RS61233B1 - Soli inhibitora pi3k i postupci za njihovo dobijanje - Google Patents

Description

Opis

OBLAST TEHNIKE

[0001] Predmetna prijava obezbeđuje postupak za dobijanje (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona, koji je koristan kao inhibitor fosfoinozitid 3-kinaze-delta (PI3Kδ), kao i oblika soli i povezane intermedijere.

STANJE TEHNIKE

[0002] Fosfoinozitid 3-kinaze (PI3K-e) pripadaju velikoj familiji lipidnih signalnih kinaza koje fosforiluju fosfoinozitide na D3 poziciji u prstenu inozitola (Cantley, Science, 2002, 296(5573): 1655-7). PI3K-e su podeljene u tri klase (klasa I, II, i III) prema njihovoj strukturi, regulaciji i specifičnosti prema supstratu. Klasa I PI3K-a, koja uključuje PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ, i PI3Kδ, su familija dvostruke specifičnosti lipidnih i proteinskih kinaza koje katalizuju fosforilaciju fosfatidilinozito-4,5-bisfosfata (PIP2) što dovodi do fosfatidilinozito-3,4,5-trisfosfata (PIP3). PIP3funkcioniše kao sekundarni prenosilac signala koji kontroliše brojne ćelijske procese, uključujući rast, preživljavanje, adheziju i migraciju. Sva četiri izooblika klase I PI3K postoje kao heterodimeri koji su sastavljeni iz katalitičke podjedinice (p110) i snažno vezane regulatorne podjedinice koja kontroliše njihovu ekspresiju, aktivaciju, i podćelijsku lokalizaciju. PI3Kα, PI3Kβ, i PI3Kδ se povezuju sa regulatornom podjedinicom koja je poznata pod imenom p85 i aktiviraju se sa faktorima rasta i citokinima preko mehanizma koji zavisi od tirozin kinaze (Jimenez, et al., J Biol Chem., 2002, 277(44):41556-62) pri čemu se PI3Kγ povezuje sa dve regulatorne podjedinice (p101 i p84) i njegova aktivacija je pokrenuta sa aktivacijom receptora kuplovanih sa G-proteinom (Brock, et al., J Cell Biol., 2003, 160(1):89-99). PI3Kα i PI3Kβ su ubikvitarno eksprimirani. Suprotno tome, PI3Kγ i PI3Kδ su predominantno eksprimirani u leukocitima (Vanhaesebroeck, et al., Trends Biochem Sci., 2005, 30(4):194-204).

[0003] Diferencijalna distribucija izooblika PI3K u tkivu ima ulogu faktora u njihovim različitim biološkim funkcijama. Genetička ablacija ili PI3Kα ili PI3Kβ dovodi do letaliteta embriona, što ukazuje da PI3Kα i PI3Kβ imaju esencijalne i ne-redundantne funkcije, bar tokom razvića (Vanhaesebroeck, et al., 2005). Suprotno tome, miševi kojima nedostaje PI3Kγ i PI3Kδ su vijabilni, fertilni i imaju normalan životni vek iako pokazuju izmenjen imunološki sistem. Deficijencija PI3Kγ dovodi do narušenog regrutovanja makrofaga i neutrofila do mesta inflamacije kao i narušene T ćelijske aktivacije (Sasaki, et al., Science, 2000, 287(5455):1040-6). Miševi sa mutiranom PI3Kδ imaju specifične defekte u B ćelijskoj signalizaciji koja dovodi do narušenog razvoja B ćelija i smanjenih odgovora antitela nakon stimulacije antigenom (Clayton, et al., J Exp Med.2002, 196(6):753-63; Jou, et al., Mol Cell Biol.2002, 22(24):8580-91; Okkenhaug, et al., Science, 2002, 297(5583):1031-4).

[0004] Fenotipovi PI3Kγ i PI3Kδ-mutiranih miševa ukazuju na to da ovi enzimi mogu da imaju ulogu u inflamaciji i drugim imunskim zasnovanim bolestima i to je potvrđeno u pretkliničkim modelima. PI3Kγ-mutirani miševi su u velikoj meri zaštieni od bolesti u mišjim modelima reumatoidnog artritisa (RA) i astme (Camps, et al., Nat Med. 2005, 11(9):936-43; Thomas, et al., Eur. J. Immunol. 2005, 35(4):1283-91). Pored toga, pokazano je da tretman miševa divljeg tipa sa selektivnim inibitorom PI3Kγ smanjuje glomerulonefritis i produžava preživljavanj kod MRL-lpr modela sistemskog lupusa nefritisa (SLE) i da suprimira inflamaciju zglobova i oštećenje u modelima RA (Barber, et al., Nat Med.

2005, 11(9):933-5; Camps, et al., 2005). Slično tome, pokazano je da oba PI3Kδ-mutirani miševi i miševi divljeg tipa koji su tretirani sa selektivnim inhibitorom PI3Kδ imaju oslabljenu alergijsku inflamaciju vazdušnih puteva i hiper-reaktivnost u mišjem modelu astme (Ali, et al., Nature. 2004, 431(7011):1007-11; Lee, et al., FASEB J.2006, 20(3):455-65) i da imaju oslabljenu bolest u modelu RA (Randis, et al., Eur. J. Immunol., 2008, 38(5): 1215-24).

[0005] Pokazano je da proliferacija B ćelija ima glavnu ulogu u razvoju inflamatornih autoimunih bolesti (Puri, Frontiers in Immunology (2012), 3(256), 1-16; Walsh, Kidney International (2007) 72, 676-682). Na primer, B ćelije podržavaju autoreaktivnost T-ćelija, kao važne komponente autoimunih bolesti. Jednom aktivirane i sazrele, B ćelije mogu da putuju do mesta inflamacije i regrutuju inflamatorne ćelije ili da se diferenciraju u plazmablaste. Prema tome, aktivnost B-ćelija može da bude pogođena ciljanjem stimulatornih citokina B-ćelije, površinskih receptora B-ćelije, ili pomoću deplecije B-ćelija. Pokazano je da rituksimab-an IgG1 κ mišje/humano himerno monoklonsko antitelo koje je usmereno protiv B-ćelijskog površinkog receptora CD20- vrši depleciju CD20+ B ćelija. Pokazano je da upotreba rituksimaba ima efikasnost u lečenju idiopatske trombocitopenijske purpure, autoimune hemolitične anemije, ili vaskulitisa. Na primer, lečenje sa rituksimabom je rezultovalo u remisiji bolesti kod pacijenata koji pate od sistemskog vaskulitisa (AASV) povezanog da anti-neutrofilnim citoplazminim antitelima (ANCA) sa pokazanom deplecijom perifernih B-ćelija (Walsh, 2007; Lovric, Nephrol Dial Transplant (2009) 24: 179-185). Slično tome, potpuni odgovor je prijavljen kod jedne trećine do dve trećine pacijenata koji imaju vaskulitis mešovite kroglobulinemije posle lečenja sa rituksimabom, uključujući pacijente koji su imali težak oblik vaskulitisa koji je bio rezistentan na ili je bio otporan na druge tretmane (Cacoub, Ann Rheum Dis 2008;67:283-287). Slično tome, pokazano je da je rituksimab efikasan u lečenju pacijenata sa idiopatskom trombocitopenijskom purpurom (ili imunskom trombocitopenijskom purpurom) (Garvey, British Journal of Haematology, (2008) 141, 149-169; Godeau, Blood (2008), 112(4), 999-1004; Medeo, European Journal of Haematology, (2008) 81, 165-169) i autoimunskom hemolitičkom anemijom (Garvey, British Journal of Haematology, (2008) 141, 149-169).

[0006] PI3Kδ signalizacija je vezana za preživljavnje B ćelija, migraciju, i aktivaciju (Puri, Frontiers in Immunology, 2012, 3(256), 1-16, strane 1-5; and Clayton, J Exp Med, 2002, 196(6):753-63). Na primer, PI3Kδ je neopodan za aktivaciju B-ćelija koja zavisi od antigena pri čemu je vođena B ćelijskim receptorom. Blokiranjem adhezije B-ćelija, preživljavanje, aktivacija, i proliferacija, inhibicija PI3Kδ može da naruši sposobnost B ćelija da aktiviraju T ćelije, sprečavanjem njihove aktivacije i smanjenjem sekrecije autoantitela i pro-inflamatornih citokina. Prema tome, njihovom sposobnošću da inhibiraju aktivaciju B ćelija, očekivano je da inhibitori PI3Kδ leče bolesti koje su posredovane B ćelijama koje se mogu lečiti korišćenjem sličnih postupaka kao što je deplecija B ćelija sa rituksimabom. Zaista, pokazano je da su inhibitori PI3Kδ korisni u mišjim modelima različitih autoimunskih bolesti koje se takođe mogu lečiti sa rituksimabom kao što je artritis (Puri (2012)). Dalje, B ćelije koje su slične urođenim, koje su povezane sa autoimunosti su osetljive na aktivnost PI3Kδ, kao što su MZ i B-1 ćelije skoro odsutne kod miševa kojima nedostaje p110δ gen (Puri (2012). Inhibitori PI3Kδ mogu da smanje kretanje i aktivaciju MZ i B-1 ćelija, koje su uključene u autoimunskim bolestima.

[0007] Pored njihove potencijalne uloge u inflamatornim bolestima, sve četiri klase I PI3K izooblika mogu da imaju ulogu u kanceru. Gen koji kodira p110α je često mutiran u uobičajenim kancerima, uključujući kancer dojke, prostate, debelog creva i endometrijuma (Samuels, et al., Science, 2004, 304(5670):554; Samuels, et al., Curr Opin Oncol. 2006, 18(1):77-82). Osamdeset procenata od ovih mutacija su predstavljene sa jednom od tri supstitucije aminokiselina u zavojnici ili kinaznom domenu enzima i dovode do značajne pojačane regulacije kinazne aktivnosti koja dovodi do onkogene transformacije u ćelijskoj kulturi i u životinjskim modelima (Kang, et al., Proc Natl Acad Sci U S A.2005, 102(3):802-7; Bader, et al., Proc Natl Acad Sci U S A.2006, 103(5):1475-9). Nijedna takva mutacija nije identifikovana kod PI3K izooblika iako postoji dokaz da one mogu da doprinesu razvoju i progresiji maligniteta. Konzistentna prekomerna ekspresija PI3Kδ je uočena u akutnoj mijeloblastnoj leukemji (Sujobert, et al., Blood, 2005, 106(3):1063-6) i inibitori PI3Kδ mogu da spreče rast ćelija leukemije (Billottet, et al., Oncogene. 2006, 25(50):6648-59). Povišena ekspresija PI3Kγ je uočena u hroničnoj mijeloidnoj leukemiji (Hickey, et al., J Biol. Chem.2006, 281(5):2441-50). Promene u ekspresiji PI3Kβ, PI3Kγ i PI3Kδ su takođe uočene u kancerima mozga, debelog creva i bešike (Benistant, et al., Oncogene, 2000, 19(44):5083-90; Mizoguchi, et al., Brain Pathol. 2004, 14(4):372-7; Knobbe, et al., Neuropathol Appl Neurobiol. 2005, 31(5):486-90). Dalje, pokazano je da su dalje svi ovi izooblici onkogeni u ćelijskoj kulturi (Kang, et al., 2006).

[0008] US 2014/249132 opisuje derivate pirazolopirimidina za lečenje poremeća povezanih sa PI3Kδ.

[0009] Zbog ovih razloga, postoji potreba za razvojem novih PI3K inhibitora koji mogu da se koriste u inflamatornim poremećajima, autoimunskim poremećajima i kanceru. Ovaj pronalazak je usmeren prema ovoj potrebi i drugim.

SUŠTINA PRONALASKA

[0010] Predmetni pronalazak obezbeđuje so koja je so hlorovodonične kiseline (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona, koja je kristalna.

[0011] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja se sastoji iz soli hlorovodnične kiseline pronalaska i farmaceutski prihvatljivog nosača.

[0012] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak za inhibiranje aktivnosti PI3Kδ kinaze, in vitro, koji se sastoji iz dovođenja u kontakt kinaze sa soli hlorovodonične kiseline iz pronalaska.

[0013] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje so hlorovodonične kiseline iz pronalaska za upotrebu u lečenju bolesti kod pacijenta, pri čemu je pomenuta bolest definisana u patentnim zahtevima [0014] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak za dobijanje soli hlorovodonične kiseline iz pronalaska, koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule I:

sa hlorovodoničnom kiselinom da bi se obrazovala pomenuta so.

[0015] Predmetna prijava dalje obezbeđuje upotrebu soli hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I za dobijanje leka za upotrebu u bilo kom od ovde opisanih postupaka.

[0016] Predmetna prijava takođe obezbeđuje postupak za dobijanje soli hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I, koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule I:

sa hlorovodoničnom kiselinom da bi se obrazovala pomenuta so.

[0017] Predmetna prijava dodatno obezbeđuje postupak za dobijanje jedinjenja Formule I, koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule XVI:

sa formamidin acetatom da se obrazuje pomenuto jedinjenje Formule I:

[0018] Predmetna prijava dalje obezbeđuje jedinjenje Formule XIV:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0019] Predmetna prijava dalje obezbeđuje jedinjenje Formule XV:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0020] Predmetna prijava dodatno obezbeđuje jedinjenje Formule XVI:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0021] Predmetna prijava dalje obezbeđuje jedinjenje Formule XIX:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0022] Predmetna prijava takođe obezbeđuje jedinjenje Formule XX:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0023] Predmetna prijava dodatno obezbeđuje jedinjenje Formule XXI:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

OPIS NACRTA

[0024]

SL.1 pokazuje DSC termogram koji predstavlja so iz Primera 3. SL.2 pokazuje TGA podatke koje predstavljaju so iz Primera 3. SL.3 pokazuje XRPD obrazac koji predstavlja so iz Primera 3. OPIS PRONALASKA

Jedinjenja i Soli

[0025] Predmetni pronalazak obezbeđuje so koja je so hlorovodnične kiseline (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona, koja je kristalna.

[0026] Ovde su takođe opisani postupci koji mogu da se koriste za dobijanje jedinjenja Formule I:

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koja je korisna kao inhibitor PI3Kδ, gde je Et etil. Takođe su opisani intermedijeri povezani sa njima koji mogu da se koriste za pripremu jedinjenja Formule I i njegovih soli.

[0027] U nekim izvođenjima, so je u stehiometrijskom odnosu 1:1 (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona prema hlorovodoničnoj kiselini.

[0028] Različiti oblici iste supstance imaju različita svojstva opipljive materije koja se odnose na, na primer, higroskopnost, rastvorljivost, stabilnost, i slično. Oblici sa visokim tačkama topljenja često imaju dobru termodinamičku stabilnost što predstavlja prednost u produžavanju polu-života formulacija leka koje sadrže čvrsti oblik. Oblici sa nižim tačkama topljenja su često manje termodinamički stabilni, ali su povoljni po tome što imaju povećanu rastvorljivost u vodi, što se prevodi u povećanu biodostupnost leka Oblici koji su slabo higroskopni su poželjni zbog svoje stabilnosti na toplotu i vlažnost i rezistentni su na degradaciju tokom dužeg skladištenja.

[0029] Ovde obezbeđena so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I je kristalna. Kao što je ovde korišćeno, "kristalna" ili "kristalni oblik" je namenjen da se odnosi na se odnosi na određenu konfiguraciju rešetke kristalne supstance. Različiti kristalni oblici iste supstance obično će imati različite kristalne rešetke (npr., jedinične ćelije) koje se prepisuju različitim fizičkim svojstvoma koja su karakteristična za svaki od kristalnih oblika. U nekim slučajevima, različite konfiguracije rešetki imaju različit sadržaj vode ili rastvarača.

[0030] Različiti oblici soli mogu da se identifikuju postupcima karakterizacije u čvrstom stanju kao što je difrakcija X-zraka na prahu (XRPD). Drugi postupci karakterizacije kao što je diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC), thermogravimetrijska analiza (TGA), dinamička sorpcija pare (DVS), i slično dalje pomažu identifikovanju oblika kao i pomažu određivanju stabilnosti i sadržaja rastvarača/vode.

[0031] XRPD obrazac refleksija (signala) se obično smatra otiskom određenog kristalnog oblika. Dobro je poznato da relativni intenziteti XRPD signala mogu široko da variraju u zavisnosti od, između ostalog, postupka za pripremu uzorka, raspodele veličine kristala, raznih korišćenih filtera, postupka za nanošenje uzorka, i određenog instrumenta koji se koristi. U nekim slučajevima, novi signali mogu da se uoče ili postojeći signali mogu da nestanu, u zavisnosti od vrste instrumenta ili podešavanja. Kao što je ovde korišćeno, izraz "signal"se odnosi na refleksiju koja ima relativnu visinu/intenzitet od najmanje oko 4% maksimalne visine/intenziteta signala. Osim toga, varijacije instrumenta i drugi faktori mogu da utiču na 2-teta vrednosti. Prema tome, dodeljivanje signala, kao što su oni koji su ovde prijavljeni, mogu da se razlikuju za plus ili minus oko 0.2° (2-teta), i izraz "u suštini" i "oko" kao što je korišćeno ovde u XRPD je namenjeno da obuhvati gore pomenute varijacije.

[0032] U nekim izvođenjima, so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I ima najmanje jedan XRPD signal, u terminima 2-teta, izabrana između 11.3°, oko 16.4°, oko 21.0°, oko 23.0°, oko 28.1°, oko 31.2°, i oko 32.8°. U nekim izvođenjima, so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I ima najmanje dva XRPD signala, u terminima 2-teta, izabrana od oko 11.3°, oko 16.4°, oko 21.0°, oko 23.0°, oko 28.1°, oko 31.2°, i oko 32.8°. U nekim izvođenjima, so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I ima najmanje tri XRPD signala, u terminima 2-teta, izabrana od oko 11.3°, oko 16.4°, oko 21.0°, oko 23.0°, oko 28.1°, oko 31.2°, i oko 32.8°. U nekim izvođenjima, so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I ima najmanje četiri XRPD signala, u izrazima 2-teta, izabrana od oko 11.3°, oko 16.4°, oko 21.0°, oko 23.0°, oko 28.1°, oko 31.2°, i oko 32.8°. U nekim izvođenjima, so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I ima najmanje pet XRPD signala, u terminima 2-teta, izabrana od oko 11.3°, oko 16.4°, oko 21.0°, oko 23.0°, oko 28.1°, oko 31.2°, i oko 32.8°. U nekim izvođenjima, so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I ima XRPD profil u suštini kao što je prikazano na Slici 3.

[0033] Na isti način, očitavanja temperature u vezi sa DSC, TGA, ili drugim toplotnim eksperimentima mogu da se razlikuju oko 63 °C u zavisnosti od instrumenta, određenih podešavanja, pripreme uzorka, itd. Prema tome, ovde prijavljeni kristalni oblik koji ima DSC termogram "u suštini" kao što je prikazano u bilo kojoj od Slika ili izraz "oko" se razume da prihvata takve varijacije. U nekim izvođenjima, so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I ima DSC termogram sa endotermnim signalom na oko 207 °C. U nekim izvođenjima, so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I ima DSC termogram u suštini kao što je prikazano na Slici 1. U nekim izvođenjima, so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I ima TGA termogram u suštini kao što je prikazano na Slici 2.

[0034] U nekim izvođenjima, ovde opisane soli i jedinjenja (npr., jedinjenje Formule I ili hlorovodonična so jedinjenja Formule I) su u suštini izolovane. Pod "u suštini izolovane" je označeno da je so ili jedinjenje bar delom ili u suštini odvojeno od okruženja u kome je nastalo ili detektovano. Delimično razdvajanje može da uključi, na primer, kompoziciju obogaćenu solima koje se ovde opisuju. Razdvajanje u suštini može da uključi kompozicije koje sadrže najmanje oko 50%, najmanje oko 60%, najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95%, najmanje oko 97%, ili najmanje oko 99% u odnosu na težinu ove opisanih soli, ili njegovih soli. Postupci ua izolovanje jedinjenja i njihovih soli su rutinski u stanju tehnike

Intermedijeri

[0035] Predmetna prijava dalje obezbeđuje intermedijere koji su korisni u dobijanju jedinjenja Formule I.

[0036] Prema tome, predmetna prijava obezbeđuje jedinjenje Formule XIV:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0037] Predmetna prijava dalje obezbeđuje jedinjenje Formule XV:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0038] Predmetna prijava dalje obezbeđuje jedinjenje Formule XVI:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0039] Predmetna prijava dalje obezbeđuje jedinjenje Formule XIX:

1

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0040] Predmetna prijava dalje obezbeđuje jedinjenje Formule XX:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0041] Predmetna prijava dalje obezbeđuje jedinjenje Formule XXI:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

Postupci

[0042] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje postupak za dobijanje soli hlorovodnične kiseline Formule I:

koji obuhvata reakciju jedinjenja Formule I:

sa hlorovodoničnom kiselinom da bi se obrazovala pomenuta so.

[0043] U nekim izvođenjima, pomenuta hlorovodonična kiselina je 1 M hlorovodnična kiselina rastvorena u vodi.

[0044] U nekim izvođenjima, oko 3.3 do oko 3.7 ekvivalenata hlorovodonične kiseline je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule I.

[0045] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija se izvodi na temperaturi od oko 45 °C do oko 55 °C.

[0046] U nekim izvođenjima, postupak se sastoji iz:

dodavanja hlorovodonične kiseline jedinjenju Formule I na sobnoj temperaturi da bi se obrazovala suspenzija;

zagrevanja pomenute suspenzije do temperature od oko 45 °C do oko 55 °C da bi se formirao rastvor; i

hlađenja rastvora do temperature od oko 0 °C do oko 5 °C da bi pomenuta so kristalisala.

[0047] U nekim izvođenjima, postupak obuhvata reakciju jedinjenja Formule XVI:

sa formamidin acetatom da se obrazuje jedinjenje Formule I:

[0048] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija jedinjenja Formule XVI sa formamidin acetatom je sprovedena u komponenti rastvarača koji se sastoji iz 1,2-etandiola.

[0049] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija jedinjenja Formule XVI sa formamidin acetatom je sprovedena na temperaturi od oko 100 °C do oko 105 °C.

[0050] U nekim izvođenjima, oko 8 do oko 10 ekvivalenata formamidin acetata je korišćena na osnovu 1 ekvivalenata jedinjenja Formule XVI.

[0051] U nekim izvođenjima, postupak dalje obuhvata pripremu jedinjenja Formule XVI pomoću postupka koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule XV:

sa (1-etoksietiliden)malononitrilom u prisustvu tercijernog amina.

[0052] U nekim izvođenjima, pomenuti tercijarni amin je N-metilpirolidinon.

[0053] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija jedinjenja Formule XV sa sa (1-etoksietiliden)malononitrilom je izvedena na približno sobnoj temperaturi.

[0054] U nekim izvođenjima, postupak dalje obuhvata pripremu jedinjenja Formule XV postupkom koji se sastoji iz reakcije jedinjenja Formule XIV-a:

1

sa hidrazinom u prisustvu tercijarnog amina, gde P<1>je C1-6alkilsulfonil.

[0055] U nekim izvođenjima, pomenuti tercijarni amin je N-metilpirolidinon.

[0056] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija jedinjenja Formule XIV-a sa hidrazinom je izvedena na temperaturi od oko 35 °C do oko 60 °C.

[0057] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija jedinjenja Formule XIV-a sa hidrazinom je izvedena u komponenti rastvarača koja se sastoji iz dihlorometana.

[0058] U nekim izvođenjima, P<1>je metansulfonil grupa.

[0059] U nekim izvođenjima, postupak se dalje sastoji iz pripreme jedinjenja Formule XIV postupkom koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule XIII:

sa C1-6alkilsulfonilhalogenidom u prisustvu tercijarnog amina.

[0060] U nekim izvođenjima, pomenuti C1-6alkilsulfonilhalogenid je metansulfonil hlorid.

[0061] U nekim izvođenjima, pomenuti tercijarni amin je N,N-diizopropiletilamin.

[0062] U nekim izvođenjima, oko 1.1 do oko 1.5 ekvivalenata alkilsulfonilhalogenida je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule XIII.

[0063] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija pomenutog jedinjenja Formule XIII sa C1-6 alkilsulfonilhalogenidom je izvedena na temperaturi od oko -10 °C do oko 5 °C.

[0064] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija pomenutog jedinjenja Formule XIII sa C1-6alkilsulfonilhalogenid je izvedena u komponenti koja se sastoji iz dihlorometana.

[0065] U nekim izvođenjima, koraci (i) reagovanja pomenutog jedinjenja Formule XIII sa C1-6alkilsulfonilhalogenidom; (ii) reagovanja pomenutog jedinjenja Formule XIV-a sa hidrazinom u prisustvu tercijarnog amina da se obrazuje jedinjenje Formule XV; i (iii) reakcija pomenutog jedinjenja Formule XV sa formamidin acetatom da se obrazuje jedinjenje Formule XVI su sprovedene u istoj posudi bez izolovanja jedinjenja Formule XIV-a ili jedinjenja Formule XV.

[0066] U nekim izvođenjima, postupak se dalje sastoji iz pripreme jedinjenja Formule XVI korišćenjem postupka koji obuhvata reakciju soli Formule XV-a:

sa (1-etoksietiliden)malononitrilom u prisustvu tercijarnog amina, pri čemu TsOH je p-toluensulfonska kiselina.

[0067] U nekim izvođenjima, pomenuti tercijerni amin je N,N-diizopropiletilamin.

[0068] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija soli Formule XV-a sa sa (1-etoksietiliden)malononitrilom je izvedena na približno sobnoj temperaturi.

[0069] U nekim izvođenjima, oko 1.3 do oko 1.6 ekvivalenata (1-etoksietiliden)malononitrila je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta soli Formule XV-a.

[0070] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija soli Formule XV-a sa sa (1-etoksietiliden)malononitrilom je izvedena u komponenti rastvarača koja se sastoji iz etanola.

[0071] U nekim izvođenjima, postupak se dalje sastoji iz pripreme soli Formule XV-a pomoću postupka koji se sastoji iz reakcije jedinjenja Formule XXI:

sa p-toluensulfonskom kiselinom, pri čemu Boc je terc-butoksikarbonil.

[0072] U nekim izvođenjima, pomenuta p-toluensulfonska kiselina je monohidrat p-toluensulfonske kiseline.

1

[0073] U nekim izvođenjima, oko 1.3 do oko 1.6 ekvivalenata p-toluensulfonske kiseline je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule XXI.

[0074] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija pomenutog jedinjenja Formule XXI sa ptoluensulfonskom kiselinom je izvedena na temperaturi od oko 45 °C do oko 65 °C.

[0075] U nekim izvođenjima, reagovanje pomenutog jedinjenja Formule XXI sa p-toluensulfonskom kiselinom je sprovedeno u komponenti rastvarača koji sadrži etanol.

[0076] U nekim izvođenjima koraci pod: (i) reagovanje pomenutog jedinjenja Formule XXI sa ptoluensulfonskom kiselinom da se obrazuje so Formule XV-a; i (ii) reagovanje pomenute soli Formule XV-a sa (1-etoksietiliden)malononitrilom su sprovedeni u istoj posudi bez izolovanja soli Formule XV-a.

[0077] U nekim izvođenjima, postupak dalje obuhvata pripremu jedinjenja Formule XXI korišćenjem postupka koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule XX:

sa vodonikovim gasom u prisustvu jednog ili više nezavisno izabranih katalizatora hidrogenizacije, pri čemu Boc je terc-butoksikarbonil.

[0078] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija jedinjenja Formule XX sa gasovitim vodonikom je izvedena u prisustvu dva nezavisno izabrana katalizatora hidrogenizacije.

[0079] U nekim izvođenjima, jedan katalizator hidrogenizacije je bis(1,5-ciklooktadien)rodijum(I)tetrafluoroborat i drugi je (R)-(-)-1-{(S)-2-[bis(4-trifluorometilfenil)fosfin]ferocenil}etil-di-t-butilfosfin.

[0080] U nekim izvođenjima, oko 13.5 do oko 14.5 ekvivalenata bis(1,5-ciklooktadien)rodijum(I)tetrafluoroborat je korišćen na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule XX.

[0081] U nekim izvođenjima, oko 12 do oko 13 ekvivalenata (R)-(-)-1-{(S)-2-[bis(4-trifluorometilfenil)fosfin]ferocenil}etil-di-t-butilfosfin je korišćen na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule XX.

[0082] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija jedinjenja Formule XX sa gasovitim vodonikom je izvedena na približno sobnoj temperaturi.

[0083] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija jedinjenja Formule XX sa gasovitim vodonikom je izvedena u komponenti rastvarača koja se sastoji iz metanola.

1

[0084] U nekim izvođenjima, postupak se dalje sastoji iz pripreme jedinjenja Formule XX postupkom koji se sastoji iz reakcije jedinjenja Formule XIX:

sa t-butil karbazatom.

[0085] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija jedinjenja Formule XIX sa t-butil karbazatom je izvedena na temperaturi od oko 60 °C do oko 70 °C.

[0086] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija jedinjenja Formule XIX sa t-butil karbazatom je izvedena u komponenti rastvarača koja se sastoji iz metanola.

[0087] U nekim izvođenjima, postupak dalje obuhvata pripremu jedinjenja Formule XIX postupkom koji se sastoji iz oksidacije jedinjenja Formule XIII-a:

u prisustvu oksidacionog sredstva.

[0088] U nekim izvođenjima, pomenuto oksidaciono sredstvo je Des-Martinov perjodinan.

[0089] U nekim izvođenjima, oko 1.2 do oko 1.7 ekvivalenata pomenutog oksidacionog sredstva je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjena Formule XIII-a.

[0090] U nekim izvođenjima, pomenuta oksidacija jedinjenja Formule XIII-a je izvedena na približno sobnoj temperaturi.

[0091] U nekim izvođenjima, pomenuta oksidacija jedinjenja Formule XIII-a je izvedena u komponenti rastvarača koja se sastoji iz dihlorometana.

[0092] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule XIII je dobijeno postupkom koji se sastoji iz zagrevanja jedinjenja Formule XII:

1

u prisustvu komponente rastvarače.

[0093] U nekim izvođenjima, pomenuto zagrevanje je izvedeno na temperaturi od oko 95 °C do oko 105 °C.

[0094] U nekim izvođenjima, pomenuta komponenta rastvarača sadrži 1,4-dioksan.

[0095] U nekim izvođenjima, pomenuta komponenta rastvarača sadrži toluen.

[0096] U nekim izvođenjima, pomenuta komponenta rastvarača sadrži 1,4-dioksan i toluen.

[0097] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule XII je pripremljeno postupkom koji se sastoji iz reakcije jedinjenja Formule XI:

u prisustvu jake baze.

[0098] U nekim izvođenjima, pomenuta jaka baza je natrijum hidroksid.

[0099] U nekim izvođenjima, pomenuta jaka baza je 1 M natrijum hidroksid rastvoran u vodi.

[0100] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija se izvodi na sobnoj temperaturi.

[0101] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule XI je dobijeno postupkom koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule X:

1

sa gasom vodonika u prisustvu Raney-ovog nikla.

[0102] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija se izvodi na temperaturi od oko 50 °C do oko 70 °C.

[0103] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule X ie dobijeno postupkom koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule IX:

u prisustvu boron trifluorid eterata, (3aS)-1-metil-3,3-difeniltetrahidro-3H-pirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborol ((S)-MeCBS) katalizatora, i kompleksa borana.

[0104] U nekim izvođenjima, oko 0.03 do oko 0.07 ekvivalenata boron trifluorid eterata je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule IX.

[0105] U nekim izvođenjima, oko 0.05 do oko 0.15 ekvivalenata (3aS)-1-metil-3,3-difeniltetrahidro-3H-pirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborolnog ((S)-MeCBS) katalizatora je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule IX.

[0106] U nekim izvođenjima, pomenuti kompleks borana je 1.0 M boran-THF kompleks u THF-u.

[0107] U nekim izvođenjima, oko 0.9 do oko 1.1 ekvivalenata kompleksa borana je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule IX.

[0108] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija se izvodi na približno sobnoj temperaturi.

[0109] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule IX je dobijeno postupkom koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule VIII:

sa jodom u prisustvu komponente rastvarača.

[0110] U nekim izvođenjima, pomenuta komponenta rastvarača se sastoji iz acetona.

1

[0111] U nekim izvođenjima, oko 0.75 do oko 1.25 ekvivalenata joda je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule VIII.

[0112] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule VIII je dobijeno postupkom koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule VII:

sa dimetil malonatom u prisustvu katalizatora.

[0113] U nekim izvođenjima, pomenuti katalizator je (1S,2S)-N,N’-dibenzilcikloheksan-1,2-diamindibromonikl (Evans-ov katalizator).

[0114] U nekim izvođenjima, oko 1.1 do oko 1.3 ekvivalenata dimetil malonata je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule VII.

[0115] U nekim izvođenjima, oko 0.02 do oko 0.03 ekvivalenata prelaznog metala je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule VII.

[0116] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule VII je dobijeno postupkom koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule VI:

sa nitrometanom u prisustvu organske kiseline da bi se dobila prva smeša.

[0117] U nekim izvođenjima, pomenuta organska kiselina je glacijalna sirćetna kiselina.

[0118] U nekim izvođenjima, oko 9.5 do oko 10.5 ekvivalenata nitrometana je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule VI.

[0119] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija dalje obuhvata dodavanje baze amina u pomenutu prvu smešu da se obrazuje druga smeša.

[0120] U nekim izvođenjima, pomenuta baza amina je benzilamin.

2

[0121] U nekim izvođenjima, oko 0.2 do oko 0.3 ekvivalenata baze amina je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule VI.

[0122] U nekim izvođenjima, pomenuta druga smeša je zagrevana na oko 55 °C do oko 65 °C.

[0123] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule VI je dobijeno postupkom koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule V:

sa kompleksa (C1-4alkil)magnezijumhalogenida da bi se obrazovala prva smeša.

[0124] U nekim izvođenjima, pomenuti kompleks (C1-4alkil)magnezijum halogenida je 1.3 M izopropilmagnezijum hlorid litijum hloridni kompleks.

[0125] U nekim izvođenjima, oko 1.1 do oko 1.3 ekvivalenata pomenutog kompleksa (C1-4 alkil)magnezijumhalogenida je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule V.

[0126] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija dalje obuhvata dodavanje N-formilmorfolina pomenutoj prvoj smeši da se dobije druga smeša.

[0127] U nekim izvođenjima, oko 1.8 do oko 2.2 ekvivalenata N-formilmorfolina je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule V.

[0128] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija se izvodi na temperaturi od oko - 5 °C do oko 10 °C.

[0129] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule V je dobijeno u skladu sa postupcima koji su opisani u U.S. Objavi br.2013-0059835A1.

[0130] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule VI je dobijeno korišćenjem postupka koji se sastoji iz reagovanja jedinjenja Formule V-a:

sa N,N-dimetilformamidom u prisustvu litijum diizopropilamida.

[0131] U nekim izvođenjima, pomenuti litijum diizopropilamid je dobijen reagovanjem N,N-diizopropilamina u prisustvu n-butillitijuma.

[0132] U nekim izvođenjima, pomenuti litijum diizopropilamid je dobijen na temperaturi od oko -75 °C do oko 5 °C.

[0133] U nekim izvođenjima:

(ii) pomenuto jedinjenje Formule V-a je reagovalo sa litijum diizopropilamidom da bi se obrazovala prva smeša; i

(ii) N,N-dimetilformamid je dodat u pomenutu prvu smešu da se obrazuje druga smeša.

[0134] U nekim izvođenjima, oko 1.2 do oko 1.3 ekvivalenata baze amina je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule V-a.

[0135] U nekim izvođenjima, oko 1.4 do oko 1.6 ekvivalenata N,N-dimetilformamida je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule V-a.

[0136] U nekim izvođenjima, pomento jedinjenje Formule V-a je dobijeno postupkom koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule IV-a:

sa 1,2-etandiolom u prisustvu p-toluensulfonske kiseline.

[0137] U nekim izvođenjima, pomenuta p-toluensulfonska kiselina je monohidrat p-toluensulfonske kiseline.

[0138] U nekim izvođenjima, oko 2.2 do oko 2.7 ekvivalenata 1,2-etandiola je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule IV-a.

[0139] U nekim izvođenjima, oko 0.05 do oko 0.1 ekvivalenata p-toluensulfonske kiseline je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule IV-a.

[0140] U nekim izvođenjima, pomenuto reagovanje se izvodi približno na refluksu.

[0141] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule IV-a je dobijeno postupkom koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule II:

sa CH2CH2-X<1>u prisustvu karbonatne baze alkalnog metala, gde:

X<1>je halogenid.

[0142] U nekim izvođenjima, X<1>je jodid.

[0143] U nekim izvođenjima, pomenuta karbonatna baza alkalnog metala je kalijum karbonat.

[0144] U nekim izvođenjima, oko 1.1 do oko 1.3 ekvivalenata CH2CH2-X<1>je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule II.

[0145] U nekim izvođenjima, oko 1.8 do oko 2.2 ekvivalenata baze karbonata alkalnog metala je korišćeno na osnovu 1 ekvivalenta jedinjenja Formule II.

[0146] U nekim izvođenjima, pomenuto reagovanje je izvedeno na oko 55 °C do oko 65 °C.

[0147] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje Formule II je dobijeno prema postupcima koji su opisani u U.S. Prijavi br.2013-0059835A1.

[0148] Razume se da određene karakteristike iz pronalaska, koje su, radi jasnoće, opisane u kontekstu odvojenih izvođenja, mogu takođe da budu obezbeđene u kombinaciji u jednom izvođenju (dok izvođenja koja su namenjena da budu kombinovana kao da su napisana u više zavisnih oblika). Suprotno tome, razne karakteristike pronalaska koje su, radi sažetosti, opisane u kontekstu jednog izvođenja, mogu takođe da budu obezbeđene odvojeno ili u bilo kojoj pogodnoj podkombinaciji.

[0149] Ovde opisane soli i jedinjenja mogu da budu asimerična (npr., da imaju jedan ili više stereocentara). Ukoliko stereohemija nije naznačena, onda svi stereoizomeri, kao što su enantiomeri i diastereoizomeri, su namenjeni osim ukoliko nije drugačije naznačeno sa strukturom ili nazivom. Soli i jedinjenja u predmetnoj prijavi koja sadrže asimetrično supstituisane atome ugljenika mogu da budu izolovana u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Postupci koji pokazuju kako mogu da se dobiju aktivni oblici iz optički neaktivnih polaznih materijala su poznati u oblasti tehnike, kao što je razdvajanjem racemskih smeša ili pomoću stereoselektivne sinteze. Mnogi geometrijski izomeri olefina, C=N dvostrukih veza, i slično mogu takođe da se nalaze u ovde opisanim solima i jedinjenjima, i svi takvi stabilni izomeri su razmotreni u predmetnog prijavi. Opisani su cis i trans geometrijski izomeri soli i jedinjenja iz predmetne prijave i mogu da budu izolovani kao smeša izomera ili kao razdvojeni izomerni oblici.

[0150] Razdvajanje racemskih smeša soli i jedinjenja može da se izvede pomoću bilo kojih brojnih postupaka koji su poznati u oblasti tehnike. Primer postupka uključuje frakcionu rekristalizaciju upotrebom hiralne kiseline za razdvajanje koja je optički aktivna, organske kiseline za obrazovanje soli. Pogodna sredstva za razdvajanje za postupke frakcione rekristalizacije su, na primer, optički aktivne kiseline, kao što su D i L oblici vinske kiseline, diacetilvinske kiseline, dibenzoilvinske kiseline, bademove kiseline, jabučne kiseline, mlečne kiseline ili raznih optički aktivnih kamforsulfonskih kiselina kao što je β-kamforsulfonska kiselina. Druga sredstva za razdvajanje koja su pogodna za postupke frakcione rekristalizacije uključuju stereoizomerne čiste oblike α-metilbenzilamina (npr., S i R oblike, ili diastereomerno čiste oblike), 2-fenilglicinol, norefedrin, efedrin, N-metilefedrin, cikloheksiletilamin, 1,2-diaminocikloheksan, i slično.

[0151] Razdvajanje racemskih smeša može takođe da se izvede eluiranjem na koloni koja je spakovana sa optički aktivnim sredstvom za razdvajanje (npr., dinitrobenzoilfenilglicin). Pogodna kompozicija rastvarača za eluiranje može da bude određena od strane stručnjaka iz oblasti tehnike.

[0152] Soli iz pronalaska i jedinjenja mogu takođe da uključe sve izotope atoma koji se pojavljuju u intermedijerima ili konačnim solima ili jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome sa istim atomskim brojem ali različitim masenim brojevima. Na primer, izotopi vodonika uključuju tricijum i deuterijum.

2

[0153] U nekim izvođenjima, jedinjenja ili soli mogu da se nađu zajedno sa drugim supstancama kao što su voda i rastvarači (npr. hidrati i solvati) ili mogu da se izoluju.

[0154] U nekim izvođenjima, ovde opisana jedinjenja, ili njihove soli (npr., so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I), su u suštini izolovana. Pod "u suštini izolovana" je označeno da je jedinjenje bar delom ili je u suštini odvojeno od okruženja u kome je nastalo ili je detektovano. Parcijalno razdvajanje može da uključi, na primer, kompoziciju koja je obogaćena u jedinjenjima. Suštinsko razdvajanje može da uključi kompozicije koje uključuju najmanje oko 50%, najmanje oko 60%, najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95%, najmanje oko 97%, ili najmanje oko 99% u odnosu na težinu jedinjenja, ili njegove soli. Postupci za izolovanje jedinjenja i njihovi soli su rutinski u stanju tehnike.

[0155] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" je ovde korišćen da se odnosi na takva jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima humanih bića i životinja bez viška toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugog problema ili komplikacije, srazumno razumno odnosu koristi/rizika.

[0156] Kao što će biti cenjeno, ovde obezbeđena jedinjenja, uključujući njihove soli, mogu da se dobiju korišćenjem poznatih postupaka organske sinteze i mogu da se sintetišu prema bilo kom od brojnih mogućih puteva sinteze. Ovde opisani postupci mogu da se prate prema bilo kom postupku koji je pogodan u oblasti tehnike. Na primer, obrazovanje proizvoda može da se prati spektroskopskim sredstvima, kao što je nuklearno magnetno rezonantna spektroskopija (npr., 1H ili 13C), infracrvena spektroskopija, ili spektrofotometrija (npr., UV-vidljiva); ili hromatografski kao što je tečna hromatografija visokih performansi (HPLC) ili hromatografija na tankom sloju (TLC) ili drugi povezani postupci.

[0157] Kao što se ovde koristi, izraz "reagovanje" je korišćen kao što je poznato u oblasti tehnike i generalno se odnosi na dovođenje u kontakt hemijskih reagenasa na takav način tako da se omogući njihovo interagovanje na molekularnom nivou da bi se postigla hemijska ili fizička transformacija. U nekim izvođenjima, reagovanje uključuje da reagensa, pri čemu jedan ili više ekvivalenata drugog reagenasa su korišćeni u odnosu na prvi reagens. Reakcioni koraci ovde opisanih postupaka se mogu izvoditi neko vreme i pod uslovima koji su pogodni za dobijanje identifikovanog proizvoda.

[0158] Reakcije iz ovde opisanih prostupaka mogu da se izvedu u pogodnim rastvaračima koji mogu brzo da se izaberu od strane stručnjaka iz oblasti tehnike u oblasti organske sinteze. Pogodni rastvarači mogu u suštini da budu nereaktivni sa polaznim materijalima (reaktanti), intermedijerima, ili proizvodima na temperaturama na kojima se rekacije izvode, npr., temperaturama koje mogu da budu opsega temperature zamrzavanja rastvarača do temperature ključanja rastvarača. Data reakcija može da se izvede u jednom rastvaraču ili smeši više od jednog rastvarača. U zavisnosti od određenog koraka reakcije, mogu da budu izabrani pogodni rastvarači za određeni korak u reakciji.

[0159] Pogodni rastvarači mogu da uključe halogenovane rastvarače kao što je ugljenik tetrahlorid, bromodihlorometan, di-bromohlorometan, bromoform, hloroform, bromohlorometan, dibromometan, butil hlorid, dihlorometan, tetrahloroetilen, trihloroetilen, 1,1,1-trihloroetan, 1,1,2-trihloroetan, 1,1-dihloroetan, 2-hloropropan, 1,2-dihloroetan, 1,2-dibromoetan, heksafluorobenzen, 1,2,4-trihlorobenzen, 1,2-dihlorobenzen, hlorobenzen, fluorobenzen, njihove smeše i slično.

[0160] Pogodni etarski rastvarači uključuju: dimetoksimetan, tetrahidrofuran, 1,3-dioksan, 1,4-dioksan, furan, dietil etar, etilen glikol dimetil etar, etilen glikol dietil etar, dietilen glikol dimetil etar, dietilen glikol dietil etar, trietilen glikol dimetil etar, anizol, t-butil metil etar, njihove smeše i slično.

[0161] Pogodni protični rastvarači mogu da uključe, kao primer i bez ograničenja, vodu, metanol, etanol, 2-nitroetanol, 2-fluoroetanol, 2,2,2-trifluoroetanol, etilen glikol, 1-propanol, 2-propanol, 2-metoksietanol, 1-butanol, 2-butanol, i-butil alkohol, t-butil alkohol, 2-etoksietanol, dietilen glikol, 1-, 2-, ili 3-pentanol, neo-pentil alkohol, t-pentil alkohol, dietilen glikol monometil etar, dietilen glikol monoetil etar, cikloheksanol, benzil alkohol, fenol, ili glicerol.

[0162] Pogodni aprotični rastvarači mogu da uključe, kao primer i bez ograničenja, tetrahidrofuran (THF), N,N-dimetilformamid (DMF), N,N-dimetilacetamid (DMA), 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(1H)-pirimidinon (DM-PU), 1,3-dimetil-2-imidazolidinon (DMI), N metilpirolidinon (NMP), formamid, N-metilacetamid, N-metilformamid, acetonitril, dimetil sulfoksid, propionitril, etil formijat, metil acetat, heksahloroaceton, aceton, etil metil keton, etil acetat, sulfolan, N,N-dimetilpropionamid, tetrametilurea, nitrometan, nitrobenzen, ili heksametilfosforamid.

[0163] Pogodni ugljovodonični rastvarači uključuju benzen, cikloheksan, pentan, heksan, toluen, cikloheptan, metilcikloheksan, heptan, etilbenzen, m-, o-, ili p-ksilen, oktan, indan, nonan, ili naftalen.

[0164] Reakcije iz ovde opisanih postupaka mogu da se izvedu na odgovarajućim temperaturama koje mogu brzo da se odrede od strane stručnjaka iz oblasti tehike. Temperature reakcije će zavisiti od, na primer, tačaka topljenja i ključanja reagenasa i rastvarača, ukoliko su prisutni; termodinamike reakcije (npr., može biti potrebno da se snažne egzotermne reakcije izvedu na smanjenim temperaturama); i kinetike reakcija (npr., visoko aktivacionoj energetskoj barijeri mog biti potrebne povišene temperature).

[0165] Izrazi, "ambijentalna temperatura" i "sobna temperatura" ili "st" kao što je ovde korišćeno, su jasni u oblasti tehnike, i generalno se odnose na temperaturu, npr. reakcionu temperaturu, koja je približna temperaturi sobe u kojoj se reakcija izvodi, na primer, temperaturi od oko 20 °C do oko 30 °C.

[0166] Reakcije iz ovde opisanih postupaka mogu da se izvedu na vazduhu ili u inertnoj atmosferi. Obično, reakcije koje sadrže reagense ili proizvode koji su u suštini reaktivni sa vazduhom mogu da se izvedu upotrebom sintetskih postupaka senzitivnih na vazduh koji su dobro poznati stručnjaku iz oblastu tehnike.

Postupci upotrebe

[0167] Soli iz pronalaska i jedinjenja mogu da moduliraju akivnost jedne ili više različitih kinaza uključujući, na primer, fosfoinozitid 3-kinaze (PI3K-i). Izraz "modulacija" je namenjen da se odnosi na sposobnost da se poveća ili smanji aktivnost jednog ili više članova familije PI3K. Prema tome, soli iz pronalaska mogu da se koriste u prostupcima modulacije PI3K dovođenjem u kontakt PI3K sa bilo kojim ili više ovde opisanih soli, jedinjenja ili kompozicija. U nekim izvođenjima, soli iz pronalaska i jedinjenja iz predmetne prijave mogu da deluju kao inhibitori jedne ili više PI3K-e. U daljim izvođenjima, soli iz pronalaska mogu da se koriste za modulaciju aktivnosti PI3K kod individue kojoj je potrebna modulacija receptora davanjem modulacione količine jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U nekim izvođenjima, modulacija je inhibicija.

[0168] Pod uslovom da rast i preživljavanje ćelija kancera se nalazi pod uticajem brojnih signalnih puteva, predmetna prijava je korisna za lečenje stanja bolesti koja se karakterišu kinaznim mutantima koji su rezistentni na lek. Dodatno, različiti kinazni inibitori, koji ispoljavaju različite preferencije prema kinazama čije aktivnosti moduliraju, mogu da se kombinovano koriste. Ovaj pristup bi se mogao prikazati visoko efikasnim u lečenju stanja bolesti ciljanjem brojnih signalnih puteva, smanjenjem verovatnoće za pojavu rezistencije na lek u ćeliji, i smanjenjem toksičnosti tretmana za bolesti.

2

[0169] Kinaze za koje se predmetne soli i jedinjenja vezuju i/ili moduliraju (npr., inhibiraju) uključuju bilo koji član familije PI3K. U nekim izvođenjima, PI3K je PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kδ, ili PI3Kγ. U nekim izvođenjima, PI3K je PI3K δ ili PI3Kγ. U nekim izvođenjima, PI3K je PI3Kδ. U nekim izvođenjima, PI3K je PI3Kγ. U nekim izvođenjima, PI3K uključuje mutaciju. Mutacija može da bude zamena jedne aminokiseline drugom, ili uklanjanje jedne ili više aminokiselina. U takvim izvođenjima, mutacija može da se nalazi u kinaznom domenu PI3K.

[0170] U nekim izvođenjima, više od jedne soli ili jedinjenja je korišćeno za inhibiranje aktivnosti jedne kinaze (npr., PI3K δ ili PI3Kγ).

[0171] U nekim izvođenjima, više od jedne soli ili jedinjenja je korišćeno za inhibiranje više od jedne kinaze, kao što su najmanje dve kinaze (npr., PI3K δ i PI3Kγ).

[0172] U nekim izvođenjima, jedna ili više soli ili jedinjenja je korišćeno u kombinaciji sa drugim kinaznim inhibitorom da bi se inhibirala aktivnost jedne kinaze (npr., PI3K δ ili PI3Kγ).

[0173] U nekim izvođenjima, edna ili više soli ili jedinjenja je korišćeno u kombinaciji sa drugim kinaznim inhibitorom da bi se inhibirale aktivnosti više od jedne kinaze (npr., PI3K δ ili PI3Kγ), kao što je najmanje dve kinaze.

[0174] Soli iz pronalaska i jedinjenja mogu da budu selektivni. Pod "selektivni" je označeno da se jedinjenje vezuje za ili inhibira kinazu sa većim afinitetom ili potencijom, redom, u poređenju sa najmanje jednom drugom kinazom. U nekim izvođenjima, soli iz pronalaska i jedinjenja su selektivni inhibitori PI3K δ ili PI3Kγ u odnosu na PI3Kα i/ili PI3Kβ. U nekim izvođenjima, soli iz pronalaska i jedinjenja su selektivni inhibitori PI3K δ(npr., u odnosu na PI3Kα, PI3Kβ i PI3Kγ). U nekim izvođenjima, soli iz pronalaska i jedinjenja su selektivni inhibitori PI3Kδ(npr., u odnosu na PI3Kα, PI3Kβ i PI3Kγ). U nekim izvođenjima, selektivnost može da bude najmanje oko 2-puta, 5-puta, 10-puta, najmanje oko 20-puta, najmanje oko 50-puta, najmanje oko 100-puta, najmanje oko 200-puta, najmanje oko 500-puta ili najmanje oko 1000-puta. Selektivnost može da bude izmerena postupcima koji su rutinski u oblasti tehnike. U nekim izvođenjima, selektivnost može da bude ispitana na KmATP koncentraciji svakog enzima. U nekim izvođenjima, selektivnost soli iz pronalaska i jedinjenja može da bude određena ćelijskim testovima koji su povezani sa određenom aktivnosti PI3K kinaze.

[0175] Drugi aspekt predmetnog pronalaska se odnosi na so iz pronalaska za upotrebu u postupcima za lečenje bolesti koja je povezana sa kinazom (kao što je PI3K) ili poremećaja kod individue (npr., pacijenta) davanjem individui kojoj je takav tretman potreban terapeutski efikasne količine ili doze jedne ili više soli ili jedinjenja iz predmetne prijave ili njihove farmaceutske kompozicije. PI3K-povezana bolest može da uključi bilo koju bolest, poremećaj ili stanje koje je direktno ili indirektno vezano sa ekspresijom ili aktivnosti PI3K, uključujući prekomernu ekspresiju i/ili nivoe abnormalne aktivnosti. U nekim izvođenjima, bolest može da bude povezana sa Akt (protein kinazom B), sisarskom metom rapamicina (mTOR), ili fosfoinozitid-zavisnom kinazom 1 (PDK1). U nekim izvođenjima, mTOR-povezana bolest može da bude inflamacija, ateroskleroza, psorijaza, restenoza, benigna hipertrofija prostate, poremećaji kostiju, pankreatitis, angiogeneza, diabetična retinopatija, ateroskleroza, artritis, imunološki poremećaji, bolest bubrega, ili kancer. PI3K-povezana bolest može takođe da uključi bilo koju bolest, poremećaj ili stanje koje može da bude sprečeno, ublaženo, ili izlečeno modulacijom aktivnosti PI3K. U nekim izvođenjima, bolest je karakterisana sa abnormalnom aktivnosti PI3K. U nekim izvođenjima, bolest je karakterisana mutiranom PI3K. U takvim izvođenjima, mutacija može da se nalazi u kinaznom domenu PI3K.

2

[0176] Primeri PI3K-povezanih bolesti uključuju imunski zasnovane bolesti koje uključuju sistem uključujući, na primer, reumatoidni artritis, alergiju, astmu, glomerulonefritis, lupus, ili zapaljenje povezano sa bilo kojim prethodno navedenim.

[0177] Dalji primeri PI3K-povezanih bolesti uključuju kancere kao što je kancer dojke, prostate, debelog creva, endometrijuma, mozga, bešike, kože, uterusa, ovarijuma, pluća, pankreasa, bubrega, želuca, ili hematološki kancer.

[0178] Dalji primeri PI3K-povezanih bolesti uključuju bolesti pluća kao što je akutna povreda pluća (ALI) i adultni respiratorni distres sindrom (ARDS).

[0179] Dalji primeri PI3K-povezanih bolesti uključuju osteoartritis, restenozu, aterosklerozu, poremećaje kostiju, artritis, diabetsku retinopatiju, psorijazu, benignu hipertrofiju prostate, inflamaciju, angiogenezu, pankreatitis, bolest bubrega, inflamatornu bolest creva, mijasteniju gravis, multiple sklerozu, ili Sjgren-ov sindrom, i slično.

[0180] Dalji primeri PI3K-povezanih bolesti uključuju idiopatsku trombocitopenijsku purpuru (ITP), autoimunsku hemolitičnu anemiju (AIHA), vaskulitis, sistemski eritematozni lupus, lupus nefritis, pemfigus, membranoznu nefropatiju, hroničnu limfocitnu leukemiju (CLL), Ne-Hodčkinov limfom (NHL), leukemiju dlakastih ćelija, limfom Mantle ćelija, Burkitov limfom, mali limfocitni limfom, folikularni limfom, limfoplazmacitni limfom, limfom ekstranodalne marginalne zone, limfom difuznih velikih B ćelija (ABC) sličan aktiviranim B ćelijama, ili limfom difuznih velikih B ćelija (GCB) sličan B ćelijama germinalnog centra.

[0181] U nekim izvođenjima, bolest je izabrana od idiopatske trombocitopenijske purpure (ITP), autoimunske hemolitične anemije, vaskulitisa, sistemskog eritematoznog lupusa, lupusa nefritisa, pemfigusa, autoimunske hemolitične anemije (AIHA), membranozne nefropatije, hronične limfocitne leukemije (CLL), Ne-Hodčkinovog limfoma (NHL), leukemije dlakastih ćelija, limfoma mantle ćelija, Burkitovog limfoma, malog limfocitnog limfoma, limfoma folikula, limfoplazmatskog limfoma, limfoma ekstranodalne marginalne zone, Hodčkinovog limfoma, Waldenstrom-ove makroglobulonemije, prolimfocitne leukemije, akutne limfoblastne leukemije, mijelofibroze, limfoma limfnog tkiva povezanog sa mukozom (MALT), limfoma B-ćelija, limfoma mediastinalnih (timusnih) velikih B-ćelija, limfomatoidne granulomatoze, limfoma marginalne zone slezine, primarnog efuzionog limfoma, limfoma intravaskularnih velikih B-ćelija, leukemije plazma ćelija, ekstramedularnog plazmacitoma, tinjajućeg mijeloma (tj. asimptomatskog mijeloma), monoklonalne gamopatije neutvrđene značajnosti (MGUS) i limfoma B ćelija.

[0182] U nekim izvođenjima, postupak je postupak za lečenje idiopatske trombocitopenijske purpure (ITP) izabrane od relapsne ITP i refraktorne ITP.

[0183] U nekim izvođenjima, postupak je postupak za lečenje vaskulitisa izabranog od Behetove bolesti, Cogan-ovog sindroma, ateritisa džinovskih ćelija, reumatske polimijalgije (PMR), Takayasujevog arteritisa, Buerger-ove bolesti (thromboangiitis obliterans), vaskulitisa centralnog nervnog sistema, Kawasaki-jeve bolesti, sistemskog nekrotizirajućeg vaskulitisa malih i srednje velikih muskularnih arterija (lat. polyarteritis nodosa), Churg-Strauss-ovog sindroma, vaskulitisa mešovite krioglobulinemije (esencijalni ili indukovan virusom hepatitisa C (HCV)), Henoch-Schnlein purpura (HSP), vaskulitisa indukovanog reakcijama preosetljivosti, mikroskopskim poliangitisom, Wegenerovom granulomatozom, i sistemskim vaskulitisom (AASV) povezanim sa anti-neutrofilnim citoplazmatskim antitelom (ANCA).

2

[0184] U nekim izvođenjima, postupak je postupak za lečenje ne-Hodčkinovog limfoma (NHL) izabranog iz relapsnog NHL, refraktornog NHL, i rekurentnog folikularnog NHL

[0185] U nekim izvođenjima, postupak je postupak za lečenje limfoma B ćelija, pri čemu pomenuti limfom B ćelija je krupnoćelijski difuzni limfom B-ćelija (DLBCL).

[0186] U nekim izvođenjima, postupak je postupak za lečenje limfoma B ćelija, pri čemu pomenuti lifom B ćelija je krupnoćelijski difuzni limfom B ćelija sličan aktiviranim B-ćelijama (ABC), ili krupnoćelijski difuzni limfom B ćelija germinalnog centra (GCB).

[0187] U nekim izvođenjima, pomenuta bolest je osteoartritis, restenoza, ateroskleroza, poremećaji kostiju, artritis, dijabetska retinopatija, psorijaza, benigna hipertrofija prostate, inflamacija, angiogeneza, pankreatitis, oboljenje bubrega, inflamatorna bolest creva, mijastenija gravis, multiple skleroza, ili Sjgrenov sindrom.

[0188] U nekim izvođenjima, pomenuta bolest je reumatoidni artritis, alergija, astma, glomerulonefritis, lupus, ili inflamacija koja je povezana sa bilo kojim od prethodno navedenih.

[0189] U nekim izvođenjima, pomenuti lupus je sistemski lupus eritematozus ili lupus nefritis.

[0190] U nekim izvođenjima, pomenuta bolest je kancer dojke, kancer prostate, kancer debelog creva, kancer endometrijuma, kancer mozga, kancer bešike, kancer kože, kancer uterusa, kancer ovarijuma, kancer pluća, kancer pankreasa, kancer bubrega, kancer želuca, ili hematološki kancer.

[0191] U nekim izvođenjima, pomenuti hematološki kancer je akutna mijeloblastna leukemija ili hronična mijeloidna leukemija.

[0192] U nekim izvođenjima, pomenuti hematološki kancer su limfoidni maligniteti B-ćelijskog porekla uključujući, indolentan / agresivni B-ćelijski ne-Hodčkinov limfom (NHL), i Hodčkinov limfom (HL).

[0193] U nekim izvođenjima, pomenuta bolest je akutna povreda pluća (ALI) ili adultni respiratorni distres sindrom (ARDS).

[0194] Kao što se ovde koristi, izraz "dovođenje u kontakt" se odnosi na dovođenje u međusobni kontakt naznačenih ostataka u in vitro sistemu ili in vivo sistemu. Na primer, "dovođenje u kontakt" PI3K sa jedinjenjem uključuje davanje jedinjenja iz predmetne prijave individui ili pacijentu, kao što je humano biće, koje ima PI3K, kao i, na primer, uvođenje jedinjenja u uzorak koji sadrži ćelijski ili prečićen preparat koji sadrži PI3K.

[0195] Kao što se ovde koristi, izraz "individua" ili "pacijent," korišćeni naizmenično, se odnosi na bilo koju životinju, uključujući sisare, poželjno miševe, pacove, druge glodare, zečeve, pse, mačke, svinju, stoku, ovce, konje, ili primate, i najpoželjnije humana bića.

[0196] Kao što se ovde koristi, izraz "terapeutski efikasna količina" se odnosi na količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog sredstva koje pokreće biološki ili medicinski odgovor koji se traži u tkivu, sistemu, životinji, individui ili humanom biću od strane istraživača, veterinara, medicinskog doktora ili drugog kliničara. U nekim izvođenjima, doza jedinjenja, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja se daje pacijentu ili individui je oko 1 mg do oko 2 g, oko 1 mg do oko 1000 mg, oko 1 mg do oko 500 mg, oko 1 mg do oko 100 mg, oko 1 mg do 50 mg, ili oko 50 mg do oko 500 mg.

2

[0197] Kao što se ovde koristi, izraz "lečenje" ili "tretman" se odnosi na jedan ili više od (1) prevencije bolesti; na primer, prevencije bolesti, stanja ili poremećaja kod individue koja može da ima predispoziciju prema bolesti, stanju ili poremećaju ali još nije prošla kroz ili ispoljila patologiju ili simptomatologiju bolesti; (2) inhibiciju bolesti; na primer, inhibiciju bolesti, stanja ili poremećaja kod individue koja prolazi kroz ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (tj., zaustavljanja daljeg razvoja patologije i/ili simptomatologije); i (3) ublažavanja bolesti; na primer, ublažavanja bolesti, stanja ili poremećaja kod individue koja prolazi kroz ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (tj., reverzije patologije i/ili simptomatologije) kao što je smanjenje težine simptoma bolesti.

Kombinovane terapije

[0198] Jedan ili više dodatnih farmaceutskih sredstava kao što su, na primer, hemoterapeutici, antiinflamatorna sredstva, steroidi, imunosupresanti, kao i Bcr-Abl, Flt-3, EGFR, HER2, JAK (npr., JAK1 ili JAK2), c-MET, VEGFR, PDGFR, cKit, IGF-1R, RAF, FAK, Akt mTOR, PIM, and AKT (npr., AKT1, AKT2, ili AKT3) kinazni inhibitori kao što su, na primer, oni koji su opisani u WO 2006/056399, ili druga sredstva kao što su, terapeutska antitela mogu da se koriste u kombinaciji sa solima jedinjenja iz predmetne prijave za lečenje PI3K-povezanih bolesti, poremećaja ili stanja. Jedno ili više dodatnih farmaceutskih sredstava mogu da se daju pacijentu istovremeno ili redom jedan za drugim.

[0199] U nekim izvođenjima, dodatno farmaceutsko sredstvo je inhibitor JAK1 i/ili JAK2. U nekim izvođenjima, predmetna prijava obezbeđuje ovde opisano jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u postupku lečenja bolesti koja se ovde opisuje (npr., maligniteta B ćelija, kao što je difuzni limfom B-ćelija) kod pacijenta koji se sastoji davanja pacijentu jedinjenja koje je ovde opisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i inhibitora JAK1 i/ili JAK2. Maligniteti B ćelija mogu da uključe one koji su ovde opisani i u U.S. Ser. br.61/976,815, koji je podnet 8 aprila, 2014.

[0200] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je jedinjenje iz Tabele 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Jedinjenja u Tabeli 1 su selektivna za inhibitore JAK1 (selektivna u odnosu na JAK2, JAK3, i TYK2). IC50dobijene postupcima u Testu A na 1 mM ATP su prikazana u Tabeli 1.

2

Tabela 1

(nastavak)

(nastavak)

1

(nastavak)

2

(nastavak)

4 (nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

[0201] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0202] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrilna so adipinske kiseline.

[0203] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0204] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je izabran između (R)-3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila, (R)-3-(1-[1,3]oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila, (R)-4-[(4-{3-cijano-2-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila, (R)-4-[(4-{3-cijano-2-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila, ili (R)-4-(4-{3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorofenoksi}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitril, (S)-3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril, (S)-3-(1-[1,3]oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril, (S)-4-[(4-{3-cijano-2-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitril, (S)-4-[(4-{3-cijano-2-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitril, (S)-4-(4-{3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorofenoksi}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitril; i farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od gore pomenutih.

[0205] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je izabran iz jedinjenja objava US Patenta Br.

2010/0298334, podnetog 21 maja, 2010, Objava US Patenta br.2011/0059951, podnetog 31 avgusta, 2010, Objava US Patenta Br. 2011/0224190, podnetog 9 marta, 2011, Objava US Patenta br.

2012/0149681, podnetog 18 novembra, 2011, Objava US Patenta br. 2012/0149682, podnetog 18 novembra, 2011, Objava US Patenta 2013/0018034, podnetog 19 juna, 2012, Objava US Patenta br.

2013/0045963, podnetog 17 avgusta, 2012, i Objava US Patenta br.2014/0005166, podnetog 17 maja, 2013.

[0206] Primeri antitela za upotrebu u kombinovanoj terapiji uključuju ali nisu ograničeni na trastuzumab (npr. anti-HER2), ranibizumab (npr. anti-VEGF-A), bevacizumab (AvastinTM, npr. anti-VEGF), panitumumab (npr. anti-EGFR), cetuksimab (npr. anti-EGFR), rituksimab (RituxanTM, anti-CD20) i antitela koja su specifična za c-MET.

[0207] Jedan ili više od sledećih sredstava mogu da se koriste u kombinaciji sa solima ili jedinjenjima iz predmetne prijave i prikazani su u ne-ograničavajućoj listi: citostatsko sredstvo, cisplatin, doksorubicin, taksoter, taksol, etopozid, irinotekan, kamptostar, topotekan, paklitaksel, docetaksel, epotiloni, tamoksifen, 5-fluorouracil, metokstreksat, temozolomid, ciklofosfamid, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, Iressa, Tarceva, antitela koja su specifična za EGFR, GleevecTM, intron, ara-C, adriamicin, citoksan, gemcitabin, iperit uracila, hlormetin, Ifosfamid, Melfalan, hlorambucil, Pipobroman, Trietilenmelamin, Trietilentiofosforamin, Busulfan, karmustin, Lomustin, Streptozocin, Dakarbazin, Floksuridin, Citarabin, 6-Merkaptopurin, 6-Tioguanin, Fludarabin fosfat, oksaliplatin, leucovirin, ELOXATINTM, Pentostatin, Vinblastin, Vinkristin, Vindezin, Bleomicin, Daktinomicin, Daunorubicin, Doksorubicin, Epirubicin, Idarubicin, Mitramicin, Deoksikoformicin, Mitomicin-C, L-Asparaginaza, Tenipozid 17.alfa.-Etinilestradiol, Dietilstilbestrol, Testosteron, Prednizon, Fluoksimesteron, Dromostanolon propionat, Testolakton, Megestrolacetat, Metilprednizolon, Metiltestosteron, Prednizolon, Triamcinolon, hlorotrianisen, Hidroksiprogesteron, Aminoglutetimid, Estramustin, Medroksiprogesteronacetat, Leuprolid, Flutamid, Toremifen, goserelin, Cisplatin, Karboplatin, Hidroksiurea, Amsakrin, Prokarbazin, Mitotan, Mitoksantron, Levamizol, Navelbin, Anastrazol, Letrazol, kapecitabin, Reloksafin, Droloksafin, Heksametilmelamin, Avastin, herceptin, Bexxar, Velcade, Zevalin, Trisenox, Xeloda, Vinorelbin, Porfimer, Erbitux, Liposomal, Tiotepa, Altretamin, Melfalan, Trastuzumab, Lerozol, Fulvestrant, Eksemestan, Fulvestrant, Ifosfomid, Rituksimab, C225, Campath, Klofarabin, kladribin, afidikolon, rituksan, sunitinib, dasatinib, tezacitabin, Sml1, fludarabin, pentostatin, triapin, didoks, trimidoks, amidoks, 3-AP, MDL-101,731, bendamustin (Treanda), ofatumumab, i GS-1101 (takođe poznat pod nazivom CAL-101).

[0208] Primer hemoterapeutika uključuje inhibitore proteozoma (npr., bortezomib), talidomid, revlimid, i sredstva koja oštećuju DNK kao što su melfalan, doksorubicin, ciklofosfamid, vinkristin, etopozid, karmustin, i slično.

[0209] Primeri steroida uključuju kortikosteroide kao što su deksametazon ili prednizon.

[0210] Primeri inhibitora Bcr-Abl uključuju jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, rodova i vrsta prikazanih u U.S. Pat. br.5,521,184, WO 04/005281, i U.S. Ser. br.60/578,491.

[0211] Primeri pogodnih inhibitora Flt-3 uključuju jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano uWO 03/037347, WO 03/099771, and WO 04/046120.

[0212] Primeri pogodnih inhibitora RAF uključuju jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 00/09495 i WO 05/028444.

[0213] Primeri pogodnih inhibitora FAK uključuju jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595, i WO 01/014402.

[0214] Primer pogodnih mTOR inhibitora uključuje jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 2011/025889.

[0215] U nekim izvođenjima, soli iz pronalaska mogu da se koriste u kombinaciji sa jednim ili više drugih kinaznih inhibitora uključujući imatinib, posebno za lečenje pacijenata koji su rezistentni na imatinib ili druge kinazne inhibitore.

[0216] U nekim izvođenjima, soli iz pronalaska mogu da se koriste u kombinaciji sa hemoterapeutikom u lečenju kancera, kao što je multipli mijelom, i mogu da unaprede odgovor na lečenje u poređenju sa odgovorom na samo hemoterapeutsko sredstvo, bez pogoršanja njegovih toksičnih efekata. Primeri dodatnih hemoterapeutskih sredstava koji su korišćeni u lečenju multiplog mijeloma, na primer, mogu da uključe, bez ograničenja, melfalan, melfalan plus prednizon [MP], doksorubicin, deksametazon, iVelcade (bortezomib). Dalje, dodatna sredstva koja su korišćena u lečenju multiplog mijeloma uključuju Bcr-Abl, Flt-3, RAF i FAK kinazne inhibitore. Aditivni ili sinergistički efekti su poželjni ishodi kombinovanja inhibitora PI3K iz predmetne prijave sa dodatnim sredstvom. Dalje, rezistencija ćelija multiplog mijeloma na sredstva kao što je deksametazom može biti reverzibilna nakon tretmana sa inhibitorom PI3K iz predmetne prijave. Sredstva mogu da se kombinuju sa predmetnim jedinjenjem u pojedinačnom ili kontinuiranom doznom obliku, ili sredstva mogu da se daju istovremeno ili uzastopno kao zasebni oblici doziranja.

4

[0217] U nekim izvođenjima, kortikosteriod kao što je deksametazon je davan pacijentu u kombinaciji sa solima iz pronalaska gde se deksametazon primenjuje sa prekidima za razliku od kontinuiranog davanja.

[0218] U nekim daljim izvođenjima, kombinacije soli iz predmetnog pronalaska sa drugim terapeutskim sredstvima mogu da se daju pacijentu pre, tokom, i/ili posle transplantacije koštane srži ili transplantacije stem ćelija.

Farmaceutske formulacije i dozni oblici

[0219] Kada se koriste kao farmaceutska sredstva, soli iz pronalaska mogu da se daju u obliku farmaceutskih kompozicija. Ove kompozicije mogu da se dobiju na način koji je dobro poznat u farmaceutskoj oblasti tehnike, i mogu da se primene različitim načinima davanja, u zavisnosti od toga da li je poželjan lokalni ili sistemski tretman na površini koja se tretira. Davanje može da bude lokalno (uključujući transdermalno, epidermalno, očno i na mukoznim membranama uključujući intranazalnu, vaginalnu i rektalnu isporuku), plućno (npr., inhalacijom ili insuflacijom praškova ili aerosoli, uključujući pomoću nebulizatora; intratrahealno ili ntranazalno), oralno ili parenteralno. Parenteralno davanje uključuje intravenozno, intraarterijalno, subkutanozno, intraperitonealno intramuskularno ili davanjem injekcije ili infuzije; ili intrakranijalno, npr., intratekalno ili intraventrikularno davanje. Parenteralno davanje može da bude u obliku jedne bolusne doze, ili može da bude, na primer, kontinuiranom perfuzijskom pumpom. Farmaceutske kompozicije i formulacije za lokalno davanje mogu da uključe transdermalne flastere, masti, losione, kreme, gelove, kapi, supozitorije, sprejeve, tečnosti i praškove. Konvencionalni farmaceutski nosači, vodene, praškaste ili uljane osnove, sredstva za zgrušnjavanje i slično mogu biti neophodni ili poželjni.

[0220] Ovaj pronalazak takođe uključuje farmaceutske kompozicije koje sadrže, kao aktivni sastojak, so prema pronalasku (tj., so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I), u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača (ekscipijenata). U nekim izvođenjima, kompozicija je pogodna za lokalno davanje. U pravljenju kompozicija iz pronalaska, aktivni sastojak je obično pomešan sa ekcipijentom, razblažen sa ekscipijentom ili je zatvoren u takvom nosaču u obliku, na primer, kapsule, kesice, papira, ili druge posude. Kada ekscipijent služi kao rastvarač, može da bude čvrsti, polu-čvrsti, ili tečni materijal, koji deluje kao nosač, nosač ili medijum za aktivni sastojak. Prema tome, kompozicije mogu da budu u obliku tableta, pilula, praškova, pastila, kesica, kapsula, eliksira, suspenzija, emulzija, rastvora, sirupa, aerosoli (kao čvrste ili u tečnom medijumu), masti koje sadrže, na primer, do 10% u odnosu na težinu aktivnog jedinjenja, meke i tvrde želatinske kapsule, supozitorije, sterilni injektabilni rastvori, i sterilno upakovani praškovi.

[0221] U dobijanju formulacije, aktivno jedinjenje ili so može da bude samleveno da se obezbedi odgovarajuća veličina čestica pre kombinovanja sa drugim sastojcima. Ukoliko je aktivno jedinjenje ili so u suštini nerastvorljivo, može da se samelje do veličine čestice manje od 200 meša. Ukoliko je aktivno jedinjenje u suštini rastvorljivo u vodi, veličina čestice može da bude podešena mlevenjem da bi se u suštini obezbedila ravnomerna raspodela u formulaciji, npr. oko 40 meša.

[0222] Soli iz pronalaska i jedinjenja mogu da budu samlevena upotrebom poznatih postupaka za mlevenje kao što je vlažno mlevenje da bi se dobilia veličina čestice koja je odgovarajuća ya obrazovanje tablete i za druge tipove formulacije. Fino podeljeni (nanopartikularni) preparati soli iz pronalaska mogu da se dobiju postupcima koji su poznati u oblasti tehnike, npr., videti Međunarodnu Prij. br. WO 2002/000196.

[0223] Neki primeri pogodnih ekscipijenata uključuju laktozu, dekstrozu, saharozu, sorbitol, manitol, skrobove, gumu akaciju, kalcijum fosfat, alginate, tragakant, želatin, kalcijum silikat, mikrokristalnu celulozu, polivinilpirolidon, celulozu, vodu, sirup, i metil celulozu. Formulacije mogu dodatno da uključe: sredstva za podmazivanje kao što su talk, magnezijum stearat, i mineralno ulje; sredstva za vlaženje; sredstva za emulgovanje u suspenziju; sredstva za konzerviranje kao što su metil- i propilhidroksi-benzoati; zaslađivači; i sredstva za davanje arome. Kompozicije iz pronalaska mogu da budu formulisane tako da obezbede brzo, produženo ili odloženo oslobađanje aktivnog sastojka nakon davanja pacijentu primenom postupaka koji su poznati u oblasti tehnike.

[0224] Kompozicije mogu da budu formulisane u jediničnom doznom obliku, svaka doza se sastoji od oko 5 do oko 1000 mg (1 g), uobičajeno oko 100 do oko 500 mg, aktivnog sastojka. Izraz "jedinični dozni oblici" se odnosi na fizički diskretne jedinice pogodne kao jedinične doze za humane subjekte i druge sisare, svaka jedinica sadrži unapred određenu količinu aktivnog materijala za kog je izračunato da proizvodi željeni terapeutski efekat, zajedno sa odgovarajućim farmaceutskim ekscipijentom.

[0225] U nekim izvođenjima, kompozicije iz pronalaska sadrže od oko 5 do oko 50 mg aktivnog sastojka. Osoba koja je uobičajeno verzirana u stanje tehnike će razumeti da ovo obuhvata kompozicije koje sadrže oko 5 do oko 10, oko 10 do oko 15, oko 15 do oko 20, oko 20 do oko 25, oko 25 do oko 30, oko 30 do oko 35, oko 35 do oko 40, oko 40 do oko 45, ili oko 45 do oko 50 mg aktivnog sastojka.

[0226] U nekim izvođenjima, kompozicije iz pronalaska sadrže oko 2.5, oko 5, oko 7.5, oko 10, oko 12.5, oko 15, oko 17.5, oko 20, oko 22.5, ili oko 25mg aktivnog sastojka. U nekim izvođenjima, kompozicije iz pronalaska sadrže oko 5mg aktivnog sastojka. U nekim izvođenjima, kompozicije iz pronalaska sadrže oko 10mg aktivnog sastojka.

[0227] Slične doze se mogu koristiti za ovde opisana jedinjenja i soli u postupcima i upotrebama pronalaska.

[0228] Aktivno jedinjenje ili so može da bude efikasno u širokom opsegu doziranja i generalno je davano u farmaceutski efikasnoj količini. Treba razumeti da će, međutim, količina jedinjenja ili soli koja se stvarno primenjuje obično biti određena od strane lekara, prema relevantnim okolnostima, uključujući stanje koje treba da se leči, izabrani način davanja, jedinjenje ili so koje se stvarno primenjuje, starosti, težine, i odgovora individualnog pacijenta, težine pacijentovih simptoma, i slično.

[0229] Za dobijanje čvrstih kompozicija kao što su tablete, glavni aktivni sastojak je pomešan sa farmaceutskim ekscipijentom da bi se obrazovala čvrsta kompozicija preformulacije koja sadrži homogenu smešu jednjenja ili soli iz predmetne prijave. Kada se ovde kompozicije preformulacija pominju kao homogene, aktivni sastojak je uobičajeno ravnomerno raspršen kroz kompoziciju tako da kompozicija može lako da se podeli u jednako efikasne jedinične dozne oblike kao što su tablete, pilule i kapsule. Ova čvrsta preformulacija je nakon toga podeljena u jedinične dozne oblike gore opisanih tipova koji sadrže od, na primer, oko 0.1 do oko 1000 mg aktivnog sastojka predmetne prijave.

[0230] Tablete ili pilule prema predmetnom pronalasku mogu da budu obložene ili na drugi način formulisane da se obezbedi oblik doziranja koji daje prednost produženog delovanja. Na primer, tableta ili pilula mogu da sadrže unutrašnju doznu i spoljnu doznu komponentu, pri čemu je druga u obliku omotača preko prve. Dve komponente mogu da budu razdvojene sa gastrorezistentnim slojem koji služi da se odupre dezintegraciji u stomaku i omogući unutrašnjoj komponenti da prođe intaktna u dvanaestopalačno crevo ili da bude sa odloženim oslobađanjem. Različiti materijali mogu da budu korišćeni za takve gastrorezistentne slojeve ili slojeve za oblaganje, takvi materijali uključuju brojne polimerne kiseline i smeše polimernih kiselina sa takvim materijalima kao što je šelak, cetil alkohol, i celulozni acetat.

[0231] Tečni oblici u kojima soli, i kompozicije iz predmetnog pronalaska mogu da budu uključene za oralno davanje ili davanje injekcijom uključuju vodene rastvore, pogodno aromatizovane sirupe, vodene ili uljane suspenzije, i aromatizovane emulzije sa jestivim uljima kao što je ulje pamučnog semena, susamovo ulje, kokosovo ulje, ili ulje kikirikija, kao i eliksiri i slični farmaceutski nosači.

[0232] Kompozicije za inhalaciju ili insuflaciju uključuju rastvore i suspenzije u farmaceutski prihvatljivim, vodenim ili organskim rastvaračima, ili njihove smeše, i praškovi. Tečne ili čvrste kompozicije mogu da sadrže pogodne farmaceutski prihvatljive ekscipijente kao što je opisano supra. U nekim izvođenjima, kompozicije su davane oralnim ili nazalnim respiratornim načinom davanja za lokalni ili sistemski efekat. Kompozicije mogu da budu nebulizovane upotrebom inertnih gasova. Nebulizovani rastvori mogu da budu udahnuti direktno sa nebulizatora ili nebilizator može da bude prikačen za masku za lice, uređaj za disanje, ili mašinu za disanje sa naizmeničnim pozitivnim pritiskom. Rastvor, suspenzija, ili kompozicije praška mogu da budu davane oralno ili nazalno iz sprava koje isporučuju formulaciju na odgovarajuči način.

[0233] Formulacije za lokalno davanje mogu da sadrže jedan ili više konvencionalnih nosača. U nekim izvođenjima, masti mogu da sadrže vodu i jedan ili više hidrofobnih nosača izabranih od, na primer, tečnog parafina, polioksietilen alkil etra, propilen glikola, belog vazelina, i slično. Nosači kompozicija ili krema mogu da budu zasnovani na vodi u kombinaciji sa glicerolom i jednom ili više od drugih komponenti, npr. glicerinmonostearatom, PEG-glicerinmonostearatom i cetil-stearil alkoholom. Gelovi mogu da budu formulisani korišćenjem izopropil alkohola i vodom, pogodno u kombinaciji sa drugim komponentama kao što su, na primer, glicerol, hidroksietil celuloza, i slično. U nekim izvođenjima, lokalne formulacije sadrže najmanje oko 0.1, najmanje oko 0.25, najmanje oko 0.5, najmanje oko 1, najmanje oko 2, ili najmanje oko 5 mas % jedinjenja ili soli iz pronalaska. Formulacije za lokalno davanje mogu da budu pogodno spakovane u tubama od, na primer, 100 g koje su po potrebi u povezane sa instrukcijama za lečenje izabrane indikacije, npr., psorijaze ili drugog stanja kože.

[0234] Količina jedinjenja, soli, ili kompozicije koja se daje pacijentu razlikovaće se u zavisnosti od toga šta se daje, svrhe davanja, kao što je profilaksa ili lečenje, stanja pacijenta, načina davanja, i slično. U terapeutskim primenama, kompozicije mogu da se daju pacijentu koji već pati od bolesti u količini dovoljnoj da se izleče ili da se bar delom zaustave simptomi bolesti i njene komplikacije. Efikasne doze će zavisiti od stanja bolesti koja se leči kao i od procene kliničara koji leči u zavisnosti od faktora kao što su težina bolesti, starosna dob, težina i opšteg stanja pacijenta, i slično.

[0235] Kompozicije koje su davane pacijentu mogu da budu u obliku gore opisanih farmaceutskih kompozicija. Ove kompozicije mogu da budu sterilizovane upotrebom uobičajenih postupaka sterilizacije, ili mogu da budu sterilno proceđene. Vodeni rastvori mogu da budu spakovani za upotrebu kao takvi, ili liofilizovani, liofilizovani preparat se kombinuje sa sterilnim vodenim nosačem pre davanja. pH preparata jedinjenja će obično biti između 3 i 11, poželjnije od 5 do 9 i najpoželjnije od 7 do 8. Treba razumeti da će upotreba nekih od gorenavedenih ekscipijenata, nosača, ili stabilizatora rezultirati obrazovanjem farmaceutskih soli.

[0236] Terapeutska doza jedinjenja ili soli iz predmetne prijave može da se razlikuje u odnosu na, na primer, određenu upotrebu za koju je tretman napravljen, načina davanja jedinjenja ili soli, zdravlja i stanja pacijenta, i procene nadležnog lekara. Proporcija ili koncentracija jedinjenja ili soli u farmaceutskoj kompoziciji može da se razlikuje u zavisnosti od brojnih faktora uključujući dozu, hemijske karakteristike (npr., hidrofobnost), i načina davanja. Na primer, jedinjenja i soli iz pronalaska mogu biti obezbeđena u vodenom rastvoru fiziološkog pufera koji sadrži oko 0.1 do oko 10% mas/v jedinjenja za parenteralno davanje. Neki uobičajeni dozni opsezi su od oko 1 μg/kg do oko 1 g/kg telesne težine po danu. U nekim izvođenjima, dozni opseg je od oko 0.01 mg/kg do oko 100 mg/kg

4

telesne težine po danu. Doza će verovatno zavisiti od takvih promenljivih kao što je vrsta i obim napredovanja bolesti ili poremećaja, sveukupnog zdravstvenog stanja određenog pacijenta, relativne biološke efikasnosti izabranog jedinjenja, formulacije i ekscipijenta, i njegovog načina davanja. Efikasne doze se mogu ekstrapolirati sa kriva doza-odgovor koje su dobijene od in vitro ili sistema za ispitivanje u životinjskim modelima.

[0237] Kompozicije iz pronalaska mogu dalje da uključe jedan ili više dodatnih farmaceutskih agenasa kao što je hemoterapeutik, steroid, anti-inflamatorno jedinjenje, ili imunosupresant, primeri koji su ovde obezbeđeni.

Kompleti

[0238] Predmetna prijava takođe uključuje farmaceutske komplete koji su korisni, na primer, u lečenju ili prevenciji PI3K-povezanih bolesti ili poremećaja, kao što je kancer, koji uključuju jedan ili više kontejnera koji sadrže farmaceutsku kompoziciju koja sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja. Takvi kompleti mogu dalje da uključe, ukoliko je potrebno, jedan ili više različitih uobičajenih komponenti farmaceutskog kompleta, kao što su, na primer, kontejneri sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, dodatni kontejneri, itd., kao što će biti očigledno stručnjaku iz oblasti tehnike. Uputstva, ili kao umetci ili nalepnice, označavaju količine jedinjenja koje su namenjene za davanje, smernice za davanje, i/ili smernice za mešanje komponenata, takođe mogu da budu uključeni u kompletu.

[0239] Pronalazak će detaljnije biti opisan pomoću specifičnih primera. Primeri koji slede su ponuđeni za svrhe ilustracije i nisu namenjeni ograničavanju pronalaska na bilo koji način. Osoba koja je verzirana u stanje tehnike će lako prepoznati niz nekritičnih parametara koji se mogu menjati ili modifikovati da se dobiju u suštini isti rezultati. U skladu da bar jednim ovde opisanim testom je pronađeno je da su so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I i jedinjenje Formule I inhibitori PI3K.

PRIMERI

[0240] Pronalazak će detaljnije biti opisan pomoću specifičnih primera. Primeri koji slede su ponuđeni za svrhe ilustracije i nisu namenjeni ograničavanju pronalaska na bilo koji način. Jedinjenja iz primera, ili njihove soli, koja sadrže jedan ili više hiralnih centara su dobijeni u racemskom obliku ili kao smeše, izomera osim ukoliko nije drugačije naznačeno.

Opšti Postupci

[0241] Preparatorna LC-MS prečišćavanja nekih dobijenih pripremljenih jedinjenja su izvedena na Waters sistemi frakcionisanja usmereni na masu. Osnovne postavke opreme, protokoli, i kontrolni softver za rad ovih sistema su detaljno opisani u literaturi. Videti npr. "Two-Pump At Column Dilution Configuration for Preparative LC-MS", K. Blom, J. Combi. Chem., 4, 295 (2002); "Optimizing Preparative LC-MS Configurations and Methods for Parallel Synthesis Purification", K. Blom, R. Sparks, J. Doughty, G. Everlof, T. Haque, A. Combs, J. Combi. Chem., 5, 670 (2003); i "Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Combi. Chem., 6, 874-883 (2004). Razdvojena jedinjenja su obično povrgavana analitičkoj tečnoj hromatografiji masenoj spektrometriji (LCMS) za analizu čistoće pod sledećim uslovima: Instrument; Agilent 1100 serije, LC/MSD, Kolona: Waters Sunfire<TM>C185 μm, 2.1 x 50 mm, Puferi: mobilna faza A: 0.025% TFA u vodi i mobilna faza B: acetonitril; gradijent 2% do 80% B u 3 minuta sa brzinom protoka 2.0 mL/minuti.

[0242] Neka od pripremljenih jedinjenja su takođe odvojene na preparativnoj skali preparative reverzno faznom tečnom hromatografijom visokih performansi (RP-HPLC) sa MS detektorom ili fleš hromatografijom (silika gel) kao što je naznačeno u Primerima. Uslovi za uobičajenu preparativnu reverzno-faznu tečnu hromatografiju na koloni visokih performansi (RP-HPLC) su prema sledećim: pH = 2 prečišćavanja: Waters SunfireTM C185 µm, 19 x 100 mm kolona, eluiranje sa mobilnom fazom A: 0.1% TFA (trifluorosirćetna kiselina) u vodi i mobilna faza B: acetonitril; brzina protoka je bila 30 mL/minuti, gradijent razdvajanja je optimizovan za svako jedinjenje koristeći protokol Složenog specifičnog postupka optimizacije kao što je opisano u literaturi [videti "Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)]. Obično, brzina protoka je korišćena sa 30 x 100 mm kolonom je bila 60 mL/minuti.

pH = 10 prečišćavanja: Waters XBridge C185 µm, 19 x 100 mm kolona, eluiranje sa mobilnom fazom A: 0.15% NH4OH u vodi i mobilna faza B: acetonitril; brzina protoka je bila 30 mL/minuti, gradijent razdvajanja je optimizovan za svako jedinjenje koristeći protokol Složenog specifičnog postupka optimizacije kao što je opisano u literaturi [Videti "Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)]. Uobičajeno, brzina protoka je korišćena sa 30 x 100 mm kolonom koja je bila 60 mL/minuti.

[0243] Neka od dobijenih jedinjenja su takođe analizirana Diferencijalnom Skenirajućom Kalorimetrijom (DSC). Uobičajeni uslovi za DSC instrument su prema sledećim:

TA Instrument Diferencijalne Skenirajuće Kalorimetrije, Model Q200 sa autosamplerom: 30 - 350 °C na 10 °C/min; T-nula posuda i poklopac aluminijumskog uzorka; protok gasa azota na 50 mL/min.

[0244] Mettler Toledo Diferencijalna Skenirajuća Kalorimetrija (DSC) 822 Instrument: 40 - 340 °C na brzini zagrevanja od 10 °C/min.

[0245] Neka od dobijenih jedinjenja su takođe analizirana pomoću Termogravimetrijske analize (TGA). Uobičajeni uslovi TGA instrumenta su prema sledećim:

TA Instrument Termogravimetrijski analizator, Model Pyris: Temperaturni opseg od 25°C do 300 °C na 10 °C/min; protok gasa azota za prečišćavanje na 60 mL/min; TGA držač uzorka od keramičke posude.

[0246] TA Instrument Q500: Temperaturni opseg od 20 °C do 300 °C na 10 °C/min.

[0247] Neka od dobijenih jedinjenja su takođe analizirana pomoću rasipanja X-zraka na prahu (XRPD). Uobičajeni uslovi za XRPD su kao što sledi:

Bruker D2 PHASER Instrument rasipanja X-zraka na prahu: talasna dužina zračenja X-zraka: 1.05406 Å CuKAI; snaga x-zraka: 30 KV, 10 mA; prah uzorka: rasejan na držaču uzorka bez pozadine; opšti uslovi merenja: startni ugao - 5 stepeni, Stop ugao - 60 stepeni, Uzorkovanje - 0.015 stepeni, Brzina skeniranja - 2 stepeni/min.

[0248] Rigaku Miniflex difraktometar na prahu: Cu na 1.054056 Å sa Kβ filterom; opšti uslovi merenja: startni ugao - 3 stepena, Stop ugao - 45 stepena, uzorkovanje -0.02 stepena, brzina skeniranja - 2 stepena/min.

4

Primer 1. Sinteza (R)-4-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-((R)-1-hidroksietil)fenil)pirolidin-2-ona

[0249]

Korak 1.1-(5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon (ii)

[0250]

[0251] 4-hloro-3-fluorofenol (i, 166 g, 1.11 mol) i acetil hlorid (107 mL, 1.50 mol) su napunjeni u balon zapremine 5-L na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana i pretvorena je u bistri rastvor dok je zabeležena smanjena temperatura ukupne količine do 6 °C. Reakciona smeša je nakon toga zagrejana do 60 °C u trajanju 2 h. Reakciona smeša je napunjena sa nitrobenzenom (187.5 mL, 1.82 mol) i nakon toga je ohlađena do sobne temperature. U smešu je zatim je dodat aluminijum trihlorid (160 g, 1.2 mmol) u tri porcije (50 g, 50g, i 60 g u intervalima od 5 min). Temperatura ukupne reakcije je povećana do 78 °C po završetku dodavanja. Reakciona smeša je nakon toga zagrejana na 100-120 °C tokom 3 h, u vreme kada je HPLC analiza pokazala završetak reakcije. Reakciona smeša je nakon toga ohlađena do 0 °C i napunjena je sa heksanima (0.45 L), etil acetatom (0.55 L), i zatim je polako pročišćena sa 1.0 N rastvorom hlorovodonične kiseline u vodi (1.0 L) na sobnoj temperaturi. Dodavanje vodenog rastvora hlorovodonične kiseline je bilo egzotermno i ukupna temperatura reakcije se povećala od 26 °C do 60 °C. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 20 min.

4

Slojevi su razdvojeni i organski sloj je ispran uzastopno sa 1.0 N rastvorom hlorovodonične kiseline u vodi (2 x 600 mL) i vodom (400 mL). Organski sloj je nakon toga ekstrahovan sa 1.0 N rastvorom natrijum hidroksida u vodi (2 x 1.4 L). Kombinovani bazni rastvori su acidifikovani do pH 2 dodavanje 12 N hlorovodonične kiseline rastvorene u vodi sve dok nije bilo moguće dalje razdvajanje taloga. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena ceđenjem, isprana je sa vodom i osušena je u levku za ceđenje pod usisavanjem da se dobije jedinjenje ii kao žuta čvrsta supstanca (187.4 g, 89.5%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.44 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 2.61 (s, 3H). Korak 2.1-(5-hloro-4-fluoro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanon (iii)

[0252]

[[0253] 1-(5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon (ii, 100.0 g, 530.3 mmol) je razblažen u sirćetnoj kiselini (302 mL) i N-jodosukcinimid (179.2 g, 796.5 mmol) je dodat u rastvor. Reakciona smeša je mešana na od oko 61 °C do oko 71 °C tokom 2 h, kada je HPLC analiza pokazala završetak reakcije. Reakciona smeša je nakon toga ohlađena do sobne temperature, dodata je vode (613 mL), i dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Proizvod je sakupljen ceđenjem i ispran je sa vodom da bi se dobile braon čvrste supstance. Vlažni proizvod je razblažen u sirćetnoj kiselini (400 mL) na 60 °C. Voda zapremine (800 mL) je dodata (tokom 15 min) u rastvor da bi se istaložio čisti proizvod. Proizvod je sakupljen ceđenjem i ispran je sa vodom (100 mL). Proizvod je osušen u levku za ceđenje pod usisavanjem tokom 18 h da se dobije jedinjenje iii kao braon čvrsta supstanca (164.8 g, 95.0% prinos).1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 813.34 (s, 1H), 8.26 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.68 (s, 3H). Korak 3.1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanon (iv)

[0254]

[0255] U trogrli balon sa okruglim dnom zapremine 5-L koji je opremljen sa kondenzatorom i termometrom, 1-(5-hloro-4-fluoro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanon (iii, 280 g, 840 mmol) je razblažen u N,N-dimetilformamidu (600 mL). Tokom rastvaranja, unutrašnja temperatura je pala od 19.3 °C do 17.0 °C. Jodoetan (81.2 mL, 1020 mmol) je dodat u dobijenu smešu. Nakon toga je u reakcionu smešu je dodavan kalijum karbonat (234 g, 1690 mmol) tokom 2 min i nije uočena promena u temperaturi ukupne smeše. Reakciona smeša je zagrejana do 60 °C tokom 3 h, kada je HPLC analiza pokazala da je reakcija završena. Reakcionoj smeši je omogućeno da se ohladi do sobne temperature i proizvod je sakupljen ceđenjem. Čvrste supstance su rastvorene u smeši DCM (1.0 L), heksanu (500 ml), i vodi (2.1 L). Bifazni sistem je mešan na 20 °C tokom 20 min. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (1.0 L). Kombinovani organski sloj je ispran sa vodom (2 x 250 mL) i rastvorom soli (60 mL). Organska faza je razdvojena, osušena je preko anhidrovanog Na2SO4, proceđena, i koncentrovana in vacuo do isušivanja da se dobije jedinjenje iv kao žuta čvrsta supstanca (292 g, 94% prinos).1HNMR

4

(400 MHz, DMSO-d6) δ7.69 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.95 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.62 (s, 3H), 1.49 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C10H10ClFIO2(M H)+: m/z = 342.9.

Korak 4.2-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)-2-metil-1,3-dioksolan (v)

[0256]

[0257] Rastvor 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanona (iv, 250.0 g, 693.4 mmol) i 1,2-etandiola (58.0 mL, 1040 mmol) u toluenu (1.5 L) je tretiran sa monohidratom p-toluensulfonske kiseline (10.6 g, 55.5 mmol). Reakcioni balon je opremljen sa Dean-Stark-ovom trapom i smeša je zagrevana na refluksu tokom 7 h. LCMS analiza je označila da je reakciona smeša sadržala 8.3% polaznog materijala i 91.7% proizvoda. Reakciona smeša je ohlađena do 106 °C, i dodatna količina 1,2-etandiola (11.6 mL, 208 mmol) je uvedena pomoću šprica. Reakciona smeša je nakon toga zagrejana na refluksu dodatnih 8 h. LCMS analiza je označila da je reakciona smeša sadržala 3.6% polaznog materijala i 96.4% proizvoda. Reakciona smeša je ohlađena do 106 °C, i dodatni 1,2-etandiol (7.73 mL, 139 mmol) je uveden pomoću šprica. Reakciona smeša je zagrevana pod refluksom za dodatnih 15.5 h. LCMS analiza je ukazala da je reakciona smeša sadržala 2.2% polaznog materijala i 97.8% proizvoda.

[0258] Reakciona smeša je nakon toga ohlađena do 0 °C i voda (200 ml) i zasićen rastvor NaHCO3u vodi (300 ml) su dodati da bi se smeša podesila do pH 9. DCM (200 ml) je dodat i količina je mešana u trajanju od 10 min. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa toluenom (300 mL). Kombinovani organski sloj je ispran uzastopno sa smešom vode (200 ml) i zasićenim rastvorom NaHCO3u vodi (200 ml), vodom (300 ml), slanim rastvorom (300 ml), osušen je preko anhidrovanog Na2SO4, proceđen, i koncentrovan u vakuumu do isušivanja da se obezbedi sirovo jedinjenje v kao

1

svetlo braon čvrsta supstanca (268 g 100% prinosa). H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.59 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.26-3.96 (m, 4H), 3.92-3.72 (m, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.50 (t, J = 7.0 Hz, 3 H). LCMS za C12H14ClFIO3(M

+ H) : m/z = 387.0.

Korak 5.3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)benzaldehid (vi)

[0259]

[0260] U mešani rastvor 2-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)-2-metil-1,3-dioksolana (v, 135.0 g, 349.2 mmol) (86.8% čistoće određeno sa HPLC sa 5.5% ketona) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (300 mL) na oko 0 °C do oko 3 °C je polako dodavan 1.3 M izopropilmagnezijum hlorid litijum hloridni kompleks u THF-u (322.3 mL, 419.0 mmol) tokom 1 h. Reakciona smeša je mešana na od oko 0 °C do oko 5 °C tokom 30 min. kada je LCMS analiza označila da je završena reakcija zamene jodo-

4

magnezijuma. N-Formilmorfolin (71.1 mL, 700 mmol) je nakon toga dodat u reakcionu smešu tokom 1 h na od oko 0 °C do oko 8°C. Reakciona smeša je mešana na od oko 0 °C do oko 8 °C dodatnih 1 h, kada su LCMS i HPLC analize pokazale da je polazni materijal iskorišćen i uočena je značajna količina sporednog proizvoda de-jodinacije, 2-(5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)-2-metil-1,3-dioksolana. Reakcija je ugašena vodenim rastvorom limunske kiseline (120.8 g, 628.6 mmol) u vodi (1.20 L) na 0 °C. Ugašena reakciona smeša je nakon toga ekstrahovana sa EtOAc (2 x 600 mL). Faze su brzo razdvojene. Kombinovani organski sloj je uzastopno ispran sa vodom (300 ml) i rastvorom soli (500 mL), osušene su preko anhidrovanog Na2SO4, proceđene, i koncentrovane u in vacuo. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni od silika gela sa 0 - 10% EtOAc/heksanu da se dobije sirovi proizvod jedinjenja vi kao bledo žuta čvrsta supstanca, koji je smeša željenog proizvoda, 3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)benzaldehida(vi, 80 g, 80%) koji se sastoji iz 36 mol % sporednog proizvoda de-jodinacije, 2-(5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)-2-metil-1,3-dioksolana kao što je naznačeno sa NMR analizom. Sirovi proizvod jedinjenja vi je dalje prečišćen sa obrazovanjem odgovarajućeg adukta natrijum bisulfita.

[0261] Natrijum bisulfit (36.91 g, 354.7 mmol) je razblažen u vodi (74.3 mL, 4121 mmol). U mešani rastvor sirovog 3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)benzaldehida (vi, 80.00g, 177.3 mmol) u etil acetatu (256.0 mL), sveže pripremljeni rastvor natrijum bisulfita je dodat u jednoj porciji. Rastvor je mešan oko 10 min i uočeni su ostaci taloženja. Suspenzija je zatim mešana dodatnih 1 h. Aldehid-bisulfitni adukt je sakupljen ceđenjem, ispran je sa EtOAc i osušen je pod vakuumom i atomosferom azota u trajanju od 20 h da se dobije bela čvrsta supstanca (58.2 g, 83.6% prinos). U aldehid-bisulfitni adukt (58.2 g, 148 mmol) koji je pomešan u 1.0 M vodenom rastvoru natrijum hidroksida (296 mL, 296 mmol) je dodat metil t-butil etar (600 mL) (MTBE). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 min da bi se dobijla bistra bifazna smeša, i mešanje je nastavljeno dodatnih 5 min. Organska faza je sakupljena i vodeni sloj je ekstrahovan sa MTBE (2 x 300 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa rastvorom soli (300 mL), osušeni su preko anhidrovanog Na2SO4, proceđeni, i koncentrovani u vakuumu da se dobije čisto jedinjenje vi kao bela kristalna čvrsta supstanca (31.4 g, 73.4% prinos).1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.27 (s, 1H), 7.78 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 4.10-3.96 (m, 4H), 3.87-3.76 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.44 (t, J = 7.0 Hz, 3 H). LCMS za C13H15ClFO

4(M H) : m/z = 289.0.

Korak 6. (E)-2-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(2-nitrovinil)fenil)-2-metil-1,3-dioksolan (vii)

[0262]

[0263] 4-grli balon sa okruglim dnom zapremine 5-L koji je opremljen sa gornjom mešalicom, pregradom, termoelementom, ulazom za azot i kondenzatorom je napunjen 3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)benzaldehid (vi, 566.2 g, 1961 mmol), nitrometan (1060 mL, 19600 mmol), i glacijalna sirćetna kiselina (1120 mL). Dalje, reakciona smeša je napunjena sa benzilaminom (53.6 mL, 490 mmol) i dobijena smeša je zagrevana do 60 °C i reakcija je praćena sa LCMS tokom 5.5 h. Analiza početnog nivoa je uzeta u t = 0. Reakcija je proverena nakon 2 h i 5 h. Nakon 2 h, bilo je oko 20% polaznog materijala aldehida koji nije izreagovao. Posle 5 h reakcioni profil je bio sledeći: polazni

4

materijal jedinjenja vi (< 2%), intermedijerni imin (< 4%), proizvod jedinjenja vii (> 93%) i benzilamin Michael-ov adukt (nije detektovan). U reakcionom vremenu 5.5 h, reakcija se smatrala završenom. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i razblažena je sa etil acetatom (3.0 L). Smeša je za obradu podeljena na pola zbog uključene velike zapremine.

[0264] Svaka polovina je tretirana prema sledećem postupku: Reakciona smeša je prvo isprana sa 1.5 M NaCl u vodi (2 x 1500 mL; nakon svakog pranja izlaz vodene zapremine se povećavao u poređenju sa ulazom ukazujući da su sirćetna kiselina i/ili nitrometan bili uklonjeni). Smeša je nakon toga ohlađena do 15°C i isprana je sa 4 M rastvorom NaOH u vodi (4 x 300 mL) dok vodeni ekstrakt nije dostigao pH 8-9. Tokom početnih ispiranja vodeni sloj je ostao kiseo, ali kako je vodena tečnost tokom sledećih pranja postajala blago bazna smeša se zagrevala i ekstrakt je bio taman. Slojevi su razdvojeni. Organski sloj je posle pH podešavanja ispran sa 1.5 M natrijum hloridom rastvorenim u vodi (1000 mL) i vodom (500 mL). Tokom ovih završnih pranja uočeni su emulzija i sporo razdvajanje. Organska faza je osušena preko anhidrovanog MgSO4, gproceđena, i koncentrovana je pod redukovanim pritiskom. Dobijeni jantarni sirup je postavljen pod visokim vakuumom preko noći. Sirup je očvrsnuo i dobijeno je 740 g sirovog proizvoda.

[0265] U sirovi proizvod je dodat heptan (1.3 L), obrazujući suspenziju, koja je zagrevana na 60 °C u vodenom kupatilu dok sve čvrste supstance nisu rastvorene. Dobijeni rastvor je fino proceđen u čisti 3-grli balon zapremine 3-L sa okruglim dnom opremljenim sa gornjom mešalicom i ulazom za azot. Filter je ispran sa heptanom (40 mL). Proceđeni rastvor je ohlađen do sobne temperature i mešan je u trajanju od 5 h. Uočeno su čvrsti precipitati i suspenzija je ohlađena do 0 °C u ledenom kupatilu u tajanju od 1 h. Proizvod je sakupljen ceđenjem i dobijeni vlažni kolač je ispran sa 500 mL ledeno hladnog heptana. Proizvod je delom sušen na filteru pod vakuumskim usisavanjem i dalje je osušen preko noći pod visokim vakuumom. Filtrat i rastvor pranja su koncentrovani pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je držan za prečišćavanje u koloni.

[0266] Čvrste supstance iz kristalizacije heptana su razblažene u maloj zapremini DCM-a i 20% EtOAc/heksanu i nanete su na kolonu koja sadrži oko 1 kg silika gela. Kolona je nakon toga eluirana sa 20% EtOAc/heksanu. Željene frakcije su kombinovane i koncentrovane su pod redukovanim pritiskom da se dobije žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je osušena preko noći pod visokim vakuumom da bi se dobilo 497 g proizvoda jedinjenja vii kao bledo žuta kristalna čvrsta supstanca.

[0267] Koncentrovani filtrat i ispranje sa kristalizacije heptana je naneto na istu kolonu kao što je gore navedeno upotrebom 20% EtOAc/heksana. Kolona je eluirana korišćenjem istog sistema rastvarača kao što je gore navedeno da bi se uklonile nečištoće osnovnog nivoa i ostatak sirćetne kiseline. Željene frakcije su kombinovane i koncentrovane su pod redukovanim pritiskom da bi se dobilo crvenkasto jantarno ulje. Ulje je postavljeno pod visokim vakuumom i dobijeno je oko 220 g sirovog proizvoda. Ovaj sirovi proizvod je razblažen u heptanu (500 mL) i zasejan je sa malom količinom prve frakcije čvrstog proizvoda. Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 h i nakon toga je ohlađena u ledenom kupatilu u trajanju od 3 h. Proizvod druge frakcije je sakupljen ceđenjem. Proizvod je osušen pod visokim vakuumom i 110 g proizvoda je dobiven kao žuta čvrsta supstanca.

1

Ukupna količina dobijenog proizvoda jedinjenja vii je bila 607 g (93.3% prinos). H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.94 (s, 2H), 7.68 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.07-3.95 (m, 4H), 3.82-3.73 (m, 2H), 1.65 (s, 3H), 1.39 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C14H16ClFNO5(M H)+: m/z = 332.0.

Korak 7. (R)-Dimetil-2-(1-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-2-nitroetil)malonat (viii)

[0268]

[0269] U posudu sa zaobljenim dnom zapremine 2-L sa magnetnom mešalicom i ulazom za azot koja sadrži (E)-2-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(2-nitrovinil)fenil)-2-metil-1,3-dioksolan (vii, 352.8 g, 1064 mmol) je dodat anhidrovani tetrahidrofuran (1.06 L) i dimetil malonat (146 mL, 1280 mmol). (1S,2S)-NN’-dibenzilcikloheksan-1,2-diamin-dibromonikl (Evansov Katalizator, 21.4 g, 26.6 mmol), je napunjen u reakcionu smešu. Rakciona smeša je bila braon boje i uočen je homogeni rastvor. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 18.5 h. Reakcija je analizirana posle 18.5 h sa HPLC. Polazni materijal koji nije izreagovao, jedinjenja vii, je bio prisutan u 2%. Reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom da se ukloni THF i dobijeni ostatak je prečišćen sa fleš hromatografijom (DCM/heksani korišćeni za nanošenje, 1422 g silika gela je korišćeno za ovu kolonu, i kolona je eluirana sa 10% do 20% EtOAc/heksanom; frakcije kolone su praćene pomoću TLC upotrebom 30% EtOAc/heksanu kao eluentom i vizuelizovane su sa UV). Željene frakcije su kombinovane i koncentrovane su pod redukovanim pritiskom. Ostatak je osušen pod visokim vakuumom. Tokom vremena, sirup se stvrdnuo do svetlo žute čvrste supstance (503.3 g) i uzorak je uziman za hiralnu HPLC analizu. Hiralna čistoća je bila 95.7 % željenog (R)-enantiomera i 4.3% neželjenog (S)-enantiomera. Etanol (1.0 L) je dodat u čvrste supstance i smeša je zagrevana na 60 °C u vodenom kupatilu dok čvrste supstance nisu rastvorene. Rastvor je fino proceđen u čist zapremine 3-L sa 4-vrata okruglim dnom kroz #1 Whatman filter paprir. Proceđeni rastvor je uz mešanje ohlađen do sobne temperature. Kristalizacija je uočena posle 30 min mešanja i suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi dodatnih 16 h. Suspenzija je ohlađena u ledenom kupatilu dodatnih 1 h. Proizvod je sakupljen ceđenjem i dobijeni kolač od ceđenja je ispran sa ledeno hladnim etanolom (500 mL) i delimično je osušen na filteru. Čvrste supstance su osušene pod visokim vakuumom da se dobije željeni proizvod viii (377.5 g) kao bele kristalne supstance. Hiralna čistoća je određena sa hiralnom HPLC da bude 100% željenog (R)-enantiomera i 0% neželjenog (S)-enantiomera.

[0270] Filtrat i ceđenje su kombinovani i koncentrovani su pod redukovanim pritiskom do ulja (118.9g). The oil was dissolved in ethanol (475.0 mL) (4 mL/g) and was seeded with the first crop crystals. The resultant slurry was stirred for 16 h at room temperature and then cooled in an ice bath for 5.5 h. The second crop product was isolated by filtration and was partially dried on the filter. It was dried under high vacuum to give the second crop product (31.0 g). The chiral purity was determined by chiral HPLC to be 98.3% of the desired (R)-enantiomer and 1.7 % of the undesired (S)-enan- tiomer. The combined yield of the first and second crops of product was 408.5 g in 82.8% yield.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.51 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.20-4.81 (m, 2H), 4.62 (m, 1H), 4.14-4.03 (m, 2H), 4.03-3.97 (m, 2H), 3.95-3.88 (m, 1H), 3.84-3.72 (m, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.38 (s, 3H), 1.61 (s, 3H), 1.39 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LCMS za C<+>

19H24ClFO9(M H) m/z = 463.9.

Korak 8. (R)-Dimetil 2-(1-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-nitroetil)malonat (ix)

[0271]

1

[0272] U mešani rastvor (R)-dimetil-2-(1-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-2-nitroetil)malonata (viii, 244.0 g, 526.0 mmol) u acetonu (1.2 L) u tro-grlom balonu sa zaobljenim dnom zapremine 5-L, koji je opremljen sa mehaničkom mešalicom, je dodat jod (13.4 g, 52.6 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijeni braon rastvor je zagrevan na 50 °C u vodenom kupatilu u trajanju od 30 min, kada je LCMS analiza pokazala da je reakcija završena. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, i zatim je ugašena sa rastvorom natrijum tiosulfata (17.0 g, 108 mmol) u vodi (160 mL) da se dobije bledo žuti čisti rastvor. U ovo vreme, dodatna količina vode (1.2 L) i napunjena u rastvor koji je ugašen i dobijena bela suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Čvrsta supstanca je nakon toga sakupljena ceđenjem i ponovo je rastvorena u acetonu (1.4 L) na 40 °C. Rastvor je ohlađen do sobne temperature, i zatim je dodatno dodata voda (1.4 L). Dobijena bela suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Čvrsta supstanca je sakupljena ceđenjem i isprana je sa vodom (3 x 100 ml). Čvrsti proizvod je osuđen u filter levku pod usisavanjem sa protokom azota u trajanju od 46 h da se dobije jedinjenje ix kao bela čvrsta supstanca (212 g, 96% prinos).1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.54 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.09-4.67 (m, 3H), 4.10-3.83 (m, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.57

(s, 3H), 2.57 (s, 3H), 1.46 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C17H20ClFNO8(M H) : m/z = 420.1.

Korak 9. Dimetil 2-((R)-1-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-((R)-1-hidroksietil)fenil)-2-nitroetil)malonat (x)

[0273]

[0274] U mešani rastvor (3aS)-1-metil-3,3-difeniltetrahidro-3H-pirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborola, ((S)-MeCBS, 16.39 g, 59.12 mmol, 0.1 ekv.) u anhidrovanom THF (100 mL) u posudi sa zaobljenim dnom zapremine 5 L na sobnoj temperaturi dodati su rastvor 1.0 M boran-THF kompleksa u THF-u (591 mL, 591 mmol, 1 ekv.) praćeno sa boron trifluorid eteratom (3.75 mL, 29.6 mmol, 0.05 eq). Dobiveni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 min. Rastvor dimetil [(1R)-1-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-nitroetil]malonata (ix, 253.0 g, 591.2 mmol) u anhidrovanom THF-u (1.7 L) je nakon toga dodavan u kapima preko levka za dodavanje tokom 60 min. Balon koji je sadržao keton ix je ispran sa anhidrovanim THF (135 mL) i rastvor je dodavan u kapima preko levka za dodavanje u reakcionu smešu. Dobiveni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi dodatnih 10 min, u vreme kada je LCMS analiza pokazala potpunu konverziju ketona u alkohol. Reakcija je razblažena dodavanjem metanola u kapima (71.8 mL, 1770 mmol) na 0 °C. Razblažena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 15 min pre nego što je koncentrovana in vacuo da se dobije sirovi proizvod. Sirovi proizvodi ove i slične serije (upotrebom 200 g polaznog materijala) su kombinovani i prečišćeni su sa hromatografijom na koloni od silika gela upotrebom 0 do 5 % MeOH/DCM kao eluenta da se dobije jedinjenje x kao bela čvrsta supstanca (437g, 97.9% prinos).1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.50

2

(d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.13 (q, J= 6.3 Hz, 1H), 5.01-4.65 (m, 3H), 4.14-3.89 (m, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 1.57-1.42 (m, 6H). LCMS za C17H21ClFNNaO8(M Na)+: m/z = 444.0.

Korak 10. (4R)-Metil 4-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-((R)-1-hidroksietil)fenil)-2-oksopirolidin-3-karboksilat (xi)

[0275]

[0276] Morton-ov balon sa 3 vrata sa okruglim dnom koji sadrži dimetil ((1R)-1-{3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-[(1R)-1-hidroksietil]fenil}-2-nitroetil)malonat (x, 100.0 g, 237.1 mmol) u tetrahidrofuranu (800.0 mL) i Ranejev Nikl (120 g posle uklanjanja vode sa pipetom) bio je opremljen sa kondenzatorom, mehaničkom mešalicom (stakleni štapić za mešanje i Teflonski ležaj), i dva balona sa gasom vodonika (nakon pročišćavanja vakuumom). Balon je postavljen u uljano kupatilo na 65°C. Partija je snažno mešana 16 h i baloni su periodično sklonjeni i ponovo napunjeni sa vodonikom. Uzorak je uzet i analiziran sa HPLC. Proizvod, jedinjenje xi, je bilo prisutno u 83%. U reakcionoj smeši je bilo 7.8% neciklizovanog amina i 5.5% sporednog proizvoda hidroksilamina. Katalizator je uklonjen ceđenjem (mora se voditi računa da se Ranejev nikl ne osuši tokom izlaganja vazduhu). Ostatak nakon ceđenja je uparen do sušenja da se dobije 91 g sirovog proizvoda kao pena bele boje. Sirovi proizvod (91 g, 82.6 % čistoće povrišne) je kombinovan sa drugom sličnom serijom sirovog proizvoda (93 g, 72.8 % purity) za prečišćavanje. Kombinovani sirovi proizvod (184 g) je prečišćen hromatografski na koloni od silika gela (EtOAc/heksan kao eluent) da se dobije jedinjenje xi (101.1 g, 93% HPLC čistoće, 59.3% sirovi prinos). Sirovi materijal je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS za C16H20ClFNO5(M H)+: m/z = 360.0.

Korak 11. (4R)-4-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-((R)-1-hidroksietil)fenil)-2-oksopirolidin-3-karboksilna kiselina (xii)

[0277]

[0278] U balon sa 4 vrata zapremine 5 L, sa okruglim dnom koji je opremljen sa mešalicom sa gornje strane i ulazom za azot je napunjen rastvor (4R)-metil 4-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-((R)-1-hidroksietil)fenil)-2-oksopirolidin-3-karboksilata (xi, 268 g, 581 mmol) u tetrahidrofuranu (2150 mL, 26500 mmol). U rastvor je napunjen, 1.0 M rastvor natrijum hidroksida u vodi (1420 mL, 1420 mmol). Dobiveni zamućeni rastvor je postao bistar tokom 1 min. Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je analizirana sa LCMS nakon 15 h i činilo se da je završena jer početni materijal nije uočen. Reakciona smeša je ohlađena u ledenom kupatilu do unutrašnje temperature od 9.5 °C i smeša je zakišeljena do pH 1-2 dodavanjem 6.0 M rastvora hlorovodonične kiseline u vodi (237.0 mL, 1422 mmol) pomoću lekvka za ukapavanje tokom 30 min. Reakciona smeša je podeljena na polovine i svaka polovina je esktrahovana sa etil acetatom (2 x 1 L). Kombinovani organski slojevi su dalje ekstrahovani sa etil acetatom (500 mL). Dva organska sloja su isprana sa slanim rastvorom (20 % mas/mas NaCl/ voda, 2 x 1000 mL), osušena su preko anhidrovanog MgSO4, proceđena, i koncentrovana da se dobije sirova intermedijerna kiselina xii kao pena žućkaste boje koja je korišćena direktno u sledećoj reakciji.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12.68 (br s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.27 (br s, 1H), 4.90 (q, J = 6.3 Hz, 1H), 4.28 (q, J = 8.8 Hz, 1H), 3.92-3.81 (m, 1H), 3.76-3.65 (m, 1H), 3.57 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 3.46 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 3.23 (q, J = 9.5 Hz, 1H), 1.33 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS za C15H17ClFNNaO5(M Na)+: m/z = 368.0.

Korak 12. (R)-4-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-((R)-1-hidroksietil)fenil)pirolidin-2-on (xiii)

[0279]

[0280] Sirovo jedinjenje xii je razblaženo u 1,4-dioksanu (976 mL) i toluenu (976 mL) i dobijeni žuti rastvor je zagrevan na 100°C. Rastvor je postao braon boje i reakcija je napredovala. Uzorci su pokupljeni tokom 1 h, 2 h i 2.5 h vremenskim tačkama. Na 2.5 h, HPLC analiza je pokazala kiselinu, jedinjenje 12, je bilo na 0.38% i željeni proizvod, jedinjenje xiii, na 78.8%. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i fino proceđen u čistu bocu sa okruglim dnom zapremine 3-L. Rastvor je nakon toga koncentrovan pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je postavljen pod visokim vakuumom da se dobije pena braon boje (254 g).

[0281] Acetonitril (350 mL) je napunjen u braon sirup i zagrevan je na 65 °C u vodenom kupatilu dok nije primećeno rastvaranje. Rastvor je ohlađen do sobne temperature i mešan je u trajanju od 16 h. Čvrste supstance su odvojene od rastvora. Dobijena suspenzija je ohlađena u ledenom kupatilu tokom 1 h. Proizvod je sakupljen ceđenjem i kolač od ceđenja je ispran sa 400 mL acetonitrila ohlađenog u ledu. Čvrste supstance su delovale higroskopnim. Čvrsta supstanca je rastvorena u DCM (2.0 L) i koncentrovana je do sirupa koji je postavljen pod visokim vakuumom da se dobije jedinjenje xiii kao pena bele boje (106.4 g).

[0282] Filtrat je koncentrovan do tamnog sirupa (oko 120 g) koji je prečišćen fleš hromatografijom (4 x 330g kolone na silika gelu, napunjene sa DCM, eluirane sa 50% do 100% EtOAc/heksanom, i praćeno sa TLC korišćenjem 100% EtOAc kao eluenta). Frakcije iz hromatografije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom i postavljene su pod visokim vakuumom da se dobije pena svetlo braon boje (54.4g). Pena je napunjena sa MTBE (400 mL) i MeOH (10 mL) i zagrevana je na 56°C u vodenom kupatilu tokom 15 minuta i neke čvrste supstance su ostale. Suspenzija je ohlađena do sobne temperature uz mešanje. Suspenzija je proceđena da bi se uklonile nerastvorljive supstance. Ostatak nakon ceđenja je koncentrovan do sirupa i postavljen je pod visokim vakuumom da bi se dobila pena. Pena je napunjena sa acetonitrilom (72 mL, 1.5 mL/g) i zagrejana je na 60°C u vodenom kupatilu dok rastvor nije postao homogen. Rastvor je ohlađen do sobne temperature uz mešanje i čvrste supstance su istaložene iz rastvora i postale su veoma guste. Dodatni acetonitril (24 mL) je napunjen da bi se

4

podesilo razblaženje do 2 mL/g. Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 h i zatim je ohlađena u ledenom kupatilu u trajanju od 1 h. Proizvod je sakupljen ceđenjem i ispran je sa acetonitrilom. Jedinjenje xiii (25 g) je dobijeno kao drugi usev. Ukupno 131.4 g jedinjenja xiii je dobijeno u 74.9 % prinosu od jedinjenja xi.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.83 (s, 1H), 7.47 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.24 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.96-4.85 (m, 1H), 4.08-3.92 (m, 1H), 3.80 (qt, J = 6.9, 3.5 Hz, 2H), 3.61-3.51 (m, 1H), 3.25 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 2.61-2.50 (m, 1H), 2.35-2.26 (m, 1H), 1.33 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.27 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS za C14H18ClFNO3(M H)+: m/z = 302.0.

Primer 2. Alternativna sinteza (R)-4-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-((R)-1-hidroksietil)fenil)pirolidin-2-on

[0283]

Korak 1.1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etanon (iv-a)

[0284]

[0285] 1-(5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon (Jedinjenje ii iz Primera 1, Step 1, 1350 g, 7160 mmol), N,N-dimetilformamid (3.32 L), jodoetan (1340 g, 8590 mmol), i kalijum karbonat (1980 g, 14300 mmol) su pomešani zajedno i mešani su na sobnoj temperaturi u trajanju od 45 min. Temperatura parije se podigla do 55 °C sa 22 °C. Reakciona smeša je zagrevana do 60 °C tokom 1 h (temperatura partije je dostigla 67 °C za 30 min i nakon toga se spustila do 60 °C). HPLC analiza je ukazala da je sav polazni materijal bio potrošen. Voda (10 L) je dodata u jednoj porciji (prestaje se sa mešanjem ukoliko se voda dodaje u delovima). Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 min. Proizvod je sakupljen ceđenjem i ispran je sa vodom (3 L). Proizvod se sušio na filteru pod vakuumom 5 dana da bi se dobilo jedinjenje iv-a kao žutosmeđa čvrsta supstanca (1418 g).

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.15 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.51 (s, 3H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

Korak 2.2-(5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)-2-metil-1, 3-dioksolan (v-a)

[0286]

[0287] Rastvor 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etanona (iv-a, 1481.0 g, 6836.3 mmol) je razblažen u toluenu (6 L).1,2-Etandiol (953 mL, 17100 mmol) i mohohidrat p-toluensulfonske kiseline (104 g, 547 mmol) su dodati u rastvor. Reakciona smeša je zagrejana do refluksa na 104-110 °C sa korišćenjem Dean-Stark-ovog trapa za ukanjanje vode u trajanju od 17.4 h. HPLC analiza je pokazala da 37% polaznog materijala nije izreagovalo. Oko 600 mL destilata je uklonjeno i reakciona smeša je zagrevana pod refluksom dodatnih 5 h (ukupno 22 h). HPLC analiza nije pokazala dalju reakciju.

[0288] Spekulisalo se da je ostatak K2CO3u polaznom materijalu jedinjenja iv-a mogao da zaustavi reakciju. Prema tome, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i isprana je sa 1 N rastvorom hlorovodnične kiseline u vodi (3 x 6.66 L). Posle ispiranja kiseline rastvorene u vodi, organski sloj je prenet nazad u reakcionu posudu. 1,2-Etandiol (381 mL, 6840 mmol) i monohidrat ptoluensulfonske kiseline (104 g, 547 mmol) su dodati i reakciona smeša je zagrevana pod refluksom dodatnih 16 h. HPLC analiza je pokazala da oko 20 % polaznog materijala nije izreagovalo. Oko 100 mL destilata je uklonjeno.1,2-Etandiol (380 mL, 6800 mmol) je dodat i izložen je refluksu tokom 6 h (22 h ukupno). HPLC je pokazala da 7% od polaznog materijala nije izreagovalo. Oko 125 mL destilata je uklonjeno. Reakciona smeša je zagrevana do refluksa tokom 6 h (ukupno 28 h). HPLC je pokazala da 5.4% od polaznog materijala nije izreagovalo. Oko 125 mL destilata je uklonjeno. Reakciona smeša je zagrevana do refluksa dodatnih 7 h. HPLC analiza je pokazala da 3.5% od polaznog materijala nije izreagovalo. Oko 80 mL destilata je uklonjeno. Reakcija se u ovom trenutku smatrala završenom.

[0289] Reakciona smeša je isprana sa 1 N vodenim rastvorom natrijum hidroksida (2 x 5.5 L). Prvo bazno ispiranje je ekstrahovano sa toluenom (2.1 L). Kombinovani rastvor toluena je ispran sa vodom (7 L) i koncentrovan je da se dobije 2153 g tamnog ulja. HPLC analiza ukazuje na čistoću proizvoda 1

93.8% sa 1.90 % polaznog materijala i 0.79% de-jodo proizvoda. H NMR analiza je pokazala oko 0.5 ekvivalenta toluena (about 256 g) preostalog u proizvodu. Ispravljeni prinos jedinjenja v-a je bio 88.0%.

1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.51 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 4.17-3.92 (m, 4H), 3.91-3.80 (m, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.46 (t, J= 7.0 Hz, 3H).

Korak 3.3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)benzaldehid (vi)

[0290]

[0291] U 4-grli balon sa okruglim dnom koji je osušen u pećnici zapremine 3-L koji je opremljen sa mešalicom sa gornje strane, levkom za dodavanje zapremine 500 mL, ulazom za azot, pregradom, i termoelementom je napunjen N,N-diizopropilamin (87.8 mL, 626 mmol) i anhidrovani tetrahidrofuran (1090 mL, 13500 mmol). Ovaj rastvor je ohlađen do -72 °C i napunjen je sa 2.5 M n-butilitijumom u heksanima (261 mL, 652 mmol). Rastvor n-butilitijuma je dodavan tokom 18 min. Maksimalna unutrašnja temperatura tokom dodavanja je bila -65°. Kupatilo sa suvim ledom i acetonom je zamenjeno sa kupatilom koje sadrži ledenu vodu i reakciona smeša je zagrevana do oko-5 °C do oko 0 °C i održavana je tokom 15 min. Reakciona smeša je nakon toga ohlađena do -74.5 °C.

[0292] U odvojeni balon sa okruglim dnom zapremine 1-L koji sadrži 2-(5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)-2-metil-1,3-dioksolan (v-a, 136.1 g, 522.1 mmol) je dodat anhidrovani tetrahidrofuran (456 mL) da bi se čvrste supstance rastvorile. Dobijeni rastvor je ohlađen u ledenom kupatilu do oko 0°C. Rastvor koji sadrži jedinjenje v-a je prenet do LDA rastvora tokom 40 minuta preko kanile uz održavanje temperature reakcije između -70°C i -72.5°C. Reakciona smeša je postala žuta suspenzija i mešana je u trajanju od 37 min na -74°C. N,N-Dimetilformamid (60.6 mL, 783 mmol) je punjen špricem u jednom delu i ovo dodavanje je prozivelo egzoterm od -74.5°C do -66.5°C. Reakcija je praćena sa HPLC na 90 min nakon dodavanja. Polazni materijal je bio prisutan na 2.9%. Hladno kupatilo je uklonjeno i reakciona smeša je zagrejana u sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je uzorkovana i analizirana posle 3 h i polazni materijal koji nije izreagovao je bio prisutan u 1.5%. Reakcija je smatrana završenom i ugašena je dodavanjem rastvora reakcije u ledenu vodu (1.4 L) i razblažena je sa etil acetatom (1.5 L). Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (1.5 L) i organski slojevi su kombinovani i isprani su sa rastvorom soli (20% mas/mas vod. NaCl, 2 x 600 mL) i osušeni su preko anhidrovanog MgSO4. MgSO4je uklonjen ceđenjem i ostatak nakon ceđenja je koncentrovan do ulja sa malo prisutnih čvrstih supstanci. Ovaj ostatak je razblažen u metilen hloridu i nanet je na podlogu od silika gela (586 g). Podloga od silika gela je eluirana sa 2% EtOAc/DCM (praćeno sa TLC upotrebom 100% DCM kao eluenta). Željene frakcije su sakupljene i konentrovane su pod redukovanim pritiskom da se dobije svetlo jantarno ulje. Ulje je postavljeno pod visokim vakuumom da se dobije jedinjenje vi kao žuta 1

čvrsta supstanca (146.5g, 95.1% prinos). H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.27 (s, 1H), 7.78 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 4.10-3.96 (m, 4H), 3.87-3.76 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.44 (t, J= 7.0 Hz, 3 H). LCMS za C13H15ClFO4(M

+ H) : m/z = 289.1.

Koraci 4-10. (R)-4-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-((R)-1-hidroksietil)fenil)pirolidin-2-on (xiii)

[0293] Jedinjenje prema naslovu je dobijeno korišćenjem postupaka koji su anlaogni sa onima koji se opisuju u Primeru 1, Koracima 6-12.

Primer 3. (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on hidrohlorid

[0294]

Korak 1. (R)-1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-((R)-5-oksopirolidin-3-il)fenil)etil metansulfonat (xiv)

[0295]

[0296] (R)-4-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-((R)-1-hidroksietil)fenil)pirolidin-2-on (xiii, 172.0 g, 570.0 mmol) (sastojao se od 147 g na 99.83%: 0.09% hiralne čistoće, 99.33% hemijske čistoće; i 25g, 87.46%: 12.54% hiralne čistoće, 86.74% chemical hemijske čistoće) je razblažen u metilen hloridu (860 mL). N,N-diizopropiletilamin (149 mL, 855 mmol) je dodat u rastvor na od oko -7 °C do oko 2 °C. Metansulfonil hlorid (57.4 mL, 741 mmol) je dodavan u kapima u reakcionu smešu tokom 25 min. Suspenzija se pretvorila u bistri rastvor. U 30 min tački reakcionog vremena HPLC je pokazala da je reakcija završena. Ova reakciona smeša koja sadrži jedinjenje xiv je korišćena direktno u sledećoj reakciji.

Step 2. (R)-4-(3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-((S)-1-hidraziniletil)fenil)pirolidin-2-on (xv)

[0297]

[0298] Na 0 °C, hidrazin (178.9 mL, 5.7 mol) je dodat u jednoj porciji nakon čega se dodaje N-metilpirolidinon (860 mL) u reakcionu smešu koja sadrži jedinjenje xiv iz Koraka 1. Reakciona smeša je postala zamućena i nastalo je nekoliko taloga. Smeša je zagrevana do 40-57 °C pod azotom u trajanju od 90 min. HPLC je pokazala da je mezilat bio potrošen.

[0299] Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i dodat je zasićen rastvor natrijum bikarbonata (28.3 g) u vodi (300 mL). Smeša je mešana u trajanju od 20 min, u vremenu kada je dodat dihlorometan (300 mL). Organski sloj je razdvojen i mešan je sa rastvorom natrijum bikarbonata (14.2 g) u vodi (150 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa dihlorometanom (200 mL x 2). Kombinivani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (80 mL), osušeni su preko anhidrovanog Na2SO4(311 g), koncentrovani, i azeotropirani sa toluenom (250 mL) da bi se dobio bezbojeni rastvor N-metilpirolidinona koji se sastoji iz jedinjenja xv koje je korišćeno direktno u sledećoj reakciji. Uzorak je prečišćen za analizu NMR.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ 7.88 (s, 1H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.42 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 4.06-3.88 (m, 2H), 3.79-3.66 (m, 1H), 3.65-3.51 (m, 1H), 3.24 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 2.60-2.46 (m, 1H), 2.36-2.25 (m, 1H), 1.37 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.26 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS za C14H19ClFN3O2+

(M H) : m/z = 316.1.

Korak 3. 5-Amino-1-((S)-1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-((R)-5-oksopirolidin-3-il)fenil)etil)-3-metil-1H-pirazol-4-karbonitril (xvi)

[0300]

[0301] Uz mešanje, (1-etoksietiliden)malononitril (101 g, 741 mmol) je dodat u rastvor N-metilpirolidinona jedinjenja xv iz Koraka 2, u porcijama i smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod prisustvom azota. Nakon 15 min, analiza HPLC je pokazala 11% početnog materijala hidrazina, jedinjenja xv, u odnosu na proizvod jedinjenja xvi. N,N-Diizopropiletilamin (15 mL, 86 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 15 h. Analiza HPLC je pokazala 5.6 % of starting material remained. N,N-Diisopropylethylamine (5 mL, 30 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 5 h. HPLC analiza je pokazala da je ostalo 5.6 % početnog materijala. Reakciona smeša je mešana u trajanju od 2.5 dana i kombinovana je sa dve slične partije i zajedno obrađena.

[0302] Reakcione smeše iz tri serije jedinjenja xvi su kombinovane. Vodeni 0.5 M rastvor natrijum hidroksida (3.8 L) je dodat na 10-20 °C i mešan je u trajanju 5 min. HPLC je ukazala da je sav početni materijal (1-etoksietiliden)malononitrila bio potrošen. Etil acetat (4.0 L) je dodat i smeša je mešana u trajanju od 15 min. Slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran sa 0.5 M natrijum hidroksidom u vodi (2.38 L). Slojevi su razdvojeni. Kombinovani organski sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2 x 2 L). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1.0 M vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (3.56 L) i pH dobijenog vodenog sloja je bila 2-3. Organski sloj je ispran sa rastvorom soli (5 L), osušen preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovan, i osušen je pod visokim vakuumom 40 h da se dobije jedinjenje xvi kao svetlo smeša penasta čvrsta supstanca (702.7 g).1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.78 (s, 1H), 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.53 (s, 2H), 5.64 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 3.96 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.34 (m, 1H), 3.58 (m, 2H), 2.59-2.50 (m, 1H), 2.29(m,1H),2.04(s,3H),1.57(d,J=6.8Hz,3H),1.37(t,J=6.9Hz,3H). LCMS

za C19H22ClFN5O2(M+H) :m/z=406.1.

[0303] Izračunato je da je sveukupan prinos jedinjenja xvi u tri koraka (mezilacija, hidrazinoliza i obrazovanje pirazola) bilo 72.8 % od ukupnog unosa jedinjenja xiii. Čistoća određena sa HPLC je bila oko 80%. Analiza HPLC je ukazala da neki proizvod postoji u baznom vodenom sloju koji je nakon toga ekstrahovan sa EtOAc (2 L), ispran sa 1.0 M vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline i rastvorom soli, osušen je sa anhidrovanim natrijum sulfatom, koncentrovan, i osušen u pumpi pod visokim vazduhom u trajanju od 40 h da se dobije jedinjenje xvi kao braon ulje (134 g, 13.9%).

Korak 4. (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on (xvii)

[0304]

[0305] 5-Amino-1-((S)-1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-((R)-5-oksopirolidin-3-il)fenil)etil)-3-metil-1H-pirazol-4-karbonitril (xvi, 702.7 g, 1731 mmol) je dodat u reakcioni sud sa formamidin acetatom (1802 g, 17.31 mol) i 1,2-etandiolom (3.51 L). Reakciona smeša je zagrevana na 102-103 °C sa mešanjem od 18 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i etil acetat (7 L) i voda (6 L) su dodati i bifazna smeša je mešana u trajanju od 15 min. Organski sloj je razdvojen i vodeni sloj je razblažen sa dodatnom vodom (4.5 L) i etil acetatom (3 L) i mešan je u trajanju od 10 min. Organski sloj je razdvojen. Vodeni sloj je dalje ekstrahovan sa etil acetatom (2 L). Organski slojevi su kombinovani i mešani su sa vodom (4.5 L). Vodeni sloj je razdvojen i organski sloj je proceđen kroz sloj od celita (oko 1 kg). Organski sloj je ekstrahovan sa 1.0 M vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (7 L) mešanjem smeše u trajanju od 10 min. Vodeni sloj je razdvojen. Organski sloj bistro braon boje je mešan sa dodatnim 1.0 M vodenim rastvorom hlorovodnične kiseline (3 L) u trajanju od 10 min. Vodeni sloj je razdvojen. Vodeni kiseli slojevi su kombinovani i isprani su sa toluenom (500 mL). Vodeni kiseli rastvor je ohlađen sa vodenim kupatilom sa ledom i dodat je metilen hlorid (4 L). Na 5-15 °C, rastvor natrijum hidroksida (530 g) u vodi (530 mL) (50% NaOH solution) je dodavan polako do rastvora pH 11-12. Uočeni su čvsti ostaci taloženja. Dodatni metilen hlorid (3.5 L) i metalnol (300 mL) su dodati i smeša je mešana u trajanju od 10-15 min. Čvrsti proizvod je sakupljen sa ceđenjem i osušen je na filteru pod usisavanjem 16 h da se dobije jedinjenja xvii (289.7 g) kao braon čvrsta supstanca.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.30 (br s, 2H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.97 (p, J = 9.2 Hz, 1H), 3.90-3.73 (m, 2H), 3.57 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 3.25 (dd, J= 9.2, 8.7 Hz, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.60-2.50 (m, 1H), 2.36-2.20 (m, 1H), 1.69 (d, J = 7.1 Hz, 3 H), 1.39 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LCMS za C20H23ClFN6O2(M

+ H) : m/z = 433.3.

[0306] Ostatak od ceđenja je prenet u levak za razdvajanje i organski sloj je razdvojen. Organski sloj je mešan sa metilen hloridom (5 L) i metanolom (200 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, koncnetrovan, osušen je na pumpi sa visokim vakuumom u trajanju 16 h da se dobije dodatna količina 259.3 g kao braon čvrste supstance. Ukupan prinos xvii je bio 548.3 g u 73.2% prinosu.

Korak 5. (R)-4-(3-((S)-1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on hidrohloridna so (xviii)

[0307]

[0308] A 1.0 M vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (HCl, 5.0 L, 5.0 mol) je dodat u (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on (xvii, 609.8 g, 1.409 mol) na sobnoj temperaturi. Dobijena gusta suspenzija je nakon toga zagrevana do 50 °C da se dobije bistar rastvor. Dodatnih 1.82 L 1.0 M vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (HCl, 1.82 L, 1.82 mol; ukupno 6.82 L, 6.82 mol, 4.84 ekviv) je dodato u bistar rastvor na 50 °C i rastvor je nakon toga proceđen kroz fino proceđene na približno 50 °C. Fino proceđena reakciona smeša je postepeno ohlađena do sobne temperature tokom 2 h pre nego što je dalje ohlađena do 0 - 5 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 - 5 °C za najmanje 20 min da bi se započelo taloženje. Dobijene čvrste supstance su sakupljene ceđenjem, isprane su sa porcijom hladne matične tečnosti, nakon toga sa 1.0 M vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (HCl, 200 mL), i sušene su na filter levku na sobnoj temperaturi pod usisavanjem do konstantne težine (tokom 39 h) da bi se dobila so hlorovodonične kiseline jedinjenja Formule I: (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on hidrohlorid (xviii, 348.7 g, 661.2 g teorijski, 52.7%) kao beli kristalni prah.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (br s, 1H), 9.05 (br s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.28 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 3.95 (m, 1H), 3.79 (m, 2H), 3.55 (m, 1H), 3.22 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.55 (ddd, J = 16.8, 10.3, 2.3 Hz, 1H), 2.28 (ddd, J = 16.8, 8.6, 1.5 Hz, 1H), 1.73 (d, J = 7.0

13

Hz, 3H), 1.38 (t, J = 6.9 Hz, 3H) ppm. C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 175.3, 156.4 (JCF= 249.8 Hz), 153.8 (JCF= 7.0 Hz), 152.4, 150.8, 147.3, 144.3, 131.4 (JCF= 3.5 Hz), 127.3, 126.4 (JCF= 12.6 Hz), 116.1 (JCF= 18.4 Hz), 98.0, 72.1, 49.1, 46.6, 36.0, 29.4, 21.0, 15.4, 14.6 ppm.19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ - 113.6 (d, JFH= 7.7 Hz) ppm. C20H23Cl2FN6O2(MW 469.34); LCMS (EI) m/e 433.2 (M<+>+ H; tačna masa xvii: 432.15). Sadržaj vode sa KF: 3.63% u odnosu na težinu; Sadržaj hlorida (Cl-) određen titracijom: 7.56% u odnosu na težinu (7.56% teorijski).

1

[0309] Opseg topljenja/raspadanja kristalnog oblika (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1- il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on hidrohloridne soli je određen sa DSC, sa početne temperature od 30°C do finalne temperature od 350°C koristeći brzinu zagrevanja od 10 °C/min. Termogram DSC je otkrio jedan endotermni događaj na 194.37°C i signal na 206.55 °C, kao što je prikazano na SL 1.

[0310] TGA termogram je pokazao ukupan gubitak u masi 4.3% do 210 °C. Iznad 210 °C so počinje da se raspada, kao što je prikazano na SL.2.

[0311] Reprezentativni obrazac difrakcije X-zraka na prahu (XRPD) koji je prikazan na SL.3 i Tabeli 2 pokazuje odgovarajuće signale i intenzitete.

Tabela 2.

(nastavak)

2

Primer 4. Alternativna sinteza (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on hidrohlorida

[0312]

Korak 1. (R)-4-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on (xix)

[0313]

[0314] (4R)-4-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]pirolidin-2-on (kao smeša dva diastereoizomera sa R-konfiguracijom na pirolidinonu i R- ili S-konfiguracijama na sekundarnom alkoholu) (xiii, 16.7 g, 55.3 mmol) je razblažen u dihlorometanu (167 mL). Rastvor je ohlađen u ledenom kupatilu i Dess-Martinov perjodinan (35.2 g, 83.0 mmol) je dodavan u malim porcijama. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 h, u vreme kada je HPLC analiza pokazala da je reakcija završena. Rastvor natrijum sulfita (28 g, 220 mmol) u vodi (70 mL) je dodat u reakcionu smešu i smeša je mešana u trajanju od 20 min.1.0 M rastvor natrijum hidroksida je dodat u smešu i mešan je u trajanju od 10 min. Slojevima je omogućeno da odstoje i orgaski sloj je odvojen i uzastopno ispran sa 1 M rastvorom natrijum hidroksida u vodi (66 mL) i vodom (60 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno ceđenjem i ostatak nakon ceenja je koncentrovan da se dobije (R)-4-[3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil]pirolidin-2-on kao ulje koje je korišćeno u sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja.

Korak 2. (R,E)-terc-butil 2-(1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(5-oksopirolidin-3-il)fenil)etiliden)hidrazinkarboksilat (xx)

[0315]

[0316] Sirovi (R)-4-[3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil]pirolidin-2-on (jedinjenje xix iz Koraka 1) je razblaženo u metanolu (60 mL) i t-butil karbazat (8.04 g, 60.8 mmol) je dodat u rastvor. Reakciona smeša je mešana na 65 °C u trajanju od 3.5 dana, kada je HPLC analiza pokazala da je reakcija kompletna. Smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa smešom 0 - 5% metanola u etil acetatu da se dobije (R,E)-terc-butil 2-(1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(5-oksopirolidin-3-il)fenil)etiliden)hidrazinkarboksilat (xx,

1

19.5 g, 85%). H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.83 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.36 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.07 (p, J = 9.1 Hz, 1H), 3.84-3.69 (m, 2H), 3.59 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 3.28 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 2.54 (m, 1H), 2.33 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 1.46 (s, 9H), 1.25 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C19H25ClFN3NaO4(M Na)+: m/z = 436.1.

Korak 3. terc-Butil 2-((S)-1-(5-hloro-2-etosi-4-fluoro-3-((R)-5-oksopirolidin-3-il)fenil)etil)hidrazinkarboksilat (xxi)

[0317]

[0318] (R,E)-terc-butil 2-(1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(5-oksopirolidin-3-il)fenil)etiliden)hidrazinkarboksilat (xx, 0.5 g, 1.2 mmol) je razblažen u metanolu (25 mL) i rastvor je produvan sa gasovitim azotom u trajanju od 5 min. Bis(1,5-ciklooktadien)rodijum(I)tetrafluoroborat (35 mg, 0.086 mmol) i (R)-(-)-1-{(S)-2-[bis(4-trifluorometilfenil)fosfin]ferocenil}etil-di-t-butilfosfin (64 mg, 0.094 mmol) su dodati u rastvor i dobijena reakciona smeša je produvana sa gasovitim azotom u trajanju od 30 min. Reakciona smeša je zatim mešana pod pritiskom gasa vodonika (56 psi) u trajanju od 2.5 dana. Reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom i dobiveni ostatak je prečišćen sa hromatografijom na koloni od silika gela eluiranjem sa smešom metanola (0-10%) u etil acetatu. Željene frakcije su koncentrovane da se dobije terc-butil 2-((S)-1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-

4

3-((R)-5-oksopirolidin-3-il)fenil)etil)hidrazinkarboksilat (xxi, 428 mg, 85% prinos).1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.18 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.53 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.41 (br s, 1H), 3.98 (m, 1H), 3.75 (m, 2H), 3.61 (m, 1H), 3.26 (m, 1H), 2.53 (m, 1H), 2.29 (dd, J = 17.6, 8.6 Hz, 1H), 1.32 (s, 12H), 1.10 (d, J = 6.5 Hz, 1H). LCMS za C19H27ClFN3NaO4(M Na)+: m/z = 437.9. Hiralna HPLC analiza je pokazala da je proizvod sadržao željeni diastereoizomer terc-butil-2-((S)-1-(5-hloro- 2-etoksi-4-fluoro-3-((R)-5-oksopirolidin-3-il)fenil)etil)hidrazin karboksilat (xxi) na 85.6% i nepoželjni diastereoizomer terc-butil-2-((R)-1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-((R)-5-oksopirolidin-3-il)fenil)etil)hidrazinkarboksilat na 14.3%. Korak 4. 5-Amino-1-((S)-1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-((R)-5-oksopirolidin-3-il)fenil)etil)-3-metil-1H-pirazol-4-karbonitril (xvi)

[0319]

[0320] terc-Butil 2-((S)-1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-((R)-5-oksopirolidin-3-il)fenil)etil)hidrazinkarboksilat (xxi, 130 mg, 0.31 mmol) i monohidrat p-toluensulfonske kiseline (86 mg, 0.45 mmol) su dodati u etanol (3 mL) i reakciona smeša je zagrevana na 50 °C u trajanju od 20 h. HPLC analiza je pokazala da je bilo oko 88 % polaznog materijala koji nije izreagovao. Dodatna količina p-toluen sulfonske kiseline (86 mg, 0.45 mmol) je dodata i reakciona smeša je zagrevana do 60 °C u trajanju od 24h. HPLC analiza je pokazala potpuno uklanjanje Boc-zaštitne grupe. Ovoj reakcionoj smeši je dodat (1-etoksietiliden)malononitril (61 mg, 0.45 mmol) i N,N-diizopropiletilamin (260 µL, 1.5 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 h. HPLC je pokazala potpuno obrazovanje prstena pirazola.1.0 M rastvor natrijum hidroksida u vodi je dodat u reakcionu smešu uz mešanje u trajanju od 20 min. Smeši je dodat etil acetat (20 mL) i mešana je. Bifaznoj smeši je dozvoljeno da odstoji. Sloj etil acetata je sakupljen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (10 mL). Kombinovani rastvor etil acetata je dodat sa 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (5 mL) i mešan je u trajanju od 15 min. BIfaznoj smeši je omogućeno da odstoji i organski sloj je sakupljen i osušen je preko anhidrovanog natrijum sulfata. Natrijum sulfat je uklonjen ceđenjem i koncentrovan je za ceđenje da se dobije 5-Amino-1-((S)-1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-((R)-5-oksopirolidin-3-il)fenil)etil)-3-metil-1H-pirazol-4-karbonitril (xvi, 126 mg, kvantitativni prinos sirovog proizvoda) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 5. (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on (xvii)

[0321]

[0322] 5-Amino-1-{(1S)-1-[5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(5-oksopirolidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazol-4-karbonitril (xvi, 126 mg, 0.31 mmol) je dodat sa formamidin acetatom (323 mg, 3.1 mmol) i 1,2-etandiolom (2 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 104-105 °C uz mešanje. Posle 18 h, HPLC analiza je pokazala da je ostalo oko 44 % polaznog materijala jedinjenja xvi. Reakciona smeša je zagrevana do 115 °C u trajanju od 24 h. HPLC analiza je pokazala da je reakcija završena. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i dodati su etil acetat (10 mL) i voda (5 ml). Bifazna smeša je mešana. Slojevima je omogućeno razdvajanje. Organski sloj je sakupljen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (5 mL). Kombinovani rastvor etil acetata je ispran sa vodom (5 mL), osušen je preko anhidrovanog natrijum sulfata. Natrijum sulfat je uklonjen ceđenjem i filtrat je koncentrovan do ostatka. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu. Kolona je eluirana sa smešom metanola (0-5%) u metilen hloridu. Željene frakcije su kombinovane i uparene da se dobije (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on (xvii,

1

94 mg, 69.9% prinos). H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.30 (br s, 2H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.97 (p, J = 9.2 Hz, 1H), 3.90-3.73 (m, 2H), 3.57 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 3.25 (dd, J = 9.2, 8.7 Hz, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.60-2.50 (m, 1H), 2.36-2.20 (m, 1H), 1.69 (d, J = 7.1 Hz, 3 H), 1.39 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LCMS za C20H23ClFN6O2(M H)<+>: m/z = 433.3.

[0323] Hiralna HPLC analiza proizvoda je pokazala da je sadržao željeni diastereoizomer, (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on (xvii), na 87% i neželjeni diastereoizomer (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on na 13%.

Korak 6. (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on hidrohlorid

[0324] Proizvod prema naslovu je dobijen u skladu sa postupkom koji je opisan u Primeru 3, Koraku 5. Dobijena hidrohloridna so se dobro podudara sa materijalom napravljenim iz sintetičkog postupka koji je opisan u Primeru 3, u svakom uporedivom aspektu uključujući hemijsku čistoću, hiralnu čistoću, i karakteristike čvrstog stanja.

Primer A1: PI3K Enzimski test

[0325] PI3-Kinazni luminiscentni komplet testa uključujući lipidni kinazni supstrat, D-miofosfatidilinozitol 4,5-bisfosfat (PtdIns(4,5)P2)D (+)-sn-1,2-di-O-oktanoilgliceril, 3-O-fosfo vezani (PIP2), biotinilovani I(1,3,4,5)P4, PI(3,4,5)P3 Detektor Protein je kupljen od Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). AlphaScreen<TM>GST komplet za detekciju uključujući donorske i akceptorske kuglice je kupljen od PerkinElmer Life Sciences (Waltham, MA). PI3Kδ (p110δ /p85α) je kupljen od Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, HEPES i CHAPS su kupljeni od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO).

AlphaScreen<TM>test za PI3Kδ

[0326] Reakcija kinaze se sprovodi u REMP ploči sa 384 bunarića kupljenoj od Thermo Fisher Scientific u finalnoj zapremini od 40 µL. Inhibitori su prvo serijski razblaženi u DMSO i dodavani su u bunariće na ploči pre dodavanja drugih reakcionih komponenti. Finalna koncentracija DMSO u testu je bila 2%.

PI3K testovi su izvedeni na sobnoj temperaturi u 50 mM HEPES, pH 7.4, 5mM MgCl2, 50 mM NaCl, 5mM DTT i CHAPS 0.04%. Reakcije započinju dodavanjem ATP, finalna reakciona smeša se sastojala iz 20 µM PIP2, 20 µM ATP, 1.2nM PI3Kδ su inkubirani u trajanju od 20 minuta.10 µL reakcione smeše je zatim preneto u 5 µL 50nM biotinilovanog I(1,3,4,5)P4 u puferu za rastvaranje: 50 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 10 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% Tween-20, nakon čega sledi dodavanje 10 µL AlphaScreen<TM>donorskih i akceptorskih kuglica suspendovanih u puferu za rastvaranje koji sadrži 25nM PI(3,4,5)P3 detektorskog proteina. Finalna koncentracija i donorskih i akceptorskih kuglica je bila 20 mg/ml. Nakon zaptivanja ploče, ploče su inkubirane na mestu bez svetlosti na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 h. Aktivnost proizvoda je određena na Fusion-alpha čitaču mikroploča (Perkin-Elmer). Određivanje ICso je sprovedeno uklapanjem krive procenta aktivnosti kontrole u odnosu na log koncentracije inhibitora upotrebom GraphPad Prism 3.0 softvera.

Primer A2: PI3K Enzimski test

[0327] Materijali: Lipidni kinazni supstrat, fosfoinozitol-4,5-bisfosfat (PIP2), su kupljeni od Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). PI3K izooblici α, β, δ i γ su kupljeni od Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS i CHAPS su kupljeni od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO).

[0328] Reakcije kinaze su sprovedene u ploči sa 96 bunarića sa providnim dnom od Thermo Fisher Scientific u finalnoj zapremini od 24 µL. Inhibitori su prvo serijski razblaženi u DMSO i dodavani su u bunariće na ploči pre dodavanja drugih reakcionih komponenti. Finalna koncentracija DMSO u testu je bila 0.5%. Testovi PI3K su izvedeni na sobnoj temperaturi u 20 mM MOPS, pH 6.7, 10 mM MgCl2, 5 mM DTT i CHAPS 0.03%. Pripremljena je reakciona smeša koja se sastojala iz 50 µM PIP2, kinaze i različitih koncentracija inhibitora. Reakcije su inicirane dodavanjem ATP koji sadrži 2.2 µCi [γ-33P]ATP do finalne koncentracije od 1000 µM. Finalne koncentracije PI3K izooblika α, β, δ i γ u testu su bile redom, 1.3, 9.4, 2.9 i 10.8 nM. Reakcije su inkubirane u trajanju od 180 minuta i završene su dodavanjem 100 µL 1 M kalijum fosfata pH 8.0, 30 mM EDTA pufera za rastvaranje. 100 µL alikvota reakcionog rastvora su zatim prenete na Millipore MultiScreen IP 0.45 µm PVDF filter ploču sa 96 bunarića (Filter ploča je prethodno ovlažena sa redom, 200 µL 100% etanola, destilovanom vodom, i 1 M kalijum fosfatom pH 8.0). Filter ploča je aspirirana na Millipore Manifold pod vakuumom i isprana je sa 18 X 200 µL pufera za ispiranje koji sadrži 1 M kalijum fosfata pH 8.0 i 1 mM ATP. Nakon suđenja aspiracijom i blotovanjem, ploča je osušena na vazduhu u inkubatoru na 37 °C preko noći. Packard TopCount adapter (Millipore) je nakon toga povezan sa pločom nakon čega sledi dodavanje 120 µL Microscint 20 scintilacionog koktela (Perkin Elmer) u svakom bunariću. Nakon zaptivanja ploče, radioaktivnost proizvoda je određivana scintilacionim brojanjem na Topcount (Perkin-Elmer). Određivanje ICso je izvedeno uklapanjem krive procenta kontrolne aktivnosti u odnosu na log koncentracije inhibitora korišćenjem GraphPad Prism 3.0 sofvera.

[0329] (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on so hlorovodonične kiseline je ispitana u testu u Primeru A2 i određeno je da je selektivni inhibitor za PI3Kδ.

[0330] (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on so hlorovodonične kiseline je ispitana u testu u Primeru A2 i određeno je da je >100 puta selektivni inhibitor za PI3Kδ preko svake od PI3Kα, PI3Kβ, i PI3Kγ.

Primer A3: Scintilacijski blizinski test PI3Kδ

Materijali

[0331] [γ-33P]ATP (10mCi/mL) je kupljen od Perkin-Elmer (Waltham, MA). Lipidni kinazni supstrat, D-mio-fosfatidilinozitol 4,5-bisfosfat (PtdIns(4,5)P2)D (+)-sn-1,2-di-O-oktanoilgliceril, 3-O-fosfo povezani (PIP2), CAS 204858-53-7, je kupljen od Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). PI3Kδ (p110δ /p85α) je kupljen od Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS i CHAPS su kupljeni od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Aglutinin pšenične klice (WGA) YSi SPA scintilacione kuglice su kupljene od GE healthcare life sciences (Piscataway, NJ).

[0332] Reakcija kinaze je sprovedena u polistirenskoj matriks ploči sa 384-bunarića od Thermo Fisher Scientific u konačnoj zapremini od 25 µL. Inhibitori su prvo serijski razblaženi u DMSO i dodavani su u bunariće na ploči pre dodavanja drugih reakcionih komponenti. Finalna koncentracija DMSO u testu je bila 0.5%. PI3K testovi su izvedeni na sobnoj temperaturi u 20 mM MOPS, pH 6.7, 10 mM MgCl2, 5 mM DTT i CHAPS 0.03%. Reakcije su započete dodavanjem ATP-a, finalna reakciona smeša se sastojala 33

iz 20 µM PIP2, 20 µM ATP, 0.2 µCi [γ- P] ATP, 4 nM PI3Kδ. Reakcije su inkubirane u trajanju od 210 min i završene su dodavanjem 40 µL SPA kuglica suspendovanih u puferu za rastvaranje: 150mM kalijum fosfata pH 8.0, 20% glicerola.25 mM EDTA, 400 µM ATP. Finalna koncentracija SPA kuglica je bila 1.0 mg/mL. Nakon zaptivanja ploče, ploče su mešane preko noći na sobnoj temperaturi i centrifugirane su na 1800 oum tokom 10 minuta, radioaktivnost proizvoda je određivana scintilacionim brojanjem na Topcount (Perkin-Elmer). Određivanje ICso je određivano uklapanjem krive procenta kontrolne aktivnosti u odnosu na log koncentracije inhibitora upotrebom GraphPad Prism 3.0 softvera. Pronađeno je da jedinjenje Formule I imalo ICso ≤ 10 nM u testu iz Primera A3.

Primer B1: Test proliferacije B ćelija

[0333] Da bi se dobile B ćelije, humane PBMC su izolovane iz periferne krvi normalnih, donora koji su oslobođeni leka standardnim centrifugiranjem na gradijentu gustine na Ficoll-Hypague (GE Healthcare, Piscataway, NJ) i inkubirane su sa anti-CD 19 mikrokuglica (Miltenyi Biotech, Auburn, CA). Nakon toga, B ćelje su prečišćene sa pozitivnim imunosortiranjem upotrebom autoMacs (Miltenyi Biotech) u skladu sa instrukcijama proizvođača.

[0334] Prečišćene B ćelije (2X105/bunariću/200 µL) su kultivisane u pločama sa 96-bunarića sa ultra niskim vezivanjem (Corning, Corning, NY) u RPMI1640, 10% FBS i kozijim F(ab’)2 anti-humanim IgM (10 µg/ml) (Invitrogen, Carlsbad, CA) u prisustvu različite količine jedinjenja koja se ispituju u trajanju 3

od tri dana. [ H]-timidin (1 µCi/well) (PerkinElmer, Boston, MA) u PBS je nakon toga dodavan u B ćelijske kulture za dodatnih 12 h pre nego što je ugrađena radioaktivnost razdvojena ceđenjem sa vodom kroz GF/B filtere (Packard Bioscience, Meriden, CT) i izmerena je tečnim scintilacionim brojanjem sa Top- Count (Packard Bioscience).

Primer B2: Test proliferacije Fajferovih ćelija

[0335] Fajferove ćelijske linije (difuzni krupnoćelijski B limfom) su kupljene od ATCC (Manassas, VA) i održavane su u preporučenom medijumu kulture (RPMI i 10% FBS). Da bi se izmerila antiproliferaciona aktivnost jedinjenja, Fajferove ćelije su zasejane sa medijumom za kulturu (2x10<3>ćelija / bunariću / po 200 µl) u ploče sa 96-bunarića sa ultra niskim vezivanjem (Corning, Corning, NY), u prisustvu ili odsustvu koncentracionog opsega jedinjenja koja se ispituju. Posle 3-4 dana, [3H]-timidin (1 µCi/bunariću) (PerkinElmer, Boston, MA) u PBS-u je nakon toga dodavan u ćelijsku kulturu za dodatnih 12 h pre nego što je ugrađena radioaktivnost razdvojena ceđenjem sa vodom kroz GF/B filtere (Packard Bioscience, Meridenj, CT) i izmerena je tečnim scintilacionim brojanjem sa TopCount (Packard Bioscience).

Primer B3: Test proliferacije SUDHL-6 ćelija

[0336] SUDHL-6 ćelijska linija (difuzni krupnoćelijski B limfom) je kupljena od ATCC (Manassas, VA) i održavana je u preporučenom medijumu kulture (RPMI i 10% FBS). Da bi se izmerila anti-proliferaciona aktivnost jedinjenja preko određivanja količine ATP, SUDHL-6 ćelije su zasejane sa medijumom kulture (5000 ćelija / bunariću / po 200 µl) u polistirenskoj prozirnoj crnoj ploči sa 96-bunarića za kultivaciju tkiva (Greiner-bio-one preko VWR, NJ) u prisustvu ili odsustvu koncentracionog opsega jedinjenja koja se ispituju. Posle 3 dana, Cell Titer-GLO Luminescent (Promega, Madison, WI) sredstvo za kulturu ćelija je dodavano u svaki bunarić u trajanju od 10 minuta na sobnoj temperaturi da bi se stabilizovao luminiscentni signal. Ovo određuje broj vijabilnih ćelija u kulturi na osnovu određivanja prisutne količine ATP-a, što signalizira prisustvo metabolički aktivnih ćelija. Luminescencija je izmerena sa TopCount 384 (Packard Bioscience preko Perkin Elmer, Boston, MA).

Primer C: Test fosforilacije Akt

[0337] Ramos-ove ćelije (B limfocit i Burkitovog limfoma) su dobijene od ATCC (Manassas, VA) i održavane su u RPMI1640 i 10% FBS. Ćelije (3X10<7>ćelija /epruveti/3 mL u RPMI) su inkubirane sa različitim količinama jedinjenja koja se ispituju u trajanju od 2 h na 37 °C i zatim su stimulisane sa kozjim F(ab’)2anti-humanim IgM (5 µg/mL) (Invitrogen) u trajanju od 17 minuta na 37 °C u vodenom kupatilu. Stimulisane ćelije su oborene na 4 °C centrifugiranjem i celi ekstrakti ćelija su pripremljeni korišćenjem 300 µL pufera za lizu (Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Dobijeni lizati su sonifikovani i supernatanti su sakupljeni. Nivoi fosforilacije Akt u supernatantima su analizirani korišćenjem PathScan fosfo-Aktl (Ser473) sendvič ELISA kompleta (Cell Signaling Technology) u skladu sa instrukcijama proizvođača.

Claims (14)

1. Patentni zahtevi 1. So koja je so hlorovodonične kiseline (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona, koja je kristalna.
2. 2. So prema zahtevu 1 koja je u stehiometrijski odnosu 1:1 (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona prema hlorovodoničnoj kiselini .
3. 3. So prema zahtevu 1 ili 2, nazačena sa DSC termogramom koji ima endotermni signal na 207 ± 3 °C.
4. 4. So prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3 koja ima DSC termogram kao što je dole prikazano:
5. 5. So prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4 koja ima TGA termogram kao što je dole prikazano:

   Temperatura (<0>C)
6. 6. So prema bilo kom od zahteva 1-5 koja ima: (a) najmanje jedan XRPD signal, u smislu 2-teta, odabran od 11.3° ± 0.2°, 16.4° ± 0.2°, 21.0° ± 0.2°, 23.0° ± 0.2°, 28.1° ± 0.2°, 31.2° 60.2°, i 32.8° 60.2°; (b) najmanje dva XRPD signala, u smislu 2-teta, odabrana od 11.3° ± 0.2°, 16.4° ± 0.2°, 21.0° ± 0.2°, 23.0° ± 0.2°, 28.1° ± 0.2°, 31.2° ± 0.2°, i 32.8° ± 0.2°; (c) najmanje tri XRPD signala, u smislu 2-teta, odabrana od 11.3° ± 0.2°, 16.4° ± 0.2°, 21.0° ± 0.2°, 23.0° ± 0.2°, 28.1° ± 0.2°, 31.2° ± 0.2°, i 32.8° ± 0.2°; (d) najmanje četiri XRPD signala, u smislu 2-teta, odabrana od 11.3° ± 0.2°, 16.4° ± 0.2°, 21.0° ± 0.2°, 23.0° ± 0.2°, 28.1° ± 0.2°, 31.2° ± 0.2°, i 32.8° ± 0.2°; (e) najmanje pet XRPD signala, u smislu 2-teta, odabrana od 11.3° ± 0.2°, 16.4° ± 0.2°, 21.0° ± 0.2°, 23.0° ± 0.2°, 28.1° ± 0.2°, 31.2° ± 0.2°, i 32.8° ± 0.2°.
7. 7. So prema bilo kom od zahteva 1-5 koja ima profil XRPD kao što je dole prikazano:

   2 Teta (Kuplovano dva teta/teta)WL=1.54060 1
8. 8. Farmaceutska kompozicija koja sadrži so prema bilo kom od zahteva 1-7 i farmaceutski prihvatljivi nosač.
9. 9. Postupak za inhibiranje aktivnosti PI3Kδ kinaze, in vitro, koji obuhvata dovođenje u kontakt kinaze sa soli prema bilo kom od zahteva 1-7.
10. 10. So prema bilo kom od zahteva 1 do 7, za upotrebu u lečenju bolesti kod pacijenta, pri čemu je pomenuta bolest izabrana od idiopatske trombocitopenijske purpure (ITP), autoimune hemolitične anemije, vaskulitisa, sistemskog lupusa eritematozusa, lupusa nefritisa, pemfigusa, autoimune hemolitične anemije (AIHA), membranozne nefropatije, hronične limfocitne leukemije (CLL), Ne-Hodčkinovog limfoma (NHL), leukemije dlakastih ćelija, limfoma Mantle ćelija, Burkitovog limfoma, malog limfocinog limfoma, folikularnog limfoma, limfoplazmacitnog limfoma, limfoma ekstranodalne marginalne zone, Hodčkinovog limfoma, Waldenstrom-ove makrogloblinemije, prolimfocitne leukemije, akutne limfoblastne leukemije, mijelofibroze, limfoma limfatičnog tkiva povezanog sa mukozom (MALT), limfoma B-ćelija, mediastinalni (timični) limfom velikih B-ćelija, limfomatoidna granulomatoza, limfoma marginalne zone slezine, primarnog efuzionog limfoma, intravaskularnog limfoma velikih B-ćelija, leukemije plazma ćelija, ekstramedularnog plazmacitoma, pritajenog mijeloma tj. asimptomatskog mijeloma), monoklonalne gamapatije neodređenog značaja (MGUS) I limfoma B ćelija; ili je bolest idiopatska trombocitopenijska purpura (ITP) izabrana od relapsnog ITP i refraktornog ITP; ili je bolest vaskulitis izabran od Behçet-ove bolesti, Cogan-ovog sindroma, arteritisa džinovskih ćelija, reumatska polimijalgija (PMR), Takayasu-jev arteritis, Buerger-ova bolest (thromboangiitis obliterans), vaskulitisa centralnog nervnog sistema, Kawasaki-jeve bolesti, poliarteritis nodoza, Čarg-Štrausovog sindroma, vaskulitisa mešovite krioglobulinemije (esencijalnog ili indukovanog virusom hepatitisa C (HCV)), Henoch-Schonlein-ove purpure (HSP), vaskulitisa indukovanog hiperpreosetljivošću, mikroskopskog angilitisa, Wegener-ove granulomatoze, i sistemskog vaskulitisa (AASV) indukovanog sa anti-neutrofilnim citoplazmatskim antitelom (ANCA); ili je bolest ne-Hodčkinov limfom (NHL) odabran od relapsnog NHL, refraktornog NHL, i rekurentnog folikularnog NHL; ili je bolest limfom B ćelija, pri čemu pomenuti limfom B ćelije je difuzni krupnoćelijski limfom B-ćelija (DLBCL); ili je bolest limfom B ćelija, pri čemu pomenuti limfom B ćelija je aktiviranim B-ćelijama sličan (ABC) difuzni krupnoćelijski B limfom, ili difuzni krupnoćelijski B limfom (GCB) B ćelija germinalnog centra; ili je bolest osteoartritis, restenoza, ateroskleroza, poremećaji kostiju, artritis, dijabetska retnopatija, psorijaza, benigna hipertrofija prostate, inflamacija, angiogeneza, pankreatitis, bolest bubrega, inflamatorna bolest creva, mijastenija gravis, multiple skleroza, ili Sjögren-ov sindrom; ili je bolest reumatoidni artritis, alergija, astma, glomerulonefritis, lupus, ili inflamacija povezana sa bilo kojim od prethodno pomenutih; ili je bolest lupus koji je sistemski lupus eritematozus ili lupus nefritis; ili je bolest kancer grudi, kancer prostate, kancer debelog creva, kancer endometrijuma, kancer mozga, kancer bešike, kancer kože, kancer uterusa, kancer jajnika, kancer pluća, kancer pankreasa, kancer bubrega, kancer želuca, ili hematološki kancer; ili je bolest hematološki kancer koji je akutna mijeloblastna leukemija ili hronična mijeloidna leukemija; ili je bolest akutna povreda pluća (ALI) ili adultni respiratorni distres sindrom (ARDS).
11. 11. Postupak za dobijanje soli prema bilo kom od patentih zaheva 1-7, koji obuhvata reagovanje jedinjenja Formule I: 2

    sa hlorovodoničnom kiselinom da bi se obrazovala pomenuta so.
12. 12. Postupak prema zahtevu 11, pri čemu pomenuta hlorovodonična kiselina je 1 M hlorovodonična kiselina u vodi.
13. 13. Postupak prema zahtevu 11 ili 12, pri čemu se pomenuta reakcija izvodi na temperaturi od oko 45 °C do 55 °C.
14. 14. Postupak prema bilo kom od zahteva 11-13, što postupak dalje obuhvata: dodavanje hlorovodonične kiseline jedinjenju Formule I na sobnoj temperatri da bi se obrazovala suspenzija; zagrevanje pomenute suspenzije do temperature od oko 45 °C do 55 °C da bi se obrazovao rastvor; i hlađenje rastvora do temperature od oko 0 °C do 5 °C da bi pomenuta so kristalisala.