CZ282603B6 - Humanizované a chimerické monoklonální protilátky - Google Patents
Humanizované a chimerické monoklonální protilátky Download PDFInfo
- Publication number
- CZ282603B6 CZ282603B6 CS923327A CS332792A CZ282603B6 CZ 282603 B6 CZ282603 B6 CZ 282603B6 CS 923327 A CS923327 A CS 923327A CS 332792 A CS332792 A CS 332792A CZ 282603 B6 CZ282603 B6 CZ 282603B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- ser
- thr
- human
- gly
- val
- Prior art date
Links
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 title claims description 31
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 82
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 61
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 61
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 61
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 26
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 claims description 2
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 claims description 2
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 claims description 2
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 claims 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract description 59
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 abstract description 19
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 abstract description 19
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 abstract description 18
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 abstract description 8
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 abstract description 3
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 45
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 43
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 38
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 25
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 24
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 18
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 17
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 16
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 16
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 14
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 14
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 14
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 14
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 13
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 13
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- 101000935587 Homo sapiens Flavin reductase (NADPH) Proteins 0.000 description 9
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 9
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 7
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 7
- 101710117290 Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 4
- 241000699729 Muridae Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102220503491 Transmembrane protease serine 9_S30T_mutation Human genes 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 102220126961 rs369936288 Human genes 0.000 description 3
- 102220057222 rs730881143 Human genes 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 2
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000001130 anti-lysozyme effect Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 2
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- -1 framework regions Proteins 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000003335 steric effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 1,3,4,6-tetrachloro-3a,6a-diphenylimidazo[4,5-d]imidazole-2,5-dione Chemical compound ClN1C(=O)N(Cl)C2(C=3C=CC=CC=3)N(Cl)C(=O)N(Cl)C12C1=CC=CC=C1 FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFFIDZXUXFLSSR-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-N-[2-(4-methylpentan-2-yl)-3-thienyl]-3-(trifluoromethyl)pyrazole-4-carboxamide Chemical compound S1C=CC(NC(=O)C=2C(=NN(C)C=2)C(F)(F)F)=C1C(C)CC(C)C PFFIDZXUXFLSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- HTAGIZQYGRLQQX-AUUYWEPGSA-N Amurine Chemical compound C1C2=CC=3OCOC=3C=C2[C@]23C=C(OC)C(=O)C=C3[C@@H]1N(C)CC2 HTAGIZQYGRLQQX-AUUYWEPGSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001598984 Bromius obscurus Species 0.000 description 1
- CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M Cetrimide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 1
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241001045988 Neogene Species 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 1
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- SJRUJQFQVLMZFW-WPRPVWTQSA-N Val-Pro-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O SJRUJQFQVLMZFW-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- HTAGIZQYGRLQQX-UHFFFAOYSA-N amurine Natural products C1C2=CC=3OCOC=3C=C2C23C=C(OC)C(=O)C=C3C1N(C)CC2 HTAGIZQYGRLQQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Inorganic materials [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 230000001159 endocytotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 108010052305 exodeoxyribonuclease III Proteins 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 description 1
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101150091879 neo gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N parathion Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- NLJUOWMZPAVXHU-UHFFFAOYSA-N prop-2-enamide;urea Chemical compound NC(N)=O.NC(=O)C=C NLJUOWMZPAVXHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 102200004706 rs1060505034 Human genes 0.000 description 1
- 102200156936 rs28934878 Human genes 0.000 description 1
- 102200118280 rs33918343 Human genes 0.000 description 1
- 102220068408 rs57932685 Human genes 0.000 description 1
- 102220244406 rs761122171 Human genes 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/867—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody produced via recombinant dna technology
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Virology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Humanizované monoklonální protilátky, obsahující umělou modifikovanou konvenční sekvenci přinejmenším úseků základní struktury (FRs) variabilní oblasti těžkého řetězce humánního imunoglobulinu. Dále se řešení týká odpovídajících humanizovaných a chimerických monoklonálních protilátek, které se vážou k epitopům epidermálního růstového faktoru (EGP), v nichž mají zodpovědné hypervariabilní oblasti následující složení aminokyselin: lehký řetězec CDR-1 -Ser-Ala-Ser-Ser-Val-Thr-Tyr-Met-TyrCDR-2 -Asp-Thr-Ser-Asn-Leu-Ala-Ser CDR-3 -Gln-Gln-Trp-Ser-Ser-His-Ile-Phe-Thrtěžký řetězec CDR-1 -Ser-His-Trp-Met-HisCDR-2 -Glu-Phe-Asn-Pro-Ser-Asn-Gly-Arg-Thr- -Asn-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-SerCDR-3 -Arg-Asp-Tyr-Asp-Tyr-Asp-Gly-Arg-Tyr-Phe- -Asp-TyrTěchto protilátek se používá k terapeutickým a diagnostickým účelům při léčbě nádorů.ŕ
Description
Oblast techniky
Vynález se týká nových humanizovaných monoklonálních protilátek, které obsahují umělou modifikovanou konvenční sekvenci, přinejmenším úseků základní struktury ve variabilní oblasti těžkého řetězce humánních imunoglobulinů.
Vynález se dále týká humanizovaných monoklonálních protilátek, které se vážou k epitopům epidermálního růstového faktoru. Vynález zveřejňuje sekvence aminokyselin odpovídajícího místa, vázajícího antigen pro tento receptor.
Dále se vynález týká farmaceutických přípravků, které obsahují tyto protilátky. Tyto farmaceutické přípravky se hodí pro léčbu nádorů, jako jsou melanomy, gliomy a karcinomy. Protilátek podle vynálezu je také možno používat při diagnostických aplikacích, při nichž se zjišťuje povaha a umístění těchto nádorů in vitro nebo in vivo.
V popisu se používá několika technických termínů, které budou nyní vysvětleny:
Pod pojmem humanizované protilátky se rozumějí protilátky, které obsahují úseky základní struktury variabilních oblastí a konstantních oblastí aminokyselin, umístěných v lehkém a těžkém řetězci, které pocházejí z humánních zdrojů. Naproti tomu jejich hypervariabilní oblasti pocházejí z nehumánních zdrojů.
Pod pojmem chimérické protilátky se rozumějí protilátky, obsahující variabilní a hypervariabilní oblasti, které pocházejí z nehumánních zdrojů, zatímco jejich konstantní oblasti jsou humánního původu.
Úseky základní struktury protilátky jsou v dalším textu označovány zkratkou FRs (framework regions). FRs se nacházejí ve variabilních oblastech. V těchto oblastech dochází k určité alteraci aminokyselin.
Zkratkou CDRs (complementarity determining regions) se označují oblasti, určující komplementaritu či hypervariabilní oblasti protilátky. CDRs se nalézají ve variabilních oblastech. Tyto oblasti představují specifické místo, vázající antigen, a vykazují nesmírně velkou výměnu aminokyselin. CDRs jsou především zodpovědné za vazebnou afinitu antigenu.
Pod pojmem konvenční sekvence se rozumí sekvence aminokyselin, která se nevyskytuje v přírodě, jako variabilní oblasti lehkého nebo těžkého řetězce. Konvenční sekvence se používá jako náhrada za původně přítomné variabilní oblasti nehumánního těžkého nebo lehkého řetězce. Konvenční sekvence je syntetická a jedná se tedy o umělou sekvenci nejběžnějších aminokyselin určité třídy nebo podtřídy či podskupiny těžkých nebo lehkých řetězců humánních imunoglobulinů.
Zkratkou EGF se označuje epidermální růstový faktor a zkratkou EGFR se označuje receptor epidermálního růstového faktoru.
Pod pojmem VL oblasti se rozumějí variabilní oblasti lehkého řetězce.
Pod pojmem VH oblasti se rozumějí variabilní oblasti těžkého řetězce.
Dosavadní stav techniky
Monoklonální protilátka z Muridae 425 (MAb 425) byla vypěstována proti humánní buněčné linii karcinomu A431 a zjistilo se, že se váže k polypeptidovému epitopu na vnější doméně receptorů humánního epidermálního růstového faktoru (EGFR). Tato protilátka inhibuje vazbu epidermálního růstového faktoru (EGF) na místech EGFR jak s nízkou, tak s vysokou afinitou (Murthy a další (1987), Arch. Biochem. Biophys. 252, 549). Ke zvýšené expresi EGFR dochází u maligní tkáně různého původu, což činí z MAb 425 možnou látku pro diagnostiku a léčbu humánních nádorů. Skutečně se zjistilo, že MAb 425 vykazuje cytotoxicitu vůči nádorům in vitro a potlačuje růst nádorových buněk z buněčných linií, odvozených od epidermoidního a colorectálního karcinomu in vitro (Rodeck a další (1987), Cancer Res. 47, 3 692). Také bylo prokázáno, že se MAb 425, značená radioizotopem, váže ke xenoroubům humánních maligních gliomů u myší (Takahashi a další (1987), Cancer Res. 47, 3 847).
EGF je polypeptidovým hormonem, který je mitogenní pro epidermální a epithelové buňky. Při interakci EGF se senzitivními buňkami dochází kjeho vazbě na membránové receptory; komplexy receptor-EGF se shlukují a potom jsou pojmuty do endocytotických váčků. Tím dochází k úkazu, označovanému termínem regulace směrem dolů (down-regulation). Vazba EGF indukuje tyrosin kinázovou aktivitu receptorové molekuly a indukuje syntézu DNA.
Receptor EGF je transmembránovým glykoproteinem o velikost přibližně 170 000 Dalton (Cohen (1982), J. Biol. Chem. 258, 1523). Je genovým produktem c-erb-B proto-onkogenu (Downward a další, Nátuře, sv. 307, strana 521 až 527, 1984). Tento receptor se vyskytuje ve dvou kinetických formách, které jsou označovány jako receptor s nízkou afinitou a receptor s vysokou afinitou.
Buněčná linie karcinomu A431 exprimuje na povrchu svých buněk velké množství receptorů EGF, a proto jí bylo použito při mnoha studiích pro tvorbu protilátek anti-EGF-receptor. Receptory na A 431 se však liší od receptorů na jiných typech buněk v uhlovodíkových zbytcích, které jsou připojeny k polypeptidu. Mnohé protilátky, vypěstované proti membránám A431, jsou proto zaměřeny proti uhlovodíkům, které nejsou společné pro všechny formy receptorových molekul (viz například Schreiber (1983) J. Biol. Chem., 258, 846).
Jiné monoklonální protilátky jsou reaktivní vůči proteinovému zbytku receptorů EGF. Při vazbě kreceptorům EGF vykazují tyto protilátky různé vlastnosti, o nichž se předpokládá, že jsou závislé na konkrétní části vázané receptorové molekuly a na izotypu protilátky. Některé protilátky napodobují některé účinky EGF (agonisty) a některé tyto účinky inhibují (antagonisty).
V průběhu růstu nádoru se předpokládá exprese receptorů EGF. Zjistilo se, že gen pro tyto receptory je buněčným analogem ptačího virového onkogenu v-erb-B (Ulrych a další (1984), Nátuře, 309, 418). Kromě toho bylo nalezeno spojení mezi pozdními stadii vývoje melanomu a kopiemi chromozomu, nesoucího receptorový gen (Koprowski a další, Somatic Cell and Molecular Genetics, sv. 11, str. 297 až 302, 1985).
Jelikož receptory EGF jsou exprimovány v celé řadě tuhých nádorů, poskytují vhodný cíl pro protinádorovou léčbu. Existuje však nutnost nalézt vhodnou protireceptorovou protilátku. Mnohé ze známých protilátek mají vlastnosti, které by při jejich použití jako protinádorových činidel byly škodlivé. Tak například protilátky, které napodobují účinky EGF, by mohly stimulovat růst nádorů, místo aby jej zastavovaly. Jiné protilátky, které se vážou k receptorům s vysokou nebo nízkou afinitou, by mohly mít účinnost nižší, než je účinnost optimální, poněvadž EGF by ještě mohl projevovat svůj účinek prostřednictvím nevázaných receptorů. Ještě další protilátky mění receptory s nízkou afinitou na receptory s vysokou afinitou, což by mohlo mít za následek výrazné posílení růstu nádoru namísto jeho inhibice. Existuje tedy v tomto oboru potřeba nalézt
-2CZ 282603 B6 protilátku proti receptorů EGF, která by byla vhodná pro protinádorovou léčbu.
Protilátek MAb (z Muridae) se sice používalo pro léčbu lidí, vyvolávaly však imunologickou odpověď (Giorgi a další, /1983/ Transplant. Proč. 15, 639; Jaffers a další, /1986/, Transplantation 41, 572). Pro překonání tohoto problému se několik skupin snažilo humanizovat protilátky z Muridae. Přitom lze použít dvou přístupů. Jednak lze domény z konstatních oblastí jak v lehkém, tak v těžkém řetězci Muridae, nahradit humánními konstantními oblastmi. Takové chimérické murinohumánní protilátky byly úspěšně zkonstruovány z několika murinních protilátek, zaměřených proti antigenům, které jsou spojeny s humánními nádory (Sun a další /1987/, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 84, 214; Whittle a další /1987/, Protein Eng., 1, 499; Liu a další /1987/, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 84, 3 439; Gillies a Wesolowski /1990/, Hum. Antibod. Hybridomas 1, 47). Při tomto přístupu se úplně zachová místo, vázající antigen murinní protilátky a tedy i afinita pro antigen a současně se dodají humánní izotypové aefektorové funkce. Při druhém přístupu se pouze roubují oblasti, určující komplementaritu (CDRs) z myších variabilních oblastí spolu s humánními úseky základní struktury (FRs) z variabilních domén z jak lehkého, tak těžkého řetězce (VL a VH). Argumentuje se, že při této technice se převede kritická a hlavní část místa, vázajícího antigen, do humánní protilátky (Jones a další /1986/, Nátuře, 321, 14).
Roubování CDR bylo prováděno u několika monoklonálních protilátek, pocházejících z hlodavců (Jones a další /1986/ Nátuře, 321, 14; Reichmann a další /1988/, Nátuře 322, 21; Verhoeyen a další /1988/, Science 239, 18; Queen a další /1989 Proč. Nati. Acad. Sci. USA 86, 10029; Co a další /1991/ Proč. Nati. Acad. Sci. USA 88, 2 869; Gorman a další /1991/ Proč. Nati. Acad. Sci. USA 88, 4 181; Maeda a další /1991/ Hum. Antibod. Hybridomas 2, 124; Tempest a další /1991/, Biol. Technology 9, 266). Všechny si zachovaly svou schopnost vázat antigen, přestože jejich afinita byla obvykle snížena. Ve většině případů bylo zapotřebí vyměnit určité aminokyseliny v humánních úsecích základní struktury (FRs). Při klinickém zkoušení se jak chimérická, tak CDR roubovaná protilátka ukázala být lepší než myší protilátky (Hale a další /1988/, Lancet, ii, 1394; LoBuglio a další /1989/, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 86, 4 220; Mathieson a další /1990/ N. Eng. J. Med. 323, 250). V žádném případě však není znám obecný poznatek, které aminokyseliny mají být vyměněny a takovou výměnu nelze ani úplně předvídat.
V EP 088 994 je navržena konstrukce vektorů rekombinantní DNA, které obsahují sekvenci DNA, kódující variabilní doménu lehkého nebo těžkého řetězce imunoglobulinu, specifického pro předem určený ligand. V této citaci se nepředpokládají variace v sekvenci variabilní domény.
V EP 102 634 se popisuje klonování a exprese genů, kódujících celý polypeptid humánního těžkého řetězce IgG nebo jeho část v bakteriálních hostitelských organismech. Ani zde se nepředpokládají variace v sekvenci polypeptidů.
V EP 239 400 se navrhuje, že humanizované protilátky lze získat tím, že se místo, vázající antigen (hypervariabilní oblasti) jakékoliv humánní protilátky nahradí místem, vázajícím antigen nehumánní, například myší nebo krysí protilátky prostřednictvím metod genového inženýrství.
Podle této citace je tedy možno vyrábět humánní nebo humanizované protilátky, obsahující specifická místa, vázající antigen, která až dosud nebyla k dispozici v protilátkách, pocházejících z lidí.
Chimérické protilátky je možno získat tak, že se nahradí nejen CDRs, ale celé variabilní oblasti lehkého a těžkého řetězce. Chimérické protilátky mohou však ještě být imunogenní. Chimérické protilátky jsou však velmi užitečné pro diagnostické účely a pro optimalizaci humanizovaných protilátek.
-3CZ 282603 B6
Bylo by možno ukázat, ža afinitu míst, vázajících antigen, lze ovlivnit selektivní výměnou některých jednotlivých aminokyselin ve variabilních oblastech, které přímo nejsou součástí CDRs (Reichmann a další /1988/, Nátuře, 322, 21).
Postupuje-li se podle údajů, uvedených v EP 239 400, může v nejhorším případě dojít k úplné ztrátě vazebné afinity pro antigen. Tuto skutečnost jsou schopni demonstrovat původci tohoto vynálezu, kterým se nepodařilo zkonstruovat odpovídající humanizovanou protilátku, zaměřenou na epitopy receptorů EGF.
Je proto třeba vzít v úvahu, že úspěšnost takové humanizace závisí na složení a konformaci použitých variabilních oblastí a jejich interakcí s odpovídajícím místem, vázajícím antigen. Nelze tedy úplně předvídat, zda nebo které modifikace ve variabilních doménách protilátky je zapotřebí modifikovat, aby se dosáhlo vazby antigenu k protilátce, nebo aby se tato vazba zlepšila.
Podstata vynálezu
Úkolem tohoto vynálezu je tedy vyvinout humanizovanou monoklonální protilátku, která je zaměřena zejména na receptory EGF a která obsahuje místo, vázající antigen nehumánního původu a úseky základní struktury (FRs) z variabilních oblastí a konstantních oblastí humánního původu, které jsou, v případě potřeby, modifikovány takovým způsobem, aby specificita vazebného místa zůstala zachována, nebo se regenerovala.
Úkolem tohoto vynálezu je především charakterizovat hypervariabilní oblasti místa, vázajícího antigen protilátky proti receptorů EGF, a zavést tyto CDRs do humanizované monoklonální protilátky, definované výše.
Tato protilátka a její chimérická varianta může hrát důležitou úlohu jako terapeutické nebo diagnostické činidlo, sloužící k potlačování nádorů, jako jsou melanomy, gliomy nebo karcinomy.
Zjistilo se, že účinné a specifické humanizované monoklonální protilátky je možno snadno získat za použití konvenční sekvence přinejmenším z variabilních oblastí těžkého řetězce humánních imunoglobulinú. Vhodné jsou zejména všechny takové konvenční sekvence, které vykazují dobrou identitu (alespoň ze 60 až 70 %, zejména ze 65 až 70 %) ve srovnání s variabilními oblastmi původních nehumánních protilátek.
Dále se zjistilo, že tyto konvenční sekvence musí být modifikovány pouze v malém rozsahu, zatímco za použití variabilních oblastí přírodních humánních protilátek je třeba někdy provádět mnohem více modifikací. Často není nutno provádět žádné modifikace, nebo je nutno provádět jen málo modifikací v sekvenci aminokyselin, aby se podle vynálezu dosáhlo dobré specifické vazby antigenu. Je tedy třeba vyměnit pouze několik aminokyselin pro dosažení perfektní vazby receptorů EGF k přednostní humanizované protilátce podle tohoto vynálezu. Podle poznatků, uvedených v EP 239 400, nelze v tomto případě dosáhnout vazby. Stupeň modifikace, kterého je podle vynálezu zapotřebí, je možno charakterizovat výměnou aminokyselin v rozsahu od 0 do 10 %, přednostně od 1 do 5 %.
Humanizovaná monoklonální protilátka podle tohoto vynálezu má následující výhody: Konvenční sekvenci, což je sekvence, odpovídající nejčastějšímu výskytu aminokyselin v určité poloze řetězce humánního imunoglobulinu z definované třídy, podtřídy nebo podskupiny, je možno bez problémů syntetizovat jako celek nebo jako část. Není zde závislost na podrobné znalosti nebo dostupnosti určitých individuálních protilátek nebo jejich fragmentů. To znamená, že je možno pokrýt široký rozsah individuálně a přírodně se vyskytujících fragmentů protilátky
-4CZ 282603 B6 prostřednictvím velmi omezeného počtu konvenčních sekvencí, které se klonují do odpovídajících expresních vektorů. Konvenční sekvence může být příznivá, pokud se týče imunogenicity, ve srovnání s individuálními přírodními sekvencemi, o nichž je známo, že se někdy jedná o epitopy pro jiné protilátky (například anti-idiotypické protilátky).
Ačkoliv bylo skutečně realizováno jen jedno přednostní provedení, poskytuje tento vynález obecné základní poznatky. Vzhledem k velkému počtu možných sekvencí a kombinací sekvencí ve variabilní a hypervariabilní doméně není pouhou náhodou, že se na základě popsaných poznatků, vztahujících se ke konvenční sekvenci, podařilo zkonstruovat humanizovanou protilátku, zaměřenou na receptory EGF.
Dále se zjistilo, že těžké řetězce variabilních domén dodávají větší příspěvek místu, vázajícímu antigen, ve srovnání s odpovídajícími lehkými řetězci. Není proto nutno modifikovat stejným způsobem lehký řetězec humanizované protilátky, obsahující konvenční sekvenci. Tento aspekt je zajímavý, poněvadž je známo, že lehké řetězce hrají u některých známých přírodních protilátek důležitější úlohu než odpovídající těžké řetězce (viz Williams a další /1990/ Tibtech. 8, 256).
Podle vynálezu je konečně možno poprvé provést pomocí genetického inženýrství charakterizaci, klonování a amplifikaci místa, vázajícího antigen murinní protilátky proti receptoru EGF (MAb 425). Tento aspekt vynálezu je nejdůležitější. Je možno syntetizovat odpovídající oligonukleotidy, kódující toto místo, vázající antigen, a celou variabilní doménu humanizované a chimérické monoklonální protilátky. Předmětem vynálezu jsou dále také odpovídajícím způsobem účinné expresní vektory, kterých lze používat pro transformaci vhodných eukaryotických buněk.
Předmětem vynálezu je tedy humanizovaná monoklonální protilátka, obsahující místa, vázající antigen, CDR nehumánního původu, úseky základní struktury, FR humánního původu a konstantní oblasti humánního imunoglobulinu, která vykazuje tyto znaky:
i) váže se k humánním receptorům EGF a inhibuje vazbu EGF k receptoru EGF, ii) konstantní oblasti jejího těžkého řetězce zahrnují sekvenci aminokyselin humánního řetězce gamma-1 a konstantní oblasti lehkého řetězce zahrnují sekvenci aminokyselin humánního řetězce kappa, iii) její oblasti CDR, reprezentující místa, vázající antigen, zahrnují následující sekvence aminokyselin lehký řetězec
CDR-1 -Ser-Ala-Ser-Ser-Ser-Val-Thr-Tyr-Met-TyrCDR-2 -Asp-Thr-Ser-Asn-Leu-Ala-SerCDR-3 -Gln-Gln-Trp-Ser-Ser-His-Ile-Phe-Thrtěžký řetězec
CDR-1 -Ser-His-Trp-Met-HisCDR-2 -Glu-Phe-Asn-Pro-Ser-Asn-Gly-Arg-Thr-Asn-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-SerCDR-3 -Arg-Asp-Tyr-Asp-Tyr-Asp-Gly-Arg-Tyr-Phe-Asp-Tyr- iv) její úseky základní struktury, FR, variabilní oblasti, která nemá vztah k místům, vázajícím antigen, zahrnují následující aminokyselinové sekvence
-5CZ 282603 B6 lehký řetězec
FR-1 -Asp-Ile-Gln-Met-Thr-Gln-Ser-Pro-Ser-Ser-Leu-Ser-Ala-Ser-Val-Gly-Asp-Arg-ValThr-Ile-Thr-CysFR-2 -Trp-Tyr-Gln-Gln-Lys-Pro-Gly-Lys-Ala-Pro-Lys-Leu-Leu-Ile-TyrFR-3 -Gly-Val-Pro-Ser-Arg-Phe-Ser-Gly-Ser-Gly-Ser-Gly-Thr-Asp-Tyr(Phe,Trp,His)-ThrPhe-Thr-Ile-Ser-Ser-Leu-Gln-Pro-Glu-Asp-Ile-Ala-Thr-Tyr-Tyr-CysFR-4 -Phe-Gly-Gln-Gly-Thr-Lys-V al-Glu-Ile-Lystěžký řetězec
FR-1 -Gln-Val-Gln-Leu-Val-Gln-Ser-Gly-Ala-Glu-Val-Lys-Lys-Pro-Gly-Ala-Ser-Val-LysVal-Ser-Cys-Lys-Ala-Ser-Gly-Tyr-Thr-Phe-Thr(Ser)FR-2 -Trp-Val-Arg(His)-Gln-Ala(Lys,His)-Pro(Val)-Gly-Gln-Gly-Leu-Glu-Trp-Ile(Val,Leu)GlyFR-3 -Lys(Arg,His)-Ala(Val-Pro-Gly)-Thr-Met-Thr-Val(Ala,Pro,Gly)-Asp-Thr-Ser-Thr-AsnThr-Ala-Tyr- Met-Glu(Asn)-Leu-Ser-Ser-Leu-Arg-Ser-Glu-Asp-Thr-Ala-Val-Tyr-TyrCys-Ala-SerFR-4 -Trp-Gly-Gln-Gly-Thr-Leu-Val-Thr-Val-Ser-Ser-,
Dále je předmětem vynálezu také expresní vektor, obsahující sekvenci DNA, kódující variabilní a konstantní oblast lehkého řetězce humanizované monoklonální protilátky podle nároku 1, který nese označení pRVL425 a je uložen ve sbírce DSM pod přírůstkovým číslem DSM 6340.
Dále je předmětem vynálezu také expresní vektor, obsahující sekvenci DNA, kódující variabilní a konstantní oblast těžkého řetězce humanizované monoklonální protilátky podle nároku 1, který nese označení pRVH425 a je uložen ve sbírce DSM pod přírůstkovým číslem DSM 6339.
Konečně je předmětem vynálezu také farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje monoklonální protilátku podle nároku 1.
Všechny citace patentů a publikací, uvedené výše a dále v tomto textu, představují náhradu za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.
Mikroorganismy a plasmidy, použité při provádění vynálezu:
a) pRVL425 (= HCMV-RV]b425-k) uložen 1. února 1991, v souladu s Budapeštskou dohodou, v Německé sbírce mikroorganismů (DSM) pod přírůstkovým číslem DSM 6340. Expresní vektor obsahuje sekvence hypervariabilních oblastí (CDRs) murinní protilátky 425 a FRs variabilní oblasti a konstantní (kappa) oblasti lehkého řetězce humanizované protilátky. Symbol R znamená přetvořený (reshaped).
b) pRVH425 (= HCMV-RVHg425-gamma), uložen 1. února 1991, v souladu s Budapeštskou dohodou, v Německé sbírce mikroorganismů (DSM) pod přírůstkovým číslem DSM 6339. Tento expresní vektor obsahuje sekvence hypervariabilních oblastí (CDRs) murinní protilátky 425 a FRs variabilní oblasti a konstantní (gamma-1) oblasti těžkého řetězce humanizované protilátky. Symbol R znamená přetvořený (reshaped).
c) pCVL425 (= HCMV-CVL425-k), uložen 1. února 1991, v souladu s Budapeštskou dohodou, v Německé sbírce mikroorganismů (DSM) pod přírůstkovým číslem DSM 6338. Tento expresní vektor obsahuje sekvence FRs a hypervariabilních oblastí (CDRs) variabilní oblasti lehkého řetězce murinní protilátky 425 a konstantní (kappa) oblasti lehkého řetězce humánního imunoglobulinu. Symbol C znamená chimérický.
-6CZ 282603 B6
d) pCVH425 (= HCMV-CVH425-gamma), uložen 1. února 1991, v souladu s Budapešťskou dohodou, v Německé sbírce mikroorganismů (DSM) pod přírůstkovým číslem DSM 6337. Tento expresní vektor obsahuje sekvence FRs a hypervariabilních oblastí (CDRs) variabilní oblasti lehkého řetězce murinní protilátky 425 a konstantní oblasti lehkého řetězce humánního gamma-1 imunoglobulinu. Symbol C znamená chimérický.
e) Hybridoma buněčná linie 425, uložena 26. února 1988, v souladu s Budapešťskou dohodou, v americké sbírce Američan Type Culture Collection (ATCC) pod přírůstkovým číslem HB 9629. Tato buněčná linie produkuje murinní protilátku 425, která je zaměřena na receptor EGF.
Jiné biologické materiály:
jiné mikroorganismy, buněčné linie, plasmidy, promotory, markéry rezistence, replikační počátky nebo jiné fragmenty vektorů, které jsou uvedeny v tomto popisu, jsou obchodně nebo jinak obecně dostupné. Pokud není v tomto popisu uvedeno jinak, používá se jich pouze jako příkladů ajejich konkrétní volba není při provádění vynálezů důležitá, takže je možno nahradit je j inými vhodnými prostředky a biologickými materiály.
Pro amplifikaci odpovídajících sekvencí DNA se přednostně používá bakteriálních hostitelů. Jako příklad takových hostitelů je možno uvést E. coli nebo Bacillus.
Při výrobě humanizovaných a chimérických protilátek podle tohoto vynálezu se dává přednost eukaryotickým buňkám, jako je COS (CV1 původ SV 40), nebo buňkám z vaječníků čínského křečka (CHO) nebo kvasinkám. Obzvláštní přednost se dává buňkám COS a CHO.
Obecné postupy výroby:
Technologie, které jsou pro provádění tohoto vynálezu podstatné, jsou podrobně uvedeny v tomto popisu.
Jiné technologie, které nejsou podrobně popsány, odpovídají známým standardním technologiím, které jsou dobře známy odborníkům v tomto oboru, nebo které jsou popsány podrobněji v uvedených literárních odkazech, patentových přihláškách a standardní odborné literatuře.
Přehled obrázků na výkrese
Na obr. 1 jsou schematicky znázorněny vektory, používané pro expresi chimérických a přetvořených humánních protilátek. Restrikční místa, používaná při konstrukci expresivních plasmidů, jsou označena. Sekvence, kódující variabilní oblast, jsou znázorněny černými úseky, konstantní oblasti jsou znázorněny bílými úseky, promotor HCMV a zesilovač transkripce (enhancer) šrafovanými úseky a nukleotidový fragment z plasmidu pSVneo je znázorněn tečkovanými úseky. Směry transkripce jsou znázorněny šipkami.
Na obr. 2 jsou znázorněny sekvence nukleotidů a aminokyselin VH425 (A) a VL425 (B) cDNA klonované do pUC18. Aminokyseliny, přispívající k vedoucí sekvenci (leader), jsou podtrženy a CDRs jsou označeny závorkami. Místa sestřihu mezi variabilními oblastmi a konstantními oblastmi jsou také znázorněna. Také jsou zde znázorněny přední a zadní PCR-primary ajejich místa teplotní hybridizace (annealing sites), použitá při konstrukci genů, kódujících chimérické protilátky.
Na obr. 3 jsou uvedeny sekvence nukleotidů a aminokyselin syntetizovaného genového fragmentu, kódujícího přetvořenou humánní VHa425. Vedoucí sekvence je podtržena a rezidua, přispívající k CDRs, jsou v závorkách.
-7CZ 282603 B6
Na obr. 4 je uvedeno srovnání sekvence aminokyselin myší a přetvořené humánní variabilní oblasti 425. Panel A ukazuje sekvenci myší VL (VL425) a přetvořené humánní VLS (RVLa425 a RVLb425). Panel B ukazuje sekvence myší VH (VH425) a přetvořené humánní VHS (RVHa425, RVHb425, RVhc425, RVHd425, RVHe425, RVHf425, RV„g425, RVHh425, RVHi425 ajsou 5 označeny FRs aCDRs. Aminokyseliny jsou číslovány podle Kabat a další /1987/ Seguences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, US Govemment Printing Offices.
Na obr. 5 je znázorněn molekulární model variabilních oblastí myší MAb 425.
Na obr. 6 je znázorněna detekce vazby k EGFR pomocí metody ELISA. Aktivita vazby antigenu se stanovuje ve zředěných supematantech transfektovaných COS buněk a vynáší se do grafu jako optická hustota při 450 nm proti koncentraci IgG (zjištěné metodou ELISA, viz část popisu Materiály a metody). Všechny verze přetvořených humánních VH oblastí se kotransfektuj í 15 s RVLa425 ajsou reprezentovány následujícími grafickými symboly: RVHa425 A, RVHb425O , RVhc425 Δ , RVHd425 ®, RVHe425Q , RVHf425e , RFHg425c , RVHh425O, RVHi425 Θ, RVHb425 ko-transfektovaný s RVLb425 je reprezentován symbolem ♦. Produkty kotransfekce chimérického VL425 a VH425 jsou reprezentovány symbolem ·.
Na obr. 7 je znázorněna konkurence při vazbě k antigenu. V okénku Aje znázorněna konkurence mezi značenou myší protilátkou 425 a (1) neznačenou myší protilátkou 425 (+) a (2) chimérickou protilátkou 425 (·), produkovanou buňkami COS po kotransfekci s HCMV-CVL425-kappa a HCMV-CVH425-gamma-l. V okénku B je znázorněna konkurence mezi značenou myší protilátkou 425 a(l) neznačenou myší protilátkou 425 (+) a (2) přetvořenými humánními protilátkami 425, produkovanými buňkami COS po kotransfekci s HCMV-RVLa425-kappa a HCMV-RVHi425 gamma-1 (O) a s HCMV-RVLa425-kappa a HCMV-RVHg425-gamma1 ( □ ). Ve všech případech se na horizontální osu vynáší koncentrace inhibitoru v ng/ml. Na vertikální osu se vynáší procento inhibice vazby.
Na obr. 8 jsou znázorněny účinky různých přetvořených humánních oblastí VL na vazbu antigenu. V okénku Aje ukázána vazba antigenu přetvořenými humánními protilátkami, produkovanými v buňkách COS transfektovaných HCMV-CVL425-kappa a HCMV-CVH425gamma-1 (·), HCMV-RVLa425-kappa a HCMV-RVHg425-gamma-l ( □ ), HCMV-RVLb425kappa a HCMV-RVHg425-gamma-l (), HCMV-RVLa425-kappa a HCMV-RVHc425-gamma-l (Δ) a HCMV-RVLb425-kappa a HCMV-RVhc425-gamma-1 (á). V okénku B je znázorněna konkurence o vazbu k antigenu mezi značenou myší protilátkou 425 a (1) neznačenou myší protilátkou 425 (+) a (2) přetvořenými humánními protilátkami 425, produkovanými v buňkách COS kotransfektovaných HCMV-VLa425-kappa a HCMV-VHg425-gamma-l ( □ ) aHCMVVLb425-kappa a HCMV-VHg425-gamma-l (). V okénku A se na vertikální osu vynáší optická hustota při 450 nm (OD45o) a na horizontální osu se vynáší koncentrace IgG v ng/ml. V okénku B se na horizontální osu vynáší koncentrace inhibitoru v ng/ml a na vertikální osu procento inhibice vazby.
Na obr. 9 je v okénku A znázorněna analýza přetvořených (dráhy 1 a 2), chimérické (dráha 3) amurinní (dráha 4) MAb s 425 metodou SDS-PAGE za neredukujících podmínek (a) a za redukujících podmínek (b). Dráhy 7 a 8 odpovídají přetvořeným, dráha 9 chimérické a dráha 10 murinní protilátce. Dráhy 5, 6, 11 a 12 představují markéry molekulové hmotnosti. V okénku B je znázorněna purifikace přetvořené MAb 425 gelovou filtrací na Superose 12. Pík 2 odpovídá IgG.
-8CZ 282603 B6
Na obr. 10 je znázorněna konkurence mezi murinní, chimérickou a přetvořenými MAbs 425 o receptor EGF (EGFR). Na vertikální osu se vynáší poměr mezi vázanou (MAb) a celkovou (MAb) v procentech (% vázaná/celkem). Na horizontální osu se vynáší koncentrace protilátky (mol/1 /log/)· Používá se následujících symbolů:
V znamená MAb 425 murinní,
O znamená MAb 425 chimérickou, ·, ▼ znamená MAb 425 přetvořené.
io Na obr. 11 je znázorněna konkurence mezi EGF a protilátkami o receptory EGF. Na vertikální osu se vynáší % vázaná/celkem (MAb). Na horizontální osu se vynáší koncentrace protilátky (mol/1 /log//). Symbol 0 znamená MAb 425 murinní a symboly Δ, V, □ , znamenají MAb 425 přetvořené.
Následuje podrobný popis vynálezu.
Klonování a sekvenování genů variabilní oblasti MAb 425
Ze syntézy cDNA a klonování za použití primeru s kappa řetězcem se pro skríning přednostně 20 vezme 300 až 400 kolonií. Ze syntézy cDNA a klonování za použití primeru gamma-2a se přednostně pro skríning vezme 200 až 300 kolonií. Po skríningu hybridizací za použití dvou odpovídajících klonovacích primerů poskytuje 20 až 30 kolonií s lehkým řetězcem a 10 až 20 kolonií s těžkým řetězcem silné signály. Z těchto kolonií se izoluje plasmidová DNA a analýzuje obvyklým způsobem štěpení obchodně dostupnými restrikčními enzymy, aby se stanovila 25 velikost inzertů cDNA. Jako kandidáti pro sekvenování se zvolí klony zřejmě obsahující inzert
400 až 500 bp v případě VL klonování a 500 až 600 bp v případě VH klonování. Tri VL klony a tři VH klony se sekvenují na obou vláknech za použití univerzálních a reverzních sekvenačních primerů M13. Ze tří možných VL klonů, které byly sekvenovány, jeden kóduje úplnou variabilní oblast a ostatní kódují peptidy, které k ní nemají vztah. Dva zVH klonů kódují identické VH 30 oblasti, zatímco ostatní kódují VH oblast s intronem mezi vedoucí sekvencí a ještě přítomným
FR-1. Vedle intronu třetí VH klon obsahuje kódující sekvenci, která je identická se sekvencemi prvních dvou klonů. Pro ověření sekvence VL oblasti se sekvenují tři další cDNA klony, které obsahují inzerty vhodné velikosti. Dva z nich poskytují sekvence, které jsou v souhlasu s prvním VL klonem. Třetí představuje nepodobnou DNA sekvenci. V sekvenovaných klonech nejsou 35 přítomny všechny původní sekvence primeru. Rozsah delecí se mění od klonu ke klonu. Tyto delece, k nimž pravděpodobně dochází v průběhu syntézy cDNA a klonování, mohou snížit účinnost skríningu kolonie.
Geny VL a VH MAb 425 jsou znázorněny na obr. 2. Sekvence aminokyselin Vl a VH oblasti 425 40 se porovnává s jinými myšími-variabilními oblastmi v Kabátově databázi (Kabat a další, /1987/
Sequence of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, US Govemment Printing Offices). Oblast VL je možno zatřídit do podskupiny IV nebo VI myších variabilních oblastí s řetězcem kappa. V úsecích základní struktury (FRs) vykazuje oblast 425 VL přibližně 86 % identitu s konvenční sekvencí myší kappa podskupiny IV a přibližně 89 % 45 identitu s podskupinou VI. Zdá se, že oblast 425 VL používá segmentu JK4. Při zkoumání VH oblasti se zjistí přibližně 98 % identita s FRs konvenční sekvencí myšího těžkého řetězce z podskupiny II (B).
Správná volba vhodné třídy nebo podskupiny humánního imunoglobulinu je závislá na stupni 50 identity s řetězcem, který je v nehumánní protilátce původně přítomen. Identita dedukované konvenční sekvence podle tohoto vynálezu by měla být vyšší než 65 až 70 %, při srovnávání se sekvencí původního nehumánního řetězce.
-9CZ 282603 B6
Dává se přednost konvenčním sekvencím těžkých řetězců, zejména však konvenční sekvenci humánního těžkého řetězce z podskupiny I. Pro jiné protilátky jsou však vhodné konvenční sekvence j iných humánních těžkých řetězců. Přednostní konvenční sekvence jsou modifikované. Možná výměna aminokyselin činí podle vynálezu 0 až 10 %, přednostně 5 až 10 %.
Konstrukce a exprese chimérické protilátky 425
Dříve než je možno použít při konstrukci chimérické protilátky 425 cDNA pro kódování VL a VH oblastí, je zapotřebí zavést několik modifikací do 5’- a 3'- konce. Tyto modifikace zahrnují zavedení vhodných míst pro restrikční enzymy tak, aby bylo možno sekvence, kódující variabilní oblast, snadno subklonovat do expresivních vektorů HCMV. Je nutno znovu vytvořit donomí sestřižená místa v 3'- lemujících oblastech pro správný a účinný sestřih variabilních oblastí ke konstantním oblastem.
Také 5'- lemující oblasti se modifikují, aby obsahovaly sekvenci, která by vytvořila účinná iniciační místa pro translaci eukaryotickými ribosomy (Kozák a další /1987/, J. Mol. Bio., 196, 947). Tyto modifikace se zavádějí za použití PCR primerů. Použité primery jsou uvedeny v tabulce 1.
Tabulka 1
Oligonukleotidy, použité pro klonování cDNA, konstrukci chimérik a mutagenezi. Podtržené úseky označují báze, které se tepelně hybridizují k humánní struktuře.
| číslo | sekvence | popis |
| 1. | 5-GTAGGATCCTGGATGGTGGGAAGATG-3' | primer lehkého řetězce pro syntézu cDNA |
| 2. | 5-GTAGGATCCAGTGGATAGACCGATG-3' | primer těžkého řetězce pro syntézu cDNA |
| 3. | 5'-CTCCAAGCTTGACCTCACCATGG-3' | přední primer chimérické oblasti VH |
| 4. | 5-TTGGATCCACTCACCTGAGGAGACTGTGA-3' | zadní primer chimérické oblasti VH |
| 5. | 5'-AGAAAGCTTCCACCATGGATTTTCAAGTG-3' | přední primer chimérické oblasti Vl |
| 6. | 5-GTAGATCTACTCACGTTTTATTTCCAAC-3' | zadní primer chimérické oblasti VL |
| 7. | 5'-ACCATCACCTGTAGTGCCAGCTCAAGTG TAACTTACATGTATTGGTACCAGCAG-3' | CDR-1 primer přetvořené oblasti VL |
| 8. | 5'-CTGCTGATCTACGACACATCCAACCTGGC | CDR-2 primer přetvořené |
| TTCTGGTGTGCCAAGC-3' | oblasti VL | |
| 9. | 5-ACCTACTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTCA- | CDR-3 primer přetvořené |
| CATATTCACGTTCGGCCAA-3' | oblasti Vl |
- 10CZ 282603 B6
| Tabulka 1 - pokračování | ||
| číslo | sekvence | Dopis |
| 10. | * 5-AGCGGTACCGACTACACCTTCACCATC-3’ * * | primer pro zavádění F71Y do RVl |
| 11. | 5’-ATACCTTCACATCCCACTG-3ř * * | primer pro zavádění S30T do RVh |
| 12. | 5ř-CGAGTGGATTGGCGAGT-3' * * * | primer pro zavádění V48I do RVh |
| 13. | 5'-TTTAAGAGCAAGGCTACCATGACCGTGGACACCTCT-3' * | primer pro zavádění R66K, V67A a L71V do RVh |
| 14. | 5'-CATGACCGTGGACACCTCT-3' | primer pro zavádění L71V do RVh |
Pro každou variabilní oblast cDNA se přednostně vytvoří dva primery. V předních primerech se použije 15 bází na 3'- konci primeru pro hybridizaci primeru ktemplátové DNA, zatímco 5'konec primeru obsahuje místo HindlII a Kozákovu sekvenci. Zadní primery mají podobné složení. Posledních 15 bází u 3'- konce se použije pro hybridizaci primeru ktemplátové DNA a 5'- konec primeru obsahuje místo BamHI donomí místo pro sestřih. V případě zadního primeru lehkého řetězce se používá místa BglII místo místa BamHI, poněvadž cDNA, kódující VL, obsahuje interní místo BamHI (viz obr. 2). Reakce PCR se přednostně provádí způsobem, popsaným v příkladech.
DNA Vl oblasti modifikovaná PCR se klonuje do míst HindlII a BamHI expresivního vektoru lehkého řetězce HCMV, jakožto HindlII-BglII fragment. Tento vektor již obsahuje humánní genomovou konstantní oblast kappa s potřebným akceptorovým místem pro sestřih a místy póly (A+). Celý PCR-modifikovaný VL fragment se sekvenuje za použití dvou primerů, které se tepelně hybridizují k místům lemujícím klonovací místo expresivního vektoru. Sekvenování potvrzuje, že v průběhu stupně PCR nebyly zavedeny žádné chyby. PCR-modifikovaná VH DNA se klonuje do expresivního vektoru těžkého řetězce HCMV, jako HindlII-BamHI fragment a také se sekvenuje, aby se potvrdilo, že během PCR nebyly zavedeny žádné chyby. Fragment BamHI, obsahující humánní genomovou konstantní oblast gamma-1, se vloží do vektoru HCMV-CVh na 3'- straně oblasti VH. Tento fragment obsahuje potřebné akceptorové místo pro sestřih V-C, který má proběhnout in vivo, a přírodní místo póly (A+).
Expresivní vektory, obsahující chimérické oblasti 425 VL aVH, se kotransfektují do vhodných eukaryotických buněk, přednostně buněk COS. Po přibližně 72 hodinách přechodné exprese se médium buněčné kultury zkouší metodou ELISA na přítomnost produkovaného humánního IgG a na vazbu k EGFR proteinu. Množství humánního IgG, detekovaného v médiu, kolísá v rozmezí od 100 do 400 ng/ml. Vyrobená chimérická protilátka se dobře váže k proteinu EGFR při standardní zkoušce vazby antigenu ELISA, čímž se potvrdí, že byly klonovány a sekvenovány správné myší variabilní oblasti.
Počáteční navržení, konstrukce a exprese přetvořených humánních lehkých a těžkých řetězců 425
Při návrhu přetvořené humánní protilátky 425 se největší důraz klade na oblast VH, poněvadž tato doména je často při vazbě antigenu nejdůležitější (Amit a další /1986/, Science 233, 747;
- 11 CZ 282603 B6
Verhoeyen a další /1988/ Science 239, 18). Při volbě humánních FRs, na nichž se mají roubovat myší CDRs, se FRs myší VH oblasti MAb 425 porovnávají s FRs konvenčních sekvencí ze všech podskupin humánních oblastí VH (Kabat a další, /1987/ viz shora uvedená citace). Toto porovnání ukazuje, že FRs oblastí VH myší protilátky MAb 425 jsou nejpodobnější FRs humánních oblastí VH podskupiny I. Je zde 73 % identita mezi FRs a přibližně 65 % identita mezi celými oblastmi VH.
Provede se další srovnávání myší oblasti VH 425 sjinými myšími oblastmi VH ze stejných Kabátových podskupin, aby se identifikovaly všechny zbytky FR, které jsou charakteristické pro MAb 425 a mohly by se tedy podílet na vazbě antigenu. Zbytek v poloze 94 myší oblasti VH MAb 425 je serin, zatímco v jiných oblastech VH myší podskupiny II (B) a také humánní podskupiny Ije zbytkem 94 arginin (Kabat a další, /1987/, viz shora uvedená citace). Tato substituce aminokyseliny je neobvyklá a poněvadž poloha 94 přiléhá k CDR-3, jedná se o překvapivě důležitou polohu. Z těchto důvodů se přetvořená oblast VH humánní 425 přednostně navrhuje tak, že je založena na CDRs myší protilátky MAb 425 a FRs odvozených z konvenční sekvence humánních FRs z podskupiny I (podle definice Kabata a dalších /1987/, viz shora uvedená citace). Polohy 94 ve FR-3 se obsadí serinem, jako je tomu u myší protilátky MAb 425. V polohách konvenční sekvence FRs z humánní podskupiny I, kde nejsou uvedeny jednotlivé aminokyseliny, se zvolí aminokyselina, která se nejčastěji vyskytuje v této poloze. Jestliže se v určité poloze humánní konvenční sekvence nevyskytuje žádná aminokyselina přednostně, volí se jako aminokyselina ta aminokyselina, která se v této poloze sekvence nalézá v oblasti VH myší MAb 425. Výsledná aminokyselinová sekvence obsahuje první verzi (verzi a) přetvořené humánní oblasti VH 425 (viz obr. 3). Všechny následující verze přetvořené oblasti VH humánní 425 jsou modifikacemi této první verze.
Navrhne se a syntetizuje (viz příklady a obr. 3) 454bp fragment DNA, který kóduje přetvořenou VH oblast humánní 425, jak je to popsáno výše. Kromě sekvencí DNA, kódujících aminokyseliny přetvořené VH oblasti humánní 425, obsahuje tento fragmen DNA také sekvence, kódující humánní vedoucí sekvenci. Humánní vedoucí sekvence může být vzata například z protilátky HG3 CL (Rechavi a další, /1983/, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 80,855), což je člen humánní oblasti VH z podskupiny I (Kabat a další /1987/, viz shora uvedená citace). Fragment syntetické DNA také obsahuje eukaryontické translační signály na 5'- konci (Kozák /1987/, J. Mol. Bio. 196, 1947), donomí místo pro sestřih na 3'- konci (Breathnach a další /1978/, Proč. Nati. Acad. Sci USA 75, 4 853), a místo HindlII na 5'- konci a místo BamHI na 3'- konci, pro subklonování do expresivního vektoru HCMV.
Podobného postupu se také použije pro sestrojení přetvořené oblasti VL humánní 425. Úseky FRs myší VL oblasti protilátky MAb 425 se porovnají s konvenčními sekvencemi všech podskupin humánních oblastí VL (Kabat a další /1987/, viz shora uvedená citace). U FRs se zjistí přibližně 71 % totožnost mezi oblastí VL myší 425 a humánní oblastí VL kappa z podskupiny III a přibližně 70 % identita s humánní oblastí VL kappa z podskupiny I. DNA kódující humánní FRs humánní oblasti VL kappa z podskupiny Ije již dostupná z přetvořené humánní oblasti VL Dl.3 (EP 239 400, Winter) a přetvořené humánní Campath-1 (Reichmann a další /1988/, Nátuře 322, 21). Návrh přetvořených humánních oblastí VL v těchto dvou humánních protilátkách je založen na strukturně vyřešeném humánním imunoglobulinovém proteinu REI (Epp a další /1975/, Biochemistry 14, 4 943). Z těchto důvodů se také používá humánních FRs z oblasti Vl z přetvořené humánní protilátky D1.3 aCAMPATH-lH v přetvořené humánní oblasti VL 425. Srovnání FRs myší oblasti VL 425 s FRs jiných myších protilátek z podobných podskupin neukazuje žádné podstatné rozdíly ve zbytcích aminokyselin ve funkčně důležitých polohách. Z těchto důvodů nejsou zapotřebí žádné změny v humánních FRs. Sekvence aminokyselin přetvořené humánní oblasti VL425 verze a je ukázána na obr. 4.
Pro konstrukci přetvořené humánní VL oblasti 425 se sestrojí tři oligonukleotidy, obsahující interní sekvence DNA kódující tři CDRs myší VL oblasti 425 a 12 bází na 5'- a 3'- koncích, které
- 12CZ 282603 B6 jsou určeny pro hybridizací se sekvencemi DNA, které kódují humánní FRs v přetvořené humánní VL oblasti protilátky Dl.3 (viz oligonukleotidy 7 až 9 v tabulce I). Roubování CDR se provádí způsobem popsaným v příkladech. Po sekvenování DNA pravděpodobných pozitivních klonů ze skríningu je celkový výtěžek trojnásobného mutantu 5 až 15 %, přednostně 9 až 10 %. Přetvořená VL oblast humánní 425, která neobsahuje žádné PCR omyly, se klonuje jako fragment HindlII-BamHI do expresivního vektoru lehkého řetězce za vzniku plasmidu HCMV-RVLa425kappa (viz obr. 1).
Dva expresivní vektory, nesoucí přetvořené oblasti Vl425 aVH425, se nyní kotransfektují do vhodných buněk (viz výše), za účelem hledání přechodné exprese funkční přetvořené humánní protilátky 425. Přibližně po 72 hodinách se buněčné supematanty sklidí a metodou ELISA se v nich stanovuje humánní IgG. Humánní IgG může být stanoven na úrovni v rozmezí od 100 do 500 ng/ml, avšak při zkoušce ELISA, zaměřené na stanovení vazby antigenu, není vazba k EGFR s překvapením detekovatelná. Jestliže se buňky kotransfektují HCMV-RVLa425-kappa/HCMVCVH425-gamma-l, vyrobí se humánní IgG, který se váže k EGFR. Jestliže se však buňky kotransfektují HCMV-CVL425-kappa/HCMV-RVHa425-gamma-l, vyrobí se humánní IgG, který se však na detekovatelné úrovni neváže k EGFR. Z těchto neočekávatelných výsledků je zřejmé, zeje zapotřebí dalších modifikací s charakterem vynálezu ve FRs přetvořené humánní oblasti VH 425, aby se získalo funkční místo, vázající antigen.
Modifikace FRs přetvořené oblasti VH humánní 425
Na základě molekulárního modelu domén myších variabilních oblastí 425 se provedou další změny ve FRs přetvořené humánní VH oblasti 425. Prozkoumají se smyčky CDR přetvořené humánní oblasti VH, aby se zjistilo, jak se shodují s kanonickými strukturami, které popsali Chothia a další /1989/, Nátuře 342, 877. Na základě této analýzy se provedou ve FRs určité změny. Provedou se také jiné změny FRs, které jsou založeny na funkční přetvořené humánní protilátce anti-Tac, která byla rovněž sestrojena na základě humánních FRs z podskupiny I (Queen a další /1989/, Proč. Nati. Acad. Sci USA 86, 10 029). S překvapením bylo zjištěno, že oblast VH myší protilátky anti-Tac je přibližně ze 79 % identická s VH oblastí myší protilátky 425. Nyní se podle vynálezu vytvoří molekulární model variabilních oblastí myší protilátky 425 (obr. 5). Model je založen na struktuře HYHEL-5, což je protilátka s vyjasněnou strukturou, jejíž variabilní oblasti vykazují vysoký stupeň homologie s oblastmi myší protilátky 425. Na základě této analýzy se zbytky aminokyselin v polohách 30, 48, 67, 68 a 71 v přetvořené humánní oblasti VH protilátky 425 změní tak, aby byly identické se zbytky aminokyselin, které se vyskytují v těchto polohách v myší oblasti VH protilátky 425. Pro ozřejmění individuálních účinků těchto změn se prováděné změny při konstrukci podle vynálezu různě kombinují a potom zkoušejí.
Celkem se zkonstruuje 8 nových verzí přetvořené oblasti VH humánní protilátky 425 (viz obr. 4). Z verzí, které se vytvoří způsoby, podrobně popsanými v příkladech, se další verze vyrobí rekombinací malých fragmentů DNA z dřívějších verzí. Když jsou již všechny požadované verze sestaveny, přednostně vpUC18, přenesou se přetvořené VH oblasti humánní protilátky 425, ve formě fragmentů HindlII-BamHI do expresivního vektoru HCMV-Vh, za vzniku verzí b až i plasmidu HCMV-RVh 425-gamma-l (obr. 4).
Modifikace FRs přetvořené oblasti Vl humánní protilátky 425
Ačkoliv odpovídající buňky kotransfektované vektory, exprimujícími přetvořený lehký řetězec humánní protilátky 425, verzí a a chimérickým těžkým řetězcem protilátky 425 skutečně produkují protilátku, která se váže k EGFR, protilátka s přetvořeným lehkým řetězcem humánní protilátky 425 se neváže tak dobře, jako chimérická protilátka 425. Prozkoumáním oblastí VL myší protilátky 425 a přetvořené humánní verze a protilátky 425 ukazuje, že zbytek 71, který je součástí kanonické struktury CDR-1 (LI), není zachován ve verzi a (Chothia a další /1989/, Nátuře 342, 877). Pro zavedení změny Phe na Tyr v této poloze se přednostně použije PCR
- 13CZ 282603 B6 mutageneze /Kamman a další /1989/, Nucleic Acids Res. 17, 5 404). Fragment HindlII-BamHI, vzniklý touto mutagenezí, se zavede do expresního vektoru HCMV-VL pro vytvoření HCMVRVLb425-kappa (viz obr. 4).
Analýza nových verzí přetvořené oblasti VH humánní protilátky 425
Expresivní vektory, obsahující přetvořené humánní verze VH a až i, se kotransfektují do shora uvedených buněk s expresivním vektorem, obsahujícím přetvořenou humánní VL oblast verze a. Po asi 3 dnech se buněčné supematanty analyzují metodou ELISA na produkci humánního IgG. Úroveň produkce kolísá v rozmezí od 50 do 500 ng/ml. Potom se vzorky analyzují metodou ELISA na humánní IgG, který je schopen se vázat kEGFR. Různé verze přetvořených humánních oblastí VH mají za následek mnoho různých úrovní vazby antigenu (viz obr. 6). Při tomto testu ELISA na vazbu antigenu se mohou různé přetvořené humánní protilátky 425 přímo porovnávat s chimérickou protilátkou 425, ale nikoliv s myší protilátkou 425. Je tomu tak proto, že protilátkou, použitou pro detekci vazby k antigenu, je antihumánní protilátka IgG. Devět verzí přetvořené humánní oblasti VH je možno rozdělit do skupin podle jejich schopnosti vazby k EGFR. Verze g a i přetvořené humánní oblasti VH poskytují nejvyšší úrovně vazby, potom následují verze c, f” a h, načež následuje verze b. Při některých pokusech poskytuje verze e nízkou, ale detekovatelnou úroveň vazby. Verze a a d nikdy neposkytují detekovatelnou úroveň vazby.
Pro přímé porovnání přetvořených humánních protilátek 425, obsahujících verze g a i VH a chimérické protilátky 425, s myší protilátkou 425 se použije konkurenčního vazebného testu (viz obr. 7). Jelikož protilátky v buněčných supematantech nejsou purifikovány a proto jsou kvantifikovány metodou ELISA, je třeba považovat výsledky konkurenčního vazebného testu za hodnoty relativní úrovně vazby, spíše než za přesnou kvantifikaci afinity. Konkurenční vazebné testy se vzorky ze 4 pokusů, například v buňkách COS, poskytují konzistentní výsledky, pokud se týče relativní úrovně vazby k antigenu. Chimérická protilátka 425 dobře soutěží se značenou myší protilátkou 425 a poskytuje procentickou inhibici vazby, která je právě o něco nižší, než je inhibice při konkurenčním testu za použití neznačené myší protilátky 425, která soutěží se značenou myší protilátkou 425 (viz obr. 7, okénko A). Přetvořená humánní protilátka s oblastí VLa aVHg je lepší než protilátka s oblastí VLa aVHi (viz obr. 7, okénko B). Porovnání bodů, které odpovídají plato na křivkách vazby, ukazuje, že přetvořená humánní protilátka s oblastí VHg soutěží se značenou myší protilátkou 425 ze 60 až 80 % tak dobře, jako to činí neznačená myší protilátka 425 při stejném testu. Když se zprůměrují výsledky, za použití vzorků ze 4 nezávislých pokusů, například za použití buněk COS nebo CHO, dospěje se ke zjištění, že přetvořená humánní protilátka, obsahující oblast Via a VHg, poskytuje vazbu, která odpovídá 60 až 80 % vazby myší protilátky 425.
Na základě těchto výsledků je možno komentovat relativní příspěvky jednotlivých zbytků ve FRs struktuře k vazbě antigenu Nejsignifikantnější jednotlivá změna v této studii je změna L71V. Bez této změny s překvapením nelze detekovat žádnou vazbu k antigenu (srovnej verze a a b VH). Pro vazbu jsou s překvapením důležité také změny R67K a V68A (srovnej verze b a c a verze i a h VH). Zatímco zavedení samotné změny V48KI a změn V48I a S30T, společně, nemá za následek signifikantní vazbu antigenu, změny v těchto polohách skutečně zvyšují vazbu antigenu. Změna S30T má s překvapením vyšší účinek než změna V48I (srovnej verze g a i a verze f a i VH).
Analýza nové verze přetvořené oblasti VL humánní protilátky 425
Expresivní vektor, obsahující RVLb425, se kotransfektuje do vhodných, přednostně eukaryotických buněk s expresivním vektorem, obsahujícím verze b, c nebo g přetvořené humánní oblasti VH. Sklidí se buněčné supematanty a zkouší na produkci humánního IgG a potom na humánní IgG, který je schopen vazby k EGFR (viz obr. 8, okénko A). Tyto výsledky ukazují, že
- 14CZ 282603 B6 verze b VL oblasti přetvořené humánní protilátky 425 zvyšují vazbu k antigenu. Potom se provede konkurenční vazebný test, za účelem porovnání přetvořených humánních protilátek 425 s oblastí VLa plus VHg aVLb plus VHg s myší protilátkou 425. Přetvořená humánní protilátka MAb 425 s verzí b oblasti VL má vyšší afinitu pro antigen. Změna F71Y v oblasti VL tedy zvyšuje vazbu antigenu. Přetvořená humánní protilátka MAb 425 s oblastí VLb a VHg vykazuje afinitu pro antigen, která činí 60 až 80 % afinity murinní protilátky MAb 425.
Z jiných experimentů, za použití přetvořené humánní protilátky, obsahující kombinaci VLb plus VHg (viz příklady 10 a 11), je zřejmé, že vazebná potence k EGFR je podobná pro chimérickou, přetvořenou a murinní protilátku.
Z vynálezu je zřejmé, že poměrně konzervativní změny ve FR zbytcích mohou silně ovlivnit vazbu antigenu.
Molekulární model variabilních oblastí myší protilátky 425 jasně ukazuje, že tento zbytek v poloze 30 VH je na povrchu této molekuly, v sousedství CDR-1. Ve skutečnosti, Hl, podle definice, kterou provedli Chothia a Lesk /1987/, J. Mol. Biol. 196, 901, zasahuje od zbytku 26 do zbytku 32, takže zahrnuje zbytek v poloze 30. Když se zbytek v poloze 30 v protilátce CAMPATH-1H změní ze Ser na Thr, nemá to žádný vliv na vazbu antigenu. Když se poloha 30 změní ze Ser na Thr v přetvořené humánní oblasti Vh425, zlepší se vazba k antigenu. Ukazuje se, že aminokyselina v poloze 30 skutečně hraje určitou úlohu při vazbě antigenu při této konkrétní interakci protilátky s antigenem. Jelikož změna S30T zlepšuje vazbu antigenu pouze nepatrně a jelikož tato změna není pro vazbu antigenu podstatná, vykazuje Thr v poloze 30 pouze slabou interakci s antigenem.
Změna zbytku v poloze 71 ve VH silně ovlivňuje vazbu antigenu. Tato skutečnost je překvapující, poněvadž dva zbytky, které byly zkoušeny v této poloze, tj. Val a Leu, se liší pouze jednou methylskupinou. H2 myší protilátky 425 je členem H2 skupiny 2 kanonických struktur definovaných Chothiou a dalšími /1989/, Nátuře 342, 877. HyHEL-5 má H2 se sekvencí aminokyselin podobnou té, kterou má H2 myší protilátky 425. V HyHEL-5 Pro v poloze 52A v CDR-2 se sbalí do dutiny, vytvořené malou aminokyselinou (Ala) v poloze 71 FRs. V modelu variabilních oblastí myší protilátky 425 existuje podobná interakce mezi Pro-52A a VaI-71. Ve Vh myší protilátky 425 je sice Pro v poloze 52A schopen sbalit se do dutiny, vytvořené Val v poloze 71, nahrazení Val-71 Leu však způsobuje molekulární kolizi, která může změnit konformaci smyčky CDR2. Z tohoto důvodu změna V71L v přetvořené VH oblasti humánní protilátky 425 znovu vytváří interakci CDR-2-FR, kjaké dochází v oblasti VH myší protilátky 425. To s překvapením velmi zlepšuje vazebné vlastnosti pro antigen přetvořených humánních protilátek 425 (srovnej přetvořené humánní protilátky s verzemi a a b Vh na obr. 6).
Změna v poloze 71 VL pravděpodobně ovlivňuje konformaci CDR, poněvadž zbytek 71 je členem navrhované kanonické struktury pro LI (CDR-1) (Chothia a další /1989/, viz shora uvedená citace). Zbytek 29 v CDR-1 je pohřbený zbytek (buried residue) a má styk se zbytkem 71 ve FRs. V myší protilátce 425 je zbytkem 71 ve VL Tyr. V humánních FRs, používaných pro konstrukci přetvořených humánních oblastí VL, je zbytkem 71 Phe. Ukazuje se, že hydroxyskupina, která je přítomna v Tyr, ale nikoliv ve Phe, má úlohu při udržování správné konformace CDR-1.
Z molekulárního modelu variabilních oblastí myší protilátky 425 je zřejmé, že Lys-66 vytváří solný můstek s Asp-86. Zavedení většího zbytku Arg do polohy 66 by tuto strukturu rozbilo. Ala67 může interagovat s CDR-2 a současná výměna zbytků 66 a 67 na Arg a Val, jako ve VH a 425 by mohla mít nepříznivý sterický účinek na CDR-2. Zbytek v poloze 48 je, jak známo, zbytek pohřbený (Chothia a Lesk /1987/, viz shora uvedená citace) a model tuto skutečnost potvrzuje. Změna zbytku 48 z Ile, který se nalézá v myší protilátce 425, na Val, který se nalézá v humánních oblastech VH podskupiny I, by mohl ovlivnit vazbu antigenu obecně tím, že by
- 15 CZ 282603 B6 došlo k rozbití této struktury. Také aminokyselina v poloze 48 je blízko CDR-2 a může mít malý sterický účinek na smyčku CDR-2.
Ze studií konkurenční vazby je zřejmé, že nej lepšími přetvořenými humánními oblastmi VL a VH 5 jsou oblasti VLb a VHg. VHg obsahuje všech pět změn FR, diskutovaných výše a zároveň změnu v poloze 94, která je zahrnuta v první verzi v oblasti VH přetvořené humánní protilátky 425. FRS ve verzi b oblasti VL přetvořené humánní protilátky 425 jsou ze 70 % identické s FRS v oblasti VL myší protilátky 425. FRS ve verzi g oblasti VH přetvořené humánní protilátky 425 jsou z 80 % identické s příslušnými oblastmi myší protilátky.
Terapeutické a diagnostické použití protilátek podle vynálezu
Protilátky podle vynálezu je možno podávat humánním pacientům z terapeutických nebo diagnostických důvodů v souladu s postupy, známými z dosavadního stavu techniky. Obvykle se 15 protilátka nebo její fragmenty podávají ve formě parenterálních injekcí, přednostně intraperitoneálně. Monoklonální protilátky podle tohoto vynálezu se však také mohou podávat intravenózně.
Stanovení vhodných titrů protilátky pro podávání je v rozsahu zkušeností odborníků v tomto 20 oboru. Obvykle se při podávání monoklonálních protilátek podle vynálezu používá tak velkého rozmezí dávkování, aby se jím dosáhlo požadovaného účinku při potlačování nádorů. Dávkování by nemělo být tak vysoké, aby způsobovalo nepříznivé vedlejší účinky, jako jsou nežádoucí křížové reakce, anafylaktické reakce apod. Dávkování se bude obvykle lišit v závislosti na stáří, zdravotním stavu, pohlaví a rozvoji choroby u pacienta a je v rozsahu zkušeností odborníků 25 v tomto oboru. Ošetřující lékař může dávkování upravit v případě jakýchkoliv kontraindikací, imunologické tolerance nebo podobných stavů. Dávkování může kolísat v rozmezí od 0,1 do 70 mg/kg, přednostně od 0,1 do 50 mg/ kg, přičemž tato dávka se může podávat jednou nebo několikrát denně po dobu jednoho nebo více dnů.
Přípravky pro parenterální podávání zahrnují sterilní, vodné nebo nevodné roztoky, suspenze a emulze. Jako příklady nevodných rozpouštědel je možno uvést propylen glykol, polyethylenglykol, rostlinné oleje, jako olivový olej, a organické estery, které je možno podávat injekčním způsobem, jako je ethyloleát. Vodné nosiče zahrnují vodu, vodně-alkoholické roztoky, emulze nebo suspenze, včetně fyziologického roztoku a tlumených médií. Parenterální vehikula 35 zahrnují roztok chloridu sodného, Ringerovu dextrózu, dextrózu a chlorid sodný, laktátované
Ringerovy přípravky nebo stabilní oleje. Intravenózní vehikula zahrnují přípravky, doplňující kapalinu a živiny nebo elektrolyt, jako jsou přípravky na bázi Ringerovy dextrózy apod. Také mohou být přítomny konzervační látky a jiné přísady, jako například antimikrobiální látky, antioxidanty, chelatační činidla, inertní plyny apod.
Protilátky mohou být konjugovány k toxinu, jako je ricinová podjednotka A, toxin diphteria nebo k toxickému enzymu. Alternativně mohou být označeny radioaktivním izotopem, v souladu se známými metodami tohoto oboru. Protilátka podle tohoto vynálezu však vykazuje vynikající cytotoxicitu za nepřítomnosti toxinu a za přítomnosti efektorových buněk, jako jsou humánní 45 monocyty.
Tuhé nádory, které je možno detekovat a léčit za použití způsobů podle tohoto vynálezu, zahrnují melanomy, gliomy a karcinomy. Rakovinné buňky, které neexprimují receptory EGFR ve velkém rozsahu, je možno indukovat, aby tak činily, za použití lymfokinových přípravků. Lymfokinové 50 přípravky mohou také způsobovat homogennější expresi receptorů EGF v buňkách nádoru, což vede k účinnější léčbě.
- 16CZ 282603 B6
Lymfokinové přípravky, které se hodí v této souvislosti pro podávání, zahrnují interferongamma, faktor nekrózy nádorů ajejich kombinace. Lze je podávat intravenózně. Vhodná dávka lymfokinu činí 10 000 až 1 000 000 jednotek na pacienta.
Pro diagnostické účely je možno protilátku konjugovat k radio-opaknímu barvivu, neboje možno ji značit radioizotopem. Přednostní metodou značení je Jodogenová metoda (Fraker a další /1978/, Biochem. Biophys. Res. Commun. 80, 849). Pro diagnostické účely se protilátka přednostně podává ve formě fragmentů F (ab')2. To zajišťuje dosažení vynikajících výsledků, takže není nutno odečítat pozadí. Fragmenty je možno připravovat známými postupy (viz například Herlyn a další /1983/, Cancer Res. 43, 2 731). Obvykle se provádí štěpení pepsinem při kyselém pH a fragmenty se oddělují od nerozštěpeného IgG a fragmentů těžkého řetězce chromatografií na Protein A-Sepharose(R).
Přetvořené humánní protilátky 425 podle tohoto vynálezu způsobují u lidí imunologickou odpověď s nižší pravděpodobností než myší nebo chimérické protilátky 425. Afinita nejlepší verze přetvořené humánní protilátky 425, která tvoří nejlepší provedení tohoto vynálezu, je stejná, jako afinita myší nebo chimérické protilátky 425. Vazebné studie ukazují, že schopnost soutěžit s EGF o vazbu k EGFR za optimálních podmínek je u chimérické, přetvořené i murinní protilátky stejná. Kromě toho, přetvořené humánní protilátky 425 jsou při terapeutickém použití u lidí účinnější než myší nebo chimérická protilátka 425. Díky velkému snížení imunogenicity vykazuje přetvořená humánní protilátka 425 v lidském těle delší poločas životnosti a pravděpodobnost, že u humánního pacienta způsobí nežádoucí imunologickou odpověď, je snížena na nejnižší míru.
Výsledky dosažené s definovanou protilátkou MAb 425 ukazují, že humanizované monoklonální protilátky, obsahující umělou konvenční sekvenci, nezpůsobují pozoruhodnou minimální odpověď. Další výhody vynálezu jsou popsány výše.
Na základě výše uvedeného popisu je možno konstatovat, že hodnota nových protilátek podle vynálezu pro terapeutické a diagnostické účely je mimořádně vysoká.
Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Molekulární klonování a sekvenování
Z buněčné linie W 425-15 (ACCT HB 9629), která produkuje protilátku MAb 425, se izoluje veškerá RNA. Pro produkci veškeré RNA se použije přibližně 9,6 x 107 buněk, za použití metody s guanidinium-CsCl (Chirgwin a další /1979/, Biochemistry 18, 5 294). Supematanty z buněk, které byly použity pro izolaci veškeré RNA, se zkoušejí metodou ELIS A, aby se zajistilo, že buňky produkují ve vysokých množstvích správnou protilátku MAb. Připraví se poly(A+)RNA (viz Aviv a Leder /1972/, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 69, 1 408). Dvouvláknová cDNA se syntetizuje v podstatě způsoby, popsanými v publikaci Gubler a Hoffman /1983/, Gene 25, 263, pouze s tím rozdílem, že se pro zahájení syntézy prvního vlákna použije příměrů, které jsou homologické s 5'- oblastmi myších kappa a gamma-2a'imunoglobulinových konstantních oblastí (viz Levý a další /1987/, Gene 54, 167). Primer lehkého řetězce je 26-mer (oligonukleotid 1), tabulka I), který byl sestrojen na základě publikovaných dat (Levý a další /1987/, Gene 54,167; Kaariten a další /1983/, J. Immunol. 130, 937). Primer těžkého řetězce je 25-mer (oligonukleotid
- 17CZ 282603 B6
2, tabulka I), který byl sestrojen na základě publikovaných dat (Kaariten a další /1983/ J. Immunol. 130, 937; Kabat a další /1987/ Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, US Govemment Printing Offices. Primery byly navrženy a syntetizovány pomocí zařízení Applied Biosystems 380B DNA Synthesizer a přečištěny na močovino-akrylamidových gelech. Po syntéze druhého vlákna se tupě zakončené cDNA klonují do Smal-štěpeného pUC18 (obchodně dostupný produkt) a transformují do kompetentních buněk E. coli, například DH5-alfa (obchodně dostupný produkt). Kolonie se pomocí mřížky přenesou na agarové misky a provede se skríning hybridizací za použití 32P-značených primerů pro syntézu prvního vlákna (Carter a další /1985/, Oligonucleotide Sitedirected Mutagenesis in M 13, an Experimental Approach Manual, Anglian Biotechology Ltd. Colchester). Sekvenování dvouvláknové plasmidové DNA se provádí za použití Sequenase (United States Biochemical Corporation).
Příklad 2
Konstrukce chimérických genů
Pro každou variabilní oblast se syntetizuje přední 5' a zadní 3' primer pro PCR reakci (řetězová reakce pomocí polymerázy (oligonukleotidy 3 až 6, viz tabulka I). Reakce PCR se provádí za použití 1 ng DNA z plasmidu pUC18, obsahující klonovanou cDNA, předního a zadního PCR primeru, z nichž každý je přítomen v konečné koncentraci 1 μΜ, vždy 200 μΜ DNTP, 10 mM Tris-HCl (pH 8,3), 50 mM KC1, 1,5 mM MgCl a 0,1 g/1 želatiny. Na každé stanovení se přidá 2,5 jednotky polymerázy DNA Amplitaq (Perkin Elmer Cetus). Po počátečním 1,5 minutovém tavení při 94 °C se provede 25 cyklů amplifikace při 94 °C po dobu 1 minuty, 45 °C po dobu 1 minuty a 72 °C po dobu 3 minut. Závěrečný prodlužovací stupeň při 72 °C se provádí po dobu 10 minut. PCR reakční směsi se dvakrát extrahují směsí fenolu a chloroformu, provede se srážení ethanolem a potom štěpení produktu HindlII a BamHI. Fragment PCR kódující oblast VL nebo VH se potom klonuje do expresivního vektoru. Tento vektor obsahuje enhancer a promotor z HCMV (humánní cytomelovirus), bakteriální neo gen a počátek replikace SV40. Vloží se 2,0 Kb BamHI fragment genomové DNA kódující humánní gamma-1 konstantní oblast (Takahashi a další /1982/, Cell 29, 671) ve správné orientaci se směru za VH oblastí fragmentu (viz HCMV-CVH425-gamma-l na obr. 1). Tento vektor se později přizpůsobí odstraněním místa BamHI u 3'- konce fragmentu konstantní oblasti, čímž se umožní, aby byly variabilní oblasti přímo vloženy do expresivního vektoru těžkého řetězce, jako HindlII-BamHI fragmenty (Maeda a další /1991/, Hum, Antibod. Hybridomas 2, 124). Fragment kódující oblast Vl se vloží do podobného HCMV expresivního vektoru, který v tomto případě obsahuje BamHI fragment genomové DNA, přibližně o velikosti 2,6 Kb, který kóduje humánní kappa konstantní oblast a obsahuje akceptorové místo pro sestřih apoly-(A+) (Rabbitts a další /1984/, Curr. Top. Microbiol. Immunol. 113, 166) (viz HCMV-CVL-425-kappa na obr. 1).
Příklad 3
Molekulární modelování VL a VH MAb 425
Molekulární model variabilních oblastí murinní protilátky MAb 425 byl vytvořen na základě vyřešené struktury vysoce homologické anti-lysosymové protilátky HyHEL-5 (Sheriff a další /1987/, Proč. Nati. Acad. Sci USA 84, 8075). Variabilní oblasti protilátek MAb 425 a HyHEL-5 vykazují přibližně 95 % homologii.
Model byl vytvořen na zařízení Silicon Graphics Iris 4D workstation running UNIX za použití programovacího balíku pro modelování molekul QUANTA (Polygen Corp). Identické zbytky
- 18CZ 282603 B6 ve struktuře byly zachovány a neidentické zbytky byly nahrazeny za použití maximálního překrývání (maximum overlap, Snow aAmzel /1986/), které bylo zavedeno do zařízení pro modelování proteinů QUANTA. Konformace hlavního řetězce tří N-terminálních zbytků v těžkém řetězci byly nahrazeny zhomologické protilátkové struktury (HyHEL-10, Padlan a další /1989/, Proč. Nati. Acad. Sci USA 86, 5938), poněvadž jejich teplotní faktory byly abnormálně vysoké (vyšší než střed plus tři směrodatné odchylky, měřeno od teplotních faktorů hlavního řetězce) a poněvadž ovlivňovaly sbalování VH CDR-3 (H3) (Martin /1990/, disertační práce na doktorát filosofie na Oxfordské univerzitě). Sekvence CDR-1 (LI) a CDR-2 (L2) oblasti VL a sekvence CDR-1 (Hl) a CDR-2 (H2) oblasti VH z protilátky MAb 425 odpovídají kanonickým formám, které postulovali Chothia a další /1989/, Nátuře 342, 877). Hlavní úhly torze řetězců těchto smyček byly udržovány tak jako v HyHEL-5. Sekvence CDR-3 (L3) oblasti VL a sekvence CDR-3 (H3) oblasti VH z protilátky MAb 425 neodpovídají kanonickým strukturám, a proto byly modelovány odlišným způsobem. Bylo použito počítačového programu Martina a dalších /1989/, Proč. Nati. Acad. Sci USA 86, 9268) pro extrakci smyček z Brookhavenovy databanky (Bemstein a další, /1977/, J. Mol. Bio 112, 525). Smyčky byly potom vytříděny na základě podobnosti sekvence, energie a zbytků určujících strukturu (Sutcliffe /1988/, disertační práce na doktorát filosofie na Londýnské universitě). Kvalitní smyčky byly kontrolovány na grafice a nej lepší z nich byly vybrány na základě vizuálního pozorování. H3 byl modelován na hovězí glutathion peroxidáze (Epp a další /1983/, Eur. J. Biochem. 133, 51) v oblasti zbytků 92 až 103. L3 byl modelován na murinní IgA (J539) Fab fragmentu (Suh a další /1986/, Proteins 1, 74) v oblasti zbytků 88 až 96 lehkého řetězce.
Model byl podroben minimalizaci energie nejstrmějšími poklesy a konjugátovými gradienty za použití potenciálu CHARm (Brooksa další /1983/, J. Comp. Chem. 4, 187) zakomponovaným do QUANTA, aby se odstranily nežádoucí kontakty atomů a aby se optimalizovaly Van der Waalsovy a elektrostatické interakce.
Příklad 4
Konstrukce genů humanizované protilátky
Konstrukce první verze lehkého řetězce přetvořené humánní protilátky 425 byla prováděna za použití CDR-roubovacího postupu, který se podobá postupu, popsanému v Reichmann a další /1988/, Nátuře 322, 21; Verhoeyen a další /1988/, Science 239, 18). Jednovláknová templátová DNA byla připravena z vektoru M13mpl8 (který je obchodně dostupný), obsahujícího fragment HinDIII-BamHI kódující humánní anti-lysosymovou oblast Vl (EP 239 400, G. Winter). FRs tohoto lehkého řetězce jsou odvozeny z krystalograficky vyřešeného proteinu REI. Byly navrženy tři oligonukleotidy, které sestávaly ze sekvencí DNA kódujících každou CDR lehkého řetězce myší protilátky MAb 425, lemovaných na každém konci 12 bázemi DNA komplementární sekvencím DNA kódujícím sousední FRs humánního REI (oligonukleotidy 7 až 9 v tabulce I). Oligonukleotidy byly syntetizovány a purifikovány shora uvedeným způsobem. Všechny tři oligonukleotidy byly fosforylovány a současně použity v systému pro mutagenezi in vitro zaměřenou na oligonukleotidy. Použitý systém je založen na metodách, které vypracovali Eckstein ajeho spolupracovníci (Taylor a další /1985/, Nucleic Acids Res, 13, strana 8749 a 8764; Nakamaye a Eckstein /1986/, Nucleic Res. 14, 9679; Sayers a další /1988/, Nucleic Acids Res. 16, 791). Až do exonukleasového III štěpícího stupně bylo postupováno podle instrukcí výrobce. Potom byla reakční směs extrahována směsí fenolu a chloroformu, produkt byl sražen ethanolem a resuspendován ve 100 μΐ TE. Objemu 10 μΐ bylo použito jako templátové DNA při 100 μΐ PCR amplifikační reakci za použití univerzálního primeru M13 a reverzního sekvenačního primeru až do koncové koncentrace každé z těchto látek 0,2 μΜ. Pufrovací a termocyklové podmínky byly stejné jako v příkladu 2 s výjimkou toho, že bylo použito hybridizační teploty 55 °C. Reakční směs byla dvakrát extrahována směsí fenolu a chloroformu
- 19CZ 282603 B6 produkt byl sražen ethanolem a potom štěpen HindlII a BamHI a subklonován do pUC18. Předpokládané pozitivní klony byly identifikovány hybridizaci k 32P - značeným mutagenním primerům (Carter a další /1987/, viz výše uvedená citace). Klony byly potvrzeny jako pozitivní sekvenováním. Oblast VL obsahující všechny tři roubované CDR byla klonována jako fragment HindlII-BamHI do expresivního vektoru VL, za vzniku plasmidu HCMV-RVLa425-kappa.
Verze b přetvořené oblasti VL byla konstruována za použití metody PCR mutageneze (Kammann a další /1989/, Nucleic Acids Res. 17, 5404) s menšími modifikacemi. Templátovou DNA byla RVLa subklonovaná do pUC18. První PCR reakce byla prováděna v celkovém objemu 50 μΐ a reakční směs obsahovala jeden μg templátu, M13 reverzní sekvenační primer a primer 10 (tabulka I) o konečné koncentraci 1 μΜ, 200 μΜ každé dNTP, 10 mM Tris-HCl (pH 8,3), 50 mM KC1, 1,5 mM MgCl a 0,1 g/1 želatiny. Ke každému stanovení byla přidána jedna jednotka DNA polymerázy Amplitaq. Reakce byla prováděna se třemi replikacemi. Po 1,5 minutovém tavení při 94 °C následovalo 40 reakčních cyklů 1 minuta při 94 °C, 1 minuta při 37 °C a 2 minuty při 72 °C. Nakonec bylo provedeno prodlužování po dobu 10 minut při 72 °C. Reakční produkty byly spojeny a extrahovány směsí fenolu a chloroformu. Před izolací PCR produktu z TAE agarózového gelu byl produkt sražen ethanolem. Jedné desetiny prvního PCR reakčního produktu se potom použilo jako jednoho z primerů při druhé PCR reakci. Druhá reakce byla stejná jako první, s výjimkou použití prvního reakčního produktu a 20 pmol univerzálního primeru M13. Cyklování bylo prováděno způsobem popsaným v publikaci Kammann a další /1989/ Nucleic Acids Res 17, 5404). Fragment HindlII-BamHI byl klonován do p-UC18 a sekvenován. Fragment DNA nesoucí požadovanou změnu, byl subklonován do VL expresivního plasmidu za vzniku plasmidu HCMV-RVLb425-kappa.
První verze přetvořené humánní oblasti VH protilátky 425 byla syntetizována chemicky. Byla sestrojena DNA sekvence kódující požadovanou sekvenci aminokyselin a obsahující potřebné lemovací sekvence DNA (viz výše). Použití kodonu bylo optimalizováno pro savčí buňky zabudováním užitečných míst pro restrikční enzymy do sekvencí DNA kódujících FRs. Byl syntetizován úsek o velikosti 454 bp a subklonován do pUC18, jako EcoRI-HindlII fragment. Potom byl HindlII-BamHI fragment kódující těžký řetězec přetvořené humanizované protilátky 425 přenesen do VH expresivního vektoru, za vzniku plasmidu HCMV- RVHa-425-gamma-l.
Různými způsoby byly zkonstruovány další verze (celkem 8) přetvořených humanizovaných těžkých řetězců. Fragment HindlII-BamHI, kódující verzi a těžkého řetězce, byl přenesen do M13mpl8 a byla připravena jednovláknová DNA. Za použití oligonukleotidů 11 až 13 (viz tabulka I) byla výše popsanou PCR-přizpůsobenou M13 mutagenezí připravena DNA kódující verze d, e, ”f' a g oblastí VH přetvořené humánní protilátky 425 v pUC18. Tyto verze byly subklonovány do expresivního vektoru těžkého řetězce jako fragmenty HindlII-BamHI, za vzniku plasmidů HCMV-RVHd425-gamma-l, HCMV-RVHe425-gamma-l, HCMV-RVHf425gamma-1 a HCMV-RVHg425-gamma-l.
Verze b a c oblastí VH přetvořené humánní protilátky 425 byly vytvořeny za použití PCR mutageneze, kterou popsali Kammann a další /1989/, viz výše uvedená citace. Jako templátové DNA bylo použito verze a oblasti VH humánní protilátky 425, subklonované do pUC18 a jako mutagenního primeru bylo při první PCR reakci použito buď primeru 13 nebo 14 (viz tabulka I). Po mutagenezi a sekvenování byly sekvence, nesoucí požadované změny, subklonovány do expresivního plasmidu těžkého řetězce, za vzniku plasmidů HCMV-RVHb425-gamma-l a HCMV- RVHc425-gamma-l.
Přetvořené verze h a i těžkého řetězce byly zkonstruovány z klonů existujících verzí na bázi pUC. 0,2 Kb fragment HindlII-Xhol z verze e byl ligován k 2,8 Kb fragmentu Xhol-HindlII buď z verze b nebo c, za vzniku nových verzí h a i. Fragmenty HindlII-BamHI, kódující tyto verze, byly subklonovány do expresivního faktoru těžkého řetězce za vzniku HCMV-20CZ 282603 B6
RVHh425-gamma-l a HCMV-RVHi425-garnma-l.
Příklad 5
Transfekce DNA do buněk COS
Buňky COS byly elektroporovány vždy 10 pg expresivního vektoru, nesoucího jednak gen kódující těžký řetězec, ajednak gen kódující lehký řetězec. Krátce řečeno, 10 pg každého plasmidu bylo přidáno k 0,8 ml alikvotního dílu suspenze buněk COS v PBS o koncentraci 1 x 107 buněk na ml. Bylo použito zařízení Bio-Rad(R) Gene Pulser pro dodání pulzu 1 900 V s kapacitou 25 pF. Buňky byly ponechány zotavit se v průběhu 10 minut při teplotě místnosti a potom byly naneseny na misky do 8 ml DMEM s obsahem 10% fetálního telecího séra. Po 72 hodinách inkubace byla média shromážděna, zbavena úlomků buněk odstředěním a před provedením analýzy metodou ELISA byla uložena za sterilních podmínek krátkou dobu při 4 °C nebo delší dobu při -20 °C.
Příklad 6
Transfekce DNA do buněk CHO byla prováděna způsobem, popsaným v příkladu 5.
Příklad 7
Kvantifikace produkce IgG a detekce vazby antigenu
Humánní IgG, přítomný v supematantech z buněk COS, byl detekován metodou ELISA. Při stanovení humánního IgG testem ELISA byly plotny s 96 jamkami povlečeny kozím antihumánním IgG (celé molekuly) a humánní IgG ve vzorcích, který se navázal na plotny, byl detekován za použití alkalickou fosfatázou konjugovaného kozího anti-humánního IgG (specifického vůči gamma-řetězcům). Jako standardu bylo použito zakoupeného přečištěného humánního IgG. Vazba antigenu rozpoznaná protilátkou MAb 425 byla stanovena druhým testem ELISA. Plotny byly povlečeny EGFR proteinovým přípravkem (který lze získat například způsobem, popsaným v publikaci Rodeck a další /1987/, Cancer Res. 47, 3692), a protilátky vázající se kEGFR byly detekovány za použití bud’ anti-humánní IgG (specifického vůči gamma-řetězcům) peroxidázového konjugátu (v případě chimérických a přetvořených humánních protilátek), nebo za použití anti-myší IgG (celá molekula) peroxidázového konjugátu (v případě myší protilátky MAb 425). Oba konjugáty byly dodány firmou Sigma. Purifikované murinní protilátky MAb 425 bylo použito jako standardu.
Příklad 8
Konkurenční vazebná zkouška
Murinní protilátka MAb 425 byla biotinylována za použití odpovídající soupravy, která je k dostání na trhu. Plotny pro test ELISA byly povlečeny EGFR proteinem v optimálním zředění. Zředěné supematanty buněk COS v objemu 50 pl byly smíseny s 50 pl biotinylované murinní protilátky MAb 425 (o koncentraci podle testu ELISA 1,75 pg/ml). Každý supematant z buněk COS byl zkoušen dvakrát. Plotny byly inkubovány přes noc při teplotě místnosti. Vázaná biotinylovaná murinní protilátka MAb 425 byla detekována přídavkem komplexu streptavidinperoxidáza z ředkve, kterýžto komplex je k dostání na trhu. Kontrolní pokus, při němž není
-21 CZ 282603 B6 přítomna žádná konkurenční látka, vedl k hodnotě procenta inhibice nebo blokování, již lze vypočítat pro každý supematant buněk COS podle následujícího vzorce:
100 - [(OD450 vzorku/OD45o kontrolního vzorku) x 100]
Příklad 9
Různé vzorky murinní, přetvořené a chimérické protilátky MAb 425 byly analyzovány metodou SDS-PAGE (SDS - Polyacrylamide-Gelspaceelectrophoresis), metodou, kterou popsali Laemmli adalší. Do každé jamky bylo naneseno 2,5 pg každého vzorku jak za neredukujících, tak za redukujících podmínek. Protein byl vizualizován barvením Coomassie. Obr. 9 (A) ukazuje, že vzorky měly podobnou čistotu. Rozmezí molekulové hmotnosti protilátek bylo 180 000 až 200 000.
Příklad 10
Přetvořená protilátka MAb 425 byla purifikována gelovou prostorovou filtrací na Superose 12^ (Pharmacia Corp., Švédsko) za použití standardních metod. Protilátka byla eluována pomocí PBS (pH 7,4, 0,8 M NaCl) (0,1 M). Je možno získat jediný pík (při 5 minutách) (obr. 9 (B)).
Příklad 11
Biotinem značené protilátky MAb 425 bylo použito jako konkurentu neznačené protilátky MAb 425 nebo jejích derivátů při vazbě kEGFR. Značení biotinem bylo provedeno standardními metodami. EGFR byl převeden do roztoku z membrán A431 standardními metodami. Buňky A 431 byly zakoupeny na trhu. Detekce byla prováděna po inkubaci s POD-konjugovaným streptavidinem a substrátem. Z těchto dat byly sestrojeny inhibiční křivky (obr. 10). Křivky ukazují, že vazba různých protilátek je srovnatelná.
Příklad 12
Různé vzorky purifikované murinní, chimérické a přetvořené MAb 425 byly zkoušeny na svou schopnost soutěžit s EGF o vazbu k EGFR. Zkouška byla prováděna za použití 125I-značeného EGF (Amersham Corp., Velká Británie) a různých protilátek, které značenému EGF konkurují při vazbě na EGF receptor pozitivní membrány (A431). Zkušební systém je založen na technologii SPA. Konkurenční křivky murinní a přetvořených protilátek (3 vzorky) jsou téměř identické (obr. 11).
Claims (4)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Humanizovaná monoklonální protilátka, obsahující místa, vázající antigen, CDR nehumánního původu, úseky základní struktury, FR humánního původu a konstantní oblasti humánního imunoglobulinu, která vykazuje tyto znaky:i) váže se k humánním receptorům EGF a inhibuje vazbu EGF k receptoru EGF, ii) konstantní oblasti jejího těžkého řetězce zahrnují sekvenci aminokyselin humánního řetězce gamma-1 a konstantní oblasti lehkého řetězce zahrnují sekvenci aminokyselin humánního řetězce kappa, iii) její oblasti CDR, reprezentující místa, vázající antigen, zahrnují následující sekvence aminokyselin lehký řetězecCDR-1 -Ser-Ala-Ser-Ser-Ser-Val-Thr-Tyr-Met-TyrCDR-2 -Asp-Thr-Ser-Asn-Leu-Ala-SerCDR-3 -Gln-Gln-Trp-Ser-Ser-His-Ile-Phe-Thrtěžký řetězecCDR-1 -Ser-His-Trp-Met-HisCDR-2 -Glu-Phe-Asn-Pro-Ser-Asn-Gly-Arg-Thr-Asn-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-SerCDR-3 -Arg-Asp-Tyr-Asp-Tyr-Asp-Gly-Arg-Tyr-Phe-Asp-Tyr- iv) její úseky základní struktury, FR, variabilní oblasti, která nemá vztah k místům, vázajícím antigen, zahrnují následující aminokyselinové sekvence lehký řetězecFR-1 -Asp-Ile-Gln-Met-Thr-Gln-Ser-Pro-Ser-Ser-Leu-Ser-Ala-Ser-Val-Gly-Asp-Arg-ValThr-Ile-Thr-CysFR-2 -Trp-Tyr-Gln-Gln-Lys-Pro-Gly-Lys-Ala-Pro-Lys-Leu-Leu-Ile-TyrFR-3 -Gly-Val-Pro-Ser-Arg-Phe-Ser-Gly-Ser-Gly-Ser-Gly-Thr-Asp-Tyr(Phe,Trp,His)-ThrPhe-Thr-Ile-Ser-Ser- Leu-Gln-Pro-Glu-Asp-Ile-Ala-Thr-Tyr-Tyr-CysFR-4 -Phe-Gly-Gln-Gly-Thr-Lys-Val-Glu-Ile-Lystěžký řetězecFR-1 -Gln-Val-Gln-Leu-Val-Gln-Ser-Gly-Ala-Glu-Val-Lys-Lys-Pro-Gly-Ala-Ser-Val-LysVal-Ser-Cys-Lys-Ala-Ser-Gly-Tyr-Thr-Phe-Thr(Ser)FR-2 -Trp-Val-Arg(His)-Gln-Ala(Lys,His)-Pro(Val)-Gly-Gin-Gly-Leu-Glu-Trp-Ile(Val,Leu)GlyFR-3 -Lys( Arg,His)-Ala(V al-Pro-Gly)-Thr-Met-Thr-V al( Ala,Pro,Gly)-Asp-Thr-Ser-Thr-AsnThr-Ala-Tyr- Met-Glu(Asn)-Leu-Ser-Ser-Leu-Arg-Ser-Glu-Asp-Thr-Ala-Val-Tyr-TyrCys-Ala-SerFR-4 -Trp-Gly-GIn-Gly-Thr-Leu-Val-Thr-Val-Ser-Ser-,-23 CZ 282603 B6
- 2. Expresní vektor, obsahující sekvenci DNA kódující variabilní a konstantní oblast lehkého řetězce humanizované monoklonální protilátky podle nároku 1, který nese označení pRVL425 aje uložen ve sbírce DSM pod přírůstkovým číslem DSM 6340.5
- 3. Expresní vektor, obsahující sekvenci DNA, kódující variabilní a konstantní oblast těžkého řetězce humanizované monoklonální protilátky podle nároku 1, který nese označení pRVH425 aje uložen ve sbírce DSM pod přírůstkovým číslem DSM 6339.
- 4. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje monoklonální io protilátku podle nároku 1.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP91103389 | 1991-03-06 | ||
| PCT/EP1992/000480 WO1992015683A1 (en) | 1991-03-06 | 1992-03-04 | Humanized and chimeric monoclonal antibodies |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ332792A3 CZ332792A3 (en) | 1994-02-16 |
| CZ282603B6 true CZ282603B6 (cs) | 1997-08-13 |
Family
ID=8206486
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS923327A CZ282603B6 (cs) | 1991-03-06 | 1992-03-04 | Humanizované a chimerické monoklonální protilátky |
| CZ963337A CZ283717B6 (cs) | 1991-03-06 | 1992-03-04 | Chimérická monoklonální protilátka, expresní vektory a farmaceutický prostředek |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ963337A CZ283717B6 (cs) | 1991-03-06 | 1992-03-04 | Chimérická monoklonální protilátka, expresní vektory a farmaceutický prostředek |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5558864A (cs) |
| EP (2) | EP1362868A3 (cs) |
| JP (1) | JP3854306B2 (cs) |
| KR (1) | KR100240308B1 (cs) |
| AT (1) | ATE247168T1 (cs) |
| AU (1) | AU658396B2 (cs) |
| CA (1) | CA2082160C (cs) |
| CZ (2) | CZ282603B6 (cs) |
| DE (1) | DE69233153T2 (cs) |
| DK (1) | DK0531472T3 (cs) |
| ES (1) | ES2204890T3 (cs) |
| HU (1) | HU219537B (cs) |
| IE (1) | IE920705A1 (cs) |
| MX (1) | MX9201016A (cs) |
| PT (1) | PT100195B (cs) |
| SK (2) | SK281143B6 (cs) |
| TW (1) | TW222279B (cs) |
| WO (1) | WO1992015683A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA921661B (cs) |
Families Citing this family (333)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CU22545A1 (es) * | 1994-11-18 | 1999-03-31 | Centro Inmunologia Molecular | Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico |
| GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
| US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
| US6750325B1 (en) | 1989-12-21 | 2004-06-15 | Celltech R&D Limited | CD3 specific recombinant antibody |
| US5994510A (en) * | 1990-12-21 | 1999-11-30 | Celltech Therapeutics Limited | Recombinant antibodies specific for TNFα |
| AU662311B2 (en) * | 1991-02-05 | 1995-08-31 | Novartis Ag | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
| DK0590058T3 (da) * | 1991-06-14 | 2004-03-29 | Genentech Inc | Humaniseret heregulin-antistof |
| WO1994004679A1 (en) * | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
| US6800738B1 (en) | 1991-06-14 | 2004-10-05 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
| CA2143621C (en) * | 1993-06-29 | 2008-02-19 | Sadaaki Iwanaga | Horseshoe crab amebocyte lysate factor g subunit a and dna encoding thereof |
| UA40577C2 (uk) * | 1993-08-02 | 2001-08-15 | Мерк Патент Гмбх | Біспецифічна молекула, що використовується для лізису пухлинних клітин, спосіб її одержання, моноклональне антитіло (варіанти), фармацевтичний препарат, фармацевтичний набір (варіанти), спосіб видалення пухлинних клітин |
| PT659439E (pt) | 1993-12-24 | 2002-04-29 | Merck Patent Gmbh | Imunoconjugados |
| GB9401182D0 (en) * | 1994-01-21 | 1994-03-16 | Inst Of Cancer The Research | Antibodies to EGF receptor and their antitumour effect |
| US20030108545A1 (en) * | 1994-02-10 | 2003-06-12 | Patricia Rockwell | Combination methods of inhibiting tumor growth with a vascular endothelial growth factor receptor antagonist |
| US6448077B1 (en) * | 1994-02-10 | 2002-09-10 | Imclone Systems, Inc. | Chimeric and humanized monoclonal antibodies specific to VEGF receptors |
| US6017719A (en) * | 1994-06-14 | 2000-01-25 | Nexell Therapeutics, Inc. | Positive and positive/negative cell selection mediated by peptide release |
| ES2167391T3 (es) * | 1994-09-16 | 2002-05-16 | Merck Patent Gmbh | Inmunoconjugados ii. |
| US7803904B2 (en) * | 1995-09-01 | 2010-09-28 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Mucosal vascular addressing and uses thereof |
| US6551593B1 (en) | 1995-02-10 | 2003-04-22 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of Inflammatory bowel disease by inhibiting binding and/or signalling through α 4 β 7 and its ligands and madcam |
| IT1277827B1 (it) * | 1995-03-01 | 1997-11-12 | Ministero Uni Ricerca Scient E | Anticorpo monoclonale chimerico murino/umano o un suo frammento specifico per il recettore egf (egf-r) |
| EP0739984A1 (en) * | 1995-04-26 | 1996-10-30 | San Tumorforschungs-Gmbh | Bivalent polypeptides containing at least two domains |
| US20050241006A1 (en) * | 1995-04-27 | 2005-10-27 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| US20050287630A1 (en) * | 1995-04-27 | 2005-12-29 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| EP1978033A3 (en) * | 1995-04-27 | 2008-12-24 | Amgen Fremont Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| US5641751A (en) * | 1995-05-01 | 1997-06-24 | Centocor, Inc. | Tumor necrosis factor inhibitors |
| DE69616651D1 (de) * | 1995-05-26 | 2001-12-13 | Merck Patent Gmbh | Antiidiotypische Antikörper die eine Immunantwort gegen den Rezeptor für epidermalen Wachstumsfaktor induzieren |
| EP0745612B1 (en) * | 1995-05-26 | 2001-11-07 | MERCK PATENT GmbH | Anti-idiotypic antibodies which induce an immune response against epidermal growth factor receptor |
| US7060808B1 (en) * | 1995-06-07 | 2006-06-13 | Imclone Systems Incorporated | Humanized anti-EGF receptor monoclonal antibody |
| US6410690B1 (en) | 1995-06-07 | 2002-06-25 | Medarex, Inc. | Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies |
| EP0781847A1 (en) | 1995-11-06 | 1997-07-02 | MERCK PATENT GmbH | Humanized monoclonal antibody |
| AR005035A1 (es) * | 1995-12-11 | 1999-04-07 | Merck Patent Ges Mit Beschränkter Haftung | Procedimiento para preparar proteinas recombinantes en e. coli, mediante fermentacion con gran concentracion de celulas. |
| EP0909277B2 (en) | 1996-06-07 | 2008-12-24 | Poniard Pharmaceuticals, Inc. | Humanized antibodies that bind to the same antigen as bound by antibody nr-lu-13, and their use in pretargeting methods |
| US7147851B1 (en) * | 1996-08-15 | 2006-12-12 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin |
| WO1998011241A1 (en) * | 1996-09-16 | 1998-03-19 | Merck Patent Gmbh | Oligocistronic expression system for the production of heteromeric proteins |
| AU5702298A (en) * | 1996-12-03 | 1998-06-29 | Abgenix, Inc. | Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and VK regions nd antibodies produced therefrom |
| ES2273415T3 (es) * | 1997-04-07 | 2007-05-01 | Genentech, Inc. | Anticuerpos anti-vegf. |
| US20020173629A1 (en) * | 1997-05-05 | 2002-11-21 | Aya Jakobovits | Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor |
| DE19722888A1 (de) * | 1997-05-28 | 1998-12-03 | Thomas Prof Dr Huenig | Human-CD28 spezifische monoklonale Antikörper zur antigenunspezifischen Aktivierung von T-Lymphozyten |
| US7052692B1 (en) | 1997-09-02 | 2006-05-30 | Advanced Research & Technology Institute | Role of tyrosine phosphorylation of a cellular protein in adeno-associated virus 2-mediated transgene expression |
| CA2311729A1 (en) * | 1998-01-23 | 1999-07-29 | Imclone Systems Incorporated | Purified populations of stem cells |
| US20030224001A1 (en) * | 1998-03-19 | 2003-12-04 | Goldstein Neil I. | Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth of tumors |
| EP1073464B1 (en) * | 1998-04-28 | 2004-10-06 | Smithkline Beecham Corporation | Monoclonal antibodies with reduced immunogenicity |
| ZA200007412B (en) * | 1998-05-15 | 2002-03-12 | Imclone Systems Inc | Treatment of human tumors with radiation and inhibitors of growth factor receptor tyrosine kinases. |
| WO2000002584A2 (en) | 1998-07-13 | 2000-01-20 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Cancer treatment methods using antibodies to aminophospholipids |
| DE69939022D1 (de) * | 1998-08-18 | 2008-08-14 | Univ California | Epidermale wachstumsfaktor rezeptor antagonisten zur behandlung stark vermehrter schleimsekretion in der lunge |
| RU2294761C2 (ru) * | 1999-05-14 | 2007-03-10 | Имклон Систимс Инкопэритид | Лечение резистентных опухолей человека антагонистами рецепторов фактора роста эпидермиса |
| GB0002952D0 (en) * | 2000-02-09 | 2000-03-29 | Pharma Mar Sa | Process for producing kahalalide F compounds |
| US20010051147A1 (en) * | 2000-03-27 | 2001-12-13 | Van De Winkel Jan G.J. | Methods for immunostimulation using binding agents for the Fc receptor of immunoglobulin A |
| AU9500201A (en) * | 2000-08-09 | 2002-02-18 | Imclone Systems Inc | Treatment of hyperproliferative diseases with epidermal growth factor receptor antagonists |
| US20040052785A1 (en) * | 2001-01-09 | 2004-03-18 | Simon Goodman | Combination therapy using receptor tyrosine kinase inhibitors and angiogenesis inhibitors |
| US7132511B2 (en) * | 2001-02-19 | 2006-11-07 | Merck Patent Gmbh | Modified anti-EGFR antibodies with reduced immunogenicity |
| AU2002322478A1 (en) * | 2001-03-02 | 2002-12-16 | Medimmune, Inc. | Methods of administering/dosing cd2 antagonists for the prevention and treatment of autoimmune disorders or inflammatory disorders |
| US20080008704A1 (en) * | 2001-03-16 | 2008-01-10 | Mark Rubin | Methods of treating colorectal cancer with anti-epidermal growth factor antibodies |
| EP2292251A1 (en) | 2001-04-24 | 2011-03-09 | Merck Patent GmbH | Combination therapy using anti-angiogenic agents and TNF-alpha |
| KR20040029975A (ko) * | 2001-05-08 | 2004-04-08 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 항-ｅｇｆｒ 항체 및 항호르몬제를 이용한 병용 요법 |
| US20100056762A1 (en) | 2001-05-11 | 2010-03-04 | Old Lloyd J | Specific binding proteins and uses thereof |
| EP2335728A1 (en) | 2001-05-11 | 2011-06-22 | Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. | Specific binding proteins and uses thereof |
| US20020193569A1 (en) * | 2001-06-04 | 2002-12-19 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Bispecific fusion protein and method of use for enhancing effector cell killing of target cells |
| EP1515707A4 (en) * | 2001-06-20 | 2005-10-19 | Imclone Systems Inc | METHOD FOR THE TREATMENT OF ATHEROSCLEROSIS AND OTHER INFLAMMATORY DISEASES |
| AU2002319402B2 (en) * | 2001-06-28 | 2008-09-11 | Domantis Limited | Dual-specific ligand and its use |
| US20050271663A1 (en) * | 2001-06-28 | 2005-12-08 | Domantis Limited | Compositions and methods for treating inflammatory disorders |
| EP1423012B1 (en) * | 2001-08-10 | 2007-11-14 | Imclone Systems, Inc. | Medical use of stem cells expressing vegfr-1 |
| WO2003030908A2 (en) * | 2001-10-09 | 2003-04-17 | The University Of Cincinnati | Inhibitors of the egf receptor for the treatment of thyroid cancer |
| EP3674322A1 (en) | 2002-02-25 | 2020-07-01 | Biogen MA Inc. | Administration of agents for the treatment of inflammation |
| US20040132101A1 (en) | 2002-09-27 | 2004-07-08 | Xencor | Optimized Fc variants and methods for their generation |
| US20090042291A1 (en) * | 2002-03-01 | 2009-02-12 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants |
| US7662925B2 (en) | 2002-03-01 | 2010-02-16 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants and methods for their generation |
| ES2347543T3 (es) * | 2002-03-04 | 2010-11-02 | Imclone Llc | Anticuerpos humanos especificos para kdr y sus usos. |
| ES2545745T3 (es) * | 2002-05-02 | 2015-09-15 | Wyeth Holdings Llc | Conjugados de transportador derivado de caliqueamicina |
| GB0210121D0 (en) | 2002-05-02 | 2002-06-12 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
| EP1575491A4 (en) * | 2002-05-20 | 2006-09-27 | Abgenix Inc | TREATMENT OF RENAL CARCINOMA USING ANTIBODIES AGAINST THE EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR |
| US7893218B2 (en) | 2003-06-16 | 2011-02-22 | Stowers Institute For Medical Research | Antibodies that specifically bind SOST peptides |
| US9321832B2 (en) * | 2002-06-28 | 2016-04-26 | Domantis Limited | Ligand |
| US7696320B2 (en) | 2004-08-24 | 2010-04-13 | Domantis Limited | Ligands that have binding specificity for VEGF and/or EGFR and methods of use therefor |
| CN1678634A (zh) * | 2002-06-28 | 2005-10-05 | 多曼蒂斯有限公司 | 免疫球蛋白单个变体抗原结合区及其特异性构建体 |
| AU2003247869C1 (en) | 2002-07-15 | 2009-12-24 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Selected antibodies binding to anionic phospholipids and aminophospholipids and their use in treating viral infections and cancer |
| DK2364996T3 (en) | 2002-09-27 | 2017-02-06 | Xencor Inc | Optimized Fc variants and methods for their formation |
| RU2349340C2 (ru) * | 2002-10-10 | 2009-03-20 | Мерк Патент Гмбх | Биспецифические антитела к erb-b и их применение для лечения опухолей |
| GB0228832D0 (en) * | 2002-12-10 | 2003-01-15 | Novartis Ag | Organic compound |
| GB0304367D0 (en) * | 2003-02-26 | 2003-04-02 | Pharma Mar Sau | Methods for treating psoriasis |
| EP1629090B1 (en) * | 2002-11-06 | 2014-03-05 | iBio, Inc. | Expression of foreign sequences in plants using trans-activation system |
| US7692063B2 (en) * | 2002-11-12 | 2010-04-06 | Ibio, Inc. | Production of foreign nucleic acids and polypeptides in sprout systems |
| US7683238B2 (en) | 2002-11-12 | 2010-03-23 | iBio, Inc. and Fraunhofer USA, Inc. | Production of pharmaceutically active proteins in sprouted seedlings |
| US8148608B2 (en) * | 2004-02-20 | 2012-04-03 | Fraunhofer Usa, Inc | Systems and methods for clonal expression in plants |
| US20040147428A1 (en) * | 2002-11-15 | 2004-07-29 | Pluenneke John D. | Methods of treatment using an inhibitor of epidermal growth factor receptor |
| CA2507099C (en) | 2002-11-26 | 2013-09-24 | Protein Design Labs, Inc. | Chimeric and humanized antibodies to .alpha.5.beta.1 integrin that modulate angiogenesis |
| US7276589B2 (en) | 2002-11-26 | 2007-10-02 | Pdl Biopharma, Inc. | Chimeric and humanized antibodies to α5β1 integrin that modulate angiogenesis |
| US7285268B2 (en) * | 2002-11-26 | 2007-10-23 | Pdl Biopharma, Inc. | Chimeric and humanized antibodies to α5β1 integrin that modulate angiogenesis |
| EP1578801A2 (en) * | 2002-12-27 | 2005-09-28 | Domantis Limited | Dual specific single domain antibodies specific for a ligand and for the receptor of the ligand |
| EP2192172B1 (en) | 2003-02-03 | 2014-12-03 | iBio, Inc. | System for expression of genes in plants |
| US8388955B2 (en) * | 2003-03-03 | 2013-03-05 | Xencor, Inc. | Fc variants |
| US20090010920A1 (en) * | 2003-03-03 | 2009-01-08 | Xencor, Inc. | Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb |
| EP1622941A2 (en) * | 2003-03-20 | 2006-02-08 | ImClone Systems Incorporated | Method of producing an antibody to epidermal growth factor receptor |
| US20050002930A1 (en) * | 2003-04-03 | 2005-01-06 | Johnson Dale E. | Methods of production and use of anti-integrin antibodies for the control of tissue granulation |
| CN1833030B (zh) | 2003-05-22 | 2014-07-23 | 美国弗劳恩霍夫股份有限公司 | 用于表达、传递及纯化目标多肽的重组载体分子 |
| EP1638600A4 (en) | 2003-06-09 | 2008-06-11 | Samuel Waksal | PROCESS FOR INHIBITING RECEPTOR TYROSINE KINASES WITH AN EXTRACELLULAR ANTAGONIST AND AN INTRA CELLULAR ANTAGONIST |
| GB0321066D0 (en) * | 2003-09-09 | 2003-10-08 | Pharma Mar Sau | New antitumoral compounds |
| US8101720B2 (en) | 2004-10-21 | 2012-01-24 | Xencor, Inc. | Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions |
| US9714282B2 (en) | 2003-09-26 | 2017-07-25 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants and methods for their generation |
| US8076459B2 (en) * | 2003-10-16 | 2011-12-13 | Micromet Ag | Multispecfic deimmunized CD3-binders |
| DE10355904A1 (de) * | 2003-11-29 | 2005-06-30 | Merck Patent Gmbh | Feste Formen von anti-EGFR-Antikörpern |
| JP2007537717A (ja) * | 2004-01-07 | 2007-12-27 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー | 上皮増殖因子受容体モデュレーターに対する感受性を決定するためのバイオマーカーおよび方法 |
| TW200533339A (en) * | 2004-03-16 | 2005-10-16 | Bristol Myers Squibb Co | Therapeutic synergy of anti-cancer compounds |
| AU2005224267B2 (en) * | 2004-03-19 | 2011-07-21 | Imclone Llc | Human anti-epidermal growth factor receptor antibody |
| AU2005226736B2 (en) * | 2004-03-24 | 2009-11-26 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Use of anti-alpha5beta1 antibodies to inhibit cancer cell proliferation |
| GB0410627D0 (en) | 2004-05-12 | 2004-06-16 | Scancell Ltd | Specific binding members |
| KR100863776B1 (ko) | 2004-07-15 | 2008-10-16 | 젠코어 인코포레이티드 | 최적화된 Ｆｃ 변이체 |
| KR101027427B1 (ko) | 2004-11-12 | 2011-04-11 | 젠코어 인코포레이티드 | ＦcRn에 대하여 증가된 결합력을 갖는 Ｆc 변이체 |
| US8546543B2 (en) | 2004-11-12 | 2013-10-01 | Xencor, Inc. | Fc variants that extend antibody half-life |
| US8367805B2 (en) * | 2004-11-12 | 2013-02-05 | Xencor, Inc. | Fc variants with altered binding to FcRn |
| US8802820B2 (en) | 2004-11-12 | 2014-08-12 | Xencor, Inc. | Fc variants with altered binding to FcRn |
| DK2343380T3 (da) | 2004-11-16 | 2019-09-09 | Humanigen Inc | Immunoglobulin variabel region kassetteudskiftning |
| CN102397542B (zh) * | 2004-11-18 | 2014-05-07 | 英克隆有限责任公司 | 抗血管内皮生长因子受体-1的抗体 |
| BRPI0607315B1 (pt) | 2005-02-07 | 2022-05-17 | Roche Glycart Ag | Molécula de ligação ao antígeno anti-egfr humanizada e seus usos, composição farmacêutica, e método para detectar a presença de egfr em uma amostra |
| MX2007009960A (es) | 2005-02-18 | 2008-03-11 | Abraxis Bioscience Inc | Combinaciones y metodos de administracion de agentes terapeuticos y terapia de combinacion. |
| US20070166388A1 (en) | 2005-02-18 | 2007-07-19 | Desai Neil P | Combinations and modes of administration of therapeutic agents and combination therapy |
| US8735394B2 (en) * | 2005-02-18 | 2014-05-27 | Abraxis Bioscience, Llc | Combinations and modes of administration of therapeutic agents and combination therapy |
| WO2007039818A2 (en) * | 2005-05-09 | 2007-04-12 | Glycart Biotechnology Ag | Antigen binding molecules having modified fc regions and altered binding to fc receptors |
| US20080044420A1 (en) * | 2005-05-11 | 2008-02-21 | Heavner George A | Anti-IL-13 antibodies, compositions, methods and uses |
| EP1919504B1 (en) * | 2005-08-03 | 2013-10-16 | iBio, Inc. | Antibody to bacillus anthracis protective antigen |
| US20090215992A1 (en) * | 2005-08-19 | 2009-08-27 | Chengbin Wu | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
| US7612181B2 (en) * | 2005-08-19 | 2009-11-03 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
| EP1928506A4 (en) | 2005-08-19 | 2009-10-21 | Abbott Lab | IMMUNOGLOBULIN HAVING TWO VARIABLE DOMAINS AND USES THEREOF |
| EP2500359A3 (en) | 2005-08-19 | 2012-10-17 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
| WO2007025044A2 (en) * | 2005-08-24 | 2007-03-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Biomarkers and methods for determining sensitivity to epidermal growth factor receptor modulators |
| WO2007041635A2 (en) | 2005-10-03 | 2007-04-12 | Xencor, Inc. | Fc variants with optimized fc receptor binding properties |
| EP2251688A1 (en) | 2005-10-11 | 2010-11-17 | Merck Patent GmbH | EGFR dependent modulation of chemokine expression and influence on therapy and diagnosis of tumors and side effects thereof |
| JP2009515552A (ja) * | 2005-11-17 | 2009-04-16 | ミレニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | α４β７インテグリン反応性ヒト化免疫グロブリン |
| KR20080077238A (ko) * | 2005-12-01 | 2008-08-21 | 도만티스 리미티드 | 인터루킨 1 수용체 타입 1에 결합하는 비경쟁적 도메인항체 포맷 |
| KR20080110987A (ko) * | 2006-01-04 | 2008-12-22 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 항-ｅｇｆｒ 및 항-ｈｅｒ２ 항체를 이용하는 조합 요법 |
| BRPI0707733B1 (pt) | 2006-02-13 | 2019-12-31 | Fraunhofer Usa Inc | antígeno isolado, composição de vacina, uso da referida composição e método para produção de uma proteína de antígeno |
| CN101395174B (zh) * | 2006-02-13 | 2014-03-19 | 艾比欧公司 | 人类乳头瘤病毒（hpv）抗原、疫苗组合物和相关方法 |
| WO2008048344A2 (en) * | 2006-02-13 | 2008-04-24 | Fraunhofer Usa, Inc. | Bacillus anthracis antigens, vaccine compositions, and related methods |
| CA2647671A1 (en) * | 2006-03-31 | 2007-11-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Treatment of tumors expressing mutant egf receptors |
| AR062223A1 (es) | 2006-08-09 | 2008-10-22 | Glycart Biotechnology Ag | Moleculas de adhesion al antigeno que se adhieren a egfr, vectores que los codifican, y sus usos de estas |
| EP3470071A1 (en) | 2006-12-14 | 2019-04-17 | Abraxis BioScience, LLC | Breast cancer therapy based on hormone receptor status with nanoparticles comprising taxane |
| WO2008077171A1 (en) * | 2006-12-22 | 2008-07-03 | Novelix Therapeutics Gmbh | Treatment of diabetes by at least one epidermal growth factor receptor specific antibody or a derivative thereof |
| PL3345607T3 (pl) | 2006-12-29 | 2023-01-09 | Ossifi-Mab Llc | Sposoby modyfikowania wzrostu kości poprzez podanie antagonisty lub agonisty sost lub wise |
| MX338185B (es) | 2007-01-25 | 2016-04-05 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Uso de anticuerpos anti-egfr en el tratamiento de enfermedad mediada por egfr mutante. |
| CA2676049C (en) | 2007-03-01 | 2018-04-10 | Symphogen A/S | Recombinant anti-epidermal growth factor receptor antibody compositions |
| CA2680854C (en) | 2007-03-15 | 2017-02-14 | Ludwig Institute For Cancer Research | Treatment method using egfr antibodies and src inhibitors and related formulations |
| WO2008134643A2 (en) * | 2007-04-28 | 2008-11-06 | Fraunhofer Usa, Inc. | Trypanosoma antigens, vaccine compositions, and related methods |
| EA200901301A1 (ru) | 2007-06-06 | 2010-06-30 | Домантис Лимитед | Полипептиды, вариабельные домены антител и антагонисты |
| CN103435696B (zh) | 2007-06-25 | 2016-10-12 | 艾斯巴技术-诺华有限责任公司 | 修饰抗体的方法和具有改善的功能性质的修饰抗体 |
| CA2692933C (en) | 2007-07-11 | 2016-10-18 | Fraunhofer Usa, Inc. | Yersinia pestis antigens, vaccine compositions, and related methods |
| EA019485B1 (ru) * | 2007-07-17 | 2014-04-30 | Мерк Патент Гмбх | Сконструированные гибридные антитела против альфа v интегрина |
| CA2694644A1 (en) * | 2007-07-27 | 2009-02-05 | Vanitha Ramakrishnan | Pharmaceutical combinations |
| CN108424454B (zh) | 2007-08-14 | 2022-05-31 | 路德维格癌症研究所有限公司 | 靶向egf受体的单克隆抗体175及其衍生物和用途 |
| CA2696764A1 (en) * | 2007-08-20 | 2009-02-26 | Fraunhofer Usa, Inc. | Prophylactic and therapeutic influenza vaccines, antigens, compositions, and methods |
| CN101868246A (zh) | 2007-09-21 | 2010-10-20 | 加利福尼亚大学董事会 | 被导靶的干扰素显示强的细胞凋亡和抗肿瘤活性 |
| CN101861159A (zh) * | 2007-10-19 | 2010-10-13 | 马尔药品公司 | 改进的抗肿瘤治疗 |
| EP4098661A1 (en) | 2007-12-26 | 2022-12-07 | Xencor, Inc. | Fc variants with altered binding to fcrn |
| WO2009095480A1 (en) * | 2008-01-30 | 2009-08-06 | Pharma Mar, S.A. | Improved antitumoral treatments |
| AU2009221120A1 (en) * | 2008-03-07 | 2009-09-11 | Pharma Mar, S.A. | Improved antitumoral treatments |
| BRPI0910482A2 (pt) | 2008-04-29 | 2019-09-24 | Abbott Lab | imunoglobinas de domínio variável duplo e usos das mesmas |
| PE20100092A1 (es) | 2008-06-03 | 2010-03-12 | Abbott Lab | Inmunoglobulina con dominio variable dual y usos de la misma |
| TW201006485A (en) | 2008-06-03 | 2010-02-16 | Abbott Lab | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
| KR20110031369A (ko) | 2008-07-08 | 2011-03-25 | 아보트 러보러터리즈 | 프로스타글란딘 ｅ2 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도 |
| ES2638579T3 (es) | 2008-08-29 | 2017-10-23 | Symphogen A/S | Composiciones de anticuerpos recombinantes contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico |
| US8734803B2 (en) | 2008-09-28 | 2014-05-27 | Ibio Inc. | Humanized neuraminidase antibody and methods of use thereof |
| SG195558A1 (en) | 2008-10-14 | 2013-12-30 | Genentech Inc | Immunoglobulin variants and uses thereof |
| EP2373692A4 (en) * | 2008-12-04 | 2013-11-20 | Abbvie Inc | IMMUNOGLOBULINE WITH DOUBLE VARIABLE DOMAIN AND ITS USE |
| PE20121094A1 (es) | 2009-03-05 | 2012-09-13 | Abbvie Inc | Proteinas de union a il-17 |
| JP2012518680A (ja) | 2009-03-31 | 2012-08-16 | ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト | ヒト化抗ＥＧＦＲＩｇＧ１抗体及びイリノテカンによる癌の処置 |
| AR075982A1 (es) | 2009-03-31 | 2011-05-11 | Roche Glycart Ag | Terapia de combinacion de un anticuerpo afucosilado y una o mas de las citoquinas seleccionadas de gm- csf humano, m -csf humano y/o il-3 humano y composicion |
| JP5612663B2 (ja) | 2009-04-07 | 2014-10-22 | ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト | 二重特異性抗ＥｒｂＢ−１／抗ｃ−Ｍｅｔ抗体 |
| US9309325B2 (en) | 2009-05-07 | 2016-04-12 | The Regents Of The University Of California | Antibodies and methods of use thereof |
| WO2011015918A2 (en) * | 2009-08-03 | 2011-02-10 | Avesthagen Limited | Vectors and compounds for expression of recombinant cetuximab |
| US8586714B2 (en) | 2009-09-01 | 2013-11-19 | Abbvie, Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
| WO2011028952A1 (en) | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Xencor, Inc. | Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens |
| AR078161A1 (es) | 2009-09-11 | 2011-10-19 | Hoffmann La Roche | Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento. |
| EP2483307A1 (en) | 2009-09-29 | 2012-08-08 | Fraunhofer USA, Inc. | Influenza hemagglutinin antibodies, compositions, and related methods |
| UY32948A (es) | 2009-10-15 | 2011-02-28 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
| UY32979A (es) * | 2009-10-28 | 2011-02-28 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
| WO2011053779A2 (en) | 2009-10-30 | 2011-05-05 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for treating cancer in patients having igf-1r inhibitor resistance |
| US20110189178A1 (en) * | 2010-02-04 | 2011-08-04 | Xencor, Inc. | Immunoprotection of Therapeutic Moieties Using Enhanced Fc Regions |
| WO2011097527A2 (en) | 2010-02-04 | 2011-08-11 | Xencor, Inc. | Immunoprotection of therapeutic moieties using enhanced fc regions |
| WO2011097633A2 (en) * | 2010-02-08 | 2011-08-11 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Egf receptor mimicking peptides |
| US20110200595A1 (en) | 2010-02-18 | 2011-08-18 | Roche Glycart | TREATMENT WITH A HUMANIZED IgG CLASS ANTI EGFR ANTIBODY AND AN ANTIBODY AGAINST INSULIN LIKE GROWTH FACTOR 1 RECEPTOR |
| EP2542692B1 (en) | 2010-03-04 | 2016-08-24 | Carpén, Olli | Method for selecting patients for treatment with an egfr inhibitor |
| CN103118665B (zh) | 2010-03-29 | 2016-01-13 | 阿布拉科斯生物科学有限公司 | 治疗癌症的方法 |
| EP3208281A1 (en) | 2010-03-29 | 2017-08-23 | Zymeworks, Inc. | Antibodies with enhanced or suppressed effector function |
| BR112012024590A2 (pt) | 2010-03-29 | 2016-05-31 | Abraxis Bioscience Inc | métodos de reforço da liberação de fármaco e da eficácia de agentes terapêuticos |
| NZ604360A (en) | 2010-05-14 | 2014-09-26 | Abbvie Inc | Il-1 binding proteins |
| US8071093B1 (en) * | 2010-05-17 | 2011-12-06 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Fully human anti-epidermal growth factor receptor antibodies |
| CA2801645A1 (en) | 2010-06-04 | 2011-12-08 | Abraxis Bioscience, Llc | Use of nanoparticules comprising a taxane and an albumin in the treatment of pancreatic cancer |
| WO2011156617A2 (en) | 2010-06-09 | 2011-12-15 | Aveo Pharmaceuticals, Inc. | Anti-egfr antibodies |
| US20120009196A1 (en) | 2010-07-08 | 2012-01-12 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein |
| UY33492A (es) | 2010-07-09 | 2012-01-31 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
| DK3029066T3 (da) | 2010-07-29 | 2019-05-20 | Xencor Inc | Antistoffer med modificerede isoelektriske punkter |
| EP3252072A3 (en) | 2010-08-03 | 2018-03-14 | AbbVie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
| WO2012024659A2 (en) | 2010-08-20 | 2012-02-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Antibody-based constructs directed against tyrosine kinase receptors |
| CA2809433A1 (en) | 2010-08-26 | 2012-03-01 | Abbvie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
| CN105399831A (zh) | 2010-10-29 | 2016-03-16 | 伊缪诺金公司 | 非拮抗性egfr结合分子及其免疫偶联物 |
| EA201390472A1 (ru) | 2010-10-29 | 2014-02-28 | Иммьюноджен, Инк. | Новые молекулы, связывающиеся с egfr, и их иммуноконъюгаты |
| MX2013007332A (es) | 2010-12-21 | 2014-01-23 | Abbvie Inc | Inmunoglobulinas de dominio variable doble biespecificas de il-1 alfa y beta y su uso. |
| MX352025B (es) | 2011-02-11 | 2017-11-07 | Merck Patent Gmbh | Anticuerpo anti-integrina alfa v para el tratamiento de cancer de prostata. |
| SG10201702384PA (en) | 2011-04-21 | 2017-05-30 | Seattle Genetics Inc | Novel binder-drug conjugates (adcs) and their use |
| GB201106870D0 (en) | 2011-04-26 | 2011-06-01 | Univ Belfast | Marker |
| EP3311834A1 (en) | 2011-05-02 | 2018-04-25 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Formulation for anti-alpha4beta7 antibody |
| UA116189C2 (uk) | 2011-05-02 | 2018-02-26 | Мілленніум Фармасьютікалз, Інк. | КОМПОЗИЦІЯ АНТИ-α4β7 АНТИТІЛА |
| EP2714738B1 (en) | 2011-05-24 | 2018-10-10 | Zyngenia, Inc. | Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses |
| EP2537933A1 (en) | 2011-06-24 | 2012-12-26 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) | An IL-15 and IL-15Ralpha sushi domain based immunocytokines |
| WO2019071023A1 (en) | 2017-10-04 | 2019-04-11 | Yale University | COMPOSITIONS AND METHODS FOR MAKING POLYPEPTIDES CONTAINING SELENOCYSTEINE |
| US9464288B2 (en) | 2011-07-11 | 2016-10-11 | Yale University | Compositions and methods for making selenocysteine containing polypeptides |
| EP2732269B1 (en) | 2011-07-12 | 2017-10-18 | Epitomics, Inc. | Facs-based method for obtaining an antibody sequence |
| WO2013022855A1 (en) | 2011-08-05 | 2013-02-14 | Xencor, Inc. | Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering |
| AU2012323287B2 (en) | 2011-10-10 | 2018-02-01 | Xencor, Inc. | A method for purifying antibodies |
| CA3101452C (en) | 2011-10-10 | 2024-04-23 | City Of Hope | Meditopes and meditope-binding antibodies and uses thereof |
| US10851178B2 (en) | 2011-10-10 | 2020-12-01 | Xencor, Inc. | Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications |
| EP2766497A1 (en) | 2011-10-13 | 2014-08-20 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for selecting and treating cancer in patients with igf-1r/ir inhibitors |
| US8999331B2 (en) | 2011-10-24 | 2015-04-07 | Abbvie Inc. | Immunobinders directed against sclerostin |
| JP6184965B2 (ja) | 2011-10-28 | 2017-08-23 | テバ・ファーマシューティカルズ・オーストラリア・ピーティワイ・リミテッド | ポリペプチド構築物およびその使用 |
| MX2014006087A (es) | 2011-11-21 | 2014-08-01 | Immunogen Inc | Metodo de tratamiento de tumores que son resistentes a terapias contra el receptor del factor de crecimiento epidermico (egfr) con agentes citotoxicos conjugados con anticuerpos dirigidos contra el receptor del factor de crecimiento epidermico. |
| EP2797955A2 (en) | 2011-12-30 | 2014-11-05 | AbbVie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins against il-13 and/or il-17 |
| HRP20190475T1 (hr) | 2012-06-08 | 2019-05-31 | Sutro Biopharma, Inc. | Antitijela koja sadrže ne-prirodne aminokiselinske ostatke specifične za mjesto, metode njihovog pripremanja i metode njihove primjene |
| UY34905A (es) | 2012-07-12 | 2014-01-31 | Abbvie Inc | Proteínas de unión a il-1 |
| HUE045227T2 (hu) | 2012-08-31 | 2019-12-30 | Sutro Biopharma Inc | Azido csoportot tartalmazó módosított aminosavak |
| CN105431453A (zh) | 2012-11-01 | 2016-03-23 | 艾伯维公司 | 稳定的双重可变结构域免疫球蛋白制剂 |
| EP2914625A2 (en) | 2012-11-01 | 2015-09-09 | AbbVie Inc. | Anti-vegf/dll4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
| CA2890190A1 (en) | 2012-11-12 | 2014-05-15 | Redwood Bioscience, Inc. | Compounds and methods for producing a conjugate |
| US9605078B2 (en) | 2012-11-16 | 2017-03-28 | The Regents Of The University Of California | Pictet-Spengler ligation for protein chemical modification |
| US9310374B2 (en) | 2012-11-16 | 2016-04-12 | Redwood Bioscience, Inc. | Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate |
| SMT201800624T1 (it) | 2012-11-21 | 2019-01-11 | Janssen Biotech Inc | Anticorpi egfr/c-met bispecifici |
| US20170275367A1 (en) | 2012-11-21 | 2017-09-28 | Janssen Biotech, Inc. | Bispecific EGFR/C-Met Antibodies |
| BR112015013849A2 (pt) | 2012-12-21 | 2017-07-11 | Sykehuset Soerlandet Hf | terapia direcionada a egfr de distúrbios neurológicos e dor |
| US9605084B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-03-28 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
| US10968276B2 (en) | 2013-03-12 | 2021-04-06 | Xencor, Inc. | Optimized anti-CD3 variable regions |
| KR102391731B1 (ko) | 2013-01-14 | 2022-04-27 | 젠코어 인코포레이티드 | 신규한 이형이량체 단백질 |
| US9701759B2 (en) | 2013-01-14 | 2017-07-11 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
| US10131710B2 (en) | 2013-01-14 | 2018-11-20 | Xencor, Inc. | Optimized antibody variable regions |
| US10487155B2 (en) | 2013-01-14 | 2019-11-26 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
| US11053316B2 (en) | 2013-01-14 | 2021-07-06 | Xencor, Inc. | Optimized antibody variable regions |
| WO2014113510A1 (en) | 2013-01-15 | 2014-07-24 | Xencor, Inc. | Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies |
| US9725520B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-08-08 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | HER3 specific monoclonal antibodies for diagnostic and therapeutic use |
| US9302005B2 (en) | 2013-03-14 | 2016-04-05 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods and materials for treating cancer |
| BR112015022119A2 (pt) | 2013-03-15 | 2017-08-29 | Abbvie Biotherapeutics Inc | Polipeptídeo, composto conjugado, composição farmacêutica, ácido nucleico, vetor, células hospedeiras procariótica e eucariótica, método de produção de um polipeptídeo, e, método de tratamento |
| US10106624B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-10-23 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
| US10858417B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-12-08 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
| WO2014144280A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Abbvie Inc. | DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17 |
| DK2970486T3 (en) | 2013-03-15 | 2018-08-06 | Xencor Inc | MODULATION OF T-CELLS WITH BISPECIFIC ANTIBODIES AND FC-FUSIONS |
| US10519242B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-12-31 | Xencor, Inc. | Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins |
| CN105451767B (zh) | 2013-03-15 | 2019-10-18 | 泽恩格尼亚股份有限公司 | 多价和单价多特异性复合物及其用途 |
| HK1220918A1 (zh) | 2013-04-19 | 2017-05-19 | 赛腾制药 | 降低的血管渗漏综合征的细胞因子衍生治疗 |
| US11117975B2 (en) | 2013-04-29 | 2021-09-14 | Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd | Anti-CD38 antibodies and fusions to attenuated interferon alpha-2B |
| JP6286532B2 (ja) | 2013-04-29 | 2018-02-28 | テバ・ファーマシューティカルズ・オーストラリア・ピーティワイ・リミテッド | 抗ｃｄ３８抗体及び弱毒化インターフェロンアルファ−２ｂとの融合物 |
| EP3336103B1 (en) | 2013-07-10 | 2021-03-17 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use |
| WO2015035044A2 (en) | 2013-09-04 | 2015-03-12 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Fc VARIANTS WITH IMPROVED ANTIBODY-DEPENDENT CELL-MEDIATED CYTOTOXICITY |
| HK1226081A1 (zh) | 2013-09-12 | 2017-09-22 | Halozyme, Inc. | 修飾的抗表皮生長因子受體抗體及其使用方法 |
| WO2015050663A1 (en) | 2013-10-01 | 2015-04-09 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods for treating cancer in patients with elevated levels of bim |
| US9840493B2 (en) | 2013-10-11 | 2017-12-12 | Sutro Biopharma, Inc. | Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use |
| US10669328B2 (en) | 2013-11-12 | 2020-06-02 | Ogd2 Pharma | Human IgG1 derived antibody with pro-apoptotic activity |
| CA2930307A1 (en) | 2013-11-13 | 2015-05-21 | Zymeworks Inc. | Monovalent antigen binding constructs targeting egfr and/or her2 and uses thereof |
| EP3074010B1 (en) | 2013-11-27 | 2025-05-14 | Redwood Bioscience, Inc. | Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate |
| ES2815098T3 (es) | 2013-12-23 | 2021-03-29 | Bayer Pharma AG | Conjugados de ligadores (ADCs) con inhibidores de KSP |
| EP2915569A1 (en) | 2014-03-03 | 2015-09-09 | Cytune Pharma | IL-15/IL-15Ralpha based conjugates purification method |
| IL248007B (en) | 2014-03-28 | 2022-07-01 | Xencor Inc | Bispecific antibodies that bind to cd38 and cd3 |
| UA119352C2 (uk) | 2014-05-01 | 2019-06-10 | Тева Фармасьютикалз Острейліа Пті Лтд | Комбінація леналідоміду або помалідоміду і конструкції анти-cd38 антитіло-атенуйований інтерферон альфа-2b та спосіб лікування суб'єкта, який має cd38-експресуючу пухлину |
| US10302653B2 (en) | 2014-05-22 | 2019-05-28 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Distinguishing antagonistic and agonistic anti B7-H1 antibodies |
| JP6668260B2 (ja) | 2014-06-06 | 2020-03-18 | レッドウッド バイオサイエンス， インコーポレイテッド | 抗ｈｅｒ２抗体−メイタンシンコンジュゲート及びその方法 |
| AU2015273353B2 (en) | 2014-06-13 | 2020-09-10 | Tenboron Oy | Conjugates comprising an anti-EGFR1 antibody |
| EP3171896A4 (en) | 2014-07-23 | 2018-03-21 | Mayo Foundation for Medical Education and Research | Targeting dna-pkcs and b7-h1 to treat cancer |
| CN107073111A (zh) | 2014-09-17 | 2017-08-18 | 默克专利股份公司 | 治疗实体癌和/或其转移的方法、其药物以及预测治疗实体癌和/或其转移的临床结果的方法 |
| KR20170055540A (ko) | 2014-09-17 | 2017-05-19 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 뼈 전이 질환 치료 방법, 그에 따른 약제, 및 뼈 전이 질환 치료의 임상 결과 예측 방법 |
| EP3200823B1 (en) | 2014-10-02 | 2022-11-23 | City of Hope | Multivalent meditopes, meditope-binding antibodies and uses thereof |
| EP3209769B1 (en) | 2014-10-24 | 2020-08-05 | The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University | Compositions and methods for inducing phagocytosis of mhc class i positive cells and countering anti-cd47/sirpa resistance |
| JP6730271B2 (ja) | 2014-10-29 | 2020-07-29 | テバ・ファーマシューティカルズ・オーストラリア・ピーティワイ・リミテッド | インターフェロンα２Ｂバリアント |
| US9982057B2 (en) | 2014-11-17 | 2018-05-29 | Pelican Therapeutics, Inc. | Human TNFRSF25 antibody |
| LT3223845T (lt) | 2014-11-26 | 2021-08-25 | Xencor, Inc. | Heterodimeriniai antikūnai, kurie suriša cd3 ir cd20 |
| US10259887B2 (en) | 2014-11-26 | 2019-04-16 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens |
| AU2015353416C1 (en) | 2014-11-26 | 2022-01-27 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind CD3 and CD38 |
| US10093733B2 (en) | 2014-12-11 | 2018-10-09 | Abbvie Inc. | LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins |
| WO2016105450A2 (en) | 2014-12-22 | 2016-06-30 | Xencor, Inc. | Trispecific antibodies |
| US10227411B2 (en) | 2015-03-05 | 2019-03-12 | Xencor, Inc. | Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions |
| TW201710286A (zh) | 2015-06-15 | 2017-03-16 | 艾伯維有限公司 | 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白 |
| CA2990076A1 (en) | 2015-06-22 | 2016-12-29 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Antibody drug conjugates (adcs) and antibody prodrug conjugates (apdcs) with enzymatically cleavable groups |
| WO2017060322A2 (en) | 2015-10-10 | 2017-04-13 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Ptefb-inhibitor-adc |
| WO2017075045A2 (en) | 2015-10-30 | 2017-05-04 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Antibodies to b7-h1 |
| WO2017079419A1 (en) | 2015-11-05 | 2017-05-11 | The Regents Of The University Of California | Cells labelled with lipid conjugates and methods of use thereof |
| EP3373937B1 (en) | 2015-11-09 | 2021-12-22 | R.P. Scherer Technologies, LLC | Anti-cd22 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof |
| US20190144547A1 (en) | 2015-11-23 | 2019-05-16 | Merck Patent Gmbh | Anti-alpha-v integrin antibody for the treatment of fibrosis and/or fibrotic disorders |
| CN108699136B (zh) | 2015-12-07 | 2022-03-18 | Xencor股份有限公司 | 结合cd3和psma的异二聚抗体 |
| EP3430039A1 (en) | 2016-03-14 | 2019-01-23 | Universitetet I Oslo | Engineered immunoglobulins with altered fcrn binding |
| WO2017161206A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | Halozyme, Inc. | Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use |
| WO2017162663A1 (de) | 2016-03-24 | 2017-09-28 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Prodrugs von cytotoxischen wirkstoffen mit enzymatisch spaltbaren gruppen |
| SG11201810853UA (en) | 2016-06-09 | 2019-01-30 | Pelican Therapeutics Inc | Anti-tnfrsf25 antibodies |
| WO2017218707A2 (en) | 2016-06-14 | 2017-12-21 | Xencor, Inc. | Bispecific checkpoint inhibitor antibodies |
| US11098107B2 (en) | 2016-06-15 | 2021-08-24 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies with engineered CH2 domains, compositions thereof and methods of using the same |
| CN109310781B (zh) | 2016-06-15 | 2024-06-18 | 拜耳制药股份公司 | 具有ksp抑制剂和抗-cd123-抗体的特异性抗体-药物-缀合物(adc) |
| JP7021127B2 (ja) | 2016-06-28 | 2022-02-16 | ゼンコア インコーポレイテッド | ソマトスタチン受容体２に結合するヘテロ二量体抗体 |
| CN117717604A (zh) | 2016-07-19 | 2024-03-19 | 梯瓦制药澳大利亚股份有限公司 | 抗cd47联合治疗 |
| US10793632B2 (en) | 2016-08-30 | 2020-10-06 | Xencor, Inc. | Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors |
| PE20240950A1 (es) | 2016-10-14 | 2024-05-06 | Xencor Inc | PROTEINAS DE FUSION FC HETERODIMERICAS IL 15/IL 15R(alfa) |
| WO2018078143A1 (en) | 2016-10-28 | 2018-05-03 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Means and methods for determining efficacy of anti-egfr inhibitors in colorectal cancer (crc) therapy |
| CA3047522A1 (en) | 2016-12-21 | 2018-06-28 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Specific antibody drug conjugates (adcs) having ksp inhibitors |
| US12059472B2 (en) | 2016-12-21 | 2024-08-13 | Bayer Aktiengesellschaft | Prodrugs of cytotoxic active agents having enzymatically cleavable groups |
| IL310558A (en) | 2016-12-21 | 2024-03-01 | Bayer Pharma AG | Drug-antibody conjugates with enzymatically cleavable groups |
| WO2018174274A1 (ja) | 2017-03-24 | 2018-09-27 | 全薬工業株式会社 | 抗ＩｇＭ／Ｂ細胞表面抗原二重特異性抗体 |
| US11084863B2 (en) | 2017-06-30 | 2021-08-10 | Xencor, Inc. | Targeted heterodimeric Fc fusion proteins containing IL-15 IL-15alpha and antigen binding domains |
| US20200290978A1 (en) | 2017-09-26 | 2020-09-17 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for treating cancer |
| CN112272563A (zh) | 2017-11-08 | 2021-01-26 | Xencor股份有限公司 | 使用新颖抗pd-1序列的双特异性和单特异性抗体 |
| US10981992B2 (en) | 2017-11-08 | 2021-04-20 | Xencor, Inc. | Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors |
| CN111655718B (zh) | 2017-12-19 | 2025-07-22 | Xencor股份有限公司 | 经过工程化的il-2 fc融合蛋白 |
| US10982006B2 (en) | 2018-04-04 | 2021-04-20 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein |
| EP3781599A1 (en) | 2018-04-18 | 2021-02-24 | Xencor, Inc. | Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof |
| WO2019204655A1 (en) | 2018-04-18 | 2019-10-24 | Xencor, Inc. | Tim-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and tim-3 antigen binding domains |
| WO2020028909A1 (en) | 2018-08-03 | 2020-02-06 | Brown University | Oral formulations with increased uptake |
| SG11202103192RA (en) | 2018-10-03 | 2021-04-29 | Xencor Inc | Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins |
| EP3863672A4 (en) | 2018-10-11 | 2022-06-29 | The Scripps Research Institute | Antibody compounds with reactive arginine and related antibody drug conjugates |
| AU2019362602A1 (en) | 2018-10-19 | 2021-06-03 | Merck Patent Gmbh | Abituzumab for the treatment of colorectal cancer |
| WO2020092839A1 (en) | 2018-10-31 | 2020-05-07 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods and materials for treating cancer |
| EP3873540A4 (en) | 2018-10-31 | 2022-07-27 | Mayo Foundation for Medical Education and Research | Methods and materials for treating cancer |
| WO2020154475A1 (en) | 2019-01-23 | 2020-07-30 | Molecular Templates, Inc. | Proteins comprising modified immunoglobulin variable light chains |
| WO2020180726A1 (en) | 2019-03-01 | 2020-09-10 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind enpp3 and cd3 |
| WO2020252043A1 (en) | 2019-06-10 | 2020-12-17 | Sutro Biopharma, Inc. | 5H-PYRROLO[3,2-d]PYRIMIDINE-2,4-DIAMINO COMPOUNDS AND ANTIBODY CONJUGATES THEREOF |
| JP2022536800A (ja) | 2019-06-17 | 2022-08-18 | ストロ バイオファーマ インコーポレーテッド | Ｔｏｌｌ様受容体（ｔｌｒ）７／８アゴニストとしての１－（４－（アミノメチル）ベンジル）－２－ブチル－２ｈ－ピラゾロ［３，４－ｃ］キノリン－４－アミン誘導体および関連化合物、ならびにがん療法および診断に使用するためのその抗体薬物コンジュゲート |
| WO2021041300A2 (en) * | 2019-08-23 | 2021-03-04 | Ab Therapeutics, Inc. | Bispecific antibodies and uses thereof |
| WO2021178597A1 (en) | 2020-03-03 | 2021-09-10 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use |
| WO2021218862A1 (en) | 2020-04-26 | 2021-11-04 | Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd | Modified immunoglobulins |
| US11919956B2 (en) | 2020-05-14 | 2024-03-05 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3 |
| KR20220001106A (ko) * | 2020-06-29 | 2022-01-05 | (주)메디톡스 | 고농도 항-ｖｅｇｆ 항체 제제 및 이에 사용하기 위한 항-ｖｅｇｆ 항체 |
| WO2022103983A2 (en) | 2020-11-11 | 2022-05-19 | Sutro Biopharma, Inc. | Fluorenylmethyloxycarbonyl and fluorenylmethylaminocarbonyl compounds, protein conjugates thereof, and methods for their use |
| KR20230122008A (ko) | 2020-11-20 | 2023-08-22 | 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨 | 항체-약물 접합체를 위한 글리코시드 이중-절단 링커 |
| IL305736A (en) | 2021-03-09 | 2023-11-01 | Xencor Inc | Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6 |
| EP4305065A1 (en) | 2021-03-10 | 2024-01-17 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind cd3 and gpc3 |
| MX2023014863A (es) | 2021-06-14 | 2024-01-16 | Ct Inmunologia Molecular | Uso de anticuerpos monoclonales contra el receptor del factor de crecimiento epidermico en el tratamiento de pacientes con insuficiencia respiratoria aguda hipoxemica. |
| WO2023010060A2 (en) | 2021-07-27 | 2023-02-02 | Novab, Inc. | Engineered vlrb antibodies with immune effector functions |
| WO2023164487A1 (en) | 2022-02-22 | 2023-08-31 | Brown University | Compositions and methods to achieve systemic uptake of particles following oral or mucosal administration |
| WO2024006272A1 (en) | 2022-06-27 | 2024-01-04 | Sutro Biopharma, Inc. | β-GLUCURONIDE LINKER-PAYLOADS, PROTEIN CONJUGATES THEREOF, AND METHODS THEREOF |
| WO2024015229A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Sutro Biopharma, Inc. | Protease/enzyme cleavable linker-payloads and protein conjugates |
| WO2024126660A1 (en) | 2022-12-15 | 2024-06-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy for cancer treatment |
| US20250108048A1 (en) | 2023-07-31 | 2025-04-03 | Sutro Biopharma, Inc. | Sting agonist compounds and conjugates |
| WO2025080711A1 (en) | 2023-10-13 | 2025-04-17 | Sutro Biopharma, Inc. | Dual payload antibody drug conjugates |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8607679D0 (en) * | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
| ATE95068T1 (de) * | 1988-02-12 | 1993-10-15 | British Tech Group | Modifizierte antikoerper. |
| IL162181A (en) * | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
-
1992
- 1992-03-04 CZ CS923327A patent/CZ282603B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-03-04 US US07/946,421 patent/US5558864A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 DE DE69233153T patent/DE69233153T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 EP EP03018303A patent/EP1362868A3/en not_active Ceased
- 1992-03-04 CZ CZ963337A patent/CZ283717B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-03-04 SK SK360-99A patent/SK281143B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-03-04 AT AT92905860T patent/ATE247168T1/de active
- 1992-03-04 CA CA002082160A patent/CA2082160C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 HU HU9203484A patent/HU219537B/hu unknown
- 1992-03-04 JP JP50595192A patent/JP3854306B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 SK SK3327-92A patent/SK281142B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-03-04 EP EP92905860A patent/EP0531472B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 ES ES92905860T patent/ES2204890T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 WO PCT/EP1992/000480 patent/WO1992015683A1/en active IP Right Grant
- 1992-03-04 AU AU13403/92A patent/AU658396B2/en not_active Expired
- 1992-03-04 KR KR1019920702755A patent/KR100240308B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 DK DK92905860T patent/DK0531472T3/da active
- 1992-03-05 ZA ZA921661A patent/ZA921661B/xx unknown
- 1992-03-05 IE IE070592A patent/IE920705A1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-03-05 PT PT100195A patent/PT100195B/pt not_active IP Right Cessation
- 1992-03-06 MX MX9201016A patent/MX9201016A/es unknown
- 1992-03-09 TW TW081101780A patent/TW222279B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR100240308B1 (ko) | 2000-01-15 |
| DK0531472T3 (da) | 2003-12-01 |
| DE69233153D1 (de) | 2003-09-18 |
| IE920705A1 (en) | 1992-09-09 |
| SK332792A3 (en) | 1996-07-03 |
| ATE247168T1 (de) | 2003-08-15 |
| AU1340392A (en) | 1992-10-06 |
| DE69233153T2 (de) | 2004-05-27 |
| JP3854306B2 (ja) | 2006-12-06 |
| SK281143B6 (sk) | 2000-12-11 |
| EP1362868A2 (en) | 2003-11-19 |
| AU658396B2 (en) | 1995-04-13 |
| CA2082160C (en) | 2003-05-06 |
| US5558864A (en) | 1996-09-24 |
| EP0531472B1 (en) | 2003-08-13 |
| SK281142B6 (sk) | 2000-12-11 |
| CZ332792A3 (en) | 1994-02-16 |
| HU9203484D0 (en) | 1993-01-28 |
| HUT65687A (en) | 1994-07-28 |
| PT100195B (pt) | 1999-09-30 |
| ZA921661B (en) | 1992-11-25 |
| PT100195A (pt) | 1993-05-31 |
| JPH05506157A (ja) | 1993-09-16 |
| EP0531472A1 (en) | 1993-03-17 |
| TW222279B (cs) | 1994-04-11 |
| ES2204890T3 (es) | 2004-05-01 |
| CA2082160A1 (en) | 1992-09-07 |
| CZ333796A3 (cs) | 1998-06-17 |
| WO1992015683A1 (en) | 1992-09-17 |
| HU219537B (hu) | 2001-05-28 |
| CZ283717B6 (cs) | 1998-06-17 |
| EP1362868A3 (en) | 2004-02-11 |
| MX9201016A (es) | 1993-08-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ282603B6 (cs) | Humanizované a chimerické monoklonální protilátky | |
| IE83807B1 (en) | Humanized monoclonal antibodies | |
| CA2163151C (en) | Humanized and chimeric monoclonal antibodies that recognized epidermal growth factor receptor (egf-r). use diagnostic and therapeutic | |
| US6410690B1 (en) | Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies | |
| ES2262186T5 (es) | Inmunoglobulina humanizada reactiva con integrina alpha4beta7 | |
| TWI323265B (en) | Antibodies | |
| JP3855071B2 (ja) | 抗ｈｉｖモノクローナル抗体 | |
| EP0953639A1 (en) | FAPalpha-specific antibody with improved producibility | |
| AU6934194A (en) | Antibodies | |
| JPH09512705A (ja) | Ｅ−セレクチンに対する抗体 | |
| CA3067597C (en) | Chimeric antibodies for treatment of amyloid deposition diseases | |
| KR102141694B1 (ko) | 비멘틴 유래 펩타이드에 특이적으로 결합하는 물질을 포함하는 피부질환 예방 및 치료용 조성물 | |
| EP3808847A1 (en) | Apj antibody, fusion protein thereof with elabela, and pharmaceutical compositions and use thereof | |
| JPH06125783A (ja) | 組換え抗ｈｉｖ抗体およびその調製方法 | |
| HK40079597A (en) | Antibodies binding il4r and uses thereof | |
| GB2528811A (en) | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same | |
| MXPA99001462A (es) | Inmunoglobulina humanizada reactiva con (alfa4beta7) integrina |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20120304 |