EA022752B1 - Длинные растворимые полипептиды рн20 и их использование - Google Patents

Длинные растворимые полипептиды рн20 и их использование Download PDF

Info

Publication number
EA022752B1
EA022752B1 EA201100908A EA201100908A EA022752B1 EA 022752 B1 EA022752 B1 EA 022752B1 EA 201100908 A EA201100908 A EA 201100908A EA 201100908 A EA201100908 A EA 201100908A EA 022752 B1 EA022752 B1 EA 022752B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
bie
zeg
rgo
azr
azp
Prior art date
Application number
EA201100908A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201100908A1 (ru
Inventor
Ги Веи
Кришнасами Панниирселвам
Грегори Ай Фрост
Луис Букбиндер
Original Assignee
Галозим, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Галозим, Инк. filed Critical Галозим, Инк.
Publication of EA201100908A1 publication Critical patent/EA201100908A1/ru
Publication of EA022752B1 publication Critical patent/EA022752B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6435—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a connective tissue peptide, e.g. collagen, fibronectin or gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/04—Amoebicides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2474—Hyaluronoglucosaminidase (3.2.1.35), i.e. hyaluronidase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

Изобретение включает растворимые полипептиды РН20, в том числе расширенные (длинные) растворимые полипептиды РН20, и их применение. Также предусмотрены укороченные с С-конца полипептиды РН20 и частично дегликозилированные полипептиды РН20, а также их использование.

Description

Приоритет по заявке на данное изобретение принадлежит предварительной заявке США № 61/281240, авторами которой являются Се \Уек Кпкйпакату Рапиеегке1уат, Ьошк ВоокЫиДег и Огедогу I. Ргок!, озаглавленной ΕΧΤΕΝΌΕΏ δΟΙΛ/ΒΙ.Κ РН20 РОЕУРЕРТГОЕ8 ΑΝΌ υδΕδ ΤΗΕΚΕΘΡ (Длинные растворимые полипептиды РН20 и их использование), поданной 13 ноября 2009 г., и предварительной заявке США № 61/201384, Се \Уек Кпкйпакату Рапиеегке1уат, Ьошк ВоокЫиДег и Огедогу I. Ргок!, озаглавленной ΕΧΤΕΝΏΕΌ δΟΙΛ/ΒΙ.Κ РН20 14)1.^343411)1^ ΑΝΌ υδΕδ ΤΗΕΚΕΘΡ (Длинные растворимые полипептиды РН20 и их использование), поданной 9 декабря 2008 г. Содержание вышеупомянутых родственных заявок в полном объеме включено в настоящее описание в виде ссылок.
Заявка на данное изобретение родственна заявке США № 12/653245, поданной одновременно с настоящей заявкой, озаглавленной ΕΧΤΕΝΌΕΏ δΘΕυΒΕΕ РН20 РΘ^ΥРΕРΤI^Εδ ΑΝΌ υδΕδ ΤΠΕΚΕΟΡ (Длинные растворимые полипептиды РН20 и их применение), которая претендует на приоритет предварительных заявок США № 61/281240 и 61/201384.
Область техники
Изобретение относится к растворимым полипептидам РН20, в том числе к длинным растворимым полипептидам РН20, и их применению. Изобретение также включает и другие укороченные с С-конца полипептиды РН20 и частично дегликозилированные полипептиды РН20 и их применение.
Уровень техники
Гиалуронан (гиалуроновая кислота, ГК) представляет собой полипептид, распространенный во внеклеточном матриксе множества тканей, особенно в мягкой соединительной ткани. В организме млекопитающих ГК также преимущественно встречается в коже, хрящах и в синовиальной жидкости. Гиалуроновая кислота также является основным компонентом стекловидного тела глаза. ГК играет важную роль в различных физиологических процессах, таких как водный гомеостаз и гомеостаз белков плазмы (Еаигеи! Т.С. е! а1. (1992), ΡΑδΕΒ 1. 6: 2397-2404).
Некоторые заболевания связаны с экспрессией и/или продукцией гиалуроновой кислоты. Гиалуронидазы представляют собой ферменты, которые разрушают гиалуронан. Выступая в роли катализаторов гидролиза ГК, гиалуронидазы могут быть использованы для лечения заболеваний или расстройств, связанных с накоплением ГК или других гликозаминогликанов. Кроме того, поскольку ГК является основным компонентом интерстициального барьера, гиалуронидазы способны увеличивать проницаемость тканей и, следовательно, могут быть использованы для усиления распространения и ускорения доставки терапевтических агентов. В терапевтических целях в комбинации с другими терапевтическими агентами, как правило, в качестве диспергирующих агентов и агентов, усиливающих распространение, были использованы различные гиалуронидазы (например НуДаке™, Уйгаке™ и ХУуДаке™). Многие из указанных ферментов являются бычьими или овечьими белками, которые могут быть иммуногенными для человека. Таким образом, существует потребность в улучшенных композициях гиалуронидаз, которые могут быть использованы для лечения.
Краткое описание изобретения
Изобретение включает растворимые полипептиды РН20, в том числе длинные растворимые полипептиды РН20 (екРН20), и их композиции. Предусмотренные в настоящем изобретении полипептиды РН20 представляют собой укороченные с С-конца растворимые белки, включая белки, в которых отсутствует сигнальная последовательность присоединения СР1-якоря (например, белки, в которых отсутствуют аминокислоты с 450 до 490). К растворимым полипептидам РН20 также относятся длинные растворимые полипептиды РН20, которые включают один или несколько аминокислотных остатков из сигнальной последовательности присоединения СР1-якоря соответствующего полноразмерного полипептида РН20 дикого типа. Также в данном изобретении предусмотрены другие модифицированные укороченные с С-конца полипептиды РН20. Также предусмотрены частично дегликозилированные формы всех описанных полипептидов. Кроме того, предусмотрены способы лечения с использованием предусмотренных полипептидов РН20.
Изобретение включает выделенные и существенно очищенные длинные растворимые гиалуронидазы РН20 (екРН20), которые могут быть Ν-гликозилированы или частично Ν-гликозилированы. В некоторых примерах частично Ν-гликозилированный полипептид екРН20 содержит, по меньшей мере, остаток Ν-ацетилглюкозамина, связанный по меньшей мере с каждым из двух Ν-замещенных остатков, таких как, например, аминокислотные остатки 368 и 393 из δΕφ ΙΌ ΝΟ: 107, или соответствующие аминокислотным остаткам 368 и 393 из δΕφ ΙΏ ΝΟ: 107 остатки. В некоторых аспектах частично Ν-гликозилированный полипептид екРН20 содержит не менее двух остатков Ν-ацетилглюкозамина, связанных по меньшей мере с каждым из двух Ν-замещенных остатков. Частично Ν-гликозилированный полипептид екРН20 по настоящему изобретению также может содержать разветвленные сахара.
Изобретение включает полипептиды екРН20 с последовательностями аминокислот, приведенными в любой из δΕφ ΙΏ ΝΟ: 60-63 и 102-104, а также их аллельные или видовые варианты. Кроме того, предусмотрены варианты полипептидов екРН20, не менее чем на 40, 45, 50, 55, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичные любой из последовательностей δΕφ ΙΏ ΝΟ: 60-63 и 102-104 и сохраняющие не менее 30% гиалуронидазной активности соответствующей немодифицированной фор- 1 022752 мы или полипептида, кодируемого нуклеиновой кислотой, которая кодирует полипептид из аминокислот 36-482 8ЕЦ ГО N0: 107. Такие полипептиды е§РН20 остаются растворимыми и активными. В одном из примеров е§РН20 представляет собой человеческую е§РН20, например, с последовательностью аминокислот, приведенной в любой из 8ЕЦ ГО N0: 60-63 и 102-104, или е§РН20 шимпанзе, например, с последовательностью аминокислот, соответствующей аминокислотам 36-491, 36-492, 36-493, 36-494, 36-495, 36-496, 36-497 или 36-498 из 81Т) ГО N0: 197.
Также в данном изобретении предусмотрены в значительной степени очищенные полипептиды РН20. Указанные полипептиды РН20 могут иметь последовательности аминокислот, приведенные в любой из 8ЕЦ ГО N0: 55-63 и 64-95, или их аллельные или видовые варианты. В другом примере полипептиды РН20 представляют собой варианты, не менее чем на 40, 45, 50, 55, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичные любой из последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 55-63 и 64-95 и сохраняющие не менее 30% гиалуронидазной активности соответствующей немодифицированной формы или полипептида, кодируемого нуклеиновой кислотой, которая кодирует полипептид из аминокислот 36-482 из 8ЕЦ ГО N0: 107. Такие полипептиды РН20 обладают промежуточной активностью.
Предусмотренные в данном изобретении полипептиды РН20 могут быть ^гликозилированы или частично ^гликозилированы. В некоторых примерах частично ^гликозилированные полипептиды е§РН20 содержат по меньшей мере один остаток ^ацетилглюкозамина, связанный по меньшей мере с каждым из двух Ь-замещенных остатков, таких как, например, аминокислотные остатки 368 и 393 из 8ЕЦ ГО N0: 107, или соответствующие аминокислотным остаткам 368 и 393 из 8ЕЦ ГО N0: 107 остатки. В некоторых аспектах частично ^гликозилированный полипептид е§РН20 содержит не менее двух остатков ^ацетилглюкозамина, связанных по меньшей мере с каждым из двух ^замещенных остатков. Частично ^гликозилированные полипептиды РН20 по настоящему документу также могут содержать разветвленные сахара. В некоторых аспектах полипептиды РН20 по настоящему документу являются растворимыми и могут представлять собой полипептиды РН20 человека, шимпанзе, макаки, обезьяны циномолгус, мыши, кролика, морской свинки, коровы или овцы.
Полипептиды е§РН20 и РН20 по настоящему изобретению могут быть модифицированы, например, путем сиалирования, альбуминирования, фарнезилирования, карбоксилирования, гидроксилирования или фосфорилирования. В некоторых аспектах полипептиды е§РН20 и РН20 модифицированы присоединением полимеров, таких как декстран или ПЭГ. В настоящем документе также предусмотрены конъюгаты, содержащие полипептиды е§РН20 или РН20. Примеры конъюгатов включают молекулы, в которых е§РН20 или РН20 конъюгированы с доменом для мультимеризации (например, доменом Ре), токсином, меткой для обнаружения или лекарством.
Также данное изобретение включает нуклеиновые кислоты, кодирующие описанные выше и предусмотренные в данном изобретении полипептиды е§РН20 и РН20. Указанные нуклеиновые кислоты включают нуклеиновые кислоты, которые кодируют полипептиды е§РН20 или РН20 с последовательностями, соответствующими аминокислотам 36-450, 36-451, 36-452, 36-453, 36-454, 36-455, 36-456, 36-457, 36-458, 36-459, 36-460, 36-461, 36-462, 36-463, 36-464, 36-465, 36-484, 36-485, 36-486, 36-487, 36-489, 36-491, 36-492, 36-493, 36-494, 36-495, 36-496 или 36-497 из 8ЕЦ ГО N0: 107, и нуклеиновые кислоты, которые кодируют е§РН20 с последовательностями, соответствующими аминокислотам 36-491, 36-492, 36-493, 36-494, 36-495, 36-496, 36-497 или 36-498 из 8ЕЦ ГО N0: 197. Также в данном изобретении предусмотрены векторы, которые содержат эти нуклеиновые кислоты, и клетки, которые содержат указанные векторы, такие как клетки СН0.
Изобретение включает композиции, содержащие один или несколько описанных здесь полипептидов е§РН20 или РН20. В некоторых примерах композиции содержат несколько полипептидов е§РН20 или РН20. Например, композиции могут содержать несколько полипептидов е§РН20, которые кодируются молекулами нуклеиновой кислоты, кодирующими последовательности, соответствующие аминокислотам 36-450, 36-451, 36-452, 36-453, 36-454, 36-455, 36-456, 36-457, 36-458, 36-459, 36-460, 36-461, 36-462, 36-463, 36-464, 36-465, 36-484, 36-485, 36-486, 36-487, 36-489, 36-491, 36-492, 36-493, 36-494, 36-495, 36-496 или 36-497 из 8ЕЦ ГО N0: 107, и которые кодируются молекулами нуклеиновой кислоты, кодирующими е§РН20 с последовательностью, соответствующей аминокислотам 36-491, 36-492, 36-493, 36-494, 36-495, 36-496, 36-497 или 36-498 из 8ЕЦ ГО N0: 197. В некоторых примерах композиции содержат полипептиды е§РН20 или РН20, которые выделяют из клеток СН0.
Предусмотренные в данном изобретении композиции могут представлять собой фармацевтические композиции. В некоторых примерах композиции содержат дополнительный терапевтический агент, который может быть включен в ту же композицию либо может быть включен в отдельную композицию. Примеры терапевтических агентов, которые могут быть включены в предусмотренные здесь композиции, включают химиотерапевтические агенты, анальгетики, противовоспалительные средства, противомикробные агенты, противоамебные агенты, противотрихомонадные агенты, агенты для лечения болезни Паркинсона, противомалярийные агенты, противосудорожные агенты, антидепрессанты, противоартритные агенты, противогрибковые агенты, антигипертензивные агенты, жаропонижающие агенты, противопаразитные агенты, антигистаминные агенты, агонисты альфа-адренорецепторов, альфа-блокаторы, анестетики, расширяющие бронхи агенты, биоцидные агенты, бактерицидные агенты, бактериостатические
- 2 022752 агенты, бета-адренергические блокаторы, блокаторы кальциевых каналов, сердечно-сосудистые агенты, противозачаточные агенты, противоотечные агенты, мочегонные агенты, депрессанты, диагностические агенты, электролиты, снотворные агенты, гормоны, средства против гипергликемии, миорелаксанты, агенты, вызывающие сокращение мышц, офтальмологические агенты, парасимпатомиметические агенты, антидепрессанты, седативные средства, симпатомиметики, транквилизаторы, агенты для лечения заболеваний, связанных с мочевой системой, агенты для лечения вагинальных заболеваний, противовирусные препараты, витамины, нестероидные противовоспалительные средства, ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента, полипептиды, белки, нуклеиновые кислоты, лекарства, органические молекулы и индукторы сна. В конкретном примере терапевтический агент представляет собой антитело, иммуноглобулин, бисфосфонат (такой как золентроновая кислота), цитокин, химиотерапевтическое средство или инсулин (например, быстродействующий инсулин).
Другие терапевтические агенты, которые могут быть включены в предусмотренные в данном изобретении композиции, включают, но не ограничиваются, ацивицин; акларубицин; акодазол; акронин; адозелезин; алдеслейкин; алемтузумаб; алитретиноин (9-цис-ретиноевая кислота); аллопуринол; алтретамин; алвоцидиб; амбазон; амбомицин; аметантрон; амифостин; аминоглутетимид; амсакрин; анастрозол; анаксирон; анситабин; антрамицин; апазиквон; аргимесна; триоксид мышьяка; аспарагиназу; асперлин; атримустин; азацитидин; азетепа; азотомицин; баноксантрон; батабулин; батимастат; вакцину БЦЖ; бенаксибин; бендамустин; бензодепа; бексаротен; бевацизумаб; бикалутамид; биетасерпин; бирикодар; бизантрен; димезилат биснафид; бизелезин; блеомицин; бортезомиб; бреквинар; бропиримин; будотитан; бусульфан; кактиномицин; калустерон; канертиниб; капецитабин; карацемид; карбетимер; карбоплатин; карбоквон; кармофур; кармустин с полифепрозаном; кармустин; карубицин; карзелезин; седефингол; селекоксиб; семадотин; хлорамбуцил; циотеронел; циролемицин; цисплатин; кладрибин; кланфенур; клофарабин; криснатол; циклофосфамид; липосомальный цитарабин; цитарабин; дакарбазин; дактиномицин; дарбепоэтин альфа; липосомальный даунорубицин; даунорубицин/дауномицин; даунорубицин; децитабин; денилейкин дифтитокс; декснигулдипин; дексоннаплатин; дексразоксан; дезагуанин; диазиквон; диброспидиум; диеногест; диналин; дизермолид; доцетаксел; дофеквидар; доксифлуридин; липосомальный доксорубицин; доксорубицин-НС1; липосомальный докорубицин-НС1 для инъекций; доксорубицинаы; дролоксифен; пропионат дромостанолона; дуазомицин; экомустин; эдатрексат; эдотекарин; эфлорнитин; элакридар; элинафид; раствор Эллиотта В; элсамитрусин; эмитефур; энлоплатин; энпромат; энзастаурин; эпипропидин; эпирубицин; эпоэтин альфа; эпталопрост; эрбулозол; эзорубицин; эстрамустин; этанидазол; этоглуцид; этопозид фосфат; этопозид УР-16; этопозиды; этоприн; эксеместан; эксизулинд; фадрозол; фазарабин; фенретинид; филграстим; флоксуридин; флударабин; фторурацил; 5-фторурацил; флуоксиместерон; флуроцитабин; фосхидон; фостриецин; фотретамин; фулвестрант; галарубицин; галоцитабин; гемцитабин; гемтузумаб/озогамицин; герохинол; гиматекан; гимерацил; глоксазон; глуфосфамид; гозерелин ацетат; гидроксимочевинуй; ибритумомаб/тиукситан; идарубицин; ифосфамид; илмофозин; иломастат; иматиниб мезилат; имексон; импросульфан; индизулам; инпроквон; интерферон альфа-2а; интерферон альфа-2Ъ; интерферон альфа, интерферон бета, интерферон гамма, интерферонами, интерлейкин-2 и другие интерлейкины (в том числе рекомбинантные интерлейкины); интоплицин; иобенгуан [131-1]; ипроплатин; иринотекан; ирсогладин; иксабепилон; кетотрексат; Ь-аланозин; ланреотид; лапатиниб; ледоксантрон; летрозол; лейковорин; лейпролид; лейпрорелин (лейпрорелид); левамизол; лексакальцитол; лиарозол; лобаплатин; лометрексол; ломустин/ССЫИ; ломустин; лонафарниб; лозоксантрон; луртотекан; мафосфамид; манносульфан; маримастат; мазопрокол; мейтансин; мехлоретамин; мехлоретамин/азотистый иприт, мегестрол ацетат; мегестрол; меленгестрол; мелфалан; мелфаланзил-РАМ; меногарил; мепитиостан; меркаптопурин; 6-меркаптопурин; месна; метезинд; метотрексат; метоксален; метомидат; метоприн; метуредепа; мибоплатин; мипроксифен; мизонидазол; митиндомид; митокарцин; митокромин; митофлаксон; митогиллин; митогуазон; митомалцин; митомицин С; митомицин; митонафид; митоквидон; митоспер; митотан; митоксантрон; митозоломид; мивобулин; мизорибин; мофаротен; мопидамол; мубритиниб; микофеноловую кислоту; фенпропионат нандролона; недаплатин; нелзарабин; неморубицин; нитракрин; нокодазол; нофетумомаб; ногаламицин; нолатрексед; нортопиксантрон; октреотид; опрелвекин; ормаплатин; ортатаксел; отерацил; оксалиплатин; оксизуран; оксофенарсин; паклитаксел; памидронат; патубилон; пегадемазу; пегаспаргазу; пегфилграстим; пелдезин; пелиомицин; пелитрексол; пеметрексед; пентамустин; пентостатин; пепломицин; перфосфамид; перифозин; пикоплатин; пинафид; пипоброман; пипосульфан; пирфенидон; пироксантрон; пиксантрон; плевитрексед; пликамицид митрамицина; пликамицин; пломестан; порфимер натрия; порфимер; порфиромицин; преднимустин; прокарбазин; пропамидин; проспидиум; пумитепу; пуромицин; пиразофурин; квинакрин; ранимустин; расбуриказу; рибоприм; ритросульфан; ритуксимаб; роглетимид; роквинимекс; руфокромомицин; сабарубицин; сафингол; сарграмостим; сатраплатин; себриплатин; семустин; симтразен; сизофиран; собузоксан; сорафениб; спарфозат; спарфозовую кислоту; спарсомицин; спирогерманий; спиромустин; спироплатин; скваламин; стрептонигрин; стрептоварицин; стрептозоцин; суфосфамид; сулофенур; сунитиниб манат; 6-ТО (тиогуанин); тацединалин; тальк; тализомицин; таллимустин; тамоксифен; тариквидар; тауромустин; текогалан; тегафур; телоксантрон; темопорфин; темозоломид; тенипозид/УМ-26; тенипозид; тероксирон; тестолактон; тиамиприн; тиагуанином; тиотепу; тиамиприн; тиазо- 3 022752 фурин; тиломизол; тилорон; тимкодар; тимонацик; тирапазамин; топиксантрон; топотекан; торемифен; тозитумомаб; трабектедин (эктеинасцидин 743); трастузумаб; трестолон; третиноин/ΆΤΚΆ; трицирибин; трилостан; триметрексат; триплатин тринитрат; трипторелин; трофосфамид; тубулозол; убенимекс; урацил иприт; уредепу; валрубицин; валсподар; вапреотид; вертепорфин; винбластин; винкристин; виндезин; винепидин; винфлунин; винформид; винглицинат; винлейцинол; винлейрозин; винорелбин; винрозидин; винтриптол; винзолидин; ворозол; ксантомицин А (гуамециклин); зениплатин; зиласкорб [2-Н]; зиностатин; золедронат; зорубицин и зосухидар.
В настоящем документе предусмотрен способ лечения заболеваний, связанных с гиалуроновой кислотой, или состояний, при которых субъекту вводят предусмотренные и описанные здесь е§РН20 или РН20 или предусмотренные и описанные здесь композиции, содержащие е§РН20 или РН20. Также предусмотрен способ лечения превышенного уровня гликозаминогликанов, способ лечения опухолей, лечения накопления гликозаминогликанов в головном мозге, лечения сердечно-сосудистых расстройств, лечения офтальмологических расстройств, лечения легочных заболеваний, способ усиления проницаемости плотных опухолей для химиотерапевтических агентов; способ лечения целлюлита или способ увеличения биодоступности лекарственных препаратов и других терапевтических средств. Описанные способы включают введение субъекту любых описанных здесь полипептидов е§РН20 или РН20 или композиций.
Предусмотренные в данном изобретении полипептиды е§РН20 и РН20 могут быть использованы вместо гиалуронидазы РН20, отдельно или в комбинации, в любых методах лечения или в комбинированной терапии, для которых гиалуронидазу РН20 используют в опубликованных заявках США № И820040268425, и820050260186 и и820060104968 и заявках США № 12/381844, 12/386249, 12/387225 и 12/386222.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 представлены выровненные аминокислотные последовательности полипептидов РН20 человека (8ЕО ГО N0: 107) и шимпанзе (8Е0 ГО N0: 197) (выровнены с помощью программы выравнивания С1и51а1^2). Аминокислотные остатки сигнальной последовательности присоединения 0Р1-якоря человеческого РН20, а также соответствующие аминокислоты в последовательности РН20 шимпанзе выделены жирным шрифтом и подчеркиванием. Символ * указывает, что расположенные выше остатки одинаковы для обеих выровненных последовательностей. Символ : указывает консервативные замены и символ . указывает полуконсервативные замены.
На фиг. 2 приведены основные типы Ν-гликанов у позвоночных, в том числе богатые маннозой гликаны, гибридные гликаные и сложные гликаны.
На фиг. 3 показаны сайты расщепления эндогликозидазой.
На фиг. 3А показаны сайты расщепления для эндогликозидазы Р1 и пептид Ν-гликозидазы Р (ПНГазы Р).
На фиг. 3В приведены сайты расщепления для эндогликозидазы Р2 и ПНГазы Р.
На фиг. 3С приведены сайты расщепления для эндогликозидазы Р3 и ПНГазы Р.
На фиг. 3Ό приведены сайты расщепления для эндогликозидазы Р4 и ПНГазы Р.
Подробное раскрытие изобретения
Обзор.
A. Определения.
B. Обзор.
1. РН20.
a) Гликозилирование.
b) 0Р1-якорь.
C. Длинные растворимые полипептиды РН20.
1. Человеческие полипептиды е§РН20.
2. Полипептиды е§РН20 других видов.
Ό. Частично гликозилированные полипептиды РН20.
1. Полипептиды РН20.
2. Укороченные с С-конца полипептиды РН20.
3. Дополнительные модификации.
- 4 022752
Конъюгирование с полимерами.
Е. Методы получения нуклеиновых кислот, кодирующих длинные растворимые гиалуронидазы РН20 и другие гиалуронидазы РН20, а также самих полипептидов.
1. Векторы и клетки.
2. Экспрессия.
a) Прокариотические клетки.
b) Клетки дрожжей.
c) Клетки насекомых.
б) Клетки млекопитающих. е) Растения.
3. Способы очистки..
Р. Подготовка, получение композиций и введение длинных растворимых полипептидов РН20 и других растворимых полипептидов РН20
1. Растворы и эмульсии для инъекций.
Лиофилизированные порошки.
2. Местное введение.
3. Композиции для других способов введения.
4. Способы введения и дозы.
5. Упаковка, изделия и наборы.
С. Анализы.
1. Гиалуронидазная активность.
2. Растворимость.
H. Способы лечения и применения длинных растворимых РН20 и других растворимых РН20 и комбинированная терапия.
I. Применение в качестве агента для распространения и для комбинированной терапии.
2. Применение для удаления избытка гликозаминогликанов.
a) Применение в лечении рака.
b) Применение в лечении накопления гликозаминогликанов в мозге.
c) Применение в лечении накопления гликозаминогликанов при сердечно-сосудистых заболеваниях.
б) Применение в витрэктомии и при офтальмологических нарушениях и состояниях. е) Применение при гиподермоклизе. ί) Применение в генной терапии. д) Косметическое применение.
Ь) Применение при трансплантации органов. ί) Применение при заболеваниях легких.
3. Другие области применения.
I. Примеры.
А. Определения.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют то же значение, как это обычно понимается специалистом в области техники, к которой относится изобретение. Все патенты, патентные заявки, опубликованные заявки и публикации, последовательности СепЬапк, базы данных, веб-сайты и другие печатные материалы, упомянутые на протяжении всего приведенного здесь раскрытия, если не указано иное, включены в настоящий документ в качестве ссылки в полном объеме. В случае если существует множество определений упомянутого в данном изобретении термина, преимущественную силу имеет определение, приведенное в этом разделе. Если в данном изобретении приведена ссылка на иРЬ или другой такой идентификатор или адрес, то подразумевается, что такой идентификатор может измениться и конкретная информация в сети Интернет может появиться и исчезнуть, однако эквивалентную информацию можно найти с помощью функции поиска в Интернете. Такая ссылка свидетельствует о наличии и публичном распространении такой информации.
В настоящем документе гиалуронидазы относятся к классу ферментов, которые разрушают гиалуроновую кислоту. Гиалуронидазы включают, но не ограничиваются, бактериальные гиалуронидазы (ЕС 4.2.2.1 или ЕС 4.2.99.1), гиалуронидазы пиявок, других паразитов и ракообразных (ЕС 3.2.1.36) и гиалуронидазы млекопитающих (ЕС 3.2.1.35). Гиалуронидазы включают любые гиалуронидазы не человеческого происхождения, включая, но не ограничиваясь, мышиные, собачьи, кошачьи, заячьи, птичьи, бычьи, овечьи, свиные, лошадиные, рыбьи, лягушачьи, бактериальные гиалуронидазы и гиалуронидазы пиявок, других паразитов и ракообразных. Примеры человеческих гиалуронидаз включают НУАЫ, ΗΥΛΕ2, НУАЬ3, НУАЬ4 и РН20 (8ЕЦ ГО N0: 107). Также гиалуронидазы включают растворимые гиалуронидазы, включая баранью и бычью РН20, растворимую человеческую РН20 и гНиРН20. Примеры коммерчески доступных бычьих или овечьих растворимых гиалуронидаз включают гиалуронидазу Указе® (овечья гиалуронидаза) и гиалуронидазу АшрЬабазе® (бычья гиалуронидаза).
- 5 022752
В настоящем документе РН20 относится к типу гиалуронидазы, который встречается в сперме и активен в нейтральной среде. РН20 локализована на поверхности сперматозоидов, в акросоме лизосомного происхождения, где она связана с внутренней акросомной мембраной. РН20 включают гиалуронидазы любого происхождения, включая, но не ограничиваясь, человеческую гиалуронидазу, гиалуронидазу шимпанзе, обезьяны циномолгус, обезьяны резус, мышиную, бычью, баранью гиалуронидазу, гиалуронидазу морской свинки, кроличью и крысиную гиалуронидазу. Примеры полипептидов РН20 включают гиалуронидазы человека (8ЕЦ ГО N0: 107), шимпанзе (8ЕЦ ГО N0: 197), обезьяны резус (8ЕЦ ГО N0: 198), обезьяны циномолгус (8ЕЦ ГО N0: 114), коровы (например, 8ЕЦ ГО N0: 111 и 119), мыши (8Ш ГО N0: 117), крысы (81Т) ГО N0: 116), кролика (81Т) ГО N0: 112), овцы (81 У) ГО N0: 113, 118 и 120) и морской свинки (8ЕЦ ГО N0: 115). Понятие РН20 включает полипептиды-предшественники РН20 и зрелые полипептиды РН20 (например, полипептиды, в которых удалена сигнальная последовательность), их усеченные формы, обладающие активностью, включает аллельные варианты и видовые варианты, варианты сплайсинга и другие варианты, включая полипептиды с 40, 45, 50, 55, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99% или большей идентичностью последовательности с полипептидомпредшественником, приведенным в 8ЕЦ ГО N0: 107 и 109, или их зрелые формы. РН20 также включают полипептиды, содержащие химические или посттрансляционные модификации, а также полипептиды без химических или посттрансляционных модификаций. Такие модификации включают, но не ограничиваются, пегилирование, альбуминирование, гликозилирование, фарнезилирование, карбоксилирование, гидроксилирование, фосфорилирование, а также другие модификации полипептидов, известные в уровне техники. Усеченные гиалуронидазы РН20 относятся к любой усеченной с С-конца форме гиалуронидазы, в частности к усеченной и активной в нейтральной среде при наличии ^гликозилирования гиалуронидазе.
В настоящем документе растворимая РН20 относится к любой форме РН20, которая является растворимой в физиологических условиях. Растворимая РН20 может быть идентифицирована, например, по распределению в водную фазу раствора Тритон® Х-114 при температуре 37°С (ВогЛег с1 а1. (1981), 1. ΒίοΙ. СНст., 256:1604-7). Заякоренная в мембране РН20, такая как заякоренная липидом РН20, включая СР1-заякоренную РН20, переходит в обогащенную детергентом фазу, но переходит в обедненную детергентом или водную фазу после обработки фосфолипазой-С. Растворимые РН20 включают заякоренные в мембране РН20, в которых один или несколько районов, связанных с заякореванием РН20 в мембране, удален или изменен, где растворимая форма сохраняет гиалуронидазную активность. Растворимые РН20 также включают рекомбинантные растворимые РН20 и полипептиды, содержащиеся в природных источниках или очищенные из природных источников, таких как, например, экстракт из овечьих или коровьих яичек. Примером таких растворимых РН20 является растворимая человеческая РН20.
В настоящем документе растворимая человеческая РН20 или 8НиРН20 включает полипептиды РН20, в которых отсутствует вся сигнальная последовательность присоединения гликозилфосфатидилинозитольного (СР1) якоря на С-конце или ее часть, так что после экспрессии полипептиды являются растворимыми в физиологических условиях. Растворимость можно оценить с помощью любого подходящего метода, который демонстрирует растворимость в физиологических условиях. Примером такого метода является описанный выше и в примерах анализ с Тритон® Х-114, при котором оценивают распределение полипептида между водной и неполярной фазами. Кроме того, растворимый человеческий полипептид РН20 при получении в клетках СН0, например клетках СН0-8, экспрессируется и секретируется в культуральную среду. Растворимые человеческие полипептиды РН20, однако, не ограничиваются получаемым в клетках СН0 полипептидом, полипептид может быть получен в любом типе клеток или любым другим способом, включая рекомбинантную экспрессию и синтез полипептида. Указание на секрецию в клетках СН0 является дефинициональным. То есть, если полипептид может быть экспрессирован и секретирован в клетках СН0 и является растворимым, т.е. полипептид переходит в водную фазу при экстракции Тритоном® Х-114, он представляет собой растворимый полипептид РН20 в не зависимости о того, как он получен. Полипептиды-предшественники полипептидов 8НиРН20 могут включать сигнальную последовательность, такую как гетерологичную или не гетерологичную (т.е. нативную) сигнальную последовательность. Примерами предшественников являются полипептиды, которые включают сигнальную последовательность, такую как нативную сигнальную последовательность из 35 аминокислот, соответствующую положениям 1-35 (см., например, аминокислоты 1-35 из 8ЕЦ ГО N0: 107).
В настоящем документе длинная растворимая РН20 или е§РН20 включает растворимый полипептид РН20, который включает остатки до сигнальной последовательности присоединения СР1-якоря и один или несколько последовательно расположенных остатков из сигнальной последовательности присоединения СР1-якоря, если при этом е§РН20 является растворимым при физиологических условиях. Растворимость в физиологических условиях может быть определена любым способом, известным специалистам в данной области. Например, она может быть оценена с помощью анализа с Тритоном® Х114, описанного выше и в примерах. Кроме того, как уже говорилось выше, растворимая РН20 при получении в клетках СН0, например клетках СН0-8, представляет собой полипептид, который экспрессируется и секретируется в культуральную среду. Растворимые человеческие полипептиды РН20, однако, не
- 6 022752 ограничиваются получаемыми в клетках СНО полипептидами, но могут быть получены в любом типе клеток или любым способом, в том числе рекомбинантной экспрессией и полипептидным синтезом. Указание на секрецию в клетках СНО является дефинициональным. То есть, если полипептид может быть экспрессирован и секретирован в клетках СНО и является растворимым, т.е. полипептид переходит в водную фазу при экстракции Тритоном® Х-114, он представляет собой растворимый полипептид РН20 вне зависимости от того, как он получен. Растворимые человеческие полипептиды свРН20 включают, помимо остатков 36-490, одну или несколько последовательно расположенных аминокислот, начиная с позиции 491 из 8ЕО ГО N0: 107, при условии, что полипептид является растворимым. Примеры человеческих растворимых полипептидов свРН20 включают полипептиды с аминокислотной последовательностью, соответствующей аминокислотам 36-491, 36-492, 36-493, 36-494, 36-495, 36-496 и 36-497 из 8Е0 ГО N0: 107. Примеры также включают полипептиды с аминокислотной последовательностью, приведенной в любой из 8Е0 ГО N0: 60-63 и 102-104. Кроме того, примеры включают аллельные варианты и другие варианты с 40, 45, 50, 55, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% и большей идентичностью последовательности с соответствующими полипептидами из 8Е0 ГО N0: 60-63 и 102-104 при условии сохранения ими активности в нейтральной среде и растворимости. Указание идентичности последовательности относится к вариантам с аминокислотными заменами.
В настоящем документе е§РН20 включает предшественников полипептидов е§РН20 и зрелые полипептиды свРН20 (в которых удалена сигнальная последовательность), их усеченные формы, которые сохраняют ферментативную активность (сохраняют по меньшей мере 1, 10, 20, 30, 40, 50% или более от активности полноразмерной формы) и которые являются растворимыми, и включает аллельные и видовые варианты, варианты сплайсинга и другие варианты, в том числе полипептиды по меньшей мере с 40, 45, 50, 55, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или большей идентичностью последовательности по сравнению с полипептидом-предшественником, приведенным в 8ЕО ГО N0: 107 и 109, или его зрелой формой.
В настоящем документе евРН20 также относится к полипептидам с химическими или посттрансляционными модификациями и полипептидам без химических или посттрансляционных модификаций. Такие модификации включают, но не ограничиваются, пегилирование, альбуминирование, гликозилирование, фарнезилирование, карбоксилирование, гидроксилирование, фосфорилирование, а также другие модификации полипептидов, известные в уровне техники.
В настоящем документе растворимая рекомбинантная человеческая РН20 (гНиРН20) относится к растворимой форме человеческой РН20, экспрессированной рекомбинантно и секретированной в клетках яичников китайского хомячка (СН0). Растворимая гНиРН20 кодируется включающей сигнальную последовательность нуклеиновой кислотой, которая приведена в 8Е0 ГО N0: 109. Также предусмотрены молекулы ДНК, представляющие собой ее аллельные варианты, и другие растворимые варианты. Кодирующие растворимую гНиРН20 нуклеиновые кислоты экспрессируют в клетках СН0, которые секретируют зрелый полипептид. При получении в культуре наблюдается гетерогенность белка на С-конце, так что продукт представляет собой смесь полипептидов, включающих один или более из полипептидов 8Е0 ГО N0: 122 - 8Е0 ГО N0: 127 в различном количественном соотношении.
Аналогично, для других форм РН20, таких как евРН20, рекомбинантно экспрессированные полипептиды и композиции могут включать множество видов полипептидов с гетерогенностью на С-конце. Например, композиции с рекомбинантно экспрессированной евРН20. полученной экспрессией полипептида 8Е0 ГО N0: 8, который кодирует евРН20, включающей аминокислоты 36-497, могут включать формы с меньшим количеством аминокислот, например 36-496, 36-495.
В настоящем документе ^замещенный остаток относится к аминокислотному остатку аспарагина (Ы) в полипептиде, который может быть посттрансляционно модифицирован гликозилированием. Примеры ^замещенных остатков в РН20 человека включают аминокислоты N82, N166, N235, N254, N368 и N393 человеческого полипептида РН20, приведенного в 8Е0 ГО N0: 107.
В настоящем документе ^гликозилированный полипептид относится к полипептиду РН20 или его усеченной форме, содержащим по меньшей мере три олигосахарида, присоединенных к ^замещенным остаткам аминокислот, например ^замещенным остаткам, соответствующим остаткам N235, N368 и N393 из последовательности 8Е0 ГО N0: 107. ^гликозилированный полипептид включает полипептид, в котором к трем, четырем, пяти или всем ^замещенным остаткам присоединены олигосахариды. ^связанные олигосахариды могут включать олигоманнозы, сложные, гибридные или сульфатированные олигосахариды или другие олигосахариды и моносахариды.
В настоящем документе ^гликозилированный полипептид относится к полипептиду, который содержит, по меньшей мере, N-ацетилглюкозаминовый гликан, присоединенный по меньшей мере к трем Н-замещеннымм остаткам. Частично гликозилированный полипептид может включать различные формы гликанов, в том числе моносахариды, олигосахариды и разветвленные сахара, в том числе образовавшиеся при обработке полипептида ЕпбоН, ΕηάοΡ1, ΕηάοΡ2 и/или ΕηάοΡ3. Расщепление гликанов указанными ферментами представлено, например, на фиг. 2.
В настоящем документе дегликозилированный полипептид РН20 относится к предусмотренному в данном изобретении полипептиду РН20, в котором гликозилированы не все возможные сайты гликози- 7 022752 лирования. Дегликозилирование может быть осуществлено, например, удалением сахаров, путем предупреждения гликозилирования или изменением полипептидной цепи для устранения сайтов гликозилирования. Как описано в данном изобретении, некоторые сайты Ν-гликозилирования не нужны для проявления активности, в то время как другие необходимы.
В настоящем документе связанные с гиалуроновой кислотой заболевания, расстройства или состояния относятся к любому заболеванию или состоянию, при котором в качестве причины, последствия или иного фактора наблюдается повышение уровня гиалуроновой кислоты. Связанные с гиалуроновой кислотой заболевания и состояния сопровождаются повышенной экспрессией гиалуроновой кислоты в тканях или клетках, увеличением давления интерстициальной жидкости, снижением сосудистого объема и/или повышением содержания воды в тканях. Связанные с гиалуроновой кислотой заболевания, нарушения или состояния можно лечить введением композиции, содержащей расщепляющий гиалуронан фермент, такой как гиалуронидазу, например растворимую гиалуронидазу, причем лечение можно проводить указанной композицией отдельно либо в сочетании или в дополнение к другому виду лечения и/или агенту. Примеры заболеваний и состояний включают, но не ограничиваются, богатые гиалуронаном раки, например опухоли, в том числе плотные опухоли, такие как опухоли на поздней стадии рака, метастатические раки, недифференцированные раки, рак яичников, рак ίη δίίπ (18С), плоскоклеточный рак (8СС), рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легкого, рак молочной железы, рак толстой кишки и другие виды рака. Также примерами связанных с гиалуроновой кислотой заболеваний или состояний являются заболевания, связанные с повышенным давлением интерстициальной жидкости, такие как связанные с внутридисковым давлением заболевания, и отеки, например отек при пересадке органов, инсульте, травме мозга или другой травме. Примеры связанных с гиалуроновой кислотой заболеваний или состояний включают заболевания и состояния, связанные с повышением давления интерстициальной жидкости, снижением сосудистого объема и/или повышением содержания воды в тканях, включая рак, повышенное внутридисковое давление и отеки. В одном из примеров лечение связанного с гиалуроновой кислотой заболевания, состояния или нарушения приводит к улучшению, уменьшению или другому полезному эффекту по отношению к повышенному давлению интерстициальной жидкости (ГРР), сниженному сосудистому объему и повышенному содержанию воды в тканях.
В настоящем документе конъюгат относится к растворимым полипептидам РН20, связанным напрямую или не напрямую с одним или несколькими другими полипептидами или химическими фрагментами. Такие конъюгаты включают слитые белки, полученные химическим конъюгированием или с применением любого другого метода, где по меньшей мере один растворимый полипептид РН20 связан напрямую или не напрямую с другим полипептидом или химическим фрагментом, при этом конъюгат сохраняет гиалуронидазную активность. Примеры конъюгатов по настоящему изобретению включают полипептиды РН20, связанные напрямую или не напрямую с доменом мультимеризации, таким как Ре-фрагмент, токсином, меткой или лекарством.
В настоящем документе белок слияния относится к полипептиду, кодируемому нуклеиновой кислотой, содержащей кодирующую последовательность из одной молекулы нуклеиновой кислоты и кодирующую последовательность из другой молекулы нуклеиновой кислоты, в которой кодирующие последовательности находятся в одной рамке считывания, так что транскрипция и трансляция гибридной конструкции в клетке-хозяине приводят к белку, включающему два белка. Две молекулы могут непосредственно соседствовать в конструкции или могут быть разделены линкерным полипептидом, который содержит 1, 2, 3 или более аминокислот, но обычно менее чем 10, 9, 8, 7 или 6 аминокислот. Белковый продукт, кодируемый гибридной конструкцией, называют белком слияния. Примеры белков слияния включают слитые с Рс белки.
В настоящем документе полимер, конъюгированный с разрушающим гиалуроновую кислоту ферментом, таким как гиалуронидаза, относится к любому полимеру, который ковалентно или иным образом стабильно связан, напрямую или через линкер, с разрушающим гиалуроновую кислоту ферментом. Такие полимеры, как правило, увеличивают период полураспада белка в сыворотке, и включают, но не ограничиваются полимерами из остатков сиаловой кислоты, фрагментами полиэтиленгликоля, декстраном, сахарами и другими фрагментами, например, присоединяемыми при гликозилировании.
В настоящем документе активность относится к функциональной активности или активностям полипептида или его части, связанным с активностью полноразмерного (целого) белка. Функциональная активность включает, но не ограничивается, биологическую активность, каталитическую и ферментативную активность, антигенность (способность связывать или конкурировать с полипептидом за связывание с антителами против полипептида), иммуногенность, способность образовывать мультимеры и способность специфически связывать рецепторы или лиганды полипептида.
В настоящем документе гиалуронидазная активность относится к способности ферментативно катализировать расщепление гиалуроновой кислоты. В тесте фармакопеи США (И8Р) XXII издания на гиалуронидазу гиалуронидазную активность определяют косвенно, измеряя оставшееся количество высокомолекулярной гиалуроновой кислоты или гиалуронана в качестве субстрата после проведения ферментативной реакции с ГК в течение 30 мин при 37°С (υ8Ρ-ΝΡ XXII XVII (1990) 644-645, Конвенция о Фарма- 8 022752 копее США, Роквилл, штат Мэриленд). Для определения относительной активности любой гиалуронидазы в единицах активности в анализе может быть использован стандартный раствор сравнения. Для определения гиалуронидазной активности гиалуронидаз, например РН20, в том числе растворимой РН20 и е§РН20, известны в уровне техники и описаны здесь ίη νίίτο анализы. Примеры анализов включают анализ микромутности, описанный ниже (см., например, пример 12), при котором расщепление гиалуроновой кислоты гиалуронидазой измеряют косвенно по нерастворимому осадку, образующемуся при связывании нерасщепленной гиалуроновой кислоты с сывороточным альбумином. Для построения стандартной кривой для определения активности исследуемой гиалуронидазы в единицах активности могут быть использованы стандартные образцы.
В настоящем документе активность в нейтральной среде относится к способности полипептида РН20 ферментативно катализировать расщепление гиалуроновой кислоты при нейтральном рН. Активная в нейтральной среде укороченная с С-конца или частично Ν-гликозилированная РН20 по настоящему документу обладает приблизительно 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 300, 400, 500, 1000% активности или большей активностью по сравнению с гиалуронидазной активностью соответствующей активной в нейтральной среде не укороченной с С-конца или не частично Ν-гликозилированной РН20.
В настоящем документе сигнальная последовательность присоединения СР1-якоря является С-концевой аминокислотной последовательностью, которая направляет присоединение предварительно синтезированного СР1-якоря к полипептиду в просвете ЭР. Сигнальная последовательность присоединения СР1-якоря присутствует в предшественниках полипептидов с СР1-якорем, таких как полипептиды РН20 с СР1-якорем. С-концевая сигнальная последовательность присоединения СР1-якоря, как правило, содержит преимущественно гидрофобную область из 8-20 аминокислот, которой предшествует гидрофильный спейсер из 8-12 аминокислот, расположенный непосредственно после ω-сайта или сайта присоединения СР1-якоря. Сигнальная последовательность присоединения СР1-якоря может быть легко идентифицирована с помощью хорошо известных в уровне техники методов. Они включают, но не ограничиваются, ίη 81Йсо методы и алгоритмы (см., например ШепГпепй еί а1. (1995), Ме11юЙ5 Εηζγιηοΐ. 250:571-582, Е15епЬаЬет е1 а1. (1999), 1. ΒίοΙ. СЬет. 292:741-758, Кгопедд и ΒΦοζ, (1999), ^еίес1юп/ргеЙ1с1юп οΓ ОР1 с1еаνаде Фе (ОР1-апс1юг) ίη а р^οίе^η (ЭСР1). например, веб-сайт 129.194.185.165/йдр1/, РапкЬаикет еί а1. (2005), Β^ο^ηΓο^таί^С8, 21:1846-1852, Отае1хеЬагпа еί а1. (2007), Р^οίеοт^с8 7:1951-1960, Р^е^1еοη^ еί а1. (2008), ВМС Β^ο^ηΓο^таί^С8, 9:392), а также протоколы, легко доступные на биоинформатических веб-сайтах, таких как веб-сайт ЕхРА8у Р^οίеοт^с8 ίοοίδ (веб-сайт еxра8у.сЬ/ίοο18/).
В настоящем документе бифукозилированный полипептид относится к полипептиду, который включает два остатка фукозы, присоединенных к Ν-ацетилглюкозаминовому ядру, где один остаток присоединен α-1,3-связью, а другой остаток присоединен а-1,6-связью, а Ν-ацетилглюкозаминовый фрагмент связан с остатком аспарагина в полипептидной цепи. Бифукозилированные полипептиды обычно производятся в клетках насекомых.
В настоящем документе нуклеиновые кислоты включают ДНК, РНК и их аналоги, в том числе пептидные нуклеиновые кислоты (ПНК), и их смеси. Нуклеиновые кислоты могут быть одноцепочечными или двухцепочечными. При упоминании зондов или праймеров, необязательно меченных, например, обнаруживаемой меткой, например люминесцентной или радиоактивной меткой, предусмотрены одноцепочечные молекулы. Длина таких молекул, как правило, достаточна для того, чтобы их мишень при гибридизации или праймировании библиотеки была статистически уникальна или была представлена низким числом копий (обычно менее 5, как правило, менее 3). Обычно зонд или праймер содержит последовательность по меньшей мере из 14, 16 или 30 расположенных подряд нуклеотидов, комплементарную или идентичную последовательности представляющего интерес гена. Зонды и праймеры могут включать 10, 20, 30, 50,100 или более нуклеотидов в длину.
В настоящем документе пептид относится к полипептиду, длина которого больше или равна 2 аминокислотам и меньше или равна 40 аминокислотам.
В настоящем документе аминокислоты, встречающиеся в различных приведенных в данном изобретении последовательностях аминокислот, определяются в соответствии с их известными, трехбуквенными или однобуквенными обозначениями (табл. 1). Нуклеотиды, встречающиеся в различных фрагментах нуклеиновых кислот, обозначены стандартными однобуквенными обозначениями, рутинно употребляемыми в уровне техники.
В настоящем документе термин аминокислота относится к органическому соединению, содержащему аминогруппу и карбоксильную группу. Полипептид содержит две или более аминокислоты. В настоящем изобретении аминокислоты включают 20 природных аминокислот, неприродные аминокислоты и аналоги аминокислот (например, аминокислоты с боковой цепью у α-атома углерода).
В настоящем документе термин аминокислотный остаток относится к аминокислоте, образующейся при химическом расщеплении (гидролизе) полипептида по пептидным связям. Аминокислотные остатки по настоящему документу находятся в Ь изомерной форме. Остатки в Ό изомерной форме,
- 9 022752 обозначенные таким образом, могут быть заменены на любой остаток Ь-аминокислоты, если при этом полипептид сохраняет желаемое свойство. ΝΗ2 относится к свободной аминогруппе, присутствующей на аминоконце полипептида. СООН относится к свободной карбоксильной группе, присутствующей на карбоксильном конце полипептида. Аббревиатуры для обозначения аминокислотных остатков, соответствующие стандартной полипептидной номенклатуре, описанной в й. ΒίοΙ. Сйет, 243. 3557-3559 (1968) и принятой 37 С.Р.К § 1.821-1.822, приведены в табл. 1.
Таблица 1
Таблица соответствия
Символ Амин окислота
Однобуквенное обозначение Трехбуквенное обозначение
Υ Туг тирозин
О О1у глицин
Р РЬе фенилаланин
м Ме1 метионин
А А1а аланин
8 8ег серин
I Не изолейцин
Ь Ьеи лейцин
Т ТЬг валин
V Уа1 треонин
Р Рго пролин
К Ьуз лизин
Н ΗΪ5 гистидин
<5 О1п глутамин
Е О1и глутаминовая кислота
Ζ О1х О1п и/или О1и
V/ Тгр триптофан
К Агд аргинин
Ώ Азр аспарагиновая кислота
N Азп аспарагин
В Азх Азп и/или Азр
С Суз цистеин
X Хаа неизвестная или другая
Все последовательности аминокислотных остатков представлены в данном изобретении в виде формул при ориентации слева направо в обычном направлении от аминоконца к карбоксильному концу. Термин аминокислотный остаток включает аминокислоты, перечисленные в табл. 1, и модифицированные и необычные аминокислоты, такие как указанные в приведенных здесь в качестве ссылки § 1.8211.822 37 С.Р.К. аминокислоты. Кроме того, следует отметить, что тире в начале или в конце последовательности аминокислотных остатков обозначает пептидную связь с последовательностью из одного или более аминокислотных остатков, связь с аминоконцевой группой, такой как ΝΗ2, или карбоксильной концевой группой, такой как СООН.
В настоящем документе термин природные α-аминокислоты относится к остаткам 20 α-аминокислот, встречающихся в природе, которые включаются в белок посредством специфического распознавания кодона мРНК молекулой тРНК, несущей остаток аминокислоты. Не встречающиеся в природе аминокислоты включают, например, аминокислоты или аналоги аминокислот, отличающиеся от 20 природных аминокислот и включающие, но не ограничивающиеся, Ό-изостереомеры аминокислот. Примеры неприродных аминокислот описаны в данном изобретении и известны специалистам в данной области.
В настоящем документе ДНК-конструкция представляет собой одноцепочечную или двухцепочечную, линейную или кольцевую молекулу ДНК, которая содержит фрагменты ДНК, комбинированные и соединенные в неприродном порядке. ДНК-конструкции существуют как результат человеческой манипуляции и включают клоны и другие копии искусственных молекул.
В настоящем документе фрагмент ДНК представляет собой часть более крупной молекулы ДНК с определенными атрибутами. Например, фрагмент ДНК, кодирующий указанный полипептид, представляет собой часть большей молекулы
ДНК, такой как плазмида или фрагмент плазмиды, который при чтении от 5' к 3' кодирует последо- 10 022752 вательность аминокислот указанного полипептида.
В настоящем документе термин полинуклеотид означает одноцепочечный или двухцепочечный полимер дезоксирибонуклеотидов или рибонуклеотидных оснований, читаемый от 5'- к 3'-концу. Полинуклеотиды включают РНК и ДНК и могут быть выделены из природных источников, синтезированы ίη νίίτο или получены комбинацией натуральных и синтетических молекул. Длину полинуклеотидных молекул в данном изобретении приводят в нуклеотидах (сокращенно нт) или парах оснований (сокращенно по). Определение длины в нуклеотидах применяют для одноцепочечных и двухцепочечных молекул, где позволяет контекст. Когда термин применяют к двухцепочечной молекуле, он употребляется для обозначения общей длины и эквивалентен термину пара оснований. Специалисту в данной области техники очевидно, что две цепи двухцепочечного полинуклеотида могут незначительно отличаться по длине и что концы их могут быть расположены уступом, поэтому не все нуклеотиды в двухцепочечной молекуле полинуклеотида могут образовывать пары. Такие непарные концы, как правило, не превышают в длину 20 нуклеотидов.
В настоящем документе сходство между двумя белками или нуклеиновыми кислотами относится к подобию аминокислотных последовательностей белков или нуклеотидных последовательностей нуклеиновых кислот. Сходство может быть определено по степени идентичности и/или гомологии последовательностей остатков и самих содержащихся в них остатков. Методы оценки степени сходства белков или нуклеиновых кислот хорошо известны специалистам в данной области. Например, в одном методе оценки сходства последовательностей две аминокислотные или нуклеотидные последовательности выравнивают таким образом, чтобы достичь максимального уровня идентичности между последовательностями. Идентичность относится к степени, в которой аминокислотные или нуклеотидные последовательности инвариантны. При выравнивании аминокислотных последовательностей, и в некоторой степени нуклеотидных последовательностей, также возможно учитывать консервативные различия и/или частые замены аминокислот (или нуклеотидов). Различия являются консервативными при сохранении физико-химических свойств участвующих остатков. Выравнивание может быть глобальным (выравнивание сравниваемых последовательностей по всей длине последовательностей, включая все остатки) или локальным (выравнивание частей последовательностей, которые включают только наиболее близкие район или районы).
Идентичность имеет признанное в данной области значение и может быть рассчитана с применением опубликованных методов (см., например, Сотри1аЦопа1 Мо1еси1аг Βίοίοβν. Ьевк, А.М., ОхРэгб итуегвбу Ргевв, Нью-Йорк, 1988; В^οсοтриί^ηд: ΙηΓοηηαΐΚδ апб Оегюте Рю^еНв, διηίΐΐτ И.^., Асабетю Ргевв, Нью-Йорк, 1993; СотриГОг Апа1у515 οΓ Зесцюпсе ИаН, часть I, ΟτίΓΓίη, А.М. и ΟτίΓΓίη, Н.О., Нитапа Ргевв, №\ν 1етвеу, 1994; Зециепсе Апа1у515 ш ΜοΚ^Πτ ВюШду, νοη Неш)е, О., Асабетю Ртевв, 1987 и Зесцюпсе Аиа1ув1в Рптег Οπ^Κογ, М. аиб Оетегеих, 1., М δίοο&οη Ргевв, №\ν ΥογΙυ 1991). Хотя существует множество методов определения идентичности между двумя полинуклеотидами или полипептидами, термин идентичность хорошо известен квалифицированному специалисту (СапШ, Н., ЫрГОп И., 81АМ 1. Арркеб МаШ. 48:1073 (1988)).
В настоящем документе термин гомологичный (по отношению к последовательностям нуклеиновых кислот и/или аминокислот) означает большую или равную приблизительно 25% гомологию последовательностей, как правило, большую или равную 25, 40, 50, 60, 70, 80, 85, 90 или 95% гомологию последовательностей; точный процент может быть указан, если это необходимо. В настоящем документе термины гомология и идентичность часто являются взаимозаменяемыми, если отдельно не указано иное. Как правило, для определения процента гомологии или идентичности последовательности выравнивают для достижения наибольшего совпадения остатков (см., например, Сοтриίаί^οηа1 Μο1еси1а^ ВюШду, Ьевк, А.М., Охкэтб итуегвку Ргевв, №\ν ΥογΙυ 1988; В^^трий^: ШЬттайсв амб Оегюте Ргсдейв, 8ткк, И.^., Асабетю Ргевв, №\ν ΥογΙυ 1993; СотрнЮг Аηа1ув^в οΓ Бесцкисе ИаН, раП I, ΟτίΓΓίη, А.М. и ΟτίΓΓίη, Н.О., Нитат Ргевв, №\ν 1егвеу, 1994; Бесцюте Ат1ув1в ш Μο1еси1а^ ВюШду, νοη Неш_)е, О., Асабетю Ргевв, 1987 и Бесцюте Ат1ув1в Рптег, Οπ^Κογ, М. и □еуегеих, 1., М δίοο^οη Ргевв, №\ν ΥογΙυ 1991; ίτιπ11ο еί а1. (1988), 81АМ 1. Аррйеб МаШ, 48:1073). Для определения гомологии последовательностей количество консервативных аминокислот определяют с помощью стандартных алгоритмов программ выравнивания, при этом могут быть использованы установленные по умолчанию штрафы за разрыв, предусмотренные поставщиком программного обеспечения. Существенно гомологичные молекулы нуклеиновых кислот гибридизуются, как правило, при умеренно жестких условиях или при высоко жестких условиях по всей длине интересующих нуклеиновых кислот. Также предусмотрены молекулы нуклеиновых кислот, которые включают вырожденные кодоны вместо кодонов в гибридизующихся молекулах нуклеиновых кислот.
Идентичность или гомология нуклеотидных последовательностей или аминокислотных последовательностей любых двух молекул по меньшей мере на 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% может быть определена с помощью известных компьютерных алгоритмов, таких как программа РА8ТА, с использованием, например, параметров по умолчанию, как указано Реа^βοη еί а1. (1988), Ргос. ИаЙ. Асаб. 8ск И8А 85:2444 (другие программы включают пакет программ ОСО (Иететеих, 1. еί а1., №ю1ею Аабв Кевеагск, 12(1):387 (1984)), программы ВЬА8ТР, ВЬА8та, РА8ТА (Айеки1, 8.Р. е1 а1., 1. Μο1. Вю1.
- 11 022752
215:403 (1990)); Сшбе 1о Ниде Сошри!ег5, Матбп 1. ΒίδΗορ, Асабетю Рге55, 8ап ЭЁедо. 1994 и СагШо е! а1. (1988), 81ЛМ 1. АррПеб Ма(Ь, 48:1073). Например, для определения идентичности может быть использована функция ВЬЛ8Т базы данных Национального центра биотехнологической информации. Другие коммерчески или публично доступные программы включают программу МедАПдп от ОКА81аг (Мэдисон, Висконсин) и программу Сар, разработанную компьютерной группой генетики Университета Висконсин (ИУС) (Мэдисон, Висконсин). Процент гомологии или идентичности белков и/или молекул нуклеиновых кислот можно определить, например, путем сравнения их последовательностей с применением компьютерной программы САР (см., например, №еб1ешап е! а1. (1970), 1. Мо1. Вю1. 48:443, с изменениями от 8ιηίΠι и Уа1етшап ((1981), Αάν. Арр1. Ма(й. 2:482). Программа САР определяет сходство как отношение количества выровненных символов (например, нуклеотидов или аминокислот), которые являются идентичными, к общему числу символов в более короткой из двух последовательностей. Параметры по умолчанию для программы САР могут включать (1) унарную матрицу сравнения (содержащую значение 1 для идентичных символов и 0 для не идентичных) и взвешенную матрицу сравнения СпЬ5кот е! а1. (1986), Ыис! Ааб5 Ке5. 14:6745, как описано 8ск\уаг1/ и ЭаукоГГ в атласе белковых последовательностей и структур А!1а5 ОГ Рто!еш 8ециепсе Апб 8!гис!иге, Ыа!юпа1 Вюшебюа1 Ке5еатсй Роипбабоп, р. 353-358 (1979); (2) штраф в размере 3,0 для каждого разрыва и дополнительный штраф 0,10 для каждого символа в каждом разрыве и (3) штраф не применяют для разрывов на концах.
Таким образом, в данном изобретении термины идентичность или гомология относятся к сравнению исходного и исследуемого полипептида или полинуклеотида. В настоящем документе термин по меньшей мере на 90% идентичны относится к проценту идентичности от 90 до 99,99% по отношению к исходной последовательности нуклеиновой кислоты или аминокислотной последовательности полипептида. Принимая для иллюстративных целей длину сравниваемого и исходного полипептидов в 100 аминокислот идентичность на уровне 90% и более свидетельствует о том, что не более 10% аминокислот (т.е. 10 из 100 аминокислот) в исследуемом полипептиде отличается от исходного полипептида. Подобное сравнение можно провести между исследуемым и исходным полинуклеотидами. Такие различия могут быть представлены в виде точечных мутаций, случайным образом распределенных по всей длине полипептидной цепи, или они могут быть сосредоточены в одном или нескольких районах цепи различной длины вплоть до максимально допустимой, например 10/100 отличающихся аминокислот (приблизительно 90% идентичности). Отличия определяются как замены, вставки или делеции нуклеотидов или аминокислот. При уровне гомологии или идентичности выше приблизительно 85-90% результат не должен зависеть от выбранной программы и параметров штрафов за разрыв; такие высокие уровни идентичности могут быть легко оценены, часто с помощью ручного выравнивания без помощи программного обеспечения.
В настоящем документе выравнивание последовательностей относится к использованию гомологии (сходства и/или идентичности) для выравнивания соответствующих позиций в нуклеотидной или аминокислотной последовательности. Как правило, две или более последовательности, которые связаны 50% и большей идентичностью, выравниваются. Набор выровненных последовательностей относится к 2 или большему количеству последовательностей, которые выровнены в соответствующих позициях, и может включать последовательности, полученные на основе РНК, такие как Е8Т и другие кДНК, выровненные с последовательностью геномной ДНК.
В настоящем документе праймер относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые в соответствующих условиях (например, в присутствии четырех различных нуклеозидтрифосфатов и полимеризующего агента, такого как ДНК-полимераза, РНК-полимераза или обратная транскриптаза) в соответствующем буфере и при подходящей температуре могут выступать в качестве точки начала направляемого матрицей синтеза ДНК. Следует иметь в виду, что определенные молекулы нуклеиновых кислот могут служить в качестве зонда и в качестве праймера. Праймеры, однако, имеют на конце 3' гидроксильную группу для удлинения. Праймеры могут быть использованы для осуществления разнообразных методов, включая, например, полимеразную цепную реакцию (ПЦР), ПЦР с обратной транскрипцией (КТ)-ПЦР, ПЦР на РНК, ЛЦР, мультиплексную ПЦР, супрессионную ПЦР, ПЦР с захватом, ПЦР с экспрессией, 3' и 5' КАСЕ (быстрая амплификация концов кДНК), ш 5Йи ПЦР, ПЦР с лигированием и другие протоколы амплификации.
Используемый в данном изобретении термин пары праймеров относится к набору праймеров, который включает 5'-праймер (вышерасположенный), который гибридизуется с 5'-концом амплифицируемой (например, методом ПЦР) последовательности, и 3' праймер (нижерасположенный), который гибридизуется с 3'-концом амплифицируемой последовательности.
В настоящем документе термин специфически гибридизуется относится к отжигу оснований молекулы нуклеиновой кислоты (например, олигонуклеотида) с целевой молекулой нуклеиновой кислоты через комплементарное спаривание. Специалистам в данной области известны ш γίΙΐΌ и ш νί\Ό параметры, которые влияют на специфическую гибридизацию, такие как длина и состав конкретной молекулы. Особенно важные для ш νίΙΐΌ гибридизации параметры дополнительно включают температуру отжига и отмывания, состав буфера и концентрацию соли. Примеры условий отмывания для удаления неспецифически связанных молекул нуклеиновых кислот включают 0,1 х 88РЕ, 0,1% 8Ό8 и 65°С при высокой же- 12 022752 сткости и 0,2х 88РЕ, 0,1% 8Ό8 и 50°С при умеренной жесткости. Эквивалентные условия известны в уровне техники. Специалист в данной области для достижения специфической гибридизации молекул нуклеиновой кислоты с целевыми молекулами нуклеиновой кислоты может легко изменить условия для конкретной задачи. При упоминании двух молекул нуклеиновых кислот комплементарность означает, что две нуклеотидные последовательности способны гибридизоваться, как правило, при наличии 25, 15 или 5% не совпадающих нуклеотидов. При необходимости может быть точно указан процент комплементарности. Как правило, две молекулы выбирают таким образом, что они гибридизуются при жестких условиях.
В настоящем документе термин в значительной степени идентичный по отношению к продукту означает достаточно близкий продукт, в котором интересующее свойство является в значительной степени неизменным, поэтому в значительной степени идентичный продукт может быть использован вместо исходного продукта.
В настоящем документе термины в значительной степени идентичные или сходные варьируются в зависимости от контекста, как это понимает специалист в данной области техники.
В настоящем документе аллельный вариант или аллельные различия относятся к любой из двух или более альтернативных форм гена, занимающих один хромосомный локус. Аллельные различия естественно возникают в результате мутаций и могут привести к фенотипическому полиморфизму в популяциях. Г енные мутации могут быть молчащими (без изменений в закодированном полипептиде) или могут приводить к полипептидам с измененной аминокислотной последовательностью. Термин аллельный вариант также используется здесь для обозначения белка, кодируемого аллельными вариантами гена. Обычно образцовая форма гена кодирует полипептид дикого типа и/или преобладающую форму полипептида в популяции или у одного представителя вида. Как правило, аллельные варианты, которые включают варианты между видами и внутри видов, обладают по меньшей мере 80, 90% или большей идентичностью аминокислотной последовательности с формой дикого типа и/или преобладающей формой у того же вида, причем степень идентичности зависит от гена и от того, является сравнение межвидовым или внутривидовым. Как правило, внутривидовые аллельные варианты обладают по меньшей мере приблизительно 80, 85, 90, 95% или большей идентичностью с формой дикого типа и/или преобладающей формой, в том числе 96, 97, 98%, 99% или большей идентичностью с формой дикого типа и/или преобладающей формой полипептида. Упоминание аллельного варианта в данном изобретении обычно относится к различиям в белках между представителями одного и того же вида.
Используемый здесь термин аллель является взаимозаменяемым с термином аллельный вариант и относится к альтернативным формам генов или их частей. Аллели занимают одинаковый локус или позицию в гомологичных хромосомах. Когда субъект имеет два одинаковых аллеля гена, субъект называется гомозиготным субъектом по этому гену или аллелю. Когда субъект имеет два различных аллеля гена, субъект называется гетерозиготным по гену. Аллели конкретного гена могут отличаться друг от друга одним нуклеотидом или несколькими нуклеотидами и могут включать изменения, такие как замены, делеции и вставки нуклеотидов. Аллель гена также может быть одной из форм гена, содержащего мутацию.
В настоящем документе видовой вариант относятся к вариантам полипептида среди различных видов, включая различные виды млекопитающих, такие как мышь и человек. Примеры видовых вариантов, предусмотренных в данном изобретении, включают РН20 приматов, включая, но не ограничиваясь, человека, шимпанзе, макак и обезьян циномолгус. Как правило, видовые варианты обладают 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 или 98% идентичностью последовательности. Соответствующие остатки у межвидовых вариантов и среди видовых вариантов могут быть определены путем сравнения и выравнивания последовательностей для достижения максимального числа соответствующих нуклеотидов или остатков, например, при идентичности между последовательностями 95% или более, 96% или более, 97% или более, 98% или более или 99% или более. Интересующему положению затем присваивают номер по сравниваемой молекуле нуклеиновой кислоты. Выравнивание может осуществляться вручную, особенно при уровне идентичности последовательностей, превышающем 80%. Например, представленное на фиг. 1 выравнивание показывает, что аминокислотный остаток 491 человеческой РН20 соответствует аминокислотному остатку 491 РН20 шимпанзе и аминокислотный остаток 497 человеческой РН20 соответствует аминокислотному остатку 498 РН20 шимпанзе.
В настоящем документе вариант сплайсинга относится к варианту, образованному в результате различного процессинга первичного транскрипта геномной ДНК, что приводит более чем к одному типу мРНК.
Используемый здесь термин промотор означает часть гена, содержащую последовательность ДНК, которая обеспечивает связывание РНК-полимеразы и инициацию транскрипции. Промоторная последовательность обычно, но не всегда, находится в 5'-некодирующей области гена.
В настоящем документе выделенный или очищенный полипептид или белок или его биологически активная часть практически не содержит клеточного материала или других загрязняющих белков из клеток или тканей, из которых происходит белок, или является в значительной степени свободным от химических веществ-предшественников и других химических веществ при его химическом синтезе.
- 13 022752
Препараты могут быть определены как существенно чистые, если они являются свободными от легко обнаруживаемых примесей, определяемых с помощью стандартных способов анализа, таких как тонкослойная хроматография (ТСХ), гель-электрофорез и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), используемых специалистами в области техники для оценки чистоты, или препараты могут быть определены как достаточно чистые, если дальнейшая очистка не изменяет физические и химические свойства вещества, такие как энзиматическая и биологическая активность. Способы очистки соединений для получения существенно химически чистых соединений известны специалистам в данной области. Существенно химически чистые соединения, однако, могут представлять собой смесь стереоизомеров. В таких случаях дополнительная очистка может увеличить удельную активность соединения.
Таким образом, упоминание существенно очищенного полипептида, например существенно очищенного длинного растворимого РН20, относится к препаратам белка РН20, которые практически не содержат клеточного материала и включают препараты белков, в которых белок отделен от компонентов клеток, из которых был выделен, или в которых получен рекомбинантно. В одном варианте термин практически не содержащий клеточного материала относится к препаратам белков-ферментов, содержащим менее чем приблизительно 30% (по сухому весу) белков неферментов (также называемых в данном изобретении загрязняющими белками), как правило, содержащим менее 20% белков неферментов, 10% белков неферментов или менее чем приблизительно 5% белков неферментов. Если белок-фермент получен рекомбинантно, препарат должен практически не содержать культуральной среды, т.е. содержание культуральной среды составляет менее приблизительно 20, 10 или 5% от объема препарата белкафермента.
Используемый здесь термин практически не содержит химических веществ-предшественников и других химических веществ относится к препарату фермента, в котором белок отделен от химических веществ-предшественников и других химических веществ, которые использовали в синтезе белка. Этот термин включает препараты фермента, содержащие менее 30% (на сухой вес), 20, 10, 5% или менее химических веществ-предшественников или химических веществ и компонентов, не являющихся ферментом.
В настоящем документе термин синтетический, употребляемый, например, по отношению к синтетическим молекулам нуклеиновой кислоты, синтетическим генам или синтетическим пептидам относится к молекуле нуклеиновой кислоты или полипептиду, которые получают с помощью рекомбинантных методов и/или методов химического синтеза.
В настоящем документе получение рекомбинантными методами или с помощью методов рекомбинантной ДНК означает использование известных методов молекулярной биологии для экспрессии белков, кодируемых клонированной ДНК.
В настоящем документе вектор (или плазмида) относится к дискретному элементу, который используется для введения гетерологичных нуклеиновых кислот в клетки для их экспрессии или репликации. Векторы обычно остаются в эписомном состоянии, но могут быть разработаны векторы для интеграции гена или его части в хромосому генома. Также предусмотрены векторы, которые представляют собой искусственные хромосомы, такие как бактериальные искусственные хромосомы, искусственные хромосомы дрожжей и искусственные хромосомы млекопитающих. Процедуры выбора и использования таких векторов хорошо известны специалистам в данной области.
В настоящем документе вектор экспрессии включает векторы, способные экспрессировать ДНК, функционально связанную с регуляторными последовательностями, такими как промоторные районы, которые способны вызывать экспрессию таких фрагментов ДНК. Дополнительные последовательности могут включать промоторные и терминаторные последовательности и, при необходимости, могут включать одну или несколько точек начала репликации, один или более маркеров для отбора, энхансер, сигнал полиаденилирования и т.п. Векторы экспрессии обычно получают из плазмидной или вирусной ДНК или вектор может содержать элементы того и другого. Таким образом, вектор экспрессии относится к рекомбинантным ДНК или РНК конструкциям, например плазмидам, бактериофагам, рекомбинантным вирусам или другим векторам, которые после введения в соответствующую клетку-хозяина приводят к экспрессии клонированной ДНК. Соответствующие векторы экспрессии хорошо известны специалистам в данной области и включают векторы, которые реплицируются в эукариотических клетках и/или прокариотических клетках, векторы, которые остаются в эписомном состоянии, или векторы, которые интегрируются в геном клетки-хозяина.
В настоящем документе вектор также включает вирусный вектор или вирусные векторы. Вирусные векторы представляют собой сконструированные вирусы, функционально связанные с экзогенным геном для передачи (как носитель или челнок) экзогенного гена в клетки.
В настоящем документе термины функционально или функционально связанный по отношению к сегментам ДНК означают, что сегменты расположены так, что они функционируют в соответствии с их назначением, например, транскрипция инициируется после промотора и до начала любой транскрибируемой последовательности. Промотор, как правило, представляет собой домен, с которым, начиная транскрипцию, связывается транскрипционный комплекс, который затем проходит через кодирующий сегмент до терминатора.
- 14 022752
В настоящем документе термин оценка относится к качественному и количественному определению абсолютного значения активности белка или его домена, присутствующих в образце, а также к получению индекса, коэффициента, процента, визуального показателя или другого показателя уровня активности. Оценка может быть прямой или косвенной, и химические вещества, определяемые в процессе исследования, необязательно должны представлять собой непосредственно продукт реакции, но могут представлять собой, например, производные или некоторые дополнительные вещества. Например, обнаружение продукта расщепления белка комплемента можно проводить, например, с помощью 8Э8-РЛСЕ и окрашивания белка кумасси синим.
Используемый здесь термин биологическая активность относится к активности соединения ίη νίνο или к физиологической реакции, которая проявляется при ίη νίνο введении соединения, композиции или другой смеси. Биологическая активность, таким образом, охватывает терапевтический эффект и фармацевтическую активность таких соединений, композиций и смесей. Биологическую активность можно наблюдать в ίη νίίτο системах, предназначенных для исследования или использования такой активности. Таким образом, например, биологическая активность протеазы представляет собой ее каталитическую активность, при которой происходит гидролиз полипептида.
Используемый в данном изобретении термин эквивалент в отношении двух последовательностей нуклеиновых кислот означает, что две интересующие последовательности кодируют одну последовательность аминокислот или эквивалентные белки. Термин эквивалент в отношении двух белков или пептидов означает, что два белка или пептида обладают в значительной степени одинаковой аминокислотной последовательностью и включают только такие аминокислотные замены, которые существенно не изменяют активности или функции белка или пептида. Термин эквивалент в отношении свойства не обязательно означает, что свойство присутствует в той же степени (например, два пептида могут проявлять одну ферментативную активность при разной скорости катализа), но при этом активность, как правило, остается в значительной мере одинаковой.
В настоящем документе термины модулирует и модуляция или изменяет относятся к изменению активности молекулы, такой как белок. Примеры активности включают, но не ограничиваются, биологическую активность, такую как передача сигнала. Модуляция может включать повышение активности (т.е. усиление активности или агонистическую активность), снижение активности (т.е. ослабление активности или ингибирование) или любые другие изменения активности (такие как изменения периодичности, частоты, длительности, кинетики или другого параметра). Термин модуляция зависит от контекста, как правило, модуляция относится к изменению параметра одного объекта по сравнению с другим указанным объектом, например белком дикого типа, белком в основном состоянии или белком, экспрессируемым в указанном типе клеток или при определенном состоянии.
В настоящем документе композиция относится к любой смеси. Композиция может представлять собой раствор, суспензию, жидкость, порошок, пасту, может быть водной или неводной или представлять собой комбинацию указанных типов.
В настоящем документе комбинация относится к любому соединению двух или более элементов. Комбинация может представлять собой два или более отдельных элемента, таких как две композиции или две совокупности, может представлять собой их смесь, например смесь двух или более элементов, или любые их вариации. Элементы комбинации, как правило, функционально связаны или сходны.
Используемый здесь термин заболевание или нарушение относится к патологическим состояниям организма, которые возникли в результате факторов или состояний, включающих, но не ограничивающихся, инфекцию, приобретенные состояния, генетические состояния, и характеризуются идентифицируемыми симптомами. Заболевания и нарушения в данном изобретении включают заболевания и нарушения, связанные с компонентами ЕСМ (внеклеточного матрикса).
В настоящем документе лечение субъекта с заболеванием или состоянием означает, что симптомы субъекта частично или полностью облегчаются или остаются неизменными после лечения. Поэтому лечение включает профилактику, процесс лечения и/или излечение. Профилактика относится к предотвращению возможного заболеваний и/или предотвращению ухудшения симптомов или прогрессирования заболевания. Лечение также включает любое фармацевтическое применение предусмотренных здесь композиций.
В настоящем документе фармацевтически эффективный агент включает любое терапевтическое средство или биологически активное вещество, включая, но не ограничиваясь, например, анестетики, вазоконстрикторы, диспергирующие агенты, обычные терапевтические препараты, включая низкомолекулярные препараты, например бисфофонаты, и терапевтические белки, например инсулин, молекулы 1дС и другие антитела.
В настоящем документе лечение представляет собой любой способ уменьшения или иного благотворного изменения симптомов состояния, расстройства или заболевания.
В настоящем документе терапевтический эффект представляет собой эффект лечения субъекта, который заключается в изменении, как правило, улучшении или смягчении симптомов заболевания или состояния, или заключается в излечении заболевания или состояния. Терапевтически эффективное количество относится к количеству композиции, молекулы или соединения, которое приводит к терапевтиче- 15 022752 скому эффекту после введения субъекту.
Используемый здесь термин субъект относится к животному, в том числе млекопитающему, такому как человек.
В настоящем документе термин пациент относится к человеческому субъекту, проявляющему симптомы заболевания или расстройства.
В настоящем документе улучшение симптомов заболевания или расстройства посредством лечения, например, фармацевтической композицией или лекарственным средством относится к любому уменьшению симптомов, постоянному или временному, устойчивому или кратковременному, связанному с введением или приписываемому введению композиции или лекарственного средства.
В настоящем документе профилактика или предотвращение относится к способам уменьшения риска развития заболевания или состояния.
В настоящем документе терапевтически эффективное количество соединения или композиции представляет собой количество, которое является достаточным для проявления терапевтического эффекта. Указанное количество необходимо для предотвращения, лечения, смягчения, устранения или частичного устранения симптомов заболевания или нарушения.
В настоящем документе единичная дозированная форма относится к физически дискретным единицам, пригодным для человека и животных, содержащимся в индивидуальной упаковке, как известно в уровне техники.
В настоящем документе единичная дозированная композиция относится к композиции для непосредственного введения.
В настоящем документе изделие представляет собой продукт, который изготавливается и продается. В настоящем документе термин охватывает терапевтический агент, используемый совместно с РН20, таким как е§РН20 или е§РН20, отдельно, содержащиеся в одной или отдельных упаковках.
В настоящем документе жидкая композиция относится к любой композиции, которая может течь. Таким образом, жидкие композиции включают композиции в полутвердой форме, пасты, растворы, водные смеси, гели, лосьоны, кремы и другие подобные композиции.
В настоящем документе набор относится к комбинации предусмотренных в данном изобретении композиций и другого объекта, предназначенного, например, для восстановления и активации, относится к комбинации предусмотренных в данном изобретении композиций и приборов/устройств для доставки, введения, диагностики и оценки биологической активности или свойства. Наборы необязательно включают инструкции по использованию.
В настоящем документе клеточный экстракт или лизат относится к смеси или фракции, которая состоит из лизированных или разрушенных клеток.
В настоящем документе животное включает любое животное, включая, но не ограничиваясь, приматов, например человека, горилл и низших приматов, грызунов, таких как мыши и крысы, птиц, таких как куры, жвачных животных, например козы, коровы, олени, овцы, свиньи, и других животных. Термин животные, не представляющие собой человека исключает человека из круга предусмотренных животных. Ферменты, предусмотренные здесь, представляют собой ферменты из любого источника, включая животных, растения, прокариоты и грибы. Большая часть ферментов представляют собой ферменты животного происхождения, в том числе ферменты млекопитающих.
В настоящем документе контроль относится к образцу, который в значительной мере идентичен исследуемому образцу, за исключением того, что он не обладает в какой-то мере исследуемым параметром, или, если речь идет об образце плазмы, контроль может быть взят у нормального добровольца, не затронутого интересующим состоянием. Контроль также может представлять собой внутренний контроль.
В настоящем документе упоминание понятий в единственном числе также включает множественное число, если контекст с очевидностью не указывает на иное. Таким образом, например, упоминание молекулы, включающей внеклеточный домен относится к молекулам с одним или несколькими внеклеточными доменами.
В настоящем документе диапазоны и количества могут быть обозначены как конкретные значения с добавлением термина приблизительно. Термин приблизительно также включает в себя точное значение. Следовательно, приблизительно 5 оснований означает приблизительно 5 оснований, а также 5 оснований.
В настоящем документе термины по желанию или необязательно означают, что описанные явления или обстоятельства могут иметь место или могут не иметь места и что описание включает случаи, когда указанное явление или обстоятельство происходит, и случаи, когда это не так. Например, необязательно замещенная группа означает, что группа не является замещенной или является замещенной.
В настоящем документе аббревиатуры для любых защитных групп, аминокислот и других соединений, если не указано иное, употребляются в соответствии с их обычным использованием и являются признанными аббревиатурами или употребляются в соответствии с Комиссией по биохимической номенклатуре ШРЛС-ШВ (см. ВюсЬет. (1972), 11:1726).
- 16 022752
В. Обзор.
Гиалуронидазы представляют собой ферменты, которые катализируют гидролиз гиалуроновой кислоты, тем самым снижая вязкость гиалуроновой кислоты и увеличивая проницаемость тканей. РН20 является активной в нейтральной среде и активной в кислой среде гиалуронидазой, демонстрирующей оптимальную активность при гликозилировании. Человеческая РН20 является белком с ОР1-якорем, который присоединяется к внеклеточной поверхности плазматической мембраны через гликозилфосфатидилинозитольный (ОР1) якорь на С-конце белка. Присоединение ОР1-якоря ко всем белкам с ОР1-якорем происходит после расщепления полипептидной цепи по определенной аминокислотной позиции, называемой ω-сайтом (как правило, сайт расположен приблизительно в 20-30 аминокислотах от С-конца) и удаления С-концевой части белка в ЭР. Указанная удаляемая С-концевая часть представляет собой сигнальную последовательность присоединения ОР1-якоря. Сигнальная последовательность присоединения ОР1-якоря человеческого РН20 соответствует положениям 491-509 аминокислотной последовательности полипептида-предшественника, приведенного в 8ЕЦ ГО N0: 107, ω-сайт находится в положении 490. Полипептиды РН20 с ОР1-якорем, такие как человеческая РН20, являются связанными с мембраной белками и, следовательно, не являются растворимыми. Нерастворимые формы РН20, как правило, не подходят для применения в терапевтических целях.
Полипептиды РН20 без ОР1-якоря обычно секретируются клетками при экспрессии, поскольку они не содержат сигнальной последовательность присоединения ОР1-якоря, которая закрепляет полипептид на мембране. Авторы изобретения обнаружили, что растворимые формы РН20 также включают белки, которые содержат аминокислотные остатки из сигнальной последовательности присоединения ОР1якоря. Длинные растворимые полипептиды РН20 (свРН20) представляют собой растворимые белки РН20, укороченные с С-конца, но сохраняющие один или более аминокислотных остатков, расположенных в сигнальной последовательности присоединения ОР1-якоря соответствующего полипептида РН20 дикого типа. Такие полипептиды свРН20 растворимы и могут быть использованы в качестве терапевтических полипептидов, например, для лечения связанных с гиалуроновой кислотой заболеваний или состояний, и/или могут быть использованы в качестве диспергирующего агента или агента для распространения с целью усиления, улучшения или увеличения распространения и доставки других агентов, лекарств и белков, улучшая, таким образом, фармакокинетический и фармакодинамический профиль совместно вводимого агента, лекарственного средства или белка.
1. РН20.
РН20, также известный как поверхностный белок сперматозоидов, молекула адгезии сперматозоидов 1, 8РАМ1 или НУАЬЗ, представляет собой гиалуронидазу. Гиалуронидаза представляет собой семейство ферментов, которые разрушают гиалуроновую кислоту (также известную как гиалуронан, гиалуронат или ГК), являющуюся одним из важнейших компонентов внеклеточного матрикса и основным составляющим интерстициального барьера. Катализируя гидролиз гиалуроновой кислоты, гиалуронидазы снижают вязкость гиалуроновой кислоты, тем самым повышая проницаемость тканей. Вследствие этого гиалуронидазы применяли, например, в качестве агентов для распространения или диспергирующих агентов в сочетании с другими агентами, лекарствами и белками для усиления их распространения и доставки, а также для улучшения фармакокинетического и фармакодинамического профиля совместно вводимого агента, лекарства или белка.
РН20, как и другие гиалуронидазы млекопитающих, представляет собой эндо- β-Ν-ацетилгексозаминидазу, которая гидролизует β 1 —>4 гликозидные связи гиалуроновой кислоты в олигосахаридах различной длины, таких как тетрасахариды и гексасахариды. РН20 обладает гидролилитической и трансгликозидазной активностями и может разрушать гиалуроновую кислоту и хондроитин сульфаты, такие как С4-8 и Сб-δ. В организме РН20 участвует в адгезии сперматозоида к яйцеклетке и посредством расщепления гиалуроновой кислоты способствует проникновению сперматозоидов сквозь слой кумулюсных клеток. РН20 находится на поверхности сперматозоидов и в акросоме лизосомального происхождения, где белок присоединен к внутренней акросомной мембране. РН20 плазматической мембраны проявляет гиалуронидазную активность только при нейтральном рН, в то время как РН20 внутренней акросомной мембраны проявляет активность при нейтральном и кислом рН. В дополнение к тому, что РН20 является гиалуронидазой, белок также представляет собой рецептор для ГК-индуцированной клеточной сигнализации, а также рецептор для зоны рсПисИа. окружающей ооцит.
Примеры РН20 белков включают, но не ограничиваются, РН20 человека (полипептидпредшественник приведен в 8ЕЦ ГО N0: 107, зрелый полипептид приведен в 8ЕЦ ГО N0: 108), бычий РН20 (δΙΤ) ГО N0: 111 и 119), кроличий (δΙΤ) ГО N0: 112), овечий РН20 (δΙΤ) ГО N0: 113, 118 и 120), РН20 обезьяны циномолгус (§ЕЦ ГО N0: 114), РН20 морской свинки (ЗЕЦ ГО N0: 115), крысы (ЗЕЦ ГО N0: 11б), мыши (ЗЕЦ ГО N0: 117), шимпанзе (§ЕЦ ГО N0: 197) и макаки резус (ЗЕЦ ГО N0: 198). мРНК транскрипт РН20 человека, как правило, транслируется с образованием белкапредшественника из 509 аминокислот (ЗЕЦ ГО N0: 107), содержащим сигнальную последовательность из 35 аминокислот на Оконце (аминокислотные остатки 1-35 из ЗЕЦ ГО N0: 107). Таким образом, после транспорта в ЭР и удаления сигнального пептида образуется зрелый полипептид из 474 аминокислот с
- 17 022752 аминокислотной последовательностью, приведенной в 8ЕЦ ГО N0: 108. Затем, как описано ниже, в ЭР отщепляется С-концевой пептид, что облегчает ковалентное присоединение СР1-якоря к новообразованной С-концевой аминокислоте в положении, соответствующем позиции 490 аминокислотной последовательности полипептида-предшественника, приведенного в 8ЕЦ ГО N0: 107.
РН20 человека является прототипом активной в нейтральной среде гиалуронидазы, которая, как правило, связана с мембраной через гликозилфосфатидилинозитольный (ОР1) якорь. Как отмечалось выше, РН20 также экспрессируется на внутренней поверхности акросомной мембраны, где она проявляет гиалуронидазную активность при нейтральном и кислом рН. Опыт показывает, что район 1 пептида РН20, который соответствует аминокислотам 142-172 последовательности полипептидапредшественника, приведенного в 8ЕЦ ГО N0: 107, требуется для активности фермента при нейтральном рН. Район 3 пептида, который соответствует аминокислотам 277-297 последовательности полипептидапредшественника, приведенного в 8ЕЦ ГО N0: 107, как представляется, важен для активности фермента при кислом рН (СЬегг е1 а1. (2001), Ма1п\ Вю1оду, 20:515-525). Таким образом, создается впечатление, что РН20 содержит два каталитических центра. В дополнение к каталитическим центрам РН20 также содержит гиалуронан-связывающий участок. Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что этот участок находится в районе 2 пептида, который соответствует аминокислотным позициям 205-235 аминокислотной последовательности полипептида-предшественника, приведенного в 8ЕЦ ГО N0: 107. Указанный район является высококонсервативным среди гиалуронидаз и похожим на связывающий гепарин мотив.
a) Гликозилирование.
Гликозилирование, в том числе N и О-гликозилирование некоторых деградирующих гиалуронан ферментов, в том числе гиалуронидаз, может иметь большое значение для их каталитической активности и стабильности. ^связанные олигосахариды делятся на несколько основных типов (олигоманнозы, сложные и гибридные), все указанные типы включают (Μаη)з-Ο1сNΑс-Ο1сNΑс-ядро, связанное через амидный азот остатка Αδη, который входит в последовательность -А8п-Хаа-ТЬт/8ет (где Хаа не является Рго). Для белка коагуляции С сообщалось о наличии дополнительного сайта гликозилирования -А8п-Хаа-Су8-. В некоторых случаях деградирующий гиалуронан фермент, такой как гиалуронидаза, может быть N и О-гликозилирован. Например, РН20 имеет один О-связанный олигосахарид в положении Т475 и шесть ^связанных олигосахаридов в положениях N82, N166, N235, N254, N368, N393 последовательности человеческой РН20, приведенной в 8ЕЦ ГО N0: 107. Аминокислотные остатки N82, N166 и N254 заняты гликанами сложного типа, в то время как аминокислотные остатки N368 и N393 заняты богатыми маннозой гликанами (см. пример 6 ниже). Аминокислотный остаток N235 приблизительно в 80% случаев занят богатыми маннозой гликанами, а в 20% случаев - сложными гликанами.
Хотя изменение типа гликана при модифицировании гликопротеина может драматически повлиять на антигенность белка, его структурный фолдинг, растворимость и стабильность, считается, что большинство ферментов не требуют гликозилирования для оптимальной ферментативной активности. Для некоторых гиалуронидаз удаление N-гликозилирования может привести к практически полной инактивации. Таким образом, для таких гиалуронидаз наличие К-гликанов необходимо для получения активного фермента. Наличие N-гликанов в полипептиде РН20 необходимо для получения активного фермента. Например, авторами изобретения установлено, что полное дегликозилирование человеческого РН20 путем обработки эндогликозидазой ПНГазой Р или ингибитором Ο1сNΑс-фосфотрансферазы (ОРТ) туникамицином приводит к полной потере гиалуронидазной активности (см. примеры 7, 8 ниже). В отличие от этого, частичное дегликозилирование человеческой РН20 обработкой эндогликозидазой ЕпйоР1, ЕпйоР2, ЕпйоР3 или ЕпйоН не влияет на активность человеческой гиалуронидазы РН20 (см. пример 7 ниже).
b) ОР1-якорь.
Человеческий РН20 представляет собой белок с ОР1-якорем. Таким образом, полипептид РН20 крепится к внеклеточной поверхности плазматической мембраны через гликозилфосфатидилинозитольный (ОР1) якорь, прикрепленный к С-концу белка. Белки с ОР1-якорем, такие как человеческий РН20, транслируются с отщепляемым N-концевым сигнальным пептидом, который направляет белок в эндоплазматический ретикулум (ЭР). На С-конце указанных белков присутствует другая сигнальная последовательность, которая направляет присоединение к полипептиду предварительно образованного ОР1-якоря в просвете ЭР. Присоединение ОР1-якоря происходит после расщепления С-концевой части полипептидной цепи по определенной аминокислотной позиции, называемой ω-сайтом (как правило, сайт расположен приблизительно в 20-30 аминокислотах от С-конца). Несмотря на то что, как представляется, не существует консенсусной последовательности для идентификации расположения ω-сайта, белки с ОРТякорем содержат С-концевую сигнальную последовательность или домен присоединения ОР1-якоря, который, как правило, содержит преимущественно гидрофобную область из 8-20 аминокислот, которой предшествует гидрофильный спейсерный район из 8-12 аминокислот, расположенный непосредственно после ω-сайта. Указанный гидрофильный спейсерный район часто богат заряженными аминокислотами и пролином (АНйе еТ а1. (2000), I Се11 8οί. 113 (часть 4):721-727). Более детальный анализ показывает,
- 18 022752 что существует область приблизительно из 11 аминокислот, предшествующая ω-1 позиции, которая характеризуется низким уровнем предсказанной вторичной структуры, область вокруг сайта расщепления (ω-сайт) от ω-1 до ω+2, которая характеризуется наличием остатков с небольшими боковыми цепями, спейсерная область между позициями ω +3 и со+9 и гидрофобный хвост от ω+10 до С-конца (Р1ет1еот е1 а1. (2008), ВМС ВютГогтайсз. 9:392).
Хотя не существует консенсусной сигнальной последовательности присоединения ОР1-якоря, было разработано множество различных ίη ыПсо методов и алгоритмов, которые могут быть использованы для определения таких последовательностей в полипептидах (см., например, ШепГпепй е1 а1. (1995), МеШоФ ЕпуутоР 250:571-582; ЕкепйаЪег е1 а1. (1999), ί. Βίο1. Сйет. 292:741-758; Кгопедд и ΒΦοζ (1999), ЭеЮсПоп/ргеФсйоп оГ ОР1 с1еауаде 8Йе (ОР1-апсйог) ίη а ргсйет (ΌΟΡΙ), 129.194.185.165/ά§ρί/; Рапкйаикег е1 а1. (2005), ВютГогтайсз 21:1846-1852; ОтаейхеЪагпа е1 а1. (2007), Ргсйеоппсз. 7:1951-1960; Р1ег1еот е1 а1. (2008), ВМС ВютГогтайсз. 9:392), включая методы, доступные на биоинформатических веб-сайтах, таких как веб-сайт ЕхРЛ§у Ргсйеописз 1оок (веб-сайт ехраку.сйЛоок/). Таким образом, специалист в данной области может определить, содержит ли полипептид РН20 сигнальную последовательность присоединения ОР1-якоря и, следовательно, является ли полипептид РН20 белком с ОР1-якорем.
Сигнальная последовательность присоединения ОР1-якоря человеческого РН20 занимает позиции 491-509 в аминокислотной последовательности полипептида-предшественника, приведенного в 8ЕО ГО NО: 107, ω-сайт находится в положении 490. Таким образом, у человеческой РН20 после переноса в ЭР отщепляются аминокислоты 491-509, и ОР1-якорь ковалентно присоединяется к остатку серина в положении 490. Ковалентное присоединение ОР1-якоря к С-концу РН20 человека и, следовательно, мембраносвязанный характер РН20, были подтверждены с помощью исследований с фосфатидилинозитолспецифическим гидролизом фосфолипазой С (Р1-РЬС) (см., например, Ьш е1 а1. (1994), ί. Вю1. Сйет. 125:1157-1163 и пример 3 ниже). Специфичные к фосфатидилинозитолу фосфолипазы С (Р1-РЬС) и Ό (Р1-РЙЭ) гидролизуют ОР1-якорь, освобождая полипептид РН20 от клеточной мембраны. Следовательно, полученный освобожденный полипептид РН20 является растворимым. Растворимый РН20 может быть обнаружен и отделен от нерастворимого, мембраносвязанного РН20 хорошо известными в данной области методами, включая, но не ограничиваясь, тест с Тритон® Х-114, как описано ниже и в примере 4. В указанном анализе растворимая гиалуронидаза РН20 переходит в водную фазу нагретого до 37°С раствора Тритон® Х-114 (ВогШег е1 а1. (1981), ί. Вю1. Сйет., 256:1604-7), тогда как заякоренная в мембране гиалуронидаза РН20 переходит в богатую детергентом фазу. Таким образом, для определения, является ли полипептид РН20 ш νί\Ό ОР1-заякоренным, в дополнение к использованию алгоритмов также могут быть выполнены тесты на растворимость.
с) Длинные растворимые полипептиды РН20.
Изобретение включает длинные растворимые полипептиды РН20 (е§РН20) и их композиции. Примерами предусмотренных в данном изобретении полипептидов е§РН20 являются полипептиды е§РН20 приматов, включая, но не ограничиваясь, полипептиды е§РН20 человека и шимпанзе. Предусмотренные в данном изобретении полипептиды е§РН20 являются растворимыми, т.е. секретируемыми, белками РН20, укороченными на С-конце, но сохраняющими по меньшей мере один или более аминокислотных остатков из сигнальной последовательности присоединения ОР1-якоря соответствующего полипептида РН20 дикого типа (например, укороченными по положениям аминокислотной последовательности 491500). Полипептиды е§РН20 могут быть получены из любого ОР1-заякоренного полипептида РН20 модификацией ОР1-заякоренного полипептида РН20, т.е. удалением части сигнальной последовательности присоединения ОР1-якоря, при условии, что полученный полипептид е§РН20 растворим. Растворимость или секрецию в культуральную среду можно определить с помощью δΌδ-РЛОЕ и анализа методом Вестерн-блоттинг после экспрессии или, альтернативно, с помощью теста с Тритон® Х-114, как описано ниже и в примере 4, при этом полипептид РН20 получают любым способом, известным специалисту в данной области, в том числе рекомбинантной экспрессией и синтетически. Предусмотренные в данном изобретении полипептиды е§РН20 могут быть использованы, например, в качестве терапевтических полипептидов, в качестве агентов для распространения или диспергирующих агентов в сочетании с другими препаратами, лекарствами и белками для улучшения их диспергирования и доставки, а также для улучшения фармакокинетического и фармакодинамического профиля совместно вводимых агентов, лекарственных средств или белков.
Предусмотренные в данном изобретении полипептиды е§РН20 содержат 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 или более аминокислотных остатков из сигнальной последовательности присоединения ОР1-якоря, что обеспечивает растворимость полипептида е§РН20, т.е. полипептид переходит в водную фазу раствора Тритон® Х-114, как описано ниже. Длинные растворимые полипептиды РН20 по настоящему документу могут быть получены укорочением С-конца любого природного ОР1-заякоренного полипептида РН20, где полученный полипептид е§РН20 является растворимым и содержит 1 или более аминокислотных остатков из сигнальной последовательности присоединения ОР1-якоря. Специалист в данной области с применением хорошо известных в уровне техники методов легко может определить, является ли полипептид РН20 ОР1-заякоренным. Такие методы включают, но не ограничиваются использованием известных ал- 19 022752 горитмов для предсказания наличия и расположения сигнальной последовательности присоединения СР1-якоря и ω-сайта, а также тестом на растворимость до и после фосфатидилинозитол-специфического расщепления фосфолипазой С (Р1-РЬС) или Ό (Р1-РЬО).
Примеры полипептидов екРН20 включают, но не ограничиваются, полипептиды екРН20 приматов, такие как, например, полипептиды екРН20 человека и шимпанзе. Например, предусмотренные в данном изобретении полипептиды екРН20 могут быть получены усечением С-конца любого зрелого полипептида или полипептида-предшественника, приведенного в δΕφ ΙΌ ΝΟ: 107, 108 или 197, а также усечением их аллельных или других вариантов, в том числе их активных фрагментов, при условии, что полученный полипептид растворим и сохраняет один или более аминокислотных остатков из сигнальной последовательности присоединения СР1-якоря. Аллельные варианты и другие варианты известны специалистам в данной области и включают полипептиды с 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95% или большей идентичностью последовательности с любой из последовательностей δΕφ ΙΌ ΝΟ: 107, 108 и 197. Полипептиды екРН20 по настоящему документу могут быть укорочены с С-конца на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более аминокислот по сравнению с полипептидом дикого типа, таким как полипептид с последовательностью δΕφ ΙΌ ΝΟ: 107, 108 и 197, при условии, что полученный полипептид екРН20 растворим и сохраняет один или более аминокислотных остатков из сигнальной последовательности присоединения СРЬякоря.
Длинные растворимые полипептиды РН20 по настоящему документу сохраняют гиалуронидазную активность. Кроме того, полипептиды екРН20 являются активными в нейтральной среде, т.е. они сохраняют гиалуронидазную активность при нейтральном рН. Гиалуронидазная активность может быть увеличена или уменьшена по сравнению с СРЬзаякоренной формой РН20 дикого типа. Например, предусмотренные в данном изобретении полипептиды екРН20 могут проявлять гиалуронидазную активность, которая составляет 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 300, 400, 500, 1000% и более от гиалуронидазной активности, проявляемой СРЬзаякоренной формой РН20 дикого типа.
1. Полипептиды екРН20 человека.
Примерами предусмотренных в данном изобретении полипептидов екРН20 являются человеческие полипептиды екРН20. Человеческие полипептиды екРН20 по настоящему документу растворимы и содержат 1 или более аминокислотных остатков из сигнальной последовательности присоединения СРЬякоря. Таким образом, в данном изобретении предусмотрены растворимые формы человеческой РН20, в которых не полностью отсутствует сигнальная последовательность присоединения СРЬякоря.
Полипептиды-предшественники екРН20 человека по настоящему документу включают, но не ограничиваются полипептидами с укороченным С-концом с последовательностью, соответствующей последовательности от 1 до 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499 или 500 аминокислоты из последовательности, приведенной в δΕφ ΙΌ ΝΟ: 107. При экспрессии в клетках млекопитающих во время процессинга у белка отщепляется Ν-концевая сигнальная последовательность из 35 аминокислот, и секретируется зрелая форма белка. Таким образом, зрелые человеческие полипептиды екРН20 содержат аминокислоты от 36 до 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499 или 500 из δΕφ ГО ΝΟ: 107. Таким образом, зрелые человеческие полипептиды екРН20 по настоящему документу включают полипептиды, приведенные в δΕφ ГО ΝΟ: 59-63 и 100-104, или их аллельные или другие варианты.
Предусмотренные в данном изобретении человеческие полипептиды екРН20 могут быть экспрессированы в клетках СΗΟ или, альтернативно, могут быть получены в любых клетках или каким-либо способом, известным специалисту в данной области, при условии, что полипептиды растворимы и содержат по меньшей мере одну аминокислоту из сигнальной последовательности присоединения СРЬякоря. Получаемые в клетках СΗΟ растворимые человеческие полипептиды екРН20 представляют собой полипептиды, секретируемые в культуральную среду. Специалисту в данной области очевидно, что если секретируемый екРН20 растворим, т.е. переходит в водную фазу раствора Тритон® Х-114, как описано ниже, то человеческий екРН20 может частично секретироваться, т.е. экспрессированный полипептид может секретироваться в культуральную среду на 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более. Человеческие полипептиды екРН20 по настоящему документу, содержащие аминокислоты 1-500 или 36-500, частично секретируются. Кроме того, при экспрессии в клетках СΗΟ полипептидыпредшественники человеческого екРН20, содержащие аминокислоты с 1 по 498, 499 или 500, или зрелые человеческие полипептиды екРН20, содержащие аминокислоты с 36 до 498, 499 или 500, экспрессируются слабо (см. пример 3 ниже).
Таким образом, примеры полипептидов-предшественников человеческой екРН20 включают, но не ограничиваются любыми укороченными с С-конца полипептидами с последовательностью от 1 до 491, 492, 493, 494, 495, 496 или 497 аминокислоты из последовательности, приведенной в δΕφ ГО ΝΟ: 107. При экспрессии в клетках млекопитающих после отщепления у белка во время процессинга Ν-концевой сигнальной последовательности, зрелые человеческие полипептиды екРН20 содержат аминокислотные последовательности, соответствующие аминокислотам от 36 до 491, 492, 493, 494, 495, 496 или 497 из δΕφ ГО ΝΟ: 107. Таким образом, примеры зрелых человеческих полипептидов екРН20 по настоящему документу включают полипептиды, содержащие 456, 457, 458, 459, 460, 461 или 462 аминокислот в дли- 20 022752 ну, такие как полипептиды в любой из 8ЕО ГО N0: 60-63 и 102-104, или их аллельные или иные варианты. Аллельные варианты и другие варианты, как известно специалистам в данной области, включают полипептиды с 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95% или большей идентичностью последовательности с любой из 8Е0 ГО N0: 107 или 108.
Также в данном изобретении предусмотрены человеческие полипептиды е§РН20 с аминокислотными заменами. Полипептиды е§РН20 с аминокислотными заменами представляют собой человеческие полипептиды е§РН20, модифицированные аминокислотными заменами по сравнению с человеческими полипептидами е§РН20, предусмотренными в данном изобретении и приведенными, например, в 8Е0 ГО N0: 60-63 и 102-104. Таким образом, человеческие полипептиды е§РН20 с аминокислотными заменами представляют собой укороченные с С-конца полипептиды. В некоторых примерах последовательности человеческих полипептидов е§РН20 с аминокислотными заменами по настоящему документу по меньшей мере на 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 87, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичны аминокислотным последовательностям с 1 до 491, 492, 493, 494, 495, 496 или 497 аминокислоты или последовательностям с 36 до 491, 492, 493, 494, 495, 496 или 497 аминокислоты из последовательности аминокислот, приведенной в 8Е0 ГО N0: 107. В других примерах последовательности человеческих полипептидов е§РН20 с аминокислотными заменами на 85, 87, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичны последовательности аминокислот, приведенной в 8Е0 ГО N0: 60-63 и 102-104.
Предусмотренные в данном изобретении человеческие полипептиды е§РН20 могут проявлять увеличенную или уменьшенную по сравнению с РН20 с ОР1-якорем дикого типа гиалуронидазную активность. Например, предусмотренные в данном изобретении человеческие полипептиды е§РН20 могут проявлять гиалуронидазную активность, которая составляет 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 300, 400, 500, 1000% и более от гиалуронидазной активности формы дикого типа с ОР1-якорем. В некоторых примерах человеческие полипептиды е§РН20 обладают повышенной гиалуронидазной активностью по сравнению с формой дикого типа с ОР1-якорем. Гиалуронидазная активность человеческих полипептидов е§РН20 может быть увеличена на 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 300, 400, 500, 1000% и более по сравнению с гиалуронидазной активностью формы дикого типа с ОР1-якорем.
Предусмотренные в данном изобретении человеческие полипептиды е§РН20 проявляют гиалуронидазную активность в нейтральной среде или гиалуронидазную активность, измеряемую при нейтральном рН, увеличенную или уменьшенную по сравнению с РН20 с ОР1-якорем дикого типа. Например, предусмотренные в данном изобретении человеческие полипептиды е§РН20 могут проявлять гиалуронидазную активность, которая составляет 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 300, 400, 500, 1000% и более от гиалуронидазной активности формы дикого типа с ОР1-якорем. В некоторых примерах человеческие полипептиды е§РН20 обладают пониженной гиалуронидазной активностью в нейтральной среде по сравнению с формой дикого типа с ОР1-якорем. Гиалуронидазная активность в нейтральной среде может быть снижена на 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95% и более по сравнению с гиалуронидазной активностью формы дикого типа с ОР1-якорем в нейтральной среде. В других примерах человеческие полипептиды е§РН20 обладают повышенной гиалуронидазной активностью в нейтральной среде по сравнению с формой дикого типа с ОР1-якорем. Гиалуронидазная активность в нейтральной среде может быть увеличена на 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 300, 400, 500, 1000% и более по сравнению с гиалуронидазной активностью формы дикого типа с ОР1-якорем в нейтральной среде.
Как правило, для сохранения активности полипептида человеческие полипептиды е§РН20 получают с помощью систем экспрессии белков, которые обеспечивают правильное ^гликозилирование, так как гликозилирование является важным для каталитической активности и стабильности этих полипептидов. Примеры полезных для рекомбинантной экспрессии полипептидов е§РН20 клеток включают, например, клетки яичников китайского хомячка (СН0) (например, клетки ΌΟ44 СН0 или клетки СН0-8).
2. Полипептиды е§РН20 других видов.
Изобретение включает длинные растворимые полипептиды РН20 не человеческого происхождения. Для определения позиций, соответствующих позициям 491-500 человеческого полипептида РН20, приведенного в 8ЕО ГО N0: 107, специалист в данной области техники может произвести выравнивание аминокислотной последовательности человеческого РН20 с последовательностью любого полипептида РН20 не человеческого происхождения, у которого для получения длинного растворимого полипептида РН20 может быть укорочен С-конец. Кроме того, для прогнозирования расположения в полипептиде сигнальной последовательности присоединения ОР1-якоря могут быть использованы, например, описанные в данном изобретении алгоритмы. Чтобы определить, являются ли полученные укороченные с С-конца полипептиды растворимыми и, следовательно, представляют ли собой полипептиды е§РН20, с помощью хорошо известных в уровне техники методов, включая анализы с Тритон® Х-114, описанные ниже и в примере 4, можно оценить растворимость укороченных с С-конца полипептидов.
Изобретение включает длинные растворимые полипептиды РН20 приматов, где приматы не включают человека. Примеры полипептидов РН20 с ОР1-якорем приматов включают, но не ограничиваются, РН20 шимпанзе (8ЕО ГО N0: 197). Таким образом, в данном изобретении предусмотрены полипептиды
- 21 022752 е§РН20 шимпанзе. Предусмотренные в данном изобретении полипептиды е§РН20 шимпанзе укорочены с С-конца, как описано выше для укороченных с С-конца человеческих полипептидов е§РН20. Таким образом, аминокислотные последовательности предусмотренных в данном изобретении полипептидов е§РН20 шимпанзе соответствуют аминокислотным остаткам с 1 до 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 500 или 501 последовательности аминокислот, приведенной в 8ЕЦ ГО N0: 107.
Полипептиды РН20 шимпанзе могут быть выровнены с человеческими полипептидами РН20 любым способом, известным специалисту в данной области. При выравнивании обычно достигается максимальное число совпадений, и способы выравнивания включают ручное выравнивание, выравнивание с помощью многочисленных доступных программ (например, ВБА8ТР) и другие известные специалистам в данной области способы. На фиг. 1 представлен результат выравнивания полипептидовпредшественников РН20 человека и шимпанзе. Аминокислотные остатки с 491 до 500 человеческой РН20 (где человеческие полипептиды е§РН20 по настоящему документу укорочены по сравнению с человеческим полипептидом РН20 дикого типа) соответствуют аминокислотным остаткам с 491 до 501 РН20 шимпанзе. Таким образом, в данном изобретении предусмотрены полипептиды е§РН20 шимпанзе, содержащие аминокислотные остатки с 1 до 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 500 или 501 из последовательности аминокислот, приведенной в 8ЕЦ ГО N0: 197. При экспрессии в системах экспрессии млекопитающих во время процессинга отщепляется сигнальный пептид из 35 аминокислот, и секретируется зрелая форма белка. Таким образом, зрелые полипептиды е§РН20 шимпанзе содержат аминокислоты с 36 до 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 500 или 501 из 81Т) ГО N0: 197.
Примеры полипептидов е§РН20 шимпанзе включают полипептиды, которые содержат аминокислотные остатки с 1 до 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497 или 498 из последовательности аминокислот, приведенной в 8ЕЦ ГО N0: 197. При экспрессии в системах экспрессии млекопитающих во время процессинга отщепляется сигнальный пептид из 35 аминокислот и секретируется зрелая форма белка. Таким образом, зрелые полипептиды е§РН20 шимпанзе содержат аминокислоты с 36 до 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497 или 498 из 81Т) ГО N0: 197.
Б. Частично ^гликозилированные полипептиды РН20.
Изобретение включает частично ^гликозилированные гиалуронидазы, в том числе частично дегликозилированные полипептиды РН20, которые полностью или частично сохраняют гиалуронидазную активность ^гликозилированной гиалуронидазы. Примеры частично дегликозилированных гиалуронидаз включают частично дегликозилированные полипептиды РН20 любых видов, например полипептиды, приведенные в любой из 8ЕЦ ГО N0: 107-109, 111-120, 197 и 198, или их аллельные или другие варианты. Аллельные и другие варианты, как известно специалистам в данной области техники, включают полипептиды, обладающие 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95% или большей идентичностью последовательности с любой из 8ЕЦ ГО N0: 107-109, 111-120, 197 и 198 или их усеченными формами. Частично дегликозилированные гиалуронидазы по настоящему документу также включают гибридные, слитые и химерные частично дегликозилированные гиалуронидазы и конъюгаты частично дегликозилированных гиалуронидаз.
Предусмотренные в данном изобретении частично ^гликозилированные гиалуронидазы могут быть получены с помощью расщепления одной или несколькими гликозидазами. Таким образом, хотя все сайты ^гликозилирования (например, сайты в аминокислотных позициях N82, N166, N235, N254, N368 и N393 РН20 человека, приведенной, например, в 8ЕЦ ГО N0: 107) могут быть гликозилированы, степень гликозилирования белка будет уменьшена по сравнению с гиалуронидазой, не расщепленной одной или несколькими гликозидазами. Частично дегликозилированные гиалуронидазы по настоящему документу, в том числе частично дегликозилированные растворимые полипептиды РН20, могут обладать 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80% гликозилирования полностью гликозилированной гиалуронидазы. В одном из примеров 1, 2, 3, 4, 5 или 6 сайтов ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕЦ ГО N0: 107, частично дегликозилированы, так что они больше не содержат богатых маннозой или сложных гликанов, а содержат, по меньшей мере, ^ацетилглюкозаминовые фрагменты. В некоторых примерах 1, 2 или 3 сайта ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166 и N254 из 8ЕЦ ГО N0: 107, дегликозилированы, т.е. не содержат полисахаридного фрагмента. В других примерах 3, 4, 5 или 6 сайтов ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕЦ ГО N0: 107, гликозилированы. Гликозилированные аминокислотные остатки содержат, по меньшей мере, ^ацетилглюкозаминовый фрагмент.
Также в данном изобретении предусмотрены частично ^гликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20. У частично дегликозилированных укороченных с С-конца полипептидов РН20 по настоящему документу отсутствуют одна или несколько аминокислот из С-конца полноразмерного полипептида РН20, такого как любой из полипептидов, приведенных в 8ЕЦ ГО N0: 107-109, 111120, 197 и 198. Таким образом, частично ^гликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу могут быть укорочены с С-конца на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 или более аминокислот по сравнению с полноразмерным полипептидом дикого типа, например полноразмерным полипептидом дикого типа с последова- 22 022752 тельностью, приведенной в 8ЕО ГО N0: 107-109, 111-120, 197 и 198. В некоторых примерах в белке гликозилированы 3, 4, 5 или 6 сайтов Ν-гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8Е0 ГО N0: 107. Гликозилированные аминокислотные остатки содержат, по меньшей мере, ^ацетилглюкозаминовый фрагмент. В других примерах 1, 2 или 3 сайта ^гликозилирования, соответствующие аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8Е0 ГО N0: 107, не гликозилированы. В других примерах может быть уменьшена степень гликозилирования, так что частично гликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20 не содержат богатых маннозой и сложных гликанов, но содержат, по меньшей мере, ^ацетилглюкозаминовый фрагмент, сохраняя при этом гиалуронидазную активность. Таким образом, частично дегликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу могут быть гликозилированы на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80% от уровня гликозилирования полностью гликозилированного укороченного с С-конца полипептида РН20.
Частично дегликозилированные полипептиды РН20 и укороченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу сохраняют гиалуронидазную активность. Кроме того, частично дегликозилированные полипептиды РН20 и укороченные с С-конца полипептиды РН20 активны в нейтральной среде, т.е. они сохраняют гиалуронидазную активность при нейтральном рН. Гиалуронидазная активность может быть увеличена или уменьшена по сравнению с гликозилированными полноразмерными или укороченными с С-конца полипептидами РН20. Например, частично дегликозилированные полипептиды РН20 и укороченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу могут проявлять гиалуронидазную активность, которая составляет 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 300, 400, 500, 1000% и более от гиалуронидазной активности гликозилированных полноразмерных и укороченных с С-конца полипептидов РН20.
Таким образом, предусмотренные в данном изобретении полипептиды РН20 могут быть использованы в качестве терапевтических полипептидов, например, для лечения связанных с гиалуроновой кислотой заболеваний или состояний. Частично дегликозилированные полипептиды РН20 и укороченные с С-конца полипептиды РН20 также могут быть использованы, например, для комбинированной терапии.
1. Полипептиды РН20.
Примеры частично ^гликозилированных гиалуронидаз по настоящему документу включают частично дегликозилированные полипептиды РН20 любых видов, например частично дегликозилированные полипептиды, приведенные в любой из 8ЕО ГО N0: 107-109, 111-120, 197 и 198, или их аллельные или другие варианты. Аллельные и другие варианты, как известно специалистам в данной области техники, включают полипептиды, обладающие 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95% или большей идентичностью последовательности с любой из 8ЕО ГО N0: 107-109, 111-120, 197 и 198 или их усеченными формами. В некоторых примерах в полипептидах гликозилированы 3, 4, 5 или 6 сайтов ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕО ГО N0: 107. В других примерах 1, 2 или 3 сайта ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166 и N254 из 8ЕО ГО N0: 107, не гликозилированы. В некоторых примерах 1, 2, 3, 4, 5 или 6 сайтов ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕО ГО N0: 107, содержат, по меньшей мере, ^ацетилглюкозаминовый фрагмент.
Частично дегликозилированные гиалуронидазы по настоящему документу могут быть получены расщеплением одной или несколькими гликозидазами. Таким образом, хотя все сайты ^гликозилирования (например, сайты гликозилирования, соответствующие аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 человеческой РН20, приведенной в 8ЕО ГО N0: 107) могут быть гликозилированы, степень их гликозилирования уменьшается по сравнению с не расщепленной одной или несколькими гликозидазами гиалуронидазой. В частности, частично гликозилированные гиалуронидазы сохраняют в каждом сайте ^гликозилирования, по меньшей мере, ^ацетилглюкозаминовый фрагмент. Частично гликозилированные гиалуронидазы могут быть гликозилированы по 3, 4, 5 или 6 сайтам ^гликозилирования, соответствующим аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕО ГО N0: 107. В некоторых примерах гиалуронидазы дегликозилированы по 1, 2 или 3 сайтам ^гликозилирования, соответствующим аминокислотным остаткам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕО ГО N0: 107. Частично дегликозилированные полипептиды РН20 по настоящему документу могут быть гликозилированы на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80% от уровня гликозилирования полностью гликозилированной гиалуронидазы.
Гликозидазы или гликозидгидролазы представляют собой ферменты, которые катализируют гидролиз гликозидной связи с образованием двух меньших молекул углеводов. Как показано на фиг. 2, к основным видам ^гликанов у позвоночных животных можно отнести богатые маннозой гликаны, гибридные гликаны и сложные гликаны. Существует несколько гликозидаз, которые дегликозилируют белки только частично, например ΕηύοΕΕ которая расщепляет богатые маннозой и гибридные гликаны; ΕηύοΕ2. которая расщепляет биантенные сложные гликаны; ЕпйоР3, которая расщепляет биантенные и более разветвленные сложные гликаны, и ЕпйоН, которая расщепляет богатые маннозой и гибридные гликаны (фиг. 3). Обработка гиалуронидазы, такой как растворимая гиалуронидаза, такая как растворимая РН20, одной или всеми указанными гликозидазами может привести лишь к частичному дегликози- 23 022752 лированию и, следовательно, сохранению гиалуронидазной активности.
Например, обработка гНиРН20 одной или всеми описанными выше гликозидазами приводит к частичному дегликозилированию. Частично дегликозилированные полипептиды гНиРН20 могут проявлять гиалуронидазную активность, которая сопоставима с активностью полностью гликозилированного полипептида (см. пример 7). Напротив, обработка гНиРН20 (8Е0 ГО N0: 122) ПНГазой Р, гликозидазой, которая расщепляет все Ν-гликаны (см. фиг. 3), или обработка ингибитором О1сNΑс-фосфотрансферазы (ОРТ) туникамицином приводит к полному удалению всех Ν-гликанов и, тем самым, делает РН20 энзиматически неактивной (см. примеры 7, 8).
Частично дегликозилированная гиалуронидаза по настоящему документу, в том числе частично дегликозилированный растворимый полипептид РН20, может сохранить 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80% от уровня гликозилирования полностью гликозилированного полипептида. Как правило, частично дегликозилированная гиалуронидаза, в том числе частично дегликозилированный растворимый полипептид РН20, проявляет гиалуронидазную активность, которая составляет 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 300, 400, 500, 1000% и более от гиалуронидазной активности полностью гликозилированного полипептида.
Частично дегликозилированные гиалуронидазы по настоящему документу также включают гибридные, слитые и химерные частично дегликозилированные гиалуронидазы и конъюгаты частично дегликозилированных гиалуронидаз.
2. Укороченные с С-конца полипептиды РН20.
Примеры частично Ν-гликозилированных или частично дегликозилированных полипептидов РН20 по настоящему документу включают укороченные с С-конца полипептиды РН20. В последовательности частично гликозилированных укороченных с С-конца полипептидов РН20 по настоящему документу отсутствуют один или несколько аминокислотных остатков из С-конца полноразмерного полипептида РН20, приведенного в 8ЕО ГО N0: 107-109, 111-120, 197 и 198. Таким образом, частично гликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу могут быть укорочены с С-конца на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 или более аминокислот по сравнению с полноразмерным полипептидом дикого типа, например полноразмерным полипептидом дикого типа с последовательностью, приведенной в 8ЕО ГО N0: 107-109, 111-120, 197 и 198. В некоторых примерах в полипептиде гликозилированы 3, 4, 5 или 6 сайтов Ν-гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕО ГО N0: 107. В других примерах 1, 2 или 3 сайта ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166 и N254 из 5>ЕО ГО N0: 107, не гликозилированы.
Частично дегликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу могут быть получены расщеплением одной или несколькими гликозидазами. Хотя все сайты ^гликозилирования (например, сайты гликозилирования, соответствующие аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 человеческой РН20, приведенной в 8ЕО ГО N0: 107) могут быть гликозилированы, степень их гликозилирования уменьшается по сравнению с не расщепленной одной или несколькими гликозидазами гиалуронидазой. Таким образом, частично дегликозилированные полипептиды РН20 по настоящему документу могут быть гликозилированы на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80% от уровня гликозилирования полностью гликозилированной гиалуронидазы. В частности, частично ^гликозилированные гиалуронидазы сохраняют в каждом сайте ^гликозилирования, по меньшей мере, ^ацетилглюкозаминовый фрагмент. В некоторых примерах 1, 2, 3, 4, 5 или 6 сайтов ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕО ГО N0: 107, содержат, по меньшей мере, ^ацетилглюкозаминовый фрагмент. В других примерах 3, 4, 5 или 6 сайтов ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕО ГО N0: 107, гликозилированы, и уровень гликозилирования в каждом из 3, 4, 5 или 6 сайтов ^гликозилирования соответствует полностью гликозилированной гиалуронидазе. В дополнительных примерах 1, 2 или 3 сайта ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 5>ЕО ГО N0: 107, полностью дегликозилированы. В этих примерах, как правило, полностью дегликозилированы аминокислоты N82, N166 и N254.
Примеры частично ^гликозилированных укороченных с С-конца полипептидов РН20 включают полипептиды любого видового происхождения, например любые полипептиды, приведенные в 8ЕО ГО N0: 107-109, 111-120, 197 и 198, или их аллельные и другие варианты. Аллельные и другие варианты, как известно специалистам в данной области техники, включают полипептиды, обладающие 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95% или большей идентичностью последовательности с любой из 5>ЕО ГО N0: 107109, 111-120, 197 и 198 или их усеченными формами. Частично ^гликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу также включают гибридные, слитые и химерные полипептиды РН20 и конъюгаты РН20. Например, частично дегликозилированный укороченный с С-конца полипептид РН20 по настоящему документу может быть конъюгирован с полимером, таким как декстран, полиэтиленгликоль (ПЭГ) (т.е. пегилирован), фрагмент полимера сиаловой кислоты или другие подобные полимеры, например природные полимеры и полисахариды. В других примерах частично ^гликозилированный укороченный с С-конца полипептид РН20 связан или слит с белковым доменом,
- 24 022752 таких как домен Рс иммуноглобулина 1дС.
Гликозилированные или частично гликозилированные укороченные с С-конца полипептиды по настоящему документу включают полипептиды, укороченные с С-конца на 2-44 аминокислоты по сравнению с РН20 дикого типа, приведенным в 8ЕЦ ГО N0: 107 (полипептид-предшественник) или 108 (зрелый полипептид), а также их аллельные или видовые варианты. Таким образом, укороченные с С-конца полипептиды РН20 включают любые полипептиды с усеченным С-концом, последовательности которых соответствуют последовательности с 1 аминокислоты до 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459,
460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481,
482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 500, 501, 502, 503,
504, 505, 506 или 507 аминокислоты из 8ЕЦ ГО N0: 107, или соответствующим позициям в ее аллельных или видовых вариантах, причем в указанных полипептидах 2, 3, 4, 5 или 6 сайтов ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕЦ ГО N0: 107, должны быть гликозилированы. При экспрессии в клетках млекопитающих во время процессинга у белка отщепляется ^концевая сигнальная последовательность из 35 аминокислот, и секретируется зрелая форма белка. Таким образом, в данном изобретении предусмотрены зрелые человеческие укороченные с С-конца полипептиды РН20, последовательности которых соответствуют аминокислотам с 36 до 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 506 или 507 из последовательности аминокислот, приведенной в 8ЕЦ ГО N0: 107, или соответствующим аминокислотам в ее аллельных или видовых вариантах, причем в указанных полипептидах 3, 4, 5 или 6 сайтов ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕЦ ГО N0: 107, должны быть гликозилированы.
В табл. 2 приведены не ограничивающие примеры укороченных с С-конца полипептидов РН20, которые могут быть гликозилированы или частично дегликозилированы. В табл. 2 ниже приведена длина (в аминокислотах) полипептидов-предшественников и зрелых полипептидов, а также идентификаторы последовательностей (8ЕЦ ГО N0), под которыми приведены примеры аминокислотных последовательностей укороченных с С-конца полипептидов-предшественников и зрелых полипептидов РН20. Полипептид РН20 дикого типа также включен в табл. 2 для сравнения.
- 25 022752
Примеры укороченных с С-конца полипептидов РН20
Таблица 2
Полипептид Предшественник (аминокислот) Предшественник 8ЕО ГО ΝΟ Зрелый пептид (аминокислот) Зрелый пептид 8Е<2 ГО ΝΟ
8РАМ1-УА8Ь 509 1 474 108
ЗРАМ1-ЗЗУА 507 3 472 55
8РАМ1-185У 506 45 471 97
8ΡΑΜ1-ΙΙ88 505 4 470 56
8РАМ1-Ы13 504 46 469 98
8РАМ1-РЫ1 503 5 468 57
ЗРАМ 14+1,1 502 47 467 99
ЗРАМЫЫЬ 501 6 466 58
ЗРАМ1-31ЬР 500 48 465 100
8РАМ1-У51Ь 499 7 464 59
8РАМ1-1У81 498 49 463 101
ЗРАМ1-Р1УЗ 497 8 462 60
8РАМ1-МР1У 496 50 461 102
8ΡΑΜΙ-ΤΜΡΙ 495 9 460 61
8РАМ1-АТМР 494 51 459 103
ЗРАМ1-ЗАТМ 493 10 458 62
8РАМ1-Ь8АТ 492 52 457 104
3ΡΑΜΙ-ΤΙ.8Α 491 11 456 63
8ΡΛΜ1-Ρ3ΤΙ. 489 12 454 64
$РАМ1-8ТЬ8 490 13 455 65
5РАМ1-8Р5Т 488 53 453 105
8РАМ1-А8РЗ 487 14 452 66
3ΡΑΜ1-ΝΑ8Ρ 486 54 451 106
3ΡΑΜ1-ΥΝΑ3 485 15 450 67
8ΡΑΜ1-ΡΥΝΑ 484 16 449 68
8ΡΑΜ1-1ΡΥΝ 483 17 448 69
8ΡΑΜ1-ΟΙΡΥ 482 18 447 70
3ΡΑΜ1-ΡΟΙΡ 481 19 446 71
δΡΑΜ1-ΕΡς>Ι 480 20 445 72
5ΡΛΜΙ-ΡΕΡΟ 479 21 444 73
8РАМ1-ТЕЕР 478 22 443 74
8РАМ1-ЕТЕЕ 477 23 442 75
- 26 022752
8РАМ1-МЕТЕ 476 24 441 76
8РАМ1-РМЕТ 475 25 440 77
5РАМ1-РРМЕ 474 26 439 78
8РАМ1-КРРМ 473 27 438 79
8РАМ1-ЬКРР 472 28 437 80
8ΡΛΜ1-ΡΙ.ΚΡ 471 29 436 81
8РАМ1-ЛРЕК 470 30 435 82
δΡΑΜΙ-ΠΑΡί 469 31 434 83
8РАМ1-ЮАР 468 32 433 84
ЗРАМ1-СГОА 467 33 432 85
8РАМ1-УСЮ 466 34 431 86
8РАМ1-ОУС1 465 35 430 87
8РАМ1-СРУС 464 36 429 88
8ΡΑΜ1-ΪΑΟΟ 462 37 427 89
8РАМ1-УС1А 460 38 425 90
8РАМ1-УПУС 458 39 423 91
δΡΑΜΙ-ϋΑνϋ 456 40 421 92
8РАМ1-ПТПЛ 454 41 419 93
8РАМ1-УКОТ 452 42 417 94
δΡΑΜΙ-ΑϋνΚ. 450 43 415 95
Ν-гликозилированные и частично дегликозилированные усеченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу включают растворимые полипептиды, т.е. полипептиды, которые переходят в водную фазу раствора Тритон® Х-114, и нерастворимые полипептиды, т.е. полипептиды, которые переходят в богатую детергентом фазу раствора Тритон® Х-114. Частично дегликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу могут быть гликозилированы на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80% от уровня гликозилирования полностью гликозилированной гиалуронидазы. Кроме того, частично дегликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20 могут иметь 1, 2 или 3 сайта Ν-гликозилирования, соответствующих аминокислотам Ν82, Ν166 и Ν254 из 8ЕО ГО ΝΟ: 107, которые не гликозилированы. Сайт Ν-гликозилирования, содержащий, по меньшей мере, Ν-ацетилглюкозаминовый фрагмент, считается гликозилированным.
В некоторых примерах частично Ν-гликозилированные укороченные с С-конца полипептиды по настоящему изобретению являются растворимыми, т.е. не содержат ОР1-якорь. Наличие ОР1-якоря можно установить, например, с помощью анализа с Тритон® Х-114 после инкубации с Р1-РЬС или Р1-РЬП, как описано ниже и в примере 4. Например, полипептиды РН20, укороченные с С-конца к 5'-концу от аминокислоты, соответствующей аминокислотной позиции 490 полипептида РН20, приведенного в 8ЕО ГО ΝΟ: 107, при получении в системе экспрессии млекопитающих обычно растворимы (см. пример 3). Эти полипептиды растворимы в силу того, что они полностью лишены сигнальной последовательности присоединения ОР1-якоря. В других примерах частично гликозилированные укороченные с С-конца полипептиды по настоящему изобретению при получении в системе экспрессии млекопитающих являются нерастворимыми и связанными с мембраной. Например, полипептиды РН20, укороченные с С-конца к 3'-концу от аминокислоты, соответствующей аминокислотной позиции 500 полипептида РН20, приведенного в 8ЕО ГО ΝΟ: 107, при получении в системе экспрессии млекопитающих обычно нерастворимы (см. пример 3). Укороченные с С-конца полипептиды по настоящему документу могут быть частично гликозилированы, т.е. в полипептидах 3, 4, 5 или 6 сайтов Ν-гликозилирования, соответствующих аминокислотам Ν82, Ν166, Ν235, Ν254, Ν368 и Ν393 из 8ЕО ГО ΝΟ: 107, являются гликозилированными.
Растворимые частично гликозилированные усеченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу включают полипептиды, которые являются укороченными, но сохраняют по меньшей мере один или более аминокислотных остатков, расположенных в сигнальной последовательности присоединения ОР1-якоря, и полипептиды, в которых полностью отсутствует сигнальная последовательность присоединения ОР1-якоря и ω-сайт. Таким образом, указанные полипептиды лишены ковалентно присоединяемого в ЭР к С-концу белка ОР1-якоря, не связаны с внеклеточной поверхностью плазматической мембраны и являются секретируемыми. Указанные усеченные с С-конца полипептиды РН20 могут быть частично гликозилированы, например могут быть гликозилированы 3, 4, 5 или 6 сайтов
Ν-гликозилирования. Примеры растворимых укороченных с С-конца полипептидов РН20 без сигнальной
- 27 022752 последовательности присоединения СР1-якоря включают полипептиды любых видов, например, приведенные в любой из 8ЕЦ ГО N0: 107-109, 111-120, 197 и 198, и полипептиды или их аллельные или другие варианты. Последовательности указанных растворимых частично гликозилированных усеченных с С-конца полипептидов РН20 соответствуют аминокислотам с 1 до 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499 или 500 из последовательности аминокислот, приведенной в 8ЕЦ ГО N0: 107. После отщепления Ν-концевой сигнальной последовательности при экспрессии в клетках млекопитающих последовательности зрелых растворимых частично гликозилированных усеченных с С-конца полипептидов РН20 соответствуют аминокислотам с 36 до 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499 или 500 из последовательности аминокислот, приведенной в 8Е0 ГО N0: 107. В некоторых примерах растворимые полипептиды РН20 с усеченной с С-конца сигнальной последовательностью присоединения СР1-якоря частично гликозилированы и содержат, например, по меньшей мере, остаток ^ацетилглюкозамина в 3, 4, 5 или 6 сайтах ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕЦ ГО N0: 107. В других примерах растворимые полипептиды РН20 с усеченной с С-конца сигнальной последовательностью присоединения СР1-якоря гликозилированы на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80% от уровня гликозилирования полностью гликозилированной гиалуронидазы.
Частично дегликозилированные усеченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу, которые сохраняют по меньшей мере одну аминокислоту из сигнальной последовательности присоединения СР1-якоря, представляют собой частично дегликозилированные длинные растворимые поли пептиды РН20. В некоторых примерах частично дегликозилированные усеченные с С-конца полипептиды РН20 не гликозилированы по 1, 2 или 3 сайтам ^гликозилирования, соответствующим аминокислотам N82, N166 и N254 из 8ЕЦ ГО N0: 107. Указанные частично дегликозилированные длинные растворимые полипептиды РН20 включают аминокислоты с 1 до 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499 или 500 из последовательности аминокислот, приведенной в 8ЕЦ ГО N0: 107. При экспрессии в клетках млекопитающих во время процессинга отщепляется ^концевая сигнальная последовательность из 35 аминокислот, и секретируется зрелая форма белка. Таким образом, зрелая форма частично дегликозилированного полипептида езРН20 включает аминокислоты с 36 до 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499 или 500 из последовательности аминокислот, приведенной в 8ЕЦ ГО N0: 107. Зрелые человеческие частично гликозилированные полипептиды езРН20 по настоящему документу включают приведенные в 8Е0 ГО N0: 59-63 и 100-104 полипептиды, содержащие, по меньшей мере, остатки ^ацетилглюкозамина в 3, 4, 5 или 6 сайтах ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕЦ ГО N0: 107. В некоторых примерах степень гликозилирования уменьшают обработкой эндогликозидазой. Таким образом, частично дегликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу, содержащие по меньшей мере одну аминокислоту из сигнальной последовательности присоединения СР1-якоря, могут быть гликозированы на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80% от уровня гликозилирования полностью гликозилированной гиалуронидазы.
Также в данном изобретении предусмотрены частично дегликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20, которые не растворимы, т.е. прикреплены к клеточной мембране и поэтому не секретируется в культуральную среду при экспрессии. Не растворимые усеченные с С-конца полипептиды РН20 могут быть частично дегликозилированы при условии, что они сохраняют гиалуронидазную активность. Примеры частично гликозилированных зрелых укороченных с С-конца полипептидов РН20, которые не являются растворимыми, включают полипептиды с последовательностями, соответствующими аминокислотам с 36 до 501, 502, 503, 504, 505, 506 или 507 из 8ЕЦ ГО N0: 107. Таким образом, частично гликозилированные укороченные с С-конца нерастворимые полипептиды РН20 по настоящему документу включают полипептиды длиной 466, 467, 468, 469, 470, 471 или 472 аминокислот, например, приведенные в 8ЕЦ ГО N0: 55-58 и 97-99, которые сохраняют по меньшей мере 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80% от уровня гликозилирования полностью гликозилированной гиалуронидазы. В некоторых примерах в полипептидах гликозилированы 3, 4, 5 или 6 сайтов ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8ЕЦ ГО N0: 107. В других примерах 1, 2, 3, 4, 5 или 6 сайтов ^гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из 8Е0 ГО N0: 107, содержат, по меньшей мере, ^ацетилглюкозаминовый фрагмент.
Частично гликозилированные укороченные с С-конца полипептиды по настоящему документу могут проявлять увеличенную или уменьшенную по сравнению с формой РН20 с СР1-якорем дикого типа гиалуронидазную активность.
Кроме того, частично дегликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20 активны в нейтральной среде, т.е. они сохраняют гиалуронидазную активность при нейтральном рН. Например, усеченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу могут проявлять гиалуронидазную активность, которая составляет 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 300, 400, 500, 1000% и более от гиалуронидазной активности, проявляемой формой дикого типа с СР1-якорем.
- 28 022752
В некоторых примерах частично гликозилированные усеченные с С-конца полипептиды РН20 обладают повышенной гиалуронидазной активностью по сравнению с формой дикого типа с СР1-якорем.
Усеченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу могут быть также Ν-гликозилированы. Ν-гликозилированные и частично Ν-гликозилированные гиалуронидазы по настоящему документу также включают гибридные, слитые и химерные Ν-гликозилированные и частично дегликозилированные гиалуронидазы, а также конъюгаты Ν-гликозилированных и частично дегликозилированных гиалуронидаз.
3. Дополнительные модификации.
Предусмотренные в данном изобретении полипептиды РН20, в том числе человеческие полипептиды е5РН20, Ν-гликозилированные и частично Ν-гликозилированные укороченные с С-конца полипептиды РН20, а также частично гликозилированные полипептиды РН20, включают также полипептиды, которые содержат химические или посттрансляционные модификации, и полипептиды, которые не содержат химических или посттрансляционных модификаций. Такие модификации включают, но не ограничиваются, пегилирование, сиалирование, альбуминирование, гликозилирование, фарнезилирование, карбоксилирование, гидроксилирование, фосфорилирование, а также другие известные в уровне техники модификации полипептидов. Таким образом, предусмотренные в данном изобретении укороченные с С-конца полипептиды РН20, в том числе полипептиды е5РН20, могут содержать и другие модификации, затрагивающие или не затрагивающие первичную последовательность полипептида, включая, но не ограничиваясь, присоединение углеводного фрагмента, фрагмента полиэтиленгликоля (ПЭГ), сиалильного фрагмента, Рс домена иммуноглобулина С или любого другого домена или фрагмента. Например, такие дополнительные модификации могут быть введены для повышения стабильности или времени полураспада белка в сыворотке. Укороченные с С-конца полипептиды РН20, в том числе полипептиды е5РН20 по настоящему документу, могут быть конъюгированы или слиты с любым фрагментом с использованием любых методов, известных в уровне техники, в том числе химических и рекомбинантных методов.
Снижение иммуногенности.
У полипептидов РН20 по настоящему документу, включая человеческие полипептиды е5РН20, может быть уменьшена иммуногенность. Снижение иммуногенности может быть достигнуто за счет внесения изменений в последовательность, которые устраняют антигенные эпитопы полипептида, или с помощью посттрансляционных модификаций. Например, предусмотрено изменение гликозилирования пептида, при условии, что полипептид должен содержать, по меньшей мере, остатки Ν-ацетилглюкозамина в аминокислотных позициях Ν235, Ν368 и Ν393 из 8ЕЦ ГО ΝΟ: 107.
Например, полипептиды РН20 могут быть модифицированы таким образом, чтобы не содержать фукозу, особенно избежать бифукозилирования. В частности, предусмотренные в данном изобретении полипептиды РН20 не бифукозилированы. Это может быть достигнуто путем экспрессии и получения полипептидов РН20 в клетках-хозяевах, как правило, клетках насекомых, в которых не происходит бифукозилирование. Фукоза представляет собой дезоксигексозу, которая присутствует в самых разнообразных организмах, включая млекопитающих, насекомых и растения. Фукозилированные гликаны синтезируются фукозилтрансферазами. См., например, Ма е! а1., С1усоЪю1оду, 15(2):158К-184К, (2006); Nакауата е! а1., 1. Вю1. СЬет., 276:16100-16106 (2001) и 8!иг1а е! а1., СГусоЪю1оду, 15(10):924-935 (2005). У человека фукоза часто присутствует на концах модифицированных гликанов, было показано, что наличие связанной а1,6-гликозидной связью с Ν-ацетилглюкозамином фукозы важно для процессинга и распознавания гликопротеинов. У насекомых в ядре структур Ν-гликанов встречается бифукозилирование с α-1,6- и а-1,3-связями. Фукозилирование ядра гликанов в клетках насекомых с α-1,3-связями порождает углеводные эпитопы, иммуногенные для человека (см., например, заявка США № 20070067855). Например, полипептиды РН20 по настоящему документу, в том числе полипептиды е5РН20, могут быть получены в клетках-хозяевах, которые не способны к бифукозилированию полипептида. Таким образом, хотя для экспрессии полипептидов могут быть использованы способные к бифукозилированию клетки насекомых или другие клетки, как правило, для получения полипептидов используют клетки млекопитающих, такие как клетки СНО.
В некоторых примерах в клетках насекомых с измененными путями гликозилирования могут быть получены дефукозилированные или фукоза-дефицитные полипептиды РН20, маммалинизированные клеточные системы экспрессии насекомых могут быть получены за счет применения бакуловирусных векторов экспрессии, содержащих гены процессинга олигосахаридов эукариот (см., например, патент США № 6461863). Кроме того, антигенность может быть устранена при экспрессии полипептидов РН20 в клетках насекомых без а-1,3-фукозилтрансферазы (РТ3) (см., например, заявку США № 20070067855). В других примерах дефукозилированные или фукоза-дефицитные полипептиды РН20 могут быть получены, например, в клеточных линиях, которые производят дефукозилированные белки, в том числе в дефицитных по фукозилированию белков Ьес13 СНО клетках (Шрка е! а1., АгсЬ. ВюсЬет. ВюрЬу5. 249:533-545 (1986); заявка США № 2003/0157108, а также \УО 2004/056312), и нокаутных клеточных линиях, таких как клетки СНО с нокаутом гена а-1,6-фукозилтрансферазы, РИТ8 (Уашапе-ОЬпиЫ е! а1., Вю!есЬ. Вюепд. 87:614 (2004)).
- 29 022752
Конъюгирование с полимерами.
В некоторых примерах полипептиды екРН20 и другие укороченные с С-конца полипептиды РН20, в том числе частично гликозилированные полипептиды РН20, предусмотренные в данном изобретении, конъюгированы с полимерами. Примеры полимеров, с которыми могут быть конъюгированы полипептиды РН20, включают природные и синтетические гомополимеры, такие как полиолы (т.е. поли-0Н), полиамины (т.е. поли-ЛН2) и поликарбоновые кислоты (например, поли-С00Н), а также гетерополимеры, т.е. полимеры, содержащие одну или несколько различных связывающихся групп, например гидроксильные группы и аминогруппы. Примеры подходящих полимерных молекул включают полимерные молекулы, выбранные из полиалкиленоксидов (ПАО), таких как полиалкиленгликоли (ПАГ), включая полиэтиленгликоли (ПЭГ), метоксиполиэтиленгликоли (мПЭГ) и полипропиленгликоли, ПЭГ-глицидиловые эфиры (Ерох-ПЭГ), ПЭГ-оксикарбонилимидазол (СЭ1-ПЭГ), разветвленные полиэтиленгликоли (ПЭГ), поливиниловых спиртов (ПВС), поликарбоксилатов, поливинилпирролидона, поли-О,Ь-аминокислот, полиэтилен-ко-малеинового ангидрида, полистирол-ко-малеинового ангидрида, декстранов, в том числе карбоксиметилдекстранов, гепарина, гомологичных альбуминов, целлюлозы, в том числе метилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, этилцеллюлозы, гидроксиэтилцеллюлозы, карбоксиэтилцеллюлозы и гидроксипропилцеллюлозы, гидролизатов хитозана, крахмалов, таких как гидроксиэтилкрахмал и гидроксипропилкрахмал, гликогена, агароз и их производных, гуаровой камеди, пуллулана, инулина, ксантановой камеди, каррагинана, пектина, гидролизатов альгиновой кислоты и биополимеров.
Как правило, полимеры представляют собой полиалкиленоксиды (ПАО), такие как полиэтиленоксиды, такие как ПЭГ, как правило, мПЭГ, которые по сравнению с полисахаридами, такими как декстран, пуллулан и тому подобное, включают меньше реактивных групп, способных к сшиванию. Как правило, полимеры представляют собой нетоксичные полимерные молекулы, такие как метоксиполиэтиленгликоль (мПЭГ), которые могут быть ковалентно конъюгированы с полипептидами екРН20 и другими укороченными с С-конца полипептидами РН20 (например, к группам на поверхности белка) с использованием относительно простых химических методов.
Подходящие для присоединения к полипептидам екРН20 и другим укороченным с С-конца полипептидам РН20 полимерные молекулы включают, но не ограничиваются, полиэтиленгликоль (ПЭГ) и производные ПЭГ, такие как метоксиполиэтиленгликоль (мПЭГ), ПЭГ-глицидиловые эфиры (Ерох-ПЭГ), ПЭГ-оксикарбонилимидазол (СЭ1-ПЭГ), разветвленные ПЭГ и полиэтиленоксид (ПЭО) (см., например, КоЪейк е! а1., Абуапсеб Эгид Оебуегу Кеу1еу, 2002, 54:459-476; Натк и 2айркку Ро1у(е!бу1епе д1усо1), Сбеткйу апб Вю1одюа1 Аррйсайопк, АС8 8утрокшт 8ег1ек 680, 1997; Мебуаг е! а1., 1. Рбагт. Рбагтасеи!. 8ск, 3(1):125-136, 2000; Натк и СНекк (2003), №1. Кеу. Эгид. Эйсою 2(3):21421; ТкиЪегу, 1. Вю1. СНет. 279(37):38118-24, 2004). Молекулярная масса полимерных молекул обычно лежит в пределах приблизительно от 3 до 60 кДа. В некоторых вариантах полимерные молекулы, конъюгированные с полипептидом РН20 по настоящему документу, имеют молекулярную массу 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 или более 60 кДа.
В уровне техники известны различные методы модификации полипептидов ковалентным присоединением (конъюгированием) ПЭГ или производных ПЭГ (т.е. пегилирования) (см., например, и8 2006/0104968; И8 5672662; И8 6737505 и И8 2004/0235734). Методы пегилирования включают, но не ограничиваются, использование специализированных линкеров и конъюгирующих химических методов (см., например, Натк, Α6ν. Эгид Эейу. Кеу. 54: 459-476, 2002), присоединение нескольких фрагментов ПЭГ к одному сайту конъюгирования (например, через использование разветвленных ПЭГ; см., например, Уегоиеке е! а1., Вюогд. Меб. СНет. Ьеб. 12:177-180, 2002), сайт-специфическое пегилирование и/или монопегилирование (см., например, СНартап е! а1., №1иге Вю!есб. 17:780-783, 1999) и сайт-направленное ферментативное пегилирование (см., например, 8а!о, Α6ν. Эгид ЭеЬу. Кеу., 54:487-504, 2002) (см. также, например, Ьи и Ребх (1994), Ιη!. 1. Рерйбе Рго!еш Кек. 43:127-138; Ьи и Ребх (1993), Рерйбе Кек. 6:142-6, 1993; Ребх е! а1. (1995), Ιη!. 1. Рерйбе Кек. 46:253-64; ВепНаг е! а1. (1994), 1. Вю1. СНет. 269:13398-404; Вгитеапи е! а1. (1995), 1. 1ттипо1. 154:3088-95; см. также, Сабсей е! а1. (2003), Абу. Эгид Эейу. Кеу. 55, (10):1261-77 и Мойпеих (2003), Рбагтасо!бегару, 23 (8 часть 2): 3-8). По методам и методикам, описанным в уровне техники, можно получать белки, имеющие 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более 10 ПЭГ или производных ПЭГ, присоединенных к одной молекуле белка (см., например, И8 2006/0104968).
В уровне техники описаны многочисленные реагенты для пегилирования. Такие реагенты включают, но не ограничиваются, ^гидроксисукцинимидил-(ПН8)-активированный ПЭГ, сукцинимидил-мПЭГ, мПЭГ 2-Л-гидроксисукцинимид, мПЭГ -сукцинимидил-альфа-метилбутаноат, мПЭГ-сукцинимидилпропионат, мПЭГ-сукцинимидилбутаноат, сукцинимидиловый эфир мПЭГ-карбоксиметил-3-гидроксибутановой кислоты, гомобифункциональный ПЭГ-сукцинимидилпропионат, гомобифункциональный ПЭГ-пропиональдегид, гомобифункциональный ПЭГ-бутиральдегид, ПЭГ-малеимид, ПЭГ-гидразид, ПЭГ-п-нитрофенил-карбонат, мПЭГ-бензотриазолкарбонат, ПЭГ-пропиональдегид, мПЭГ-бутиральдегид, разветвленный мПЭГ2-бутиральдегид, мПЭГ-ацетил, мПЭГ-пиперидон, мПЭГ-метилкетон, безлинкерный мПЭГ-малеимид, мПЭГ-винилсульфон, мПЭГ-тиол, мПЭГ-ортопиридилтиоэфир, мПЭГ-ортопиридилдисульфид, Ртос-ПЭГ-ЛН8, Вос-ПЭГ-ЛН8, ПЭГ-ЛН8- 30 022752 винилсульфон, ПЭГ-МЖ-акрилат, ПЭГ-ИЖ-флуоресцеин и ПЭГ-ЯЖ-биотин (см., например, МоиСагФт е! а1., В|осоп)ида1е СЬет 6:62-69, 1995; Уегоиеке е! а1., I. ВюасЬуе СотраЬЫе Ро1утегк 12:197207, 1997; Ж 5672662; Ж 5932462; Ж 6495659; Ж 6737505; Ж 4002531; Ж 4179337; Ж 5122614; υδ 5183550; Ж 5324844; Ж 5446090; Ж 5612460; Ж 5643575; Ж 5766581; Ж 5795569; Ж 5808096; υδ 5900461; υδ 5919455; υδ 5985263; υδ 5990237; υδ 6113906; υδ 6214966; υδ 6258351; υδ 6340742; υδ 6413507; υδ 6420339; υδ 6437025; υδ 6448369; υδ 6461802; υδ 6828401; υδ 6858736; υδ 2001/0021763; υδ 2001/0044526; υδ 2001/0046481; υδ 2002/0052430; υδ 2002/0072573; υδ 2002/0156047; υδ 2003/0114647; υδ 2003/0143596; υδ 2003/0158333; υδ 2003/0220447; υδ 2004/0013637; υδ 2004/0235734; υδ 2005/000360; υδ 2005/0114037; υδ 2005/0171328; υδ 2005/0209416; ΕР 01064951; ΕР 0822199; \\'Ο 00176640; \\'Ο 0002017; \\'Ο 0249673; \\'Ο 9428024 и \\Ό 0187925).
Другие модификации.
Полипептиды екРН20 и другие укороченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу также включают их конъюгаты и слитые полипептиды.
Е. Способы получения нуклеиновых кислот, кодирующих длинные растворимые РН20 и другие растворимые гиалуронидазы РН20, и их полипептидов.
Длинные растворимые полипептиды РН20, усеченные с С-конца гиалуронидазы РН20 и частично гликозилированные гиалуронидазы РН20 по настоящему документу, а также молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие такие полипептиды, могут быть получены хорошо известными в уровне техники методами рекомбинантной экспрессии и очистки белков. Например, ДНК может быть получена из клонированной ДНК (например, из библиотеки ДНК), путем химического синтеза, клонированием кДНК, клонированием геномной ДНК или ее фрагментов, очищенных из необходимых видов клеток. Если полипептиды получают рекомбинантными методами, могут быть использованы любые известные специалистам в данной области методы идентификации нуклеиновых кислот, кодирующих желаемые гены. Для получения, например, из клеток или тканей полноразмерных (т.е. охватывающих всю кодирующую область) кДНК или геномных ДНК, кодирующих фермент РН20, может быть использован любой метод, известный в уровне техники. Модифицированные полипептиды или варианты полипептидов, в том числе усеченные формы, например, предусмотренные в данном изобретении, могут быть получены из полипептида дикого типа с применением стандартных технологий рекомбинантной ДНК.
Полипептиды можно клонировать или выделять с помощью любых доступных известных в уровне техники методов клонирования и выделения молекул нуклеиновых кислот. Такие методы включают ПЦР-амплификацию нуклеиновых кислот и скрининг библиотек, включая скрининг гибридизацией нуклеиновых кислот, скрининг с помощью антител и скрининг по активности.
Для выделения молекул нуклеиновых кислот, кодирующих желаемый полипептид, могут быть использованы методы амплификации нуклеиновых кислот, включая, например, полимеразную цепную реакцию (ПЦР). ПЦР может быть проведена с использованием любых известных в уровне техники процедур и методов. Например, могут быть использованы ПЦР-амплификатор Регкт^тег Се!ик и Τа^-полимераза (от Сеие Αтр). В качестве исходного материала, из которого может быть выделена желаемая кодирующая полипептид молекула нуклеиновой кислоты, может быть использован содержащий нуклеиновые кислоты материал. Например, в методах амплификации могут быть использованы препараты ДНК и РНК, клеточные экстракты, тканевые экстракты из подходящих источников (например, яичек, предстательной железы, молочной железы), образцы жидкостей (например, крови, сыворотки, слюны), образцы, взятые у здоровых и/или больных субъектов. Нуклеиновые кислоты могут быть получены из любого вида эукариот, включая, но не ограничиваясь, позвоночных животных, млекопитающих, человека, свиней, быков, кошек, птиц, лошадей, собак, приматов. В качестве источника исходного материала также могут быть использованы библиотеки нуклеиновых кислот. Для амплификации желаемого полипептида могут быть разработаны соответствующие праймеры. Например, праймеры могут быть разработаны на основе экспрессируемых последовательностей, с которых был синтезирован желаемый полипептид. Праймеры могут быть разработаны на основе обратной трансляции аминокислотной последовательности полипептида. При необходимости, для амплификации могут быть использованы вырожденные праймеры. В качестве праймеров для амплификации последовательности из образца нуклеиновых кислот методом ПЦР могут быть использованы олигонуклеотидные затравки, которые гибридизуются с последовательностями на 3'- и 5'-конце желаемой последовательности. Праймеры могут быть использованы для амплификации всей полноразмерной последовательности РН20 или ее усеченной последовательности, например последовательности, кодирующей любой из предусмотренных в данном изобретении растворимых полипептидов РН20. Для подтверждения кодирования желаемого полипептида может быть определена последовательность молекул нуклеиновых кислот, полученных в результате амплификации.
К кодирующей полипептид молекуле нуклеиновой кислоты могут быть присоединены дополнительные нуклеотидные последовательности, в том числе линкерные последовательности, содержащие сайты рестрикции для клонирования синтетического гена в вектор, например в вектор экспрессии белка или в вектор, предназначенный для амплификации кодирующей белок последовательности ДНК. Кроме того, с кодирующей полипептид молекулой нуклеиновой кислоты могут быть функционально связаны
- 31 022752 дополнительные нуклеотидные последовательности, являющиеся функциональными элементами ДНК. Примеры таких последовательностей включают, но не ограничиваются, промоторные последовательности, способствующие внутриклеточной экспрессии белка, и последовательности для секреции, например гетерологичными сигнальные последовательности, предназначенные для облегчения секреции белка. Такие последовательности известны специалистам в данной области. Примеры гетерологичных сигнальных последовательностей включают, но не ограничиваются, гетерологичные сигнальные последовательности 1дО каппа человека и мыши, приведенные в 8ЕЦ ГО N0: 144 и 145 соответственно. Дополнительные последовательности нуклеотидных остатков, такие как последовательности оснований, кодирующие связывающие белки районы, также могут быть связаны с кодирующей фермент молекулой нуклеиновой кислоты. Такие районы включают, но не ограничиваются, последовательности остатков, которые способствуют поглощению фермента конкретными клетками-мишенями, или которые кодируют белки, способствующие такому поглощению, или которые иным образом изменяют фармакокинетику продукта синтетического гена.
Кроме того, к полипептиду могут быть добавлены метки или другие фрагменты, например, способствующие обнаружению или аффинной очистке полипептида. Например, с кодирующей фермент молекулой нуклеиновой кислоты могут быть связаны дополнительные последовательности нуклеотидных остатков, такие как последовательности оснований, кодирующие эпитопную метку или другой обнаруживаемый маркер. Примеры таких последовательностей включают последовательности нуклеотидов, кодирующие №в-метку (например, 6хШв, НННННН; 8ЕЦ ГО N0: 54) или Р1ад-метку (ΌΥΚΌΌΌΌΚ; 8ЕЦ ГО N0: 55).
Идентифицированные и выделенные нуклеиновые кислоты могут быть вставлены в соответствующий вектор клонирования. Может быть использовано большое количество известных в уровне техники систем вектор-хозяин. Возможные векторы включают, но не ограничиваются плазмидами или модифицированными вирусами, причем векторная система должна быть совместима с используемой клеткойхозяином. Такие векторы включают, но не ограничиваются, бактериофаги, такие как производные бактериофага лямбда, или плазмиды, такие как рСМУ4, рВК322 или рИС плазмиды, или производные вектора В1иевсг1р1 ^раздет, Ьа 1ο11η, Калифорния). Другие векторы экспрессии включают вектор экспрессии Н224, приведенный в качестве примера в данном изобретении (приведен в 8ЕЦ ГО N0: 140). Вставка в вектор для клонирования, например, может быть осуществлена лигированием фрагмента ДНК в вектор клонирования, который обладает комплементарными липкими концами. Если для фрагментации ДНК использовали комплементарные сайты рестрикции, которых нет в векторе клонирования, концы молекулы ДНК могут быть ферментативно модифицированы. Кроме того, любой желаемый сайт может быть получен лигированием нуклеотидных последовательностей (линкеров) на концах ДНК, эти лигированные линкеры могут содержать специфические химически синтезированные олигонуклеотиды, кодирующие последовательность, распознаваемую эндонуклеазой рестрикции. В альтернативном методе расщепленный вектор и ген белка могут быть модифицированы достраиванием гомополимерного хвоста. Вставка может осуществляться с использованием векторов клонирования ТОРО (Iην^ί^οдеη, Саг1вЬаб, Калифорния). В конкретных вариантах трансформация клеток-хозяев рекомбинантными молекулами ДНК, которые включают выделенный ген белка, кДНК или синтезированные последовательности ДНК, позволяет получать множество копий гена. Таким образом, ген может быть получен в больших количествах в растущих трансформантах с последующим выделением рекомбинантных молекул ДНК из трансформантов и, при необходимости, получением вставленного гена из выделенной рекомбинантной ДНК.
В дополнение к рекомбинантному получению растворимые РН20, включая любые евРН20 по настоящему документу, могут быть получены прямым пептидным синтезом твердофазным методом (см., например, 5>1е\уаг1 еί а1. (1969), ЕюПб-Ркаве Рер11бе ЗуШкевхв, \УН Ρ^еетаη СР, Сан-Франциско; Метйе1б
1. (1963), 1. Ат. Скет. δοα 85:2149-2154). Ιη νίίτο синтез белка может быть проведен вручную или может быть автоматизирован. Автоматизированный синтез может быть проведен, например, с помощью пептидного синтезатора Арркеб ВювувЮтв 431А (Реткш Е1тег, Ροвίе^ С11у, Калифорния) в соответствии с инструкциями производителя. Различные фрагменты полипептида могут быть химически синтезированы по отдельности и объединены с помощью химических методов.
1. Векторы и клетки.
Для рекомбинантной экспрессии одного или более желаемых белков, таких как любые описанные здесь белки, нуклеиновые кислоты, содержащие всю кодирующую белок нуклеотидную последовательность или ее часть, могут быть вставлены в соответствующий вектор экспрессии, т.е. вектор, который содержит необходимые элементы для транскрипции и трансляции вставленной кодирующей белок последовательности. Необходимые сигналы транскрипции и трансляции также могут содержаться в нативном промоторе гена РН20 и/или в его фланкирующих районах.
Кроме того, предусмотрены векторы, которые содержат нуклеиновые кислоты, кодирующие фермент. Клетки, содержащие векторы, также предусмотрены. Клетки включают эукариотические клетки и прокариотические клетки, и векторы представляют собой любые подходящие для использования в них векторы.
Предусмотрены прокариотические и эукариотические клетки, включая клетки эндотелия, содержа- 32 022752 щие векторы. Такие клетки включают бактериальные клетки, клетки дрожжей, клетки грибов, археи, растительные клетки, клетки насекомых и животные клетки. Клетки используют для получения белка с помощью выращивания описанных выше клеток в условиях, в которых закодированные белки экспрессируются клеткой, и выделения экспрессированного белка. В настоящем изобретении, например, растворимые полипептиды РН20, включая длинные растворимые полипептиды РН20, могут быть секретированы в среду.
Штамм клеток-хозяев может быть выбран по его способности к экспрессии введенной последовательности или по способности к нужному процессингу экспрессированного белка. Процессинг полипептида включает, но не ограничивается, ацетилирование, карбоксилирование, гликозилирование, фосфорилирование, присоединение липидов и ацилирование. Посттрансляционный процессинг может повлиять на фолдинг и/или функционирование полипептида. Различные клетки-хозяева, включая, но не ограничиваясь, СН0 (ЭО44, ΌΧΒ11, СН0-К1), НеЬа, МСЭК, 293 и У138, обладают специфическими клеточными инструментами и характерными механизмами для посттрансляционной модификации и поэтому могут быть выбраны для правильной модификации и процессинга введенного белка. Как правило, выбирают такой тип клеток, который способен провести ^гликозилирование экспрессированного полипептида. Таким образом, предусмотрены эукариотические клетки, содержащие векторы. Примеры эукариотических клеток включают клетки млекопитающих, например клетки яичников китайского хомячка (СН0). Например, для получения предусмотренных в данном изобретении полипептидов используют дефицитные по дигидрофолатредуктазе клетки СН0 (например, клетки ЭО44). Бактериальная экспрессия растворимых длинных РН20 или укороченных с С-конца РН20 по настоящему документу не приведет к каталитически активному полипептиду, но при наличии надлежащих ферментов гликозилирования РН20 может быть искусственно гликозилирован.
Изобретение включает векторы, которые содержат последовательность нуклеотидов, кодирующую полипептид гиалуронидазы, включая длинные растворимые полипептиды РН20 и укороченные с С-конца РН20, связанные с нативной или гетерологичной сигнальной последовательностью, или несколькими ее копиями. Векторы могут быть выбраны для экспрессии фермента в клетке, вектор также может обеспечивать секрецию экспрессированного фермента.
Для экспрессии кодирующей последовательности белка могут быть использованы различные системы хозяин-вектор. Они включают, но не ограничиваются, системы клеток млекопитающих, инфицированных вирусом (например, вирусом осповакцины, аденовирусом и другими вирусами); системы клеток насекомых, инфицированных вирусом (например, бакуловирусом); микроорганизмы, такие как дрожжи, содержащие дрожжевые векторы, или бактерии, трансформированные бактериофагом, ДНК, плазмидной ДНК или космидной ДНК. Экспрессионные элементы векторов варьируют по силе и специфичности. В зависимости от используемой системы хозяин-вектор может быть использован любой подходящий транскрипционный и трансляционный элемент.
Для конструирования векторов экспрессии, содержащих химерный ген, включающий соответствующие сигналы контроля транскрипции/трансляции и кодирующие белок последовательности, могут быть использованы любые методы вставки фрагментов ДНК в вектор, известные специалистам в данной области. Эти методы могут включать рекомбинацию и синтез ДНК ίη νίίτο или рекомбинацию ίη νίνο (генетическую рекомбинацию). Экспрессию последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, его домены, производные, фрагменты или гомологи, можно регулировать с использованием второй последовательности нуклеиновой кислоты, которая приводит к экспрессии генов или их фрагментов в трансформированном молекулой (молекулами) рекомбинантной ДНК хозяине. Например, экспрессией белков можно управлять с помощью любого промотора/энхансера, известного в уровне техники. В одном варианте промотор не является нативным для генов желаемого белка. Промоторы, которые могут быть использованы, включают, но не ограничиваются, ранний промотор δΥ40 (Вегпок и СЬатЬоп, №Лиге 290:304-310 (1981)), промотор, содержащий в 3'-длинном концевом повторе вируса саркомы Рауса (УататоЮ е1 а1., Се11, 22:781-791 (1980)), промотор тимидинкиназы герпеса (Уадпег е1 а1., Ргос. №·ιΐ1. Асаб. 8с1 υδΑ, 75:1441-1445 (1981)), регуляторные последовательности гена металлотионеина (Вппйег е1 а1., №1ите, 296:39-42 (1982)), промоторы прокариотических векторов экспрессии, включающие промотор βлактамазы Цау е1 а1. (1981), Ргос. №л1. Асаб. δα υδΑ, 75:5543) или 1ас промотор (ЭеВоег е1 а1., Ргос. №·ιΐ1. Асаб. δα υδΑ, 80:21-25 (1983)), см. также и8е£и1 Рго1етв йот РесотЬтаШ ВасЮпа в журнале δ^ηййс Атейсап, 242:79-94 (1980); векторы экспрессии растений включают промотор нопалин-синтетазы (Неггага-ЕйгсПа е1 а1., кЛиге, 305:209-213 (1984)), промотор 35δ РНК вируса мозаики цветной капусты (Оагбег е1 а1., ШсШс Ааб8 Рее. 9:2871 (1981)) и промотор фермента фотосинтеза рибулозо-бисфосфаткарбоксилазы (Нетгега-ЕвйеЬа е1 а1., №Лиге, 310: 115-120 (1984)); промоторные элементы дрожжей и других грибов включают промотор Оа14, промотор алкогольдегидрогеназы, промотор фосфоглицеролкиназы, промотор щелочной фосфатазы; районы контроля транскрипции животных, которые проявляют тканеспецифичность и которые были использованы в трансгенных животных, включают контролирующий район гена эластазы I, который активен в ацинарных клетках поджелудочной железы (δ\νίΠ е1 а1., Се11, 35:639-646 (1984); 0τηίΐζ е1 а1., Со1б δρτίη§ НагЬог δутρ. ЦиаШ. Вю1. 50:399-409 (1986); МасЭопа1б, Нера1о1оду, 7:425-515 (1987)); контролирующий район гена инсулина, активный в бета-клетках поджелу- 33 022752 дочной железы (НапаЬап еТ а1., Шине, 315: 115-122 (1985)), контролирующий район генов иммуноглобулинов, который активен в лимфоидных клетках (Ото88сЬей1 еТ а1., Се11, 35:647-658 (1984); Айат8 еТ а1., МаШте, 318:533-538 (1985); А1е\апйет еТ а1., Мо1. Се11 Вю1. 7:1436-1444 (1987)), контролирующий район вируса опухоли молочной железы мыши, активный в яичках, молочной железе, лимфоидных и тучных клетках (Бейет еТ а1., Се11 45:485-495 (1986)), контролирующий район гена альбумина, активный в печени (Ршскей еТ а1., Оепез апй Эеуе! 7:268-276 (1987)), контролирующий район гена альфа-фетобелка, активный в печени (Ктат1аи! еТ а1., Мо1. Се11 Вю1. 5:1639-1648 (1985); Наттег еТ а1., 8с1епсе, 235:53-58 1987)), контролирующий район гена альфа-1-антитрипсина, активный в печени (Ке1зеу еТ а1., Оепез апй Беуе1, 7:161-171 (1987)), контролирующий район гена бета-глобина, активный в миелоидных клетках (Модгат еТ а1., NаТи^е, 375:338-340 (1985); КоШаз еТ а1., Се11, 46:89-94 (1986)), контролирующий район гена основного белка миелина, активный в олигодендроцитах мозга (КеайЬеай еТ а1., Се11, 45:703-712 (1987)), контролирующий район гена легких цепей-2 миозина, активный в скелетных мышцах (8Ьат, На1иге, 374:283-286 (1985)) и контролирующий район гена гонадотропного рилизинг-гормона, активный в гонадотрофоцитах гипоталамуса (Мазоп еТ а1., 8аепсе 234:1372-1378 (1986)).
В конкретном варианте используют вектор, который содержит промотор, функционально связанный с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок РН20 или его домен, фрагмент, производное или гомолог, вектор также содержит одну или несколько точек начала репликации и, по желанию, один или более селективных маркеров (например, ген устойчивости к антибиотику). В зависимости от системы экспрессии для эффективной трансляции последовательности РН20 также необходимы специфические сигналы инициации. Указанные сигналы включают инициирующий кодон АТО и соседние последовательности. Если инициирующий кодон и вышерасположенные последовательности РН20 или ее растворимой формы вставлены в соответствующий вектор экспрессии, никаких дополнительных сигналов контроля трансляции не требуется. Если в вектор экспрессии введена только кодирующая последовательность или ее часть, должны быть предусмотрены экзогенные сигналы контроля трансляции, включая инициирующий кодон АТО. Кроме того, для правильной транскрипции всей вставки инициирующий кодон должен быть в правильной рамке считывания. Экзогенные транскрипционные элементы и инициирующий кодон могут быть различного происхождения, могут быть природными и синтетическими. Эффективность экспрессии может быть повышена за счет введения подходящих для используемой клеточной системы энхансеров (8сЬатТ еТ а1. (1994), Ке8и1Т8 РгоЬ1. Се11 Όίίίετ, 20:125-62; ВШпет еТ а1. (1987), Ме1ЬоЙ8 ш Еп7уто1., 153:516-544).
Примеры плазмидных векторов для трансформации клеток Е.сой включают, например, векторы экспрессии рЦЕ (доступные от О|адеп, Уа1епс1а, Калифорния, см. также литературу, опубликованную Ц1адеп для описания системы). рЦЕ вектор включает промотор бактериофага Т5 (распознается РНКполимеразой Е.сой), двойной участок репрессии в Бас-операторе для жестко регулируемой высокой экспрессии рекомбинантных белков в Е.сой, синтетический сайт связывания рибосом (КВ8 II) для эффективной трансляции, последовательность, кодирующую 6хН18 метку, Т0 и Т1 терминаторы транскрипции, точку начала репликации Со1Е1 и ген бета-лактамазы для устойчивости к ампициллину. рЦЕ вектор позволяет присоединять 6хН18 метку на Оконце или С-конце рекомбинантного белка. Такие плазмиды включают рЦЕ 32, рЦЕ 30 и рЦЕ 31, которые включают сайты множественного клонирования для всех трех рамок считывания и обеспечивают экспрессию белков с ^концевой 6хН18 меткой. Другие примеры плазмидных векторов для трансформации клеток Е.сой включают, например, векторы экспрессии рЕТ (см., патент США 4952496; вектор доступен от №уадеп, Май18оп, Висконсин, см. также опубликованную №уадеп литературу с описанием системы). Такие плазмиды включают рЕТ11а, которая содержит промотор Т7-1ас, Т7 терминатор, индуцируемый 1ас-оператор Е.сой и ген 1ас-репрессора; рЕТ12а-с, которая содержит промотор Т7, терминатор Т7 и сигнал секреции отрТ из Е.сой; рЕТ15Ь и рЕТ19Ь (Шуадеи МаЙ18оп, Висконсин), которые содержат лидерную последовательность Н18-Тад™ для очистки на Н18 колонке и сайт расщепления тромбином, который позволяет осуществить расщепление после очистки на колонке, Т7-1ас промоторный район и Т7 терминатор.
Примером вектора для экспрессии в клетках млекопитающих является вектор экспрессии Н224. Вектор экспрессии Ж24 был получен из вектора рС1 (Рготеда). Он содержит ДНК, кодирующую бета-лактамазный ген устойчивости (АтрК), точку начала репликации Р1, немедленный ранний энхансерный/промоторный район цитомегаловируса (СМУ) и поздний сигнал полиаденилирования 8У40 (8У40). Вектор экспрессии также включает внутренний сайт посадки рибосомы (1КЕ8) от вируса ЕСМУ (С1опТесЬ) и ген дигидрофолатредуктазы мыши (БНРК). Трансфицированные таким вектором клетки можно культивировать в среде с химически определенным составом в отсутствие гипоксантина и тимидина, после чего при увеличении концентрации метотрексата в среде можно добиться дополнительной амплификации гена. Указанные методы описаны в примерах 13 и 15.
- 34 022752
2. Экспрессия.
Полипептиды РН20, в том числе полипептиды евРН20 и укороченные с С-конца полипептиды РН20 по настоящему документу, могут быть получены любым методом, известным специалистам в данной области, в том числе ίη νίνο и ίη νίΐτο методами. Желаемые белки могут быть экспресссированы в любом организме, подходящем для получения необходимого количества белка и необходимой формы белка, требуемых для введения и лечения. Хозяева в системах экспрессии включают прокариотические и эукариотические организмы, такие как Е.соН, дрожжи, растения, клетки насекомых, клетки млекопитающих, в том числе клеточные линии человека, и трансгенные животные. Хозяева систем экспрессии могут отличаться уровнями экспрессии белка, а также типом посттрансляционных модификаций, которые присутствуют на экспрессированных белках. Выбор хозяина системы экспрессии может быть сделан на основе перечисленных и других факторов, таких как нормативные ограничения и соображения безопасности, издержки производства, необходимость очистки и способы очистки.
Множество векторов экспрессии доступно и известно специалистам в данной области, и может быть использовано для экспрессии белков. Выбор вектора экспрессии зависит от выбора хозяина системы экспрессии. В общем, векторы экспрессии могут включать транскрипционные промоторы и, по желанию, энхансеры, сигналы трансляции и сигналы терминации, транскрипции и трансляции. Векторы экспрессии, которые используют для стабильной трансформации, обычно имеют селективные маркеры, которые позволяют отбирать и поддерживать трансформированные клетки. В некоторых случаях для амплификации вектора могут быть использованы точки начала репликации.
Растворимые полипептиды гиалуронидазы, в том числе евРН20 и другие укороченные с С-конца полипептиды РН20, также могут быть использованы или экспрессированы в виде белков слияния. Например, может быть получен слитый фермент с дополнительной функцией. Примеры слитых ферментов включают, но не ограничиваются, белки слияния с сигнальными последовательностями, такими как метки для локализации, такие как 6хН|8 метка или тус метка, или метки для очистки, такие как ΟδΤ, белки слияния с последовательностями для направления секреции белков и/или ассоциации с мембраной и с другими последовательностями, применяемыми для увеличения периода полураспада, например последовательностью Рс.
Для длительной высокопроизводительной продукции рекомбинантных белков необходима их стабильная экспрессия. Например, клеточные линии, стабильно экспрессирующие растворимую РН20, такую как евРН20 или другой укороченный с С-конца полипептид РН20, могут быть трансформированы вектором экспрессии, содержащим точку начала репликации вируса, эндогенные элементы экспрессии и маркерный ген для отбора. После введения вектора клетки можно культивировать в течение 1-2 дней в обогащенной среде, а затем перенести на селективную среду. Селективный маркер придает трансформантам свойство устойчивости при селекции, и его присутствие позволяет культивировать и поддерживать клетки, которые успешно экспрессируют введенные последовательности. Пролиферацию устойчивых стабильно трансформированных клеток можно поддерживать с применением приемлемых для соответствующего типа клеток методов культивирования тканей.
Для поддержания трансформированных клеточных линий может быть использовано любое количество систем селекции. Системы включают, но не ограничиваются, системы с генами тимидинкиназы вируса простого герпеса (^1§1ег М. е! а1. (1977), Се11, 11:223-32.) и аденинфосфорибозилтрансферазы (Ьо^у I. е! а1. (1980), Се11, 22:817-23), которые могут быть использованы в ТК- или АРКТ-клетках соответственно. Кроме того, в качестве основы для селекции может быть использована устойчивость к антиметаболитам, антибиотикам и гербицидам. Например, могут быть использованы ген ЭНРР. который придает устойчивость к метотрексату (^1§1ег М. е! а1. (1980), Ргос. Ναΐ1. Асай. δα. 77:3567-70); ген ηρΐ, который придает устойчивость к аминогликозидам неомицину и 0-418 (Со1Ъеге-0агарш Р. е! а1. (1981), 1. Мо1. Βίο1. 150:1-14); и гены а1в или ра!, которые придают устойчивость к хлорсульфурону и фосфинотрицину соответственно. Были описаны дополнительные гены для отбора, например !грВ, который позволяет клеткам использовать индол вместо триптофана, или ΗίδΌ, который позволяет клеткам использовать гистинол вместо гистидина (Найтап §.С. и МиШдап К.С. (1988),. Ргос. №11. Асай. δει., 85:8047-51). Для идентификации трансформантов, а также количественной оценки временной или стабильной экспрессии белка при использовании определенной векторной системы также могут быть использованы видимые маркеры, включая, но не ограничиваясь антоцианами, бета-глюкуронидазой и е! субстратом, Ουδ? и люциферазой и ее субстратом люциферином (КНойев С.А. е! а1. (1995), Ме!НоЙ8 Мо1. Вю1. 55:121-131).
Наличие экспрессии и уровень экспрессии растворимых полипептидов РН20, в том числе евРН20 и других усеченных с С-конца полипептидов РН20, могут быть установлены. Например, наличие функциональных полипептидов может быть определено путем исследования кондиционированной среды на гиалуронидазную ферментативную активность при соответствующих условиях. В разделе О ниже представлены примеры анализов для оценки растворимости и активности экспрессированных белков.
- 35 022752
a) Прокариотические клетки.
Прокариоты, особенно Е.соН, представляют собой системы для получения большого количества белка. Трансформация Е.соН представляет собой простой и быстрый метод, хорошо известный специалистам в данной области. Векторы экспрессии Е.соН могут содержать индуцибельный промотор, полезный для стимулирования высоких уровней экспрессии белка и для экспрессии белков, которые проявляют токсичность для клеток-хозяев. Примеры индуцибельных промоторов включают 1ас-промотор, Нр промотор, гибридный 1ас промотор, Т7 и 8Р6 РНК промоторы и термочувствительный ХРЪ промотор.
Белок, такой как любой предусмотренный в данном изобретении белок, может быть экспрессирован в цитоплазматической среде Е.соН. Цитоплазма представляет собой восстановительную среду, и для некоторых молекул это может привести к образованию нерастворимых телец включения. Для ресолюбилизации белков могут быть использованы восстанавливающие агенты, такие как дитиотреитол и β-меркаптоэтанол, и денатурирующие агенты, такие как гуанидин-НС1 и мочевина. Альтернативный подход состоит в экспрессии белка в периплазматическом пространстве бактерий, которое предоставляет окислительную среду, шаперонин-подобные белки и дисульфидизомеразы, что приводит к образованию растворимого белка. Как правило, с экспрессируемым белком сливают лидерную последовательность, которая направляет белок в периплазму. Затем лидерная последовательность удаляется сигнальной пептидазой внутри периплазмы. Примеры лидерных последовательностей, направляющих белки в периплазму, включают лидерную последовательность гена пектатлиазы ре1В и лидерную последовательность гена щелочной фосфатазы. В некоторых случаях периплазматическая экспрессия приводит к утечке экспрессированного белка в культуральную среду. Секреция белков позволяет быстро и просто очистить белки от культурального супернатанта. Не секретируемые белки могут быть получены из периплазмы с помощью осмотического лизиса. Как и при цитоплазматической экспрессии в некоторых случаях белки могут стать нерастворимыми, и для облегчения растворения и рефолдинга белков могут быть использованы денатурирующие агенты и восстановители. Температуры индукции и культивирования также могут влиять на уровень экспрессии и растворимость белков, как правило, используются температуры между 25 и 37°С. Как правило, бактерии производят агликозилированные белки. Таким образом, если для функционирования белки требуют гликозилирования, то гликозилирование может быть осуществлено ίη νίΗΌ после очистки из клетки-хозяина.
b) Клетки дрожжей.
Дрожжи, такие как 8ассНатотусе5 сеге\'ыае. 8сЫ/о5ассНаготусе5 ротЬе, УаггоМа Нро1уНса, 1<1иу\'еготусе5 1ас115 и Рю1йа ра^огю, являются хорошо известными дрожжевыми хозяевами систем экспрессии и могут быть полезны для получения белков, таких как описанные в данном изобретении. Дрожжи могут быть трансформированы эписомными репликативными векторами или стабильной интеграцией в хромосомы путем гомологичной рекомбинации. Как правило, для регуляции экспрессии генов используют индуцируемые промоторы. Примеры таких промоторов включают промоторы САЬ1, САЬ7, САЬ5 и металлотионеиновые промоторы, такие как СиР1, АОХ, или другие промоторы Рюша или других дрожжей. Для отбора и поддержания трансформированной ДНК векторы экспрессии часто включают селективные маркеры, такие как ЬЕШ, ТРР1, Ш83 и иКА3. Экспрессируемые в дрожжах белки часто являются растворимыми, а коэкспрессия с шаперонинами, такими как Βίρ и протеиндисульфидизомераза, может повысить уровень экспрессии и растворимость белка. Кроме того, экспрессируемые в дрожжах белки могут быть направлены для секреции с использованием слитого сигнального пептида секреции, такого как сигнал секреции альфа-фактора типа спаривания дрожжей из 8ассНатотусе5 сегезамае, и слитого сигнального пептида белков поверхности клетки дрожжей, таких как адгезивный рецептор спаривания Ада2р или глюкоамилаза Агхи1а аДетпщотапк. Для удаления слитой последовательности из полипептидов после секреции может быть введен сайт расщепления протеазой (например, протеазой Кех-2). Дрожжи также способны к гликозилированию мотива А8η-X-8е^/ТΗ^.
c) Клетки насекомых.
Клетки насекомых, в частности, при использовании системы бакуловирусной экспрессии полезны для экспрессии полипептидов, таких как полипептиды гиалуронидазы. Клетки насекомых экспрессируют высокие уровни белка и способны осуществлять большинство посттрансляционных модификаций высших эукариот. Бакуловирусы имеют ограниченный диапазон хозяев, что повышает безопасность и снижает нормативные ограничения, присущие системам эукариотической экспрессии. Как правило, в векторах экспрессии для высокого уровня экспрессии белка используют промотор полиэдрина бакуловируса. Обычно используемые бакуловирусные системы включают такие бакуловирусы, как вирус ядерного полиэдроза АиЮдгарНа саПГогпюа (Ас№\) и вирус ядерного полиэдроза ВотЬух топ (В|п>\;') и линии клеток насекомых, такие как 8Г9, полученная из 8роДор1ега ГгиЦрегДа, Р8еиДа1еНа ишрипйа (А78) и Бапаик р1ех1рри8 (БрШ). Для достижения высокого уровня экспрессии нуклеотидную последовательность молекулы, которая будет экспрессирована, присоединяют непосредственно после инициаторного кодона полиэдрина вируса. Сигналы секреции млекопитающих точно процессируются в клетках насекомых и могут быть использованы для секреции экспрессированного белка в культуральную среду. Кроме того, клеточные линии Р8еиДа1еНа итрипсН (А78) и Бапаик р1ех1рри8 (БрМ) производят белки, гликози- 36 022752 лирование которых похоже на гликозилирование в клеточных системах млекопитающих. Примеры клеток насекомых включают клетки, которые были модифицированы для уменьшения иммуногенности, включая модифицированные бакуловирусными векторами экспрессии клетки и клетки, в которых отсутствует фермент РТ3.
Альтернативной системой экспрессии в клетках насекомых является использование стабильно трансформированных клеток. Для экспрессии могут быть использованы такие клеточные линии, как 8сЬтебег 2 (82), Кс клетки (ИгокорЬба те1аиодак1ег) и С7 клетки (Лебек а1Ьор1с1ик). Для достижения высокого уровня экспрессии может быть использован промотор металлотионеина ИгокорЬба с индукцией тяжелыми металлами кадмием и медью. Векторы экспрессии, как правило, поддерживают за счет использования селективных маркеров, таких как неомицин и гигромицин.
б) Клетки млекопитающих.
Для экспрессии белков, включая полипептиды растворимой гиалуронидазы, могут быть использованы системы экспрессии млекопитающих. Экспрессионные конструкции могут быть введены в клетки млекопитающих посредством вирусной инфекции, например с помощью аденовируса, или путем прямого переноса ДНК, например с помощью липосом, фосфата кальция, ДЭАЭ-декстрана и физических методов, таких как электропорация и микроинъекция. Векторы экспрессии для клеток млекопитающих обычно включают сайт кэпирования мРНК, ТАТА-бокс, последовательность инициации трансляции (консенсусную последовательность Козака) и элементы полиаденилирования. Для бицистронной экспрессии с другим геном, таким как селективный маркер, могут быть использованы 1КЕ8 элементы. Такие векторы для достижения высокого уровня экспрессии часто включают промоторы и энхансеры транскрипции, например промотор-энхансер 8У40, промотор цитомегаловируса человека (СМУ) и длинный концевой повтор вируса саркомы Рауса (К8У). Указанные промоторы-энхансеры действуют во многих типах клеток. Также для экспрессии могут быть использованы тканеспецифичные и специфичные к определенным типам клеток промоторы и энхансерные районы. Примеры промоторных/энхансерных районов включают, но не ограничиваются, районы из таких генов, как ген эластазы I, ген инсулина, гены иммуноглобулинов, промоторный/энхансерный район вируса опухоли молочной железы мыши, гена альбумина, гена альфа-фетобелка, альфа-1-антитрипсина, бета-глобина, основного белка миелина, легкой цепи-2 миозина и гонадотропного рилизинг-гормона. Для отбора и поддержания клеток с экспрессионными конструкциями могут быть использованы селективные маркеры. Примеры селективных маркеров включают, но не ограничиваются, гены гигромицин-В-фосфотрансферазы, аденозиндезаминазы, ксантингуанинфосфорибозилтрансферазы, аминогликозидфосфотрансферазы, дигидрофолатредуктазы (ИНРК) и тимидинкиназы. Например, экспрессию можно проводить в присутствии метотрексата для отбора клеток, экспрессирующих ген дигидрофолатредуктазы. Слитые с сигнальными молекулами клеточной поверхности, такими как ТСК-ζ и РсЕК1-Х, белки могут непосредственно экспрессироваться в активном состоянии на поверхность клеток.
Для экспрессии в млекопитающих доступны многие клеточные линии, включая клетки мыши, крысы, человека, обезьяны, курицы и хомяка. Примеры линий клеток включают, но не ограничиваются, СН0, Ва1Ь/3Т3, НеЬа, МТ2, мышиные N80 (не секретирующие) и другие клеточные линии миеломы, гибридомные и гетерогибридомные клеточные линии, лимфоциты, фибробласты, 8Р2/0, С08, №Н3Т3, НЕК293, 2938, 293Т, 2В8 и НКВ клетки. Также доступны адаптированные к бессывороточной среде клеточные линии, что облегчает очистку секретируемых белков из культуральной среды. Примеры включают клетки СН0-8 (1п\6годеп. Саг1кЬаб, Калифорния, лот # 11619-012) и бессывороточную линию клеток ЕВNΑ-I (РЬат е1 а1. (2003), Вю1ес1то1 Вюеид. 84:332-42). Также доступны линии клеток, адаптированные для роста в специальной среде, оптимизированной для максимальной экспрессии. Например, клетки СН0 ΌΟ44 адаптированы для роста в суспензионной культуре в свободной от продуктов животного происхождения среде с химически определенным составом.
е) Растения.
Для экспрессии белков, таких как любые описанные в настоящем изобретении белки, могут быть использованы трансгенные клетки растений и трансгенные растения. Экспрессионные конструкции, как правило, переносят в растения с использованием прямого переноса ДНК, такого как бомбардировка микрочастицами и ПЭГ-опосредованный перенос в протопласты, или с использованием агробактериальной трансформации. Векторы экспрессии могут включать промоторные и энхансерные последовательности, элементы терминации транскрипции и элементы контроля трансляции. Векторы экспрессии и методы трансформации, как правило, отличаются для двудольных хозяев, таких как АгаЫборяк и табак, и однодольных хозяев, таких как кукуруза и рис. Примеры промоторов растений, используемых для экспрессии, включают промотор вируса мозаики цветной капусты, промотор нопалинсинтазы, промотор рибулозобисфосфаткарбоксилазы и промотор убиквитина и иВ03. Для облегчения отбора и поддержания трансформированных клеток часто используют селективные маркеры, такие как гигромицин, фосфоманнозоизомераза и неомицинфосфотрансфераза. Трансформированные клетки растений можно поддерживать в культуре в виде клеток, агрегатов (каллусной ткани) или регенерировать в целые растения. Трансгенные клетки растений также могут включать генетически модифицированные водоросли, предназначенные для получения полипептидов гиалуронидазы. Поскольку паттерны гликозилирования у растений
- 37 022752 отличаются от гликозилирования в клетках млекопитающих, это может повлиять на выбор белков, продуцируемых в этих хозяевах.
3. Способы очистки.
Клетки, трансформированные нуклеиновой кислотой с последовательностью, кодирующей растворимый РН20, в том числе е§РН20 и другие усеченные с С-конца полипептиды РН20, можно культивировать в условиях, подходящих для экспрессии и получения из клеточной культуры закодированного белка. Вырабатываемый рекомбинантной клеткой белок, как правило, секретируется, но может также содержаться внутри клетки в зависимости от последовательности и/или используемого вектора. Специалистам в данной области очевидно, что вектор экспрессии, содержащий кодирующую РН20 нуклеиновую кислоту, может включать сигнальную последовательность, облегчающую прямую секрецию РН20 через прокариотическую или эукариотическую клеточную мембрану.
Следовательно, способы очистки полипептидов из клетки-хозяина зависят от выбранной клеткихозяина и системы экспрессии. В случае секреции белки, в общем, являются очищенными из культуральной среды после удаления клеток. В случае внутриклеточной экспрессии клетки могут быть лизированы, и белки очищают из экстракта. Если для экспрессии используют трансгенные организмы, такие как трансгенные растения и животные, в качестве исходного материала для получения экстракта лизированных клеток могут быть использованы ткани или органы. Кроме того, получение белков в трансгенных животных может включать получение полипептидов в молоке или яйцах, которые могут быть собраны, и затем при необходимости белки могут быть выделены и очищены с использованием стандартных способов, известных в уровне техники.
Белки, такие как растворимые полипептиды РН20, включая е§РН20 и другие усеченные с С-конца полипептиды РН20, могут быть очищены с использованием стандартных способов очистки белков, известных в уровне техники, включая, но не ограничиваясь δΌδ-РАОЕ, эксклюзионной хроматографией, хроматографией по размеру, осаждением сульфатом аммония и ионообменной хроматографией, такой как анионообменная хроматография. Для увеличения эффективности очистки и улучшения чистоты получаемых препаратов может быть использована аффинная очистка. Например, для аффинной очистки могут быть использованы антитела, рецепторы и другие молекулы, которые связывают гиалуронидазу. Например, растворимые РН20 могут быть очищены из кондиционированной среды.
В экспрессионных конструкциях к белку может быть добавлена аффинная метка, такая как тус эпитоп, гибридная последовательность О8Т или 6/Нк, и аффинная очистка может быть проведена с помощью тус антител, смолы с глутатионом и Νί-смолы соответственно. Такие метки, которые могут облегчить очистку растворимых белков, могут быть присоединены к нуклеотидной последовательности, кодирующей растворимую РН20, как описано в данном изобретении. Например, растворимая РН20 может быть экспрессирована в виде рекомбинантного белка с одним или несколькими дополнительными полипептидными доменами, добавленными для облегчения очистки белка. Такие облегчающие очистку домены включают, но не ограничиваются хелатирующими металлы пептидами, такими как гистидинтриптофановые модули, которые позволяют проводить очистку на иммобилизованных металлах, доменами белка А, которые позволяют проводить очистку на иммобилизованных иммуноглобулинах, и доменами, применяемыми в системах аффинной очистки РЬЛО8 (1ттипех Согр., Сиэтл, штат Вашингтон). Облегчению очистки способствует включение между доменом для очистки и экспрессированным полипептидом РН20 расщепляемой, например, фактором Ха или энтерокиназой (йпуйгодеп, Сан-Диего, Калифорния) линкерной последовательности. Один из экспрессионных векторов для экспрессии гибридного белка, содержащего растворимый РН20, включает последовательность нуклеотидов, кодирующую 6 остатков гистидина, тиоредоксин и сайт расщепления энтерокиназы. Остатки гистидина предназначены для очистки методом 1М1АС (аффинная хроматография с иммобилизованными ионами металла), в то время как сайт расщепления энтерокиназой позволяет очистить полипептид из слитого белка.
Чистота может быть оценена любым способом, известным в уровне техники, включая гельэлектрофорез, двумерная ВЭЖХ, окрашивание и спектрофотометрические методы. Экспрессированный и очищенный белок может быть проанализирован с помощью любого анализа или метода, известного специалисту в данной области, например любого метода, описанного в разделе О.
Анализы основаны на физических и/или функциональных свойствах белка, включая, но не ограничиваясь, анализ методом гель-электрофореза, иммуноферментный анализ и анализ на гиалуронидазную активность.
В зависимости от используемой системы экспрессии и клетки-хозяина из-за присутствующих в культуральной среде при продукции и очистке полипептидов пептидаз полученные полипептиды могут быть гетерогенны. Например, получение растворимых РН20 в клетках СНО может привести к смеси гетерогенных полипептидов. Пример протокола для конструирования, продукции и очистки растворимых РН20 (например, гНиРН20) описан в примерах 13-15 ниже. Аналогично, например, экспрессия нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с последовательностью аминокислот 36-497, приведенной в 8Е0 ГО NО: 60, может привести к гетерогенной смеси полипептидов переменного состава, включающей, например, укороченные с С-конца полипептиды из 497, 496, 495, 494, 493, 492, 491, 490, 489 аминокислот или менее.
- 38 022752
Р. Подготовка, получение композиций и введение длинных растворимых полипептидов РН20 и других растворимых полипептидов РН20.
Данное изобретение предусматривает введение фармацевтических композиций растворимого полипептида РН20, в том числе е§РН20. Растворимые полипептиды РН20 могут быть включены в отдельную композицию или могут быть включены в композицию совместно с другими терапевтическими агентами, или введены одновременно с фармацевтическими препаратами других терапевтических агентов, например, как описано в разделе О. Соединения могут быть включены в подходящие фармацевтические формы, такие как растворы, суспензии, таблетки, растворимые таблетки, драже, капсулы, порошки, препараты с замедленным высвобождением или эликсиры для перорального применения, а также препараты для пластырей с трансдермальным проникновением и сухие порошки для ингаляции. Как правило, соединения включают в фармацевтические композиции с применением методов и процедур, хорошо известных в уровне техники (см., например, Ап§е1, ΙηίΓοάυοΙίοη ίο РЬаттасеийса1 Эо^аде Рогтк, 4-е изд., 1985, 126).
Как правило, предусмотрены терапевтически эффективные дозы. Количество вводимого выбранного для лечения заболевания или состояния растворимого РН20 может быть определено стандартными клиническими методами. Кроме того, для выявления оптимальных диапазонов дозировки могут быть использованы ίη νίίτο анализы и моделирование на животных. Точная дозировка, которая может быть определена эмпирически, может зависеть от конкретного фермента, пути введения, подвергаемого лечению заболевания и тяжести заболевания.
Таким образом, следует понимать, что точная дозировка и продолжительность лечения зависит от подвергаемого лечению заболевания, и может быть определена эмпирически с использованием известных алгоритмов или путем экстраполяции ίη νίνο или ίη νίίτο тестовых данных. Следует отметить, что концентрация и дозировка также могут меняться в зависимости от тяжести подвергаемого лечению состояния. Необходимо подчеркнуть, что для любого конкретного субъекта с течением времени должен быть персонально скорректирован режим введения в зависимости от индивидуальных потребностей и профессионального суждения лица, вводящего композицию или контролирующего введение композиции, также необходимо подчеркнуть, что указанные здесь диапазоны концентраций приведены только в качестве примеров и не предназначены для ограничения использования содержащих их композиций или комбинаций. Композиции можно вводить каждый час, каждый день, каждую неделю, каждый месяц, каждый год или один раз. Как правило, режим дозирования выбирают таким образом, чтобы уменьшить токсичность. Следует отметить, что решение о том, как и когда следует прекратить, прервать или изменить терапию в сторону снижения дозы по причине токсичности или дисфункции костного мозга, печени, почек или другого органа, лежит в компетенции лечащего врача. Также лечащий врач решает, как и когда, напротив, следует изменить лечение в сторону более высоких доз, если клинический ответ не является адекватным (за исключением токсичных побочных эффектов).
Фармацевтически приемлемые композиции получают в соответствии с требованиями регулирующего органа или другого органа в соответствии с общепризнанной фармакопеей для использования на животных и для человека. Композиции могут иметь форму раствора, суспензии, эмульсии, таблеток, пилюль, капсул, порошка и композиции с замедленным высвобождением. Композиция может быть включена в суппозитории с традиционными связующими и носителями, такими как триглицериды. Композиции для орального введения могут включать стандартные носители, такие как маннитол, лактоза, крахмал, стеарат магния, натрия сахарин, целлюлоза, карбонат магния фармацевтической чистоты и другие подобные вещества. Композиция должна соответствовать способу введения.
Фармацевтические композиции могут включать в себя вспомогательные вещества, такие как разбавитель, адъювант, наполнитель или переносчик, с которыми вводят растворимый РН20. Примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в КеттдЮп'к РНагтасеи11са1 8с1епсе§, Е.^. Матйп. Такие композиции содержат терапевтически эффективное количество соединения, как правило, в очищенном или частично очищенном виде вместе с подходящим количеством носителя, обеспечивающим форму лекарственного средства для надлежащего введения пациенту. Такие фармацевтические носители могут представлять собой стерильную жидкость, такую как вода и масло, в том числе масло нефтяного, животного, растительного или синтетического происхождения, такое как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло и кунжутное масло. Вода является типичным носителем, если фармацевтическую композицию вводят внутривенно. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина также могут быть использованы в качестве жидкого носителя, особенно в качестве раствора для инъекций. Композиции наряду с активным ингредиентом могут содержать наполняющий агент, такой как лактоза, сахароза, дикальция фосфат или карбоксиметилцеллюлоза; смазку, такую как стеарат магния, стеарат кальция и тальк, и связующее, такое как крахмал, натуральные смолы, такие как камедь, гуммиарабик, желатин, глюкоза, патока, поливинилпирролидон, целлюлоза и ее производные, повидон, кроссповидоны и другие подобные связующие, известные специалистам в данной области. Подходящие фармацевтические наполнители представляют собой крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рисовую муку, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропиленгликоль, воду и этанол. Композиция, по желанию, также может содержать небольшие количества смачивателя, или эмульгатора, или буферных агентов, например ацетата, цитрата натрия,
- 39 022752 производных циклодекстрина, сорбитанмонолаурата, ацетата натрия, триэтаноламина, триэтаноламинолеата и других подобных агентов.
Фармацевтические терапевтически активные соединения и их производные, как правило, включены в композиции и вводятся в единичных дозированных формах или множественных дозированных формах. Например, соединения могут быть включены в таблетки, капсулы, пилюли, порошки, гранулы, стерильные парентеральные растворы или суспензии, пероральные растворы или суспензии и водно-масляные эмульсии, содержащие подходящие количества соединений или их фармацевтически приемлемых производных. Каждая единичная доза содержит определенное количество терапевтически активного соединения, достаточное для получения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем, переносчиком или растворителем. Примеры единичных дозированных форм включают ампулы и шприцы, и индивидуально упакованные таблетки или капсулы. Единичные дозированные формы могут быть введены частями, или может быть введено несколько единичных дозированных форм одновременно. Множественная дозированная форма представляет собой множество одинаковых единичных дозированных форм, упакованных в один контейнер для введения отдельными единичными дозированными формами. Примеры множественных дозированных форм включают флаконы, картриджи, бутылки таблеток или капсул или бутылки с пинтами или галлонами жидкости. Таким образом, множественные дозированные формы представляют собой множество единичных дозированных форм, которые не разделены в упаковке. Как правило, получают дозированные формы и композиции, содержащие активный ингредиент в диапазоне от 0,005 до 100% по отношению к нетоксичному носителю.
Предусмотренные в данном изобретении композиции обычно составляют для подкожного введения, хотя предусмотрены и другие пути введения, например любой путь, известный специалистам в данной области, включая внутримышечное, внутрибрюшинное, внутривенное, внутрикожное введение, введение внутрь опухоли, внутрибрюшинное, эпидуральное, вагинальное, ректальное, местное, отикальное, трансдермальное введение или введение другим путем. Композиции, подходящие для таких путей введения, известны специалистам в данной области. Введение может быть локальным, местным или системным в зависимости от подвергающейся лечению области. Локальное введение в область, нуждающуюся в лечении, можно осуществить, например, местной инфузией во время операции, местным нанесением, например, в сочетании с повязкой после операции, путем инъекции с помощью катетера, с помощью свечи или с помощью имплантатов. Композиции также могут быть введены с другими биологически активными веществами последовательно, с перерывом или в одной композиции.
Наиболее подходящий путь введения в каждом конкретном случае зависит от ряда факторов, таких как характер заболевания, толерантность субъекта к конкретному пути введения, тяжесть заболевания и особенности используемой композиции. Как правило, предусмотренные здесь композиции вводят парентерально. В некоторых примерах композиции растворимого РН20 вводят так, что он достигает интерстиции кожи или ткани, таким образом деградируя интерстициальное пространство для последующей доставки терапевтического агента. Таким образом, в некоторых примерах предусмотрено прямое введение под кожу, например, методами подкожного введения. Так, в одном примере местное введение может быть достигнуто инъекцией, например, из шприца или другого изделия, содержащего инъекционное устройство, такое как иглу. В другом примере местное введение может быть достигнуто инфузией, которая может осуществляться насосом или другим подобным устройством. Также предусмотрены другие режимы введения. Фармацевтические композиции могут быть составлены в соответствующих дозированных формах для каждого пути введения.
Для уменьшения процессов деградации растворимых полипептидов РН20, например протеолитической деградации и иммунного воздействия через антигенный и иммуногенный ответ, могут быть использованы некоторые методы введения. Примером таких методов является местное введение в подвергающуюся лечению область. Считается, что пегилирование лекарственного средства повышает устойчивость к протеолизу, увеличивает период полураспада в сыворотке и снижает антигенность и иммуногенность. Примеры методов пегилирования известны в уровне техники (см., например, Ьи и Рейх, Ιηί. 1. Реркке Рго1еш Кек., 43:127-138, 1994; Ьи и Рейх, Реркке Кек., 6:142-6, 1993; Рекх е1 а1., Ιηΐ. ΐ. Реркке Кек., 46:25364, 1995; Вепкаг е! а1., ΐ. Βίοί. СЬет., 269:13398-404, 1994; Вгитеапи е! а1., ΐ. 1ттипо1., 154:3088-95, 1995; см. также Саксек е! а1. (2003), Аку. Эгид ЭеЬу. Кеу. 55(10):1261-11 и МоЬпеих (2003), РЬагтасоШегару, 23 (8 часть 2), р. 3-8). Пегилирование также может быть использовано для доставки молекул нуклеиновой кислоты ίη νίνο. Например, пегилирование аденовируса может увеличить стабильность и улучшить перенос генов (см., например, СЬепд е! а1. (2003), РЬагт. Кек. 20 (9):1444-51).
1. Растворы и эмульсии для инъекций.
В настоящем документе предусмотрено парентеральное введение, как правило, в виде инъекций или инфузий, проводимое подкожно, внутримышечно, внутривенно или трансдермально. Препараты для инъекций могут быть произведены в обычной форме, в виде жидких растворов или суспензий, твердых форм, предназначенных для растворения или суспендирования в жидкости до инъекций, или в виде эмульсий. Подходящими формообразующими являются, например, вода, физиологический раствор, глюкоза, глицерин или этанол. Фармацевтические композиции могут содержать незначительные количества других нетоксичных вспомогательных веществ, таких как смачиватели или эмульгаторы, буферизующие
- 40 022752 агенты, стабилизаторы, усилители растворимости и другие подобные агенты, например ацетат натрия, фосфат натрия, сорбитанмонолаурат, триэтаноламинолеат и циклодекстрины. Также в данном изобретении предусмотрена имплантация систем с медленным высвобождением или пролонгированным высвобождением, позволяющих поддерживать постоянный уровень дозирования (см., например, патент США № 3710795). Содержание активного вещества в таких парентеральных композициях во многом зависит от их природы, а также от активности соединения и потребностей субъекта.
Инъекционные композиции предназначены для местного и системного введения. Для целей настоящего изобретения местное введение требуется для прямого введения в область разрушенной интерстиции. Препараты для парентерального введения включают стерильные готовые для инъекций растворы, стерильные сухие растворимые продукты, такие как лиофилизированные порошки, которые необходимо смешать с растворителем непосредственно перед использованием, включая гиподермальные таблетки, стерильные готовые для инъекций суспензии, стерильные сухие нерастворимые продукты, которые необходимо смешать со средой непосредственно перед использованием, и стерильные эмульсии. Растворы могут быть водными или неводными. При внутривенном введении подходящие носители включают физиологический раствор или фосфатно-солевой буфер (РВ8) и растворы, содержащие сгущающие и солюбилизирующие агенты, такие как глюкозу, полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль, и их смеси.
Фармацевтически приемлемые носители, используемые в препаратах для парентерального введения, включают водные носители, неводные носители, антимикробные агенты, изотонические агенты, буферы, антиоксиданты, местные анестетики, суспендирующие и диспергирующие агенты, эмульгаторы, изолирующие агенты или хелатообразователи и другие фармацевтически приемлемые вещества. Примеры водных сред включают раствор хлористого натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, изотонический раствор декстрозы для инъекции, стерильную воду для инъекций, раствор Рингера с декстрозой и лактатом для инъекций. Неводные парентеральные среды включают жирные масла растительного происхождения, хлопковое масло, кукурузное масло, кунжутное масло и арахисовое масло. К препаратам для парентерального введения, упакованным в контейнеры с множественными дозированными формами, могут быть добавлены противомикробные препараты в бактериостатических или фунгистатических концентрациях, включая фенолы или крезолы, ртутные консерванты, бензиновый спирт, хлорбутанол, метиловый и пропиловый эфиры п-оксибензойной кислоты, тимеросал, хлорид бензалкония и хлорид бензетония. Изотонические агенты включают хлорид натрия и декстрозу. Буферы включают фосфатный и цитратный буферы. Антиоксиданты включают бисульфат натрия. Местные анестетики включают гидрохлорид прокаина. Суспендирующие и диспергирующие агенты включают натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, гидроксипропилметилцеллюлозу и поливинилпирролидон. Эмульгаторы включают полисорбат 80 (Твин-80). Изолирующие агенты или хелаторы ионов металлов включают ЭДТА. Фармацевтические носители также включают этиловый спирт, полиэтиленгликоль и пропиленгликоль для смешиваемых с водой сред и гидроксид натрия, соляную кислоту, лимонную кислоту или молочную кислоту для доведения рН.
Концентрацию фармацевтически активного соединения подбирают таким образом, что инъекция или инфузия обеспечивает эффективное количество активного соединения для получения желаемого фармакологического эффекта. Точная доза зависит от возраста, веса и состояния пациента или животного, как известно в уровне техники. Единичные дозированные формы препаратов для парентерального введения могут быть упакованы, например, в ампулы, картриджи, флаконы или шприцы с иглой. Объем жидкого раствора или восстановленного из порошка препарата, содержащего фармацевтически активное соединение, зависит от подвергающегося лечению заболевания и от конкретного упакованного изделия. Все препараты для парентерального введения должны быть стерильными, как известно и практикуется в уровне техники.
В одном примере фармацевтический препарат может быть в жидком виде, например в виде раствора, сиропа или суспензии. Если препарат представлен в жидкой форме, то он может быть предусмотрен в виде концентрированного препарата для разведения до терапевтически эффективной концентрации перед использованием. Такие жидкие препараты могут быть получены обычными способами с применением фармацевтически приемлемых добавок, таких как суспендирующие агенты (например, сорбитольный сироп, производные целлюлозы или гидрогенизированные пищевые жиры); эмульгаторы (например, лецитин или гуммиарабик); неводные среды (например, миндальное масло, эфиры жирных кислот или фракционированные растительные масла) и консерванты (например, метил- или пропил-пгидроксибензоат или сорбиновая кислота). В другом примере фармацевтические препараты могут быть предусмотрены в лиофилизированной форме для восстановления водой или другой подходящей средой перед использованием.
- 41 022752
Лиофилизированные порошки.
Изобретение включает лиофилизированные порошки, которые могут быть восстановлены для введения в виде растворов, эмульсий и других смесей. Они также могут быть восстановлены и представлены в твердой форме или в форме геля.
Стерильный лиофилизированный порошок готовят растворением неактивного фермента в буферном растворе. Буферный раствор может содержать вспомогательное вещество, которое улучшает стабильность или другие фармакологические свойства порошка или восстановленного раствора, приготовленного из порошка. После стерильной фильтрации раствора следует лиофилизация при стандартных условиях, известных специалистам в данной области, которая приводит к желаемой композиции. Лиофилизированный порошок готовят растворением наполнителя, такого как декстроза, сорбитол, фруктоза, кукурузный сироп, ксилит, глицерин, глюкоза, сахароза или другой подходящий агент в подходящем буфере, таком как цитратный, натрий- или калий-фосфатный или другой подобный буфер, известный специалистам в данной области. Затем в полученную смесь добавляют выбранный фермент, смесь перемешивают до полного его растворения. Полученную смесь стерильно фильтруют или обрабатывают для удаления твердых частиц и для обеспечения стерильности и распределяют по флаконам для лиофилизации. Каждый флакон будет содержать одну дозу или несколько доз соединения. Лиофилизированный порошок может храниться в надлежащих условиях, например, приблизительно в интервале от 4°С до комнатной температуры. Восстановление этого лиофилизированного порошка буфером приводит к композиции для парентерального введения.
2. Местное введение.
Смеси для местного введения готовят, как описано для локального и системного введения. Полученная смесь может представлять собой раствор, суспензию, эмульсию или т.п. и может быть представлена в форме крема, геля, мази, эмульсии, раствора, эликсира, лосьона, суспензии, настойки, пасты, пены, аэрозоля, раствора для промывания, спрея, суппозиториев, бинтов, пластырей или в виде любых других подходящих для местного применения композиций.
Соединения или их фармацевтически приемлемые производные могут быть введены в композиции в форме аэрозолей для местного применения, например, путем ингаляции (см., например, патенты США № 4044126, 4414209 и 4364923, в которых описаны аэрозоли для доставки стероидов, эффективных при лечении воспалительных заболеваний, в частности, астмы). Указанные композиции для введения в дыхательные пути могут быть в форме аэрозоля или раствора для распылителя или в форме мелкодисперсного порошка для инсуффляции, отдельно или в сочетании с инертным носителем, таким как лактоза. В таком случае частицы композиции, как правило, имеют диаметр менее 50 или менее 10 мкм.
Соединения могут быть введены в композиции для локального или местного применения, например для местного нанесения на кожу и слизистые оболочки, например слизистые оболочки глаз, в форме гелей, кремов и лосьонов, а также для введения в глаза или для интрацистернального, или интраспинального введения. Местное введение подразумевает трансдермальную доставку, а также введение в глаза или слизистые оболочки, а также ингаляцию. Также растворы активного соединения отдельно или в комбинации с другими фармацевтически приемлемыми наполнителями могут быть введены назально.
Предусмотрены композиции, пригодные для трансдермального введения. Они могут быть предусмотрены в любой удобной форме, например в форме отдельных пластырей, поддерживающих тесный контакт с эпидермисом реципиента в течение длительного периода времени. Такие пластыри содержат действующее вещество необязательно в буферном водном растворе с концентрацией активного соединения, например, от 0,1 до 0,2 М. Пригодные для трансдермального введения композиции также могут быть доставлены с помощью лекарственного электрофореза (см., например, РЬагтасеиЬса1 КекеагсЬ, 3(6):318 (1986)), для которого, как правило, композиции представляют собой необязательно буферные водные растворы активного соединения.
3. Композиции для других способов введения.
В зависимости от подвергающегося лечению состояния в данном изобретении также предусмотрены другие пути введения, такие как местное введение, трансдермальное введение с помощью пластырей, оральное и ректальное введение. Например, фармацевтические дозированные формы для ректального введения представляют собой ректальные суппозитории, капсулы и таблетки для системного эффекта. Ректальные суппозитории представляют собой твердые объекты для введения в прямую кишку, которые плавятся или размягчаются при температуре тела, высвобождая один или несколько фармакологически или терапевтически активных ингредиентов. Фармацевтически приемлемые вещества, используемые в ректальных суппозиториях, включают основу или носитель и агенты, повышающие температуру плавления. Примеры основ включают масло какао (масло теобромы), глицерин-желатин, карбовакс (полиоксиэтиленгликоль) и подходящие смеси моно-, ди- и триглицеридов жирных кислот. Могут быть использованы комбинации различных основ. Агенты, повышающие температуру плавления суппозиториев, включают спермацет и воск. Ректальные суппозитории могут быть изготовлены методом сжатия или путем формовки. Типичный вес ректальных свечей составляет от 2 до 3 г. Таблетки и капсулы для ректального введения изготавливают с применением тех же фармацевтически приемлемых веществ и теми же методами, как и композиции для орального введения.
- 42 022752
Композиции для ректального введения могут быть представлены в виде единичных дозированных суппозиториев. Они могут быть получены путем смешения активного соединения с одним или более обычными твердыми носителями, например маслом какао, с последующей формовкой полученной смеси.
Для перорального введения фармацевтические композиции могут быть представлены в форме, например, таблеток или капсул, полученных обычными методами с фармацевтически приемлемыми формообразующими, такими как связующие вещества (например, прежелатинизированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или гидрофосфат кальция), смазывающие агенты (например, стеарат магния, тальк или кремнезем); разрыхлители (например, картофельный крахмал или крахмал гликолат натрия) или увлажняющие агенты (например, лаурилсульфат натрия). Таблетки могут быть покрыты оболочкой, что хорошо известно в уровне техники.
Композиции, пригодные для буккального (под язык) введения, включают, например, таблетки, содержащие активное соединение в ароматизированной основе, представляющей собой, как правило, сахарозу, гуммиарабик или адрагантовую камедь, и пастилки, содержащие соединение в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и гуммиарабик.
Фармацевтические композиции также могут быть введены с помощью устройств с регулируемым высвобождением и/или доставкой лекарственного средства (см., например, патенты США № 3536809; 3598123; 3630200; 3845770; 3847770; 3916899; 4008719; 4687610; 4769027; 5059595; 5073543; 5120548; 5354566; 5591767; 5639476; 5674533 и 5733566).
Для введения выбранных растворимых полипептидов РН20 известны в уровне техники и могут быть использованы различные способами доставки, включая, но не ограничиваясь, липосомы с инкапсулированным препаратом, микрочастицы, микрокапсулы, рекомбинантные клетки, способные экспрессировать соединения, опосредованный рецепторами эндоцитоз и доставка молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих выбранные растворимые полипептиды РН20, например доставка с помощью ретровирусных систем.
Таким образом, в некоторых вариантах для введения растворимых полипептидов РН20 могут быть использованы липосомы и/или наночастицы. Липосомы образуются из диспергированных в водной среде фосфолипидов, самопроизвольно образующих многослойные концентрические бислойные пузырьки (также называемые многослойными везикулами (МЬУ)). Как правило, МЬУ имеют диаметр от 25 нм до 4 мкм. Обработка МЬУ ультразвуком приводит к образованию мелких однослойных везикул (8ИУ) диаметром в диапазоне от 200 до 500 ангстрем, содержащих в ядре водный раствор.
В зависимости от молярного соотношения липидов и воды фосфолипиды при диспергировании в воде могут образовывать различные структуры, отличные от липосом. При низком соотношении формируются липосомы. Физические характеристики липосом зависят от рН, ионной силы и присутствия двухвалентных катионов. Липосомы характеризуются низкой проницаемостью для ионов и полярных веществ, но при повышенной температуре происходит фазовый переход, который заметно изменяет их проницаемость. Фазовый переход связан с изменением структуры из плотно упакованной, упорядоченной, известной как гелеобразное состояние, в неплотно упакованную, менее упорядоченную структуру, известную как жидкое состояние. Это происходит при характерной температуре фазового перехода и приводит к увеличению проницаемости для ионов, сахаров и лекарственных средств.
Липосомы взаимодействуют с клетками с помощью различных механизмов: эндоцитоза фагоцитирующими клетками ретикулоэндотелиальной системы, такими как макрофаги и нейтрофилы; адсорбции на поверхности клеток за счет неспецифических слабых гидрофобных или электростатических сил либо специфических взаимодействий с компонентами клеточной поверхности; слияния с плазматической клеточной мембраной путем включения липидного бислоя липосомы в плазматическую мембрану с одновременным высвобождением содержимого липосомы в цитоплазму; а также путем передачи липосомных липидов клеточной или субклеточной мембране без какого-либо участия содержимого липосомы. Изменение состава липосомы может изменить механизм взаимодействия, при этом следует понимать, что одновременно могут реализоваться более одного механизма. Обычно нанокапсулы могут стабильно и воспроизводимо удерживать соединения. Чтобы избежать побочных эффектов, связанных с перегрузкой клеток полимером, такие ультрадисперсные частицы (размером приблизительно 0,1 мкм) должны быть изготовлены из деградируемых ш νί\Ό полимеров. Для целей настоящего изобретения подходят биоразлагаемые полиалкил-цианоакрилатные наночастицы, которые отвечают этим требованиям, причем такие частицы могут быть легко изготовлены.
4. Способы применения и дозы.
Растворимые полипептиды РН20, в том числе е5РН20 по настоящему документу могут быть включены в фармацевтические композиции для введения одной дозой или несколькими дозами. Выбранный деградирующий гиалуронан фермент содержится в композициях в количестве, достаточном для оказания терапевтического эффекта в отсутствие нежелательных побочных эффектов для пациента. Терапевтически эффективная концентрация может быть определена эмпирически путем тестирования полипептидов в известных ш νίΙΐΌ и ш νί\Ό системах, например, с помощью анализов, предусмотренных в данном изо- 43 022752 бретении или известных в уровне техники (см., например, ТаИат е! а1. (1996), Λη;·ι1. Вюскет., 240:60-67; Ρ^1οсатο е! а1. (1997), 1. V^^ο1ο§у, 71:1417-1427; 8ιι6ο е! а1. (1996), АйМга1 Кев. 32:9-18; Вийагб е! а1. (1995), νίΓο1οβν, 209:52-59; ВхлпсЫ е! а1. (1996), Аии! Вюскет., 237:239-244; Ната!аке е! а1. (1996), Iη!е^ν^^ο1ο§у, 39:249-258; ЗкешкпЫег е! а1. (1998), Вюскет., 37:8899-8905; Ο'δοιι/а е! а1. (1995), 1. Оет νίτο1., 76:1729-1736; Такевкка е! а1. (1997), Агак Вюскет., 247:242-246; см. также, например, δΐιίιηίζιι е! а1. (1994), 1. νΐιο1. 68:8406-8408; Мк/Шаш е! а1. (1996), 1. νΐιο1. 70:7219-7223; Мк/Шаш е! а1. (1996), Вюскет. Вюркув. Кев. ί.’οιηιηιιη., 227:822-826; Ьи е! а1. (1996), Ргос. Асаб. Зск (ИЗА), 93:1412-1417;
Накт е! а1. (1996), νίΓο1ο§γ, 226:318-326; Ι!ο е! а1. (1996), 1. Оет νύο1., 77:1043-1054;. Мк/Шаш е! а1. (1995), Вюскет. Вюркув. Кев. Сοттиη., 212: 906-911; С1ю е! а1. (1997), 1. νίτο1. Ме!к. 65:201-207), а затем экстраполирована на дозу для человека.
Как правило, терапевтически эффективная доза растворимого РН20 в виде стабилизированного раствора, суспензии или в лиофилизированной форме составляет приблизительно от 10 до 500000 единиц (И), от 100 до 100000 единиц, от 500 до 50000 единиц, от 1000 до 10000 единиц, от 5000 до 7500 единиц, от 5000 до 50000 единиц или от 1000 до 10000 единиц, как правило, от 1000 до 50000 единиц. Композиции могут быть представлены в виде единичных дозированных форм, таких как, например, ампулы, шприцы и индивидуально упакованные таблетки или капсулы. Диспергирующий агент может быть введен отдельно или с другим фармакологически эффективным агентом или терапевтическим агентом в общем объеме 0,1- 100 мл, 1-50 мл, 10-50 мл, 10-30 мл, 1-20 мл или 1-10 мл, как правило, 10-50 мл.
Например, растворимые РН20, в том числе евРН20, можно вводить подкожно в количестве приблизительно 10 и, 20 и, 30 и, 40 и, 50 и, 100 и, 150 и, 200 и, 250 и, 300 и, 350 и, 400 и, 450 и, 500 и, 600 и, 700 и, 800 и, 900 и, 1000 и, 2000 и, 3000 и, 4000 и, 5000 и или более. В некоторых примерах дозы могут быть представлены в виде отношения количества растворимого РН20 к количеству вводимого терапевтического агента. Например, растворимый полипептид РН20 может быть введен с терапевтическим агентом при отношении от 1 и гиалуронидазы на 1 и терапевтического агента (1:1) до 50:1 или более, например, при отношении приблизительно 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 11:1, 12:1, 13:1, 14:1, 15:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1 и более. Как правило, объемы инъекций или инфузий предусмотренного в данном изобретении растворимого РН20 составляют по меньшей мере приблизительно 0,01, 0,05, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50 мл и более. Для непосредственного применения или для разведения до эффективной концентрации перед применением растворимые РН20 могут быть представлены в виде концентрированного раствора с удельной активностью приблизительно 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 800 или 1000 ед/мл или могут быть представлена в виде более концентрированного раствора, например с удельной активностью приблизительно 2000, 3000, 4000, 5000, 8000, 10000 или 20000 ед/мл. Растворимые РН20 могут быть предусмотрены в виде жидких или лиофилизированных композиций.
5. Упаковка, изделия и наборы.
Растворимые полипептиды РН20, в том числе евРН20, или нуклеиновые кислоты, кодирующие такие полипептиды, их производные или варианты могут быть упакованы в виде изделий, содержащих упаковочный материал, эффективную для лечения заболевания или нарушения фармацевтическую композицию и этикетку, которая указывает, что растворимый РН20 или нуклеиновая кислота могут быть использованы для лечения заболевания или нарушения. Комбинации выбранной растворимой гиалуронидазы РН20 или ее производных или вариантов и терапевтического агента также могут быть упакованы в виде изделий.
Предусмотренные в данном изобретении изделия содержат упаковочный материал. Упаковочные материалы, используемые для упаковки фармацевтических препаратов, хорошо известны специалистам в данной области. См., например, патенты США № 5323907, 5052558 и 5033352, каждый из которых включен здесь в качестве ссылки в полном объеме. Примеры фармацевтических упаковочных материалов включают, но не ограничиваются блистерной упаковкой, бутылками, тюбиками, ингаляторами, насосами, пакетами, флаконами, контейнерами, шприцами и любым упаковочным материалом, подходящим для выбранной композиции и способа введения и лечения. Изделия также могут включать иглу или другое инъекционное приспособление для местного введения (например, подкожного введения) инъекцией. В настоящем документе предусмотрен широкий спектр комбинаций соединений и композиций, например комбинаций растворимой РН20, такой как евРН20, с терапевтическим агентом, предназначенным для лечения заболевания или нарушения. Выбор упаковки зависит от выбранной растворимой РН20 и/или терапевтического агента и от необходимости упаковать композиции вместе или по отдельности. В одном из примеров растворимая РН20 может быть упакована в виде смеси с терапевтическим агентом. В другом примере компоненты могут быть упакованы в виде отдельных композиций.
Выбранный растворимый полипептид РН20, такой как полипептид евРН20, терапевтический агент и/или изготовленные из них изделия также могут быть предусмотрены в виде наборов. Наборы могут включать описанные здесь фармацевтические композиции и приспособления для введения, представленные в виде изделий. Например, композиции растворимых полипептидов РН20 могут быть оснащены приспособлением для введения, таким как шприц, ингалятор, емкость для дозирования, пипетка или аппликатор. Композиции могут содержаться в устройстве для введения или могут быть предоставлены от- 44 022752 дельно для перенесения в устройство для введения позже. Набор может, при необходимости, включать инструкции для применения, в которых приведены дозы, режимы дозирования и инструкции для введения. Наборы также могут включать описанные здесь фармацевтические композиции и приспособление для диагностики. Например, такие наборы могут включать приспособление для измерения концентрации, количества или активности выбранного фермента.
О. Анализы.
Растворимые полипептиды РН20 по настоящему документу, в том числе полипептиды е§РН20, являются растворимыми и сохраняют ферментативную гиалуронидазную активность. Ν-гликозилированные или частично Ν-гликозилированные полипептиды РН20 по настоящему документу сохраняют гиалуронидазную ферментативную активность. Активность предусмотренных в данном изобретении РН20 составляет приблизительно 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% и более от активности соответствующих РН20, которые не укорочены с С-конца или полностью Ν-гликозилированы. Активность растворимых гиалуронидаз РН20, таких как е§РН20, можно оценить с помощью методов, хорошо известных в уровне техники. Указанные методы включают, например, анализ микромутности и микротитровальный с применением биотинилированной гиалуроновой кислоты. Может быть измерена гиалуронидазная активность в кондиционированной среде, супернатанте или гиалуронидазная активность очищенного белка. Растворимость белка также может быть измерена, например, с помощью анализа с Тритон® Х-114. Во всех анализах активность или растворимость растворимого РН20 можно сравнить с характеристиками контрольного образца, например, не усеченного с С-конца полноразмерного полипептида РН20.
1. Гиалуронидазная активность.
Активность растворимого полипептида РН20 можно оценить с помощью хорошо известных в данной области методов. Например, в анализе на гиалуронидазную активность Фармакопеи США (И8Р) XXII гиалуронидазную активность определяют косвенно путем измерения количества недеградированной гиалуроновой кислоты или гиалуронана (ГК), оставшегося после реакции фермента с ГК в течение 30 мин при 37°С (Е8Р-ХЕ XXII XVII (1990) 644-645 Ипйей δίаίе8 РИаттатореха Сοηνеηί^οη, 1пс, Кпс^Ше, Мэриленд). Для определения активности препарата любой гиалуронидазы в единицах активности может быть использован стандарт сравнения гиалуронидазы (И8Р) или стандартный раствор гиалуронидазы Национального формуляра (ΝΡ).
В одном из примеров активность измеряют с помощью анализа микромутности, как описано в примере 12. Метод основан на образовании нерастворимого осадка при связывании гиалуроновой кислоты с сывороточным альбумином. Активность измеряют с помощью инкубации гиалуронидазы с гиалуронатом натрия (гиалуроновой кислотой) в течение определенного периода времени (например, 10 мин) и последующего осаждения нерасщепленного гиалуроната натрия при добавлении подкисленного сывороточного альбумина. Мутность образца измеряют при 640 нм после дополнительного периода инкубации. Снижение мутности в результате активности гиалуронидазы по отношению к гиалуронату натрия является показателем ферментативной активности гиалуронидазы.
В другом примере активность гиалуронидазы измеряют с помощью микротитрования, при котором оставшуюся биотинилированную гиалуроновую кислоту определяют после инкубации с гиалуронидазой (см., например, Ρτοδί и 81егп (1997), Апа1. ВюсЬет. 251:263-269, опубликованную заявку США № 20050260186). В примере 4 гиалуронидазную активность усеченной человеческой гиалуронидазы РН20 определяют с использованием биотинилированной гиалуроновой кислоты. Свободные карбоксильные группы глюкуроновых остатков гиалуроновой кислоты биотинилированы, и биотинилированная гиалуроновая кислота ковалентно связана с планшетом. После инкубации с гиалуронидазой остаточную биотинилированную гиалуроновую кислоту определяют с помощью авидин-пероксидазной реакции и ее количество сравнивают с количеством гиалуроновой кислоты после реакции со стандартом гиалуронидазы известной активности. Так как субстрат ковалентно связан с планшетом, таких артефактов, как рНзависимое вытеснение биотинилированного субстрата, не происходит. Чувствительность метода позволяет быстро измерять гиалуронидазную активность культивируемых клеток и биологических образцов с вариацией между анализами менее 10%.
Другие анализы для измерения активности гиалуронидазы также известны в уровне техники и могут быть использованы в методах по настоящему изобретению (см., например, Эе1ресЬ еί а1. (1995), Апа1. ВюсЬет. 229:35-41; ТакаЬакЫ еί а1. (2003), Апа1. ВюсЬет. 322:257-263).
Многие анализы на гиалуронидазную активность основаны на образовании новых восстанавливающих Ν-ацетиламиновых групп (Βοηηе^ и СаШеу, СИп. СЫт. Ас1а 13:746-752, 1966), потере вязкости (Эе 8а1е§и1 еί а1., АгсЬ. ВюсЬет. ВюрЬук. 121:548-554, 1967) или мутности (ΌοιΤπκπι и Οίί, I. Βίο1. СЬет. 172:367, 1948). При наличии очищенного субстрата все указанные способы подходят для определения наличия или отсутствия эндоглюкозамидазной активности.
Существенно очищенные гликозаминогликановые субстраты также могут быть использованы в анализе на изменение подвижности в геле. Для определения эндогликозидазной активности гликозаминогликаны смешивают с рекомбинантным РН20, таким как растворимый РН20, что приводит к сдвигу подвижности субстрата внутри геля. Примеры таких субстратов включают, но не ограничиваются, хонд- 45 022752 роитин-4-сульфат и хондроитин-6-сульфат, дерматансульфат и гепарансульфат, которые могут быть получены от 81дта СЬеткаЕ Гиалуроновая кислота из пуповины человека может быть получена от 1СИ Например, каждый субстрат для исследования может быть разбавлен до концентрации приблизительно 0,1 мг/мл в буфере с рН 3,5-7,5. Для анализа, например, приблизительно 10 мкл образца очищенного растворимого РН20 или кондиционированной среды от экспрессирующих РН20 клеток можно смешать приблизительно с 90 мкл субстрата в нужном буфере и инкубировать в течение 3 ч при 37°С. После инкубации образцы нейтрализуют буфером для образцов (Трис-ЭДТА, рН 8,0, бромфеноловый синий и глицерин), а затем исследуют с помощью электрофореза. Гликозаминогликаны могут быть обнаружены любым методом, известным в уровне техники, например гликозаминогликаны можно обнаружить с помощью окрашивания гелей 0,5% альциановым синим в 3% ледяной уксусной кислоте в течение ночи с последующим отмыванием в 7% ледяной уксусной кислоте. Деградацию гиалуронана определяют путем сравнения подвижности субстрата в присутствии и в отсутствие фермента.
Гиалуронидазную активность можно определить также с помощью гелевой зимографии в присутствии субстрата (СиейепЬопег е1 а1., 1992, Ма1п\, 388-396). В данном анализе образец наносят на гель для 8Э8-РАСЕ. содержащий гиалуроновую кислоту, и белки в образце разделяют электрофорезом. Гель инкубируют в буфере для проведения ферментативной реакции, а затем окрашивают для выявления гиалуроновой кислоты в геле. Гиалуронидазная активность визуализируется как очищенная от субстрата зона геля.
Также может быть оценена способность растворимого полипептида РН20 действовать в качестве агента для распространения или диффузии. Например, краситель трипановый синий можно вводить мышам без волосяного покрова под кожу латеральной поверхности тела с каждой стороны с РН20 или без него. Затем для определения способности деградирующего гиалуронан фермента действовать в качестве агента для распространения может быть измерена область распространения красителя, например, с помощью микроциркуля (патент США № 20060104968). Эффект совместного введения гиалуронидазы с другим агентом, таким как терапевтический агент, на фармакокинетические и фармакодинамические свойства агента также может быть оценен ш νίνο на моделях на животных и/или человеческих субъектах, например, в серии клинических испытаний.
Функциональную активность растворимого полипептида РН20, такого как езРН20, можно сравнить и/или нормализовать на активность стандарта сравнения с использованием любого из этих методов. Это может быть сделано для определения функционально эквивалентного количества растворимого полипептида РН20. Например, способность растворимого РН20 действовать в качестве агента для распространения или диффузии может быть оценена путем введения его в кожу на боку мыши с трипановым синим, затем может быть определено количество, необходимое для достижения той же диффузии, как, например, при введении красителя со 100 единицами Стандарта сравнения гиалуронидазы. Количество растворимого полипептида РН20, таким образом, функционально эквивалентно 100 единицам гиалуронидазы.
2. Растворимость.
Растворимость гиалуронидазы может быть оценена любым известным специалисту в данной области методом. Одним из методов определения растворимости является анализ на распределение в растворе детергента. Например, растворимый полипептид РН20 можно отличить, например, по его свойству переходить в водную фазу раствора Тритон® Х-114 при температуре 37°С (Βογ6κγ е1 а1. (1981), ί. ΒίοΙ. СЬет., 256:1604-1607). Например, растворимость описанных в данном изобретении полипептидов РН20 оценивают, как описано в примере 4. Заякоренные в мембране гиалуронидазы, такие как заякоренные липидами гиалуронидазы, в том числе СР1-заякоренные гиалуронидазы, переходят в богатую детергентом фазу, но переходят в бедную детергентом или водную фазу после обработки фосфолипазой С. Фосфолипаза С (РЬС) является ферментом, который расщепляет фосфо-глицерольную связь в СР1-заякоренных белках. Обработка РЬС вызовет высвобождение СР1-связанных белков от внешней мембраны клетки.
Другим методом оценки растворимости является определение наличия у полипептида РН20 СР1-якоря. Полипептид РН20 с СР1-якорем связан с клеточной мембраной и, следовательно, не является растворимым. Чтобы определить, является ли полипептид РН20 СР1-заякоренным, можно оценить растворимость полипептида до и после гидролиза РЬС/РЬО, а также применить компьютерные алгоритмы для выявления сигнальной последовательности присоединения СР1-якоря. Белки с СР1-якорем могут быть определены по солюбилизации после специфического ферментативного или химического расщепления в сочетании с распределением в растворе детергента (например, в растворе Тритон® Х-114), по распознаванию антителами и с помощью метаболической радиоактивной метки.
Распространенным методом, используемым для выявления белков с СР1-якорем, является их отделение от клеточной поверхности или их солюбилизация при обработке препаратов бактериальной Р1-РЬС или СР1-специфической фосфолипазой С трипаносомы (СР1-РЬС). Указанные ферменты расщепляют диацилглицерол в мембране и производят иммунореактивный гликановый эпитоп (СРЭ) в белке, который можно обнаружить методом Вестерн-блоттинг с антителами против СР1 трипаносом. Общая проблема, связанная с этим подходом, особенно характерная для клеток млекопитающих, заключается в том,
- 46 022752 что липаза не расщепляет СР1 якорь, в котором инозитол ацилирован. Для анализа требуется предварительная обработка разбавленной щелочью для удаления остатков жирных кислот от инозитольного кольца. Альтернативно, для расщепления СР1-якоря можно использовать полученную из сыворотки СР1-специфическую фосфолипазу Б. Этот фермент расщепляет связь между инозитольным кольцом и фрагментом фосфатидной кислоты и не ингибируется ацилированием инозитола. Обработка плавиковой кислотой расщепляет связь между инозитольным кольцом и фрагментом фосфатидной кислоты, а также расщепляет фосфодиэфирные связи между любыми фосфоэтаноламинами и остатками маннозы. Обработка разведенной азотистой кислотой особенно полезна при изучении ОР1-якорей, поскольку при такой обработке специфично расщепляется связь между неацетилированным глюкозамином и инозитольным кольцом, освобождая связанный с гликаном белок (содержащий маркерный ангидроманнозный фрагмент) и фосфатидилинозитол. В сочетании с антителами к СКБ, анализом химического состава, радиоактивным мечением миоинозитола, этаноламина, глюкозамина, маннозы или жирных кислот, хроматографическим анализом или анализом с распределением в растворе детергентов указанные способы расщепления представляют собой мощный набор инструментов для изучения ОР1-якорей белков.
Для идентификации консенсусной сигнальной последовательности присоединения ОР1-якоря в полипептидах были разработаны различные ίη зШсо методы и алгоритмы (см., например, ийепйтепй е! а1. (1995), Ме!ЬоЙ8 Епгушо1. 250:571-582; Е18епЬаЬет е! а1. (1999), I. ΒίοΙ. СЬет. 292:741-758, Кгопедд апй Βι.ι1οζ, (1999); Бе!ес!1оп/ртеЙ1с!1оп о£ ОР1 с1еауаде 81!е (ОР1-апсЬот) ш а рто!еш (БОРГ), 129.194.185.165/ά§ρί/; РапкЬаивет е! а1. (2005) ВюшГогтайсБ 21:1846-1852; 0тае!хеЬата е! а1. (2007), Рго!еотк8 7:1951-1960; Р1ег1еот е! а1. (2008) ВМС ВютТогтайсБ 9:392); включая алгоритмы, легко доступные на биоинформатических веб-сайтах, таких как веб-сайт ЕхРА8у Рго1еоппс5 !оо18 (веб-сайт ехра8у.сЬ/!оок/). Таким образом, специалист в данной области может определить, содержит ли полипептид РН20 сигнальную последовательность присоединения ОР1-якоря и, следовательно, является ли полипептид РН20 белком с ОР1-якорем.
Н. Способы лечения и применения длинных растворимых РН20 и других растворимых РН20 и комбинированная терапия.
Для терапевтического применения на людях были разработаны и одобрены препараты различных форм гиалуронидазы РН20. Например, препараты гиалуронидаз животного происхождения включают УЬтаве® (18ТА РЬаттасеийсаЬ), очищенную из бараньих яичек гиалуронидазу, ЛтрЬайаве® (АтрЬа8!аг РЬаттасеийсак), гиалуронидазу из бычьих яичек. Гиалуронидаза Ну1епех® (На1οζуте ТЬегареиЬсв) является человеческой рекомбинантной гиалуронидазой, получаемой генно-инженерным методом в клетках яичника китайского хомячка (СН0), содержащих нуклеиновую кислоту, кодирующую растворимую гНиРН20. Одобренное терапевтическое применение гиалуронидазы включает применение в качестве адъюванта для усиления абсорбции и дисперсии других лекарственных средств, применение для гиподермоклиза (подкожного введения жидкости), в качестве вспомогательного средства при подкожной урографии для улучшения рассасывания рентгеноконтрастного вещества. Дополнительно гиалуронидазу можно использовать в качестве терапевтического или косметического средства для лечения некоторых заболеваний и состояний.
Гиалуронидазы были также использованы для повышения активности химиотерапевтических агентов и/или доступности опухолей для химиотерапевтических агентов (8сЬи11ег е! а1., 1991, Ргос. Атег. Л88ос. Сапсег Ке8. 32:173, реферат № 1034; Сζе^ка е! а1., 1990, РИатите, 45:Н.9). Комбинированная химиотерапия с гиалуронидазой эффективна при лечении различных видов рака, включая рак мочевого пузыря (Нот е! а1., 1985, I. 8игд. 0псо1. 28:304-307), плоскоклеточный рак (КоЬпо е! а1., 94, I. Сапсег Ке8. 0псо1. 120:293-297), рак молочной железы (Вескеп1еЬпег е! а1., 1992, I. Сапсег Ке8. 0псо1. 118:591-596) и двенадцатиперстной кишки (ЗсЬеЬЬаиет е! а1., 1988, Апйсапсет Ке8. 8:391-396). Гиалуронидаза эффективна в качестве отдельного терапевтического агента для лечения рака мозга (глиомы) (опубликованная заявка РСТ \У0 88/02261, публикация 7 апреля 1988 г.). Введение гиалуронидазы также индуцирует восприимчивость ранее резистентных к химиотерапии опухолей поджелудочной железы, желудка, толстой кишки, яичников и молочной железы (Ваитдайпет е! а1., 1988, Кед. Сапсег Тгеа!. 1:55-58; 2апкет е! а1., 1986, Ргос. Атег. Л88ос. Сапсег Ке8. 27:390). К сожалению, загрязнения и не человеческое происхождение таких гиалуронидаз приводит к анафилактическим реакциям.
В дополнение к своим непрямым противоопухолевым эффектам гиалуронидазы проявляют также прямые противоопухолевые эффекты. Гиалуронидаза предотвращает рост пересаженных мышам опухолей (Бе Маеуег е! а1., 1992, 1п!. ί. Сапсег, 51:657-660) и подавляет образование опухолей при воздействии канцерогенов (Ра\у1о\\ък1 е! а1., 1979, 1п!. ί. Сапсег, 23:105-109; НаЬегтап е! а1., 1981, Ртосеейтдв о£ !Ье 17'1' Аппиа1 МееЬпд о£ !Ье Атепсап 8ос1е1у о£ СЬтса1 0псо1оду, ХУайппдЮп, Б.С., 22:105, реферат № 415).
В частности, гиалуронидаза РН20 может быть использована для лечения связанных с гиалуроновой кислотой заболеваний или связанных с высоким давлением интерстициальной жидкости, таким как внутридисковое давление, состояний, пролиферативных расстройств, таких как рак и доброкачественная гиперплазия предстательной железы, и отеков. Отек может, например, проявляться при пересадке орга- 47 022752 нов, инсульте или травме мозга или являться следствием таких состояний. Пролиферативные расстройства включают, но не ограничиваются, рак, пролиферацию гладкомышечных клеток, системный склероз, цирроз печени, респираторный дистресс-синдром взрослых, идиопатическую кардиомиопатию, системную красную волчанку, ретинопатию, например диабетическую ретинопатию или другую ретинопатию, сердечную гиперплазию, связанную с репродуктивной системой расстройствами, такими как доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ) и киста яичников, легочный фиброз, эндометриоз, фиброматоз, гарматому, лимфангиоматоз, саркоидоз, десмоидную опухоль. Раки включают твердые опухоли и раки лимфатической системы/крови, а также метастазы и недифференцированные опухоли. Поддающиеся лечению опухоли обычно характеризуются клеточной и/или стромальной экспрессией гиалуронана по сравнению с не раковой тканью того же типа или по сравнению с не метастазирующей опухолью того же типа. Раки включают рак яичников, ш кйи карциному (18С), плоскоклеточный рак (ПКР), рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, другие виды рака желудка, немелкоклеточный рак легкого, рак молочной железы, рак мозга и рак толстой кишки.
Таким образом, гиалуронидазы РН20 имеют несколько областей применения помимо их использования в качестве агента для распространения. Гиалуронидазу обычно применяют, например, для перибульбарного блока для местной анестезии в офтальмохирургии. Наличие фермента устраняет необходимость дополнительных блоков и ускоряет наступление акинезии (потери подвижности глаза). Перибульбарный блок и субтеноновый блок являются наиболее распространенными методиками офтальмологической медицины, в которых применяют гиалуронидазу. Гиалуронидаза также может способствовать акинезии в косметической хирургии, например при блефаропластике и подтяжке лица. Подразумевается, что растворимая гиалуронидаза РН20 по настоящему документу, в том числе гиалуронидаза екРН20, может быть использована в любом методе лечения или в комбинированной терапии, для которых применяют гиалуронидазу РН20 (см., например, опубликованные заявки США № И8 20040268425; И8 20050260186; И8 20060104968 и заявки США № 12/381844, 12/386249, 12/387225 и 12/386222, приведенные здесь в качестве ссылки в полном объеме). Примеры терапевтического и косметического применения гиалуронидазы описаны ниже.
1. Применение в качестве агента для распространения и для комбинированной терапии.
Как отмечалось выше, гиалуронидаза представляет собой агент, усиливающий распространение или диффузию вещества, который изменяет проницаемость соединительной ткани посредством гидролиза гиалуроновой кислоты, полисахарида межклеточного вещества соединительной ткани, а также некоторых специализированных тканей, таких как ткань пуповины и стекловидного тела. В отсутствие фактора распространения введенные подкожно вещества, такие как лекарственные средства, белки, пептиды и нуклеиновые кислоты, распространяются очень медленно. Совместная инъекция с гиалуронидазой, однако, может привести к быстрому распространению вещества. Скорость диффузии пропорциональна количеству фермента, а величина диффузии пропорциональна объему раствора.
РН20, в том числе растворимые РН20, такие как екРН20 по настоящему документу, могут быть использованы для содействия доставке или улучшения доставки агентов и молекул к любой из различных тканей млекопитающих ш γί\Ό. Указанные ферменты могут быть использованы для облегчения диффузии и, следовательно, могут способствовать доставке низкомолекулярных фармакологических агентов, а также высокомолекулярных фармакологических агентов, таких как белки, нуклеиновые кислоты, рибонуклеиновые кислоты и высокомолекулярные композиции, которые могут содержать комбинацию компонентов, включая, но не ограничиваясь, нуклеиновые кислоты, белки, углеводы, липиды, молекулы с липидной основой и лекарственными препаратами (см. например, опубликованные заявки США № и8 20040268425; И8 20050260186 и И8 20060104968). РН20, в том числе растворимый полипептид РН20, такой как екРН20, может быть введен пациенту и/или включен в фармацевтическую композицию совместно с терапевтическим агентом для улучшения биодоступности, а также фармакокинетических (РК) и/или фармакодинамических (РЭ) характеристик совместно вводимого или включенного в ту же композицию агента. РК/РЭ параметры, которые можно улучшить с помощью растворимого РН20, такого как екРН20, включают такие показатели, как Стах (максимальная концентрация агента после абсорбции, например, в крови), Ттах (время, необходимое для достижения максимальной концентрации), Т1/2 (время, необходимое для уменьшения концентрации в два раза), Стш (минимальная концентрация агента после метаболизма и выведения), АИС (площадь под кривой зависимости концентрации от времени, является мерой общей биодоступности), концентрация в различных интересующих тканях (включая, например, скорость достижения желаемых концентраций, общую концентрацию и продолжительность поддержания желаемой концентрации), а также Етах (максимальный достигаемый эффект).
Предусмотренные в данном изобретении способы лечения включают лечение заболевания или расстройства посредством комбинированной терапии с терапевтическим агентом, используемым для лечения такого заболевания. Любой терапевтический агент, который улучшает симптомы и или иным образом уменьшает тяжесть заболевания или состояния, может быть комбинирован с растворимым РН20 по настоящему документу в целях увеличения биодоступности такого терапевтического агента. В частности, растворимые полипептиды РН20 по настоящему документу, такие как екРН20к, могут быть использованы вместо раскрытой гиалуронидазы или деградирующего гиалуронан фермента в каждой комбина- 48 022752 ции и во всех комбинациях, описанных, например, в опубликованных заявках США № υδ 20040268425; υδ 20050260186; υδ 20060104968 и заявках США № 12/381844, 12/386249, 12/387225 и 12/386222.
Растворимые полипептиды РН20 по настоящему документу, в частности полипептиды екРН20, могут быть введены до, после, с перерывом или одновременно с препаратом терапевтического агента. Как правило, растворимые РН20 вводят до введения препарата терапевтического агента или одновременно с введением препарата терапевтического агента для разрушения растворимым РН20 гиалуроновой кислоты в интерстициальном пространстве. Растворимые РН20 могут быть введены в место, отличное от места введения терапевтического агента, или растворимые РН20 могут быть введены то же место, в которое вводят терапевтический агент.
Примеры фармацевтических, терапевтических и косметических агентов и молекул, которые могут быть введены с гиалуронидазой, включают, но не ограничиваются, химиотерапевтические или противораковые агенты, анальгетики, антибиотики, противовоспалительные средства, противомикробные агенты, противоамебные агенты, противотрихомонадные агенты, агенты для лечения болезни Паркинсона, противомалярийные агенты, противосудорожные агенты, антидепрессанты, противоартритные агенты, противогрибковые агенты, антигипертензивные агенты, жаропонижающие агенты, противопаразитные агенты, антигистаминные агенты, агонисты альфа-адренорецепторов, альфа-блокаторами, анестетики, расширяющие бронхи агенты, биоцидные агенты, бактерицидные агенты, бактериостатические агенты, бета-адренергические блокаторы, блокаторы кальциевых каналов, сердечно-сосудистые агенты, противозачаточные агенты, косметические агенты, противоотечные агенты, мочегонные агенты, депрессанты, диагностические агенты, электролиты, снотворные агенты, гормоны, средства против гипергликемии, миорелаксанты, агенты, вызывающие сокращение мышц, офтальмологические агенты, парасимпатомиметические агенты, антидепрессанты, седативные средства, симпатомиметики, транквилизаторы, агенты для лечения заболеваний, связанных с мочевой системой, агенты для лечения вагинальных заболеваний, противовирусные препараты, витамины, нестероидные противовоспалительные средства, ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента и любые их комбинации. В конкретном примере терапевтический агент включает антитела, в том числе моноклональные антитела, бисфосфонаты, инсулины и иммуноглобулины.
Примеры антибиотиков включают, но не ограничиваются, аминогликозиды; амфениколы; ансамицины; карбацефемы; карбапенемы, цефалоспорины или цефемы; цефамицины; клавамы; циклические липопептиды; диаминопиримидины; кетолиды; линкозамиды, макролиды; монобактамы; нитрофураны; оксацефемы; оксазолидиноны; пенемы, тиенамицины и различные бета-лактамы; пенициллины; полипептидные антибиотики; хинолоны; сульфонамиды; сульфоны; тетрациклины и другие антибиотики (например, клофоктол, фузидиевая кислота, гексидин, метенамин, нитрофурантоины, нитроксолины, ритипенемы, тауролидины, ксибомолы).
Примеры терапевтических агентов также включают модифицирующие свойства крови агенты, такие как антигемофильные факторы, противоингибиторные комплексы свертывания ΙΧ, антитромбин ΙΙΙ, фактор свертывания νΙΙ, фактор свертывания УШ, факторы свертывания, фракции белков плазмы, фактор Виллебранда; антитромбоцитные агенты (включая, например, абциксимаб, анагрелид, цилостазол, клопидогрель бисульфат, дипиридамол, эпопростенол, эптифибатид, тирофибан; колониестимулирующие факторы (КСФ) (в том числе, например, гранулоцитный КСФ и гранулоцитарный макрофагальный КСФ); стимуляторы эритропоэза (включая, например, эритропоэтины, такие как дарбэпоэтин альфа) и эпоэтин альфа; кровоостанавливающие средства и альбумины (включая, например, апротинин, комбинации антигемофильных факторов и плазмы, десмопрессин ацетат и альбумины), иммуноглобулины, иммуноглобулины против гепатита В; ингибиторы тромбина (включая, например, прямые ингибиторы тромбина и лепирудин), дротекогин альфа; антикоагулянты (включая, например, дальтепарин, эноксапарин, другие гепарины и варфарины).
Другие примеры терапевтических агентов, которые могут быть комбинированы путем совместного введения и/или включения в одну композицию с растворимым РН20, таким как екРН20, включают следующие вещества, но не ограничиваются адалимумабом, агалзидазой бета, алефацептом, ампициллином, анакинра, вакциной против полиомиелита, противотимоцитными агентами, азитромицином, бекаплермином, каспофунгином, цефазолином, цефепимом, цефотетаном, цефтазидимом, цефтриаксоном, цетуксимабом, циластатином, клавулановой кислотой, клиндамицином, дарбэпоэтином альфа, даклизумабом, дифтерией, дифтерийным антитоксином, дифтерийным анатоксином, эфализумабом, эпинефрином, эритропоэтином альфа, этанерцептом, филграстимом, флуконазолом, фолликулостимулирующим гормоном, фоллитропином альфа, фоллитропином бета, фосфенилоином, гадодиамидом, гадопентетатом, гатифлоксацином, глатирамером, ГМ-КСФ, гозерелином, гозерелин ацетатом, гранизетроном, НаеторЬЛик ΙηΠιιеп/а В, галоперидолом, вакциной против гепатита, вакциной против гепатита А, вакциной против гепатита В, ибритумомаб тиукситаном, ибритумомабом, тиукситаном, иммуноглобулинами, вакциной против НаеторЬЬик Iηί1иеηζа, вакциной против вируса гриппа, инфликсимабом, инсулином, инсулином гларгин, интерферонами, интерфероном альфа, интерфероном бета, интерфероном гамма, интерфероном альфа2а, интерфероном альфа-2Ъ, интерфероном альфа-1, интерфероном альфа-и3, интерфероном бета, интерфероном бета-1а, интерфероном гамма, консенсус-интерфероном альфа, йодиксанолом, йогексолом, йо- 49 022752 памидолом, йоверсолом, кеторолаком, ларонидазой, левофлоксацином, лидокаином, линезолидом, лоразепамом, вакциной против кори, вирусом кори, вирусом свинки, вакциной против кори, свинки и краснухи, вакциной против краснухи, медроксипрогестероном, меропенемом, метилпреднизолоном, мидазоламом, морфином, октреотидом, омализумабом, ондансетроном, паливизумабом, пантопразолом, пегаспаргазой, пегфилграстимом, ПЭГ-интерфероном альфа-2а, ПЭГ-интерфероном альфа-2Ь, пегвисомантом, вакциной против коклюша, пиперациллином, пневмококковой вакциной и пневмококковой конъюгатной вакциной, прометазином, ретеплазой, соматропином, сульбактамом, суматриптаном, тазобактамом, тенектеплазой, очищенным столбнячным анатоксином, тикарциллином, тозитумомабом, триамцинолоном, триамцинолон ацетонидом, триамцинолон гексацетонидом, ванкомицином, иммуноглобулинами против ветряной оспы, вакциной против ветряной оспы, другими вакцинами, алемтузумабом, алитретиноином, аллопуринолом, алтретамином, амифостином, анастрозолом, препаратами мышьякв, триоксидом мышьяка, аспарагиназой, бациллой Кальметта-Герена (вакциной БЦЖ), живой БЦЖ, бексаротеном, блеомицином, бусульфаном, бусульфаном для внутривенного введения, бусульфаном для орального введения, калустероном, капецитабином, карбоплатином, кармустином, кармустином с полифепрозаном, селекоксибом, хлорамбуцилом, цисплатином, кладрибином, циклофосфамидом, цитарабином, липосомальным цитарабином, дакарбазином, дактиномицином, липосомальным даунорубицином, даунорубицином, дауномицином, денилейкин дифтитоксом, дексразоксаном, доцетакселом, доксорубицином, липосомальным доксорубицином, дромостанолон пропионатом, раствором Эллиотта В, эпирубицином, эпоэтином альфа, эстрамустином, этопозидом, этопозид фосфатом, этопозидом УР-16, эксеместаном, флоксуридином, флударабином, фторурацилом, 5-фторурацилом, фулвестрантом, гемцитабином, гемтузумабом, озогамицином, гемтузумаб озогамицином, гидроксимочевиной, идарубицином, ифосфамидом, иматиниб мезилатом, иринотеканом, летрозолом, лейковорином, левамизолом, ломустином, ССИи, мехлоретамином, азотистыми ипритами, мегестролом, мегестрол ацетатом, мелфаланом, Ь-РАМ, меркаптопурином, 6меркаптопурином, месна, метотрексатом, метоксаленами, митомицинами, митомицин С, митотанами, митоксантронами, препараты нандролона, нандролон фенпропионатом, нофетумомабом, опрелвекином, оксалиплатином, паклитакселом, памидронатом, пегадемазой, пентостатином, пипоброманом, пликамицином, митрамицином, порфимером, порфимером натрия, прокарбазином, квинакрином, расбуриказой, ритуксимабом, сарграмостимом, стрептозоцином, тальком, тамоксифеном, темозоломидом, тенипозидом, тестолактоном, тиагуанином, 6-тиагуанином, триэтилентиофосфорамидом (тиотепа), топотеканом, торемифеном, трастузумабом, третиноином, урацилипритом, валрубицином, винбластином, винкристином, винорелбином, золедронатом, ацивицином, акларубицином, акодазолом, акронином, адозелезином, алдеслейкином, ретиноевой кислотой, алитретиноином, 9-цис-ретиноевой кислотой, алвоцидибом, амбазоном, амбомицином, аметантроном, аминоглутетимидом, амсакрином, анаксироном, анситабином, антрамицином, апазиквоном, аргимесна, асперлином, атримустином, азацитидином, азетепа, азотомицином, баноксантроном, батабулином, батимастатом, бенаксибином, бендамустином, бензодепа, бикалутамидом, биетасерпином, бирикодаром, бизантреном, биснафида димезилатом, бизелезином, бортезомибом, бреквинаром, бропиримином, будотитаном, кактиномицином, канертинибом, карацемидом, карбетимером, карбоквоном, кармофуром, карубицином, карзелезином, седефинголом, семадотином, хлорамбуцилом, циотеронелом, циролемицином, кланфенуром, клофарабином, криснатолом, децитабином, декснигулдипином, дексормаплатином, дезагуанином, диазиквоном, диброспидиумом, диеногестом, диналином, дизермолидом, дофеквидаром, доксифлуридином, дролоксифеном, дуазомицином, экомустином, эдатрексатом, эдотекарином, эфломитином, элакридаром, элинафидом, элсамитрусином, эмитефуром, энлоплатином, энпроматом, энзастаурином, эпипропидином, эпталопростом, эрбулозолом, эзорубицином, этанидазолом, этоглуцидом, этоприном, эксизулиндом, фадрозолом, фазарабином, фенретинидом, флуоксиместероном, флуроцитабином, фосхидоном, фостриецином, фотретамином, галарубицином, галоцитабином, герохинолом, гиматеканом, гимерацилом, глоксазоном, глуфосфамидом, илмофозином, иломастатом, имексоном, импросульфаном, индизуламом, инпроквоном, интерлейкином, интерлейкином-2, рекомбинантным интерлейкином, интоплицином, иобенгуаном, ипроплатином, ирсогладином, иксабепилоном, кетотрексатом, Ь-аланозином, ланреотидом, лапатинибом, ледоксантроном, лейпролидом, лейпрорелином, лексакалцитолом, лиарозолом, лобаплатином, лометрексолом, лонафарнибом, лозоксантроном, луртотеканом, мафосфамидом, манносульфаном, маримастатом, мазопроколом, мейтансином, мехлоретамином, меленгестролом, мейфаланом, меногарилом, мепитиостаном, метезиндом, метомидатом, метоприном, метуредепа, мибоплатином, мипроксифеном, мизонидазолом, митиндомидом, митокарцином, митокромином, митофлаксоном, митогиллином, митогуазоном, митомалцином, митонафидом, митоквидоном, митоспером, митозоломидом, мивобулином, мизорибином, мофаротеном, мопидамолом, мубритинибом, микофеноловой кислотой, недаплатином, нейзарабином, неморубицином, нитракрином, нокодазолом, ногаламицином, нолатрекседом, нортопиксантроном, ормаплатином, ортатакселом, отерацилом, оксизураном, оксофенарсином, патубилоном, пелдезином, пелиомицином, пелитрексолом, пеметрекседом, пентамустином, пепломицином, перфосфамидом, перифозином, пикоплатином, пинафидом, пипосульфаном, пирфенидоном, пироксантроном, пиксантроном, плевитрекседом, пломестаном, порфиромицином, преднимустином, пропамидином, проспидиумом, пумитепа, пуромицином, пиразофурином, ранимустином, рибопримом, ритросульфаном, роглетимидом, роквинимексом, руфокромо- 50 022752 мицином, сабарубицином, сафинголом, сатраплатином, себриплатином, семустином, симтразеном, сизофираном, собузоксаном, сорафенибом, спарфозатом, спарфозовой кислотой, спарсомицином, спирогерманием, спиромустином, спироплатином, скваламином, стрептонигрином, стрептоварицином, суфосфамидом, сулофенуром, тацединалином, тализомицином, таллимустином, тариквидаром, тауромустином, текогаланом, тегафуром, телоксантроном, темопорфином, тероксироном, тиамиприном, тиазофурином, тиломизолом, тилороном, тимкодаром, тимонацисом, тирапазамином, топиксантроном, трабектедином, эктеинасцидином 743, трестолоном, трицирибином, трилостаном, триметрексатом, триплатин тринитратом, трипторелином, трофосфарнидом, тубулозолом, убенимексом, уредепа, валсподаром, вапреотидом, вертепорфином, винбиастином, виндезином, винепидином, винфлунином, винформидом, винглицинатом, винлейцинолом, винлейрозином, винрозидином, винтриптолом, винзолидином, ворозолом, ксантомицином, гуамециклином, зениплатином, зиласкорбом [2-Н], зиностатином, зорубицином, зосуквидаром, ацетазоламидом, ацикловиром, адипиодоном, алатрофлоксацином, алфентанилом, противоаллергенными экстрактами, ингибиторами альфа-1-протеиназы, аипростадилом, амикацином, аминокислотами, аминокапроновой кислотой, аминофиллином, амитриптилином, амобарбиталом, амриноном, анальгетиками, вакцинами против полиомиелита, сывороткой против бешенства, противостолбнячными иммуноглобулинами, вакциной против столбняка, антитромбином ΙΙΙ, противоядной сывороткой, аргатробаном, аргинином, аскорбиновой кислотой, атенололом, атракуриумом, атропином, ауротиоглюкозой, азатиоприном, азтреонамом, бацитрацином, баклофеном, базиликсимабом, бензойной кислотой, бензтропином, бетаметазоном, биотином, бивалирудином, антитоксином ботулизма, бретилиумом, буметанидом, бупивакаином, бупренорфином, буторфанолом, кальцитонином, кальцитриолом, кальцием, капреомицином, карбопростом, карнитином, цефамандолом, цефоперазоном, цефотаксимом, цефокситином, цефтизоксимом, цефуроксимом, хлорамамфениколом, хлорпрокаином, хлорохином, хлортиазидом, хлорпромазином, хондроитинсульфокислотой, хориогонадотрофином альфа, хромиумом, цидофовиром, циметидином, ципрофлоксацином, цизатракурием, клонидином, кодеином, колхицином, колистином, коллагеном, трифлутатом кортикорелина, кортикотрофином, косинтропином, цианкобаламином, циклоспорином, цистеином, дакликсимабом, далфопристином, далтепарином, данапароидом, дантроленом, дефероксамином, десмопрессином, дексаметазоном, дексмедетомидином, декспантенолом, декстраном, декстраном железа, диатризоевой кислотой, диазепамом, диазоксидом, дицикломином, дигибиндом, дигоксином, дигидроэрготамином, дилтиаземом, дифенгидрамином, дипиридамолом, добутамином, допамином, доксакуриумом, доксапрамом, доксеркальциферолом, доксициклином, дроперидолом, дифиллином, эдетовой кислотой, эдрофонием, эналаприлатом, эфедрином, эпопростенолом, эргокальциферолом, эргоновином, эртапенемом, эритромицином, эсмололом, эстрадиолом, эстрогеном, этакриновой кислотой, этаноламином, этанолом, этиолированным маслом, этидроновой кислотой, этомидатом, фактором VIII, фамотидином, фенолдопамом, фентанилом, флумазенилом, флуоресцеином, флуфеназином, фолиевой кислотой, фомепизолом, фомивирсеном, фондапаринуксом, фоскарнетом, фосфенитоином, фуросемидом, гадотеридолом, гадоверсетамидом, ганцикловиром, гентамицином, глюкагоном, глюкозой, глицином, гликопирролатом, гонадорелином, хориальный гонадотропин, полисахаридами НаеторЫ1и8 В, гемином, травяными препаратами, гистамином, гидралазином, гидрокортизолом, гидроморфоном, гидроксокобаламином, гидроксизином, гиосциамином, ибутилидом, имиглуцеразой, индигокармином, индометацином, йодидами, иопромидом, йоталамовой кислотой, иоксагловой кислотой, иоксиланом, изониазидом, изопротеренолом, вакциной против японского энцефалита, канамицином, кетамином, лабеталолом, лепирудином, левобупивакаином, левотироксином, линкомицином, лиотиронином, лютеинизирующим гормоном, вакциной против болезни Лайма, мангафодипиром, маннитолом, менингококковой полисахаридной вакциной, меперидином, мепивакаином, мезоридазином, метараминолом, метадоном, метокарбамолом, метогекситалом, метилдопатом, метилэргоновином, метоклопрамидом, метопрололом, метронидазолом, миноциклином, мивакурием, морруиновой кислотой, моксифлоксацином, муромонаб-СО3, микофенолата мофетилом, нафциллином, налбуфином, налмефеном, налоксоном, неостигмином, ниацинамидом, никардипином, нитроглицерином, нитропруссидом, норэпинефрином, орфенадрином, оксациллином, оксиморфоном, окситетрациклином, окситоцином, панкуронием, пантенолом, пантотеновой кислотой, папаверином, ПЭГ-интерфероном-альфа (например, интерфероном альфа-2а или -2Ъ), пенициллином О, пентамидином, пентазоцином, пентобарбиталом, перфиутреном, перфеназином, фенобарбиталом, фентоламином, фенилэфрином, фенитоином, физостигмином, фитонадионом, полимиксином Ъ, пралидоксимом, прилокаином, прокаинамидом, прокаином, прохлорперазином, прогестероном, пропранололом, пиридостигмин гидроксидом, пиридоксином, квинидином, хинупристином, антителами против бешенства, вакциной против бешенства, ранитидином, ремифентанилом, рибофлавином, рифампином, ропивакаином, самарием, скополамином, селеном, серморелином, синкалидом, соматремом, спектиномицином, стрептокиназой, стрептомицином, сукцинилхолином, суфентанилом, сульфаметоксазолом, такролимусом, тербуталином, терипаратидом, тестостероном, антитоксином столбняка, тетракаином, тетрадецил сульфатом, теофиллином, тиамином, тиэтилперазином, тиопенталом, тиреотропным гормоном, тинзапарином, тирофибаном, тобрамицином, толазолином, толбутамидом, торсемидом, транексамовой кислотой, трепростинилом, трифторперазином, триметобензамидом, триметопримом, трометамином, туберкулином, вакциной против брюшного тифа, урофоллитропином, урокиназой, вальпроевой ки- 51 022752 слотой, вазопрессином, векурониумом, верапамилом, вориконазолом, варфарином, вакциной против желтой лихорадки, зидовудином, цинком, зипрасидон гидрохлоридом, аклациномицином, актиномицином, адриамицином, азасерином, 6-азауридином, карзинофилином, хромомицином, деноптерином, 6диазо-5-оксо-Ь-норлейцином, эноцитабином, локсуридином, оливомицином, пирарубицином, пиритрексимом, птероптерином, тагафуром, туберцидином, алтеплазой, арцитумомабом, бевацизумабом, ботулиническим токсином А типа, ботулиническим токсином В типа, капромаб пендетидом, даклизумабом, дорназой альфа, дротрекогином альфа, имциромабом пентетатом и йодом-131.
В частности, терапевтические агенты включают, но не ограничиваются, иммуноглобулины, интерферон бета, интерферон альфа-2а, интерферон альфа-1, интерферон альфа-п3, интерферон бета-1, интерферон бета-1а, интерферон гамма-1Ъ, ПЭГ-интерферон альфа-2 и ПЭГ-интерферон альфа-2Ъ, инсулин, бисфосфат (например, памидронатом или золедронатом), доцетаксел, доксорубицин, липосомальный доксорубицин и бевацизумаб.
2. Применение фермента для удаления избытка гликозамигликанов.
Изобретение включает методы лечения связанных с гиалуроновой кислотой заболеваний и состояний введением композиции, содержащей растворимую РН20, причем растворимую гиалуронидазу можно применять отдельно или в сочетании или в дополнение к другому агенту и/или способу лечения. Связанные с гиалуроновой кислотой заболевания или состояния относятся к любым заболеваниям или состояниям, при которых в качестве причины, последствия или иного фактора наблюдается повышение уровня гиалуроновой кислоты, такие заболевания возможно лечить введением композиции гиалуронидазы, такой как растворимая РН20, причем растворимую гиалуронидазу можно применять отдельно или в сочетании или в дополнение к другому агенту и/или способу лечения.
Как правило, связанные с гиалуроновой кислотой заболевания и состояния характеризуются повышенной экспрессией гиалуронана в тканях, клетках или биологических жидкостях (например, в опухолевой ткани или опухоль-ассоциированной ткани, в крови или интерстициальном пространстве) по сравнению с контролем, например, другой тканью, другими клетками или биологическими жидкостями. Экспрессия гиалуронана может быть повышена по сравнению с нормальной тканью, клетками или биологическими жидкостями, например тканью, клетками или жидкостью, аналогичными исследуемому образцу, но выделенными из другого субъекта, например нормального субъекта (т.е. субъекта, который не страдает заболеванием или состоянием или который не страдает тем же заболеванием или состоянием, которым страдает исследуемый субъект), например субъекта, который не страдает связанным с гиалуроновой кислотой заболеванием или состоянием. Экспрессия гиалуронана может быть повышена по сравнению с аналогичным образцом ткани другого субъекта, который страдает аналогичным заболеванием или состоянием, но в менее тяжелой форме и/или заболевание которого не является связанным с гиалуронановой кислотой или характеризуется относительно меньшей экспрессией гиалуронана и, таким образом, является в меньшей степени связанным с гиалуронановой кислотой заболеванием. Например, исследуемый субъект может являться субъектом, страдающим связанным с гиалуроновой кислотой раком, и количество ГК (гиалуроновой кислоты) в ткани, клетках или жидкости у субъекта повышено по сравнению с образцами субъекта с менее тяжелой формой рака, например раком на ранней стадии, дифференцированным раком или другим видом рака. В другом примере в клетках, ткани или жидкости содержание гиалуронана повышено по сравнению с контрольным образцом, таким как жидкость, ткань, экстракт (например, клеточный или ядерный экстракт), препарат нуклеиновых кислот или пептидов, клеточная линия, биоптат, стандартный или другой образец с известным абсолютным или относительным количеством ГК, например образец опухолевой клеточной линии, которая, как известно, экспрессирует ГК на относительно низком уровне, например образец описанной в данном изобретении опухолевой клеточной линии, которая экспрессирует ГК на низком уровне, например клеточной линии НСТ 116, клеточной линии НТ29, клеточной линии Νί'.Ί Н460, клеточной линии Όυ145, клеточной линии Сарап-1, или образец опухоли из модели опухоли, полученной с применением таких клеточных линий.
В некоторых случаях связанные с гиалуроновой кислотой заболеваний и состояния характеризуются повышенным давлением интерстициальной жидкости, уменьшенным сосудистым объемом и/или повышеным содержанием воды в тканях, таких как опухоли. В одном из примеров лечение композициями и соединениями по настоящему документу улучшает один или несколько из указанных симптомов или других симптомов, связанных с заболеванием или состоянием, например, увеличивает выживаемость и улучшает качество жизни субъекта с течением времени или подавляет рост опухоли.
Примеры связанных с гиалуроновой кислотой заболеваний и состояний, которые можно лечить с помощью предусмотренных в данном изобретении ферментов, композиций и методов, включают, но не ограничиваются, богатые гиалуронан раки, например опухоли, в том числе плотные опухоли, такие как опухоли на поздней стадии рака, метастатические раки, недифференцированные раки, рак яичников, карцинома ш 51!и (18С), плоскоклеточный рак (8СС), рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легкого, рак молочной железы, рак толстой кишки и другие виды рака.
Также примерами связанных с гиалуроновой кислотой заболеваний или состояний являются заболевания, связанные с повышенным давлением интерстициальной жидкости, такие как связанные с внут- 52 022752 ридисковым давлением заболевания и отеки, например отек при пересадке органов, инсульте, травме мозга или другой травме. Примеры связанных с гиалуроновой кислотой заболеваний или состояний включают заболевания и состояния, связанные с повышением давления интерстициальной жидкости, снижением сосудистого объема и/или повышением содержания воды в тканях, включая рак, повышенное внутридисковое давление и отеки. В одном из примеров лечение связанного с гиалуроновой кислотой заболевания, состояния или нарушения приводит к улучшению, уменьшению или другому полезному эффекту по отношению к повышенному давлению интерстициальной жидкости (1РР), сниженному сосудистому объему и повышенному содержанию воды в тканях.
Как правило, связанные с гиалуроновой кислотой заболевания или состояния характеризуются повышенной экспрессией ГК, например, в пораженной ткани, например в опухоли. В одном примере в тканях субъекта, например в пораженной ткани, образуются гало (перицеллюлярные области матрикса, богатые протеогликанами, в том числе гиалуронаном). В другом примере наличие гало можно обнаружить 1п У1уо в культуре клеток из ткани субъекта, например в культуре из подверженной заболеванию ткани.
а) Применение для лечения рака.
Гиалуронидаза оказывает прямой противораковый эффект, деградируя гиалуроновую кислоту в опухолях. Таким образом, растворимая гиалуронидаза РН20, такая как екРН20, может быть использована для лечения опухолей, в частности опухолей, которые богаты гиалуронаном. Богатый гиалуронаном рак может представлять собой рак, при котором раковые клетки образуют гало, рак, при котором имеет место повышенная экспрессия гиалуронана (определяют методом иммуногистохимии, например с помощью гистологического окрашивания срезов опухоли), рак, при котором имеет место повышенная активность НА82 (гиалуронан синтазы 2), рак, клетки которого не производят гиалуронидазу (НУАЬ1) ίη уйго.
Богатый гиалуронаном рак может быть определен с помощью любого метода оценки экспрессии гиалуронана, а также другими известными методами анализа экспрессии белка/мРНК.
Описано несколько богатых гиалуроновой кислотой видов рака. В некоторых случаях экспрессия гиалуронана коррелирует с плохим прогнозом, например пониженной выживаемостью и/или пониженной безрецидивной выживаемостью, метастазированием, ангиогенезом, инвазией раковых клеток в другие ткани/области, а также другими показателями плохого прогноза. Такую корреляцию наблюдали, например, для богатых гиалуроновой кислотой опухолей, включая рак яичников, плоскоклеточный рак (8СС), 18С, рак простаты, рак легких, в том числе немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), рак молочной железы, рак толстой кишки и рак поджелудочной железы (см., например, Маагй е1 а1., Сапсег КекеагсЬ, 60:150-155 (2000); Кагушеп е1 а1., ВпйкЬ боигпа1 о£ ИегтаЮкду, 148:86-94 (2003); Ырропеп е1 а1., Еиг. боита1 о£ Сапсег, 849-856 (2001); Ртпеп е1 а1., 1пБ ί. Сапсег: 95: 12-17 (2001); Аиушеп е1 а1., Атепсап боита1 о£ Ра1Ьо1оду, 156(2):529-536 (2000); Корропеп е1 а1., Сапсег КекеагсЬ, 58:342-347 (1998)). Таким образом, для лечения одного или более симптомов рака богатый гиалуроновой кислотой рак можно лечить введением гиалуронидазы, такой как растворимая РН20. Богатые гиалуроновой кислотой опухоли включают, но не ограничиваются опухолями простаты, молочной железы, толстой кишки, яичников, желудка, головы и шеи, а также другими опухолями и видами рака.
Гиалуронидазы также могут быть использованы для повышения чувствительности устойчивых к традиционной химиотерапии опухолей. Например, пациенту с опухолью, характеризующейся дефектом НУАЬ1, можно вводить гиалуронидазу, такую как растворимая РН20, в количестве, достаточном для увеличения диффузии в опухоли (например, для облегчения проникновения химиотерапевтического агента в опухоль и/или увеличения концентрации химиотерапевтического агента в опухоли), ингибирования подвижности опухолевых клеток, например, за счет деградации гиалуроновой кислоты, и/или снижения порога чувствительности опухолевых клеток к апоптозу. Воздействие гиалуронидазы может перевести опухолевые клетки в состояние анойкиза, что сделает опухолевые клетки более восприимчивыми к действию химиотерапевтических агентов. Введение гиалуронидазы может сенсибилизировать ранее резистентные к химиотерапии опухоли поджелудочной железы, желудка, толстой кишки, яичников и молочной железы (Ваитдайпег е1 а1. (1988) Кед. Сапсег ТгеаГ 1:55-58; 2апкег е1 а1. (1986), Ргос. Атег. Аккос. Сапсег Кек. 27:390). Таким образом, в дополнение к лечению рака введением растворимой РН20, предусмотренные в данном изобретении композиции и методы также могут быть использованы для лечения связанных с гиалуроновой кислотой видов рака путем введения растворимой РН20 в сочетании с химиотерапевтическим или другим противораковым агентом или методом лечения, причем гиалуронидазу можно вводить, например, одновременно с другим агентом либо до него. В этом примере гиалуронидаза, такая как растворимая РН20, как правило, способствует проникновению химиотерапевтического или другого противоракового агента в плотную опухоль, таким образом способствуя лечению заболевания.
Композиции, содержащие растворимую РН20, могут быть введены интратуморально совместно с противораковым агентом или внутривенно в случае диссеминированного рака или труднодоступной опухоли. Противоопухолевый агент может представлять собой химиотерапевтический агент, антитело, пептид, вектор для генной терапии, вирус или ДНК. Кроме того, гиалуронидазу можно использовать для перевода опухолевых клеток в пул делящихся клеток для сенсибилизации ранее устойчивых к химиотерапии опухолей, которые приобрели множественную лекарственную устойчивость (8ΐ Сго1х е1 а1. (1998),
- 53 022752
Сапсег Ьей., 8ер1етЬег, 131(1): 35-44).
Примеры противораковых агентов, которые могут быть введены после, совместно или до введения растворимой РН20, такой как е§РН20, включают, но не ограничиваются, ацивицин; акларубицин; акодазол; акронин; адозелезин; алдеслейкин; алемтузумаб; алитретиноин (9-цис-ретиноевой кислотой); аллопуринол; алтретамин; алвоцидиб; амбазон; амбомицин; аметантрон; амифостин; аминоглутетимид; амсакрин; анастрозол; анаксирон; анситабин; антрамицин; апазиквон; аргимесна; триоксид мышьяк; аспарагиназой; асперлин; атримустин; азацитидин; азетепа; азотомицин; баноксантрон; батабулин; батимастат; живой БЦЖ; бенаксибин; бендамустин; бензодепа; бексаротен; бевацизумаб; бикалутамид; биетасерпин; бирикодар; бизантрен; бизантрен; биснафида димезилат; бизелезин; блеомицин; бортезомиб; бреквинар; бропиримин; будотитан; бусульфан; кактиномицин; калустерон; канертиниб; капецитабин; карацемид; карбетимер; карбоплатин; карбоквон; кармофур; кармустин с полифепрозаном; кармустин; карубицин; карзелезин; седефингол; селекоксиб; семадотин; хлорамбуцил; циотеронел; циролемицин; цисплатин; кладрибин; кланфенур; клофарабин; криснатол; циклофосфамид; липосомальный цитарабин; цитарабин; дакарбазин; дактиномицин; дарбэпоэтин альфа; липосомальный даунорубицин; даунорубицин/дауномицин; даунорубицин; децитабин; денилейкин дифтитокс; декснигулдипин; дексоннаплатин; дексразоксан; дезагуанин; диазиквон; диброспидиум; диеногест; диналин; дизермолид; доцетаксел; дофеквидар; доксифлуридин; липосомальный доксорубицин; доксорубицин НС1; липосомальный докорубицин НС1 для инъекций; доксорубицины; дролоксифен; дромостанолона пропионат; дуазомицин; экомустин; эдатрексат; эдотекарин; эфлорнитин; элакридар; элинафид; раствор Эллиотта В; элсамитрусин; эмитефур; энлоплатин; энпромат; энзастаурин; эпипропидин; эпирубицин; эпоэтин альфа; эпталопрост; эрбулозол; эзорубицин; эстрамустин; этанидазол; этоглуцид; этопозид фосфат; этопозид УР-16; этопозиды; этоприн; эксеместан; эксизулинд; фадрозол; фазарабин; фенретинид; филграстим; флоксуридин; флударабин; фторурацил; 5-фторурацил; флуоксиместерон; флуроцитабин; фосхидон; фостриецин; фотретамин; фулвестрант; галарубицин; галоцитабин; гемцитабин; гемтузумаб/озогамицин; герохинол; гиматекан; гимерацил; глоксазон; глуфосфамид; гозерелин ацетат; гидроксимочевину; ибритумомаб/тиукситан; идарубицин; ифосфамид; илмофозин; иломастат; иматиниб мезилат; имексон; импросульфан; индизулам; инпроквон; интерферон альфа-2а; интерферон альфа-2Ь; интерферон альфа, интерферон бета, интерферон гамма, интерфероны, интерлейкин-2 и другие интерлейкины (в том числе рекомбинантные интерлейкины); интоплицин; иобенгуан [131-Ι]; ипроплатин; иринотекан; ирсогладин; иксабепилон; кетотрексат; Ь-аланозин; ланреотид; лапатиниб; ледоксантрон; летрозол; лейковорин; лейпролид; лейпрорелин (лейпрорелид); левамизол; лексакалцитол; лиарозол; лобаплатин; лометрексол; ломустин/ССNυ; ломустин; лонафарниб; лозоксантрон; луртотекан; мафосфамид; манносульфан; маримастат; мазопрокол; мейтансин; мехлоретамин; мехлоретамин/азотистый иприт; мегестрол ацетат; мегестрол; меленгестрол; мелфалан; мелфалан/Ь-РАМ; меногарил; мепитиостан; меркаптопурин; 6меркаптопурин; месна; метезинд; метотрексат; метоксален; метомидат; метоприн; метуредепа; мибоплатин; мипроксифен; мизонидазол; митиндомид; митокарцин; митокромин; митофлаксон; митогиллин; митогуазон; митомалцин; митомицин С; митомицин; митонафид; митоквидон; митоспер; митотан; митоксантрон; митозоломид; мивобулин; мизорибин; мофаротен; мопидамол; мубритиниб; микофеноловую кислоту; нандролон фенпропионат; недаплатин; нелзарабин; неморубицин; нитракрин; нокодазол; нофетумомаб; ногаламицин; нолатрексед; нортопиксантрон; октреотид; опрелвекин; ормаплатин; ортатаксел; отерацил; оксалиплатин; оксизуран; оксофенарсин; паклитаксел; памидронат; патубилон; пегадемазу; пегаспаргазу; пегфилграстим; пелдезин; пелиомицин; пелитрексол; пеметрексед; пентамустин; пентостатин; пепломицин; перфосфамид; перифозин; пикоплатин; пинафид; пипоброман; пипосульфан; пирфенидон; пироксантрон; пиксантрон; плевитрексед; пликамицид митрамицин; пликамицин; пломестан; пломестан; порфимер натрия; порфимер; порфиромицин; преднимустин; прокарбазин; пропамидин; проспидиум; пумитепа; пуромицин; пиразофурин; квинакрин; ранимустин; расбуриказу; рибоприм; ритросульфан; ритуксимаб; роглетимид; роквинимекс; руфокромомицин; сабарубицин; сафингол; сарграмостим; сатраплатин; себриплатин; семустин; симтразен; сизофиран; собузоксан; сорафениб; спарфозат; спарфозовую кислоту; спарсомицин; спирогерманий; спиромустин; спироплатин; скваламин; стрептонигрин; стрептоварицин; стрептозоцин; суфосфамид; сулофенур; сунитиниб малат; 6-ТО; тацединалин; тальк; тализомицин; таллимустин; тамоксифен; тариквидар; тауромустин; текогалан; тегафур; телоксантрон; темопорфин; темозоломид; тенипозид/УМ-26; тенипозид; тероксирон; тестолактон; тиамиприн; тиагуанин; тиотепа; тиамиприн; тиазофурин; тиломизол; тилорон; тимкодар; тимонацис; тирапазамин; топиксантрон; топотекан; торемифен; тозитумомаб; трабектедин (эктеинасцидин 743); трастузумаб; трестолон; третиноин/АТКА; трицирибин; трилостан; триметрексат; триплатин тринитрат; трипторелин; трофосфамид; тубулозол; убенимекс; урацилиприт; уредепа; валрубицин; валсподар; вапреотид; вертепорфин; винбластин; винкристин; виндезин; винепидин; винфлунин; винформид; винглицинат; винлейцинол; винлейрозин; винорелбин; винрозидин; винтриптол; винзолидин; ворозол; ксантомицин А (гуамециклин); зениплатин; зиласкорб [2-Н]; зиностатин; золедронат; зорубицин и зосуквидар, например алдеслейкин (например, Рго1еикш®); алемтузумаб (например, СатраШ®); алитретиноин (например, Рапгейп®); аллопуринол (например, Ζν1ορπιη®); алтретамин (например, Неха1еп®); амифостин (например,
- 54 022752
Е1Ьуо1®); анастрозол (например, Аппикех®); триоксид мышьяка (например, Тпкепох®); аспарагиназу (например, Е1краг®); живую БЦЖ (например, Т1се® БЦЖ); бексаротен (например, Тагдгекп®); бевацизумаб (АмакИп®); блеомицин (например, В1епохапе®); бусульфан для внутривенного введения (например, Вики1Гех®); бусульфан для орального введения (например, Му1егап™); калустерон (например, МеМокагЪ®); капецитабин (например, Хе1ока®); карбоплатин (например, Рагар1акп®); кармустин (например, ВСМ.'®, ВК’Ни®); кармустин с полифепрозаном (например, ОПаке1® ХУа.Гег); селекоксиб (например, Се1еЪгех®); хлорамбуцил (например, Ьеикегап®); цисплатин (например, Р1акпо1®); кладрибин (например, ЬЕикйкп®, 2-СкА®); циклофосфамид (например, С’уЮхап®, №окаг®); цитарабин (например, СуЮкаг-и®); липосомальный цитарабин (например, ЭероСу!®); дакарбазин (например, ОТ1С-Ооте®): дактиномицин (например, Соктедеп®); дарбэпоэтин альфа (например, Агапекр®); липосомальный даунорубицин (например, Эапиохоте®); даунорубицин/дауномицин (например, СегиЫкше®); денилейкин дифтитокс (например, 0йак®); дексразоксан (например, 2шесагк®); доцетаксел (например, Тахо1еге®); доксорубицин (например, Акпатусш®, КиЪех®); липосомальный доксорубицин, в том числе липосомальный доксорубицин НС1 для инъекций (например, ЭохП®); пропионат дромостанолона (например, Оготок1апо1опе® и МакЮгопе®); раствор Эллиотта В (например, ЕШоЦ'к В §о1ийоп®); эпирубицин (например, Е11епсе®); эпоэтин альфа (например, Еродеп®); эстрамустин (например, Етсу!®); этопозид фосфат (например, ЕШрорЬок®); этопозид УР-16 (например, УерекШ®); эксеместан (например, Аготакш®); филграстим (например, №иродеп®); флоксуридин (например, Рикг®); флударабин (например, Р1икага®); фторурацилы, включая 5-РИ (например, АкгисП®); фулвестрант (например, Рак1окех®); гемцитабин (например, Оет/аг®); гемтузумаб/озогамицин (например, Му1о1агд®); гозерелин ацетат (например, 2о1акех®); гидроксимочевиной (например, Нукгеа®); ибритумомаб/тиукситан (например, 2емаПп®); идарубицин (например, Матует®); ифосфамид (например, 1Гех®); иматиниб мезилат (например, О1ееνес®); интерферон альфа-2а (например, КоГегоп-А®); интерферон альфа-2Ъ (например, 1п1гоп А®); иринотекан (например, СатрЮкаг®); летрозол (например, Ретага®); лейковорин (например, ХУеПсомогт®, Ьеисомогт®); левамизол (например, Егдапико1®); ломустин/ССNυ (например, СееВИ®); мехлоретамин/азотистый иприт (например, Мийагдеп®); мегестрол ацетат (например, Медасе®); мелфалан/Ь-РАМ (например, А1кегап®); меркаптопуринами, включая 6-МР (например, Риппе11ю1®); месна (например, Мекпех®); метотрексат; метоксален (например, Ьмакех®); митомицин С (например, Мн1атусш®, Мйо/уЦех®); митотан (например, Ьукокгеп®); митоксантрон (например,
ИомапЦопе®); нандролон фенпропионат (например, ОигаЪоПп-50®); нофетумомаб (например, Уег1ита®); опрелвекин (например, №итеда®); оксалиплатин (например, Е1охакп®); паклитаксел (например, Рахепе®, Тахо1®); памидронат (например, АгеШа®); пегадемазу (например, Акадеп®); пегаспаргазу (например, 0псакраг®); пегфилграстим (например, №и1ак1а®); пентостатин (например, №реп1®); пипоброман (например, Уегсу1е®); пликамицин/митрамицин (например, МйЬгасш®); порфимер натрия (например, РЬоМГгш®); прокарбазин (например, Ма1н1апе®); квинакрин (например, А1аЪгше®); расбуриказу (например, ЕМек®); ритуксимаб (например, Кйихап®); сарграмостим (например, Ргокше®); стрептозоцин (например, 2апокаг®); сунитиниб малат (например, 8н1еп1®); тальк (например, 8с1егоко1®); тамоксифен (например, №1макех®); темозоломид (например, Тетокаг®); тенипозид/УМ-26 (например, Уитоп®); тестолактон (например, Тек1ас®); тиагуанины, включая 6-ТО; тиотепа (например, ТЫор1ех®); топотекан (например, Нусаткп®); торемифен (например, РагекМп®); тозитумомаб (например, Веххаг®); трастузумаб (например, Негсеркп®); третиноин/АТКА (например, УекапоМ®); урацилиприт; валрубицин (например, Уа1к1аг®); винбластин (например, Уе1Ъап®); винкристин (например, 0псомт®); винорелбин (например, Иауе1Ъте®), а также золедронат (например, 2оте1а®).
В одном из примеров растворимую РН20, такую как екРН20, например пегилированную гНиРН20, вводят субъекту после, совместно или до введения одного или нескольких агентов, выбранных из доцетаксела (например, ТахоЮге®), липосомального доксорубицина (например, ИохП®), сунитиниб малата (например, 8йеп1®) или бевацизумаба (Ауаккп®).
Таким образом, растворимые полипептиды РН20 по настоящему документу могут быть использованы для лечения метастатического и не метастатического рака, включая различные виды рака со сниженной эндогенной гиалуронидазной активностью относительно активности в не раковых клетках. Гиалуронидаза может быть использована как химиотерапевтический агент для монотерапии или может быть использована в комбинации с другими химиотерапевтическими агентами. Примеры видов рака включают, но не ограничиваются, мелкоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак легкого, рак молочной железы, яичников, головы и шеи или любые другие виды рака, связанные с понижением гиалуронидазной активности или уменьшением катаболизма гиалуроновой кислоты.
Ъ) Применение для лечения накопления гликозаминогликанов в мозге.
Уровень гиалуроновой кислоты повышен при ряде патологических состояний спинного мозга. Уровень гиалуроновой кислоты в спинном мозге взрослых людей составляет, как правило, менее 200 мкг/л (ЬаигеШ е1 а1. (1996), Ас1а №иго1 §сапк 8ер1етЪег, 94(3):194-206), однако содержание гиалуронана может
- 55 022752 повыситься более чем до 8000 мкг/л при таких заболеваниях, как менингит, стеноз позвоночного канала, черепно-мозговая травма и инфаркт головного мозга. При критически повышенном уровне субстрата для его разрушения могут быть использованы гиалуронидазы, такие как, например, растворимая гНиРН20.
Отсутствие эффективной лимфатической системы в мозге также может привести после травмы головы к опасным для жизни отекам. Накопление гиалуроновой кислоты является результатом увеличения ее синтеза гиалуронансинтазой и уменьшения ее деградации. Накопление гиалуроновой кислоты изначально может играть позитивную роль, увеличивая содержание воды в поврежденных тканях, облегчая тем самым экстравазацию лейкоцитов, но продолжение процесса накопления может привести к летальному исходу. Введение страдающему от травмы головы пациенту гиалуронидазы, например интратекально или внутривенно, может привести к удалению гиалуроновой кислоты и связанной с ней накопленой воды из ткани.
Растворимая РН20 также может быть использована при лечении связанного с опухолями головного мозга отека, в частности, связанного с полиморфной глиобластомой отека. Связанные с опухолями головного мозга отеки являются результатом накопления гиалуроновой кислоты в незлокачественных областях мозга, прилежащих к опухоли. Введение растворимой гиалуронидазы РН20 в область накопления гиалуроновой кислоты (например, путем внутривенной инъекции или через шунт) может уменьшить связанный со злокачественными новообразованиями отек за счет разрушения избытка гиалуроновой кислоты в месте введения.
с) Применение в лечении накопления гликозаминогликанов при сердечно-сосудистых заболеваниях.
Растворимая гиалуронидаза РН20 может быть использована для лечения некоторых сердечнососудистых заболеваний. Введение гиалуронидазы животным после экспериментального инфаркта миокарда может уменьшить размер инфаркта (Мас1еап, е! а1. (1976), δ№ιη^, 194(4261):199-200). Одним из предложенных механизмов, объясняющих наблюдаемое явление, является уменьшение количества гиалуроновой кислоты, накопление которой происходит после ишемии-реперфузии. Уменьшение затронутой инфарктом области, как полагают, происходит за счет увеличения лимфодренажа, усиления оксигенации тканей и восстанавления содержания воды в миокарде.
Растворимые гиалуронидазы РН20 также могут быть использованы для разрушения коронарных атеросклеротических бляшек. В таких бляшках происходит накопление гликозаминогликанов, что опосредует адгезию макрофагов и пенных клеток (Ко1ойд1е е! а1. (2002), Лг1егю8с1ег ТНготЪ. Уавс. Вю1. 22(10):1642-8).
й) Применение в витрэктомии и для лечения офтальмологических нарушений и состояний.
Гиалуронидаза, такая как растворимая РН20, может быть использована для минимизации отслоения или разрыва сетчатки во время витрэктомии. Применение гиалуронидазы может привести, например, к отделению или отслоению стекловидного тела от сетчатки до удаления стекловидного тела. Такое отслоение сетчатки или отделение стекловидного тела могут свести к минимуму вероятность того, что при удалении стекловидного тела произойдет дальнейший разрыв или отделение сетчатки.
Гиалуронидаза, такая как растворимая РН20, может быть использована в офтальмологии для различных целей, например, как вспомогательное средство при витрэктомии, как описано в патенте США № 5292509. С точки зрения минимизации иммуногенности и токсичности применение высокоочищенной гиалуронидазы, такой как, например, растворимая РН20 по настоящему документу является предпочтительным при внутриглазном введении.
Растворимая гиалуронидаза РН20 может быть использована для лечения и/или предотвращения офтальмологических расстройств, например предотвращения образования новых сосудов и увеличения скорости клиренса токсичных для сетчатки материалов из стекловидного тела. Растворимую гиалуронидазу РН20 можно вводить в количестве, эффективном для разжижения стекловидного тела глаза, не вызывая при этом токсического повреждения глаза. Разжижение стекловидного тела увеличивает скорость обмена жидкости из глазной камеры. Указанное усиление обмена приводит к удалению загрязняющих агентов, присутствие которых может привести к повреждению глаза и сетчатки.
Растворимую гиалуронидазу РН20 также можно использовать для уменьшения внутриглазного давления после операции. Гиалуроновую кислоту использовали в офтальмологии в первую очередь для защиты тканей глаза во время удаления катаракты и имплантации искусственного хрусталика. Гиалуроновую кислоту также применяли для других глазных хирургических процедур, таких как лечение глаукомы, хирургия стекловидного тела и сетчатки, трансплантация роговицы. Частым побочным эффектом, проявляющимся у пациентов после удаления катаракты, является быстрое и иногда длительное повышение внутриглазного давления. Такое состояние иногда может привести к серьезным последствиям особенно у пациентов с вызванными глаукомой изменениями слепого пятна. Для уменьшения послеоперационного глазного давления гиалуронидазу, такую как растворимая РН20, можно вводить одновременно с гиалуроновой кислотой до операции на глазе. Гиалуронидазу вводят в эффективном для снижения внутриглазного давления до предоперационного уровня количестве, давление снижается за счет разрушения гиалуроновой кислоты, что не уменьшает ее эффективность во время операции и не вызывает побочных эффектов у пациента (патент США № 6745776).
- 56 022752
Растворимую гиалуронидазу РН20 также можно вводить пациентам с глаукомой для удаления гликозаминогликанов из трабекулярной сети и снижения внутриглазного давления, фермент можно нанести на стекловидное тело, что может содействовать рассасыванию кровоизлияния в стекловидном теле (т.е. выходу крови из сосуда в стекловидное тело), которое может произойти в связи с такими состояниями, как диабетическая ретинопатия, неоваскуляризация сетчатки, закупорка вен сетчатки, заднее отслоение стекловидного тела, разрыв сетчатки, травма глаза и т.п. Наличие кровоизлияния в стекловидное тело, которое рассасывается обычно очень медленно, может затянуть, осложнить или исключить возможность проведения процедуры, требующей осмотра сетчатки через стекловидное тело для диагностики и/или терапевтических процедур, такой как лазерная фотокоагуляция и т.п., которые часто являются первыми методами лечения для таких состояний, как пролиферативная диабетическая ретинопатия.
е) Применение при гиподермоклизе.
Гиподермоклиз, вливание жидкости и электролитов в подкожную клетчатку, является полезной и простой методикой гидратации, подходящей для лечения взрослых пациентов с легким и средним обезвоживанием, особенно пожилых людей. Хотя данная процедура считается безопасной и эффективной, наиболее часто проявляющимся побочным эффектом является умеренный подкожный отек, который можно лечить с помощью массажа или системных диуретиков. В течение 24 ч в два отдельных сайта можно ввести приблизительно 3 л жидкости. Обычно места инфузии включают грудь, живот, бедра и предплечья. Используемые для гиподермоклиза растворы включают, например, изотонический раствор, полуизотонический раствор, изотонический раствор с глюкозой и 5% раствор глюкозы. К раствору также может быть добавлен хлористый калий. Добавление гиалуронидазы, такой как растворимая РН20, к раствору может усилить поглощение жидкости и повысить общую скорость введения.
£) Применение для генной терапии.
Эффективность большинства средств доставки генов ш У1уо не соответствует эффективности, наблюдаемой ш у1Тго. Гликозаминогликаны могут помешать передаче и проникновению ДНК и вирусных векторов во множество типов клеток. Такие преграды, как материал внеклеточного матрикса, могут значительно помешать процессу. Введение гиалуронидазы, такой как растворимая РН20, может открыть каналы во внеклеточном матриксе, тем самым способствуя доставке агентов генной терапии. Например, для облегчения трансдукции ДНК ш У1уо растворимая РН20 может быть введена совместно с коллагеназой (ОиЬеп8ку еТ а1. (1984), Ргос. №Н. Асай. 8сй И8А, 81(23):7529-33). Гиалуронидазы также могут способствовать генной терапии с применением аденоассоциированных вирусов (Рауге еТ а1., (2000), Оепе ТЬегару, 7(16):1417-20). Размер образовавшихся после введения гиалуронидазы каналов позволяет усилить диффузию таких частиц, как ретровирусы, аденовирусы, аденоассоциированные вирусы и ДНКкомплексы (как и другие интересующие терапевтические и фармакологические агенты). Поры, однако, не настолько велики, чтобы содействовать перемещению и движению клеток.
В некоторых примерах могут быть разработаны вирусы, экспрессирующие для облегчения их репликации и распространения в ткани-мишени гиалуронидазу, такую как растворимая РН20. Ткань-мишень может представлять собой, например, раковую ткань, и вирус может быть способен селективно реплицироваться внутри опухоли. Вирус также может представлять собой нелитический вирус, способный селективно реплицироваться под контролем тканеспецифического промотора. При репликации вируса коэкспрессия гиалуронидазы с вирусными генами может способствовать распространению вируса ш У1уо.
д) Косметическое применение.
Гиалуронидазы, такие как растворимая РН20, можно вводить для удаления гликозаминогликанов, участвующих в накоплении целлюлита, и для содействию лимфотоку. Например, растворимая РН20 может быть использована для лечения целлюлита. Гиалуронидазы можно вводить многократными подкожными инъекциями, с помощью трансдермальной доставки в виде мазей или кремов, либо с применением инъекционных композиций с замедленным высвобождением, что будет содействовать постоянной деградации гликозаминогликанов и не допускать их повторного накопления.
Гиалуронидаза, такая как растворимая РН20, также может быть использована для лечения таких состояний как отек типа свиная кожа или отек типа апельсиновой корки. Гиалуронидаза может вызвать деполимеризацию длинных мукополисахаридных цепей, которые могут накапливаться в дерме и которые отвечают за удержание связанной воды и замедление за счет капиллярного сжатия диффузии жидкостей организма, которые устраняют отходы метаболизма. Такая задержка воды и отходов связана с перегрузкой жиром липоцитов и представляет собой классический отек типа свиная кожа или отек типа апельсиновой корки. В процессе деполимеризации длинные цепочки мукополисахаридов могут быть фрагментированы на более короткие цепи, что приведет к удалению связанной воды и отходов и восстановлению венозной и лимфатической циркуляции, что приведет к исчезновению местных отеков.
Ь) Применение при трансплантации органов.
Содержание гиалуроновой кислоты в органе может увеличиться с воспалением. Повышение концентрации гиалуроновой кислоты наблюдается в тканях различных органов, характеризующихся воспалительно-иммунологическим состоянием, таким как альвеолит (№Т1е1Ь1айТ еТ а1. (1991), Ат. Кеу. Ке8р. Όΐ8. 139:759-762) и инфаркт миокарда (Аа1йеп8Тгот еТ а1. (1991), I. Сйп. 1пуе8Т. 88(5):1622-1628). Другие примеры включают отторжение аллотрансплантата после трансплантации почек (На11дгеп еТ а1. (1990), ί.
- 57 022752
Ехр. МеД. 171:2063-2076; \Уе115 е! а1. (1990), Тгап§р1ап1аДоп, 50:240-243), тонкой кишки (^а11апДег е! а1. (1993), Тгап8р1ай. НИ. 6:133-137) или сердца (На11дгеп е! а1. (1990), 1. С1ш. 85:668-673), а также воспаление миокарда вирусного происхождения (\Уа1Деп51гот е! а1. (1993), Еиг. 1. С1ш. 23:277282). Появление интерстициального отека в связи с пересадкой органа представляет серьезную проблему в области трансплантационной хирургии. Трансплантат с интерстициальным отеком может набухать до такой степени, что его функция будет временно потеряна. В некоторых случаях разбухание может привести к нарушению функции почек, что приводит к крупному кровотечению. Гиалуронидазы, такие как растворимые РН20, могут быть использованы для разрушения накопленных гликозаминогликанов в пересаженном органе. Удаление таких гликозаминогликанов способствует удалению воды из трансплантата и таким образом способствует функционированию органа.
ί) Применение при заболевании легких.
Уровень гиалуроновой кислоты в бронхоальвеолярном лаваже (БАЛ) здоровых людей, как правило, ниже 15 нг/мл. Уровень гиалуроновой кислоте в БАЛ резко растет в условиях дыхательной недостаточности (В_)егтег е! а1. (1987), Вг. МеД. 1. (С1ш. Кек. ЕД.), 295 (6602):803-6). Повышенный уровень гиалуроновой кислоты в легких может помешать диффузии кислорода и газообмену, а также активировать ответов нейтрофилов и макрофагов. Чтобы уменьшить уровень гиалуронана, очищенные препараты растворимой РН20, такой как любая РН20 по настоящему документу, могут быть доставлены пациентам с такими состояниями легочно или внутривенно. Гиалуронидазу, такую как растворимая РН20, также можно вводить пациентам, страдающим от других легочных осложнений, связанных с повышенным уровнем гликозаминогликанов, также гиалуронидазу можно вводить для улучшения доставки других совместно вводимых молекул в легкие.
3. Другие области применения.
В других примерах терапевтического применения гиалуронидазу, такую как растворимая РН20, в том числе екРН20 по настоящему документу, можно использовать в качестве антидота от местного некроза, вызванного околовенозной инъекцией некротического вещества, такого как алкалоиды винка (Рете е! а1. (1987), Атег. 1. Ма1егп. СЫ1Д. Шгю 12, 23-26), для лечения ганглиозной кисты (Раи1 е1 а1. (1997), 1. НапД 8иг§. 22 (2):219-21) и лечения некроза тканей из-за венозной недостаточности (Е1Дег е1 а1. (1980), Ьапсе! 648-649). Растворимая РН20 также может быть использована для лечения ганглиозной кисты (также известной как киста запястья, киста библии или дорсальная киста сухожилия), которая является наиболее распространенной опухолью мягкой ткани руки и представляет собой заполненный жидкостью объем, который можно почувствовать под кожей.
Гиалуронидазы, такие как растворимая РН20, могут быть использованы при лечении травм спинного мозга для разрушения протеогликана хондроитинсульфата (С8РО). После травмы спинного мозга астроциты формируют глиальные рубцы, содержащие С8РО. С8РО играет решающую роль в торможении роста аксонов. Кроме того, было показано, что после травмы центральной нервной системы (ЦНС) также происходит увеличение экспрессии С8РО. Растворимую РН20 также можно использовать для лечения грыжи межпозвоночного диска с помощью хемонуклеолиза. Хондроитиназа АВС, представляющая собой фермент, расщепляющий субстраты, аналогичные субстратам гиалуронидазы, может уменьшить внутридисковое давление в поясничном отделе позвоночника. Выделено три типа травм межпозвоносных дисков. Грыжа межпозвоночного диска относится к тому типу травмы, при котором диск не поврежден, но деформирован вздутием. При экструдированном диске его волокнистая оболочка порвана, и студенистое ядро диска выступило наружу, но все еще соединено с диском. При поглощенном диске фрагмент студенистого ядра оторван от диска и свободно перемещается в спинномозговом канале. Хемонуклеолиз, как правило, эффективен при экструдированном диске и грыже диска, но не при поглощенном диске.
I. Примеры.
Следующие примеры приведены в иллюстративных целях и не предназначены для ограничения объема изобретения.
Пример 1. Получение укороченных с С-конца мутантов человеческой гиалуронидазы РН20.
Получена серия укороченных с С-конца мутантов человеческой гиалуронидазы РН20. Зрелая человеческая гиалуронидаза РН20 или молекула адгезии сперматозоидов 1 (8РАМ1) содержит 474 аминокислоты, в то время как получаемый по этому примеру зрелый укороченный с С-конца мутант включает в длину от 472 до 415 аминокислот.
ДНК-олигонуклеотиды, кодирующие усеченные с аминокислоты А507 до аминокислоты К450 с С-конца мутанты человеческой гиалуронидазы РН20, были синтезированы в соответствии со стандартными протоколами синтеза ДНК.
Исходная последовательность ДНК представляла собой кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность человеческой гиалуронидазы РН20, приведенную в 8ЕЦ ГО N0: 2. Указанная последовательность человеческой гиалуронидазы РН20 с оптимизированными кодонами содержала гетерологичную сигнальную последовательность иммуноглобулина каппа (ЮК), приведенную в 8ЕЦ ГО N0: 144. Кроме того, для клонирования в плазмиду Н224 последовательности содержали 5' N1^ и 3' ВатШ сайты рестрикции (8ЕЦ ГО N0: 140). Нуклеотидные последовательности укороченных с С-конца мутантов че- 58 022752 ловеческой гиалуронидазы РН20 приведены в 8Е0 ГО ΝΟ8: 146-185 и 199-201. Для получения индифидуальных клонов содержащих мутанта плазмид 8РАМ1-Н224 синтетические последовательности ДНК расщепляли эндонуклеазами рестрикции NЬеI и ВатШ и клонировали в расщепленную теми же ферментами плазмиду Н224.
Укороченные с С-конца мутанты человеческой гиалуронидазы РН20 приведены в табл. 3. Мутанты 8РАМ1 идентифицировали по 4 аминокислотам на С-конце белка. В таблице также приведены длины (в аминокислотах) предшественников и зрелых укороченных с С-конца мутантов.
Таблица 3
Укороченные с С-конца мутанты человеческой гиалуронидазы РН20
Мутант Предшественник (аминокислоты) Предшественник ЗЕС? ГО ΝΟ Зрелый пептид (аминокислоты) Зрелый пептид ЗЕр ГО ΝΟ
ЗРАМ1-УА51. 509 1 474 108
ЗРАМ1-85УА 507 3 472 55
8РАМ1-Н83 505 4 470 56
8РАМ1-РЫ1 503 5 468 57
8РАМ1-ЬРЫ 502 47 467 99
ЗРАММЬРЬ 501 6 466 58
8РАМ1-ЗГОР 500 48 465 100
8РАМ1-У8ГО 499 7 464 59
5РАМ1-1У51 498 49 463 101
ЗРАМ1-Р1УЗ 497 8 462 60
3ΡΑΜ1-ΤΜΡΙ 495 9 460 61
ЗРАМ1-8АТМ 493 10 458 62
8РАМ1-ТЬ8А 491 11 456 63
8ΡΑΜ1-Ρ3ΊΈ 489 12 454 64
ЗРАМ1-ЗТЬ8 490 13 455 65
8РАМ1-А8РЗ 487 14 452 66
5ΡΑΜ1-ΥΝΑ5 485 15 450 67
- 59 022752
8ΡΑΜ1-ΡΥΝΑ 484 16 449 68
5ΡΑΜ1-ΙΡΥΝ 483 17 448 69
5ΡΑΜ1Α3ΙΡΥ 482 18 447 70
δΡΑΜΙ-ΡφΙΡ 481 19 446 71
5ΡΛΜΡΕΡ9Ι 480 20 445 72
8РАМ1-ЕЕРО 479 21 444 73
8РАМ1-ТЕЕР 478 22 443 74
5РАМ1-ЕТЕЕ 477 23 442 75
8РАМ1-МЕТЕ 476 24 441 76
5РАМ1-РМЕТ 475 25 440 77
8РАМ1-РРМЕ 474 26 439 78
8РАМ1-КРРМ 473 27 438 79
КРАМ1-РКРР 472 28 437 80
ЗРАМЬРЬКР 471 29 436 81
ЗРАМЬАРЬК 470 30 435 82
5ΡΑΜΙ-ϋΑΙΤ_ 469 31 434 83
8РАМ1-ЮАР 468 32 433 84
8РАМ1-СГОА 467 33 432 85
8РАМ1-УСГО 466 34 431 86
5РАМ1-СУС1 465 35 430 87
5РАМ1-ОСУС 464 36 429 88
8 РАМ 1-1А П(г 462 37 427 89
8РАМ1-УС1А 460 38 425 90
8РАМ1-УОУС 458 39 423 91
8РАМ1-ОАУО 456 40 421 92
3ΡΑΜΙΌΤΟΛ 454 41 419 93
δΡΑΜί-νκϋτ 452 42 417 94
δΡΑΜΙ-ΑΡΥΚ 450 43 415 95
Пример 2. Экспрессия укороченных с С-конца мутантов человеческой гиалуронидазы РН20.
Сконструированные в примере 1 укороченные с С-конца мутанты человеческой гиалуронидазы РН20 экспрессировали в клетках ΜΟ-δ. Кроме того, гНиРН20 и РН20 с Нй-метками экспрессировали в каждом из четырех штаммов устойчивых к лектину мутантов СΗΟ, включая Ьес1 (№ СКЬ-1735, ΑΤСС), Ьес2 (№ СКЬ-1736, ΑΤСС), Ьес8 (№ СКЬ-1737, ΑΤСС) и Рго-5 (№ СКЬ-1781). Экспрессия РН20 в мутантных клетках Ьее более подробно описана в примере 9.
A. Временная экспрессия в клетках СΗΟ-δ в 6-луночных планшетах.
Сконструированные в примере 1 плазмиды РН20-Н224, содержащие мутантный ген, временно трансфицировали в клетки СΗΟ-δ (производные клеток яичников китайского хомячка СΗΟ К1) с помощью Сеие 1и1се® (№уадеи) в соответствии с инструкциями производителя. Клетки СΗΟ-δ культивировали в СО СΗΟ среде, дополненной Ь-глутамином. До трансфекции СΗΟ-δ клетки высевали на 6луночные планшеты при плотности приблизительно 5х105 клеток на лунку и выращивали в течение ночи при температуре 37°С и 5% ί'.’Ο2. Среду удаляли и ΜΟ-δ клетки промывали 2 раза 1 мл бессывороточной среды. Сеие1и1се® смешивали с бессывороточной средой с последующим добавлением 2 мкг ДНК мутантной Н224. После инкубации при комнатной температуре в течение 5-15 мин смесь Сеие1и1се®/ДНК добавляли по каплям в лунки, содержащие отмытые СΗΟ-δ клетки. Через 4 ч среду заменяли на 1 мл ί'.'Ό-ί'.ΉΟ среды, дополненной Ь-глутаминой, и клетки инкубировали в течение 72 ч при температуре 37°С и 5% ί'.’Ο2. После экспрессии среду и клетки собирали отдельно.
B. Транзиентная экспрессия в клетках СΗΟ в 10 см культуральных чашках.
Сконструированные в примере 1 плазмиды РН20-Н224, содержащие мутантный ген, временно трансфицировали в клетки СΗΟ-δ с помощью Сеие1шсе® (Nоνадеи) в соответствии с инструкциями производителя. Кроме того, Н224-РН20 (δΕφ ΙΌ ΝΟ: 108, кодирующая гНиРН20), РН20 Н1к (δΕφ ΙΌ ΝΟ: 187, кодирующая РН20 с Нй-меткой) и Н224-Ми1 (Β/δ) (δΕφ ΙΌ ΝΟ: 122, кодирующая укороченную до аминокислоты 482 РН20) временно трансфицировали в четыре штамма устойчивых к лектину мутантов ί'.ΉΟ. включая Ьес1 (№ СКЬ-1735, ΑΤСС), Ьес2 (№ СКЬ-1736, ΑΤСС), Ьес8 (№ СКЬ-1737, ΑΤСС) и Рго-5 (№ СКЬ-1781), используя Сеие1шсе® (Nоνадеи) в соответствии с инструкциями производителя.
Клетки СΗΟ-δ культивировали на ί'.'Ό-ί'.ΉΟ среде, дополненной 8 мМ С1и!аМах. Устойчивые к лектину мутанты клеток СΗΟ выращивали в среде ΌΜΕΜ с добавлением 10% ФБС. До трансфекции клетки СΗΟ высевали в 10 см чашки для культивирования клеток при плотности 3х106 клеток на лунку и выра- 60 022752 щивали в течение ночи в среде ЭМЕМ с добавлением 10% ФБС при 37°С и 5% СО2. Среду удаляли и монослой клеток промывали 2 раза 10 мл бессывороточной среды. 36 мкл Сепе1шсе® смешивали с 1,2 мл ЭМЕМ и инкубировали при комнатной температуре в течение 5 мин. После инкубации к смеси добавили 12 мкг ДНК и осторожно перемешали. После инкубации при комнатной температуре в течение 15 мин смесь Сепе 1шсе®/ДНК по каплям добавляли к монослою клеток СНО, после чего культуральную чашку осторожно покачали для перемешивания содержимого. Чашку инкубировали в течение 4 ч при температуре 37°С и 5% СО2. Через 4 ч среду заменяли на 12 мл СО ЭС44 среды без детергента, дополненной С1и!ашах-1, и клетки инкубировали в течение 48 ч при 37°С и 5% СО2. После экспрессии отдельно собирали среду и клетки.
Пример 3. Растворимость укороченных с С-конца мутантов человеческой гиалуронидазы РН20.
В этом примере после транзиентной экспрессии, описанной в примере 2 выше, среду и клетки отдельно собирали и анализировали на экспрессию и растворимость РН20 с помощью Вестерн-блоттинг анализа. Растворимость укороченных с С-конца мутантов определяли по локализации экспрессированного белка в культуральной среде или в клетках. Укороченные с С-конца мутанты длиной от 455 до 472 аминокислот, приведенные в 8ЕЦ ГО NΟ: 55-65 и 99-101, содержат аминокислотные остатки СР1-якоря, которые служат для прикрепления белка к клеточной мембране. Клетки, экспрессирующие такие мутанты, обрабатывали фосфоинозитол-фосфолипазой С (Р1-РБС), которая расщепляет СР1-якорь, высвобождая растворимый белок в среду, затем наличие РН20 в полученной среде и клетках определяли методом Вестерн-блоттинг анализа.
A. Вестерн-блот анализ.
Не подвергнутые восстановлению образцы разделяли в 4-20% Трис-глициновом геле и переносили на РУЭР мембрану с помощью 1В1о! (ЧпуПгодеп). Для иммуноблоттинга в качестве первичных антител использовали кроличьи анти-РН20 1дС (0,5 мкг/мл), в качестве вторичных антител использовали НКРконъюгаты козьих антител против 1дС кролика (0,1 нг/мл, # ЭС03Е. ЕМЭ). Наличие экспрессии определяли по полосе, соответствующей приблизительно 66 кДа, что соответствует рекомбинантной человеческой гиалуронидазе РН20.
B. Обработка Р1-РБС.
1. Транзиентная экспрессия в 6-луночных планшетах.
После экспрессии гНиРН20 в клетках СНО-8 в течение 72 ч, как описано в примере 2А выше, отдельно собирали среду и клетки. Клетки промывали бессывороточной средой, затем в каждую лунку добавляли по 2 мл бессывороточной среды. Р1-РБС (0,5 ед/лунку) добавляли в каждую лунку и клетки инкубировали с Р1-РБС в течение 2 ч. Полученные среду и клетки анализировали с помощью Вестернблоттинг анализа, как описано выше.
2. Транзиентная экспрессия в 10 см культуральных чашках.
Для каждого укороченного с С-конца мутанта два планшета заполняли экспрессирующими гНиРН20 СНО-8 клетками, как описано выше в примере 2В, один планшет обрабатывали Р1-РБС, а другой не обрабатывали Р1-РБС. После экспрессии в течение 48 ч отдельно собирали не обработанные Р1РЬС клетки и среду. Собранную среду центрифугировали, концентрировали до объема 10 мл и буфер заменяли на РВ8 с помощью концентратора Анисом с пределом исключения по молекулярной массе (М^СО) 30 кД. Клетки промывали холодным РВ8, собирали и ресуспендировали в 1,2 мл РВ8 с ингибитором протеазы III (по каталогу № 539134, Са1ЪюсЬет). Для получения цельноклеточного экстракта ресуспендированные клетки быстро обрабатывали ультразвуком. Для обработки клеток Р1-РБС после экспрессии в течение 48 ч сначала, как описано выше, собирали необработанную среду. Клетки один раз промывали свежей средой СО ЭС44 с С1и(атах-1, и среду заменяли на 12 мл свежей свободной от детергента среды СО ЭС44, дополненной С1и!атах-1 с 3,0 единицами Р1-РБС на чашку, затем клетки инкубировали в течение 2 ч при 37°С и 5% СО2. Через 2 ч среду с Р1-РБС и клетки собирали отдельно, как описано выше. Полученные необработанные среду и клетки и обработанные Р1-РБС среду и клетки анализировали методом Вестерн-блоттинг, как описано выше.
C. Результаты.
Результаты представлены в табл. 4. Четыре мутанта, ГОРБ (8ЕЦ ГО NΟ: 58), 8ГОР (8ЕЦ ГО NΟ: 100), У81Ь (8ЕЦ ГО NΟ: 59) и 1У81 (8ЕЦ ГО NΟ: 101), характеризовались низкой экспрессией РН20. Анализ методом Вестерн-блоттинг показал, что укороченные с С-конца по меньшей мере до Р500 мутанты человеческой гиалуронидазы РН20 (8ЕЦ ГО NΟ: 59-95 и 100-101) экспрессируются в среду, о чем свидетельствует полоса, соответствующая белку массой приблизительно 66 кДа. Укороченные с С-конца мутанты человеческой гиалуронидазы РН20, заканчивающиеся между Б501 и А507 (8ЕЦ ГО NΟ: 55-58 и 99), экспрессируются и накапливаются в клетках. После обработки клеток Р1-РБС человеческая гиалуронидаза РН20 секретируется в среду, о чем свидетельствует полоса, соответствующая белку массой приблизительно 66 кДа. Обработка Р1-РБС клеток, экспрессирующих укороченные с С-конца мутанты человеческой гиалуронидазы РН20, соответствующие 8ЕЦ ГО NΟ: 59-65 и 100-101, не оказывает никакого эффекта, так как эти белки первоначально экспрессируются в среду.
- 61 022752
Таблица 4
Экспрессия укороченных с С-конца мутантов человеческой гиалуронидазы РН20
Мутант Зрелый белок (аминокислот) Экспрессия белка Экспрессия в среду Экспрессия в среду после обработки ΡΙ-ΡΙΧ
5РАМ1-УАЗЬ (8ЕЦ ГО N0:108) 474 да нет да
5РАМ1-83УА (8Εζ> ГО N0:55) 472 да нет да
3ΡΑΜΜΙ83 (5ЕС?ГО№):56) 470 да нет да
ЗРАМ1-РЫ1 (5Εζ)ΙϋΝΟ:57) 468 да нет да
δΡΑΜΙ-ЬРЫ (ЗЕр ГО N0:99) 467 да нет да
ЗРАМ1-ГОРЬ (5Е<2 ГО N0:58) 466 слабая нет да
5РАМ1-8ГОР (ЗЕф ГО N0:100) 465 слабая слабая/да первоначально в среду
5РАМ1-У51Ь |ЗЕр ГО N0:59) 464 слабая да первоначально в
8РАМ1-1У81 (ЗЕф ГО N0:101) 463 слабая да первоначально в среду
8РАМ1-Р1УЗ (ЗЕр ГО N0:60) 462 да да первоначально в среду
3ΡΑΜ1-ΤΜΡΙ (ЗЕр ГО N0:61) 460 да да первоначально в среду
ЗРАМ1-ЗАТМ (ЗЕр ГО N0:62) 458 да да первоначально в среду
5ΡΑΜ1-ΤΈ5Α (ЗЕр ГО N0:63) 456 да да первоначально в среду
5РАМ1-8ТЕ8 (ЗЕф ГО N0:65) 455 да да первоначально в среду
ЗРАМЙРЗТЬ (ЗЕО ГО N0:64) 454 да да первоначально в среду
5РАМ1-А8Р5 (ЗЕО ГО N0:66) 452 да да нет данных
5ΡΑΜ1-ΥΝΑ3 (ЗЕО ГО N0:67) 450 да да нет данных
8ΡΑΜ1-ΡΥΝΑ (ЗЕО ГО N0:68) 449 да да нет данных
8ΡΑΜ1-ΙΡΥΝ (ЗЕО ГО N0:69) 448 да да нет данных
8ΡΑΜ1-0ΙΡΥ (ЗЕО ГО N0:70) 447 да да нет данных
5ΡΑΜ1-Ρ0ΙΡ (ЗЕО ГО N0:71) 446 да да нет данных
3ΡΑΜ1-ΕΡ0Ι (ЗЕО ГО N0:72) 445 да да нет данных
ЗРАМ1-ЕЕР0 (ЗЕО ГО N0:73) 444 да да нет данных
- 62 022752
5РАМ1-ТЕЕР (8Е<5 ГО N0:74) 443 да да нет данных
8РАМ1-ЕТЕЕ (8Еф Ю N0:75) 442 да да нет данных
ЗРАМ1-МЕТЕ (ЗЕО ГО N0:76) 441 да да нет данных
8РАМ1-РМЕТ (8Е0 ГО N0:77) 440 да да нет данных
ЗРАМ1-РРМЕ (ЗЕО ГО N0:78) 439 да да нет данных
8РАМ1-КРРМ (8ΕφΙϋΝΟ:79) 438 да да нет данных
δΡΑΜΙ-ЬКРР (ЗЕО ГО N0:80) 437 да да нет данных
8РЛМ1-РЕКР ;8ЕЦГО N0:81) 436 да да нет данных
5РАМ1-АРЬК (ЗЕС) ГО N0:82) 435 да да нет данных
8РАМ1-0АРЕ (5ΕΟΙΌΝΟ:83) 434 да да нет данных
5РАМ1-ЮАГ (ЗЕЦ ГО N0:84) 433 да да нет данных
ЗРАМ1-СГОА [ЗЕО ГО N0:85) 432 да да нет данных
ЗРАМ1-УСГО (ЗЕО ГО N0:86) 431 да да нет данных
3ΡΑΜ1-θνθΙ (ЗЕО ГО N0:87) 430 да да нет данных
ЗРАММЗОУС (ЗЕО ГО N0:88) 429 да да нет данных
ЗРАМ1-1А1ЭО (ЗЕО ГО N0:89) 427 да да нет данных
ЗРАМ1-УС1А (ЗЕО ГО N0:90) 425 да да нет данных
8РАМ1ЛГОУС (ЗЕО ГО N0:91) 423 да да нет данных
δΡΑΜΙ-ΏΑΥΌ (ЗЕО ГО N0:92) 421 да да нет данных
δΡΑΜΙ-ϋΤϋΑ (ЗЕО ГО N0:93) 419 да да нет данных
δΡΑΜΙ-νΚΏΤ (ЗЕО ГО N0:94) 417 да да нет данных
5ΡΑΜ1-Α0νΚ (ЗЕО ГО N0:95) 415 да да нет данных
Пример 4. Анализ растворимости укороченных с С-конца мутантов человеческой гиалуронидазы РН20 с помощью Тритон® Х-114.
В этом примере растворимость укороченных с С-конца мутантов человеческой гиалуронидазы РН20 оценивали с помощью анализа с Тритон® Х-114. В данном анализе растворимая гиалуронидаза РН20 переходит в водную фазу раствора Тритон® Х-114, нагретого до 37°С (модификация метода, как описано ВогЙ1ег е! а1. (1981), 1. Вю1. СНет., 256:1604-7), тогда как заякоренная в мембране гиалуронидаза РН20 переходит в богатую детергентом фазу.
Для проведения анализа к 200 мкл культуральной среды или клеточного экстракта, полученного, как описано в примере 3В выше, добавляли 2% (об./об.) раствора Тритон® Х-114 в РΒδ при 0°С и образцы инкубировали на льду. Для разделения в пробирке для микроцентрифугирования образец наносили на 30 мкл сахарозной подложки (6% мас./об.), содержащей 0,06% Тритон® Х-114 при температуре 4°С. Для разделения фаз образцы нагревали до 37°С в течение 3 мин и центрифугировали в течение 3 мин при 4000д при комнатной температуре. Водную и богатую детергентом фазы отбирали для анализа методом δΌδ-РАОЕ и Вестерн-блоттинг. В качестве первичных антител использовали кроличьи анти-РН20 1дО (0,5 мкг/мл), в качестве вторичных антител использовали НКР-конъюгаты козьих антител против 1дО кролика (0,1 нг/мл, # ΌΟ3Ε ЕМО). Полноразмерную человеческую РН20, которая распределяется преимущественно в богатую детергентом фазу, использовали в качестве контроля.
Результаты анализа растворимости укороченных с С-конца мутантов приведены в табл. 5. Укороченные не менее чем до Р500 с С-конца мутанты человеческой гиалуронидазы РН20 (предшественники приведены в δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 7-13 и 48-49 и зрелые пептиды приведены в ГО δΕΟ ΝΟ: 59-65 и 100-101) пере- 63 022752 ходят в водную фазу и, следовательно, являются растворимыми. Укороченные не более чем до Р500 с С-конца мутанты человеческой гиалуронидазы РН20 ШЕР ГО N0δ: 55-58 и 99) переходят в богатую детергентом фазу и не являются растворимыми. Полноразмерные РН20 также нерастворимы.
Таблица 5
Растворимость укороченных с С-конца мутантов человеческой гиалуронидазы РН20
Мутант 5Е£ ГО N0 Зрелый пептид (аминокислот) Растворимость
ЗРАМЕУАЗЕ 108 474 нет
ЗРАМ1-ЗЗУА 55 472 нет
8ΡΑΜ1-ΙΙ88 56 470 нет
ЗРАМ1-РЫ1 57 468 нет
8РАМ1-ЬРЫ 99 467 нет
ЗРАММЬГЕ 58 466 нет
ЗРАМЕЗГОР 100 465 да
ЗРАМЕУЗШ 59 464 да
8ΡΑΜ1-ΐνδΙ 101 463 да
8РАМ1-Р1У8 60 462 да
3ΡΑΜΕΤΜΡΙ 61 460 да
5РАМ1-8АТМ 62 458 да
ЗРАМЕТБЗА 63 456 да
ЗРАМЕРЗТБ 64 454 да
ЗРАМЕЗТБЗ 65 455 да
Пример 5. Гиалуронидазная активность укороченных с С-конца мутантов человеческой гиалуронидазы РН20.
Гиалуронидазную активность укороченных с С-конца мутантов человеческой гиалуронидазы РН20 оценивали с применением микротитровального анализа с биотинилированной гиалуроновой кислотой (биотинилированная ГК или бГК). Гиалуронидазную активность укороченных с С-конца мутантов человеческой гиалуронидазы РН20 исследовали при рН 7,4 и рН 5,5.
В 4х ВНХ 96-луночный планшет сорбировали биотинилированную ГК (1,1 МДа). Через 72 ч после трансфекции супернатант от клеток, трансфицированных укороченным с С-конца мутантом человеческой гиалуронидазы РН20, разводили в буфере с рН 7,4 или 5,5 и добавляли в отдельные лунки планшета, после чего инкубировали при 37°С в течение 90 мин. Реакцию останавливали добавлением 4 М гуанидин-НС1. Для удаления расщепленной биотинилированной ГК лунки промывали 4 раза солевым фосфатным буферным раствором с Т\уееп 20 (РВ8Т), затем в лунки добавляли стрептавидин-НРР и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Лунки промывали 4 раза РΒδТ и планшет обрабатывали ТМВ. Оптическую плотность раствора в лунках планшета определяли при 450 нм с помощью планшетного спектрофотометра для ИФА. Гиалуронидазную активность (в ед/мл) определяли путем интерполяции измеренного поглощения при 450 нм со стандартной кривой, полученной с использованием стандартного препарата гиалуронидазы. Полноразмерную зрелую человеческую гиалуронидазу РН20 и нетрансфицированные клетки СН0 использовали в качестве положительного и отрицательного контроля.
Результаты представлены в табл. 6 и 6А. Укороченные с С-конца до 1430 или более мутанты человеческой гиалуронидазы РН20, соответствующие вариантам от 8РАМ1-ОЭУС до 8РАМ1-АЭУК ШЕО ГО N0δ: 88-95), являются неактивными. Укороченные с С-конца до 1498 ШЕО ГО N0: 101), Ь499 ШЕР ГО N0: 59), Р500 (8Ер ГО N0: 100), Ь501 (8Ер ГО N0: 58) и 1502 (8Ер ГО N0: 99) мутанты человеческой гиалуронидазы РН20 обладают трудно обнаруживаемой активностью из-за низкого уровня экспрессии. Все остальные укороченные с С-конца мутанты человеческой гиалуронидазы РН20 (8ЕЦ ГО N0δ: 55-57 и 60-87) проявляют гиалуронидазную активность при рН 7,4 и 5,5.
- 64 022752
Г иалуронидазная активность
Таблица 6
Мутант с делецией Предшественник (аминокислот) Зрелый белок (аминокислот) Активность при рН 7,4 (единиц/мл) Активность при рН 5,5 (единиц/мл)
5РАМ1-83УА (ЗЕО ГО N0:55) 507 472 1,4715 1,125
3ΡΑΜ1-Ι153 (ЗЕО ГО N0:56) 505 470 1,458 0,837
ЗРАМ1-РЫ1 (ЗЕО ГО N0:57) 503 468 0,9405 0,6345
8РАМ1-П,РЬ (ЗЕО ГО N0:58) 501 466 0,0405 0,0405
ЗРАМ1-У81Ь (ЗЕ<3 ГО N0:59) 499 464 0,02025 0,045
8РАМ1-Р1У8 (ЗЕО ГО N0:60) 497 462 0,1755 0,216
5ΡΑΜ1-ΤΜΡΙ (ЗЕО ΙϋΝ0:61) 495 460 0,45 0,612
5РАМ1-5АТМ (ЗЕО ГО N0:62) 493 458 0,5715 0,7335
5РАМ1-ТЬ5А (ЗЕО ГО N0:63) 491 456 0,3645 0,5625
ЗРАМЕЗТЬЗ (ЗЕО ГО N0:65) 490 455 0,819 1,2375
ЗРАМЬРЗТЬ (ЗЕО ГО N0:64) 489 454 1,557 1,089
ЗРАМ1-А5Р5 (ЗЕО ГО N0:66) 487 452 1,017 0,9225
8ΡΑΜ1-ΥΝΑ5 (ЗЕО ГО N0:67) 485 450 1,8765 1,74825
- 65 022752
3ΡΑΜ1-ΡΥΝΑ (5ЕОГОЖ>:68) 484 449 1,4985 1,26225
5ΡΑΜ1-ΙΡΥΝ (КЕО ГО N0:69) 483 448 2,45025 2,3085
ΚΡΑΜ1-0ΙΡΥ (ЗЕО ГО N0:70) 482 447 2,03175 1,647
5ΡΑΜ1-Ρ0ΙΡ (ЗЕО ГО N0:71) 481 446 1,818 1,701
3ΡΑΜ1-ΕΡ0Ι (ЗЕО ГО N0:72) 480 445 2,1825 1,6425
ЗРАМ1-ЕЕР0 (ЗЕО ГО N0:73) 479 444 1,917 2,0745
8РАМ1-ТЕЕР (ЗЕО ГО N0:74) 478 443 1,764 1,584
5РАМ1-ЕТЕЕ (ЗЕО ГО N0:75) 477 442 2,088 2,0475
ЗРАМ1-МЕТЕ (ЗЕО ГО N0:76) 476 441 1,332 1,278
5РАМ1-РМЕТ (ЗЕО ГО N0:77) 475 440 2,223 2,0925
5РАМ1-РРМЕ (ЗЕО ГО N0:78) 474 439 1,2105 1,341
5РАМ1-КРРМ (ЗЕО ГО N0:79) 473 438 0,8595 0,91575
ЗРАМ1-ЬК.РР (ЗЕО ГО N0:80) 472 437 0,5445 0,9
ΚΡΑΜΙ-ΓΙ.ΚΡ (ЗЕО ГО N0:81) 471 436 3,321 2,79
ЗРАМ1-АРЕК (ЗЕО ГО N0:82) 470 435 3,204 2,925
5РАМ1ГОАРЬ (ЗЕО ГО N0:83) 469 434 2,3895 2,2365
5РАМ1-ГОАР (ЗЕО ГО N0:84) 468 433 0,5625 0,62775
ЗРАМ1-СГОА (ЗЕО ГО N0:85) 467 432 0,5535 0,4725
ЗРАМ1-УСГО (ЗЕО ГО N0:86) 466 431 0 0,2115
5РАМ1-0УС1 (ЗЕО ГО N0:87) 465 430 0,441 0,468
ЗРАМ1-00УС (ЗЕО ГО N0:88) 464 429 0 0,045
3ΡΑΜ1-ΙΑϋΟ (ЗЕО ГО N0:89) 462 427 0 0,00225
5РАМ1-УС1А (ЗЕО ГО N0:90) 460 425 0 0,0135
ЗРАМ1-УОУС (ЗЕО ГО N0:91) 458 423 0,0495 0,0585
5РАМ1ГОАУО (ЗЕО ГО N0:92) 456 421 0 0,0675
КРАМ1-ПТ0А (ЗЕО ГО N0:93) 454 419 0 0,054
КРАМ1-УК0Т (ЗЕО ГО N0:94) 452 417 0,054 0,0225
ЗРАМ1-АОУК (ЗЕО Ш N0:95) 450 415 0,063 | 0,0405
УАЗЕ (ЗЕО ГО N0:108) 509 474 1,8045 0,891
УАЗЬ + РЬС (ЗЕО ГО N0:108) 509 474 3,96 2,313
ΗΖ24-ΡΗ20 (ЗЕО ГО N0:109) 482 447 0,499 0,726188
СНО-З нет данных нет данных 0 0,012375
- 66 022752
Таблица 6А
Г иалуронидазная активность
Мутант с делецией Предшественник (аминокислот) Зредый белок (аминокислот) Активность при рН 7,4 (единиц/мл) Активность при рН 5,5 (единиц/мл)
5РАМ1-58УА (8ЕЦ ГО N0:55) 507 472 1,782 1,256
8РАМ1-1188 (8Е0 ГО N0:56) 505 470 1,863 0,932
8РАМ1-РЦ1 (8Е<?ГО№Э:57) 503 468 1,094 0,648
8РАМ1-ЬРЫ (5ЕЦ ГО N0:99) 502 467 0,608 0,324
8РАМ1-1ЕРЬ (8Ε01ϋΝΟ:58) 501 466 0,446 0,122
ЗРАМ1-8ЮР (8ЕО ГО N0:100) 500 465 0,365 0,162
8РАМ1-У8Ю (£Е(2 ГО N0:59) 499 464 0,486 0,122
δΡΑΜ1-ΐν5Ι (8Е0 ГО N0:101) 498 463 0,527 0,203
8ΡΑΜ1-Ρΐν8 (δΕΟΙϋΝΟ.όΟ) 497 462 0,365 0,162
8ΡΑΜ1-ΤΜΡΙ (8ΕΟΓϋΝΟ:61) 495 460 0,689 0,770
8ΡΛΜΙ-8ΑΤΜ (8Е0 ГО N0.62) 493 458 0,689 0,851
8ΡΑΜΙ-ΤΈ8Α (5Е0 ГО N0:63) 491 456 0,851 0,729
8РАМ1-РЗТЬ (5Е0 ГО N0:64) 489 454 1,985 3,321
5РАМ1-А8РЗ (8Е0 ГО N0:66) 487 452 1,134 1,580
Пример 6. Анализ гликана гНиРН20 с помощью ЬС-М8.
В этом примере с помощью масс-спектрального анализа расщепленного трипсином РН20 исследовали гликаны гНиРН20 (8ЕЦ ГО N0: 122).
гНиРН20 (полученный, как описано в примере 15С) лиофилизировали и ресуспендировали в буфере, содержащем 6 М гуанидин-НС1, 0,002 М ЭДТА и 0,02 М Трис, с рН 8,28 до конечной концентрации 0,5 мг/мл. К раствору добавляли ΌΤΤ (конечная концентрация 10 мМ) и смесь белок/ΌΤΤ инкубировали в течение 1 ч при температуре 37°С. После восстановления к раствору добавляли иодацетамид до конечной концентрации 20 мМ. Наконец, к раствору добавляли трипсин (1:25 по массе) и смесь инкубировали в течение 20 ч при температуре 37°С.
Расщепленный трипсином препарат анализировали методом ЬС-М8. Расщепленный трипсином препарат загружали на обратно-фазную колонку С18, как описано в табл. 7. Данные анализа М8 получали с помощью масспектрометра Ο-Τ0Γ и1бта с ионизацией электрораспылением (Е81) в режиме положительно заряженных ионов. Данные получали для т/ζ 200-1950 в режиме М8. Для определения типа гликана гликопептиды анализировали с помощью программного обеспечения ^γ^Μο6 (\υ\υ\υ^\|ρ·15υ^1ι/Ιοο15/§1\όοπιο6/).
Таблица 7
Параметры и настройки ЬС-М8
Параметры Настройки
Колонка РЬепотепех 5упегд1 Нубго-КР
Температура колонки зо°с
Подвижная фаза А деионизировги муравьиной кг гнал вода, сод< [СЛОТЫ ;одержащий 0,2 ;ржащая 0,2%
Подвижная фаза В ацетонитрил, < кислоты % муравьиной
Градиент время (мин) %А %В
0,0 97,0 3,0
5,0 97,0 3,0
144,0 60,0 40,0
150,0 10,0 90,0
160,0 10,0 90,0
161,0 97,0 3,0
180,0 97,0 3,0
Скорость потока через колонку 0,2 мл/мин
Объем нанесения 5 мкл
Время разделения (общее) 180 минут
- 67 022752
Человеческая гиалуронидаза РН20 имеет один сайт О-гликозилирования в положении Т475. Сайт занимает коровый гликан 1 типа, включающий один или два остатка сиаловой кислоты. гНиРН20 гликозилирован по шести различным остаткам аспарагина, N82, N166, N235, N254, N368 и N393. Результаты исследования показывают, что положение N254 занято гликаном приблизительно в 75% случаев, N393 занято приблизительно в 85%, а четырех оставшихся положения, N82, N166, N235 и N368, заняты более чем в 99% случаев. В гНиРН20 присутствуют все три типа N-гликанов, т.е. богатые маннозой, гибридные и сложные гликаны. Как правило, гНиРН20 содержит приблизительно 45% богатых маннозой гликанов, 45% сложных гликанов и 10% гибридных гликанов. Приблизительно 35% всех гликанов являются анионными, 25% из которых содержат сиаловую кислоту, а оставшиеся 10% содержат неизвестные анионные группы, возможно, фосфатные группы. Большая часть сложных гликанов фукозилированы, анионные сложные гликаны в основном содержат один остаток сиаловой кислоты, в то время как некоторые из них содержат два остатка сиаловой кислоты. Каждый остаток аспарагина замещен приблизительно в 90% случаев гликаном одного типа и редко гликанами двух других типов, за исключением N235. Основные типы гликанов для каждого остатка приведены в табл. 8 ниже. Остатки N82, N166 и N254 заняты сложными гликанами. Остатки N368 и N393 заняты богатыми маннозой гликанами. Остаток N235 занят приблизительно в 80% случаев богатыми маннозой гликанами и приблизительно в 20% случаев сложными гликанами.
Таблица 8
Типы N-гликанов аспарагиновых остатков гНиРН20
Пример 7. Дегликозилирование человеческой гиалуронидазы РН20 с помощью обработки эндогликозидазой.
В этом примере человеческую гиалуронидазу РН20 дегликозилировали, обрабатывая очищенную гНиРН20 (8ЕЦ ГО N0: 122) различными гликозидазами и оценивая гиалуронидазную активность. Человеческая гиалуронидаза РН20 гликозилирована по шести различным остаткам аспарагина, N82, N166, N235, N254, N368, и N393. Для получения дегликозилированных человеческих гиалуронидаз РН20 применяли пять гликозидаз, включая ПНГазу Р (йот Епд1апй Вю1аЬ8, номер по каталогу Р07048, лот #34), которая расщепляет все N-гликаны; ЕпйоР1, которая расщепляет богатые маннозой и гибридные гликаны; ЕпйоР2, которая расщепляет биантенные сложные гликаны; ЕпйоР3, которая расщепляет биантенные и более разветвленные сложные гликаны, и ЕпйоН (№те Епд1апй Вю1аЬ8, номер по каталогу Р07028), которая расщепляет богатые маннозой и гибридные гликаны. Таким образом, обработка ПНГазой Р приводит к полному дегликозилированию пептида, в то время как обработка эндогликозидазами приводит к лишь частичному дегликозилированию.
Для полного дегликозилирования очищенную гНиРН20 (конечная концентрация 0,1 мг/мл) инкубировали с ПНГазой Р (50000 ед/мл) в 50 мМ фосфатном буфере с рН 7,2 в течение ночи при температуре 37°С. Для частичного дегликозилирования очищенную гНиРН20 (конечная концентрация 0,5 мг/мл) инкубировали с 0,3 ед/мл эндогликозидазы (ЕпйоР1, ЕпйоР2, ЕпйоР3 или ЕпйоН) или смесью всех четырех эндогликозидаз в 50 мМ натрий-ацетатном буфере с рН 5,0 в течение ночи при 35°С. Дегликозилирование гНиРН20 оценивали по изменению подвижности РН20 в 8Э8-РАОЕ. Ферментативную активность гиалуронидазы определяли, как описано в примере 5.
Молекулярная масса человеческой гиалуронидазы РН20 составляет приблизительно 66 кДа. Обработка ЕпйоР1, ЕпйоН или смесью ЕпйоР1, ЕпйоР2, ЕпйоР3 и ЕпйоН привела к частичному дегликозилированию человеческой гиалуронидазы РН20, которое оценивали по изменению подвижности белка в 8Э8-РАОЕ до кажущейся молекулярной массы приблизительно 56 кДа. Обработка ПНГазой Р привела к полному дегликозилированию человеческой гиалуронидазы РН20. Частичное дегликозилирование гНиРН20 не привело к инактивации гиалуронидазы, в то время как полное расщепление ПНГ азой Р, полностью удаляющее N-гликаны, привело к полной потере ферментативной гиалуронидазной активности (см. табл. 9).
- 68 022752
Таблица 9
Эффект обработки гликозидазой на активность гНиРН20
гНиТТСО (ед/мл) контроль РН20 ΕηάοΡΙ Еп4оР2 Еп4оРЗ Еп4оН Еп4оР1,Р2,РЗ,Н ПНГазаР
1,0000 0,3195 0,2983 0,2573 0,2965 0,2144 1,9315
0,2000 0,7910 0,7656 0,6048 0,5880 0,7435 0,5366 1,9173
0,0400 1,4299 1,3450 1,3117 1,2255 1,3584 1,3877 1,9926
0,0080 1,8397 1,7338 1,6900 1,6698 1,6998 1,8418 1,9172
Пример 8. Обработка человеческой гиалуронидазы РН20 ингибиторами гликозилирования. гНиРН20 (8Е0 ГО N0: 122) временно экспрессировали в присутствии каждого из двух ингибиторов гликозилирования, после чего оценивали секрецию и активность гиалуронидазы. Кифунензин является мощным ингибитором участвующего в процессинге гликанов фермента маннозидазы I (см., например, ЕбЬебп е! а1., б. Вю1. СЬет., 265:15599-15605 (1990)). Туникамицин представляет собой смесь гомологичных нуклеозидных антибиотиков, которые ингибируют фермент Ο1сNАс-фосфотрансферазу (ОРТ), тем самым блокируя синтез всех ^гликанов (см., например, ВоЬте еб а1., Еиг. б. ВбосЬет. 269:977-988 (2002)).
1х106 Ж24-2В2 экспрессирующих гНиРН20 клеток (см. пример 14) высевали в 24 мл полной СЭ-СН0 среды в два 125 мл флакона. Туникамицин (растворенный в ДМСО) или кифунензин (свежий водный раствор) добавляли до конечной концентрации 5 мкг/мл (содержание ДМСО 12 мкл). В качестве контроля в один флакон высевали 1 х 106 Н224-2В2 клеток, экспрессирующих гНиРН20, и к содержимому добавляли 12 мкл ДМСО. После добавления туникамицина или кифунензина клетки инкубировали в течение 4-6 ч при температуре 37°С и 5% С02. После экспрессии 2 мл культуральной среды отбирали и центрифугировали в течение 5 мин при 500д. Супернатант хранили при температуре 4°С клеточный осадок хранили при температуре -20°С. Оставшиеся 22 мл культуры центрифугировали в течение 5 мин при 500д. Супернатант хранили при 4°С. Клетки ресуспендировали в 22 мл полной СЭ-СН0 среды в двух исходных 125 мл флаконах. Туникамицин или кифунензин добавляли в культуральную среду до конечной концентрации 5 мкг/мл и инкубировали при 37°С и 5% С02. Приблизительно через каждые 24 ч после замены среды из каждой колбы отбирали 2 мл культуры. Для каждой временной точки супернатант хранили при температуре 4°С, а клеточный осадок при температуре -20°С. Экспрессию гНиРН20 анализировали методом Вестерн-блоттинг, а гиалуронидазную активность измеряли с помощью анализа с биотинилированной ГК (как описано в примерах 3 и 5).
Результаты представлены в табл. 10-13, где приведены количество жизнеспособных клеток и активность РН20. Как показано в табл. 10, 11, туникамицин ингибирует активность РН20 в культуральной среде и внутри клеток, а также приводит к полной потере жизнеспособности клеток. Кроме того, 1 ч обработки туникамицином приводит к накоплению дегликозилированной человеческой гиалуронидазы РН20 внутри клеток, определенному по изменению подвижности белка из фракций клеточного осадка в 8Э8-РАОЕ до кажущейся молекулярной массы приблизительно 56 кДа. Как показано в табл. 12, 13, кифунензин не влияет на активность РН20, в то время как анализ методом Вестерн-блоттинг показал, что кифунензин тормозит экспрессию и секрецию гНиРН20 в обработанных им клетках.
Таблица 10
Влияние туникамицина на жизнеспособность клеток и активность РН20 в культуральной среде
Время (часы) В присутствии туникамицина Без туникамицина
жизнеспособные клетки (х106) Активность РН20 (ед/мл) жизнеспособные клетки (хЮ6) Активность РН20 (ед/мл)
0 1,04 0,50 1,04 0,00
1 1,04 2,80 1,04 1,50
2 1,04 5,00 1,04 3,00
4 0,910 8,80 1,30 7,00
25 1,08 5,80 1,32 82,50
49 0,200 6,80 2,72 171,30
73 0,080 7,80 3,80 331,00
91 0 7,50 6,25 313,30
- 69 022752
Таблица 11
Влияние туникамицина на жизнеспособность клеток и активность РН20 в клеточном осадке
Время (часы) В присутствии туникамицина Без туникамицина
жизнеспособные клетки (хЮ6) Активность РН20 (ед/мл) жизнеспособные клетки (хЮ6) Активность РН20 (ед/мл)
0 1,04 34,50 1,04 35,00
1 1,04 38,00 1,04 38,10
2 1,04 34,00 1,04 36,60
4 0,910 18,00 1,30 31,90
25 1,08 1,00 1,32 14,40
49 0,200 0,80 2,72 33,10
73 0,080 0,30 3,80 67,50
91 0 0,30 6,25 79,40
Таблица 12
Влияние кифунензина на жизнеспособность клеток и активность РН20 в культуральной среде
Время (часы) В присутствии кифунензина Без кифунензина
жизнеспособные клетки (хЮ6) Активность РН20 (ед/мл) жизнеспособные клетки (хЮ6) Активность РН20 (ед/мл)
0 1 0,4 1 0,45
6 1 23,85 1 15,75
24 1,2 129,6 1,4 75,6
50 2,1 299,7 2,4 206,55
72 3 535,95 4,4 444,15
96 3,7 945 6,3 726,3
144 5,8 2968,65 8,5 2241
Таблица 13
Влияние кифунензина на жизнеспособность клеток и активность РН20 в клеточном осадке
Время (часы) В присутствии кифунензина Без кифунензина
жизнеспособные клетки (х106) Активность РН20 (ед/мл) жизнеспособные клетки (хЮ6) Активность РН20 (ед/мл)
0 1 22,25 1 23
6 1 21,25 1 27
24 1,2 27,75 1,4 14,45
50 2,1 43 2,4 26
72 3 98,75 4,4 52,75
96 3,7 208,75 6,3 167,5
144 5,8 497,25 8,5 107
Пример 9. Транзиентная экспрессия гНиРН20 в устойчивых к лектину мутантах СН0.
гНиРН20 временно экспрессировали в четырех устойчивых к лектину мутантах СН0 и оценивали секрецию и активность гиалуронидазы. Характеристики устойчивых к лектину мутантов СН0 приведены в табл. 14. В клетках Рго-5 отсутствует галактозилтрансфераза β4§;·ι1Τ-6, что приводит к уменьшению количества галактозилированных ^гликанов (см., например, Ьее еί а1., I. Βίο1. СНет. 276:13924-13934 (2001)). В клетках Ьес1 отсутствует активность ^ацетилглюкозаминилтрансферазы I, и, следовательно, клетки не синтезируют сложные или гибридные гликаны (см., например, СНеп и 8ίаη1еу, О1усοЬ^ο1ο§у, 13:43-50 (2003)). В клетках Ьес2 и Ьес8 отсутствуют переносчики сахаронуклеотидов, которые переносят сахаронуклеотиды через мембрану ЭР или аппарата Гольджи.
Клетки Ьес2 не способны к транслокации СМР-сиаловой кислоты (а именно, СМР-ЫеиАс), поэтому на поверхности клетки экспрессируются асиалированные белки (см., например, ЕскНатШ еί а1., I. Βίο1. СНет. 273:20189-20195 (1998)). Клетки Ьес8 не способны к транслокации ИОР-галактозы, поэтому в гликанах этих клеток отсутствует галактоза (см., например, Ваккег еί а1., О1усοЬ^ο1ο§у, 15:193-201 (2005)).
- 70 022752
Таблица 14
Устойчивые к лектину мутанты СН0
Линия клеток СНО Биохимическое изменение Генетическое изменение
Рго'5 Ф 0а1 в Ν-гликанах Нет экспрессии β4%α1ι6
Ьес1 Ф 01οΝΑο-Τ I вставка/делеция в ОРС Μ%αι1
Ьсс2 Ф транспортер СМР- сиаловой кислоты в мембране аппарата Гольджи Мутация в ОРС 3!с35а]
Ьес8 Ф ЕГОР-СЫ транспортер в мембране аппарата Гольджи Мутация в ОРС 8!с35а2
РН20 Н15 (РН20 с Н15-меткой, 8ЕЦ ГО N0: 187) транзиентно экспрессировали в каждом из четырех штаммов устойчивых к лектину мутантов СН0, Ьес1 (№ СКЬ-1735, АТСС), Ьес2 (№ СКЬ-1736, АТСС), Ьес8 (№ СКЬ-1737, АТСС) и Рго-5 (№ СКЬ-1781), как описано в примере 2А выше. Кроме того, в клетках Рго-5 транзиентно экспрессировали Н224-Ми1(В/8) (плазмида кодирует укороченный до 482 аминокислоты РН20, 8ЕЦ ГО N0: 122) и в качестве отрицательного контроля Рго-5 клетки подвергали процедуре трансфекции без плазмиды. Полученную культуральную среду анализировали методом Вестернблоттинг, гиалуронидазную активность измеряли с помощью анализа с биотинилированной ГК (как описано в примерах 3 и 5).
Результаты показывают, что экспрессируемые в Ьес мутантах гНиРН20 секретируются в среду, о чем свидетельствует полоса, соответствующая белку с массой приблизительно 66 кДа. Результаты анализа ферментативной активности с биотинилированной ГК приведены в табл. 15, где указаны устойчивые к лектину мутанты СН0, используемые для трансфекции клеток кодирующие РН20 плазмиды и активности РН20 при рН 5,5 для разведений 1:27 и 1:81. Экспрессированный в Ьес мутантных клетках гНиРН20 является ферментативно активным.
Таблица 15
Активность РН20 (ед/мл) транзиентно экспрессированной в Ьес мутантных клетках гНиРН20
Устойчивый к лектину мутант Рго-5 Рго-5 Ьес1 Ьес2 Ьес8 Рго-5
Плазмида ΗΖ24- ти1{В/5) ΗΖ24РН20 Ηί$ ΗΖ24РН20 ΗΪ5 ΗΖ24РН20 НЕ ΗΖ24РН20 НЕ Трансфекция без плазмиды
Активность РН20(1:27) 0,6615 0,297 0,54 0,675 0,2565 0,081
Активность РН20(1:81) 1,1745 0,6075 0,7695 1,053 0,567 0,1215
Пример 10. Сайт-направленный мутагенез сайтов ^гликозилирования в человеческой гиалуронидазе РН20.
Получены дегликозилированные сайт-специфические мутанты человеческой гиалуронидазы РН20 по сайтам ^гликозилирования и были оценены их паттерны секреции и ферментативнаяю гиалуронидазная активность. Дегликозилированные сайт-специфические мутанты по сайтам ^гликозилирования и типы их гликанов описаны в табл. 16.
В качестве матрицы для мутагенеза каждого остатка аспарагина на аланин использовали РН20 Н15 (8ЕЦ ГО N0: 210) и применяли набор для сайт-направленного мутагенеза ЦшкСЬапде® (номер по каталогу 200518, 81га1адепе). Кодируемый ДНК-матрицей белок соответствует РН20 Н15 (8ЕЦ ГО N0: 187), клону человеческой РН20, который содержит гексагистидиновую метку (8ЕЦ ГО N0: 142) после аминокислоты 8490. РН20 Н15 дикого типа и дегликозилированные мутанты приведены в табл. 16. Были получены шесть вариантов с одной мутацией, по одному для каждого сайта ^гликозилирования. Кроме того, для аспарагинов N82, N166 и N254, каждый из которых замещен сложным гликаном, было создано три двойных мутантов и тройной мутант. Наконец, был получен двойной мутант №68А/№93А, в котором отсутствуют богатые маннозой гликаны. Мутанты трансфицировали в СН0-8 клетки и белки экспрессировали, как описано в примере 2А. Секрецию в среду и гиалуронидазную активность определяли, как описано в примерах 3 и 5.
Результаты представлены в табл. 16, в которой указаны мутации, типы гликанов, наличие секреции белка в среду и гиалуронидазная активность при рН 5,5 и 7,4. Вестерн-блоттинг анализ показал, что мутация остатков N82, N166, N235 и N254 не влияет на секрецию белка гНиРН20 в среду. Мутация остатков И368А и И368А/И393А предотвращает экспрессию и секрецию РН20, о чем свидетельствует отсутствие белка с молекулярной массой приблизительно 66 кДа в среде. Мутация остатка Н393А приводит к снижению экспрессии белка, но гНиРН20 обнаруживается в среде, о чем свидетельствует полоса, соответствующая белку массой приблизительно 66 кДа. Мутация остатков N82, N166 и/или N254 не влияет на ак- 71 022752 тивность гНиРН20. Эти остатки заняты сложными гликанами. Напротив, мутация остатков N235, N368 и/или N393, которые содержат богатые маннозой гликаны, приводит к полной потере обнаруживаемой активности в среде из-за отсутствия секреции.
Таблица 16
Дегликозилированные мутанты человеческой гиалуронидазы РН20
мутант ЗЕБГОЫО Тип гликана Секреция Активность при рН 5,5 Активность при рН 7,4
РН20 ΗΪ3 (исходный) 187 оба типа да да да
Ν82Α 202 СЛОЖНЫЙ да да да
Ν166Α 203 сложный да да да
Ν235Α 204 богатый маннозой (80%) сложный (20%) да нет нет
Ν254Α 205 сложный да да да
Ν368Α 188 богатый маннозой нет нет нет
Ν393Α 189 богатый маннозой да (слабая) нет нет
Ν82Α/Ν166Α 206 сложный да да да
Ν82Α/Ν254Α 207 СЛОЖНЫЙ да да да
Ν166Α/Ν254Α 208 сложный да да да
Ν82Α/Ν166Α/Ν25 4А 209 сложный да да да
Ν368Α/Ν393Α 190 богатый маннозой нет нет нет
Для визуализации экспрессии дегликозилированных сайт-специфических мутантов по сайтам ^гликозилирования №68А, Ш93А и N368А/N393А использовали иммунофлуоресцентный анализ клеток СН0 с анти-РН20 антителами. Для получения монослойной культуры клетки СН0 высевали в 8-луночные камеры для микроскопирования по 200 мкл клеток с концентрацией 2,5х104 клеток на 1 мл модифицированной Дульбеко среды Игла (БМЕМ), содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (РВ8), и выращивали при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% С02. Клетки трансфицировали через 36 ч при плотности монослоя 80% с помощью ЫроГесЦппте™ 2000 (1пуйгодеп) следующим образом.
ДНК (0,4 мкг в 50 мкл БМЕМ без сыворотки) и ЫроГес!атте™ 2000 (1 мкл в БМЕМ без сыворотки) осторожно смешивали в течение 20 мин при комнатной температуре, а затем добавляли в каждую лунку, содержащую клетки и 100 мкл бессывороточной среды. Перемешивание производили осторожно, покачивая планшет назад и вперед. Затем клетки инкубировали при 37°С в С02-инкубаторе в течение 4-6 ч, после чего бессывороточную среду заменяли на содержащую 10% РВ8 среду. Через 48 ч после трансфекции клетки в камерах для микроскопирования фиксировали 4% параформальдегидом в течение 15 мин. Клетки промывали 3 раза РВ8, к ним добавляли 200 мкл 1% раствора ХР-40/РВ8 и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре. Клетки промывали 3 раза РВ8 и хранили при 4°С до окрашивания антителами.
Для окрашивания антителами клетки образцы блокировали 15% нормальной козьей сывороткой в течение 30 мин при комнатной температуре. Клетки инкубировали в течение 2 ч с 1:20 раствором антиРН20 1дО кролика, разведенным 5% нормальной козьей сывороткой в РВ8. Наконец, клетки отмывали 3 раза РВ8, затем в течение 1 ч инкубировали с Р1ТС-конъюгированными козьими антителами к 1дО кролика для последующей визуализации. Кроме того, раствор для фиксации содержал БАР1 для окрашивания ядер. Иммунофлуоресцентный анализ с применением анти-РН20 антител показал, что мутации Ш68А и Ш93А вызывают накопление РН20 внутри клеток.
Выводы из исследований ^гликозилирования.
Как продемонстрировано в примерах 7-10 выше, ^гликозилирование является необходимым для фолдинга и ферментативной активности гНиРН20. Полное дегликозилирование гНиРН20, достигаемое исчерпывающим расщеплением ПИГазой Р или ингибированием гликозилирования туникамицином в процессе биосинтеза, приводит к потере ферментативной активности. Кроме того, было показано накопление негликозилированного гНиРН20 в клетке. Напротив, частично дегликозилированная гНиРН20, получаемая обработкой кифунензином или экспрессией в Ьес мутантах, сохраняет ферментативную активность. Наконец, детальный мутационный анализ с помощью сайт-направленного мутагенеза показал, что наличие богатых маннозой гликанов необходимо для получения растворимой, ферментативно активной гНиРН20.
- 72 022752
Пример 11 Получение клеточной линии, экспрессирующей растворимую гНиРН20.
Плазмиду Н224 (приведенную в 8ЕЦ ГО N0: 140) использовали для трансфекции клеток яичника китайского хомячка (СН0 клеток) (см., например, заявки США № 10795095, 11/065716 и 11/238171). Плазмидный вектор Ж24 для экспрессии растворимой гНиРН20 содержит основу вектора РС1 (Рготеда), ДНК, кодирующую аминокислоты 1-482 человеческой гиалуронидазы РН20 (8ЕЦ ГО N0: 110), внутренний сайт посадки рибосомы (1КЕ8) вируса ЕСМУ (С1опТесЬ) и ген дигидрофолатредуктазы мыши (ЭНЕК). Вектор РС1 также включает в себя ДНК, кодирующую ген бета-лактамазы (АтрК), точку начала репликации Е1, немедленный ранний энхансерный/промоторный район цитомегаловируса (СМУ), химерный интрон и поздний сигнал полиаденилирования вируса 8У40 (8У40). Конструкция ДНК, кодирующая растворимую гНиРН20, содержит сайт N1^1 и консенсусную последовательность Козака до последовательности ДНК, кодирующей метионин в положении 1 нативной сигнальной последовательности РН20 человека из 35 аминокислот, и стоп-кодон после ДНК, кодирующей тирозин, соответствующий аминокислотной позиции 482 человеческой гиалуронидазы РН20, приведенной в 8ЕЦ ГО N0: 107, после которого расположен сайт рестрикции ВатН1. Следовательно, направляемая промотором СМУ транскрипция конструкции РС1-РН20-1КЕ8ГОНРК-8У40ра (Ж24) приводит к молекуле мРНК, которая кодирует аминокислоты 1-482 РН20 человека (приведена в 8ЕЦ ГО N0: 109) и аминокислоты 1-186 дигидрофолатредуктазы мыши (приведены в 8ЕЦ ГО N0: 141), разделенные внутренним сайтом посадки рибосомы (1КЕ8).
Не трансфицированные клетки ΌΟ44 СН0 культивировали в модифицированной О1ВС0 СГО-СН0 среде для ОНРК(-) клеток, дополненной 4 мМ глутамина и 18 мл/л плюроника Р68/Б (О1Ьсо), и для подготовки к трансфекции высевали при концентрации 0,5х106 клеток/мл во встряхиваемый флакон. Клетки культивировали при 37°С и 5% С02 в увлажненном инкубаторе при скорости перемешивания 120 об/мин. Экспоненциально растущие не трансфицированные клетки ΌΟ44 СН0 проверяли на жизнеспособность до трансфекции.
млн жизнеспособных клеток из культуры не трансфицированных клеток ΌΟ44 СН0 осаждали и ресуспендировали до плотности 2х107 клеток в 0,7 мл 2х буфера для трансфекции (2х НеВ8: 40 мМ Нере8, рН 7,0, 274 мМ №С1, 10 мМ КС1, 1,4 мМ №2НР04, 12 мМ декстроза). К каждой аликвоте ресуспендированных клеток добавляли 0,09 мл (250 мкг) линейной плазмиды Н224 (линеаризовали в течение ночи эндонуклеазой С1а I (Яете Епд1апй Вю1аЬ8) и смесь клетки/ДНК переносили в кюветы для электропорации ВТХ (ОепТготс8) с зазором 0,4 см при комнатной температуре. Для отрицательного контроля проводили электропорацию клеток без плазмидной ДНК. Смесь клетки/плазмида электропорировали разрядом конденсатора при 330 В и 960 мкФ или при 350 В и 960 мкФ.
Клетки переносили из кюветы после электропорации в 5 мл модифицированной среды СГО-СН0 для ОНРК(-) клеток, дополненной 4 мМ глутамина и 18 мл/л плюроника Р68/Б (ОЛсо), и культивировали в лунках 6-луночных планшетов для культивирования без селекции в течение 2 дней при 37°С и 5% С02 в увлажненном инкубаторе.
Через два дня после электропорации из каждой лунки отбирали 0,5 мл культуральной среды и проверяли ее на наличие гиалуронидазной активности с помощью анализа микромутности, описанного в примере 12. Результаты представлены в табл. 17.
Таблица 17
Начальная гиалуронидазная активность трансфицированных Ж24 клеток ΌΟ44 СН0 через 40 ч после трансфекции
Активность ед/мл
0,25
0,52
0,015
Клетки из трансфекции 2 (350 В) отбирали из культуральной лунки, подсчитывали и разбавляли до 1х104 - 2х104 жизнеспособных клеток на 1 мл. Аликвоту суспензии клеток 0,1 мл переносили в каждую лунку пяти 96-луночных планшетов для культивирования с круглодонными лунками. В лунки с клетками добавляли 100 мкл среды СГО-СН0 (О1ВС0), дополненной 4 мМ О1иТаМАХ™-1 (О1ВС0™, 1пуйгодеп Сотротайоп) и не содержащей гипоксантина и тимидина (конечный объем 0,2 мл).
Из пяти планшетов были выделены десять клонов, выращиваемых без метотрексата (табл. 18).
- 73 022752
Таблица 18
Г иалуронидазная активность идентифицированных клонов
Номер планшета и лунки Относительная гиалуронидазная активность
1СЗ 261
2С2 261
ЗЭЗ 261
ЗЕ5 243
ЗС6 174
208 103
1В9 304
2ϋ9 273
4Р10 302
Шесть клонов 4Ζ24 дополнительно культивировали и переносили во флаконы в виде суспензии отдельных клеток. Клоны 3Ό3, 3Е5, 2О8, 2Ό9, 1Е11 и 4Ό10 высевали в 96-луночные планшеты для культивирования с круглодонными лунками методом двумерного бесконечного разведения, при котором клетки разводили 1:2 в лунках планшета сверху вниз и 1:3 в лунках планшета слева направо, начиная с 5000 клеток в верхней левой ячейке. Для обеспечения необходимых факторов роста в первые дни роста в культуре разведенные суспензии клонов культивировали в присутствии 500 не трансфицированных ΌΟ44 СНО клеток на лунку. Для каждого субклона было заполнено десять планшетов, где 5 планшетов содержали 50 нМ метотрексата и 5 планшетов не содержали метотрексат.
Клон 3Ό3 дал 24 визуально определенных субклона, 13 из которых обнаружены в планшетах без метотрексата, а 11 - в планшетах с 50 нМ метотрексата. Значительную гиалуронидазную активность определили в супернатантах 8 из 24 субклонов (>50 ед/мл), указанные 8 субклонов наращивали во флаконах для культивирования Т-25. Идентифицированные в присутствии метотрексата клоны культивировали с добавлением 50 нМ метотрексата. Клон 3Ό35Μ растили в присутствии 500 нМ метотрексата, что привело к получению клона, продуцирующего при культивировании во флаконе при перемешивании свыше 1000 единиц/мл гиалуронидазы (клон 3Ό35Μ или Оеп1 3Ό35Μ). Затем был получен банк клеток 3Ό35Μ.
Пример 12. Определение гиалуронидазной активности растворимой гНиРН20.
Гиалуронидазную активность растворимой гНиРН20 определяли в таких образцах, как клеточные культуры, очищенные фракции и очищенный раствор, с помощью турбидометрического анализа, который основан на образовании нерастворимого осадка при связывании гиалуроновой кислоты с сывороточным альбумином. Активность измеряли путем инкубации растворимой гНиРН20 с гиалуронатом натрия (гиалуроновой кислотой) в течение определенного периода времени (10 мин) с последующим осаждением нерасщепленного гиалуроната натрия при добавлении подкисленного сывороточного альбумина. Мутность полученного образца измеряли при 640 нм после 30-минутной инкубации. Уменьшение мутности в результате ферментативной активности гиалуронидазы к своему субстрату гиалуронату натрия является мерой активности растворимой гиалуронидазы гНиРН20. Анализ проводят с помощью калибровочной кривой, полученной с использованием разведений стандарта растворимой гНиРН20, определение активности образцов проводили относительно этой калибровочной кривой.
Образцы разбавляли с помощью раствора для разведения фермента. Раствор для разведения фермента готовили, растворяя 33,0±0,05 мг гидролизованного желатина в 25,0 мл 50 мМ реакционного буфера РРЕ8 (140 мМ №С1, 50 мМ РШЕ8, рН 5,5) и 25,0 мл 8ΑΡΊ и разбавляя 0,2 мл 25% раствора человеческого сывороточного альбумина в полученной смеси и перемешивая на вортексе раствор в течение 30 с. Раствор готовили за 2 ч до применения и хранили его на льду до использования. Образцы разводили приблизительно до 1-2 ед/мл. Как правило, максимальное шаговое разведение не превышало 1:100 и начальный объем образца для первого разведения составлял не менее 20 мкл. Минимальные объемы образцов, необходимые для проведения анализа, для образцов, полученных в ходе выделения, и фракций ЕРЬС (жидкостная хроматография быстрого разрешения) составляли 80 мкл; для культурального супернатанта - 1 мл; для концентрированного материала - 80 мкл; для очищенного образца или образца на заключительном этапе выделения - 80 мкл. Разведения готовили в трех повторностях в 96-луночных планшетах с низким связыванием белка, 30 мкл каждого разведения переносили в планшеты ΟρίΠιιχ с черным/прозрачным дном (ВО Вю8с1епсе5).
Для получения стандартной кривой в растворе для разведения ферментов готовили разведения известной растворимой гНиРН20 с концентрацией 2,5 ед/мл, которые добавляли в планшет ΟρίΠιιχ в трех повторностях. Использовали разведения 0 ед/мл, 0,25 ед/мл, 0,5 ед/мл, 1,0 ед/мл, 1,5 ед/мл, 2,0 ед/мл и 2,5 ед/мл. В качестве отрицательного контроля в планшете предусмотрели лунки без реагента, которые содержали только 60 мкл раствора для разведения ферментов. Затем планшет закрывали и нагревали в течение 5 мин при 37°С. Крышку снимали и содержимое планшета перемешивали на шейкере в течение 10 с. После перемешивания планшет снова нагревали и в жидкостный манипулятор ΜυΕ-ΜΩΡΟ? 384
- 74 022752 йиций НапДИпд Иеуюе вносили теплый 0,25 мг/мл раствор гиалуроната натрия (готовят растворением 100 мг гиалуроната натрия (ЫГеСоге ВютеФса1) в 20,0 мл δ\νΡΕ Раствор перемешивали, осторожно вращая и/или покачивая емкость при температуре 2-8°С в течение 2-4 ч или до полного растворения). Реакционный планшет переносили в устройство МИЬТГОКОР 384 и реакцию начинали, нажимая клавишу Старт, что приводило к добавлению 30 мкл раствора гиалуроната натрия в каждую лунку. Планшет вынимали из МИЬТГОКОР 384 и встряхивали в течение 10 с, а затем нагревали с закрытой крышкой. Планшет инкубировали при 37°С в течение 10 мин.
Реакцию останавливали с помощью МИЬТГОКОР 384, в который загружали сывороточный рабочий раствор при увеличении вносимого объема до 240 мкл (25 мл исходного сывороточного раствора [1 объем лошадиной сыворотки (§1§та) разбавляли 9 объемами 500 мМ ацетатного буферного раствора и рН доводили до 3,1 соляной кислотой] добавляли к 75 мл 500 мМ ацетатного буферного раствора). Планшет вынимали из нагревающего блока и помещали в МИЬТГОКОР 384, который добавлял по 240 мкл сывороточного рабочего раствора в лунку. Планшет вынимали и встряхивали в течение 10 с. Через 15 мин мутность образцов измеряли при 640 нм, гиалуронидазную активность (в ед/мл) каждого образца определяли сравнением со стандартной кривой.
Удельную активность (единиц/мг) рассчитывали делением гиалуронидазной активности (ед/мл) на концентрацию белка (мг/мл).
Пример 13. Получение и очистка человеческой зРН20 Оеп1.
A. Получение в биореакторе объемом 5 л.
Колбу с 3И35М размораживали и клетки растили в перемешиваемых на шейкере колбах, затем в 1 л вращающихся колбах в СИ-СНО среде (1пуйгодеп, СайзЪаф Калифорния) с добавлением 100 нМ метотрексата и О1и1аМАКС™-1 (1пуйгодеп). Клетки переносили из вращающихся колб в 5 л биореактор (Вгаип) при плотности инокуляции 4/105 жизнеспособных клеток/мл. Температура была установлена на 37°С, рН 7,2 (начальная установка), количество растворенного кислорода составляло 25%, подача воздуха составляла 0-100 см3/мин. На 168 часу добавили 250 мл питательной среды # 1 (СИ СНО с 50 г/л глюкозы). На 216 часу добавили 250 мл питательной среды # 2 (СИ СНО с 50 г/л глюкозы и 10 мМ бутирата натрия), на 264 часу вновь добавили 250 мл питательной среды # 2. Окончательная продуктивность составила 1600 единиц на мл с максимальной плотностью клеток 6/106 клеток/мл. Добавление бутирата натрия резко повысило продукцию растворимой гНиРН20 на завершающей стадии получения.
Кондиционированную среду от клона 3И35М очищали глубинной фильтрацией и тангенциальной проточной диафильтрацией в 10 мМ Нерез рН 7,0. Растворимую гНиРН20 затем последовательно очищали с помощью хроматографии на ионообменной О-сефарозе (Рйагташа), гидрофобной хроматографии на фенилсефарозе (Рйагташа), на фенилборонате (Рготейсз) и хроматографии на гидроксиапатите (Вюгаф Кюйтопф Калифорния).
Растворимую гНиРН20, связавшуюся с 0-сефарозой, элюировали 400 мМ №-1С1 в том же буфере. Элюат разбавляли 2М раствором сульфата аммония до конечной концентрации 500 мМ сульфата аммония и пропускали через колонку с фенилсефарозой (низкозамещенную) с последующим связыванием в тех же условиях на фенилборонатной смоле. Растворимую гНиРН20 элюировали с фенилсефарозной смолы Нерез с рН 6,9 после отмывания 50 мМ бицином при рН 9,0 без сульфата аммония. Элюат загружали на керамический гидроксиапатитный носитель при рН 6,9 в 5 мМ фосфате калия и 1 мМ СаС12 и элюировали 80 мМ фосфатом калия, рН 7,4 с 0,1 мМ СаС12.
Полученная очищенная растворимая гНиРН20 обладала удельной активностью более 65000 И8Р единиц/мг белка по данным анализа микромутности (пример 3) с использованием стандарта сравнения И8Р. Очищенную зРН20 элюировали с колонки со стирол-дивинилбензольным носителем Рйагташа 5КРС в виде одного пика градиентом от 0,1% ТРА/Н2О до 0,1% ТРА/90% ацетонитрил/10% Н2О с 24 по 26 мин, при анализе методом δΌδ-электрофореза белок давал одну широкую полосу, соответствующую 61 кДа, после обработки ПНГазой Ρ белок давал узкую полосу, соответствующую 51 кДа. Ν-концевое секвенирование показало, что лидерный пептид эффективно удалялся.
B. Наращивание культуры клеток в 100 л биореакторе для культивирования клеток.
Для раздельной очистки растворимой гНиРН20 из четырех различных колб с клетками 3И35М и получения 4 отдельных партий зНиРН20 НИА0406С, НИА0410С, НИА0415С и НИА0420С использовали масштабирование процесса получения.
Клетки из каждой колбы отдельно наращивали и культивировали в 125 л биореакторе, затем белок очищали с использованием колоночной хроматографии. Для оценки таких параметров как выход фермента на протяжении всего процесса отбирали пробы. В приведенном ниже описании процесса указаны примеры условий для таких процессов и параметров, как запуск биореактора и объем питательной среды, плотность клеток при переносе и объемы отмывания и элюции. Точные численные значения незначительно отличались для каждой партии, они подробно описаны в табл. 24-30.
Четыре колбы с клетками 3И35М размораживали на водяной бане при 37°С, затем к клеткам добавляли СИ-СНО среду, содержащую 100 нМ метотрексата и 40 мл/л ОйНаМАХ, и клетки центрифугировали. Клетки ресуспендировали в 125 мл встряхиваемой колбе в 20 мл свежей среды, после чего колбу по- 75 022752 мещали в инкубатор с 7% СО2 при 37°С. Клетки растили в объеме 40 мл в 125 мл колбе при перемешивании на шейкере. Когда плотность клеток достигла 1,5-2,5х106 клеток/мл, культуру растили в 125 мл вращающейся колбе в объеме 100 мл. Колбу инкубировали при 37°С и 7% СО2. Когда плотность клеток достигла 1,5-2,5х106 клеток/мл, культуру растили в 250 мл вращающейся колбе в объеме 200 мл, колбы инкубировали при 37°С и 7% СО2. Когда плотность клеток достигла 1,5-2,5х106 клеток/мл, культуру растили в 1 л вращающейся колбе в объеме 800 мл, колбу инкубировали при 37°С и 7% СО2. Когда плотность клеток достигла 1,5-2,5х106 клеток/мл, культуру растили в 6 л вращающейся колбе в объеме 5 л, колбу инкубировали при 37°С и 7% СО2. Когда плотность клеток достигла 1,5-2,5х106 клеток/мл, культуру растили в 36 л вращающейся колбе в объеме 20 л, колбы инкубировали при 37°С и 7% СО2.
125 л реактор стерилизовали паром при 121°С и 20 Р81 (фунт/кв.дюйм), после чего добавляли 65 л СЭ-СНО. Перед использованием реактора его проверили на загрязнение. Когда плотность клеток в 36 л вращающейся колбе достигла 1,8-2,5х106 клеток/мл, 20 л культуры клеток перенесли из 36 л вращающейся колбы в 125 л биореактор (Вгаип), в результате чего окончательный объем составил 85 л, а плотность посева составила около 4х105 клеток/мл. Температуру установили на 37°С, рН 7,2; уровень растворенного кислорода составлял 25±10%; скорость вращения крыльчатки 50 об/мин; давление в емкости 3 фунта/кв.дюйм; количество барботируемого воздуха 1 л/мин; подача воздуха 1 л/мин. Каждый день содержимое реактора исследовали на количество клеток, рН, проводили анализ среды, анализ продукции и устойчивости белка. Во время культивирования добавляли питательные вещества. На 6 день добавили 3,4 л питательной среды # 1 (СО СНО + 50 г/л глюкозы + 40 мл/л С1и!аМАХ™-1) и температуру культивирования изменили на 36,5°С. На 9 день добавили 3,5 л питательной среды # 2 (СО СНО + 40 г/л глюкозы + 50 мл/л С1и!аМАХ™-1 + 1,1 г/л бутирата натрия) и температуру культивирования изменили на 36°С. На 11 день добавили 3,7 л питательной среды # 3 (СО СНО + 50 г/л глюкозы + 40 мл/л С1и!аМАХ™-1 + 1,1 г/л бутирата натрия) и температуру культивирования изменили на 35,5°С. Клетки из реактора собирали на 14 день, или когда жизнеспособность клеток падала ниже 50%. Процесс приводил к получению растворимой гНиРН20 с ферментативной активностью 1600 ед/мл при максимальной плотности клеток 8 млн клеток/мл. При сборе клеток культуру исследовали на микоплазму, биологическое загрязнение, эндотоксин и вирусы ш уПго и ш νί\Ό, вирусные частицы обнаруживали просвечивающим электронным микроскопом (ПЭМ), а также исследовали ферментативную активность.
Сто литров собранной из биореактора клеточной культуры фильтровали через серию одноразовых фильтров с полиэфирсульфонным фильтрующим материалом (8айогш5): сначала фильтровали через картридж с порами 8,0 мкм, затем 0,65 мкм, 0,22 мкм и, наконец, через 0,22 мкм фильтр 8аг1ороге площадью 2000 см в 100 л стерильный баллон для хранения. Культуру сконцентрировали в 10 раз с использованием двух ТРР (тангенциальный проточный фильтр) со спиральными полиэфирсульфонными фильтрами с М\УСО 30 кДа (МПИроге), затем провели 6х замену буфера на 10 мМ Нере5 с 25 мМ №28О4, рН 7,0 с помощью последнего 0,22 мкм фильтра и среду переносили в 20 л стерильный баллон для хранения. В табл. 19 приведены данные, относящиеся к культивированию клеток, их сбору, стадиям концентрирования и замены буфера.
- 76 022752
Таблица 19
Данные по культивированию клеток, их сбору, стадиям концентрирования и замены буфера
Параметр Н11А0406С ниА04оюс НЧА0415С НЦА0420С
Время от размораживания до внесения в 100 л биореактор (дней) 21 19 17 18
Плотность инокуляции В 100 Л (х 106 клеток/мл) 0,45 0,33 0,44 0,46
Время удвоения количества [слеток при логарифмическом росте (ч) 29,8 27,3 29,2 23,5
Макс, плотность клеток (х 10й клеток/мл) 5,65 8,70 6,07 9,70
Жизнеспособность собранных клеток (%) 41 48 41 41
Титр собранной среды (ед/мл) 1964 1670 99! 1319
Время культивирования в 100 л биореакторе (дней) 13 13 12 13
Объем очищенной среды (мл) 81800 93300 91800 89100
Активность собранного отфильтрованного фермента (ед/мл) 2385 1768 1039 1425
Активность сконцентрированного фермента (ед/мл) 22954 17091 8561 17785
Активность сконцентрированного фермента после замены буфера (ед/мл) 15829 11649 9915 8679
Активность сконцентрированного отфильтрованного фермента после замены буфера (ед/мл) 21550 10882 9471 8527
Объем после концентрирования и замены буфера (мл) 10699 13578 12727 20500
Отношение количества единиц фермента/собранный фермент 0,87 0,96 1,32 1,4
Готовили инообменную колонку с О сефарозой (РЬаттааа) (3 л смолы, высота 20 см, диаметр 14 см). Для определения рН, проводимости и анализа на эндотоксин были взяты образцы после промывания колонки. Колонку уравновешивали 5 объемами 10 мМ Трис, 20 мМ №2δ04, рН 7,5. На О колонку при скорости 100 см3/ч наносили сконцентрированную диафильтрованную среду. Колонку промывали 5 объемами 10 мМ Трис, 20 мМ №-ь80+ рН 7,5 и 10 мМ Нерев, 50 мМ №С1, рН 7,0. Белок элюировали 10 мМ Нерев, 400 мМ №С1, рН 7,0 и фильтровали через 0,22 мкм фильтр в стерильную емкость.
Затем проводили гидрофобную хроматографию на фенилсефарозе (РЬаттааа). Готовили колонку с фенилсефарозой (Р8) (9,1 л смолы, высота 29 см, диаметр 20 см). Колонку уравновешивали 5 объемами 5 мМ фосфата калия с 0,5 М сульфатом аммония, 0,1 мМ СаС12, рН 7,0. К элюированному, как описано выше, белку добавляли 2М раствор сульфата аммония, 1 М фосфат калия и 1 М СаС12 до конечных концентраций 5 мМ, 0,5 М и 0,1 мМ соответственно. Белок загружали на Р8 колонку при скорости 100 см3/ч. При скорости 100 см3/ч через колонку пропускали 5 мМ фосфат калия, 0,5 М сульфат аммония и 0,1 мМ СаС12, рН 7,0. Прошедший через колонку раствор пропускали через 0,22 мкм фильтр и собирали в стерильную емкость.
Затем очищенный на Р8 белок загружали на аминофенилборонатную колонку (РтоМебкв) (6,3 л смолы, высота 20 см, диаметр 20 см), которую предварительно уравновесили 5 объемами 5 мМ фосфата калия с 0,5 М сульфатом аммония. Белок пропускали через колонку со скоростью 100 см3/ч и колонку промывали 5 мМ фосфатом калия с 0,5 М сульфатом аммония, рН 7,0. Затем колонку промывали 20 мМ бицином с 100 мМ №С1, рН 9,0, белок элюировали 50 мМ Нерев, 100 мМ №-1С1 рН 6,9 и собирали через стерильный фильтр в 20 л стерильную емкость. Элюат исследовали на наличие биологического загрязнения, определяли концентрацию белка и активность фермента.
Колонку с гидроксиапатитом (ВюРаб) (1,6 л смолы, высота 10 см, диаметр 14 см) уравновешивали 5 мМ фосфатом калия с 100 мМ №С1, 0,1 мМ СаС12 рН 7,0. Для определения рН, проводимости и анализа на эндотоксин были взяты образцы после промывания колонки. К очищенному на аминофенилборонатной смоле белку добавляли фосфат калия и СаС12 до конечной концентрации 5 мМ фосфата калия и 0,1 мМ СаС12, раствор наносили на колонку с гидроксиапатитом при скорости 100 см3/ч. Колонку промывали 5 мМ фосфатом калия, рН 7,0 с 100 мМ №С1, 0,1 мМ СаС12, затем 10 мМ фосфатом калия, рН 7,0 с 100 мМ №С1, 0,1 мМ СаС12. Белок элюировали 70 мМ фосфатом калия с рН 7,0, элюат фильтровали через 0,22 мкм фильтр в 5 л стерильную емкость для хранения. Элюат исследовали на наличие биологи- 77 022752 ческого загрязнения, определяли концентрацию белка и активность фермента.
Очищенный на колонке с гидроксиапатитом белок затем пропускали через 20 нМ фильтр для удаления вирусов с помощью резервуара для нагнетания давления. Белок вносили в резервуар ЭУ20 для нагнетания давления и фильтровали (Ра11 Согрогабоп) через Ибброг ИУ20 фильтр с 20 нм порами (Ра11 Согрогабоп) в стерильную 20 л емкость для хранения. Фильтрат исследовали на концентрацию белка, ферментативную активность, содержание олигосахаридов, проводили характеризацию моносахаридов и сиаловых кислот и связанных с процессом выделения и очистки примесей. Белок в фильтрате затем концентрировали до 1 мг/мл, используя систему тангенциальной проточной фильтрации (ТРР) 8аг1осоп 8бсе (8айогшк) с пределом исключения 10 кД по молекулярной массе (М\УС0). Фильтр подготавливали, промывая Нерек/солевым раствором (10 мМ Нерек, 130 мМ №С1, рН 7,0), и пермеат исследовали на рН и проводимость. После концентрирования раствор белка тестировали на концентрацию белка и ферментативную активность. Затем концентрированный белок перевели 6х в 10 мМ Нерек буфер с 130 мМ №С1, рН 7,0. Концентрированный белок пропускали через 0,22 мкм фильтр в 20 л стерильную емкость для хранения. Раствор белка исследовали на концентрацию белка, ферментативную активность, количество свободных сульфгидрильных групп, проводили характеризацию олигосахаридов и определяли осмолярность.
В табл. 20-26 приведены данные, относящиеся к каждой из описанных выше стадий очистки, проводимых для каждой партии клеток 3Ό35Μ.
Таблица 20
Данные по очистке белка на О-сефарозе
Параметр НКА0406С Н6А0410С НТА0415С Н11А0420С
Нанесенный объем (мл) 10647 13524 12852 20418
Отношение нанесенный объем/объем смолы 3., 4,9 4,5 7,3
Объем колонки (мл) 2770 3840 2850 2880
Объем элюата (мл) 6108 5923 5759 6284
Конц, белка в элюате (мг/мл) 2,8 3,05 2,80 2,86
Анализ активности в элюате (ед/мл) 24493 26683 18321 21052
Выход фермента (%) 65 107 87 76
Таблица 21
Данные по очистке белка на колонке с фенилсефарозой
Параметр Н11А0406С НиА0410С НиА0415С нило42ос
Объем до добавления исходного раствора (мл) 5670 5015 5694 6251
Нанесенный объем (мл) 7599 6693 7631 8360
Объем колонки (мл) 9106 9420 9340 9420
Отношение нанесенный объем/объем смолы 0,8 0,71 0,82 0,89
Объем элюата (мл) 16144 18010 16960 17328
Конц, белка в элюате (мг/мл) 0,4 0,33 0,33 0,38
Анализ активности в элюате (ед/мл) 8806 6585 4472 7509
Выход белка (%) 41 40 36 37
Выход фермента (%) 102 88 82 96
Таблица 22
Данные по очистке белка на аминофенилборонатной колонке
Параметр НиА0406С НиА0410С НиА0415С НЛА0420С
Нанесенный объем (мл) 16136 ) 17958 16931 17884
Отношение нанесенный объем/объем смолье 2,99 3,15 3,08 2,98
Объем колонки (мл) 5400 5700 5500 5300
Объем элюата (мл) 17595 22084 20686 19145
Конц, белка в элюате (мг/мл) 0,0 0,03 0,03 0,04
Конц, белка в фильтрованном элюате (мг/мл) не определяли 0,03 0,00 0,04
Анализ активности в элюате (ед/мл) 4050 2410 1523 4721
Выход белка (%) 0 11 11 12
Выход фермента (%) не определяли 41 40 69
- 78 022752
Таблица 23
Данные по очистке белка на гидроксиапатитной колонке
Параметр нило40бс ниА04юс НиА0415С НиА0420С
Объем до добавления исходного раствора (мл) 16345 20799 20640 19103
Отношение нанесенный объем/объем смолы 10,95 13,58 14,19 12,81
Объем колонки (мл) 1500 1540 1462 1500
Нанесенный объем (мл) 16429 20917 20746 19213
Объем элюата (мл) 4100 2415 1936 2419
Конц, белка в элюате (мг/мл) не определяли 0,24 0,17 0,23
Конц. белка в фильтрованном элюате (мг/мл) не определяли не определяли 0,17 не определяли
Анализ активности в элюате (ед/мл) 14051 29089 20424 29826
Выход белка (%) не определяли 93 53 73
Выход фермента (%) 87 118 140 104
Таблица 24
Данные по фильтрации на ΌΥ20
Параметр нило4Обс нило41ос НиА0415С НиА0420С
Начальный объем (мл) 4077 2233 1917 2419
Объем фильтрата (мл) 4602 3334 2963 3504
Конц. белка в фильтрате (мг/мл) 0,1 не определяли 0,09 не определяли
Конц. белка в фильтрованном элюате (мг/мл) не определяли 0,15 0,09 0,16
Выход белка (%) не определяли 93 82 101
Таблица 25
Окончательные данные по концентрации
Параметр ЕП1А0406С НиА0410С НЧА0415С Н11А0420С
Начальный объем (мл) 4575 3298 2963 3492
Объем концентрата (мл) 562 407 237 316
Конц, белка в концентрате (мг/мл) 0,9 1,24 1,16 1,73
Выход белка (%) 111 102 103 98
Таблица 26
Данные по замене буфера в окончательном препарате
Параметр нилодобс НиА0410С Н11А0415С НиА0420С
Начальный объем (мл) 562 407 237 316
Конечный объем концентрата после замены буфера (мл) 594 516 310 554
Конц, белка в концентрате (мг/мл) 1,00 0,97 0,98 1,00
Конц, белка в фильтрованном концентрате (мг/мл) 0,95 0,92 0,95 1,02
Выход белка (%) 118 99 НО 101
Очищенную и сконцентрированную растворимую гНиРН20 асептически перенесли в стерильные колбы на 5 мл и 1 мл. Раствор белка пропускали через 0,22 мкм фильтр к контролируемому оператором насосу, который использовали для заполнения колб, которое контролировали гравиметрически. Колбы были закрыты пробками и дополнительно завинчивающимися крышками. Закрытые колбы визуально проверяли на наличие посторонних частиц, а затем подписывали. Затем колбы мгновенно замораживали погружением в жидкий азот не более чем на 1 мин и хранили при <-15°С (-20±5°С).
Пример 14. Получение клеток Оеп2, продуцирующих растворимую человеческую РН20 (гНиРН20).
Клетки линии Оеп1 3Ό35Μ, описанные в примере 2, адаптировали к более высоким уровням метотрексата и получали 2 поколение клонов (Оеп 2). Клетки 3Ό35Μ из стабильных содержащих метотрексат культур высевали в СО СН0 среду, содержащую 4мМ О1и1аМАХ-1™ и 1,0 мкМ метотрексата. Клетки адаптировали к повышенному уровню метотрексата и пассировали их 9 раз в течение 46 дней при 37°С и 7% С02 в увлажненном инкубаторе. Выросшую популяцию клеток клонировали методом предельных разведений в 96-луночных культуральных планшетах, содержащих среду с 2,0 мкМ метотрексата. Примерно через 4 недели клоны идентифицировали, и клон 3Е10В был выбран для культивирования. 3Е10В клетки выращивали в среде СО СН0, содержащей 4 мМ О1ШаМАХ-1™ и 2,0 мкМ метотрексата в течение 20 пассажей. Из клеточной линии 3Е10В получили банк клеток, клетки заморозили и использовали
- 79 022752 для последующих исследований.
Культивирование клеточной линии продолжали, выращивая 3Е10В клетки в среде СО СНЮ, содержащей 4 мМ О1иίаΜАX-1™ и 4,0 мкМ метотрексата. После 12 пассажа клетки заморозили во флаконах, получив банк клеток для исследования (КСВ). Один флакон из КСВ разморозили и культивировали в среде, содержащей 8,0 мкМ метотрексата. Через 5 дней концентрацию метотрексата в среде увеличили до 16,0 мкм, затем через 18 дней концентрацию увеличили до 20,0 мкМ. Клетки после 8 пассажа в среде, содержащей 20,0 мкМ метотрексата, клонировали методом предельных разведений в 96-луночных планшетах для культивирования, содержащих среду СО ί'ΉΟ с 4 мМ О1иίаΜАX-1™ и 20,0 мкМ метотрексата. Клоны идентифицировали через 5-6 недель, клон 2В2 был выбран для культивирования в среде, содержащей 20,0 мкМ метотрексата. После 11 пассажа клетки 2В2 заморозили во флаконах в виде банка клеток для исследования (КСВ).
Полученные 2В2 клетки являются дефектными по дигидрофолатредуктазе (ОНРК-) клетками СНО ΌΟ44, экспрессирующими растворимую рекомбинантную человеческую РН20 (гНиРН20). Растворимая РН20 присутствует в 2В2 клетках при количестве копий приблизительно 206 копий/клетку. Саузернблоттинг анализ расщепленной 8реЕ XЬаI и ВатШ/Ншй III геномной ДНК клеток 2В2 с использованием специфичного к гНиРН20 зонда показал следующий профиль расщепления рестриктазами: при расщеплении ДНК 8реI была выявлена одна крупная полоса гибридизации ~ 7,7 Кб и четыре минорных полосы гибридизации (~13,9, ~6,6, ~5,7 и ~4,6 Кб); при расщеплении ДНК XЬаI была выявлена одна крупная полоса гибридизации ~5,0 Кб и две минорных полосы гибридизации (~13,9 и ~6,5 Кб), при расщеплении ДНК ВатШ/Ншй III выявили одну крупную полосу гибридизации ~ 1,4 Кб. Анализ последовательности мРНК транскрипта показал, что полученная кДНК (8ЕО ГО ΝΟ: 56) идентична исходной последовательности (8ЕО ГО ΝΟ: 49) за исключением одной пары оснований в пложении 1131, в котором наблюдался тимидин (Т) вместо ожидаемого цитозина (С). Это молчащая мутация, не влияющая на аминокислотную последовательность.
Пример 15.
А. Получение растворимой гНиРН20 Оеп2 в 300 л биореакторе для культивирования клеток.
Колбу с Н224-2В2 клетками разморозили и клетки растили в перемешиваемых на шейкере колбах, затем в 36 л вращающихся колбах в ί'Ό-ί'ΉΟ среде (^Ьгодеп, СагНЬай, Калифорния) с добавлением 20 мкМ метотрексата и О1иίаΜАX™-1 ОпуПгодеп). Колбу с клетками разморозили при 37°С на водяной бане, к содержимому добавили среду и клетки центрифугировали. Клетки ресуспендировали в 125 мл колбе в 20 мл свежей среды при перемешивании, колбу помещали в инкубатор при 37°С и 7% СΟ2. Клетки растили в объеме 40 мл в 125 мл встряхиваемой колбе. Когда плотность клеток превысила 1,5х106 клеток/ мл, культуру растили в 125 мл вращающейся колбе в объеме 100 мл. Колбу инкубировали при 37°С и 7% СΟ2. Когда плотность клеток превысила 1,5х106 клеток/мл, культуру растили в 250 мл вращающейся колбе в объеме 200 мл, колбу инкубировали при 37°С и 7% СΟ2. Когда плотность клеток превысила 1,5х 106 клеток/мл, культуру растили в 1 л вращающейся колбе в объеме 800 мл при 37°С и 7% СΟ2. Когда плотность клеток превысила 1,5 х 106 клеток/ мл, культуру растили в 6 л вращающейся колбе в объеме 5000 мл при 37°С и 7% СΟ2. Когда плотность клеток превысила 1,5х106 клеток/мл, культуру растили в 36 л вращающейся колбе в объеме 32 л при 37°С и 7% СО2.
Реактор объемом 400 л стерилизовали и в него добавляли 230 мл ί'Ό-ί'ΉΟ среды. Перед использованием реактор был проверен на загрязнение. Приблизительно 30 л клеток перенесли из 36 л вращающейся колбы в 400 л биореактор (Вгаип) при плотности посева 4,0х105 жизнеспособных клеток/мл и общем объеме 260 л. Температуру установили на 37°С, рН 7,2; скорость вращения крыльчатки 40-55 об/мин; давление в емкости 3 фунта/кв.дюйм; количество барботируемого воздуха 0,5-1,5 л/мин; подача воздуха 3 л/мин. Каждый день содержимое реактора исследовали на количество клеток, рН, проводили анализ среды, анализ продукции и устойчивости белка. В ходе культивирования также добавляли питательные вещества. Через 120 ч (день 5) добавили 10,4 л питательной среды # 1 (4 х ΕΩ-ΕΒΟ + 33 г/л глюкозы + 160 мл/л О1иίаΜАX-1™ + 83 мл/л дрожжевого экстракта Уеа8Ю1аЮ + 33 мг/л рекомбинантного человеческого инсулина). Через 168 ч (день 7) добавили 10,8 л питательной среды # 2 (2 х ΕΩ-ΕΩΟ + 33 г/л глюкозы + 80 мл/л О1иίаΜАX-1™ + 167 мл/л дрожжевого экстракта УеазЮЫе + 0,92 г/л бутирата натрия), температуру культивирования понизили до 36,5°С. Через 216 ч (день 9) добавили 10,8 л питательной среды #3(1 х ΕΩ-^Ο + 50 г/л глюкозы + 50 мл/л О1иίаΜАX-1™ + 250 мл/л дрожжевого экстракта Уеа8Ю1а1е + 1,80 г/л бутирата натрия), температуру культивирования понизили до 36°С. Через 264 ч (день 11) добавили 10,8 л питательной среды #4 (1 х ΕΩ-^Ο + 33 г/л глюкозы + 33 мл/л О1иίаΜАX-1™ + 250 мл/л дрожжевого экстракта Уеа8Ю1аЮ + 0,92 г/л бутират натрия), температуру культивирования понизили до 35,5°С. Добавление питательной среды резко повысило продукцию растворимой гНиРН20 на завершающей стадии получения. Клетки из реактора собирали на 14 или 15 день или когда жизнеспособность клеток падала ниже 40%. Процесс приводил к получению растворимой гНиРН20 с ферментативной активностью 17000 ед/мл при максимальной плотности клеток 12 млн клеток/мл. При сборе клеток культуру исследовали на микоплазму, биологическое загрязнение, эндотоксин и вирусы ш νίίτο и ш νίνο, вирусные частицы обнаруживали просвечивающим электронным микроскопом (ПЭМ), а
- 80 022752 также исследовали ферментативную активность.
Культуру прокачивали перистальтическим насосом через четыре параллельно соединенных модуля системы фильтрации МППк1ак (МЛНроге), каждый из которых содержал слой диатомовой земли размером 4-8 мкм и слой диатомовой земли размером 1,4-1,1 мкм, а затем целлюлозную мембрану, после чего жидкость проходила через вторую систему фильтрации МППк1ак (МЛНроге), содержащую слой диатомовой земли размером 0,4-0,11 мкм и слой диатомовой земли размером <0,1 мкм, а затем целлюлозную мембрану, затем жидкость проходила через последний 0,22 мкм фильтр и ее собирали в стерильную одноразовую гибкую емкость вместимостью 350 л. К собранной культуральной жидкости добавляли ЭДТА до 10 мМ и 10 мМ Трис до рН 7,5.
В сконцентрированной диафильтрованной собранной жидкости инактивировали вирусы. До инактивации вирусов готовили 10% раствор Тритона Х-100 с 3% три(н-бутил)фосфатом (Т^Р). Сконцентрированную диафильтрованную собранную жидкость обрабатывали 1% Тритоном Х-100 с 0,3% 'ЛВР в течение 1 ч в 36 л стеклянном реакционном сосуде непосредственно перед очисткой на О колонке.
В. Очистка растворимой гНиРН20 из Оеп2.
Была подготовлена колонка с ионообменным носителем О сефарозой (РЬагтата) (9 л смолы, высота 29 см, диаметр 20 см). Для определения рН, проводимости и анализа на эндотоксин были взяты образцы после промывания колонки. Колонку уравновешивали 5 объемами 10 мМ Трис, 20 мМ №2804, рН 7,5. На О колонку при скорости 100 см3/час наносили сконцентрированную диафильтрованную среду после инактивации вирусов. Колонку промывали 5 объемами 10 мМ трис, 20 мМ №2804, рН 7,5 и 10 мМ Нерек, 50 мМ №С1, рН 7,0. Белок элюировали 10 мМ Нерек, 400 мМ №С1, рН 7,0 и фильтровали через 0,22 мкм фильтр в стерильную емкость. Элюат исследовали на наличие микрофлоры, определяли концентрацию белка и гиалуронидазную активность. В начале и в конце процесса измеряли поглощение А280.
Затем проводили гидрофобную хроматографию на фенил-сефарозе (РЬагтааа). Готовили колонку с фенилсефарозой (Р§) (19-21 л смолы, высота 29 см, диаметр 30 см). Для определения рН, проводимости и анализа на эндотоксин были взяты образцы после промывания колонки. Колонку уравновешивали 5 объемами 5 мМ фосфата калия с 0,5 М сульфатом аммония, 0,1 мМ СаС12, рН 7,0. К элюированному с О сефарозы белку добавляли 2 М раствор сульфата аммония, 1 М фосфат калия и 1 М СаС12 до конечных концентраций 5 мМ, 0,5 М и 0,1 мМ соответственно. Белок загружали на Р8 колонку при скорости 100 см3/ч и прошедший через колонку раствор собирали. Колонку промывали при скорости 100 см3/ч 5 мМ фосфатом калия с 0,5 М сульфатом аммония и 0,1 мМ СаС12, рН 7,0, прошедший через колонку раствор собирали. Объединенный прошедший через колонку раствор пропускали через 0,22 мкм фильтр и собирали в стерильную емкость. Собранный раствор исследовали на наличие микрофлоры, определяли концентрацию белка и энзиматическую активность.
Готовили колонку с аминофенилборонатной смолой (РготеНск). Для определения рН, проводимости и анализа на эндотоксин были взяты образцы после промывания колонки. Колонку уравновешивали 5 объемами 5 мМ фосфата калия с 0,5 М сульфатом аммония. Затем прошедшую через Р8 жидкость, содержащую очищенный белок, загружали на аминофенилборонатную колонку со скоростью 100 см3/ч. Колонку промывали 5 мМ фосфатом калия с 0,5 М сульфатом аммония, рН 7,0. Колонку промывали 20 мМ бицином с 0,5 М сульфатом аммония, рН 9,0. Колонку промывали 20 мМ бицином с 100 мМ хлоридом натрия, рН 9,0. Белок элюировали 50 мМ Нерек с 100 мМ №С1, рН 6,9, элюат пропускали через стерильный фильтр в стерильную емкость. Элюат исследовали на наличие микрофлоры, определяли концентрацию белка и энзиматическую активность.
Готовили колонку с гидроксиапатитом (Вюгак). Для определения рН, проводимости и анализа на эндотоксин были взяты образцы после промывания колонки. Колонку уравновешивали 5 мМ фосфатом калия с 100 мМ №С1, 0,1 мМ СаС12, рН 7,0. К очищенному на аминофенилборонатной смоле раствору белка добавляли фосфат калия до конечной концентрации 5 мМ и СаС12 до конечной концентрации 0,1 мМ, раствор наносили на колонку при скорости 100 см3/ч. Колонку промывали 5 мМ фосфатом калия, рН 7 с 100 мМ №С1, 0,1 мМ СаС12. Затем колонку промывали 10 мМ фосфатом калия, рН 7 с 100 мМ №С1, 0,1 мМ СаС12. Белок элюировали 70 мМ фосфатом калия, рН 7,0, элюат пропускали через 0,22 мкм стерильный фильтр в стерильную емкость. Элюат исследовали на наличие микрофлоры, определяли концентрацию белка и энзиматическую активность.
Очищенный на колонке с гидроксиапатитом белок затем пропускали через фильтр для удаления вирусов. Сначала проводили подготовку стерильного фильтра Укокай (Зайогшк), промывая его 2 л 70 мМ фосфата калия, рН 7,0. Перед использованием профильтрованный буфер исследовали на рН и электропроводность. Очищенный на колонке с гидроксиапатитом раствор белка затем прокачивали с помощью перистальтического насоса через 20 нМ фильтр для удаления вирусов.
Профильтрованный раствор белка в 70 мМ фосфате калия, рН 7,0, пропускали через 0,22 мкм фильтр в стерильную емкость. Фильтрат исследовали на концентрацию белка, ферментативную активность, содержание олигосахаридов, проводили характеризацию моносахаридов и сиаловых кислот. Образец также тестировали на связанные с процессом выделения и очистки примеси.
- 81 022752
Белок в фильтрате затем концентрировали до 10 мг/мл, используя систему тангенциальной проточной фильтрации (ТРР) 8айосоп 8Псе (8атйтш8) с пределом исключения 10 кД по молекулярной массе (МАС0). Фильтр подготавливали, промывая его 10 мМ гистидином с 130 мМ №С1, рН 6,0, пермеат исследовали на рН и проводимость. После концентрирования раствор белка тестировали на концентрацию белка и ферментативную активность. Затем концентрированный белок перевели 6х в 10 мМ гистидиновый буфер с 130 мМ №С1, рН 6,0. Концентрированный белок пропускали через 0,22 мкм фильтр в 20 л стерильную емкость для хранения. Раствор белка исследовали на концентрацию белка, ферментативную активность, количество свободных сульфгидрильных групп, проводили характеризацию олигосахаридов и определяли осмолярность.
Стерильной профильтрованный раствор белка асептически переносили порциями по 20 мл в 30 мл стерильные тефлоновые колбы (Иа1§епе). Затем колбы мгновенно замораживали и хранили при -20±5°С.
С. Сравнение данных о продукции и очистке растворимой гНиРН20 из Оеп1 и растворимой гНиРН20 из Оеп2.
Продукция и очистка растворимой гНиРН20 из Оеп2 в 300 л биореакторе для культивирования клеток характеризуется некоторыми изменениями в технологии по сравнению с продукцией и очисткой растворимой гНиРН20 из Оеп1 в 100 л биореакторе для культивирования клеток (как описано в примере 13В). В табл. 27 приведены примеры различий в технологии (в дополнение к обычному изменению масштаба).
- 82 022752
Таблица 27
Различия процесса Растворимая гНиРН20 Оеп1 Растворимая гНиРН20 Оеп2
Линия клеток ЗБ35М 2В2
Используемая для наращивания клеток среда Содержит 0,10 мкМ метотрексат (0,045 мг/л) Содержит 20 мкМ метотрексат (9 мг/л)
Среда для дальнейшего культивирования в объеме 6 л Содержит 0,10 мкМ метотрексат Не содержит метотрексат
36 л вращающаяся колба Без дополнительных приспособлений Рабочий объем 20 л. Оснащена устройствами для определения и контроля рН, уровня растворенного кислорода, барботирования и скорости подачи воздуха. Рабочий объем 32 л
Конечный рабочий объем в биореакторе Приблизительно 100 л в 125 л биореакторе (начальный объем культуры + 65 л) Приблизительно 300 л в 400 л биореакторе (начальный объем культуры + 260 л)
Культуральная среда в биореакторе без рекомбинантного человеческого инсулина 5,0 мг/л рекомбинантного человеческого инсулина
Объем питательной среды Составляла 4% от объема клеточной культуры в биореакторе, т.е. 3,4, 3,5 и 3,7 л, что приводило к желаемому объему в биореакторе --92 л. Составляла 4% от объема клеточной культуры в биореакторе, т.е. 10,4,10,8, 11,2 и 11,7 л, что приводило к желаемому объему в биореакторе -303 л.
Питательная среда Питательная среда # 1: СБ СНО + 50 г/л глюкозы + 8 мМ О1ШаМАХ™-1 Питательная среда #2 (СБ СНО + 50 г/л глюкозы + 8 мМ О1ц1аМАХ + 1,1 г/л бутират натрия Питательная среда #3; СВ СНО + 50 г/л глюкозы + 8 мМ О1и(аМАХ +1,1 г/л бутират натрия Питательная среда #1: 4х СБ СНО + 33 г/л глюкозы + 32 мМ О1и1атах + 16,6 г/л Уеаз1о1а1е + 33 мг/л рекомбинантного человеческого инсулина Питательная среда #2: 2х СБ СНО + 33 г/л глюкозы +16 мМ О1и1атах + 33,4 г/л Усав(о1а1е + 0,92 г/л бутират натрия Питательная среда #3: 1 х СБ СНО + 50 г/л глюкозы +10 мМ О1и1атах + 50 г/л Уеаз1о1а1е + 1,80 г/л бутирата натрия Питательная среда #4: 1 х СБ СНО + 33 г/л глюкозы + 6.6 мМ СНШатах + 50 г/л УеалоЫе + 0,92 г/л бутирата натрия
- 83 022752
Фильтрация клеточной культуры из биореактора Четыре полиэфирсульфонных фильтра (8,0 мкМ, 0,65 мкМ, 0,22 мкМ и 0,22 мкМ) последовательно 1 стадия - четыре модуля параллельно, каждый со слоем диатомовой земли размером 4-8 мкМ, слоем диатомовой земли размером 1,4-1,1 мкМ, затем с целлюлозной мембраной. 2 стадия - один модуль со слоем диатомовой земли размером 0,4-0,11 мкм и со слоем диатомовой земли размером <0,1 мкм, затем с целлюлозной мембраной. 3 стадия - 0,22 мкМ полиэфирсульфонный фильтр
100 л емкость для зранения 300 л емкость для зранения К собранной клеточной культуре добавляли ЭДТА до 10 мМ, 10 мМ Трис до рН 7,5.
Концентрирование и замена буфера до хроматографии Концентрировали с использованием 2 ТРР со спиральными полиэфирсульфо иными фильтрами МйПроге с М1УСО 30 кДа Концентрировали с использованием фильтра ЗаПопиз ЗаПозНсе ТРР МУ/СО 30 кДа
Замена буфера для 6* концентрата на 10 мМ НЕРЕ8 с 25 μΜΝβΌΙ, рН 7,0 Замена буфера для 1 Οχ концентрата на 10 мМ Трис с 20 мМ МагЗОд, рН 7,5
20 л стерильная емкость для хранения 50 л стерильная емкость для хранения
Инактивация вирусов до хроматографии Не проводили Инактивацию вирусов проводили добавлением 1% Тритона Х-100 с 0,3% трибутилфосфата, рН 7,5,
1 стадия очистки (0 сефароза) Не измеряли поглощение Поглощение А?яо измеряли в начале и в конце процесса
Фильтрация от вирусов после хроматографии Фильтр Ра11 ОУ-20 (20 нм) Фильтр БагТопиз УпояаН (20 нм)
Концентрирование и замена буфера после хроматографии Буфер ΗΕΡΕδ/солевой раствор рН 7,0 Белок концентрировали до 1 мг/мл гистидин/солевой раствор, рН 6,0 Белок концентрировали до 10 мг/мл
Пример 16. Определение содержания сиаловых кислот и моносахаридов.
Содержание сиаловых кислот и моносахаридов в растворимой гНиРН20 можно определить с помощью обратно-фазной жидкостной хроматографии (КРЬС) после гидролиза трифторуксусной кислотой. В одном примере определяли содержание сиаловых кислот и моносахаридов в партии очищенной гиалуронидазы # НиВ0701Е (1,2 мг/мл; получена и очищена, как описано в примере 15). 100 мкг образца гидролизовали 40% (по объему) трифторуксусной кислоты при 100°С в течение 4 ч в двух повторностях. После гидролиза образцы высушивали и суспендировали в 300 мкл воды. Аликвоту 45 мкл каждого ресуспендированного образца переносили в новую пробирку и высушивали, затем к содержимому пробирки добавляли 10 мкл 10 мг/мл раствора ацетата натрия. Выделенные моносахариды флуоресцентно метили добавлением 50 мкл раствора, содержащего 30 мг/мл 2-аминобензойной кислоты, 20 мг/мл цианоборгидрида натрия, около 40 мг/мл ацетата натрия и 20 мг/мл борной кислоты в метаноле. Смесь инкубировали в течение 30 мин при 80°С в темноте. Реакцию получения меченых производных останавливали добавлением 440 мкл раствора А (0,2% (об./об.) н-бутиламина, 0,5% (об./об.) фосфорной кислоты, 1% (об./об.) тетрагидрофурана). Аликвоту воды также подвергали процессу гидролиза и флуоресцентного мечения, как описано для образца гиалуронидазы, в качестве отрицательного контроля. Выделенные моносахариды разделяли методом КРЬС с использованием октадецильной (С18) обратно-фазной колонки
- 84 022752 (4,6x250 мм, размер частиц 5 мкм; ТГ Вакег), детекцию осуществляли с помощью флуоресценции (возбуждение 360 нм, излучение 425 нм). Количественное определение содержания моносахаридов проводили сравнением хроматограмм образца гиалуронидазы с хроматограммой стандартов моносахаридов, включающих й-Э-глюкозамин (О1с^, й-Э-галактозамин (СаШ), галактозу, фукозу и маннозу. В табл. 28 представлены молярные отношения каждого моносахарида к молекуле гиалуронидазы.
Таблица 28
Содержание моносахаридов в растворимой гНиРН20
партия повторность ΟΙςΝ ΟαΙΝ галактоза манноза фукоза
НиВ0701Е 1 14,28 0,07* 6,19 25,28 2,69
2 13,66 0,08* 6,00 24,34 2,61
среднее 13,97 0,08* 6,10 24,81 2,65
Пример 17. С-концевая гетерогенность растворимой гНиРН20 из клеток 3Э35М и 2В2.
Для кНиРН20 из партии, полученной и очищенной из клеток 3Э35М в 100 л биореакторе (партия НИА0505МА), и партии, полученной из 2В2 клеток в 300 л биореакторе (партия НИВ0701ЕВ), провели определение С-концевой последовательности. Белки из каждой партии отдельно расщепляли эндопротеиназой Акр-Н которая специфически расщепляет пептидные связи с Оконца от аспарагиновой кислоты и цистеиновой кислоты. Расщепление привело к высвобождению С-концевой части растворимой гНиРН20, начиная с аспарагиновой кислоты в положении 431 из 8ЕЦ ГО N0: 4. С-концевой фрагмент отделяли и характеризовали для определения последовательности и относительного содержания в партии НИА0505МА и партии НИВ0701ЕВ.
Было отмечено, что препараты растворимой гНиРН20 из клеток 3Э35М и клеток 2В2 демонстрировали гетерогенность, т.е. содержали полипептиды, которые отличались друг от друга по С-концевой последовательности (см. табл. 30 и 31). Такая гетерогенность, скорее всего, объяснянется расщеплением экспрессируемого 447 аминокислотного полипептида (8ЕЦ ГО N0: 4) с С-конца пептидазами, присутствующими в культуральной среде или других растворах, применяемых в ходе получения и очистки белка. Полученные из препаратов растворимой гНиРН20 полипептиды имели аминокислотные последовательности, соответствующие аминокислотам 1-447, 1-446, 1-445, 1-444 и 1-443 последовательности растворимой гНиРН20, приведенной в 8ЕЦ ГО N0: 122. Полные аминокислотные последовательности каждого из этих полипептидов приведены в 8ЕЦ ГО N0: 122-126 соответственно. Как отмечено в табл. 29 и 30, содержание каждого полипептида в препаратах растворимой гНиРН20 из клеток 3Э35М и 2В2 клеток отличается.
Таблица 29
Анализ С-концевых фрагментов из партии НИА0505МА
Фрагмент А.-к. позиция (по ЗЕО Ю N0:4} Последовательность Теор. масса Эксп. масса Ошибка Время элюции Содержани
028а 431-447 0АРКЬРРМЕТЕЕРр1Р¥ (ЗЕО 10 N0:191) 2053,97 2054,42 0,45 99,87 0,2%
О28Ь 431-446 0АГКЬРРМЕТЕЕР(?1Г (8ЕОГО N0:192) 1890,91 1891,28 0,37 97,02 18,4%
Ц28с 431-445 ОАРКЬРРМЕТЕЕРЦ! (ЗЕр ГО N0:193) 1743,84 1744,17 0,33 86,4 11,8%
Ό28ύ 431-444 ЦАККЬРРМЕТЕЕРО [ЗЕО ГО N0.194) 1630,70 1631,07 0,32 74,15 56,1%
О28е 431-443 ОАРКЬРРМЕТЕЕР (ЗЕО ГО N0:195) 1502,70 1502,98 0,28 77,36 13,6%
Ц28Г 431-442 ОАРКЬРРМЕТЕЕ (ЗЕО ГО N0:196) 1405,64 Нет данных Нет данных Нет данных 0,0%
Таблица 30
Анализ С-концевых фрагментов из партии НИВ0701ЕВ
Фрагмент А.-к. позиция (по ЗЕО ΪΟΝΟ: 4) Последовательность Теор. масса Эксп. масса Ошибка Время элюции Содержат
028а 431-447 ОАРКЬРРМЕТЕЕРЩРУ (5Е<5 ГО N0:191) 2053,97 2054,42 0,45 99,89 1,9%
Ц28Ь 431-446 ЦАРКЬРРМЕТЕЕРЩР (81:0 10 N0:192) 1890,91 1891,36 0,45 96,92 46,7%
028с 431-445 0АРКЬРРМЕТЕЕР<}1 (ЗЕО ГО N0:193) 1743,84 1744,24 0,40 85,98 16,7%
028(1 431-444 ЦАРКЬРРМЕТЕЕРО (ЗЕО ГО N0:194) 1630,70 1631,14 0,39 73,9 27,8%
О28е 431-443 ОАРКЬРРМЕТЕЕР (ЗЕО ГО N0:195) 1502,70 1503,03 0,33 1 77,02 6,9%
0281 431-442 ОАРКЬРРМЕТЕЕ (ЗЕО ГО N0:196) 1405,64 Нет данных Нет Нет данных 1 данных 0,0%
Все изменения изобретения должны быть очевидны специалистам в данной области, но предполагается, что изобретение ограничено формулой изобретения.
В настоящем документе также предусмотрены все очевидные специалистам в данной области изменения изобретения, но предполагается, что изобретение ограничено формулой изобретения.
- 85 022752

Claims (57)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Гиалуронидаза РН20, выбранная из полипептида с последовательностью аминокислот, приведенной как аминокислоты 36-491, 36-492, 36-493, 36-495, 36-496, 36-497, 36-498, 36-499 или 36-500 в ЗЕЦ ГО N0: 107; или полипептида с последовательностью аминокислот, приведенной как аминокислоты 36-491, 36-492, 36-493, 36-495, 36-496, 36-497, 36-498, 36-499 или 36-500 в ЗЕЦ ГО N0: 107, включающей замены аминокислот, в результате чего аминокислотная последовательность полипептида, включающего аминокислотные замены, идентична по меньшей мере на 85, 87, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более соответствующей последовательности аминокислот, приведенной как аминокислоты 36-491, 36-492, 36493, 36-495, 36-496, 36-497, 36-498, 36-499 или 36-500 в ЗЕЦ ГО N0: 107, где полипептид является растворимым и активен в нейтральной среде.
  2. 2. Гиалуронидаза РН20 по п.1, которая ^гликозилирована.
  3. 3. Гиалуронидаза РН20 по п.1 или 2, где полипептид содержит остаток ^ацетилглюкозамина, связанный с каждым по меньшей мере из трех остатков аспарагина (К).
  4. 4. Гиалуронидаза РН20 по п.3, в которой три остатка аспарагина представляют собой аминокислотные остатки 235, 368 и 393 из ЗЕЦ ГО N0: 107.
  5. 5. Гиалуронидаза РН20 по п.1 с последовательностью аминокислот, приведенной как аминокислоты 36-491, 36-492, 36-493, 36-495, 36-496, 36-497, 36-498, 36-499 или 36-500 в ЗЕЦ ГО N0: 107.
  6. 6. Гиалуронидаза РН20 с последовательностью аминокислот, приведенной как аминокислоты 36-465, 36-469, 36-470, 36-471, 36-474, 36-475, 36-476, 36-484, 36-486, 36-487, 36-488 или 36-489 в ЗЕЦ ГО N0: 107, или гиалуронидаза РН20 с аминокислотными заменами в последовательностях аминокислот, приведенных как аминокислоты 36-465, 36-469, 36-470, 36-471, 36-474, 36-475, 36-476, 36-484, 36-486, 36-487, 36-488 или 36-489 в ЗЕЦ ГО N0: 107, включающей замены аминокислот, в результате чего аминокислотная последовательность полипептида, включающего аминокислотные замены, идентична по меньшей мере на 85, 87, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более соответствующей последовательности аминокислот, приведенной как аминокислоты 36-465, 36-469, 36-470, 36-471, 36-474, 36-475, 36-476, 36-484, 36-486, 36-487, 36-488 или 36-489 в ЗЕЦ ГО N0: 107, где полипептид является растворимым и активным в нейтральной среде.
  7. 7. Гиалуронидаза РН20 по п.6 с последовательностью аминокислот, приведенной как аминокислоты 36-469, 36-470 или 36-471 в ЗЕЦ ГО N0: 107 или включающей замены аминокислот в последовательностях, приведенных как аминокислоты 36-469, 36-470 или 36-471 в ЗЕЦ ГО N0: 107, в результате чего гиалуронидаза РН20 с аминокислотными заменами состоит из последовательности аминокислот, идентичной по крайней мере на 95% аминокислотной последовательности, приведенной как аминокислоты 36-469, 36-470, или 36-471, 36-474, 36-475, или 36-476 в ЗЕЦ ГО N0: 107.
  8. 8. Гиалуронидаза РН20 по п.7, состоящая из последовательности аминокислот, приведенной как аминокислоты 36-469, 36-470 или 36-471 в ЗЕЦ ГО N0: 107.
  9. 9. Гиалуронидаза РН20 по п.6 или 7, которая ^гликозилирована.
  10. 10. Гиалуронидаза РН20 по п.8, которая включает остаток ^ацетилглюкозамина, связанный с каждым по меньшей мере из трех остатков аспарагина (М), где три остатка аспарагина являются аминокислотными остатками 235, 368 и 393 в ЗЕЦ ГО N0: 107.
  11. 11. Гиалуронидаза РН20 по любому из пп.1-10, которая модифицирована одним или более способами, выбранными из сиалирования, альбуминирования, фарнезилирования, карбоксилирования, гидроксилирования и фосфорилирования.
  12. 12. Гиалуронидаза РН20 по любому из пп.1-10, модифицированная полимером.
  13. 13. Гиалуронидаза РН20 по п. 12, где полимер представляет собой декстран или ПЭГ.
  14. 14. Гиалуронидаза РН20 по любому из пп.1-13, где полипептид получают экспрессией в клеткаххозяевах, которые не производят бифукозилирование полипептида.
  15. 15. Гиалуронидаза РН20 по п.14, где клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего или экспрессионную систему на основе клеток насекомых, продуцирующих белки с признаками белков млекопитающих.
  16. 16. Гиалуронидаза РН20 по любому из пп.1-15, которая не бифукозилирована.
  17. 17. Гиалуронидаза РН20 по любому из пп.1-16, которая является существенно очищенной или выделенной.
  18. 18. Конъюгат, включающий гиалуронидазу РН20 по любому из пп.1-17.
  19. 19. Конъюгат по п.18, в котором гиалуронидаза РН20 конъюгирована с фрагментом, выбранным из домена для мультимеризации, токсина, детектируемой метки или лекарства.
  20. 20. Конъюгат по п.19, в котором гиалуронидаза РН20 конъюгирована с Рс-доменом.
  21. 21. Конъюгат по п.18, в котором гиалуронидаза РН20 конъюгирована с полимером.
  22. 22. Конъюгат по п.21, в котором полимер представляет собой декстран или ПЭГ.
  23. 23. Конъюгат по любому из пп.18-22, в котором конъюгированная часть связана непосредственно или через линкер с С-концом или ^концом гиалуронидазы РН20.
  24. 24. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая гиалуронидазу РН20 по любому из пп.1-10, где
    - 86 022752 молекула нуклеиновой кислоты не кодирует полноразмерную гиалуронидазу РН20, но кодирует растворимую гиалуронидазу РН20.
  25. 25. Вектор экспрессии, включающий полинуклеотид, который состоит из последовательности нуклеотидов, кодирующей гиалуронидазу РН20 по любому из пп.1-10, которая включает стоп-кодон или после которой немедленно следует стоп-кодон, где полинуклеотид функционально вставлен в вектор для экспрессии гиалуронидазы РН20 по любому из пп.1-10.
  26. 26. Вектор, включающий нуклеиновую кислоту по п.24.
  27. 27. Клетка, включающая вектор по п.25 или 26 или молекулу нуклеиновой кислоты по п.24.
  28. 28. Клетка по п.27, которая представляет собой клетку СН0.
  29. 29. Композиция, содержащая полипептид гиалуронидазы РН20 по любому из пп.1-17.
  30. 30. Композиция, содержащая несколько полипептидов гиалуронидазы РН20 по любому из пп.1-10.
  31. 31. Композиция, содержащая несколько полипептидов гиалуронидазы РН20 по любому из пп.11-17.
  32. 32. Композиция по п.30, в которой несколько полипептидов гиалуронидазы РН20 кодируются молекулой нуклеиновой кислоты по п.24 или вектором по п.25 или 26.
  33. 33. Композиция по любому из пп.29-32, где полипептиды гиалуронидазы РН20 секретируются из клеток СН0.
  34. 34. Композиция по любому из пп.29-33, которая представляет собой фармацевтическую композицию.
  35. 35. Композиция по п.34, включающая дополнительный терапевтический агент.
  36. 36. Набор, включающий композицию по п.34 и дополнительный терапевтический агент, где терапевтический агент находится в отдельной композиции.
  37. 37. Композиция по п.35 или набор по п.36, где терапевтический агент выбран из химиотерапевтических агентов, анальгетиков, противовоспалительных агентов, противомикробных агентов, противоамебных агентов, противотрихомонадных агентов, агентов для лечения болезни Паркинсона, противомалярийных агентов, противосудорожных агентов, антидепрессантов, противоартритных агентов, противогрибковых агентов, антигипертензивных агентов, жаропонижающих агентов, противопаразитных агентов, антигистаминных агентов, агонистов альфа-адренорецепторов, альфа-блокаторов, анестетиков, расширяющих бронхи агентов, биоцидных агентов, бактерицидных агентов, бактериостатических агентов, бета-адренергических блокаторов, блокаторов кальциевых каналов, сердечно-сосудистых агентов, противозачаточных агентов, противоотечных агентов, мочегонных агентов, депрессантов, диагностических агентов, электролитов, снотворных агентов, гормонов, агентов против гипергликемии, миорелаксантов, агентов, вызывающих сокращение мышц, офтальмологических агентов, парасимпатомиметических агентов, антидепрессантов, седативных агентов, симпатомиметических агентов, транквилизаторов, агентов для лечения заболеваний, связанных с мочевой системой, агентов для лечения вагинальных заболеваний, противовирусных агентов, витаминов, нестероидных противовоспалительных агентов, ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента, полипептидов, белков, нуклеиновых кислот, лекарств, органических молекул и индукторов сна.
  38. 38. Композиция или набор по любому из пп.35-37, где терапевтический агент выбран из антител, иммуноглобулинов, бисфосфонатов, цитокинов, химиотерапевтических агентов и инсулина.
  39. 39. Композиция или набор по п.38, где инсулин представляет собой быстродействующий инсулин и бисфосфонат представляет собой золедроновую кислоту.
  40. 40. Композиция или набор по любому из пп.35-38, где дополнительный терапевтический агент выбран из ацивицина; акларубицина; акодазола; акронина; адозелезина; алдеслейкина; алемтузумаба; алитретиноина (9-цис-ретиноевой кислоты); аллопуринола; алтретамина; алвоцидиба; амбазона; амбомицина; аметантрона; амифостина; аминоглутетимида; амсакрина; анастрозола; анаксирона; анситабина; антрамицина; апазиквона; аргимесны; триоксида мышьяка; аспарагиназы; асперлина; атримустина; азацитидина; азетепа; азотомицина; баноксантрона; батабулина; батимастата; вакцины БЦЖ; бенаксибина; бендамустина; бензодепа; бексаротена; бевацизумаба; бикалутамида; биетасерпина; бирикодара; бизантрена; димезилата биснафида; бизелезина; блеомицина; бортезомиба; бреквинара; бропиримина; будотитана; бусульфана; кактиномицина; калустерона; канертиниба; капецитабина; карацемида; карбетимера; карбоплатина; карбоквона; кармофура; кармустина с полифепрозана; кармустина; карубицина; карзелезина; седефингола; селекоксиба; семадотина; хлорамбуцила; циотеронела; циролемицина; цисплатина; кладрибина; кланфенура; клофарабина; криснатола; циклофосфамида; липосомального цитарабина; цитарабина; дакарбазина; дактиномицина; дарбепоэтина альфа; липосомального даунорубицина; даунорубицина/дауномицина; даунорубицина; децитабина; денилейкин дифтитокса; декснигулдипина; дексона, циплактина; дексразоксана; дезагуанина; диазиквона; диброспидиума; диеногеста; диналина; дизермолида; доцетаксела; дофеквидара; доксифлуридина; липосомального доксорубицина; доксорубицина-НС1; липосомального докорубицина-НС1 для инъекций; доксорубицинов; дролоксифена; пропионата дромостанолона; дуазомицина; экомустина; эдатрексата; эдотекарина; эфлорнитина; элакридара; элинафида; раствора Эллиотта В; элсамитрусина; эмитефура; энлоплатина; энпромата; энзастаурина; эпипропидина; эпирубицина; эпоэтина альфа; эпталопроста; эрбулозола; эзорубицина; эстрамустина; этанидазола; этоглуцида; этопозид фосфата; этопозида УР-16; этопозидов; этоприна; эксеместана; эксизулинда; фадрозола;
    - 87 022752 фазарабина; фенретинида; филграстима; флоксуридина; флударабина; фторурацила; 5-фторурацила; флуоксиместерона; флуроцитабина; фосхидона; фостриецина; фотретамина; фулвестранта; галарубицина; галоцитабина; гемцитабина; гемтузумаб/озогамицина; герохинола; гиматекана; гимерацила; глоксазона; глуфосфамида; гозерелин ацетата; гидроксимочевины; ибритумомаб/тиукситана; идарубицина; ифосфамида; илмофозина; иломастата; иматиниб мезилата; имексона; импросульфана; индизулама; инпроквона; интерферона альфа-2а; интерферона альфа-2Ъ; интерферона альфа, интерферона бета, интерферона гамма, интерферонов, интерлейкина-2 и других интерлейкинов (в том числе рекомбинантных интерлейкинов); интоплицина; иобенгуана [131-1]; ипроплатина; иринотекана; ирсогладина; иксабепилона; кетотрексата; Ь-аланозина; ланреотида; лапатиниба; ледоксантрона; летрозола; лейковорина; лейпролида; лейпрорелина (лейпролида); левамизола; лексакальцитола; лиарозола; лобаплатина; лометрексола; ломустина/ССNυ; ломустина; лонафарниба; лозоксантрона; луртотекана; мафосфамида; манносульфана; маримастата; мазопрокола; мейтансина; мехлоретамина; мехлоретамина/азотистого иприта, мегестрол ацетата; мегестрола; меленгестрола; мелфалана; мелфалана (Ь-РАМ); меногарила; мепитиостана; меркаптопурина; 6-меркаптопурина; месна; метезинда; метотрексата; метоксалена; метомидата; метоприна; метуредепа; мибоплатина; мипроксифена; мизонидазола; митиндомида; митокарцина; митокромина; митофлаксона; митогиллина; митогуазона; митомалцина; митомицина С; митомицина; митонафида; митоквидона; митоспера; митотана; митоксантрона; митозоломида; мивобулина; мизорибина; мофаротена; мопидамола; мубритиниба; микофеноловой кислоты; фенпропионата нандролона; недаплатина; нейзарабина; неморубицина; нитракрина; нокодазола; нофетумомаба; ногаламицина; нолатрекседа; нортопиксантрона; октреотида; опрелвекина; ормаплатина; ортатаксела; отерацила; оксалиплатина; оксизурана; оксофенарсина; паклитаксела; памидроната; патупилона; пегадемазы; пегаспаргазы; пегфилграстима; пелдезина; пелиомицина; пелитрексола; пеметрекседа; пентамустина; пентостатина; пепломицина; перфосфамида; перифозина; пикоплатина; пинафида; пипобромана; пипосульфана; пирфенидона; пироксантрона; пиксантрона; плевитрекседа; пликамицина; пломестана; порфимера натрия; порфимера; порфиромицина; преднимустина; прокарбазина; пропамидина; проспидиума; пумитепа; пуромицина; пиразофурина; квинакрина; ранимустина; расбуриказы; рибоприма; ритросульфана; ритуксимаба; роглетимида; роквинимекса; руфокромомицина; сабарубицина; сафингола; сарграмостима; сатраплатина; себриплатина; семустина; симтразена; сизофирана; собузоксана; сорафениба; спарфозата; спарфозовой кислоты; спарсомицина; спирогермания; спиромустина; спироплатина; скваламина; стрептонигрина; стрептоварицина; стрептозоцина; суфосфамида; сулофенура; сунитиниб малата; 6-ТС (тиогуанина); тацединалина; талька; тализомицина; таллимустина; тамоксифена; тариквидара; тауромустина; текогалана; тегафура; телоксантрона; темопорфина; темозоломида; тенипозида/УМ-26; тенипозида; тероксирона; тестолактона; тиамиприна; тиагуанина; тиотепа; тиамиприна; тиазофурина; тиломизола; тилорона; тимкодара; тимонацика; тирапазамина; топиксантрона; топотекана; торемифена; тозитумомаба; трабектедина (эктеинасцидина 743); трастузумаба; трестолона; третиноина/АТКА; трицирибина; трилостана; триметрексата; триплатин тринитрата; трипторелина; трофосфамида; тубулозола; убенимекса; урацил иприта; уредепа; валрубицина; валсподара; вапреотида; вертепорфина; винбластина; винкристина; виндезина; винепидина; винфлунина; винформида; винглицината; винлейцинола; винлейрозина; винорелбина; винрозидина; винтриптола; винзолидина; ворозола; ксантомицина А (гуамециклина); зениплатина; зиласкорба [2-Н]; зиностатина; золедроната; зорубицина и зосухидара.
  41. 41. Способ лечения связанных с гиалуронаном заболеваний или состояний, включающий введение субъекту гиалуронидазы РН20 по любому из пп.1-17 или композиции или набора по любому из пп.29-39.
  42. 42. Способ лечения накопления избытка гликозаминогликанов, лечения опухолей, лечения накопления гликозаминогликанов в мозге, лечения сердечно-сосудистых расстройств, лечения офтальмологических расстройств, лечения легочных заболеваний, увеличения проникновения химиотерапевтических агентов в плотные опухоли, лечения целлюлита, лечения пролиферативных расстройств или увеличения биодоступности лекарственных препаратов и других терапевтических агентов, включающий введение субъекту гиалуронидазы РН20 по любому из пп.1-17 или композиции или набора по любому из пп.29-39.
  43. 43. Способ по п.42, в котором пролиферативное расстройство представляет собой доброкачественную гиперплазию предстательной железы.
  44. 44. Способ по п.42, где дополнительный терапевтический агент выбран из ацивицина; акларубицина; акодазола; акронина; адозелезина; алдеслейкина; алемтузумаба; алитретиноина (9-цис-ретиноевой кислоты); аллопуринола; алтретамина; алвоцидиба; амбазона; амбомицина; аметантрона; амифостина; аминоглутетимида; амсакрина; анастрозола; анаксирона; анситабина; антрамицина; апазиквона; аргимесны; триоксида мышьяка; аспарагиназы; асперлина; атримустина; азацитидина; азетепа; азотомицина; баноксантрона; батабулина; батимастата; вакцины БЦЖ; бенаксибина; бендамустина; бензодепа; бексаротена; бевацизумаба; бикалутамида; биетасерпина; бирикодара; бизантрена; димезилата биснафида; бизелезина; блеомицина; бортезомиба; бреквинара; бропиримина; будотитана; бусульфана; кактиномицина; калустерона; канертиниба; капецитабина; карацемида; карбетимера; карбоплатина; карбоквона; кармофура; кармустина с полифепрозана; кармустина; карубицина; карзелезина; седефингола; селекоксиба; семадотина; хлорамбуцила; циотеронела; циролемицина; цисплатина; кладрибина; кланфенура; клофарабина; криснатола; циклофосфамида; липосомального цитарабина; цитарабина; дакарбазина; дак- 88 022752 тиномицина; дарбепоэтина альфа; липосомального даунорубицина; даунорубицина/дауномицина; даунорубицина; децитабина; денилейкин дифтитокса; декснигулдипина; дексона, циплактина; дексразоксана; дезагуанина; диазиквона; диброспидиума; диеногеста; диналина; дизермолида; доцетаксела; дофеквидара; доксифлуридина; липосомального доксорубицина; доксорубицина-НС1; липосомального докорубицина-НС1 для инъекций; доксорубицинов; дролоксифена; пропионата дромостанолона; дуазомицина; экомустина; эдатрексата; эдотекарина; эфлорнитина; элакридара; элинафида; раствора Эллиотта В; элсамитрусина; эмитефура; энлоплатина; энпромата; энзастаурина; эпипропидина; эпирубицина; эпоэтина альфа; эпталопроста; эрбулозола; эзорубицина; эстрамустина; этанидазола; этоглуцида; этопозид фосфата; этопозида УР-16; этопозидов; этоприна; эксеместана; эксизулинда; фадрозола; фазарабина; фенретинида; филграстима; флоксуридина; флударабина; фторурацила; 5-фторурацила; флуоксиместерона; флуроцитабина; фосхидона; фостриецина; фотретамина; фулвестранта; галарубицина; галоцитабина; гемцитабина; гемтузумаб/озогамицина; герохинола; гиматекана; гимерацила; глоксазона; глуфосфамида; гозерелин ацетата; гидроксимочевины; ибритумомаб/тиукситана; идарубицина; ифосфамида; илмофозина; иломастата; иматиниб мезилата; имексона; импросульфана; индизулама; инпроквона; интерферона альфа-2а; интерферона альфа-2Ъ; интерферона альфа, интерферона бета, интерферона гамма, интерферонов, интерлейкина-2 и других интерлейкинов (в том числе рекомбинантных интерлейкинов); интоплицина; иобенгуана [131-Ι]; ипроплатина; иринотекана; ирсогладина; иксабепилона; кетотрексата; Ь-аланозина; ланреотида; лапатиниба; ледоксантрона; летрозола; лейковорина; лейпролида; лейпрорелина (лейпролида); левамизола; лексакальцитола; лиарозола; лобаплатина; лометрексола; ломустина/ССNυ; ломустина; лонафарниба; лозоксантрона; луртотекана; мафосфамида; манносульфана; маримастата; мазопрокола; мейтансина; мехлоретамина; мехлоретамина/азотистого иприта, мегестрол ацетата; мегестрола; меленгестрола; мелфалана; мелфалана (Й-РЛМ); меногарила; мепитиостана; меркаптопурина; 6-меркаптопурина; месна; метезинда; метотрексата; метоксалена; метомидата; метоприна; метуредепа; мибоплатина; мипроксифена; мизонидазола; митиндомида; митокарцина; митокромина; митофлаксона; митогиллина; митогуазона; митомалцина; митомицина С; митомицина; митонафида; митоквидона; митоспера; митотана; митоксантрона; митозоломида; мивобулина; мизорибина; мофаротена; мопидамола; мубритиниба; микофеноловой кислоты; фенпропионата нандролона; недаплатина; нейзарабина; неморубицина; нитракрина; нокодазола; нофетумомаба; ногаламицина; нолатрекседа; нортопиксантрона; октреотида; опрелвекина; ормаплатина; ортатаксела; отерацила; оксалиплатина; оксизурана; оксофенарсина; паклитаксела; памидроната; патупилона; пегадемазы; пегаспаргазы; пегфилграстима; пелдезина; пелиомицина; пелитрексола; пеметрекседа; пентамустина; пентостатина; пепломицина; перфосфамида; перифозина; пикоплатина; пинафида; пипобромана; пипосульфана; пирфенидона; пироксантрона; пиксантрона; плевитрекседа; пликамицина; пломестана; порфимера натрия; порфимера; порфиромицина; преднимустина; прокарбазина; пропамидина; проспидиума; пумитепа; пуромицина; пиразофурина; квинакрина; ранимустина; расбуриказы; рибоприма; ритросульфана; ритуксимаба; роглетимида; роквинимекса; руфокромомицина; сабарубицина; сафингола; сарграмостима; сатраплатина; себриплатина; семустина; симтразена; сизофирана; собузоксана; сорафениба; спарфозата; спарфозовой кислоты; спарсомицина; спирогермания; спиромустина; спироплатина; скваламина; стрептонигрина; стрептоварицина; стрептозоцина; суфосфамида; сулофенура; сунитиниб малата; 6^С (тиогуанина); тацединалина; талька; тализомицина; таллимустина; тамоксифена; тариквидара; тауромустина; текогалана; тегафура; телоксантрона; темопорфина; темозоломида; тенипозида/УМ-26; тенипозида; тероксирона; тестолактона; тиамиприна; тиагуанина; тиотепа; тиамиприна; тиазофурина; тиломизола; тилорона; тимкодара; тимонацика; тирапазамина; топиксантрона; топотекана; торемифена; тозитумомаба; трабектедина (эктеинасцидина 743); трастузумаба; трестолона; третиноина/ΑΤΚΑ; трицирибина; трилостана; триметрексата; триплатин тринитрата; трипторелина; трофосфамида; тубулозола; убенимекса; урацил иприта; уредепа; валрубицина; валсподара; вапреотида; вертепорфина; винбластина; винкристина; виндезина; винепидина; винфлунина; винформида; винглицината; винлейцинола; винлейрозина; винорелбина; винрозидина; винтриптола; винзолидина; ворозола; ксантомицина А (гуамециклина); зениплатина; зиласкорба [2-Н]; зиностатина; золедроната; зорубицина и зосухидара.
  45. 45. Способ по п.43, в котором гиалуронидаза РН20 пегилирована.
  46. 46. Применение гиалуронидазы РН20 по любому из пп.1-17 или композиции или набора по любому из пп.29-39 для получения лекарственного средства для лечения связанных с гиалуронаном заболеваний или состояний.
  47. 47. Применение фармацевтической композиции, включающей полипептид по любому из пп.1-17, для лечения связанных с гиалуронаном заболеваний или состояний.
  48. 48. Применение фармацевтической композиции или набора по любому из пп.29-39 для лечения связанных с гиалуронаном заболеваний или состояний.
  49. 49. Применение гиалуронидазы РН20 по любому из пп.1-17 или композиции или набора по любому из пп.29-39 для получения лекарственного средства для лечения накопления избыточного количества гликозаминогликанов, для лечения опухолей, для лечения накопления гликозаминогликанов в мозге, для лечения сердечно-сосудистых расстройств, для лечения офтальмологических расстройств, для лечения заболеваний легких, для увеличения проникновения химиотерапевтических препаратов в плотные опу- 89 022752 холи, для лечения целлюлита, для лечения пролиферативных расстройств или для повышения биодоступности лекарств и других терапевтических агентов.
  50. 50. Применение по п.49, где пролиферативное расстройство представляет собой доброкачественную гиперплазию предстательной железы.
  51. 51. Применение фармацевтической композиции, включающей полипептид по любому из пп.1-17, для лечения накопления избыточного количества гликозаминогликанов, для лечения опухолей, для лечения накопления гликозаминогликанов в мозге, для лечения сердечно-сосудистых расстройств, для лечения офтальмологических расстройств, для лечения заболеваний легких, для увеличения проникновения химиотерапевтических препаратов в плотные опухоли, для лечения целлюлита, для лечения пролиферативных расстройств или для повышения биодоступности лекарств и других терапевтических агентов.
  52. 52. Применение фармацевтической композиции или набора по любому из пп.29-39 для лечения накопления избыточного количества гликозаминогликанов, для лечения опухолей, для лечения накопления гликозаминогликанов в мозге, лечения сердечно-сосудистых расстройств, для лечения офтальмологических расстройств, для лечения заболеваний легких, для увеличения проникновения химиотерапевтических препаратов в плотные опухоли, для лечения целлюлита, для лечения пролиферативных расстройств или для повышения биодоступности лекарств и других терапевтических агентов.
  53. 53. Применение по п.51 или 52, где пролиферативное расстройство представляет собой доброкачественную гиперплазию предстательной железы.
  54. 54. Способ лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы, включающий введение гиалуронидазы РН20.
  55. 55. Применение гиалуронидазы РН20 для получения лекарственного средства для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
  56. 56. Применение фармацевтической композиции, включающей гиалуронидазу РН20, для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
    РН20 шимпанзе РН20 человека
    РН20 шимпанзе РН20 человека
    РН20 шимпанзе РН20 человека
    РН20 шимпанзе РН20 человека
    РН20 шимпанзе РН20 человека
    РН20 шимпанзе РН20 человека
    РН20 шимпанзе РН20 человека
    РН20 шимпанзе РН20 человека
    РН20 шимпанзе РН20 человека мотшжю(тя$г«:$5®/50е йтти.ΐροαπ,ΝΕ^ρρνιрдерпаядар^гс во Юи;КН1ГР«5ГЖ55СУ501 «’ΤΕίί IРСЙ П.ЯР«АРР¥ ι ΡΗΪΡΡЕМЛИНАР5ЕРС 60 *********** ****************************************** ******* еЖГОЕР!23К51Р5пе5РР1НАТ5(йй1Рг®«.еугруго51гайУяаз1Рак1Я ш 1<жгаЕР1Еияг$и<арй1Н!Лтотптсгурно$:тст™зе1Р0«51120 ********************** *** ********************************* оаищкАйсо! тгорйнеонай оиееирр™аян*<рюугк№?51 а инимедл 1» ОТ1ДШ1Ф1Гтру0Н1^у1^ЕГ4ЯРТЦ^№!КР1а¥1ЛС1В51Е1т0Ф1ТО5 180
    ЕЙАТЕКАХЖГ£ХдагаПЛ‘тКШЙЬРРЕК^иЕР0СЕ>ННУККРС¥!Ю$СЕН 240 1ТЕАТЕ^ВДЕГК№ЩЕ1уЩКЬ5й1№НН1у^ДЕРрСТН^ККР6У1155СЕ8 240
    ШО?Щ0194ЕКНЕ5ТАЕУР51Р,.ИГ<И5РУМи¥7КНКйШ?.75К1геМ5Р1Р7 300 ШЖЮ0Е5ШШТАЕт1УЕНГ®$РШТ1«ггаЯ«!ШтяР0АК5Р1РУ 300
    МЬλ* йй№А Α'λΆΑ***ΑΊΐι А* А*4с*4 *й ЛМА'й·'· Мв'Мк'А*МкА* АА'Л'ЯА ΑΆ ΑΑ'ί ΑΑΆΆАлк'А
    РА'ЕТКГУПМУ1ХП.З®Ж1¥ГТГ0£ТУ)Ч.еА5е1¥Н6Я5ГИЙ»»;5Си.10Н’(НЕГ 360 360 [1ЛР¥ПМ¥-П.ААК1С5а1а.0аЕ«;¥С1ИОВ«50¥иН1МРа1ЕА1{|-К0йКЕ'Т'А19; 420 11ЛРГII НУПААКНС5а¥1.С0Е(Е¥С ΙΒΚίΗ«55ΒΥϊ,ΗΙΗΡΟίΓΑΙ %КЗБК ПЛЯЖ 420 ********** *** ***************** ******************************
    РП.ЕОЕЕОЕЗЕКЕУСЗСГЯЕЗейЕАОУКОтаАгаУСЕАабУСШЙКРдаЕТЕЕРО! 480
    РКЕОиОЕ5ЕКПОСТ5К5СКЕМО¥КОПЗАТО¥С1АОО¥С1САП.Ю>РНЕ'1ЕБ<Н 480 **** ** ** ********************************* ******* ****** *** **
    ЕУМА5РЗП.5Й ЕГНА5Р5П _ ** ** ***********
    Фиг. 1
    - 90 022752
    Фиг. 2 «1-6
    ΕηόοΡΙ ® «1-3 © «1-6 (©Ιον() β1-4 ® «1-4 (<3ΙοΝ() β1-4 (<3ΙοΝ() —( Азр () _ «1-3 Т
    θ)»1-2® ПНГэзаГ гибридный Ν-связанный (Азр) олигосахарид ЕлбоР1 ®«1-2®«1-6~ I ^«1-6 _п 4 _ © «1-2 ® 0 3 © «1-4 (О1сы() β1-4 (αοΝ()-τ-(^ρ{) ® «1-2® «1-2 «1-3
    ПНГазаР олигоманнозный Ν-связанный олигосахарид
    Фиг. 3А
    ΕγκΙο Р2 (б> «2-3/6 © 01-4 (О1сЫ() β1 -2©^ I © β1-4(ΘΙοΝ[) β1-4 (<асм()--( Азр () (б> «2-3/6 © β1-4 (<3ΙοΝ() β1 -2 © «1-3
    ПНГазаР биантенный Ν-связанный гликан
    Εηάο Ρ2 ©«1-2®“'' ©α1-4(θΙΟΝ[)β1-4(θΙοΝ()-γ-(Α3ρ() ® «1-2© «1-2® © «1-2 ©«1-6 _ «1-3^01-6
    I
    ПНГазаР олигоманнозный Ν-связанный гликан
    Фиг. 3В
    - 91 022752 ,_л Εηύο РЗ (δ> 02-3/6 <§) ρΐ-4{θΙΕΝ()β1-2 | (Μ) β1-4(θΙοΝ() р1-4 (01сЫ[) у(Аар()
    Ц> о2-3/6© Ρ1-4(β|0Ν()Ρ1-2@ о1-3
    ПНГазаР биантенный Ν-связанный гликан
    ЕпйоРЗ
    I (б> о2-3/6 (О) Ρ1-4(θΙοΝ{)Ρ1-2@^ι §>α2.3Ζβ®βΜ^)9,.4 βΗ0·Μ0γ|3| _ @а1_3 I (§> о2-3/6 @ρΐ-3/4(θΙοΝ() Р1-2 ПНГазаР триантенный Ν-связанный гликан
    Фиг. 3С
    Фиг. 3Ό
    - 92 022752
    Перечень последовательностей <110> Галозим, Инк БЕИ, Ги
    ПАННИИРСЕЛВАМ, Кришнасами БУКБИНДЕР, Луис ФРОСТ, Грегори Ай.
    <120> РАСШИРЕННЫЕ РАСТВОРИМЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ РН20 И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ <130> 3800020.00246/3074РС <140> Еще не установлено <141> Посредством этого <150> 03 61/201,384 <151> 2008-12-09 <150> УЗ 61/281,240 <151> 2009-11-13 <16О> 215 <170> ГазОЗЕф для Нхпскжз версии 4.0 <210> 1 <211> 1530 <212> ДНК <213> Ноте дархепз .
    <220>
    <223> Человеческая РН20 кДНК, кодирующая аминокислоты 1-509 <400> 1 аОдддадОдс ОааааООсаа дсасаОсСОО оосадаадсо сОдООаааДс аадОддадОа 60
    СсссадаОад гОСОсассОО ссЬЪсЪдаИ: ссаОдсСдсг. ОдасОсОдаа ССОсададса 120 ссОссОдООа ООссаааОдО дссОООссОс ОдддссОдда аДдссссаад СдааООООдО 180 сДДддааааО гОдаСдадсс асДадаОаОд адссОсООсО сОООсаОадд аадсссссда 240 аОааасдсса ссдддсаадд сдОДасааОа ООООаОдООд аОадасООдд 01:301:31:00(: 300
    РасаОадаОО сааОсасадд адОаасОдОд ааОддаддаа Осссссадаа даОООссООа 360 саадассаСс Оддасааадс Саадааадас аООасаЪОЪО аЪаОдссадО адасааОООд 420 ддааОддсОд ООаООдасОд ддаадааОдд адасссасОО дддсаадааа сОддааассС 480 ааадаОдООО асаадааОад д Ос Да ¢.1: да а (ЛддССсадс аасааааЪдС асаасЪОадЬ 540 сЬсасададд ссасОдадаа адсаааасаа дааДЁсдааа аддсадддаа ддаООСсссд 600 дСададасОа СааааООддд ааааООасОО сддссаааОс асООдОдддд ООаООаОсОО 660
    ГССссддаОО дООасаасса ЪсасЬаОаад ааасссддОО асааОддаад ООдсООсааО 720 дЪадаааОаа ааадаааОда ЬдаОсОсадс ОддООдОдда аОдааадсас ОдсОсОООас 780 ссаОссэООО аОООдаасас ЬсадсадОсО ссОдЬадсОд сСасасОсОа ^дЪдсдсаа!. 840 сдадЬОсддд аадссаОсад адОООссааа аОассОдаОд сааааадОсс асСОссддЫ; 900
    ОООдсаОаОа сссдсаьадс ооосасОдаО саадООООда ааООссОООс ОсаадаОдаа 960 сООдОдОаЬа саОООддсда аасОдООдсО сОдддОдсЬО сОддааЬОдЪ ааОаОдддда 1020 асссСоадОа ОааОдсдаад СаОдаааОсО ОдсОСдсОсс ОадэсааОСа саОддада^ 1080 аОасЪдааОс сООасаОааО саасдОсаса сДадсадсса аааОдЬдОад ссаадОдсОЁ 1140
    Сдссаддадс ааддадОдОд СаОааддааа аасОддааОО саадОдасОа ЬсООсассОс 1200 аасссадаОа аООООдсЪаД ЬсаасООдад аааддОддаа адООсасадО асдОддаааа 1260 ссдасасООд аадассОдда дсааССООсО даааааООН: а^СдсадсСд ООаОадсасс 1320
    ССдадООдОа аддадааадс ОдаДдЪаааа дасасЬдаОд сОдССдаОдО дОдОаООдс£ 1380
    551:99091:01: дОаОадаОдс ООЬОсОаааа ссОсссаОдд адасадаада ассОсаааОО 1440
    ООсОасааОд сООсасссОс сасасОаОсС. дссасааОдО ОсаООдОЬад ОаООООдООО 1500 сООаОсаООО сООсОдОадс дадОООдОаа 1530
    - 93 022752 <210> 2 <211> 1506 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> Кодон-оптимизированная РН20 с сайтами рестрикции <400> 2 дсЬадсаЬдд асаЬдадддЪ ассадсссад сЬдЪЪдддсс ЬЬсЬЬсЬдсЬ ЪЬддсЬсссЬ 60 ддддсааддд дасЬЬаасСЬ сададсЬссс ссЪдЬааЬсс сааасдЬссс сЬЛссЬдЬдд 120 дсаЬддаасд ссссЬадсда аЪЛсСдИЬд дддаааЫПд асдаассЬсС ддасаОдЬсЬ 180 с5дЬ555сЬ5 ЬЬаЪсддЬад сссссдаасс аасдсьассд дасадддддс дасааЬсИ5 240
    Ъасд5ддаЪс дЪсЬдддсЪа ЬСасссРРас аЬсдасадса пасьддддс дассдьдаас 300 ддаддсаЬСс с£садаааа5 а^сасСдсад дассассЬдд асааадсЪаа дааддаЬаП 360 асаНсЪаса ЬдссадЬдда сааЮСсдда аСддсЬдЬда ЬЬдасЬддда ддадЬддада 420 сссасссддд сссдаааЫд даадсссаад даСд5.д£а£а адаассдаЬс саМздадсСд 480 дЪдсадсадс адаасдСдса дсЪдЬсссЬЪ асадаадсса ссдааааадс Ёаадсаддаа 540
    ЬЬсдадааад с^дддаадда ЬЪЪссЬддЬЬ дадасааЬаа аасЬЬдддаа ас^дсСЬада 600 ссЬаассасс ЬсЬддддсСа ЬСаИЬдПс сссдаЬЬдсЬ асааЬсасса сЬаЬаадаад 660 сссддсьаса асддаъсосд ьсссаасдъс даааСЁаааа дааасдаьда ссссьс55дд 720 ^идСддаасд ад^сьасьдс асЪсЬасссс ЬсЬаЬаЬаЬс Ъсаасасаса дсадгсссса 780 дЬадссдсЬа сссЬсЪасдЪ СсддааЬада дЬдадддаад ссаЬсадддр. дЬссаадаЪс 840 сссда5дсса ааЬсЬссссЬ сссадЬдЬП дссЬасасса ддаЬсдЪдЬС Ьассдассад 900 дЬдЬЬдаадЬ ЬссЬдадсса ддасдадсСс дЬдЬаЬасИ Иддсдадас адПдсЬсСд 960 ддадссссьд ддаьсдсдас съддддсас! с£дадсаЬ5а сдсдассаа^. даадгссьдс 1020 ссдссдсЬдд асаас£аса£. ддадасааЛс сЬдаасссаЬ аЬаЬсаМ;аа сдЬдасПЛд 1080 дссдсЬаада ЬдЬдЬЬсаса ддЬдсЬдЬдЬ саададсадд дадЬаЬдсаЬ Ьаддаадаас 1140
    Ьдда.ас5саа дсдаЬЬаЬсС ссаСсОдаас ссадаЬааЬЬ ЬЬ-дсаа^сса дсЬддаааад 1200 ддЬддЬаааЬ ЬсасЬд^ссд адддаадссс асасЬсдадд аСс^сдааса дНЪадСдаа 1260 аадЬЬс5ас£ дЬадсЬдсЬа ЪадсасЬсСд адИдЬаадд ааааадссда ЬдЬдааадас 1320 асЬдаЬдссд ИдасдИЬд саЪсдссда! ддддъдидоа пдасдсси ьсьсаадсса 1380 ссааьддада сьдаддадсс ссадаЬсЬИ £асаасдсс£ сссссьссас сидадьдсь 1440 ассаЬд^Ъса ЬсдЬа^сЬас асЪЬЬЬссЬд аЬЪаЪаЬсаа дсдЪддсаад ссЬс^даЬаа 1500 ддаЬсс 1506 <210> 3 <211> 507 <212> Белок <213> Ното зархепз <220>
    <223> Предшественник НиРН20 (1-507) <400> 3
    Ме5 С1у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе ьу® Ш.5 Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у V®! Зег С1п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суа Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе 50 55 60 Аар С1и Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг О1у С1п О1у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг νβΐ Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг С1у Уа1 ТЬг Уа1 Азп С1у 100 105 110
    - 94 022752
    Е1у Не Рго 115 С1п Ьуз Не Зег Ьеи С1п Азр Нхз 120 Ьеи Азр 125 Ьуз А1а Ьуз Ъуз Азр Не ТЬг РЬе Туг Мес Рго Уа1 Азр Азп Ьеи 61у МеС А1а Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр 61и С1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не С1и Ьеи Уа1 61п 61п 51п Азп 165 170 175 7а1 Е1п Ьеи Зег Ьеи ТЬг С1и А1а ТЬг С1и Ьуз А1а Ьуз Е1п С1и РЬе 180 185 190 Е1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи νβΐ С1и ТЫ Не Ьуз Ьеи 51у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Ηί3 Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп ΗΪ5 Н13 Туг Ьуз Ьуз Рго 61у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 61и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи АЗП ТЬг Е1п С1п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а Не Агд νβΐ 275 290 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЬг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег Е1п Азр Е1и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТЬг РЬе С1у С1и ТЬг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег Е1у Не 325 330 335 7а1 Не Тгр С1у ТЬг Ьеи Зег Не МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ 61и ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеС Суз Зег 61п Уа1 Ьеи Суз Е1п Е1и С1п 370 375 380 С1у Уа1 Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи ΗΪ3 Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а Не Е1п Ьеи С1и Ьуз С1у С1у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 21 у Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи С1и С1п РЬе Зег С1и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр С1у Уа1 Суз 450 455 460 11е Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеС С1и ТЬг С1и С1и Рго 61п Г1е 4 65 470 475 480 РЬе Туг Азп А1а Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег А1а ТЬг МеС РЬе Не 7а1 485 490 495 Зег Не Ьеи РЬе Ьеи 11е Не Зег Зег Уа1 А1а 500 505
    <210> 4 <211> 505 <212> Белок <213> Ногао заргепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-505
    - 95 022752
    <4ΰΰ> 4 Мер С1у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз Н15 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег С1п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 11е Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Аз η А1а ТЫ С1у С1п С1у Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег 11е ТЬг С1у Уа1 ТЬг Уа1 Азп С1у 100 105 110 С1у Не Рго С1п Ьуз Не Зег Ьеи <31п Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго Уа1 Азр Азп Ьеи С1у МеЬ А1а Уа1 130 135 140 11е Азр Тгр С1и С1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е С1и Ьеи Уа1 С1п С1п С1п Азп 165 170 175 1/а1 61п Ьеи Зег Ьеи ТЬг С1и А1а ТЬг С1и Ьуз А1а Ьуз 61Ь С1и РЬе 180 185 190 С1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 С1и ТЬг Не Ьуз Ьеи С1у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр Е1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Н1з ΗΪ3 Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг С1п еш Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЫ Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд 1/а1 Агд С1и А1а Г1е Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз 11е Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд 11е Уа1 РЬе ТЬг Азр СЬп 17а 1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1п Азр С1и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТЫ РЬе С1у С1и ТЬг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег 61у Не 325 330 335 Уа1 Не Тгр С1у ТЬг Ьеи Зег 11е Мег Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азь Туг МеЬ 51и ТЫ 11е Ьеи Азп Рго Туг Не 11е Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеЬ Суз Зег С1п 17а1 Ьеи Суз С1п С1и С1п 370 375 380 С1у Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи ΗΪ3 Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а Не С1п Ьеи С1и Ьуз С1у С1у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд С1у Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи С1и С1п РЬе Зег С1и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр 17а1 Суз 11е А1а Азр С1у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ С1и ТЬг С1и С1и Рго С1ь Не 465 470 475 480
    - 96 022752
    РЬе Туг Азп А1а Зег 485 Рго Зег ТЫ Ьеи Зег А1а ТЬг МеЕ 490 РЬе 11е Уа1 495 Зег Не Ьеи РНе Ьеи Не 11е Зег Зег 500 505
    <210> 5 <211> 503 <212> Белок <213> Ното зариепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-503 <400> 5
    Меб С1у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НП 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег С1п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ьеи 61у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр 61 и Рго Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп А1а ТЬг С1у 61п 61у Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 61у Туг Туг Рго Туг 11е Азр Зег Не ТЬг 61 у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61у 100 105 110 61у 11е Рго С1п Ьуз 11е Зег Ьеи 61п Азр ΗΪ3 Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеС Рго Уа1 Азр Азп Ьеи 61 у Мер А1а Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр 61и 61 и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не С1и Ьеи Уа1 61п С1п С1п Азп 165 170 175 Уа1 61п Ьеи Зег Ьеи ТЬг 61и А1а ТЬг 61 и Ьуз А1а Ьуз С1п 61и РЬе 180 185 190 61и Ьуз А1а 61 у Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 51и ТЬг Не Ьуз Ьеи 61у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Шз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп ΗΪ3 Низ Туг Ьуз Ьу5 Рго С1у Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 01и Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг 61п 61 п Бег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а 11е Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Агр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 2 95 300 Агд 11е Уа1 РЬе ТЬг Азр 61п Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1п Азр 61и 305 310 315 320 Ьеи νβΐ Туг ТЬг РЬе С1у С1и ТЬг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег С1у Не 325 330 335 Уа1 Не Тгр 61у ТЬг Ьеи Зег Не Меь Агд Зег Меь Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Меь 61и ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Туг 11е Не Азп 355 360 365
    - 97 022752
    νβΐ ТНг 370 Ьеи А1а А1а Ьуз МеЕ 375 Суз Зег С1п Уа1 Ъеи 380 Суз С1п С1и С1п С1у Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи ΗΪ3 Ьеи 365 390 395 400 Азп Рго Азр АЗП РНе А1а Не С1п Ьеи С1и Ьуз С1у С1у Ьуз РНе ТНг 405 410. 415 Уа1 Агд С1у Ьуз Рго ТНг Ьеи С1и Азр Ьеи 61и С1н РНе Зег 61и Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр νβΐ Суз Не А1а Азр С1у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РНе Ьеи Ьуз Рго Рго Не! <31и ТНг 61и С1и Рго С1п Не 4 65 470 475 480 РНе Туг Аз η А1а Зег Рго Зег ТНг Ьеи Зег А1а ТНг МеЕ РНе Не Уа1 485 490 495 Зег 11е Ьеи РНе Ьеи Не Не
    500 <210> 6 <211> 501 <212> Белок <213> Ното заргеп5 <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-501 <400> 6
    МеЕ С1у Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьуз Нгз Не РНе РНе Агд Зег РНе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1 у Уа1 Зег С1п Не Уа1 РНе ТНг РНе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Аз η РНе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уэ1 Рго 35 40 45 РНе Ьеи Тгр А1а Тгр АЗП А1а Рго Зег С1и РНе Су5 Ьеи С1у Ьуз РНе 50 55 60 Азр С1и Рго Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РНе Зег РНе Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Аз η А1а ТНг С1у Е1п С1у Уа1 ТНг 11е РНе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 61у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТНг С1 у Уа1 ТНг Уа1 АЗП С1у 100 105 110 С1у Не Рго С1п Ьуз Не Зег Ьеи С1п Азр Нгз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТНг РНе Туг МеЕ Рго Уа1 Азр Азп Ьеи С1у МеЕ А1а 7а1 130 135 140 Не Азр Тгр С1и С1и Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не С1 и Ьеи Уа1 С1п С1п О1п Азп 165 170 175 Уа1 С1п Ьеи Зег Ьеи ТНг С1и А1а ТНг 01и Ьуз А1а Ьуз С1п С1и РНе 180 185 190 С1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РНе Ьеи Уа1 С1и ТНг Не Ьуз Ьеи С1у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп ΗΪ3 Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Аз η Нгз ΗΪ5 Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РНе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег 245 250 255
    - 98 022752
    ТЬг А1а Ьеи Туг 260 Рго Зег Не Туг Ьеи 2 65 Азп ТЫ С1п С1п Зег 270 Рго Ча1 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Ча1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а 11е Агд Ча1 275 280 285 Зег Ъуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Ча1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не ЧА1 РЬе ТЬг Азр 61п Ча1 ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1п Азр С1и 305 310 315 320 Ьеи Ча1 Туг ТЬг РЬе С1у С1и ТЬг Ча1 А1а Ьеи С1у А1а Зег 61у 11е 325 330 335 Ча1 Не Тгр С1у ТЬг Ьеи Зег Не МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг НеЬ С1и ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеЕ Суз Зег С1п Уа1 Ьеи Суз С1п С1и С1п 370 375 380 С1у Ча1 Суз Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Н13 Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а 11е С1п Ьеи С1и Ьуз 01 у С1у Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 Ча1 Агд С1у Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи С1и С1п РЬе Зег С1и Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ъуз А1а Азр 435 440 445 Ча1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Ча1 Азр Ча1 Суз Не А1а Азр С1у Ча1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ 61и ТЬг С1и С1и Рго 01п Не 465 470 475 480 РНе Туг Азп А1а Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег А1а ТЬе Ме! РЬе Не Уа1 485 490 495 Зег Не Ьеи РЬе Ьеи
    500 <210> 7 <211> 499 <212> Белок <213> Ното зар1еп5 <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-499 <400> 7
    МеЬ С1у Уа1 Ьеи Ъуз РЬе Ьуз ΗΪ5 Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег С1п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Ча1 Не Рго АЗП Ча1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр С1 и Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не С1 у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг 01 у С1п С1у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг 61у Ча1 ТЬг Уа1 АЗП С1у 100 105 но 51у Не Рго С1п Ъуз Не Зег Ьеи С1п Азр Н1з Ьеи Азр Ъуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РНе Туг МеЬ Рго Уа1 Азр АЗП Ьеи С1у МеЬ А1а Уа1 130 135 140
    99 022752
    Не Азр Тгр СБи СБи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АБа Агд Агп Тгр Буг Рго 145 150 155 160 Буз Азр УаБ Туг Буз Азп Агд Зег ББе СБи Беи УаБ СБп СБп СБп Азп 165 170 175 Уа1 СБп Беи Зег Беи ТЬг СБи АБа ТЬг СБи Буз АБа Буг СБп СБи РЬе 180 185 190 С1и Буг А1а СБу Буз Азр РЬе Беи УаБ СБи ТНг 11е Буз Беи СБу Буз 195 200 205 Беи Беи Агд Рго Агп ΗΪ3 Беи Тгр СБу Туг Туг Беи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Агп НБз НБг Туг Буг Буз Рго СБу Туг Азп СБу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 СБи ББе Буз Агд Азп Азр Азр Беи Зег Тгр Беи Тгр Азп СБи Зег 245 250 255 ТНг А1а Беи Туг Рго Зег Не Туг Беи Азп ТЬг СБп СБп Зег Рго УаБ 260 2 65 27 0 АБа А1а ТЬг Беи Туг УаБ Агд Азп Агд УаБ Агд С1 и АБа ББе Агд УаБ 275 280 285 Зег Бу 5 ББе Рго Азр А1а Буг Зег Рго Беи Рго УаБ РЬе АБа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Б1е УаБ РЬе ТЬг Азр СБп УаБ Беи Буз РЬе Беи Зег СБп Азр СБи 305 310 315 320 Беи УаБ Туг ТЬг РЬе СБу СБи ТЬг УаБ АБа Беи 01 у АБа Зег СБу Не 325 330 335 УаБ ББе Тгр СБу ТНг Беи Зег ББе МеС Агд Зег МеС Ьуг Зег Суг Беи 340 345 350 Беи Беи Азр Азп Туг МеБ С1и ТЬг ББе Беи Азп Рго Туг Не ББе Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Беи АБа АБа Буз Мес Суз Зег СБп УаБ Беи Суз СБп СБи СБп 370 375 330 СБу УаБ Суз ББе Агд Буз Азп Тгр Азп Зег Зег Агр Туг Беи НБг Беи 385 390 395 400 Авп Рго Азр Азп РЬе АБа ББе СБп Ьей СБи Буз СБу СБу Буз РЬе ТЬг 4 05 410 415 УаБ Агд СБу Буз Рго ТЫ Беи СБи Азр Беи СБи СБп РЬе Зег СБи Буг 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьей Зег Суг Буз СБи Буг АБа Азр 435 440 445 УаБ Буз Азр ТЬг Азр АБа УаБ Азр УаБ Суз ББе А1а Азр СБу УаБ Суз 450 455 4 60 11е Азр АБа РЬе Беи Буг Рго Рго МеС СБи ТЬг СБи СБи Рго СБп ББе 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АБа Зег Рго Зег ТЬг Беи Зег АБа ТЬг МеС РЬе Не УаБ 485 490 495 Бег 11е Беи
    <210> 8 <211> 497 <212> Белок <213> Ното гарБепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-497 <400> 8
    МеС СБу УаБ Беи Буз РЬе Буз ΗΪ5 Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаБ Буз 1 5 10 15 Зег Зег СБу УаБ Зег СБп ББе Уа1 РЬе ТЬг РЬе Беи Ьей Не Рго Суз 20 25 30
    100 022752
    Суз Ъеи ТЬг 35 Ъеи Азп РЬе Агд АЪа 40 Рго Рго УаЪ Не Рго А5П Уа1 45 Рго РЬе Ъеи Тгр А1а Тгр Азп АЪа Рго Зег 61и РЬе Суз Ъеи 61 у Ъуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ъеи Азр МеЬ Зег Ъеи РЬе Зег РЬе Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЪа ТЬг 61у 61п 61у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ъеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг 61у Уа1 ТЬг Уа1 Азп С1у 100 105 110 61у 11е Рго С1п Ъуз Не Зег Ъеи 61п Азр ΗΪΞ Ъеи Азр Ъуз АЪа Ъуз 115 120 125 Ъуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЪ Рго Уа1 Азр Азп Ъеи С1у МеЪ АЪа Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр 61и С1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ъуз Азр Уа1 Туг Ъуз АЗП Агд Зег Не 61и Ъеи Уа1 61п 61п 61п Азп 165 170 175 Уа1 61 п Ъеи Зег Ъеи ТЬг С1и АЪа ТЬг 61и Ъуз А1а Ъуз 61п 61и РЬе 180 185 190 61и Ъуз А1а 61 у Ъуз Азр РЬе Ъеи Уа1 61и ТЬг Не Ъуз Ъеи 61 у Ъуз 195 200 205 Ъеи Ъеи Агд Рго Азп ΗΪ5 Ъеи Тгр 61у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЪз Шз Туг Ъуз Ъуз Рго С1у Туг Азп 61 у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 61 и Не Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп 61и Зег 245 250 255 ТЫ АЪа Ъеи Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТЬг 61п 61п Зег Рго Уа1 260 265 270 АЪа А1а ТЬг Ъеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61 и АЪа Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ъуз Не Рго Азр АЪа Ъуз Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе АЪа Туг ТЬг 290 2 95 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЬг Азр 61η 7а1 Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег 61 п Азр 61и 305 310 315 320 Ъеи Уа1 Туг ТЬг РЬе 61 у 61и ТЬг Уа1 А1а Ъеи 61у АЪа Зег 61у Не 32 5 330 335 Уа1 11е Тгр 61у ТЬг Ъеи Зег Не МеЪ Агд Зег МеЪ Ъуз Зег Суз Ъеи 340 345 350 Ъеи Ъеи Азр Азп Туг Мер 61и ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ъеи АЪа А1а Ъуз МеЪ Суз Зег 61п Уа1 Ъеи Суз 61 п 61и С1п 370 375 380 С1у Уа1 Суз Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи ΗΪ3 Ъеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЪа 11е 61п Ъеи 61и Ъуз 61у 61 у Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61 у Ъуз Рго ТЬг Ъеи 61и Азр Ъеи С1и 61 п РЬе Зег С1и Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз 61и Ъуз АЪа Азр 435 440 445 Уа1 ьуз Азр ТЬг Азр АЪа Уа1 Азр Уа1 Суз Не АЪа Азр 61у Уа1 Суз 450 455 460 Не А2р АЪа РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго МеЪ 61и ТЫ 61и С1и Рго 61п Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЪа Зег Рго Зег ТЬг Ъеи Зег А1а ТЬг МеЪ РЬе 11е Уа1 485 490 495 Зег
    101 022752 <210> 9 <211> 495 <212> Белок <213> Ното зарьепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-495 <400> 9
    Мер 1 С1у Уа1 Ьей Ьуз 5 РЬе Ьуз Шз 11е РЬе 10 РЬе Агд Зег РЬе Уа1 15 Ьуз Зег Зег Е1у Уа1 Зег С1п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьей Ьеп Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьей ТЬг Ьей Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеп Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ьей С1у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ьей Азр Мер Зег Ьей РЬе Зег РЬе 11е С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Аз η А1а ТЬг С1у С1п 61у Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьей 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг С1у Уа1 ТЬг Уа1 Азп С1у 100 105 но С1у 11е Рго ст Ьуз Не Зег Ьей С1п Азр НЬз Ьей Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр 11е ТЬг РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ьей С1у Мер А1а Уа1 130 135 140 11е Азр Тгр С1и Е1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не С1ь Ьей Уа1 С1п С1п С1п АЗП 165 170 175 Уа1 С1п Ьей Зег Ьей ТЬг С1и А1а ТЫ С1и Ьуз А1а Ьуз С1п С1и РЬе 180 185 190 С1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РЬе Ьей Уа1 С1и ТЬг 11е Ьуз Ьей С1у Ьуз 195 200 205 Ьей Ьей Агд Рго Азп Н1з Ьей Тгр С1у Туг Туг Ьей РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Аз П Н1з ΗΪ3 Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьей Зег Тгр Ьей Тгр Азп С1и Зег 245 2 50 255 ТЬг А1а Ьей Туг Рго Зег Не Туг Ьей Азп ТЬг С1п С1п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьей Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз 11е Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьей Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЬг Азр 61п Уа1 Ьей Ьуз РЬе Ьей Зег С1п Азр С1а 305 310 315 320 Ьей Уа1 Туг ТЬг РЬе С1у С1и ТЬг Уа1 А1а Ьей С1у А1а Зег С1у Не 325 330 335 Уа1 11е Тгр С1у ТЬг Ьей Зег Не Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьей 340 345 350 Ьей Ьей Азр АЗП Туг Мег С1и ТЬг Не Ьей Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьей А1а А1а Ьуз Мер Суз Зег С1п Уа1 Ьей Суз С1п С1и С1п 370 375 380 01у Уа1 Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьей Ηίδ Ьей 335 390 395 400 Аз η Рго Азр Аз η РЬе А1а Не С1п Ьеп С1и Ьуз С1у Е1 у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415
    102
    Уа1 Агд С1у Луз 420 Рго ТЬг Леи С1и Азр 425 Леи С1и С1п РЬе Зег 430 С1и Луз РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Леи Зег Суз Луз С1и Луз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз 11е А1а Азр С1у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Леи Луз Рго Рго МеС 61и ТЬг С1и С1и Рго С1п Не 465 470 405 430 РЬе Туг Аз η А1а Зег Рго Зег ТЬг Леи Зег А1а ТЬг Мер РЬе 11е 485 490 495
    <210> 10 <211> 493 <212> Белок <213> Ното ! Баргепз <220> <223> НиРН20 предшественник 1-493 <400> 10 Мер С1у Уа1 Леи Луз РЬе Луз Н1з 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЛ Луз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег С1П Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Леи Леи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Леи ТЬг Леи Аз η РЬе Агд А1а Рго Рго УаЛ Не Рго Азп УаЛ Рго 35 40 45 РЬе Леи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Леи С1у Луз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Леи Азр мер Зег Леи РЬе Зег РЬе Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Аз η А1а ТЬг С1у С1п С1у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Леи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЛу Уа1 ТЬг УаЛ Азп СЛу 100 105 но б1у Не Рго С1п Луз Не Зег Леи 61п Азр ΗΪ3 Леи Азр Луз А1а Луз 115 120 125 Луз Азр Не ТЬг РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Леи С1у МеЬ А1а УаЛ 130 135 140 Не Азр Тгр С1и С1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Луз Рго 145 150 155 160 Луз Азр Уа1 Туг Луз АЗП Агд Зег Не 61и Леи Уа1 С1п СЛп СЛп Азп 165 170 175 Уа1 С1п Леи Зег Леи ТЬг С1и А1а ТЬг С1и Луз А1а Луз СЛп СЛи РЬе 180 185 190 С1и Луз А1а С1у Луз Азр РЬе Леи УаЛ С1и ТЬг Не Луз Леи СЛу Луз 195 200 205 Леи Леи Агд Рго Аз η ΗΪ3 Леи Тгр 31у Туг Туг Леи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азы Низ ΗΪ3 Туг Луз Луз Рго СЛу Туг Азп СЛу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и Не Луз Агд АЗП Азр Азр Леи Зег Тгр Леи Тгр Азп СЛи Зег 245 250 255 ТЬг А1а Леи Туг Рго Зег Не Туг Леи Азп ТЬг С1п С1п Зег Рго УаЛ 260 265 270 А1а А1а ТЬг Леи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а Не Агд УаЛ 275 280 285 Зег Луз 11е Рго Азр А1а Луз Зег Рго Леи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЬг Азр 61п Уа1 Леи Луз РЬе Леи Зег 61п Азр СЛи 305 310 315 320
    103
    Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 335 Не 325 330 УаЬ Не Тгр СЬу ТЫ Ьеи Зег Не Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Аэп Туг Мер СЬи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз Мер Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Не Агд Ьуз АЗП Тгр Азп Зег Зес Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег 01 и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Не АЬа Азр 01 у УаЬ Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТЬг Мер
    485 490 <210> 11 <211> 491 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-491 <400> 11
    МеР 1 СЬу УаЬ Ьеи Ьуз 5 РЬе Ьуз НЬз Не РЬе 10 РЬе Агд Зег РЬе УаЬ 15 Ьуз Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Не УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Аэп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Не Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр ОЬи Рго Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 1Ье Азп АЬа ТЫ СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Не РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 но СЬу 11е Рго СЬп Ьуз 11е Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеР Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мер АЬа УаЬ ЬЗО 135 140 Не Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег ТЬе СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг ОЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг 11е Ьуз Ьеи 01 у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп ΗΪ3 Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220
    104
    Туг Азп Н1з Низ Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и Не Ьуз Агд Азь Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг 21п 21п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз 11е Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не νπ РЬе ТЬг Азр 61п Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1п Азр С1и 305 310 315 320 Ъеи Уа1 Туг ТЬг РЬе С1у 61и ТЬг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег С1у Не 325 330 335 Уа1 Х1е Тгр С1у ТЬг Ьеи Зег Не МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ С1и ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеЬ Суз Зег 61п Уа1 Ьеи Суз С1п С1и С1п 370 375 380 Е1у Уа1 Сун 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Аз η Рго Азр Азп РЬе А1а 11е С1п Ьеи С1и Ьуз С1у С1у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд С1у Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи С1и 61п РЬе Зег С1и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз 11е А1а Азр С1у Уа1 Суз 450 455 4 60 Не Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ 01и ТЬг С1и С1и Рго С1п Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп А1а Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег А1а
    485 490 <210> 12 <211> 489 <212> Белок <213> Нолю зартепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-489 <400> 12
    МеЬ С1у Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьуз ΗΪ5 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе νβΐ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег С1п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Су5 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп Рпе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ьеи Азр Ме£ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп А1а ТЬг С1у С1п С1у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг С1у Уа1 ТЬг Уа1 Азп С1у 100 105 НО С1у 11е Рго С1п Ьуз 11е Зег Ьеи С1п Азр ΗΪ3 Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125
    105 022752
    Ъу£ Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЬ 135 Рго Уа1 Азр Азп Ъеи С1у МеЬ 140 А1а Уа1 130 Не Азр Тгр Е1и Е1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ъуз Азр Уа1 Туг Ъуз Азп Агд Зег Не 61и Ъеи Уа1 С1п С1п С1п Азп 165 170 175 Уа1 Е1п Ъеи Зег Ъеи ТЬг Е1и А1а ТЬг С1и Ъуз А1а Ъуз 61п С1и РЬе 180 185 190 С1и Ъуз А1а 61у Ъуз Азр РЬе Ъеи Уа1 61и ТЬг Не Ъуз Ъеи Е1у Ъуз 195 200 205 Ъеи Ъеи Агд Рго Азп ΗΪ3 Ъеи Тгр С1у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Аз η ΗΪΞ НЪз Туг Ъуз Ъуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и Не Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп С1и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ъеи Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТЬг С1п С1п Зег Рго Уа1 260 2 65 270 А1а А1а ТЬг Ъеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61и А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ъуз Не Рго Азр А1а Ъуз Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 2 90 2 95 300 Агд Не νβΐ РЬе ТЬг Азр С1п Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег 01п Азр С1и 305 310 315 320 Ъеи Уа1 Туг ТЬг РЬе 61у 61и ТЬГ Уа1 А1а Ъеи Е1у А1а Зег С1у Не 325 330 335 Уа1 Не Тгр С1у ТЬг Ъеи Зег Не Мер Агд Зег Мер Ъуз Зег Суз Ъеи 340 345 350 Ъеи Ъеи Азр Азп Туг МеЬ 61и ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ъеи А1а А1а Ъуз МеЪ Суз Зег С1п Уа1 Ъеи Суз С1п С1и Е1п 370 375 380 С1у Уа1 Суз Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи Низ Ъеи 385 3 90 395 400 АЗП Рго Азр Азп РЬе А1а Не С1п Ъеи С1и Ъуз Е1у Е1у Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд Е1у Ъуз Рго ТЬг Ъеи С1и Азр Ъеи С1и 01п РЬе Зег Е1и Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз ъуз Е1и Ъуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ъуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр Е1у Уа1 Суз 450 455 4 60 Не Азр А1а РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго МеС С1и ТЬг С1и С1и Рго С1п Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп А1а Зег Рго Зег ТЬг Ъеи
    485 <210> 13 <211> 490 <212> Белок <213> Ното заръепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-490 <400> 13
    МеЪ С1у Уа1 Ьеи Ъуз РЬе Ъуз ΗΪ5 Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у ν^ι Зег С1п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30
    106
    Суз Беи ТЬх 35 Беи Азп РЬе Ахд АБа 40 Рго Рго УаБ Не Рго 45 Азп Уа1 Рго РЬе Беи Тгр АБа Тгр Азп АБа Рхо Зех СБи РЬе Суз Беи СБу Буз РЬе 50 55 60 Азр СБи Рго Беи Азр МеС Зег Беи РЬе Зег РЬе Не СБу Зег Рго Ахд 65 70 75 80 11е Азп АБа ТЬх СБу СБп СБу УаБ ТЬг Не РЬе Тух УаБ Азр Ахд Беи 85 90 95 СБу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег 11е ТЬх СБу УаБ ТЬх УаБ Азп СБу 100 105 110 СБу 11е Рхо СБп Буз Не Зег Беи СБп Азр НБз Беи Азр Буз АБа Буз 115 120 125 Буз Азр ББе ТЬх РЬе Тух МеС Рго УаБ Азр Азп Беи СБу мес АБа УаБ 130 135 140 Не Азр Тгр СБи СБи Тхр Агд Рхо ТЬх Тхр АБа Ахд Азп Тгр Буз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаБ Туг Буз Азп Агд Зег 11е СБи Беи УаБ СБп СБп СБп Азп 165 170 175 Уа1 СБп Беи Зег Беи ТЬх СБи АБа ТЬх СБи Буз АБа Буз СБп СБи РЬе 180 185 190 СБи Буз АБа СБу Буз Азр РЬе Беи УаБ СБи ТЬг ББе Буз Беи СБу Буз 195 200 205 Беи Беи Агд РГО Азп НБз Беи Тгр СБу Туг Туг Беи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Тух Азп НБз НБз Туг Буз Буз Рго СБу Туг Азп СБу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаБ СБи 11е Буз Агд АЗП Азр Азр Беи Зег Тгр Беи Тхр Агп СБи Зег 245 250 255 ТНг АБа Беи Туг Рхо Зег 11е Тух Беи Азп ТЬх СБп СБп Зег Рхо УаБ 260 265 270 А1а АБа ТЬх Беи Туг УаБ Агд Азп Агд УаБ Агд СБи АБа 11е Агд УаБ 275 280 285 Зег Буз Не РГО Азр АБа Буз Зех Рго Беи Рго УаБ РЬе АБа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаБ РЬе ТЬг Азр СБп УаБ Беи Буз РЬе Беи Зег СБп Азр СБи 305 310 315 320 Беи УаБ Туг ТЬг РЬе СБу СБи ТЬг УаБ А1а Беи СБу АБа Зег СБу 11е 325 330 335 УаБ 11е Тгр СБу ТЬг Беи Зег 11е МеС Агд Зег МеС Буз Зег Суз Беи 340 345 350 Беи Беи Азр Азп Туг МеС СБи ТЬх Не Беи Азп Рго Туг 11е Не Азп 355 360 365 УаБ ТЬг Беи АБа АБа Буз МеС Суз Зег СБп УаБ Беи Суз СБп СБи СБп 370 375 380 СБу УаБ Суз Не Агд Буз Азп Тхр Азп Зех Зег Азр Туг Беи НБз Беи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АБа 11е СБп Беи СБи Буз СБу СБу Буз РЬе ТЬх 405 410 415 УаБ Агд СБу Буз Рго ТЬг Беи СБи Азр Беи СБи СБп РЬе Зег СБи Буз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Беи Зег Суз Буз СБи Буз АБа Азр 435 440 445 УаБ Буз Азр ТЬх Азр А1а УаБ Азр УаБ Суз 11е АБа Азр СБу УаБ Суз 450 455 460 Не Азр АБа РЬе Беи Буз Рго Рго МеС СБи ТЬх СБи СБи Рго СБп Не 465 470 475 480 РЬе Тух Азп АБа Зег Рхо Зех ТЬх Беи Зег 485 4 90
    107 022752 <210> 14 <211> 487 <212> Белок <213> Ногао заргепз <22О>
    <223> НиРН20 предшественник 1-487 <400> 14
    МеС 61у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег 61у Уа1 Зег 61п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 61и РЬе Суз Ьеи 61 у Ьуз РЬе 50 55 60 Агр 61 и Рго Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг 61у 61п 61у Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг 11е Азр Зег 11е ТЬг 61у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61 у 100 105 110 61 у Не Рго 61п Ьу5 Не Зег Ьеи 61п Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеС Рго Уа1 Азр Азп Ьеи 61у МеС А1а Уа1 130 135 140 Не Аэр Тгр 61и 61и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз АЗП Агд Зег Не С1и Ьеи Уа1 61п С1п ст Азп 165 170 175 Уа1 61п Ьеи Зег Ьеи ТЬг 61и А1а ТЬг 61и Ьуз А1а Ьуз 61п 01и РЬе 180 185 190 С1и Ьуз А1а 61у Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг 11е Ьуз Ьеи С1у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп ΗΪΞ Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп ΗΪ3 НЬз Туг ьуз Ьуз Рго 61у Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 01и Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 61и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг 6Ьп 61п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго 7а1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЬг Азр 61п УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег 61п Азр 61и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТЬг РЬе 61у 61и ТЬг Уа1 А1а Ьеи 6Ьу А1а Зег 61у Не 325 330 335 Уа1 Не Тгр С1у ТЬг Ьеи Зег Не МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеС б1и ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеС Суз Зег 61п УаЬ Ьеи Суз С1п СЬи 61п 370 375 380 С1у Уа1 Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а Не 61п Ьеи 61и Ьуз 61у С1у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415
    108 022752
    УаЬ Агд СЬу Ьуз 420 Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи 425 СЬи СЬп РНе Зег 430 СЬи Ьуз РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз А1а Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТНг Азр АЬа УаЬ Азр Уа1 Суз Не А1а Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Не Азр АЬа РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЕ СЬи ТНг СЬи СЬи Рго СЬп 11е 465 470 475 480 РНе Туг АЗП АЬа Зег Рго Зег
    485 <210> 15 <2Ы> 485 <212> Белок <213> Ното заргепз <220>
    <223> НпРН20 предшественник 1-485 <400> 15
    МеЕ СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьуз Нгз Не РНе РНе Агд Зег РНе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Не УаЬ РНе ТНг РНе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Азп РНе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Не Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РНе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег СЬи РНе Су5 Ьеи С1у Ьуз РНе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РНе Зег РНе Не СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЬа ТНг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТНг Не РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТНг СЬу УаЬ ТНг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу Не Рго С1п Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр Нгз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТНг РНе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЕ А1а УаЬ 130 135 140 Не Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп 01п Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТНг СЬи А1а ТНг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РНе 180 135 190 СЬи Ьуз А1а СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг Не Ьуз Ьеи С1у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Нгз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Нгз Нгз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Не Ьуз Агд АЗП Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТНг А1а Ьеи Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТНг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТНг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи А1а Не Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе А1а Туг ТНг 290 295 300 Агд Не УаЬ РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320
    109
    Ъеи УаЪ Туг ТНг РЬе 325 С1у С1и ТЬг УаЪ А1а 330 Ъеи 61у АЪа Зег СЪу 335 Не УаЪ Пе Тгр 61у ТЬг Ъеи Зег 11е МеЪ Агд Зег МеЪ Ъуз Зег Суз Ъеи 340 345 350 Ъеи Ъеи Азр Азп Туг МеЪ СЪи ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Не 11е Азп 355 360 365 УаЪ ТЬг Ъеи А1а АЪа Ъуз МеЪ Суз Зег СЪп УаЪ Ъеи Суз СЪп СЪи СЪп 370 375 380 С1у Уа1 Суз Пе Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи Н13 Ъеи 385 390 395 4 00 АЗП Рго Азр Азп РЬе А1а 11е еъп Ъеи СЪи Ъуз С1у СЪу Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ъуз Рго ТЬг Ъеи СЪи Азр Ъеи СЪи 61 п РЬе Зег 61 и Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз СЪи Ъуз АЪа Азр 435 440 445 УаЪ Ъуз Азр ТЬг Азр АЪа УаЪ Азр УаЪ Суз Не АЪа Азр СЪу УаЪ Суз 450 455 460 Пе Азр АЪа РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго МеЪ СЪи ТЬг СЪи СЪи Рго СЪп Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЪа Зег 485
    <210> 16 <2Η> 484 <212> Белок <213> Ното заръепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-484 <400> 16
    МеЪ 1 СЪу УаЪ Ъеи Ъуз 5 РЬе Ъуз Н1з Не РЬе 10 РЬе Агд Зег РЬе УаЪ 15 Ъуз Зег Зег 61у УаЪ Зег СЪп Пе УаЪ РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд АЪа Рго Рго УаЪ Не Рго Азп УаЪ Рго 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр АЪа Тгр Азп АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ъеи еъу Ъуз РЬе 50 55 60 Азр 61 и Рго Ъеи Азр МеЪ Зег Ъеи РЬе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЪа ТЬг СЪу СЪп 61у УаЪ ТНг Не РЬе Туг УаЪ Азр Агд Ъеи 85 90 95 СЪу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЪу УаЪ ТНг УаЪ Азп С1у 100 105 но СЪу Не Рго СЪп Ъуз Не Зег Ъеи 61п Азр НЪз Ъеи Азр Ъуз АЪа Ъуз 115 120 125 Ъуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЪ Рго УаЪ Азр Азп Ъеи СЪу МеЪ АЪа УаЪ 130 135 140 Не Азр Тгр СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ъуз Азр УаЪ Туг Ъуз Азп Агд Зег Не СЪи Ъеи УаЪ СЪп СЪп СЪп Азп 165 170 175 УаЪ СЪп Ъеи Зег Ъеи ТЬг СЪи АЪа ТЬг СЪи Ъуз АЪа Ъуз СЪп СЪи РЬе 180 185 190 СЪи Ъуз АЪа СЪу Ъуз Азр РЬе Ъеи УаЪ СЪи ТЬг Не Ъуз Ъеи СЪу Ъуз 195 200 205 Ъеи Ъеи Агд Рго Азп НЪз Ъеи Тгр СЪу Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220
    110
    Туг Азп Н1з Н1з Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 61и 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 61и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг С1п 01 п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а Ие Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз 11е Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 2 95 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЬг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуэ РЬе Ьеи Зег С1п Азр С1и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТЬг РЬе С1у С1и ТЬг Уа1 А1а Ьеи 01 у А1а Зег С1у Не 325 330 335 Уа1 Не Тгр С1у ТЬг Ьеи Зег Ие Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Мер С1и ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Ие Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз Мер Суз Зег С1п Уа1 Ьеи Суз О1п О1и С1п 370 375 380 С1у Уа1 Суз Не Агд ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Ηί3 Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а Не С1 п Ьеи С1и Ьуз С1у С1у Ьу5 РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 51 у Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи 61и О1п РЬе Зег 01и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Су5 Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр С1у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер С1и ТЬг С1и С1и Рго С1п Ие 465 470 475 480 РЬе Туг Азп А1а
    <210> 17 <211> 483 <212> Белок <213> Ното зархепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-483 <400> 17
    Мес С1у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз Шг Не РЬе РНе Агд Зег РЬе νβΐ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег Е1у Уа1 Зег С1п Ие Уа1 РЬе ТЬг РНе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго ν*ι Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РНе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр 61и Рго Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РНе Не б1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг 01у С1п С1у Уа1 ТЬг Не РНе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 51у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Ие ТЬг С1у Уа1 ТЬг Уа1 Азп С1у 100 105 но С1у Не Рго О1п Ьуз Ие Зег Ьеи С1п Азр ΗΪ5 Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125
    111 022752
    Ъуз Азр 130 11е ТЬг РЬе Туг Мер 135 Его Ча1 Азр Азп Ъеи С1у МеР А1а Ча1 140 Не Азр Тгр Е1и С1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Его 145 150 155 160 Ъуз Азр Ча1 Туг Ъуз Азп Агд Зег Не 61и Ьеи Ча1 С1п С1п 01п Азп 165 170 175 Уа1 01 п Ъеи Зег Ьеи ТЬг С1и А1а ТЬг С1и Ьуз А1а Ьуз С1п С1и РЬе 180 185 190 С1и Ьуз А1а 61у Ъуз Азр РЬе Ьеи Уа1 01и ТЬг Не Ьуз Ьеи 01у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Ыз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Ыз Ыз Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РНе Азп 225 230 235 240 Уа1 О1и Не Ъуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп С1и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг 61п Е1п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ъеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не Ча1 РЬе ТЬг Азр С1п Ча1 ъеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1п Азр С1и 305 310 315 320 Ьеи Ча1 Туг ТЬг РЬе 01у С1и ТЬг Ча1 А1а Ьеи 61у А1а Зег С1у Не 325 330 335 Уа1 Не Тгр С1у ТЬг Ьеи Зег Не Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Мер С1и ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Ча1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз Ме1 Суз Зег 61п Ча1 Ьеи Суз С1п С1и С1п 370 375 380 С1у Ча1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Агр Туг Ьеи Ыз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а 11е С1п Ьеи С1и Ьуз 01 у С1у Ьуз РЬе ТЫ 405 410 415 Ча1 Агд СЪу Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи С1и 01п РЬе Зег С1и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз 01и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Ча1 Суз Не А1а Азр С1у νβΐ Суз 450 455 4 60 11е Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер С1и ТЬг С1и С1и Рго С1п Не 465 470 475 480
    РЬе Туг Азп <210> 18 <211> 482 <212> Белок <213> Ното зар!епз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-482 <400> 18
    Мер С1у Ча1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз Ыз 11е РЬе РНе Агд Зег РЬе Ча1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег 01у Ча1 Бег С1п Не Уа1 РНе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30
    112
    Суз Леи ТЬг 35 Леи Азп РЬе Агд АЛа 40 Рго Рго УаЛ 11е Рго Азп Уа1 45 Рго РЬе Леи Тгр АЛа Тгр Азп АЛа Рго Зег СЛи РЬе Суз Леи СЛу Луз РЬе 50 55 60 Азр СЛи Рго Леи Азр МеЛ Зег Леи РЬе Зег РЬе Не СЛу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЛа ТЬг СЛу СЛп С1у УаЛ ТЬг Не РЬе Туг УаЛ Азр Агд Леи 85 90 95 СЛу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЛу УаЛ ТЬг УаЛ Азп СЛу 100 105 НО СЛу Не Рго СЛп Луз Не Зел Леи С1п Азр НЛз Леи Азр Луз АЛа Луз 115 120 125 Луз Азр 11е ТЬг РЬе Туг Мел Рго УаЛ Азр Азп Леи СЛу Мер АЛа УаЛ 130 135 140 Не Азр Тгр СЛи СЛи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЛа Агд Азп Тгр Луз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЛ Туг Луз Азп Агд Зег Не СЛи Леи Уа1 СЛп СЛп С1п Азп 165 170 175 УаЛ СЛп Леи Зег Леи ТЬг СЛи АЛа ТЬг СЛи Луз АЛа Луз СЛп СЛи РЬе 180 185 190 СЛи Луз АЛа СЛу Луг Азр РЬе Леи УаЛ СЛи ТЬг Не Луз Леи СЛу Луз 195 200 205 Леи Леи Агд Рго Азп ΗΪ5 Леи Тгр СЛу Туг Туг Леи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Н1з Нпз Туг Луз Луз Рго СЛу Туг Азп СЛу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЛ СЛи Не Луз Агд Азп Азр Азр Леи Зег Тгр Леи Тгр Азп СЛи Зег 245 250 255 ТЬг АЛа Леи Туг Рго Зег Не Туг Леи Азп ТЬг С1п СЛп Зег Рго УаЛ 260 265 270 АЛа АЛа ТЬг Леи Туг УаЛ Агд Азп Агд УаЛ Агд СЛи А1а Не Агд УаЛ 275 280 285 Зег Луз Не Рго Азр АЛа Луз Зег Рго Леи Рго УаЛ РЬе АЛа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаЛ РЬе ТЬг Азр СЛп УаЛ Леи Луз РЬе Леи Зег СЛп Азр С1и 305 310 315 320 Леи УаЛ Туг ТЬг РЬе СЛу СЛи ТЬг УаЛ А1а Леи СЛу АЛа Зег СЛу Не 325 330 335 УаЛ 11е Тгр СЛу ТЬг Леи Зег Не МеЛ Агд Зег Мер луз Зег Суз Леи 340 345 350 Леи Леи Азр Азп Туг МеС СЛи ТЬг Не Леи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 УаЛ ТЬг Леи АЛа АЛа Луз Мел Суз Зег СЛп Уа1 Леи Суз СЛп СЛи СЛп 370 375 38 0 СЛу УаЛ Суз 11е Агд Луз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Леи Низ Леи 335 390 395 400 АЗЬ Рго Азр Азп РЬе АЛа Не СЛп Леи СЛи Луз С1у СЛу Луз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЛ Агд СЛу Луз Рго ТЬг Леи СЛи Азр Леи СЛи СЛп РЬе Зег СЛи Луз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Леи Зег Суз Луз СЛи Луз АЛа Азр 435 440 445 УаЛ Луз Азр ТЬг Азр АЛа УаЛ Азр УаЛ Суз 11е АЛа Азр СЛу УаЛ Суз 450 455 460 11е Азр АЛа РЬе Леи Луз Рго Рго МеЛ С1и ТЬг СЛи СЛи Рго СЛп Не 465 470 475 480 РЬе Туг
    113 022752 <210 19 <211> 481 <212> Белок <213> Ното зартеьз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-481 <400 19
    МеЬ С1у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Ые РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег С1ь 11е Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго УаЬ Не Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе 11е СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп А1а ТЬг 61у С1п С1у Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу 7аЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 С1у Ые Рго СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр 11е ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго Уа1 Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ А1а УаЬ 130 135 140 11е Азр Тгр 61и С1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые С1и Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 Уа1 С1п Ьеи Зег Ьеи ТЬг 61и А1а ТЬг СЬи Ьуз А1а Ьуз С1п СЬи РЬе 180 185 190 С1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи С1у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи А1а 11е Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые Уа1 РЬе ТЬг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТЬг РЬе С1у С1и ТЬг Уа1 А1а Ьеи СЬу А1а Зег СЬу Ые 325 330 335 Уа1 Ые Тгр С1у ТЬг Ьеи Зег 11е МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ 61и ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 С1у Уа1 Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Эе г Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а 11е С1п Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415
    114
    УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи 425 СЬп РЬе Зег 4 30 СЬи Ьуз 420 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз 11е АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Не Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп 11е 4 65 470 475 480
    РЬе <210> 20 <211> 480 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-480 <400> 20
    Мер СЬу УаЬ 1 Ьеи Ьуз 5 РЬе Ьуз НЬз Не РЬе 10 РЬе Агд Зег РЬе УаЬ 15 Ьуз Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Не УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Не Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Не РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег 11е ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу Не Рго СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеР Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ 130 135 140 Не Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп С1и РЬе 130 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг 11е Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 2 65 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа 11е Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз 11е Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320
    115
    Ьеп Уа1 Туг ТЬг РЬе 61у 61и ТЬг Уа1 А1а Ьей С1у А1а Зег 61у 335 Не 325 330 Уа1 Не Тгр 61 у ТЬг Ьеп Зег 11е Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьей 340 345 350 Ьей Ьей Айр АЗП Туг Мер С1и ТЬг Не Ьей Азп Рго Туг 11е Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьей А1а А1а Ьуз Мер Суз Зег 61п Уа1 Ьей Суз 61п 61и 61п 370 375 380 61у Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеп НЬз Ьей 385 390 395 400 АЗП Рго Азр Азп РЬе А1а Не 61 п Ьей 61 и Ьуз 61у 61у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд С1у Ьуз Рго ТЬг Ьей С1и Азр Ьеп С1и 61п РЬе Зег 61и Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьей Зег Суз Ьуз 61и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Пе А1а Азр 61у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Ьей Ьуз Рго Рго Мер 61и ТЬг 61и С1и Рго 61п Не 465 470 475 480
    <210> 21 <211> 479 <212> Белок <213> Ното зараепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-479 <400> 21
    Мер 61 у \7а1 Ьей Ьуз РЬе Ьуз ΗΪ5 Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег С1п Не νβΐ РЬе ТЬг РЬе Ьей Ьеп Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьей ТЬг Ьей Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьей Тгр А1а Тгр Агп А1а Рго 5ег 61и РЬе Суз Ьей 61у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ьей Азр Мер Зег Ьей РНе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг 61 у С1п 61 у Уа1 ТНг 11е РЬе Туг Уа1 Азр Агд Геи 85 90 95 61у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег 11е ТЬг 61 у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61у 100 105 110 С1у Не Рго С1п Ьуз 11е Зег Ъеи С1п Азр ΗΪ3 Ьей Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ьей 61у МеС А1а Уа1 130 135 140 11е Азр Тгр С1и С1и Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е С1и Ьеп Уа1 61 п 61 п 61п Азп 165 170 175 Уа1 61п Ьей Зег Ьеп ТЬг С1и А1а ТНг 61и Ьуз А1а Ьуз 61п С1п РЬе 180 185 190 61и Ьуз А1а 61у Ьуз Азр РНе Ьей Уа1 61и ТЬг Не Ьуз Ьеп С1у Ьуз 195 200 205 Ьей Ьей Агд Рго Азп Н1з Ьей Тгр С1у Туг Туг Ьей РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Нпз ΗΪ 3 Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240
    116
    УаБ СБи ББе Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьей Зег Тгр Беи Тгр Азп СБи 255 Зег 245 250 ТЬг АБа Ьей Туг Рго Зег 11е Туг Беи Азп ТЬг СБп СБп Зег Рго УаБ 260 265 270 АБа АБа ТЬг Ьей Туг УаБ Агд АЗП Агд УаБ Агд СБи АБа ББе Агд УаБ 275 280 285 Зег Ьуз ББе Рго Азр АБа Ьуз Зег Рго Беи Рго УаБ РЬе АБа Туг ТЬг 290 295 300 Агд ББе УаБ РЬе ГЬг Азр СБп УаБ Беи Буэ РЬе Беи Зег СБп Азр СБи 305 310 315 320 Ьей УаБ Туг ТЬг РЬе СБу СБи ТЬг УаБ АБа Ьей СБу АБа Зег СБу ББе 325 330 335 УаБ ББе Тгр СБу ТЬг Ьей Зег ББе МеБ Агд Зег МеБ Буз Зег Суз Беи 340 345 350 Ьей Ьей Азр Азп Туг МеБ СБи ТЬг ББе Ьей Азп Рго Туг ББе ББе Азп 355 360 365 УаБ ТЬг Ьей АБа АБа Ьуз МеБ Суз Зег СБп УаБ Беи Суз СБп СБи СБп 370 375 380 СБу УаБ Суз ББе Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Беи НБз Беи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АБа ББе СБп Беи СБи Буз СБу СБу Буз РЬе ТЬг 405 410 415 УаБ Агд СБу Ьуз Рго ТЬг Беи СБи Азр Ьей СБи СБп РЬе Зег СБи Ьуз 420 425 4 30 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Беи Зег Суз Буз СБи Ьуз АБа Азр 435 440 445 УаБ Ьуз Азр ТНг Азр АБа УаБ Азр УаБ Суз 11е АБа Азр СБу УаБ Суз 450 455 4 60 11е Агр АБа РЬе Ьей Ьуз Рго Рго МеБ СБи ТЬг СБи СБи Рго СБп 465 470 475
    <210> 22 <211> 478 <212> Белок <213> Ното ί зархепз <220> <223> НиРН20 предшественник 1-473 <400> 22 МеБ СБу УаБ Беи Ьуз РЬе Буз НБз Б1е РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаБ Буз 1 5 10 15 Зег Зег СБу УаБ Зег СБп ББе УаБ РЬе ТЬг РЬе Ьей Беи ББе Рго Суз 20 25 30 Суз Ьей ТЬг Беи Азп РЬе Агд АБа Рго Рго УаБ ББе Рго Азп УаБ Рго 35 40 45 РЬе Беи Тгр АБа Тгр Азп АБа Рго Зег СБи РЬе Суз Беи СБу Буз РЬе 50 55 60 Азр СБи Рго Беи Азр МеБ Зег Ьей РЬе Зег РЬе ББе СБу Зег Рго Агд 65 70 75 80 ББе Агп АБа ТЬг СБу СБп С1у УаБ ТЬг ББе РЬе Туг УаБ Азр Агд Беи 85 90 95 СБу Туг Туг Рго Туг ББе Азр Зег ББе ТЬг СБу УаБ ТЬг УаБ Азп СБу 100 105 110 СБу 11е Рго СБп Буз ББе Зег Ьей СБп Азр НБз Беи Азр Буз АБа Буз 115 120 125 Буг Азр ББе ТЬг РЬе Туг МеБ Рго УаБ Азр Азп Беи СБу МеБ АБа УаБ 130 135 140 ББе Азр Тгр СБи СБи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АБа Агд Азп Тгр Буз Рго 145 150 155 160
    117
    Ъуз Азр УаЪ Туг Ъуз Азп Агд 165 Зег Не СЪи Ъеи УаЪ 170 СЪп СЪп СЪп 175 Азп УаЪ СЪп Ъеи Зег Ъеи ТЬг СЪи АЪа ТНг СЪи Ъуз АЪа Ъуз СЪп СЪи РНе 180 185 190 СЪи Ъуз АЪа СЪу Ъуз Азр РЬе Ъеи УаЪ СЪи ТЬг Пе Ъуз Ъеи СЪу Ъуз 195 200 205 Ъеи Ъеи Агд Рго Азп НЪз Ъеи тгр СЪу Туг Туг ъеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЪз НЪз Туг Ъуз Ъуз Рго СЪу Туг Азп СЪу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЪ СЪи Не Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп СЪи Зег 245 250 255 ТНг АЪа Ъеи Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТНг СЪп СЪп Зег Рго УаЪ 260 265 270 АЪа АЪа ТНг Ъеи Туг УаЪ Агд Азп Агд УаЪ Агд СЪи АЪа Пе Агд УаЪ 275 280 285 Зег Ъуз Не Рго Азр АЪа Ъуз Зег Рго Ъеи Рго УаЪ РНе АЪа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Пе УаЪ РНе ТЬг Азр СЪп УаЪ Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег СЪп Азр СЪи 305 310 315 320 Ъеи УаЪ Туг ТНг РЬе СЪу СЪи ТНг УаЪ АЪа Ъеи СЪу АЪа Зег СЪу Пе 325 330 335 УаЪ Не Тгр СЪу ТЬг Ъеи Зег 11е МеЪ Агд Зег МеЬ Ъуз Зег Суз Ъеи 340 345 350 Ъеи Ъеи Азр Азп Туг МеЪ СЪи ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Пе Пе Азп 355 360 365 УаЪ ТНг Ъеи АЪа АЪа Ъуз Мес Суз Зег СЪп УаЪ Ъеи Суз СЪп СЪи СЪп 37 0 375 380 СЪу УаЪ Суз Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи НЪз Ъеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЪа Не СЪп Ъеи СЪи Ъуз СЪу СЪу Ъуз РНе ТНг 405 410 415 УаЪ Агд СЪу Ъуз Рго ТНг Ъеи СЪи Азр Ъеи СЪи СЪп РНе Зег С1и Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз СЪи Ъуз А1а Азр 435 440 445 УаЪ Ъуз Азр ТНг Азр АЪа УаЪ Азр УаЪ Суз Не АЪа Азр СЪу УаЪ Суз 450 455 460 Пе Азр АЪа РНе Ъеи Ъуз Рго Рго МеЪ СЪи ТНг СЪи СЪи Рго 465 470 475
    <210> 23 <211> 477 <212> Белок <213> Ното зар1еп5 <220> <223> НиРН20 предшественник 1-477 <400 23 Мег СЪу УаЪ Ъеи Ъуз РНе Ъуз НЪз Пе РНе РЬе Агд Зег РЬе УаЪ Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег СЪу УаЪ Зег СЪп Пе УаЪ РНе ТНг РЬе Ъеи Ъеи Пе Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТНг Ъеи Азп РНе Агд АЪа Рго Рго УаЪ Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РНе Ъеи Тгр АЪа Тгр АЗП АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ъеи съу Ъуз РЬе 50 55 60 Азр СЪи Рго Ъеи Азр МеЬ Зег Ъеи РНе Зег РЬе Пе СЪу Зег Рго Агд 65 70 75 80
    118
    Не Азп А1а ТЬг СЬу 85 СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые 90 РЬе Туг УаЬ Азр Агд 95 Ьеи СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу 11е Рго СЬп Ьуз 11е Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 ЬуЗ Азр Не ТЬг РЬе Туг Мер Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ 130 135 140 Не Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп ТЕр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз А1а СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа А1а ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 £ег Ьу 5 Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 2 90 2 95 300 Агд 11е УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ 11е Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг 11е Ые Азп 35 5 360 365 УаЬ ТЬе Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз 11е Агд Ьуз АЗП Тгр Азп Зег зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 365 390 395 400 Аз η Рго Азр Аэп РЬе АЬа Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Ые Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи 465 470 475
    <210> 24 <2П> 476 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-476
    119 022752 <400> 24
    МеЬ 51 у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег 61п Не Уа1 РЬе ТЬе РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Агп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр 51и Рго Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг 51 у 01 п С1у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг 51у Уа1 ТЬг Уа1 Азп Б1у 100 105 110 С1у 11е Рго С1п Ьуз Не Зег Ьеи О1п Азр Шз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго Уа1 Азр Азп Ьеи С1у МеЬ А1а Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр С1и 61и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр 7а1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не С1и Ьеи Уа1 С1п С1п С1п Азп 165 170 175 Уа1 С1п Ьеи Зег Ьеи ТЬг С1и А1а ТЬг С1и Ьуз А1а Ьуз С1п С1и РЬе 180 185 190 С1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 С1и ТЬг Не Ьуз Ьеи 51у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Шз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Н1з Н1з Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп 225 2 30 235 240 Уа1 С1и Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 61и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг С1п С1п Зег Рго 7а1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61и А1э Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬе 290 295 300 Агд Не νβΐ РЬе ТЬг Азр 61п Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег 51п Азр 51 и 305 310 315 320 Ьеи νβΐ Туг ТЬг РЬе 61у С1и ТЬЕ Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег 61у Не 325 330 335 Уа1 Не Тгр 51у ТЬг Ьеи Зег Не Мер Агд Зег МеЬ Ьу5 Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ 01 и ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеЬ Суз Зег О1п Уа1 Ьеи Суз С1п С1и 51п 370 375 380 С1у Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Шз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а Не С1п Ьеи С1и Ьуз С1у С1у Ьуэ РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 51 у Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи 51и С1п РЬе Зег 51и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр νβΐ Суз Не А1а Азр С1у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер С1и ТЬг 51и 465 470 475
    120 <210> 25 <2Ы> 475 <212> Белок <213> Нолю зарЬепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-475 <400> 25
    МеЕ 1 СЬу УаЬ ьеи Ьуз 5 РЬе Ьуз НЬз Ые РНе 10 РНе Агд Зег РНе УаЬ 15 Ьуз Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Ые УаЬ РНе ТЬг РНе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Азп РНе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РНе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РНе Зег РНе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 30 Ые Азп АЬа ТНг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТНг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу Не Рго СЬп Ьуз 11е Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТНг РНе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи сьу МеЕ АЬа УаЬ 130 135 140 Не Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп АЗП 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуэ АЬа Ьуз СЬп СЬи РНе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг Ые Ьуз Ьеи С1у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТНг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 2 65 270 АЬа АЬа ТНг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе АЬа Туг ТНг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег С1п Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТНг РНе СЬу СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТНг Ьеи Зег Ые МеЕ Агд Зег МеЕ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЕ СЬи ТНг Не Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 35 5 360 365 УаЬ ТНг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЕ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 АЗП Рго Азр Азп РНе АЬа ТЬе СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг 405 410 415
    121 022752
    УаЬ Агд СЬу Ьуз 420 Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи 425 СЬи СЬп РЬе Зег 430 СЬи Ьуз РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Бег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа Уа1 Азр ν$ι Суз 11е АЬа Авр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 11е Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МОЁ СЬи ТЫ 465 470 475
    <210> 26 <211> 474 <212> Белок <213> Ноте ; зар1епз <220> <223> НиРН20 предшественник 1-474 <400> 26 МеЬ СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Не УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Не Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЫ 11е РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 но СЬу Не Рго СЬп Ьуз 11е Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мес АЬа УаЬ 130 135 140 Не Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг сьи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз С1п СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг 11е Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп ΗΪ5 Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе РГО Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Не Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 2 90 295 300 Агд Не УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не 325 330 335
    122
    νβΐ 11е Тгр С1у ТЬг 340 Ъеи Зег 11е Мер 345 Агд Зег Мер Ъуз Зег 350 Суз Ъеи Ъеи Ъеи Азр Азп Туг Мер 61и ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ъеи А1а А1а Ъуз Мер Суз Зег 61п Уа1 Ъеи Суз 61п 61 и 61п 370 375 380 61 у Уа1 Суз Х1е Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи Н1з Ъеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а Не 61п Ъеи 61и Ъуз 61 у 61 у Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 νβΐ Агд С1у Ъуз Рго ТЬг Ъеи С1и Азр Ъеи С1и 61П РЬе Зег 61и Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз 61и Ъуз А1а Агр 435 440 445 Уа1 Ъуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр 61у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго Мер 61и
    465 470 <210> 27 <211> 473 <212> Белок <213> Нолю зарЪепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-473 <400> 27
    Мер 1 61у Уа1 Ъеи Ъуз 5 РЬе Ъуз Шз Не РЬе 10 РЬе Агд Зег РЬе Уа1 15 Ъуз Зег Зег 61 у Уа1 Зег 61п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп νβΐ Рго 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 61и РЬе Суз Ъеи 61 у Ъуз РЬе 50 55 60 Азр 61и Рго Ъеи Азр Мер Зег Ъеи РЬе Зег РЬе 11е 61у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг 61у 61п 61у νβΐ ТЬг Не РЬе Туг νβΐ Азр Агд Ъеи 85 90 95 61у Туг Туг Рго Туг 11е Азр Зег Не ТЬг 61 у Уа1 ТЬг νβΐ Азп 61у 100 105 НО 61 у Не Рго 61п Ъуз 11е Зег Ъеи 61п Азр Шз Ъеи Азр Ъуз А1а Ъуз 115 120 125 Ъуз Азр Не ТЬг РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ъеи 61у Мер А1а Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр 61и 61и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ъуз Азр νβΐ Туг Ъуз Азп Агд Зег Не С1и Ъеи Уа1 61п 61п 61 п Азп 165 170 175 Уа1 61п Ъеи Зег Ъеи ТЬг 61и А1а ТЬг 61и Ъуз А1а Ъу® 61п 61и РЬе 180 185 190 61и Ъуз А1а 61у Ъуз Азр РЬе Ъеи Уа1 61и ТЬг Не Ъуз Ъеи 61 у Ъуз 195 200 205 Ъеи Ъеи Агд Рго Азп Н1з Ъеи Тгр 61у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Шз Шз Туг Ъуз Ъуз Рго 61у Туг Азп 61 у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 61и Не Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп 61 и Зег 245 250 255
    123 022752
    ТЬг АЛа Леи Туг 260 Рго Зег Не Туг Леи 265 Азп ТЬг СЛп СЛп Зег 270 Рго УаЛ АЛа АЛа ТЬг Леи Туг УаЛ Агд Азп Агд УаЛ Агд СЛи АЛа 11е Агд УаЛ 275 280 285 Зег Луз Пе Рго Азр АЛа Луз Зег Рго Леи Рго УаЛ РЬе АЛа Туг ТЬг 2 90 295 300 Агд Пе УаЛ РЬе ТЬг Азр СЛп УаЛ Леи Луз РЬе Леи Зег СЛп Азр СЛи 305 310 315 320 Леи УаЛ Тух ТЬг РЬе слу СЛи ТЬг УаЛ АЛа Леи СЛу АЛа Зег СЛу Пе 325 330 335 УаЛ Пе Тгр ЕЛ у ТЬг Леи Зег Пе Мер Агд Зех МеЛ Луз Зег Суз Леи 340 345 350 Леи Леи Азр Азп Туг МеС СЛи ТЬг 11е Леи Азп Рго Туг Пе Не Азп 355 360 365 УаЛ ТЬг Леи АЛа АЛа Луз Мер Суз Зег СЛп УаЛ Леи Суз СЛп СЛи СЛп 370 375 380 СЛу УаЛ Суз Пе Агд Луз АЗП Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Леи НЛз Леи 385 390 395 400 Авп Рго Азр Азп РЬе АЛа Пе СЛп Леи СЛи Луз СЛу СЛу луз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЛ Агд СЛу Луз Рго ТЬг Леи СЛи Азр Леи СЛи СЛп РЬе Зег СЛи Луз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Леи Зег Суз Луз СЛи Луз АЛа Азр 435 440 445 УаЛ Ьуз Азр ТЬг Азр АЛа УаЛ Азр УаЛ Суэ Пе АЛа Авр СЛу УаЛ Суз 450 455 4 60 Не Азр АЛа РЬе Леи Луз Рго Рго МеЛ
    465 470 <210> 28 <211> 472 <212> Белок <213> Ното зархепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-472 <400> 28
    МеЛ СЛу УаЛ Леи Луз РЬе Луз НЛз Пе РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЛ Луз 1 5 10 15 Зег Зег СЛу УаЛ Зег СЛп 11е УаЛ РЬе ТЬг РЬе Леи Леи Не Рхо Суз 20 25 30 Суз Леи ТЬг Леи Азп РЬе Агд АЛа Рго Рхо УаЛ Пе Рго Азп Уа1 Рхо 35 40 45 РЬе Леи Тгр АЛа Тгр Азп АЛа Рго Зех СЛи РЬе Суз Леи СЛу Луз РЬе 50 55 60 Азр СЛи Рго Леи Азр Мех Зег Леи РЬе Зег РЬе 11е СЛу зег РГО Агд 65 70 75 80 Пе Азп АЛа ТЬг СЛу СЛп СЛу УаЛ ТЬг Пе РЬе Туг УаЛ Азр Агд Леи 85 90 95 СЛу Туг Туг Рго Тух Пе Агр Зег Пе ТЬх СЛу УаЛ ТЬг УаЛ Азп СЛу 100 105 110 СЛу Пе Рго С1п Луз Пе Зег Леи СЛп Азр НЛз Леи Азр Луз АЛа Луз 115 120 125 Луз Азр Пе ТЬг РЬе Тух Мех Рхо УаЛ Азр Азп Леи СЛу Мех АЛа Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр СЛи СЛи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Луз Рго 145 150 155 160 Луз Азр УаЛ Тух Луз Азп Агд Зег Пе СЛи Леи УаЛ СЛп СЛп СЛп Азп 165 170 175
    - 124 022752
    Уа1 С1п Ъеи Зег Ъеи ТЬг 180 <31и А1а ТЬг 61и 185 Ъуз А1а Ъуз 61п 190 С1и РЬе С1и Ьуз А1а С1у Ъуз Азр РЬе Ъеи 7а1 С1и ТЬг Не Ьуз Ьеи <31у Ъуз 195 200 205 Ъеи Ъеи Агд Рго Азп ΗΪ3 Ъеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп ΗίΞ ΗίΞ Туг Ъуз Ъуз Рго С1у Туг Азп <31 у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и 11е Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп <31и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ъеи Туг Рго Зег 11е Туг Ъеи Азп ТЫ <31п <31п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ъеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а 11е Агд Уа1 275 280 285 Зег Ъуз 11е Рго Азр А1а Ъуз Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд 11е Уа1 РЬе ТЬг Азр С31п Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ьеи Зег С1п Азр <31и 305 310 315 320 ъеи Уа1 Туг ТЬг РЬе С1у С1и ТЬг Уа1 А1а Ъеи <31 у А1а Зег С1у 11е 325 330 335 Уа1 Не Тгр <31 у ТЬг Ъеи Зег Не МеС Агд Зег мес Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ъеи Ъеи Азр Азп Туг Мер С1и ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 3 65 Уа1 ТЬг Ъеи А1а А1а Ъуз Мер Суз Зег <31п Уа1 Ьеи Суз С1п С1и <31п 370 375 380 61у Уа1 Суз 11е Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Агр Туг Ьеи ΗΪ5 Ъеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а 11е С1п Ъеи С1и Ъуз С1у <31у Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд С1у Ъуз Рго ТЫ Ъеи С1и Азр Ъеи С1и С1п РЬе Зег С1и Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз <31 и Ъуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ъуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр С31у Уа1 Суз 450 455 460 11е Азр А1а РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго
    465 470 <210> 29 <211> 471 <212> Белок <213> Ното заръепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-471 <400> 29
    Мес С1у Уа1 Ьеи Ъуз РЬе Ьуз ΗΪ5 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе 1/а1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег <31у Уа1 Зег С1п 11е 7а1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго νθΐ 11е Рго Азп Уа1 Рго 35 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ьеи <31 у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ьеи Азр МеЪ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе 11е <31у Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп А1а ТЬг <31у 61п С1у ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95
    125 022752
    61у Туг туг Рго 100 Туг Не Азр Зег Не 105 ТЬг 61у Уа1 ТЬг Уа1 110 Азп С1у 61у 11е Рго 61п Ьуз Не Зег Ьеи 61п Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр 11е ТЬг РЬе Туг МеС Рго Уа1 Азр Азп Ьеи С1у МеС АЬа Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр СЬи 61и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е 61и Ьеи Уа1 61ь 61 п 61п Азп 165 170 175 Уа1 61 п Ьеи Зег Ьеи ТЬг 61и АЬа ТЬх 61и Ьуз А1а Ьуз 61п 61и РЬе 180 185 190 61и Ьуз А1а 61у Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 61и ТЬг Не Ьуз Ьеи 61 у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго 61у Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 61и Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 61и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг 61п 61 п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61 и А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз 11е Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе АЬа Туг ТЬг 290 2 95 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЫ Азр 61п Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег 61п Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТЬг РЬе 61у 61 и ТЬг Уа1 А1а Ьеи 61 у А1а Зег 61 у 11е 325 330 335 Уа1 11е Тгр С1у ТЬг Ьеи Зег Не МеС Агд Зег Мес Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеС 61и ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеС Суз Зег 61п 7а1 Ьеи Суз 61п 61и 61п 370 375 380 61 у Уа1 Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 АЗП Рго Азр Азп РЬе АЬа 11е 61п Ьеи 61и Ьуз 61у 61у ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТЫ Ьеи б1и Азр Ьеи 61и 61п РЬе Зег 61и Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз 61 и Ьуз АЬа АЗр 435 440 445 Уа1 ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз 11е АЬа Азр 61у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго 4 65 470
    <210> 30 <211> 470 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-470 <400> 30
    МеС С1у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 15 10 15
    126 022752
    Зег Зег СБу УаБ 20 Зег СБп 11е УаБ РЬе 25 ТЬг РЬе Беи Беи 11е 30 Рго Суз Суз Беи ТЬг Беи Азп РЬе Агд АБа Рго Рго УаБ 11е Рго Азп УаБ Рхо 35 40 45 РЬе Ьей Тгр АБа Тгр Азп АБа Рго Зех СБи РЬе Суз Беи СБу Буз РЬе 50 55 60 Азр СБи Рго Беи Азр МеБ Зех Беи РЬе Зег РЬе Не СБу Зег Рго Ахд 65 70 75 80 11е Азп АБа ТЬг СБу СБп СБу Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг УаБ Азр Агд Беи 85 90 95 СБу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег 11е ТЬг СБу УаБ ТЬг УаБ Азп СБу 100 105 но СБу 11е Рго СБп Буз 11е Зег Беи СБп Азр НБз Беи Азр Буз АБа Буз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬх РЬе Туг МеБ Рхо УаБ Азр Азп Беи СБу Мер АБа УаБ 130 135 140 I Бе Азр Тгр СБи СБи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АБа Агд Азп Тгр Буз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаБ Тух Буз АЗП Агд Зег 11е СБи Беи УаБ СБп ст СБп АЗП 165 170 175 УаБ СБп Беи Зег Беи ТЬг СБи АБа ТЬг СБи Буз АБа Буз С1п СБи РЬе 180 185 190 СБи Ьуз А1а СБу ЪУ® Азр РЬе Беи УаБ СБи ТЬх Не Буз Беи СБу Буз 195 200 205 Ьей Ьей Агд Рго Азп Нхз Беи тгр СБу Тух Туг Беи РЬе Рхо Азр суз 210 215 220 Туг Азп НБз НБз Туг Буз Буз Рго СБу Туг Азп СБу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаБ СБи Не Буз Агд Азп Азр Азр Беи Зег Тгр Беи Тхр Азп СБи Зех 245 250 255 ТЬг АБа Беи Туг Рго Зег 11е Тух Беи Азп ТЬг СБп СБп Зег Рхо УаБ 260 265 270 АБа АБа ТЬх Беи Туг УаБ Агд Азп Агд УаБ Ахд СБи АБа ББе Ахд УаБ 275 280 285 Зег Буз Не Рхо Азр АБа Буз Зех Рхо Беи Рхо УаБ РЬе АБа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаБ РЬе ТЬг Азр СБп УаБ Беи Буз РЬе Беи Зег СБп Азр СБи 305 310 315 320 Ьей УаБ Туг ТЬг РЬе СБу СБи ТЬх УаБ АБа Беи СБу АБа Зег СБу Не 325 330 335 УаБ 11е Тгр СБу ТЬг Беи Зег Не МеБ Агд Зег МеЬ Буз Зег Суз Беи 340 345 350 Ьей Беи Азр Азп Туг МеБ СБи ТЬг Не Беи Азп Рго Туг 11е Не Азп 355 360 365 УаБ ТЬг Беи АБа АБа Буз МеБ Суз Зег СБп УаБ Беи Суз СБп СБи СБп 370 375 380 СБу УаБ Суз ББе Агд Буз Азп Тхр Азп Зег Зех Азр Тух Беи НБз Беи 385 390 395 4 00 АЗП Рго Азр Азп РЬе АБа Не СБп Беи СБи Буз СБу СБу Буз РЬе ТЬг 405 410 415 УаБ Агд СБу Буз Рго ТЬх Беи СБи Азр Беи СБи СБп РЬе Зег СБи Буз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Тух Зег ТЬг Беи Зег Суз Буз СБи Буз А1а Азр 435 440 445 УаБ Буз Азр ТНг Азр АБа УаБ Азр УаБ Суз Не АБа Азр СБу УаБ Суз 450 455 4 60 11е Азр АБа РЬе Беи Буз 465 470
    127 <210> 31 <211> 469 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-469 <400> 31
    МеС С1у Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьуз Н1з Не РНе РНе Агд Зег РНе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег С1п Не νβΐ РНе ТНг РНе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Азп РНе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РНе Ьеи Тгр А1а Тгр Аэп А1а Рго Зег С1и РНе Суз Ьеи С1у Ьуз РНе 50 55 60 Азр С1и Рго Ьеи Азр Мес Зег Ьеи РНе Зег РНе Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТНг С1у С1п С1у Уа1 ТНг Не РНе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг РГО Туг Не Азр Зег Не ТНг С1у Уа1 ТНг Уа1 Азп С1у 100 105 110 Е1у Не Рго Е1п Ьуз Не Зег Ьеи С1п Азр ΗΪ3 Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр 11е ТНг РНе Туг МеС Рго Уа1 Азр Азп Ьеи СЛу МеС А1а Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр νβΐ Туг Ьуз Азп Агд Зег Не С1и Ьеи Уа1 С1п С1п С1п Азп 165 170 175 Уа1 С1п Ьеи Зег Ьеи ТНг СЬи А1а ТНг С1и Ьуз А1а Ьуз С1п С1и РНе 180 185 190 С1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РНе Ьеи 7а 1 С1и ТНг Не Ьуз Ьеи С1у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп ΗΪ5 Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп ΗΪ8 Низ Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп 31 у Зег Суз РНе Азп 225 230 235 240 Уа1 Е1и Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег 245 250 255 ТНг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТНг 01п С1п Зег Рго Уа1 2 60 265 270 А1а А1а ТНг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд СЬи А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РНе А1а Туг ТНг 290 295 300 Агд 11е Уа1 РНе ТНг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег С1п АЗр С1и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТНг РНе С1у СЬи ТНг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег С1у Не 325 330 335 Уа1 11е Тгр С1у ТНг Ьеи Зег Не Мер Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеС С1и ТНг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 3 60 365 Уа1 ТНг Ьеи А1а А1а Ьуз МеС Суз Зег С1п Уа1 Ьеи Суз С1п СЬи С1п 370 375 380 С1у Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Низ Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РНе А1а 11е С1п Ьеи С1и Ьуз С1у С1у Ьуз РНе ТНг 405 410 415
    128 022752
    Уа1 Агд С1у Ьуз 420 Рго ТНг Ьеи С1и Азр 425 Ьеи С1и 61п РНе Зег 4 30 С1и Ьуз РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТНг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Ие А1а Азр 61у Уа1 Суз 450 455 460 Ие Азр А1а РНе Ьеи
    4 65 <210> 32 <211> 468 <212> Белок <213> Нолю зариепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-468 <400> 32
    Мер 1 С1у Уа1 Ьеи Ьуз 5 РНе Ьуз Н1з Не РНе 10 РНе Агд Зег РНе Уа1 15 Ьуз Зег Зег С1у Уа1 Зег С1п Не Уа1 РНе ТНг РНе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Азп РНе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РНе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РНе Суз Ьеи С1у Ьуз РНе 50 55 60 Азр С1и Рго Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РНе Зег РНе Не 61у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Ие Азп А1а ТНг С1у ет С1у Уа1 ТНг Ие РНе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Ие ТНг С1у Уа1 ТНг Уа1 Азп 61у 100 105 но С1у Ие Рго С1п Ьуз Не Зег Ьеи С1п Азр Н13 Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ие ТНг РНе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ьеи С1у Мес А1а Уа1 130 135 140 Ие Азр Тгр С1и С1и Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз АЗП Агд Зег Не С1и Ьеи Уа1 ст ст ст Азп 165 ПО 175 Уа1 С1п Ьеи Зег Ьеи ТНг 61и А1а ТНг 61и Ьуз А1а Ьуз С1п С1и РНе 180 185 190 С1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РНе Ьеи Уа1 С1и ТНг Не Ьуз Ьеи С1у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Шз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Шз Низ Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РНе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и Ие Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег 245 250 255 ТНг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи АЗП ТНг С1п С1п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61и А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Ие Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РНе А1а Туг ТНг 290 295 300 Агд Ие Уа1 РНе ТНг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег С1п Азр С1и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТНг РНе С1у С1и ТНг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег С1у Не 325 330 335
    129 022752
    Ча1 Не Тгр 61 у 340 ТЬг Ьеи Зег Не Мер 345 Агд Зег МеР Ьуз Зег 350 Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Мер б1и ТЫ Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Ча1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеР Суз Зег 61п Уа1 Ьеи Суз 61п 61и 61п 370 375 380 61у Ча1 Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Ыз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а Не 61п Ьеи С1и Ьуз 61 у 61 у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТЬг Ьеи 61и Азр Ьеи С1и С1п РЬе Зег 61и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Ча1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Ча1 Азр Ча1 Суз Не А1а Азр С1у Ча1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе
    465 <210> 33 <211> 467 <212> Белок <213> Ното заргепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-467 <400> 33
    МеР С1у Ча1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз Низ Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Ча1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег 61 у Ча1 Зег 61п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЫ Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Ча1 Не Рго Азп Ча1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 61и РЬе Суз Ьеи 61 у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр 61и Рго Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг С1у С1п С1у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Ча1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг 61 у Ча1 ТЬг Ча1 Азп 61у 100 105 110 61у Не Рго 61п Ьуз Не Зег Ьеи 61п Азр Ыз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ А1а ЧаЬ 130 135 140 Не Азр Тгр 61и С1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Ча1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не С1и Ьеи Ча1 61η 61 п 61 п Азп 165 170 175 Ча1 С1п Ьеи Зег Ьеи ТЬг 61и А1а ТЬг С1и Ьуз А1а Ьуз С1п С1и РЬе 180 185 190 61и Ьуз А1а 61у Ьуз Азр РЬе Ьеи Ча1 61и ТЬг Не Ьуз Ьеи 61у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Ыз Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Нгз Ы з Туг Ьуз Ьуз Рго 61у Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 61и Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 61и Зег 245 250 255
    130
    ТЬг АЪа Ъеи Туг 260 Рго Зег Не Туг Ъеи 265 Азп ТЬг 61п СЪп Зег 270 Рго УаЪ АЪа АЪа ТЬг Ъеи Туг УаЪ Агд Азп Агд УаЪ Агд СЪи АЪа Не Агд УаЪ 275 280 285 Зег Ъуз Не Рго Азр АЪа Ъуз Зег Рго Ъеи Рго УаЪ РЬе АЪа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаЪ РЬе ТНг Азр СЪп Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег СЪп Азр СЪи 305 310 315 320 Ъеи УаЪ Туг ТЬг РНе 61у СЪи ТНг УаЪ АЪа Ъеи СЪу АЪа Зег 61у Не 325 330 335 УаЪ Не Тгр 61у ТЬг Ъеи Зег Не МеЪ Агд Зег МеЪ Ъуз Зег Суз Ъеи 340 345 350 Ъеи Ъеи Азр Азп Туг МеЪ СЪи ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг 1Ъе Не Агп 355 360 365 УаЪ ТЬг Ъеи АЪа АЪа Ъуз МеЪ Суз Зег 61 п УаЪ Ъеи Суз СЪп СЪи СЪп 370 375 380 61у УаЪ Суз Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи НЪз Ъеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЪа Не СЪп Ъеи СЪи Ъуз СЪу СЪу Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЪ Агд С1у Ъуз Рго ТЬг Ъеи С1и Азр Ъеи СЪи СЪп РЬе Зег СЪи Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз СЪи Ъуз АЪа Азр 435 440 445 УаЪ Ъуз Азр ТЬг Азр АЪа УаЪ Азр УаЪ Суз 11е АЪа Азр СЪу УаЪ Суз 450 455 460 Не Азр АЪа 465
    <210> 34 <211> 466 <212> Белок <213> Ното : зархепз <22О> <223> НиРН20 предшественник 1-466 <400> 34 МеЪ СЪу УаЪ Ъеи Ъуз РЬе Ъуз НЪз Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЪ Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег СЪу УаЪ Зег СЪп Не УаЪ РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд АЪа Рго Рго УаЪ Не Рго Азп УаЪ Рго 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр АЪа Тгр Азп АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ъеи 61у Ъуз РЬе 50 55 60 Азр СЪи Рго Ъеи Азр МеЪ Зег Ъеи РЬе Зег РЬе 11е СЪу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЪа ТЬг СЪу СЪп С1у УаЪ ТЫ Пе РЬе Туг УаЪ Азр Агд Ъеи 85 90 95 БЪу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЫ СЪу УаЪ ТЬг УаЪ Азп СЪу 100 105 НО С1у Не Рго СЪп Ъуз Не Зег Ъеи СЪп Азр НЪз Ъеи Азр Ъуз АЪа Ъуз 115 120 125 Ъуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЪ Рго УаЪ Азр Азп Ъеи СЪу МеЪ АЪа УаЪ 130 135 Х40 Не Азр Тгр СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ъуз Азр УаЪ Туг Ъуз Азп Агд Зег Не СЪи Ъеи УаЪ СЪп СЪп СЪп Азп 165 170 175
    131 022752
    УаЬ СЬп Ьеи Зег 180 Ъеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг 185 СЬи Ьуз А1а Ьуз СЬп 190 СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ъеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не 32 5 330 335 Уа1 Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз Мег Суз Зег СЬп Уа1 Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 335 390 395 400 АЗП Рго Азр Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Аэр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 11е Азр 4 65
    <210> 35 <211> 465 <212> Белок <213> Ното ί зар±епз <220> <223> НиРН20 предшественник 1-465 <400> 35 МеЬ С1у УаЬ Ьеи Ьу5 РЬе Ьуз НЬз Ые РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Ые УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп А1а ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95
    132 022752
    С1у Туг Туг Рго 100 Туг 11е Азр Зег Ые 105 ТНг С1у ТНг Уа1 110 Азп С1у С1у 11е Рго С1п Ьуз 11е Зег Ьеи С1п Азр Нгз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеЕ Рго Уа1 Азр Азп Ьеи С1у МеЕ АЬа УаЬ 130 135 140 Ые Азр Тгр С1и С1и Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не С1и Ьеи Уа1 С1п С1п еьп Азп 165 170 175 Уа1 С1п Ьеи Зег Ьеи ТНг 61и А1а ТНг СЬи Ьуз АЬа Ьуз 61 п СЬи РНе 180 135 190 С1и Ьуз А1а 61 у Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ С1и ТНг Ые Ьуз Ьеи С1у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Нгз Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Нгз НГ5 Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг АЗП С1у Зег Суз РНе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп 61п Эе г Рго УаЬ 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд СЬи АЬа Ые Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РНе АЬа Туг ТНг 290 295 300 Агд Ые Уа1 РЬе ТНг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег 61п Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТЬг РНе 61у 61и ТНг Уа1 АЬа Ьеи С1у АЬа Зег С1у Ые 325 330 335 Уа1 Ые Тгр С1у ТНг Ьеи Зег Ые МеЕ Агд Зег МеЕ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр АЗП Туг МеЕ С1и ТНг 11е Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 Уа1 ТЫ Ьеи А1а А1а Ьуз МеЕ Суз Зег 61п Уа1 Ьеи Суз 61п С1и СЬп 370 375 380 61у Уа1 Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Нгз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Абп РНе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз С1у С1у Ьу5 РНе ТНг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТНг Ьеи 61и Азр Ьеи 61и СЬп РНе Зег С1и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз 61 и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Ые А1а Азр 61у Уа1 Суз 450 455 460
    11е
    465 <210> 36 <211> 464 <212> Белок <213> Нолю заргепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-464 <400> 36
    МеЕ С1у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз Нгз Ые РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 15 10 15
    133 022752
    Зег Зег СЛу УаЛ 20 Зег СЛп Не УаЛ РНе 25 ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не 30 Рго Суз Суз Леи ТЬг Леи Азп РЬе Агд АЛа Рго Рго Уа1 Пе Рго Азп УаЛ Рго 35 40 45 РЬе Леи Тгр АЛа тгр Азп АЛа Рго Зег СЛи РЬе Суз Ьеи СЛу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЛи Рго Леи Азр МеЛ Зег Леи РЬе Зег РЬе Не СЛу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЛа ТЬг СЛу С1п СЛу УаЛ ТНг Не РЬе Туг УаЛ Азр Агд Леи 85 90 95 СЛу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег 11е ТЬг СЛу УаЛ ТЬг УаЛ Азп СЛу 100 105 НО С1у Не Рго СЛп Луз Не Зег Леи СЛп Азр НЛз Леи Азр Ьуз АЛа Луз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг Мел Рго УаЛ Азр Азп Леи СЛу МеЛ АЛа УаЛ 130 135 140 Не Азр Тгр СЛи СЛи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЛа Агд Азп Тгр Луз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЛ Туг Луз Азп Агд Зег 11е СЛи Леи УаЛ СЛп СЛп СЛп Азп 165 170 175 УаЛ СЛп Леи Зег Леи ТЬг СЛи АЛа ТНг СЛи Луз АЛа Луз СЛп СЛи РЬе 180 185 190 СЛи Луз АЛа СЛу Луз Азр РЬе Леи УаЛ СЛи ТЬг Не Луз Леи СЛу Луз 195 200 205 Леи Леи Агд Рго Азп НЛз Леи Тгр СЛу Туг Туг Леи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЛз НЛз Туг Луз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЛ СЛи 11е Луз Агд Азп Азр Азр Леи Зег Тгр Леи Тгр Азп СЛи Зег 245 250 255 ТЬг АЛа Леи Туг Рго Зег 11е Туг Леи Азп ТЬг СЛп СЛп Зег Рго УаЛ 260 265 270 АЛа АЛа ТЬг Леи Туг УаЛ Агд Азп Агд УаЛ Агд СЛи АЛа Не Агд УаЛ 275 280 285 Зег Луз 11е Рго Азр А1а Луг Зег Рго Леи Рго УаЛ РЬе АЛа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаЛ РЬе ТЬг Азр СЛп УаЛ Леи Луз РЬе Леи Зег СЛп Азр С1и 305 310 315 320 леи Уа1 Туг ТЬг РЬе СЛу С1и ТЬг УаЛ АЛа Леи СЛу АЛа Зег С1у 11е 325 330 335 УаЛ Не Тгр СЛу ТЬг Леи Зег Не МеЛ Агд Зег МеЛ Ьуз Зег Суз Леи 340 345 350 Леи Леи Азр Азп Туг МеЛ СЛи ТНг Не Леи Азп Рго Туг Пе Не Азп 355 360 365 УаЛ ТЬг Леи АЛа А1а Ьуз МеЛ Суз Зег СЛп УаЛ Леи Суз СЛп СЛи СЛп 37 0 375 380 ел у УаЛ Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Леи НЛз Леи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЛа Не СЛп Леи СЛи Луз С1у С1у Луз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЛ Агд СЛу Луз Рго ТЬг Леи СЛи Азр Ьеи СЛи СЛп РЬе Зег СЛи Луз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Леи Зег Суз Луз СЛи Луз АЛа Азр 435 440 445 УаЛ Луз Азр ТЬг Азр АЛа УаЛ Азр УаЛ Суз Не АЛа Азр С1у УаЛ Суз 450 455 4 60
    <210> 37 <211> 462 <212> Белок
    134 022752 <213> Ното эархепв <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-462 <400> 37
    МеС СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Ые РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Ые УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Ые Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 ыо СЬу Ые Рго СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеС Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеС АЬа УаЬ 130 135 140 Ые Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 18 5 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи 11е Ьуз Агд АЗП Азр Азр Ьеи Зег тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи А5П ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 2 85 Зег Ьу® Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеС СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые АЗП 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеС Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьу® Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа 11е СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр
    135
    435 440 445
    УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Не А1а Азр СЬу
    450 455 460 <210> 38 <211> 460 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-460 <400> 38
    МеЬ СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Не УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Не Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Не РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу 11е Рго СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьу5 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго УаЬ Агр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ 130 135 140 11е Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Абп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг 11е Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп ΗΪ5 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Не Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не 325 330 335 УаЬ Не Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Не МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп
    136 022752
    370 375 380 61у Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьей Н1з Ьеп 385 390 3 95 4 00 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а 11е 61 п Ьей 61и Ьуз 61у С1у Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТЬг Ьеп 61ч Азр Ьей 61ч 61П РЬе Зег 61и Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьей Зег Суз Ьуз 61ч Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а 450 455 4 60
    <210> 39 <211> 458 <212> Белок <213> Ното : зархепз <220> <223> НиРН20 предшественник 1-458 <400> 39 МеС 61 у Уа1 Ьей Ьуз РЬе Ьуз Ηί$ Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе νβΐ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег 61 у Уа1 Зег 61п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеч Ьеч Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьей ТЬг Ьей Азп РЬе Агд А1а Рго РГО Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьей Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 61ч РЬе Суз Ьеч 61у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр 61ч Рго Ьей Азр МеС Зег ьеч РЬе Зег РЬе 11е 61у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг 61 у 61п 61 у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеч 85 90 95 61у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг 61 у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61у 100 105 110 61у 11е Рго 61п Ьуз Не Зег Ьеч С1п Азр Нгз Ьеч Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Агр Не ТЬг РЬе Туг МеС Рго Уа1 Азр Азп Ьеч С1у МеС А1а Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр 61ч 61ч Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не 61ч Ьеч Уа1 61п 61п 61п Азп 165 170 175 Уа1 61 п Ьей Зег Ьей ТЬг 61ч А1а ТЬг 61ч Ьуз А1а Ьуз 61п 61ч РЬе 18 0 185 190 61ч Ьуз А1а 61у Ьуз Азр РЬе Ьеч Уа1 61ч ТЬг Не Ьуз Ьеч 61у Ьуз 195 200 205 Ьеп Ьеп Агд Рго Азп ΗΪ3 Ьеч Тгр 61у Туг Туг Ьеч РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Нгз Н13 Туг Ьуз Ьуз Рго 61у Туг Азп 61 у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 61ч Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеч Зег Тгр Ьеч Тгр Азп 61ч Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьей Туг Рго Зег Не Туг Ьеч Азп ТЬг 61п 61η Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьей Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61ч А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеч Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЬг Азр 61п Уа1 Ьеч Ьуз РЬе ьеч Зег 61п Азр 61ч
    137 022752
    305 310 315 320 Беи УаБ Туг ТЬг РЬе СБу СБи ТЬг УаБ А1а Беи СБу АБа Зег СБу Не 325 330 335 УаБ Пе Тгр СБу ТЬг Беи Зег Не Мер Агд Зег Мер Буз Зег Суз Беи 340 345 350 Беи Беи Азр А5П Туг Мер СБи ТЬг 11е Беи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 УаБ ТНг Беи АБа АБа Буз Мер Суз Зег СБп УаБ Беи Суз СБп СБи СБп 370 375 330 СБу УаБ Суз Не Агд Буз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Беи ΗΪ5 Беи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АБа 11е СБп Беи СБи Буз СБу СБу Буг РЬе ТЬг 405 410 415 УаБ Агд СБу Буз Рго ТЬг Беи СБи Аэр Беи С1и СБп РЬе Зег СБи Буз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Беи Зег Суз Буз СБи Буз АБа Азр 435 440 445 УаБ Буз Азр ТЬг Азр АБа УаБ Азр УаБ Суз
    450 455 <210> 40 <211> 456 <212> Белок <213> Ното зарБепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-456 <400> 40
    Мер СБу УаБ Беи Буз РЬе Буз НБз Не РЬе РЬе Агд Зех РЬе УаБ Буз 1 5 10 15 Зег Зег СБу УаБ Зех СБп Не УаБ РЬе ТЬх РЬе Ъеи Беи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Беи ТЬг Беи Азп РЬе Ахд АБа Рго Рго УаБ 11е Рго Азп УаБ Рго 35 40 45 РЬе Беи Тгр АБа Тгр Азп АБа Рго Зех СБи РЬе Суз Беи СБу Буг РЬе 50 55 60 Азр СБи Рго Беи Азр Мер Зег Беи РЬе Зег РЬе Не С1 у Зех Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АБа ТЬг СБу СБп СБу УаБ ТЬг Не РЬе Тух УаБ Азр Агд Беи 85 90 95 СБу Туг Тух Рхо Тух Не Азр Зех Б1е ТЬг СБу Уа1 ТЬх УаБ АЗП СБу 100 105 но СБу ББе Рго СБп Буз Не Зег Беи СБп Азр НБз Беи Азр Буз АБа Буз 115 120 125 Буз Азр Не ТЬг РЬе Туг Мер Рго УаБ Азр Азп Беи СБу МеБ АБа УаБ 130 135 140 Не Азр Тгр СБи СБи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АБа Ахд Азп Тгр Буз Рго 145 150 155 160 Буз Азр УаБ Туг Буз Азп Ахд Зег Пе СБи Беи УаБ СБп СБп СБп Азп 165 170 175 УаБ СБп Беи Зег Беи ТЬг СБи АБа ТЬх СБи Буз АБа Буз СБп СБи РЬе 180 185 190 СБи Буз АБа СБу Буз Азр РЬе Беи УаБ СБи ТЬг 11е Буз Беи СБу Буз 195 200 205 Беи Беи Агд Рго Азп НБз Беи Тхр СБу Туг Туг Беи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НБз НБз Туг Буз Буз Рго СБу Тух АЗП СБу Зех Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаБ СБи Не Буз Агд А5П Азр Азр Беи Зег Тгр Беи Тхр Азп СБи Зех
    138 022752
    245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг 61п 61п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи РЕО Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не 7а1 РЬе ТЬг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег 61п Агр 61и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТЬг РЬе С1у С1и ТЬг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег С1у Не 325 330 335 νβΐ Не Тгр 61 у ТЬЕ Ьеи Зег Не Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Мер С1и ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз Мер Суз Зет С1п Уа1 Ьеи Суз 61п С1и 61п 370 375 380 С1у Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп ТЕр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Низ Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а Не 61п Ьеи С1и Ьуз С1у Е1у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТЬг Ьеи 61и Азр Ьеи 61и 61п РЬе Зег 61и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз 61и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр
    450 455 <210> 41 <211> 454 <212> Белок <213> Ното зариепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-454 <400> 41
    Мер С1у Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъуз Низ Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег 61у Уа1 Зег 61п 11е Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬе Ъеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рео 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ъеи С1у Ъуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ъеи Азр Мер Зег Ъеи РЬе Зег РЬе Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬе 61у 61п С1у Уа1 ТЬг Не РЬе ТуЕ Уа1 Азр Агд Ъеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рео ТуЕ Не Азр Зег Не ТЬг С1у Уа1 ТЬг Уа1 Азп С1у 100 105 но 61 у Не Рго 61 п Ъуз Не Зег Ъеи 61п Азр Низ Ъеи Азр Ъуз А1а Ъуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ъеи С1у Мер А1а Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр 61и С1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ъуз Азп Агд Зег Не С1и Ъеи Уа1 61 п 61П 61П Азп 165 170 175 Уа1 61п Ъеи Зег Ъеи ТЬг 61и А1а ТЬг 61и Ъуз А1а Ъуз 61 п 61и РЬе
    139
    180 185 190 СЬи Ьуз АЬа 61у Ьуз Азр РЬе Ьеи 7а1 СЬи ТЬг 11е Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Агп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз ΗΪΞ Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп 61 у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 νβΐ 61 и 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТНг А1а Ьеи Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа А1а ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи А1а Не Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго 7а1 РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РНе СЬу СЬи ТЫ Уа1 АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег 61 у Не 325 330 335 УаЬ 11е Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Не МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Мер СЬи ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 УаЬ ТНг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеС Суз Зег 61п 1/а1 Ьеи Суз СЬп 61и СЬп 370 375 380 СЬу \7а1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу 61у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи С1п РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа
    450 <210> 42 <211> 452 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-452 <400> 42
    МеС СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз н±з 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег 61 у УаЬ Зег С1п Не УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Не Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп 6Ьу УаЬ ТЫ Не РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг 1Ье Азр Зег Не ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 но СЬу ТЬе Рго СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз
    140 022752
    115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго Уа1 Азр Азп Ьеи Е1у МеЬ А1а Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр С1и 51и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не 51и Ьеи Уа1 51П С1п С1п Азп 165 170 175 Уа1 51 п Ьеи Зег Ьеи ТЬг Б1и А1а ТЬг 51и Ьуз А1а Ьуз 51П С1и РЬе 180 185 190 С1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 С1и ТЬг Не Ьуз Ьеи 51у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Шз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз Ηίδ Туг Ьуз Ьуз Рго 51 у Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 51и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг 61п С1п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг 1/а1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61и А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго 1/а1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЬг Азр 51п Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег 61п Азр С1и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТЬг РЬе 61у С1и ТЬг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег С1у Не 325 330 335 Уа1 Не Тгр С1у ТЬг Ьеи Зег Не Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ 01и ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеС Суз зег 51 п Уа1 Ьеи Суз 61п 61и 51п 370 375 380 01у Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Шз Ьеи 38 5 390 395 400 Азп Рго Азр АЗП РЬе А1а Не 61п Ьеи С1и Ьуз 61у 51 у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТЬг Ьеи 61и Азр Ьеи 61и 51п РЬе Зег О1и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЫ Ьеи Зег Суз Ьуз 51и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг
    450 <210> 43 <211> 450 <212> Белок <213> Ногао заргепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-450 <400> 43
    МеЬ 51у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег 51 у νβΐ Зег 51п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ьеи 51 у Ьуз РЬе
    - 141 022752
    50 55 60 Азр С1и Рго Ьеи Азр Мес Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не 61 у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг 61у С1п 61у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ъеи 85 90 95 61у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЫ 61у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61у 100 105 110 С1у Не Рго 61 п Ьуз Не Зег Ьеи 61п Азр НЪз Ьеи Азр Ъу5 А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЫ РЬе Туг МеС Рго Уа1 Азр Азп Ьеи 61у Мес А1а Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр 61 и 61и тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не 61 и Ъеи Уа1 С1п С1п С1п Азп 165 170 175 Уа1 С1п Ьеи Зег Ъеи ТЬг 61и А1а ТЬг 61и Ъуз А1а Ьуз 61п 61и РЬе 180 185 190 61и Ьуз А1а 61у Ьуз Агр РЬе Ъеи Уа1 61и ТЬг Не Ьуз Ъеи С1у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Ηίε Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп ΗίΞ ΗίΞ Туг Ьуз Ъуз Рго С1у Туг Азп О1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 61и Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп С1и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТЬг 61п 61п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61и А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ъуз Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЬг Азр 61п Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег С1п Азр 61и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТЬг РЬе 61 у С1и ТЬг Уа1 А1а Ъеи С1у А1а Зег 61 у Не 325 330 335 Уа1 Не Тгр 61 у ТЬг Ъеи Зег Пе МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеС 61и ТЬг Не Ъеи Аэп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ъуз МеС Суз Зег 61п Уа1 Ьеи Суз 61п 61и С1п 370 375 380 61 у Уа1 Суз Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Н13 Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а Не 61п Ъеи 61и Ъуз 61у 61у Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТЬг Ьеи 61и Азр Ъеи 61 и 61п РЬе Зег 61и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ьуз 61и Ъуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз 450
    <210> 44 <211> 508 <212> Белок <213> Ното зарЪепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-508
    142 022752 <400> 44
    МеЬ СЪу УаЪ Ъеи Ъуз РНе Ъуз НЪз Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЪ Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег БЪу УаЪ Зег СЪп Не УаЪ РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд АЪа Рго Рго УаЪ Не Рго АЗП УаЪ Рго 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр АЪа Тгр Азп АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ъеи БЪу Ъуз РЬе 50 55 60 Азр СЪи Рго Ъеи Азр МеЪ Зег Ъеи РЬе Зег РЬе 11е 61 у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЪа ТЬг С1у СЪп СЪу УаЪ ТЬг Не РЬе Туг УаЪ Азр Агд Ъеи 85 90 95 БЪу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег 11е ТЬг СЪу УаЪ ТЫ УаЪ АЗП 61у 100 105 НО СЪу Не Рго СЪп Ъуз Не Зег Ъеи СЪп Азр НЪз Ъеи Азр Ъуз АЪа Ъуз 115 120 125 Ъуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЪ Рго УаЪ Азр Азп Ъеи С1у МеЪ АЪа УаЪ 130 135 140 Не Азр Тгр СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ъуз Азр УаЪ Туг Ъуз Азп Агд Зег Не СЪи Ъеи УаЪ СЪп СЪп СЪп Азп 165 170 175 УаЪ БЪп Ъеи Зег Ъеи ТЬг СЪи АЪа ТЬг СЪи Ъуз АЪа Ъуз СЪп СЪи РЬе 180 185 190 СЪи Ъуз АЪа 61 у Ъуз Азр РЬе Ъеи УаЪ БЪи ТЬг 11е Ъуз Ъеи СЪу Ъуз 195 200 205 Ъеи Ъеи Агд Рго Азп НЪз Ъеи Тгр СЪу Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЪз НЪз Туг Ъуз Ъуз Рго СЪу Туг Азп 61 у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЪ СЪи 11е Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп СЪи Зег 245 250 255 ТЬг АЪа Ъеи Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТЬг 61 п еъп Зег Рго УаЪ 260 265 270 АЪа АЪа ТЬг Ъеи Туг УаЪ Агд Азп Агд УаЪ Агд СЪи АЪа 11е Агд УаЪ 275 280 285 Зег Ъуз Не Рго Азр АЪа Ъуз Зег Рго Ъеи Рго УаЪ РЬе АЪа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаЪ РЬе ТЬг Азр СЪп УаЪ Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег СЪп Азр СЪи 305 310 315 320 Ъеи УаЪ туг ТЬг РЬе 61у СЪи ТЫ УаЪ АЪа Ъеи БЪу АЪа Зег 61 у Не 325 330 335 УаЪ Не Тгр еъу ТЬг Ъеи Зег Не МеЪ Агд Зег МеЪ Ъуз Зег Суз Ъеи 340 345 350 Ъеи Ъеи Азр Азп Туг МеЪ СЪи ТЫ Не Ъеи АЗП Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 УаЪ ТЬе Ъеи АЪа АЪа Ъуз МеЪ Суз Зег БЪп УаЪ Ъеи Суз СЪп СЪи БЪп 370 375 380 СЪу УаЪ Суз Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи НЪз Ъеи 335 390 395 400 Азп Рго Аэр Азп РЬе АЪа Не СЪп Ъеи СЪи Ъуз СЪу 61у Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЪ Агд еъу Ъуз Рго ТЬг Ъеи СЪи Азр Ъеи СЪи БЪп РЬе Зег СЪи Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЫ Ъеи Зег Суз Ъуз СЪи Ъуз АЪа Азр 435 440 445 УаЪ Ъуз Азр ТЬг Азр АЪа УаЪ Азр УаЪ Суз Не АЪа Азр БЪу УаЪ Суз 450 455 460 Не Азр АЪа РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго МеЪ СЪи ТЬг СЪи СЪи Рго СЪп Не 465 470 475 480
    143
    РЬе Туг Агп АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ъеи Зег А1а ТЬг МеЬ РЬе 11е УаЬ 485 490 495 Зег 11е Ьеи РЬе Ьеи Ые Ые Зег Зег УаЬ А1а Зег 500 505
    <210> 45 <211> 506 <212> Белок <213> Ното заргепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-506 <400> 45
    МеЬ СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Ые РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Ые УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ъеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ъеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ъеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу Ые Рго СЬп Ьуз Ые Зег Ъеи СЬп Азр Н13 Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго Уа1 Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ 130 135 140 Ые Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз А1а Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ъуз АЬа СЬу Ъуз Азр РЬе Ьеи Уа1 СЬи ТЬг Ые Ьуз Ъеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ъуз Ьуз Рго СЬу Туг АЗЬ СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азь Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ъеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Αερ АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е 325 330 335 УаЬ 11е Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег 11е МеЬ Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ С1 и ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Не Ые Азп 355 360 365
    144
    УаЬ ТЬг 370 Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЬ 375 Сув Зег СЬп УаЬ Ьеи 380 Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз Не Агд ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 38 5 390 395 4 00 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа 11е СЬп Ьеи СЬи Ьув СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Бег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз 11е АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Ые Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп 11е 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТЬг МеЬ РЬе Ые УаЬ 485 490 495 Бег ТЬе Ьеи РЬе Ьеи Не Не Зег Бег УаЬ
    500 505 <210> 46 <211> 504 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> НцРН20 предшественник 1-504 <400> 46
    МеЬ СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Ые РЬе РЬе Агд Бег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Бег СЬп Ые УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Бег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЬ Бег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Бег Рго Агд 65 70 75 80 Ые Азп АЬа ТЫ СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг 11е РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Бег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу Ые Рго СЬп Ьуз Ые Бег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Агп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ 130 135 140 Ые Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Аэп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Бег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Бег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Бег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Бег 245 250 255
    145 022752
    ТНг А1а Ьеи Туг 260 Рго Зег Не Туг Ьеи 265 Азп ТНг С1п 61п Зег 270 Рго Уа1 А1а А1а ТНг Ьеи Туг Уа1 Агд АЗП Агд νβΐ Агд 61и А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз 11е Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РНе А1а Туг ТНг 290 295 300 Агд 11е Уа1 РНе ТЬг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег С1п Азр 61и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТНг РНе 61у С1и ТНг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег 61у 11е 325 330 335 Уа1 11е Тгр С1у ТНг Ьеи Зег Не Мес Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг мес С1и ТНг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 7а1 ТНг Ьеи А1а А1а Ьуз МеС Суз Зег 61п Уа1 Ьеи Суз 61п С1и С1п 370 375 380 С1у νβΐ Суз Не Агд Ьуз АЗП тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Низ Ьеи 385 390 395 400 АЗП Рго Азр АЗП РНе А1а Не 51п Ьеи С1и Ьуз 61 у 61у Ьуз РНе ТНг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТНг Ьеи С1и Азр Ьеи 61 и 61п РНе Зег С1и Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз 61и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уэ1 Азр Уа1 Суз 11е А1а Азр 61у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеС 61и ТНг 61 и 61 и Рго 61 п 11е 4 65 470 475 480 РНе Туг Азп А1а Зег Рго Зег ТНг Ьеи Зег А1а ТНг МеС РНе Не Уа1 485 4 90 495 Зег 11е Ьеи РНе Ьеи 11е Не Зег
    500 <210> 47 <211> 502 <212> Белок <213> Ното зарпепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-502 <400> 47
    МеС С1у Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьуз Низ Не РНе РНе Агд Зег РНе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег 61у 7а1 Зег 61п 11е Уа1 РНе ТЬг РНе Ьеи Ьеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Азп РНе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РНе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РНе Суз Ьеи 61у Ьуз РНе 50 55 60 Азр 61и Рго Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РНе Зег РНе Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТНг 61 у С1п С1у Уа1 ТНг Не РНе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг 11е Азр Зег Не ТНг 61 у Уа1 ТНг Уа1 Азп 61у 100 105 но 61 у 11е Рго 61п Ьуз 11е Зег Ьеи 61п Азр Н1з Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТНг РНе Туг МеС Рго Уа1 Азр Азп Ьеи 61 у МеС А1а Уа1 130 135 140
    146
    Ые Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 235 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТЬг ьеи Зег Ые МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг мес СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеС суз Зег СЬп УаЬ ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 4 60 Ые Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеС СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые 465 4 70 475 430 РЬе Туг Азп АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТЬг МеС РЬе Ые УаЬ 485 490 495 Зег Ые Ьеи РЬе Ьеи Ые
    500 <210 48 <2Ы> 500 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-500 <400> 48
    Ме(: С1у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз Н1з Ые РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у УаЬ Зег С1п Ые Уа! РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30
    147 022752
    Суз Ьей ТЬг 35 Ьей Азп РЬе Агд АБа 40 Рго Рго УаБ Не Рго 45 Азп УаБ РГО РЬе Ьей Тгр АБа Тгр Азп АБа Рго Зег СБи РЬе Суз Ьей СБу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СБи Рго Ъеи Азр МеБ Зег Ьей РЬе Зег РЬе 11е СБу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АБа ты СБу СБп СБу УаБ ТНг Не РЬе Туг УаБ Азр Агд Ьей 85 90 95 СБу Туг Туг Рго Туг Пе Азр Зег Не ТЬг СБу УаБ ТЬг УаБ Азп СБу 100 105 НО СБу Не Рго СБп Ьуз Не Зег Ъеи СБп Азр НБз Ъеи Азр Ьуз АБа Ъуз 115 120 125 Ьуз Азр 11е ТЬг РЬе Туг МеБ Рго УаБ Азр Азп Ъеи СБу МеБ АБа УаБ 130 135 140 Не Азр Тгр СБи СБи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АБа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаБ Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СБи Ьей УаБ СБп СБп СБп Азп 165 170 175 УаБ СБп Ъеи Зег Ьей ТЬг СБи АБа ТЬг СБи Ьуз А1а Ьуз СБп СБи РЬе 180 185 190 СБи Ьуз АБа СБу Ьуз Азр РЬе Ъеи УаБ СБи ТЬг Не Ьуз Ъеи СБу Ьуз 195 200 205 Ьей Ьей Агд Рго Азп НБз Ьей Тгр СБу Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НБз НБз Туг Ъуз Ьуз Рго СБу Туг Азп СБу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаБ СБи Не Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп СБи Зег 245 250 255 ТЬг АБа Ъеи Туг Рго Зег Не Туг Ьей Азп ТЬг СБп СБп Зег Рго УаБ 260 265 270 АБа АБа ТЬг Ьей Туг УаБ Агд Азп Агд УаБ Агд СБи АБа Не Агд УаБ 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр АБа Ьуз Зег Рго Ъеи Рго УаБ РЬе АБа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаБ РЬе ТНг Азр СБп УаБ Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег СБп Азр СБи 305 310 315 320 Ьей УаБ Туг ТЬг РЬе СБу С1и ТЬг УаБ АБа Ъеи СБу А1а Зег СБу 11е 325 330 335 УаБ Не Тгр СБу ТЬг Ьей Зег Не МеБ Агд Зег МеБ Ьуз Зег Суз Ъеи 340 345 350 Ьей Ъеи Азр Азп Туг МеБ СБи ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 УаБ ТЬг Ъеи АБа АБа Ьуз МеБ Суз Зег СБп УаБ Ъеи Суз СБп СБи СБп 370 375 38 0 СБу УаБ Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьей НБз Ьей 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АБа Не СБп Ъеи СБи Ъуз СБу СБу Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаБ Агд СБу Ьуз Рго ТЬг Ьей СБи Азр Ьей С1ц СБп РЬе Зег СБи Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ьуз СБи Ъуз АБа Азр 435 440 445 УаБ Ьуз Азр ТЬг Азр АБа УаБ Азр УаБ Суз 11е АБа Азр СБу УаБ Суз 450 455 460 Не Азр АБа РЬе Ьей Ьуз Рго Рго МеБ СБи ТЬг СБи СБи Рго СБп 11е 4 65 470 475 480 РЬе Туг Азп АБа Зег Рго Зег ТЬг Ъеи Зег АБа ТЬг МеБ РЬе Не УаБ 485 490 495 Зег Не Ьей РЬе 500
    148 <210> 49 <211> 498 ' <212> Белок <213> Ното зархепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-498 <400> 49
    Мес С1у УаЛ Леи Ьуз РЬе Луз НЛз Пе РЬе РЬе Ахд Зех РЬе Уа1 Луз 1 5 10 15 Зех Зег СЛу УаЛ Зег СЛп Пе УаЛ РЬе ТЬх РЬе Леи Леи Пе Рхо Суз 20 25 30 Суз Леи ТЬг Леи Азп РЬе Агд АЛа Рго Рго Уа1 Пе Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тхр АЛа Тгр Азп АЛа Рго Зег СЛи РЬе Суз Леи 61 у Луз РЬе 50 55 60 Азр СЛи Рго Леи Азр МеС Зег Леи РЬе Зех РЬе Пе 61у Йех Рго Агд 65 70 75 80 Пе Азп АЛа ТЬг елу СЛп 61у УаЛ ТЬг 11е РЬе Туг УаЛ Азр Ахд Леи 85 90 95 С1у Туг Тух Рго Тух Пе Азр Зег Не ТЬх 61у УаЛ ТЬх УаЛ Азп 61у 100 105 110 С1у Не Рхо СЛп Луз Пе Зег Леи 61п Азр НЛз Леи Азр Луз АЛа Луз Л15 120 125 Ьуз Аэр Не ТЬг РЬе Туг МеС Рго Уа1 Азр Азп Леи С1у МеС А1а Уа1 130 135 140 Пе Азр Тгр 61 и СЛи Тгр Агд Рго ТЬх Тгр АЛа Ахд Азп Тхр Луз Рхо 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЛ Тух Луз Азп Агд Зех Пе СЛи Леи УаЛ 61п СЛп СЛп Азп 165 170 175 Уа1 СЛп Леи Зех Леи ТЬг СЛи АЛа ТЬх СЛи Луз АЛа Луз С1п СЛи РЬе 180 185 190 61и Луз А1а 61у Луз Азр РЬе Леи УаЛ СЛи ТЬг Пе Луз Леи 61у Луз 195 200 205 Ьеи Леи Ахд Рхо Азп НЛз Леи Тгр 61у Тух Тух Леи РЬе Рхо Азр Суз 210 215 220 Тух Азп НЛз НЛз Туг Луз Луз Рго С1у Тух Азп 61 у Зех Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и Не Луз Агд Азп Азр Азр Леи Зех Тхр Леи Тхр Азп СЛи Зег 245 250 255 ТЬх АЛа Леи Туг Рго Зег Не Туг Леи Азп ТЬг СЛп СЛп Зех Рхо Уа1 260 265 270 АЛа АЛа ТЬг Леи Тух УаЛ Агд Азп Агд Уа1 Агд СЛи АЛа Пе Агд УаЛ 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр АЛа Луз Зег Рхо Леи Рхо УаЛ РЬе АЛа Тух ТЬх 290 295 300 Агд Не УаЛ РЬе ТЬг Азр 61п УаЛ Леи Луз РЬе Леи Зех СЛп Азр 61и 305 310 315 320 Ьеи УаЛ Туг ТЬг РЬе С1у СЛи ТЬг Уа1 АЛа Леи С1у АЛа Зех С1у Не 325 330 335 УаЛ Не Тхр СЛу ТЬг Леи Зех Пе МеС Ахд Зег МеС Луз Зех Суз Леи 340 345 350 Леи Ьеи Азр Азп Туг МеС СЛи ТЬг Пе Леи Азп Рхо Тух Пе Пе Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Леи АЛа АЛа Луз МеС Суз Зех 61п УаЛ Леи Суз СЛп СЛи СЛп 370 375 380 61у УаЛ Суз 11е Агд Луз Азп Тгр Азп Зех Зег Азр Туг Леи НЛз Леи 385 390 395 400 Азп Рхо Азр Азп РЬе А1а Пе СЛп Леи СЛи Луз С1у СЛу Луз РЬе ТЬг 405 410 415
    149
    Ча1 Агд С1у Ьуз 420 Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи 425 Б1и 61п РЬе Зег 430 61и Ьуз РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Ча1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Ча1 Азр Ча1 Суз Не А1а Азр 61 у Ча1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Ьец Ьуз Рго Рго МеЬ С1и ТЬг С1и С1и Рго СЬп Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп А1а Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег А1а ТЬг МеЬ РЬе 11е Ча! 485 490 495 Зег Т1е
    <210> 50 <211> 496 <212> Белок <213> Ното зархепз <220> <223> НиРН20 предшественник 1-496 <400> 50 МеЬ СЬу Ча1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз Н1з Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Ча1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу ЧаЬ Зег С1п Не Ча1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Ча1 Не Рго Азп ЧаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ьеи 61 у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр 61 и Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Бег РЬе Не СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп А1а ТЬг СЬу СЬп С1у Ча1 ТЬг 11е РЬе Туг Ча1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг 61 у Ча1 ТЬг Ча1 Азп СЬу 100 105 110 С1у Пе Рго 61п Ьуз 11е Зег Ьеи С1п Азр Нйз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго Ча1 Азр Азп Ьеи 61 у МеЬ А1а Ча1 130 135 140 Не Азр Тгр 61и 61и Тгр Агд РГО ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Ча1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не С1и Ьеи Ча1 СЬп СЬп С1п Азп 165 170 175 Ча1 С1п Ьеи Зег Ьеи ТЬг С1и А1а ТЬг 61и Ьуз А1а Ьуз СЬп С1и РЬе 180 185 190 61и Ьуз А1а СЬу Ьуг Азр РЬе Ьеи Ча1 С1и ТЬг 11е Ьуз Ьеи 61 у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Н13 Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Н1Б ΗΪ5 Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Ча1 С1и 11е Ьуг Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 61 и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг 61 п 61 п Зег Рго Ча1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг ЧаЬ Агд Азп Агд Ча1 Агд С1и А1а Не Агд Ча1 275 280 285 Зег Ьуг Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Ча1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300
    150 022752
    Агд 305 11е УаЬ РНе ТНг Азр 310 СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе 315 Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 320 Ьеи Уа1 Туг ТНг РНе СЬу СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не 325 330 335 УаЬ Не Тгр СЬу ТНг Ьеи Зег Не МеД Агд Зег МеД Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеД СЬи ТНг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТНг Ьеи А1а А1а Ьуз МеД Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи ΗΪ3 Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Агп РНе А1а Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РНе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТНг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Не Азр А1а РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеД СЬи ТНг СЬи СЬи Рго СЬп Не 465 470 475 480 РНе Туг Азп АЬа 8ех Рго Зег ТНг Ьеи Зег АЬа ТНг МеД РНе Не Уа! 485 490 495
    <210> 51 <211> 494 <212> Белок <213> Ното : =ар1епз <220 <223> НиРН20 предшественник 1-494 <400> 51 МеД СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьуз НЬз Не РНе РНе Агд Зег РНе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Не УаЬ РНе ТНг РНе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Азп РНе Агд АЬа Рго Рго 7а1 Не Рго Азп УаЬ Рхо 35 40 45 РНе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РНе Зег РНе 11е СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТНг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТНг 11е РНе Туг УаЬ Азр Ахд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТНг СЬу УаЬ ТНг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу Не Рго СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТНг РНе Туг МеД Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеД АЬа УаЬ 130 135 140 Не Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНх Тгр АЬа Агд АЗП Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ С1п Ьеи Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуэ АЬа Ьуз СЬп СЬи РНе 180 185 190 СЬи Ьуз А1а СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205
    151 022752
    Ьеи Ьеи 210 Агд Рго Азп Нгз Ьеи Тгр 215 С1у Туг Туг Ьеи 220 РНе Рго Азр Суз Туг Азп Нгз Нгз Туг Ьуз ьуз Рго 61у Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 61 и Зег 245 250 255 ТНг А1а Ьеи Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТНг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа А1а ТНг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи А1а 11е Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд 11е УаЬ РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТНг РНе СЬу СЬи ТНг УаЬ А1а Ьеи 61у А1а Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ 11е Тгр С1у ТНг Ьеи Зег 11е МеЕ Агд Зег МеЕ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЕ СЬи ТНг 11е Ьеи Азп Рго Туг Ые 11е Азп 355 360 365 УаЬ ТНг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЕ Суз Зег СЬп Уа1 Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Нгз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РНе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз 61у СЬу Ьуз РЬе ТНг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РНе Бег СЬи Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТНг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр 61у УаЬ Суз 450 455 460 11е Азр АЬа РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЕ СЬи ТНг СЬи СЬи Рго СЬп 11е 465 470 475 480 РНе Туг Азп А1а Зег Рго Зег ТНг Ьеи Зег А1а ТНг МеЕ РНе
    485 490 <210 52 <211> 492 <212> Белок <213> Ното заргепз <220>
    <223> НиРН20 предшественник 1-492 <400 52
    МеЕ 61у УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьуз Нгз Ые РНе РНе Агд Зег РНе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Ые УаЬ РНе ТНг РНе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи АЗП РНе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РНе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РНе Зег РНе Ые 61 у Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп АЬа ТНг С1у СЬп СЬу УаЬ ТНг Ые РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг ТЬе Азр Зег Ые ТЬг 61у УаЬ ТНг УаЬ Азп С1у 100 105 110
    - 152 022752
    61у 11е Рго 115 61п Ьуз Не Зег Ьеч 120 61п Азр ΗΪ3 Ьеч Азр 125 Ьуз А1а Ьуз Ьуз Агр Не ТЫ РЬе Туг МеС Рго Уа1 Азр Азп Ьей 61 у МеС А1а Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр 61ч 61 и Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е 61ч Ьей Уа1 61п 61п 61п Азп 165 170 175 Уа1 61п Ьеч Зег Ьеч ТЬг 61ч А1а ТЬг 61и Ьуз А1а Ьуз С1п 61и РПе 180 185 190 61и Ьуз А1а 61у Ьуз Азр РНе Ьей Уа1 б1и ТЬг Не Ьуз Ьеч 61 у Ьуз 195 200 205 Ьеч Ьеч Агд Рго Азп ΗΪ3 Ьеч Тгр 61у Туг Туг Ьеч РПе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг АЗП ΗΪ3 Н15 Туг Ьуз Ьуз Рго 61у Туг Азп 61 у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 61 и Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеч Зег Тгр Ьей Тгр Азп 61ч Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеч Туг Рго Зег Не Туг Ьеч Азп ТЬг С1п С1п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеч Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61ч А1а Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеч Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЬг Азр 61п Уа1 Ьеч Ьуз РЬе Ьеч Зег С1п Азр С1и 305 310 315 320 Ьеч Уа1 Туг ТЬг РЬе 61у 61ч ТЬг Уа1 А1а Ьей 61у А1а Зег 61 у Не 325 330 335 Уа1 Не Тгр 61у ТЬг Ьеч Зег 11е Мес Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеч 340 345 350 Ьеч Ьеч Азр Азп Туг МеС 61и ТЬг Не Ьей Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТНг Ьей А1а А1а Ьуз МеС Суз Зег 61п Уа1 Ьеч Суз 61п 61и 61п 370 375 380 С1у Уа1 Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеч Нхз Ьей 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РПе А1а Не 61п Ьеч 61ч Ьуз 61у 61у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТЬг Ьей 61и Азр Ьей 61ч С1п РНе Зег 61и Ьу5 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеч Зег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 1/а1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз 11е А1а Азр 61у Уа1 Суз 450 455 460 11е Азр А1а РЬе Ьеч Ьуз Рго Рго МеС С1ч ТЫ С1и 61 и Рго 61п Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп А1а Зег Рго Зег ТЬг Ьей Зег А1а ТЬг 485 490
    <210> 53 <211> 488 <212> Белок <213> Ното зархепз <220>
    <223> НЧРН20 предшественник 1-488 <400> 53
    МеС 61у Уа1 Ьеч Ьуз РЬе Ьуз Ηί3 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 15 10 15
    153 022752
    Зег Зег СЬу УаЬ 20 Зег СЬп Ые Уа1 РЬе 25 ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые 30 Рго Суз Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп рье Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп АЬа ТЬг СЬу С1п СЬу УаЬ ТЬг Не РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг 11е Азр Зег 11е ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу Не Рго СЬп Ьуз 11е Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеС Рго Уа1 Азр Агп Ьеи СЬу МеС АЬа УаЬ 130 135 140 11е Азр Тгр СЬи 61 и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е СЬи Ьеи УаЬ СЬп 61п СЬп Азп 165 170 175 Уа1 СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 С1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬЗ Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз ΗΪ3 Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТНг А1а Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Не Агд УаЬ 275 2 80 285 Зег Ьуз ТЬе Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг рье СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е 325 330 335 Уа1 Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеС СЬи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг 11е Ые АЗП 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеС Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп 61 и СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Нгз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр А1а УаЬ Азр УаЬ Суз 11е АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Ые Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеС СЬи ТНг СЬи СЬи Рго С1п Ые 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЬа Зег Рго Зег ТЬг 485
    - 154 022752 <210> 54 <211> 486 <212> Белок <213> Ното зарЪепз <220 <223> НиРН20 предшественник 1-486 <400> 54
    Мер С1у УаЪ Ъеи Ъуз РЬе Ъуз НЪз 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЪ Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег СЪу УаЪ Зег СЪп Не УаЪ РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд АЪа Рго Рго УаЪ Не Рго Азп УаЪ Рго 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр АЪа Тгр АЗП АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ъеи СЪу Ъуз РЬе 50 55 60 Азр СЪи Рго Ъеи Азр Мер Зег Ъеи РЬе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЪа ТЬг 61 у СЪп С1у УаЪ ТЬг Не РЬе Туг УаЪ Азр Агд Ъеи 85 90 95 61у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЪу УаЪ ТЬг УаЪ АЗП С1у 100 105 110 С1у Не Рго СЪп Ъуз Не Зег Ъеи СЪп Азр НЪз Ъеи Азр Ъуз АЪа Ъуз 115 120 125 Ъуз Азр 11е ТЬг РЬе Туг Мер Рго УаЪ Азр Азп Ъеи СЪу Мер АЪа УаЪ 130 135 140 Не Азр Тгр СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ъуз Азр УаЪ Туг Ъуз Азп Агд Зег Не СЪи Ъеи УаЪ СЪп СЪп СЪп Азп 165 170 175 УаЪ СЪп Ъеи Зег Ъеи ТЬг СЪи АЪа ТЬг СЪи Ъуз АЪа Ъуз СЪп СЪи РНе 180 185 190 СЪи Ъуз АЪа СЪу Ъуз Азр РЬе Ъеи УаЪ СЪи ТЬг 11е Ъуз Ъеи СЪу Ъуз 195 200 205 Ъеи Ъеи Агд Рго Азп НЪз Ъеи Тгр 61у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЪз НЪз Туг Ъуз Ъуз Рго 61 у Туг Азп СЪу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЪ СЪи 11е Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп СЪи Зег 245 250 255 ТЬг АЪа Ъеи Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТНг СЪп СЪп Зег Рго УаЪ 260 265 270 АЪа АЪа ТЬг Ъеи Туг УаЪ Агд Азп Агд УаЪ Агд СЪи АЪа Не Агд УаЪ 275 280 285 Зег Ъуз Не Рго Азр АЪа Ъуз Зег Рго Ъеи Рго УаЪ РЬе АЪа Туг ТЬг 2 90 295 300 Агд Не УаЪ РЬе ТНг Азр СЪп УаЪ Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег СЪп Азр СЪи 305 310 315 320 Ъеи УаЪ Туг ТЬг РЬе СЪу СЪи ТЬг УаЪ А1а Ъеи 61у АЪа Зег 61у Не 325 330 335 УаЪ 11е Тгр СЪу ТЬг Ъеи Зег Не Мер Агд Зег МеР Ъуз Зег Суз Ъеи 340 345 350 Ъеи Ъеи Азр Азп Туг Мер СЪи ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 УаЪ ТЬг Ъеи АЪа АЪа Ъуз Мер Суз Зег СЪп УаЪ Ъеи Суз СЪп СЪи СЪп 370 375 380 СЪу УаЪ Суз Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи НЪз Ъеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЪа Не СЪп Ъеи СЪи Ъуз СЪу С1у Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415
    155
    Уа1 Агд 61у Ъуз Рго ТЬг Ъеи С1и Азр 425 Ъеи С1и 61п РЬе Зег 430 61и Ъуз 420 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз 61 и Ъуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ъуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр 61у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго Мер 61и ТЬг С1и 61 и Рго 61п Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп А1а Зег Рго
    485 <210> 55 <211> 472 <212> Белок <213> Ното зариепз <220>
    <223> зрелый НиРН20 36-507 <400> 55
    Ъеи Азп 1 РЬе Агд А1а 5 Рго Рго Уа1 11е Рго 10 Азп Уа1 Рго РЬе Ъеи 15 Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 61и РЬе Суз Ъеи 61у Ъуз РЬе Азр 61и Рго 20 25 30 Ъеи Азр Мер Зег Ъеи РЬе Зег РЬе 11е 61у Зег Рго Агд Не Азп А1а 35 40 45 ТЬг 61у 61п 61у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ъеи 61у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг 61 у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61у 61у 11е Рго 65 70 75 80 61п Ъуз Не Зег Ъеи 61 п Азр Низ Ъеи Азр Ъуз А1а Ъуз Ъуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ъеи 61у Мер А1а Уа1 11е Азр Тгр 100 105 110 61и 61и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго Ъуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ъуз Азп Агд Зег Не 61и Ъеи Уа1 61п 61п С1п Азп Уа1 61п Ъеи 130 135 140 Зег Ъеи ТЬг 61и А1а ТНг 61и Ъуз А1а Ъуз 61п 61 и РЬе 61и Ъуз А1а 145 150 155 160 61 у Ъуз Азр РЬе Ъеи Уа1 С1и ТЬг Не Ъуз Ъеи 61у Ъуз Ъеи Ъеи Агд 165 170 175 Рго Азп Шз Ъеи Тгр 61у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп Низ 180 185 190 Н1з Туг Ъуз Ъуз Рго С1у Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп Уа1 61 и Не 195 200 205 Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп 61и Зег ТЬг А1а Ъеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТЬг 61п 61п Зег Рго Уа1 А1а А1а ТЬг 225 230 235 240 Ъеи Туг Уа1 Агд Азп Ахд Уа1 Агд 61и А1а Не Агд Уа1 Зег Ъуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг Агд Не Уа1 260 265 270 РЬе ТЬг Азр 61п Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег 61п Азр 61и Ъеи Уа1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе 61у 61и ТЬг Уа1 А1а Ъеи 61у А1а Зег 61у Не Уа1 Не Тгр 290 295 300 С1у ТЬг Ъеи Зег Не Мер Агд Зег МеР Ъуз Зег Суз Ъеи Ъеи Ъеи Азр 305 310 315 320
    156 022752
    Азп Туг Мер С1и ТЬг 325 Не Ьеи Азп Рго Туг 330 Не Пе Азп УаЬ ТЬг 335 Ьеи А1а А1а Ьуз Мер Суз Зег ст УаЬ Ьеи Суз СЬп С1и СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи ΗΪ5 Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 АЗП РЬе А1а Не С1п Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 7аЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег С1и Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз А1а Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр А1а УаЬ Азр Уа1 Суз Не А1а Азр С1у Уа1 Суз Не Азр А1а 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер С1и ТЬг СЬи СЬи Рго С1п 11е РЬе Туг Азп 435 440 445 А1а Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег А1а ТЬг Мер РЬе Не УаЬ Зег Не Ьеи 450 455 460 РЬе Ьеи Не Не Зег Зег Уа1 А1а
    465 470 <210> 56 <211> 470 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> зрелый НиРН20 36-505 <400> 56
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Не Рго Азп 10 УаЬ Рго РЬе Ьеи 15 Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не СЬу Зег Рго Агд 11е Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу ст СЬу УаЬ ТЬг Не РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи С1у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЫ СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу С1у Не Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг Мер Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мер А1а УаЬ 11е Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп Уа1 СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи А1а ТЬг СЬи Ьуз А1а Ьуз СЬп С1и РЬе С1и Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Не Ьуз Ьеи С1у Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп Уа1 СЬи Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго Уа1 А1а А1а ТЬг 225 230 235 240
    157
    Ьеи Туг УаЬ Агд Азп 245 Агд УаЬ Агд СЬи А1а 250 Ые Агд УаЬ Зег Ьуз 255 11е Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТПг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РЬе ТЫ Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РПе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТПг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ъуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп С1и СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи ΗΪ3 Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РПе ТПг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз А1а Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Аэр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп ХЬе РПе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Еег АЬа ТПг МеГ РПе 11е УаЬ Зег Ые Ьеи 450 455 460 РЬе Ьеи Ые Ые Зег Зег 465 470
    <210> 57 <2Ы> 468 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> зрелый НиРН20 36-503 <400> 57
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Ые Рго 10 Азп УаЬ Рго РПе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп А1а Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РПе Азр СЬи Рго 20 25 30 ъеи Азр Мег Еег Ьеи РПе зег РЬе 11е СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТПг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТПг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТПг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр 11е 85 90 95 ТЬг РПе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеП АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТПг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТПг СЬи АЬа ТПг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РПе СЬи Ъуз АЬа 145 150 155 160
    158
    СБу Ьуз Азр РЬе Ьей 165 УаБ СБи ТЬх 11е Ьуз 170 Ьей СБу Ьуз Ьей Ьей 175 Ахд Рго Азп НБз Ьей Тгр СБу Туг Тух Ьей РЬе Рхо Азр Суз Туг Азп НБз 180 185 190 НБз Тух Ьуз Ьуз Рхо СБу Туг Азп СБу Зег Суз РЬе Азп УаБ СБи ББе 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьей Зег Тгр Ьей Тгр Азп СБи Зех ТЬг АБа Ьей 210 215 220 туг Рго Зех ББе Туг Ьей Азп ТЬх СБп СБп Зег Рго УаБ АБа АБа ТЬг 225 230 235 240 Ьей Тух УаБ Агд Азп Агд УаБ Агд СБи АБа ББе Агд УаБ Зег Ьуз ББе 245 250 255 Рго Азр АБа Ьуз Эег Рго Ьей Рго УаБ РЬе АБа Тух ТЬг Агд ББе УаБ 260 2 65 270 РЬе ТЬг Азр СБп УаБ Ьей Ьуз РЬе Ьей Зег СБп Азр СБи Ьей УаБ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СБу С1и ТЬг УаБ АБа Ьей СБу АБа Зег СБу ББе УаБ ББе Тхр 290 295 300 СБу ТЬг Ьей Эе г ББе МеБ Агд Зег МеБ Ьуз Зех Суз Ьей Ьей Ьей Азр 305 310 315 320 Азп Тух МеБ СБи ТЬг ББе Ьей Азп Рхо Туг ББе ББе Азп УаБ ТЬг Ьей 325 330 335 АБа АБа Ьуз МеБ Суз Эег ст УаБ Ьей Суз СБп СБи СБп СБу УаБ Суз 34 0 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Эег Зег Азр Тух Ьей НБг Ьей Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АБа Не ст Ьей СБи Ьуз СБу СБу Ьуз РЬе ТЬг УаБ Ахд СБу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬх Ьей СБи Азр Ьей СБи СБп РЬе Зег СБи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьей Зег Суз Ьуз СБи Ьуз АБа Азр УаБ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АБа УаБ Азр УаБ Суз ББе АБа Азр СБу УаБ Суз Б1е Азр А1а 42 0 425 430 РЬе Ьей Ьуз Рго Рго МеБ СБи ТЬг СБи СБи Рго ст ББе РЬе Туг Азп 435 440 445 А1а Зег Рхо Зех ТЬх Ъеи Эег АБа ТЬг МеБ РЬе 11е УаБ Эег Б1е Ьей 450 455 460 РЬе Ьей Не Пе
    465 <210> 58 <211> 466 <212> Белок <213> Ното зарБепз <220>
    <223> зрелый НиРН20 36-501 <400> 58
    Ьей Азп РЬе Ахд АБа Рхо Рго Уа1 ББе Рго Азп УаБ Рхо РЬе Ьей Тгр 1 5 10 15 АБа Тгр Азп АБа Рго Зег СБи РЬе Суз Ьей СБу Ьуз РЬе Азр СБи Рго 20 25 30 Ьей Азр МеБ Зег Ъеи РЬе Зех РЬе ББе СБу Зег Рго Агд 11е Азп АБа 35 40 45 ТЬг СБу СБп СБу УаБ ТЬг ББе РЬе Туг УаБ Азр Агд Ьей СБу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг ББе Агр Зег ББе ТЬг СБу УаБ ТЬг УаБ АЗП СБу СБу ББе Рго 65 70 75 80
    159
    61п Ъуз Ые Зег Ьеи 85 СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа 90 Ьуз Ьуз Азр 95 Ые ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 ыо СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 14 5 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 155 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд АЗП Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа 11е Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Тус ТЬг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые РЬе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТЬг МеЬ РЬе Ые УаЬ Зег Ые Ьеи 450 455 460 РЬе Ьеи 465
    <210> 59 <211> 464 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220> <223> зрелый НиРН20
    160 022752
    <400> 59 Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые АЗП АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеС Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеС АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп 61п СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьу5 АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 ΗΪ3 Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Эег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеС Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 335 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеС СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые РЬе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТЬг МеС РЬе Ые УаЬ Зег Ые Ьеи 450 455 460
    161 022752 <210> 60 <211> 462 <212> Белок <213> Ното заръепз <220>
    <223> езНиРН20 36-497 <400> 60
    Ъеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго РЬе Ъеи Тгр 1 5 10 15 А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 61и РЬе Суз Ъеи 61 у Ъуз РЬе Азр С1и Рго 20 25 30 Ъеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд Не Азп АЪа 35 40 45 ТЬг С1у 61п 61у Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 61у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг 11е Азр Зег Не ТЬг 61у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61у 61 у Не Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз Не 5ег Ьеи 61п Азр ΗΪ3 Ъеи Азр Ьуз АЪа Ьуз Ьуз Азр Не 35 90 95 ТЬг РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ьеи С1у Мер АЪа Уа1 11е Азр Тгр 100 105 110 61и С1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго Ьуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не 61и Ьеи Уа1 С1п 61п 61п Азп Уа1 61п Ъеи 130 135 140 Ёег Ъеи ТЬг 61и А1а ТЬг б1и Ьуз А1а Ьуз 61 п 61и РЬе 61и Ъуз А1а 145 150 155 160 С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 б1и ТЬг 11е Ьуз Ъеи 61 у Ьуз Ьеи Ъеи Агд 165 170 175 Рго Азп ΗΪ5 Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп Н1з 180 185 190 ΗΪ3 Туг Ъуз Ъуз Рго 61у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп Уа1 61и Не 195 200 205 Ъуз Агд АЗП Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп 61 и Зег ТЬг АЪа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг С1п 61п Зег Рго Уа1 АЪа АЪа ТЬг 225 230 235 240 Ъеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61и А1а Не Агд Уа1 Зег Ъуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг Агд Не Уа1 260 265 270 РЬе ТЬг Азр ет Уа1 Ъеи Ьуз РЬе Ьеи Зег 61п Азр 61и Ъеи Уа1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе 61 у С1и ТЬг Уа1 А1а Ъеи 61у АЪа Зег 61 у Не Уа1 Не Тгр 290 295 300 С1у ТЬг Ъеи Зег Не Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ъеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Мер 61и ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп Уа1 ТЬг Ьеи 325 330 335 А1а А1а Ъуз Мер Суз Зег 61п Уа1 Ъеи Суз 61п 61и 61п 61у Уа1 Суз 340 345 350 Не Агд Ъуз Агп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЪз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЪа 11е С1п Ъеи 61и Ъуз С1у С1у Ьуз РЬе ТЬг УаЪ Агд 61у 37 0 37 5 330 Ъуз Рго ТЬг Ьеи 61и Азр Ьеи 61и 61п РЬе Зег 61и Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ъуз 61и Ьуз АЪа Азр Уа1 Ьуз Азр 405 410 415
    162
    ТЬг Азр АЬа УаЬ 420 Азр Уа1 Суз Не А1а 425 Азр 61у Уа1 Су£ 11е 430 Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Ме!: С1и ТЬг С1и С1и Рго ЕЬп 11е РЬе Туг Азп 435 440 445 АЛа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТПг РЬе Пе Уа1 Зег 450 455 460
    <210> 61 <211> 460 <212> Белок <213> Ното зарЛепз <220>
    <223> езНиРН20 36-495 <400> 61
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд А1а 5 Рго Рго УаЬ Пе Рго Азп Уа1 10 Рго РЬе Ьеи 15 Тгр А1а Тгр Азп АЬа Рго Зег 61и РНе Суз Ьеи 61 у Ьуз РЬе Азр С1и Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РНе Зег РЬе Пе 61у Зег Рго Ахд Пе Азп А1а 35 40 45 ТЬг 61у 61п 61у УаЬ ТНг 11е РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 61 у Туг Тух 50 55 60 Рго Туг Пе Азр Зег 11е ТЬг С1у УаЛ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Пе Рго 65 70 75 80 61п Ьуз 11е Зег Ьеи СЛп Азр НЛз Ьеи Азр Ьу® АЬа Ьуз Ьу® Азр Пе 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеС Рго УаЛ Азр Азп Ьеи СЬу МеС А1а Уа1 Пе Азр Тгр 100 105 110 61и 61и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЛа Агд Азп Тгр Ьу® Рхо Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е С1и Ьеи УаЛ 61п СЬп 61п Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг С1и АЬа ТЬг СЛи Ьуз АЬа Ьуз 61 п СЬи РЬе СЬи Ьуз А1а 145 150 155 160 61 у Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЛ 61и ТЬг Пе Ьуз Ьеи СЬу Ьу® Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЛз Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Тух Азп НЛз 180 185 190 НЛз Туг Ьуз Ьуз Рго 61у Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ 61 и 11е 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Пе Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зех Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬх 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЛ Агд Азп Агд УаЛ Агд СЬи А1а 11е Агд УаЬ Зех Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Ахд 11е УаЛ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Тух 275 280 285 ТЬг РЬе 61у 61и ТЬг УаЛ АЬа Ьеи СЬу А1а Зег 61у Пе УаЬ Пе Тхр 290 295 300 61у ТЬг Ьеи Зег 11е МеС Агд Зег МеС Ьуз Зех Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Туг Не Пе Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа А1а Ьуз МеС Суз Зег СЬп УаЛ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350
    163
    Ые Агд Ьуз 355 Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг 360 Ьеи НЬз Ьеи 365 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа 11е СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг УаЬ Агд С1у 370 375 380 Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РНе Зег СЬи Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТНг Азр АЬа Уа1 Азр УаЬ Суз 11е АЬа Азр С1у УаЬ Суз Ые Азр А1а 420 425 430 РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЕ СЬи ТНг СЬи СЬи Рго СЬп Ые РНе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТНг Ьеи Зег АЬа ТНг МеЕ РНе 11е 450 455 460
    <210> 62 <211> 458 <212> Белок <213> Ното : зархепз <220> <223> езНиРН20 36-493 <400> 62 Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго РНе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РНе Зег РНе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТНг С1у СЬп СЬу УаЬ ТНг 11е РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТНг СЬу УаЬ ТНг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТНг РНе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЕ АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз А1а Ьуз СЬп СЬи РНе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 С1у Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг Азп Н1з 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РНе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТНг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТНг СЬп СЬп Зег Рго Уа1 АЬа АЬа ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе АЬа Туг ТНг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 235
    164
    ТНг РНе 290 С1у Т1эг Уа1 А1а 295 Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 300 Не УаЬ Не Тгр СЬу ТНг Ьеи Зег Не МеД Агд Зег МеД Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеД СЬи ТНг 11е Ьеи Азп Рго Гуг Не Не Азп УаЬ ТНг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеД Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу Уа1 Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз А5П Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Н13 Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РНе АЬа Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РНе Зег СЬи Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТНг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Не Азр АЬа 420 425 430 РНе Ьеи Ьуз Рго Рго Мед СЬи ТНг СЬи СЬи Рго СЬп 11е РНе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТНг Ьеи Зег АЬа ТНг МеД 450 455
    <210> 63 <211> 456 <212> Белок <213> Ното : 5ар1еп5 <220> <223> езНиРН20 36-491 <400> 63 Ьеи Азп РНе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Не Рго Азп УаЬ Рго РНе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи С1у Ьуз РНе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеД Зег Ьеи РНе Зег РНе Не СЬу Зег Рго Агд Не Азп АЬа 35 40 45 ТНг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТНг Не РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг 11е Азр Зег Не ТНг СЬу УаЬ ТНг УаЬ Азп СЬу С1у Не рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз 11е Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр 11е 85 90 95 ТНг РНе Туг МеД Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеД АЬа УаЬ Не Азр Тгр 100 105 но СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуз А1а Ьуз СЬп СЬи РНе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Агр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп УаЬ СЬи 11е 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТНг АЬа Ьеи
    210 215 220
    165 022752
    Туг 225 Рго Зег Ые Туг Ьеи 230 Азп ТЬг СЬп СЬп Зег 235 Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд Не УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Агр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Не МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС СЬи ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Туг 11е Не Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 А1а АЬа Ьуз МеС Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТНг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз 11е АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеС СЬи ТЫ СЬи СЬи Рго СЬп ТЬе РЬе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТЫ Ьеи Зег АЬа 450 455
    <210> 64 <211> 454 <212> Белок <213> Ногао зарЬепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-489 <400> 64
    Ьеи Азп 1 РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Не Рго 10 Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр С1и Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд Не Азп АЬа 35 40 45 ТЬг 61у СЬп СЬу Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег 11е ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Не Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеС Рго УаЬ Агр Азп Ьеи СЬу МеС АЬа УаЬ 11е Азр Тгр 100 105 ыо СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Агп Агд Зег Не С1и Ьеи УаЬ СЬп С1п СЬп Азп УаЬ С1п Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160
    166
    С1у Ъуз Азр РЬе Ъеи Уа1 165 СЬи ТЬг Не Ьуз 170 Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи 175 Агд Рго Азп ΗΪ3 Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 ΗΪ5 Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп Ча1 С1и Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 61и Зег ТЬг А1а Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг С1п СЬп Зег Рго Ча1 А1а АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг Ча1 Агд Азп Агд Ча1 Агд С1и А1а Не Агд Ча1 Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго ЧаЬ РЬе А1а Туг ТЬг Агд Не Ча1 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп Ча1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег 61п Азр С1и Ьеи ЧаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе С1у С1и ТЬг Ча1 АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег 61 у Не Ча1 Не Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Не Мес Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС С1и ТЬг 11е Ьеи Авп Рго Туг Не Не Азп Ча1 ТЬг Ьеи 325 330 335 А1а А1а Ьуз МеС Суз Зег С1п Ча1 Ьеи Суз С1п С1и СЬп СЬу ЧаЬ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Низ Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе А1а Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг Ча1 Агд 61у 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи С1и СЬп РЬе Зег С1и Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Аэр ЧаЬ Ьуг Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа ЧаЬ Азр ЧаЬ Суз Не А1а Азр С1у Ча1 Суз Не Азр А1а 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рсо МеС С1и ТЬг С1и С1и Рго С1п Не РЬе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи
    450 <210> 65 <2Η> 455 <212> Белок <213> Ното зарьепз <220>
    <223> зрелый НиРН20 36-490 <400> 65
    Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго ЧаЬ Не Рго Азп Ча1 Рго РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 А1а Тгр Азп А1а Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе Азр С1и Рго 20 25 30 Ьеи Азр Мес Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не С1у Зег Рго Агд Не Азь АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу С1п СЬу ЧаЬ ТЬг Не РЬе Туг Ча1 Азр Агд Ьеи 61 у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЬу Ча1 ТЬг Ча1 Азп СЬу 61у Не Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз Не Зег Ьеи С1п Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Т1е 85 90 95
    167 022752
    ТЬг РЬе Туг МеС 100 Рго Уа1 Азр Азп Ьеи 61у МеС А1а Уа1 105 Ие 110 Азр Тгр 61и 61и Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр 7а1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не 61и Ьеи Уа1 61п 61п 61п Азп Уа1 61П Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг 61и А1а ТНг 61и Ьуз А1а Ьуз 61п 61 и РНе 61и Ьуз А1а 145 150 155 160 61у Ьуз Азр РНе Ьеи Уа1 61и ТНг Ие Ьуз Ьеи 61 у Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп Низ Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг Азп Н±з 180 185 190 Н15 Туг Ьуз Ьуз Рго 61у Туг Азп 61у Зег Суз РНе Азп Уа1 61и Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 61 и Зег ТНг А1а Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ие Туг ьеи Азп ТНг 61п 61п Зег Рго Уа1 А1а А1а ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61и А1а Не Агд Уа1 Зег Ьуз 11е 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РНе А1а Туг ТНг Агд Не Уа1 260 265 270 РНе ТЬг Азр 61п Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег С1п Азр 61и Ьеи Уа1 Туг 275 280 285 ТЬг РНе 61 у 61и ТНг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег 61 у Ие Уа1 Не Тгр 290 295 300 61у ТНг Ьеи Зег Ие МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС С1и ТНг Ие Ьеи Азп Рго Туг Ие Не Азп Уа1 ТНг Ьеи 325 330 335 А1а А1а Ьуз МеС Суз Зег 61п Уа1 Ьеи Суз 61п 61и 61п 61у Уа1 Суз 340 345 350 Ие Ахд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Шз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РНе А1а Ие 61п Ьеи 61и Ьуз 61у 61у Ьуз РНе ТНг Уа1 Агд 61у 370 375 380 Ьуз РЕО ТНг Ьеи 61 и Азр Ьеи 61и 61п РНе Зег 61и Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз ьуз 61и ьуз А1а Азр νβΐ Ьуз АЗр 405 410 415 ТЬг Азр А1а νβΐ Азр 17а1 Суз Ие А1а Азр 61у Уа1 Суз Ие Азр А1а 420 425 430 РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеС С1и ТНг 61и 61и Рго 61 п Ие РНе Туг Азп 435 440 445 А1а Зег Рго Зег ТНг Ьеи Зег
    450 455 <210> 66 <211> 452 <212> Белок <213> Нолю зарЬепз <220 <223> зрелый НиРН20 36-487 <400> 66
    Ьеи 1 А$п РЬе Агд А1а 5 Рго Рго Уа1 Не Рго 10 Азп νβΐ РГО РНе Ьеи 15 Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 61и РНе Суз Ьеи 61у Ьуз РНе Азр С1и Рго 20 25 30
    168
    Ъеи Азр Мер 35 Зег Ъеи РЬе Зег РЬе 40 Не СЪу Зег Рго Агд 45 Не Азп АЪа ТЬг БЪу СЪп СЪу УаЪ ТЬг Не РНе Туг УаЪ Азр Агд Ъеи СЪу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЪу УаЪ ТНг УаЪ Азп СЪу СЪу Не Рго 65 70 75 80 СЪп Ъуз Не Зег Ъеи СЪп Азр НЪз Ъеи Азр Ъуз АЪа Ъуз Ъуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг Мер Рго УаЪ Азр Азп Ъеи СЪу Мер АЪа УаЪ Не Азр Тгр 100 105 НО СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ъуз Рго Ъуз Азр УаЪ 115 120 125 Туг Ъуз Азп Агд Зег Не СЪи Ъеи УаЪ СЪп СЪп СЪп Азп УаЪ СЪп Ъеи 130 135 140 Зег Ъеи ТЬг СЪи АЪа ТЬг СЪи Ъуз АЪа Ъуз СЪп СЪи РНе СЪи Ъуз АЪа 145 150 155 160 СЪу Ъуз Азр РЬе Ъеи УаЪ СЪи ТЬг Не Ъуз Ъеи СЪу Ъуз Ъеи Ъеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЪз Ъеи Тгр С1у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЪз 180 185 190 НЪз Туг Ъуз Ъуз Рго СЪу Туг Азп СЪу Зег Суз РЬе Азп УаЪ СЪи Не 195 200 205 Ъуз Агд Агп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп СЪи Зег ТЫ АЪа Ъеи 210 215 220 Туг Рго Зег 11е Туг Ъеи Азп ТЬг СЪп СЪп Зег Рго УаЪ АЪа АЪа ТЬг 225 230 235 240 Ъеи Туг УаЪ Агд Азп Агд УаЪ Агд СЪи АЪа Не Агд УаЪ Зег Ъуз Не 245 250 255 Рго Азр АЪа Ъуз Зег Рго Ъеи Рго УаЪ РЬе АЪа Туг ТЬг Агд Не УаЪ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЪп УаЪ Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег СЪп Азр СЪи Ъеи УаЪ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЪу СЪи ТЬг УаЪ АЪа Ъеи еъу АЪа Зег СЪу Не УаЪ Не Тгр 290 295 300 СЪу ТЬг Ъеи Зег Не Мер Агд Зег Мер Ъуз Зег Суз Ъеи Ъеи Ъеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Мер СЪи ТЫ Не Ъеи Азп Рго Туг Не Не Азп УаЪ ТЬг Ъеи 325 330 335 АЪа А1а Ъуз Мер Суз Зег СЪп УаЪ Ъеи Суз СЪп СЪи СЪп СЪу УаЪ Суз 340 345 350 Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Бег Зег Азр Туг Ъеи НЪз Ъеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЪа 11е СЪп Ъеи СЪи Ъуз СЪу СЪу Ъуз РЬе ТЬг УаЪ Агд СЪу 370 375 380 Ъуз Рго ТЬг Ъеи СЪи Азр Ъеи СЪи СЪп РЬе Зег СЪи Ъуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суэ Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз СЪи Ъуз АЪа Азр УаЪ Ъуз Азр 405 410 415 ТНг Агр АЪа УаЪ Азр УаЪ Суз Не АЪа Азр СЪу УаЪ Суз 11е Азр АЪа 420 425 430 РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго Мер СЪи ТЬг СЪи СЪи Рго СЪп Не РЬе Туг Азп 435 440 445 АЪа Зег Рго Зег 450
    <210> 67 <211> 450 <212> Белок <213> Ното зарЪепз
    169 022752 <220>
    <223> зрелый НиРН20 36-485 <400> 67
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ 11е Рго 10 Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ъуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТЬе СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг ХЬе РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег ХЬе ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу 11е Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ъуз АЬа Ьуз Ьуз Азр 11е 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьу5 Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд З^г 11е СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ъеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 100 185 190 НЬз Туг Ъуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи ХЬе 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи АЗП ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа 11е Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЫ Агд Ые УаЬ 260 2 65 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ А1а Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е УаЬ 11е Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Агп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Агр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 11е Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые РЬе Туг Азп 435 440 445
    170 022752
    АЬа Зег 450 <210> 68 <211> 449 <212> Белок <213> Нолю зарЬепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-484 <400> 68
    Ьеи АЗП РПе Агд АЬа Рго Рго Уа1 11е Рго Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РПе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр Меб Зег Ьеи РПе Зег РПе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТПг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг 11е Азр Зег 11е ТПг СЬу УаЬ ТПг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз 11е Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТПг РПе Туг Меб Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Меб АЬа УаЬ 11е Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТПг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз АЗП Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТПг СЬи АЬа ТПг СЬи Ьуз А1а Ьуз СЬп СЬи РПе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТПг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 130 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Агр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТПг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТПг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТПг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи А1а Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РПе АЬа Туг ТПг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РПе ТПг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РПе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Тух 275 280 285 ТПг РПе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е Уа1 11е Тгр 290 295 300 СЬу ТПг Ьеи Зег Ые Меб Агд Зег Меб Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Меб СЬи ТПг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп Уа1 ТПг Ьеи 325 330 335 АЬа А1а Ьуз Меб Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РПе АЬа 11е СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РПе ТПг УаЬ Агд СЬу 370 375 380
    171
    Ьуз Рго ТЬг Ьей СБи Азр Ьей СБи СБп РЬе Зег СБи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьей Зег Суз Ьуз СБи Ьуз АБа Азр УаБ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АБа УаБ Азр УаБ Суз Не АБа Азр СБу УаБ Суз Не Азр АБа 420 425 430 РЬе Ъеи Ьуз Рго Рго МеЬ СБи ТЬг СБи СБи Рго СБп ББе РЬе Туг Азп 435 440 445 АБа
    <210> 69 <211> 448 <212> Белок <213> Ното : зар1епз <220> <223> Зрелый НиРН20 36-' 483 <400> 69 Ьей Азп РЬе Ахд АБа Рго Рхо УаБ Ые Рго Азп УаБ Рго РЬе Ьей Тхр 1 5 10 15 АБа Тхр Азп АБа Рго Зег СБи РЬе Суз Ьей СБу Ьуз РЬе Азр СБи Рго 20 25 30 Ьей Азр МеЬ Зех Ьей РЬе Зех РЬе ББе СБу Зег Рго Ахд Ые Азп АБа 35 40 45 ТЬг СБу СБп СБу УаБ ТЬг Ые РЬе Туг УаБ Азр Агд Ьей СБу Тух Туг 50 55 60 Рхо Туг ББе Азр Зег ББе ТЬг СБу УаБ ТНг УаБ Азп СБу СБу Ые Рго 65 70 75 80 СБп Ьуз Ые Зег Ьей СБп Азр НБз Ьей Азр Ьуз АБа Ьуз Ьуг Азр Ые 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго УаБ Азр Азп Ьей СБу МеБ АБа УаБ ББе Азр Тгр 100 105 110 СБи СБи Тгр Ахд Рго ТЬг Тгр АБа Агд Азп Тгр Ьуз Рхо Ьуз Азр УаБ 115 120 125 Тух Ьуз Азп Ахд Зег ББе СБи Ьей УаБ СБп СБп СБп Азп УаБ СБп Ьей БЗО 135 140 Зег Ьей ТЬх СБи АБа ТЬг СБи Ьуз АБа Ьуз СБп СБи РЬе СБи Ьуз АБа 145 150 155 160 СБу Ьуз Азр РЬе Ьей УаБ СБи ТЬх Ые Ьуз Ьей СЬу ьуз Ьей Ьей Агд 165 170 175 Рго Азп НБз Ьей Тгр СБу Туг Тух Ьей РЬе Рго Азр Суз Тух Азп НБз 180 185 190 НБз Туг Ьуз Ьуз Рго СБу Туг Азп СБу Зех Суз РЬе Азп УаБ С1и Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьей Зех Тгр Ьей Тгр Азп СБи Зег ТЬг АБа Ьей 210 215 220 Тух Рго Зег ББе Туг Ьей Азп ТНг СБп СБп Зег Рхо УаБ АБа АБа ТЬг 225 230 235 240 Ьей Туг УаБ Ахд Азп Агд УаБ Агд СБи АБа 11е Агд УаБ Зег Ьуз ББе 245 250 255 Рго Азр АБа Ьуз Зег Рго Ьей Рхо УаБ РЬе АБа Туг ТЬг Агд Ые УаБ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СБп УаБ Ьей Ьу® РЬе Ьей Зег СБп Азр СБи Ьей УаБ Тух 275 280 285 ТЬг РЬе СБу СБи ТЬг УаБ АБа Ьей СБу АБа Зег СБу ББе УаБ Ые Тхр 290 295 300 СБу ТЬх Ьей Зех ББе МеЬ Агд Зег меь Ьуз Зег Суз Ьей Ьей Ьей Азр 305 310 315 320
    172
    Азп Туг МеИ С1и ТНг 325 11е Ьеч Азп Рго Туг 330 11е 11е Азп Уа1 ТЬг 335 Ьеч А1а А1а Ьуз МеС Суз Зег С1п Уа1 Ьеч Суз С1п <31 и С1п С1у Уа1 Суз 340 345 350 Т1е Агд Ъуз АЗП Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеч Н1з Ьеч Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РНе А1а 11е С1п Ьеч С1ч Ьуз 61у 61у Ьуз РЬе ТЬг Уа1 Агд 61у 370 375 38 0 Ьуз Рго ТНг Ьеч Е1ч Азр Ьеч 61ч 61п РНе Зег С1ч Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеч Зег Суз Ьуз С1ч Ьуз А1а Азр Уа1 Ьуз Азр 405 410 415 ТНг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз 11е А1а Азр С1у Уа1 Суз 11е Агр А1а 420 425 430 РНе Ьей Ьуз Рго Рго МеС С1ч ТНг С1ч 61ч Рго С1п 11е РЬе Туг Азп 435 440 445
    <210> 70 <211> 447 <212> Белок <213> Ното : зархепз <220> <223> Зрелый НчРН20 36-· 482 <400> 70 Ьеч АЗП РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго АЗП Уа1 Рго РЬе Ьеч Тгр 1 5 10 15 А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 61ч РЬе Суз Ьеч 61у Ьуз РЬе Азр 61ч Рго 20 25 30 Ьеч Азр МеС Зег Ьеч РЬе Зег РЬе 11е С1у Зег Рго Агд 11е Азп А1а 35 40 45 ТЬг С1 у <31п С1у Уа1 ТНг 11е РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеч 61у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг 11е Азр Зег 11е ТЬг 61у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61 у 61у Не Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз 11е Зег Ьеч 61п Азр ΗΪ5 Ьеч Азр Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеС Рго Уа1 Азр Азп Ьеч 01у МеС А1а Уа1 Не АЗр Тгр 100 105 НО С1ч С1ч Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е С1ч Ьеч Уа1 61п 61 п 61п Азп Уа1 61 п Ьеч 130 135 140 Зег Ьеч ТЬг 61ч А1а ТЬг 61ч Ьуз А1а Ъуз 51п 61ч РЬе 61ч Ьуз А1а 145 150 155 160 61у Ьуз Азр РЬе Ьеч Уа1 С1ч ТЬг Не Ьуз Ьеч 61у Ьуз Ьеч Ьеч Агд 165 170 175 Рго Азп ΗΪ3 Ьеч Тгр С1у Туг Туг Ьеч РЬе РГО Азр Суз Туг Азп ΗΪ5 180 185 190 Ηί3 Туг Ьуз Ьуз Рго 61у Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп Уа1 61ч Не 195 200 205 Ьуз Агд АЗП Азр АЗр Ьеч Зег Тгр Ьеч Тгр Азп 61ч Зег ТЬг А1а Ьеч 210 215 220 Туг Рго Зег 11е Туг Ьеч Азп ТЬг 61п С1п Зег Рго Уа1 А1а А1а ТЬг 225 230 235 240 Ьеч Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 51ч А1а 11е Агд Уа1 Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеч Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг Агд Не Уа1 260 265 270
    173 022752
    РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз 275 РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 2 95 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Туг ТЬе Ые Азп УаЬ ТЬг Ьеи 32 5 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые РЬе Туг 435 440 445
    <210> 71 <211> 446 <212> Белок <213> Нотс- ί зархепз <220> <223> Зрелый НиРН20 36-481 <400> 71 Ъеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 А1а Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Абп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТЫ РЬе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ Ые Азр Тгр то 105 110 С1и СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 14 5 150 155 160 С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп ΗΪ3 Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 ΗΪ5 Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр АЗП СЬи Зег ТЬг АЬа ьеи 210 215 220
    174
    Туг 225 Рго Зег Не Туг Ьеи 230 Азп ТЫ СЬп СЬп Зег 235 Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Не Агд УаЬ Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе А1а Туг ТЬг Агд 11е УаЬ 260 265 270 РЬе ТЫ Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЫ РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не УаЬ Не Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Не Мер Агд Зег мер Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 ЗЬО 315 320 Азп Туг Мер СЬи ТЬг ТЬе Ьеи Азп Рго Туг Не ТЬе Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз Мер Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЫ Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Не Азр АЬа 420 425 4 30 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Не РЬе 435 440 445
    <210> 72 <2Ь1> 445 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220> <223> Зрелый НиРН20 36-· 480 <400> 72 Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Не Рго Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не СЬу Зег Рго Агд Не Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Не РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 01У Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Не Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз ТЬе Зег Ьеи ст Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеР Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мер АЬа УаЬ Не Азр Тгр ЬОО 105 но СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп АЗП УаЬ ст Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬР СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ С1и ТЬг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175
    175 022752
    Рго Азп Шз Ъеи 180 Тгр 61у Туг Туг Ъеи 185 РЬе Рго Азр Суз Туг 190 Азп Н1з ΗΪΞ Туг Ъуз Ъуз РГО 61у Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп Уа1 61и Не 195 200 205 Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп 61и Зег ТЬг А1а Ъеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТЬг С1п 01п Зег Рго Уа1 А1а А1а ТЬг 225 230 235 240 Ъеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61и А1а Не Агд Уа1 Зег Ъуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ъуз Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг Агд Не Уа1 260 265 270 РЬе ТЬг Азр С1п Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег 61п Азр 61 и Ъеи Уа1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе 61 у С1и ТЬг Уа1 А1а Ъеи 61у А1а Зег С1 у Не Уа1 Не Тгр 290 295 300 61у ТЬг Ъеи Зег 11е Мер Агд Зег Мер Ъуз Зег Суз Ъеи Ъеи Ъеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Мер 61и ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Не Не Азп Уа1 ТЬг Ъеи 325 330 335 А1а А1а Ъуз Мер Суз Зег 61п Уа1 ъеи Суз 61п 61и С1п 01У Уа1 Суз 340 345 350 Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи Шз Ъеи АЗП Рго Азр 355 360 365 АЗП РЬе А1а Не 61п Ъеи С1и Ъуз 61у 61 у Ъуз РЬе ТЬг Уа1 Агд 61у 370 375 380 Ъуз Рго ТЬг Ъеи С1и Азр Ъеи 61и 61п РЬе Зег 61и Ъуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз 61и Ъуз А1а Азр Уа1 Ъуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр С1у Уа1 Суз Не Азр А1а 420 425 430 РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго МеР 61и ТЬг 61и 61и Рго 01п 11е 435 440 445
    <210> 73 <211> 479 <212> Белок <213> Ното : зариепз <220> <223> Зрелый НиРН20 36-' 479 <400> 73 МеР С1у Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъуз Н1з Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег 61у Уа1 Зег 61п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 01и РЬе Суз Ъеи С1у Ъуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ъеи Азр Мер Зег Ъеи РЬе Зег РЬе Не 61 у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг 61у 61п С1у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ъеи 85 90 95 61у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг 61у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61у 100 105 НО С1у Не Рго 61п Ъуз Не Зег Ъеи О1п Азр Шз Ъеи Азр Ъуз А1а Ъуз 115 120 12 5
    176
    Ьуз Азр 130 11е ТНг РНе Туг МеЕ 135 Рго УаЬ Азр Азп Ьеи 140 СЬу МеЕ АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 51 и СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 1Й0 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РНе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз АЗр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг Пе Ьуз Ьеи сьу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Нгз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Нгз Нгз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТНг А1а Ьеи Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТНг С1п СЬп Зег Рго УаЬ 260 2 65 270 А1а АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе АЬа Туг ТНг 290 296 300 Агд Ые УаЬ РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РНе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТНг Ьеи Зег Ые МеЕ Агд Зег МеЕ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЕ СЬи ТНг 11е Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 УаЬ ТНг Ьеи АЬа А1а Ьуз МеЕ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Нгз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РНе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз С1у С1у Ьуз РНе ТНг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РНе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТНг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр С1у УаЬ Суз 450 455 460 Не Азр АЬа РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЕ СЬи ТНг СЬи СЬи Рго СЬп
    465 470 475 <210> 74 <2Ы> 443 <212> Белок <213> Ното заргепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-478 <400> 74
    Ьеи 1 Абп РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго ν$Ι Ые Рго 10 Азп УаЬ РГО РНе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Бег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РНе Зег РЬе 11е СЬу Зег Рго Агд Ые Азп А1а 35 40 45
    177
    ТНг СЬу 50 СЬп СЬу УаЬ ТНг Не 55 РНе Туг УаЬ Азр Агд 60 Ьеи СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТНг СЬу УаЬ ТНг УаЬ Азп СЬу СЬу Не Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТНг РНе Туг МеД Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеД АЬа УаЬ Не Азр Тгр 100 105 НО СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп тгр Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РНе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе РГО Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп УаЬ СЬи 11е 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТНг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТНг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Не Агд Уа1 Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе АЬа Туг ТНг Агд Не УаЬ 260 265 270 РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТНг РНе СЬу СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не УаЬ Не Тгр 290 295 300 СЬу ТНг Ьеи Зег Не МеД Агд Зег МеД Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеД СЬи ТНг 11е Ьеи Азп Рго Туг 11е 11е Азп УаЬ ТНг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеД Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РНе АЬа 11е СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу С1у Ьуз РНе ТНг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РНе Зег СЬи Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТНг Азр АЬа УаЬ Азр Уа1 Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Не Азр АЬа 420 425 430 РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеД СЬи ТНг СЬи СЬи Рго 435 440
    <210> 75 <2Ы> 442 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-477
    - 178 <400> 75
    ьеи 1 Азп РНе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Ые Рго 10 Агп УаЬ Рго РНе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа РГО Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьу® РНе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РНе Зег РНе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТНг СЬу С1п СЬу УаЬ ТНг 11е РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТНг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр ΗΪ5 Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТНг РНе Туг МеС Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеС АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 ЫО СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуз АЬа Ьуз С1п СЬи РНе СЬи Ьуэ АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьу® Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Агр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Су® РНе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТНг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго 8ег Ые Туг Ьеи Азп ТНг СЬп С1п Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе АЬа Туг ТНг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТНг РНе С1у СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 2 95 300 СЬу ТНг Ьеи Зег Ые Мес Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС СЬи ТНг 1Ье Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТНг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеС Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп зег Зег Азр Туг Ьеи НЬ® Ьеи Аэп Рго Азр 355 360 365 Азп РНе АЬа Ые сьп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РНе Зег СЬи Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 4 00 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТНг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Не Азр АЬа 420 425 430 РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеС СЬи ТЬг СЬи СЬи 435 440
    <210> 76 <211> 441
    179 022752 <212> Белок <213> Ното зарЪепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-476 <400> 76
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЪа 5 Рго Рго УаЪ Не Рго 10 Азп УаЪ Рго РЬе Ьеи 15 Тгр АЪа Тгр Азп АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ьеи СЪу Ьуз РЬе Азр СЪи Рго 20 25 30 Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не СЪу Зег Рго Агд Не Азп АЪа 35 40 45 ТЬг СЪу СЪп СЪу УаЪ ТЬг Не РЬе Туг УаЪ Азр Агд Ьеи СЪу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЪу УаЪ ТЬг УаЪ Азп СЪу СЪу Не Рго 65 70 75 80 СЪп Ьуз Не Зег Ьеи СЪп Азр НЪз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр 11е 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеС Рго УаЪ Азр Аап Ьеи С1у МеЪ АЪа УаЪ Не Азр Тгр 100 105 НО СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЪ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЪи Ьеи УаЪ СЪп СЪп СЪп Азп УаЪ СЪп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЪи АЪа ТЬг СЪи Ьуз АЪа Ьуз СЪп СЪи РЬе СЪи Ьуз АЪа 145 150 155 160 С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЪ СЪи ТЬг Не Ьуз Ьеи СЪу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 РГО АЗП НЪз Ьеи Тгр СЪу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЪз 180 185 190 НЪз Туг Ьуз Ьуз Рго СЪу Туг Азп СЪу Зег Суз РЬе Азп УаЪ СЪи Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЪи Зег ТЬг АЪа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЫ СЪп СЪп Зег Рго УаЪ АЪа АЪа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЪ Агд Азп Агд УаЪ Агд СЪи АЪа 11е Агд УаЪ Зег Ьуз 11е 245 250 255 Рго Азр АЪа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЪ РЬе АЪа Туг ТЬг Агд Не УаЪ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЪп УаЪ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЪп Азр СЪи Ьеи УаЪ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЪу СЪи ТЬг УаЪ АЪа Ьеи СЪу АЪа Зег СЪу Не УаЪ Не Тгр 290 295 300 СЪу ТЬг Ьеи Зег Не МеЪ Агд Зег МеЪ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЪ СЪи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп УаЪ ТЬе Ьеи 325 330 335 АЪа АЪа Ьуз Мер Суз Зег СЪп УаЪ Ьеи Суз СЪп СЪи СЪп СЪу УаЪ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЪз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЪа Не СЪп Ьеи СЪи Ьуз СЪу СЪу Ьуз РЬе ТЬг УаЪ Агд СЪу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЪи Азр Ьеи СЪи СЪп РЬе Зег СЪи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЪи Ьуз АЪа Азр УаЪ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЪа УаЪ Азр УаЪ Суз Не АЪа Азр С1у УаЪ Суз Не Азр АЪа 420 425 430
    180 022752
    РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи 435 440 <210> 77 <211> 440 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-475 <400> 7Ί
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Ые Рго 10 Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз 11е Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТЫ РЬе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мер АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 ыо СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьу5 Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЫ СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 ΗΪ5 Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз 11е 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд 11е УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЬ СЬи ТЫ 11е Ьеи Азп Рго Туг 11е Ые Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Агр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЫ УаЬ Агд СЬу 370 375 380
    181
    Ьун Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Не Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеГ СЬи ТЬг
    435 440 <210> 78 <211> 439 <212> Белок <213> Ното зарЛепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-474 <400> 78
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Не Рго 10 Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи 15 Тгр А1а Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеГ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе 11е СЬу Зег Рго Агд Не Азп А1а 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу Уа1 ТЬг Не РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЬу УаЛ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Не Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЛз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеГ Рго УаЬ Аэр Азп Ьеи СЬу МеГ АЬа УаЬ Не Азр Тгр 100 105 110 СЛи СЬи Тгр Агд Рго ТЫ Тгр АЛа Агд АЗП Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЛ СЛп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЛа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ С1и ТЬг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЛз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЛз 180 185 190 НЛз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу 5ег Суз РЬе Азп УаЬ С1и Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа А1а ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи А1а Не Агд УаЬ Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд Не УаЛ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЛа Зег СЬу 11е УаЬ Не Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи 5е г Не Мег Агд Зег МеГ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеГ СЬи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп УаЬ ТЫ Ьеи 325 330 335
    182 022752
    А1а А1а Ъуз МеС 340 Суз Зег С1п Уа1 Ъеи 345 Суз 61п 61и С1п 61у Уа1 Суз 350 Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи Ηίε Ъеи Αεη Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЪа Не 61п Ьеи СЪи Ъуз 61 у 61у ъуз РЬе ТЬг Уа1 Агд 61у 370 375 380 Ъуз Рго ТЬг Ьеи 61и Азр Ъеи СЪи С1п РЬе Зег 61и Ъуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЪи Ъуз АЪа Азр Уа1 Ъуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЪа Уа1 Азр Уа1 Суз 11е А1а Азр 61у Уа1 Суз Не Азр А1а 420 425 430 РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго Мес СЪи
    435 <210> 79 <211> 438 <212> Белок <213> Ното заръепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-473 <400> 79
    Ъеи 1 Азп РЬе Агд АЪа 5 Рго Рго УаЪ Не Рео Азп Уа1 10 Рго РЬе Ъеи 15 Тгр АЪа Тгр Азп АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ъеи 61у Ъуз РЬе Азр 6Ъи Рго 20 25 30 Ъеи Азр Мес Зег Ъеи РЬе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд Не Азп АЪа 35 40 45 ТЬг 61у С1п 61у УаЪ ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ъеи 61у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг С1у УаЪ ТЬг УаЪ Азп СЪу 6Ъу 11е Рго 65 70 75 80 61 п Ъуз Не Зег Ъеи 6Ъп Азр НЪз Ъеи Азр Ъуз АЪа Ьуз Ъуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеС Рго УаЪ Азр Азп Ъеи 61 у МеС А1а УаЪ Не Азр Тгр 100 105 110 СЪи 61 и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ъуз Рго Ъуз Азр 7аЪ 115 120 125 Туг Ъуз Азп Агд Зег Не СЪи Ъеи УаЪ 61п 61 п 61 п Азп УаЪ 61 п Ъеи 130 135 140 Зег Ъеи ТЬг 61и АЪа ТЬг 61и Ъуз АЪа Ъуз 61п 6Ъи РЬе СЪи Ъуз АЪа 145 150 155 160 С1у Ъуз Азр РЬе Ъеи УаЪ 6Ъи ТЬг Не Ъуз Ъеи 6Ъу Ъуз Ъеи Ъеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЪз Ъеи Тгр 61 у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЪз 180 185 190 ΗΪΞ Туг Ъуз Ъуз Рго С1у Туг Азп СЪу Зег Суз РЬе Азп Уа1 СЪи Не 195 200 205 Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп 6Ъи Зег ТЬг АЪа Ъеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТЬг 6Ъп 61п Зег Рго УаЪ АЪа АЪа ТЬг 225 230 235 240 Ъеи Туг Уа1 Агд Азп Агд УаЪ Агд 61и А1а Не Агд Уа1 Зег Ъуз Пе 245 250 255 Рго Азр А1а Ъуз Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе АЪа Туг ТЫ Агд 11е Уа1 260 2 65 270 РЬе ТЬг Азр 61п УаЪ Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег 61 п Азр 61и Ъеи Уа1 Туг 275 280 285
    - 183
    ТЬг РЬе 290 СБу СБи ТЬг УаБ А1а 295 Ьей СБу АБа Зег СЬу 300 Не УаБ Ые Тгр СБу ТЬг Ьей Зег Не Мес Агд Зег МеР Ьуз Зег Суз Ъеи Ьей Ьей Азр 305 310 315 320 Азп Туг Мес СБи ТЬг Не Ьей Азп Рго Туг Не Не Азп УаБ ТЬг Ъеи 325 330 335 А1а А1а Ьуз МеЬ Суз Зег СБп УаБ Ьей Суз СБп СЬи СБп СБу УаБ Суз 340 345 350 Не Агд ЬуЗ Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьей НБз Ьей Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АБа 11е СБп Ъеи СБи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаБ Агд СБу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьей СБи Азр Ьей СБи СБп РЬе Зег СБи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьей Зег Суг Ьуз СБи Ьуз АБа Азр УаБ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр А1а УаБ Азр УаБ Суз Не А1а Азр СЬу УаБ Суз 11е Азр АБа 420 425 430 РЬе Ьей Ьуз Рго Рго МеС
    435 <210> 80 <211> 437 <212> Белок <213> Ното зарБепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-472 <400> 80
    Ъеи Азп 1 РЬе Агд АБа 5 Рго Рго УаБ Не Рго 10 Азп УаБ Рго РЬе Ьей 15 Тгр АБа Тгр Азп АБа Рго Зег СБи РЬе Суз Ьей СБу Ьуз РЬе Азр СБи Рго 20 25 30 Ьей Азр Мер Зег Ьей РЬе Зег РЬе Не СБу Зег Рго Агд Не Азп АБа 35 40 45 ТЬг СБу СБп СБу УаБ ТЬг Не РЬе Туг УаБ Агр Агд Ьей СБу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СБу УаБ ТЬг УаБ Азп СБу СБу Б1е Рго 65 70 75 30 СБп Ьуг Не Зег Ьей СБп Агр НБз Ьей Азр Ьуг А1а Ьуз Ьуг Азр Ые 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеР Рго УаБ Азр Азп Ьей СБу МеБ А1а УаБ ББе Азр Тгр 100 105 110 СБи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АБа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаБ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СБи Ьей УаБ СБп СБп СБп Азп УаБ СБп Ьей 130 135 140 Зег Ьей ТЬг СБи АБа ТЬг СБи Ьуз АБа Ьуз СБп СБи РЬе СБи Ьуг АБа 145 150 155 160 СБу Ьуз Азр РЬе Ьей УаБ СБи ТЬг Ые Ьуз Ьей СБу Ьуз Ьей Ьей Агд 165 170 175 Рго Азп НБз Ьей Тгр СБу Туг Туг Ьей РЬе Рго Азр Суз Туг АЗП НБз 180 185 190 НБг Туг Ьуз Ьуз Рго СБу Туг Азп СБу Зег Суз РЬе Азп УаБ СБи Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьей Зег Тгр Ьей Тгр Азп СБи Зег ТЬг АБа Ьей 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьей Азп ТЬг СБп СБп Зег Рго Уа1 А1а АБа ТЬг 225 230 235 240
    184
    Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи А1а Ые Агд УаЬ Зег Ьуз 255 11е 245 250 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РПе АЬа Туг ТЬг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РЬе ТПг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 235 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТПг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е УаЬ 11е Тгр 2 90 2 95 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые Меб Агд Зег Меб Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Меб СЬи ТПг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТПг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз Меб Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РПе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РПе Зег СЬи Ьуз РПе Туг Суз 38 5 3 90 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТПг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430 РПе Ьеи Ьуз Рго Рго
    435 <210> 81 <211> 436 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-471 <400> 81
    Ьеи 1 Азп РПе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Ые Рго 10 Азп УаЬ Рго РПе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РПе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр Меб Зег Ьеи РПе Зег РПе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТПг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТПг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТПг СЬу УаЬ ТПг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи С1п Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТПг РЬе Туг Меб Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Меб А1а УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТПг Тгр АЬа Агд Азп тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ 61п Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТПг СЬи АЬа ТПг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РПе Ьеи УаЬ СЬи ТПг 11е Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Агп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РПе Рго Азр Суз Туг АЗП НЬз 180 185 190
    185 022752
    ΗΪ3 Туг Ьуз 195 Ьуз Рго 61у Туг Азп 200 С1у Зег Суз РЬе Азп 205 ЧаЬ С1и Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп С1п Зег Рго Ча1 АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг Ча1 Агд Азп Агд Ча1 Агд СЬи А1а Не Агд ЧаЬ Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Ча1 РЬе АЬа Туп ТЬг Агд Не Ча1 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп Ча1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1ь Азр С1и Ьеи Ча1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе С1у СЬи ТЬг Ча1 А1а Ьеи С1у А1а Зег С1у Не Ча1 Не Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Не Мес Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи Ъеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС СЬи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп ЧаЬ ТЫ Ьеи 32 5 330 335 АЬа А1а Ьуз МеС Суз Зег СЬп ЧаЬ Ьеи Суз СЬп С1и СЬп СЬу Ча1 Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз АЗП Тгр Азь Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе А1а Не СЬп Ьеи 01и Ьуз СЬу СЬу Ьуг РЬе ТЬг Ча1 Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег С1и Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуг А1а Азр Ча1 Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр А1а Ча1 Азр Ча1 Суз Не АЬа АЗр СЬу ЧаЬ Суз Не Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго
    435 <210> 82 <211> 435 <212> Белок <213> Ното зархепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 3 6-47 0 <400> 82
    Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго ЧаЬ Не Рго АЗП Ча1 Рго РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр АЗП АЬа ЕГО Зег С1и РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе Азр С1и Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не С1у 5ег Рго Агд Не Аэп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу С1п СЬу ЧаЬ ТЬг Не РЬе Туг ЧаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг 11е Азр Зег Не ТЬг СЬу ЧаЬ ТЬг Уа1 Азп СЬу С1у Не Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Не Зег Ьеи С1п Азр НЬз Ьеи Азр Ъуз А1а Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеС Рго ЧаЬ Азр Азп Ьеи С1у ИеЪ А1а Ча1 Не Азр Тгр 100 105 НО СЬи сьи Тгр Агд Рго ТЫ Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр Ча1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не сьи Ьеи Ча1 СЬп С1п СЬп Азп Ча1 СЬп Ьеи 130 135 140
    186 022752
    Эег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг ТЬе Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Эег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Эег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Вег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Эег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Эег 11е МеЬ Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТЫ Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Эег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 3Θ5 390 395 400 Эег СуЗ Туг Эег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз
    435 <210> 83 <2Ы> 434 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-469 <400> 83
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп 10 УаЬ Рго РЬе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Эег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95
    187 022752
    ТПг РНе Туг МеС 100 Рго Ή1 Азр Азп Ьеи 61у 105 Мер А1а Уа1 Ие 110 Азр Тгр 61и 61и Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 115 120 12 5 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ие 61и Ьеи Уа1 61п 61п 61п Азп Уа1 61п Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг 61и А1а ТНг 61и Ьуз А1а Ьуз 61п 61ц РНе 61 и Ьуз А1а 145 150 155 160 С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи 7а1 61и ТНг Ие Ьуз Ьеи б1у Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Агп Шз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РНе Рхо Азр Суз Туг Азп ΗΪ3 180 185 190 ΗΪ3 Тух Ьуз Ьуз Рго 61у Туг Азп 61у Зег Суз РНе Азп Уа1 б1и Не 195 200 205 ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тхр Ьеи Тгр Азп 61ц Зег ТНг А1а Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ие Туг Ьеи Азп ТНг 61п 61п Зег Рго Уа1 А1а А1а ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61и А1а Ие Агд Уа1 Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зех Рхо Ьеи Рго Уа1 РНе А1а Тух ТНг Агд Ие Уа1 260 265 270 РНе ТЬг Азр 61п Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег 61п Азр 61и Ьеи Уа1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе 61 у 61и ТЬг Уа1 А1а Ьеи 61у А1а Зег 61у Ие Уа1 Ие Тгр 290 295 300 61у ТЬг Ьеи Зег Не МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС 61 и ТЬг Ие Ьеи Азп Рго Туг Ие Ие Азп Уа1 ТНг Ьеи 32 5 330 335 А1а А1а Ьуз МеС Суз Зег 61п Уа1 Ьеи Суз 61п 61и 61п 61у Уа1 Суз 340 345 350 Ие Агд Ьуз АЗП Тгр Азп Зег Зег Азр Тух Ьеи ΗΪ5 Ьеи Азп Рго Азр 35 5 360 365 Азп РНе А1а Ие 61п Ьеи 61и Ьуз 61у 61у Ьуз РНе ТНг Уа1 Агд 61у 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи 61 и Азр Ьеи 61и 61п РНе Зег б1и Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз 61и Ьуз А1а Азр νβΐ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр 61у Уа1 Суз Ие Азр А1а
    420 425 430
    РНе Ьеи <210> 84 <211> 433 <212> Белок <213> Ното зархепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-468 <400> 84
    Ьеи 1 Азп РНе Агд А1а 5 Рго Рго 7а1 Не Рго 10 Азп ν$1 Рго РНе Ьеи 15 Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РНе Суз Ьеи 61у Ьу5 РНе Азр С1и Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеИ Зег Ьеи РНе Зег РНе Не С1у Зег Рго Агд Не А5П А1а 35 40 45
    188
    ТЫ СЬу 50 СЬп СЬу УаЬ ТЬг Не 55 РЬе Туг Уа1 Азр Агд 60 Ьеи СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Не Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг Мер Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мер АЬа УаЬ Не Азр Тгр 100 105 110 С1и СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьу® Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬ з Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Не 195 200 205 Ьу® Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Не Агд УаЬ Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе А1а Туг ТЬг Агд Не УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ А1а Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не УаЬ Не Тгр 290 295 300 СЬу ТЫ Ьеи Зег Не Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Мер СЬи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеР Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Не Азр АЬа 420 425 430 РЬе
    <210> 85 <2Ы> 432 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-467
    189 022752
    <400> 85 Ьеи Азп РНе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Не Рео Азп УаЬ Рго РНе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе Азр СЬи Рго 20 25 30 ьеи Азр МеД Зег Ьеи РНе Зег РНе Не СЬу Зег Рго Агд 11е АЗП АЬа 35 40 45 ТНг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТНг 11е РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТНг СЬу УаЬ ТЫ УаЬ Азп СЬу СЬу 11е Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр 11е 85 90 95 ТНг РНе Туг МеД Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеД АЬа УаЬ Не Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТЫ СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп С1и РНе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг 11е Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп УаЬ СЬи Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТНг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи АЗП ТНг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Агп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Не Агд УаЬ Зег Ьуз 11е 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе А1а Туг ТНг Агд Не УаЬ 260 265 270 РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТНг РНе СЬу СЬи ТНг УаЬ А1а Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не УаЬ Не Тгр 290 295 300 СЬу ТНг Ьеи Зег Не МеД Агд Зег МеД Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеД СЬи ТНг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп Уа1 ТНг Ьеи 325 330 335 АЬа А1а Ьуз МеД Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Агп РНе АЬа Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РНе Зег СЬи Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьу® СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТНг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Не Азр АЬа 420 425 430
    <210> 86 <211> 431 <212> Белок <213> Нолю зарЬепз
    190 <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-466 <400> 86
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Ые Рго 10 Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеР Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг 11е РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз 11е Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр 11е 85 90 95 ТЬг РЬе Туг Мер Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мер АЬа УаЬ ТЬе Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 8ег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг 11е Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи 11е 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЫ СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа 11е Агд УаЬ Зег Ьуз 11е 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые УаЬ 11е Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеР СЬи ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Туг Ые Т1е Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз Мер Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Агр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз ТЬе АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Не Азр 420 425 430
    191 <210> 87 <211> 430 <212> Белок <213> Ното зарЛепэ <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-465 <400> 87
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Не Рго 10 Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеГ Зег Ьеи РЬе Зег РНе Не СЬу Зег Рго Агд 11е Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг 11е РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Не Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЛз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеГ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеГ АЬа УаЬ Не Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЛа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег ЬЬе СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз А1а Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЛз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЛз 180 185 190 НЛз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Не Агд УаЬ Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд 11е УаЛ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ А1а Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не УаЬ 11е Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Не МеГ Агд Зег МеГ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеГ СЬи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг 11е Не Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа А1а Ьуз Мег Суз Зег ст УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЛз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЛи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз АЛа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415
    192
    ТНг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 11е 420 425 430 <210> 88 <211> 429 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-464 <400> 88
    Ьеи 1 Азп РНе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Ые Рго 10 Азп УаЬ Рго РНе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РНе Зег РНе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТНг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТНг Ые РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТНг С1у УаЬ ТНг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рео 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр ΗΪ3 Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТНг РНе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЕ АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РНе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТНг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТНг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТНг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе АЬа Туг ТНг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТНг РНе СЬу СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи С1у АЬа Зег сьу Ые УаЬ Ые Тгр 290 2 95 300 СЬу ТНг Ьеи Зег 11е МеЕ Агд Зег МеЕ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЕ СЬи ТНг Ые Ьеи Азп Рго Туг 11е Ые Азп УаЬ ТНг Ьеи 325 330 335 АЬа А1а Ьуз МеЕ Суз Зег 61п УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 11е Агд Ьуз Азп тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 3 60 365 Азп РНе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг УаЬ Агд С1у 370 375 380
    193 022752
    Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи С1и С1п РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр Уа1 Ьуз Азр 405 410 415 ТПг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз
    420 425 <210> 89 <2Ы> 427 <212> Белок <213> Нолю заргепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-462 <400> 89
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ 11е Рго 10 Азп УаЬ Рго РПе Ъеи 15 Тгр А1а Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РПе Суз Ьеи СЬу Ьуз РПе Аэр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр Меб Зег Ьеи РПе Зег РПе Ые СЬу Еег Рго Агд Ые Азп А1а 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг 11е РПе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Αερ Зег Ые ТПг СЬу УаЬ ТПг УаЬ Азп СЬу С1у Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Агр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТЬг РПе Туг Меб Рго УаЬ Азр Азп Ъеи СЬу Меб АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп Уа1 СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи А1а ТПг СЬи Ьуз АЬа Ъуз СЬп СЬи РПе С1и Ьуз АЬа 145 150 155 160 С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТПг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп Низ Ъеи Тгр СЬу Туг Туг Ъеи РПе Рго Азр Суз Туг Азп Ηίδ 180 185 190 Ηίδ Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Еег Суз РПе Азп УаЬ СЬи 11е 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Еег ТПг А1а Ьеи 210 215 220 Туг Рго Еег 11е Туг Ьеи Азп ТПг СЬп С1п Еег Рго УаЬ АЬа А1а ТПг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа 11е Агд УаЬ Еег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РПе АЬа Туг ТЬг Агд 11е Уа1 2 60 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РПе Ьеи 8ег С1п Азр СЬи Ъеи Уа1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТПг УаЬ А1а Ьеи СЬу А1а Еег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые Меб Агд Еег Меб Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Меб СЬи ТПг 11е Ьеи Азп Рго Туг Ые Не Азп УаЬ ТПг Ьеи 325 330 335 АЬа А1а Ьуз МеЪ Суз Еег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу Уа1 Суз 340 345 350
    194 022752
    Не Агд Ьуз 355 Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг 360 Ьеи НЪз Ьеи 365 Азп Рго Азр Азп РЬе АЪа 11е СЪп Ьеи СЪи Ьуз СЪу СЪу Ьуз РЬе ТЬг УаЪ Агд СЪу 370 375 380 ьуз Рго ТЬг Ьеи СЪи Азр Ьеи СЪи СЪп РЬе Зег СЪи Ьуз РЬе Туг Су5 385 390 395 400 Зег Су5 Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЪи Ьуз АЪа Азр УаЪ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЪа УаЪ Азр УаЪ Суз 11е АЪа Азр СЪу 420 425
    <210> 90 <211> 425 <212> Белок <213> Ното ; зархепз <220> <223> Зрелый НиРН20 36- 460 <400> 90 Ьеи Азп РЬе Агд АЪа Рго Рго УаЪ Не Рго Азп УаЪ Рго РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЪа Тгр Азп АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ьеи СЪу Ьуз РЬе Азр СЪи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЪ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд Не АЗП АЪа 35 40 45 ТЬг СЪу СЪп 01 у УаЪ ТЬг Не РЬе Туг УаЪ Азр Агд Ьеи СЪу Тух Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЫ СЪу УаЪ ТЬг УаЪ Азп СЪу СЪу Не Рго 65 70 75 80 СЪп Ьуз Не Зег Ьеи СЪп Азр НЪз Ьеи Азр Ьуз АЪа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЫ РЬе Туг МеЪ Рго УаЪ Азр Азп Ьеи СЪу МеЪ АЪа УаЪ Не Азр Тгр 100 105 110 СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЪ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЪи Ьеи УаЪ СЪп СЪп СЪп Азп УаЪ СЪп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЫ СЪи АЪа ТЬг СЪи Ьуз АЪа Ьуз СЪп СЪи РЬе СЪи Ьуз АЪа 145 150 155 160 СЪу Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 СЪи ТЬг 11е Ьуз Ьеи СЪу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЪз Ьеи Тгр СЪу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЪз 180 185 190 НЪз Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп СЪу Зег Суз РЬе Азп УаЪ СЪи Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЪи Зег ТЬг АЪа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи А5П ТЬг СЪп СЪп Зег Рго УаЪ АЪа АЪа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЪ Агд Азп Агд УаЪ Агд СЪи АЪа Не Агд УаЪ Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр АЪа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЪ РЬе АЪа Туг ТЬг Агд Не УаЪ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЪп УаЪ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЪп Азр СЪи Ьеи УаЪ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЪу СЪи ТЬг Уа1 А1а Ьеи СЪу АЪа Зег С1у Не УаЪ Не Тгр 290 295 300 СЪу ТЬг Ьеи Зег Не МеЪ Агд Зег МеЪ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320
    195
    Азп Туг Мер С1и ТЬг 325 Не Ьей Азп Рго Туг 330 Не ХБе Азп УаБ ТНг 335 Ьей АБа АБа Ьуз Мер Суз Зег СБп УаБ Ьей Суз СБп СБи СБп СБу УаБ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз АЗП Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьей НБз Ьей Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АБа Не СБп Ъеи СБи Ьуз СБу СБу Ьуз РЬе ТЬг УаБ Агд СБу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьей СБи Азр Ьей СБи СБп РЬе Зег СБи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ьуз СБи Ьуг АБа Азр УаБ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АБа УаБ Азр ν^Ι Суз Не АБа
    420 425 <210> 91 <211> 423 <212> Белок <213> Ното зарБепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-458 <400> 91
    Ьей 1 Азп РЬе Агд АБа 5 Рго Рго УаБ Не Рго Азп УаБ 10 Рго РЬе Ьей 15 Тгр АБа Тгр Азп АБа Рго Зег СБи РЬе Суз Ьей СБу Ьуз РЬе Азр СБи Рго 20 25 30 Ьей Азр Мер £ег Ьей РЬе Зег РЬе 11е СБу Зег Рго Агд 11е Азп АБа 35 40 45 ТЬг СБу С1п СБу УаБ ТЬг 11е РЬе Туг УаБ Азр Агд Ьей СБу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СБу Уа1 ТЬг УаБ Азп СБу СБу 11е Рго 65 70 75 80 СБп Ьуз Не Зег Ъеи СБп Азр НБз Ьей Азр Ьуз АБа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг Мер Рго УаБ Азр Азп Ьей СБу МеЬ АБа УаБ Не Азр Тгр 100 105 110 СБи СБи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АБа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаБ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е СБи Ьей Уа1 СБп СБп СБп Азп УаБ СБп Ьей 130 135 140 Зег Ьей ТЬг СБи АБа ТЬг СБи Ьуз АБа Ьуз СБп СЬи РЬе СБи Ьуз АБа 145 150 155 160 СБу Ьуз Азр РЬе Ьей УаБ СБи ТЬг Не Ьуз Ьей СБу Ьуз Ьей Ъеи Агд 165 170 175 Рго Азп НБз Ьей Тгр СБу Туг Туг Ьей РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НБз 180 185 190 НБз Туг Ьуз Ьуз Рго СБу Туг Азп СБу Зег Суз РЬе Азп УаБ СБи 11е 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьей Зег Тгр Ьей Тгр Азп СБи Зег ТЬг АБа Ьей 210 215 220 Туг Рго 5ег Не Туг Ьей Азп ТЬг СБп СБп Зег Рго УаБ АБа АБа ТЬг 225 230 235 240 Ьей Туг УаБ Агд Азп Агд Уа1 Агд СБи АБа Не Агд УаБ Зег Ьуз 11е 245 250 255 Рго Азр АБа Ьуз Зег Рго Ьей Рго Уа1 РЬе АБа Туг ТЬг Агд Не УаБ 260 2 65 270 РЬе ТЬг Азр СБп УаБ Ьей Ьуз РЬе Ьей Зег СБп Азр СБи Ьей УаБ Туг 275 280 285
    196 022752
    ТЬг РЬе 290 СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа 295 Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 300 Ые УаЬ Ые Тгр СЬу ТЫ Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 зео Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Аэр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 3 90 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЫ Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз
    420 <210> 92 <2Ы> 421 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-456 <400 92
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп 10 УаЬ Рго РЬе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе 11е СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬе Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТЬг РЬе Туг Меь Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЫ 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255
    197
    Рго Азр А1а Ьуз 260 Зег Рго Ьеи Рго Уа1 265 РНе А1а Туг ТНг Агд 270 Ые УаЬ РНе ТНг Азр С1п УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег С1п Азр СЬи Ьеи Уа1 Туг 275 280 285 ТНг РНе С1у СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые Уа1 11е Тгр 290 295 300 СЬу ТНг Ьеи Зег Ые МеС Агд Зег Мес Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС СЬи ТНг 11е Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТНг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеС Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп С1и С1п СЬу Уа1 Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РНе АЬа 11е С1п Ьеи СЬи Ьуз С1у СЬу Ьуз РНе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи С1п РНе Зег СЬи Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суг Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТНг Аэр АЬа УаЬ Азр
    420 <210> 93 <211> 419 <212> Белок <213> Ногао зарЬепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-454 <400> 93
    Ьеи Агп РНе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп Уа1 Рго РНе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РНе Зег РНе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТНг СЬу С1п СЬу УаЬ ТНг Ые РНе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТНг СЬу УаЬ ТЬг Уа1 Азп СЬу СЬу 11е Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз Ые Зег Ьеи 61п Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТНг РНе Туг МеС Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу мес АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи С1и Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи Уа1 С1п СЬп С1п Азп Уа1 С1п Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуз АЬа Ьуз С1п СЬи РНе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи Уа1 СЬи ТНг 11е Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Агп НЬз Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬг Туг Ьуз Ъуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп Уа1 СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1 и Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220
    198
    Туг Рго 225 Зег Не Туг Ьеи Азп 230 ТЬг 61п 61п Зег 235 Рго Уа1 А1а А1а ТЬг 240 Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61и А1а 11е Агд Уа1 Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго А$р А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг Агд Не Уа1 260 265 270 РЬе ТЬг Азр 61п Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи 5ег 61п Азр 61и Ьеи Уа1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе 61у 61и ТЬг Уа1 А1а Ьеи 61у А1а Зег 61 у 11е Уа1 Не Тгр 290 295 300 С1у ТЬг Ьеи Зег 11е Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Мер 61и ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп Уа1 ТЬг Ьеи 325 330 335 А1а А1а Ьуз Мер Суз Зег С1п Уа1 Ьеи Суз 61п 61и 61 п 61 у Уа1 Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Н1з Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе А1а Не С1п Ьеи 61и Ьуз С1у 61у Ьуз РЬе ТЬг Уа1 Агд 61у 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи 61и Азр Ьеи 61и 61п РЬе Зег 61 и Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз 61и Ьуз А1а Азр Уа1 Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр А1а
    <210> 94 <211> 417 <212> Белок <213> Ното : зархепз <220> <223> Зрелый НиРН20 36-, 4 52 <400> 94 Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 11е Рго Азп Уа1 Рго РЬе Ъеи Тгр 1 5 10 15 А1а Тгр Азп А1а Рго Зег б1и РЬе Суз Ьеи 61у Ъуз РЬе Азр 61и Рго 20 25 30 Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд Не АЗП А1а 35 40 45 ТЬг 61у С1п 61у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 61у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег 11е ТЬг 61у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61у 61у Не Рго 65 70 75 80 61п Ьуз Не Зег Ьеи 61п Азр Шз Ьеи Азр Ъуз А1а Ьуз Ъуз Азр Не 85 90 95 ТЫ РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ьеи 61у МеР А1а Уа1 Не Азр Тгр 100 105 110 61и 61 и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго Ъуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не С1и Ьеи Уа1 61п 61п 61 п Азп Уа1 С1п Ъеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг 61и А1а ТЬг б1и Ьуз А1а Ъуз 61п 61и РЬе С1и Ъуз А1а 145 150 155 160 61у Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 61и ТЬг Не Ъуз Ъеи 61у Ъуз Ъеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп Шз Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Абп Шз 180 185 190
    199
    ΗΪ3 Туг Ьуз 195 Ьуз Рго 61у Туг Азп 200 С1у Зег Суз РЬе Азп 205 Уа1 61ч Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеч Зег Тгр Ьеч Тгр Азп 61ч Зег ТЬг А1а Ьеч 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеч Азп ТЬг 61п 61п Зег Рго Уа1 А1а А1а ТЬг 225 230 235 240 Ьеч Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61ч А1а Не Агд Уа1 Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеч Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЫ Агд Не Уа1 2 60 265 270 РЬе ТЬг Азр С1п Уа1 Ьеч Ьуз РЬе Ьеч Зег 61п Азр 61ч Ьеч Уа1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе 61у 61ч ТЬг Уа1 А1а Ьеч 61у А1а Зег 61у 11е Уа1 Не Тгр 290 2 95 300 61 у ТЬг Ьеч Зег Не МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеч Ьеч Ьеч Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС 61ч ТЬг Не Ьеч Азп Рго Туг 11е Не Азп УаЬ ТЬг Ьеч 325 330 335 А1а А1а Ьуз МеС Су5 Зег С1п Уа1 Ьеч Суз 61п 61ч 61п 61у Уа1 Суз 340 345 350 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеч Ηί3 Ьеч Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе А1а 11е С1п Ьеч С1ч Ьуз 61у 61у Ьуз РЬе ТЬг Уа1 Агд 61у 370 375 380 Ьуз Рго ТНг Ьеч 61ч Азр Ьеч 61ч 61п РНе Зег 61ч Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеч Зег Суз Ьуз 61ч Ьуз А1а Азр Уа1 Ьуз Азр 405 410 415 ТНг
    <210> 95 <211> 415 <212> Белок <213> Ното : зартепБ <220> <223> Зрелый НЧРН20 36-· 450 <400> 95 Ьеч Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго РЬе Ьеч Тгр 1 5 10 15 А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 61ч РЬе Суз Ьеч 61у Ьуз РЬе Азр 61ч Рго 20 25 30 Ьеч Азр МеС Зег Ьеч РЬе Зег РНе Не 61у Зег Рго Агд Не Азп А1а 35 40 45 ТЬг 61у 61п 61у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеч 61у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Агр Зег Не ТЬг С1у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61 у 61у Не Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз 11е Зег Ьеч 61п Азр Н1з Ьеч Азр Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеС Рго Уа1 Азр Азп Ьеч б1у МеС А1а Уа1 Не Азр Тгр 100 105 но 61ч 61ч Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не 61ч Ьеч Уа1 61п 61п 61п Азп Уа1 61 п Ьеч 130 135 140 Зег Ьеч ТЬг 61ч А1а ТЬг 61ч Ьуз А1а Ьуз 61п 61ч РЬе 61ч Ьуз А1а 145 150 155 160
    200
    61у Ъуз Азр РЬе Ъеи 165 Уа1 СЪи ТЬг 11е Ъуз 170 Ъеи СЪу Ъуз Ъеи Ъеи 175 Агд Рго Азп НЪз Ъеи Тгр СЪу Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп Низ 180 185 190 НЪз Туг Ъуз Ъуз Рго СЪу Туг АЗП СЪу Зег Суз РЬе Азь УаЪ СЪи Не 195 200 205 Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп СЪи Зег ТЬг АЪа Ъеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТЬг С1п 61п Зег Рго Уа1 А1а АЪа ТЬг 225 230 235 240 Ъеи Туг УаЪ Агд Азп Агд Уа1 Агд СЪи А1а Не Агд Уа1 Зег Ъуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ъуз Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе АЪа Туг ТЬг Агд Не 17а 1 260 2 65 270 РЬе ТЬг Азр <31п Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег С1п Азр СЪи Ъеи УаЪ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЪу СЪи ТЬг Уа1 А1а Ъеи СЪу АЪа Зег СЪу 11е Уа1 11е Тгр 290 295 300 СЪу ТЬг Ъеи Зег 11е МеЪ Агд Зег МеЪ Ъуз Зег Суз Ъеи Ъеи Ъеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЪ СЪи ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Не Не Азп 17а 1 ТЬг Ъеи 325 330 335 АЪа АЪа Ъуз МеЪ Суз Зег 61п Уа1 Ъеи Суз 61п СЪи С1п СЪу УаЪ Суз 340 345 350 Не Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи ΗΪ5 Ъеи АЗП Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЪа Не С1п Ъеи СЪи Ъуз СЪу СЪу Ъуз РЬе ТЬг УаЪ Агд СЪу 370 375 380 Ъуз Рго ТЬг Ъеи СЪи Азр Ъеи СЪи 61п РЬе Зег СЪи Ъуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз СЪи Ъуз АЪа Азр Уа1 Ъуз 405 410 415
    <210> 96 <211> 473 <212> Белок <213> Ното : зархепз <220> <223> Зрелый НиРН20 36-; 508 <400> 96 Ъеи Азп РЬе Агд АЪа Рго Рго Уа1 Не Рго Азп 17а 1 Рго РЬе Ъеи Тгр 1 5 10 15 А1а Тгр Азп АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ъеи 61у Ъуз РЬе Азр СЪи Рго 20 25 30 Ъеи Азр МеЪ Зег Ъеи РЬе Зег РЬе Не СЪу Зег Рго Агд 11е Азп АЪа 35 40 45 ТЬг СЪу С1п 61у Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг 1/а1 Азр Агд Ъеи 61у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЪу 17а1 ТЬг 1/а1 Азп С1у СЪу Не Рго 65 70 75 80 С1п Ъуз 11е Зег Ъеи С1п Азр НЪз Ъеи Азр Ъуз А1а Ъуз Ъуз Азр Пе 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеЪ Рго 17а 1 Азр Азп Ъеи СЪу МеЪ АЪа 17а1 Не Азр Тгр 100 105 110 СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ъуз Рго Ъуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ъуз Азп Агд Зег Не СЪи Ъеи Уа1 ст 61п С1п АЗП Уа1 С1п Ъеи 130 135 140
    201
    Зег Ьеи ТЫ С1и АЬа ТЬг 61и Ъуз А1а Ьуз С1п С1и РЬе С1и Ьуз АЬа 145 150 155 160 С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи Ча1 С1и ТЬг Пе Ьуз Ьеи С1у Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп Ηί5 180 185 190 Н15 Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп ЧаЬ С1и Пе 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег ТЬг А1а Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп 61п Зег Рго Ча1 АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг Ча1 Агд Азп Агд Ча1 Агд С1и АЬа Пе Агд ЧаЬ Зег Ьуз Пе 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго ча1 РЬе А1а Туг ТЬг Агд Пе ЧаЬ 260 2 65 270 РНе ТЬг Азр СЬп Ча1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1п Азр С1и Ьеи Ча1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе С1у С1и ТЬг Ча1 А1а Ьеи С1у АЬа Зег СЬу Не ЧаЬ Пе Тгр 290 295 300 61у ТЬг Ьеи Зег Пе МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС С1и ТЬг Пе Ьеи Азп Рго Туг Пе Пе Азп Ча1 ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа А1а Ьуз Мес Суз Зег С1п ча1 Ьеи Суз С1п С1и С1п СЬу ЧаЬ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе А1а Пе СЬп Ьеи С1и Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг ЧаЬ Агд С1у 37 0 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи С1и С1п РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз АЬа Азр Ча1 Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа Ча1 Азр ЧаЬ Суз Пе АЬа Азр СЬу Ча1 Суз Не Агр А1а 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеС С1и ТЬг С1и С1и Рго СЬп Пе РЬе Туг Азп 435 440 445 А1а Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег А1а ТЬг МеС РЬе Пе Ча1 Зег Пе Ьеи 450 455 460 РЬе Ьеи Не Пе Зег Зег ЧаЬ АЬа Зег
    465 470 <210> 97 <211> 471 <212> Белок <213> Ното зархепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-506 <400> 97
    Ьеи 1 АЗП РЬе Агд А1а 5 Рго РГО Ча1 Пе Рго 10 Азп Ча1 Рго РЬе Ьеи 15 Тгр А1а Тгр Азп А1а 20 Рго Зег С1и РЬе Суз 25 Ьеи С1у Ьуз РЬе Азр 30 С1и РГО Ьеи Азр МеС 35 Зес Ьеи РЬе Зег РЬе 40 Пе СЬу Зег Рго Агд 45 Не Азп А1а ТЬг С1у 50 СЬп С1у ЧаЬ ТЬг Не 55 РЬе Туг Ча1 Азр Агд 60 Ьеи СЬу Туг Туг
    202 022752
    Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Не Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЫ РЬе Туг Мер Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мер АЬа УаЬ Не Азр Тгр 100 105 НО СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РНе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЫ АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Не Агд УаЬ Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз 8ег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе А1а Туг ТЬг Агд Не УаЬ 2 60 2 65 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Агр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег С1у Не УаЬ Не Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Не Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 АЗП Туг Мер СЬи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз Мер Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу О1у Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 ьуз Рго ТЬг ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз ЗЭ5 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Не Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Не РЬе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТЬг Мер РЬе Не УаЬ Зег Не Ьеи 450 455 460 РЬе Ьеи Не Не Зег Зег УаЬ 4 65 470
    <210> 98 <211> 469 <212> Белок <213> Нолю заргепз <220> <223> Зрелый НиРН20
    203 <400> 98
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд А1а 5 Рго Рго Уа1 Ие Рго 10 Азп Уа1 Рго РНе Ьеи 15 Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РНе Суз Ьеи 61у Ьуз РНе Азр С1и Рго 20 25 30 Ьеи Авр Мер Зег Ьеи РНе Зег РНе Ие С1у Зег Рго Агд Ие Азп А1а 35 40 45 ТЬг 01 у С1п С1у Уа1 ТЬг Ие РНе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи С1у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ие Азр Зег Ие ТЬг С1у Уа1 ТНг Уа1 Азп 01 у С1у Ие Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз Ие Зег Ьеи С1п Азр ΗΪ3 Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр Ие 85 90 95 ТЬг РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ьеи О1у Мер А1а Уа1 Ие Азр тгр 100 105 110 С1и <31и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ие С1и Ьеи Уа1 01п 01 п 01 п Азп Уа1 С1п Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг 01и А1а ТНг С1 и Ьуз А1а Ьуз 01п 61и РНе С1и Ьуз А1а 145 150 155 160 С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 С1и ТНг Не Ьуз Ьеи О1у Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг Азп Шз 180 185 190 Шз Туг Ьуз Ьуз Рго 01 у Туг Азп С1у Зег Суз РНе Азп Уа1 01 и Ие 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп 01и Зег ТНг А1а Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ие Туг Ьеи Азп ТНг 61п С1п Зег Рго Уа1 А1а А1а ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а Ие Агд Уа1 Зег Ьуз Ие 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РНе А1а Туг ТНг Агд Не Уа1 260 265 270 РЬе ТЬг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег С1п Азр С1и Ьеи Уа1 Туг 275 280 285 ТЫ РЬе 01у О1ц ТЬг Уа1 А1а Ьеи 01у А1а Зег 01 у Не Уа1 Ие Тгр 2 90 295 300 С1у ТЬг Ьеи Зег Ие Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Мер С1и ТЬг Не Ьеи Аэп Рго Туг Ие Ие Азп Уа1 ТЬг Ьеи 325 330 335 А1а А1а Ьуз Мер Суз Зег 01п Уа1 Ьеи Суз С1п 61и 61п 01 у Уа1 Суз 340 345 350 Ие Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Н15 Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе А1а Ие О1п Ьеи С1и Ьуз 61у О1у Ьуз РНе ТНг Уа1 Агд 01у 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи 01 и Азр Ьеи С1и С1п РНе Зег 01и Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр Уа1 Ьуз Азр 4 05 410 415 ТЫ Азр А1а Уа1 Агр Уа1 Суз Ие А1а Азр 61у Уа1 Суз Не Азр А1а 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер 01и ТЫ С1и С1и Рго С1п Ие РНе Туг Азп 435 440 445 А1а Зег Рго Зег ТНг Ьеи Зег А1а ТНг Мер РНе Ие Уа1 Зег Ие Ьеи 450 455 460 РЬе Ьеи Ие Ие Зег 465
    204 <210> 99 <211> 467 <212> Белок <213> Ното зарЛепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-502 <400> 99
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд А1а 5 Рго Рго УаЬ Не Рго 10 Азп Уа1 Рго РЬе Ьеи 15 Тгр АЛа Тхр Азп А1а Рго Зех С1и РНе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеГ Зег Ьеи РЬе Зех РНе Пе СЬу Зег Рхо Ахд Не Азп АЬа 35 40 45 ТЫ СЬу С1п С1у УаЬ ТЬг Не РЬе Туг УаЛ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Пе Азр зег Не ТЬг СЬу УаЛ ТЬг Уа1 Азп СЬу СЬу Пе Рго 65 70 75 80 СЛп Ьуз Пе Зег Ьеи СЬп Азр НЛз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр Пе 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеГ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеГ А1а УаЛ Пе Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЛи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЛа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи УаЛ СЛп СЬп СЛп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬх С1и Ьуз АЛа Ьуз СЬп СЛи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуэ Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЛз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп Нхз 180 185 190 НЛ з Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Пе 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЛи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Тух Рхо Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЛп СЛп Зег Рго УаЛ А1а А1а ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЛи АЛа Не Агд УаЛ Зег Ьуз 11е 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЛ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд Пе УаЬ 260 2 65 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1п Азр СЛи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЛа Зех СЬу Не УаЬ Пе Тгр 290 295 300 С1у ТЬг Ьеи Зег Не МеГ Агд Зег МеГ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеГ СЬи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг 11е Не Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЛа А1а Ьуз МеГ Суз Зег СЛп УаЬ Ьеи Суз 61 п СЛи СЛп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зех Зех Азр Туг Ьеи НЛз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Не СЛп Ьеи СЬи ьуз 61у С1у Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЛи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЛи Ьуз АЛа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415
    205
    ТЬг Азр АБа УаБ 420 Азр УаБ Суз 11е АБа 425 Азр СБу УаБ Суз 11е 430 Азр АБа РЬе Ьей Ьуз Рго Рго МеЬ СБи ты СБи СБи Рго СБп 11е РЬе Туг Азп 435 440 445 АБа Зег Рго Зег ТНг Ьей Зег АБа ТНг МеН РЬе Не УаБ Зег 11е Ьей 450 455 460
    РНе Ьей 11е 465 <210> 100 <211> 465 <212> Белок <213> Ното зарБепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-500 <40 0 100
    Ьей 1 Азп РЬе Агд АБа 5 Рго Рго УаБ 11е Рго Азп УаБ 10 Рго РЬе Ьей 15 Тгр АБа Тгр Азп АБа Рго Зег СБи РЬе Суз Ьей СБу Ьуз РЬе Азр СБи Рго 20 25 30 Ьей Азр МеП Зег Ьей РЬе Зег РЬе 11е СБу Зег Рго Агд Ые Азп АБа 35 40 45 ТЬг СБу СБп СБу УаБ ТЬг 11е РЬе Туг УаБ Азр Агд Ьей СБу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг 11е Азр Зег Ые ТЬг СБу УаБ ТЬг УаБ Азп СБу СБу Ые Рго 65 70 75 80 СБп Ьуз Ые Зег Ьей СБп Азр НБг Ьей Азр Ьуз АБа Ьуз Ьуз Азр 11е 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеБ Рго УаБ Азр Азп Ьей СБу МеБ АБа УаБ 11е Азр Тгр 100 105 110 СБи СБи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АБа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаБ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е СБи Ьей УаБ СБп СБп СБп Азп УаБ СБп Ьей 130 135 140 Зег Ьей ТЬг СБи АБа ТЬг СБи Ьуз АБа Ьуз СБп СБи РЬе СБи Ьуз АБа 145 150 155 160 СБу Ьуз Азр РЬе Ьей УаБ СБи ТЬг 11е Ьуз Ьей СБу Ьуз Ьей Ьей Агд 165 170 175 Рго Азп НБз Ьей Тгр СБу Туг Туг Ьей РЬе Рго Агр Суз Туг Азп НБз 180 185 190 НБз Туг Ьуз Ьуз Рго СБу Туг Азп СБу Зег Суз РЬе Азп УаБ СБи 11е 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьей Зег Тгр Ьей Тгр Азп СБи Зег ТЬг АБа Ьей 210 215 220 Туг Рго Зег 11е Туг Ьей Азп ТЬг СБп СБп Зег Рго УаБ АБа АБа ТЬг 225 230 235 240 Ьей Туг УаБ Агд Азп Агд УаБ Агд СБи АБа 11е Агд УаБ Зег Ьуз 11е 245 250 255 Рго Азр АБа Ьуз Зег Рго Ьей Рго УаБ РЬе АБа Туг ТЬг Агд 11е УаБ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СБп УаБ Ьей Ьуз РЬе Ьей Зег СБп Азр СБи Ьей УаБ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СБу СБи ТЬг УаБ АБа Ьей СБу АБа Зег СБу 11е УаБ Пе Тгр 290 295 300 СБу ТЬг Ьей Зег 11е МеБ Агд Зег МеБ Ьуз Зег Суз Ьей Ьей Ьей Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеБ СБи ТЬг 11е Ьей Азп Рго Туг 11е Ые Азп УаБ ТЬг Ьей 325 330 335
    - 206 022752
    АЬа АЬа Ьуз МеЕ 340 Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи 345 Суз СЬп СЬи СЬп С1у 350 УаЬ Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа 11е СЬп Ьеи СЬи Ьуз С1у СЬу Ьуз РНе ТНг УаЬ Агд С1у 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РНе Зег СЬи Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр А1а 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЕ СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые РНе Туг Азп 4 35 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТНг МеЕ РЬе Ые УаЬ Зег Ые Ьеи 450 455 460 РЬе 465
    <210> 101 <211> 463 <212> Белок <213> Ното ! заргепз <220> <223> Зрелый НиРН20 36-498 <400> 101 Ьеи Азп РНе Агд АЬа Рго Рго Уа1 Ые Рго Азп УаЬ Рго РНе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РНе Зег РНе Ые С1у Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТНг С1у СЬп С1у УаЬ ТНг Ые РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТНг СЬу УаЬ ТНг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр 11е 85 90 95 ТНг РНе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЕ АЬа УаЬ Ые АЗр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз РГО Ьуз АЗр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг С1и Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РНе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 61у Ьуз Азр РНе Ьеи Уа1 СЬи ТНг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬг Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тьр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТНг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТНг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд Уа1 Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз 11е 245 250 255
    207
    Рго Азр АЬа Ьуз 260 Зег Рго Ьеи Рго УаЬ 265 РНе А1а Туг ТНг Агд 270 Не Уа1 РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТНг РНе СЬу СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не Уа1 Не Тгр 290 295 300 С1у ТНг Ьеи Зег 11е МеД Агд Зег МеД Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеД СЬи ТНг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп Уа1 ТНг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеД Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РНе А1а Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу С1у Ьуз РНе ТНг Уа1 Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи С1п РНе Зег С1и Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр Уа1 Ьуз Азр 405 410 415 ТНг Азр АЬа Уа1 Азр Уа1 Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Не Азр А1а 420 425 430 РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеД СЬи ТНг СЬи СЬи Рго СЬп Не РНе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТНг Ьеи Зег АЬа ТНг МеД РНе Ые УаЬ Зег Не 450 455 460
    <210> 102 <211> 461 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> езНиРН20 36-496 <400> 102
    Ьеи 1 АЗП РНе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Не Рго 10 Азп УаЬ Рго РНе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп А1а Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи С1у Ьуз РНе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеД Зег Ьеи РНе Зег РНе Не СЬу Зег Рго Агд 11е Азп АЬа 35 40 45 ТНг С1у СЬп СЬу УаЬ ТНг 11е РНе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 61у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг 11е Азр Зег Не ТНг С1у УаЬ ТНг УаЬ АЗП СЬу СЬу Не Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз Не Зег Ьеи С1п Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТНг РНе Туг МеД Рго Уа1 Азр Азп Ьеи С1у МеД АЬа Уа1 11е Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи Уа1 СЬп СЬп СЬп Азп Уа1 СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг С1и Ьуз А1а Ьуз С1п С1и РНе С1и Ьуз А1а 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи Уа1 СЬи ТНг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190
    208
    НЬз Туг Ьуз 195 Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег 200 Суз РЬе Азп 205 УаЬ СЬи Ые Ьу® Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 235 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг 11е Ые Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеС Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Агр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеС СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые РЬе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТПг МеС РЬе Ые УаЬ 450 455 460
    <210> 103 <211> 459 <212> Белок <213> Ното : зархепз <220> <223> езНиРН20 : 36-494 <400> 103 Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Авп УаЬ Рго РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТПг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ АЗП СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТПг РЬе Туг МеС Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеС АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 ыо СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125
    209
    Туг Ьуз Азп Агд 130 Зег Ые СЬи 135 Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 140 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг 11е Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи 11е 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Тух УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд 11е УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег 11е МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Туг Ые ТЬе Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи АЗП Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа 11е СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Аэр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые РЬе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТЬг МеЬ РЬе
    450 455 <210> 104 <2Ы> 457 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> езНиРН20 36-492 <400> 104
    Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг 11е РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60
    210
    Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЪу УаЪ ТЬг УаЪ Азп СЪу 61у Не Рго 65 70 75 80 СЪп Ьуз 11е Зег Ьеи СЪп Азр НЪз Ьеи Азр Ьуз АЪа Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЫ РЬе Туг Мер Рго УаЪ Азр Азп Ьеи СЪу Мер АЪа УаЪ Не Азр Тгр 100 105 НО СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЪ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЪи Ьеи УаЪ СЪп СЪп СЪп Азп УаЪ СЪп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЪи АЪа ТЬг СЪи Ьуз АЪа Ьуз СЪп СЪи РЬе СЪи Ьуз АЪа 145 150 155 160 С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЪ СЪи ТЬг Не Ьуз Ьеи СЪу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп ΗΪ5 Ьеи Тгр СЪу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЪз 180 185 190 НЪЗ Туг Ьуз Ьуз Рго СЪу Туг Азп СЪу Зег Суз РЬе Азп УаЪ СЪи Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЪи Зег ТЬг АЪа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЪп СЪп Зег Рго УаЪ АЪа АЪа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЪ Агд Азп Агд УаЪ Агд СЪи АЪа Не Агд УаЪ Зег Ьуз 11е 245 250 255 Рго Азр АЪа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЪ РЬе АЪа Туг ТЬг Агд Не УаЪ 260 2 65 270 РЬе ТЬг Азр СЪп УаЪ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЪп Азр СЪи Ьеи УаЪ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЪу СЪи ТЬг УаЪ АЪа Ьеи СЪу АЪа Зег СЪу Не УаЪ Не Тгр 290 295 300 С1у ТЬг Ьеи Зег Не МеР Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Мер СЪи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп УаЪ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЪа А1а Ьуз Мер Суз Зег СЪп УаЪ Ьеи Суз СЪп СЪи СЪп СЪу УаЪ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЪз Ьеи АЗП Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЪа 11е СЪп Ьеи СЪи Ьуз С1у С1у Ьуз РЬе ТЬг УаЪ Агд С1у 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЪи Азр Ьеи СЪи СЪп РЬе Зег СЪи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЪи Ьуз АЪа Азр УаЪ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЪа УаЪ Азр УаЪ Суз Не АЪа Азр СЪу УаЪ Суз Не Азр АЪа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер СЪи ТЬг СЪи СЪи Рго СЪп Не РЬе Туг Азп 435 440 445 А1а Зег Рго Зег ТЫ Ьеи Зег АЪа ТЬг 450 455
    <210> 105 <2Η> 453 <212> Белок <213> Ното зарЪепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-488
    211 <4ОО> 105
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд А1а 5 Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ 10 Рго РПе Ьеи 15 Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег СЬи РПе Суз Ьеи С1у Ьуз РПе Азр С1и Рго 20 25 30 Ьеи Азр Меб Зег Ьеи РПе Зег РПе Ые С1у Зег Рго Агд Ые Азп А1а 35 40 45 ТПг С1у СЬп СЬу УаЬ ТПг Ые РПе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТПг СЬу УаЬ ТПг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз 11е Зег Ьеи СЬп Азр ΗΪ3 Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТЫ РЬе Туг Меб Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Меб АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 С1и СЬи Тгр Агд Рго ТПг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТПг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп С1и РПе СЬи Ьуз А1а 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 СЬи ТПг ХЬе Ьуз Ьеи С1у Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РПе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РПе АЗП УаЬ С1и Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег ТПг А1а Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТПг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа А1а ТПг 225 230 235 240 Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз 11е 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РПе АЬа Туг ТПг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РПе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 235 ТЬг РЬе С1у СЬи ТПг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е УаЬ 11е Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые Меб Агд Зег Меб Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Меб СЬи ТПг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТПг Ьеи 32 5 330 335 АЬа А1а Ьуз Меб Суз Зег СЬп Уа1 Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РПе ТПг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РПе Зег СЬи Ьуз РПе Туг Суз 385 390 395 4 00 Зег Суз Туг Зег ТПг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз А1а Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр А1а УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр С1у УаЬ Суз Ые Азр А1а 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Меб СЬи ТПг СЬи С1и Рго С1п Ые РПе Туг Азп 435 440 445 А1а Зег Рго Зег ТЬг 450
    212 <210> 106 <2Ы> 451 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> Зрелый НиРН20 36-486 <400> 106
    ьеи 1 Азп РНе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Ые Рго 10 Азп УаЬ Рго РНе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РНе Зег РНе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу С1п СЬу УаЬ ТНг Ые РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТНг СЬу УаЬ ТНг УаЬ Азп СЬу СЬу 11е Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи С1п Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТЬг РНе Туг МеС Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мер АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп С1п СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуз АЬа ьуз СЬп СЬи РНе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг 11е Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТНг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Эе г 11е Туг Ьеи Азп ТНг сьп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе АЬа Туг ТНг Агд Ые УаЬ 260 2 65 270 РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТНг РНе СЬу СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТНг Ьеи Зег Ые МеС Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Агп Туг МеС СЬи ТНг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТНг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеС Суз Зег С1п УаЬ Ьеи Суз С1п СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РНе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Агр Ьеи СЬи СЬп РНе Зег СЬи Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415
    - 213 022752
    ТЬг Азр А1а ν^ι 420 Аар Уа1 суа Не А1а 425 Азр СЪу Уа1 Суз Не 430 Азр А1а РЬе Ьеи Ъу£ Рго Рго Моь С1и ТЬг СЪи СЪи Его С1п Не РЬе Туг Азп 435 440 445
    А1а Зег Рго 450 <210> 107 <211> 509 <212> Белок <213> Ното заргепз <220>
    <223> Человеческая РН20 1-509 <400> 107
    МеЪ СЪу Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъуз НЪз Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЪ Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у ЧаЪ Зег СЪп Не УаЪ РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд АЪа Рго Рго УаЪ Пе Рго Азп УаЪ Рго 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр АЪа Тгр Азп АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ъеи СЪу Ъуз РЬе 50 55 60 Азр СЪи Рго Ъеи Азр МеЕ Зег Ъеи РЬе Зег РЬе 11е СЪу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЪа ТЬг СЪу СЪп СЪу УаЪ ТЬг Не РЬе Туг Ча! Азр Агд Ъеи 85 90 95 СЪу Туг Туг Рго Туг 11е Азр Зег Не ТЬг СЪу УаЪ ТЬг Ча! Азп СЪу 100 105 но СЪу 11е Рго С1п Ъуз Не Зег Ъеи СЪп Азр Низ Ъеи Азр Ъуз АЪа Ъуз 115 120 125 Ъуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЪ Рго ЧаЪ Азр Азп Ъеи СЪу МеЪ АЪа УаЪ 130 135· 140 Не Азр Тгр С1и СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ъуз Азр УаЪ Туг Ъуз Азп Агд Зег 11е СЪи Ъеи ЧаЪ СЪп С1п СЪп Азп 165 170 175 ЧаЪ С1п Ъеи Зег Ъеи ТЬг С1и АЪа ТЬг СЪи Ъуз АЪа Ъуз СЪп СЪи РЬе 180 185 190 СЪи Ъуз АЪа СЪу Ъуз Азр РЬе Ъеи УаЪ СЪи ТЬг Не Ъуз Ъеи СЪу Ъуз 195 200 205 Ъеи Ъеи Агд РГО АЗП ΗΪ3 ъеи Тгр СЪу Туг Туг Ъеи РЬе РГО Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Ηί3 НЪз Туг Ъуз Ъуз Рго СЪу Туг Азп СЪу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Ча1 СЪи Не Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп СЪи Зег 245 250 255 ТЬг АЪа Ъеи Туг Рго Зег 11е Туг Ъеи Азп ТЬг СЪп СЪп Зег Рго ЧаЪ 260 2 65 270 АЪа АЪа ТЬг Ъеи Туг Ча1 Агд Азп Ахд УаЪ Агд СЪи АЪа Не Агд УаЪ 275 280 285 Зег Ъуз Не Рго Азр АЪа Ъуз Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе АЪа Туг ТЬг 290 295 300 Агд 11е Ча1 РЬе ТЬг Азр СЪп УаЪ Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег СЪп Азр СЪи 305 310 315 320 Ъеи Уа1 Туг ТЬг РЬе СЪу СЪи ТЬг УаЪ АЪа Ъеи СЪу АЪа Зег СЪу Не 325 330 335 Уа1 Не Тгр СЪу ТЬг Ъеи Зег Не МеЪ Агд Зег МеЪ Ъуз Зег Суз Ъеи 340 345 350
    214
    Ьеи Ьеи Азр 355 Азп Туг МеР б1и ТЬг 360 Не Ьеи Азп Рго Туг 365 Не Не Азп Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеР Суз Зег 61п Уа1 Ьеи Суз 61п 61и 61п 370 375 380 61у Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи ΗΪ5 Ьеи 385 390 395 400 АЗП Рго Азр Азп РЬе А1а Не С1п Ьеи С1и Ьуз 61 у 61 у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТЬг Ьеи 61и Азр Ьеи 61и 61п РЬе Зег 61и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз 61и Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр 61 у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер С1и ТЬг 61и 61и Рго 61п Не 465 470 475 480 РЬе Туг АЗП А1а Зег Рго Бег ТЬг Ьеи Зег А1а ТЬг Мер РЬе Не Уа1 485 490 495 Зег Не Ьеи РЬе Ьеи Не Не Зег Зег Уа1 А1а Зег Ьеи 500 505
    <210> 108 <211> 474 <212> Белок <213> Ното зарЪепз <220>
    <223> Зрелая человеческая ΡΗ20 36-509 <400> 108
    Ъеи 1 Азп РЬе Агд А1а 5 Рго Рго Уа1 Не Рго 10 Азп Уа1 Рго РЬе Ъеи 15 Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 61и РЬе Суз Ъеи 61у Ъуз РЬе Азр 61 и Рго 20 25 30 Ъеи Азр МеР Бег Ъеи РЬе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд Не Азп А1а 35 40 45 ТЬг 61у 61п 61у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ъеи 61у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЫ С1у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61у С1у Не Рго 65 70 75 80 61п Ъуз Не Зег Ъеи 61п Азр Шз Ъеи Азр Ъуз А1а Ъуз Ъуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ъеи 61 у Мер А1а Уа1 Не Азр Тгр 100 105 110 61и 61и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго Ъуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ъуз Азп Агд Зег Не 61и Ъеи Уа1 61 п 61п 61п Азп Уа1 61п Ъеи 130 135 140 Зег Ъеи ТЬг С1и А1а ТЬг 61и Ъуз А1а Ъуз 61п 61и РЬе 61и Ьуз А1а 145 150 155 160 С1у Ъуз Азр РЬе Ъеи Уа1 61и ТЬг Не Ъуз Ъеи 61у Ъуз Ъеи Ъеи Агд 165 170 175 Рго Азп ΗΪ3 Ъеи Тгр 61у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп Шз 180 185 190 Н1з Туг Ъуз Ъуз Рго 61у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп Уа1 61и Не 195 200 205 Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп 61и Зег ТЬг А1а Ъеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТНг 61п 61 п Зег Рго Уа1 А1а А1а ТЫ 225 230 235 240
    215
    Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд 245 УаЬ Агд СЬи АЬа 250 Не Агд УаЬ Зег Ьуз 255 Не Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд Не УаЬ 260 2 65 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не УаЬ Не Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Не МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп УаЬ ТЬх Ьеи 325 330 335 А1а АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Агп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа 11е СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг зег ТЬг Ьеи зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЫ Азр А1а УаЬ Азр УаЬ Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Не Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЫ СЬи СЬи Рго СЬп Не РЬе Туг Азп 435 440 445 АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТЬг МеЬ РЬе Не УаЬ Зег Ые Ьеи 4 50 455 460 РЬе Ьеи Ые Не Зег Зег УаЬ АЬа Зег Ьеи
    465 470 <210> 109 <2Ы> 482 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> предшественник гНиРН20 1-482 <400> 109
    МеЬ СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Не РЬе РЬе Агд Зех РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу Уа1 Зег СЬп Не УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Ахд АЬа Рго Рго УаЬ Не Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РНе Зег РЬе Не СЬу Зех Рго Агд 65 70 75 80 Ые Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 но СЬу Не Рго С1п Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РНе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ 130 135 140 Не Азр Тгр С1и СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Ахд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160
    216
    Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз 165 Азп Агд Зег Не 61и 170 Ьей Уа1 С1п С1п С1п 175 АЗп Уа1 С1п Ьей Зег Ьей ТЬг 61и А1а ТЬг С1и Ьуз А1а Ьуз С1п С1и РЬе 180 185 190 С1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РЬе Ьей Уа1 С1и ТЬг Не Ьуз Ьей С1у Ьуз 195 200 205 Ьей Ьей Агд Рго Азп Нгз Ьей Тгр С1у Туг Туг Ьей РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп ΗΪ3 ΗΪΞ Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и Пе Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьей Зег Тгр Ьеп Тгр Азп С1и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьей Туг Рго Зег Пе Туг Ьей Азп ТЬг С1п С1п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьей Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а Не Агд νβΐ 275 280 235 Зег Ьуз Пе Рго Азр А1а ьуз Зег Рго Ьей Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Пе Уа1 РЬе ТЬг Азр С1п Уа1 Ьеп Ьуз РЬе Ьей Зег С1п Азр С1и 305 310 315 320 Ьей νδΐ Туг ТЬг РЬе С1у С1и ТНг Уа1 А1а Ьей С1у А1а Зег С1у Не 325 330 335 Уа1 Пе Тгр С1у ТЬг Ьей Зег Не МеЬ Агд Зег мее Ьуз Зег Суз Ьей 340 345 350 Ьей Ьей Азр Азп Туг МеЪ С1и ТНг 11е Ьеч Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьей А1а А1а Ьуз Мер Суз Зег С1п Уа1 Ьей Суз С1п С1и С1п 370 375 380 С1у Уа1 Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьей Н1з Ьей 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а Не С1п Ьей О1ч Ьуз С1у С1у Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 ν^ι Агд С1у Ьуз Рго ТЬг Ьей С1и Азр Ьеч С1и С1п РЬе Зег С1и Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТНг Ьей Зег Суз Ьуз О1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 ναΐ Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр С1у Уа1 Суз 450 455 460 Не Азр А1а РЬе Ьетд Ьуз Рго РГО ме! О1и ТЬг С1и С1и Рго С1п Не 465 470 475 480 РЬе Туг
    <210> НО <211> 1446 <212> ДНК <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> ДНК, кодирующая предшественник растворимого гНиЕН20 <400> НО аСдддадСдс
    Ссссадасад ссЧссЬдНа сНддаааа!
    аСааасдсса
    СасаСадаСС саадассаСс ддааНддсСд сааааСссаа
    СЁССсассСС
    ННссаааНдН ндаСдадсс ссдддсаадд сааСсасадд
    Сддасааадс
    ННаСНдасНд дсасаСсССС ссНСсСдаСС дссСССссСс асСадаСаСд
    НдНасааСа адСаасСдСд
    Саадааадас ддаадааСдд
    ССсадаадсС ссаСдССдсС
    СдддссСдда адссСсССс!
    СССЬаСдСЬд ааСддаддаа аСЪасаСССС адасссасСС
    ССдССааасс
    СдасссСдаа аСдссссаад сСССсаСадд аСадасЫдд
    Ссссссадаа аСаСдссадС дддсаадааа аадСддадСа ссссададса
    НдааЫНд!
    аадсссссда сЬасСаСсс!
    даСССссССа адасааСССд сНддааассН
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    - 217 022752 ааадаНдЬЬЬ асаадааНад дНсЬаЬНдаа гГддИсадс аасааааЬдГ асаасггадг 540 сГсасададд ссасСдадаа адсаааасаа дааИГдааа аддсадддаа ддаГГСссЬд 600 дгададасЬа Гааааггддд ааааЬЬасН сддссаааЬс асГСдЪдддд ЬЬаГГаЬсГ!: 660
    НЬссддаЬЬ дЪГасаасса ЬсасНаНаад ааасссддГГ. асааРддаад РРдсРРсааР 720 дРадаааРаа ааадаааРда РдаРсрсадс РддРРдРдда аРдааадсас Ьдсгстас 780 ссаЪссаРРР аРРРдаасас ЬсадсадЪсР сеРдРадеРд сЪасасЬсРа ЬдГдсдсааЬ 840 сдадРРсддд аадссаРсад адРРРссааа аРассРдаРд сааааадРсс асРРссддРР 900
    РРРдсаРаРа сссдсаРадР ИГГасГдаЪ саадРРРРда ааРРссРРРс РсаадаРдаа 960 сРРдРдРаРа саНЬддсда аасРдЪЪдсР сРдддРдсРР сРддааРРдР ааРаРдддда 1020 асссРсадРа РааРдсдаад РаРдаааРсР РдсРРдсРсс РадасааРРа саРддадасР 1080 аРасРдааРс сРРасаРааР саасдРсаса сРадсадсса аааРдРдРад ссаадРдсРР 1140
    Рдсеаддадс ааддадрдрд РаРааддааа аасРддааРР саадРдасРа РсРРсассРс 1200 аасссадаРа аРРРРдсРаР рсаасррдад аааддрддаа адРРсасадР асдрддаааа 1260 ссдасасРРд аадассРдда дсааРРРРсР даааааРРРР аРРдсадсРд РРаРадсасс 1320 ррдадррдра аддадааадс рдаРдраааа дасасрдард срдррдардр дрдраррдср 1380 даРддРдРсР дРаРадаРдс РРРРсРаааа ссРсссаРдд адасадаада ассРсаааРР 1440
    РРсРас 1446 <210> 111 <211> 553 <212> Белок <213> Воз Раигиз <220>
    <223> РН20 быка <400> 111
    МеР Агд МеР Ьеи Агд Агд Нгз Нгз Не Зег РНе Агд Зег РНе АЬа СЬу 1 5 10 15 Зег Зег СЬу ТЬг Рго СЬп А1а УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ьеи Рго Суг 20 25 30 Суз Ьеи АЬа Ьеи Азр РЬе Агд А1а Рго Рго Ьеи 11е Зег Азп ТЬг Зег 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп А1а Рго УаЬ С1и Агд Суз Уа1 Азп Агд Агд 50 55 60 РЬе СЬп Ьеи Рго Рго Азр Ьеи Агд Ьеи РЬе Зег УаЬ Ьуз СЬу Зег Рго 65 70 75 30 С1п Ьуз Зег АЬа ТЬг СЬу СЬп РНе Пе ТЬг Ьеи РНе Туг А1а Азр Агд 35 90 95 Ьеи С1у Туг Туг Рго Нгз 11е Азр С1и Ьуз ТЬг СЬу Ьуз ТНг Уа1 РНе 100 105 110 С1у СЬу 11е Рго СЬп Ьеи С1у Азп Ьеи Ьуз Зег Н±5 МеЪ С1и Ьуз АЬа 115 120 125 Ьуз Азп Азр Не АЬа Туг Туг Не Рго Азп Азр Зег Уа1 С1у Ьеи А1а 130 135 140 ν&1 Не Азр Тгр С1и Азп Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз 145 150 155 160 Рго Ьуз Азр УаЬ Туг Агд Азр СЬи Зег УаЬ СЬи Ьеи νβΐ Ьеи СЬп Ьуз 165 170 175 Азп Рго СЬп Ьеи Зег РЬе Рго СЬи А1а Зег Ьуз Пе АЬа Ьуз Уа1 Азр 180 185 190 РЬе С1и ТЬг АЬа С1у Ьуз Зег РНе МеЬ СЬп СЬи ТЬг Ьеи Ьуз Ьеи СЬу 195 200 205 Ьуэ Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Нгз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр 210 215 220 Суз Туг Азп НГ5 Азп Н1з Азп СЬп Рго ТЬг Туг Азп СЬу Азп Су5 Рго 225 230 235 240 А5р УаЬ С1и Ьуз Агд Агд Азп Азр Азр Ьеи СЬи тгр Ьеи Тгр Ьуз СЬи 245 250 255 Зег ТЬг АЬа Ьеи РЬе Рго Зег УаЬ Туг Ьеи А5П Не Агд Ьеи Ьуз Зег 260 265 270
    - 218 022752
    ТЬг СБп Азп АБа АБа Ъеи Туг Уа1 Агд Азп Агд 230 УаБ СБп 285 СБи АБа ББе 275 Агд Ьей Зег Ьуз 11е АБа Зег УаБ СБи Бег Рго Ьей Рго УаБ РЬе УаБ 290 295 300 Туг АБа Агд Рго УаБ РЬе ТЬг Азр СБу Зег Зег ТЬг Туг Ьей Зег СБп 305 310 315 320 СБу Азр Ьей УаБ Азп Зег УаБ СБу СБи Не УаБ Зег Ьей СБу АБа зег 325 330 335 СБу Не Не МеБ Тгр СБу Зег Ьей Азп Ьей Зег Ьей Зег МеБ СБп Зег 340 345 350 Суз МеБ Азп Ьей СБу ТНг Туг Ьей Азп ТЬг ТНг Ьей Азп Рго Туг ХБе 355 360 365 Б1е Азп УаБ ТЬг Ьей АБа АБа Ьуз МеБ Суз Зег СБп УаБ Ьей Суз НБз 370 375 380 Азп СБи СБу УаБ Суз ТЬг Агд Ьуз НБз Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьей 385 390 395 400 НБз Ьей Азп Рго МеБ Азп РЬе АБа Не СБп ТНг СБу СБи СБу СБу Ьуз 405 410 415 Туг ТЬг УаБ Рго СБу ТЬг УаБ ТЬг Ьей СБи Азр Ьей СБп Ьуз РЬе Зег 420 425 430 Азр ТЬг РЬе Туг Суз Зег Суз Туг АБа Азп ББе НБз Суз Ьуз ьуз Агд 435 440 445 УаБ Азр Не Ьуз Азп УаБ НБз Зег УаБ Азп УаБ Суз МеБ АБа СБи Азр 450 455 460 Не Суз ББе Азр Зег Рго УаБ Ьуз Ьей СБп Рго Зег Азр НБз Зег Зег 465 470 475 480 Зег СБп СБи АБа Зег ТЬг ТЬг ТЬг РЬе Зег Зег ББе Зег Рго Зег ТЬг 485 490 495 ТЫ ТЬг АБа ТЬг УаБ Зег Рго Суз ТЬг Рго СБи Ьуз НБз Зег Рго СБи 500 505 510 Суз Ьей Ьуз УаБ Агд Суз Зег СБи УаБ ББе Рго Агп УаБ ТЬг СБп Ьуз 515 520 525 АБа Суз СБп Зег УаБ Ьуз Ьей Ьуз Азп ББе Зег Туг СБп Зег Рго ББе 530 535 540 СБп Азп Не Ьуг Агп СБп ТЬг ТЬг Туг 545 550
    <210> 112 <212> 545 <212> Белок <213> ОгусБоБадиз сипБсиБиз <220> <223> РН20 кролика <400> 112 МеБ СБу УаБ Ьей Ьуз РЬе Ьуз НБз ББе РЬе РЬе СБу Бег АБа УаБ СБи 1 5 10 15 Ьей Зег СБу УаБ РЬе СБп Б Бе УаБ РЬе 11е РЬе Ьей Ьей Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьей ТЬг АБа Азп РЬе Агд АБа Рго Рго УаБ Не Рго Азп УаБ Рго 35 40 45 РЬе Ьей Тгр АБа Тгр Азп АБа Рго ТЬг СБи РЬе Суг Ьей СБу Ьуз Зег 50 55 60 СБу СБи Рго Ьей Азр МеБ Зег Ьей РЬе Зег Ьей РЬе СБу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Ьуз Азп Ьуг ТЬг СБу СБп СБу ББе ТЬг Не РЬе Туг УаБ Азр Агд Ьей 85 90 95 СБу Туг Туг Рго Туг Не Азр Рго НБз ТЬг СБу АБа Не УаБ НБз СБу
    100 105 110
    219
    Агд Не Рго 115 С1п Ьеи С1у Рго Ьеи 120 СЬп 01η ΗΪ5 Ьеи ТЬг 125 Ьуз Ьеи Агд 61п СЬи Не Ьеи Туг Туг МеГ Рго Ьуз Азр Азп УаЬ СЬу Ьеи АЛа УаЛ 130 135 140 Не Азр Тгр СЛи СЬи Тгр Ьеи Рго ТЬг Тхр Ьеи Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Не Туг Агд Не Ьуз Зег Не СЬи Ьеи УаЬ Ьуз Зег СЛп НЛз 165 170 175 Рго СЬп Туг Азп НЛз Зег Туг АЬа ТЬх СЬи Ьуз А1а Ьуз Агд Азр РЬе 180 185 190 СЛи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе МеГ СЬи СЬи ТЬг Ьеи Ьуз Ьеи 61 у Агд 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Агп НЛз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЛз НЛз Туг Азр Ьуз Рхо Азп Ьеи Туг Ьуз СЬу Зег Суз РЬе 225 230 235 240 Азр Не СЬи Ьуз Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тхр Ьуз СЛи 245 250 255 Зег ТЬг АЬа Ьеи РЬе Рго Зег УаЬ Туг Ьеи ТЬг Зег Ахд А1а Агд Зег 260 265 270 АЛа ТЫ АЬа Ьеи Зег Ьуз Ьеи Туг УаЬ УаЬ Агд Азп Агд Уа1 НЛз СЛи 275 280 285 А1а Не Агд УаЬ Зег Ьуз Не Рго Азр Азр Ьуз Зег Рго Ьеи Рхо Азп 290 295 300 РЬе УаЬ Туг ТЬг Агд Ьеи УаЬ РЬе ТНг Азр С1п 11е РЬе СЬп РЬе Ьеи 305 310 315 320 Зег НЛз Нхз Азр Ьеи УаЬ Туг ТЬх Не 61у СЬи Не УаЬ А1а Ьеи СЬу 325 330 335 АЛа Зег СЬу Не УаЛ УаЬ Тгр СЬу Зег СЬп Зег Ьеи АЬа Агд Зег МеГ 340 345 350 Ьуз Зег Суз Ьеи НЛз Ьеи Азр Азп Тух МеГ Ьуз ТЬг Не Ьеи Азп Рго 355 360 365 Туг Ьеи Не Азп УаЛ ТЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеГ Суз Азп СЬп УаЬ Ьеи 370 375 380 Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз ТЬх Ахд Ьуз Азп Тгр Азп Рго Азп Азр 365 390 395 400 Туг Ьеи НЛз Ьеи Азп Рго СЬу Азп РЬе АЬа Не СЬп Ьеи СЬу Зег Азп 405 410 415 С1у ТЬг Туг Ьуз УаЛ Азр СЬу Ьуз Рхо ТЬг Ьеи ТЬх Азр Ьеи СЛи СЬП 420 425 430 РЬе Зег Ьуз Азп РЬе СЬп Суз Зег Суз Туг ТЬх Азп Ьеи Азп Суз Ьуз 435 440 445 СЛи Агд ТЬг Азр МеГ Азп Азп УаЬ Ахд ТЬх УаЬ Азп УаЬ Суз АЛа УаЬ 450 455 4 60 СЬи Азп УаЬ Суз 11е Азр ТЫ Азп УаЬ СЬу Рго СЬп АЛа УаЬ ТЬх Туг 465 470 475 430 АЬа Рго Ьуз СЬи Ьуз Ьуз Азр Уа1 АЬа НЛз Не Ьеи Зег Азп ТЬг ТЬх 485 4 90 495 Зег Не Азп Зег Зег ТЬг ТЬг МеГ Зех Ьеи Рго РЬе Рго Агд Ьуз НЛз 500 505 510 УаЬ Зег СЬу Суз Ьеи Ьеи УаЬ Ьеи Суз МеГ Туг Зег СЛп Туг Ьеи Азп 515 520 525 Не Суз Туг Агд Ьеи УаЬ АЛа Не СЬу Не СЬп НЛз СЬу Туг Туг Ьеи 530 535 540
    Ьуз
    545 <210> 113 <211> 114 <212> Белок
    220 <213> Ονί.3 агЬез <220>
    <223> Овечий РН20 (частично) <400> 113
    Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд С1и А1а Ые Агд Ьеи Бег Ьуз Ые 1 5 10 15 АЬа Бег УаЬ СЬи Бег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе УаЬ Туг НЬз Агд Рго УаЬ 20 25 30 РНе ТНг Азр СЬу Зег Зег ТНг Туг Ьеи Бег СЬп СЬу Азр Ьеи УаЬ Азп 35 40 45 Зег УаЬ СЬу СЬи 11е УаЬ А1а Ьеи СЬу АЬа Бег СЬу Ые Ые МеЕ Тгр 50 55 60 ОЬу Бег Ьеи Азп Ьеи Бег Ьеи ТНг МеЕ СЬп Бег Суз МеЕ Азп Ьеи СЬу 65 70 75 80 Азп Туг Ьеи АЗП ТНг ТНг Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТНг Ьеи 85 90 95 А1а АЬа Ьуз МеЕ Суз Бег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 100 105 110 Ые Агд
    <210> 114 <211> 510 <212> Белок <213> Масаса ЕазсЬсиЬагЬз <220>
    <223> РН20 обезьяны циномолгус <400> 114
    МеЕ 1 СЬу УаЬ Ьеи Ьуз 5 РНе Ьуз НЬз Ые РНе 10 РНе Агд Бег РНе УаЬ 15 Ьуз Бег Бег СЬу УаЬ Бег СЬп 11е УаЬ РНе ТНг РНе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Азп РНе Агд АЬа Рго Рго 11е Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РНе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе 50 55 60 Азп СЬи Рго Ьеи Азр МеЕ Бег Ьеи РНе ТНг Ьеи МеЕ СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Ые Азп УаЬ ТНг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТНг 11е РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг Ые Азр Ьеи ТНг ТНг СЬу УаЬ ТНг УаЬ НЬз СЬу 100 105 110 СЬу Ые Рго СЬп Ьуз УаЬ Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз Бег Ьуз 115 120 125 СЬп Азр 11е Ьеи РНе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЕ АЬа УаЬ 130 135 140 Ые Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Бег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Бег Ьеи Рго СЬп АЬа ТНг Азр Ьуз АЬа Ьуз СЬп С1и РНе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РНе МеЕ Ьеи СЬи ТНг Ые Ьуз Ьеи СЬу Агд 195 200 205 Бег Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220
    221
    Туг Агп НЬз НЬз Туг Агд Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азр 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуэ Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Агп ТЬг СЬп СЬп Зег УаЬ УаЬ 260 2 65 270 УаЬ АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Азп Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе УаЬ Туг АЬа 290 295 300 Агд Ьеи УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег Агд СЬи СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Зег ТЬг Ьеи СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу Зег Ьеи Зег Ые ТЬг Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр ТЬг Туг МеС СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеС Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ суз Ые Агд Ьуз Азр Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе Азр Ые Агд Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЬ НЬз СЬу Ьуз Рго ТЬг УаЬ СЬи Азр Ьеи СЬи СЬи РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 4 30 РЬе Туе Суз Зег Суз Туг ТЬг Азп Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Ые Азр АЬа Зег Ьеи Ьуз Рго Рго УаЬ СЬи ТЬг СЬи СЬу Зег Рго Рго 465 470 475 480 Ые РЬе Туг Азп ТЬг Зег Зег Зег ТЬг УаЬ Зег ТЬе ТЬг МеС РЬе Ые 485 4 90 495 УаЬ Азп Ые Ьеи РЬе Ьеи Ые Ые Зег Зег УаЬ АЬа Зег Ьеи 500 505 510
    <210> 115 <211> 529 <212> Белок <213> рогсеНив <220> <223> РН20 морской свинки <400> 115 МеС СЬу АЬа РЬе ТЬг РЬе Ьуз НЬз Зег РЬе РЬе СЬу Зег РЬе УаЬ СЬи 1 5 10 15 Суз Зег СЬу УаЬ Ьеи СЬп ТЬг УаЬ РЬе Ые РЬе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи АЬа Азр Ьуз Агд АЬа Рго Рго Ьеи 11е Рго Аеп УаЬ Рго Ьеи 35 40 45 Ьеи Тгр УаЬ Тгр Азп АЬа Рго ТЬг СЬи РЬе Суз Ые СЬу СЬу ТЬг Азп 50 55 60 СЬп Рго Ьеи Азр МеС Зег РЬе РЬе Зег Ые УаЬ СЬу ТЬг Рго Агд Ьуз 65 70 75 80 Азп Ые ТЬг СЬу СЬп Зег Ые ТЬг Ьеи Туг Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу 85 90 95 Туг Туг Рго Туг Ые Азр Рго НЬз ТЬг СЬу АЬа Ые УаЬ НЬз СЬу СЬу
    100 105 110
    222
    Ьеи Рго СЬп 115 Ьеи МеЬ Азп Ьеи СЬп СЬп 120 Н1з Ьеи Агд Ьуз 125 Зег Агд СЬп Азр Ые Ьеи РЬе Туг МеЬ Рго ТЬг Азр Зег УаЬ СЬу Ьеи АЬа УаЬ Ые 130 135 140 Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр ТЬг Агд Азп Тгр Агд Рго Ьуз 145 150 155 160 Азр Ые Туг Агд Азп Ьуз Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ Ьу® Зег СЬп НЬз Рго 165 170 175 СЬп Туг Азп НЬз Зег Туг АЬа УаЬ АЬа УаЬ АЬа Ьуз Агд Азр РЬе СЬи 180 185 190 Агд ТЬг СЬу Ьуз АЬа РЬе МеЬ Ьеи СЬи ТЬг Ьеи Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Зег 195 200 205 Ьеи Агд Рго Зег Зег Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг 210 215 220 Азп ТЬг ΗΪ5 РЬе ТЬг Ьуз Рго Азп Туг Азр СЬу НЬз Суз Рго Рго Ые 225 230 235 240 СЬи Ьеи СЬп Агд Азп Азп Азр Ьеи СЬп Тгр Ьеи Тгр Азп Азр Зег ТЬг 245 250 255 А1а Ьеи Туг Рго Зег УаЬ Туг Ьеи ТЬг Зег Агд УаЬ Агд Зег Зег СЬп 260 265 270 Азп СЬу АЬа Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ НЬз СЬи Зег Ые Агд УаЬ 275 260 285 Зег Ьу5 Ьеи МеЬ Азр Азр Ьуз Азп Рго Ьеи Рго Ые Туг УаЬ Туг Ые 290 295 300 Агд Ьеи УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп ТЬг ТЬг ТЬг РЬе Ьеи СЬи Ьеи Азр Азр 305 310 315 320 Ьеи УаЬ НЬз Зег УаЬ СЬу СЬи Ые УаЬ Рго Ьеи СЬу УаЬ Зег СЬу Ые 325 330 335 Не Ые Тгр СЬу Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Агд Зег Ьеи УаЬ Зег Суз Ые 340 345 350 СЬу Ьеи СЬи Азп Туг МеЬ Ьуз СЬу ТЬг Ьеи Ъеи Рго Туг Ьеи 11е Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз СЬу СЬп УаЬ Ьеи Суз Ьуз Азп СЬп 370 375 380 СЬу Ые Суз ТЬг Агд Ьуз Азр Тгр Азп ТЬг Азп ТЬг Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп АЬа ТЬг Азп РЬе Азр Ые СЬи Ьеи СЬп СЬп Азп СЬу Ьуз РЬе УаЬ 405 410 415 УаЬ НЬз СЬу Ьуз РГО Зег Ьеи С1и Азр Ьеи СЬп СЬи РЬе Зег Ьуз Азп 420 425 430 РЬе НЬз Суэ Зег суз Туг ТЬг Азп УаЬ АЬа Суз Ьуз Азр Агд Ьеи Азр 435 440 445 УаЬ НЬз Азп УаЬ Агд Зег УаЬ АЗП УаЬ Суз ТЬг АЬа Азп Азп Ые Суз 450 455 460 Ые Азр АЬа УаЬ Ьеи Азп РЬе Рго Зег Ьеи Азр Азр Азр Азр СЬи Рго 465 470 475 480 Рго Ые ТЬг Азр Азр ТЬг Зег СЬп Азп СЬп Азр Зег Ые Зег Азр Ые 485 490 495 ТЬг Зег Зег АЬа Рго Рго Зег Зег НЬз Ые Ьеи Рго Ьуз Агр Ьеи Зег 500 505 510 Тгр Суз Ьеи РЬе Ьеи Ьеи Зег Ые РЬе Зег СЬп НЬз Тгр Ьуз Туг Ьеи 515 520 525 Ьеи
    <210> 116 <211> 512 <212> Белок <213> КаЬЬиз погуедЬсиз
    223 <220>
    <223> крысиный РН20 <400> 116
    Мер СЪу СЪи Ьеи СЪп РЬе Ьуз Тгр Ьеи РЬе Тгр Агд Зег РЬе АЪа СЪи 1 5 10 15 Зег С1у С1у ТЬг РЬе СЪп ТЬг УаЪ Ьеи Не РЬе Ьеи РЬе Не Рго Туг 20 25 30 Зег Ьеи ТЬг УаЪ Азр Туг Агд АЪа ТЬг Рго УаЪ Ьеи Зег Азр ТЬг ТЬг 35 40 45 РЬе УаЪ Тгр УаЪ тгр Азп УаЪ Рго ТЬг СЪи АЪа Суз УаЪ СЪи Азп УаЪ 50 55 60 ТЬг СЪи Рго Пе Азр Ьеи Зег РЬе РЬе Зег Ьеи Не СЪу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Ьуз ТЬг А1э Не С1у СЪп Рго УаЪ ТЬг Ьеи РЬе Туг УаЪ Азр Агд Ьеи 85 90 95 С1у Азп Туг Рго Шз Не Азр АЪа СЪп СЪп ТЬг СЪи НЪз НЪз С1у С1у 100 105 НО 11е Рго С1п Ьуз СЪу Азр Ьеи ТЬг ТЬг ΗΪ5 Ьеи УаЪ Ьуз АЪа Ьуз СЪи 115 120 125 Азр УаЪ С1и Агд Туг Не Рго ТЬг Азр Ьуз Ьеи СЪу Ьеи АЪа Не Не 130 135 140 Азр Тгр С1и СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр Мер Агд Азп Тгр ТЬг Рго Ьуз 145 150 155 160 Азр Пе Туг Агд Азп Ьуз Зег Не СЪи Ьеи УаЪ СЪп АЪа АЪа Азр Рго 165 170 175 А1а Пе Азп Пе ТЬг СЪи А1а ТЬг УаЪ Агд АЪа Ьуз АЪа СЪп РЬе СЪи 180 185 190 С1у А1а АЪа Ьуз СЪи РЬе Мер СЪи С1у ТЬг Ьеи Ьуз Ьеи С1у Ьуз НЪз 195 200 205 Не Агд Рго Ьуз НЪз Ьеи Тгр СЪу РЬе Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг 210 215 220 Азп АЗП Ьуз РЬе СЪп УаЪ Азр Азп Туг Азр СЪу СЪп Суз РГО АЗр УаЪ 225 230 235 240 СЪи Ьуз Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Азр Тгр Ьеи Тгр Ьуз СЪи Зег ТЬг 245 250 255 С1у Ьеи Туг Рго Зег УаЪ Туг Ьеи Ьуз Ьуз Азр Ьеи Ьуз Зег Зег Агд 260 265 270 Ьуз А1а ТЬг Ьеи Туг УаЪ Агд Туг Агд УаЪ Ьеи СЪи Зег Не Агд УаЪ 275 280 285 Зег Ьуз УаЪ Зег Азр СЪи Зег Азп Рго УаЪ Рго Не РЬе УаЪ Туг Не 290 295 300 Агд Ьеи УаЪ РЬе ТЫ Азр НЪз УаЪ Зег СЪи Туг Ьеи Ьеи СЪи Азр Азр 305 310 315 320 Ьеи УаЪ Азп ТЬг Не С1у СЪи Не УаЪ АЪа СЪп С1у ТЬг Зег С1у Не 325 330 335 Не Пе Тхр Азр АЪа Мер Зег Ьеи АЪа СЪп Агд Зег АЪа СЪу Суз Рго 340 345 350 Не Ьеи Агд СЪп Туг МеР Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Азп Рго Туг Не УаЪ Азп 355 360 365 УаЪ ТЬг Ьеи АЪа АЪа Ьуз Мер Суз Зег СЪп ТЬг Ьеи Суз Ьуз СЪи Ьуз 37 0 375 380 СЪу МеР Суз Зег Агд Ьуз ТЬг СЪи Зег Зег Азр АЪа Туг Ьеи НЪз Ьеи 385 390 395 400 Азр Рго Зег Зег РЬе Зег Не Азп УаЪ ТЫ СЪи АЪа С1у ьуз Туг СЪи 405 410 415 УаЪ Ьеи С1у Ьуз Рго СЪи УаЪ Ьуз Азр Ьеи СЪи Туг РЬе Зег СЪи НЪз 420 425 430 РЬе Ьуз Суз Зег Суз РЬе Зег Ьуз Мер ТЬг Суз СЪи СЪи ТЬг Зег Азр 435 440 445
    224
    МеД Агд Зег 11е СЬп Азр УаЬ 455 Азп УаЬ Су5 Ме+ СЬу Азр Азп УаЬ 460 Суз 450 Не Ьуз АЬа ТЫ Ьеи СЬу Рго Азп Зег АЬа РНе НЬз Ьеи Ьеи Рго С1у 465 470 475 480 Ьуз СЬу Ьеи Ьеи Ьеи МеД ТНг ТНг Ьеи АЬа НЬз 11е Ьеи НЬз НЬз Ьеи 485 490 495 Рго НЬз Азр Не РНе УаЬ РНе Рго Тгр Ьуз МеД Ьеи УаЬ Зег ТНГ Рго 500 505 510
    <210> 117 <211> 512 <212> Белок <213> Миз тизсиЬиз <220> <223> Мышиный РН20 <400> 117 МеД 61у С1и Ьеи Агд РНе Ьуз НЬз Ьеи РНе Тгр СЬу Зег РНе Уа1 С1и 1 5 10 15 Зег С1у С1у ТНг РНе СЬп ТНг УаЬ Ьеи Не РНе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Зег Ьеи ТНг УаЬ Азр Туг Агд АЬа АЬа Рго Не Ьеи Зег Азп ТНг ТНг 35 40 45 РНе Ьеи Тгр Ые Тгр Азп УаЬ Рго ТНг СЬи Агд Суз Уа1 СЬу Азп УаЬ 50 55 60 Азп Азр Рго 11е Азр Ьеи Зег РНе РНе Зег Ьеи Не С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Ьуз ТНг А1а ТНг СЬу СЬп Рго УаЬ ТНг Ьеи РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Ьеи Туг Рго НЬз Не Азр АЬа Азп СЬп АЬа СЬи НЬз Туг СЬу С1у 100 105 110 11е Рго СЬп Агд СЬу Азр Туг С1п АЬа НЬз Ьеи Агд Ьуз АЬа Ьуз ТНг 115 120 125 Азр Не СЬи НЬз Туг Ые Рго Азр Азр Ьуз Ьеи СЬу Ьеи АЬа Не 11е 130 135 140 Аэр Тгр С1и С1и Тгр Агд Рго ТНг Тгр Ьеи Агд Азп Тгр Ьуг Рго Ьуз 145 150 155 160 Азр Азп Туг Агд Азп Ьуз Зег Не СЬи Ьеи Уа1 С1п Зег ТНг Азп Рго 165 170 175 С1у Ьеи Зег Не ТНг СЬи АЬа ТНг С1п Ьуз АЬа Не СЬп СЬп РНе С1и 180 185 190 СЬи АЬа СЬу Агд Ьуз РНе МеД СЬи СЬу ТНг Ьеи НЬз Ьеи С1у Ьуз РНе 195 200 205 Ьеи Агд Рго Азп СЬп Ьеи Тгр СЬу Туп Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг 210 215 220 Азп Азп Ьуз РНе СЬп Азр Рго Ьуз Туг Азр С1у СЬп Суз Рго АЬа Уа1 225 230 235 240 С1и Ьуз Ьуз Агд Азп Азр Азп Ьеи Ьуз Тгр Ьеи Тгр Ьуз АЬа Зег ТНг 245 250 255 61у Ьеи Туг Рго Зег УаЬ Туг Ьеи Ьуз Ьуз Азр Ьеи Ьуз Зег Азп Агд 260 265 270 СЬп АЬа ТНг Ьеи Туг УаЬ Агд Туг Агд УаЬ УаЬ 61 и АЬа Ые Агд Уа1 275 230 285 Зег Ьуз УаЬ СЬу Азп АЬа Зег Азр Рго УаЬ Рго Не РНе УаЬ Туг Ые 290 295 300 Агд Ьеи УаЬ РНе ТНг Азр Агд ТНг Зег СЬи Туг Ьеи Ьеи СЬи Азр Азр 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Азп ТНг Не СЬу С1и Не УаЬ АЬа Ьеи С1у ТНг Зег СЬу Не 325 330 335
    225
    11е 11е Тгр Азр 340 АЬа МеЬ Зег Ьеи АЬа 345 СЬп Агд АЬа АЬа СЬу 350 Суз Рго 11е Ьеи НЬз Ьуз Туг МеЬ СЬп ТЬг ТЬг Ьеи Азп Рго Туг 11е УаЬ Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп ТЬг Ьеи Суз Азп СЬи Ьуз 370 375 380 СЬу МеЬ Суз Зег Агд Агд Ьуз СЬи Зег Зег Азр УаЬ Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Зег НЬз РЬе Азр Ые МеЬ Ьеи ТЬг СЬи ТЬг СЬу Ьуз Туг СЬи 405 410 415 УаЬ Ьеи СЬу Азп Рго Агд УаЬ СЬу Азр Ьеи СЬи Туг РЬе Зег СЬи НЬз 420 425 430 РЬе Ьуз Суз Зег Суз РЬе Эе г Агд МеЬ ТЬг Суз Ьуз СЬи ТЬг Зег Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азп УаЬ СЬп Азр УаЬ Азп УаЬ Сун УаЬ СЬу Азр Азп УаЬ Суз 450 455 460 11е Ьуз АЬа Ьуз УаЬ СЬи Рго Азп Рго АЬа РЬе Туг Ьеи Ьеи Рго СЬу 465 470 475 430 Ьуз Зег Ьеи Ьеи РЬе МеЬ ТЬг ТЬг Ьеи СЬу НЬз УаЬ Ьеи Туг НЬз Ьеи 485 490 495 Рго СЬп Азр Ые РЬе УаЬ РЬе Рго Агд Ьуз ТЬг Ьеи УаЬ Зег ТЬг Рго 500 505 510
    <210> 113 <211> 520 <212> Белок <213> ОуЬз ; эг+ез <220> <223> Овечий РН20 <400> 118 Ьеи Азр РЬе Рго АЬа Рго Рго Ьеи 11е Зег АЗП ТЬг Зег РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго АЬа СЬи Агд Суз УаЬ Ьуз Ые РЬе Ьуз Ьеи Рго 20 25 30 Рго Азр Ьеи Агд Ьеи РЬе Зег УаЬ Ьуз СЬу Зег Рго СЬп Ьуз Зег АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп РНе 11е ТЬг Ьеи РЬе Туг АЬа Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго НЬз I Ье Азр СЬи Ьуз ТЬг СЬу Азп ТЬг УаЬ Туг СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьеи СЬу Азп Ьеи Ьуз Азп НЬз Ьеи СЬи Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр 11е 85 90 95 АЬа Туг Туг 11е Рго Азп Азр Эег УаЬ СЬу Ьеи АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи Азп Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Агд Азр СЬи Зег УаЬ СЬи Ьеи УаЬ Ьеи СЬп Ьуз Азп Рго СЬп Ьеи 130 135 140 Зег РЬе Рго СЬи АЬа Зег Ьуз 11е АЬа Ьуз УаЬ Азр РЬе СЬи ТЫ АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Зег РЬе Мер СЬп СЬи ТЬг Ьеи Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 Азп Туг Азп СЬп Рго ТЬг Туг Азп СЬу Азп Суз Зег Азр Ьеи СЬи Ьуз 195 200 205 Агд Агд АЗП Азр Азр Ьеи Азр Тгр Ьеи Тгр Ьуз СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220
    226
    РЬе Рго Зег УаЬ Туг Ьеи Азп Ые Ьуз Ьеи Ьуз Зег ТПг Рго Ьуз АЬа 225 230 235 240 АЬа РПе Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ СЬп СЬи АЬа Ые Агд Ьеи Зег Ьуз 245 250 255 Ые АЬа Зег УаЬ СЬи Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РПе УаЬ Туг НЬз Агд Рго 260 265 270 УаЬ РПе ТПг Азр СЬу Зег Зег ТЬг Туг Ьеи Зег СЬп СЬу Азр Ьеи УаЬ 275 280 285 АЗП Зег УаЬ СЬу СЬи 1Ье УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 11е меб 290 295 300 Тгр СЬу Зег Ьеи Азп Ьеи Зег Ьеи ТПг Меб СЬп Зег Суз Меб Азп Ьеи 305 310 315 320 СЬу Азп Туг Азп ТПг ТПг Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТПг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз Меб Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз НЬз Азр СЬи СЬу УаЬ Суз 340 345 350 ТПг Агд Ьуз СЬп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Ые 355 360 365 Меб Азп РПе АЬа Ые СЬп ТПг СЬу Ьуз СЬу СЬу Ьуз Туг ТЬг Уа1 Рго 370 375 380 СЬу Ьуз УаЬ ТПг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬп ТПг РПе Зег Азр Ьуз РЬе Туг 385 390 395 400 Суз Зег Суз Туг АЬа Азп 1Ье Азп Суз Ьуз Ьуз Агд УаЬ Азр Ые Ьуз 405 410 415 Азп УаЬ НЬз Зег УаЬ Азп УаЬ Суз Меб АЬа СЬи Азр Ые Суз Ые СЬи 420 425 4 30 СЬу Рго УаЬ Ьуз Ьеи СЬп Рго Зег Азр НЬз Зег Зег Зег СЬп Азп СЬи 435 440 445 АЬа Зег ТПг ТЬг ТПг УаЬ Зег Зег Ые Зег Рго Зег ТПг ТПг А1а ТПг 450 455 460 ТЬг УаЬ УаЬ Зег Рго Суз ТПг Рго СЬи Ьуз СЬп Зег Рго СЬи Суз Ьеи 4 65 470 475 480 Ьуз УаЬ Агд Суз Ьеи СЬи АЬа 11е АЬа Азп УаЬ ТПг СЬп ТПг С1у Суз 485 490 495 СЬп СЬу УаЬ Ьуз Тгр Ьуз Азп ТПг Зег Зег СЬп Зег СЬп Зег Зег Ые 500 505 510 СЬп Азп 11е Ьуз Азп СЬп ТПг ТПг
    515 520 <210> 119 <2Ы> 474 <212> Белок <213> Воз баигиз <220>
    <223> РН20 коровы <400> 119
    Меб СЬу Меб РПе Агд Агд НЬз НЬз Ые Зег РЬе Агд Зег РПе АЬа СЬу 1 5 10 15 Зег Зег СЬу ТПг Рго СЬп АЬа УаЬ РЬе ТПг РЬе Ьеи Ьеи Ьеи Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи АЬа Ьеи АЗр РПе Агд АЬа Рго Рго Ьеи 11е Зег Азп ТПг Зег 35 40 45 РПе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго УаЬ СЬи Агд Суз УаЬ Азп Агд Агд 50 55 60 РПе СЬп Ьеи Рго Рго Азр Ьеи Агд Ьеи РПе Зег УаЬ Ьуз СЬу Зег Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Зег АЬа ТПг СЬу СЬп РПе 11е ТПг Ьеи РПе Туг АЬа Азр Агд 85 90 95
    227
    Ьеи СЬу Туг Туг Рго НЬз Ые Азр СЬи 105 Ьуз ТНг СЬу Ьуз ТНг ыо УаЬ РНе 100 СЬу СЬу 11е Рго СЬп Ьеи СЬу Азп Ьеи Ьуз Зег НЬз Ьеи СЬи Ьуз АЬа 115 120 125 Ьуз Азп Азр 11е АЬа Туг Туг Ые Рго Азп Азр Зег УаЬ СЬу Ьеи АЬа 130 135 140 УаЬ Ые Азр Тгр СЬи Азп Тгр Агд Рго ТНг. Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз 145 150 155 160 Рго Ьуз Азр УаЬ Туг Агд Азр СЬи Зег УаЬ СЬи Ьеи УаЬ Ьеи С1п Ьуз 165 170 175 Азп Рго СЬп Ьеи Зег РНе Рго СЬи АЬа Зег Ьуз Ые АЬа Ьуз УаЬ Азр 180 185 190 РНе СЬи ТНг АЬа СЬу Ьуз Зег РНе Мер СЬп СЬи ТНг Ьеи Ьуз Ьеи СЬу 195 200 205 Ьуз Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр 210 215 220 Суз Туг Азп НЬз Азп Нхз Азп СЬп Рго ТНг Туг Азп СЬу Азп Суз Рго 225 230 235 240 Азр УаЬ СЬи Ьуз Агд Агд Азп Азр Азр Ьеи СЬи Тгр Ьеи Тгр Ьуз СЬи 245 250 255 Зег ТНг АЬа Ьеи РНе Рго Зег УаЬ Туг Ьеи Азп Ые Агд Ьеи Ьуз Зег 260 265 270 ТНг С1п Азп АЬа АЬа Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ С1п СЬи АЬа 11е 275 280 285 Агд Ьеи Зег Ьуз Ые АЬа Зег УаЬ СЬи Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе УаЬ 290 295 300 Туг АЬа Агд Рго УаЬ РНе ТНг Азр СЬу Зег Зег ТНг Туг Ьеи Зег СЬп 305 310 315 320 СЬу Азр Ьеи УаЬ Азп Зег Уа1 СЬу СЬи 11е УаЬ Зег Ьеи СЬу АЬа Зег 325 330 335 СЬу Ые 11е МеЬ Тгр СЬу Зег Ьеи Азп Ьеи Зег Ьеи Зег УаЬ СЬп Зег 340 345 350 Суз МеЬ Азп Ьеи СЬу ТНг Туг Ьеи Азп ТНг ТНг Ьеи Азп Рго Туг 11е 355 360 365 Ые Азп УаЬ ТНг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеО Суз Зег С1п УаЬ Ьеи Суз Низ 370 375 380 Азр СЬу СЬу УаЬ Суз ТНг Агд Ьу5 НЬз Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи 38 5 390 395 400 ΗΪ3 ьеи Азп Рго МеН Азп РНе АЬа 11е С1п ТНг СЬу СЬи СЬу СЬу Ьуз 405 410 415 Туг ТНг УаЬ Рго СЬу ТНг Ьеи ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи 61п Ьуз РНе Зег 420 425 430 Азр ТНг РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег Азп Ьеи Зег Суз Ьуз Ьуз Агд 435 440 445 УаЬ Азр Ые Ьуз Азп УаЬ НЬз Зег УаЬ Азр УаЬ Суз Мер АЬа СЬи Азр 450 455 460 УаЬ Суз 11е Азр АЬа РНе Ьеи Ьуз Рго Рго 4 65 470
    <210> 120 <2Ы> 517 <212> Белок <213> ΟνΪΕ асЬез <220>
    <223> Овечий РН20 (НаЬогуте) <400 120
    Азр РНе Агд АЬа Рго Рго Ьеи 11е 8ег Азп ТНг Зег РНе Ьеи Тгр АЬа 15 10 15
    - 228
    Тгр Азп АЪа Рго 20 АЪа СЪи Агд Суз Не 25 Ъуз Не РЬе Ъуз Ъеи 30 Рго Рго Азр Ъеи Агд Ъеи РЬе Зег Уа1 Ъуз С1у Зег Рго СЪп Ъуз Зег АЪа ТЬг 35 40 45 СЪу СЪп РЬе Не ТЫ Ъеи РЬе Туг А1а Азр Агд Ъеи СЪу Туг Туг Рго 50 55 60 НЪз Не Азр СЪи Ъуз ТЬг СЪу Азп ТЬг Уа1 Туг СЪу СЪу Не Рго СЪп 65 70 75 30 Ъеи СЪу Азп Ъеи Ъуз Азп Ηί3 Ъеи СЪи Ъуз А1а Ъуз Ъуз Азр Не АЪа 85 90 95 Туг Туг Не Рго Азп Азр Зег Уа1 СЪу Ъеи АЪа Уа1 Не Азр Тгр СЪи 100 105 110 Азп Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго Ъуз Азр Уа1 Туг 115 120 125 Агд Азр С1и Зег Уа1 СЪи Ъеи Уа1 Ъеи СЪп Ъуз Азп Рго СЪп Ъеи Зег 130 135 140 РЬе Рго СЪи АЪа Зег Ъуз Не А1а Ъуз Уа1 Азр РЬе СЪи ТЬг АЪа С1у 145 150 155 160 Ъуз Зег РЬе Мер СЪп СЪи ТЬг Ъеи Ъуз Ъеи С1у Ъуз Ъеи Ъеи Агд Рго 165 170 175 Азп Н±з Ъеи Тгр СЪу Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЪз Азп 180 185 190 Туг Азп СЪп Рго ТЬг Туг Азп С1у Азп Суз Зег Азр Ъеи СЪи Ъуз Агд 195 200 205 Агд Азп Азр Азр Ъеи Азр Тгр Ъеи Тгр Ъуз СЪи Зег ТЬг АЪа Ъеи РЬе 210 215 220 Рго Зег Уа1 Туг Ъеи Азп Не Ъуз Ъеи Ъуз Зег ТЬг Рго Ъуз АЪа АЪа 225 230 235 240 РЬе Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 С1п СЪи АЪа Не Агд Ъеи Зег Ъуз Не 245 250 255 АЪа Зег Уа1 СЪи Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе Уа1 Туг НЪз Агд Рго Уа1 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЪу Зег Зег ТЬг Туг Ъеи Зег СЪп СЪу Азр Ъеи Уа1 Азп 275 280 285 Зег Уа1 СЪу СЪи Не Уа1 А1а Ъеи СЪу АЪа Зег СЪу Не Не МеЬ Тгр 290 295 300 СЪу Зег Ъеи Азп Ъеи Зег Ъеи ТЬг МеЪ С1п Зег Суз МеЬ Азп Ъеи СЪу 305 310 315 320 Азп Туг Ъеи Азп ТЬг ТЬг Ъеи Азп Рго Туг Не Не Азп Уа1 ТЬг Ъеи 325 330 335 АЪа АЪа Ъуз МеЪ Суз Зег СЪп Уа1 Ъеи Суз НЪз Азр СЪи С1у УаЪ Суз 340 345 350 ТЬг Агд Ъуз С1п Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи НЪз Ъеи Азп Рго МеЬ 355 360 365 Азп РЬе АЪа Не С1п ТЬг СЪу Ъуз СЪу СЪу Ъуз Туг ТЬг Уа1 Рго СЪу 370 375 380 Ъуз Уа1 ТЬг Ъеи С1и Азр Ъеи С1п ТЬг РЬе Зег Азр Ъуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг АЪа Азп Не Азп Суз Ъуз Ъуз Агд Уа1 Азр Не Ъуз Азп 405 410 415 Уа1 НЪз Зег Уа1 Азп Уа1 Суз МеЪ А1а СЪи Азр Не Суз Не СЪи СЪу 420 425 430 Рго Уа1 Ъуз Ъеи С1п РГО Зег Азр НЪз Зег Зег Зег С1п Азп С1и А1а 435 440 445 Зег ТЬг ТЬг ТЬг Уа1 Зег Зег Не Зег Рго Зег ТЬг ТЬг А1а ТЬг ТЬг 450 455 460 Уа1 Зег Рго Суз ТЬг Рго С1и Ъуз СЪп Зег Рго СЪи Суз Ъеи Ъуз Уа1 465 470 475 430 Агд Суз Ъеи СЪи АЪа Не А1а Азп Уа1 ТЫ СЪп ТЬг 61У Суз С1п С1у 485 490 495
    - 229 022752
    УаБ Ьуз Тгр Ьуз Азп ТНг Зег Зег СБп Зег Зег 11е СБп Азп 11е Ьуз 500 505 510
    Азп СБп ТНг ТЬг Туг 515 <210> 121 <211> 1620 <212> ДНК <213> Ονΐ3 агБез <220>
    <223> ДНК, кодирующая овечий РН20, приведенный в 5Е<2 Ю N0:118 <400> 121 ррррссдрдр ЬддЬРддсРс рддасЬРсад адсасссссР сРсаРРРсаа асасРРсРРР 60 ссРсРдддсс СддааРдссс садсРдаасд РЬдЬаРРааа аРсЬРЬааас РассРссада 120
    РсЪдадасРс РРсЬсЬдРаа ааддаадссс ссаааааадр дсЬасдддас ааСРРаРЬас 180 аРРаРБРРаР дсРдаРадас РРддсРасРа рссРсаРаРа даЬдаааааа саддсаасас 240
    РдРаРаРдда ддааРРсссс адРРдддааа сРРааааааР саРРРддааа аадссааааа 300 адасаРРдсс РаРРасаРас саааРдасад сдРдддсРРд дсддРсаРРд асРдддаааа 360 сРддаддссР ассрдддсаа дааасрддаа ассРааадаР дрррасаддд ардадрсрдр 420
    РдадРРддРР срдсаааааа аРссасаасР садРРРссса даддсРРсса адаРРдсааа 480 адРддаРРРР дадасадсад дааададРРР сардсаадад асРРРаааас РдддааааРР 540 асРРсддсса ааРсасРРаР ддддРРаРРа РсРРРРРссР даРРдРРаса аРсаРааРРа 600
    РаассадссР асРРасааРд даааРРдсРс РдаРРРадаа ааааддадаа аРдаРдаРсР 660 сдасрддррд Рддааддааа дсасРдсссР РРРсссРРсР дРРРаРРРда аРаРсаадРР 720 ааааРсРасР ссаааадсРд ссРРсРаРдР РсдРааРсдР дРссаддаад ссаРРсддРР 780 дРсРааааРа дсдадрдррд ааадРссасР РсссдРгРРР дРаРаРсасс дРссадРРРР 840
    РасРдаРддд РсРРсаасаР ассРРГсГса дддРдассРР дРдааРРсдд РРддРдадаР 900 сдРРдсРсРа ддРдссРсРд ддаРРаСааР дрддддсадр сРсааРсРаа дссРаасРаР 960 дсааРсРРдс аЬдаассСад дсааСРасЬр даасасРаса сГдааРссРР асаРааСсаа 1020 сдРсасссСа дсадссаааа рдрдсадсса адРдсЬРРдс сасдаРдаад дадРдРдРас 1080 ааддааасаа рддааРРсаа дсдасРаРср РсассРдаас ссааРдааРР РрдсРаРРса 1140 аасрдддааа ддрддаааар асасадРасс РдддааадРс асасРРдаад ассрдсааас 1200 дррррсрдар аааРРРРаРР дсадРРдСРа РдссаасаРс аасРдРаада адададРРда 1260
    РаРааааааР дРРсаРадРд РРааРдРаРд РаРддсадаа дасаРРРдРа Рададддссс 1320
    РдРдаадРРа саасссадрд аРсаРРссРс РадссадааР даддсаРсРа сРассассдР 1380 садсадрарс РсасссРсЬа сРасадссас сасадРаРсР ссаРдРасРс срдадаааса 1440 дрссссрдад РдссРсааад РсаддРдРРР ддаадссаРс дссаасдрса сссааасддд 1500 дрдрсааддр дРРаааРдда адаасасРРс садРсадРса адРаРРсааа аРаРРааааа 1560
    Рсааасаасс РаРРааааРа РаааРРсадР дсРРаРаааа аааааааааа аааааааааа 1620 <210> 122 <211> 447 <212> Белок <213> Ното зарБепз <220>
    <223> растворимый гНиРН20 36-482 <400> 122
    Ьей 1 Азп РНе Агд АБа 5 Рго Рго УаБ 11е Рго 10 Азп УаБ Рго РЬе Ьей 15 Тгр АБа Тгр Азп АБа Рго Зег СБи РЬе Суз Ьей СБу Ьуз РЬе Азр СБи Рго 20 25 30 Ьей Азр Мер Зег Ьей РНе Зег РЬе 11е СБу Зег Рго Агд 11е Азп А1а 35 40 45 ТНг СБу СБп СБу УаБ ТЬг 1Бе РЬе Туг УаБ Азр Агд Ьей СБу Туг Туг 50 55 60
    - 230 022752
    Рго Туг Не Азр Зег Ие ТНг С1у Уа1 ТНг Уа1 Азп С1у С1у Ие Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз Ие Зег Ьеи С1п Азр Шз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТНг РНе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ьеи С1у МеР А1а Уа1 Не Азр Тгр 100 105 110 С1и С1и Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ие О1и Ьеи Уа1 ст С1п С1п Азп Уа1 С1п Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг 01и А1а ТНг С1и Ьуз А1а Ьуз 01 п С1и РНе 01 и Ьуз А1а 145 150 155 160 С1у Ьуз Азр РНе Ьеи Уа1 С1и ТНг Ие Ьуз Ьеи С1у Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп Н1з Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг Азп Шз 180 185 190 Шз Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РНе Азп Уа1 01 и Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег ТНг А1а Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ие Туг Ьеи Азп ТНг О1п С1п Зег Рго Уа1 А1а А1а ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а Ие Агд Уа1 Зег Ьуз Ие 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РНе А1а Туг ТНг Агд Ие Уа1 260 265 270 РНе ТНг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег С1п Азр С1и Ьеи Уа1 Туг 275 280 285 ТНг РНе 01 у С1и ТНг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зег С1у Ие Уа1 Ие Тгр 290 295 300 С1у ТЬг Ьеи Зег Не Мер Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг Мер С1и ТНг Не Ьеи Азп Рго Туг Ие Не Азп Уа1 ТНг Ьеи 325 330 335 А1а А1а Ьуз Мер Суз Зег С1п Уа1 Ьеи Суз 01 п 01и 61 п О1у Уа1 Суз 340 345 350 Ие Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Шз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе А1а Ие С1 п Ьеи С1и Ьуз 61у С1у Ьуз РНе ТНг Уа1 Агд 01у 370 375 380 Ьуз Рго ТНг Ьеи С1и Азр Ьеи С1и С1п РНе Зег С1и Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз 01и Ьуз А1а Азр Уа1 Ьуз Азр 405 410 415 ТНг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр 01 у Уа1 Суз Не Азр А1а 420 425 430 РНе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер С1и ТНг 01и С1и Рго С1п Ие РНе Туг 435 440 445
    <210> 123 <211> 446 <212> Белок <213> Нолю зарЬепз <220>
    <223> растворимый гНиРН20 36-481 <400> 123
    Ьеи Азп РНе Агд А1а Рго Рго Уа1 Ие Рго Азп Уа1 Рго РНе Ьеи Тгр 15 10 15
    - 231 022752
    АЬа Тгр Азп АЬа 20 Рго Зег СЬи РЬе Сув 25 Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр 30 СЬи Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг 11е Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу 11е Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Авр Ьув АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬЗ Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа ЬЬе Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 АЗП Туг МеЬ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые РЬе 435 440 445
    <210> 124 <2Ы> 445 <212> Белок <213> Нолю зарЬепз
    232 022752 <220>
    <223> растворимый гНиРН20 36-480 <400> 124
    Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу СЬу Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеС Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеС АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 ЫО СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Агп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз 180 185 190 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп УаЬ СЬи Ые 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Аар Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго 5ег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз Ые 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые УаЬ Ые Тгр 290 295 300 СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеС СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые АЗП УаЬ ТЬг Ьеи 325 330 335 АЬа А1а Ьуз МеС Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп СЬу УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг УаЬ Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеС СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые 435 440 445
    233 022752 <210> 125 <211> 444 <212> Белок <213> Ното зариепз <220 <223> растворимый гНиРЬ20 36-479 <400 125
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд А1а 5 Рго Рго Уа1 Не Рго 10 Азп Уа1 Рго РЬе Ъеи 15 Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег 61и РЬе Суз Ъеи 61у Ъуз РЬе Азр 61и Рго 20 25 30 Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд Не Азп А1а 35 40 45 ТЬг 61у 61п 61 у Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ъеи 61 у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг 61у Уа1 ТЬг Уа1 Азп 61у 61 у Не Рго 65 70 75 80 61п Ьуз Не Зег Ъеи С1п Азр Н1з Ъеи Азр Ъуз А1а Ъуз Ъуз Азр Не 85 90 95 ТНг РЬе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ъеи 61у Мер А1а Уа1 Не Азр Тгр 100 105 110 61и С1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго Ъуз Азр Уа1 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не С1и Ъеи Уа1 С1п 61п 61п Азп Уа1 61п Ъеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг 61и А1а ТЬг 61и Ъуз А1а Ъуз 61п 61и РЬе 61и Ъуз А1а 145 150 155 160 61 у Ъуз Азр РЬе Ъеи Уа1 61и ТЬг Не Ъуз Ъеи 61у Ъуз Ъеи Ъеи Агд 165 170 175 Рго Азп Ηίε Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз Туг АЗП Ηί3 180 185 190 Ηί3 Туг Ьуз Ьуз Рго 61у Туг Азп 61у Зег Суз РЬе Азп Уа1 С1и Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп 61и Зег ТЬг А1а Ъеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТЬг 61п 61п Зег Рго Уа1 А1а А1а ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд 61и А1а Не Агд Уа1 Зег Ъуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг Агд 11е νθΐ 260 265 270 РНе ТЬг Азр 61п Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег 61п Агр 61и Ъеи Уа1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе 61у 61и ТЬг Уа1 А1а Ъеи 61 у А1а Зег 61у Не Уа1 Не Тгр 290 295 300 61у ТЬг Ьеи Зег Не Мер Агд Зег Мер Ъуз Бег Суз Ъеи Ъеи Ъеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеР С1и ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Ие Не Азп Уа1 ТЬг Ъеи 325 330 335 А1а А1а Ьуз Мер Суз Зег 61п Уа1 Ъеи Суз 01п С1и С1п 61у Уа1 Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи Н1з Ъеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе А1а Не 61п Ъеи 61и Ъуз 61у 61у Ъуз РЬе ТЬг Уа1 Агд 61у 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи 61и Агр Ъеи 61и 61 п РЬе Зег 61и Ъуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз 61и Ъуз А1а Азр Уа1 Ъуз Азр 405 410 415
    234
    ТНг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр С1у УаЬ Суз Ые Азр АЬа 420 425 430
    РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЕ СЬи ТНг СЬи Е1и Рго СЬп 435 440 <210> 126 <211> 443 <212> Белок <213> Ногтю заргепз <220>
    <223> растворимый гНиРН20 36-478 <400> 126
    Ьеи Азп РНе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго РНе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп А1а Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РНе Зег РНе 11е ОЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТНг ОЬу СЬп СЬу УаЬ ТНг Ые РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТНг СЬу УаЬ ТНг УаЬ Азп С1у СЬу Не Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр Нгз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТНг РНе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЕ АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьу5 Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РНе СЬи Ьуз А1а 145 150 155 160 СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп Ηί з Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз Туг Азп Нгз 180 185 190 Нгз Туг Ьуз Ьуз Рго ОЬу Туг Азп С1у Зег Суз РНе Азп УаЬ СЬи Ые 195 2 00 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег ТЬг АЬа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТНг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ АЬа АЬа ТНг 225 2 30 235 240 Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд Уа1 Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ Зег Ьуз 11е 245 250 255 Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе А1а Туг ТНг Агд Ые УаЬ 260 265 270 РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи Ьеи УаЬ Туг 275 280 285 ТНг РНе СЬу СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е УаЬ 11е Тгр 290 295 300 СЬу ТНг Ьеи Зег Ые МеЕ Агд Зег МеЕ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеЕ СЬи ТНг Ые Ьеи Агп Рго Туг Ые Ые Азп УаЬ ТНг Ьеи 325 330 335 АЬа АЬа Ьуз МеЕ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп С1у УаЬ Суз 340 345 350 Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Нгз Ьеи Азп Рго Азр 355 3 60 365
    235
    Азп РЬе А1а 370 Не СЛп Ьеи СЛи Ьуз С1у С1у Ьуз 375 РЬе 380 ТЬг УаЛ Агд С1у Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЛи Азр Ьеи СЛи С1п РЬе Зег СЛи Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЛи Ьуз АЛа АЗр Уа1 Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЛа УаЛ Азр УаЛ Суз Не А1а Азр С1у Уа1 Суз Не Азр АЛа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеГ СЛи ТЬг СЛи СЛи Рго
    435 440 <210> 127 <211> 442 <212> Белок <213> Ното зарЛепз <220>
    <223> растворимый гНиРЬ20 36-477 <400> 127
    Ьеи 1 Азп РЬе Агд АЛа 5 Рго Рго Уа1 Не Рго 10 Азп УаЛ Рго РЬе Ьеи 15 Тгр АЛа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЛи РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеГ Зег Ьеи РЬе Зег РНе Не С1у Зег Рго Агд 11е Азп АЛа 35 40 45 ТЬг С1у СЛп СЬу УаЛ ТЬг 11е РНе Туг УаЛ Азр Агд Ьеи СЛу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг С1у УаЛ ТЬг Уа1 Азп СЛу ЗЛу Не Рго 65 70 75 80 СЛп Ьуз Не Зег Ьеи СЛп Азр НЛз Ьеи Агр Ьуз А1а Ьу5 Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеГ Рго УаЛ Азр Азп Ьеи СЬу МеГ А1а Уа1 Не Азр Тгр 100 105 но СЛи СЛи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЛа Агд АЗП Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЛ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи Уа1 СЛп С1п СЛп Азп УаЛ СЛп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТЬг С1и А1а ТЬг СЛи Ьуз АЛа Ьуз СЛп СЛи РЬе СЛи Ьуз АЛа 145 150 155 160 С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЛ СЛи ТЬг Не Ьуз Ьеи С1у Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЛз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЛз 180 185 190 НЛз Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп СЛу Зег Суз РЬе АЗП УаЛ СЛи Не 195 200 205 Ьуз Агд АЗП Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЛи Зег ТЬг АЛа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг СЛп СЛп Зег Рго УаЛ АЛа А1а ТНг 225 230 235 240 Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд СЛи А1а Не Агд Уа1 Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр АЛа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЛ РНе А1а Туг ТЬг Агд Не УаЛ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЛп Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1п Азр СЛи Ьеи УаЛ Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЛу СЛи ТЫ Уа1 АЛа Ьеи СЛу А1а Зег СЬу Не УаЛ Не Тгр 290 295 300 С1у ТЬг Ьеи Зег Не МеГ Агд Зег МеГ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320
    236
    Азп Туг МеД СЬи ТНг 32 5 Ые Ьеи Азп Рго Туг 330 11е 11е Азп УаЬ ТНг 335 Ьеи А1а АЬа Ьуз МеД Суз Зег С1п УаЬ Ьеи Суз С1п СЬи С1п СЬу Уа1 Суз 340 345 350 11е Агд Ьуз АЗП Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РНе А1а Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг Уа1 Агд СЬу 370 375 380 Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РНе Зег СЬи Ьуз РНе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз А1а Азр Уа1 Ьуз Азр 405 410 415 ТНг Агр АЬа УаЬ Азр Уа1 Суэ 11е АЬа Азр СЬу Уа1 Суз Ые Азр А1а 420 425 430 РНе Ьеи Ьуз Рго Рго МеД СЬи ТНг СЬи С1и
    435 440 <210> 128 <211> 467 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> ®НиРН20 предшественник 1-467 <400> 128
    Мед СЬу Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьуз НЬз Ые РНе РНе Агд Зег РНе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у УаЬ Зег СЬп 11е Уа1 РНе ТНг РНе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Азп РНе Агд А1а Рго Рго Уа1 11е Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РНе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп АЬа Рго Зег С1и РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеД Зег Ьеи РНе Зег РНе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп АЬа ТНг СЬу С1п С1у Уа1 ТНг Ые РНе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег 11е ТНг СЬу Уа1 ТНг Уа1 Азп СЬу 100 105 110 СЬу 11е Рго С1п Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи АЗр ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр 11е ТНг РНе Туг МеД Рго Уа1 Азр Азп Ьеи СЬу МеД А1а УаЬ 130 135 140 11е Азр Тгр СЬи С1и Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е СЬи Ьеи УаЬ С1п С1п СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуз А1а Ьуз СЬп СЬи РНе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи Уа1 СЬи ТНг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Су® 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп 225 230 235 240 УаЬ С1и 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТНг А1а Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТНг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 2 65 270
    237
    АЪа АЪа ТНг 275 Ьеи Туг УаЪ Агд Азп Агд 280 УаЪ Агд СЪи АЪа 285 Не Агд УаЪ Зег Ьуз Не Рго Азр АЪа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЪ РНе АЪа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаЪ РНе ТНг Азр СЪп УаЪ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЪп Азр СЪи 305 310 315 320 Ьеи УаЪ Туг ТНг РЬе СЪу СЪи ТЬг УаЪ АЪа Ьеи СЪу АЪа Зег С1у Не 325 330 335 УаЪ Не Тгр СЪу ТНг Ьеи Зег Не Мер Агд Зег Меи Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Меи СЪи ТНг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 УаЪ ТНг Ьеи АЪа АЪа Ьуз Меи Суз Зег СЪп УаЪ Ьеи Суз СЪп СЪи СЪп 370 375 380 СЪу УаЪ Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЪз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РНе АЪа Не СЪп Ьеи СЪи Ьуз СЪу С1у Ьуз РНе ТНг 405 410 415 УаЪ Агд 61у Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЪи Азр Ьеи СЪи СЪп РНе Зег СЪи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз СЪи Ьуз АЪа Азр 435 440 445 УаЪ Ьуз Азр ТНг Азр АЪа УаЪ Азр УаЪ Суз Не АЪа Азр СЪу УаЪ Суз 450 455 4 60 Не Азр АЪа 465
    <210> 129 <2Н> 477 <212> Белок <213> Ното : зар1еп2 <220> <223> зНиРН20 предшественник 1-- 477 <400> 129 Меи 61 у УаЪ Ьеи Ьуз РНе Ьуз НЪз Не РНе РНе Агд Зег РНе УаЪ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЪу УаЪ Зег СЪп Не УаЪ РНе ТНг РНе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Азп РНе Агд АЪа Рго Рго УаЪ Не Рго Азп УаЪ Рго 35 40 45 РНе Ьеи Тгр АЪа Тгр Азп АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ьеи СЪу Ьуз РНе 50 55 60 Азр СЪи Рго Ьеи Азр Меи Зег Ьеи РНе Зег РНе Не 61у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп АЪа ТНг 61 у СЪп СЪу УаЪ ТНг Не РНе Туг УаЪ Азр Агд Ьеи 85 90 95 61 у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТНг СЪу УаЪ ТНг УаЪ Азп 61у 100 105 но 61у Не Рго СЪп Ьуз Не Зег Ьеи СЪп Азр НЪз Ьеи Азр Ьуз АЪа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТНг РНе Туг Меи Рго УаЪ Азр Азп Ьеи 61 у Меи АЪа УаЪ 130 135 140 11е Азр Тгр СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЪ Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЪи Ьеи УаЪ СЪп СЪп СЪп Азп 165 170 175 УаЪ СЪп Ьеи Зег Ьеи ТЬг 61и АЪа ТНг СЪи Ьуз АЪа Ьуз СЪп СЪи РЬе 180 185 190
    238
    С1и Ьуз АЬа СЬу 195 Ьуз Азр РЬе Ьеи 200 УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз 205 Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 2 65 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи. УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 32 5 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз ьуз СЬи ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Аэр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 ТЬе Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи 465 470 475
    <210> 130 <211> 478 <212> Белок <213> Ногао зарЬепз <220> <223> зНиРН20 предшественник 1- 478 <400> 130 МеЬ СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Ые УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РНе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 30 Ые Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 110
    - 239
    СЬу Ые Рго 115 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз 120 Ьеи Азр 125 Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр 11е ТПг РПе Туг Меб Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Меб АЬа УаЬ 130 135 140 11е Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТПг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 Уа1 СЬп Ьеи Зег Ьеи ТПг СЬи А1а ТПг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп С1и РПе 180 185 190 С1и Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РПе Ьеи УаЬ СЬи ТПг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РПе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Н13 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РПе Азп 225 230 235 240 Уа1 СЬи 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег 245 250 255 ТПг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТПг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 А1а АЬа ТПг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьу5 11е Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РПе АЬа Туг ТПг 2 90 295 300 Агд 11е УаЬ РПе ТПг Азр СЬп Уа1 Ьеи Ьу5 РПе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТПг РПе СЬу СЬи ТПг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е 325 330 335 УаЬ 11е Тгр СЬу ТПг Ьеи Зег Ые Меб Агд Зег Меб Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Меб СЬи ТПг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 3 60 365 УаЬ ТПг Ьеи АЬа АЬа Ьуз Меб Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РПе ТПг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТПг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РПе Зег СЬи Ьуз 420 425 4 30 РПе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Ые Азр АЬа РПе Ьеи Ьуз Рго Рго Меб СЬи ТПг СЬи СЬи Рго
    465 470 475 <210 131 <211> 479 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220 <223> зНиРН20 предшественник 1-479 <400> 131
    мее СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьуз ΗΪ5 11е РПе Р?1е Агд Зег РПе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег С1п 11е Уа1 РПе ТПг Рпе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30
    - 240
    Суз Ьеи ТНг 35 Ьеи Азп РНе Агд АЬа 40 Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ 45 Рго РНе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РНе Зег РНе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп АЬа ТНг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТНг Ые РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТНг УаЬ Азп СЬу 100 105 ыо СЬу Ые Рго ст Ьуз Ые Зег Ьеи СЬП Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр 11е ТНг РНе Туг Меь Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мен АЬа УаЬ 130 135 140 Ые Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп С1п С1п Азп 165 170 175 УаЬ сьп Ьеи Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп С1и РНе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РНе Ьеи УаЬ СЬи ТНг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТНг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТНг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТНг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе АЬа Туг ТНг 290 2 95 300 Агд Ые УаЬ РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТНг РНе СЬу СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи СЬу А1а Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТНг Ьеи Зег 11е МеЬ Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Мер СЬи ТНг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 УаЬ ТНг Ьеи АЬа АЬа Ьуз Меь Суз Зег С1п УаЬ Ьеи Суз С1п СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РНе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РНе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТНг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Ые Азр АЬа РНе Ьеи Ьуз Рго Рго Меь СЬи ТНг СЬи СЬи Рго СЬп 465 470 475
    <210> 132 <2Ы> 480 <212> Белок
    241 <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> зНиРНЗО предшественник 1-480 <400> 132
    МеЬ СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Ые РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Ые УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи АЗП РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Ые Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг 11е РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬе СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 120 СЬу Ые Рго СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ 130 135 140 Ые Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Αεη Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго 5ег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 37 0 375 380 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа 11е СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430
    242
    РЬе Туг Суз 435 Зег Суз Туг Зег ТЬг 440 Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи 445 Ьуз АЬа Азр УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 11е Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые 465 470 475 480
    <210> 133 <2Ы> 481 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> зНиРН20 предшественник 1-481 <400> 133
    Мер СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Ые РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Ые УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр меь Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Ые Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЫ СЬу УаЬ ТЬг УаЬ АЗП СЬу 100 105 ЫО СЬу Ые Рго СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мер АЬа УаЬ 130 135 140 Ые Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЫ СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Тур Азп НЬз НЬз Туг ьуз ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Αξπ СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые Меь Агд Зег Мер Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350
    243
    Ьей Ьей Азр Азп 355 Туг МеС 61и ТЬг 3 60 11е Ъеи Азп Рго Туг 365 11е 11е Азп Уа1 ТЬг Ьеп А1а А1а Ъуз МеС Суз Зег 61п УаЪ Ъеи Суз 61п 61 и С1п 370 375 380 Е1у Уа1 Суз 11е Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи ΗΪ3 Ъеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а 11е Е1п Ъеи С1и Ъуз 61 у С1у Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ъуз Рго ТЬг Ъеи 61и Агр Ъеи 61и 61П РЬе Зег 61и Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Су® Зег Суз Туг Зег ТЫ Ъеи Зег Суз Ъуз 61и Ъуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Акр ТЬг Азр А1а 17а 1 Азр 17а1 Сун Не А1а Азр С1у Уа1 Суз 450 455 460 11е Азр А1а РЬе Ьеч Ъуз Рго Рго МеС С1и ТЬг С1и 61и Рго 61 п Не 465 470 475 480 РЬе
    <210 134 <211> 483 <212> Белок <213> Ното заргепз <220>
    <223> зНиРН20 предшественник 1-483 <400> 134
    МеС 61 у Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъуз Нгз 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе 17а 1 Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег 61у 17а 1 Зег 61п Не 17а1 РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго 17а1 Не Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ъеи 61 у Ъуз РЬе 50 55 60 Азр 61и Рго Ъеи Азр МеС Зег Ъеи РЬе Зег РЬе Не 61у Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп А1а ТЬг 61у 61п 61 у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ъеи 85 90 95 61у Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег 11е ТЬг 61у 17а 1 ТЬг 17а 1 Азп 61у 100 105 110 61 у 11е Рго 61п Ъу5 Не Зег Ъеи 61п Азр Нгз Ъеи Азр Ъуз А1а Ъуз 115 120 125 Ъуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеС Рго 17а 1 Агр Азп Ъеи 61у МеС А1а 17а1 130 135 140 11е Азр Тгр 61и 61и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ъуз Азр 17а1 Туг Ъуз Азп Агд Зег Не 61и Ъеи Уа1 С1п 61п 61п Азп 165 170 175 Уа1 61 п Ъеи Зег Ъеи ТЬг 61и А1а ТЬг С1и Ъуз А1а Ъуз 61п 61и РЬе 180 185 190 61и Ъуз А1а 61 у Ъуз Азр РЬе Ъеи 17а1 61и ТЬг Не Ъуз Ъеи 61 у Ъуз 195 200 205 Ъеи Ъеи Агд Рго Азп Нгз Ъеи Тгр С1у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Нгз Нгз Туг Ъуз Ъуз Рго 61у Туг Азп СЪу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 17а 1 61и Не Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп б1и Зег 245 250 255
    - 244
    ТНг АЬа Ьеи Туг 2 60 Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТНг 265 СЬп СЬп Зег 270 Рго УаЬ А1а АЬа ТНг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 27 5 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе АЬа Туг ТНг 290 295 300 Агд Пе УаЬ РНе ТНг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТНг РНе СЬу СЬи ТНг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТНг Ьеи Зег Ые МеЕ Агд Зег МеЕ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЕ СЬи ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Туг Ые 11е Азп 355 360 365 УаЬ ТНг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЕ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 37 0 375 38 0 СЬу УаЬ Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Αεη Зег Зег Азр Туг Ьеи Нгз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РНе АЬа 11е СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг 405 410 415 УаЬ Агд ОЬу Ьуз Рго ТНг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суэ Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТНг Азр АЬа УаЬ Агр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Ые Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЕ СЬи ТНг СЬи СЬи Рго СЬп 11е 4 65 470 475 480 РНе Туг Азп
    <210> 135 <2Ы> 432 <212> Белок <213> Нолю заргепз <220>
    <223> зНиРН20 зрелый 36-467 <400> 135
    Ьеи Азп 1 РНе Агд АЬа 5 Рго Рго УаЬ Ые Рго 10 Азп УаЬ Рго РНе Ьеи 15 Тгр АЬа Тгр Азп А1а Рго Зег СЬи РНе Суз Ьеи СЬу Ьуз РНе Азр СЬи Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РНе Зег РНе Ые СЬу Зег Рго Агд Ые Азп АЬа 35 40 45 ТНг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТНг Ые РНе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи СЬу Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Ые Азр Зег 11е ТНг С1у УаЬ ТНг УаЬ Азп СЬу 61 у Ые Рго 65 70 75 80 СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр ΗΪ5 Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз Ьуз Азр Ые 85 90 95 ТНг РНе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи С1у МеЕ АЬа УаЬ Ые Азр Тгр 100 105 110 СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ 115 120 125 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп УаЬ СЬп Ьеи 130 135 140 Зег Ьеи ТНг СЬи АЬа ТНг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РНе СЬи Ьуз АЬа 145 150 155 160
    245 022752
    С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи 165 Уа1 С1и ТЬг Не Ьуз 170 Ьеи С1у Ьуз Ьеи Ьеи 175 Агд Рго Азп НЛз Ьеи Тгр С1у Туг Тух Ьеи РЬе Рго Азр Суз Тух Азп НЛз 180 185 190 НЛз Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп Уа1 С1и Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Агр Азр Ьеи Зег Тхр Ьеи Тгр Азп С1и Зех ТЬг А1а Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг СЛп С1п Зег Рхо Уа1 А1а А1а ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и А1а Не Агд Уа1 Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг Агд Не УаЛ 260 265 270 РЬе ТЬг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1п Азр СЬи Ьеи Уа1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе 51 у СЬи ТЬг Уа1 А1а Ьеи С1у А1а Зех СЬу Не Уа1 Не Тгр 290 295 300 СЛу ТЬг Ьеи Зег Не МеГ Агд Зег МеГ Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 Азп Туг МеГ СЬи ТЬг 11е Ьеи Азп Рго Тух Не 11е Азп Уа1 ТЬг Ьеи 325 330 335 АЛа А1а Ьуз МеГ Суз Зег С1п Уа1 Ьеи Суз С1п С1и С1п С1у Уа1 Суз 340 345 350 Пе Агд Ьуз АЗП Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи ΗΪ5 Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе А1а 11е СЬп Ьеи С1и Ьуз С1у С1у Ьуз РЬе ТЬг Уа1 Агд С1у 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи С1и СЛп РЬе Зех Е1и Ьуз РЬе Туг Суз 385 390 395 400 Зег Суз Туг Зех ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр Уа1 Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр АЬа Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр С1у Уа1 Суз Не Азр АЛа 420 425 430
    <210> 136 <211> 448 <212> Белок <213> Ното : гархепз <220> <223> зНиРН20 зрелый 36- -483 <400> 136 Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп Уа1 Рго РЬе Ьеи Тгр 1 5 10 15 АЬа Тгр Азп А1а Рго Зег 61и РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе Азр С1и Рго 20 25 30 Ьеи Азр МеГ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе 11е С1у Зег Рго Агд 11е Азп АЬа 35 40 45 ТЬг С1у СЛп С1у Уа1 ТЬг Не РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи С1у Туг Туг 50 55 60 Рго Туг Не Азр Зег Не ТНг С1у Уа1 ТЬг Уа1 Азп СЬу С1у Не Рго 65 70 75 80 С1п Ьуз 11е Зег Ьеи С1п АЗр НЛз Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр Не 85 90 95 ТЬг РЬе Туг МеГ Рго Уа1 Азр Азп Ьеи С1 у МеГ А1а Уа1 Не Азр Тгр 100 105 но С1и С1и Тгр Агд Рго ТЬг тгр АЛа Агд Азп Тгр Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 115 120 125
    246
    Туг Ьуз Азп 130 Агд Зег Не СЪи Ьеи Уа1 135 СЪп С1п СЪп Азп Уа1 140 СЪп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЪи А1а ТЬг СЪи Ьуз АЪа Ьуз СЪп СЪи РЬе СЪи Ьуз АЪа 145 150 155 160 СЪу Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 СЪи ТЬг 11е Ьуз Ьеи СЪу Ьуз Ьеи Ьеи Агд 165 170 175 Рго Азп НЪз Ьеи Тгр СЪу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЪз 180 185 190 НЪз Туг Ьуз Ьуз Рго СЪу Туг Азп СЪу Зег Суз РЬе Азп Уа1 СЪи Не 195 200 205 Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЪи Зег ТЬг АЪа Ьеи 210 215 220 Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЪп СЪп Зег Рго Уа1 АЪа АЪа ТЬг 225 230 235 240 Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд УаЪ Агд СЪи АЪа Не Агд Уа1 Зег Ьуз Не 245 250 255 Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЪ РЬе АЪа Туг ТЬг Агд Не Уа1 260 265 270 РЬе ТЬг Азр СЪп Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЪп Азр СЪи Ьеи Уа1 Туг 275 280 285 ТЬг РЬе СЪу СЪи ТЬг Уа1 АЪа Ьеи С1у АЪа Зег СЪу Не Уа1 Пе Тгр 290 295 300 СЪу ТЬг Ьеи Зег Не Мес Агд Зег Мег Ьуз Зег Суз Ьеи Ьеи Ьеи Азр 305 310 315 320 АЗП Туг Мер СЪи ТЬг Пе Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп Уа1 ТЬг Ьеи 325 330 335 АЪа АЪа Ьуз Ме! Суз Зег СЪп УаЪ Ьеи Суз СЪп СЪи С1п СЪу Уа1 Суз 340 345 350 Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Н1з Ьеи Азп Рго Азр 355 360 365 Азп РЬе АЪа Не С1п Ьеи С1и Ьуз С1у СЪу Ьуз РЬе ТЬг Уа1 Агд С1у 370 375 380 Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЪи Азр Ьеи СЪи СЪп РЬе Зег СЪи Ьуз РЬе Туг Суз 38 5 3 90 395 400 Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЪи Ьуз А1а Азр Уа1 Ьуз Азр 405 410 415 ТЬг Азр А1а УаЪ Азр Уа1 Суз Не А1а Азр СЪу Уа1 Суз Не Азр АЪа 420 425 430 РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго Мер СЪи ТЬг СЪи СЪи Рго СЪп Не РЬе Туг Азп 435 440 445
    <210> 137 <211> 509 <212> Белок <213> Ното : зархепз <220> <223> предшественник РН20 вариант Р48А <400> 137 МеЪ 61у Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЪз 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЪу Уа1 Зег С1п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 Не Рго Азп УаЪ А1а 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЪа Тгр Азп А1а Рго Зег СЪи РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЪи Рго Ьеи Азр МеЪ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не СЪу Зег Рго Агд 65 70 75 80
    247
    Ые Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп 85 СЬу УаЬ ТЬг Ые 90 РЬе Туг УаЬ Азр Агд 95 Ьеи СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу Ые Рго СЬп Ьуз Г1е Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЬ АЬа УаЬ 130 135 140 Ые Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Агп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Агп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа 11е Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег С1у Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеС СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Аэп Рго Азр Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи ст РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр Уа1 Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Ые Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЬа ТЬг меь РЬе Ые УаЬ 485 4 90 495 Зег Ые Ьеи РЬе Ьеи Ые Ые Зег Зег УаЬ АЬа Зег Ьеи 500 505
    <210> 138 <211> 509 <212> Белок <213> Ното зарЬепз
    248 022752 <220>
    <223> предшественник РН20 вариант Σ499Ν <400> 138
    МеЬ СЬу ЧаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе ЧаЬ Ьуз 1 5 10 15 8ег Зег СЬу ЧаЬ Зег СЬп Не ЧаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго ЧаЬ Не Рго Азп ЧаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег С1и РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ьеи Азр Мер Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Не СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу ЧаЬ ТЬг Не РЬе Туг ЧаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туп Не Азр Зег Не ТЬг СЬу ЧаЬ ТЬг ЧаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу 11е Рго СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеС Рго ЧаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Мер АЬа ЧаЬ ЬЗО 135 140 1Ье Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЫ Тгр АЬа Агд АЗП Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 ьу® Адр ЧаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Не СЬи Ьеи ЧаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 ЧаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг С1и АЬа ТЬг С1и Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬп Ьу® АЬа СЬу Ьу® Азр РЬе Ьеи ЧаЬ СЬи ТЬг Не Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг АЗП НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 чаЬ СЬи Не Ьуз Агд АЗП АЗр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр АЗП С1и Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго ЧаЬ 260 2 65 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг ЧаЬ Агд Азп Агд ЧаЬ Агд СЬи АЬа Не Агд ЧаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго ЧаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не ЧаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп ЧаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи ЧаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу С1и ТЬг ЧаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не 325 330 335 ЧаЬ Не Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег 11е Мес Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 ЧаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп ЧаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу ЧаЬ Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Аэр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа Не СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 ЧаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи С1и СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз АЬа Азр 435 440 445
    249
    Уа1 Ъуз 450 Азр ТЬг Азр А1а УаЪ 455 Азр 7а1 Суз Не АЪа 460 Азр С1у УаЪ Суз Не Азр А1а РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго МеЪ СЪи ТЬг СЪи С1и Рго СЪп Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп А1а Зег Рго Зег ТЬг Ъеи Зег А1а ТНг МеЪ РЬе 1Ъе Уа1 485 490 495 5ег 11е Тгр РЬе Ъеи 11е Не Зег Зег УаЪ А1а Зег Ъеи
    500 505 <210> 139 <211> 1449 <212> ДНК <213> Ното заргепз <220>
    <223> последовательность гена 2 мРНК <400 139 аЪдддадЪдс Ъаааа~Ъсаа дсасаЪсЪЪЪ ЪЪсадаадсЪ ЪЪдЪЪаааЪс аадЪддадЪа 60
    ЪсссадаЪад ЪЪЪЪсассЪЪ ссЪЪсЪдаЪЪ ссаЪдЪЪдсЪ ЪдасЪсЪдаа ЪЪЪсададса 120 ссЪссЪдЪЪа ЪЪссаааЪдЪ дссЪЪЪссЪс ЪдддссЪдда аЪдссссаад ЪдааЪЪЪЪдЪ 180 сЪЪддааааЪ ЪЪдаЪдадсс асЪадаЪаЪд адссЪсЪЪсЪ сЪЪЪсаЪадд аадсссссда 240 аЪааасдсса ссдддсаадд ЪдЪЪасааЪа ЪЪЪЪаЪдЪЪд аЪадасЪЪдд сЪасЪаЪссЪ 300
    ЪасаЪадаЪЪ сааЪсасадд адЪаасЪдЪд ааЪддаддаа Ъсссссадаа даъъъссъъа 360 саадассаЪс Ъддасааадс Ъаадааадас аъъасаъъъъ аЪаЪдссадЪ адасааЪЪЪд 420 ддааъддсЪд ъъаъъдасъд ддаадааъдд адасссасЪЪ дддсаадааа сЪддааассЪ 480 ааадаЪдЪЪЪ асаадаасад дЪсЪаЪЪдаа ЪЪддЪЪсадс аасааааЪдЪ асаасЪЪадЪ 540 съсасададд ссасЪдадаа адсаааасаа дааЪЪЪдааа аддсадддаа ддаЪЪЪссЪд 600 дЪададзсЪа ЪааааЪЪддд ааааЪгасч- сддссаааЪс асЪЪдЪдддд ЪЪаЪЪаЪссг 660
    ЪЪЪссддаЪЪ дЪЪасаасса ЪсасЪаЪаад ааасссддЪг асааЪддаад ЪЪдсЪЪсааЪ 720 дЪадаааЪаа ааадаааЪда ЪдаЪсЪсадс ЪддЪЪдЪдда аЪдааадсас ЪдсЪсЪЪЪас 780 ссаЪссаЪЪЪ аЪЪЪдаасас ЪсадсадЪсЪ ссЪдЪадсЪд сЪасасЪсЪа ЪдЪдсдсааЪ 840 сдадЪЪсддд аадссаЪсад адЪНссааэ аЪассЪдаЪд сааааадЪсс асЪЪссддЪЪ 900
    ЪЪЪдсаЪаЪа сссдсаЪадЪ ЪЪЪЪасЪдаЪ саадЪЪЪЪда ааЪЪссЪЪЪс ЪсаадаЪдаа 960 сЪЪдЪдЪаЪа саЪЪЪддсда аасЪдЪЪдсС сЪдддЪдсЪЪ сЪддааЪЪдЪ ааЪаЪдддда 1020 асссЪсадЪа ЪааЪдсдаад ЪаЪдаааЪсЪ ЪдсЪЪдсЪсс ЪадасааЪЪа саЪддадасЪ 1080 аъаеъдааЪс съъасаъааъ саасдЪсаса съадсадсса аааъдъдъад ъсаадъдсъъ 1140
    Ъдссаддадс ааддадЪдЪд ЪаЪааддааа аасЪддааЪЪ саадЪдасЪа ЪсЪЪсассЪс 1200 аасссадаЪа аЪЪЪЪдсЪаЪ ЪсаасЪЪдад аааддЪддаа адЪЪсасадЪ асдЪддаааа 1260 ссдасасЪЪд аадассЪдда дсааЪЪЪЪсЪ даааааЪЪЪЪ аЪЪдсадсЪд ЪЪаЪадсасс 1320
    ЪЪдадЪЪдЪа аддадааадс ЪдаЪдЪаааа дасасЪдаЪд сЪдЪЪдаЪдЪ дЪдЪаЪЪдсЪ 1380 даЪддЪдЪсЪ дЪаЪадаЪдс ЪЪЪЪсЪаааа ссЪсссаЪдд адасадаада ассЪсаааЪЪ 1440
    ЪЪсЪасЪда 1449 <210> 140 <211> 6630 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ΗΞ24 вектор <400> 140
    ЪсааЪаЪЪдд ссаЪЪадсса ЪаъЪаЪЪсаЪ ъддъъаъаъа дсаЪаааЪса аЪаЪЪддсЪа 60
    ЪЪддссаЪЪд саЪасдЪЪдЪ аЪсЪаЪаЪса ЪааЪаЪдЪас аЪЪЪаЪаЪЪд дсЪсаЪдЪсс 120 ааЪаЪдассд ссаЪдЪЪддс аЪЪдаЪЪаЪЪ дасЪадЪЪаЪ ЪааЪадЪааЪ сааЪЪасддд 180 дЪсаЪЪадЪЪ саЪадсссаЪ аЪаЪддадЪЪ ссдсдЬгаса ЪаасЪЪасдд ЪаааЪддссс 240 дссЪддсЪда ссдсссаасд асссссдссс аЪЪдасдЪса аЪааЪдасдЪ аЪдЪЪсссаЪ 300 адъаасдсса аЪадддасЪЪ ЪссаЪЪдасд ЪсааЪдддЪд дадЪаЪЪЪас ддЪааасЪдс 360 ссасЪЪддса дЪасаЪсаад ЪдЪаЪсаЪаЪ дссаадЪссд сссссЪаЪЪд асдЪсааЪда 420
    - 250 022752 сддбааабдд сссдссбддс аСЛабдссса дбасабдасс ббасдддасЪ СЛссбасООд 480 дсадбасаЪс басдЪабЪад бсабсдсбаб Ъассабддбд абдсддббЫ; ддсадбасас 540 саабдддсдб ддабадсддб ббдасЪсасд дддабббсса адбсбссасс ссаббдасдС. 600 саабдддадб ббдббббддс ассааааСса асдддас£££ ссаааабдбс дбаабаассс 660 сдссссдбЪд асдсааабдд дсддбаддсд бдбасддбдд даддбсбаба баадсададс 720 бсдбббадбд аассдбсада ЬсасЪадаад сХСЛаббдсд дОадбббабс асад£Лаааб 780
    СдсЪаасдса дЕсадЪдсЕЪ сбдасасаас адЪсЛсдаас Мзаадсбдса даад£Лддбс 840 дбдаддсасб дддсаддбаа дбаЪсааддЪ сасаадасад дбббааддад ассаабадаа 900 асСдддсМзд ΐ-сдадасада даадасЪсЫ; дсд^бСсЪда Ъаддсассба ббддбсГЛас 960
    Ьдасабссас бббдссбббс бебссасадд бдбссасбсс садббсаабб асад<Хс££а 1020 аддсбададО асббаабасд асбсасбаЬа ддсОадсабд ддадбдсбаа аабОсаадса 1080 саСс^Сбббс адаадсМзбд Обааабсаад бддадСаЪсс садабадббб Ссассббсс^: 1140
    СсЬдаббсса бдббдсббда с^сбдааббб сададсассЬ ссбдСС.а'Ьбс саааСдбдсс 1200 бЪЪссбсбдд дссбддааЬд ссссаадбда аббб'Ьдбсбб ддааааббЪд абдадссасС 1260 адабабдадс с£сб£сбсбб Ъсабаддаад сссссдааба аасдссассд ддсааддбдб 1320 басаабаббб бабдббдаба дасббддсба сбабссббас абадаббсаа бсасаддадб 1380 аасОдЕдзаб ддаддаабсс сссадаадаб ЪЪссЪЪасаа дассабсбдд асааадсбаа 1440 дааадасаМ: асаЪбббаСа бдссадбада саабССддда аЪддсЪдЪЪа СбдасСддда 1500 адаабддада сссасббддд саадааасбд дааассбааа дабдССбаса адаа!;адд1;с 1560 баббдааббд дббсадсаас аааабдбаса асббадбсбс асададдсса сбдадааадс 1620 аааасаадаа бббдаааадд садддаадда бббссЪддба дадасСа'Ьаа ааббдддааа 1680 аббасбСсдд ссааабсасб бдбддддбба ббабсЪбббб ссддаСбдбб асаассаСса 1740 сЪабаадааа сссддббаса абддаадббд сббсаабдба дааабааааа дааа^даСда 1800 бсбсадсбдд ббдСддааСд ааадсасСдс СсСббассса бссаЪббаЪб бдаасас1;са 1860 дсадбсбссЪ дбадсЪдсба сасбсЬаНдС дсдсаабсда дббсдддаад ссабсададб 1920
    СЛссааааЪа ссбдабдсаа ааадЪссасС ЪссддИЪббб дсабабассс дсабадббЪб 1980
    Оасбдабсаа дЪЪбЪдаааЪ ессббЬсбса адабдаасбб дбдбабасаб ббддсдааас 2040 сдссдсссод ддбдсСбсбд дааббдбааб абддддаасс сСсадбаСаа бдсдаад^аб 2100 дааагсббдс Ъбдсоссбад асааССасаб ддадасЪаСа сЪдаабссЪб аса^ааЪсаа 2160 сдбсасасба дсадссаааа бдсдбадсса адбдсббЪдс саддадсаад дадЪдбдбаЪ 2220 ааддааааас бддааббсаа дсдасса^сб ссассбсаас ссадабаабб ЪЪдсСаЪЪса 2280 асОбдадааа ддбддааадб ссасадбасд Сддаааассд асасСЪдаад ассЪддадса 2340 аГСбЬсбдаа аааббббаЬб дсадсбдГЛа Гадсассббд адббдбаадд адааадсбда 2400 бдбаааадас асЬдаСдссд ИбдаЁдГдГд бабОдсбдаЪ ддСдСсбдба бадабдсССС 2460 сссаааассб сссаоддада садаадаасс бсааабСЫзс басбдаддаС ссабадсбаа 2520 сдссссСсЪс ссбссссссс сссСаасдбб асбддссдаа дссдсббдда абааддссдд 2580 бдбдсдбССд бсбаСабдСО аббббссасс аЪаббдссдЬ сСС^бддсаа Ъдбдадддсс 2640 сддааассбд дсссбдбсбб сббдасдадс аСЪссОаддд дЬсбббсссс Ссбсдссааа 2700 ддааОдсаад д£с£дСЪдаа £д£сд!даад даадсадббс сСсЪддаадс ббсбЬдаада 2760 сааасаасдЪ ссд1:адсдас ссосбдсадд садсддаасс ссссассбдд сдасаддбдс 2320 сЬсбдсддсс аааадссасд гдгабаадаг асассодсаа аддсддсаса ассссадбдс 2380 сасдб^дбда дГИддабадб СдЪддааада дСсааабддс ЪсбссСсаад сдбагссаас 2940 ааддддсбда аддаЬдссса дааддбассс саЬЁдИабдд дабсЬдабсб ддддссбсдд 3000
    ЕдсасабдсС ЪОасабдЪдб ЪЪад1;сдадд бЬааааааас дбсбаддссс сссдаассас 3060 ддддасдСдд бЪЪЪссЪССд ааааасасда бдабаадсбб дссасаассс асадсддссд 3120 сСдссабсаб ддЪЪсдасса ЪСдаасЪдса бсдбсдссдб дЪсссааааб абддддаЬбд 3180 дсаадаасдд адассбассс бддссбссдс бсаддаасда дббсаадбас ббссааадаа 3240 бдассасаас сбсббсадбд дааддбааас адаабсбддс даЪСабдддо аддаааассе 3300 ддЪЪсбссае бссбдадаад аа£сдасс£С баааддасад ааооаабаба дООсСсадба 3360 дадаасбсаа адаассасса сдаддадсбс аббббсЪбдс саааадбббд дабдабдссо 3420 ^аадасббаб бдаасаассд дааббддсаа дСааадбада сагддбЪЪдд аЬадЬсддад 3480 дсадббсбдб ббассаддаа дссабдаабс аассаддсса ссбсадасбс ооодедасаа 3540 ддаЬсабдса ддаабббдаа адбдасасдЪ ббббессада ааГГдаЪЪЪд дддааабаба 3600 аасСЛсбссс адаабассса ддсдЁссбсЪ сбдаддбсса ддаддааааа ддсаЬсаадЪ 3660 аЬаадбббда адбсбасдад аадааадасб ааасдсдбдд бассбсЪада дбсдасссдд 3720 дсддссдсбЪ сдадсадаса бдабаадаЬа саССдабдад бббддасааа ссасаасбад 3780 заСдсадбда аааааабдсб ЪбабООдбда ааЪЪбдЪдае дсбаббдсЪЪ ЪаЪЪЪдЪаас 3840 саССаСаадс бдсаасааас аадббаасаа саасааббдс аббсаЪббба ЪдбЪбсаддЪ 3900 бсадддддад аЪдбдддадд ££££Ъ£ааад саад£аааас сбсбасаааб дбддСааааЪ 3960 сдаЪааддаЪ ссдддсСддс дбааЬадсда ададдсссдс ассдабсдсс сббсссааса 4020 дббдсдсадс с£даа£ддсд аабддасдсд сссбдбадсд дсдсаббаад сдсддсдддб 4080
    - 251 022752 д5ддЪдд£Ъа сдсдсадсдЪ дассдсЪаса сИИдссадсд сссСадсдсс сдсХссХЪЪс 4140 дсГГГсГГсс сХЪссХПсХ сдссасдЪЪс дссддсЪгГс сссд£саадс £сХааа!сдд 4200 дддс+сссЪЪ ЬадддЬ+ссд аЬНадЬдсХ ^Хасддсасс Ъсдассссаа аааасХГдаТ. 4260 £аддд£да£д дььсасд+ад гдддссаьсд ссссдаЪада сддС++£Хсд сссХЬ£дасд 4320 ЬОддадЬсса сдЬЬсХЬЪаа Ьад1дда<Хс СХдЬЬссааа схддаасаас асХсаасссХ 4380 аЪс+сдд+сЪ а+Сс++++да СЪЬаЪааддд а£ХЫ:дссда ЪЪЬсддссЪа 5Хдд{Хаааа 4440 ааЬдадсХда ЪСХаасаааа а££Хаасдсд ааЕХСХааса ааа+а+Ъаас дсХ1асаа!Х 4500 ЪссХдаЪдсд д+аЪ+Ъ+сХс сХ+асдсаХх Ъд^дсддЪаЬ ъъсасассдс а+а^дд+дса 4560 сСсХсад+ас аа+сХдсхсХ да^дссдсаЬ адЬСаадсса дссссдасас ссдссаасас 4620 ссдсЦдасдс дсссЬдасдд дс+1д+с+дс СсссддсаЬс сдс+Гасада саадсЬд+да 4630 ссдЪсХссдд дадсЬдса+д ЬдСсададдЬ ЫХсассдЬс а^сассдааа сдсдсдадас 4740 дааадддссЬ сдЬда+асдс сСа££Х£ХаЪ адд+ЬааЪдЪ са£даЪаа£а а1:ддЬЬСс77 4800 адасдЬсадд ЪддсасЫЛЛ сддддаааЪд Ъдсдсддаас сссЪа+ХХдЪ 1;+а££ХХХсХ. 4860 аааьасаыс аааьаьдЬаЪ ссдсьсаьда дасааьаасс с£даЬааа5д с+ссаа+аа£. 4920 аЬХдааааад даадад5.аСд адЬаЬЪсаас аЪСХссд^дЬ сдссс1Ха51 сссИХ£Ь5д 4980 сддсаММзд зсЬГссгдЫ: СЬЬдсЬсасс садааасдсЬ дд£дааад5а ааада+дсЬд 5040 аадаСсадТХ ддд£.дсасда д!дддппаса ЬсдаасЬдда ЪсКсаасадс дд£аадаЬсс 5100 ЬХдададХХЪ £сдссссдаа даасд+ХХ+с саа+да^дад сас+СЬХааа д^Ъс+дс+аГ 5160 дгддсдсдде а++а+сссд+ а^Сдасдссд ддсаададса асЬсддЪсдс сдса!:асас^ 5220 аСХс+садаа £дас!ЬддЫ: дад!ас5сас садЬсасада ааадсаСсМ асддаСддса 5230 ъдасадьаад адааххаьдс адсдссдсса Ьаассасдад гдаьаасасХ дсддссаасЬ 5340 ЬасЪСсСдас аасдаСсдда ддассдаадд адс+аассдс Ы:£5Х+дсас аасаИддддд 5400 аИса£.д+аас ИсдссЪ+даГ сд£Хдддаас сддадс+даа 1даадсса+а ссааасдасд 5460 адсдСдасас сасдаСдссС дСадсааЬдд саасаасд£Х дсдсааасСа ЫаасСддсд 5520 аасЬас^хас ^ссадсСГсс сддсаасааг Ъаагадас^д да£.ддаддсд даЬааадсСд 5580 саддассасС Ьс+дсдс+сд дсссСХссдд сХддсХддЪЪ ЬаСЪдсЪдаС аааСсСддад 5640 ссддЬдадсд Ъддд+сЪсдс ддЪа+саСЪд садсасХддд дссада^ддС аадсссХссс 5700 дГаЬсдЪад!. ЪаЪсХасасд асддддадЬс аддсаасЛаЪ дда+даасда ааНадасада 5760 ЬсдсЬдадаЬ аддСдссЪса сХдаЬ'Ь.аадс а^ГддЪаасЪ дСсадассаа д+С+аеХсаС 5820 а+а+асХЪ+а да1дата ааасХ+са££ СГСааМХаа ааддаЬсСад дгдаада^сс 5880 СМ+ЪдаСаа Ъс+са+дасс ааааЬсссСС аасдЬдадЬЬ 1+сдЪ+ссас ЬдадсдЬсад 5940 ассссдГада ааада^сааа ддаГсгхсХЬ дада£.сс££Ь ίΐΧΐсгдсдс д+аа£.схдсх 6000 дсЪХдсааас ааааааасса ссдсЬассад сддЬддЪЬЬд НХдссддаЬ саададсЬас 6060 саасХсХСХЪ сссдааддса асьддсхъса дсададсдса даСассаааС асСдССсЬСс 6120 ЬадЪдЬадсс дЬадЫаддс сассасХЬса адаасХсХдЪ адсассдссЪ асаЪассЪсд 6180 сЪсЪдс+ааЪ ссЪдЪЪасса дЪддсЪдсЪд ссадЪддсда ЪаадЪсдЪдЪ сЪЪассдддЪ 6240 ЪддасЪсаад асдаЪадЪЪа ссддаЪаадд сдсадсддЪс дддсХдаасд дддддЪЪсдЪ 6300 дсасасадсс садсЪХддад сдаасдассЪ асассдэасЪ дада+ассХа садсдЪдадс 6360 ЪаЪдадааад сдссасдсЪЪ сссдааддда даааддсдда саддЪаЪссд дЪаадсддса 6420 дддЪсддаас аддададсдс асдадддадс ЪЪссаддддд ааасдссЪдд ЪаЪсХХХаХа. 6480 дЪссЪдЪсдд дЪЪХсдссас сЪсЪдасЪЪд адсдЪсдаСХ ЪЪЪдСдаЪдс ЪсдЪсадддд 6540 ддсддадссХ аЪддааааас дссадсаасд сддссЪЪЪЪЪ асддЪЪссЪд дссЪХЪЪдсХ 6600 ддссЪХ£Хдс ЪсасаЪддсЪ сдасадаЪсЪ 6630 <210> 141 <211> 186 <212> Белок <213> Миз ггьизси1из <220>
    <223> дигидрофолатредуктаза <400> 141
    Уа1 1 Агд Рго Ьеи Азп Суз 5 Не Уа1 А1а νβΐ 10 Зег С1п АЗП МеЪ 31у 15 11е С1у Ьу® Αεη С1у Азр Ьеи Рго Тгр Рго РГО Ьеи Агд АЗП С1и РНе Ьуз 20 25 30 Туг РНе С1п Агд МеЪ ТЬг ТЬг ТЬг Зег Эег Уа1 С1и С1у Ьуз С1п Азп 35 40 45 Ьеи Уа1 11е МеЪ С1у Агд Ьуз ТЬг Тгр РЬе Зег 11е Рго С1и Ьуз Азп 50 55 60
    - 252 022752
    Агд Рго Ьеи Ьуз Азр Агд 11е Азп 11е УаЬ Ьеи Зег Агд СЬи Ьеи Ьуз 65 70 75 80 СЬи Рго Рго Агд СЬу АЬа Н1з РЬе Ьеи АЬа Ьуз Зег Ъеи Азр Азр АЬа 85 90 95 Ьеи Агд Ьеи 11е СЬи СЬп Рго СЬи Ьеи АЬа Зег Ьуз Уа1 Азр Меб УаЬ 100 105 110 Тгр 11е УаЬ СЬу СЬу Зег Зег УаЬ Туг СЬп СЬи АЬа МеЪ Азп СЬп Рго 115 120 125 Е1у ΗΪ3 Ьеи Агд Ьеи РПе УаЬ ТПг Агд Ые Меб СЬп С1и РПе СЬи Зег 130 135 140 Азр ТПг РЬе РЬе Рго СЬи 11е Азр Ъеи СЬу Ьуз Туг Ьуз Ьеи Ьеи Рго 145 150 155 160 СЬи Туг Рго СЬу УаЬ Ьеи Зег СЬи УаЬ СЬп СЬи СЬи Ъуг СЬу 11е Ьуз 165 170 175 Туг Ьуз РЬе СЬи УаЬ Туг СЬи Ьуз Ьуз Азр 180 135
    <210> 142 <211> 6 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> Метка гексаШз <400> 142
    Ηίδ Ηίδ Ηίδ Ηίδ Ηίδ Ηίδ 1 5 <210> 143 <211> 8 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> Г1ад-метка <400> 143
    Азр Туг Ьуз Азр Азр Азр Азр Ьуз 1 5 <210> 144 <211> 22 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> сигнальный пептид человеческого 1дК <400> 144
    Ме£ Азр Ме£ Агд УаЬ Рго АЬа СЬп Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Ъеи Ъеи Ъеи Тгр 1 5 10 15 Ьеи Рго СЬу АЬа Агд СЬу 20
    <210> 145 <211> 21
    - 253 022752 <212> Белок <213> Ми£ пшзси1из <220 <223> сигнальный пептид 1дК мыши <400> 145
    МеЕ С1и ТНг Азр ТЬг Ьеи Ьеи Ьеи Тгр УаЬ Ьеи Ьеи Ьеи Тгр 7а1 Рго 1 5 10 15 С1у Зег ТНг 61 у А$р 20
    <210> 146 <211> 1500 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220 <223> 3ΡΑΜΐ-53νΑ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ΝΚ$Ι и ВатН1 <400 146 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60 ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд 120 дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ 180 сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ 240
    ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕзсссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд 430 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540
    ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720
    ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад 900 дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд 960 ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ сЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс 1020 сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд 1080 дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас 1140
    ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад 1200 ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа 1260 аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас 1320 асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ЕЕдасдссЕЕ ЕсЕсаадсса 1380 ссааЕддада сЕдаддадсс ссадаЕсЕЕЕ ЕасаасдссЕ сссссЕссас сЕЕдадЕдсЕ 1440 ассаЕдЕЕса ЕсдЕаЕсЕаЕ асЕЕЕЕссЕд аЕЕаЕаЕсаа дсдЕддсаЕд аЕааддаЕсс 1500 <210 147 <211> 1494 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5ΡΑΜ1-ΙΙ53 кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ΝΗβΙ и ВатН1 <400 147 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60
    - 254 022752 ддддсааддд дасРРаасРР сададсРссс ссРдРааРсс дсаРддаасд ссссРадсда аРРсРдРРРд дддаааРРРд сОдОРООсОР РРаРсддРад сссРсдааРс аасдсРассд гасдрддагс дгсРдддсРа РРасссРРас арсдасадса ддаддсаРРс сРсадааааС аРсасРдсад дассассрдд асаРРсРаса РдссадРдда саарсрсдда арддсрдрда ссРасРРддд сссдаааРРд даадсссаад даРдРдРаРа дрдсадсадс адаасдрдса дсРдРсссРР асадаадсса РРсдадааад сРдддаадда РРРссРддРР дадасаараа ссраассасс РсРддддсРа РРаРРРдРРс сссдаРРдсР сссддсРаса асддаРсРРд РССсаасдРс даааРРаааа РРдРддааРд адРсРасРдс асРсРасссс РсРаРаРаРс дРадссдсРа сссРсРасдР РсддааРада дрдадддаад сссдардсса ааРсРссссР сссадРдРРР дссРасасса дрдррдаадр РссРдадсса ддасдадсРс дРдРаРасРР ддадссРсРд ддаРсдРдаР сРддддсасР сРдадРаРРа сРдсРдРРдд аРаасРасаР ддадасааРс сРдаасссаР дссдсРаада РдРдРРсаса ддрдсрдрдр саададсадд РддаасРсаа дсдаРРаРсР СсаРсРдаас ссадаРааРР ддрддрааар РсасРдРссд адддаадссс асасРсдадд аадРРсРасР дРадсРдсРа РадсасРсРд адррдраадд асрдардссд РРдасдРРРд саРсдссдаР ддддрдрдра ссааРддада срдаддадсс ссадаРсРРР РасаасдссР ассаРдРРса РсдРаРсРаР ас-|.--.-.-секс аррарарсаа <210> 148 <211> 1488 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАМ1-ГЫ1 кодон-оптимизированная ДНК и ВатН1 <400> 148 дсРадсаРдд асаЪдадддЪ ассадсссад срдрРдддсс ддддсааддд дасРРаасРР сададсРссс ссРдРааРсс дсаРддаасд ссссРадсда аРРсРдРРРд дддаааРРРд срдррррсрр РРаРсддРад сссРсдааРс аасдсРассд РасдРддаРс дРсРдддсРа РРасссРРас арсдасадса ддаддсаРРс сРсадааааР аРсасРдсад дассассрдд асаРРсРаса РдссадРдда сааРсРсдда арддсрдрда ссРасРРддд сссдаааРРд даадсссаад даРдРдРаРа дрдсадсадс адаасдрдса дсРдРсссРР асадаадсса РРсдадааад сРдддаадда РРРссРддРР дадасаараа ссраассасс РсРддддсРа РРаРРРдРРс сссдаРРдсР сссддсРаса асддаРсРРд РРРсаасдРс даааРРаааа РРдРддааРд адРсРасРдс асРсРасссс РсРаРаРаРс дРадссдсРа сссРсРасдР РсддааРада дрдадддаад сссдардсса ааРсРссссР сссадРдРРР дссРасасса дрдррдаадр РссРдадсса ддасдадсРс дРдРаРасРР ддадссРсРд ддаРсдРдаР сРддддсасР СРдадРаРРа сРдсРдРРдд аРаасРасаР ддадасааРс сРдаасссаР дссдсРаада РдРдРРсаса ддрдсрдрдр саададсадд РддаасРсаа дсдаРРаРсР ссаРсРдаас ссадаРааРР ддрддрааар РсасРдРссд адддаадссс асасРсдадд аадРРсРасР дРадсРдсРа РадсасРсРд адррдраадд асрдардссд РРдасдРРРд саРсдссдаР ддддрдрдра ссааРддада срдаддадсс ссадаРсРРР РасаасдссР ассаРдРРса РсдРаРсРаР асРРРРссРд аРРаРаРдаР сааасдрссс асдаассРсР дасадддддр
    РРасРддддС асааадсРаа
    РРдасРддда адаассдарс ссдааааадс аасРРдддаа асааРсасса дааасдарда
    Рсаасасаса ссаРсадддР ддаРсдРдРР
    РРддсдадас
    РдсдаРсааР аРаРсаРРаа дадРаРдсаР
    РРдсааРсса агсрсдааса ааааадссда
    РРдасдссРР сссссРссас дсРдаРаадд
    сРРссРдРдд 12 0 ддасаРдРсР 180 дасааРсРРР 240 дассдрдаас 300 дааддаРаРР 360 ддадрддада 420 саррдадсрд 480 Раадсаддаа 540 асРдсРРада 600 сРаРаадаад 660 ссРсРсРРдд 720 дсадрсссса 780 дРссаадаРс 840 Рассдассад 900 адРРдсРсРд 960 даадрссрдс 1020 сдРдасРРРд 1080 Раддаадаас 1140 дсрддаааад 1200 дрррадсдаа 1260 рдрдааадас 1320 РсРсаадсса 1380 СРРдадРдсР 1440 аРсс 1494
    с сайтами рестрикции ΝΙιβΙ
    РРсРРсРдсР сааасдрссс асдаассРсР дасадддддр
    РРасРддддР асааадсРаа
    РРдасРддда адаассдарс ссдааааадс аасРРдддаа асааРсасса дааасдарда
    Рсаасасаса ссарсадддр ддаРсдРдРР
    РРддсдадас
    РдсдаРсааР аРаРсаРРаа дадРаРдсаР
    РРдсааРсса аРсРсдааса ааааадссда
    РРдасдссРР сссссРссас ааддаРсс
    РРддсРсссР сРРссРдРдд ддасаРдРсР дасааРсРРР дассдрдаас дааддаРаРР ддадрддада саррдадсрд
    Раадсаддаа асРдсРРада сРаРаадаад ссрсрсррдд дсадрсссса дРссаадаРс
    Рассдассад адРРдсРсРд даадрссрдс сдРдасРРРд
    Раддаадаас дсрддаааад дРРРадРдаа рдрдааадас
    РсРсаадсса сРРдадРдсР
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1440
    1488
    - 255 022752 <210 149 <211> 1482 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220 <223> 5РАМ1-1ЪГЪ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ИЬе! и ВашН!
    <400> 149 дсСадсаЪдд ддддсааддд дсаСддаасд с£д£С.£Лс£1;
    СасдЬддаДс ддаддсаДСс асаККс^аса ссДасДДддд дСдсадсадс ££сдадааад сс1аассасс сссддсСаса
    ГЛдДддааЪд дЪадссдсЪа сссдаЪдсса д£дДДдаад£ ддадсс(:сДд ссдсддсъдд дссдсРаада
    7ддаасДсаа ддЪддЪаааб аадСЛсДас£ асСдаСдссд ссааЪддада асса1:д1:(:са асаЪдадддЪ дасЪКаасДД ссссКадсда
    ЪЪаЪсддСад дСсЪдддсЪа сСсадаааа7
    7дссад5дда сссдаааССд адаасдЬдса с^дддаадда
    ЪсСддддсСа асддаСсскд адСсЪасЪдс сссЪсЪасдС ааЪсХссссЬ
    ДссДдадсса ддаЪсдЪдаЪ асаасСасаЪ
    СдДдСЕсаса дсдаСЪа^сД
    ДсасСдСссд д£адс£дс£а
    КДдасдССДд сСдаддадсс
    ДсдДаДсДаД ассадсссад сададсЪссс а^Ъс^д^Г^д сссЪсдааЪс
    ЬЬасссЪЪас аСсасЪдсад саа^сХсдда даадсссаад дсДдЬсссЪЪ
    ДДДссДддДД
    СЪаЪС^дСЪс
    ССДсаасд7с асСсСасссс
    Ъсддаа^ада
    00039(:9(:(:(:
    ддасдадс^с с^ддддсасЪ ддадасааЪс ддДдсЪдЪдЪ ссаЪсДдаас адддаадссс садсасгсгд са5сдссда£ ссадаДсССС асКЬЪСссДд сСдСЪдддсс ссДдЪааЪсс дддааа£Л£д аасдсСассд аЪсдасадса дассассХдд аКддсКд^да даКдКдСа^а асадаадсса дадасааСаа сссдаЫдсЪ дааасъаааа
    ЪсКаКаСа^с дЪдадддаад дссЪасасса д^д^аЪасСД сДдадЪа^Са сДдаасссаЪ саададсадд ссада^ааДД асасЪсдадд адссдСаадд ддддЪдСдЪа
    ЪасаасдссЪ
    1да1аадда£
    ЪЪсСЪсДдсС сааасдСссс асдаассСсК дасадддддЪ
    СЪасЬддддЪ асааадсСаа
    СЪдас7ддда адаассда(:с ссдааааадс аас£Ъдддаа асааЮасса дааасдасда
    Ксаасасаса ссаЪсаддд£ ддаЪсдЪд1:Ъ дсддсдадас
    ЪдсдаКсааС аЪаЪсаЪЪаэ дадЬаЪдсаС
    ДЪдсааДсса аЪсЪсдааса ааааадссда
    ДСдасдссДД сссссСссас
    ЪСддсЪсссЪ сДЪссЪдДдд ддаса7д(:с1: дасааЪсЪЫ: дассд(:даас дааддаЪаЪЪ ддадЪддада са££дадс1:д Саадсаддаа ас^дсДДада с1:а1:аадаад ссбсссксдд дсадКсссса дСссаадаСс Ъассдассад адк^дсъсъд даадКссКдс сдСдасСЪСд Ъаддаадаас дс^ддаааад д££ Дад(:даа сдсдааадас ЬсДсаадсса сС(:дадДдс(:
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1440
    1482 <210> 150 <211> 1476 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 3ΡΑΜ1-ν5ΙΣ кодон-оптимизированная ДНК с и ВатпН!
    сайтами рестрикции КЬе!
    <400 150 дсбадсабдд ддддсааддд дсаСддаасд сЁдД ΐΐΐιοΐί;
    5асд5дда1:с ддаддсаЪСс асабЬсСаса ссДасЪСддд д(:дсадсадс
    6(:сдадааад ссДаассасс сссддсСаса
    СДдСддааПд дсадссдсса сссдаКдсса асаЬдадддЪ дасЪДаасДЪ ссссЪадсда
    ДДаЪсддДад д£с£дддс£а сСсадааааЪ
    ЬдссадСдда сссдаааДДд адаасдДдса сПдддаадда
    СсДддддсДа асддаСсДЪд адПсСасСдс ссссссасдс ааКсдссссД ассадсссад сададсЪссс аСДсДдЪДДд ссс7сдаа1:с
    М:ассс71:ас аОсасЪдсад саа(:с(:сдда даадсссаад дсбдДсссМ:
    ЬЪЪссДддМ:
    ЪЪаДДЪдЪЪс ъъдсаасддс асъсъасссс ъсддаасада сссадбдСЬС сСдСЁдддсс ссЪдСааДсс дддаааДДЪд аасдссассд аДсдасадса дассассЪдд аЪддсДдЪда даЪдЬдСа^а асадаадсса дадасааДаа сссдаДСдсб даааЪСаааа
    Дсъаъаъадс дДдадддаад дссЪасасса
    СЪсССсДдсб сааасдСссс асдаассСс!:
    дасаддддд!
    СЛасСддддЪ асааадсДаа
    ЬЪдасЪддда адаассдаДс ссдааааадс аасЪСдддаа асааЪсасса дааасдаДда
    Ъсаасасаса ссаЪсадддС ддаСсдСд^С
    ДбддсДсссД 60 сГСсс(:д1дд 120 ддасаСдЪсЪ 180 дасаассссд 240 дассд^даас 300 дааддаДаДЪ 360 ддадЪддада 420 саМздадсИд 480 Саадсаддаа 540 асЪдсСбада 600 с(:а6аадаад 660 ссСсЪсДСдд 720 дсад(:сссса 780 дДссаадаСс 840 бассдассад 900
    - 256 022752 дВдРВдаад!
    ддадссВсСд сЬдсРдввдд дссдсбаада
    ОддаасРсаа ддбддбаааР аадЫсВасР асЬдаЬдссд ссааЕддада ассаРдЪВса
    ЬссЕдадсса ддаВсдВдаВ абаасВаса!
    СдРдВРсаса дсдагРассг
    ВсасЪдРссд дРадсРдсЬа
    ВРдасдРГЬд сЬдаддадсс
    ЕсдЕаГсЬаГ ддасдадсЬс сЬддддсасС ддадасааГс ддРдсбдСдС ссагсвдаас адддаадссс
    РадсасСсбд саВсдссдаЬ ссадаСсССЬ асВРВдаРаа дСдВаВасСЬ сГдадЪаЪЬа сбдаасссаЬ саададсадд ссадасаабг асасбсдадд адЫдбаадд ддддбдВдВа ЪасаасдссЬ ддаЪсс
    ССддсдадас
    СдсдаСсааС аЬаСсаССаа дадСаСдсаС сСдсааЬсса аСсСсдааса ааааадссда
    ССдасдссСС сссссСссас адССдсСсСд даадСссЬдс сдСдасСССд
    Саддаадаас дссддаааад дСССадСдаа
    СдСдааадас
    СсСсаадсса сССдадСдсС
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1440
    1476 <210> 151 <211> 1470 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5РАМ1-Р1УЗ кодон-оптимизированная ДНК ΝΠθΙ и ВашН1 <400> 151 дсЪадсаСдд асаВдадддС ассадсссад сЬдГсдддсс ддддсааддд дасВСаасВР сададсСссс ссРдРааВсс дсаРддаасд ссссРадсда абРсбдЬЪЬд дддаааЪВВд сСдСССЕсСЬ ССаЕсддСад сссСсдааЬс аасдсРассд ОасдсддаРс дРсЪдддсва всасссссас абсдасадса ддаддсаРРс сЪсадааааС аГсасРдсад дассассЬдд асаЫсГаса СдссадЬдда сааЬсбсдда аЬддсРдВда ссЪасЫддд сссдаааСВд даадсссаад даЪдРдВаВа дрдсадсадс адаасдЬдса дсрдбсссбб асадаадсса ССсдадааад срдддаадда СССссСддЪЬ дадасааЬаа ссВаассасс РсРддддсРа ЫаВВСдВЬс сссдаРРдсс сссддсГаса асддаРсбРд ГРРсаасдбс даааВРаааа Ыдбддаабд адЬсбасЬдс асЬсЬасссс ЬсЬаСасаГс дСадссдсЪа сссЕсРасдР ЕсддааСада дГдадддаад сссдасдсса ааЪссссссР сссадсдвы; дссЪасасса дСдСВдаадВ ЪссРдадсса ддасдадсЬс дЬдбаЬасЬЬ ддадссбсрд ддаЬсдЬдаб сРддддсасЪ сСдадСаССа сСдсВдЫдд абаасЬасаб ддадасааСс сОдаасссаб дссдсЬаада ЬдЕдЫсаса ддЬдсВдСдГ саададсадд Рддаасбсаа дсдаЬГаЬсЛ ссабсВдаас ссадэаааЬС ддбддОаааЬ ВсасВдЬссд адддаадссс асасбсдадд аадЫсЬасЬ дЬадсРдсба ВадсасВсВд адЫдСаадд асЬдардссд СбдасдЬЬЬд сабсдссдаВ ддддбдРдЬа ссаабддада сВдаддадсс ссадаСсбЫ басаасдссР ассаВдВВса ЪсдЬаРсРРд аРааддаОсс <210> 152 <211> 1464 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность с сайтами рестрикции сссссссдсс сааасдСссс асдаассСсС дасадддддС ссассддддс асааадсСаа ССдасСддда адаассдаСс ссдааааадс аасССдддаа асааСсасса дааасдаСда Ссаасасаса ссаСсадддС ддаСсдСдСС 1Сддсдадас СдсдаСсааС аСаСсаССаа дадСаСдсаС ССдсааСсса аСсСсдааса ааааадссда ССдасдссСС сссссСссас ссддсссссс 60 сССссСдСдд 120 ддасаСдСсС 180 дасааСсССС 240 дассдСдаас 300 дааддаСаСС 360 ддадСддада 420 саССдадсСд 480 Саадсаддаа 540 асСдсССада 600 сСаСаадаад 660 ссСсСсССдд 720 дсадСсссса 780 дСссаадаСс 840 Сассдассад 900 адССдсСсСд 960 даадСссСдс 1020 сдСдасСССд 1080 Саддаадаас 1140 дссддаааад 1200 дСССадСдаа 1260 СдСдааадас 1320 СсСсаадсса 1380 сССдадСдсС 1440
    1470 <220>
    <223> 3ΡΑΜ1-ΤΜΓΙ кодон-оптимизированная ДНК ЫЬе! и ВашН!
    с сайтами рестрикции <400> 152 дсРадсаРдд ддддсааддд дсаЬддаасд с;д:ЫсУ асаРдадддЬ дасРРаасРЕ ссссЬадсда
    РРаРсддРад ассадсссад сададссссс аССсСдСССд сссСсдааСс сСдССдддсс сссдбааСсс дддаааСССд аасдсСассд
    ССсССсСдсС сааасдсссс асдаассСсС дасадддддС
    ССддсСсссС сССссСдСдд ддасаСдСсС дасааСсССС
    120
    180
    240
    - 257 022752
    ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЬддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адзассдаЕс саЕЕдадсЕд 480 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540
    ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720
    ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад 900 дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд 960 ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ сЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс 1020 сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд 1080 дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас 1140
    ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад 1200 ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа 1260 аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас 1320 асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ЕЕдасдссЕЕ ЕсЕсаадсса 1380 ссааЕддада сЕдаддадсс ссадаЕсЕЕЕ ЕасаасдссЕ сссссЕссас сЕЕдадЕдсЕ 1440 ассаЕдЕЕса ЕсЕдаЕаадд аЕсс 1464 <210> 153 <211> 1458 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАМ1-5АТМ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ΝΕίθΙ и ВатН1 <400> 153 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60 ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд 120 дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ 180 сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ 240
    ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд 480 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540
    ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса СЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720
    ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад 900 дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд 960 ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ сЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс 1020 сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд 1080 дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас 1140
    ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад 1200 ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа 1260 аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас 1320 асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ЕЕдасдссЕЕ ЕсЕсаадсса 1380 ссааЕддада сЕдаддадсс ссадаЕсЕЕЕ ЕасаасдссЕ сссссЕссас сЕЕдадЕдсЕ 1440 ассаЕдЕдаЕ ааддаЕсс 1458 <210> 154 <211> 1452 <212> ДНК
    - 258 022752 <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАМ1-ТЬЗА кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ΝΙίοΙ и ВатН1 <400> 154 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа ЕЕсдадааад СЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ сЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ЕЕдасдссЕЕ ЕсЕсаадсса ссааЕддада сЕдаддадсс ссадаЕсЕЕЕ ЕасаасдссЕ сссссЕссас сЕЕдадЕдсЕ ЕдаЕааддаЕ сс <210> 155 <211> 1446 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАМ1-Р5ТЬ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ΝΗοΙ и ВатН!
    <400> 155 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕэаЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЬЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ сЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1440
    1452
    120
    130
    240
    300
    3 60
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    - 259 022752 дссдссаада бддаасссаа ддбддбаааб аадббсбасб асбдабдссд ссаабддада ддабсс бдбдббсаса дсдаббабсб бсасбдбссд дбадсбдсба ббдасдбббд сбдаддадсс ддбдсбдбдб ссабсбдаас адддаадссс бадсасбсбд сабсдссдаб ссадабсббб саададсадд ссадабаабб асасбсдадд адббдбаадд ддддбдбдба басаасдссб дадбабдсаб ббдсаабсса абсбсдаасэ ааааадссда ббдасдссбб сссссбссас баддаадаас дсбддаааад дбббадбдаа бдбдааадас бсбсаадсса сббдбдабаа
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1440
    1446 <210> 156 <211> 1440 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАМ1-АЗР5 кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ИПе! и ВатН!
    <400> 156 дсбадсабдд ддддсааддд дсабддаасд сбдббббсбб басдбддабс ддаддсаббс асаббсбаса ссбасббддд дбдсадсадс ббсдадааад ссбаассасс сссддсбаса ббдбддаабд дбадссдсба сссдабдсса дбдббдаадб ддадссбсбд сбдсбдббдд дссдсбаада бддаасбсаа ддбддбаааб аадббсбасб асбдабдссд ссаабддада асабдадддб дасббаасбб ссссбадсда ббабсддбад дбсбдддсба сбсадааааб бдссадбдда сссдаааббд адаасдбдса сбдддаадда бсбддддсба асддабсббд адбсбасбдс сссбсбасдб аабсбссссб бссбдадсса ддабсдбдаб абаасбасаб бдбдббсаса дсдаббабсб бсасбдбссд дбадсбдсба ббдасдбббд сбдаддадсс ассадсссад сададсбссс аббсбдбббд сссбсдаабс ббасссббас абсасбдсад саабсбсдда даадсссаад дсбдбсссбб бббссбддбб ббабббдббс бббсаасдбс асбсбасссс бсддаабада сссадбдббб ддасдадсбс сбддддсасб ддадасаабс ддбдсбдбдб ссабсбдаас адддаадссс бадсасбсбд сабсдссдаб ссадабсббб сбдббдддсс ссбдбаабсс дддааабббд аасдсбассд абсдасадса дассассбдд абддсбдбда дабдбдбаба асадаадсса дадасаабаа сссдаббдсб даааббаааа бсбабабабс дбдадддаад дссбасасса дбдбабасбб сбдадбабба сбдаасссаб саададсадд ссадабаабб асасбсдадд адббдбаадд ддддбдбдба басаасдссб ббсббсбдсб сааасдбссс асдаассбсб дасадддддб ббасбддддб асааадсбаа ббдасбддда адаассдабс ссдааааадс аасббдддаа асаабсасса дааасдабда бсаасасаса ссабсадддб ддабсдбдбб ббддсдадас бдсдабсааб абабсаббаа дадбабдсаб ббдсаабсса абсбсдааса ааааадссда ббдасдссбб сссссбссбд ббддсбсссб сббссбдбдд ддасабдбсб дасаабсббб дассдбдаас дааддабабб ддадбддада саббдадсбд баадсаддаа асбдсббада сбабаадаад ссбсбсббдд дсадбсссса дбссаадабс бассдассад адббдсбсбд даадбссбдс сдбдасбббд баддаадаас дсбддаааад дбббадбдаа бдбдааадас бсбсаадсса абааддабсс
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    490
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1030
    1140
    1200
    1260
    1320
    1390
    1440 <210> 157 <211> 1434 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5ΡΑΜ1-ΥΝΑ3 кодон-оптимиэированная ДНК с сайтами рестрикции ΝΗοΙ и ВатН!
    <400> 157 дсбадсабдд ддддсааддд дсабддаасд сбдббббсбб басдбддабс ддаддсаббс асаббсбаса асабдадддб дасббаасбб ссссбадсда ббабсддбад дбсбдддсба сбсадааааб бдссадбдда ассадсссад сададсбссс аббсбдбббд сссбсдаабс ббасссббас абсасбдсад саабсбсдда сбдббдддсс ссбдбаабсс дддааабббд аасдсбассд абсдасадса дассассбдд абддсбдбда ббсббсбдсб сааасдбссс асдаассбсб дасадддддб ббасбддддб асааадсбаа ббдасбддда ббддсбсссб 60 сббссбдбдд 120 ддасабдбсб 180 дасаабсббб 240 дассдбдаас 300 дааддабабб 360 ддадбддада 420
    - 260 022752 ссЪасЪЪддд сссдааа1:£д даадсссаад дабдЪдЪаЁа адаассдаЪс са££дадс£д 480 дИдсадсадс адаасдЪдса дсЪд^сссЪЪ асадаадсса ссдааааадс баадсаддаа 540 £1сдадааад сбдддаадда ЪЪЪссЪддМ; дадасааСаа аас^Ъдддаа асТдсИада 600 сс^аассасс ^сЪддддсЪа Ъ^а^ЛбдЪ^с сссда££дс£ асааЬсасса сСаиаадаад 660 сссддсЪаса асддаЪсЪЪд £££саасд£с даааЪЪаааа дааасдаЪда ссЪсТсццдд 720
    ЪЪдЪддааЪд адЪсЪасЪдс ас^сЪасссс £с£а£аСаЪс Ьсаасасаса дсад^сссса 780 дСадссдсЬа сссСсСасдС СсддааСада дСдадддаад ссаЪсаддд£ дТссаадаТс 840 сссдаЪдоса аасс1:ссссС. сссадЪдЪМ: дссЪасасса дда£сд£дС1: £ассдассад 900 дЪд1:С.даад1: ЪссЪдадсса ддасдадс£с д£д£а£ас££ Ъ£ддсдадас адЪЪдсЪсЪд 960 ддадссЪсЪд ддаЕсд'Ьдаи с!ддддсас£ с£дад£а£Ха ЪдсдаЪсааЪ даадЬссЪдс 1020 сСдсСдЪЪдд аЪаас^асат ддадасааЪс сЪдаассса! аъатсассаа сдЪдас£££д 1080 дссдсЬаада £.дЬд!Лсаса ддЪдс^дЪдЪ саададсадд дад^аЪдсаЪ Ъаддаадаас 1140 £ддаас£саа дсдаЪЬаЪсЛ ссатсодаас ссада^а^ЪЪ ЬЪдсааЪсса дсЪддаааад 1200 ддЪддъаааъ ссасгдЪссд адддаадссс асасгсдадд а^сссдааса д£££ад£даа 1260 аад££с1:асС. дСадсТдсЪа Ьадсас£с1;д адССдСаадд ааааадссда Сд^дааадас 1320 асЪдаЪдссд СЛдасд1М;д саЪсдссдаС ддддЪдЪдЪа ЪЪдасдссЕЕ ПсЕсаадсса 1380 ссаа£ддада с^даддадсс ссада£с£££ £асаасдсс£ сс^даЪаадд аьсс 1434 <210> 158 <211> 1431 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5ΡΑΜ1~ΕΥΝΑ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции МЬе1 и ВаглН1 <400> 158 дсЪадсаЪдд асаЪдадддЬ ассадсссад сХдСЪдддсс Ъ£с£Ъс£дс£ ЪЪддсЪсссЪ 60 ддддсааддд дасЪСаасСЬ сададсСссс ссЪдЪааСсс сааасд^ссс сСЪссЪдЪдд 120 дса^ддаасд ссссЬадсда а^^с^дсссд дддаааЪССд асдаассСсс ддаса£д£с£ 180 с^д^СТЪсЪТ Ъ^аЪсддЪад ссс^сдааЪс аасдс^ассд дасаддддд£ дасаа£с£££ 240
    СасдЪддаСс дЬсМдддсЪа ЪЪасссЪЪас аЪсдасадса 1сасСдддд1: дассдСдаас 300 ддаддсаЪЪс сЬсадаааа! аТсасСдсад дассассСдд асааадсЬаа дааддаЪаСЪ 360 аса1;£с£аса ЪдссадЪдда сааЪсЪсдда асддсСдЪда ЪЪдасХддда ддад^ддада 420 сс£асС£ддд сссдаааЪ^д даадсссаад даЪдЪд£а1:а адаассда!:с саМ;дадс£д 480 дЪдсадсадс адаасдЪдса дсСдссссЫ асадаадсса ссдааааадс Саадсаддаа 540
    Шсдадааад сидддаадда ГССссПддЪ! дадасаа^аа аасЪЪдддаа ас£дсЪ£ада 600 ссЁаассасс £сСддддс1:а ЪЪа£ЛЪд££с сссдаССдсС асааНсасса с^аСаадаад 660 сссддс^аса асддаЪсЪЪд ЪЪЪсаасдЪс даааЪЬаааа дааасдаЬда сс£с£с££дд 720
    ООдОддааПд адТсЪасЦдс ас!сЪасссс £сСа£а£а£с Ъсаасасаса дсадСсссса 780 дсадссдс£а ссс£с£асд£ Ъсддаатада дгдадддаад ссаъсадддЬ дгссаадаЪс 840 сссда^дсса аа£с±сссс£ сссадЪдЪЪЛ дсс^асасса дда£сд£д1:£ Нассдассад 900 дЬдЪСдаадИ Ъсс^дадсса ддасдадсЪс д^дЪаЪас^Ь £Ъддсдадас ад££дсСс1:д 960 ддадссЪсСд ддаСсд^даС сЪддддсас^ с£дад£аЪСа ^дсдаСсааС даадПссСдс 1020 с£дс£д£Ъдд а£аасЪаса£ ддадасааЪс с£даассса£ аЪа£.са£Лаа сдЪдасЪЪЪд 1080 дссдссаада ЪдСдЪСсаса ддСдсСдТдТ саададсадд дадЪаЪдсаС. Ъаддаадаас 1140 £ддаасС.саа дсда£С.а£сС. ссаСсСдаас ссадаСааЫ: ССдсаа^сса дсСддаааад 1200 дд£дд£ааа1: ЪсасЪд^ссд адддаадссс асас^сдадд а£с£сдааса д£СС.адСдаа 1260 аадссссасс дЪадсидсиа садсасСсЪд ад£Ъд£аадд ааааадссда ЪдСдааадас 1320 ас!да!дссд ЪЪдасдЪЪЪд са1сдссда£ ддддС-дЪдСа МздасдссСС ЪсСсаадсса 1380 ссааЪддада с^даддадсс ссадаСсОСС 1асаасдссЪ даСааддаЮ с 1431 <210> 159 <211> 1428 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 8ΡΑΜ1-ΙΓΥΝ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ΝΗβΙ и ВатН!
    - 261 022752 <400> 159 дсЬадсаСдд ддддсааддд дсаЪддаасд сЬдЬЬЬЪсЬЪ £асдЪддаСс ддаддсаЬ^с аса1Лс1аса ссЬасЫзддд д£дсадсадс
    Мсдадааад ссЪаассасс сссддсЬаса
    МдИддааСд д^адссдсСа сссдаВдсса дидгсдаадс ддадссЬсГд сПдсЬдИдд дссдсЪаада
    ДддаасДсаа ддСддВааа!
    аадИссэсС асВдаВдссд ссааЪддада асаЬдадддЪ дасЪЪаасДЪ ссссСадсда
    1Ьа1сдд1ад д^сХдддсЪа сссадаааас
    1;дссад1:дда сссдааа^Ьд адаасдЪдса сидддаадда
    Сс^ддддсЪа асддаЬсЪВд адИсСасЪдс сссЪсЪасдЪ ааЬсЪссссГ сссЪдадсса ддаЪсдСдаС аВаасСасаЪ £дсдГХсаса дсдаСЬаЬсЬ ъсасъдъссд дВадсСдсДа £ЬдасдЪ££д сВдаддадсс ассадсссад сададс£ссс аисддЪГЪд ссс£.сдааЬс £ЪасссЪЬас агсасСдсад сааВсЬсдда даадсссаад дс^д1ссс1£
    ЫзДссЬддЬг съаъъъдъ^с
    ЫзВсаасдЬс асЪсЪасссс
    ЪсддааЪада сссадЪдЪЪЪ ддасдадс^с сЪддддсасЪ ддадасааЪс ддСдс£дСд£ ссаСсСдаас адддаадссс
    ЬадсасДсДд саСсдссда^ ссадаЪсЪЪЪ с£д£Сдддсс ссЪдЪааЪсс дддаааС££д аасдсЪассд аЪсдасадса дассасс^дд а’ЬддсВдЬда дасдсдсаса асадаадсса дадасаа!аа сссдаЪСдсЪ дааа1±аааа £с£а£а£а£с дЪдадддаад дссЕасасса дСд£а!асС1 сЪдадЪаЪЪа сЪдаассса! саададсадд ссада!аа£С асасСсдадд ад11д1аадд ддддедедЪа ЪасаасЬдаЬ
    ЫсЮсГдс!
    сааасдХссс асдаасссс!
    дасадддддЪ
    НасЪддддР асааадсЪаа
    СЬдасЬддда адаассдаос ссдааааадс аасЪЬдддаа асааСсасса дааасдаЬда
    Ссаасасаса ссаЪсадддЪ ддаЪсдЪдЬЬ ссддсдадас
    СдсдаСсааС аСаСсаССаа дадСаСдсаС
    ССдсааСсса аСсСсдааса ааааадссда
    ССдасдссСС ааддаСсс
    ССддсСсссС сССссСдСдд ддасаСдСсС дасааСсССС дассдсдаас дааддаСаСС ддадСддада сассдадссд
    Саадсаддаа асСдсССада сСаСаадаад ссСсСсССдд дсадСсссса дСссаадаСс
    Сассдассад адССдсСсСд даадСссСдс сдСдасСССд
    Саддаадаас дсСддаааад дСССадСдаа
    СдСдааадас
    СсСсаадсса
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1428 <210> 160 <211> 1425 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5ΡΑΜ1-0ΙΓΥ кодон-олтимизированная ДНК ЫЬе! и ВатК!
    с сайтами рестрикции <400> 160 дсЬадсаОдд ддддсааддд дсаЪддаасд седЪЪеЪсЪС
    ЪасдДддаВс ддаддса^Ъс асаС1:с£аса ссЬасНЬддд дСдсадсадс
    ЁДсдадааад сс^аассасс сссддсГаса
    С^дСддааЬд дЪадссдсЬа сссда£дсса дДдПСдаадЪ ддадссЬсЪд с£дс1д1£дд дссдсЪаада £ддаас!саа ддСддЬаааЪ аадС1с1ас£ асСдаЬдссд ссааЪддада аса!дадддО даснаасьъ ссссСадсда £С.а£сдд1:ад дСсЪдддсЪа сЪсадаааа!:
    СдссадСдда сссдаааЬЪд адаасдсдса сСдддаадда
    ЪсОддддс^а асдда£с£Сд ад^сЪасДдс сссЮЪасдЪ ааГсЪсссс!
    ЪссВдадсса ддаЪсдЬдаЪ аСаасЬасаЬ
    ДдСдЫсаса дсдаЫаЬСЁ
    ЪсасЪдЪссд д£адс!дсСа
    ДДдасдЬЬОд сЬдаддадсс ассадсссад сададсиссс аВПсОдЪЫд сссЪсдааЪс
    ССасссЪЬас а^сасЪдсад саа£с£сдда даадсссаад дсддсссссь
    СССссЁддСЬ
    С^ДсаасдВс асЪсДасссс
    ЬсддааЬада сссадЬдИЬ ддасдадсЬс сСддддсас!
    ддадасааЬс ддСдсЬдЬд!
    ссаьсьдаас адддаадссс
    СадсасЪсЬд саЬсдссда!
    ссадаЪсЪЪЪ сЪд1Ьдддсс ссСдИаа^сс дддаааЪ^Ьд аасдсЬассд аЬсдасадса дассасс^дд аЬддсЪд^да даВдЬдЬаЬа асадаадсса дадасааСаа сссдаЪ^дс1:
    дааа^Ьаааа
    ЬсЪаСаОаЬс д!дадддаад дссЬасасса дДдЪаЪасЮ сЪдадЪаЫа с£даассса£ саададсадд ссадаЪаан:
    асасСсдадд адСЪдСаадд ддддОдОдОа
    ОасОдаОаад
    ССсССсСдсС сааасдСссс асдаассСсС дасадддддС
    ССасСддддС асааадсСаа
    ССдасСддда адаассдаСс ссдааааадс аасССдддаа асааСсасса дааасдаСда
    Ссаасасаса ссаСсадддС ддаСсдСдСС ссддсдадас
    СдсдаСсааС аСаСсаССаа дадСаСдсаС
    ССдсааСсса аСсСсдааса ааааадссда
    ССдасдссСС даСсс
    ССддсСсссС сССссСдСдд ддасаСдСсС дасааСсССС дассдСдаас дааддаСаСС ддадсддада саССдадсСд
    Саадсаддаа асСдсССада сСаСаадаад ссСсСсССдд дсадСсссса дСссаадаСс
    Сассдассад адССдсСсСд даадСссСдс сдСдасСССд
    Саддаадаас дсСддаааад дСССадСдаа
    СдСдааадас
    СсСсаадсса
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1425
    - 262 022752 с сайтами рестрикции <210> 161 <211> 1422 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5РАМ1-Рф1Г кодон-оптимизированная ДНК МЬе! и ВатН!
    <400> 161 дсёадсаёдд асаёдадддё ассадсссад сёдёёдддсс ддддсааддд дасёёаасХЛ сададсёссс ссёдёааёсс дсаёддаасд ссссёадсда аёёсёдёёёд дддаааёёёд сёдёёёЬсёё ёЪаёсддёад сссёсдааёс аасдсёассд ёасдёддаёс дЪсёдддсёа ёёасссёёас аёсдасадса дааддсасЕс сёсадааааё аёсасёдсад дассассёдд асаёёсёаса Ъдссадёдда сааёсёсдда аёддсёдёда ссёасёёддд сссдаааЪЪд даадсссаад даёдёдёаёа дёдсадсадс адаасдёдса дсёдссссёё асадаадсса ёёсдадааад сёдддаадда ёёёссёддёё дадэсааёаа ссёаассаес ё.сёддддсёа ёёаёёёдёёс сссдаёёдсё сссддсёаса асддаёсёёд ёёёсаасдёс даааёёаааа ёёдёддааёд адёсёасёдс асёсёасссс ёсёаёаёаёс дёадссдсёа сссёсёасдё ёсддааёада дёдадддаад сссдаёдсса ааёсёссссё сссадёдёёё. дссёасасса дёдёёдаадё ёссёдадсса ддасдадсёс дёдёаёасёё ддадсс^сёд ддаёсдёдаё сёддддсасё. сёдадёаёёа сёдсёдёёдд аёаасёасаё ддадасааёс сёдаасссаё дссдсёаада ёдёдёёсаса ддёдс^дёдё саададсадд ёддаасёсаа дсдаёёаёсё ссаёсёдаас ссадаёааёё ддёддёаааё ёсасёдёссд адддаадссс асасёсдадд аадёёсёасё дёадсёдсёа ёадсасёсёд адёёдёаадд асёдаёдссд ёёдасдёёёд саёсдссдаё ддддёдёдёа ссааёддада сёдаддадсс ссадаёсёёё ёдаёааддаё ёёсёёсёдсё сааасдёссс асдаассёсё дасадддддё ёёасёддддё асааадсёаа ёёдасёддда адаассдаёс ссдааааадс аасёёдддаа асааёсасса дааасдаёда ёсаасасаса ссаёсадддё ддаёсдёдёё ёёддсдадас ёдсдаёсааё аёаёсаёёаа дадёаёдсаё ёёдсааёсса аёсёсдааса ааааадссда ёёдасдссёё сс ёёддсёсссё сёёссёдёдд ддасаёдёсё дасааёсёёё дассдёдаас дааддаёаёё ддадёддада саёёдадсёд ёаадсаддаа асёдсёёада сёаёаадаад ссёсёсёёдд дсадёсссса дёссаадаёс ёассдассад адёёдсёсёд даадёссёдс сдёдасёёёд ёаддаадаас дсёддаааад дёёёадёдаа ёдёдааадас ёсёсаадсса
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1422 <210> 162 <211> 1419 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАМ1-ЕР<21 кодон-оптимизированная ДНК ΝΚοί и ватН1 <400> 162 дсёадсаёдд асаёдадддё ассадсссад сёдёёдддсс ддддсааддд дасёёаас£ё сададсёссс ссёдёааёсс дсаёддаасд ссссёадсда аёёсёдёёёд дддаааёёёд сёд£ёёёсё.ё ёёаёсддёад сссёсдааёс аасдсёассд ёасдёддаёс дёсёдддсёа ёёасссёёас аёсдасадса ддаддсаёёс сёсадааааё аёсасёдсад дассассёдд асаёёсёаса ёдссадёдда сааёсёсдда аёддсёдёда ссёасёёддд сссдаааёёд даадсссаад даёдёдёаёа дёдсадсадс адаасдёдса дсёдёсссёё асадаадсса Ьёсдадааад сёдддаадда ёёёссёддёё дадасааёаа ссёаассасс ёсёддддсёа ёёаёёёдёёс сссдаёёдсё сссддсёаса асддаёсёёд ёёёсаасдёс даааёёаааа ёёдёддааёд адёсёасёдс асёсёасссс ёсёаёаёаёс дёадссдсёа сссёсёасдё ёсддааёада дёдадддаад сссдаёдсса ааёсёссссё сссадёдёёё дссёасасса дёдёёдаадё ёссёдадсса ддасдадсёс дёдёаёасёё с сайтами рестрикции ёёсёёсёдсё сааасдёссс асдаассёсё дасадддддё ёёасёддддё асааадсёаа ёёдасёддда адаассдаёс ссдааааадс аасёёдддаа асааёсасса дааасдаёда ёсаасасаса ссаёсадддё ддаёсдёдёё ёёддсдадас ёёддсёсссё сёёссёдёдд ддасаёдёсё дасааёсёёё дассдёдаас дааддаёаёё ддадёддада саёёдадсёд ёаадсаддаа асёдсёёада сёаёаадаад ссёсёсёёдд дсадёсссса дёссаадаёс ёассдассад адёёдсёсёд
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    - 263 022752 ддадсс+с+д с+дс+д+Ьдд дссдсСаада гддаас+саа ддЬддСаааЬ аадг+с+асг ас+да+дссд ссааЕддада ддаЕсд+даЕ аЕаасЕасаС
    ЕдЕдЕЕсаса дсдаЕЕаЕсЕ
    ЕсасЕдЕссд дЕадсЕдсЕа
    ЕЕдасдЕЕЕд сЕдаддадсс сЕддддсасЕ ддадасааЕс ддЕдсЕдЕдЕ ссаЕсЕдаас адддаадссс
    ЕадсасЕсЕд саЕсдссдаЕ ссадаЕсЕда сЕдадЕаЕЕа сЕдаасссаЕ саададсадд ссадаЕааЕЕ асасЕсдадд адЕЕдЕаадд ддддГдНдГа
    ГааддаИсс
    ЕдсдаЕсааЕ аЕаЕсаЕЕаа дадЕаЕдсаЕ
    ЕЕдсааЕсса аЕсЕсдааса ааааадссда
    ЕЕдасдссЕЕ даадЕссЕдс сдЕдасЕЕЕд
    Еаддаадаас дсЕддаааад дЕЕЕадЕдаа
    ЕдЕдааадас
    ЕсЕсаадсса
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1419 <210> 163 <211> 1416 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5РАМ1-ЕЕР0 кодон-оптимизированная ДНК ННе1 и ВатН1 <400> 163 дсЪадсаЬдд асагдадддс ассадсссад ссдссдддсс ддддсааддд дасНаасСЛ сададсассс ссСдСааГсс дсаСддаасд ссссГадсда аИсГдИГд дддаааИСд с£дтии ИаГсддГад сссЪсдааЪс аасдсГассд ГасдСддаГс дГс^дддсСа ИасссИас а^сдасадса ддаддсаНс с£садааааЪ аГсас^дсад дассассЕдд асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕссссЕ асадаадсса ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ СЕдадЕаЕЕа сЕдсЕдЕСдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ссааЕддада сЕдаддадсс ссадЕдаЕаа ддаЕсс <210> 164 <211> 1413 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность с сайтами рестрикции
    ЕЕсЕЕсЕдсЕ сааасдЕссс асдаассЕсЕ дасадддддЕ
    ЕЕасЕддддЕ асааадсЕаа
    ЕЕдасЕддда адаассдаЕс ссдааааадс аасЕЕдддаа асааЕсасса дааасдаЕда
    Есаасасаса ссаЕсадддЕ ддаЕсдЕдЕЕ
    ЕЕддсдадас
    ЕдсдаЕсааЕ аЕаЕсаЕЕаа дадЕаЕдсаЕ
    ЕЕдсааЕсса аЕсЕсдааса ааааадссда
    ЕЕдасдссЕЕ
    ЕЕддсЕсссЕ сЕЕссЕдЕдд ддасаЕдЕсЕ дасааЕсЕЕЕ дассдЕдаас дааддаЕаЕЕ ддадЕддада саЕЕдадсСд
    Еаадсаддаа асЕдсЕЕада сЕаЕаадаад ссЕсЕсЕЕдд дсадЕсссса дЕссаадаЕс
    Еассдассад адЕЕдсЕсЕд даадЕссЕдс сдЕдасЕЕЕд
    Еаддаадаас дсЕддаааад дЕЕЕадЕдаа
    ЕдЕдааадас
    ЕсЕсаадсса
    120
    130
    240
    300
    360
    420
    430
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1416 <220>
    <223> ЗРАМ1-ТЕЕР кодон-оптимизированная ДНК МЬеТ и ВатНТ с сайтами рестрикции <400> 164 дсЕадсаЕдд ддддсааддд дсаЕддаасд сЕдЕЕЕЕсЕЕ
    ЕасдЕддаЕс ддаддсаЕЕс асаЕЕсЕаса асаЕдадддЕ дасЕЕаасЕЕ ссссЕадсда
    ЕЕаЕсддЕад дЕсЕдддсЕа сЕсадааааЕ
    ЕдссадЕдда ассадсссад сададсЕссс аСЕсЕдСЕЕд сссЕсдааЕс
    ЕЕасссЕЕас аЕсасЕдсад сааЕсЕсдда сЕдЕЕдддсс ссЕдЕааЕсс дддаааЕЕЕд аасдсЕассд аЕсдасадса дассассЕдд аЕддсЕдЕда
    ЕЕсЕЕсЕдсЕ сааасдЕссс асдаассЕсЕ дасадддддЕ
    ЕЕасЕддддЕ асааадсЕаа
    ЕЕдасЕддда
    ЕЕддсЕсссЕ сЕЕссЕдЕдд ддасаЕдЕсЕ дасааЕсЕЕЕ дассдЕдаас дааддаЕаЕЕ ддадЕддада
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    - 264 022752 ссбас££ддд сссдааа£Ьд даадсссаад да^дбдТаба адаассдаСс саЬРдадсрд 480 дСдсадсадс адаасдЪдса дс^д^сссСС асадаадсса ссдааааадс саадсаддаа 540
    Ьбсдадааад ссдддаадда сс£сс£ддгс дадасаасаа аасССдддаа асСдсССада 600 ссСаассасс СсСддддсСа ССаСССдССс сссдаССдсС асааСсасса сСаСаадаад 660 сссддсСаса асддаСсССд СССсаасдСс даааССаааа дааасдаСда ссСсСсССдд 720
    ССдСддааСд адСсСасСдс асСсСасссс СсСаСаСаСс Ссаасасаса дсадСсссса 780 дСадссдсСа сссСсСасдС СсддааСада дСдадддаад ссаСсадддС дСссаадаСс 840 сссдаСдсса ааСсСссссС сссадСдССС дссСасасса ддаСсдСдСС Сассдассад 900 дрдССдаадЪ Сссбдадсса ддасдадсСс дСдСаСасСС ССддсдадас адСЪдсСсСд 960 ддадссСсСд ддаСсдСдаС сСддддсасС сСдадСаССа СдсдаСсааС даадСссСдс 1020 сСдсСдССдд аСаасСасаС ддадасааСс сСдаасссаС аСаСсаССаа сдСдасСССд 1080 дссде£аада СдСдССсаса ддСдсСдСдС саададсадд дадСаСдсаС Саддаадаас 1140
    СддаасСсаа дсдаССаСсС ссаСсСдаас ссадасаасс ссдсаассса дссддаааад 1200 ддсддСааас СсасСдСссд адддаадссс асасСсдадд аСсСсдааса дСССадСдаа 1260 аадССсСасС дСадсСдсСа СадсасСсСд адССдСаадд ааааадссда СдСдааадас 1320 асСдаСдссд сСдасдСССд саСсдссдаС ддддСдСдСа ССдасдссСС СсСсаадсса 1380 ссааСддада сСдаддадсс сСдаСаадда Ссс 1413 <210> 165 <211> 1410 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5РАМ1-ЕТЕЕ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ΝΟθΙ и ВатН1 <400> 165 дсСадсаСдд асаСдадддС ассадсссад сСдССдддсс ССсССсСдсС ССддсСсссС 60 ддддсааддд дасССаасСС сададсСссс ссСдСааСсс сааасдСссс сССссСдСдд 120 дсасддаасд ссссСадсда аССсСдССЪд дддаааСССд асдаассбсС ддасаСдЪсс 180 сСдССССсСС ссаСсддСад сссСсдааСс аасдсСассд дасадддддС дасааСсССС 240
    СасдСддаСс дСсСдддсСа ССасссССас аСсдасадса ССасСддддС дассдСдаас 300 ддаддсаССс сСсадааааС аСсасСдсад дассассСдд асааадсСаа дааддаСаСС 360 асаССсСаса СдссадСдда сааСсСсдда аСддсСдСда ССдасСддда ддадСддада 420 ссСасССддд сссдаааССд даадсссаад даСдСдСаСа адаассдаСс саССдадсСд 480 дСдсадсадс адаасдСдса дсСдСсссСС асадаадсса ссдааааадс Саадсаддаа 540 сссдадааад сСдддаадда СССссСддбС дадасаасаа аасСсдддаа ассдсссада 600 ссСаассасс СсСддддсСа ССаСССдССс сссдаССдсС асааСсасса сСаСаадаад 660 сссддссаса асддаСсССд СССсаасдСс даааССаааа дааасдаСда ссСсСсССдд 720
    ССдСддааСд адСсСасСдс асСсСасссс СсСаСаСаСс Ссаасасаса дсадСсссса 780 дСадссдсСа сссСсСасдС СсддааСада дСдадддаад ссаСсадддС дСссаадаСс 840 сссдаСдсса ааСсСссссС сссадСдССС дссСасасса ддаСсдСдСС Сассдассад 900 дСдССдаадС СссСдадсса ддасдадсСс дСдСаСасСС ССддсдадас адССдсСсСд 960 ддадсссссд ддассдсдас сСддддсасС сСдадСаССа СдсдаСсааС даадСссСдс 1020 сСдсСдССдд аСаасСэсаС ддадасааСс сСдаасссаС аСаСсаССаа сдСдасСССд 1080 дссдсСаада СдСдССсаса ддСдсСдСдС саададсадд дадСаСдсаС Саддаадаас 1140
    СддаасСсаа дсдаССаСсС ссаСсСдаас ссадаСааСС ССдсааСсса дсСддаааад 1200 ддСддСаааС СсасСдСссд адддаадссс асасСсдадд аСсссдааса дсссадСдаа 1260 аадССсСасС дСадсСдсСа СадсасСсСд адССдСаадд ааааадссда СдСдааадас 1320 асСдаСдссд ССдасдСССд саСсдссдаС ддддСдСдСа ССдасдссСС СсСсаадсса 1380 ссааСддада сСдаддадСд аСааддаСсс 1410 <210> 166 <2П> 1407 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5РАМ1-МЕТЕ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ΝϊιβΙ и ВатНТ
    - 265 022752 <400> 166 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ СЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ЕЕдасдссЕЕ ЕсЕсаадсса ссааЕддада сЕдадЕдаЕа аддаЕсс <210> 167 <211> 1404 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5РАМ1-РМЕТ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ЫНе1 и ВатН1 <400> 167 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас ддаддсаЕЕс СЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ СЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ЕЕдасдссЕЕ ЕсЕсаадсса ссааЕддада сЕЕдаЕаадд аЕсс
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1407
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1360
    1404
    - 266 022752 <210> 168 <211> 1401 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 3ΡΆΜ1-ΡΡΜΕ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ИЬе1 и ВашН!
    <400> 168 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60 ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд 120 дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ 180 сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ 240
    ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд 480 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540
    ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720
    ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад 900 дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд 960 ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ сЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс 1020 сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд 1080 дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас 1140
    ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад 1200 ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа 1260 аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас 1320 асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ЕЕдасдссЕЕ ЕсЕсаадсса 1380 ссааЕддадЕ даЕааддаЕс с 1401 <210> 169 <211> 1398 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 8РАМ1-КРРМ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции Юте1 и ВатН1 <400> 169 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60 ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд 120 дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ 180 сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ 240 ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд 480 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540 ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720 ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад 900 дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд 960
    - 267 022752 ддадссЕсЕд сЕдсЕдЕЕдд дссдсЕаада
    ЕддаасЕсаа ддЕддЕаааЕ аадЕЕсЕасЕ асЕдаЕдссд ссааЕдЕдаЕ ддаЕсдЕдаЕ аЕаасЕасаЕ
    ЕдЕдЕЕсаса дсдаЕЕаЕсЕ
    ЕсасЕдЕссд дЕадсЕдсЕа
    ЕЕдасдЕЕЕд ааддаЕсс сЕддддсасЕ ддадасааЕс ддЕдсЕдЕдЕ ссаЕсЕдаас адддаадссс
    ЕадсасЕсЕд саЕсдссдаЕ сЕдадЕаЕЕа сЕдаасссаЕ саададсадд ссадаЕааЕЕ асасЕсдадд адЕЕдЕаадд ддддЕдЕдЕа
    ЕдсдаЕсааЕ аЕаЕсаЕЕаа дадЕаЕдсаЕ
    ЕЕдсааЕсса аЕсЕсдааса ааааадссда
    ЕЕдасдссЕЕ даадЕссЕдс сдЕдасЕЕЕд
    Еаддаадаас дсЕддаааад дЕЕЕадЕдаа
    ЕдЕдааадас
    ЕсЕсаадсса
    1020
    1080
    1140
    1200
    1250
    1320
    1380
    1398 <210> 170 <211> 1395 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАШ-ЬКРР кодон-оптимизированная ДНК ΝΗθΙ и ВагаН1 <400> 170 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ сЕдадЕаЕЕа сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ссаЕдаЕаад даЕсс <210> 171 <211> 1392 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность с сайтами рестрикции
    ЕЕсЕЕсЕдсЕ сааасдЕссс асдаассЕсЕ дасадддддЕ
    ЕЕасЕддддЕ асааадсЕаа
    ЕЕдасЕддда адаассдаЕс ссдааааадс аасЕЕдддаа асааЕсасса дааасдаЕда
    Есаасасаса ссаЕсадддЕ ддаЕсдЕдЕЕ
    ЕЕддсдадас
    ЕдсдаЕсааЕ аЕаЕсаЕЕаа дадЕаЕдсаЕ
    ЕЕдсааЕсса аЕсЕсдааса ааааадссда
    ЕЕдасдссЕЕ
    ЕЕддсЕсссЕ сЕЕссЕдЕдд ддасаЕдЕсЕ дасааЕсЕЕЕ дассдЕдаас дааддаЕаЕЕ ддадЕддада саЕЕдадсЕд
    Еаадсаддаа асЕдсЕЕада сЕаЕаадаад ссЕсЕсЕЕдд дсадЕсссса дЕссаадаЕс
    Еассдассад адЕЕдсЕсЕд даадЕссЕдс сдЕдасЕЕЕд
    Еаддаадаас дсЕддаааад дЕЕЕадЕдаа
    ЕдЕдааадас
    ЕсЕсаадсса
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1395 <220>
    <223> 5РАМ1-ПКР кодон-оптимизированная ДНК ΝΗβΙ и ВатН1 <400 171 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда с сайтами рестрикции
    ЕЕсЕЕсЕдсЕ сааасдЕссс асдаассЕсЕ дасадддддЕ
    ЕЕасЕддддЕ асааадсЕаа
    ЕЕдасЕддда
    ЕЕддсЕсссЕ сЕЕссЕдЕдд ддасаЕдЕсЕ дасааЕсЕЕЕ дассдЕдаас дааддаЕаЕЕ ддадЕддада
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    - 268 022752 ссбасббддд сссдаааббд даадсссаад дабдбдбаба адаассдабс саббдадсбд 480 дбдсадсадс адаасдбдса дсбдбсссбб асадаадсса ссдааааадс баадсаддаа 540 ббсдадааад сбдддаадда бббссбддбб дадасаабаа аасббдддаа асбдсббада 600 ссбаассасс бсбддддсба иаШ'Же сссдаОСдсс асаабсасса сбабаадаад 660 сссддсбаса асддабсббд бббсаасдбс даааббаааа дааасдабда ссбсбсббдд 720 ббдбддаабд адбсбасбдс асбсбасссс бсбабабабс бсаасасаса дсадбсссса 780 дбадссдсба сссбсбасдб бсддаабада дбдадддаад ссабсадддб дбссаадабс 840 сссдабдсса аабсбссссб сссадбдббб дссбасасса ддабсдбдбб бассдассад 900 дбдббдаадб бссбдадсса ддасдадсбс дбдбабасбб ббддсдадас адббдсбсбд 960 ддадссбсбд ддабсдбдаб сбддддсасб сбдадбабба бдсдабсааб даадбссбдс 1020 сбдсбдббдд абаасбасаб ддадасаабс сбдаасссаб абабсаббаа сдбдасбббд 1080 дссдсбаада бдбдббсаса ддбдсбдбдб саададсадд дадбабдсаб баддаадаас 1140 бддаасбсаа дсдаббабсб ссабсбдаас ссадабаабб ббдсаабсса дсбддаааад 1200 ддбддбаааб бсасбдбссд адддаадссс асасбсдадд абсбсдааса дбббадбдаа 1260 аадббсбасб дбадсбдсба бадсасбсбд адббдбаадд ааааадссда бдбдааадас 1320 асбдабдссд ббдасдбббд сабсдссдаб ддддбдбдба ббдасдссбб бсбсаадсса 1380 бдабааддаб сс 1392 <210> 172 <211> 1389 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5РАМ1-АРЬК кодон-оптимиэированная ДНК с сайтами рестрикции ΝΠβΙ и ВатН1 <400> 172 дсбадсабдд асабдадддб ассадсссад сбдббдддсс ббсббсбдсб ббддсбсссб 60 ддддсааддд дасббаасбб сададсбссс ссбдбаабсс сааасдбссс сббссбдбдд 120 дсабддаасд ссссбадсда аббсбдбббд дддааабббд асдаассбсб ддасабдбсб 180 сбдббббсбб ббабсддбад сссбсдаабс аасдсбассд дасадддддб дасаабсббб 240 басдбддабс дбсбдддсба ббасссббас абсдасадса ббасбддддб дассдбдаас 300 ддаддсаббс сбсадааааб абсасбдсад дассассбдд асааадсбаа дааддабабб 360 асаббсбаса бдссадбдда саабсбсдда абддсбдбда ббдасбддда ддадбддада 420 ссбасббддд сссдаааббд даадсссаад дабдбдбаба адаассдабс саббдадсбд 480 дбдсадсадс адаасдбдса дсбдбсссбб асадаадсса ссдааааадс баадсаддаа 540 ббсдадааад сбдддаадда бббссбддбб дадасаабаа аасббдддаа асбдсббада 600 ссбаассасс бсбддддсба ббабббдббс сссдаббдсб асаабсасса сбабаадаад 660 сссддсбаса асддабсббд бббсаасдбс даааббаааа дааасдабда ссбсбсббдд 720 ббдбддаабд адбсбасбдс асбсбасссс бсбабабабс бсаасасаса дсадбсссса 780 дбадссдсба сссбсбасдб бсддаабада дбдадддаад ссабсадддб дбссаадабс 840 сссдабдсса аабсбссссб сссадбдббб дссбасасса ддабсдбдбб бассдассад 900 дбдббдаадб бссбдадсса ддасдадсбс дбдбабасбб ббддсдадас адббдсбсбд 960 ддадссбсбд ддабсдбдаб сбддддсасб сбдадбабба бдсдабсааб даадбссбдс 1020 сбдсбдббдд абаасбасаб ддадасаабс сбдаасссаб абабсаббаа сдбдасбббд 1080 дссдсбаада бдбдббсаса ддбдсбдбдб саададсадд дадбабдсаб баддаадаас 1140 бддаасбсаа дсдаббабсб ссабсбдаас ссадабаабб ббдсаабсса дсбддаааад 1200 ддбддбаааб бсасбдбссд адддаадссс асасбсдадд абсбсдааса дбббадбдаа 1260 аадббсбасб дбадсбдсба бадсасбсбд адббдбаадд ааааадссда бдбдааадас 1320 асбдабдссд ббдасдбббд сабсдссдаб ддддбдбдба ббдасдссбб бсбсаадбда 1380 бааддабсс 1389 <210> 173 <211> 1386 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <22 3> ΕΡΑΜΙ-ϋΑΕΊ, кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ΝΠβΙ и ВатН!
    - 269 022752 <400> 173 дсЕадсаЕдд ддддсааддд дсаЕддаасд сЕдЕЕЕЕсЕЕ
    ЕасдЕддаЕс ддаддсаЕЕс асаЕЕсЕаса ссЕасЕЕддд дЕдсадсадс
    ЕЕсдадааад ссЕаассасс сссддсЕаса
    ЕЕдЕддааЕд дЕадссдсЕа сссдаЕдсса дЕдЕЕдаадЕ ддадссЕсЕд сЕдсЕдЕЕдд дссдсЕаада
    ЕддаасЕсаа ддЕддЕаааЕ аадЕЕсЕасЕ асЕдаЕдссд ддаЕсс асаЕдадддЕ дасЕЕаасЕЕ ссссЕадсда
    ЕЕаЕсддЕад дЕсЕдддсЕа сЕсадааааЕ
    ЕдссадЕдда сссдаааЕЕд адаасдЕдса сЕдддаадда
    ЕсЕддддсЕа асддаЕсЕЕд адЕсЕасЕдс сссЕсЕасдЕ ааЕсЕссссЕ
    ЕссЕдадсса ддаЕсдЕдаЕ аЕаасЕасаЕ
    ЕдЕдЕЕсаса дсдаЕЕаЕсЕ
    ЕсасЕдЕссд дЕадсЕдсЕа
    ЕЕдасдЕЕЕд ассадсссад сададсЕссс аЕЕсЕдЕЕЕд сссЕсдааЕс
    ЕЕасссЕЕас аЕсасЕдсад сааЕсЕсдда даадсссаад дсЕдЕсссЕЕ
    ЕЕЕссЕддЕЕ
    ЕЕаЕЕЕдЕЕс
    ЕЕЕсаасдЕс асЕсЕасссс
    ЕсддааЕада сссадЕдЕЕЕ ддасдадсЕс сЕддддсасЕ ддадасааЕс ддЕдсЕдЕдЕ ссаЕсЕдаас адддаадссс
    ЕадсасЕсЕд саЕсдссдаЕ сЕдЕЕдддсс ссЕдЕааЕсс дддаааЕЕЕд аасдсЕассд аЕсдасадса дассассЕдд аЕддсЕдЕда даЕдЕдЕаЕа асадаадсса дадасааЕаа сссдаЕЕдсЕ даааЕЕаааа
    ЕсЕаЕаЕаЕс дЕдадддаад дссЕасасса дЕдЕаЕасЕЕ
    СЕдадЕаЕЕа сЕдаасссаЕ саададсадд ссадаЕааЕЕ асасЕсдадд адЕЕдЕаадд ддддЕдЕдЕа
    ЕЕсЕЕсЕдсЕ сааасдЕссс асдаассЕсЕ дасадддддЕ
    ЕЕасЕддддЕ асааадсЕаа
    ЕЕдасЕддда адаассдаЕс ссдааааадс аасЕЕдддаа асааЕсасса дааасдаЕда
    Есаасасаса ссаЕсадддЕ ддаЕсдЕдЕЕ
    ЕЕддсдадас
    ЕдсдаЕсааЕ аЕаЕсаЕЕаа дадЕаЕдсаЕ
    ЕЕдсааЕсса аЕсЕсдааса ааааадссда
    ЕЕдасдссЕЕ
    ЕЕддсЕсссЕ сЕЕссЕдЕдд ддасаЕдЕсЕ дасааЕсЕЕЕ дассдЕдаас дааддаЕаЕЕ ддадЕддада саЕЕдадсЕд
    Еаадсаддаа асЕдсЕЕада сЕаЕаадаад ссЕсЕсЕЕдд дсадЕсссса дЕссаадаЕс
    Еассдассад адЕЕдсЕсЕд даадЕссЕдс сдЕдасЕЕЕд
    Еаддаадаас дсЕддаааад дЕЕЕадЕдаа
    ЕдЕдааадас
    СсЕсЕдаСаа
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1386 <210> 174 <211> 1383 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 3ΡΑΜ1-Ι0ΑΓ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции КЬе! и ВашН!
    <400> 174 дсЕадсаЕдд ддддсааддд дсаЕддаасд
    СЕдЕЕЕЕсЕЕ
    ЕасдЕддаЕс ддаддсаЕЕс асаЕЕсЕаса ссЕасЕЕддд дЕдсадсадс
    ЕЕсдадааад ссЕаассасс сссддсЕаса
    ЕЕдЕддааЕд дЕадссдсЕа сссдаЕдсса дЕдЕЕдаадЕ ддадссЕсЕд сЕдсЕдЕЕдд дссдсЕаада
    ЕддаасЕсаа ддЕддЕаааЕ аадЕЕсЕасЕ асЕдаЕдссд
    Есс асаЕдадддЕ дасЕЕаасЕЕ ссссЕадсда
    ЕЕаЕсддЕад дЕсЕдддсЕа сЕсадааааЕ
    ЕдссадЕдда сссдаааЕЕд адаасдЕдса сЕдддаадда
    ЕсЕддддсЕа асддаЕсЕЕд адЕсЕасЕдс сссЕсЕасдЕ ааЕсЕссссЕ
    ЕссЕдадсса ддаЕсдЕдаЕ аЕаасЕасаЕ
    ЕдЕдЕЕсаса дсдаЕЕаЕсЕ
    ЕсасЕдЕссд дЕадсЕдсЕа
    ЕЕдасдЕЕЕд ассадсссад сададсЕссс аЕЕсЕдЕЕЕд сссЕсдааЕс
    ЕЕасссЕЕас аЕсасЕдсад сааЕсЕсдда даадсссаад дсЕдЕсссЕЕ
    ЕЕЕссЕддЕЕ
    ЕЕаЕЕЕдЕЕс
    ЕЕЕсаасдЕс асЕсЕасссс
    ЕсддааЕада сссадЕдЕЕЕ ддасдадсЕс сЕддддсасЕ ддадасааЕс ддЕдсЕдЕдЕ ссаЕсЕдаас адддаадссс
    ЕадсасЕсЕд саЕсдссдаЕ сЕдЕЕдддсс ссЕдЕааЕсс дддаааЕЕЕд аасдсЕассд аЕсдасадса дассассЕдд аЕддсЕдЕда даЕдЕдЕаЕа асадаадсса дадасааЕаа сссдаЕЕдсЕ даааЕЕаааа
    ЕсЕаЕаЕаЕс дЕдадддаад дссЕасасса дЕдЕаЕасЕЕ
    СЕдадЕаЕЕа сЕдаасссаЕ саададсадд ссадаЕааЕЕ асасЕсдадд адЕЕдЕаадд ддддЕдЕдЕа
    ЕЕсЕЕсЕдсЕ сааасдЕссс асдаассЕсЕ дасадддддЕ
    ЕЕасЕддддЕ асааадсЕаа
    ЕЕдасЕддда адаассдаЕс ссдааааадс аасЕЕдддаа асааЕсасса дааасдаЕда
    Есаасасаса ссаЕсадддЕ ддаЕсдЕдЕЕ
    ЕЕддсдадас
    ЕдсдаЕсааЕ аЕаЕсаЕЕаа дадЕаЕдсаЕ
    ЕЕдсааЕсса аЕсЕсдааса ааааадссда
    ЕЕдасдссЕЕ
    ЕЕддсЕсссЕ
    СЕЕссЕдЕдд ддасаЕдЕсЕ дасааЕсЕЕЕ дассдЕдаас дааддаЕаЕЕ ддадЕддада саЕЕдадсЕд
    Еаадсаддаа асЕдсЕЕада сЕаЕаадаад ссЕсЕсЕЕдд дсадЕсссса дЕссаадаЕс
    Еассдассад адЕЕдсЕсЕд даадЕссЕдс сдЕдасЕЕЕд
    Еаддаадаас дсЕддаааад дЕЕЕадЕдаа
    ЕдЕдааадас
    ЕЕдаЕаадда
  57. 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 7 80 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 138 3
    - 270 022752 <210> 175 <211> 1380 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 8РАМ1-СЮА кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ННе1 и ВашН1 <400> 175 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ СЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ЕЕдасдссЕд аЕааддаЕсс
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380 <210> 176 <211> 1377 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 3ΡΑΜ1-ν0Ιϋ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции №е1 и ВашН1 <400> 176 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса СЕаЕаадаад сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    - 271 022752 ддадссРсРд ддаРсдРдаР сРддддсасР СРдадРаРРа сРдсРдРРдд аРаасРасаР ддадасааРс сРдаасссаР дссдсРаада РдРдРРсаса ддрдсрдрдр саададсадд РддаасРсаа дсдаРРаРсР ссаРсРдаас ссадаРааРР ддрддрааар РсасРдРссд адддаадссс асасРсдадд аадРРсРасР дРадсРдсРа РадсасРсРд адррдраадд асрдардссд РРдасдРРРд саРсдссдаР ддддрдрдра <210> 177 <211> 1374 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5РАМ1-ОТС1 кодон-оптимизированная ДНК НЬе1 и ВатН1 <400> 177 дсРадсаРдд асардадддр ассадсссад срдррдддсс ддддсааддд дасРРаасРР сададсРссс ссРдРааРсс дсаРддаасд ссссРадсда аРРсРдРРРд дддаааРРРд сРдРРРРсРР РРаРсддРад сссРсдааРс аасдсРассд гасдрддагс дРсРдддсРа РРасссРРас арсдасадса ддаддсаРРс сРсадааааР аРсасРдсад дассассрдд асаРРсРаса РдссадРдда саарсрсдда арддсрдрда ссРасРРддд сссдаааРРд даадсссаад даРдРдРаРа дрдсадсадс адаасдрдса дсРдРсссРР асадаадсса РРсдадааад сРдддаадда РРРссРддРР дадасаараа ссраассасс РсРддддсРа РРаРРРдРРс сссдаРРдсР сссддсРаса асддаРсРРд РРРсаасдРс даааРРаааа РРдРддааРд адРсРасРдс асРсРасссс РсРаРаРаРс дРадссдсРа сссРсРасдР РсддааРада дрдадддаад сссдардсса ааРсРссссР сссадРдРРР дссРасасса дрдррдаадр РссРдадсса ддасдадсРс дРдРаРасРР ддадссРсРд ддаРсдРдаР сРддддсасР СРдадРаРРа сРдсРдРРдд аРаасРасаР ддадасааРс сРдаасссаР дссдсРаада РдРдРРсаса ддрдсрдрдр саададсадд РддаасРсаа дсдаРРаРсР ссаРсРдаас ссадаРааРР ддрддрааар РсасРдРссд адддаадссс асасРсдадд аадРРсРасР дРадсРдсРа РадсасРсРд адррдраадд асрдардссд РРдасдРРРд саРсдссдаР ддддрдрдра <210> 178 <211> 1371 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <22О>
    <223> 5РАМ1-Бетс кодон-оптимизированная ДНК КЬе1 и ВатН1 <400> 178 дсРадсаРдд асардадддр ассадсссад срдррдддсс ддддсааддд дасРРаасРР сададсРссс ссгдгааРсс дсаРддаасд ссссРадсда аРРсРдРРРд дддаааРРРд сРдРРРРсРР РРаРсддРад сссРсдааРс аасдсРассд РасдРддаРс дРсРдддсРа РРасссРРас арсдасадса ддаддсаРРс СРсадааааР аРсасРдсад дассассрдд асаРРсРаса РдссадРдда саарсрсдда арддсрдрда ссРасРРддд сссдаааРРд даадсссаад даРдРдРаРа дрдсадсадс адаасдрдса дсРдРсссРР асадаадсса
    РдсдаРсааР аРаРсаРРаа дадРаРдсаР
    РРдсааРсса аРсРсдааса ааааадссда
    РРдасРдаРа даадрссрдс сдРдасРРРд
    Раддаадаас дсрддаааад дРРРадРдаа рдрдааадас аддаРсс
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1377 с сайтами рестрикции
    РРсРРсРдсР сааасдрссс асдаассРсР дасадддддр
    РРасРддддР асааадсРаа
    РРдасРддда адаассдарс ссдааааадс аасРРдддаа асааРсасса дааасдарда
    Рсаасасаса ссарсадддр ддаРсдРдРР
    РРддсдадас
    РдсдаРсааР аРаРсаРРаа дадРаРдсаР
    РРдсааРсса аРсРсдааса ааааадссда
    РРРдаРаадд
    РРддсРсссР сРРссРдРдд ддасаРдРсР дасааРсРРР дассдрдаас дааддаРаРР ддадрддада саррдадсрд
    Раадсаддаа асРдсРРада сРаРаадаад ссрсрсррдд дсадрсссса дРссаадаРс
    Рассдассад адРРдсРсРд даадрссрдс сдРдасРРРд
    Раддаадаас дсрддаааад дРРРадРдаа рдрдааадас аРсс
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1374 с сайтами рестрикции
    РРсРРсРдсР сааасдрссс асдаассРсР дасадддддр
    РРасРддддР асааадсРаа
    РРдасРддда адаассдарс ссдааааадс
    РРддсРсссР сРРссРдРдд ддасаРдРсР дасааРсРРР дассдрдаас дааддаРаРР ддадрддада саррдадсрд
    Раадсаддаа
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    - 272 022752
    РРсдадааад ссРаассасс сссддсРаса ррдрддаард дРадссдсРа сссдаРдсса дрдррдаадр ддадссРсРд срдсрдррдд дссдсРаада
    РддаасРсаа ддрддрааар аадРРсРасР асРдаРдссд срдддаадда
    РсРддддсРа асддаРсРРд адРсРасРдс сссРсРасдР ааРсРссссР
    РссРдадсса ддаРсдРдаР аРаасРасаР рдрдррсаса дсдаРРаРсР
    РсасРдРссд дРадсРдсРа ррдасдрррд рррссрддрр ррарггдггс
    РРРсаасдРс асРсРасссс
    РсддааРада сссадРдРРР ддасдадсРс сРддддсасР ддадасаарс ддрдсрдрдр ссаРсРдаас адддаадссс
    РадсасРсРд саРсдссдаР дадасааРаа сссдаРРдсР даааРРаааа
    РсРаРараРс дрдадддаад дссРасасса дРдРаРасРР сРдадРаРРа сРдаасссаР саададсадд ссадаРааРР асасРсдадд адРРдРаадд ддддрдрдрр аасРРдддаа асааРсасса дааасдарда
    Рсаасасаса ссаРсадддР ддаРсдРдРР
    РРддсдадас
    РдсдаРсааР аРаРсаРРаа дадРаРдсаР
    РРдсааРсса аРсРсдааса ааааадссда даРааддаРс асРдсРРада сРаРаадаад ссРсРсРрдд дсадрсссса дРссаадаРс
    Рассдассад адРРдсРсРд даадрссрдс сдРдасРРРд
    Раддаадаас дсРддаааад дрррадрдаа
    РдРдааадас с
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1371 <210> 179 <211> 1365 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220> .
    <223> ЗРАМ1-1АОС кодон-оптимизированная ДНК ЫЬе1 и ВатН1 <400> 179 дсрадсардд асардадддр ассадсссад срдррдддсс ддддсааддд дасРРаасРР сададсРссс ссРдРааРсс дсарддаасд ссссРадсда аррсрдрррд дддааарррд сРдРРРРсРР РРаРсддРад сссРсдааРс аасдсРассд РасдРддаРс дрсрдддсра РРасссРРас аРсдасадса ддаддсаРРс сРсадааааР арсасрдсад дассассРдд асаРРсРаса рдссадрдда сааРсРсдда арддсрдрда ссРасРРддд сссдаааРРд даадсссаад даРдРдРаРа дрдсадсадс адаасдрдса дсрдрсссрр асадаадсса РРсдадааад срдддаадда рррссрддрр дадасааРаа ссРаассасс РсРддддсРа сРаШуРРс сссдаРРдсР сссддсРаса асддаРсРРд РРРсаасдРс даааРРаааа ррдрддаард адРсРасРдс асРсРасссс РсРаРаРаРс дРадссдсРа сссРсРасдР РсддааРада дрдадддаад сссдаРдсса ааРсРссссР сссадРдРРР дссРасасса дрдррдаадр РссРдадсса ддасдадсРс дРдРаРасРР ддадссРсРд ддаРсдРдаР сРддддсасР СРдадРаРРа срдсрдррдд аРаасРасаР ддадасаарс сРдаасссаР дссдсРаада рдрдррсаса ддрдсрдрдр саададсадд РддаасРсаа дсдаРРаРсР ссаРсРдаас ссадаРааРР ддрддрааар РсасРдРссд адддаадссс асасРсдадд аадРРсРасР дРадсРдсРа РадсасРсРд адРРдРаадд асРдаРдссд ррдасдрррд саРсдссдаР дддРдаРаад <210> 160 <211> 1359 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность с сайтами рестрикции
    РРсРРсРдсР сааасдРссс асдаассРсР дасадддддр
    РРасРддддР асзаадсРаа
    РРдасРддда адаассдаРс ссдааааадс аасРРдддаа асааРсасса дааасдарда
    Рсаасасаса ссаРсадддР ддаРсдРдРР
    РРддсдадас
    РдсдаРсааР аРаРсаРРаа дадРаРдсаР
    РРдсааРсса аРсРсдааса ааааадссда даРсс
    РРддсРсссР сРРссРдРдд ддасаРдРсР дасааРсРРР дассдрдаас дааддаРаРР ддадрддада саррдадсрд раадсаддаа асРдсРРада сРаРаадаад ссРсРсРРдд дсадрсссса дРссаадаРс
    Рассдассад адРРдсРсРд даадрссрдс сдРдасРРРд
    Раддаадаас дсРддаааад дрррадрдаа
    РдРдааадас
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1365 <220>
    <223> 5РАМ1-УС1А кодон-оптимизированная ДНК ΝΗβΙ и ВатН!
    с сайтами рестрикции <400 130 дсрадсардд асардадддр ассадсссад срдррдддсс ддддсааддд дасРРаасРР сададсРссс ссРдРааРсс
    РРсРРсРдсР РРддсРсссР сааасдРссс сРРссРдРдд
    120
    - 273 022752 дсабддаасд ссссбадсда аббсбдбббд дддааабббд асдаассбсб ддасабдбсб 180 сбдббббсбб ббабсддбад сссбсдаабс аасдсбассд дасадддддб дасаабсббб 240 басдбддабс дбсбдддсба ббасссббас абсдасадса ббасбддддб дассдбдаас 300 ддаддсаббс сбсадааааб абсасбдсад дассассбдд асааадсбаа дааддабабб 360 асаббсбаса бдссадбдда саабсбсдда абддсбдбда ббдасбддда ддадбддада 420 ссбасббддд сссдаааббд даадсссаад дабдбдбаба адаассдабс саббдадсбд 480 дбдсадсадс адаасдбдса дсбдбсссбб асадаадсса ссдааааадс баадсаддаа 540 ббсдадааад сбдддаадда бббссбддбб дадасаабаа аасббдддаа асбдсббада 600 ссбаассасс бсбддддсба ббабббдббс сссдаббдсб асаабсасса сбабаадаад 660 сссддсбаса асддабсббд бббсаасдбс даааббаааа дааасдабда ссбсбсббдд 720 ббдбддаабд адбсбасбдс асбсбасссс бсбабабабс бсаасасаса дсадбсссса 780 дбадссдсба сссбсбасдб бсддаабада дбдадддаад ссабсадддб дбссаадабс 840 сссдабдсса аабсбссссб сссадбдббб дссбасасса ддабсдбдбб бассдассад 900 дбдббдаадб бссбдадсса ддасдадсбс дбдбабасбб ббддсдадас адббдсбсбд 960 ддадссбсбд ддабсдбдаб сбддддсасб сбдадбабба бдсдабсааб даадбссбдс 1020 сбдсбдббдд абаасбасаб ддадасаабс сбдаасссаб абабсаббаа сдбдасбббд 1080 дссдсбаада бдбдббсаса ддбдсбдбдб саададсадд дадбабдсаб баддаадаас 1140 бддаасбсаа дсдаббабсб ссабсбдаас ссадабаабб ббдсаабсса дсбддаааад 1200 ддбддбаааб бсасбдбссд адддаадссс асасбсдадд абсбсдааса дбббадбдаа 1260 аадббсбасб дбадсбдсба бадсасбсбд адббдбаадд ааааадссда бдбдааадас 1320 асбдабдссд ббдасдбббд сабсдссбда бааддабсс 1359 <210 181 <211> 1353 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАМ1-УОУС кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции НПе1 и ВатН1 <400> 181 дсбадсабдд асабдадддб ассадсссад сбдббдддсс ббсббсбдсб ббддсбсссб 60 ддддсааддд дасббаасбб сададсбссс ссбдбаабсс сааасдбссс сббссбдбдд 120 дсабддаасд ссссбадсда аббсбдбббд дддааабббд асдаассбсб ддасабдбсб 180 сбдббббсбб ббабсддбад сссбсдаабс аасдсбассд дасадддддб дасаабсббб 240 басдбддабс дбсбдддсба ббасссббас абсдасадса ббасбддддб дассдбдаас 300 ддаддсаббс сбсадааааб абсасбдсад дассассбдд асааадсбаа дааддабабб 360 асаббсбаса бдссадбдда саабсбсдда абддсбдбда ббдасбддда ддадбддада 420 ссбасббддд сссдаааббд даадсссаад дабдбдбаба адаассдабс саббдадсбд 480 дбдсадсадс адаасдбдса дсбдбсссбб асадаадсса ссдааааадс баадсаддаа 540 ббсдадааад сбдддаадда бббссбддбб дадасаабаа аасббдддаа асбдсббада 600 ссбаассасс бсбддддсба ббабббдббс сссдаббдсб асаабсасса сбабаадаад 660 сссддсбаса асддабсббд бббсаасдбс даааббаааа дааасдабда ссбсбсббдд 720 ббдбддаабд адбсбасбдс асбсбасссс бсбабабабс бсаасасаса дсадбсссса 780 дбадссдсба сссбсбасдб бсддаабада дбдадддаад ссабсадддб дбссаадабс 840 сссдабдсса аабсбссссб сссадбдббб дссбасасса ддабсдбдбб бассдассад 900 дбдббдаадб бссбдадсса ддасдадсбс дбдбабасбб ббддсдадас адббдсбсбд 960 ддадссбсбд ддабсдбдаб сбддддсасб сбдадбабба бдсдабсааб даадбссбдс 1020 сбдсбдббдд абаасбасаб ддадасаабс сбдаасссаб абабсаббаа сдбдасбббд 1080 дссдсбаада бдбдббсаса ддбдсбдбдб саададсадд дадбабдсаб баддаадаас 1140 бддаасбсаа дсдаббабсб ссабсбдаас ссадабаабб ббдсаабсса дсбддаааад 1200 ддбддбаааб бсасбдбссд адддаадссс асасбсдадд абсбсдааса дбббадбдаа 1260 аадббсбасб дбадсбдсба бадсасбсбд адббдбаадд ааааадссда бдбдааадас 1320 асбдабдссд ббдасдбббд сбдабаадда бсс 1353 <210> 182 <211> 1347 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
    - 274 022752 <220>
    <223> 3ΡΑΜ1-ΟΑνΌ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ЫЬе1 и ВатН!
    <400> 182 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60 ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд 120 дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ 180
    СЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ 240
    ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд 480 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540
    ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720
    ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад 900 дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд 960 ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ сЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс 1020 сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд 1080 дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас 1140
    ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад 1200 ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа 1260 аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас 1320 асЕдаЕдссд ЕЕдасЕдаЕа аддаЕсс 1347 <210> 183 <211> 1341 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5ΡΑΜ1-ΡΊΟΑ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ЫНе1 и ВашН!
    <400> 183 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60 ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд 120 дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ 180 сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ 240
    ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс СЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЬддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд 480 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540
    ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720
    ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад 900 дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд 960 ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ СЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс 1020 сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд 1080 дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас 1140
    ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад 1200 ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа 1260 аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас 1320
    - 275 022752 асЕдаЕдссЕ даЕааддаЕс с 1341 <210> 184 <211> 1335 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАМ1-УКОТ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции НЬе1 и ВатН1 <400> 184 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60 ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд 120 дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ 180 сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ 240
    ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд 480 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540
    ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720
    ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад 900 дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд 960 ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ сЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс 1020 сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд 1080 дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас 1140
    ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад 1200 ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа 1260 аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас 1320 асЕЕдаЕаад даЕсс 1335 <210> 185 <211> 1329 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ΞΡΑΜΙ-ΑΩνκ кодон-оптимизированная ДНК с сайтами рестрикции ННе! и ВатН1 <400> 185 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60 ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд 120 дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ 180 сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ 240
    ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд 480 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540
    ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720
    ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад 900
    - 276 022752 дрдррдаадр РссРдадсса ддасдадсРс дРдРаРасРР РРддсдадас адРРдсРсРд 960 ддадссРсРд ддаРсдРдаР сРддддсасР СРдадРаРРа РдсдаРсааР даадрссрдс 1020 сРдсРдРРдд аРаасРасаР ддадасааРс сРдаасссаР аРаРсаРРаа сдРдасРРРд 1080 дссдсРаада РдРдРРсаса ддрдсрдрдр саададсадд дадРаРдсаР Раддаадаас 1140
    РддаасРсаа дсдаРРаРсР ссаРсРдаас ссадаРааРР РРдсааРсса дсрддаааад 1200 ддрддрааар РсасРдРссд адддаадссс асасРсдадд аРсРсдааса дРРРадРдаа 1260 аадРРсРасР дРадсРдсРа РадсасРсРд адррдраадд ааааадссда РдРдаааРда 1320
    РааддаРсс 1329 <210 186 <211> 35 <212> Белок <213> Ното зариепз <220>
    <223> сигнальный пептид РН20 <400> 186
    МеЪ С1у ν^ι Ъеи Ъуз РЬе Ъуз ΗΪ3 Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег С1п Не Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Х1е Рго Суз 20 25 30
    Суз Ьеи ТЬг 35 <210 187 <211> 496 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> РН20зН1з <400> 187
    МеЪ С1у Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъуз ΗΪ5 Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег С1п 11е νπ РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 11е Рго Азп νβΐ Рго 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег С1и РЬе Суз Ъеи С1у Ъуз РЬе 50 55 60 Азр С1и Рго Ъеи Азр МеС Зег Ъеи РЬе Зег РЬе 11е С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп А1а ТЬг О1у С1п С1у Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ъеи 85 90 95 С1у Туг Туг Рго Туг 11е Азр Зег 11е ТЬг С1 у Уа1 ТЬг Уа1 АЗП С1у 100 105 110 С1у 11е Рго С1п Ъуз 11е Зег Ъеи С1п Азр Низ Ъеи Авр Ъуз А1а Ъуз 115 120 125 Ъуз Азр 11е ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго νπ Азр Азп Ъеи С1у Ме£ А1а Уа1 130 135 140 Не Азр Тгр С1и Е1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ъуз Азр Уа1 Туг Ъуз Азп Агд Зег 11е 61и Ъеи Уа1 С1п С1п С1п Азп 165 170 175 νπ С1п Ъеи Зег Ъеи ТЬг С1и А1а ТЬг С1и Ьуз А1а Ъуз С1п С1и РЬе 180 185 190 С1и Ъуз А1а С1у Ъуз Азр РЬе Ъеи Уа1 С1и ТЬг 11е Ъуз Ъеи С1у Ъуз 195 200 205
    - 277 022752
    Ьеи Ьеи 210 Агд Рго Азп НЬз Ьеи 215 Тгр СЬу Туг Туг Ьеи 220 РЬе Рго Азр Суз Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Еег Суз РПе Азп 225 230 235 240 νβΐ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТПг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТПг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз ЬЬе Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РПе АЬа Туг ТПг 2 90 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТПг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РПе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТПг РПе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Не 325 330 335 УаЬ Ые Тгр еЬу ТПг Ьеи Зег ЬЬе Меб Агд Зег Меб Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Меб СЬи ТПг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 УаЬ ТПг Ьеи АЬа АЬа Ьуз Меб Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьуз АЗП тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РПе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РПе ТПг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТПг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РПе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РПе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТПг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 4 60 11е Азр АЬа РПе Ьеи Ьуз Рго Рго Меб СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые 465 470 475 480 РПе Туг Азп АЬа Зег Рго Зег ТПг Ьеи Зег НЬз НЬэ НЬз НЬз НЬз НЬз 485 490 495
    <210> 188 <211> 496 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220> <223> РН20зН1з-Н368А (тиб!) <400> 188 Меб СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РПе Ьуз НЬв Ые РПе РЬе Агд Зег РПе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Ые УаЬ РПе ТПг РПе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТПг Ьеи Азп РПе Агд АЬа Рго Рго УаЬ 11е Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РПе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РПе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр Меб Зег Ьеи РПе Зег РПе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп АЬа ТПг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТПг 11е РПе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТПг СЬу УаЬ ТПг УаЬ Азп СЬу 100 105 110
    278
    С1у 11е Рго 115 С1п Ьуз 1Ье Зег 1еи 120 С1п Абр Ηίβ 1еи Азр Ьуз 125 АЬа Ьуз Ьуз Азр 11е ТЬг РЬе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр АЗП Ьеи СЬу МеЕ АЬа УаЬ 130 135 140 11е Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп С1п Агп 165 170 175 Уа1 С1п Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РНе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп ΗΪ5 Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп ΗΪ3 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азп 225 230 235 240 Уа1 СЬи 11е Ьуз Агд АЗП Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 2 50 255 ТЫ А1а Ьеи Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго Уа1 2 60 265 270 А1а АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи А1а Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз 11е Рго Азр АЬа Ъуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РНе А1а Туг ТНг 290 295 300 Агд 11е Уа1 РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1п Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ А1а Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е 325 330 335 Уа1 11е Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЕ Агд Зег МеЕ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр АЗП Туг МеЕ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг 11е 11е А1а 355 360 365 Уа1 ТЫ Ьеи А1а АЬа Ьуз МеЕ Суз Зег С1п УаЬ 1еи Суз ст СЬи СЬп 370 375 380 СЬу Уа1 Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи Н1з Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа 11е ст Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТНг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ъуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суг Ьуз СЬи Ъуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а УаЬ Азр УаЬ Суз Не АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 11е Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЕ СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго ст Ые 465 470 475 480 РНе Туг Азп АЬа Зег Рго Зег ТЬг 1еи Зег Н±з Ηίε Ηίε НЬз Ηίε Ηίε 485 490 495
    <210> 189 <211> 496 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ΡΗ203Ηίε-Ν393Α (шиЬ2) <400> 189
    МеЕ С1у ’7аЬ Ьеи Ьуз РНе Ьуз Ηίε 11е РНе РНе Агд Зег РНе УаЬ Ьуз 15 10 15
    - 279 022752
    Зег Зег СЬу УаЬ 20 Зег СЬп Ые УаЬ РЬе 25 ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые 30 Рго Суз Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр АЗП АЬа Рго Зег С1и РЬе Суз Ьеи С1у Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЬ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Ые Азп АЬа ТЬг С1у СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг Уа1 Азп С1у 100 105 110 С1у 11е Рго С1п Ьуз Ые Зег Ьеи 61п Азр Н1з Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеЬ Рго Уа1 Азр Азп Ьеи С1у МеЬ АЬа Уа1 130 135 140 Ые Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е СЬи Ьеи Уа1 СЬп С1п СЬп Азп 165 170 175 Уа1 СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг С1и А1а ТЬг С1и Ьуз А1а Ьуз С1п СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 С1и ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп ΗΪ3 Н13 Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 СЬи 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп С1и Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго Уа1 260 265 270 АЬа А1а ТЬг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд СЬи А1а Ые Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз 11е Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе АЬа Туг ТЬг 2 90 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег С1п Агр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег С1у Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЬ Агд Зег МеЬ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ С1и ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг 11е Ые Азп 355 3 60 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп Уа1 Ьеи Суг СЬп СЬи С1п 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр А1а Зег Зег Азр Туг Ьеи Нгз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а Не с1п Ьеи С1и Ьуз СЬу СЬу Ьуз РНе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд С1у Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи С1и СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Агр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые А1а Азр С1у Уа1 Суз 450 455 460 Ые Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго С1п Ые 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег Н1з НЬз НЬз НЬз НЬз НЬз 485 490 495
    - 280 022752 <210> 190 <2Ы> 496 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ΡΗ203Ηί5-Ν368Α/Ν393Α (тиЕЗ) <400> 190
    МеЕ 1 СЬу УаЬ Ьеи Ьуз 5 РЬе Ьуз НЬз Ые РЬе 10 РЬе Агд Зег РЬе УаЬ 15 Ьуз 5ег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп 11е УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ 11е Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Ые Азп АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег 11е ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу ьоо 105 110 СЬу Ые Рго СЬп Ьуз 11е Зег Ьеи СЬп Азр НХЗ Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЕ АЬа УаЬ 130 135 140 11е Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Агп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 С1и Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Н13 Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз ΗΪΞ Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 2 30 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ты АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 5ег Ьуз Не Рго Азр АЬа Ьуз Зех Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЕ Агд Зег МеЕ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЕ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые АЬа 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЕ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 330 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр АЬа Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз С1у СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415
    - 281 022752
    Уа1 Агд 51 у Ьуз 420 Рго ТЬг Ьеи С1и Азр 425 Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег 430 51 и Ьуз РЬе Туг Суз Бег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Х1е АЬа Азр СЬу Уа1 Суз 450 455 460 11е Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЕ С1и ТЬг С1и С1и Рго СЬп 11е 4 65 470 475 480 РЬе Туг Азп А1а 5ег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег НЬз НЬз НЬз НЬз НЬз НЬз 485 490 495
    <210> 191 <211> 17 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220>
    <223> С-Еегт1па1 рерЕЬбе οίεβνθά £гот гНиРН20 аа 431-447 <400> 191
    Азр АЬа РЬе Ьуз Ьеи Рго Рго МеЕ С1и ТЬг С1и С1и Рго С1п 11е РЬе 1 Туг 5 10 15
    <210> 192 <211> 16 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220> <223> С-концевой пептид, отщепленный от гКиРН20 аа 431-446 <400> 192 Азр А1а РЬе Ьуз Ьеи Рго Рго МеЕ С1и ТЬг СЬи С1и Рго 01п 11е РЬе 1 5 10 15 <210> 193 <211> 15 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220> <223> С-концевой пептид, отщепленный от гНиРН20 аа 431-445 <400> 193 Азр АЬа РЬе Ьуз Ьеи Рго Рго МеЕ С1и ТЬг СЬи СЬи Рго С1п 11е 1 5 10 15 <210> 194 <211> 14 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220> <223> С-концееой пептид, отщепленный от гНиРН20 аа 431-444
    - 282 022752 <400> 194
    Азр АЬа РНе Ьуз Ьеи Рго Рго МеС С1и ТНг 10 СЬи С1и Рго СЬп 1 5 <210> 195 <211> 13 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <220 <223> С-концевой пептид. отщепленный : от гНиРН20 аа 431-443 <400> 195 Азр АЬа РНе Ьуз Ьеи Рго Рго МеС СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго 1 5 10 <210> 196 <211> 12 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220> <223> С-концевой пептид, отщепленный от гНиРН20 аа 431-442 <400> 196 Азр АЬа РНе Ьуз Ьеи Рго Рго МеЕ С1и ТНг С1и С1и
    15 10 <210> 197 <211> 510 <212> Белок <213> Рап сгодЬодуСез <220>
    <223> РН20 шимпанзе <400 197
    МеС СЬу ЧаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе ЧаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег 8ег СЬу ЧаЬ 8ег СЬп Не ЧаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи АЗП РЬе Агд АЬа Рго Рго ЧаЬ Ые Рго Азп ЧаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ъуз РНе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не Азп ЧаЬ ТЬг СЬу СЬп Азр ЧаЬ ТЬг Ые РЬе Туг ЧаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Ые ТНг СЬу ЧаЬ ТЬг ЧаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу 11е Рго СЬп Ьуз Не Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеС Рго ЧаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеС АЬа ЧаЬ 130 135 140 Не Азр Тгр 61и СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тер Ьуз Рго 145 150 155 160
    - 283 022752
    Ьуз Азр УаЛ Туг Ьуз 165 Азп Агд Зег 11е СЛи 170 Ьеи УаЛ СЛп СЛп СЛп 175 Азп Уа1 СЛп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи А1а ТЬг СЛи Ьуз АЛа Ьуз СЛп СЛи РЬе 180 185 190 С1и Ьуз АЛа С1у Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЛ СЛи ТЬг Не Ьуз Ьеи СЛу Ьуз 195 200 205 Ъеи Ьеи Агд Рго Азп НЛз Ьеи Тгр С1у Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЛз НЛз Туг Ьуз Ьуз Рго СЛу Туг Азп СЛу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 СЛи Не Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЛи Зег 245 250 255 ТНг АЛа Ьеи Туг Рго Зег 11е Туг Ьеи Азп ТЬг СЛп СЛп Зег Рго УаЛ 260 265 270 АЛа АЛа ТЬг Ьеи Туг УаЛ Агд Азп Агд УаЛ СЛп СЛи АЛа Не Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр АЛа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе УаЛ Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не УаЛ РЬе ТЬг Азр СЛп УаЛ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЛп Азр СЛи 305 310 315 320 Ьеи УаЛ Туг ТЬг РЬе 01 у СЛи ТЬг УаЛ АЛа Ьеи С1у АЛа Зег С1у Не 325 330 335 УаЛ 11е Тгр СЛу ТЬг Ьеи Зег 11е МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеС СЛи ТЬг Не Ьеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 УаЛ ТЬг Ьеи АЛа АЬа Ьуз МеС Суз Зег СЛп УаЛ Ьеи Суз СЛп СЛи СЛп 370 375 380 01 у УаЛ Суз 11е Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи ΗίΞ Ьеи 385 390 395 400 АЗП Рго Азр Азп РЬе АЛа Не СЛп Ьеи СЛи Ьуз СЛу слу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЛ Агд С1у Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЛи Азр Ьеи СЛи СЛп РЬе Зег СЛи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЛи Ьуз АЛа Азр 435 440 445 УаЛ Ьуз Азр ТЬг Азр АЛа УаЛ Азр УаЛ Суз Не АЛа Азр С1у УаЛ Суз 450 455 460 11е Азр АЛа РЬе Ьеи ьуз Рго Рго МеС СЛи ТЬг СЛи СЛи Зег СЛп Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЛа Эе г Рго Зег ТЬг Ьеи Зег АЛа ТЬг МеС РЬе Не Азр 485 4 90 495 Ьеи Суз Азр Ьеи Туг Ьеи УаЛ Рго ТЬг Зег Туг Ьеи Не Ьеи
    500 505 510 <210> 198 <211> 512 <212> Белок <213> Масаса ши1аССа <220>
    <223> РН20 макаки резус <400> 198
    Меё СЛу УаЛ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЛз Не РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЛ Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег СЛу УаЛ Зег СЛп Не УаЛ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЛа Рго Рго Не Не Рго Азп УаЛ Рго 35 40 45
    - 284 022752
    РНе Ьеи 50 Тгр АЬа Тгр Азп АЬа 55 Рго Зег СЬи РНе Суз 60 Ьеи С1у Ьуз РНе Азп СЬи Рго Ьеи Азр МеД Зег Ьеи РНе ТНг Ьеи МеД С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп Ые ТНг 61 у С1п 61у УаЬ ТНг Ые РНе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 61у Туг Туг Рго Туг 11е Азр Ьеи ТНг ТНг С1у Уа1 ТНг УаЬ НЬз С1у 100 105 110 СЬу 11е Рго 61η Ьуз Уа1 Зег Ьеи СЬп Агр Шз Ьеи Азр Ьуз Зег Ьуз 115 120 125 61 η Азр Ые Ьеи РНе Туг МеД Рго Уа1 Азр Азп Ьеи СЬу МеД А1а Уа1 130 135 140 11е Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТНг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег 11е 01и Ьеи Уа1 С1п СЬп С1п Азп 165 170 175 Уа1 С1п Ьеи Зег Ьеи Рго СЬп АЬа ТНг Азр Ьуз АЬа Ьуэ СЬп С1и РНе 180 185 190 С1и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РНе МеД Ьеи С1и ТНг Ые Ьуз Ьеи 61у Агд 195 200 205 Зег Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Н1з НЬз Туг Агд Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РНе Азр 225 230 235 240 Уа1 С1и 11е Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТНг С1п С1п Зег Уа1 Уа1 260 265 270 Уа1 А1а ТНг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд СЬи А1а Ые Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз 11е Рго Азр АЬа Ьуз Азп Рго Ьеи Рго Уа1 РНе Уа1 Туг А1а 290 295 300 Агд Ьеи УаЬ РНе ТЬг Азр СЬп Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег Агд СЬи 61и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Зег ТНг Ьеи СЬу С1и ТНг Уа1 А1а Ьеи СЬу А1а Зег С1у Ые 325 330 335 Уа1 11е Тгр С1у Зег Ьеи Зег Ые ТНг Агд Зег МеД Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр ТНг Туг МеД СЬи ТНг 11е Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 Уа1 ТНг Ьеи А1а АЬа Ьуз МеД Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз С1п СЬи С1п 370 375 380 61 у Уа1 Суз 11е Агд Ьуз Азр Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РНе Азр Ые Агд Ьеи 61и Ьуз СЬу С1у Ьуз РНе ТНг 405 410 415 УаЬ Низ СЬу Ьуз Рго ТЬг Уа1 С1и Азр Ьеи СЬи СЬи РНе Зег С1и Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг ТНг Азп Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТНг Азр АЬа Уа1 Азр Уа1 Суз Ые А1а Азр С1у УаЬ Суз 450 455 460 Ые Азр АЬа Зег Ьеи Ьуз Рго Рго Уа1 С1и ТНг С1и С1у Зег Рго Рго 4 65 470 475 480 11е РНе Туг Азп ТНг Зег Зег Зег ТНг Уа1 Зег ТНг ТНг МеД РНе 11е 485 4 90 495 Тгр Агд Ьеи СЬи Уа1 Тгр Азр С1п С1у 11е Зег Агд Ые С1у РНе РНе 500 505 510
    - 285 022752 <210> 199 <211> 1485 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАМ1-ДРЫ кодон-оптимизированная ДНК с ΝΠβΙ и ВатН!
    <400> 199 дсбадсабдд асабдадддб ассадсссад сбдббдддсс ббсббсбдсб ббддсбсссб ддддсааддд дасббаасбб сададсбссс ссбдбаабсс сааасдбссс сббссбдбдд дсабддаасд ссссбадсда аббсбдбббд дддааабббд асдаассбсб ддасабдбсб сбдббббсбб ббабсддбад сссбсдаабс аасдсбассд дасадддддб дасаабсббб басдбддабс дбсбдддсба ббасссббас абсдасадса ббасбддддб дассдбдаас ддаддсаббс сбсадааааб абсасбдсад дассассбдд асааадсбаа дааддабабб асаббсбаса бдссадбдда саабсбсдда абддсбдбда ббдасбддда ддадбддада ссбасббддд сссдаааббд даадсссаад дабдбдбаба адаассдабс саббдадсбд дбдсадсадс адаасдбдса дсбдбсссбб асадаадсса ссдааааадс баадсаддаа ббсдадааад сбдддаадда бббссбддбб дадасаабаа аасббдддаа асбдсббада ссбаассасс бсбддддсба ббабббдббс сссдаббдсб асаабсасса сбабаадаад сссддсбаса асддабсббд бббсаасдбс даааббаааа дааасдабда ссбсбсббдд ббдбддаабд адбсбасбдс асбсбасссс бсбабабабс бсаасасаса дсадбсссса дбадссдсба сссбсбасдб бсддаабада дбдадддаад ссабсадддб дбссаадабс сссдабдсса аабсбссссб сссадбдббб дссбасасса ддабсдбдбб бассдассад дбдббдаадб бссбдадсса ддасдадсбс дбдбабасбб ббддсдадас адббдсбсбд ддадссбсбд ддабсдбдаб сбддддсасб сбдадбабба бдсдабсааб даадбссбдс сбдсбдббдд абаасбасаб ддадасаабс сбдаасссаб абабсаббаа сдбдасбббд дссдсбаада бдбдббсаса ддбдсбдбдб саададсадд дадбабдсаб баддаадаас бддаасбсаа дсдаббабсб ссабсбдаас ссадабаабб ббдсаабсса дсбддаааад ддбддбаааб бсасбдбссд адддаадссс асасбсдадд абсбсдааса дбббадбдаа аадббсбасб дбадсбдсба бадсасбсбд адббдбаадд ааааадссда бдбдааадас асбдабдссд ббдасдбббд сабсдссдаб ддддбдбдба ббдасдссбб бсбсаадсса ссаабддада сбдаддадсс ссадабсббб басаасдссб сссссбссас сббдадбдсб ассабдббса бсдбабсбаб асббббссбд абббдабаад дабсс <210> 200 <211> 1479 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5РАМ1-31ЪГ кодон-оптимизированная ДНК с ЫПе! и ВатН!
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1030
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1440
    1485 <400> 200 дсбадсабдд асабдадддб ассадсссад сбдббдддсс ббсббсбдсб ддддсааддд дасббаасбб сададсбссс ссбдбаабсс сааасдбссс дсабддаасд ссссбадсда аббсбдбббд дддааабббд асдаассбсб сбдббббсбб ббабсддбад сссбсдаабс аасдсбассд дасадддддб басдбддабс дбсбдддсба ббасссббас абсдасадса ббасбддддб ддаддсаббс сбсадааааб абсасбдсад дассассбдд асааадсбаа асаббсбаса бдссадбдда саабсбсдда абддсбдбда ббдасбддда ссбасббддд сссдаааббд даадсссаад дабдбдбаба адаассдабс дбдсадсадс адаасдбдса дсбдбсссбб асадаадсса ссдааааадс ббсдадааад сбдддаадда бббссбддбб дадасаабаа аасббдддаа ссбаассасс бсбддддсба ббабббдббс сссдаббдсб асаабсасса сссддсбаса асддабсббд бббсаасдбс даааббаааа дааасдабда ббдбддаабд адбсбасбдс асбсбасссс бсбабабабс бсаасасаса дбадссдсба сссбсбасдб бсддаабада дбдадддаад ссабсадддб сссдабдсса аабсбссссб сссадбдббб дссбасасса ддабсдбдбб дбдббдаадб бссбдадсса ддасдадсбс дбдбабасбб ббддсдадас ддадссбсбд ддабсдбдаб сбддддсасб сбдадбабба бдсдабсааб ббддсбсссб сббссбдбдд ддасабдбсб дасаабсббб дассдбдаас дааддабабб ддадбддада саббдадсбд баадсаддаа асбдсббада сбабаадаад ссбсбсббдд дсадбсссса дбссаадабс бассдассад адббдсбсбд даадбссбдс
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    - 286 022752 сРдсРдРРдд дссдсРаада
    РддаасРсаа ддрддрааар аадРРсРасР асРдаРдссд ссаарддада ассаРдРРса аРаасРасаР
    РдРдРРсаса дсдаРРаРсР
    РсасРдРссд дРадсРдсРа
    РРдасдРРРд срдаддадсс
    РсдРаРсРаР ддадасааРс ддрдсрдрдр ссаРсРдаас адддаадссс
    РадсасРсРд саРсдссдаР ссадаРсРРР асРРРРсРда срдаасссар саададсадд ссадаРааРР асасРсдадд адРРдРэадд ддддрдрдра
    РасаасдссР
    РааддаРсс аРаРсаРРаа дадРаРдсэР
    РРдсааРсса аРсРсдааса ааааадссда
    РРдасдссРР сссссрссас сдРдасРРРд
    Раддаадаас дсрддаааад дРРРадРдаа рдрдааадас
    РсРсаадсса сррдадрдср
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1440
    1479 <210> 201 <211> 1473 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5РАМ1-1У31 кодон-оптимизированная ДНК с ЫЬе! и ВатН!
    <400> 201 дсРадсаРдд асаРдадддР ассадсссад срдррдддсс ддддсааддд дасРРаасРР сададсРссс ссРдРааРсс дсарддаасд ссссРадсда аРРсРдРРРд дддаааРРРд срдррррсрр РРаРсддРад сссРсдааРс аасдсРассд расдрддарс дрсрдддсра ррасссррас аРсдасадса ддаддсаРРс сРсадааааР арсасрдсад дассассРдд асаРРсРаса РдссадРдда сааРсРсдда арддсрдрда ссРасРРддд сссдаааррд даадсссаад даРдРдРаРа дрдсадсадс адаасдрдса дсРдРсссРР асадаадсса РРсдадааад сРдддаадда РРРссРддРР дадасааРаа ссраассасс РсРддддсРа РРаРРРдРРс сссдаЬРдсР сссддсРаса асддарсррд РРСсаасдРс даааРРаааа РРдРддааРд адРсРасРдс асрсРасссс РсРаРаРаРс дРадссдсРа сссРсРасдР РсддааРада дрдадддаад сссдаРдсса ааРсРссссР сссадрдррр дссРасасса дрдррдаадр Рссрдадсса ддасдадсРс дРдРаРасРР ддадссРсРд ддарсдрдар срддддсаср сРдадРаРРа срдсрдррдд аРаасРасаР ддадасааРс срдаасссар дссдсРаада РдРдРРсаса ддрдсрдрдр саададсадд РддаасРсаа дсдаРРаРсР ссаРсРдаас ссадаРааРР ддрддрааар РсасРдРссд адддаадссс асасРсдадд аадррсраср дРадсРдсРа РадсасРсРд адррдраадд асРдаРдссд РРдасдРРРд саРсдссдаР ддддрдрдра ссаарддада срдаддадсс ссадаРсРРР РасаасдссР ассаРдРРса РсдРаРсРаР аРдаРаадда Рсс <210> 202 <211> 496 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> РН20зНБз Ν82Α
    РРсРРсРдсР сааасдрссс асдаассРсР дасадддддр
    РРасРддддР асааадсРаа
    РРдасРддда адаассдаРс ссдааааадс аасРРдддаа асаарсасса дааасдарда
    Рсаасасаса ссаРсадддР ддаРсдРдРР
    РРддсдадас рдсдарсаар аРаРсаРРаа дадрардсар
    РРдсааРсса аРсРсдааса ааааадссда
    РРдасдссРР сссссрссас
    РРддсРссср сРРссРдРдд ддасаРдРср дасааРсРРР дассдрдаас дааддаРаРР ддадрддада саРРдадсРд
    Раадсаддаа асРдсРРада сРаРаадаад ссРсРсРРдд дсадрсссса дРссаадаРс
    Рассдассад адРРдсРсРд даадрссрдс сдРдасРРРд
    Раддаадаас дсрддаааад дРРРадРдаа
    Рдрдааадас
    РсРсаадсса сррдадрдср
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1440
    1473 <400> 202
    Мер С1у Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъуз НБз 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег 01 у Уа1 Зег С1п 11е Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Деи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 11е Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр АБа Тгр Азп А1а Рго Зег СБи РЬе Суз Ъеи СБу Ъуз РЬе 50 55 60
    - 287 022752
    Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые С1у Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не АЬа АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу Уа1 ТЬг 11е РЬе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг С1у Уа1 ТЬх Уа1 Азп С1у 100 105 110 СЬу Ые Рго СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи С1п Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЕ А1а Уа1 130 135 140 Ые Азр Тгр С1и СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые С1и Ьеи УаЬ С1п СЬп 01 п Азп 165 170 175 Уа1 СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг С1и АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз С1п С1и РЬе 180 185 190 С1и Ьуз А1а СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ С1и ТЬг Ые Ьуз Ьеи С1 у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго С1у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг С1п СЬп Зег Рго УаЬ 260 2 65 270 А1а АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд Уа1 Агд С1и АЬа Ые Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 2 90 295 300 Агд Ые Уа1 РЬе ТЬг Азр СЬп Уа1 Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу С1и ты Уа1 АЬа Ьеи СЬу А1а Зег С1у Ые 325 330 335 Уа1 Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеЕ Агд Зег МеЕ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 35 0 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЕ С1и ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 3 60 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а АЬа Ьуз МеЕ Суз Зег С1п Уа1 Ьеи Суз С1п С1и СЬп 370 375 380 СЬу Уа1 Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа Ые С1п Ьеи СЬи Ьуз С1у СЬу Ьуз РЬе ТЫ 405 410 415 УаЬ Агд С1у Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз А1а Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Агр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 460 Ые Азр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЕ СЬи ТЫ СЬи СЬи Рго СЬп Ые 465 470 475 480 РЬе туг Азп АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег НЬз Н13 НЬз НЬз НЬз НЬз 485 490 495
    <210> 203 <211> 496 <212> Белок <213> Искусственная последовательность
    - 288 022752 <220>
    <223> РН203Н13 Ν166Α <400> 203
    Мер С1у Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьуз Шз Не РНе РНе Агд Зег РНе Уа1 Ьуз 1 5 10 15 Зег Бег 61у Уа1 Зег С1п Ие Уа1 РНе ТНг РНе Ьеи Ьеи Ие Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТНг Ьеи Азп РНе Агд А1а Рго Рго 1/а1 Ие Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РНе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Бег 61и РНе Суз Ьеи 61у Ьуз РНе 50 55 60 Азр 61и Рго Ьеи Азр МеН Зег Ьеи РНе Бег РНе Ие 61у Бег Рго Агд 65 70 75 80 Ие Азп А1а ТНг 61у С1п 61у Уа1 ТЬг Не РНе Туг Уа1 Азр Агд Ьеи 85 90 95 61у Туг Туг Рго Туг Ие Азр Зег Ие ТНг 61у Уа1 ТНг Уа1 Азп 61 у 100 105 110 С1у Не Рго С1п Ьуз Ие Зег Ьеи О1п Азр Н1з Ьеи Азр Ьуз А1а Ьуз 115 120 125 Ьуз Авр Ие ТНг РНе Туг Мер Рго Уа1 Азр Азп Ьеи 61у МеН А1а Уа1 130 135 140 Ие Азр Тгр 61и 61и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр А1а Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз А1а Агд Зег Ие 61и Ьеи Уа1 61 п 61П 61п Азп 165 170 175 Уа1 61П Ьеи Зег Ьеи ТНг С1и А1а ТНг 61и Ьуз А1а Ьуз 61п 61и РНе 180 185 190 61и Ьуз А1а С1у Ьуз Азр РНе Ьеи Уа1 61и ТНг Не Ьуз Ьеи С1у Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп Н1з Ьеи Тгр 61у Туг Туг Ьеи РНе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Ш.5 ΗΪ3 Туг Ьуз Ьуз Рго 61 у Туг Азп 61 у Зег Суз РНе Азп 225 2 30 235 240 Уа1 61и Ие Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Бег Тгр Ьеи Тгр Азп 61 и Бег 245 250 255 ТНг А1а Ьеи Туг Рго Бег Не Туг Ьеи Азп ТНг 61 п 61η Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТНг Ьеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд б1и А1а Не Агд Уа1 27,5 280 285 Бег Ьуз Не Рго Азр А1а Ьуз Зег Рго Ьеи Рго ν3ι РНе А1а Туг ТНг 290 295 300 Агд Ие Уа1 РНе ТНг Азр С1п Уа1 Ьеи Ьуз РНе Ьеи Зег 61п Азр 61и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТНг РНе 61у С1и ТНг Уа1 А1а Ьеи 61у А1а Бег 61у Ие 325 330 335 Уа1 Не Тгр 61 у ТНг Ьеи Бег Ие МеН Агд Бег МеН Ьу® Бег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеН 61и ТНг Ие Ьеи Азп Рго Туг Ие Не Азп 355 360 365 Уа1 ТНг Ьеи А1а А1а Ьуз Мен Суз Зег 61п Уа1 Ьеи Суз 61п 61и 61п 370 375 380 61 у Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Бег Бег Азр Туг Ьеи Шз Ьеи 385 390 395 400 Ав η Рго Азр Азп РНе А1а Не 61п Ьеи 61и Ьуз 61у 61у Ьуз РНе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд 61у Ьуз Рго ТНг Ьеи 61и Азр Ьеи С1и С1п РНе Бег 61и Ьуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТНг Ьеи Бег Суз Ьуз С1и Ьуз А1а Азр 435 440 445
    - 289 022752
    ЧаЬ Ьуз 450 Азр ТЬг Азр АЬа ЧаЬ 455 Азр ЧаЬ Суз Ые АЬа 460 Азр СЬу ЧаЬ Суз Ые Азр АЬа РЬе Ъеи Ьуз Рго Рго МеС СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Ые 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег НЬз НЬз НЬз НЬз НЬз НЬз
    485 490 495 <210> 204 <2Ы> 496 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> РН20зНЬз Ν235Α <400> 204
    МеС 1 СЬу ЧаЬ Ьеи Ьуз 5 РЬе Ьуз НЬз Ые РЬе 10 РЬе Агд Зег РЬе ЧаЬ 15 Ьуз Зег Зег СЬу ЧаЬ Зег СЬп Ые ЧаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго ЧаЬ Ые Рго Азп чаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуг РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеС Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Ые Азп АЬа ТНг СЬу СЬп СЬу ЧаЬ ТЬг Ые РЬе Туг ЧаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Ые ТЬг СЬу ЧаЬ ТНг ЧаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу 11е Рго СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Агр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеС Рго ЧаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеС АЬа ЧаЬ 130 135 140 Ые Азр Тгр СЬи С1и Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр ЧаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи ЧаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 ЧаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 С1и Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи ЧаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуг Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз Н13 Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг АЬа СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 ЧаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр Азп СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго ЧаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг ЧаЬ Агд Азп Агд ЧаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд ЧаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго ЧаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые ЧаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп ЧаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи ЧаЬ Туг ТЬх РЬе СЬу СЬи ТЬг ЧаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу Ые 325 330 335 ЧаЬ Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег Ые МеС Агд Зег МеС Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350
    - 290 022752
    Ъеи Ъеи Азр Азп Туг Мер СЪи ТЬг ЪЪе Ъеи Азп Рго Туг 365 Не 11е Азп 355 360 УаЪ ТЬг Ъеи АЪа АЪа Ъуз МеР Суз Зег СЪп УаЪ Ъеи Суз СЪп СЪи СЪп 370 375 380 СЪу УаЪ Суз ТЪе Агд Ъуэ Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи НЪз Ъеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЪа ЪЪе СЪп Ъеи СЪи Ъуз СЪу СЪу Ъуз РЬе ТНг 405 4Ъ0 415 УаЪ Агд СЪу Ъуз Рго ТЬг Ъеи СЪи Азр Ъеи СЪи СЪп РЬе Зег СЪи Ъуз 420 425 430 РНе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз СЪи Ъуз АЪа Азр 435 440 445 УаЪ Ъуз Азр ТЬг Азр АЪа УаЪ Азр УаЪ Суз 1Ъе АЪа Азр С1у УаЪ Суз 450 455 4 60 ЪЪе Азр АЪа РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго МеР СЪи ТЬг СЪи СЪи Рго СЪп ЪЪе 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЪа Зег Рго Зег ТЬг Ъеи Зег НЪз НЪз НЪз НЪз НЪз НЪз 485 490 495
    <2Ъ0> 205 <211> 496 <2Ъ2> Белок <2ЪЗ> Искусственная последовательность <220> <223> РН20зНЪз Н254А <400> 205 Мер СЪу УаЪ Ъеи Ъуз РЬе Ъуз НЪз 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЪ Ъуз Ъ 5 10 15 8ег Зег СЪу УаЪ Зег СЪп Ъ1е УаЪ РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд АЪа Рго Рго УаЪ 11е Рго Азп УаЪ Рго 35 40 45 РНе Ъеи Тгр АЪа Тгр Азп АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ъеи СЪу Ъуз РЬе 50 55 60 Азр СЪи Рго Ъеи Азр МеЪ Зег Ъеи РЬе Зег РЬе Не СЪу Зег Рго Агд 65 70 75 80 1Ъе Азп АЪа ТЬг СЪу СЪп СЪу УаЪ ТЬг 11е РЬе Туг УаЪ Азр Агд Ъеи 85 90 95 СЪу Туг Туг Рго Туг 11е Азр Зег 11е ТЬг СЪу УаЪ ТЬг УаЪ Азп С1у ЪОО 105 110 СЪу ЪЪе Рго СЪп Ъуз Не Зег Ъеи СЪп Азр НЪз Ъеи Азр Ъуз АЪа Ъуз 115 120 125 Ъуз Азр 11е ТЬг РЬе Туг МеЪ Рго УаЪ Азр Азп Ъеи СЪу МеЪ АЪа УаЪ 130 135 140 11е Азр Тгр СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160 Ъуз Азр УаЪ Туг Ъуз Азп Агд Зег 11е СЪи Ъеи УаЪ СЪп СЪп СЪп Азп 165 170 175 УаЪ СЪп Ъеи Зег Ъеи ТЬг СЪи АЪа ТЬг СЪи Ъуз АЪа Ъуз СЪп СЪи РЬе 130 185 190 СЪи Ъуз АЪа СЪу Ъуз Азр РЬе Ъеи УаЪ СЪи ТЬг 11е Ъуз Ъеи СЪу Ъуз 195 200 205 Ъеи Ъеи Агд Рго Азп НЪз Ъеи Тгр С1у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЪз НЪз Туг Ъуз Ъуз Рго СЪу Туг Азп СЪу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЪ СЪи ГЪе Ъуз Агд Азп Азр Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр АЪа СЪи Зег 245 250 255
    - 291
    ТЬг АЪа Ъеи Туг 260 Рго Зег Не Гуг Ъеи Αεη 265 ТЬг СЪп С1п Зег 270 Рго УаЪ АЪа АЪа ТЬг Ъеи Туг УаЪ Агд Азп Агд УаЪ Агд СЪи АЪа 11е Агд УаЪ 275 280 285 Зег Ъуз Не Рго Азр АЪа Ъуз Зег Рго Ъеи Рго УаЪ РЬе АЪа Туг ТЫ 290 2 95 300 Агд Пе УаЪ РЬе ТЬг Азр СЪп УаЪ Ъеи Ъуз РЬе Ъеи 8ег СЪп Азр СЪи 305 зъо 315 320 Ъеи УаЪ Туг ТЬг РЬе СЪу СЪи ТЬг Уа1 АЪа Ъеи СЪу А1а Зег СЪу Не 325 330 335 УаЪ Не Тгр СЪу ТЫ Ъеи Зег 1Ъе МеС Агд Зег МеС Ъуз Зег Суз Ъеи 340 345 350 Ъеи Ъеи Азр Азп Туг МеС СЪи ТЬг 11е Ъеи Азп Рго Туг 11е 11е Азп 355 360 365 УаЪ ТЬг Ъеи АЪа АЪа Ъуз МеС Суз Зег СЪп УаЪ Ъеи Суз СЪп СЪи СЪп 370 37 5 38 0 СЪу УаЪ Суз 1Ъе Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи НЪз Ъеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЪа Не СЪп Ъеи СЪи Ъуз СЪу СЪу Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЪ Агд СЪу Ъуз Рго ТЬг Ъеи СЪи Азр Ъеи СЪи СЪп РЬе Зег СЪи Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз СЪи Ъуз АЪа Азр 435 440 445 УаЪ Ъуз Азр ТЬг Азр АЪа УаЪ Азр 7а1 Суз Не АЪа Азр СЪу УаЪ Суз 450 455 460 Не Азр АЪа РЬе Ъеи Ъуз Рго Рго МеС СЪи ТЬг СЪи СЪи Рго СЪп Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЪа Зег Рго Зег ТЬг Ъеи Зег НЪз НЪз Нгз НЪз НЪз НЪз 485 490 495
    <210> 206 <211> 496 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220> <223> РН20зНЪз Н82А/Ы166А <400> 206 МеС СЪу УаЪ Ъеи Ъуз РЬе Ъуз НЪз Т1е РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЪ Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег СЪу УаЪ Зег СЪп Не УаЪ РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи Не Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд АЪа Рго Рго УаЪ Не Рго Азп УаЪ Рго 35 40 45 РЬе Ъеи Тгр АЪа Тгр Азп АЪа Рго Зег СЪи РЬе Суз Ъеи СЪу Ъуз РЬе 50 55 60 Азр СЪи Рго Ъеи Азр Мес Зег Ъеи РЬе Зег РЬе Не СЪу Зег Рго Агд 65 70 75 80 Не АЪа АЪа ТЬг СЪу СЪп СЪу УаЪ ТЬг 11е РЬе Туг УаЪ Азр Агд Ъеи 85 90 95 СЪу Туг Туг Рго Туг Не Азр Зег Не ТЬг СЪу УаЪ ТЬг УаЪ Азп СЪу 100 105 110 СЪу 11е Рго СЪп Ъуз 11е Зег Ъеи СЪп Азр НЪз Ъеи Азр Ъуз АЪа Ъуз 115 120 125 Ъуз Азр Не ТЬг РЬе Туг МеЪ Рго УаЪ Азр Азп Ъеи СЪу МеС АЪа УаЪ 130 135 140 11е Азр Тгр СЪи СЪи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЪа Агд Азп Тгр Ъуз Рго 145 150 155 160
    - 292 022752
    Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз А1а 165 Агд Зег Не С1и 170 Ъеи Уа1 С1п С1п С1п 175 Азп Уа1 С1п Ьеи Зег Ъеи ТЬг С1и А1а ТЬг О1и Ъуз А1а Ъуз С1п С1и РЬе 180 185 190 01и Ьуз А1а С1у Ъуз Азр РЬе Ъеи Уа1 С1и ТЬг Не Ъуз Ъеи С1у Ъуз 195 200 205 Ьеи ьеи Агд РГО АЗП Н1з Ъеи Тгр 61у Туг Туг Ъеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп Низ Ηίε Туг Ъуз Ъу5 Рго 61у Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 Уа1 С1и 11е Ъуз Агд Азп Αερ Азр Ъеи Зег Тгр Ъеи Тгр Азп б1и Зег 245 250 255 ТЬг А1а Ьеи Туг Рго Зег Не Туг Ъеи Азп ТЬг О1п С1п Зег Рго Уа1 260 265 270 А1а А1а ТЬг Ъеи Туг Уа1 Агд Азп Агд Уа1 Агд <31и А1а 11е Агд Уа1 275 280 285 Зег Ьуз Не Рго Азр А1а Ъуз Зег Рго Ъеи Рго Уа1 РЬе А1а Туг ТЬг 290 295 300 Агд Не Уа1 РЬе ТЬг Азр С1п Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъеи Зег С1п Азр О1и 305 310 315 320 Ьеи Уа1 Туг ТЬг РЬе С1у С1и ТЫ Уа1 А1а Ъеи С1у А1а Зег 61у 11е 32 5 330 335 Уа1 11е Тгр 01 у ТЬг Ъеи Зег Не МеЬ Агд Зег МеЪ Ъуз Зег Суз Ъеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ С1и ТЬг Не Ъеи Азп Рго Туг Не Не Азп 355 360 365 Уа1 ТЬг Ьеи А1а А1а Ъуз Ме! Су5 Зег С1п Уа1 Ъеи Суз С1 п О1и О1п 370 375 380 С1у Уа1 Суз 11е Агд Ъуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ъеи Низ Ъеи 335 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а 11е С1п Ъеи С1и Ъуз С1у С1у Ъуз РЬе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд С1у Ъуз Рго ТЬг Ъеи 01и Азр Ъеи О1и 61п РЬе Зег С1и Ъуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ъеи Зег Суз Ъуз 01 и Ъуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьуз Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз 11е А1а Азр О1у Уа1 Суз 450 455 460 11е Азр А1а РЬе Ъеи Ъуз РГО Рго МеЪ 01и ТЬг С1и 01 и Рго С1 п 11е 465 470 475 480 РЬе Туг Азп А1а Зег Рго Зег ТЬг Ъеи Зег Низ Низ Низ Низ Низ Низ 485 490 495
    <210> <211> <212> <213> 207 496 Белок Искусственная последовательность <220> <223> РН20зН1з Н82А/Ы254А <4 00> 207 Ме5 С1у Уа1 Ъеи Ъуз РЬе Ъуз Низ 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе Уа1 Ъуз 1 5 10 15 Зег Зег С1у Уа1 Зег С1п 11е Уа1 РЬе ТЬг РЬе Ъеи Ъеи 11е Рго Суз 20 25 30 Суз Ъеи ТЬг Ъеи Азп РЬе Агд А1а Рго Рго Уа1 11е Рго Азп Уа1 Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр А1а Тгр Азп А1а Рго Зег О1и РЬе Суз Ъеи С1у Ъуз РЬе 50 55 60
    293
    Авр СЬи Рго Ьеи Азр Мер Бег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Бег Рго Агд 65 70 75 80 Ые АЬа АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 35 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 ыо СЬу Ые Рго СЬп Ьуз Ые Бег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг Мер Рго УаЬ Азр Агп Ьеи СЬу Мер АЬа УаЬ 130 135 140 ЬЬе Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз Азп Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЫ Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг Азп НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Еег Тгр Ьеи Тгр АЬа СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Еег Ые Туг Ьеи Азп ТЫ СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 230 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Бег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЫ РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Бег СЬу I Ье 325 330 335 УаЬ Ые Тгр СЬу ТЬг Ьеи Зег 11е меь Агд Зег Меь Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг МеЬ СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи АЬа АЬа Ьуз МеЬ Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа Ые СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬе 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Агр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445 УаЬ Ьуз Азр ТЬг Азр АЬа УаЬ Азр УаЬ Суз Ые АЬа Азр СЬу УаЬ Суз 450 455 4 60 Ые Авр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЬ СЬи ТЬг СЬи СЬи РЕО СЬп Ые 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЬа Бег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег НЬз НЬз НЬз НЬз НЬз Н13 485 490 495
    <210> 208 <2Ы> 496 <212> Белок <213> Искусственная последовательность
    - 294 022752 <220>
    <223> РН20зН1з Ν166Α/Ν254Α <400> 208
    Мес СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз 11е РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег С1п 11е УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬГ Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго Уа1 Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр Азп АЬа Рго Зег СЬи РЬе Суз Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр Мес Зег Ьеи РЬе Зег РЬе Ые СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 11е Азп АЬа ТЬг СЬу С1п СЬу УаЬ ТЬг 11е РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг 11е Азр Зег 11е ТЬг СЬу УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 СЬу 11е Рго СЬп Ьуз 11е Зег Ьеи С1п Азр НЬз Ьеи Агр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ъуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеС Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу Меб АЬа УаЬ 130 135 140 Не Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр УаЬ Туг Ьуз А1а Агд Зег 11е СЬи Ьеи Уа1 СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз А1а Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 61ч ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ С1и ТЬг 11е Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе РГО Азр Суз 210 215 220 Туг Азп ΗΪ3 НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп СЬу Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр АЬа СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 А1а АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд Уа1 Агд СЬи АЬа Ые Агд Уа1 275 230 285 Зег Ьуз 11е Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ъеи Зег С1п Азр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ А1а Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е 325 330 335 Уа1 Ые Тгр ЕЬу ТЬг Ьеи Зег Ые Меб Агд Зег Меб Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350 Ьеи Ьеи Азр Азп Туг Меб СЬи ТЬг Ые Ьеи Азп Рго Туг Ые Ые Азп 355 360 365 УаЬ ТЬг Ьеи А1а АЬа Ьуз меб Суз Зег СЬп УаЬ Ьеи Суз СЬп СЬи СЬп 370 375 380 СЬу УаЬ Суз Ые Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬз Ъеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе АЬа 11е СЬп Ьеи СЬи Ьуз СЬу СЬу Ьуз РЬе ТЬг 405 410 415 УаЬ Агд СЬу Ьуз Рго ТЬг Ьеи СЬи Азр Ьеи СЬи СЬп РЬе Зег СЬи Ьуз 420 425 430 РЬе Туг Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз АЬа Азр 435 440 445
    295
    УаЬ Ьуз 450 Азр ТЬг Азр АЬа Уа1 Азр νβΐ 455 Суз 11е АЬа 460 Азр С1у УаЬ Суз Ые Азр АЬа РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго меь СЬи ТЬг СЬи СЬи Рго СЬп Не 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЬа Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег Н13 НЬз Н13 НЬз НЬз ΗΪ3 435 490 495
    <210> 209 <2Ы> 496 <212> Белок <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> РН20зНЬз Ν82Α/Ν166Α/Ν254Α <400> 209
    МеЕ СЬу УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьуз НЬз Ые РЬе РЬе Агд Зег РЬе УаЬ Ьуз 1 5 10 15 Зег Зег СЬу УаЬ Зег СЬп Ые УаЬ РЬе ТЬг РЬе Ьеи Ьеи Ые Рго Суз 20 25 30 Суз Ьеи ТЬг Ьеи Азп РЬе Агд АЬа Рго Рго УаЬ Ые Рго Азп УаЬ Рго 35 40 45 РЬе Ьеи Тгр АЬа Тгр АЗП АЬа Рго Зег СЬи РЬе Су® Ьеи СЬу Ьуз РЬе 50 55 60 Азр СЬи Рго Ьеи Азр МеЕ Зег Ьеи РЬе Зех РЬе Пе СЬу Зег Рго Агд 65 70 75 80 1Ье АЬа АЬа ТЬг СЬу СЬп СЬу УаЬ ТЬг Ые РЬе Туг УаЬ Азр Агд Ьеи 85 90 95 СЬу Туг Туг Рго Туг Ые Азр Зег Ые ТЬг С1у УаЬ ТЬг УаЬ Азп СЬу 100 105 110 С1у Ые Рго СЬп Ьуз Ые Зег Ьеи СЬп Азр НЬз Ьеи Азр Ьуз АЬа Ьуз 115 120 125 Ьуз Азр Ые ТЬг РЬе Туг МеЕ Рго УаЬ Азр Азп Ьеи СЬу МеЕ АЬа УаЬ 130 135 140 Ые Азр Тгр СЬи СЬи Тгр Агд Рго ТЬг Тгр АЬа Агд Азп Тгр Ьуз Рго 145 150 155 160 Ьуз Азр Уа1 Туг Ьуз АЬа Агд Зег Ые СЬи Ьеи УаЬ СЬп СЬп СЬп Азп 165 170 175 УаЬ СЬп Ьеи Зег Ьеи ТЬг СЬи АЬа ТЬг СЬи Ьуз АЬа Ьуз СЬп СЬи РЬе 180 185 190 СЬи Ьуз АЬа СЬу Ьуз Азр РЬе Ьеи УаЬ СЬи ТЬг Ые Ьуз Ьеи СЬу Ьуз 195 200 205 Ьеи Ьеи Агд Рго Азп НЬз Ьеи Тгр СЬу Туг Туг Ьеи РЬе Рго Азр Суз 210 215 220 Туг АЗП НЬз НЬз Туг Ьуз Ьуз Рго СЬу Туг Азп С1у Зег Суз РЬе Азп 225 230 235 240 УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд Азп Азр Азр Ьеи Зег Тгр Ьеи Тгр АЬа СЬи Зег 245 250 255 ТЬг АЬа Ьеи Туг Рго Зег Ые Туг Ьеи Азп ТЬг СЬп СЬп Зег Рго УаЬ 260 265 270 АЬа АЬа ТЬг Ьеи Туг УаЬ Агд Азп Агд УаЬ Агд СЬи АЬа Ые Агд УаЬ 275 280 285 Зег Ьуз Ые Рго Азр АЬа Ьуз Зег Рго Ьеи Рго УаЬ РЬе АЬа Туг ТЬг 290 295 300 Агд Ые УаЬ РЬе ТЬг Азр СЬп УаЬ Ьеи Ьуз РЬе Ьеи Зег СЬп Аэр СЬи 305 310 315 320 Ьеи УаЬ Туг ТЬг РЬе СЬу СЬи ТЬг УаЬ АЬа Ьеи СЬу АЬа Зег СЬу 11е 325 330 335 УаЬ Ые Тгр С1у ТЬг Ьеи Зег 11е МеЕ Агд Зег МеЕ Ьуз Зег Суз Ьеи 340 345 350
    296
    Ьеи Ьеи Авр А5п 355 Туг Меё СЬи ТЬг 360 Не Ьеи Азп Рго Туг 365 11е Пе Азп Уа1 ГЬг Ьеи А1а А1а Ьуз МеЕ Суз Зег С1п УаЛ Ьеи Суз СЬп СЬи С1п 370 375 330 С1у Уа1 Суз Не Агд Ьуз Азп Тгр Азп Зег Зег Азр Туг Ьеи НЬв Ьеи 385 390 395 400 Азп Рго Азр Азп РЬе А1а 11е С1п Ьеи СЛи Ьуз СЛу СЛу Ьуз РНе ТЬг 405 410 415 Уа1 Агд С1у Ьуз Рго ТЬг Ьеи С1и Азр Ьеи СЛи СЛп РНе Зег С1и Ьуз 420 425 430 РЬе Гу г Суз Зег Суз Туг Зег ТЬг Ьеи Зег Суз Ьуз СЬи Ьуз А1а Азр 435 440 445 Уа1 Ьув Азр ТЬг Азр А1а Уа1 Азр Уа1 Суз Не А1а Азр С1у Уа1 Суз 450 455 4 60 Не Авр А1а РЬе Ьеи Ьуз Рго Рго МеЕ СЬи ТЬг СЛи С1и Рго С1п 11е 465 470 475 480 РЬе Туг Азп АЬа зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег ΗΪ3 ΗΪ3 ΗΪ5 НЬз ΗΪΞ НЬз 485 490 495
    <210> 210 <211> 1494 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ДНК РН20зНЬз <400> 210 аЕдддадЕдс ЕааааЕЕсаа дсасаЕсЕЕЕ ЕЕсэдаадсЕ ЕЕдЕЕаааЕс аадЕддадЕа 60
    ЕсссадаЕад СЬИсассП ссЕЕсЕдаЕЕ ссаЕдЕЕдсЕ ЕдасЕсЕЕаа сЕЕсададсЕ 120 сссссЕдЕаа ЕсссааасдЕ ссссЕЕссЕд ЕдддсаЕдда асдссссЕад сдааЕЕсЕдЕ 1Θ0
    ЕЕддддаааЕ ЕЕдасдаасс ЕсЕддасаЕд ЕсЕсЕдЕЕЕЕ сЕЕЕЕаЕсдд ЕадсссЕсда 240 аЕсаасдсЕа ссддасаддд ддЕдасааЕс ЕЕЕЕасдЕдд аЕсдЕсЕддд сЕаЕЕасссЕ 300
    ЕасэЕсдаса дсаЕЕасЕдд ддЕдассдЕд аасддаддса ЕЕссЕсадаа ааЕаЕсасЕд 360 саддассасс Еддасааадс ЕаадааддаЕ аЕЕасаЕЕсЕ асаЕдссадЕ ддасааЕсЕс 420 ддааЕддсЕд ЕдаЕЕдасЕд ддаддадЕдд адассЕасЕЕ дддсссдааа ЕЕддаадссс 480 ааддаЕдЕдЕ аЕаадаассд аЕссаЕЕдад сЕддЕдсадс адсадаасдЕ дсадсЕдЕсс 540 сЕЕасадаад ссассдаааа адсЕаадсад дааЕЕсдада аадсЕдддаа ддаЕЕЕссЕд 600 дЕЕдадасаа ЕаааасЕЕдд дааасЕдсЕЕ адассЕаасс ассЕсЕдддд сЕаЕЕаЕЕЕд 660
    ЕЕссссдаЕЕ дсЕасааЕса ссасЕаЕаад аадсссддсЕ асаасддаЬс ЕЕдЕЕЕсаас 720 дЕсдаааЕЕа ааадааасда ЕдассЕсЕсЕ ЕддЕЕдЕдда аЕдадЕсЕас ЕдсасЕсЕас 780 сссЕсЕаЕаЕ аЕсЕсаасас асадсадЕсс ссадЕадссд сЕасссЕсЕа сдЕЕсддааЕ 8 40 ададЕдаддд аадссаЬсад ддЕдЕссаад аЕссссдаЕд ссаааЕсЕсс ссЕсссадЕд 900
    ЕЕЕдссЕаса ссаддаЕсдЕ дЕЕЕассдас саддЕдЕЕда адЕЕссЕдад ссаддасдад 960 сЕсдЕдЕаЕа сЕЕЕЕддсда дасадЕЕдсЕ сЕдддадссЕ сЕдддаЕсдЕ даЕсЕддддс 1020 асЕсЕдадЕа ЕЕаЕдсдаЕс ааЕдаадЕсс ЕдссЕдсСдЕ ЕддаЕаасЕа саЕддадаса 1080 аЕссЕдаасс саЕаЕаЕсаЕ ЕаасдЕдасЕ ЕЕддссдсЕа адаЕдЕдЕЕс асаддЕдсЕд 1140
    ЕдЕсаададс адддадЕаЕд саЕЕаддаад аасЕддаасЕ саадсдаЕЕа ЕсЕссаЕсЕд 1200 аасссадаЕа аЕЕЕЕдсааЕ ссадсЕддаа аадддЕддЕа ааЕЕсасЕдЕ ссдадддаад 1260 сссасасЕсд аддаЕсЕсда асадЕЕЕадЕ даааадЕЕсЕ асЕдЕадсЕд сЕаЕадсасЕ 1320 сЕдадЕЕдьа аддааааадс сдаЕдЕдааа дасасЕдзЕд ссдЕЕдасдЕ ЕЕдсаЕсдсс 1380 даЕддддЕдЕ дЕаЕЕдасдс сЕЕЕсЕсаад ссассааЕдд адасЕдадда дссссадаЕс 1440
    ЕЕЕЕасаасд ссЕсссссЕс сассЕЕдадЕ саЕсаЕсаЕс аЕсаЕсаЕЕа дЕаа 1494 <210> 211 <211> 1497 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    - 297 022752 <223> 5ΡΑΜ1-Ι33ν <400> 211 дсСадсаСдд ддддсааддд дсаСддаасд
    С'-СШ[С1СасдСддаСс ддаддсаССс асаССсСаса ссСасССддд дСдсадсадс
    ССсдадааад ссСаассасс сссддсСаса
    ССдСддааСд дСадссдсСа сссдаСдсса дСдССдаадС ддадссСсСд сСдсСдССдд дссдсСаада
    СддаасСсаа ддСддСаааС аадССсСасС асСдаСдссд ссааСддада ассасдсСса асаСдадддС дасССаасСС ссссСадсда 1ьагсдд1ад дСсСдддсСа сСсадааааС СдссадСдда сссдаааССд адаасдСдса сСдддаадда СсСддддсСа асдда СсССд адСсСасСдс сссСсСасдС ааСсСссссС СссСдадсса ддаСсдСдаС аСаасСасаС СдСдССсаса дсдассассС СсасСдСссд дСадсСдсСа ССдасдСССд сСдаддадсс ссдсасссаС ассадсссад сададссссс аССсСдСССд сссСсдааСс ССасссССас аСсасСдсад сааСсСсдда даадсссаад дсСдСсссСС СССссСддСС тддШ'.цд.с 1 ССсаасдСс асСсСасссс СсддааСада сссадСдССС ддасдадсСс сСддддсасС ддадасааСс ддСдсСдСдС ссаСсСдаас адддаадссс СадсасСсСд саСсдссдаС ссадаСссеС асссс ссссд сСдССдддсс ссСдСааСсс дддаааСССд аасдсСассд аСсдасадса дассассСдд аСддсСдСда даСдСдСаСа асадаадсса дадасааСаа сссдаССдсС даааССаааа СсСаСаСаСс дСдадддаад дссСасасса дСдСаСасСС сСдадСаССа сСдаасссаС саададсадд ссадаСааС1 асасСсдадд адССдСаадд ддддСдСдСа СасаасдссС ассасассаа
    ССсССсСдсС сааасдСссс асдаассСсС дасадддддС
    ССасСддддС асааадсСаа
    ССдасСддда адаассдаСс ссдааааадс аасССдддаа асааСсасса дааасдаСда
    Ссаасасаса ссаСсадддС ддаСсдСдСС
    ССддсдадас
    СдсдаСсааС аСаСсаССаа дадСаСдсаС
    ССдсааСсса аСсСсдааса ааааадссда
    ССдасдссСС сссссСссас дсдСдСдаСа
    ССддсСсссС сССссСдСдд ддасаСдСсС дасааСсССС дассдСдаас дааддаСаСС ддадСддада саССдадсСд
    Саадсаддаа асСдсССада сСаСаадаад ссСсСсССдд дсадСсссса дСссаадаСс
    Сассдассад адССдсСсСд даадСссСдс сдСдасСССд
    Саддаадаас дссддаааад дСССадСдаа
    СдСдааадас
    СсСсаадсса сссдадСдсс аддаСсс
    120
    160
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    1440
    1497 <210> 212 <211> 1491 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАМ1-Ы13 <400> 212 дсСадсаСдд ддддсааддд дсаСддаасд сСдССССсСС
    СасдСддаСс ддаддсаССс асаССсСаса сссасссддд дСдсадсэдс
    ССсдадааад ссСаассэсс сссддсЬаса
    ССдСддааСд дСадссдсСа сссдаСдсса дСдССдаадС ддадссСсСд сСдсСдССдд дссдсСаэда
    СддаасСсаа ддСддСаааС аадссссасс асСдаСдссд асаСдадддС дасССаасСС ссссСадсда
    ССаСсддСад дСсСдддсСа сСсадааааС сдссадсдда сссдаааССд адаасдСдса сСдддаадда
    СсСддддсСа асддаСсССд адСсСасСдс сссСсСасдС ааСсСссссС
    СссСдадсса ддаСсдСдаС аСаасСасаС
    СдСдССсаса дсдаССаСсС
    СсасСдСссд дсадссдсса
    ССдасдСССд ассадсссад сададссссс аССсСдСССд сссСсдааСс
    ССасссССас аСсасСдсад сааСсссдда даадсссаад дсСдСсссСС
    СССссСддСС
    ССаСССдССс
    СССсаасдСс асСсСасссс
    СсддааСада сссадСдССС ддасдадсСс сСддддсасС ддадасааСс ддСдсСдСдС ссаСсСдаас адддаадссс садсасСссд саСсдссдаС сСдССдддсс ссСдСааСсс дддаааСССд аасдсСассд аСсдасадса дассассСдд асддсСдсда даСдСдСаСа асадаадсса дадасааСаа сссдаССдсС даааССаааа
    СсСаСаСаСс дсдадддаад дссСасасса дСдСаСасСС сСдадСаССа сСдаасссаС саададсадд ссадаСааСС асасСсдадд адссдсаадд ддддсдсдса сссссссдсс сааасдсссс асдаассСсС дасадддддС
    ССасСддддС асааадсСаа
    ССдасСддда адаассдаСс ссдааааадс аасССдддаа асааСсасса дааасдаСда
    Ссаасасаса ссассадддс ддаСсдСдСС
    ССддсдадас
    СдсдаСсааС аСаСсаССаа дадСаСдсаС
    ССдсааСсса аСсСсдааса ааааадссда
    ССдасдссСС ссддсссссс сССссСдСдд ддасаСдСсС дасааСсССС дассдСдаас дааддаСаСС ддадСддада саССдадсСд
    Саадсаддаа асСдсССада сСаСаадаад ссСсСсССдд дсадСсссса дСссаадаСс
    Сассдассад адССдсСсСд даадСссСдс сдСдасСССд
    Саддаадаас дссддаааад дСССадСдаа сдсдааадас
    СсСсаадсса
    120
    180
    240
    300
    360
    420
    480
    540
    600
    660
    720
    780
    840
    900
    960
    1020
    1080
    1140
    1200
    1260
    1320
    1380
    - 298 022752 ссааЕддада сЕдаддадсс ссадаЕсЕЕЕ ЕасаасдссЕ сссссЕссас сЕЕдадЕдсЕ 1440 ассаЕдЕЕса ЕсдЕаЕсЕаЕ асЕЕЕЕссЕд аЕЕаЕаЕсаЕ даЕааддаЕс с 1491 <210> 213 <211> 1467 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 3ΡΑΜ1-ΜΕΊν <400> 213 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60 ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд 120 дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ 180 сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ 240
    ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд 480 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540
    ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720
    ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассад 900 дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд 960 ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ сЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс 1020 сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд 1080 дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас 1140
    ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад 1200 ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа 1260 аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас 1320 асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ЕЕдасдссЕЕ ЕсЕсаадсса 1380 ссааЕддада сЕдаддадсс ссадаЕсЕЕЕ ЕасаасдссЕ сссссЕссас сЕЕдадЕдсЕ 1440 ассаЕдЕЕса ЕсдЕаЕдаЕа аддаЕсс 1467 <210> 214 <211> 1461 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> 5РАМ1-АГМГ <400> 214 дсЕадсаЕдд асаЕдадддЕ ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60 ддддсааддд дасЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд 120 дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдЕсЕ 180 сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ 240
    ЕасдЕддаЕс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс СЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд 480 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540
    ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720
    ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840
    - 299 022752 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдЕЕ Еассдассэд 900 дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд 960 ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ СЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс 1020
    СЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа СдЕдасЕЕЕд 1080 дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас 1140
    ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад 1200 ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа 1260 аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас 1320 асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ЕЕдасдссЕЕ ЕсЕсаадсса 1380 ссааЕддада сЕдаддадсс ссадаЕсЕЕЕ ЕасаасдссЕ сссссЕссас сЕЕдадЕдсЕ 1440 ассаЕдЕЕсЕ даЕааддаЕс с 1461 <210> 215 <211> 1455 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
    <223> ЗРАМ1-ЪЗАТ <400> 215 дсЕадсаЕдд асаЕдадддс ассадсссад сЕдЕЕдддсс ЕЕсЕЕсЕдсЕ ЕЕддсЕсссЕ 60 ддддсааддд дэсЕЕаасЕЕ сададсЕссс ссЕдЕааЕсс сааасдЕссс сЕЕссЕдЕдд 120 дсаЕддаасд ссссЕадсда аЕЕсЕдЕЕЕд дддаааЕЕЕд асдаассЕсЕ ддасаЕдСсЕ 180 сЕдЕЕЕЕсЕЕ ЕЕаЕсддЕад сссЕсдааЕс аасдсЕассд дасадддддЕ дасааЕсЕЕЕ 240
    ЕасдЕддаСс дЕсЕдддсЕа ЕЕасссЕЕас аЕсдасадса ЕЕасЕддддЕ дассдЕдаас 300 ддаддсаЕЕс сЕсадааааЕ аЕсасЕдсад дассассЕдд асааадсЕаа дааддаЕаЕЕ 360 асаЕЕсЕаса ЕдссадЕдда сааЕсЕсдда аЕддсЕдЕда ЕЕдасЕддда ддадЕддада 420 ссЕасЕЕддд сссдаааЕЕд даадсссаад даЕдЕдЕаЕа адаассдаЕс саЕЕдадсЕд 480 дЕдсадсадс адаасдЕдса дсЕдЕсссЕЕ асадаадсса ссдааааадс Еаадсаддаа 540
    ЕЕсдадааад сЕдддаадда ЕЕЕссЕддЕЕ дадасааЕаа аасЕЕдддаа асЕдсЕЕада 600 ссЕаассасс ЕсЕддддсЕа ЕЕаЕЕЕдЕЕс сссдаЕЕдсЕ асааЕсасса сЕаЕаадаад 660 сссддсЕаса асддаЕсЕЕд ЕЕЕсаасдЕс даааЕЕаааа дааасдаЕда ссЕсЕсЕЕдд 720
    ЕЕдЕддааЕд адЕсЕасЕдс асЕсЕасссс ЕсЕаЕаЕаЕс Есаасасаса дсадЕсссса 780 дЕадссдсЕа сссЕсЕасдЕ ЕсддааЕада дЕдадддаад ссаЕсадддЕ дЕссаадаЕс 840 сссдаЕдсса ааЕсЕссссЕ сссадЕдЕЕЕ дссЕасасса ддаЕсдЕдСЕ Рассдассад 900 дЕдЕЕдаадЕ ЕссЕдадсса ддасдадсЕс дЕдЕаЕасЕЕ ЕЕддсдадас адЕЕдсЕсЕд 960 ддадссЕсЕд ддаЕсдЕдаЕ сЕддддсасЕ сЕдадЕаЕЕа ЕдсдаЕсааЕ даадЕссЕдс 1020 сЕдсЕдЕЕдд аЕаасЕасаЕ ддадасааЕс сЕдаасссаЕ аЕаЕсаЕЕаа сдЕдасЕЕЕд 1080 дссдсЕаада ЕдЕдЕЕсаса ддЕдсЕдЕдЕ саададсадд дадЕаЕдсаЕ Еаддаадаас 1140
    ЕддаасЕсаа дсдаЕЕаЕсЕ ссаЕсЕдаас ссадаЕааЕЕ ЕЕдсааЕсса дсЕддаааад 1200 ддЕддЕаааЕ ЕсасЕдЕссд адддаадссс асасЕсдадд аЕсЕсдааса дЕЕЕадЕдаа 1260 аадЕЕсЕасЕ дЕадсЕдсЕа ЕадсасЕсЕд адЕЕдЕаадд ааааадссда ЕдЕдааадас 1320 асЕдаЕдссд ЕЕдасдЕЕЕд саЕсдссдаЕ ддддЕдЕдЕа ЕЕдасдссЕЕ ЕсЕсаадсса 1380 ссааЕддада сЕдаддадсс ссадаЕсЕЕЕ ЕасаасдссЕ сссссЕссас сЕЕдадЕдсЕ 1440 ассЕдаЕаад даЕсс 1455
EA201100908A 2008-12-09 2009-12-09 Длинные растворимые полипептиды рн20 и их использование EA022752B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US20138408P 2008-12-09 2008-12-09
US28124009P 2009-11-13 2009-11-13
PCT/US2009/006501 WO2010077297A1 (en) 2008-12-09 2009-12-09 Extended soluble ph20 polypeptides and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201100908A1 EA201100908A1 (ru) 2012-03-30
EA022752B1 true EA022752B1 (ru) 2016-02-29

Family

ID=42035671

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201100908A EA022752B1 (ru) 2008-12-09 2009-12-09 Длинные растворимые полипептиды рн20 и их использование
EA201500485A EA036569B1 (ru) 2008-12-09 2009-12-09 Способ получения полипептида гиалуронидазы ph20

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201500485A EA036569B1 (ru) 2008-12-09 2009-12-09 Способ получения полипептида гиалуронидазы ph20

Country Status (27)

Country Link
US (2) US8927249B2 (ru)
EP (2) EP3037529B1 (ru)
JP (2) JP5670913B2 (ru)
KR (2) KR101546563B1 (ru)
CN (2) CN103205407B (ru)
AU (1) AU2009333918B2 (ru)
BR (1) BRPI0922538A2 (ru)
CA (2) CA2915783C (ru)
CO (1) CO6341652A2 (ru)
CY (1) CY1121618T1 (ru)
DK (1) DK3037529T3 (ru)
EA (2) EA022752B1 (ru)
ES (1) ES2724588T3 (ru)
HK (1) HK1224330A1 (ru)
HR (1) HRP20190766T1 (ru)
HU (1) HUE043591T2 (ru)
IL (2) IL213150A (ru)
LT (1) LT3037529T (ru)
MX (1) MX2011006110A (ru)
NZ (1) NZ593641A (ru)
PL (1) PL3037529T3 (ru)
PT (1) PT3037529T (ru)
RS (1) RS58728B1 (ru)
SG (2) SG172064A1 (ru)
SI (1) SI3037529T1 (ru)
WO (1) WO2010077297A1 (ru)
ZA (1) ZA201104116B (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2619050C1 (ru) * 2016-03-16 2017-05-11 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) Рекомбинантная плазмидная ДНК pET-15b_T1_RL, обеспечивающая синтез рекомбинантного слитого белка, состоящего из опухоль-специфического пептида и противоопухолевого пептида RL2, и рекомбинантный слитый белок, обладающий цитотоксической активностью по отношению к раковым клеткам и таргетными свойствами к опухолевой ткани

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2218779A1 (en) 2002-12-16 2010-08-18 Halozyme, Inc. Human chondroitinase glycoprotein (chasegp), process for preparing the same, and pharmaceutical compositions comprising thereof
US20090123367A1 (en) * 2003-03-05 2009-05-14 Delfmems Soluble Glycosaminoglycanases and Methods of Preparing and Using Soluble Glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) * 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
PT2177620E (pt) * 2003-03-05 2015-02-16 Halozyme Inc Glicoproteína hialuronidase solúvel (shasegp), processo para preparação da mesma, suas utilizações e composições farmacêuticas que a compreendem
EP3960854A1 (en) * 2008-03-06 2022-03-02 Halozyme, Inc. Large-scale production of soluble hyaluronidase
TWI395593B (zh) 2008-03-06 2013-05-11 Halozyme Inc 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制
TWI532498B (zh) * 2008-03-17 2016-05-11 巴克斯特保健公司 供免疫球蛋白及玻尿酸酶之皮下投藥之用的組合及方法
CA3096629A1 (en) * 2008-04-14 2009-10-22 Halozyme, Inc. Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions
TWI394580B (zh) 2008-04-28 2013-05-01 Halozyme Inc 超快起作用胰島素組成物
CA2915783C (en) 2008-12-09 2020-07-21 Halozyme, Inc. Extended soluble ph20 polypeptides and uses thereof
JP5734985B2 (ja) 2009-09-17 2015-06-17 バクスター・ヘルスケヤー・ソシエテ・アノニムＢａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＳＡ ヒアルロニダーゼおよび免疫グロブリンの安定な共製剤およびそれらの使用方法
EP2595624B1 (en) 2010-07-20 2018-01-31 Halozyme, Inc. Methods of treatment or prevention of the adverse side-effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent
EP2907504B1 (en) 2011-02-08 2017-06-28 Halozyme, Inc. Composition and lipid formulation of a hyaluronan-degrading enzyme and the use thereof for treatment of benign prostatic hyperplasia
NZ717728A (en) 2011-06-17 2016-04-29 Halozyme Inc Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme
AU2012271361B2 (en) 2011-06-17 2017-03-02 Halozyme, Inc. Continuous subcutaneous insulin infusion methods with a hyaluronan degrading enzyme
US9993529B2 (en) 2011-06-17 2018-06-12 Halozyme, Inc. Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme
WO2013040501A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Pharmathene, Inc. Compositions and combinations of organophosphorus bioscavengers and hyaluronan-degrading enzymes, and uses thereof
EP2768521B1 (en) * 2011-10-18 2016-07-13 CSL Behring GmbH Combined use of a sulfated glycosaminoglycan and a hyaluronidase for improving the bioavailability of factor viii
JP6162707B2 (ja) 2011-10-24 2017-07-12 ハロザイム インコーポレイテッド 抗ヒアルロナン剤治療のためのコンパニオン診断およびその使用方法
JP6067746B2 (ja) * 2011-12-30 2017-01-25 ハロザイム インコーポレイテッド Ｐｈ２０ポリペプチド変異体、その製剤および使用
SI2833905T1 (en) 2012-04-04 2018-08-31 Halozyme, Inc. Combination therapy with hyaluronidase and tumane-directed taxane
WO2014062856A1 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Halozyme, Inc. Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods
TW201534726A (zh) 2013-07-03 2015-09-16 Halozyme Inc 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途
AR102333A1 (es) * 2014-08-19 2017-02-22 Regeneron Pharma Selectividad eficiente de proteínas recombinadas
WO2016033555A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Halozyme, Inc. Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor
US9616114B1 (en) 2014-09-18 2017-04-11 David Gordon Bermudes Modified bacteria having improved pharmacokinetics and tumor colonization enhancing antitumor activity
KR102122463B1 (ko) 2014-10-14 2020-06-15 할로자임, 아이엔씨 아데노신 디아미네이즈-2(ada2)의 조성물, 이의 변이체 및 이를 사용하는 방법
CN104745553B (zh) * 2015-03-27 2017-11-28 杭州北斗生物技术有限公司 重组人透明质酸酶及其制备方法和采用聚乙二醇共价修饰的化合物和方法
CN105567606B (zh) * 2016-03-02 2019-03-19 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 一种球形节杆菌及其产生的透明质酸酶
EP3516397A1 (en) * 2016-09-23 2019-07-31 Ventana Medical Systems, Inc. Methods and systems for scoring extracellular matrix biomarkers in tumor samples
ES2827012T3 (es) * 2016-11-17 2021-05-19 Vcn Biosciences Sl Uso de vectores virales oncolíticos en el tratamiento del retinoblastoma
US11129906B1 (en) 2016-12-07 2021-09-28 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
US11180535B1 (en) 2016-12-07 2021-11-23 David Gordon Bermudes Saccharide binding, tumor penetration, and cytotoxic antitumor chimeric peptides from therapeutic bacteria
CN106987559A (zh) * 2017-03-22 2017-07-28 上海药明生物技术有限公司 一种重组chok1细胞株的构建方法及其应用
WO2019222435A1 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Halozyme, Inc. Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20
BR112020019041A2 (pt) * 2018-07-25 2021-02-09 Alteogen, Inc. variantes de ph20 ou fragmento da mesma, ácido nucleico, vetor de expressão recombinante, célula hospedeira e composição para tratamento de câncer
MX2021011278A (es) * 2019-03-25 2022-03-17 Alteogen Inc Composicion farmaceutica para inyeccion subcutanea que comprende una variante de hialuronidasa humana ph20 y un farmaco.
US20230125585A1 (en) * 2019-08-02 2023-04-27 Enterin, Inc. Dosing protocols and regimens for aminosterol treatment
EP3992285A4 (en) * 2020-01-23 2023-01-25 Alteogen, Inc. NOVEL HYALURONIC HYDROLYZING ENZYME VARIANT WITH IMPROVED STABILITY AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING IT
BR112022018741A2 (pt) * 2020-04-03 2022-11-01 Standard Of Care Corp Composições de hialuronidase e/ou 4-metilumbeliferona aerossolizadas e métodos de uso das mesmas para tratar doenças ou distúrbios respiratórios
JP2023522966A (ja) * 2020-04-20 2023-06-01 ファーマクト ホールディング アーゲー 修飾細菌性ヒアルロニダーゼポリペプチド、製造方法、医薬組成物およびそれらの使用
CN115427562A (zh) * 2020-08-07 2022-12-02 阿特根公司 制备重组玻尿酸酶的方法
JP2024503265A (ja) 2020-12-28 2024-01-25 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗体組成物およびその使用の方法
AU2021416156A1 (en) 2020-12-28 2023-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumors
WO2022141232A1 (zh) * 2020-12-30 2022-07-07 上海宝济药业有限公司 一种重组人透明质酸酶制剂及其应用
CN115671267A (zh) 2021-07-23 2023-02-03 上海宝济药业有限公司 一种皮下抗生素药物组合物
IL310608A (en) 2021-08-02 2024-04-01 argenx BV Dosage forms for subcutaneous administration
AU2022347379A1 (en) 2021-09-14 2024-03-21 Takeda Pharmaceutical Company Limited Facilitated delivery of concentrated antibody formulations using hyaluronidase
WO2023168305A1 (en) 2022-03-01 2023-09-07 Exuma Biotech Corp. Viral particles with membrane-bound hyaluronidase
CN114573715A (zh) * 2022-03-14 2022-06-03 江苏雅酶医药科技有限公司 一种重组长效人透明质酸酶及其生产方法和应用
CN114634920B (zh) * 2022-03-24 2024-02-27 江南大学 一种产人源透明质酸酶ph20的重组毕赤酵母及其构建方法
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
KR20230168902A (ko) * 2022-06-08 2023-12-15 (주)한국비엠아이 히알루로니다제 폴리펩티드 및 이의 용도
KR20240038901A (ko) * 2022-09-16 2024-03-26 (주)피앤피바이오팜 신규한 히알루로니다제 ph-20 변이체 및 그 용도

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6057110A (en) * 1996-07-03 2000-05-02 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human hyaluronidase
WO2004078140A2 (en) * 2003-03-05 2004-09-16 Halozyme, Inc. SOLUBLE HYALURONIDASE GLYCOPROTEIN (sHASEGP), PROCESS FOR PREPARING THE SAME, USES AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING THEREOF
WO2006091871A1 (en) * 2005-02-23 2006-08-31 Halozyme Therapeutics, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
WO2009128917A2 (en) * 2008-04-14 2009-10-22 Halozyme, Inc. Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3536809A (en) 1969-02-17 1970-10-27 Alza Corp Medication method
US3598123A (en) 1969-04-01 1971-08-10 Alza Corp Bandage for administering drugs
US3630200A (en) 1969-06-09 1971-12-28 Alza Corp Ocular insert
US3710795A (en) 1970-09-29 1973-01-16 Alza Corp Drug-delivery device with stretched, rate-controlling membrane
US3847770A (en) 1972-04-10 1974-11-12 Continental Can Co Photopolymerizable compositions prepared from beta hydroxy esters and polyitaconates
US4044126A (en) 1972-04-20 1977-08-23 Allen & Hanburys Limited Steroidal aerosol compositions and process for the preparation thereof
GB1429184A (en) 1972-04-20 1976-03-24 Allen & Hanburys Ltd Physically anti-inflammatory steroids for use in aerosols
US3845770A (en) 1972-06-05 1974-11-05 Alza Corp Osmatic dispensing device for releasing beneficial agent
USRE28819E (en) 1972-12-08 1976-05-18 Syntex (U.S.A.) Inc. Dialkylated glycol compositions and medicament preparations containing same
US3916899A (en) 1973-04-25 1975-11-04 Alza Corp Osmotic dispensing device with maximum and minimum sizes for the passageway
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4002531A (en) 1976-01-22 1977-01-11 Pierce Chemical Company Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby
US4008719A (en) 1976-02-02 1977-02-22 Alza Corporation Osmotic system having laminar arrangement for programming delivery of active agent
JPS5951355A (ja) 1982-09-17 1984-03-24 Fujirebio Inc 抗ウイルス抗体検出用試薬
US4952496A (en) 1984-03-30 1990-08-28 Associated Universities, Inc. Cloning and expression of the gene for bacteriophage T7 RNA polymerase
US4769027A (en) 1984-08-15 1988-09-06 Burroughs Wellcome Co. Delivery system
US4687610A (en) 1986-04-30 1987-08-18 E. I. Du Pont De Neumours And Company Low crystallinity polyester yarn produced at ultra high spinning speeds
JPH01500997A (ja) 1986-09-30 1989-04-06 ビオヘミー・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング ヒアルロニダーゼの使用
US5052558A (en) 1987-12-23 1991-10-01 Entravision, Inc. Packaged pharmaceutical product
US5033252A (en) 1987-12-23 1991-07-23 Entravision, Inc. Method of packaging and sterilizing a pharmaceutical product
US5073543A (en) 1988-07-21 1991-12-17 G. D. Searle & Co. Controlled release formulations of trophic factors in ganglioside-lipsome vehicle
US5116615A (en) * 1989-01-27 1992-05-26 Immunolytics, Inc. Method for treating benign prostatic hypertrophy
IT1229203B (it) 1989-03-22 1991-07-25 Bioresearch Spa Impiego di acido 5 metiltetraidrofolico, di acido 5 formiltetraidrofolico e dei loro sali farmaceuticamente accettabili per la preparazione di composizioni farmaceutiche in forma a rilascio controllato attive nella terapia dei disturbi mentali organici e composizioni farmaceutiche relative.
US5122614A (en) 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5324844A (en) 1989-04-19 1994-06-28 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
DK0400472T3 (da) 1989-05-27 1996-05-13 Sumitomo Pharma Fremgangsmåde til fremstilling af polyethylenglycolderivater og modificeret protein
DE3921528A1 (de) 1989-06-30 1991-01-10 Draegerwerk Ag Messzelle fuer den elektrochemischen gasnachweis
US5120548A (en) 1989-11-07 1992-06-09 Merck & Co., Inc. Swelling modulated polymeric drug delivery device
US6552170B1 (en) 1990-04-06 2003-04-22 Amgen Inc. PEGylation reagents and compounds formed therewith
ZA912770B (en) 1990-04-16 1992-01-29 Bethesda Eye Inst Enzymatic disinsertion of vitreous body
US5733566A (en) 1990-05-15 1998-03-31 Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Ii Controlled release of antiparasitic agents in animals
US5721348A (en) 1990-12-14 1998-02-24 University Of Connecticut DNA encoding PH-20 proteins
US5580578A (en) 1992-01-27 1996-12-03 Euro-Celtique, S.A. Controlled release formulations coated with aqueous dispersions of acrylic polymers
US5323907A (en) 1992-06-23 1994-06-28 Multi-Comp, Inc. Child resistant package assembly for dispensing pharmaceutical medications
US5591767A (en) 1993-01-25 1997-01-07 Pharmetrix Corporation Liquid reservoir transdermal patch for the administration of ketorolac
AU7097094A (en) 1993-06-01 1994-12-20 Enzon, Inc. Carbohydrate-modified polymer conjugates with erythropoietic activity
US5354566A (en) 1993-06-02 1994-10-11 Kraft General Foods, Inc. Preparation of yeast-leavened dough crusts
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5446090A (en) 1993-11-12 1995-08-29 Shearwater Polymers, Inc. Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
US5795569A (en) 1994-03-31 1998-08-18 Amgen Inc. Mono-pegylated proteins that stimulate megakaryocyte growth and differentiation
WO1995026746A1 (en) 1994-03-31 1995-10-12 Amgen Inc. Compositions and methods for stimulating megakaryocyte growth and differentiation
IT1270594B (it) 1994-07-07 1997-05-07 Recordati Chem Pharm Composizione farmaceutica a rilascio controllato di moguisteina in sospensione liquida
US5824784A (en) 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5705364A (en) * 1995-06-06 1998-01-06 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
US6828431B1 (en) 1999-04-09 2004-12-07 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of breast cancer
US20010055563A1 (en) 1999-09-09 2001-12-27 Rhomed Incorporated Post-labeling stabilization of radiolabeled proteins and peptides
US5665069A (en) 1996-07-19 1997-09-09 Cumer; Patricia Lynn Pressure-directed peribulbar anesthesia delivery device
US6461863B1 (en) 1996-08-16 2002-10-08 University Of Wyoming Modifying insect cell gylcosylation pathways with baculovirus expression vectors
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
US6103525A (en) 1996-10-17 2000-08-15 The Regents Of The University Of California Hybridoma cell lines producing monoclonal antibodies that bind to human plasma hyaluronidase
US6193963B1 (en) 1996-10-17 2001-02-27 The Regents Of The University Of California Method of treating tumor-bearing patients with human plasma hyaluronidase
US6123938A (en) 1996-10-17 2000-09-26 The Regents Of The University Of California Human urinary hyaluronidase
US6258351B1 (en) 1996-11-06 2001-07-10 Shearwater Corporation Delivery of poly(ethylene glycol)-modified molecules from degradable hydrogels
US5990237A (en) 1997-05-21 1999-11-23 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines
US6448369B1 (en) 1997-11-06 2002-09-10 Shearwater Corporation Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation
US5985263A (en) 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
ATE268609T1 (de) 1998-03-12 2004-06-15 Nektar Therapeutics Al Corp Polyethylenglycolderivate mit benachbarten reaktiven gruppen
EP1095243A2 (en) 1998-07-03 2001-05-02 Neles Field Controls Oy Method and arrangement for measuring fluid
US6420339B1 (en) 1998-10-14 2002-07-16 Amgen Inc. Site-directed dual pegylation of proteins for improved bioactivity and biocompatibility
DE19982882D2 (de) 1998-12-23 2001-10-04 Id Pharma Gmbh Pharmazeutische Formulierung enthaltend ein hyaluronsäure-spaltendes Enzym mikrobieller Herkunft
JO2291B1 (en) 1999-07-02 2005-09-12 اف . هوفمان لاروش ايه جي Erythropoietin derivatives
CZ299516B6 (cs) 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US6461802B1 (en) 1999-08-02 2002-10-08 Agfa-Gevaert Adhesive layer for polyester film
US6495659B2 (en) 1999-12-22 2002-12-17 Shearwater Corporation Sterically hindered poly(ethylene glycol) alkanoic acids and derivatives thereof
US6413507B1 (en) 1999-12-23 2002-07-02 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly (ethylene glycol)
US20030212021A1 (en) * 2001-01-25 2003-11-13 Frost Gregory I. Myeloid colony stimulating factor and uses thereof
US6602498B2 (en) 2000-02-22 2003-08-05 Shearwater Corporation N-maleimidyl polymer derivatives
US6586398B1 (en) 2000-04-07 2003-07-01 Amgen, Inc. Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods
CN1318443C (zh) 2000-05-16 2007-05-30 博尔德生物技术公司 含游离半胱氨酸残基的蛋白重折叠的方法
ATE505204T1 (de) 2000-12-20 2011-04-15 Hoffmann La Roche Konjugate von erythropoietin (epo) mit polyethylenglykol (peg)
TWI246524B (en) 2001-01-19 2006-01-01 Shearwater Corp Multi-arm block copolymers as drug delivery vehicles
US6571605B2 (en) 2001-01-19 2003-06-03 Larry Keith Johnson Constant-head soil permeameter for determining the hydraulic conductivity of earthen materials
US6745776B2 (en) 2001-04-10 2004-06-08 David B. Soll Methods for reducing postoperative intraocular pressure
WO2003005889A2 (en) * 2001-07-10 2003-01-23 Ams Research Corporation Surgical kit for treating prostate tissue
US6908963B2 (en) 2001-10-09 2005-06-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith
KR100988949B1 (ko) 2001-10-25 2010-10-20 제넨테크, 인크. 당단백질 조성물
EP1446438A2 (en) 2001-11-07 2004-08-18 Nektar Therapeutics Al, Corporation Branched polymers and their conjugates
US7368108B2 (en) 2001-11-28 2008-05-06 Neose Technologies, Inc. Glycopeptide remodeling using amidases
US7192468B2 (en) 2002-04-15 2007-03-20 Fluor Technologies Corporation Configurations and method for improved gas removal
US6682904B1 (en) 2002-08-15 2004-01-27 Deliatroph Pharmaceuticals, Inc. Specific inhibitors of hyaluronidase 2, and methods of identifying and using same
KR20040040782A (ko) 2002-11-08 2004-05-13 선바이오(주) 신규한 헥사-암 폴리에틸렌글리콜과 유도체 및 그의합성방법
EP2218779A1 (en) 2002-12-16 2010-08-18 Halozyme, Inc. Human chondroitinase glycoprotein (chasegp), process for preparing the same, and pharmaceutical compositions comprising thereof
PT1572744E (pt) 2002-12-16 2010-09-07 Genentech Inc Variantes de imunoglobulina e utilizações destas
CN102139114A (zh) 2003-02-26 2011-08-03 尼克塔治疗公司 聚合物-因子viii部分缀合物
US20090123367A1 (en) * 2003-03-05 2009-05-14 Delfmems Soluble Glycosaminoglycanases and Methods of Preparing and Using Soluble Glycosaminoglycanases
US7871607B2 (en) * 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US7610156B2 (en) 2003-03-31 2009-10-27 Xencor, Inc. Methods for rational pegylation of proteins
KR100512483B1 (ko) 2003-05-07 2005-09-05 선바이오(주) 신규한 폴리에틸렌글리콜-말레이미드 유도체의 합성방법
US20070067855A1 (en) 2003-10-28 2007-03-22 Chesapeake Perl, Inc. Production of human glycosylated proteins in transgenic insects
US20050260711A1 (en) * 2004-03-30 2005-11-24 Deepshikha Datta Modulating pH-sensitive binding using non-natural amino acids
US7572613B2 (en) 2004-06-25 2009-08-11 Klein Jeffrey A Drug delivery system for accelerated subcutaneous absorption
US7758594B2 (en) * 2005-05-20 2010-07-20 Neotract, Inc. Devices, systems and methods for treating benign prostatic hyperplasia and other conditions
WO2006127517A2 (en) 2005-05-20 2006-11-30 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
NZ564954A (en) 2005-06-14 2011-02-25 Protox Therapeutics Inc Method of treating or preventing benign prostatic hyperplasia using modified pore-forming proteins
US20070243567A1 (en) 2006-04-13 2007-10-18 Syhhong Chang Beta cell mimicking control algorithm for artificial pancreas
ES2520765T3 (es) 2007-02-15 2014-11-11 Allergan, Inc. Uso de toxina botulínica para el tratamiento de hiperhidrosis
US8288142B2 (en) * 2007-06-19 2012-10-16 Uvarkina Tamara P Hyaluronidase and method of use thereof
EP3960854A1 (en) * 2008-03-06 2022-03-02 Halozyme, Inc. Large-scale production of soluble hyaluronidase
TWI395593B (zh) 2008-03-06 2013-05-11 Halozyme Inc 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制
TWI532498B (zh) * 2008-03-17 2016-05-11 巴克斯特保健公司 供免疫球蛋白及玻尿酸酶之皮下投藥之用的組合及方法
US20090311237A1 (en) 2008-04-14 2009-12-17 Frost Gregory I Combination therapy using a soluble hyaluronidase and a bisphosphonate
TWI394580B (zh) * 2008-04-28 2013-05-01 Halozyme Inc 超快起作用胰島素組成物
CA2915783C (en) 2008-12-09 2020-07-21 Halozyme, Inc. Extended soluble ph20 polypeptides and uses thereof
US20110229451A2 (en) 2009-03-06 2011-09-22 Halozyme, Inc. Temperature sensitive mutants of matrix metalloproteases and uses thereof
EP2595624B1 (en) * 2010-07-20 2018-01-31 Halozyme, Inc. Methods of treatment or prevention of the adverse side-effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent
EP2907504B1 (en) * 2011-02-08 2017-06-28 Halozyme, Inc. Composition and lipid formulation of a hyaluronan-degrading enzyme and the use thereof for treatment of benign prostatic hyperplasia
AU2012271361B2 (en) 2011-06-17 2017-03-02 Halozyme, Inc. Continuous subcutaneous insulin infusion methods with a hyaluronan degrading enzyme
US9993529B2 (en) 2011-06-17 2018-06-12 Halozyme, Inc. Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme
JP6162707B2 (ja) * 2011-10-24 2017-07-12 ハロザイム インコーポレイテッド 抗ヒアルロナン剤治療のためのコンパニオン診断およびその使用方法
JP6067746B2 (ja) * 2011-12-30 2017-01-25 ハロザイム インコーポレイテッド Ｐｈ２０ポリペプチド変異体、その製剤および使用
SI2833905T1 (en) * 2012-04-04 2018-08-31 Halozyme, Inc. Combination therapy with hyaluronidase and tumane-directed taxane

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6057110A (en) * 1996-07-03 2000-05-02 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human hyaluronidase
WO2004078140A2 (en) * 2003-03-05 2004-09-16 Halozyme, Inc. SOLUBLE HYALURONIDASE GLYCOPROTEIN (sHASEGP), PROCESS FOR PREPARING THE SAME, USES AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING THEREOF
WO2006091871A1 (en) * 2005-02-23 2006-08-31 Halozyme Therapeutics, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
WO2009128917A2 (en) * 2008-04-14 2009-10-22 Halozyme, Inc. Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BOOKBINDER L.H. ET AL.: "A recombinant human enzyme for enhanced interstitial transport of therapeutics". JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL LNKD-DOI:10. 1016/J. JCONREL. 2006.05.027, vol. 114, no. 2, 28 August 2006 (2006-08-28), pages 230-241, XP024957594, ISSN: 0168-3659 [retrieved on 2006-08-28], abstract, page 231, column 1, paragraph 3 - column 2, paragraph 1, page 238, column 1, paragraph 2 - column 2, page 239, column 2, paragraph 2 - page 240 *
CHER G.N. ET AL.: "The dual functions of GPI anchored PH-20: hyaluronidase and intracelluar signalling", MATRIX BIOLOGY, XX, XX, vol .20, no. 8, 1 December 2001 (2001-12-01), pages 515-525, XP002990038, abstract *
CHER G.N. ET AL.: "The PH-20 protein in cynomolgus macaque spermatozoa: identification of two different forms exhibiting hyaluronidase activity". MATRIX BIOLOGY, XX, XX, vol. 175, no. 1, 1 January 1996 (1996-01-01), pages 142-153, XP002990039, abstract *
LIN YING ET AL.: "Molecular cloning of the human and monkey sperm surface protein PH-20". PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF USA. (PNAS), NATIONAL ACADEMY OF SCIENCE, WASHINGTON, DC, US LNKD- DOI:10. 1073/PNAS.90.21.10071, vol. 90, no. 21, 1 January 1993 (1993-01-01), pages 10071-10075, XP002386599, ISSN: 0027-8424, abstract *
MEYER M.F. ET AL.: "The soluble hyaluronidase from bull testes is a fragment of the membrane-bound PH-20 enzyme". FEBS LETTERS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL LNKD- DOI: 10. 1016/S0014-5793(97)00936-8, vol. 413, no. 2, 18 August 1997 (1997-08-18), pages 385-388, XP000961262, ISSN: 0014-5793, abstract, page 387, column 1, paragraph 3 - column 2, paragraph 2; figure 1 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2619050C1 (ru) * 2016-03-16 2017-05-11 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) Рекомбинантная плазмидная ДНК pET-15b_T1_RL, обеспечивающая синтез рекомбинантного слитого белка, состоящего из опухоль-специфического пептида и противоопухолевого пептида RL2, и рекомбинантный слитый белок, обладающий цитотоксической активностью по отношению к раковым клеткам и таргетными свойствами к опухолевой ткани

Also Published As

Publication number Publication date
EP2367936B1 (en) 2016-03-02
CA2746181A1 (en) 2010-07-08
EP3037529A1 (en) 2016-06-29
MX2011006110A (es) 2011-06-24
US20100143457A1 (en) 2010-06-10
IL213150A (en) 2017-05-29
JP2014128277A (ja) 2014-07-10
CN103205407B (zh) 2016-03-16
IL213150A0 (en) 2011-07-31
JP5670913B2 (ja) 2015-02-18
SI3037529T1 (sl) 2019-06-28
PL3037529T3 (pl) 2019-08-30
HK1224330A1 (zh) 2017-08-18
HRP20190766T1 (hr) 2019-06-28
NZ593641A (en) 2013-01-25
EA201500485A1 (ru) 2015-11-30
CO6341652A2 (es) 2011-11-21
AU2009333918B2 (en) 2014-06-05
US8927249B2 (en) 2015-01-06
PT3037529T (pt) 2019-05-31
JP5885765B2 (ja) 2016-03-15
EA201100908A1 (ru) 2012-03-30
KR20140021046A (ko) 2014-02-19
CN103205407A (zh) 2013-07-17
US9284543B2 (en) 2016-03-15
SG194364A1 (en) 2013-11-29
BRPI0922538A2 (pt) 2020-10-13
ZA201104116B (en) 2018-12-19
US20120213767A1 (en) 2012-08-23
CA2746181C (en) 2016-03-15
CN102307993A (zh) 2012-01-04
CA2915783A1 (en) 2010-07-08
KR20110099126A (ko) 2011-09-06
CN102307993B (zh) 2014-06-25
KR101546563B1 (ko) 2015-08-28
RS58728B1 (sr) 2019-06-28
WO2010077297A1 (en) 2010-07-08
IL238669A (en) 2017-12-31
HUE043591T2 (hu) 2019-08-28
CY1121618T1 (el) 2020-07-31
KR101493644B1 (ko) 2015-02-13
IL238669A0 (en) 2015-06-30
AU2009333918A1 (en) 2011-07-07
CA2915783C (en) 2020-07-21
EP3037529B1 (en) 2019-03-27
EP2367936A1 (en) 2011-09-28
SG172064A1 (en) 2011-07-28
LT3037529T (lt) 2019-05-27
US20130101577A9 (en) 2013-04-25
JP2012511327A (ja) 2012-05-24
EA036569B1 (ru) 2020-11-24
DK3037529T3 (da) 2019-05-20
ES2724588T3 (es) 2019-09-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA022752B1 (ru) Длинные растворимые полипептиды рн20 и их использование
JP6262700B2 (ja) 修飾されたヒアルロニダーゼおよびヒアルロナン関連疾患および状態の治療における使用
JP6422933B2 (ja) Ｐｈ２０ポリペプチド変異体、その製剤および使用
JP5756785B2 (ja) 可溶性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、その調製プロセス、使用およびそれを含む薬学的組成物
EA011654B1 (ru) Растворимые гликозаминогликаназы и способы получения и применения растворимых гликозаминогликаназ
AU2013202000B2 (en) Extended soluble PH20 polypeptides and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KZ KG MD TJ TM