RU2762607C2

RU2762607C2 - Стабилизированные небелковые композиции клостридиального токсина

Info

Publication number: RU2762607C2
Application number: RU2019110912A
Authority: RU
Inventors: Морис АБИАД; Бхас ДАНИ; Евгений ШАЛАЕВ
Original assignee: Аллерган, Инк.
Priority date: 2016-09-13
Filing date: 2017-09-13
Publication date: 2021-12-21
Also published as: TWI773686B; US20210369821A1; EP3436054B1; AU2017327369A1; IL308091A; US20230355724A1; PH12019500501A1; TW201822786A; CN109803672A; US20210290739A1; CA3035473A1; PT3432916T; KR20220132013A; KR20240023684A; HUE046290T2; AU2017326253B2; CA3036095A1; RS59600B2; ES2755816T5; MX2019002835A

Abstract

Группа изобретений относится к жидкой фармацевтической композиции, обладающей активностью связывания с рецептором клостридиального токсина. Представлены варианты жидкой фармацевтической композиции, не содержащей белковых эксципиентов и включающей активный ингредиент в виде клостридиального ботулотоксина; водный носитель; поверхностно-активное вещество, представляющее собой полоксамер; и метионин. Компоненты используются в заявленных количествах. Композиция подходит для подкожной или внутримышечной инъекции и является стабильной в течение по меньшей мере одного месяца при 40°C. Использование группы изобретений позволяет повысить стабильность фармацевтической композиции, обладающей активностью связывания с рецептором клостридиального токсина. 3 н. и 16 з.п. ф-лы, 5 табл., 3 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0001] Настоящее изобретение относится к твердым и жидким фармацевтическим композициям, содержащим активный ингредиент в виде клостридиального токсина и один или более небелковых эксципиентов.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] Фармацевтическая композиция представляет собой состав, который содержит по меньшей мере один активный ингредиент (такой как клостридиальный токсин), а также, например, один или более эксципиентов, буферов, носителей, стабилизаторов, консервантов и/или наполнителей, и он подходит для введения пациенту для достижения желаемого диагностического результата или терапевтического эффекта. Фармацевтические композиции, описанные в настоящем документе, можно применять в диагностических, терапевтических и/или исследовательских целях.

[0003] Для обеспечения стабильности при хранении и удобства в обращении фармацевтическую композицию можно готовить в виде лиофилизированного (т.е. высушенного сублимацией) или высушенного в вакууме порошка, который перед введением пациенту может быть разведен подходящей жидкостью, такой как солевой раствор или вода. В альтернативном варианте осуществления фармацевтическую композицию можно приготовить в виде водного раствора или суспензии. Фармацевтическая композиция может содержать белковый активный ингредиент. К сожалению, белковый активный ингредиент может быть очень сложно стабилизировать (т.е. поддерживать в состоянии, в котором потеря биологической активности сводится к минимуму), что в результате приводит к потере белка и/или потере белковой активности во время приготовления, разведения (при необходимости) и хранения фармацевтической композиции перед использованием. Проблемы со стабильностью могут возникать из-за поверхностной адсорбции белкового активного ингредиента, физической нестабильности, такой как, например, денатурация или агрегация, или химической нестабильности, такой как, например, поперечное сшивание, деамидирование, изомеризация, окисление, образование кислых или основных соединений, реакция Майяра и фрагментация. Для предотвращения такой нестабильности применяют различные эксципиенты на основе белков, такие как альбумин и желатин, для стабилизации активного белкового ингредиента, присутствующего в фармацевтической композиции.

[0004] К сожалению, несмотря на известные стабилизирующие эффекты, существуют значительные недостатки в применении белковых эксципиентов, таких как альбумин или желатин, в фармацевтической композиции. Например, альбумин и желатин являются дорогостоящими и все более трудными для получения. Более того, препараты крови или продукты животного происхождения, такие как альбумин и желатин, при введении пациенту могут подвергать его потенциальному риску заражения патогенами или инфекционными агентами, передаваемыми через кровь. Таким образом, известно, что существует возможность того, что наличие белкового эксципиента животного происхождения в фармацевтической композиции может привести к непреднамеренному включению инфекционных элементов в фармацевтическую композицию. Например, сообщено, что использование человеческого сывороточного альбумина может приводить к попаданию в фармацевтическую композицию прионов. Таким образом, желательно найти подходящие небелковые эксципиенты, такие как, например, стабилизаторы, криопротекторы и лиопротекторы, которые можно использовать для стабилизации белкового активного ингредиента, присутствующего в фармацевтической композиции.

[0005] Уникальные характеристики клостридиальных токсинов дополнительно ограничивают и затрудняют выбор подходящих небелковых эксципиентов для фармацевтической композиции, содержащей активный ингредиент в виде клостридиального токсина. Например, клостридиальные токсины представляют собой крупные белки со средней молекулярной массой приблизительно 150 кДа и дополнительно объединены в комплексы с нетоксичными связанными белками, которые увеличивают размер до приблизительно 300-900 кДа. Размер комплекса клостридиального токсина делает его более хрупким и неустойчивым по сравнению с меньшими менее сложными белками, тем самым усложняя получение и обращение в случае необходимости поддерживания стабильности клостридиального токсина. Таким образом, небелковые эксципиенты, такие как, например, стабилизаторы, криопротекторы и лиопротекторы, при их применении должны быть способны взаимодействовать с активным ингредиентом в виде клостридиального токсина таким образом, чтобы не денатурировать, фрагментировать или иным образом инактивировать токсин или не вызывать отсоединения нетоксичных связанных белков, присутствующих в комплексе токсина.

[0006] Еще одной проблемой, связанной с активным ингредиентом в виде клостридиального токсина, является исключительная безопасность, точность и правильность, необходимые для всех этапов способа приготовления. Таким образом, небелковый эксципиент сам по себе не должен быть токсичным или сложным в обращении, чтобы не усугублять и без того чрезвычайно строгие требования.

[0007] Дополнительной проблемой, связанной с активным ингредиентом в виде клостридиального токсина, является невероятно низкое количество клостридиального токсина, которое используется в фармацевтической композиции. Как и в случае с ферментами в целом, биологическая активность клостридиальных токсинов по меньшей мере частично зависит от их трехмерной конформации. Таким образом, клостридиальный токсин обезвреживается нагреванием, различными химическими веществами, растягиванием поверхности и сушкой поверхности. Кроме того, известно, что разбавление комплекса клостридиального токсина, полученного известными способами культивирования, ферментации и очистки, до гораздо меньшей концентрации, используемой в фармацевтической композиции, приводит к быстрой инактивации токсина. Чрезвычайно низкое количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, который используется в фармацевтической композиции, делает этот активный ингредиент очень восприимчивым к адсорбции, например, на поверхностях лабораторной посуды, сосудов, на флаконе, в котором разводят фармацевтическую композицию, и на внутренней поверхности шприца, используемого для введения фармацевтической композиции. Такая адсорбция активного ингредиента в виде клостридиального токсина на поверхностях может привести к потере активного ингредиента и денатурации оставшегося активного ингредиента в виде клостридиального токсина, и оба этих эффекта снижают общую активность активного ингредиента, присутствующего в фармацевтической композиции. Таким образом, небелковые эксципиенты, такие как, например, стабилизаторы, криопротекторы и лиопротекторы, при их применении должны быть способны выступать в качестве поверхностных блокаторов для предотвращения адсорбции активного ингредиента в виде клостридиального токсина на поверхности.

[0008] Еще одна проблема, связанная с активным ингредиентом в виде клостридиального токсина, заключается в том, что чувствительность к pH связана с образованием комплекса. Например, известно, что комплекс BONT/A размером 900 кДа растворим в разбавленных водных растворах при pH 3,5-6,8. Однако при pH выше около 7 нетоксичные связанные белки отсоединяются от нейротоксина размером 150 кДа, что приводит к потере токсичности, особенно при повышении pH выше 8,0. См. Edward J. Schantz et al, pp. 44-45, Preparation and characterization of botulinum toxin type A for human treatment, in Jankovic, J., et al, Therapy with Botulinum Toxin (Marcel Dekker, Inc., 1994). Поскольку считается, что нетоксичные связанные белки сохраняют или помогают стабилизировать вторичную и третичную структуры, от которых зависит токсичность, диссоциация этих белков приводит к получению более нестабильного активного ингредиента в виде клостридиального токсина. Таким образом, небелковые эксципиенты, подходящие для приготовления фармацевтической композиции, содержащей активный ингредиент в виде клостридиального токсина, должны быть способны функционировать в пределах диапазона рН, необходимого для поддержания активности активного ингредиента в виде клостридиального токсина.

[0009] Таким образом, необходима фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином, в которой активный ингредиент в виде клостридиального токсина (такого как ботулотоксин) стабилизируется небелковым эксципиентом. Настоящее изобретение относится к твердым и жидким фармацевтическим композициям с клостридиальным токсином и одним или более небелковыми эксципиентами, которые служат для стабилизации активного ингредиента в виде клостридиального токсина, присутствующего в твердой или жидкой фармацевтической композиции.

ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0010] В одном аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая активный ингредиент в виде клостридиального токсина, регулятор тоничности, поверхностно-активное вещество и антиоксидант. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат ботулотоксин. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит трегалозу. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит хлорид натрия. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит полоксамер и/или полисорбат. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит полоксамер 188 и/или полисорбат 20. В некоторых вариантах осуществления антиоксидант содержит L-метионин, N-ацетилцистеин и/или натриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) или аналог ЭДТА. В некоторых вариантах осуществления композиция дополнительно содержит буферный агент. В одном варианте осуществления буферный агент включает в себя гистидиновый буфер. В некоторых вариантах осуществления композиция имеет pH от 5 до 7. В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой жидкий состав. В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой твердый состав.

[0011] В одном аспекте в настоящем описании предложена жидкая фармацевтическая композиция, содержащая производное клостридиального токсина, трегалозу, полоксамер 188 или полисорбат 20 и L-метионин или N-ацетилцистеин (NAC). В некоторых вариантах осуществления жидкая фармацевтическая композиция содержит ботулотоксин. В некоторых вариантах осуществления жидкая фармацевтическая композиция дополнительно содержит ЭДТА или аналог ЭДТА. В некоторых вариантах осуществления жидкая фармацевтическая композиция содержит гистидиновый буфер. В некоторых вариантах осуществления pH жидкой фармацевтической композиции находится в диапазоне от 5 до 7. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество L-метионина находится в диапазоне от около 0,1% до около 0,3%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество NAC находится в диапазоне от около 0,1% до около 0,5%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество ЭДТА находится в диапазоне от около 0,01% до около 0,05%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество трегалозы находится в диапазоне от около 1,0 до около 10%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество полоксамера 188 находится в диапазоне от около 2% до около 5%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество полисорбата 20 находится в диапазоне от около 0,02% до около 0,06%.

[0012] В другом аспекте в настоящем описании предложена твердая фармацевтическая композиция, содержащая ботулотоксин, трегалозу, полоксамер 188 или полисорбат 20, NAC и ЭДТА или аналог ЭДТА. В альтернативном варианте осуществления твердая фармацевтическая композиция содержит ботулотоксин, трегалозу, полоксамер 188 и L-метионин. В некоторых вариантах осуществления твердая фармацевтическая композиция дополнительно содержит гистидиновый буфер. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество L-метионина находится в диапазоне от около 0,1% до около 0,3%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество NAC находится в диапазоне от около 0,01% до около 0,05%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество ЭДТА находится в диапазоне от около 0,01% до около 0,05%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество трегалозы находится в диапазоне от около 1,0 до около 10%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество полоксамера 188 находится в диапазоне от около 0,5% до около 5%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество полисорбата 20 находится в диапазоне от около 0,02% до около 0,06%.

ОПИСАНИЕ

[0013] Некоторые композиции настоящего изобретения представляют собой стабильную жидкую или твердую фармацевтическую композицию, содержащую производное клостридиального токсина, дисахарид, поверхностно-активное вещество и антиоксидант.

[0014] В некоторых вариантах осуществления также предложены способы лечения различных заболеваний, расстройств и состояний, включая, например, депрессию, головную боль (например, мигрень, головную боль напряжения и т.п.), боль, гипергидроз, спастичность мышц, цервикальную дистонию, блефароспазм, гиперактивный мочевой пузырь (нейрогенную гиперактивность детрузора и идиопатический гиперактивный мочевой пузырь), заболевания кожи, включая, например, морщины, несимметричности, вдавления и т.п., с использованием композиций, предложенных в соответствии с аспектом настоящего изобретения. Варианты осуществления могут включать различные способы введения, включая, например, инъекцию, например внутримышечную, внутрикожную, подкожную или т.п., введение по каплям, внутривенное введение, трансдермальное и местное введение.

Определения

[0015] В настоящем документе слова или термины, изложенные ниже, имеют следующие определения.

[0016] Термин «около» или «приблизительно» в настоящем документе означает «в пределах приемлемого диапазона ошибки» для конкретного значения, определенного средним специалистом в данной области, причем ошибка отчасти зависит от того, каким образом измерено или определено это значение (т.е. от ограничений системы измерения). Например, «около» может означать в пределах 1 или более 1 стандартного отклонения в соответствии с практикой в данной области. Если не указано иное, для конкретных значений, которые описаны в заявке и формуле изобретения, термин «около» означает «в пределах приемлемого диапазона ошибки для конкретного значения».

[0017] Термин «введение» или «вводить» означает этап назначения (т.е. введения) фармацевтической композиции субъекту или альтернативно субъекту, получающему фармацевтическую композицию. Фармацевтические композиции, описанные в настоящем документе, можно вводить локально различными способами. Например, подходящими способами введения могут быть внутримышечное, внутрикожное, подкожное введение, интратекальное введение, внутрибрюшинное введение, местное (трансдермальное) введение, введение по каплям и имплантация (например, устройства с медленным высвобождением, такого как полимерный имплантат или миниатюрный осмотический насос).

[0018] Термин «облегчение» означает уменьшение возникновения боли, головной боли или любого симптома или причины состояния или расстройства. Таким образом, облегчение включает некоторое снижение, значительное снижение, практически полное снижение или полное снижение.

[0019] Термин «не содержащий животного белка» означает отсутствие полученных из крови, смешанной крови и других продуктов или соединений животного происхождения. «Животное» означает млекопитающее (например, человека), птицу, рептилию, рыбу, насекомое, паука или животное других видов. Термин «животное» исключает микроорганизмы, такие как бактерии. Таким образом, не содержащая животного белка фармацевтическая композиция может включать в себя ботулиновый нейротоксин. Например, «не содержащая животного белка» фармацевтическая композиция означает фармацевтическую композицию, которая либо по существу не содержит, либо совсем не содержит сывороточного альбумина, желатина и других белков животного происхождения, таких как иммуноглобулины. Примером не содержащей животного белка фармацевтической композиции является фармацевтическая композиция, которая содержит или состоит из ботулотоксина (в качестве активного ингредиента) и подходящего полисахарида в качестве стабилизатора или эксципиента.

[0020] «Биологическая активность» описывает полезные или неблагоприятные эффекты лекарственного средства на живую материю. Если лекарственное средство представляет собой сложную химическую смесь, эта активность обусловлена активным ингредиентом вещества, но может быть модифицирована другими компонентами. Биологическую активность можно оценить как эффективность или токсичность в анализе in vivo LD₅₀ или ED₅₀ или с помощью анализа in vitro, такого как, например, клеточные анализы эффективности, описанные в U.S. 20100203559 и U.S. 20100233802.

[0021] Термин «ботулотоксин» означает нейротоксин, продуцируемый Clostridium botulinum, а также ботулотоксин (или его легкую цепь или тяжелую цепь), полученный путем рекомбинации из неклостридиальных видов. В настоящем документе термин «ботулотоксин» охватывает ботулотоксины серотипов A, B, C, D, E, F и G и их подтипы и любые другие типы и их подтипы или любые искусственные белки, аналоги, производные, гомологи, части, подчасти, варианты или версии, в каждом случае, любого из ранее упомянутого. В настоящем документе термин «ботулотоксин» также охватывает «модифицированный ботулотоксин». Дополнительно в настоящем документе термин «ботулотоксин» также охватывает комплекс ботулотоксина (например, комплексы размером 300, 600 и 900 кДа), а также нейротоксичный компонент ботулотоксина (150 кДа), который не связан с белками комплекса.

[0022] Термин «клостридиальный токсин» означает любой токсин, продуцируемый выделяющим клостридиальный токсин штаммом, который способен запускать общий клеточный механизм, посредством которого клостридиальный токсин вызывает интоксикацию клетки и который включает связывание клостридиального токсина с низко- или высокоаффинным рецептором клостридиального токсина, интернализацию комплекса токсин/рецептор, транслокацию легкой цепи клостридиального токсина в цитоплазму и ферментативную модификацию субстрата клостридиального токсина. Не имеющие ограничительного характера примеры клостридиальных токсинов включают ботулотоксин, такой как BoNT/A, BoNT/B, BoNT/C₁, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, столбнячный токсин (TeN), токсин Clostridium baratii (BaNT) и токсин Clostridium butyricum (BuNT). Цитотоксин BONT/C₂ и цитотоксин BoNT/C₃, не являющиеся нейротоксинами, исключены из термина «клостридиальный токсин». Клостридиальный токсин, описанный в настоящем документе, включает в себя, без ограничений, варианты клостридиального токсина природного происхождения, такие как, например, изоформы клостридиального токсина и подтипы клостридиального токсина; варианты клостридиального токсина, не встречающиеся в природе, такие как, например, консервативные варианты клостридиального токсина, неконсервативные варианты клостридиального токсина, химерные варианты клостридиального токсина и активные фрагменты клостридиального токсина или любая их комбинация. Клостридиальный токсин, описанный в настоящем документе, также включает в себя комплекс клостридиального токсина. Используемый в настоящем документе термин «комплекс клостридиального токсина» относится к комплексу, содержащему клостридиальный токсин и нетоксичные связанные белки (NAP), такому как, например, комплекс ботулотоксина, комплекс столбнячного токсина, комплекс токсина Clostridium baratii и комплекс токсина Clostridium butyricum. Не имеющие ограничительного характера примеры комплексов клостридиального токсина включают в себя комплексы, продуцируемые Clostridium botulinum, такие как, например, комплекс BoNT/A размером 900 кДа, комплекс BoNT/A размером 500 кДа, комплекс BoNT/A размером 300 кДа, комплекс BoNT/B размером 500 кДа, комплекс BoNT/C₁ размером 500 кДа, комплекс BoNT/D размером 500 кДа, комплекс BoNT/D размером 300 кДа, комплекс BoNT/E размером 300 кДа и комплекс BoNT/F размером 300 кДа.

[0023] Термин «активный ингредиент в виде клостридиального токсина» относится к молекуле, которая содержит любую часть клостридиального токсина, оказывающую воздействие при введении или после введения субъекту или пациенту. Используемый в настоящем документе термин «активный ингредиент в виде клостридиального токсина» охватывает комплекс клостридиального токсина, содержащий клостридиальный токсин размером приблизительно 150 кДа и другие белки, совместно называемые нетоксичными связанными белками (NAP), только клостридиальный токсин размером приблизительно 150 кДа или модифицированный клостридиальный токсин, такой как, например, перенацеленные клостридиальные токсины.

[0024] Термин «деформация» означает косметическую, физическую или функциональную несимметричность, дефект, аномалию, несовершенство, порок, впадину или искажение.

[0025] Термин «эффективное количество» в отношении биологически активного ингредиента означает такое количество ингредиента, которое является по существу достаточным для эффекта нужного изменения у субъекта. Например, если нужным эффектом является ослабление симптома аутоиммунного расстройства, эффективным количеством ингредиента является такое количество, которое приводит к по меньшей мере существенному ослаблению симптома аутоиммунного заболевания и не вызывает выраженной токсичности.

[0026] Термин «эффективное количество» применительно к количеству эксципиента или специфической комбинации эксципиентов, добавляемых к композиции с клостридиальным токсином, относится к количеству каждого эксципиента, которое необходимо для достижения желаемой начальной эффективности активного ингредиента в виде клостридиального токсина после разведения. В аспектах настоящего варианта осуществления эффективное количество эксципиента или комбинации эксципиентов обеспечивает начальную эффективность после разведения, например, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или по меньшей мере 90% или по меньшей мере 100%. В других аспектах настоящего варианта осуществления терапевтически эффективная концентрация активного ингредиента в виде клостридиального токсина облегчает симптом, связанный с подвергаемым лечению заболеванием, например, не более чем на 10%, не более чем на 20%, не более чем на 30%, не более чем на 40%, не более чем на 50%, не более чем на 60%, не более чем на 70%, не более чем на 80%, не более чем на 90% или не более чем на 100%.

[0027] Термин «тяжелая цепь» означает тяжелую цепь ботулинового нейротоксина. Она имеет молекулярную массу приблизительно 100 кДа и может обозначаться как H-цепь или H.

[0028] Hc означает фрагмент (приблизительно 50 кДа), полученный из H-цепи ботулинового нейротоксина, который приблизительно эквивалентен сегменту H-цепи со стороны С-конца или участку, соответствующему этому фрагменту в интактной H-цепи. Считается, что он является иммуногенным и содержит часть ботулинового нейротоксина природного происхождения или дикого типа, участвующую в высокоаффинном, пресинаптическом связывании с моторными нейронами.

[0029] H_N означает фрагмент (около 50 кДа), полученный из H-цепи ботулинового нейротоксина, который приблизительно эквивалентен сегменту H-цепи со стороны N-конца или участку, соответствующему этому фрагменту в интактной H-цепи. Считается, что он содержит часть ботулинового нейротоксина природного происхождения или дикого типа, участвующую в транслокации L-цепи через внутриклеточную эндосомальную мембрану.

[0030] Термин «легкая цепь» означает легкую цепь клостридиального нейротоксина. Она имеет молекулярную массу около 50 кДа и может обозначаться как L-цепь, L или как протеолитический домен (аминокислотная последовательность) ботулинового нейротоксина.

[0031] LH_N или L-H_N означает фрагмент, полученный из клостридиального нейротоксина, который содержит L-цепь, или ее функциональный фрагмент, связанный с доменом H_N. Он может быть получен из интактного клостридиального нейротоксина путем протеолиза, обеспечивающего удаление или модификацию домена Hc.

[0032] Термин «имплантат» означает композицию или систему доставки лекарственного средства с контролируемым высвобождением (например, пульсирующим или непрерывным). Имплантат может быть, например, введен, вставлен или имплантирован внутрь тела человека.

[0033] Термин «местное введение» означает прямое введение фармацевтического средства в участок или вблизи участка, находящегося на теле животного или внутри него, в котором требуется биологический эффект фармацевтического средства, посредством, например, внутримышечной, внутрикожной или подкожной инъекции или местного введения. Местное введение исключает системные способы введения, такие как внутривенное или пероральное введение. Местное нанесение представляет собой разновидность местного введения, при котором фармацевтический агент наносят на кожу пациента.

[0034] «Модифицированный ботулотоксин» означает ботулотоксин, в котором по меньшей мере одна из аминокислот была удалена, модифицирована или замещена, по сравнению с нативным ботулотоксином. Кроме того, модифицированный ботулотоксин может представлять собой полученный путем рекомбинации нейротоксин или производное или фрагмент полученного путем рекомбинации нейротоксина. Модифицированный ботулотоксин сохраняет по меньшей мере одну биологическую активность нативного ботулотоксина, такую как способность связываться с рецептором ботулотоксина или способность ингибировать высвобождение нейромедиатора из нейрона. Одним примером модифицированного ботулотоксина является ботулотоксин, легкая цепь которого получена из ботулотоксина одного серотипа (такого как серотип A), а тяжелая цепь - из ботулотоксина другого серотипа (такого как серотип B). Другим примером модифицированного ботулотоксина является ботулотоксин, связанный с нейромедиатором, таким как вещество P.

[0035] Термин «мутация» означает структурную модификацию белка или нуклеотидной последовательности природного происхождения. Например, в случае мутаций нуклеиновой кислоты мутация может представлять собой делецию, добавление или замену одного или более нуклеотидов в последовательности ДНК. В случае мутации белковой последовательности мутация может представлять собой делецию, добавление или замену одной или более аминокислот в белковой последовательности. Например, конкретная аминокислота, содержащаяся в белковой последовательности, может быть замещена другой аминокислотой, например аминокислотой, выбранной из группы, которая включает аланин, аспарагин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, фенилаланин, глицин, гистидин, изолейцин, лизин, лейцин, метионин, пролин, глутамин, аргинин, серин, треонин, валин, триптофан, тирозин или любую другую аминокислоту природного или неприродного происхождения или химически модифицированные аминокислоты. Мутации в белковой последовательности могут возникать в результате мутаций в последовательностях ДНК, которые при транскрипции и трансляции конечной мРНК продуцируют мутированную белковую последовательность. Мутации в белковой последовательности также могут быть созданы путем слияния пептидной последовательности, содержащей желаемую мутацию, с желаемой последовательностью белка.

[0036] Термин «пациент» означает человека или не относящегося к человеку субъекта, получающего медицинский или ветеринарный уход. Соответственно, композиции, описанные в настоящем документе, можно применять для лечения любого животного, такого как, например, млекопитающие или т.п.

[0037] Термин «периферическое введение» означает подкожное, внутрикожное, трансдермальное или подкожное введение, но исключает внутримышечное введение. Термин «периферический» означает участок под кожей и исключает висцеральные участки.

[0038] Термин «фармацевтическая композиция» означает композицию, содержащую активный фармацевтический ингредиент, такой как, например, активный ингредиент в виде клостридиального токсина, такой как ботулотоксин, и по меньшей мере один дополнительный ингредиент, такой как, например, стабилизатор или эксципиент или т.п. Таким образом, фармацевтическая композиция представляет собой состав, который подходит для диагностического или терапевтического введения субъекту, такому как пациент-человек. Фармацевтическая композиция может находиться, например, в лиофилизированном или высушенном в вакууме состоянии, в виде раствора, образованного после разведения лиофилизированной или высушенной в вакууме фармацевтической композиции, или в виде раствора или твердого вещества, которое не требует разведения.

[0039] Термин «фармакологически приемлемый эксципиент» является синонимом термину «фармакологический эксципиент» или «эксципиент» и относится к любому эксципиенту, который по существу не оказывает длительного или постоянного негативного влияния при введении млекопитающему и охватывает такие соединения, как, например, стабилизатор, наполнитель, криопротектор, лиопротектор, добавка, несущая среда, носитель, разбавитель или вспомогательный компонент. Эксципиент, как правило, смешивают с активным ингредиентом или позволяют ему разбавить или включить в себя активный ингредиент, и он может представлять собой твердый, полутвердый или жидкий агент. Кроме того, предполагается, что фармацевтическая композиция, содержащая активный ингредиент в виде клостридиального токсина, может включать в себя один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов, облегчающих превращение активного ингредиента в фармацевтически приемлемые композиции. Если любой фармакологически приемлемый эксципиент совместим с активным ингредиентом в виде клостридиального токсина, его можно применять в фармацевтически приемлемых композициях. Не имеющие ограничительного характера примеры фармакологически приемлемых эксципиентов можно найти, например, в изданиях Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (Howard C. Ansel et al., eds., Lippincott Williams Wilkins Publishers, 7^th ed. 1999); Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Alfonso R. Gennaro ed., Lippincott, Williams Wilkins, 20^th ed. 2000); Goodman Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Joel G. Hardman et al., eds., McGraw-Hill Professional, 10^th ed. 2001); и Handbook of Pharmaceutical Excipients (Raymond C. Rowe et al., APhA Publications, 4^th edition 2003), каждое из которых полностью включено в настоящий документ путем ссылки.

[0040] Ингредиенты, составляющие фармацевтическую композицию, могут быть включены в одну композицию (т.е. все составляющие ингредиенты, за исключением какой-либо жидкости, требуемой для разведения, присутствуют во время первоначального приготовления фармацевтической композиции) или могут быть в виде двухкомпонентной системы, например высушенной вакуумом композиции, разведенной с помощью среды для разведения, которая может, например, содержать ингредиент, не присутствующий при первоначальном приготовлении фармацевтической композиции. Двухкомпонентная система может обеспечивать ряд преимуществ, в том числе возможность включения ингредиентов, которые не являются достаточно совместимыми при долгосрочном хранении с первым компонентом двухкомпонентной системы. Например, среда для разведения может включать в себя консервант, который обеспечивает достаточную защиту от роста микроорганизмов в течение периода применения, например, в течение одной недели хранения в холодильнике, но отсутствует в течение двухлетнего периода хранения в морозильнике, так как в течение этого периода он может разрушить токсин. Таким способом можно включать другие ингредиенты, которые могут быть несовместимы с ботулотоксином или другими ингредиентами в течение длительных периодов времени; т.е. добавлять во вторую среду (например, в среду для разведения) в приблизительное время использования. Фармацевтическая композиция может также включать в себя консерванты, такие как бензиловый спирт, бензойная кислота, фенол, парабены и сорбиновая кислота. Фармацевтические композиции могут включать в себя, например, эксципиенты, такие как поверхностно-активные вещества; диспергирующие агенты; инертные разбавители; гранулирующие и улучшающие распадаемость агенты; связывающие агенты; смазывающие агенты; консерванты; разлагаемые в физиологических условиях композиции, такие как желатин; водные среды и растворители; масляные среды и растворители; суспендирующие агенты; диспергирующие или смачивающие агенты; эмульгирующие агенты, смягчающие средства; буферы; соли; загустители; наполнители; антиоксиданты; стабилизаторы; и фармацевтически приемлемые полимерные или гидрофобные материалы и другие ингредиенты, известные в данной области и описанные, например, в издании Genaro, ed., 1985, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., которое включено в настоящий документ путем ссылки.

[0041] Термин «регулятор тоничности» означает эксципиент с низкой молекулярной массой, который включен в состав для обеспечения изотоничности. В качестве регулятора тоничности могут выступать дисахарид, такой как трегалоза или сахароза, многоатомный спирт, такой как сорбит или маннит, моносахарид, такой как глюкоза, и соль, такая как хлорид натрия.

[0042] Термин «полисахарид» означает полимер, состоящий из более чем двух мономерных молекул сахарида. Мономеры могут быть одинаковыми или разными.

[0043] «Стабилизирующий агент» или «стабилизатор» означает вещество, которое стабилизирует активный ингредиент в виде клостридиального токсина таким образом, что эффективность фармацевтической композиции возрастает по сравнению с нестабилизированной композицией.

[0044] «Стабилизаторы» могут включать в себя эксципиенты и могут включать в себя белковые и небелковые молекулы.

[0045] «Терапевтический состав» означает состав, который можно применять для лечения и, следовательно, облегчения расстройства или заболевания, такого как, например, расстройство или заболевание, характеризующееся гиперактивностью (т.е. спастичностью) периферической мышцы.

[0046] При использовании в настоящем документе аббревиатура TEM является синонимом термина «модулятор нацеленного экзоцитоза» или «перенацеленная эндопептидаза». Как правило, TEM содержит ферментативный домен из легкой цепи клостридиального токсина, домен транслокации из тяжелой цепи клостридиального токсина и нацеливающий домен. Нацеливающий домен TEM приводит к изменению способности к нацеливанию на клетки, что обеспечивает нацеливание молекулы на рецептор, отличный от нативного рецептора клостридиального токсина, используемого клостридиальным токсином природного происхождения. Эта перенацеленная способность достигается путем замены связывающего домена клостридиального токсина природного происхождения нацеливающим доменом, имеющим связывающую активность по отношению к рецептору неклостридиального токсина. Несмотря на связывание с рецептором неклостридиального токсина, TEM проходит все остальные этапы процесса интоксикации, включая интернализацию комплекса TEM/рецептор в цитоплазму, формирование поры в мембране везикулы и двухцепочечной молекулы, транслокацию ферментативного домена в цитоплазму и оказание протеолитического воздействия на компонент комплекса SNARE клетки-мишени.

[0047] Термин «местное введение» исключает системное введение нейротоксина. Другими словами, и в отличие от стандартных терапевтических трансдермальных способов, местное введение ботулотоксина не приводит к попаданию значительных количеств, например большей части, нейротоксина в кровеносную систему пациента.

[0048] Термин «лечение» означает временно или постоянное ослабление (или устранение) по меньшей мере одного симптома состояния или расстройства, такого как, например, морщины, спастичность, депрессия, боль (например, головная боль), гиперактивность мочевого пузыря или т.п.

[0049] Термин «вариант» означает клостридиальный нейротоксин, такой как ботулотоксин дикого типа серотипа A, B, C, D, E, F или G, который модифицирован путем замены, модификации, добавления или удаления по меньшей мере одной аминокислоты по сравнению с ботулотоксином дикого типа, который распознается клеткой-мишенью, подвергается интернализации в клетку-мишень и каталитически расщепляет белок SNARE (рецептор SNAP (растворимый белок присоединения к NSF)) в клетке-мишени.

[0050] Пример варианта нейротоксического компонента может включать в себя вариант легкой цепи ботулотоксина, в котором одна или более аминокислот замещены, модифицированы, удалены и/или добавлены. Такой вариант легкой цепи может обладать такой же или лучшей способностью предотвращать экзоцитоз, например высвобождение везикул с нейромедиаторами. Кроме того, биологический эффект варианта может быть снижен по сравнению с исходным химическим веществом. Например, вариант легкой цепи ботулотоксина типа A с удаленной аминокислотной последовательностью может иметь более короткую биологическую персистенцию по сравнению с исходной (или нативной) легкой цепью ботулотоксина типа A.

Фармацевтические композиции

[0051] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения включают фармацевтическую композицию, содержащую (или состоящую из или по существу состоящую из) активный ингредиент в виде клостридиального токсина, такого как ботулотоксин, дисахарид, поверхностно-активное вещество и антиоксидант.

[0052] В аспектах настоящих фармацевтических композиций частично предложен активный ингредиент в виде клостридиального токсина. При использовании в настоящем документе термин «активный ингредиент в виде клостридиального токсина» относится к терапевтически эффективной концентрации активного ингредиента в виде клостридиального токсина, такого как, например, комплекс клостридиального токсина, клостридиальный токсин, модифицированный клостридиальный токсин или перенацеленный клостридиальный токсин. Используемый в настоящем документе термин «терапевтически эффективная концентрация» является синонимом термину «терапевтически эффективное количество», «эффективное количество», «эффективная доза» и «терапевтически эффективная доза» и относится к минимальной дозе активного ингредиента в виде клостридиального токсина, необходимой для достижения желаемого терапевтического эффекта, и включает в себя дозу, достаточную для уменьшения симптома, связанного с подвергаемым лечению заболеванием. В аспектах настоящего варианта осуществления терапевтически эффективная концентрация активного ингредиента в виде клостридиального токсина облегчает симптом, связанный с подвергаемым лечению заболеванием, например, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 100%. В других аспектах настоящего варианта осуществления терапевтически эффективная концентрация активного ингредиента в виде клостридиального токсина облегчает симптом, связанный с подвергаемым лечению заболеванием, например, не более чем на 10%, не более чем на 20%, не более чем на 30%, не более чем на 40%, не более чем на 50%, не более чем на 60%, не более чем на 70%, не более чем на 80%, не более чем на 90% или не более чем на 100%.

[0053] Предполагается, что при приготовлении фармацевтических композиций клостридиального токсина, описанных в настоящем документе, может быть добавлено любое количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, при условии, что терапевтически эффективное количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина может быть восстановлено. В аспектах данного варианта осуществления количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, добавляемое в состав, составляет по меньшей мере 0,1 Ед/мл, по меньшей мере 1,0 Ед/мл, по меньшей мере 10 Ед/мл, по меньшей мере 50 Ед/мл, по меньшей мере 100 Ед/мл, по меньшей мере 200 Ед/мл или по меньшей мере 1000 Ед/мл. В других аспектах данного варианта осуществления количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, добавляемое в состав, составляет не более 0,1 Ед/мл, не более 1,0 Ед/мл, не более 10 Ед/мл, не более 50 Ед/мл, не более 100 Ед/мл, не более 200 Ед/мл или не более 1000 Ед/мл. В дополнительных других аспектах данного варианта осуществления количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, добавляемое в состав, составляет от около 0,1 Ед/мл до около 1000 Ед/мл или от около 1,0 Ед/мл до около 1000 Ед/мл. В еще одних аспектах данного варианта осуществления количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, добавляемое в состав, составляет от около 0,001 Ед/мл до около 100 Ед/мл, от около 0,01 Ед/мл до около 100 Ед/мл, от около 0,1 Ед/мл до около 100 Ед/мл или от около 1,0 Ед/мл до около 100 Ед/мл. При использовании в настоящем документе термин «единица» или «Ед» относится к дозе LD50, определяемой как количество клостридиального токсина, комплекса клостридиального токсина или модифицированного клостридиального токсина, которое привело к смерти 50% мышей, которым вводили клостридиальный токсин, комплекс клостридиального токсина или модифицированный клостридиальный токсин. В настоящем документе термин «около» при количественной оценке величины указанного элемента, числа, процента или срока означает диапазон плюс или минус десять процентов от величины указанного элемента, процента, параметра или срока.

[0054] В других аспектах данного варианта осуществления количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, добавляемое в состав, составляет по меньшей мере 1,0 пг, по меньшей мере 10 пг, по меньшей мере 100 пг, по меньшей мере 1,0 нг, по меньшей мере 10 нг, по меньшей мере 100 нг, по меньшей мере 1,0 мкг, по меньшей мере 10 мкг, по меньшей мере 100 мкг или по меньшей мере 1,0 мг. В дополнительных других аспектах данного варианта осуществления количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, добавляемое в состав, составляет не более 1,0 пг, не более 10 пг, не более 100 пг, не более 1,0 нг, не более 10 нг, не более 100 нг, не более 1,0 мкг, не более 10 мкг, не более 100 мкг или не более 1,0 мг. В дополнительных других аспектах данного варианта осуществления количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, добавляемое в состав, составляет от около 1,0 пг до около 10 мкг, от около 10 пг до около 10 мкг, от около 100 пг до около 10 мкг, от около 1,0 нг до около 10 мкг, от около 10 нг до около 10 мкг или от около 100 нг до около 10 мг. В еще одних аспектах данного варианта осуществления количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, добавляемое в состав, составляет от около 1,0 пг до около 1,0 мкг, от около 10 пг до около 1,0 мкг, от около 100 пг до около 1,0 мкг, от около 1,0 нг до около 1,0 мкг, от около 10 нг до около 1,0 мкг или от около 100 нг до около 1,0 мкг. В дополнительных аспектах данного варианта осуществления количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, добавляемое в состав, составляет от около 1,0 пг до около 5,0 мкг, от около 10 пг до около 5,0 мкг, от около 100 пг до около 5,0 мкг, от около 1,0 нг до около 5,0 мкг, от около 10 нг до около 5,0 мкг или от около 100 нг до около 5,0 мкг. В дополнительных аспектах данного варианта осуществления количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина, добавляемое в состав, составляет от около 1,0 пг до около 10 мкг, от около 10 пг до около 10 мкг, от около 100 пг до около 10 мкг, от около 1,0 нг до около 10 мкг, от около 10 нг до около 10 мкг или от около 100 нг до около 10 мкг.

[0055] В аспектах настоящего изобретения фармацевтическая композиция клостридиального токсина содержит BoNT/A, BoNT/B, BoNT/C₁, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, TeNT, BaNT или BuNT. В другом варианте осуществления в качестве активного ингредиента в виде клостридиального токсина фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином содержит вариант клостридиального токсина. В некоторых аспектах настоящего изобретения фармацевтическая композиция клостридиального токсина содержит вариант клостридиального токсина природного происхождения или вариант клостридиального токсина неприродного происхождения. В других аспектах настоящего варианта осуществления фармацевтическая композиция клостридиального токсина содержит вариант BONT/A, вариант BONT/B, вариант BoNT/C₁, вариант BONT/D, вариант BONT/E, вариант BONT/F, вариант BONT/G, вариант TeNT, вариант BaNT или вариант BuNT, при этом вариант представляет собой вариант природного происхождения или вариант неприродного происхождения.

[0056] В аспектах настоящих фармацевтических композиций в качестве активного ингредиента в виде клостридиального токсина частично предложен комплекс клостридиального токсина. Используемый в настоящем документе термин «комплекс клостридиального токсина» относится к комплексу, содержащему клостридиальный токсин и связанные белки NAP, такому как, например, комплекс ботулотоксина, комплекс столбнячного токсина, комплекс токсина Clostridium baratii и комплекс токсина Clostridium butyricum. Не имеющие ограничительного характера примеры комплексов клостридиального токсина включают в себя комплексы, продуцируемые Clostridium botulinum, такие как, например, комплекс BoNT/A размером 900 кДа, комплекс BoNT/A размером 500 кДа, комплекс BoNT/A размером 300 кДа, комплекс BoNT/B размером 500 кДа, комплекс BoNT/C1 размером 500 кДа, комплекс BoNT/D размером 500 кДа, комплекс BoNT/D размером 300 кДа, комплекс BoNT/E размером 300 кДа и комплекс BoNT/F размером 300 кДа. Комплексы клостридиального токсина могут быть очищены с помощью способов, описанных в публикациях Schantz, выше (1992); Hui Xiang et al, Animal Product Free System and Process for Purifying a Botulinum Toxin, и патенте США №7,354,740, содержание каждой из которых полностью включено в настоящий документ путем ссылки. Комплексы клостридиальных токсинов можно приобрести, например, в компании List Biological Laboratories, Inc. (г.Кэмпбелл, штат Калифорния), Центре прикладной микробиологии и исследований (г.Портон-Даун, Великобритания), Wako (г.Осака, Япония) и Sigma Chemicals (г.Сент-Луис, штат Миссури).

[0057] В аспектах настоящих фармацевтических композиций частично предложен небелковый эксципиент. При использовании в настоящем документе термин «небелковый эксципиент» относится к любому эксципиенту, который не является полипептидом и содержит по меньшей мере пятнадцать аминокислот. Предусматривается, что любой небелковый эксципиент может использоваться для получения фармацевтических композиций клостридиального токсина, описанных в настоящем документе, при условии, что терапевтически эффективное количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина восстанавливается с помощью данного небелкового эксципиента.

[0058] В аспектах настоящих фармацевтических композиций частично предложен сахар. При использовании в настоящем документе термин «сахар» относится к соединению, содержащему от одного до 10 моносахаридных звеньев, например моносахариду, дисахариду, триглицериду и олигосахариду, содержащему от четырех до десяти моносахаридных звеньев. Предусматривается, что для получения фармацевтических композиций клостридиального токсина, описанных в настоящем документе, можно использовать любой сахар, при условии, что терапевтически эффективное количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина восстанавливается с помощью данного сахара. Моносахариды представляют собой полигидроксиальдегиды или полигидроксикетоны с тремя или более атомами углерода, включая альдозы, диальдозы, альдокетозы, кетозы и дикетозы, а также циклические формы, дезоксисахара и аминокислоты и их производные, при условии, что исходный моносахарид имеет (потенциальную) карбонильную группу. Моносахариды включают в себя триозы, такие как глицеральдегид и дигидроксиацетон; тетрозы, такие как эритроза, эритрулоза и треоза; пентозы, такие как арабиноза, ликсоза, рибоза, рибулоза, ксилоза, ксилулоза; гексозы, такие как аллоза, алтроза, фруктоза, фукоза, галактоза, глюкоза, гулоза, идоза, манноза, псикоза, рамноза, сорбоза, тагатоза, талоза и трегалоза; гептозы, такие как седогептулоза и манногептулоза; октоозы, такие как октулоза и 2-кето-3-дезоксиманнооктонат; нонозы, такие как сиалоза; и декоза. Олигосахариды представляют собой соединения, в которых по меньшей мере два моносахаридных звена соединены гликозидными связями. В зависимости от числа звеньев они называются дисахаридами, трисахаридами, тетрасахаридами, пентасахаридами, гексасахаридами, гептасахаридами, октасахаридами, нонасахаридами, декасахаридами и т.д. Олигосахарид может быть неразветвленным, разветвленным или циклическим. Типичные дисахариды включают в себя, без ограничений, сахарозу, лактозу, мальтозу, трегалозу, целлобиозу, гентиобиозу, койибиозу, ламинарибиозу, маннобиозу, мелибиозу, нигерозу, рутинозу и ксилобиозу. Типичные трисахариды включают, без ограничений, рафинозу, акарбозу, мальтотриозу и мелезитозу. Другие не имеющие ограничительного характера примеры специфического применения сахарных эксципиентов описаны, например, в публикациях Ansel, выше (1999); Gennaro, выше (2000); Hardman, выше (2001); и Rowe, выше (2003), содержание каждой из которых полностью включено в настоящий документ путем ссылки

[0059] В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином содержит сахар. В аспектах настоящего варианта осуществления фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином содержит моносахарид. В других аспектах настоящего варианта осуществления фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином содержит дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, пентасахарид, гексасахарид, гептасахарид, октасахарид, нонасахарид или декасахарид. В дополнительных других аспектах настоящего варианта осуществления фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином содержит олигосахарид, содержащий от двух до десяти моносахаридных звеньев.

[0060] Предусматривается, что для получения фармацевтических композиций клостридиального токсина, описанных в настоящем документе, можно использовать любое количество сахара, при условии, что терапевтически эффективное количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина восстанавливается с помощью данного количества сахара. В аспектах настоящего варианта осуществления количество сахара, добавляемое в состав, составляет около 0,1% (масс.), около 0,5% (масс.), около 1,0% (масс.), около 1,5% (масс.), около 2,0% (масс.), около 2,5% (масс.), около 3,0% (масс.), около 3,5% (масс.), около 4,0% (масс.), около 4,5% (масс.), около 5,0% (масс.), около 5,5% (масс.), около 6,0% (масс.), около 6,5% (масс.), около 7,0% (масс.), около 7,5% (масс.), около 8,0% (масс.), около 8,5% (масс.), около 9,0% (масс.), около 9,5% (масс.), около 10% (масс.), около 15% (масс.), около 20% (масс.), около 25% (масс.), около 30% (масс.) или около 35% (масс.). В других аспектах настоящего варианта осуществления количество сахара, добавляемое в состав, составляет по меньшей мере 0,1% (масс.), по меньшей мере 0,5% (масс.), по меньшей мере 1,0% (масс.), по меньшей мере 1,5% (масс.), по меньшей мере 2,0% (масс.), по меньшей мере 2,5% (масс.), по меньшей мере 3,0% (масс.), по меньшей мере 3,5% (масс.), по меньшей мере 4,0% (масс.), по меньшей мере 4,5% (масс.), по меньшей мере 5,0% (масс.), по меньшей мере 5,5% (масс.), по меньшей мере 6,0% (масс.), по меньшей мере 6,5% (масс.), по меньшей мере 7,0% (масс.), по меньшей мере 7,5% (масс.), по меньшей мере 8,0% (масс.), по меньшей мере 8,5% (масс.), по меньшей мере 9,0% (масс.), по меньшей мере 9,5% (масс.), по меньшей мере 10% (масс.), по меньшей мере 15% (масс.), по меньшей мере 20% (масс.), по меньшей мере 25% (масс.), по меньшей мере 30% (масс.) или по меньшей мере 35% (масс.). В дополнительных других аспектах настоящего варианта осуществления количество сахара, добавляемое в состав, составляет не более 0,1% (масс.), не более 0,5% (масс.), не более 1,0% (масс.), не более 1,5% (масс.), не более 2,0% (масс.), не более 2,5% (масс.), не более 3,0% (масс.), не более 3,5% (масс.), не более 4,0% (масс.), не более 4,5% (масс.), не более 5,0% (масс.), не более 5,5% (масс.), не более 6,0% (масс.), не более 6,5% (масс.), не более 7,0% (масс.), не более 7,5% (масс.), не более 8,0% (масс.), не более 8,5% (масс.), не более 9,0% (масс.), не более 9,5% (масс.), не более 10% (масс.), не более 15% (масс.), не более 20% (масс.), не более 25% (масс.), не более 30% (масс.) или не более 35% (масс.).

[0061] В одном варианте осуществления данная фармацевтическая композиция клостридиального токсина содержит дисахарид. Типичные дисахариды включают в себя, без ограничений, сахарозу, лактозу, мальтозу, трегалозу, целлобиозу, гентиобиозу, койибиозу, ламинарибиозу, маннобиозу, мелибиозу, нигерозу, рутинозу и ксилобиозу. В аспектах настоящего варианта осуществления фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином содержит сахарозу. В одном конкретном варианте осуществления фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином содержит трегалозу. В аспектах настоящего варианта осуществления количество дисахарида, добавляемое в состав, составляет около 0,1% (масс.), около 0,5% (масс.), около 1,0% (масс.), около 1,5% (масс.), около 2,0% (масс.), около 2,5% (масс.), около 3,0% (масс.), около 3,5% (масс.), около 4,0% (масс.), около 4,5% (масс.), около 5,0% (масс.), около 5,5% (масс.), около 6,0% (масс.), около 6,5% (масс.), около 7,0% (масс.), около 7,5% (масс.), около 8,0% (масс.), около 8,5% (масс.), около 9,0% (масс.), около 9,5% (масс.), около 10% (масс.), около 15% (масс.), около 20% (масс.), около 25% (масс.), около 30% (масс.) или около 35% (масс.).

[0062] В аспектах настоящих фармацевтических композиций частично предложено поверхностно-активное вещество. При использовании в настоящем документе термин «поверхностно-активное вещество» относится к природному или синтетическому амфифильному соединению. Поверхностно-активное вещество может быть неионным, цвиттер-ионным или ионным. Предусматривается, что для получения фармацевтических композиций клостридиального токсина, описанных в настоящем документе, можно использовать любое поверхностно-активное вещество, при условии, что терапевтически эффективное количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина восстанавливается с помощью данного поверхностно-активного вещества. Не имеющие ограничительного характера примеры поверхностно-активных веществ включают полисорбаты, такие как полисорбат 20 (TWEEN^® 20), полисорбат 40 (TWEEN^® 40), полисорбат 60 (TWEEN^® 60), полисорбат 61 (TWEEN^® 61), полисорбат 65 (TWEEN^® 65), полисорбат 80 (TWEEN^® 80) и полисорбат 81 (TWEEN^® 81); полоксамеры (сополимеры полиэтилена и полипропилена), такие как полоксамер 124 (PLURONIC^® L44), полоксамер 181 (PLURONIC^® L61), полоксамер 182 (PLURONIC^® L62), полоксамер 184 (PLURONIC^® L64), полоксамер 188 (PLURONIC^® F68), полоксамер 237 (PLURONIC^® F87), полоксамер 338 (PLURONIC^® L108), полоксамер 407 (PLURONIC^® F127), полиоксиэтиленгликоль додецил эфиры, такие как BRIJ^® 30 и BRIJ^® 35; 2-додекоксиэтанол (LUBROL^®-PX); полиоксиэтиленоктилфенилэфир (TRITON^®X-100); додецилсульфат натрия (SDS); солютол HS15; 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-l-пропансульфонат (CHAPS); 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-2-гидрокси-l-пропансульфонат (CHAPSO); монолаурат сахарозы; и холат натрия. Другие не имеющие ограничительного характера примеры эксципиентов, представляющих собой поверхностно-активное вещество, описаны, например, в публикациях Ansel, выше (1999); Gennaro, выше (2000); Hardman, выше (2001); и Rowe, выше (2003), содержание каждой из которых полностью включено в настоящий документ путем ссылки.

[0063] Таким образом, в одном варианте осуществления фармацевтическая композиция клостридиального токсина содержит поверхностно-активное вещество. В аспектах настоящего изобретения фармацевтическая композиция клостридиального токсина содержит полисорбат, полоксамер, полиоксиэтиленгликоль додецил эфир, 2-додекоксиэтанол, полиоксиэтиленоктилфенилэфир, додецилсульфат натрия, 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-l-пропансульфонат, 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-2-гидрокси-l-пропансульфонат, монолаурат сахарозы; или холат натрия.

[0064] Предусматривается, что для получения фармацевтических композиций клостридиального токсина, описанных в настоящем документе, можно использовать любое количество поверхностно-активного вещества, при условии, что терапевтически эффективное количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина восстанавливается с помощью данного количества поверхностно-активного вещества. В аспектах настоящего варианта осуществления количество поверхностно-активного вещества, добавляемое в состав, составляет около 0,01% (масс.), около 0,02% (масс.), около 0,03% (масс.), около 0,04% (масс.), около 0,05% (масс.), около 0,06% (масс.), около 0,07% (масс.), около 0,08% (масс.), около 0,09% (масс.), около 0,1% (масс.), около 0,5% (масс.), около 1,0% (масс.), около 1,5% (масс.), около 2,0% (масс.), около 2,5% (масс.), около 3,0% (масс.), около 3,5% (масс.), около 4,0% (масс.), около 4,5% (масс.), около 5,0% (масс.), около 5,5% (масс.), около 6,0% (масс.), около 6,5% (масс.), около 7,0% (масс.), около 7,5% (масс.), около 8,0% (масс.), около 8,5% (масс.), около 9,0% (масс.), около 9,5% (масс.), около 10% (масс.), около 15% (масс.), около 20% (масс.), около 25% (масс.), около 30% (масс.) или около 35% (масс.). В других аспектах настоящего варианта осуществления количество поверхностно-активного вещества, добавляемое в состав, составляет по меньшей мере 0,01% (масс.), по меньшей мере 0,02% (масс.), по меньшей мере 0,03% (масс.), по меньшей мере 0,04% (масс.), по меньшей мере 0,05% (масс.), по меньшей мере 0,06% (масс.), по меньшей мере 0,07% (масс.), по меньшей мере 0,08% (масс.), по меньшей мере 0,09% (масс.), по меньшей мере 0,1% (масс.), по меньшей мере 0,5% (масс.), по меньшей мере 1,0% (масс.), по меньшей мере 1,5% (масс.), по меньшей мере 2,0% (масс.), по меньшей мере 2,5% (масс.), по меньшей мере 3,0% (масс.), по меньшей мере 3,5% (масс.), по меньшей мере 4,0% (масс.), по меньшей мере 4,5% (масс.), по меньшей мере 5,0% (масс.), по меньшей мере 5,5% (масс.), по меньшей мере 6,0% (масс.), по меньшей мере 6,5% (масс.), по меньшей мере 7,0% (масс.), по меньшей мере 7,5% (масс.), по меньшей мере 8,0% (масс.), по меньшей мере 8,5% (масс.), по меньшей мере 9,0% (масс.), по меньшей мере 9,5% (масс.), по меньшей мере 10% (масс.), по меньшей мере 15% (масс.), по меньшей мере 20% (масс.), по меньшей мере 25% (масс.), по меньшей мере 30% (масс.) или по меньшей мере 35% (масс.). В дополнительных других аспектах настоящего варианта осуществления количество поверхностно-активного вещества, добавляемое в состав, составляет не более 0,01% (масс.), не более 0,02% (масс.), не более 0,03% (масс.), не более 0,04% (масс.), не более 0,05% (масс.), не более 0,06% (масс.), не более 0,07% (масс.), не более 0,08% (масс.), не более 0,09% (масс.), не более 0,1% (масс.), не более 0,5% (масс.), не более 1,0% (масс.), не более 1,5% (масс.), не более 2,0% (масс.), не более 2,5% (масс.), не более 3,0% (масс.), не более 3,5% (масс.), не более 4,0% (масс.), не более 4,5% (масс.), не более 5,0% (масс.), не более 5,5% (масс.), не более 6,0% (масс.), не более 6,5% (масс.), не более 7,0% (масс.), не более 7,5% (масс.), не более 8,0% (масс.), не более 8,5% (масс.), не более 9,0% (масс.), не более 9,5% (масс.), не более 10% (масс.), не более 15% (масс.), не более 20% (масс.), не более 25% (масс.), не более 30% (масс.) или не более 35% (масс.).

[0065] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция клостридиального токсина содержит полоксамер. Полоксамеры, которые можно использовать с настоящей фармацевтической композицией, включают полоксамер 124 (PLURONIC^® L44), полоксамер 181 (PLURONIC^® L61), полоксамер 182 (PLURONIC^® L62), полоксамер 184 (PLURONIC^® L64), полоксамер 188 (PLURONIC^® F68), полоксамер 237 (PLURONIC^® F87), полоксамер 338 (PLURONIC^® L108), полоксамер 407 (PLURONIC^® F127). В некоторых вариантах осуществления более предпочтительным вариантом может быть полоксамер 188.

[0066] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином содержит полисорбат. Полисорбаты, которые можно использовать с настоящей фармацевтической композицией, включают в себя полисорбат 20 (TWEEN^® 20), полисорбат 40 (TWEEN^® 40), полисорбат 60 (TWEEN^® 60), полисорбат 61 (TWEEN^® 61), полисорбат 65 (TWEEN^® 65), полисорбат 80 (TWEEN^® 80) и полисорбат 81 (TWEEN^® 81). В некоторых вариантах осуществления полисорбат 20 может быть более предпочтительным, чем другие полисорбаты.

[0067] В аспектах настоящих фармацевтических композиций частично предложен по меньшей мере антиоксидант. Не имеющие ограничительного характера примеры антиоксиданта включают, без ограничений, метионин, цистеин, N-ацетилцистеин (NAC), метабисульфит натрия, тиосульфат натрия, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, витамин E и аналоги, включая Trolox C; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА (натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты), DPTA (диэтилентриаминпентауксусная кислота) или бисамид DPTA, DTPA кальция и бисамид CaNaDPTA; или их комбинации. В аспектах настоящего варианта осуществления количество антиоксиданта, добавляемое в состав, находится в диапазоне от около 0,01% (масс.) до около 0,10% (масс.).

[0068] Дополнительно предполагается, что фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином, описанная в настоящем документе, может необязательно включать в себя, без ограничений, другие фармацевтически приемлемые компоненты (или фармацевтические компоненты), включая, без ограничений, буферы, консерванты, регуляторы тоничности, соли, антиоксиданты, регуляторы осмоляльности, эмульгаторы, подсластители или ароматизаторы и т.п. Для получения фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, можно использовать различные буферы и средства регулировки рН при условии, что полученный препарат является фармацевтически приемлемым. Такие буферы включают, без ограничений, ацетатные буферы, боратные буферы, цитратные буферы, фосфатные буферы, нейтральный солевой буфер и фосфатно-солевой буфер. Следует понимать, что для регулировки pH фармацевтической композиции при необходимости можно использовать кислоты или основания. Предусматривается, что для получения фармацевтических композиций клостридиального токсина, описанных в настоящем документе, можно использовать буферный раствор с любым уровнем рН, при условии, что терапевтически эффективное количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина восстанавливается с помощью буферного раствора с данным эффективным уровнем рН. В одном аспекте данного варианта осуществления эффективный уровень pH составляет по меньшей мере около 5,0, по меньшей мере около 5,5, по меньшей мере около 6,0, по меньшей мере около 6,5, по меньшей мере около 7,0 или по меньшей мере около 7,5. В другом аспекте данного варианта осуществления эффективный уровень pH составляет не более около 5,0, не более около 5,5, не более около 6,0, не более около 6,5, не более около 7,0 или не более около 7,5. В еще одном аспекте данного варианта осуществления эффективный уровень pH составляет от около 5,0 до около 8,0, эффективный уровень pH составляет от около 5,0 до около 7,0, эффективный уровень pH составляет от около 5,0 до около 6,0, эффективный уровень pH составляет от около 5,5 до около 8,0, эффективный уровень pH составляет от около 5,5 до около 7,0, эффективный уровень pH составляет от около 5,5 до около 5,0, составляет от около 5,5 до около 7,5, эффективный уровень pH составляет от около 5,5 до около 6,5.

[0069] Фармацевтические композиции, описанные в настоящем документе, могут иметь pH от около 5 до около 8 при разведении или введении. В некоторых вариантах осуществления композиция имеет значение рН ниже 8, такое как, например, 7,9, или 7,8, или 7,7, или 7,6, или 7,5, или 7,4, или 7,3, или 7,2, или 7,1, или 7,0, или 6,9, или 6,8, или 6,7, или 6,6, или 6,5, или 6,4, или 6,3, или 6,2, или 6,1, или 6,0, или 5,9, или 5,8, или 5,7, или 5,6, или 5,5, или 5,4, или 5,3, или 5,2, или 5,1, или т.п.В некоторых вариантах осуществления pH находится в диапазоне от 5 до 7.

[0070] Предусматривается, что для получения фармацевтических композиций клостридиального токсина, описанных в настоящем документе, можно использовать любую концентрацию буфера, при условии, что терапевтически эффективное количество активного ингредиента в виде клостридиального токсина восстанавливается с помощью данной эффективной концентрации буфера. В аспектах настоящего варианта осуществления эффективная концентрация буфера составляет по меньшей мере 0,1 мМ, по меньшей мере 0,2 мМ, по меньшей мере 0,3 мМ, по меньшей мере 0,4 мМ, по меньшей мере 0,5 мМ, по меньшей мере 0,6 мМ, по меньшей мере 0,7 мМ, по меньшей мере 0,8 мМ или по меньшей мере 0,9 мМ. В других аспектах настоящего варианта осуществления эффективная концентрация буфера составляет по меньшей мере 1,0 мМ, по меньшей мере 2,0 мМ, по меньшей мере 3,0 мМ, по меньшей мере 4,0 мМ, по меньшей мере 5,0 мМ, по меньшей мере 6,0 мМ, по меньшей мере 7,0 мМ, по меньшей мере 8,0 мМ или по меньшей мере 9,0 мМ. В еще одних аспектах настоящего варианта осуществления эффективная концентрация буфера составляет по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 20 мМ, по меньшей мере 30 мМ, по меньшей мере 40 мМ, по меньшей мере 50 мМ, по меньшей мере 60 мМ, по меньшей мере 70 мМ, по меньшей мере 80 мМ или по меньшей мере 90 мМ. В дополнительных аспектах настоящего варианта осуществления эффективная концентрация буфера составляет по меньшей мере 100 мМ, по меньшей мере 200 мМ, по меньшей мере 300 мМ, по меньшей мере 400 мМ, по меньшей мере 500 мМ, по меньшей мере 600 мМ, по меньшей мере 700 мМ, по меньшей мере 800 мМ или по меньшей мере 900 мМ. В дополнительных других аспектах настоящего варианта осуществления эффективная концентрация буфера составляет не более 0,1 мМ, не более 0,2 мМ, не более 0,3 мМ, не более 0,4 мМ, не более 0,5 мМ, не более 0,6 мМ, не более 0,7 мМ, не более 0,8 мМ или не более 0,9 мМ. В дополнительных других аспектах настоящего варианта осуществления эффективная концентрация буфера составляет не более 1,0 мМ, не более 2,0 мМ, не более 3,0 мМ, не более 4,0 мМ, не более 5,0 мМ, не более 6,0 мМ, не более 7,0 мМ, не более 8,0 мМ или не более 9,0 мМ. В дополнительных других аспектах настоящего варианта осуществления эффективная концентрация буфера составляет не более 10 мМ, не более 20 мМ, не более 30 мМ, не более 40 мМ, не более 50 мМ, не более 60 мМ, не более 70 мМ, не более 80 мМ или не более 90 мМ. В дополнительных других аспектах настоящего варианта осуществления эффективная концентрация буфера составляет не более 100 мМ, не более 200 мМ, не более 300 мМ, не более 400 мМ, не более 500 мМ, не более 600 мМ, не более 700 мМ, не более 800 мМ или не более 900 мМ. В еще одних аспектах настоящего варианта осуществления эффективная концентрация буфера составляет от около 0,1 мМ до около 900 мМ, от 0,1 мМ до около 500 мМ, от 0,1 мМ до около 100 мМ, от 0,1 мМ до около 90 мМ, от 0,1 мМ до около 50 мМ, от 1,0 мМ до около 900 мМ, от 1,0 мМ до около 500 мМ, от 1,0 мМ до около 100 мМ, от 1,0 мМ до около 90 мМ или от 1,0 мМ до около 50 мМ.

[0071] Варианты осуществления настоящего изобретения можно применять на практике с композицией, которая содержит множество серотипов ботулотоксина, таких как серотипы ботулотоксина, выбранные из группы, состоящей из серотипов ботулотоксина A, B, C₁, D, E, F и G. В некоторых вариантах осуществления могут использоваться очищенные ботулотоксины. В других вариантах осуществления можно использовать модифицированные ботулотоксины.

[0072] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию клостридиального токсина можно приготовить в виде лиофилизированного (т.е. высушенного сублимацией) или высушенного в вакууме порошка, который перед введением пациенту может быть разведен подходящей жидкостью, такой как солевой раствор или вода. В альтернативных вариантах осуществления фармацевтическую композицию можно приготовить в виде водного раствора или суспензии.

[0073] В некоторых вариантах осуществления твердая фармацевтическая композиция клостридиального токсина содержит ботулотоксин, регулятор тоничности, полоксамер и/или полисорбат и антиоксидант. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином содержит ботулотоксин. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином содержит трегалозу. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция с клостридиальным токсином содержит полоксамер 188 или полисорбат 20. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит ЭДТА или аналог ЭДТА. В альтернативных вариантах осуществления композиция содержит метионин и/или NAC. В некоторых аспектах этих альтернативных вариантов осуществления композиция дополнительно содержит ЭДТА или аналог ЭДТА. В некоторых вариантах осуществления композиция дополнительно содержит буферный агент. В одном варианте осуществления композиция содержит гистидиновый буфер. В некоторых вариантах осуществления относительные весовые количества трегалозы, полоксамера и метионина находятся в пределах следующих диапазонов соответственно: от 1 до 10%; от 0,5 до 5% и от 0,1 до 0,3%. В некоторых вариантах осуществления относительные весовые количества трегалозы, полисорбата и метионина находятся в пределах следующих диапазонов соответственно: от 1 до 10%; от 0,02% до 0,06%; и от 0,1 до 0,3%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество ЭДТА или аналога ЭДТА составляет от около 0,01 до 0,10%. В некоторых вариантах осуществления относительное весовое количество NAC находится в диапазоне от 0,01 до 0,5%.

[0074] В аспектах этих вариантов осуществления фармацевтическую композицию с клостридиальным токсином готовят в виде твердой (т.е. лиофилизированной или высушенной вакуумом) композиции. В некоторых вариантах осуществления твердая фармацевтическая композиция содержит NAC в относительном весовом количестве 0,01-0,05%. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит ЭДТА или аналог ЭДТА. В альтернативных вариантах осуществления твердая фармацевтическая композиция содержит метионин и ЭДТА или аналог ЭДТА.

[0075] В альтернативном аспекте этих вариантов осуществления фармацевтическую композицию с клостридиальным токсином готовят в виде жидкости. В некоторых вариантах осуществления жидкая фармацевтическая композиция содержит NAC в относительном весовом количестве 0,1-0,5%. В некоторых вариантах осуществления жидкая фармацевтическая композиция содержит NAC и ЭДТА или аналог ЭДТА. В некоторых вариантах осуществления жидкая фармацевтическая композиция содержит гистидиновый буфер. В некоторых вариантах осуществления жидкая фармацевтическая композиция имеет pH от 5 до 7.

Способы лечения

[0076] В вариантах осуществления изобретения предложены способы лечения заболеваний, расстройств, состояний и т.п., включающие этап введения нуждающемуся в этом субъекту фармацевтического состава изобретения в количестве, достаточном для улучшения функционирования пациента. В некоторых вариантах осуществления заболевания представляют собой нейромышечные заболевания, такие как, например, заболевания, которые поражают мышцы и управляющие ими нервы, такие как, например, гиперактивный мочевой пузырь и т.п. Некоторые варианты осуществления относятся к лечению боли, например лечению головной боли, или боли в спине, или боли в мышцах, или т.п. В некоторых вариантах осуществления способы изобретения включают лечение психологических расстройств, включая, например, депрессию, тревожность и т.п.

[0077] Композиции и способы изобретения могут использоваться для лечения, уменьшения симптомов и/или профилактики, например, ахалазии, анальной трещины, анизмуса, блефароспазма, церебрального паралича, цервикальной дистонии, цервикогенной головной боли, гемифациального спазма, дисгидротической экземы, дисфагии, дисфонии, дискинезии пищевода, пищеводного мышечного кольца, сходящегося косоглазия (младенческого), подъема века, лицевой миокимии, нарушений походки (идиопатического хождения на пальцах ног), генерализованной дистонии, гемифациального спазма, гиперфункциональных морщин на лице (межбровных, лба, в уголках глаз, опущенных вниз углы рта), гипергидроза, недержания (идиопатического или нейрогенного), головной боли из-за избыточного употребления медикаментов, мигрени, миоклонуса, снижения мышечной массы или активности с вовлечением, например, жевательной мышцы или т.п., миофасциального болевого синдрома, симптомов обструкции мочевых путей, панкреатита из-за разделенной поджелудочной железы, болезни Паркинсона, пуборектального синдрома, снижения упругости послеоперационного рубца, гиперсекреции слюны, кисты слюнной железы, паралича шестого нерва, спастичности, нарушений речи/голоса, косоглазия, послеоперационных придатков (глазных), поздней дискинезии, расстройств височно-нижнечелюстного сустава, головной боли напряжения, синдрома верхней апертуры грудной клетки, торсионной дистонии, кривошеи, синдрома Туретта, тремора, боли в шее, связанной с резким движением головы, боли, зуда, воспаления, аллергии, рака и доброкачественных опухолей, лихорадки, ожирения, инфекционных заболеваний, вирусных и бактериальных заболеваний, гипертензии, аритмий сердца, вазоспазма, атеросклероза, эндотелиальной гиперплазии, венозного тромбоза, варикозного расширения вен, афтозного стоматита, повышенного слюноотделения, синдрома височно-нижнечелюстного сустава, гипергидроза, бромгидроза, акне, розовых угрей, гиперпигментации, гипертрофических шрамов, келоидов, костных и кожных мозолей, морщинистости кожи, избыточного образования кожного сала, псориаза, дерматита, аллергического ринита, заложенности носа, стекания слизи по носоглотке, чихания, ушной серы, серозного и гнойного среднего отита, гипертрофии миндалин и аденоидов, шума в ушах, головокружения, вертиго, хрипоты, кашля, апноэ во сне, храпа, глаукомы, конъюнктивита, увеита, косоглазия, болезни Грейвса, избыточного оволосения, облысения, астмы, бронхита, эмфиземы, продукции слизи, плеврита, нарушений коагуляции, миелопролиферативных расстройств, расстройств с вовлечением эозинофилов, нейтрофилов, макрофагов и лимфоцитов, иммунной толерантности и трансплантации, аутоиммунных заболеваний, дисфагии, кислотного рефлюкса, грыжи пищеводного отверстия, гастрита и повышенной кислотности, диареи и запора, геморроя, недержания мочи, гипертрофии предстательной железы, эректильной дисфункции, приапизма и болезни Пейрони, эпидидимита, контрацепции, менструальных болей, для профилактики преждевременных родов, эндометриоза и фибром, артрита, остеоартрита, ревматизма, бурсита, тендинита, тендосиновита, фибромиалгии, припадочных расстройств, спастичности, головной боли и невралгий.

[0078] В некоторых вариантах осуществления пациентам вводят не более 360 Ед ботулотоксина в течение любого 90-дневного периода.

Лечение нервных/мышечных заболеваний

[0079] В одном варианте осуществления нейромышечное заболевание представляет собой гипергидроз. Субъект, страдающий гипергидрозом, например, получает около 59 Ед на одну подмышку, или около 58 Ед на одну подмышку, или около 57 Ед на одну подмышку, или около 56 Ед на одну подмышку, или около 55 Ед на одну подмышку, или около 54 Ед на одну подмышку, или около 53 Ед на одну подмышку, или около 52 Ед на одну подмышку, или около 51 Ед на одну подмышку, или около 50 Ед на одну подмышку, или около 49 Ед на одну подмышку, или около 48 Ед на одну подмышку, или около 47 Ед на одну подмышку, или около 46 Ед на одну подмышку, или около 45 Ед на одну подмышку, или около 44 Ед на одну подмышку, или около 43 Ед на одну подмышку, или около 42 Ед на одну подмышку, или около 41 Ед на одну подмышку, или около 40 Ед на одну подмышку, или около 39 Ед на одну подмышку, или около 38 Ед на одну подмышку, или около 37 Ед на одну подмышку, или около 36 Ед на одну подмышку или менее за один сеанс лечения фармацевтическим составом настоящего изобретения. В одном варианте осуществления суммарно 50 Ед вводят внутрикожно в 10-15 участков, находящихся на расстоянии приблизительно 1-2 см друг от друга.

[0080] В одном варианте осуществления нейромышечное заболевание представляет собой гемифациальный спазм. Субъект, страдающий гемифациальным спазмом, например, получает от около 1,5 до 15 Ед за один сеанс лечения фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере пациенту с гемифациальным спазмом вводят от около 1,5 до 3 Ед, от 1,5 до 5 Ед, от 1,5 до 7 Ед, от 1,5 до 10 Ед, от 1,5 до 12 Ед, от 1,5 до 15 Ед, от 5 до 10 Ед, от 5 до 15 Ед, от 10 до 15 Ед за один сеанс лечения. В еще одном дополнительном примере пациенту с гемифациальным спазмом вводят около 1,5 Ед, около 2 Ед, около 2,5 Ед, около 3 Ед, около 3,5 Ед, около 4 Ед, около 4,5 Ед около 5 Ед, около 5,5 Ед, около 6 Ед, около 6,5 Ед, около 7 Ед, около 7,5 Ед, около 8 Ед, около 8,5 Ед, около 9 Ед, около 9,5 Ед, около 10 Ед, около 10,5 Ед, около 11 Ед, около 11,5 Ед, около 12 Ед, около 12,5 Ед, около 13 Ед, около 13,5 Ед, около 14 Ед, около 14,5 Ед или около 15 Ед. Для достижения терапевтического ответа пациентам с гемифациальным спазмом также можно вводить дозу более 15 Ед за один сеанс лечения. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0081] В одном варианте осуществления нейромышечное заболевание представляет собой цервикальную дистонию. Субъект, страдающий цервикальной дистонией, например, получает от около 15 до 300 Ед за один сеанс лечения фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере пациенту с цервикальной дистонией вводят около 35-250 Ед, 65-200 Ед, 85-175 Ед, 105-160 Ед или 125-145 Ед. В одном варианте осуществления дозы, вводимые в грудино-ключично-сосцевидную мышцу, составляют 100 Ед или менее. Для достижения терапевтического ответа пациентам с цервикальной дистонией также можно вводить дозу более 300 Ед за один сеанс лечения. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0082] В одном варианте осуществления нейромышечное заболевание представляет собой блефароспазм. Субъект, страдающий блефароспазмом, например, принимает около 1,25-2,5 Ед фармацевтического состава настоящего изобретения, вводимого в медиальную и латеральную части круговой мышцы глаза в области верхнего века и латеральную часть круговой мышцы глаза в области нижнего века. В дополнительном примере субъект получает около 1,5 Ед, около 1,6 Ед, около 1,7 Ед, около 1,8 Ед, около 1,9 Ед, около 2,0 Ед, около 2,1 Ед, около 2,2 Ед, около 2,3 Ед, около 2,4 Ед, около 2,5 Ед или более на один участок инъекции. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0083] В одном варианте осуществления нейромышечное заболевание представляет собой косоглазие. Субъект, страдающий косоглазием, например, получает от около 1,25 до 2,5 Ед на один участок инъекции фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере для достижения терапевтического ответа субъект получает около 1,5 Ед, около 1,6 Ед, около 1,7 Ед, около 1,8 Ед, около 1,9 Ед, около 2,0 Ед, около 2,1 Ед, около 2,2 Ед, около 2,3 Ед, около 2,4 Ед, около 2,5 Ед или более на один участок инъекции. В вариантах осуществления для лечения небольших отклонений используются более низкие дозы. В вариантах осуществления вертикальное и горизонтальное косоглазие менее 20 диаметров призмы можно лечить дозой от 1,25 до 2,5 Ед на один участок инъекции. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0084] В одном варианте осуществления нейромышечное заболевание представляет собой спастичность мышц. Субъект, страдающий спастичностью мышц, например, получает от около 20 до 200 Ед за один сеанс лечения фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере пациенту со спастичностью мышц вводят от около 20 до 30 Ед, от 20 до 40 Ед, от 20 до 60 Ед, от 20 до 80 Ед, от 20 до 100 Ед, от 20 до 125 Ед, от 20 до 150 Ед или от 20 до 175 Ед за один сеанс лечения. В еще одном дополнительном примере пациенту со спастичностью мышц вводят около 20 Ед, около 25 Ед, около 30 Ед, около 35 Ед, около 40 Ед, около 45 Ед, около 50 Ед, около 55 Ед, около 60 Ед, около 65 Ед, около 70 Ед, около 75 Ед, около 80 Ед, около 85 Ед, около 90 Ед, около 95 Ед, около 100 Ед, около 105 Ед, около 110 Ед, около 115 Ед, около 120 Ед, около 125 Ед, около 130 Ед, около 135 Ед, около 140 Ед, около 145 Ед, около 150 Ед, около 155 Ед, около 160 Ед, около 165 Ед, около 170 Ед, около 175 Ед, около 180 Ед, около 185 Ед, около 190 Ед, около 195 Ед или около 200 Ед за один сеанс лечения. В одном варианте осуществления в двуглавую мышцу плеча вводят от 100 Ед до 200 Ед, разделив их между 4 участками инъекции. В одном варианте осуществления в лучевой сгибатель запястья вводят от 12,5 Ед до 50 Ед в 1 участок инъекции. В одном варианте осуществления в локтевой сгибатель запястья вводят от 12,5 Ед до 50 Ед в 1 участок инъекции. В одном варианте осуществления в глубокий сгибатель пальцев вводят от 30 Ед до 50 Ед в один участок инъекции. В одном варианте осуществления в поверхностный сгибатель пальцев вводят от 30 Ед до 50 Ед в один участок инъекции. Для достижения терапевтического ответа пациентам со спастичностью мышц также можно вводить дозу более 200 Ед за один сеанс лечения. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

Лечение боли

[0085] В другом варианте осуществления в настоящем изобретении предложены способы лечения боли, включающие этап введения фармацевтического состава настоящего изобретения нуждающемуся в этом субъекту в количестве, достаточном для уменьшения боли. В другом варианте осуществления пациент страдает от миофасциальной боли, мигрени, головной боли напряжения, нейропатической боли, боли в области лица, боли в пояснице, синусовой головной боли, боли, связанной с заболеванием височно-нижнечелюстного сустава, боли, связанной со спастичностью или цервикальной дистонией, послеоперационной боли в ране или невралгии. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0086] В одном варианте осуществления пациент страдает от боли в области лица. Субъект, страдающий от боли в области лица, например, получает от около 4 до 40 Ед за один сеанс лечения фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере пациенту, страдающему от боли в области лица, вводят около 4-10 Ед, 4-15 Ед, 4-20 Ед, 4-25 Ед, 4-30 Ед, 4-35 Ед, 7-15 Ед, 7-20 Ед, 7-25 Ед, 7-30 Ед, 7-35 Ед или 7-40 Ед за один сеанс лечения. В еще одном дополнительном примере пациенту, страдающему от боли в области лица, вводят около 4 Ед, около 5 Ед, около 7,5 Ед, около 10 Ед, около 12,5 Ед, около 15 Ед, около 17,5 Ед, около 20,0 Ед, около 22,5 Ед, около 25,0 Ед, около 27,5 Ед, около 30,0 Ед, около 32,5 Ед, около 35 Ед, около 37,5 Ед или около 40 Ед за один сеанс лечения. Для достижения терапевтического ответа пациентам с болью в области лица также можно вводить дозу более 40 Ед за один сеанс лечения. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0087] В одном варианте осуществления пациент страдает от миофасциальной боли. Субъект, страдающий от миофасциальной боли, например, получает от около 5 до 100 Ед за один сеанс лечения фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере пациенту, страдающему от миофасциальной боли, вводят около 5-10 Ед, 5-20 Ед, 5-30 Ед, 5-40 Ед, 5-50 Ед, 5-60 Ед, 5-70 Ед, 5-80 Ед, 5-90 Ед, 10-20 Ед, 10-30 Ед, 10-50 Ед, или 10-60 Ед, или 10-70 Ед, или 10-80 Ед, 10-90 Ед, или 10-100 Ед за один сеанс лечения. В дополнительном примере пациенту, страдающему от миофасциальной боли, вводят около 5 Ед, около 10 Ед, около 15 Ед, около 20 Ед, около 25 Ед, около 30 Ед, около 35 Ед, около 40 Ед, около 45 Ед, около 50 Ед, около 55 Ед, около 60 Ед, около 65 Ед, около 70 Ед, около 75 Ед, около 80 Ед, около 85 Ед, около 90 Ед, около 95 Ед или около 100 Ед за один сеанс лечения. Для достижения терапевтического ответа пациентам с миофасциальной болью также можно вводить дозу более 100 Ед за один сеанс лечения. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0088] В одном варианте осуществления субъект страдает от боли в пояснице. Субъект, страдающий от боли в пояснице, например, получает от около 15 до 150 Ед за один сеанс лечения фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере пациенту с болью в пояснице вводят около 15-30 Ед, 15-50 Ед, 15-75 Ед, 15-100 Ед, 15-125 Ед, 15-150 Ед, 20-100 Ед, 20-150 Ед или 100-150 Ед за один сеанс лечения. В еще одном дополнительном примере пациенту с болью в пояснице вводят около 15 Ед, около 20 Ед, около 25 Ед, около 30 Ед, около 35 Ед, около 40 Ед, около 45 Ед, около 50 Ед, около 55 Ед, около 60 Ед, около 65 Ед, около 70 Ед, около 75 Ед, около 80 Ед, около 85 Ед, около 90 Ед, около 95 Ед, около 100 Ед, около 105 Ед, около 110 Ед, около 115 Ед, около 120 Ед, около 125 Ед, около 130 Ед, около 135 Ед, около 140 Ед, около 145 Ед или около 150 Ед за один сеанс лечения. Для достижения терапевтического ответа пациентам с болью в пояснице также можно вводить дозу более 150 Ед за один сеанс лечения. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0089] В одном варианте осуществления пациент страдает от мигрени, включая случаи, когда пациента страдает от мигрени 4 часа или более в течение 15 или более дней в месяц. Субъект, страдающий от мигрени, например, получает от около 0,5 до 200 Ед за один сеанс лечения фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере пациенту, страдающему от мигрени, вводят около 5-190 Ед, 15-180 Ед, 25-170 Ед, 35-160 Ед, 45-150 Ед, 55-140 Ед, 65-130 Ед, 75-120 Ед, 85-110 Ед или 95-105 Ед за один сеанс лечения. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0090] Например, пациенту, страдающему от мигрени, вводят около 0,5 Ед, около 1,0 Ед, около 1,5 Ед, около 2,0 Ед, около 2,5 Ед, около 3,0 Ед, около 3,5 Ед, около 4,0 Ед, около 4,5 Ед, около 5,0 Ед, около 5,5 Ед, около 6,0 Ед, около 6,5 Ед, около 7,0 Ед, около 7,5 Ед, около 8,0 Ед, около 8,5 Ед, около 9,0 Ед, около 9,5 Ед, около 10,0 Ед, около 12 Ед, около 15 Ед, около 17 Ед, около 20 Ед, около 22 Ед, около 25 Ед, около 27 Ед, около 30 Ед, около 32 Ед, около 35 Ед, около 37 Ед, около 40 Ед, около 42 Ед, около 45 Ед, около 47 Ед или около 50 Ед на один участок лечения. Пациент может получать лечение во множестве участков, например 2 участках, 3 участках, 4 участках, 5 участках, 6 участках, 7 участках, 8 участках, 9 участках, 10 участках, 11 участках, 12 участках, 13 участках, 14 участках, 15 участках, 16 участках, 17 участках, 18 участках, 19 участках, 20 участках, 21 участке, 22 участках, 23 участках, 24 участках, 25 участках, 26 участках, 27 участках, 28 участках, 29 участках, 30 участках, 31 участке, 32 участках или более или т.п.В одном варианте осуществления пациенту, страдающему от мигрени, делают 31 инъекцию по 5 Ед объемом 0,1 мл в мышцу, сморщивающую бровь (2 инъекции по 5 Ед каждая), мышцу гордецов (1 инъекция 5 Ед), лобную (4 инъекции по 5 Ед каждая), височную (8 инъекций по 5 Ед каждая), затылочную (6 инъекций по 5 Ед каждая), шейную параспинальную (4 инъекции по 5 Ед каждая) и трапециевидную (6 инъекций по 5 Ед каждая) мышцы. За исключением мышцы гордецов, инъекция в которую может быть выполнена по средней линии, инъекции во все остальные мышцы в определенных вариантах осуществления могут быть выполнены с обеих сторон так, чтобы половина участков инъекции находилась на левой стороне, а половина на правой стороне головы и шеи. Для достижения терапевтического ответа пациентам с мигренью также можно вводить дозу более 200 Ед за один сеанс лечения. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0091] В одном варианте осуществления пациент страдает от синусовой головной боли. Субъект, страдающий от синусовой головной боли, например, получает от около 4 до 40 Ед за один сеанс лечения фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере пациенту, страдающему от синусовой головной боли, вводят около 4-10 Ед, 4-15 Ед, 4-20 Ед, 4-25 Ед, 4-30 Ед, 4-35 Ед, 7-15 Ед, 7-20 Ед, 7-25 Ед, 7-30 Ед, 7-35 Ед или 7-40 Ед за один сеанс лечения. В еще одном дополнительном примере пациенту, страдающему от синусовой головной боли, вводят около 4 Ед, около 5 Ед, около 7,5 Ед, около 10 Ед, около 12,5 Ед, около 15 Ед, около 17,5 Ед, около 20,0 Ед, около 22,5 Ед, около 25,0 Ед, около 27,5 Ед, около 30,0 Ед, около 32,5 Ед, около 35 Ед, около 37,5 Ед или около 40 Ед за один сеанс лечения. Для достижения терапевтического ответа пациентам с синусовой головной болью также можно вводить дозу более 40 Ед за один сеанс лечения. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0092] В одном варианте осуществления пациент страдает от головной боли напряжения. Субъект, страдающий от головной боли напряжения, например, получает от около 5 до 50 Ед за один сеанс лечения фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере пациенту, страдающему от головной боли напряжения, вводят около 5-10 Ед, 5-15 Ед, 5-20 Ед, 5-25 Ед, 5-30 Ед, 5-35 Ед, 5-40 Ед, 5-45 Ед, 10-20 Ед, 10-25 Ед, 10-30 Ед, 10-35 Ед, 10-40 Ед или 10-45 Ед за один сеанс лечения. В еще одном дополнительном примере пациенту, страдающему от головной боли напряжения, вводят около 5 Ед, около 10 Ед, около 20 Ед, около 25 Ед, около 30 Ед, около 35 Ед, около 40 Ед, около 45 Ед или около 50 Ед за один сеанс лечения. В одном варианте осуществления пациенту, страдающему от головной боли напряжения, делают 31 инъекцию по 5 Ед объемом 0,1 мл в мышцу, сморщивающую бровь (2 инъекции по 5 Ед каждая), мышцу гордецов (1 инъекция 5 Ед), лобную (4 инъекции по 5 Ед каждая), височную (8 инъекций по 5 Ед каждая), затылочную (6 инъекций по 5 Ед каждая), шейную параспинальную (4 инъекции по 5 Ед каждая) и трапециевидную (6 инъекций по 5 Ед каждая) мышцы. За исключением мышцы гордецов, инъекция в которую может быть выполнена по средней линии, инъекции во все остальные мышцы в определенных вариантах осуществления могут быть выполнены с обеих сторон так, чтобы половина участков инъекции находилась на левой стороне, а половина на правой стороне головы и шеи. Для достижения терапевтического ответа пациентам с головной болью напряжения также можно вводить дозу более 200 Ед за один сеанс лечения. Сеанс лечения может включать в себя множество сеансов лечения.

[0093] В одном варианте осуществления пациент страдает от синусовой головной боли или боли в области лица, связанной с острым или рецидивирующим хроническим синуситом. Например, фармацевтический состав настоящего изобретения можно вводить в слизистую оболочку носа или в подкожные структуры, расположенные поверх пазух, причем введение состава уменьшает головную боли и/или боль в области лица, связанные с острым рецидивирующим или хроническим синуситом. В дополнительных вариантах осуществления любой из фармацевтических составов настоящего изобретения можно вводить в слизистую оболочку носа или в подкожные структуры, расположенных поверх пазух, например поверх одной или более пазух, выбранных из группы, состоящей из пазухи решетчатой кости; верхнечелюстной пазухи; сосцевидной пазухи; лобной пазухи; и клиновидной пазухи. В другом варианте осуществления подкожные структуры, расположенные поверх пазух, находятся в пределах одной или более областей, выбранных из группы, состоящей из области лба; скуловой области; височной области; постаурикулярной области; и губ. В вариантах осуществления для лечения синусовой головной боли или боли в области лица, связанных с острым или рецидивирующим хроническим синуситом, вводят множество инъекций по 5 Ед каждая.

[0094] В другом варианте осуществления пациента, страдающего от синусовой головной боли или боли в области лица, связанных с острым или рецидивирующим хроническим синуситом, лечат путем введения любого из фармацевтических составов настоящего изобретения в пораженную область пациента. В дополнительном варианте осуществления фармацевтические составы, описанные в настоящем документе, вводят в проекции тройничного нерва, иннервирующего пазуху.

[0095] У пациентов, страдающих синусовой головной болью или болью в области лица, связанными с острым или рецидивирующим хроническим синуситом, часто наблюдаются симптомы, включающие ринит, синусовую гиперсекрецию и/или гнойные выделения из носа. В одном варианте осуществления у пациентов, получающих лечение фармацевтическими составами настоящего изобретения, наблюдаются симптомы синусовой гиперсекреции и гнойные выделения из носа.

[0096] В вариантах осуществления настоящего изобретения также предложены способы лечения пациента, страдающего от синусовой головной боли или боли в области лица, связанных с острым или рецидивирующим хроническим синуситом, причем субъект страдает от невралгии. В некоторых вариантах осуществления невралгия представляет собой невралгию тройничного нерва. В другом варианте осуществления невралгия связана с воздействием сжимающих сил на чувствительный нерв; связана с внутренним повреждением нерва, демиелинизирующим заболеванием или генетическим расстройством; связана с метаболическим расстройством; связана с центральным нейрососудистым заболеванием; или связана с травмой. В другом варианте осуществления настоящего изобретения боль связана с удалением или реконструкцией зуба.

Лечение урологических расстройств

[0097] В одном варианте осуществления в изобретении также предложены способы лечения пациента, страдающего гиперактивным мочевым пузырем (OAB), например, связанным с неврологическим состоянием (NOAB) или идиопатическим OAB (IOAB). Например, фармацевтические составы настоящего изобретения можно вводить в мочевой пузырь или вблизи него, например, в детрузор, причем введение состава уменьшает недержание мочи, связанное с гиперактивным мочевым пузырем. В некоторых вариантах осуществления доза может составлять, например, 200 Ед, или более, или менее, или т.п.Например, доза может составлять около 15 Ед, около 20 Ед, около 25 Ед, около 30 Ед, около 35 Ед, около 40 Ед, около 45 Ед, около 50 Ед, около 55 Ед, около 60 Ед, около 65 Ед, около 70 Ед, около 75 Ед, около 80 Ед, около 85 Ед, около 90 Ед, около 95 Ед, около 100 Ед, около 105 Ед, около 110 Ед, около 115 Ед, около 120 Ед, около 125 Ед, около 130 Ед, около 135 Ед, около 140 Ед, около 145 Ед, около 150 Ед, около 160 Ед, около 170 Ед, около 180 Ед, около 190 Ед, около 200 Ед, около 210 Ед, около 220, около 230 Ед, около 240 Ед или более или т.п.за один сеанс лечения. Пациент может получать инъекцию во множестве участков, например 2 участках, 3 участках, 4 участках, 5 участках, 6 участках, 7 участках, 8 участках, 9 участках, 10 участках, 11 участках, 12 участках, 13 участках, 14 участках, 15 участках, 16 участках, 17 участках, 18 участках, 19 участках, 20 участках, 21 участке, 22 участках, 23 участках, 24 участках, 25 участках, 26 участках, 27 участках, 28 участках, 29 участках, 30 участках, 31 участке, 32 участках, 33 участках, 34 участках, 35 участках, 36 участках, 37 участках, 38 участках или более или т.п.В одном варианте осуществления пациентов, страдающих OAB, лечат инъекциями 30 мл приблизительно 6,7 Ед за одну инъекцию в мышцу детрузора.

[0098] В одном варианте осуществления в изобретении также предложены способы лечения пациента, страдающего нейрогенной гиперактивностью детрузора (NDO), например, связанной с неврологическим состоянием. Например, фармацевтические составы настоящего изобретения можно вводить в мочевой пузырь или вблизи него, например, в детрузор, причем введение состава уменьшает недержание мочи, связанное с гиперактивным мочевым пузырем. В некоторых вариантах осуществления доза может составлять, например, 200 Ед, или более, или менее, или т.п. Например, доза может составлять около 15 Ед, около 20 Ед, около 25 Ед, около 30 Ед, около 35 Ед, около 40 Ед, около 45 Ед, около 50 Ед, около 55 Ед, около 60 Ед, около 65 Ед, около 70 Ед, около 75 Ед, около 80 Ед, около 85 Ед, около 90 Ед, около 95 Ед, около 100 Ед, около 105 Ед, около 110 Ед, около 115 Ед, около 120 Ед, около 125 Ед, около 130 Ед, около 135 Ед, около 140 Ед, около 145 Ед, около 150 Ед, около 160 Ед, около 170 Ед, около 180 Ед, около 190 Ед, около 200 Ед, около 210 Ед, около 220, около 230 Ед, около 240 Ед или более или т.п. за один сеанс лечения. Пациент может получать инъекцию во множестве участков, например 2 участках, 3 участках, 4 участках, 5 участках, 6 участках, 7 участках, 8 участках, 9 участках, 10 участках, 11 участках, 12 участках, 13 участках, 14 участках, 15 участках, 16 участках, 17 участках, 18 участках, 19 участках, 20 участках, 21 участке, 22 участках, 23 участках, 24 участках, 25 участках, 26 участках, 27 участках, 28 участках, 29 участках, 30 участках, 31 участке, 32 участках или более или т.п.В одном варианте осуществления пациентов, страдающих NDO, лечат инъекциями 30 мл приблизительно 6,7 Ед за одну инъекцию в мышцу детрузора.

Лечение косметических особенностей

[0099] В другом варианте осуществления в настоящем изобретении предложены способы косметической модификации особенностей мягких тканей, включающие этап введения по меньшей мере одного фармацевтического состава настоящего изобретения нуждающемуся в этом субъекту в количестве, достаточном для модификации указанных особенностей. В дополнительном варианте осуществления фармацевтический состав вводят посредством чрескожной или чресслизистой инъекции либо в одну точку, либо во множество точек.

[0100] В вариантах осуществления фармацевтические составы настоящего изобретения вводят в лицо или шею субъекта. В дополнительном варианте осуществления фармацевтические составы настоящего изобретения вводят субъекту в количестве, достаточном для уменьшения морщин. Например, состав можно вводить между бровями субъекта в количестве, достаточном для уменьшения вертикальных линий между бровями и на переносице. Фармацевтические составы также можно вводить вблизи одного или обоих глаз субъекта в количестве, достаточном для уменьшения линий в углах глаз. В одном варианте осуществления композиции изобретения можно вводить местно в гладкую кожу. В другом варианте осуществления фармацевтические составы настоящего изобретения также можно вводить в лоб субъекта в количестве, достаточном для уменьшения горизонтальных линий в указанном лбу. В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтический состав вводят в шею субъекта в количестве, достаточном для уменьшения мышечных полос на шее. В одном варианте осуществления фармацевтическую композицию наносят на жевательную мышцу для расслабления и уменьшения массы жевательной мышцы.

[0101] В дополнительном варианте осуществления пациент страдает от морщин на лице. Субъект, страдающий от морщин на лице, например, может получать от около 1 до 100 Ед за один сеанс лечения фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере пациенту с воспалительным расстройством вводят около 1-10 Ед, 1-20 Ед, 1-30 Ед, 1-40 Ед, 1-50 Ед, 1-60 Ед, 1-70 Ед, 1-80 Ед, 1-90 Ед, 5-20 Ед, 5-30 Ед, 5-40 Ед, 5-50 Ед, 5-60 Ед, 5-70 Ед, 5-80 Ед, 5-90 Ед или 5-100 Ед за один сеанс лечения. В еще одном дополнительном примере пациенту вводят около 1 Ед, около 10 Ед, около 20 Ед, около 30 Ед, около 40 Ед, около 50 Ед, около 60 Ед, около 70 Ед, около 80 Ед, около 90 Ед или около 100 Ед за один сеанс лечения. Для достижения терапевтического ответа пациентам, страдающим воспалением или воспалительным расстройством, также можно вводить дозу более 100 Ед за один сеанс лечения.

Лечение воспаления

[0102] В другом варианте осуществления в настоящем изобретении предложены способы лечения воспаления, включающие этап введения фармацевтического состава настоящего изобретения нуждающемуся в этом субъекту в количестве, достаточном для уменьшения воспаления. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические составы настоящего изобретения вводят пациенту без инициирования мышечной слабости. В одном варианте осуществления фармацевтические составы настоящего изобретения вводят пациентам с воспалительным состоянием. В некоторых вариантах осуществления воспалительное состояние представляет собой нейрогенное воспаление. В другом варианте осуществления субъект страдает ревматоидным артритом или желудочно-кишечным воспалительным заболеванием.

[0103] В дополнительном варианте осуществления пациент страдает воспалительным расстройством. Субъект, страдающий воспалительным расстройством, например, получает около 1-100 Ед за один сеанс лечения фармацевтического состава настоящего изобретения. В дополнительном примере пациенту с воспалительным расстройством вводят около 1-10 Ед, 1-20 Ед, 1-30 Ед, 1-40 Ед, 1-50 Ед, 1-60 Ед, 1-70 Ед, 1-80 Ед, 1-90 Ед, 5-20 Ед, 5-30 Ед, 5-40 Ед, 5-50 Ед, 5-60 Ед, 5-70 Ед, 5-80 Ед, 5-90 Ед или 5-100 Ед за один сеанс лечения. В еще одном дополнительном примере пациенту вводят около 1 Ед, около 10 Ед, около 20 Ед, около 30 Ед, около 40 Ед, около 50 Ед, около 60 Ед, около 70 Ед, около 80 Ед, около 90 Ед или около 100 Ед за один сеанс лечения. Для достижения терапевтического ответа пациентам, страдающим воспалением или воспалительным расстройством, также можно вводить дозу более 100 Ед за один сеанс лечения.

Лечение кожных заболеваний

[0104] Способ в рамках объема настоящего изобретения лечения кожного расстройства может включать этап местного введения ботулинового нейротоксина в область кожного расстройства пациента, например, в лицо, кисть или стопу пациента. Нейротоксин можно вводить местно в количестве от около 10^-3 единиц/кг массы тела пациента до около 35 единиц/кг массы тела пациента. Например, нейротоксин вводят местно в количестве от около 10^-2 Ед/кг до около 25 Ед/кг массы тела пациента. В дополнительном примере нейротоксин вводят в количестве от около 10^-1 Ед/кг до около 15 Ед/кг.В одном способе в рамках объема настоящего изобретения нейротоксин вводят местно в количестве от около 1 Ед/кг до около 10 Ед/кг.В клинических условиях может быть предпочтительно вводить от 1 Ед до 3000 Ед нейротоксина, такого как ботулотоксин типа A или B, в область кожного расстройства путем местного нанесения или подкожного введения для эффективного лечения кожного расстройства.

[0105] Введение ботулотоксина можно осуществлять во множестве участков кожи, причем участки смежных инъекций находятся, например, на расстоянии около 0,1-10 см или около 0,5-5 см, например около 1,5-3 см друг от друга. Токсины могут представлять собой любой из ботулотоксинов A, B, C, D, E, F или G. Вводимые количества могут варьироваться от 0,1 до 1000 Ед, или от около 1 до около 40, или от около 5 до около 10 Ед, в зависимости от спецификаций производителя, класса токсина и способа введения. Диапазон времени повторения для этих введений для поддержания желательного изменения по существу варьируется в зависимости от места инъекции, подлежащего коррекции состояния и состояния пациента. Таким образом, время повторения может варьироваться от около 1 недели до около 50 недель, однако общий диапазон составляет от около 4 до около 25 недель или даже от около 12 недель до около 16 недель.

[[0106] Расстояния между введениями, например инъекциями, могут варьироваться от около 1 мм до около 10 см, предпочтительно от около 5 мм до около 5 см, а чаще от около 1 см до около 3 см. Таким образом, например, ботулотоксин A подходит для введения путем внутрикожных инъекций в количестве от около 0,1 до около 10 Ед на расстоянии от около 0,5 до около 10 см друг от друга.

[0107] В другом варианте осуществления в настоящем изобретении предложены способы лечения кожных расстройств, включающие этап введения фармацевтического состава настоящего изобретения нуждающемуся в этом субъекту в количестве, достаточном для уменьшения секреции сала или слизи. В дополнительных вариантах осуществления фармацевтические составы настоящего изобретения вводят пациенту без инициирования мышечной слабости. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические составы настоящего изобретения вводят в один или более участков века или конъюнктивы. В другом варианте осуществления составы настоящего изобретения вводят в поверхность тела.

[0108] В другом варианте осуществления фармацевтические составы вводят в количестве, достаточном для уменьшения бактериального или грибкового роста на коже, включая, без ограничений, Staphylococcus; Streptococcus и Moraxella. Например, фармацевтические составы настоящего изобретения вводят в область, выбранную из группы, состоящей из века; волосистой части кожи головы; стопы; паховой области; и подмышки, для ослабления кожной инфекции.

ПРИМЕРЫ

[0109] Следующие примеры иллюстрируют варианты осуществления и аспекты настоящего изобретения и не ограничивают объем настоящего изобретения.

[0110] Пример 1. Эффекты и стабильность примеров твердых фармацевтических композиций клостридиального токсина по сравнению с составами предшествующего уровня техники.

[0111] Нефасованные растворы ботулотоксина готовили путем смешивания соответствующей аликвоты ботулотоксина типа A с несколькими растворами несущей среды, как описано в приведенных ниже таблицах 1-3. Растворы заливали в стеклянные флаконы и лиофилизировали с использованием стандартных условий сублимационной сушки. Эффективность лиофилизированных составов тестировали с помощью клеточного анализа эффективности (CBPA) после разведения лиофилизатов солевым раствором. Результаты восстановления эффективности после сублимационной сушки и после хранения при указанных температурах приведены в таблицах и нормализованы по целевой эффективности (известное количество токсинов, которые были добавлены в состав). Эффективности твердых композиций, полученных в соответствии с аспектами настоящего изобретения, сравнивали с тремя составами предшествующего уровня техники, как показано в таблицах 1-3.

[0112] Таблица 1.1. Лиофилизированные составы

	Эксципиент, % масс.							Нормализованная эффективность, хранение при 25°C
Состав	Treh	TWEEN^® 20	P188	NaCl	Met	NAC	Буфер	T0	3 мес.	6 мес.
Сравнительное соединение 1	3	0,04		0,9	0,2	-	Вода	80,6%	86,4%	80,8%
Сравнительное соединение 2	2	-	4	–	–	–	20 мM гистидин, pH 5,5	81,5%	68,6%	68,0%
Состав 1	2	–	4	–	–	0,03	20 мM гистидин, pH 5,5	98,6%	91,9%	86,9%

Treh=трегалоза; P 188=полоксамер P 188; Met=L-метионин; NAC=N-ацетил-L-цистеин.

[0113] Таблица 1.2. Лиофилизированные составы

	Эксципиент, % масс.							Нормализованная эффективность, хранение при 40°C
Состав	Treh	TWEEN^® 20	P188	NaCl	Met	NAC	Буфер	1 мес.	3 мес.	6 мес.
Сравнительное соединение 1	3	0,04		0,9	0,2	–	Вода	74,8%	70,3%	24,0%
Сравнительное соединение 2	2	–	4	–	–	–	20 мM гистидин, pH 5,5	64,8%	57,8%	46,8%
Состав 1	2	–	4	–	–	0,03	20 мM гистидин, pH 5,5	86,5%	77,9%	62,3%

[0114] Таблица 2. Лиофилизированные составы

	Эксципиент, % масс.								Нормализованная эффективность (% от целевого значения)
Состав	Treh	Sucr	TWEEN^® 20	P188	NaCl	Met	NAC	Буфер	T0	1 мес.при -20°C	1 мес.при 40°C
Сравнительное соединение 2	2			4				20 мM гистидин, pH 5,5	87,15%	88,95%	76,32%
Сравнительное соединение 3		3	0,04		0,9	0,2		Вода	84,06%	85,18%	72,68%
Состав 2	2			4		0,2		20 мM гистидин, pH 6,0	98,60%	120,85%	91,17%
Состав 3	8		0,04				0,03	20 мM гистидин, pH 6,0	105,2%	110,05%	96,89%

Treh=трегалоза; Sucr=сахароза; P188=полоксамер P 188; Met=L-метионин; NAC=N-ацетил-L-цистеин.

[0115] Таблица 3. Лиофилизированные составы

	Эксципиент, % масс.								Нормализованная эффективность, хранение при 25°C
Состав	Treh	Sucr	TWEEN^® 20	P188	NaCl	Met	NAC	Буфер	T0	3 мес.	7,5 мес.
Сравнительное соединение 2	2			4				20 мM гистидин, pH 5,5	87,1%	78,0%	78,0%
Состав 2	2			4	–	0,2		20 мM гистидин, pH 6,0	98,6%	97,0%	98,0%
Состав 4	8			0,6		0,2		20 мM гистидин, pH 6,0	86,5%	83,0%	84,0%

P-188=полоксамер P-188; Met=L-метионин.

[0116] Пример 2. Эффекты жидких фармацевтических композиций клостридиального токсина в присутствии или в отсутствие антиоксидантов.

[0117] Нефасованные растворы лекарственного средства получали путем смешивания соответствующей аликвоты активного ингредиента (АИ) BoNT/A с тремя различными растворами несущей среды, как показано в таблице 4. Все три состава содержали 8% масс. трегалозы, 4% масс.P 188 и 20 мМ гистидинового буфера при pH 6,0. Состав 10 не содержал антиоксиданта. Составы 11 и 12 содержали NAC и метионин соответственно. Нефасованные растворы заливали в стеклянные флаконы объемом 2 мл (заполнение 1,25 мл) и герметизировали резиновой пробкой и алюминиевым колпачком. Эффективность составов тестировали с помощью клеточного анализа эффективности (CBPA) после заполнения (нулевой момент времени, t0) и хранения в течение одного месяца при четырех температурах (-70, 5, 25 и 40°C). Результаты тестирования эффективности приведены в таблице 4. Вкратце, содержащий метионин состав (№ 12) сохранял свою эффективность после хранения в течение одного месяца при всех четырех температурах, включая 40°C, тогда как состав без антиоксиданта потерял приблизительно 15% эффективности при 25°C и потерял по существу всю эффективность (т.е. произошла полная инактивация) при 40°C. Второй протестированный антиоксидант, N-ацетил-L-цистеин, ускорил потерю эффективности по сравнению с составом, не содержащим антиоксиданта, что свидетельствует о том, что N-ацетил-L-цистеин действовал в качестве прооксиданта в этом составе.

[0118] Таблица 4. Жидкие составы

		Эффективность, Ед/мл
№состава*	Антиоксидант	T0	1 мес.при -70°C	1 мес.при 5°C	1 мес.при 25°C	1 мес.при 40°C
Состав 10	нет	128	135	135	106	0,225
Состав 11	N-ацетил-L-цистеин, 0,2% масс.	128	133	129	61	0,2
Состав 12	L-метионин, 0,2% масс.	133	146	146	145	138

* Каждый состав содержал одинаковое количество ботулотоксина, 8% масс.Трегалозы и 4% масс.полоксамера P188 в гистидиновом буфере.

[0119] Пример 3. Влияние примеров антиоксидантов на стабильность примеров жидких составов.

[0120] Нефасованные растворы лекарственного средства получали путем смешивания соответствующей аликвоты активного ингредиента (АИ) BoNT/A с различными антиоксидантами, как показано в таблице 5. Все составы содержали 8% трегалозы, 4% P 188, 20 мМ гистидинового буфера при pH 6,0 и один или более антиоксидантов, перечисленных в списке. Целевая эффективность составляла 100 Ед/мл. Нефасованные растворы заливали в стеклянные флаконы объемом 2 мл (заполнение 1,25 мл) и герметизировали резиновой пробкой и алюминиевым колпачком. Эффективность составов тестировали с помощью клеточного анализа эффективности (CBPA) после заполнения (нулевой момент времени, t0) и хранения в течение двух недель и 1 месяца при 40°C. Результаты тестирования эффективности приведены в таблице 5.

[0121] Таблица 5. Жидкие составы

	Антиоксидант²							Эффективность Ед/мл
№состава¹	NAC %	Met %	TRP %	GSH %	NaSul %	PrpGal %	ЭДТА %	T0	2 нед. при 40°C	1 мес.при 40°C
Состав 20		0,2						126	129	130
Состав 21			0,2					127	13,71	NT³
Состав 22				0,2				123	3,76	NT
Состав 23					0,2			23,7	0,161	NT
Состав 24						0,2		0,164	0,150	NT
Состав 25	0,2		0,2					133	0,253	NT
Состав 26	0,2						0,03	129	127	127
Состав 27	0,2		0,2				0,03	129	125	122
Состав 28			0,2	0,2				126	2,45	NT

¹Каждый состав содержал 100 Ед/мл ботулотоксина, 8% масс.трегалозы и 4% масс.полоксамера P188 в 20 мМ гистидиновом буфере, pH 6,0, и указанный антиоксидант.

²NAC=N-ацетил-L-цистеин; Met=L-метионин; TRP=L-триптофан; GSH=L-глутатион; NaSul=сульфит натрия; PrpGal=пропилгаллат; ЭДТА=этилендиаминтетрауксусная кислота, натриевая соль.

³Н/Т - не тестировали

[0122] Средние специалисты в данной области могут выполнить множество изменений и модификаций без отклонения от сущности и объема описания. Таким образом, следует понимать, что описанные варианты осуществления были изложены только в качестве примеров и что варианты осуществления не следует рассматривать как ограничивающие объем описанных ниже пунктов формулы изобретения. Таким образом, следующие пункты формулы изобретения следует истолковывать как включающие не только комбинацию элементов, которые буквально изложены, но также все эквивалентные элементы для выполнения по существу аналогичной функции по существу аналогичным образом для получения по существу аналогичного результата. Следовательно, следует понимать, что пункты формулы изобретения включают то, что описано выше, то, что является концептуально эквивалентным, и то, что содержит идеи настоящего описания.

Claims

1. Жидкая фармацевтическая композиция, не содержащая белковых эксципиентов, обладающая активностью связывания с рецептором клостридиального токсина, содержащая:

(i) активный ингредиент в виде клостридиального ботулотоксина;

(ii) водный носитель;

(iii) поверхностно-активное вещество, представляющее собой полоксамер; и

(iv) метионин в количестве от около 0,1 до около 0,3 масс.%, причем

композиция подходит для подкожной или внутримышечной инъекции, и при этом

композиция является стабильной в течение по меньшей мере одного месяца при 40°C.

2. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 1, дополнительно содержащая трегалозу.

3. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 2, где трегалоза присутствует в количестве от около 1 до около 15 масс.%.

4. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 1, где полоксамер представляет собой полоксамер P188.

5. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 1, где полоксамер присутствует в количестве от около 0,5 до около 8 масс.%.

6. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 1, где метионин присутствует в количестве около 0,2 масс.%.

7. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 1, где композиция дополнительно содержит трегалозу, и полоксамер представляет собой полоксамер P188.

8. Жидкая фармацевтическая композиция, не содержащая белковых эксципиентов, обладающая активностью связывания с рецептором клостридиального токсина, содержащая:

(ii) трегалозу в количестве от около 1 до около 15 масс.%;

(iii) полоксамер в количестве от около 0,5 до около 8 масс.%; и

9. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 8, где метионин присутствует в количестве около 0,2 масс.%.

10. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 8, где полоксамер присутствует в количестве от около 2 до около 6 масс.%.

11. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 8, где трегалоза присутствует в количестве от около 5 до около 12 масс.%.

12. Композиция по п. 1 для применения при лечении депрессии.

13. Композиция по п. 1 для применения при лечении аритмии сердца.

14. Композиция по п. 8 для применения при лечении депрессии.

15. Композиция по п. 8 для применения при лечении аритмии сердца.

16. Жидкая фармацевтическая композиция, не содержащая белковых эксципиентов, обладающая активностью связывания с рецептором клостридиального токсина, содержащая:

активный ингредиент в виде клостридиального ботулотоксина;

полоксамер P188 в количестве от около 0,6 до около 4 масс.%;

трегалозу в количестве от около 2 до около 8 масс.%;

метионин в количестве от около 0,1 до около 0,3 масс.%, и

20 мМ гистидиновый буфер.

17. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 16, где композиция содержит:

трегалозу в количестве около 8 масс.%;

полоксамер P188 в количестве около 4 масс.%;

метионин в количестве около 0,2 масс.%, и

20 мМ гистидиновый буфер при pH около 6,0.

18. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 16, где композиция содержит:

трегалозу в количестве около 2 масс.%;

полоксамер P188 в количестве около 4 масс.%;

хлорид натрия в количестве около 0,6 масс.%;

метионин в количестве около 0,2 масс.%, и

20 мМ гистидиновый буфер при pH около 6,0.

19. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 16, где композиция содержит:

трегалозу в количестве около 8 масс.%;

полоксамер P188 в количестве около 4 масс.%;

метионин в количестве около 0,2 масс.%;

ЭДТА в количестве около 0,03 масс.%, и

20 мМ гистидиновый буфер при pH около 6,0.