KR20080013878A - Ｉｌ-21 변이체 - Google Patents

Abstract

본원에서는, 아미노산 번호 65-96에 상응하는 영역에서 아미노산이 결실 및/또는 치환된 IL-21 변이체를 제공한다.

IL-21, 아미노산 치환, 결실, 멜라닌종, 암

Description

ＩＬ-21 변이체{IL-21 variants}

본 발명은 IL-21의 신규 변이체와 관련된 것이고, 상기 변이체는 치료에 유용한 것이다.

IL-21 펩타이드는 WO 00/53761에서 SEQ ID No:　2로서 최초로 기술되었다. 프로펩타이드는 161개 아미노산 잔기의 펩타이드이다. 편의를 위해, 서열은 SEQ ID No:　1로서 본 출원에서 약칭된다. 처음에는 성숙한 단백질이 SEQ ID No:1의 아미노산 번호 33 내지 아미노산 번호 162로 구성된 펩타이드인 것으로 생각되었다. 하지만 더 최근에 들어서(WO 2004/112703), 성숙한 단백질은 실제로는 아미노산 번호 30 내지 아미노산 번호 162인 것으로 제안되었으며, 이는 본 출원에서 추가적으로 N 말단에 메싸이오닌(methionine)을 갖는 SEQ ID No:11로서 기술된다.

IL-21은 사이토카인(cytokine)이다. 사이토카인은 일반적으로는 조혈세포 계통 세포의 증식, 분화 및/또는 활성화를 자극하고, 체내의 면역 및 염증 반응 기작에 참여한다. 인터루킨(interleukin)은 각종 사이토카인을 생산함으로써 면역 반응을 매개하는 사이토카인의 패밀리이며, 이들은 항원에 대한 적응 면역에 관여한다. 성숙한 T 세포는 항원이나 다른 자극에 의해 활성화되어 예를 들면, 사이토카인, 생화학적 시그널 분자, 또는 T 세포 집단의 운명에 추가로 영향을 미치는 리셉 터 등을 생산할 수 있다.

T 세포에 의해 생산된 사이토카인은 제1형 및 제2형으로서 분류된다(Kelso, A. Immun . Cell Biol . 76:300-317, 1998). 제1형 사이토카인은 IL-2, IFN-γ, LT-α를 포함하고, 이들은 면역 반응, 바이러스 면역, 세포내 기생충 면역 및 동종이식편 거부반응에 관여한다. 제2형 사이토카인은 IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 및 IL-13를 포함하고, 체액성 반응, 기생충 면역 및 알레르기 반응에 관여한다. 제1형 및 제2형에 동시에 속하는 사이토카인에는 IL-3, GM-CSF 및 TNF-α가 포함된다. T 세포 집단을 생산하는 제1형 및 제2형 사이토카인은 상이한 유형의 염증 조직에 차별적으로 이동한다는 것을 제안하는 일부 증거가 있다.

성숙한 T 세포는 항원이나 다른 자극에 의해 활성화되어 예를 들면, 사이토카인, 생화학적 시그널 분자, 또는 T 세포 집단의 운명에 추가로 영향을 미치는 리셉터 등을 생산할 수 있다.

B 세포는 B 세포 리셉터 또는 다른 보조 분자를 포함하는 그들 세포 표면상의 리셉터를 통해 활성화되어, 보조적 세포 기능, 예컨대 사이토카인 및 항체를 생산하는 것을 수행할 수 있다.

내추럴 킬러(NK) 세포는 T 세포 및 B 세포를 갖는 공통의 프로제니터(progenitor) 세포를 가지며, 면역감시기구에서 중요한 역할을 담당한다. NK 세포는 혈액 림프구의 최대 15%까지 포함되며, 항원 리셉터를 발현하지 않고, 이에 따라 표적 세포에 대한 결합이 요구될 때 MHC 인식을 사용하지 않는다. NK 세포는 특정 종양 세포 및 바이러스 감염된 세포의 인식 및 사멸에 관여한다. 인 비보(in vivo)에서 NK 세포는 활성화가 필요한 것으로 생각되지만, 인 비트로(in vitro)에서 NK 세포는 KIR 리간드 의존성 활성화를 통해 일부 유형의 종양 세포를 사멸시키는 것으로 보여진다.

각종 질병의 치료에서 IL-21이 효능이 있는 것으로 증명되긴 하였지만, 임상학적으로 요구되는 것을 수행하기 위한, 활성, 선택성, 안정성 및 순환 시간 또는 생물학적 반감기와 같은 개선된 특성 또는 대안적인 특성을 가진 IL-21의 변이체는 여전히 요구되는 실정이다.

발명의 개요

본 발명자는 IL-21의 활성이 66 내지 98 영역에서의 아미노산이 결실 및/또는 치환되었을 때 유지되거나 심지어는 개선됨을 놀랍게도 발견하였다. 본 발명의 명세서에서, 아미노산 번호는 성숙한 133개 아미노산 펩타이드(프로펩타이드인 SEQ ID No:1의 아미노산 번호 30 내지 아미노산 번호 162)에 관해 매겨진 것이다. 이 서열은 추가적으로 N 말단에 메싸이오닌을 포함하여 134개 아미노산 펩타이드를 만드는 SEQ ID No: 11로 소개된다. SEQ ID No:2는 프로펩타이드인 SEQ ID No:1의 아미노산 번호 30 내지 아미노산 번호 162로서, 추가적인 N 말단 메싸이오닌이 없어서 133개 아미노산 펩타이드를 만드는 것을 말한다. 따라서, 일 양태에서, 본 발명은

a) SEQ ID No:2의 아미노산 번호 65 내지 아미노산 번호 96으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 제 1 서열; 또는

b) 상기 제 1 서열에서 10개까지의 아미노산의 보존적 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서 본 발명은 치료시 본 발명의 펩타이드의 용도를 제공한다.

일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 치료 방법을 제공하는데, 본 방법은 본 발명의 펩타이드의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 약제의 제조시 본 발명의 펩타이드의 용도에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 암호화하는 핵산 구조체에 관한 것이고; 또한 상기 구조체를 포함하는 벡터에 관한 것이며; 또한 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드에 대한 특이적인 항체에 관한 것이다.

도 1은 IL-21 변이체의 Baf3/hIL-21R/Stat-Luc 분석 결과이다.

기술한 IL-21 구조체로 형질감염된 HEK293-FS 세포로부터의 상층액을 BAf3-hIL-21R/Stat-Luc 리포터 분석방법으로 분석하였다. 단백질 함량은 ELISA로 측정하였다.

■는 야생형 IL-21이고, ▲---는 IL-21 결실 돌연변이체 [A83-R86] (SEQ ID No:　3)이며; △는 IL-21는 서열[K77 - T92]이 치환된 변이체이다(SEQ ID No:　7).

도 2는 hIL-WT 및 ChimIL-21/4dp 대한 투여량-반응 그래프이다.

정제한 단백질을 Baf3/hIL-21Ra 세포를 사용하여 리포터 분석방법으로 분석하였다. 그래프는 총3회 실시된 개별적인 실험결과(n=4)에서의 합을 나타낸다. 활성은 최대 반응의 %로서 표현된다. 수득된 EC50값 ± S.E.M.을 나타내었다. Chim-IL21은 IL-21 sub[K77 - T92]이다.

정의

본 명세서에서 단수형으로 표현되었더라도 이는 단수 또는 복수의 개체를 나타낸다.

본 명세서에서, "펩타이드"라는 용어는 펩타이드 결합에 의해 결합된 2개 이상의 아미노산을 나타낸다. 상기 아미노산은 코드로 표현될 수 있거나 그렇지 않을 수 있으며, 이 용어는 또한 펩타이드내 하나 이상의 아미노산이 화학적으로 치환된, 예컨대 PEG 및 친지질성 작용기에 의해 치환된 펩타이드 유도체도 포함한다. "펩타이드" 및 "폴리펩타이드"라는 용어는 호환되어 사용하며 동일한 것을 지칭하는 것이다.

본 명세서에서 "약학적으로 수용가능한 염"이라는 용어는 환자에게 해롭지 않은 염을 가리키는 것이다. 이러한 염은 약학적으로 수용가능한 산 첨가 염, 약학적으로 수용가능한 금속 염, 암모늄염 및 알킬화된 암모늄 염을 포함한다. 산첨가 염은 무기산 및 유기산의 염을 포함한다. 대표적인 적당한 무기산 염의 예는 하이드로클로로산, 하이드로브로모산, 하이드로아이오드산, 포스포르산, 설퓨르산, 니트르산 등을 포함한다. 대표적인 적당한 유기산 염의 예는 폼산, 아세트산, 트리클 로로아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 벤조산, 시남산, 시트르산, 퓨마르산, 글리콜산, 락트산, 말레산, 말산, 말론산, 만델산, 옥살산, 피크르산, 피루브산, 살리실산, 석신산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 타타르산, 아스코브산, 파모산, 비스메틸렌 살리실산, 에탄다이설폰산, 글루콘산, 시트라콘산, 아스파트산(aspartic acid), 스테아르산, 팔미트산, EDTA, 글리콜산, p-아미노벤조산, 글루탐산(glutamic acid), 벤조설폰산, p-톨루엔설폰산 등을 포함한다. 약학적으로 수용가능한 무기산 또는 유기산 첨가 염의 추가적인 예는 본원에 참조로서 인용되는 J. Pham. Sci. 1977, 66, 2에 제시된 약학적으로 수용가능한 염을 포함한다. 금속염의 예는 리튬, 소듐, 포타슘, 마그네슘염 등을 포함한다. 암모늄 및 알킬화된 암모늄 염의 예는 암모늄, 메틸암모늄, 다이메틸암모늄, 트라이메틸암모늄, 에틸암모늄, 하이드록시에틸암모늄, 다이에틸암모늄, 부틸암모늄, 테트라메틸암모늄 염 등을 포함한다.

본원에서 사용된 펩타이드의 "치료 유효량"이라는 용어는 해당 질병 및 이의 합병증의 임상적 증상을 치료, 완화 또는 부분적으로 억제하기에 충분한 양을 의미한다. 이를 달성하기에 적당한 양은 "치료 유효량"이라고 정의한다. 각각의 목적을 위한 치료 유효량은 질병이나 상처의 유형이나 심각도, 그리고 개체의 체중이나 일반적인 상태 등에 따라 결정될 것이다. 적당한 투여량을 결정하는 것은, 수치 매트릭스를 제조하고, 매트릭스내 상이한 지점을 시험하는 통상적인 실험 방법에 의해 달성될 것으로 이해되고, 이러한 것은 훈련된 의사 또는 약사 등 당업자에게 는 자명한 것이다.

본원에서 사용된 "치료" 및 "치료하는"이라는 용어는 질병이나 질환과 같은 증세를 퇴치할 목적으로 환자를 관리하고 돌보는 것을 가리키는 용어이다. 이 용어는 증세를 보이는 환자로부터 소정의 증세를 치료하기 위한 넓은 영역의 치료를 모두 포함하는 것을 의미하고, 여기에는 징후나 합병증을 완화하기 위해, 질병, 질환 또는 증세의 진행을 지연시키기 위해, 징후 및 합병증을 완화하기 위해, 그리고/또는 질병, 질환 또는 증세를 제거하는 것 뿐 아니라 증세를 예방하기 위해 활성 화합물을 투여하는 것이 있고, 상기 표현 중 예방이란, 질병, 증세 또는 질환을 퇴치할 목적으로 환자를 관리하고 돌보는 것으로 이해되고, 또한 징후나 합병증이 시작되는 것을 예방하기 위해 활성 펩타이드를 투여하는 것을 포함한다. 치료받아야 할 환자는 바람직하게는 포유류, 구체적으로는 인간이지만, 개, 고양이, 소, 양 및 돼지와 같은 동물도 포함될 수 있다. 치료 및 예방 방법도 본 발명의 다른 측면을 나타내는 것으로 이해하여야 한다.

일 양태에서, 본 발명은

a) SEQ ID No:2의 아미노산 번호 65 내지 아미노산 번호 96으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 제 1 서열; 또는

b) 제 1 서열에서 10개까지의 아미노산의 보존적 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다. 구체적으로, 상기 제 1 서열 중에서 적어도 2개, 예컨대 적어도 3개, 예컨대 적어도 4개, 예컨대 적어도 5개, 예컨대 적어도 6개의 아미노산이 결실 및/또는 치환되어 있다.

본 발명은 또한 하기에 기술되는 본 발명의 펩타이드의 더욱 구체적인 양태에서 보존적인 치환에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

구체적으로, 10개 이하, 예컨대 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 보존적으로 치환될 수 있다. 본 발명의 명세서에서, 하나의 아미노산 잔기가 동일 군에 속하는 다른 아미노산 잔기 또는 같은 작용기로 치환되었을 때, 즉 유사한 특징을 갖는 다른 아미노산 잔기로 치환되었을 때 보존적이라고 말한다. 아미노산은 그들의 특징에 근거하여 하기의 군으로 편의를 위해 나눌 수 있다: 염기성 아미노산(예컨대 아르지닌(arginine) 및 라이신(lysine)); 산성 아미노산(예컨대 글루탐산 및 아스파트산); 극성 아미노산(예컨대 글루타민(glutamine), 히스티딘(histidine), 메싸이오닌 및 아스파라진(asparagine)), 지방족 또는 소수성 아미노산(예컨대 알라닌(alanine), 루신(leucine), 아이소루신(isoleucine), 발린(valine)), 방향족 아미노산(예컨대 페닐알라닌(phenilalanine), 트립토판(tryptophan), 타이로신(tyrosine)) 및 소형 아미노산(예컨대 글리신(glycine), 알라닌, 세린(serine), 및 트레오닌(threonine)).

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 86으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 88으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 90으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 82 내지 아미노산 번호 88으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 71 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 65 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 96으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 86으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 88으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 90으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 82 내지 아미노산 번호 88으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 둘 이상의 아미노산 치환 및 결실에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 71 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 둘 이상의 아미노산 치환 및 결실에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 65 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 둘 이상의 아미노산 치환 및 결실에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 96으로 구성된 영역내 둘 이상의 아미노산 치환 및 결실에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 86으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 88으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 90으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 82 내지 아미노산 번호 88으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 71 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 65 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 96으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 86으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 88으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 90으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 82 내지 아미노산 번호 88으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 둘 이상의 아미노산 치환 및 결실에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:2의 아미노산 번호 71 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 둘 이상의 아미노산 치환 및 결실에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 65 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 둘 이상의 아미노산 치환 및 결실에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 96으로 구성된 영역내 둘 이상의 아미노산 치환 및 결실에 의해 수득된 펩타이드에 관한 것이다.

상기 언급한 바와 같이, IL-21은 161개 아미노산 펩타이드로 표현되지만, 아미노산 번호 1 내지 아미노산 번호 29 또는 아미노산 번호 1 내지 아미노산 번호 31을 제거함으로써, 해독후 가공된다. 따라서 본 발명은 또한 아미노산 번호 65 내지 아미노산 번호 96으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 제거 및/또는 결실에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하는데, 여기에서 N 말단은 SEQ ID No:　1로부터의 N 말단 29개 아미노산에 의해 또는 SEQ ID No:　1로부터의 N 말단 31개 아미노산에 의해 연장된다.

펩타이드가 CHO 세포와 같은 포유류 세포내에서 발현되면, N 말단의 시그널 펩타이드는 성숙한 단백질을 만드는 소위 시그널 펩티다아제에 의해 보통 제거된다. E. coli와 같은 원핵 세포에서 동일한 이종(heterologous) 펩타이드를 발현하기 위해서는, 재조합 기술 등과 같이 당업계에 공지된 기술을 통해 성숙한 펩타이드의 서열에 추가적인 N 말단 메싸이오닌을 도입해야 하는 것이 보통 요구된다는 것을 당업자는 잘 알고 있다. 본 발명은 이에 따라 상기에 언급된 N 말단 메싸이오닌이 있거나 없는 펩타이드를 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은

A) SEQ ID No:3(A83-R86 결실), SEQ ID No:4(A83-K88 결실), SEQ ID No:5(A83-R90 결실) 및 SEQ ID No:6(N82-K88 결실); 및

B) 추가로 N-말단 메싸이오닌을 가지는 A)의 펩타이드; 및

C) 10개까지의 아미노산이 보존적으로 치환된 A)-B)의 펩타이드 중에서 선택된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은

D) SEQ ID No:7(K77-T92 결실), SEQ ID No:8(I71-T92 치환), SEQ ID No:9(R65-T92 치환) 및 SEQ ID No:10(K77-C96 치환); 및

E) 추가로 N-말단 메싸이오닌을 가지는 D)의 펩타이드; 및

F) 10개까지의 아미노산이 보존적으로 치환된 D)-E)의 펩타이드 중에서 선택된 펩타이드에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 상기 언급한 펩타이드의 약학적으로 수용가능한 염에 관한 것이다.

본 발명의 펩타이드는 원형질에서의 순환 시간 및/또는 생물학적 반감기를 연장하는데 효과적이거나, 임의의 면역성을 감소시키는 데 효과적인 작용기를 부착시킴으로써 추가로 유도체화할 수 있다. 이러한 효과는 특정한 작용기, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜(PEG); 친지질성 작용기, 예컨대 지방산; 원형질 단백질, 예컨대 알부민; 또는 알부민 결합 잔기와 같은 작용기를 부착시킴으로써 수득할 수 있는 것으로 당업계에 공지되어 있다. 예를 들면, WO 01/79271, US 5,739,208, 및 WO 03/44056 문헌을 참조하면 된다.

본원에 사용된 "핵산 구조체"라는 용어는 cDNA, 게놈 DNA, 합성 DNA 또는 RNA 기원의 임의의 핵산 분자를 가리키는 것이다. "구조체"라는 용어는 핵산 절편을 가리키는 것으로서, 싱글 스트랜드 또는 더블 스트랜드일 수 있고, 해당 단백질을 암호화하는 완전히 또는 부분적으로 천연 발생한 뉴클레오타이드 서열에 기초할 수 있다. 구조체는 임의로는 다른 핵산 절편을 함유할 수 있다.

본 발명의 단백질을 암호화하는 본 발명의 핵산 구조체는 적당하게는 게놈 DNA 또는 cDNA 기원의 것일 수 있는데, 예를 들면 게놈 DNA 또는 cDNA 라이브러리를 제조하는 단계와, 표준 기술(참고: Sambrook et al의 상기 문헌)에 따라 합성 올리고뉴클레오타이드 탐침을 사용하여 하이브리드화함으로써 단백질의 전부 또는 일부를 암호화하는 DNA 서열을 스크리닝하는 단계에 의해 수득된다. 본 목적을 위해, 단백질을 암호화하는 DNA 서열은 바람직하게는 인간 기원의 것인데, 즉 인간 게놈 DNA 또는 cDNA 라이브러리로부터 유래한 것이다. 특히, DNA 서열은 인간 기원일 수 있는데, 예를 들면, 특정 인간 장기 또는 세포 유형으로부터의 cDNA 또는 인간 게놈 DNA로부터 유래한 유전자일 수 있다.

펩타이드를 암호화하는 본 발명의 핵산 구조체는 기정립된 표준 방법에 따라 합성하여 제조할 수 있는데, 이러한 방법에는 Beaucage and Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859 - 1869에 기재된 포스포아미다이트(phosphoamidite) 방법, 또는, Matthes et al., EMBO Journal 3 (1984), 801 - 805에 기재된 방법이 있다. 포스포아미다이트 방법에 따르면, 올리고뉴클레오타이드를 예를 들면 자동 DNA 합성기에서 합성한 후, 정제하고, 어닐링하며, 연결한 뒤, 적당한 벡터에서 클로닝한다.

뿐만 아니라, 핵산 구조체는 표준 기술에 따라, 합성 DNA, 게놈 DNA, 또는 cDNA 기원(적당한 것)의 단편을 연결함으로써 제조된, 합성 DNA 및 게놈 DNA의 혼합 형태, 합성 DNA 및 cDNA의 혼합 형태, 게놈 DNA 및 cDNA 기원의 혼합 형태일 수 있는데, 상기의 단편은 전체 핵산 구조체의 여러 부분에 상응하는 것이다.

핵산 구조체는 특정 프라이머를 사용하여, 예를 들면, US 4,683,202 또는 Saiki et al., Science 239 (1988), 487 - 491에 기술된 바에 따라 중합효소연쇄반응에 의해 제조할 수 있다.

핵산 구조체는 바람직하게는 DNA 구조체이며, 이 용어는 하기에서만 정의하여 사용되는 것이다.

재조합 벡터

추가적 측면에서, 본 발명은 본 발명의 DNA 구조체를 포함하는 재조합 벡터에 관한 것이다. 본 발명의 DNA 구조체가 삽입되는 재조합 벡터는 재조합 DNA 절차에 편리하게 투입될 수 있는 임의의 벡터일 수 있고, 벡터의 선택은 도입될 숙주 세포에 따라 결정될 것이다. 따라서, 벡터는 자가복제 벡터, 즉, 염색체외 물질로서 존재하는 벡터일 수 있고, 이것의 복제는 염색체와 독립적으로 발생하며, 예를 들면 플라스미드이다. 그렇지 않으면, 벡터는 숙주 세포에 도입될 때 숙주 세포 게놈에 일체화되어 삽입된 염색체(들)과 함께 복제되는 것일 수 있다.

벡터는 바람직하게는 본 발명의 단백질을 암호화하는 DNA 서열이 DNA의 전사를 위해 요구되는 추가의 절편에 작동가능하게 연결되어 있는 발현 벡터이다. 일반적으로는, 발현 벡터는 플라스미드 또는 바이러스 DNA로부터 유래한 것이고, 이들 두 성분을 모두 함유할 수도 있다. "작동가능하게 연결된"이라는 용어는 희망하는 목적에 맞게 기능할 수 있도록 절편이 배열되어 있는 것을 가리키는데, 예를 들면, 전사가 프로모터에서 시작되어, 단백질을 암호화하는 DNA 서열 방향 쪽으로 진행되는 것을 가리킨다.

프로모터는 선택한 숙주 세포내에서 전사 활성을 보이는 임의의 DNA 서열일 수 있고, 숙주 세포와 상동성이거나 이종인 단백질을 암호화하는 유전자로부터 유래할 수 있다.

본 발명의 단백질을 암호화하는 DNA의 전사를 지휘하는데 적당한, 포유류 세포에서의 프로모터의 예는 SV40 프로모터(Subramani et al., Mol . Cell Biol . 1 (1981), 854　-864), MT-1(메탈로티오네인 유전자) 프로모터(Palmiter et al., Science 222 (1983), 809 - 814) 또는 아데노바이러스 2 메이저 레이트 프로모터이다.

곤충 세포에서 사용하기에 적합한 프로모터의 예는 폴리헤드린 프로모터(US 4,745,051; Vasuvedan et al., FEBS Lett . 311, (1992) 7 - 11), P10 프로모터(J.M. Vlak et al., J. Gen . Virology 69, 1988, pp. 765-776), Autographa californica 폴리헤드로시스 바이러스 염기성 단백질 프로모터(EP 397 485), 및 배큘로바이러스 이미데이트 얼리 진 1 프로모터(US 5,155,037; US 5,162,222), 또는 배큘로바이러스 39k 딜레이드-얼리 진 프로모터(US 5,155,037; US 5,162,222)이다.

효모 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 프로모터의 예는 효모 해당(glycolytic) 유전자((Hitzeman et al., J. Biol . Chem . 255 (1980), 12073 - 12080; Alber and Kawasaki, J. Mol . Appl . Gen . 1 (1982), 419 - 434)); 알콜 디하이드로게나아제 유전자(Young et al., in Genetic Engineering of Microorganisms for Chemicals (Hollaen-der et al, eds.), Plenum Press, New York, 1982)의 프로모터; 또는 TPI1(US 4,599,311) 또는 ADH2 -4c (Russell et al., Nature 304 (1983), 652 - 654) 프로모터를 포함한다.

섬유성 균류 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 프로모터의 예는 예를 들면ADH3 프로모터 (McKnight et al., The EMBO J. 4 (1985), 2093 - 2099) 또는 tpiA 프로모터이다. 다른 유용한 프로모터의 예는 A. oryzae TAKA 아밀라아제, Rhizo -mucor miehei 아스파틱 프로테나아제, A. niger 중성 알파-아밀라아제, A. niger 산성 안정 알파-아밀라아제, A. niger 또는 A. awamori 글루코아밀라아제 (gluA), Rhizo-mucor miehei 리파아제, A. oryzae 알칼리 프로테아제, A. oryzae 트로아즈 포스페이트 아이소머라아제 또는 A. nidulans 아세트아미다아제를 암호화하는 유전자로부터 유래한 것들이다. 바람직한 것은 TAKA-아밀라아제 및 gluA 프로모터이다.

박테리아 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 프로모터의 예는 Bacillus stearothermophilus 말토제닉 아밀라아제 유전자, Bacillus licheniformis 알파-아밀라아제 유전자, Bacillus amyloliquefaciens BAN 아밀라아제 유전자, Bacillus subtilis 알칼리성 프로테아제 유전자, 또는 Bacillus pumilus 자일로시다아제 유전자의 프로모터, 또는 람파 파지 P_R 또는 P_L 프로모터 또는 E. coli lac, trp 또는 tac 프로모터를 포함한다.

본 발명의 단백질을 암호화하는 DNA 서열은 또한 필요하다면 적당한 터미테이터, 예컨대 인간 성장 호르몬 터미네이터(Palmiter et al., op . cit .) 또는 (균류 숙주에 대해서는) TPI1 (Alber and Kawasaki, op . cit .) 또는 ADH3 (McKnight et al., op . cit .) 터미네이터와 같은 적당한 터미네이터에 작동가능하게 연결될 수 있다. 벡터는 폴리아데닐화 시그널(예를 들면, SV40 또는 아데노바이러스 5 Elb 영역으로부터의 시그널), 전사 인핸서 서열(SV40 인핸서) 및 해독 인핸서 서열(예를 들면, 아데노바이러스 VA RNA를 암호화하는 것)과 같은 요소를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 재조합 벡터는, 벡터가 해당 숙주 세포내에서 복제할 수 있도록 하는 DNA 서열을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 서열의 예(숙주 세포가 포유류 세포인 경우)는 SV40 복제 원점이다.

숙주 세포가 효모 세포인 경우, 벡터가 복제할 수 있도록 하는 적당한 서열은 효모 플라스미드 2μ 복제 유전자 REP1-3 및 복제 원점이다.

숙주 세포가 박테리아 세포인 경우, 벡터가 복제할 수 있도록 하는 서열은 DNA 폴리머라아제 III 암호화 유전자 복합체 및 복제 원점이다.

벡터는 선별 마커도 포함할 수 있는데, 예를 들면, 숙주 세포의 결함을 보상하는 산물의 유전자를 포함할 수 있고, 이러한 예로는 디하이드로폴레이트 리덕타아제(DHFR)를 암호화하는 유전자 또는 Schizosaccharomyces pombe TPI 유전자 (P.R. Russell, Gene 40, 1985, pp. 125-130에 기재된 것), 약물에 대한 내성을 부여하는 것, 예를 들면 앰피실린, 카나마이신, 테트라사이클린, 클로람페놀, 네오마이신, 하이그로마이신 또는 메토트레제이트에 대한 내성을 부여하는 것이 포함된다. 섬유성 균류에 대해서 선별 마커로는 amdS, pyrG, argB, niaD 및 sC을 포함한다.

본 발명의 단백질을 숙주 세포에서 분비되는 경로로 들어가게 하기 위해서는, 분비 시그널 서열(이는 또한 리더(leader) 서열, 프리프로(prepro) 서열 또는 프리(pre) 서열로도 알려져 있다)이 재조합 벡터내에 제공될 수 있다. 분비 시그널 서열은 정확한 리딩 프레임내에서 단백질을 암호화하는 DNA 서열과 조합된다. 분비 시그널 서열은 보통은 단백질을 암호화하는 DNA 서열의 5'에 위치한다. 분비 시그널 서열은 보통은 단백질과 관련된 것일 수 있거나, 다른 분비된 단백질을 암호화하는 유전자로부터 유래할 수 있다.

효모 세포에서 분비를 위해서, 분비 시그널 서열은 발현된 단백질이 세포의 분비 경로로 효율적으로 들어가게 할 임의의 시그널 펩타이드를 암호화할 수 있다. 시그널 펩타이드는 천연 발생 시그널 펩타이드, 또는 이의 기능적인 부분, 또는 합성 펩타이드일 수 있다. 적당한 시그널 펩타이드는 α-팩터 시그널 펩타이드(참조: US 4,870,008), 마우스 타액 아밀라아제의 시그널 펩타이드(참조: O. Hagenbuchle et al., Nature 289, 1981, pp. 643-646), 변형된 카복시펩티다아제 시그널 펩타이드(참조: L.A. Valls et al., Cell 48, 1987, pp. 887-897), 효모 BAR1 시그널 펩타이드(참조: WO 87/02670), 또는 효모 아스파틱 프로테아제3(YAP3) 시그널 펩타이드(참조: M. Egel-Mitani et al., Yeast 6, 1990, pp. 127-137) 중에서 찾을 수 있다.

효모에서 효율적인 분비를 위해서, 리더 펩타이더를 암호화하는 서열은 시그널 서열의 다운스트림 및 단백질을 암호화하는 DNA 서열의 업스트림에 삽입될 수 있다. 리더 펩타이드의 기능은 발현된 단백질이 소포체로부터 골지체로 이동할 수 있도록 하고, 추가로는 배양 배지로 분비 베지클을 분비되도록 하는 것이다(즉, 단백질을 세포벽 바깥으로 수송하고, 적어도 효모 세포의 원형질 바깥으로 세포막을 통해 이동시키는 것이다). 리더 펩타이드는 효모 α-팩터 리더일 수 있다(이의 사용은 예를 들면, US 4,546,082, EP 16 201, EP 123 294, EP 123 544 및 EP 163 529에 기재되어 있다). 대안적으로는, 리더 펩타이드는 합성 리더 펩타이드일 수 있는데, 말하자면 리더 펩타이드가 자연에서는 발견되지 않는다는 의미이다. 합성 리더 펩타이드는 WO 89/02463 또는 WO 92/11378에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.

섬유성 균류에서의 사용을 위해서, 시그널 펩타이드는 편리하게는 Aspergillus sp. 아밀라아제 또는 글루코아밀라아제를 암호화하는 유전자, Rhizomucor miehei 리파아제 또는 프로테아제를 암호화하는 유전자, 또는 Humicola lanuginosa 리파아제를 암호화하는 유전자로부터 유래할 수 있다. 시그널 펩타이드는 바람직하게는 A. oryzae TAKA 아밀라아제, A. niger 중성 α-아밀라아제, A. niger 산 안정성 아밀라아제, 또는 A. niger 글루코아밀라아제를 암호화하는 유전자로부터 유래한다.

곤충 세포에서의 사용을 위해서, 시그널 펩타이드는 편리하게는 예컨대 인시목(lepidopteran) Manduca sexta 아디포카이네틱 호르몬 전구체 시그널 펩타이드(cf. US 5,023,328)와 같이, 곤충 유전자(참조: WO 90/05783)에서 유래할 수 있다.

본 발명의 단백질을 암호화하는 서열, 프로모터 및 임의로는 터미네이터 및/또는 분비 시그널 서열을 각각 연결하고, 복제하는데 필요한 정보를 함유하는 적당한 벡터로 이들을 삽입하는데 사용되는 절차는 당업자에게 익히 공지되어 있다(참조: 예를 들면, Sambrook et al., op . cit .).

숙주 세포

본 발명의 DNA 구조체 또는 재조합 벡터가 도입되는 숙주 세포는 본 발명의 단백질을 생산할 수 있는 임의의 세포로서, 박테리아, 효모, 균류, 및 고등 진핵 세포를 포함하는 세포일 수 있다.

배양시 본 발명의 단백질을 생산할 수 있는 박테리아 숙주 세포의 예는 그람양성 박테리아, 예컨대, 바실러스(Bacillus ) 주, 예를 들자면 B. subtilis , B. licheniformis, B. lentus , B. brevis , B. stearothermophilus , B. alkalophilus , B. amyloliquefaciens , B. coagulans , B. circulans , B. lautus, B. megatherium 또는 B. thuringiensis, 또는 스트렙토마이세스(Streptomyces ) 주, 예컨대 S. lividans 또는 S. murinus, 또는 그람음성 박테리아, 예컨대 Echerichia coli가 있다. 박테리아의 형질전환은 당업계에 공지된 방식으로 프로토플라스트(protoplast) 형질전환에 의해 이루어질 수 있거나, 컴피턴트(competent) 세포를 사용하여 이루어질 수 있다(참조: 상기의 Sambrook et al.)

E. coli와 같은 박테리아에서 단백질을 발현하는 경우, 단백질은 전형적으로는 불용성 입자(봉입체(inclusion body)로서 공지되어 있다)로서 원형질내에 존재할 수 있거나, 박테리아 분비 서열에 의해 원형질주위 공간으로 바로 향할 수도 있다. 전자의 경우, 세포를 분해하여 입자를 회수하며 변성제에 의해 희석됨으로써 리폴딩(refolding)된 후에는 단백질이 변성된다. 후자의 경우에는 예를 들면, 음파처리 또는 삼투압 충격에 의해 세포를 파괴하여 원형질주위 공간의 내용물을 방출시킨 후 단백질을 회수함으로써, 원형질주위 공간으로부터 회수할 수 있다.

적당한 포유류 세포주의 예는 COS (ATCC CRL 1650), BHK (ATCC CRL 1632, ATCC CCL 10), CHL (ATCC CCL39) 또는 CHO (ATCC CCL 61) 세포주가 있다. 포유류 세포주를 형질감염하고 세포내에 도입된 DNA 서열을 발현하는 방법은 예를 들면, 하기의 문헌에 기술되어 있다: Kaufman and Sharp, J. Mol . Biol . 159 (1982), 601 - 621; Southern and Berg, J. Mol . Appl . Genet . 1 (1982), 327 - 341; Loyter et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 79 (1982), 422 - 426; Wigler et al., Cell 14 (1978), 725; Corsaro and Pearson, Somatic Cell Genetics 7 (1981), 603, Graham and van der Eb, Virology 52 (1973), 456; 및 Neumann et al., EMBO J. 1 (1982), 841 - 845.

적당한 효모 세포의 예에는 Saccharomyces spp. 또는 Schizosaccharomyces spp.의 세포, 특히 Saccharomyces cerevisiae 또는 Saccharomyces kluyveri의 세포주가 포함된다. 효모 세포를 이종 DNA로 형질전환하고 그러한 이종 단백질을 생산하는 방법은 예를 들면, US 4,599,311, US 4,931,373, US 4,870,008, 5,037,743, 및 US 4,845,075에 기술되어 있고, 상기의 문헌은 본원에 참조로서 인용된다. 형질전환된 세포는 선별 마커를 통해 결정된 표현형에 의해 선택되는데, 보통은 약물 내성이나, 특정 영양성분, 예컨대 루신의 부재속에서 성장할 수 있는 능력이 선별 마커이다. 효모에서 사용하기에 바람직한 벡터는 미국 특허 4,931,373호에 기재된 POT1 벡터이다. 본 발명의 단백질을 암호화하는 DNA 서열은 예를 들면, 상기 기술한 바와 같은 시그널 서열 및 임의로는 리더 서열을 함유할 수 있다. 적당한 효모 세포의 다른 예는 Kluyveromyces 스트레인, 예컨대 K. lactis, Hansenula, 예를 들어 H. polymorpha, 또는 Pichia, 예를 들어 P. pastoris (참조: Gleeson et al., J. Gen . Microbiol . 132, 1986, pp. 3459-3465; 미국 특허 제4,882,279호)가 있다.

기타 균류 세포의 예에는 섬유형 균류, 예컨대 Aspergillus spp., Neurospora spp., Fusarium spp. 또는 Trichoderma spp., 특히 스트레인 A. oryzae, A. nidulans 또는 A. niger가 있다. 단백질을 발현시키기 위해 Aspergillus spp.를 사용하는 것은 예를 들면, EP 272 277 및 EP 230 023에 기재되어 있다. F. oxysporum 의 형질 전환은 예를 들면 하기 문헌에 기재된 바와 같이 수행할 수 있다: Malardier et al., 1989, Gene 78: 147-156.

섬유형 균류가 숙주 세포로 사용된 경우, 본 발명의 DNA 구조체로 형질전환할 수 있는데, 편리하게는 숙주 염색체내에 DNA 구조체를 일체화함으로써 재조합 숙주 세포를 얻을 수 있다. 이러한 일체화는 일반적으로는 유리한 것으로 생각되는데, 왜냐하면 DNA 서열이 세포내에서 훨씬 안정적으로 유지될 수 있기 때문이다. DNA 구조체를 숙주 염색체에 일체화하는 것은 통상의 방법, 예컨대 상동 또는 이종 재조합 방법에 따라 수행할 수 있다.

곤충 세포의 형질전환 및 그 안의 이종 단백질의 생산은 본원에 모두 참조로서 인용되는 하기 문헌에 기술된 바와 같이 수행할 수 있다: US 4,745,051; US 4,879,236; US 5,155,037; 5,162,222; EP 397,485. 숙주로서 사용된 곤충 세포주는 적당하게는 인시목(Lepidoptera ) 세포주, 예컨대 Spodoptera frugiperda 세포 또는 Trichoplusia ni 세포 (참조: US 5,077,214)이다. 배양 조건은 적당하게는 예를 들면, WO 89/01029 또는 WO 89/01028, 또는 전술한 참조문헌 중에 기술된 바와 같을 수 있다.

이어서, 상기에 기술된 형질전환된 또는 형질감염된 숙주 세포를 그 단백질의 발현을 허용하는 조건 하에 적당한 영양 배지에서 배양한 다음에, 생성된 단백질을 배양 배지로부터 회수한다.

세포를 배양하는데 사용된 배지는 숙주 세포를 생장시키기에 적당한 통상적인 임의의 배지일 수 있는데, 예컨대 제한 배지 또는 적당한 보충제를 함유하는 복합형 배지일 수 있다. 적당한 배지는 시중의 공급업자로부터 구입할 수 있거나, 아니면 공개된(예를 들면, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)의 카탈로그에 공개된) 제조방법에 따라 제조할 수도 있다. 통상의 절차에 따라, 세포에 의해 생성된 단백질을 배양 배지로부터 회수할 수 있는데, 이 통상의 절차에는 원심분리 및 여과함으로써 배지에서 숙주 세포를 분리하는 단계, 상층액 또는 여과물의 단백질성 성분을 염, 예컨대 암모늄 설페이트를 사용하여 침전시키는 단계, 해당 단백질 유형에 따라 각종 크로마토그래피 절차, 예컨대 이온 교환 크로마토그래피, 겔여과 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피 등에 의해 정제하는 단계가 포함된다.

본 발명의 펩타이드는 본 발명의 펩타이드에 특이적으로 결합하는 항체를 만드는데 사용할 수 있다. 본 명세서에서, "항체"에는 모노클로날 및 폴리클로날 항체, 그리고 이들의 항원 결합성 단편, 예컨대, F(ab')₂ 및 Fab 단편, 유전자 조작된 항체 및 인체에 적응시킨 항체가 포함된다. 항체는 10⁷ M^{- 1}와 같거나 이보다 큰 k_a로 본 발명의 펩타이드와 결합하면 특이적이라고 말한다. 항체의 제조 방법은 예를 들면 하기에 기술되어 있다: Hurrell J.G.R. (Ed.) Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications, CRC Press, Boca Raton, Florida, 1982 및 Sambrok, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour, New York, 1989.

IL-21은 바이러스성 질병, 예컨대 B형 간염 바이러스(hepatitis B Virus), C형 간염 바이러스(Hepatitis C virus), 인간 면역 결핍 바이러스(Human Immunodeficiency Virus), 호흡기 세포융합 바이러스(Respiratory Syncytial Virus), 엡스타인-바 바이러스(Eppstein-Barr Virus), 인플루엔자 바이러스(Influenza Virus), 사이토메갈로바이러스(Cytomegalovirus), 헤르페스 바이러스(Herpes-Virus) 및 급성 악성 호흡기 증후군(Severe Acute Respiratory Syndrome), 그리고 알레르기성 질병, 예컨대 천식, 알레르기성 비염, 또는 알리지성 피부 질병; 그리고 기생충 질병, 예컨대 기생충 감염, 그리고 자가면역 질병, 예컨대 동종이식편 거부 및 당뇨병; 그리고 암의 치료에서 사용되어 왔다.

본 명세서에서, "암"이라는 것은 임의의 종양 질환이고, 예컨대 육종(sarcoma), 암종(carcinoma), 멜라닌종, 백혈병, 림프종과 같은 세포성 질환, 유방암, 머리암 및 목암, 난소암, 방광암, 폐암, 인두암, 후두암, 식도암, 위암, 소장암, 간암, 췌장암, 결장암, 여성 생식기 암, 남성 생식기 암, 전립선암, 신장암 및 중추신경계암을 포함하는 것이다. 특히, "암"이란 비전이성 및 전이성 종양 질환을 말하는 것인데, 예컨대 악성 멜라닌종, 비(non)악성 피부암, 신장세포 암종, 머리 및 목의 암, 내분비계의 암, 난소암, 작은세포허파암, 비(non)작은세포허파암, 유방암, 식도암, 상부 위창자암, 직장결장암, 간 및 담즙선 암, 췌장암, 전립선암, 방광암, 고환암, 자궁경부암, 자궁내막암, 뼈육종 및 연조직 육종, 중추신경계의 암, 림프종, 백혈병, 및 미지의 일차 오리진(origin)의 암이 있다.

본 발명의 더욱 구체적인 측면에서, "종양 질환(neoplastic disorder)", "암(cancer)" 또는 "종양 성장"이라는 용어는 세포 종양 및 고형 종양, 그리고 뼈 및 연조직 종양을 포함하는 모든 형태의 종양 세포 성장을 언급하는 것으로서 이해되어야 하는데, 여기에는 항문 조직, 담즙선, 방광, 혈구 세포, 뼈, 뼈(2차), 창자(결장 및 직장), 뇌, 뇌(2차), 유방, 유방(2차), 카시노이드, 자궁경부, 소아암, 눈, 식도, 머리 및 목, 카포시 육종, 신장, 후두, 백혈병(급성 림프모구성), 백혈병(급성 골수성), 백혈병(만성 림프구성), 백혈병(만성 골수성), 백혈병(기타), 간, 간(2차), 폐, 폐(2차), 림프절(2차), 림프종(호지킨스), 림프종(호지킨스 외), 멜라닌종, 메소테리오마, 골수종, 난소, 췌장, 음경, 전립선, 피부, 연조직 육종, 위, 정소, 갑상선, 알려지지 않은 1차 종양, 질, 음문, 자궁의 종양을 포함하는 양성 및 악성 종양이 포함된다.

연조직 종양에는 양성 신경집종 홑염색체(schwannoma Monosomy), 데스모이드 종양(Desmoid tumor), 지방모세포종(Lipo-blastoma), 지방종(Lipoma), 자궁 평활근종(Uterine leiomyoma), 투명세포 육종(clear cell sarcoma), 피부섬유육종(Dermatofibrosarcoma), 에빙 육종(Ewing sarcoma), 외골격점액연골육종(Extraskeletal myxoid chondrosarcoma), 점액지질육종(Liposarcoma myxoid), 지방육종(liposarcoma), 잘 분화된 꽈리횡문근육종(Alveolar rhabdomyosarcoma), 및 윤활막육종(Synovial sarcoma)이 포함된다.

뼈 종양에는 비뼈형성 섬유종(Nonossifying Fibroma), 유니카메랄 본 시스트(Unicameral bone cyst), 골내연골종(Enchondroma), 동맥류뼈낭종(Aneurysmal bone cyst), 골모세포종(Osteoblastoma), 연골모세포종(Chondroblastoma), 연골점액피부종(Chondromyxofibroma, 뼈형성섬유종(Ossifying fibroma) 및 사기질종(Adamantinoma), 거대세포종양(Giant cell tumor), 섬유형성이상(Fibrous dysplasia), 에빙 육종, 친에오신성 육아종(Eosinophilic Granuloma), 뼈육종(Osteosarcoma), 연골종(Chondroma), 연골육종(Chondrosarcoma), 악성 섬유 조직구종(Fibrous Histiocytoma), 및 전이성 암종(Metastatic Carcinoma)이 포함된다.

백혈병이란 골수에 의해 생산되는 백혈구에 암이 생긴 것을 말한다. 이에는 하기를 포함하나 이에 국한되는 것은 아닌 4가지 주요 유형의 백혈병이 포함된다: 급성 림프모구성(ALL), 급성 골수모구성(AML), 만성 림프구성(CLL) 및 만성 골수성(CML).

일 양태에서, 본 발명은 바이러스성 감염, 알레르기성 질병, 자가면역 질병 및 상기에 기술된 암의 치료 방법에 관한 것인데, 이 방법은 본 발명의 펩타이드의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 바이러스성 감염, 알레르기성 질병, 자가면역 질병 및 상기에 기술된 암의 약제의 제조에 있어, 본 발명의 펩타이드의 용도에 관한 것이다.

암 치료 방법은 종종 하나 이상의 치료제 또는 치료 양식을 포함한다는 사실은 당업계에 공지되어 있다. 일 양태에서, 이에 따라 본 발명은 암의 치료 방법을 제공하는데, 이 방법은 본 발명의 펩타이드의 유효량과 함께, 하기 I 내지 VI 중 하나 이상의 유효량을 배합하여 투여하는 것을 포함한다. 본 발명에서, "배합하여"라는 용어는 본 발명의 펩타이드가 하기의 I 내지 VI 중 하나 이상으로 (i) 처리하는 것에 앞서, (ii) 처리하는 것과 동시에 및/또는 (iii) 처리한 후에 투여되는 것을 말한다.

I. 암 세포 사멸 또는 바이러스 감염된 세포의 사멸을 유도하는 제제

a) 통상의 화학치료

b) 방사선 치료

c) 모노클로날 항체

d) 세포 주기 조절제/세포사멸 조절제

e) 성장 인자 및 신호 전달 조절제

f) 종양 혈관형성 억제제(혈관생성 억제제, 항혈관생성 약물)

g) 바이러스 표적화(종양 세포를 파괴하기 위해 재조합 바이러스를 사용)

h) 항바이러스제

i) 호르몬제

II . 종양 세포 또는 바이러스 감염된 세포에 대한 면역 반응을 향상시키는 제제

j) 면역계 활성제

k) 면역계 억제제(예를 들면, 면역 반응을 하향 조절하는 면역 신호를 억제하는 제제), 항아네르기제(anti-anergic agent) 포함

l) 치료용 백신

III . 종양 성장, 바이러스 감염된 세포의 전이 또는 퍼짐을 방해하는 제제

m) 인테그린(integrin), 즉 세포 부착 분자 조절제

n) 항전이제

o) 내피 세포 조절제

IV . 내부 예방접종

V. 응집 캐스케이드에 영향을 미치는 조직 인자 길항제 및 기타 인자

p) 항Xa 인자, 항IIa 인자 억제제, 항 피브리노겐 제제

q) 오당체 등

VI . 면역억제제 / 면역조절제

r) T-림프구 호밍(homing)에 영향을 미치는 제제, 예를 들면 FTY-720

s) 칼시뉴린(Calcineurin) 억제제

t) TOR 억제제

가능한 약물 배합의 일부에 대해 더욱 상세히 설명한 것을 하기에 제공한다.

I: 암 세포 사멸 및 바이러스 감염된 세포의 사멸을 유도하는 제제

a) 통상의 화학치료제:

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드 및 통상의 화학치료제를 투여함으로써 복합 치료를 수행한다. 화학치료제는 a) DNA 수준, 또는 b) RNA 수준에 영향을 미치는 것과 같은 상이한 활성화 방식을 가진다.

DNA 수준 또는 RNA 수준에 양향을 미치는 통상의 화학치료제의 예로는 항대사제(예컨대 아자티오프린(Azathioprine), 사이타라빈(Cytarabine), 플루다라빈 포스페이트(Fludarabine phosphate), 플루다라빈(Fludarabine), 겜시타빈(Gemcitabine), 사이타라빈(cytarabine), 클라드라빈(Cladribine), 카페시타빈 6-머캅토퓨린(Capecitabine 6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 메토트레제이트(methotrexate), 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 및 하이드록시우레아(hydroxyurea)), 알킬화제(예컨대, 멜파란(Melphalan), 부술판(Busulfan), 시스플라틴(Cisplatin), 카보플라틴(Carboplatin), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 이포스파미드(Ifosphamide), 다카바진(Dacarbazine), 프로카바진(procarbazine), 클로람부실(Chlorambucil), 티오테파(Thiotepa), 로무스틴(Lomustine), 테모졸라마이드(Temozolamide)), 항세포분열제(예컨대 비노렐빈(Vinorelbine), 빈크리스틴(Vincristine), 빈블라스틴(Vinblastine), 도세탁셀(Docetaxel), 파크리탁셀(Paclitaxel)), 토포아이소머라아제 억제제((예컨대 독소루비신(Doxorubicin), 암사크린(Amsacrin), 이리노테칸(Irinotecan), 다우노루비신(Daunorubicin), 에피루비신(Epirubicin), 마이토마이신(Mitomycin), 마이토잔트론(Mitoxantrone), 이다루비신(Idarubicin), 테니포사이드(Teniposide), 에토포사이드(Etoposide), 토포테칸(Topotecan)), 항체(예컨대 액티노마이신(actinomycin) 및 블레오마이신(bleomycin)) 아스파라기나아제, 또는 안트라사이클린(anthracycline) 또는 탁산(taxane)이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드와 다카바진(DTIC)을 투여함으로써 복합 치료를 수행한다.

b) 방사선 치료:

어떤 종류의 종양은 방사선이나 방사선약물로 치료할 수 있다. 방사선의 기원은 치료받아야 할 환자 외부 또는 내부에서 유래할 수 있다. 기원이 환자 외부에서 유래한 경우, 치료는 소위 외부 방사선 치료(EBRT)로 알려져 있다. 방사선이 환자 내부에서 유래한 경우 치료는 소위 브라키테라피(Brachtherapy, BT)라고 부른다. 사용되어온 전형적인 방사선활성 원자에는 라듐, 세슘-137, 이리듐-192, 아메리큠-241, 금-198, 코발트-57, 구리-67, 테크네튬-99, 아이오다이드-123, 아이오다이드-131 및 인듐-111이 포함된다.

방사선 치료는 절제불가능하거나 수술불가능한 종양 및/또는 종양 전이를 제어하기 위한 표준 치료법이다. 방사선 치료가 다른 치료법과 함께 병행된 경우 개선된 결과가 얻어졌다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 방사선 치료와 함께 투여된다.

c) 모노클로날 항체(약자로, MAb ):

Mab는 백혈병 및 림프종 뿐만 아니라 고형 종양의 치료를 위해 개발되었고, 이 원리는 점점 그 장점이 증가되고 있다. 종양 세포의 생존에 필수적인 기능을 억제함으로써, 또는 독성 페이로드(payload)를 전달함으로써, 또는 중요 신호전달을 방해함으로써, 또는 종양 세포에 대한 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC) 또는 상보성 지향성 세포독성(CDC)을 유발시킴으로써, 이러한 항체가 작동하게 된다. 종양 세포가 사멸하면, 면역계에 "백신처리"하고 면역계를 자극하는 종양 항원의 방출을 유도하여, 종양 세포를 표적화하는 2차 반응이 발생되게 한다(즉, 하기에 기술되는 바와 같은 "내부 백신접종"). 과발현된 암발생유전자 및 종양특이적 항원은 개발 중에 있는 다수의 Mab에 대한 중요 표적이 된다.

종양 항원은 예를 들면, 하기의 문헌에 기술되어 있다: Stauss H, Kawakami Y and Parmiani G: Tumor antigens recognized by T cells and antibodies. Taylor and Frances (2003). 본 발명은 이러한 표적에 대해 길러진 항체도 포함한다. 본 발명은 또한 바이러스 항원에 대해 길러진 항체도 포함한다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명은 리툭시맙(Rituximab), 알렘투주맙(Alemtuzumab), 트라스트주맙(Trastuzumab), 겜투주맙(Gemtuzumab), 겜투주맙-오조가미신(Gemtuzumab-ozogamicin) (Myelotarg^®, Wyeth) 세툭시맙(Cetuximab)(Erbitux^TM), 베카시주맙(Bevacizumab), HuMax-CD20, HuMax-EGFr, 자밀(Zamyl) 및 퍼투주맙(Pertuzumab)과 같은 항체와 함께 사용한다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 리툭시맙과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 세툭시맙과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 베카시주맙과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 베카시주맙 및 세툭시맙과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 베카시주맙 및 세툭시맙과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 패니투무맙(panitumumab)과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 베카시주맙 및 패니투무맙과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 조직 인자, 킬러 Ig형 리셉터(KIR), 라미닌-5(laminin-5), EGF-R, VEGF-R, PDGF-R, HER-2/neu에 대한 항체, 또는 PSA, PSCA, CEA, CA125, KSA등과 같은 종양 항원에 대한 항체와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 치료용 항체, 예컨대, 상기에 언급된 것과 함께 투여되고, 또한 추가적인 ADCC-향상 화합물, 예컨대 블록킹 항-KIR 항체, NKG2D 작용제, NKG2A 길항제, IL-2, IL-12, IL-15, IL-18 또는 IL-21와 함께 투여된다.

본 발명의 또다른 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 바이러스 항원에 대한 항체와 함께 배합물로서 투여된다.

d) 세포주기 조절제/세포사멸 조절제:

일련의 조절제는 정상적인 세포 주기의 유지에 관여한다. 이는 하기 (i) 내지 (iii)과 같은 표적 조절제인 화합물이다:(i) cdc-25 (비제한적 예로서 NSC 663284 (Pu et al (2003) J Biol Chem 278, 46877)), (ii) 세포 주기를 과도하게 자극하는 사이클린 의존성 카이나아제(하기의 비제한적 예: 플라보피리돌(flavopiridol)(L868275, HMR1275; Aventis), 7-하이드록시스타우로스포린(7-hydroxystaurosporine)(UCN-01, KW-2401; Kyowa Hakko Kogyo) 및 로스코비틴(roscovitine) (R-roscovitine, CYC202; Cyclacel)-Fischer & Gianella-Borradori (2003) Exp Op Invest Drugs 12, 955-970)에서 기재된 것), 그리고 (iii)텔로머라아제, 이 효소는 본 발명내의 암 세포가 이의 텔로미어를 재구성하게 돕는 효소로서, 하기의 비제한적인 예가 있다: BIBR1532 (Damm et al (2001) EMBO J 20, 6958-6968) 및 SOT-095 (Tauchi et al (2003) Oncogene 22, 5338-5347). 또한 세포사멸 경로를 방해하는 약물도 본 발명에 포함되며, 이러한 것에는 하기의 예가 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다: TNF-관련 세포사멸 유도 리간드 (TRAIL)/세포사멸-2 리간드 (Apo-2L), TRAIL 리셉터를 활성화하는 항체, IFN-α 및 안티-센스 Bcl-2.(참조: Igney and Krammer (2002) Nature Rev. Cancer 2, 277-288; Makin and Dive (2003) Trends Mol Med 9, 2519; Smyth et al (2003) Immunity 18, 1-6; Panaretakis et al (2003) Oncogene 22, 4543-4556, 그리고 상기에 기술된 참조문헌). 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 하나 이상의 세포 주기 조절제 및/또는 세포사멸 유도제와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 상기의 화합물은 cdc-25, NSC 663284, 플라보피리돌, 7-하이드록시스타우로스포린, 로스코비틴, BIBR1532 SOT-095, TNF-관련 세포사멸 유도 리간드(TRAIL)/세포사멸-2 리간드(Apo-2L), TRAIL 리셉터를 활성화하는 항체, IFNα 및 안티-센스 Bcl-2를 포함하는 군에서 선택된다.

e) 성장 인자 억제제:

다수의 성장 인자 및 성장 인자 리셉터에 대한 mAb가 암 치료를 위해 개발되었다. 따라서, 비제한적인 예로서, 내피세포 성장 인자 리셉터(EGF-R) 패밀리의 구성원은 다수의 상피 종양에서 비정상적으로 활성화되는데, 이는 종종 공격적인 임상적 코스와 상응한다. 이러한 리셉터의 세포외 리간드 결합 도메인 및 타이로신 카이나아제 도메인을 억제하는 저분자량 분자에 대한 항체는 임상 개발 단계의 막바지에 이르렀거나, 단일 약물로서, 또는 다른 암 약물과 함께 처리하기 위해 암 치료용으로 승인받았다. 비제한적 예는 헤르셉틴(Herceptin)(모노클로날 항체), 세툭시맙(모노클로날 항체), 타세바(Tarceva) (저분자량 억제제), 및 이레사(Iressa)(저분자량 억제제)가 있다. 추가로, 리간드는 리셉터에 결합하기 전에 중화처리될 수 있다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 성장 인자 억제제와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 성장 인자 억제제는 헤르셉틴(모노클로날 항체), 세툭시맙(모노클로날 항체), 타세바(저분자량 억제제), 및 이레사(저분자량 억제제)를 포함하는 군에서 선택된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 헤르셉틴과 배합된다.

f) 종양 혈관형성 억제제( 항혈관생성 약물 및 항전이성 제제):

종양 성장은 충분한 혈액 공급 여부에 따라 달라지고, 이에 따라 새로운 혈관의 발달 여부도 결정된다. 이러한 고형 종양의 일반적인 특징은 치료적 측면에서 보면 매력적으로 보이는데, 즉 항혈관생성 약물로 암에 걸린 환자를 치료하면 종양 성장 억제 및 종양 퇴행을 예측할 수 있다. 현재로는 60개가 넘는 항혈관생성 약물이 임상적 시험 중에 있으며, 여기에는 천연 발생 엔도스태틴(endostatin) 및 앤지오스태틴(angiostatin)이 포함된다(Marx (2003) Science 301, 452-454에 기고됨). 하지만 기존의 화학치료 약물, 기타 치료약 및 방사선 치료도 항혈관생성 효과를 가진다. 본 발명의 일 양태는, IL-21, 이의 유사체 또는 유도체 및 하나 이상의 항혈관생성제와 함께 복합치료하는 것인데, 여기에서 항혈관생성제는 하기의 예를 포함하나 이에 국한되는 것은 아니다: 엔도스태틴, 앤지오스태틴, 혈관생성을 개시하는 인자를 차단하는 항체(예를 들면, 항-VEGF-아바스틴), 상응하는 신호 전달 경로에서 핵심 요소를 억제함으로써 혈관생성을 억제하는 저분자량 화합물.

종양 및 세포외 매트릭스의 혈관형성을 공격하는 것은 생각하지 못했던 이점을 가져다 준다. 하기의 원리가 지금까지 개발된 것이다: 내피 세포의 차단, 앤지오스태틴 및 엔도스태틴의 투여, VEGF 표적화 및 세포외 매트릭스.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 항혈관생성 약물과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 항혈관생성 약물은 하기를 포함하는 군에서 선택된다: 아바스틴(avastin), 네오바스탯(neovastat), 탈리도미드(thalidomide), PTK787, PTK787, ZK222584, ZD-6474 , SU6668, PD547,632, VEGF-Trap, CEP-7055, NM-3, SU11248.

g) 바이러스 표적화 :

바이러스 표적화는 재조합 바이러스-보통은 복제 능력이 없다-를 사용하여 종양을 직접 파괴한다. 실제로는, 바이러스가 무력화되기 전에 적어도 한 차례의 복제가 일어난다. 그러므로, 종양이 파괴되면, 이는 발생되는 보호기작으로서 전신 면역화를 유발하게 된다. 이러한 접근법은 면역 반응을 향상시키기 위한 유전자 변형을 사용하여 더욱 정밀해졌다. 예를 들면, 인간 GM-CSF의 유전자를 제2형 헤르페스 심플렉스 바이러스 벡터에 삽입하는 것은 백신의 효율을 개선하기 위하여 사용된다. 본 발명의 일 양태에서, IL-21, 이의 유사체 또는 유도체 및 바이러스 표적화를 투여함으로써 복합 치료를 수행한다.

i) 호르몬제:

호르몬제는 보통은 호르몬 의존성 암, 예컨대 난소암, 유방암 및 전립선 암의 치료에 항안드로겐 및 항에스트로겐 치료로서 주로 알려져 있다. 호르몬 및 항호르몬은 에스트라무스틴 포스페이트(Estramustine phosphate), 폴리에스트라디올 포스페이트(Polyestradiol phosphate), 에스트라디올(Estradiol), 아나스트로졸(Anastrozole), 엑세메스탄(Exemestane), 레트로졸(Letrozole), 타목시펜(Tamoxifen), 메게스트롤 아세테이트(Megestrol acetate), 메드록시프로게스테론 아세테이트(Medroxyprogesterone acetate), 옥트레오타이드(Octreotide), 사이프로테론 아세테이트(Cyproterone acetate), 바이칼투미드(Bicaltumide), 플루타미드(Flutamide), 트리토렐린(Tritorelin), 류프로레린(Leuprorelin), 부세레린(Buserelin) 또는 고세레린(Goserelin)과 같은 화합물이다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 호르몬 치료와 배합된다.

II . 종양 세포 또는 바이러스 감염된 세포에 대한 면역 반응을 향상시키는 제제

j) 면역계 활성제

면역계의 효율을 향상시킴으로써 암 및 바이러스 감염의 복합치료에서 본 발명의 펩타이드와 함께 사용될 수 있는 성분이나 제제의 목록은 다음과 같고, 이는 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다.

보조제:

면역치료는 특이적 및 비특이적 양식으로 구성된다. 비특이적 면역치료의 예는 면역 반응의 개시에 촉매로서 주로 작용하는 보조제이다. 이러한 백신 보조제의 비제한적인 예로, QS21, GM-CSF 및 CpG 올리고데옥시뉴클로에타이드, 리포폴리사카라이드 및 폴리이노신산, 폴리사이티딜산이 있다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 하나 이상의 보조제와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 보조제는, QS 21, GM-CSF 및 CpG 올리고데옥시뉴클레오타이드, 리포폴리사카라이드 및 폴리이노신산, 폴리사이티딜산, a-갈락토실세라마이드 또는 이의 유사체, 히스타민 다이하이드로클로라이드, 또는 알루미늄 하이드록사이드를 포함하는 군에서 선택된다.

사이토카인:

사이토카인의 비제한적 예로는, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-2, PEG-IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IL-21, IL-23, IL-27, IL-28a, IL-28b, IL-29, GM-CSF, Flt3 리간드 또는 스템셀 인자가 있다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 사이토카인과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서 IL-21은 IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-2, PEG-IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IL-21, IL-23, IL-27, IL-28a, IL-28b, IL-29, GM-CSF, Flt3 리간드 또는 스템셀 인자, 또는 상기 중 임의의 것의 유사체 또는 유도체를 포함하는 군에서 선택된 하나 이상의 화합물과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 화합물은 IFN-α, IFN-β, IFN-γ, PEG-IL-2, IL-18, IL-23, IL-27, IL-28a, IL-28b, IL-29를 포함하는 군에서 선택된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 하기 중 하나와 함께 배합된다: IL-2, PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18 및 IFN-α.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 IL-12와 배합된다. 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 PEG-IL-2와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 하기 중 하나 이상과 배합된다: IL-2, PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18 및 IFNα. 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 하기 중 적어도 하나와 배합된다: IL-2, PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18 및 IFN-α 및 하나의 추가적 활성 성분. 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 하기 중 적어도 하나와 배합된다: IL-2, PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18 및 IFN-α및 하나의 상기 기재된 사이토카인. 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 IFN-α및 GM-CSF와 배합된다. 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 IFN-α및 티모펜틴(thymopentin)과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 IFN-γ와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 자가이식편 TILS 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 IFN-α 및 IL-12와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴, 타목시펜(tamoxifen), 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴, DTIC, 타목시펜, 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴, DTIC, 타목시펜, 및 GM-CSF와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴, 카무스틴, DTIC, IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴, 카무스틴, DTIC, 타목시펜, 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴, 카무스틴, DTIC, 카보프라틴, 타목시펜 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴, DTIC, 빈블라스틴, 타목시펜, 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴, 빈블라스틴, 테모졸로미드 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴, 카무스틴, DTIC, 빈데신, 타목시펜 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴, 타목시펜 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 시스플라틴, 빈블라스틴, DTIC 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 DTIC 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 DTIC, GM-CSF 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 DTIC, 티모신-α 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 빈블라스틴 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 5-플루오로우라실 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 포테무스틴(Fotemustine) 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴(Oxaliplatin) 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, 타목시펜 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, DTIC, 타목시펜 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, DTIC, 타목시펜 및 GM-CSF와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, 카무스틴, DTIC 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, 카무스틴, DTIC, 타목시펜 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, 카무스틴, DTIC, 카보플라틴, 타목시펜 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, DTIC, 빈블라스틴, 타목시펜 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, 빈블라스틴, 테모졸로미드 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, 카무스틴, DTIC, 빈데신, 타목시펜 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, 타목시펜 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, 빈블라스틴, DTIC 및 IFN-α와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 5-플루오로우라실 또는 이의 구강내에서 활성인 유사체와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, 5-플루오로우라실 또는 이의 구강내에서 활성인 유사체와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 옥살리플라틴, 류코보린(leucovorin), 및 5-플루오로우라실 또는 이의 구강내에서 활성인 유사체와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 이리노테칸과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 이리노테칸 및 옥살리플라틴과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 이리노테칸 및 세툭시맙과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 이리노테칸 및 베카시주맙과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 이리노테칸 및 세툭시맙 및 베카시주맙과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 DTIC 및 자기유래의 LAK 세포 유사체와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 겜시타빈 및 IFN-α와 배합된다.

상기의 배합물 중 임의의 것은 IL-2와 추가로 배합될 수 있다.

세포내 면역치료

세포내 면역치료(또는 적응성 면역치료)의 예에는 T 세포를 침입한 엑스-비보(ex - vivo)에서 확장된 종양의 재혼입 또는 유전자 변형된 T 세포를 포함한다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드를 투여하고 세포내 면역치료하는 복합 치료가 수행된다.

세포내 면역치료는 환자로부터 항암 반응을 자극하거나 지휘할 수 있는 세포의 분리 단계, 이러한 세포를 대량으로 확장하는 단계 및 이를 동일 환자 또는 다른 환자에게 재투여하는 단계를 포함할 수 있다. 일 측면에서, 이는 종양 특이적 항원이나 종양 관련 항원을 인식하는 CD4⁺ 또는 CD8⁺ 세포일 수 있다. 다른 측면에서, 이는 종양 특이적 항원이나 종양 관련 항원에 대해 특이적인 항체를 발현하는 B 세포일 수 있다. 다른 측면에서, 이는 종양 세포를 사멸시킬 수 있는 NK 세포일 수 있다. 바람직한 측면에서, 이는 DC-확장제(예를 들면, GM-CSF 또는 Flt3-L)와 함께 엑스 비보에서 배양되고, 종양 특이적인 항원이나 종양 관련 항원과 함께 로딩되며, 필요한 환자에게 재혼입되는 덴트라이트 세포(DC)일 수 있다. 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드를 투여하고, 세포내 면역치료 또는 적응성 치료를 함께 하여 복합치료를 수행한다.

본 발명의 일 양태에서, 세포 적응성 치료는 종양 특이적 항원이나 종양 관련 항원을 인식하는 CD4⁺ 또는 CD8⁺ 세포를 포함한다.

본 발명의 일 양태에서, 세포 적응성 치료는 종양 특이적 항원이나 종양 관련 항원에 특이적인 항체를 발현하는 B 세포를 포함한다.

본 발명의 일 양태에서, 세포 적응성 치료는 종양 세포를 사멸시킬 수 있는 NK 세포를 포함한다.

본 발명의 일 양태에서, 세포 적응성 치료는 덴트라이트 세포(DC)를 포함한다.

상기의 양태에서, 덴트라이트 세포는 DC 확장제(예를 들면, 예를 들면, GM-CSF 또는 Flt3-L)와 함께 인 비보에서 배양되고, 종양 특이적 항원이나 종양 관련 항원과 함께 로딩되며, 인 비보에 다시 도입된다.

k) 면역계에서 신호전달을 차단 억제하는 제제

항종양 및 항바이러스 반응을 포함하는 면역 반응은 면역계의 세포내 자극 리셉터 및 억제 리셉터를 통해 신호전달의 균형이 이루어짐으로써 조절된다. 활동성 리셉터를 통해 풍부한 신호전달 쪽으로 이동하는 것은 보다 효율적인 면역 반응을 이끌 수 있는 반면에, 억제성 리셉터를 통해 신호전달이 향상되는 것은 생산적인 반응을 보다 덜 유도할 수 있거나, 면역반응에 실패할 수도 있다. 항종양 또는 항바이러스 반응을 향상시키기 위해서는, 활성화 방향으로 균형이 이동되도록 하기 위하여 억제성 리셉터를 통해 신호전달되는 것을 치료적으로 차단하는 것이 유용하다. 그러므로, 억제성 리셉터, 또는 억제성 신호전달 경로를 차단하는 제제가 본 발명의 펩타이드와 함께 복합 치료를 위해 바람직한 제제이다. 이러한 억제성 리셉터를 차단하는 제제의 예로는, CTLA-4에 특이적인 mAbs (항-CTLA-4), KIR에 특이적인 mAbs(항-KIR), LIR에 특이적인 mAbs(항-LIR), CD94에 특이적인 mAbs(항-CD94),또는 NKG2A에 특이적인 mAbs(항-NKG2A)이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다.

항알레르기 제제는 소형 화합물, 단백질, 글리코단백질, 또는 종양 및 암 항원에 대한 내성을 파괴할 수 있는 항체이다.

다수의 상이한 유형의 암에서 개선된 임상적 결과와 상응하는 종양 침투 림프구(TIL)의 존재에도 불구하고, 종양 항원에 대한 아네르기 또는 내성 때문에 이러한 TIL의 활성을 개선시킬 필요가 명백히 존재한다. 아네르기 환경은 다수의 실질적인 경우, CTLA-4 유발성 아네르기 또는 내성을 예방하는 모노클로날 항체에 의해 반대작용될 수 있다. CTLA-4의 차단은 동물 모델에서, 인간 암 환자에서 암 치료의 효율성을 개선시키기 위해 제시되었으며, 이는 CTLA-4 차단은 암 및 종양 항원에 대한 내성을 파괴하는 데 사용될 수 있음을 암시한다. TIL의 활성을 유도하는데 사용될 수 있는 모노클로날 항체의 예에는 MDX-100(Phan et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100: 8372)이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드 및 암, 종양 또는 바이러스 항원에 대한 내성을 파괴하는 하나 이상의 제제를 투여함으로써 복합 치료한다. 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 MDX-010과 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 CTLA-4에 대한 항체와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 KIR에 대한 항체와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 CD94에 대한 항체와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 NKG2A에 대한 항체와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 NK 세포, T 세포, 또는 NKT 세포 상에서 발현되는 억제성 리셉터에 대한 항체와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 억제성 리셉터에 대한 길항제와 배합된다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 억제성 신호전달에 관여하는 신호전달 단백질의 길항제와 배합된다.

l) 치료용 백신:

대부분의 인간 암의 발달에는 유전자 변화가 관여되어 있는데, 이는 종양 세포내에서 변경된 분자의 발현을 유도할 수 있거나, 정상적인 분자의 과발현을 유도할 수 있다. 기본적으로는 이러한 변화는 숙주로부터의 면역 반응(면역감시기구)을 유도할 것이다. 명백하게 이렇게 면역계가 이론적으로 활성화되는 것은 매우 적은 소수의 경우에만 종양의 자발적인 퇴보를 유도할 뿐이다. 이들은 여러 인자들 중에서도 "위험 신호"의 부재 때문에 발생하는 것인데, 이것은 매력적인 이점을 부여할 수 있는 현상이다.

종양 특이적 항원을 동정한 다음에, 이러한 항원으로 예방접종하면 종양을 파괴하는 면역계를 자극할 수 있다. 종양 특이적 항원(TSA)은 비교적 작은 군의 항원이며, 예를 들면, 암-정소 항원이 있다. 이러한 유전자는 정상적인 조직에서는 발현되지 않지만, 암 세포에 의해 발현된다. 이들은 질병에 대한 매우 특이적인 마커가 되며, 멜라닌종에서 발견되는 MAGE(멜라닌종 항원 유전자)를 포함한다.

종양 관련 항원(TAA)은 보통 정상적인 세포에 의해 발현되는 분화 항원이지만, 암 조직에서는 대량으로 과발현된다. 처음에 특정 암에 대해 특이적인 것으로 여겨진 표적은 실제로는 다수의 종양, 예컨대 강글리오사이드 및 뮤신 항원에서 흔하게 발견되는 것이었다. 기존의 분화 항원에는 MART-1(T 세포에 의해 인식되는 멜라닌종 항원) 및 gp 100(멜라닌종 및 티로시나아제에서 유래한 것), 카시노엠브리오닉 항원(CEA) 및 gp75가 포함된다.

돌연변이 항원: 다수의 암에서 점돌연변이가 일반적이지만, 종종 P53 또는 ras 암발생유전자의 일반적인 돌연변이와 같은 것이 유사 위치에서 발생할 수 있다. 돌연변이 및 야생형 p53의 펩타이드에 대해서, 인간 세포독성 T-림프구(CTL) 반응이 인 비트로에서 유도된 것이 보고된 바 있다. 마우스 모델에서, 돌연변이 p53-펄스드 덴드라이트 세포에서 CTL에 특이적인 p53을 유도할 수 있고, 정립된 종양의 성장을 억제할 수 있다.

바이러스 항원: 어떤 종류의 바이러스는 암을 발생시킬 수 있으며, 이러한 바이러스에 의해 암호화된 유전자 산물은 면역 반응을 유발시킬 수 있어서, 암 항원으로서 작용할 수 있다. 이러한 것의 예로는 인간 파필로마 바이러스 16형으로부터의 E6 및 E7 단백질이며, 이는 인 비트로에서 세포독성 T-림프구 반응을 유발할 수 있는 것으로 제시된 바 있다.

종양 특이적 항원, 종양 관련 항원 및/또는 돌연변이 항원 및 바이러스 항원은 각각 펩타이드로서, 재조합 정제된 단일 제제 항원으로서, 재조합 정제된 항원 및/또는 정제된 항원 또는 암 세포 또는 종양 세포로부터 분리된 항원의 풀(pool)로서 백신으로 사용되어, 항 종양 면역 반응을 유발시킬 수 있다. 유사하게는, 펩타이드, 재조합 정제된 단일 제제 항원, 재조합 항원 및/또는 정제된 항원 또는 바이러스 감염된 세포로부터 분리된 항원의 풀도 백신에서 사용되어 바이러스 감염된 세포에 대한 반응을 유발시킬 수 있다. 치료용 백신은 자가조직의 종양 세포 분해물 또는 추출물 형태일 수 있으며, 또는 동종이계의 세포주의 분해물 또는 추출물 형태일 수 있다. 치료용 백신은 암 및 바이러스 감염된 세포에 대한 면역 반응을 유발시키기 위하여 DNA 백신 형태일 수 있다. 상기 DNA 백신은 항원만, 또는 암 및 바이러스 감염된 세포의 면역 반응을 향상시킬 수 있는 사이토카인(예를 들면 GM-CSF, IL-2, IL-12 또는 IL-21)과 함께 항원을 암호화하는 발현 벡터를 구성할 수 있다.상기의 DNA 백신은 항원만, 또는 사이토카인과 함께 항원을 암호화하는 DNA 서열을 함유하는 변형된 바이러스(예를 들면 계두 바이러스, 배시니아 바이러스 또는 아데노바이러스)로 구성될 수 있다. 치료용 백신은 암 및 바이러스 감염된 세포에 대항하여 면역 반응을 유발시키기 위한 항-유전자형(idiotype) 항체 형태일 수도 있다. 치료용 백신은 또한 DC 변형제, 예컨대 사이토카인, 톨라이크(toll-like) 리셉터(TLR) 작용제, CpG 올리고데옥시뉴클레오타이드, GM-CSF, 또는 히트-샥 단백질(heat-shock protein)과 함께 이에서 유도된 항원 또는 단백질이 로딩된 자가조직의 덴드라이트 세포 형태일 수 있다.

항종양 반응 또는 바이러스 감염된 세포에 대한 반응의 백신 매개 유발화는 보조제, 사이토카인, 톨라이크 리셉터(TLR) 작용제, CpG 올리고뉴클레오타이드, 덴드라이드 세포, GM-CSF, 및 히트-샥 단백질에 의해 향상될 수 있다. 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드 및, 보조제, 사이토카인, 톨라이크 리셉터(TLR) 작용제, CpG 올리고데옥시뉴클레오타이드, 덴드라이트 세포, GM-CSF, 또는 히트-샥 단백질과 함께, 또는 단독으로 하나 이상의 치료용 백신과 함께 투여하여 복합 치료를 수행한다.

n) 항전이제 :

전이성 암 세포는 세포외 기질(ECM) 및 혈관 기저막을 통과하여, 표적 기관(엑토픽 사이트(ectopic site))으로 전이된다. EMC는 다당류 복합체(헤파린 설페이트 펩티도글리칸)에 둘러싸인 단백질로 구성되며, 종양을 둘러싸고 있는 프로테아제는 이것 안에서 활성을 띠어 숙주 세포를 파괴한다. 항전이제는 이러한 프로테아제(예를 들면 메탈로프로테이나아제 억제제)의 효능에 영향을 미친다(Coussens et al. Science 2002;295:2387-2392). 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드와 항전이제, 예컨대 메탈로프로테이나아제 억제제 하나 이상을 함께 투여하여 복합 치료한다.

IV : 내부 예방접종

"내부 예방접종" 및 "내부 백신치료"라는 용어는 (i) 종양 세포 전체, 또는 (ii) (a) 분비된 단백질, 글리코단백질 또는 다른 산물, (b) 막관련 단백질 또는 글리코단백질 또는 막에 삽입되거나 관여하는 다른 성분 및 (c) 세포내 단백질 또는 다른 세포내 성분을 포함하는 종양 세포의 일부에 대해 면역 반응을 유발시키는 것을 유도하는 종양 세포의, 약물- 또는 방사선-유도성 세포 사멸을 말한다. 면역 반응은 체액성(즉, 항체-보체 매개)일 수 있거나 세포 매개성일 수 있는데, 후자에는 종양 세포나 이의 일부를 인식하는 세포독성 T 림프구의 발달을 포함하나, 이에 국한되는 것은 아니다. 내부 예방접종은 다른 예방접종 절차와 많은 유사점을 가지고, 조혈계 및 면역계의 동일한 세포내 성분을 다수 또는 전부 포함하며, 면역원 또는 항원 성분이 내생성이어서, 종양 세포의 항원 레퍼토리를 대표하는 이점을 가진다. 내부 예방접종은 개인적 예방접종으로 간주될 수 있는데, 이는 종양 세포 사멸을 유도하는 암치료의 일반적인 절차를 사용함으로써 유발되기 때문이다. 방사선 치료외에도, 종양 세포 사멸 및 내부 예방접종을 유도하는데 사용될 수 있는 약물 및 제제의 비제한적인 예에는 전통적인 화학치료제, 세포주기 억제제, 항혈관생성 약물, 모노클로날 항체, 세포사멸 유도제, 및 신호전달 억제제가 있다.

"본 발명의 펩타이드 및 내부 예방접종 복합 치료"라는 용어는 본 발명의 펩타이드가 내부 예방접종 받은 암환자에 투여된다는 뜻이다. 본 발명의 펩타이드는 내부 예방접종을 수행하기 전에, 수행하면서, 또는 수행한 후에 투여될 수 있다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 내부 예방접종 치료에 포함된다.

유전자 치료는 세포 표현형을 일시적으로 또는 영구적으로 변경시키기 위해 유전자 물질을 세포로 전달하는 것을 포함한다. 사이토카인, 종양 항원 및 추가의 자극성 분자를 전달하기 위하여 여러가지 방법이 연구된 바 있다. 본 발명의 명세서에서, 본 발명의 펩타이드는 전달되는 제제이거나 또는 동시에 투여될 수 있다. 본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드는 폴리뉴클레오타이드로서 투여될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 WO 00/53761에 기술되어 있다.

VI : 면역억제제/면역조절제

r) T-림프구 호밍에 영향을 미치는 제제, 예컨대 FTY -720:

s) 칼시뉴린 억제제:

발스포도르(valspodar), PSC 833와 같은 칼시뉴린 억제제는 MDR-1 및 p-글리코단백질에 대해 억제 효과를 가지기 때문에 세포독성제에 대한 내성 발현을 예방하는데 활성이 있다.

t) TOR -억제제:

TOR 억제제는 포유류 TOR(mTOR)의 세린-트레오닌 카이나아제를 차단하는 작용을 한다. 시롤리무스, 에버롤리무스 및 라프마이신과 같은 화합물은 항증식석 제제이다. 이들은 다운스트림 신호전달 캐스케이드에 관여하므로 모든 종양 유형의 치료에 적절하다(예를 들면, 항혈관생성 성질).

일 양태에서, 상기 언급된 암 치료 양식은 본 발명의 펩타이드로 예시된 바와 동일한 방식으로 SEQ ID No:　2와 배합된다. 일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No:　2인 펩타이드, 그리고 상기 기술한 바와 같은 하나 이상의 암 치료 양식을 포함하는 하기 서술되는 바와 같은 약학적 조성물을 제공한다.

약학적 조성물

본 발명의 또다른 목적은 본 발명의 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것인데, 여기에서 펩타이드는 10^-15 mg/ml 내지 200 mg/ml의 농도, 예컨대 10^-10 mg/ml 내지 5 mg/ml의 농도이고, 제형물의 pH는 2.0 내지 10.0이다. 임의로는 상기 제형물은 상기에 기술된 바와 같은 하나 이상의 추가의 암치료제를 포함할 수 있다. 제형물은 완충액 시스템, 보존제, 등장화제, 킬레이팅제, 안정화제 및 표면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 일 양태에서, 약학적 제형물은 수성 제형물인데, 즉 물을 포함하는 제형물이다. 이러한 제형물은 전형적으로는 용액이거나 현탁액이다. 본 발명의 또다른 양태에서, 약학적 조성물은 수성 용액이다. "수성 제형물"이라는 용어는 적어도 50% w/w 물을 포함하는 제형물로 정의된다. 마찬가지로, "수성 용액"이라는 용어는 적어도 50% w/w 물을 포함하는 용액으로 정의되고, "수성 현탁액"이라는 용어는 적어도 50% w/w 물을 포함하는 현탁액으로 정의된다.

다른 양태에서, 약학적 제형물은 동결건조된 제형물이고, 의사나 환자는 이를 사용하기에 앞서 용매 및/또는 희석제를 여기에 첨가한다.

다른 양태에서, 약학적 제형물은 건조형 제형물(즉, 동결건조되거나 분무건조된 것)이고, 사용하기 전에 따로 용해시키지 않아도 되도록 준비된 것이다.

또다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드의 수성 용액, 완충액을 포함하는 약학적 제형물에 관한 것인데, 여기에서 상기 OGP 단백질의 농도는 0.1-100 mg/ml이고, 제형물의 pH는 약 2.0 내지 약 10.0이다.

본 발명의 다른 양태에서, 제형물의 pH는 하기로 구성되는 목록 중에서 선택된다: 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 및 10.0.

본 발명의 또다른 양태에서, 완충액은 하기로 구성되는 군에서 선택된다: 소듐 아세테이트(sodium acetate), 소듐 카보네이트(sodium carbonate), 시트레이트(citrate), 글리실글리신(glycylglycine), 히스티딘, 글리신, 라이신, 아르지닌, 소듐 다이하이드로겐 포스페이트(sodium dihydrogen phosphate), 다이소듐 하이드로젠 포스페이트(disodium hydrogen phosphate), 소듐 포스페이트(sodium phosphate), 및 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄(tris(hydroxymethyl)-aminomethan), 바이신(bicine), 트라이신(tricine), 말산(malic acid), 석시네이트(succinate), 말레산(maleic acid), 퓨마르산(fumaric acid), 타타르산(tartaric acid), 아스파트산 또는 이의 혼합물. 이들 특정한 완충액 중 각각 하나의 것은 본 발명의 대안적인 양태를 구성한다.

본 발명의 또다른 양태에서, 제형물은 약학적으로 수용가능한 보존제를 추가로 포함한다. 본 발명의 또다른 양태에서 보존제는 하기로 구성되는 군 중에서 선택된다: 페놀(phenol), o-크레졸(o-cresol), m-크레졸(m-cresol), p-크레졸(p-cresol), 메틸 p-하이드록시벤조에이트(methyl p-hydroxybenzoate), 프로필 p-하이드록시벤조에이트(propyl p-hydroxybenzoate), 2-페녹시에탄올(2-phenoxyethanol), 부틸 p-하이드록시벤조에이트(butyl p-hydroxybenzoate), 2-페닐에탄올(2-phenylethanol), 벤질 알콜(benzyl alcohol), 클로로부탄올(chlorobutanol), 및 티오메로살(thiomerosal), 브로노폴(bronopol), 벤조산(benzoic acid), 이미드우레아(imidurea), 클로로헥시딘(chlorohexidine), 소듐 디하이드로아세테이트(sodium dehydroacetate), 클로로크레졸(chlorocresol), 에틸 p-하이드록시벤조에이트(ethyl p-hydroxybenzoate), 벤제토니움 클로라이드(benzethonium chloride), 클로르페네신(chlorphenesine)(3p-클로르페녹시프로판-1,2-디올)((3p-chlorphenoxypropane-1,2-diol)) 또는 이의 혼합물. 본 발명의 또다른 양태에서, 보존제의 농도는 0.1 mg/ml 내지 20 mg/ml이다. 본 발명의 또다른 양태에서, 보존제의 농도는 0.1 mg/ml 내지 5 mg/ml이다. 본 발명의 또다른 양태에서, 보존제의 농도는 5 mg/ml 내지 10 mg/ml이다. 본 발명의 또다른 양태에서, 보존제의 농도는 10 mg/ml 내지 20 mg/ml이다. 이러한 특정 보존제들 중 각각 하나는 본 발명의 대안적인 양태를 구성한다. 약학적 조성물 중에 보존제를 사용하는 것은 당업자에게 익히 공지되어 있다. 편의를 위해 하기를 참조하면 된다: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th edition, 2000.

본 발명의 또다른 양태에서, 제형물은 등장화제를 추가로 포함한다. 본 발명의 또다른 양태에서, 등장화제는 하기로 구성되는 군 중에서 선택된다: 염(예를 들면, 소듐 클로라이드), 당류 또는 당 알콜, 아미노산(예를 들면, L-글리신, L-히스티딘, 아르지닌, 라이신, 아이소루신, 아스파트산, 트립토판, 트레오닌) 또는 알디톨(예를 들면 글리세롤 (글리세린), 1,2-프로판디올 (프로필렌글리콜), 1,3-프로판디올, 1,3-부탄디올), 폴리에틸렌글리콜 (예를 들면, PEG400), 또는 이의 혼합물. 단당류, 또는 이당류 또는 다당류와 같은 임의의 당류, 또는 수용성 글루칸, 예를 들면, 프럭토스, 글루코스, 마노스, 소보스, 자일로스, 말토스, 락토스, 수크로스, 트레할로스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 수용성 녹말, 하이드록시에틸 녹말 및 카복시메틸셀룰로스-Na도 사용될 수 있다. 일 양태에서, 당류 첨가제는 수크로스이다. 당 알콜은 적어도 하나의 -OH기를 가지는 C4-C8 탄수화물로서 정의되는데, 예를 들면, 마니톨, 소비톨, 이노시톨, 갈락티톨, 둘시톨, 자일리톨, 및 아라비톨이 포함된다. 일 양태에서, 당 알콜 첨가제는 마니톨이다. 상기에서 언급된 당류 또는 당 알콜은 독립적으로 또는 배합하여 사용될 수 있다. 당류 또는 당 알콜이 액체 제조물에 용해될 수 있고 본 발명의 방법을 사용하여 달성된 안정한 효과에 악영향을 미치지 않는 한, 사용되는 양에는 특별히 제한이 있는 것은 아니다. 일 양태에서, 당류 또는 당 알콜 농도는 약 1 mg/ml 내지 약 150 mg/ml이다. 본 발명의 또다른 양태에서, 등장화제의 농도는 1 mg/ml 내지 50 mg/ml이다. 본 발명의 또다른 양태에서, 등장화제의 농도는 1 mg/ml 내지 7 mg/ml이다. 본 발명의 또다른 양태에서, 등장화제의 농도는 8 mg/ml 내지 24 mg/ml이다. 본 발명의 또다른 양태에서, 등장화제의 농도는 25 mg/ml 내지 50 mg/ml이다. 이렇게 특정된 등장화제 중 각각 하나는 본 발명의 대안적인 양태를 구성한다. 약학적 조성물 중에 등장화제를 사용하는 것은 당업자에게 익히 공지되어 있다. 편의를 위해 하기를 참조하면 된다: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th edition, 2000.

본 발명의 또다른 양태에서, 제형물은 킬레이팅제를 추가로 포함한다. 본 발명의 또다른 양태에서, 킬레이팅제는 에틸렌다이아민테트라아세트산(EDTA), 시트르산, 및 아스파트산의 염, 및 이들의 혼합물 중에서 선택된다. 본 발명의 또다른 양태에서, 킬레이팅제의 농도는 0.1 mg/ml 내지 5 mg/ml이다. 본 발명의 또다른 양태에서, 킬레이팅제의 농도는 0.1 mg/ml 내지 2 mg/ml이다. 본 발명의 또다른 양태에서, 킬레이팅제의 농도는 2 mg/ml 내지 5 mg/ml이다. 이렇게 특정된 킬레이팅제 중 각각 하나는 본 발명의 대안적인 양태를 구성한다. 약학적 조성물 중에 킬레이팅제를 사용하는 것은 당업자에게 익히 공지되어 있다. 편의를 위해 하기를 참조하면 된다:Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th edition, 2000.

본 발명의 또다른 양태에서, 제형물은 안정화제를 포함한다. 약학적 조성물 중에 안정화제를 사용하는 것은 당업자에게 익히 공지되어 있다. 편의를 위해 하기를 참조하면 된다:Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th edition, 2000.

더욱 구체적으로는, 본 발명의 조성물은 안정화된 액체 약학적 조성물이며, 이의 치료적으로 활성인 성분은 액체 약학적 제형물을 보관하는 동안에 응집물을 형성할 수 있는 폴리펩타이드를 포함한다. "응집물 형성"이란 올리고머 형성을 초래하는 폴리펩타이드 분자 간의 물리적 상호작용을 뜻하는 것이며, 이는 용액으로부터 침전되는 가용성의, 크고, 육안으로 관찰가능한 응집물로 남아있을 수 있다. "보관하는 동안에"라는 것은 액체 약학적 조성물 또는 제형물이 일단 만들어진 후 개체에 즉시 투여되지 않는 것을 뜻한다. 그보다는, 제조 후에, 액체 형태나 개체에 투여하기 위한 다른 적당한 형태로 재구성하기 위해, 액체 형태, 냉동 상태, 또는 건조 형태 중 하나로 보관용으로 포장된다. "건조 형태"라는 것은 액체 약학적 조성물 또는 제형물이 냉동 건조(즉, 동결건조; 참조: 예를 들면, Williams and Polli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38:48-59)에 의해, 또는 분무 건조(참조: Masters (1991) in Spray-Drying Handbook (5th ed; Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), pp. 491-676; Broadhead et al. (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206; 및 Mumenthaler et al. (1994) Pharm. Res. 11:12-20)에 의해, 또는 공기 건조(Carpenter and Crowe (1988) Cryobiology 25:459-470; 및 Roser (1991) Biopharm. 4:47-53)에 의해 건조된 것을 뜻한다. 액체 약학적 조성물의 보관 동안에 폴리펩타이드에 의한 응집물이 형성되면 해당 폴리펩타이드의 생물학적 활성에 악영향을 미쳐서, 약학적 조성물의 치료 효능의 손실을 유발할 수 있다. 또한, 응집물이 형성되면 폴리펩타이드 함유 약학적 조성물이 혼입 시스템을 사용하여 투여된 경우에, 튜브, 막, 또는 펌프를 파괴하는 것과 같은 다른 문제점을 불러일으킬 수도 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 조성물의 보관 동안에 폴리펩타이드에 의한 응집물 형성을 감소시키기에 충분한 양의 아미노산 염기를 추가로 포함할 수 있다. "아미노산 염기"는 아미노산이나 아미노산의 조합을 뜻하는 것으로서, 해당 아미노산이 자유 염기 형태나 이의 염 형태로 존재하는 것을 말한다. 아미노산의 조합이 사용된 경우, 아미노산 모두는 모두 자유 염기 형태로 존재할 수 있거나, 모두 염 형태로 존재할 수 있거나, 그렇지 않으면, 이들 중 일부는 자유 염기 형태로 존재하고, 나머지는 이의 염 형태로 존재하는 것일 수 있다. 일 양태에서, 본 발명의 조성물을 제조하는데 사용되는 아미노산은 전하를 띤 측쇄를 가진 것, 예컨대 아르지닌, 라이신, 아스파트산, 및 글루탐산이다. 특정 아미노산(예를 들면, 글리신, 메싸이오닌, 히스티딘, 이미다졸, 아르지닌, 라이신, 아이소루신, 아스파트산, 트립토판, 트레오닌 및 이들의 혼합물)의 임의의 입체이성질체(즉, L, D, 또는 이의 혼합물) 또는 이들 입체이성질체의 배합물도, 특정 아미노산이 자유 염기 형태나 이의 염 형태로 존재하는 한, 본 발명의 약학적 조성물 중에 존재할 수 있다. 일 양태에서, L-입체이성질체가 사용된다. 본 발명의 조성물은 또한 이러한 아미노산의 유사체와 함께 제형될 수도 있다. "아미노산 유사체"란, 본 발명의 액체 약학적 조성물의 보관 동안에 폴리펩타이드에 의한 응집물 형성을 감소시키는 바람직한 효과를 가져오는 자연 발생적인 아미노산의 유도체를 뜻하는 것이다. 적당한 아르지닌 유사체에는, 예를 들면, 아미노구아니딘(aminoguanidine), 오르니틴(ornithine) 및 N-모노에틸 L-아르지닌이 포함되고, 적당한 메싸이오닌 유사체에는 에싸이오닌(ethionine) 및 부싸이오닌(buthionine)이 포함되며, 적당한 시스테인 유사체에는 S-메틸-L 시스테인이 포함된다. 다른 아미노산과 함께이기 때문에, 아미노산 유사체는 자유 염기 형태 또는 염 형태로 조성물 중에 혼입된다. 본 발명의 또다른 양태에서, 아미노산 또는 아미노산 유사체는 단백질의 응집을 방지하거나 지연시키기에 충분한 농도로 사용된다.

본 발명의 또다른 양태에서, 치료제로서 작용하는 폴리펩타이드가 산화에 취약한 적어도 하나의 메싸이오닌 잔기를 포함하는 폴리펩타이드인 경우, 메싸이오닌 잔기가 메싸이오닌 설폭사이드로 산화되는 것을 억제하기 위해 메싸이오닌(또는 다른 황함유 아미노산 또는 아미노산 유도체)이 첨가될 수 있다. "억제한다"라는 것은, 시간이 지나도 산화된 메싸이오닌 종이 최소한으로 축적되는 것을 뜻한다. 메싸이오닌 산화를 억제하면, 결과적으로 적당한 분자 형태의 폴리펩타이드의 더욱 좋은 보유력(retention)이 생긴다. 메싸이오닌의 임의의 입체이성질체(L, D, 또는 이들의 혼합물) 또는 이들의 배합물도 사용될 수 있다. 첨가되는 양은, 메싸이오닌 설폭사이드의 양이 조절제로 수용가능한 양이도록 하는, 메싸이오닌 잔기의 산화를 억제하기에 충분한 양이어야 한다. 전형적으로는, 이는 약 10% 내지 약 30% 미만의 메싸이오닌 설폭사이드를 함유하는 것을 뜻한다. 일반적으로는, 이는 첨가되는 메싸이오닌 대 메싸이오닌 잔기의 비가 약 1:1 내지 약 1000:1, 예컨대 10:1 내지 약 100:1 범위이도록, 메싸이오닌을 첨가함으로써 달성할 수 있다.

본 발명의 또다른 양태에서, 제형물은 고분자량 중합체 또는 저분자량 중합체로 구성되는 군에서 선택된 안정화제를 추가로 포함한다. 본 발명의 또다른 양태에서, 안정화제는 폴리에틸렌 글리콜(예를 들면, PEG 3350), 폴리비닐 알콜(PVA), 폴리비닐피롤리돈, 카복시-/하이드록시셀룰로스 또는 이의 유도체(예를 들면 HPC, HPC-SL, HPC-L 및 HPMC), 사이클로덱스트린, 황함유 물질 예컨대 모노티오글리세롤, 티오글리콜산(thioglycolic acid) 및 2-메틸티오에탄올(2-methylthioethanol), 및 상이한 염(예를 들면, 소듐 클로라이드) 중에서 선택된다. 이렇게 특정된 안정화제 각각 중 하나는 본 발명의 대안적인 양태를 구성한다.

약학적 조성물은 또한 추가의 안정화제를 포함할 수도 있는데, 이는 이 속의 치료적으로 활성이 있는 폴리펩타이드의 안정도를 추가로 향상시키는 것이다. 본 발명에 유익한 특정 안정화제의 예에는, 메싸이오닌, 메싸이오닌의 산화로부터 폴리펩타이드를 보호하는 EDTA, 및 동결-해동 또는 기계적 전단과 관련된 응집으로부터 폴리펩타이드를 보호하는 비이온성 표면활성제가 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다.

본 발명의 또다른 양태에서, 제형물은 표면활성제를 추가로 포함한다. 본 발명의 또다른 양태에서, 표면활성제는 세제, 에톡실화 캐스터 오일(ethoxylated castor oil), 폴리글리콜라이즈드 글리세라이드(olyglycolyzed glycerides), 아세틸화 모노글리세라이드(cetylated monoglycerides), 소비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 블록 공중합체(예를 들면, Pluronic^®F68, poloxamer 188 및 407와 같은 폴록사머, Triton X-100), 폴리옥시에틸렌 소비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 및 폴리에틸렌 유도체, 예컨대 알킬화 및 알콕시화 유도체(예컨대 Tween-20, Tween-40, Tween-80 및 Brij-35과 같은 트윈), 이의 모노글리세라이드 또는 에톡실화 유도체, 이의 다이글리세라이드 또는 폴리옥시에틸렌 유도체, 알콜, 글리세롤, 렉틴 및 포스포리피드(예를 들면, 포스파티딜 세린, 포스파디틸 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 이노시톨, 다이포스파티딜 글리세롤 및 스핑고미엘린), 포스포리피드의 유도체(예를 들면, 다이팔미토일 포스파티드산), 라이소포스포리피드의 유도체(예를 들면, 에탄올아민, 콜린, 세린 또는 트레오닌의 팔미토일 라이소포스파티딜-L-세린 및 1-아실-sn-글리세로-3-포스페이트 에스테르), 라이소포스파티딜, 다이팔미토일포스파티딜의 알킬, 알콕실(알킬 에스테르), 알콕시(알킬 에테르)-유도체, 예컨대 라이소포스포파티딜콜린, 다이팔미토일포스파티딜콜린의 로로일 및 미리스토일 유도체, 및 극성 헤드기의 변형, 즉 콜린, 에탄올아민, 포스파티드산, 세린, 트레오닌, 글리세롤, 이노시톨, 및 양전하를 띤 DODAC, DOTMA, DCP, BISHOP, 라이소포스파티딜세린 라이소포스파티딜트레오닌, 및 글리세로글리코리피드(예컨대, 세팔린(cephalins)), 글리세로글리코리피드(glyceroglycolipids) (예를 들면 갈락토피란소이드(galactopyransoide)), 스핑고글리코리피드(sphingoglycolipids)(예를 들면, 세라마이드(ceramides), 강글리오사이드), 도데실포스포콜린(dodecylphosphocholine), 암닭 달걀 라이소레시틴(hen egg lysolecithin), 후시딘산 유도체(fusidic acid derivatives)- (예를 들면 소듐 타우로-다이하이드로푸시데이트 등(sodium tauro-dihydrofusidate), 장쇄 지방산 및 이의 염 C6-C12 (예를 들면, 올레산(oleic acid) 및 카프릴산(caprylic acid), 아실카니트네스(acylcarnitines) 및 유도체, 라이신, 아르지닌 또는 히스티딘의 N^a-아실화 유도체, 라이신 또는 아르지닌의 측쇄 아실화 유도체, 라이신, 아르지닌 또는 히스티딘 및 중성 또는 산성 아미노산의 임의의 조합을 포함하는 다이펩타이드의 N^a-아실화 유도체, 중성 아미노산 및 2개의 전하를 띤 아미노산의 임의의 조합을 포함하는 트라이펩타이드의 N^a-아실화 유도체, DSS (도쿠세이트 소듐(docusate sodium), CAS 등록번호 [577-11-7]), 도구세이트 칼슘, CAS 등록번호 [128-49-4]), 도쿠세이트 포타슘, CAS 등록번호 [7491-09-0]), SDS (소듐 도데실 설페이트(sodium dodecyl sulphate) 또는 소듐 로릴 설페이트(sodium lauryl sulphate), 소듐 카프릴레이트(sodium caprylate), 콜린산(cholic acid) 또는 이의 유도체, 담즙산 및 이의 염 및 글리신 또는 타우린 컨쥬게이트, 우르소데옥시콜린산(ursodeoxycholic acid), 소듐 콜레이트(sodium cholate), 소듐 데옥시콜레이트(sodium deoxycholate), 소듐 타우로콜레이트(sodium taurocholate), 소듐 글리코콜레이트(sodium glycocholate), N-헥사데실-N,N-디메틸-3-암모니오-1-프로판설포네이트(N-Hexadecyl-N,N-dimethyl-3-ammonio-1-propanesulfonate), 음이온성(알킬-아릴-설포네이트) 1가 표면활성제, 양성이온성(zwitterionic) 표면활성제(예를 들면, N-알킬-N,N-다이메틸암모니오-1-프로판설포네이트, 3-콜아미도-1-프로필다이메틸암모니오-1-프로판설포네이트), 양이온성 표면활성제(4차 암모늄 염기)(예를 들면, 세틸-트라이메틸암모늄 브로마이드(cetyl-trimethylammoniubromide), 세틸피리디늄 클로라이드(cetylpyridinium chloride)), 비이온성 표면활성제(예를 들면, 도데실 베타-D-글루코피라노사이드(Dodecyl β-D-glucopyranoside), 폴록사민(예를 들면, Tetronic's)(이것은 에틸렌다이아민에 프로필렌 옥사이드 및 에틸렌 옥사이드를 순차 첨가한 것으로부터 유래한 4가작용성 블록 공중합체이다) 중에서 선택될 수 있거나, 또는 표면활성제는 이미다졸린 유도체, 또는 이의 혼합물로 구성되는 군 중에서 선택될 수 있다. 이러한 특정한 표면활성제 각각 중 하나는 본 발명의 대안적인 양태를 구성한다.

약학적 조성물 중에 표면활성제를 사용하는 것은 당업자에게 익히 공지되어 있다. 편의를 위해 하기를 참조하면 된다: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th edition, 2000.

본 발명의 펩타이드 약학적 제형물에 다른 성분도 존재할 수 있다. 이러한 추가적 성분은 습윤제(wetting agents), 에멀젼화제(emulsifiers), 항산화제(antioxidants), 벌킹제(bulking agents), 등장화 변형제(tonicity modifiers), 킬레이팅제, 금속 이온, 유성 베히클(oleaginous vehicles), 단백질(예를 들면, 인간 혈청 알부민, 젤라틴 또는 단백질) 및 양성이온(예를 들면, 베타인(betaine), 타우린(taurine), 아르지닌, 글리신, 라이신 및 히스티딘과 같은 아미노산)을 포함할 수 있다. 이러한 추가적 성분은 물론 본 발명의 약학적 제형물의 전체적 안정성에 악영향을 미치지 않아야 한다.

본 발명의 펩타이드를 함유하는 약학적 조성물은 이러한 치료가 필요한 환자의 여러 부위에, 예를 들면, 국소적 부위에, 예를 들면, 피부 및 점막 부위에, 바이패스 흡수 부위에, 예를 들면, 동맥, 정맥, 심장에, 그리고 흡수가 관여되는 부위에, 예를 들면, 피부내에, 피부아래에, 근육에 또는 복부에 투여할 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여는 여러가지 투여 경로를 통할 수 있는데, 예를 들면, 혀에, 혀아래에, 볼에, 입속에, 경구로, 위장내에, 그리고 소장내에, 비강내에, 폐내에, 예를 들면 세기관지 및 폐포 또는 이들 모두를 통해 폐내에, 상피에, 피부에, 경피에, 질에, 직장내에, 눈에, 예를 들면 결막을 통해 눈에, 요도에, 그리고 비경구로 이러한 치료가 필요한 환자에게 투여한다.

본 발명의 조성물은 여러가지 투여량 형태로 투여될 수 있는데, 예를 들면, 용액, 현탁액, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 다중 에멀젼, 발포, 슬레이브(slave), 패스트(paste), 플라스터(plaster), 연고(oinment), 정(tablet), 코팅된 정, 린스(rinse), 캡슐, 예를 들면 경질 젤라틴 캡슐 및 연질 젤라틴 캡슐, 좌약, 직장 캡슐, 드롭(drop), 겔, 스프레이, 파우더, 에어로졸, 흡입액, 점안액, 안연고, 안린스, 질 페서리(vaginal pessary), 질내 링, 질내 연고, 주사 용액, 인시츄(in situ) 형질전환 용액, 예를 들면 인시츄 겔화, 인시츄 세팅, 인시츄 침전, 인시츄 결정화, 혼입 용액, 및 임플란트로 투여될 수 있다.

본 발명의 펩타이드의 안정성을 추가로 향상시키고, 생물학적 활용도를 향상시키고, 용해도를 향상시키고, 악영향을 감소시키며, 당업자에게 익히 공지되어 있는 크로노테라피(chronotherapy)를 달성하며, 환자의 요구사항이나 상기 중 임의의 조합을 향상시키기 위해서, 예를 들면, 공유결합성 상호작용, 소수성 상호작용, 및 전기적 상호작용을 통해, 본 발명의 조성물은 추가로 약물 담체, 약물 전달 시스템 및 진보된 약물 전달 시스템 속에 컴파운딩(compounding)되거나, 이에 부착될 수 있다. 담체, 약물 전달 시스템 및 진보된 약물 전달 시스템의 예에는 중합체, 예를 들면, 셀룰로스 및 유도체, 다당류, 예를 들면 덱스트란 및 유도체, 녹말 및 유도체, 폴리(비닐 알콜), 아크릴레이트 및 메타크릴레이트 중합체, 폴리아크릴산 및 폴리글리콜산 및 이의 공중합체, 폴리에틸렌 글리콜, 담체 단백질, 예를 들면, 알부민, 겔, 예를 들면, 써모겔(thermogelling) 시스템, 예를 들면, 당업자에게 익히 공지되어 있는 블록-공중합체, 미셀, 리포좀, 마이크로스피어, 나노입자, 액정 및 이의 분산물, 엑체-물 시스템에서 페이즈 활동(phase behavior)의 당업자에게 익히 공지되어 있는 이의 L2 페이즈 및 이의 분산물, 중합체 미셀, 다중 에멀젼, 자가에멀젼화제, 자가마이크로에멀젼화제, 사이클로덱스트린 및 이의 유도체, 및 덴드라이머(dendrimer)가 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은, 본 발명의 펩타이드를 폐에 투여하는 용도로는, 예를 들면, 미터기가 달린 흡입기, 건조 파우더 흡입기, 네뷸라이저(nebulizer), 당업자에게 익히 공지되어 있는 장치에서 사용하기 위해서, 고체, 반고체, 파우더 및 용액 형태 제형물이 유용하다.

본 발명의 조성물은 특히 제어된, 지속적인, 연장된, 지연된 및 저속 방출되는 약물 전달 시스템의 제형물에서 유용하다. 더욱 구체적으로는, 조성물은 당업자에게 익히 공지되어 있는 비경구의 제어된 방출 및 지속적인 방출 시스템(투여 수를 몇배 감소시킬 수 있다)의 제형물에서 특히 유용할 수 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 더욱 바람직한 것은 피하에 투여되는 제어된 방출 및 지속적인 방출 시스템이다. 본 발명의 범위를 제한함이 없이, 유용한 제어된 방출 시스템 및 조성물의 예는 하이드로겔, 유성 겔, 액정, 중합체 미셀, 마이크로스피어, 나노입자가 있다.

본 발명의 조성물에 유용한 제어된 방출 시스템을 제조하기 위한 방법에는 결정화(crystallization), 압축(condensation), 공결정화(co-crystallization), 침전(precipitation), 공침전(co-precipitation), 에멀젼화(emulsification), 분산화(dispersion), 고압 균질화(high pressure homogenisation), 캡슐화(encapsulation), 분무 건조(spray drying), 마이크로캡슐화(microencapsulating), 코아세르베이션(coacervation), 상분리화(phase separation), 마이크로스피어 형성 위한 용매 증발, 압출(extrusion) 및 초임계액체 프로세스(supercritical fluid processes)가 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다. 상기에 관해서는 일반적으로 하기의 문헌을 참조하면 된다: Handbook of Pharmaceutical Controlled Release (Wise, D.L., ed. Marcel Dekker, New York, 2000) 및 Drug and the Pharmaceutical Sciences vol. 99: Protein Formulation and Delivery (MacNally, E.J., ed. Marcel Dekker, New York, 2000).

비경구 투여는 주사기와, 임의로는 펜(pen)형 주사기를 사용하여, 피하주사, 근육내주사, 복강내주사, 및 정맥내주사를 통해 수행할 수 있다. 대안적으로는, 비경구 투여는 혼입 펌프를 통해 수행할 수 있다. 추가의 선택사항은, 본 발명의 펩타이드의 투여를 위한 비강용 스프레이 또는 폐용 스프레이 형태의 용액 또는 현탁액일 수 있는 조성물이다. 또다른 추가의 선택사항으로서, 본 발명의 펩타이드를 함유하는 약학적 조성물은 경피 투여를 위해 변형될 수 있는데, 예를 들면, 바늘없이 수행하는 주사 또는 패치 형태, 임의로는 이온토포레픽(iontophoretic) 패치, 또는 근육외 패치, 예를 들면, 볼에 투여하기 위해 변형될 수 있다.

"안정화된 제형물"이라는 용어는 증가된 물리적 안정도와, 증가된 화학적 안정도, 또는 증가된 물리적 및 화학적 안정도를 갖는 제형물을 뜻하는 것이다.

본원에 사용된 단백질 제형물의 "물리적 안정도"란 단백질이 열이나 기계적 압력 및/또는 소수성 표면 및 경계면과 같은 안정도를 제거하는 경계 및 표면과의 상호작용에 노출된 결과로서, 단백질이 생물학적으로 비활성 및/또는 불용해성 응집물을 형성하는 경향을 뜻하는 용어이다. 수성 단백질 제형물의 물리적 안정도는 다양한 시간 및 다양한 온도에서 적당한 용기(예를 들면, 카트리지나 바이얼)내 채워진 제형물을 기계적/물리적 압력(예를 들면, 교반)에 노출시킨 다음 육안 검사 및/또는 탁도 측정함으로써 평가한다. 제형물의 육안 검사는 암소에서 한곳으로 모아 비추어지는 빛 아래에서 수행한다. 제형물의 탁도는 탁도의 정도를 매긴 육안 점수로 측정하는데, 예를 들면 0 내지 3(전혀 탁하지 않은 제형물은 0점의 육안 점수에, 직사광선에서 육안으로 관찰되는 탁도를 보이는 제형물은 육안 점수 3점에 상응한다)점으로 매긴다. 제형물이 직사광선에서 육안으로 관찰되는 탁도를 보이는 경우 단백질 응집에 관해 물리적으로 안정하지 않은 것으로 분류된다. 대안적으로는, 제형물의 탁도는 당업자에게 익히 공지되어 있는 단순한 탁도 측정법에 의해 측정할 수도 있다. 수성 단백질 제형물의 물리적 안정도는 또한, 단백질의 위치적 상태를 보는 스펙트로스코피용 제제나 탐침을 사용하여 측정할 수 있다. 탐침은 바람직하게는 단백질의 원래 구조가 아닌(non-native) 컨포머(conformer)에 바람직하게 결합하는 작은 분자이다. 단백질 구조의 스펙트로스코피용 탐침인 작은 분자의 예로는 티오플라빈 (Thioflavin T)가 있다. 티오플라빈 T는 아밀로이드 섬유의 검출을 위해 널리 사용되는 형광 염료이다. 섬유, 그리고 아마도 다른 단백질 구조 등이 존재하면, 티오플라빈 T는 약 450 nm에서 최대의 새로운 들뜬 상태로 이르렀다가, 섬유 단백질 형태에 결합하였을 때에는 482 nm에서 발광이 증가한다. 결합하지 않은 티오플라빈 T는 그 파장에서 본질적으로는 형광을 발하지 않는다.

원래 단백질 상태(native)에서 원래 단백질 상태가 아닌 것(non-native)으로 단백질 구조가 변화되는 것의 탐침으로서 다른 작은 분자도 사용될 수 있다. 예를 들면, "소수성 패치" 탐침은 단백질의 노출된 소수성 패치에 차별적으로 결합하는 탐침이다. 소수성 패치는 원래 상태에 있는 단백질의 3차 구조내에서는 일반적으로 감추어져 있지만, 단백질이 폴딩하지 않거나 파괴된 상태로 되자마자 노출된다. 이러한 스펙트로스코피용 탐침인 작은 분자의 예는 방향족 염료, 예컨대 안트라센, 아크리딘, 페난트롤린 등이 있다. 다른 스펙트로스코피용 탐침은 금속-아미노산 복합체, 예컨대 소수성 아미노산, 예컨대 페닐알라닌, 루신, 아이소루신, 메싸이오닌, 발린 등의 코발트 금속 복합체가 있다.

본원에서 사용된 단백질 제형물의 "화학적 안정도"라는 용어는 원래 단백질 구조에 비해, 잠재적인 감소된 생물학적 포텐시(potency) 및/또는 잠재적인 증가된 면역학적 성질을 갖는 화학적 분해 산물의 형성을 유도하는 단백질 구조내 화학적 공유 결합 변화를 뜻한다. 각종 화학적 분해 산물은 원래 단백질의 유형 및 성질 그리고 단백질이 노출되는 환경에 따라 달리 형성될 수 있다. 화학적 분해의 감소는 최대한으로 해도 완전히는 피할 수 없을 것이고, 당업자에게 익히 공지되어 있는 바와 같이 화학적 분해 산물의 양이 증가되는 것은 단백질 제형물의 보관 및 사용 동안에 종종 관찰된다. 대부분의 단백질은 탈아미노화에 취약한데, 탈아미노화란, 글루타미닐기 또는 아스파라지닐기의 아마이드기 측쇄가 수화되어 자유 카복실기를 형성하는 과정을 말한다. 다른 분해 경로에는, 고분자량 형질전환 산물을 형성하는 것이 포함되는데, 이것은 두 개 이상의 단백질 분자가 트랜스아미노화 및/또는 디설파이드 상호작용을 통해 다른 것에 결합하여 공유 결합된 이량체, 올리고머 및 중합체 분해 산물을 형성하는 것이다(Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern . T.J. & Manning M.C., Plenum Press , New York 1992). 산화(예를 들면, 메싸이오닌 잔기에 대한 산화)는 또다른 화학적 분해의 변이체로서 언급될 수 있다. 단백질 제형물의 화학적 안정도는 상이한 환경 조건에 노출된 후 다양한 시점에서 화학적 분해 산물의 양을 측정함으로써 평가할 수 있다(분해 산물의 형성은 예를 들면 온도를 증가시킴으로써 종종 가속화할 수 있다). 각 개별적인 분해 산물의 양은 각종 크로마토그래피 기술(예를 들면, SEC-HPLC 및/또는 RP-HPLC)을 사용하여 분자 크기 및/또는 전하에 따라 분해 산물을 분리함으로써 보통 측정한다.

따라서, 상기에서 개괄적으로 말한 바와 같이, "안정화된 제형물"이라는 용어는 증가된 물리적 안정도, 증가된 화학적 안정도 또는 증가된 물리적 및 화학적 안정도를 갖는 제형물을 뜻하는 것이다. 일반적으로, 제형물은 유통기한이 만기되기 전에 사용 및 보관하는 동안에(권장되는 사용 및 보관 조건에 따라야 한다) 안정해야만 한다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 펩타이드를 포함하는 약학적 제형물은 6주 이상의 사용 기간 동안에 안정하며, 3년 이상의 보관 기간 동안에 안정하다.

본 발명의 다른 양태에서, 본 발명의 펩타이드를 포함하는 약학적 제형물은 4주 이상의 사용 기간 동안에 안정하며, 3년 이상의 보관 기간 동안에 안정하다.

본 발명의 또다른 양태에서, 본 발명의 펩타이드를 포함하는 약학적 제형물은 4주 이상의 사용 기간 동안에 안정하며, 2년 이상의 보관 기간 동안에 안정하다.

본 발명의 또다른 양태에서, 본 발명의 펩타이드를 포함하는 약학적 제형물은 2주 이상의 사용 기간 동안에 안정하며, 2년 이상의 보관 기간 동안에 안정하다.

IL -21 변이체의 활성 시험

stat-조절되는 루시페라아제 리포터 시스템을 사용하는 세포 활성 시험을 사용하여 hIL-21 야생형 및 돌연변이형 단백질을 분석하였다.

시험에서는 쥣과의 Baf3 세포주를 사용하였는데, 본 세포주는 인간 IL-21R 및 Stat-링크 루시페라아제 리포터 구조체를 발현하도록 안정하게 형질감염된 것이었다. Baf3 세포주는 IL-21 리셉터 복합체의 신호전달에 필수적인 성분을 구성하는 감마 C "common chain"을 내생적으로 발현한다. 자극에 앞서 6시간 동안 Baf3/hIL-21R 리포터 세포주를 IL-3이 없는 배지에서 아무것도 공급하지 않았다. 세포를 자극하고 24시간 동안에 순차적으로 투여량-반응 분석을 수행하였다.

도 1은 HEK293 FS 세포 (Stengaard-Pedersen et al. N.Engl.J.Med. (2003) 349: 554; Invitrogen)에서 일시적으로 발현된 단백질을 분석한 것을 나타낸다. 단백질을 형질감염후 48시간 동안 수집된 상층액 그대로의 형태로 분석하였다.

도 2는 정제된 단백질로서 분석된 야생형 및 돌연변이형 hIL-21 단백질을 분석한 것을 나타낸다. Chim-IL21는 IL-21 sub[K77 - T92] (SEQ ID No.7)이다. 여기에서 구조체는 E.coli내에서 발현되도록 준비하였으며, 봉입체 중에 존재하는 단백질의 리폴딩을 통해 정제된다.

또다른 IL -21 변이체의 활성 시험

IL-21 변이체를 암호화하는 cDNA를 일시적 발현에 의해 분석한 다음, stat-조절 리포터 시스템에서 활성 분석시험하였다.

cDNA를 HEK293 FreeStyle 세포(Stengaard-Pedersen et al. N.Engl.J.Med. (2003) 349: 554; Invitrogen)에 형질감염한다. 형질감염후 48시간 째에 혈청이 없는 배지로부터 상층액을 수집하고, 세포내 분석시험한다. 시험에는 쥣과의 Baf3 세포주를 사용하였는데, 이 세포주는 인간 IL-21R 및 Stat-링크 루시페라아제 리포터 구조체를 발현하도록 안정하게 형질감염된 것이다. Baf3 세포는 활성 IL-21 리셉터 복합체의 γc 성분을 내생적으로 발현한다. 자극에 앞서 18시간 동안 Baf3/hIL-21R 세포주를 IL-3이 없는 배지에서 아무것도 공급하지 않았다. HEK293-FS 형질감염체로부터 상층액 그대로를 사용하여 투여량-반응 분석을 수행한다. 자극 기간은 4시간이다.

약학적 방법

하기의 인 비트로 방법은 ADCC의 향상을 연구하기 위하여 사용한 것이다.

표적 항원을 발현하는 표적 세포를 표적 항원에 대한 항체 및 효과기 세포로서 모세혈관 단핵 세포, NK 세포, 중성구, 마크로파지, 단핵구 또는 DC와 함께 인큐베이팅한다. 효과기 세포는 IL-21과 1일 내지 10일 동안 미리 인큐베이팅할 수 있고, 그렇지 않으면, IL-21을 효과기 세포 및 표적 세포 모두를 함유하는 배양액에 첨가할 수 있다. ADCC를 향상시킬 수 있는 다른 성분을 배양액 또는 전배양액에 첨가할 수 있다. ADCC의 효율은 표적 세포로부터의 특이적인 ⁵¹Cr 방출 및 전술한 바와 같은 LDH 활성(Golay et al., Haematologica 88:1002-1012, 2003 또는 Liu et al., Cancer Immun 2:13, 2002 또는 Watanabe et al., Breast Cancer Res Treat 53:199-207, 1999)을 사용하여 측정할 것이다.

유체 세포 측정법(flow cytometry)을 사용하는 ADCC 측정은 상기 언급한 바와 같은 분석에 근거한 것이다(Flieger et. al., J Immunother 23:480-486, 2000 또는 Flieger et al., J Immunol Methods 180:1-13, 1995 또는 Flieger et al., Hybridoma 18:63-68, 1999).

2색 형광 분석을 통한 ADCP의 측정은 하기 문헌에 기재된 바와 같다: Watanabe et al., Breast Cancer Res Treat 53:199-207, 1999 또는 Akewanlop et al., Cancer Res 61:4061-4065, 2001.

ADCC의 향상을 측정하기 위한 인 비보 방법은 하기와 같다.

백혈병 세포 또는 형질전환된 세포를 주사기를 통해 i.v., i.p. 또는 s.c.로 동물에 주사한 다음에, 백혈병 세포 또는 형질전환된 세포의 발현에 의해 항원을 인식하는 치료용 항체로 치료하는데, 이 때 IL-21 치료를 병행하거나 병행하지 않는다. 종점들은 종양 발현 및 생존이다. ADCC의 개입은 FcγRI 차단 항체, 또는 FcγRI 결핍 마우스의 사용에 의해 확인될 수 있다.

인간 기원의 표적 세포에 대한 ADCC의 향상을 조사하기 위한 인 비보 방법은 Zhang et al., Blood 102:284-288, 2003 또는 Flavell et al. Cancer Res 58:5787-5794, 1998에 기술되어 있다. 이러한 모델에 따르면, 인간 백혈병 세포 또는 형질전환된 세포는 i.v., i.p. 또는 s.c.로, SCID 마우스에 주사한 다음, 백혈병 세포 또는 형질전환된 세포의 발현에 의해 항원을 인식하는 치료용 항체로 치료하는데, 이 때 IL-21 치료를 병행하거나 병행하지 않는다.

종양 세포주, 예를 들면, 루이스 폐 암종(Lewis Lung Carcinoma, LLC) 또는 B16-F10 멜라닌종 세포 또는 신장세포 암종 세포 또는 4T1 유방암종 세포를 마우스에 주사기로 s.c. 이식한다. 종양이 손으로 만져질 때, 본 적용에서 상기 기술한 바와 같은 다른 항암제와 배합하여 IL-21로 마우스를 처리한다. 이 방법은 하기의 문헌에 기술되어 있다: Palumbo et al. , Cancer Res . 62:6966-6972 (2002); Bove et al., Biochem Biophys Res Commun 291:1001-1005 (2002); Wigginton et al., J Immunol 169:4467-4474 (2002).

종양 세포주, 예를 들면, 루이스 폐 암종(LLC) 세포 또는 B16-F10 멜라닌종 세포를 주사기를 통해 s.c.로 마우스에 주사한다. 1차 종양은 1-4주 후에 제거되었으며, 본 적용에서 상기 기술한 바와 같은 다른 항암제와 배합하여 IL-21로 마우스를 처리한다. 이 방법은 하기의 문헌에 기술되어 있다: Palumbo et al., Cancer Res . 62:6966-6972 (2002).

종양 세포주, 예를 들면, 루이스 폐 암종(LLC) 세포 또는 B16-F10 멜라닌종 세포 또는 renca 신장 세포 암종 세포를 주사기를 통해 s.c.로 마우스에 주사하고, 본 적용에서 상기 기술한 바와 같은 다른 항암제와 배합하여 IL-21로 마우스를 처리한다. 이 방법은 하기의 문헌에 기술되어 있다: Amirkhosravi et al., Thromb.Haemost. 87:930-936 (2002);Hosaka et al., Cancer Lett 161:231-240 (2000); Maini et al., In vivo 17:119-123 (2003).

신장 세포 암종 세포를 공통유전자를 가진(syngeneic) 마우스 한쪽 신장에 주사한다. 1차 종양은 1-4주 후에 제거한 다음에, 본 적용에서 상기 기술한 바와 같은 다은 항암제와 배합하여 IL-21로 마우스를 처리한다. 이 방법은 하기의 문헌에 기술되어 있다: Murphy et al., J Immunol 170:2727-2733 (2003).

<110> Novo Nordisk A/S <120> IL-21 Variants <150> PA 2005 00562 <151> 2005-04-18 <160> 11 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 162 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Arg Ser Ser Pro Gly Asn Met Glu Arg Ile Val Ile Cys Leu Met 1 5 10 15 Val Ile Phe Leu Gly Thr Leu Val His Lys Ser Ser Ser Gln Gly Gln 20 25 30 Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile Val Asp Gln 35 40 45 Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu Pro Ala Pro 50 55 60 Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser Cys Phe Gln 65 70 75 80 Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu Arg Ile Ile 85 90 95 Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser Thr Asn Ala 100 105 110 Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys Asp Ser Tyr 115 120 125 Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys Ser Leu Leu 130 135 140 Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His Gly Ser Glu 145 150 155 160 Asp Ser <210> 2 <211> 133 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gln Gly Gln Asp Arg 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Claims (46)

1. a) SEQ ID No:2의 아미노산 번호 65 내지 아미노산 번호 96으로 구성되는 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 제 1 서열; 또는

   b) 상기 제 1 서열에서 10개까지의 아미노산의 보존적 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드.
2. 제 1 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 86으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드.
3. 제 1 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 88로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드.
4. 제 1 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 90으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드.
5. 제 1 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 82 내지 아미노산 번호 88 로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드.
6. 제 1 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드.
7. 제 1 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 71 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드.
8. 제 1 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 65 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드.
9. 제 1 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 96으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 서열을 포함하는 펩타이드.
10. 제 2 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 86 으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드.
11. 제 3 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 88로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드.
12. 제 4 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 83 내지 아미노산 번호 90으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드.
13. 제 5 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 82 내지 아미노산 번호 88로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드.
14. 제 6 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드.
15. 제 7 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 71 내지 아미노산 번호 92 로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드.
16. 제 8 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 65 내지 아미노산 번호 92로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드.
17. 제 9 항에 있어서, SEQ ID No:2의 아미노산 번호 77 내지 아미노산 번호 96으로 구성된 영역내 하나 이상의 아미노산 결실 및/또는 치환에 의해 수득된 펩타이드.
18. 제 1 항에 있어서,

    A) SEQ ID No:3, SEQ ID No:4, SEQ ID No:5 및 SEQ ID No:6; 및

    B) 추가로 N-말단 메싸이오닌을 가지는 A)의 펩타이드; 및

    C) 10개까지의 아미노산이 보존적으로 치환되는 A)-B)의 펩타이드 중에서 선택되는 펩타이드.
19. 제 1 항에 있어서,

    D) SEQ ID No:7, SEQ ID No:8, SEQ ID No:9 및 SEQ ID No:10; 및

    E) 추가로 N-말단 메싸이오닌을 가지는 D)의 펩타이드; 및

    F) 10개까지의 아미노산이 보존적으로 치환되는 D)-E)의 펩타이드 중에서 선택되는 펩타이드.
20. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드의 포텐시(potency)는 실시예에서 기술된 바와 같이, 하나 이상의 분석에서 야생형 IL-21의 포텐시의 적어도 80%인 것을 특징으로 하는 펩타이드.
21. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드의 포텐시는 실시예에서 기술된 바와 같이, 하나 이상의 분석에서 야생형 IL-21의 포텐시와 적어도 실질적으로 유사한 것을 특징으로 하는 펩타이드.
22. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드의 포텐시는 실시예에서 기술된 바와 같이, 하나 이상의 분석에서 야생형 IL-21의 포텐시보다 실질적으로 높은 것을 특징으로 하는 펩타이드.
23. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드의 포텐시는 실시예에서 기술된 바와 같이, 하나 이상의 분석에서 야생형 IL-21의 포텐시보다 적어도 2배 높은 것을 특징으로 하는 펩타이드.
24. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드의 포텐시는 실시 예에서 기술된 바와 같이, 하나 이상의 분석에서 야생형 IL-21의 포텐시보다 적어도 5배 높은 것을 특징으로 하는 펩타이드.
25. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드의 포텐시는 실시예에서 기술된 바와 같이, 하나 이상의 분석에서 야생형 IL-21의 포텐시보다 적어도 10배 높은 것을 특징으로 하는 펩타이드.
26. 치료의 용도를 위한 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드.
27. 암의 치료의 용도를 위한 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드.
28. 암의 치료를 위한 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드.
29. 제 27 항 또는 제 28 항에 있어서, 암은 비전이성 및 전이성 종양 질환, 예컨대 악성 멜라닌종, 비(non)악성 피부암, 신장세포 암종, 머리 및 목의 암, 내분비계의 암, 난소암, 작은세포허파암, 비(non)작은세포허파암, 유방암, 식도암, 상부 위창자암, 직장결장암, 간 및 담즙선 암, 췌장암, 전립선암, 방광암, 고환암, 자궁경부암, 자궁내막암, 뼈육종 및 연조직 육종, 중추신경계의 암, 림프종, 백혈병, 및 미지의 일차 오리진(origin)의 암 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 펩 타이드.
30. 제 29 항에 있어서, 암은 악성 멜라닌종인 것을 특징으로 하는 용도.
31. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물.
32. 제 31 항에 있어서, 상기 조성물은 암 약제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
33. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드의 유효량을, 임의로는 암 약제와 배합하여, 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료 방법.
34. 제 33 항에 있어서, 암은 비전이성 및 전이성 종양 질환, 예컨대 악성 멜라닌종, 비악성 피부암, 신장세포 암종, 머리 및 목의 암, 내분비계의 암, 난소암, 작은세포허파암, 비작은세포허파암, 유방암, 식도암, 상부 위창자암, 직장결장암, 간 및 담즙선 암, 췌장암, 전립선암, 방광암, 고환암, 자궁경부암, 자궁내막암, 뼈육종 및 연조직 육종, 중추신경계의 암, 림프종, 백혈병, 및 미지의 일차 오리진의 암 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
35. 제 34 항에 있어서, 암은 악성 멜라닌종인 것을 특징으로 하는 방법.
36. 암의 치료를 위한 약제 제조시 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드의 용도.
37. 제 36 항에 있어서, 암은 비전이성 및 전이성 종양 질환, 예컨대 악성 멜라닌종, 비악성 피부암, 신장세포 암종, 머리 및 목의 암, 내분비계의 암, 난소암, 작은세포허파암, 비작은세포허파암, 유방암, 식도암, 상부 위창자암, 직장결장암, 간 및 담즙선 암, 췌장암, 전립선암, 방광암, 고환암, 자궁경부암, 자궁내막암, 뼈육종 및 연조직 육종, 중추신경계의 암, 림프종, 백혈병, 및 미지의 일차 오리진의 암 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
38. 제 37 항에 있어서, 암은 악성 멜라닌종인 것을 특징으로 하는 용도.
39. 제 항에 있어서, 암은 비전이성 및 전이성 종양 질환, 예컨대 악성 멜라닌종, 비악성 피부암, 신장세포 암종, 머리 및 목의 암, 내분비계의 암, 난소암, 작은세포허파암, 비작은세포허파암, 유방암, 식도암, 상부 위창자암, 직장결장암, 간 및 담즙선 암, 췌장암, 전립선암, 방광암, 고환암, 자궁경부암, 자궁내막암, 뼈육종 및 연조직 육종, 중추신경계의 암, 림프종, 백혈병, 및 미지의 일차 오리진의 암 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
40. 제 항에 있어서, 암은 악성 멜라닌종인 것을 특징으로 하는 용도.
41. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드를 암호화하는 핵산 구조체.
42. 제 41 항에 따른 핵산 구조체를 포함하는 벡터.
43. 제 41 항의 핵산 구조체, 또는 제 42 항의 벡터를 포함하는 숙주.
44. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드에 대한 항체.
45. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드에 특이적으로 결합하는 항체.
46. 제 45 항에 있어서, 야생형 IL-21에는 결합하지 않는 것을 특징으로 하는 항체.

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