SK282950B6 - Deriváty alfa-D-neuramínovej kyseliny, spôsob ich prípravy, ich použitie a farmaceutické prípravky na ich báze - Google Patents

Abstract

Zlúčeniny všeobecného vzorca (Ib), kde R3b je (alk)xNR6bR7b, CN alebo N3, kde alk je prípadne substituovaný metylén, X je 0 alebo 1, R6b je H, C1-6alkyl, aryl, aralkyl, amidino, NR7bR8b alebo nenasýtený alebo nasýtený kruh, obsahujúci jeden alebo viacero heteroatómov zvolených z N, 0 alebo S, R7b je H, C1-6alkyl alebo alkyl, alebo R8b je H, alebo C1-6alkyl a R4b je NHCOR9b, kde R9b je H, prípadne substituovaný C1-4alkyl alebo aryl, alebo ich farmaceuticky prijateľné soli, alebo deriváty a farmaceutické prípravky na ich báze. Spôsob prípravy zlúčenín Ib postupom, ktorý zahŕňa reakciu zlúčeniny vzorca (IIIb), kde R4b má definovaný význam vyššie a OL je odstupujúca skupina, alebo chráneného derivátu tejto zlúčeniny, s vhodným nukleofilom. Použitie zlúčeniny Ib na výrobu liečiva na liečenie vírusovej infekcie.ŕ

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka derivátov α-D-neuramínovej kyseliny, spôsobu ich prípravy a použitia na výrobu liečiv a farmaceutických prípravkov na ich báze.

Doterajší stav techniky

Enzýmy, ktoré sú schopné štiepiť N-acetylneuramínovú kyselinu (NANA), tiež známu ako kyselina sialová, z iných cukrov, sú prítomné v mnohých mikroorganizmoch. Tieto zahŕňajú baktérie ako Vibrio cholerae, Clostridium perfringes, Streptococus pneumoniae s Arthrobacter sialophilus a vírusy, ako chrípkový vírus, parachrípkový vírus, vírus príušníc, vírus Newcasteleckej choroby, vírus hydinového moru a Sendai vírus. Väčšina z týchto vírusov sú ortomyxovírusy alebo paramyxovírusy a nesú na svojom povrchu vírusových častíc neuraminidázovú aktivitu.

Mnohé z organizmov majúcich neuraminidázovú aktivitu sú hlavné patogény u ľudí alebo u zvierat a niektoré, ako vírus chrípky, vírus Newcastelskej choroby a vírus hydinového moru, spôsobujú choroby, ktoré majú zvláštnu ekonomickú dôležitosť.

Dlho sa predpokladalo, že by inhibítory neuraminidázovej aktivity mohli pôsobiť preventívne pri infekciách vírusmi nesúcimi neuraminidázu. Najznámejšie inhibítory neuraminidázy sú analógy neuramínovej kyseliny, ako je 2-deoxy-2,3-didehydro-N-acetylneuraminová kyselina (DANA) a jej deriváty. Pozri napr. Meindl a spol., Virology 1974 58 457 - 63. Najaktívnejšia z nich je 2-deoxy-2,3-dehydro-N-trifluóracetyl-neuramínová kyselina (FANA), ktorá inhibuje milticyklovú replikáciu vírusov chrípky a parachrípky in vitro. Pozri Palese a spol., Virology 1974 59 490 - 498.

Značné množstvo derivátov 2-deoxy-2,3-didehydro-N-acetyl-neuramínovej kyseliny je v odbore známe. Pozri napr. P. Meindl a spol., Virology 58, 457 - 463 (1974), P. Meindl a H. Tuppy, Mh, Chem, 100 (4), 1295 - 1306 (1969), M. Flashner a spol., Carbohydrate Research, 103, 281 - 285 (1982), E. Zbiral a spol., Liebigs Ann Chem, 159 - 165 (1989), T. Ogawa a Y. Ito, Tetrahedron Letters, 28 (49), 6221 - 6224 (1987), T. Goto a spol., Tetrahedron Letters, 27 (43), 5229 - 5232 (1986), H. Ogura a spol., Chem. Pharm. Bull, 36 (12), 4807 - 4813 (1986), DE-OS P 1439249. Mnohé z týchto zlúčenín sú aktívne in vitro proti neuraminidáze z V. cholerae alebo vírusu Newcastelskej choroby, ako aj vírusu chrípky. O neuraminidáze aspoň v niektorých kmeňoch vírusov sa tiež uvádzalo, že je inhibovaná in vitro 3-áza-2,3,4-trideoxy-4-oxo-D-ara-binoktonovou kyselinou-ó-lakton/'™ a O-a-N-acetyl-D-neuramínosyl-)2-----3)-2-acetamido-2-deoxy-D-glukózou. Pozri Zaksteľskaya a spol., Vop. Virol 1972 17 223 - 28.

Neuraminidáza z Arthrobacter sialophilus je inhibovaná in vitro glykolmi 2,3-dehydro-4-epi-N-acetylneuramínovej kyseliny, 2,3-dehydro-2-deoxy-N-acetylneuramínovej kyseliny a 5-acetamido-2,6-anhydro-2,3,5-trideoxy-D-manno-non-2-en-4-ulosonátom a ich metylestermi. Pozri Kumar a spol., Carbohydrate Res. 1981 M 123 - 130, Carbohydrate Res. 1982 103 281 - 285. O tioanalógoch 2-a-azido-6-tioneuramínovej kyseline a 2-deoxy-2,3-dehydro-6-tioneuramínovej kyseline, Mach a Brossmer, Tetrahedron Letters 1987 28 191 - 194 a fluorovaných analógoch N-acetyl-2,3-difluór-D-neuraminovej kyseliny, Nakajima a spol., Agric. Biol. Chem. 1988 52 1209 - 1215, sa uvádza, že inhibujú neuraminidázu, aj keď typ neuraminidázy nebol uvedený. Schmidt a spol., Tetrahedron Letters 1958 29 3643 - 3646, opisuje syntézu 2-deoxy-N-acetyl-D-neuramínovej kyseliny, ale neuvádza jej aktivitu alebo iné správanie k neuraminidáze.

Pri žiadnom zo známych inhibítorov neuraminidázovej aktivity in vitro nebolo uvedené, že vykazuje antivírusovú aktivitu in vivo a skutočne niektoré, ako je FANA, sa prejavujú ako inaktívne in vivo. Tento poznatok je v súlade s predpokladom, že zlúčeniny vykazujúce in vitro inhibíciu vírusovej neuraminidázy nebudú pôsobiť in vivo blokádu vírusovej infekcie.

Meindl a Tuppy, Hoppe-Seyler's Z. Physiol Chem. 1969 350 1088, opisujú hydrogenáciu olefmickej dvojitej väzby 2-deoxy-2,3-dehydro-N-acetylneuramínovej kyseliny za vzniku β-anoméru 2-deoxy-N-acetylneuramínovej kyseliny. Tento β-anomér neinhibuje Vibrio cholerae neuraminidázu.

Ako najúčinnejšie in vitro inhibítory vírusovej neuraminidázy boli identifikované zlúčeniny, ktoré sú založené na fragmentoch kyseliny neuramínovej a predpokladá sa o nich, že sú analógmi prechodného stavu. Miller a spol., Biochem. Biophys. Res. Comm. 1978 83 1479. Aj keď mnohé z uvedených analógov neuramínovej kyseliny sú schopné inhibovať neuraminidázu, dosiaľ sa o žiadnom neuvádzalo, že vykazuje antivírusovú aktivitu in vivo. Napríklad aj keď poloplanámy nenasýtený šesťčlenný kruhový systém je pokladaný za dôležitý pre inhibičnú aktivitu, pozri Demick a spol. v ANTIVIRAL CHEMO-THERAPY (K. K. Cauri ed) Academic Press, 1981, str. 327 - 336, niektoré zlúčeniny, charakterizované takým systémom, hlavne FANA, sa neuvádzajú ako schopné in vivo antivírusovej aktivity. Pozri Palose a Schulman v CHEMOPROPHYLAXIS AND VÍRUS INFECTION OF THE UPPER RESPIRÁTORY TRACT, Vo. 1 (J. S. Oxford ed) CRC Press, 1977, str. 189-205.

Teraz boli nájdené nové 4-substituované 2-deoxy-2,3-didehydroderiváty α-D-neuraminovej kyseliny, ktoré sú aktívne in vivo.

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu sú deriváty a-D-neuramínovej kyseliny všeobecného vzorca (Ib)

kde R^3b znamená (alk)xNR^6bR^7b, CN alebo N3, kde alk je prípadne substituovaný metylén x je 0 alebo 1,

R^6b znamená vodík, C^alkyl, aryl, aralkyl, amidino,

NR^7bR^8b alebo nenasýtený alebo nasýtený kruh obsahujúci jeden alebo viacero heteroatómov zvolených z dusíka, kyslíka alebo síry,

R^7b znamená vodík, C1Galkyl alebo alyl, alebo R^8b je vodík alebo Ci.6alkyl, a

R^4bje HHCOR^9b, kde R^9b je vodík, prípadne substituovaný C]_₄ alkyl alebo aryl, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo deriváty.

Predmetom vynálezu je tiež farmaceutický prípravok, ktorého podstata sa zakladá na tom, že obsahuje derivát a

-D-neuramínovej kyseliny všeobecného vzorca (lb) definovaný skôr alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ, alebo derivát, spolu s farmaceutický prijateľným nosičom.

Ďalej je predmetom vynálezu taktiež použitie derivátu α-D-neuramínovej kyseliny všeobecného vzorca (lb) definovaného skôr na výrobu liečiva na liečenie vírusovej infekcie a na použitie v lekárstve.

Nakoniec je predmetom vynálezu tiež spôsob prípravy derivátov α-D-neuramínovej kyseliny všeobecného vzorca (lb), definovaných skôr, ktorého podstata spočíva v tom, že zahŕňa stupne:

A. reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca (Illb)

kde R^4b má význam definovaný v nároku 1 a OL je odstupujúca skupina chráneného derivátu tej to zlúčeniny, s vhodným nukleofílom, alebo

B. prevedenie zlúčeniny všeobecného vzorca (lb) na inú zlúčeninu všeobecného vzorca (lb), a ak je to nevyhnutné, spracovanie výslednej zlúčeniny jednou alebo dvoma reakciami, ktoré zahŕňajú:

i) odstránenie akýchkoľvek chrániacich skupín a ii) prevedenie zlúčeniny všeobecného vzorca (lb) alebo jej soli na jej farmaceutický prijateľnú soľ.

C₁.₄alkyl, ako je tu použitý, zahŕňa skupiny tak s priamym reťazcom (napr. metyl, etyl), ako s rozvetveným reťazcom (napr. izopropyl, terc, butyl) v alkyle.

Farmaceutický prijateľnými derivátmi sa rozumejú akékoľvek farmaceutický prijateľné estery alebo soli takých esterov zlúčenín všeobecného vzorca (I) alebo akýchkoľvek iných zlúčenín, ktoré po podaní príjemcovi sú schopné poskytnúť (priamo alebo nepriamo) zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo antivírusovo účinný metabolit, alebo zvyšok takej zlúčeniny.

Pre odborníkov bude jasné, že zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu byť modifikované za poskytnutia farmaceutických derivátov na akejkoľvek funkčnej skupine v zlúčenine. Zvlášť zaujímavé sú také deriváty, kde sú zlúčeniny modifikované na C-l karboxylovej funkcii, C-7 alebo C-9 hydroxylovej funkcii, alebo na aminoskupinách. Také zlúčeniny zahŕňajú Ci.₄alkylové (ako metylové, etylové alebo propylové, napr. izopropylové) alebo arylové (napr. fenylové, benzoylové) estery zlúčenín všeobecného vzorca (I), C-7 alebo C-9 estery zlúčenín všeobecného vzorca (I), ako sú ich acetylestery, C-7 alebo C-9 étery, ako sú fenyl-étery, benzyiétery, p-tolylétery a acylované aminoderiváty, ako je formyl, acetamido.

Pre odborníkov bude jasné, že farmaceutický prijateľné deriváty zlúčenín všeobecného vzorca (I) môžu byť derivatizované v jednej alebo viacerých polohách.

Farmaceutický prijateľné soli zlúčenín všeobecného vzorca (I) zahŕňajú soli odvodené od farmaceutický prijateľných anorganických alebo organických kyselín a báz. Príklady vhodných kyselín zahŕňajú kyselinu chlorovodíkovú, bromovodíkovú, sírovú, dusičnú, chloristú, fumarovú, maleínovú, fosforečnú, glykolovú, mliečnu, salicylovú, jantárovú, toluén-p-sulfónovú, vínnu, octovú, citrónovú, metánsulfónovú, mravčiu, benzoovú, malónovú, naftalén-2-sulfónovú a benzénsulfónovú. Iné kyseliny, ako je kyseli na šťaveľová, aj keď nie sú samotné farmaceutický prijateľné sa môžu použiť pri príprave solí, ako medziprodukty pri príprave zlúčenín podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľných kyslých adičných solí.

Soli odvodené od vhodných báz zahŕňajú alkalické kovy (napr. sodík), kovy alkalických zemín (napr. horčík), amóniové a NR⁺ ₄ (kde R znamená C_b4alkyl) soli.

Referencie uvádzané ďalej k zlúčeninám podľa vynálezu zahŕňajú zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich farmaceutický prijateľné soli a ich deriváty, zvlášť výhodné zlúčeniny podľa vynálezu zahŕňajú: 5-acetaido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galaktonon-2-enopyrasonovú kyselinu, jej soli, zahŕňajúce sodnú soľ a 5-acetamido-4-guanidino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galaktonon-2-enopyranosonovú kyselinu a jej soli, zahŕňajúce amóniovú soľ.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) majú antivírusovú aktivitu. Hlavne tieto zlúčeniny sú inhibitormi vírusovej neuraminidázy ortomyxovírusov a paramyxovírusov, napríklad vírusovej neuraminidázy vírusu chrípky A a B, parachrípky, príušníc, Newcastelskej choroby, hydinového moru a Vírusu Sendai.

Ďalším aspektom predloženého vynálezu je použitie zlúčenín všeobecného vzorca (I) alebo ich farmaceutický prijateľných soli alebo derivátov ako aktívnych terapeutických činidiel, hlavne ako antivírusových činidiel, napríklad pri liečení infekcií spôsobených ortomyxovírusmi a paramyxovírusmi.

Ďalším alebo alternatívnym aspektom je poskytnutie metódy na liečenie vírusových infekcií, napríklad infekcií spôsobených ortomyxovírusmi a paramyxovírusmi u cicavcov, ktorá zahŕňa stupeň podania účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli alebo jej derivátu cicavcovi.

Je taktiež poskytnuté použitie zlúčeniny podľa predloženého vynálezu na výrobu liečiv na liečenie vírusových infekcií.

Odborníkom bude jasné, že uvádzané liečenie zahŕňa tak profylaxiu, ako aj liečenie infekcií alebo symptómov.

Ďalej je jasné, že množstvo zlúčeniny podľa vynálezu potrebné na použitie pri liečení sa bude meniť nielen podľa zvolenej zlúčeniny, ale aj podľa spôsobu podania, stavu podmienok, ktoré majú byť liečené a veku a stavu pacienta, a bude závisieť od rozhodnutia lekára alebo zverolekára.

Všeobecne môže byť vhodná dávka v rozmedzí asi od 0,01 do 750 mg/kg telesnej hmotnosti na deň, výhodne v rozmedzí 0,1 až 100 mg/kg/deň, zvlášť výhodne v rozmedzí od 0,5 do 25 mg/kg/deň.

Bolo zistené, že výhodné dávky zlúčenín, ktoré boli testované, sa vzťahujú k ich in vitro účinnosti. Tak DANA (majúca IC₅o redukciu plakov 5 pg/ml) bola určená ako výhodná dávka medzi 1 a 100 mg/kg pri liečení. Zodpovedajúci metylester DANA (IC₅₀ 50 - 100 pg/ml) je účinný v úmerne vyššej dávke.

Liečenie je výhodne začaté pred alebo v čase infekcie a pokračuje tak dlho, až vírus nie je prítomný v respiračnom trakte. No zlúčeniny sú tiež účinné, ak sa podávajú po infekcii, napríklad po objavení typických symptómov.

Vhodné ošetrenie je podávaním 1 až 4 x denne a pokračuje 3 až 7, napr. 5 dní po infekcii v závislosti od konkrétnej použitej zlúčeniny.

Požadovaná dávka môže byť podaná v jednej dávke alebo vo forme rozdelených dávok podávaných vo vhodných intervaloch, napríklad ako dve, tri alebo štyri alebo viac delených dávok na deň.

Zlúčenina je vhodne podávaná v odmeranom dávkovaní, obsahujúcom napríklad 10 až 1500 mg, výhodne 20 až

1000 mg, najvýhodejšie 50 až 700 mg účinnej látky' na dávkovú jednotkovú formu.

Aj keď je možné na použitie v terapii podávať zlúčeninu podľa vynálezu samotné, je výhodné túto účinnú látku spracovať do formy farmaceutického prípravku.

Vynález ďalej poskytuje farmaceutické prípravky obsahujúce zlúčeniny vzorca (I) alebo vzorca (la), ktoré však nie sú obmedzené len na tieto zlúčeniny, ale aj na ich farmaceutický vhodné soli spolu s farmaceutický vhodným nosičom, taktiež sa môžu nachádzať aj deriváty týchto zlúčenín. Nosič musí byť „prijateľný“ v tom zmysle, aby bol kompatibilný s ďalšími látkami v prípravku a nepoškodzoval príjemcu.

Farmaceutické prípravky môžu byť vo forme bežných prípravkov na uvedený spôsob použitia.

Na intranazálne podanie podľa spôsobu podľa vynálezu môžu byť neraminidázové inhibítory podávané akýmkoľvek spôsobom a v prípravkoch používaných na intranazálne podanie.

Všeobecne možno teda tieto zlúčeniny podávať vo forme roztoku alebo suspenzie, alebo suchého prášku.

Roztoky a suspenzie budú všeobecne vodné, napríklad pripravené zo samotnej vody (napríklad sterilnej alebo apyrogénnej vody), alebo vody a fyziologicky prijateľného korozpúšťadla (napríklad etanolu, propylénglykolu, polyetylénglykolov, ako je PEG 400).

Také roztoky alebo suspenzie môžu ďalej obsahovať ďalšie prísady, napríklad ochranné látky (ako je benzalkoniumchlorid), solubilizačné činidlá/surfaktany, ako sú polysorbáty (napr. Tween 80, Span 80, benzalkoniumchlorid), pufrovacie činidlá, činidlá upravujúce izotonicitu (napr. chlorid sodný), činidlá zvyšujúce absorpciu a viskozitu. Suspenzie môžu ďalej obsahovať suspenzačné činidlá (napríklad mikrokryštalickú celulózu, sodnú soľ karboxymetylcelulózy).

Roztoky alebo suspenzie sú aplikované priamo do nazálnej dutiny obvyklými spôsobmi, napr. kvapkadlom, pipetkou alebo sprejom. Prípravky môžu byť poskytnuté v jednodávkovej alebo viacdávkovej forme. V tomto druhom prípade to znamená, že sa požaduje zaistenie odmeriavania. V prípade kvapkadla alebo pipetky to možno dosiahnuť tým, že pacient si odmeriava vhodné dopredu stanovené množstvo roztoku alebo suspenzie. V prípade spreja to možno dosiahnuť napríklad pomocou dávkovacieho rozprašovacieho ventilu.

Intranazálne podanie možno tiež urobiť pomocou aerosólových prípravkov, v ktorých daná zlúčenina je prítomná v tlakovom balení s vhodným poháňacím plynom, ako je chlórfluórkarbón (CFG), napríklad dichlórdifluórmetán, trichlórfluórmetán alebo dichlórtetrafluóretán, oxid uhličitý alebo iný vhodný plyn. Aerosól môže vhodne tiež obsahovať surfaktant, ako je lecitín. Dávka liečiva môže byť kontrolovaná pomocou dávkovacieho ventilu.

Alternatívne môžu byť tieto zlúčeniny poskytnuté vo forme suchého prášku, napríklad v práškovej zmesi tejto zlúčeniny vo vhodnom práškovom základe, ako je laktóza, škrob, deriváty škrobu, ako je hydroxypropylmetylcelulóza a polyvinylpyrolidín (PVP). Výhodne práškový nosič tvorí v nosnej dutine gél. Práškové prípravky môžu byť vyrobené v jednotkovej dávkovej zmesi, napríklad vo forme kapsúl alebo vložiek, napr. v želatínových alebo blistrových baleniach, z ktorých možno prášok podávať pomocou inhalátora.

V intranazálnych prípravkoch majú všeobecne tieto zlúčeniny malú veľkosť častíc, napríklad rádovo 5 mikrometrov alebo menej. Takéto častice možno získať spôsobmi známymi v odbore, napríklad mikronizáciou.

Ak sa to požaduje, možno prípravky spracovať tak, že postupne uvoľňujú účinnú látku. Zlúčeniny podľa vynálezu možno taktiež použiť v kombinácii s ďalšími terapeutickými čidlami, napríklad inými antiinfekčnými látkami. Zlúčeniny podľa vynálezu možno hlavne použiť s ďalšími antivírusovými látkami. Predložený vynález takto poskytuje v ďalšom aspekte kombináciu obsahujúcu zlúčeninu vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ, alebo jej derivát spolu s ďalším terapeuticky účinným činidlom, hlavne virostatikom.

Kombinácie uvedené skôr môžu výhodne byť využité vo forme farmaceutických prípravkov a tieto prípravky obsahujú uvedenú kombináciu spoločne s farmaceutický vhodným nosičom, čo tvorí ďalší aspekt vynálezu.

Vhodné terapeutické činidlá na použitie v týchto kombináciách zahŕňajú ďalšie antiinfekčné činidlá, hlavne antibakteriálne činidlá a antivirostatiká, ktoré sa používajú pri liečení respiračných infekcii. Napríklad ďalšie zlúčeniny, ktoré sú účinné proti chrípkovým vírusom, ako je amantadín, rimatadín a ribovirín, sa môžu nachádzať v týchto kombináciách.

Jednotlivé zložky týchto kombinácií sa môžu podávať buď postupne alebo súčasne v oddelených alebo kombinovaných farmaceutických prípravkoch.

Ak sa zlúčeniny podľa vynálezu použijú s ďalšou terapeuticky účinnou látkou proti rovnakému vírusu, dávka každej zlúčeniny môže byť alebo rovnaká alebo odlišná od dávky použitej pri samostatnom použití tejto zlúčeniny. Vhodné dávky budú ľahko stanovené odborníkmi.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich farmaceutický prijateľne soli a deriváty sa môžu pripraviť spôsobmi známymi v odbore na prípravu zlúčenín analogickej štruktúry.

V jednom z takých spôsobov, označenom (A) zlúčenina všeobecného vzorca (III)

kde R² má význam definovaný vo všeobecnom vzorci (I) a L je odštiepiteľná skupina (napríklad zvyšok kyseliny sulfónovej, ako je tosyl, mesyl, trifluórmesyl) alebo jej chránený derivát, sa nechá reagovať s vhodným nukleofilom, napríklad azidom, kyanidom, vhodným karboniónom alebo tioacetátom.

Zlúčenina všeobecného vzorca (III) môže byť získaná zo zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca (IV)

premenou 4-OH skupiny metódami známymi v odbore, napríklad reakciou s Lewisovou kyselinou (ako je BF₃eterát) s nasledujúcou hydrolýzou. Zlúčeniny všeobecného vzorca (IV) sú buď v odbore známe, alebo sa môžu získať metódami analogickými na prípravu známych zlúčenín.

V druhom spôsobe (B) môžu byť zlúčeniny všeobecného vzorca (I) pripravené z iných zlúčenín všeobecného vzorca (I) interkonverziou. Zlúčeniny všeobecného vzorca (I), kde R³ je NH₂ alebo CH₂NH₂ môžu byť pripravené redukciou zodpovedajúcich azido alebo kyanoanalógov.

Zlúčeniny, kde R³ je NH alkyl alebo guanidinoskupina, môžu byť pripravené derivatizáciou zodpovedajúcich zlúčenín, kde R³ je NH₂.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I), kde R¹ je COOH, môžu byť pripravené hydrolýzou zodpovedajúcich esterov buď za kyslých alebo bázických podmienok, napríklad pri pH 11 - 12 (s použitím bázy, ako je hydroxid sodný alebo amónny), alebo pri pH 2 - 3 (ako pri použití kyseliny sírovej ako kyseliny).

Pre odborníkov bude jasné, že môže byť nevyhnutné alebo sa to vyžaduje v ktoromkoľvek stupni v uvedených postupoch chrániť jednu alebo viacero citlivých skupín v molekule na zabránenie nežiaducim vedľajším reakciám, chrániaca skupina môže byť odstránená v akomkoľvek bežnom nasledujúcom stupni v reakčnej postupnosti.

Chrániace skupiny použité v príprave zlúčením všeobecného vzorca (I) sa môžu použiť obvyklým spôsobom. Pozri napr. „Protective Groups in Organic Chemistry“ Ed. J. F. W. McOmie (Plénum Press 1973) alebo „Procetive Groups in Organic Synthesis“ od Theodora W. Greena (John Wiley and Sons 1981).

Výhodné chrániace skupiny aminoskupiny môžu zahŕňať napríklad aralkylové skupiny, ako je benzyl, difenylmetyl alebo trifenylmetylová skupina, acylové skupiny sú N-benzyloxykarbonyl alebo terc.butoxykarbonyl zlúčeniny všeobecného vzorca (I), kde jedna alebo obe skupiny R* a R³ predstavujú vodík, môžu byť pripravené odstránením chrániacich skupín zo zodpovedajúcej chránenej zlúčeniny.

Hydroxylové skupiny môžu byť chránené, napríklad aralkylovým skupinami, ako je benzylová, difenylmetylová alebo trifenylmetylová skupina, acylovými skupinami, ako je acetyl, kremičitými chrániacimi skupinami, ako je trimetylsilylová skupina alebo ako tetrahydropyránové deriváty.

Odstránenie akýchkoľvek chrániacich skupín, ktoré sú prítomné, sa môže zrealizovať obvyklými postupmi. Aralkylová skupina, ako je benzyl, môže byť odštiepená hydrogenolýzou za prítomnosti katalyzátora (napr. paládia na aktívnom uhlí), acylová skupina, ako N-benzyloxykarbo-nyl, môže byť odstránená hydrolýzou, napríklad bromovodíkom v kyseline octovej alebo redukciou, napríklad katalytickou hydrogenáciou, silikónovej chrániacej skupiny môžu byť odstránené napríklad spracovaním s fluoridovým iónom, tetrahydropyránové skupiny môžu byť odštiepené hydrolýzou za kyslých podmienok.

Ak sa vyžaduje izolovať zlúčeninu podľa vynálezu vo forme soli, napríklad kyslej adičnej soli, je možné túto zlúčeninu pripraviť spracovaním s voľnou bázou všeobecného vzorca (I) s vhodnou kyselinou, výhodne s ekvivalentným množstvom, alebo so sulfátom kreatinínu vo vhodnom rozpúšťadle (napr. vodnom etanole).

Predložený vynález bude ďalej bližšie opísaný nasledujúcimi príkladmi, ktoré ho ale len ilustrujú a nie sú vôbec pre predložený vynález obmedzujúce.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Nasledujúce všeobecné metódy sú aplikovateľné pri syntéze zlúčenín podľa vynálezu.

Deacetylácia

Acetylovaný materiál sa spracuje s Amberlitom IRA-400 (OH’) za miešania všeobecne počas 2-3 hodín, pri teplote miestnosti, čo má za následok úplnú de-O-acetyláciu. Živica sa odfiltruje a filtrát sa zahustí dosucha na získanie de-O-acetylovaného materiálu.

Odborníkom bude jasné, že aj iné štandardné postupy sú vhodné na úplnú de-O-acetyláciu rovnakého materiálu, ako je spracovanie s metoxidom sodným v metanole.

Deesterifikácia

Úplne de-O-acetylovaný materiál sa prevedie do vodného hydroxidu sodného a mieša sa pri teplote miestnosti v časovom období, všeobecne počas 2 - 3 hodín. Zmes sa upraví na pH 7,0 až 7,5 pomocou živice Dowex 50w X 8 (H⁺), Filtráciou s nasledujúcou lyofilizáciou sa získa požadovaný deesterifikovaný materiál.

Odborníkom bude jasné, že existuje mnoho alternatívnych spôsobov na deesterifikáciu rovnakého materiálu, ako je kyslá hydrolýza, alternatívna hydrolýza bázická, napr. hydroxidom amónnym, hydroxidom draselným.

Medziprodukty uvádzané v príkladoch 1 až 15 sú označované nasledujúco:

Zlúčenina 2 Metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-O-acetyl-2,3,5-trideoxy-D-glycero-D-talo-non-2-enopyranosonát (4-epi-Neu5,7,8Ac₄2en I Me)

Zlúčenina 3

Metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetyl-4-azido-2,3,5-trideoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (4-azido-Neu7,7,8,OAc₄ 2enlMe)

Zlúčenina 5 Metyl-5-acelamido-7,8,9-tri-O-acetyl-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (4-amino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

Zlúčenina 8 Metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-O-acetyl-4-N,N-dialylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-gIycero-D-gaIakto-non-2-enopyranosonát (4-N,N-dialylamino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

Zlúčenina 10

Metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetyl-4-N-alylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (4-N-alylamino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

Zlúčenina 12 Metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetyl-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-talo-non-2-cnopyranosonát (4-epi-4-amino-Neu5,7,8,9Ac₄2en 1 Me)

Zlúčenina 13 Metyl-7,8,9-tri-O-acetyl-2,3,5-triedeoxy-4',5'-dihydro-2'-metyloxazolo/5.4-d/D-glycero-D-talo-non-2-enopyranosonát (4-epi-4,5-oxazolo-Neu7,8,9Ac₃2enlMe)

Zlúčenina 15 Metyl-5-acetaimido-7,8,9-tri-0-acetyl-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-talo-non-2-enopyranosonát (4-epi-azido-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

Zlúčenina 16

Metyl-5-acetamido-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-talo-non-2-enopyranosonát (4-epi-azido-Neu5 Ac2en 1 Me)

Zlúčenina 18

MetyI-5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetyl-4-N-metylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galaktonon-2-enopyranosonát (4-N-metylamino-Neu5,7,8,9Ac₄2en 1 Me)

Zlúčenina 19

Metyl-5-acetamido-4-N-metylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (4-N-metylamino-Neu5 Ac2en 1 Me)

Zlúčenina 21

Metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-O-acetyl-4-N,N-diraetylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (4-N,N-dimetylamino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

Zlúčenina 22

Metyl-5-acetamido-4-N,N-dimetylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (4-N,N-dimetylamino-Neu5Ac2en 1 Me)

Zlúčenina 24

Metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetyl-4-N-metoxykarbonylmetylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (4-N-metoxykarbonylmetylamino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

Zlúčenina 25

Metyl-5-acetamido-4-N-metoxykarbonylmetylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (4-N-metoxykarbonylmetylamino-Neu5Ac2enlMe)

Zlúčenina 27

Metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetyl-4-N-2-hydroxyetylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (4-N-2'-hydroxyetylamino-Neu5,7,8,9Ac₄2en 1 Me)

Zlúčenina 28

Mctyl-5-acetamido-4-N-2'-hydroxyetylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (4N-2'-hydroxyetylamino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

Zlúčenina 29

Metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-O-acetyl-4-N-2'-hydroxyetylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (4-N-2'-hydroxyetylamino-Ncu5Ac2cnlMc)

Zlúčenina 30

-Deoxy-D-glycero-D-galakto-2-nonulopyranosonová kyselina (KDM)

Zlúčenina 31

MetyI-3-deoxy-D-glycero-D-glakto-2-nonulopyranosonát (KDNIMe)

Zlúčenina 32

Metyl-(4,5,7,8,9-penta-O-acetyl-2,3-dideoxy-D-glycero-P-D-galakto-2-nonulopyranosyl chlorid)onát (KDN4,5,7,8,9Ac₅2pCl IMe)

Zlúčenina 33

Metyl-4,5,7,8,9-penta-O-acetyl-2,3-dideoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát(KDN4,5,7,8,9Ac₅2enlMe)

Zlúčenina 34

Metyl-2,3-dideoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (KDN2enlMe)

Zlúčenina 36

Hydrazínium-4,5-diamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (Hydrazínium-4,5-diamino-Neu2en)

Zlúčenina 37

4,5-Diamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonová kyselina (4,5-diamino-Neu2en)

Príklad 1

Príprava 5-acetamido-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonátu sodného (4-Azido-Neu5Ac2en) (4)

Všeobecná schéma je nasledujúca:

ΗΌ

2) HOAcZfctj

R = Me,R’.N4AC R’-Ac

RxMe,R' = NHAt R = At

R = Ni. R¹ = MHAc R·* H

2) OH

1) TfjO/pyiidín XHjCIj

2) NaNýn-3_U<N.HSO.®MF

DNiOMe/MeOH

R = Mc, R'xWUAc R- = Ae

Príprava (2)

K miešanému roztoku metyl-5-acetamido-4,7,8,9-tetra-0-acetyl-2,3,5-trideoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonátu (1) (1500 mg, 3,17 mmol) v zmesi benzénu (50 ml) a metanolu (300 mg) sa prikvapká BF₃Et₂O (12 ml) počas tridsiatich minút pod atmosférou dusíka pri teplote miestnosti. Zmes sa potom mieša pri teplote miestnosti 16 hodín. Roztok sa potom zriedi etylacetátom (250 ml), premyje sa postupne nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (30 ml x 3) a vodou (20 ml x 3), potom sa odparí na malý objem (asi 10 ml), ku ktorému sa pridá voda (0,5 ml) a kyselina octová (0,5 ml). Reakčná zmes sa potom mieša pri teplote miestnosti dva dni, keď bola predtým zriedená etylacetátom (200 ml). Roztok etylacetátu sa premyje 5 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného (30 ml x 2) a vodou (20 ml x 3), potom sa odparí dosucha. Zvyšok sa chromatografuje (silikagél, etylacetát ako elučné činidlo), získa sa tak čistá zlúčenina (2) (550 mg, 40 %). 'H-NMR (CDClj) δ ppm: 1,95, 2,06, 2,08, 2,10, 2,35 (s, 15H, acetyl CHj x 5), 3,80 (s, 3H, COOCHj), 4,1 - 4,4 (m, 4H, H₄, H_s, H₆, H₉), 4,82 (dd, IH, J_9>8, 1,8 Hz, J₉,₉ 12,3 Hz, H₉), 5,27 (m, IH, H₈), 5,45 (dd, 1H^ J₇₈ 3,5 Hz, H₇), 6,15 (d, IH, J_3i4 5,4 Hz) 6,47 (d, IH, J_NH,_S 8,8 Hz, -CONH).

Príprava (3)

K miešanému roztoku zlúčeniny (2) (800 mg, 1,67 mmol) v bezvodom dichlórmetáne (10 ml) a suchom pyridíne (316 mg, 4 mmol) pri -30 až -40 °C sa prikvapká roztok anhydridu trifluórmetánsulfonovej kyseliny (Tf₂O) (556 mg, 2 mmol) v dichlórmetáne (2 ml) počas 15 minút. Reakčná zmes sa potom mieša pri -30 °C počas piatich hodín a zahustí sa dosucha vo vákuu. Zvyšok sa potom rozpustí v suchom DMF (5 ml), obsahujúcom zmes azidu sodného (650 mg, 10 mmol) a hydrogénsulfátu tetrabutylamóniového (170 mg, 0,5 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 16 hodín a potom sa odparí do sucha za vysokého vákua. Zvyšok sa rozdelí medzi etylacetát (200 ml) a vodu (50 ml). Organická vrstva sa oddelí a premyje vodou (50 ml x 2), suší nad síranom sodným, odparí sa na zvyšok (780 mg), ktorý sa spracuje dvojitou chromatografiou (silikagél, prvé rozpúšťadlo etylacetát (acetón 8/1, druhý rozpúšťadlový systém dichlórmetán/voda: 10/1), získa sa tak bezfarebný olej (3) (185 mg, 24 %)

MS (FAB) 457 (M⁺ + l), 4 + 4 (M⁺ -N_}) lal D + 19,1 ° (c 1, MeOH) IR (CHClj)cnf' 2100 (N-N₃), 1748 (karbonyl).

^]H-NKR(CDCI₃) ppm: 2,04, 2,05, 2,06, 2,12 (s, 1 2H, acetyl CHj x 4), 3,79 (s, 3H, COOCH₃), 3,91, (ddd, 1H, J₅, _NH

8,4 Hz, J₅,₄ 8,8 Hz, J_5>6 9,9 Hz, H₅), 4,17 (dd, 1H, J_9>8 6,8 Hz, J₉₉ 12,5 Hz, H₈), 4,42 (dd, 1H, J_4>3 2,9 Hz, J₄,₅ 8,8 Hz, H₄), 4’48 (dd, 1H, J₆₇ 2,3 Hz, J₆₅ 9,9 Hz, H₆ 4,46 (dd, 1H, J, ₈ 2,7 Hz, J₉₉, 12,5 Hz, H₉), 5,31 (m, 1H, J_8>7 5,2 Hz, J₈.₉ 2,7 Hz, J_g._9> 6,8 Hz, H₈), 5,45 (dd, 1H, J_7>6, 2,3 Hz, J₇,₈

5,2 Hz, H₇), 5,96 (d, 1H, J₃₄ 2,9H, H₃) 6,13 (d, 1H, J_NH,₅

8,4 Hz, -CONH) ^l3C-NMR (CDCIj) δ ppm: 20,7 (CHj-CO-O-), 23,2 (CHjCO-NH), 48,3 (C₅), 52,6 (COOCH₃), 57,8 (C₄), 62,1 (C₉), 67,7, 70,9 (C₇, C₈), 75,9 (C₆), 107,6 (C₃), 145,1 (C₂), 161,5 (Cj>, 170,2 170,3 (acetyl-C = 0 x 4).

Príprava (4)

Zlúčenina (3) (50 mg, 0,11 mmol) sa rozpustí v bezvodom metanole (5 ml), obsahujúcom metoxid sodný (8 mg, 0,15 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 2 hodiny a zahustí dosucha vo vákuu. Zvyšok sa vyberie do vody (3 ml), mieša pri teplote miestnosti 1,5 hodiny, pH sa upraví na hodnotu 6-7 Dowexom 50 x 8 (H⁺) živicou a potom sa lyofilizuje, získa sa tak titulná zlúčenina (4) (35 mg, 94 %).

IR (KBr) cm'¹ 3400 (br-OH), 2100 (-N₃), 1714 (karbonyl) (DjO) (j>j>a): 2,06 < 5, 3K, acetyl CH₃), 3,64 (dd, 1K, J_{9 8} «,3 Hl , J₉ 5 11, 8Hz, H,l, 3,«5 (dd, 1H, 7, ₆ 3,9Hz, J₇ g tí,8Hl, K₇), 3,B6 (dd, 1H, Jj ₈, 2,6HZ, J, ₉ ll.SHZ, Hj), 3,94 (Λ, 1H, J_8|7 6,8Hz, 2,6111, Jg g 6.3HS, H_g),

4,21 (dd, 1H, Jg ₄ 10,4Hz, Jg g 8,9Hz, Hg), 4,31 (dd, 1H, J, ₃ 2,2HZ, J_{4 s} 2,2HZ, J_t5 10,4Hz, Bg), 4,34 (dd, 1H, Jg ₅ β,9Ηζ, Jg ₇ 3,9Hz, Hg), 5,82 (d, 1J, J_{3 4} 2,2Hz, B₃).

Príklad 2

Príprava 5-acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonátu sodného (4-amino-Neu5Ac2en) (6)

Všeobecná schéma je nasledujúca:

l)HjS/pyridio

R«Me,R’-NHAc R**Ac

R-Na.R '«NHA« R»H

Príprava (5)

Roztok metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-O-acetyl-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-nan-2-enopyranosonátu (3), pripraveného ako v príklade 1 (95 mg, 0,208 mmol) v pyridíne (6 ml) bol prebublávaný H₂S počas 16 hodín pri teplote miestnosti. Roztok bol potom premývaný 15 minút dusíkom s odparený za vysokého vákua na odstránenie zvyšného pyridínu. Zvyšok bol chromatografovaný (silikagél, etylacetát/izopropanol/voda = 5/2/1) získa sa tak bezfarebná zlúčenina (5) (50 mg, 56 %).

MS (ruB) 431 (M* + 1), 414 (M^4- -KKj, W²⁰ _D t 35,5° (cl,

MeOH) ir(chc1₃ c»¹ 3400 (br.MHj), 1740 (karbonyl). ^-NMRÍCDClj +CD₃Ot>) (ppa):<T1,9«, 2,0«, 2,07, 2,10 (a,12H acetyl. CH, x 4), 3,81 (S, 3H, -COOCH₃), 3,92 (brt, 1H,J₅,₄ a J_5>6 10 Hz,H₅), 4,17 (dd, 1H, Jji g 7,2Hl, Jjij 12,3Hl,H_s|, 4,22 (br.dd, 2H,J_{4 4} a Jg g 10 Hz, >r_{4 3} a Jg ₇ 2,1Hz, H₄ a

Hg), 4,71 (dd, IH.oj g 2,6Hz, J_g9' 12,3 Hz, H₉), 5,31 (n, 1H, J_e , 4,9Hz), Jg ₉ 2,6 Hz, J_8i, 7,2HZ, Hj), 5,45 (d, lH,J_7/g

2,1HZ, J_{7 3} 4.9HZ, H,), 5,97 (d, 1H, J₃,₄ 2,1HZ, H₃).

¹³c-NMR (CDC1₃ + CDjODlízTppa):

20.2 20,3 (CH₃-CO-0), 22,3 (CH₃-C0-HH), 48,2 (Cg), 50,4 (C₄), 52,0 (COOCHj), 52,1 (c₉), 67,8, 71,2 (C,, Cg), 76,5 (Cg), 112,5 (C₃), 143,5 (C₂), 162,0 (Cj), 170,2, 170,4 170,8,

172.2 (acetyl -c-0 x 4).

Príprava (6)

Zlúčenina (5) (50 mg, 0,116 mmol) sa rozpustí v bezvodom metanole (5 ml), obsahujúcom metoxid sodný (12,4 mg, 0,23 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti

1,5 hodiny a odparí sa do sucha za vákua pri 30 °C. Zvyšok sa mieša s vodou (3 ml) pri teplote miestnosti, pokým TLC (silikagél, etylacetát/metanol (O,1N HC1 = 5/4/1) neindikuje, že hydrolýza bola úplná. Roztok (pH asi 10,5) sa postupne upraví na pH 7,5 živicou Dowex 50 x 8 (H⁺). Sotva pH reakcia dosiahne 7,5, suspenzia sa rýchlo sfiltruje cez tlakový filter. Filtrát sa lyofilizuje, získa sa titulná zlúčenina (6) (30 mg, 83%).

’H-NMR (DjO) δ (ppm): 2,07 (S, 3H, acetyl CH_}), 3,59 - 3,70 m.2H, H₇ a H₉) 3,89 (dd, 1H J₉,₈ 2,6 Hz, -J₉₉ 11,8 Hz, H₉), 3,95 (m, 1H, H_s), 3,99 (brd, 1H, J_4>5 10,6 Hz, H₄), 4,21 (brt, 1 H, J_{5 4} a J_{5 6} 10,6 Hz, H₅), 4,29 (bŕd, 1 H, J_{6 5} 10,6 Hz, H₆), 5,66 (dŕ 1H, J,₄1,9 Hz, H₃).

Príklad 3

Príprava 5-acetamido-4-guanidino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonátu amónneho (7) Všeobecná reakčná schéma je nasledujúca:

8-OHj D HjU-om

Do roztoku 9-Metylizomočoviny (546 mg, 3 mmol) vo vode (15 ml) pri teplote ľadového kúpeľa sa pridá metyl-5,7,8,9-tri-O-acetyl-4-ammo-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glyccro-O-galakto-non-2-enopyranosonát (5) pripravený ako v príklade 2 (40 mg, 0,093 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri 5 °C sedem dní a naleje sa na stĺpec živice (35 ml) Dowex 50 W x 8 (H⁺). Stĺpec sa potom premyje chladnou vodou (120 ml) a zahustí za vysokého vákua do sucha. Získaný zvyšok sa chromatografuje (silikagél, rozpúšťadlový systém 1: etylacetát/izopropanol/voda 1/5/1, rozpúšťadlový systém 2: 75 % izopropanol), získa sa titulná zlúčenina (7) (8 mg, 24,5 %).

Zlúčenina (7) poskytuje silnú, pozitívnu Sakguchiovu reakciu, inhibujúcu prítomnosť guanidínovej skupiny. NMR hodnoty pre zlúčeninu (7) sú uvedené ďalej. ’H-NMR (D₂O + CD₃OD) δ (ppm): 2,06 (s, 2H, acetyl, CH₃), 3,60 (br, d, 1H, J_7>8 9,4 Hz, H₇), 3,63 (dd, 1H, J_{9 8} 6,2 Hz, J„ ₉ 11,8 Hz, H₉), 3,76 (br. d. 1H, J₄,₅ 9,4 Hz, H₄),’3,87 (dd, 1H, J₉₈, 2,6 Hz, J₉₉, 11,7 Hz, H₉),3,93 (ddd, 1H, J₈₇ 9,4 Hz, J₈₉, 6,2 Hz, H₈), 4,01 (dd, 1H, J₅₄ 9,4 Hz, J₅₆10,6 Hz, Hj), 4,20 (br. d, 1H, J₆,₅10,6 Hz, H_e) 5,63 (d, 1H, J₃,₄ 2,lHz,H₃).

Príklad 4

5-Acetamido-4-N,N-dialylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-O-galakto-non-2-enopyranosonát sodný (9) Všeobecná reakčná schéma je nasledujúca:

«*·

Do roztoku alylbromidu (60 mg, 0,5 mmol) a metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetyl-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonátu (5) (90 mg, 0,209 mmol) v acetonitrile (5 ml) sa pridá uhličitan strieborný (116 mg, 0,481 mmol). Zmes sa mieša a chráni pred svetlom pri teplote miestnosti 16 hodín. Výsledná suspenzia sa sfiltruje a filtrát sa odparí do sucha. Zvyšok sa spracuje rýchlou chromatografiou na silikagéli (etylacetát, obsahujúci 10 % metanolu), získa sa metyl-5-acetamido-7,8,9-tri-O-acetyl-4-N,N-dialylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galaktonon-2-enopyranosonát (8) (85 mg, 80 %).

¹H-KHH /CDC1₃/A(ppn) ·. 1,94, 2,05, 2,0«, 2,11 (β, 12H, acetyl

CH₃ x 4) 2,97 (dd, 2H, J₄Q_a,_2()b a Jio_a,₂oy, 14,3Hz, ₃₁ a ^J Itfa 11' ⁷'^6Hz a H₁₍ý_a a H_10a), 3,24 (dd, 2H, J_{10bf 10a} a ’-'lO'b, 10a' 24,3HZ, J₁₉t,ll · ^J Ot 11' ⁴'^9HZ' ^HloH “ ^H101J'

3,58 (dd, 1H, J₄ j 2,4Hz, J_{4 5} 9,3Hz, H₄), 3,79 ( s, 3H,

COOCH₃), 4,12-4,26 (a, 3H,H_e,H₉, H_s), 4,70 (dd, 1H, J₉,_a

2,6Hz, J₉ ,Ί2,3Hz, H, ), 5,09 (dd, 2H, J,,',. a J,,-.. 10,6Hz, íi_2geai4,l,5Hz, H_12oI6 a H_12bls), 5,14 (dd, 2H, ^J12trans,ll · ^J12’trana n'17,7Hz, J_gen a 5Hz, ^tt12trans ^a “lŕtran.¹· ⁵'⁷⁷ ' ⁵'^{32 2H}' ^K8 ^z 5,55 (dd, 1H, ₆ 2,1 HZ, J₇ J 4,7Hz, H_?;, 5,72 ( n, 2H, H_ua

H_u'), 6,07 (d, 1H, J_{3 4} 2,4Hz, Hj)

Zlúčenina (8) (80 mg, 0,156 mmol) sa rozpustí v bezvodom metanole (10 ml), obsahujúcom metoxid sodný (16,2 mg, 0,30 mmol).

Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 2 hodiny, potom sa odparí do sucha. Zvyšok sa vyberie do vody (50 ml) a ponechá stáť pri teplote miestnosti 2 hodiny. Výsledný roztok sa neutralizuje Dowexom 50 x 8 (H⁺) a lyofilizuje, získa sa titulná zlúčenina (9) (49 mg, 80 %).

’h-SMR (D₂O)/(_PFin) ! 1,94 (e, 3H, acetyl-CH,) , 3,24 3,44 (n, 4K, H_lo x 2 a 2), 3,48 - 4,33 (n, 7H,H₄, Hj, ^a6- ^H7r ^H8' ^H9 ^{4 H}9>' ⁵r²⁴“ 5,29 (», 4H, Η_χ2 x 2 a X 2),

5,69 (d, 1K, J_{3 4} 2H2, H·,), 5,73 - 5,76 (a, 2H, H_ua H_u )

Príklad 5

5-Acetamido-4-N-alylamino-2,3,4,5-tetra-deoxy-D-glycero-D-galakto-non-enopyranosonát sodný (11) Všeobecná reakčná schéma je nasledujúca:

Cll

_cg ellylbroeld

O >3 XíCOj/CHjCM

OU

K roztoku alylbromidu (48 mg, 0,40 mmol) a zlúčeniny (5) (155 mg, 0,36 mmol) v acetonitrile (5 ml) sa pridá uhličitan strieborný (107 mg, 0,38 mmol). Zmes sa mieša a je pritom chránená pred svetlom, pri teplote miestnosti 16 hod.

Výsledná suspenzia sa odfiltruje a filtrát sa odparí do sucha. Zvyšok sa chromatografuje na stĺpci silikagélu (etylacetát/izopropanol/voda = 5:2: 1). Frakcie s hodnotou Rf

0,5 sa spoja a odparia sa do sucha, získa sa zlúčenina (10) (53 mg, 32 %). Východiskový materiál (5) s Rf hodnotou 0,3 (61 mg, 39 %) a N,N-alylderivát (8) s hodnotou Rf 0,9 (20 mg, 11 %) sa taktiež získali.

'H-NMR (CDCIj) zlúčeniny (10) je nasledujúca:

Stpp») 1 ,96, 2,05, 3,06, 2,11 (», )2K,»c.t_Z3 CH. x 4), 1,2) <44, 18, 4,_{0bi 10b}-14,1 H») J_|Oa „ 5,88«, Η,ο,), 1,37 <44, 18, 2,_{ek )0|l}-t4,1H», J_)Ob)1 5.9Η», H_)cb>, 1,43 (44, j 3.1Η», J₄ «7,511»,Hg), 3,79 («, 38,000»,),

4,09 (aaa, m, i_J>4 7,5a», J_s J« ₄ e,m., «),

4,2t <44, τ,ικ», J,· _s-i2,an*, h,>, 4,30 (aa, ib.

^J6,5 ⁸·^,Η·· ^J6,7 ⁴·1Η», Hj>, 4,63 (4a, 18, i , 3,28», 4,.,-12.28», 8,1. 5 09 (dd, 1H. JUei,>n 1C,ÍH«, í1JhBU tr·»·'·)¹’». ^Biaoi,>· i·’® «a. n >7.m«,

JiatrrM.iooi,·'>3n«J Ευ,™,,), 5,36 (aaa, m, j. _ 4,2a», ^Je,9'7,18«, Hg), 5,57 «d, 18, J . 4,18», J 4,ie.,n_>, 5,65 ta, 18, J J 9,1H», -COHH-), 5,83 (<H4d[ 18,.L - 17,18», J,, _|ícU 10.2Η», J₍₎ 5,83», 2,, ,_0fc 5,98»,

H_n), 5,09 (4, 1B,J_3j4 3,111», 8j). '

Zlúčenina (10) (50 mg, 0,11 mmol) sa mieša v bezvodom metanole (5 ml), obsahujúcom metoxid sodný (12 mg, 0,225 mmol) pri teplote miestnosti 2 hodiny, potom sa odparí do sucha. Zvyšok sa opäť rozpustí vo vode (5 ml) a nechá sa stáť pri teplote miestnosti 2 hodiny, predtým bol neutralizovaný živicou Dowex 50 x 8 (H⁺). Vodný roztok sa lyofilizuje, získa sa zlúčenina (11) (31 mg, 78 %).

³H-HMR (DjOl/tppa) í 2,02, (B, 3H, CHjCO) 3,42 (dd, 1H, Ηχοβ, _10b -13,4H«, 6,632, ^H10a>> ³>^{52 (M}' ^1H' ^a10b 10a

-13,4Hz, J₁₀b,ll 6,3Hz, J₁₀b>‘ 3,51-4,27 (B, 7H, Hg.Hg, Hg,

H₇, H_a, Hg a Hg, 1, 5,30 (dd, 1H, J₃2_O1_S, 12trans/v/ 1,5Hz, ^J12cia,ll ¹⁰'^{3 Hl}' 1*1201«·' ^{5,34 (da}' ^{1H J}12trans, 12cis' ^1,5 2. ^J12tranB 11 17,78», H_12trsns), 5,72, (d, 1H, J₃,₄ 2,4HZ, H₃), 5,99 (dddd, _10a 6,6Hz, J_{11( 10b} 6,3Hz, 12cls

10,3Hz, 3n,i2trana, 17,78», Ηχχ).

Príklad 6

5-Acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetra-deoxy-D-glycero-D-talonon-2-enopyranosonát sodný (14)

Všeobecná reakčná schéma je nasledujúca:

I IHjQ/CTrlaúiZe^ci,

2)X Ν» ali®ojropyl*aín

J)näll,/n-BB_t1I.H^₄/UlB8a/H2p

04«

HHj o *^^4 0 2 , _Q ««2

nosti počas 16 hodín. Reakčná zmes sa zahustí za vysokého vákua na odstránenie DMF. Zvyšok sa potom mieša v dvojfázovej zmesi toluénu (5 ml) a vody (5 ml), obsahujúcej hydrogensulfát tetra-n-butylamónia (950 mg, 2,8 mmol) a azid sodný (137 mg, 2,1 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 16 hodín a potom sa odparí do sucha. Zvyšok sa rozdelí medzi etylacetát (50 ml) a vodu (15 ml), organická vrstva sa dôkladne premyje vodou (5 ml x 2) a potom sa odparí do sucha. Zvyšok sa vyberie do pyridínu (5 ml), prebublá sírovodíkom a potom sa odparí do sucha. Zvyšok sa spracuje rýchlou chromatografíou na stĺpci (silikagél, prvý rozpúšťadlový’ systém bol etylacetát, druhý rozpúšťadlový systém bol etylacctát/izo-propanol/fhO: 5/2/1. Etylacetát eluuje zlúčeninu (13) (260 mg, 53 %). Frakcie s pozitívnou ninhydrínovou reakciou, odobraté z druhého rozpúšťadlového systému boli spojené a odparené do sucha, získa sa zlúčenina (12) (32 mg, 6,5 %).

HS (HB) 431 <H⁺M), 414 (H* -8¾).

’h-KMR (CDCIj ♦ CDjOD) £ (bP»> 1,96, 2,06, 2,08, 2,09 <», I2H, acetyl CÄj x 4), 3,52 ΙΗ» j 5)511*, j 4,5H«, HJ, 3,80 3H, COOOHj), 4,16 (44, ii, Jg., 10,28»,

J₆ - 2,38», Hg), 4,17 (44, 1H, J,-.,-12,48«! 4,..g 7,38», 8,1, 4,23 (44, 1R, 4, ₆ 10,211·, J,’₄ 4,58», H,), 4,73 <44, 1H, J, ,-12,48«, J, g'j.TH», 8,), L36 ”*· <·, 7 4,78»,

Jg g 2|7H·, Jg g*7)^B*| Bg), 5»45 (dd, IB, 2,3»», ^J7,e ♦>»». 6,12 (a, |_R, J_{3 4} creľľ’ľ ^(0DC13 * ^CDl^aB> ** ^{ΙηΛ) a}’^r «W-í, 23 I (CH .

« ; ľ:.^{8 4}‘·^{2 (}°⁴’· «·* ^toA>· «.j <ύ ^r

Zlúčenina (12) sa mieša v bezvodom metanole (5 ml), obsahujúcom živicu Amberlit IRA-400 (OH‘) (100 mg) pri teplote miestnosti počas 3 hodín. Po nasledujúcej filtrácii sa filtrát odparí dosucha. Zvyšok sa rozpustí vo vode (5 ml) a pH sa uprav! na 13 pomocou 0,lM NaOH. Vodný roztok sa mieša pri teplote miestnosti 2 hodiny a potom sa neutralizuje pomocou živice Dowex 50 x 8 (H⁺). Po filtrácii sa filtrát lyofilizuje, získa sa zlúčenina (14) (16 mg, 70 %), ktorá je pozitívna v ninhydrínovej reakcii.

*H-HMR (DjOlriw»): 2,10 <», 3H, CHjCO), 3,67 - 3,75 (B, 2H, H_t» H^_y3,92 (dd, 1H, _B 2,8Ha, J,J -11,9H9, H₉), 3,90 4,02 (B, 2B, H₇ a H₈>, 4,37-4,44 (b, 28, Hg a Hg), 5,81 (d, 1H, J₃ g 5,1.Hz, H₃).

Príklad 7 5-Acetamido-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-talonon-2-enopyranosonát sodný (17)

R-Me.Ra.NHAc

R’-Ac

H pfT ²⁾ K.II-dÍliÍprcpyli-ÍjlaHla.'jao

1$

R = Me, R'» NHAc R’’Ac

K miešanému roztoku zlúčeniny (2) (500 mg, 1,04 mmol) v bezvodom dichlórmetáne (8 ml), obsahujúcom pyridín (205 mg, 2,6 mmol) pri -30 °C sa prikvapká roztok anhydridu trifluórmetánsulfónovej kyseliny (Tf₂O) (367 mg, 1,3 mmol) v dichlórmetáne (2 ml) počas 20 minút. Reakčná zmes sa potom mieša pri -30 °C 5 hodín a nakoniec sa odparí do sucha za zníženého tlaku. Výsledný zvyšok sa mieša v suchom DMF, obsahujúcom N,N-diizopropyletylamín (194 mg, 1,5 mmol) pri teplote miest-

R-Na,R'»NHAc

R*«H

N»OMe/MeOH

R-Me, R'-NHAc R-bH

K miešanému roztoku zlúčeniny (2) (500 mg, 1,04 mmol) v bezvodom dichlórmetáne (8 ml), obsahujúcom pyridín (205 mg, 2,6 mmol) pri -30 °C, roztok anhydridu trifluórmetánsulfónovej kyseliny (Tf₂O) (367 mg,

1,3 mmol) v dichlórmetáne (2 ml) sa prikvapká počas 20 minút. Reakčná zmes sa potom mieša pri 3 °C 5 hodín a nakoniec sa odparí dosucha za zníženého tlaku. Výsledný zvyšok sa mieša v suchom DMF, obsahujúcom N,N-diizopropyletylamín (194 mg, 1,5 mmol) pri teplote miestnosti počas 16 hodín. Reakčná zmes sa zahustí za vysokého vákua na odstránenie DMF. Zvyšok sa potom mieša v dvojfázovej zmesi toluénu (5 ml) a vody (5 ml), obsahujúcej hydrogensulfát tetrabutylamónia (950 mg, 2,8 mmol) a azid sodný (137 mg, 2,1 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 16 hodín a potom sa zriedi 0,2M HC1 (5 ml). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 48 hodín, K tejto reakčnej zmesi sa pridá etylacetát (50 ml) a 2M HC1 (1 ml). Organická vrstva sa oddelí a premyje sa vodou (5 ml x 3), potom sa odparí dosucha. Zvyšok sa podrobí stĺpcovej chromatografii (silikagél, etylacetát/hexán = 2/1). Frakcie s hodnotou Rf 0,32 (etylacetát/hexán = 2/1 ako vyvíjajúce činidlo) sa spoja a odparia sa do sucha, získa sa zlúčenina (15) (40 mg, 8,4 %). Kolóna sa potom eluuje etylacetátom/metanolom = 10/1 na získanie východiskového materiálu (2) (280 mg, 56 %). Zlúčenina (15) bola izolovaná vo forme bielej peny.

MS (ZAB) 457 (M* m), 4’4 («*-«3),

IB (CHClj)e»'¹ 2108 (-Hj), ’748 (larbonyl) 'β-SI® (CX1,)£(PP«) 1,97, 2,04, 2,06, 2,07 <»>’2H, CH, x 4), 3,82 (>, 3H, COOCHj), 4,12-4,20 <, 3H,C6, C4 « C„5, 4,51 (ddd, 1H, J. 4 4,4H»,J5 , 10,711», JjMH, 10,ΙΗ», He), 4,69 (dd, IB, θ 2,6«», J, 9'12,4H«, Hj), 5,31 (, 1H, J. . 4,9H», J8 a ^·^βΗϊ’ 97,0H», %>· »·♦» <^M> ^,H· J7 6 2’lH«, J₇ g 4Í9H», Uf), 5,68 (d. 18, tO,tH«,COim),

6,15 («, ’H, jj_i4 5,7H», Hj) (CDC1,) S (pp·)

20,7, 20,8, (CHjCO-O x 3), 23,1 (0 CHj CO-OTt), 44,8 (Cj),

52,6 (COOCHj), 54,8 (C*), 62,1 (Oj), 67,6, 71,3 (C₇,C_e),

73.5 (Cj), 104,5 (Cj), 146,3 (¾). 161,5 (C,), 169,», 170,2»

170.5 («»«1, -oo X 4)

Zlúčenina (15) (40 mg, 0,088 mmol) sa rozpustí v bezvodom metanole (4 ml), obsahujúcom metoxid sodný (6,4 mg, 0,12 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 2 hodiny a zahustí sa do sucha vo vákuu, získa sa tak zlúčenina (16), ktorá sa potom rozpustí vo vode (3 ml), mieša sa pri teplote miestnosti počas 2 hodín, pH sa upraví na pH 6 - 7 živicou Dowex 50 x 8 (H⁴) a potom sa lyofílizujc, získa sa titulná zlúčenina (17) ako žltkastý prášok (25 mg, 83 %).

IR (ΚΒΓ) CK^-1 JÍOOXbz, -OH, 2106 (-Hj), 1714 (Xaxbonyl) (D₂O) <Γ(ρρη}:

1,97 (S, 3H,acetyl), 3,5«-4,4 (m, 7H, H₄, Hj, H₆r H?, H _8< Hg a Hg·), 6,07 (d, J_3f4 5,6 Hz, K₃)

Príklad 8

5-Acetamido-4-N-metylamino-2,3₎4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát sodný (20)

RsMe,R'_KNHAe

R-.Ac

Mel/AftCOýCHjCN

NHCHj

U

R«N<, R'vMIIAc R'«H

NaOH/Η,ι

NHCH,

K roztoku metyljodidu (15 mg, 0,10 mol) a zlúčeniny (5) (48 mg, 0,11 mmol) v acetonitrile (6 ml) sa pridá uhličitan strieborný (42 mg, 0,15 mmol), zmes sa mieša a je pritom chránená pred svetlom, pri teplote miestnosti počas 16 hodín. Výsledná suspenzia sa odfiltruje a filtrát sa odparí do sucha. Zvyšok sa spracuje chromatografiou (silikagél, etylacetát/izopropanol/voda = 5/2/1). Frakcie s hodnotou R_f 0,36 sa spoja a zahustia za vákua do sucha, získa sa tak zlúčenina (18) (25 mg, 51 %).

«3 (FAB) 445 (M*4|), 4,14 (),⁺ -«(HCHjí 'u-lílB (CDCljÁ (pi.ií); 1,95, 2,05, 2,U6, 2,12 <«, t(’H, ac«tyl CHj X ₄), 2,45 (a, 3H, X-CHj), 3,72 (dd, III, . 2.3Η», J_4|5 9,2Hz, H,), 3,Π, (a, JH, COOCHj), 4,t6 (dd, 111, J,· _B 7,211», J_g-_j9 12,3Hz, H_g->, 4,26 (ddd, 1H, ₄ 9,211», ’ ^J5,tW ^J5,6 ^h5>· ⁴>^3S <«> h 5 ⁹>^0Η!’

J₆ , 2,711», H_s) 1 4,64 (dd, IH, 2,911», J. j.12,3Hz, ÍL), 5,34 (o, IH, J_{o 7} 4,BHí, ₅ 2,9Hz, J,, j-7,211», ty, 5,51 (dd, 1H,J_{7 9} 2,)Hz, J_{? 0} 4,fHx), 6,05 ‘(ď, IH, Jj ₄ 2,3llz,«j)

Zlúčenina (18) (25 mg, 0,056 mmol) sa mieša v bezvodom metanole (50 ml), obsahujúcom metoxid sodný (5,4 mg, 0,1 mmol) pri teplote miestnosti 2 hodiny, potom sa odparí do sucha, získa sa zlúčenina (19), ktorá sa opäť rozpustí vo vode (5 ml) a nechá stáť pri teplote miestnosti 2 hodiny, keď predtým bola neutralizovaná živicou Dowex 50 x 8 (H⁺). Filtrát bol lyofilizovaný, získa sa zlúčenina (20) (15 mg, 82 %).

‘H-NMR (D₂O) δ (ppm): 1,94 (s, 3H, CH₃CO), 2,43 (s, 3H, N-CH₃), 3,5 ~ 4,3 (m, 7H, H₄, H₅, H₆, H₇, H₈, H, a H,'), 5,65 (d, IH, J_3j42Hz, Hj)

Príklad 9 5-Acetanudo-4-N,N-dimetylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát sodný (23)

Mel/AftCoyCHjCN

R»N«. R'xNHAc

R'» H

NtOH/NgO

R-Me. R'.NHAc

R'-Ac

K roztoku metyljodidu (65 mg, 0,46 mmol) a zlúčeniny (5) (100 mg, 0,23 mmol) v acetonitrile (15 ml) sa pridá uhličitan strieborný (127 mg, 0,46 mmol). Zmes sa mieša a chráni pred svetlom pri teplote miestnosti 16 hodín. Výsledná suspenzia sa odfiltruje a filtrát sa odparí do sucha. Zvyšok sa spracuje dvakrát rýchlou chromatografiou (silikagél, etylacetát/izopropanol/voda = 5/2/1), získa sa tak zlúčenina (21) (30 mg, 28 %) ako bezfarebná pena.

ks (ras) 459 in* + U 4i4 (m*-h<cí1j>₂) ’lt-l'KB (CDClj) 1,9E, 2,05, 2,06, 2,17 (b, IZH, acetyl, CHj x 4), 2,53 (br n, 611, NÍCHjJg, 3,42 ('M, >11, C₄ j 2,8Hz, j B,6Hz, H,), 3,79 (a, 3H, ČOOCHj), 4,17 (00, 111, a₉' fN«>, >>9' 5 Ή.3ΗΖ, H₉>, 4,10 (666, IH, Jj ₄ 6,5 Hz, Jj Ν]β,9Ηζ) 5 9,0Hz, (,), 4,31 (M, 1K, ₅ 4,0Kz, ₇ H₆), 4 Í6B (dd, IH, dj ₍₎ 3,0Hz, ^-1^,3111,

H₉i, 5,31 (a, IH, Jg_i7 4,4Hz, J_e_₉ 3,0Hz, J₈j. 7,4H«, H_B>, 5,51 (44, IH, j 219Hz, J, ₀ 414111, Ηγ), í’,79 (4,111, C_(|. j e,9i(z, CClA), 6,09 (4,’lH, Jj ₄ 2,011», Hj).

Zlúčenina (21) (30 mg, 0,066 mmol) sa mieša v bezvodom metanole (4 ml), obsahujúcom suchú živicu Amberlite IRA 400 (CH’) (90 mg) pri teplote miestnosti 3 hodiny, potom sa živica odfiltruje. Filtrát a premývacie roztoky sa spoja a odparia do sucha, získa sa zlúčenina (22) (20 mg), ktorá sa mieša s vodou (5 ml) pri pH 12 pri teplote miestnosti 2 hodiny, potom sa upraví pH 7,5 Dowexom 50 x 8 (H⁺) pred filtráciou. Filtrát sa lyofilizuje, získa sa zlúčenina (23) (15 mg, 66 %) ako biely prášok.

'H-NMR (D₂O) δ (ppm): 1,97 (s, 3H, acetyl), 2,33 (s, 6H, N(CH₃)₂), 3,50 4,26 (m, 7H, H₄, H_s, H₆, H₇, H₈, H₉ a H/), 5,71 (d, J₃.₄ 1,8 Hz, H₃)

Príklad 10

5-Acetamido-4-N-oxykarbonylmetylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-galaktonon-2-eno-pyranosonát disodný

’h-MB (CDClj) ílpp·): 1,97, 2,044, 2,047, 2,11 (t,12H, zoztyl CHj x 4), 3,49 (*3, 2H. '7.6Hz, H,_o x 2), 3,50 (dd, IH, J₄ j 2,9Hz, J₄ j 6,4Hz, H,), 3,71 t., 3H, Ο,,ΟΟΜζ), 3,79 (·, 3b! Ο,ΟΟ»·), 4’,09 UWM, 1H, 4,^ 8,4Hz,

6,SH«, ₆ a.lHz.H,», 4, f? (dd, IH, J₉'- g 7,4Hz, J,· ,

12,3Hz, H^>, 4,32 (dd, IH, Jj, 8,1Hz, jj _? 4,1Hz, Hjl, *,63 (dd, IH, Jj _# 3,1Hz, 4_{9 9}.12,3Hs, Hj5, 5,37 (a, 1H, d_{8 7} 4,1Hz, j'3,IHz, J_{s 9}-7,4Hz, Hg), 5,56 (t, IH,

J₇’₆ 4,1Hz, 4,1Hz, H?!, 6,03 <4,IH, j β,ΒΗ», C08H),

6,04 (d, IH, Jj ₄ 2,9Hz, Hj) '

Zlúčenina (24) (80 mg, 0,159 mmol) sa mieša v bezvodom metanole (20 ml), obsahujúcom metoxid sodný (18 mg, 0,32 mmol) pri teplote miestnosti počas 2 hodín, potom sa odparí do sucha, čím sa získa zlúčenina (25), ktorá sa opäť rozpustí vo vode (15 ml). Roztok sa nechá stáť pri teplote miestnosti 2 hodiny, predtým bolo jeho pH upravené na hodnotu 7 živicou Dowex 50 x 8 (H⁺). Filtrát sa lyofilizuje, získa sa zlúčenina (26) ako biely prášok (59 mg, 94,6 %).

'H-NMR (D₂O) δ (ppm): 2,04 (s, 3H, acetyl), 3,58 (AB, 2H, J_AB 17,6 Hz, H₁₀ x 2) 3,50, 4,40 (M, 7H, H₄, H_5> H₆, H₇, H_g, H₉ a H₉), 5,68 (d, IH, J₃,₄ 2,1 Hz, H₃)

Príklad 11 5-Acetamido-4-N-2’-hydroxyetylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát sodný (29)

fra

BrCHjCHjOH/AgiCOyCHjČN

M

R = Me, Fl'- NRAc R‘-Ac

N«OMe/MeOH

►«MsCOOR

M

R'-H

NHCHgCOOM*

R«Me, R’ = NHAe R=H

K roztoku metyl a-brómacetátu (36 mg, 0,23 mmol) a zlúčeniny (5) (100 mg, 0,23 mmol) v acetonitrile (12 ml) sa pridá uhličitan strieborný (64 mg, 0,23 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 16 hodín a pritom je chránená pred svetlom, potom sa odfiltruje. Filtrát sa odparí do sucha. Zvyšok sa chromatografúje na stĺpci silikagélu (etylacetát/izopropanol/voda = 5/2/1). Frakcie s hodnotou Rf 0,60 sa odoberú a odparia do sucha, získa sa lak zlúčenina (24) (80 mg, 68,5 %).

K roztoku brómetanolu (158 mg, 1,26 mmol) a zlúčeniny (5) (84 mg, 0,195 mmol) v acetonitrile (10 ml) sa pridá uhličitan strieborný (100 mg, 0,36 mmol), zmes sa chráni pred svetlom a mieša sa pri teplote miestnosti 7 dní. Potom sa odfiltruje a odparí do sucha. Zvyšok sa chromatografuje na stĺpci silikagélu (etylacetát/izopropanol/voda = 5/2/1. Frakcie s hodnotou RF 0,4 sa spoja a odparia do sucha, získa sa zlúčenina (27) (40 ml, 40 %).

MS (FAB) 475 (M⁺ + 1), 4 + 4 -NHCH₂CH₂OH) 'H NMR (CDC1₃) δ (ppm): 1,96, 2,05, 2,10 (s, IH acetyl CH, x 4), 2,29 (br. s, 2H, NH a OH), 2,76 (ABm, 2H, H_lo X x 2),

3,47 (dd, IH, J₄ j 2,9Hz, 7,5Hz, 3,62 (t, 2H, ^J11,l0 H,J k2), 3,79’(b, 311, COOCHj), 4,15 (ddd, ’H. J_S>4 7,5Hz, J_5i& 8,4114. J 8,3Hz, ÍL·), 4,1₉ (dd, ^,H’ ^J9',e ^J ₉' ₉ 12.3Hz, Kg-J, 4,25 (dd, III, J

MHz, Ú_6>7 3,6Hz, H’), 4,65 (dd, IH, J 2,9Hz, J, ' . 17,3Hz, H<,3, 5,36 (a, IH, J_£ 4Hz, d- ’í.silz, J ’, 7,5Hz, H_o), 5,55 (dd, IH, J_?'₆ 3,8Hz, Ó, _e 4Hz, H

6.08 (β, III, J 2,9Hz, 11,)( 6,09 (d, lá, , 8,311», CWH) -^{1 W}>⁵ (ouoij) j(_Λ,«).· so,c, ₂₀,_B tciij-co-o-x 3), :13,1ο <CH,-C0-KH), 46,5 (Cj), 47,2 (C_|o), 52,3 (CH,CCOCH.), 55,6 <c₄)> 61,1 (0_tl), 62,1 (Cj), 68,1, 71,1 (C-.C-), 76,7 <Ο_δ>, 111,6 (Cj), 143,7 (C₂), 162,1 (Cj>, 170,1, 170,3, 171,C (·β*ί/1ΧατΙ>οη)Γ1 x 4)

Zlúčenina (27) (40 mg, 0,084 mmol) sa mieša v bezvodom metanole (10 ml), obsahujúcom suchý Amberlite IRA-400 (CH‘) (120 mg) pri teplote miestnosti 4 hodiny, potom sa odfiltruje. Filtrát a premývacie roztoky sa spoja a odparia sa do sucha, získa sa zlúčenina (28), ktorá sa opäť rozpustí vo vode (10 ml) a hodnota pH sa upraví na 13 pridaním hydroxidu sodného. Vodný roztok sa nechá stáť pri teplote miestnosti počas 3 hodín, keď bolo dopredu jeho pH upravené na hodnotu 6 - 7 živicou Dowex 50 x 8 (H⁺). Roztok po odfiltrovaní bol lyofilizovaný, získa sa tak zlúčenina (29) ako biely prášok (20 mg, 66 %).

'H-NMR (D₂O) S (ppm): 1,99 (s, 3H, acetyl), 2,91 (AB, 2H, H₁₀ x 2), 3,53 ~ 4,25 (m, 9H, H₄, H₅₁ H₆, H₇, H₈, H₉, H/, Hu x 2), 5,65 (d, J_3>4, 2,24 Hz, H₃)

Príklad 12

2,3-Dideoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát sodný (35)

%), ktorá sa opäť rozpustí vo vode (5 ml) a nechá sa stáť teplote miestnosti 3 hodiny, keď bolo jej pH predtým upravené na hodnotu 7 živicou Dowex 50 x 8 (H⁺). Roztok sa lyofilizuje a získa sa zlúčenina (35) (47 mg, 91 %).

‘H-NMR (D₂O) δ (ppm): 3,69 (dd, IH, J₉₈ 5,6 Hz, J₉-₉ 12,0 Hz H,') 3,76 (dd, IH, J₃,₄ 7,8 Hz, J₃₆ 10,5 Hz, H_sj, 3,87 ~ 3,99 (m, 3H, H₇, H_s, H₉), 4,13 (d, IH, J₆₃ 10,5 Hz, H₆), 4,40 (dd, IH, J₄₃ 2,3 Hz, J₄₅ 7,8 Hz, H₄) 5,67 (d, IH, J₃,₄ 2,3 Hz, H_ä)

Príklad 13

4,5-Diamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát sodný (38)

J3 k«Me,R’«OAc R*-A«

R > Ma, R' OAc R* aAe

NzOH

t) Amberlite IRA-4D0 [HCOOJ 2)IJMHCOOH J) Amberlite

R Ml, R'zfiHj

R'-H

NiOMe/MeOH

R-Me,R’.OH R·-H

R-Na,R»OH Η··Η

Zlúčenina (30) (332 mg, 1,24 mmol) sa získa v bezvodom metanole (40 ml), obsahujúcom živicu Dowex 50 x 8 (H⁺) (50 mg) pri teplote miestnosti 16 hodín pred filtráciou. Filtrát sa odparí do sucha, získa sa zlúčenina (31) (320 mg, 1,13 mmol, 91,5 %), ktorá sa mieša v acetylchloride (5 ml) pri teplote miestnosti počas 3 dni, potom sa odparí do sucha a získa sa zlúčenina (32) (539 mg, 1,057 mmol, 93,6 %). Zvyšok sa rozpustí v acetonitrile (20 ml) obsahujúcom dusičnan strieborný (500 mg, 2,94 mmol) a uhličitan draselný (90 mg, 0,65 mmol), chráni sa pred svetlom a mieša pri teplote miestnosti 16 hodín, potom sa odfiltruje. Filtrát sa odparí na malý objem a rozdelí sa medzi etylacetát (75 ml) a vodu (15 ml). Organická vrstva sa premyje vodou (10 ml x 3) a odparí sa do sucha. Zvyšok sa chromatografuje na stĺpci silikagélu (etylacetát/hexán = 2/1), získa sa čistá zlúčenina (33) (200 mg, 0,423 mmol, 40 %).

'n-m teocij) f (ppa): 2,962, z,«70, 2,073, 2,094, 2,09« í«, 15H, acetyl CHj x 5), 3,89 (·, 3H, CO:OH,), 4,19 (aa, IH, J_{9 8} 5,9H»J J₉· J 12,3Hz, H₉<), 4,33 (4a. IH, J- J₆ , 3,0Hz, á₄), 4,57 (aa, IH, J, ₈ 1,98«, c ’ .

12,3Η», h₉), 5,20 íaa, u, e, _A 7.on«, Z _f 9,4H»> n’).

5,38 («, 1H, J_B>1 5,lHí, σ_βι9Ί,9Η», J_{8 9}·5,9Ηχ,

5,49 (44, tu, 3,9Hz, J_{9 8} 5,1Hz, 5,57 (ad, IB, ^J ₄,J 3,1Hz, J_4>,’7,0Hz, H₄),’5,97 (4, 1H, *j ₄ 3,1Hz, Hj)

Zlúčenina (33) (100 mg, 0,211 mmol) sa mieša v bezvodom metanole (10 ml), obsahujúcom metoxid sodný (24 mg, 0,423 mmol) pri teplote miestnosti 3 hodiny, potom sa odparí do sucha, získa sa tak zlúčenina (34) (50 mg,

Roztok zlúčeniny (6) (125 mg, 0,40 mmol) v hydrazínhydráte (5 ml) pod argónom sa zahrieva na 85 °C tri dni a výsledná zmes sa odparí vo vákuu do sucha. Zvyšok sa rozpustí vo vode (15 ml) a nechá sa prejsť kolónou Amberlitu IRA-400 (HCOO ), potom sa eluuje 1,5M HCOOH. Eluát (200 ml) sa odparí do sucha. Zvyšok sa chromatografuje na silikagéli deaktivovanom 10 % vody (vyvíjacie činidlo: izopropanol/voda = 4/1. Frakcie s hodnotou Rf 0,1 sa spoja a odparia do sucha, potom sa lyofilizujú. Zvyšok, zlúčenina (36) sa rozpustí vo vode (10 ml), nechá sa prejsť malou kolónou Amberlitu IR-48 (OH ) (10 ml). Elučné činidlo sa odparí do sucha, získa sa zlúčenina (37), MS (FAB) je 249 (M⁺ + 1). Zlúčenina (37) bola rozpustená vo vode a upravené pH na hodnotu 7,5 0,1 M NaOH, potom bola lyofilizovaná a získaná zlúčenina (38) (20 mg, 20 %) ako biely prášok.

'H-MMR (D₂O) δ (ppm): 3,01 (dd, IH, J₅,₄ 9,7 Hz, J_3>6 10,2 Hz, H₅), 3,58 (m, 2H, H₉' a H₇), 3,08 3,89 (m, 3H, H₄, H_s a H₉), 4,06 (d, IH, J₆₃10,2 Hz, H₆), 5,54 (d, IH, J₃₄ 2,4 Hz, H₃)

Príklad 14

Metyl-5-acetamido-2,3,5-trideoxy-9-(p-toluénsulfonyl)-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (39)

Roztok metyl-5-acetamido-2,3,5-trideoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonátu (1000 mg, 3,16 mmol) v suchom pyridíne (85 ml) sa ochladí na ľadovom kúpeli. Pridá sa p-toluénsulfonylchlorid (660 mg, 3,46 mmol) a žltkastý homogénny roztok sa nechá stáť cez noc pri 4 °C.

Pridá sa ďalší p-toluénsulfonylchlorid (220 mg, 1,15 mmol) a roztok sa nechá miešať ďalšie 4 hodiny pri teplote miestnosti.

Spracuje sa ďalej tak, že sa pridá voda (1 ml) a ďalej sa spracuje v rotačnej odparke, získa sa tak viskózny žltý olej, ktorý sa spracuje rýchlou chromatografiou (SiO₂, EtOAc/i-PrÓH/H₂O, 6/2/1, obj/obj/obj), získa sa tak hlavný produkt 1,19 g (80 % výťažok) zlúčeniny (39).

IR (KBr): (cm¹) 2964 (OH), 1730 (CO₂CH₃), 1656 (NHAc), 1358, 1174 (SO₂), 810, 662, 550 (Ar) MS (FAB), 460(M⁺ + H⁺) *H NMR (300 MHz, CD₃OD/TMS) δ (ppm) = 2,03 (s, 3H, NHAc), 2,45 (s, 3H, ArCH₃), 3,49 (d, IH, J_6j7 1,70, H₆), 3,76 (s, 3H, CO₂CH,) 3,91 (dd, IH, J₅,₆ 10,80, H₅), 3,98 - 4,13 (m, 3H, H_s, H, a H₉), 4,28 (dd, IH, J₇₈ 9,55, H₇), 4,39 (dd, IH, J₄₅ 8,64, H₄), 5,92 (d, IH, J₃.₄ 2,49, H₃), 7,74 (d, 2H, ArH), 7?79 (d, 2H, ArH)

Príklad 15

Metyl-5-acetamido-9-azido-2,3,5,9-tetradeoxy-C-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (39)

Metyl-5-acetamido-2,3,5-trideoxy-9-(p-toluénsulfonyl)-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (40) (600 mg, 1,27 mol) a azid lítny (186 mg, 3,80 mmol) sa rozpustí v suchom DMF (20 ml) a žltý homogénny roztok sa zahrieva na 80 °C. Po 2 hodinách sa pridá ďalší azid lítny (186 mg, 3,80 mmol) a roztok sa nechá pri 80 °C cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni na rotačnej odparke a zvyšný hnedý olej sa rozpustí v pyridíne (2 ml) a spracuje sa rýchlou chromatografiou (SiO₂, 5/2/1 EtOAc/i prOH/H₂O). Hlavným produktom je zlúčenina 40 (370 mg, 88 % výťažok), získaná vo forme bielej peny.

IR (KBr): (cm^-1) 3428 (s, OH), 2104 (s, H₃), 1730 (s,

CO₂CH₃), 1656 (s, NHAC)

MS (FAB): 331 (M + H⁺) 'H-NMR (300 MHz, D₂O): δ (ppm) = 1,94 (s, 3H, NHAc), 3,37 (dd, IH, H₉), 3,48 - 3,57 (m, 2H, J_By 5,77, H₈ s J₉,₉13,16, H,), 3,66 (s, 3H, CO₂CH₃), 3,91 - 3,98 (m, 2H, H₅ a H₆), 4,15 (d, IH, J₇,₈10,86, H₇), 4,38 (dd, IH, J₄,₅ 8,88, H₄), 5,91 (d, IH, J₃,₄2,44, H₃)

Príklad 16

Metyl-5,9-diacetamido-2,3,5,9-tetradeoxy-D-gIycero-D-galakto-non-3-cnopyranosonát (41)

Tioloctová kyselina (130 ml, 1,82 mmol) sa pridá k metyl-5-acetamido-9-azido-2,3,5,9-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonátu (70 mg, 0,21 mmol), získa sa svetložltý roztok, ktorý sa mieša cez noc pri teplote miestnosti.

Prebytok tioloctovej kyseliny sa potom odparí za zníženého tlaku a zvyšná látka sa opakovane spracuje s vodou s nasledujúcim odparením (3x3 ml). Zvyšná pevná látka sa rozpustí v metanole (4 ml), sfiitruje a filtrát sa aplikuje na preparatívnu TLC doštičku (SiO₂, 20 cm x 20 cm x x 2 mm, elúcia 5/2/1 EtOAc/i-PrOH/H₂O). Pruh s Rf = 0,47 sa vyberie a poskytne 51 mg (70 % výťažok) zlúčeniny (41) vo forme bieleho prášku.

IH(KBr): V_m3x<c®·’) 3400 (s,on), i₇2e (e, CO-,αιιρ, 1656 (S, MUAoí

MS(FAB): 347 'll ΒΙΕ (300 MHz, O₂c) Γ(ρρι,) = 1,₉6 (s, 3H, ti*!Ac), 2,00 (z, 3H, HHAo),

3,23 (dd, Hl, H,), 3,48 (d, III, Mg), 3,56 (dd, IH, Jj 5'14,17,Hj),

3,75 (s, 311, atT,cí/₃>, j.ao (□. m, , 2,90, j_g 7,40, H_e), 4,02 (ad, IH, <. 9,IO,H₅J, 4,22 (ä,' IH, ₀ 10,05, H_?), 4,45 (dd, IH, , H,94,H₄), 5?61 (á, III, Jj 2,47, Kj) ’^J

Príklad 17

5,9-Diacetamido-2,3,5,9-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonová kyselina (42)

Prípravu zlúčeniny (42) zo zlúčeniny (39) možno zhrnúť nasledujúcou schémou:

Roztok metyl-5,9-diacetamido-2,3,5,9-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonátu (41) (46 mg, 0,13 mmol) sa rozpustí v 0,1 M vodnom hydroxide sodnom (5 ml), mieša sa pri teplote miestnosti 2,5 hodiny. Roztok sa potom upraví na hodnotu pH 5 Dowexom 50-W-X8 (H⁺), živica sa odfiltruje a filtrát sa lyofilizuje, získa sa 40 mg (91 % výťažok) zlúčeniny (42) ako bieleho prášku.

IS(KBr): 9 _ωχ(4«-’) 3376 <«, 0K), 1652 (b, MIAc) «<ΓΛΒ)| 333EK+H*) ’h xsn (3t>6 aiz, α,ο): δ(ρρπ) » ι,εο (s, 3h, nhac), 1,93 (s, ja, muc),

3,15 (dd, IH, Η,>, 3,40 (d, 111, H,), 3,48 (dd, IH, J_9iS'I4,16, h,),

3,C2 (m, III, J₆₍₉ 3,01, 5.7,43, líg), 3,94 (dd,

IH, , 10,42, Ifj), 4,13 (d, 111, J 10,91, ÍL), 4,36 (Id, IH, J r,,6₀, H ), 5,₆i ,_K j ' Hj) '' ’

Príklad 18

Metyl-5-acetamido-9-kyano-2,3,5,9-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát (43)

Roztok metyl-5-acetamido-2,3,5-trideoxy-9-(p-toluénsulfonyl)-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonátu (39) (80 mg, 0,17 mmol), terc.butylamóniumkyanidu (2 mg) a kyanidu sodného (12 mg, 0,25 mmol) v suchom DMSO (1,25 ml) sa mieša pri teplote miestnosti 5 dní.

Spracovaním preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve (SiOj, 20 cm x 20 cm x 2 mm, elúcia EtOAc/i-PrOH/H₂O, 5/2/1) sa získa ako hlavná zložka 30 mg (61 %) zlúčeniny (43) vo forme krémovito sfarbeného prášku. (Rf= 0,74)

IR(KBr): 9^(0»·’) 3440 (·, OH), 2256 (w, CH), 1724 (e, COjCHj), 1638 <», HIU«)

MS (FAB); 315 (M*H⁺)

H HM» (300 aHa, 0₂»>4(ppa> - 1,92 (·, 3H, WUa), 2,75 (dd, IH, H,),

2,93 «4, IH, c₉ ,67,22, Hj), 3,55 (aa, u, J₆ _

1,17, fl₆), 3,67 1·, 3H, COjCHj), 4,02 (dd, IH.'j . »,05, H,), 4,13-4,19 (a, IH, J_g ,-6,56, H-), 4,lž’ (da, iH, ₈ io,₉o, t,j7 |aa, m, j. . e,95

5,90 (i, IH, J-, 2,42,Hj) ’

Príklad 19

5-Acetamido-9-kyano-2,3,5,9-tetradeoxy-D-glycero-D-galaktonon-2-enopyranosonová kyselina (44)

Postup na prípravu 5-acetamido-9-kyano-2,3,5,9-tetradeoxy-D-glyccro-galakta-non-2-enopyranosonovej kyseliny (44) je zhrnutý ďalej:

Tabuľka 1

Inhibícia neuraminidázy vírusu chrípky in vitro

R«Me,R-.NHAí R'-H

l)N«CWt-BujNCN DMSOŕS dal

R = Me,R' = NHAc R’»H

A-Oneunefnfltí kyiella·

M>ranoeca4t ladný (4) ,

Σ 1 19⁶ «Γ.«ρττΜβ·οη4ι ladný (6) „

10“· > »s> * <c~⁷

ΙΛ9 neurarlnlddu, pg

X ir^e

IKZ TÍrut, PH 7,5) (»lbkla>n»a~é-*noMrr«noatit4t Matu? (7>

1,7 x 10*® >ϊ « 10*®

ÍK5 n»ure:!nidi*a)

4,5 t )0'⁴ tVícholme a«ura«tnij<s·, pi| 5,0) >IO² ljiqNaOH

2) H* Ríriea

M«X»kto-Ben-2-aaepjrranoa&Mt codný (9) (arfll* n»*ra.inťd4*e, pH 4,5) -ruaioxy-^lypero4 K J0“^C |tlrtto-iu>_a.2-._{neWPeiW3an<t |edB# (n>}

Í,J> 1 K“⁶ (N2 a »9 nriíraktnidfta)

R»H,R-=NHAc R»H

Metyl-5-acetamido-9-kyano-2,3,5,9-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enpyranosonát (43) (80 mg, 0,25 mmol) sa rozpustí v 0,1 M vodnom hydroxide sodnom (10 ml) a vzniknutý roztok sa mieša pri teplote miestnosti 3 hodiny.

pH sa potom upraví na hodnotu 4 Dowexom 50W-X8 (H⁺), živica sa odfiltruje a filtrát sa lyofilizuje, získa sa 75 mg (98 % výťažok) zlúčeniny (44) ako perovitý biely prášok.

IR (KBr): (cm'¹) 3370 (s, OH), 2254 (w, CN), 1656 (s,

MHAc), MS (FAB): 301 (M + H⁺) ’H NMR (300 MHz, D₂O): (ppm) = 1,98 (s, 3H, NHAc), 2,70 (dd, IH, H₉), 2,88 (dd, IH, J₉.₉ 17,27, H₉), 3,48 (d, IH, H₆) 3,97 (dd, IH, J₅₆ 9,84, H₅), 4,09 - 4,24 (m, 2H, H₇ a H₈, J₈₉ 3,90 (J_g9 6,53) 4,41 (dd, IH, J₄,₅ 8,87, H₄), 5,80 (d, IH, J₃₄2,42, H j) t X^celO-l>-talo-non-2-anĎP7rana«cndt U?} pflbl J „„lm.olc /5,,./-0-,,,„„ , •nopxranoiondt (t<) «.

5^ 4, •ncR-rMolMdk aodný (17)

5“*^M'*el<Jo-4-K-a»tyJaaíao aon»!-ano;y?aa«aMiít iidný <2o) •*>yl-5-aa«taďído-4-?l~i aatyUmboaylartT>..y._ŤJ .

5-*e*taadd4-4-]t_2'. »en-3-«nop7riiDoion4t ladný (29)

X IC'³

10⁵ t

(K? a N9 z 10⁷ neuiieiniddia)

15-t · t r*l»e*y-U2,β * 1e“*

1,15 K ip”⁴ r 10-7 * io*<

• ^í*^,*^s»⁽»/-5-jljr««ro«9-xal8kto-aeB-t>.tnep_Jr_Puaoaea4t lodný (35)

4,5-1163^0-2,),4 5.4.4,^ •odflí (26)

-í-jaimo1.6 a 10· (X? a H? aeurocilnÍddaa)

4,B k to^-4

P-£t>lnlrto-_nBlr4._(nep_rraa0B()n4t

Príklad 20 •W -5,9-d1ae»taaÍdo-?, •nopyranoaoaát (41) «,5 s 1P-7

3,6 x ip-⁴

Inhibícia neuraminidázy vírusu chrípky

In vitro bioskúška uvedených zlúčenín proti neuraminidáze NZ vírusu chrípky bola urobená podľa Warnera a O'Briena, Biochemistry, 1979 18 2783 - 2787. Na porovnanie bola rovnaká skúška K; urobená pre 2-deoxy-N-acetyl-α-D-neuramínovú kyselinu pri 3 x 10⁴ M.

Hodnoty K_f boli merané spektroflurometrickou technikou, ktorá používa fluorogénny substrát 4-metylumbeliferyl-N-acetylneuramínovú kyselinu (MUN), ako je opísané Meyersom a spol., Anál, Biochem. 1980 101 166 - 174. Pre oba enzýmy obsahuje skúšaná zmes testovanú zlúčeninu v niekoľkých koncentráciách medzi 0 a 2 mM a približne 1 mU enzýmu v pifre (32,5 mM MES, 4 mM CaClj, pH 6,5 pre N2, 32,5 mM acetátu, 4 mM CaCl₂, pH 5,5 pre neuraminidázu V. cholerae).

Reakcia bola naštartovaná prídavkom MUN do konečnej koncentrácie 75 alebo 40 μΜ. Po 5 minútach pri 37 °C bol pridaný k 0,1 ml reakčnej zmesi na ukončenie reakcie

2,4 ml 0,1 M glycín-NaOH, pH 10,2. Pri excitácii 365 nm bola odčítaná fluorescencia, emisia 450 nm a príslušné MUN biele plochy (neobsahujúce žiaden enzým) boli odčítané. Kj bola hodnotená Dixonovými diagramami (1/fluorescencia proti koncentrácii zlúčeniny). Výsledky sú zhrnuté v tabuľke 1, a ak nie je uvedené inak, týkajú sa inhibície N2 neuraminidázy.

J x ΙΟ“¹ x 10’

Príklad 21

Inhibícia replikácie vírusu chrípky in vitro

Inhibícia replikácie vírusu chrípky A/Snagapur/1/57 (H2N2) a chrípky B/Victoria/102/85 in vitro bola meraná redukciou tvorby virálnych plakov v Madin Darby psích ľadvinových (MDCK) bunkách.

Monovrstvy konfluentných MDCK buniek, kultivovaných v šesťjamkových platniach pre kultúru tkanív, boli inokulované 0,3 ml vírusu zriedeného asi na 50 - 100 plakov/jamka. Vírus bol zriedený séra zbaveným základným médiom (MFM), obsahujúcim 2 pg/ml N-tosyl-l-fenylalanin-chlórmetylketónom (TPCK) spracovaného trypsínu (Worthington Enzymes) a testovanú zlúčeninu.

Vírus bol adsorbovaný pri teplote miestnosti počas jednej hodiny a bunky boli potom prekryté definovaným bunkovým kultivačným médiom, verzia 1 (DCCM-l)/agar prevrstvenie, obsahujúce testovanú zlúčeninu, 4 ml/jamka. DCCM-1 je séra zbavené kompletné bunkové kultivačné médium (Biological Industries), ku ktorému bol pridaný TPCK spracovaný trypsín a DEAE-dextrán na konečnú koncentráciu 2 pg/ml a 0,001 %. Agar (5 %) (Indubiose) bol zriedený 1 : 10 v krycom roztoku prv ako bol pridaný na platňu.

Sotva bolo urobené prevrstvenie, platne boli inkubované pri 37 °C, 5 % CO₂ počas 3 dní. Bunky boli potom fixované 5 % glutaraldehydom, vyfarbené karbolfuchsínom a vírusové plaky boli spočítané. Výsledky sú nasledujúce:

Tabuľka 2 iCjo rtaukoi* piikov (_zu3) >-M<t*ei4o-4-»*íi»-í₁J|4,5-trtr«d«»j’-í>-gLyc«ro<>Tga3aKt»-noti-2-»aoj>rrM>oiM>*t eodftý (♦-**lao-X«u5*ei«u) (6) , 4,5-1« trBd’ux/-j>-gl«c«ro3-fcelo-noi>-2-«aopyT»iMbeonál todnj 11·)3,0

5-ecrtM14o-4'-4vanlOfno-?,3>4,>-UU«aeov-*⁰~fVe«r»•*-<Β1·41ο-ηοητΒ-·Αορ7Γη«6ΒθΜί hBonitf 17)1.6 >•30· i«eílo-4~!<»2 '-hydroxy^tňjlatíno-? ,J.‘,5-teer·itoaj-O-gl rocr»-l>-4xX«kto~»<or>-2-»noi3rranoecrti4t sodn/

W Λ6α i-H-okXyl-M-t^írwy'-í’.i.-í.p-títraanoKj-J£lyo«ro*0-olikto-n&o-^-«aopyronMon4l o očný i*5) 4,12,1 «,5-dtBifno-2, J,4, 5~t, tr«d»exy-u-^lya»ro-i>-g«l«ktenoo-2-»nopyrnno»cn4t ·ο<!η/ (36j ľ6,6

Príklad 22

In vivo antivírusová aktivita

Zlúčeniny z príkladov 2,3 a 6 (4-amino, 4-guanidino a 4-epi-amino), ako aj zlúčenina DANA (2-deoxy-N-acetyl-α-D-neuramínová kyselina), o ktorej je v príklade 20 uvedené, že má in vitro antineuraminidázovú aktivitu, boli testované na svoju antivírusovú aktivitu v štandardnej in vivo skúške. Pri intranazálnom podaní myši pred a počas napadnutia vírusom chrípky A, tieto zlúčeniny redukujú titcr vírusu v pľúcnom tkanive 1 až 3 dni po infekcii.

Myši boli infikované intranazálne 50 μΐ 10³ TCID₅₀ jednotiek/myš vírusom H2N2 chrípky A (A/Sing/1/57). Testovaná zlúčenina bola podaná intranazálne v dávke buď 12,5 alebo 25 mg/kg telesnej hmotnosti (50 μΐ vodného roztoku/myš) nasledovne: 24 hodín a 3 hodiny pred infekciou, 3 hodiny po infekcii, potom dvakrát denne, prvý, druhý a tretí deň po infekcii. Štruktúrne nepodobné zlúčeniny ribavirín a amantadín boli použité na porovnanie.

Myši boli usmrtené prvý, druhý a tretí deň po infekcii, vybraté ich pľúca a bol stanovený titer vírusu v pľúcach. Titre boli graficky spracované a vyjadrené ako plošné percentá pod krivkou (AUC) v porovnaní s neošetrenou myšou. Výsledky sú uvedené ďalej.

Tabuľka 3

Účinnosť na vírusom chrípky infikovanej myši

Pokus d. zlúčenina dívka I A’JC (mg/kg tel.bxot).

5-&cetB»ido-4-atlno-2,3,4,5tetradBOxy-D-glycaro-D-ga ia)cto-non-2-BnopyranoBonát sodný

(6-aníno-Nsu5Ac2sn)(6)	25	0,06
amantadín	25	0,08
DANA	25	0,18
5-&ceta»ido-4-guanidíno-2,3,4,
S-tatradacxy-D-glycero-D-ga-
lakto-non-2-enopyranoeonát a-
nónny (7)	12,5	0,03
ribavirín	25	29, B
amantadín	25	0.2
	12,3	0,03
DANA	12,5	2,0
5-acetamido-4-aalno-2,3,4,5-
tatradaoxy-D-glycero-D-talo-
ron-2-snopyranosonát *odný(14)	12,5	21.1
amantadín	12,5	8,8
DANA	12.5	48,C

Všetky tri zlúčeniny, ktoré boli testované, majú vyššiu
účinnosť ako DANA.
Príklad 23
Nasledujúce prípravky zmesi podľa vynálezu.	predstavujú reprezentatívne
Vodný roztok	% hmotn./hmotn.
zlúčenina vzorca (I)	10,0
benzalkóniumchlorid	0,04
fenyletylalkohol	0,40
čistená voda	do 100 % hmotn./hmotn.
Vodný kosolventný roztok	% hmotn./hmotn.
zlúčenina vzorca (I)	10,0
benzalkóniumchlorid	0,04
polyetylénglykol 400	10,0
propylénglykol	30,0
čistená voda	do 10 % hmotn./hmotn.
Aerosólový prípravok	% hmotn/hmotn.
zlúčenina vzorca (I)	7,5
lecitín	0,4
propelant 11	25,6
propelant 12	66,5
Prípravok vo forme suchého prášku
	% hmotn./hmotn.
zlúčenina vzorca (I)	40,0
laktóza	60,0

Uvedené prípravky sa pripravia zmiesením aktívnej látky a prísad obvyklými farmaceutickými postupmi.

Potrebné je zdôrazniť, že vynález vo svojom celkovom ponímaní nie je obmedzený uvedenými detailmi.

Claims (17)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Deriváty a-D-neuramínovej kyseliny všeobecného vzorca (Ib) kde R^3bznamená (alk)_xNR^6bR^7b, CN alebo Nj, kde alk je prípadne substituovaný metylén, x je 0 alebo 1,

   R^6b znamená vodík, Ci.₆alkyl, aryl, aralkyl, amidino, NR^7bR^8b alebo nenasýtený alebo nasýtený kruh obsahujúci jeden alebo viac heteroatómov zvolených z dusíka, kyslíka alebo síry,

   R^7b znamená vodík, C i _₆alkyl alebo alyl, alebo

   R^8b je vodík alebo C^alkyl, a

   R^4b je NHCOR^9b, kde R^9b je vodík, prípadne substituovaný

   C].₄ alkyl alebo aryl, alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo deriváty.
2. 2. Deriváty α-D-neuramínovej kyseliny podľa nároku l,kde R^3bje NR^6bR^7b.
3. 3. Deriváty α-D-neuramínovej kyseliny podľa nároku

   1, kde R^3bje NH₂ alebo NHC(=NH)NH₂.
4. 4. Derivát -D-neuramínovej kyseliny podľa nároku 1, zvolený zo súboru skladajúceho sa z 5-acetamido-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galaktonon-2-enopyranosonátu sodného (4-Azido-Neu5Ac2en), 5-acetamido-4-N-allylaroíno-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galaktonon-2-enopyranosonátu sodného, metyl 5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetyI-4-N-alylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galaktonon-2-enopyranosonátu (4-N-alylamino-Neu-5,7,8,9Ac₄ 2enlMe), a 5-acetamido-4-N,N-dimetylamino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-gaIaktonon-2-enopyranosonátu sodného.
5. 5. 5-Acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galaktonon-2-enopyranosonová kyselina a jej farmaceutický prijateľné soli a deriváty.
6. 6. 5-Acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galakto-non-2-enopyranosonát sodný.
7. 7. 5-Acetamido-4-guanidino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galaktonon-2-enopyranosonová kyselina a jej farmaceutický prijateľné soli a deriváty.
8. 8. 5-Acetamido-4-guanidino-2,3,4,5-tetradeoxy-D-glycero-D-galaktonon-2-enopyranosonát amónny.
9. 9. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa t ý m , že obsahuje derivát α-D-neuramínovej kyseliny podľa niektorého z nárokov 1 až 8 alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ alebo derivát, spolu s farmaceutický prijateľným nosičom.
10. 10. Farmaceutický prípravok podľa nároku 9, vyzná J u j ú c i sa tým, že je vo forme vhodnej na intranazálne podávanie.
11. 11. Použitie derivátu α-D-neuramínovej kyseliny všeobecného vzorca (Ib) podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie vírusovej infekcie.
12. 12. Použitie podľa nároku 11, kde vírusovou infekciou je chrípka.
13. 13. Použitie podľa nároku 11, kde infekcia je vyvolaná respiračným vírusom.
14. 14. Použitie podľa niektorého z nárokov 11 až 13 na výrobu liečiva na podávanie do dýchacieho traktu.
15. 15. Použitie podľa niektorého z nárokov 11 až 14 na výrobu liečiva na intranazálne podávanie.
16. 16. Derivát α-D-neuramínovej kyseliny podľa niektorého z nárokov 1 až 8 na použitie v lekárstve.
17. 17. Spôsob prípravy derivátu α-D-neuramínovej kyseliny všeobecného vzorca (Ib) podľa niektorého z nárokov 1 až 8, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa stupne: A. reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca (Illb) (IHb), kde R^4b má význam definovaný v nároku 1 a OL je odstupujúca skupina, alebo chráneného derivátu tejto zlúčeniny, s vhodným nukleofilom, alebo

    B. prevedenie zlúčeniny všeobecného vzorca (Ib) na inú zlúčeninu všeobecného vzorca (Ib), a ak je to nevyhnutné, spracovanie výslednej zlúčeniny jednou alebo dvoma ďalšími reakciami, ktoré zahŕňajú

    i) odstránenie akýchkoľvek chrániacich skupín a

    i) prevedenie zlúčeniny všeobecného vzorca (Ib) alebo jej soli na jej farmaceutický prijateľnú soľ.