CZ295640B6 - Ve vodě rozpustný a izolovatelný aktivovaný polymer, který je stabilní vůči hydrolýze a jeho použití, hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát a jeho použití, biomateriál, způsob syntézy izolovatelného ve vodě rozpustného aktivovaného polymeru a způsob výroby biologicky aktivního konjugátu - Google Patents

Ve vodě rozpustný a izolovatelný aktivovaný polymer, který je stabilní vůči hydrolýze a jeho použití, hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát a jeho použití, biomateriál, způsob syntézy izolovatelného ve vodě rozpustného aktivovaného polymeru a způsob výroby biologicky aktivního konjugátu Download PDF

Info

Publication number
CZ295640B6
CZ295640B6 CZ19961375A CZ137596A CZ295640B6 CZ 295640 B6 CZ295640 B6 CZ 295640B6 CZ 19961375 A CZ19961375 A CZ 19961375A CZ 137596 A CZ137596 A CZ 137596A CZ 295640 B6 CZ295640 B6 CZ 295640B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
group
polymer
sulfone
peg
poly
Prior art date
Application number
CZ19961375A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ137596A3 (en
Inventor
J. Milton Harris
Original Assignee
Shearwater Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shearwater Corporation filed Critical Shearwater Corporation
Publication of CZ137596A3 publication Critical patent/CZ137596A3/cs
Publication of CZ295640B6 publication Critical patent/CZ295640B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/334—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing sulfur
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/321—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds
    • C08G65/326—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds containing sulfur
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y10S530/816—Attached to the carrier via a bridging agent

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Polyethers (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
  • Treatments Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)

Abstract

Řešení uvádí ve vodě rozpustný a izolovatelný aktivovaný polymer, který je stabilní vůči hydrolýze, vybraný ze skupiny sestávající z poly(alkylenoxidů), včetně poly(propylenglykolu), polyethylenglykolu, poly(oxyethylovaných polyolů), poly(oxyethylovaného glycerolu), poly(oxyethylovaného sorbitolu) a poly(oxyethylované glukózy) a poly(olefinických alkoholů), včetně poly(vinylalkoholu), a derivátů těchto polymerů, přičemž tyto polymery mají alespoň jednu aktivní sulfonovou skupinu a obecný vzorec R-CH.sub.2.n.-polymer-CH.sub.2.n.-Y, kde -CH.sub.2.n.- skupiny obsahují buď koncové uhlíkové skupiny polymeru nebo koncové uhlíkové skupiny spojovací části polymeru, přičemž tento polymer má od 5 do 3000 monomerních jednotek, a Y znamená alespoň jednu aktivní sulfonovou skupinu vybranou ze skupiny sestávající ze skupiny -SO.sub.2.n.-CH=CH.sub.2.n. a -SO.sub.2.n.-CH.sub.2.n.-CH.sub.2.n.-X, v níž X znamená atom halogenu, a jejich aktivní sulfonové deriváty, přičemž R znamená stejnou nebo jinou skupinu než Y, a jestliže polymer znamená poly(ethylenglykol), potom má tento polymer obecný vzorec R-CH.sub.2.n.CH.sub.2.n.-(OCH.sub.2.n.CH.sub.2.n.).sub.n.n.-Y a n znamená číslo 5 až 3000. Dále je uvedeno jeho použití, hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát, jeho použití, biomateriál, způsob syntézy izolovatelného ve vodě rozpustného aktivovaného polymeru a způsob výroby biologicky aktivního konjugátu.ŕ

Description

Oblast techniky
Tento vynález se týká ve vodě rozpustného aktivovaného polymeru, který je stabilní proti hydrolýze, aktivovaného polyethylenglykolového derivátu, hydrolyticky stabilního, biologicky aktivního konjugátu, biomateriálu obsahujícího ve vodě rozpustný polymemí derivát a způsobů jejich přípravy. Tento vynález se tedy týká aktivních derivátů polyethylenglykolu a podobných hydrofilních polymerů a způsobů jejich syntézy pro použití pro úpravu vlastností povrchů a molekul.
Dosavadní stav techniky
Polyethylenglykol („PEG“) byl studován pro použití ve farmaceutických prostředcích, u umělých implantátů a při dalších aplikacích, při nichž hraje důležitou roli biokompatibilita. Byly navrženy různé deriváty polyethylenglykolu („PEG-deriváty“), které mají aktivní části umožňující, aby se PEG připojil na farmaceutické prostředky, na implantáty a obecně na molekuly a povrchy pro modifikování fyzikálních nebo chemických vlastností molekuly nebo povrchu.
PEG-deriváty byly navrženy například pro kondenzaci PEG na povrchy pro regulaci smáčivosti, hromadění statické elektřiny a pro připojení dalších typů molekul na povrch, včetně proteinů a zbytků proteinů. Podrobněji - PEG-deriváty byly navrženy pro připojení na povrchy konstantních čoček u umělé hmoty pro snížení hromadění proteinů a kalení zraku. PEG-deriváty byly navrženy pro připojení na umělé krevní cévy kvůli snížení hromadění proteinů a kvůli nebezpečí blokády. PEG-deriváty byly navrženy pro imobilizování proteinů na povrchu, jak je tomu u enzymových katalyzátorů chemických reakcí.
V ještě dalším příkladu byly PEG deriváty navrženy pro napojení na molekuly, včetně proteinů, pro ochranu molekuly před chemickým působením, pro omezení nepříznivých vedlejších účinků molekuly nebo pro zvýšení velikosti molekuly, a tím i pro potenciální získání užitečných látek, které mají některé příznivé účinky v lékařství, ale jinak nejsou nijak užitečné nebo dokonce škodí živému organismu. Malé molekuly, které by se normálně vylučovaly ledvinami, se zadržují v krevním oběhu, jestliže se jejich velikost zvýší připojením biokompatibilního PEG-derivátu. Proteiny a další látky které tvoří imunitní odpověď, jestliže se podají injekčně, se mohou do jistého stupně skrýt před imunitním systémem kondenzací PEG molekuly na protein.
PEG-deriváty byly navrženy také pro afínitní dělení, například enzymů z buněčné masy. Při afinitním dělení PEG-derivát obsahuje funkční skupinu pro reverzibilní navázání na enzym, který je obsažen v buněčné mase. Konjugát PEG a enzymu se od buněčné masy oddělí a potom se enzym oddělí od PEG-derivátu, jestliže je to žádoucí.
Kondenzace PEG-derivátů na proteiny ilustruje některé problémy, se kterými se setkáváme při napojení PEG na povrchy a molekuly. U mnoha povrchů a molekul je počet míst dostupných pro kondenzační reakce s PEG-derivátem do jisté míry omezen. Například proteiny mají typicky omezený počet a různý typ reaktivních míst dostupných pro kondenzaci. Ještě problematičtější je to, že některá reaktivní místa mohou být zodpovědná za proteinovou biologickou aktivitu, jako je tomu tehdy, když enzym katalyzuje některé chemické reakce. PEG-derivát, který je připojen na dostatečný počet těchto míst, by mohl nepříznivě ovlivnit aktivitu proteinu.
Reaktivní místa, která tvoří místo připojení PEG-derivátů na proteiny, jsou dána strukturou proteinů. Proteiny, včetně enzymů, jsou vystavěny z různých sekvencí α-aminokyselin obecného
-1 CZ 295640 B6 vzorce H2N-CHR-COOH. Alfa-aminokyselinový zbytek (H2N-) jedné aminokyseliny se napojuje na karboxylovou skupinu (-COOH) přilehlé aminokyseliny za vzniku amidových vazeb, které lze znázornit jako -(NH-CHR-CO)n-, kde n může znamenat stovky nebo tisíce. Fragment R může obsahovat reaktivní místa pro proteinovou biologickou aktivitu a pro připojení PEGderivátů.
Například u lysinu, který je aminokyselinou tvořící část základního skeletu většina proteinů, skupina -NH2 je přítomna v poloze epsilon stejně jako v poloze alfa. Epsilonová skupina -NH2 je za bazického pH pro reakci volná. Mnoho práce v oblasti techniky směřovalo k vyvinutí PEGderivátů pro napojení epsilonové skupiny -NH2 lysinové frakce proteinu. U všech těchto PEGderivátů je lysinová frakce aminokyselin proteinu typicky inaktivována, což může být nevýhoda, jestliže lysin je důležitý pro aktivitu proteinu.
Zalipsky v patentu US 5 122 614 popisuje, že PEG molekuly aktivované oxykarbonyl-N-dikarboximidovou funkční skupinou mohou být napojeny za vodných bazických podmínek urethanovou vazbou na aminovou skupinu polypeptidů. O aktivovaném PEG-N-sukcinimiduhličitanu se uvádí, že tvoří stabilní, vůči hydrolýze rezistentní urethanové vazby s aminovými skupinami. O aminové skupině se uvádí, že je reaktivnější při bazických pH od 8,0 do 9,5 a že reaktivita ostře klesá při nižším pH. Hydrolýza nekondenzovaného PEG-derivátu se však také ostře zvyšuje při pH 8,0 až 9.5. Zalipsky odchází problém zvýšení rychlosti reakce nekondenzovaného PEG-derivátu s vodou použitím nadbytku PEG-derivátu pro navázání na povrch proteinu. Při použití nadbytku jsou dostatečně reaktivní epsilonová aminová místa navázána na PEG pro modifikování proteinu předtím, než má PEG-derivát příležitost být zhydrolyzován a nereaktivní.
Zalipskyho způsob odpovídá připojení lysinové frakce proteinu na PEG-derivát na jedno aktivní místo PEG-derivátu. Avšak jestliže je rychlost hydrolýzy PEG-derivátu dostatečná, potom může být problematické dosáhnout připojení na více než jedno aktivní místo na PEG molekule, jelikož jednoduchý nadbytek nezpomaluje rychlost hydrolýzy.
Například lineární PEG s aktivními místy na obou koncích se napojí na protein na jednom konci, ale jestliže rychlost hydrolýzy je významná, zreaguje s vodou na druhém konci, takže je spíše ukončen relativně nereaktivní hydroxylovou skupino, která strukturně znamená skupinu -OH, než by se vytvořila molekulární struktura „činky“ s napojenými proteiny nebo jinými žádoucími skupinami na obou koncích. Podobný problém se objevuje tehdy, jestliže je žádoucí kondenzovat molekulu na povrch PEG vázajícím činidlem, protože PEG se nejdříve napojí na povrch nebo nakondenzuje na molekulu a opačný konec PEG-derivátu představuje problém, potom se opačný konec typicky neaktivuje.
V Zalipskyho patentu US 5 122 614 je popsáno také několik jiných PEG-derivátů z předcházejících patentů. O PEG-sukcinoyl-N-hydroxysukcinimidovém esteru se uvádí, že tvoří esterové vazby, které mají ve vodném prostředí omezenou stabilitu, což znamená nežádoucně krátký poločas tohoto derivátu. O PEG-2,4,6-trichlor-l,3,5-triazinu se uvádí, že vykazuje nežádoucí toxicitu a že je nespecifický pro reakci s příslušnými funkčními skupinami na proteinu. PEG2,4,6-trichlor-l,3,5-triazinový derivát může mít tedy nežádoucí vedlejší účinky a může snižovat aktivitu proteinu, protože se připojuje na četné různé typy aminokyselin v různých reaktivních místech. O PEG-fenylkarbonylátu se uvádí, že poskytuje toxické hydrofobní fenolové zbytky, které mají afinitu pro proteiny. O PEG aktivovaném karbonyldiimidazolem se uvádí, že je příliš pomalý při reakci s proteinovými funkčními skupinami, což vyžaduje dlouhé reakční doby pro získání dostatečné modifikace proteinu.
Pro připojení na funkční skupiny aminokyselin jiných než epsilonovou -NH2 lysinu byly navrženy ještě jiné PEG-deriváty. Histidin obsahuje reaktivní iminovou skupinu, která strukturně znamená -N(H)-, ale mnohé deriváty, které reagují s epsilonovou -NH2, reagují také se skupinou -N(H)-. Cystein obsahuje reaktivní thiolovou skupinu -SH, ale PEG-derivát maleimidu, který reaguje s touto skupinou, podléhá hydrolýze.
-2CZ 295640 B6
Jak lze vidět z malého shora uvedeného vzorku, bylo věnováno značné úsilí vyvinutí různých PEG-derivátů pro připojení na skupinu -NH2 lysinové aminokyselinové frakce různých proteinů. Syntéza a použití mnohých těchto derivátů jsou problematické. Některé tvoří nestálé vazby s proteiny, které podléhají hydrolýze, a nevydrží tedy velmi dlouho ve vodných prostředích, jako například v krevním oběhu. Některé tvoří stabilnější vazby, ale dochází u nich k hydrolýze před vytvořením vazby, což znamená, že tato reaktivní skupina PEG-derivátu může být deaktivována předtím, než se protein připojí. Některé jsou poněkud toxické a jsou tedy méně vhodné pro použití in vivo. Některé příliš pomalu reagují na to, aby byly prakticky užitečné. Některé příliš pomalu reagují na to, aby byly prakticky užitečné. Některé vedou ke ztrátě proteinové aktivity připojením na místa odpovědná za proteinovou aktivitu. Některé nejsou specifické v místech, v němž se připojují, což také může vést ke ztrátě žádoucí aktivity a k chybějící reprodukovatelnosti výsledků.
Podstata vynálezu
Tento vynález poskytuje ve vodě rozpustné a hydrolyticky stabilní deriváty polyethylenglykolových polymerů a příbuzných hydrofilních polymerů s jednou nebo více aktivními sulfonovými skupinami. Tyto polymerní deriváty s aktivními sulfonovými skupinami jsou vysoce selektivní pro kondenzaci s thiolovými skupinami místo aminovými skupinami na molekulách a površích, zvláště při pH 9 nebo méně. Sulfonová skupina, vazba mezi polymerem a sulfonovou skupinou a vazba mezi thiolovou skupinou, sulfonovou skupinou nejsou obecně reverzibilní v redukujících prostředcích a jsou po prodlouženou dobu stabilní proti hydrolýze ve vodných prostředcích při pH 11 nebo méně. Důsledkem je to, že fyzikální a chemické vlastnosti rozmanitých látek lze upravit za požadovaných vodných podmínek aktivními sulfonovými polymemími deriváty.
Například podmínky pro modifikaci biologicky aktivních látek mohou být optimalizovány tak, aby se zachoval vysoký stupeň biologické aktivity. Farmaceutické prostředky od aspirinu k penicilinu lze užitečně upravit připojením aktivních sulfonových polymerních derivátů, jestliže jsou tyto farmaceutické prostředky upraveny tak, že obsahují thíolové skupiny. Velké proteiny obsahující cysteinové jednotky, které máji aktivní thiolové skupiny, lze také užitečně modifikovat. Pro zavedení cysteinových skupin do žádoucích míst proteinu lze použít způsobů technologie rekombinantní DNA („genetické inženýrství“). Tyto cysteiny lze kondenzovat na aktivní sulfonové polymerní deriváty. Získají se tak hydrolyticky stabilní vazby na rozmanitých proteinech, které normálně neobsahují cysteinové jednotky.
Specifické sulfonové skupiny pro aktivované polymery podle vynálezu jsou skupiny s alespoň dvěma atomy uhlíku napojenými na sulfonovou skupinu -SO2- a reaktivním místem pro thiol specifické kondenzační reakce na druhém atomu uhlíku od sulfonové skupiny.
Vynález se tedy týká ve vodě rozpustného a izolovatelného aktivovaného polymeru, který je stabilní vůči hydrolýze, vybraný ze skupiny sestávající z poly(alkylenoxidů), včetně poly(propylenglykolu), polyethylenglykolu, poly(oxyethylovaných polyolů), poly(oxyethylovaného glycerolu), poly(oxyethylovaného sorbitolu) a poly(oxyethylované glukózy) a poly(olefinických alkoholů), včetně poly(vinylalkoholu), a derivátů těchto polymerů, přičemž tyto polymery mají alespoň jednu aktivní sulfonovou skupinu s obecný vzorec R-CH2-polymer-CH2-Y, kde -CH2- skupiny obsahují buď koncové uhlíkové skupiny polymeru nebo koncové uhlíkové skupiny spojovací části polymeru, přičemž tento polymer má od 5 do 3000 monomerních jednotek, a Y znamená alespoň jednu aktivní sulfonovou skupinu vybranou ze skupiny sestávající ze skupiny -SO2CH=CH2 a -SO2-CH2-CH2-X, v níž X znamená atom halogenu, a jejich aktivní sulfonové deriváty, přičemž R znamená stejnou nebo jinou skupinu než Y, a jestliže polymer znamená poly(ethylenglykol), potom má tento polymer obecný vzorec R-CH2CH2-(OCH2CH2)n- Y a n znamená číslo 5 až 3000.
-3CZ 295640 B6
Podrobněji - aktivní sulfonové skupiny obsahují vinylsulfon, aktivní ethylsulfony, včetně halogenethylsulfonů, a thiol-specifícké aktivní deriváty těchto sulfonů. Vinylsulfonová skupina může znamenat skupinu vzorce -SO2-CH=CH2, aktivní ethylsulfonová skupina může znamenat skupinu vzorce -SO2-CH2-CH2-Z, v němž Z může znamenat atom halogenu nebo nějakou odcházející skupinu se schopností být substituována thiolem za vzniku sulfonové a thiolové vazby -SO2CH2-CH2-S-W, kde W znamená biologicky aktivní molekulu, povrch nebo nějakou jinou látku. Mezi deriváty vinyl a ethylsulfonů mohou patřit jiné substituenty, pokud se zachová rozpustnost ve vodě a thiolově specifická reaktivita reakčního místa na druhém atomu uhlíku.
Vynález dále zahrnuje hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát, vybraný ze skupiny, která obsahuje:
- biologicky aktivní molekulu s reaktivní thiolovou skupinou a ve vodě rozpustný polymerní derivát s aktivní sulfonovou skupinou podle nároku 1, tvořící vazbu s thiolovou skupinou,
- dvě biologicky aktivní části, které mohou být stejné nebo různé, přičemž alespoň jedna biologicky aktivní část má reaktivní thiolovou skupinu, a ve vodě rozpustný činkovitý aktivovaný polymer podle nároku 1 nebo 2, který má reaktivní skupinu na obou koncích, kde alespoň jedna skupina má aktivní sulfonovou skupinu, a tvoří vazbu s thiolovou skupinou alespoň jedné biologicky aktivní části, přičemž druhá biologicky aktivní část tvoří vazbu s jinými reaktivními částmi na polymeru, a první protein s thiolovou skupinou, druhý protein s aminovou skupinou a aktivovaný ve vodě rozpustný polymer podle nároku 1 nebo 2, který má alespoň jednu aktivní sulfonovou skupinu, která je selektivní pro reakci s thiolovými skupinami, a alespoň jednu další skupinu, která je selektivní pro reakci s aminovými skupinami, přičemž thiolová skupina tvoří hydrolyticky stabilní vazbu se sulfonovou skupinou na uvedeném polymeru a aminová část tvoří hydrolyticky stabilní vazbu s další reaktivní částí na polymeru.
Tento vynález zahrnuje hydrolyticky stabilní konjugáty látek s thiolovými skupinami s uvedenými polymemími deriváty s aktivními sulfonovými skupinami. Například ve vodě rozpustný sulfonanovou skupinou aktivovaný PEG polymer se může nakondenzovat na biologicky aktivní molekulu v místě reaktivního thiolu. Vazba, kterou jsou PEG a biologicky aktivní molekula spojeny, zahrnuje sulfonovou skupinu napojenou na thiolovou skupinu obecného vzorce PEGSO2-CH2-CH2-S-W, v němž W znamená biologicky aktivní molekulu, ať sulfonová skupina před napojením na PEG znamenala vinylsulfon nebo aktivní ethylsulfon.
Dále tento vynález zahrnuje hydrolyticky aktivní, biologicky aktivní konjugát, v němž jsou biologicky aktivní molekuly vybrány ze skupiny sestávající z protein, farmaceutických látek, buněk, vitaminů a jejich kombinací.
Dalším provedením tohoto vynálezu je hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát, v němž aktivní sulfonová část znamená vinylsulfon nebo halogenethylsulfon a další reaktivní část je selektivní pro reakci s aminovými skupinami.
Vynález také zahrnuje použití tohoto hydrolyticky stabilního, biologicky aktivního konjugátu, pro přípravu farmaceutického prostředku.
Tento vynález zahrnuje také biomateriály obsahující povrch s jedním nebo více reaktivními thiolovými místy a jedním nebo více ve vodě rozpustnými sulfonem aktivovanými výše uvedenými polymery podle vynálezu napojenými na povrch sulfonovou a thiolovou vazbu. Biomateriály a další látky mohou být napojeny také na sulfonem aktivované polymerní deriváty jinou vazbou než je sulfonová a thiolová vazba, jako je konvenční aminová vazba. Získá se tak hydrolyticky stabilnější aktivující skupina, sulfonová skupina dostupná pro následující reakce.
Tento vynález zahrnuje způsob syntetizování výše uvedených aktivovaných polymerů podle vynálezu. Skupina obsahující síru se naváže přímo na atom polymeru a pak se převede na aktivní sulfonovou skupinu. Nebo se sulfonová skupina může připravit připojením vazebného činidla,
-4CZ 295640 B6 které má sulfonovou skupinu na jednom konci, na konvenční aktivovaný polymer tak, že výsledný polymer má na svém konci sulfonovou skupinu.
Podrobněji - ve vodě rozpustný polymer s alespoň jednou aktivní hydroxylovou skupinou podléhá reakci za vzniku substituovaného polymeru, který má reaktivnější skupinu. Výsledný substituovaný polymer podléhá reakci, kterou se substituuje reaktivnější skupina síru obsahující skupinou s alespoň dvěma atomy uhlíku, kde síra v síru obsahující skupině je navázána přímo na atom uhlíku polymeru. Síru obsahující skupina potom podléhá reakcím, při kterých se síra, -S-, oxiduje na sulfon, -SO2- Získá se tak dostatečně reaktivní místo na druhém atomu uhlíku sulfonu obsahující skupinu pro vytvoření vazeb se skupinami obsahujícími thiol.
Ještě podrobněji - způsob syntézy aktivovaných polymerů podle vynálezu spočívá v tom, že se polyethylenglykol nechá zreagovat s derivátem obsahujícím atom halogenu, čímž se získá PEG se pak nechá zreagovat s merkaptoethanolem, přičemž se etherová skupina nebo halogen substituuje merkaptoethanolovou skupinou. Síra v merkaptoethanolové skupině se oxiduje na sulfon. Ethanolsulfon se aktivuje buď aktivací hydroxylové skupiny nebo substituováním hydroxylové skupiny aktivnější skupinou než je atom halogenu. Aktivní ethylsulfon PEGu se pak převede na vinylsulfon, jestliže je to žádoucí, štěpení aktivované hydroxylové skupiny nebo jiné aktivní skupiny a zavedením dvojné vazby mezi atomy uhlíku přilehlé ksulfonové skupině -SO2~.
Tento vynález zahrnuje také způsob přípravy konjugátu látky s polymemím derivátem, který má aktivní sulfonovou skupinu. Tento způsob zahrnuje stupeň vytvoření vazby mezi polymemím derivátem a látkou. Tato vazba může znamenat vazbu mezi sulfonovou skupinou a thiolovou skupinou.
Vynález dále zahrnuje způsob výroby biologicky aktivního konjugátu látky a ve vodě rozpustného izolovatelného aktivovaného polymeru, přičemž látka, kterou je biologicky aktivní molekula mající reaktivní thiolovou skupinu se nechá reagovat s aktivovaným polymerem, který má alespoň jednu aktivní sulfonovou skupinu, a který je vybrán ze skupiny sestávající zpoly(alkylenoxidů), poly(oxyethylovaných polyolů) a poly(olefínických alkoholů), přičemž se vytvoří vazba mezi thiolovou skupinou a alespoň jednou aktivní sulfonovou skupinou.
Výhodně je uveden způsob výroby biologicky aktivního konjugátu látky kde látka, kterou je biologicky aktivní molekula obecného vzorce W-SH, v němž W znamená biologicky aktivní část a SH znamená aktivní thiolovou skupinu, se nechá reagovat s polyethylenglykolovým derivátem obecného vzorce R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-Y, v němž n znamená číslo 5 až 3000, Y znamená skupinu vzorce -SO2- CH=CH2 a R znamená skupinu vybranou ze skupiny sestávající z HO-, H3CO-, X-CH2-CH2-SO2, kde X znamená atom halogenu, a CH2=CH-SO2~, a vytvoří se vazba mezi thiolovou skupinou a alespoň jednou aktivní sulfonovou skupinou poly(ethylenglykol)ového derivátu.
Výhodně je dále uveden způsob výroby biologicky aktivního konjugátu kdy látka, kterou je protein s aktivní thiolovou skupinou, se nechá reagovat s polyethylenglykolovým derivátem obecného vzorce R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-Y, v němž n znamená číslo 5 až 3000, Y znamená skupinu -SO2-CH=CH2 a R znamená skupinu vybranou ze skupiny sestávající z HO-, H3CO-, X-CH2CH2-SO2- kde X znamená atom halogenu, a CH2=CH-SO2-, a vytvoří se vazba mezi thiolovou skupinou a alespoň jednou aktivní sulfonovou skupinou poly(ethylenglykol)ového derivátu.
Výhodně je dále uveden způsob výroby biologicky aktivního konjugátu, kde vyrobený konjugát je vybrán ze skupiny sestávající z:
konjugátu obecného vzorce R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-W, v němž n znamená číslo 5 až 3000 a R znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající zHO- a H3CO-, konjugátu obecného vzorce W-S-CH2-CH2-SO2-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-W, v němž n znamení číslo 5 až 3000,
-5CZ 295640 B6 konjugátu obecného vzorce R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-protein, v němž n znamená číslo 5 až 3000 a R znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z HO- a H3COkonjugátu obecného vzorce protein-S-CH2-CH2-SO2-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2S-protein, v němž n znamená číslo 5 až 3000.
Tento vynález tedy poskytuje aktivované polymery, které jsou specifické ve své aktivitě, stabilní ve vodě, stabilní v redukujících prostředích a tvoří stabilnější vazby s povrchy a molekulami, včetně biologicky aktivních molekul, než dříve získané vazby. Aktivovaný polymer se může použít k modifikaci vlastností povrchů a molekul, jejichž biokompatibilita je důležitá. Jelikož aktivovaný polymer je stabilní za vodných podmínek a tvoří stabilní vazby s thiolovými skupinami, pro zachování aktivity biologicky aktivních látek a pro optimalizování rychlosti reakce při navazování polymeru lze zvolit nejvýhodnější reakční podmínky.
Syntetická cesta použití pro přípravu aktivních sulfonů polyethylenglykolu a příbuzných polymerů obsahuje alespoň čtyři stupně, v nichž atom síry je navázán na polymemí molekulu a potom převeden řadou reakcí na aktivní sulfonovou funkční skupinu. Výchozí PEG polymemí molekula má alespoň jednu hydroxylovou skupinu, -OH, která je dostupná pro participaci v chemických reakcích a která je považována za „aktivní“ hydroxylovou skupinu. PEG molekula může být více aktivních hydroxylových skupin dostupných pro chemické reakce, jak je vysvětleno níže. Tyto aktivní hydroxylové skupiny jsou ve skutečnosti relativně nereaktivní. Prvním stupněm při syntéze je připravit PEG s reaktivnějšími skupinami.
Reaktivnější skupina se typicky tvoří podle jednoho ze dvou způsobů, aktivací nebo substitucí hydroxylu. Jsou dostupné další způsoby, jak je zřejmé odborníkům z oblasti techniky, ale aktivace a substituce hydroxylu jsou dva nejčastěji používané způsoby. Při aktivaci hydroxylu se atom vodíku na hydroxylové skupině nahradí aktivnější skupinou. Typicky se kyselina nebo derivát kyseliny, jako je halogenid kyseliny, nechá reagovat s PEG za vzniku reaktivního esteru, v němž jsou PEG a zbytek kyseliny navázány esterovou vazbou. Kyselinová část je obecně reaktivnější než hydroxylová část. Typickými estery jsou síran, uhličitan a fosforečnan.
Mezi halogenidy sulfonylových kyselin, které jsou vhodné pro použití v praxi podle vynálezu, patří methansulfonylchlorid a p-toluensulfonylchlorid. Methansulfonylchlorid je sloučenina vzorce CH3SO2C1, která je známa jako mesylchlorid. methansulfonylestery se někdy označují jako mesyláty. p-Toluensulfonylchlorid je sloučenina vzorce CH3C6H4SO4C1, která je známa jako tosylchlorid. Toluensulfonylestery se někdy označují jako tosyláty.
V substituční reakci se celá -OH skupina na PEG substituuje reaktivnější skupinou, typicky halogenidem. Například thionylchlorid vzorce SOC12 může reagovat s PEG za vzniku reaktivnějšího PEG substituovaného atomem chloru. Substituce hydroxylové skupiny jinou skupinou se někdy v oblasti techniky označuje jako aktivace hydroxylu. Pojem „aktivace hydroxylu“ by zde měl být interpretován tak, že znamená substituci stejně jako esterifíkaci a další způsoby aktivace hydroxylové skupiny.
Pojmy „skupina“, „funkční skupina“, „část, „aktivní část“, „reaktivní místo“ a „radikál“ jsou v oblasti chemie do jisté míry synonyma. V oblasti techniky a zde se používají pro označení různých daných definovaných poloh nebo jednotek molekuly a jednotek, které vykonávají jistou funkci nebo aktivitu a jsou reaktivní s jinými molekulami nebo částmi molekul. V tomto smyslu lze protein nebo zbytek proteinu považovat za molekulu nebo funkční skupinu nebo část, jestliže se kondenzuje s polymerem.
Pojem „PEG“ je v oblasti techniky a zde používán k popisu jakéhokoliv z několika kondenzačních polymerů ethylenglykolu obecného vzorce H(OCH2CH2)nOH, který může znamenat také HO-CH2CH2-(OCH2CH2)n-OH. PEG je znám také jako polyoxyethylen, polyethylenoxid, poly
-6CZ 295640 B6 glykol a polyetherglykol. PEG lez připravit jako kopolymery ethylenoxidu a mnoha dalších monomerů.
Polyethylenglykol se používá v biologických aplikacích, protože má vlastnosti, které jsou vysoce žádoucí, a je obecně schválen pro biologické nebo biotechnologické aplikace. PEG je typický čirý, bezbarvý, bez vůně, rozpustný ve vodě, stabilní vůči teplu, inertní k mnoha chemickým činidlům, nehydrolyzuje se ani nerozkládá a není toxický. Polyethylenglykol je považován za bioslučitelný, což znamená, že PEG je schopen koexistovat společně s živými tkáněmi nebo organismy bez toho, aby jim škodil. Podrobněji - PEG není imunogenní, což znamená, že PEG nemá tendenci produkovat imunitní odpověď těla. Jestliže se připojí na skupinu, která má v těle žádoucí funkci, PEG má tendenci maskovat tuto část a může snižovat nebo odstraňovat jakoukoliv imunitní odpověď, takže organismus může tolerovat přítomnost této skupiny. Sulfonem aktivované PEGy podle vynálezu by tedy měly být v podstatě netoxické a neměly by mít tendenci v podstatě produkovat imunitní odpověď nebo způsobovat srážení nebo jiné nežádoucí účinky.
Druhým stupněm syntézy je navázání síry přímo na atom uhlíku v polymeru a ve formě, která může být převedena na ethylsulfon nebo ethylsulfonový derivát s podobnými reaktivními vlastnostmi. „Ethyl“ zde znamená skupinu s identifikovatelnou skupinou dvou atomů uhlíku spolu spojených. Aktivní sulfonový PEG-derivát vyžaduje, aby druhý atom uhlíku v řetězci od sulfonové skupiny poskytoval reaktivní místo pro navázání thiolových skupin se sulfonem. Tohoto výsledku lze dosáhnout reagováním aktivní skupiny připravené ve shora uvedeném prvním stupni, kterou typicky bude esterem nebo halogenidem substituovaný PEG, v substituční reakci s alkoholem, který obsahuje také reaktivní thiolovou skupinu připojenou na ethylovou skupinu, thioethanolovou skupinu. Thiolová skupina se oxiduje na sulfon a druhý atom uhlíku od sulfonu na ethylové skupině se převede na reaktivní místo.
Sloučeniny obsahující thiolové skupiny -SH jsou organické sloučeniny, které připomínají alkoholy, které obsahují hydroxylovou skupinu -OH s výjimkou thiolů, v nichž je atom kyslíku alespoň jedné hydroxylové skupiny nahrazen atomem síry. Aktivující část na PEG-derivátu z první reakce, která je typicky buď halogenidem nebo kyselinovou částí esteru, se odštěpí od polymeru a nahradí se alkoholovou skupinou thioethanolové sloučeniny. Atom síry v thiolové skupině alkoholu se napojí přímo na atom uhlíku polymeru.
Alkoholem by měl být takový alkohol, který poskytuje thioethanolovou část pro napojení přímo na atom uhlíku polymerního řetězce nebo který lze snadno převést na thioethanolovou skupinu nebo substituovanou skupinu podobných reaktivních vlastností. Příkladem takového alkoholu je merkaptoethanol vzorce HSCH2CH2OH, který se někdy nazývá thioethanol.
Ve třetím stupni syntézy se pro převedení atomu síry, který je napojen na atom uhlíku, na sulfonovou skupinu -SO2 použije oxidační činidlo. Existuje mnoho oxidačních činidel, včetně peroxidu vodíku a perboritanu sodného. Užitečným může být takový katalyzátor, jako je kyselina wolframová. Sulfon, který se vytvoří, však není ve formě aktivní pro reakci selektivní pro thiolovou skupinu. Je nutné odstranit relativně nereaktivní hydroxylovou skupinu alkoholu, která byla přidána v substituční reakci druhého stupně.
Ve čtvrtém stupni se hydroxylová část alkoholu, která byla přidána ve druhém stupni, převede na reaktivnější formu, buď aktivací hydroxylové skupiny nebo substitucí hydroxylové skupiny reaktivnější skupinou, podobně jako v prvním stupni reakční řady. Substituce se typicky provádí halogenidem. Získá se halogenethylsulfon nebo jeho derivát s reaktivním místem na druhém atomu uhlíku od sulfonové skupiny. Druhý atom uhlíku na ethylové skupině se typicky aktivuje chlorovodíkem nebo bromovodíkem. Aktivace hydroxylu by měla poskytnout místo podobné reaktivity jako je sulfonátový ester. Vhodnými reakčními činidly jsou kyseliny, halogenidy kyselin a další sloučeniny shora uvedené v souvislosti s prvním stupněm reakce, zvláště thionylchlorid pro substituci hydroxylové skupiny atomem chloru.
-7CZ 295640 B6
Výsledný polymerní aktivovaný ethylsulfon je stabilní, izolovatelný a vhodný pro kondenzační reakce selektivní pro thiolovou skupinu. Jak je uvedeno v příkladech, PEG-chlorethylsulfon je stabilní ve vodě při pH 7 a menším, nicméně se s výhodou může používat pro kondenzační reakce selektivní pro thiolovou skupinu při bazickém pH až do pH alespoň 9.
U thiolové kondenzační reakce je možné, že thiolová skupina nahradí chlorid, jak je to uvedeno v následující reakci:
PEG-SO2-CH2-CH2-C1 + W-S-H -> PEG-SO2-CH2-CH2-S-W, v níž W znamená skupinu, na kterou je navázána thiolová skupina SH, a může znamenat biologicky aktivní molekulu, povrch nebo některé jiné látky. Bez ohledu na teorii se předpokládá, na základě pozorovatelných reakčních kinetik, jak je uvedeno v příkladu 3, že chlorethyl a jiné aktivované ethylsulfony a reaktivní deriváty jsou převedeny na PEG-vinylsulfon a že to je PEGvinylsulfon nebo jeho derivát, který se ve skutečnosti váže na thiolovou skupinu. Nicméně, výsledná sulfonová nebo thiolová vazba není rozlišitelná v tom, zda je z aktivního PEG ethylsulfonu nebo z PEG-vinyl vinylsulfonu, takže pro navázání na thiolové skupiny se při pH nad 7 může použít aktivní ethylsulfon.
PEG-vinylsulfon je také stabilní a izolovatelný a může tvořit hydrolyticky stabilní vazby selektivní pro thiol, typicky za mnohem kratší dobu než halogenethylsulfon nebo jiný aktivovaný ethylsulfon, jak dále vysvětleno.
V pátém stupni, který může být přidán k syntéze, se aktivovaný ethylsulfon nechá zreagovat s jakoukoliv z rozmanitých bází, jako je hydroxid sodný nebo thiethylamin. Vznikne PEG-vinylsulfon nebo jeden z jeho aktivních derivátů pro použití v kondenzačních reakcích selektivních pro thiol.
Jak je níže uvedeno v příkladech, zvláště v příkladu 3, PEG-vinylsulfon reaguje rychle s thiolovými skupinami a je stabilní proti hydrolýze ve vodě při Ph menší než 11 po dobu alespoň několika dnů. Reakci lze znázornit takto:
PEG-SO2-CH=CH2 + W-S-H -> PEG-SO2-CH2-CH2-S-W.
O thiolové části se uvádí, že se aduje „na dvojnou vazbu“. W-S skupina se aduje na koncovou CH2 skupinu dvojné vazby, která je druhým atomem uhlíku od sulfonové skupiny SO2. Atom vodíku se aduje na CH dvojné vazby. Při pH nad 9 je však selektivita sulfonové skupiny pro thiol snížena a sulfonová skupina začíná poněkud více reagovat s aminovými skupinami.
Alternativně ke shora uvedené syntéze se sulfonem aktivované PEG-deriváty mohou připravovat připojením vazebného činidla se sulfonovou částí ne PEG aktivovaný různými funkčními skupinami. Například aminovou skupinou aktivovaný PEG, PEG-NH2, se nechá zreagovat za vhodných podmínek při pH 9 nebo méně s malou molekulou, která má sukcinimidylovou aktivní esterovou část NHS-OOC- na jednom konci a sulfonovou část, vinylsulfon vzorce -SO2-CH=CH2, na druhém konci. Aminovou skupinou aktivované PEG formy tvoří stabilní vazbu se sukcinimidylovým esterem. Výsledný PEG je na konci aktivován vinylsulfonovou částí a je hydrolyticky stabilní. Reakce a výsledný vinylsulfonem aktivovaný PEG jsou strukturně reprezentovány následující rovnicí:
peg-nh2+NHS-O2C-CH2-CH2-SO2-CH=CH2 ->PEG-NH-OC-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
Podobný aktivovaný PEG by se mohl získat reakcí aminovou skupinou aktivovaného PEG, jako je sukcinimidylovou skupinou aktivní ester PEG, PEG-CO2-NHS, s malou molekulou, která má aminovou skupinu na jednom konci a vinylsulfonovou skupinu na druhém konci. Sukcinimidylový ester tvoří stabilní vazbu s aminovou skupinou:
PEG-CO2-NHS + NH2-CH2-CH2-SO2-CH=CH2 -> PEG-CO-NH-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
-8CZ 295640 B6
Aktivní PEG sulfony podle vynálezu mohou mít jakoukoliv molekulovou hmotnost, mohou být lineární nebo větvené se stovky ramének. PEG může být substituován nebo není substituován, pokud pro substituci sulfonovými skupinami existuje alespoň jedno reaktivní místo. PEG má typicky průměrné molekulové hmotnosti od 200 do 100 000 a jeho biologické vlastnosti se mění podle molekulové hmotnosti a podle stupně větvení a substituce, takže ne všechny tyto deriváty musí být užitečné pro biologické a biotechnologické aplikace. Pro většinu biologických a biotechnologických aplikací s bude používat PEG-vinylsulfon, bisvinylsulfon nebo aktivovaný ethylsulfon s v podstatě lineárním přímým řetězcem, v podstatě nesubstituovaný, s výjimkou vinylsulfonové nebo ethylsulfonové části, a, jestliže je to žádoucí, s dalšími funkčními skupinami. Pro mnoho biologických a biotechnologických aplikací by měly substituenty znamenat typicky nereaktivní skupiny, jak je atom vodíku -H a methylová skupina -CH3 („m-PEG“).
PEG může mít připojenu více než jednu vinylsulfonovou nebo prekurzorovou skupinu nebo může být PEG ukončen na jednom konci relativně nereaktivní skupinou, jako je methylová skupina, -CH3. Ukončená forma může být užitečná, například tehdy, jestliže je žádoucí jednoduše připojit polymemí řetězce na různá thiolová místa podél proteinového řetězce. Připojení PEG molekul k biologicky aktivní molekule, jako je protein nebo jiný farmaceutický prostředek, nebo na povrch se někdy nazývá jako „PEGylace“.
Lineární PEG s aktivními hydroxylovými skupinami na koncích se může aktivovat na obou koncích vinylsulfonem, jeho prekurzorem nebo derivátem podobné reaktivity tak, že se stane bifunkční. Tato bifunkční struktura, například PEG-bisvinylsulfon, se někdy označuje jako činkovitá struktura a může se používat například jako linker - spojující člen nebo spacer (raménko) pro připojení na biologicky aktivní molekuly, na povrch nebo pro připojení více než jedné této biologicky aktivní molekuly na PEG molekulu. Stabilita sulfonové části vůči hydrolýze způsobuje, že je zvláště užitečný pro bifunkční nebo heterobifunkční aplikace.
Jinou aplikací PEG-vinylsulfonu a jeho prekurzorů je dendriticky aktivovaný PEG, v němž je mnoho ramének PEG připojeno na centrální jadernou strukturu. Dendritické PEG struktury mohou být vysoce větvené a jsou obvykle nazývány „hvězdovité“ molekuly. Hvězdicovité molekuly jsou obecně popsány Merrillem v patentu US 5 171 264, jehož obsah je zde zahrnut jako citace. Sulfonové skupiny se mohou používat pro získání aktivní funkční skupiny na konci PEG řetězce vycházejícího z jádra a jako linker pro napojení funkční skupina na raménka hvězdicové molekuly.
PEG-vinylsulfony a jeho prekurzory a deriváty se mohou používat pro napojení přímo na povrchy a molekuly s thiolovou částí. Typičtěji však heterobifunkční PEG-deriváty se sulfonovou částí na jednom konci a jinou funkční skupinu na opačném konci bude připojen různými skupinami a povrch nebo molekulu. Jestliže je substituován jednou jinou aktivní skupinou, může se heterobifunkční PEG činkovitá struktura používat například pro nesení proteinu nebo jiné biologicky aktivní molekuly sulfonovými vazbami na jednom konci a jinou vazbou na jiném konci, jako je aminová vazba. Získá se tak molekula s dvěma různými aktivitami. Heterobifunkční PEG se sulfonovou částí na jednom konci a aminově specifickou částí na jiném konci by se mohl připojit jak na cystainové, tak lysinové frakci protein. Lze získat stabilní aminovou vazbu a potom hydrolyticky stabilní nereaktivní sulfonová skupina je dostupná pro následné reakce specifické pro thiolovou skupinu, podle potřeby.
Z mnoha různých sloučenin lze vybrat jiné aktivní skupiny pro heterobifunkční sulfonem aktivované PEG-y. Pro biologické a biotechnologické aplikace se substituenty typicky vyberou z reaktivních skupin typicky používaných v PEG chemii pro aktivování PEG, jako jsou aldehydy, trifluorethylsulfonát, který je někdy nazýván tresylát, N-hydroxylsukcinimidový ester, 2,4,6-trichlor-l,3,5-triazin, fluorderivát předcházející sloučeniny, acylazid, sukcinát, p-diazo-benzylová skupina, 3-(p-diazofenyloxy)-2-hydroxy-propyloxyskupina a další.
-9CZ 295640 B6
Příklady aktivních částí jiných než sulfon jsou uvedeny Davisem v patentu US 4 179 337, Leem a spol. v patentech US 4 296 097 a US 4 430 260, Iwasakim a spol. v patentu US 4 670 417, Katreem a spol. v patentech US 4 766 106, US 4 917 888 a US 4 931 544, Nakagawou a spol. v patentu US 4 791 192, Niteckim a spol. v patentu 4 902 502 a US 5 089 261, Saiferem v patentu US 5 080 891, Zalipsky v patentu US 5 122 614, Shadlem a spol. v patentu US 5 135 265, Rheem a spol. v patentu US 5 162 430, v evropské patentové přihlášce EP 0 247 860 a v PCT mezinárodních přihláškách č. WO 87/00056, WO 90/04606, WO 90/04384, WO 90/04650, WO 90/15628, WO 91/07190, WO 92/04384, WO 92/13095 a WO 92/16555, jejichž obsahy jsou zde zahrnuty jako citace.
Zručnému odborníkovi z oblasti techniky by mělo být zřejmé, že shora diskutované činkovité struktury by mohly být použity pro získání různých substituentů a kombinace substituentů. Mohly by tak být modifikovány farmaceutické prostředky, jako je aspirin, vitaminy, penicilín a další, příliš četné na to, aby zde byly uvedeny, polypeptidy nebo proteiny a fragmenty peptidů s různými funkcemi a molekulovými hmotnostmi, různé typy buněk, povrchy pro biomateriály, téměř jakákoliv látka. Pojem „protein“ tak, jak je zde používán, by měl být chápán tak, že zahrnuje peptidy a polypeptidy, které jsou polymery aminokyselin. Pojem „biomateriál“ znamená takový materiál, typicky syntetický, někdy vyrobený z umělých hmot, který je vhodný pro implantování do živého těla, aby se tak opravily poškozené nebo nemocné části. Příkladem biomateriálu jsou umělé krevní cévy.
Jeden PEG-derivát s přímým řetězcem podle vynálezu pro biologické a biotechnologické aplikace má základní strukturu vzorce R-CH2CH2-(OCH2CH2)n-Y. PEG monomer OCH2CH2 je s výhodou v podstatě nesubstituovaný a nevětvený podél polymemího základního skeletu. Index „n“ může znamenat číslo od 5 do 3000, typičtějším rozmezí je 5 až 2200, což odpovídá molekulové hmotnosti 220 až 100 000. Ještě typičtějším rozmezím je rozmezí od 34 do 1100, což odpovídá molekulovým hmotnostem od 1500 do 50000. Většina aplikací se provádí s molekulovými hmotnostmi od 2000 do 5000, což odpovídá hodnotě indexu n od 45 do 110.
Ve shora uvedeném vzorci Y znamená skupinu -SO2-CH=CH2 nebo -SO2-CH2-CH2-X, v němž X znamená atom halogenu. R znamená skupinu, která může být stejná jako Y nebo může být jiná než Y. R může znamenat HO-, H3CO-, CH2=CH-SO2-, C1-CH2-CH2-SO2- nebo polymer aktivující skupinu jinou než CH2=CH-SO2-, C1-CH2-CH2-SO2- tak, jak je to uvedeno ve shora uvedených patentech a publikovaných patentových přihláškách.
Aktivní polymemí deriváty jsou ve vodě rozpustné a hydrolyticky stabilní a poskytují ve vodě rozpustné a hydrolyticky stabilní vazby s thiolovými skupinami. Tyto deriváty jsou považovány za nekonečně rozpustné ve vodě nebo přibližující se této rozpustnosti a mohou umožňovat jinak nerozpustným molekulám vcházet do roztoku, jestliže jsou konjugovány stímto derivátem.
Hydrolyticky stabilní derivát znamená, že vazba mezi polymemí a sulfonovou částí je stabilní ve vodě a že vinylsulfonová skupiny nereaguje s vodou při pH menším než 11 po delší dobu alespoň několika dnů a potenciálně nekonečně, jak je uvedeno níže v příkladu 3. Aktivovaný ethylsulfon může být převeden na vinylsulfon za podmínek bazického pH se stejnou výslednou stabilitou. Hydrolytická stabilita thiolové vazby znamená, že konjugáty aktivovaného polymeru a látky nesoucí thiolovou skupinu jsou stabilní na vazbě sulfon-thiol po prodlouženou dobu ve vodných prostředcích při pH pod 11.0 většině proteinů lze očekávat, že ztratí svoji aktivitu při bazickém pH 11 nebo vyšším pH, takže by mělo být zručnému odborníkovi z oblasti techniky zřejmé, že mnohé aplikace pro aktivní sulfonové PEG-deriváty se budou provádět při pH menším než 11, bez ohledu na stabilitu sulfonové části při vyšších pH.
Aby byly užitečné pro modifikaci proteinů a dalších látek je pouze nutné, by sulfon byl stabilní po dobu dostatečnou pro to, aby sulfon mohl zreagovat s reaktivní thiolovou skupinou na proteinu nebo jiné látce. Rychlost reakce sulfonové skupiny s thiolem se mění podle pH, jak je uvedeno níže v příkladu 2, od 2 do 30 minut, což je mnohem rychlejší než rychlost hydrolýzy, pokud k ní
-10CZ 295640 B6 dochází. O vinylsulfonu lze očekávat, že reaguje s thiolem v mnohem širším rozmezí reakčních časů, jelikož je stabilní delší dobu. Za podmínek bazického pH chlorethylsulfon není hydrolyzován, jak je také uvedeno níže v příkladu 3, ale je převeden na vinylsulfon, který zůstává stabilní několik dnů a je dokonce reaktivnější s thiolovými skupinami. Pro účely modifikování vlastností sloučenin je možné tedy aktivní ethylsulfony považovat za hydrolyticky stabilní po prodlouženou dobu v širším rozmezí pH.
O jiných ve vodě rozpustných polymerech než PEG se předpokládá, že jsou vhodné pro podobné modifikace a aktivace aktivní sulfonovou částí. Mezi tyto další polymery patří polyvinylalkohol („PVA“), jiné polyalkylenoxidy, jako je polypropylenglykol („PPG“) a podobné, polyoxyethylované polyoly, jako je polyoxyethylenovaný glycerol, polyoxyethylenovaný sorbitol a polyoxyethylenovaná glukóza, a podobné. Tyto polymery mohou znamenat homopolymery nebo náhodné nebo blokové kopolymery a terpolymery odvozené do monomerů shora uvedených polymerů s přímým řetězcem nebo s rozvětveným řetězcem nebo substituované neb nesubstituované podobně jako PEG, ale s alespoň jedním aktivním místem dostupným pro reakci, při níž se tvoří sulfonová část.
Následující příklad 1 ukazuje syntézu, izolaci a charakterizaci polyethylenglykol-chlorethylsulfonu po přípravě polyethylenglykoGvinylsulfonu z chlorethylsulfonu. Příprava jiných polymerních sulfonů s reakčním místem na druhém atomu uhlíku od sulfonové skupiny je podobná a stupně této přípravy by měly být zřejmé odborníkům z oblasti techniky na základě níže uvedeného příkladu 1 a shora uvedeného seznamu polymerů.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Syntéza
Reakční stupně lze ilustrovat následujícími reakcemi:
(1) PEG-OH + CH3SO2CI -> PEG-OSO2CH3 (2) PEG-OSO2CH3 + HSCH2CH2OH -> PEG-SCH2CH2OH (3) PEG-SCH2CH2OH + H2O2 -> PEG-SO2CH2CH2PH (4) PEG-SO2CH2CH2OH + SOC12 PEG-SO2CH2CH2C1 (5) PEG-SO2CH2CH2C1 + NaOH -> PEG-SO2-CH=CH2 + HC1
Každá ze shora uvedených reakcí je podobně popsána níže.
Reakce 1
Reakce 1 znamená přípravu methansulfonylesteru polyethylenglykolu, který se také nazývá methansulfonát nebo mesylát polyethylenglykolu. Tosylát a halogenidy se mohou připravovat podobnými postupy, o kterých se předpokládá, že jsou známy odborníkům zoblasti techniky.
Při přípravě mesylátu se azeotropickou destilací ve 150 ml toluenu vysuší 25 g PEG o molekulové hmotnosti 3400. Při sušení PEG se přibližně polovina toluenu oddestiluje. K toluenu a PEG roztoku se přidá 40 ml suchého dichlormethanu a směs se ochladí v ledové lázni. K ochlazenému roztoku se přidá 1,230 ml destilovaného methansulfonylchloridu, což je 1,06 ekvivalentu vzhledem kPEG hydroxylovým skupinám, a 2,664 ml suchého triethylaminu, což je 1,3 ekvivalentu vzhledem kPEG hydroxylovým skupinám. „Ekvivalent“ tak, jak se zde používá, znamená množství sloučeniny, které reaguje s ekvivalentním množstvím PEG hydroxylových skupin.
Reakce se nechá stát přes noc. Během této doby se ohřeje na teplotu místnosti. Vysráží se triethylamoniumhydrochlorid a sraženina se odstraní odfiltrováním. Potom se objem sníží na
-11 CZ 295640 B6 rotačním odpařováku na 20 ml. Přidáním 100 ml ochlazeného suchého ethyletheru se vysráží mesylát. NMR analýza ukázala 100% konverzi hydroxylových skupin na mesylátové skupiny.
Reakce 2
Reakce znamená tvorbu polyethylenglykol-merkaptoethanolu reakcí mesylátu s merkaptoethanolem. Tato reakce způsobí, že methylsulfonátová skupina je vytěsněna z PEG. Síra v merkaptoethanolové skupině je napojena přímo na atom uhlíku v základním skeletu atom uhlíku-atom uhlíku PEG.
Dvacet gramů mesylátu z reakce 1 se rozpustí ve 150 ml destilované vody. Roztok mesylátu a vody se ochladí ponořením do ledové lázně. K ochlazenému roztoku se přidá 2,366 ml merkaptoethanolu, což jsou 3 ekvivalenty vzhledem k PEG hydroxylovým skupinám. Přidá se také 16,86 ml 2N báze NaOH. Tato reakce se vaří pod zpětným chladičem 3 h, což znamená, že páry z reakce se kontinuálně kondenzují a nechají se stékat zpět do reakce.
Polyethylenglykol-merkaptoethanolový produkt se extrahuje třikrát po 25 ml dichlormethanu. Organické frakce se spojí a vysuší se nad bezvodým síranem hořečnatým. Objem se sníží na 20 ml a produkt se vysráží přidáním 150ml studeného suchého etheru.
NMR analýza vd6-DMSO (dimethylsulfoxid) poskytla pro PEG-SCH2CH2OH následující maxima: 2,57 ppm, triplet, -CH2-S~, 2,65 ppm, triplet, -S-CH2-, 3,5 ppm singlet základního skeletu a 4,76 ppm, triplet, -OH. Hydroxylové maximum při 4,76 ppm ukazuje na 81% substituci. Avšak maximum u 2,65 ppm pro -S-CH2- ukazuje na 100% substituci. Bylo pozorování, že hydroxylová maxima často dávají nižší čísla procent substituce a tak maximum u 2,65 ppm pro -S-CH2- je považováno za odůvodněnější a potvrzuje 100% substituci.
Reakce 3
Reakce 3 znamená peroxidovou oxidaci polyethylenglykol-merkaptoethanolového produktu, při níž se síra převádí na sulfon. Získá se tak PEG-ethansulfon.
Dvacet gramů PEG-SCH2CH2OH se rozpustí ve 30 ml 0,123M roztoku kyseliny wolframové a roztok se ochladí v ledové lázni. Roztok kyseliny wolframové se připraví rozpuštěním kyseliny v roztoku hydroxidu sodného o pH 11,5 a následnou úpravou pH ledovou kyselinou octovou na hodnotu 5,6. K roztoku kyseliny wolframové a polyethylenglykol-merkaptoethanolu se přidá 20 ml destilované vody a 2,876 ml 30% (hmotn.) peroxidu vodíku. Reakce se nechá ohřát na teplotu místnosti přes noc.
Oxidovaný produkt byl třikrát extrahován 25ml dávkami dichlormethanu. Spojené organické frakce se promyjí zředěným vodným hydrogenuhličitanem sodným a vysuší se bezvodým síranem hořečnatým. Objem se zredukuje na 20 ml PEG-ethanolsulfonový produkt se vysráží přidáním do ochlazeného suchého ethyletheru.
NMR analýza vd6-DMSO (dimethylsulfoxid) poskytla pro PEG-SO2CH2CH2OH následující maxima: 3,25 ppm, triplet, -CH2-SO2-, 3,37 ppm, triplet, -SO2-CH2-, 3,50 ppm, singlet základního skeletu, 3,77 ppm, triplet, -CH2OH a 5,04 ppm, triplet, -OH. Hydroxylové maximum při 5,04 ppm ukazuje na 85% substituci. Avšak maximum u 3,37 ppm pro -SO2-CH2- ukazuje na 100% substituci. Toto maximum je považováno za odůvodněnější.
Reakce 4
Reakce 4 znamená konečný stupeň syntézy, izolaci a charakterizaci polyethylenglykol-chlorethyl-sulfonu.
-12CZ 295640 B6
Pro syntézu produktu se 20 g PEG-SO2CH2CH2OH rozpustí ve 100 ml čerstvě předestilovaného trionylchloridu. Tento roztok se vaří pod zpětným chladiče přes noc. Thionylchlorid byl předestilován přes chinolin. Nadbytek thionylchloridu se odstraní destilací. Přidá se 50 ml toluenu a 50 ml dichlormethanu a odstraní se oddestilováním.
Pro izolaci produktu se PEG-chlorethylsulfon rozpustí ve 20 ml dichlormethanu a vysráží se přidáním ke 100 ml ochlazeného suchého ethyletheru. Produkt se izoluje překrystalováním sraženiny z 50 ml ethylacetátu.
Pro charakterizaci produktu se použije NMR. NMR analýza v d6-DMSO (dimethylsulfoxid) poskytla pro PEG-SO2CH2CH2C1 následující maxima: 3,50 ppm, základní skelet, 3,64 ppm, triplet, -CH2SO2-, 3,80, triplet, -SO2-CH2-. U 3,94 ppm se nachází triplet malé hydroxylové nečistoty. Výpočet procent substituce z tohoto spektra byl obtížný vzhledem k blízkosti důležitých maxim a velkého maxima základního skeletu.
Reakce 5
Reakce 5 znamená převedení polyethylenglykol-chlorethylsulfony z reakčního stupně 4 na polyethylenglykol-vinylsulfon a izolaci a charakterizaci vinylsulfonového produktu.
PEG-vinylsulfon se snadno připraví rozpuštěním pevného PEG-chlorethylsulfonu vdichlormethanovém rozpouštědle a následující přidáním dvou ekvivalentů báze NaOH. Roztok se zfiltruje, aby se odstranila báze, a rozpouštědlo se odpaří, aby se izoloval konečný produkt PEG-SO2-CH=CH2, PEG-vinylsulfon.
PEG-vinylsulfon byl charakterizován NMR analýzou vd6-DMSO (dimethylsulfoxid). NMR analýza ukazovala následující maxima: 3,50 ppm, základní skelet, 3,73 ppm, triplet, -CH2-SO2-, 6,21 ppm, triplet, =CH2, 6,97 ppm, dublet dubletů, -SO2-CH2- Maximum u 6,97 pro -SO2-CHukazovalo na 84% substituci. Maximum u 6,21 ppm pro =CH2 ukazovalo na 94% substituci. Titrace merkaptoethanolem a 2,2'-dithiodipyridinem ukazovala na 95% substituci.
Příklad 2
Reaktivita selektivní pro thiol
Příklad 2 ukazuje, že PEG-vinylsulfon a jeho prekurzor PEG-chlorethylsulfon jsou významně reaktivnější s thiolovými skupinami (-SH) než s aminovými (-NH2) nebo iminovými skupinami (-NH-). Sloučeniny obsahující thiolové skupiny jsou organické sloučeniny, které připomínají alkoholy a které obsahují hydroxylovou skupinu s tím, že v thiolech je atom kyslíku hydroxylové skupiny nahrazen atomem síry. Thioly se někdy nazývají také sulfhydrily nebo merkaptany. PEG-vinylsulfon obsahuje vinylsulfonovou skupinu -SO2-CH=CH2- PEG-chlorethylsulfon obsahuje chlorethylsulfonovou skupinu -SO2CH2CH2C1.
Selektivita na thioly je důležitá u modifikace proteinu, protože znamená, že cysteinové jednotky (obsahující -SH) budou modifikovány s výhodou před lysinovými jednotkami (obsahujícími -NH2) a histidinovými jednotkami (obsahujícími (-NH-). Selektivita PEG-vinylsulfonu pro thioly znamená, že PEG může být selektivně připojen na cysteinové jednotky, čímž chrání proteinovou aktivitu specifických proteinů a reguluje počet molekul PEG připojených na protein.
Relativní reaktivita PEG-vinylsulfonu s thiolovými a aminovými skupinami se stanoví měřením rychlosti reakce PEG-vinylsulfonu s methylesterem Ν-α-acetylysinu a s merkaptoethanolem. Methylester Ν-α-acetylysinu je lysinový model obsahující aminovou skupinu, zkráceně se označuje Lys-NH2. Merkaptoethanol slouží jako cysteinový model obsahující thiolovou skupinu a zkracuje se Cys-SH. Relativní reaktivita PEG-chlorethylsulfonu se stanovuje podobným způso
-13 CZ 295640 B6 bem. Tato molekula může sloužit jako „ochranná“ forma vinylsulfonu, protože je stálá v kyselině, ale přidáním báze přechází na PEG-vinylsulfon.
Reaktivita na PEG-vinylsulfon a PEG-chlorethylsulfonový prekurzor byla studována při pH 8,0, pH 9,0 a pH 9,5. Pufry pro úpravu pH byly: 0,lM fosforečnan pro pH 8,0 a 0,lM boritan pro pH 9,0 a 9,5. Pro měření merkaptoethanolové reaktivity se k oběma pufrům přidá 5 mM ethylendiamintetraoctové kyseliny (EDTA), aby se zabránilo konverzi thiolu na disulfíd.
Pro reakci PEG-derivátů podle vynálezu s Lys-NH2 se 3mM roztok PEG-derivátu přidá za míchání k 0,3mM roztoku Lys-NH2 v příslušném pufru pro každé ze tří hodnot bazického pH. Reakce se sleduje přidáním fluoreskaminu k reakčnímu roztoku, čímž se získá fluorescenční derivát z reakce se zbývajícími aminovými skupinami. Stupeň sledování se provádí přidáním 50 μΐ reakční směsi k 1,950 ml fosforečnanového pufru o pH 8,0, následuje přidání 1,0 ml roztoku fluoreskaminu za intenzivního míchání. Roztok fluoreskaminu obsahuje 0,3 ml fluoreskaminu na ml acetonu.
Fluorescence se měří 10 minut po smíchání. Excitace se uvádí při vlnové délce 390 nm. K emisi světla dochází při 475 nm. Během 24 h nebyla pozorována žádná reakce ani pro PEG-vinylsulfon ani pro PEG-chlorethylsulfon při pH 8,0. Při pH 9,5 byla reakce pomalá, ale všechny aminokyseliny zreagovaly po několika dnech.
Pro reakci PEG-vinylsulfonu a PEG-chlorethylsulfonového prekurzoru s Cys-NH2 se 2mM roztok PEG-derivátu přidá k 0,2mM roztoku Cys-SH v příslušném pufru pro každou ze tří hodnot pH. Reakce se sleduje přidáním 4-dithiopyridinu k reakčnímu roztoku. 4-Dithiopyridinová sloučenina reaguje s Cys-SH. získá se tak 4-thiopyridon, který obsahuje ultrafialové světlo.
Stupeň sledování se provádí přidáním 50 μΐ reakční směsi k 0,950 ml 0,lM fosforečnanového pufru při pH 8,0, obsahujícího 5mM EDTA s následujícím přidáním 1 ml 2mM 4-dithiopyridinu ve stejném pufru.
Absorbance 4-thiopyridonu se měří při 324 nm. Jak PEG-vinylsulfon tak PEG-chlorethylsulfon vykazovaly reaktivitu na Cys-SH, přičemž PEG-vinylsulfon vykazuje větší reaktivitu. Při pH 9,0 je reakce ukončena během 2 minut použitím vinylsulfonu a během 15 minut použitím chlorethylsulfonu. Tyto reakce však byly příliš rychlé pro stanovení přesných rychlostních konstant. Při pH 8,0 byly reakce pomalejší, ale stále ještě úplné během 1 h s vinylsulfonem a 3 h s chlorethylsulfonem. Konverze chlorethylsulfonu na vinylsulfon je významně pomalejší než reakce vinylsulfonu s Cys-SH. Reakční rychlost chlorethylsulfonu s Cys-SH se zdá být závislá na rychlosti konverze chlorethylsulfonu na vinylsulfon. Nicméně tyto reakční rychlosti byly ještě stále mnohem rychlejší než iychlosti s Lys-NH2.
Shora uvedené kinetické studie ukazují na následující. PEG-vinylsulfon je mnohem reaktivnější s thiolovými skupinami než s aminovými skupinami, což ukazuje na to, že připojení PEG-vinylsulfonu na protein obsahující jak cysteinovou tak lysinou skupinu probíhá primárně reakcí s cysteinem. Jelikož reaktivita aminových skupin je podobná reaktivitě iminových skupin, reaktivita histidinových jednotek bude také mnohem nižší než reaktivita s cysteinovými podjednotkami. Selektivita na thiolové skupiny je také zdůrazněna při nižších hodnotách pH pro PEGchlorethylsulfon a PEG-vinylsulfon, i když reakce PEG-chlorethylsulfonu je poněkud pomalejší.
Užitečnost mnoha PEG-derivátů je omezena, protože reagují rychle s vodou, což interferuje s pokusy připojit tento derivát na molekuly a povrchy ve vodném prostředí. Následující příklad 3 ukazuje, že PEG-vinylsulfon a PEG-chlorethylsulfon jsou stabilní ve vodě.
-14CZ 295640 B6
Příklad 3
Hydrolytická stabilita
PEG-vinylsulfon byl rozpuštěn v těžké vodě, D2O, a sledován NMR. K reakci nedošlo. Roztok PEG-chlorethylsulfonu poskytl PEG-vinylsulfon v těžké vodě, která byla pufrována boritanem na pH 9,0. Monitorování NMR ukázalo, že PEG-vinylsulfon, jakmile je jednou vyroben, je stabilní 3 dny v těžké vodě.
PEG-chlorethylsulfon je stabilní ve vodě dokud se roztok nestane bazickým, pak se převede na vinylsulfon. Konverze na vinylsulfon byla demonstrována rozpuštěním PEG-chlorethylsulfonú ve vodě při pH 7 a v boritanovém pufru při pH 9. PEG-derivát se extrahuje do methylenchloridu. Odstranění methylenchloridu sledované NMR analýzou ukázalo, že PEG-chlorethylsulfon je stabilní při neutrálním pH 7,0 a reaguje s bází na PEG-vinylsulfon.
Vinylsulfon je stabilní po dobu několika dnů ve vodě, dokonce i při bazickém pH. Značná hydrolytická stabilita a reaktivita specifická k thiolu PEG-vinylsulfonu znamená, že PEG-vinylsulfon a jeho prekurzor jsou užitečnými pro modifikaci molekul a povrchů ve vodném prostředí, jak je uvedeno v následujícím příkladu 4.
Příklad 4
Konjugace proteinů
Modifikace proteinů byla demonstrována připojením PEG-derivátu na hovězí sérový albumin (BSA) dvěma různými způsoby. BSA je protein. Přírodní nemodifikovaný BSA obsahuje cystainové skupiny, které neobsahují thiolové skupiny. Tyto cystinové jednotky jsou svázány disulfidovými můstky S-S.
Podle prvního způsobu se m-PEG-vinylsulfon o molekulové hmotnosti 5000 nechá reagovat s nemodifikovaným BSA 24 h v 0,lM boritanovém pufru při pH 9,5 za teploty místnosti. Tento roztok obsahoval 1 mg BSA a 1 mg m-PEG-vinylsulfonu o molekulové hmotnosti 5000 na ml roztoku. Výsledky modelové sloučeniny z příkladu 2 ukázaly, že lysinové podjednotky (a možná histidinové podjednotky) by byly modifikovány za těchto relativně bazických podmínek a v nepřítomnosti volných thiolových skupin dostupných pro tuto reakci.
Připojení na lysinové podjednotky bylo demonstrováno dvěma způsoby. Za prvé, vylučování chromatografie ukázala, že molekulová hmotnost proteinu byla zvýšena o přibližně 50 %, což ukazuje připojení přibližně 10 PEG na protein. Za druhé, fluoreskaminová analýza ukázala, že počet lysinových skupin v BSA molekule byl přibližně desetkrát zmenšen.
Podle druhého způsobu se BSA nechá zreagovat s tributylfosfinem. Zredukují se tak disulfidové vazby S-S na thiolové skupiny -SH, které jsou dostupné pro reakci. Modifikovaný BSA se pak nechá reagovat s PEG-chlorethylsulfonem při pH 8,0 v 0,lM fosforečnanovém pufru za teploty místnosti 1 h. Tento roztok obsahoval 1 mg modifikovaného BSA a 1 mg m-PEG-chlorethylsulfonu s molekulovou hmotností 5000 na ml roztoku. Tyto výsledky ukázaly, že lysinové skupiny nebyly za těchto podmínek reaktivní. Thiolové skupiny však byly reaktivní.
Připojení PEG k proteinu bylo prokázáno vylučovací chromatografíí, která ukázala zvýšení molekulové hmotnosti proteinu o asi 25 %. Fluoreskaminová analýza neukázala žádnou změnu v počtu lysinových podjednotek v proteinu, což potvrzuje, že k připojení PEG nedochází na lysinových podjednotkách. Substituce na thiolových skupinách byla tedy potvrzena.
Vynález zde nárokovaný je popsán na zvláštních provedeních. Předcházející popis však není zamýšlen jako omezení vynálezu na provedení uvedená v příkladech. Zručný odborník z oblasti techniky by měl rozpoznat různé variace, které lze udělat v duchu a rozsahu tohoto vynálezu, jak
-15CZ 295640 B6 je popsáno v předcházejícím spisu. A naopak, tento vynález zahrnuje všechny alternativy, modifikace a ekvivalenty, které spadají do pravdivého ducha a rozsahu tohoto vynálezu tak, jak je definován v připojených nárocích.
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (15)

1. Ve vodě rozpustný a izolovaný aktivovaný polymer, který je stabilní vůči hydrolýze, vybraný ze skupiny sestávající z poly(alkylenoxidů), včetně poly(propylenglykolu), polyethylenglykolu, poly(oxyethylenovaných polyolů), poly(oxyethylovaného glycerolu), poly(oxyethylovaného sorbitolu) a poly(oxyethylované glukózy) a poly(olefinických alkoholů), včetně poly(vinylalkoholu), a derivátů těchto polymerů, přičemž tyto polymery mají alespoň jednu aktivní sulfonovou skupinu a obecný vzorec R-CH2-polymer-CH2-Y, kde -CH2- skupiny obsahující buď koncové uhlíkové skupiny polymeru nebo koncové uhlíkové skupiny spojovací části polymeru, přičemž tento polymer má od 5 do 3000 monomerních jednotek, a Y znamená alespoň jednu aktivní sulfonovou skupinu vybranou ze skupiny sestávající ze skupiny -SOr-CH=CH2 a -SO^OH^-CHt-X, v níž X znamená atom halogenu, a jejich aktivní sulfonové deriváty, přičemž R znamená stejnou nebo jinou skupinu než Y, a jestliže polymer znamená poly(ethylenglykol), potom má tento polymer obecný vzorec R-CH2CH2-(OCH2CH2)n-Y a n znamená číslo 5 až 3000.
2. Ve vodě rozpustný a izolovatelný aktivovaný polymer, který je stabilní vůči hydrolýze podle nároku 1, přičemž polymer je vybrán ze skupiny sestávající zaktivovaných polymerů s činkovitou strukturou, kde R znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající ze skupiny HO-, H3CO-, CH2CH=SO2-, X-CH2-CH2-SO2- a jejich derivátů, nebo aktivující skupiny jiné než CH2=CH-SO2- nebo X-CH2-CH2-SO2- a jejich derivátů.
3. Použití ve vodě rozpustného a izolovatelného aktivovaného polymeru, který je stabilní vůči hydrolýze definovaného v nároku 1 nebo 2, pro výrobu farmaceutického prostředku.
4. Hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát, vybraný ze skupiny, která obsahuje:
- biologicky aktivní molekulu s reaktivní thiolovou skupinou a ve vodě rozpustný polymemí derivát s aktivní sulfonovou skupinou podle nároku 1, tvořící vazbu s thiolovou skupinou,
- dvě biologicky aktivní části, které mohou být stejné nebo různé, přičemž alespoň jedna biologicky aktivní část má reaktivní thiolovou skupinu, a ve vodě rozpustný činkovitý aktivovaný polymer podle nároku 1 nebo 2, který má reaktivní skupinu na obou koncích, kde alespoň jedna skupina má aktivní sulfonovou skupinu, a tvoří vazbu s thiolovou skupinou alespoň jedné biologicky aktivní části, přičemž druhá biologicky aktivní část tvoří vazbu s jinými reaktivními částmi na polymeru, a
- první protein s thiolovou skupinou, druhý protein s aminovou skupinou a aktivovaný ve vodě rozpustný polymer podle nároku 1 nebo 2, který má alespoň jednu aktivní sulfonovou skupinu, která je selektivní pro reakci s thiolovými skupinami, a alespoň jednu další skupinu, která je selektivní pro reakci s aminovými skupinami, přičemž thiolová skupina tvoří hydrolyticky stabilní vazbu na sulfonovou skupinu na uvedeném polymeru a aminová část tvoří hydrolyticky stabilní vazbu s další reaktivní částí na polymeru.
5. Hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát podle nároku 4, který je vybrán ze skupiny sestávající z:
konjugátů, v nichž biologicky aktivní molekula znamená protein a reaktivní thiolová skupina je obsažena v cysteinová části proteinu,
-16CZ 295640 B6 konjugátu, v nichž polymemí derivát je hydrolyticky stabilní a je vybrán ze skupiny sestávající z poly(alkylenoxidů), poly(oxyethylovaných polyolů) a poly(olefmických alkoholů), konjugátů obecného vzorce PEG-SO2-CH2-CH2-S-W, v němž W znamenají biologicky aktivní molekuly, které mohou být stejné nebo různé.
6. Hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát podle nároku 4, v němž jsou biologicky aktivní molekuly vybrány ze skupiny sestávající z proteinů, farmaceutických látek, buněk, vitaminů a jejich kombinací.
7. Hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát podle nároku 4, v němž aktivní sulfonová část znamená vinylsulfon nebo halogenethylsulfon a další reaktivní část je selektivní pro reakci s aminovými skupinami.
8. Použití hydrolyticky stabilního, biologicky aktivního konjugátu podle nároků 4 až 7, pro přípravu farmaceutického prostředku.
9. Biomateriál, vyznačující se tím, že obsahuje povrch s alespoň jednou reaktivní thiolovou skupinou a alespoň jeden ve voděrozpustný aktivovaný polymer podle nároku 1 nebo 2 mají aktivní sulfonovou skupinu, napojený k tomuto povrchu sulfonovou a thiolovou vazbou.
10. Způsob syntézy izolovatelného ve vodě rozpustného aktivovaného organického polymeru podle nároku 1, přičemž vstupním polymerem je polyethylenglykol, vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:
(a) reakci polyethylenglykolu majícího alespoň jednu aktivní hydroxylovou skupinu se sloučeninou vytvářející esterem nebo halogenidem substituovaný polyethylenglykol;
(b) reakci esterem nebo halogenidem substituovaného polyethylenglykolu získaného z kroku (a) s merkaptoethanolem k nahrazení esterové nebo halogenidové skupiny merkaptoethanolovým radikálem;
(c) reakci merkaptoethanolem substituovaného polyethylenglykolu získaného v kroku (b) s oxidačním činidlem k oxidaci síry v merkaptoethanolové skupině na sulfonovou skupinu;
(d) reakce sulfonové skupiny z kroku (c) se sloučeninou převádějící hydroxylovou část merkaptoethanolové skupiny na chloridovou skupinu;
(e) izolaci PEG-chlorethylsulfonu rozpouštěním v dichlormethanu, srážením v ethyletheru a rekrystalizaci z ethylacetátu;
(f) reakci ethylsulfonu z kroku (e) s bází za tvorby PEG-vinylsulfonu.
11. Způsob výroby biologicky aktivního konjugátu látky podle nároku 4 a ve vodě rozpustného izolovatelného aktivovaného polymeru, vyznačující se tím, že látka, kterou je biologicky aktivní molekula mající reaktivní thiolovou skupinu se nechá reagovat s aktivovaným polymerem, který má alespoň jednu aktivní sulfonovou skupinu, a který je vybrán ze skupiny sestávající z poly(alkylenoxidů), poly(oxyethylovaných polyolů) a poly(olefínických alkoholů), přičemž se vytvoří vazba mezi thiolovou skupinou a alespoň jednou aktivní sulfonovou skupinou.
12. Způsob výroby konjugátu podle nároku 11, vy z n a č uj í c í se tím, že poly(olefmickým alkoholem) je polyethylenglykolový derivát.
13. Způsob výroby konjugátu látky podle nároku 11 nebo 12, vyznačující se tím, že látka, kterou je biologicky aktivní molekula obecného vzorce W-SH, v němž W znamená biologicky aktivní část a SH znamená aktivní thiolovou skupinu, se nechá reagovat s polyethylenglykolovým derivátem obecného vzorce R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-Y, v němž n znamená
-17CZ 295640 B6 číslo 5 až 3000, Y znamená skupinu vzorce -SO2-CH=CH2 a R znamená skupinu vybranou ze skupiny sestávající zHO-, H3CO~, X-CH2-CH2-SO2, kde X znamená atom halogenu, a CH2=CH-SO2-, a vytvoří se vazba mezi thiolovou skupinou a alespoň jednou aktivní sulfonovou skupinou poly(ethylenglykol)ového derivátu.
14. Způsob výroby konjugátu látky podle kteréhokoliv z nároků 11 až 13, vyznačující se tím, že látka, kterou je protein s reaktivní thiolovou skupinou, se nechá reagovat s polyethylenglykolovým derivátem obecného vzorce R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-Y, v němž n znamená číslo 5 až 3000, Y znamená skupinu -SO2-CH=CH2 a R znamená skupinu vybranou ze skupiny sestávající z HO-, H3CO, X-CH2-CH2-SO2-, kde X znamená atom halogenu, a CH2=CH-SO2-, a vytvoří se vazba mezi thiolovou skupinou a alespoň jednou aktivní sulfonovou skupinou poly(ethylenglykol)ového derivátu.
15. Způsob výroby konjugátu látky a ve vodě rozpustného izolovatelného aktivovaného polymer ru podle kteréhokoliv z nároků 11 až 14, vyznačující se tím, že vyrobený konjugát je vybrán ze skupiny sestávající z: konjugátu obecného vzorce R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2CH2-CH2-S-W, v němž n znamená číslo 5 až 3000 a R znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z HO- a H3CO- konjugátu obecného vzorce W-S-CH2-CH2-SO2-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-W, v němž n znamená číslo 5 až 3000, konjugátu obecného vzorce R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-S02-CH2-CH2-S-protein, v němž n znamená číslo 5 až 3000 a R znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z HO- a H3CO-, a konjugátu obecného vzorce protein-S-CH2-CH2-SO2-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2S-protein, v němž n znamená číslo 5 až 3000.
CZ19961375A 1993-11-12 1994-11-14 Ve vodě rozpustný a izolovatelný aktivovaný polymer, který je stabilní vůči hydrolýze a jeho použití, hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát a jeho použití, biomateriál, způsob syntézy izolovatelného ve vodě rozpustného aktivovaného polymeru a způsob výroby biologicky aktivního konjugátu CZ295640B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/151,481 US5446090A (en) 1993-11-12 1993-11-12 Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ137596A3 CZ137596A3 (en) 1996-10-16
CZ295640B6 true CZ295640B6 (cs) 2005-09-14

Family

ID=22538958

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19961375A CZ295640B6 (cs) 1993-11-12 1994-11-14 Ve vodě rozpustný a izolovatelný aktivovaný polymer, který je stabilní vůči hydrolýze a jeho použití, hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát a jeho použití, biomateriál, způsob syntézy izolovatelného ve vodě rozpustného aktivovaného polymeru a způsob výroby biologicky aktivního konjugátu

Country Status (26)

Country Link
US (6) US5446090A (cs)
EP (2) EP0728155B1 (cs)
JP (1) JP3114998B2 (cs)
KR (1) KR100225746B1 (cs)
CN (1) CN1085689C (cs)
AT (1) ATE215577T1 (cs)
AU (1) AU687937B2 (cs)
BG (1) BG63399B1 (cs)
BR (1) BR9408048A (cs)
CA (1) CA2176203C (cs)
CZ (1) CZ295640B6 (cs)
DE (1) DE69430317T2 (cs)
DK (1) DK0728155T3 (cs)
EE (1) EE03448B1 (cs)
ES (1) ES2173943T3 (cs)
FI (1) FI117441B (cs)
HK (1) HK1042312A1 (cs)
HU (1) HU225649B1 (cs)
NO (1) NO315377B1 (cs)
NZ (1) NZ276313A (cs)
PL (1) PL180149B1 (cs)
RO (2) RO118434B1 (cs)
RU (1) RU2176253C2 (cs)
SK (1) SK284527B6 (cs)
UA (1) UA58481C2 (cs)
WO (1) WO1995013312A1 (cs)

Families Citing this family (440)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6143866A (en) * 1989-07-18 2000-11-07 Amgen, Inc. Tumor necrosis factor (TNF) inhibitor and method for obtaining the same
US6552170B1 (en) * 1990-04-06 2003-04-22 Amgen Inc. PEGylation reagents and compounds formed therewith
US6057287A (en) 1994-01-11 2000-05-02 Dyax Corp. Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5583114A (en) 1994-07-27 1996-12-10 Minnesota Mining And Manufacturing Company Adhesive sealant composition
US5672662A (en) * 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
KR20040010739A (ko) 1996-02-09 2004-01-31 암젠 인코포레이티드 인터루킨-1 수용체 길항물질을 포함하는 융합 단백질 및 이를 포함하는 제약학적 조성물
US5747639A (en) * 1996-03-06 1998-05-05 Amgen Boulder Inc. Use of hydrophobic interaction chromatography to purify polyethylene glycols
TW555765B (en) 1996-07-09 2003-10-01 Amgen Inc Low molecular weight soluble tumor necrosis factor type-I and type-II proteins
US8003705B2 (en) * 1996-09-23 2011-08-23 Incept Llc Biocompatible hydrogels made with small molecule precursors
AU4648697A (en) * 1996-09-23 1998-04-14 Chandrashekar Pathak Methods and devices for preparing protein concentrates
US6566406B1 (en) 1998-12-04 2003-05-20 Incept, Llc Biocompatible crosslinked polymers
AU4981897A (en) 1996-10-15 1998-05-11 Navix, Inc. Stabilized conjugates of uncomplexed subunits of multimeric proteins
AU736876B2 (en) 1996-12-06 2001-08-02 Amgen, Inc. Combination therapy using an IL-1 inhibitor for treating IL-1 mediated diseases
JP2001513754A (ja) 1996-12-06 2001-09-04 アムジェン インコーポレイテッド Ｔｎｆ媒介疾患を処置するためのｔｎｆ結合タンパク質を使用する組み合わせ治療
US6743248B2 (en) 1996-12-18 2004-06-01 Neomend, Inc. Pretreatment method for enhancing tissue adhesion
US6371975B2 (en) 1998-11-06 2002-04-16 Neomend, Inc. Compositions, systems, and methods for creating in situ, chemically cross-linked, mechanical barriers
US20040176801A1 (en) * 1997-03-12 2004-09-09 Neomend, Inc. Pretreatment method for enhancing tissue adhesion
US20030191496A1 (en) * 1997-03-12 2003-10-09 Neomend, Inc. Vascular sealing device with microwave antenna
AU7282698A (en) * 1997-05-15 1998-12-08 Theratech, Inc. Targeted delivery to t lymphocytes
US6284246B1 (en) 1997-07-30 2001-09-04 The Procter & Gamble Co. Modified polypeptides with high activity and reduced allergenicity
US6251866B1 (en) 1997-08-05 2001-06-26 Watson Laboratories, Inc. Conjugates targeted to the interleukin-2 receptor
US6168784B1 (en) 1997-09-03 2001-01-02 Gryphon Sciences N-terminal modifications of RANTES and methods of use
WO1999011202A1 (en) * 1997-09-05 1999-03-11 Icet, Inc. Biomimetic calcium phosphate implant coatings and methods for making the same
US7229841B2 (en) * 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6407218B1 (en) * 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US6066673A (en) * 1998-03-12 2000-05-23 The Procter & Gamble Company Enzyme inhibitors
AU2903899A (en) 1998-03-12 1999-09-27 Shearwater Polymers Inc. Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups
US6908757B1 (en) 1998-03-26 2005-06-21 The Procter & Gamble Company Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions
AU2742499A (en) 1998-03-26 1999-10-18 Procter & Gamble Company, The Serine protease variants having amino acid substitutions
US6495136B1 (en) 1998-03-26 2002-12-17 The Procter & Gamble Company Proteases having modified amino acid sequences conjugated to addition moieties
US6632457B1 (en) * 1998-08-14 2003-10-14 Incept Llc Composite hydrogel drug delivery systems
US6458147B1 (en) 1998-11-06 2002-10-01 Neomend, Inc. Compositions, systems, and methods for arresting or controlling bleeding or fluid leakage in body tissue
US6994686B2 (en) * 1998-08-26 2006-02-07 Neomend, Inc. Systems for applying cross-linked mechanical barriers
WO2000012587A2 (en) * 1998-08-28 2000-03-09 Gryphon Sciences Polyamide chains of precise length, methods to manufacture them and their conjugates
US6551613B1 (en) * 1998-09-08 2003-04-22 Alza Corporation Dosage form comprising therapeutic formulation
AU743363B2 (en) 1998-09-22 2002-01-24 Procter & Gamble Company, The Personal care compositions containing active proteins tethered to a water insoluble substrate
US6660843B1 (en) * 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US7279001B2 (en) * 1998-11-06 2007-10-09 Neomend, Inc. Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites
US6899889B1 (en) * 1998-11-06 2005-05-31 Neomend, Inc. Biocompatible material composition adaptable to diverse therapeutic indications
US6949114B2 (en) 1998-11-06 2005-09-27 Neomend, Inc. Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites
US6830756B2 (en) 1998-11-06 2004-12-14 Neomend, Inc. Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites
US6958212B1 (en) * 1999-02-01 2005-10-25 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds
JP4954370B2 (ja) 1999-02-01 2012-06-13 エイドジェノシスク テクニスク ホクシューレ チューリッヒ 共役不飽和基に対する求核付加反応によって作製される生体適合材料
WO2000078285A1 (en) * 1999-06-18 2000-12-28 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Controlled release of therapeutics by in-situ entrapment by matrix cross-linking
US6946128B1 (en) 1999-07-22 2005-09-20 The Procter & Gamble Company Protease conjugates having sterically protected epitope regions
WO2001007578A2 (en) 1999-07-22 2001-02-01 The Procter & Gamble Company Subtilisin protease variants having amino acid substitutions in defined epitope regions
EP1196548A2 (en) 1999-07-22 2002-04-17 The Procter & Gamble Company Protease conjugates having sterically protected clip sites
KR20020021397A (ko) 1999-07-22 2002-03-20 데이비드 엠 모이어 규정된 에피토프 영역에 아미노산 결실 및 치환을 갖는서브틸리신 프로테아제 변이체
US7008635B1 (en) 1999-09-10 2006-03-07 Genzyme Corporation Hydrogels for orthopedic repair
US6303119B1 (en) 1999-09-22 2001-10-16 The Procter & Gamble Company Personal care compositions containing subtilisin enzymes bound to water insoluble substrates
US6348558B1 (en) 1999-12-10 2002-02-19 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom
US7074878B1 (en) * 1999-12-10 2006-07-11 Harris J Milton Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom
ATE435033T1 (de) 2000-01-10 2009-07-15 Maxygen Holdings Ltd G-csf konjugate
EP2319541A1 (en) 2000-02-11 2011-05-11 Bayer HealthCare LLC Factor VII or VIIA-like conjugates
JP2003533681A (ja) 2000-05-15 2003-11-11 テカン・トレーディング・アクチェンゲゼルシャフト ミクロ流体装置および細胞ベースの分析を実行する方法
DE60129432T2 (de) * 2000-05-16 2008-04-17 Bolder Biotechnology, Inc., Louisville Verfahren zur rückfaltung von proteinen mit freien cysteinresten
US7291673B2 (en) * 2000-06-02 2007-11-06 Eidgenossiche Technische Hochschule Zurich Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds
KR20030032977A (ko) * 2000-07-12 2003-04-26 그리폰 테라퓨틱스, 인코포레이티드 키모카인 수용체 조절제, 제조 및 사용
JP2004518621A (ja) * 2000-09-08 2004-06-24 グリフォン セラピューティクス，インコーポレーテッド 「擬似」天然型化学的ライゲーション
US7118737B2 (en) 2000-09-08 2006-10-10 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Polymer-modified synthetic proteins
AU2002245205B2 (en) * 2000-10-19 2007-07-19 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Block copolymers for multifunctional self-assembled systems
AU2000202A (en) 2000-10-31 2002-05-15 Pr Pharmaceuticals Inc Methods and compositions for enhanced delivery of bioactive molecules
US7053150B2 (en) * 2000-12-18 2006-05-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Segmented polymers and their conjugates
TW593427B (en) * 2000-12-18 2004-06-21 Nektar Therapeutics Al Corp Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives
EP1366075B1 (en) 2001-02-27 2009-05-27 Maxygen Aps New interferon beta-like molecules
WO2002074158A2 (en) * 2001-03-20 2002-09-26 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Two-phase processing of thermosensitive polymers for use as biomaterials
US6538104B2 (en) * 2001-04-27 2003-03-25 Medical Analysis Systems, Inc. Stabilization of cardiac troponin I subunits and complexes
US20040077835A1 (en) * 2001-07-12 2004-04-22 Robin Offord Chemokine receptor modulators, production and use
WO2003018665A1 (en) * 2001-08-22 2003-03-06 Bioartificial Gel Technologies Inc. Process for the preparation of activated polyethylene glycols
SG159381A1 (en) 2001-10-10 2010-03-30 Novo Nordisk As Remodeling and glycoconjugation of peptides
US7173003B2 (en) 2001-10-10 2007-02-06 Neose Technologies, Inc. Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF
DK2279755T3 (da) 2001-10-10 2014-05-26 Ratiopharm Gmbh Remodellering og glycokonjugering af fibroblastvækstfaktor (FGF)
US8008252B2 (en) 2001-10-10 2011-08-30 Novo Nordisk A/S Factor VII: remodeling and glycoconjugation of Factor VII
US7795210B2 (en) 2001-10-10 2010-09-14 Novo Nordisk A/S Protein remodeling methods and proteins/peptides produced by the methods
US7157277B2 (en) 2001-11-28 2007-01-02 Neose Technologies, Inc. Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII
US7214660B2 (en) 2001-10-10 2007-05-08 Neose Technologies, Inc. Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin
EP2939696B1 (en) 2001-10-18 2016-03-09 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of opioid antagonists
US8013134B2 (en) * 2001-11-23 2011-09-06 Olink Ab Kit for proximity probing with multivalent proximity probes
CN1630530A (zh) * 2002-01-18 2005-06-22 比奥根艾迪克Ma公司 聚亚烷基聚合物及其用途
US20030179692A1 (en) * 2002-03-19 2003-09-25 Yoshitaka Ohotomo Storage medium
US8282912B2 (en) * 2002-03-22 2012-10-09 Kuros Biosurgery, AG Compositions for tissue augmentation
ES2528254T3 (es) * 2002-06-07 2015-02-05 Dyax Corp. Polipéptidos de dominio Kunitz modificado y su uso para reducir la isquemia o el inicio de una respuesta inflamatoria sistémica asociada con un procedimiento quirúrgico
US7153829B2 (en) 2002-06-07 2006-12-26 Dyax Corp. Kallikrein-inhibitor therapies
DE60336555D1 (de) 2002-06-21 2011-05-12 Novo Nordisk Healthcare Ag Pegylierte glykoformen von faktor vii
UA86744C2 (en) 2002-06-21 2009-05-25 Ново Нордиск Хэлс Кеа Аг Pegylated factor vii glycoforms
US7034127B2 (en) * 2002-07-02 2006-04-25 Genzyme Corporation Hydrophilic biopolymer-drug conjugates, their preparation and use
CN1691956A (zh) * 2002-09-05 2005-11-02 通用医疗公司 去唾液酸干扰素和肝癌的治疗
WO2004021993A2 (en) * 2002-09-05 2004-03-18 The General Hospital Corporation Modified asialo-interferons and uses thereof
JP4959133B2 (ja) * 2002-09-09 2012-06-20 ネクター セラピューティックス 末端カルボン酸またはそのエステルを有する水溶性ポリマー誘導体の調製方法
CN1312279C (zh) * 2002-11-07 2007-04-25 连云港新阳医药有限公司 聚乙二醇修饰门冬酰胺酶的制备方法
BR0317752A (pt) * 2002-12-26 2005-11-22 Mountain View Pharmaceuticals Conjugados poliméricos de citocinas, quimiocinas, fatores do crescimento, hormÈnios polipeptìdicos e seus antagonistas com atividade de ligação a receptores conservada
EP1667708B9 (en) * 2002-12-26 2012-10-31 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. POLYETHYLENE GLYCOL CONJUGATES OF INTERFERON-BETA-1b WITH ENHANCED IN VITRO BIOLOGICAL POTENCY
EP1616003A4 (en) 2002-12-30 2007-06-20 Gryphon Therapeutics Inc WATER-SOLUBLE THIOESTER AND SELENOESTER COMPOUNDS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
US7553930B2 (en) * 2003-01-06 2009-06-30 Xencor, Inc. BAFF variants and methods thereof
MXPA05007348A (es) * 2003-01-06 2005-10-05 Nektar Therapeutics Al Corp Derivados de polimeros solubles en agua tiol-selectivos.
US20050221443A1 (en) * 2003-01-06 2005-10-06 Xencor, Inc. Tumor necrosis factor super family agonists
US20060014248A1 (en) * 2003-01-06 2006-01-19 Xencor, Inc. TNF super family members with altered immunogenicity
ES2352337T5 (es) * 2003-01-06 2017-08-11 Nektar Therapeutics Derivados tiol-selectivos de un polimero soluble en agua
US20050130892A1 (en) * 2003-03-07 2005-06-16 Xencor, Inc. BAFF variants and methods thereof
ES2911435T3 (es) 2003-02-26 2022-05-19 Nektar Therapeutics Conjugados de polímero-resto de Factor VIII
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
CA2517145C (en) * 2003-03-05 2017-08-01 Halozyme, Inc. Soluble hyaluronidase glycoprotein (shasegp), process for preparing the same, uses and pharmaceutical compositions comprising thereof
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20090123367A1 (en) * 2003-03-05 2009-05-14 Delfmems Soluble Glycosaminoglycanases and Methods of Preparing and Using Soluble Glycosaminoglycanases
ES2420581T3 (es) 2003-03-14 2013-08-26 Biogenerix Gmbh Polímeros solubles en agua ramificados y sus conjugados
US7642340B2 (en) 2003-03-31 2010-01-05 Xencor, Inc. PEGylated TNF-α variant proteins
WO2004089421A2 (en) * 2003-03-31 2004-10-21 Xencor, Inc Methods for rational pegylation of proteins
US7610156B2 (en) * 2003-03-31 2009-10-27 Xencor, Inc. Methods for rational pegylation of proteins
US8791070B2 (en) 2003-04-09 2014-07-29 Novo Nordisk A/S Glycopegylated factor IX
MXPA05010773A (es) 2003-04-09 2005-12-12 Neose Technologies Inc Metodos de glicopegilacion y proteinas/peptidos producidos por los metodos.
US9040664B2 (en) 2003-04-11 2015-05-26 Antriabio, Inc. Materials and methods for preparing protein-polymer conjugates
DE602004025799D1 (de) 2003-04-15 2010-04-15 Glaxosmithkline Llc Humane il-18 substitutionsmutanten und deren konjugate
ATE540055T1 (de) 2003-05-09 2012-01-15 Biogenerix Ag Zusammensetzungen und verfahren zur herstellung von glykosylierungsmutanten des menschlichen wachstumshormons
US20040249119A1 (en) * 2003-06-05 2004-12-09 Fox Martin Edward Novel mPEG propionaldehyde precursor
GB0316294D0 (en) 2003-07-11 2003-08-13 Polytherics Ltd Conjugated biological molecules and their preparation
PL1656410T3 (pl) 2003-07-22 2010-08-31 Nektar Therapeutics Sposób wytwarzania sfunkcjonalizowanych polimerów z polimerycznych alkoholi
WO2005012484A2 (en) 2003-07-25 2005-02-10 Neose Technologies, Inc. Antibody-toxin conjugates
DK1663281T3 (en) * 2003-08-29 2014-03-17 Dyax Corp POLY-PEGYLED PROTEASE INHIBITORS
KR101200729B1 (ko) 2003-09-17 2012-11-13 넥타르 테라퓨틱스 다분지형 고분자 전구약물
WO2005035727A2 (en) * 2003-10-09 2005-04-21 Ambrx, Inc. Polymer derivatives
CA2542353A1 (en) 2003-10-10 2005-04-21 Xencor, Inc. Protein based tnf-alpha variants for the treatment of tnf-alpha related disorders
US7524813B2 (en) * 2003-10-10 2009-04-28 Novo Nordisk Health Care Ag Selectively conjugated peptides and methods of making the same
CN102516386A (zh) 2003-10-10 2012-06-27 诺沃挪第克公司 Il-21衍生物
EP2633866A3 (en) * 2003-10-17 2013-12-18 Novo Nordisk A/S Combination therapy
EP1725572B1 (de) 2003-11-05 2017-05-31 AGCT GmbH Makromolekulare nukleotidverbindungen und methoden zu deren anwendung
KR20060120141A (ko) * 2003-11-24 2006-11-24 네오스 테크놀로지스, 인크. 글리코페질화 에리트로포이에틴
US8633157B2 (en) 2003-11-24 2014-01-21 Novo Nordisk A/S Glycopegylated erythropoietin
US20080305992A1 (en) 2003-11-24 2008-12-11 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin
CA2548179A1 (en) 2003-12-02 2005-07-21 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
US7956032B2 (en) 2003-12-03 2011-06-07 Novo Nordisk A/S Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
US20060040856A1 (en) * 2003-12-03 2006-02-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor IX
WO2005070138A2 (en) 2004-01-08 2005-08-04 Neose Technologies, Inc. O-linked glycosylation of peptides
WO2005072893A1 (en) * 2004-01-28 2005-08-11 Cytimmune Sciences, Inc. Functionalized colloidal metal compositions and methods
BRPI0507169A (pt) * 2004-02-02 2007-06-26 Ambrx Inc polipeptìdeos do hormÈnio de crescimento humano modificados e seu usos
KR100580644B1 (ko) * 2004-02-16 2006-05-16 삼성전자주식회사 생물분자를 고체 기판상에 비공유적으로 고정화 하는 방법및 그에 의하여 제조되는 마이크로어레이
US7351787B2 (en) * 2004-03-05 2008-04-01 Bioartificial Gel Technologies, Inc. Process for the preparation of activated polyethylene glycols
US9446139B2 (en) * 2004-03-15 2016-09-20 Nektar Therapeutics Polymer-based compositions and conjugates of HIV entry inhibitors
WO2005091944A2 (en) * 2004-03-17 2005-10-06 Eli Lilly And Company Glycol linked fgf-21 compounds
US8470315B2 (en) * 2004-04-13 2013-06-25 Quintessence Biosciences, Inc. Non-natural ribonuclease conjugates as cytotoxic agents
KR20070034512A (ko) 2004-06-18 2007-03-28 암브룩스, 인코포레이티드 신규 항원-결합 폴리펩티드 및 이의 용도
US20080300173A1 (en) 2004-07-13 2008-12-04 Defrees Shawn Branched Peg Remodeling and Glycosylation of Glucagon-Like Peptides-1 [Glp-1]
JP2008506703A (ja) 2004-07-14 2008-03-06 ユニバーシティ オブ ユタ リサーチ ファウンデーション ネトリン関連化合物および用途
MX2007000728A (es) * 2004-07-21 2007-03-15 Ambrx Inc Polipeptidos biosinteticos que utilizan amino acidos no naturalmente codificados.
EP1799249A2 (en) 2004-09-10 2007-06-27 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated interferon alpha
CA2581423A1 (en) 2004-09-23 2006-03-30 Vasgene Therapeutics, Inc. Polipeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth
US7235530B2 (en) 2004-09-27 2007-06-26 Dyax Corporation Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof
WO2006047419A2 (en) * 2004-10-25 2006-05-04 Intezyne Technologies, Incorporated Heterobifunctional poly(ethylene glycol) and uses thereof
EP1814573B1 (en) 2004-10-29 2016-03-09 ratiopharm GmbH Remodeling and glycopegylation of fibroblast growth factor (fgf)
WO2006069388A2 (en) 2004-12-21 2006-06-29 Nektar Therapeutics Al, Corporation Stabilized polymeric thiol reagents
CA2594561C (en) * 2004-12-22 2014-12-23 Ambrx, Inc. Formulations of human growth hormone comprising a non-naturally encoded amino acid
CA2594557C (en) 2004-12-22 2016-04-26 Ambrx, Inc. Modified human growth hormone
AU2005323106B2 (en) 2004-12-22 2010-07-29 Ambrx, Inc. Methods for expression and purification of recombinant human growth hormone
WO2006068802A2 (en) * 2004-12-22 2006-06-29 Ambrx, Inc. COMPOSITIONS OF AMINOACYL-tRNA SYNTHETASE AND USES THEREOF
EP2399893B1 (en) 2004-12-22 2018-08-15 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides
JP4951527B2 (ja) 2005-01-10 2012-06-13 バイオジェネリックス アーゲー 糖ｐｅｇ化顆粒球コロニー刺激因子
US7402730B1 (en) 2005-02-03 2008-07-22 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Knockout animals manifesting hyperlipidemia
CA2595633C (en) * 2005-02-09 2013-11-19 Ahmad R. Hadba Synthetic sealants
US20100092505A1 (en) 2005-04-05 2010-04-15 Elisabetta Bianchi Method for Shielding Functional Sites or Epitopes on Proteins
EP2386571B1 (en) 2005-04-08 2016-06-01 ratiopharm GmbH Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants
EP1885403B1 (en) 2005-04-12 2013-05-08 Nektar Therapeutics Poly(ethyleneglycol) conjugates of Lysostaphin
KR20080013878A (ko) 2005-04-18 2008-02-13 노보 노르디스크 에이/에스 Ｉｌ-21 변이체
US7833979B2 (en) * 2005-04-22 2010-11-16 Amgen Inc. Toxin peptide therapeutic agents
CN101166545B (zh) 2005-05-13 2011-06-15 伊莱利利公司 Glp-1聚乙二醇化的化合物
WO2006127910A2 (en) 2005-05-25 2006-11-30 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin formulations
EP2975135A1 (en) 2005-05-25 2016-01-20 Novo Nordisk A/S Glycopegylated factor IX
EP1891141B1 (en) * 2005-05-31 2016-11-16 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs
WO2006133089A2 (en) * 2005-06-03 2006-12-14 Ambrx, Inc. Improved human interferon molecules and their uses
US8193206B2 (en) 2005-06-14 2012-06-05 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Pyrimidine compounds
WO2006138304A2 (en) 2005-06-14 2006-12-28 Taigen Biotechnology Pyrimidine compounds
WO2006134173A2 (en) 2005-06-17 2006-12-21 Novo Nordisk Health Care Ag Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprising at least one non-native cysteine
US8568705B2 (en) * 2005-07-18 2013-10-29 Nektar Therapeutics Method for preparing branched functionalized polymers using branched polyol cores
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
CN102703446B (zh) * 2005-08-18 2014-05-28 Ambrx公司 tRNA组合物和其用途
US20070105755A1 (en) 2005-10-26 2007-05-10 Neose Technologies, Inc. One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides
US20090048440A1 (en) 2005-11-03 2009-02-19 Neose Technologies, Inc. Nucleotide Sugar Purification Using Membranes
DK1954710T3 (da) * 2005-11-08 2011-06-27 Ambrx Inc Acceleratorer til modifikation af unaturlige aminosyrer og unaturlige aminosyrepolypeptider
CN101454461A (zh) * 2005-11-16 2009-06-10 Ambrx公司 包括非天然氨基酸的方法和组合物
KR101423898B1 (ko) * 2005-12-14 2014-07-28 암브룩스, 인코포레이티드 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드를 함유하는 조성물, 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드를 포함하는 방법, 및 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드의 용도
EP2364735A3 (en) 2005-12-16 2012-04-11 Nektar Therapeutics Branched PEG conjugates of GLP-1
US7743730B2 (en) * 2005-12-21 2010-06-29 Lam Research Corporation Apparatus for an optimized plasma chamber grounded electrode assembly
EP3363455A1 (en) * 2005-12-30 2018-08-22 Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. Extended release of neuregulin for improved cardiac function
SI1984009T1 (sl) 2006-01-18 2013-02-28 Qps, Llc Farmacevtski sestavki z izboljĺ ano stabilnostjo
EP1986695B1 (en) 2006-02-21 2015-06-03 Nektar Therapeutics Segmented degradable polymers and conjugates made therefrom
CA2648582C (en) 2006-04-07 2016-12-06 Nektar Therapeutics Al, Corporation Conjugates of an anti-tnf-alpha antibody
EP2573111A1 (en) 2006-04-20 2013-03-27 Amgen Inc. GLP-1 compounds
US7560588B2 (en) 2006-04-27 2009-07-14 Intezyne Technologies, Inc. Poly(ethylene glycol) containing chemically disparate endgroups
EP2213733A3 (en) 2006-05-24 2010-12-29 Novo Nordisk Health Care AG Factor IX analogues having prolonged in vivo half life
WO2008002482A2 (en) * 2006-06-23 2008-01-03 Surmodics, Inc. Hydrogel-based joint repair system and method
WO2007149594A2 (en) 2006-06-23 2007-12-27 Quintessence Biosciences, Inc. Modified ribonucleases
WO2008010991A2 (en) * 2006-07-17 2008-01-24 Quintessence Biosciences, Inc. Methods and compositions for the treatment of cancer
EP2049144B8 (en) * 2006-07-21 2015-02-18 ratiopharm GmbH Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences
KR20090051227A (ko) * 2006-09-08 2009-05-21 암브룩스, 인코포레이티드 척추동물 세포를 위한 하이브리드 서프레서 ｔＲＮＡ
JP5451390B2 (ja) * 2006-09-08 2014-03-26 アンブルックス，インコーポレイテッド 脊椎動物細胞内におけるサプレッサーｔｒｎａの転写
CN106008699A (zh) * 2006-09-08 2016-10-12 Ambrx公司 经修饰的人类血浆多肽或Fc骨架和其用途
US7985783B2 (en) 2006-09-21 2011-07-26 The Regents Of The University Of California Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification
JP2010505874A (ja) 2006-10-03 2010-02-25 ノヴォ ノルディスク アー／エス ポリペプチドコンジュゲートの精製方法
ES2655734T3 (es) * 2006-10-04 2018-02-21 Novo Nordisk A/S Glicopéptidos y azúcares pegilados unidos a glicerol
US7803769B2 (en) * 2006-10-25 2010-09-28 Amgen Inc. OSK1 peptide analogs and pharmaceutical compositions
WO2008049920A2 (en) 2006-10-26 2008-05-02 Novo Nordisk A/S Il-21 variants
KR20090110295A (ko) 2006-11-22 2009-10-21 에드넥서스, 어 브리스톨-마이어스 스퀴브 알＆디 컴파니 Ｉｇｆ-ｉｒ을 포함하는 티로신 키나제 수용체에 대한 공학처리된 단백질에 기반한 표적화 치료제
WO2008066902A2 (en) 2006-11-30 2008-06-05 Nektar Therapeutics Al, Corporation Method for preparing a polymer conjugate
HUE033960T2 (en) 2006-12-08 2018-01-29 Lexicon Pharmaceuticals Inc Monoclonal Antibodies to ANGPTL3
US8617531B2 (en) 2006-12-14 2013-12-31 Bolder Biotechnology, Inc. Methods of making proteins and peptides containing a single free cysteine
EP2117603A2 (en) 2006-12-19 2009-11-18 Bracco International B.V. Targeting and therapeutic compounds and gas-filled microvesicles comprising said compounds
EP2097140B1 (en) 2006-12-20 2012-09-26 Arkema Inc. Polymer encapsulation and/or binding
UA95996C2 (ru) 2007-01-18 2011-09-26 Эли Лилли Энд Компани Пегилированный fab-фрагмент антитела, который специфически связывается с бета-амилоидным пептидом
PL2118123T3 (pl) 2007-01-31 2016-06-30 Dana Farber Cancer Inst Inc Stabilizowane peptydy p53 i ich zastosowania
ATE516814T1 (de) 2007-02-02 2011-08-15 Bristol Myers Squibb Co 10fn3 domain zur behandlung von krankheiten begleitet von unerwünschter angiogenese
US20090227689A1 (en) * 2007-03-05 2009-09-10 Bennett Steven L Low-Swelling Biocompatible Hydrogels
US20090227981A1 (en) * 2007-03-05 2009-09-10 Bennett Steven L Low-Swelling Biocompatible Hydrogels
KR101476472B1 (ko) 2007-03-30 2015-01-05 암브룩스, 인코포레이티드 변형된 ｆｇｆ-21 폴리펩티드 및 그 용도
EP2144923B1 (en) 2007-04-03 2013-02-13 BioGeneriX AG Methods of treatment using glycopegylated g-csf
PT2136850E (pt) 2007-04-13 2012-04-27 Kuros Biosurgery Ag Selante tecidual polimérico
MX2009011870A (es) * 2007-05-02 2009-11-12 Ambrx Inc Polipeptidos de interferon beta modificados y usos de los mismos.
AU2008262490B2 (en) * 2007-05-22 2011-11-17 Amgen Inc. Compositions and methods for producing bioactive fusion proteins
WO2008154639A2 (en) 2007-06-12 2008-12-18 Neose Technologies, Inc. Improved process for the production of nucleotide sugars
US7968811B2 (en) * 2007-06-29 2011-06-28 Harley-Davidson Motor Company Group, Inc. Integrated ignition and key switch
US9125807B2 (en) 2007-07-09 2015-09-08 Incept Llc Adhesive hydrogels for ophthalmic drug delivery
CN101361968B (zh) 2007-08-06 2011-08-03 健能隆医药技术（上海）有限公司 白介素-22在治疗脂肪肝中的应用
US20110269942A1 (en) * 2007-08-09 2011-11-03 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibodies modified with hydrophobic molecule
US8067028B2 (en) * 2007-08-13 2011-11-29 Confluent Surgical Inc. Drug delivery device
US20090075887A1 (en) * 2007-08-21 2009-03-19 Genzyme Corporation Treatment with Kallikrein Inhibitors
US8207112B2 (en) 2007-08-29 2012-06-26 Biogenerix Ag Liquid formulation of G-CSF conjugate
US20110014118A1 (en) * 2007-09-21 2011-01-20 Lawrence Tamarkin Nanotherapeutic colloidal metal compositions and methods
CA2700378A1 (en) * 2007-09-21 2009-03-29 Cytimmune Sciences, Inc. Nanotherapeutic colloidal metal compositions and methods
JP2010540681A (ja) * 2007-10-08 2010-12-24 クインテッセンス バイオサイエンシズ，インコーポレーテッド リボヌクレアーゼに基づく治療のための組成物及び方法
CA2702945C (en) 2007-10-23 2016-08-23 Nektar Therapeutics Al, Corporation Hydroxyapatite-targeting multiarm polymers and conjugates made therefrom
CA2706700A1 (en) 2007-11-08 2009-05-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
US20090123519A1 (en) * 2007-11-12 2009-05-14 Surmodics, Inc. Swellable hydrogel matrix and methods
US20110282093A1 (en) * 2007-11-12 2011-11-17 Intradigm Corporation Heterobifunctional polyethylene glycol reagents
ES2632504T3 (es) 2007-11-20 2017-09-13 Ambrx, Inc. Polipéptidos de insulina modificados y sus usos
NZ602170A (en) 2008-02-08 2014-03-28 Ambrx Inc Modified leptin polypeptides and their uses
CN101965200B (zh) 2008-02-27 2013-06-19 诺沃-诺迪斯克有限公司 缀合的因子ⅷ分子
TWI395593B (zh) 2008-03-06 2013-05-11 Halozyme Inc 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制
US20090226531A1 (en) * 2008-03-07 2009-09-10 Allergan, Inc. Methods and composition for intraocular delivery of therapeutic sirna
NZ588638A (en) 2008-04-14 2012-09-28 Halozyme Inc Screening method for identifying a subject for treatment with a modified hyaluronidase polypeptides
PL2268635T3 (pl) 2008-04-21 2015-11-30 Taigen Biotechnology Co Ltd Związki heterocykliczne
TWI394580B (zh) 2008-04-28 2013-05-01 Halozyme Inc 超快起作用胰島素組成物
KR20110008075A (ko) * 2008-05-16 2011-01-25 넥타르 테라퓨틱스 콜린에스테라아제 부분 및 폴리머의 콘쥬게이트
WO2009142773A2 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Bristol-Myers Squibb Company Multivalent fibronectin based scaffold domain proteins
DK2326349T3 (en) * 2008-07-21 2015-05-26 Polytherics Ltd Novel Reagents and Methods for Conjugation of Biological Molecules
JP5680534B2 (ja) 2008-07-23 2015-03-04 イーライ リリー アンド カンパニー 修飾されているウシｇ−ｃｓｆポリペプチドおよびそれらの使用
JP5588983B2 (ja) 2008-08-11 2014-09-10 ウェルズ ファーゴ バンク ナショナル アソシエイション マルチアームポリマーアルカノエートコンジュゲート
EP2340045B1 (en) 2008-09-19 2017-04-12 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of protegrin peptides
US20110165113A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-07 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of v681-like peptides
EP2334335A1 (en) * 2008-09-19 2011-06-22 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of cd-np peptides
US20110237524A1 (en) * 2008-09-19 2011-09-29 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of aod-like peptides
EP2337585A1 (en) * 2008-09-19 2011-06-29 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of glp-2-like peptides
EP2334337A1 (en) * 2008-09-19 2011-06-22 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of opioid growth factor peptides
WO2010033224A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of kiss1 peptides
WO2010033227A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of thymosin alpha 1 peptides
US20110171163A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of ziconotide peptides
EP2334336A1 (en) * 2008-09-19 2011-06-22 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of osteocalcin peptides
EP2341942A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-13 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of therapeutic peptides
US20110171312A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Modified therapeutic peptides, methods of their preparation and use
EP2334338A2 (en) * 2008-09-19 2011-06-22 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of c-peptides
MX2011003272A (es) * 2008-09-26 2011-04-28 Ambrx Inc Polipeptidos de eritropoyetina animal modificados y sus usos.
ES2660000T3 (es) 2008-09-26 2018-03-20 Ambrx, Inc. Vacunas y microorganismos dependientes de la replicación de aminoácidos no naturales
WO2010039985A1 (en) 2008-10-01 2010-04-08 Quintessence Biosciences, Inc. Therapeutic Ribonucleases
US9023834B2 (en) 2008-11-13 2015-05-05 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Lyophilization formulation
US9271929B2 (en) 2008-11-25 2016-03-01 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Block copolymers and uses thereof
WO2010077297A1 (en) 2008-12-09 2010-07-08 Halozyme, Inc. Extended soluble ph20 polypeptides and uses thereof
GB0823309D0 (en) * 2008-12-19 2009-01-28 Univ Bath Functionalising reagents and their uses
EP2385843A4 (en) * 2009-01-06 2013-02-27 Dyax Corp TREATMENT OF MUZOSITIS WITH CALLICINE INHIBITORS
US20110318322A1 (en) 2009-01-12 2011-12-29 Nektar Therapeutics Conjugates of a Lysosomal Enzyme Moiety and a Water Soluble Polymer
CN102395401B (zh) 2009-02-12 2015-08-19 因赛普特有限责任公司 经由水凝胶塞的药物递送
WO2010100430A1 (en) 2009-03-04 2010-09-10 Polytherics Limited Conjugated proteins and peptides
US8067201B2 (en) * 2009-04-17 2011-11-29 Bristol-Myers Squibb Company Methods for protein refolding
NO2440239T3 (cs) 2009-06-09 2018-02-10
CA2770149A1 (en) 2009-08-05 2011-02-10 Pieris Ag Controlled release formulations of lipocalin muteins
BR112012005890B1 (pt) 2009-09-17 2023-01-17 Takeda Pharmaceutical Company Limited Co-formulação estável de hialuronidase e imunoglobulina e métodos de utilização da mesma
DE102010049607A1 (de) 2009-10-26 2011-06-30 Becker, Claus, Prof., 76470 Konjugate von Nukleotiden und Methoden zu deren Anwendung
EP2774935B8 (en) 2009-10-30 2017-06-21 NTF Therapeutics, Inc. Improved neurturin molecules
EP2805965A1 (en) 2009-12-21 2014-11-26 Ambrx, Inc. Modified porcine somatotropin polypeptides and their uses
JP2013515080A (ja) 2009-12-21 2013-05-02 アンブルックス，インコーポレイテッド 修飾されているウシのソマトトロピンポリペプチドおよびそれらの使用
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
AR079345A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina
PT3459564T (pt) * 2010-01-06 2022-01-31 Takeda Pharmaceuticals Co Proteínas de ligação à calicreína plasmática
CN102161754B (zh) * 2010-02-13 2012-06-13 华中科技大学同济医学院附属协和医院 枝化状聚乙二醇衍生物的功能化修饰方法
EP2542569B1 (en) 2010-03-05 2020-09-16 Omeros Corporation Chimeric inhibitor molecules of complement activation
EP2563380B1 (en) 2010-04-26 2018-05-30 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of cysteinyl-trna synthetase
AU2011248614B2 (en) 2010-04-27 2017-02-16 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl tRNA synthetases
EP2563911B1 (en) 2010-04-28 2021-07-21 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of alanyl trna synthetases
CA2797393C (en) 2010-04-29 2020-03-10 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of valyl trna synthetases
US9068177B2 (en) 2010-04-29 2015-06-30 Atyr Pharma, Inc Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glutaminyl-tRNA synthetases
AU2011248490B2 (en) 2010-04-29 2016-11-10 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of Asparaginyl tRNA synthetases
CN103140233B (zh) 2010-05-03 2017-04-05 Atyr 医药公司 与甲硫氨酰‑tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的发现
US9034321B2 (en) 2010-05-03 2015-05-19 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-alpha-tRNA synthetases
EP2566515B1 (en) 2010-05-03 2017-08-02 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of arginyl-trna synthetases
CA2798139C (en) 2010-05-04 2019-09-24 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of p38 multi-trna synthetase complex
EP2569331A1 (en) 2010-05-10 2013-03-20 Perseid Therapeutics LLC Polypeptide inhibitors of vla4
EP2568996B1 (en) 2010-05-14 2017-10-04 aTyr Pharma, Inc. Therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-beta-trna synthetases
MX2012013375A (es) 2010-05-17 2013-04-11 Cebix Inc Peptido c pegilado.
CA2799480C (en) 2010-05-17 2020-12-15 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of leucyl-trna synthetases
EP3091028A1 (en) 2010-05-26 2016-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold proteins having improved stability
CN103118694B (zh) 2010-06-01 2016-08-03 Atyr医药公司 与赖氨酰-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的发现
EP2593125B1 (en) 2010-07-12 2017-11-01 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glycyl-trna synthetases
MX348420B (es) 2010-07-20 2017-06-12 Halozyme Inc Efectos secundarios adversos asociados con la administracion de agentes anti-hialuronano y metodos para mejorar o prevenir los efectos secundarios.
PL2461767T3 (pl) 2010-07-30 2013-09-30 Novartis Ag Soczewki silikonowo-hydrożelowe z powierzchniami bogatymi w wodę
ES2972902T3 (es) 2010-08-17 2024-06-17 Ambrx Inc Polipéptidos de relaxina modificados y sus usos
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
EP2608801B1 (en) 2010-08-25 2019-08-21 aTyr Pharma, Inc. INNOVATIVE DISCOVERY OF THERAPEUTIC, DIAGNOSTIC, AND ANTIBODY COMPOSITIONS RELATED TO PROTEIN FRAGMENTS OF TYROSYL-tRNA SYNTHETASES
US8961501B2 (en) 2010-09-17 2015-02-24 Incept, Llc Method for applying flowable hydrogels to a cornea
TWI480288B (zh) 2010-09-23 2015-04-11 Lilly Co Eli 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物
WO2012054822A1 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Nektar Therapeutics Pharmacologically active polymer-glp-1 conjugates
KR102591732B1 (ko) 2010-11-12 2023-10-19 넥타르 테라퓨틱스 Ｉｌ-2 부분 및 중합체의 접합체
WO2012065181A2 (en) 2010-11-12 2012-05-18 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Cancer therapies and diagnostics
PT2643019T (pt) 2010-11-24 2019-04-23 Lexicon Pharmaceuticals Inc Anticorpos para notum pectinacetilesterase
US20140371258A1 (en) 2010-12-17 2014-12-18 Nektar Therapeutics Water-Soluble Polymer Conjugates of Topotecan
EP2654795B1 (en) 2010-12-21 2018-03-07 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of pemetrexed-based compounds
US20130331443A1 (en) 2010-12-22 2013-12-12 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of taxane-based compounds
US10894087B2 (en) 2010-12-22 2021-01-19 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of cabazitaxel-based compounds
KR102107695B1 (ko) 2011-01-06 2020-05-07 다이액스 코포레이션 혈장 칼리크레인 결합 단백질
ES2634669T3 (es) 2011-02-08 2017-09-28 Halozyme, Inc. Composición y formulación lipídica de una enzima de degradación de hialuronano y uso de la misma para el tratamiento de la hiperplasia benigna de próstata
EA201391331A1 (ru) 2011-03-16 2014-02-28 Эмджен Инк. Активные и селективные ингибиторы nav1.3 и nav1.7
WO2012158678A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Methods for maintaining pegylation of polypeptides
WO2012166555A1 (en) 2011-05-27 2012-12-06 Nektar Therapeutics Water - soluble polymer - linked binding moiety and drug compounds
EP2720722A4 (en) 2011-06-16 2014-12-03 Univ Hong Kong Science & Techn MOLECULAR WITH SEVERAL VINYL SULPHONES
EA033472B1 (ru) 2011-06-17 2019-10-31 Halozyme Inc Композиция для стабилизации гиалуронидазы и ее применение
US20130011378A1 (en) 2011-06-17 2013-01-10 Tzung-Horng Yang Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme
BR112013032265A2 (pt) 2011-06-17 2016-12-20 Halozyme Inc métodos de infusão de insulina subcutânea contínua com uma enzima de degradação do hialuronano
KR20140054009A (ko) 2011-07-01 2014-05-08 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 릴랙신 융합 폴리펩타이드 및 그의 용도
US9150846B2 (en) 2011-07-05 2015-10-06 Bioasis Technologies, Inc. P97-antibody conjugates and methods of use
WO2013020079A2 (en) 2011-08-04 2013-02-07 Nektar Therapeutics Conjugates of an il-11 moiety and a polymer
US20130071394A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 John K. Troyer Compositions and combinations of organophosphorus bioscavengers and hyaluronan-degrading enzymes, and methods of use
US10226417B2 (en) 2011-09-16 2019-03-12 Peter Jarrett Drug delivery systems and applications
EP2771028A2 (en) 2011-10-24 2014-09-03 Halozyme, Inc. Companion diagnostic for anti-hyaluronan agent therapy and methods of use thereof
JP2015504038A (ja) 2011-10-31 2015-02-05 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 低減した免疫原性を有するフィブロネクチン結合ドメイン
CN104220086A (zh) 2011-11-17 2014-12-17 塞比克斯股份公司 Peg化的c-肽
KR102039468B1 (ko) 2011-12-05 2019-11-01 인셉트, 엘엘씨 의료용 유기젤 방법 및 조성물
CA2862391C (en) 2011-12-29 2023-10-10 Loren D. Walensky Stabilized antiviral fusion helices
WO2013102144A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Halozyme, Inc. Ph20 polypeptede variants, formulations and uses thereof
EP2814514B1 (en) 2012-02-16 2017-09-13 Atyr Pharma, Inc. Histidyl-trna synthetases for treating autoimmune and inflammatory diseases
EP2831237B1 (en) 2012-03-30 2017-11-29 The Board of Regents of the University of Oklahoma High molecular weight heparosan polymers and methods of production and use thereof
US8956682B2 (en) 2012-04-02 2015-02-17 Surmodics, Inc. Hydrophilic polymeric coatings for medical articles with visualization moiety
WO2013151774A1 (en) 2012-04-04 2013-10-10 Halozyme, Inc. Combination therapy with an anti - hyaluronan agent and a tumor - targeted taxane
WO2013177187A2 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with extended-pk il-2 and therapeutic agents
AU2013267161A1 (en) 2012-05-31 2014-11-20 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind PD-L1
EP2859017B1 (en) 2012-06-08 2019-02-20 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
JP6429771B2 (ja) 2012-06-21 2018-11-28 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． ｃ−Ｍｅｔに結合する抗原結合タンパク質
EP2864358B1 (en) 2012-06-22 2019-08-07 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind ccr2
WO2014004639A1 (en) 2012-06-26 2014-01-03 Sutro Biopharma, Inc. Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
CA2880162C (en) 2012-07-31 2023-04-04 Bioasis Technologies, Inc. Dephosphorylated lysosomal storage disease proteins and methods of use thereof
US9395468B2 (en) 2012-08-27 2016-07-19 Ocular Dynamics, Llc Contact lens with a hydrophilic layer
SG11201501464TA (en) 2012-08-31 2015-03-30 Sutro Biopharma Inc Modified amino acids comprising an azido group
WO2014062856A1 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Halozyme, Inc. Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods
EP2916835A4 (en) 2012-11-12 2016-07-27 Redwood Bioscience Inc COMPOUNDS AND METHOD FOR PRODUCING A CONJUGATE
KR20150085064A (ko) 2012-11-16 2015-07-22 더 리젠트스 오브 더 유니이버시티 오브 캘리포니아 단백질 화학적 변형을 위한 피크테 스펭글러 결합
US9310374B2 (en) 2012-11-16 2016-04-12 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
US9383357B2 (en) 2012-12-07 2016-07-05 Northwestern University Biomarker for replicative senescence
JP6426107B2 (ja) 2012-12-20 2018-11-21 アムジエン・インコーポレーテツド Ａｐｊ受容体アゴニストおよびその使用
EP2951206A2 (en) 2013-02-01 2015-12-09 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold proteins
WO2014165277A2 (en) 2013-03-12 2014-10-09 Amgen Inc. POTENT AND SELECTIVE INHIBITORS OF Nav1.7
NZ711373A (en) 2013-03-13 2020-07-31 Bioasis Technologies Inc Fragments of p97 and uses thereof
US10087215B2 (en) 2013-03-15 2018-10-02 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized SOS1 peptides
US10106590B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. BH4 stabilized peptides and uses thereof
WO2014151369A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized ezh2 peptides
CA3175360C (en) 2013-05-31 2024-05-28 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind pd-1
TW201534726A (zh) 2013-07-03 2015-09-16 Halozyme Inc 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途
WO2015006555A2 (en) 2013-07-10 2015-01-15 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
WO2015013510A1 (en) 2013-07-25 2015-01-29 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Epfl High aspect ratio nanofibril materials
WO2015031673A2 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Bioasis Technologies Inc. Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
CN104623637A (zh) 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
EP3570093B1 (en) 2013-11-15 2021-09-15 Tangible Science, Inc. Contact lens with a hydrophilic layer
JP6745218B2 (ja) 2013-11-27 2020-08-26 レッドウッド バイオサイエンス， インコーポレイテッド ヒドラジニル−ピロロ化合物及び複合体を生成するための方法
WO2015081891A1 (en) 2013-12-06 2015-06-11 Baikang (Suzhou) Co., Ltd Bioreversable promoieties for nitrogen-containing and hydroxyl-containing drugs
JP6719384B2 (ja) 2014-03-27 2020-07-15 ダイアックス コーポレーション 糖尿病黄斑浮腫の治療のための組成物および方法
MA39711A (fr) 2014-04-03 2015-10-08 Nektar Therapeutics Conjugués d'une fraction d'il-15 et d'un polymère
CA2948864C (en) 2014-05-14 2023-10-17 Karl E. Griswold Deimmunized lysostaphin and methods of use
JP6803236B2 (ja) 2014-06-10 2020-12-23 アムジェン インコーポレイテッド アペリンポリペプチド
WO2016025647A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and a cancer vaccine
AU2015301753B2 (en) 2014-08-12 2021-04-08 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with IL-2 and integrin-binding-Fc-fusion protein
AU2015305894A1 (en) 2014-08-22 2017-04-06 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind CXCR3
WO2016033555A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Halozyme, Inc. Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor
PL3207130T3 (pl) 2014-10-14 2020-02-28 Halozyme, Inc. Kompozycje deaminazy adenozyny 2 (ada2), jej warianty i sposoby ich zastosowania
EP3218009B1 (en) * 2014-10-14 2021-04-07 Polytherics Limited Process for the conjugation of a peptide or protein with a reagent comprising a leaving group including a portion of peg
AU2015335603B2 (en) 2014-10-24 2020-04-30 Bristol-Myers Squibb Company Modified FGF-21 polypeptides and uses thereof
US20170290925A1 (en) * 2014-10-24 2017-10-12 Polytherics Limited Conjugates And Conjugating Reagents
GB201419108D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Glythera Ltd Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates
US10525170B2 (en) * 2014-12-09 2020-01-07 Tangible Science, Llc Medical device coating with a biocompatible layer
CA2979999A1 (en) 2015-03-18 2016-09-22 Massachusetts Institute Of Technology Selective mcl-1 binding peptides
EP3317294B1 (en) 2015-07-02 2023-03-15 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized anti-microbial peptides
CA2995479A1 (en) 2015-08-28 2017-03-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Peptides binding to bfl-1
US11286307B2 (en) 2015-12-11 2022-03-29 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack
CN116333124A (zh) 2016-01-29 2023-06-27 索伦托药业有限公司 与pd-l1结合的抗原结合蛋白
AU2017228333C1 (en) 2016-02-29 2022-03-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stapled intracellular-targeting antimicrobial peptides to treat infection
US10421785B2 (en) 2016-04-11 2019-09-24 Bar-Ilan University Delta receptor agonist peptides and use thereof
US11510966B2 (en) 2016-04-15 2022-11-29 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd Use of IL-22 in treating necrotizing enterocolitis
WO2018017922A2 (en) 2016-07-22 2018-01-25 Massachusetts Institute Of Technology Selective bfl-1 peptides
JP6949102B2 (ja) 2016-08-09 2021-10-13 イーライ リリー アンド カンパニー 併用療法
US11466064B2 (en) 2016-08-26 2022-10-11 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bcl-w polypeptides and mimetics for treating or preventing chemotherapy-induced peripheral neuropathy and hearing loss
AU2018219283B2 (en) 2017-02-08 2022-05-19 Bristol-Myers Squibb Company Modified relaxin polypeptides comprising a pharmacokinetic enhancer and uses thereof
WO2018170299A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Inhibitors of prokaryotic gene transcription and uses thereof
WO2018172503A2 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Basf Se Liquid laundry detergent comprising modified saccharide or polysaccharide
SG11201912071QA (en) 2017-06-22 2020-01-30 Catalyst Biosciences Inc Modified membrane type serine protease 1 (mtsp-1) polypeptides and methods of use
AU2018304230A1 (en) 2017-07-19 2020-02-06 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized anti-microbial peptides for the treatment of antibiotic-resistant bacterial infections
WO2019036605A2 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Massachusetts Institute Of Technology MULTIPLE SPECIFICITY BINDING AGENTS OF CXC CHEMOKINES AND USES THEREOF
WO2019063958A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 The University Of York BIOCONJUGATION OF POLYPEPTIDES
JP2021506800A (ja) 2017-12-15 2021-02-22 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド 構造安定化および／またはシステイン反応性ｎｏｘａペプチドによるアポトーシスタンパク質の選択的標的化
JP2021506814A (ja) 2017-12-15 2021-02-22 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド 安定化ペプチドによって介在される標的タンパク質の分解
EP3732254A4 (en) 2017-12-26 2021-12-22 Becton, Dickinson and Company DEEP UV-EXCITABLE WATER-SOLVATIZED POLYMER DYES
CA3089279A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Cell-permeable stapled peptide modules for cellular delivery
WO2019178313A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized peptides for biomarker detection
US10844228B2 (en) 2018-03-30 2020-11-24 Becton, Dickinson And Company Water-soluble polymeric dyes having pendant chromophores
WO2019222435A1 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Halozyme, Inc. Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20
KR102167755B1 (ko) 2018-05-23 2020-10-19 주식회사 큐어바이오 단편화된 grs 폴리펩타이드, 이의 변이체 및 이들의 용도
CA3107332A1 (en) 2018-07-22 2020-01-30 Bioasis Technologies Inc. Treatment of lymphatic metastases
KR20210063351A (ko) 2018-08-28 2021-06-01 암브룩스, 인코포레이티드 항-cd3 항체 폴레이트 생체접합체 및 이들의 용도
SI3849614T1 (sl) 2018-09-11 2024-04-30 Ambrx, Inc. Polipeptidni konjugati interlevkina-2 in njihove uporabe
EP3852783A1 (en) 2018-09-17 2021-07-28 Massachusetts Institute of Technology Peptides selective for bcl-2 family proteins
CN113366015A (zh) 2018-10-19 2021-09-07 Ambrx公司 白细胞介素-10多肽缀合物、其二聚体及其用途
US20200262887A1 (en) 2018-11-30 2020-08-20 Opko Ireland Global Holdings, Ltd. Oxyntomodulin peptide analog formulations
WO2020131871A1 (en) * 2018-12-19 2020-06-25 Tangible Science, Inc. Systems and methods of treating a hydrogel-coated medical device
US11613744B2 (en) 2018-12-28 2023-03-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use
CN113661239A (zh) 2018-12-28 2021-11-16 催化剂生物科学公司 经修饰的尿激酶型纤溶酶原激活物多肽和使用方法
WO2020154032A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Massachusetts Institute Of Technology Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade
KR20210136014A (ko) 2019-02-12 2021-11-16 암브룩스, 인코포레이티드 항체-tlr 작용제 콘쥬게이트를 함유하는 조성물, 방법 및 이의 용도
US20220169688A1 (en) 2019-04-18 2022-06-02 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Selective targeting of ubiquitin- and ubiquitin-like e1-activating enzymes by structurally-stabilized peptides
CN113747948B (zh) 2019-04-26 2023-12-15 宝洁公司 减少来源于阳离子抗微生物剂的牙齿变色
EP4077361A1 (en) 2019-12-16 2022-10-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Structurally-stabilized oncolytic peptides and uses thereof
EP4077366A1 (en) 2019-12-20 2022-10-26 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Structurally-stabilized glucagon-like peptide 1 peptides and uses thereof
KR102653906B1 (ko) 2020-01-14 2024-04-03 신테카인, 인크. 편향된 il2 뮤테인 방법 및 조성물
WO2021173889A1 (en) 2020-02-26 2021-09-02 Ambrx, Inc. Uses of anti-cd3 antibody folate bioconjugates
AU2021230544A1 (en) 2020-03-04 2022-09-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antiviral structurally-stabilized SARS-CoV-2 peptides and uses thereof
IL296099A (en) 2020-03-11 2022-11-01 Ambrx Inc Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of using them
EP4139360A1 (en) 2020-04-22 2023-03-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antiviral structurally-stabilized ace2 helix 1 peptides and uses thereof
WO2021222243A2 (en) 2020-04-27 2021-11-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Structurally-stabilized and hdmx-selective p53 peptides and uses thereof
US20210355468A1 (en) 2020-05-18 2021-11-18 Bioasis Technologies, Inc. Compositions and methods for treating lewy body dementia
US20210393787A1 (en) 2020-06-17 2021-12-23 Bioasis Technologies, Inc. Compositions and methods for treating frontotemporal dementia
US20230302150A1 (en) 2020-08-20 2023-09-28 Ambrx, Inc. Antibody-tlr agonist conjugates, methods and uses thereof
CA3193261A1 (en) 2020-10-14 2022-04-21 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Chimeric conjugates for degradation of viral and host proteins and methods of use
US20240002450A1 (en) 2020-11-05 2024-01-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antiviral structurally-stabilized ebolavirus peptides and uses thereof
EP4313163A1 (en) 2021-04-03 2024-02-07 Ambrx, Inc. Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof
CA3231587A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antiviral structurally-stapled sars-cov-2 peptide- cholesterol conjugates and uses thereof
EP4155349A1 (en) 2021-09-24 2023-03-29 Becton, Dickinson and Company Water-soluble yellow green absorbing dyes
WO2023215784A1 (en) 2022-05-04 2023-11-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Ebolavirus surface glycoprotein peptides, conjugates, and uses thereof
WO2024007016A2 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Beckman Coulter, Inc. Novel fluorescent dyes and polymers from dihydrophenanthrene derivatives
WO2024044327A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Beckman Coulter, Inc. Dhnt monomers and polymer dyes with modified photophysical properties

Family Cites Families (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3784524A (en) * 1971-06-25 1974-01-08 Grace W R & Co Urethane/thioether-containing polyene composition and the reaction product thereof
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4134887A (en) * 1973-10-17 1979-01-16 Hoechst Aktiengesellschaft Phenyl-azo-phenyl dyestuffs
CH586739A5 (cs) * 1973-10-17 1977-04-15 Hoechst Ag
US4179387A (en) * 1974-03-12 1979-12-18 Fuji Photo Film Co., Ltd. Process for producing magnetic FE oxide
IL47468A (en) * 1975-06-12 1979-05-31 Rehovot Res Prod Process for the cross-linking of proteins using water soluble cross-linking agents
US4002531A (en) * 1976-01-22 1977-01-11 Pierce Chemical Company Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby
DE2607766C3 (de) * 1976-02-26 1978-12-07 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur Herstellung von trägergebundenen biologisch aktiven Substanzen
US4228019A (en) * 1978-06-19 1980-10-14 Texaco Development Corp. Secondary recovery process
US4473693A (en) * 1978-08-04 1984-09-25 Stewart Walter W Aminonaphthalimide dyes for intracellular labelling
US4356166A (en) * 1978-12-08 1982-10-26 University Of Utah Time-release chemical delivery system
US4430260A (en) * 1979-02-27 1984-02-07 Lee Weng Y Penicillin-polyvinyl alcohol conjugate and process of preparation
US4296097A (en) * 1979-02-27 1981-10-20 Lee Weng Y Suppression of reaginic antibodies to drugs employing polyvinyl alcohol as carrier therefor
US4241199A (en) * 1979-09-18 1980-12-23 Union Carbide Corporation Novel polyester diols
US4280979A (en) * 1979-09-18 1981-07-28 Union Carbide Corporation Copolymers, compositions, and articles, and methods for making same
JPS585320A (ja) * 1981-07-01 1983-01-12 Toray Ind Inc グラフト共重合体
US4973493A (en) * 1982-09-29 1990-11-27 Bio-Metric Systems, Inc. Method of improving the biocompatibility of solid surfaces
JPS59204144A (ja) * 1983-04-12 1984-11-19 Daikin Ind Ltd 新規含フッ素化合物およびその製法
SE470099B (sv) * 1984-05-17 1993-11-08 Jerker Porath Sulfonaktiverade tioeteradsorbenter för separation av t ex protein
SE454885B (sv) * 1984-10-19 1988-06-06 Exploaterings Ab Tbf Polymerbelagda partiklar med immobiliserade metalljoner pa sin yta jemte forfarande for framstellning derav
US4616644A (en) * 1985-06-14 1986-10-14 Johnson & Johnson Products, Inc. Hemostatic adhesive bandage
EP0206448B1 (en) * 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4917888A (en) * 1985-06-26 1990-04-17 Cetus Corporation Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4766106A (en) * 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
EP0229108B1 (en) * 1985-06-26 1990-12-27 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4883864A (en) * 1985-09-06 1989-11-28 Minnesota Mining And Manufacturing Company Modified collagen compound and method of preparation
US4983494A (en) * 1985-10-16 1991-01-08 Fuji Photo Film Co., Ltd. Image forming process including heating step
CA1283046C (en) * 1986-05-29 1991-04-16 Nandini Katre Tumor necrosis factor formulation
US4791192A (en) * 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4871785A (en) * 1986-08-13 1989-10-03 Michael Froix Clouding-resistant contact lens compositions
DE3628717A1 (de) * 1986-08-23 1988-02-25 Agfa Gevaert Ag Haertungsmittel fuer proteine, eine damit gehaertete bindemittelschicht und eine solche schicht enthaltendes fotografisches aufzeichnungsmaterial
US4931544A (en) * 1986-09-04 1990-06-05 Cetus Corporation Succinylated interleukin-2 for pharmaceutical compositions
DE3634525A1 (de) * 1986-10-10 1988-04-21 Miles Lab Testmittel und indikatoren zum nachweis von thiolgruppen und verfahren zu deren herstellung
US5080891A (en) * 1987-08-03 1992-01-14 Ddi Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols
US5153265A (en) * 1988-01-20 1992-10-06 Cetus Corporation Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1
NL8800577A (nl) * 1988-03-08 1989-10-02 Stichting Tech Wetenschapp Werkwijze voor het aanbrengen van een bloedcompatibele bekleding op polyetherurethaanvormstukken.
GB8824593D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Liposomes
GB8824592D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Purification process
GB8824591D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Fractionation process
US5162430A (en) * 1988-11-21 1992-11-10 Collagen Corporation Collagen-polymer conjugates
US5089261A (en) * 1989-01-23 1992-02-18 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US4902502A (en) * 1989-01-23 1990-02-20 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US5122614A (en) * 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
WO1990015628A1 (en) * 1989-06-14 1990-12-27 Cetus Corporation Polymer/antibiotic conjugate
US5234903A (en) * 1989-11-22 1993-08-10 Enzon, Inc. Chemically modified hemoglobin as an effective, stable non-immunogenic red blood cell substitute
US5171264A (en) * 1990-02-28 1992-12-15 Massachusetts Institute Of Technology Immobilized polyethylene oxide star molecules for bioapplications
EP0801082B1 (en) * 1990-08-31 2003-04-09 Regents Of The University Of Minnesota Method for making graft resins for solid-phase peptide synthesis
US5380536A (en) * 1990-10-15 1995-01-10 The Board Of Regents, The University Of Texas System Biocompatible microcapsules
SE467308B (sv) * 1990-10-22 1992-06-29 Berol Nobel Ab Fast yta belagd med ett hydrofilt ytterskikt med kovalent bundna biopolymerer, saett att framstaella en saadan yta och ett konjugat daerfoer
EP0567566B2 (en) * 1991-01-18 2007-07-04 Amgen Inc., Methods for treating tumor necrosis factor mediated diseases
CA2106079C (en) * 1991-03-15 2000-04-25 Robert C. Thompson Pegylation of polypeptides
WO1992016555A1 (en) * 1991-03-18 1992-10-01 Enzon, Inc. Hydrazine containing conjugates of polypeptides and glycopolypeptides with polymers
DK52791D0 (da) * 1991-03-22 1991-03-22 Kem En Tec As Adsorptionsmatricer
DK130991D0 (da) * 1991-07-04 1991-07-04 Immunodex K S Polymere konjugater
DK0594772T3 (cs) * 1991-07-04 1997-02-24 Immunodex K S
US5414135A (en) 1991-12-30 1995-05-09 Sterling Winthrop Inc. Vinyl sulfone coupling of polyoxyalkylenes to proteins
EP0622394A1 (en) * 1993-04-30 1994-11-02 S.A. Laboratoires S.M.B. Reversible modification of sulfur-containing molecules with polyalkylene glycol derivatives and their use

Also Published As

Publication number Publication date
CN1137280A (zh) 1996-12-04
SK60896A3 (en) 1997-04-09
KR960705869A (ko) 1996-11-08
AU1054895A (en) 1995-05-29
US5739208A (en) 1998-04-14
FI117441B (fi) 2006-10-13
CA2176203C (en) 2003-06-10
FI962004A0 (fi) 1996-05-10
AU687937B2 (en) 1998-03-05
DK0728155T3 (da) 2002-07-29
DE69430317D1 (de) 2002-05-08
US7214366B2 (en) 2007-05-08
EP1176160A3 (en) 2004-03-03
US20020150548A1 (en) 2002-10-17
US6610281B2 (en) 2003-08-26
RO121855B1 (ro) 2008-06-30
US20050209416A1 (en) 2005-09-22
ATE215577T1 (de) 2002-04-15
BR9408048A (pt) 1996-12-24
US20040037801A1 (en) 2004-02-26
WO1995013312A1 (en) 1995-05-18
RO118434B1 (ro) 2003-05-30
RU2176253C2 (ru) 2001-11-27
EP0728155B1 (en) 2002-04-03
EE03448B1 (et) 2001-06-15
DE69430317T2 (de) 2002-10-02
NO961918L (no) 1996-07-12
NO315377B1 (no) 2003-08-25
HU225649B1 (en) 2007-05-29
HK1042312A1 (zh) 2002-08-09
PL314298A1 (en) 1996-09-02
PL180149B1 (pl) 2000-12-29
US6894025B2 (en) 2005-05-17
EP0728155A1 (en) 1996-08-28
ES2173943T3 (es) 2002-11-01
EP1176160A2 (en) 2002-01-30
CN1085689C (zh) 2002-05-29
BG100568A (bg) 1996-12-31
UA58481C2 (uk) 2003-08-15
BG63399B1 (bg) 2001-12-29
HUP9601253A2 (en) 2001-06-28
NZ276313A (en) 1997-04-24
JP3114998B2 (ja) 2000-12-04
CA2176203A1 (en) 1995-05-18
US5900461A (en) 1999-05-04
FI962004A (fi) 1996-05-10
JPH09508926A (ja) 1997-09-09
US5446090A (en) 1995-08-29
CZ137596A3 (en) 1996-10-16
NO961918D0 (no) 1996-05-10
SK284527B6 (sk) 2005-05-05
HU9601253D0 (en) 1996-07-29
KR100225746B1 (ko) 1999-10-15
EE9600128A (et) 1997-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ295640B6 (cs) Ve vodě rozpustný a izolovatelný aktivovaný polymer, který je stabilní vůči hydrolýze a jeho použití, hydrolyticky stabilní, biologicky aktivní konjugát a jeho použití, biomateriál, způsob syntézy izolovatelného ve vodě rozpustného aktivovaného polymeru a způsob výroby biologicky aktivního konjugátu
JP5095061B2 (ja) ポリ（エチレングリコール）の１−ベンゾトリアゾリル炭酸エステルの調製のための方法
KR100807141B1 (ko) 고분자량 비펩티드성 중합체 유도체의 합성
US8003742B2 (en) Polymer derivatives with proximal reactive groups
JP5681605B2 (ja) アジドまたはアセチレン末端水溶性ポリマー
EP1259562B1 (en) Sterically hindered derivatives of water soluble polymers

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20061114