PT97460B - Processo para a preparacao de compostos anti-virus derivados de acido d-neuraminico e das suas formulacoes farmaceuticas - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

DA

PATENTE DE INVENÇÃO

N.° 97.460

REQUERENTE: BIOTA SCIENTIFfc MANAGEMENT PTY LTD., industrial, australiana, com sede em Levei 28, North Tower, Rialto, 525 Collins Street, Melbourne, Victoria 3000, Austrália.

EPÍGRAFE: Processo para a preparação de compostos anti-virus e das suas formulações farmacêuticas.

INVENTORES:

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 4.° da Convenção de Paris de 20 de Março de 1883.

Austrália, em 24 de Abril de 1990 sob o nS PJ9800.

Austrália, em 19 de Outubro de 1990 sob o n2. PK 2896.

Austrália, em 11 de Fevereiro de 1991 sob o n~. PK 4537.

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INPI. MOD. 113 RF 13732

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PROCESSO PARA A PREPARAÇAO DE COMPOSTOS ΑΝΤΙ-VIRUS E DAS SUAS FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS para que

BIOTA SCIENTIFIC MANAGEMENT PTY LTD., pretende obter privilégio de invenção em Portugal.

O presente invento refere-se a uma nova classe de compostos químicos e ao seu uso na medicina. Em particular, o presente invento refere-se a derivados de ácido ^-D-neuramínico 4substituído-2-deoxi-2,3-didehidro, aos processos para a sua preparação, às suas formulações farmacêuticas e ao seu uso como agente anti-vírus.

As enzimas com capacidade para penetrar o ácido N-acetilo neuramínico (NANA), também conhecido como ácido siálico, a partir de outros açucares encontram-se presentes em muitos microrganismos. Os referidos microrganismos incluem bactérias como Vibrio cholerae, Clostridium perfrincens, Streptococcus pneumoniae e Arthrobacter sialophilus e vírus, como por exemplo o vírus da influenza, o vírus da parainfluenza, o vírus da parotidite, vírus da doença de Newcastle, vírus da peste das aves e o vírus de Sendai. A maioria destes vírus pertencem aos grupos ortomixovirus ou paramixovirus e possuem uma actividade neuraminidase na superfície das partículas de vírus.

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-2Muitos dos organismos de processamento de neuraminidase são patogéneos importantes de seres humanos e animais e, alguns, tais como o vírus da influenza, o vírus da doença de

Newcastle e o vírus da peste das aves provocam doenças de enorme importância económica.

Pensou-se durante muito tempo que os inibidores de actividade neuraminidase podem evitar a infecçâo por vírus portadores de neuraminidase. A maioria dos inibidores conhecidos de neuraminidase são análogos de ácido neuramínico, como por exemplo ácido 2-deoxi-2,3-didehidro-N-acetilneuramínico (DANA) e seus derivados. Ver, por exemplo, Meindl e outros, Virology 1974 58 457-63. 0 mais activo destes é o ácido

2-deoxi-2,3-dehidro-N-trifluoroacetil-neuramínico (FANA), que inibe a reprodução multi-ciclo de vírus de influenza e parainfluenza in vitro. Ver Palese e outros, Virology 1974

490-498.

É conhecido na arte um número de derivados de ácido 2-deoxi-2,3-didehidro-N-acetilo-neuramínico. Ver, por exemplo, P. Meindl e outros, Virology, 58, 457-463 (1974) ; P. Meindl e H. Tuppy, Mh. Chem, 100 (4), 1295-1306 (1969); M. Flashner e outros, Carbohydrate Research, 103. 281-285 (1982); E. Zbiral e outros, Liebigs Ann Chem, 159-165 (1989); T. Ogawa e Y. Ito, Tetrahedron Letters, 28 (49), 6221-6224 (1987); T. Goto e outros, Tetrahedron letters, 27 (43), 5229-5232 (1986); H. Ogura e outros, Chem. Pharm. Buli, 36 (12), 4807-4813 (1988);

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German Offenlegungschrift P 1439249. Muitos destes compostos são activos in vitro contra a neuraminidase proveniente de V. cholerae ou vírus da doença de Newcastle, assim como do vírus da influenza. Foi relatado que, pelo menos nalguns casos de vírus de influenza ou parainfluenza, a neuraminidase é inibida in vitro por ácido 3-aza-2,3,4-trideoxi-4-oxo-D-arabinoctónico  -lactona e 0- <t-N-acetilo-D-neuraminosil)2--->3)-2-acetamido-2-deoxi-D-glucose. Ver Zakstel'skaya e outros, Vop. Virol. 1972 17 223-28.

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A neuraminidase proveniente de Arthrobacter sialophilus é inibida in vitro pelos glicóis do ácido 2,3-dehidro-4-epi-N-acetilo-neuramínico, ácido 2,3-dehidro-2-deoxi-N-acetilneuramínico e 5-acetamido-2,6-anidro-2,3,5-trideoxi-D-mano-non-2-en-4-ulosonato, e pelos seus ésteres de metilo. Ver Kumar e outros, Carbohydrate Res. 1981 94 123-130;

Carbohydrate Res. 1982 103 281-285. Os tio análogos do ácido 2-<-azido-6-tio-neuramínico e do ácido 2-deoxi-2,3-didehidro-6-tioneuramínico, Mack & Brossmer, Tetrahedron Letters 1987

191-194, e o ácido fluorinatado análogo N-acetilo-2,3— difluoro- 4,-D-neuramínico, Nakajima e outros, Agric. Biol. Chem. 1988 52 1209-1215, foram revelados como inibindo a neuraminidase, embora o tipo de neuraminidase não tivesse sido identificado. Schmid e outros, Tetrahedron Letters 1958

3643-3646, descreveram a síntese do ácido 2—deoxi-Nacetilo- d-D-neuramínico, mas não fizeram referência à sua actividade ou qualquer outra referência contra a

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-4/

neuraminidase.

Não se revelou que qualquer dos inibidores conhecidos da actividade da neuraminidase in vitro possua actividade anti-vírus in vivo e, com efeito, mostrou-se especificamente que alguns deles, como por exemplo, FANA, são inactivos in vivo. Deste modo, a ciência convencional temconsequentemente considerado que os compostos que exibem inibição in vitro de neuraminidase virai não efectuam um bloqueio in vivo de infecçâo de vírus.

Meindl e Tuppy, Hoppe-Seyler's z. Physiol Chem. 1969 350 1088, descreveram a hidrogenação da ligação dupla olefínica do ácido 2-deoxi-2,3-dehidro-N-acetilneuramínico para produzir o ^-anómero do ácido 2-deoxi-N-acetilneuramínico. Este ^-anómero não inibiu a neuraminidase de Vibrio cholerae.

Os mais potentes inibidores in vitro de neuraminidase virai têm, portanto, sido identificados como compostos que se baseiam na estrutura do ácido neuramínico e há quem pense tratar-se de análogos de estado-transição. Miller e outros, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1978 83 1479. Mas enquanto muitos dos análogos do ácido neuramínico acima referidos são inibidores competitivos de neuraminidase, até à data, nenhum foi referido como revelando actividade anti-viral in vivo.

Por exemplo, embora se tenha revelado que um sistema de anel

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de 6-elementos, insaturado, meio-planar, é importante para a actividade inibitória, ver Dernick e outros em ANTIVIRAL CHEMOTHERAPY (K. K. Gauri ed.) Academic Press, 1981, a páginas 327-336, revelou-se que alguns compostos caracterizados por esse sistema, nomeadamente FANA, não possuem actividade anti-viral in vivo. Ver Palese e Schulman em CHEMOPROPHYLAXIS AND VIRUS INFECTION OF THE UPPER

RESPIRATORY TRACT, Vol. 1 (J. S. Oxford ed.) CRC Press, 1977, a páginas 189-205.

Descobriram-se agora novos derivados 2-deoxi 2,3-didehidro 4-substituído de ácido cf-D-neuramínico que são activos in vivo.

Consequentemente, o invento proporciona, num primeiro aspecto, compostos de fórmula (I) ou fórmula (Ia)

(I) (la) em que na fórmula geral (I) , A é oxigénio, carbono ou enxofre e na fórmula geral (Ia), A é azoto ou carbono;

R¹ designa COOH, P(O)(OH)₂, N0₂, SOOH, SO₃H, tetrazol,

CH₂CHO, CHO ou CH(CHO)₂,

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R² designa H, OR⁶, F, Cl, Br, CN, NIIR⁶, SR⁶ ou CII₂X, em que X é NHR⁶, halogêneo ou OR⁶ e

R⁶ é hidrogénio; um grupo acilo tendo de 1 a 4 átomos de carbono; um grupo alquilo linear ou cíclico tendo de 1 a 6 átomos de carbono, ou um seu análogo de halogéneo-substituído; um grupo alilo ou um grupo arilo insubstituído ou um arilo substituído por um halogêneo, um grupo OH, um grupo N0₂, um grupo NH₂, ou um grupo COOH,

J *3 *3

R e R ' são iguais ou diferentes, e cada um designa hidrogénio, CN, NHR⁶, N₃, SR⁶, =N-OR⁶, OR⁶, guanidino, :i- R⁶ , NR⁶

OR⁶

N.

R^ç • JH-N-R⁶ ,

R⁶ R⁶

I

R⁴ designa NHR⁶, SR⁶, OR⁶, COOR⁶, N02, C(R⁶)3,

CH₂C00R⁶, CH₂NO₂ ou CH₂NHR⁶, e

R⁵ designa CH2YR⁶, CHYR⁶CH2YR⁶ OU CHYR⁶CHYR⁶CH₂YR⁶, em que Y é 0, S, NH ou H, e metades sucessivas de Y num grupo R⁶ são iguais ou diferentes, e seus sais ou derivados farmaceuticamente aceitáveis.

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-7Em ambas estas fórmulas R¹, R², R³, R³ ’, R⁴, R⁵ e R⁶ estão sujeitos à condição de que na fórmula geral (I), (i) quando R³ ou R³' são OR⁶ ou hidrogénio, e A é oxigénio ou enxofre, então o referido composto não pode ter (a) um R² que é hidrogénio e (b) um R⁴ que é NH-acilo, e (ii) R^ representa uma ligação covalente quando Y é hidrogénio, e que na fórmula geral (Ia), (i) quando R³ ou R³' é OR⁶ ou hidrogénio, e A é azoto, então o referido composto não pode ter (a) um R² que é hidrogénio, e (b) um R⁴ que é NH-acilo, e (ii) R⁶ representa uma ligação covalente quando Y é hidrogénio.

Numa forma de realização preferida, o composto tem a fórmula geral (II)

HO OH

COOH (II)

CH^CO.NH

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i.e. na fórmula geral (I) acima, R¹ é COOH, R² é hidrogénio, é acetamido, e é -CHOH.CHOH.CH₂OH, e R³ é hidrogénio ou

R³', em gue R³' designa -N3, -CN, -CH2NH2, ou -N.R8.R9; r8 e R⁹ são iguais ou deiferentes e, cada um, designa hidrogénio, um grupo alquilo linear ou cíclico de 1 a 6 átomos de carbono, um acilo ou um grupo acilo substituído de 1 a 6 átomos de carbono, -C.(NH).NH2, -CH₂. COOH, -CH₂»CH₂».OH_? ou -CH₂.CH.(R⁹)(R¹¹),

R⁹ e R¹¹ podem ser iguais ou diferentes e, cada um, designa oxigénio ou R N=, e

R¹² designa hidrogénio, -OH, -OCH₃, -NH₂, ou (CH₃)₂N-.

Descobriu-se uma sub-classe particular de compostos de formula (I) que são, inesperadamente mais activos que os seus análogos 4-hidroxi correspondentes.

Deste modo, num aspecto particularmente preferido, o invento proporciona compostos de fórmula (Ib)

_R3b em que R³*³ é (alk) xNR^kR⁷*³, CN ou N₃ em que alq é metileno substitído ou insubstituido,

X é 0 ou 1

R é hidrogénio, alquilo 0_1-6 (por exemplo metilo,

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-9etilo), arilo (por exemplo fenilo), aralquilo (por exemplo fen_cl_₄alquilo tal como benzilo), amidina, NR^7bR^8b, ou um anel saturado ou insaturado contendo um ou mais heteroátomos (tal como azoto, oxigénio ou enxofre),

R^7b é hidrogénio, alquilo_cl_₆ (por exemplo metilo, etilo), ou alilo ou NR^6bR^7b forma um anel de 5 ou 6 elementos opcionalmente substituídos contendo, opcionalmente um ou mais heteroátomos adicionais (tais como, azoto, oxigénio ou enxofre), R^8b é hidrogénio ou alquilo C^g, e

R^4b é NHCOR^9b em que R^9b é hidrogénio, alquilo_cl_₄ ou arilo substituído ou insubstituído, e sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (Ib) e seus derivados farmaceuticamente aceitáveis.

Nos compostos de fórmula (Ib) os substituintes (por exemplo o grupo R no substituinte R ) podem eles próprios possuir substituintes associados convencionalmente na arte da química farmacêutica com esses substituintes.

De preferência R³ é NR⁶R⁷, em particular NH₂ ou guanidino.

De preferência R⁴ é NHCOR⁹ em que R⁹ é metilo substituído por halogéneo (por exemplo FCH₂, F₂CH-, FgC).

As referências feitas a definições preferidas de grupos em

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-10compostos de fórmula (I) aplicam-se mutatis mutandis aos grupos correspondentes nas fórmulas (ia), (lb) e (II).

O alquilOç^_₄ tal como aqui usado inclui tanto grupos alquilo de cadeia direita (por exemplo metilo, etilo) como de cadeia ramificada (por exemplo isopropilo, t-butilo).

Por derivados farmaceuticamente aceitáveis pretende-se significar qualquer éster ou sal farmaceuticamente aceitável desses ésteres dos compostos de fórmula (I) ou qualquer outro composto que, quando da administração ao receptor é capaz de proporcionar (directa ou indirectamente) um composto de fórmula (I) um metabolizador activo antivirus ou um seu resíduo.

Os peritos na arte verificarão que os compostos de fórmula (I) podem ser modificados para proporcionar derivados seus farmaceuticamente aceitáveis em qualquer dos grupos funcionais nos compostos. Derivados de particular interesse são compostos modificados na função carboxilo C-1, nas funções hidroxilo C-7 ou C-9, ou em amino grupos. Estes compostos de interesse incluem alquilo_cl_₄ (tais como metilo, etilo ou propilo, por exemplo isopropilo) ou arilo (por exemplo fenilo, benzoilo), ésteres dos compostos de fórmula (I) , ésteres de compostos de fórmula (I) C-7 ou C-9 tais como os seus ésteres acetilo, éteres C-7 ou C-9 tais como éteres de fenilo, éteres de benzilo, éteres p-tolilo, e

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derivados amino acilados, tais como as formilo, acetamido.

Os peritos na arte verificarão que os derivados farmaeeuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (I) podem ser feitos derivar em mais do que uma posição.

Sais farmaeeuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (I) incluem aqueles derivados de ácidos e bases orgânicos e inorgânicos farmaeeuticamente aceitáveis. Exemplos de ácidos apropriados incluem áciddos clorídrico, bromídrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico, láctico, salicílico, succínico, tolueno-p-sulfónico, tartárico, acético, cítrico, metanosulfónico, fórmico, benzóico, malónico, naftaleno-2-sulfónico e benzenosulfónico. Outros ácidos tais como oxálico, se bem que sem si próprios não sejam farmaeeuticamente aceitáveis, podem ser úteis na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção de compostos do presente invento e seus sais de adição de ácido farmaeeuticamente aceitáveis.

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Sais derivados de bases apropriadas incluem sais de metal alkali (por exemplo sódio), sais metálicos alcalino-terrosos (por exemplo magnésio), amónio e NR⁺ (em que R é alquilo_cl_₄) 4

As referências que a seguir se fazem a um composto do presente invento incluem os compostos de fórmula (I) e seus sais e derivados farmaeeuticamente aceitáveis.

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-12Compostos partioularmente preferidos do presente invento incluem;

ácido 5-Acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-ql icero-D-galacto-non-2-enopiranosónico (também conhecido como ácido 5-(acetilamino)-4-amino-2,6-anidro-3,4,5-trideoxi-D-gliceroD-qalacto-non-2-enóico) , os seus sais, includindo o sal de sódio e ácido 5-Acetamido-4-guanidino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-qlicero-D-qalacto-non-2-enopiranosónico (também conhecido como ácido 5-(Acetilamino)-2,6-anidro-4-guanidino-3,4,5-trideoxi-D-qlicero-D-qalacto-non-2-enóico) e os seus sais, includindo o sal de amónio.

Os compostos de fórmula (I) possuem actividade anti-vírus. Em particular, estes compostos são inibidores de neuraminidase virai de ortomixovirus e paramixovirus, por exemplo, a neuraminidase virai de influenza A e B, parainfluenza, parotidite, doença de Newcastle, peste das aves e vírus de Sendai.

Proporciona-se assim, num outro aspecto do presente invento um composto de fórmula (I) ou um seu sal ou derivado farmaceuticamente aceitáveis para uso como agente terapêutico activo, em particular como um agente anti-vírus, por exemplo no tratamento de infecções de ortomixovirus e paramixovirus.

Num outro aspecto alternativo proporciona-se um método alternativo para o tratamento de uma infecção virai, por exemplo infecções de ortomixovirus e paramixovirus num mamífero, inclusive no homem, que compreende a fase de se ’¹³ /. / (J/·

D-473 administrar ao referido mamífero uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou um seu sal ou derivado farmaceuticamente aceitáveis.

Também se proporciona num outro aspecto ou num aspecto alternativo o uso de um composto do presente invento para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma infecção virai.

Os peritos na arte verificarão que a referência aqui feita a tratamento estende-se tanto à profilaxia como ao tratamento de infecções ou sintomas estabelecidos.

Notar-se-á ainda que a quantidade de um composto do presente invento necessária para uso no tratamento variará não só com o composto particular escolhido, mas também com a via de administração, a natureza do estado a ser tratado e com a idade e condição do paciente e, em última análise, dependerá da prescrição do médico ou do veterinário. Em geral, contudo, uma dose apropriada situar-se-á na gama de desde cerca de 0,01 a 750 mg/kg de peso de corpo por dia, de preferência, na gama de 0,1 a 100 mg/kg/dia e mais preferivelmente, na gama de 0,5 a 25 mg/kg/dia.

Em particular, verificou-se que as doses eficazes dos compostos ensaiados estão relacionadas com a sua potência in vitro. Deste modo verificou-se que o DANA (que tem uma redução de placa IC₅₀ de 5/ig/ml) é eficaz em doses que se situam entre 1 e lOmg/kg por tratamento. O éster de metilo

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correspondente de DANA (IC_5O 50-100ug/ml) é eficaz em doses proporcionalmente mais elevadas.

tratamento é, de preferência, iniciado antes ou durante a infeeção e continuado até que o vírus já não se encontre presente na zona respiratória. No entanto os compostos também são eficazes quando ministrados post-infecção, por exemplo, após o aparecimento de sintomas estabelecidos.

tratamento apropriado é ministrado 1 a 4 vezes por dia e continuado durante 3 a 7, por exemplo 5 dias após a infeeção, dependendo do composto particular que se utiliza.

A dose desejada pode ser apresentada numa dose única ou em doses divididas administradas a intervalos apropriados, por exemplo, duas, três, quatro ou mais sub-doses por dia.

O composto é convenientemente administrado numa unidade de dosaqem contendo, por exemplo, 10 a 1500 mq, convenientemente 20 a 1000 mq, e mais convenientemente 50 a 700mg de ingrediente activo por forma de unidade de dosagem.

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Se bem que seja possível que, para uso em terapia, um composto do presente invento possa ser administrado como o produto químico em bruto, é preferível apresentar o ingrediente activo como uma formulação farmacêutica.

Por esta razão, o invento proporciona uma formulação farmacêutica que compreende um composto da fórmula (I) ou fórmula (Ia), mas não sujeito a essa condição, ou um seu sal

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ou derivado farmaceuticamente aceitáveis em conjunto com um veículo farmaceuticamente aceitável.

Os veículos devem ser 'aceitáveis' no sentido de serem compatíveis com os outros ingreredientes da formulação e não prejudiciais aos seus aceitantes.

As formulações farmacêuticas podem ser na forma de formulações convencionais para o modo de administração pretendido. Para administração intranasal de acordo com o método do presente invento os inibidores de neuraminidase podem ser administrados por qualquer dos métodos e formulações empregues na arte para administração intranasal.

Assim, em geral, os compostos podem ser administrados na forma de uma solução ou de uma suspensão ou como um pó seco.

As soluções e as suspensões serão geralmente aquosas, por exemplo, preparadas a partir apenas de água (por exemplo água estéril ou livre de pirogénio) ou água e um co-solvente fisiológicamente aceitável (por exemplo etanol, propileno glicol, e polietileno glicol, tais como PEG 400).

Tais soluções ou suspensões podem adicionalmente conter outros excipientes, por exemplo preservantes (tais como cloreto de benzalcónio), agentes de solubilização/agentes tensioactivos, tais como polisorbatos (por exemplo Tween 80,

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Span 80, cloreto de benzalcónio), agentes de tamponização, agentes de ajustamento de isotonicídade (por exemplo cloreto de sódio), aumentadores de absorpção e aumentadores de viscosidade. As suspensões podem conter adicionalmente agentes de suspensão (por exemplo celulose microcistalina, sódio de celulose de carboximetil).

As soluções ou suspensões são aplicadas directamente a uma cavidade nasal por meios convencionais, por exemplo, contagotas, pipeta ou spray. As formulações podem ser fornecidade em forma simples ou em dose múltipla. No último caso é desejável proporcionar um meio de medição de dose. No caso de um conta-gotas ou de uma pipeta isto pode ser conseguido pelo facto de o apciente administrar um volume apropriado previamente determinado da solução ou da suspensão. No caso de um spray” isto pode ser conseguido, por exemplo, por meio de uma bomba de medição atomizadora de spray.

A administração intranasal pode também ser conseguida por meio de uma formulação aerosol em que o composto é fornecido numa embalagem pressurizada com um propulsor apropriado, tal como um clorofluoreto de carbono (CFC), como por exemplo diclorodifluorometano, triclorofluorometano ou diclorotetrafluorometano, dióxido de carbono ou qualquer outro gás apropriado. O aerosol pode, de modo conveniente, conter também um agente tensio-activo, tal como lecitina.

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Esta dose de medicamento pode ser controlada por meio de uma válvula de medição.

Em alternativa os compostos podem ser proporcionados na forma de um pó seco, por exemplo, uma mistura de pó do composto numa base de pó apropriada, tal como lactose, amido, derivados de amido tal como celulose hidroxipropilmetil e polivinilpirrolidina (PVP). Convenientemente o veículo de pó formará um gel na cavidade nasal. A composição de pó pode ser apresentada numa forma de dose unitária, por exemplo em cápsulas ou cartuchos, por exemplo, de embalagens ou ampolas de gelatina, a partir das quais se pode administrar o pó através de um inalador.

Nas formulações intranasais, o composto terá geralmente uma pequena dimensão de partícula, por exemplo, na ordem de 5 microns ou menos. Uma tal dimensão de partícula pode ser obtida por meios conhecidos na arte, por exemplo, por micronização.

Quando se desejar as formulações podem ser adaptadas para dar uma libertação sustentada do ingrediente activo. Os compostos do presente invento podem também ser usados em combinação com outros agentes terapêuticos, por exemplo, outros agentes anti-infecciosos. Em particular, os compostos do invento podem ser empregues com outros agentes anti-vírus. Deste modo o invento proporciona, num outro aspecto, uma

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-18- / combinação que compreende composto de fórmula (I) ou um seu sal ou derivado farmaceuticamente aceitáveis juntamente com outro agente terapeuticamente activo, em particular um composto anti-virus.

As combinações acima referidas podem ser convenientemente apresentadas para uso na forma de uma formulação farmacêutica e, assim, essas formulações que compreendem uma combinação tal como acima se definiu em conjunto com veículos seus farmaceuticamente aceitáveis, integram um outro aspecto do presente invento.

Agentes terapêuticos apropriados para uso nessas combinações incluem outros agentes anti-infecciosos, em particular agentes antibacterianos e agentes anti-vírus, tais como os que são utilizados no tratamento de infecções respiratórias. Por exemplo, outros compostos eficazes contra vírus de influenza, tais como amantadina, rimantadina e ribavirina, podem ser incluídos nessas combinações.

Os componentes individuais dessas combinações podem ser administrados tanto sequencial como simultaneamente em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas.

Quando os compostos do presente invento são usados com um segundo agente terapêutico activo contra os mesmos vírus, a dose de cada composto tanto pode ser a mesma como diferente

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-19daquela que se emprega quando cada um dos compostos é utilizado isoladamente. As doses apropriadas serão facilmente determinadas pelos peritos na arte.

composto de fórmula (I) e os seus sais e derivados farmaeeuticamente aceitáveis podem ser preparados por qualquer método conhecido no ramo para a preparação de compostos de estrutura análoga.

Num desses processos (A) um composto de fórmula (III)

R_Z (III) em que R² é como se definiu na fórmula (I) , e L é um grupo residual (por exemplo um resíduo de ácido sulfónico, como por exemplo tosilo, mesilo ou trifluoromesilo) ou um seu derivado protegido, é feito reagir com o nucleófilo apropriado, por exemplo azida, cianida, um carbanion apropriado ou tioacetato.

Os compostos de fórmula (III) podem ser obtidos a partir dos compostos correspondentes de fórmula (IV)

OH (IV)

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através da inversão do grupo 4-OH por métodos conhecidos na arte, por exemplo, através de reacção com um ácido Lewis (como por exemplo, eterato BF₃) seguida de hidrólise. Os compostos de fórmula (IV) ou são conhecidos no ramo ou podem ser obtidos por métodos análogos aos utilizados para a preparação de compostos conhecidos.

Num segundo método (B) os compostos de fórmula (I) podem ser preparados a partir de outros compostos de fórmula (I) por interconversão. Deste modo, os compostos de fórmula (I) em gue R³ é NH₂ ou CH₂NH₂ podem ser preparados por redução respectivamente dos análogos ciano ou azida correspondentes.

Os Compostos em que R³ é alquilo NH ou guanidino podem ser preparados fazendo-se derivar o composto correspondente em que R³ é NH₂.

Os Compostos de fórmula I em que R¹ é COOH podem ser preparados por hidrólise do éster correspondente sob condições básicas ou acídicas, por exemplo a pH 11-12 (utilizando uma base, como por exemplo hidróxido de sódio ou de amónio) ou a pH 2-3 (utilizando um ácido, como por exemplo ácido sulfúrico).

Tal como será apreciado pelos peritos na arte, pode ser necessário ou desejável em qualquer estádio dos processos acima descritos proteger um ou mais grupos sensíveis na molécula para evitar reacções colaterais indesejáveis; o

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-21Λ grupo de protecção pode ser removido em qualquer estádio subsequente na sequência de reacção.

Os grupos proteotores utilizados na preparação de compostos de fórmula (I) podem ser usados de modo convencional. Veja-se por exemplo Protective Groups in Organic Chemistry Ed. J. F. W. McOmie (Plenum Press 1973) ou Protective Groups in Organic Synthesis por Theodora W Greene (John Wiley and Sons 1981).

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Grupos protectores amino convencionais podem incluir, por exemplo, grupos aralquilo, tal como benzilo, difenilmetilo ou grupos trifenilmetilo; e grupos acilo tal como N-benziloxi-carbonilo ou t-butoxicarbonilo. Deste modo, os compostos de fórmula geral (I) em que um ou ambos os grupos R² e R³ representam hidrogénio podem ser preparados por meio de desprotecção de um composto protegido correspondente.

Os grupos hidroxi podem ser protegidos, por exemplo, por grupos aralquilo, tais como benzilo, difenilmetilo ou grupos trifenilmetilo, grupos acilo, tais como acetilo; grupos protectores de silicone, tais como grupos trimetilsililo; ou como derivados de tetrahidropirano.

A remoção de quaisquer grupos protectores presentes pode ser conseguida por procedimentos convencionais. Deste modo, um grupo aralquilo, tal como benzilo, pode ser dividido por hidrogenólise na presença de um catalisador (por exemplo

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-22/ paládio em carvão vegetal); um grupo acilo tal como N-benziloxicarbonilo, pode ser removido por hidrólise com, por exemplo, brometo de hidrogénio em ácido acético ou por redução, por exemplo por hidrogenação catalíca; grupos protectores de silicone podem ser removidos, por exemplo, por tratamento com ião de fluoreto; grupos tetrahidropirano podem ser divididos por hidrólise sob condições acídicas.

Quando se desejar isolar um composto do invento como um sal, por exemplo um sal de adição de ácido, isto pode ser conseguido tratando a base livre de fórmula geral (I) com um ácido apropriado, de preferência com uma quantidade equivalente ou com sulfato de creatinina num solvente apropriado (por exemplo, etanol aquoso).

presente invento é ainda descrito através dos seguintes exemplos, que têm apenas fins ilustrativos, e não devem ser interpretados como uma limitação do presente invento.

Os métodos gerais que se seguem são aplicáveis à síntese de compostos do presente invento.

Desacetilação

Tratamento do material acetilado com Amberlite IRA-400 (OH^-) com agitação, durante um período de tempo, geraimente 2-3 horas, à temperatura ambiente resulta em completa des-OD-473

-23-acetilação. A resina é retirada por filtração e o filtrado concentrado até à secagem para se conseguir o desejado material de des-0—acetilação.

Os peritos na arte reconhecerão que existem disponíveis outros processos padrão para a completa des—O-acetilação do mesmo material, tal como tratamento com metóxido de sódio em metanol.

Desesterificação material completamente des-O-acetilado é recolhido em hidróxido de sódio aquoso e agitado à temperatura ambiente durante um período de tempo, geralmente 2-3 horas. A mistura é, em seguida, ajustada para pH 7,0-7,5 com resina Dowex 50w x 8 (H⁺) . A filtração seguida por secagem com gelo do filtrado rende o desejado material desesterifiçado.

Os peritos no ramo serão rapidamente capazes de identificar várias opções alternativas para a desesterificação do mesmo material, tal como hidrólise de ácido, em alternativa hidrólise de base, por exemplo hidróxido de amónio ou hidróxido de potássio.

Os compostos intermediários referidos nos Exemplos 1 a 15 são identificados como se segue:

COMPOSTO 2

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-2,3,5-trideoxi-D-glicero-D-talo-non-2-enopiranosonato de metilo (4-epi-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

D-473

-24COMPOSTO 3

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-azido-2,3,5-trideoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-azido-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

COMPOSTO 5

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-amino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe).

J

COMPOSTO 8

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-N,N-dialilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-N,N-dialilamino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

COMPOSTO 10

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-N-alilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-N-alilamino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

COMPOSTO 12

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-talo-non-2-enopiranosonato de metilo (4-epi-4-aminoNeu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

COMPOSTO 13

7,8,9-tri-0-acetilo-2,3,5-trideoxi-4¹,5'-dihidro-2’-metiloxazolo [5,4-d] D-glicero-D-talo-non-2-enopiranosonato

D-473

de metilo (4-epi-4,5-oxazaloNeu7,8,9Ac₃2enlMe)

COMPOSTO 15

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-talo-non-2-enopiranosonato de metilo (4-epi-az idoNeuS,7,8,9Ac₄ 2enlMe)

COMPOSTO 16

5-acetamido-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-talo-non-2-enopiranosonato de metilo (4-epi-azidoNeu5Ac2enlMe)

COMPOSTO 18

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-N-metilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-N-metilamino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

COMPOSTO 19

5-acetamido-4-N-metilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-N-metilaminoNeu5Ac2enlMe)

COMPOSTO 21

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-N,N-dimetilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2enopiranosonato de metilo (4-N,N-dimetilamino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

D-473

COMPOSTO 22

5-acetamido-4-N,N-dimetilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-N,N-dimetilaminoNeu5Ac2enlMe)

COMPOSTO 24

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-N-metoxicarbonilmetilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-N-metoxicarbonilmetilaminoNeu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

J

COMPOSTO 25

5-acetamido-4-N-metoxicarbonilmetilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-N-metoxicarbonilmetilaminoNeu5Ac2enlMe)

COMPOSTO 27

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-N-2/-hidroxietilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-N-2/-hidroxietilaminoNeu5,7,8,9-Ac₄2enlMe)

COMPOSTO 28

5-acetamido-4-N-2/-hidroxietilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-N-2/-hidroxietilaminoNeu5,7,8,9Ac₄2enlMe)

D-473

-27- /

L

COMPOSTO 29

5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-N-2/-hidroxietilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-p-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-N-2/-hidroxietilaminoNeu5Ac2enlMe)

COMPOSTO 30 ácido 3-Deoxi-D-glicero-D-galacto-2-nonulopiranosónico (KDN)

COMPOSTO 31

3-Deoxi-D-glicero-D-galacto-2-nonulopiranosonato de metilo (KDNIMe)

COMPOSTO 32 (4,5,7,8,9-penta-0-acetilo-2,3-dideoxi-D-glicero-J?-D-galacto-2-nonulopiranosilo clorid)onato de metilo (KDN4,5,7,8,9Ac₅2^CllMe)

COMPOSTO 33

4,5,7,8,9-penta-0-acetilo-2,3-dideoxi-D-glicero-p-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (KDN4,5,7,8,9Ac₅2enlMe)

COMPOSTO 34

2,3-dideoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (KDN2enlMe)

COMPOSTO 36

4,5-diamino-2,3,4,5-tetradeoxi-p-glicero-D-galacto-non-2D-473

-28- /

enopiranosonato de hidrazínio (Hidrazinio 4,5-diaminoNeu2en)

COMPOSTO 37 ácido 4,5-diamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non2-enopiranosónico (4,5-diaminoNeu2en)

Exemplo 1

Preparação de 5-Acetamido-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxi-D-qlicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de sódio (4-Azido-Neu5Ac2en) (4) esquema da reacção total é a seguinte:

de Etilo/H₂0

2) HOAc/Acetato

1) Tf₂0/piridina/ ch₂ci₂

HN ‘-r Ac Nj

2) OH

AcQ^x

Ac

2) NaNj/π-Bu/jN.IISO^/

DMF

(4) (3)

Preparação de (2)

A uma solução agitada de 5-acetamido-4,7,8,9-tetra-0acetilo-2,3,5-trideoxi-D-qlicero-D-qalacto-non-2-enopiranosonato de metilo (1) (1500 mg, 3,17 moles) numa mistura de

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-29benzeno (50 ml) e metanol (300 mg) adicionou-se, gota a gota, BF₃Et₂O (12 ml) durante mais de trinta minutos sob uma atmosfera de azoto à temperatura ambiente. Toda a mistura foi, em seguida, deixada em agitação à temperatura ambiente durante 16 horas. A solução foi diluída com acetato de etilo (250 ml) , lavada sucessivamente com uma solução saturada de NaHCO₃ (30 ml x 3) e água (20 ml x 3), depois evaporada para um pequeno volume (cerca de 10 ml) , à qual se adicionou água (0,5 ml) e ácido acético (0,5 ml). Toda a mistura foi, em seguida agitada à temperatura ambiente durante dois dias antes de ser diluída com acetato de etilo (200 ml) . A solução de acetato de etilo foi lavada com uma solução de NaHCO₃ a 5% (30 ml x 2) e água (20 ml x 3) e, depois, evaporada até à secura. 0 resíduo foi cromatografado (sílica gel, acetato de etilo como solvente de eluição) para render um composto puro (2) (550 mg, 40%).

¹H-nmr (CDCl₃) $ (ppm); 1.95, 2.06, 2.08, 2.10, 2.35 (s, 15H, Acetilo CH₃ X 5), 3.80 (S, 3H, COOCH₃) , 4.1-4.4 (m, 4H, H₄, H5, Hg/ Hg) , 4.82 (dd, ÍH, Jg θ 1.8Hz, Jg g, 12.3Hz, Hg) ,

5.27 (m, ÍH, H₈), 5.45 (dd, ÍH, J₇ , θ 3.5Hz, Η_γ), 6.15 (d, ÍH, J₃,₄ 5.4Hz, H₃), 6.47 (d, ÍH, J_NH,₅ 8.8Hz, -CONH).

Preparação de (3)

A uma solução agitada de composto (2) (800 mg, 1.67 moles) em diclorometano anidro (10 ml) e piridina seca (316 mg, 4 moles) a -30^a até -40^aC, adicionou-se, gota a gota uma

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solução de anidrido sulfónico de trifluorometano (TfgO) (556 mg, 2 moles) em diclorometano (2 ml) durante 15 minutos. A mistura de reacção foi, em seguida, agitada a -30^B durante 5 horas, e concentrada até à secura em vácuo. 0 residuo foi, em seguida, dissolvido em DMF seco (5 ml) contendo uma mistura de azida de sódio (650 mg, 10 moles) e sulfato de hidrogénio tetrabutilamónio (170 mg, 0,5 moles). A mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas e, em seguida, evaporada até à secura sob forte vácuo. 0 resíduo foi dividido entre acetato de etilo (200 ml) e água (50 ml). A camada orgânica foi separada e lavada com água (50 ml x 2), seca sobre Na₂S0₄, evaporada para deixar um resíduo (780 mg), a qual foi sujeita a uma dupla cromatografia (sílica gel, sendo o primeiro sistema de solvente acetato de etilo/acetona: 8/1; o segundo sistema de solvente foi diclorometano/água: 10/1) para render um óleo incolor (3) (185 mg, 24%).

MS. (FAB) 457 (M⁺ + 1), 414 (M⁺ -N3. [ cf ]²°D + 19.1^fl (Cl,MeOH) .ir. (CHC1₃) cm^-1 2100 (N-N₃) . 1748 (carbonilo). •’ή-

nmr (CDC13)	6 (ppm). 2.04, 2.05, 2.06, 2.12, (s,	12H,
Acetilo CH3	X 4). 3.79 (S, 3H, C00CH3), 3.91 (ddd, ÍH,	J5,NH
8.4Hz, Jg , 4	8.8 Hz, J5,6 9.9Hz, H5) , 4.17 (dd, ÍH,	J9'8
6 · 8Hz, J^ ι g	, 12.5Hz, Hg'), 4.42 (dd, ÍH, J4,3 2.9Hz,	J4,5
8.8HZ, H4),	4.48 (dd, ÍH, J6,7 2.3Hz, J6,5 9.9Hz, Ηθ	4.46
(dd, ÍH, J9	g 2 · 7 Hz f Jg 9 i 12 · 5Hz f Hg) , 5 · 31 ζΐπ , 1H ,	J8,7

5* 2Hzj Jθ g 2.7Hz, J_g g t f 6·8Hz? Hg) , 5·45 (dd/ 1H, Jy θ

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-31“

2.3Hz, J₇,₈ 5.2Hz, Η_γ), 5.96 (d, ÍH, J_3/4 2.9H, H₃), 6.13 (d, ÍH, ^JNH,5 8.4Hz, -CONH) 13_c__nmr (CDCl₃) b (ppm)

20.7 (CH3-CO-O-), 23.2 (CH₃CO-NH), 48.3 (C₅), 52.6 (COOCH₃),

57.8 (C₄), 62.1 (C₉), 67.7, 70.9 (C₇, Cg), 75.9 (Cg), 107.6 (C₃), 145.1 (C₂), 161.5 (C^ , 170.2, 170.3, 170.7, (acetilo C = 0 x 4) .

Preparação de (4)

O composto (3) (50 mg, 0,11 mole) foi dissolvido em metanol anidro (5 ml) contendo metóxido de sódio (8 mg, 0,15 mole). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e concentrada até à secura em vácuo. O resíduo foi tomado em água (3 ml), agitado à temperatura ambiente durante 1,5 horas, o pH ajustado para 6-7 com resina Dowex 50 x 8 (H⁺) e,

I em seguida liofilizado para render o composto de título (4) (35 mg, 94%).

i.r. (KBr)cm¹ 3400 (br.-OH), 2100 (-N₃), 1714 (carbonilo). •^H-nmr (D₂0) (ppm). 2.06 (5, 3H, acetilo CH₃), 3.64 (dd, ÍH, J₉i_f8 6.3Hz, J₉._f9 11.8Hz, Hg,), 3.65 (dd, ÍH, J₇, _g · 9Hz, J ₇ θ 6.8Hz, H₇) , 3.88 (dd, ÍH, ^9 8 2 6HZ, Jg g ,

11.8Hz, Hg) , 3.94 (m, ÍH, Jg ₇ 6.8Hz, Jg ₉ 2.6Hz, Jg θ»

6.3Hz, Hg), 4.21 (dd, ÍH, J₅,₄ 10.4Hz, J₅,₆ 8.9Hz, Hg), 4.31 (dd, ÍH, J₄,₃ 2.2HZ, J₄,₅ 2.2HZ, J₄,₅ 10.4Hz, H₄), 4.34 (dd, ÍH, J₆,₅ 8.9Hz, J₆,₇ 3.9Hz, H_g) 5.82 (d, ÍH, J_{3 4} 2.2Hz, Hg).

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Exemplo 2 Preparação de 5-Acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-qalacto-non-2-enopiranosonato de sódio (4-amino-Neu5Ac2en) (6) esquema da reacção total é o seguinte:

(5)

J

1) NaOMe/MeOH

2) OH

Preparação de (5)

Uma solução de 5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxi-D-qlicero-D-qalacto-non-2-enopiranosonato de metilo (3) preparada como no Exemplo 1, (95 mg, 0.208 mole) em piridina (6 ml) foi feita borbulhar com H₂S durante 16 horas à temperatura ambiente. A solução foi, em seguida, lavada com jacto de azoto durante 15 minutos, e evaporada para remover a piridina sob forte vácuo. 0 resíduo foi cromatografado (sílica gel, acetato de etilo/isopropanol/água - 5/2/1) para render um composto incolor (5) (50 mg, 56%).

MS. (FAB) 431 (M⁺ + 1), 414 (M⁺ -NH2), [<]²°D +34.5= (Cl, MeOH). i.r. (CHC1₃) cm-1 3400 (br.NH₂), 1740 (carbonilo). ^-H-nmr (CDC1₃ + CD₃OD) & (ppm). 1.96, 2.06, 2.07, 2.10 (s,

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12H acetilo CH₃ X 4), 3.81 (S, 3H, -COOCH₃), 3.92 (brt, IH, ^5,4 & ^5,6 ίθΗζ, Hg), 4.17 (dd, IH, Jgi^g 7.2HZ, Jgi^g 12.3Hz, H₉,), 4.22 (br. dd, 2H, J₄,₅ & J₆₅ 10Hz, J₄,₃ & Jg,₇ 2.1Hz, H₄ & H₆), 4.71 (dd, IH, Jg,₈ 2.6Hz, J_9/9, 12.3Hz, Hg), 5.31 (m, IH, Jg η 4.9Hz, Jg g 2.6Hz, Jg g, 7.2Hz, Hg), 5.45 (d, IH, J₇^₆ 2.1HZ, J₇,g 4.9Hz, Η_γ), 5.97 (d, IH, J₃,₄ 2.1Hz, h₃).

¹³C-nmr (CDC1₃ + CD₃OD) ó (ppm)

20.2, 20.3 (CH3-CO-O-), 22.3 (CH3-CO-NH), 48.2 (Cg), 50.4 (C₄), 52.0 (COOCH3), 52.1 (Cg), 67.8, 71.2 (C_?, C_g),

76.5 (C₆), 112.5 (C₃), 143.5 (C₂), 162.0 (C-^ , 170.2, 170.4, 170.8, 172.2 (acetilo -C = 0 x 4).

Preparação de (6)

O composto (5) (50 mg, 0.116 mole) foi dissolvido em metanol anidro (5 ml) contendo metóxido de sódio (12.4 mg, 0.23 mole). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante

1.5 horas e evaporada até à secura em vácuo a 30²C. O resíduo foi agitado em água (3 ml) à temperatura ambiente até que o TLC (sílica gel, acetato de etilo/metanol/0,1 N HCl = 5/4/1) indicasse que a hidrólise estava completa. A solução (pH cerca de 10,5) foi, em seguida, gradualmente ajustada para um pH de cerca 7,5 através de resina Dowex 50 x 8 (H⁺) . Logo que o pH da solução atingiu 7,5, a suspensão foi rapidamente filtrada num filtro de compressão. O filtrado foi liofilizado para proporcionar o composto (6) em título (30 mg, 83%).

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1H-nmr (D20)	õ (ppm). 2.07 (S, 3H, acetilo CH3), 3.59 - 3.70
m, 2H,	h7	&	Hg,), 3.89 (dd, IH Jg,g 2.6HZ, -Jgfgi 11	. 8Hz,
Hg), 3	.95	(m,	IH, H8), 3.99 (brd, IH, J4,5 10.6Hz, ,	4.21
(brt,	IH,	J5	,4 & J5,6 1θ·θΗζ, H5) , 4.29 (brd, IH,	J6,5

10.6Hz, Hg), 5.66 (d, IH J3,₄ 1.9Hz, Hg).

Exemplo 3 Preparação de 5-Acetamido-4-guanidino-2,3,4,5tetradeoxi-D-qlicero-D-qalacto-non-2-enopiranosorlato de amónio (7) esquema da reacção total é o seguinte:

A uma solução de S-metilisourea (546 mg, 3 moles) em água (15 ml) a uma temperatura de banho de gelo, adicionou-se

5,7,8,9-tri-0-acetilo-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-qlicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (5) preparado como no Exemplo 2 (40 mg, 0.093 mole). A mistura de reacção foi agitada a 5^aC durante sete dias e vazada para uma coluna de resina Dowex 50W X 8 (H⁺) (35 ml) . A coluna foi depois lavada com água fria (700 ml) e eluida com uma solução de NH₄0H 1,5 M. The eluate (120 ml) foi concentrado até à

D-473

-35secura sob elevado vácuo. 0 resíduo resultante foi cromatografado (sílica gel; sistema de solvente 1: acetato de etilo/isopropanol/água, 1/5/1; sistema de solvente 2; 75% isopropanol) para proporcionar o composto de título (7) (8 mg, 24.5%).

composto (7) deu uma reacção de Sakaguchi forte e positiva indicativa da presença de um grupo guanidina. Os dados NMR para o composto (7) são dados abaixo.

¹H-nmr (D₂0 + CD₃OD) Ô (ppm).

2.06	(s, 2H, acetilo CHg),	3.60 (br. d.	, ÍH, J7/g	9.4Hz,	h7) ,
3.63	(dd, ÍH, Jg.^g 6.2Hz,	Jgι g 11„8Hz	t Hg|), 3.	76 (br.	d.,
ÍH, «3	r4,5 9.4Hz, H4), 3.87	(dd, 1H, J9/8	2.6HZ, Jg	t g t f H1	. 8Hz,
Hg) ,	3.93 (ddd, ÍH, J8,7 9	• 4HZ, Jg g 2·	6Hz, J89,	6.2Hz,	h8),
4.01	(dd, ÍH, J5,4 9.4Hz,	J5 θ 10.6Hz,	H5), 4.20	(br. d.	, , ÍH
J6,5	10.6Hz, H6), 5.63 (d,	ÍH, J3,4 2.1	Hz, H3).

Exemplo 4 5-Acetamido-4-N,N-dialilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de sódio.

(9).

esquema da reacção total é o seguinte;

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-36- /

CH, (9)

A uma solução de brometo de alilo (60mg, 0,5 mole) e 5acetamido-7,8,9-tri-0-acetilo-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-qlicero-D-galacto-non-2-enoplranosonato de metilo (5) (90mg, 0.209 mole) em acetonitrilo (5ml), adicionou-se carbonato de prata (116 mg, 0.418 mole). A mistura foi agitada e protegida da luz ã temperatura ambiente durante 16 horas. A suspensão resultante foi filtrada e o filtrado foi evaporado até à secura. O resíduo foi sujeito a cromatografia de coluna cintilação de sílica gel, acetato de etilo contendo 10% de metanol) para render 5-acetamido-7,8,9-tri-O-acetilo-4-N,N-dialilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-qalacto-non-2-enopiranosonato de metilo (8) (85 mg, 80%).

¹H-nmr (CDC1₃) ô (ppm) 1.94, 2.05, 2.06, 2.11 (s, 12H, acotllo CH^ X 4) ? 2»9*7 (dd, 2H, 10 to & ^10^3 10’to 14·3Ηζ, ^J10a,ll ^{& J}10'a,ll’ ^7,6Hz' ^H10a ^{& H}10'a)' ³·²⁴ (^ddr ^2H/ ^J10b,10a ^{& J}10’b,10'a ^14>3Hz' ^Jiob,ll ^{& J}10'b,ll' ⁴-^9Hzr ^Hiob & H10'b)' ^3,58 <^dd' ^1H' ^J4,3 ²‘^4IÍZ' ^J4,5 9·3Ηζ, H4), 3.79 (s,

D-473

-373H, COOCH₃), 4.12-4.26 (m, 3H, H_g, Hg,, Hg), 4.70 (dd, ÍH,

Jg g 2 · 6Hz f Jg gi 12 · 3Hz j Hg) ? 5 · 09 (ââ, 2H, ^12θΐδ 11 & ^J12'cis,ll' 10.6Hz, J12gem & ^J12'gem'^1,5Hz' ^H12cis ^{& H}12'cis)' ^{5,14 2H}' ^J12trans,ll ^{& J}12'trans,11’ ^17,7Hz' ^J12gem ^{& J}12'gem ^1,5Hz' Hi2trans & ^H12'trans)' 5.27-5.32 (m, 2H, Ηθ & -CONH-), 5.55 (dd, ÍH, J7,₆ 2.1Hz, J₇,₈ 4.7Hz, H₇), 5.72 (m, 2H, Η_1χ & H-q,), 6.07 (d, ÍH, J₃,₄ 2.4Hz, H₃) .

O composto (8) (80 mg, 0.156 mole) foi dissolvido em metanol anidro (10 ml) contendo metóxido de sódio (16,2 mg, 0,30 mole).

A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e depois evaporada até à secura. 0 resíduo foi tomado em água (5 ml) e deixado à temperatura ambiente durante 2 horas. A solução resultante foi neutralizada com Dowex 50 x 8 (H⁺) e seca em gelo para render o composto de título (9) (49mg,

80%) .

^H-nmr (D₂O) ô (ppm) 1.94 (s, 3H, acetilo CH₃) , 3.24-3.44 (m, 4H, Η_1θ X 2 & H_lo, X 2), 3.48-4.33 (m, 7H, H₄, Hg, Hg, H₇, Hg, Hg & Hg,), 5.24~5.29 (m, 4H, H₁₂ X 2 & H₁₂1 X 2), 5.69 (d, ÍH, J_3f4 ~2Hz, H₃), 5.73-5.76 (m, 2H , Η_χχ & Η_χχ®)

Exemplo 5 5-Acetamido-4-N-alilamino-2,3,4,5-tetra-deox i-D-olicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato (11)

D-473

-38O esquema da reacção total é o seguinte:

OAc

AcO

l\c H₂N (5)

1) NaOMe/MeOH 2) OH

,ch₃ (11)

A uma solução de brometo de alilo (48 mg, 0.40 mole) e composto (5) (155 mg, 0.36 mole) em acetonitrilo (5 ml) adicionou-se carbonato de prata (107 mg, 0.38 mole). A mistura foi agitada e ao mesmo tempo protegida da luz, à temperatura ambiente durante 16 horas. A suspensão resultante foi retirada por filtração e o filtrado foi evaporado até à secura. 0 resíduo foi cromatografado numa coluna de sílica gel (acetato de etilo/isopropanol/água = 5:2:1). Fracções com um valor Rf de 0,5 foram combinadas e evaporadas até à secura para renderem o composto (10) (53 mg, 32%). O material de partida (5) com um valor de Rf de 0,3 (61 mg, 39%) e o derivado de N, N-dialilo (8) com um valor Rf de 0.9 (20 mg, 11%) foram respectivamente recuperados.

D-473

l-H-nmr (CDC1₃) de composto (10) é ilustrado como se segue;

ô(ppm) 1.96, 2.05, 2.06, 2.11(s, 12H, acetilo CH₃ x 4), 3.25 (dd, ÍH, ^loa,lOb*·^·^*' Jl0a,ll 5.8Hz, HjQ_a) , 3.37 (dd, ÍH, ^J10b, 10a“¹⁴ ’ ^J10b,ll ⁵·⁹Ηζ, Η-^θ^) , 3.43 (dd, ΙΗ, J₄,3

3.1Hz, J_4/5 7.5Hz, H₄), 3.79 (s, 3H, COOCH₃), 4.09 (ddd, ÍH, J_{5 4} 7.5Hz, J_{5 f NHg} · 1Hz, J_5/6 8.1Hz, Hg) , 4.21 (dd, ΙΗ, Ιθ,,θ 7.1Hz, J_g, ,₉-12.2Hz, Hg,), 4.30 (dd, ÍH, J_g,₅ 8.1Hz, Jg,₇

4.1Hz, Hg), 4.63 (dd, ÍH, J_g,g 3.2Hz, Jg_/9,-12.2Hz, H_g) , 5.09

J (dd, ÍH, Ji2cis,ll ¹⁰‘^2Hz' ^J12cis,12trans^-1·^3Hz' ^H12cis)'

5.18 (dd, ÍH, ^Ji2trans,ll ^17,1Hz' ^J12trans,12cis^-1·^3Hz' ^IStrans^* 5.36 (ddd, ÍH, Jg γ 4.2HZ, Jg g 3.2Hz, Jg θ ι

7.1Hz, H₈), 5.57 (dd, ÍH, J₇,₆ 4.1Hz, J₇,₈ 4.2Hz, H_?) , 5.65 (d, 1H, J_NH,₅ 9.1Hz, -CONH-), 5.83 (dddd, ÍH, Jn^trans

17.1Hz, ^Jn,i2cis ^10,2Hz' ^Jll,10a ^5,8Hz' ^Jll,10b ^5,9Hz' ^hh) ' 6.09 (d, ÍH, J₃,₄ 3.1Hz, H₃).

O composto (10) (50 mg, 0.11 mole) foi agitado em metanol anidro (5 ml) contendo metóxido de sódio (12 mg, 0.225 mole) à temperatura ambiente durante 2 horas e, em seguida, evaporado até à secura. O resíduo foi redissolvido em água (5 ml) e deixado repousar à temperatura ambiente durante 2 horas antes de ser neutralizado com resina Dowex 50 x 8 (H⁺). A solução aquosa foi seca sobre gelo para dar o composto (11) (31 mg, 78%).

D-473

-40¹H-nmr (D₂O) (ppm) 2.02 (s, 3H, CH₃CO) , 3.42 (dd, ÍH, ^J10a,10b“¹³·^4Hz' ^J10a,ll ⁶·^6Ηζ/ ^H10a), 3.52 (dd, ÍH, ^lOb, lOa”-^ · 4Hz, 6.3Hz, J^ob) ' 3.51-4.27 (m, 7H, H₄,

H₅, Hg, H_?, Ηθ, H_g & Hgi), 5.30 (dd, ÍH, ^Ji2cis,12trans

1.5Hz, Jl2cis,ll 10.3Hz, H^₂cis)' 5·34 (dd, ÍH, ^J12trans,12cis ^1,5Hz' ^Ji2trans,ll ¹⁷·^7Ηζ» H₁₂trans)· 5.72 (d, ÍH_r |~Γ3 4 2.4Hz, Ηβ) , 5.89 (d.ddd, 10ci θ·6Ηζ, 10b

6.3Hz, Jn_fi2cis ^10,3Hz' ^Jll,12trans ¹⁷·^7Ηζ/ ^Hn) ·

Exemplo 6

5-Acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-cflicero-D-talo-non- 2 -enop iranosonato (14).

esquema da reacção total é o seguinte;

4) H^/piridina

1) (12)

2)

Amberlite IRA-400

->

OH

(14)

D-473

-4 Ι-

Α uma solução agitada de composto (2) (500 mg, 1.04 moles) em diclorometano anidro (8 ml) contendo piridina (8 ml) (205 mg, 2,6 mole) a -30^a, adicionou-se, gota a gota, uma solução de anidrido trifluorometanosulfónico (Tf20) (367 mg, 1,3 moles) em diclorometano (2ml) durante um período de 20 minutos. A mistura de reacção foi depois agitada a -30^a durante 5 horas e finalmente evaporada até à secura sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi agitado em DMF seco contendo N,N-diisopropiletilamina (194 mg, 1,5 moles) à temperatura ambiente, durante 16 horas. A misturade reacção foi concentrada sob elevado vácuo para remover o DMF. 0 resíduo foi depois agitado muma mistura de tolueno de duas fases (5ml) e água (5 ml) contendo sulfato de hidrogénio tetra-n-butilamónio (950 mg, 2,8 moles) e azida de sódio (137 mg, 2,1 moles). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas e depois evaporada até à secura. 0 resíduo foi dividido entre acetato de etilo (50 ml) e água (15ml), sendo a camada orgânica sucessivamente lavada com água (5ml x 2), e depois evaporada até à secura. 0 resíduo foi tomado em piridina (5 ml), feito borbulhar com H₂S e, depois, evaporado até à secura. 0 resíduo foi sujeito a cromatografia de coluna de cintilação (sílica gel, sendo o primeiro sistema de solvente acetato de etilo, o segundo sistema de solvente acetato de etilo/iso-propanol/H₂0 : 5/2/1). O eluato de acetato de etilo continnha o composto (13) (260 mg, 53%). As fracções com uma reacção de nihidrina positiva, recolhidas do segundo sistema de solvente, foram combinadas e evapooradas

D-473

até à secura para dar o composto 12 (32mg, 6.5%).

MS (FAB), 431 (M⁺ + 1), 414 (M⁺ - NH2).

¹H-nmr (CDClg + CD₃OD) 6 (ppm) 1.96, 2.06, 2.08, 2.09 (s, 12H, Acetilo CH₃ X 4), 3.52 (dd, ÍH, J₄,₃ 5.5Hz, J₄,₅ 4.5Hz, H₄), 3.80 (s, 3H, COOCH₃), 4.16 (dd, ÍH, Jg,₅ 10.2Hz, Jg,₇ 2.3HZ, H₆), 4.17 (dd, ÍH, J_g ,,_g-12.4Hz, J_gig 7.3Hz, H_g,) , 4.23 (dd, ÍH, J₅,₆ 10.2Hz, J₅,₄ 4.5Hz, H₅) , 4.73 (dd, ÍH,

J_g,_g,-12.4HZ, J_g,g 2.7Hz, Hg), 5.34 (ddd, ÍH, Jg,₇ 4.7HZ, Jg,₉ 2.7Hz, Jθ'g, 7.3Hz, Hg), 5.45 (dd, ÍH, J₇,₆ 2.3Hz, J₇,₈ 4.7Hz, H₇), 6.12 (d, ÍH, J₃,₄ 5.5Hz, H₃).

¹³C-nmr (CDC1₃ + CD₃OD) fo (ppm) 20.7 (CH₃C(O)O-),

23.1(CH₃C(O)N-) , 43.8(C₅), 46.2(C₄), 52.4 (COOCH-j) , 62.3(C_g),

68.3, 71.8(C_?, Cg), 73.0(Cg), 111.5(C₃), 143.8(C₂),

162.4((^), 170.3 & 170.8(CH₃CO X 4).

O composto (12) foi agitado em metanol anidro (5ml) contendo resina Amberlite IRA-400 (OH-) (lOOmg) à temperatura ambiente durante 3 horas. A seguir foi filtrado e o filtrado evaporado até à secura. O resíduo foi dissolvido em água (5 ml) e o pH ajustado para pH13 com NaOH 0,1. A solução aquosa foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e, em seguida, neutralizada com resina Dowex 50 x 8 (H⁺). Após filtração, o filtrado foi liofilizado para dar o composto (14) (16 mg, 70%) , que se revelou positivo na reacção de nihidrina.

D-473

-43/ ^-H-nmr (D₂0) Ô (ppm) 2.10 (s, 3H, CH₃CO) , 3.67-3.76 (m, 2H, H₄ & Hg,), 3.92 (dd, ÍH, Jg,g 2.8HZ, J_g,_g,-11.9Hz, H_g), 3.90-4.02 (m, 2H, H₇ & H₈), 4.37-4.44 (m, 2H, H₅ & Hg), 5.81 (d, ÍH, J₃,₄ 5.14HZ, H₃).

Exemplo 7

AcO.

OAC lin

I COOMe

5-acetamido-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-talo-non-2-enopiranosonato de sódio (17).

OAc N₃ AcO 1 )Tf20/piridina/ AcHN.

DCM_AcO

⁰ COOMe //

2) N.N-diisopropiletilamina/DMF

3) NaNj/n-Bu^N.HSOyTolueno^O

COONa

NaOH

HoO

NaOMe/meOH

A uma solução agitada de composto (2) (500 mg, 1,04 moles) em diclorometano anidro (8 ml) contendo piridina (205 mg, 2,6 moles) a -30^aC, adicionou-se gota a gota uma solução de anidrido trifluorometano sulfónico (Tf₂O) (367 mg, 1.3 moles) em diclorometano (2 ml) por um período superior a 20 minutos. A mistura de reacção foi depois agitada a 3^eC durante 5 horas e finalmente evaporada até à secura sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi agitado em DMF seco contendo N,Ndiisopropiletilamina (194 mg, 1,5 moles) à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura de reacção foi

D-473

-44concentrada sob forte vácuo para remover o DMF. 0 resíduo foi depois agitado numa mistura de duas fases de tolueno (5 ml) e água (5 ml) contendo sulfato de hidrogénio tetra-n-butilamónio (950 mg, 2,8 moles) e azida de sódio (137 mg, 2,1 moles). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas e, em seguida, foi diluída com HCl 0,2M(5 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 48 horas. A esta mistura de reacção adicionou-se acetato de etilo (50 ml) e HCl 2 Μ (1 ml). A camada orgânica foi separada e lavada com água (5 ml X 3) e, em seguida, foi evaporada até à secura. O resíduo foi sujeito a cromatografia de coluna de cintilação (sílica gel, acetato de etilo/hexano=2/l). As fracções com um valor Rf de 0,32 (acetato de etilo/hexano=2/l como solvente de desenvolvimento) foram combinadas e evaporadas até à secura para dar o composto (15) (40 mg, 8,4%). A coluna foi depois eluída com acetato de etilo/metanol=10/l para se recuperar o material de partida (2) (280 mg, 56%) . O composto (15) foi isolado como uma substância branca espumosa.

MS (FAB) 457 (M⁺+l), 414 (M⁺-N₃),

i.r. (CHC1₃) cm^-1 2108 (-N₃), 1748 (carbonilo) ¹H-nmr (CDC1₃) , (ppm)1.97, 2.04, 2.06, 2.07 (s,12H, acetilo CH₃ X 4), 3.82 (S, 3H, COOCH₃) , 4.12~4.20 (m, 3H,Cg, C₄ & C₉), 4.51 (ddd, ÍH, J₅,₄ 4.4Hz, J₅,g 10.7Hz, J₅,NH, 10.1Hz, H₅) , 4.69 (dd, ÍH, J₉,₈ 2.6Hz, J_9f9i 12.4Hz, H_g) , 5.31 (m, ÍH, J_gf7 4.9HZ, J₈,_g 2.6Hz, J_8f9> 7.0HZ, Ηθ) , 5.45 (dd, ÍH, J₇,₆ 2.1Hz, J_{? θ} 4.9Hz, H₇) 5.68 (d, ÍH, J_NH,₅10.1Hz,CONH),

D-473

-4S- /

6.15 (d, ÍH, J_3f4 5.7Hz, H₃) ¹³C-nmr (CDC1₃) ô (ppm)

20.7, 20.8, (CH₃C0-0 x 3), 23.1 (O CH₃ CO-NH), 44.8 (Cg),

52.6 (COOCH₃), 54.8 (C₄), 62.1 (Cg), 67.6, 71.3 (C₇, Cg),

73.5 (Cg), 104.5 (C₃), 146.3 (C₂), 161.5 (C^J , 169.9, 170.2,

170.5 (acetilo, -C=O X 4)

O composto (15) (40 mg, 0,088 mole) foi dissolvido em metanol anidro (4 ml) contendo metóxido de sódio (6,4 mg, 0,12 mole). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e concentrada até à secura em vácuo para dar o composto (16), que foi depois dissolvido em água (3 ml) , agitado à temperatura ambiente durante 2 horas, o pH ajustado para 6-7 cora resina Dowex 50 X 8 (H⁺) e depois liofilizado para dar o composto de título (17) como um pó amarelado (25 mg, 83%) .

i.r. (KBr) cm¹ 3400 (br, -OH), 2108 (-N3) , 1714 (carbonilo) ¹H-nmr (D20) $ (ppm)

1.97 (s, 3H, acetilo), 3.5~4.4 (m, 7H, H₄, Hg, Ηθ,Η₇, Ηθ, Hg, & Hg,), 6.07 (d, J_3>4 5.6Hz, H₃)

Exemplo 8 5-acetamido-4-N-metilamino-2,3,4.5tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2enopiranosonato de sódio (20).

D-473

OAc ^Ac0 - -k COOMe

AcO

NH_Z

COONa

AcO

OAc

I

M_eI/Ag₂C0₃/CH₃CN ^AcHJÍ -► ^HCb NHCH₃

NaOH

H₂0 ⁰ COOMe

Γ

NaOMe/MeOH

COOMe

A uma solução de iodeto de metilo (15 mg, 0,10 mole) e composto (5) (48 mg, 0,11 mole) em acetonitrilo (6 ml) adicionou-se carbonato de prata (42 mg, 0,15 mole). A mistura foi agitada enquanto, ao mesmo tempo, era protegida da luz, à temperatura ambiente durante 16 horas. A suspensão resultante foi retirada por filtração e o filtrado foi evaporado até à secura. 0 resíduo foi sujeito a cromatografia (sílica gel, acetato de etilo/isopropanol/ /água=5/2/l) . As fracções com um valor de Rf de 0,36 foram combinadas e concentradas em vácuo até à secura para dar o composto (18) (25 mg, 51%).

MS (FAB) 445 (M⁺+l), 414 (M⁺ - NHCHg) ¹H - nmr (CDC₃) $ (ppm)

1.95, 2.05, 2.06, 2.12 (S, 12H, acetilo CH₃ X 4), 2.45 (s,

D-473

4.8Hz), 6.05 (d, ÍH, J₃,₄ 2.3Hz, H₃)

O composto (18) (25 mg, 0,056 mole) foi agitado em metanol anidro (5 mL) contendo metóxido de sódio (5,4 mg, 0,1 mole) à temperatura ambiente durante 2 horas, em seguida, evaporado até à secura para dar o composto (19) , que foi redissolvido em água (5 ml) e deixado repousar à temperatura ambiente durante 2 horas antes de ser neutralizado com resina Dowex 50 x 8 (H⁺). 0 filtrado foi liofilizado para dar o composto (20) (15 mg, 82%).

^•H-nmr (D₂0) fi (ppm)

1.94 (S, 3H, CH₃CO), 2.43 (s, 3H, N-CH₃), 3.5~4.3 (m, 7H, H₄,

H₅, Ηθ, H_?, Hg,

Exemplo 9

Hg & Hg,), 5.65 (d, ÍH, J₃,₄ 2Hz, H₃)

5-acetamido-4-N,N-dimetilamino-2,3,4,5tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de sódio (23).

D-473

NaOH

H₂0

A uma solução de iodeto de metilo (65 mg, 0,46 mole) e composto (5) (100 mg, 0,23 mole) em acetonitrilo (15 ml), adicionou-se carbonato de prata (127 mg, 0,46 mole). A mistura foi agitada e protegida da luz à temperatura ambiente durante 16 horas. A suspensão resultante foi filtrada e o filtrado foi evaporado até à secura. 0 resíduo foi sujeito duas vezes a cromatografia de coluna de cintilação (sílica gel, acetato de etilo/isopropanol/água=5/2/l) para dar o composto (21) (30 mg, 28%) como uma espuma incolor.

MS (FAB) 459 (M⁺+l) 414 (M⁺-N(CH₃)₂)

-^H-nmr (CDC₃) $ (ppm)

1.98, 2.05, 2.06, 2.12 (s, 12H, acetilo, CH₃ X 4), 2.33 (br S, 6H, N(CH₃)₂), 3.42 (dd, IH, J₄,₃ 2.8 Hz, J₄,₅ 8.6Hz, H₄), 3.79 (s, 3H, COOCH₃), 4.17 (dd, IH, Jg,₈ 7.4Hz, Jg,,g 12.3Hz, Hg,), 4.18 (ddd, IH. J_5?4 8.5Hz, J_5/NH 8.9Hz, J₅,₆ 9.0Hz,

H₅), 4.31 (dd, IH, J₆,₅ 9.0Hz, J₆,₇ 2.9Hz, Ηθ), 4.68 (dd, IH, Jg g 3.0Hz, Jg g, 12.3HZ, Hg), 5.31 (m, IH, Jg ₇ 4·4Hz, Jg g 3.0Hz, Jg_fg, 7.4Hz, Η_θ), 5.51 (dd, IH, J_?,₆ 2.9Hz, J_?,g

D-473

4.4Hz, H₇), 5.79 (d, ÍH, J_NH>5 8.9Hz, CONH), 6.09 (d, ÍH,

J_{3 4} 2·8Hz, Ηβ) composto (21) (30 mg, 0_z066 mole) foi agitado em metanol anidro (4 ml) contendo resina Amberlite seca IRA 400 (OH^-) (90 mg) à temperatura ambiente durante 3 horas e, em seguida a resina foi retirada por filtração. 0 filtrado e as lavagens foram combinados e evaporados até à secura para dar o composto (22) (20 mg), que foi agitado em água (5 ml) a pH 12 à temperatura ambiente durante 2 horas e, em seguida, o pH foi ajustado para 7,5 com Dowex 50 X 8 (H⁺) antes de se filtrar. O filtrado foi liofilizado para dar o composto (23) (15 mg, 66%) na forma de uma pó branco.

¹H-nmr (D₂0) ô(ppm)

1.97 (s, 3H, acetilo), 2.33 (s, 6H, N(CH₃)₂), 3.50~4.26 (m, 7H, H₄, H₅, H₆, H₇, Hg, Hg & Hg,), 5.71 (d, J₃,₄ 1.8Hz, H₃)

Exemplo 10

5-acetamido-4-N-oxicarbonilometil-amino-

2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato dissódio (26).

H0

JH

AcHN\

H0

COONa

-<

NHCH₂C00Na

NaOH

H₂0

NaOMe/MeOH

V

D-473

A uma solução ^-bromoacetato de metilo (36 mg, 0,23 mole) e composto (5) (100 mg, 0,23 mole) em acetonitrilo (12 ml) adicionou-se carbonato de prata (64 mg, 0,23 mole). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas enquanto se protegia da luz e, depois, foi filtrada. 0 filtrado foi evaporado até à secura. 0 resíduo foi cromatografado em coluna de sílica-gel (acetato de etilo/isopropanol/água=5/2/l). As fraeções com um valor Rf de 0,60 foram recolhidas e evaporadas até à secura para dar o composto (24) (80 mg, 68,5%).

^H-nmr (CDC₃) $ (ppm)

1.97, 2.044, 2.047, 2.11 (s, 12H, acetilo CHg x 4), 3.49 (AB, 2H, J_AB 17.6Hz, Η_1θ X 2), 3.50 (dd, IH, J₄,₃ 2.9Hz, J₄,₅

8.4Hz, H₄), 3.71 (s, 3H,C₁₁OOMe), 3.79 (s, ΟΗ,α,ΟΟΜβ), 4.09 (ddd, IH, J₅,₄ 8.4 HZ, J₅,_NH 8.8Hz, J₅,₆ 8.1Hz,Hg), 4.17 (dd, IH, J₉i_;8 7.4Hz, Jg._/9 12.3Hz, Hg,), 4.32 (dd, IH, Jg,₅ 8.1Hz, J₆,₇ 4.1Hz, Hg), 4.63 (dd, IH, Jg,g 3.1Hz, Jg,gi 12.3Hz, Hg), 5.37 (m, IH, Jg ₇ 4.1Hz, Jg g 3.1Hz, Jg g,

7.4Hz, Hg), 5.56 (t, IH, J₇,₆ 4.1Hz, J₇,_Q 4.1Hz, H_?), 6.03 (d, IH, Jjjh,5 θ·θΗζ, CONH), 6.04 (d, IH, Jg,₄ 2.9Hz, Hg)

O composto (24) (80 mg, 0,159 mole) foi agitado em metanol anidro (20 ml) contendo metóxido de sódio (18 mg, 0,32 mole) à temperatura ambiente durante 2 horas, em seguida evaporado até à secura para dar o composto (25), que foi redissolvido em água (15 ml) . A solução foi deixada repousar à

D-473 temperatura ambiente durante 2 horas antes de o pH ser ajustado para 7 através da resina Dowex 50 x 8 (H⁺). 0 filtrado foi seco sobre gelo para dar o composto (26) na forma de um pó branco (59 mg, 94,6%).

-51- / ff ¹H-nmr (D₂0) 3 (PP^m)

2.04 (s, 3H, acetilo), 3.58 (AB, 2H, J_AB 17.6 Hz, H_lo X 2), 3.50~4.40 (Μ, 7H, H₄, H₅, Hg, H7, Hg, H_g & H_g,), 5.68 (d, IH, J₃,₄ 2.1Hz, H₃)

Exemplo 11

5-acetamido-4-N-2’-hidroxietilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2enopiranosonato de sódio (29)

OAc

AcO 1

COOMe

OAc 'AcáríXy ^AcQ^ik^⁰'Í-'™^Me

ScO ' B_rCH₂CH₂0H/Sg₂C0_?/CH₃CN ^Α nhch₂ch₂oh

10 11 27

OH

HO _x 1 AcHN

HO

COONa

NaOH

HO h₂o nhch₂ch₂oh

Amberlite IRA - 400(0H) MeOH

OH , I .-°-COOMe

HO '

NHCH₂CH₂0H

A uma solução de bromoetanol (158 mg, 1,26 moles) e composto (5) (84 mg, 0,195 mole) em acetonitrilo (10 ml) adicionou-se carbonato de prata (100 mg, 0,3 6 mole) . A mistura foi

D-473

-53- /

composto (27) (40 mg, 0,084 mole) foi agitado em metanol anidro (10 ml) contendo Amberlite seca IRA-400 (OH”) (120 mg) à temperatura ambiente durante 4 horas e., em seguida, filtrado. 0 filtrado e as lavagens foram combinados e evaporados até à secura para dar o composto (28) que foi redissolvido em água (10 ml) e o pH ajustado para 13 através da adição de NaOH. A solução aquosa foi deixada à temperatura ambiente durante 3 horas antes de se ajustar o pH para 6-7 com resina Dowex 50 x 8 (H⁺) . Após filtração, a solução foi liófilizada para dar o composto (29) na forma de um pó branco (20 mg 66%).

¹H-nmr (D₂O) Ô (ppm)

1.99 (s, 3H, acetilo), 2.91 (AB, 2H, H_lo X 2), 3.53 ~ 4.25 (m, 9H, H₄, H₅, H₆, H₇, Hg, H₉, Hg,, Η_η X 2), 5.65 (d, Jg, ₄ 2.24 HZ, H₃)

D-473

-52protegida da luz e agitada à temperatura ambiente durante 7 dias. A seguir foi retirada por filtração, o filtrado foi evaporado até à secura. 0 resíduo foi cromatografado numa coluna de sílica gel (acetato de etilo/isopropanol/água=5/2/l). As fracções com um valor de Rf de 0,4 forám combinadas e evaporadas até à secura para dar o composto (27) (40 ml, 40%).

MS (FAB) 475 (M⁺+l), 414 (M⁺-NHCH₂CH₂OH) ^í-nmr (CDC₃) $ (ppm)

1.96, 2.05, 2.10 (s, 12H, acetilo CH₃ X 4), 2.29 (br. S, 2H, NH &0H), 2.76 (ABm, 2H, Η_1θ X 2), 3.47 (dd, ÍH, J₄,₃ 2.9Hz, J₄,₅ 7.5HZ, H₄), 3.62 (t, 2H, J_11/lo 4.9Hz, H_1;L X 2), 3.79 (s, 3H, COOCH₃), 4.15 (ddd, ÍH, J₅,₄ 7.5Hz, J₅,g 8.4Hz, J_5fNH 8.3HZ, H₅), 4.19 (dd, ÍH, Jg._f8 7.5Hz, Jg,,_g 12.3Hz Hg,),

4.29 (dd, ÍH, Jg,₅ 8.4Hz, Jg,₇ 3.8Hz, Hg), 4.65 (dd, ÍH, Jg,₈ 2.9Hz, J_9;9i 12.3Hz, H_g), 5.36 (m, ÍH, Jg,₇ 4Hz, Jg,g 2.9Hz, J₈,₉, 7.5HZ, H_g), 5.55 (dd, ÍH, J₇,g 3.8Hz, J_?^₈ 4Hz, Η_γ), 6.08 (d, ÍH, J₃,₄ 2.9Hz, H₃), 6.09 (d, ÍH, J_NHf5 8.3Hz, CONH) ¹³c-nmr (CDC13) $ (ppm)

20.6, 20.8, (CH₃-CO-O- X 3), 23.10 (CH₃-Co-NH), 46.5 (C_g), 47.2 (C_1Q), 52.3 (CH₃COOCH₃), 55.6 (C₄) , 61.1 (C_1;L) , 62.1 (Cg), 68.1, 71.1 (C₇,C₈), 76.7 (Cg), 111.6 (C₃), 143.7 (C₂), 162.1 (C-p , 170.1, 170.3, 170.6, 171.0 (acetilo carbonilo x

4)

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-54Exemplo 12

2,-3-dideoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato (35)

AcO^

:OOMe

AgN0₃/CH₃CN

NaOMe/MeOH

35

O composto (30) (332 mg, 1,24 moles) foi agitado em metanol anidro (40 ml) contendo resina Dowex 50 x 8 (H⁺) (50 mg) à temperatura ambiente durante 16 horas antes de se filtrar. O filtrado foi evaporado até à secura para dar o composto (31) (320 mg, 1,13 moles, 91,5%), gue foi agitado em cloreto de acetilo (5 ml) à temperatura ambiente durante 3 dias e,

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depois evaporado até à secura para dar o composto (32) (539 mg, 1,057 moles, 93_z6%). O resíduo foi dissolvido em acetonitrilo (20 ml) contendo nitrato de prata (500 mg, 2,94 moles) e carbonato potássio (90 mg, 0,65 mole) protegido da luz e agitado à temperatura ambiente durante 16 horas e, depois, filtrado. 0 filtrado foi evaporado até atingir um pequeno volume e dividido entre acetato de etilo (75 ml) e água (15 ml). A camada orgânica foi lavada com água (10 ml x 3) e evaporado até à secura. 0 resíduo foi cromatografado em coluna de sílica gel (acetato de etilo/hexano=2/l) para dar o composto puro (33) (200 mg, 0,423 mole, 40%).

¹H-nmr (CDC₃) $ (ppm)

2.062, 2.070, 2.073, 2.094, 2.096 (s, 15H, acetilo CH₃ X 5), 3.80 (S, 3H, COOCH₃), 4.19 (dd, ÍH, Jg,g 5.9Hz, Jg , , _g 12.3Hz, H_gI), 4.33 (dd, ÍH, Jg,₅ 9.4Hz, Jg,₇ 3.0Hz, Ηθ), 4.57 (dd,

ÍH, J₉,₈ 1.9Hz, J_9f9, 12.3Hz, Hg), 5.20 (dd, ÍH, Jg,₄ 7.0Hz, Jg θ 9.4Hz, Hg), 5.38 (m, ÍH, Jg ₇ 5.1Hz, J₈ g 1.9Hz, Jg g, 5.9HZ Ηθ), 5.49 (dd, ÍH, J_?,θ 3.0Hz, J_?,g 5.1Hz, Η_γ), 5.57 (dd, 1H, J₄,₃ 3.1HZ, J₄,₅ 7.0HZ, H₄), 5.97 (d, ÍH, J₃,₄ 3.1Hz, H₃)

O composto (33) (100 mg, 0,211 mole) foi agitado em metanol anidro (10 ml) contendo metóxido de sódio (24 mg, 0,423 mole) à temperatura ambiente durante 3 horas e, em seguida, evaporado até à secura para dar o composto (34) (50 mg, 90%), que foi redissolvido em água (5 ml) e deixado à temperatura ambiente durante 3 horas antes de se ajustar o pH para 7 com

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resina Dowex 50 x 8 (H⁺). A solução foi seca sobre gelo para dar composto (35) (47 mg, 91%).

¹H-nmr (D₂0) $ (ppm)

3.69 (dd, IH, Jg,₈ 5.6HZ, J_g!g 12.0Hz, H_g,) , 3.76 (dd,lH,

J₅₄ 7.8Hz, J₅₆ 10.5Hz H₅), 3.87 ~ 3.99 (m, 3H, H₇, Hg, H_g) , 4.13 (d, IH, J₆,₅ 10.5Hz, H_g), 4.40 (dd, IH, J₄,₃ 2.3Hz, J₄,₅ 7.8Hz, H₄), 5.67 (d, IH, J₃,₄ 2.3Hz H₃)

Exemplo 13

0H

4,5-Diamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato (38)

0H

HO, n

AcHN ? H0

flH_z ,cooNH₂NH₇.H₇0_r

Aquecimento ™ I

H₂N

0.

í

H0

-C00-

NaOH

0H !

NH₂

1) Amberlite IRA - 400(HC00“)

2) HCOOH 1,5 M

F

3) Amberlite IR-4B(0H~) ,0,

H0_x ^COOH

NH₂ ^Z 37

Uma solução de composto (6) (125 mg, 0,40 mole) em hidrato de hidrazina (5 ml) sob argon foi aquecida a 85^aC durante 3 dias, e a mistura resultante foi evaporada sob vácuo até à secura»· O resíduo foi dissolvido em água (15 ml) e feito passar através de uma coluna de Amberlite IRA-400 (HCOO”), em seguida eluída com HCOOH 1,5 Μ. O eluato (200 ml) foi evaporado até à secura. O resíduo foi cromatografado em

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H₇) , 3.80 3

10.2Hz, H₆),

Exemplo 14

J

-57- /?

/ sílica gel, desactivado com 10% de água (solvente de desenvolvimento:isopropanol/água = 4/1). As fracções com um valor de Rf de 0,1 foram combinadas e evaporadas até à secura e, em seguida, secas sobre gelo. O resíduo, o composto (36), foi dissolvido em água (10 ml), feito passar através de uma pequena coluna de Amberlite IR-4B (OH“)(10 ml) . O efluente foi evaporado até à secura para dar o composto (37), do qual o MS (FAB) era 249 (M⁺+l). O composto (37) foi dissolvido em água e o pH ajustado para 7,5 com NaOH 0,1 M, depois seco sobre gelo para dar o composto (38) (20 mg, 20%) na forma de um pó branco.

^H-nmr (D₂0) fi (ppm)

3.01 (dd, ÍH, J_5f49.7Hz, J₅,₆ 10.2Hz, H₅), 3,58 (m, 2H, Hg, &

.89 (m, 3H, H₄, Hg, & Hg), 4.06 (d, ÍH, J₆,₅

5.54 (d, ÍH, J₃,₄ 2.4Hz, H₃)

5-acetamido-2,3,5-trideoxi-9-(p-toluenosulfonil)-D-glicero-D-galacto-non-2enopiranosonato de metilo (39).

Uma solução constituída por 5-acetamido-2,3,5-trideoxi-Dglicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (1000 mg., 3,16 moles) em piridina seca (85 ml) foi arrefecida num banho de gelo. Adicionou-se cloreto de p-toluenosulfonilo (660 mg., 3,46 moles) e deixou-se a solução amarelo pálido a agitar durante a noite a 4^aC.

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Ζ)

Depois adicionou-se mais cloreto de p-toluenosulfonil (220 mg., 1,15 moles) e deixou-se a solução a agitar durante 4 horas à temperatura ambiente.

Aproveitou-se primeiro através da adição de água (1 ml) seguindo-se agitação rotativa para dar um óleo amarelo viscoso que foi cromatografado por cintilação (SiO₂, EtOAc/i-PrOH/H₂O,6/2/1,v/v/v) para dar como produto principal 1,19 g. (80% de rendimento) de composto (39).

i.r (KBr) : v_max (cm^-1) 2964 (OH), 1730 (CO₂CH₃), 1656 (NHAc),

1358, 1174 (S0₂), 810, 662, 550 (Ar)

MS (FAB); 460 (M+H⁺) ^ΧΗ nmr (300 MHz, CD3OD/TMS)? β (PP^m) = ²·⁰³ (s, ^3Hr NHAc), 2.45 (s, 3H, ArCH3), 3.49 (d, IH, Jg,₇1.70, Hg), 3.76 (s, 3H, CO₂CH₃), 3.91 (dd, IH, J₅,₆ 10.80, H₅), 3.98-4.13 (m, 3H, H_g, H₉ e Hg,), 4.28 (dd, IH, J₇,_g 9.55, Η_γ) , 4.39 (dd, IH,

J₄,₅8.64, H₄), 5.92 (d, IH, J₃,₄ 2.49, H₃) , 7.74 (d, 2H,

ArH) , 7.79 (d, 2H, ArlI)

Exemplo 15 5-acetamido-9-azido-2,3,5,9-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato (40)

Dissolveu-se 5-acetamido-2,3,5-trideoxi-9-(p-toluenesulfonil) -D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (39)

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(600 mg., 1,27 moles) e azida de lítio (186 mg., 3,80 moles) em DMF seco (2 0 ml) e a solução homogénea amarela foi aguecida até 80^BC. Após 2 horas, adicionou-se mais azida de lítio (186 mg., 3,80 moles) e a solução foi deixada a repousar a 80^SC durante a noite. O solvente foi removido por evaporação rotativa e o óleo castanho escuro remanescente foi dissolvido piridina (2 ml) e cromatografado por cintilação (SiO₂, 5/2/1 EtOAc/i-PrOH/H₂0). 0 produto principal foi o composto (40) (370 mg., 88% de rendimento) obtido na forma dee uma espuma branca.

i.r.(KBr):v_max (cm^-1) 3428 (s,OH), 2104 (s, N₃), 1730 (s, CO₂CH₃), 1656 (s, NHAc)

MS (FAB) : 331 (M+H⁺) ¹H nmr (300 MHz, D₂0) : <5 (ppm) = 1.94 (s, 3H, NHAc), 3.37 (dd, ÍH, Hg,),

3.48 - 3.57 (m, 2H, Jg^g, 5.77, Hg e Jg,gi 13.16, Hg), 3.66 (s, 3H, CO₂CH₃), 3.91 - 3.98 (m, 2H, Hg e Hg), 4.15 (d, ÍH, J₇,₈ 10.86, H₇), 4.38 (dd, ÍH, J₄,₅ 8.88, H₄), 5.91 (d, ÍH,

J₃,₄ 2.44, H₃)

Exemplo 16 5,9-diacetamido-2,3,5,9-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (41).

Adicionou-se ácido tiolacético (130 ml, 1,82 moles) a 5-acetamido-9-azido-2,3,5,9-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato (70 mg., 0,21 mole) para dar uma

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(dd,

J ^J8·⁹

4.22

5.61 solução amarelo pálida que foi deixada a agitar durante a noite à temperatura ambiente.

excesso de ácido tiolacético foi depois retirado por evaporação sob pressão reduzida e o sólido remanescente foi repetidamente tratado com água seguido de evaporação (3x3 ml). 0 sólido remanescente foi dissolvido em metanol (4 ml) filtrado e o filtrado aplicado a um prato de preparação tlc (SiO₂) , 20 cm x 20 cm x 2 mm, eluído com (EtOAc/i-PrOH/H₂O 5/2/1). A faixa com um valor Rf=0,47 foi aproveitada para dar 51 mg (70% de rendimento) do composto (41) na forma de um pó branco.

i.r. (KBr) : v_max (cm¹) 3400 (s, OH), 1728 (s,CO₂CH₃), 1656 (s, NHAc)

MS (FAB) : 347 (M+H⁺) ¹H nmr (300 MHz, D₂O) : fi (ppm) = 1.96 (s, 3H, NHAc), 2.00 (s, 3H, NHAc), 3.23 (dd, ÍH, Hg,), 3.48 (d, ÍH, Hg), 3.56

ÍH, J_9f9i 14.17, Hg), 3.75 (s, 3H, CO₂CH₃), 3,89 (m, ÍH, 2.90, Jg,₉. 7.40, Ηθ), 4.02 (dd, ÍH, Jg,g 9.10, Hg), (d, ÍH, J₇,₈ 10.85, H₇), 4.45 (dd, ÍH, J₄,₅ 8.94, H₄) , (d, ÍH, J₃,₄ 2.47, H₃);

Exemplo 17 ácido 5,9-diacetamido-2,3,5,9-tetradeoxi-D-qlicero-D-qalacto-non-2-enopyranosonic (42) .

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A preparação do composto (42) proveniente do composto (39) é resumida a seguir:

r

TsO.

CQOMe

HO OH LiN₃/DMF/80“C

CHjUOSH

OH ^ACHN - ^{1) 0H}' ^teHN' t

HO OH 42

2) H^{+ AcHN}<Z^/

OOMe

HO OH 41

Uma solução de 5,9-diacetamido-2,3,5,9-tetradeoxi-D-glicero-

-D-galacto-non-2-enopiranosonato (41) (46 mg., 0,13 mole) dissolvida em hidróxido de sódio 0.1M aq. (5 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 2.5 horas. o pH da solução foi então ajustado para 5 com Dowex 50W-X8 (H ) , a resma retirada por filtração e o filtrado liofilizado para dar 40 mg (91% de rendimento) de composto (42) na forma de um pó branco.

i.r. (KBr) : v_max (cm^-1) 3376 (s, OH), 1652 (s, NHAc)

MS (FAB) : 333 (M+H⁺) ^TH nmr (300 MHz, D₂O) : <5 (ppm) - 1.89 (s, 3H, NHAc), 1.93

(S, 3H, NHAc), 3.15 (dd, IH, Hg»), 3.40	(d, IH, Ηθ), 3.48
(dd, IH, J9f9i 14.18, H9), 3.82 (m, IH,	Jg,9 3.01, Jg,g,
7.43, Hg), 3.94 (dd, IH, J5,6 10.42, H5) ,	4.13 (d, IH, J7,g
10.91, H?), 4.36 (dd, IH, J4,5 8.80, H4) ,	5.81 (d, IH, J3f4

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2.41, H₃)

Exemplo 18

5-acetamido-9-cyano-2,3,5,9-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato (43)

Uma solução de 5-acetamido-2,3,5-trideoxi-9-(ptoluenosulfonilo)-_D-glicero-_D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (39) (80 mg., 0,17 mole), cianeto de tercbutilamónio (2 mg) e cianeto de sódio (12 mg., 0,25 mole) em DMSO seco (1,25 ml) foi agiatada à temperatura ambiente durante 5 dias.

O aproveitamento por preparação de cromatografia de camada delgada (SiO₂, 20 cm. x 20 cm. x 2 mm. eluido com EtOAc/ iPrOH/H₂O, 5/2/1) deu como componente principal 30 mg. (61% de rendimento) de composto (43) na forma de um pó colorido cremoso.

(R_f=0.74).

l.r.(KBR) : V_max (cm^-1) 3440 (S, OH), 2256 (W, CN), 1726 (s, CO₂CH₃), 1638 (s, NHAc) MS (FAB) : 315 (M+H⁺) •’-Η nmr (300mHz, D₂O) : (ppm) = 1.92 (s, 3H, NHAc), 2.75

(dd,	ÍH, Hg,), 2.93 (dd, ÍH, Jg,g,17.22, Hg), 3.55 (dd,	ÍH,
J6,7	1.17, Hg), 3.67 (S, 3H, CO2CH3) , 4.02 (dd, ÍH,	J5,6
9.05,	H5), 4.13-4.19 (m, ÍH, Jg,g 3.91, Jg,g,6.56, Hg),	4.16
(dd,	ÍH, J7,g 10.90, H7), 4.37 (dd, 1H,J4,5 8.95, H4) ,	5.90

(d, ÍH, J₃,₄ 2.42, H₃)

-63ácido 5-Acetamido-9-cyano-2,3,5,9-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-eno· piranosónico (44).

Exemplo 19

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A metodologia utilizada para preparar ácido 5-acetamido-9ciano-2,3,5,9-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2enopiranosónico (44) é resumida a seguir:

OH

OH

TsO.

AcHN

0^ JZOOMe

NC .COOMe

HO OH

NaCN/t-Bu^NCN ^AcHI

HO OH

DMSO/5 dias

1) aq NaOH

2) Resina H⁺

OH

NC\

Acl

HO OH

Dissolveu-se 5-acetamido-9-cyano-2,3,5,9-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (43) (80 mg., 0,25 mole) em hidróxido de sódio O,1M aq. (10 ml) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante horas.

O pH foi a seguir ajustado para 4 com Dowex 50W-X8(H⁺), a resina foi retirada por filtração e o filtrado liofilizado

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-64JÁ para dar 75 mg (98% de rendimento) de composto (44) na forma de um pó branco macio.

i.r. (KBr) : v_max (cm^-1) 3370 (s,OH), 2254 (w, CN), 1656 (s, NHAc)

MS (FAB) : 301 (M+H⁺) nmr (300MHz, D₂O) : Ó (ppm) = 1.98 (s, 3H, NHAc), 2.70 (dd, ÍH, Hg,),

2.88 (dd, ÍH, Jg,_g, 17.27, H_g), 3.48 (d, ÍH, Hg), 3.97 (dd, ÍH, J₅,g 9.84, H₅), 4.09-4.24 (m, 2H, H₇ e H₈,J₈,_g 3.90,Jg,_g, 6.53), 4.41 (dd, ÍH, J₄,₅ 8.87, H₄), 5.80 (d, ÍH, J_{3 4} 2.4 2, H₃)

Exemplo 20 Inibição de Neuraminidase de Virus de Influenza

Um bioensaio in vitro dos compostos acima descritos contra neuraminidase de virus de influenza N2 foi conduzido seguindo-se Warner e O'Brien, Biochemistry, 1979 18 2783-2787. Para comparação, com o mesmo ensaio o Ki para ácido 2-deoxi-N-aceti-((,-D-neuramínico foi determinado para ser 3 x 10^-4 M.

Os valores para Ki foram medidos por meio de uma técnica espectrofluorométrica que utiliza um substrato fluorogénico 4-metilumbeliferil ácido N-acetilneuramínico (MUN), tal como descrito por Meyers e outros, Anal. Biochem. 1980 101 166-174. Para ambas as enzimas, a mistura de ensaio continha o

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-65/

composto de ensaio em várias concentraçãos entre 0 e 2 mM, e aproximadamente 1 mU de enzima em tampão (32,5 mM MES, 4 mM CaCl₂, pH 6,5 para N2; acetato 32,5 mM, 4 mM de CaCl₂, pH 5,5 para neuraminidase V. cholerae).

A reacção foi iniciada pela adição de MUN para concentrações finais de 75 ou 40 pM. Após 5 minutos a 37^aC, adicionaram-se 2,4 ml de glicina-NaOH 0,1 M, pH 10,2 a 0,1 ml de mistura de reacção para terminar a reacção. A fluorescência foi lida com um estímulo de 365 nm, emissão de 450 nm, e brancos apropriados MUN (não contendo enzima) foram subtraídos das leituras. O Ki foi avaliado por marcas Dixon (1/fluorescência versus concentração de composto). Os resultados estão resumidos no Quadro 1 e, a menos que se indique de outro modo, refere-se à inibição de neuraminidase

N2.

I ω

<ο ι

νο

I >

I I ο Η Μ •rl

Μ

CM νο σι ιη οο £ - ι

Ο 10 Η φ ω W X (β Λ Ό σ> ·η - d Η ·Η §

Ρ d

φ

C <ν ιη a Ο Γ η ω iU

CO 00

I I ο ο

Η <—1

X X r» ιη

Η λ (neuraminidase Ν9)

1—473

ο

Μ

Ρ •Η >

d

Η cd ν

§

Q g

OÍ|

d	CM	CM
φ	1	1
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r4	0	0
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ω	0	V
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Φ	P	P	1—1
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D-473

Exemplo 21 Inibição da Reprodução de Vírus de Influenza Virus In Vitro

A inibição de influenza A/Singapore/1/57 (H2N2) e reprodução de Influenza B/Victoria/102/85 in vitro foi medida por redução da formação da placa virai em células caninas Madin Darby kidney (MDCK).

Células de monocamadas de confluente MDCK, cultivadas em seis placas de reserva de cultura de tecidos, foram inoculadas com 0,3 ml de vírus diluído para dar cerca de 50-100 placas/reserva. 0 vírus foi diluído em meio essencial mínimo isento de soro (MEM) contendo 2 pg/ml de clorometilo de N-tosil-l-fenilalanina de tripisina tratada com cetona (TPCK) (Worthington Enzimas) e composto de ensaio.

O Vírus foi adsorvido à temperatura ambiente durante uma hora e as células foram depois revestidas com um meio de cultura de célula definido, versão 1 (DCCM-l)/agar de revestimento contendo composto de ensaio, 4 ml/reserva. 0 DCCM-1 é um meio de cultura de célula completa isenta de soro (Biological Industries), ao qual se adicionou tripisina tratada TPCK e DEAE-dextran com uma concentração final de 2 Mg/ml e 0,001% respectivamente. Diluiu-se agar (5%) (Indubiose) 1:10 no revestimento antes de ser adicionado à placa.

Uma vez revestidas as placas foram incubadas a 37^aC, CO₂ a 5% durante 3 dias. As células foram depois fixadas com

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glutaraldeído a 5%, coloridas com carbol e as placas de vírus foram contadas. Os resultados são os seguintes:

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-730 5-acetamido-4-N-alil-N-hidroxi-2,3,4,5-tetradeoxi-D-qlicero-D-qalacto-non-2-enopiranosonato de sódio (45) pode ser facilmente preparado a partir do composto (11) descrito no Exemplo 5, utilizando processos de oxidação.

Exemplo 22 Actividade Anti-Vírus In Vivo

Os compostos dos Exemplos 2, 3 e 6 (4-amino, 4-guanidino e 4-epi-amino), assim como o composto DANA (ácido 2-deoxi-N-acetilo-d-D-neuramínico), que no Exemplo 20 se mostrou possuir actividade anti-neuraminidase in vitro. foram testados quanto à actividade anti-vírus num ensaioin vivo padrão. Quando administrados a ratinhos intranasalmente antes e depois de estimulados com o vírus de Influenza A, estes compostos reduziram a titulação de vírus no tecido dos pulmões 1 a 3 dias após a infecção.

Os ratinhos foram infectados intranasalmente com 50 ul de 10³ TCID₅₀ unidades/ratinho de vírus influenza A H2N2 (A/Sing/1/57). 0 composto de ensaio foi administrado intranasalmente a uma taxa de dose de 12,5 ou 25 mg/kg por peso de corpo (50 /il de solução aquosa/ratinho), como a seguir se indica: 24 horas e 3 horas antes da infecção; 3 horas depois da infecção e, em seguida, duas vezes por dia apenas em cada um dos dias 1, 2 e 3 após a infecção. Também se usaram os compostos não relacionados estruturalmente ribavirina e amantadina para comparação.

D-473

Os ratinhos foram sacrificados nos dias 1, 2 e 3 após a infecção, os seus pulmões foram removidos e mediram-se as titulações de virus. As titulações foram representadas graficamente e expressas como a área de percentagem pelas curvas (AUC) comparadas com as dos ratinhos não tratados. Os resultados estão resumidos a seguir:

Efiácia em Ratinhos Infectados com o Virus de Influenza

α		w co co		ro ro		rl 00 o
ίο		O O rl		o co ro o o
«fl		*. *.		·» K *. *» *.		rl CO CO
		o o o		ο σ\ o o ro		ro v
o\o				ro
z-s
0 a
P 0
0
<u				w w w		WWW
o) p				- «fe-		— * *»
(fl		WWW		ro w w ro ro		ro ro ro
0 0		ro ro ro		H ro ro rl i-l		rl rl rl
Q (fl
fl)
ft
tP
tn
g
			i •r| 0
			X -P
			0 (0
	1 1		fl) β		1 O
	•rl 0		P O		•rl +J
	X (fl		(tí (fl		X (0
	0 0	U5	P 0		0 β
	0) fi		-Ρ β		0) 0
	P (0		0) (tí		ρ m
	(tí P		•P P		(tí 0
	P -rl	β	1 -rl		Ρ β
	P ft fl)	W Q.	•P (tí
	0) O	ro	- O		0) P
	P c	0	Μ* β		4-1 -rl
	1 0) «fl	- 0)		1 Or
	w ι	W	ro 1		W 0
	-ro	P	-ro		- β
	•4* 1	d)	ro ι		M* fl)
		l β		- 1
	ro o	1	O O		ro ro
	- fi	0	β β		- 1
	ro ι	β	•rl |		ro β
	- 0	•rl	P O		1 0
	o h	g	•rl p		0 β
	β 0	(0	β 0		β 1
	•rl (t)	1	(tí (0		•rl 0
	fi rl	M1	rj		g H
	(tí (tí	•S-τ'	& (tí		(tí (tí
	1 w		1 &		1 -P
	1	0	<a< ι		-fl1 1	r—
	l OH	ι Qlr-	1 QlM·
	0 1	p	0 1		0 1	rl
	p o	•O fl)	P 0	(tí (tí	P 0	(tí
	•Η P	(fl β	Ή P	0 β β	•rl P	β
0	g fl)	•rl	g Φ	•rl ·Ρ ·γΙ	g 0)	0 -rl
•P	<tí 0	0) ρ	(tí 0	β ρ ρ	(tí 0	•r| p
(fl	4J -rl	h <tí	•P -rl	•ο ·Η <tí	•P -rl	P (tí
O	0) r-l	+>	0) i—1	fi ί> -P	0) rl	•o 1-1
&	0 tr	0 β «fl	o tn	Ití (tí β «fl	o p	(0 β «fl
g	(tí 1	•P (tí &	(tí 1	Λ (tí £	(tí 1	(tí &
0	1 Q (tí g «fl	1 Q fl) -H g «fl	1 Q| fl) g «fl
o	in ι	M Q	W 1	P pq «fl Q	W 1	P |<Q
(0
•rl
0
c
«D
•rl 0
Ρ P
fl) fl)	H		ro		ro
ΒΊ
M S

D-473

76Os três compostos ensaiados revelaram uma maior potência do que a DANA.

Exemplo 23 As formulações seguintes são representativas de composições de acordo com o invento:

SOLUÇÃO AQUOSA

Composto de fórmula (I)

Cloreto de benzalcónio

Alcol feniletílico Agua purificada

SOLUÇÃO COSOLVENTE AQUOSA

Composto de fórmula (I)

Cloreto de benzalcónio Polietileno glicol 400 Propileno glicol Agua purificada

10,0

0,04

0,40 até 100% p/p ,% .P/P.

10,0

0,04

10,0

30,0 até 100% p/p

FORMULAÇÃO DE AEROSOL

Composto de fórmula (I)	.% P/P 7,5
Lecitina	0,4
Propulsor 11	25,6
Propulsor 12	66,5

D-473

-77z

FORMULAÇÃO DE PO SECO

5l_BZê

Composto de fórmula (I) 40,0

Lactose 60,0

Estas formulações são preparadas misturando o ingrediente activo e os excipientes por métodos farmacêuticos convencionais.

>

Compreender-se-á perfeitamente que o invento no seu aspecto geral não está limitado aos pormenores específicos acima referidos.

D-473

Claims (25)

1. l^â. - Processo para a preparação (I) ou de fórmula (Ia) de um composto de fórmula caracterizado pelo facto de na fórmula geral oxigénio, carbono ou enxofre e na fórmula geral azoto ou carbono;

   (I) , A ser (Ia), A ser

   R·¹· designar COOH, P(O)(OH)₂, N0₂, SOOH, SO₃H, tetrazol, ch₂cho, CHO ou ch(cho)₂,

   R² designar H, 0R⁶, F, Cl, Br, CN, NHR⁶, SR⁶ ou CH₂X, em que X é NHR⁶, halogêneo ou OR⁶ e

   R⁶ ser hidrogénio, um grupo acilo tendo de 1 a 4 átomos de carbono; um grupo alquilo linear ou cíclico tendo de 1 a 6 átomos de carbono ou um seu análogo de halogêneo substituido; um grupo alilo ou um grupo arilo não substituído ou um arilo substituído por um halogêneo, um grupo OH, um grupo N0₂, um grupo NH₂ ou um grupo COOH,

   D-473

   39’ · · . ,

   R e R serem iguais ou diferentes e, cada um, designar hidrogénio, CN, NHR⁶, N₃, SR⁶, =N-OR⁶, OR⁶, guanidino,

   N--R⁶ , NR⁶

   OR⁶

   N -> 0 , -NH-N-R⁶ ,

   R⁶ R⁶ R⁶

   R⁴ designar NHR⁶, SR⁶, OR⁶, COOR⁶, N02, C(R⁶)3, CH₂COOR⁶,

   CH₂NO₂ ou CH₂NHR⁶, e

   R⁵ designar CH2YR⁶, CHYR⁶CH2YR⁶ ou CHYR⁶CHYR⁶CH₂YR⁶, em que Y é O, S, NH, ou H e as metades sucessivas de Y num grupo R⁶ serem iguais ou diferentes, e seus sais ou derivados farmaceuticamente aceitáveis, desde que na fórmula geral (I) • 3 3 * · · . .

   (í) quando R ou R sao OR ou hidrogénio e A é oxigénio ou enxofre, então o referido composto não pode ter (a) um R² que seja hidrogénio e (b) um R⁴ que seja O-acilo ou NH-acilo, e

   D-473 (ii) R⁶ representa uma ligação covalente quando Y é hidrogénio e que na fórmula geral (Ia), (i) quando R^{2 3} ou R³' é OR⁶ ou hidrogénio e A é azoto, então o referido composto não pode ter

   9 « ι (a) um R que seja hidrogénio, e (b) um R⁴ que seja NH-acilo, e (ii) R⁶ representa uma ligação covalente quando Y é hidrogénio.
2. 2^a. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido composto ser um composto de fórmula (II)

   COOH (II) ^r3 em que R³ é hidrogénio ou R³ e R³ é -N₃, -CN, -CH₂NH₂, ou N.R⁸.R⁹?

   R⁸ e R⁹ são iguais ou diferentes e cada um designa hidrogénio, um grupo alquilo linear ou cíclico de 1 a 6

   D-473 átomos de carbono e um grupo acilo ou acilo substituído de 1 a 6 átomos de carbono, -C.(NH).NH₂, -CH₂.COOH, -CH₂-CH₂-OH ou -CH₂.CH.(R¹⁰)(R¹¹),

   R E R podem ser iguais ou diferentes e, cada um designa oxigénio ou R N=, e

   R¹² designa hidrogénio, -OH, -OCH₃, -NH₂, ou (CH₃)₂N- ou um seu sal ou derivado farmaceuticamente aceitável.
3. 3^a. - Processo de acordo com as reivindicações 1 ou 2, caracterizado por R³ ser NHR⁶.
4. 4^a. - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3, caracterizado por R³ ser

   NH

   J nh₂ ou nh-c-nh₂.
5. 5^a. - Processo de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por o referido composto ser escolhido do grupo que consiste em:

   5-acetamido-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de sódio (4-Azido-Neu5Ac2en); 5-acetamido-4-N,N-dialilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de sódio;

   D-473

   -82 —

   5-acetamido-4-N-alilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de sódio;

   5-acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-talo-non-2-enopiranosonato de sódio (4-epi-amino-Neu4Ac2en); ; 5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetil-4-N,N-dialilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo-(4-N,N-dialilamino-Neu5,7,8,9Ac₄2enlMe); 5-acetamido-4-N,N-dialilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-qlicero-D-qalacto-non-2-enopiranosonato de sódio;

   5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetil-4-N-alilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-p-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de metilo (4-Nalilamino-Neu-5,7,8,9Ac₄2enlMe);

   5-acetamido-4-N,N-dimetilamino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de sódio;

   2,3-dideoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de sódio;

   5-acetamido-7,8,9-tri-0-acetil-4-azido-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-talo-non-2-enopiranosonato de metilo (4-N-epi-azidoNeu-5,7,8,9Ac₄2enlMe);
6. 6^fl. - Processo para a preparação de uma formulação farmacêutica, caracterizada por compreender um composto de fórmula (I) ou (Ia) tal como se definiu em qualquer das reivindicações 1 a 5 ou um seu sal ou derivado farmaceuticamente aceitável, juntamente com um seu veículo farmaceuticamente aceitável.

   D-473
7. 7^a. - Processo para a preparação de uma formulação farmacêutica de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por a referida formulação ser própria para administração intranasal.
8. 8^a. - Processo para o tratamento de mamíferos, incluindo seres humanos, que sofram de uma infecção virai, caracterizado por compreender a administração de um composto de fórmula (I) ou fórmula (Ia) ^R1 (i) ,R₅ (la) em que na fórmula geral (I), A é oxigénio, carbono ou enxofre e na fórmula geral (Ia), A é azoto ou carbono;

   R¹ designa COOH, P(O)(OH)₂, N0₂, SOOH, SO3H, tetrazol,

   CH₂CHO, 0 ou CH(CHO)₂,

   R² designa H, OR⁶, F, Cl, Br, CN, NHR⁶, SR⁶ ou CH₂X, em que'X é NHR⁶, halogéneo ou OR⁶ e

   D-473

   84ΜΓ

   R é hidrogénio; um grupo acilo tendo de 1 a 4 átomos de carbono; um grupo alquilo cíclico ou linear tendo de 1 a 6 átomos de carbono, ou um seu análogo com halogêneo substituído; ou um grupo alilo ou um grupo arilo insubstituído ou um arilo substituído por um halogêneo, um grupo OH, um grupo N0₂, um grupo NH₂ ou um grupo COOH,

   R³ e R³' são iguais ou diferentes e, cada um, designa hidrogénio, CN, NHR⁶, N₃, SR⁶, =N-OR⁶, OR⁶, guanidino,

   R⁴ designa NHR⁶, SR⁶, OR⁶, COOR⁶, N02, C(R⁶)3, CH₂COOR⁶, CH₂NO₂ ou CH₂NHR⁶, e

   R⁵ designa CH2YR⁶, CHR⁶CH2YR⁶ ou CHYR⁶CHYR⁶CH₂YR⁶, em que Y é 0, S, NH ou H e as metades sucessivas de Y num grupo R⁵ são iguais ou diferentes, ou um seu sal ou derivado farmaceuticamente aceitável.
9. 9^â. - Processo de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado por o ingrediente activo ser aplicado ao

   D-473 aparelho respiratório.
10. 10®. - Processo de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado por o ingrediente activo ser administrado intranasalmente.
11. 11®. - Processo para a preparação de um composto de fórmula (I), tal como definido na reivindicação 1, caracterizado por compreender as fases de (A) reacção de um composto de fórmula (III) em que R¹, R², R⁴ e R⁵ serem como se definiu na reivindicação

    1 e L ser um grupo residual com um nucleófilo; ou (B) interconversão de um composto de fórmula (I) para outro composto de fórmula (I) e, se necessário ou desejável, se sujeitar o composto resultante ainda a mais uma ou duas reacções que compreendem;

    (i) a remoção de quaisquer grupos protectores;

    D-473 (ii) a conversão de um composto de fórmula (I) ou um seu sal num seu sal farmaceuticamente aceitável.
12. 12^a. - Processo de acordo com as reivindicações anteriores caracterizado por o referido composto possuir a fórmula (lb)

    3b co₂h (lb) onde alq é metileno substituído ou não substituído x é 0 ou 1 zrV» _{e e} ...

    R é hidrogénio, C-^galquilo, arilo, aralquilo, amidma, NR^7bR^8b ou um anel saturado ou insaturado contendo um ou mais heteroãtomos (tais como azoto, oxigénio ou enxofre),

    R^7b é hidrogénio, C₁_₆alquilo ou alilo; ou

    NR^^bR^7b forma um anel de 5 ou 6 elementos opcionalmente substituído que contem opcionalmente um ou mais heteroátomos adicionais, nu · ·

    R é hidrogénio ou C-^galquilo e

    D-473

    R^4b é NHCOR^9b em que R^9b é hidrogénio ou C_1-4 alquilo ou arilo substituído ou insubstituído, ou um seu sal ou derivado farmaceuticamente aceitáveis.
13. 13 ®. - Processo para a preparação de um composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por no referido composto R^3b ser NR^6bR^7b.
14. 14®. - Processo para a preparação de um composto de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por no referido composto R^3b ser NH₂ ou NHC(=NH)NH₂.
15. 15®. - Processo de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado por o composto ser ácido 5-acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosónico e seus sais e derivados farmaceuticamente aceitáveis.
16. 16®. - Processo de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado por o composto ser 5-acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de sódio.
17. 17®. - Processo de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado por o composto ser ácido 5-acetamido-4-guanidino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosónico e seus sais e derivados farmaceuticamente aceitáveis.

    D-473

    -8818^a. - Processo de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado por o composto ser 5-acetamido-4-guanidino·-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosonato de amónio.
18. 19^a. - Formulação farmacêutica de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizada por o referido composto ser um ingrediente activo juntamente com um seu veículo farmaceuticamente aceitável.
19. 20^a. - Formulação farmacêutica apropriada para administração intranasal, caracterizada por compreender um composto de acordo como as reivindicações anteriores, como um ingrediente activo, juntamente com um seu veículo farmaceuticamente aceitável.
20. 21^a. - Formulação farmacêutica de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizada por o ingrediente activo ser ácido 5-acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosónico ou um seu sal farmaoeutioamente aceitável.
21. 22^a. - Formulação farmacêutica de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizada por o ingrediente ser ácido 5-acetamido-4-guanidino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosónico ou um seu sâl farmaceuticamente aceitável.

    D-473

    -8923^a. - Processo para o tratamento de um mamífero, incluindo um ser humano que sofra de uma infecção virai, caracterizado por compreender a administração de uma quantidade eficaz de um composto de acordo com as reivindicações anteriores.
22. 24^a. - Processo de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado por o ingrediente activo ser administrado às vias respiratórias.

    >
23. 25^a. - Processo de acordo com as reivindicações anteriores,

    caracterizado por o composto ser administrado intranasalmente. 26^a. - Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por o composto ser ácido 5-

    -acetamido-4-amino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosónico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
24. 27^a. - Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por o composto ser ácido 5-acetamido-4-guanidino-2,3,4,5-tetradeoxi-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranosónico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
25. 28 ^a. - Processo para a preparação de um composto de fórmula (lb) tal como definido em qualquer das reivindicações

    90D-473 anteriores, caracterizado por compreender as fases de (A) reacção de um composto de fórmula (Illb)

    HO

    Z _R4b _rC0₂H (Illb) em que R⁴*³ é como definido na reivindicação 17 e L é um grupo residual, ou um derivado protegido do referido composto, com um nucleófilo; ou

    B) interconversão de um composto de fórmula (Ib) para outro composto de fórmula (Ib) e, se necessário, sujeitando o composto resultante a uma ou duas outras reacçóes que compreendem (i) remoção de quaisquer grupos protectores;

    (ii) conversão de um composto de fórmula (Ib) ou de um seu sal num seu sal farmaceuticamente aceitável.

    A requerente declara haver depositado os correspondentes pedidos de Patente na Austrália, em 24 de Abril de 1990 sob o n^B. PJ 9800, em 19 de Outubro de 1990 sob o n^B PK 2896 e em

    11 de Fevereiro de 1991 sob ο η². PK 4537.

    D-473

    -91Pede a V. Exa. se digne conceder-lhe a respeetiva Patente de Invenção.

    Lisboa, >

    V

    PELA REQUERENTE

    D-473