CN114375304A - 蛋白质组合物及其食用品 - Google Patents

蛋白质组合物及其食用品 Download PDF

Info

Publication number
CN114375304A
CN114375304A CN202080063974.8A CN202080063974A CN114375304A CN 114375304 A CN114375304 A CN 114375304A CN 202080063974 A CN202080063974 A CN 202080063974A CN 114375304 A CN114375304 A CN 114375304A
Authority
CN
China
Prior art keywords
composition
protein
rovd
reovd
cys
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080063974.8A
Other languages
English (en)
Inventor
克里缇卡·马哈德万
乔伊·安德鲁·克雷普斯
伊沙·乔希
法诺什·阿勇盖
钟微希
哈沙尔·卡什萨格
亚历山大·查普奥克斯
韦斯利·拉瑟福德-詹金斯
兰詹·帕特奈克
弗兰克·道格拉斯·艾维
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Every Co
Original Assignee
Clara Foods Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Clara Foods Co filed Critical Clara Foods Co
Priority claimed from PCT/US2020/041720 external-priority patent/WO2021007565A1/en
Publication of CN114375304A publication Critical patent/CN114375304A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • C07K14/8135—Kazal type inhibitors, e.g. pancreatic secretory inhibitor, ovomucoid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C11/00—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions
    • A23C11/02—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins
    • A23C11/06—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins containing non-milk proteins
    • A23C11/065—Microbial proteins, inactivated yeast or animal proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/008—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/08—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from eggs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/18—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/04—Animal proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/20—Proteins from microorganisms or unicellular algae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L15/00—Egg products; Preparation or treatment thereof
    • A23L15/35—Egg substitutes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L19/00—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof
    • A23L19/03—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof consisting of whole pieces or fragments without mashing the original pieces
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A23L2/54—Mixing with gases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A23L2/66—Proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L21/00—Marmalades, jams, jellies or the like; Products from apiculture; Preparation or treatment thereof
    • A23L21/10—Marmalades; Jams; Jellies; Other similar fruit or vegetable compositions; Simulated fruit products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/60—Salad dressings; Mayonnaise; Ketchup
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/195—Proteins from microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/03—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with a oxygen as acceptor (1.1.3)
    • C12Y101/03013—Alcohol oxidase (1.1.3.13)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/0123—Kojibiose phosphorylase (2.4.1.230)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01232—Initiation-specific alpha-1,6-mannosyltransferase (2.4.1.232)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01017—Lysozyme (3.2.1.17)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01096—Mannosyl-glycoprotein endo-beta-N-acetylglucosaminidase (3.2.1.96)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L23/00—Soups; Sauces; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/02—Cells for production

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pediatric Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Grain Derivatives (AREA)
  • Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

本文提供了具有提高的蛋白质含量的组合物、具有高溶解度的蛋白质、蛋白质组合及其制备方法。

Description

蛋白质组合物及其食用品
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年7月11日提交的美国临时专利申请第62/873,154号和2019年7月11日提交的美国临时专利申请第62/873,159号的优先权。前述专利申请的全部内容通过引用并入本文。
序列表
本申请包含序列表，该序列表已通过EFS-Web以ASCII格式提交，并通过引用整体并入本文。该ASCII副本创建于2020年7月10日，命名为49160-714.601_ST25.txt，大小为95,504字节。
背景技术
蛋白质是重要的膳食营养素。它们可以作为燃料源或氨基酸的来源，包括人体无法合成的必需氨基酸。健康成年人每天推荐的蛋白质摄入量是个人总热量需求的10％至35％，且目前大多数人的主要蛋白质摄入来自动物来源。此外，运动员和健美运动者可能依赖增加的蛋白质消耗来逐渐增加肌肉质量和改善表现。随着世界人口的增长和全球粮食需求的同时增长，有必要提供蛋白质的可替代、可持续的、非动物来源作为日常饮食、膳食补充剂和运动营养品的有用蛋白质来源。
发明内容
本发明的一个方面是一种包含重组卵类粘蛋白(recombinant ovomucoidprotein，rOVD)的组合物。所述rOVD包含至少一个糖基化的天冬酰胺残基，并且所述rOVD基本上不存在N-连接甘露糖基化。
在一些实施方案中，每个糖基化天冬酰胺包含单个N-乙酰氨基葡萄糖。rOVD可包含至少三个糖基化的天冬酰胺残基。在一些情况下，rOVD是rOVD蛋白质的一种分泌型。在各种实施方案中，所述组合物为粉末。基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物可具有至少30％rOVD蛋白质、至少40％rOVD蛋白质、至少50％rOVD蛋白质、至少60％rOVD蛋白质、至少70％rOVD蛋白质、至少80％rOVD蛋白质、至少85％rOVD蛋白质、至少90％rOVD蛋白质或至少95％rOVD蛋白质的蛋白质含量。在一些情况下，所述粉末能够溶解在液体中。
本发明的另一方面是一种包含重组卵类粘蛋白(rOVD)的组合物。所述组合物是为人或动物食用而配制的粉末，并且基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物具有至少70％rOVD蛋白质、至少80％rOVD蛋白质、至少85％rOVD蛋白质、至少90％rOVD蛋白质或至少95％rOVD蛋白质的蛋白质含量。
基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述粉末可包含小于15％、12％、10％、8％、6％、5％、3％、2％或1％的水分。所述粉末可包含小于30％、27％、25％、22％、20％、17％、15％、12％、10％、8％、5％、3％或1％的游离碳水化合物含量。在一些实施方案中，所述粉末能够溶解在液体中。
在实施方案中，所述组合物包含选自调味品、着色剂、甜味剂、氨基酸、蛋白质、酸化剂、防腐剂和灰分的一种或多种附加成分。在一些情况下，所述组合物包含小于5％、4.5％、4％、3.5％、3％、2.5％、2％、1.5％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或0.1％的灰分。氨基酸可选自色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸或其组合。
本发明的另一方面是一种包含重组卵类粘蛋白(rOVD)的组合物。所述组合物为人或动物食用而配制的固体形式，其中所述rOVD为所述组合物提供蛋白质强化以及选自口感、质地、硬度、热处理稳定性和pH稳定性的至少一个附加特征。
在各种实施方案中，rOVD包含至少一个连接至N-乙酰氨基葡萄糖的天冬酰胺残基，并且rOVD基本上不存在N-连接甘露糖基化。基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积和/或基于重量/组合物总体积，rOVD的浓度可大于约5％、约10％、约15％、约20％或约25％。在一些情况下，与缺少rOVD的固体可食用组合物相比，rOVD基本上不会改变固体可食用组合物的可见外观或口感；与含有与rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的固体可食用组合物相比，rOVD基本上不会改变固体可食用组合物的可见外观或口感；与缺少rOVD的固体可食用组合物相比，rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级；和/或与含有与rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的可比组合物相比，rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级。在一些实施方案中，所述固体可食用组合物为零食棒、蛋白质棒、营养棒、能量棒或蛋白质补充剂。在一些情况下，所述固体可食用组合物包含选自调味品、着色剂、甜味剂、氨基酸、蛋白质、酸化剂、防腐剂和灰分的一种或多种附加成分。
在一个方面，本发明提供了一种包含重组卵类粘蛋白(rOVD)的组合物。所述组合物是为人或动物食用而配制的液体，其中rOVD为所述组合物提供蛋白质强化以及选自溶解度、口感、热处理稳定性和pH稳定性的至少一个附加特征。
在一些情况下，基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物具有包含至少15％rOVD、至少20％rOVD蛋白质、至少30％rOVD蛋白质或至少40％rOVD蛋白质的蛋白质含量。所述组合物可具有包含至少5％rOVD的蛋白质含量，且其中所述液体可食用组合物基本上是光学澄清的。在实施方案中，所述组合物的光学净度大于含有与rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的可比组合物。在一些情况下，与缺少rOVD的液体可食用组合物相比，rOVD基本上不会改变液体可食用组合物的可见外观或口感；与含有与rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的可比组合物相比，rOVD基本上不会改变液体可食用组合物的可见外观或口感；与缺少rOVD的液体可食用组合物相比，rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级；和/或与含有与rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的可比组合物相比，rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级。在将液体可食用组合物加热至约72℃至约121℃的温度后，rOVD可保持基本上可溶。在一些情况下，与乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质在与rOVD相同浓度下的稳定性相比，rOVD在热处理后的液体中具有较高的溶解度、光学净度或溶解度和光学净度两者。在一些实施方案中，热处理包括将液体暴露于约72℃至约121℃的温度。rOVD在液体中的溶解度可大于与rOVD相同浓度乳清蛋质白、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的溶解度。在一些情况下，所述液体可食用组合物的pH为约2.0至约8.0。
在一些实施方案中，为人或动物食用而配制的固体形式或为人或动物食用而配制的液体可包含一种或多种选自调味品、着色剂、甜味剂、氨基酸、蛋白质、酸化剂和防腐剂的附加成分。在各种实施方案中，氨基酸选自色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸或其组合。在一些情况下，蛋白质是溶菌酶蛋白质，例如蛋清溶菌酶(OVL)。rOVD与OVL的比率可为约60％rOVD:40％OVL至约82％rOVD:18％OVL。溶菌酶可以是重组溶菌酶蛋白质。在一些情况下，蛋白质和/或氨基酸为所述固体形式或液体提供了改善的氨基酸平衡。在实施方案中，蛋白质消化率校正氨基酸评分(PDCAAS)等于或大于约0.75，例如，大于或等于约0.8、0.85、0.90、0.95或PDCAAS为约1.0或为1.0。液体可食用组合物可包含rOVD和OVL，且蛋白质是可溶的且组合物是光学澄清的。
在一些情况下，液体可食用组合物是选自果汁、肉汤、汤、苏打水、软饮料、加味水、蛋白质水、强化水、碳酸水、营养饮料、能量饮料、运动饮料、恢复饮料、加热饮料、咖啡基饮料、茶基饮料、植物基奶、奶基饮料、非乳制品、植物基温和饮料、婴儿配方饮料、膳食替代饮料的饮品。在一些实施方案中，所述饮品包含碳酸化。
液体可食用组合物可以是糖浆，所述糖浆包含基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积的20％rOVD蛋白质至至少60％rOVD蛋白质。
在一些情况下，液体可食用组合物是乳液，例如酱汁、肉汁或沙拉调料。
在另一方面，本发明提供了一种包含重组卵类粘蛋白(rOVD)的组合物。所述组合物是为人或动物食用而配制的半固体形式，其中rOVD提供选自口感、质地、硬度、热处理稳定性和pH稳定性的至少一个附加特征。
在各种实施方案中，半固体可食用组合物是粘性物、糖果、果冻、糖浆、凝胶、稠化制剂。在一些情况下，与缺少rOVD的半固体可食用组合物相比，rOVD基本上不会改变半固体可食用组合物的可见外观或口感；与含有与rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的半固体可食用组合物相比，rOVD基本上不会改变半固体可食用组合物的可见外观或口感；与缺少rOVD的半固体可食用组合物相比，rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级；和/或与含有与rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的可比组合物相比，rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级。半固体可食用组合物的光学净度可大于含有与rOVD相同浓度乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的可比组合物。
半固体可食用组合物可包含选自调味品、着色剂、甜味剂、氨基酸、蛋白质、酸化剂和防腐剂的一种或多种附加成分。所述蛋白质和/或氨基酸可为所述半固体可食用组合物提供改善的氨基酸平衡。在一些情况下，氨基酸选自色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸或其组合。在一些实施方案中，蛋白质和/或氨基酸为半固体可食用组合物提供改善的氨基酸平衡。所述蛋白质和/或氨基酸可为所述半固体可食用组合物提供改善的氨基酸平衡。在某些情况下，氨基酸选自色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸或其组合。在实施方案中，蛋白质为溶菌酶蛋白质，例如，溶菌酶蛋白质为蛋清溶菌酶(OVL)。rOVD与OVL的比率可为约60％rOVD:40％OVL至约82％rOVD:18％OVL。溶菌酶可以是重组溶菌酶蛋白质。在各种实施方案中，蛋白质消化率校正氨基酸评分(PDCAAS)等于或大于约0.75、0.8、0.85、0.90、0.95或PDCAAS为约1.0或为1.0。
在一些情况下，rOVD包括已暴露于氧化剂或产氧剂的rOVD。在各种实施方案中，产氧剂为过氧化氢、过碳酸钠、泡沫氧、活性二氧化氯或臭氧。
在一些情况下，rOVD包含天然存在于鸟类物种中的氨基酸序列，所述鸟类物种例如为鸡、鹌鹑、火鸡、火鸡秃鹰、蜂鸟、鸭子、鸵鸟、鹅、鸥、珍珠鸡、雉鸡或鸸鹋以及其任意组合。
rOVD可包含SEQ ID No.1-44之一的氨基酸序列或与SEQ ID No.1-44之一具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在实施方案中，rOVD基本上是全长rOVD氨基酸序列。
在一些情况下，rOVD为所述组合物提供蛋白质强化。
在一些实施方案中，rOVD由微生物宿主细胞产生，例如，在一些情况下，微生物宿主细胞是酵母、丝状真菌或细菌。微生物宿主细胞可以是毕赤酵母属物种、酵母属物种、木霉属物种、假单胞菌物种或大肠杆菌物种。微生物宿主细胞可以是巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)或法夫驹形氏酵母(Komagataella phaffii)。
另一方面是一种包含重组卵类粘蛋白(rOVD)的可食用组合物。rOVD为所述组合物提供蛋白质强化；其中rOVD提供与天然卵类粘蛋白相当或更高的溶解度。
本发明的一个方面是一种包含重组卵类粘蛋白(rOVD)的可食用粉末蛋白质组合物。所述组合物的蛋白质含量大于70％，其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物包含小于2％的灰分、小于20％的碳水化合物和小于1％的通过酸水解的脂肪。
本发明的另一方面是一种包含重组卵类粘蛋白(rOVD)的可食用组合物。基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物具有包含至少15％的rOVD蛋白质的蛋白质含量。
在一个方面，本发明提供了一种包含重组卵类粘蛋白(rOVD)的可食用组合物。rOVD为所述组合物提供蛋白质强化；其中rOVD提供的保水能力高于天然卵类粘蛋白。
本发明的另一方面是一种饮品组合物，其包含重组卵类粘蛋白(rOVD)和至少一种可食用液体，其中rOVD基本上可溶于所述组合物，其中所述饮品组合物基本上是光学澄清的，且其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，rOVD的浓度大于约5％。所述饮品选自果汁、肉汤、汤、苏打水、软饮料、加味水、蛋白质水、强化水、碳酸水、营养饮料、能量饮料、运动饮料、恢复饮料、加热饮料、咖啡基饮料、茶基饮料、植物基奶、奶基饮料、非乳制品、植物基温和饮料、婴儿配方饮料、膳食替代饮料。所述饮品可包含碳酸化。
在一个方面，本发明提供了一种制备可食用食品制剂的方法。所述方法包括以下步骤：提供由微生物宿主产生的重组OVD(rOVD)；其中rOVD包含N-连接糖基化，并且其中rOVD基本上不存在N-连接甘露糖基化；通过将rOVD与至少一种可食用成分组合或混合来生产制剂；其中，rOVD为组合物提供蛋白质强化和选自溶解度、光学净度、口感、质地、硬度、热处理稳定性和pH稳定性的至少一个附加特征。
在各种实施方案中，rOVD包含一个或多个糖基化的天冬酰胺残基，其中每个糖基化的天冬酰胺残基包含单个N-乙酰氨基葡萄糖。在一些情况下，基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，可食用食品制剂中存在的rOVD的量为或为约1％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％。
所述方法可进一步包括对制剂进行热处理，例如，将制剂暴露于约72℃至约121℃的温度。热处理可包括热充填、巴氏杀菌、干馏、煮沸、烘焙、炙烤(broiling)和烧烤(grilling)。在实施方案中，所述制剂的pH为约2至约6。
在一些情况下，所述方法还包括在例如酵母、丝状真菌或细菌的微生物宿主中表达rOVD蛋白质。在一些实施方案中，微生物宿主是毕赤酵母属物种、酵母属物种、木霉属物种、假单胞菌物种或大肠杆菌物种。在一些情况下，微生物宿主是巴斯德毕赤酵母或法夫驹形氏酵母。
在一些实施方案中，所述方法还包括在微生物宿主中表达酶，所述酶具有通过在N-连接糖蛋白上的高甘露糖和混合低聚糖的壳二糖核心内裂解来去除聚糖的活性。在各种实施方案中，所述酶包含EndoH、OCH1-EndoH融合或EndoH的活性片段。
在一些情况下，rOVD是从微生物宿主分泌的，其中所述方法还包括在将rOVD与至少一种可食用成分组合或混合之前分离分泌的rOVD。
所述方法还可包括将分泌的rOVD与微生物宿主分离，并将rOVD暴露于氧化剂或产氧剂，例如过氧化氢、过碳酸钠、活性二氧化氯、泡沫氧或臭氧。
在一些情况下，所述方法还包括干燥、粉末化和/或喷雾干燥rOVD。
在各种实施方案中，制剂适合于人食用和/或动物食用。
本发明的一个方面是通过本文公开的方法生产的可食用组合物。
本发明的另一方面是包含N-连接糖基化的重组卵类粘蛋白(rOVD)蛋白质，其中N-连接糖基化包含N-乙酰氨基葡萄糖，且基本上不存在甘露糖残基。
在一些情况下，rOVD还包含O-连接糖基化。OVD的至少一个天冬酰胺残基被糖基化且具有单个N-乙酰氨基葡萄糖残基。在实施方案中，rOVD的至少三个天冬酰胺残基具有单个N-乙酰氨基葡萄糖残基。rOVD蛋白质可包含已暴露于氧化剂或产氧剂的rOVD，所述氧化剂或产氧剂例如为过氧化氢、过碳酸钠、泡沫氧、活性二氧化氯或臭氧。
另一方面是包含根据本文所公开的任何方面或实施方案的rOVD蛋白质的组合物。
在一些实施方案中，所述组合物为粉末形式，且其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物的蛋白质含量为约70％或更高。在一些情况下，基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，组合物中存在的rOVD蛋白质的量为约80％或更高。
在一个方面，本发明提供了一种制备rOVD蛋白质的方法。所述方法包括：在真核宿主细胞中产生rOVD蛋白质，其中所述rOVD蛋白质由宿主细胞分泌，且其中宿主细胞表达具有从N-乙酰氨基葡萄糖连接中去除甘露糖残基的活性的酶；将rOVD蛋白质与宿主细胞分离；将rOVD蛋白质暴露于氧化剂或产氧剂中；和将rOVD与氧化剂或产氧剂分离。
在一些实施方案中，所述酶包含EndoH、OCH1-EndoH融合或EndoH的活性片段。在一些情况下，氧化剂或产氧剂包括过氧化氢、过碳酸钠、泡沫氧、活性二氧化氯或臭氧。在一些实施方案中，宿主细胞是酵母或真菌细胞。
在一些情况下，宿主细胞是毕赤酵母属物种(Pichia sp)。
在本文公开的任何方法或组合物中，rOVD可衍生自鸟类物种。
在本文公开的任何方法或组合物中，rOVD可包含鸡OVD、鹅OVD蛋白质、蜂鸟OVD或火鸡秃鹰OVD的氨基酸序列。
在本文公开的任何方法或组合物中，rOVD可包含选自SEQ ID No.1-44的氨基酸序列和与SEQ ID No.1-44具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
从以下详细描述来看，本发明的其他方面和优点对于本领域技术人员来说将变得显而易见，其中仅示出和描述了本发明的示例性实施方案。如将要实现的，本发明能够实现其他和不同的实施方案，并且能够在各种明显方面对其若干细节进行修改，所有这些都不偏离本发明。附图和描述应视为在本质上是说明性的，而不是限制性的。本文关于具体组合物和/或方法的任何描述适用于并可用于本文公开的任何其他具体组合物和/或方法。此外，本文公开的任何组合物适用于本文公开的任何方法。换句话说，本文描述的任何方面或实施方案可以与本文公开的任何其他方面或实施方案相结合。
援引并入
本说明书中所提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度犹如具体地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请均通过引用而并入。如果通过引用并入的出版物和专利或专利申请与本说明书中包含的公开内容相矛盾，本说明书旨在取代和/或优先于任何此类相矛盾的文件。
附图说明
本发明的新颖特征在所附权利要求书中具体阐述。通过参考以下对利用了本发明的原理的说明性实施方案加以阐述的详细描述和附图(本文中也称为“图”)，将会获得对本发明的特征和优点的更好理解，在附图中：
图1A显示了用于表达rOVD的载体结构体。
图1B显示了天然卵类粘蛋白和根据本发明在巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)中产生的重组卵类粘蛋白的糖基化模式的比较。所示为当在包含内切糖苷酶的巴斯德毕赤酵母菌株中产生时，重组卵类粘蛋白缺少复杂的支化糖基化(包括缺少甘露糖残基)。
图1C显示了在不经内切糖苷酶处理的情况下由巴斯德毕赤酵母产生的重组OVD的糖基化模式。由此产生的rOVD具有复杂的支化糖基化模式。
图1D比较了天然OVD、经内切糖苷酶处理的天然OVD和重组OVD样品的分子量。
图2显示了具有4.23％w/v rOVD的rOVD溶液的性质。
图3显示了使用600nm下的吸光度所测量的在不同热处理后在约pH4为和约pH 6具有30％w/v rOVD的rOVD溶液的净度。
图4显示了不同热处理后具有在去离子水中30％w/v rOVD的rOVD溶液的净度。
图5A显示了在不同热处理条件下在pH 2.5、4和6的rOVD溶液(9％w/v)的外观。
图5B是显示在pH 2.5、4和6在不同热处理条件后rOVD溶液(9％w/v)在600nm下的吸光度的图。在每个数据对中，左柱的数据与rOVD相关，右柱的数据与缓冲液相关。
图6A显示了rOVD在不同饮品中的溶解度。
图6B是显示在不同饮品中在600nm下rOVD溶液的吸光度的图。在每个数据对中，左柱的数据与饮品相关，右柱的数据与具有rOVD的饮品相关。
图7从左至右显示了室温如下样品的比较：在pH 2.5、4、6，OVL+OVD和OVD对照。
图8从左至右显示了如下巴氏杀菌(72℃)的样品的比较：在pH 2.5、4、6，OVL+OVD和OVD对照。
图9从左至右显示了在pH 2.5、4、6OVL+OVD与OVD对照样品的热充填(85℃)样品的比较。
图10从左到右显示了在pH 2.5、4、6OVL+OVD和OVD对照样品的干馏(121℃)样品的比较。
图11从左至右显示了在pH 2.5、4、6OVL对照和OVD对照样品的巴氏灭菌(72℃)样品的比较。
图12从左至右显示了在pH为2.5、4、6OVL对照和OVD对照样品的热充填(85℃)样品的比较。
图13从左至右显示了在pH 2.5、4、6OVL对照和OVD对照样品的干馏(121℃)样品的比较。
图14从左至右显示了室温以及不同热处理后在pH 2.5、4、6的rOVL+rOVD和rOVD样品的比较。
图15A和图15B显示了在pH 2.5、4、6的乳清分离物(WPI1和WPI3，9％w/v)和rOVD溶液(9％w/v)的净度比较。
图16显示了含有5％蛋白质的蛋白质水样，其中从左至右，含乳清蛋白质分离物(中性)、乳清蛋白质分离物(酸性)、nOVD、rOVD、4％、豌豆蛋白质(酸性)和大豆蛋白质。
图17A和图17B从左到右分别显示了含有15％乳清蛋白质、15％nOVD、15％rOVD、20％rOVD、30％rOVD或(无蛋白质)对照的橙汁样品。图17A：0小时时间的溶液，图17B：在4℃下储存48小时后。
图18A显示了果冻样品，从左到右为对照(不含蛋白质补充)、补充有20％rOVD，补充有20％nOVD和补充有20％乳清蛋白质。
图18B显示了无蛋白质(对照)、补充有20％rOVD和补充有20％乳清蛋白质的果冻样品(对照)的比较。
图18C至图18E显示了补充有20％乳清蛋白质、补充有16％明胶和补充有20％明胶的果冻样品。
图19A和图19B显示了以不同浓度溶解在水中的rOVD-H和rOVD-T样品。
图20显示了rOVD样品、来自鸡蛋清的天然卵类粘蛋白(nOVD)和去糖基化天然卵类粘蛋白(nOVD+PNGaseF)的免疫反应性比较。
图21显示了未经过氧化氢处理(左)和经过氧化氢处理(右)的rOVD溶液的颜色。
图22显示了使用不同蛋白质样品的成膜比较。
具体实施方式
虽然本发明的各种实施方案已在本文中示出和描述，但对于本领域技术人员来说，显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员可以进行多种变化、改变和替换。应当理解，可以使用本文描述的本发明实施方案的各种替代方案。
本文提供用于蛋白质的非动物来源的作为可食用蛋白质的可用来源被动物(包括人)摄入的组合物(例如用于日常饮食、膳食补充剂、食用性食品和饮品以及营养品)和制备组合物的方法。
本文提供包含卵类粘蛋白(OVD)的可食用组合物。此类可食用组合物可用于食品、饮料产品、营养品、药物、化妆品中或用作成品的成分。在本文的实施方案中，可食用组合物为液体形式或半固体形式。在本文的实施方案中，可食用组合物以粉末形式提供；所述粉末可用于生产液体、固体或半固体可食用组合物。优选地，这样的可食用组合物中的OVD以重组方式制备，并且在本文中可称为重组OVD(rOVD)。
除非另有说明，否则术语OVD包括天然OVD(nOVD)和rOVD。本文中提供的可食用组合物中的nOVD或rOVD的浓度既增加了可食用组合物的蛋白质含量，又保持了一个或多个附加特征，例如高净度、高溶解度、降低的浊度或实质性的感官中性。
在本文中的任何可食用组合物中使用rOVD产生蛋白质的非动物来源，同时提供额外的特性，例如溶解性、净度、硬度、质地、口感、与热处理的兼容性、与pH范围的兼容性，并保持食用者有利的感官特征。本文提供了此类组合物的多种实施方案、制备它们的方法以及使用它们的方法。
在一些实施方案中，本文所述组合物和用于制备组合物的方法增加了可食用组合物的蛋白质含量，并且还提供了其他特征，例如与其他成分(例如，与麸质、维生素、矿物质和碳酸化的兼容性)、着色、气味、味道的兼容性，与食品和饮品制备和/或储存条件的兼容性。
天然卵类粘蛋白(nOVD)，例如从鸡或其他鸟类蛋中分离出来的，具有高度复杂的糖基化支化形式。糖基化模式包括N-连接的聚糖结构，例如N-乙酰氨基葡萄糖单元和N-连接的甘露糖单元。参见，例如，图1B(左列)。在一些情况下，用于本文公开的可食用组合物并使用本文所述方法生产的rOVD具有不同于nOVD的糖基化模式的糖基化模式。例如，当在毕赤酵母中产生rOVD时，蛋白质可能被高度糖基化。图1C示出了由巴斯德毕赤酵母产生的rOVD的糖基化模式，显示了复杂的支化糖基化模式。在本文所述组合物和方法的一些实施方案中，对rOVD进行处理，以使糖基化模式从nOVD的糖基化模式被修饰，并且与未经该处理的毕赤酵母产生的rOVD相比也被修饰。在一些情况下，rOVD没有糖基化。在其他情况下，rOVD具有降低的糖基化。在一些情况下，rOVD在蛋白质的一个或多个天冬酰胺残基处被N-乙酰氨基葡萄糖修饰，并且缺少或基本上没有N-连接甘露糖基化。参见，例如，图1B(右列)。与例如乳清蛋白质、大豆蛋白质、豌豆蛋白质和nOVD的其他形式的蛋白质相比，本文所述的糖基化变化可导致rOVD的溶解度和净度增加。rOVD的糖基化修饰可导致蛋白质的氮碳比改变，从而减少或去除基本上所有甘露糖残基，氮碳比增加(例如与nOVD或未对糖基化模式进行修饰而产生的rOVD相比)。
在一些实施方案中，所述组合物为可食用食品。在一些实施方案中，可食用食品是成品。在一些实施方案中，所述组合物是成品的成分，例如，包含rOVD或基本上由rOVD组成的粉末。
如本文所用，术语“可食用食品组合物”是指包含分离的蛋白质并且可供动物(包括但不限于人和其他哺乳动物)食用的组合物。可食用食品组合物包括食品产品、饮品、膳食补充剂、食品添加剂和营养品作为非限制性示例。
可食用食品组合物还包括作为食品或饮品或作为动物饮食的部分摄入的产品的成分的组合物。
由于本发明的rOVD不是从动物来源获得的，因此包含rOVD的可食用组合物被认为是素食(vegetarian)和/或纯素食(vegan)。
如本文所用，“成品”是指指向或其本身适合作为用于动物食用的食品或饮品的可食用食品组合物。如本文所用，涉及可食用食品组合物的“成分”或“组分”是指与其他成分或组分一起用于制造成品的组合物。
具有rOVD合作的组合物
本文提供了可食用食品组合物和制备这样的组合物的方法，所述组合物通过添加重组卵类粘蛋白蛋白质(rOVD)增加了可食用食品组合物的蛋白质含量。在一些实施方案中，将rOVD添加到可食用食品组合物中以增加蛋白质含量，例如用于补充营养物。在一些实施方案中，基于重量/总重量(w/w)和/或基于重量/组合物总体积(w/v)，可食用食品组合物中存在的rOVD的量为约1％至约40％。例如，在100ml的组合物中，rOVD以30g存在，因此rOVD的浓度为30％。在一些实施方案中，以w/w和/或w/v为基础，rOVD的浓度为或为约1％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％。在一些实施方案中，rOVD以或以约1-5％、5-10％、10-15％、15-20％、20-25％、25-30％的浓度存在或rOVD以大于5％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％w/w和/或w/v的浓度存在。
可食用产品可包括一种或多种其他蛋白质，例如非OVD蛋白质或非重组蛋白质。rOVD可以增加可食用产品中的蛋白质含量，和/或它还可以增加所述一种或多种其他蛋白质的溶解度。例如，可食用组合物可包括乳清蛋白质、豌豆蛋白质、大豆蛋白质、杏仁蛋白质、燕麦蛋白质、亚麻籽蛋白质、植物蛋白质或蛋清蛋白质。在一些情况下，所述一种或多种其他蛋白质可包含具有天然存在于鸟类或爬行动物中的氨基酸序列的OVD。
在一些实施方案中，所述组合物和用于制备组合物的方法增加了蛋白质含量，并提供蛋白质在组合物中的溶解度，以及保持或基本上不降低组合物的净度。在一些实施方案中，所述组合物和用于制备组合物的方法增加了蛋白质含量，并提供溶解度和保持净度，同时不会对组合物的稳定性或一种或多种感官质量产生不利影响。
在一些实施方案中，可食用食品组合物和用于制备可食用食品组合物的方法包括rOVD，rOVD增加可食用食品组合物的蛋白质含量，且rOVD基本上可溶于可食用食品组合物。可食用食品组合物可以是成品或用于制造成品的成分，例如粉末状rOVD组合物。
rOVD蛋白质可单独使用或与其他组分结合使用，以形成组合物。在一些实施方案中，基于重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)，组合物可包含约或至少约10％、20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的蛋白质，例如rOVD。在一些情况下，基于w/w或w/v，本文所述的组合物可含有高达约10％、20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的蛋白质，例如rOVD。
在一些实施方案中，本文所述的组合物含有的总蛋白质的浓度为每100毫升液体(例如水)约或至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或75克总蛋白质。在一些情况下，本文所述的组合物含有的总蛋白质的浓度为每100g组合物(例如，粉末)约或至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100g总蛋白质。
在一些实施方案中，本文所述的组合物含有的总蛋白质的浓度为每100ml液体(例如水)约或至少0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7或5g总蛋白质。在一些情况下，本文所述的组合物含有的总蛋白质的浓度为每100g组合物(例如粉末)约或至少0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7或5g总蛋白质。
在一些实施方案中，rOVD可食用组合物为液体组合物。在这种情况下，液体组合物中rOVD的浓度可为0.1％至40％。液体组合物中rOVD的浓度可为至少0.1％。液体组合物中rOVD的浓度可为最多40％。液体组合物中rOVD的浓度可为0.1％至1％、0.1％至5％、0.1％至10％、0.1％至15％、0.1％至20％、0.1％至25％、0.1％至30％、0.1％至35％、0.1％至40％、1％至5％、1％至10％、1％至15％、1％至20％、1％至25％、1％至30％、1％至35％、1％至40％、5％至10％、5％至15％、5％至20％、5％至25％、5％至30％、5％至35％、5％至40％、10％至15％、10％至20％、10％至25％、10％至30％、10％至35％、10％至40％、15％至20％、15％至25％、15％至30％、15％至35％、15％至40％、20％至25％、20％至30％、20％至35％、20％至40％、25％至30％、25％至35％、25％至40％、30％至35％、30％至40％或35％至40％重量/总体积(w/v)。液体组合物中rOVD的浓度可为约0.1％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或40％w/v。液体组合物中rOVD的浓度可为至少0.1％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％或35％w/v。液体组合物中rOVD的浓度可为最多1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或40％w/v。
在一些实施方案中，rOVD可食用组合物是固体组合物。在这种情况下，固体组合物中rOVD的浓度可为0.1％至70％。固体组合物中rOVD的浓度可为至少0.1％。固体组合物中rOVD的浓度可为最多70％。固体组合物中rOVD的浓度可为0.1％至1％、0.1％至10％、0.1％至20％、0.1％至30％、0.1％至40％、0.1％至50％、0.1％至60％、0.1％至70％、1％至10％、1％至20％、1％至30％、1％至40％、1％至50％、1％至60％、1％至70％、10％至20％、10％至30％、10％至40％、10％至50％、10％至60％、10％至70％、20％至30％、20％至40％、20％至50％，20％至60％、20％至70％、30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、40％至50％、40％至60％、40％至70％、50％至60％、50％至70％或60％至70％重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)。固体组合物中rOVD的浓度可为0.1％、1％、10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％w/w或w/v。固体组合物中rOVD的浓度可为至少0.1％、1％、10％、20％、30％、40％、50％或60％w/w或w/v。固体组合物中rOVD的浓度可为最多1％、10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％w/w或w/v。
在一些实施方案中，rOVD可食用组合物为粉末组合物。在这种情况下，粉末组合物中rOVD的浓度可为15％至99％重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)。粉末组合物中rOVD的浓度可为至少15％w/w或w/v。在实施方案中，粉末组合物中rOVD的浓度可为最多99％w/w或w/v。粉末组合物中rOVD的浓度可为15％至30％、15％至45％、15％至60％、15％至75％、15％至80％、15％至85％、15％至90％、15％至95％、15％至99％、30％至45％、30％至60％、30％至75％、30％至80％、30％至85％、30％至90％、30％至95％、30％至99％、45％至60％、45％至75％、45％至80％、45％至85％、45％至90％、45％至95％、45％至99％、60％至75％、60％至80％、60％至85％、60％至90％、60％至95％、60％至99％、75％至80％、75％至85％、75％至90％、75％至95％、75％至99％、80％至85％、80％至90％、80％至95％、80％至99％、85％至90％，85％至95％、85％至99％、90％至95％、90％至99％或95％至99％w/w或w/v。粉末组合物中rOVD的浓度可为约15％、30％、45％、60％、75％、80％、85％、90％、95％或99％w/w或w/v。粉末组合物中rOVD的浓度可为至少15％、30％、45％、60％、75％、80％、85％、90％或95％w/w或w/v。粉末组合物中rOVD的浓度可为最多30％、45％、60％、75％、80％、85％、90％、95％或99％w/w或w/v。
在一些实施方案中，rOVD可食用组合物是浓缩糖浆组合物。在这种情况下，糖浆组合物中rOVD的浓度可为10％至60％重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)。糖浆中rOVD的浓度可为至少10％w/w或w/v。糖浆中rOVD的浓度可为最多60％w/w或w/v。糖浆中rOVD的浓度可为10％至20％、10％至30％、10％至40％、10％至50％、10％至60％、20％至30％、20％至40％、20％至50％、20％至60％、30％至40％、30％至50％、30％至60％、40％至50％、40％至60％或50％至60％w/w或w/v。糖浆中rOVD的浓度可为约10％、20％、30％、40％、50％或60％w/w或w/v。糖浆中rOVD的浓度可为至少10％、20％、30％、40％或50％w/w或w/v。糖浆中rOVD的浓度可为最多20％、30％、40％、50％或60％w/w或w/v。糖浆可包括任何溶剂，例如水和果汁。
溶解度和净度
本文特别提供了OVD的组合物，其中OVD蛋白质在所述组合物中保持可溶。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，在最低rOVD量(例如，0.1g或更少)至逐渐增加的量直至约30或40g rOVD/100ml溶液并包括约30或40g rOVD/100ml溶液的蛋白质浓度，蛋白质完全可溶。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，例如当在诸如水的液体中配制时，在约1、2、5、7、10、12或15g总OVD蛋白质/100ml溶液的浓度，蛋白质完全可溶。在本文所述的任何组合物的一些实施方案中，例如当在诸如水的液体中配制时，在约15、约20、约25、约30或约40g总OVD蛋白质/100ml体积的浓度，蛋白质完全可溶。在本文的组合物中，OVD可以是天然OVD或重组OVD。在一些实施方案中，OVD是分离的重组蛋白质。在一些实施方案中，OVD是具有修饰的糖基化的rOVD，例如具有一个或多个通过N-乙酰氨基葡萄糖修饰的天冬酰胺残基且基本上不存在N-连接甘露糖基化。
可通过包括目视检测和测量600nm波长下溶液的吸光度(OD600)的多种技术测量rOVD的溶解度。在一些实施方案中，如使用600nm波长所测量的，本文所述的溶解的蛋白质组合物具有小于1(<1)的吸光度。在一些实施方案中，本文所述的溶解的rOVD组合物在600nm下观察到的测量的透射率大于约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。在一些实施方案中，与不含rOVD的组合物相比，向组合物中添加rOVD不会改变或仅轻微改变OD600测量值。
在一些实施方案中，与不含rOVD的组合物相比，向组合物中添加rOVD可增加OD600测量值，且增加值小于添加另一种蛋白质(例如以相同量添加到组合物中的乳清蛋白或的天然OVD)时所看到的值。
在一些实施方案中，当在相同蛋白质浓度和同等条件(例如pH和温度处理)下进行比较时，向组合物中添加rOVD具有比乳清蛋白质或天然OVD更好的溶解度。在一些实施方案中，当在相同蛋白质浓度下进行比较时，向组合物中添加rOVD具有比乳清蛋白质或天然OVD更好的溶解度，并且所述组合物是可食用食品组合物，例如成分或成品。
如本文所用，“澄清”或“净度”是指无浑浊。净度可通过目测评估，包括与不含蛋白质的溶液进行比较。这种比较可通过机器、个人或测试人员(例如，在检测净度方面受过培训的测试人员)小组进行。溶液的净度可由一个小组(至少3人、5人、7人、10人或12人)或精通此类测试的人员进行测试。优选地，至少大多数测试人员可能无法明显区分rOVD组合物与不含蛋白质或含相同浓度的不同蛋白质的溶液。
在一些实施方案中，与具有等同浓度的不同蛋白质的其他组合物(例如含有豌豆蛋白质、乳清分离物或乳清蛋白质、天然蛋清蛋白质(例如nOVD)或全蛋清的组合物)相比，rOVD组合物表现出提高的净度。在一些实施方案中，至少大多数或更多测试人员可能无法明显区分rOVD添加到组合物中与不含蛋白质的溶液。
澄清溶液可以是有色的，也可以是无色的。在一些实施方案中，组合物中溶解的rOVD蛋白质可以是无色的，如通过在350nm至850nm的波长下小于0.15的吸光度所测量的。在一些实施方案中，组合物中溶解的rOVD蛋白质可向可食用食品组合物提供颜色，例如黄色、绿色或棕色或其色度。在一些情况下，rOVD和/或溶解的rOVD蛋白质可用氧化剂或产氧剂处理，以将溶液的颜色改为较浅或较淡的颜色。
在一些实施方案中，rOVD的组合物在溶液中，例如在液体可食用食品组合物中，在最低rOVD量(例如，0.1g)至逐渐增加的量直至约30grOVD蛋白质/100ml溶液并包括约30grOVD蛋白质/100ml溶液的蛋白质浓度，是基本上澄清的。在一些实施方案中，rOVD的组合物在溶液中，例如在液体可食用食品组合物中，在约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30g rOVD蛋白质/100ml溶液的高蛋白质浓度，基本上是澄清的。在一些实施方案中，至少约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30g总rOVD蛋白质/100ml溶液(例如，在100ml水中)的rOVD组合物是基本上澄清的。
在一些实施方案中，当在相同蛋白质浓度和同等条件(例如pH和温度)下进行比较时，rOVD组合物的净度超过乳清蛋白质，例如乳清蛋白质分离物或乳清蛋白质浓缩物。在一些实施方案中，当在相同蛋白质浓度下进行比较时，rOVD组合物的净度超过乳清蛋白质，并且rOVD组合物是可食用食品组合物的组分，例如成品或成品中的成分。
在一些实施方案中，当在相同蛋白质浓度和同等条件(例如pH和温度)下进行比较时，rOVD组合物的净度超过天然OVD(nOVD)。在一些实施方案中，当在相同蛋白质浓度下比较时，rOVD组合物的净度超过nOVD组合物，并且rOVD组合物是可食用食品组合物的组分，例如成品或成品中的成分。
在本文的一些实施方案中，rOVD的组合物在至少约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30g或超过30g总rOVD蛋白质/100ml溶液(例如，在100ml水中)的浓度具有实质性的溶解度且基本上是澄清的。
在一些情况下，当组合物被加热到大于50℃、60℃或70℃或约70℃至约120℃的温度时，即使rOVD的浓度为以w/v计至少2％、4％、10％、20、30％、40％或50％，rOVD在可食用组合物中仍保持可溶且澄清。
在一个实例中，使用可见光的吸光度，例如通过在600nm波长测量溶液的吸光度(OD600)，确定本文中可食用组合物的净度。优选地，当使用600nm的可见光测定时，本文中的液体或半液体可食用组合物的吸光度小于1.2、1.1、1、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05或0.04。其他测量溶解度的方法包括通过如下步骤测定溶解度：离心浓缩，然后进行蛋白质浓度分析，例如Coomassie Plus(Bradford)蛋白质分析(ThermoScientific)和二辛可宁酸(BCA)蛋白质分析(Sigma-Aldrich)。
在一些情况下，可食用组合物的净度与添加rOVD前溶液的净度没有实质性的不同。例如，与不含rOVD的组合物相比，向溶液(可食用组合物)中添加rOVD不会改变或基本上不会改变(变化小于0.03、0.02、0.01)OD600测量值。
因此，含有rOVD的可食用组合物在室温下以OD600测得的净度可小于2，其中rOVD的浓度为至少或约10％、15％、20％、25％或30％rOVD重量/每总重(w/w)和/或重量/总体积(w/v)。或者，含有浓度大于10％w/w或w/v的rOVD的溶液在室温以OD 600所测量的净度可小于2、1.8、1.6、1.4、1.2、1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.08、0.06、0.04或0.02。基本上光学澄清的溶液可指其中OD600测量值小于或等于约0.1的溶液。在一些情况下，基本上光学澄清的溶液的OD600测量值小于0.08、0.06、0.05或0.02。
在一些实施方案中，与引入rOVD之前的溶液相比，添加rOVD将蛋白质浓度提高至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)，且不降低溶液的净度或升高溶液的浊度不超过1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％w/w或w/v。
在一些实施方案中，rOVD蛋白质的添加量(例如相对于可食用食品组合物的总重量或体积的百分比)可大于可食用产品中使用的其他蛋白质源(例如乳清蛋白质(例如乳清蛋白质分离物(WPI)和乳清蛋白质浓缩物(WPC))、豌豆蛋白质、大豆蛋白质、全蛋或蛋清蛋白质(例如天然OVD)的所有实施方案)可能添加的量，同时仍保持组合物的溶解度或溶解度和净度性质。
感官中性和改善的感官吸引力
在一些实施方案中，除了增加的蛋白质营养物含量外，与此类组合物中的其他蛋白质相比，向可食用食品组合物中添加rOVD可提供感官中性或改善的感官吸引力。如本文所用，“感官中性”是指没有强烈或独特的味道、气味(臭味)或味道和气味的组合，以及质地、口感、回味和颜色。经培训的分析员小组可以使用例如Kemp等人2009中描述的感官小组。当含有rOVD的可食用食品组合物与具有相同浓度的不同蛋白质(例如乳清蛋白质、豌豆蛋白质、大豆蛋白质、全蛋或蛋清蛋白质)的另一类似组合物相比时，感官中性可为品尝者(例如食品测试者或消费者)提供改善的感官吸引力。
在一些实施方案中，与具有与含rOVD的溶液相同浓度的不同蛋白质组分(例如，在对比物中是乳清、大豆、胶原蛋白、豌豆、蛋清固体分离物和/或天然OVD)的不同溶液相比，rOVD当添加到可食用食品组合物中时基本上是无气味的，例如通过经培训的感官小组所测量的。在本文所述的rOVD组合物的一些实施方案中，当蛋白质浓度为约5-10％、10-15％、15-20％、20-25％、25-30％或大于30％rOVD重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)时或当蛋白质浓度为约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或大于30g rOVD总蛋白质/100ml溶液(例如每100ml水)中时，所述组合物基本上无气味。
在一些实施方案中，除了例如增加的蛋白质营养物含量、溶解度、净度和/或无气味特征之外，向可食用食品组合物中添加rOVD还提供中性味道。中性味道例如可通过经培训的感官小组与含有与rOVD浓度相同的不同蛋白质(例如乳清、大豆、胶原蛋白、豌豆、全蛋和蛋清固体分离物(包括天然OVD))的溶液进行比较来测量。
在一些实施方案中，添加rOVD减少了与用于补充的其他蛋白质相关的特定气味和/或味道。例如，与向可食用食品组合物中添加全蛋、分离的蛋或蛋清相比，添加rOVD具有更少的“蛋样”气味或味道。在一些实施方案中，与其他蛋白质源相比，添加rOVD具有更少的金属气味或味道。
在一些实施方案中，与添加其他蛋白质源相比，添加rOVD具有改善的口感。例如，与其他蛋白质源相比，添加rOVD颗粒较少或沉淀或固体较少。
在一些实施方案中，例如，与其他可用的补充蛋白质源相比，添加rOVD具有改善的质地。
在一些实施方案中，与其他可用的补充蛋白质源相比，添加rOVD具有改善的或吸引人的颜色或视觉吸引力。例如，添加rOVD可以保持液体(例如碳酸饮料、蛋白质水、运动饮料)的净度，并为消费者提供视觉吸引力。
与不含rOVD的组合物或含与rOVD浓度相同的不同蛋白质的组合物相比，含有rOVD的可食用组合物也可具有改善的感官吸引力。这种改善的感官吸引力可与味道和/或气味有关。味道和气味可例如通过经培训的感官小组来测量。在一些情况下，感官小组将含有rOVD的可食用组合物与不含rOVD或含有等量不同蛋白质的可食用组合物进行比较。
如本文所述，本文中的可食用组合物可以是液体形式。液体形式可以是中间产品，例如可溶性rOVD溶液。在一些情况下，液体形式可以是成品，例如包含rOVD的饮品。本文所预期的不同类型的饮品的实例包括：果汁、苏打水、软饮料、加味水、蛋白质水、强化水、碳酸水、营养饮料、能量饮料、运动饮料、恢复饮料、加热饮料、咖啡基饮料、茶基饮料、植物基奶、奶基饮料、非乳制品、植物基温和饮料、婴儿配方饮料、膳食替代饮料。
果汁饮料的非限制性实例包括
Figure BDA0003542861390000221
和
Figure BDA0003542861390000222
苏打水饮料的非限制性实例包括
Figure BDA0003542861390000223
和
Figure BDA0003542861390000224
恢复饮料的非限制性实例包括GatoradeTM、
Figure BDA0003542861390000225
和
Figure BDA0003542861390000226
能量饮料的非限制性实例包括：Red BullTM、MonsterTM、Full
Figure BDA0003542861390000227
Figure BDA0003542861390000228
BangTM、ReignTM、
Figure BDA0003542861390000229
以及能量浓缩饮料，例如5-Hour EnergyTM。
液体形式成品的其他实例包括肉汤、汤和液体食品。
液体形式可以是冷饮、热饮或温饮或室温饮料。
本文中的任何液体形式都可以是碳酸化的。碳酸化可使用任何安全气体，如二氧化碳来实现。
在一个实施方案中，可食用组合物是气泡水(例如San PellegrinoTM)，并且具有0.5％至30％w/w或w/v的rOVD。这种产品的OD 600小于0.2，优选小于0.15，同时基本上保持无色、无气味和无味道。
在一个实施方案中，可食用组合物是苏打水饮料(例如Diet CokeTM PepsiTM,CokeTM)，并且具有0.5％至30％w/w或w/v的rOVD。这种产品保留了与不添加rOVD的组合物相当的感官特征(味道、气味和净度)。
在一些实施方案中，可食用组合物为半固体形式。半固体可食用组合物的实例包括：果冻、糖果、肉汤、汤、糖浆、含有明胶的产品、稠化产品和胶质产品或其组合。
与附加成分的兼容性
本文提供了具有rOVD的组合物，其中所述rOVD与用于制备可食用食品组合物(包括成品)的一种或多种附加成分兼容。这种兼容性为可食用食品组合物提供蛋白质含量的强化，同时保持可食用食品组合物的一个或多个期望特性。
在一些实施方案中，rOVD与含麸质成分兼容。例如，rOVD可与含麸质成分一起添加，以实现蛋白质强化，并保持成分和/或成品所需的麸质结构。例如，rOVD可用作生产蛋白质强化的烘焙食品、面包、曲奇饼、薄脆饼干、饼干、冷冻乳制品、冷冻“乳制状”产品、预制食品、肉制品、无肉产品、汉堡、小馅饼、蛋白质补充剂、零食棒、蛋白质棒、营养棒、能量棒、甜点、沙拉调料、蛋液产品或“蛋状”产品、糕点、蛋糕和面条。在成品中，与其他蛋白质源相比，rOVD不会对麸质结构产生实质性干扰或对麸质结构的干扰显著降低。
在一些实施方案中，rOVD与无麸质成分兼容。例如，rOVD可与无麸质成分混合物一起添加，以实现蛋白质强化，并为成品提供结构和/或质地。无麸质成分和成品包括谷物和淀粉(大米、玉米、高粱和其他谷物)、块根(例如土豆)和豆类(例如鹰嘴豆和扁豆)。例如，rOVD可用作生产蛋白质强化的无麸质产品的成分，所述蛋白质强化的无麸质产品包括烘焙食品、面包、曲奇饼、薄脆饼干、饼干、冷冻乳制品、冷冻“乳制类”产品、预制食品、肉制品、无肉产品、汉堡、小馅饼、蛋白质补充剂、零食棒、蛋白质棒、营养棒、能量棒、甜点、或“蛋状”产品、糕点、蛋糕和面条。
在一些实施方案中，rOVD与盐兼容，使得rOVD蛋白质不会从溶液中沉淀出来。例如，对于在食品和饮品(例如蛋白质冰沙、植物奶和用rOVD强化的果汁)中使用，蛋白质基本上保持在溶液中。添加rOVD不会在维生素/矿物质强化的环境(例如果汁和果汁类产品)中沉淀，并且rOVD提供了提高的蛋白质含量和营养。
具有第二氨基酸源的rOVD组合
在一些实施方案中，将rOVD添加到可食用食品组合物中，并添加第二氨基酸源，使得所述组合具有提高的蛋白质含量并提供所需量或平衡的氨基酸含量。在一些实施方案中，第二氨基酸源是第二蛋白质(天然蛋白质或重组蛋白质)。在一些实施方案中，通过添加一种或多种游离氨基酸来提供第二氨基酸源。
在一些实施方案中，将rOVD添加到可食用食品组合物中，并添加第二种蛋白质，使得所述组合具有提高的蛋白质含量并提供所需量或平衡的氨基酸含量。在一些实施方案中，第二蛋白质是重组蛋白质。在一些实施方案中，第二蛋白质是天然蛋白质，例如，从其天然来源分离的天然蛋白质。
组合物的蛋白质含量可通过各种方法测定，例如蛋白质消化率校正氨基酸评分(PDCAAS)法。PDCAAS是一种测量人体营养中蛋白质值的方法。所述方法基于将测试蛋白质中第一限制性必需氨基酸的浓度与参考(评分)模式中该氨基酸的浓度进行比较。所述方法将针对标准氨基酸图谱的特定食品蛋白质的氨基酸图谱与具有最高可能评分1.0的标准氨基酸图谱进行比较，这样的1.0评分意味着所述特定食品蛋白质提供每单位蛋白质100％或更多的人体营养所需的必需氨基酸(例如，参见FAO/WHO/UNU专家磋商会议1985)。
用于计算PDCAAS百分比的公式为：(1g测试蛋白质中限制性氨基酸的mg/1g参考蛋白质中相同氨基酸的mg)×粪便真实消化率百分比。PDCAAS评分在1.0以上的被截取为1.0。氨基酸评分(未修正或截取)可超过1.0。
在一些实施方案中，rOVD和第二蛋白质的组合提高了蛋白质含量，并提供大于约0.75的PDCAAS。在一些实施方案中，所述组合提供的PDCAAS为或为约0.75、0.76、0.77、0.78、0.79、0.80、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99或1.0。在一些实施方案中，所述组合提供的PDCAAS大于或大于约0.75、0.76、0.77、0.78、0.79、0.80、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94或0.95。在一些实施方案中，所述组合提供的PDCAAS为1.0或约1.0。
在一些实施方案中，选择rOVD和第二蛋白质的比率以提供至少约0.75的PDCAAS，其中在可食用食品组合物中rOVD和第二蛋白质的组合保持可溶。在本文所公开的rOVD和第二蛋白质的组合的一些实施方案中，所述组合中存在的rOVD的量为或为约95％、90％、89％、88％、87％、86％、85％、84％、83％、82％、81％、80％、79％、78％、77％、76％、75％、74％、73％、72％、71％或70％重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)。在本文所公开的rOVD和第二蛋白质的组合的一些实施方案中，所述组合中的存在rOVD的量为或为约69％、78％、67％、66％、65％、64％、63％、62％、61％、60％、59％、58％、57％、56％、55％、54％、53％、52％、51％或50％w/w或w/v。在rOVD和第二蛋白质的组合的一些实施方案中，rOVD在所述组合中以至少或至少约60％、65％、70％、75％、80％或大于80％w/w或w/v的总蛋白质的百分比存在。在本文所公开的rOVD和第二蛋白质的组合的一些实施方案中，第二蛋白质以上述百分比存在于所述组合中，使得以低于第二蛋白质的量提供rOVD。
在一些实施方案中，基于第二蛋白质的氨基酸组成选择第二蛋白质。在一些实施方案中，第二蛋白质向组合物提供色氨酸。在一些实施方案中，第二蛋白质提供色氨酸，使得与rOVD的组合具有至少约1.7g/100g总蛋白质的色氨酸含量。
在一些实施方案中，第二蛋白质为溶菌酶。在一些实施方案中，第二蛋白质是蛋清溶菌酶。在一些实施方案中，第二蛋白质是重组蛋白质。在一些实施方案中，第二种蛋白质是重组蛋清溶菌酶(rOVL)。
rOVD和rOVL可在与任何其他食品成分或可食用食品产品混合之前被加工或混合。或者，rOVD或rOVL可以与任何其他食品成分或可食用食品产品同时或单独分别被加工或混合。在实施方案中，单个转化细胞表达rOVL和rOVD两者。
在一些实施方案中，第二蛋白质是rOVL，且rOVD和rOVL的组合提供蛋白质强化，同时保持可溶于组合物，并提供约1.0的PDCAAS。rOVD与rOVL的比率可为约60％rOVD:40％rOVL至约82％rOVD:18％rOVL或约75％rOVD:25％rOVL至约82％rOVD:18％rOVL重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)。
天然OVD的PDCAAS为约0.02。将rOVL添加到rOVD中可增加组合的氨基酸评分和PDCAAS。例如，78.3％rOVD和21.7％rOVL混合物导致氨基酸评分为0.86且PDCAAS为0.79。当rOVD与rOVL的比率为约78.3％rOVD+21.7％rOVL至约60％rOVD+40％rOVL时，提供0.86至1.06的氨基酸评分范围。在这些示例性范围内，rOVD和rOVL的组合保持可溶。
在一些实施方案中，可食用组合物包含rOVD和rOVL的蛋白质混合物。在一些情况下，包含rOVD和rOVL混合物的组合物具有约20％-99％的rOVD和1-20％的rOVL。在一些实例中，rOVD和rOVL的蛋白质混合物中的rOVD浓度可为至少20％。rOVD和rOVL的蛋白质混合物中的rOVD浓度可为最多99％。rOVD和rOVL的蛋白质混合物中的rOVD浓度可为约20％至30％、20％至40％、20％至50％、20％至60％、20％至70％、20％至80％、20％至90％、20％至99％、30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至80％、30％至90％、30％至99％、40％至50％、40％至60％、40％至70％、40％至80％、40％至90％、40％至99％、50％至60％、50％至70％、50％至80％、50％至90％、50％至99％、60％至70％、60％至80％、60％至90％、60％至99％、70％至80％、70％至90％、70％至99％、80％至90％、80％至99％或90％至99％总量/总重量(w/w)和/或总量/总体积(w/v)。rOVD和rOVL的蛋白质混合物中的rOVD浓度可为约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或99％w/w或w/v。rOVD和rOVL的蛋白质混合物中的rOVL浓度可为1％至20％。rOVD和rOVL的蛋白质混合物中的rOVL浓度可为至少1％。rOVD和rOVL的蛋白质混合物中的rOVL浓度可为最多20％。rOVD和rOVL的蛋白质混合物中的rOVL浓度可为1％至5％、1％至10％、1％至15％、1％至20％、5％至10％、5％至15％、5％至20％、10％至15％、10％至20％或15％至20％w/w或w/v。rOVD和rOVL的蛋白质混合物中的rOVL浓度可为约1％、5％、10％、15％或20％w/w或w/v。
在一些实施方案中，rOVD和第二蛋白质提供类似于其他蛋白质源(如乳清蛋白质和乳清蛋白质分离物)的PDCAAS，并且rOVD和第二蛋白质提供至少一种与其他蛋白质源相比改善的特征，包括溶解性、净度、感官中性或改善的味道和/或气味、改善的口感和与附加成分的兼容性。在一些实施方案中，rOVD和第二蛋白质提供类似于其他蛋白质源的PDCAAS，并在食品制备和加工条件(例如pH、加热和碳酸化)中提供改善的溶解度和净度。
在一些实施方案中，与rOVD一起添加的第二氨基酸源是一个或多个游离氨基酸。在一些实施方案中，rOVD可与游离氨基酸(例如色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸)结合以选择性地提高PDCAAS。在一些实施方案中，添加一种或多种游离氨基酸提供了类似于添加第二蛋白质的氨基酸平衡，例如类似于通过添加rOVL实现的PDCAAS。例如，以下一种或多种物质可与rOVD一起添加：色氨酸＝1.7g/100g样品、异亮氨酸＝2.03g/100g样品、亮氨酸＝4.55g/100g样品、缬氨酸＝4.94g/100g样品。
组合物的加热条件和pH
在一些实施方案中，可食用食品组合物和制备此类组合物的方法包括特定pH范围，并且在该范围内，rOVD在组合物中保持可溶。在一些实施方案中，pH为约1.0至约8.0。在一些实施方案中，pH为约2.0至约6.0、6.5或7.0。在一些实施方案中，pH为约2.0至约2.5、约2.5至约3.0、约2.5至约3.5、约3.5至约4.0、约2.5至约4.5、约2.0至约4.0、约4.0至约6.0、约2.0至约6.0、约4.0至约6.5或约2.0至约6.5。在一些实施方案中，pH小于2.0或等于2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5或大于4.5。在这样的pH或pH范围内，当rOVD是成品的成分(例如，作为在成品中使用的粉末形式)或成品本身时，rOVD保持可溶于可食用食品组合物。在这样的pH或pH范围内，rOVD在不影响组合物的质地或颗粒性的情况下保持可溶于可食用食品组合物。在半固体和固体食品中，rOVD的溶解度能够在不损害食品功能和感官性质的情况下强化蛋白质。例如，添加rOVD提供强化并保持感官吸引力，例如良好的口感和没有颗粒性。在一些实施方案中，rOVD的添加提供强化，保持溶解度，并因此提供rOVD与其他成分混合的能力。
在一些实施方案中，可食用食品组合物和制备此类组合物的方法包括加热条件。例如，可食用食品组合物可以是加热的(例如，油炸、煮沸或烘焙的)或者可以是热饮品，例如温饮料或热饮料、汤或肉汤。在一些情况下，可食用食品组合物可具有加热步骤，作为生产成分或成品的制备或灭菌过程的一部分。例如，加热步骤可包括巴氏杀菌、热充填和/或干馏。在一些实施方案中，加热步骤包括加热至约72℃至约121℃的温度。例如，加热步骤可以是巴氏杀菌，其中将组合物加热至72℃持续1分钟，然后冷却并储存，包括在室温下储存或冷藏。对于热充填，可将组合物加热至85℃至95℃，例如30秒，然后在室温下放置。干馏可包括在压力下加热至121℃，例如在19psi下加热15分钟，然后在室温下储存。
可食用组合物的制备还可包括一个或多个加热步骤。加热步骤可包括巴氏杀菌、热充填和/或干馏。在一些实施方案中，加热步骤包括加热至约70℃至约150℃的温度。
在一个实例中，巴氏杀菌加热步骤在70℃至100℃的温度下进行。
在一个实例中，热充填加热步骤在约90℃至约97℃的温度下进行。
在一个实例中，干馏在约100℃至约140℃的温度下进行。干馏可进行约10分钟或更长时间，且可在约或至少12psi的压力下进行。
在一些实施方案中，与含有相同浓度的不同蛋白质(例如乳清蛋白质、大豆蛋白质、豌豆蛋白质、全蛋蛋白质(例如，天然OVD)或全蛋清蛋白质)相比，可食用食品组合物和用rOVD制备此类组合物的方法在pH范围和/或加热下提供更大的蛋白质溶解度或更大的蛋白质溶解度和提高的净度。
在一些情况下，在约2至约6的pH，以浓度为约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30g或多于30g总rOVD蛋白质/100ml溶液(例如，在100ml水中)的rOVD浓度或以基于重量/总组合物体积约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30％的百分比，rOVD提供可食用食品组合物中的蛋白质溶解度。在一些情况下，在约2至约6的pH，以浓度为约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30g或多于30g总rOVD蛋白质/100ml溶液(例如，在100ml水中)的rOVD浓度或以基于重量/总组合物体积的9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30％的百分比，rOVD提供可食用食品组合物中的蛋白质溶解度和净度。
在一些情况下，当组合物被加热至约72℃至约121℃的温度时，以浓度为约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30g或多于30g总rOVD蛋白质/100ml溶液(例如，在100ml水中)的rOVD浓度或基于重量/总组合物体积约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30％的百分比，rOVD提供可食用食品组合物中的蛋白质溶解度。在一些情况下，当组合物被加热至约72℃至约121℃的温度时，以浓度为约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30g或多于30g总rOVD蛋白质/100ml溶液(例如，在100ml水中)的rOVD浓度或以基于重量/总组合物体积约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30％的百分比，rOVD提供可食用食品组合物中的蛋白质溶解度和净度。
在一些情况下，当组合物被加热至约72℃至约121℃的温度时，以浓度为约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30g或多于30g总rOVD蛋白质/100ml溶液(例如，在100ml水中)的rOVD浓度或以基于重量/总组合物体积约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30％的百分比，rOVD提供可食用食品组合物中的蛋白质溶解度，其中组合物的pH为约2至约4或pH为约2至约6。在一些情况下，当组合物被加热至约72℃至约121℃的温度时，以浓度为约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30g或多于30g总rOVD蛋白质/100ml溶液(例如，在100ml水中)的rOVD浓度或以基于重量/总组合物体积约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30％的百分比，rOVD提供可食用食品组合物中的蛋白质溶解度和净度，其中组合物的pH为约2至约4或pH为约2至约6。
可食用食品组合物
本文所述的可食用食品组合物包括作为非限制性实例的食品、饮品产品、膳食补充剂、食品添加剂和营养品，并且还包括作为食品或饮品或作为动物饮食的一部分摄入的产品的成分的组合物。在一些实施方案中，可食用食品组合物是成品，例如用于动物食用或人类食用的食品或饮品、膳食补充剂或营养品。
在一些实施方案中，成品是含有rOVD和可选的第二蛋白质(例如rOVL)的饮品。所述饮品可以是澄清饮品，并可选自果汁、苏打水、软饮料、加味水、无味水、强化水、碳酸水、营养饮料、能量饮料、运动饮料、恢复饮料、加热饮料、咖啡基饮料、茶基饮料、可可饮料、冰沙、奶昔、椰子水、啤酒、葡萄酒、酒精饮品、坚果奶、果汁饮品、乳制品饮品和植物基奶。这些饮品中的许多饮品的pH为约2至约7，rOVD和/或rOVD和第二蛋白质的组合在这样的饮料中保持可溶。在一些实施方案中，饮品是加热饮品。在一些实施方案中，饮品是冷饮品或在室温下供应或储存的饮品。在一些实施方案中，饮品含有3％至40％重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)的酒精。
在一些实施方案中，饮品是碳酸化的。碳酸化可由例如二氧化碳、碳酸、碳酸氢钠和碳酸氢钾产生。本文所述的组合物可被碳酸化。在一些情况下，本文所述的组合物在每体积饮品中含有约或至少约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、2、2.5、3、3.5或4体积的二氧化碳气体。在一些情况下，本文所述的组合物在每体积饮品中含有最多约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、2、2.5、3、3.5或4体积的二氧化碳气体。在一些情况下，本文所述的组合物在每体积饮品中含有约0.1体积至约4体积或约1.5体积至约3.5体积的二氧化碳气体。
在一些实施方案中，蛋白质组合物可包含二氧化碳，且其中添加至可溶性蛋白质组合物中的二氧化碳量可为355ml中0.01g至4.4g的比例或者对于每1体积的可溶性蛋白质组合物，气态二氧化碳可为0.02体积至5体积，且其中饮品的pH范围可为约2至约6或约2至约4。在一些实施方案中，碳酸饮品的pH为1.0至6.0或约1.0至约4或约1.6至约3.4。
在一些实施方案中，饮品制备包括加热步骤，例如热充填、巴氏杀菌或干馏，且饮品中的rOVD在加热步骤期间和之后保持可溶。在一些实施方案中，与不含所述组合物的饮品相比，向饮品中添加rOVD基本上不会改变饮料的可见外观、气味、味道或口感。在一些实施方案中，向饮品中添加rOVD是感官中性的，并与以相同浓度添加至饮品中的其他蛋白质(例如乳清蛋白质、大豆蛋白质、豌豆蛋白质、蛋清蛋白质或全蛋蛋白质)相比提供了改善的感官吸引力。在一些实施方案中，饮品制剂还包括第二蛋白质，诸如rOVL，并且rOVD和第二蛋白质的组合在加热步骤期间和之后保持可溶。
在一些实施方案中，成品是含有rOVD的食品。食品可以是果冻、糖果、肉汤、汤、含有明胶的产品、稠化产品和胶质产品。可添加rOVD的其他典型食品类别包括酱汁、调味品、调味酱料。
rOVD也可以添加到佐料混合物和调味料中。rOVD也可用于涂层和面包屑(breadings)。rOVD还可用于增加零食(例如水果和蔬菜类零食)的蛋白质含量。
rOVD可用作蛋液，以促进种子或谷粒粘附在烘焙食品上，和/或改善烘焙食品的视觉外观，如褐变。
在本文的一些实施方案中，含有rOVD的可食用食品组合物是用作与其他成分或组分一起的成分以产生成品的组合物。例如，rOVD可与水或其他液体混合，然后将该混合物用作成分，以制造饮品、食品、膳食补充剂或营养品。在一些情况下，rOVD与其他成分，例如其他液体(例如，坚果奶、果汁、蔬菜提取物或碳酸化的溶液)进行混合。该溶液可以是所述成分然后与其他成分混合以为最终用户制备成品的成分；例如，所述溶液可以是含有浓缩rOVD的糖浆。最终产品或成品是可供最终用户食用的产品。成品可以是加工产品，例如加工食品或加工饮料。在一些情况下，rOVD被装在单独的容器中以被最终用户混合至成品。在一些情况下，rOVD与其他成分例如凝胶剂混合以制备糖果、胶质产品、稠化产品(如JelloTM)或运动凝胶。
在制备含有rOVD的可食用食品期间或之后，可将其被配制成液体、固体、糖浆或粉末。组合物可以冷藏、冷冻、温存、室温储存或在加热的温度下保存。食品的制备可以包括加热步骤或者食品在加热的温度下储存或供应，并且在加热步骤期间和之后，rOVD在食品中保持可溶。在一些情况下，食品的pH值可为约2至约6，且rOVD在食品中保持可溶。
液体可食用组合物或饮品的实例包括：苏打水、维生素饮料、蛋白质奶昔、膳食替代奶昔、果汁、茶点饮料、奶基饮料或非乳制品饮料、加味水、碳酸饮料、咖啡、含咖啡因饮料、茶、花基饮料、啤酒、烈性酒和运动饮料。
本文中的任何液体或半固体可食用组合物都可以通过将粉末rOVD混合到溶液中来产生。所述溶液可以是最终产品或然后进一步修饰以生成最终产品的中间溶液。
可用于制备rOVD溶液的溶剂的实例包括静水、碳酸水、酒精、果汁和任何其他商用饮料，包括本文更详细描述的饮料。
产生包含rOVD的可食用组合物的方法可包括将rOVD与溶剂和任选的一种或多种其他组分混合。混合可通过任何常规使用的混合方法进行，包括研钵及研杵、机械研磨机、共混、均质化工艺或声波处理工艺。
添加到溶液中的rOVD量可以是产生如本文衍生的rOVD浓度(在最终产品或中间产品中)的量。
优选地，将rOVD添加到溶液中使得大部分或几乎所有rOVD在室温下溶解到溶液中。在一个实例中，溶解度是基于净度或无浊度的程度来确定的。
本文中的可食用组合物也可经受加热步骤。这样的步骤可以改变或提高rOVD的溶解度。例如，发现在制造产品的过程中实施加热步骤，例如干馏、热充填或巴氏杀菌，可以提高溶解度，从而提高本文中rOVD溶液的净度。
含rOVD的可食用食品的制备可包括加工步骤，例如，冷冻、冷却、加热、烘焙、焙烤、烘烤、煮沸、烫漂、包装、装罐、漂白、浓缩、干燥、压榨、研磨、混合、部分烹饪、烹饪、发酵(proofing)、腌渍、切割、切片、切丁、粉碎、切碎、剁碎、摇晃、核化、螺旋化、滚压、榨汁、应变、过滤、揉捏、搅拌、敲打、搅打、磨碎、填塞、剥皮、去籽、熏制、腌制、盐渍、保存、酸洗、发酵(fermenting)、均质化、巴氏杀菌、杀菌、辐照、冷等离子体处理、高压处理、脉冲电场处理，微波辅助热杀菌、稳定化、混合、煮成浓汤、强化、精炼、加氢、老化、延长保质期或添加酶。
含有rOVD的可食用食品的制备可包括干燥和/或浓缩。在一些情况下，干燥形成干燥、脱水的、浓缩的和/或固体蛋白质或组合物。干燥方法的一些非限制性实例包括热干燥、蒸发(例如通过真空或空气)、蒸馏、煮沸、在烘箱中加热、真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥和冻干或其任何组合。
含有rOVD的可食用食品的制备可包括稀释和/或水合。在一些情况下，稀释可包括添加液体，所述液体可以是水或另一种液体形式。例如，组合物可被稀释(例如，20％的水至99.9％的水)。在另一个实例中，干燥组合物可被水合(例如，干燥固体至99.9％的水)。
在一些实施方案中，含有rOVD的可食用食品组合物呈粉末形式，当粉末组合物被配制成溶液时，rOVD基本上完全可溶。在一些实施方案中，当粉末组合物被配制成溶液时，rOVD基本上完全可溶，并且溶液基本上是澄清的。在一些实施方案中，当粉末组合物被配制成溶液时，rOVD基本上完全可溶，溶液基本上是澄清的，且溶液基本上是感官中性的或与用其他粉末蛋白质(例如乳清蛋白质、大豆蛋白质、豌豆蛋白质、蛋清蛋白质或全蛋蛋白质)形成的溶液相比具有改善的感官吸引力。在一些实施方案中，粉末组合物溶解于水中，其中rOVD的浓度为或约为1％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％重量/总重量(w/w)和/或重量/组合物总体积(w/v)。
在本文所述的可食用食品组合物的一些实施方案中，所述组合物基本上不含动物源性组分、乳清蛋白质、酪蛋白酸盐、脂肪、乳糖、水解乳糖、大豆蛋白质、胶原蛋白、水解胶原蛋白或明胶或其任何组合。本文所述的组合物可基本上不含胆固醇、葡萄糖、脂肪、饱和脂肪、反式脂肪或其任何组合。在一些情况下，本文所述的组合物包含干重小于10％、5％、4％、3％、2％、1％或0.5％的脂肪。在一些实施方案中，所述组合物可以是含脂肪的(例如蛋黄酱)，这样的组合物可包含高达约60％的脂肪或低脂组合物(例如低脂蛋黄酱)，且这样的组合物可以包含较少百分比的脂肪。不含动物源性组分的组合物可被视为素食和/或纯素食。
在一些实施方案中，rOVD粉末组合物包含小于5％的灰分。术语“灰分”是本领域已知的术语，代表无机物，例如一种或多种离子、元素、矿物质和/或化合物。在一些情况下，rOVD粉末组合物包含小于5％、4.5％、4％、3.5％、3％、2.5％、2％、1.5％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或0.1％的灰分重量/总重量(w/w)和/或总量/总体积(w/v)。
在一些实施方案中，rOVD粉末组合物的水分含量可小于15％。rOVD粉末组合物可具有小于15％、12％、10％、8％、6％、5％、3％、2％或1％的水分重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)。在一些实施方案中，rOVD粉末组合物的碳水化合物含量可小于30％。rOVD粉末组合物的碳水化合物含量可小于30％、27％、25％、22％、20％、17％、15％、12％、10％、8％、5％、3％或1％w/w或w/v。
在一些情况下，rOVD粉末组合物的蛋白质含量可为30％至99％重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)。在一些情况下，rOVD粉末组合物的蛋白质含量可为至少30％w/w或w/v。在一些情况下，rOVD粉末组合物的蛋白质含量可为最多99％w/w或w/v。在一些情况下，rOVD粉末组合物的蛋白质含量可为30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至75％、30％至80％、30％至85％、30％至90％、30％至95％、30％至99％、40％至50％、40％至60％、40％至70％、40％至75％、40％至80％、40％至85％、40％至90％、40％至95％、40％至99％、50％至60％、50％至70％、50％至75％、50％至80％、50％至85％、50％至90％、50％至95％、50％至99％、60％至70％、60％至75％、60％至80％、60％至85％、60％至90％、60％至95％、60％至99％、70％至75％、70％至80％、70％至85％、70％至90％、70％至95％、70％至99％、75％至80％、75％至85％、75％至90％、75％至95％、75％至99％、80％至85％、80％至90％、80％至95％、80％至99％、85％至90％、85％至95％、85％至99％、90％至95％、90％至99％或95％至99％w/w或w/v。在一些情况下，rOVD粉末组合物的蛋白质含量可为约30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％w/w或w/v。在一些情况下，rOVD粉末组合物的蛋白质含量可为至少30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％或95％w/w或w/v。在一些情况下，rOVD粉末组合物的蛋白质含量可为最多40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％w/w或w/v。
组合物的附加组分
本文公开的含有rOVD的可食用食品组合物以及制备此类组合物的方法可包括将rOVD与一种或多种成分一起添加或混合。例如，食品添加剂可添加到组合物中或与组合物混合。食品添加剂可增加组合物的体积和/或质量。食品添加剂可改善功能性能和/或物理特性。例如，食品添加剂可防止冻融循环中脂蛋白的脂质部分导致的凝胶化或粘度增加。可添加防结块剂以形成自由流动的组合物。可添加碳水化合物以提高抗热损害性，例如，在干燥过程中减少的蛋白质变性，并改善干燥组合物的稳定性和流动性。食品添加剂包括但不限于食用色素、pH调节剂、天然调味品、人工调味品、增味剂、批次标记物(batch marker)、食品酸、填料、防结块剂(例如硅铝酸钠)、防绿化剂(例如柠檬酸)、食品稳定剂、泡沫稳定剂或粘合剂、抗氧化剂、酸度调节剂、填充剂、保色剂、搅打剂(例如酯型搅打剂、柠檬酸三乙酯、十二烷基硫酸钠)、乳化剂(例如卵磷脂)、保湿剂、增稠剂、赋形剂、固体稀释剂、盐、营养素、甜味剂、上光剂、防腐剂、维生素、膳食元素、碳水化合物、多元醇、树胶、淀粉、面粉、油或麸皮。
食用色素包括但不限于FD&C黄#5、FD&C黄#6、FD&C红#40、FD&C红#3、FD&C蓝1号、FD&C蓝2号、FD&C绿3号、类胡萝卜素(例如藏红花、β-胡萝卜素)、花青素、胭脂树红、甜菜苷、蝶豆花、焦糖色素、叶绿酸、接骨木汁、番茄红素、胭脂红、班兰、红辣椒粉、姜黄、姜黄素、喹啉黄、红色酸性染料(carmoisine)、丽春红4R、专利蓝V和绿S。
用于pH调节的成分包括但不限于Tris缓冲液、磷酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾、柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸氢钠和盐酸。
盐包括但不限于酸盐、碱盐、有机盐、无机盐、磷酸盐、氯化物盐、钠盐、氯化钠、钾盐、氯化钾、镁盐、氯化镁、高氯酸镁、钙盐、氯化钙、氯化铵、铁盐、氯化铁、锌盐和氯化锌。
营养素包括但不限于大量营养素、微量营养素、必需营养素、非必需营养素、膳食纤维、氨基酸、必需脂肪酸、ω-3脂肪酸和共轭亚油酸。
甜味剂包括但不限于糖替代物、人工甜味剂、乙酰磺胺酸钾、爱德万甜(advantame)、阿力甜、阿斯巴甜、环氨酸钠、甘素、甜素、新橙皮苷二氢查尔酮、纽甜、P-4000、糖精、阿斯巴甜-乙酰磺胺酸盐、三氯蔗糖、巴西甜蛋白(brazzein)、仙茅甜蛋白(curculin)、甘草甜素、甘油、菊糖、罗汉果苷、马槟榔甜蛋白(mabinlin)、麦芽低聚糖、甘露醇、神秘果蛋白(miraculin)、莫纳汀(monatin)、应乐果甜蛋白(monellin)、欧亚水龙骨甜素(osladin)、倍它丁(pentadin)、甜菊糖苷、三叶苷和奇异果甜蛋白(thaumatin)。
碳水化合物包括但不限于糖、蔗糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖、阿卢糖、塔格糖、木糖、阿拉伯糖、高果糖玉米糖浆、高麦芽糖玉米糖浆、玉米糖浆(例如无葡萄糖玉米糖浆)、唾液酸、单糖、双糖和多糖(如聚葡萄糖、麦芽糖糊精)。
多元醇包括但不限于木糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇、山梨醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、氢化淀粉水解物、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、甘露醇和半乳糖醇(卫矛醇)。
树胶包括但不限于阿拉伯树胶、结冷胶、瓜尔豆胶、刺槐豆胶、阿拉伯树胶、纤维素胶和黄原胶。
维生素包括但不限于烟酸、核黄素、泛酸、硫胺素、叶酸、维生素A、维生素B6、维生素B12、维生素D、维生素E、叶黄素、玉米黄质、胆碱、肌醇和生物素。
膳食元素包括但不限于钙、铁、镁、磷、钾、钠、锌、铜、锰、硒、氯、碘、硫、钴、钼、镍和溴。
包装材料
本文公开的可食用组合物的优点之一是，它们允许更简单的包装。在一个实例中，本文公开的可食用液体组合物可包装在透明容器中，因为所述组合物无浊度，可产生更具消费者吸引力的产品。
可食用组合物可被冷藏、冷冻、保温储存、室温储存或在加热的温度下保存。
rOVD组合物可包装为粉末、浓缩糖浆、可食用食品、饮品、即食食品、成分或成品。
重组OVD和OVL
在本文所述的任何组合物中，蛋白质可在宿主细胞中重组表达。重组蛋白质可以是OVD、第一非重组蛋白质(例如OVD)和第二重组蛋白质(例如溶菌酶，例如rOVL)或OVD和至少一种第二蛋白质可都被重组产生(例如rOVD和rOVL)。
rOVD或rOVL可具有来自任何物种的氨基酸序列。例如，rOVD可具有原产于鸟(鸟类)或爬行动物或鸭嘴兽的OVD氨基酸序列，rOVL可具有原产于鸟或爬行动物或鸭嘴兽的OVL氨基酸序列。具有来自鸟类OVD和/或OVL的氨基酸序列的rOVD和/或rOVL可选自：家禽、飞禽、水禽、猎鸟、鸡、鹌鹑、火鸡、火鸡秃鹰、蜂鸟、鸭子、鸵鸟、鹅、鸥、珍珠鸡、雉鸡、鸸鹋以及其任意组合。rOVD和/或rOVL可具有原产于单个物种(例如家鸡(Gallus gallusdomesticus))的氨基酸序列。或者，rOVD和/或rOVL可具有原产于两个或更多个物种的氨基酸序列，因此可以是杂化的。
下文表1中分别提供了本文设想的示例性OVD和OVL氨基酸序列SEQ ID NOs:1-44和45-51。
表1：序列
Figure BDA0003542861390000371
Figure BDA0003542861390000381
Figure BDA0003542861390000391
Figure BDA0003542861390000401
Figure BDA0003542861390000411
rOVD或rOVL可包括附加序列。rOVD和rOVL在宿主细胞(例如毕赤酵母属物种、酵母属物种、木霉属物种、假单胞菌物种)中的表达可导致在OVD或OVL序列中添加肽，作为转录后修饰或翻译后修饰的一部分。这样的肽可能不是天然OVD或OVL序列的一部分。例如，在毕赤酵母属物种(例如法夫驹形氏酵母和巴斯德驹形氏酵母)中表达OVD序列可导致在N端或C端添加肽。在一些情况下，当在宿主细胞中表达时，将四肽EAEA(SEQ ID NO:53)添加到OVD序列的N端。在一些实施方案中，rOVD或rOVL或两者均在N端包括氨基酸EAEA。OVD或OVL蛋白质序列可包括信号序列，例如用于指导从宿主细胞的分泌。在一些情况下，信号序列可能是天然信号序列。在一些情况下，信号序列可能是异源信号序列。例如，α交配因子信号序列可以融合至OVD或OVL序列，用于在酵母细胞(如毕赤酵母属物种)中表达和分泌。在一些情况下，当蛋白质(如rOVD或rOVL)从宿主细胞分泌时，信号序列全部或部分被移除。
rOVD和/或rOVL可以是OVD和/或OVL的非天然的变体。这种变体可包含相对于天然OVD或天然OVL序列的一个或多个氨基酸插入、删除或替换。
这种rOVD变体与SEQ ID NOs:1-44的序列同一性可为至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。rOVL变体与SEQ ID NOs:45-51的序列同一性可为至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。如本文在氨基酸序列语境中所用，术语“序列同一性”定义为在对齐序列并引入间隙(如有必要)以实现最大百分比序列同一性后且不考虑任何保守替换作为序列同一性的一部分，候选序列中与所选序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。可通过本领域技术范围内的各种方式，例如，使用公开可用的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)软件，实现用于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的对齐。本领域技术人员可以确定用于测量对齐的适当参数，包括在所比较序列的全长上实现最大对齐所需的任何算法。
在一些实施方案中，变体是赋予附加特征例如降低的变应原性的变体。例如，相对于野生型OVD序列SEQ ID NO:2，rOVD可包括G162M和/或F167A(例如在SEQ ID NO:3中)，并且与野生型OVD序列相比具有降低的变应原性。
根据用于表达rOVD和/或rOVL的宿主生物体，rOVD和/或rOVL可具有不同于野生型OVD(例如，天然OVD)或野生型OVL(例如，天然OVL)的糖基化、乙酰化或磷酸化模式。例如，本文中的rOVD和/或rOVL可以是或可以不是糖基化、乙酰化或磷酸化的。rOVD和/或rOVL可具有鸟类、非鸟类、微生物、非微生物、哺乳动物或非哺乳动物的糖基化、乙酰化或磷酸化模式。
rOVD和/或rOVL在宿主细胞中重组表达。如本文所用，“宿主”或“宿主细胞”在本文种表示被选择或经基因修饰以产生所需产物的任何蛋白质生产宿主。典型宿主包括真菌，例如丝状真菌，以及细菌、酵母、植物、昆虫和哺乳动物细胞。宿主细胞可以是阿氏酵母属物种(Arxula spp.)、解腺嘌呤阿氏酵母(Arxula adeninivorans)、克鲁维酵母属物种(Kluyveromyces spp.)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、法夫驹形氏酵母(Komagataella phaffii)、毕赤酵母属物种(Pichia spp.)、安格斯毕赤酵母(Pichiaangusta)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、酵母属物种(Saccharomyces spp.)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、裂殖酵母属物种(Schizosaccharomyces spp.)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、耶氏酵母属物种(Yarrowia spp.)、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)、蘑菇属物种(Agaricus spp.)、双孢蘑菇(Agaricusbisporus)、曲霉属物种(Aspergillus spp.)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillusniger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、炭疽菌属物种(Colletotrichum spp.)、胶胞炭疽菌(Colletotrichum gloeosporiodes)、内座壳属物种(Endothia spp.)、寄生内座壳(Endothia parasitica)、大肠杆菌(Escherichia coli)、镰孢属物种(Fusarium spp.)、禾谷镰孢(Fusarium graminearum)、腐皮镰孢(Fusariumsolani)、毛霉属物种(Mucor spp.)、米黑毛霉(Mucor miehei)、微小毛霉(Mucorpusillus)、毁丝霉属物种(Myceliophthora spp.)、嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)、脉孢菌属物种(Neurospora spp.)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、青霉属物种(Penicillium spp.)、沙门柏干酪青霉(Penicillium camemberti)、变灰青霉(Penicillium canescens)、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)、埃默森青霉(踝节菌)(Penicillium(Talaromyces)emersonii)、绳状青霉(Penicillium funiculosum)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、娄地青霉(Penicillium roqueforti)、侧耳属物种(Pleurotus spp.)、糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)、根毛霉属物种(Rhizomucor spp.)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)、根霉属物种(Rhizopus spp.)、少根根霉(Rhizopus arrhizus)、少孢根霉(Rhizopus oligosporus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、木霉属物种(Trichoderma spp.)、深绿木霉(Trichodermaaltroviride)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、或绿色木霉(Trichoderma vireus)。宿主细胞可以是被美国食品和药物管理局批准为通常认为安全的生物体。
重组蛋白质可以在酵母、丝状真菌或细菌中重组表达。在一些实施方案中，重组蛋白质在毕赤酵母属物种(法夫驹形氏酵母和巴斯德驹形氏酵母)、酵母属物种、木霉属物种、木霉属物种、假单胞菌物种或大肠杆菌物种中重组表达。
宿主细胞可被转化为包括一个或多个表达盒。例如，宿主细胞可被转化为表达一个表达盒、两个表达盒、三个表达盒或更多个表达盒。
在一些情况下，rOVD和/或rOVL可在其糖基化中被去糖基化或修饰(例如，通过内切葡聚糖酶(例如EndoH)、内切糖苷酶、甘露糖苷酶(如α-1,2甘露糖苷酶)、PNGase F、O-糖苷酶、OCH1、神经氨酸苷酶、β,1-4半乳糖苷酶、β-N-乙酰氨基葡糖苷酶等进行化学酶解促)、去乙酰化(例如蛋白质去乙酰化酶、组蛋白去乙酰化酶、Sirtuin)或去磷酸化(例如酸性磷酸酶、λ蛋白磷酸酶、小牛肠道磷酸酶、碱性磷酸酶)。去糖基化、去乙酰化或去磷酸化可产生更均匀或能够产生具有较少变体的组合物的蛋白质。
本发明设想对重组OVD的糖基化进行修饰，以改变或增强蛋白质的一个或多个功能特征和/或其生产。宿主细胞可包含对卵类粘蛋白糖基化模式进行修饰的异源酶。在一些情况下，一种或多种酶可用于修饰rOVD蛋白质的糖基化。用于修饰rOVD糖基化的酶可以是酶或包含酶或酶的活性片段的融合蛋白，例如，可在宿主细胞中提供EndoH或OCH1与EndoH的融合(例如以提供EndoH酶的高尔基体保留)。
天然卵类粘蛋白(nOVD)，例如从鸡或其他鸟类蛋中分离出来的天然卵类粘蛋白，具有高度复杂的糖基化支化形式。糖基化模式包括N-连接的聚糖结构，例如N-乙酰氨基葡萄糖单元和N-连接的甘露糖单元。例如，参见图1B(左列)。在一些情况下，用于本文公开的可食用组合物以及使用本文所述方法生产的rOVD具有不同于nOVD的糖基化模式的糖基化模式。例如，当在毕赤酵母属物种中生产rOVD时，蛋白质可高度糖基化。图1C示出了由巴斯德毕赤酵母产生的rOVD的糖基化模式，显示了复杂的支化糖基化模式。在本文所述的组合物和方法的一些实施方案中，对rOVD进行处理，以使糖基化模式被从nOVD的糖基化模式修饰，并且与未经该处理的由巴斯德毕赤酵母产生的rOVD相比也被修饰。在一些情况下，rOVD没有糖基化。在其他情况下，rOVD具有降低的糖基化。在一些情况下，rOVD在蛋白质的一个或多个天冬酰胺残基处被N-乙酰氨基葡萄糖修饰，并且没有或基本上没有N-连接甘露糖基化。例如，参见图1B(右列)。与乳清蛋白质、大豆蛋白质、豌豆蛋白质和nOVD等其他形式的蛋白质相比，本文所述的糖基化变化可引起rOVD的溶解度和净度升高。
在一些情况下，用于修饰糖基化的酶可被转化入宿主细胞。在一些情况下，用于修饰糖基化的酶可转化入产生rOVD的同一宿主细胞。在一些情况下，例如通过诱导表达系统，所述酶可瞬时提供给宿主细胞。在一些情况下，当宿主细胞表达用于修饰糖基化的酶时，重组蛋白质(例如rOVD和rOVL)以修饰状态下从宿主细胞分泌。
在一个实例中，产生OVD的宿主细胞包含EndoH和OCH1酶的融合。示例性的OCH1-EndoH蛋白质序列如SEQ ID No:52所示。在这种情况下，从宿主细胞产生的rOVD包含与在没有这样的酶的细胞中产生的rOVD实质不同的糖基化模式。在这种情况下产生的rOVD与天然OVD(例如，由鸡或其他鸟类蛋产生)相比也实质不同。图1B显示了nOVD(具有甘露糖残基)和rOVD糖基化模式的比较，其中rOVD用EndoH处理，且在天冬酰胺处包含N-乙酰氨基葡萄糖残基，但不具有甘露糖残基。图1C显示了在宿主细胞(例如巴斯德毕赤酵母)中产生的rOVD的糖基化模式，其中rOVD未经EndoH处理，并且具有N-乙酰氨基葡萄糖残基以及N-连接甘露糖残基链。rOVD的糖基化修饰可为rOVD提供营养益处，例如更高的氮碳比，并可改善蛋白质的净度和溶解度。在一些情况下，在从宿主细胞分泌rOVD和/或分离rOVD之前，在产生rOVD的宿主细胞内对rOVD的糖基化进行修饰。在一些情况下，rOVD的糖基化修饰是在其分泌和/或从宿主细胞分离rOVD后进行的。
rOVD的分子量可与nOVD不同。蛋白质的分子量可小于nOVD的分子量或小于由宿主细胞产生且其中rOVD糖基化未被修饰的rOVD的分子量。在实施方案中，rOVD的分子量可为20kDa至40kDa。在一些情况下，例如与天然OVD(由鸟类宿主物种产生)相比或如糖基化rOVD的宿主细胞(例如其中rOVD包含N-连接甘露糖基化)相比，具有修饰糖基化的rOVD具有不同的分子量。在一些情况下，rOVD的分子量大于完全没有翻译后修饰的rOVD的分子量或者大于没有所有形式的N-连接糖基化的rOVD的分子量。
rOVD或rOVL的表达可通过表达载体、质粒、整合到宿主基因组中的核酸或其他方式提供。例如，用于表达的载体可以包括：(a)启动子元件、(b)信号肽、(c)异源OVD或OVL序列以及(d)终止子元件。
可用于表达OVD和OVL的表达载体包括含有具有(a)、(b)、(c)和(d)元件的表达盒的表达载体。在一些实施方案中，信号肽(c)不需要包括在载体中。一般来说，表达盒被设计成在整合到同源宿主微生物的基因组中时介导转基因的转录。
为了在转化入宿主微生物之前辅助载体的扩增，载体中可含有复制起始点(e)(例如PUC_ORIC和PUC(DNA2.0))。为了辅助选择用表达载体稳定转化的微生物，载体还可包括选择性标记物(f)，例如URA3基因和玉博来霉素(Zeocin)抗性基因(ZeoR)。表达载体还可包含限制酶位点(g)，其允许在转化入宿主微生物之前对表达载体进行线性化，以促进表达载体稳定地整合到宿主基因组中。在一些实施方案中，表达载体可包含(b)、(e)、(f)和(g)元件的任何子集，不包括(b)、(e)、(f)和(g)元件。本领域技术人员已知的其他表达元件和载体元件可以组合使用或替代本文所述的元件。
启动子元件(A)可包括但不限于组成型启动子、诱导型启动子和杂合启动子。启动子包括但不限于acu-5、adh1+、醇脱氢酶(ADH1、ADH2、ADH4)、AHSB4m、AINV、alcA、α-淀粉酶、替代氧化酶(AOD)、醇氧化酶I(AOX1)、醇氧化酶2(AOX2)、AXDH、B2、CaMV、纤维二糖水解酶I(cbh1)、ccg-1、cDNA1、细胞丝多肽(cfp)、cpc-2、ctr4+、CUP1、二羟基丙酮合酶(DAS)、烯醇酶(ENO、ENO1)、甲醛脱氢酶(FLD1)、FMD、甲酸脱氢酶(FMDH)、G1、G6、GAA、GAL1、GAL2、GAL3、GAL4、GAL5、GAL6、GAL7、GAL8、GAL9、GAL10、GCW14、gdhA、gla-1、α-葡糖淀粉酶(glaA)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(gpdA、GAP、GAPDH)、磷酸甘油酸变位酶(GPM1)、甘油激酶(GUT1)、HSP82、invl+、异柠檬酸裂合酶(ICL1)、乙酰羟酸异构还原酶(ILV5)、KAR2、KEX2、β-半乳糖苷酶(lac4)、LEU2、melO、MET3、甲醇氧化酶(MOX)、nmt1、NSP、pcbC、PET9、过氧化物酶体蛋白质(peroxin)8(PEX8)、磷酸甘油酸酯激酶(PGK、PGK1)、pho1、PHO5、PHO89、磷脂酰肌醇合酶(PIS1)、PYK1、丙酮酸激酶(pki1)、RPS7、山梨醇脱氢酶(SDH)、3-磷酸丝氨酸氨基转移酶(SER1)、SSA4、SV40、TEF、翻译延伸因子1α-(TEF1)、THI11、同型丝氨酸激酶(THR1)、tpi、TPS1、丙糖磷酸异构酶(TPI1)、XRP2、YPT1、从SEQ ID Nos:121-132中选择的序列或子序列，及其任何组合。说明性的诱导型启动子包括甲醇诱导型启动子，例如DAS1和pPEX11。
信号肽(b)，也称为信号序列、靶向信号、定位信号、定位序列、信号肽、转运肽、前导序列或前导肽，可支持蛋白质或多核苷酸的分泌。重组蛋白质或异源表达的蛋白质从宿主细胞的细胞外分泌可有助于蛋白质纯化。信号肽可源自蛋白质的前体(例如前肽原、前蛋白)。信号肽可源自蛋白质的前体，而不是天然OVD和/或OVL中的信号肽。
任何编码OVD和/或OVL的核酸序列都可以用作(c)。优选地，这样的序列是针对宿主细胞优化的密码子。
示例性转录终止子元件包括但不限于acu-5、adh1+、醇脱氢酶(ADH1、ADH2、ADH4)、AHSB4m、AINV、alcA、α-淀粉酶、替代氧化酶(AOD)、醇氧化酶I(AOX1)、醇氧化酶2(AOX2)、AXDH、B2、CaMV、纤维二糖水解酶I(cbh1)、ccg-1、cDNA1、细胞丝多肽(cfp)、cpc-2、ctr4+、CUP1、二羟基丙酮合酶(DAS)、烯醇化酶(ENO、ENO1)、甲醛脱氢酶(FLD1)、FMD、甲酸脱氢酶(FMDH)、G1、G6、GAA、GAL1、GAL2、GAL3、GAL4、GAL5、GAL6、GAL7、GAL8、GAL9、GAL10、GCW14、gdhA、gla-1、α-葡糖淀粉酶(glaA)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(gpdA、GAP、GAPDH)、磷酸甘油酸变位酶(GPM1)、甘油激酶(GUT1)、HSP82、invl+、异柠檬酸裂合酶(ICL1)、乙酰羟酸异构还原酶(ILV5)、KAR2、KEX2、β-半乳糖苷酶(lac4)、LEU2、melO、MET3、甲醇氧化酶(MOX)、nmt1、NSP、pcbC、PET9、过氧化物酶体蛋白质(peroxin)8(PEX8)、磷酸甘油酸酯激酶(PGK、PGK1)、pho1、PHO5、PHO89、磷脂酰肌醇合酶(PIS1)、PYK1、丙酮酸激酶(pki1)、RPS7、山梨醇脱氢酶(SDH)、3-磷酸丝氨酸氨基转移酶(SER1)、SSA4、SV40、TEF、翻译延伸因子1α-(TEF1)、THI11、同型丝氨酸激酶(THR1)、tpi、TPS1、丙糖磷酸异构酶(TPI1)、XRP2、YPT1，及其任意组合。
典型的选择性标记物(F)可包括但不限于：抗生素抗性基因(例如，博莱霉素、氨苄青霉素(ampicillin)、杀稻瘟素(blasticidin)、卡那霉素(kanamycin)、诺尔丝菌素(nurseothricin)、氯霉素(chloroamphenicol)、四环素(tetracycline)、三氯生(triclosan)、更昔洛韦(ganciclovir)，及其任意组合)、营养缺陷型标记物(例如，f ade1、arg4、his4、ura3、met2，及其任意组合)。
在一个实例中，用于在毕赤酵母属物种中表达的载体可包括可操作地连接至信号肽(α交配因子)的AOX1启动子，所述信号肽与编码OVD和/或OVL的核酸序列以及紧接编码OVD和/或OVL的核酸序列下游的终止子元件(AOX1终止子)在框架中融合。
在另一个实例中，包含DAS1启动子的载体可操作地连接至信号肽(α交配因子)，该信号肽与编码OVD和/或OVL的核酸序列以及紧接OVD和/或OVL下游的终止元件(AOX1终止子)在框架中融合。
本文所述的重组蛋白质可从所述一个或多个宿主细胞分泌。在一些实施方案中，从宿主细胞分泌rOVD和/或rOVL蛋白质。分泌的rOVD和/或rOVL可通过例如离心、分馏、过滤、亲和纯化以及其他用于将蛋白质与细胞、液体和固体培养基组分以及其他细胞产物和副产物分离的方法分离和纯化。在一些实施方案中，rOVD和/或rOVL在毕赤酵母属物种中产生，并从宿主细胞分泌到培养基中。然后将分泌的rOVD和/或rOVL与其他培养基组分分离以供进一步使用。
在一些情况下，可以将包含OVD的多个载体转染到一个或多个宿主细胞中。宿主细胞可包含多于一个OVD拷贝。单个宿主细胞可包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个OVD拷贝。单个宿主细胞可包含一个或多个用于OVD表达的载体。单个宿主细胞可包含2、3、4、5、6、7、8、9或10个用于OVD表达的载体。宿主细胞中的每个载体可以使用相同的启动子驱动OVD的表达。或者，不同的启动子可用在用于OVD表达的不同载体中。
本文中的可食用产品和rOVD和/或rOVL组合物可基本上不含任何微生物细胞或微生物细胞污染物。例如，可以从包含微生物生长的培养物中分离rOVD和/或rOVL。
在纯化rOVD以用于可食用组合物之前，可以对rOVD进行化学或酶处理。可进行此类处理以减少rOVD蛋白质组合物中的杂质。可实施此类处理以改善rOVD蛋白质组合物的感官属性。处理可能包括但不限于纯化步骤、过滤、化学处理和酶处理。
在一些情况下，可使用氧化剂或产氧剂处理rOVD蛋白质和含有rOVD蛋白质的组合物(包括具有修饰糖基化(例如，具有N-乙酰氨基葡萄糖但无N-连接甘露糖残基的形式)的rOVD形式)以修饰rOVD组合物的组分，例如杂质。氧化剂或产氧剂可包括过氧化氢、过碳酸钠、活性二氧化氯、泡沫氧或臭氧。所述处理可提高rOVD组合物的溶解度和净度。所述处理可减少rOVD组合物的气味。所述处理可中和rOVD组合物的颜色；例如，rOVD组合物在处理后可能会褪色，例如，褪色成较低/较浅的颜色。在实施方案中，颜色可以从绿色变为微黄色和/或从微黄色变为基本无色。
在一些实施例中，在纯化rOVD以用于可食用组合物之前，可使用氧化剂或产氧剂(例如过氧化氢或过碳酸钠)对其进行处理。可以用产氧剂(例如过氧化氢或过碳酸钠)处理包含分泌的或分离的rOVD的培养基。以使用过氧化氢为例，过氧化氢处理后可进行一个或多个清洗步骤和/或过滤步骤，以从产生的rOVD组合物中去除过氧化氢。这些步骤可在使用其他产氧剂(例如过碳酸钠)处理后进行。
在一些情况下，用于处理rOVD的过氧化氢浓度可为1％至20％。用于处理rOVD的过氧化氢浓度可为至少1％。用于处理rOVD的过氧化氢浓度可为最多20％。用于处理rOVD的过氧化氢浓度可为1％至2％、1％至5％、1％至7％、1％至10％、1％至12％、1％至15％、1％至17％、1％至20％、2％至5％、2％至7％、2％至10％、2％至12％、2％至15％、2％至17％、2％至20％、5％至7％、5％至10％、5％至12％、5％至15％、5％至17％、5％至20％、7％至10％、7％至12％、7％至15％、7％至17％、7％至20％、10％至12％、10％至15％、10％至17％、10％至20％、12％至15％、12％至17％、12％至20％、15％至17％、15％至20％或17％至20％重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)。用于处理rOVD的过氧化氢浓度可为约1％、2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％或20％w/w或w/v。用于处理rOVD的过氧化氢浓度可为至少1％、2％、5％、7％、10％、12％、15％或17％w/w或w/v。用于处理rOVD的过氧化氢浓度可为最多2％、5％、7％、10％，12％、15％、17％或20％w/w或w/v。
可用过氧化氢处理rOVD有限的时间。例如，rOVD可暴露于过氧化氢至少1小时、2小时、3小时、5小时、7小时、10小时、12小时、15小时、17小时、20小时、22小时、24小时、26小时、28小时、30小时、34小时、36小时、40小时、44小时或48小时。在整个培养过程中，可向rOVD培养基中添加过氧化氢。
可在约3至6的pH用过氧化氢处理rOVD。可在约3、3.2、3.4、3.6、3.8、4、4.1、4.2、4.4、4.6、4.8、5、5.2、5.4、5.6、5.8或6的pH用过氧化氢处理rOVD。可在至少3、3.2、3.4、3.6、3.8、4、4.1、4.2、4.4、4.6、4.8、5、5.2、5.4、5.6或5.8的pH用过氧化氢处理rOVD。可在最多3.2、3.4、3.6、3.8、4、4.1、4.2、4.4、4.6、4.8、5、5.2、5.4、5.6、5.8或6的pH用过氧化氢处理rOVD。
在使用产氧剂进行处理之前，可对rOVD进行过滤。在一些情况下，rOVD可在用产氧剂处理前后被过滤。
定义
本文中使用的术语仅用于描述特定情况的目的，并不旨在限制。
如本文所用，除非另有说明，否则术语“一”、“一个”和“该”旨在包括复数形式和单数形式，除非上下文另有明确说明。
本公开和/或权利要求书中使用的术语“包含(comprise)”、“包含(comprising)”、“含有(contain)”、“含有(containing)”、“包括(including)”、“包括(includes)”、“具有(having)”、“具有(has)”、“具有(with)”或其变体旨在以类似于术语“包含(comprising)”的方式是包含性的。
]术语“约”或“大约”是指在本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，其部分取决于如何测量或确定该值，例如测量系统的限制。例如，“约”可表示大于或小于指定值的10％。在另一个实例中，“约”可指在每个给定值的实践中，在1个标准偏差范围内或多于1个标准偏差。在本申请和权利要求中描述了特定值的情况下，除非另有说明，否则术语“约”应假定为指特定值的可接受误差范围。
术语“基本上”对于多数部分，是指显著程度；或本质上。换句话说，术语基本上可意味着与所需属性几乎完全相同或者与确切属性略有不同。基本上可与所需属性无法区分。基本上可与所需属性区分，但差异不重要或可以忽略。
本文描述的任何方面或实施方案可与本文公开的任何其他方面或实施方案相结合。
实施例
以下实施例是为了说明本发明的各种实施方案而给出的，并不意味着以任何方式限制本发明。本实施例以及本文描述的方法是目前优选实施方案的代表，是示例性的，并不旨在作为对本发明范围的限制。本领域技术人员将对其进行改变及其他应用，所述改变和应用包含在如根据权利要求范围所定义的本发明精神内。
实施例1：表达载体、转化、蛋白质纯化和处理
创建了两种表达载体用于在巴斯德毕赤酵母中表达OVD(SEQ ID NO:1)。第一种结构体包含醇氧化酶1(AOX1)启动子。OVD编码序列与启动子序列下游的α交配因子信号序列在框架内融合。AOX1基因的转录终止子位于OVD序列的下游。将表达载体置入Kpas-URA 3载体中。
创建了第二种表达载体，其包含α交配因子信号序列上游的甲醇诱导型DAS1启动子(ATCC No.28485)，所述α交配因子信号序列与编码与第一种表达载体中相同的OVD蛋白序列的核酸序列在框架内融合。来自AOX1基因的转录终止子位于OVD序列的下游。
在这两种表达结构中，OVD序列是鸡(原鸡)的OVD序列，其氨基酸序列为SEQ IDNO:1。
两种表达载体均转化到巴斯德毕赤酵母中。基因组测序证实了这两种结构体的成功整合。
发酵：在环境条件下在生物反应器中生产来自每个表达载体的重组OVD(rOVD)。发酵过程的种子培养始于用液体生长肉汤接种摇瓶。接种的摇瓶保存在振动器中，然后将生长的巴斯德毕赤酵母转移到规模生产反应器中。
培养物在30℃、设定pH和溶解氧(DO)下生长。培养物被供给有碳源。
分泌的rOVD通过从液体生长肉汤中分离细胞、执行多个过滤步骤、使用和干燥最终蛋白质产物进行层析来纯化，以产生纯rOVD粉末。
实施例2：表达载体、转化、蛋白质纯化和处理
创建了三种表达载体用于在巴斯德毕赤酵母中表达成熟形式的OVD(SEQ ID NO.:1)。第一种结构体包含AOX1启动子。OVD编码序列与启动子序列(SEQ ID NO.:39)下游的α交配因子信号序列在框架内融合。来自AOX1基因的转录终止子位于OVD序列的下游。宿主细胞有11个OVD拷贝，其中10个在杂化启动子系统中，其中5个由缩短的pAOX1驱动。第11个拷贝由全尺寸的pAOX1启动子驱动。
创建了第二种表达载体，其包含在强甲醇诱导型启动子的控制下编码巴斯德毕赤酵母转录因子HAC1的核酸。来自AOX1基因的转录终止子位于HAC1序列的下游。
创建了第三个表达载体，其编码融合蛋白质。该结构体包含在强甲醇诱导型启动子pPEX11下融合到具有催化活性的天蓝黄链霉菌(Streptomyces coelicoflavus)EndoH(SEQ ID NO.:52)中的编码毕赤酵母属OCH1蛋白质前48个残基的核酸。来自AOX1基因的转录终止子位于EndoH-OCH1融合蛋白质序列的下游。
对巴斯德毕赤酵母菌株进行修饰以去除细胞质杀伤质粒，然后进一步修饰以在AOX1基因中具有缺失。这种缺失产生了甲醇利用缓慢(mutS)表型，降低了菌株消耗甲醇的能力。用所述三种表达载体转化该基础菌株。
使用标准电穿孔方法将如下线性盒引入所述基础巴斯德毕赤酵母菌株：甲醇诱导型启动子：ScPrePro(酵母属初前(pre-pro)序列)：：卵类粘蛋白：：AOX1项(term)的线性盒；甲醇诱导型启动子：：HAC1：：AOX1项的线性盒；甲醇诱导型启动子：：EndoH-OCH1：：AOX1项的线性盒。图1A示出了用于表达rOVD的载体结构体。
发酵：在环境条件下在生物反应器中生产来自每个表达载体的重组OVD。发酵过程的种子培养始于用液体生长肉汤接种摇瓶。接种的摇瓶保存在振动器中，然后将生长的巴斯德毕赤酵母转移到规模生产反应器中。
培养物在30℃、设定pH和溶解氧(DO)下生长。培养物被供给有碳源。
为了扩大生产，将rOVD巴斯德毕赤酵母种子菌株从冷冻保存中取出并解冻至室温。解冻的种子瓶的内容物用于将液体种子培养基接种到带挡板烧瓶中，并在30℃下在振荡培养器中生长。然后将这些种子烧瓶转移到一系列越来越大的种子发酵罐中(数量根据规模变化)并在其中生长，所述种子发酵罐含有基础盐培养基、微量金属和葡萄糖。种子反应器中的温度被控制为30℃、pH被控制为5、DO被控制为30％的条件下。通过投加氢氧化氨保持pH，氢氧化氨也可作为氮源。一旦达到足够的细胞质量，将生长的rOVD巴斯德毕赤酵母接种在含有基础盐培养基、微量金属和葡萄糖的规模生产反应器中。与在种子罐一样，整个过程中培养物的温度被控制为30℃、pH被控制为5、DO被控制为30％的条件下。通过投加氢氧化氨再次保持pH。在最初批次葡萄糖阶段，让培养物消耗所有葡萄糖和随后生产的乙醇。一旦达到目标细胞密度且葡萄糖和乙醇浓度被确认为零，开始葡萄糖供给批次生长阶段。在这一阶段，供给葡萄糖直至培养物达到目标细胞密度。葡萄糖以限制的速率供给，以防止乙醇在非零葡萄糖浓度存在下积累。在最后的诱导阶段，培养物被共同供给葡萄糖和甲醇，从而诱导其产生rOVD。葡萄糖的供给量应能产生所需的生长速率，而甲醇的供给量应能将甲醇浓度保持在1％，以确保持续诱导表达。在整个发酵过程中定期采集样本，以分析特定工艺参数(例如，细胞密度、葡萄糖/甲醇浓度、产物滴度和质量)。在指定的发酵时间后，收集并转移分泌的rOVD用于下游处理。
rOVD产物通过从液体生长肉汤中分离细胞、执行多个过滤步骤、进行层析和/或干燥最终蛋白质产物来纯化，以生产纯rOVD粉末。
来自OCH1-EndoH融合蛋白质的翻译后修饰引起α因子初前序列的去除。N-端测序结果显示，与成熟OVD的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)相比，毕赤酵母属宿主转录后机械地将另外四个氨基酸残基(主要)或六个氨基酸残基(次要)融合到产生的rOVD(SEQ ID NO:37)或(SEQ ID NO:38)的N-端，对N-末端前序列(pro sequence)产生不精确的切割。
用SDS-PAGE比较了来自毕赤酵母rOVD与天然鸡卵类粘蛋白(nOVD)的分子量。rOVD显示出迁移差异。为了确定凝胶迁移的差异是否归因于不同的翻译后糖基化，用PNGase F(PNGase F是一种专门去糖基化蛋白质的酶(BioLabs 2020))处理去糖基化的天然卵类粘蛋白，并与rOVD样品进行比较。去糖基化的天然卵类粘蛋白(nOVD+PNGaseF)显示出与三个测试的rOVD样品相同的带型和分子量(图1D)。糖基化的差异归因于毕赤酵母属菌株中OCH1-EndoH的作用，使得rOVD仅具有连接至Asn残基的核N-乙酰氨基葡萄糖单元，而不是鸡蛋清中的nOVD的复杂支化糖基化(包括甘露糖)(图1B和图1C)。
在不含EndoH的毕赤酵母中表达的rOVD的质谱分析显示具有八种不同的N-聚糖结构(图1C)。这些结构包括Man9 GlcNAc2、Man9 GlcNAc2 Hex、Man9 GlcNAc2Hex2、Man9GlcNAc2Hex3、Man9GlcNAc2Hex4、Man9 GlcNAc2 Hex5、v Man9 GlcNAc2Hex6和Man9GlcNAc2Hex7。下表2显示了在无内切糖苷酶处理的条件下产生的rOVD样品中N-连接的聚糖的百分比。
Figure BDA0003542861390000561
实施例3：不同rOVD浓度下的溶解度和净度测试
将冻干的rOVD(来自实施例2)以不同浓度和pH混合到水溶液(蒸馏水)中。然后通过目视(例如浊度、沉淀、粘度和颜色)以及通过测量600nm下的吸光度来评估rOVD溶液的净度和溶解度。
图2显示了去离子水的600nm下的吸光度与蛋白质浓度为4.23％w/v的rOVD的去离子水溶液的600nm下的吸光度的比较。rOVD溶液的pH为4.11。去离子水的吸光度为0.037(OD600)。含4.23％w/vrOVD的溶液的吸光度为0.047，升高了27％。图2中rOVD溶液的照片显示了在液体外观和视觉流动上澄清无色的溶液，没有沉淀，没有明显的粘度变化。
实施例4：不同温度下的溶解度和净度测试
pH 4.06或pH 6.3的实施例3的含水30％rOVD(w/v)样品在室温下被培养，并经过三次热处理：巴氏杀菌、热充填和干馏。然后通过目视(例如浊度、沉淀、粘度和颜色)以及通过测量600nm下的吸光度来评估rOVD的净度和溶解度。
每个样品的热处理执行如下：
对于巴氏杀菌，将样品加热至72℃持续1分钟，然后放置在冰浴中10分钟。冰浴后，将样品置于室温下，然后评估溶解度和净度。
对于热充填，将样品加热至85℃持续30秒，然后置于室温下，以评估溶解度和净度。
对于干馏，将样品在19psi加热至121℃持续15分钟，然后保持在室温下，以评估溶解度和净度。
图3显示了在去离子水中含30％rOVD的rOVD溶液的pH、吸光度和净度的结果。令人惊讶的是，rOVD在pH 4.06或pH 6.3以30％(w/v，基于蛋白质的量)可溶于去离子水中。pH4.06和pH 6.3的rOVD溶液的照片看起来是澄清、淡绿色和粘性的，但在热处理之前的“预处理”条件下则不那么明显。从图3可以得出，在30％w/v的rOVD浓度下，rOVD可以在酸性(pH为～4.0)和弱酸性(pH为～6)溶液中保持可溶。更具体地说，pH4.06的30％rOVD溶液在巴氏杀菌后的OD600为0.101，在热充填后OD600为0.104。在pH为6.3的酸性较低的pH下，30％rOVD溶液在巴氏杀菌后的OD600为0.089，在热充填后的OD600为0.094。因此，在较高的pH值，rOVD的净度和溶解度似乎更高。
图4显示了图3中pH 4.06实验的照片。从图4可以得出，在施加热后，rOVD令人惊讶地以30％w/v保持在溶液中。
实施例5：在不同温度和pH下的溶解度和净度测试
将冻干的rOVD(来自实施例2)以9％(w/v)的浓度混合到水溶液(蒸馏水)中。使用柠檬酸钠缓冲液(0.1M)将溶液的pH调节为2.5、4或6，如下表3所示：
表3：pH 2.5、4或6下柠檬酸盐缓冲液的组成
Figure BDA0003542861390000571
pH调节后，在室温下对每个pH值的单独含水rOVD样品进行培养，并进行三种类型的热处理：巴氏杀菌、热充填和干馏(如下文所述)。然后通过目视(例如浊度、沉淀、粘度和颜色)以及通过测量600nm下的吸光度来评估rOVD溶液的净度和溶解度。
每个样品的热处理执行如下：
对于巴氏杀菌，将样品加热至72℃持续1分钟，然后放置在冰浴中10分钟。冰浴后，将样品置于室温下，然后评估溶解度和净度。
对于热充填，将样品加热至85℃持续30秒，然后置于室温下，以评估溶解度和净度。
对于干馏，将样品在19psi加热至121℃持续15分钟，然后保持在室温下，以评估溶解度和净度。
样品的目视检查和OD600测量结果如图5A和图5B所示。
图5A示出了样品的照片。不同热处理对rOVD溶液和缓冲液吸光度(600nm)的影响。
发现添加rOVD提高了缓冲溶液的吸光度。在巴氏杀菌和热充填后，rOVD溶液的吸光度保持不变(在pH 2.5至pH 4没有显著差异)。干馏后吸光度降低。令人惊讶的是，在不同的pH下，即使经过巴氏杀菌和热充填的热处理，rOVD溶液仍然保持澄清。例外情况是，rOVD溶液在pH 4或pH 6在干馏条件下凝结。这些结果表明，在施加热之前和之后，本发明的rOVD在不同酸性pH保持可溶于溶液。
实施例6：rOVD在商业饮品中的溶解度和净度
根据文献中公布的碳酸化水平(下表4)，San
Figure BDA0003542861390000581
被选为代表低碳酸饮品，而Diet CokeTM被选为碳酸化水平较高的饮品。GatoradeTM和Red BullTM代表(非碳酸化)能量饮料类别。选择
Figure BDA0003542861390000582
研究饮品中电解质对rOVD溶解度的影响。
表4：不同商业饮品的碳酸化水平
典型的碳酸化水平 体积 g/L
轻微气泡 2 4
碳酸果汁 2.5 5
柠檬饮料 3.0-3.5 6-7
可乐 4 8
混合饮料 4.5-5.0 9-10
将冻干的rOVD以30-50％(％表示为重量蛋白质/体积)的浓度范围混合到各种饮料溶液中。令人惊讶的是，本发明的rOVD以30％w/v的浓度可溶于
Figure BDA0003542861390000583
San
Figure BDA0003542861390000584
Diet CokeTM和GatoradeTM中。在Red BullTM中的溶解度为26％w/v蛋白质。在较高浓度(例如>30％)下，rOVD在一些浓度下表现出溶解性，但伴随着净度降低和粘度增加。在甚至更高的浓度下(例如，接近50％w/v)，rOVD不再可溶，并且在一些样品中，当放入饮料溶液时，rOVD不再湿润。下表显示了30％及更高浓度(对于RedbullTM为26％)的结果。对于无色的饮品，添加rOVD后观察到明显的颜色变化，而对于有色的饮品(例如Diet CokeTM)，添加rOVD的情况下几乎没有颜色变化。
表5：rOVD在San
Figure BDA0003542861390000591
中的溶解度研究
Figure BDA0003542861390000592
表6：rOVD在Diet
Figure BDA0003542861390000593
中的溶解度研究
Figure BDA0003542861390000594
表7：rOVD在GatoradeTM(止渴饮料柠檬酸橙)中的溶解度研究
Figure BDA0003542861390000595
Figure BDA0003542861390000601
表8：rOVD在Red BullTM中的溶解度研究
Figure BDA0003542861390000602
表9：rOVD在
Figure BDA0003542861390000603
中的溶解度研究
Figure BDA0003542861390000604
图6A显示了起始饮料(无rOVD)和30％rOVD溶液(对于RedBullTM为26％)的图片。图6B显示了rOVD溶液的吸光度结果。使用600nm下的吸光度评估30％w/v(对于RedBullTM为26％)的rOVD溶液。rOVD添加后pH的变化依赖于饮品组成和初始基础pH。
实施例7：在毕赤酵母中产生重组OVL蛋白质
重组溶菌酶(rOVL)菌株是通过用表达盒转化毕赤酵母属物种法夫驹形氏酵母形成的，所述表达盒含有在甲醇诱导型启动子控制下表达的SEQ ID NO:45的OVL。OVL编码序列编码与来自酿酒酵母的α因子初前分泌信号的编码序列融合的成熟OVL蛋白。rOVL菌株在含有甲醇的培养基中生长时分泌rOVL。对含有rOVL重组蛋白的肉汤进行离心以去除细胞，并对所得上清液进行类似于rOVD的处理，如上所描述的。
实施例8：OVD和OVL组合
在本实施例中，制作含有2.5％(w/v)的rOVL和9％(w/v)的nOVD的溶液。所得到的蛋白质混合物含有21.7％的rOVL和78.3％和。
然后在以下条件下对rOVL+OVD混合物进行热处理：
巴氏杀菌：72℃下持续1分钟，然后在冰浴中10分钟。
热充填：85℃下持续30秒。
干馏：19psi下，121℃持续15分钟。
保持在室温下的对照OVD样品用于模拟无菌处理条件。柠檬酸钠缓冲液(0.1M)用于调节试验溶液的pH，如表10中所描述的。
表10：pH 2.5、4或6的柠檬酸盐缓冲液的组成
Figure BDA0003542861390000611
如图7至图10和表11所示，当rOVL+OVD混合物通过巴氏杀菌、热充填或干馏进行热处理时，与室温下保持的OVD对照样品相比，在pH 2.5，通过600nm下的吸光度测量的rOVL+OVD混合物的净度/溶解度不受影响。在pH 4，经巴氏杀菌或热充填后，rOVL+OVD混合物保持其净度度/溶解性。如通过增加的光密度测量的，干馏条件产生浑浊度(表11)。对于所有样品，在pH 6的热处理导致净度降低。
表11：含有rOVL和天然OVD的样品在600nm下的吸光度
pH 2.5 对照 巴氏杀菌 热充填 干馏
rOVL+OVD 0.043AB 0.039B 0.038B 0.045AB
OVD 0.044AB* 0.042AB 0.050A 0.046AB
rOVL 0.038B 0.038B 0.037B 0.037B
pH 4 对照 巴氏杀菌 热充填 干馏
rOVL+OVD 0.044C 0.065C 0.056C 0.154A
OVD 0.055C 0.166A 0.126B 0.315D
rOVL 0.049C 0.042C 0.042C 0.040C
pH 6 对照 巴氏杀菌 热充填 干馏
rOVL+OVD 0.063E 0.610B 0.384C 0.898B
OVD 0.041E 0.202D 0.228D 0.525B
rOVL 0.039E 1.425A 0.588B 白色沉淀F
*在每个子表中共享相同字母的样品在统计学上相似(p>0.05)
如图11至图13和表12所示，天然OVL(nOVL)样品对OVD的影响与用重组OVL(rOVL)看到的相似。在pH为2.5时，当在所有三种条件(巴氏杀菌、热充填或干馏)下进行热处理时，nOVL+OVD溶液的净度/溶解度保持不变。nOVL+OVD溶液在pH4时保持其净度，只有在干馏条件下才会产生浑浊。在热处理后pH 6不适合保持净度。表12：含有商业天然OVL(nOVL)和天然OVD(nOVD)的样品在600nm下的吸光度
pH 2.5 对照 巴氏杀菌 热充填 干馏
nOVL+OVD 0.043AB 0.046AB 0.043AB 0.051B
OVD 0.044AB* 0.042AB 0.050B 0.046AB
nOVL 0.037A 0.038A 0.038A 0.036A
pH 4 对照 巴氏杀菌 热充填 干馏
nOVL+OVD 0.052CD 0.073C 0.075C 0.174A
OVD 0.055CD* 0.166A 0.126B 0.315E
nOVL 0.037D 0.042D 0.042D 0.044D
pH 6 对照 巴氏杀菌 热充填 干馏
nOVL+OVD 0.054A 0.445F 0.322E 0.954H
OVD 0.041A* 0.042CD 0.228D 0.525G
nOVL 0.041A 0.092B 0.178C Coagulated
*在每个子表中共享相同字母的样品在统计学上相似(p>0.05)
在室温或热处理条件下，向样品中的OVD中添加rOVL可增加样品的蛋白质含量，而不会影响样品的净度或溶解度。因此，是在室温下或热处理后，将rOVL添加到OVD中并添加到饮品中可增加饮品中的蛋白质含量，而不影响净度或溶解度或感官质量(外观、气味、味道和口感)。
制备含有9％(w/v)的本发明的重组OVD(rOVD)和2.5％(w/v)的rOVL的样品。得到的蛋白质混合物含有78.3％的rOVD和21.7％的rOVL。图14比较了在pH 2.5、4、6在室温以及在不同热处理后的溶液：rOVL+rOVD以及rOVD对照。
表13：含有rOVL和rOVD的样品在600nm下的吸光度
pH 2.5 室温 巴氏杀菌 热充填 干馏
rOVD+rOVL 0.063AB* 0.066A 0.061B 0.061B
rOVD 0.062B 0.061B 0.062B 0.056C
pH 4 室温 巴氏杀菌 热充填 干馏
rOVD+rOVL 0.065B* 0.109A 0.066B 白色凝结物
rOVD 0.062B 0.060B 0.061B 白色凝结物
pH 6 室温 巴氏杀菌 热充填 干馏
rOVD+rOVL 0.066C* 0.256A 0.091B 白色凝结物
rOVD 0.072C 0.056D 0.058D 白色凝结物
*在每个子表中共享相同字母的样品在统计学上相似(p>0.05)
实施例9：与乳清蛋白质溶液的比较
为了比较rOVD与替代蛋白质(乳清)的结果，将rOVD或乳清蛋白质以9％(w/v)浓度溶解在水中。将四种商业乳清蛋白分离物(WP1、WP2、WP3和WP4)与本发明的rOVD进行比较。使用Hanna Lab pH探针测量每个样品的pH，并使用SpectroMax测量在600nm波长下的吸光度。结果示于表14。外观通过目视检查进行评估；气味通过鼻吸试验进行评估；由3名经培训的人员组成的小组通过品尝来评估味道。
表14：乳清蛋白质溶液(WPI)与rOVD溶液的溶液特性比较
Figure BDA0003542861390000641
乳清蛋白质分离物(WPI 1和WPI 3)的浓度为9g/100ml蒸馏水，调节至pH 2、4或6。图15A和图15B显示了乳清蛋白质溶液(WPI 1和WPI 3)与pH 2、4和6的rOVD溶液之间的比较结果。与相同浓度的乳清蛋白质溶液相比，rOVD溶液显示出显著更高的溶液净度。
实施例10：各种蛋白质水溶液的净度比较
在本实施例中，将本发明的重组卵类粘蛋白(rOVD)的溶解度与其他蛋白质进行比较。
适量的酸性乳清蛋白质分离物(含90％w/w蛋白质的WP1和含92.7％w/w蛋白质的WP2)、nOVD(85％蛋白质含量)、rOVD(85.6％蛋白质含量)、豌豆蛋白质(90％蛋白质含量)和大豆蛋白质(90％蛋白质含量)与水(使用漩涡)混合以形成5％的蛋白质溶液。
表15：成分及其比例的列表
Figure BDA0003542861390000651
图16显示了各种蛋白质溶液的实例。
将100μl的每种蛋白质溶液分三等份加入平底透明96孔板中(如表15所示)。使用平板适配器以Spectramax测量每个样品在600nm下的吸光度。结果示于表16。
表16：不同蛋白质溶液的吸光度结果
Figure BDA0003542861390000652
实施例11：蛋白质强化溶液的悬浮稳定性的比较
在本实施例中，测定了用rOVD强化的橙汁(添加了钙和维生素D)的可行性。
使用nOVD、乳清蛋白质或rOVD(蛋白质含量为86％)对橙汁(不含果肉；每8液盎司份量含350mg钙和2.5mcg维生素D)进行蛋白质强化。样品处理如下。将感兴趣的蛋白质以不同的量添加到10g橙汁中，并混合直到完全溶解，以生产强化橙汁。测量无蛋白质强化的原始橙汁(作为对照样品)的pH，并将其视为目标pH。使用1M柠檬酸和/或小苏打调节强化橙汁样品的pH，使其接近目标pH。在热处理前，目视观察所有样品中的蛋白质溶解度和/或沉淀。施加70℃热处理1分钟，以充分降低橙汁中的微生物负荷。然后，立即将样品冷却至4℃10分钟。
在加热过程后(图17A)以及在4℃下储存48小时后(图17B)，立即评估样品的物理和悬浮稳定性。
发现用15％的nOVD或15％的rOVD强化的橙汁的悬浮稳定性与无蛋白质强化的对照相似。48小时后，用15％乳清蛋白质强化的橙汁略微形成凝胶，因此在该样品中未观察到分离。高浓度(30％)的rOVD不沉淀，即使在存在0.25mcg维生素D和35mg钙的情况下，也完全溶解在橙汁中。
还发现rOVD具有热稳定性，在巴氏杀菌过程中不形成凝胶。在外观方面，对照与用15％的nOVD或用15％或20％两个水平的rOVD强化的橙汁之间没有显著差异。
实施例12：蛋白质强化的果冻的悬浮稳定性比较
在本实施例中，评估了用rOVD强化果冻的可行性。
JelloTM果冻用于蛋白质强化，所述蛋白质强化使用nOVD(80％蛋白质)、rOVD(86-93％蛋白质)、无味乳清分离蛋白(87.5-92.7％蛋白质)、无味明胶(92％蛋白质)进行。样品制备如下：
对照果冻方法：向果冻混合粉末中加入热水，搅拌两分钟，直到完全溶解。然后加入冷水，以装满2厘米1盎司的杯子，盖上盖子，然后冷藏。
强化果冻方法：向果冻混合粉末中加入热水，搅拌两分钟，直到完全溶解。将冷水逐渐加入蛋白质粉末中，并缓慢搅拌以溶解。将溶解的果冻溶液转移到蛋白质混合物中并完全混合。装满2厘米1盎司的杯子，盖上盖子，然后冷藏。
蛋白质果冻制剂：下表17示出了对照和具有感兴趣的特定蛋白质的其他实验果冻样品中使用的成分及其比例的列表。
表17：成分列表
对照 乳清20％ nOVD 20％ rOVD 20％
成分 ％ ％ ％ ％
凝胶物 15.23 11.7 11.4 11.7
冷水 42.38 32.7 31.8 32.5
热水 42.38 32.7 31.8 32.5
蛋白质 0 22.9 25.0 23.3
总g 100 100 100 100
(*根据蛋白质w/w含量百分比调节的成分量)。果冻样品的质地使用BrookfieldCT3质地分析仪测量(表18)。对于每个果冻样品，读取三个读数。果冻位于测试探针下方的中心位置，并按照以下测试设置压缩至5毫米的距离。粘合度(也称为粘附性)测量了分离果冻表面和探针表面之间吸引力所需的能量(接近在舌头、牙齿和/或上颚上的粘附性)。硬度是压缩果冻以达到给定变形所需的力。
表18：质地分析仪测试设置
测试 压缩测试
探针 TA 5
质地性质 硬度(g)和粘合度(mj)
速度 1mm/sec
距离 5mm
样品尺寸 柱形；H:20mm D:36mm
触发负荷 4.5g
在粘合度方面，用20％nOVD强化的果冻与对照之间没有观察到统计学上的显著差异。另一方面，含有20％乳清和rOVD蛋白质的果冻的粘合度值显著降低(表19)。
表19：质地分析结果
Figure BDA0003542861390000671
*平均值±标准偏差；对于给定的定量参数(例如硬度)，含不同字母的果冻样品在统计学上彼此不同，p<0.05。
用20％乳清、nOVD或rOVD强化的果冻的硬度明显低于对照果冻。
对照果冻和用20％rOVD强化的果冻的净度没有观察到显著差异(p<0.05)。用乳清分离蛋白质强化的果冻不透明且不澄清。(图18A和图18B)。
用20％乳清蛋白质强化的JelloTM质地非常柔软，与对照组不可比。(图18C)。
含有16％或20％水解明胶的JelloTM质地呈橡胶状，具有强的弹性和抗变形能力。在这个实验中，样品的等分是不可能的，因为果冻在室温下很快凝固(图18D和图18E)。
实施例13：测试来自不同物种的重组OVD
在本实施例中，评估了具有非鸡、鸟类物种氨基酸序列的rOVD的性质。
在巴斯德毕赤酵母中构建了两种表达载体用于表达两种非鸡rOVD(SEQ ID NO:40，下文称为rOVD-T(火鸡秃鹰)，和SEQ ID NO:43，下文称为rOVD-H(蜂鸟))，并对其进行了类似于实施例2的表达、纯化和处理。将冷干的rOVD样品以不同浓度和pH混合到水溶液(蒸馏水)中。然后通过目视(例如浊度、沉淀、粘度和颜色)以及通过测量600nm下的吸光度来评估rOVD溶液的净度和溶解度。
图19A显示了去离子水中包含rOVD-H的蛋白质-水样品，其中蛋白质浓度为4.23％、10％、20％或30％w/v。溶液的pH为4.15。与前面实施例中的鸡rOVD一样，图19A显示了对于高达20％rOVD-H的溶液，外观上没有沉淀和明显的粘度变化且具有可视液体流动的澄清无色溶液。
图19B显示了包含去离子水中的rOVD-T的蛋白质-水样品，其中蛋白质浓度为4.23％、10％或20％w/v。溶液的pH值为3.69。与前面实施例中的鸡rOVD一样，图19B显示了对于包含高达10％rOVD-T的溶液，外观上没有沉淀和明显的粘度变化且具有可视液体流动的澄清溶液。在20％时，蛋白质没有完全溶解。
样品在室温下培养，并经过三种类型的热处理：如实施例4或实施例5所示的巴氏杀菌、热充填或干馏。然后通过目视(例如浊度、沉淀、粘度和颜色)以及通过测量600nm下的吸光度来评估不同rOVD的净度和溶解度。表20显示了在缓冲液或水中含有4.23％rOVD-H或rOVD-T溶液的rOVD溶液的pH、吸光度和净度结果。“处理前”栏中的数据是在任何热处理之前测量的。令人惊讶的是，在不同酸性pH，即使经过巴氏杀菌、热充填或干馏等极端热处理，rOVD溶液仍保持澄清。这些结果表明，在施加热之前和之后，rOVD样品在不同酸性pH下仍然可溶于溶液。
这些数据表明，上述针对重组鸡OVD(参见实施例2)的有利性质也可通过其他重组OVD获得。
表20：rOVD-H和rOVD-T的溶解度和净度研究
Figure BDA0003542861390000691
实施例14：牛胰蛋白酶抑制活性的比较
本实施例中使用了实施例2中生产的rOVD。在使用牛胰蛋白酶的标准试验(AACC#22-40.01)中，比较了天然OVD(nOVD)和重组OVD(rOVD)的胰蛋白酶抑制活性。表21示出了rOVD与nOVD的比较。一个胰蛋白酶单位任意定义为在试验条件下，每10ml反应混合物在410nm处0.01个吸光度单位的增加。胰蛋白酶抑制活性以胰蛋白酶抑制单位(TIU)表示。将三个不同批次的rOVD(样品1-3)与天然鸡卵类粘蛋白进行比较。
表21：胰蛋白酶抑制活性的比较
产品 胰蛋白酶抑制活性
样品1 8190TIU/g
样品2 8180TIU/g
样品3 8649TIU/g
天然鸡卵类粘蛋白 13721TIU/g
实施例15：体外消化率的比较
使用蛋白质消化率测定程序(Megazyme，Medallion Labs)测量rOVD样品的体外消化率。rOVD样品与nOVD的比较示于表22中。数据表明，天然卵类粘蛋白和rOVD的体外消化率相当。
表22：体外消化率比较
产品 In-vitro digestibility
样品1 93％
样品2 93％
样品3 93％
天然鸡卵类粘蛋白 92％
实施例16：卵类粘蛋白规范
根据生产的rOVD组合物的特性和天然鸡卵类粘蛋白的性质，为本发明的rOVD构建了产品规范(表23)和质量控制规范(表24)。
使用AOAC 2006测定蛋白质百分比。参见Protein(crude)in animal feed,combustion method,990.03.In:Official methods of analysis of AOACInternational.第18版.Gaithersburg:ASA-SSA Inc.和AOAC 2006.Proximate Analysisand Calculations Crude Protein Meat and Meat Products Including Pet Foods-第80项.In:Official methods of analysis Association of Analytical Communities,Gaithersburg,MD,第17版,参照资料：方法992.15(39.1.16)；NFNAP；NITR；NT。
使用官方分析化学家协会1995的官方分析方法测量水分百分比。
使用J AOAC Int.2012Sep-Oct；95(5):1392-7中描述的方法测量碳水化合物百分比。
使用如下方法测量酸水解的脂肪：Official Method Fat(crude)or etherextraction in pet food.Gravimetric方法,954.02,Official Methods of Analysis ofAOAC International,第19版,AOAC International,Gaithersburg,MD,USA,2012。
使用如下方法测量标准平板计数：AOAC International.2005.Aerobic platecount in foods,dry rehydratable film,方法990.12.AOAC International,第17版，Gaithersburg,MD。使用如下方法测量酵母和霉菌计数：AOAC Official Method997.02.Yeast and Mold Counts in Foods Dry Rehydratable Film Method(PetrifilmTM方法)第一措施1997最终措施2000。使用如下方法测量沙门氏菌：AOACInternational.2005.Salmonella in selected foods,BAX自动系统,方法2003.09,Official methods of analysis of AOAC International,第17版,AOAC International,Gaithersburg,MD。使用如下方法测量总大肠菌：AOAC International.2005.E.coli countin foods,dry rehydratable film,方法991.14，Official methods of analysis ofAOAC International,第17版，AOAC International,Gaithersburg,MD。
表23：由巴斯德毕赤酵母DFB-003产生的卵类粘蛋白的规范
物理性质 规范
来源 源于酵母发酵
外观 白色至米白色非晶态粉末
溶解度 可溶于水中
Figure BDA0003542861390000711
微生物性质(依原来样子的粉末形式) 规范 方法
标准平板计数 <10000CFU/g AOAC 990.12<sup>6</sup>
酵母&霉菌 <100CFU/g AOAC 997.02<sup>7</sup>
沙门氏菌 未检测出/25g AOAC 2003.09<sup>8</sup>
大肠杆菌 未检测出/25g AOAC 991.14<sup>9</sup>
总大肠菌 ≤30CFU/g AOAC 991.14<sup>9</sup>
表24：由巴斯德毕赤酵母DFB-003产生的三批卵类粘蛋白的质量控制结果
Figure BDA0003542861390000712
Figure BDA0003542861390000721
*源生物体的检测限＝11CFU/mg样品
**编码DNA的检测限＝10毫微微克
实施例17：rOVD制剂中不存在生产有机体和DNA
将rOVD粉末铺在PGA平板上，如果样品产生菌落，则重新划线，并通过PCR分析毕赤酵母生物体的存在。该方法应用于由重组菌株产生的三批rOVD粉末。在任一批次中均未检测到制造有机体(表24)。
PCR分析用于确认使用rOVD盒的引物在rOVD制剂中不存在重组DNA的编码片段。OVD质粒DNA用作阳性对照，产生对应于OVD PCR产物的570bp条带。在测试的所有三批rOVD粉末中，该条带均不存在。
实施例18：比较免疫反应性
以1:2500稀释度使用来自兔子(NBP1-74676 Novus)的一级抗卵类粘蛋白抗体，对三个rOVD批次进行Western Blot比较。使用的二级抗体是与碱性磷酸酶(AP ab97048Abcam)结合的山羊抗兔IgG。使用的分子量标记制剂来自Bio Rad(161-0394)。比较表明，rOVD样品、来自鸡蛋清的天然卵类粘蛋白(nOVD)和去糖基化的天然卵类粘蛋白(nOVD+PNGaseF)具有相同的免疫反应性(图20)。
实施例19：rOVD的发酵和纯化
将rOVD巴斯德毕赤酵母种子菌株从冷冻保存中取出，并解冻至室温。解冻的种子瓶中的内容物用于接种初级发酵罐中的液体培养基，并在工艺温度下生长，直到达到目标细胞密度。然后，将生长的rOVD巴斯德毕赤酵母转移到规模生产反应器中。培养物在目标发酵条件下在生产生物反应器中生长，并被供给一系列底物。在此过程中，多次分析发酵的培养物纯度。
通过离心将细胞与液体培养基分离，然后进行微滤，来纯化重组OVD。首先将发酵液的pH调节至3，并用去离子水稀释发酵液。采用斗式离心法去除细胞。使用氢氧化钠将收集的上清液调节至pH 7，对其进行0.2μm过滤，然后使用五体积的去离子水进行渗滤。将0.2μm的渗透物调节至pH 5，然后通过5kDa TFF膜进行浓缩。使用65％饱和硫酸铵沉淀5kDa滞留物。添加盐后，用磷酸将pH调节至pH 4-4.1。在室温搅拌培养混合物过夜。第二天，用斗式离心法分离沉淀物。将rOVD沉淀物溶解在去离子水中，并使用氢氧化钠将pH调节至5。然后对rOVD溶液进行渗滤，然后使滞留物通过0.2μm瓶式过滤器。
使用喷雾干燥器将rOVD溶液脱水成rOVD粉末。
实施例20：rOVD净化过程中的过氧化氢处理
使用5kDa TFF膜将液体rOVD浓缩至50-60g/L。使rOVD溶液通过0.2μm过滤器以去除微生物。在搅拌的同时，将相当于10％溶液体积的量的过氧化氢(产氧剂)缓慢添加到rOVD溶液中。搅拌下培养混合物，并对其进行监测，以确保颜色从处理前的深绿棕色变为处理后的淡黄色。1.5小时后，通过5kDa TFF膜使用5体积的去离子水进行渗滤。在室温下，使用65％盐饱和度的硫酸铵沉淀5kDa渗滤滞留物中的rOVD。添加盐后，用磷酸将pH值调节至pH 4-4.1。将混合物在搅拌下培养过夜以形成沉淀物。第二天，用斗式离心法分离沉淀物。沉淀物被去除，被溶解在去离子水中，并使用氢氧化钠将pH调节至5。清洗5kDa TFF膜，并使用体积去离子水进行渗滤，直到达到滞留物电导率小于2.0mS。使滞留物通过0.2μm瓶式过滤器。然后将过滤后的rOVD溶液喷雾干燥并储存。
实施例21：用氧化氢处理的再加工的rOVD
OVD粉末被溶解在去离子水中至50-60g/L，并通过中空纤维0.2μm切向流过滤器过滤，然后通过0.2μm瓶式过滤器过滤。将提供10％溶液的量的过氧化氢缓慢搅拌到rOVD溶液中，并培养30分钟。处理后的溶液用5体积的去离子水通过5kDa膜洗涤。
将硫酸铵缓慢添加到滞留物溶液中，并使用磷酸将pH调节为4-4.1。在培养基搅拌下培养过夜后，将溶液离心，并丢弃上清液。收集沉淀物，将沉淀物溶解在去离子水中，并使用氢氧化钠调节至pH 5。蛋白溶液被用5kDa膜脱盐，并通过0.2μm瓶式过滤器过滤。然后，将蛋白质溶液喷雾干燥以制备rOVD粉末。
实施例22：感官测试和结果
对rOVD样品和称为RE-RC的H2O2再加工的样品进行感官特性分析，以确定过氧化氢处理的效果。
用去离子水制备4.23％w/v浓度的每个干样品的溶液。两种样品都是在同一时期以单个地提交给专家组成员。经培训的专家组成员(n＝6)评估两种样品的外观、气味、味道、口感和回味。对于每个类别，专家组成员描述感知属性，然后使用强度评级量表(表25)对每个属性的强度进行评级(Kemp et al.2009)。
表26显示了与对照样品相比，经过氧化氢处理的样品颜色更浅，具有更干净的感官特征，更少的感官属性。
表25：属性强度评级量表
Figure BDA0003542861390000741
Figure BDA0003542861390000751
表26：感官评定结果
Figure BDA0003542861390000752
实施例23：H2O2处理的rOVD的溶解度和净度测试
使用分光光度计，根据光密度(A600)测量对照溶液和过氧化氢处理的样品溶液(4.23％w/v)的溶解度和净度。较低的吸光度值(在600nm波长下)表明样品溶液的净度和溶解度较高。
与对照相比，过氧化氢处理的样品具有较低的吸光度(表27)和较浅颜色的。这表明所述处理导致改善的外观，不那么浓烈的颜色和澄清的溶液。这些特征如图21所示。
表27：样品溶液(4.23％w/v)的吸光度(600nm处)
rOVD H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>再加工的RE-RC
吸光度 0.068 0.046
实施例24：蛋白质棒制备和硬度和感官喜欢程度测试
如表28所示，将切碎的枣、切碎的坚果(杏仁和核桃)和可可(可可)的均匀混合物与感兴趣的蛋白质粉末组合。在含有蛋白质粉末的制剂中，枣和坚果的含量减少，如表29所示。枣：坚果比例保持在恒定的4.6水平。以2％、8％、16％或23％的包含水平制备的蛋清蛋白质粉末和nOVD，而以2％、4％、8％、12％或16％的包含水平制备的rOVD。(表28至表31)。
每种混合物的一半在350℉的烘箱中烘焙10分钟。每种混合物的另一半作为未烘焙的混合物进行测试。
表28：对照制剂中使用的成分及其比例的列表
成分 量(％)
枣 78.67
坚果 17.33
可可 4
总计 100
表29：蛋清蛋白质制剂中使用的成分及其比例的列表
成分 2％蛋白质 8％蛋白质 16％蛋白质 23％蛋白质 32％蛋白质
枣 76.67 71 63.33 56.67 48
坚果 17 15.67 14 12.50 10.67
可可 4 4 4 4 4
蛋白质 2.33 9.33 18.67 26.83 37.33
总计 100 100 100 100 100
表30：nOVD制剂中使用的成分及其比例的列表
成分 2％蛋白质 8％蛋白质 16％蛋白质 23％蛋白质
枣 76.67 70.67 62.33 55.25
坚果 16.83 15.33 13.67 12
可可 4 4 4 4
蛋白质 2.5 10 20 28.75
总计 100 100 100 100
表31：rOVD制剂中使用的成分及其比例的列表
Figure BDA0003542861390000761
Figure BDA0003542861390000771
实施例25：蛋白质棒硬度/质地测试
使用CT3 Brookfield质地分析仪(1500g称重传感器)测量实施例25中制备的烘焙和未烘焙的蛋白质棒的质地性质。三点弯曲试验用于断裂、弯曲和测量蛋白质棒的硬度。对一个样品的每个蛋白质包含水平进行分析。使用的试验参数如表32所示。
烘焙的蛋白质棒的硬度结果远高于未烘焙的蛋白质棒的硬度结果。在未烘焙的蛋白质棒中，对于所有蛋白质粉末8％的包含水平导致类似的硬度值。随着蛋白质包含水平的增加，所有未烘焙的蛋白质棒的硬度曲线逐渐增加。在16％和23％的蛋白质包含水平下，蛋清蛋白质、天然OVD和rOVD的硬度值是可比的。参见表33和表34。
蛋清蛋白质可以高达32％的蛋白质水平被包含。对于天然和rOVD，观察到蛋白质棒中的蛋白质包含水平最大23％。较高的蛋白质浓度不能包含在蛋白质棒形式中。
nOVD在8％包含水平的硬度值远低于蛋清蛋白质和rOVD。然而，在16％和23％的包含水平，观察到所有蛋白棒样品的相似硬度值。对较高的16％和23％的包含水平，含有天然和rOVD的烘焙的蛋白质棒显示出多孔碎屑和坚硬的外壳。总的来说，在所有蛋白质粉末中，8％的蛋白质粉末包含水平是最理想的(更高的适口性和质地属性)。表32：用于三点弯曲试验以使用CT3 Brookfield质地分析仪测量硬度的试验参数
Figure BDA0003542861390000772
Figure BDA0003542861390000781
表33：未烘焙的蛋白质棒样品的试验结果
Figure BDA0003542861390000782
表34：烘焙的蛋白质棒样品的试验结果
Figure BDA0003542861390000783
实施例26：蛋白质棒感官测试
由经培训的内部专家组成员评估如实施例26所述制备的样品的品质等级描述。
测试的质量属性包括外观、气味、味道、口感/质地和总体喜好，所述总体喜好分为九个等级：1：极度不喜欢，2：非常不喜欢，3：适度不喜欢，4：轻微不喜欢，5：既不喜欢也不讨厌，6：轻微喜欢，7：适度喜欢，8：非常喜欢，和9：极度喜欢。
表35：8％蛋白质棒样品的感官喜欢程度结果
Figure BDA0003542861390000791
对于未烘焙的对照样品，专家组成员注意到，其具有良好的外观，略软的质地/口感，但总体良好的口感且没有令人不快的回味。对于烘焙的样品，专家组成员喜欢样品的每个属性至最高评分，并给出满分。
对于未烘焙的(8％)蛋白质棒，专家小组成员提供了以下评论：蛋清蛋白质棒尝起来像软式面包，它甜且有粘性，但口感干燥；与对照相比，天然OVD棒粘性较小，但有强烈的OVD样、金属味和酸味，且口感干燥；rOVD蛋白质棒没有酸度，稍低的甜度，但有粘性，且具有宜人的回味。
对于烘焙的(8％)蛋白质棒，专家小组成员提供了以下评论：蛋清蛋白质棒呈微酸性，有薄脆饼干/烤谷物类的味道和回味；与对照相比，天然OVD棒更硬、有粘性，更可口；而rOVD棒缺少酸度，有嚼劲，且具有粘性，这是专家小组成员喜欢的。
表36：16％蛋白质棒样品的感官喜欢程度结果
Figure BDA0003542861390000792
Figure BDA0003542861390000801
对于烘焙的(16％)蛋白质棒，专家小组成员提供了以下评论：蛋清蛋白质棒尝起来像是烤的面包味，呈白色(whiteish)，具有粉末状口感；nOVD棒很硬，很难咬，看起来像硬面包，有强烈的酸味，留下烧灼感；rOVD棒有着柔和的甜味、干巴巴的(mealy)烤面包味，没有酸度或回味，虽然发黏但是硬的。
总体而言，在实施例25至实施例27所述的试验中，rOVD棒的性能超过nOVD棒，且与蛋清蛋白质样品相当。对于nOVD和rOVD，最高23％的蛋白质包含水平看起来是可能的，而蛋清蛋白质样品的包含水平可高达32％。对于所有蛋白质棒，8％的棒被认为是最佳的包含水平。
12％的rOVD棒为未烘焙的棒时具有轻微的酸度，但为烘焙的棒时没有感知到酸度。烘焙的棒有嚼劲，有粘性，且是硬的。
实施例27：rOVD沙拉调料
使用L5M-A均质机(Silverson)在室温下制备沙拉调料。通过将蛋白质粉末和盐分散到水相(水和醋)中，并使用General Purpose Disintegrating Head以2000rpm搅拌5分钟来制备乳液。混合后，以受控方式添加菜籽油，并使用Square Hole High Shear Screen在6000rpm下均质15分钟，以制备稳定的水包油乳液。
将所有乳液样品转移到玻璃管中，用塑料盖密封，并在4℃下储存七天。通过目视监测底部相可见浆液(serum)分离的高度随储存时间的变化来评估样品的稳定性。对物理稳定性进行监测，直到没有发生可见的相分离。乳液的稳定性表示为：％浆液＝(Ht/H0)*100。H0代表初始乳液高度，Ht代表可见浆液分离层高度。
示出了对照样品和含有感兴趣的特定蛋白质的其他沙拉调料样品中使用的成分及其比例的列表(表37)。
表37：成分列表
Figure BDA0003542861390000802
Figure BDA0003542861390000811
表38示出了调料的乳液稳定性随储存时间的变化。与对照样品相比，nOVD和rOVD样品显示出更好的乳液稳定性，对照样品在4℃下储存的第一天经历了相分离。第2天之后，含nOVD和rOVD的样品在乳液相分离方面没有表现出太大的变化。值越高，说明乳液稳定性越低。
表38：乳液稳定性结果
Figure BDA0003542861390000812
Figure BDA0003542861390000821
实施例28：rOVD蛋液形成
在面包应用中评估了rOVD的成膜和光泽形成功能。烘焙说明：
a、在小容器中，将酵母和糖混合，加入温水(85-95F)，让它静置5分钟。
b、在混合碗中加水。
c、慢慢混合面粉(30秒)，直到形成稳固的面团(以速度3混合2分钟)。
d、在撒了少量面粉的板上揉面(折叠7次)30秒，只在需要时加入少量面粉。
e、把面团放在抹了油脂的碗里。在碗里翻转面团，使面团顶部也涂上少量油脂。盖上盖子，在80F的发酵温度下发酵45分钟(第一次发酵)。
f、将面团翻到撒了面粉的板上，并揉出空气(折叠7次)。
g、做成迷你条形状，放在抹了油脂的迷你平底锅里。
h、盖上盖子，在室温下发酵30分钟(第二次发酵)。
i、在面团球上涂3％含量的适量蛋液(如果涂芝麻籽，则将10粒芝麻籽涂在涂蛋液后的每个面团上)。
j、在350F的温度烘焙8分钟或直至呈金黄色(在4分钟时切换面包的位置，以对所有样品实现均匀烘焙)。
k、在顶部添加面包面团总重量的3％的蛋液。各使用25g样品(总蛋液＝0.75g)。
l、对于含有全蛋和商业蛋液替代品的样品，将0.75g的每个样品涂到面团表面。
使用的感兴趣蛋白质的制剂如表39所示。
表39：蛋液制剂中使用的成分及其比例的列表
蛋清粉末 rOVD
成分 ％ ％
DI水 90.67 91.21
成膜剂 9.33 8.79
芝麻籽的保留：在蛋糕、面包、百吉饼或其他烘焙食品上任何顶部物保留是蛋液的重要因素。芝麻籽用于评估烘焙后各成膜剂的结合功能。在涂蛋液后且在烘焙前，在每个面团球上施加10粒芝麻籽。这些芝麻籽的保留率根据烘焙后粘在面包上的芝麻籽量计算。
获得了以下结果：
表40：芝麻籽的保留水平
Figure BDA0003542861390000831
没有蛋液的对照样品对芝麻籽没有结合能力，烘焙后表面上没有保留芝麻籽。然而，所有其他成膜剂都能在烘焙后保留所有10个芝麻籽，表明顶部物的保留率为100％。
比色分析：使用Colorgrab应用程序(Loomatix)分析RGB光谱中的单个样品图片的颜色数据。使用从面包表面中心提取的2×2cm横截面产生样品值。然后使用在线软件www.colormine.org将RGB数据转换为CIELAB系统。CIELAB模型是颜色空间系统，用三个值来表示颜色：L*表示从黑色(0)到白色(100)的亮度，a*表示从绿色(-)至红色(+)，b*表示从蓝色(-)至黄色(+)。
表42：烘焙后面包的CIELAB结果
Figure BDA0003542861390000832
Figure BDA0003542861390000841
rOVD和蛋清蛋白质样品的L*值较高，表明亮度或明亮度较高。与全蛋和rOVD样品相比，对照(不含蛋液)、商业蛋液替代品和蛋清蛋白质样品的a*值低，表明红色或棕色较低。
全蛋液和rOVD样品也有类似的b*值，表明与其他样品相比类似的黄色色调。
目视检查：对照样品看起来颜色浅、起皱、没有光泽。具有蛋液的样品具有良好褐变、好的光泽、光滑的表面。烘焙光泽样品具有光滑的表面且轻微的明显光泽。蛋清蛋白质粉末样品和rOVD样品具有良好的光泽和褐变。
rOVD作为成膜剂和光泽形成剂效果良好。所有芝麻籽在褐变后仍保留在表面上，表明良好的成膜和结合能力。与其他样品相比，目视检查和颜色值表明了良好的光泽形成和褐变(图22)。
序列表
<110> 克莱拉食品公司
<120> 蛋白质组合物及其食用品
<130> 49160-714.601
<150> US 62/873,154
<151> 2019-07-11
<150> US 62/873,159
<151> 2019-07-11
<160> 53
<170> PatentIn版本 3.5
<210> 1
<211> 186
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 1
Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Ala Thr Asp Lys Glu Gly
1 5 10 15
Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr
20 25 30
Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Ile
35 40 45
Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp
65 70 75 80
Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly
85 90 95
Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys
100 105 110
Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg
115 120 125
Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro
130 135 140
Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr
145 150 155 160
Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
180 185
<210> 2
<211> 186
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 2
Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Ala Thr Asp Met Glu Gly
1 5 10 15
Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr
20 25 30
Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Val
35 40 45
Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp
65 70 75 80
Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly
85 90 95
Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys
100 105 110
Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg
115 120 125
Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro
130 135 140
Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr
145 150 155 160
Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
180 185
<210> 3
<211> 186
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 3
Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Ala Thr Asp Met Glu Gly
1 5 10 15
Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr
20 25 30
Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Val
35 40 45
Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp
65 70 75 80
Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly
85 90 95
Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys
100 105 110
Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg
115 120 125
Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro
130 135 140
Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr
145 150 155 160
Tyr Met Asn Lys Cys Asn Ala Cys Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
180 185
<210> 4
<211> 210
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 4
Met Ala Met Ala Gly Val Phe Val Leu Phe Ser Phe Val Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Ala Phe Gly Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Ala Thr Asp Lys Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys
35 40 45
Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Ile Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys
65 70 75 80
Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser
85 90 95
Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn
100 105 110
Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp
130 135 140
Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val
145 150 155 160
Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro
165 170 175
Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys
180 185 190
Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly
195 200 205
Lys Cys
210
<210> 5
<211> 210
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 5
Met Ala Met Ala Gly Val Phe Val Leu Phe Ser Phe Val Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Val Phe Gly Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Ala Thr Asp Met Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys
35 40 45
Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Val Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys
65 70 75 80
Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser
85 90 95
Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn
100 105 110
Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp
130 135 140
Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val
145 150 155 160
Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro
165 170 175
Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys
180 185 190
Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly
195 200 205
Lys Cys
210
<210> 6
<211> 208
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 6
Met Ala Met Ala Gly Val Phe Val Leu Phe Ser Phe Val Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Ala Phe Gly Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Ala Thr Asp Lys Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys
35 40 45
Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Ile Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys
65 70 75 80
Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser
85 90 95
Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn
100 105 110
Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp
130 135 140
Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Asp Cys
145 150 155 160
Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro Leu Cys
165 170 175
Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala
180 185 190
Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 7
<211> 186
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 7
Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Ala Thr Asp Lys Glu Gly
1 5 10 15
Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr
20 25 30
Asp Gly Val Thr Tyr Asn Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Ile
35 40 45
Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp
65 70 75 80
Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly
85 90 95
Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys
100 105 110
Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp Lys Arg His Asp Gly Glu Cys Arg
115 120 125
Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro
130 135 140
Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr
145 150 155 160
Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
180 185
<210> 8
<211> 208
<212> PRT
<213> 珍珠鸡
<400> 8
Met Ala Met Ala Gly Val Phe Val Leu Phe Ser Phe Ala Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Ala Thr Asn Glu Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Thr Glu
35 40 45
Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Asp
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys
65 70 75 80
Glu His Asp Gly Glu Cys Arg Glu Ala Val Pro Val Asp Cys Ser Arg
85 90 95
Tyr Pro Asn Met Thr Ser Glu Glu Gly Lys Val Leu Ile Leu Cys Asn
100 105 110
Lys Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Asn Val Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly
130 135 140
Lys Lys His Asp Gly Glu Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Asp Cys
145 150 155 160
Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Thr Met Glu Tyr Arg Pro Leu Cys
165 170 175
Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Asp Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala
180 185 190
Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 9
<211> 239
<212> PRT
<213> 火鸡
<400> 9
Met Gln Thr Ile Thr Trp Arg Gln Pro Gln Gly Asp His Leu Arg Ser
1 5 10 15
Arg Ala Pro Ala Ala Thr Cys Arg Ala Gly Gln Tyr Leu Thr Met Ala
20 25 30
Met Ala Gly Ile Phe Val Leu Phe Ser Phe Ala Leu Cys Gly Phe Leu
35 40 45
Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn
50 55 60
Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Thr Glu Asp Leu
65 70 75 80
Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr His Ser Glu Cys Leu Leu
85 90 95
Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp
100 105 110
Gly Glu Cys Arg Glu Ala Val Pro Met Asp Cys Ser Arg Tyr Pro Asn
115 120 125
Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Met Ile Leu Cys Asn Lys Ala Leu
130 135 140
Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Val
145 150 155 160
Leu Cys Ala His Asn Leu Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys His
165 170 175
Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser
180 185 190
Glu Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Thr Leu Glu Tyr Arg Pro Leu Cys Gly
195 200 205
Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
210 215 220
Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
225 230 235
<210> 10
<211> 185
<212> PRT
<213> 火鸡
<400> 10
Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly
1 5 10 15
Lys Asp Val Leu Val Cys Thr Glu Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr
20 25 30
Asp Gly Val Thr His Ser Glu Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu
35 40 45
Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp Gly Glu Cys Arg Glu Ala
50 55 60
Val Pro Met Asp Cys Ser Arg Tyr Pro Asn Thr Thr Ser Glu Glu Gly
65 70 75 80
Lys Val Met Ile Leu Cys Asn Lys Ala Leu Asn Pro Val Cys Gly Thr
85 90 95
Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Val Leu Cys Ala His Asn Leu
100 105 110
Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys His Asp Gly Glu Cys Arg Lys
115 120 125
Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Ala
130 135 140
Cys Thr Leu Glu Tyr Arg Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr
145 150 155 160
Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
180 185
<210> 11
<211> 237
<212> PRT
<213> 火鸡
<400> 11
Met Gln Thr Ile Thr Trp Arg Gln Pro Gln Gly Asp His Leu Arg Ser
1 5 10 15
Arg Ala Pro Ala Ala Thr Cys Arg Ala Gly Gln Tyr Leu Thr Met Ala
20 25 30
Met Ala Gly Ile Phe Val Leu Phe Ser Phe Ala Leu Cys Gly Phe Leu
35 40 45
Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn
50 55 60
Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Thr Glu Asp Leu
65 70 75 80
Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr His Ser Glu Cys Leu Leu
85 90 95
Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp
100 105 110
Gly Glu Cys Arg Glu Ala Val Pro Met Asp Cys Ser Arg Tyr Pro Asn
115 120 125
Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Met Ile Leu Cys Asn Lys Ala Leu
130 135 140
Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Val
145 150 155 160
Leu Cys Ala His Asn Leu Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys His
165 170 175
Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Asp Cys Ser Glu Tyr
180 185 190
Pro Lys Pro Ala Cys Thr Leu Glu Tyr Arg Pro Leu Cys Gly Ser Asp
195 200 205
Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Glu
210 215 220
Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
225 230 235
<210> 12
<211> 128
<212> PRT
<213> 灰胸竹鸡
<400> 12
Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Ile Lys His Asn Gly Glu Cys Lys Glu
1 5 10 15
Thr Val Pro Met Asp Cys Ser Arg Tyr Ala Asn Met Thr Asn Glu Glu
20 25 30
Gly Lys Val Met Met Pro Cys Asp Arg Thr Tyr Asn Pro Val Cys Gly
35 40 45
Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Gln Leu Cys Ala His Asn
50 55 60
Val Glu Gln Gly Thr Ser Val Asp Lys Lys His Asp Gly Val Cys Gly
65 70 75 80
Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro
85 90 95
Glu Cys Thr Ala Glu Glu Arg Pro Ile Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr
100 105 110
Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Tyr Val Gln Pro
115 120 125
<210> 13
<211> 195
<212> PRT
<213> 鳞斑翎鹑
<400> 13
Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Asp
1 5 10 15
Val Leu Ala Cys Thr Lys Glu Leu His Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly
20 25 30
Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys Leu Leu Cys Tyr Tyr Asn Ile Glu Tyr
35 40 45
Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp Gly Glu Cys Thr Glu Ala Val
50 55 60
Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr Pro Asn Thr Thr Ser Glu Glu Gly Lys
65 70 75 80
Val Leu Ile Pro Cys Asn Arg Asp Phe Asn Pro Val Cys Gly Ser Asp
85 90 95
Gly Val Thr Tyr Glu Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Asn Val Glu
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu
115 120 125
Phe Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Cys
130 135 140
Thr Leu Glu Tyr Arg Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Ala
145 150 155 160
Ser Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Ile Trp Glu Gln Glu Lys
165 170 175
Asn Thr Arg His His Ala Ser His Ser Val Phe Phe Ile Ser Ala Arg
180 185 190
Leu Val Cys
195
<210> 14
<211> 339
<212> PRT
<213> 山齿鹑
<400> 14
Met Leu Pro Leu Gly Leu Arg Glu Tyr Gly Thr Asn Thr Ser Lys Glu
1 5 10 15
His Asp Gly Glu Cys Thr Glu Ala Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr
20 25 30
Pro Asn Thr Thr Ser Glu Glu Gly Lys Val Arg Ile Leu Cys Lys Lys
35 40 45
Asp Ile Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ser His Ser Val Gly Gln Gly Ala Ser Ile Asp Lys
65 70 75 80
Lys His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Phe Ala Ala Val Ser Val Asp
85 90 95
Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Met Ser Glu Tyr Arg Pro Leu
100 105 110
Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Val Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn
115 120 125
Ala Val Val Tyr Val Gln Pro Trp Leu His Ser Arg Cys Arg Leu Pro
130 135 140
Pro Thr Gly Thr Ser Phe Leu Gly Ser Glu Gly Arg Glu Thr Ser Leu
145 150 155 160
Leu Thr Ser Arg Ala Thr Asp Leu Gln Val Ala Gly Cys Thr Ala Ile
165 170 175
Ser Ala Met Glu Ala Thr Arg Ala Ala Ala Leu Leu Gly Leu Val Leu
180 185 190
Leu Ser Ser Phe Cys Glu Leu Ser His Leu Cys Phe Ser Gln Ala Ser
195 200 205
Cys Asp Val Tyr Arg Leu Ser Gly Ser Arg Asn Leu Ala Cys Pro Arg
210 215 220
Ile Phe Gln Pro Val Cys Gly Thr Asp Asn Val Thr Tyr Pro Asn Glu
225 230 235 240
Cys Ser Leu Cys Arg Gln Met Leu Arg Ser Arg Ala Val Tyr Lys Lys
245 250 255
His Asp Gly Arg Cys Val Lys Val Asp Cys Thr Gly Tyr Met Arg Ala
260 265 270
Thr Gly Gly Leu Gly Thr Ala Cys Ser Gln Gln Tyr Ser Pro Leu Tyr
275 280 285
Ala Thr Asn Gly Val Ile Tyr Ser Asn Lys Cys Thr Phe Cys Ser Ala
290 295 300
Val Ala Asn Gly Glu Asp Ile Asp Leu Leu Ala Val Lys Tyr Pro Glu
305 310 315 320
Glu Glu Ser Trp Ile Ser Val Ser Pro Thr Pro Trp Arg Met Leu Ser
325 330 335
Ala Gly Ala
<210> 15
<211> 238
<212> PRT
<213> 中国家鹅
<400> 15
Met Ser Trp Trp Gly Ile Lys Pro Ala Leu Glu Arg Pro Ser Gln Glu
1 5 10 15
Gln Ser Thr Ser Gly Gln Pro Val Asp Ser Gly Ser Thr Ser Thr Thr
20 25 30
Thr Met Ala Gly Ile Phe Val Leu Leu Ser Leu Val Leu Cys Cys Phe
35 40 45
Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn
50 55 60
Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Leu Cys Thr Lys Asp Leu
65 70 75 80
Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys Leu
85 90 95
Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Asp His
100 105 110
Asp Gly Glu Cys Lys Glu Ala Val Pro Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
115 120 125
Asn Met Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Met Leu Val Cys Asn Lys Met
130 135 140
Phe Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys
145 150 155 160
Met Leu Cys Ala His Asn Val Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys
165 170 175
Tyr Asp Gly Lys Cys Lys Lys Glu Val Ala Thr Val Asp Cys Ser Asp
180 185 190
Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Thr Val Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser
195 200 205
Asp Asn Lys Thr Tyr Asp Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val
210 215 220
Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
225 230 235
<210> 16
<211> 284
<212> PRT
<213> 中国家鹅
<400> 16
Met Ser Ser Gln Asn Gln Leu His Arg Arg Arg Arg Pro Leu Pro Gly
1 5 10 15
Gly Gln Asp Leu Asn Lys Tyr Tyr Trp Pro His Cys Thr Ser Asp Arg
20 25 30
Phe Ser Trp Leu Leu His Val Thr Ala Glu Gln Phe Arg His Cys Val
35 40 45
Cys Ile Tyr Leu Gln Pro Ala Leu Glu Arg Pro Ser Gln Glu Gln Ser
50 55 60
Thr Ser Gly Gln Pro Val Asp Ser Gly Ser Thr Ser Thr Thr Thr Met
65 70 75 80
Ala Gly Ile Phe Val Leu Leu Ser Leu Val Leu Cys Cys Phe Pro Asp
85 90 95
Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Thr Thr
100 105 110
Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Leu Cys Thr Lys Asp Leu Ser Pro
115 120 125
Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys Leu Leu Cys
130 135 140
Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Asp His Asp Gly
145 150 155 160
Glu Cys Lys Glu Ala Val Pro Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro Asn Met
165 170 175
Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Met Leu Val Cys Asn Lys Met Phe Ser
180 185 190
Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Met Leu
195 200 205
Cys Ala His Asn Val Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys Tyr Asp
210 215 220
Gly Lys Cys Lys Lys Glu Val Ala Thr Val Asp Cys Ser Asp Tyr Pro
225 230 235 240
Lys Pro Ala Cys Thr Val Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn
245 250 255
Lys Thr Tyr Asp Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Asp Ser
260 265 270
Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
275 280
<210> 17
<211> 186
<212> PRT
<213> 日本鹌鹑
<400> 17
Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly
1 5 10 15
Lys Asp Glu Val Val Cys Pro Asp Glu Leu Arg Leu Ile Cys Gly Thr
20 25 30
Asp Gly Val Thr Tyr Asn His Glu Cys Met Leu Cys Phe Tyr Asn Lys
35 40 45
Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu Gln Asp Gly Glu Cys Gly Glu
50 55 60
Thr Val Pro Met Asp Cys Ser Arg Tyr Pro Asn Thr Thr Ser Glu Asp
65 70 75 80
Gly Lys Val Thr Ile Leu Cys Thr Lys Asp Phe Ser Phe Val Cys Gly
85 90 95
Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Met Leu Cys Ala His Asn
100 105 110
Val Val Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys His Asp Gly Glu Cys Arg
115 120 125
Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro
130 135 140
Ala Cys Pro Lys Asp Tyr Arg Pro Val Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr
145 150 155 160
Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Asn His Phe Gly Lys Cys
180 185
<210> 18
<211> 210
<212> PRT
<213> 日本鹌鹑
<400> 18
Met Ala Met Ala Gly Val Phe Leu Leu Phe Ser Phe Ala Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Asp Glu Val Val Cys Pro Asp
35 40 45
Glu Leu Arg Leu Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asn His Glu
50 55 60
Cys Met Leu Cys Phe Tyr Asn Lys Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys
65 70 75 80
Glu Gln Asp Gly Glu Cys Gly Glu Thr Val Pro Met Asp Cys Ser Arg
85 90 95
Tyr Pro Asn Thr Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Thr Ile Leu Cys Thr
100 105 110
Lys Asp Phe Ser Phe Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Met Leu Cys Ala His Asn Ile Val Gln Gly Thr Ser Val Gly
130 135 140
Lys Lys His Asp Gly Glu Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val
145 150 155 160
Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Pro Lys Asp Tyr Arg Pro
165 170 175
Val Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys
180 185 190
Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Asn His Phe Gly
195 200 205
Lys Cys
210
<210> 19
<211> 205
<212> PRT
<213> 绿头鸭
<400> 19
Met Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Leu Val Leu Cys Cys Phe Pro
1 5 10 15
Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Thr
20 25 30
Thr Asn Glu Glu Gly Lys Asp Val Leu Leu Cys Thr Lys Glu Leu Ser
35 40 45
Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys Leu Leu
50 55 60
Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Asp His Asp
65 70 75 80
Gly Glu Cys Lys Glu Ala Val Pro Ala Asp Cys Ser Met Tyr Pro Asn
85 90 95
Met Thr Asn Glu Glu Gly Lys Met Thr Leu Leu Cys Asn Lys Met Phe
100 105 110
Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Met
115 120 125
Leu Cys Ala His Asn Val Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys Tyr
130 135 140
Asp Gly Lys Cys Lys Lys Glu Val Ala Thr Val Asp Cys Ser Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Pro Ala Cys Thr Met Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser Asp
165 170 175
Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Asp
180 185 190
Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Glu Cys
195 200 205
<210> 20
<211> 171
<212> PRT
<213> 绿头鸭
<400> 20
Gln Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys
1 5 10 15
Glu Val Leu Leu Cys Thr Lys Glu Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp
20 25 30
Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu
35 40 45
Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Asp His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Ala
50 55 60
Val Pro Ala Asp Cys Ser Met Tyr Pro Asn Met Thr Asn Glu Glu Gly
65 70 75 80
Lys Met Thr Leu Leu Cys Asn Lys Met Phe Ser Pro Val Cys Gly Thr
85 90 95
Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Met Leu Cys Ala His Asn Val
100 105 110
Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys Tyr Asp Gly Lys Cys Lys Lys
115 120 125
Glu Val Ala Thr Val Ser Val Asp Cys Ser Gly Tyr Pro Lys Pro Ala
130 135 140
Cys Thr Met Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr
145 150 155 160
Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val
165 170
<210> 21
<211> 207
<212> PRT
<213> 仓鸮
<400> 21
Met Thr Met Pro Gly Ala Phe Val Val Leu Ser Phe Val Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Thr Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Ser Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Asn Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Tyr
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Phe Val Pro Val Asn Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Met Leu Ile Cys Asn Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Leu Leu Cys Ala His Asn Leu Glu Pro Gly Thr Ser Val Gly Lys
130 135 140
Lys Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Glu Ser Met Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val Asp Ser Asn Glu Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 22
<211> 207
<212> PRT
<213> 东非冕鹤肯尼亚亚种
<400> 22
Met Thr Met Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Ala Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Val Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Ser Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Val Met Leu Cys Ser Lys
100 105 110
Asp Leu Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Val Leu Cys Ala His Asn Val Glu Ser Gly Thr Ser Val Gly Lys
130 135 140
Lys Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Thr Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Thr Leu Glu Tyr Met Pro Phe Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 23
<211> 207
<212> PRT
<213> 红头美洲鹫
<400> 23
Met Thr Thr Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Ala Leu Cys Ser
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Phe Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Asp Gly Lys Val Val Leu Leu Cys Asn Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Leu Leu Cys Ala Arg Asn Leu Glu Pro Gly Thr Ser Val Gly Lys
130 135 140
Lys Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 24
<211> 207
<212> PRT
<213> 大杜鹃
<400> 24
Met Thr Thr Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Thr Leu Cys Ser
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Pro Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Asn Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Leu Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Asp
65 70 75 80
Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Glu Val Ala Pro Val Asp Cys Ser Arg His
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Glu Leu Leu Cys Asn Lys
100 105 110
Asp Leu Asn Pro Ile Cys Gly Thr Asn Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Leu Leu Cys Ala Arg Asn Leu Glu Ser Gly Thr Ser Ile Gly Lys
130 135 140
Lys Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Thr Leu Glu Glu Met Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 25
<211> 207
<212> PRT
<213> 卡氏夜鹰
<400> 25
Met Thr Thr Ala Val Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Ala Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Ser Thr Asn Glu Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Pro Lys Ile
35 40 45
Leu Gly Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Gln Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Ile Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Val Phe Leu Cys Asn Lys
100 105 110
Asn Phe Asp Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Asp Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Met Leu Cys Ala Arg Ser Leu Glu Pro Gly Thr Thr Val Gly Lys
130 135 140
Lys His Asp Gly Glu Cys Lys Arg Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Thr Cys Ser Ala Glu Asp Met Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser Arg Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 26
<211> 207
<212> PRT
<213> 红腿叫鹤
<400> 26
Met Thr Met Thr Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Ala Ile Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Val Val Pro Val Asp Cys Ser Lys Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Val Leu Leu Cys Ser Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Leu Leu Cys Ala Arg Asn Leu Glu Pro Gly Ser Ser Val Gly Lys
130 135 140
Lys Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Ile Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Asp Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 27
<211> 207
<212> PRT
<213> 阿德利企鹅
<400> 27
Met Thr Thr Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Val Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Val Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Val Val Pro Val Asn Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Val Leu Arg Cys Ser Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Leu Met Cys Ala Arg Asn Leu Glu Pro Gly Ala Val Val Gly Lys
130 135 140
Asn Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 28
<211> 207
<212> PRT
<213> 朱鹮
<400> 28
Met Thr Thr Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Ile Ala Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Ala Tyr Ser
20 25 30
Asn Thr Thr Ser Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Ser Cys Thr Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Val Val Ser Val Asp Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Ala Val Leu Leu Cys Asn Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Leu Leu Cys Ala His Asn Leu Glu Pro Gly Thr Ser Val Gly Lys
130 135 140
Lys Tyr Asp Gly Ala Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Thr Leu Glu Tyr Leu Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asp Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 29
<211> 206
<212> PRT
<213> 白尾鹲
<400> 29
Met Thr Thr Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Ala Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Thr Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Val Val Pro Val Asp Cys Ser Lys Tyr Pro
85 90 95
Asn Thr Thr Asn Glu Asp Gly Lys Val Val Leu Leu Cys Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Arg Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys
115 120 125
Leu Met Cys Ala His Asn Leu Glu Pro Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys
130 135 140
His Asp Gly Glu Cys Gln Lys Glu Val Ala Thr Val Asp Cys Ser Asp
145 150 155 160
Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser
165 170 175
Asp Gly Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val
180 185 190
Asn Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Glu Lys Cys
195 200 205
<210> 30
<211> 213
<212> PRT
<213> 虎皮鹦鹉
<400> 30
Met Thr Thr Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Val Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Phe Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr
20 25 30
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Ala Lys
35 40 45
Ile Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ala His Asn Ile Glu Asn Gly Thr Asn Val Gly Lys
65 70 75 80
Asp His Asp Gly Lys Cys Lys Glu Ala Val Pro Val Asp Cys Ser Arg
85 90 95
Tyr Pro Asn Thr Thr Asp Glu Glu Gly Lys Val Val Leu Leu Cys Asn
100 105 110
Lys Asp Val Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Asn Leu Glu Ala Gly Thr Ser Val Asp
130 135 140
Lys Lys Asn Asp Ser Glu Cys Lys Thr Glu Asp Thr Thr Leu Ala Ala
145 150 155 160
Val Ser Val Asp Cys Ser Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Thr Leu Glu
165 170 175
Tyr Leu Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys
180 185 190
Arg Phe Cys Asn Ala Val Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser
195 200 205
Arg Phe Gly Lys Cys
210
<210> 31
<211> 207
<212> PRT
<213> 凤头鸊鷉
<400> 31
Met Thr Thr Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Ala Leu Cys Cys
1 5 10 15
Ser Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Ala Cys Thr Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Met Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Lys Cys Lys Glu Val Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Val Leu Leu Cys Asn Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Leu Leu Cys Ala Arg Asn Leu Glu Pro Gly Ala Ser Val Gly Lys
130 135 140
Lys Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Glu His Met Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Thr Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 32
<211> 207
<212> PRT
<213> 暴风鹱
<400> 32
Met Thr Thr Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Ala Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Arg Glu Val Leu Val Cys Thr Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Val Ala Pro Val Gly Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Val Leu Leu Cys Asn Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Leu Leu Cys Ala Arg His Leu Glu Pro Gly Thr Ser Val Gly Lys
130 135 140
Lys Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Leu Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 33
<211> 207
<212> PRT
<213> 帝企鹅
<400> 33
Met Thr Thr Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Ala Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Val Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Val Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Val Leu Arg Cys Asn Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Leu Met Cys Ala Arg Asn Leu Glu Pro Gly Ala Ile Val Gly Lys
130 135 140
Lys Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Ile Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 34
<211> 207
<212> PRT
<213> 阿德利企鹅
<400> 34
Met Thr Thr Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Val Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Val Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr Lys Ile
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Val Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Val Leu Arg Cys Ser Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Leu Met Cys Ala Arg Asn Leu Glu Pro Gly Ala Val Val Gly Lys
130 135 140
Asn Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 35
<211> 282
<212> PRT
<213> 帝企鹅
<400> 35
Met Ser Ser Gln Asn Gln Leu Pro Ser Arg Cys Arg Pro Leu Pro Gly
1 5 10 15
Ser Gln Asp Leu Asn Lys Tyr Tyr Gln Pro His Cys Thr Gly Asp Arg
20 25 30
Phe Cys Trp Leu Phe Tyr Val Thr Val Glu Gln Phe Arg His Cys Ile
35 40 45
Cys Ile Tyr Leu Gln Leu Ala Leu Glu Arg Pro Ser His Glu Gln Ser
50 55 60
Gly Gln Pro Ala Asp Ser Arg Asn Thr Ser Thr Met Thr Thr Ala Gly
65 70 75 80
Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Ala Leu Cys Cys Phe Pro Asp Ala Val
85 90 95
Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro Asn Thr Thr Asn Glu
100 105 110
Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr Lys Ile Leu Ser Pro Ile Cys
115 120 125
Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala Tyr
130 135 140
Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp His Asp Gly Glu Cys
145 150 155 160
Lys Glu Val Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr Pro Asn Thr Thr Asn
165 170 175
Glu Glu Gly Lys Val Val Leu Arg Cys Asn Lys Asp Leu Ser Pro Val
180 185 190
Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Leu Met Cys Ala
195 200 205
Arg Asn Leu Glu Pro Gly Ala Ile Val Gly Lys Lys Tyr Asp Gly Glu
210 215 220
Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser Asp Tyr Pro Lys Pro
225 230 235 240
Val Cys Ser Leu Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser Asp Ser Lys Thr
245 250 255
Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Asp Ser Asn Gly
260 265 270
Thr Leu Ile Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
275 280
<210> 36
<211> 193
<212> PRT
<213> 卡氏夜鹰
<400> 36
Met Thr Thr Ala Val Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Ala Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro
20 25 30
Asn Ser Thr Asn Glu Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Pro Lys Ile
35 40 45
Leu Gly Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Gln Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Ile Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Val Phe Leu Cys Asn Lys
100 105 110
Asn Phe Asp Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Asp Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Met Leu Cys Ala Arg Ser Leu Glu Pro Gly Thr Thr Val Gly Lys
130 135 140
Lys His Asp Gly Glu Cys Lys Arg Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Pro Lys Pro Thr Cys Ser Ala Glu Asp Met Pro Leu Cys Gly
165 170 175
Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val
180 185 190
Val
<210> 37
<211> 190
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 37
Glu Ala Glu Ala Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Ala Thr
1 5 10 15
Asp Lys Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys Asp Leu Arg Pro
20 25 30
Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp Cys Leu Leu Cys
35 40 45
Ala Tyr Ser Ile Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp Gly
50 55 60
Glu Cys Lys Glu Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser Tyr Ala Asn Thr
65 70 75 80
Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn Arg Ala Phe Asn
85 90 95
Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Leu Leu
100 105 110
Cys Ala His Lys Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp Lys Arg His Asp
115 120 125
Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu
130 135 140
Tyr Pro Lys Pro Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro Leu Cys Gly Ser
145 150 155 160
Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val
165 170 175
Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
180 185 190
<210> 38
<211> 199
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 38
Glu Glu Gly Val Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala Ala Glu Val
1 5 10 15
Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Ala Thr Asp Lys Glu Gly Lys Asp Val
20 25 30
Leu Val Cys Asn Lys Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val
35 40 45
Thr Tyr Thr Asn Asp Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Ile Glu Phe Gly
50 55 60
Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Thr Val Pro
65 70 75 80
Met Asn Cys Ser Ser Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val
85 90 95
Met Val Leu Cys Asn Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly
100 105 110
Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys Val Glu Gln
115 120 125
Gly Ala Ser Val Asp Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu
130 135 140
Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Cys Thr
145 150 155 160
Ala Glu Asp Arg Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn
165 170 175
Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr
180 185 190
Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195
<210> 39
<211> 275
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 39
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
20 25 30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
35 40 45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
50 55 60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65 70 75 80
Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg
85 90 95
Phe Pro Asn Ala Thr Asp Lys Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Asn
100 105 110
Lys Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn
115 120 125
Asp Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Ile Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser
130 135 140
Lys Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Thr Val Pro Met Asn Cys Ser
145 150 155 160
Ser Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Met Val Leu Cys
165 170 175
Asn Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp
180 185 190
Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys Val Glu Gln Gly Ala Ser Val
195 200 205
Asp Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser
210 215 220
Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg
225 230 235 240
Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe
245 250 255
Cys Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe
260 265 270
Gly Lys Cys
275
<210> 40
<211> 273
<212> PRT
<213> 红头美洲鹫
<400> 40
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
20 25 30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
35 40 45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
50 55 60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65 70 75 80
Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala Val Glu Val Asp Cys Ser Thr
85 90 95
Tyr Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr
100 105 110
Lys Ile Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser
130 135 140
Lys Asp His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Phe Val Pro Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Arg Tyr Pro Asn Thr Thr Asn Glu Asp Gly Lys Val Val Leu Leu Cys
165 170 175
Asn Lys Asp Leu Ser Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp
180 185 190
Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala Arg Asn Leu Glu Pro Gly Thr Ser Val
195 200 205
Gly Lys Lys Tyr Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp
210 215 220
Cys Ser Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Glu Tyr Met Pro Leu
225 230 235 240
Cys Gly Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn
245 250 255
Ala Val Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys
260 265 270
Cys
<210> 41
<211> 188
<212> PRT
<213> 红头美洲鹫
<400> 41
Glu Ala Glu Ala Val Glu Val Asp Cys Ser Thr Tyr Pro Asn Thr Thr
1 5 10 15
Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr Lys Ile Leu Ser Pro
20 25 30
Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys Leu Leu Cys
35 40 45
Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp His Asp Gly
50 55 60
Glu Cys Lys Glu Phe Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr Pro Asn Thr
65 70 75 80
Thr Asn Glu Asp Gly Lys Val Val Leu Leu Cys Asn Lys Asp Leu Ser
85 90 95
Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Leu Leu
100 105 110
Cys Ala Arg Asn Leu Glu Pro Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys Tyr Asp
115 120 125
Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Ser Asp Tyr Pro
130 135 140
Lys Pro Val Cys Ser Leu Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser Asp Ser
145 150 155 160
Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Asp Ser
165 170 175
Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
180 185
<210> 42
<211> 206
<212> PRT
<213> 安氏蜂鸟
<400> 42
Met Thr Met Ala Gly Val Phe Val Leu Leu Ser Phe Ile Leu Cys Cys
1 5 10 15
Phe Pro Asp Thr Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Ile Tyr Pro
20 25 30
Asn Thr Thr Ser Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr Glu Thr
35 40 45
Leu Ser Pro Ile Cys Gly Ser Asp Gly Val Thr Tyr Asn Asn Glu Cys
50 55 60
Gln Leu Cys Ala Tyr Asn Val Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Ile Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Glu Glu Gly Arg Val Val Met Leu Cys Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys
115 120 125
Leu Leu Cys Ala Arg Asn Leu Glu Ser Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys
130 135 140
Phe Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Thr Asp
145 150 155 160
Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Asp Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser
165 170 175
Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Met
180 185 190
Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Asn His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 43
<211> 272
<212> PRT
<213> 安氏蜂鸟
<400> 43
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
20 25 30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
35 40 45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
50 55 60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65 70 75 80
Ser Leu Asp Lys Arg Glu Ala Glu Ala Val Glu Val Asp Cys Ser Ile
85 90 95
Tyr Pro Asn Thr Thr Ser Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr
100 105 110
Glu Thr Leu Ser Pro Ile Cys Gly Ser Asp Gly Val Thr Tyr Asn Asn
115 120 125
Glu Cys Gln Leu Cys Ala Tyr Asn Val Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser
130 135 140
Lys Asp His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Ile Val Pro Val Asp Cys Ser
145 150 155 160
Arg Tyr Pro Asn Thr Thr Glu Glu Gly Arg Val Val Met Leu Cys Asn
165 170 175
Lys Ala Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
180 185 190
Glu Cys Leu Leu Cys Ala Arg Asn Leu Glu Ser Gly Thr Ser Val Gly
195 200 205
Lys Lys Phe Asp Gly Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys
210 215 220
Thr Asp Tyr Pro Lys Pro Val Cys Ser Leu Asp Tyr Met Pro Leu Cys
225 230 235 240
Gly Ser Asp Ser Lys Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala
245 250 255
Val Met Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Asn His Phe Gly Lys Cys
260 265 270
<210> 44
<211> 187
<212> PRT
<213> 安氏蜂鸟
<400> 44
Glu Ala Glu Ala Val Glu Val Asp Cys Ser Ile Tyr Pro Asn Thr Thr
1 5 10 15
Ser Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Val Cys Thr Glu Thr Leu Ser Pro
20 25 30
Ile Cys Gly Ser Asp Gly Val Thr Tyr Asn Asn Glu Cys Gln Leu Cys
35 40 45
Ala Tyr Asn Val Glu Tyr Gly Thr Asn Val Ser Lys Asp His Asp Gly
50 55 60
Glu Cys Lys Glu Ile Val Pro Val Asp Cys Ser Arg Tyr Pro Asn Thr
65 70 75 80
Thr Glu Glu Gly Arg Val Val Met Leu Cys Asn Lys Ala Leu Ser Pro
85 90 95
Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Leu Leu Cys
100 105 110
Ala Arg Asn Leu Glu Ser Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys Phe Asp Gly
115 120 125
Glu Cys Lys Lys Glu Ile Ala Thr Val Asp Cys Thr Asp Tyr Pro Lys
130 135 140
Pro Val Cys Ser Leu Asp Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser Asp Ser Lys
145 150 155 160
Thr Tyr Ser Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Met Asp Ser Asn
165 170 175
Gly Thr Leu Thr Leu Asn His Phe Gly Lys Cys
180 185
<210> 45
<211> 218
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 45
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
20 25 30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
35 40 45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
50 55 60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65 70 75 80
Ser Leu Asp Lys Arg Glu Ala Glu Ala Lys Val Phe Gly Arg Cys Glu
85 90 95
Leu Ala Ala Ala Met Lys Arg His Gly Leu Asp Asn Tyr Arg Gly Tyr
100 105 110
Ser Leu Gly Asn Trp Val Cys Ala Ala Lys Phe Glu Ser Asn Phe Asn
115 120 125
Thr Gln Ala Thr Asn Arg Asn Thr Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Gly Ile
130 135 140
Leu Gln Ile Asn Ser Arg Trp Trp Cys Asn Asp Gly Arg Thr Pro Gly
145 150 155 160
Ser Arg Asn Leu Cys Asn Ile Pro Cys Ser Ala Leu Leu Ser Ser Asp
165 170 175
Ile Thr Ala Ser Val Asn Cys Ala Lys Lys Ile Val Ser Asp Gly Asn
180 185 190
Gly Met Asn Ala Trp Val Ala Trp Arg Asn Arg Cys Lys Gly Thr Asp
195 200 205
Val Gln Ala Trp Ile Arg Gly Cys Arg Leu
210 215
<210> 46
<211> 133
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 46
Glu Ala Glu Ala Lys Val Phe Gly Arg Cys Glu Leu Ala Ala Ala Met
1 5 10 15
Lys Arg His Gly Leu Asp Asn Tyr Arg Gly Tyr Ser Leu Gly Asn Trp
20 25 30
Val Cys Ala Ala Lys Phe Glu Ser Asn Phe Asn Thr Gln Ala Thr Asn
35 40 45
Arg Asn Thr Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Gly Ile Leu Gln Ile Asn Ser
50 55 60
Arg Trp Trp Cys Asn Asp Gly Arg Thr Pro Gly Ser Arg Asn Leu Cys
65 70 75 80
Asn Ile Pro Cys Ser Ala Leu Leu Ser Ser Asp Ile Thr Ala Ser Val
85 90 95
Asn Cys Ala Lys Lys Ile Val Ser Asp Gly Asn Gly Met Asn Ala Trp
100 105 110
Val Ala Trp Arg Asn Arg Cys Lys Gly Thr Asp Val Gln Ala Trp Ile
115 120 125
Arg Gly Cys Arg Leu
130
<210> 47
<211> 129
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 47
Lys Val Phe Gly Arg Cys Glu Leu Ala Ala Ala Met Lys Arg His Gly
1 5 10 15
Leu Asp Asn Tyr Arg Gly Tyr Ser Leu Gly Asn Trp Val Cys Ala Ala
20 25 30
Lys Phe Glu Ser Asn Phe Asn Thr Gln Ala Thr Asn Arg Asn Thr Asp
35 40 45
Gly Ser Thr Asp Tyr Gly Ile Leu Gln Ile Asn Ser Arg Trp Trp Cys
50 55 60
Asn Asp Gly Arg Thr Pro Gly Ser Arg Asn Leu Cys Asn Ile Pro Cys
65 70 75 80
Ser Ala Leu Leu Ser Ser Asp Ile Thr Ala Ser Val Asn Cys Ala Lys
85 90 95
Lys Ile Val Ser Asp Gly Asn Gly Met Asn Ala Trp Val Ala Trp Arg
100 105 110
Asn Arg Cys Lys Gly Thr Asp Val Gln Ala Trp Ile Arg Gly Cys Arg
115 120 125
Leu
<210> 48
<211> 129
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 48
Lys Val Phe Gly Arg Cys Glu Leu Ala Ala Ala Met Lys Arg His Gly
1 5 10 15
Leu Asp Asn Tyr Arg Gly Tyr Ser Leu Gly Asn Trp Val Cys Val Ala
20 25 30
Lys Phe Glu Ser Asn Phe Asn Thr Gln Ala Thr Asn Arg Asn Thr Asp
35 40 45
Gly Ser Thr Asp Tyr Gly Ile Leu Gln Ile Asn Ser Arg Trp Trp Cys
50 55 60
Asn Asp Gly Arg Thr Pro Gly Ser Arg Asn Leu Cys Asn Ile Pro Cys
65 70 75 80
Ser Ala Leu Leu Ser Ser Asp Ile Thr Ala Ser Val Asn Cys Ala Lys
85 90 95
Lys Ile Val Ser Asp Gly Asn Gly Met Ser Ala Trp Val Ala Trp Arg
100 105 110
Asn Arg Cys Lys Gly Thr Asp Val Gln Ala Trp Ile Arg Gly Cys Arg
115 120 125
Leu
<210> 49
<211> 130
<212> PRT
<213> 智人
<400> 49
Lys Val Phe Glu Arg Cys Glu Leu Ala Arg Thr Leu Lys Arg Leu Gly
1 5 10 15
Met Asp Gly Tyr Arg Gly Ile Ser Leu Ala Asn Trp Met Cys Leu Ala
20 25 30
Lys Trp Glu Ser Gly Tyr Asn Thr Arg Ala Thr Asn Tyr Asn Ala Gly
35 40 45
Asp Arg Ser Thr Asp Tyr Gly Ile Phe Gln Ile Asn Ser Arg Tyr Trp
50 55 60
Cys Asn Asp Gly Lys Thr Pro Gly Ala Val Asn Ala Cys His Leu Ser
65 70 75 80
Cys Ser Ala Leu Leu Gln Asp Asn Ile Ala Asp Ala Val Ala Cys Ala
85 90 95
Lys Arg Val Val Arg Asp Pro Gln Gly Ile Arg Ala Trp Val Ala Trp
100 105 110
Arg Asn Arg Cys Gln Asn Arg Asp Val Arg Gln Tyr Val Gln Gly Cys
115 120 125
Gly Val
130
<210> 50
<211> 129
<212> PRT
<213> 牛
<400> 50
Lys Val Phe Glu Arg Cys Glu Leu Ala Arg Thr Leu Lys Lys Leu Gly
1 5 10 15
Leu Asp Gly Tyr Lys Gly Val Ser Leu Ala Asn Trp Leu Cys Leu Thr
20 25 30
Lys Trp Glu Ser Ser Tyr Asn Thr Lys Ala Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
35 40 45
Ser Glu Ser Thr Asp Tyr Gly Ile Phe Gln Ile Asn Ser Lys Trp Trp
50 55 60
Cys Asn Asp Gly Lys Thr Pro Asn Ala Val Asp Gly Cys His Val Ser
65 70 75 80
Cys Arg Glu Leu Met Glu Asn Asp Ile Ala Lys Ala Val Ala Cys Ala
85 90 95
Lys His Ile Val Ser Glu Gln Gly Ile Thr Ala Trp Val Ala Trp Lys
100 105 110
Ser His Cys Arg Asp His Asp Val Ser Ser Tyr Val Glu Gly Cys Thr
115 120 125
Leu
<210> 51
<211> 147
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 51
Met Arg Ser Leu Leu Ile Leu Val Leu Cys Phe Leu Pro Leu Ala Ala
1 5 10 15
Leu Gly Lys Val Phe Gly Arg Cys Glu Leu Ala Ala Ala Met Lys Arg
20 25 30
His Gly Leu Asp Asn Tyr Arg Gly Tyr Ser Leu Gly Asn Trp Val Cys
35 40 45
Ala Ala Lys Phe Glu Ser Asn Phe Asn Thr Gln Ala Thr Asn Arg Asn
50 55 60
Thr Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Gly Ile Leu Gln Ile Asn Ser Arg Trp
65 70 75 80
Trp Cys Asn Asp Gly Arg Thr Pro Gly Ser Arg Asn Leu Cys Asn Ile
85 90 95
Pro Cys Ser Ala Leu Leu Ser Ser Asp Ile Thr Ala Ser Val Asn Cys
100 105 110
Ala Lys Lys Ile Val Ser Asp Gly Asn Gly Met Asn Ala Trp Val Ala
115 120 125
Trp Arg Asn Arg Cys Lys Gly Thr Asp Val Gln Ala Trp Ile Arg Gly
130 135 140
Cys Arg Leu
145
<210> 52
<211> 321
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 52
Met Ala Lys Ala Asp Gly Ser Leu Leu Tyr Tyr Asn Pro His Asn Pro
1 5 10 15
Pro Arg Arg Tyr Tyr Phe Tyr Met Ala Ile Phe Ala Val Ser Val Ile
20 25 30
Cys Val Leu Tyr Gly Pro Ser Gln Gln Leu Ser Ser Pro Lys Ile Asp
35 40 45
Ala Ser Ala Pro Ala Pro Val Lys Gln Gly Pro Thr Ser Val Ala Tyr
50 55 60
Val Glu Val Asn Asn Asn Ser Met Leu Asn Val Gly Lys Tyr Thr Leu
65 70 75 80
Ala Asp Gly Gly Gly Asn Ala Phe Asp Val Ala Val Ile Phe Ala Ala
85 90 95
Asn Ile Asn Tyr Asp Thr Gly Thr Lys Thr Ala Tyr Leu His Phe Asn
100 105 110
Glu Asn Val Gln Arg Val Leu Asp Asn Ala Val Thr Gln Ile Arg Pro
115 120 125
Leu Gln Gln Gln Gly Ile Lys Val Leu Leu Ser Val Leu Gly Asn His
130 135 140
Gln Gly Ala Gly Phe Ala Asn Phe Pro Ser Gln Gln Ala Ala Ser Ala
145 150 155 160
Phe Ala Lys Gln Leu Ser Asp Ala Val Ala Lys Tyr Gly Leu Asp Gly
165 170 175
Val Asp Phe Asp Asp Glu Tyr Ala Glu Tyr Gly Asn Asn Gly Thr Ala
180 185 190
Gln Pro Asn Asp Ser Ser Phe Val His Leu Val Thr Ala Leu Arg Ala
195 200 205
Asn Met Pro Asp Lys Ile Ile Ser Leu Tyr Asn Ile Gly Pro Ala Ala
210 215 220
Ser Arg Leu Ser Tyr Gly Gly Val Asp Val Ser Asp Lys Phe Asp Tyr
225 230 235 240
Ala Trp Asn Pro Tyr Tyr Gly Thr Trp Gln Val Pro Gly Ile Ala Leu
245 250 255
Pro Lys Ala Gln Leu Ser Pro Ala Ala Val Glu Ile Gly Arg Thr Ser
260 265 270
Arg Ser Thr Val Ala Asp Leu Ala Arg Arg Thr Val Asp Glu Gly Tyr
275 280 285
Gly Val Tyr Leu Thr Tyr Asn Leu Asp Gly Gly Asp Arg Thr Ala Asp
290 295 300
Val Ser Ala Phe Thr Arg Glu Leu Tyr Gly Ser Glu Ala Val Arg Thr
305 310 315 320
Pro
<210> 53
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 53
Glu Ala Glu Ala
1

Claims (117)

1.一种组合物，其包含重组卵类粘蛋白(rOVD)，其中所述rOVD包含至少一个糖基化的天冬酰胺残基，且所述rOVD基本上不存在N-连接甘露糖基化。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中每个糖基化天冬酰胺包含单个N-乙酰葡糖胺。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述rOVD包含至少三个糖基化的天冬酰胺残基。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中所述rOVD为分泌型的rOVD蛋白质。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述组合物为粉末。
6.根据权利要求5所述的组合物，其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物具有至少30％rOVD蛋白质、至少40％rOVD蛋白质、至少50％rOVD蛋白质、至少60％rOVD蛋白质、至少70％rOVD蛋白质、至少80％rOVD蛋白质、至少85％rOVD蛋白质、至少90％rOVD蛋白质或至少95％的rOVD蛋白质的蛋白质含量。
7.一种组合物，其包含重组卵类粘蛋白(rOVD)，其中所述组合物是为人或动物食用而配制的粉末，并且基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物具有至少70％rOVD蛋白质、至少80％rOVD蛋白质、至少85％rOVD蛋白质、至少90％rOVD蛋白质或至少95％rOVD蛋白质的蛋白质含量。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的组合物，其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述粉末包含小于15％、12％、10％、8％、6％、5％、3％、2％或1％的水分。
9.根据权利要求5-8中任一项所述的组合物，其中所述粉末包含小于30％、27％、25％、22％、20％、17％、15％、12％、10％、8％、5％、3％或1％的游离碳水化合物含量。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含选自调味品、着色剂、甜味剂、氨基酸、蛋白质、酸化剂、防腐剂和灰分的一种或多种附加成分。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含小于5％、4.5％、4％、3.5％、3％、2.5％、2％、1.5％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或0.1％的灰分。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的组合物，其中所述氨基酸选自色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸或其组合。
13.根据权利要求5-12中任一项所述的组合物，其中所述粉末能够溶于液体中。
14.一种组合物，其包含重组卵类粘蛋白(rOVD)，其中所述组合物为人或动物食用而配制的固体形式，其中所述rOVD为所述组合物提供蛋白质强化以及选自口感、质地、硬度、热处理稳定性和pH稳定性的至少一个附加特征。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述rOVD包含至少一个连接至N-乙酰氨基葡萄糖的天冬酰胺残基，并且所述rOVD基本上不存在N-连接甘露糖基化。
16.根据权利要求14或权利要求15所述的组合物，其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积和/或基于重量/组合物总体积，rOVD的浓度大于约5％、约10％、约15％、约20％或约25％。
17.根据权利要求14-16中任一项所述的组合物，其中与缺少rOVD的固体可食用组合物相比，所述rOVD基本上不会改变所述固体可食用组合物的可见外观或口感。
18.根据权利要求14-17中任一项所述的组合物，其中与含有与所述rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的固体可食用组合物相比，所述rOVD基本上不会改变所述固体可食用组合物的可见外观或口感。
19.根据权利要求14-18中任一项所述的组合物，其中与缺少rOVD的固体可食用组合物相比，所述rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级。
20.根据权利要求14-19中任一项所述的组合物，其中与含有与所述rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的可比组合物相比，所述rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级。
21.根据权利要求14-20中任一项所述的组合物，其中所述固体可食用组合物为零食棒、蛋白质棒、营养棒、能量棒或蛋白质补充剂。
22.根据权利要求14-21中任一项所述的组合物，其中所述固体可食用组合物包含选自调味品、着色剂、甜味剂、氨基酸、蛋白质、酸化剂、防腐剂和灰分的一种或多种附加成分。
23.一种组合物，其包含重组卵类粘蛋白(rOVD)，其中所述组合物是为人或动物食用而配制的液体，其中所述rOVD为所述组合物提供蛋白质强化以及选自溶解度、口感、热处理稳定性和pH稳定性的至少一个附加特征。
24.根据权利要求23所述的组合物，其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物具有包含至少15％rOVD、至少20％rOVD蛋白质、至少30％rOVD蛋白质或至少40％rOVD蛋白质的蛋白质含量。
25.根据权利要求23或权利要求24所述的组合物，其中所述组合物具有包含至少5％rOVD的蛋白质含量，且其中所述液体可食用组合物基本上是光学澄清的。
26.根据权利要求23-25中任一项所述的组合物，其中所述组合物的光学净度大于含有与所述rOVD相同浓度的乳清蛋白、大豆蛋白或豌豆蛋白的可比组合物。
27.根据权利要求23-26中任一项所述的组合物，其中与缺少rOVD的液体可食用组合物相比，所述rOVD基本上不会改变所述液体可食用组合物的可见外观或口感。
28.根据权利要求23-27中任一项所述的组合物，其中与含有与所述rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的可比组合物相比，所述rOVD基本上不会改变所述液体可食用组合物的可见外观或口感。
29.根据权利要求23-28中任一项所述的组合物，其中与缺少rOVD的液体可食用组合物相比，所述rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级。
30.根据权利要求23-29中任一项所述的组合物，其中与含有与所述rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的可比组合物相比，所述rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级。
31.根据权利要求23-30中任一项所述的组合物，其中在将所述液体可食用组合物加热至约72℃至约121℃的温度后，所述rOVD保持基本上可溶。
32.根据权利要求23-31中任一项所述的组合物，其中与乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质在与所述rOVD相同浓度下的稳定性相比，所述rOVD在热处理后的液体中具有较高的溶解度、光学净度或溶解度和光学净度两者。
33.根据权利要求23-32中任一项所述的组合物，其中所述热处理包括将液体暴露于约72℃至约121℃的温度。
34.根据权利要求23-33中任一项所述的组合物，其中所述rOVD在液体中的溶解度大于与rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的溶解度。
35.根据权利要求23-34中任一项所述的组合物，其中所述液体可食用组合物的pH为约2.0至约8.0。
36.根据权利要求14-35中任一项所述的组合物，其中所述为人或动物食用而配制的固体形式或所述为人或动物食用而配制的液体包含一种或多种选自调味品、着色剂、甜味剂、氨基酸、蛋白质、酸化剂和防腐剂的附加成分。
37.根据权利要求36所述的组合物，其中所述氨基酸选自色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸或其组合。
38.根据权利要求36所述的组合物，其中所述蛋白质是溶菌酶蛋白质。
39.根据权利要求38所述的组合物，其中所述溶菌酶蛋白质是蛋清溶菌酶(OVL)。
40.根据权利要求39所述的组合物，其中rOVD与OVL的比率为约60％rOVD:40％OVL至约82％rOVD:18％OVL。
41.根据权利要求38-40中任一项所述的组合物，其中所述溶菌酶是重组溶菌酶蛋白质。
42.根据权利要求36-41中任一项所述的组合物，其中所述蛋白质和/或氨基酸为所述固体形式或所述液体提供改善的氨基酸平衡。
43.根据权利要求36-42中任一项所述的组合物，其中蛋白质消化率校正氨基酸评分(PDCAAS)等于或大于约0.75。
44.根据权利要求43所述的组合物，其中所述PDCAAS大于或等于约0.8、0.85、0.90、0.95或所述PDCAAS为约1.0或为1.0。
45.根据权利要求39-44中任一项所述的组合物，其中所述液体可食用组合物包含rOVD和OVL，其中所述蛋白质是可溶的且所述组合物是光学澄清的。
46.根据权利要求23-45中任一项所述的组合物，其中所述液体可食用组合物为选自果汁、肉汤、汤、苏打水、软饮料、加味水、蛋白质水、强化水、碳酸水、营养饮料、能量饮料、运动饮料、恢复饮料、加热饮料、咖啡基饮料、茶基饮料、植物基奶、奶基饮料、非乳制品、植物基温和饮料、婴儿配方饮料、膳食替代饮料的饮品。
47.根据权利要求46所述的组合物，其中所述饮品包含碳酸化。
48.根据权利要求23-47中任一项所述的组合物，其中所述液体可食用组合物为糖浆，基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述糖浆包含20％rOVD蛋白质至至少60％rOVD蛋白质。
49.根据权利要求23-48中任一项所述的组合物，其中所述液体为乳液。
50.根据权利要求49所述的组合物，其中所述乳液为酱汁、肉汁或沙拉调料。
51.一种组合物，其包含重组卵类粘蛋白(rOVD)，其中所述组合物是为人或动物食用而配制的半固体形式，其中所述rOVD提供选自口感、质地、硬度、热处理稳定性和pH稳定性的至少一个附加特征。
52.根据权利要求51所述的组合物，其中所述半固体可食用组合物为粘性物、糖果、果冻、糖浆、凝胶、稠化制剂。
53.根据权利要求51或权利要求52所述的组合物，其中与缺少rOVD的半固体可食用组合物相比，所述rOVD基本上不会改变所述半固体可食用组合物的可见外观或口感。
54.根据权利要求51-53中任一项所述的组合物，其中与含有与所述rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的半固体可食用组合物相比，所述rOVD基本上不会改变所述半固体可食用组合物的可见外观或口感。
55.根据权利要求51-54中任一项所述的组合物，其中所述半固体可食用组合物的光学净度大于含有与所述rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的可比组合物。
56.根据权利要求51-55中任一项所述的组合物，其中与缺少rOVD的半固体可食用组合物相比，所述rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级。
57.根据权利要求51-56中任一项所述的组合物，其中与含有与所述rOVD相同浓度的乳清蛋白质、大豆蛋白质或豌豆蛋白质的可比组合物相比，所述rOVD基本上不会影响气味和/或味道的感官评级。
58.根据权利要求51-56中任一项所述的组合物，其中所述半固体可食用组合物包含选自调味品、着色剂、甜味剂、氨基酸、蛋白质、酸化剂和防腐剂的一种或多种附加成分。
59.根据权利要求58所述的组合物，其中所述蛋白质和/或氨基酸为所述半固体可食用组合物提供改善的氨基酸平衡。
60.根据权利要求59所述的组合物，其中所述氨基酸选自色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸或其组合。
61.根据权利要求59所述的组合物，其中所述蛋白质为溶菌酶蛋白质。
62.根据权利要求61所述的组合物，其中所述溶菌酶蛋白质为蛋清溶菌酶(OVL)。
63.根据权利要求62所述的组合物，其中rOVD与OVL的比率为约60％rOVD:40％OVL至约82％rOVD:18％OVL。
64.根据权利要求61-63中任一项所述的组合物，其中所述溶菌酶为重组溶菌酶蛋白质。
65.根据权利要求61-64中任一项所述的组合物，其中蛋白质消化率校正氨基酸评分(PDCAAS)等于或大于约0.75、0.8、0.85、0.90、0.95或PDCAAS为约1.0或为1.0。
66.根据权利要求1-65中任一项所述的组合物，其中所述rOVD包括已暴露于氧化剂或产氧剂的rOVD。
67.根据权利要求66所述的组合物，其中所述产氧剂为过氧化氢、过碳酸钠、泡沫氧、活性二氧化氯或臭氧。
68.根据权利要求1-67中任一项所述的组合物，其中所述rOVD包含天然存在于鸟类物种中的氨基酸序列。
69.根据权利要求68所述的组合物，其中所述鸟类物种为鸡、鹌鹑、火鸡、火鸡秃鹰、蜂鸟、鸭子、鸵鸟、鹅、鸥、珍珠鸡、雉鸡或鸸鹋以及其任意组合。
70.根据权利要求1-69中任一项所述的组合物，其中所述rOVD可包含SEQ ID No.1-44之一的氨基酸序列或与SEQ ID No.1-44之一具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
71.根据权利要求1-70中任一项所述的组合物，其中所述rOVD基本上是全长rOVD氨基酸序列。
72.根据权利要求1-71中任一项所述的组合物，其中所述rOVD为所述组合物提供蛋白质强化。
73.根据权利要求1-72中任一项所述的组合物，其中所述rOVD由微生物宿主细胞产生。
74.根据权利要求73所述的组合物，其中所述微生物宿主细胞为酵母、丝状真菌或细菌。
75.根据权利要求73或权利要求74所述的组合物，其中所述微生物宿主细胞为毕赤酵母属物种、酵母属物种、木霉属物种、假单胞菌物种或大肠杆菌物种。
76.根据权利要求73-75中任一项所述的组合物，其中所述微生物宿主细胞为巴斯德毕赤酵母或法夫驹形氏酵母。
77.一种可食用粉末蛋白质组合物，其包含重组卵类粘蛋白(rOVD)，其中所述组合物的蛋白质含量大于70％，其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物包含小于2％的灰分、小于20％的碳水化合物和小于1％的通过酸水解的脂肪。
78.一种可食用组合物，其包含重组卵类粘蛋白(rOVD)，其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物具有包含至少15％的rOVD蛋白质的蛋白质含量。
79.一种饮品组合物，其包含重组卵类粘蛋白(rOVD)和至少一种可食用液体，其中所述rOVD基本上可溶于所述组合物，其中所述饮品组合物基本上是光学澄清的，且其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述rOVD的浓度大于约5％。
80.根据权利要求79所述的饮品组合物，其中所述饮品选自果汁、肉汤、汤、苏打水、软饮料、加味水、蛋白质水、强化水、碳酸水、营养饮料、能量饮料、运动饮料、恢复饮料、加热饮料、咖啡基饮料、茶基饮料、植物基奶、奶基饮料、非乳制品、植物基温和饮料、婴儿配方饮料、膳食替代饮料。
81.根据权利要求79或权利要求80所述的饮品组合物，其中所述饮品包含碳酸化。
82.一种制备可食用食品制剂的方法，包括以下步骤：
提供由微生物宿主产生的重组OVD(rOVD)；
其中所述rOVD包含N-连接糖基化，并且其中所述rOVD基本上不存在N-连接甘露糖基化；
通过将所述rOVD与至少一种可食用成分组合或混合来生产制剂；
其中，所述rOVD为组合物提供蛋白质强化以及选自溶解度、光学净度、口感、质地、硬度、热处理稳定性和pH稳定性的至少一种附加特征。
83.根据权利要求82所述的方法，其中所述rOVD包含一个或多个糖基化的天冬酰胺残基，其中每个糖基化的天冬酰胺残基包含单个N-乙酰氨基葡萄糖。
84.根据权利要求82或权利要求83所述的方法，其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述可食用食品制剂中存在于的所述rOVD的量为或为约1％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％。
85.根据权利要求82-84中任一项所述的方法，其进一步包括对制剂进行热处理。
86.根据权利要求85所述的方法，其中所述热处理包括暴露于约72℃至约121℃的温度。
87.根据权利要求85或权利要求86所述的方法，其中所述热处理包括热充填、巴氏杀菌、干馏、煮沸、烘焙、炙烤和烧烤。
88.根据权利要求82-87中任一项所述的方法，其中所述制剂的pH为约2至约6。
89.根据权利要求82-88中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在微生物宿主中表达rOVD蛋白质。
90.根据权利要求89所述的方法，其中所述微生物宿主为酵母、丝状真菌或细菌。
91.根据权利要求89或权利要求90所述的方法，其中所述微生物宿主是毕赤酵母属物种、酵母属物种、木霉属物种、假单胞菌物种或大肠杆菌物种。
92.根据权利要求89-91中任一项所述的方法，其中所述微生物宿主是巴斯德毕赤酵母或法夫驹形氏酵母。
93.根据权利要求89-92中任一项所述的方法，其还包括在微生物宿主中表达酶，所述酶具有通过在N-连接糖蛋白上的高甘露糖和混合低聚糖的壳二糖核心内裂解来去除聚糖的活性。
94.根据权利要求93所述的方法，其中所述酶包含EndoH、OCH1-EndoH融合或EndoH的活性片段。
95.根据权利要求89-94中任一项所述的方法，其中所述rOVD从微生物宿主分泌，且其中所述方法还包括在将所述rOVD与至少一种可食用成分组合或混合之前分离分泌的rOVD。
96.根据权利要求95所述的方法，其中所述方法还包括将分泌的rOVD与微生物宿主分离，并将rOVD暴露于氧化剂或产氧剂。
97.根据权利要求97所述的方法，其中所述氧化剂或产氧剂为过氧化氢、过碳酸钠、活性二氧化氯、泡沫氧或臭氧。
98.根据权利要求82-97中任一项所述的方法，其还包括干燥、粉末化和/或喷雾干燥所述rOVD。
99.根据权利要求82-98中任一项所述的方法，其中所述制剂适合于人食用。
100.根据权利要求82-98中任一项所述的方法，其中所述制剂适合于动物食用。
101.一种可食用组合物，通过权利要求82-100中任一项所述的方法生产。
102.一种重组卵类粘蛋白(rOVD)蛋白质，其包含N-连接糖基化，其中所述N-连接糖基化包含N-乙酰氨基葡萄糖且基本上不存在甘露糖残基。
103.根据权利要求102所述的rOVD蛋白质，其中所述rOVD还包含O-连接糖基化。
104.根据权利要求102或权利要求103所述的rOVD蛋白质，其包含至少一个天冬酰胺残基，所述天冬酰胺残基被糖基化且具有单个N-乙酰氨基葡萄糖残基。
105.根据权利要求104所述的rOVD蛋白质，其中rOVD的至少三个天冬酰胺残基具有单个N-乙酰氨基葡萄糖残基。
106.根据权利要求102-105中任一项所述的rOVD蛋白质，其中所述rOVD蛋白质包含已暴露于氧化剂或产氧剂的rOVD。
107.根据权利要求106所述的rOVD蛋白质，其中所述氧化剂或产氧剂为过氧化氢、过碳酸钠、泡沫氧、活性二氧化氯或臭氧。
108.一种组合物，其包含根据权利要求102-107中任一项所述的rOVD蛋白质，其中所述组合物为粉末形式，且其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物具有约70％或更高的蛋白质含量。
109.根据权利要求108所述的组合物，其中基于重量/重量和/或基于重量/组合物总体积，所述组合物中存在的所述rOVD蛋白质的量为约80％或更高。
110.一种制备rOVD蛋白质的方法，包括：
在真核宿主细胞中产生rOVD蛋白质，其中所述rOVD蛋白质由宿主细胞分泌，且其中所述宿主细胞表达具有从N-乙酰氨基葡萄糖连接中去除甘露糖残基的活性的酶；
将所述rOVD蛋白质与所述宿主细胞中分离；
将所述rOVD蛋白质暴露于氧化剂或产氧剂中；以及
将rOVD与所述氧化剂或产氧剂分离。
111.根据权利要求110所述的方法，其中所述酶包含EndoH、OCH1-EndoH融合或EndoH的活性片段。
112.根据权利要求110或权利要求111所述的方法，其中所述氧化剂或产氧剂包括过氧化氢、过碳酸钠、泡沫氧、活性二氧化氯或臭氧。
113.根据权利要求110-112中任一项所述的方法，其中所述宿主细胞为酵母或真菌细胞。
114.根据权利要求110-113中任一项所述的方法，其中所述宿主细胞为毕赤酵母属物种。
115.根据权利要求82-100或权利要求110-114中任一项所述的方法，根据权利要求102-107中任一项所述的rOVD蛋白质或根据权利要求77-81、101、108或109中任一项所述的组合物，其中所述rOVD衍生自鸟类物种。
116.根据权利要求82-100或权利要求110-114中任一项所述的方法，根据权利要求102-107中任一项所述的rOVD蛋白质或根据权利要求77-81、101、108或109中任一项所述的组合物，其中所述rOVD包含鸡OVD、鹅OVD蛋白质、蜂鸟OVD或火鸡秃鹰OVD的氨基酸序列。
117.根据权利要求82-100或权利要求110-114中任一项所述的方法，根据权利要求102-107中任一项所述的rOVD蛋白质或根据权利要求77-81、101、108或109中任一项所述的组合物，其中所述rOVD包含选自SEQ ID No.1-44的氨基酸序列和与SEQ ID No.1-44具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
CN202080063974.8A 2019-07-11 2020-07-10 蛋白质组合物及其食用品 Pending CN114375304A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962873154P 2019-07-11 2019-07-11
US201962873159P 2019-07-11 2019-07-11
US62/873,154 2019-07-11
US62/873,159 2019-07-11
PCT/US2020/041720 WO2021007565A1 (en) 2019-07-11 2020-07-10 Protein compositions and consumable products thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114375304A true CN114375304A (zh) 2022-04-19

Family

ID=74101586

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080063974.8A Pending CN114375304A (zh) 2019-07-11 2020-07-10 蛋白质组合物及其食用品

Country Status (10)

Country Link
US (4) US11160299B2 (zh)
EP (1) EP3997118A4 (zh)
JP (1) JP2022539879A (zh)
KR (1) KR20220034848A (zh)
CN (1) CN114375304A (zh)
AU (1) AU2020309602A1 (zh)
BR (1) BR112022000545A2 (zh)
CA (1) CA3146649A1 (zh)
IL (1) IL289727A (zh)
MX (1) MX2022000374A (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114375304A (zh) 2019-07-11 2022-04-19 克莱拉食品公司 蛋白质组合物及其食用品
US12096784B2 (en) 2019-07-11 2024-09-24 Clara Foods Co. Protein compositions and consumable products thereof
US10927360B1 (en) 2019-08-07 2021-02-23 Clara Foods Co. Compositions comprising digestive enzymes
US10947552B1 (en) 2020-09-30 2021-03-16 Alpine Roads, Inc. Recombinant fusion proteins for producing milk proteins in plants
WO2022072718A1 (en) 2020-09-30 2022-04-07 Nobell Foods, Inc. Recombinant milk proteins and food compositions comprising the same
KR102571169B1 (ko) * 2020-12-24 2023-08-24 건국대학교 산학협력단 L-페닐알라닌, l-트립토판 및 아세트산 포함하는 유단백 합성 촉진용 조성물
MX2023009645A (es) * 2021-02-23 2023-10-16 Clara Foods Co Composiciones para preparar productos similares al huevo libres de animales.

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107205432A (zh) * 2014-11-11 2017-09-26 克莱拉食品公司 用于生成卵清蛋白的方法和组合物
US20180084814A1 (en) * 2015-03-27 2018-03-29 Kedar Challakere Synthetic avian-free egg white substitute and uses thereof

Family Cites Families (191)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US897192A (en) 1907-11-19 1908-08-25 William H Poole Stock-releaser.
US3251697A (en) 1964-03-19 1966-05-17 Lineweaver Hans Process for pasteurizing egg white
GB1211361A (en) 1967-03-15 1970-11-04 Orsymonde Improvements in or relating to proteinic pharmaceutical compositions for use in the treatment of obesity
US3806608A (en) 1972-03-06 1974-04-23 Rhodia Synthetic egg composition
JPS5048487U (zh) 1973-08-30 1975-05-13
GB2033905B (en) 1978-08-21 1982-10-13 Upjohn Co Bacterial preparation of proteins
FR2458585A1 (fr) 1979-06-07 1981-01-02 Pasteur Institut Procede de production de proteines par expression des genes correspondants dans des micro-organismes et vecteurs susceptibles d'etre mis en oeuvre dans de tels procedes
US4675201A (en) 1979-11-19 1987-06-23 Ciba Corning Diagnostics Corp. Protein composition characterized by lower thermogelation temperature and improved acid solubility
US4430428A (en) 1980-02-05 1984-02-07 The Upjohn Company Composition of matter and process
US4355022A (en) 1981-07-01 1982-10-19 Interon, Inc. Method of dental treatment
EP0138341B1 (en) 1983-09-03 1988-10-26 Bass Public Limited Company Beer and other beverages and their manufacture
DE3587307T2 (de) 1984-12-06 1993-09-02 Fina Research Transformierte hefen die lysozym produzieren, fuer diese transformation zu verwendende plasmide und deren verwendung.
IT1197924B (it) 1986-10-28 1988-12-21 Prodotti Antibiotici Spa Procedimento per la preparazione di alimenti di origine animale
IT1229192B (it) 1989-02-27 1991-07-25 Prodotti Antibiotici Spa Procedimento per la decontaminazione batterica di alimenti di origine vegetale.
US5182258A (en) 1989-03-20 1993-01-26 Orbon Corporation Systemic delivery of polypeptides through the eye
EP0392691A3 (en) 1989-04-10 1991-10-02 Baylor College Of Medicine Assays of coup-transcription factor interactions
MY106919A (en) 1990-08-31 1995-08-30 Kao Corp Composition for use in oral cavity.
DE69221841T2 (de) 1991-12-20 1998-01-22 Shinetsu Bio Inc Verfahren zur Herstellung von gereinigtem Xanthangummi
JPH06209763A (ja) 1993-01-13 1994-08-02 Green Cross Corp:The 変異株
GB9310472D0 (en) 1993-05-20 1993-07-07 Univ Warwick Phenylalanine-free protein and dna coding thereof
US5514408A (en) 1994-11-08 1996-05-07 Kowng Young Pharm. & Chem Co., Ltd. Non-heating food binder
DK1012225T3 (da) 1997-08-05 2007-02-12 Oregon State Fremgangsmåde og sammensætninger til formindskelse af ödelæggelse af öl
EP1659173A1 (en) 1997-10-01 2006-05-24 DSMIP Assets B.V. Protein production process
JP4206154B2 (ja) 1997-11-13 2009-01-07 大日本住友製薬株式会社 変異型ｌｏｘＰ配列とその応用
AU766257C (en) 1998-05-07 2004-06-03 Universite Libre De Bruxelles Cytotoxin-based biological containment
US6730499B1 (en) 1998-07-03 2004-05-04 Research Corporation Technologies, Inc. Promoter for the Pichia pastoris formaldehyde dehydrogenase gene FLD1
DE19844393A1 (de) 1998-09-28 2000-03-30 Effem Gmbh Stückiges Produkt in Tiernahrungsmittelzusammensetzungen sowie ein Verfahren zur Herstellung desselben
ATE240052T1 (de) 1999-03-01 2003-05-15 Nestle Sa System zur anreicherung mit eisen
US6994876B1 (en) 1999-03-01 2006-02-07 Nestec S.A. Iron fortification system
GB9904629D0 (en) 1999-03-02 1999-04-21 Danbiosyst Uk Oral drug delivery system
US6133010A (en) 1999-07-08 2000-10-17 Biotec Asa Chlamysin B antibacterial protein, a protein gene for and an expression system for same
DE60032370T2 (de) 1999-08-19 2007-10-11 Kirin Beer K.K. Hefevarianten und verfahren zur herstellung von glykoprotein enthaltenden zuckerketten vom säugetiertyp
US20030118547A1 (en) 2000-01-27 2003-06-26 Vandenberg Grant William Composition for intestinal delivery
US6602532B2 (en) 2000-03-03 2003-08-05 F.G.A. Laboratories Flavourence Corporation Process of preserving food and food preservative
HUP0001769A2 (hu) 2000-05-04 2002-01-28 dr. Kahán Ilona Molnárné Lakrofil készítmény alkalmazása gyógyászati hatóanyag-tartalmú szemcseppekben
US7449308B2 (en) 2000-06-28 2008-11-11 Glycofi, Inc. Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes
US7598055B2 (en) 2000-06-28 2009-10-06 Glycofi, Inc. N-acetylglucosaminyltransferase III expression in lower eukaryotes
WO2002000879A2 (en) 2000-06-28 2002-01-03 Glycofi, Inc. Methods for producing modified glycoproteins
US8697394B2 (en) 2000-06-28 2014-04-15 Glycofi, Inc. Production of modified glycoproteins having multiple antennary structures
WO2002000856A2 (en) 2000-06-30 2002-01-03 Flanders Interuniversity Institute For Biotechnology (Vib) Protein glycosylation modification in pichia pastoris
ES2188336B1 (es) 2000-10-18 2004-04-01 Tedec Meiji Farma, S.A. Aductos de albumina soluble con complejos polihidroxilados (polialcoholicos) de hierro trivalente, metodo de obtencion y preparaciones farmaceuticas y dieteticas que los contienen.
WO2002059294A1 (en) 2001-01-26 2002-08-01 Commonwealth Scientific And Industrial Research O Rganisation Methods and means for producing efficient silencing construct using recombinational cloning
EP1377306A1 (en) 2001-03-09 2004-01-07 Dyax Corp. Serum albumin binding moieties
US7037895B2 (en) 2001-03-27 2006-05-02 Medical College Of Ohio Albumin-based colloid composition and method of use in treating hypovolemia and multiorgan dysfunction
EP1385866A4 (en) 2001-04-05 2006-03-29 Univ Nebraska ALCOHOL OXIDASE-1 REGULATING NUCLEOTIDE SEQUENCES FOR HETEROLOGIC GENE EXPRESSION IN YEAST
US20120148585A1 (en) 2001-05-01 2012-06-14 Andrew Saxon Fusion molecules and methods for treatment of immune diseases
CN1214729C (zh) 2001-07-20 2005-08-17 上海光明乳业股份有限公司 运动牛奶及其制造方法
US6645739B2 (en) 2001-07-26 2003-11-11 Phoenix Pharmacologies, Inc. Yeast expression systems, methods of producing polypeptides in yeast, and compositions relating to same
US20050233945A1 (en) 2003-07-18 2005-10-20 Larry Brown Methods for fabrication, uses and compositions of small spherical particles of insulin prepared by controlled phase separation
US6683066B2 (en) 2001-09-24 2004-01-27 Yanming Wang Composition and treatment method for brain and spinal cord injuries
US6875588B2 (en) 2001-11-30 2005-04-05 Avigenics, Inc. Ovomucoid promoter and methods of use
US7335761B2 (en) 2001-11-30 2008-02-26 Avigenics, Inc. Avian gene expression controlling regions
US7294507B2 (en) 2001-11-30 2007-11-13 Avigenics, Inc. Ovomucoid promoters and methods of use
US7923431B2 (en) 2001-12-21 2011-04-12 Ferrosan Medical Devices A/S Haemostatic kit, a method of preparing a haemostatic agent and a method of promoting haemostatis
US8932825B2 (en) 2001-12-27 2015-01-13 Glycofi Inc. Method to engineer mammalian-type carbohydrate structures
US7345150B2 (en) 2002-03-26 2008-03-18 Medical University Of Toledo Albumin-based colloid composition having at least one protected thiol region, methods of making, and methods of use
US7884068B2 (en) 2002-03-26 2011-02-08 Assaly Ragheb A Albumin-based colloid composition having at least one protected thiol region, methods of making, and methods of use
DE60325720D1 (de) 2002-04-26 2009-02-26 Kirin Pharma Kk Methylotrophe hefe,die eine zuckerkette eines säugers herstellt
US20040029179A1 (en) 2002-05-31 2004-02-12 Frank Koentgen Higher molecular weight entities and uses therefor
IL165717A0 (en) 2002-06-26 2006-01-15 Flanders Interuniversity Inst A strain of methylotrophic yeast for producing proteins
EP1388297A1 (en) 2002-08-06 2004-02-11 Nestec S.A. Calcium absorption enhancer
WO2004017073A1 (ja) 2002-08-13 2004-02-26 Incorporated Administrative Agency, National Agriculture And Bio-Oriented Research Organization アレルゲン蛋白質の検出方法
US20100210745A1 (en) 2002-09-09 2010-08-19 Reactive Surfaces, Ltd. Molecular Healing of Polymeric Materials, Coatings, Plastics, Elastomers, Composites, Laminates, Adhesives, and Sealants by Active Enzymes
US20040231010A1 (en) 2003-01-09 2004-11-18 Murray James D. Lysozyme transgenic ungulates
ES2247872B1 (es) 2003-01-24 2007-05-01 Consejo Sup. Investig. Cientificas Pepsina y pepsinogeno bovinos recombinantes producidos en celulas procariotas y eucariotas.
US7078488B2 (en) 2003-07-28 2006-07-18 Nugen Bioscience (Taiwan) Co., Ltd. Temperature-stable glycosylated recombinant chicken cystatin and the use thereof
ES2253036B1 (es) 2003-07-31 2007-07-16 Consejo Sup. Investig. Cientificas Peptidos bioactivos derivados de proteinas de la clara de huevo mediante hidrolisis enzimatica.
US20050090001A1 (en) 2003-10-07 2005-04-28 Parker Stephen H. Cell lines and methods for producing proteins
US7507573B2 (en) 2003-11-14 2009-03-24 Vib, Vzw Modification of protein glycosylation in methylotrophic yeast
WO2006028497A2 (en) 2004-02-20 2006-03-16 University Of Virginia Patent Foundation Active recombinant human lysozyme
CN1997282A (zh) 2004-03-11 2007-07-11 马萨诸塞州立大学 脂质系统的生物聚合物包封和稳定性及其应用方法
EP1685764A1 (en) 2005-01-27 2006-08-02 Globus Egg Sciences B.V. Anti-hypertensive functional food products
CN101022737B (zh) 2004-07-22 2012-08-15 格罗伯斯卵类科学有限公司 抗高血压的功能性食品
US20070207209A1 (en) 2004-08-27 2007-09-06 Murphy Christopher J Trophic factor combinations for nervous system treatment
US9220292B2 (en) 2004-10-07 2015-12-29 Next Problems, Inc. Protein beverage and method of making same
US7205018B2 (en) 2004-10-07 2007-04-17 Next Proteins, Inc. Carbonated protein drink and method of making
US7794770B2 (en) 2004-10-07 2010-09-14 Next Proteins, Inc. Protein beverage and method of making the same
US7799363B2 (en) 2004-10-07 2010-09-21 Next Proteins, Inc. Protein beverage and protein beverage concentrate and methods of making the same
US7906160B2 (en) 2004-10-07 2011-03-15 Next Proteins, Inc. Protein beverage and method of making the same
US7897192B2 (en) 2004-10-07 2011-03-01 Next Proteins, Inc. High energy carbonated protein drink and method of making
ES2258391B1 (es) 2004-11-03 2007-12-01 Tedec-Meiji Farma, S.A. Aducto de ovoalbumina soluble con complejos polialcoholicos de hierro trivalente y metodo para su obtencion.
AT501955B1 (de) 2005-02-23 2007-08-15 Univ Graz Tech Mutierte aox1-promotoren
ES2329316B1 (es) 2005-05-23 2010-10-14 Consejo Superior Investig. Cientificas Obtencion y propiedades antihipertensivas de peptidos derivados de proteinas de clara de huevo.
US20060280840A1 (en) 2005-05-24 2006-12-14 Robertson Marion G Universal protein formulation meeting multiple dietary needs for optimal health and enhancing the human immune system
US20070065555A1 (en) 2005-07-08 2007-03-22 Durafizz, Llc Stabilized edible foams
CN1332025C (zh) 2005-07-18 2007-08-15 山东大学 制备基因工程固定化酶n－糖酰胺酶的方法
CN1746302A (zh) 2005-07-18 2006-03-15 山东大学 利用酵母生产非n－糖基化蛋白的方法
US7888101B2 (en) 2005-12-08 2011-02-15 Amgen Inc. Host cells comprising alpha 1,2 mannosidase and culture methods thereof
EP1800544A1 (en) 2005-12-23 2007-06-27 Stichting Technologisch Top-Instituut Voedselwetenschappen Controlled gelation of protein mixture by glycosylation
AU2007226683B9 (en) 2006-03-10 2013-12-05 Next Proteins, Inc. Protein drink and method of making same
EP1835031A1 (en) 2006-03-14 2007-09-19 Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe Use of a recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA) for the treatment of type I hypersensitivity in a living animal including humans
JP2007259805A (ja) 2006-03-29 2007-10-11 Mukogawa Gakuin アレルゲン低減化方法、低アレルゲン化卵白の製造方法、低アレルゲン化卵白組成物の製造方法および低アレルゲン化食品
US20080131487A1 (en) 2006-11-30 2008-06-05 Dag Ommundsen Chymosin for the prevention and treatment of gastrointestinal disorders
WO2008086431A1 (en) 2007-01-09 2008-07-17 Biova, L.L.C. A method of separating components of technical eggs, edible eggs, yolk and whites and products therefrom
WO2008086556A1 (en) 2007-01-16 2008-07-24 The University Of Queensland Method of inducing an immune response
US20080260913A1 (en) 2007-04-05 2008-10-23 Solae, Llc Meat Compositions Comprising Colored Structured Protein Products
GB0713179D0 (en) 2007-07-06 2007-08-15 Fermentas Uab Vectors for cloning
CN101353630A (zh) 2007-07-26 2009-01-28 复旦大学 一种获得高产量鹅型溶菌酶的方法
NZ585555A (en) 2008-01-07 2012-08-31 Synageva Biopharma Corp Transgenic chicken containing a transgene comprising a glycosyltransferase coding sequence
CN101496575B (zh) 2008-01-28 2010-10-20 中国食品发酵工业研究院 一种含短肽和益生菌的特殊营养食品配方
CN101496579B (zh) 2008-01-28 2010-10-13 中国食品发酵工业研究院 一种供肿瘤患者食用含短肽的特殊膳食用食品配方
JP5604764B2 (ja) 2008-04-29 2014-10-15 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． カゼインミセルとトリプトファンの豊富なペプチドとを含むパッケージ化水性液体組成物の製造方法
JP5088694B2 (ja) 2008-05-26 2012-12-05 セイコーエプソン株式会社 液体容器およびその製造方法
AU2009279062B2 (en) 2008-08-08 2014-01-16 Universiteit Gent Cells producing glycoproteins having altered glycosylation patterns and methods and use thereof
KR101794298B1 (ko) 2008-11-19 2017-11-20 아미리스 인코퍼레이티드 폴리뉴클레오타이드의 집합체 조성물 및 이에 대한 방법
IT1391784B1 (it) 2008-11-20 2012-01-27 Consiglio Naz Delle Ricerche 16 67 Metodo per la produzione di un film di materia termoplastica contenente una sostanza ad attività antimicrobica e utilizzo di tale film nella produzione di confezioni per alimenti
CN101623111B (zh) 2009-07-30 2011-08-17 中国海洋大学 一种膨化鱼糜即食产品
CN102008076B (zh) 2009-09-04 2013-07-31 广东好普多肽生物科技有限公司 一种有助于调节免疫功能的鸡卵清营养合剂及其制备方法
CN103003438B (zh) 2010-02-10 2016-01-20 拜康有限公司 减少蛋白质糖基化的方法和过程及其蛋白质
US20120093994A1 (en) 2010-10-13 2012-04-19 The Curators Of The University Of Missouri Meat Analog Compositions and Process
DE102010052923A1 (de) 2010-11-30 2012-05-31 Mars Inc. Stückiges Produkt in Tiernahrungsmittelzusammensetzungen sowie Verfahren zu dessen Herstellung
US8642017B2 (en) 2011-01-13 2014-02-04 Orabrush, Inc. Method of using and composition for a foaming oral cleaner
US20140011236A1 (en) 2011-03-22 2014-01-09 Merch Sharp & Dohme Corp. Promoters for high level recombinant expression in fungal host cells
US20160150803A9 (en) 2011-06-03 2016-06-02 The Hershey Company Process for preparing and formulation for aerated baked food products and chocolate products
CN102308940B (zh) 2011-08-08 2012-08-08 山东鲁健生物医药科技有限公司 一种供术后人群食用含低聚肽和低聚糖的组合物
EP2565262A1 (en) 2011-08-31 2013-03-06 VTU Holding GmbH Protein expression
US20130084361A1 (en) 2011-09-29 2013-04-04 Rockney A. Shepheard Vegan simulated egg compositions and methods
US9512432B2 (en) 2011-10-07 2016-12-06 Lonza Ltd. Regulatable promoter
CA2873413C (en) 2011-11-02 2020-03-10 Hampton Creek, Inc. Plant-based egg substitute and method of manufacture
CN103182074B (zh) 2011-12-30 2016-03-30 沈阳兴齐眼药股份有限公司 一种含有溶菌酶的眼用制剂
CN102429307A (zh) 2012-01-10 2012-05-02 西安力邦制药有限公司 一种低热量全营养饮品及其制备方法
AU2013240183B2 (en) * 2012-03-26 2016-10-20 Axcella Health Inc. Charged nutritive proteins and methods
EP2831102A4 (en) 2012-03-26 2015-12-02 Pronutria Inc NUTRIENT FRAGMENTS, NUTRIENT PROTEINS AND METHODS
BR112014023792A2 (pt) 2012-03-26 2017-07-18 Pronutria Inc proteínas nutritivas carregadas e métodos
WO2013148328A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Pronutria, Inc. Nutritive proteins and methods
US9757328B2 (en) 2012-03-29 2017-09-12 Murami Pharma, Inc. Lysozyme gel formulations
CN102630865B (zh) 2012-05-08 2013-05-15 新乡医学院 一种含有生物活性成分的组合物
CN104797703A (zh) 2012-10-23 2015-07-22 研究技术股份有限公司 产生显著均质的聚糖结构的巴斯德毕赤酵母菌株
US9982242B2 (en) 2012-11-09 2018-05-29 Sanyo Foods Co., Ltd. Protein complex capable of catalyzing asymmetric oxidation reaction and method for producing same
CN104936466A (zh) 2012-11-20 2015-09-23 普罗努塔利亚公司 工程化的分泌蛋白质和方法
CN102978268A (zh) 2012-12-26 2013-03-20 山东天智绿业生物科技有限公司 从卵蛋白粉中酶法制取卵白蛋白多肽的方法
JP2014171424A (ja) 2013-03-08 2014-09-22 Niigata Univ オボムコイドアレルゲンを選択的に低減化した卵白素材の製造方法
ES2856265T3 (es) 2013-03-08 2021-09-27 Biogrammatics Inc Promotores de levadura para la expresión de proteínas
TWI636136B (zh) 2013-03-15 2018-09-21 艾爾德生物製藥股份有限公司 在酵母菌及其它轉型細胞中多肽高產量表現用之溫度變動技術
DK3017814T3 (en) 2013-07-03 2018-03-12 Mitsubishi Chemical Foods Corp PROCEDURE FOR PREVENTION AND / OR TREATMENT OF DIGITAL DERMATITIS
US9822357B2 (en) 2013-07-05 2017-11-21 Technische Universitat Graz Bidirectional promoter
KR101698200B1 (ko) * 2013-08-22 2017-02-02 한국식품연구원 저항원성 식품 제조방법 및 그 방법에 의해 제조된 저항원성 식품
CN103445263A (zh) 2013-09-17 2013-12-18 张国庆 酶解卵白蛋白复配营养口服液
WO2015048346A2 (en) 2013-09-25 2015-04-02 Pronutria, Inc. Compositions and formulations for prevention and treatment of diabetes and obesity, and methods of production and use thereof in glucose and caloric control
WO2015048339A2 (en) 2013-09-25 2015-04-02 Pronutria, Inc. Compositions and formulations for non-human nutrition and methods of production and use thereof
US20180125926A1 (en) 2013-09-25 2018-05-10 Axcella Health Inc. Compositions and Formulations and Methods of Production and Use Thereof
CN104694560A (zh) 2013-12-04 2015-06-10 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种源于里氏木霉的二硫键异构酶基因Trpdi2及其用途
US9689016B2 (en) 2013-12-18 2017-06-27 Caliber Biotherapeutics, Llc Method for in vivo production of deglycosylated recombinant proteins used as substrate for downstream protein glycoremodeling
CN103937830B (zh) 2014-03-21 2016-05-11 北京燕京啤酒股份有限公司 一种高效分泌表达纳豆激酶的重组菌
US10865416B2 (en) 2014-04-17 2020-12-15 Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh & Co Kg Recombinant host cell engineered to overexpress helper proteins
MX2016014147A (es) 2014-04-28 2017-02-15 Int Dehydrated Foods Inc Composiciones de proteina soluble y metodos para su elaboracion.
WO2016012468A1 (en) 2014-07-21 2016-01-28 Novartis Ag Production of glycoproteins with mammalian-like n-glycans in filamentous fungi
WO2016014900A2 (en) 2014-07-25 2016-01-28 Novogy, Inc. Promoters derived from yarrowia lipolytica and arxula adeninivorans, and methods of use thereof
CN104146248B (zh) 2014-07-30 2016-06-01 广州施健生物科技有限公司 一种免疫营养组合物及其应用
CA2957368C (en) 2014-08-05 2023-05-23 Advanced Bionutrition Corp. Encapsulation of hydrophobic biologically active compounds
CN104187634A (zh) 2014-08-15 2014-12-10 胡安然 肌肉衰减综合征全营养配方食品
CN104256633A (zh) 2014-08-16 2015-01-07 胡安然 妇女延更调理全营养配方食品
CN104172168A (zh) 2014-08-23 2014-12-03 胡安然 一种调理动脉粥样硬化的方便食品
CN104172186A (zh) 2014-08-23 2014-12-03 胡安然 一种调理肝肿瘤的方便食品
CN104187666A (zh) 2014-08-25 2014-12-10 胡安然 一种调理阴茎癌的方便食品
EP4275760A3 (en) 2014-08-25 2024-02-07 Société des Produits Nestlé S.A. Egg protein formulations and methods of manufacture thereof
WO2016033402A1 (en) 2014-08-29 2016-03-03 Massachusetts Institute Of Technology Composability and design of parts for large-scale pathway engineering in yeast
CN104256648A (zh) 2014-10-25 2015-01-07 胡安然 甲状腺癌全营养配方食品
CN104431285A (zh) 2014-11-04 2015-03-25 南昌大学 一种微波超声波制备高起泡性卵清蛋白的方法
US11260089B2 (en) 2014-11-19 2022-03-01 San Diego State University (Sdsu) Foundation Products of manufacture comprising bacteriophages
CN105876440A (zh) 2015-01-08 2016-08-24 无锡索莱美生物科技有限公司 一种含短肽的复合型特殊营养食品配方
CN104738624A (zh) 2015-03-17 2015-07-01 鄢明亮 一种神经衰弱、健忘失眠的营养保健食品
US10932482B2 (en) 2015-03-27 2021-03-02 Kedarnath Krishnamurthy Challakere Synthetic avian-free egg white substitute and method of making same
CN104855977A (zh) 2015-04-16 2015-08-26 鄢明亮 一种防治矽肺的营养保健食品及制备方法
CN104824674A (zh) 2015-04-22 2015-08-12 鄢明亮 一种防治脱发的营养保健食品
TW201707573A (zh) 2015-05-11 2017-03-01 耐克斯特蛋白質有限公司 用於製造碳酸蛋白質飲料組合物之方法及系統
CN104961823B (zh) 2015-06-19 2019-05-31 江苏大学 一种适用于大规模制备食品级卵白蛋白的提纯方法
CN105039189B (zh) 2015-06-23 2018-04-17 山东新概念生物技术有限公司 一种产鸡溶菌酶的基因工程菌及其构建与应用
CN104957356B (zh) 2015-07-22 2018-05-08 福建农林大学 一种糖基化改性提高卵白蛋白起泡性的方法
CN105012941A (zh) 2015-08-17 2015-11-04 鄢明亮 一种保健营养品用于颈椎病、脊柱炎、关节炎的应用及制备方法
US9821249B2 (en) 2015-09-08 2017-11-21 Orochem Technologies, Inc. Continuous process for separation of proteins
DK3184642T3 (da) 2015-12-22 2019-08-12 Bisy E U Gærcelle
US11293033B2 (en) 2016-05-18 2022-04-05 Amyris, Inc. Compositions and methods for genomic integration of nucleic acids into exogenous landing pads
CN106173829A (zh) 2016-07-06 2016-12-07 武汉好多多生物科技有限公司 一种营养米粉的加工方法
CN106259946A (zh) 2016-08-23 2017-01-04 江苏朸健生命科技发展有限公司 一种运动营养固体饮料及其制备方法
US11623942B2 (en) 2017-03-07 2023-04-11 LIHME PROTEIN SOLUTIONS ApS Method for purifying proteins using silicate
CN107083373B (zh) 2017-06-01 2020-07-07 江苏师范大学 一株异源高效表达脂肪酶的重组毕赤酵母及其应用
CN109722423A (zh) 2017-10-27 2019-05-07 成都必高生物科技有限公司 具提升酶活性的溶菌酶
EP3510870B1 (en) 2018-01-16 2023-07-26 Viscofan S.A. Food casing with antifungal properties and method for production thereof
US20200337336A1 (en) 2018-01-18 2020-10-29 Pando Nutrition Inc. Recombinant yeast as animal feed
CN108652017A (zh) 2018-04-11 2018-10-16 华中农业大学 超声波辅助糖基化改性制备高起泡性卵白蛋白的方法
AU2019325329A1 (en) 2018-08-21 2021-04-08 Clara Foods Co. Modification of protein glycosylation in microorganisms
MX2021009035A (es) 2019-01-29 2022-01-19 Bond Pet Foods Inc Composiciones y metodos para producir productos alimenticios con proteina animal recombinante.
CN114375304A (zh) 2019-07-11 2022-04-19 克莱拉食品公司 蛋白质组合物及其食用品
DE202020005913U1 (de) 2019-07-11 2023-07-04 Clara Foods Co. Proteinzusammensetzungen und verzehrbare Produkte davon
US10927360B1 (en) 2019-08-07 2021-02-23 Clara Foods Co. Compositions comprising digestive enzymes
EP4017287A4 (en) 2019-08-19 2023-08-09 Clara Foods Co. NON-ANIMAL PROTEIN SOURCES WITH FUNCTIONAL PROPERTIES
CN115135168A (zh) 2019-12-24 2022-09-30 克莱拉食品公司 酶组合物及其制备方法
KR20220137055A (ko) 2020-02-04 2022-10-11 클라라 푸드즈 컴퍼니 재조합 미생물을 고수율로 수득하기 위한 시스템 및 방법과 이의 용도
IL302016A (en) 2020-10-06 2023-06-01 Clara Foods Co Edible protein compositions and products thereof
MX2023009645A (es) 2021-02-23 2023-10-16 Clara Foods Co Composiciones para preparar productos similares al huevo libres de animales.

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107205432A (zh) * 2014-11-11 2017-09-26 克莱拉食品公司 用于生成卵清蛋白的方法和组合物
US20180084814A1 (en) * 2015-03-27 2018-03-29 Kedar Challakere Synthetic avian-free egg white substitute and uses thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FEI WANG等: "High-level expression of endo-β-N-acetylglucosaminidase H from Streptomyces plicatus in Pichia pastoris and its application for the deglycosylation of glycoproteins", 《PLOS ONE》, vol. 10, no. 3, pages 0120458 - 232 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2020309602A1 (en) 2022-02-24
US11974592B1 (en) 2024-05-07
JP2022539879A (ja) 2022-09-13
US11800887B2 (en) 2023-10-31
EP3997118A1 (en) 2022-05-18
US20240225073A1 (en) 2024-07-11
US20210007384A1 (en) 2021-01-14
US11160299B2 (en) 2021-11-02
EP3997118A4 (en) 2023-07-19
CA3146649A1 (en) 2021-01-14
BR112022000545A2 (pt) 2022-04-05
KR20220034848A (ko) 2022-03-18
US20240130413A1 (en) 2024-04-25
MX2022000374A (es) 2022-03-25
IL289727A (en) 2022-03-01
US20220117285A1 (en) 2022-04-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK202300014Y3 (da) Proteinsammensætninger og konsumerbare produkter deraf
US11974592B1 (en) Protein compositions and consumable products thereof
DK202300015Y3 (da) Ikke-animalsk baserede proteinkilder med funktionelle egenskaber
US20230329294A1 (en) Protein compositions and consumable products thereof
CN117295405A (zh) 用于制备无动物的蛋类产品的组合物
US20230192811A1 (en) Non-animal based protein sources with functional properties
US12096784B2 (en) Protein compositions and consumable products thereof
AU2022354549A1 (en) Couloring composition

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination