CN117736209A - Pi3k抑制剂的盐及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本申请提供用于制备(R)‑4‑(3‑((S)‑1‑(4‑氨基‑3‑甲基‑1H‑吡唑并[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)乙基)‑5‑氯‑2‑乙氧基‑6‑氟苯基)吡咯烷‑2‑酮的方法，所述化合物适用作磷酸肌醇3‑激酶‑δ(PI3Kδ)的抑制剂；以及与其相关的盐形式和中间体。

Description

PI3K抑制剂的盐及其制备方法

本申请是申请号为201680011760.X的中国专利申请(申请日：2016年2月26日，发明名称：PI3K抑制剂的盐及其制备方法)的分案申请。

本申请要求2015年2月27日提交的美国序列号62/121,697的权益，其以引用的方式整体并入本文。

技术领域

本申请提供用于制备(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮的方法，所述化合物适用作磷酸肌醇3-激酶-δ(PI3Kδ)的抑制剂；以及与其相关的盐形式和中间体。

背景

磷酸肌醇3-激酶(PI3K)属于脂质信号传导激酶的大家族，其在肌醇环的D3位处磷酸化磷酸肌醇(Cantley,Science,2002，296(5573):1655-7)。根据其结构、调控和底物特异性，PI3K被分为三类(I类、II类和III类)。I类PI3K(其包括PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ)是双特异性脂质和蛋白激酶的家族，其催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP₂)的磷酸化，从而产生磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP₃)。PIP₃作为控制许多细胞过程(包括生长、存活、粘附和迁移)的第二信使起作用。所有四种I类PI3K亚型都作为异二聚体存在，所述异二聚体由催化亚基(p110)和紧密相关的调控亚基构成，所述调控亚基控制所述亚型的表达、活化和亚细胞定位。PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ与称为p85的调控亚基相关并且通过酪氨酸激酶依赖性机制被生长因子和细胞因子活化(Jimenez,等人,J Biol Chem.,2002,277(44):41556-62)，而PI3Kγ与两个调控亚基(p101和p84)相关并且其活化由G蛋白偶联受体的活化驱动(Brock等人,J Cell Biol.,2003,160(1):89-99)。PI3Kα和PI3Kβ是遍在表达的。相比之下，PI3Kγ和PI3Kδ主要表达于白细胞中(范黑泽布罗埃克(Vanhaesebroeck)等人，生物化学科学趋势(Trends Biochem Sci.)，2005，30(4):194-204)。

所述PI3K亚型的差异性组织分布是其生物学功能不同的原因。PI3Kα或PI3Kβ的遗传消除产生胚胎致死性，从而指示PI3Kα和PI3Kβ至少在发育期间具有必需且非冗余的功能(Vanhaesebroeck等人,2005)。相比之下，缺乏PI3Kγ和PI3Kδ的小鼠是可存活的，能育的并且具有正常寿命，但是它们显示改变的免疫系统。PI3Kγ缺乏导致巨噬细胞和中性粒细胞向炎症部位的募集受损以及T细胞活化受损(Sasaki等人,Science,2000,287(5455):1040-6)。PI3Kδ突变小鼠在B细胞信号传导中具有特定缺陷，所述缺陷导致B细胞发育受损并且抗原刺激后抗体应答减少(Clayton等人,J Exp Med.2002,196(6):753-63；Jou,等人,MolCell Biol.2002,22(24):8580-91；Okkenhaug等人,科学Science,2002,297(5583):1031-4)。

PI3Kγ和PI3Kδ突变小鼠的表型表明这些酶可在炎症和其他基于免疫的疾病中发挥作用并且这在临床前模型中得到证实。PI3Kγ突变小鼠在类风湿性关节炎(RA)和哮喘的小鼠模型中在很大程度上被保护免受疾病影响(Camps等人,Nat Med.2005,11(9):936-43；Thomas等人,Eur.J.Immunol.2005,35(4):1283-91)。另外，显示用PI3Kγ的选择性抑制剂处理野生型小鼠在全身性狼疮性肾炎(SLE)的MRL-lpr模型中可减轻肾小球性肾炎并延长存活，并且在RA模型中可抑制关节炎症和损伤(Barber等人,Nat Med.2005,11(9):933-5；Camps等人,2005)。类似地，已经显示用PI3Kδ的选择性抑制剂处理的PI3Kδ突变小鼠和野生型小鼠两者在哮喘小鼠模型中具有减弱的过敏性气道炎症和高反应性(Ali等人,Nature.2004,431(7011):1007-11；Lee等人，FASEB J.2006,20(3):455-65)并且在RA模型中具有减弱的疾病(Randis等人,Eur.J.Immunol.,2008,38(5):1215-24)。

已经显示B细胞增殖在炎性自身免疫性疾病的发展中发挥主要作用(Puri,Frontiers in Immunology(2012),3(256),1-16；Walsh,Kidney International(2007)72，676-682)。例如，B细胞支持T细胞自身反应性，T细胞是炎性自身免疫性疾病的重要组分。一旦被活化并且成熟，B细胞可流到炎症部位并且募集炎性细胞或者分化成浆细胞。因此，可通过靶向B细胞刺激性细胞因子、B细胞表面受体，或者经由B细胞耗尽来影响B细胞的活性。已经显示利妥昔单抗(针对B细胞表面受体CD20的IgG1κ小鼠/人嵌合单克隆抗体)可耗尽CD20+B细胞。已经显示使用利妥昔单抗在治疗特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血或血管炎方面具有功效。例如，用利妥昔单抗进行治疗通过证明之外周(B细胞耗尽在)患有抗中性粒细胞细胞质抗体相关(ANCA)全身性血管炎(AASV)的患者中导致所述疾病的缓解(Walsh,2007；Lovric,Nephrol Dial Transplant(2009)24:179-185)。类似地，在用利妥昔单抗治疗后，在三分之一至三分之二患有混合型冷球蛋白血症血管炎的患者中报告了完全应答，包括呈现出对其他治疗有抗性或不耐受的血管炎严重形式的患者(Cacoub,Ann Rheum Dis2008；67:283-287)。类似地，已经显示利妥昔单抗在治疗患有特发性血小板减少性紫癜(或免疫性血小板减少性紫癜)(Garvey,British Journal ofHaematology,(2008)141,149-169；Godeau,Blood(2008),112(4),999-1004；Medeo,European Journalof Haematology,(2008)81,165-169)和自身免疫性溶血性贫血(Garvey,British Journalof Haematology,(2008)141,149-169)的患者中具有功效。

PI3Kδ信号传导已经与B细胞存活、迁移和活化相关联(Puri,Frontiers inImmunology,2012，3(256),1-16，在第1-5页处；和Clayton,J Exp Med，2002,196(6):753-63)。例如，PI3Kδ是B细胞受体驱动的抗原依赖性B细胞活化所需要的。通过阻断B细胞粘附、存活、活化和增殖，PI3Kδ抑制可损害B细胞活化T细胞的能力，从而阻止其活化并且减少自身抗体和促炎性细胞因子的分泌。因此，通过其抑制B细胞活化的能力，PI3Kδ抑制剂将被预期治疗可通过类似方法(如通过利妥昔单抗耗尽B细胞)治疗的B细胞介导的疾病。实际上，已经显示PI3Kδ抑制剂适用于还可通过利妥昔单抗治疗的多种自身免疫性疾病(如关节炎)的小鼠模型中(Puri(2012))。另外，与自身免疫性联系的先天样B细胞对PI3Kδ活性是敏感的，因为在缺乏p110δ基因的小鼠中几乎不存在MZ和B-1细胞(Puri(2012))。PI3Kδ抑制剂可减少MZ和B-1细胞的运输和活化，所述细胞牵涉于自身免疫性疾病中。

除了其在炎性疾病中的潜在作用之外，所有四种I类PI3K亚型还可在癌症中发挥作用。编码p110α的基因在常见癌症(包括乳癌、前列腺癌、结肠癌和子宫内膜癌)中频繁地突变(Samuels等人,Science,2004,304(5670):554；Samuels等人,Curr Opin Oncol.2006,18(1):77-82)。这些突变的百分之八十由所述酶的螺旋或激酶结构域中的三种氨基酸取代之一表示并且导致激酶活性显著上调，从而在细胞培养物中和在动物模型中产生致癌性转化(Kang等人,Proc Natl Acad Sci U S A.2005,102(3):802-7；Bader等人,Proc NatlAcad Sci U S A.2006,103(5):1475-9)。在其他PI3K亚型中未鉴别出此类突变，但是存在它们能够促进恶性肿瘤的发生和发展的证据。在急性成髓细胞性白血病中观察到PI3Kδ的一致过度表达(Sujobert等人,Blood,2005,106(3):1063-6)并且PI3Kδ的抑制剂可阻止白血病细胞的生长(Billottet等人,Oncogene.2006,25(50):6648-59)。在慢性骨髓性白血病中观察到PI3Kγ的表达升高(Hickey等人,J Biol.Chem.2006,281(5):2441-50)。还已经在脑癌、结肠癌和膀胱癌中观察到PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ的表达的改变(Benistant等人,Oncogene,2000,19(44):5083-90；Mizoguchi,等人,Brain Pathol.2004,14(4):372-7；Knobbe等人,Neuropathol Appl Neurobiol.2005,31(5):486-90)。另外，已经显示这些亚型在细胞培养物中都具致癌性(Kang等人，2006)。

出于这些原因，需要开发可用于炎性病症、自身免疫性疾病和癌症的新的PI3K抑制剂。本发明涉及这种需要和其他需要。

概述

本申请提供制备式I化合物：

或其药学上可接受的盐的方法，所述化合物适用作PI3Kδ的抑制剂。

本申请还提供式I化合物的盐酸盐。

本申请还提供包含本文所述的盐酸盐和药学上可接受的载体的药物组合物。

本申请还提供抑制PI3K激酶的活性的方法，所述方法包括使所述激酶与式I化合物的盐酸盐接触。

本申请还提供治疗患者的疾病的方法，其中所述疾病与PI3K激酶的异常表达或活性相关，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的式I化合物的盐酸盐。

本申请另外提供用于在本文描述的任何方法中使用的式I化合物的盐酸盐。

本申请还提供式I化合物的盐酸盐用于制造药剂的用途，所述药剂用于在本文描述的任何方法中使用。

本申请还提供一种制备式I化合物的盐酸盐的方法，所述方法包括使式I化合物：

与盐酸反应，以形成所述盐。

本申请另外提供一种制备式I化合物的方法，所述方法包括使式XVI化合物：

与乙酸甲脒反应，以形成所述式I化合物：

本申请还提供一种式XIV化合物：

或其药学上可接受的盐。

本申请还提供一种式XV化合物：

或其药学上可接受的盐。

本申请另外提供一种式XVI化合物：

或其药学上可接受的盐。

本申请还提供一种式XIX化合物：

或其药学上可接受的盐。

本申请还提供了式XX化合物：

或其药学上可接受的盐。

本申请另外提供一种式XXI化合物：

或其药学上可接受的盐。

附图说明

图1示出了代表实施例3的盐的DSC热谱图。

图2示出了代表实施例3的盐的TGA数据。

图3示出了代表实施例3的盐的XRPD图谱。

详述

化合物与盐

本申请提供制备式I化合物：

或其药学上可接受的盐的方法，所述化合物适用作PI3Kδ的抑制剂，其中Et是乙基。

本申请还提供式I化合物的盐。

因此，在一些实施方案中，本申请提供4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐。在一些实施方案中，本申请提供(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐。在一些实施方案中，所述盐是1:1化学计量比的(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮与盐酸。

同一物质的不同形式具有与例如吸湿性、溶解性、稳定性等有关的不同综合性质。具有高熔点的形式通常具有良好的热力学稳定性，这在延长含有所述固体形式的药物制剂的保质期中是有利的。具有较低熔点的形式在热力学方面通常是较不稳定的，但是是有利的，因为它们具有增加的水溶性，即增加的药物生物利用度。弱吸湿的形式因为其对热和湿度的稳定性是令人希望的并且在长期储存期间是耐降解的。

在一些实施方案中，本文提供的式I化合物的盐酸盐是结晶的。如本文所用，“结晶的”或“结晶形式”是指结晶物质的某一晶格构型。同一物质的不同结晶形式通常具有不同的晶格(例如，晶胞)，这归因于作为所述结晶形式中的每者的特征的不同物理特性。在一些情况下，不同的晶格构型具有不同水或溶剂含量。

所述不同的盐形式可通过固态表征方法(如通过X射线粉末衍射(XRPD)鉴别。其他表征方法(如差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)、动态蒸汽吸附(DVS)等)进一步帮助鉴别所述形式并且帮助确定稳定性和溶剂/水含量。

反射(峰)的XRPD图谱通常被认为是具体结晶形式的指纹。众所周知的是，XRPD峰的相对强度可尤其取决于样品制备技术、晶体粒度分布、所使用的不同过滤器、样品安装程序以及应用的具体仪器而广泛变化。在一些情况下，取决于仪器的类型或设置，可观察到新的峰或现有峰可能消失。如本文所用，术语“峰”是指具有最大峰高度/强度的至少约4％的相对高度/强度的反射。此外，仪器差异和其他因素可影响2-θ值。因此，峰分配(如本文报道的那些)可变化约±0.2°(2-θ)，并且如在本文的XRPD背景下所使用的术语“基本上”和“约”意在涵盖上述变化。

在一些实施方案中，就2-θ而言，式I化合物的盐酸盐具有至少一个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。在一些实施方案中，就2-θ而言，式I化合物的盐酸盐具有至少两个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。在一些实施方案中，就2-θ而言，式I化合物的盐酸盐具有至少三个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。在一些实施方案中，就2-θ而言，式I化合物的盐酸盐具有至少四个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。在一些实施方案中，就2-θ而言，式I化合物的盐酸盐具有至少五个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。在一些实施方案中，式I化合物的盐酸盐具有基本上如图3所示的XRPD图谱。

以相同方式，取决于仪器、具体设置、样品制备等，与DSC、TGA或其他热实验结合的温度读数可变化约±3℃。因此，具有“基本上”如在任何图中所示的DSC热谱图的本文报道的结晶形式或术语“约”被理解为适应这样的变化。在一些实施方案中，式I化合物的盐酸盐具有DSC热谱图，所述热谱图在约207℃处具有吸热峰。在一些实施方案中，式I化合物的盐酸盐具有基本上如图1所示的DSC热谱图。在一些实施方案中，式I化合物的盐酸盐具有基本上如图2所示的TGA热谱图。

在一些实施方案中，本文所述的盐和化合物(例如，式I化合物或式I化合物的盐酸盐)是基本上分离的。所谓“基本上分离的”是指所述盐或化合物至少部分地或基本上从形成或检测到它的环境中分离出来。部分分离可包括例如富含本文描述的盐的组合物。基本上分离可包括组合物，所述组合物包含至少约50重量％、至少约60重量％、至少约70重量％、至少约80重量％、至少约90重量％、至少约95重量％、至少约97重量％或至少约99重量％的本文所述的盐或其盐。用于分离化合物及其盐的方法在本领域是常规的。

中间体

本申请还提供在制备式I化合物中有用的中间体。

因此，在一些实施方案中，本申请提供式XIV化合物：

或其药学上可接受的盐。

本申请还提供式XV化合物：

或其药学上可接受的盐。

本申请还提供式XVI化合物：

或其药学上可接受的盐。

本申请还提供式XIX化合物：

或其药学上可接受的盐。

本申请还提供式XX化合物：

或其药学上可接受的盐。

本申请还提供式XXI化合物：

或其药学上可接受的盐。

方法

本申请还提供制备式I的盐的方法：

在一些实施方案中，所述方法包括使式I化合物：

与盐酸反应，以形成所述盐。

在一些实施方案中，所述盐酸是1M水性盐酸。

在一些实施方案中，基于1当量的式I化合物使用约3.3至约3.7当量的盐酸。

在一些实施方案中，在约45℃至约55℃的温度下进行所述反应。

在一些实施方案中，所述方法包括：

在室温下将盐酸添加至式I化合物，以形成浆液；

将所述浆液加热至约45℃至约55℃的温度，以形成溶液；并且

将所述溶液冷却至约0℃至约5℃的温度，以使所述盐结晶。

在一些实施方案中，所述方法包括使式XVI化合物：

与乙酸甲脒反应，以形成式I化合物：

在一些实施方案中，在包含1,2-乙二醇的溶剂组分中进行式XVI化合物与乙酸甲脒的所述反应。

在一些实施方案中，在约100℃至约105℃的温度下进行式XVI化合物与乙酸甲脒的所述反应。

在一些实施方案中，基于1当量的式XVI化合物使用约8至约10当量的乙酸甲脒。

在一些实施方案中，所述方法还包括通过如下方法制备式XVI化合物，所述方法包括使式XV化合物：

与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈在叔胺的存在下反应。

在一些实施方案中，所述叔胺是N-甲基吡咯烷酮。

在一些实施方案中，在约室温下进行式XV化合物与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈的所述反应。

在一些实施方案中，所述方法还包括通过如下方法制备式XV化合物，所述方法包括使式XIV-a化合物：

与肼在叔胺的存在下反应，其中P¹是C_1-6烷基磺酰基。

在一些实施方案中，所述叔胺是N-甲基吡咯烷酮。

在一些实施方案中，在约35℃至约60℃的温度下进行式XIV-a化合物与肼的所述反应。

在一些实施方案中，在包含二氯甲烷的溶剂组分中进行式XIV-a化合物与肼的所述反应。

在一些实施方案中，P¹是甲磺酰基。

在一些实施方案中，所述方法还包括通过如下方法制备式XIV化合物，所述方法包括使式XIII化合物：

与C_1-6烷基磺酰基卤化物在叔胺的存在下反应。

在一些实施方案中，所述C_1-6烷基磺酰基卤化物是甲磺酰氯。

在一些实施方案中，所述叔胺是N,N-二异丙基乙胺。

在一些实施方案中，基于1当量的式XIII化合物使用约1.1至约1.5当量的烷基磺酰基卤化物。

在一些实施方案中，在约-10℃至约5℃的温度下进行式所述XIII化合物与C_1-6烷基磺酰基卤化物的所述反应。

在一些实施方案中，在包含二氯甲烷的溶剂组分中进行所述式XIII化合物与C_1-6烷基磺酰基卤化物的所述反应。

在一些实施方案中，以下步骤：(i)使所述式XIII化合物与C_1-6烷基磺酰基卤化物反应；(ii)使所述式XIV-a化合物与肼在叔胺的存在下反应，以形成式XV化合物；以及(iii)使所述式XV化合物与乙酸甲脒反应，以形成式XVI化合物，所述步骤以一锅法进行而不分离式XIV-a化合物或式XV化合物。

在一些实施方案中，所述方法还包括通过如下方法制备式XVI化合物，所述方法包括使式XV-a的盐：

与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈在叔胺的存在下反应，其中TsOH是对甲苯磺酸。

在一些实施方案中，所述叔胺是N,N-二异丙基乙胺。

在一些实施方案中，在约室温下进行式XV-a的盐与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈的所述反应。

在一些实施方案中，基于1当量的式XV-a的盐使用约1.3至约1.6当量的(1-乙氧基亚乙基)丙二腈。

在一些实施方案中，在包含乙醇的溶剂组分中进行式XV-a的盐与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈的所述反应。

在一些实施方案中，所述方法还包括通过如下方法制备式XV-a的盐，所述方法包括使式XXI化合物：

与对甲苯磺酸反应，其中Boc是叔丁氧基羰基。

在一些实施方案中，所述对甲苯磺酸是对甲苯磺酸一水合物。

在一些实施方案中，基于1当量的式XXI化合物使用约1.3至约1.6当量的对甲苯磺酸。

在一些实施方案中，在约45℃至约65℃的温度下进行所述式XXI化合物与对甲苯磺酸的所述反应。

在一些实施方案中，在包含乙醇的溶剂组分中进行所述式XXI化合物与对甲苯磺酸的所述反应。

在一些实施方案中，以下步骤：(i)使所述式XXI化合物与对甲苯磺酸反应，以形成式XV-a的盐；以及(ii)使所述式XV-a的盐与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈反应，所述步骤以一锅法进行而不分离式XV-a的盐。

在一些实施方案中，所述方法还包括通过如下方法制备式XXI化合物，所述方法包括使式XX化合物：

与氢气在一种或多种独立选择的氢化催化剂的存在下反应，其中Boc是叔丁氧基羰基。

在一些实施方案中，在两种独立选择的氢化催化剂的存在下进行式XX化合物与氢气的所述反应。

在一些实施方案中，一种氢化催化剂是双(1,5-环辛二烯)四氟硼酸铑(I)并且另一种是(R)-(-)-1-{(S)-2-[双(4-三氟甲基苯基)膦]二茂铁基}乙基-二-叔丁基膦。

在一些实施方案中，基于1当量的式XX化合物使用约13.5至约14.5当量的双(1,5-环辛二烯)四氟硼酸铑(I)。

在一些实施方案中，基于1当量的式XX化合物使用约12至约13当量的(R)-(-)-1-{(S)-2-[双(4-三氟甲基苯基)膦]二茂铁基}乙基-二-叔丁基膦。

在一些实施方案中，在约室温下进行式XX化合物与氢气的所述反应。

在一些实施方案中，在包含甲醇的溶剂组分中进行式XX化合物与氢气的所述反应。

在一些实施方案中，所述方法还包括通过如下方法制备式XX化合物，所述方法包括使式XIX化合物：

与肼基甲酸叔丁酯反应。

在一些实施方案中，在约60℃至约70℃的温度下进行式XIX化合物与肼基甲酸叔丁酯的所述反应。

在一些实施方案中，在包含甲醇的溶剂组分中进行式XIX化合物与肼基甲酸叔丁酯的所述反应。

在一些实施方案中，所述方法还包括通过如下方法制备式XIX化合物，所述方法包括将式XIII-a化合物：

在氧化剂的存在下氧化。

在一些实施方案中，所述氧化剂是戴斯-马丁高碘烷。

在一些实施方案中，基于1当量的式XIII-a化合物使用约1.2至约1.7当量的所述氧化剂。

在一些实施方案中，在约室温下进行式XIII-a化合物的所述氧化。

在一些实施方案中，在包含二氯甲烷的溶剂组分中进行式XIII-a化合物的所述氧化。

在一些实施方案中，通过如下方法制备所述式XIII化合物，所述方法包括将式XII化合物：

在溶剂组分的存在下加热。

在一些实施方案中，在约95℃至约105℃的温度下进行所述加热。

在一些实施方案中，所述溶剂组分包含1,4-二噁烷。

在一些实施方案中，所述溶剂组分包含甲苯。

在一些实施方案中，所述溶剂组分包含1,4-二噁烷和甲苯。

在一些实施方案中，通过如下方法制备式所述XII化合物，所述方法包括使式XI化合物：

在强碱的存在下反应。

在一些实施方案中，所述强碱使氢氧化钠。

在一些实施方案中，所述强碱使1M水性氢氧化钠。

在一些实施方案中，在约室温下进行所述反应。

在一些实施方案中，通过如下方法制备式所述XI化合物，所述方法包括使式X化合物：

与氢气在雷尼镍的存在下反应。

在一些实施方案中，在约50℃至约70℃的温度下进行所述反应。

在一些实施方案中，通过如下方法制备所述式X化合物，所述方法包括使式IX化合物：

在三氟化硼醚化物、(3aS)-1-甲基-3,3-二苯基四氢-3H-吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧氮杂硼杂环戊二烯((S)-MeCBS)催化剂和硼烷复合物的存在下反应。

在一些实施方案中，基于1当量的式IX化合物使用约0.03至约0.07当量的三氟化硼醚化物。

在一些实施方案中，基于1当量的式IX化合物使用约0.05至约0.15当量的(3aS)-1-甲基-3,3-二苯基四氢-3H-吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧氮杂硼杂环戊二烯((S)-MeCBS)催化剂。

在一些实施方案中，所述硼烷复合物使THF中的1.0M硼烷-THF复合物。

在一些实施方案中，基于1当量的式IX化合物使用约0.9至约1.1当量的硼烷复合物。

在一些实施方案中，在约室温下进行所述反应。

在一些实施方案中，通过如下方法制备所述式IX化合物，所述方法包括使式VIII化合物：

与碘在溶剂组分的存在下反应。

在一些实施方案中，所述溶剂组分包含丙酮。

在一些实施方案中，基于1当量的式VIII化合物使用约0.75至约1.25当量的碘。

在一些实施方案中，通过如下方法制备所述式VIII化合物，所述方法包括使式VII化合物：

与丙二酸二甲酯在催化剂的存在下反应。

在一些实施方案中，所述催化剂是(1S,2S)-N,N'-二苄基环己烷-1,2-二胺-二溴镍(埃文斯(Evans)催化剂)。

在一些实施方案中，基于1当量的式VII化合物使用约1.1至约1.3当量的丙二酸二甲酯。

在一些实施方案中，基于1当量的式VII化合物使用约0.02至约0.03当量的过渡金属催化剂。

在一些实施方案中，通过如下方法制备所述式VII化合物，所述方法包括使式VI化合物：

与硝基甲烷在有机酸的存在下反应，以形成第一混合物。

在一些实施方案中，所述有机酸是冰乙酸。

在一些实施方案中，基于1当量的式VI化合物使用约9.5至约10.5当量的硝基甲烷。

在一些实施方案中，所述反应还包括将胺碱添加至所述第一混合物中，以形成第二混合物。

在一些实施方案中，所述胺碱是苄胺。

在一些实施方案中，基于1当量的式VI化合物使用约0.2至约0.3当量的胺碱。

在一些实施方案中，在约55℃至约65℃下加热所述第二混合物。

在一些实施方案中，通过如下方法制备所述式VI化合物，所述方法包括使式V化合物：

与(C_1-4烷基)卤化镁复合物反应，以形成第一混合物。

在一些实施方案中，所述(C_1-4烷基)卤化镁复合物是1.3M异丙基氯化镁氯化锂复合物。

在一些实施方案中，基于1当量的式V化合物使用约1.1至约1.3当量的所述(C_1-4烷基)卤化镁复合物。

在一些实施方案中，所述反应还包括将N-甲酰基吗啉添加至所述第一混合物中，以形成第二混合物。

在一些实施方案中，基于1当量的式V化合物使用约1.8至约2.2当量的N-甲酰基吗啉。

在一些实施方案中，在约-5℃至约10℃的温度下进行所述反应。

在一些实施方案中，根据描述于美国公布号2013-0059835Al中的程序制备所述式V化合物。

在一些实施方案中，通过如下方法制备所述式VI化合物，所述方法包括使式V-a化合物：

与N,N-二甲基甲酰胺在二异丙基氨基锂的存在下反应。

在一些实施方案中，通过使N,N-二异丙胺在正丁基锂的存在下反应来制备所述二异丙基氨基锂。

在一些实施方案中，在约-75℃至约5℃的温度下制备所述二异丙基氨基锂。

在一些实施方案中：

(ii)使所述式V-a化合物与二异丙基氨基锂反应，以形成第一混合物；以及

(ii)将N,N-二甲基甲酰胺添加至所述第一混合物中，以形成第二混合物。

在一些实施方案中，基于1当量的式V-a化合物使用约1.2至约1.3当量的胺碱。

在一些实施方案中，基于1当量的式V-a化合物使用约1.4至约1.6当量的N,N-二甲基甲酰胺。

在一些实施方案中，通过如下方法制备所述式V-a化合物，所述方法包括使式IV-a化合物：

与1,2-乙二醇在对甲苯磺酸的存在下反应。

在一些实施方案中，所述对甲苯磺酸是对甲苯磺酸一水合物。

在一些实施方案中，基于1当量的式IV-a化合物使用约2.2至约2.7当量的1,2-乙二醇。

在一些实施方案中，基于1当量的式IV-a化合物使用约0.05至约0.1当量的对甲苯磺酸。

在一些实施方案中，在约回流下进行所述反应。

在一些实施方案中，通过如下方法制备所述式IV-a化合物，所述方法包括使式II化合物：

与CH₂CH₂-X¹在碱金属碳酸盐碱的存在下反应，其中：

X¹是卤化物。

在一些实施方案中，X¹是碘化物。

在一些实施方案中，所述碱金属碳酸盐碱是碳酸钾。

在一些实施方案中，基于1当量的式II化合物使用约1.1至约1.3当量的CH₂CH₂-X¹。

在一些实施方案中，基于1当量的式II化合物使用约1.8至约2.2当量的碱金属碳酸盐碱。

在一些实施方案中，在约55℃至约65℃下进行所述反应。

在一些实施方案中，根据描述于美国公布号2013-0059835Al中的程序制备所述式II化合物。

应理解的是，为清楚起见而描述于分开的实施方案背景下的本发明的某些特征也可在单个实施方案中以组合的形式提供(同时意图将所述实施方案组合成如同以多项从属形式书写的一样)。相反，为简洁起见而描述于单个实施方案的背景下的本发明的不同特征也可分开地或以任何合适的子组合形式提供。

本文描述的盐和化合物可以是不对称的(例如，具有一个或多个立体中心)。如果没有指明立体化学，则所有立体异构体(如对映异构体和非对映异构体)都被预期，除非通过结构或名称另外说明。本申请的包含不对称取代的碳原子的盐和化合物可按光学活性形式或外消旋形式分离。关于如何从无光学活性起始材料制备光学活性形式的方法在本领域是已知的，如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成。烯烃的许多几何异构体、C＝N双键等也可存在于本文描述的盐和化合物中，并且在本申请中考虑了所有此类稳定的异构体。描述了本申请的盐和化合物的顺式和反式几何异构体并且它们可作为异构体的混合物或作为分开的同分异构形式分离。

可通过本领域中已知的众多方法中的任一种进行盐和化合物的外消旋混合物的拆分。示例性方法包括使用手性拆分酸的分步再结晶，所述酸是光学活性的成盐有机酸。用于分步再结晶方法的合适的拆分剂是例如光学活性酸，如D式和L式酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或各种光学活性樟脑磺酸(如β-樟脑磺酸)。适于分步结晶方法的其他拆分剂包括立体异构纯形式的α-甲基苄胺(例如，S和R形式，或非镜像异构纯形式)、2-苯基甘氨醇、去甲麻黄碱、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1,2-二氨基环己烷等。

还可通过在填充有光学活性拆分剂(例如，二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的柱上洗脱来进行外消旋混合物的拆分。本领域的技术人员可确定合适的洗脱溶剂组成。

本发明的盐和化合物还可包括出现在中间体或最终的盐或化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但不同质量数的那些原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。

在一些实施方案中，所述化合物或盐可与其他物质如水和溶剂一起发现(例如，水合物和溶剂化物)或可被分离。

在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐(例如，式I化合物的盐酸盐)是基本上分离的。所谓“基本上分离的”是指所述化合物至少部分地或基本上从它所形成的或被检测到的环境中分离。部分分离可包括例如富含本发明的化合物的组合物。基本上分离可包括含有至少约50重量％、至少约60重量％、至少约70重量％、至少约80重量％、至少约90重量％、至少约95重量％、至少约97重量％或至少约99重量％的本发明的化合物或其盐的组合物。用于分离化合物及其盐的方法在本领域是常规的。

短语“药学上可接受的”在本文中用于指在合理医学判断范围内适合用于与人和动物组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症、与合理的益处/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

如应了解，本文提供的化合物(包括其盐)可使用已知的有机合成技术制备并且可根据众多可能的合成途径中的任一种来合成。可根据本领域中已知的任何合适的方法监测本文所述的方法。例如，可通过光谱手段如核磁共振光谱法(例如，1H或13C)、红外光谱法，或分光光度测定法(例如，UV可见的)；或者通过色谱法如高效液相色谱(HPLC)或薄层色谱(TLC)或其他相关技术监测产物形成。

如本文所用，术语“反应”如在本领域中已知的使用并且通常是指按一种方式将化学试剂集合在一起，以便允许它们在分子水平上相互作用，以实现化学或物理转化。在一些实施方案中，反应涉及两种试剂，其中相对于第一试剂使用一个或多个当量的第二试剂。可将本文所述的方法的反应步骤进行一段时间并且在适于制备所鉴别的产物的条件下进行。

本文所述的方法的反应可在适合的溶剂中进行，所述溶剂可由有机合成领域的技术人员容易地选择。合适的溶剂在进行反应的温度(例如，可在从溶剂的冻结温度至溶剂的沸腾温度范围内的温度)下与起始材料(反应物)、中间体或产物可基本无反应性。给定反应可在一种溶剂或多于一种溶剂的混合物中进行。取决于具体的反应步骤，可针对具体的反应步骤选择合适的溶剂。

合适的溶剂可包括卤化溶剂，如四氯化碳、溴二氯甲烷、二溴氯甲烷、溴仿、氯仿、溴氯甲烷、二溴甲烷、丁基氯、二氯甲烷、四氯乙烯、三氯乙烯、1,1,1-三氯乙烷、1,1,2-三氯乙烷、1,1-二氯乙烷、2-氯丙烷、1,2-二氯乙烷、1,2-二溴乙烷、六氟苯、1,2,4-三氯苯、1,2-二氯苯、氯苯、氟苯、其混合物等。

合适的醚溶剂包括：二甲氧基甲烷、四氢呋喃、1,3-二噁烷、1,4-二噁烷、呋喃、二乙醚、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、二甘醇二甲醚、二甘醇二乙醚、三甘醇二甲醚、苯甲醚、叔丁基甲醚、其混合物等。

通过举例，合适的质子溶剂可包括但不限于水、甲醇、乙醇、2-硝基乙醇、2-氟乙醇、2,2,2-三氟乙醇、乙二醇、1-丙醇、2-丙醇、2-甲氧基乙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、2-乙氧基乙醇、二甘醇、1-、2-或3-戊醇、新戊醇、叔戊醇、二甘醇单甲醚、二甘醇单乙醚、环己醇、苄醇、苯酚或甘油。

通过举例，合适的非质子溶剂可包括但不限于四氢呋喃(THF)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2(1H)-嘧啶酮(DMPU)、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)、N甲基吡咯烷酮(NMP)、甲酰胺、N-甲基乙酰胺、N-甲基甲酰胺、乙腈、二甲亚砜、丙腈、甲酸乙酯、乙酸甲酯、六氯丙酮、丙酮、乙基甲基酮、乙酸乙酯、环丁砜、N,N-二甲基丙酰胺、四甲基脲、硝基甲烷、硝基苯或六甲基磷酰胺。

合适的烃溶剂包括苯、环己烷、戊烷、己烷、甲苯、环庚烷、甲基环己烷、庚烷、乙苯、间、邻或对二甲苯、辛烷、二氢化茚、壬烷或萘。

本文所述的方法的反应可在适当的温度下进行，所述温度可由本领域的技术人员容易地确定。反应温度将取决于例如试剂和溶剂(如果存在)的熔点和沸点；反应的热力学(例如，剧烈放热反应可能需要在降低的温度下进行)；以及反应的动力学(例如，高活化能垒可能需要升高的温度)。

如本文所用，表达“环境温度”和“室温”或“rt”是如本领域中所理解的，并且通常是指约为进行反应的房间的温度的温度(例如，反应温度)，例如约20℃至约30℃的温度。

本文所述的方法的反应可在大气环境中或在惰性气氛下进行。通常，可使用本领域的技术人员熟知的空气敏感合成技术进行包含与空气具充分反应性的试剂或产物的反应。

使用方法

本发明的盐和化合物可调节不同激酶中的一种或多种(包括例如磷酸肌醇3-激酶(PI3K)的活性。术语“调节”是指升高或降低PI3K家族的一个或多个成员的活性的能力。因此，可通过使PI3K与本文所述的盐、化合物或组合物中的任一种或多种接触而将本发明的盐和化合物用于调节所述PI3K的方法中。在一些实施方案中，本申请的盐和化合物可充当一种或多种PI3K的抑制剂。在另外的实施方案中，可通过施用调节量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐而将本发明的盐和化合物用于调节对调节受体有需要的个体中的PI3K的活性。在一些实施方案中，调节是抑制。

鉴于癌细胞生长和存活受多个信号传导途径影响，本申请适用于治疗以抗药性激酶突变体为特征的疾病状态。另外，对它们所调节活性的激酶展示出不同偏好的不同激酶抑制剂可组合地使用。这种方法通过靶向多个信号传导途径在治疗疾病状态中被证明可以是高效的，降低在细胞中出现耐药性的可能性，并且减少针对疾病的治疗毒性。

本发明盐和化合物所结合和/或调节(例如，抑制)的激酶包括PI3K家族的任何成员。在一些实施方案中，所述PI3K是PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ或PI3Kγ。在一些实施方案中，所述PI3K是PI3Kδ或PI3Kγ。在一些实施方案中，所述PI3K是PI3Kδ。在一些实施方案中，所述PI3K是PI3Kγ。在一些实施方案中，所述PI3K包括突变。突变可以是一个氨基酸取代另一个氨基酸，或缺失一个或多个氨基酸。在此类实施方案中，所述突变可存在于PI3K的激酶结构域中。

在一些实施方案中，多于一种本发明的盐或化合物用于抑制一种激酶(例如，PI3Kδ或PI3Kγ)的活性。

在一些实施方案中，多于一种本发明的盐或化合物用于抑制多于一种激酶(如至少两种激酶(例如，PI3Kδ和PI3Kγ)的活性。

在一些实施方案中，所述盐或化合物中的一种或多种与另一种激酶抑制剂组合使用，以抑制一种激酶(例如，PI3Kδ或PI3Kγ)的活性。

在一些实施方案中，所述盐或化合物中的一种或多种与另一种激酶抑制剂组合使用，以抑制多于一种激酶(例如，PI3Kδ或PI3Kγ)(如至少两种激酶)的活性。

本发明的盐和化合物可具选择性。所谓“选择性”是指与至少一种其他激酶相比，所述化合物以更大的亲和力或效力分别地与激酶结合或抑制所述激酶。在一些实施方案中，相对于PI3Kα和/或PI3Kβ，本发明的盐和化合物是PI3Kδ或PI3Kγ的选择性抑制剂。在一些实施方案中，本发明的盐和化合物是PI3Kδ的选择性抑制剂(例如，相对于PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kγ)。在一些实施方案中，本发明的盐和化合物是PI3Kδ的选择性抑制剂(例如，相对于PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kγ)。在一些实施方案中，选择性可以是至少约2倍、5倍、10倍、至少约20倍、至少约50倍、至少约100倍、至少约200倍、至少约500倍或至少约1000倍。可通过本领域中的常规方法测量选择性。在一些实施方案中，可在每种酶的K_m ATP浓度下测试选择性。在一些实施方案中，可通过与具体PI3K激酶活性相关的细胞测定来确定本发明的盐和化合物的选择性。

本申请的另一方面涉及通过向需要这种治疗的个体施用治疗有效量或剂量的一种或多种本申请的盐或化合物或者其药物组合物来治疗所述个体(例如，患者)的激酶(如PI3K)相关疾病或病症的方法。PI3K相关疾病可包括与PI3K的表达或活性(包括过度表达和/或异常活性水平)直接或间接相关的任何疾病、病症或病状。在一些实施方案中，所述疾病可与AKt(蛋白激酶B)、哺乳动物雷帕霉素靶标(mTOR)或磷酸肌醇依赖性激酶1(PDK1)联系。在一些实施方案中，所述mTOR相关疾病可以是炎症、动脉粥样硬化、银屑病、再狭窄、良性前列腺肥大、骨病症、胰腺炎、血管生成、糖尿病性视网膜病变、动脉粥样硬化、关节炎、免疫病症、肾病或癌症。PI3K相关疾病还可以包括可通过调节PI3K活性来预防、改善或治愈的任何疾病、病症或病状。在一些实施方案中，所述疾病以PI3K的异常活性为特征。在一些实施方案中，所述疾病以突变型PI3K为特征。在此类实施方案中，所述突变可存在于PI3K的激酶结构域中。

PI3K相关疾病的实例包括涉及所述系统的、基于免疫的疾病，包括例如类风湿性关节炎、过敏症、哮喘、肾小球性肾炎、狼疮或与上述任一项有关的炎症。

PI3K相关疾病的另外实例包括癌症，如乳癌、前列腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、脑癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、胃癌或血液癌症。

PI3K相关疾病的另外实例包括肺病，如急性肺损伤(ALI)和成人呼吸窘迫综合征(ARDS)。

PI3K相关疾病的另外实例包括骨关节炎、再狭窄、动脉粥样硬化、骨病症、关节炎、糖尿病性视网膜病变、牛皮癣、良性前列腺肥大、炎症、血管生成、胰腺炎、肾病、炎性肠疾、重症肌无力、多发性硬化症或舍格伦综合征等。

PI3K相关疾病的另外实例包括特发性血小板减少性紫癜(ITP)、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、血管炎、全身性红斑狼疮、狼疮性肾炎、天疱疮、膜性肾病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、毛细胞白血病、套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、结外边缘区淋巴瘤、活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤或生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤。

在一些实施方案中，所述疾病选自特发性血小板减少性紫癜(ITP)、自身免疫性溶血性贫血、血管炎、全身性红斑狼疮、狼疮性肾炎、天疱疮、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、膜性肾病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、毛细胞白血病、套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、结外边缘区淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom'smacroglobulinemia)、幼淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、骨髓纤维化、粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、脾边缘区淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、浆细胞白血病、髓外浆细胞瘤、郁结性骨髓瘤(亦称无症状骨髓瘤)、意义未明的单克隆丙种球蛋白症(MGUS)以及B细胞淋巴瘤。

在一些实施方案中，所述方法是治疗选自复发性ITP和难治性ITP的特发性血小板减少性紫癜(ITP)的方法。

在一些实施方案中，所述方法是治疗选自白塞氏病(disease)、柯根氏综合症(Cogan's syndrome)、巨细胞性动脉炎、风湿性多肌痛(PMR)、高安氏动脉炎(Takayasu'sarteritis)、伯格氏病(Buerger's disease)(血栓闭塞性脉管炎)、中枢神经系统血管炎、川崎病(Kawasaki disease)、结节性多动脉炎、丘格-施特劳斯综合症(Churg-Strauss syndrome)、混合型冷球蛋白血症血管炎(自发的或丙型肝炎病毒(HCV)诱导的)、亨诺赫-舍恩莱因紫癜( purpura，HSP)、过敏性血管炎、显微镜下多血管炎、韦格纳氏肉芽肿病以及抗中性粒细胞细胞质抗体相关(ANCA)全身性血管炎(AASV)的血管炎的方法。

在一些实施方案中，所述方法是治疗选自复发性NHL、难治性NHL和复发性滤泡性NHL的非何杰金氏淋巴瘤(NHL)的方法。

在一些实施方案中，所述方法是治疗B细胞淋巴瘤的方法，其中所述B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。

在一些实施方案中，所述方法是治疗B细胞淋巴瘤的方法，其中所述B细胞淋巴瘤是活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤或生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤。

在一些实施方案中，所述疾病是骨关节炎、再狭窄、动脉粥样硬化、骨病症、关节炎、糖尿病性视网膜病变、银屑病、良性前列腺肥大、炎症、血管生成、胰腺炎、肾病、炎性肠疾、重症肌无力、多发性硬化症或舍格伦综合征。

在一些实施方案中，所述疾病是类风湿性关节炎、过敏症、哮喘、肾小球性肾炎、狼疮或与前述任一项有关的炎症。

在一些实施方案中，所述狼疮是全身性红斑狼疮或狼疮性肾炎。

在一些实施方案中，所述疾病是乳癌、前列腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、脑癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、胃癌或血液癌症。

在一些实施方案中，所述血液癌症是急性成髓细胞性白血病或慢性骨髓性白血病。

在一些实施方案中，所述血液癌症是B细胞起源的淋巴性恶性肿瘤，包括缓慢进展性/侵袭性B细胞非何杰金氏淋巴瘤(NHL)和何杰金氏淋巴瘤(HL)。

在一些实施方案中，所述疾病是急性肺损伤(ALI)或成人呼吸窘迫综合征(ARDS)。

如本文所用，术语“接触”是指使体外系统或体内系统中的指示部分在一起。例如，使PI3K与本发明的化合物“接触”包括向具有PI3K的个体或患者(如人)施用本申请的化合物，以及例如将本发明的化合物引入包含含有PI3K的细胞制剂或纯化制剂的样品中。

如本文所用，可互换使用的术语“个体”或“患者”是指任何动物，包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其他啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马或灵长类动物，并且最优选人。

如本文所用，短语“治疗有效量”是指研究员、兽医、医师或其他临床医生寻找的在组织、系统、动物、个体或人中引发生物学或医学反应的活性化合物或药剂的量。在一些实施方案中，向患者或个体施用的化合物或其药学上可接受的盐的剂量是约1mg至约2g、约1mg至约1000mg、约1mg至约500mg、约1mg至约100mg、约1mg至50mg或约50mg至约500mg。

如本文所用，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指以下项中的一者或多者：(1)预防所述疾病；例如，对易患疾病、病状或病症但尚未经历或显示所述疾病的病理学或症状学的个体的所述疾病、病状或病症进行预防；(2)抑制所述疾病；例如，抑制正在经历或显示疾病、病状或病症的病理学或症状学的个体的所述疾病、病状或病症(即，阻止病理学和/或症状学的进一步发展)；以及(3)改善所述疾病；例如，改善正在经历或显示疾病、病状或病症的病理学或症状学的个体的所述疾病、病状或病症(即，逆转病理学和/或症状学)，如降低疾病的严重程度。

组合疗法

一种或多种另外的药剂(例如像化疗剂、消炎剂、类固醇、免疫抑制剂，以及Bcr-Abl、Flt-3、EGFR、HER2、JAK(例如，JAK1或JAK2)、c-MET、VEGFR、PDGFR、cKit、IGF-1R、RAF、FAK、Akt mTOR、PIM和AKT(例如，AKT1、AKT2或AKT3)激酶抑制剂，例如像描述于WO 2006/056399中的那些，或者其他药剂如治疗性抗体)可与本申请的盐或化合物组合使用，用于治疗PI3K相关疾病、病症或病状。可将所述一种或多种另外的药剂同时或顺序施用至患者。

在一些实施方案中，所述另外的药剂是JAK1和/或JAK2抑制剂。在一些实施方案中，本申请提供治疗患者的本文所述的疾病(例如，B细胞恶性肿瘤，如弥漫性B细胞淋巴瘤)的方法，所述方法包括向所述患者施用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐以及JAK1和/或JAK2抑制剂。所述B细胞恶性肿瘤可包括本文所述的以及在2014年4月8日提交的美国序号61/976,815中描述的那些。

在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂是表1的化合物或其药学上可接受的盐。表1中的化合物是选择性JAK1抑制剂(相对于JAK2、JAK3和TYK2具有选择性)。通过测定A的方法在1mM ATP下获得的IC₅₀示于表1中。

表1

+意指≤10nM

++意指≤100nM

+++意指≤300nM

^a对映异构体1的数据

^b对映异构体2的数据

在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂是{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂是{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈己二酸盐。

在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂是4-{3-(氰基甲基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂选自(R)-3-[1-(6-氯吡啶-2-基)吡咯烷-3-基]-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈、(R)-3-(1-[1,3]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-基吡咯烷-3-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈、(R)-4-[(4-{3-氰基-2-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙基}哌嗪-1-基)羰基]-3-氟苯甲腈、(R)-4-[(4-{3-氰基-2-[3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡咯-1-基]丙基}哌嗪-1-基)羰基]-3-氟苯甲腈、或(R)-4-(4-{3-[(二甲基氨基)甲基]-5-氟苯氧基}哌啶-1-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁腈、(S)-3-[1-(6-氯吡啶-2-基)吡咯烷-3-基]-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈、(S)-3-(1-[1,3]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-基吡咯烷-3-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈、(S)-4-[(4-{3-氰基-2-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙基}哌嗪-1-基)羰基]-3-氟苯甲腈、(S)-4-[(4-{3-氰基-2-[3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡咯-1-基]丙基}哌嗪-1-基)羰基]-3-氟苯甲腈、(S)-4-(4-{3-[(二甲基氨基)甲基]-5-氟苯氧基}哌啶-1-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁腈；以及前述任一项的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂选自2010年5月21日提交的美国专利公布号2010/0298334、2010年8月31日提交的美国专利公布号2011/0059951、2011年3月9日提交的美国专利公布号2011/0224190、2011年11月18日提交的美国专利公布号2012/0149681、2011年11月18日提交的美国专利公布号2012/0149682、2012年6月19日提交的美国专利公布2013/0018034、2012年8月17日提交的美国专利公布号2013/0045963以及2013年5月17日提交的美国专利公布号2014/0005166的化合物，其各自以引用的方式整体并入本文。

用于在组合疗法中使用的示例性抗体包括但不限于曲妥珠单抗(例如抗-HER2)、兰尼单抗(例如抗-VEGF-A)、贝伐单抗(Avastin^TM，例如抗-VEGF)、帕尼单抗(例如抗-EGFR)、西妥昔单抗(例如抗-EGFR)、利妥昔单抗(Rituxan^TM，抗-CD20)以及针对c-MET的抗体。

以下药剂中的一种或多种可与本申请的盐或化合物组合使用并且被呈现为非限制性列表：细胞生长抑制剂、顺铂、阿霉素(doxorubicin)、泰索帝(taxotere)、紫杉酚(taxol)、依托泊苷(etoposide)、伊立替康(irinotecan)、开普拓(camptostar)、托泊替康(topotecan)、紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、埃博霉素(epothilones)、他莫昔芬(tamoxifen)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、甲氨喋呤(methoxtrexate)、替莫唑胺(temozolomide)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、SCH 66336、R115777、L778,123、BMS214662、易瑞沙(Iressa)、特罗凯(Tarceva)、EGFR的抗体、Gleevec^TM、内含子(intron)、ara-C、阿德力霉素(adriamycin)、环磷酰胺(cytoxan)、吉西他滨(gemcitabine)、乌拉莫司汀(Uracil mustard)、氮芥(Chlormethine)、异环磷酰胺(Ifosfamide)、美法仑(Melphalan)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、哌泊溴烷(Pipobroman)、三亚乙基蜜胺(Triethylenemelamine)、三亚乙基硫代磷酰胺(Triethylenethiophosphoramine)、白消安(Busulfan)、卡莫司汀(Carmustine)、洛莫司汀(Lomustine)、链脲霉素(Streptozocin)、达卡巴嗪(Dacarbazine)、氟尿苷(Floxuridine)、阿糖胞苷(Cytarabine)、6-巯基嘌呤(6-Mercaptopurine)、6-硫鸟嘌呤(6-Thioguanine)、磷酸氟达拉滨(Fludarabinephosphate)、奥沙利铂(oxaliplatin)、亚叶酸(leucovirin)、ELOXATIN^TM、喷司他丁(Pentostatine)、长春碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春地辛(Vindesine)、博莱霉素(Bleomycin)、放线菌素(Dactinomycin)、道诺霉素(Daunorubicin)、阿霉素(Doxorubicin)、表柔比星(Epirubicin)、伊达比星(Idarubicin)、光辉霉素(Mithramycin)、脱氧柯福霉素(Deoxycoformycin)、丝裂霉素-C(Mitomycin-C)、L-天冬酰胺酶(L-Asparaginase)、替尼泊苷17.α.-炔雌醇(Teniposide17.alpha.-Ethinylestradiol)、己烯雌酚、睾固酮(Testosterone)、泼尼松(Prednisone)、氟羟甲基睪酮(Fluoxymesterone)、丙酸屈他雄酮(Dromostanolone propionate)、睾内酯(Testolactone)、醋酸甲地孕酮(Megestrolacetate)、甲基强的松龙(Methylprednisolone)、甲基睾酮(Methyltestosterone)、泼尼松龙(Prednisolone)、曲安奈德(Triamcinolone)、氯烯雌醚(Chlorotrianisene)、羟孕酮(Hydroxyprogesterone)、氨鲁米特(Aminoglutethimide)、雌莫司汀(Estramustine)、醋酸甲羟孕酮(Medroxyprogesteroneacetate)、亮丙瑞林(Leuprolide)、氟他胺(Flutamide)、托瑞米芬(Toremifene)、戈舍瑞林(goserelin)、顺铂(Cisplatin)、卡铂(Carboplatin)、羟基脲(Hydroxyurea)、安吖啶(Amsacrine)、丙卡巴肼(Procarbazine)、米托坦(Mitotane)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、左旋咪唑(Levamisole)、诺维本(Navelbene)、阿那曲唑(Anastrazole)、来曲唑(Letrazole)、卡培他滨(Capecitabine)、雷洛昔芬(Reloxafine)、德洛昔芬(Droloxafine)、六甲蜜胺(Hexamethylmelamine)、阿瓦斯汀(Avastin)、赫塞汀(herceptin)、百克沙(Bexxar)、万珂(Velcade)、泽娃灵(Zevalin)、三氧化二砷(Trisenox)、希罗达(Xeloda)、长春瑞滨(Vinorelbine)、卟吩姆钠(Porfimer)、爱必妥(Erbitux)、脂质体(Liposomal)、噻替派(Thiotepa)、六甲蜜胺(Altretamine)、美法仑(Melphalan)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、来诺唑(Lerozole)、氟维司群(Fulvestrant)、依西美坦(Exemestane)、氟维司群(Fulvestrant)、异环磷酰胺(Ifosfomide)、利妥昔单抗(Rituximab)、C225(C225)、阿仑单抗(Campath)、氯法拉滨(Clofarabine)、克拉屈滨(cladribine)、阿非迪霉素(aphidicolon)、美罗华(rituxan)、舒尼替尼(sunitinib)、达沙替尼(dasatinib)、替扎他滨(tezacitabine)、Sml1、氟达拉滨(fludarabine)、喷司他丁(pentostatin)、三安平(triapine)、迪多克斯(didox)、崔米多克斯(trimidox)、阿米多克斯(amidox)、3-AP、MDL-101,731、苯达莫司汀(Treanda)、奥法木单抗(ofatumumab)以及GS-1101(亦称CAL-101)。

示例性化疗剂包括蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米)、沙利度胺、来那度胺，以及DNA损伤剂，如美法仑、阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、依托泊苷、卡莫司汀等。

示例性类固醇包括皮质类固醇，如地塞米松或强的松。

示例性Bcr-Abl抑制剂包括公开于美国专利号5,521,184、WO 04/005281和美国序号60/578,491中的类别和种类的化合物及其药学上可接受的盐。

示例性合适的Flt-3抑制剂包括如公开于WO 03/037347、WO 03/099771和WO 04/046120中的化合物及其药学上可接受的盐。

示例性合适的RAF抑制剂包括如公开于WO 00/09495和WO 05/028444中的化合物及其药学上可接受的盐。

示例性合适的FAK抑制剂包括如公开于WO 04/080980、WO 04/056786、WO 03/024967、WO 01/064655、WO 00/053595以及WO 01/014402中的化合物及其药学上可接受的盐。

示例性合适的mTOR抑制剂包括如公开于WO2011/025889中的化合物及其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明的盐和化合物可与一种或多种其他激酶抑制剂(包括伊马替尼)组合使用，特别是用于治疗对伊马替尼或其他激酶抑制剂有抗性的患者。

在一些实施方案中，本发明的盐和化合物可与化疗剂组合用于治疗癌症，如多发性骨髓瘤，并且相较于单独使用化学治疗剂的应答而言可改进治疗应答，而不加剧其毒性作用。例如，用于治疗多发性骨髓瘤的另外的药剂的实例可包括但不限于美法仑、美法仑加强的松[MP]、阿霉素、地塞米松以及万珂(硼替佐米)。用于治疗多发性骨髓瘤的其他另外的药剂包括Bcr-Abl、Flt-3、RAF以及FAK激酶抑制剂。相加效应或协同效应是将本申请的PI3K抑制剂与另外的药剂组合所希望得到的结果。此外，当用本申请的PI3K抑制剂治疗时，多发性骨髓瘤细胞对如地塞米松的药剂的抗性可以是可逆的。可将所述药剂与本发明化合物组合为单一或连续剂型，或者可将所述药剂按分开的剂型同时或顺序施用。

在一些实施方案中，将如地塞米松的皮质类固醇与本发明的盐和化合物组合施用至患者，其中地塞米松是间歇地而非连续地施用。

在一些另外的实施方案中，可将本发明的盐和化合物与其他治疗剂的组合在骨髓移植或干细胞移植之前、期间和/或之后施用至患者。

药物制剂与剂型

当被用作药物时，本发明的化合物和盐可按药物组合物的形式施用。所述组合物可按制药领域中熟知的方式制备，并且可通过多种途径施用，取决于希望局部治疗还是全身性治疗并且取决于有待治疗的部位。施用可以是局部的(包括经皮的、表皮的、眼的和至粘膜，包括鼻内、阴道和直肠递送)、肺部的(例如，通过吸入或吹入粉末或气溶胶，包括通过喷雾器；气管内或鼻内)、经口的或胃肠外的。胃肠外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注；或颅内(例如，鞘内或脑室内)施用。胃肠外施用可处于单次推注剂量的形式，或者可例如通过连续灌注泵。用于局部施用的药物组合物和制剂可包括透皮贴剂、软膏剂、洗剂、乳膏剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体以及粉末。常规的药物载体，水性基质，粉末或油性基质，增稠剂等可以是必要的或希望的。

本发明还包括药物组合物，所述药物组合物包含与一种或多种药学上可接受的载体(赋形剂)组合的本发明的化合物或盐(例如，式I化合物的盐酸盐)作为活性成分。在一些实施方案中，所述组合物适于局部施用。在制备本发明的组合物中，通常将活性成分与赋形剂混合，用赋形剂稀释或封装在这样一种载体之内，所述载体处于例如胶囊、药袋(sachet)、纸或其他容器的形式。当赋形剂充当稀释剂时，它可以是固体的、半固体的或液体的材料，它可作为活性成分的媒介物、载体或介质。因此，所述组合物可处于片剂、丸剂、粉末、锭剂、药袋、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆剂、气溶胶(作为固体或在液体介质中)、包含例如达10重量％的活性化合物的软膏剂、软和硬明胶胶囊剂、栓剂、无菌可注射溶液以及无菌包装粉末的形式。

在制备制剂中，在与其他成分组合之前，可将活性化合物或盐研磨以提供适当的粒径。如果活性化合物或盐是基本上不可溶的，可将它研磨至小于200目的粒径。如果活性化合物或盐是基本上水可溶的，可通过研磨调整粒径，以在制剂中提供基本上均匀的分布，例如约40目。

可使用已知的研磨程序(如湿磨)研磨本发明的化合物和盐，以获得适于片剂形成以及适于其他制剂类型的粒径。可通过本领域中已知的方法制备本发明的盐和化合物的精细分散的(纳米微粒状)制剂，例如参见国际申请号WO2002/000196。

合适的赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄芪胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆以及甲基纤维素。所述制剂可另外包含：润滑剂，如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，如苯甲酸甲酯和丙基羟基苯甲酸酯；甜味剂；以及调味剂。可通过应用本领域中已知的程序配制本发明的组合物，以在施用至患者之后提供活性成分的迅速、持续或延迟释放。

可将组合物配制成单位剂型，每个剂量包含约5mg至约1000mg(1g)，更通常是约100mg至约500mg的活性成分。术语“单位剂型”是指适于作为用于人受试者和其他哺乳动物的单位剂量的物理离散单位，每个单位包含经计算用于产生希望的治疗效果的预定量的活性材料以及合适的药物赋形剂。

在一些实施方案中，本发明的组合物包含约5mg至约50mg的活性成分。本领域的技术人员应理解的是，这包括了含有约5mg至约10mg、约10mg至约15mg、约15mg至约20mg、约20mg至约25mg、约25mg至约30mg、约30mg至约35mg、约35mg至约40mg、约40mg至约45mg或约45mg至约50mg的活性成分的组合物。

在一些实施方案中，本发明的组合物包含约2.5mg、约5mg、约7.5mg、约10mg、约12.5mg、约15mg、约17.5mg、约20mg、约22.5mg或约25mg的活性成分。在一些实施方案中，本发明的组合物包含约5mg的活性成分。在一些实施方案中，本发明的组合物包含约10mg的活性成分。

可在本发明的方法和用途中使用本文所述的化合物和盐的类似剂量。

活性化合物或盐在宽剂量范围上可以是有效的并且通常以药学上有效的量施用。然而应当理解的是，实际施用的化合物或盐的量通常将由医师根据相关情况(包括待治疗的病状，所选择的施用途径，所施用的实际化合物或盐，个体患者的年龄、体重和应答，患者症状的严重性等)来确定。

对于制备固体组合物(如片剂)而言，将主要的活性成分与药物赋形剂混合，以形成包含本申请的化合物或盐的均匀混合物的固体预配制组合物。当提及这些预配制组合物均匀时，活性成分通常被均匀分散到所述组合物各处，以使得可将所述组合物容易地再分成同样有效的单位剂型，如片剂、丸剂和胶囊剂。然后将此固体预制剂再分成上述类型的单位剂型，其包含例如约0.1mg至约1000mg的本申请的活性成分。

本申请的片剂或丸剂可被包衣或者以其他方式混合，以得到提供延长作用优势的剂型。例如，片剂或丸剂可包括内剂量组分和外剂量组分，后者处于前者外的包膜的形式。这两种组分可被肠溶层分开，所述肠溶层用来抵抗胃中的崩解并且允许内组分完整地传递进入十二指肠中或延迟释放。多种材料可用于此类肠溶层或包衣，此类材料包括许多聚合酸以及聚合酸与例如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素等材料的混合物。

本申请的化合物、盐和组合物可掺入其中用于口服或通过注射施用的液体形式包括水溶液、适当调味的糖浆、水性或油悬浮液以及用食用油(如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)调味的乳液，连同酏剂和类似的药物媒介物。

用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液，以及粉末。液体或固体组合物可包含如上文所述的合适的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述组合物通过口或鼻的呼吸途径施用，用于得到局部或全身性作用。可通过使用惰性气体来雾化组合物。雾化溶液可从雾化装置直接呼吸，或者可将所述雾化装置连接于面罩、帷罩，或者连接于间歇性正压呼吸机。溶液、悬浮液或粉末组合物可从以适当方式递送制剂的装置口服或经鼻施用。

局部制剂可包含一种或多种常规载体。在一些实施方案中，软膏剂可包含水和一种或多种疏水载体，所述疏水载体选自例如液体石蜡、聚氧乙烯烷基醚、丙二醇、白凡士林等。乳膏剂的载体组成可基于水与甘油和一种或多种其他组分(例如单硬脂酸甘油酯、PEG-单硬脂酸甘油酯和十六基硬脂醇)组合。可使用异丙醇和水，适当地与其他组分(例如像甘油、羟乙基纤维素等)组合来配制凝胶剂。在一些实施方案中，局部制剂包含至少约0.1、至少约0.25、至少约0.5、至少约1、至少约2或至少约5wt％的本发明的化合物或盐。局部制剂可被适当地封装在例如100g的管中，所述管任选地带有用于治疗所选择的适应症(例如，银屑病或其他皮肤病状)的说明书。

施用至患者的化合物、盐或组合物的量将取决于施用的药物、施用的目的(如预防或治疗)、患者的状态、施用方式等而变化。在治疗性应用中，可按足以治愈或至少部分地抑制疾病的症状及其并发症的量将组合物施用至已经患有所述疾病的患者。有效剂量将取决于正在治疗的疾病病状并且通过主治临床医师的判断取决于以下因素，如疾病的严重性，患者的年龄、体重和一般状况等。

施用至患者的组合物可处于上述药物组合物的形式。这些组合物可通过常规灭菌技术灭菌，或者可以是无菌过滤的。水溶液可被包装以按原样使用，或者被冻干，在施用前将所述冻干制剂与无菌水性载体组合。化合物制剂的pH通常将在3与11之间，更优选5至9，并且最优选7至8。应理解，使用某些前述赋形剂、载体或稳定剂应导致形成药物盐。

本申请的化合物或盐的治疗剂量可根据例如进行治疗的具体用途、化合物或盐的施用方式、患者的健康和状况以及开处方医师的判断而变化。本发明的化合物或盐在药物组合物中的比例或浓度可取决于许多因素(包括剂量、化学特征(例如，疏水性)和给药途径)而变化。例如，本发明的化合物和盐可被提供于用于胃肠外施用的水性生理缓冲溶液中，所述溶液包含约0.1至约10％w/v的所述化合物。一些典型的剂量范围是约1μg/kg体重/天至约1g/kg体重/天。在一些实施方案中，剂量范围是约0.01mg/kg体重/天至约100mg/kg体重/天。剂量可能取决于如疾病或病症的类型和进展程度、具体患者的整体健康状况、所选择的化合物的相对生物功效、赋形剂的配方及其施用途径等变量。可从来源于体外或动物模型测试系统的剂量-反应曲线外推出有效剂量。

本发明的组合物还可包含一种或多种另外的药剂，如化疗剂、类固醇、消炎化合物或免疫抑制剂，本文提供了其实例。

试剂盒

本申请还包括例如在PI3K相关疾病或病症(如癌症)的治疗或预防中有用的药物试剂盒，所述试剂盒包括一个或多个含有药物组合物的容器，所述药物组合物包含治疗有效量的本发明的化合物。如果需要，此类试剂盒还可包括多种常规药物试剂盒组分中的一种或多种，例如像具有一种或多种药学上可接受的载体的容器、另外的容器等，如本领域的技术人员显而易见的。作为插入物或作为标记指示待施用的组分的量的说明书、施用指南和/或混合组分用的指南也可被包括在试剂盒中。

将通过具体实施例更详细地描述本发明。以下实施例是出于说明性目的而提供，并非意图以任何方式限制本发明。本领域的技术人员将容易地识别可被改变或修改以产生基本相同结果的多个非关键参数。根据本文所述的至少一个测定已经发现式I化合物的盐酸盐和式I化合物是PI3K抑制剂。

实施例

将通过具体实施例更详细地描述本发明。以下实施例是出于说明性目的而提供，并非意图以任何方式限制本发明。含有一个或多个手性中心的示例性化合物或其盐以外消旋体形式或作为同分异构混合物获得，除非另外说明。

一般方法

在沃特斯(Waters)质量引导分离系统上进行一些制备的化合物的制备型LC-MS纯化。这些系统的基本设备设置、方案及其操作控制软件已经详细描述于文献中。参见例如“用于制备型LC-MS的柱稀释配置的双泵(Two-Pump At Column Dilution Configurationfor Preparative LC-MS)”,K.Blom,J.Combi.Chem.,4,295(2002)；“OptimizingPreparative LC-MS Configurations and Methods for Parallel SynthesisPurification)”,K.Blom,R.Sparks,J.Doughty,G.Everlof,T.Haque,A.Combs,J.Combi.Chem.,5,670(2003)；以及“Preparative LC-MS Purification:ImprovedCompound Specific Method Optimization)”，K.Blom,B.Glass,R.Sparks,A.Combs,J.Combi.Chem.,6,874-883(2004)。使分离的化合物通常在以下条件下经受分析型液相色谱质谱(LCMS)用于纯度分析：仪器；Agilent 1100系列，LC/MSD，柱：Waters Sunfire^TM C₁₈5μm，2.1x 50mm，缓冲液：流动相A：水中的0.025％ TFA和流动相B：乙腈；梯度以2.0mL/分钟的流速在3分钟内2％至80％的B。

一些制备的化合物还以制备规模通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)(用MS检测器)或快速色谱(硅胶)分离，如在实施例中所指示。典型的制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱条件如下：

pH＝2纯化：Waters Sunfire^TM C₁₈ 5μm，19x 100mm柱，用流动相A：水中的0.1％TFA(三氟乙酸)和流动相B：乙腈洗脱；流速为30mL/分钟，针对每种化合物使用如描述于文献[参见“Preparative LCMS Purification:Improved Compound Specific MethodOptimization”,K.Blom,B.Glass,R.Sparks,A.Combs,J.Comb.Chem.,6,874-883(2004)]中的化合物特异性方法优化方案优化分离梯度。通常，30x 100mm柱使用的流速为60mL/分钟。

pH＝10纯化：Waters XBridge C₁₈ 5μm，19x 100mm柱，用流动相A：水中的0.15％NH₄OH和流动相B：乙腈洗脱；流速为30mL/分钟，针对每种化合物使用如描述于文献[参见“Preparative LCMS Purification:Improved Compound Specific MethodOptimization”,K.Blom,B.Glass,R.Sparks,A.Combs,J.Comb.Chem.,6,874-883(2004)]中的化合物特异性方法优化方案优化分离梯度。通常，30x 100mm柱使用的流速为60mL/分钟。

还经由差示扫描量热法(DSC)分析了一些制备的化合物。典型的DSC仪器条件如下：

TA仪器差示扫描热量法，具有自动进样器的型号Q200：30℃-350℃，以10℃/分钟；T-zero公司铝样品盘和盖；氮气流，以50mL/分钟。

Mettler Toledo差示扫描热量法(DSC)822仪器：40℃-340℃，以10℃/分钟的加热速率。

还经由热重分析(TGA)分析了一些制备的化合物。典型的TGA仪器条件如下：

TA仪器热重分析仪，型号Pyris：温度以10℃/分钟从25℃斜升至300℃；氮吹扫气流，以60mL/分钟；TGA陶质坩埚样品夹持器。

TA仪器Q500：温度以10℃/分钟从20℃斜升至300℃。

还经由X射线粉末衍射(XRPD)分析了一些制备的化合物。典型的XRPD仪器条件如下：

Bruker D2 PHASER X射线粉末衍射仪仪器：X射线辐射波长：CuKAI；x射线功率：30KV，10mA；样品粉末：分散在零背景样品夹持器上；一般测量条件：起始角度-5度，停止角度-60度，取样-0.015度，扫描速度-2度/分钟。

Rigaku分钟iflex粉末衍射仪：Cu，带有Kβ滤波器；一般测量条件：起始角度-3度，停止角度-45度，取样-0.02度，扫描速度-2度/分钟。

实施例1.(R)-4-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-((R)-1-羟基乙基)苯基)吡咯烷-2-酮的合成

步骤1.1-(5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(ii)

在室温下，将4-氯-3-氟苯酚(i，166g，1.11mol)和乙酰氯(107mL，1.50mol)装入5-L烧瓶中。搅拌反应混合物并且变为澄清溶液，同时记录到批料温度降低至6℃。然后将反应混合物加热至60℃，持续2小时。将硝基苯(187.5mL，1.82mol)装入反应混合物中，并且随后冷却至室温。然后将三氯化铝(160g，1.2mmol)分三次添加至混合物中(50g、50g和60g，以5分钟之间隔)。添加完成后，批料温度升高至78℃。然后将反应混合物在100℃-120℃下加热3小时，此时HPLC分析显示反应完成。然后将反应混合物冷却至0℃并且在室温下装入己烷(0.45L)、乙酸乙酯(0.55L)，并且然后缓慢地装入1.0N水性盐酸(1.0L)。添加水性盐酸是放热的并且批料温度从26℃升高至60℃。将所得混合物在室温下搅拌20分钟。将各层分离并且将有机层用1.0N水性盐酸(2x 600mL)和水(400mL)顺序地洗涤。然后将有机层用1.0N氢氧化钠水溶液(2x 1.4L)萃取。将合并的碱性溶液通过添加12N水性盐酸酸化至pH 2，直到不再分离出另外的沉淀。将所得固体通过过滤收集，用水洗涤并且在抽吸下于过滤漏斗中干燥，以得到呈黄色固体的化合物ii(187.4g，89.5％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.44(d,J＝1.4Hz,1H),7.78(d,J＝8.1Hz,1H),6.77(d,J＝10.2Hz,1H),2.61(s,3H)。

步骤2.1-(5-氯-4-氟-2-羟基-3-碘苯基)乙酮(iii)

将1-(5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(ii，100.0g，530.3mmol)溶解于乙酸(302mL)中并且将N-碘代琥珀酰亚胺(179.2g，796.5mmol)添加至溶液中。将反应混合物在约61℃至约71℃下搅拌2小时，此时HPLC分析指示反应完成。然后将反应混合物冷却至室温，添加水(613mL)，并且将所得浆液在室温下搅拌30分钟。将产物通过过滤收集并用水冲洗，以提供棕色固体。在60℃下将湿产物溶解于乙酸(400mL)中。将水(800mL)(经15分钟)添加至溶液中，以沉淀出纯产物。将产物通过过滤收集并用水(100mL)洗涤。将产物在抽吸下于过滤漏斗上干燥18小时，以得到呈棕色固体的化合物iii(164.8g，95.0％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ13.34(s,1H),8.26(d,J＝8.4Hz,1H),2.68(s,3H)。

步骤3.1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮(iv)

在配备有冷凝器和温度计的5-L三颈圆底烧瓶中，将1-(5-氯-4-氟-2-羟基-3-碘苯基)乙酮(iii，280g，840mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(600mL)中。在溶解期间，内部温度从19.3℃降至17.0℃。将碘乙烷(81.2mL，1020mmol)添加至所得混合物中。然后经2分钟将碳酸钾(234g，1690mmol)添加至反应混合物中并且没有观察到批料温度的变化。将反应混合物加热至60℃持续3小时，此时HPLC分析指示反应完成。允许将反应混合物冷却至室温并且将产物通过过滤收集。将固体溶解于DCM(1.0L)、己烷(500ml)和水(2.1L)的混合物中。将双相系统在20℃下搅拌20分钟。将各层分离并且将水层用DCM(1.0L)萃取。将合并的有机层用水(2x 250mL)和盐水(60mL)洗涤。将有机相分离，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并且在真空中浓缩至干，以得到呈黄色固体的化合物iv(292g，94％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.69(d,J＝8.4Hz,1H),3.95(q,J＝7.0Hz,2H),2.62(s,3H),1.49(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₀H₁₀ClFIO₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝342.9。

步骤4.2-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)-2-甲基-1,3-二氧戊环(v)

将甲苯(1.5L)中的1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮(iv，250.0g，693.4mmol)和1,2-乙二醇(58.0mL，1040mmol)的溶液用对甲苯磺酸一水合物(10.6g，55.5mmol)处理。反应烧瓶配有迪安-斯达克(Dean-Stark)分水器并且将混合物在回流下加热7小时。LCMS分析指示反应混合物包含8.3％起始材料和91.7％产物。将反应混合物冷却至106℃，并且经由注射器引入另外量的1,2-乙二醇(11.6mL，208mmol)。然后将反应混合物在回流下再加热8小时。LCMS分析指示反应混合物包含3.6％起始材料和96.4％产物。将反应混合物冷却至106℃，并且经由注射器引入另外的1,2-乙二醇(7.73mL，139mmol)。将反应混合物在回流下再加热15.5小时。LCMS分析指示反应混合物包含2.2％起始材料和97.8％产物。

然后将反应混合物冷却至0℃并且添加水(200ml)和水性饱和NaHCO₃(300ml)，以将混合物调节至pH 9。添加DCM(200ml)并且将批料搅拌10分钟。将各层分离并且将水层用甲苯(300mL)萃取。将合并的有机层用水(200ml)和水性饱和NaHCO₃(200ml)的混合物、水(300ml)、盐水(300ml)顺序地洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并且在真空中浓缩至干，以提供呈浅棕色固体的粗化合物v(268g，100％产率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.59(d,J＝8.6Hz,1H),4.26-3.96(m,4H),3.92-3.72(m,2H),1.74(s,3H),1.50(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₂H₁₄ClFIO₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝387.0。

步骤5.3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯甲醛(vi)

在约0℃至约3℃下，经约1小时向无水四氢呋喃(300mL)中的2-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)-2-甲基-1,3-二氧戊环(v，135.0g，349.2mmol)(通过用5.5％的酮进行的HPLC得到纯度为86.8％)的搅拌溶液中缓慢添加THF(322.3mL，419.0mmol)中的1.3M异丙基氯化镁氯化锂复合物。将反应混合物在约0℃至约5℃下搅拌30分钟，此时LCMS分析指示碘-镁交换反应完成。然后在约0℃至约8℃下，经1小时将N-甲酰基吗啉(71.1mL，700mmol)添加至反应混合物中。将反应混合物在约0℃至约8℃下再搅拌1小时，此时LCMS和HPLC分析显示起始材料被消耗并且观察到显著量的脱碘副产物2-(5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)-2-甲基-1,3-二氧戊环。在0℃下，将反应用水(1.20L)中的柠檬酸(120.8g，628.6mmol)的水溶液淬灭。然后将淬灭的反应混合物用EtOAc(2x 600mL)萃取。将各相容易地分离。将合并的有机层用水(300ml)和盐水(500mL)顺序地洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将残余物通过快速柱色谱在硅胶上用0％-10％ EtOAc/己烷纯化，以得到呈淡黄色固体的粗产物化合物vi，其是所需产物3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯甲醛(vi，80g，80％)的混合物，含有36mol％的脱碘副产物2-(5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)-2-甲基-1,3-二氧戊环，如通过NMR分析所指示。将粗产物化合物vi通过形成相应的亚硫酸氢钠加合物进一步纯化。

将亚硫酸氢钠(36.91g，354.7mmol)溶解于水(74.3mL，4121mmol)中。向乙酸乙酯(256.0mL)中的粗3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯甲醛(vi，80.00g，177.3mmol)的搅拌溶液中一次性添加新鲜制备的亚硫酸氢钠溶液。将溶液搅拌约10分钟并且观察到沉淀。然后将浆液再搅拌1小时。将醛-亚硫酸氢盐加合物通过过滤收集，用EtOAc洗涤并且在真空和氮气氛下干燥20小时，以得到白色固体(58.2g，83.6％产率)。向混合于1.0M水性氢氧化钠(296mL，296mmol)中的醛-亚硫酸氢盐加合物(58.2g，148mmol)中添加甲基叔丁基醚(600mL)(MTBE)。将反应混合物在室温下搅拌6分钟，以得到澄清的双相混合物并且再继续搅拌5分钟。将有机相收集并且将水层用MTBE(2x 300mL)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并且在真空中浓缩，以得到呈白色结晶固体的纯化合物vi(31.4g，73.4％产率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.27(s,1H),7.78(d,J＝8.5Hz,1H),4.10-3.96(m,4H),3.87-3.76(m,2H),1.72(s,3H),1.44(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₃H₁₅ClFO₄的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝289.0。

步骤6.(E)-2-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(2-硝基乙烯基)苯基)-2-甲基-1,3-二氧戊环(vii)

向配备有顶置式搅拌器、隔片、热电偶、氮进口和冷凝器的5-L4颈圆底烧瓶中装入3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯甲醛(vi，566.2g，1961mmol)、硝基甲烷(1060mL，19600mmol)和冰乙酸(1120mL)。接下来，将苄胺(53.6mL，490mmol)装入反应混合物中并且将所得混合物加热至60℃并且通过LCMS将反应监测5.5小时。在t＝0时进行初始基线分析。2小时和5小时之后检查反应。2小时之后，存在约20％的起始材料醛未反应。5小时之后，反应概况如下：起始材料化合物vi(<2％)、中间体亚胺(<4％)、产物化合物vii(>93％)以及苄胺Michael加合物(未检测到)。在5.5小时的反应时间时，反应被认为完成。将反应混合物冷却至室温并用乙酸乙酯(3.0L)稀释。将混合物分成两半用于处理，因为涉及的体积较大。

根据以下程序处理每一半：将反应混合物首先用水中的1.5MNaCl洗涤(2x1500mL；每次洗涤之后，与输入相比，水性体积输出增加，从而表明乙酸和/或硝基甲烷正在被去除)。然后将混合物冷却至约15℃并用4M NaOH水溶液(4x 300mL)洗涤，直到水性萃取物达到pH 8-9。在初始洗涤期间，水层仍是酸性的，但是在后续洗涤期间当水层变成弱碱性时，将混合物加热并且萃取物是深色的。将各层分离。pH调节之后，然后将有机层用水(1000mL)中的1.5M氯化钠和水(500mL)洗涤。在所述最终洗涤期间观察到乳化和缓慢分配。将有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得琥珀色浆料在高真空下放置过夜。浆料凝固并且获得740g的粗产物。

将庚烷(1.3L)添加至粗产物中，从而形成浆液，将其在60℃水浴中加热，直到所有固体都溶解。将所得溶液精滤进配备有顶置式搅拌器和氮进口的干净的3-L 4颈圆底烧瓶中。将过滤器用庚烷(40mL)冲洗。将经过滤溶液冷却至室温并搅拌5小时。观察到固体沉淀并且将浆液在冰浴中冷却至0℃持续1小时。将产物通过过滤收集并且将所得湿饼用500mL的冰冷庚烷洗涤。将产物在真空抽吸下在过滤器上部分地干燥并且进一步在高真空下干燥过夜。将滤液和洗涤溶液在减压下浓缩并且将所得残余物保存用于柱纯化。

将来自庚烷结晶的固体溶解于小体积的DCM和20％ EtOAc/己烷中并且负载到包含约1kg硅胶的柱上。将柱用20％ EtOAc/己烷洗脱。将所需级分合并并在减压下浓缩，以得到黄色固体。将固体在高真空下干燥过夜，以得到497g呈淡黄色结晶固体的产物化合物vii。

将浓缩的滤液和来自庚烷结晶的洗涤物负载到使用20％ EtOAc/己烷的与上面相同的柱上。将柱使用与上面相同的溶剂洗脱，以除去基线杂质和残留的乙酸。将所需级分合并并在减压下浓缩，以得到微红的琥珀色油状物。将油状物在高真空下放置并且获得约220g的粗产物。将此粗产物溶解于庚烷(500mL)中并且用少量的第一批固体产物接种。将浆液在室温下搅拌16小时且然后在冰浴中冷却3小时。将第二批产物通过过滤收集。将产物在高真空下干燥并且获得110g呈黄色固体的产物。获得的产物化合物vii的总量为607g(93.3％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.94(s,2H),7.68(d,J＝8.9Hz,1H),4.07-3.95(m,4H),3.82-3.73(m,2H),1.65(s,3H),1.39(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₄H₁₆ClFNO₅的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝332.0。

步骤7.(R)-二甲基-2-(1-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基)-2-硝基乙基)丙二酸酯(viii)

向包含(E)-2-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(2-硝基乙烯基)苯基)-2-甲基-1,3-二氧戊环(vii，352.8g，1064mmol)的带有磁力搅拌棒和氮进口的2-L圆底烧瓶中添加无水四氢呋喃(1.06L)和丙二酸二甲酯(146mL，1280mmol)。将(1S,2S)-N,N'-二苄基环己烷-1,2-二胺-二溴镍(埃文斯催化剂，21.4g，26.6mmol)装入反应混合物中。反应混合物的颜色为棕色并且观察到均匀溶液。将反应混合物在室温下搅拌18.5小时。18.5小时之后通过HPLC分析反应。未反应的起始材料化合物vii以2％存在。将反应混合物在减压下浓缩以除去THF并且将所得残余物通过快速色谱纯化(DCM/己烷用于负载，将1422g的硅胶用于此柱，并且将柱用10％至20％ EtOAc/己烷洗脱；使用30％ EtOAc/己烷作为洗脱液通过TLC监测柱级分并且通过UV视觉化)。将所需级分合并并在减压下浓缩。将残余物在高真空下干燥。随时间推移，浆料凝固成浅黄色固体(503.3g)并且取样用于手性HPLC分析。所需的(R)-对映异构体的手性纯度为95.7％并且不合乎需要的(S)-对映异构体的手性纯度为4.3％。将乙醇(1.0L)添加至固体中并且将混合物在60℃水浴中加热，直到固体溶解。将溶液通过#1瓦特曼(Whatman)滤纸精滤到干净的3-L 4颈圆底烧瓶中。将经过滤的溶液在搅拌的同时冷却至室温。搅拌30分钟之后观察到结晶并且将浆液在室温下搅拌16小时。将浆液在冰浴中冷却1小时。将产物通过过滤收集并且将所得滤饼用冰冷乙醇(500mL)洗涤并且在过滤器上部分地干燥。将固体在高真空下干燥，以得到呈白色结晶固体的所需产物viii(377.5g)。通过手性HPLC确定所需(R)-对映异构体的手性纯度为100％并且不合乎需要的(S)-对映异构体的手性纯度为0％。

将滤液和洗涤物合并并在减压下浓缩成油状物(118.9g)。将油状物溶解于乙醇(475.0mL)(4mL/g)中并且用第一批晶体接种。将所得的浆液在室温下搅拌16小时并且然后在冰浴中冷却5.5小时。将第二批产物通过过滤分离并且在过滤器上部分地干燥。将它在高真空下干燥，以得到第二批产物(31.0g)。通过手性HPLC确定所需(R)-镜像异构体的手性纯度为98.3％并且不合乎需要的(S)-对映异构体的手性纯度为1.7％。第一批和第二批产物的合并产率为408.5g，82.8％产率。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ7.51(d,J＝9.0Hz,1H),5.20-4.81(m,2H),4.62(m,1H),4.14-4.03(m,2H),4.03-3.97(m,2H),3.95-3.88(m,1H),3.84-3.72(m,2H),3.70(s,3H),3.38(s,3H),1.61(s,3H),1.39(t,J＝6.9Hz,3H)。C₁₉H₂₄ClFO₉的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝463.9。

步骤8.(R)-2-(1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-硝基乙基)丙二酸二甲酯(ix)

在室温下，向配备有机械搅拌器的三颈5-L圆底烧瓶中的丙酮(1.2L)中的(R)-二甲基-2-(1-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基)-2-硝基乙基)丙二酸酯(viii，244.0g，526.0mmol)的搅拌溶液中添加碘(13.4g，52.6mmol)。将所得棕色溶液在50℃下于水浴中加热30分钟，此时LCMS分析显示反应完成。将反应混合物冷却至室温，并且然后用水(160mL)中的硫代硫酸钠(17.0g，108mmol)的溶液淬灭，以得到淡黄色澄清溶液。此时，将另外量的水(1.2L)装入淬灭的溶液中并且将所得白色浆液在室温下搅拌1小时。然后将固体通过过滤收集并且在40℃下重新溶解于丙酮(1.4L)中。将溶液冷却至室温，并且然后添加另外的水(1.4L)。将所得白色浆液在室温下搅拌1小时。将固体通过过滤收集并用水(3x 100ml)洗涤。将固体产物在抽吸下在过滤漏斗中用氮流干燥46小时，以得到呈白色固体的化合物ix(212g，96％产率)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.54(d,J＝8.6Hz,1H),5.09-4.67(m,3H),4.10-3.83(m,3H),3.90(s,3H),3.57(s,3H),2.57(s,3H),1.46(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₇H₂₀ClFNO₈的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝420.1。

步骤9.2-((R)-1-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-((R)-1-羟基乙基)苯基)-2-硝基乙基)丙二酸二甲酯(x)

在室温下，向5L圆底烧瓶中的无水THF(100mL)中的(3aS)-1-甲基-3,3-二苯基四氢-3H-吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧氮杂硼杂环戊二烯((S)-MeCBS，16.39g，59.12mmol，0.1当量)的搅拌溶液中添加THF中的1.0M硼烷-THF复合物的溶液(591mL，591mmol，1当量)，随后添加三氟化硼醚化物(3.75mL，29.6mmol，0.05当量)。将所得溶液在室温下搅拌30分钟。然后经60分钟经由加料漏斗滴加无水THF(1.7L)中的[(1R)-1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-硝基乙基]丙二酸二甲酯(ix，253.0g，591.2mmol)的溶液。将包含酮ix的烧瓶用无水THF(135mL)冲洗并且经由加料漏斗将溶液滴加至反应混合物中。将所得溶液在室温下再搅拌10分钟，此时LCMS分析显示酮完全转化为醇。将反应在0℃下通过滴加甲醇(71.8mL，1770mmol)淬灭。将淬灭的反应混合物在室温下搅拌15分钟，之后将它在真空中浓缩，以得到粗产物。将此批和类似批次(使用200g的起始材料)的粗产物合并并且通过硅胶柱色谱使用0％至5％ MeOH/DCM作为洗脱液纯化，以得到呈白色固体的化合物x(437g，97.9％产率)。¹HNMR(300MHz,CDCl₃)δ7.50(d,J＝8.8Hz,1H),5.13(q,J＝6.3Hz,1H),5.01-4.65(m,3H),4.14-3.89(m,3H),3.79(s,3H),3.57(s,3H),1.57-1.42(m,6H)。C₁₇H₂₁ClFNNaO₈的LCMS：(M+Na)⁺:m/z＝444.0。

步骤10.(4R)-4-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-((R)-1-羟基乙基)苯基)-2-氧代吡咯烷-3-甲酸甲酯(xi)

含有四氢呋喃(800.0mL)中的((1R)-1-{3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-[(1R)-1-羟基乙基]苯基}-2-硝基乙基)丙二酸二甲酯(x，100.0g，237.1mmol)和雷尼镍(通过移液管除水之后是120g)的3颈莫顿(Morton)圆底烧瓶配有冷凝器、机械搅拌器(玻璃搅拌棒和聚四氟乙烯支座)和两个氢气气囊(真空吹扫之后)。将烧瓶在65℃下放置于油浴中。将批料剧烈搅拌16小时并且将气囊定期排放并且用氢回填。取样并且通过HPLC分析。产物化合物xi以83％存在。在反应混合物中有7.8％未环化的胺和5.5％羟胺副产物。将催化剂滤出(必须注意不允许雷尼镍变干而暴露于空气中)。将滤液蒸发至干燥，以得到91g呈白色泡沫的粗产物。将粗产物(91g，82.6％面积纯度)与类似批次的粗产物(93g，72.8％纯度)合并用于纯化。将合并的粗产物(184g)通过柱色谱在硅胶上纯化(EtOAc/己烷作为洗脱液)，以得到化合物xi(101.1g，93％ HPLC纯度，59.3％粗产率)。将粗材料不经进一步纯化而用于下一步骤。C₁₆H₂₀ClFNO₅的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝360.0。

步骤11.(4R)-4-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-((R)-1-羟基乙基)苯基)-2-氧代吡咯烷-3-甲酸(xii)

向配备有顶置式搅拌器和氮进口的5L 4颈圆底烧瓶中装入四氢呋喃(2150mL，26500mmol)中的(4R)-甲基4-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-((R)-1-羟基乙基)苯基)-2-氧代吡咯烷-3-甲酸酯(xi，268g，581mmol)的溶液。向溶液中装入水中的1.0M氢氧化钠(1420mL，1420mmol)。所得浑浊溶液在1分钟内变澄清。将反应混合物在室温下搅拌过夜。15小时之后通过LCMS分析反应并且当观察不到起始材料时，反应完成。将反应混合物在冰浴中冷却至9.5℃的内部温度并且通过在30分钟内经由滴液漏斗添加6.0M水性盐酸(237.0mL，1422mmol)而将混合物酸化至pH 1-2。将反应混合物分成两半并且将每一半用乙酸乙酯(2x1L)萃取。将合并的水层用乙酸乙酯(500mL)进一步萃取。将两个有机层用盐水(20％w/wNaCl/水，2x 1000mL)洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤，并且浓缩，以得到呈淡黄色泡沫的粗中间体酸xii，将其直接用于下一反应。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.68(br s,1H),8.26(s,1H),7.52(d,J＝8.0Hz,1H),5.27(br s,1H),4.90(q,J＝6.3Hz,1H),4.28(q,J＝8.8Hz,1H),3.92-3.81(m,1H),3.76-3.65(m,1H),3.57(t,J＝9.6Hz,1H),3.46(d,J＝9.4Hz,1H),3.23(q,J＝9.5Hz,1H),1.33(t,J＝6.9Hz,3H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H)。C₁₅H₁₇ClFNNaO₅的LCMS：(M+Na)⁺:m/z＝368.0.

步骤12.(R)-4-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-((R)-1-羟基乙基)苯基)吡咯烷-2-酮(xiii)

将粗化合物xii溶解于1,4-二噁烷(976mL)和甲苯(976mL)中并且将所得黄色溶液在100℃下加热。随着反应进行，溶液的颜色变为棕色。在1小时、2小时和2.5小时时间点采样。在2.5小时时，HPLC分析显示酸化合物12为0.38％并且所需产物化合物xiii为78.8％。将反应混合物冷却至室温并且精滤至干净的3-L圆底烧瓶中。然后将溶液在减压下浓缩并且将所得残余物放置在高真空下，以得到棕色泡沫(254g)。

将乙腈(350mL)装入棕色浆料中并且在65℃水浴中加热，直到观察到溶解。将溶液冷却至室温并搅拌16小时。将固体分离出溶液。将所得浆液在冰浴中冷却1小时。将产物通过过滤收集并且将滤饼用400mL的冰冷乙腈冲洗。固体似乎是吸湿的。将固体溶解于DCM(2.0L)中并且浓缩成浆料，将其放置在高真空下，以产生呈白色泡沫的化合物xiii(106.4g)。

将滤液浓缩成深色浆料(约120g)，将其通过快速色谱纯化(4x330g硅胶柱，负载有DCM，用50％至100％ EtOAc/己烷洗脱，并且通过TLC监测，使用100％ EtOAc作为洗脱液)。将来自色谱的级分在减压下浓缩并且放置在高真空下，以产生浅棕色泡沫(54.4g)。将泡沫装入MTBE(400mL)和MeOH(10mL)中并在56℃水浴中加热15分钟并且剩余一些固体。将浆液伴随搅拌冷却至室温。将浆液过滤，以除去不溶性物质。将滤液浓缩成浆料并且放置在高真空下，以产生泡沫。将泡沫装入乙腈(72mL，1.5mL/g)中并在60℃水浴中加热，直到溶液变得均匀。将溶液伴随搅拌冷却至室温并且将固体沉淀出溶液并且溶液变得非常浓。装入另外的乙腈(24mL)，以将稀释度调节至2mL/g。将浆液在室温下搅拌16小时并且然后在冰浴中冷却1小时。将产物通过过滤收集并用乙腈冲洗。获得作为第二批的化合物xiii(25g)。以74.9％产率从化合物xi获得总计131.4g的化合物xiii。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.83(s,1H),7.47(d,J＝8.7Hz,1H),5.24(d,J＝4.5Hz,1H),4.96-4.85(m,1H),4.08-3.92(m,1H),3.80(qt,J＝6.9,3.5Hz,2H),3.61-3.51(m,1H),3.25(t,J＝9.1Hz,1H),2.61-2.50(m,1H),2.35-2.26(m,1H),1.33(t,J＝7.0Hz,3H),1.27(d,J＝6.4Hz,3H)。C₁₄H₁₈ClFNO₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝302.0。

实施例2.(R)-4-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-((R)-1-羟基乙基)苯基)吡咯烷-2-酮的替代合成

步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙酮(iv-a)

将1-(5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(来自实施例1、步骤1的化合物ii，1350g，7160mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(3.32L)、碘乙烷(1340g，8590mmol)和碳酸钾(1980g，14300mmol)混合在一起并且在室温下搅拌45分钟。批料温度从22℃升至55℃。将反应混合物加热至60℃持续1小时(批料温度在30分钟内达到67℃并且然后降至60℃)。HPLC分析指示所有起始材料都被消耗。一次性添加水(10L)(如果分部分地添加水，则搅拌将停止)。将所得浆液在室温下搅拌30分钟。将产物通过过滤收集并用水(3L)冲洗。将产物在真空下在过滤器上干燥5天，以得到呈褐色固体的化合物iv-a(1418g)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.69(d,J＝8.9Hz,1H),7.30(d,J＝11.6Hz,1H),4.15(q,J＝7.0Hz,2H),2.51(s,3H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。

步骤2.2-(5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)-2-甲基-1,3-二氧戊环(v-a)

将1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙酮(iv-a，1481.0g，6836.3mmo)的溶液溶解于甲苯(6L)中。将1,2-乙二醇(953mL，17100mmol)和对甲苯磺酸一水合物(104g，547mmol)添加至溶液中。将反应混合物在104℃-110℃下加热至回流，并且使用迪安-斯达克分水器除水，持续17.4小时。HPLC分析指示37％的起始材料仍未反应。将约600mL的馏出物除去并且将反应混合物在回流下再加热5小时(总共22小时)。HPLC分析指示没有进一步反应。

据推测起始材料化合物iv-a中的残留K₂CO₃可使反应停止。因此，将反应混合物冷却至室温并用1N水性盐酸(3x 6.66L)洗涤。水性酸洗涤之后，将有机层转移回反应容器中。添加1,2-乙二醇(381mL，6840mmol)和对甲苯磺酸一水合物(104g，547mmol)并且将反应混合物在回流下加热16小时。HPLC分析指示约20％的起始材料仍未反应。将约100mL的馏出物除去。添加1,2-乙二醇(380mL，6800mmol)并回流6小时(总共22小时)。HPLC指示7％的起始材料仍未反应。将约125mL的馏出物除去。将反应混合物加热至回流持续6小时(总共28小时)。HPLC指示5.4％的起始材料仍未反应。将约125mL的馏出物除去。将反应混合物加热至回流，再持续7小时。HPLC分析指示3.5％的起始材料仍未反应。将约80mL的馏出物除去。在此时反应被认为完成。

将反应混合物用1N氢氧化钠水溶液(2x 5.5L)洗涤。将第一次碱性洗涤物用甲苯(2.1L)萃取。将合并的甲苯溶液用水(7L)洗涤并浓缩，以得到2153g的深色油状物。HPLC分析指示产物纯度为93.8％，并且起始材料为1.90％且脱碘产物为0.79％。¹H NMR分析指示产物中仍有约0.5当量的甲苯(约256g)。化合物v-a的校正产率为88.0％。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.51(d,J＝8.8Hz,1H),6.70(d,J＝11.0Hz,1H),4.17-3.92(m,4H),3.91-3.80(m,2H),1.75(s,3H),1.46(t,J＝7.0Hz,3H)。

步骤3.3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯甲醛(vi)

向配备有顶置式搅拌器、500mL加料漏斗、氮进口、隔片和热电偶的烘干的3-L 4颈圆底烧瓶中装入N,N-二异丙基胺(87.8mL，626mmol)和无水四氢呋喃(1090mL，13500mmol)。将此溶液冷却至-72℃并且装入己烷(261mL，652mmol)中的2.5M正丁基锂。经18分钟添加正丁基锂溶液。在添加期间最大内部温度为-65℃。将干冰-丙酮浴替换为冰-水浴并且将反应混合物温至约-5℃至约0℃并且保持15分钟。然后将反应混合物冷却至-74.5℃。

向包含2-(5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)-2-甲基-1,3-二氧戊环(v-a，136.1g，522.1mmol)的单独1-L圆底烧瓶中添加无水四氢呋喃(456mL)，以溶解固体。将所得溶液在冰浴中冷却至约0℃。经40分钟经由套管将含有化合物v-a的溶液转移到LDA溶液中，同时将反应温度维持在-70℃与-72.5℃之间。反应混合物变为黄色浆液并在-74℃下搅拌37分钟。经由注射器一次性装入N,N-二甲基甲酰胺(60.6mL，783mmol)并且此次添加产生放热，从-74.5℃至-66.5℃。添加之后，在90分钟时，通过HPLC监测反应。起始材料以2.9％存在。将冷却浴移除并且将反应混合物在环境温度下加温。3小时之后，对反应混合物取样并分析，并且未反应的起始材料以1.5％存在。反应被认为完成并且通过将反应溶液添加至冰水(1.4L)中而淬灭并且用乙酸乙酯(1.5L)稀释。将水层用乙酸乙酯(1.5L)萃取并且将有机层合并并用盐水(20％w/w水性NaCl，2x 600mL)洗涤并且经无水MgSO₄干燥。将MgSO₄通过过滤除去并且将滤液浓缩成油状物，同时存在一些固体。将此残余物溶解于亚甲基氯中并负载到硅胶垫(586g)上。将硅胶垫用2％ EtOAc/DCM洗脱(通过TLC监测，使用100％ DCM作为洗脱液)。将所需级分收集并在减压下浓缩，以得到浅琥珀色油状物。将油状物放置在高真空下，以得到呈黄色固体的化合物vi(146.5g，95.1％产率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.27(s,1H),7.78(d,J＝8.5Hz,1H),4.10-3.96(m,4H),3.87-3.76(m,2H),1.72(s,3H),1.44(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₃H₁₅ClFO₄的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝289.1。

步骤4-10.(R)-4-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-((R)-1-羟基乙基)苯基)吡咯烷-2-酮(xiii)

使用类似于实施例1，步骤6-12中描述的程序制备标题化合物。

实施例3.(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐

步骤1.甲烷磺酸(R)-1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-((R)-5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)乙酯(xiv)

将(R)-4-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-((R)-1-羟基乙基)苯基)吡咯烷-2-酮(xiii，172.0g，570.0mmol)(由以下组成：147g，99.83％：0.09％手性纯度、99.33％化学纯度；和25g，87.46％：12.54％手性纯度、86.74％化学纯度)溶解于亚甲基氯(860mL)中。在约-7℃至约2℃下将N,N-二异丙基乙胺(149mL，855mmol)添加至溶液中。在25分钟内将甲磺酰氯(57.4mL，741mmol)滴加至反应混合物中。悬浮液变成澄清溶液。在30分钟反应时间点时，HPLC指示反应完成。将含有化合物xiv的此反应混合物直接用于下一反应。

步骤2.(R)-4-(3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-((S)-1-肼基乙基)苯基)吡咯烷-2-酮(xv)

在0℃下，将肼(178.9mL，5.7mol)一次性添加至来自步骤1的包含化合物xiv的反应混合物中，随后添加N-甲基吡咯烷酮(860mL)。反应混合物变浑浊并且形成一些沉淀。将混合物在氮下加热至40℃-57℃持续90分钟。HPLC指示所有甲磺酸盐都已经被消耗。

将反应混合物冷却至室温并且添加水(300mL)中的碳酸氢钠(28.3g)的饱和溶液。将混合物搅拌20分钟，此时添加二氯甲烷(300mL)。将有机层分离并且与水(150mL)中的碳酸氢钠(14.2g)的溶液一起搅拌。将水层用二氯甲烷(200mL x2)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，经无水Na₂SO₄(311g)干燥，浓缩，并且与甲苯(250mL)共沸，以得到含有化合物xv的无色N-甲基吡咯烷酮溶液，将其直接用于下一反应。纯化样品，用于NMR分析。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆),δ7.88(s,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),4.42(q,J＝6.7Hz,1H),4.06-3.88(m,2H),3.79-3.66(m,1H),3.65-3.51(m,1H),3.24(t,J＝8.8Hz,1H),2.60-2.46(m,1H),2.36-2.25(m,1H),1.37(t,J＝6.9Hz,3H),1.26(d,J＝6.8Hz,3H)。C₁₄H₁₉ClFN₃O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝316.1。

步骤3.5-氨基-1-((S)-1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-((R)-5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-甲腈(xvi)

伴随搅拌，将(1-乙氧基亚乙基)丙二腈(101g，741mmol)分部分地添加至来自步骤2的化合物xv的N-甲基吡咯烷酮溶液中并且将混合物在氮下在室温下搅拌。15分钟之后，HPLC分析指示相对于产物化合物xvi，有11％的起始材料肼，化合物xv。添加N,N-二异丙基乙胺(15mL，86mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌15小时。HPLC分析指示仍有5.6％的起始材料。添加N,N-二异丙基乙胺(5mL，30mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌5小时。HPLC指示仍有5.6％起始材料。将反应混合物搅拌2.5天并且与两个类似的批次合并并且一起处理。

将三批化合物xvi的反应混合物合并。在10℃-20℃下添加0.5M氢氧化钠水溶液(3.8L)并搅拌5分钟。HPLC指示所有起始材料(1-乙氧基亚乙基)丙二腈被消耗。添加乙酸乙酯(4.0L)并且将混合物搅拌15分钟。将各层分离。将有机层用水(2.38L)中的0.5M氢氧化钠洗涤。将各层分离。将合并的水层用乙酸乙酯(2x 2L)萃取。将合并的有机层用1.0M水性盐酸(3.56L)洗涤并且所得水层的pH为2-3。将有机层用盐水(5L)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，浓缩，并且在高真空下干燥40小时，以得到呈浅棕色泡沫状固体的化合物xvi(702.7g)。¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ7.78(s,1H),7.44(d,J＝8.4Hz,1H),6.53(s,2H),5.64(q,J＝6.7Hz,1H),3.96(m,1H),3.74(m,1H),3.34(m,1H),3.58(m,2H),2.59-2.50(m,1H),2.29(m,1H),2.04(s,3H),1.57(d,J＝6.8Hz,3H),1.37(t,J＝6.9Hz,3H)。C₁₉H₂₂ClFN₅O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝406.1。

经计算，从总输入化合物xiii，化合物xvi三个步骤(甲磺酰化、肼解和吡唑形成)的总产率为72.8％。通过HPLC确定纯度是约80％。HPLC分析指示在碱性水层中存在一些产物，随后将水层用EtOAc(2L)萃取，用1.0M水性盐酸和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，并且在高真空泵上干燥40小时，以提供呈棕色油状物的化合物xvi(134g，13.9％)。

步骤4.(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮(xvii)

将5-氨基-1-((S)-1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-((R)-5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-甲腈(xvi，702.7g，1731mmol)与乙酸甲脒(1802g，17.31mol)和1,2-乙二醇(3.51L)一起添加至反应容器中。伴随搅拌将反应混合物在102℃-103℃下加热18小时。将反应混合物冷却至室温并且添加乙酸乙酯(7L)和水(6L)并且将双相混合物搅拌15分钟。将有机层分离并且将水层用另外的水(4.5L)和乙酸乙酯(3L)稀释并搅拌10分钟。将有机层分离。将水层用乙酸乙酯(2L)进一步萃取。将有机层合并并且与水(4.5L)一起搅拌。将水层分离并且将有机层通过硅藻土垫(约1kg)过滤。通过将混合物搅拌10分钟将有机层用1.0M水性盐酸(7L)萃取。将水层分离。将澄清的棕色有机层与另外的1.0M水性盐酸(3L)一起搅拌10分钟。将水层分离。将水性酸层合并并用甲苯(500mL)洗涤。将水性酸溶液用冰-水浴冷却并且添加亚甲基氯(4L)。在5℃-15℃下，缓慢添加水(530mL)中的氢氧化钠(530g)的溶液(50％ NaOH溶液)，直到溶液的pH为11-12。观察到固体沉淀。添加另外的亚甲基氯(3.5L)和甲醇(300mL)并且将混合物搅拌10-15分钟。将固体产物通过过滤收集并且在抽吸下在过滤器上干燥16小时，以得到呈棕色固体的化合物xvii(289.7g)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.82(s,1H),7.52(d,J＝8.5Hz,1H),7.30(br s,2H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),3.97(p,J＝9.2Hz,1H),3.90-3.73(m,2H),3.57(t,J＝9.9Hz,1H),3.25(dd,J＝9.2,8.7Hz,1H),2.48(s,3H),2.60-2.50(m,1H),2.36-2.20(m,1H),1.69(d,J＝7.1Hz,3H),1.39(t,J＝6.9Hz,3H)。C₂₀H₂₃ClFN₆O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝433.3。

将滤液转移到分液漏斗中并且将有机层分离。将水层与亚甲基氯(5L)和甲醇(200mL)一起搅拌。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，浓缩，在高真空泵上干燥16小时，以得到呈棕色固体的另外的量259.3g。xvii的总产率为548.3g，73.2％产率。

步骤5.(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(xviii)

在室温下，将1.0M水性盐酸(HCl，5.0L，5.0mol)溶液添加至(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮(xvii，609.8g，1.409mol)中。然后将所得浓浆液加热至50℃，以提供澄清溶液。在50℃下将另外1.82L的1.0M水性盐酸溶液(HCl，1.82L，1.82mol；总共6.82L，6.82mol，4.84当量)添加至澄清溶液中并且然后在大约50℃下将溶液通过精过滤器过滤。将精滤的反应混合物经2小时逐渐冷却至室温，之后将它进一步冷却至0℃-5℃。将反应混合物在0℃-5℃下搅拌至少20分钟，以启动沉淀。将所得固体通过过滤收集，用一部分冷母液冲洗，随后用1.0M水性盐酸(HCl，200mL)冲洗，并且在抽吸下在室温下在过滤漏斗上干燥至恒重(在约39小时内)，以提供呈白色结晶粉末的式I化合物的盐酸盐：(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(xviii，348.7g，理论值661.2g，52.7％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.39(br s,1H),9.05(br s,1H),8.50(s,1H),7.84(s,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),6.28(q,J＝6.9Hz,1H),3.95(m,1H),3.79(m,2H),3.55(m,1H),3.22(m,1H),2.59(s,3H),2.55(ddd,J＝16.8,10.3,2.3Hz,1H),2.28(ddd,J＝16.8,8.6,1.5Hz,1H),1.73(d,J＝7.0Hz,3H),1.38(t,J＝6.9Hz,3H)ppm。¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ175.3,156.4(J_CF＝249.8Hz),153.8(J_CF＝7.0Hz),152.4,150.8,147.3,144.3,131.4(J_CF＝3.5Hz),127.3,126.4(J_CF＝12.6Hz),116.1(J_CF＝18.4Hz),98.0,72.1,49.1,46.6,36.0,29.4,21.0,15.4,14.6ppm。¹⁹F NMR(376MHz,DMSO-d₆)δ–113.6(d,J_FH＝7.7Hz)ppm。C₂₀H₂₃Cl₂FN₆O₂(MW469.34)；LCMS(EI)m/e433.2(M⁺+H；xvii的准确质量：432.15)。通过KF确定水含量：3.63重量％；通过滴定法确定氯化物(Cl^-)含量：7.56重量％(按理论计7.56％)。

使用10℃/分钟的加热速率，通过DSC确定(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐结晶形式的熔点/分解范围为从30℃的初始温度至350℃的最终温度。DSC热谱图揭示了一个吸热事件，开始于194.37℃并且峰处于206.55℃，如图1所示。

TGA热谱图显示高达210℃时4.3％的总重损失。高于210℃，盐开始分解，如图2所示。

代表性X射线粉末衍射(XRPD)图谱示于图3中并且表2示出了相应的峰和强度。

表2.

实施例4.(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐的替代合成

步骤1.(R)-4-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮(xix)

将(4R)-4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟基乙基)苯基]吡咯烷-2-酮(作为在吡咯烷酮处具有R-构型并且在二级醇处具有R-或S-构型的两种非镜像异构体的混合物)(xiii，16.7g，55.3mmol)溶解于二氯甲烷(167mL)中。将溶液在冰-水浴中冷却并且小部分地添加戴斯-马丁高碘烷(35.2g，83.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，此时HPLC分析显示反应完成。将水(70mL)中的亚硫酸钠(28g，220mmol)的溶液添加至反应混合物中并且将混合物搅拌20分钟。将1.0M氢氧化钠溶液添加至混合物中并搅拌10分钟。允许各层沉降并且将有机层分离并用1M水性氢氧化钠溶液(66mL)和水(60mL)顺序地洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥。将干燥剂通过过滤除去并且将滤液浓缩，以得到呈油状物的(R)-4-[3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基]吡咯烷-2-酮，其不经进一步纯化而用于下一反应。

步骤2.(R,E)-2-(1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)亚乙基)肼甲酸叔丁酯(xx)

将粗(R)-4-[3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基]吡咯烷-2-酮(来自步骤1的化合物xix)溶解于甲醇(60mL)中并且将肼基甲酸叔丁酯(8.04g，60.8mmol)添加至溶液中。将反应混合物在65℃下搅拌3.5天，此时HPLC分析显示反应完成。将混合物在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶色谱纯化(用乙酸乙酯中的0-5％甲醇的混合物洗脱)，以得到(R,E)-2-(1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)亚乙基)肼甲酸叔丁酯(xx，19.5g，85％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.83(s,1H),7.78(s,1H),7.36(d,J＝8.6Hz,1H),4.07(p,J＝9.1Hz,1H),3.84-3.69(m,2H),3.59(t,J＝9.5Hz,1H),3.28(t,J＝9.5Hz,1H),2.54(m,1H),2.33(m,1H),2.14(s,3H),1.46(s,9H),1.25(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₉H₂₅ClFN₃NaO₄的LCMS：(M+Na)⁺:m/z＝436.1。

步骤3.2-((S)-1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-((R)-5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)乙基)肼甲酸叔丁酯(xxi)

将(R,E)-2-(1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)亚乙基)肼甲酸叔丁酯(xx，0.5g，1.2mmol)溶解于甲醇(25mL)中并且将溶液用氮气鼓泡5分钟。将双(1,5-环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(35mg，0.086mmol)和(R)-(-)-1-{(S)-2-[双(4-三氟甲基苯基)膦]二茂铁基}乙基-二-叔丁基膦(64mg，0.094mmol)添加至溶液中并且将所得反应混合物用氮气鼓泡30分钟。然后将反应混合物在氢气(56psi)压力下搅拌2.5天。将反应混合物在减压下浓缩并且将所得残余物通过硅胶柱色谱纯化(用乙酸乙酯中的甲醇(0％-10％)的混合物洗脱)。将所需级分浓缩，以得到2-((S)-1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-((R)-5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)乙基)肼甲酸叔丁酯(xxi，428mg，85％产率)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.18(s,1H),7.78(s,1H),7.53(d,J＝8.2Hz,1H),4.73(s,1H),4.41(br s,1H),3.98(m,1H),3.75(m,2H),3.61(m,1H),3.26(m,1H),2.53(m,1H),2.29(dd,J＝17.6,8.6Hz,1H),1.32(s,12H),1.10(d,J＝6.5Hz,1H)。C₁₉H₂₇ClFN₃NaO₄的LCMS：(M+Na)⁺:m/z＝437.9。手性HPLC分析指示产物包含85.6％的所需非对映异构体叔丁基-2-((S)-1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-((R)-5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)乙基)肼甲酸酯(xxi)和14.3％的不合乎需要的非对映异构体叔丁基-2-((R)-1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-((R)-5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)乙基)肼甲酸酯。

步骤4.5-氨基-1-((S)-1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-((R)-5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-甲腈(xvi)

将2-((S)-1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-((R)-5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)乙基)肼甲酸叔丁酯(xxi，130mg，0.31mmol)和对甲苯磺酸一水合物(86mg，0.45mmol)添加至乙醇(3mL)中并且将反应混合物在50℃下加热20小时。HPLC分析显示有约88％的未反应的起始材料。装入另外量的对甲苯磺酸(86mg，0.45mmol)并且将反应混合物加热至60℃持续24小时。HPLC分析显示完成Boc-脱保护。向此反应混合物中添加(1-乙氧基亚乙基)丙二腈(61mg，0.45mmol)和N,N-二异丙基乙胺(260μL，1.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。HPLC显示吡唑-环形成完成。将1.0M水性氢氧化钠溶液添加至反应混合物中并搅拌20分钟。将乙酸乙酯(20mL)添加至混合物中并搅拌。允许双相混合物沉降。将乙酸乙酯层收集并且将水层用乙酸乙酯(10mL)萃取。向合并的乙酸乙酯溶液中添加1M水性盐酸(5mL)并搅拌15分钟。允许双相混合物沉降并且将有机层收集并经无水硫酸钠干燥。将硫酸钠通过过滤除去并且将滤液浓缩，以得到5-氨基-1-((S)-1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-((R)-5-氧代吡咯烷-3-基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-甲腈(xvi，126mg，粗产物的定量产率)并且将其不经进一步纯化而用于下一步骤。

步骤5.(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮(xvii)

向5-氨基-1-{(1S)-1-[5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(5-氧代吡咯烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H吡唑-4-甲腈(xvi，126mg，0.31mmol)中添加乙酸甲脒(323mg，3.1mmol)和1,2-乙二醇(2mL)。伴随搅拌将反应混合物在104℃-105℃下加热。18小时之后，HPLC分析显示剩余约44％的起始材料化合物xvi。将反应混合物加热至115℃持续24小时。HPLC分析显示反应完成。将反应混合物冷却至室温并且添加乙酸乙酯(10mL)和水(5ml)。搅拌双相混合物。允许将各层分离。将有机层收集并且将水层用乙酸乙酯(5mL)萃取。将合并的乙酸乙酯溶液用水(5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥。将硫酸钠通过过滤除去并且将滤液浓缩成残余物。将残余物通过硅胶色谱纯化。将柱用亚甲基氯中的甲醇(0％-5％)的混合物洗脱。将所需的级分合并并蒸发，以得到(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮(xvii，94mg，69.9％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.82(s,1H),7.52(d,J＝8.5Hz,1H),7.30(br s,2H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),3.97(p,J＝9.2Hz,1H),3.90-3.73(m,2H),3.57(t,J＝9.9Hz,1H),3.25(dd,J＝9.2,8.7Hz,1H),2.48(s,3H),2.60-2.50(m,1H),2.36-2.20(m,1H),1.69(d,J＝7.1Hz,3H),1.39(t,J＝6.9Hz,3H)。C₂₀H₂₃ClFN₆O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝433.3。

产物的手性HPLC分析指示它包含87％的所需非镜像异构体(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮(xvii)和13％的不合乎需要的非对映异构体(R)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮。

步骤6.(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐

根据描述于实施例3，步骤5中的程序制备标题产物。在每个可比较的方面(包括化学纯度、手性纯度和固态特征)，所得盐酸盐都与由描述于实施例3中的合成方法制得的材料良好匹配。

实施例A1：PI3K酶测定

PI3-激酶发光测定试剂盒购自Echelon Biosciences(Salt Lake City,UT)，所述试剂盒包括脂质激酶底物D-myo-磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PtdIns(4,5)P2)D(+)-sn-1,2-二-O-辛酰基甘油基，3-O-磷酸基连接的(PIP2)，生物素化I(1,3,4,5)P4，PI(3,4,5)P3检测蛋白)。AlphaScreen^TM GST检测试剂盒购自PerkinElmer Life Sciences(Waltham,MA)，所述试剂盒包括供体和受体珠粒。PI3Kδ(P110δ/p85α)购自Millipore(Bedford,MA)。ATP、MgCl₂、DTT、EDTA、HEPES和CHAPS购自Sigma–Aldrich(St.Louis,MO)。

PI3Kδ的AlphaScreen^TM测定

在来自Thermo Fisher Scientific的384孔REMP板中以终体积40μL进行激酶反应。首先将抑制剂在DMSO中连续稀释并且在添加其他反应组分之前将其添加至板孔中。DMSO在测定中的终浓度为2％。在室温下，在50mM HEPES(PH 7.4)、5mM MgCl₂、50mM NaCl、5mM DTT和CHAPS 0.04％中进行PI3K测定。通过添加ATP启动反应，将由20μM PIP2、20μMATP、1.2nM PI3Kδ组成的最终反应混合物培养20分钟。然后将10μL的反应混合物转移到淬灭缓冲液(50mM HEPES pH 7.4、150mM NaCl、10mM EDTA、5mM DTT、0.1％Tween-20)中的5μL50nM生物素化I(1,3,4,5)P4中，随后添加悬浮于包含25nM PI(3,4,5)P3检测蛋白的淬灭缓冲液中的10μLAlphaScreen^TM供体和受体珠粒。供体和受体珠粒两者的终浓度为20mg/ml。密封板之后，将板在室温下在黑暗场所中培养2小时。在融合-α酶标仪(Perkin Elmer)上确定产物的活性。通过使用GraphPad Prism 3.0软件拟合对照活性百分比与抑制剂浓度对数的曲线来确定IC₅₀。

实施例A2：PI3K酶测定

材料：脂质激酶底物磷酸肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)购自Echelon Biosciences(Salt Lake City,UT)。PI3K亚型α、β、δ和γ购自Millipore(Bedford,MA)。ATP、MgCl₂、DTT、EDTA、MOPS和CHAPS购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。

在来自Thermo Fisher Scientific的透明底96孔板中以终体积24μL进行激酶反应。首先将抑制剂在DMSO中连续稀释并且在添加其他反应组分之前将其添加至板孔中。DMSO在测定中的终浓度为0.5％。在室温下，在20mM MOPS(PH 6.7)、10mM MgCl₂、5mM DTT和CHAPS 0.03％中进行PI3K测定。制备包含50μM PIP2、激酶和不同浓度的抑制剂的反应混合物。通过添加包含2.2μCi[γ-³³P]ATP的ATP至终浓度1000μM而启动反应。PI3K亚型α、β、δ和γ在测定中的终浓度分别为1.3nM、9.4nM、2.9nM和10.8nM。将反应培养180分钟并且通过添加100μL的1M磷酸钾(PH 8.0)、30mM EDTA淬灭缓冲液而终止。然后将反应溶液的100μL等分部分转移到96-孔Millipore MultiScreen IP 0.45μm PVDF滤板(用200μL 100％乙醇、蒸馏水和1M磷酸钾(PH 8.0)分别地预湿所述滤板)中。将滤板在真空下在Millipore歧管上抽吸并且用包含1M磷酸钾(PH 8.0)和1mM ATP的18x200μL洗涤缓冲液洗涤。通过抽吸干燥和印迹之后，将板在37℃下在孵育箱中风干过夜。然后将Packard TopCount接头(Millipore)连接至所述板，随后在每个孔中添加120μL Microscint 20闪烁混合液(Perkin Elmer)。将板密封之后，通过闪烁计数在Topcount(Perkin Elmer)上确定产物的放射性。通过使用GraphPad Prism 3.0软件拟合对照活性百分比与抑制剂浓度对数的曲线来确定IC₅₀。

在实施例A2的测定中测试(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐并且确定它是PI3Kδ的选择性抑制剂。

在实施例A2的测定中测试(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐并且确定相对于PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kγ中的每种，它是PI3Kδ的选择性>100倍的抑制剂。

实施例A3：PI3Kδ闪烁亲近测定

材料

[γ-³³P]ATP(10mCi/mL)购自Perkin–Elmer(Waltham,MA)。脂质激酶底物D-myo-磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PtdIns(4,5)P2)D(+)-sn-1,2-二-O-辛酰基甘油基，3-O-磷酸基连接的(PIP2)，CAS204858-53-7)购自Echelon Biosciences(Salt Lake City,UT)。PI3Kδ(P110δ/p85α)购自Millipore(Bedford,MA)。ATP、MgCl₂、DTT、EDTA、MOPS和CHAPS购自Sigma–Aldrich(St.Louis,MO)。小麦胚芽凝集素(WGA)YSi SPA闪烁珠粒购自GE healthcare lifesciences(Piscataway,NJ)。

在来自Thermo Fisher Scientific的聚苯乙烯384孔基质白板中以终体积25μL进行激酶反应。首先将抑制剂在DMSO中连续稀释并且在添加其他反应组分之前将其添加至板孔中。DMSO在测定中的终浓度为0.5％。在室温下，在20mM MOPS(PH 6.7)、10mM MgCl₂、5mMDTT和CHAPS 0.03％中进行PI3K测定。通过添加ATP启动反应，最终反应混合物由20μMPIP2、20μM ATP、0.2μCi[γ-³³P]ATP、4nM PI3Kδ组成。将反应孵育210分钟并且通过添加悬浮于淬灭缓冲液(150mM磷酸钾(PH 8.0)、20％甘油、25mM EDTA、400μM ATP)中的40μL SPA珠粒而终止。SPA珠粒的终浓度为1.0mg/mL。将板密封之后，将板在室温下振荡过夜并且在1800rpm下离心10分钟，通过闪烁计数在Topcount(Perkin–Elmer)上确定产物的放射性。通过使用GraphPad Prism 3.0软件拟合对照活性百分比与抑制剂浓度对数的曲线来确定IC₅₀。发现式I化合物在实施例A3的测定中具有≤10nM的IC₅₀。

实施例B1：B细胞增殖测定

为了获得B细胞，通过标准密度梯度离心在Ficoll-Hypague(GE Healthcare,Piscataway,NJ)上从正常的无药物供体的外周血中分离人PBMC并且将其与抗-CD19微珠粒(Miltenyi Biotech,Auburn,CA)一起孵育。然后根据制造商的说明使用autoMacs(Miltenyi Biotech)通过阳性免疫分选来纯化B细胞。

将纯化的B细胞(2×10⁵/孔/200μL)在96孔超低结合板(Corning,Corning,NY)中在不同量的测试化合物的存在下在RPMI1640、10％FBS和山羊F(ab’)2抗人IgM(10μg/ml)(Invitrogen,Carlsbad,CA)中培养三天。然后将PBS中的[³H]-胸苷(1μCi/孔)(PerkinElmer,Boston,MA)添加至B细胞培养物中再持续12小时，之后通过用水经由GF/B过滤器(Packard Bioscience,Meriden,CT)过滤来分离掺入的放射性并且通过液体闪烁计数用TopCount(Packard Bioscience)测量。

实施例B2：Pfeiffer细胞增殖测定

Pfeiffer细胞系(弥漫性大B细胞淋巴瘤)购自ATCC(Manassas,VA)并且维持于推荐的培养基(RPMI和10％ FBS)中。为了测量化合物的抗增殖活性，在存在或不存在一定浓度范围的测试化合物的情况下，将Pfeiffer细胞与培养基(2x10³个细胞/孔/200μl)一起接种到96孔超低结合板(Corning,Corning,NY)中。3-4天之后，然后将PBS中的[³H]-胸苷(1μCi/孔)(PerkinElmer,Boston,MA)添加至细胞培养物中再持续12小时，之后通过用水经由GF/B过滤器(Packard Bioscience,Meridenj,CT)过滤来分离掺入的放射性并且通过液体闪烁计数用TopCount(Packard Bioscience)测量。

实施例B3：SUDHL-6细胞增殖测定

SUDHL-6细胞是(弥漫性大B细胞淋巴瘤)购自ATCC(Manassas,VA)并且维持于推荐的培养基(RPMI和10％ FBS)中。为了通过ATP定量来测量化合物的抗增殖活性，在存在或不存在一定浓度范围的测试化合物的情况下，将SUDHL-6细胞与培养基(5000个细胞/孔/200μl)一起接种到96孔聚苯乙烯透明黑色组织培养板(Greiner-bio-one，通过VWR,NJ)中。3天之后，将Cell Titer-GLO发光(Promega,Madison,WI)细胞培养剂添加至每个孔中，在室温下持续10分钟，以稳定发光信号。这基于存在的ATP的定量来确定培养物中的活细胞的数目，ATP的存在标志着存在代谢活性细胞。用TopCount 384(Packard Bioscience throughPerkin Elmer,Boston,MA)测量发光。

实施例C：Akt磷酸化测定

Ramos细胞(来自伯基特淋巴瘤的B淋巴细胞)获自ATCC(Manassas,VA)并且维持在RPMI1640和10％ FBS中。将细胞(3×10⁷个细胞/管/3mL，在RPMI中)在37℃下与不同量的测试化合物一起孵育2小时并且然后在37℃水浴中用山羊F(ab’)2抗人IgM(5μg/mL)(Invitrogen)刺激17分钟。将经刺激的细胞伴随离心在4℃下旋降并且使用300μL溶解缓冲液(Cell Signaling Technology,Danvers,MA)制备全细胞提取物。将所得溶解产物进行超声波处理并且收集上清液。根据制造商的说明通过使用PathScan phospho-Akt1(Ser473)夹心ELISA试剂盒(Cell Signaling Technology)分析Akt在上清液中的磷酸化水平。

除了本文描述的那些之外，本发明的各种修改将从前述说明而对本领域的技术人员变得清楚。此类修改也意图落入所附权利要求的范围内。本申请中所引用的每一参考文献(包括所有专利、专利申请和公布)都以引用的方式整体并入本文。

综上所述，本发明包括但不限于以下项：

1.一种盐，其是(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐。

2.如项1所述的盐，其是1:1化学计量比的(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮与盐酸。

3.如项1或2所述的盐，其是结晶的。

4.如项1-3中任一项所述的盐，其是基本上分离的。

5.如项1-4中任一项所述的盐，其通过DSC热谱图进行表征，所述热谱图在约207℃处具有吸热峰。

6.如项1-4中任一项所述的盐，其具有基本上如图1所示的DSC热谱图。

7.如项1-6中任一项所述的盐，其具有基本上如图2所示的TGA热谱图。

8.如项1-7中任一项所述的盐，就2-θ而言，所述盐具有至少一个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。

9.如项1-7中任一项所述的盐，就2-θ而言，所述盐具有至少两个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。

10.如项1-7中任一项所述的盐，就2-θ而言，所述盐具有至少三个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。

11.如项1-7中任一项所述的盐，就2-θ而言，所述盐具有至少四个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。

12.如项1-7中任一项所述的盐，就2-θ而言，所述盐具有至少五个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。

13.如项1-7中任一项所述的盐，其具有基本上如图3所示的XRPD图谱。

14.一种药物组合物，其包含如项1-13中任一项所述的盐以及药学上可接受的载体。

15.一种抑制PI3K激酶的活性的方法，所述方法包括使所述激酶与如项1-13中任一项所述的盐接触。

16.如项15所述的方法，其中所述PI3K是PI3Kδ。

17.如项16所述的方法，其中相对于PI3Kα、PI3Kβ或PI3Kγ中之一种或多种，所述盐是PI3Kδ的选择性抑制剂。

18.一种治疗患者的疾病的方法，其中所述疾病与PI3K激酶的异常表达或活性相关，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的如项1-13中任一项所述的盐。

19.如项18所述的方法，其中所述疾病选自特发性血小板减少性紫癜(ITP)、自身免疫性溶血性贫血、血管炎、全身性红斑狼疮、狼疮性肾炎、天疱疮、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、膜性肾病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、毛细胞白血病、套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、结外边缘区淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、幼淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、骨髓纤维化、粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、脾边缘区淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、浆细胞白血病、髓外浆细胞瘤、郁结性骨髓瘤(亦称无症状骨髓瘤)、意义未明的单克隆丙种球蛋白症(MGUS)以及B细胞淋巴瘤。

20.如项19所述的方法，其中所述方法是一种治疗选自复发性ITP和难治性ITP的特发性血小板减少性紫癜(ITP)的方法。

21.如项19所述的方法，其中所述方法是一种治疗血管炎的方法，所述血管炎选自白塞氏病、柯根氏综合症、巨细胞性动脉炎、风湿性多肌痛(PMR)、高安氏动脉炎、伯格氏病(血栓闭塞性脉管炎)、中枢神经系统血管炎、川崎病、结节性多动脉炎、丘格-施特劳斯综合症、混合型冷球蛋白血症血管炎(自发的或丙型肝炎病毒(HCV)诱导的)、亨诺赫-舍恩莱因紫癜(HSP)、过敏性血管炎、显微镜下多血管炎、韦格纳氏肉芽肿病以及抗中性粒细胞细胞质抗体相关(ANCA)全身性血管炎(AASV)。

22.如项19所述的方法，其中所述方法是一种治疗非何杰金氏淋巴瘤(NHL)的方法，所述非何杰金氏淋巴瘤选自复发性NHL、难治性NHL和复发性滤泡性NHL。

23.如项19所述的方法，其中所述方法是一种治疗B细胞淋巴瘤的方法，其中所述B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。

24.如项19所述的方法，其中所述方法是一种治疗B细胞淋巴瘤的方法，其中所述B细胞淋巴瘤是活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤或生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤。

25.如项18所述的方法，其中所述疾病是骨关节炎、再狭窄、动脉粥样硬化、骨病症、关节炎、糖尿病性视网膜病变、银屑病、良性前列腺肥大、炎症、血管生成、胰腺炎、肾病、炎性肠疾、重症肌无力、多发性硬化症或舍格伦综合征。

26.如项18所述的方法，其中所述疾病是类风湿性关节炎、过敏症、哮喘、肾小球性肾炎、狼疮或与前述任一项有关的炎症。

27.如项26所述的方法，其中狼疮是全身性红斑狼疮或狼疮性肾炎。

28如项18所述的方法，其中所述疾病是乳癌、前列腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、脑癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、胃癌或血液癌症。

29.如项28所述的方法，其中所述血液癌症是急性成髓细胞性白血病或慢性骨髓性白血病。

30.如项18所述的方法，其中所述疾病是急性肺损伤(ALI)或成人呼吸窘迫综合征(ARDS)。

31.一种制备如项1-13中任一项所述的盐的方法，所述方法包括使式I化合物：

与盐酸反应，以形成所述盐。

32.如项31所述的方法，其中所述盐酸是1M水性盐酸。

33.如项31或32所述的方法，其中基于1当量的所述式I化合物使用约3.3至约3.7当量的盐酸。

34.如项31-33中任一项所述的方法，其中在约45℃至约55℃的温度下进行所述反应。

35.如项31-33中任一项所述的方法，其中所述方法包括：

在室温下将盐酸添加至所述式I化合物，以形成浆液；

将所述浆液加热至约45℃至约55℃的温度，以形成溶液；以及

将所述溶液冷却至约0℃至约5℃的温度，以使所述盐结晶。

36.一种方法，其包括使式XVI化合物：

与乙酸甲脒反应，以形成式I化合物：

37.如项36所述的方法，其中在包含1,2-乙二醇的溶剂组分中进行所述式XVI化合物与乙酸甲脒的所述反应。

38.如项36或37所述的方法，其中在约100℃至约105℃的温度下进行所述式XVI化合物与乙酸甲脒的所述反应。

39.如项36至38中任一项所述的方法，其中基于1当量的所述式XVI化合物使用约8至约10当量的乙酸甲脒。

40.如项36-39中任一项所述的方法，其还包括通过如下方法制备所述式XVI化合物，所述方法包括使式XV化合物：

与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈在叔胺的存在下反应。

41.如项40所述的方法，其中所述叔胺是N-甲基吡咯烷酮。

42.如项40或41所述的方法，其中在约室温下进行所述式XV化合物与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈的所述反应。

43.如项40-42中任一项所述的方法，其还包括通过如下方法制备所述式XV化合物，所述方法包括使式XIV-a化合物：

与肼在叔胺的存在下反应，其中P¹是C_1-6烷基磺酰基。

44.如项43所述的方法，其中所述叔胺是N-甲基吡咯烷酮。

45.如项43或44所述的方法，其中在约35℃至约60℃的温度下进行所述式XIV-a化合物与肼的所述反应。

46.如项43-45中任一项所述的方法，其中在包含二氯甲烷的溶剂组分中进行所述式XIV-a化合物与肼的所述反应。

47.如项43-46中任一项所述的方法，其中P¹是甲磺酰基。

48.如项43-47中任一项所述的方法，其还包括通过如下方法制备式XIV化合物，所述方法包括使式XIII化合物：

与C_1-6烷基磺酰基卤化物在叔胺的存在下反应。

49.如项48所述的方法，其中所述C_1-6烷基磺酰基卤化物是甲磺酰氯。

50.如项48或49所述的方法，其中所述叔胺是N,N-二异丙基乙胺。

51.如项48-50中任一项所述的方法，其中基于1当量的所述式XIII化合物使用约1.1至约1.5当量的烷基磺酰基卤化物。

52.如项48-51中任一项所述的方法，其中在约-10℃至约5℃的温度下进行所述式XIII化合物与C_1-6烷基磺酰基卤化物的所述反应。

53.如项48-52中任一项所述的方法，其中在包含二氯甲烷的溶剂组分中进行所述式XIII化合物与C_1-6烷基磺酰基卤化物的所述反应。

54.如项36-53中任一项所述的方法，其中以下步骤：(i)使所述式XIII化合物与C_1-6烷基磺酰基卤化物反应；(ii)使所述式XIV-a化合物与肼在叔胺的存在下反应以形成式XV化合物；以及(iii)使所述式XV化合物与乙酸甲脒反应以形成式XVI化合物是以一锅法进行而不分离所述式XIV-a化合物或所述式XV化合物。

55.如项36-39中任一项所述的方法，其还包括通过如下方法制备所述式XVI化合物，所述方法包括使式XV-a的盐：

与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈在叔胺的存在下反应，其中TsOH是对甲苯磺酸。

56.如项55所述的方法，其中所述叔胺是N,N-二异丙基乙胺。

57.如项55或56所述的方法，其中在约室温下进行式XV-a的盐与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈的所述反应。

58.如项55-57中任一项所述的方法，其中基于1当量的所述式XV-a的盐使用约1.3至约1.6当量的(1-乙氧基亚乙基)丙二腈。

59.如项55-58中任一项所述的方法，其中在包含乙醇的溶剂组分中进行所述式XV-a的盐与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈的所述反应。

60.如项55-59中任一项所述的方法，其还包括通过如下方法制备所述式XV-a的盐，所述方法包括使式XXI化合物：

与对甲苯磺酸反应，其中Boc是叔丁氧基羰基。

61.如项60所述的方法，其中所述对甲苯磺酸是对甲苯磺酸一水合物。

62.如项60或61所述的方法，其中基于1当量的所述式XXI化合物使用约1.3至约1.6当量的对甲苯磺酸。

63.如项60-62中任一项所述的方法，其中在约45℃至约65℃的温度下进行所述式XXI化合物与对甲苯磺酸的所述反应。

64.如项60-63中任一项所述的方法，其中在包含乙醇的溶剂组分中进行所述式XXI化合物与对甲苯磺酸的所述反应。

65.如项60-64中任一项所述的方法，其中以下步骤：(i)使所述式XXI化合物与对甲苯磺酸反应以形成式XV-a的盐；以及(ii)使所述式XV-a的盐与(1-乙氧基亚乙基)丙二腈反应是以一锅法进行而不分离所述式XV-a的盐。

66.如项60-65中任一项所述的方法，其还包括通过如下方法制备所述式XXI化合物，所述方法包括使式XX化合物：

与氢气在一种或多种独立选择的氢化催化剂的存在下反应，其中Boc是叔丁氧基羰基。

67.如项66所述的方法，其中在两种独立选择的氢化催化剂的存在下进行所述式XX化合物与氢气的所述反应。

68.如项67所述的方法，其中一种氢化催化剂是双(1,5-环辛二烯)四氟硼酸铑(I)并且另一种是(R)-(-)-1-{(S)-2-[双(4-三氟甲基苯基)膦]二茂铁基}乙基-二-叔丁基膦。

69.如项68所述的方法，其中基于1当量的所述式XX化合物使用约13.5至约14.5当量的双(1,5-环辛二烯)四氟硼酸铑(I)。

70.如项68或69所述的方法，其中基于1当量的所述式XX化合物使用约12至约13当量的(R)-(-)-1-{(S)-2-[双(4-三氟甲基苯基)膦]二茂铁基}乙基-二-叔丁基膦。

71.如项66-70中任一项所述的方法，其中在约室温下进行所述式XX化合物与氢气的所述反应。

72.如项66-71中任一项所述的方法，其中在包含甲醇的溶剂组分中进行所述式XX化合物与氢气的所述反应。

73.如项66-72中任一项所述的方法，其还包括通过如下方法制备所述式XX化合物，所述方法包括使式XIX化合物：

与肼基甲酸叔丁酯反应。

74.如项73所述的方法，其中在约60℃至约70℃的温度下进行所述式XIX化合物与肼基甲酸叔丁酯的所述反应。

75.如项73或74所述的方法，其中在包含甲醇的溶剂组分中进行所述式XIX化合物与肼基甲酸叔丁酯的所述反应。

76.如项73-75中任一项所述的方法，其还包括通过如下方法制备所述式XIX化合物，所述方法包括将式XIII-a化合物：

在氧化剂的存在下氧化。

77.如项76所述的方法，其中所述氧化剂是戴斯-马丁高碘烷。

78.如项76或77所述的方法，其中基于1当量的所述式XIII-a化合物使用约1.2至约1.7当量的所述氧化剂。

79.如项76-78中任一项所述的方法，其中在约室温下进行所述式XIII-a化合物的所述氧化。

80.如项76-79中任一项所述的方法，其中在包含二氯甲烷的溶剂组分中进行所述式XIII-a化合物的所述氧化。

81.一种式XIV化合物：

或其药学上可接受的盐。

82.一种式XV化合物：

或其药学上可接受的盐。

83.一种式XVI化合物：

或其药学上可接受的盐。

84.一种式XIX化合物：

或其药学上可接受的盐。

85.一种式XX化合物：

或其药学上可接受的盐。

86.一种式XXI化合物：

或其药学上可接受的盐。

Claims (10)

1.一种盐，其是(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮盐酸盐。

2.如权利要求1所述的盐，其是1:1化学计量比的(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮与盐酸。

3.如权利要求1或2所述的盐，其是结晶的。

4.如权利要求1-3中任一项所述的盐，其是基本上分离的。

5.如权利要求1-4中任一项所述的盐，其通过DSC热谱图进行表征，所述热谱图在约207℃处具有吸热峰。

6.如权利要求1-4中任一项所述的盐，其具有基本上如图1所示的DSC热谱图。

7.如权利要求1-6中任一项所述的盐，其具有基本上如图2所示的TGA热谱图。

8.如权利要求1-7中任一项所述的盐，就2-θ而言，所述盐具有至少一个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。

9.如权利要求1-7中任一项所述的盐，就2-θ而言，所述盐具有至少两个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。

10.如权利要求1-7中任一项所述的盐，就2-θ而言，所述盐具有至少三个选自约11.3°、约16.4°、约21.0°、约23.0°、约28.1°、约31.2°以及约32.8°的XRPD峰。