SK284527B6 - Vodorozpustné aktívne polyetylénglykolové sulfóny a spôsob ich prípravy - Google Patents

Vodorozpustné aktívne polyetylénglykolové sulfóny a spôsob ich prípravy Download PDF

Info

Publication number
SK284527B6
SK284527B6 SK608-96A SK60896A SK284527B6 SK 284527 B6 SK284527 B6 SK 284527B6 SK 60896 A SK60896 A SK 60896A SK 284527 B6 SK284527 B6 SK 284527B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
group
sulfone
polymer
poly
active
Prior art date
Application number
SK608-96A
Other languages
English (en)
Other versions
SK60896A3 (en
Inventor
J. Milton Harris
Original Assignee
Shearwater Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shearwater Corporation filed Critical Shearwater Corporation
Publication of SK60896A3 publication Critical patent/SK60896A3/sk
Publication of SK284527B6 publication Critical patent/SK284527B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/334—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing sulfur
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/321—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds
    • C08G65/326—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds containing sulfur
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y10S530/816—Attached to the carrier via a bridging agent

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Polyethers (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Treatments Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)

Abstract

Vodorozpustný aktivovaný polymér, ktorý je stabilný proti hydrolýze, vybraný zo skupiny pozostávajúcej z poly(alkylenoxidov), poly(oxyetylénových polyolov) a poly(olefinických alkoholov) s aspoň jednou aktívnou sulfónovou časťou. Aktivovaný polyetylénglykolový derivát všeobecného vzorca R-(OCH2CH2)n-Y, v ktorom n je číslo 5 až 3 000, Y je skupina vybratá zo skupiny pozostávajúcej z -SO2-CH=CH2 a -SO2-CH2-CH2-X, kde X je atóm halogénu, a ich deriváty, pričom R znamená rovnakú alebo inú skupinu ako Y. Hydrolyticky stabilný, biologicky aktívny konjugát, biomateriál, ktorý obsahuje povrch a aspoň jeden vo vode rozpustný polymérny derivát napojený na tento povrch, spôsob prípravy polyetylénglykol-vinylsulfónu, spôsob syntézy vo vode rozpustného organického polyméru s aktívnou sulfónovou skupinou, spôsob prípravy konjugátu látky a vo vode rozpustného aktivovaného polyméru a spôsob prípravy konjugátu biologicky aktívnych molekúl a aktívneho derivátu polyetylénglykolu.ŕ

Description

Oblasť techniky
Tento vynález sa týka vo vode rozpustného aktivovaného polyméru, ktorý je stabilný proti hydrolýze, aktivovaného polyetylénglykolového derivátu, hydrolyticky stabilného, biologicky aktívneho konjugátu, biomateriálu obsahujúceho vo vode rozpustný polymérny derivát a spôsobu ich prípravy. Tento vynález sa teda týka aktívnych derivátov polyetylénglykolu a podobných hydrofilných polymérov a spôsobov ich syntézy na použitie na úpravu vlastností povrchov a molekúl.
Doterajší stav techniky
Polyetylénglykol („PEG“) bol študovaný na použitie vo farmaceutických prostriedkoch, pre umelé implatnáty a na ďalšie aplikácie, pri ktorých hrá dôležitú úlohu biokompatibilita. Navrhnuté boli rôzne deriváty polyetylénglykolu („PEG-deriváty“), ktoré majú aktívnu časť umožňujúcu, aby sa PEG pripojil na farmaceutické prostriedky, na implantáty a všeobecne na molekuly a povrchy na modifikovanie fyzikálnych alebo chemických vlastností molekuly alebo povrchu.
PEG-deriváty boli navrhnuté napríklad na kondenzáciu PEG na povrchy na reguláciu zmáčanlivosti, hromadenie statickej elektriny a na pripojenie ďalších typov molekúl na povrch, vrátane proteínov a zvyšku proteínov. Podrobnejšie - PEG deriváty boli navrhnuté na pripojenie na povrchy kontaktných šošoviek z plastu, na zníženie hromadenia proteínov a kalenia zraku. PEG-deriváty boli navrhnuté na pripojenie na umelé krvné cievy na zníženie hromadenia proteínov a kvôli nebezpečiu blokády. PEG-deriváty boli navrhnuté na imobilizovanie proteínov na povrchu, tak ako je to v enzýmových katalyzátoroch chemických reakcií.
Ďalej PEG deriváty boli navrhnuté na napojenie na molekuly, vrátane proteínov, na ochranu molekuly pred chemickým pôsobením, na obmedzenie nepriaznivých vedľajších účinkov molekuly, alebo na zväčšenie veľkosti molekuly a tým potencionálne získanie užitočných látok, ktoré majú niektoré priaznivé účinky v lekárstve, ale inak nie sú nijako vhodné, ba dokonca škodia živému organizmu. Malé molekuly, ktoré by sa normálne vylučovali ľadvinami, sa zadržujú v krvnom obehu, ak sa ich veľkosť zvýši pripojením biokompatibilného PEG-derivátu. Proteíny a ďalšie látky, ktoré tvoria imunitnú odpoveď, ak sa podajú injekčné, sa môžu do určitého stupňa skryť pred imunitným systémom kondenzáciou PEG molekuly na proteín.
PEG-deriváty boli navrhnuté tiež na afinitné delenie, napríklad enzýmov z bunkovej masy. Pri afinitnom delení PEG-derivát obsahuje funkčnú skupinu na reverzibilné naviazanie na enzým, ktorý je obsiahnutý v bunkovej mase. Konjugát PEG a enzým sa od bunkovej masy oddelia a potom sa enzým oddelí od PEG-derivátu, ak je to potrebné.
Kondenzácia PEG-derivátov na proteíny ilustruje niektoré problémy, s ktorými sa stretávame pri napojení PEG na povrchy a molekuly. Vo viacerých povrchoch a molekúl je počet miest dostupných na kondenzačné reakcie s PEG-derivátom do určitej miery obmedzený. Napríklad proteíny majú typicky obmedzený počet a rôzny typ reaktívnych miest dostupných na kondenzáciu. Ešte problematickejšie je to, že niektoré reaktívne miesta môžu byť zodpovedné za proteínovú biologickú aktivitu, je to vtedy, keď enzým katalyzuje niektoré chemické reakcie. PEG-derivát, ktorý je pripojený na dostatočný počet týchto miest, by mohol nepriaznivo ovplyvniť aktivitu proteínu.
Reaktívne miesta, ktoré tvoria miesto pripojenia PEG-derivátov na proteíny, sú dané štruktúrou proteínov. Proteíny, vrátane enzýmov sú postavené z rôznych sekvencii-aminokyselín všeobecného vzorca H2N-CHR-COOH. Alfa-aminokyselinový zvyšok (H2N-) jednej aminokyseliny sa pripája na karboxylovú skupinu (-COOH) priľahlej aminokyseliny za vzniku amidových väzieb, ktoré sa dajú znázorniť, ako -(NH-CHR-CO)n-, kde n môže znamenať stovky alebo tisícky. Fragment R môže obsahovať: reaktívne miesta pre proteínovú biologickú aktivitu a pre pripojenie PEG-derivátov.
Napríklad v lyzíne, ktorý je aminokyselinou tvoriacou časť základnej kostry väčšiny proteínov, skupina -NH2 je prítomná v polohe epsilon tak isto ako v polohe alfa. Epsilónová skupina -NH2 je pri alkalickom pH pre reakciu voľná. Veľa práce v oblasti techniky smerovalo k vyvinutiu PEG-derivátov na napojenie epsilonovej skupiny -NH2 lyzínovej frakcie proteínu. Vo všetkých týchto PEG-derivátoch je lyzínová frakcia aminokyselín proteínov typicky inaktivovaná, čo môže byť nevýhodné, ak je lysín dôležitý na aktivitu proteínu.
Zalipský v USA patente č. 5 122 614 opisuje, že PEG molekuly aktivované oxykarbonyl-N-dikarboximidovou funkčnou skupinou môžu byť napojené vo vodných alkalických podmienkach uretánovou väzbou na amínovú skupinu polypeptidu. 0 aktivovanom PEG-N-sukcínimiduhličitane sa uvádza, že tvorí stabilné, proti hydrolýze rezistentné uretánové väzby s amínovými skupinami. 0 amínovej skupine sa uvádza, že je reaktívnejšia pri alkalickom pH od 8,0 do 9,5 a že reaktivita prudko klesá pri nižšom pH. Hydrolýza nekondenzovaného PEG-derivátu sa však tiež prudko zvyšuje pri pH 8,0 až 9,5. Zalipský obchádza problém zvýšenej rýchlosti reakcie nekondenzovaného PEG-derivátu s vodou použitím nadbytku PEG-derivátu pre naviazanie na povrch proteínu. Pri použití nadbytku sú dostatočne reaktívne epsilónové amínové miesta naviazané na PEG na modifikovanie proteínu predtým, ako má PEG-derivát príležitosť byť zhydrolyzovaný a nereaktívny.
Zalipského spôsob zodpovedá pripojeniu lyzínovej frakcie proteínu na PEG-derivát na jedno aktívne miesto PEG-derivátu. Ak je však rýchlosti hydrolýzy PEG-derivátu dostatočná, potom môže byť problematické dosiahnuť pripojenie na viac ako jedno aktívne miesto na PEG molekule, pretože jednoduchý nadbytok nespomaľuje rýchlosti hydrolýzy.
Napríklad lineárne PEG s aktívnymi miestami na obidvoch koncoch sa napoja na proteín na jednom konci, ale ak je rýchlosť hydrolýzy dôležitá, zreaguje s vodou na druhom konci, tak je skôr ukončený relatívne nereaktívnou hydroxylovou skupinou, ktorá štruktúrne predstavuje skupinu -OH , skôr ako by sa vytvorila molekulárna štruktúra „činky“ s napojenými proteínmi alebo inými žiaducimi skupinami na obidvoch koncoch. Podobný problém sa objavuje vtedy, ale je potrebné kondenzovať molekulu na povrch PEG viažucim činidlom, pretože PEG sa najprv napojí na povrch alebo kondenzuje na molekulu a opačný koniec PEG-derivátu musí zostať aktívny pre nasledujúcu reakciu. Ak hydrolýza je problémom, potom sa opačný koniec typicky neaktivuje.
V Zalipského USA patente č. 5 122 614 je opísaných tiež niekoľko iných PEG-derivátov z predchádzajúcich patentov. O PEG-sukcionyl-N-hydroxysukcínimidovom esteri sa uvádza, že tvorí esterové väzby, ktoré majú vo vodnom prostredí obmedzenú stabilitu, čo znamená nežiaduci krátky polčas tohto derivátu. O PEG-2,4,6-trichlór-l,3,5-triazíne sa uvádza, že má nežiaducu toxicitu a že je nešpecifický pre reakciu s príslušnými skupinami na proteíne.
PEG-2,4,6-trichlór-l,3,5-triazínový derivát môže mať teda nežiaduce vedľajšie účinky a môže znižovač aktivitu proteínu, pretože sa pripojuje na viaceré rôzne typy aminokyselín v rôznych reaktívnych miestach. O PEG-fenylkarbonáte sa uvádza, že poskytuje toxické hydrofóbne fenolové zvyšky, ktoré majú afinitu pre proteíny. O PEG aktivovanom karbonyldiimidazole sa uvádza, že je veľmi pomalý pri reakcii s proteínovými funkčnými skupinami, čo vyžaduje dlhý reakčný čas na získanie dostatočnej modifikácie proteínu.
Na pripojenie na funkčné skupiny aminokyselín iných ako espilónovú -NH2 lyzínu boli navrhnuté ešte iné PEG-deriváty. Histidín obsahuje reaktívnu iminovú skupinu, ktorá štruktúrou znamená -N(H)-, ale mnohé deriváty, ktoré reagujú s epsilónovou -NH2, reagujú tiež so skupinou -N(H)-. Cysteín obsahuje reaktívnu tiolovú skupinu -SH, ale PEG-derivát maleimidu, ktorý reaguje s touto skupinou, podlieha hydrolýze.
Ako je vidieť z malej uvedenej vzorky, značné úsilie bolo venované na vyvinutie rôznych PEG-derivátov na pripojenie na skupinu-NH2 lyzínovej aminokyselinovej frakcie rôznych proteínov. Syntéza a použitie mnohých týchto derivátov je problematické. Niektoré tvoria nestále väzby s proteínmi, ktoré podliehajú hydrolýze a nevydržia veľmi dlho vo vodnom prostredí, ako napríklad v krvnom obehu. Niektoré tvoria stabilnejšie väzby, ale dochádza pri nich k hydrolýze pred vytvorením väzby, čo znamená, že táto reaktívna skupina PEG-derivátov môže byť deaktivovaná predtým, ako sa proteín pripojí. Niektoré sú niekedy toxické a sú teda menej vhodné na použitie in vivo. Niektoré reagujú veľmi pomaly na to, aby boli prakticky vhodné. Niektoré vedú k strate proteínovej aktivity pripojením na miesta zodpovedné za proteínovú aktivitu. Niektoré nie sú špecifické v miestach, na ktoré sa pripájajú, čo tiež môže viest k strate požadovanej aktivity a k chýbajúcej reprodukovateľnosti výsledkov.
Podstata vynálezu
Tento vynález poskytuje vo vode rozpustné a hydrolyticky stabilné deriváty polyetylénglykolových polymérov a príbuzných hydrofilných polymérov s jednou alebo s viacerými aktívnymi sulfónovými skupinami. Tieto polyméme deriváty s aktívnymi sulfónovými skupinami sú vysoko selektívne na kondenzáciu s tiolovými skupinami namiesto aminových skupín na molekulách a povrchoch, obzvlášť, pri pH 9 alebo menej. Sulfónová skupina, väzba medzi polymérom a sulfónovou skupinou a väzba medzi tiolovou skupinou, sulfónovou skupinou, nie sú všeobecne reverzibilné v redukujúcich prostrediach a sú predĺžený čas stabilné proti hydrolýze vo vodných prostrediach pri pH 11 alebo menej. Dôsledkom toho je, že fyzikálne a chemické vlastnosti rôznych látok je možné upraviť pri požadovaných vodných podmienkach aktívnymi sulfónovými polymérnymi derivátmi.
Napríklad podmienky modifikácie biologicky aktívnych látok môžu byť optimalizované tak, aby sa zachoval vysoký stupeň biologickej aktivity. Farmaceutické prostriedky, od aspirínu k penicilínu, je možné vhodne upraviť, pripojením aktívnych sulfónových polymcrových derivátov, ak sú tieto farmaceutické prostriedky upravené tak, že obsahujú tiolové skupiny. Veľké proteíny obsahujúce cysteínové jednotky, ktoré majú aktívnu tiolovú skupinu, je možné tiež vhodne modifikovať. Na zavedenie cysteínových skupín do požadovaných miest proteínu je možné použiť spôsob technológie rekombinantnej DNA („genetické inžinierstvo“). Tieto cysteíny je možné kondenzovať, na aktívne sulfónové polyméme deriváty. Získavajú sa tak hydrolyticky stabilné väzby na rozmanitých proteínoch, ktoré normálne neobsahujú cysteínové jednotky.
Špecifické sulfónové skupiny pre aktivované polyméry podľa vynálezu sú skupiny s aspoň dvoma atómami uhlíka napojenými na sulfónovú skupinu -SO2- a reaktívnym miestom pre tiol špecifickej kondenzačnej reakcie na druhom atóme uhlíka od sulfónovej skupiny.
Podrobnejšie, aktívne sulfónové skupiny obsahujú vinylsulfón, aktívne etylsulfóny, vrátane halogénetylsulfónov a thiolové špecifické aktívne deriváty týchto sulfónov. Vinylsulfónová skupina môže znamenať skupinu vzorca -SO2-CH=CH2, aktívna etyl-sulfónvá skupina môže znamenať skupinu vzorca -SO2-CH2-CH2-Z, kde Z môže predstavovať: atóm halogénu alebo odchádzajúcu skupinu so schopnosťou byť substituovaná tiolom za vzniku sulfónovej a tiolovej väzby -SO2-CH2-CH2-S-W, kde W znamená biologicky aktívnu molekulu, povrch alebo inú látku. Medzi deriváty vinyl a etylsulfónov môžu patriť aj iné substituenty, pokiaľ sa zachová rozpustnosť vo vode a tiolovú špecifická reaktivita reakčného miesta na druhom atóme uhlíka.
Tento vynález zahrnuje hydrolyticky stabilné konjugáty látok s tiolovými skupinami s polymémymi derivátmi a aktívnymi sulfónovými skupinami. Napríklad vo vode rozpustný sulfónovou skupinou aktivovaný PEG polymér sa môže kondenzovať na biologicky aktívnu molekulu v mieste reaktívneho tiolu. Väzba, ktorou sú PEG a biologicky aktívna molekula spojené, zahrnuje sulfónovú skupinu napojenú na thiolovú skupinu všeobecného vzorca PEG-SO2-CH2-CH2-S-W, kde W znamená biologicky aktívnu molekulu, hoci sulfónová skupina pred napojením na PEG znamenala vinylsulfón alebo aktívny etylsulfón.
Tento vynález tiež zahrnuje biomateriály obsahujúce povrch s jedným alebo viac reaktívnymi tiolovými miestami a jedným alebo viacerými vo vode rozpustnými sulfónom aktivovanými polymérmi podľa vynálezu napojenými na povrch sulfónovou a tiolovou väzbou. Biomateriály a ďalšie látky môžu byť tiež napojené na sulfónom aktivované polyméme deriváty inou väzbou, ako je sulfónová a tiolová väzba, akou je konvenčná aminová väzba. Získa sa tak hydrolyticky stabilnejšia aktivujúca skupina, sulfónová skupina, dostupná pre nasledujúce reakcie.
Tento vynález obsahuje spôsob syntetizovania aktivovaných polymérov podľa vynálezu. Skupina obsahujúca síru sa naviaže priamo na atóm uhlíka polyméru a potom sa prevedie na aktívnu sulfónovú skupinu. Sulfónová skupina sa môže pripraviť pripojením väzbového činidla, ktoré má sulfónovú skupinu na jednom konci, na konvenčný aktivovaný polymér tak, že výsledný polymér má na svojom konci sulfónovú skupinu.
Podrobnejšie - vo vode rozpustný polymér s aspoň jednou aktívnou hydroxylovou skupinou podlieha reakcii za vzniku substituovaného polyméru, ktorý má reaktívnej šiu skupinu. Výsledný substituovaný polymér podlieha reakcii, ktorou sa substituuje reaktívnejšia skupina skupinou obsahujúcou síru s aspoň dvoma atómami uhlíka, kde síra v skupine síru obsahujúcej je naviazaná priamo na atóm uhlíka polyméra. Skupina obsahujúca síru potom podlieha reakciám, pri ktorých sa síra, -S-, oxiduje na sulfón- SO2-. Získa sa tak dostatočne reaktívne miesto na druhom atóme uhlíka sulfónu obsahujúceho skupinu na vytvorenie väzby so skupinami obsahujúcimi tiol.
Ešte podrobnejšie - spôsob syntézy aktivovaných polymérov podľa vynálezu sa vyznačuje tým, že sa polyetylénglykol nechá zreagovať, so zlúčeninou s aktívnou hyd roxylovou skupinou. Získa sa ester alebo sa nechá zreagovať s derivátom obsahujúcim atóm halogénu, čím sa získa PEG substituovaný atómom halogénu. Výsledný aktivovaný PEG sa potom nechá zreagovať s merkaptoetanolom, pričom sa esterová skupina alebo halogenid substituuje merkaptoetanolovou skupinou. Síra v merkaptoetanolovej skupine sa oxiduje na sulfón. Etanolsulfón sa aktivuje alebo aktiváciou hydroxylovej skupiny, alebo substituovaním hydroxylovej skupiny aktívnejšou skupinou, ako je atóm halogénu. Aktívny etylsulfón PBGu sa potom prevedie na vinylsulfón, ak je to žiaduce, štiepením aktivovanej hydroxylovej skupiny alebo inej aktívnej skupiny a zavedením dvojnej väzby medzi atómy uhlíka priľahlé k sulfónovej skupine - SO2-.
Tento vynález zahrnuje aj spôsob prípravy konjugátu látky s polymémym derivátom, ktorý má aktívnu sulfónovú skupinu. Tento spôsob zahrnuje stupeň vytvorenia väzby medzi polymémym derivátom a látkou. Táto väzba môže znamenať väzbu medzi sulfónovou a tiolovou skupinou.
Tento vynález poskytuje aktivované polyméry, ktoré sú špecifické vo svojej reaktivite, stabilné vo vode, stabilné v redukujúcich prostrediach a tvoria stabilnejšie väzby s povrchom a molekulami, vrátane biologicky aktívnych molekúl, ako skôr získané väzby. Aktivovaný polymér sa môže používať na modifikáciu vlastností povrchov a molekúl, ktorých biokompatibilita je dôležitá. Pretože aktivovaný polymér je stabilný vo vodných podmienkach a tvorí stabilné väzby s tiolovými skupinami, na zachovanie aktivity biologicky aktívnych látok a na optimalizáciu rýchlosti reakcie pri naväzovaní polyméru je možné zvoliť najvýhodnejšie reakčné podmienky.
Syntetická cesta použitá na prípravu aktívnych sulfónov polyetylénglykolu a príbuzných polymérov obsahuje aspoň štyri stupne, v ktorých atóm síry je naviazaný na polymérmi molekulu a potom je prevedený radom reakcií na aktívnu sulfónovú funkčnú skupinu. Východisková PEG polyméma molekula má aspoň jednu hydroxylovú skupinu, OH, ktorá je dostupná pre participáciu v chemických reakciách a ktorá je považovaná za „aktívnu“ hydroxylovú skupinu. PEG molekula môže mať viac aktívnych hydroxylových skupín dostupných pre chemické reakcie, ako je vysvetlené. Tieto aktívne hydroxylové skupiny sú v skutočnosti relatívne nereaktívne. Prvým stupňom pri syntéze je pripraviť PEG s reaktívnej šími skupinami.
Reaktívnejšia skupina sa typicky tvorí podľa jedného z dvoch spôsobov, aktiváciou alebo substitúciou hydroxylu. Sú dostupné ďalšie spôsoby, ako je známe odborníkom z oblasti techniky, ale aktivácia a substitúcia hydroxylu sú dva najčastejšie používané spôsoby. Pri aktivácii hydroxylu sa atóm vodíka na hydroxylovej skupine nahradí aktívnejšou skupinou. Typicky sa kyselina alebo derivát kyseliny, ako je halogenid kyseliny, nechá reagovať s PEG za vzniku reaktívneho esteru, v ktorom sú PEG a zvyšok kyseliny naviazané esterovou väzbou. Kyselinová časť je všeobecne reaktívnejšia ako hydroxylová časť. Typickými estermi sú síran, uhličitan a fosforečnan.
Medzi halogenidy sulfonylových kyselín, ktoré sú vhodné na použitie v praxi podľa vynálezu, patria metansulfonylchlorid a p-toluénsulfonylchlorid. Metansulfonylchlorid je zlúčenina vzorca CH3SO2C1, ktorá je známa ako mezylchlorid. Metansulfonylestery sa niekedy označujú ako mezyláty. p-toluénsulfonylchlorid je zlúčenina vzorca CH3C6H4SO2C1, ktorá je známa ako tosylchlorid. Toluénsulfonylestery sa niekedy označujú ako tosyláty.
V substitučnej reakcii sa celá -OH skupina na PEG substituuje reaktívnejšou skupinou, typicky halogenidom. Napríklad tionylchlorid vzorca SOC12 môže reagovať s PEG za vzniku reaktívnejšieho PEG substituovaného atómom chlóru. Substitúcia hydroxylovej skupiny inou skupinou sa niekedy v oblasti techniky označuje ako aktivácia hydroxylu. Pojem aktivácie hydroxylu by mal byť interpretovaný tak, že znamená substitúciu, rovnako ako esterifikáciu, a ďalšie spôsoby aktivovania hydroxylovej skupiny.
Pojmy „skupina“, „funkčná skupina“, „časť“, „aktívna časť“, „reaktívne miesto“, „radikál“, sú v oblasti chémie v určitej miere synonymá. V oblasti techniky a tu sa používajú na označenie rôznych definovaných polôh alebo jednotiek molekuly a jednotiek, ktoré vykonávajú určitú funkciu alebo aktivitu a sú reaktívne s inými molekulami alebo s časťami molekúl. V tomto zmysle je možné proteín alebo zvyšok proteínu považovať za molekulu alebo funkčnú skupinu alebo časť, ak sa kondenzuje s polymérom.
Pojem „PEG“ je v oblasti techniky a tu používaný k opisu akéhokoľvek z niekoľkých kondenzovaných polymérov etylénglykolu všeobecného vzorca H(OCH2CH2)nOH. PEG poznáme tiež ako polyoxyetylén, polyetylénoxid, polyglykol a polyéterglykol. PEG je možné pripraviť ako kopolyméry etylénoxidu a veľa ďalších monomérov.
Polyetylénglykol sa používa v biologických aplikáciách, pretože má vlastnosti, ktoré sú veľmi požadované a je všeobecne schválený na biologické alebo biotechnologické aplikácie. PEG je typicky priezračný, bezfarebný, bez vône, rozpustný vo vode, stabilný proti teplu, inertný k mnohým chemickým činidlám, nehydrolyzuje, ani sa nerozkladá a nie je toxický. Polyetylénglykol je považovaný za biozlúčiteľný, čo znamená, že PEG je schopný koexistovať spoločne so živou tkaninou alebo organizmom bez toho, aby im škodil. Podrobnejšie -PEG nie je imunogénny, čo znamená, že PEG nemá tendenciu produkovať, imunitnú odpoveď tela. Ak sa pripojí na skupinu, ktorá má v tele žiaducu úlohu, PEG má tendenciu maskovať túto časť a môže znižovať, alebo odstraňovať, akúkoľvek imunitnú odpoveď tak, že organizmus môže tolerovať prítomnosť tejto skupiny. Sulfónom aktivované PEG podľa vynálezu by teda mali byť v podstate netoxické a nemali by mať tendenciu v podstate produkovať imunitnú odpoveď alebo spôsobovať zrážanie alebo iné nežiaduce účinky.
Druhým stupňom syntézy je naviazanie síry priamo na atóm uhlíka v polymére a vo forme, ktorá môže byť prevedená na etylsulfón alebo etylsulfónový derivát s podobnými reaktívnymi vlastnosťami. „Etyl“ tu znamená skupinu s identifikovateľnou skupinou dvoch atómov uhlíka spolu spojených. Aktívny sulfónový PEG derivát vyžaduje, aby druhý atóm uhlíka v reťazci od sulfónovej skupiny poskytoval reaktívne miesto na naviazanie tiolových skupín so sulfónmi. Tento výsledok môžeme dosiahnuť reagovaním aktívnej skupiny pripravenej v uvedenom prvom stupni, kde bude esterom alebo halogenidom substituovaný PEG, v substitučnej reakcii s alkoholom, ktorý obsahuje aj reaktívnu tiolovú skupinu pripojenú na etylovú skupinu, tioetanolovú skupinu. Tiolová skupina oxiduje na sulfón a druhý atóm uhlíka sulfónu na etylovej skupine sa prevedie na reaktívne miesto.
Zlúčeniny obsahujúce tiolové skupiny -SH sú organické zlúčeniny, ktoré pripomínajú alkoholy, ktoré obsahujú hydroxylovú skupinu -OH s výnimkou tiolov, v ktorých je atóm kyslíka aspoň jednej hydroxylovej skupiny nahradený atómom síry. Aktivujúca časť, na PEG deriváte z prvej reakcie, ktorá je buď halogenidom, alebo kyselinovou časťou esteru, sa odštiepi od polyméru a nahradí sa alkoholovou skupinou tioetanolovej zlúčeniny. Atóm síry v tiolovej skupine alkoholu sa napojí priamo na atóm uhlíka polyméru. Alkoholom by mal byť taký alkohol, ktorý poskytuje tioetanolovú časť pre napojenie priamo na atóm uhlíka poly mémeho reťazca, alebo ktorý je možné ľahko previesť na tioetanolovú skupinu alebo substituovanú skupinu podobných reaktívnych vlastností. Príkladom takéhoto alkoholu je merkaptoetanol vzorca HSCH2CH2OH, ktorý sa niekedy nazýva tioetanol.
V treťom stupni syntézy sa po prevedení atómu síry, ktorý je napojený na atóm uhlíka , na sulfónovú skupinu -SO2 použije oxidačné činidlo. Existuje veľa oxidačných činidiel, vrátane peroxidu vodíka a perboritanu sodného. Vhodným môže byť taký katalyzátor, akým je kyselina wol&ámová. Sulfón, ktorý sa vytvorí, nie je však v aktívnej forme na selektívnu reakciu pre tiolovú skupinu. Je nutné odstrániť relatívne nereaktívnu hydroxylovú skupinu alkoholu, ktorá bola pridaná v subtitučnej reakcii druhého stupňa.
V štvrtom stupni sa hydroxylová časť alkoholu, ktorá bola pridaná v druhom stupni, prevedie na reaktívnejšiu formu, buď aktiváciou hydroxylovej skupiny, alebo substitúciou hydroxylovej skupiny reaktívnejšou skupinou, podobne ako v prvom stopni reakčnej schémy. Substitúcia sa prevádza typicky halogenidom. Získa halogenetylsulfón alebo jeho derivát s reaktívnym miestom na druhom atóme uhlíka od sulfónovej skupiny. Druhý atóm uhlíka na etylovej skupine sa typicky aktivuje chlorovodíkom alebo brómovodíkom. Aktivácia hydroxylu by mala poskytnúť miesto podobnej reaktivity ako je sulfonátový ester. Vhodnými reakčnými činidlami sú kyseliny, halogenidy kyselín a ďalšie zlúčeniny uvedené v súvislosti s prvým stupňom reakcie, najmä tionylchlorid na substitúciu hydroxylovej skupiny atómom chlóru.
Výsledný polymérny aktivovaný etylsulfón je stabilný, izolovateľný a vhodný na kondenzačné reakcie selektívne pre tiolovú skupinu. Ako je uvedené v príkladoch, PEG-chlóretylsulfón je stabilný vo vode pri pH 7 a menšom, môže sa výhodne používať na kondenzačné reakcie selektívne pre tiolovú skupinu pri alkalickom pH až do pH aspoň 9.
Pri tiolovej kondenzačnej reakcii je možné, že tiolová skupina nahradí chlorid, ako jc uvedené v nasledujúcej reakcii: PEG-SO2-CH2-CH2-C1+W-S-H->PEG-SO2-CH2-CH2-S-W, kde W znamená skupinu, na ktorú je naviazaná tiolová skupina SH, a môže znamenať biologicky aktívnu molekulu, povrch alebo niektoré iné látky. Bez ohľadu na teóriu sa predpokladá, na základe pozorovateľných reakčných kinetík, ako je uvedené v príklade 3, že chlóretyl a iné aktivované etylsulfóny a reaktívne deriváty sú prevedené na PEG -vinylsulfón a že to je PEG -vinylsulfón alebo jeho derivát, ktorý sa v skutočnosti viaže na tiolovú skupinu. Výsledná sulfónová alebo tiolová väzba nie je rozlíšiteľná v tom, či je z aktívneho PEG-etylsulfónu alebo z PEG-vinyl vinylsulfónu, takže na naviazanie na tiolové skupiny sa pri pH nad 7 môže použiť aktívny etylsulfón.
PEG vinylsulfón je tiež stabilný a izolovateľný a môže tvoriť hydrolyticky stabilnú väzbu selektívnu pre tiol, za oveľa kratší čas ako halogénetylsulfón alebo iný aktivovaný etylsulfón, ako je ďalej vysvetlené.
V piatom stupni, ktorý môže byť pridaný k syntéze, sa aktivovaný etylsulfón nechá zreagovať s akoukoľvek z rozmanitých zásad, akou je hydroxid sodný alebo trietylamín. Vznikne PEG vinylsulfón alebo jeden z jeho aktívnych derivátov na použitie v kondenzačných reakciách selektívnych pre tiol.
Ako je uvedené v príkladoch, najmä v príklade 3, PEG-vinylsulfón reaguje rýchlo s tiolovými skupinami a je stabilný proti hydrolýze vo vode pri pH menšom ako 11 aspoň počas niekoľkých dní.
Reakciu je možné znázorniť takto:
PEG-SO2-CH=CH2 + W-S-H -> PEG-SO2-CH2-CH2-S-W.
O tiolovej časti sa uvádza, že sa aduje „na dvojitú väzbu“. W-S skupina sa aduje na koncovú CH2 skupinu dvojitej väzby, ktorá je druhým atómom uhlíka od sulfónovej skupiny SO2. Atóm vodíka sa aduje na CH dvojitej väzby. Pri pH nad 9 je však selektivita sulfónovej skupiny pre tiol znížená a sulfónová skupina začína trocha viac reagovať s amínovými skupinami.
Alternatívne na uvedenú syntézu sa sulfónom aktivované PEG deriváty môžu pripravovať pripojením väzbového činidla so sulfónovou časťou na PEG aktivovaný rôznymi funkčnými skupinami. Napríklad amínovou skupinou aktivovaný PEG, PEG -NH2, sa nechá zreagovať, pri vhodných podmienkach pri pH 9 alebo menej s malou molekulou, ktorá má sukcinimidylovú aktívnu esterovú časť. NHS-OOC- na jednom konci a sulfónovú časť, vinylsulfón vzorca -SO2-CH=CH2 na druhom konci. Amínovou skupinou aktivované PEG formy tvoria stabilnú väzbu so sukcinimidylovým esterom. Výsledný PEG je na konci aktivovaný vinyl sulfónovou časťou a je hydrolyticky stabilný. Reakcie a výsledný vinylsulfónom aktivovaný PEG sú štruktúrne reprezentované nasledujúcou rovnicou:
PEG-NH + NHS-O2C-CH2-CH2-SO2-CH=CH2 ->
PEG-NH-OC-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
Podobný aktivovaný PEG by sa mohol získať reakciou amínovou skupinou aktivovaného PEG, akou je sukcinimidylovou skupinou aktívny ester PEG, PEG-CO2-NHS, s malou molekulou, ktorá má aminovú skupinu na jednom konci a vinylsulfónovú skupinu na druhom konci. Sukcinimidylový ester tvorí stabilnú väzbu s amínovou skupinou:
PEG-CO2-NHS + NH2-CH2-CH2-SO2-CH=CH2 -> PEG-C0-NH-CH2-CH2-S02-CH=CH2.
Aktívne PEG sulfóny podľa vynálezu môžu mať akúkoľvek molekulovú hmotnosť, môžu byť lineárne alebo vetvené so stovkami reťazcov. PEG môže byť subsituovaný alebo nie je substituovaný, pokiaľ na substitúciu so sulfónovými skupinami existuje aspoň jedno reaktívne miesto. PEG má typicky priemernú molekulovú hmotnosť od 200 do 100 000 a jeho biologické vlastnosti sa menia podľa molekulovej hmotnosti, substitúcie a podľa stupňa vetvenia, takže všetky tieto deriváty musia byť užitočné na biologické a biotechnologické aplikácie. Na väčšinu biologických a biotechnologických aplikácií sa budú používať PEG-vinylsulfón, bisvinylsulfón alebo aktivovaný etylsulfón v podstate s lineárnym priamym reťazcom, v podstate nesubstituovaný, s výnimkou vinylsulfónovej alebo etylsulfónovej časti, a ak je to žiaduce, s ďaľšími íúnkčnými skupinami. Pre veľa biologických a biotechnologických aplikácií by mali substituenty znamenať typicky nereaktívne skupiny, ako je atóm vodíka -H a metylová skupina -CH3 (,μη-PEG“).
PEG môže mať pripojenú viac ako jednu vinylsulfónovú alebo prekurzorovú skupinu, alebo môže byť PEG ukončený na jednom konci relatívne nereaktívnou skupinou, akou je metylová skupina, -CH-. Ukončená forma môže byť užitočná, napríklad vtedy, ak je žiaduce pripojiť polyméme reťazce na rôzne tiolové miesta pozdĺž proteínového reťazca. Pripojenie PEG molekúl na biologicky aktívnu molekulu, ako je proteín alebo iný farmaceutický prostriedok, alebo na povrch, sa niekedy nazýva ako „PEGylácia“.
Lineárne PEG s aktívnymi hydroxylovými skupinami na koncoch sa môžu aktivovať, na obidvoch koncoch vinylsulfónom, jeho prekurzorom alebo derivátom podobnej reaktivity tak, že sa stane biofunkčným. Táto biofunkčná štruktúra, napr. PEG-bisvinylsulfón sa niekedy označuje ako činkovitá štruktúra a môže sa používať napríklad ako linker alebo spacer (ramienko) na pripojenie na biologicky aktívne molekuly, na povrch alebo na pripojenie viac ako jednej biologicky aktívnej molekuly na PEG molekulu. Stabilita sulfónovej časti proti hydrolýze spôsobuje, že je obzvlášť užitočný na biofunkčné alebo heterobifunkčné aplikácie.
Inou aplikáciou PEG-vinylsulfónu a jeho prekurzora je dendriticky aktivovaný PEG, v ktorom je veľa ramienok PEG pripojených na centrálnu jadrovú štruktúru. Dendritické PEG štruktúry môžu byť vysoko vetvené a sú obyčajne nazývané „hviezdovité“ molekuly. Hviezdovité molekuly sú všeobecne opísané Merrillom v USA patente č. 5 171 264, ktorého obsah je tu zahrnutý ako citácia. Sulfónové skupiny sa môžu používať na získanie aktívnej funkčnej skupiny na konci PEG reťazca vychádzajúceho z jadra a ako linker na napojenie funkčnej skupiny na ramienka hviezdovitej molekuly.
PEG-vinylsulfóny a jeho prekurzory a deriváty sa môžu používať na napojenie priamo na povrchy a molekuly s tiolovou časťou. Všeobecne však heterobifunkčné PEG-deriváty so sulfónovou časťou na jednom konci a inou funkčnou skupinou na opačnom konci budú pripojené rôznymi skupinami na povrch alebo molekulu. Ak sú substituované jednou inou aktívnou skupinou, môže sa heterobiofunkčná PEG činkovitá štruktúra používať, napríklad pre nesenie proteínov alebo inej biologicky aktívnej molekuly sulfónovými väzbami na jednom konci a inou väzbou na inom konci, ako je amínová väzba. Získa sa tak molekula s dvoma rôznymi aktivitami. Heterobifunkčné PEG so sulfónovou časťou na jednom konci a amínovo špecifickou časťou na inom konci by sa mohli pripojiť tak na cysteinovú, ako na lyzínovú frakciu proteínu. Je možné tak získať stabilnú amínovú väzbu a potom hydrolyticky stabilná nereaktívna sulfónová skupina je dostupná pre ďalšie reakcie špecifické pre fiolovú skupinu podľa potreby.
Z veľa rôznych zlúčenín je možné vybrať iné aktívne skupiny na heterobifunkčné sulfónom aktivované PEG. Na biologické a biotechnologické aplikácie sa substituenty vyberú z reaktívnych skupín typicky používaných v PEG chémii pre aktivovanie PEG, ako sú aldehydy, trifluóretylsulfonát, ktorý je tiež nazývaný trezylát, N-hydroxylsukcinimidový ester, 2,4,6-trichlór-l,3,5-triazín, fluórderivát predchádzajúcej zlúčeniny, acylazid, sukcinát, p-diazo-benzylová skupina, 3-(p-diazofenyl-oxy)-2-hydroxy-propyloxy skupina a ďalšie.
Príklady aktívnych častí iných ako sulfón sú uvedené Davisom v USA patente č. 4 179 337, Leem a spol. v USA patentoch č. 4 269 097 a 4 430 260, Iwasakim a spol. č. 4 670 417, Katreom a spol. v USA patentoch č. 4 766 106, 4 917 888 a 4 931 544 Nakagawou a spol. v USA patente č. 4 791 192, Niteckim a spol. v USA patentoch č. 4 902 502 a 5 089 261, Seiferom v USA patente č. 5 080 891, Zalipskim v USA patente č. 5 122 614, Shadlom a spol. v USA patente č. 5 153 265, Rheom a spol. v USA patente č. 5 162 430, v európskej patentovej priŇáške č. 0 247 860 a v PCT medzinárodných prihláškach č. US86/01252, GB89/01261, GB89/01262, GB89/01263, US90/03252, US90/06843, US91/06103, US92/00432, A US92/02047, ktorých obsahy sú tu zahrnuté ako citácie.
Zručnému odborníkovi z oblasti techniky by malo byť jasné, že diskutované činkovité štruktúry by mohli byť po užité na získanie rôznych substituentov a kombinácie substituentov. Mohli by tak byť modifikované farmaceutické prostriedky, ako je aspirín, vitamíny, penicilín a ďalšie, príliš časté na to, aby tu boli uvedené, polypetidy alebo proteíny a fragmenty peptidov s rôznymi funkciami a molekulovými hmotnosťami, rôzne typy buniek, povrchy pre biomateriály, skoro akákoľvek látka. Pojem „proteín“ tak , ako je tu používaný, by mal byť chápaný tak, že zahrnuje peptidy a polypeptidy , ktoré sú polymérmi aminokyselín. Pojem „biomateriál“ znamená taký materiál, typicky syntetický, niekedy vyrobený z plastu, ktorý je vhodný na implantovanie do živého tela, aby sa tak opravili poškodené alebo choré časti. Príkladom biomateriálu sú umelé krvné cievy.
Jeden PEG-derivát s priamym reťazcom podľa vynálezu pre biologické a biotechnologické aplikácie má základnú štruktúru vzorca R-CH2CH2-(OCH2CH2)n-Y. PEG monomér OCH2CH2 je výhodne v podstate nesubstituovaný a nevetvený pozdĺž polymémej základnej kostry. Index „n“ môže znamenať číslo od 5 do 3 000, typickým rozmedzím je 5 až 2 200, čo zodpovedá molekulovej hmotnosti 220 až 100 000. Ešte typickejším rozmedzím je rozmedzie od 34 do 1 100, čo zodpovedá molekulovým hmotnostiam od 1 500 do 50 000. Väčšina aplikácií sa uskutočňuje s molekulovými hmotnosťami od 2 000 do 5 000, čo zodpovedá hodnote indexu n od 45 do 110.
V uvedenom vzorci Y znamená skupinu -SO2-CH=CH2- alebo -SO2-CH2-CH2-X, v ktorom X znamená atóm halogénu. R znamená skupinu, ktorá môže byť rovnaká ako Y alebo môže byť iná ako Y. R môže znamenať HO-, H3CO-, CH2=CH-SO2-, C1-CH2-CH2-SO2- alebo polymér aktivujúci skupinu inú ako CH2=CH-SO2- a C1-CH2, -CH-, -SO2 -tak, ako je to uvedené v uvedených patentoch a publikovaných patentových prihláškach.
Aktívne polyméme deriváty sú vo vode rozpustné, hydrolyticky stabilné a poskytujú vo vode rozpustné a hydrolyticky stabilné väzby s tiolovými skupinami. Tieto deriváty sú považované za nekonečne rozpustné vo vode alebo približujúce sa tejto rozpustnosti a môžu umožňovať inak nerozpustným molekulám vchádzať do roztoku, ak sú konjugované s týmto derivátom.
Hydrolyticky stabilné deriváty znamenajú, že väzba medzi polymémou a sulfónovou časťou je stabilná vo vode a že vinylsulfónová skupina nereaguje s vodou pri pH menšom ako 11 po dlhší čas aspoň niekoľkých dní a potencionálne nekonečne, ako je to uvedené v príklade 3. Aktivovaný etylsulfón môže byť prevedený na vinylsulfón v podmienkach alkalického pH s rovnakou výslednou stabilitou. Hydrolytická stabilita tiolovej väzby znamená, že konjugáty aktivovaného polyméru a látky nesúce fiolovú skupinu sú stabilné na väzbe sulfóntiol predĺžený čas vo vodných prostrediach pri pH pod 11. Od väčšiny proteínov je možné očakávať, že stratia svoju aktivitu v alkalickom pH 11 alebo vyššom, tým by malo byť odborníkovi z oblasti techniky jasné, že mnohé aplikácie pre aktívne sulfónové PEG deriváty sa budú uskutočňovať pri pH menšom ako 11 bez ohľadu na stabilitu sulfónovej časti pri vyššom pH.
Aby boli užitočné na modifikáciu proteínu a ďalších látok je potrebné, aby bol sulfón stabilný v čase dostatočnom na to, aby mohol zreagovať s reaktívnou tiolovou skupinou na proteíne alebo inej látke. Rýchlosť reakcie sulfónovej skupiny s tiolom sa mení podľa pH, ako je uvedené v príklade 2, od 2 do 30 minút, čo je oveľa rýchlejšie ako rýchlosť hydrolýzy, pokiaľ k nej dochádza. Od vinylsulfónu môžeme očakávať, že reaguje s tiolom v omnoho širšom rozmedzí reakčných časov, pretože je stabilný dlhší čas. V podmienkach alkalického pH chlóretylsulfón nie je hydrolyzovaný, ako je to uvedené v príklade 3, ale je prevedený na vinylsulfón, ktorý zostáva stabilný niekoľko dní a je dokonca reaktívnejší s tiolovými skupinami. Na účely modifikovania vlastností zlúčenín je možné teda aktívny etylsulfón považovať za hydrolyticky stabilný po predĺžený čas v širšom rozmedzí pH.
O iných vo vode rozpustných polyméroch ako PEG sa predpokladá, že sú vhodné na podobné modifikácie a aktivácie aktívnou sulfónovou časťou. Medzi tieto ďalšie polyméry patrí polyvinylalkohol („PVA“), iné polyalkylénoxidy, ako je polypropylénglykol („PPG“) a podobné, polyoxyetylované polyoly, ako je polyoxyetylenovaný glycerol, polyoxyetylovaný sorbitol a polyoxyetylénová glukóza, a podobné. Tieto polyméry môžu znamenať homopolyméry alebo náhodné, alebo blokové kopolyméry a terpolyméry odvodené od monomérov uvedených polymérov s priamym reťazcom alebo s rozvetveným reťazcom, alebo substituované, alebo nesubstituované podobne ako PEG, ale s aspoň jedným aktívnym miestom dostupným pre reakciu, pri ktorej sa tvorí sulfónová časť.
Nasledujúci príklad 1 znázorňuje syntézu, izoláciu a charakterizáciu polyetylénglykol-chlóretyl-sulfón po príprave polyetylénglykol-vinylsulfónu z chlóretylsulfónu. Príprava iných polymémych sulfónov s reakčným miestom na druhom atóme uhlíka od sulfónovej skupiny je podobná a stupne tejto prípravy by mali byť jasné odborníkom z oblasti techniky na základe uvedeného príkladu 1 a uvedeného zoznamu polymérov.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Syntéza Reakčné stupne je možné ilustrovať nasledujúcimi reakciami:
1. PEG-OH + CH3SO2C1 -> PEG-OSO2CH3
2. PEG-OSOpCH. + HSCH2CH2OH -> PEG-SCH2CH2OH
3. PEG-SCH2CH2OH + H2O2 -> PEG-SO2CH2CH2OH
4. PEG-SO2CH2CH2OH + SOC12 -> PEG-SO2CH2CH2C1
5. PEG-SO2CH2CH2C1 + NaOH -> PEG-SO2-CH=CH2 + + HC1
Každá z uvedených reakcií je podrobne opísaná.
Reakcia 1
Reakcia 1 znamená prípravu metansulfonylesteru polyetylén-glykolu, ktorý sa tiež nazýva metansulfonát alebo mezylátpoly-etylénglykolu. Tozylát a halogenidy sa môžu pripravovať podobnými postupmi, o ktorých sa predpokladá, že sú známe odborníkom z oblasti techniky.
Pri príprave mezylátu sa azeotropickou destiláciou v 150 ml toluénu vysuší 25 g PEG s molekulovou hmotnosťou 3 400. Pri sušení PEG sa približne polovica toluénu oddestiluje. K toluénu a PEG roztoku sa pridá 40 ml suchého dichlórmetánu a zmes sa ochladí v ľadovom kúpeli. K ochladenému roztoku sa pridá 1,230 ml destilovaného metánsulfonylchloridu, čo je 1,06 ekvivalentu vzhľadom na PEG hydroxylové skupiny, a 2,664 ml suchého trietylamidu, čo je 1,3 ekvivalentu vzhľadom na PEG hydroxylové skupiny. „Ekvivalent“ tak, ako sa tu používa, znamená množstvo zlúčeniny, ktoré reaguje s ekvivalentným množstvom PEG hydroxylových skupín.
Reakcia sa nechá stáť cez noc. Počas tohto času sa ohreje na teplotu miestnosti. Vyzráža sa trietylamoniumhydrochlorid a zrazenina sa odstráni odfiltrovaním. Potom sa objem zníži na rotačnom odparovači na 20 ml. Pridaním 100 ml ochladeného suchého etyléteru sa vyzráža mezylát. NMR analýza ukázala 100 % konverziu hydroxylových skupín na mezylátové skupiny.
Reakcia 2
Reakcia 2 znamená tvorbu polyetylénglykol-merkaptoetanolu reakciou mezylátu s merkaptoetanolom. Táto reakcia spôsobí, že metylsulfonátová skupina je vytlačená z PEG. Síra v merkaptoetanolovej skupine je napojená priamo na atóm uhlíka v základnej kostre atóm uhlíka - atóm uhlíka PEG.
Dvadsať gramov mezylátu z reakcie 1 sa rozpusti v 150 ml destilovanej vody. Roztok mezylátu a vody sa ochladí ponorením do ľadového kúpeľa. K ochladenému roztoku sa pridá 2,366 ml merkaptoetanolu, čo sú 3 ekvivalenty vzhľadom na PEG hydroxylové skupiny. Pridá sa tiež 16,86 ml 2N zásady NaOH. Táto reakcia sa varí pod spätným chladičom 3 h, čo znamená, že pary z reakcie sa kontinuálne kondenzujú a nechajú sa stekať späť do reakcie.
Polyetylénglykol-merkaptoetanolový produkt sa extrahuje trikrát po 25 ml dichlórmetánom. Organické frakcie sa spoja a vysušia sa nad bezradným síranom horečnatým. Objem sa zníži na 20 ml a produkt sa vyzráža pridaním 150 ml studeného suchého éteru.
NMR analýza v d,;-DMSO (dimetylsulfoxid) poskytla pre PEG-SCH2CH2OH nasledujúce maximá: 2,57 ppm, triplet, -CH2-S-, 2,65 ppm, triplet, -S-CH2-, 3,5 ppm, singlet základnej kostry a 4,76 ppm, triplet, -OH. Hydroxylové maximum pri 4,76 pmm ukazuje na 81 % substitúciu. Ale maximum pri 2,65 ppm pre -S-CH2- ukazuje na 100 % substitúciu. Bolo pozorované, že hydroxylové maximá dávajú často nižšie percentá substitúcie a tak maximum pri 2,65 ppm pre -S-CH2- je považované za odôvodnené a potvrdzuje 100 % substitúciu.
Reakcia 3
Reakcia 3 znamená peroxidovú oxidáciu polyetylénglykol-merkaptoetanolového produktu, kde sa síra prevádza na sulfón. Získa sa tak PEG-etanolsulfón.
gramov PEG-SCH2CH2OH sa rozpustí v 30 ml 0,123M roztoku kyseliny wolfrámovej a roztok sa ochladí v ľadovom kúpeli. Roztok kyseliny wolfrámovej sa pripraví rozpustením kyseliny v roztoku hydroxidu sodného s pH 11,5 a následnou úpravou pH ľadovou kyselinou octovou na hodnotu 5,6. K roztoku kyseliny wolfrámovej a polyetylénglykol-merkaptoetanol sa pridá 20 ml destilovanej vody a 2,876 ml 30 % (hmotn.) peroxidu vodíka. Reakcia sa uskutočňuje za ohriatia na teplotu miestnosti cez noc.
Oxidovaný produkt bol trikrát extrahovaný 25 ml dávkami dichlórmetánom. Spojené organické frakcie sa premyjú zriedeným vodným hydrogenuhličitanom sodným a vysušia sa bezradným síranom horečnatým. Objem sa zredukuje na 20 ml. PEG-etanolsulfónový produkt sa vyzráža pridaním do ochladeného suchého etyléteru.
NMR analýza v d6-DMSO (dimetylsulfoxid) poskytla pre PEG-SO2CH2CH2OH nasledujúce maximá: 3,25 ppm, triplet, -CH2-SO2-, 3,37 ppm, triplet, -SO2-CH2-, 3,50 ppm, singlet základnej kostry, 3,77 ppm, triplet, -CH2OH a 5,04 ppm, triplet, -OH. Hydroxylové maximum pri 5,04 ppm ukazuje na 85 % substitúciu. Ale maximum pri 3,37 ppm pre -SO2-CH2 - ukazuje na 100 % substitúciu. Toto maximum je považované za odôvodnejšie.
Reakcia 4
Reakcia 4 znamená konečný stupeň syntézy, izoláciu a charakterizáciu polyetylénglykol-chlóretyl-sulfónu.
SK 284527 Β6
Na syntézu produktu sa 20 g PEG-SO2CH2CH2OH rozpustí v 100 ml čerstvo predestilovaného tionylchloridu. Tento roztok sa varí pod spätným chladičom cez noc. Tionylchlorid bol predestilovaný cez chinolín. Nadbytok tionylchloridu sa odstráni destiláciou. Pridá sa 50 ml toluénu a 50 ml dichlórmetánu a odstráni sa oddestilovaním.
Na izoláciu produktu sa PEG-chlóretylsulfón rozpustí v 20 ml dichlórmetánu a vyzráža sa pridaním k 100 ml ochladeného suchého etyléteru. Produkt sa izoluje prekryštalizovaním zrazeniny z 50 ml etylacetátu.
Na charakterizáciu produktu sa použije NMR. NMR analýza v de-DMSO (dimetylsulfoxid) poskytla pre PEG-SO2CH2CH2C1 nasledujúce maximá: 3,50 ppm, základná kostra, 3,64 ppm, triplet, -CH2SO2-, 3,80, triplet, -SO2-CHj-. Pri 3,94 ppm sa nachádza triplet s nízkou hydroxylovou nečistotou. Výpočet percent substitúcie z tohto spektra bol náročný vzhľadom na blízkosť dôležitých maxím a veľkého maxima základnej kostry.
Reakcia 5
Reakcia 5 znamená prevedenie polyetylénglykol-chlóretylsulfón z reakčného stupňa 4 na polyetylénglykol-vinylsulfón a izoláciu a charakterizáciu vinylsulfónového produktu.
PEG-vinylsulfón sa ľahko pripraví rozpustením pevného PEG-chlóretylsulfónu v dichlórmetánovom rozpúšťadle a nasledujúcim pridaním dvoch ekvivalentov zásady NaOH. Roztok sa sfiltruje, aby sa odstránila zásada, a rozpúšťadlo sa odparí, aby sa izoloval konečný produkt PEG-SO2-CH=CH2, PEG-vinylsulfón.
PEG-vinylsulfón bol charakterizovaný NMR analýzou v dg-DMSO (dimetylsulfoxid). NMR analýza ukazovala nasledujúce maximá: 3,50 ppm, základná kostra, 3,73 ppm, triplet, -CH2-SO2-, 6,21 ppm, triplet, =CH2, 6,97 ppm, dublet dubletov, -SO2-CH2- Maximum pri 6,97 pre -SO2-CH- ukazovalo na 84 % substitúciu. Maximum pri 6,21 ppm pre -CH2 ukazovalo na 94 % substitúciu. Titrácia merkaptoetanolom a 2,2'-ditiodipyrinidom ukazovala na 95 % substitúciu.
Príklad 2
Selektívna reaktivita pre tiol
Príklad 2 ukazuje, že PEG-vinylsulfón a jeho prekurzor PEG-chlóretylsulfón sú významne reaktívnejšie s tiolovými skupinami (-SH) ako s aminovými (NH2) alebo mínovými skupinami (-NH-). Zlúčeniny obsahujúce tiolové skupiny sú organické zlúčeniny, ktoré pripomínajú alkoholy a ktoré obsahujú hydroxylovú skupinu s tým, že v tioloch je atóm kyslíka hydroxylovej skupiny nahradený atómom síry. Tioly tiež nazývame sulfhydryly alebo merkaptany. PEG-vinylsulfón obsahuje vinylsulfónovú skupinu -SO2-CH=CH2-. PEG-chlóretylsulfón obsahuje chlóretylsulfónovú skupinu -SO2CH2CH2C1.
Selektivita na tioly je dôležitá pri modifikácii proteínu, pretože znamená, že cysteinové jednotky (obsahujúce -SH) budú modifikované výhodne pred lyzínovými jednotkami a histidínovými jednotkami. Selektivita PEG-vinylsulfónu pre tioly znamená, že PEG môže byť selektívne pripojený na cysteinové jednotky, čím chráni proteínovú aktivitu špecifikovaných proteínov a reguluje počet molekúl PEG pripojených na proteín.
Relatívna reaktivita PEG-vinylsulfónu s tiolovými a amínovými skupinami sa stanoví meraním rýchlosti reakcie PEG-vinylsulfónu s metylesterem N-alfa-acetylyzínu a s merkaptoetanolom. Metylester N-alfa-acetylyzínu je lyzínový model obsahujúci aminovú skupinu, skrátene sa označuje Lys-NH2. Merkaptoetanol slúži ako cysteínový model obsahujúci tiolovú skupinu a jeho skratka je Cys-SH. Relatívna reaktivita PEG-chlóretylsulfónu sa stanovuje podobným spôsobom. Táto molekula môže slúžiť ako „ochranná“ forma vinylsulfónu, pretože je stála v kyseline, ale pridaním zásady prechádza na PEG-vinylsulfón.
Reaktivita na PEG-vinylsulfón a PEG-chlóretylsulfónový prekurzor bola študovaná pri pH 8,0, pH 9,0 a pH 9,5. Pufre na úpravu pH boli: 0. IM fosforečnan pre pH 8,0 a 0,lM boritan na pH 9,0 a 9,5. Na meranie merkaptoetanolovej reaktivity sa k obidvom pufrom pridá 5 mM etyléndiamintetraoctovej kyseliny, aby sa zabránilo konverzii tiolu na disulfid.
Na reakciu PEG-derivátov podľa vynálezu s Lys-NH2 sa 3 mM roztok PEG-derivátu pridá za miešania k 0,3 mM roztoku Lys-NH2 v príslušnom pufri pre každú z troch hodnôt alkalického pH. Reakcia sa sleduje pridaním fluóreskamínu k reakčnému roztoku, čím sa získa fluorescenčný derivát z reakcie s ostávajúcimi aminovými skupinami. Stupeň sledovania sa uskutočňuje pridaním 50 1 reakčnej zmesi k 1,950 ml fosforečňanového pufra s pH 8,0, nasleduje pridanie 1,0 ml roztoku fluoreskamínu za intenzívneho miešania. Roztok fluoreskamínu obsahoval 0,3 ml fluoreskamínu na ml acetónu.
Fluorescencia sa meria 10 minút po zmiešaní. Excitácia sa uvádza pri vlnovej dĺžke 390 nm. K emisii svetla dochádza pri 475 nm. Počas 24 hod. nebola pozorovaná žiadna reakcia ani pre PEG-vinylsulfón, ani pre PEG-chlóretylsulfón pri pH 8.0. Pri pH 9,5 bola reakcia pomalá, ale všetky aminokyseliny zreagovali po niekoľkých dňoch.
Pri reakcii PEG-vinylsulfónu a PEG-chlóretylsulfónového prekurzora s Cys-NH2 sa 2mM roztok PEG-derivátu pridá k 0,2 mM roztoku Cys-SH v príslušnom pufri pre každú z troch hodnôt pH. Reakcia sa sleduje pridaním 4-ditiopyridínu k reakčnému roztoku. 4-ditiopyridínová zlúčenina reaguje s Cys-SH. Získa sa tak 4-tiopyridón, ktorý absorbuje ultrafialové svetlo.
Stupeň sledovania sa uskutočňuje pridaním 50 1 reakčnej zmesi k 0,950 ml 0,1 M fosforečňanového pufra pri pH 8,0 obsahujúceho 5 mM EDTA s nasledujúcim pridaním 1 ml 2 mM 4-ditiopyridínu v rovnakom pufri.
Absorbancia 4-tiopyridónu sa meria pri 324 nm. PEG-vinylsulfón ako aj PEG-chlóretylsulfón mali reaktivitu na Cys-SH, pričom PEG-vinylsulfón má väčšiu reaktivitu. Pri pH 9,0 je reakcia ukončená počas 2 min. použitím vínylsulfónu a počas 15 minút použitím chlóretylsulfónu. Tieto reakcie boli však príliš rýchle na stanovenie presných rýchlostných konštánt. Pri pH 8,0 boli reakcie pomalšie, ale stále ešte úplné počas 1 hod. s vinylsulfónom a 3 hod. s chlóretylsulfónom. Konverzia chlóretylsulfónu na vinylsulfón je výrazne pomalšia ako reakcia vinylsulfónu s CysSH. Reakčná rýchlosť chlóretylsulfónu s Cys-SH sa zdá byť závislá od rýchlosti konverzie chlóretylsulfónu na vinylsulfón. Ale tieto reakčné rýchlosti boli ešte stále o mnoho rýchlejšie ako rýchlosti s Lys-NH2-.
Uvedené kinetické štúdie ukazujú na nasledovné. PEG-vinylsulfón je oveľa reaktívnejší s tiolovými skupinami ako s aminovými skupinami, čo ukazuje na to, že pripojenie PEG-vinylsulfónu na proteín obsahujúci tak cysteínovú, ako aj lyzinovú skupinu, prebieha primáme reakciou s cysteínom. Pretože reaktivita amínových skupín je podobná reaktivite imínových skupín, reaktivita histidínových podjednotiek bude tiež omnoho nižšia ako reaktivita s cysteínovými podjednotkami. Selektivita na tiolové skupiny je tiež zdôraznená pri nižších hodnotách pH pre PEG-chlóretylsulfón a PEG-vinylsulfón, aj keď reakcia PEG-chlóretylsulfónu je pomalšia.
SK 284527 Β6
Užitočnosť PEG-derivátov je obmedzená, pretože reagujú rýchlo s vodou, čo interferuje s pokusmi pripojiť tento derivát na molekuly a povrchy vo vodnom prostredí. Nasledujúci príklad ukazuje, že PEG-vinylsulfón a PEG-chlóretylsulfón sú stabilné vo vode.
Príklad 3
Hydrolytická stabilita
PEG-vinylsulfón bol rozpustený v ťažkej vode, D2O, a sledovaný NMR. K reakcii nedošlo. Roztok PEG-chlóretylsulfónu poskytol PEG-vinylsulfón v ťažkej vode, ktorá bola purfovaná boritanom na pH 9,0. Monitorovanie NMR ukázalo, že PEG-vinylsulfón hneď ako je vyrobený, je 3 dni stabilný v ťažkej vode.
PEG-chlóretylsulfón je stabilný vo vode, pokiaľ sa roztok nestane zásaditým, potom sa prevedie na vinylsulfón. Konverzia na vinylsulfón bola demonštrovaná rozpustením PEG-chlóretylsulfónu vo vode pri pH 7 a v boritanovom pufri pri pH 9. PEG-derivát sa extrahuje do metylénchloridu. Odstránenie metylénchloridu pozorované NMR analýzou ukázalo, že PEG-chlóretylsulfón je stabilný pri neutrálnom pH 7,0 a reaguje so zásadou na PEG-vinylsulfón.
Vinylsulfón je stabilný vo vode niekoľko dní, dokonca i pri zásaditom pH. Značná hydrolytická stabilita a reaktivita špecifická na tiol PEG-vinylsulfón znamená, že PEG-vinylsulfón a jeho prekurzor sú vhodnými na modifikáciu molekúl a povrchov vo vodnom prostredí, ako je to uvedené v nasledujúcom príklade 4.
Príklad 4
Konjugácia proteínov
Modifikácia proteínov bola demonštrovaná pripojením PEG-derivátu na hovädzí sérový albumín (BSA) dvoma rôznymi spôsobmi. BSA je proteín. Prírodný nemodifikovaný BSA obsahuje cystínové skupiny, ktoré neobsahujú tiolové skupiny. Tieto cystínové jednotky sú viazané disulfidovými mostíkmi S-S.
Podľa prvého spôsobu sa m-PEG-vinylsulfón s molekulovou hmotnosťou 5000 nechá reagovať s nemodifikovaným BSA 24 hod. v 0,lM boritanovom pufri pri pH 9,5 a teplote miestnosti. Tento roztok obsahoval I mg BSA a 1 mg m-PEG-vinylsulfónu s molekulovou hmotnosťou 5000 na ml roztoku. Výsledky modelovej zlúčeniny z príkladu 2 ukázali, že lyzinové podjednotky ( a možno histidínové podjednotky) by boli modifikované za týchto relatívne zásaditých podmienok a v neprítomnosti voľných tiolových skupín dostupných pre túto reakciu.
Pripojenie na lyzinové podjednotky bolo demonštrované dvoma spôsobmi. Po prvé, vylučovacia chromatografia ukázala, že molekulová hmotnosť proteínu bola zvýšená približne o 50 %, čo ukazuje pripojenie približne 10 PEG na proteín. Po druhé, fluoreskamínová analýza ukázala, že počet lyzínových skupín v BSA molekule bol približne 10 x zmenšený.
Podľa druhého spôsobu sa BSA nechá zreagovať s tributylfosfínom. Zredukujú sa tak disulfidové väzby S-S na tiolové skupiny -SH, ktoré sú dostupné pre reakciu. Modifikovaný BSA sa potom nechá zreagovať s PEG-chlóretylsulfónom pri pH 8,0 v 0,1 M fosforečňanovom pufri pri teplote miestnosti 1 hod. Tento roztok obsahoval 1 mg modifikovaného BSA a 1 mg m-PEG-chlóretylsulfónu s molekulovou hmotnosťou 5000 na 1 ml roztoku. Tieto výsledky ukázali, že lyzinové skupiny neboli v týchto podmienkach reaktívne. Tiolové skupiny však boli reaktívne.
Pripojenie PEG na proteín bolo dokázané vylučovacou chromatografiou, ktorá ukázala zvýšenie molekulovej hmotnosti proteínu asi o 25 %. Fluoreskamínová analýza neukázala žiadnu zmenu v počte lyzínových jednotiek v proteíne, čo potvrdzuje, že k pripojeniu PEG nedochádza na lyzínových podjednotkách. Substitúcia v tiolových skupinách bola teda potvrdená.
Vynález je opísaný zvláštnymi príkladmi uskutočnenia. Predchádzajúci opis však nie je myslený ako obmedzenie vynálezu na uskutočnenia uvedené v príkladoch. Odborník z oblasti techniky by mal rozpoznať rôzne variácie, ktoré je možné urobiť v rozsahu tohto vynálezu, ako je opísané v predchádzajúcom opise. A naopak, tento vynález zahrnuje všetky alternatívy, modifikácie a ekvivalenty, ktoré spadajú do pravdivého ducha a rozsahu tohto vynálezu tak, ako je to definované v pripojených nárokoch.

Claims (15)

1. Vo vode rozpustný a izolovateľný aktivovaný polymér stabilný proti hydrolýze, vybraný zo skupiny pozostávajúcej z poly(alkylénoxidov), vrátane poly(propylénglykolu), poly(oxyctylovaných polyolov), vrátane polyetylénglykolu, poly(oxyetylovaného glycerolu), poly(oxyetylovaného sorbitolu) a poly(oxyetylovanej glukózy) a poly(olefmických alkoholov) vrátane poly(vinylalkoholu) a derivátov týchto polymérov, ktoré majú aspoň jednu aktívnu sulfónovú skupinu a všeobecný vzorec R-CH2-polymér-CH2-Y, v ktorom -CH2- skupiny obsahujú buď koncové uhlíkové skupiny polyméru, alebo koncové uhlíkové skupiny linkerovej časti polyméru, pričom tento polymér má od 5 až 3 000 monomémych jednotiek, a Y predstavuje aspoň jednu aktívnu sulfónovú skupiny vybratú zo skupiny pozostávajúcej zo skupiny -SO2-CH=ČH2 a -SO2-CH2-CH2-X, v ktorej X znamená atóm halogénu, a ich aktívne sulfónové deriváty, pričom R má rovnaký alebo rozdielny význam ako Y a kde ak polymérom je poly(etylénglykol), potom má tento polymér všeobecný vzorec R-CH2CH2-(OCH2CH2 )nY, v ktorom n je číslo 5 až 3000.
2. Vo vode rozpustný a izolovateľný aktivovaný polymér stabilný proti hydrolýze podľa nároku 1, pričom polymér je vybratý zo skupiny pozostávajúcej z aktivovaných polymérov s činkovitou štruktúrou, kde R znamená skupinu, ktorá je vybratá zo skupiny pozostávajúcej zo skupiny HO, -HjCO-, CH2=CH-SO2-, X-CH2-CH2-SO2- a ich derivátov, alebo aktivujúce skupiny iné ako CH2=CH-
-SO2 - alebo X-CH2 -CH2-SO2-a ich derivátov.
3. Vo vode rozpustný a izolovateľný aktivovaný polymér stabilný proti hydrolýze podľa nároku 1 alebo 2, ktorý sa získava na výrobu farmaceutického prostriedku.
4. Hydrolyticky stabilný, biologicky aktívny konjugát, ktorý je vybratý zo skupiny, ktorá obsahuje biologicky aktívnu molekulu s reaktívnou tiolovou skupinou a vo vode rozpustný polymérny derivát s aktívnou sulfónovou skupinou tvoriacu väzbu s tiolovou skupinou, dve biologicky aktívne časti, ktoré môžu byť rovnaké alebo rôzne, aspoň jedna biologicky aktívna časť má reaktívnu tiolovú skupinu, a vo vode rozpustný činkovitý polymérny derivát, ktorý má reaktívnu skupinu na oboch koncoch, aspoň jedna skupina má aktívnu sulfónovú skupinu, a tvorí väzbu s tiolovou skupinou aspoň jednej biologicky aktívnej časti, druhá biologicky aktívna časť tvorí väzbu s inými reaktívnymi časťami na polyméri a prvý proteín s tiolovou skupinou, druhý proteín s aminovou skupinou a aktivovaný vo vode rozpustný polymér, ktorý má aspoň jednu aktívnu sulfónovú skupinu, ktorá je selektívna pre reakciu s tiolovými skupinami, a aspoň jednu ďalšiu skupinu, ktorá je selektívna pre reakciu s amínovými skupinami, tiolová skupina tvorí hydrolyticky stabilnú väzbu so sulfónovou skupinou na uvedenom polyméri, a amínová časť tvorí hydrolyticky stabilnú väzbu s ďalšou reaktívnou časťou na polyméri.
5. Hydrolyticky stabilný, biologicky aktívny konjugát podľa nároku 4, ktorý je vybratý zo skupiny pozostávajúcej z konjugátov, v ktorých biologicky aktívna molekula znamená proteín a reaktívna tiolová skupina je obsiahnutá v cysteínovej časti proteínu, konjugátov, v ktorých polymérny derivát je hydrolyticky stabilný a je vybratý zo skupiny pozostávajúcej z poly(alkylénoxidov), poly(oxyetylovaných polyolov) a poly(olefínických alkoholov), konjugátov všeobecného vzorca PEG-SO2-CH2-CH2-S-W, v ktorom W znamená biologicky aktívnu molekulu a konjugátov všeobecného vzorca W-S-CH2-CH2-SO2-CH2-CH2-PEG)„-SO2-CH2-CH2-S-W, v ktorom W znamenajú biologicky aktívne molekuly, ktoré môžu byť rovnaké alebo rôzne.
6. Hydrolyticky stabilný, biologicky aktívny konjugát podľa nároku 4, v ktorom biologicky aktívne molekuly sú vybraté zo skupiny pozostávajúcej z proteínov, farmaceutických látok, buniek, vitamínov a ich kombinácií.
7. Hydrolyticky stabilný, biologicky aktívny konjugát podľa nároku 4, v ktorom aktívna auliónová časť znamená vinylsulfón alebo halogénetylsulfón a ďalšia reaktívna časť je selektívna pre reakciu s amínovými skupinami.
8. Hydrolyticky stabilný, biologicky aktívny konjugát podľa nárokov 4 až 7, ktorý sa získava na prípravu farmaceutického prostriedku.
9. Biomateriál, vyznačujúci sa tým, že obsahuje povrch a aspoň jeden vo vode rozpustný polymérny derivát napojený na tento povrch, polymérny derivát je vybratý zo skupiny pozostávajúcej z poly(alkylénoxidov), poly(oxyetylovaných polyolov) a poly(olefinických alkoholov) s aspoň jednou aktívnou sulfónovou skupinou.
10. Spôsob syntézy izolovateľného vo vode rozpustného aktivovaného organického polyméru, ktorý má aktívnu sulfónovú skupinu, pričom väzba medzi polymérom a sulfónovou skupinou je stabilná proti hydrolýze, vyznačujúci sa tým, že obsahuje stupne, ktoré sú vybraté z naviazania sulfónovej skupiny obsahujúcej atóm síry priamo na atóm uhlíka polyméru a následné prevedenie skupiny obsahujúcej atóm síry na aktívnu sulfónovú skupinu, pripojenie aktívnej sulfónovej skupiny obsahujúcej väzbovú skupinu a ďalšiu aktívnu skupinu na polymérny derivát, ktorý je vybratý zo skupiny pozostávajúcej z poly(alkylénoxidov), poly(oxyetylovaných polyolov) a poly(olefinických alkoholov) s funkčnou skupinou inou ako je sulfónová skupina, pričom funkčná skupina je selektívna pre inú aktívnu skupinu na skupine linkera, zreagovanie polyetylénglykolu, ktorý má aspoň jednu aktívnu hydroxylovú skupinu, so zlúčeninou za vzniku buď esterom, alebo halogenidom substituovaného polyetylénglykolu, zreagovanie esterom alebo halogenidom substituovaného polyetylénglykolu s merkaptoetanolom, čím sa substituuje estcrová alebo halogenidová skupina merkaptoetanolovou skupinou, zreagovanie merkaptoetanolom substituovaného polyetylénglykolu s oxidačným činidlom, čím sa zoxiduje atóm síry v merkaptoetanolovej skupine na sulfón, zreagovanie sulfónu so zlúčeninou, čím sa prevedie hydroxylová skupina merkaptoetanolovej skupiny na esterovú alebo halogenidovú skupinu a zreagovanie etylsulfónu so zásadou za vzniku polyetylén-glykol-vinylsulfónu.
11. Spôsob prípravy konjugátu látky a vo vode rozpustného aktivovaného polyméru, ktorý je vybratý zo skupiny pozostávajúcej z poly(alkylénoxidov), poly(oxyetylovaných polyolov) a poly(olefinických alkoholov) s aspoň jednou sulfónovou skupinou, vyznačujúci sa t ý m , že obsahuje stupne zreagovania látky s aktivovaným polymérom, ktorý má aktívnu sulfónovú skupinu, a vytvorenie väzby medzi látkou a polymémym derivátom.
12. Spôsob prípravy podľa nároku 11,vyznačujúci sa tým, že zahrnuje zreagovanie látky, ktorou je biologicky aktívna molekula s reaktívnou tiolovou skupinou, s polyetylénglykolovým derivátom s aktívnou sulfónovou skupinou a vytvorenie väzby medzi sulfónovou skupinou a tiolovou skupinou.
13. Spôsob prípravy podľa nárokov 11 a 12, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje zreagovanie látky, ktorou je biologicky aktívna molekula všeobecného vzorca W-SH, v ktorom W znamená biologicky aktívnu časť a SH znamená aktívnu tiolovú skupinu, s polyetylénglykolovým derivátom všeobecného vzorca R-CH2-CH2-(0CH2CH2)n-Y, v ktorom n znamená číslo 5 až 3000, Y znamená skupinu vzorca -SO2CH=CH2 a H znamená skupinu vybratú zo skupiny pozostávajúcej z HO, -H3CO-, X-CH2-CH2-SO2-, kde X znamená atóm halogénu a CH2=CH-SO2, a vytvorenie väzby medzi tiolovou skupinou a aspoň jednou aktívnou sulfónovou skupinou poly(etylénglykolového) derivátu.
14. Spôsob prípravy podľa ktoréhokoľvek z nárokov 11 až 13, vyznačujúci sa t ý m , že zahrnuje reakciu látky, ktorou je proteín s reaktívnou tiolovou skupinou, s poly(etylénglykol)ovým derivátom všeobecného vzorca R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-Y, v ktorom n znamená číslo 5 až 3000, Y znamená skupinu vzorca -SO2CH=CH2 a R znamená skupinu vybratú zo skupiny pozostávajúcej z HO, - H3CO-, X-CH2-CH2-SO2-, kde X znamená atóm halogénu a CH2 =CH-SO2, a vytvorenie väzby medzi tiolovou skupinou a aspoň jednou aktívnou sulfónovou skupinou polyetylénglykolového derivátu.
15. Spôsob prípravy podľa ktoréhokoľvek z nárokov 11 až 14, vyznačujúci sa tým, že sa vyrobí konjugát, ktorý jc vybratý zo skupiny pozostávajúcej z: konjugátu všeobecného vzorca R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-W, v ktorom n znamená číslo 5 až 3000 a R znamená skupinu, ktorá je vybratá zo skupiny pozostávajúcej z HO- a - H3CO-, konjugátu všeobecného vzorca W-S-CH2-CH2-SO2-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-W, v ktorom n znamená číslo 5 až 3000, konjugátu všeobecného vzorca R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-proteín, v ktorom n znamená číslo 5 až 3000 a R znamená skupinu, ktorá je vybratá zo skupiny pozostávajúcej z HO- a-H3CO-, a konjugátu všeobecného vzorca proteín-S-CH2-CH2-S02-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-S02-CH2-CH2-S-proteín, v ktorom n znamená číslo 5 až 3000.
SK608-96A 1993-11-12 1994-11-14 Vodorozpustné aktívne polyetylénglykolové sulfóny a spôsob ich prípravy SK284527B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/151,481 US5446090A (en) 1993-11-12 1993-11-12 Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
PCT/US1994/013013 WO1995013312A1 (en) 1993-11-12 1994-11-14 Water soluble active sulfones of poly(ethylene glycol)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK60896A3 SK60896A3 (en) 1997-04-09
SK284527B6 true SK284527B6 (sk) 2005-05-05

Family

ID=22538958

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK608-96A SK284527B6 (sk) 1993-11-12 1994-11-14 Vodorozpustné aktívne polyetylénglykolové sulfóny a spôsob ich prípravy

Country Status (26)

Country Link
US (6) US5446090A (sk)
EP (2) EP1176160A3 (sk)
JP (1) JP3114998B2 (sk)
KR (1) KR100225746B1 (sk)
CN (1) CN1085689C (sk)
AT (1) ATE215577T1 (sk)
AU (1) AU687937B2 (sk)
BG (1) BG63399B1 (sk)
BR (1) BR9408048A (sk)
CA (1) CA2176203C (sk)
CZ (1) CZ295640B6 (sk)
DE (1) DE69430317T2 (sk)
DK (1) DK0728155T3 (sk)
EE (1) EE03448B1 (sk)
ES (1) ES2173943T3 (sk)
FI (1) FI117441B (sk)
HK (1) HK1042312A1 (sk)
HU (1) HU225649B1 (sk)
NO (1) NO315377B1 (sk)
NZ (1) NZ276313A (sk)
PL (1) PL180149B1 (sk)
RO (2) RO118434B1 (sk)
RU (1) RU2176253C2 (sk)
SK (1) SK284527B6 (sk)
UA (1) UA58481C2 (sk)
WO (1) WO1995013312A1 (sk)

Families Citing this family (442)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6143866A (en) * 1989-07-18 2000-11-07 Amgen, Inc. Tumor necrosis factor (TNF) inhibitor and method for obtaining the same
US6552170B1 (en) * 1990-04-06 2003-04-22 Amgen Inc. PEGylation reagents and compounds formed therewith
US6057287A (en) 1994-01-11 2000-05-02 Dyax Corp. Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5583114A (en) 1994-07-27 1996-12-10 Minnesota Mining And Manufacturing Company Adhesive sealant composition
US5672662A (en) * 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
NZ503548A (en) 1996-02-09 2001-09-28 Amgen Inc A fusion protein comprising an IL-1ra receptor antagonist with a constant domain of human immunoglobulin at the carboxy terminus
US5747639A (en) * 1996-03-06 1998-05-05 Amgen Boulder Inc. Use of hydrophobic interaction chromatography to purify polyethylene glycols
TW555765B (en) * 1996-07-09 2003-10-01 Amgen Inc Low molecular weight soluble tumor necrosis factor type-I and type-II proteins
US8003705B2 (en) * 1996-09-23 2011-08-23 Incept Llc Biocompatible hydrogels made with small molecule precursors
WO1998012274A1 (en) * 1996-09-23 1998-03-26 Chandrashekar Pathak Methods and devices for preparing protein concentrates
US6072040A (en) * 1996-10-15 2000-06-06 Medical Analysis Systems, Inc. Stabilized conjugates of uncomplexed subunits of multimeric proteins
JP4771563B2 (ja) 1996-12-06 2011-09-14 アムジエン・インコーポレーテツド Ｉｌ−１媒介疾患を処置するためにｉｌ−１インヒビターを使用する組合せ療法
ES2207759T3 (es) 1996-12-06 2004-06-01 Amgen Inc. Terapia de combinacion que utiliza una proteina de union del factor de necrosis tumoral (tnf) en el tratamiento de enfermedades inducidas por el tnf.
US6743248B2 (en) 1996-12-18 2004-06-01 Neomend, Inc. Pretreatment method for enhancing tissue adhesion
US20040176801A1 (en) * 1997-03-12 2004-09-09 Neomend, Inc. Pretreatment method for enhancing tissue adhesion
US6371975B2 (en) 1998-11-06 2002-04-16 Neomend, Inc. Compositions, systems, and methods for creating in situ, chemically cross-linked, mechanical barriers
US20030191496A1 (en) * 1997-03-12 2003-10-09 Neomend, Inc. Vascular sealing device with microwave antenna
AU7282698A (en) * 1997-05-15 1998-12-08 Theratech, Inc. Targeted delivery to t lymphocytes
US6284246B1 (en) 1997-07-30 2001-09-04 The Procter & Gamble Co. Modified polypeptides with high activity and reduced allergenicity
US6251866B1 (en) 1997-08-05 2001-06-26 Watson Laboratories, Inc. Conjugates targeted to the interleukin-2 receptor
US6168784B1 (en) 1997-09-03 2001-01-02 Gryphon Sciences N-terminal modifications of RANTES and methods of use
WO1999011202A1 (en) * 1997-09-05 1999-03-11 Icet, Inc. Biomimetic calcium phosphate implant coatings and methods for making the same
US6407218B1 (en) * 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7229841B2 (en) * 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6066673A (en) * 1998-03-12 2000-05-23 The Procter & Gamble Company Enzyme inhibitors
PT1061954E (pt) * 1998-03-12 2004-10-29 Nektar Therapeutics Al Corp Derivados de poli(etileno glicol) com grupos reactivos proximos
BR9909130A (pt) 1998-03-26 2000-12-19 Procter & Gamble Variantes de protease de serina tendo substituições de amino-ácido
US6495136B1 (en) 1998-03-26 2002-12-17 The Procter & Gamble Company Proteases having modified amino acid sequences conjugated to addition moieties
US6908757B1 (en) 1998-03-26 2005-06-21 The Procter & Gamble Company Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions
US6632457B1 (en) * 1998-08-14 2003-10-14 Incept Llc Composite hydrogel drug delivery systems
US6994686B2 (en) * 1998-08-26 2006-02-07 Neomend, Inc. Systems for applying cross-linked mechanical barriers
US6458147B1 (en) 1998-11-06 2002-10-01 Neomend, Inc. Compositions, systems, and methods for arresting or controlling bleeding or fluid leakage in body tissue
DK1400551T3 (da) 1998-08-28 2007-10-15 Amylin Pharmaceuticals Inc Polyamidkæder med præcis længde og deres konjugater med proteiner
US6551613B1 (en) * 1998-09-08 2003-04-22 Alza Corporation Dosage form comprising therapeutic formulation
CA2344675A1 (en) 1998-09-22 2000-03-30 The Procter & Gamble Company Personal care compositions containing active proteins tethered to a water insoluble substrate
US6660843B1 (en) * 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6899889B1 (en) * 1998-11-06 2005-05-31 Neomend, Inc. Biocompatible material composition adaptable to diverse therapeutic indications
US6830756B2 (en) * 1998-11-06 2004-12-14 Neomend, Inc. Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites
US7279001B2 (en) * 1998-11-06 2007-10-09 Neomend, Inc. Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites
US6949114B2 (en) 1998-11-06 2005-09-27 Neomend, Inc. Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites
JP2002531217A (ja) * 1998-12-04 2002-09-24 チャンドラシェカー ピー． パサック， 生体適合性架橋ポリマー
US6958212B1 (en) * 1999-02-01 2005-10-25 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds
EP2311895B1 (en) 1999-02-01 2017-04-12 Eidgenössische Technische Hochschule Zürich Biomaterials formed by nucleophilic addition reaction to conjugated unsaturated groups
WO2000078285A1 (en) * 1999-06-18 2000-12-28 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Controlled release of therapeutics by in-situ entrapment by matrix cross-linking
EP1210415A2 (en) 1999-07-22 2002-06-05 The Procter & Gamble Company Subtilisin protease variants having amino acid substitutions in defined epitope regions
KR20020021395A (ko) 1999-07-22 2002-03-20 데이비드 엠 모이어 입체적으로 보호된 ｃｌｉｐ 부위를 갖는 프로테아제콘쥬게이트
US6946128B1 (en) 1999-07-22 2005-09-20 The Procter & Gamble Company Protease conjugates having sterically protected epitope regions
BR0012693A (pt) 1999-07-22 2002-04-09 Procter & Gamble Variante, de protease tipo subtilisina; composição de limpeza; e composição de cuidado pessoal
US7008635B1 (en) * 1999-09-10 2006-03-07 Genzyme Corporation Hydrogels for orthopedic repair
US6303119B1 (en) 1999-09-22 2001-10-16 The Procter & Gamble Company Personal care compositions containing subtilisin enzymes bound to water insoluble substrates
US7074878B1 (en) * 1999-12-10 2006-07-11 Harris J Milton Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom
US6348558B1 (en) 1999-12-10 2002-02-19 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom
AU782580B2 (en) 2000-01-10 2005-08-11 Maxygen, Inc. G-CSF conjugates
DK1257295T3 (da) 2000-02-11 2009-08-10 Bayer Healthcare Llc Faktor VII eller VIIA-lignende molekyler
JP2003533681A (ja) 2000-05-15 2003-11-11 テカン・トレーディング・アクチェンゲゼルシャフト ミクロ流体装置および細胞ベースの分析を実行する方法
AU7485301A (en) * 2000-05-16 2001-11-26 Bolder Biotechnology Inc Methods for refolding proteins containing free cysteine residues
US7291673B2 (en) * 2000-06-02 2007-11-06 Eidgenossiche Technische Hochschule Zurich Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds
AU2002218769A1 (en) * 2000-07-12 2002-01-21 Gryphon Therapeutics, Inc. Chemokine receptor modulators, production and use
US7118737B2 (en) 2000-09-08 2006-10-10 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Polymer-modified synthetic proteins
JP2004508338A (ja) * 2000-09-08 2004-03-18 グリフォン　セラピューティクス，インコーポレーテッド ポリマー修飾合成タンパク質
WO2002055185A2 (en) * 2000-10-19 2002-07-18 Eidgenoess Tech Hochschule Block copolymers for multifunctional self-assembled systems
JP2004534721A (ja) 2000-10-31 2004-11-18 ピーアール ファーマシューティカルズ，インク． 生理活性分子の向上した送達のための方法及び組成物
US7053150B2 (en) 2000-12-18 2006-05-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Segmented polymers and their conjugates
TW593427B (en) * 2000-12-18 2004-06-21 Nektar Therapeutics Al Corp Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives
WO2002074806A2 (en) 2001-02-27 2002-09-26 Maxygen Aps New interferon beta-like molecules
EP1379133A2 (en) * 2001-03-20 2004-01-14 Eidgenössische Technische Hochschule Zürich Two-phase processing of thermosensitive polymers for use as biomaterials
US6538104B2 (en) 2001-04-27 2003-03-25 Medical Analysis Systems, Inc. Stabilization of cardiac troponin I subunits and complexes
US20040077835A1 (en) * 2001-07-12 2004-04-22 Robin Offord Chemokine receptor modulators, production and use
ATE376020T1 (de) * 2001-08-22 2007-11-15 Bioartificial Gel Technologies Inc Verfahren zu herstellung von aktivierten polyethylenglykolen
US7173003B2 (en) 2001-10-10 2007-02-06 Neose Technologies, Inc. Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF
DK2279753T3 (en) 2001-10-10 2015-11-23 Novo Nordisk As The conversion of peptides and glycokonjugering
US7157277B2 (en) 2001-11-28 2007-01-02 Neose Technologies, Inc. Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII
IL161251A0 (en) 2001-10-10 2004-09-27 Neose Technologies Inc Remodeling and glycoconjugation of peptides
US7795210B2 (en) 2001-10-10 2010-09-14 Novo Nordisk A/S Protein remodeling methods and proteins/peptides produced by the methods
US7214660B2 (en) 2001-10-10 2007-05-08 Neose Technologies, Inc. Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin
US8008252B2 (en) 2001-10-10 2011-08-30 Novo Nordisk A/S Factor VII: remodeling and glycoconjugation of Factor VII
MXPA04003597A (es) 2001-10-18 2004-07-30 Nektar Therapeutics Al Corp Conjugados polimericos de antagonistas opiaceos.
CA2462819A1 (en) * 2001-11-23 2003-05-30 Simon Fredriksson Method and kit for proximity probing with multivalent proximity probes
DK3025726T3 (da) 2002-01-18 2019-12-09 Biogen Ma Inc Polyalkylenpolymerforbindelser og anvendelser deraf
US20030179692A1 (en) * 2002-03-19 2003-09-25 Yoshitaka Ohotomo Storage medium
US8282912B2 (en) * 2002-03-22 2012-10-09 Kuros Biosurgery, AG Compositions for tissue augmentation
WO2003103475A2 (en) 2002-06-07 2003-12-18 Dyax Corp. Prevention and reduction of blood loss
US7153829B2 (en) 2002-06-07 2006-12-26 Dyax Corp. Kallikrein-inhibitor therapies
MXPA04012496A (es) 2002-06-21 2005-09-12 Novo Nordisk Healthcare Ag Glicoformos del factor vii pegilados.
DK1517710T3 (da) 2002-06-21 2011-07-18 Novo Nordisk Healthcare Ag Pegylerede faktor VII-glycoformer
US7034127B2 (en) * 2002-07-02 2006-04-25 Genzyme Corporation Hydrophilic biopolymer-drug conjugates, their preparation and use
CA2497772A1 (en) * 2002-09-05 2004-03-18 The General Hospital Corporation Asialo-interferons and the treatment of liver cancer
CA2497777A1 (en) * 2002-09-05 2004-03-18 The General Hospital Corporation Modified asialo-interferons and uses thereof
CA2497980C (en) 2002-09-09 2011-06-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Method for preparing water-soluble polymer derivatives bearing a terminal carboxylic acid
CN1312279C (zh) * 2002-11-07 2007-04-25 连云港新阳医药有限公司 聚乙二醇修饰门冬酰胺酶的制备方法
EP1628618A4 (en) * 2002-12-26 2009-09-09 Mountain View Pharmaceuticals POLYMER CONJUGATES OF CYTOKINES, CHEMOKINS, GROWTH FACTORS, POLYPEPTIDE HORMONES AND ANTAGONISTS THEREOF WITH PRESERVED RECEPTOR BINDING ACTIVITY
RS20050502A (en) * 2002-12-26 2007-08-03 Mountain View Pharmaceuticals Inc., Polymer conjugates of interferon- beta with enhanced biological potency
WO2004061094A1 (en) 2002-12-30 2004-07-22 Gryphon Therapeutics, Inc. Water-soluble thioester and selenoester compounds and methods for making and using the same
US20050221443A1 (en) * 2003-01-06 2005-10-06 Xencor, Inc. Tumor necrosis factor super family agonists
CN1723232B (zh) * 2003-01-06 2012-08-22 尼克塔治疗公司 巯基选择性水溶性聚合物衍生物
US7553930B2 (en) * 2003-01-06 2009-06-30 Xencor, Inc. BAFF variants and methods thereof
US20050130892A1 (en) * 2003-03-07 2005-06-16 Xencor, Inc. BAFF variants and methods thereof
US20060014248A1 (en) * 2003-01-06 2006-01-19 Xencor, Inc. TNF super family members with altered immunogenicity
EP1581582B2 (en) * 2003-01-06 2017-06-07 Nektar Therapeutics Thiol-selective water-soluble polmer derivatives
CA2788505C (en) 2003-02-26 2018-09-04 Nektar Therapeutics Polymer-factor viii moiety conjugates
ES2335005T5 (es) * 2003-03-05 2013-04-17 Halozyme, Inc. Glicoproteína hialuronidasa soluble (shasegp), proceso para prepararla, usos y composiciones farmacéuticas que la comprenden
US20090123367A1 (en) * 2003-03-05 2009-05-14 Delfmems Soluble Glycosaminoglycanases and Methods of Preparing and Using Soluble Glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) * 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
BRPI0408358A (pt) 2003-03-14 2006-03-21 Neose Technologies Inc polìmeros hidrossolúveis ramificados e seus conjugados
US7642340B2 (en) 2003-03-31 2010-01-05 Xencor, Inc. PEGylated TNF-α variant proteins
US7610156B2 (en) * 2003-03-31 2009-10-27 Xencor, Inc. Methods for rational pegylation of proteins
AU2004227937B2 (en) * 2003-03-31 2007-09-20 Xencor, Inc Methods for rational pegylation of proteins
US8791070B2 (en) 2003-04-09 2014-07-29 Novo Nordisk A/S Glycopegylated factor IX
MXPA05010773A (es) 2003-04-09 2005-12-12 Neose Technologies Inc Metodos de glicopegilacion y proteinas/peptidos producidos por los metodos.
DK2599502T3 (en) 2003-04-11 2017-04-18 Antriabio Inc Process for Preparation of Site-Specific Protein Conjugates
ES2340494T3 (es) 2003-04-15 2010-06-04 Glaxosmithkline Llc Mutantes de sustitucion de il-18 humana y sus conjugados.
BRPI0410164A (pt) 2003-05-09 2006-05-16 Neose Technologies Inc composições e métodos para preparação de mutantes de glicosilação de hormÈnio do crescimento humano
US20040249119A1 (en) * 2003-06-05 2004-12-09 Fox Martin Edward Novel mPEG propionaldehyde precursor
GB0316294D0 (en) 2003-07-11 2003-08-13 Polytherics Ltd Conjugated biological molecules and their preparation
NZ545009A (en) 2003-07-22 2009-11-27 Nektar Therapeutics Al Corp Method for preparing functionalized polymers from polymer alcohols
WO2005012484A2 (en) 2003-07-25 2005-02-10 Neose Technologies, Inc. Antibody-toxin conjugates
WO2005021557A2 (en) * 2003-08-29 2005-03-10 Dyax Corp. Poly-pegylated protease inhibitors
EP2626083A1 (en) 2003-09-17 2013-08-14 Nektar Therapeutics Multi-arm polymer prodrugs
EP2322569B1 (en) 2003-10-09 2020-08-26 Ambrx, Inc. Polymer derivatives for the selective modification of proteins
US7524813B2 (en) * 2003-10-10 2009-04-28 Novo Nordisk Health Care Ag Selectively conjugated peptides and methods of making the same
EP1673387B1 (en) 2003-10-10 2010-09-15 Novo Nordisk A/S Il-21 derivatives
CA2542353A1 (en) 2003-10-10 2005-04-21 Xencor, Inc. Protein based tnf-alpha variants for the treatment of tnf-alpha related disorders
EP2641611A3 (en) 2003-10-17 2013-12-18 Novo Nordisk A/S Combination therapy
US8637650B2 (en) 2003-11-05 2014-01-28 Genovoxx Gmbh Macromolecular nucleotide compounds and methods for using the same
US8633157B2 (en) 2003-11-24 2014-01-21 Novo Nordisk A/S Glycopegylated erythropoietin
US7842661B2 (en) 2003-11-24 2010-11-30 Novo Nordisk A/S Glycopegylated erythropoietin formulations
US20080305992A1 (en) 2003-11-24 2008-12-11 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin
EP1694347B1 (en) * 2003-11-24 2013-11-20 BioGeneriX AG Glycopegylated erythropoietin
JP2008504216A (ja) 2003-12-02 2008-02-14 サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド モノクローナル抗体の生成のための方法および組成物
US20060040856A1 (en) * 2003-12-03 2006-02-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor IX
US7956032B2 (en) 2003-12-03 2011-06-07 Novo Nordisk A/S Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
CN101072789B (zh) * 2004-01-08 2013-05-15 生物种属学股份公司 肽的o-连接的糖基化
JP4833862B2 (ja) * 2004-01-28 2011-12-07 サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド 官能化コロイド金属組成物および方法
CA2553040A1 (en) 2004-02-02 2005-08-18 Ambrx, Inc. Modified human four helical bundle polypeptides and their uses
KR100580644B1 (ko) * 2004-02-16 2006-05-16 삼성전자주식회사 생물분자를 고체 기판상에 비공유적으로 고정화 하는 방법및 그에 의하여 제조되는 마이크로어레이
US7351787B2 (en) * 2004-03-05 2008-04-01 Bioartificial Gel Technologies, Inc. Process for the preparation of activated polyethylene glycols
MXPA06010505A (es) * 2004-03-15 2006-12-19 Nektar Therapeutics Al Corp Composiciones y conjugados, basados en polimeros, de inhibidores de ingreso de vih.
WO2005091944A2 (en) * 2004-03-17 2005-10-06 Eli Lilly And Company Glycol linked fgf-21 compounds
WO2005115477A2 (en) 2004-04-13 2005-12-08 Quintessence Biosciences, Inc. Non-natural ribonuclease conjugates as cytotoxic agents
CN102603895B (zh) 2004-06-18 2016-09-28 Ambrx公司 新颖抗原结合多肽和其用途
US20080300173A1 (en) 2004-07-13 2008-12-04 Defrees Shawn Branched Peg Remodeling and Glycosylation of Glucagon-Like Peptides-1 [Glp-1]
CA2573720A1 (en) 2004-07-14 2006-02-23 University Of Utah Research Foundation Netrin-related compositions and uses
BRPI0512396A (pt) * 2004-07-21 2008-03-11 Ambrx Inc polipeptìdeos biossintéticos utilizando aminoácidos codificados não naturalmente
WO2006031811A2 (en) 2004-09-10 2006-03-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated interferon alpha
CA2581423A1 (en) 2004-09-23 2006-03-30 Vasgene Therapeutics, Inc. Polipeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth
US7235530B2 (en) 2004-09-27 2007-06-26 Dyax Corporation Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof
EP2502941A1 (en) * 2004-10-25 2012-09-26 Intezyne Technologies Inc. Heterobifunctional poly (ethylene glycol) and uses thereof
JP5948627B2 (ja) 2004-10-29 2016-07-20 レイショファーム ゲーエムベーハー 線維芽細胞成長因子（ｆｇｆ）のリモデリングと糖質ペグ化
AU2005318984B2 (en) 2004-12-21 2011-12-01 Nektar Therapeutics Stabilized polymeric thiol reagents
US7385028B2 (en) 2004-12-22 2008-06-10 Ambrx, Inc Derivatization of non-natural amino acids and polypeptides
NZ555386A (en) 2004-12-22 2011-01-28 Ambrx Inc Formulations of human growth hormone comprising a non-naturally encoded amino acid
KR20070090023A (ko) 2004-12-22 2007-09-04 암브룩스, 인코포레이티드 변형 인간 성장 호르몬
KR101252835B1 (ko) 2004-12-22 2013-04-10 암브룩스, 인코포레이티드 아미노아실-ｔＲＮＡ 합성효소의 조성물 및 그것의 용도
WO2006073846A2 (en) 2004-12-22 2006-07-13 Ambrx, Inc. Methods for expression and purification of recombinant human growth hormone
EP1858543B1 (en) 2005-01-10 2013-11-27 BioGeneriX AG Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
US7402730B1 (en) 2005-02-03 2008-07-22 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Knockout animals manifesting hyperlipidemia
JP2008530305A (ja) * 2005-02-09 2008-08-07 タイコ ヘルスケア グループ エルピー 合成封止剤
JP2008534640A (ja) 2005-04-05 2008-08-28 イステイチユート・デイ・リチエルケ・デイ・ビオロジア・モレコラーレ・ピ・アンジエレツテイ・エツセ・ピー・アー タンパク質の機能部位またはエピトープの遮蔽方法
EP2386571B1 (en) 2005-04-08 2016-06-01 ratiopharm GmbH Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants
US8273339B2 (en) 2005-04-12 2012-09-25 Nektar Therapeutics Polymer-based compositions and conjugates of antimicrobial agents
MX2007012887A (es) 2005-04-18 2007-12-10 Novo Nordisk As Variantes il-21.
US7833979B2 (en) * 2005-04-22 2010-11-16 Amgen Inc. Toxin peptide therapeutic agents
CA2608311C (en) 2005-05-13 2012-11-27 Eli Lilly And Company Glp-1 pegylated compounds
EP2975135A1 (en) * 2005-05-25 2016-01-20 Novo Nordisk A/S Glycopegylated factor IX
US9505867B2 (en) * 2005-05-31 2016-11-29 Ecole Polytechmique Fédérale De Lausanne Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs
CN101247821B (zh) * 2005-06-03 2013-01-23 Ambrx公司 经改良人类干扰素分子和其用途
US8193206B2 (en) 2005-06-14 2012-06-05 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Pyrimidine compounds
US20060281712A1 (en) 2005-06-14 2006-12-14 Chi-Feng Yen Pyrimidine compounds
EP1893632B1 (en) 2005-06-17 2015-08-12 Novo Nordisk Health Care AG Selective reduction and derivatization of engineered factor vii proteins comprising at least one non-native cysteine
EP1926768B1 (en) 2005-07-18 2011-09-14 Nektar Therapeutics Branched functionalized polymers using branched polyol cores
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
KR101285904B1 (ko) * 2005-08-18 2013-07-15 암브룩스, 인코포레이티드 ｔＲＮＡ 조성물 및 이의 용도
US20070105755A1 (en) 2005-10-26 2007-05-10 Neose Technologies, Inc. One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides
WO2007056191A2 (en) 2005-11-03 2007-05-18 Neose Technologies, Inc. Nucleotide sugar purification using membranes
PL1954710T3 (pl) * 2005-11-08 2011-09-30 Ambrx Inc Przyspieszacze do modyfikacji aminokwasów niewystępujących w przyrodzie i polipeptydów zbudowanych z aminokwasów nie występujących w przyrodzie
KR20080079643A (ko) * 2005-11-16 2008-09-01 암브룩스, 인코포레이티드 비-천연 아미노산을 포함하는 방법 및 조성물
US20080317670A1 (en) * 2005-12-14 2008-12-25 Ambrx, Inc. Compositions Containing, Methods Involving, and Uses of Non-Natural Amino Acids and Polypeptides
ES2390286T3 (es) * 2005-12-16 2012-11-08 Nektar Therapeutics Conjugados poliméricos de GLP-1
US7743730B2 (en) * 2005-12-21 2010-06-29 Lam Research Corporation Apparatus for an optimized plasma chamber grounded electrode assembly
EP1981525B1 (en) 2005-12-30 2015-01-21 Zensun (Shanghai) Science and Technology Limited Extended release of neuregulin for improved cardiac function
WO2007084460A2 (en) 2006-01-18 2007-07-26 Qps, Llc Pharmaceutical compositions with enhanced stability
CN101420984B (zh) 2006-02-21 2013-01-02 尼克塔治疗公司 嵌段可降解聚合物及由其制备的轭合物
CA2648582C (en) 2006-04-07 2016-12-06 Nektar Therapeutics Al, Corporation Conjugates of an anti-tnf-alpha antibody
MX2008013304A (es) 2006-04-20 2008-10-27 Amgen Inc Compuestos de peptido 1 tipo glucagon.
CA2861601A1 (en) * 2006-04-27 2007-11-08 Intezyne Technologies, Inc. Poly (ethylene glycol) containing chemically disparate endgroups
JP2009537609A (ja) 2006-05-24 2009-10-29 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アーゲー 延長されたｆｉｘアナログ及び誘導体
US8242179B2 (en) * 2006-06-23 2012-08-14 Surmodics, Inc. Hydrogel-based joint repair system and method
US8840882B2 (en) * 2006-06-23 2014-09-23 Quintessence Biosciences, Inc. Modified ribonucleases
JP2009543868A (ja) 2006-07-17 2009-12-10 クインテセンス バイオサイエンシーズ インコーポレーティッド 癌治療に関する方法および組成物
US9187532B2 (en) 2006-07-21 2015-11-17 Novo Nordisk A/S Glycosylation of peptides via O-linked glycosylation sequences
EP2069396B1 (en) * 2006-09-08 2015-10-21 Ambrx, Inc. Modified human plasma polypeptide or fc scaffolds and their uses
KR20090051227A (ko) * 2006-09-08 2009-05-21 암브룩스, 인코포레이티드 척추동물 세포를 위한 하이브리드 서프레서 ｔＲＮＡ
PT2064333E (pt) * 2006-09-08 2014-06-09 Ambrx Inc Supressor híbrido arnt para células de vertebrados
US7985783B2 (en) 2006-09-21 2011-07-26 The Regents Of The University Of California Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification
JP2010505874A (ja) 2006-10-03 2010-02-25 ノヴォ ノルディスク アー／エス ポリペプチドコンジュゲートの精製方法
CN101600448B (zh) * 2006-10-04 2015-11-25 诺和诺德公司 甘油连接的peg化的糖和糖肽
US8043829B2 (en) * 2006-10-25 2011-10-25 Amgen Inc. DNA encoding chimeric toxin peptide fusion proteins and vectors and mammalian cells for recombinant expression
AU2007310777A1 (en) 2006-10-26 2008-05-02 Novo Nordisk A/S IL-21 variants
AU2007325838B2 (en) 2006-11-22 2013-09-19 Bristol-Myers Squibb Company Targeted therapeutics based on engineered proteins for tyrosine kinases receptors, including IGF-IR
AU2007325631B9 (en) 2006-11-30 2014-01-30 Nektar Therapeutics Method for preparing a polymer conjugate
HUE033960T2 (en) 2006-12-08 2018-01-29 Lexicon Pharmaceuticals Inc Monoclonal Antibodies to ANGPTL3
US8617531B2 (en) 2006-12-14 2013-12-31 Bolder Biotechnology, Inc. Methods of making proteins and peptides containing a single free cysteine
EP2117603A2 (en) 2006-12-19 2009-11-18 Bracco International B.V. Targeting and therapeutic compounds and gas-filled microvesicles comprising said compounds
WO2008079677A2 (en) 2006-12-20 2008-07-03 Arkema Inc. Polymer encapsulation and/or binding
CN101981053B (zh) 2007-01-18 2013-11-13 伊莱利利公司 聚乙二醇化的AβFAB
DK2118123T3 (en) 2007-01-31 2016-01-25 Dana Farber Cancer Inst Inc Stabilized p53 peptides and uses thereof
WO2008097497A2 (en) 2007-02-02 2008-08-14 Adnexus, A Bristol-Myers Squibb R & D Company Vegf pathway blockade
US20090227981A1 (en) * 2007-03-05 2009-09-10 Bennett Steven L Low-Swelling Biocompatible Hydrogels
US20090227689A1 (en) * 2007-03-05 2009-09-10 Bennett Steven L Low-Swelling Biocompatible Hydrogels
CN104163864B (zh) * 2007-03-30 2017-08-01 Ambrx公司 经修饰fgf‑21多肽和其用途
KR20150064246A (ko) 2007-04-03 2015-06-10 바이오제너릭스 게엠베하 글리코페길화 ｇ―ｃｓｆ를 이용하는 치료 방법
ES2733276T3 (es) * 2007-04-13 2019-11-28 Kuros Biosurgery Ag Sellante polimérico para tejidos
AU2008247815B2 (en) * 2007-05-02 2012-09-06 Ambrx, Inc. Modified interferon beta polypeptides and their uses
AU2008262490B2 (en) * 2007-05-22 2011-11-17 Amgen Inc. Compositions and methods for producing bioactive fusion proteins
CA2690611C (en) 2007-06-12 2015-12-08 Novo Nordisk A/S Improved process for the production of nucleotide sugars
US7968811B2 (en) * 2007-06-29 2011-06-28 Harley-Davidson Motor Company Group, Inc. Integrated ignition and key switch
US9125807B2 (en) 2007-07-09 2015-09-08 Incept Llc Adhesive hydrogels for ophthalmic drug delivery
CN101361968B (zh) 2007-08-06 2011-08-03 健能隆医药技术（上海）有限公司 白介素-22在治疗脂肪肝中的应用
JPWO2009020094A1 (ja) * 2007-08-09 2010-11-04 第一三共株式会社 疎水性分子で修飾した抗体
US8067028B2 (en) * 2007-08-13 2011-11-29 Confluent Surgical Inc. Drug delivery device
WO2009026334A2 (en) * 2007-08-21 2009-02-26 Genzyme Corporation Treatment with kallikrein inhibitors
US8207112B2 (en) 2007-08-29 2012-06-26 Biogenerix Ag Liquid formulation of G-CSF conjugate
CN102203002A (zh) * 2007-09-21 2011-09-28 细胞免疫科学公司 纳米治疗性胶态金属组合物和方法
US20110014118A1 (en) * 2007-09-21 2011-01-20 Lawrence Tamarkin Nanotherapeutic colloidal metal compositions and methods
US8697062B2 (en) * 2007-10-08 2014-04-15 Quintessence Biosciences, Inc. Compositions and methods for ribonuclease-based therapeutics
US8440787B2 (en) 2007-10-23 2013-05-14 Nektar Therapeutics Hydroxyapatite-targeting multiarm polymers and conjugates made therefrom
US7960145B2 (en) * 2007-11-08 2011-06-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
WO2009064459A2 (en) * 2007-11-12 2009-05-22 Intradigm Corporation Heterobifunctional polyethylene glycol reagents
US20090123519A1 (en) * 2007-11-12 2009-05-14 Surmodics, Inc. Swellable hydrogel matrix and methods
MX338336B (es) * 2007-11-20 2016-04-07 Ambrx Inc Polipeptidos de insulina modificados y sus usos.
CN101939443B (zh) 2008-02-08 2014-01-29 Ambrx公司 经修饰瘦素多肽和其用途
WO2009108806A1 (en) 2008-02-27 2009-09-03 Novo Nordisk A/S Conjugated factor viii molecules
TWI395593B (zh) 2008-03-06 2013-05-11 Halozyme Inc 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制
US20090226531A1 (en) * 2008-03-07 2009-09-10 Allergan, Inc. Methods and composition for intraocular delivery of therapeutic sirna
CA2721229C (en) 2008-04-14 2022-08-23 Halozyme, Inc. Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions
EA019289B1 (ru) 2008-04-21 2014-02-28 Тайджен Байотекнолоджи Ко., Лтд. Производные аминопиридина, аминопиримидина и амино-1,3,5-триазина
TWI394580B (zh) 2008-04-28 2013-05-01 Halozyme Inc 超快起作用胰島素組成物
JP2011520447A (ja) * 2008-05-16 2011-07-21 ネクター セラピューティックス コリンエステラーゼ部分とポリマーとのコンジュゲート
CN102099373A (zh) 2008-05-22 2011-06-15 百时美施贵宝公司 基于纤连蛋白的多价支架结构域蛋白
EP2326349B1 (en) * 2008-07-21 2015-02-25 Polytherics Limited Novel reagents and method for conjugating biological molecules
PT2318029T (pt) * 2008-07-23 2018-01-10 Ambrx Inc Polipéptidos de g-csf bovino modificados e suas utilizações
KR101671537B1 (ko) 2008-08-11 2016-11-01 넥타르 테라퓨틱스 다분지형 중합체 알카노에이트 컨쥬게이트
WO2010033205A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of v681-like peptides
WO2010033222A2 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Netkar Therapeutics Polymer conjugates of ziconotide peptides
US20110237524A1 (en) * 2008-09-19 2011-09-29 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of aod-like peptides
EP2341942A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-13 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of therapeutic peptides
WO2010033227A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of thymosin alpha 1 peptides
US20110171161A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of protegrin peptides
US8449872B2 (en) * 2008-09-19 2013-05-28 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of nesiritide peptides
EP2334336A1 (en) * 2008-09-19 2011-06-22 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of osteocalcin peptides
US20110171160A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of kiss1 peptides
WO2010033223A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of opioid growth factor peptides
US20110171312A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Modified therapeutic peptides, methods of their preparation and use
US20110165112A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-07 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of c-peptides
WO2010042145A1 (en) * 2008-09-19 2010-04-15 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of glp-2-like peptides
ES2660000T3 (es) * 2008-09-26 2018-03-20 Ambrx, Inc. Vacunas y microorganismos dependientes de la replicación de aminoácidos no naturales
EP2342223B1 (en) 2008-09-26 2017-04-26 Ambrx, Inc. Modified animal erythropoietin polypeptides and their uses
JP2012504423A (ja) 2008-10-01 2012-02-23 クインテッセンス バイオサイエンシズ，インコーポレーテッド 治療用リボヌクレアーゼ
WO2010056847A2 (en) 2008-11-13 2010-05-20 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Lyophilization formulation
JP5814793B2 (ja) 2008-11-25 2015-11-17 エコール ポリテクニク フェデラル ド ローザンヌ（エーペーエフエル） ブロックコポリマーおよびその使用
EA022752B1 (ru) 2008-12-09 2016-02-29 Галозим, Инк. Длинные растворимые полипептиды рн20 и их использование
GB0823309D0 (en) * 2008-12-19 2009-01-28 Univ Bath Functionalising reagents and their uses
CN102307594A (zh) * 2009-01-06 2012-01-04 戴埃克斯有限公司 用激肽释放酶抑制剂治疗粘膜炎
WO2010080720A2 (en) 2009-01-12 2010-07-15 Nektar Therapeutics Conjugates of a lysosomal enzyme moiety and a water soluble polymer
EP2396070A4 (en) 2009-02-12 2012-09-19 Incept Llc ACTIVE COMPOSITION WITH HYDROGEL PLUGS
EP2403538B1 (en) * 2009-03-04 2017-10-04 Polytherics Limited Conjugated proteins and peptides
US8067201B2 (en) * 2009-04-17 2011-11-29 Bristol-Myers Squibb Company Methods for protein refolding
PL3266463T3 (pl) 2009-06-09 2024-03-18 Prolong Pharmaceuticals, LLC Kompozycje hemoglobiny
IN2012DN00407A (sk) 2009-08-05 2015-08-21 Pieris Ag
JP5734985B2 (ja) 2009-09-17 2015-06-17 バクスター・ヘルスケヤー・ソシエテ・アノニムＢａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＳＡ ヒアルロニダーゼおよび免疫グロブリンの安定な共製剤およびそれらの使用方法
US9315860B2 (en) 2009-10-26 2016-04-19 Genovoxx Gmbh Conjugates of nucleotides and method for the application thereof
CA2778678A1 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Cns Therapeutics, Inc. Improved neurturin molecules
US20120283171A1 (en) 2009-12-21 2012-11-08 Ambrx, Inc. Modified bovine somatotropin polypeptides and their uses
SG181769A1 (en) 2009-12-21 2012-07-30 Ambrx Inc Modified porcine somatotropin polypeptides and their uses
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
AR079345A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina
HUE039605T2 (hu) 2010-01-06 2019-01-28 Dyax Corp Plazma kallikreint kötõ proteinek
CN102161754B (zh) * 2010-02-13 2012-06-13 华中科技大学同济医学院附属协和医院 枝化状聚乙二醇衍生物的功能化修饰方法
WO2011107591A1 (en) 2010-03-05 2011-09-09 Rigshospitalet Chimeric inhibitor molecules of complement activation
WO2011139714A2 (en) 2010-04-26 2011-11-10 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of cysteinyl-trna synthetase
EP2563381B1 (en) 2010-04-27 2017-08-09 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl trna synthetases
EP2563911B1 (en) 2010-04-28 2021-07-21 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of alanyl trna synthetases
AU2011248490B2 (en) 2010-04-29 2016-11-10 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of Asparaginyl tRNA synthetases
US9034320B2 (en) 2010-04-29 2015-05-19 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of Valyl-tRNA synthetases
CA2797277C (en) 2010-05-03 2021-02-23 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of arginyl-trna synthetases
EP2566495B1 (en) 2010-05-03 2017-03-01 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-alpha-trna synthetases
EP2566496B1 (en) 2010-05-03 2018-02-28 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of methionyl-trna synthetases
AU2011248101B2 (en) 2010-05-04 2016-10-20 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of p38 multi-tRNA synthetase complex
JP2013528374A (ja) 2010-05-10 2013-07-11 パーシード セラピューティクス リミテッド ライアビリティ カンパニー Ｖｌａ４のポリペプチド阻害剤
AU2011252990B2 (en) 2010-05-14 2017-04-20 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-beta-tRNA synthetases
CN103119055A (zh) 2010-05-17 2013-05-22 塞比克斯公司 聚乙二醇化c肽
AU2011256366C1 (en) 2010-05-17 2017-06-15 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of leucyl-tRNA synthetases
US9562089B2 (en) 2010-05-26 2017-02-07 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold proteins having improved stability
JP6046607B2 (ja) 2010-05-27 2016-12-21 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド グルタミニルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見
CA2800281C (en) 2010-06-01 2021-01-12 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of lysyl-trna synthetases
JP6116479B2 (ja) 2010-07-12 2017-04-19 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド グリシルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見
DK2595624T3 (en) 2010-07-20 2018-03-26 Halozyme Inc Methods of treating or preventing adverse side effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent
MY186340A (en) 2010-07-30 2021-07-13 Alcon Inc Silicone hydrogel lenses with water-rich surfaces
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
PL2605789T3 (pl) 2010-08-17 2019-11-29 Ambrx Inc Zmodyfikowane polipeptydy relaksyny i ich zastosowania
US9029506B2 (en) 2010-08-25 2015-05-12 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of tyrosyl-tRNA synthetases
US8961501B2 (en) 2010-09-17 2015-02-24 Incept, Llc Method for applying flowable hydrogels to a cornea
AR083006A1 (es) 2010-09-23 2013-01-23 Lilly Co Eli Formulaciones para el factor estimulante de colonias de granulocitos (g-csf) bovino y variantes de las mismas
WO2012054822A1 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Nektar Therapeutics Pharmacologically active polymer-glp-1 conjugates
RS61854B1 (sr) 2010-11-12 2021-06-30 Nektar Therapeutics Konjugati il-2 dela i polimera
JP2014502152A (ja) 2010-11-12 2014-01-30 ダナ ファーバー キャンサー インスティテュート，インコーポレイテッド 癌の治療及び診断
JP6033229B2 (ja) 2010-11-24 2016-11-30 レクシコン ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｎｏｔｕｍペクチンアセチルエステラーゼと結合する抗体
WO2012083197A1 (en) 2010-12-17 2012-06-21 Nektar Therapeutics Water-soluble polymer conjugates of topotecan
JP5899241B2 (ja) 2010-12-21 2016-04-06 ネクター セラピューティクス ペメトレキセドベースの化合物のマルチアームポリマープロドラッグコンジュゲート
US20130331443A1 (en) 2010-12-22 2013-12-12 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of taxane-based compounds
US10894087B2 (en) 2010-12-22 2021-01-19 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of cabazitaxel-based compounds
KR102320178B1 (ko) 2011-01-06 2021-11-02 다케다 파머수티컬 컴패니 리미티드 혈장 칼리크레인 결합 단백질
JP2014510045A (ja) 2011-02-08 2014-04-24 ハロザイム インコーポレイテッド ヒアルロナン分解酵素の組成物および脂質製剤ならびに良性前立腺肥大症の治療のためのその使用
CA2830065A1 (en) 2011-03-16 2012-09-20 Amgen Inc. Potent and selective inhibitors of nav1.3 and nav1.7
US20140187488A1 (en) 2011-05-17 2014-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Methods for maintaining pegylation of polypeptides
WO2012166555A1 (en) 2011-05-27 2012-12-06 Nektar Therapeutics Water - soluble polymer - linked binding moiety and drug compounds
WO2012171335A1 (en) 2011-06-16 2012-12-20 The Hong Kong University Of Science And Technology Multi-vinylsulfone containing molecule
NZ618331A (en) 2011-06-17 2016-04-29 Halozyme Inc Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme
US9993529B2 (en) 2011-06-17 2018-06-12 Halozyme, Inc. Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme
KR101676543B1 (ko) 2011-06-17 2016-11-15 할로자임, 아이엔씨 히알루로난 분해효소를 이용한 연속적인 피하 인슐린 주입 방법
KR20140054009A (ko) 2011-07-01 2014-05-08 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 릴랙신 융합 폴리펩타이드 및 그의 용도
PT2717917T (pt) 2011-07-05 2016-07-27 Bioasis Technologies Inc Conjugados de anticorpos p97
WO2013020079A2 (en) 2011-08-04 2013-02-07 Nektar Therapeutics Conjugates of an il-11 moiety and a polymer
WO2013040501A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Pharmathene, Inc. Compositions and combinations of organophosphorus bioscavengers and hyaluronan-degrading enzymes, and uses thereof
US10226417B2 (en) 2011-09-16 2019-03-12 Peter Jarrett Drug delivery systems and applications
EP2771028A2 (en) 2011-10-24 2014-09-03 Halozyme, Inc. Companion diagnostic for anti-hyaluronan agent therapy and methods of use thereof
EP2773659A2 (en) 2011-10-31 2014-09-10 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin binding domains with reduced immunogenicity
CA2855770A1 (en) 2011-11-17 2013-05-23 Cebix Ab Pegylated c-peptide
CA2858161C (en) 2011-12-05 2020-03-10 Incept, Llc Medical organogel processes and compositions
EP2858661B1 (en) 2011-12-29 2020-04-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized antiviral fusion helices
DK3130347T3 (da) 2011-12-30 2019-10-14 Halozyme Inc PH20-polypeptidvarianter, formuleringer og anvendelser deraf
CN104334196B (zh) 2012-02-16 2018-04-10 Atyr 医药公司 用于治疗自身免疫疾病和炎性疾病的组氨酰‑tRNA合成酶
ES2661575T3 (es) 2012-03-30 2018-04-02 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Producción de polímeros de heparosano de peso molecular alto y métodos de producción y uso de los mismos
US8956682B2 (en) 2012-04-02 2015-02-17 Surmodics, Inc. Hydrophilic polymeric coatings for medical articles with visualization moiety
AU2013243873B2 (en) 2012-04-04 2016-08-25 Halozyme, Inc. Combination therapy with an anti - hyaluronan agent and a tumor - targeted taxane
US9844582B2 (en) 2012-05-22 2017-12-19 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with extended-PK IL-2 and therapeutic agents
CA2872030A1 (en) 2012-05-31 2013-12-05 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind pd-l1
SI2859017T1 (sl) 2012-06-08 2019-05-31 Sutro Biopharma, Inc. Protitelesa, ki vsebujejo specifične nenaravne aminokislinske ostanke, postopki njihove priprave in postopki njihove uporabe
JP6429771B2 (ja) 2012-06-21 2018-11-28 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． ｃ−Ｍｅｔに結合する抗原結合タンパク質
CA2877814A1 (en) 2012-06-22 2013-12-27 Dingqiu HUANG Antigen binding proteins that bind ccr2
WO2014004639A1 (en) 2012-06-26 2014-01-03 Sutro Biopharma, Inc. Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
ES2647082T3 (es) 2012-07-31 2017-12-19 Bioasis Technologies Inc Proteínas desfosforiladas de la enfermedad de depósito lisosómico y métodos de uso de las mismas
US9395468B2 (en) 2012-08-27 2016-07-19 Ocular Dynamics, Llc Contact lens with a hydrophilic layer
ES2907763T3 (es) 2012-08-31 2022-04-26 Sutro Biopharma Inc Aminoácidos modificados que comprenden un grupo azido
WO2014062856A1 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Halozyme, Inc. Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods
WO2014074218A1 (en) 2012-11-12 2014-05-15 Redwood Bioscience, Inc. Compounds and methods for producing a conjugate
US9310374B2 (en) 2012-11-16 2016-04-12 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
EP2920148B1 (en) 2012-11-16 2019-06-12 The Regents of the University of California Pictet-spengler ligation for protein chemical modification
US9383357B2 (en) 2012-12-07 2016-07-05 Northwestern University Biomarker for replicative senescence
EP3907237A1 (en) 2012-12-20 2021-11-10 Amgen Inc. Apj receptor agonists and uses thereof
WO2014120891A2 (en) 2013-02-01 2014-08-07 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold proteins
US10344060B2 (en) 2013-03-12 2019-07-09 Amgen Inc. Potent and selective inhibitors of Nav1.7
CA2906003C (en) 2013-03-13 2021-07-06 Bioasis Technologies Inc. Fragments of p97 and uses thereof
WO2014144768A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bh4 stabilized peptides and uses thereof
WO2014151369A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized ezh2 peptides
EP2970392B1 (en) 2013-03-15 2019-07-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized sos1 peptides
JP6563906B2 (ja) 2013-05-31 2019-08-21 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． Ｐｄ−１に結合する抗原結合蛋白質
TW201534726A (zh) 2013-07-03 2015-09-16 Halozyme Inc 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途
EP3019522B1 (en) 2013-07-10 2017-12-13 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US10711106B2 (en) 2013-07-25 2020-07-14 The University Of Chicago High aspect ratio nanofibril materials
EP3038657A2 (en) 2013-08-28 2016-07-06 Bioasis Technologies Inc. Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
CN104623637A (zh) 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
EP3069195B8 (en) 2013-11-15 2019-07-10 Tangible Science, LLC Contact lens with a hydrophilic layer
JP6745218B2 (ja) 2013-11-27 2020-08-26 レッドウッド バイオサイエンス， インコーポレイテッド ヒドラジニル−ピロロ化合物及び複合体を生成するための方法
WO2015081891A1 (en) 2013-12-06 2015-06-11 Baikang (Suzhou) Co., Ltd Bioreversable promoieties for nitrogen-containing and hydroxyl-containing drugs
WO2015148790A1 (en) 2014-03-27 2015-10-01 Dyax Corp. Compositions and methods for treatment of diabetic macular edema
MA39711A (fr) 2014-04-03 2015-10-08 Nektar Therapeutics Conjugués d'une fraction d'il-15 et d'un polymère
WO2015175774A1 (en) 2014-05-14 2015-11-19 Trustees Of Dartmouth College Deimmunized lysostaphin and methods of use
ES2950789T3 (es) 2014-06-10 2023-10-13 Amgen Inc Polipéptidos de apelina
EP3180018B1 (en) 2014-08-12 2019-07-24 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2 and integrin-binding-fc-fusion protein
WO2016025647A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and a cancer vaccine
KR20170067729A (ko) 2014-08-22 2017-06-16 소렌토 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 Cxcr3에 결합하는 항원 결합 단백질
HUE043847T2 (hu) 2014-08-28 2019-09-30 Halozyme Inc Hialuronán-lebontó enzimmel és egy immun checkpoint inhibitorral végzett kombinációs terápia
KR20230158134A (ko) 2014-10-14 2023-11-17 폴리테릭스 리미티드 Peg의 일부를 포함하는 이탈기를 포함하는 시약을 사용한, 펩티드 또는 단백질의 접합방법
DK3207130T3 (da) 2014-10-14 2019-11-11 Halozyme Inc Sammensætninger af Adenosin Deaminase-2 (ADA2), varianter deraf og fremgangsmåder til anvendelse af samme
US20170290925A1 (en) * 2014-10-24 2017-10-12 Polytherics Limited Conjugates And Conjugating Reagents
KR20240024362A (ko) 2014-10-24 2024-02-23 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 변형된 fgf-21 폴리펩티드 및 그의 용도
GB201419108D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Glythera Ltd Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates
CN107206119B (zh) 2014-12-09 2021-01-29 实体科学公司 具有生物相容性层的医疗设备涂层
JP2018511594A (ja) 2015-03-18 2018-04-26 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 選択的ｍｃｌ−１結合ペプチド
AU2016287754B2 (en) 2015-07-02 2021-02-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized anti-microbial peptides
JP7049989B2 (ja) 2015-08-28 2022-04-07 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド Ｂｆｌ－１と結合するペプチド
NZ744233A (en) 2015-12-11 2023-11-24 Takeda Pharmaceuticals Co Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack
US10118963B2 (en) 2016-01-29 2018-11-06 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind PD-L1
EP3423075B1 (en) 2016-02-29 2024-04-03 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stapled intracellular-targeting antimicrobial peptides to treat infection
US10421785B2 (en) 2016-04-11 2019-09-24 Bar-Ilan University Delta receptor agonist peptides and use thereof
EP3442562B1 (en) 2016-04-15 2022-09-21 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd An il-22 dimer for use in treating necrotizing enterocolitis
WO2018017922A2 (en) 2016-07-22 2018-01-25 Massachusetts Institute Of Technology Selective bfl-1 peptides
CA3032692A1 (en) 2016-08-09 2018-02-15 Eli Lilly And Company Combination antibody therapy for the treatment of neurodegenerative diseases
JP7069126B2 (ja) 2016-08-26 2022-05-17 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド 化学療法誘発性末梢性ニューロパシーおよび難聴を処置または予防するためのｂｃｌ－ｗポリペプチドおよび模倣物
SG10201912034UA (en) 2017-02-08 2020-02-27 Bristol Myers Squibb Co Modified relaxin polypeptides comprising a pharmacokinetic enhancer and uses thereof
WO2018170299A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Inhibitors of prokaryotic gene transcription and uses thereof
WO2018172503A2 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Basf Se Liquid laundry detergent comprising modified saccharide or polysaccharide
US12036283B2 (en) 2017-05-15 2024-07-16 Nektar Therapeutics Long-acting interleukin-15 receptor agonists and related immunotherapeutic compositions and methods
KR102675270B1 (ko) 2017-06-22 2024-06-17 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 변형된 막 유형 세린 프로테아제 １(ｍｔｓｐ－１) 폴리펩티드 및 사용 방법
JP7305614B2 (ja) 2017-07-19 2023-07-10 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド 抗生物質耐性細菌感染症の処置のための安定化抗菌ペプチド
US11485781B2 (en) 2017-08-17 2022-11-01 Massachusetts Institute Of Technology Multiple specificity binders of CXC chemokines
WO2019063958A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 The University Of York BIOCONJUGATION OF POLYPEPTIDES
AU2018372167B2 (en) 2017-11-21 2023-12-07 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Partial agonists of interleukin-2
EP3737404A1 (en) 2017-12-15 2020-11-18 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Selective targeting of apoptosis proteins by structurally-stabilized and/or cysteine-reactive noxa peptides
EP3724216A1 (en) 2017-12-15 2020-10-21 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized peptide-mediated targeted protein degradation
US11492493B2 (en) 2017-12-26 2022-11-08 Becton, Dickinson And Company Deep ultraviolet-excitable water-solvated polymeric dyes
AU2019218786B2 (en) 2018-02-07 2024-05-02 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Cell-permeable stapled peptide modules for cellular delivery
EP3765852A1 (en) 2018-03-14 2021-01-20 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized peptides for biomarker detection
WO2019191482A1 (en) 2018-03-30 2019-10-03 Becton, Dickinson And Company Water-soluble polymeric dyes having pendant chromophores
WO2019222435A1 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Halozyme, Inc. Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20
KR102167755B1 (ko) 2018-05-23 2020-10-19 주식회사 큐어바이오 단편화된 grs 폴리펩타이드, 이의 변이체 및 이들의 용도
EP3813867A1 (en) 2018-07-22 2021-05-05 Bioasis Technologies Inc. Treatment of lymmphatic metastases
BR112021003843A2 (pt) 2018-08-28 2021-05-25 Ambrx, Inc. biconjugados de folato de anticorpo anti-cd3 e seus usos
CA3111576A1 (en) 2018-09-11 2020-03-19 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and their uses
EP3852783A1 (en) 2018-09-17 2021-07-28 Massachusetts Institute of Technology Peptides selective for bcl-2 family proteins
AU2019361206A1 (en) 2018-10-19 2021-06-03 Ambrx, Inc. Interleukin-10 polypeptide conjugates, dimers thereof, and their uses
US20200262887A1 (en) 2018-11-30 2020-08-20 Opko Ireland Global Holdings, Ltd. Oxyntomodulin peptide analog formulations
US20220075098A1 (en) * 2018-12-19 2022-03-10 Tangible Science, Inc. Systems and methods of treating a hydrogel-coated medical device
US11613744B2 (en) 2018-12-28 2023-03-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use
AU2019413431A1 (en) 2018-12-28 2021-07-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use
EP3914289A1 (en) 2019-01-23 2021-12-01 Massachusetts Institute of Technology Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade
KR20210136014A (ko) 2019-02-12 2021-11-16 암브룩스, 인코포레이티드 항체-tlr 작용제 콘쥬게이트를 함유하는 조성물, 방법 및 이의 용도
WO2020215005A1 (en) 2019-04-18 2020-10-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Selective targeting of ubiquitin- and ubiquitin-like e1-activating enzymes by structurally-stabilized peptides
CN113747948B (zh) 2019-04-26 2023-12-15 宝洁公司 减少来源于阳离子抗微生物剂的牙齿变色
US20230116760A1 (en) 2019-12-16 2023-04-13 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Structurally-stabilized oncolytic peptides and uses thereof
US20230183309A1 (en) 2019-12-20 2023-06-15 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Structurally-stabilized glucagon-like peptide 1 peptides and uses thereof
MX2022008771A (es) 2020-01-14 2022-10-07 Synthekine Inc Metodos y composiciones de muteinas de il2 sesgadas.
WO2021173889A1 (en) 2020-02-26 2021-09-02 Ambrx, Inc. Uses of anti-cd3 antibody folate bioconjugates
US20240124529A1 (en) 2020-03-04 2024-04-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. ANTIVIRAL STRUCTURALLY-STABILIZED SARS-CoV-2 PEPTIDES AND USES THEREOF
AU2021233909A1 (en) 2020-03-11 2022-09-29 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of use thereof
AU2021258205A1 (en) 2020-04-22 2022-10-13 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antiviral structurally-stabilized ACE2 helix 1 peptides and uses thereof
WO2021222243A2 (en) 2020-04-27 2021-11-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Structurally-stabilized and hdmx-selective p53 peptides and uses thereof
US20210355468A1 (en) 2020-05-18 2021-11-18 Bioasis Technologies, Inc. Compositions and methods for treating lewy body dementia
US20210393787A1 (en) 2020-06-17 2021-12-23 Bioasis Technologies, Inc. Compositions and methods for treating frontotemporal dementia
JP2023538071A (ja) 2020-08-20 2023-09-06 アンブルックス，インコーポレイテッド 抗体－ｔｌｒアゴニストコンジュゲート、その方法及び使用
CA3193261A1 (en) 2020-10-14 2022-04-21 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Chimeric conjugates for degradation of viral and host proteins and methods of use
WO2022098848A1 (en) 2020-11-05 2022-05-12 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antiviral structurally-stabilized ebolavirus peptides and uses thereof
EP4313163A1 (en) 2021-04-03 2024-02-07 Ambrx, Inc. Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof
CA3231587A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antiviral structurally-stapled sars-cov-2 peptide- cholesterol conjugates and uses thereof
EP4155349A1 (en) 2021-09-24 2023-03-29 Becton, Dickinson and Company Water-soluble yellow green absorbing dyes
WO2023215784A1 (en) 2022-05-04 2023-11-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Ebolavirus surface glycoprotein peptides, conjugates, and uses thereof
WO2024007016A2 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Beckman Coulter, Inc. Novel fluorescent dyes and polymers from dihydrophenanthrene derivatives
WO2024044327A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Beckman Coulter, Inc. Dhnt monomers and polymer dyes with modified photophysical properties

Family Cites Families (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3784524A (en) * 1971-06-25 1974-01-08 Grace W R & Co Urethane/thioether-containing polyene composition and the reaction product thereof
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
CH586739A5 (sk) * 1973-10-17 1977-04-15 Hoechst Ag
US4134887A (en) * 1973-10-17 1979-01-16 Hoechst Aktiengesellschaft Phenyl-azo-phenyl dyestuffs
US4179387A (en) * 1974-03-12 1979-12-18 Fuji Photo Film Co., Ltd. Process for producing magnetic FE oxide
IL47468A (en) * 1975-06-12 1979-05-31 Rehovot Res Prod Process for the cross-linking of proteins using water soluble cross-linking agents
US4002531A (en) * 1976-01-22 1977-01-11 Pierce Chemical Company Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby
DE2607766C3 (de) * 1976-02-26 1978-12-07 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur Herstellung von trägergebundenen biologisch aktiven Substanzen
US4228019A (en) * 1978-06-19 1980-10-14 Texaco Development Corp. Secondary recovery process
US4473693A (en) * 1978-08-04 1984-09-25 Stewart Walter W Aminonaphthalimide dyes for intracellular labelling
US4356166A (en) * 1978-12-08 1982-10-26 University Of Utah Time-release chemical delivery system
US4296097A (en) * 1979-02-27 1981-10-20 Lee Weng Y Suppression of reaginic antibodies to drugs employing polyvinyl alcohol as carrier therefor
US4430260A (en) * 1979-02-27 1984-02-07 Lee Weng Y Penicillin-polyvinyl alcohol conjugate and process of preparation
US4280979A (en) * 1979-09-18 1981-07-28 Union Carbide Corporation Copolymers, compositions, and articles, and methods for making same
US4241199A (en) * 1979-09-18 1980-12-23 Union Carbide Corporation Novel polyester diols
JPS585320A (ja) * 1981-07-01 1983-01-12 Toray Ind Inc グラフト共重合体
US4973493A (en) * 1982-09-29 1990-11-27 Bio-Metric Systems, Inc. Method of improving the biocompatibility of solid surfaces
JPS59204144A (ja) * 1983-04-12 1984-11-19 Daikin Ind Ltd 新規含フッ素化合物およびその製法
SE470099B (sv) * 1984-05-17 1993-11-08 Jerker Porath Sulfonaktiverade tioeteradsorbenter för separation av t ex protein
SE454885B (sv) * 1984-10-19 1988-06-06 Exploaterings Ab Tbf Polymerbelagda partiklar med immobiliserade metalljoner pa sin yta jemte forfarande for framstellning derav
US4616644A (en) * 1985-06-14 1986-10-14 Johnson & Johnson Products, Inc. Hemostatic adhesive bandage
DE3675588D1 (de) * 1985-06-19 1990-12-20 Ajinomoto Kk Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist.
JP2524586B2 (ja) * 1985-06-26 1996-08-14 シタス コーポレイション ポリマ−接合を利用する医薬組成物用蛋白質の可溶化
US4917888A (en) * 1985-06-26 1990-04-17 Cetus Corporation Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4766106A (en) * 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4883864A (en) * 1985-09-06 1989-11-28 Minnesota Mining And Manufacturing Company Modified collagen compound and method of preparation
US4983494A (en) * 1985-10-16 1991-01-08 Fuji Photo Film Co., Ltd. Image forming process including heating step
CA1283046C (en) * 1986-05-29 1991-04-16 Nandini Katre Tumor necrosis factor formulation
US4791192A (en) * 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4871785A (en) * 1986-08-13 1989-10-03 Michael Froix Clouding-resistant contact lens compositions
DE3628717A1 (de) * 1986-08-23 1988-02-25 Agfa Gevaert Ag Haertungsmittel fuer proteine, eine damit gehaertete bindemittelschicht und eine solche schicht enthaltendes fotografisches aufzeichnungsmaterial
US4931544A (en) * 1986-09-04 1990-06-05 Cetus Corporation Succinylated interleukin-2 for pharmaceutical compositions
DE3634525A1 (de) * 1986-10-10 1988-04-21 Miles Lab Testmittel und indikatoren zum nachweis von thiolgruppen und verfahren zu deren herstellung
US5080891A (en) * 1987-08-03 1992-01-14 Ddi Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols
US5153265A (en) * 1988-01-20 1992-10-06 Cetus Corporation Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1
NL8800577A (nl) * 1988-03-08 1989-10-02 Stichting Tech Wetenschapp Werkwijze voor het aanbrengen van een bloedcompatibele bekleding op polyetherurethaanvormstukken.
GB8824592D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Purification process
GB8824591D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Fractionation process
GB8824593D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Liposomes
US5162430A (en) * 1988-11-21 1992-11-10 Collagen Corporation Collagen-polymer conjugates
US4902502A (en) * 1989-01-23 1990-02-20 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US5089261A (en) * 1989-01-23 1992-02-18 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US5122614A (en) * 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
AU5858690A (en) * 1989-06-14 1991-01-08 Cetus Corporation Polymer/antibiotic conjugate
US5234903A (en) * 1989-11-22 1993-08-10 Enzon, Inc. Chemically modified hemoglobin as an effective, stable non-immunogenic red blood cell substitute
US5171264A (en) * 1990-02-28 1992-12-15 Massachusetts Institute Of Technology Immobilized polyethylene oxide star molecules for bioapplications
EP0546055B1 (en) * 1990-08-31 1996-07-10 Regents Of The University Of Minnesota Polyethylene glycol derivatives for solid-phase applications
US5380536A (en) * 1990-10-15 1995-01-10 The Board Of Regents, The University Of Texas System Biocompatible microcapsules
SE467308B (sv) * 1990-10-22 1992-06-29 Berol Nobel Ab Fast yta belagd med ett hydrofilt ytterskikt med kovalent bundna biopolymerer, saett att framstaella en saadan yta och ett konjugat daerfoer
DK0567566T4 (da) * 1991-01-18 2007-10-22 Amgen Inc Fremgangsmåder til behandling af tumornekrosefaktor-medierede sygdomme
JP3693671B2 (ja) * 1991-03-15 2005-09-07 アムゲン インコーポレーテッド ポリペプチドのｐｅｇ化
JPH06506217A (ja) * 1991-03-18 1994-07-14 エンゾン，インコーポレーテッド ポリペプチドまたはグリコポリペプチドとポリマーとのヒドラジン含有結合体
DK52791D0 (da) * 1991-03-22 1991-03-22 Kem En Tec As Adsorptionsmatricer
DK130991D0 (da) * 1991-07-04 1991-07-04 Immunodex K S Polymere konjugater
DE69213240T2 (de) * 1991-07-04 1997-04-24 Immunodex K/S, Glostrup Wasserlösliche reagenzien und konjugate auf polymerbasis, die vom divinylsulfon abgeleitete reste enthalten
US5414135A (en) 1991-12-30 1995-05-09 Sterling Winthrop Inc. Vinyl sulfone coupling of polyoxyalkylenes to proteins
EP0622394A1 (en) * 1993-04-30 1994-11-02 S.A. Laboratoires S.M.B. Reversible modification of sulfur-containing molecules with polyalkylene glycol derivatives and their use

Also Published As

Publication number Publication date
AU1054895A (en) 1995-05-29
EP0728155A1 (en) 1996-08-28
HK1042312A1 (zh) 2002-08-09
US6610281B2 (en) 2003-08-26
BG100568A (bg) 1996-12-31
NO961918L (no) 1996-07-12
RO118434B1 (ro) 2003-05-30
RU2176253C2 (ru) 2001-11-27
DK0728155T3 (da) 2002-07-29
KR100225746B1 (ko) 1999-10-15
CN1137280A (zh) 1996-12-04
SK60896A3 (en) 1997-04-09
EP0728155B1 (en) 2002-04-03
KR960705869A (ko) 1996-11-08
JPH09508926A (ja) 1997-09-09
DE69430317D1 (de) 2002-05-08
JP3114998B2 (ja) 2000-12-04
UA58481C2 (uk) 2003-08-15
US6894025B2 (en) 2005-05-17
HU225649B1 (en) 2007-05-29
CN1085689C (zh) 2002-05-29
US5900461A (en) 1999-05-04
AU687937B2 (en) 1998-03-05
US20050209416A1 (en) 2005-09-22
US7214366B2 (en) 2007-05-08
FI117441B (fi) 2006-10-13
PL180149B1 (pl) 2000-12-29
FI962004A (fi) 1996-05-10
HUP9601253A2 (en) 2001-06-28
PL314298A1 (en) 1996-09-02
RO121855B1 (ro) 2008-06-30
HU9601253D0 (en) 1996-07-29
EP1176160A2 (en) 2002-01-30
NZ276313A (en) 1997-04-24
CZ137596A3 (en) 1996-10-16
CZ295640B6 (cs) 2005-09-14
CA2176203A1 (en) 1995-05-18
NO315377B1 (no) 2003-08-25
US20020150548A1 (en) 2002-10-17
CA2176203C (en) 2003-06-10
NO961918D0 (no) 1996-05-10
DE69430317T2 (de) 2002-10-02
WO1995013312A1 (en) 1995-05-18
ATE215577T1 (de) 2002-04-15
BR9408048A (pt) 1996-12-24
US5739208A (en) 1998-04-14
EE9600128A (et) 1997-04-15
FI962004A0 (fi) 1996-05-10
US5446090A (en) 1995-08-29
US20040037801A1 (en) 2004-02-26
EE03448B1 (et) 2001-06-15
ES2173943T3 (es) 2002-11-01
EP1176160A3 (en) 2004-03-03
BG63399B1 (bg) 2001-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK284527B6 (sk) Vodorozpustné aktívne polyetylénglykolové sulfóny a spôsob ich prípravy
US8003742B2 (en) Polymer derivatives with proximal reactive groups
JP5681605B2 (ja) アジドまたはアセチレン末端水溶性ポリマー
EP1259562B1 (en) Sterically hindered derivatives of water soluble polymers
KR100807141B1 (ko) 고분자량 비펩티드성 중합체 유도체의 합성

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees

Effective date: 20101114