BR112020021998A2

BR112020021998A2 - métodos para preparar uma composição hemostática e para reconstituir uma composição de trombina seca, composição hemostática, e, estojo.

Info

Publication number: BR112020021998A2
Application number: BR112020021998-3A
Authority: BR
Inventors: Peter Lund Hammershøj; Kristian Larsen; Douglas B. Johns; Nicole Smith; Michael Cardinale; Gabriella Ferrara; Guanghui Zhang
Original assignee: Ferrosan Medical Devices A/S; Ethicon Inc.
Priority date: 2018-05-09
Filing date: 2019-05-09
Publication date: 2021-01-26
Also published as: CA3097819A1; EP4321182A3; JP7395113B2; US20190343981A1; EP3790600C0; JP2021523097A; MX2020011866A; WO2019215274A1; US11801324B2; EP3790600B1; US20240009345A1; AU2019266529A1; AU2019266529B2; EP3790600A1; EP4321182A2; ES2968412T3; CN112368028A; KR20210008479A

Abstract

A presente invenção se refere a um método para preparar uma composição hemostática compreendendo trombina, o método compreendendo a etapa de reconstituição de uma trombina seca diretamente em uma pasta, tal como uma pasta compreendendo um polímero biocompatível. A composição hemostática compreendendo trombina pode ser preparada a partir de uma composição de trombina seca e uma pasta em uma operação de etapa única e ser usada para o tratamento de uma ferida.

Description

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MÉTODOS PARA PREPARAR UMA COMPOSIÇÃO HEMOSTÁTICA E PARA RECONSTITUIR UMA COMPOSIÇÃO DE TROMBINA SECA, COMPOSIÇÃO HEMOSTÁTICA, E, ESTOJO CAMPO TÉCNICO

[001] A presente descrição se refere a um método simplificado para preparar uma composição de pasta hemostática compreendendo trombina, o método compreendendo a etapa de reconstituir uma trombina seca diretamente em uma pasta, tal como uma pasta compreendendo um polímero biocompatível. A composição hemostática compreendendo trombina pode ser preparada a partir de uma composição de trombina seca e uma pasta em uma operação de etapa única e ser usada para o tratamento de uma ferida.

FUNDAMENTOS

[002] Os materiais hemostáticos à base de proteínas, tais como o colágeno e a gelatina, estão comercialmente disponíveis em esponjas sólidas e em forma de pó solto ou não embalado para uso em procedimentos cirúrgicos. A mistura do pó solto ou não embalado com um fluido, tal como solução salina ou uma solução de trombina, pode formar uma pasta ou pasta fluida que é útil como uma composição hemostática para uso em casos de sangramento difuso, particularmente de superfícies irregulares ou áreas de difícil acesso, dependendo de condições de mistura e razões relativas dos materiais.

[003] As pastas hemostáticas convencionais são geralmente preparadas no ponto de uso por agitação mecânica e mistura de um polímero biocompatível, por exemplo, gelatina, e um líquido, por exemplo, uma solução de trombina, para prover uniformidade da composição. A mistura para formar uma pasta geralmente requer uma mistura extensa, tal como amassar ou transferir entre duas seringas.

[004] Muitas vezes, é desejado que a pasta hemostática compreenda um componente de trombina para prover o efeito hemostático ideal da pasta.

2 / 50 Devido a razões de estabilidade, o componente de trombina é normalmente provido como uma composição seca separada do componente de polímero biocompatível. A trombina seca é então reconstituída para formar uma suspensão ou solução antes de ser misturada com o polímero biocompatível. Esta etapa de reconstituição do componente de trombina geralmente ocorre imediatamente antes da mistura com o polímero biocompatível. A reconstituição de trombina é demorada e desafiadora, pois envolve o manuseio de seringas em múltiplas etapas; fatores indesejáveis em uma sala de cirurgia com sangramentos, pois o cirurgião terá que abruptar seu procedimento enquanto espera que o hemostato seja preparado.

[005] Surgiflo® Haemostatic Matrix (Ethicon) é um estojo para a produção de uma pasta de gelatina hemostática compreendendo trombina, que é preparada reconstituindo primeiro uma composição de trombina seca e subsequentemente transferindo uma mistura de solução de matriz de gelatina- trombina para frente e para trás entre duas seringas conectadas para um total de pelo menos seis passes.

[006] Floseal® Haemostatic Matrix (Baxter) é da mesma forma um estojo para a produção de uma pasta de gelatina hemostática, exigindo reconstituição inicial de uma composição de trombina seca seguida pela transferência da mistura de solução de matriz de gelatina-trombina para frente e para trás entre duas seringas conectadas por um total de pelo menos vinte passes. Uma vez que uma composição de pasta substancialmente homogênea é alcançada, as pastas hemostáticas podem ser aplicadas a um sangramento para promover a hemostasia por extrusão das pastas da seringa.

[007] Tentativas também foram feitas para prover o polímero biocompatível e a trombina na forma seca na mesma seringa, tal como descrito anteriormente em, por exemplo, WO 2011/151400, WO 2011/151384, WO 2011/151386 e WO 2013/185776, os preceitos das quais são incorporados por referência na sua totalidade. No entanto, devido à

3 / 50 sensibilidade da trombina aos métodos de esterilização geralmente empregados na fabricação de produtos hemostáticos, isto é, radiação ionizante e/ou óxido de etileno, a sensibilidade da trombina à água e as diferentes propriedades físico-químicas da trombina e dos polímeros geralmente empregados, tais como a gelatina, tem se mostrado um desafio fabricar tais produtos “tudo em um” (all-in-one) de modo que retenham atividade de trombina suficiente durante a fabricação, esterilização e durante todo o prazo de validade do produto e/ou que assegure a distribuição satisfatória de trombina no produto de pasta hemostática reconstituída final.

[008] Como mencionado acima, a incorporação de trombina na pasta hemostática é um desafio devido ou a razões de fabricação ou estabilidade ou devido à reconstituição demorada de uma composição de trombina seca antes da mistura com o polímero biocompatível. Assim, existe uma necessidade na técnica de desenvolver novos métodos para incorporação rápida e fácil de trombina na pasta hemostática.

SUMÁRIO

[009] A presente descrição aborda os problemas acima relacionados à incorporação de trombina em pastas hemostáticas e provê um método para reconstituir uma composição de trombina seca diretamente em uma pasta compreendendo um polímero biocompatível, para gerar uma pasta hemostática compreendendo trombina em uma operação de etapa única. Esse método simples e rápido para preparar uma composição hemostática é altamente valioso na sala de cirurgia, onde o sangramento potencial deve ser controlado de maneira rápida e eficiente.

[0010] Assim, em um aspecto, a presente descrição se refere a um método para preparar uma composição hemostática, o método compreendendo as etapas de: a) prover uma composição de trombina seca em um primeiro recipiente;

4 / 50 b) prover uma pasta compreendendo um polímero biocompatível em um segundo recipiente; c) conectar o primeiro recipiente e o segundo recipiente usando meios de conexão adequados; e d) misturar os teores dos recipientes.

[0011] Em um segundo aspecto, a presente descrição se refere a um método para reconstituir uma composição de trombina seca, o método compreendendo as etapas de: a) prover uma composição de trombina seca em um primeiro recipiente; b) prover uma pasta compreendendo um polímero biocompatível em um segundo recipiente; c) conectar o primeiro recipiente e o segundo recipiente usando meios de conexão adequados; e d) misturar os teores dos recipientes.

[0012] A mistura dos teores dos recipientes pode ser realizada transferindo os teores dos recipientes para frente e para trás várias vezes, tal como menos de 20 vezes, por exemplo menos de 15 vezes, tal como menos de 10 vezes, de preferência cerca de seis vezes.

[0013] Os inventores verificaram surpreendentemente que tal método para reconstituir uma composição de trombina seca diretamente em uma pasta compreendendo um polímero biocompatível resulta em uma distribuição substancialmente homogênea da trombina na composição hemostática. Assim, a presente descrição provê um método para preparar uma composição hemostática compreendendo trombina de uma maneira rápida e simples que não requer reconstituição separada do componente de trombina antes da mistura com o polímero biocompatível.

[0014] A presente descrição se refere ainda a uma composição hemostática obtida pelos métodos aqui descritos, bem como aos usos dos

5 / 50 mesmos.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS Figura 1

[0015] Exibe uma configuração e método exemplificativos para reconstituir uma composição de trombina seca diretamente em uma pasta que compreende um polímero biocompatível para gerar uma composição hemostática. A composição de trombina seca está contida em uma primeira seringa e a pasta que compreende um polímero biocompatível, aqui exemplificado por uma pasta de gelatina, está contida em uma segunda seringa. As duas seringas estão interligadas, nesta modalidade, por meio de um misturador estático, e o teor das seringas é transferido para frente e para trás seis vezes para gerar a composição hemostática. Figura 2

[0016] Exibe a distribuição da atividade da trombina na porção inicial, intermediária e final de uma seringa que compreende uma composição hemostática reconstituída usando o método da presente descrição. A atividade média da trombina é dada como porcentagem da atividade total da trombina. Os dados mostram que a reconstituição da trombina seca com uma pasta produz uma composição de pasta hemostática com uma distribuição homogênea de trombina. Barras de erro são construídas usando um desvio padrão da média. Figura 3

[0017] Exibe eficácia hemostática (Tempo para hemostasia (TTH)) de uma pasta da presente invenção (pasta 6TM) em comparação com o controle (Surgiflo misturado com 2 ml de solução de trombina) (Média +/- SEM, n = 7). A pasta 6TM preparada de acordo com a presente invenção foi verificada induzir a hemostasia mais rápida e mais consistentemente do que a pasta de controle.

DEFINIÇÕES

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[0018] Um “agente bioativo” é qualquer agente, fármaco, composto, composição de matéria ou mistura que provê algum efeito farmacológico, muitas vezes benéfico, que pode ser demonstrado in vivo ou in vitro. Um agente é, portanto, considerado bioativo se tiver interação ou efeito em um tecido celular no corpo humano ou animal. Tal como aqui usado, este termo inclui ainda qualquer substância fisiologicamente ou farmacologicamente ativa que produza um efeito localizado ou sistémico em um indivíduo. Os agentes bioativos podem ser uma proteína, tal como uma enzima. Outros exemplos de agentes bioativos incluem, mas não estão limitados a, agentes que compreendem ou consistem em um oligossacarídeo, um polissacarídeo, um peptídeo opcionalmente glicosilado, um polipeptídeo opcionalmente glicosilado, um oligonucleotídeo, um polinucleotídeo, um lipídeo, um ácido graxo, um éster de ácido graxo e metabólitos secundários. Pode ser usado profilaticamente, terapeuticamente, em conexão com o tratamento de um indivíduo, tal como um ser humano ou qualquer outro animal. O termo “agente bioativo”, tal como aqui usado, não abrange células, tais como células eucarióticas ou procarióticas.

[0019] “Biocompatível” refere-se à capacidade de um material de realizar sua função pretendida sem provocar quaisquer efeitos locais ou sistêmicos indesejáveis substanciais no hospedeiro.

[0020] “Biologicamente absorvível” ou “reabsorvível” são termos que, no presente contexto, são usados para descrever que os materiais de que o dito pó é feito podem ser degradados no corpo em moléculas menores com um tamanho que permite que sejam transportados para a corrente sanguínea. Pela dita degradação e absorção, os ditos materiais em pó serão gradualmente removidos do local de aplicação. Por exemplo, a gelatina pode ser degradada por enzimas de tecido proteolíticas em moléculas menores absorvíveis, em que a gelatina, quando aplicada em tecidos, é tipicamente absorvida em cerca de 4 a 6 semanas e quando aplicada em superfícies sangrando e membranas

7 / 50 mucosas normalmente em 3 a 5 dias.

[0021] Um “gel” é um material sólido semelhante a uma geleia que pode ter propriedades que variam de macio e fraco a duro e resistente. Os géis são definidos como um sistema reticulado substancialmente diluído, que não exibe fluxo quando no estado estacionário. Em peso, os géis são principalmente líquidos, mas ainda se comportam como sólidos devido a uma rede reticulada tridimensional dentro do líquido. São as reticulações dentro do fluido que dão ao gel sua estrutura (dureza) e contribuem para a pegajosidade (aderência). Desta forma, os géis são uma dispersão de moléculas de um líquido dentro de um sólido em que o sólido é a fase contínua e o líquido é a fase descontínua. Um gel não é uma pasta ou pasta fluida. Por exemplo, a gelatina não reticulada é solúvel e forma um gel em contato com um meio aquoso tal como a água.

[0022] “Hemostasia” é um processo que faz com que o sangramento diminua ou pare. A hemostasia ocorre quando o sangue está presente fora do corpo ou dos vasos sanguíneos e é a resposta instintiva do corpo para parar o sangramento e a perda de sangue. Durante a hemostasia, três etapas ocorrem em uma sequência rápida. O espasmo vascular é a primeira resposta quando os vasos sanguíneos se contraem para permitir que menos sangue seja perdido. Na segunda etapa, a formação do tampão de plaquetas, as plaquetas se unem para formar uma vedação temporária para cobrir a ruptura na parede do vaso. A terceira e última etapa é chamada de coagulação ou coagulação do sangue. A coagulação reforça o tampão plaquetário com fios de fibrina que atuam como uma “cola molecular”. Consequentemente, um composto hemostático é capaz de estimular a hemostasia.

[0023] “Unidade Internacional (UI)”. Em farmacologia, a Unidade Internacional é uma unidade de medida para a quantidade de uma substância, com base na atividade ou efeito biológico. É abreviada como IU, UI ou IE. É usada para quantificar vitaminas, hormônios, alguns medicamentos, vacinas,

8 / 50 hemoderivados e substâncias biologicamente ativas semelhantes.

[0024] Uma “pasta” de acordo com a presente descrição tem uma consistência semelhante a uma massa maleável, tal como pasta de dente. Uma pasta é uma mistura fluida espessa de sólido pulverizado/sólido na forma de pó com um líquido. Uma pasta é uma substância que se comporta como um sólido até que uma carga ou tensão suficientemente grande seja aplicada, momento em que flui como um fluido, isto é, uma pasta é fluível. Os fluíveis se adaptam com eficiência às superfícies irregulares na aplicação. As pastas normalmente consistem em uma suspensão de material granular em um fluido de fundo. Os grãos individuais são amontoados como areia em uma praia, formando uma estrutura desordenada, vítrea ou amorfa, e dando às pastas seu caráter sólido. É essa “capacidade de se amontoar” que dá às pastas algumas de suas propriedades mais incomuns; isso faz com que uma pasta demonstre propriedades de matéria frágil. Uma pasta não é um gel/geleia. Uma “pasta fluida” é uma mistura fluida de um sólido em pó/pulverizado com um líquido, tal como água. As suspensões se comportam de algumas maneiras como fluidos espessos, fluindo sob a gravidade e sendo capazes de ser bombeadas, se não forem muito espessas. Uma pasta fluida pode ser considerada funcionalmente como uma pasta aquosa fina, mas uma pasta fluida geralmente contém mais água do que uma pasta. Partículas de pó substancialmente insolúveis em água, tais como partículas de gelatina reticuladas, irão formar uma pasta ao serem misturadas com um meio aquoso.

[0025] “Porcentagem”. Se nada mais for indicado, a porcentagem é porcentagem em peso: % p/p ou % em peso. As razões são indicadas como peso por peso (p/p).

[0026] “Variação no teor de trombina”. A variação no teor de trombina, conforme aqui usado, é definida como a diferença percentual na atividade média da trombina entre duas frações da composição hemostática. A atividade média da trombina é dada como a atividade da trombina de uma

9 / 50 fração como uma porcentagem da atividade total da trombina da composição hemostática completa.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0027] A presente descrição se refere a um método simplificado para preparar uma composição de pasta hemostática compreendendo trombina. O método compreende a etapa de reconstituição de uma composição de trombina seca diretamente em uma pasta, tal como uma pasta compreendendo um polímero biocompatível.

[0028] A invenção, portanto, se refere a um método para preparar uma composição hemostática, o método compreendendo as etapas de: a) prover uma composição de trombina seca em um primeiro recipiente; b) prover uma pasta compreendendo um polímero biocompatível em um segundo recipiente; c) conectar o primeiro recipiente e o segundo recipiente usando meios de conexão adequados; e d) misturar os teores dos recipientes.

[0029] Após a mistura, o primeiro ou o segundo recipiente (dependendo do número de transferências) pode ser usado como um dispositivo de distribuição para distribuir a composição hemostática ao tecido.

[0030] Assim, a composição hemostática compreendendo trombina pode ser preparada a partir de uma composição de trombina seca e uma pasta em uma operação de etapa única sem a necessidade de reconstituição anterior demorada e propensa a erros da composição de trombina seca em uma solução.

[0031] Esse método simples e rápido para preparar uma composição hemostática é altamente valioso na sala de cirurgia, onde o sangramento potencial deve ser controlado de maneira rápida e eficiente.

[0032] As vantagens dos métodos providos na presente descrição e a

10 / 50 composição hemostática obtida por tais métodos são numerosas e incluem: • Menos tempo gasto na preparação da composição hemostática, por exemplo, o sangramento pode ser parado mais rápido; • Redução do risco de comprometer a esterilidade da composição hemostática durante preparação devido a menos etapas de manuseio; • Menor risco de cometer erros durante a preparação devido à preparação simplificada da pasta; • Reconstituição confiável e consistente em um curto período de tempo; • Evita as etapas de diluição da trombina demoradas e sujeitas a erros das preparações de composição hemostática padrão; • Minimiza os custos da sala de operação uma vez que a preparação do produto atualmente descrito é tão simples e rápida que não há razão para pré-preparar os fluíveis hemostáticos antes da cirurgia que não podem ser usados; • Maior flexibilidade para adicionar um meio aquoso à pasta para modificar a consistência da composição final da mistura.

[0033] Todos os fatores acima aumentam a segurança do paciente. Composição de trombina seca

[0034] A presente descrição refere-se a um método para reconstituir uma composição de trombina seca diretamente em uma pasta.

[0035] A trombina é uma proteína de serina protease “semelhante à tripsina” que, em humanos, é codificada pelo gene F2. A protrombina (fator de coagulação II) é proteoliticamente clivada para formar trombina na cascata de coagulação, o que acaba resultando na redução da perda de sangue. A trombina, por sua vez, atua como uma serina protease que converte fibrinogênio solúvel em fios insolúveis de fibrina, bem como catalisa muitas outras reações relacionadas à coagulação. Na via de coagulação do sangue, a

11 / 50 trombina atua convertendo o fator XI em XIa, VIII em VIIIa, V em Va e o fibrinogênio em fibrina.

[0036] Em uma modalidade, a trombina é trombina humana.

[0037] Em uma modalidade, a trombina é trombina humana recombinante.

[0038] Em outras modalidades, a origem da trombina é de um mamífero diferente do humano, como a trombina bovina.

[0039] Em uma modalidade, a trombina está na forma de protrombina.

[0040] A composição de trombina seca pode ser preparada por quaisquer métodos conhecidos do versado e é normalmente provida na forma estéril. Assim, em uma modalidade, a composição de trombina seca é estéril.

[0041] Em uma modalidade, a composição de trombina seca é preparada por secagem por pulverização ou liofilização.

[0042] Em uma modalidade preferida, a composição de trombina seca é preparada por liofilização.

[0043] Em uma modalidade, a composição de trombina seca compreende menos de 2% de água, tal como menos de 1% de água.

[0044] A quantidade de trombina na composição hemostática deve ser suficiente para garantir uma hemostase eficaz. Em uma modalidade, a concentração final de trombina na composição hemostática está na faixa de cerca de 50 UI/ml a cerca de 1000 UI/ml, por exemplo 100 UI /ml a cerca de 500 UI /ml, tal como cerca de 150 UI /ml a cerca de 450 UI/ml, por exemplo cerca de 200 UI /ml a cerca de 400 UI /ml, tal como cerca de 200 UI /ml a cerca de 300 UI /ml.

[0045] A composição de trombina seca pode opcionalmente compreender um ou mais agente(s) hidrofílico(s), como por exemplo um ou mais poliol(óis) e/ou um ou mais poli(etilenoglicol)(óis) (PEGs).

[0046] Em uma modalidade, a composição de trombina seca

12 / 50 compreende um ou mais outros agentes bioativos. Tal ou mais agentes bioativos podem ser capazes de estimular a hemostasia, cicatrização de feridas, cicatrização de ossos, cicatrização de tecido e/ou cicatrização de tendões.

[0047] Em uma modalidade, a composição de trombina seca opcionalmente compreende um ou mais intensificadores de extrusão, tais como, por exemplo, albumina. O uso de intensificadores de extrusão para melhorar a capacidade de extrusão de pastas hemostáticas é, por exemplo, descrito em WO 2015/086028, que é aqui incorporado na sua totalidade. Pasta compreendendo polímero biocompatível

[0048] A composição de trombina seca da descrição é reconstituída diretamente em uma pasta, tal como uma pasta compreendendo um polímero biocompatível.

[0049] O polímero biocompatível da presente descrição pode ser um polímero biológico ou não biológico. Polímeros biológicos adequados incluem proteínas, tais como gelatina, colágeno, albumina, hemoglobina, caseína, fibrinogênio, fibrina, fibronectina, elastina, queratina e laminina; ou derivados ou combinações dos mesmos. Particularmente preferido é o uso de gelatina ou colágeno, mais preferencialmente gelatina. Outros polímeros biológicos adequados incluem polissacarídeos, tais como glicosaminoglicanos, derivados de amido, xilano, derivados de celulose, derivados de hemicelulose, agarose, alginato e quitosana; ou derivados ou combinações dos mesmos. Os polímeros não biológicos adequados serão selecionados para serem degradáveis por um de dois mecanismos, isto é, (1) quebra da espinha dorsal polimérica ou (2) degradação de cadeias laterais que resultam em solubilidade aquosa. Polímeros não biológicos exemplificativos incluem sintéticos, tais como poliacrilatos, polimetacrilatos, poliacrilamidas, resinas de polivinila, polilactido-glicolidos, policaprolactonas e polioxietilenos; ou derivados ou combinações dos mesmos. Também são

13 / 50 possíveis combinações de diferentes tipos de polímeros.

[0050] Em uma modalidade, o polímero biocompatível é biologicamente absorvível. Exemplos de materiais biologicamente absorvíveis adequados incluem gelatina, colágeno, quitina, quitosana, alginato, celulose, celulose oxidada, ácido poliglicólico, ácido poliacético e combinações dos mesmos. Será entendido que várias formas dos mesmos, tais como formas lineares ou reticuladas, sais, ésteres e semelhantes também são contemplados para a presente descrição. Em uma modalidade preferida da invenção, o material biologicamente absorvível é a gelatina. A gelatina é preferida porque a gelatina é altamente biologicamente absorvível. Além disso, a gelatina é altamente biocompatível, o que significa que não é tóxica para um animal, tal como um ser humano, quando/se entra na corrente sanguínea ou está em contato prolongado com tecidos humanos.

[0051] A gelatina normalmente se origina de uma fonte suína, mas pode ser proveniente de outras fontes animais, tais como de origem bovina ou de peixes. A gelatina também pode ser produzida sinteticamente, isto é, feita por meios recombinantes.

[0052] Em uma modalidade preferida, o polímero biocompatível é reticulado. A reticulação geralmente torna o polímero substancialmente insolúvel em um meio aquoso. Em uma modalidade, o polímero biocompatível consiste em partículas de pó que são substancialmente insolúveis em um meio aquoso. Quaisquer métodos de reticulação adequados conhecidos por um versado podem ser usados, incluindo métodos de reticulação químicos e físicos.

[0053] Em uma modalidade da presente descrição, o polímero foi reticulado por meios físicos, tais como por calor seco. O tratamento com calor seco é geralmente realizado a temperaturas entre 100°C e 250°C, tal como cerca de 110°C a cerca de 200°C. Em particular, a temperatura pode estar na faixa de 110 a 160°C, por exemplo, na faixa de 110 a 140°C, ou na faixa de

14 / 50 120 a 180°C, ou na faixa de 130 a 170°C, ou na faixa de 130 a 160°C, ou na faixa de 120 a 150°C. O período de tempo para reticulação pode ser otimizado por um versado e é normalmente um período entre cerca de 10 minutos a cerca de 12 horas, tal como cerca de 1 hora a cerca de 10 horas, por exemplo, entre cerca de 2 horas a cerca de 10 horas, tal como entre cerca de 4 horas a cerca de 8 horas, por exemplo, entre cerca de 5 horas a cerca de 7 horas, tal como cerca de 6 horas.

[0054] Em outra modalidade, o polímero foi reticulado por meios químicos, isto é, por exposição a um agente químico de reticulação. Exemplos de agentes químicos de reticulação adequados incluem, mas não estão limitados a aldeídos, em particular glutaraldeído e formaldeído, acil azida, carbodi-imidas, di-isocianato de hexametileno, óxido de poliéter, éter 1,4- butanodioldiglicidílico, ácido tânico, açúcares de aldose, por exemplo, D- frutose, genipina e foto-oxidação mediada por corantes. Os compostos específicos incluem, mas não estão limitados a cloridrato de 1-(3- dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (EDC) e ditiobis(di-hidrazida propanoica) (DTP).

[0055] Em uma modalidade, as partículas de polímero biocompatíveis usadas para a preparação da pasta de acordo com a presente descrição podem ser obtidas a partir de esponjas reticuladas de, por exemplo, gelatina ou colágeno, em particular esponjas reticuladas de gelatina (tais como as esponjas Spongostan® e as esponjas Surgifoam® comercialmente disponíveis). As esponjas reticuladas são micronizadas por métodos conhecidos na técnica para obter um polímero biocompatível reticulado em forma de pó, tal como por leito rotativo, extrusão, granulação e tratamento em um misturador intensivo ou moagem (por exemplo, usando um moinho de martelo ou um moinho centrífugo). O polímero biocompatível reticulado em forma de pó é então misturado com uma quantidade de meio aquoso para prover uma pasta de consistência desejável.

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[0056] Spongostan®/Surgifoam® disponível na Ethicon é uma esponja hemostática absorvível reticulada à base de gelatina. Ela absorve > 35 g de sangue/g e em 4 a 6 semanas é completamente absorvida pelo corpo humano.

[0057] Em uma modalidade, a pasta compreendendo um polímero biocompatível compreende partículas de gelatina reticuladas obtidas a partir de uma esponja de gelatina porosa micronizada, que foi reticulada por tratamento com calor a seco.

[0058] As esponjas de gelatina porosa micronizada podem ser preparadas misturando uma quantidade de gelatina solúvel com um meio aquoso a fim de criar uma espuma compreendendo uma fase gasosa descontínua, secando a dita espuma e reticulando a espuma seca por exposição ao calor seco. A esponja reticulada obtida pode ser micronizada por métodos conhecidos na técnica. A espuma de gelatina geralmente tem uma concentração de gelatina de cerca de 1% a 70% em peso, geralmente de 3% a 20% em peso. A secagem é geralmente realizada a cerca de 20°C a cerca de 40°C durante cerca de 5 a 20 horas. A espuma seca é geralmente reticulada por exposição a uma temperatura de cerca de 110°C a cerca de 200°C por cerca de 15 minutos a cerca de 8 horas, tal como a cerca de 150°C a cerca de 170°C por cerca de 5 a 7 horas.

[0059] Em uma modalidade, as partículas de polímero biocompatíveis usadas para a preparação da pasta de acordo com a presente descrição são obtidas a partir de géis reticulados de, por exemplo, gelatina ou colágeno, em particular géis de gelatina reticulados. Os géis reticulados podem ser micronizados como descrito acima. O polímero biocompatível reticulado em forma de pó é então misturado com uma quantidade de meio aquoso para prover uma pasta de consistência desejável.

[0060] Em uma modalidade, a pasta compreendendo um polímero biocompatível compreende partículas de gelatina reticuladas obtidas a partir

16 / 50 de um gel de gelatina micronizado, que foi reticulado por tratamento de calor a seco.

[0061] Em uma modalidade, a pasta compreendendo um polímero biocompatível compreende ou consiste em partículas de gelatina reticuladas obtidas a partir de um hidrogel de gelatina. Um hidrogel de gelatina pode ser preparado dissolvendo uma quantidade de gelatina em um tampão aquoso para formar um hidrogel não reticulado, tipicamente tendo um teor de sólidos de 1% a 70% em peso, geralmente de 3% a 10% em peso. A gelatina pode ser reticulada, por exemplo, por exposição a qualquer glutaraldeído (por exemplo, 0,01% a 0,05% p/p, durante a noite a 0°C a 15°C em tampão aquoso), periodato de sódio (por exemplo, 0,05 M, mantido a 0°C a 15°C por 48 horas) ou 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida (EDC) (por exemplo, 0,5% a 1,5% p/p, durante a noite à temperatura ambiente), ou por exposição à cerca de 0,3 a 3 megarads de radiação gama ou feixe de elétrons. Os hidrogéis reticulados resultantes podem ser fragmentados e secos para se obter um pó de gelatina. Alternativamente, as partículas de gelatina podem ser suspensas em um álcool, de preferência álcool metílico ou álcool etílico, com um teor de sólidos de 1% a 70% em peso, geralmente 3% a 10% em peso, e reticuladas por exposição a um agente de reticulação, tipicamente glutaraldeído (por exemplo, 0,01% a 0,1% p/p, durante a noite à temperatura ambiente). Quando a reticulação com glutaraldeído, as reticulações são formadas através de bases de Schiff que podem ser estabilizadas por redução subsequente, por exemplo, por tratamento com boro-hidreto de sódio. Após a reticulação, os grânulos resultantes podem ser lavados em água e opcionalmente enxaguados com um álcool e secos para se obter um pó de gelatina. Em uma modalidade, as partículas de gelatina reticuladas são preparadas essencialmente como descrito na US 6.066.325.

[0062] Em uma modalidade, a pasta compreende um polímero biocompatível em um teor de cerca de 7% a 20%, tal como cerca de 8% a

17 / 50 18%, por exemplo cerca de 10% a 16%, tal como cerca de 11% a 15%, por exemplo cerca de 12% a 14%.

[0063] Em uma modalidade, a pasta compreende um polímero biocompatível em um teor de cerca de 7% a 20%, tal como cerca de 7% a 18%, por exemplo cerca de 7% a 16%, tal como cerca de 7% a 14%, por exemplo cerca de 7% a 13%, tal como cerca de 7% a 12%, por exemplo cerca de 7% a 11%, tal como cerca de 7% a 10%, por exemplo cerca de 7% a 9%.

[0064] Em uma modalidade, a pasta compreende um polímero biocompatível em um teor de cerca de 7% a 20%, tal como cerca de 10% a 20%, por exemplo cerca de 11% a 20%, tal como cerca de 12% a 20%, por exemplo cerca de 13% a 20%, tal como cerca de 14% a 20%, por exemplo cerca de 15% a 20%, tal como cerca de 17% a 20%, por exemplo cerca de 19% a 20%.

[0065] Em uma modalidade, a pasta compreende um polímero biocompatível em um teor de cerca de 10% a 20%, tal como cerca de 10% a 18%, por exemplo cerca de 10% a 16%, tal como cerca de 10% a 15%.

[0066] A pasta compreendendo um polímero biocompatível pode compreender ainda um ou mais agente(s) hidrofílico(s), tal como, por exemplo, um ou mais poliol(óis) e/ou um ou mais poli(etilenoglicol)(óis) (PEG).

[0067] Em uma modalidade, a pasta que compreende um polímero biocompatível compreende um ou mais outros agentes bioativos. Tal um ou mais agentes bioativos podem ser capazes de estimular a hemostasia, cicatrização de feridas, cicatrização de ossos, cicatrização de tecidos e/ou cicatrização de tendões.

[0068] Em uma modalidade, a pasta compreendendo um polímero biocompatível compreende um ou mais intensificadores de extrusão, tais como, por exemplo, albumina.

[0069] Em uma modalidade, a pasta que compreende um polímero

18 / 50 biocompatível compreende um ou mais agentes antimicrobianos, tais como um ou mais agentes antibacterianos.

[0070] Em uma modalidade, a pasta compreendendo um polímero biocompatível compreende cloreto de benzalcônio.

[0071] A pasta compreendendo um polímero biocompatível, conforme descrito aqui, pode ser preparada de acordo com técnicas conhecidas na técnica. Consequentemente, a pasta compreendendo um polímero biocompatível pode ser preparada por mistura de um pó de polímero biocompatível com um meio aquoso para gerar a dita pasta.

[0072] A pasta compreendendo um polímero biocompatível é geralmente provida na forma estéril. Assim, em uma modalidade, a pasta que compreende um polímero biocompatível é estéril.

[0073] A pasta compreendendo um polímero biocompatível compreende adicionalmente um meio aquoso, como por exemplo água, solução salina, uma solução de cloreto de cálcio ou um meio aquoso tamponado. Meio aquoso

[0074] Um meio aquoso pode ser usado na presente descrição para preparar a pasta que compreende um polímero biocompatível.

[0075] O meio aquoso da presente descrição pode ser qualquer meio aquoso adequado para preparar uma pasta conhecida por um versado na técnica, por exemplo, água, solução salina ou um meio aquoso tamponado. A água pode ser WFI (Água para injeção). É importante que o meio aquoso seja selecionado de modo que o produto em pasta reconstituído seja essencialmente isotônico quando destinado ao uso em um sujeito humano ou animal, tal como para fins hemostáticos e/ou cicatrização de feridas. O meio aquoso é preferencialmente estéril.

[0076] O meio aquoso da presente descrição é, em uma modalidade, uma solução salina.

19 / 50

[0077] Em uma modalidade, o meio aquoso é uma solução de cloreto de cálcio.

[0078] Em outras modalidades, o meio aquoso é água.

[0079] O meio aquoso também pode ser um meio aquoso tamponado adequado para uso em uma pasta hemostática. Qualquer agente tamponante adequado conhecido por um versado na técnica pode ser usado, tal como um ou mais agentes tamponantes selecionados a partir do grupo que consiste em: citrato de sódio; ácido cítrico, citrato de sódio; ácido acético, acetato de sódio; K2HPO4, KH2PO4; Na2HPO4, NaH2PO4; CHES; Bórax, hidróxido de sódio; TAPS; Bicina; Tris; Tricina; TAPSO; HEPES; TES; MOPS; PIPES; Cacodilato; SSC; MES ou outros. O pH do meio aquoso tamponado deve ser adequado para criar uma pasta hemostática destinada ao uso humano e pode ser determinado por um versado.

[0080] Assim, em uma modalidade, a pasta compreendendo um polímero biocompatível compreende um meio aquoso selecionado a partir do grupo que consiste em água, solução salina, uma solução de cloreto de cálcio e um meio aquoso tamponado.

[0081] Em uma modalidade, a pasta compreendendo um polímero biocompatível compreende entre cerca de 60% a cerca de 95% de água, por exemplo cerca de 70% a cerca de 90% de água, tal como entre cerca de 75% a cerca de 90% de água, por exemplo entre cerca de 80% a cerca de 90% de água.

[0082] O meio aquoso pode compreender um ou mais agente(s) hidrofílico(s), tal como, por exemplo, um ou mais poliol(óis) ou um ou mais poli(etilenoglicol)(óis) (PEG).

[0083] Em uma modalidade, o meio aquoso compreende um ou mais outros agentes bioativos. Tal ou mais agentes bioativos podem ser capazes de estimular a hemostasia, cicatrização de feridas, cicatrização de ossos, cicatrização de tecidos e/ou cicatrização de tendões.

20 / 50

[0084] Em uma modalidade, o meio aquoso compreende um ou mais intensificadores de extrusão, tais como, por exemplo, albumina. Compostos hidrofílicos

[0085] Em uma modalidade, a composição hemostática compreende um ou mais compostos hidrofílicos. Os compostos hidrofílicos geralmente contêm grupos funcionais polares ou carregados, tornando-os solúveis em água. A inclusão de um ou mais compostos hidrofílicos na composição hemostática da presente descrição é considerada como tendo um efeito benéfico na estabilidade da trombina e pode melhorar a eficiência da reconstituição da composição de trombina seca. Os compostos hidrofílicos também podem melhorar a consistência da composição hemostática.

[0086] Em uma modalidade, o composto hidrofílico é um polímero hidrofílico. O polímero hidrofílico pode ser natural ou sintético, linear ou ramificado e ter qualquer comprimento adequado.

[0087] Em uma modalidade, o polímero hidrofílico é selecionado a partir do grupo que consiste em polietilenimina (PEI), poli(etilenoglicol) (PEG), poli(óxido de etileno), poli(álcool vinílico) (PVA), poli(estirenossulfonato) (PSS), poli(ácido acrílico) (PAA), poli(cloridrato de alilamina) e poli(ácido vinílico). Em uma modalidade, o composto hidrofílico é PEG.

[0088] Em uma modalidade, o composto hidrofílico é selecionado a partir do grupo que consiste em cloreto de cetilpiridínio, docusato de sódio, glicina, hipromelose, ftalato, lecitina, fosfolipídios, poloxâmero, éteres alquílicos de polioxietileno, derivados de óleo de rícino de polioxietileno, ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitano, estearatos de polioxietileno, álcool polivinílico, lauril sulfato de sódio, ésteres de sorbitano (ésteres de ácido graxo de sorbitano) e tricaprilina.

[0089] Em uma modalidade preferida, o composto hidrofílico é um poliol. Assim, de acordo com uma modalidade da invenção, um ou mais

21 / 50 polióis podem ser incluídos na composição hemostática. Os polióis podem aumentar a taxa de reconstituição da composição de trombina seca, estabilizar a atividade da trombina e desempenhar um papel na garantia de uma consistência ideal da composição hemostática.

[0090] Um poliol conforme definido aqui é um composto com múltiplos grupos funcionais hidroxila. Os polióis incluem açúcares (mono-, di- e polissacarídeos), álcoois de açúcar e derivados dos mesmos. Especialmente preferidos são os álcoois de açúcar.

[0091] Monossacarídeos incluem, mas não estão limitados a glicose, frutose, galactose, xilose e ribose.

[0092] Os dissacarídeos incluem, mas não estão limitados a sacarose (sacarose), lactulose, lactose, maltose, trealose e celobiose.

[0093] Os polissacarídeos incluem, mas não estão limitados a amido, glicogênio, celulose e quitina.

[0094] Um álcool de açúcar, também conhecido como poliálcool, é uma forma hidrogenada de carboidrato, em que o grupo carbonila (aldeído ou cetona, açúcar redutor) foi reduzido a um grupo hidroxila primário ou secundário (por isso, o álcool). Os álcoois de açúcar têm a fórmula geral H(HCHO)n+1H, enquanto os açúcares têm H(HCHO)nHCO. Alguns álcoois de açúcar comuns que podem ser usados no método da presente descrição incluem, mas não estão limitados a: glicol (2-carbonos), glicerol (3-carbonos), eritritol (4-carbonos), treitol (4-carbonos), arabitol (5-carbonos), xilitol (5- carbonos), ribitol (5-carbonos), manitol (6-carbonos), sorbitol (6-carbonos), dulcitol (6-carbonos), fucitol (6-carbonos), iditol (6 carbonos), inositol (6 carbonos); um álcool de açúcar cíclico, volemitol (7 carbonos), isomalte (12 carbonos), maltitol (12 carbonos), lactitol (12 carbonos), poliglicitol.

[0095] Em uma modalidade, a composição hemostática compreende um único composto hidrofílico, tal como um único poliol.

[0096] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática

22 / 50 compreende mais de um composto hidrofílico, tal como dois, três, quatro, cinco, seis ou até mais compostos hidrofílicos diferentes.

[0097] Em uma modalidade preferida, o composto hidrofílico é um poliol.

[0098] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática compreende dois polióis, por exemplo, manitol e glicerol ou trealose e um glicol.

[0099] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática compreende um ou mais álcoois de açúcar, tal como um ou mais álcoois de açúcar selecionados a partir do grupo que consiste em glicol, glicerol, eritritol, treitol, arabitol, xilitol, ribitol, manitol, sorbitol, dulcitol, fucitol, iditol, inositol, volemitol, isomalte, maltitol, lactitol, poliglicitol.

[00100] Em uma modalidade, a composição hemostática compreende um ou mais álcoois de açúcar e um ou mais açúcares, tais como um álcool de açúcar e um açúcar.

[00101] Em uma modalidade, a composição hemostática compreende um álcool de açúcar e, opcionalmente, um ou mais compostos hidrofílicos adicionais, tais como um ou mais polióis, que podem ser álcoois de açúcar ou açúcares.

[00102] Em uma modalidade, a composição hemostática não compreende um açúcar como o único poliol.

[00103] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática compreende manitol.

[00104] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática compreende sorbitol.

[00105] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática compreende glicerol.

[00106] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática compreende trealose.

23 / 50

[00107] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática compreende glicol, tal como propileno glicol.

[00108] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática compreende xilitol.

[00109] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática compreende maltitol.

[00110] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática compreende sorbitol.

[00111] Em uma modalidade, a composição hemostática compreende de cerca de 1% a cerca de 20% de um ou mais compostos hidrofílicos, por exemplo, de cerca de 1% a cerca de 15% de um ou mais compostos hidrofílicos, tal como de cerca de 1% a cerca de 10% de um ou mais compostos hidrofílicos, por exemplo, de cerca de 1% a cerca de 7% de um ou mais compostos hidrofílicos, tais como de cerca de 1% a cerca de 5% de um ou mais compostos hidrofílicos, tal como de cerca de 2% a cerca de 5% de um ou mais compostos hidrofílicos, por exemplo de cerca de 3% a cerca de 5% de um ou mais compostos hidrofílicos.

[00112] Em uma modalidade, o composto hidrofílico da presente descrição não é poli(etileno glicol) (PEG).

[00113] O composto hidrofílico pode ser um componente da composição de trombina seca, um componente da pasta compreendendo um polímero biocompatível e/ou ser incorporado na composição hemostática em uma etapa separada após reconstituição da composição de trombina seca.

[00114] Em uma modalidade, o um ou mais composto(s) hidrofílico(s) é um componente da composição de trombina seca.

[00115] Em uma modalidade, o um ou mais composto(s) hidrofílico(s) é um componente da pasta que compreende um polímero biocompatível.

[00116] Em uma modalidade, o um ou mais composto(s) hidrofílico(s) são incorporados na composição hemostática em uma etapa separada após a

24 / 50 reconstituição da composição de trombina seca.

[00117] De preferência, o(s) composto(s) hidrofílico(s) é (são) incluído(s) no componente de trombina ou no componente de pasta para evitar etapas de mistura adicionais para produzir a composição hemostática. Agentes bioativos adicionais

[00118] Em uma modalidade da invenção, a composição hemostática compreende um ou mais agentes bioativos adicionais capazes de estimular a hemostasia, cicatrização de feridas, cicatrização óssea, cicatrização de tecidos e/ou cicatrização de tendões. O um ou mais agentes bioativos podem ser um componente da composição de trombina seca, a pasta compreendendo um polímero biocompatível e/ou ser incorporada na composição hemostática em uma etapa separada após a reconstituição da composição de trombina seca. De preferência, tais agentes bioativos são incluídos ou na composição de trombina seca ou na pasta que compreende um polímero biocompatível para evitar etapas de mistura adicionais. É essencial que o agente bioativo retenha sua bioatividade durante o armazenamento e a reconstituição, isto é, que o agente retenha sua função biológica na composição hemostática final. Muitos agentes bioativos são instáveis em solução, particularmente enzimas e outras proteínas que podem ser degradadas ou perder sua estrutura secundária quando a água está presente.

[00119] O um ou mais agentes bioativos adicionais podem ser, por exemplo, fibrinogênio, fibrinogênio em combinação com Fator XIII ou fibrinogênio e Fator XIII em combinação com ácido tranexâmico.

[00120] Em uma modalidade, a composição hemostática compreende um ou mais agentes bioativos adicionais que estimulam a cicatrização de osso e/ou tendão e/ou tecido, tal como um ou mais fatores de crescimento selecionados a partir do grupo que consiste em metaloproteinases de matriz (MMPs), fator de crescimento semelhante à insulina 1 (IGF-I), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), fator de crescimento endotelial

25 / 50 vascular (VEGF), fator de crescimento de fibroblastos básico (bFGF) e fator de crescimento transformador beta (TGF-β).

[00121] Em uma modalidade, a composição hemostática compreende uma ou mais Proteínas Morfogenéticas Ósseas (BMPs). As proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) são um subgrupo da superfamília TGF-β. As proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) são um grupo de fatores de crescimento também conhecidos como citocinas e como metabologenos. Verificadas originalmente por sua capacidade de induzir a formação de osso e cartilagem, as BMPs são agora consideradas como constituindo um grupo de sinais morfogenéticos essenciais, orquestrando a arquitetura do tecido por todo o corpo.

[00122] Em uma modalidade, a composição hemostática compreende uma ou mais metaloproteinases de matriz (MMPs). MMPs são endopeptidases dependentes de zinco. As MMPs têm um papel muito importante na degradação e remodelação da matriz extracelular (MEC) durante o processo de cicatrização após uma lesão. Certas MMPs, incluindo MMP-1, MMP-2, MMP-8, MMP-13 e MMP-14, têm atividade de colagenase, o que significa que, ao contrário de muitas outras enzimas, são capazes de degradar fibrilas de colágeno I.

[00123] Todos esses fatores de crescimento têm papéis diferentes durante o processo de cura. O IGF-1 aumenta a produção de colágeno e proteoglicano durante o primeiro estágio da inflamação, e o PDGF também está presente durante os estágios iniciais após a lesão e promove a síntese de outros fatores de crescimento junto com a síntese de DNA e a proliferação de células. As três isoformas de TGF-β (TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3) são conhecidas por desempenhar um papel na cicatrização de feridas e na formação de cicatrizes. O VEGF é bem conhecido por promover a angiogênese e induzir a proliferação e migração de células endoteliais.

[00124] Em uma modalidade, a composição hemostática da presente

26 / 50 descrição compreende flocos ou partículas de matriz extracelular (MEC). MEC é a parte extracelular do tecido animal que geralmente provê suporte estrutural para as células animais, além de realizar várias outras funções importantes. A MEC demonstrou ter um efeito muito benéfico na cicatrização, pois facilita a regeneração funcional do tecido.

[00125] A variedade de outros agentes bioativos que podem ser usados em conjunto com a composição hemostática da invenção é vasta. Em geral, os agentes bioativos que podem ser administrados por meio da composição hemostática da invenção incluem, sem limitação, anti-infecciosos, tais como antibióticos e agentes antivirais; analgésicos e combinações de analgésicos; anti-helmínticos; antiartríticos; anticonvulsivantes; antidepressivos; anti- histamínicos; agentes anti-inflamatórios; preparações antienxaqueca; antineoplásicos; fármacos antiparkinsonismo; antipsicóticos; antipiréticos, antiespasmódicos; anticolinérgicos; simpaticomiméticos; derivados de xantina; preparações cardiovasculares, incluindo bloqueadores dos canais de cálcio e beta-bloqueadores, tais como pindolol e antiarrítmicos; anti- hipertensivos; diuréticos; vasodilatadores, incluindo coronários gerais, periféricos e cerebrais; estimulantes do sistema nervoso central; hormônios, tais como estradiol e outros esteróides, incluindo corticosteróides; imunossupressores; relaxantes musculares; parassimpatolíticos; psicoestimulantes; proteínas, polissacarídeos, glicoproteínas ou lipoproteínas derivadas naturalmente ou geneticamente modificadas; oligonucleotídeos, anticorpos, antígenos, colinérgicos, quimioterápicos, agentes radioativos, agentes osteoindutores, neutralizadores de heparina cistostáticos, pró- coagulantes e agentes hemostáticos, tais como protrombina, trombina, fibrinogênio, fibrina, fibronectina, heparinase, Fator X/Xa, Fator VII/VIIa, Fator VIII/VIIIa, Fator IX/IXa, Fator XI/XIa, Fator XII/XIIa, Fator XIII/XIIIa, fator de tecido, batroxobina, ancrod, ecarina, Fator de von Willebrand, glicoproteínas de superfície plaquetária, vasopressina, análogos

27 / 50 de vasopressina, epinefrina, selectina, veneno pró-coagulante, inibidor do ativador do plasminogênio, agentes ativadores de plaquetas e peptídeos sintéticos com atividade hemostática.

[00126] Em uma modalidade, o um ou mais agentes bioativos adicionais são um componente da composição de trombina seca.

[00127] Em uma modalidade, o um ou mais agentes bioativos adicionais são um componente da pasta que compreende um polímero biocompatível.

[00128] Em uma modalidade, o um ou mais agentes bioativos adicionais são incorporados na composição hemostática em uma etapa separada após a reconstituição da composição de trombina seca. Compostos adicionais

[00129] A composição hemostática da invenção pode ainda compreender um ou mais dos seguintes: DMSO (sulfóxido de dimetila) e/ou 2-metil-2,4-pentanodiol (MPD).

[00130] Em uma modalidade, a composição hemostática da presente descrição compreende um ou mais agentes antimicrobianos, tais como um ou mais agentes antibacterianos.

[00131] Em uma modalidade, a composição hemostática da presente descrição compreende cloreto de benzalcônio.

[00132] Em uma modalidade, a composição hemostática da presente descrição não compreende um agente antimicrobiano.

[00133] Em uma modalidade, a composição hemostática compreende adicionalmente um intensificador de extrusão, isto é, um composto capaz de facilitar a extrusão de uma pasta de uma seringa.

[00134] Foi anteriormente demonstrado que a provisão de certos intensificadores de extrusão, tais como albumina em uma quantidade apropriada, permite o uso de concentrações de gelatina mais altas, uma vez que diminui a quantidade de força necessária para extrudar a composição de

28 / 50 pasta de gelatina a partir de, por exemplo, uma seringa. O uso de concentrações mais altas de gelatina pode, por sua vez, melhorar as propriedades hemostáticas de tais produtos. É necessário prover os intensificadores de extrusão em quantidades apropriadas. As quantidades são, de preferência, suficientemente elevadas de modo a obter o efeito de extrusão, isto é, para permitir uma pasta fluível mesmo para quantidades relativamente elevadas do polímero biocompatível, por exemplo, gelatina reticulada, de modo que a composição hemostática pode ser aplicada com precisão por um cirurgião usando, por exemplo, uma seringa que compreende uma ponta aplicadora; por outro lado, as quantidades devem ser tão baixas quanto para evitar propriedades funcionais negativas potenciais da composição hemostática.

[00135] O intensificador de extrusão é de preferência albumina, especialmente albumina de soro humano.

[00136] Na composição hemostática da presente invenção, o intensificador de extrusão, tal como albumina, está presente em uma quantidade entre cerca de 0,1% a cerca de 10%, tal como entre cerca de 0,2% a cerca de 8%, por exemplo, entre cerca de 0,3% a cerca de 7%, de preferência entre cerca de 0,5% a cerca de 5%, tal como entre cerca de 1% a cerca de 4%.

[00137] Em uma modalidade, a composição hemostática da presente invenção compreende traços de albumina, tal como menos de 0,1%, por exemplo, menos de 0,01%, tal como menos de 0,001%, por exemplo, menos de 0,0001%.

[00138] O um ou mais composto(s) adicional(is) pode(m) ser um componente da composição de trombina seca, um componente da pasta compreendendo um polímero biocompatível e/ou ser incorporado na composição hemostática em uma etapa separada após a reconstituição da composição de trombina seca.

29 / 50

[00139] Em uma modalidade, o um ou mais composto(s) adicional(is) é/são um componente da composição de trombina seca.

[00140] Em uma modalidade, o um ou mais composto(s) adicional(is) é/são um componente da pasta que compreende um polímero biocompatível.

[00141] Em uma modalidade, o um ou mais composto(s) adicional(is) é/são incorporado(s) na composição hemostática em uma etapa separada após a reconstituição da composição de trombina seca. Fazendo a composição hemostática/reconstituição da composição de trombina seca

[00142] A presente descrição se refere a um método para reconstituir uma composição de trombina seca diretamente em uma pasta para gerar uma composição hemostática adequada para uso no tratamento de uma ferida; particularmente para fins hemostáticos.

[00143] Assim, em uma modalidade, um método para preparar uma composição hemostática é provido, o método compreendendo as etapas de: a) prover uma composição de trombina seca em um primeiro recipiente; b) prover uma pasta compreendendo um polímero biocompatível em um segundo recipiente; c) conectar o primeiro recipiente e o segundo recipiente usando meios de conexão; e d) misturar os teores dos recipientes.

[00144] Em uma modalidade, um método para reconstituir uma composição de trombina seca é provido, o método compreendendo as etapas de: a) prover uma composição de trombina seca em um primeiro recipiente; b) prover uma pasta compreendendo um polímero biocompatível em um segundo recipiente;

30 / 50 c) conectar o primeiro recipiente e o segundo recipiente usando meios de conexão; e d) misturar os teores dos recipientes.

[00145] Os recipientes são geralmente seringas, mais preferencialmente seringas interconectáveis.

[00146] Em uma modalidade, o meio de conexão adequado compreende um misturador estático. O dito misturador estático pode prover a capacidade de misturar ar na pasta durante a mistura. As dimensões do misturador estático podem influenciar a consistência da composição hemostática e a capacidade de misturar o ar na composição hemostática.

[00147] Em uma modalidade, os meios de conexão adequados compreendem uma parte do conector de um tipo padrão, tal como uma Luer Lock ou conector Luer Slip. As dimensões do Luer Lock ou da conexão Luer Slip podem influenciar a consistência da composição hemostática e a capacidade de misturar o ar na composição hemostática.

[00148] A mistura é realizada transferindo o teor dos recipientes para a frente e para trás várias vezes.

[00149] Em uma modalidade, o número de transferências é menos de 20 vezes, por exemplo, menos de 15 vezes, como menos de 12 vezes, por exemplo, menos de 10 vezes, como menos de 6 vezes.

[00150] Em uma modalidade, o número de transferências é menos de 10, por exemplo menos do que 9, tal como menos do que 8 vezes, por exemplo menos do que 7 vezes, tal como menos do que 6 vezes, por exemplo menos do que 5 vezes.

[00151] Em uma modalidade, o número de transferências é menos de

8.

[00152] Em uma modalidade preferida, o número de transferências é cerca de 6 vezes ou menos.

[00153] A mistura com 6 transferências pode ser realizada da seguinte

31 / 50 forma: A mistura é iniciada pela transferência da pasta compreendendo um polímero biocompatível para o primeiro recipiente contendo a composição de trombina seca. Assim, a primeira transferência é distinguida pela transferência da pasta que compreende um polímero biocompatível do segundo recipiente para o primeiro recipiente. A segunda transferência é distinguida pela transferência da mistura de trombina e pasta, resultante da primeira transferência, do primeiro recipiente para o segundo recipiente, contendo inicialmente a pasta que compreende um polímero biocompatível. A terceira transferência é distinguida pela transferência da mistura de trombina e pasta, resultante da segunda transferência, do segundo recipiente para o primeiro recipiente. A quarta transferência é distinguida pela transferência da mistura de trombina e pasta, resultante da terceira transferência, do primeiro recipiente para o segundo recipiente. A quinta transferência é distinguida pela transferência da mistura de trombina e pasta, resultante da quarta transferência, do segundo recipiente para o primeiro recipiente. A sexta e última transferência é distinguida pela transferência da mistura de trombina e pasta, resultante da quinta transferência, do primeiro recipiente para o segundo recipiente.

[00154] Em uma modalidade, mais de seis transferências entre o primeiro e o segundo recipientes são usadas para reconstituir a composição de trombina seca na pasta.

[00155] Em uma modalidade, a transferência final é distinguida pela transferência da mistura de trombina e pasta do primeiro recipiente para o segundo recipiente. A composição hemostática resultante pode então ser aplicada diretamente a partir do dito segundo recipiente em um local de tratamento, por exemplo, em uma ferida sangrando. Uma ponta aplicadora pode, em algumas modalidades, ser encaixada na seringa e empregada conforme descrito anteriormente.

[00156] A mistura da composição de trombina seca e a pasta

32 / 50 compreendendo um polímero biocompatível resulta em distribuição substancialmente homogênea de trombina na composição hemostática. A composição hemostática

[00157] A composição hemostática desta descrição é preparada pela reconstituição de uma composição de trombina seca diretamente em uma pasta que compreende um polímero biocompatível. A reconstituição da pasta pode ser realizada por métodos como aqui descritos. A composição hemostática tem uma distribuição substancialmente homogênea de trombina na composição hemostática.

[00158] Em uma modalidade, a distribuição homogênea de trombina é distinguida por uma variação no teor de trombina ao longo da composição hemostática de menos de 20%, por exemplo, menos de 10%, tal como menos de 5%, por exemplo menos de 4%, tal como menos de 3%, por exemplo menos de 2%, tal como menos de 1%. A variação no teor de trombina pode ser medida como a diferença na atividade ou concentração da trombina entre as diferentes frações da pasta hemostática no recipiente, tal como por exemplo entre a fração inicial de uma seringa, a fração média de uma seringa ou a fração final de um seringa.

[00159] Em uma modalidade, a variação no teor de trombina ao longo da composição hemostática é menos de 10%.

[00160] Em uma modalidade, a variação no teor de trombina ao longo da composição hemostática é menos de 5%.

[00161] Em uma modalidade, a variação no teor de trombina ao longo da composição hemostática é menos de 4%.

[00162] Em uma modalidade, a variação no teor de trombina ao longo da composição hemostática é menos de 3%.

[00163] Em uma modalidade, a variação no teor de trombina ao longo da composição hemostática é menos de 2%.

[00164] Em uma modalidade, a variação no teor de trombina ao longo

33 / 50 da composição hemostática é menos de 1%.

[00165] A composição hemostática obtida pelos métodos descritos aqui é preferencialmente uma composição fluível. A composição hemostática obtida pelos métodos aqui descritos é adequada para uso em hemostasia e/ou cicatrização de feridas.

[00166] A composição hemostática pode compreender um ou mais agente(s) hidrofílico(s), tal como por exemplo um ou mais poliol(óis) ou um ou mais poli(etilenoglicol)(óis) (PEG).

[00167] Em uma modalidade, a composição hemostática compreende um ou mais outros agentes bioativos além da trombina. Tal um ou mais agentes bioativos podem ser capazes de estimular a hemostasia, cicatrização de feridas, cicatrização de ossos, cicatrização de tecidos e/ou cicatrização de tendões.

[00168] Em uma modalidade, a composição hemostática compreende um ou mais intensificadores de extrusão, tal como, por exemplo, albumina.

[00169] A composição hemostática pode ser obtida por qualquer método de reconstituição de uma composição de trombina seca como aqui descrito.

[00170] Em uma modalidade, a composição hemostática tem uma consistência dentro da faixa de cerca de 100 g x s a cerca de 10000 g x s, tal como de cerca de 500 g x s a cerca de 5000 g x s, por exemplo de cerca de 1000 g x se a cerca de 3000 g x s, tal como de cerca de 1500 g x s a cerca de 2000 g x s.

[00171] Em uma modalidade, a composição hemostática tem uma consistência de menos do que cerca de 5000 g x s, por exemplo, menos do que cerca de 4000 g x s, tal como menos do que cerca de 3000 g x s, por exemplo menos do que cerca de 2000 g x s. Recipientes

[00172] Quaisquer recipientes adequados conhecidos por um versado

34 / 50 podem ser usados para preparar a composição hemostática, tais como frascos, potes, tubos, bandejas, cartuchos ou seringas.

[00173] A composição de trombina seca é provida em um primeiro recipiente e a pasta compreendendo um polímero biocompatível é provida em um segundo recipiente.

[00174] O primeiro e o segundo recipientes podem ser feitos de qualquer material adequado, tal como plástico, vidro, cerâmica, plástico ou metal, tal como aço inoxidável. Exemplos de materiais plásticos adequados incluem, mas não estão limitados a polietileno, polipropileno, poliestireno, cloreto de polivinila e politetrafluoroetileno (PTFE).

[00175] Em uma modalidade, a composição de trombina seca é provida em um primeiro recipiente que pode ser selecionado dentre uma seringa, um frasco, um pote, um tubo, uma bandeja ou um cartucho.

[00176] Em uma modalidade preferida, o dito primeiro recipiente contendo a composição de trombina seca é um dispositivo de distribuição médico adequado para distribuir composições hemostáticas fluíveis a um paciente que delas necessite, tal como uma seringa.

[00177] O primeiro recipiente é geralmente feito de um material adequado para esterilização química de superfície sem influenciar o teor do recipiente. Por exemplo, o dito primeiro recipiente pode ser feito de um material que é impermeável ao óxido de etileno, tal como, por exemplo, feito de metal, vidro ou um plástico que é impermeável ao óxido de etileno.

[00178] A composição de trombina seca pode preferencialmente ser provida em um recipiente de vidro, permitindo assim a esterilização do dito recipiente usando óxido de etileno gasoso. Em uma modalidade, o dito primeiro recipiente é uma seringa de vidro. Em uma modalidade, o dito primeiro recipiente é uma seringa com um inserto de vidro contendo a trombina seca.

[00179] Em uma modalidade, a pasta que compreende um polímero

35 / 50 biocompatível é provida em um segundo recipiente que pode ser selecionado dentre uma seringa, um frasco, um pote, um tubo, uma bandeja ou um cartucho. A pasta compreendendo um polímero biocompatível pode ser preparada por métodos conhecidos na técnica, tais como por mistura de um pó de polímero biocompatível com um meio aquoso para gerar a dita pasta. A pasta compreendendo um polímero biocompatível pode ser adequadamente preparada a granel e transferida/aliquotada para o dito segundo recipiente.

[00180] Em uma modalidade preferida, o recipiente que contém a pasta que compreende um polímero biocompatível é um dispositivo de distribuição médico adequado para distribuir composições hemostáticas fluíveis a um paciente que delas necessite, tal como uma seringa. Em uma modalidade, o segundo recipiente é uma seringa de plástico descartável.

[00181] Em uma modalidade, o primeiro e o segundo recipientes são interconectáveis. A parte do conector pode ser uma parte do conector de um tipo padrão, tal como um conector Luer lock ou um conector Luer slip. A parte do conector pode ser provida com uma parte roscada para conexão segura com o conector correspondente. As dimensões da dita conexão Luer lock ou Luer slip podem ser capazes de alterar a capacidade de mistura do ar na composição hemostática durante a mistura da composição de trombina seca e a pasta compreendendo um polímero biocompatível. Além disso, as dimensões da conexão Luer lock ou Luer slip podem ser capazes de influenciar a consistência da composição hemostática.

[00182] Em uma modalidade, a parte do conector compreende um misturador estático. As dimensões do dito misturador estático podem ser capazes de alterar a capacidade de mistura do ar na composição hemostática durante a mistura da composição de trombina seca e a pasta compreendendo um polímero biocompatível. Além disso, as dimensões do misturador estático podem influenciar a consistência da composição hemostática. Embalagem externa

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[00183] Em uma modalidade, a composição de trombina seca e/ou a pasta compreendendo um polímero biocompatível contido dentro de, por exemplo, uma seringa, tal como a seringa aqui descrita, ou outra unidade de contenção, está ainda contida dentro de uma embalagem externa de modo que o produto seja mantido estéril até o uso. Isso permitirá que o usuário remova a embalagem externa e transfira os componentes da composição hemostática para um campo estéril.

[00184] A embalagem externa é geralmente feita de um material flexível, semirrígido ou rígido e normalmente consiste em materiais tais como plástico, folha de alumínio e/ou laminado de plástico, onde o plástico pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em PET, PETG, PE, LLDPE, CPP, PA, PETP, METPET, Tyvek e opcionalmente ligado com um adesivo, tal como poliuretano, ou coextrudado.

[00185] Em uma modalidade, a embalagem externa é uma embalagem externa de folha de alumínio.

[00186] A embalagem externa forma de preferência uma barreira completa à umidade.

[00187] A embalagem externa é, de preferência, capaz de suportar tratamento de esterilização, tal como por radiação.

[00188] Em uma modalidade, a primeira seringa que compreende uma composição de trombina seca e a segunda seringa compreendendo uma pasta que compreende um polímero biocompatível estão contidas em embalagens externas separadas. Esterilização

[00189] A composição de trombina seca, a pasta compreendendo um polímero biocompatível e/ou a composição hemostática da presente descrição são preferencialmente estéreis. Qualquer técnica de esterilização adequada conhecida na técnica pode ser usada. Esterilização refere-se a qualquer processo que efetivamente mata ou elimina agentes transmissíveis (tais como

37 / 50 fungos, bactérias, vírus, príons e formas de esporos, etc.). A esterilização pode ser conseguida através de, por exemplo, aplicação de calor, produtos químicos e/ou irradiação.

[00190] A esterilização pode ser obtida por esterilização por calor, incluindo autoclavagem (usa vapor em altas temperaturas) e calor seco.

[00191] A esterilização pode ser conseguida por irradiação, por exemplo, irradiação ionizante, de modo a prover esterilidade aos componentes. Essa irradiação pode incluir feixe de elétrons (irradiação beta), raios-X, raios gama e beta, luz ultravioleta e partículas subatômicas. O nível de irradiação e as condições de esterilização, incluindo o tempo, são aqueles que proporcionam composições estéreis. As condições de esterilização são semelhantes às atualmente usadas na técnica e podem ser determinadas pelo versado.

[00192] A esterilização pode ser realizada por esterilização química, tal como usando gás de óxido de etileno, ozônio, alvejante de cloro, glutaraldeído, formaldeído, orto ftalaldeído, peróxido de hidrogênio e/ou ácido peracético.

[00193] A composição de trombina seca é geralmente preparada usando métodos assépticos, provendo assim uma composição de trombina seca estéril no dito primeiro recipiente.

[00194] Em uma modalidade, a superfície do primeiro recipiente que compreende uma composição de trombina seca é esterilizada com esterilização química, tal como com óxido de etileno gasoso.

[00195] Em uma modalidade, a pasta compreendendo um polímero biocompatível é esterilizada por irradiação, tal como por irradiação gama.

[00196] Em uma modalidade, a esterilização do segundo recipiente compreendendo uma pasta que compreende um polímero biocompatível é esterilizada usando irradiação beta ou gama, provendo assim uma pasta estéril e um recipiente estéril.

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[00197] Em uma modalidade, a esterilização do segundo recipiente que compreende uma pasta compreendendo um polímero biocompatível ocorre como esterilização terminal, isto é, quando o segundo recipiente que compreende uma pasta compreendendo um polímero biocompatível está contido dentro de uma embalagem externa. Uso médico

[00198] A presente descrição se refere ainda ao uso da composição hemostática obtida pelos métodos desta descrição para promover a hemostasia e/ou cicatrização de feridas.

[00199] A composição hemostática da presente descrição pode, por exemplo, ser usada em uma série de procedimentos cirúrgicos em que o controle de sangramento é desejado. A composição hemostática está na forma de uma pasta que se conforma a superfícies irregulares para parar o sangramento rápido e é, portanto, útil para prover hemostase rápida em superfícies ásperas ou irregulares onde as esponjas hemostáticas não são eficientes.

[00200] Em geral, as pastas hemostáticas são preparadas diretamente no local da cirurgia no momento da necessidade pelo médico, isto é, os médicos ou enfermeiras geralmente por adição de líquido (opcionalmente compreendendo trombina) a um recipiente, tal como uma seringa, contendo uma quantidade de um polímero biocompatível. O polímero biocompatível pode ser pré-umedecido com o líquido ou estar essencialmente seco (pó fluindo solto). A pasta é, portanto, muitas vezes preparada em condições extremamente estressantes e, portanto, é essencial que o processo de preparação da pasta seja simples e rápido para garantir que o sangramento seja interrompido o mais rápido possível e que nenhum erro seja cometido durante a preparação da pasta de forma que a enfermeira pode manter o foco nas necessidades do cirurgião em vez de preparar o hemostato. É também importante que a consistência da pasta seja adequada para uso como pasta

39 / 50 hemostática e que a consistência do produto seja independente da preparação para a preparação e ao longo do tempo.

[00201] Produtos de pasta fluível atualmente disponíveis (Floseal® e Surgiflo®) requerem reconstituição de uma composição de trombina em um líquido antes da mistura mecânica da dita solução de trombina reconstituída com o polímero biocompatível passando o polímero biocompatível e o líquido entre duas seringas conectadas várias vezes para obter uma pasta substancialmente homogênea. A reconstituição da trombina é demorada e sujeita a erros, dois fatores indesejáveis em um ambiente de cirurgia. Esses produtos frequentemente são pré-preparados na sala de cirurgia antes da cirurgia, caso sejam necessários durante a cirurgia e o produto não usado seja frequentemente descartado, causando altos custos desnecessários na sala de cirurgia.

[00202] O método para preparar uma composição hemostática da presente descrição é superior aos métodos atualmente disponíveis, pois reduz o número de etapas de manipulação no procedimento, permitindo a reconstituição direta de uma composição de trombina seca em uma pasta. A composição hemostática da presente descrição pode ser preparada simplesmente adicionando uma quantidade de uma pasta compreendendo um polímero biocompatível a um recipiente compreendendo a composição de trombina seca e misturando o teor, tal como transferir o teor entre duas seringas interligadas várias vezes, após o que forma-se uma pasta hemostática pronta para usar que compreende trombina distribuída de maneira substancialmente homogênea.

[00203] O fato de que nenhuma reconstituição prévia da composição de trombina seca em um líquido é necessária também significa que menos tempo é gasto na preparação da pasta, o que por sua vez leva a uma maior segurança do paciente, tanto devido ao fato de que a composição hemostática pode ser aplicada ao paciente mais rápido e que o método de preparação

40 / 50 simples diminui a probabilidade de erros serem cometidos durante a preparação da composição hemostática. Além disso, o método para preparar uma composição hemostática da presente descrição pode diminuir os custos da sala de cirurgia, pois não há necessidade de pré-preparar o produto atual antes da cirurgia, uma vez que a preparação é tão simples e rápida.

[00204] Outra vantagem notável do método da presente invenção é que um estojo que consiste em menos componentes pode ser preparado em comparação com os atuais estojos hemostáticos fluíveis. Tudo o que é necessário para preparar uma composição de pasta fluível na sala de cirurgia é a composição de trombina seca, conforme descrito aqui, compreendida em um primeiro recipiente, tal como uma seringa e um segundo recipiente, como um dispositivo de distribuição médico compreendendo uma pasta que compreende um polímero biocompatível. Após a conexão dos dois e a mistura, uma pasta fluível pronta para usar contendo todos os agentes necessários para a hemostase eficaz, incluindo trombina é formada. Assim, nenhuma seringa extra, adaptadores de frasco, agulhas e tigelas de mistura são necessários com o produto preparado de acordo com os métodos da presente descrição. Isso significa que os custos de fabricação podem ser reduzidos e também garante uma boa segurança do paciente, uma vez que há menos componentes para a equipe da sala de cirurgia controlar durante a cirurgia. A preparação do hemostato sem agulhas também garante a segurança da equipe da sala de cirurgia.

[00205] Em uma modalidade, a presente descrição refere-se a um método para interromper o sangramento/promoção da hemostasia em um indivíduo em necessidade do mesmo por aplicação da composição hemostática preparada pelos métodos da presente descrição a um local de sangramento.

[00206] A composição hemostática da presente descrição pode ser usada para qualquer tipo de cirurgia, incluindo cirurgia geral, cirurgia

41 / 50 cardiotorácica, cirurgia vascular, cirurgia plástica, cirurgia pediátrica, cirurgia colorretal, cirurgia de transplante, oncologia cirúrgica, cirurgia de trauma, cirurgia endócrina, cirurgia de mama, cirurgia de pele, otorrinolaringologia, ginecologia, cirurgia oral e maxilofacial, cirurgia dentária, cirurgia ortopédica, neurocirurgia, oftalmologia, cirurgia podológica, urologia.

[00207] Em uma modalidade, a presente descrição se refere a um método para promover a cicatrização de feridas em um indivíduo em necessidade do mesmo por aplicação da composição hemostática preparada pelos métodos da presente descrição na ferida.

[00208] Uma “ferida” refere-se amplamente a lesões na pele e/ou tecido subjacente (subcutâneo) iniciadas de maneiras diferentes (por exemplo, úlceras de pressão de repouso prolongado e feridas induzidas por trauma) e com características variáveis. As feridas podem ser classificadas em um de quatro graus, dependendo da profundidade da ferida: i) Grau I: feridas limitadas ao epitélio; ii) Grau II: feridas que se estendem até a derme; iii) Grau III: feridas que se estendem para o tecido subcutâneo; e iv) Grau IV (ou feridas de espessura total): feridas em que os ossos são expostos (por exemplo, um ponto de pressão óssea, tal como o trocanter maior ou o sacro). A presente descrição refere-se ao tratamento de qualquer tipo de ferida mencionada acima usando a composição hemostática da presente descrição.

[00209] O tratamento de uma ferida pode, em princípio, resultar na cura da ferida ou na cura acelerada da ferida. A cura acelerada pode ser resultado da, por exemplo, administração de uma substância promotora de cicatrização de feridas. Alternativamente, a cicatrização da ferida pode ser promovida pela prevenção da infecção bacteriana ou viral, ou pela redução do risco de tal infecção que de outra forma teria prolongado o processo de tratamento da ferida.

[00210] Em uma modalidade, a presente descrição se refere a um método para promover a cicatrização de osso e/ou tendão em um indivíduo

42 / 50 em necessidade do mesmo por aplicação da composição hemostática preparada pelos métodos da presente descrição ao osso/tendão lesionado.

[00211] O “indivíduo” aqui referido pode ser qualquer mamífero, incluindo, mas não se limitando a, mamíferos da ordem Rodentia, tais como camundongos e hamsters, e mamíferos da ordem Logomorpha, tais como coelhos. É preferível que os mamíferos sejam da ordem Carnivora, incluindo Felinos (gatos) e Caninos (cães). É mais preferido que os mamíferos sejam da ordem Artiodactyla, incluindo Bovinos (vacas) e Suínos (porcos) ou da ordem Perssodactyla, incluindo Equinos (cavalos). É mais preferido que os mamíferos sejam da ordem dos Primatas, Cebóides ou Simóides (macacos) ou da ordem dos Antropóides (humanos e macacos). Um mamífero especialmente preferido é o humano.

[00212] Em uma modalidade, a presente descrição se refere a uma composição hemostática, conforme descrito aqui, para uso no tratamento de uma ferida, por exemplo, para parar o sangramento ou para promover a cicatrização de feridas. Um estojo hemostático

[00213] A presente descrição se refere ainda a um estojo hemostático que compreende a composição de trombina seca da presente descrição e uma pasta que compreende um polímero biocompatível combinado com a quantidade da composição de trombina seca de modo que, após a mistura, uma composição hemostática com um teor de trombina adequado para uso em hemostasia irá se formar.

[00214] Portanto, em uma modalidade, a presente descrição se refere a um estojo hemostático que compreende: a) uma primeira seringa compreendendo uma composição de trombina seca; b) uma segunda seringa que compreende uma pasta que compreende um polímero biocompatível; e

43 / 50 c) opcionalmente, uma embalagem externa, em que as duas seringas são interconectáveis.

[00215] Em uma modalidade, o estojo hemostático compreende: a) uma primeira seringa compreendendo uma composição de trombina seca em uma embalagem externa; b) uma segunda seringa compreendendo uma pasta que compreende um polímero biocompatível em uma embalagem externa; e c) opcionalmente, uma embalagem externa compreendendo os componentes de a) e b), em que as duas seringas são interconectáveis.

[00216] Em uma modalidade, o estojo compreende adicionalmente uma ou mais pontas aplicadoras.

[00217] O estojo pode conter opcionalmente instruções de uso do estojo.

[00218] Os componentes do estojo hemostático podem ser conforme descrito em outro lugar aqui. Exemplos Exemplo 1: Distribuição de trombina na pasta Materiais:

[00219] 2.000 UI de trombina seca em uma seringa de vidro de 10 ml (primeira seringa).

[00220] 5 ml de uma pasta de gelatina em uma seringa de 10 ml (segunda seringa). Método:

[00221] As duas seringas são interconectadas por meio de um luer lock e o teor da pasta de gelatina é transferido para a seringa contendo a composição de trombina seca (primeira transferência). A mistura resultante de trombina e pasta de gelatina é então transferida para a frente e para trás entre a primeira e a segunda seringas cinco vezes, resultando em uma composição hemostática contida na segunda seringa (Figura 1). O número total de

44 / 50 transferências é de 6 vezes. A composição hemostática obtida é uma formulação de pasta fluível compreendendo trombina e é aqui identificada como a pasta “6tomix” ou “6TM”. Como consequência da mistura, um total de cerca de 3 ml de ar é misturado à pasta, provendo um volume final da pasta de cerca de 8 ml. Resultados:

[00222] A composição hemostática final é uma pasta com um volume de cerca de 8 ml.

[00223] O teor de trombina da composição hemostática é medido como a atividade média da trombina em diferentes frações da composição hemostática.

[00224] As seguintes divisões fracionárias são aplicadas: A fração inicial (isto é, o primeiro 1/3 da composição hemostática extrudada da seringa), a fração intermediária (a média de 1/3 da composição hemostática extrudada da seringa) e a fração final (o último 1/3 composição hemostática extrudada da seringa).

[00225] A atividade da trombina da composição hemostática total é fixada em 100% e a atividade média da trombina das frações individuais é calculada como porcentagem da atividade total. Uma distribuição de trombina completamente homogênea na composição hemostática resultaria em uma atividade média de trombina de cada uma das três frações de 33,333%. Fração Fração inicial intermediária Fração final Atividade média de trombina 33 % 31 % 36 % Variação no teor de trombina:

[00226] A variação no teor de trombina é calculada como a diferença percentual na atividade média da trombina entre duas frações.

[00227] A variação máxima no teor de trombina é aqui calculada da seguinte forma: (36 / (31 + 36)) - 0,50) * 100 = 3,7%.

[00228] Em conclusão, isso demonstra que uma composição de

45 / 50 trombina seca pode ser reconstituída diretamente em uma pasta de gelatina, por meio de seis transferências dos dois componentes entre duas seringas, para gerar uma composição hemostática com uma distribuição substancialmente homogênea de trombina na composição hemostática. Exemplo 2: Efeito hemostático da pasta Objetivo

[00229] O objetivo do estudo era testar a eficácia hemostática da pasta 6TM do Exemplo 1. A eficácia hemostática da pasta foi comparada com a da pasta Surgiflo® comercialmente disponível. Surgiflo® é uma formulação de pasta de gelatina porcina estéril e absorvível, aprovada para uso hemostático por aplicação em uma superfície com sangramento e é um produto estabelecido no mercado.

[00230] A eficácia hemostática foi testada em um modelo de biópsia de baço porcino, conforme descrito abaixo. Modelo experimental

[00231] Um modelo de punção de biópsia de baço porcino foi usado aplicando punções de 8 mm (3 mm de profundidade) no baço com um período de compressão inicial de 10 segundos seguido por um período de avaliação de 120 segundos e após períodos de compressão de 10 segundos.

[00232] O modelo de punção de biópsia do baço porcino é um modelo estabelecido para avaliar a eficácia hemostática de pastas hemostáticas in vivo (Hutchinson et al., 2015, Surgical Technology International XXVII). O modelo de punção de biópsia de baço suíno do presente estudo é semelhante ao usado em Hutchinson et al., 2015. O presente estudo foi conduzido com permissão da The Animal Experiments Inspectorate of Denmark (Dyreforsøgstilsynet). Animal experimental

[00233] O porco é o animal de escolha para este modelo, pois tem um grande volume de sangue (70 ml/kg) e um grande baço vascular que permite

46 / 50 muitas comparações hemostáticas em um único animal. As porcas fêmeas do presente estudo tinham peso aproximado de 40 kg (± 5 kg) e idade aproximada de três meses. O critério de inclusão do porco foi o peso. O limite inferior de peso foi definido para garantir que os órgãos a serem testados tivessem um tamanho apropriado, enquanto o limite superior foi uma orientação para garantir que o tamanho do porco fosse padronizado.

[00234] No momento da cirurgia, os porcos testados não mostraram sinais de doença clínica. Anestesia e fluidoterapia

[00235] Os porcos jejuaram por pelo menos 6 horas antes da cirurgia. A anestesia foi induzida por uma injeção intramuscular (1 ml/10 kg) da seguinte mistura: 6,25 ml de Narcoxil (Xilazina 20 mg/ml), 1,25 ml de Cetaminol (Cetamina 100 mg/ml), 2 ml de Turbogésico (Butorfanol 10 mg/ml), e 2 ml de Metadon (metadona 10 mg/ml) adicionados a um frasco de Zoletil 50 Vet (contendo 125 mg de Tiletamina e 125 mg de Zolazepam).

[00236] Os porcos foram intubados e ventilados com respirador com mistura de 0,5 l oxigênio/2,5 l ar/min. A anestesia foi mantida com administração intravenosa de Fentanil (50 µg/ml, 1ml/10 kg/hora) e Propofol (10 mg/ml, 1,5 ml/kg/hora). Os animais foram mantidos normidratados com solução de Ringer com lactato (125 ml/hora). Foi previamente avaliado que o uso do medicamento mencionado não afeta a hemostasia.

[00237] Os porcos usados no presente estudo foram sacrificados após cirurgia com overdose de barbitúrico resultando em parada cardíaca. Procedimento de teste Preparação da amostra

[00238] A pasta 6TM da presente invenção foi preparada como descrito no Exemplo 1, isto é, misturando uma pasta de gelatina úmida com uma preparação seca de trombina sem reconstituição prévia da trombina em solução salina.

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[00239] A pasta Surgiflo (controle) foi misturada com uma solução de trombina de acordo com as Instruções de Uso de Surgiflo datadas de 11 de junho de 2014.

[00240] Uma vez misturada com a trombina, a composição química e o teor de água do produto de controle (Surgiflo) e da pasta 6TM da presente invenção eram os mesmos.

[00241] Para imitar as condições de armazenamento, as pastas foram armazenadas a 40°C por 3 meses antes da mistura com a trombina e teste subsequente, a única diferença sendo que a pasta de controle continha 2 ml a menos de líquido (solução salina) do que a pasta 6TM da presente invenção durante armazenamento. Os 2 ml de solução salina com trombina foram adicionados à pasta de controle imediatamente antes do teste enquanto que a pasta 6TM da presente invenção foi misturada com trombina seca como descrito no Exemplo 1 imediatamente antes do teste. Procedimentos cirúrgicos

[00242] Uma incisão abdominal na linha média foi feita para expor o baço. Uma punção de 8 mm (3 mm de profundidade) foi feita no baço. A intensidade do sangramento foi avaliada em uma escala de 0 a 5, conforme descrito abaixo. Apenas as intensidades de sangramento 3 e 4 foram consideradas aceitáveis. A punção agora estava pronta para uma amostra de controle ou uma amostra de teste. Uma nova punção foi feita para cada amostra de teste.

[00243] Cada tipo de amostra foi testado 7 vezes (n = 7). As amostras foram testadas em ordem aleatória.

[00244] Um controle negativo de 12 minutos, usando apenas gaze umedecida, foi realizado no início e na conclusão do período de teste em cada porco. Os controles negativos foram usados como uma indicação da capacidade do animal de sangrar ao longo do estudo.

[00245] O principal parâmetro de teste foi medir o tempo de

48 / 50 hemostasia (TTH). TTH é definido como o tempo total menos o período de avaliação da hemostasia final garantindo que nenhum sangramento adicional ocorreu, isto é, nenhum sangramento novamente.

[00246] A avaliação da intensidade do sangramento e a aplicação de amostras de teste e controles negativos são descritos em detalhes abaixo. Intensidade de sangramento

[00247] A intensidade do sangramento de cada punção foi avaliada pelo cirurgião em uma escala de 0 a 5 (ver Tabela abaixo).

[00248] A intensidade do sangramento foi observada em t = 0 para cada punção. Apenas testes realizados em feridas com intensidade de sangramento de 3 a 4 foram usados para análise posterior. Tabela: Níveis de intensidade de sangramento Nível 0 Sem sangramento (por pelo menos 30 segundos) Nível 1 Nenhum sangramento observado inicialmente, sangramento observado nos primeiros 30 segundos da lesão Nível 2 Sangramento observado imediatamente após a lesão, o local da ferida preenche em aproximadamente 30 segundos Nível 3 Sangramento observado imediatamente após a lesão, o local da ferida preenche em aproximadamente 3 segundos Nível 4 Sangramento observado imediatamente após a lesão, o local da ferida preenche imediatamente após a lesão (não inclui sangramento arterial ou pulsátil) Nível 5 Sangramento observado imediatamente após a lesão, o local da ferida preenche imediatamente após a lesão (incluindo sangramento arterial ou pulsátil) Controle negativo

[00249] A gaze umedecida foi colocada diretamente sobre a punção. A pressão digital foi aplicada por 30 segundos, seguida por um período de avaliação da hemostasia de 120 segundos. A hemostasia foi avaliada (definida como ausência de peneiramento do sangue sob o artigo de teste por 30 segundos). Se a hemostasia não fosse alcançada dentro de 120 segundos, uma pressão digital adicional de 30 segundos era aplicada e uma reavaliação de 120 segundos para hemostasia era realizada. A aplicação do tamponamento e os períodos de observação foram realizados até o sangramento parar e a hemostasia ser alcançada ou até o período de teste atingir 12 minutos. A hemostasia não foi alcançada dentro do período de teste de 12 minutos para os controles negativos, mostrando assim a capacidade do porco sangrar ao longo

49 / 50 do estudo. Aplicação de amostras de teste

[00250] Aproximadamente 1 a 2 ml de pasta foram aplicados diretamente na punção com uma ponta aplicadora. Durante a aplicação, a ponta penetrou na punção para garantir o contato com o tecido. Após a aplicação, a gaze umedecida em solução salina 0,9% foi colocada na punção. Pressão digital (tamponamento) foi aplicada por 10 segundos. A pressão foi interrompida e a gaze removida seguida de avaliação da hemostasia. Se nenhuma peneira de sangue foi vista sob o artigo de teste por 120 segundos, foi concluído que a hemostasia foi alcançada e o experimento foi encerrado. Se o sangue peneirado sob o artigo de teste no período de 120 segundos, o tempo de peneiramento foi registrado e a pressão digital foi novamente aplicada por 10 segundos, após o que a hemostasia foi inspecionada. Este procedimento foi continuado até que a hemostasia fosse alcançada ou por 12 minutos, o que ocorrer primeiro. Exemplo de cálculo para avaliação do tempo para hemostasia

[00251] 10 segundos de pressão digital, inspecionar para hemostasia: peneiras de sangue após 39 segundos, pressão digital por mais 10 segundos, inspecionar para hemostasia por 120 segundos: sem peneiramento - conclusão: hemostasia foi alcançada após 10 + 39 + 10 segundos = 59 segundos, isto é, o último período de observação não está incluído no cálculo do TTH. Resultados

[00252] Os resultados do presente estudo são apresentados na tabela a seguir e posteriormente representados na figura 3. Medida Pasta de Controle (n=7) Pasta 6TM (n=7) Tempo para hemostasia (TTH) 43 ± 9,8 s 24 ± 10,9 s médio ± SEM* * SEM: Erro padrão da média. “s” são segundos.

[00253] Os resultados mostram uma redução de quase 2 vezes no TTH médio da pasta 6TM em comparação com a pasta de controle.

50 / 50

[00254] A média do TTH da pasta de controle foi de 37 segundos, enquanto a média do TTH da pasta de 6TM foi de 10 segundos.

[00255] Os dados surpreendentemente mostram que a pasta 6TM preparada de acordo com a presente invenção conduz à hemostasia mais rápida e mais consistentemente do que a pasta de controle.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para preparar uma composição hemostática, o método caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) prover uma composição de trombina seca em um primeiro recipiente; b) prover uma pasta compreendendo um polímero biocompatível em um segundo recipiente; c) conectar o primeiro recipiente e o segundo recipiente usando meios de conexão adequados; e d) misturar os teores dos recipientes

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a mistura é realizada transferindo o teor dos recipientes para frente e para trás várias vezes, obtendo assim uma distribuição substancialmente homogênea de trombina.

3. Método de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o número de transferências é menos de 20 vezes, por exemplo menos de 15 vezes, tal como menos de 10 vezes, por exemplo, menos de 8 vezes, tal como cerca de 6 vezes.

4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a distribuição homogênea de trombina é distinguida por uma variação no teor de trombina ao longo da composição hemostática de menos de 20%, por exemplo, menos de 10%, tal como menos de 5%.

5. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a composição hemostática é uma pasta adequada para uso em hemostasia e/ou cicatrização de feridas.

6. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a composição hemostática é uma composição fluível.

7. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a composição de trombina seca é preparada por secagem por pulverização ou liofilização.

8. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a composição de trombina seca é preparada por liofilização.

9. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a composição de trombina seca compreende menos de 2% de água, tal como menos de 1% de água.

10. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o polímero biocompatível consiste em partículas de pó que são substancialmente insolúveis em um meio aquoso.

11. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o polímero biocompatível é reticulado.

12. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o polímero biocompatível é biologicamente absorvível.

13. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o polímero biocompatível compreende ou consiste em gelatina.

14. Método de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a gelatina é obtida a partir de uma esponja de gelatina micronizada ou hidrogel.

15. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a pasta em b) compreende um meio aquoso selecionado a partir do grupo que consiste em água, solução salina, uma solução de cloreto de cálcio e um meio aquoso tamponado.

16. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a pasta em b) compreende um polímero biocompatível em um teor de cerca de 7 a 20%, tal como cerca de 8 a 18%, por exemplo cerca de 10 a 16%, tal como cerca de 11 a 15%, preferencialmente cerca de 12 a 14%.

17. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a composição hemostática compreende um ou mais composto(s) hidrofílico(s).

18. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o um ou mais composto(s) hidrofílico(s) é um ou mais poliol(óis).

19. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o um ou mais poliol(óis) é selecionado dentre álcoois de açúcar, açúcares e/ou derivados dos mesmos.

20. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o um ou mais poliol(óis) é um álcool de açúcar.

21. Método de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o álcool de açúcar é selecionado a partir do grupo que consiste em glicol, glicerol, eritritol, treitol, arabitol, xilitol, ribitol, manitol, sorbitol, dulcitol, fucitol, iditol, inositol, volemitol, isomalte, maltitol, lactitol, poliglicitol e misturas dos mesmos.

22. Método de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o álcool de açúcar é manitol.

23. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o um ou mais composto(s) hidrofílico(s) é/são poli(etilenoglicol) (PEG).

24. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a composição hemostática compreende um ou mais agentes bioativos adicionais capazes de estimular a hemostasia, cicatrização de feridas, cicatrização óssea, cicatrização de tecidos e/ou cicatrização de tendões.

25. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a composição hemostática compreende adicionalmente um ou mais intensificador(es) de extrusão, tais como albumina, preferencialmente albumina de soro humano.

26. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o composto hidrofílico como definido em qualquer uma das reivindicações 17 a 23, o agente bioativo como definido na reivindicação 24 e/ou o intensificador de extrusão como definido na reivindicação 25 é um componente da composição de trombina seca em a), é um componente da pasta em b) e/ou é incorporado na composição hemostática em uma etapa separada após a etapa d).

27. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o composto hidrofílico como definido em qualquer uma das reivindicações 17 a 23, o agente bioativo como definido na reivindicação 24 e/ou o intensificador de extrusão como definido na reivindicação 25 é um componente da composição de trombina seca em a).

28. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o composto hidrofílico como definido em qualquer uma das reivindicações 17 a 23, o agente bioativo como definido na reivindicação 24 e/ou o intensificador de extrusão como definido na reivindicação 25 é um componente da pasta em b).

29. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o primeiro e o segundo recipientes são dispositivos de distribuição médicos adequados para reconstituir a composição de trombina seca e dispensar a composição hemostática que compreende trombina.

30. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o primeiro e o segundo recipientes são seringas.

31. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o primeiro recipiente é uma seringa de vidro ou em que o primeiro recipiente compreende um inserto de vidro que compreende a composição de trombina seca.

32. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o segundo recipiente é uma seringa de plástico.

33. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que compreende uma etapa adicional de esterilização da composição de trombina seca em a), a pasta em b) e/ou a composição hemostática.

34. Composição hemostática, caracterizada pelo fato de ser obtida ou obtenível pelo método como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33.

35. Composição hemostática de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de ser para uso no tratamento de uma ferida.

36. Estojo, caracterizado pelo fato de que compreende a) uma primeira seringa compreendendo uma composição de trombina seca; b) uma segunda seringa compreendendo uma pasta que compreende um polímero biocompatível; e c) opcionalmente, uma embalagem externa, em que as duas seringas são interconectáveis.

37. Método para reconstituir uma composição de trombina seca, o método caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) prover uma composição de trombina seca em um primeiro recipiente; b) prover uma pasta compreendendo um polímero biocompatível em um segundo recipiente;

c) conectar o primeiro recipiente e o segundo recipiente usando meios de conexão adequados; e d) misturar os teores dos recipientes.

Misturador estático Composição de trombina seca Pasta de gelatina

Petição 870200135488, de 27/10/2020, pág. 71/74 6 x de mistura

Composição hemostática

% de atividade da trombina

Inicial Intermediária Final

Fração

Tempo médio para hemostasia TTH [segundos]

Pasta de controle Pasta 6TM