 2007-07-09 | 2015-09-08 | Incept Llc | Adhesive hydrogels for ophthalmic drug delivery |
| CN101361968B (zh) | 2007-08-06 | 2011-08-03 | 健能隆医药技术（上海）有限公司 | 白介素-22在治疗脂肪肝中的应用 |
| US20110269942A1 (en) * | 2007-08-09 | 2011-11-03 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Antibodies modified with hydrophobic molecule |
| US8067028B2 (en) * | 2007-08-13 | 2011-11-29 | Confluent Surgical Inc. | Drug delivery device |
| US20090075887A1 (en) * | 2007-08-21 | 2009-03-19 | Genzyme Corporation | Treatment with Kallikrein Inhibitors |
| US8207112B2 (en) | 2007-08-29 | 2012-06-26 | Biogenerix Ag | Liquid formulation of G-CSF conjugate |
| US20110014118A1 (en) * | 2007-09-21 | 2011-01-20 | Lawrence Tamarkin | Nanotherapeutic colloidal metal compositions and methods |
| CA2700378A1 (en) * | 2007-09-21 | 2009-03-29 | Cytimmune Sciences, Inc. | Nanotherapeutic colloidal metal compositions and methods |
| JP2010540681A (ja) * | 2007-10-08 | 2010-12-24 | クインテッセンス バイオサイエンシズ，インコーポレーテッド | リボヌクレアーゼに基づく治療のための組成物及び方法 |
| CA2702945C (en) | 2007-10-23 | 2016-08-23 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Hydroxyapatite-targeting multiarm polymers and conjugates made therefrom |
| CA2706700A1 (en) | 2007-11-08 | 2009-05-14 | Cytimmune Sciences, Inc. | Compositions and methods for generating antibodies |
| US20090123519A1 (en) * | 2007-11-12 | 2009-05-14 | Surmodics, Inc. | Swellable hydrogel matrix and methods |
| US20110282093A1 (en) * | 2007-11-12 | 2011-11-17 | Intradigm Corporation | Heterobifunctional polyethylene glycol reagents |
| ES2632504T3 (es) | 2007-11-20 | 2017-09-13 | Ambrx, Inc. | Polipéptidos de insulina modificados y sus usos |
| NZ602170A (en) | 2008-02-08 | 2014-03-28 | Ambrx Inc | Modified leptin polypeptides and their uses |
| CN101965200B (zh) | 2008-02-27 | 2013-06-19 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | 缀合的因子ⅷ分子 |
| TWI395593B (zh) | 2008-03-06 | 2013-05-11 | Halozyme Inc | 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制 |
| US20090226531A1 (en) * | 2008-03-07 | 2009-09-10 | Allergan, Inc. | Methods and composition for intraocular delivery of therapeutic sirna |
| NZ588638A (en) | 2008-04-14 | 2012-09-28 | Halozyme Inc | Screening method for identifying a subject for treatment with a modified hyaluronidase polypeptides |
| PL2268635T3 (pl) | 2008-04-21 | 2015-11-30 | Taigen Biotechnology Co Ltd | Związki heterocykliczne |
| TWI394580B (zh) | 2008-04-28 | 2013-05-01 | Halozyme Inc | 超快起作用胰島素組成物 |
| KR20110008075A (ko) * | 2008-05-16 | 2011-01-25 | 넥타르 테라퓨틱스 | 콜린에스테라아제 부분 및 폴리머의 콘쥬게이트 |
| WO2009142773A2 (en) | 2008-05-22 | 2009-11-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Multivalent fibronectin based scaffold domain proteins |
| DK2326349T3 (en) * | 2008-07-21 | 2015-05-26 | Polytherics Ltd | Novel Reagents and Methods for Conjugation of Biological Molecules |
| JP5680534B2 (ja) | 2008-07-23 | 2015-03-04 | イーライ リリー アンド カンパニー | 修飾されているウシｇ−ｃｓｆポリペプチドおよびそれらの使用 |
| JP5588983B2 (ja) | 2008-08-11 | 2014-09-10 | ウェルズ ファーゴ バンク ナショナル アソシエイション | マルチアームポリマーアルカノエートコンジュゲート |
| EP2340045B1 (en) | 2008-09-19 | 2017-04-12 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of protegrin peptides |
| US20110165113A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-07-07 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of v681-like peptides |
| EP2334335A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-06-22 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of cd-np peptides |
| US20110237524A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-09-29 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of aod-like peptides |
| EP2337585A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-06-29 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of glp-2-like peptides |
| EP2334337A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-06-22 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of opioid growth factor peptides |
| WO2010033224A1 (en) * | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of kiss1 peptides |
| WO2010033227A1 (en) * | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of thymosin alpha 1 peptides |
| US20110171163A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-07-14 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of ziconotide peptides |
| EP2334336A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-06-22 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of osteocalcin peptides |
| EP2341942A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-07-13 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of therapeutic peptides |
| US20110171312A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-07-14 | Nektar Therapeutics | Modified therapeutic peptides, methods of their preparation and use |
| EP2334338A2 (en) * | 2008-09-19 | 2011-06-22 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of c-peptides |
| MX2011003272A (es) * | 2008-09-26 | 2011-04-28 | Ambrx Inc | Polipeptidos de eritropoyetina animal modificados y sus usos. |
| ES2660000T3 (es) | 2008-09-26 | 2018-03-20 | Ambrx, Inc. | Vacunas y microorganismos dependientes de la replicación de aminoácidos no naturales |
| WO2010039985A1 (en) | 2008-10-01 | 2010-04-08 | Quintessence Biosciences, Inc. | Therapeutic Ribonucleases |
| US9023834B2 (en) | 2008-11-13 | 2015-05-05 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Lyophilization formulation |
| US9271929B2 (en) | 2008-11-25 | 2016-03-01 | École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) | Block copolymers and uses thereof |
| WO2010077297A1 (en) | 2008-12-09 | 2010-07-08 | Halozyme, Inc. | Extended soluble ph20 polypeptides and uses thereof |
| GB0823309D0 (en) * | 2008-12-19 | 2009-01-28 | Univ Bath | Functionalising reagents and their uses |
| EP2385843A4 (en) * | 2009-01-06 | 2013-02-27 | Dyax Corp | TREATMENT OF MUZOSITIS WITH CALLICINE INHIBITORS |
| US20110318322A1 (en) | 2009-01-12 | 2011-12-29 | Nektar Therapeutics | Conjugates of a Lysosomal Enzyme Moiety and a Water Soluble Polymer |
| CN102395401B (zh) | 2009-02-12 | 2015-08-19 | 因赛普特有限责任公司 | 经由水凝胶塞的药物递送 |
| WO2010100430A1 (en) | 2009-03-04 | 2010-09-10 | Polytherics Limited | Conjugated proteins and peptides |
| US8067201B2 (en) * | 2009-04-17 | 2011-11-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for protein refolding |
| NO2440239T3 (hu) | 2009-06-09 | 2018-02-10 | ||
| CA2770149A1 (en) | 2009-08-05 | 2011-02-10 | Pieris Ag | Controlled release formulations of lipocalin muteins |
| BR112012005890B1 (pt) | 2009-09-17 | 2023-01-17 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Co-formulação estável de hialuronidase e imunoglobulina e métodos de utilização da mesma |
| DE102010049607A1 (de) | 2009-10-26 | 2011-06-30 | Becker, Claus, Prof., 76470 | Konjugate von Nukleotiden und Methoden zu deren Anwendung |
| EP2774935B8 (en) | 2009-10-30 | 2017-06-21 | NTF Therapeutics, Inc. | Improved neurturin molecules |
| EP2805965A1 (en) | 2009-12-21 | 2014-11-26 | Ambrx, Inc. | Modified porcine somatotropin polypeptides and their uses |
| JP2013515080A (ja) | 2009-12-21 | 2013-05-02 | アンブルックス，インコーポレイテッド | 修飾されているウシのソマトトロピンポリペプチドおよびそれらの使用 |
| AR079344A1 (es) | 2009-12-22 | 2012-01-18 | Lilly Co Eli | Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad |
| AR079345A1 (es) | 2009-12-22 | 2012-01-18 | Lilly Co Eli | Analogo peptidico de oxintomodulina |
| PT3459564T (pt) * | 2010-01-06 | 2022-01-31 | Takeda Pharmaceuticals Co | Proteínas de ligação à calicreína plasmática |
| CN102161754B (zh) * | 2010-02-13 | 2012-06-13 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 枝化状聚乙二醇衍生物的功能化修饰方法 |
| EP2542569B1 (en) | 2010-03-05 | 2020-09-16 | Omeros Corporation | Chimeric inhibitor molecules of complement activation |
| EP2563380B1 (en) | 2010-04-26 | 2018-05-30 | aTyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of cysteinyl-trna synthetase |
| AU2011248614B2 (en) | 2010-04-27 | 2017-02-16 | Pangu Biopharma Limited | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl tRNA synthetases |
| EP2563911B1 (en) | 2010-04-28 | 2021-07-21 | aTyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of alanyl trna synthetases |
| CA2797393C (en) | 2010-04-29 | 2020-03-10 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of valyl trna synthetases |
| US9068177B2 (en) | 2010-04-29 | 2015-06-30 | Atyr Pharma, Inc | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glutaminyl-tRNA synthetases |
| AU2011248490B2 (en) | 2010-04-29 | 2016-11-10 | Pangu Biopharma Limited | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of Asparaginyl tRNA synthetases |
| CN103140233B (zh) | 2010-05-03 | 2017-04-05 | Atyr 医药公司 | 与甲硫氨酰‑tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的发现 |
| US9034321B2 (en) | 2010-05-03 | 2015-05-19 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-alpha-tRNA synthetases |
| EP2566515B1 (en) | 2010-05-03 | 2017-08-02 | aTyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of arginyl-trna synthetases |
| CA2798139C (en) | 2010-05-04 | 2019-09-24 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of p38 multi-trna synthetase complex |
| EP2569331A1 (en) | 2010-05-10 | 2013-03-20 | Perseid Therapeutics LLC | Polypeptide inhibitors of vla4 |
| EP2568996B1 (en) | 2010-05-14 | 2017-10-04 | aTyr Pharma, Inc. | Therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-beta-trna synthetases |
| MX2012013375A (es) | 2010-05-17 | 2013-04-11 | Cebix Inc | Peptido c pegilado. |
| CA2799480C (en) | 2010-05-17 | 2020-12-15 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of leucyl-trna synthetases |
| EP3091028A1 (en) | 2010-05-26 | 2016-11-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold proteins having improved stability |
| CN103118694B (zh) | 2010-06-01 | 2016-08-03 | Atyr医药公司 | 与赖氨酰-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的发现 |
| EP2593125B1 (en) | 2010-07-12 | 2017-11-01 | aTyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glycyl-trna synthetases |
| MX348420B (es) | 2010-07-20 | 2017-06-12 | Halozyme Inc | Efectos secundarios adversos asociados con la administracion de agentes anti-hialuronano y metodos para mejorar o prevenir los efectos secundarios. |
| PL2461767T3 (pl) | 2010-07-30 | 2013-09-30 | Novartis Ag | Soczewki silikonowo-hydrożelowe z powierzchniami bogatymi w wodę |
| ES2972902T3 (es) | 2010-08-17 | 2024-06-17 | Ambrx Inc | Polipéptidos de relaxina modificados y sus usos |
| US9567386B2 (en) | 2010-08-17 | 2017-02-14 | Ambrx, Inc. | Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides |
| EP2608801B1 (en) | 2010-08-25 | 2019-08-21 | aTyr Pharma, Inc. | INNOVATIVE DISCOVERY OF THERAPEUTIC, DIAGNOSTIC, AND ANTIBODY COMPOSITIONS RELATED TO PROTEIN FRAGMENTS OF TYROSYL-tRNA SYNTHETASES |
| US8961501B2 (en) | 2010-09-17 | 2015-02-24 | Incept, Llc | Method for applying flowable hydrogels to a cornea |
| TWI480288B (zh) | 2010-09-23 | 2015-04-11 | Lilly Co Eli | 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物 |
| WO2012054822A1 (en) | 2010-10-22 | 2012-04-26 | Nektar Therapeutics | Pharmacologically active polymer-glp-1 conjugates |
| KR102591732B1 (ko) | 2010-11-12 | 2023-10-19 | 넥타르 테라퓨틱스 | Ｉｌ-2 부분 및 중합체의 접합체 |
| WO2012065181A2 (en) | 2010-11-12 | 2012-05-18 | Dana Farber Cancer Institute, Inc. | Cancer therapies and diagnostics |
| PT2643019T (pt) | 2010-11-24 | 2019-04-23 | Lexicon Pharmaceuticals Inc | Anticorpos para notum pectinacetilesterase |
| US20140371258A1 (en) | 2010-12-17 | 2014-12-18 | Nektar Therapeutics | Water-Soluble Polymer Conjugates of Topotecan |
| EP2654795B1 (en) | 2010-12-21 | 2018-03-07 | Nektar Therapeutics | Multi-arm polymeric prodrug conjugates of pemetrexed-based compounds |
| US20130331443A1 (en) | 2010-12-22 | 2013-12-12 | Nektar Therapeutics | Multi-arm polymeric prodrug conjugates of taxane-based compounds |
| US10894087B2 (en) | 2010-12-22 | 2021-01-19 | Nektar Therapeutics | Multi-arm polymeric prodrug conjugates of cabazitaxel-based compounds |
| KR102107695B1 (ko) | 2011-01-06 | 2020-05-07 | 다이액스 코포레이션 | 혈장 칼리크레인 결합 단백질 |
| ES2634669T3 (es) | 2011-02-08 | 2017-09-28 | Halozyme, Inc. | Composición y formulación lipídica de una enzima de degradación de hialuronano y uso de la misma para el tratamiento de la hiperplasia benigna de próstata |
| EA201391331A1 (ru) | 2011-03-16 | 2014-02-28 | Эмджен Инк. | Активные и селективные ингибиторы nav1.3 и nav1.7 |
| WO2012158678A1 (en) | 2011-05-17 | 2012-11-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for maintaining pegylation of polypeptides |
| WO2012166555A1 (en) | 2011-05-27 | 2012-12-06 | Nektar Therapeutics | Water - soluble polymer - linked binding moiety and drug compounds |
| EP2720722A4 (en) | 2011-06-16 | 2014-12-03 | Univ Hong Kong Science & Techn | MOLECULAR WITH SEVERAL VINYL SULPHONES |
| EA033472B1 (ru) | 2011-06-17 | 2019-10-31 | Halozyme Inc | Композиция для стабилизации гиалуронидазы и ее применение |
| US20130011378A1 (en) | 2011-06-17 | 2013-01-10 | Tzung-Horng Yang | Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme |
| BR112013032265A2 (pt) | 2011-06-17 | 2016-12-20 | Halozyme Inc | métodos de infusão de insulina subcutânea contínua com uma enzima de degradação do hialuronano |
| KR20140054009A (ko) | 2011-07-01 | 2014-05-08 | 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 | 릴랙신 융합 폴리펩타이드 및 그의 용도 |
| US9150846B2 (en) | 2011-07-05 | 2015-10-06 | Bioasis Technologies, Inc. | P97-antibody conjugates and methods of use |
| WO2013020079A2 (en) | 2011-08-04 | 2013-02-07 | Nektar Therapeutics | Conjugates of an il-11 moiety and a polymer |
| US20130071394A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | John K. Troyer | Compositions and combinations of organophosphorus bioscavengers and hyaluronan-degrading enzymes, and methods of use |
| US10226417B2 (en) | 2011-09-16 | 2019-03-12 | Peter Jarrett | Drug delivery systems and applications |
| EP2771028A2 (en) | 2011-10-24 | 2014-09-03 | Halozyme, Inc. | Companion diagnostic for anti-hyaluronan agent therapy and methods of use thereof |
| JP2015504038A (ja) | 2011-10-31 | 2015-02-05 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ | 低減した免疫原性を有するフィブロネクチン結合ドメイン |
| CN104220086A (zh) | 2011-11-17 | 2014-12-17 | 塞比克斯股份公司 | Peg化的c-肽 |
| KR102039468B1 (ko) | 2011-12-05 | 2019-11-01 | 인셉트, 엘엘씨 | 의료용 유기젤 방법 및 조성물 |
| CA2862391C (en) | 2011-12-29 | 2023-10-10 | Loren D. Walensky | Stabilized antiviral fusion helices |
| WO2013102144A2 (en) | 2011-12-30 | 2013-07-04 | Halozyme, Inc. | Ph20 polypeptede variants, formulations and uses thereof |
| EP2814514B1 (en) | 2012-02-16 | 2017-09-13 | Atyr Pharma, Inc. | Histidyl-trna synthetases for treating autoimmune and inflammatory diseases |
| EP2831237B1 (en) | 2012-03-30 | 2017-11-29 | The Board of Regents of the University of Oklahoma | High molecular weight heparosan polymers and methods of production and use thereof |
| US8956682B2 (en) | 2012-04-02 | 2015-02-17 | Surmodics, Inc. | Hydrophilic polymeric coatings for medical articles with visualization moiety |
| WO2013151774A1 (en) | 2012-04-04 | 2013-10-10 | Halozyme, Inc. | Combination therapy with an anti - hyaluronan agent and a tumor - targeted taxane |
| WO2013177187A2 (en) | 2012-05-22 | 2013-11-28 | Massachusetts Institute Of Technology | Synergistic tumor treatment with extended-pk il-2 and therapeutic agents |
| AU2013267161A1 (en) | 2012-05-31 | 2014-11-20 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antigen binding proteins that bind PD-L1 |
| EP2859017B1 (en) | 2012-06-08 | 2019-02-20 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use |
| JP6429771B2 (ja) | 2012-06-21 | 2018-11-28 | ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． | ｃ−Ｍｅｔに結合する抗原結合タンパク質 |
| EP2864358B1 (en) | 2012-06-22 | 2019-08-07 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antigen binding proteins that bind ccr2 |
| WO2014004639A1 (en) | 2012-06-26 | 2014-01-03 | Sutro Biopharma, Inc. | Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use |
| CA2880162C (en) | 2012-07-31 | 2023-04-04 | Bioasis Technologies, Inc. | Dephosphorylated lysosomal storage disease proteins and methods of use thereof |
| US9395468B2 (en) | 2012-08-27 | 2016-07-19 | Ocular Dynamics, Llc | Contact lens with a hydrophilic layer |
| SG11201501464TA (en) | 2012-08-31 | 2015-03-30 | Sutro Biopharma Inc | Modified amino acids comprising an azido group |
| WO2014062856A1 (en) | 2012-10-16 | 2014-04-24 | Halozyme, Inc. | Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods |
| EP2916835A4 (en) | 2012-11-12 | 2016-07-27 | Redwood Bioscience Inc | COMPOUNDS AND METHOD FOR PRODUCING A CONJUGATE |
| KR20150085064A (ko) | 2012-11-16 | 2015-07-22 | 더 리젠트스 오브 더 유니이버시티 오브 캘리포니아 | 단백질 화학적 변형을 위한 피크테 스펭글러 결합 |
| US9310374B2 (en) | 2012-11-16 | 2016-04-12 | Redwood Bioscience, Inc. | Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate |
| US9383357B2 (en) | 2012-12-07 | 2016-07-05 | Northwestern University | Biomarker for replicative senescence |
| JP6426107B2 (ja) | 2012-12-20 | 2018-11-21 | アムジエン・インコーポレーテツド | Ａｐｊ受容体アゴニストおよびその使用 |
| EP2951206A2 (en) | 2013-02-01 | 2015-12-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold proteins |
| WO2014165277A2 (en) | 2013-03-12 | 2014-10-09 | Amgen Inc. | POTENT AND SELECTIVE INHIBITORS OF Nav1.7 |
| NZ711373A (en) | 2013-03-13 | 2020-07-31 | Bioasis Technologies Inc | Fragments of p97 and uses thereof |
| US10087215B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-10-02 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized SOS1 peptides |
| US10106590B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-10-23 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | BH4 stabilized peptides and uses thereof |
| WO2014151369A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized ezh2 peptides |
| CA3175360C (en) | 2013-05-31 | 2024-05-28 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antigen binding proteins that bind pd-1 |
| TW201534726A (zh) | 2013-07-03 | 2015-09-16 | Halozyme Inc | 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途 |
| WO2015006555A2 (en) | 2013-07-10 | 2015-01-15 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use |
| WO2015013510A1 (en) | 2013-07-25 | 2015-01-29 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Epfl | High aspect ratio nanofibril materials |
| WO2015031673A2 (en) | 2013-08-28 | 2015-03-05 | Bioasis Technologies Inc. | Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof |
| US9840493B2 (en) | 2013-10-11 | 2017-12-12 | Sutro Biopharma, Inc. | Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use |
| CN104623637A (zh) | 2013-11-07 | 2015-05-20 | 健能隆医药技术（上海）有限公司 | Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用 |
| EP3570093B1 (en) | 2013-11-15 | 2021-09-15 | Tangible Science, Inc. | Contact lens with a hydrophilic layer |
| JP6745218B2 (ja) | 2013-11-27 | 2020-08-26 | レッドウッド バイオサイエンス， インコーポレイテッド | ヒドラジニル−ピロロ化合物及び複合体を生成するための方法 |
| WO2015081891A1 (en) | 2013-12-06 | 2015-06-11 | Baikang (Suzhou) Co., Ltd | Bioreversable promoieties for nitrogen-containing and hydroxyl-containing drugs |
| JP6719384B2 (ja) | 2014-03-27 | 2020-07-15 | ダイアックス コーポレーション | 糖尿病黄斑浮腫の治療のための組成物および方法 |
| MA39711A (fr) | 2014-04-03 | 2015-10-08 | Nektar Therapeutics | Conjugués d'une fraction d'il-15 et d'un polymère |
| CA2948864C (en) | 2014-05-14 | 2023-10-17 | Karl E. Griswold | Deimmunized lysostaphin and methods of use |
| JP6803236B2 (ja) | 2014-06-10 | 2020-12-23 | アムジェン インコーポレイテッド | アペリンポリペプチド |
| WO2016025647A1 (en) | 2014-08-12 | 2016-02-18 | Massachusetts Institute Of Technology | Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and a cancer vaccine |
| AU2015301753B2 (en) | 2014-08-12 | 2021-04-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Synergistic tumor treatment with IL-2 and integrin-binding-Fc-fusion protein |
| AU2015305894A1 (en) | 2014-08-22 | 2017-04-06 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antigen binding proteins that bind CXCR3 |
| WO2016033555A1 (en) | 2014-08-28 | 2016-03-03 | Halozyme, Inc. | Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor |
| PL3207130T3 (pl) | 2014-10-14 | 2020-02-28 | Halozyme, Inc. | Kompozycje deaminazy adenozyny 2 (ada2), jej warianty i sposoby ich zastosowania |
| EP3218009B1 (en) * | 2014-10-14 | 2021-04-07 | Polytherics Limited | Process for the conjugation of a peptide or protein with a reagent comprising a leaving group including a portion of peg |
| AU2015335603B2 (en) | 2014-10-24 | 2020-04-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Modified FGF-21 polypeptides and uses thereof |
| US20170290925A1 (en) * | 2014-10-24 | 2017-10-12 | Polytherics Limited | Conjugates And Conjugating Reagents |
| GB201419108D0 (en) | 2014-10-27 | 2014-12-10 | Glythera Ltd | Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates |
| US10525170B2 (en) * | 2014-12-09 | 2020-01-07 | Tangible Science, Llc | Medical device coating with a biocompatible layer |
| CA2979999A1 (en) | 2015-03-18 | 2016-09-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Selective mcl-1 binding peptides |
| EP3317294B1 (en) | 2015-07-02 | 2023-03-15 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized anti-microbial peptides |
| CA2995479A1 (en) | 2015-08-28 | 2017-03-09 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Peptides binding to bfl-1 |
| US11286307B2 (en) | 2015-12-11 | 2022-03-29 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack |
| CN116333124A (zh) | 2016-01-29 | 2023-06-27 | 索伦托药业有限公司 | 与pd-l1结合的抗原结合蛋白 |
| AU2017228333C1 (en) | 2016-02-29 | 2022-03-10 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stapled intracellular-targeting antimicrobial peptides to treat infection |
| US10421785B2 (en) | 2016-04-11 | 2019-09-24 | Bar-Ilan University | Delta receptor agonist peptides and use thereof |
| US11510966B2 (en) | 2016-04-15 | 2022-11-29 | Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd | Use of IL-22 in treating necrotizing enterocolitis |
| WO2018017922A2 (en) | 2016-07-22 | 2018-01-25 | Massachusetts Institute Of Technology | Selective bfl-1 peptides |
| JP6949102B2 (ja) | 2016-08-09 | 2021-10-13 | イーライ リリー アンド カンパニー | 併用療法 |
| US11466064B2 (en) | 2016-08-26 | 2022-10-11 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Bcl-w polypeptides and mimetics for treating or preventing chemotherapy-induced peripheral neuropathy and hearing loss |
| AU2018219283B2 (en) | 2017-02-08 | 2022-05-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Modified relaxin polypeptides comprising a pharmacokinetic enhancer and uses thereof |
| WO2018170299A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Inhibitors of prokaryotic gene transcription and uses thereof |
| WO2018172503A2 (en) | 2017-03-24 | 2018-09-27 | Basf Se | Liquid laundry detergent comprising modified saccharide or polysaccharide |
| SG11201912071QA (en) | 2017-06-22 | 2020-01-30 | Catalyst Biosciences Inc | Modified membrane type serine protease 1 (mtsp-1) polypeptides and methods of use |
| AU2018304230A1 (en) | 2017-07-19 | 2020-02-06 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized anti-microbial peptides for the treatment of antibiotic-resistant bacterial infections |
| WO2019036605A2 (en) | 2017-08-17 | 2019-02-21 | Massachusetts Institute Of Technology | MULTIPLE SPECIFICITY BINDING AGENTS OF CXC CHEMOKINES AND USES THEREOF |
| WO2019063958A1 (en) | 2017-09-27 | 2019-04-04 | The University Of York | BIOCONJUGATION OF POLYPEPTIDES |
| JP2021506800A (ja) | 2017-12-15 | 2021-02-22 | デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド | 構造安定化および／またはシステイン反応性ｎｏｘａペプチドによるアポトーシスタンパク質の選択的標的化 |
| JP2021506814A (ja) | 2017-12-15 | 2021-02-22 | デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド | 安定化ペプチドによって介在される標的タンパク質の分解 |
| EP3732254A4 (en) | 2017-12-26 | 2021-12-22 | Becton, Dickinson and Company | DEEP UV-EXCITABLE WATER-SOLVATIZED POLYMER DYES |
| CA3089279A1 (en) | 2018-02-07 | 2019-08-15 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Cell-permeable stapled peptide modules for cellular delivery |
| WO2019178313A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized peptides for biomarker detection |
| US10844228B2 (en) | 2018-03-30 | 2020-11-24 | Becton, Dickinson And Company | Water-soluble polymeric dyes having pendant chromophores |
| WO2019222435A1 (en) | 2018-05-16 | 2019-11-21 | Halozyme, Inc. | Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20 |
| KR102167755B1 (ko) | 2018-05-23 | 2020-10-19 | 주식회사 큐어바이오 | 단편화된 grs 폴리펩타이드, 이의 변이체 및 이들의 용도 |
| CA3107332A1 (en) | 2018-07-22 | 2020-01-30 | Bioasis Technologies Inc. | Treatment of lymphatic metastases |
| KR20210063351A (ko) | 2018-08-28 | 2021-06-01 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 항-cd3 항체 폴레이트 생체접합체 및 이들의 용도 |
| SI3849614T1 (sl) | 2018-09-11 | 2024-04-30 | Ambrx, Inc. | Polipeptidni konjugati interlevkina-2 in njihove uporabe |
| EP3852783A1 (en) | 2018-09-17 | 2021-07-28 | Massachusetts Institute of Technology | Peptides selective for bcl-2 family proteins |
| CN113366015A (zh) | 2018-10-19 | 2021-09-07 | Ambrx公司 | 白细胞介素-10多肽缀合物、其二聚体及其用途 |
| US20200262887A1 (en) | 2018-11-30 | 2020-08-20 | Opko Ireland Global Holdings, Ltd. | Oxyntomodulin peptide analog formulations |
| WO2020131871A1 (en) * | 2018-12-19 | 2020-06-25 | Tangible Science, Inc. | Systems and methods of treating a hydrogel-coated medical device |
| US11613744B2 (en) | 2018-12-28 | 2023-03-28 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use |
| CN113661239A (zh) | 2018-12-28 | 2021-11-16 | 催化剂生物科学公司 | 经修饰的尿激酶型纤溶酶原激活物多肽和使用方法 |
| WO2020154032A1 (en) | 2019-01-23 | 2020-07-30 | Massachusetts Institute Of Technology | Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade |
| KR20210136014A (ko) | 2019-02-12 | 2021-11-16 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 항체-tlr 작용제 콘쥬게이트를 함유하는 조성물, 방법 및 이의 용도 |
| US20220169688A1 (en) | 2019-04-18 | 2022-06-02 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Selective targeting of ubiquitin- and ubiquitin-like e1-activating enzymes by structurally-stabilized peptides |
| CN113747948B (zh) | 2019-04-26 | 2023-12-15 | 宝洁公司 | 减少来源于阳离子抗微生物剂的牙齿变色 |
| EP4077361A1 (en) | 2019-12-16 | 2022-10-26 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Structurally-stabilized oncolytic peptides and uses thereof |
| EP4077366A1 (en) | 2019-12-20 | 2022-10-26 | Dana Farber Cancer Institute, Inc. | Structurally-stabilized glucagon-like peptide 1 peptides and uses thereof |
| KR102653906B1 (ko) | 2020-01-14 | 2024-04-03 | 신테카인, 인크. | 편향된 il2 뮤테인 방법 및 조성물 |
| WO2021173889A1 (en) | 2020-02-26 | 2021-09-02 | Ambrx, Inc. | Uses of anti-cd3 antibody folate bioconjugates |
| AU2021230544A1 (en) | 2020-03-04 | 2022-09-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antiviral structurally-stabilized SARS-CoV-2 peptides and uses thereof |
| IL296099A (en) | 2020-03-11 | 2022-11-01 | Ambrx Inc | Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of using them |
| EP4139360A1 (en) | 2020-04-22 | 2023-03-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antiviral structurally-stabilized ace2 helix 1 peptides and uses thereof |
| WO2021222243A2 (en) | 2020-04-27 | 2021-11-04 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Structurally-stabilized and hdmx-selective p53 peptides and uses thereof |
| US20210355468A1 (en) | 2020-05-18 | 2021-11-18 | Bioasis Technologies, Inc. | Compositions and methods for treating lewy body dementia |
| US20210393787A1 (en) | 2020-06-17 | 2021-12-23 | Bioasis Technologies, Inc. | Compositions and methods for treating frontotemporal dementia |
| US20230302150A1 (en) | 2020-08-20 | 2023-09-28 | Ambrx, Inc. | Antibody-tlr agonist conjugates, methods and uses thereof |
| CA3193261A1 (en) | 2020-10-14 | 2022-04-21 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Chimeric conjugates for degradation of viral and host proteins and methods of use |
| US20240002450A1 (en) | 2020-11-05 | 2024-01-04 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antiviral structurally-stabilized ebolavirus peptides and uses thereof |
| EP4313163A1 (en) | 2021-04-03 | 2024-02-07 | Ambrx, Inc. | Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof |
| CA3231587A1 (en) | 2021-09-08 | 2023-03-16 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antiviral structurally-stapled sars-cov-2 peptide- cholesterol conjugates and uses thereof |
| EP4155349A1 (en) | 2021-09-24 | 2023-03-29 | Becton, Dickinson and Company | Water-soluble yellow green absorbing dyes |
| WO2023215784A1 (en) | 2022-05-04 | 2023-11-09 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Ebolavirus surface glycoprotein peptides, conjugates, and uses thereof |
| WO2024007016A2 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Beckman Coulter, Inc. | Novel fluorescent dyes and polymers from dihydrophenanthrene derivatives |
| WO2024044327A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-02-29 | Beckman Coulter, Inc. | Dhnt monomers and polymer dyes with modified photophysical properties |
Family Cites Families (57)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3784524A (en) * | 1971-06-25 | 1974-01-08 | Grace W R & Co | Urethane/thioether-containing polyene composition and the reaction product thereof |
| US4179337A (en) * | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| US4134887A (en) * | 1973-10-17 | 1979-01-16 | Hoechst Aktiengesellschaft | Phenyl-azo-phenyl dyestuffs |
| CH586739A5 (hu) * | 1973-10-17 | 1977-04-15 | Hoechst Ag | |
| US4179387A (en) * | 1974-03-12 | 1979-12-18 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Process for producing magnetic FE oxide |
| IL47468A (en) * | 1975-06-12 | 1979-05-31 | Rehovot Res Prod | Process for the cross-linking of proteins using water soluble cross-linking agents |
| US4002531A (en) * | 1976-01-22 | 1977-01-11 | Pierce Chemical Company | Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby |
| DE2607766C3 (de) * | 1976-02-26 | 1978-12-07 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur Herstellung von trägergebundenen biologisch aktiven Substanzen |
| US4228019A (en) * | 1978-06-19 | 1980-10-14 | Texaco Development Corp. | Secondary recovery process |
| US4473693A (en) * | 1978-08-04 | 1984-09-25 | Stewart Walter W | Aminonaphthalimide dyes for intracellular labelling |
| US4356166A (en) * | 1978-12-08 | 1982-10-26 | University Of Utah | Time-release chemical delivery system |
| US4430260A (en) * | 1979-02-27 | 1984-02-07 | Lee Weng Y | Penicillin-polyvinyl alcohol conjugate and process of preparation |
| US4296097A (en) * | 1979-02-27 | 1981-10-20 | Lee Weng Y | Suppression of reaginic antibodies to drugs employing polyvinyl alcohol as carrier therefor |
| US4241199A (en) * | 1979-09-18 | 1980-12-23 | Union Carbide Corporation | Novel polyester diols |
| US4280979A (en) * | 1979-09-18 | 1981-07-28 | Union Carbide Corporation | Copolymers, compositions, and articles, and methods for making same |
| JPS585320A (ja) * | 1981-07-01 | 1983-01-12 | Toray Ind Inc | グラフト共重合体 |
| US4973493A (en) * | 1982-09-29 | 1990-11-27 | Bio-Metric Systems, Inc. | Method of improving the biocompatibility of solid surfaces |
| JPS59204144A (ja) * | 1983-04-12 | 1984-11-19 | Daikin Ind Ltd | 新規含フッ素化合物およびその製法 |
| SE470099B (sv) * | 1984-05-17 | 1993-11-08 | Jerker Porath | Sulfonaktiverade tioeteradsorbenter för separation av t ex protein |
| SE454885B (sv) * | 1984-10-19 | 1988-06-06 | Exploaterings Ab Tbf | Polymerbelagda partiklar med immobiliserade metalljoner pa sin yta jemte forfarande for framstellning derav |
| US4616644A (en) * | 1985-06-14 | 1986-10-14 | Johnson & Johnson Products, Inc. | Hemostatic adhesive bandage |
| EP0206448B1 (en) * | 1985-06-19 | 1990-11-14 | Ajinomoto Co., Inc. | Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide) |
| US4917888A (en) * | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4766106A (en) * | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| EP0229108B1 (en) * | 1985-06-26 | 1990-12-27 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4883864A (en) * | 1985-09-06 | 1989-11-28 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Modified collagen compound and method of preparation |
| US4983494A (en) * | 1985-10-16 | 1991-01-08 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Image forming process including heating step |
| CA1283046C (en) * | 1986-05-29 | 1991-04-16 | Nandini Katre | Tumor necrosis factor formulation |
| US4791192A (en) * | 1986-06-26 | 1988-12-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified protein with polyethyleneglycol |
| US4871785A (en) * | 1986-08-13 | 1989-10-03 | Michael Froix | Clouding-resistant contact lens compositions |
| DE3628717A1 (de) * | 1986-08-23 | 1988-02-25 | Agfa Gevaert Ag | Haertungsmittel fuer proteine, eine damit gehaertete bindemittelschicht und eine solche schicht enthaltendes fotografisches aufzeichnungsmaterial |
| US4931544A (en) * | 1986-09-04 | 1990-06-05 | Cetus Corporation | Succinylated interleukin-2 for pharmaceutical compositions |
| DE3634525A1 (de) * | 1986-10-10 | 1988-04-21 | Miles Lab | Testmittel und indikatoren zum nachweis von thiolgruppen und verfahren zu deren herstellung |
| US5080891A (en) * | 1987-08-03 | 1992-01-14 | Ddi Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols |
| US5153265A (en) * | 1988-01-20 | 1992-10-06 | Cetus Corporation | Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1 |
| NL8800577A (nl) * | 1988-03-08 | 1989-10-02 | Stichting Tech Wetenschapp | Werkwijze voor het aanbrengen van een bloedcompatibele bekleding op polyetherurethaanvormstukken. |
| GB8824593D0 (en) * | 1988-10-20 | 1988-11-23 | Royal Free Hosp School Med | Liposomes |
| GB8824592D0 (en) * | 1988-10-20 | 1988-11-23 | Royal Free Hosp School Med | Purification process |
| GB8824591D0 (en) * | 1988-10-20 | 1988-11-23 | Royal Free Hosp School Med | Fractionation process |
| US5162430A (en) * | 1988-11-21 | 1992-11-10 | Collagen Corporation | Collagen-polymer conjugates |
| US5089261A (en) * | 1989-01-23 | 1992-02-18 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
| US4902502A (en) * | 1989-01-23 | 1990-02-20 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
| US5122614A (en) * | 1989-04-19 | 1992-06-16 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
| WO1990015628A1 (en) * | 1989-06-14 | 1990-12-27 | Cetus Corporation | Polymer/antibiotic conjugate |
| US5234903A (en) * | 1989-11-22 | 1993-08-10 | Enzon, Inc. | Chemically modified hemoglobin as an effective, stable non-immunogenic red blood cell substitute |
| US5171264A (en) * | 1990-02-28 | 1992-12-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Immobilized polyethylene oxide star molecules for bioapplications |
| EP0801082B1 (en) * | 1990-08-31 | 2003-04-09 | Regents Of The University Of Minnesota | Method for making graft resins for solid-phase peptide synthesis |
| US5380536A (en) * | 1990-10-15 | 1995-01-10 | The Board Of Regents, The University Of Texas System | Biocompatible microcapsules |
| SE467308B (sv) * | 1990-10-22 | 1992-06-29 | Berol Nobel Ab | Fast yta belagd med ett hydrofilt ytterskikt med kovalent bundna biopolymerer, saett att framstaella en saadan yta och ett konjugat daerfoer |
| EP0567566B2 (en) * | 1991-01-18 | 2007-07-04 | Amgen Inc., | Methods for treating tumor necrosis factor mediated diseases |
| CA2106079C (en) * | 1991-03-15 | 2000-04-25 | Robert C. Thompson | Pegylation of polypeptides |
| WO1992016555A1 (en) * | 1991-03-18 | 1992-10-01 | Enzon, Inc. | Hydrazine containing conjugates of polypeptides and glycopolypeptides with polymers |
| DK52791D0 (da) * | 1991-03-22 | 1991-03-22 | Kem En Tec As | Adsorptionsmatricer |
| DK130991D0 (da) * | 1991-07-04 | 1991-07-04 | Immunodex K S | Polymere konjugater |
| DK0594772T3 (hu) * | 1991-07-04 | 1997-02-24 | Immunodex K S | |
| US5414135A (en) | 1991-12-30 | 1995-05-09 | Sterling Winthrop Inc. | Vinyl sulfone coupling of polyoxyalkylenes to proteins |
| EP0622394A1 (en) * | 1993-04-30 | 1994-11-02 | S.A. Laboratoires S.M.B. | Reversible modification of sulfur-containing molecules with polyalkylene glycol derivatives and their use |
-
1993
- 1993-11-12 US US08/151,481 patent/US5446090A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-11-14 KR KR1019960702507A patent/KR100225746B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 RO RO96-00959A patent/RO118434B1/ro unknown
- 1994-11-14 CA CA002176203A patent/CA2176203C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-14 DE DE69430317T patent/DE69430317T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-14 AT AT95901226T patent/ATE215577T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 CN CN94194460A patent/CN1085689C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-14 AU AU10548/95A patent/AU687937B2/en not_active Ceased
- 1994-11-14 JP JP07514031A patent/JP3114998B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-14 WO PCT/US1994/013013 patent/WO1995013312A1/en active IP Right Grant
- 1994-11-14 NZ NZ276313A patent/NZ276313A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 RO ROA200000307A patent/RO121855B1/ro unknown
- 1994-11-14 ES ES95901226T patent/ES2173943T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-14 BR BR9408048A patent/BR9408048A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-11-14 DK DK95901226T patent/DK0728155T3/da active
- 1994-11-14 CZ CZ19961375A patent/CZ295640B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 PL PL94314298A patent/PL180149B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 EE EE9600128A patent/EE03448B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 HU HU9601253A patent/HU225649B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 UA UA96062250A patent/UA58481C2/uk unknown
- 1994-11-14 EP EP95901226A patent/EP0728155B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-14 RU RU96113123/04A patent/RU2176253C2/ru active
- 1994-11-14 SK SK608-96A patent/SK284527B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 EP EP01122161A patent/EP1176160A3/en not_active Withdrawn
-
1995
- 1995-06-07 US US08/473,734 patent/US5739208A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-05-06 BG BG100568A patent/BG63399B1/bg unknown
- 1996-05-10 FI FI962004A patent/FI117441B/fi not_active IP Right Cessation
- 1996-05-10 NO NO19961918A patent/NO315377B1/no not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-02-23 US US09/027,679 patent/US5900461A/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-04-19 US US09/294,188 patent/US6610281B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-05-30 HK HK02104035.7A patent/HK1042312A1/zh unknown
-
2003
- 2003-08-25 US US10/647,621 patent/US6894025B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-04-22 US US11/112,118 patent/US7214366B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU225649B1 (en) | Isolable, water soluble, hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers to modify surfaces and molecules, process for producing thereof, biologically active conjugates thereof and process for producing said conjugates | |
| JP5095061B2 (ja) | ポリ（エチレングリコール）の１−ベンゾトリアゾリル炭酸エステルの調製のための方法 | |
| JP5681605B2 (ja) | アジドまたはアセチレン末端水溶性ポリマー | |
| KR100807141B1 (ko) | 고분자량 비펩티드성 중합체 유도체의 합성 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: NEKTAR THERAPEUTICS AL, CORPORATION, US Free format text: FORMER OWNER(S): SHEARWATER POLYMERS INC., US |
|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |