RU2010129539A - Двухвалентные биспецифические антитела - Google Patents

Abstract

1. Двухвалентное биспецифическое антитело, содержащее: ! а) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном; и ! б) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга ! и ! в котором константные домены CL и СН1 заменены друг на друга. ! 2. Антитело по п.1, отличающееся тем, что ! СН3-домен одной тяжелой цепи и CH3-домен другой тяжелой цепи каждый соприкасается друг с другом на поверхности раздела, которая представляет собой исходную поверхность раздела между СН3-доменами антитела; при этом поверхность раздела изменена для активации формирования двухвалентного биспецифического антитела, где изменение отличается тем, что: ! а) изменен СН3-домен одной тяжелой цепи ! так, что на исходной поверхности раздела СН3-домена одной тяжелой цепи, которая соприкасается с исходной поверхностью раздела СН3-домена второй тяжелой цепи в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток, который имеет большую по объему боковую цепь, что приводит к созданию выпуклости на поверхности раздела СН3-домена одной тяжелой цепи, которая может помещаться в полость на поверхности раздела СН3-домена другой тяжелой цепи, ! и !б) изменен СН3-домен другой тяжелой цепи ! так, что на исходной поверхности раздела второго СН3-домена, которая соприкасается с исходной поверхностью раздела первого СН3-домена в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток, который имеет меньшую по объему боковую цепь, что приводит к созданию полости

Claims (10)

1. Двухвалентное биспецифическое антитело, содержащее:

а) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном; и

б) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга

и

в котором константные домены CL и СН1 заменены друг на друга.

2. Антитело по п.1, отличающееся тем, что

СН3-домен одной тяжелой цепи и CH3-домен другой тяжелой цепи каждый соприкасается друг с другом на поверхности раздела, которая представляет собой исходную поверхность раздела между СН3-доменами антитела; при этом поверхность раздела изменена для активации формирования двухвалентного биспецифического антитела, где изменение отличается тем, что:

а) изменен СН3-домен одной тяжелой цепи

так, что на исходной поверхности раздела СН3-домена одной тяжелой цепи, которая соприкасается с исходной поверхностью раздела СН3-домена второй тяжелой цепи в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток, который имеет большую по объему боковую цепь, что приводит к созданию выпуклости на поверхности раздела СН3-домена одной тяжелой цепи, которая может помещаться в полость на поверхности раздела СН3-домена другой тяжелой цепи,

и

б) изменен СН3-домен другой тяжелой цепи

так, что на исходной поверхности раздела второго СН3-домена, которая соприкасается с исходной поверхностью раздела первого СН3-домена в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток, который имеет меньшую по объему боковую цепь, что приводит к созданию полости на поверхности раздела второго СН3-домена, в которую может помещаться выпуклость на поверхности раздела первого СН3-домена.

3. Антитело по п.2, отличающееся тем, что

указанный аминокислотный остаток, который имеет большую по объему боковую цепь, выбран из группы, включающей аргинин (R), фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W).

4. Антитело по одному из п.2 или 3, отличающееся тем, что

указанный аминокислотный остаток, который имеет меньшую по объему боковую цепь, выбран из группы, включающей аланин (А), серии (S), треонин (Т), валин (V).

5. Антитело по одному из п.2 или 3, отличающееся тем, что

оба СН3-домена дополнительно изменены путем интродукции цистеина (С) в качестве аминокислоты в соответствующие положения каждого СН3-домена.

6. Антитело по п.1, отличающееся тем, что

один из СН3-доменов константной области тяжелой цепи обеих тяжелых цепей заменен на СН1-домен константной области тяжелой цепи; а другой СН3-домен константной области тяжелой цепи заменен на CL-домен константной области легкой цепи.

7. Способ получения двухвалентного биспецифического антитела по п.1, заключающийся в том, что

а) трансформируют клетку-хозяина

- векторами, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном,

- векторами, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном,

в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга

и

в котором константные домены CL и СН1 заменены друг на друга;

б) культивируют клетку-хозяина в условиях, которые позволяют синтезировать указанную молекулу антитела; и

в) выделяют молекулу антитела из культуры.

8. Клетка-хозяин, содержащая:

- векторы, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном,

- векторы, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга

и

в котором константные домены CL и СН1 заменены друг на друга.

9. Композиция, предпочтительно фармацевтическая или диагностическая композиция двухвалентного биспецифического антитела по пп.1-6.

10. Фармацевтическая композиция, содержащая двухвалентное биспецифическое антитело по пп.1-6 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.