UA127308C2 - Активована протеазою біспецифічна молекула, яка зв'язує т-клітини - Google Patents
Активована протеазою біспецифічна молекула, яка зв'язує т-клітини Download PDFInfo
- Publication number
- UA127308C2 UA127308C2 UAA201810280A UAA201810280A UA127308C2 UA 127308 C2 UA127308 C2 UA 127308C2 UA A201810280 A UAA201810280 A UA A201810280A UA A201810280 A UAA201810280 A UA A201810280A UA 127308 C2 UA127308 C2 UA 127308C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- antigen
- protease
- amino acid
- acid sequence
- light chain
- Prior art date
Links
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 title claims description 355
- 239000004365 Protease Substances 0.000 title claims description 353
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 title claims 37
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 316
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 279
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 277
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 126
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 claims abstract description 96
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 65
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 18
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 559
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 522
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 521
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 520
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 512
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 323
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 315
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 288
- 239000002957 persistent organic pollutant Substances 0.000 claims description 121
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 claims description 98
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 97
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 60
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 46
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 36
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 claims description 33
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 claims description 33
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 28
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 19
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 14
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 claims description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 claims description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 6
- 235000014548 Rubus moluccanus Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 2
- 244000005894 Albizia lebbeck Species 0.000 claims 2
- 241000159610 Roya <green alga> Species 0.000 claims 2
- 230000035622 drinking Effects 0.000 claims 2
- 239000002574 poison Substances 0.000 claims 2
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 claims 2
- REGZQZHKIFOMRK-LSCFUAHRSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-[6-[(4-amino-3-iodophenyl)methylamino]purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C1=C(I)C(N)=CC=C1CNC1=NC=NC2=C1N=CN2[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 REGZQZHKIFOMRK-LSCFUAHRSA-N 0.000 claims 1
- 101500020117 Aedes aegypti Sialokinin Proteins 0.000 claims 1
- 241001116389 Aloe Species 0.000 claims 1
- 241000802703 Antistia Species 0.000 claims 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 claims 1
- 241000566113 Branta sandvicensis Species 0.000 claims 1
- 241000722731 Carex Species 0.000 claims 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 claims 1
- 244000157795 Cordia myxa Species 0.000 claims 1
- 235000004257 Cordia myxa Nutrition 0.000 claims 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims 1
- 235000005459 Digitaria exilis Nutrition 0.000 claims 1
- 235000017274 Diospyros sandwicensis Nutrition 0.000 claims 1
- 101100285518 Drosophila melanogaster how gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 claims 1
- 241000283070 Equus zebra Species 0.000 claims 1
- 241000975394 Evechinus chloroticus Species 0.000 claims 1
- 239000001653 FEMA 3120 Substances 0.000 claims 1
- 240000008168 Ficus benjamina Species 0.000 claims 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims 1
- 206010018498 Goitre Diseases 0.000 claims 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 claims 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 claims 1
- 241001318330 Nenia Species 0.000 claims 1
- 235000016787 Piper methysticum Nutrition 0.000 claims 1
- 240000005546 Piper methysticum Species 0.000 claims 1
- 244000046146 Pueraria lobata Species 0.000 claims 1
- 235000010575 Pueraria lobata Nutrition 0.000 claims 1
- 240000001987 Pyrus communis Species 0.000 claims 1
- 244000097202 Rathbunia alamosensis Species 0.000 claims 1
- 235000009776 Rathbunia alamosensis Nutrition 0.000 claims 1
- 241000863115 Reinia Species 0.000 claims 1
- 244000295923 Yucca aloifolia Species 0.000 claims 1
- 235000004552 Yucca aloifolia Nutrition 0.000 claims 1
- 235000012044 Yucca brevifolia Nutrition 0.000 claims 1
- 235000017049 Yucca glauca Nutrition 0.000 claims 1
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 claims 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 claims 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 claims 1
- 210000004709 eyebrow Anatomy 0.000 claims 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims 1
- 210000001061 forehead Anatomy 0.000 claims 1
- 201000003872 goiter Diseases 0.000 claims 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 claims 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 claims 1
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 claims 1
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 claims 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 claims 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 claims 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 abstract description 104
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 abstract description 104
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 abstract description 104
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 18
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 318
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 85
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 46
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 46
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 45
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 45
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 36
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 36
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 33
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 31
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 30
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 30
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 29
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 29
- 101150036800 SOV gene Proteins 0.000 description 28
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 27
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 26
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 26
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 26
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 24
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 23
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 23
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 23
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 22
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 22
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 22
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 20
- 108010091175 Matriptase Proteins 0.000 description 19
- 102100037942 Suppressor of tumorigenicity 14 protein Human genes 0.000 description 19
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 18
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 17
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 17
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 17
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 16
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 16
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 102100021889 Helix-loop-helix protein 2 Human genes 0.000 description 13
- 101000897700 Homo sapiens Helix-loop-helix protein 2 Proteins 0.000 description 13
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 13
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 13
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 12
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 11
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 11
- 101000840540 Homo sapiens Iduronate 2-sulfatase Proteins 0.000 description 10
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 10
- 238000013461 design Methods 0.000 description 10
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 9
- -1 for example Proteins 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 9
- 101100501772 Arabidopsis thaliana ESR2 gene Proteins 0.000 description 8
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 8
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 8
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 8
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 7
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 7
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 7
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 101001094649 Homo sapiens Popeye domain-containing protein 3 Proteins 0.000 description 6
- 101000608234 Homo sapiens Pyrin domain-containing protein 5 Proteins 0.000 description 6
- 101000578693 Homo sapiens Target of rapamycin complex subunit LST8 Proteins 0.000 description 6
- 208000007256 Nevus Diseases 0.000 description 6
- 102100039889 Pyrin domain-containing protein 5 Human genes 0.000 description 6
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 6
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- 101000939500 Homo sapiens UBX domain-containing protein 11 Proteins 0.000 description 5
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 5
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 238000013103 analytical ultracentrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 5
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 5
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 5
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 5
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 5
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 description 4
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 description 4
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 description 4
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 4
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 241001233384 Negha Species 0.000 description 4
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 4
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 4
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 4
- 102100029645 UBX domain-containing protein 11 Human genes 0.000 description 4
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 4
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 4
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 3
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 3
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 3
- 101800001224 Disintegrin Proteins 0.000 description 3
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 3
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101000627872 Homo sapiens 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 description 3
- 101000740070 Homo sapiens BMP and activin membrane-bound inhibitor homolog Proteins 0.000 description 3
- 101000576802 Homo sapiens Mesothelin Proteins 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 238000000516 activation analysis Methods 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 3
- 102000057422 human IDS Human genes 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 101100020619 Arabidopsis thaliana LATE gene Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000010451 Folate receptor alpha Human genes 0.000 description 2
- 108050001931 Folate receptor alpha Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000897691 Homo sapiens Helix-loop-helix protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000897669 Homo sapiens Small RNA 2'-O-methyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 102100021887 Small RNA 2'-O-methyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 2
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 2
- 241000724291 Tobacco streak virus Species 0.000 description 2
- 102100027193 Twinkle mtDNA helicase Human genes 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000000424 bronchial epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 238000007373 indentation Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000004308 thiabendazole Substances 0.000 description 2
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 3-Methylhistidine Natural products CN1C=NC(CC(N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940117976 5-hydroxylysine Drugs 0.000 description 1
- 101710151806 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 101100460150 Arabidopsis thaliana NEN2 gene Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 108700021041 Disintegrin Proteins 0.000 description 1
- 235000008247 Echinochloa frumentacea Nutrition 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100027685 Hemoglobin subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 108091005902 Hemoglobin subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101100070543 Hevea brasiliensis HEV1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001046529 Homo sapiens Mevalonate kinase Proteins 0.000 description 1
- 101000990990 Homo sapiens Midkine Proteins 0.000 description 1
- 101100137225 Homo sapiens POPDC3 gene Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- 108010070551 Meat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 1
- JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N N(pros)-methyl-L-histidine Chemical compound CN1C=NC=C1C[C@H](N)C(O)=O JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 240000004072 Panicum sumatrense Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 229940122605 Short-acting muscarinic antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000006043 T cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940125363 active pharmaceutical ingredient starting material Drugs 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 102220414502 c.35C>A Human genes 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 101150077246 gas5 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000045108 human EGFR Human genes 0.000 description 1
- 102000053521 human MDK Human genes 0.000 description 1
- 102000050113 human UBXN11 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 210000000428 immunological synapse Anatomy 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000003935 rough endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- 230000003868 tissue accumulation Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000402 unacceptable toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
- C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
- C07K16/4258—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig against anti-receptor Ig
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/524—CH2 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/50—Fusion polypeptide containing protease site
Abstract
Винахід стосується активованої протеазою біспецифічної молекули, яка активує T-клітини, та ідіотипспецифічного поліпептиду, і способу застосування вказаної активованої протеазою біспецифічної молекули, яка активує T-клітини, та ідіотипспецифічного поліпептиду для лікування захворювання.
Description
біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, та ідіотипспецифічного поліпептиду для лікування захворювання. 100 я
Ей и в | с. МА о а 0- фоннннн фін Ф от жно оо о о о ов ЕФ 6вз 5 т ев и,яонш в че р я
Фіг. 18А
Галузь техніки, до якої відноситься винахід
Даний винахід відноситься в цілому до нових активованих протеазою антигензв'язуючих молекул, які містять антиідіотипзв'язуючий фрагмент, що оборотно маскує зв'язування антигена молекулою. Зокрема, винахід відноситься до молекул, які зв'язують Т-клітини, що мають антиіїдіотипзв'язуючий фрагмент, що маскує СОЗ-зв'язуючий фрагмент до розщеплення протеазою. Це забезпечує недоступність або "маскування" СОЗ-зв'язуючого фрагмента до його наближення до тканини-мішені, такої як пухлина, наприклад, до Т-клітин, які інфільтрують пухлину. Крім того, даний винахід відноситься до полінуклеотидів, які кодують вказані активовані протеазою молекули, що зв'язують Т-клітини, та ідіотипспецифічні поліпептиди, і до векторів і клітин-хазяїнів, які містять вказані полінуклеотиди. Винахід відноситься також до способів одержання активованих протеазою молекул, які зв'язують Т-клітини, запропонованих у винаході, і до способів їх застосування, наприклад, для лікування захворювання.
Передумови створення винаходу
В різних клінічних ситуаціях часто потрібна вибіркова деструкція індивідуальної клітини- мішені або визначеного типу клітин-мішеней. Наприклад, основною задачею при терапії раку є руйнування саме пухлинних клітин із зберіганням при цьому в інтактному та непошкодженому стані здорових клітин і тканин.
Перспективним підходом для досягнення цієї мети є індукція імунної відповіді проти пухлини, при якій імунні ефекторні клітини, такі як природні клітини-кілери (МК) або цитотоксичні
Т-лімфоцити (СТІ), атакують і руйнують пухлинні клітини. В цьому плані в останні роки зріс інтерес до біспецифічних антитіл, сконструйованих таким чином, щоб вони зв'язувались за допомогою одного "плеча" з поверхневим антигеном на клітинах-мішенях, а за допомогою іншого "плеча" з активуючим інваріантним компонентом комплексу Т-клітинного рецептора (ТСА). Одночасне зв'язування такого антитіла з обома його мішенями має посилювати тимчасову взаємодію між клітиною-мішенню і Т- клітиною, викликаючи активацію будь-якої цитотоксичної Т-клітини і подальший лізис клітини-мішені. Таким чином, імунна відповідь переорієнтується на клітини-мішені і не залежить від презентації пептидного антигена клітиною- мішенню або специфічності Т-клітини, що має місце при нормальній обмеженій за ГКГС активації СТІ. В цьому контексті вирішальне значення має те, що СТІ активуються тільки в
Зо умовах тісної близькості до клітини-мішені, тобто коли має місце імітація імунологічного синапсу. Найбільш переважними є біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, для яких не потрібне попереднє кондиціонування або костімуляція лімфоцитів для того, щоб викликати ефективний лізис клітин-мішеней. Розроблено декілька форматів біспецифічних антитіл і вивчена їх придатність для опосередкованої Т-клітинами імунотерапії. Вони включають молекули ВіТЕ (рівресіїс ї сеї еподадег, біспецифічний активатор (провідник) Т-клітин) (Мадогзеп і Вацепе, Ехр Сеї! Рез 317, 2011, сс. 1255-1260), димерні антитіла (діабоди) (НоїЇїдег та ін., Ргої Епд 9, 1996, сс. 299-305) та їх похідні, такі як тандемні діабоди (Кіргіуапом та ін., У Мої!
Віо! 293, 1999, сс. 41-66), молекули ВАНТ (апа! айіппу геїагдеїіпод, переорієнтовані молекули з подвійною афінністю) (Мооге та ін., Віоса 117, 2011, сс. 4542-51) і міотареФф (трифункціональні антитіла) (беітеї» та ін., Сапсег Тгеаї Нем 36, 2010, сс. 458-467).
Задача створення біспецифічних молекул, придатних для лікування, ставить декілька технічних проблем, пов'язаних з вимогами до ефективності, токсичності, застосовуваності і технологічності, які вони повинні задовольняти. В тих випадках, коли мішенню біспецифічної молекули є антиген на клітині-мішені, наприклад, на раковій клітині, що експресується, також і в тканині, яка не є мішенню, може виникати токсичність. Таким чином, існує потреба в ефективних біспецифічних молекулах, що активують Т-клітини, які забезпечують повну активацію Т-клітин в присутності клітин-мішеней, але не в присутності здорових клітин або тканин.
Короткий виклад сутності винаходу
Винахід відноситься в цілому до біспецифічних молекул, що активують Т-клітини, які вибірково активуються в присутності клітини-мішені.
Одним з об'єктів винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, яка містить (а) перший антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СОЮЗ; (б) другий антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені; і (в) маскуючий фрагмент, ковалентно приєднаний до біспецифічної молекули, що зв'язує Т- клітини, через розщеплюваний протеазою лінкер, де маскуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ідіотипом першого або другого антигензв'язуючого фрагмента, тим самим оборотно приховуючи ("ховаючи") перший або другий антигензв'язуючий фрагмент. бо В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент активованої протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, ковалентно приєднаний до першого антигензв'язуючого фрагмента. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент ковалентно приєднаний до варіабельної ділянки важкого ланцюга першого антигензв'язуючого фрагмента. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент ковалентно приєднаний до варіабельної ділянки легкого ланцюга першого антигензв'язуючого фрагмента. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент являє собою антиідіотиповий ве.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить другий маскуючий фрагмент, що оборотно приховує другий антигензв'язуючий фрагмент.
В одному з варіантів здійснення винаходу протеаза, що має здатність розщеплювати лінкер, розщеплений протеазою, експресується клітиною-мішенню.
В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій обмінені або варіабельні, або константні ділянки легкого ланцюга
Еаьб ї важкого ланцюга Раб. В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Бар, в якій обмінені константні ділянки легкого ланцюга Бар і важкого ланцюга Бар. В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою канонічну молекулу Бар. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить не більше одного антигензв'язуючого фрагмента, який має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ3. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить третій антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Рар, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язуючий фрагмент ідентичний другому антигензв'язуючому фрагменту. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язуючий фрагмент не ідентичний другому антигензв'язуючому фрагменту. В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з Рой! або НЕРІ1. В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність
Зо специфічно зв'язуватись з БоЇВ1, НЕВІ або мезотеліном. В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ГоІН1,
НЕВІТ, НЕВ?2 або мезотеліном.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший і другий антигензв'язуючі фрагменти злиті один з одним, необов'язково через пептидний лінкер. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга
БабБ з М-кінцем важкого ланцюга Раб першого антигензв'язуючого фрагмента. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент злитий на С- кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Бар іншого антигензв'язуючого фрагмента. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу легкий ланцюг Гар першого антигензв'язуючого фрагмента і легкий ланцюг Рар іншого антигензв'язуючого фрагмента злиті один з одним, необов'язково через пептидний лінкер.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить додатково Ес-домен, який складається з першої і другої субодиниць, які мають здатність до стабільної асоціації. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен являє собою Ес-домен да, конкретно Ес-домен даси: або ІдСа. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен являє собою людський Ес-домен. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен характеризується зниженою афінністю зв'язування з Ес- рецептором і/або зниженою ефекторною функцією порівняно з нативним Ес-доменом Ідси. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен містить одну або декілька амінокислотну(их) заміну(н), яка(ї) знижує(ють) зв'язування з Ес-рецептором і/або ефекторну функцію. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу одна або декілька амінокислотна(их) заміна(н) знаходиться(яться) в одному або декількох положеннях, вибраних з наступної групи: І 234, 1235 і РЗ29 (нумерація за Кеботом). В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу кожна субодиниця Ес-домену містить три амінокислотні заміни, які знижують зв'язування з активуючим
Ес-рецептором і/або ефекторну функцію, де вказані амінокислотні заміни являють собою І 234А, 1235А і РЗ29а. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу Ес-рецептор являє собою
Есу-рецептор. В одному з варіантів здійснення винаходу ефекторна функція являє собою антитіло-обумовлену клітинозалежну цитотоксичність (АОССО). В одному з варіантів здійснення винаходу клітина-мішень являє собою людську клітину. бо В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
РУБІН (ЗЕО ІО МО: 20); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 МІМТЕТОЕРАМАВОЕКа (5ЕО ІО МО: 21); і (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ РМОМОМІ ОМ (ЗЕО ІО МО: 22).
В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВ І) 1
ВАБКОЗУЗТОЗММУМІН (ЗЕО ІО МО: 23); (б) амінокислотну послідовність СОВА 2 МУБМІ ЕБЗ (5ЕО ІЮО МО: 24) і (в) амінокислотну послідовність СОВА І З ОНЗАЕЕРМУТ (5ЕО ІО МО: 25).
В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
РУБІН (ЗЕО ІО МО: 20); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 МІМТЕТОЕРАМАВОЕКа (5ЕО ІО МО: 21); і (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ РМОМОМІ ОМ (ЗЕО ІО МО: 22); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
ВАБКОЗУЗТОЗММУМІН (ЗЕО ІО МО: 23); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 УМ5МІ ЕБЗ (ЗЕО І МО: 24) і (є) амінокислотну послідовність СОВА І З ОНБВЕЕРМ/Т (ЗЕО ІО МО: 25).
В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
ЗУСМУБ5(5ЕО ІЮ МО: 26); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 ПУ/сравТмМуНзаА ІЗ (5ЕО ІО МО: 27); і (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ СІИТТММООММАМОМ (5ЕО І МО: 28).
В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку
Зо легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА |) 1
ВАБЕМІЮОБМІ А (5ЕО І МО: 29); (б) амінокислотну послідовність СОН 12 ААТНГ АЮ (ЗЕО ІО МО: 30); і (в) амінокислотну послідовність СОН І З ОНУУБТРМТ (5ЕО ІО МО: 31).
В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
ЗУСМУБ5(5ЕО ІЮ МО: 26); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 ПУ/сравТмМуНзА ІЗ (5ЕО ІО МО: 27); (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ СІИТТММООММАМОМ (5ЕО І МО: 28); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
ВАБЕМІЮБМІ А (5ЕО І МО: 29); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 ААТЕГ А (ЗЕО ІО МО: 30); і (є) амінокислотну послідовність СОН І З ОНУМТРМТ (ЗЕО ІО МО: 31).
В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер, розщеплений протеазою, містить принаймні одну розпізнавану протеазою послідовність. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність. В одному з варіантів здійснення винаходу розпізнавану протеазою послідовність вибирають з групи, що складається з: (а) КОАКУММО (5ЕО ІО МО: 36); (б) МНМРІ СР ЄРОКЗКОЗЕР (5ЕО І МО: 37); (в) КОАЕУУМОХХХХХМРІ 51 Уа (5ЕО ІО МО: 38); і (г) КОАКУММОМРІ 5І У5О (5ЕО І МО: 39), (д) річіма (ЗЕО ІО МО: 40), де Х позначає будь-яку амінокислоту.
В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність. В одному з варіантів здійснення винаходу розпізнавану протеазою послідовність вибирають з групи, що складається з: (а) КОАКУММО (5ЕО ІО МО: 36); 60 (б) МНМРІ СР ЄРОКЗКОЗЕР (5ЕО І МО: 37);
(в) КОАЕУУМОХХХХХМРІ 51 55 (ЗЕО ІЮ МО: 38); (г) КОАКУММОМРІ 5І У5О (5ЕО І МО: 39); (д) річіма (ЗЕО ІО МО: 40); (є) МНМРГ ОБГ ОРКОАКМУММО (ЗЕО ІЮ МО: 97); (ж) ЕМОаатТа (5ЕО ІЮ МО: 98); (3) ККААРУМа (5ЕО ІО МО: 99); () РМАККУМа (5ЕО ІО МО: 100); (юю ОАВАКУМа (5ЕО ІО МО: 101); (л) МНМРІ ОБГ ОР (5ЕО ІО МО: 102); (м) ОАВАК (ЗЕО ІО МО: 103); (н) МНМРІ СР аРРМАКК (5ЕО ІО МО: 104); (о) ККААР (ЗЕО ІО МО: 105); і (п) РМАКК (ЗЕО ІО МО: 106), де Х позначає будь-яку амінокислоту.
В одному з варіантів здійснення винаходу протеазу, яка має здатність розщеплювати лінкер, розщеплений протеазою, вибирають з групи, яка складається з металопротеїнази, наприклад, матричної металопротеїнази (ММР) 1-28 і "дезінтегрину і металопротеїнази" (А Оівіпієдгіп Апа
МеїаїІоргоїєїпазе (АБАМ)) 2, 7-12, 15, 17-23, 28-30 і 33, серинової протеази, наприклад, активатора плазміногену урокіназного типу і матриптази, цистеїнової протеази, аспарагінової протеази і протеази катепсину. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу протеаза являє собою ММРУ або ММР2. В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу протеаза являє собою матриптазу. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність ВОАВУММа (5ЕО ІО МО: 36).
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, перший антигензв'язуючий фрагмент містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9Уо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраній з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 45 і ЗЕО ІЮ МО: 46, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, що вибраний з групи, що складається з
ЗЕО ІО МО: 17, 5ЕО ІЮ МО: 181 5ЕО ІЮ МО: 19.
Зо В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, перший антигензв'язуючий фрагмент містить гіперваріабельні ділянки (СОР) важкого ланцюга, що мають 5ЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 451
ЗЕО ІО МО: 46, і СОВ легкого ланцюга, що мають 5ЕО І МО: 17, 5ЕО ІЮ МО: 18 ії 5ЕО І МО: 19.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, перший антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності
ЗЕО ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 90, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 55.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, перший антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 55.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВІ1 і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні
БО приблизно на 95 95, 96 9, 97 Фо, 98 Фо, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраній з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІО МО: 15 і 5ЕО ІО МО: 16, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 Фо, 96 95, 97 95, 98 о, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраній з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 17, «ЕОІЮО МО: 1811 5ЕО ІЮО МО: 19.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВІ1 і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 Фо, 98 Фо, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраній з бо групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 151, 5ЕО ІО МО: 152 ї 5БО ІЮО МО: 153, і принаймні одну
СОК легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 Фо, 98 Фо, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраній з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 154, БО ІЮ МО: 155 і 5ЕО ІО МО: 156.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1 і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 14, 5БЕО ІЮО МО: 15 і 5ЕО ІО МО: 16, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 17, БЕО ІЮО МО: 18 і 5ЕО І МО: 19.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1 і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮО МО: 151, 5ЕО ІО МО: 152 ї 5ЕО ІО МО: 153, і принаймні одну СОЕК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 154, 5ЕО ІЮО МО: 155 ії БЕО ІЮ МО: 156.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності
ЗЕО ІЮ МО: 47, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 90, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 55.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності
ЗЕБЕО 10 МО: 157, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9Уо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО: 158.
Зо В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 47, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 55.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 157, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 158.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 Фо, 97 9», 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраній з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 107, 5ЕО ІЮО МО: 108 ї 5ЕО ІО МО: 109, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 Фо, 97 9», 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраній з групи, яка складається з ФБЕО ІЮ МО: 110, 5ЕО ІО МО: 111 ї БЕО ІО МО: 112.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 107, 5ЕО ІО МО: 108 ї БЕО ІО МО: 109, і принаймні одну СОЕК легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ
МО: 110, БЕО ІО МО: 111 ї БЕО ІЮ МО: 112.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Ор, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІО МО: 113, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО: 114. бо В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі,
що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 113, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 114.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з НЕВІ і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга будь-якого з антитіл, описаних в УУ0/2006/082515, яка повністю включена в даний опис як посилання.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з НЕВІ і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 Фо, 98 Фо, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраній з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 57 і 5ЕО ІО МО: 58, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 Фо, 96 95, 97 95, 98 о, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраній з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 59, БЕО ІЮО МО: 60 і 5ЕО ІЮ МО: 61.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з НЕВІ і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 56, 5БО ІЮО МО: 57 і 5ЕО ІО МО: 58, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ
МО: 59, БЕО ІЮ МО: 60 ї БЕО ІЮ МО: 61.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Ор, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕСО ІО МО: 32, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95
Зо амінокислотній послідовності ФЕО ІЮО МО: 33.
В одному з варіантів здійснення винаходу в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини, вказаній в даному описі, другий антигензв'язуючий фрагмент містить важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 32, і легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 33.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 9», 97 9», 98 Фо, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 55, і другий і третій антигензв'язуючі фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з НЕН2, де другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 160, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 9895, 9995 або 10095 амінокислотній послідовності 5ЕО 10 МО: 161, де третій антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 159, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 98 925, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮО МО: 161.
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, вказана в даному описі, містить (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕ ІО МО: 2; (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 3; і (в) легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 1.
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, вказана в даному описі, містить (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕ ІО МО: 4; 60 (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 3; і б
(в) легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 1.
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, вказана в даному описі, містить (а) принаймні один важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС І МО: 32; (б) принаймні один легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 34.
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, вказана в даному описі, містить (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО І МО: 72; (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 3; і (в) легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 1.
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, вказана в даному описі, містить (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО І МО: 85; (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 3; і (в) легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 1.
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, вказана в даному описі, містить (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮО МО: 73; (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕ ІО МО: З; (в) перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 1; і (г) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 74.
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, вказана в даному описі, містить (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 77; (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 82; (в) перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮО МО: 78; і (г) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 81.
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, вказана в даному описі, містить
Зо (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО І МО: 76; (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 77; (в) перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮО МО: 78; і (г) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 79.
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, вказана в даному описі, містить (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕ ІО МО: 132; (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 136; (в) перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮО МО: 81; і (г) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 133.
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, вказана в даному описі, містить (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕ ІЮ МО: 137; (б) другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІО МО: 139; (в)уперший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 81; і (г) другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 138.
Одним з об'єктів винаходу є ідіотипспецифічний поліпептид для оборотного приховування антигензв'язуючого сайта молекули антитіла до СО3. В одному з варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид являє собою антиїдіотиповий 5сЕм. В одному з варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид ковалентно приєднаний до молекули через лінкер. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер являє собою пептидний лінкер. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер являє собою лінкер, розщеплений протеазою. В одному з варіантів здійснення винаходу пептидний лінкер містить принаймні один сайт, який розпізнається протеазою. В одному з варіантів здійснення винаходу протеазу вибирають з групи, яка складається з металопротеїнази, наприклад, матричної металопротеїнази (ММР) 1-28 і "дезінтегрину і металопротеїнази" (АСАМ) 2, 7-12, 15, 17-23, 28-30 і 33, серинової протеази, наприклад, активатора плазміногену урокіназного типу і матриптази, цистеїнової протеази, аспарагінової протеази і протеази катепсину.
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу протеаза являє собою ММРО або
ММР. В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу протеаза являє собою матриптазу. 60 В одному з варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид ковалентно приєднаний до молекули через декілька лінкерів. В одному з варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид ковалентно приєднаний до молекули через два лінкера.
В одному з варіантів здійснення винаходу молекула, яка містить антигензв'язуючий сайт антитіла до СОЗ, являє собою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
РУБІН (ЗЕО ІО МО: 20); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 МІМТЕТОЕРАМАВОЕКа (5ЕО ІО МО: 21); і (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ РМОМОМІ ОМ (ЗЕО ІО МО: 22).
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА |) 1
ВАБКОЗУЗТОЗММУМІН (ЗЕО ІО МО: 23); (б) амінокислотну послідовність СОВА 2 МУБМІ ЕБЗ (5ЕО ІЮО МО: 24) і (в) амінокислотну послідовність СОВА І З ОНЗАЕЕРМУТ (5ЕО ІО МО: 25).
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
РУБІН (ЗЕО ІО МО: 20); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 МІМТЕТОЕРАМАВОЕКа (5ЕО ІО МО: 21); (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ РМОМОМІ ОМ (ЗЕО ІО МО: 22); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
ВАБКОЗУЗТОЗММУМІН (ЗЕО ІО МО: 23); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 УМ5МІ ЕБЗ (ЗЕО І МО: 24) і (є) амінокислотну послідовність СОВА І З ОНБВЕЕРМ/Т (ЗЕО ІО МО: 25).
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей:
Зо (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОМ Н) 1
ЗУСМУБ5(5ЕО ІЮ МО: 26); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 ПМУ/сравТмМуНзА ІЗ (5ЕО ІО МО: 27); і (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ СІИТТММООММАМОМ (5ЕО І МО: 28).
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОК І) 1
ВАБЕМІЮБМІ А (5ЕО І МО: 29); (б) амінокислотну послідовність СОН 12 ААТНГ АЮ (ЗЕО ІО МО: 30); і (в) амінокислотну послідовність СОН І З ОНУУБТРМТ (5ЕО ІО МО: 31).
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОМ Н) 1
ЗУСМУБ5(5ЕО ІЮ МО: 26); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 ПУ/сравТмМуНзА ІЗ (5ЕО ІО МО: 27); (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ СІИТТММООММАМОМ (5ЕО І МО: 28); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОК І) 1
ВАБЕМІЮБМІ А (5ЕО І МО: 29); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 ААТЕГ А (ЗЕО ІО МО: 30); і (є) амінокислотну послідовність СОН І З ОНУМТРМТ (ЗЕО ІО МО: 31).
Іншим об'єктом винаходу є виділений полінуклеотид, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, запропоновану у винаході, або його фрагмент.
Винахід відноситься також до поліпептидів, які кодуються полінуклеотидуми, запропонованими у винаході. Винахід відноситься також до експресійного вектора, що містить виділений полінуклеотид, запропонований у винаході, і клітини-хазяїна, яка містить виділений полінуклеотид або експресійний вектор, запропонований у винаході. В деяких варіантах здійснення винаходу клітина-хазяїн являє собою еукаріотичну клітину, зокрема, клітину ссавця.
Іншим об'єктом винаходу є спосіб одержання активованою протеазою молекули, що активує
Т-клітини, запропонованої у винаході, що включає стадії а) культивування клітини-хазяїна, 60 запропонованої у винаході, в умовах, придатних для експресії активованою протеазою молекулою, що активує Т-клітини, і (б) виділення активованою протеазою молекули, що активує
Т-клітини. Винахід відноситься також до активованої протеазою молекули, що активує Т-клітини, одержаної способом, запропонованим у винаході.
Іншим об'єктом винаходу є спосіб одержання ідіотипспецифічного поліпептиду, запропонованого у винаході, що включає стадії а) культивування клітини-хазяїна, запропонованої у винаході, в умовах, придатних для експресії активованою протеазою молекули, що активує Т-клітини, і (б) виділення ідіотипспецифічного поліпептиду. Винахід відноситься також до одержаного способом, запропонованим у винаході, ідіотипспецифічного поліпептиду.
Винахід відноситься також до фармацевтичної композиції, яка містить активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, запропоновану у винаході, і фармацевтично прийнятний носій.
Під обсяг винаходу підпадають також способи застосування активованої протеазою молекули, що активує Т-клітини, і фармацевтичної композиції, запропонованої у винаході.
Одним з об'єктів винаходу є активована протеазою молекула, що активує Т-клітини, або фармацевтична композиція, запропонована у винаході, призначена для застосування як лікарський засіб. Одним з об'єктів винаходу є активована протеазою молекула, що активує Т- клітини або фармацевтична композиція, запропонована у винаході, призначена для застосування для лікування захворювання в індивідуума, що потребує цього. В конкретному варіанті здійснення винаходу захворювання являє собою рак.
Запропоновано також застосування активованою протеазою молекули, що активує Т- клітини, запропонованої у винаході, для приготування лікарського засобу, призначеного для лікування захворювання в індивідуума, що потребує цього; а також спосіб лікування захворювання в індивідуума, що включає введення зазначеному індивідууму в терапевтично ефективній кількості композиції, яка містить активовану протеазою молекулу, що активує Т- клітини, запропоновану у винаході, в фармацевтично прийнятній формі. В конкретному варіанті здійснення винаходу захворювання являє собою рак. В будь-якому із вищевказаних варіантів здійснення винаходу індивідуум переважно є ссавцем, насамперед людиною.
У винаході запропонований також спосіб індукції лізису клітини-мішені, насамперед
Зо пухлинної клітини, що включає приведення в контакт клітини-мішені з активованою протеазою молекулою, що активує Т-клітини, запропонованою у винаході, в присутності Т-клітини, насамперед цитотоксичної Т-клітини.
Іншим об'єктом винаходу є також композиція, яка містить активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, вказану в даному описі, і фармацевтично прийнятний носій.
Іншим об'єктом винаходу є також композиція, що містить ідіотипспецифічний поліпептид, вказаний в даному описі, і фармацевтично прийнятний носій.
Іншим об'єктом винаходу є також активована протеазою біспецифічна молекула, що активує
Т-клітини, або ідіотипспецифічний поліпептид, вказані в даному описі, або композиція, вказана в даному описі, призначені для застосування як лікарський засіб. В одному з варіантів здійснення винаходу лікарський засіб призначений для лікування або уповільнення розвитку раку, лікування або уповільнення розвитку захворювання, пов'язаного з імунною системою, і/або підвищення або стимуляції імунної відповіді або функції в індивідуума.
Іншим об'єктом винаходу є також активована протеазою біспецифічна молекула, що активує
Т-клітини, або ідіотипспецифічний поліпептид, вказані в даному описі, призначені для лікування захворювання в індивідуума, що потребує цього. В одному з варіантів здійснення винаходу захворювання являє собою проліферативне порушення, насамперед рак.
Іншим об'єктом винаходу є також спосіб лікування захворювання в індивідуума, що включає введення зазначеному індивідууму в терапевтично ефективній кількості композиції, яка містить активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, або композицію, вказану в даному описі.
Іншим об'єктом винаходу є також спосіб індукції лізису клітини-мішені, що включає приведення до контакту клітини-мішені з активованою протеазою біспецифічною молекулою, що активує Т-клітини або композицією, вказаній в даному описі, в присутності Т-клітини. В одному з варіантів здійснення винаходу спосіб індукції лізису клітини-мішені являє собою спосіб іп міо. В одному з варіантів здійснення винаходу клітина-мішень являє собою ракову клітину. В одному з варіантів здійснення винаходу клітина-мішень експресує протеазу, що має здатність активувати активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини.
Іншим об'єктом винаходу є також антиідіотипове антитіло до СО3З або його бо антигензв'язуючий фрагмент, специфічні по відношенню до ідіотипу анти-СОЗ антигензв'язуючої молекули, де антиідіотипове антитіло до СОЗ або його фрагмент при зв'язуванні з анти-СОЗ антигензв'язуючою молекулою специфічно блокують зв'язування анти-СОЗ антигензв'язуючої молекули з СОЗ.
В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотипове антитіло до СОЗ або його антигензв'язуючий фрагмент оборотно асоційовані з анти-СОЗ антигензв'язуючою молекулою через пептидний лінкер, що містить сайт, який розпізнається протеазою. В одному з варіантів здійснення винаходу СОЗ являє собою мишачий, мавпячий або людський СОЗ.
Іншим об'єктом винаходу є спосіб знижчення токсичності іп мімо біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, що включає приєднання ідіотипспецифічного поліпептиду, вказаного в даному описі, до біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, за допомогою розщеплюваного протеазою лінкера з утворенням активованої протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т- клітини, де активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, має знижчену токсичність іп мімо порівняно з біспецифічною молекулою, яка активує Т-клітини.
Короткий опис креслень
На кресленнях показано:
На фіг. 1А-Д - схематичне зображення різних зв'язуючих СОЗ агентів з маскуючими фрагментами. На фіг. АТ - конструкція 7859: анти-ІО (антиідіотиповий) СН2527 5сЕм 4.15.64, сайт, який розпізнається матриптазою МКОб2, СОЗ Ес. На фіг. 1Б - конструкція 7860: анти-ІО
СнН2г527 5сЕм 4.32.63, сайт, який розпізнається матриптазою МКОб2, СОЗ Ес. На фіг. 18 - конструкція 7857: анти-ІЮ СН2г527 всЕм 4.15.64, нерозщеплюваний лінкер, СОЗ Ес. На фіг. 1Г - конструкція: ІЮ (ідентифікаційний номер) 7858 анти-ІЮ СН2г527 зсЕм 4.32.63, нерозщеплюваний лінкер, СОЗ Ес. На фіг. 1Д - конструкція 7861: одновалентне антитіло до СОЗ, Ес;
На фіг. 2 - таблиця, в якій узагальнені дані про афінність антиідіотипових маскуючих фрагментів до зв'язуючого СОЗ агента (СН2527);
На фіг. ЗА-Г - результати аналізу методом капілярного електрофорезу в присутності ДСН молекул, представлених на фіг. ТА і Б. На фіг. ЗА-Б - результати аналізу методом капілярного електрофорезу в присутності ДСН молекули, представленої на фіг. ТА, в невідновлюючих (фіг. ЗА) і відновлюючих (фіг. ЗБ) умовах. Порівняння необробленої (І) і обробленої молекули (І) продемонструвало повне розщеплення анти-ІЮО 5сЕм після обробки рекомбінантної (й)
Зо матриптазою/5114 протягом 48 год. при 37 "С. Один зразок (ІІ) не обробляли, але інкубували при 37"С протягом 48 год. На фіг. 3В-Г - результати аналізу методом капілярного електрофорезу в присутності ДСН молекули, представленої на фіг. 1Б, в невідновлюючих (фіг. ЗВ) і відновлюючих (фіг. ЗГ) умовах. Порівняння необробленої (І) і обробленої молекули (І) продемонструвало повне розщеплення анти-ІЮО 5сЕм після обробки "п-матриптазою/51Т14 протягом 48 год. при 37 "С. Один зразок (ІІ) не обробляли, але інкубували при 37 "С протягом 48 год.;
На фіг. 4А-В - вплив антиідіотипічного маскування на зв'язування СОЗ3. На фіг. 4Аї В - результати репортерних аналізів з використанням дигкаї МЕАТ, які демонструють маскуючий ефект антиідіотипового специфічного по відношенню до СОЗ в5сЕм 4.15.64 (фіг. 4А) або антиїдіотипового специфічного по відношенню до СОЗ 5сЕм 4.32.63 (фіг. 4Б). Одновалентні ІдС до СОЗ перехресно зшивали через антитіло до людського Ес-домену (нанесеного на планшет для аналізу) перед додаванням клітин дшиКаї МЕАТ (репортерна клітинна лінія гострого лімфатичного лейкозу з промотором МЕАТ, що експресує людську СОЗє (є-субодиницю людського СО3)). Репортерна клітинна лінія УиЖаї-МЕАТ (фірма Рготеда) являє собою репортерну клітинну лінію людського гострого лімфатичного лейкозу з промотором МЕАТ, яка експресує людську СОЗє. Якщо СОЗ-зв'язуючий агент зв'язується з СОЗє, то відбувається експресія люциферази та її можна вимірювати за люмінесценцією після додавання субстрату
Опе-Сіо (фірма Рготеда). На фіг. 48 представлені результати порівняння величин ЕСво, що характеризують зв'язування з СОЗє, для замаскованого і незамаскованого СОЗ-зв'язуючого агента;
На фіг. БА-3 - схематичне зображення різних біспецифічних молекул, які активують Т- клітини, з маскуючими фрагментами. На фіг. БА - конструкція 7344: анти-ІЮ СН2г527 в5сЕм 4.15.64, сайт, який розпізнається матриптазою МКОб2, СОЗ 1605 Ес. На фіг. 5Б - конструкція 7676: анти-ІЮ СН2г527 5сЕм 4.15.64, нерозщеплюваний лінкер, СОЗ 1605 Ес. На фіг. 58 - конструкція 7496: анти-ІЮ СН2г527 зсЕм 4.32.63, сайт, який розпізнається матриптазою МКОб2,
СОЗ 1605 Ес. На фіг. 5Г - конструкція 7611: анти-ІЮ СН2г527 з5сЕм 4.32.63, нерозщеплюваний лінксер, СОЗ 1605 Ес. На фіг. 5Д - конструкція 6298: СА916-0-1605-02 51 МУ(1). БоІВт1 1605 класична ТОВ (біспецифічна молекула, що активує Т-клітини) в форматі 2-1 із загальним легким ланцюгом. На фіг. 5Е - конструкція 6100: СЦББА9У16-0-1605 в5ї МУ(За) Бої! 1605 бо інвертована ТОВ в форматі 24-41 із загальним легким ланцюгом. На фіг. 5Ж - конструкція ІО 6182:
рРА7а5 ТОВ 51 СНО М/(За). ОР47 інвертована ТОВ в форматі 2-41. На фіг. 53 - конструкція 7494: анти-ІО СН2г527 Раб 4.15.64, сайт, який розпізнається матриптазою МКОб62, СОЗ 1605 Ес;
На фіг. 6 - результати застосування для трансфекції першого співвідношення плазмід, одержані за допомогою гель-фільтрації (1("западина"): 1 ("виступ"): З (СІ С) (загальний легкий ланцюг);
На фіг. 7 - результати застосування для трансфекції іншого співвідношення плазмід, одержані за допомогою гель-фільтрації (1("западина"): 2 ("виступ"): З (СІ С);
На фіг. 8 - результати, одержані за допомогою аналізу методом капілярного електрофорезу в присутності ДСН (КЕ-ДСН), ТОВ-молекули, представленої на фіг. БА (10 7344) (повністю очищений препарат): Смуга А - невідновлюючі умови, смуга Б - відновлюючі умови, смуга В - білковий стандарт;
На фіг. 9 - результати, одержані за допомогою аналізу методом КЕ-ДСН, ТОВ-молекули, представленої на фіг. 5Б (10 7676) (повністю очищений препарат): Смуга А - невідновлюючі умови, смуга Б - відновлюючі умови, смуга В - білковий стандарт;
На фіг. 10 - результати, одержані за допомогою аналізу методом КЕ-ДСН, ТОВ-молекули, представленої на фіг. 5В (10 7496) (повністю очищений препарат): Смуга А - невідновлюючі умови, смуга Б - відновлюючі умови, смуга В - білковий стандарт;
На фіг. 11 - результати, одержані за допомогою аналізу методом КЕ-ДСН, ТОВ-молекули, представленої на фіг. 5Г (10 7611) (повністю очищений препарат): Смуга А - невідновлюючі умови, смуга Б - відновлюючі умови, смуга В - білковий стандарт;
На фіг. 12А-Г - результати, одержані за допомогою аналізу методом капілярного електрофорезу в присутності ДСН, молекул, представлених на фіг. 5А і В. На фіг.т12А і Б - результати, одержані за допомогою аналізу методом капілярного електрофорезу, молекул, представлених на фіг. БА (10 7344) анти-ІЮ СН2г527 зсЕм 4.15.64, МКОб62, СОЗ3 1606 Ес, в невідновлюючих (фіг. 12А) і відновлюючих (фіг. 12Б) умовах. Порівняння необробленої (1) і обробленої (Ії) молекули продемонструвало повне розщеплення анти-ІО 5сЕм після обробки гп- матриптазою/5114 протягом 48 год. при 37 "С. Один зразок (Ії) не обробляли, але інкубували при 37 "С протягом 48 год. Застосовували попереднє фарбування білковим маркером (ІМ) Мак 12 (фірма Іпмйгтодеп) для визначення правильної молекулярної маси. На фіг. 128 ії г -
Зо результати, одержані за допомогою аналізу методом капілярного електрофорезу, молекули, представленої на фіг. 58 (10 7496) анти-ІЮ СН2г527 взсЕм 4.32.63 МКО6б2 СОЗ 1606 Кс, в невідновлюючих (фіг. 128) і відновлюючих (фіг. 12Г) умовах. Порівняння необробленої (1) і обробленої (Ії) молекули продемонструвало повне розщеплення анти-ІО 5сЕм після обробки гп- матриптазою/5114 протягом 48 год. при 37 "С. Один зразок (Ії) не обробляли, але інкубували при 37 "С протягом 48 год. Застосовували попереднє фарбування білковим маркером (ІМ) Мак 12 (фірма Іпийкодеп) для визначення правильної молекулярної маси;
На фіг. 13 - дані про рівень експресії ЕоІВ1, кількісно встановлені за допомогою набіру ОК (фірма РакКо). антитіло до ЕоІВ1!: Мо І5-0125620-100 (фірма ІМебрап Віобсієпсев Іпс); застосоване в концентрації 20 мкг/мл; мишачий Ідаст1-ізотип: Мо 554121 (фірма ВО);
На фіг. 14А ї Б - результати оцінки активації Т-клітин активованими протеазою ТОВ. На фіг. 14А - дані про цитоліз клітин 5КоУ3, індукований активованими протеазою молекулами ТОВ в концентрації 1їОнМ (ТОВ з різними маскуючими антиіїдіотиповими специфічними по відношенню до СОЗ клонами, розщеплюваним і нерозщеплюваним лінкером, попередньо оброблені очищеною гп-матриптазою/5114) і людськими РВМО після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-7:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Попередню обробку гй- матриптазою/5114 (фірма НУО Бузієтв) здійснювали протягом 24 год. при 37 "С. На фіг. 14Б продемонстрована активація Т-клітин з людських РВМС, індукована зв'язуванням активованою протеазою ТСВ в концентрації їО0нМ (ТОВ з різними маскуючими антиідіотиповими специфічними по відношенню до СОЗ фрагментами, розщеплюваним і нерозщеплюваним лінксером, оброблені молекули) на клітинах 5КоуЗ3 після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-7171, ефекторні клітини являли собою людські РВМСО). Маркери Т-клітинної активації являли собою
СО25 (ліві панелі) і 2069 (праві панелі). Представлені дані для СО4-- і СО8:-Т-клітин;
На фіг. 15А ї Б - результати оцінки активації Т-клітин активованими протеазою ТОВ. На фіг. 15А - дані про цитоліз клітин МКп-45, індукований активованими протеазою молекулами
ТОВ в концентрації Т0О0нМ (ТОВ з різними маскуючими антиідіотиповими специфічними по відношенню до СОЗ клонами, розщеплюваним і нерозщеплюваним лінкером, оброблені молекули) і людськими РВМС після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-7:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМСО). Попередню обробку гп-матриптазою/5114 (фірма НУО Бузієтв) здійснювали протягом 24 год. при 37 "С. На фіг. 15Б продемонстрована активація Т-клітин з бо людських РВМС, індукована зв'язуванням активованою протеазою ТОВ в концентрації 100нМ
(ТОВ з різними маскуючими антиїдіостиповими специфічними по відношенню до СОЗ фрагментами, розщеплюваним і нерозщеплюваним лінкером, оброблені молекули) на клітинах
МКп-45 після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-7:1, ефекторні клітини являли собою людські
РВМСО). Маркери Т-клітинної активації являли собою СО25 (ліві панелі) і СО69 (праві панелі).
Представлені дані для СО4-- і 2О8:-Т-клітин;
На фіг. 16 - дані про цитоліз клітин НТ29, індукований активованими протеазою молекулами
ТОВ в концентрації ТбнмМ (ТОВ з різними маскуючими антиїдіостиповими специфічними по відношенню до СОЗ клонами, розщеплюваним і нерозщеплюваним лінкером, оброблені молекули) і людськими РВМС після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-7:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМСО). Попередню обробку гп-матриптазою/5114 (фірма НУО Бузієтв) здійснювали протягом 24 год. при 37 "С. Стовпчиками зліва направо позначені наступні конструкції: 7344: анти-ІЮ СН2г527 5сЕм 4.15.64 МКОб2 СОЗ 1606Ес; 7344: анти-ІЮ СН2г527 зсЕм 4.15.64 МКО62 СОЗ 1606Ес оброблена; 7676: анти-ІЮО СН2г527 5зсЕм 4.15.64 нерозщеплюваний лінкер СОЗ 16О6Ес; 7496: анти-ІЮ СН2г527 5сЕм 4.32.63 МКО6б2 СОЗ 1606 Ес; 7496: анти-ІО
СН2г527 зсЕм 4.32.63 МКОб2 СОЗ 1606 Бс оброблена; 7611: анти-ІЮ СН2г527 взсЕм 4.32.63 нерозщеплюваний лінкер СОЗ 1606 Ес; 6298: САЗУ16-0-1605-02 51 М(1); 6182: ОРА7С5 ТОВ ві
СНО М (За);
На фіг. 17 - дані про цитоліз клітин 5КоУЗ3, індукований активованими протеазою молекулами
ТОВ в концентрації ТїбнМ (ТОВ з різними маскуючими антиїдіостиповими специфічними по відношенню до СОЗ клонами, розщеплюваним і нерозщеплюваним лінкером, оброблені молекули) і людськими РВМОС (РВМОС з іншого донора порівняно з тим, клітини якого використовували при отриманні результатів, представлених на фіг. 14А) після інкубації протягом 48 год. (Е"Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Попередню обробку пп-матриптазою/5Т14 (фірма НЯ Бузіет5) здійснювали за 24 год. при 37 "б.
Стовпчиками зліва направо позначені наступні конструкції: 7344: анти-ІЮ СН2г527 зсЕм 4.15.64, мМКОб2, СОЗ 1606Ес; 7344: анти-ІЮ СН2г527 5сЕм 4.15.64, МКО62, СОЗ 1606Ес оброблена; 7676: анти-ІЮО СН2г527 зем 4.15.64 нерозщеплюваний лінкер СОЗ 1606Ес; 7496: анти-ІЮ СН2г527 5сЕм 432.63 МКОб2 СОЗ 1606 Ес; 7496: анти-ІіЮ0 СН2г527 в5сЕм 4.32.63 МКОб2 СОЗ3 1606
Ес оброблена; 7611: анти-ІЮО СН2г527 всем 4.32.63 нерозщеплюваний лінкер СОЗ 1606 Ес; 6298:
Зо сАЗ16-0-1605-02 51 М(1); 6182: ОРА7О5 ТОВ 5 СНО М (За);
На фіг. 18А ї Б - результати оцінки активації Т-клітин активованими протеазою ТОВ. На фіг. 18А - дані про цитоліз залежно від дози клітин НегГа, індукований активованими протеазою молекулами ТОВ (ТОВ з маскуючим антиїдіостиповим специфічним по відношенню до СОЗ клоном 4.15.64, розщеплюваним або нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) і людськими РВМС (виділеними з лейкоцитарної плівки) після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Попередню обробку гн- матриптазою/5114 (фірма НУО бувієтв) здійснювали протягом 24 год. при 37 "С. На фіг. 185 - дані про активацію залежно від дози Т-клітин з людських РВМС, індукованою зв'язуванням активованою протеазою ТОВ (ТОВ з маскуючим антиідіотиповим специфічним по відношенню до СОЗ клоном 4.15.64, розщеплюваним або нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) на клітинах НегГа після інкубації протягом 48 год. (Е"Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Маркери Т-клітинної активації являли собою СО25 (ліві панелі) і СО69 (праві панелі). Представлені дані для СО4-- і 2О8:-Т-клітин;
На фіг. 19А ї Б - результати оцінки активації Т-клітин активованими протеазою ТОВ. На фіг. 19А - дані про цитоліз залежно від дози клітин НегГа, індукований активованими протеазою молекулами ТОВ (ТОВ з маскуючим антиїдіостиповим специфічним по відношенню до СОЗ клоном 4.32.63, розщеплюваним або нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) і людськими РВМС (виділеними з лейкоцитарної плівки) після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Попередню обробку гн- матриптазою/5114 (фірма НУО бувієтв) здійснювали протягом 24 год. при 37 "С. На фіг. 1965 - дані про активацію залежно від дози Т-клітин з людських РВМС, індукованою зв'язуванням активованою протеазою ТОВ (ТОВ з маскуючим антиідіотиповим специфічним по відношенню до СОЗ клоном 4.32.63, розщеплюваним або нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) на клітинах НегГа після інкубації протягом 48 год. (Е"Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Маркери Т-клітинної активації являли собою СО25 (ліві панелі) і СО69 (праві панелі). Представлені дані для СО4-- і 2О8:-Т-клітин;
На фіг. 20А ї Б - результати оцінки активації Т-клітин активованими протеазою ТОВ. На фіг. 20А - дані про цитоліз залежно від дози клітин 5КоОУЗ, індукований активованими протеазою молекулами ТОВ (ТОВ з маскуючим антиїдіостиповим специфічним по відношенню до СОЗ 60 клоном 4.15.64, розщеплюваним або нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) і людськими РВМС (виділеними з лейкоцитарної плівки) після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Попередню обробку гн- матриптазою/5114 (фірма НУО бувієтв) здійснювали протягом 24 год. при 37 "С. На фіг. 205 - дані про активацію залежно від дози Т-клітин з людських РВМС, індукованою зв'язуванням активованою протеазою ТОВ (ТОВ з маскуючим антиідіотиповим специфічним по відношенню до СОЗ клоном 4.15.64, розщеплюваним або нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) на клітинах 5КоуЗ після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Маркери Т-клітинної активації являли собою СО25 (ліві панелі) і СО69 (праві панелі). Представлені дані для СО4-- і 2О8:-Т-клітин;
На фіг. 21А ї Б - результати оцінки активації Т-клітин активованими протеазою ТОВ. На фіг. 21А - дані про цитоліз залежно від дози клітин 5КоОУЗ, індукований активованими протеазою молекулами ТОВ (ТОВ з маскуючим антиїдіостиповим специфічним по відношенню до СОЗ клоном 4.32.63, розщеплюваним або нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) і людськими РВМС (виділеними з лейкоцитарної плівки) після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Попередню обробку гн- матриптазою/5114 (фірма НУО бувієтв) здійснювали протягом 24 год. при 37 "С. На фіг. 2165 - дані про активацію залежно від дози Т-клітин з людських РВМС, індукованою зв'язуванням активованою протеазою ТОВ (ТОВ з маскуючим антиідіотиповим специфічним по відношенню до СОЗ клоном 4.32.63, розщеплюваним або нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) на клітинах 5КоуЗ після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Маркери Т-клітинної активації являли собою СО25 (ліві панелі) і СО69 (праві панелі). Представлені дані для СО4-- і 2О8:-Т-клітин;
На фіг. 22А їі Б - результати оцінки активації Т-клітин активованими протеазою ТОВ. На фіг. 22А - дані про активацію залежно від дози Т-клітин з людських РВМС (з донора, відмінного від донора, клітини якого використовували в описаних раніше експериментах), індукованою зв'язуванням активованою протеазою ТОВ (ТОВ з маскуючим антиідіотиповим специфічним по відношенню до СОЗ клоном 4.15.64, розщеплюваним або нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) на клітинах НТ29 після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМСО). Маркери Т-клітинної активації являли собою СО25 (ліві
Зо панелі) і СО69 (праві панелі). Представлені дані для СО4-- і СО8:-Т-клітин. На фіг. 22Б - дані про активацію залежно від дози Т-клітин з людських РВМО (з іншого донора порівняно з тим, клітини якого використовували при отриманні результатів, представлених на фіг. 16), індукованою зв'язуванням активованою протеазою ТОВ (ТОВ з маскуючим антиідіотиповим специфічним по відношенню до СОЗ клоном 4.32.63, розщеплюваним або нерозщеплюваним лінксером, оброблена молекула) на клітинах НТ29 після інкубації протягом 48 год. (Е"Т-10171, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Маркери Т-клітинної активації являли собою
СО25 (ліві панелі) і 2069 (праві панелі). Представлені дані для СО4-- і СО8:-Т-клітин.
На фіг. 23 -дані про активацію залежно від дози Т-клітин з людських РВМСО (з донора, відмінного від донора, клітини якого використовували в описаних раніше експериментах), індукованою зв'язуванням активованою протеазою ТОВ (ТОВ з маскуючим антиідіотиповим специфічним по відношенню до СОЗ клоном 4.15.64, розщеплюваним або нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) на клітинах НАСЕріс після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС). Маркери Т-клітинної активації являли собою
СО25 (ліві панелі) і 2069 (праві панелі). Представлені дані для СО4-- і СО8:-Т-клітин;
На фіг. 24 - дані про цитоліз клітин Оусаг/3З, індукований активованими протеазою молекулами ТСВ в концентрації 50нМ (ТОВ з різними маскуючими антиідіотиповими специфічними по відношенню до СОЗ клонами, розщеплюваним і нерозщеплюваним лінкером, оброблені молекули) і людськими РВМС після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМСОС). Попередню обробку гп-матриптазою/5114 (фірма НО
Зузієтв) здійснювали протягом 10 хв при 37 "С (неповне розщеплення);
На фіг. 25 - дані про цитоліз клітин 5КоУЗ3, індукований активованими протеазою молекулами
ТОВ в концентрації тОнМ (ТОВ з маскуючим антиідіотиповим специфічним по відношенню до
СОЗ клоном 4.15.64, розщеплюваним і нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) і людськими РВМС (виділеними з лейкоцитарної плівки) після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-1071, ефекторні клітини являли собою людські РВМО з трьох інших донорів). Попередню обробку пПп-матриптазою/5114 (фірма НУО Зузіетв) здійснювали протягом 24 год. 37 "С;
На фіг. 26 - дані про цитоліз клітин 5КоУЗ3, індукований активованими протеазою молекулами
ТОВ в концентрації тОнМ (ТОВ з маскуючим антиідіотиповим специфічним по відношенню до
СОЗ клоном 4.32.63, розщеплюваним і нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) і бо людськими РВМС (виділеними з лейкоцитарної плівки) після інкубації протягом 48 год.
(Е:Т-1071, ефекторні клітини являли собою людські РВМО з трьох інших донорів). Попередню обробку пПп-матриптазою/5114 (фірма НУО Зузіетв) здійснювали протягом 24 год. при 37 "С;
На фіг. 27 - дані про цитоліз клітин НеГа, індукований активованими протеазою молекулами
ТОВ в концентрації 100пМ (ТОВ з маскуючим антиідіотиповим специфічним по відношенню до
СОЗ клоном 4.32.63, розщеплюваним і нерозщеплюваним лінкером, оброблена молекула) і людськими РВМС (виділеними з лейкоцитарної плівки) після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-1071, ефекторні клітини являли собою людські РВМО з трьох інших донорів). Попередню обробку пПп-матриптазою/5114 (фірма НУО Зузіетв) здійснювали протягом 24 год. при 37 "С;
На фіг.28 - схематичне зображення конструкції анти-ІЮО (3А201 в5сЕм, сайт, який розпізнається матричної металопротеїназою, (А2О1 Ес (БА201-анти-СА201-5сЕм);
На фіг. 29 - схематичне зображення антитіла до НЕНІТ СА2О1;
На фіг. зЗОА ії Б - результати, одержані за допомогою аналізу методом капілярного електрофорезу в присутності ДСН, для молекули, представленої на фіг. 28, в невідновлюючих (фіг. ЗОА) і відновлюючих умовах (фіг. ЗОБ). Молекулу, представлену на фіг. 28, очищували до гомогенного стану на білку А і за допомогою гель-фільтрації і піддавали аналізу методом капілярного електрофорезу-ДСН;
На фіг. 31 - результати ЕАС5-аналізу зв'язування СА2О1-анти-СЙЧА201-5сЕм і СА201 з НЕНІ, що експресується на клітинах НЗ22М, для підтвердження маскуючого ефекту антиідіотипового
САгОЇ 5сБбм. 0 (А201-анти-йА201-5сЕм інкубували протягом ночі з матриксною металопротеїназою ММР-2 і зв'язування з клітинами НЗ22М порівнювали з нерозщепленою конструкцією С(А201-анти-СА201-5сЕм, С1А201 і антитілом, застосовуваним як контроль ізотипу
Ідс21. Зв'язування з НЕВІ1 на клітинах НЗ22М виявляли, використовуючи як вторинне антитіло
Кар")2-фрагмент козячого антилюдського Ідс, Ес-специфічного, кон'югованого з ФІТЦ, і аналізували з використанням БАС5, застосовуючи пристрій ВО ГАС5 Сапіо ІІ. Для аналізу використовували медіанну інтенсивність флуоресценції (МЕ);
На фіг. 32 - результати, одержані методом поверхневого плазмонного резонансу, аналізу зв'язування НЕНКІ із замаскованим і незамаскованим Ср(|А2ОЇ до і після розщеплення за допомогою ММР2;
На фіг. ЗЗА-К - схематичне зображення різних біспецифічних молекул, які активують Т-
Зо клітини, з маскуючими фрагментами. На фіг. ЗЗА - конструкція ІЮ 8364: 1605 ТОВ, класичний формат, анти-ІЮ СН2г527 зсЕм 4.32.63 сайт ММРО-матриптази МКОб2, злитий на М-кінці з СОЗ.
На фіг. 33Б - конструкція: ІЮ 8363. 1605 ТОВ, класичний формат, анти-ІЮ СН2г527 зсЕм 44.32.63, сайт катепсину 5/В, злитий на М-кінці з ОЗ. На фіг. 33В - конструкція: ІЮ 8365. 1605 ТОВ, інвертований формат, анти-ІЮ СН2г527 зсЕм 4.32.63, сайт матриптази МКОб62, злитий на М-кінці із загальним легким ланцюгом. На фіг. З3Г - конструкція: ІЮ 8366. 1605 ТОВ, інвертований формат, анти-ІЮ СН2г527 5сЕм 4.32.63, нерозщеплюваний лінкер, злитий на М-кінці із загальним легким ланцюгом. На фіг. 33Д- конструкція: ІЮ 8672. антитіло до мезотеліну ВСс7787 із зарядженими залишками ТОВ, класичний формат, анти-ІЮ СН2г527 5сЕм 4.32.63 сайт ММРО- матриптази МКОб2, злитий на М-кінці з СОЗ Х Раб. На фіг. ЗЗЕ - конструкція ІО 8673. антитіло з мезотеліну На7787 з ТОВ із зарядженими залишками, класичний формат, анти-ІЮ СН2г527 зсЕм 4.32.63, нерозщеплюваний лінкер, злитий на М-кінці з СОЗ Х Раб. На фіг. ЗЗ3Ж - конструкція: ІЮ 8674. антитіло до мезотеліну НС7787 з ТОВ із зарядженими залишками, інвертований формат, анти-ІЮО СН2г527 зсЕм 4.32.63 сайт ММРО-матриптази МКОб2, злитий на М-кінці з СОЗ ХРаб. На фіг. 333 - конструкція: 8675. антитіло до мезотеліну На7787 з ТОВ із зарядженими залишками, інвертований формат, анти-ІЮ СН2г527 зем 4.32.63, нерозщеплюваний лінкер, злитий на М-кінці з СОЗ ХРабр. На фіг. 33! - конструкція: ІЮ 8505. антитіло до мезотеліну НИ7787 з ТОВ із зарядженими залишками СОЗ ХРаб, інвертований формат. На фіг. ЗЗ3К - конструкція: ІЮ 8676.
СОЗ ХРар антитіло до мезотеліну НСтТ787 з ТОВ із зарядженими залишками, класичний формат;
БО На фіг. 34 -результати, одержані за допомогою аналізу методом КЕ-ДСН, ТОВ ІО 8365 і ТОВ
ІЮО 8366 (повністю очищений препарат): смуга А - білковий стандарт, смуга Б - білок, що зберігався при 4 "С, смуга В - білок, попередньо оброблений "п-матриптазою/5114 (фірма НО
Зузієтв), смуга Г - білок, інкубований протягом 72 год. при 37 "С, і смуга Д - молекула 3;
На фіг. З35А і Б- результати, одержані за допомогою аналізу методом КЕ-ДСН, ТОВ, представленої на фіг. ЗЗА (10 8364) і ТОВ, представленої на фіг. З33Б (10 8363). На фіг. ЗБА - результати, одержані за допомогою аналізу методом КЕ-ДСН, ТОВ 8364 (кінцевий очищений препарат): смуга А - білковий стандарт, смуга Б - білок, що зберігався при 4 "С, смуга В :- білок, попередньо оброблений пПп-матриптазою/5114 (фірма НО БЗувіетв), смуга Г - білок, інкубований протягом 72 год. при 37 "С, і смуга Д - конструкція з нерозщеплюваним лінкером. бо На фіг. 35Б - результати, одержані за допомогою аналізу методом КЕ-ДСН, ТОВ 8363 (повністю очищений препарат): смуга А - білковий стандарт, смуга Б - білок, що зберігався при 4 "с, смуга В - білок, попередньо оброблений гп-матриптазою/5114 (фірма НО бузіетв), смуга Г - білок, інкубований протягом 72 год. при 37 "С, і смуга Д - конструкція з нерозщеплюваним лінкером;
На фіг.зЗбА і Б - одержаний з використанням клітин дигкаї МЕАТ аналіз активації, в якому як клітини-мішені застосовували клітини Неїа і 5Коу-3. Кожна точка відповідає середньому значенню, отриманому за трьома повторностями. Стандартне відхилення позначено планками похибок. Репортерна клітинна лінія УиКа-МЕАТ (фірма Рготеда) являє собою репортерну клітинну лінію людського гострого лімфатичного лейкозу з промотором МЕАТ, яка експресує людську СОЗє. Якщо СОЗ-зв'язуючий агент ТОВ ТОВ зв'язується з пухлиною-мішенню і СОЗ (необхідне перехресне зшивання) зв'язується з СЮОЗє, то експресію люциферази можна вимірювати за люмінесценцією після додавання субстрату Опе-Сіо (фірма Рготеда).
Порівнювали ЕоІй1-ТСВ (чорні трикутники зі спрямованою вниз вершиною) і попередньо оброблену протеазою активовану ТОВ (8364, зафарбовані сірими кольором квадрати), злиту на
М-кінці з анти-ІЮ СОЗ 4.32.63 зем і із сайтом ММРО-матриптази МКОб62. Молекулу обробляли гп- матриптазою/5114 (фірма НУО Зузіетв) протягом приблизно 20 год. при 37 "С. Представлені також результати, одержані для замаскованої ТОВ (яка містить нерозщеплюваний лінкер С5, сірі трикутники зі спрямованою вгору вершиною) і "ненацілену" ТОВ, застосовувану як контроль (незафарбований трикутник зі спрямованою вниз вершиною). Пунктирною лінією позначена люмінесценція клітин-мішеней і ефекторних клітин за відсутності будь-якої ТОВ. На фіг. З6А - одержаний з використанням клітин ди"Каї МЕАТ аналіз активації, в якому як клітини-мішені застосовували клітини Неїа. На фіг. 36Б - одержаний з використанням клітин диїКаї МЕАТ аналіз активації, в якому як клітини-мішені застосовували клітини 5Ком-3;
На фіг. 37А-Г - дані про цитотоксичність по відношенню до пухлинних клітин, обумовлену
ЕоІВ1-ТСВ і людськими РВМС (співвідношення ефекторів: мішеней - 10:11). Кожна точка відповідає середньому значенню, отриманому за трьома повторностями. Стандартне відхилення позначено планками похибок. На фіг. 37А - дані про цитотоксичність по відношенню до клітин-мішеней НегГа. Здійснювали порівняння двох різних форматів активованих протеазою
ТОВ, обидва містили антиідіостиповий СОЗ 5сЕм, зчеплений з лінкером із сайтом, що
Зо розпізнається, матриптазою МКОб2. На фіг. 37Б - дані про цитотоксичність по відношенню до клітин-мішеней 5Кох-3. Здійснювали порівняння двох різних форматів активованих протеазою
ТОВ, обидва містили антиідіостиповий СОЗ 5сЕм, зчеплений з лінкером із сайтом, що розпізнається, матриптазою МКОб2. На фіг. 37В - дані про цитотоксичність по відношенню до клітин-мішеней НегГа. Здійснювали порівняння класичної активованої протеази ТОВ, яка містить антиїдіостиповий СОЗ 5сЕм і Сйоб-лінкери з різними сайтами, що розпізнається, і протеазою.
Порівнювали активовану протеазою ТОВ, що містить лінкер із сайтом ММРО-матриптази МКОб2 (8364, сірі квадрати), ЕоІВ1-ТСОВ (світло-сірі трикутники зі спрямованою вниз вершиною), активовану протеазою ТОВ, що містить лінкер тільки із сайтом матриптази МКОба2 (світло-сірий ромб)/ сайтом катепсину (сірі кружечки) або нерозщеплюваний лінкер (чорні трикутники зі спрямованою вниз вершиною). На фіг. 37Г - дані про цитотоксичність по відношенню до клітин- мішеней 5Коу-3. Здійснювали порівняння класичної активованої протеази ТОВ, яка містить антиїдіостиповий СОЗ 5сЕм і Сйоб-лінкери з різними сайтами, що розпізнається, і протеазою.
Порівнювали активовану протеазою ТОВ, що містить лінкер із сайтом ММРО-матриптази МКОб2 (8364, сірі квадрати), ЕоІВ1-ТСОВ (світло-сірі трикутники зі спрямованою вниз вершиною), активовану протеазою ТОВ, що містить лінкер тільки із сайтом матриптази МКОба2 (світло-сірий ромб)/сайтом катепсину (сірі кружечки) або нерозщеплюваний лінкер (чорні трикутники зі спрямованою вниз вершиною);
На фіг. ЗВА і Б - результати кількісної оцінки позитивних за СО69О СОВ8-клітин після спільної інкубації первинних епітеліальних клітин кіркової речовини нирок людини (фіг. З8А) або бронхіальних епітеліальних клітин людини (фіг. 38Б) з різними ТОВ в концентрації 200ОНМ і одержаними з трьох різних донорів людськими РВМО. Т-клітини забарвлювали після інкубації протягом 48 год. (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМСО). Представлена медіанна інтенсивність флуоресценції маркера Т-клітинної активації СО69 в популяції СО8:-Т- клітин. Кожна точка відповідає середньому значенню, отриманому за трьома повторностями для РВМО з трьох різних донорів. Стандартне відхилення позначено планками похибок. Для статистичного аналізу використовували непарний І-критерій;
На фіг. З9А і Б - дані про цитотоксичність по відношенню до пухлинних клітин, обумовлену
М5І М-(мезотелін)-ТОВ і людськими РВМС (співвідношення ефекторів: мішеней - 10:1).
Максимальний лізис клітин-мішеней (- 10095) досягався при інкубації клітин-мішеней в бо присутності 1 96 Тритону Х-100 протягом 20 год. перед визначенням ЛДГ. Мінімальний лізис (-
О 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без будь- якої ТСВ. Кожна точка відповідає середньому значенню, отриманому за трьома повторностями.
Стандартне відхилення позначено планками похибок. На фіг. З9А - дані про цитотоксичність по відношенню до клітин-мішеней МС! Н5БОб. активована протеазою М5ІМ-ТСВ містила антиідіостиповий СОЗ 5сЕм, зчеплений з лінкером із сайтом ММРО-матриптази МКОб2.
Порівнювали активовану протеазою ТОВ (8672, світло-сірі кружечки), М5І М-ТОВ (темно-сірі трикутники зі спрямованою вниз вершиною) і активовану протеазою ТСВ, що містить нерозщеплюваний лінкер (8673, сірі трикутники зі спрямованою вгору вершиною). На фіг. 395 - дані про цитотоксичність по відношенню до клітин-мішеней Аб5РО-1. активована протеазою
М5ІМ-ТОВ містила анти-ідіотиповий СОЗ в5сЕм, зчеплений з лінкером із сайтом ММРО- матриптази МКОб62. Порівнювали активовану протеазою ТОВ (8672, світло-сірі кружечки), МБ М-
ТОВ (темно-сірі трикутники зі спрямованою вниз вершиною) і активовану протеазою ТОВ, що містить нерозщеплюваний лінкер (8673, сірі трикутники зі спрямованою вгору вершиною);
На фіг. 40 - одержаний з використанням клітин диКаї МЕАТ аналіз активації, в якому застосовували зразки первинних пухлин і активовані протеазою Ро!В1-ТСВ. Репортерні клітини
Уимжаї МЕАТ активувались після спільної інкубації з Ео!81-ТСВ (6298) і активованою протеазою
ЕоІВ81-ТСВ, яка містить сайт розщеплення ММРО-матриптазою (8364). Активовані протеазою
ЕоІВ81-ТСВ (8363, 8408) і контрольні ТОВ (8409, 7235) не індукували експресію люциферази.
Пунктирною лінією позначена базисна лінія люмінесценції для клітин УиКаї МЕАТ, які спільно інкубували з пухлиною;
На фіг. 4АТ1А-В - одержані за допомогою капілярного електрофорезу дані для активованих протеазою ТСВ після інкубації в людській сироватці. Молекули інкубували протягом 0 або 14 днів у виснаженій за людським Ідеї сироватці при 37 "С у вологій камері (5 95 СО»). Всі молекули очищували за допомогою афінної хроматографії (білок А) і потім аналізували за допомогою капілярного електрофорезу. На фіг.41А - результати КЕ-ДСН-аналізу сироватки для визначення ЕРоЇй1-ТСВ (6298) в сироватці в день 0 і день 14. На фіг. 41Б - результати КЕ-ДСН- аналізу сироватки для визначення активованою протеазою ЕоІВ1-ТСВ з лінкером із сайтом
ММРО-матриптази (8364) в сироватці в день 0 і день 14. На фіг. 418 - результати КЕ-ДСН- аналізу сироватки для визначення активованою протеазою ЕоІВ1-ТСВ з лінкером із сайтом
Зо матриптази (8408) в сироватці в день 0 і день 14 і попередньо розщепленої молекули в сироватці;
На фіг. 42А-Е - схематичне зображення різних біспецифічних молекул, які активують Т- клітини, з маскуючими фрагментами. На фіг. 42А - конструкція: ІЮ 8955. Негсеріаг9-ТСВ, класичний формат, анти-ІЮ СН2г527 5сЕм 4.32.63, лінкер з МКОб2-ММРУ, злитий на М-кінці з МН.
На фіг. 25 - конструкція: ІЮ 8957. Негсеріаг9- ТОВ, класичний формат, анти-ІЮ СН2г527 5сЕм 4.32.63, нерозщеплюваний лінкер, злитий на М-кінці з МН. На фіг. 428 - конструкція: ІЮ 8959.
Негсеріагу- ТОВ, класичний формат. На фіг. 42Г - конструкція: ІЮ 8997. Бої! ЗбЕ2-ТСВ, класичний формат, анти-ІЮО СН2г527 5сЕм 4.32.63, лінкер з МКОб2 ММРУ, злитий на М-кінці з МН.
На фіг. 42Д - конструкція: ІЮ 8998. Гоїй81 З6Е2-ТСВ, класичний формат, анти-ІЮ СН2г527 в5сЕм 4.32.63, нерозщеплюваний лінкер, злитий на М-кінці з МН. На фіг. 42Е - конструкція: ІЮ 8996.
ЕоІВ81 З6Б2-ТСВ, класичний формат;
На фіг. 43 - дані про токсичність по відношенню до бронхіальних епітеліальних клітин людини, опосередковану людськими РВМС і ТОВ в концентрації 100 або ТОнМ. Максимальний лізис клітин-мішеней (- 10095) досягався при інкубації клітин-мішеней в присутності 1 95
Тритону Х-100 протягом 20 год. перед визначенням ЛДГ. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без будь-якої ТОВ. Кожна точка відповідає середньому значенню, отриманому за трьома повторностями. Стандартне відхилення позначено планками похибок;
На фіг. 44 - дані про цитотоксичність по відношенню до негативних за ЕоІН1 клітин-мішеней (МКпи-45), опосередковану ЕоІВ1-ТСВ в концентрації 100нНМ і людськими РВМО. Максимальний лізис клітин-мішеней (- 10095) досягався при інкубації клітин-мішеней в присутності 1 95
Тритону Х-100 протягом 20 год. перед визначенням ЛДГ. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без будь-якої ТОВ. Кожна точка відповідає середньому значенню, отриманому за трьома повторностями. Стандартне відхилення позначено планками похибок.
Детальний опис винаходу
Визначення
Поняття, застосовувані в даному описі, мають значення, загальноприйняті в даній галузі, якщо спеціально не вказане інше. бо В контексті даного опису поняття "антигензв'язуюча молекула" в найбільш широкому сенсі відноситься до молекули, яка специфічно зв'язується з антигенною детермінантою. Прикладами антигензв'язуючих молекул є імуноглобуліни та їх похідні, наприклад, їх фрагменти.
Поняття "біспецифічна" означає, що антигензв'язуюча молекула має здатність специфічно зв'язуватись принаймні з двома різними антигенними детермінантами. Як правило, біспецифічна антигензв'язуюча молекула містить два антигензв'язуючих сайта, кожний з яких є специфічним по відношенню до різних антигенних детермінант. В деяких варіантах здійснення винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула має здатність одночасно зв'язуватись з двома антигенними детермінантами, насамперед з двома антигенними детермінантами, які експресуються на двох різних клітинах.
В контексті даного опису поняття "валентність" означає наявність певної кількості антигензв'язуючих сайтів в антигензв'язуючій молекулі. Так, поняття "одновалентне зв'язування з антигеном" означає наявність одного (і не більше одного) специфічного по відношенню до антигена антигензв'язуючого сайта в антигензв'язуючій молекулі.
Поняття "антигензв'язуючий сайт" відноситься до сайта, тобто одного або декількох амінокислотних залишків антигензв'язуючої молекули, які забезпечують взаємодію з антигеном.
Наприклад, антигензв'язуючий сайт антитіла містить амінокислотні залишки з гіперваріабельних ділянок (які визначають комплементарність ділянок) (СОК). Нативна молекула імуноглобуліну має, як правило, два антигензв'язуючих сайта, молекула Бар, як правило, має один антигензв'язуючий сайт.
В контексті даного опису поняття "антигензв'язуючий фрагмент" відноситься до поліпептидної молекули, яка специфічно зв'язується з антигенною детермінантою. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент має здатність направляти субстанцію, до якої він приєднаний (наприклад, другий антигензв'язуючий фрагмент), до сайта- мішені, наприклад, до специфічного типу пухлинної клітини або строми пухлини, що несе антигенну детермінанту. В іншому варіанті здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент має здатність активувати передачу сигналів через його антиген-мішень, наприклад, антиген комплексу Т-клітинного рецептора. антигензв'язуючі фрагменти включають антитіла та їх фрагменти, додатково описані нижче. Конкретні антигензв'язуючі фрагменти включають антигензв'язуючий домен антитіла, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла і
Зо варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла. В деяких варіантах здійснення винаходу антигензв'язуючі фрагменти можуть включати константні ділянки антитіла, що додатково описано нижче і відомо в даній галузі. Придатні константні ділянки важких ланцюгів включають будь-які з п'яти ізотипів: а, б, є, у або М. Придатні константні ділянки легких ланцюгів включають будь-які з двох ізотипів: к і А.
В контексті даного опису поняття "антигенна детермінанта" є синонімом понять "антиген" і "епітоп" і відноситься до сайта (наприклад, ділянки, що складається із суміжних амінокислот, або конформаційної конфігурації, що складається з різних ділянок несуміжних амінокислот) на поліпептидній макромолекулі, з якою зв'язується антигензв'язуючий фрагмент з утворенням комплексу антигензв'язуючий фрагмент-антиген. Придатні антигенні детермінанти можуть бути присутніми, наприклад, на поверхні пухлинних клітин, на поверхні інфікованих вірусом клітин, на поверхні інших хворих клітин, на поверхні імунних клітин, клітин, які знаходяться у вільному стані в сироватці крові і/або у позаклітинному матриксі (ЕСМ). В контексті даного опису білки, які відносяться до антигенів (наприклад, БоІВ1, НЕНІ, НЕН2, СОЗ3, мезотелін), якщо не вказано інше, можуть являти собою будь-які нативні форми білків з будь-якої хребетної тварини, запо відношенню дої як джерело, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) і гризуни (наприклад, миші та щури). В конкретному варіанті здійснення винаходу антиген являє собою людський білок. В контексті даного опису при посиланні на конкретний білок мається на увазі "повнорозмірний", непроцесований білок, а також будь-яка форма білка, одержана в результаті процесінгу в клітині. Під поняття підпадають також варіанти білка, що зустрічаються в природних умовах, наприклад, сплайсингові варіанти або алельні варіанти. Прикладами людськими білків, придатних як антигенів, є (але, не обмежуючись тільки ними): Ео!А1, НЕНІ і
СО3, насамперед епсилон-субодиниця СОЗ (див. ОпіРтої Мо РО7766 (версія 130), МСВІ Неїбед
Мо МР 000724.1, БЕО ІО МО: 54, людська послідовність; або ОпіРгої Мо 0951 І5 (версія 49), МОВІ
СепВапк, Мо ВАВ71849.1, послідовність мавп ціномолгус |Масаса Гавсісшіагв|) В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що активує Т-клітини, запропонована у винаході, зв'язується з епітопом СОЗ або антигеном клітини-мішені, що є консервативним для СОЗ або антигена-мішені з різних видів. В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що активує Т-клітини, запропонована у винаході, зв'язується з СОЗ і ЕоІВт, але не зв'язується з бо Ео!В2 або ГоІВ3. В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що активує Т-клітини, запропонована у винаході, зв'язується з СОЮЗ і НЕНВНІ1. В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що активує Т-клітини, запропонована у винаході, зв'язується з СОЮЗ і мезотеліном. В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що активує Т-клітини, запропонована у винаході, зв'язується з СОЮЗ і НЕН2.
Поняття "специфічно зв'язується" означає, що зв'язування є вибірковим по відношенню до антигена і його можна відрізняти від небажаних або неспецифічних взаиймодій. Здатність антигензв'язуючого фрагмента зв'язуватись зі специфічною антигенною детермінантою, можна визначати за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу (ЕГІ5А) або інших методик, відомих спеціалісту в даній галузі, наприклад, за допомогою методики на основі поверхневого плазмонного резонансу (здійснюючи аналіз за допомогою пристрою ВіАсогеє) (І ЩШебріай та ін.,
СПусо У 17, 2000, сс. 323-329), і традиційних аналізів зв'язування (Невєїєу, Епдосг Нез 28, 2002, сб. 217-229). В одному з варіантів здійснення винаходу рівень зв'язування антигензв'язуючого фрагмента з неспорідненим білком складає менше ніж приблизно 10 95 від рівня зв'язування антигензв'язуючого фрагмента з антигеном при вимірюванні, наприклад, за допомогою 5РА. В деяких варіантах здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, що зв'язується з антигеном, або антигензв'язуюча молекула, що містить антигензв'язуючий фрагмент, характеризується величиною константи дисоціації (Ко), що складає х 1мкМ, х 100нМ, х 1ТОНМ, х 1ТнМ, х 0,1нНМ, х 0,01нНМ або х 0,001нНМ (наприклад, 109М або менше, наприклад, від 102М до 10- 1ЗМ, наприклад, від 109М до 10-73М).
Поняття "афінність" відноситься до сумарної сили всіх нековалентних взаємодій між індивідуальним сайтом зв'язування молекули (наприклад, рецептора) та її партнера із зв'язування (наприклад, ліганда). Якщо не вказано інше, то в контексті даного опису поняття "афінність зв'язування" відноситься до властивої компонентам пари, що зв'язується, (наприклад, антигензв'язуючому фрагменту і антигена або рецептору і ліганду) афінності зв'язування, що відбиває взаємодію за типом 1:1. Афінність молекули Х до її партнера У можна, як правило, характеризувати за допомогою константи дисоціації (Ко), яка являє собою відношення констант швидкості реакції дисоціації і асоціації (Конг і Коп відповідно). Так, еквівалентні афінності можуть відповідати різним константам швидкості, якщо співвідношення констант швидкості залишається таким же. Афінність можна оцінювати загальноприйнятими методами, відомими в даній галузі включаючи представлені в даному описі методи.
Конкретним методом вимірювання афінності є метод поверхневого плазмонного резонансу (БРВ).
Поняття "знижене зв'язування (знижена здатність до зв'язування)", наприклад, знижена здатність до зв'язування з Ес-рецептором, відноситься до зниження афінності по відношенню до відповідної взаємодії, вимірюваної, наприклад, за допомогою 5РНА. Для ясності слід зазначити, що поняття включає також зниження афінності до нуля (або нижче межі виявлення аналітичного методу), тобто повну елімінацію взаємодії. І, навпаки, "підвищене зв'язування (підвищена здатність до зв'язування)" відноситься до підвищення афінності зв'язування по відношенню до відповідної взаємодії.
Поняття "Т-клітинна активація (активація Т-клітин)" в контексті даного опису відноситься до однієї або декількох клітинних відповідей Т-лімфоцита, зокрема, цитотоксичного Т-лімфоцита, вибраним з: проліферації, диференціювання, секреції цитокінів, вивільнення цитотоксичних ефекторних молекул, цитотоксичної активності і експресії маркерів активації. Активовані протеазою біспецифічні антигензв'язуючі молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, мають здатність індукувати Т-клітинну активацію. Прийнятні аналізи оцінки Т-клітинної активації, відомі в даній галузі, представлені в даному описі.
Поняття "антиген клітини-мішені" в контексті даного опису відноситься до антигенної детермінанти, присутньої на поверхні клітини-мішені, наприклад, клітини в пухлині, такої як ракова клітина або клітина строми пухлини.
В контексті даного опису поняття "перший" і "другий" по відношенню до антигензв'язуючих фрагментів і т.д. застосовують з метою зручності розрізнення, коли є присутнім більше одного типу кожного з фрагментів. Застосування цих понять не припускає їх конкретний порядок або орієнтацію в активованій протеазою біспецифічній антигензв'язуючій молекулі, що активує Т- клітини, якщо спеціально не вказане інше.
Поняття "молекула Рар" відноситься до білка, що складається з МН і СНІ-домену важкого ланцюга ("важкий ланцюг Бар") і МІ її Сі-домену легкого ланцюга ("легсий ланцюг Еабр") імуноглобуліну. бо Під поняттям "злиті" мається на увазі, що компоненти (наприклад, молекула ГЕар і субодиниця Ес-домену) з'єднані пептидними зв'язками, або безпосередньо, або за допомогою одного або декількох пептидних лінкерів.
В контексті даного опису поняття "одноланцюгова" відноситься до молекули, яка містить амінокислотні мономери, зв'язані лінійно за допомогою пептидних зв'язків. В деяких варіантах здійснення винаходу один з антигензв'язуючих фрагментів являє собою одноланцюжкову молекулу Раб, тобто молекулу Раб, в якій легкий ланцюг Рар і важкий ланцюг Раб з'єднані за допомогою пептидного лінкера з утворенням одного пептидного ланцюга. У конкретному вказаному варіанті здійснення винаходу в одноланцюговій молекулі Раб С-кінець легкого ланцюга Раб з'єднаний з М-кінцем важкого ланцюга Раб.
Під кросовер-молекулою Бар (яку позначають також як "Сто55ЕРар") мається на увазі молекула Раб, в якій або варіабельні ділянки, або константні ділянки важкого і легкого ланцюга аб обмінені одна на одну, тобто кросовер-молекула Бар містить пептидний ланцюг, що складається з варіабельної ділянки легкого ланцюга і константною ділянки важкого ланцюга, і пептидний ланцюг, що складається з варіабельної ділянки важкого ланцюга і константною ділянки легкого ланцюга. Для простоти розуміння, слід зазначити, що в кросовер-молекулі Раб, в якій обмінені варіабельні ділянки легкого ланцюга Бар і важкого ланцюга Раб, пептидний ланцюг, що містить константну ділянку важкого ланцюга, позначають в контексті даного опису як "важкий ланцюг" кросовер-молекули РарБ. І, навпаки, в кросовер-молекулі Раб, в якій обмінені константні ділянки легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Рар, пептидний ланцюг, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, позначають в контексті даного опису як "важкий ланцюг" кросовер-молекули Еар.
На відміну від цього, поняття "канонічна" молекула Бар позначає молекулу Раб в її форматі, що зустрічається в природних умовах, тобто що містить важкий ланцюг, яка складається з варіабельної і константної ділянок важкого ланцюга (УН-СНІ), і легкий ланцюг, яка складається з варіабельної і константної ділянок легкого ланцюга (МІ -СІ.).
Поняття "молекула імуноглобуліну" відноситься до білка, що має структуру антитіла, що зустрічається в природних умовах. Наприклад, імуноглобуліни класу сь являють собою гетеротетрамірні глікопротеїни з молекулярною масою приблизно 150000 Да, що складаються з двох легких ланцюгів і двох важких ланцюгів, зв'язаних дисульфідними містками. В напрямку від
Зо М-кінця до С-кінця кожний важкий ланцюг містить варіабельну ділянку (МН), яку називають також варіабельним важким доменом або варіабельним доменом важкого ланцюга, за яким розташовані три константні домени (СНІ, СН2 ії СНЗ), які називають також константною ділянкою важкого ланцюга. Аналогічно цьому, в напрямку від М- кінця до С-кінця кожна легкий ланцюг містить варіабельну ділянку (МІ), яку називають також варіабельним легким доменом або варіабельним доменом легкого ланцюга, за яким розташований константний домен легкого ланцюга (СІ), що називають також константною ділянкою легкого ланцюга. Важкий ланцюг імуноглобуліну може відноситись до одного з п'яти типів, позначених як а (ІдА), б (940), є (Є), у (942) або н (І9М), деякі з яких додатково підрозділяють на підтипи, наприклад, у: (ІДС), уг (ІДС), уз (ІДСз), ул (Са), си (ІФА) і а» (ІДАг). Легкий ланцюг імуноглобуліну може відноситись до одного з двох типів, позначених як каппа (к) і лямбда (Х), на основі амінокислотної послідовності її константного домену. Імуноглобулін, як правило, складається з двох молекул Еабр і Ес-домену, які з'єднані через шарнірну ділянку імуноглобуліну.
В контексті даного опису поняття "антитіло" використовується в його найбільш широкому сенсі, і воно відноситься до різних структур антитіл, включаючи (але, не обмежуючись тільки ними) моноклональні антитіла, поліклональні антитіла і фрагменти антитіл, за умови, що вони мають потрібну антигензв'язуючу активність.
Поняття "фрагмент антитіла" відноситься до молекули, відмінної від інтактного антитіла, яка містить частину інтактного антитіла, яка має здатність зв'язуватись з антигеном, з яким зв'язується інтактне антитіло. Прикладами фрагментів антитіл є (але, не обмежуючись тільки
БО ними) Ем, Раб, Раб", Раб'-5Н, К(ар)2, димерні антитіла (діабоди), лінійні антитіла, одноланцюгові молекули антитіл (наприклад, з5сЕм) і однодоменні антитіла. Огляд деяких фрагментів антитіл див., наприклад, у Нидзоп та ін., Маї Меса 9, 2003, сс. 129-134. Огляд 5сЕм-фрагментів див., наприклад, у РІійСКкІпип в: Тпе Рпагтасоїоду ої Мопосіопаї! Апііродієв, т. 113, під ред. Нозепригу і
Мооге, вид-во бргіпде!-Мепад, Мем МогїКк, 1994, сс. 269-315; див. також МО 93/16185; і ОБ МоМо 5571894 і 5587458. Обговорення Рар- і Р(аб')»-фрагментів, які містять залишки епітопу, що зв'язується з рецептором рятування, і мають подовженим часом напівжиття іп мімо, див. в О5 Мо 5869046. Димерні антитіла являють собою фрагменти антитіл з двома антигензв'язуючими сайтами, які можуть бути двовалентними або біспецифічними (див., наприклад, ЕР 404097; МО 1993/01161; Ниавзоп та ін., Маї Меа 9, 2003, сс. 129-134; і Ноїподег та ін., Ргос Маї! Асай 5сі ОБА бо 90, 1993, сс. 6444-6448. Тримерні (тріабоді) і тетрамерні (тетрабоді) антитіла описані також у
Нидзоп та ін., Маї Меса 9, 2003, сс. 129-134. Однодоменні антитіла являють собою фрагменти антитіл, що містять весь варіабельний домен важкого ланцюга або його частину або весь варіабельний домен легкого ланцюга антитіла або його частину. В деяких варіантах здійснення винаходу однодоменне антитіло являє собою людське однодоменне антитіло (фірма Юотапіїв,
Іпс., Валтам, шт. Массачусетс; див., наприклад, О5 Мо 6248516 ВІ). Фрагменти антитіл можна створювати за допомогою різних методик, включаючи (але, не обмежуючись тільки ними) протеолітичне розщеплення інтактного антитіла, а також одержувати з використанням рекомбінантних клітин-хазяїнів (наприклад, Е. соїї або фага), як зазначено в даному описі.
Поняття "антигензв'язуючий домен" відноситься до частини антитіла, яка містить ділянку, що специфічно звязується і є комплементарною частиною антигена або повного антигена.
Антигензв'язуючий домен може являти собою, наприклад, один або декілька варіабельних доменів антитіла (які називають також варіабельними ділянками антитіла). Переважно антигензв'язуючий домен містить варіабельну ділянку легкого ланцюга (МІ) антитіла і варіабельну ділянку важкого ланцюга (УН) антитіла.
Поняття "варіабельна ділянка" або "варіабельний домен" відноситься до домену важкого або легкого ланцюга антитіла, що бере участь у зв'язуванні антитіла з антигеном. Варіабельні домени важкого ланцюга і легкого ланцюга (МН і МІ. відповідно) нативного антитіла, як правило, мають подібні структури, при цьому кожний домен містить чотири консервативні каркасні ділянки (ЕВ) і три гіперваріабельні ділянки (НУВ) (див., наприклад, Кіпаї та ін., Кибу Іттипоіоау, б-е вид., вид-во МУ.Н. Егеетап апа Со., 2007, с. 91). Одного МН- або Мі -домену може бути достатньо для забезпечення специфічності зв'язування антигена.
Поняття "гіперваріабельна ділянка" або "НМА" в контексті даного опису відноситься до кожної з ділянок варіабельного домену антитіла, послідовності яких є гіперваріабельними, і/або які утворюють структури у вигляді петель ("іперваріабельні петлі"). Як правило, нативні чотириланцюгові антитіла містять шість НМА; три в МН (НІ, Н2, НЗ) і три в МІ (ІТ, 12, 13). НМА, як правило, містять амінокислотні залишки з гіперваріабельних петель і/або з "ділянок, які визначають комплементарність" (СОР), останні відрізняються найбільш вираженою варіабельністю послідовності і/або беруть участь в розпізнаванні антигенів. За винятком СОВІ1 в
МН, СОВ, як правило, містять амінокислотні залишки з гіперваріабельних петель.
Зо Гіперваріабельні ділянки (НМА) часто позначають як "ділянки, що визначають комплементарність" (СОР), і ці поняття в контексті даного опису використовують взаємозамінно, і вони відносяться до ділянок варіабельної ділянки, які утворюють антигензв'язуючі ділянки. Ця конкретна ділянка описана у КаБбаї та ін., 0.5. Оері. ої Неайй апа Нитап 5егуісез, "Зедиепсев ої
Ргоїєїпв ої Іттипоіодіса! Іпіегеві", 1983 і у Споїйіа та ін., у). Мої. Віої. 196, 1987, сс. 901-917, причому ці визначення відносяться до амінокислотних залишок, що перекриваються, або піднаборів амінокислотних залишків при їх порівнянні один з одним. Проте в контексті даного опису мається на увазі можливість застосування будь-якого визначення СОВ антитіла або його варіантів. Відповідні амінокислотні залишки, з яких складаються СОН, як вони визначені в кожній з процитованих вище посилань, представлені в порівнянні нижче в таблиці 1. Точні номера залишків, які утворюють конкретний СОВА, повинні варіюватись залежно від послідовності і розміру СОВА. Спеціалісти в даній галузі на основі дані про амінокислотну послідовність варіабельної ділянки антитіла легко можуть визначати, які залишки входять в конкретний СОВ.
Таблиця 1
Визначення СОВ!' 11111111 кебот///// | /// Хоїта,./7777 | - Ам 1 Нумерація всіх залишків, які входять в СОВ в таблиці 1 дана відповідно до номенклатури, запропонованої Кеботом із співавторами (див. нижче). 2 Позначення "АБМ" з великої літери "р", використане в таблиці 1, відноситься до СОВ, як вони визначені програмою для моделювання антитіл "АБМ" компанії Охтога Моїієсшаг Стоир.
Кебот з співавторами запропонували також систему нумерації (номенклатуру) послідовностей варіабельних ділянок, яку можна застосовувати для будь-якого антитіла.
Звичайний спеціаліст в даній галузі може однозначно застосовувати цю систему "нумерації за
Кеботом" до будь-якої послідовності варіабельної ділянки, не маючи жодних експериментальних даних, крім відомостей про саму послідовності. В контексті даного опису поняття "нумерація за Кеботом" відноситься до системи нумерації, описаній у Кабаї та ін., "Бедцепсе ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві", вид-во Ш.5. Оері. ої Неайй апа Нитап 5егуісев, 1983. Якщо не вказано інше, то посилання на нумерацію положень конкретних амінокислотних залишків в варіабельній ділянці антитіла дані відповідно до системи нумерації за Кеботом.
Нумерація поліпептидних послідовностей в "Переліку послідовностей" не являє собою нумерацію відповідно до системи Кебота. Проте в компетенції звичайного спеціаліста в даній галузі є перетворення нумерації послідовностей в "Переліку послідовностей" на нумерацію за
Кеботом. "Каркасні ділянки" або "ЕВ"-ділянки являють собою ділянки варіабельних доменів, відмінні від залишків гіперваріабельних ділянок (НМА). ЕВ варіабельного домену, як правило, представлені чотирма ЕВК-доменами: ЕН, ЕН2, ЕВЗ ї ЕВ4. Таким чином, послідовності НМЕ і
ЕВ, як правило, розташовані в УН (або МІ) в наступному порядку: ЕВ1-НІ(І11)-ЕН2-Н2(І2)-ЕВЗ-
НЗ(І3)-ЕНА.
Поняття "клас" антитіла або імуноглобуліну відноситься до типу константного домену або константною ділянки, який входить/яка входить у важкий ланцюг. Існує п'ять основних класів антитіл: ДА, 90, ІДЕ, дСї і ЯМ, а деякі з них можна додатково підрозділяти на підкласи (ізотипи), наприклад, Ідсї, ІдСі2, ІдСіз, ДС, ІДА:ї і ІдАг». Константні домени важких ланцюгів, відповідні різним класам імуноглобулінів, позначають як а, б, є, у і н відповідно.
В контексті даного опису поняття "Рс-домен" або "Ес-ділянка" відноситься до С-кінцевої ділянки важкого ланцюга імуноглобуліну, яка містить принаймні частину константною ділянки.
Поняття відноситься до нативної послідовності Ес-ділянок і варіантів Ес-ділянок. Хоча пограничні послідовності Ес-ділянки в важкому ланцюзі (ДС; можуть злегка варіюватись, як правило, Ес-ділянка важкого ланцюга людського Ід простягається від Суз226 або від Рго230 до
Зо карбоксильного кінця важкого ланцюга. Проте С-кінцевий лізин (І уз447) Ес-ділянки може або бути присутніми, або відсутніми. Якщо спеціально не вказане інше, то нумерація амінокислотних залишків в Ес-ділянці або константній ділянці відповідає системі ЕО-нумерації, яку називають також ЕО-індексом, описаній в Кабаї та ін., хедоепсевз ої Ргоївєїп5 ої Іттипоіодісаї
Іптегеві, 5-е вид., вид-во Рибріїс Неайй бегмісе, Маїйопаї! Іпвзійшевз ої Неайй, Веїйпезаа, МО, 1991.
Поняття "субодиниця" Ес-домену в контексті даного опису відноситься до одного з двох поліпептидів, які утворюють димерний Ес-домен, тобто до поліпептиду, що містить С-кінцеві константні ділянки важкого ланцюга імуноглобуліну, які мають здатність до стабільної самоасоціації. Наприклад, субодиниця Ес-домену Ід містить константний домен СНУ Ідс і СНЗ
Іа. "Модифікація, що посилює асоціацію першої і другої субодиниць ЕРс-домену" являє собою маніпуляцію з пептидним каркасом або пост-трансляційні модифікації субодиниці Ес-домену, які зменшують або перешкоджають асоціації поліпептиду, що містить субодиницю Ес-домену, з ідентичним поліпептидом з утворенням гомодимеру. В контексті даного опису модифікація, що посилює асоціацію, включає, насамперед, різноманітні модифікації, здійснювані з кожною з двох субодиниць Ес-домену, призначених для асоціації (наприклад, першої і другої субодиниць Ес- домену), при цьому, модифікації доповнюють одна одну таким чином, щоб посилювати асоціацію двох субодиниць Ес-домену. Наприклад, модифікація, що посилює асоціацію, може змінювати структуру або заряд однієї або обох субодиниць Ес-домену таким чином, щоб покращувати їх асоціацію стерично або електростатично відповідно. Так, (гетеро)димеризація має місце між поліпептидом, що містить першу субодиницю Ес-домену, і поліпептидом, що містить другу субодиницю Ес-домену, які можуть бути неідентичними, оскільки додаткові компоненти, злиті з кожною з субодиниць (наприклад, антигензв'язуючі фрагменти), не є одинаковими. В деяких варіантах здійснення винаходу модифікація, що посилює асоціацію, являє собою амінокислотну мутацію в Ес-домені, зокрема, амінокислотну заміну. В конкретному варіанті здійснення винаходу модифікація, що посилює асоціацію, являє собою індивідуальну амінокислотну мутацію, зокрема, амінокислотну заміну, в кожній з двох субодиниць Ес-домену.
Поняття "ефекторні функції" що використовується в даному описі, відноситься до видів біологічної активності, властивих Ес-ділянкам антитіла, які варіюються залежно від ізотипу антитіла. Прикладами ефекторних функцій антитіла є: здатність зв'язуватись з Ста і бо комплементзалежна цитотоксичність (СОС), здатність зв'язуватись з Ес-рецептором, антитіло-
обумовлена клітиннозалежна цитотоксичність (АОСС), антитіло-обумовлений клітиннозалежний фагоцитоз (АЮОСР), секреція цитокінів, опосередковане імунним комплексом поглинання антигена антигенпрезентуючими клітинами, знижувальна регуляція рецепторів клітинної поверхні (наприклад, В-клітинного рецептора); і активація В-клітин.
В контексті даного опису мається на увазі, що поняття "конструювання, сконструйований, інженерія" включають будь-яку маніпуляцію з пептидним каркасом або пост-трансляційні модифікації поліпетиду, який зустрічається в природніх умовах, або рекомбінантного поліпептиду або його фрагмента. Інженерія включає модифікації амінокислотної послідовності, схеми глікозилювання або групи бічних ланцюгів індивідуальних амінокислот, а також комбінації зазначених підходів.
В контексті даного опису мається на увазі, що поняття "амінокислотна мутація" відноситься до амінокислотних замін, делеціям, інсерціям і модифікаціям. Можна застосовувати будь-яку комбінацію заміни, делеції, инсерції і модифікації для створення кінцевої конструкції за умови, що кінцева конструкція має необхідні характеристики, наприклад, знижену здатність зв'язуватись з Ес-рецептором або підвищеною асоціацією з іншим пептидом. Амінокислотна послідовність з делеціями і інсерціями включає аміно- і/або карбоксикінцеві делеції і інсерції амінокислот. Конкретними амінокислотними мутаціями є амінокислотні заміни. Для зміни, наприклад, характеристик зв'язування Ес-ділянки, найбільш переважними є неконсервативні амінокислотні заміни, тобто заміна однієї амінокислоти на іншу амінокислоту, що має інші структурні і/або хімічні властивості. Амінокислотні заміни включають заміну на амінокислоти, що не зустрічаються в природних умовах, або на похідні двадцати стандартних амінокислот, які зустрічаються в природніх умовах (наприклад, на 4-гідроксипролін, З-метилгістидин, орнітин, гомосерин, 5-гідроксилізин). Амінокислотні мутації можна створювати за допомогою генетичних або хімічних методів, добре відомих в даній галузі. генетичні методи можуть включати сайтнаправлений мутагенез, ПЛР, синтез генів і т.п. Мається на увазі, що можна застосовувати також методи зміни бічної групи амінокислоти, відмінні від методів генетичної інженерії, такі як хімічна модифікація. Для позначення однієї і тієї ж амінокислотної мутації можна використовувати різноманітні позначення. Наприклад, заміну проліну в положенні 329 Ес- домену на гліцин можна позначати як 3292, (3329, Сзго, РЗ2ОО або Ргоз29ау.
В контексті даного опису поняття "поліпептид" відноситься до молекулі, що складається з мономерів (амінокислот), лінійно зв'язаних амідними зв'язками (які позначають також як пептидні зв'язки). Поняття "поліпептид" відноситься до будь-якого ланцюга, що складається з двох або більшої кількості амінокислот, і не припускає, що продукт має конкретну довжину. Так, пептиди, дипептиди, трипептиди, оіигопептиди, "білок", "амінокислотний ланцюг" або будь-яке інше прийняте поняття, що відноситься до ланцюга, що складається з двох або більшої кількості амінокислот, всі підпадають під визначення "поліпептид", і поняття "поліпептид" можна застосовувати замість або взаємозамінно з будь-яким із вказаних понять. Мається на увазі також, що поняття "поліпептид" відноситься до продуктів, які несуть пост-експресійні модифікації поліпептиду, включаючи (але, не обмежуючись тільки ними) глікозування, ацетилювання, фосфорилювання, амідування, дериватизацію з використанням відомих захисних/блокуючих груп, протеолітичне розщеплення або модифікацію за допомогою амінокислот, які не зустрічаються в природніх умовах. Поліпептид можна одержувати з біологічного джерела, що зустрічається в природніх умовах, або можна одержувати за допомогою технології рекомбінантної ДНК, і його не обов'язково транслювати з утвореної нуклеотидної послідовності. Його можна створювати будь-яким шляхом, включаючи хімічний синтез. Поліпептид, запропонований у винаході, може складатись приблизно з З або більше, 5 або більше, 10 або більше, 20 або більше, 25 або більше, 50 або більше, 75 або більше, 100 або більше, 200 або більше, 500 або більше, 1000 або більше або 2000 або більше амінокислот.
Поліпептиди можуть мати різну тримірну структуру, хоча вони необов'язково повинні мати вказану структуру. Поліпептиди з визначеною тримірною структурою позначають як поліпептиди, що мають укладку, а поліпептиди, які не мають визначену тримірну структуру, але які можуть легше адаптуватись до великої кількості різних конформацій, позначають як поліпептиди, що не мають укладку.
Під "виділеним" поліпептидом або його варіантом, або похідним мають на увазі поліпептид, що не знаходиться в його природному середовищі. При цьому не потрібна наявність будь-або конкретного рівня очистки. Наприклад, виділений поліпептид можна видаляти з його нативного або природнього середовища. Одержані шляхом рекомбінації поліпептиди і білки, експресовані в клітинах-хазяїнах, розглядаються як виділені для цілей даного винаходу, якщо вони являють собою нативні або рекомбінантні поліпептиди, які відділені, фракціоновані або частково або бо повністю очищені за допомогою будь-якого прийнятного методу.
"Процент (95) ідентичності амінокислотної послідовності" по відношенню до поліпептидної референс-послідовності визначають як процент амінокислотних залишків в послідовності- кандидаті, які идентичні амінокислотним залишкам в поліпептидній референс-послідовності, після вирівнювання послідовностей та інтродукції за необхідності проломів для досягнення максимального процента ідентичності послідовностей, і при цьому які-або консервативні заміни не враховуються при оцінці ідентичності послідовностей. порівняльний аналіз для визначення процента ідентичності амінокислотних послідовностей можна здійснювати різними шляхами, які знаходяться в компетенції спеціаліста в даній галузі, наприклад, з використанням публічно доступних комп'ютерних програм, таких як програма ВІ А5Т, ВІ АЄТ-2, АПІСМ або Медаїїдп (ОМАБТАМ). Спеціалісти в даній ділянки можуть визначати відповідні параметри для вирівнювання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині порівнюваних послідовностей. Проте для цілей даного винаходу величину бо ідентичності амінокислотних послідовностей одержують з використанням призначеної для порівняння послідовностей комп'ютерної програми АГІСМ-2.
Призначена для порівняння послідовностей комп'ютерна програма А'СМ-2 розроблена фірмою
Сепепіеси, Іпс., і вихідний код поміщений на зберігання разом з документацією для користувача в 0.5. Соругідні ОНісе, Мазпіпдіоп 0О.С., 20559, де він зареєстрований під реєстраційним номером Ш.5. Соругпідні Ведівзігайоп, Мо ТХО510087. Програма АГІСМ-2 являє собою публічно доступну програму фірми Сепепієсн, Іпс., Південний Сан-Франциско, шт. Каліфорнія, або її можна компілювати з вихідного коду. Програму АГ'СМ-2 можна компілювати для застосування в операційній системі ОМІХ, включаючи цифрову версію ОМІХ М4.00. В програмі АГ ІСМ-2 всі параметри для порівняння послідовностей є заданими і не повинні змінюватись. В ситуаціях, коли АГІСМ-2 застосовують для порівняння амінокислотних послідовностей, 95 ідентичності амінокислотних послідовностей даної амінокислотної послідовності А по відношенню до або порівняно з даною амінокислотною послідовністю Б (яку іншими словами можна позначати як дана амінокислотна послідовність А, яка має або відрізняється визначеним 95 ідентичності амінокислотної послідовності по відношенню до або порівняно з даною амінокислотною послідовністю Б), розраховують наступним чином: 100Охчастка Х/У,
Зо де Х позначає кількість амінокислотних залишків, оцінених програмою порівняльного аналізу послідовностей А ЇС2М-2 як ідентичні співпадіння при порівняльному аналізі послідовностей А і
Б за допомогою вказаної програми, і де У позначає загальну кількість амінокислотних залишків в Б. Має бути очевидним, що, коли довжина амінокислотної послідовності А не дорівнює довжині амінокислотної послідовності Б, то 95 ідентичності амінокислотної послідовності А по відношенню до амінокислотної послідовності Б не має дорівнювати 95 ідентичності амінокислотної послідовності Б по відношенню до амінокислотної послідовності А. Якщо спеціально не вказане інше, то в контексті даного опису всі величини 95 ідентичності амінокислотних послідовностей отримують відповідно до процедури, описаній в останньому з попередніх параграфів, за допомогою комп'ютерної програми АГІСМ-2.
Поняття "полінуклеотид" відноситься до виділеної молекули нуклеїнової кислоти або конструкції, наприклад, матричної РНК (мРНК), РНК вірусного походження або плазмідною ДНК (пДНК). Полінуклеотид може містити звичайний фосфодиефірний зв'язок або нетрадиційний зв'язок (наприклад, амідний зв'язок, такий, що є присутнім в пептидних нуклеїнових кислотах (ПНК)). Поняття "молекула нуклеїнової кислоти" відноситься до будь-якого одного або декількох сегментів нуклеїнової кислоти, наприклад, фрагментів ДНК або РНК, присутніх в полінуклеотиді.
Під "виділеною" молекулою нуклеїнової кислоти або полінуклеотидом мається на увазі молекула нуклеїнової кислоти, тобто ДНК або РНК, яка відділена від її нативного середовища.
Наприклад, рекомбінантний полінуклеотид, який кодує поліпептид, що входить в вектор, розглядається як виділений для цілей даного винаходу. Іншими прикладами виділеного полінуклеотиду є рекомбінантні полінуклеотиди, присутні в гетерологічних клітинах-хазяїнах, або очищені (частково або повністю) полінуклеотиди, що знаходяться в розчині. Виділений полінуклеотид включає молекулу полінуклеотиду, що входить в клітини, які в нормі містять молекулу полінуклеотиду, але молекула полінуклеотиду є присутнім поза хромосоми або має локалізацію в хромосомі, відмінну від її локалізації в хромосомі в природнихумовах. Виділені молекули РНК включають одержані іп мімо або іп міго РНК-транскрипти, запропоновані в даному винаході, а також форми з позитивним і негативним ланцюгом і дволанцюгові форми. Виділені полінуклеотиди або нуклеїнові кислоти, запропоновані в даному винаході, включають також вказані молекули, одержані за допомогою синтезу. Крім того, полінуклеотид або нуклеїнова кислота може являти собою або може включати регуляторний елемент, Такий як промотор, 60 сайт зв'язування рибосом або термінатор транскрипції.
Під нуклеїнової кислотою або полінуклеотидом, яка має/який має нуклеотидну послідовність, що, наприклад, на 9595 "ідентична" нуклеотидній референс-послідовності, запропонованій в даному винаході, мається на увазі, що нуклеотидна послідовність полінуклеотиду ідентична референс-послідовності за винятком того, що полінуклеотидна послідовність може включати аж до 5 точкових мутацій на кожні 100 нуклеотидів нуклеотидної референс-послідовності. ІюІнакше кажучи, для одержання полінуклеотиду, що має нуклеотидну послідовність, яка ідентична принаймні на 95 95 нуклеотидній референс-послідовності, аж до 5 95 нуклеотидів в референс-послідовності можна вилучати шляхом делеції або замінювати на інший нуклеотид, або аж до 5 95 нуклеотидів від загальної кількості нуклеотидів в референс- послідовності можна вбудовувати в референс-послідовність. Ці зміни референс-послідовності можуть мати місце в положеннях на 5'- або 3"-кінці нуклеотидної референс-послідовності або в іншому положенні між цими кінцевими положеннями, та їх вбудовують або індивідуально між залишками в референс-послідовності, або їх вбудовують в референс-послідовність у вигляді однієї або декількох суміжних груп. На практиці вирішення питання про те, чи ідентична конкретна полінуклеотидна послідовність принаймні на 80 95, 85 95, 90 95, 95 95, 96 95, 97 Фо, 9895 або 9995 нуклеотидній послідовності, запропонованої в даному винаході, можна вирішувати, як правило, з використанням відомих комп'ютерних програм, наприклад, вищевказаних для поліпептидів (наприклад, АГ ІСМ-2).
Поняття "касета експресії" відноситься до полінуклеотиду, одержаному за допомогою рекомбінації або синтезу, що містить серії специфічних нуклеотидних елементів, які забезпечують транскрипцію конкретної нуклеїнової кислоти в клітині-мішені. Рекомбінантну касету експресії можна вбудовувати в плазміду, хромосому, мітохондріальну ДНК, пластидну
ДНК, вірус або фрагмент нуклеїнової кислоти. Як правило, рекомбінантна касета експресії, що являє собою частину експресійного вектора, включає серед інших послідовностей нуклеотидну послідовність, що підлягає транскрипції, і промотор. В деяких варіантах здійснення винаходу касета експресії, запропонована у винаході, містить полінуклеотидні послідовності, які кодують біспецифічні антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, або їх фрагменти.
Поняття "вектор" або "експресійний вектор" є синонімом поняття "експресійна конструкція" і відноситься до молекули ДНК, яку застосовують для інтродукції і забезпечення експресії
Зо конкретного гену, з якою він функціонально зв'язаний в клітині-мішені. Поняття включає вектор, що являє собою структуру нуклеїнової кислоти, що самореплікується, а також вектор, вбудований в геном клітини-хазяїна, в яку він інтродукований. Експресійний вектор, запропонований в даному винаході, містить касету експресії. Експресійні вектори дозволяють здійснювати транскрипцію стабільної МРНК у великих кількостях. Коли експресійний вектор знаходиться всередині клітини-мішені, то молекула рибонуклеїнової кислоти або білок, що кодується геном, продукується в результаті клітинного механізму транскрипції і/або трансляції.
В одному з варіантів здійснення винаходу експресійний вектор, запропонований у винаході, містить касету експресії, яка включає полінуклеотидні послідовності, які кодують біспецифічні антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, або їх фрагменти.
В контексті даного опису поняття "клітина-хазяїн", "лінія клітин-хазяїнів" і "культура клітин- хазяїнів" використовуються взаємозамінно, і вони відносяться до клітин, в які інтродукована екзогенна нуклеїнова кислота, включаючи потомство вказаних клітин. До клітин-хазяїнів відносяться "трансформанти" і "трансформовані клітини", які включають первинні трансформовані клітини, а також потомство, виведене з них, незалежно від кількості пересівів.
Потомство може не бути строго ідентичним батьківській клітині за складом нуклеїнових кислот, а може нести мутації. Під дане поняття підпадає мутантне потомство, яке має таку ж функцію або біологічну активність, що і відібрана шляхом скринінгу або селекції вихідна трансформована клітина. Клітина-хазяїн являє собою будь-який тип клітинної системи, яку можна застосовувати для створення біспецифічних антигензв'язуючих молекул, запропонованих в даному винаході. Клітини-хазяїни включають культивовані клітини, наприклад, культивовані клітини ссавців, такі як (але, не обмежуючись тільки ними). СНО- клітини, ВНК-клітини, М5О-клітини, 5Р2/О-клітини, клітини мієломи лінії МО, клітини мишачої мієломи лінії Р3хб3, РЕВ-клітини, РЕН.Сб-клітини або клітини гібридоми, клітини дріжджів, клітини комах і клітини рослин, але також клітини, що знаходяться в трансгенній тварині, трансгенній рослині або в культивованій рослинній або тваринній тканині. "Активуючий Ес-рецептор" являє собою Ес-рецептор, що після взаємодії з Ес-доменом антитіла здійснює процес передачі сигналів, які стимулюють клітину, що несе рецептор, здійснювати ефекторні функції. Людські активуючі Ес-рецептори включають ЕсуВІПа (СО16а),
ЕсуВІ (С064), ЕсуВііа (032) і ЕсаВіІ (С089). 60 Антитіло-обумовлена клітиннозалежна цитотоксичність (АЮСОС) являє собою імунний механізм, що призводить до лізису сенсибілізованих антитілом клітин-мішеней імунними ефекторними клітинами. Клітини-мішені являють собою клітини, з якими антитіла або їх похідні, що містять Ес-ділянку, специфічно зв'язуються, як правило, через ділянку білка, яка є М- кінцевою по відношенню до Ес-ділянки. В контексті даного опису поняття "знижена АЮСС" відноситься або до зниження кількості лізованих в даний момент часу клітин-мішеней при даній концентрації антитіла в середовищі, яке оточує клітини-мішені, шляхом вказаного вище механізму АОСС, і/або до підвищення концентрації антитіла в середовищі, що оточує клітини- мішені, необхідної для досягнення лізису даної кількості клітин-мішеней в даний час за допомогою механізму АЮСО. Зниження АЮСс-активності визначають по відношенню до АОСС, опосередковану таким же антитілом, яке одержане за допомогою Такого же типу клітин-хазяїнів з використанням однакових стандартних методів одержання, очистки, приготування композицій і зберігання (які відомі спеціалістам в даній галузі), але яке не піддавали інженерії. Наприклад, зниження АЮСС, опосередковане антитілом, що містить в його Ес-домені амінокислотну заміну, яка знижує АОСС, визначають по відношенню до АЮСС, опосередковану таким же антитілом без вказаної амінокислотної заміни в Ес-домені. Прийнятні аналізи оцінки АОСС добре відомі в даній галузі (див., наприклад, публікацію РОСТ М/О 2006/082515 або публікацію РСТ МО 2012/130831).
Поняття "ефективна кількість" агента відноситься до кількості, необхідної для забезпечення фізіологічної зміни в клітині або тканині, в яку його вводять.
Поняття "терапевтично ефективна кількість" агента, наприклад, фармацевтичної композиції, відноситься до кількості, ефективній при застосуванні в дозах і протягом періодів часу, необхідних для досягнення потрібного терапевтичного або профілактичного результата.
Терапевтично ефективна кількість агента, наприклад, елімінує, знижує, уповільнює, мінімізує або попереджає небажані явища захворювання. "Індивідуум" або "суб'єкт" є ссавцем. Ссавці є (але, не обмежуючись тільки ними) одомашненими тваринами (наприклад, коровами, вівцями, кішками, собаками і конями), приматами (наприклад, людьми і приматами крім людини, такими як мавпи), кроликами і гризунами (наприклад, миші і щури). Переважно індивідуум або суб'єкт являє собою людини.
Поняття "фармацевтична композиція" відноситься до препарату, що знаходиться в такій
Зо формі, що він забезпечує біологічну активність діючої речовини, що входить до його складу, яка повинна мати ефективність, і що не містить додаткових компонентів, які мають неприйнятну токсичність для індивідуума, якому слід вводити композицію. "Фармацевтично прийнятний носій" відноситься до інгредієнта в фармацевтичній композиції, відмінному від діючої речовини, що є нетоксичним для індивідуума. Фармацевтично прийнятні носії включають (але, не обмежуючись тільки ними) буфер, ексципієнт, стабілізатор або консервант.
В контексті даного опису поняття "лікування" (і його граматичні варіації, такі як "лікувати" або "процес лікування") відноситься до клінічного втручання з метою зміни природного перебігу захворювання в індивідуума, що підлягає лікуванню, і його можна здійснювати або для профілактики або в процесі розвитку клінічної патології. Необхідними діями лікування є (але, не обмежуючись тільки ними) попередження появи або рецидиву захворювання, полегшення симптомів, зменшення будь-яких прямих або непрямих патологічних наслідків захворювання, попередження метастазів, зниження швидкості розвитку захворювання, полегшення або тимчасове ослаблення хворобливого стану і ремісія або покращення прогнозу. В деяких варіантах здійснення винаходу активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т- клітини, запропоновані у винаході, застосовують для затримки розвитку захворювання або уповільнення прогресування захворювання.
Поняття "листівка-вкладиш в упаковку" в контексті даного опису відноситься до інструкцій, які звичайно поміщають в упаковки терапевтичних продуктів, які надходять у продаж і містять інформацію про показання, застосування, дозу, шляхи введення, комбіновану терапію, протипоказаннях і/або запобіжні заходи при застосуванні вказаних терапевтичних продуктів.
Поняття "ідіотипспецифічний поліпептид" В контексті даного опису відноситься до поліпептиду, що розпізнає ідіотип антигензв'язуючого фрагмента, наприклад, антигензв'язуючого фрагмента, специфічного по відношенню до СО3. Ідіотипспецифічний поліпептид має здатність специфічно зв'язуватись з варіабельною ділянкою антигензв'язуючого фрагмента і тим самим знижує або попереджає специфічне зв'язування антигензв'язуючого фрагмента з його когнатним антигеном. При асоціації з молекулою, яка містить антигензв'язуючий фрагмент, ідіотипспецифічний поліпептид може функціонувати як маскуючий фрагмент молекули. В даному описі представлені конкретно антиідіотипові антитіла або бо фрагменти антиідіотипзв'язуючого антитіла, специфічного по відношенню до ідіотипу анти-СОЗ3-
зв'язуючих молекул.
Поняття "протеаза" або "протеолітичний фермент" В контексті даного опису відноситься до будь-якого протеолітичного ферменту, що розщеплює лінкер в сайті, який розпізнається ферментом, і що експресується клітиною-мішенню. Вказані протеази можуть секретуватись клітиною-мішенню або залишатись асоційованими з клітиною-мішенню, наприклад, на поверхні клітини-мішені. приклади протеаз включають (але, не обмежуючись тільки ними) металопротеїнази, наприклад, матричну металопротеїназу 1-28 і "дезінтегрин «г металопротеіназу" (АСАМ) 2, 7-12, 15, 17-23, 28-30 і 33, серинові протеази, наприклад, активатор плазміногену урокіназного типу і матриптазу, цистеїнові протеази, аспарагінові протеази і представників сімейства катепсину.
В контексті даного опису поняття "активована протеазою" по відношенню до що активує Т- клітини біспецифічної молекули відноситься до що активує Т-клітини біспецифічної молекулі, яка має знижену здатність або в якій анульована здатність активувати Т-клітини завдяки маскуючому фрагменту, що знижує або анулює здатність біспецифічної молекули, що активує
Т-клітини, зв'язуватись з СОЮЗ. Після дисоціації маскуючого фрагмента шляхом протеолітичного розщеплення, наприклад, протеолітичного розщеплення лінкера, що з'єднує маскуючий фрагмент з що активує Т-клітини біспецифічної молекулою, зв'язування з СОЗ відновлюється і тим самим біспецифічна молекула, що активує Т-клітини активується.
Поняття "оборотне приховування" в контексті даного опису відноситься до Такого зв'язування маскуючого фрагмента або ідіотипспецифічного поліпептиду з антигензв'язуючим фрагментом або молекулою, яке заважає зв'язуванню антигензв'язуючого фрагмента або молекули з його/її антигеном, наприклад, СОЮЗ. Вказане приховування є оборотним в тому сенсі, що ідіотипспецифічний поліпептид може вивільнятися з антигензв'язуючого фрагмента або молекули, наприклад, в результаті розщеплення протеазою, і тим самим вивільняє антигензв'язуючий фрагмент або молекулу, даючи їм зв'язуватись з їх антигеном.
Детальний опис варіантів здійснення винаходу
Одним з об'єктів винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, яка містить (а) перший антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СОЮЗ;
Зо (б) другий антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені; і (в) маскуючий фрагмент, ковалентно приєднаний до біспецифічної молекули, що зв'язує Т- клітини, через розщеплюваний протеазою лінкер, де маскуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ідіостипом першого або другого антигензв'язуючого фрагмента, забезпечуючи тим самим оборотне приховування першого або другого антигензв'язуючого фрагмента.
Перший антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, містить ідіотип. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, ковалентно приєднаний до першого антигензв'язуючого фрагмента. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент ковалентно приєднаний до варіабельної ділянки важкого ланцюга першого антигензв'язуючого фрагмента. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент ковалентно приєднаний до варіабельної ділянки легкого ланцюга першого антигензв'язуючого фрагмента.
Вказаний ковалентний зв'язок відрізняється від специфічного зв'язку маскуючого фрагмента з ідіотипом першого антигензв'язуючого сайта, яка переважно є нековалентною. Ідіотип першого антигензв'язуючого фрагмента містить його варіабельну ділянку. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент зв'язується з амінокислотними залишками, які забезпечують контакт з СОЗ, коли перший антигензв'язуючий фрагмент зв'язується з СОЗ3. В переважному варіанті здійснення винаходу маскуючий фрагмент не являє собою когнатний антиген або його фрагменти першого антигензв'язуючого фрагмента, тобто маскуючий фрагмент не являє собою СОЗ або його фрагменти. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент являє собою антиідіотипіве антитіло або його фрагмент. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент являє собою антиідіотиповий 5сгЕм.
Наведені як приклад варіанти маскуючих фрагментів, які являють собою антиідіотиповий 5сгУ, і активованих протеазою молекул, що активує Т-клітини, які містять вказані маскуючі фрагменти, детально описані в прикладах.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить другий маскуючий фрагмент, що оборотно приховує другий антигензв'язуючий фрагмент. бо В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула,
що активує Т-клітини, містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, і що містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОН) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 45 |і 5ЕО ІО
МО: 46, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 17, БЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; (І) другий антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності
ЗЕО ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 55.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 55.
В конкретному варіанті здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1 і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІЮО МО: 15і 5ЕО
ІО МО: 16, і принаймні одну СОМ. легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 17, БЕО ІЮ МО: 1811 5ЕО ІЮ МО: 19.
В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕРоІ/В1 і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 47, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 55.
В конкретному варіанті здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має
Зо здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1 і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОВ) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 151, 5ЕО ІО МО: 152 і
ЗЕО ІО МО: 153, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО
ІО МО: 154, 5ЕО ІЮ МО: 155 і 5ЕО ІЮ МО: 156.
В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕРоІ/В1 і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮО МО: 157, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 158.
В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з НЕВІ і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОВ) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 56, 5ЕО ІО МО: 57 і 5ЕО
ІО МО: 58, і принаймні одну СОМ. легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 59, БЕО ІЮ МО: 60 ї БЕО ІЮ МО: 61.
В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з НЕНІ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 32, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 Фо, 97 о, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності БЕО ІЮ МО: 33.
В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з НЕНІ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності «ЕС ІЮО МО: 115, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 116.
В конкретному варіанті здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОВ) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 107, 5ЕО ІЮ МО: 60 108 ї 5ЕО ІО МО: 109, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з
ЗЕО ІО МО: 110, 5ЕО ІЮ МО: 111 ї 5ЕО І МО: 112.
В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 ФУ, 98 о, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 113, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У», 98 9Уо, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 114.
Одним з варіантів даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОН) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 45 |і 5ЕО ІО
МО: 46, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 17, БЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; (І) другий антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОВА) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 14, 5ЕО ІЮО МО: 15 ії 5ЕО ІО
МО: 16, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 17, ЗЕОІЮ МО: 181 5ЕО ІЮ МО: 19.
Одним з варіантів даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЮЗ, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 98 925, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІО МО: 55, (І) другий антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність
Зо специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 47, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 98 925, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІО МО: 55.
Одним з варіантів даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Еаб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОН) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 45 |і 5ЕО ІО
МО: 46, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 17, БЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; (І) другий антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОВА) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 151, 5ЕО ІЮ МО: 152 ії 5ЕО Ір
МО: 153, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО І МО: 154, 5ЕО ІЮО МО: 1551 5ЕО І МО: 156.
Одним з варіантів даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЮЗ, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 98 925, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІО МО: 55, (І) другий антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 157, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 60 98 925, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО І МО: 158.
Одним з варіантів даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Рар, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОН) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІО МО: 45 ії 5ЕО ІО
МО: 46, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 17, БЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; (І) другий антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з НЕН'Т, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОВА) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 56, 5ЕО ІО МО: 57 і 5ЕО ІО
МО: 58, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 59, 5ЕОІЮО МО: 60 їі 5ЕО І МО: 61.
Одним з варіантів даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЮЗ, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 98 925, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІО МО: 55, (І) другий антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з НЕНТ, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 115, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 98 925, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮО МО: 116.
В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки легкого ланцюга
Еаб і важкого ланцюга Раб обмінені.
Зо Одним з варіантів даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОН) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 45 |і 5ЕО ІО
МО: 46, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 17, БЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; (І) другий антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОВ) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 107, 5ЕО ІО МО: 108 і
ЗЕО І МО: 109, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО
ІО МО: 110, 5ЕО ІЮ МО: 111 ї 5ЕО І МО: 112.
Одним з варіантів даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЮЗ, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 98 925, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІО МО: 55, (І) другий антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності «ЕС ІЮО МО: 113, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 114.
В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент являє собою канонічну молекулу Раб. В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій константні ділянки легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Раб обмінені, а другий антигензв'язуючий фрагмент являє собою канонічну бо молекулу Раб. В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу перший і другий антигензв'язуючі фрагменти злиті один з одним, необов'язково через пептидний лінкер.
В конкретних варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, додатково містить Ес-домен, який складається з першої і другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.
В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу не більше одного антигензв'язуючого фрагмента, що має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, є присутнім в активованій протеазою біспецифічній молекулі, що активує Т-клітини (тобто активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, характеризується одновалентним зв'язуванням з
С03).
Формати активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини,
Компоненти активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, можна зливати один з одним в різних конфігураціях. Приклади конфігурацією представлені на фіг. ТА-Д і 5А-С. Додаткові приклади конфігурацій представлені на фіг. ЗЗА-Л.
В конкретних варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить Гс-домен, який складається з першої і другої субодиниць, які мають здатність до стабільної асоціації. В деяких варіантах здійснення винаходу другий антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес-домену.
В одному з вказаних варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга ар іншого антигензв'язуючого фрагмента. В конкретному вказаному варіанті здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, практично складається з першого та другого антигензв'язуючих фрагментів, Рсе-домену, що складається ф першої і другої субодиниць, і необов'язково одного або декількох пептидних лінкерів, в якій перший антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем важкого ланцюга
Еаб іншого антигензв'язуючого фрагмента, а другий антигензв'язуючий фрагмент злитий на С- кінці важкого ланцюга Рар з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес-домену. Необов'язково легкий ланцюг Бар першого антигензв'язуючого фрагмента і легкий ланцюг Рар іншого антигензв'язуючого фрагмента можуть бути додатково злиті один з одним.
Зо В іншому вказаному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес-домену. В конкретному вказаному варіанті здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, практично складається з першого та другого антигензв'язуючих фрагментів, Ес-домену, що складається ф першої і другої субодиниць, і необов'язково одного або декількох пептидних лінкерів, в якій перший і другий антигензв'язуючий фрагмент кожний злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем однієї з субодиниць Ес-домену.
В інших варіантах здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент злитий на С- кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес-домену.
В конкретному вказаному варіанті здійснення винаходудругий антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента. В конкретному вказаному варіанті здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, практично складається з першого та другого антигензв'язуючих фрагментів, Рсе-домену, що складається ф першої і другої субодиниць, і необов'язково одного або декількох пептидних лінкерів, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем важкого ланцюга
Раб першого антигензв'язуючого фрагмента, а перший антигензв'язуючий фрагмент злитий на
С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес-домену. Необов'язково легкий ланцюг Бар першого антигензв'язуючого фрагмента і легкий ланцюг Рар іншого антигензв'язуючого фрагмента можуть бути додатково злиті один з одним.
Антигензв'язуючі фрагменти можуть бути злиті з Ес-доменом або один з одним безпосередньо або через пептидний лінкер, який містить одну або декілька амінокислот, як правило, приблизно 2-20 амінокислот. Пептидні лінкери відомі в даній галузі, і вони представлені в даному описі. Придатні неімуногенні пептидні лінкери включають, наприклад, пептидні лінкери (С45)п, (ЗСі4)п, (Сі45)п або С4(5Сі4)п. Як правило, "п" позначає число від 1 до 10, як правило, від 2 до 4. Найбільш придатним пептидним лінкером для злиття одного з одним легких ланцюгів аб першого та другого антигензв'язуючих фрагментів є ((45)2. Прикладом пептидного лінкера, придатного для з'єднання важких ланцюгів Раб першого та другого антигензв'язуючих фрагментів є ЕРКЗС(О)-(С45)2 (ЗЕБО ІО МО: 105 і 106). Лінкери можуть додатково містити шарнірну ділянку імуноглобуліну (її частину). Зокрема, коли бо антигензв'язуючий фрагмент злитий з М-кінцем субодиниці Ес-домену, то він може бути злитий
Зо за допомогою шарнірної ділянки імуноглобуліну або її частини з використанням або без використання додаткового пептидного лінкера.
Цінною є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, 3 одним антигензв'язуючим фрагментом, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, насамперед у випадках, коли очікується інтерналізація антигена клітини-мішені після зв'язування з антигензв'язуючим фрагментом, який має високу афінність. В таких випадках присутність декількох антигензв'язуючих фрагментів, специфічних по відношенню до антигена клітини-мішені, може підвищувати інтерналізацію антигена клітини-мішені, знижуючи тим самим його доступність.
Проте в багатьох інших випадках доцільно, щоб активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містила два або більшу кількість антигензв'язуючих фрагментів, специфічних по відношенню до оантигена клітини-мішені (див. приклади, представлені на фіг. 5А-3), наприклад, для оптимізації спрямованого перенесення до сайта- мішені або для забезпечення перехресного зшивання антигенів клітини-мішені.
Так, в деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, запропонована у винаході, додатково містить третій антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Бар, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені. В одному з варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язуючий фрагмент являє собою канонічну молекулу Бар. В одному з варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з тим же самим антигеном клітини-мішені, що і другий антигензв'язуючий фрагмент. В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені. В конкретному варіанті здійснення винаходу другий і третій антигензв'язуючі фрагменти є ідентичними (тобто вони містять протеві амінокислотні послідовності).
В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з Боїй!ї, при цьому другий і третій антигензв'язуючі
Зо фрагменти містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІО МО: 15 і 5ЕО ІО МО: 16, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з ФЕО ІЮ МО: 17, БЕОІО МО: 1811 5ЕО ІО МО: 19.
В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 45і 5ЕО
ІО МО: 46, і принаймні одну СОМ. легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 17, ЗЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з Боїй!ї, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІО МО: 15 і 5ЕО ІО МО: 16, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з ФЕО ІЮ МО: 17, БЕОІО МО: 1811 5ЕО ІО МО: 19.
В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 45і 5ЕО
ІО МО: 46, і принаймні одну СОМ. легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 17, ЗЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з Боїй!ї, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІО МО: 15 і 5ЕО ІО МО: 16, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з ФЕО ІЮ МО: 17, БЕОІО МО: 1811 5ЕО ІО МО: 19.
В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 9», 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 55, а другий і третій бо антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІН1, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 47, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 98 925, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності БЕО ІО МО: 55.
В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з НЕЯВНІ, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 57 і 5ЕО ІО МО: 58, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з ФЕО ІЮ МО: 59, 5БЕОІО МО: 60 ї БЕО ІО МО: 61.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 45і 5ЕО
ІО МО: 46, і принаймні одну СОМ. легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 17, ЗЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з НЕЯВНІ, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 57 і 5ЕО ІО МО: 58, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з ФЕО ІЮ МО: 59, 5БЕОІО МО: 60 ї БЕО ІО МО: 61.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 45і 5ЕО
ІО МО: 46, і принаймні одну СОМ. легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 17, ЗЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з НЕЯВНІ, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з
Зо групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 57 і 5ЕО ІО МО: 58, і принаймні одну СО легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з ФЕО ІЮ МО: 59, 5БЕОІО МО: 60 ї БЕО ІО МО: 61.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 9», 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 55, а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з НЕНТ, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 115, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 98 925, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮО МО: 116.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з НЕН2, при цьому другий антигензв'язуючий фрагмент містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 142, 5ЕО ІЮО МО: 143 ї 5ЕО ІО МО: 144, і принаймні одну СОЕ легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 148, 5ЕО І МО: 149 ї БЕО ІЮО МО: 150, а третій антигензв'язуючий фрагмент містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОН) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 145, 5ЕО ІЮ МО: 146 ї 5ЕО Ір
МО: 147, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО І МО: 148, 5ЕО ІЮО МО: 149 і 5ЕО І МО: 150.
В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 45і 5ЕО
ІО МО: 46, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 17, ЗЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають бо здатність специфічно зв'язуватись з НЕН2, при цьому другий антигензв'язуючий фрагмент містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 142, 5ЕО ІЮО МО: 143 ї 5ЕО ІО МО: 144, і принаймні одну СОЕ легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 148, 5ЕО ІЮО МО: 149 ї БЕО ІЮО МО: 150, а третій антигензв'язуючий фрагмент містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОН) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 145, 5ЕО ІЮО МО: 146 і 5ЕО І
МО: 147, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 148, 5ЕО ІЮО МО: 149 і 5ЕО І МО: 150.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 9», 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 55, а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з НЕН2, при цьому другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 о, 99 90 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 160, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Об, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮО МО: 161, а третій антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Уо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІО МО: 159, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ЗЕО ІО МО: 161.
В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 107, 5ЕО ІО МО: 108 ї 5ЕО ІО МО: 109, і принаймні одну
СОБК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5БЕО ІЮ МО: 110, 5ЕО ІЮ МО: 111 і 5ЕО
ІО МО: 112.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 45і 5ЕО
ІО МО: 46, і принаймні одну СОМ. легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 17, ЗЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 107, 5ЕО ІО МО: 108 ї 5ЕО ІО МО: 109, і принаймні одну
СО легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 110, 5ЕО ІЮ МО: 111 і 5ЕО
ІО МО: 112.
В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 9», 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 55, а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності «ЕС ІЮО МО: 113, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 114.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з НЕЯВНІ, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 57 і 5ЕО ІО МО: 58, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з ФЕО ІЮ МО: 59, 5БЕОІО МО: 60 ї БЕО ІО МО: 60 61.
В конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 45і 5ЕО
ІО МО: 46, і принаймні одну СОМ. легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 17, 5ЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19; а другий і третій антигензв'язуючі фрагменти мають здатність специфічно зв'язуватись з НЕЯВНІ, при цьому другий і третій антигензв'язуючі фрагменти містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 57 і 5ЕО ІО МО: 58, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з ФЕО ІЮ МО: 59, 5БЕОІО МО: 60 ї БЕО ІО МО: 61.
В одному з варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язуючий фрагмент злитий на С- кінці важкого ланцюга Рар з М-кінцем першої або другої субодиниці ЕРс-домену. В більш конкретному варіанті здійснення винаходу другий і третій антигензв'язуючий фрагмент кожний злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем однієї з субодиниць Ес-домену, в перший антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем важкого ланцюга
Бар іншого антигензв'язуючого фрагмента. Необов'язково легкий ланцюг Бар першого антигензв'язуючого фрагмента і легкий ланцюг Бар іншого антигензв'язуючого фрагмента можуть бути додатково злиті один з одним.
Другий і третій антигензв'язуючі фрагменти можуть бути злиті з Есе-доменом безпосередньо або через пептидний лінкер. В конкретному варіанті здійснення винаходу другий і третій антигензв'язуючий фрагмент кожний озлитий з Ес-доменом через шарнірну ділянку імуноглобуліну. В конкретному варіанті здійснення винаходу шарнірна ділянка імуноглобуліну являє собою шарнірну ділянку людського Ідси. В одному з варіантів здійснення винаходу другий і третій антигензв'язуючі фрагменти і с-домен являють собою частину молекули імуноглобуліну. В конкретному варіанті здійснення винаходу молекула імуноглобуліну являє собою імуноглобулін Ідс-класу. В ще більш конкретному варіанті здійснення винаходу імуноглобулін являє собою імуноглобулін Ідс:-підкласу. В іншому варіанті здійснення винаходу імуноглобулін являє собою імуноглобулін Ідсз4-підкласу. В іншому варіанті здійснення винаходу імуноглобулін являє собою людський імуноглобулін. В інших варіантах здійснення винаходу
Зо імуноглобулін являє собою химерний імуноглобулін або гуманізований імуноглобулін. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, складається в основному з молекули імуноглобуліну, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і антигензв'язуючого фрагмента, який має здатність специфічно зв'язуватись з СОЮЗ, в якій антигензв'язуючий фрагмент являє собою молекулу Раб, насамперед кросовер-молекулу Раб, злиту з М-кінцем однієї з важких ланцюгів імуноглобуліну, необов'язково через пептидний лінкер.
В конкретному варіанті здійснення винаходу перший і третій антигензв'язуючий фрагмент кожний злитий на С-кінці важкого ланцюга Рар з М-кінцем однієї з субодиниць Ес-домену, а другий антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Рар першого антигензв'язуючого фрагмента. У вказаному конкретному варіанті здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, практично складається з першого, іншого і третього антигензв'язуючих фрагментів, Ес-домену, що складається з першої і другої субодиниць, і необов'язково одного або декількох пептидних лінкерів, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Рар з М- кінцем важкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента, а перший антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем першої субодиниці Ес-домену, і в якій третій антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем другої субодиниці Ес-домену. Необов'язково легкий ланцюг Еаб першого антигензв'язуючого фрагмента і легкий ланцюг Бар іншого антигензв'язуючого фрагмента можуть бути додатково злиті один з одним.
Одним з варіантів здійснення даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, що містить гіперваріабельну ділянку (СОР) 1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 44, СОВА 2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 45, СОВА 3 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 46, СОВ 1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 17, СОВ 2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 18, ї СОВА 3 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 19, де перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки, насамперед константні ділянки, легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Ба 60 обмінені;
(ІЇ) другий і третій антигензв'язуючі фрагменти, кожний з яких являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1, яка містить СОВ 1 важкого ланцюга, що має
ЗЕО ІО МО: 14, СОВ 2 важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 15, СОВ 3 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 16, СОВ 1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 17, легкого ланцюга, що має
СОВА 2 5ЕО ІО МО: 18, ії СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 19.
Одним з варіантів здійснення даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 90, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 55, де перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки, насамперед константні ділянки, легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Ба обмінені; (ІЇ) другий і третій антигензв'язуючі фрагменти, кожний з яких являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1, яка містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 9, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності «ЕС ІЮ МО: 47, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У», 98 9Уо, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 55.
Одним з варіантів здійснення даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЮЗ, що містить гіперваріабельну ділянку (СОР) 1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 44, СОВА 2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 45, СОВА 3 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 46, СОВ 1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 17, СОВ 2 легкого
Зо ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 18, ї СОВ 3 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 19, де перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки, насамперед константні ділянки, легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Ба обмінені; (ІЇ) другий і третій антигензв'язуючі фрагменти, кожний з яких являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1, яка містить СОВ 1 важкого ланцюга, що має
ЗЕО ІЮ МО: 151, СОВ 2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 152, СОВ З важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 153, СОВ 1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 154, легкого ланцюга, що має
СОВА 2 5ЕО ІО МО: 155, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 156.
Одним з варіантів здійснення даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 90, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 55, де перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки, насамперед константні ділянки, легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Ба обмінені; (ІЇ) другий і третій антигензв'язуючі фрагменти, кожний з яких являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1, яка містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 ФУ, 98 о, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 157, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У», 98 9Уо, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 158.
Одним з варіантів здійснення даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність бо специфічно зв'язуватись з СОЗ, що містить гіперваріабельну ділянку (СОР) 1 важкого ланцюга,
що має 5ЕО ІО МО: 44, СОВА 2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 45, СОВА 3 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 46, СОВ 1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 17, СОВ 2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 18, ї СОВ 3 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 19, де перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки, насамперед константні ділянки, легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Ба обмінені; (ІЇ) другий і третій антигензв'язуючі фрагменти, кожний з яких являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з НЕВІ, яка містить СОВ 1 важкого ланцюга, що має
ЗЕО ІО МО: 56, СОВ 2 важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 57, СОВ 3 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 58, СОВ 1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 59, легкого ланцюга, що має
СОВА 2 5ЕО ІО МО: 60, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 61.
Одним з варіантів здійснення даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 90, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 55, де перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки, насамперед константні ділянки, легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Ба обмінені; (ІЇ) другий і третій антигензв'язуючі фрагменти, кожний з яких являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з НЕН'Т, яка містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 ФУ, 98 о, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 115, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У», 98 9Уо, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 116.
Зо Одним з варіантів здійснення даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, що містить гіперваріабельну ділянку (СОР) 1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 44, СОВА 2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 45, СОВА 3 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 46, СОВ 1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 17, СОВ 2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 18, ї СОВ 3 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 19, де перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки, насамперед константні ділянки, легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Бар обмінені; (ІЇ) другий і третій антигензв'язуючі фрагменти, кожний з яких являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з НЕН2, де другий антигензв'язуючий фрагмент містить СОВ 1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 142, СОВ 2 важкого ланцюга, що має БЕО
ІО МО: 143, СОВ З важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 144, СОВ 1 легкого ланцюга, що має
ЗЕО ІО МО: 148, легкого ланцюга, що має СОВ 2 5ЕО ІО МО: 149, ії СОВЗ легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 150, і де третій антигензв'язуючий фрагмент містить СОВ 1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 145, СОВ 2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 146, СОВА 3 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 147, СОВ 1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 148, легкого ланцюга, що має СОВА 2 5ЕО ІЮ МО: 149, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 150.
Одним з варіантів здійснення даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 90, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 55, де перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки, насамперед константні ділянки, легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Ба обмінені; бо (ІЇ) другий і третій антигензв'язуючі фрагменти, кожний з яких являє собою молекулу Раб,
Зб яка має здатність специфічно зв'язуватись з НЕН2, де другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 в, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 160, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9Уо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮО МО: 161, і де третій антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності
ЗЕБЕО 10 МО: 159, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9Уо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ЗЕО І МО: 161.
Одним з варіантів здійснення даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, що містить гіперваріабельну ділянку (СОР) 1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 44, СОВА 2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 45, СОВА 3 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 46, СОВ 1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 17, СОВ 2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 18, ї СОВ 3 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 19, де перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки, насамперед константні ділянки, легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Ба обмінені; (ІЇ) другий і третій антигензв'язуючі фрагменти, кожний з яких являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном, яка містить СОВ 1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІОЮО МО: 107, СОВ 2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 108, СОВА 3 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 109, СОВА 1 легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 110, легкого ланцюга, що має СОВ 2 5ЕО ІЮ МО: 111, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 112.
Одним з варіантів здійснення даного винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить () перший антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність
Зо специфічно зв'язуватись з СОЗ, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 90, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 560) ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 55, де перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки, насамперед константні ділянки, легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Ба обмінені; (ІЇ) другий і третій антигензв'язуючі фрагменти, кожний з яких являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном, яка містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 90, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності «ЕС ІО МО: 113, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності
ЗЕО ІЮО МО: 114.
Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із десяти вищевказаних варіантів здійснення винаходу може містити також (І) Ес-домен, який складається з першої і другої субодиниць, які мають здатність до стабільної асоціації, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Ра з М-кінцем важкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента, а перший антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої субодиниці Ес-домену і в якій третій антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем другої субодиниці Ес-домену.
В деяких активованих протеазою біспецифічних молекулах, які активують Т-клітини, запропонованих у винаході, легкий ланцюг Рар першого антигензв'язуючого фрагмента і легкий ланцюг Раб іншого антигензв'язуючого фрагмента злиті один з одним, необов'язково через лінкерний пептид. Залежно від конфігурації першого і другий антигензв'язуючих фрагментів легкий ланцюг Раб першого антигензв'язуючого фрагмента може бути злита на її С-кінці з М- кінцем легкого ланцюга Раб іншого антигензв'язуючого фрагмента або легкий ланцюг ЕРар іншого антигензв'язуючого фрагмента може бути злита на її С-кінці з М-кінцем легкого ланцюга бо Раб першого антигензв'язуючого фрагмента. Злиття легких ланцюгів бар першого та другого антигензв'язуючих фрагментів може додатково знижувати помилкове спаровування невідповідних важких і легких ланцюгів Бар, а також зменшувати кількість плазмід, необхідних для експресії деяких активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, запропонованих у винаході.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептид, в якому варіабельна ділянка легкого ланцюга Еар першого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою важкого ланцюга Раб першого антигензв'язуючого фрагмента (тобто перший антигензв'язуючий фрагмент містить важкий ланцюг кросовер-молекули Еар, в якій варіабельна ділянка важкого ланцюга замінена варіабельною ділянкою легкого ланцюга), що в свою чергу об'єднаний карбоксикінцевим пептидним зв'язком з субодиницею Ес-домену (МІ1)-
СНІТ-СН2г-СНЗ(-СНЯ)), і поліпептид, в якому важкий ланцюг Раб іншого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з субодиницею Ес-домену (МН()-
СНІг-АСН2г-СНЗ(І-СН4)) В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, додатково містить поліпептид, в якому варіабельна ділянка важкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою легкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента (МН()»-СіІ(3)), і поліпептид легкого ланцюга ар іншого антигензв'язуючого фрагмента (МІ 2)-СІ г). В деяких варіантах здійснення винаходу поліпептиди ковалентно зв'язані, наприклад, дисульфідним зв'язком.
В альтернативних варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептид, в якому варіабельна ділянка важкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого об'єднана карбоксикінцневим пептидним зв'язком з константною ділянкою легкого ланцюга Раб першого антигензв'язуючого фрагмента (тобто перший антигензв'язуючий фрагмент містить важкий ланцюг кросовер-молекули Еар, в якій константна ділянка важкого ланцюга замінена константною ділянкою легкого ланцюга), що в свою чергу об'єднаний карбоксикінцевим пептидним зв'язком з субодиницею Ес-домену (МН|()-
Сі -СнН2г-СнНЗ(-СНЯ)), і поліпептид, в якому важкий ланцюг Раб іншого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з субодиницею Ес-домену (МН()-
Зо СНІг-АСН2г-СНЗ(І-СН4)) В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить додатково поліпептид, в якому варіабельна ділянка легкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою важкого ланцюга баб першого антигензв'язуючого фрагмента (МІ(3-СНІ()), і поліпептид легкого ланцюга Раб іншого антигензв'язуючого фрагмента (МІ 2)-СІ у). В деяких варіантах здійснення винаходу поліпептиди ковалентно зв'язані, наприклад, дисульфідним зв'язком.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептид, в якому варіабельна ділянка легкого ланцюга Еар першого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою важкого ланцюга Раб першого антигензв'язуючого фрагмента (тобто перший антигензв'язуючий фрагмент містить важкий ланцюг кросовер-молекули Еар, в якій варіабельна ділянка важкого ланцюга замінена варіабельною ділянкою легкого ланцюга), що в свою чергу об'єднаний карбоксикінцневим пептидним зв'язком з важким ланцюгом Рар іншого антигензв'язуючого фрагмента, що в свою чергу об'єднаний карбоксикінцевим пептидним зв'язком з субодиницею Ес-домену (МІ 3-СНІ(13-МН(еа-СНІ1 2 СН2г-СНЗ(-СНЯ)). В інших варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептид, в якому варіабельна ділянка важкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою легкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента (тобто перший антигензв'язуючий фрагмент містить важкий ланцюг кросовер-молекули Раб, в якій константна ділянка важкого ланцюга заміна константною ділянкою легкого ланцюга), що в свою чергу об'єднаний карбоксикінцевим пептидним зв'язком з важким ланцюгом Рар іншого антигензв'язуючого фрагмента, що в свою чергу об'єднаний карбоксикінцевим пептидним зв'язком з субодиницею Рс-домену (МНа-СЦ1)-МНе-СНІ(2--СН2-СНЗ(-СН4)). В наступних варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, містить поліпептид, в якому важкий ланцюг Рар іншого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з варіабельною ділянкою легкого ланцюга Рар першого антигензв'язуючого фрагмента, яка в свою чергу об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою важкого ланцюга Рар першого антигензв'язуючого бо фрагмента (тобто перший антигензв'язуючий фрагмент містить важкий ланцюг кросовер-
молекули Раб, в якій варіабельна ділянка важкого ланцюга замінена варіабельною ділянкою легкого ланцюга), що в свою чергу об'єднаний карбоксикінцевим пептидним зв'язком з субодиницею Ес-домену (МНе)-СНІ(2-М3-СНІ1(3-СН2-СНЗ(-СНЯ)). В інших варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептид, в якому важкий ланцюг Раб іншого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з варіабельною ділянкою важкого ланцюга баб першого антигензв'язуючого фрагмента, яка в свою чергу об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою легкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента (тобто перший антигензв'язуючий фрагмент містить важкий ланцюг кросовер-молекули Еаб, в якій константна ділянка важкого ланцюга заміна константною ділянкою легкого ланцюга), що в свою чергу об'єднаний карбоксикінцевим пептидним зв'язком з субодиницею Ес-домену (МН()-
СснІіе-МНа-СЦо-СНага-СнНЗ(-СНЯ)).
В деяких із вказаних варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептид містить додатково поліпептид легкого ланцюга кросовер-молекули Раб першого антигензв'язуючого фрагмента, в якому варіабельна ділянка важкого ланцюга Раб першого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою легкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента (МН()»-СіІ(3)), і поліпептид легкого ланцюга ар іншого антигензв'язуючого фрагмента (МІ2)-СІ (2). В інших зазначених випадках здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить додатково поліпептид легкого ланцюга кросовер-молекули Раб, в якій варіабельна ділянка легкого ланцюга
Еаб першого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою важкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента (М((1-
СНІ), і поліпептид легкого ланцюга Раб іншого антигензв'язуючого фрагмента (МІ2-СІ (2). В інших зазначених випадках здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить додатково поліпептид варіабельної ділянки легкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента, яка об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою важкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента, яка в свою чергу об'єднана карбоксикінцневим пептидним зв'язком з поліпептидом легкого ланцюга Еар
Зо іншого антигензв'язуючого фрагмента (М|Ц1-СНІ1(3-МЦ23-Сі гу), поліпептид, в якому варіабельна ділянка важкого ланцюга Раб першого антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою легкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента, яка в свою чергу об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з поліпептидом легкого ланцюга Раб іншого антигензв'язуючого фрагмента (МН()-СІ(1-
МЦе-Сі-г)), поліпептид, в якому поліпептид легкого ланцюга Раб іншого антигензв'язуючого фрагмента об'єднаний карбоксикінцевим пептидним зв'язком з варіабельною ділянкою легкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента, яка в свою чергу об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою важкого ланцюга баб першого антигензв'язуючого фрагмента (МЦг-СІ2г-МІ13-СНІ (у), або поліпептид, в якому поліпептид легкого ланцюга Рар іншого антигензв'язуючого фрагмента об'єднаний карбоксикінцевим пептидним зв'язком з варіабельною ділянкою важкого ланцюга Рар першого антигензв'язуючого фрагмента, яка в свою чергу об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з константною ділянкою легкого ланцюга Рар першого антигензв'язуючого фрагмента (М|Ц2-СЦеа-МН(а-СіІ (3).
Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, відповідно до вказаних варіантів здійснення винаходу може містити додатково (І) поліпептид субодиниці Ес- домену (СН2-СНЗ(-СН4)), або (І) поліпептид, в якому важкий ланцюг ар третього антигензв'язуючого фрагмента об'єднана карбоксикінцевим пептидним зв'язком з субодиницею
Ес-домену (МН(з-СНІ(3у"СН2-СНЗ(-СН4)), і поліпептид легкого ланцюга Бар третього антигензв'язуючого фрагмента (МІ (33-СІ (зу). В деяких варіантах здійснення винаходу поліпептиди ковалентно зв'язані, наприклад, дисульфідним зв'язком.
Відповідно до будь-якого із вищевказаних варіантів здійснення винаходу компоненти активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, (наприклад, антигензв'язуючий фрагмент, Ес-домен) можуть бути злиті безпосередньо або через різноманітні лінкери, насамперед пептидні лінкери, що містять одну або декілька амінокислот, як правило, приблизно 2-20 амінокислот, які вказані в даному описі і відомі в даній галузі.
Придатні неімуногенні пептидні лінкери включають, наприклад, пептидні лінкери (С45)п, (ЗО), (Са5)п або С4(5С4)п, де, як правило, "п" позначає число від 1 до 10, як правило, від 2 до 4.
Ес-домен
Ес-домен активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, 60 складається з пари поліпептидних ланцюгів, які містять домени важкого ланцюга молекули імуноглобуліну. Наприклад, Ес-домен молекули імуноглобуліну Г (92) являє собою димер, кожна субодиниця якого містить константні домени СН? і СНЗ важкого ланцюга Ідс. Дві субодиниці Ес-домену мають здатність до стабільної асоціації один з одним. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, запропонована у винаході, містить не більше одного Ес-домену.
В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, являє собою Ес-домен Ідс. В конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен являє собою Ес-домен ІдСи. В іншому варіанті здійснення винаходу Ес- домен являє собою Ес-домен Ідсі«. В більш конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен являє собою Ес-домен ІдСія, який містить амінокислотну заміну в положенні 5228 (нумерація за
Кеботом), насамперед амінокислотну заміну 5228Р. Вказана амінокислотна заміна знижує іп мімо обмін в РГаб-плече антитіл у вигляді ІЇдС14 (див. біШрепгацйсі та ін., Огид Меїароїїзт апа
Ріврозйоп 38, 2010, сс. 84-91). В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу Есо-домен є людським.
Модифікації Ес-домену, які сприяють гетеродимеризації
Активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, містять різноманітні антигензв'язуючі фрагменти, злиті з однієї або іншою з двох субодиниць Ес-домену, при цьому дві субодиниці ЕРс-домену, як правило, містяться в двох неідентичних поліпептидних ланцюгах. Рекомбінантна спільна експресія цих поліпептидів і наступна димеризація призводить до декількох можливих комбінацій двох поліпептидів. Для підвищення виходу і чистоти активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т- клітини, при їх одержанні методами рекомбінації доцільно інтродукувати в Ес-домен активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини модифікацію, яка сприяє асоціації необхідних поліпептидів.
Таким чином, в конкретних варіантах здійснення винаходу Ес-домен активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, запропонованої у винаході, містить модифікацію, яка сприяє асоціації першої і другої субодиниць Ес-домену. Сайт найбільш сильної білок-білкової взаємодії двох субодиниць Ес-домену людського ІдСсї знаходиться в СНЗ- домені Ес-домену. Таким чином, в одному з варіантів здійснення винаходу вказана модифікація знаходиться в СНЗ-домені Ес-домену.
В конкретному варіанті здійснення винаходу вказана модифікація являє собою так звану модифікацію типу "Кпобр-іп-поїе" (типу "виступ-западина"), яка включає модифікацію, що призводить до утворення "виступа" на одній з двох субодиниць Ес-домену і модифікацію, що призводить до утворення "западини" в іншій одній з двох субодиниць Ес-домену.
Технологія "Кпоб-іпіо-поЇе" описана, наприклад, в ОБ Мо 5731168; 005 Мо 7695936; у Віддуау та ін., Ргої Епа 9, 1996, сс. 617-621 і Сапег, У Іттипої Меїй 248, 2001, сс. 7-15. В цілому, метод включає інтродукцію опуклості ("виступ") на поверхні розділу першого поліпептиду і відповідної порожнини ("западина") в поверхні розділу іншого поліпептиду, в результаті опуклість может вміщуватися в порожнину, сприяючи тим самим утворенню гетеродимера і перешкоджаючи утворенню гомодимера. Опуклості конструюють шляхом заміни амінокислот з невеликими бічними ланцюгами на поверхні розділу першого поліпептиду на амінокислоти з більш крупними бічними ланцюгами (наприклад, на тірозин або триптофан). Компенсуючі порожнини ідентичного або схожого з опуклостями розміру створюють в поверхні розділу іншого поліпептиду шляхом заміни амінокислот з крупними бічними ланцюгами на амінокислоти з менше крупними бічними ланцюгами (наприклад, аланін або треонін).
Таким чином, в конкретному варіанті здійснення винаходу в СНЗ-домені першої субодиниці
Ес-домену активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини амінокислотний залишок замінений амінокислотним залишком, що має більший об'єм бічного ланцюга, що призводить до утворення опуклості на СНЗ-домені першої субодиниці, яка може поміщатись в порожнину в СНЗ-домені другої субодиниці, і в СНЗ-домені другої субодиниці Ес- домену амінокислотний залишок замінений амінокислотних залишком, що має менший об'єм бічного ланцюга, що призводить до утворення порожнини в СНЗ-домені другої субодиниці, в яку може поміщатись опуклість на СНЗ-домені першої субодиниці.
Опуклість і порожнину можна створювати шляхом зміни нуклеїнових кислот, які кодують поліпептиди, наприклад, за допомогою сайтнаправленого мутагенеза або шляхом пептидного синтезу.
В конкретному варіанті здійснення винаходу в СНЗ-домені першої субодиниці Ес-домену залишок треоніну в положенні 366 замінений залишком триптофану (Т366МУ), а в СНЗ-домені другої субодиниці Ес-домену залишок тірозину в положенні 407 замінений на залишок валіну бо (У407М). В одному з варіантів здійснення винаходу в другій субодиниці Ес-домену додатково залишок треоніну в положенні 366 замінений на залишок серину (Т3665) і залишок лейцину в положенні 368 замінений на залишок аланіну (І З68А).
В наступному варіанті здійснення винаходу в першій субодиниці Ес-домену додатково залишок серину в положенні 354 замінений на залишок цистеїну (5354), а в другій субодиниці
Ес-домену додатково залишок тірозину в положенні 349 замінений на залишок цистеїну (У3490). Інтродукція вказаних двох залишків цистеїну призводить до утворення дисульфідного містка між двома субодиницями Ес-домену, тим самим додатково стабілізуючи димер (Сапег, /
Іттипо! Меїйоаз 248, 2001, со. 7-15).
В конкретному варіанті здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність зв'язуватись з СОЗ, злитий (необов'язково через антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність зв'язуватись з антигеном клітини-мішені) з першою субодиницею Ес-домену (яка містить модифікацію, що призводить до утворення "виступа"). Не вдаючись в будь-яку теорію, злиття антигензв'язуючого фрагмента, що має здатність зв'язуватись з СОЗ, з субодиницею Ес- домену, яка містить "виступ", повинне (додатково) мінімізуквати утворення антигензв'язуючих молекул, які містять два антигензв'язуючі фрагменти, які мають здатність зв'язуватись з СОЗ (стеричне "зіткнення" двох які містять "виступ" поліпептидів).
В альтернативному варіанті здійснення винаходу модифікація, що сприяє асоціації першої і другої субодиниць Ес-домену, являє собою модифікацію, що опосередковує визначені електростатичною дією впливи, наприклад, описані в публікації РСТ М/О 2009/089004. В цілому, вказаний метод включає заміну одного або декількох амінокислотних залишків на поверхні розділу двох субодиниць Ес-домену на заряджені амінокислотні залишки, в результаті чого утворення гомодимера стає електростатично невигідним, а гетеродимеризація стає електростатично вигідною.
Модифікації Ес-домену, що призводять зниження зв'язування з Ес-рецептором і/або ефекторної функції
Ес-домен надає активованій протеазою біспецифічній антигензв'язуючій молекулі, що активує Т-клітини, переважні фармакокінетичні властивості включаючи тривалий час напівжиття в сироватці, що забезпечує хороше накопичення в тканині-мішені і переважне співвідношення розподілу в тканині-крові. Проте в той же час він може призводити до небажаної
Зо направленості активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, до клітин, які експресують Ес-рецептори, а не до переважним клітинам, які несуть антиген. Крім того, спільна активація шляхів передачі сигналів Ес-рецептора може приводити до вивільнення цитокінів, що в поєднанні з властивостями, що обумовлюють активацію Т-клітин, і тривалим часом напівжиття антигензв'язуючої молекули, призводить до надлишкової активації цитокінових рецепторів і серйозних побічних дій при системному введенні. Активація імунних клітин (які несуть Ес-рецептор), відмінних від Т-клітин, може навіть знижувати ефективність активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини через можливу деструкцію Т-клітин, наприклад, МК-клітини.
Таким чином, відповідно до конкретних варіантів здійснення винаходу Ес-домен активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, запропонованих у винаході, має знижену афінністю зв'язування з Ес-рецептором і/або зниженою ефекторною функцією порівняно з нативним Ес-доменом Ідсі. в одному з вказаних варіантів здійснення винаходу Ес- домен (або активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, що містить вказаний ЕРсо-домен) характеризується афінністю зв'язування, що складає менше ніж 50 95, переважно менше ніж 20 95, більш переважно менше ніж 10 95 і найбільш переважно менше ніж 595 від афінності зв'язування з Ес-рецептором нативного Ес-домену ІдС: (або активованою протеазою біспецифічною молекулою, що активує Т-клітину, яка містить нативний Ес-домен
Ідс1), або ефекторною функцією, що складає менше ніж 50 95, переважно менше ніж 20 95, більш переважно менше ніж 10 95 і найбільш переважно менше ніж 5 95 від ефекторної функції нативного Ес-домену даси (або активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т- клітини, яка містить нативний Ес-домен Ідси). В одному з варіантів здійснення винаходу Ес- домен (або активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, що містить вказаний Ес-домен) практичале не зв'язується з Ес-рецептором і/або не індукує ефекторну функцію. В конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-рецептор являє собою Есу-рецептор. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-рецептор являє собою людський Ес-рецептор. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-рецептор являє собою активуючий Ес-рецептор. В конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-рецептор являє собою активуючий людський Есу- рецептор, більше конкретно людський ЕсуВІПа, ЕсувВІ або ЕсуВіІа, найбільш переважно людський ЕсуВіПа. В одному з варіантів здійснення винаходу ефекторна функція являє собою 60 одну або декілька функцій, вибраних з групи, що включає СОС, АОСС, АОСР і секрецію цитокінів. В конкретному варіанті здійснення винаходу ефекторна функція являє собою АЮСО. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен характеризується практично такою е афінністю зв'язування з неонатальним Ес-рецептором (ЕсАп), що і нативний Ес-домен Ідсі.
Практично таке ж зв'язування з ЕсАп досягається, коли Ес-домен (або активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, що містить вказаний Ес-домен), характеризується афінністю зв'язування, що складає більше ніж приблизно 7095, переважно більше ніж приблизно 80 95, більш переважно більше ніж приблизно 90 95, від афінності зв'язування нативного Ес-домену Ідсиї (або активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т- клітини, який містить нативний Ес-домен Ідси) з ЕсВп.
Відповідно до деяких варіантів здійснення винаходу Ес-домен конструюють так, щоб він мав знижену афінністю зв'язування з Ес-рецептором і/або зниженою ефекторною функцією порівняно з Ес-доменом, що не піддається інженерії. В конкретних варіантах здійснення винаходу Ес-домен активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, містить одну або декілька амінокислотних мутацій, які знижують Афінність зв'язування Ес- домену з Ес-рецептором і/або ефекторну функцію. Як правило, в кожній з двох субодиниць Ес- домену є присутнім(іою) одна або декілька однакових амінокислотних мутацій. В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна мутація знижує афінність зв'язування Ес-домену з
Ес-рецептором. В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна мутація знижує афінність зв'язування Ес-домену з Ес-рецептором принаймні в 2 рази, принаймні в 5 разів або принаймні в 10 разів. відповідно до варіантів здійснення винаходу, в яких має місце більше однієї амінокислотної мутації, які знижують афінність зв'язування ЕРс-домену з Ес-рецептором, комбінація вказаних амінокислотних мутацій може знижувати афінність зв'язування Ес-домену з
Ес-рецептором принаймні в 10 разів, принаймні в 20 разів або навіть принаймні в 50 разів. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, що містить сконструйований с-домен, характеризується афінністю зв'язування, що складає менше ніж 20 95, зокрема, менше ніж 10 95, більш переважно менше ніж 5905 від афінності зв'язування з Ес-рецептором, характерної для активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, яка містить Ро-домен, що не піддається інженерії. В конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-рецептор являє собою Есу-рецептор.
Зо В деяких варіантах здійснення винаходу Ес-рецептор являє собою людський Ес-рецептор. В деяких варіантах здійснення винаходу Ес-рецептор являє собою активуючий Ес-рецептор. В конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-рецептор являє собою активуючий людський Ес- рецептор, більше конкретно людський ЕсуВІПа, ЕсувВІ або ЕсуВіІа, найбільш переважно людський ЕсуВІШПа. Переважно зменшується зв'язування з кожним із цих рецепторів. Відповідно до деяких варіантів здійснення винаходу знижується також афінність зв'язування з компонентом системи комплемента, зокрема, афінність зв'язування з Сід. відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу не знижується афінність зв'язування з неонатальним Ес-рецептором (ЕсАп). Практично такее ж зв'язування з ЕсАп, тобто зберігання афінності зв'язування Ес- домену із вказаним рецептором, досягається, коли Ес-домен (або активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, що містить вказаний Ес-домен) характеризується афінністю зв'язування з ЕсВп, що складає більше ніж приблизно 70 95 від афінності зв'язування з ЕсАп вне підпадають під інженерію форми Ес-домену (або активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, яка містить вказану форму Ес-домену, що що не піддається інженерії). Ес-домен або активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують
Т-клітини, запропоновані у винаході, що містять вказаний ЕРс-домен, можуть характеризуватися афінністю, що складає більше ніж приблизно 80 95 і навіть більше ніж приблизно 90 95 від вказаній вище афінності. В деяких варіантах здійснення винаходу Ес-домен активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини створюють так, щоб він мав зниженою ефекторною функцією порівняно з ЕГс-доменом, що не піддається інженерії. Знижена ефекторна функція може являти собою (але, не обмежуючись тільки ними) знижчену(і) одну або декілька з наступних функцій: знижена комплементзалежна цитотоксичність (СОС), знижена антитіло- обумовлена клітиннозалежна цитотоксичність (АЮБСОС), знижений антитіло-обумовлений клітиннозалежний фагоцитоз (АОСР), знижена секреція цитокінів, знижене опосередковане імунним комплексом поглинання антигена антигенпрезентуючими клітинами, знижене зв'язування з МК-клітинами, знижене зв'язування з макрофагами, знижене зв'язування з моноцитами, знижене зв'язування з поліморфоядерними клітинами, знижена безпосередня передача сигналу, що індукує апоптоз, знижене перехресне зшивання зв'язаних з мішенню антитіл, знижене дозрівання дендритних клітин або знижене Т-клітинне примірування. В одному з варіантів здійснення винаходу знижена ефекторна функція являє собою одну або декілька 60 функцій, вибраних з групи, що включає знижчену СОС, знижчену АЮСС, знижений АОСР і знижчену секрецію цитокінів. В конкретному варіанті здійснення винаходу знижена ефекторна функція являє собою знижчену АЮСО. В одному з варіантів здійснення винаходу знижена АОСС складає менше 2095 від АОСС, індукованої Ес-доменом, що не піддається інженерії (або активованою протеазою біспецифічної молекулою, що активує Т-клітини, яка містить що не піддається інженерії Ес-домен).
В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна мутація, яка знижує афінність зв'язування Ес-домену з Ес-рецептором і/або ефекторну функцію, являє собою амінокислотну заміну. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні, вибраному з Е233, 1234, 1235, М297, РЗ31 і РЗ29. В більш конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні, вибраному з 1234,
ІЇ235 і РЗ29. В деяких варіантах здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотні заміни
ІЇ234А і 1235А. в одному з вказаних варіантів здійснення винаходу Ес-домен являє собою Ес- домен даси, зокрема, Ес-домен людського ІдСи. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес- домен містить амінокислотну заміну в положенні РЗ329. В більш конкретному варіанті здійснення винаходу амінокислотна заміна являє собою РЗ29А або РЗ290, насамперед РЗ29а. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні РЗ329 і, крім того, амінокислотну заміну в положенні, вибраному з Е233, І 234, 1235, М297 і РЗ31. В більш конкретному варіанті здійснення винаходу додаткова амінокислотна заміна являє собою Е2ЗЗР,
ІЇ234А, 1235А, 1235Е, М297А, М2970 або РЗЗ315. В конкретному варіанті здійснення винаходу
Ес-домен містить амінокислотні заміни в положеннях РЗа29, 1234 і 1235. В більш конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотні мутації /234А, 1235А і РЗ29Г ("РЗ29 І АГА"). в одному з вказаних варіантів здійснення винаходу Ес-домен являє собою Ес- домен Ідси, насамперед Ес-домен людського ІдСи. комбінація амінокислотних замін "Р3290
І АГА" практично повністю елімінує зв'язування з Есу-рецептором Ес-домену людського ІдсС (а також з комплементом), описане в публикації РОСТ МО 2012/130831, яка повністю включена в даний опис як посилання. В МО 2012/130831 описані також методи одержання вказаних мутантних Ес-доменів, методи вивчення їх властивостей, таких як зв'язування з Ес-рецептором або ефекторні функції.
Антитіла підкласу ІДС. мають знижену афінністю до зв'язування з Ес-рецепторами і
Зо зниженими ефекторними функціями порівняно з антитілами підкласу ІдС1. Таким чином, В деяких варіантах здійснення винаходу Ес-домен активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, запропонованих у винаході, являє собою Ес-домен Ідсае, зокрема Ес-домен людського ІдСя. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен Ідса містить амінокислотні заміни в положенні 5228, конкретно амінокислотну заміну 5228Р. Для додаткового зниження афінності зв'язування з Ес-рецептором і/або його ефекторної функції В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен Ід(Стя містить амінокислотну заміну в положенні І 235, зокрема, амінокислотну заміну І 235Е. В іншому варіанті здійснення винаходу
Ес-домен ІдСа містить амінокислотну заміну в положенні РЗ329, зокрема, амінокислотну заміну
РЗ2г9а В конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен Ідсі4 містить амінокислотні заміни в положеннях 5228, 1 235 і РЗ329, зокрема, амінокислотні заміни 5228Р, 1235Е і РЗ290. Вказані мутанти Ес-домену ІДС та їх особливості зв'язування з Есу-рецептором описані в публікації
РСТ МО 2012/130831, яка повністю включена в даний опис як посилання.
В конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен, що характеризується знижену афінністю зв'язування з Ес-рецептором і/або зниженою ефекторною функцією порівняно з нативним Ес-доменом Ідси, являє собою Ес-домен людського ІдСі, який містить амінокислотні заміни Г234А, І235А і необов'язково РЗ29С, або Ес-домен людського Ід(Сі4, який містить амінокислотні заміни 5228Р, І 235Е і необов'язково РЗ29О.
В деяких варіантах здійснення винаходу елімінували М-глікозування Есо-домену. В одному з вказаних варіантів здійснення винаходу Рсо-домен містить амінокислотну мутацію в положенні
М297, зокрема, амінокислотну заміну аспарагіну на аланін (М297А) або аспарагінову кислоту (М2970).
Крім Ес-доменів, описаних вище і в публікації РСТ МО 2012/130831, Ес-домени зі зниженою здатністю зв'язуватись з Ес-рецептором і/або ефекторною функцією включають також Ес- домени із заміною одного або декількох залишків 238, 265, 269, 270, 297, 327 і 329 (05 Мо 6737056). До зазначених мутантів Ес відносяться мутанти Ес із замінами в двох або більшій кількості з амінокислотних положень 265, 269, 270, 297 і 327, включаючи так званий мутант Ес- домену "САМА" із заміною залишків 265 і 297 на аланін (05 Мо 7332581).
Мутантні Ес-домени можна одержувати шляхом амінокислотної делеції, заміни, інсерції або модифікації з використанням генетичних або хімічних методів, добре відомих в даній галузі. 60 генетичні методи можуть включати сайтнаправлений мутагенез кодуючої ДНК послідовності,
ПЛР, синтез генів і т.п. Правильність нуклеотидних замін можна підтверджувати, наприклад, секвенуванням.
Зв'язування з Ес-рецепторами можна легко визначати, наприклад, за допомогою ЕГ І5ЗА або поверхневого плазмонного резонансу (5РЕ) з використанням стандартного обладнання, такого як пристрій ВіІАсоге (фірма СЕ НеаїйНсаге), і з застосуванням таких Ес-рецепторів, які можна одержувати методом рекомбінантної експресії. прийнятний вказаний аналіз зв'язування представлений в даному описі. Альтернативно цьому, афінність зв'язування Ес-доменів або біспецифічних антигензв'язуючих молекул, що активують клітини, які містять Ес-домен, з Ес- рецепторами можна оцінювати з використанням клітинних ліній, для яких відомо, що вони експресують конкретні Ес-рецептори, такі як людські МК-клітини, що експресують ЕсуШа- рецептор.
Ефекторну функцію Ес-домену або активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, яка містить Ес-домен, можна оцінювати методами, відомими в даній галузі. прийнятний аналіз для оцінки АЮОСС представлений в даному описі. інші приклади аналізів іп міо, представлених для оцінки АОСС-активності молекули, що представляє інтерес, описані в 05 Мо 5500362; у НеїЇвігот та ін., Ргос Маї! Асай бсі ОБА 83, 1986, сс. 7059-7063 і НеїІвігот та ін., Ргос Маї!Ї Асай 5сі ОА 82, 1985, сс. 1499-1502; 05 Мо 5821337; у Вгиддетапп та ін., У Ехр
Меса 166, 1987, сс. 1351-1361. Альтернативно цьому, можна застосовувати методи, основані на нерадіоактивному аналізі (див., наприклад, АСТІ "М - нерадіоактивний аналіз цитотоксичності за допомогою протокової цитометрии (фірма СеїІесНпоіоаду, Іпс. Маунтін-Вью, шт. Каліфорния); і
СуюТох 969 - нерадіоактивний аналіз цитотоксичності (фірма Рготеда, Медісон, шт.
Вісконсин)). Прийнятними ефекторними клітинами для таких аналізів є мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) і природні клітини-кілери (МК). В альтернативному або додатковому варіанті АЮСбС-активність молекули, що представляє інтерес, можна оцінювати іп мімо, наприклад, з використанням створених на тваринах моделей, описаних у Сіупез та ін., Ргос Маї!
Асад 5сі ОБА 95, 1998, сс. 652-656.
В деяких варіантах здійснення винаходу знижують зв'язування Ес-домену з компонентом системи комплемента, зокрема з Сід. Таким чином, В деяких варіантах здійснення винаходу, в яких Ес-домен конструюють Так, щоб він мав знижчену ефекторну функцію, вказана знижена
Зо ефекторна функція включає знижчену СОС. Можна здійснювати аналізи зв'язування Сід для вирішення питання про те, чи може активована протеазою біспецифічна молекула, що активує
Т-клітини, зв'язуватись з Сід і, як наслідок, чи має вона СОС-активність (див., наприклад, аналізи зв'язування з С1д і СЗс, які проводять за допомогою ЕЇГ І5А, описані в УУО 2006/029879 і
МО 2005/100402). Для оцінки активації комплемента можна здійснювати аналіз СОС (див., наприклад, Са7гапо-Запіого та ін., ) Іттипої! Меїнодз» 202, 1996, с. 163; Стадо та ін., Віоса 101, 2003, сс. 1045-1052 і Стадо і СІеппіє, Віоса 103, 2004, сс. 2738-2743). антигензв'язуючі фрагменти антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, є біспецифічної, тобто вна містить принаймні два антигензв'язуючі фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з двома різними антигенними детермінантами. Відповідно до винаходу антигензв'язуючі фрагменти являють собою молекули Раб (тобто антигензв'язуючі домени, що складаються з важкого і легкого ланцюгів, кожна з яких містить варіабельну і константну ділянки). В одному з варіантів здійснення винаходу вказані молекули Рар є людськими. В іншому варіанті здійснення винаходу вказані молекули Рар є гуманізованими. Ще в одному варіанті здійснення винаходу вказані молекули Раб містять людські константні ділянки важкого і легкого ланцюгів.
Принаймні один з антигензв'язуючих фрагментів являє собою кросовер-молекулу Раб.
Вказана модифікація перешкоджає помилковому спаровуванню важких і легких ланцюгів з різних молекул Бар, підвищуючи тим самим вихід і чистоту активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, запропонованої у винаході, при виробництві рекомбінантних молекул. Зокрема, в кросовер-молекулі аб, яку можна застосовувати для створення активованої протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, запропонованої у винаході, константні ділянки легкого ланцюга Бар і важкого ланцюга Рар обмінені. В іншому варіанті кросовер-молекули Бар, яку можна застосовувати для створення активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, запропонованої у винаході, обмінені варіабельні ділянки легкого ланцюга ГЕаб і важкого ланцюга Раб.
В конкретному варіанті здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, запропонована у винаході, має здатність одночасно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, зокрема, антигеном пухлинної клітини, і СО3. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, має бо здатність перехресно зшивати Т-клітину і клітину-мішень шляхом одночасного зв'язування з антигеном клітини-мішені і СО3. В ще більш конкретному варіанті здійснення винаходу вказане одночасне зв'язування призводить до лізису клітини-мішені, зокрема, пухлинної клітини. В одному з варіантів здійснення винаходу вказане одночасне зв'язування призводить до активації
Т-клітини. В інших варіантах здійснення винаходу вказане одночасне зв'язування призводить до клітинної відповіді Т-лімфоцита, зокрема, цитотоксичного Т-лімфоцита, вибраного з наступної групи: проліферація, диференціювання, секреція цитокінів, вивільнення ефекторною молекули, цитотоксичність активність і експресія маркерів активації. В одному з варіантів здійснення винаходу зв'язування активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, з
СОЗ без одночасного зв'язування з антигеном клітини-мішені не призводить до Т-клітинної активації.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, має здатність перенаправляти цитотоксичну активність Т-клітини на клітину-«мішень. В конкретному варіанті здійснення винаходу вказана перенаправленість не залежить від опосередковану ГКГС презентації пептидного антигена клітиною-мішенню і/або від специфічності Т-клітини.
Зокрема, відповідно до деяких варіантів здійснення винаходу Т-клітина являє собою цитотоксичну Т-клітину. В деяких варіантах здійснення винаходу Т-клітина являє собою СО4-- або СО8:-Т-клітину, насамперед СО8:-Т-клітину.
СОЗ-зв'язуючий фрагмент активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, запропонована у винаході, містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність зв'язуватись з СОЗ3 (в даному описі його позначають також як "який зв'язує антиген СОЗ фрагмент" або "перший антигензв'язуючий фрагмент"). В конкретному варіанті здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить не більше одного антигензв'язуючого фрагмента, що має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ3. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, характеризується одновалентним зв'язуванням з СОЗ. Молекула, що зв'язує антиген
СО3З, являє собою кросовер-молекулу Раб, тобто молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки важких і легких ланцюгів бар обмінені. В варіантах здійснення винаходу, в
Зо яких не більше одного антигензв'язуючого фрагмента, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, входить в активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ3, переважно являє собою кросовер-молекулу Раб, а антигензв'язуючі фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являють собою канонічні молекули Раб.
В конкретному варіанті здійснення винаходу СОЗ являє собою СОЗ людини або СОЗ мавп ціномолгус, більше конкретно, людський СОЮЗ. В конкретному варіанті здійснення винаходу який зв'язує антиген СОЗ фрагмент має перехресну реактивність з (тобто специфічно зв'язується 3)
СОЗ людини і мавп о ціномолгус. В деяких варіантах здійснення винаходу перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з епсилон-субодиницею
Со3.
Фрагмент, який зв'язує антиген СОЮЗ, містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОВА) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 11, 5ЕО ІЮО МО: 12 ії 5ЕО І0
МО: 13, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 17, БЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО І МО: 19.
В одному з варіантів здійснення винаходу який зв'язує антиген СОЗ фрагмент містить СОВІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 11, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 12, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 13, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 17, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 18, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 19.
В одному з варіантів здійснення винаходу який зв'язує антиген СОЗ фрагмент містить СОВІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 44, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 45, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 46, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 17, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 18, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 19.
В одному з варіантів здійснення винаходу який зв'язує антиген СОЗ фрагмент містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, яка ідентична принаймні приблизно на 9595, 9696, 97 95, 98 965, 9995 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІО МО: 43, і послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, яка ідентична принаймні приблизно на 95 Фо, 96 о, 97 95, 98 Уо, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІО МО: 55.
В одному з варіантів здійснення винаходу який зв'язує антиген СОЗ фрагмент містить 60 варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО І МО: 55.
В одному з варіантів здійснення винаходу який зв'язує антиген СОЗ фрагмент містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга 5ЕО І1О МО: 43 і послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 55.
Фрагмент, який зв'язує антиген клітини-мішені
Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, запропонована у винаході, містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність зв'язуватись з антигеном клітини-мішені (в даному описі його позначають також як "фрагмент, що зв'язує антиген клітини-мішені" або "другий" або "третій" антигензв'язуючий фрагмент"). В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, містить два антигензв'язуючі фрагменти, які мають здатність зв'язуватись з антигеном клітини-мішені. У конкретному вказаному варіанті здійснення винаходукожний із вказаних антигензв'язуючих фрагментів специфічно зв'язується з однією і тією ж антигенною детермінантною. В ще більш конкретному варіанті здійснення винаходу всі вказані антигензв'язуючі фрагменти є ідентичними. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить молекулу імуноглобуліну, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить не більше двох антигензв'язуючих фрагментів, які мають здатність зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.
В переважному варіанті здійснення винаходу фрагмент, який зв'язує антиген клітини-мішені, являє собою молекулу Раб, насамперед канонічну молекулу Раб, яка зв'язується зі специфічною антигенною детермінантою і може направляти активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, до сайта-мішені, наприклад, специфічного типу пухлинної клітини, яка несе антигенну детермінанту.
В деяких варіантах здійснення винаходу фрагмент, який зв'язує антиген клітини-мішені, специфічно зв'язується з антигеном клітинної поверхні. В конкретному варіанті здійснення винаходу фрагмент, який зв'язує антиген клітини-мішені, специфічно зв'язується з фолатним рецептором 1 (РоІН1) на поверхні клітини-мішені. В іншому конкретному варіанті здійснення
Зо винаходу фрагмент, який зв'язує антиген клітини-мішені, специфічно зв'язується з рецептором епідермального фактора росту (ЕСЕР), зокрема, з людським ЕСЕН, наприклад, НЕВІ. В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу фрагмент, який зв'язує антиген клітини-мішені, специфічно зв'язується з НЕН2. В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу фрагмент, який зв'язує антиген клітини-мішені, специфічно зв'язується з мезотеліном, зокрема, з людським мезотеліном.
В деяких варіантах здійснення винаходу фрагмент, який зв'язує антиген клітини-мішені, направлений на антиген, асоційований з патологічним станом, таким як антиген, що презентуються на пухлинній клітині або інфікованій вірусом клітині. прийнятними антигенами є антигени клітинної поверхні, наприклад (але не обмежуючись тільки ними) рецептори клітинної поверхні. В конкретних варіантах здійснення винаходу антиген являє собою людський антиген.
В конкретному варіанті здійснення винаходу антиген клітини-мішені вибирають з фолатного рецептора 1 (ЕоІВ1) і рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕВ), зокрема, людського
ЕСЕВ, наприклад, НЕВІ. В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу антиген клітини- мішені являє собою НЕН2. В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу антиген клітини- мішені являє собою мезотелін.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕНІ. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕВТ, містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОН) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 56, 5ЕО ІО МО: 57 і 5ЕО ІО
МО: 58, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 59, 5ЕОІЮО МО: 60 їі 5ЕО І МО: 61.
В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕНТ, містить СОВІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 56, СОН2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 57, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 58, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 59, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 60, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 61.
В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕНТ, містить послідовності СОК важкого і легкого ланцюгів антитіла до НЕНІ, 60 описаного в опублікованій заявці РОСТ М/О 2006/082515.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕН1, містить принаймні одну поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 9, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 32, поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Уо, 98 95, 99 95 або 100 95
ЗЕО ІО МО: 33, поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 9895, 9995 або 10095 5ЕО ІО МО: 34. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕВІ, містить принаймні одну поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 32, поліпептидну послідовність ФЕО ІО МО: 33 і поліпептидну послідовність «ЕС ІЮО МО: 34.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕН1, містить додатково антиідіотиповий по відношенню до СОЗ 5сЕм (антиідіотиповий СОЗ 5сЕм), що містить принаймні один з СОКІ важкого ланцюга, що має 5БЕО
ІО МО: 20, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 21, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО
ІО МО: 22, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 23, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО
ІО МО: 24, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 25. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий 5сЕм містить СОНІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 20, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 21, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 22, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 23, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 24, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 25.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕВТ, містить додатково антиідіотиповий СОЗ бом, що містить принаймні один з СОКІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 26, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 27, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 28, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 29, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 30, ії СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 31. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий 5сЕм містить СОВІ важкого
Зо ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 26, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 27, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 28, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 29, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 30, ії СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 31.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕНТ, містить додатково антиідіотиповий СОЗ 5сЕм, який містить поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9Уо, 98 95, 99 95 або 100 95
ЗЕО ІЮО МО: 41 або 42. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий СОЗ 5сЕм містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 41 або 42.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕНТ1, містить додатково антиїдіотиповий НЕНІ 5сЕм, що містить принаймні одну СОКІТ важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 48, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 49, СОВАЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 50, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 51, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 52, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 53. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий з5сЕм містить СОНІТ важкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 48, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 49, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 50, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 51, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 52, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 53.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕН1, містить додатково лінкер, що містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮ МО: 35.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕНТ, містить додатково лінкер, що має сайт, який розпізнається протеазою, який містить поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 ЗУ», 98 9», 99 95 або 100 95 5ЕО І МО: З6, 37, 38, 39, 40, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 або 106. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність ФЕО ІЮО МО: 36, 37, 38, 39, 40, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 бо або 106. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 36. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність 5ЕС ІО МО: 97. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕВТ, містить додатково лінкер, що містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ЗЕО ІО МО: 7, 8, 9, 10, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95 або 96. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність ФЕО ІО МО: 7, 8, 9, 10, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95 або 96. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність 5ЕО І МО: 7. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність 5ЕО І МО: 86.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕР2. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕНг, містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОН) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 142, 5ЕО ІЮ МО: 143 ї 5ЕО Ір
МО: 144, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО І МО: 148, 5ЕО ІО МО: 149 ї 5ЕО ІО МО: 150. В одному з додаткових варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕР2, містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОВ) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 145, 5ЕО ІЮО МО: 146 ї 5ЕО ІЮО МО: 147, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 148, 5ЕО ІЮ МО: 149 ії 5ЕО ІО МО: 150.
В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕН2, містить СОНІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 142, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 143, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 144, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 148, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 149, Її
СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 150. В одному з додаткових варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕН2, містить СОВІ1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 145, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 146,
Зо СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 147, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 148, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 149, ії СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 150.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, що містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕН2, містить додатково антиідіотиповий СОЗ зом, що містить принаймні один з СОКІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 20, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 21, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 22, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 23, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 24, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 25. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий 5сЕм містить СОНІ важкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 20, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 21, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 22, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 23, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 24, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 25.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, що містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕН2, містить додатково антиідіотиповий СОЗ бом, що містить принаймні один з СОКІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 26, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 27, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 28, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 29, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 30, ії СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 31. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий 5сЕм містить СОВІ важкого
БО ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 26, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 27, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 28, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 29, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 30, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 31.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕН2, містить додатково антиідіотиповий СОЗ 5сЕм, який містить поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9Уо, 98 95, 99 95 або 100 95
ЗЕО ІЮО МО: 41 або 42. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий СОЗ 5сЕм містить поліпептидну послідовність ФЕО ІЮ МО: 41 або 42.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, бо що активує Т-клітини, що містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕН2, містить додатково антиідіотиповий НЕН2 5сЕм, що містить принаймні один з СОКІ важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 48, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 49, СОВАЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 50, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 51, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 52, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 53. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий з5сЕм містить СОНІТ важкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 48, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 49, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 50, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 51, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 52, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 53.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕНг, містить додатково лінкер, який містить поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 Ус, 99 95 або 100 95 5ЕО І МО: 35.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕН2, містить додатково лінкер, що має сайт, який розпізнається протеазою, який містить поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 ЗУ», 98 9», 99 95 або 100 95 5ЕО І МО: З6, 37, 38, 39, 40, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 або 106. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність ФЕО ІЮО МО: 36, 37, 38, 39, 40, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 або 106. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 36. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність ЕС ІО МО: 97. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до НЕНг, містить додатково лінкер, що містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9о, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮО МО: 7, 8, 9, 10, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95 або 96. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність ФЕО ІЮО МО: 7, 8, 9, 10, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95 або 96. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність 5ЕО І МО: 7. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 86.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮО МО: 132, поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО І МО: 136, поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 9, 99956 або 10095 5БО ІО МО: 81, і поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 о, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮО МО: 133.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 132, поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 136, поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 81 їі поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 133.
В конкретних варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕоІН1. В одному з варіантів здійснення винаходу ЕБоЇйК1 являє собою людський
ЕоІВ1. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до людського ЕоІВ1, і не зв'язується з людським БоЇй2 або людським Ео!ВЗ3. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕоІР1, містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 15 ії 5ЕО ІО МО: 16, і принаймні одну СОР. легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 17, 5ЕО ІЮО МО: 181
ЗЕО ІО МО: 19.
В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕоІНт, містить СОВІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 14, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 15, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 16, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 17, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 18, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 19.
В іншому варіанті здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по 60 відношенню до ЕоЇй1!, містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 47, і послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, яка ідентична принаймні приблизно на 9596, 9695, 97 95, 9895, 9995 або 10095 5ЕО ІО МО: 55, або їх варіанти, які зберігають функціональність.
В іншому варіанті здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до Ео!ІВ1, містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 47, і варіабельної ділянки легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 55.
В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕоІВ1, містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 151, 5ЕО ІО МО: 152 їі 5ЕО ІО МО: 153, Її принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 154, 5ЕО
ІО МО: 1551 5ЕО ІО МО: 156.
В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕоІВ1, містить СОНІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 151, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 152, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 153, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 154, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 155, і
СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 156.
В іншому варіанті здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕоЇй1!, містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 90, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО І МО: 157, і послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, яка ідентична принаймні приблизно на 9596, 96 95, 97 95, 98 95, 9995 або 10095 5ЕО ІО МО: 158, або їх варіанти, які зберігають функціональність.
В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕоІВ1, містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 157, і варіабельної ділянки легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО 10 МО: 158.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула,
Зо що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮО МО: 2, і поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮ МО: 1.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 2 і поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 1.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕоІВ1, додатково містить антиідіотиповий СОЗ зом, що містить принаймні один з СОКІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 20, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 21, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 22, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 23, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 24, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 25. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий 5сЕм містить СОНІ важкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 20, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 21, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 22, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 23, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 24, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 25.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕоІВ1, додатково містить антиідіотиповий СОЗ зом, що містить принаймні один з СОКІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 26, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО:
БО 27, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 28, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 29, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 30, ії СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 31. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий 5сЕм містить СОВІ важкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 26, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 27, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 28, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 29, СОВ2 легкого 55 ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 30, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 31.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕоЇІНт, додатково містить антиідіотиповий СОЗ 5сЕм, що містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 5ЕО 60 ІЮО МО: 41 або 42. В одному з варіантів здійснення винаходу антиіїдіотиповий 5сЕм містить поліпептидну послідовність ФЕО ІЮО МО: 41 або 42.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕоІВ1, додатково містить лінкер, що має який розпізнається протеазою сайт, що містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 9, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: З6, 37, 38, 39, 40, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 або 106. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність ФЕО ІЮО МО: 36, 37, 38, 39, 40, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 або 106. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 36. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність 5ЕО І МО: 97. В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до ЕОЇ!Н1, додатково містить лінкер, що містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9о, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮО МО: 7, 8, 9, 10, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95 або 96. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність ФЕО ІЮО МО: 7, 8, 9, 10, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95 або 96. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність 5ЕО І МО: 7. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 86.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 Фо, 98 95, 99 956 або 100 95 5ЕО ІЮ МО: 1, поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 9, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 3, і поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 5ЕО
ІО МО: 72.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 Фо, 98 95, 99 956 або 100 95 5ЕО ІЮ МО: 1, поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 9, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 3, і поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 5ЕО
ІО МО: 72.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 Фо, 98 95, 99 956 або 100 95 5ЕО ІЮ МО: 1, поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 9, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 3, і поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 5ЕО
ІО МО: 85.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 Фо, 98 95, 99 956 або 100 95 5ЕО ІЮ МО: 1, поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 Фо, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 3, поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 5ЕО
ІО МО: 73 і поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮ МО: 74.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність 5ЕСО І МО: 1, поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: З і поліпептидну послідовність ФЕО ІЮ МО: 72.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула,
БО що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність 5ЕСО І МО: 1, поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: З і поліпептидну послідовність ФЕО ІЮ МО: 85.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність 5ЕСО І МО: 1, поліпептидну послідовність 5ЕСО ІО МО: 3, поліпептидну послідовність 5ЕО 10 МО: 73 і поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 74.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 9», 96 9», 97 Уо, 98 9», 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 137, поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 90, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮО МО: 139, поліпептидну бо послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 5ЕО
ІО МО: 81 і поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 Фо, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮ МО: 138.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність 5ЕО 10 МО: 137, поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 139, поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 81 їі поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 138.
В конкретних варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до мезотеліну. В одному з варіантів здійснення винаходу мезотелін являє собою людський мезотелін. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до людського мезотеліну. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до мезотеліну, містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 107, 5ЕО ІО МО: 108 ї БЕО ІО МО: 109, і принаймні одну СОЕК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 110, 5ЕО ІО МО: 111 ї БЕО ІЮ МО: 112.
В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до мезотеліну, містить СОНІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 107, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 108, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 109,
СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 110, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 111, і СОВАЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 112.
В наступному варіанті здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до мезотеліну, містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 90, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО І МО: 113, і послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, яка ідентична принаймні приблизно на 9596, 96 95, 97 95, 98 95, 9995 або 10095 5ЕО ІО МО: 114, або їх варіанти, які зберігають функціональність.
В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до мезотеліну, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить
Зо амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 113, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО: 114.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до мезотеліну, додатково містить антиідіотиповий СОЗ 5сЕм, що містить принаймні один з СОКІ важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 20, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 21, СОВАЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 22, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 23, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 24, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 25. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий з5сЕм містить СОНІТ важкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 20, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 21, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 22, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 23, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 24, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 25.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до мезотеліну, додатково містить антиідіотиповий СОЗ 5сЕм, що містить принаймні один з СОКІ важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 26, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 27, СОВАЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 28, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 29, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 30, ії СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 31. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий з5сЕм містить СОНІТ важкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 26, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 27, СОВЗ важкого
БО ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 28, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 29, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 30, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 31.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до мезотеліну, додатково містить антиідіостиповий СОЗ 5сЕм, що містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 Фо, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 41 або 42. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий 5СЕм містить поліпептидну послідовність 5ХЕО ІЮ МО: 41 або 42.
В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по 60 відношенню до мезотеліну, додатково містить лінкер, що має який розпізнається протеазою сайт, що містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 ЗУ», 98 9», 99 95 або 100 95 5ЕО І МО: З6, 37, 38, 39, 40, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 або 106. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність ФЕО ІЮО МО: 36, 37, 38, 39, 40, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 або 106. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 36. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність 5ЕО І МО: 97. В деяких варіантах здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, яка містить принаймні один антигензв'язуючий фрагмент, специфічний по відношенню до мезотеліну, додатково містить лінкер, що містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 Фо, 99 96 або 100 95 5ЕО ІО МО: 7, 8, 9, 10, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95 або 96. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність 5ЕС ІО МО: 7, 8, 9, 10, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95 або 96. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 7. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 86.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Ув, 98 95, 99 95 або 10095 5ЕО ІО МО: 77, поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮ МО: 78, поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 9, 9995 або 10095 5БО І0О МО: 81 і поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 о, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІЮ МО: 82.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Ув, 98 95, 99 95 або 10095 5ЕО ІО МО: 76, поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У», 98 95, 99 956 або 10095 5ЕО ІЮ МО: 77, поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 9, 99956 або 10095 5БО ІО МО: 78, і поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 У», 99 95 або 100 95 5ЕО І МО: 79.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 77, поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 78, поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 81 і поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 82.
В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить поліпептидну послідовність 5ЕО І МО: 76, поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 77, поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 78 і поліпептидну послідовність 5ЕО І МО: 79.
Одним з варіантів здійснення винаходу є біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 9, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 76, поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 Фо, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО 10 МО: 77, поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на95 95, 96 9, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 78, і поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 5ЕО
ІО МО: 81.
Одним з варіантів здійснення винаходу є біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 9, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 77, поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 Фо, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО 10 МО: 78, поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на95 95, 96 9, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 81, і поліпептидну послідовність, ідентичну принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 У, 99 95 або 100 95 5ЕО
ІО МО: 84.
В одному з варіантів здійснення винаходу біспецифічна молекула, що активує Т-клітини містить поліпептидну послідовність 5ЕО) ІЮ МО: 76, поліпептидну послідовність ФЕО І МО: 77, поліпептидну послідовність ЕС ІЮО МО: 78 і поліпептидну послідовність БЕО ІЮ МО: 81.
В одному з варіантів здійснення винаходу біспецифічна молекула, що активує Т-клітини містить поліпептидну послідовність 5ЕО) ІЮ МО: 77, поліпептидну послідовність ЕС ІО МО: 78, поліпептидну послідовність ЕС ІЮО МО: 81 і поліпептидну послідовність БЕО ІЮ МО: 84.
Маскуючий фрагмент бо активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, запропонована у винаході, містить принаймні один маскуючий фрагмент. В інших дослідженнях робилися спроби маскувати зв'язування антитіла шляхом кепірування зв'язуючого фрагмента фрагментом антигена, що розпізнається, зв'язуючим фрагментом (див., наприклад, УУО 2013/128194). цей підхід має декілька обмежень. Наприклад, застосування антигена зменшує гнучкість по відношенню до зменшення афінності зв'язуючого фрагмента. Це обумовлено тим, що афінність повинна бути достатньо високою для відповідного маскування маскуючим антигеном. Крім того, після дисоціації антиген може потенційно зв'язуватись і взаємодіяти з його когнатним(ними) рецептором(ами) іп мімо і викликати небажані сигнали в клітинах, що експресують вказаний рецептор. На противагу цьому, в підході, представленому в даному описі, для маскування застосовують антиідіотипіве антитіло або його фрагмент. Двома альтернативними факторами, які можна розглядати для створення ефективного маскуючого фрагмента є 1. ефективність маскування і 2. оборотність маскування. Якщо афінність є занадто низькою, то маскування може виявитись неефективною. Проте, якщо афінність є занадто високою, то процес маскування може бути недостатньо оборотним. Не можна передбачити, який агент буде краще "працювати": антиіїдіотиповий маскуючий агент з високою афінністю або антиїдіотиповий маскуючий агент з низькою афінністю. Як зазначено в даному описі маскуючі фрагменти, які мають більш високу афінність, в цілому забезпечували краще маскування антигензв'язуючого сайта і одночасно могли ефективно бути видалені з метою активації молекули. В одному з варіантів здійснення винаходу антиїдіотиповий маскуючий агент має КО 1-8НМ. В одному з варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий маскуючий агент має КО 2нМ при 37 "С. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий маскуючий фрагмент розпізнає ідіотип першого антигензв'язуючого фрагмента, який має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ, наприклад, людським СОЗ3. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу антиідіотиповий маскуючий фрагмент розпізнає ідіотип іншого антигензв'язуючого фрагмента, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.
В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент маскує СОЗ-зв'язуючий фрагмент і містить принаймні один з СОТ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 20, СОВН2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 21, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 22, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 23, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 24, і СОВЗ
Зо легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 25. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент містить СОВІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 20, СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 21, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 22, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 23, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 24, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 25.
В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент маскує СОЗ-зв'язуючий фрагмент і містить поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 бо, 97 Уо, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 41. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент маскує СОЗ-зв'язуючий фрагмент і містить поліпептидну послідовність
ЗЕО І МО: 41.
В одному з переважних варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент маскує СОЗ- зв'язуючий фрагмент і містить принаймні один з СОКІ1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 26,
СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 27, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 28,
СОВІ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 29, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 30, і
СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 31. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент містить СОВІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 26, СОН2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 27, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 28, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 29, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 30, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 31.
В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент маскує СОЗ-зв'язуючий фрагмент і містить поліпептидну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 Уо, 98 95, 99 95 або 100 95 5ЕО ІО МО: 42. В одному з варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент маскує СОЗ-зв'язуючий фрагмент і містить поліпептидну послідовність
ЗЕО І МО: 42.
В одному з переважних варіантів здійснення винаходу маскуючий фрагмент маскує НЕВ1- зв'язуючий фрагмент і містить принаймні один з СОКІ1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 48,
СОВ2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 49, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 50,
СОВІ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 51, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 52, і
СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 53. В одному з варіантів здійснення винаходу анти- ідіотиповий 5сСЕм містить СОН важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 48, СОВ2 важкого бо ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 49, СОВЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 50, СОВІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО 10 МО: 51, СОВ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 52, і СОВЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 53.
Одним з об'єктів винаходу є ідіотипспецифічний поліпептид, призначений для оборотного приховування сайта зв'язування антигена антигензв'язуючої молекули. Одним з варіантів здійснення винаходу є ідіотипспецифічний поліпептид, призначений для оборотного приховування анти-СОЗ антигензв'язуючого сайта молекули. Вказаний ідіотипспецифічний поліпептид, призначений для оборотного приховування анти-СОЗ антигензв'язуючого сайта, повинен мати здатність специфічно зв'язуватись з ідіотипом анти-СОЗ антигензв'язуючого сайта і тим самим знижувати або анулювати зв'язування анти-СОЗ антигензв'язуючого сайта з СОЗ.
Одним з варіантів здійснення винаходу є ідіотипспецифічний поліпептид, призначений для оборотного приховування анти- НЕНІ1 антигензв'язуючого сайта молекули. В одному з варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид являє собою антиідіотиповий 5сЕм. В одному з варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид ковалентно приєднаний до молекули через лінкер. В одному з варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид ковалентно приєднаний до молекули через декілька лінкерів. В одному з варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид ковалентно приєднаний до молекули через два лінкера. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер являє собою пептидний лінкер. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер являє собою лінкер, розщеплений протеазою. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить послідовність 5ЕО ІО МО: 7, 8, 9 або 10.
В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить послідовність 5ЕО І МО: 7, 8, 9, 10, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95 або 96. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 7. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить поліпептидну послідовність ЕС ОО МО: 86. В одному з варіантів здійснення винаходу лінкер містить принаймні один сайт, який розпізнається протеазою. В одному з варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить поліпептидну послідовність зЕО ІЮ МО: 36, 37, 38, 39, 40, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 або 106. В одному з переважних варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить розпізнавану протеазою послідовність НОАНУММО (5ЕБЕО ІО МО: 36). В іншому варіанті здійснення винаходу лінкер містить декілька які розпізнаються протеазою сайтів. В одному з
Зо переважних варіантів здійснення винаходу який розпізнається протеазою сайт містить розпізнавану протеазою послідовність УНМРІ СР СРАСОАВУММаИ (ЗЕО ІО МО:97). В одному з варіантів здійснення винаходу протеазу вибирають з групи, що складається з металопротеїнази, наприклад, матричної металопротеїнази 1-28 і "дезінтегрину і металопротеїнази" (АОАМ) 2, 7-12, 15, 17-23, 28-30 і 33, серинової протеази, наприклад, активатора плазміногену урокіназного типу і матриптази, цистеїнової протеази, аспарагінової протеази і протеази катепсину. В конкретних варіантах здійснення винаходу протеаза являє собою ММРУ або ММР2. В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу протеаза являє собою матриптазу.
В одному з варіантів здійснення винаходу молекула, яка містить анти-СОЗ антигензв'язуючий сайт являє собою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних ділянок: гіперваріабельну ділянку важкого ланцюга (СОВ Н) 1, що має амінокислотну послідовність ОМ5ІН (ЗЕО І МО: 20); СОВ Н2, що має амінокислотну послідовність МІМТЕТЯЕРАМАВОЕКа (ЗЕО ІЮ МО: 21); і
СОВА НЗ, що має амінокислотну послідовність РУЮМОМІ ОМ (ЗЕО І МО: 22). В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних ділянок: гіперваріабельну ділянку легкого ланцюга (СО І) 1, що має амінокислотну послідовність ВА5ЄКОУЗТЗМУЗМІН (ЗЕО І МО: 23); СОВ 12, що має амінокислотну послідовність УУБМУІ Е5 (ЗЕО І МО: 24); і СОВ
ЇЗ, що має амінокислотну послідовність ОН5ВЕЕРМ/Т (5ЕО ІО МО: 25). В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить: гіперваріабельну ділянку важкого ланцюга (СО Н) 1, що має амінокислотну послідовність ОУ5ІН (ЗЕО ІЮ МО: 20); СОВ
Н2, що має амінокислотну послідовність МІМТЕТЯЕРАМАВОЕКа (5ЕО ІО МО: 21); СОВ НЗ, що має амінокислотну послідовність РУЮМОМІ ОМ (5ЕО І МО: 22); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить? (СОВА 1) 1 легкого ланцюга, що має амінокислотну послідовність
ВАБКОЗУ5ЗТОЗММУБМІН (ЗЕО І МО: 23); СОВ 12, що має амінокислотну послідовність УУЗМУІ ЕБ (5ЕО ІО МО: 24); ії СОВ ІЗ, що має амінокислотну послідовність ОНЗВЕЕРМУ/Т (5ЕО ІО МО: 25).
В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних ділянок: бо гіперваріабельну ділянку важкого ланцюга (СОВА Н) 1, що має амінокислотну послідовність
ЗУСМ5 (5ЕБЕО ІО МО: 26); СОВ Н2, що має амінокислотну послідовність ПУСОСеТМУН5ЗАГІВ (ЗЕО І МО: 27); ії СОВ НЗ, що має амінокислотну послідовність СІ" УМООММАМОМ (5ЕО Ір
МО: 28). В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних ділянок: (СОВ М 1 легкого ланцюга, що має амінокислотну послідовність ВАБЕМІОЗМІ А (5ЕО ІЮО МО: 29); СОВ 12, що має амінокислотну послідовність ААТЕГ АЮ (ЗЕО ІО МО: 30); ії СОВ ІЗ, що має амінокислотну послідовність ОНМУБТРМТ (5ЕО ІО МО: 31). В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: гіперваріабельну ділянку важкого ланцюга (СОН Н) 1, що має амінокислотну послідовність 55 (5ЕБЕО ІО МО: 26); СОВ НО, що має амінокислотну послідовність ПУУсСОСЄТМУНЗАгІВ (5ЕБЕО І МО: 27) СОВА НЗ, що має амінокислотну послідовність СП" УМООММАМОМ (5ЕО І МО: 28); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (СОВ |) 1 легкого ланцюга, що має амінокислотну послідовність ВАБЕМІОЗМІ А (5ЕО
ІО МО: 29); СОВ 12, що має амінокислотну послідовність ААТЕГ АЮ (5ЕО ІО МО: 30); і СОВ І З, що має амінокислотну послідовність ОНУМОТРМТ (5ЕО ІЮО МО: 31). В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних ділянок: гіперваріабельну ділянку важкого ланцюга (СОВ Н) 1, що має амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 48; СОВА Н2 що має амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 49; і СОВА НЗ що має амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 50. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних ділянок: гіперваріабельну ділянку легкого ланцюга (СОВ І) 1, що має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 51; СОВ 12, що має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 52; і
СО ІЗ, що має амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 53. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: гіперваріабельну ділянку важкого ланцюга (СОН Н) 1, що має амінокислотну послідовність ФЕО 10 МО: 48; СОВ На, що має амінокислотну послідовність ФЕО
ІО МО: 49; і СОВ НЗ, що має амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 50, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: гіперваріабельну ділянку легкого ланцюга (СОВА І) 1, що має
Зо амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 51; СОВ 12, що має амінокислотну послідовність БЕО
ІО МО: 52; ії СОВ І 3, що має амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 53.
Полінуклеотиди
Винахід відноситься також до виділених полінуклеотидів, які кодують активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, представлену в даному описі, або її фрагмент. В деяких варіантах здійснення винаходу вказаний фрагмент являє собою антигензв'язуючий фрагмент.
Полінуклеотиди, запропоновані у винаході, включають полінуклеотиди, послідовності яких принаймні приблизно на 80 925, 85 95, 90 95, 95 У», 96 У, 97 95, 98 о, 99 95, або 100 95 ідентичні послідовностям, представленим в 5ЕО ІЮ МО: 62-71 або в 5ЕО ІЮО МО:, включаючи їх функціональні фрагменти або варіанти. Полінуклеотиди, запропоновані у винаході, включають також полінуклеотиди, послідовності яких принаймні приблизно на 80 95, 85 95, 90 Ов, 95 95, 96 9, 97 У, 98 90, 99 95, або 100 95 ідентичні послідовностям, представленим в 5ЕО ІО МО: 117- 131, включаючи їх функціональні фрагменти або варіанти. Полінуклеотиди, запропоновані у винаході, включають також полінуклеотиди, послідовності яких принаймні приблизно на 80 95, 85 9», 90 9», 95 95, 96 9», 97 Уо, 98 9», 99 905, або 100 95 ідентичні послідовностям, представленим в ЗЕО ІЮ МО: 162-170, включаючи їх функціональні фрагменти або варіанти.
Полінуклеотиди, що кодують активовані протеазою біспецифічні молекули, які активують Т- клітини, запропоновані у винаході можна експресувати у вигляді індивідуального полінуклеотиду, що кодує повну активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т- клітини, або у вигляді декількох (наприклад, двох або більшої кількості) спільно експресованих полінуклеотидів. Поліпептиди, які кодуються спільно експресованими полінуклеотидуми, можна з'єднувати, наприклад, через дисульфідні зв'язки або іншими шляхами з утворенням функциональної біспецифічної молекули, активованої протеазою, що активує Т-клітини.
Наприклад, частину антигензв'язуючого фрагмента, що являє собою легкий ланцюг, може кодуватись полінуклеотидом, відмінним від полінуклеотиду, що кодує частину активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, яка містить частину антигензв'язуючого фрагмента, що являє собою важкий ланцюг, субодиницю Ес-домену і необов'язково (частину) іншого антигензв'язуючого фрагмента. При спільній експресії поліпептиди важких ланцюгів повинні зв'язуватися з поліпептидами легких ланцюгів з бо утворенням антигензв'язуючого фрагмента. В іншому прикладі частину активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, яка містить одну з двох субодиниць Ес-домену і необов'язково один або декілька (частину одного або декількох) антигензв'язуючих фрагментів, може кодуватись полінуклеотидом, відмінним від полінуклеотиду, що кодує частину активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, яка містить другу з двох субодиниць Ес-домену і необов'язково антигензв'язуючий фрагмент (його частину). При спільній експресії субодиниці Ес-домену повинні зв'язуватися з утворенням Ес-домену.
В деяких варіантах здійснення винаходу виділений полінуклеотид кодує повну вказану в даному описі активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, запропоновану у винаході. В інших варіантах здійснення винаходу виділений полінуклеотид кодує поліпептиди, що входять до вказаної вказану в даному описі активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, запропоновану у винаході.
Інший варіант здійснення даного винаходу відноситься до виділеного полінуклеотиду, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує послідовність варіабельної ділянки. Інший варіант здійснення даного винаходу відноситься до виділеного полінуклеотиду, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує поліпептидну послідовність, представлену в БЕО ІЮ МО: 1,2,3,4,5,6, 7,8, 9,10, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 47 або 55. Інший варіант здійснення даного винаходу відноситься до виділеного полінуклеотиду, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує поліпептидну послідовність, представлену в
ЗЕОІОМО:1,2,3,4,5,6, 7,8, 9,10, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 47, 55, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85. Інший варіант здійснення даного винаходу відноситься до виділеного полінуклеотиду, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує поліпептидну послідовність, представлену в БЕО ІЮ МО: 1,2,3,4,5,6, 7, 8,9, 10, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, АТ, 42, 43, 47,55, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140 або 141. Іншим варіантом здійснення даного винаходу є також виділений полінуклеотид, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 80 95, 8595, 9095, 95 95, 96 95, 97 95, 9895 або 99 95 нуклеотидній послідовності, представленої в 5ЕСО ІО МО: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 або 71. Іншим варіантом здійснення даного винаходу є також виділений полінуклеотид, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 80 95, 85 95, 90 95, 95 95, 96 9, 97 У», 98 95 або 99 95 нуклеотидній послідовності, представленої в 5ЕО ІЮО МО: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130 або 131.
Іншим варіантом здійснення даного винаходу є також виділений полінуклеотид, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 80 95, 85 9», 90 95, 95 95, 96 9», 97 9, 98 95 або 99 95 нуклеотидній послідовності, представленої в 5ЕО ІЮО МО: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169 або 170. Іншим варіантом здійснення винаходу є виділений полінуклеотид, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує
Т-клітини, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить нуклеотидну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮО МО: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 або 71. Іншим варіантом здійснення винаходу є виділений полінуклеотид, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить нуклеотидну послідовність, представлену в 5ЕО ІО МО: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130 або 131.
Іншим варіантом здійснення винаходу є виділений полінуклеотид, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить нуклеотидну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮ МО: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169 або 170. Іншим варіантом здійснення винаходу є також виділений полінуклеотид, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, що кодує послідовність варіабельної ділянки, яка ідентична принаймні приблизно на 80 95, 85 95, 90 95, 9595, 96 95, 97 У, 9895 або 99 95 амінокислотної послідовності 5ЕО ІЮО МО: 43, 47 або 55. 60 Винахід відноситься до виділеного полінуклеотиду, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує послідовність варіабельної ділянки 5ЕО ІЮ МО: 43, 47 або 55 з консервантивними амінокислотними замінами.
Інший варіант здійснення винаходу відноситься до виділеного полінуклеотиду, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, що кодує послідовність варіабельної ділянки, яка ідентична принаймні приблизно на 80 95, 85 95, 90 У», 95 95, 96 9о, 97 У», 98 96 або 99 95 амінокислотної послідовності ЕС ІО МО: 43, 47, 55, 113, 114, 115 або 116. Винахід відноситься до виділеного полінуклеотиду, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує послідовність варіабельної ділянки 5ЕО ІЮО МО: 43, 47, 55, 113, 114, 115 або 116 з консервантивними амінокислотними замінами.
Інший варіант здійснення винаходу відноситься до виділеного полінуклеотиду, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, що кодує послідовність варіабельної ділянки, яка ідентична принаймні приблизно на 80 95, 85 95, 90 У», 95 95, 96 9о, 97 У», 98 96 або 99 95 амінокислотної послідовності 5ЕО ІЮО МО: 43, 47, 55, 113, 114, 115, 116, 157, 158, 159, 160 або 161. Винахід відноситься до виділеного полінуклеотиду, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує послідовність варіабельної ділянки 5ЕО ІО МО: 43, 47, 55, 113, 114, 115, 116, 157, 158, 159, 160 або 161 з консервантивними амінокислотними замінами.
В деяких варіантах здійснення винаходу полінуклеотид або нуклеїнова кислота являє собою
ДНК. В інших варіантах здійснення винаходу полінуклеотид, запропонований в даному винаході, являє собою РНК, наприклад, в формі матричної РНК (мРНК). РНК, запропонована в даному винаході, може бути одноланцюговою або дволанцюговою.
У винаході запропоновані також виділені полінуклеотиди, які кодують ідіотипспецифічний поліпептид, вказаний в даному описі, або його фрагмент. В деяких варіантах здійснення винаходу вказаний фрагмент являє собою фрагмент, зв'язуючий ідіотип, тобто антиїдіотипспецифічне антитіло або його фрагмент. В одному з варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид являє собою антиідіотиповий 5сгЕУ.
Винахід відноситься також до виділеного полінуклеотиду, що кодує ідіотипспецифічний поліпептид, запропонований у винаході, або його фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує одну або декілька з поліпептидних послідовностей, представлених в
ЗЕО ІЮО МО: 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26,27, 28, 29, 30, 31, 48, 49, 50, 51, 52 і 53. Винахід відноситься також до виділеного полінуклеотиду, що кодує ідіотипспецифічний поліпептид, запропонований у винаході, або його фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує одну або декілька з поліпептидних послідовностей, представлених в 5ЕО ІЮО МО: 20, 21, 22,23, 24,25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 48, 49, 50, 51, 52 і 53, з консервантивними амінокислотними замінами.
Полінуклеотиди, що кодують ідіотипспецифічні поліпептиди, запропоновані у винаході, можна експресувати у вигляді індивідуального полінуклеотиду, що кодує повний ідіотипспецифічний поліпептид, або у вигляді декількох (наприклад, двох або більшої кількості) спільно експресованих полінуклеотидів. Поліпептиди, які кодуються спільно експресованими полінуклеотидуми, можна з'єднувати, наприклад, через дисульфідні зв'язки або іншими шляхами з утворенням функціонального ідіотипспецифічного поліпептиду, наприклад, маскуючого фрагмента активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини.
Наприклад, В одному з варіантів здійснення винаходу ідіотипспецифічний поліпептид являє собою антиіїдіотиповий зсЕм (одноланцюговий варіабельний фрагмент), в якому частину, що являє собою легкий ланцюг антиідіотипового 5сЕм, може кодуватись полінуклеотидом, відмінним від полінуклеотиду, що кодує частину антиідіотипового 5сЕм, що являє собою варіабельну ділянку важкого ланцюга антиіїдіотипового 5сЕм.При спільній експресії поліпептиди важких ланцюгів повинні зв'язуватися з поліпептидами легких ланцюгів з утворенням антиідіотипового зсЕм. В деяких варіантах здійснення винаходу виділений полінуклеотид кодує вказаний в даному описі ідіотипспецифічний поліпептид, запропонований у винаході.
В деяких варіантах здійснення винаходу полінуклеотид або нуклеїнова кислота являє собою
ДНК. В інших варіантах здійснення винаходу полінуклеотид, запропонований в даному винаході, являє собою РНК, наприклад, в формі матричної РНК (мРНК). РНК, запропонована в даному винаході, може бути одноланцюговою або дволанцюговою.
Методи рекомбинації бо Активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна одержувати, наприклад, шляхом твердофазного пептидного синтезу (наприклад, твердофазний синтез Меріфільда) або методом рекомбінації. Для рекомбінантного одержання один або декілька полінуклеотидів, які кодують активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, (фрагмент), наприклад, описану вище, виділяють і вбудовують в один або декілька векторів для додаткового клонування і/або експресії в клітині-хазяїні.
Вказаний полінуклеотид можна легко виділяти і секвенувати за допомогою загальноприйнятих процедур. Одним з варіантів здійснення винаходу є вектор, переважно експресійний вектор, який містить один або декілька полінуклеотидів, запропонованих у винаході. Методи, добре відомі спеціалістам в даній галузі, можна застосовувати для конструювання експресійних векторів, які містять що кодує послідовність активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, (фрагмента) поряд З прийнятними контролюючими транскрипцію/трансляцію сигналами. Ці методи включають технології рекомбінантної ДНК іп міо, методи синтезу і рекомбінації/генетичної рекомбінації іп мімо (див., наприклад, методи, описані у Мапіаїз та ін., Мапіаїі5 та ін., МоІесшаг Сіопіпу А І абогаїгу Мапиаї, вид-во Соїа бргіпа
Нарог Іарогаїогу, М.М., 1989; ї А!йз5ибеї! та ін., Ситепі Ргоїосоїв іп МоїІесшіаг Віоіоду, вид-во
Стеепе Рибіїзпіпу Авзосіаїе5 апа МУ/йеу Іпієгвсієпсе, М.М., 1989). Експресійний вектор може являти собою частину плазміди, вірусу або може являти собою фрагмент нуклеїнової кислоти.
Експресійний вектор включає касету експресії, в якій полінуклеотид, який кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, (фрагмент) (тобто що кодує ділянка), клонують із обезпеченням функціонального зв'язку з промотором і/або іншими елементами, що контролюють транскрипцію або трансляцію. В контексті даного опису "кодуюча ділянка" являє собою частину нуклеїнової кислоти, яка складається з кодонів, що транслюються в амінокислотах. Хоча "стоп-кодон" (ТАС, ТА або ТАА) не транслюється в амінокислоту, він, у випадку його присутності, може розглядатись як частину кодуючої ділянки, проте будь-які фланкуючі послідовності, наприклад, промотори, сайти зв'язування рибосом, термінатори транскрипції, інтрони, 5'- і З3'і-нетрансльовані ділянки і т.п., не є частиною кодуючої ділянки. Дві або більша частина ділянок, які кодують, може бути присутньою в індивідуальній полінуклеотидній конструкції наприклад, індивідуальному векторі, або в окремих полінуклеотидних конструкціях, наприклад, окремих (різних) векторах. Крім того, будь-який
Зо вектор може містити одну кодуючу ділянку або може містити дві або більшу кількість кодуючих ділянок, наприклад, вектор, запропонований в даному винаході, може кодувати один або декілька поліпептидів, які пост- або котранляційно розділяються на кінцеві білки за допомогою протеолітичного розщеплення. Крім того, вектор, полінуклеотид або нуклеїнова кислота, запропонований/запропонована у винаході, може кодувати гетерологічні кодуючі ділянки, або злиті, або не злиті з полінуклеотидом, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, (фрагмент), запропоновану у винаході, або її варіант або похідне.
Гетерологічні кодуючі ділянки включають (але, не обмежуючись тільки ними) спеціалізовані елементи або мотиви, такі як секреторний сигнальний пептид або гетерологічний функціональний домен. Функціональний зв'язок має місце, коли кодуюча ділянка генного продукту, наприклад, поліпептиду, асоційована з однією або декількома регуляторними послідовностями Таким чином, щоб експресія генного продукту знаходилась під впливом або контролем регуляторної(тх) послідовності(ей). Два ДНК-фрагменти (такі як кодуюча ділянка поліпептиду і асоційований з нею промотор) є "функціонально зв'язаними", якщо індукція промоторної функції призводить до транскрипції мРНК, що кодує необхідний генний продукт, і якщо природа зв'язку між двома ДНК-фрагментами не чинить впливу на здатність послідовностей, що регулюють експресію, направляти експресію генного продукту, або не чинить впливу на здатність ДНК-матриці до транскрипції. Таким чином, промоторна ділянка повинна бути функціонально зв'язана з нуклеїновою кислотою, кодуючої поліпептид, якщо промотор має здатність здійснювати транскрипцію нуклеїнової кислоти. Промотор може являти собою специфічний для клітини промотор, що забезпечує значну транскрипцію ДНК тільки в попередньо відібраних клітинах. Інші елементи, які контролюють транскрипцію, крім промотора, наприклад, енхансери, оператори, репресори і сигнали термінації транскрипції, можна функціонально зв'язувати з полінуклеотидом для забезпечення специфічної для клітини транскрипції. Прийнятні промотори та інші ділянки, що контролюють транскрипцію, представлені в даному описі. Спеціалістам в даній галузі відомо широке розмаїття ділянок, які контролюють транскрипцію. Вони включають (але, не обмежуючись тільки ними) ділянки, що контролюють транскрипцію, які функціонують в клітинах хребетних тварин, такі як (але, не обмежуючись тільки ними) сегменти промоторів і енхансерів з цитомегаловірусів (наприклад, негайно-ранній промотор в поєднанні з інтроном-А), мавпячого вірусу 40 (наприклад, ранній промотор) і бо ретровірусів (таких як вірус саркоми Рауса). Інші ділянки, що контролюють транскрипцію,
включають ділянки, одержують з генів хребетних тварин, таких як ген актину, білка теплового шоку, бичачого гормону росту і кролячого а-глобіну, а також інші послідовності, які можуть контролювати експресію генів в клітині. Додаткові прийнятні ділянки, які контролюють транскрипцію, включають тканиноспецифічні промотори і енхансери, а також індуцибельні промотори (наприклад, промотори, індуковані тетрациклінами). Аналогічно цьому, звичайним спеціалістам в даній галузі відоме широке розмаїття елементів, які контролюють трансляцію.
Вони включають (але, не обмежуючись тільки ними) сайти зв'язування рибосом, кодони ініціації трансляції та термінуючі кодони і елементи, одержані з вірусних систем (зокрема внутрішній сайт зв'язування (посадки) рибосом або ІКЕ5, який позначають також як СІТЕ-послідовність).
Касета експресії може включати також інші характерні структури, такі як сайт ініціації реплікації і/або інтегровані в хромосому елементи, такі як довгі кінцеві повтори (ІТК) ретровірусів, або інвертовані кінцеві повтори (ІТК) аденоасоційованого вірусу (ААМ).
Кодуючі ділянки полінуклеотиду і нуклеїнової кислоти, запропоновані в даному винаході, можуть бути асоційовані з додатковими кодуюючими ділянками, що кодують секреторні або сигнальні пептиди, які направляють секрецію поліпептиду, що кодується полінуклеотидом, запропонованим в даному винаході. Наприклад, якщо потрібна секреція активованої протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, то ДНК, що кодує сигнальну послідовність, можна поміщати проти ходу транскрипці по відношенню до нуклеїнової кислоти, кодуючої активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, запропоновану у винаході, або її фрагмент. Відповідно до гіпотези, що стосується сигналів, білки, що секретуються клітинами ссавців, мають сигнальний пептид або секреторну лідерну послідовність, який/яка відщеплюється від зрілого білка після ініціації експорту зростаючого білкового ланцюга через шорсткий ендоплазматичний ретикулум. Звичайним спеціалістам в даній галузі має бути очевидно, що поліпептиди, які секретуються клітинами хребетних тварин, як правило, мають сигнальний пептид, злитий з М-кінцем поліпептиду, який відщеплюється від трансльованого поліпептиду з утворенням секретованої або "зрілої" форми поліпептиду. В деяких варіантах здійснення винаходу використовують нативний сигнальний пептид, наприклад, сигнальний пептид важкого ланцюга або легкого ланцюга імуноглобуліну або функціональне похідне зазначеної послідовності, що зберігає здатність забезпечувати секрецію поліпептиду,
Зо функціонально зв'язаного з ним. Альтернативно цьому, можна застосовувати гетерологічний сигнальний пептид ссавців або його функціональне похідне. Наприклад, лідерну послідовність дикого типу можна замінювати на лідерну послідовність людського тканинного активатора плазміногену (ТРА) або мишачої р-глюкуронідази.
ДНК, що кодує коротку білкову послідовність, яку можна застосовувати для полегшення подальшої очистки (наприклад, гістидинову мітку), або призначену для мічення активованої протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, можна включати всередину або на кінці полінуклеотиду, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т- клітини, (фрагменті).
Додатковим варіантом здійснення винаходу є клітина-хазяїн, що містить один або декілька полінуклеотидів, запропонованих у винаході. Деякими варіантами здійснення винаходу є клітина-хазяїн, що містить один або декілька векторів, запропонованих у винаході.
Полінуклеотиди і вектори можуть мати будь-які особливості, індивідуально або в поєднанні, вказані в даному описі по відношенню до полінуклеотидів і векторів відповідно. В одному з таких варіантів здійснення винаходу клітина-хазяїн містить (наприклад, трансформована або трансфектована) вектором, полінуклеотид, який кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, запропоновану у винаході (або її частинину). В контексті даного опису поняття "клітина-хазяїн" відноситься до будь-якого типу клітинної системи, яку можна конструювати для одержання активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, запропонованих у винаході, або їх фрагментів. Клітини-хазяїни, придатні для реплікації і для підтримання експресії активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, добре відомі в даній галузі. Такі клітини можна трансфектувати або трансдукувати відповідним чином конкретним експресійним вектором і можна вирощувати у великих кількостях клітини, що містять вектор, з метою внесення їх в ферментери для крупномасштабних процесів одержання активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, в достатніх для клінічних застосувань кількостях. прийнятними клітинами- хазяїнами є прокаріотичні мікроорганізми, такі як Е. соїї, або різноманітні еукаріотичні клітини, такі як клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), клітини комах або т.п. Наприклад, поліпептиди можна одержувати в бактеріях, зокрема, коли відсутня потреба в глікозилюванні.
Після експресії поліпептид можна виділяти з пасти бактеріальних клітин в розчинну фракцію і бо можна додатково очищати. крім прокаріот, як хазяїнів для клонування або експресії векторів, які бо кодують поліпептид, можна використовувати еукаріотичні мікроорганізми, такі як нитчасті гриби або дріжджі, включаючи штами грибів і дріжджів, шляхи глікозилювання яких були "гуманізовані", що дозволяє одержувати поліпептид з частково або повністю людською схемою глікозилювання (див. Сіегпдго55, Маї. Віоїесп. 22, 2004, сс. 1409-1414 і | Ї та ін., Маї. Віотеси. 24, 2006, сс. 210-215). Клітини-хазяїни, які можна використовувати для експресії (глікозильованих) поліпептидів, одержують також з багатоклітинних організмів (безхребетних і хребетних тварин).
Прикладами клітин безхребетних є клітини комах, а також можна застосовувати клітини рослин.
Були виявлені багаточисельні бакуловірусні штами і відповідні придатні для них як хазяїнів клітини комах, насамперед для трансфекції клітин 5родорієга Пидірегда. Як хазяїнів можна застосовувати також культури рослинних клітин (див., наприклад, 05 МоМо 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 і 6417429 (опис технології РІ АМТІВОСІЕЄВ"М для одержання антитіл в трансгенних рослинах). Як хазяїнів можна застосовувати також клітини хребетних тварин.
Наприклад, можна використовувати клітинні лінії ссавців, які адаптовані до росту в суспензії.
Іншими прикладами прийнятних ліній клітин-хазяїнів ссавців є лінія клітин нирки мавпи СМ1, трансформована за допомогою 540 (СбО5-7); лінія клітин нирки ембріона людини (293 або клітини лінії 293, субклоновані з метою вирощування в суспензійний культурі, сгапйат та ін., У.
Сеп. Мігої!., 36, 1977, с. 59); клітини нирки дитинчати хом'яка (ВНК); клітини Сертолі миші (ТМА- клітини, описані, наприклад, у Маїпег, Віо!. Нергод., 23, 1980, со. 243-251); клітини нирки мавпи (СМ'1); клітини нирки африканської зеленої мавпи (МЕНО-76,); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітини нирки собаки (МОСК); клітини печінки бичачого щура (ВВІ. ЗА); клітини легені людини (М/138); клітини печінки людини (Нер С2); клітини пухлини молочної залози миші (ММТ 060562); клітини ТВІ, описані, наприклад, у Маїнег" та ін., Аппа!5 М.У. Асад. 5сі., 383, 1982, сс. 44-68); клітини МАС 5 і клітини Е54. Іншими цінними лініями клітин-хазяїнів ссавців є клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), включаючи апт-СНоО-клітини (Опацб та ін., Ргос. Маї).
Асад. 5сі. ОБА, 77, 1980, с. 4216); і клітинні лінії мієломи, такі як МО, М5О ії 5р2/0. Огляд конкретних ліній клітин-хазяїнів ссавців, які можна застосовувати для виробництва білка, див., наприклад, у МалакКі і Ми, в: Меїнодз іп Моієсшіаг Віоіоду під ред. В.К.С. Го, вид-во Нитапа
Ргез5, Тоїоула, МУ, т. 248, 2003, сс. 255-268. Клітини-хазяїни включають культивовані клітини, наприклад, культивовані клітини ссавців, клітини дріжджів, клітини комах, клітини бактерій і
Зо клітини рослин (але не обмежуючись тільки ними), а також клітини, що знаходяться в організмі трансгенної тварини, трансгенної рослини або культивованої рослинної або тваринної тканини.
В одному з варіантів здійснення винаходу клітина-хазяїн являє собою еукаріотичну клітину, переважно клітину ссавця, таку як клітина яєчника китайського хом'ячка (СНО), клітина нирки людського ембріона (НЕК) або лімфоїдна клітина (наприклад, клітина МО, МБО, 5рагб).
В даній галузі відомі стандартні технології для експресії чужорідних генів в цих системах.
Клітини, що експресують поліпептид, який містить або важкий, або легкий ланцюг антигензв'язуючого домену, такого як антитіло, можна конструювати таким чином, щоб в них відбувалась експресія інших ланцюгів антитіла, наприклад, таким чином, щоб експресований продукт являв собою антитіло, яке має як важкий, так і легкий ланцюг.
Одним з варіантів здійснення винаходу є спосіб одержання активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, запропонованої у винаході, який полягає в тому, що культивують клітину-хазяїна, що містить полінуклеотид, що кодує активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, представлену в даному описі, в умовах, придатних для експресії активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, і виділяють активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, з клітини- хазяїна (або культурального середовища клітини-хазяїна).
Компоненти активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, генетично зливають один з одним. Активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т- клітини, можна створювати Так, щоб її компоненти зливати один з одним безпосередньо або опосередковано через лінкерну послідовність. Склад і довжину лінкера можна визначати за допомогою методів, добре відомих в даній галузі, і можна оцінювати ефективність. приклади лінкерних послідовностей, розташованих між різними компонентами активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, представлені в наведених в даному описі послідовностях. Можна включати також додаткові послідовності для вбудовування сайта розщеплення, якщо потрібне розділення індивідуальних компонентів злиття, наприклад, послідовність, розпізнавану ендопептидазою.
В деяких варіантах здійснення винаходу один або декілька антигензв'язуючих фрагментів активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини містить(ять) принаймні варіабельну ділянку антитіла, яка має здатність зв'язуватись з антигенною детермінантою. бо Варіабельні ділянки можуть утворювати частину які зустрічаються в природніх умовах або які не зустрічаються в природніх умовах антитіл або їх фрагментів або можуть бути одержані з них.
Методи одержання поліклональних антитіл і моноклональних антитіл добре відомі в даній галузі (див., наприклад, Напом/ і Іапе, "Апіїрбодіев: а І арогаюгту Мапиа!", вид-во Соїд бргіпду Наїбог
І арогаїогу, 1988). Антитіла, що не зустрічаються в природних умовах, можна створювати за допомогою твердофазного пептидного синтезу, можна одержувати за допомогою методів рекомбінації (наприклад, описаних в 05 Мо 4186567) або можна одержувати, наприклад, шляхом скринінгу комбінаторних бібліотек, які містять варіабельні ділянки важких ланцюгів і варіабельні ділянки легких ланцюгів (див., наприклад, Ш5 Мо 5969108 на ім'я МеСапйепу).
Антитіла, фрагменти антитіл, антигензв'язуючі домени або варіабельні ділянки з будь-яких видів тварин можна застосовувати в активованих протеазою біспецифічних молекулах, які активують Т-клітини, запропонованих у винаході. Прикладами антитіл, фрагментів антитіл, антигензв'язуючих доменів або варіабельних ділянок, які можна застосовувати відповідно до даного винаходу, є (але, не обмежуючись тільки ними) конструкції, одержані з організму мишей, приматів або людини. Якщо активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, призначена для застосування на людині, то можна використовувати химерну форму антитіла, в якій константні ділянки антитіла одержані з людського антитіла. Гуманізовану або повністю людську форму антитіла можна одержувати також за допомогою методів, добре відомих в даній галузі (див., наприклад, 05 Мо 5565332 на ім'я М/іпіє). Для здійснення гуманізації можна застосовувати різноманітні методи, такі як (але, не обмежуючись тільки ними) (а) трансплантація нелюдськими (наприклад, з антитіла-донора) СОВ в людську (наприклад, антитіло-реципієнт) каркасну ділянку і константні ділянки, які зберігають або не зберігають залишки каркасної ділянки, що мають вирішальне значення (наприклад, залишки, важливі для зберігання хорошої антигензв'язуючої афінності або функцій антитіла), (б) трансплантація тільки нелюдських ділянок, які визначають специфічність (5ОВ або а-СОВ; залишки мають вирішальне значення для взаємодії антитіло-антиген) в людські каркасні і константні ділянки, або (в) трансплантація повних нелюдських варіабельних доменів, але їх "маскування" шляхом шляхом заміни поверхневих залишків, що нагадує людський сегмент. Огляд гуманізованих антитіл і методів їх одержання див., наприклад, у АІтадго і Егап55оп, Егопі Віовсі 13, 12008, сс. 1619- 1633, і вони описані також, наприклад, у Вієсптапп та ін., Маїшге 332, 1988, сс. 323-329; диееп
Зо та ін., Ргос Маї! Асай 5сі ОБА 86, 1989, сс. 10029-10033; 05, МоМо 5821337, 7527791, 6982321 і 7087409; допез та ін., Машге 321, 1986, сс. 522-525; Могтізоп та ін., Ргос Маї! Асаа 5сі 81, 1984, сс. 6851-6855; Мотізоп і ОЇ, Адм Іттипої 44, 1988, сс. 65-92; Метоеуеєп та ін., Зсієпсе 239, 1988, сс. 1534-1536; Радіап, Моїес Іттип 31(3), 1994, сс.169-217; КазПтіїі та ін., Меїйоаз 36, 2005, сс. 25-34) (опис трансплантації 5ОВА (а-СОНВ)); Радіап, Мої Іттипої! 28, 1991, сс. 489-498 (опис методу зміни поверхні ("повторне покриття")); баІгАсдпа та ін., Меїйод5 36, 2005, сс. 43-60 (опис "перестановки ЕВ") ії О5рошт та ін., Меїнодз 36, 2005, сс. 61-68, і КіїткКа та ін., Вг ) Сапсег 83, 2000, сс. 252-260 (опис підходу на основі "цілеспрямованої селекції" для перестановки ЕК).
Людські антитіла і людські варіабельні ділянки можна одержувати за допомогою різних методик, відомих в даній галузі. Людські антитіла описані в цілому, у мап біЇКкК ї мап де М/іпКеї, Сит Оріп
Ріпаптасої 5, 2001, сс. 368-374 і Її опрегу, Ст Оріп Іттипо! 20, 2008, сс. 450-459. Людські варіабельні ділянки можуть утворювати частину людських моноклональних антитіл або можуть бути одержані з них за допомогою методу гібридом (див., наприклад, Мопосіопа! Апіїбоду
Ргодисіюп Тесппідне5 апа Арріїсайоп5, вид-во Магсе! Оеккег, Іпс., Мем/ МоїК, 1987, сб. 51-63).
Людські антитіла і людські варіабельні ділянки можна одержувати також шляхом введення імуногену трансгенній тварині, яка модифікована таким чином, що може продуквати інтактні людські антитіла або інтактні антитіла з людськими варіабельними ділянками у відповідь на контрольне зараження антигеном (див., наприклад, ІГопрего, Маї Віоїесп 23, 2005, сс. 1117- 1125). Людські антитіла і людські варіабельні ділянки можна створювати також шляхом виділення послідовностей варіабельних ділянок Ему-клона, відібраних з людських фагових дисплейних бібліотек (див., наприклад, Ноодепроот та ін. в: Меїйосд5 іп Моїесшіаг Віоіоду, під ред. О'Вгіеп та ін., вид-во Нитап Ргев5, ТоїОула, МУ, 178, 2001, сс. 1-37); і МесСанепу та ін.,
Маїшге 348, 552-554; Сіасквоп та ін., Майшге 352, 1991, сс. 624-628). Фаг, як правило, експонує фрагменти антитіл або у вигляді одноланцюгових Ем-(5сЕм)-фрагментів, або у вигляді Еар- фрагментів.
В деяких варіантах здійснення винаходу антигензв'язуючі фрагменти, придатні для застосування відповідно до даного винаходу, створюють Так, щоб вони мали підвищену афінність зв'язування, наприклад, за допомогою методів, описаних в публікації заявки на патент
США Мо 2004/0132066, повний вміст якої включено в даний опис як посилання. Здатність активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, запропонованої у бо винаході, зв'язуватись зі специфічною антигенною детермінантою, можна оцінювати кількісно або за допомогою твердофазного ферментного аналізу (ЕГІБА), або іншими методиками, відомими спеціалісту в даній галузі наприклад, за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу (здійснюючи аналіз з використанням системи ВІАСОВЕ Т100) (І ПШебріай та ін., Спусо У 17, 2000, сс. 323-329), і традиційних аналізів зв'язування (Невєїєу, Епдосг Вез 28, 2002, сб. 217-229). Аналізи в умовах конкуренції можна застосовувати для ідентифікації антитіла, фрагмента антитіла, антигензв'язуючого домену або варіабельного домену, конкуруючого з референс-антитілом за зв'язування з конкретним антигеном, наприклад, антитіла, яке конкурує з антитілом МУ за зв'язування з СОЗ3. В деяких варіантах здійснення винаходу вказане конкуруюче антитіло зв'язується з тим же епітопом (наприклад, лінійним або конформаційним епітопом), з яким зв'язується референс-антитіло. Наведені як приклади детальні методи картирування епітопу, з яким зв'язується антитіло, представлені у Моїтів, "Еріюре Марріпд Ргоюсої!5", в: Меїйпоа5 іп МоїІесшіаг Віоіоду, вид-во Нитапа Ргез5, Тома, Му, т. 66, 1996. При здійсненні наведеного як приклад аналізу в умовах конкуренції іммобілізований антиген (наприклад, СОЗ3) інкубують в розчині, який містить перше мічене антитіло, що зв'язується з антигеном (наприклад, антитіло МО, описане в 05 6054297), і і друге немічене антитіло, яке підлягає тестуванню у відношенні його здатності конкурувати з першим антитілом за зв'язування з антигеном. Друге антитіло може бути присутнім в супернатанті гібридоми. Як контроль іммобілізований антиген інкубують в розчині, який містить перше мічене антитіло, але не містить інше немічене антитіло. Після інкубації в умовах, що забезпечують зв'язування першого антитіла з антигеном, надлишок незв'язаного антитіла видаляють і оцінюють кількість мітки, асоційованої з іммобілізованим антигеном. Якщо кількість мітки, асоційованої з іммобілізованим антигеном, істотно знижено в тестованому зразку порівняно з контрольним зразком, то це свідчить про те, що друге антитіло конкурує з першим антитілом за зв'язування з антигеном (див. Напом/ і Гапе. Апіїродіеєє: А І арогаюту Мапиа!, вид-во СоЇй бргіпу Нагїбог
І арогайогу, Соїа бргіпу Нагтотг, МУ, гл. 14, 1988).
Активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, одержані за допомогою представлених в даному описі методів, можна очищати з використанням відомих в даній галузі методик, таких як рідинна хроматографія високого розрішення, іонообмінна хроматографія, гель-електрофорез, афінна хроматографія, гель-фільтрація і т.п. Фактичні
Зо умови, що застосовуються для очистки конкретного білка, залежать, зокрема, від таких факторів, як чистий заряд, гідрофобність, гідрофільність і т.д., і вони повинні бути очевидні спеціалісту в даній галузі. Для очистки антитіла за допомогою афінної хроматографії можна використовувати ліганд, рецептор або антиген, з яким зв'язується активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини. Наприклад, для очистки за допомогою афінної хроматографії активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, запропонованих у винаході, можна використовувати матрикс з білком А або білком а.
Наприклад, послідовне застосування афінної хроматографії на білку А або с і гель-фільтрації можна застосовувати для виділення активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, практично згідно з методом, описаним в розділі "Приклади". Чистоту активованої протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, можна визначати за допомогою будь-якого з широкої різноманітності добре відомих аналітичних методів, включаючи гель-електрофорез, рідинну хроматографію високого тиску і т.п. Наприклад, встановлено, що злиті білки. які містять важкі ланцюги, які експресували згідно описаними в розділі "Приклади" методам, є інтактними і правильно зібраними, що продемонстровано за допомогою ДСН-ПААГ у відновлюючих умовах (див., наприклад, фіг. 8-12). Розділяли три смуги, відповідні приблизно Мг 25000, Мі 50000 ії Мі 75000, які відповідали передбаченим молекулярним масам легкого ланцюга, важкого ланцюга і злитому білку важкий ланцюг/легсий ланцюг активованої біспецифічної антигензв'язуючої молекули, протеазою що активує Т-клітини.
Аналізи
Активовані протеазою біспецифічні молекули, які активують Т-клітини, представлені в даному описі, можна ідентифікувати, піддавати скринінгу або характеризувати їх фізичні/хімічні властивості і/або види біологічної активності за допомогою різних аналізів, відомих в даній галузі.
Аналізи афінності
Афінність активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, до Ес- рецептора або антигена-мішені можна визначати за допомогою методів, викладених в розділі "Приклади", за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (5РА), використовуючи стандартну інструментальну базу, наприклад, пристрій ВІіАсоге (фірма СЕ Нвеайнсагеє), і рецептори або білки-мішені, які можна одержувати за допомогою рекомбінантної експресії. бо Альтернативно цьому, зв'язування активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини з різними рецепторами або антигенами-мішенями можна оцінювати з використанням клітинних ліній, що експресують конкретний рецептор або антиген-мішень, наприклад, за допомогою протокової цитометрии (БАС5). Конкретний ілюстративний і наведений як приклад варіант вимірювання афінності зв'язування описаний нижче в розділі "Приклади".
Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу величину Ко вимірювали методом поверхневого плазмонного резонансу за допомогою пристрою ВІАСОНЕФ Т100 (фірма СЕ
НеайНсагеє) при 25260.
Для аналізу взаємодії між Ес-ділянкою і Ес-рецепторами мічений за допомогою Нів рекомбінантний Ес-рецептор "захоплювали" за допомогою антитіла до пента-Ніз (фірма
Оіадеп), іммобілізованого на СМ5-чіпах, і біспецифічні конструкції застосовували як аналіти. В цілому, метод полягав у наступному: біосенсорні чіпи з карбоксиметильованого декстрану (СМ5, фірма СЕ НеаїйНсагеє) активували за допомогою гідрохлориду /М-етил-М'-(3- диметиламінопропіл)карбодіїміду (ЕС) ії М-гідроксисукциніміду (МН) згідно з інструкціями постачальника. Антитіло до пента-Ніх розводили 10мМ ацетатом натрію, рН 5,0 до концентрації 40 мкг/мл перед ін'єкцією зі швидкістю потоку 5 мкл/хв для досягнення рівня іммобілізації, відповідної приблизно 6500 одиниць відповіді (ВІ) зв'язаного білка. Після ін'єкції ліганда ін'єктували 1М етаноламін для блокади непрореагованих груп. Потім здійснювали "захоплення"
Ес-рецептора протягом 60 с в концентрації 4 або 1ОнНМ. Для кінетичних вимірів ін'єктували чотирикратні серійні розведення біспецифічної конструкції (діапазон від 500 до 4000нМ) в буфері НВ5О-ЕР. (фірма СЕ Неайсагє, 10мМ НЕРЕ5, 150мМ Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,05 95 сурфактанта Р2О, рН 7,4) при 2520 зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с.
Для визначення афінності до антигена-мішені біспецифічні конструкції "захоплювали" за допомогою специфічного по відношенню до людського Раб антитіла (фірма СЕ Неайнсагеє), яке іммобілізували на поверхні активованого сенсорного СМ5-чіпа згідно з методом, описаним для антитіла до пента-Ніб5. Кінцева кількість зшитого білка відповідала приблизно 12000 КИ.
Здійснювали "захоплення" біспецифічних конструкцій протягом 90 с в концентрації ЗО00ОнНМ.
Антигени-мішені пропускали через проточні комірки протягом 180 с в діапазоні концентрацій від 250 до 1000Нм зі швидкістю потоку 30 мкл/хв. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 180 б.
Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці. Відповідь на стаціонарній стадії використовували для визначення константи дисоціації (КО) за допомогою апроксимації нелінійної кривої ізотерми зв'язування Ленгмюра. Швидкість реакції асоціації (Коп) і реакції дисоціації (Кої) розраховували з використанням простої моделі зв'язування Ленгмюра 1:11 (програма ВІАСОКЕ Ф Т100
Емаїнайоп Зоймаге, версія 1.1.1) шляхом одночасної апроксимації сенсограмм асоціації і дисоціації. Константу рівноваги реакції дисоціації (КО) розраховували як співвідношення КОоП/коп (див., наприклад, Спеп та ін., У Мої Віо! 293, 1999, сс. 865-881).
Аналізи активності
Біологічну активність активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т- клітини, запропонованих у винаході, можна визначати за допомогою різних аналізів, описаних в розділе "Приклади". Види біологічної активності можуть включати, наприклад, індукцію проліферації Т-клітин, індукцію передачі сигналу в Т-клітинах, індукцію експресії маркерів активації в Т-клітинах, індукцію секреції цитокінів Т-клітинами, індукцію лізису клітин-мішеней, таких як пухлинні клітини, і індукцію регресу пухлини і/або підвищення виживаності.
Композиції, препаративні форми і шляхи введення
Наступним об'єктом винаходу є фармацевтичні композиції, що містять будь-яку з активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, представлених в даному описі, наприклад, призначені для застосування в будь-якому із вказаних нижче терапевтичних способів. В одному з варіантів здійснення винаходу фармацевтична композиція містить будь-яку з активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, представлених в даному описі, і фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення винаходу фармацевтична композиція містить будь-яку з активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, представлених в даному описі, і принаймні один додатковий терапевтичний засіб, наприклад, вказаний нижче.
Крім того, представлений спосіб одержання активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, запропонованої у винаході, в формі, придатної для введення іп мімо, який полягає в тому, що (а) одержують активовану протеазою біспецифічну молекулу, яка активує Т-клітини, запропоновану у винаході, і (б) об'єднують в препаративній формі активовану бо протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, принаймні з одним фармацевтично прийнятним носієм, де одержаний препарат активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, придатний для застосування іп мімо.
Фармацевтичні композиції, запропоновані в даному винаході, містять в терапевтично ефективній кількості одну або декілька активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, яка(ї) розчинена(ї) або диспергована(ї) в фармацевтично прийнятному носії. Поняття "фармацевтично або фармакологічно прийнятний" відноситься до молекулярних субстанцій та композицій, які, в цілому, нетоксичні для реципієнтів в застосовуваних дозах і концентраціях, тобто не викликають шкідливі, алергічні або інші небажані реакції при введенні за необхідності тварині, такій, наприклад, як людина. Приготування фармацевтичної композиції, яка містить принаймні одну активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т- клітини, і необов'язково додаткову діючу речовину, має бути очевидно спеціалістам в даній галузі в світлі даного опису, наприклад, з довідника Кетіпдіоп'є Рпаптасешііса! Зсіепсев, 18-е вид., вид-во Маск Ргіпіпуд Сотрапу, 1990, включеного в даний опис як посилання. Крім того, очевидно, що препарати, призначені для введення тварині (наприклад, людині), повинні задовольняти вимогам стандартів стерильності, пірогенності і загальної безпеки і чистоти, розроблених відділенням біологічних стандартів ЕСА (Управління контролю харчових продуктів і лікарських засобів) або відповідним уповноваженим органом інших країн. Переважними композиціями є ліофілізовані препаративні форми або водні розчини. В контексті даного опису "фармацевтично прийнятний носій" включає будь-які і всі розчинники, буфери, дисперсійні середовища, покриття, поверхнево-активні речовини, антиоксиданти, консерванти (наприклад, антибактеріальні агенти, протигрибкові агенти), агенти для додання ізотонічності, агенти, що пригнічують абсорбцію, солі, білки, лікарські засоби, стабілізатори лікарських засобів, полімери, гелі, сполучні речовини, наповнювачі, розпушувачі, замаслювачі, підсолоджуючі речовини, коригенти, барвники і подібні матеріали і їх комбінації, які повинні бути відомі звичайному спеціалісту в даній галузі (див., наприклад, Кетіпдіоп'є Ріаптасецшісаї Зсіепсез, 18-е вид., вид- во Маск Ргіпіпд Сотрапу, 1990, сс. 1289-1329, включений в даний опис у як посилання). В терапевтичних або фармацевтичних композиціях можна застосовувати будь-який загальноприйнятий носій, за винятком тих випадків, коли він несумісний з діючою речовиною.
Композиція може містити різні типи носіїв в залежності від того, чи запроваджують її у
Зо твердій, рідкій або аерозольній формі, і від того, чи повинна вона бути стерильною, як у випадку використання таких шляхів введень, як ін'єкція. Активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані в даному винаході (і будь-який додатковий терапевтичний засіб), можна вводити внутрішньовенно, внутрішньошкірно, внутрішньоартеріально, внутрибрюшинно, всередину пошкодження, всередину черепа, всередину суглоба, всередину передміхурової залози, всередину селезінки, внутрішньоренально, внутрішньоплеврально, внутрішньотрахеально, внутрішньоназально, всередину склоподібного тіла, внутрішньовагінально, внутрішньоректально, всередину пухлини, внутрішньом'язово, внутрішньочеревно, підшкірно, підкон'юнктивально, інтравезікулярно, в слизову оболонку, інтраперикардіально, всередину пуповини, інтраокулярно, орально, топікального, місцево, шляхом інгаляції (наприклад, аерозольної інгаляції), ін'єкції, інфузії, безперервної інфузії, локалізованої перфузії, що омиває безпосередньо клітини-мішені, через катетер, за допомогою лаважу, у вигляді кремів, в ліпідних композиціях (наприклад, ліпосоми), або за допомогою будь-якого іншого методу або будь-якої комбінації вищевказаних шляхів, відомих звичайному спеціалісту в даній галузі (див., наприклад, Кетіпдіоп'є Рпагтасешіісаї
Зсієпсе5, 18-е вид., вид-во Маск Ргіпіїпуд Сотрапу, 1990., включений в даний опис як посилання). Для введення молекул поліпептидів, таких як активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, найбільш часто застосовують парентеральне введення, зокрема, внутрішньовенну ін'єкцію.
Парентеральні композиції включають композиції, створені для введення шляхом ін'єкції, наприклад, підшкірної, внутрішньошкірної, всередину пошкодження, внутрішньовенної, внутрішньоартеріальної, внутрішньом'язової, підоболонкової або внутрішньочеревної ін'єкції.
Для ін'єкції активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна включати в препаративні форми у вигляді водних розчинів, переважно у фізіологічно сумісних буферах, таких як розчин Хенкса, розчин Рінгера або фізіологічний соляний буфер. Розчин може містити призначені для одержання препаративної форми агенти, такі як суспендуючі, стабілізуючі і/або диспергуючі агенти. Альтернативно цьому, активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини можуть перебувати в порошкоподібній формі, призначеній для відновлення перед застосуванням прийнятним наповнювачем, наприклад, стерильною водою, яка не містить пірогенів. Стерильні ін'єковані бо розчини готують шляхом включення активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, запропонованих у винаході, в необхідній кількості у відповідний розчинник за необхідності в поєднанні з різними іншими інгредієнтами, що вказані нижче. Стерильність можна легко забезпечувати, наприклад, шляхом фільтрації через стерильні фільтруючі мембрани. Як правило, дисперсії отримують шляхом включення різних стерилізованих діючих речовин в стерильний наповнювач, який містить основне дисперсійне середовище і/або інші інгредієнти. У випадку стерильних порошків для одержання стерильних ін'єкованих розчинів, суспензій або емульсій переважними методами отримання є вакуумне сушіння або сушіння виморожуванням, які дозволяють одержувати порошок діючої речовини в поєднанні з будь-яким додатковим необхідним інгредієнтом з попередньо стерилізованим фільтрацією рідкого середовища. За необхідності рідке середовище перед здійсненням ін'єкції може бути відповідним чином забуферене і рідкому розріджувачу спочатку надана ізотонічність за допомогою достатньої кількості соляного розчину або глюкози. Композиція повинна бути стабільною в умовах приготування і зберігання і захищена від забруднюючої дії мікроорганізмів, таких як бактерії і гриби. Прийнято підтримувати забруднення ендотоксинами на мінімальному безпечному рівні, наприклад, менше 0,5 нг/мг білка. Придатні фармацевтично прийнятні носії включають (але, не обмежуючись тільки ними): буфери, такі як фосфатний, цитратний і буфери на основі інших органічних кислот; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту та метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламмонійхлорид; гексаметонійхлорид; бензалконійхлорид; бензетонійхлорид; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкілларабени, такі як метил або пропілпарабен; катехол, резорцинол; циклогексанол; 3- пентанол і мета-крезол); низькомолекулярні (містять менше приблизно 10 залишків) поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші вуглеводи, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатуючі агенти, такі як ЕДТА; цукри, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; солеутворюючі противоіони, такі як натрій; комплекси з металами (наприклад, комплекси 2п- білок); іиабо неіоногенні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (ПЕГ). Водні суспензії для ін'єкцій можуть містити сполуки, які підвищують в'язкість суспензії, такі як натрієва сіль карбоксиметилцелюлози, сорбіт, декстран або т.п. Необов'язково суспензія може містити
Зо також стабілізатори або агенти, які підвищують розчинність сполук, що дозволяє одержувати висококонцентровані розчини. Крім того, суспензії діючих речовин можна одержувати у вигляді відповідних масляних призначених для ін'єкції суспензій. Прийнятні ліпофільні розчинники або наповнювачі включають жирні нелеткі олії, такі як кунжутне масло, або синтетичні ефіри жирних кислот, такі як етилолеат або тригліцериди, або ліпосоми...
Діючі речовини можна укладати в мікрокапсули, наприклад, одержані за допомогою методів коацервації або міжфазної полімеризації, наприклад в гідроксипропілметилцелюлозні або желатинові мікрокапсули і полі (метилметакрилатні) мікрокапсули відповідно, в колоїдні системи введення лікарського засобу (наприклад, в ліпосоми, альбумінові мікросфери, мікроемульсії, наночастинки і нанокапсули) або в макроемульсії. Такі методи описані в Ветіпаоп'5
Ріпаптасешііса! Зсієпсе5, під ред. А. О50іІ, 1980. Можна готувати препарати з уповільненим вивільненням. Прийнятними прикладами препаратів з уповільненим вивільненням є напівпроникні матриці з твердих гідрофобних полімерів, які включають поліпептид, такі матриці являють собою вироби певної форми, наприклад, плівки або мікрокапсули. В конкретному варіанті здійснення винаходу для досягнення пролонгованої абсорбції ін'єктовані композиції можна застосовувати в композиції агенти, що пригнічують абсорбцію, такі, наприклад, як моностеарат алюмінію, желатин або їх комбінації.
Крім описаних вище композицій, активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують
Т-клітини, можна готувати також у вигляді препарату в формі депо. Зазначені препаративні форми тривалої дії можна застосовувати шляхом імплантації (наприклад, підшкірної або внутрішньом'язової) або внутрішньом'язової ін'єкції. Так, наприклад, активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, можна включати в препаративні форми в поєднанні з прийнятними полімерними або гідрофобними матеріалами (наприклад, у вигляді емульсії в прийнятній олії) або іонообмінні смоли, або у вигляді помірно розчинних похідних, наприклад, помірно розчинної солі...
Фармацевтичні композиції, що містять активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна готувати за допомогою загальноприйнятих процесів змішання, розчинення, емульгування, капсулювання, захоплення або ліофілізації. Фармацевтичні композиції можна включати в препаративні форми за допомогою загальноприйнятого методу з використанням одного або декількох фізіологічно бо прийнятних носіїв, розріджувачів, наповнювачів або допоміжних речовин, які полегшують обробку білків, з одержанням препаратів, які можна застосовувати в фармацевтичних цілях.
Відповідна форма залежить від обраного шляху введення.
Активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, можна включати в композиції у вигляді вільної кислоти або вільної основи, в нейтральній формі або у формі солі.
Фармацевтично прийнятні солі являють собою солі, які практично зберігають біологічну активність вільної кислоти або вільної основи. Вони включають кислотно-адитивні солі, наприклад, солі, утворені з вільними аміногрупами білкової композиції, або утворені з неорганічними кислотами, такими, наприклад, як соляна або фосфорна кислота, або такими органічними кислотами, як оцтова, щавлева, винна чи мигдальна кислота. Солі, утворені з вільною карбоксильною групою, можна одержувати також з неорганічних основ, таких, наприклад, як гідроксиди натрію, калію, амонію, кальцію або заліза; або таких органічних основ як ізопропіламін, триметиламін, гістидин або прокаїн. Фармацевтичні солі мають тенденцію до більш високої розчинності у водних та інших протонних розчинниках порівняно з відповідними формами у вигляді вільних основ.
Способи і композиції для терапевтичного застосування
Будь-яку з активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, представлених в даному описі, можна застосовувати в терапевтичних способах. Активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна використовувати як імунотерапевтичні агенти, наприклад, при лікуванні різних видів раку.
Для застосування в терапевтичних способах активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна включати до складу препаративних форм, дозувати і вводити відповідно до належної клинічної практики. Розглянуті в цьому контексті фактори включають конкретне порушення, яке підлягає лікуванню, конкретний ссавець, яке підлягає лікуванню, клінічний стан індивідуального пацієнта, причину захворювання, ділянку введення агента, метод введення, схему введення та інші фактори, відомі практикуючим медикам.
Одним з об'єктів винаходу є активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т- клітини, запропоновані у винаході, призначені для застосування як лікарський засіб. Наступними об'єктами винаходу є активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують Т-клітини,
Зо запропоновані у винаході, призначені для застосування при лікуванні захворювання. Деякими варіантами здійснення винаходу є активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують
Т-клітини, запропоновані у винаході, призначені для застосування в способі лікування. Одним з варіантів здійснення винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т- клітини, представлена в даному описі, призначена для застосування при лікуванні захворювання в індивідуума, що потребує цього. Деякими варіантами здійснення винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, призначена для застосування в способі лікування індивідуума, що має захворювання, який включає індивідууму в терапевтично ефективній кількості активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини. В деяких варіантах здійснення винаходу захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою проліферативне порушення. В конкретному варіанті здійснення винаходу захворювання являє собою рак. В деяких варіантах здійснення винаходу спосіб включає також введення індивідууму в терапевтично ефективній кількості принаймні одного додаткового терапевтичного засобу, наприклад, протиракового засобу, якщо захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою рак. Додатковими варіантами здійснення винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, представлена в даному описі, призначена для застосування з метою індукції лізису клітини-мішені, зокрема пухлинної клітини. Деякими варіантами здійснення винаходу є активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, призначена для застосування в способі індукції лізису клітини- мішені, зокрема пухлинної клітини, в індивідуума, що включає введення індивідууму в ефективній кількості активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини для індукції лізису клітини-мішені. "Індивідуум" в контексті будь-якого з вищевказаних варіантів здійснення винаходу є ссавцем, переважно людини.
Наступним об'єктом винаходу є застосування активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, запропонованої у винаході, для виробництва або приготування лікарського засобу. В одному з варіантів здійснення винаходу лікарський засіб призначений для лікування захворювання в індивідуума, який потребує цього. В одному з варіантів здійснення винаходу лікарський засіб призначений для застосування в способі лікування захворювання, який включає індивідууму, що має захворювання, в терапевтично ефективній кількості лікарського засобу. В деяких варіантах здійснення винаходу захворювання, яке підлягає бо лікуванню, являє собою проліферативне порушення. В конкретному варіанті здійснення винаходу захворювання являє собою рак. В одному з варіантів здійснення винаходу спосіб включає також введення індивідууму в терапевтично ефективній кількості принаймні одного додаткового терапевтичного засобу, наприклад, протиракового засобу, якщо захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою рак. В іншому варіанті здійснення винаходу лікарський засіб призначений для індукції лізису клітини-мішені, зокрема пухлинної клітини. В наступному варіанті здійснення винаходу лікарський засіб призначений для застосування в способі індукції лізису клітини-мішені, зокрема пухлинної клітини, в індивідуума, що включає введення індивідууму в ефективній кількості лікарського засобу для індукції лізису клітини-мішені. "Індивідуум" в контексті будь-якого з вищевказаних варіантів здійснення винаходу є ссавцем, переважно людини.
Наступним об'єктом винаходу є спосіб лікування захворювання. В одному з варіантів здійснення винаходу спосіб включає введення індивідууму, що має вказане захворювання, в терапевтично ефективній кількості активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує
Т-клітини, запропонованої у винаході. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаному індивідууму вводять композицію, яка містить активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, запропоновану у винаході, в фармацевтично прийнятній формі. В деяких варіантах здійснення винаходу захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою проліферативне порушення. В конкретному варіанті здійснення винаходу захворювання являє собою рак. В деяких варіантах здійснення винаходу спосіб включає також введення індивідууму в терапевтично ефективній кількості принаймні одного додаткового терапевтичного засобу, наприклад, протиракового засобу, якщо захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою рак. "Індивідуум" в контексті будь-якого з вищевказаних варіантів здійснення винаходу може бути ссавцем, переважно людиною.
Наступним об'єктом винаходу є спосіб індукції лізису клітини-мішені, зокрема, пухлинної клітини. В одному з варіантів здійснення винаходу спосіб включає приведення в контакт клітини- мішені з активованою протеазою біспецифічною молекулою, яка активує Т-клітини, запропонованої у винаході, в присутності Т-клітини, зокрема, цитотоксичної Т-клітини. Іншим об'єктом винаходу є спосіб індукції лізису клітини-мішені, зокрема, пухлинної клітини. в одному з вказаних варіантів здійснення винаходу спосіб включає введення індивідууму в ефективній
Зо кількості активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини для індукції лізису клітини-мішені. В одному з варіантів здійснення винаходу "індивідуум" являє собою людини.
В деяких варіантах здійснення винаходу захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою проліферативне порушення, насамперед рак. Прикладами раку є (але, не обмежуючись тільки ними) рак сечового міхура, рак головного мозку, рак голови і шиї, рак підшлункової залози, рак легені, рак молочної залози, рак яєчника, рак матки, рак шийки матки, рак ендометрію, рак стравоходу, рак ободової кишки, колоректальний рак, ректальний рак, рак шлунка, рак передміхурової залози, рак крові, рак шкіри, плоскоклітінна карцинома, рак кістки і рак нирки. інші порушення клітінної проліферації, які можна лікувати з використанням активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, запропонованої в даному винаході, включають (але, не обмежуючись тільки ними) неоплазми, локалізовані в: животі, кістці, молочній залозі, травній системі, печінці, підшлунковій залозі, очеревині, ендокринних залозах (наднирник, паращитовидная, гіпофіз, яєчка, яєчник, тимус, щитовидна залоза), оці, голові и шиї, нервовій системі (центральній и периферичної), лімфатичної системи, тазової ділянки, шкірі, м'якої тканини, селезінці, грудному відділі и сечостатевій системі. такоже під обсяг винаходу підпадають передракові стани або пошкодження і метастази раку. В деяких варіантах здійснення винаходу рак вибирають з групи, що включає нирковоклітинний рак, рак шкіри, рак легені, колоректальний рак, рак молочної залози, рак головного мозку, рак голови и шиї.
Спеціалісту в даній Галузі має буті очевидно, что у багатьох випадкуактивована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, не може забезпечувати зцілення, а може тільки чинити частковий сприятливий вплив. В деяких варіантах здійснення винаходу фізіологічні зміни, які характеризуютьс деякою сприятливою дією, розглядаються також як терапевтично цінні. Таким чином, в деяких варіантах здійснення винаходу кількість активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, яку забезпечує фізіологічну зміну, розглядається як "ефективна кількість" або "терапевтично ефективна кількість". Суб'єкт, пацієнт або індивідуум, який має потребу влікуванні, є, як правило, ссавцем, більш конкретно людиною.
В деяких варіантах здійснення винаходу активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, запропоновану у винаході, вводять в ефективній кількості в клітину. В інших варіантах здійснення винаходу активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т- бо клітини, запропоновану у винаході, вводять в терапевтично ефективній кількості індивідууму для лікування захворювання.
Для попередження або лікування захворювання відповідна доза активованої протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, запропонованої у винаході (при її застосуванні індивідуально або в поєднанні з одним або декількома іншими додатковими терапевтичними засобами), повинна залежати від типу захворювання, що підлягає лікуванню, шляхи введення, ваги тіла пацієнта, типу біспецифічної антигензв'язуючої молекули, що активує Т-клітини, серйозності і перебігу захворювання, від того, чи вводять біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, що активує Т-клітини в превентивних або терапевтичних цілях, попередніх або здійснюваних одночасно терапевтичних втручань, історії захворювання пацієнта і відповіді на активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, і приписи лікуючого лікаря.
Практикуючий спеціаліст, відповідальний за введення, в будь-якому випадку, повинен визначати концентрацію діючоїїих) речовини в композиції і відповідну(ї) дозу(и) для індивідуального пацієнта. Різноманітні схеми введення доз включають (але, не обмежуючись тільки ними) одноразове введення або декілька введень в різноманітні моменти часу, болюсне введення і пульсуючу інфузію.
Активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини можна вводити пацієнту у вигляді однієї обробки або серій обробок. Залежно від типу і серйозності захворювання можлива початкова доза активованої протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини для введення, пацієнту, наприклад, з використанням одного або декількох індивідуальних введень або за допомогою непреривної інфузії, може складати приблизно від 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, 0,1-10 мг/кг). Типова добова доза може складати від приблизно 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше залежно від зазначених вище факторів. Для повторних введень протягом декількох днів або більше тривалого періоду залежно від стану лікування, як правило, має продовжуватись до досягнення потрібного придушення наявних симптомів захворювання.
Як приклад, доза активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини може складати від приблизно 0,005 до приблизно 10 мг/кг. В іншому прикладі (але, не обмежуючись тільки зазначеним) доза на одне введення може складати від приблизно 1, приблизно 5, приблизно 10, приблизно 50, приблизно 100, приблизно 200, приблизно 350, приблизно 500 мкг/кг ваги тіла, приблизно 1, приблизно 5, приблизно 10, приблизно 50, приблизно 100,
Зо приблизно 200, приблизно 350, приблизно 500 до приблизно 1000 мг/кг ваги тіла або більше, і знаходиться в будь-якому зазначеному діапазоні. Як приклади (але, не обмежуючись тільки ними) вказаного діапазону значень, можна вводити від приблизно 5 до приблизно 100 мг/кг ваги тіла, від приблизно 5 мкг/кг ваги тіла до приблизно 500 мг/кг ваги тіла і т.д. із врахуванням вищевказаних рівней доз. Так, пацієнту можна вводити одну або декілька доз, які складають приблизно 0,5, 2,0, 5,0 або 10 мг/кг (або будь-яку їх комбінацію). Вказані дози можна вводити переривчасто, наприклад, щотижня або кожні три тижні (наприклад, Таким чином, щоб пацієнт одержував від приблизно двох до приблизно двадцяти або, наприклад, приблизно шість доз активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини). Можна вводити початкову більш високу ударну дозу, після якої застосовувати одну або декілька більш низьких доз. Проте можна використовувати інші схеми введення доз. Успіх такої терапії легко оцінювати за допомогою загальноприйнятих методик і аналізів.
Активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, запропоновану у винаході, як правило, слід застосовувати в кількості, ефективній для досягнення поставленої цілі. При застосуванні для лікування або попередження хворобливого стану активовані протеазою біспецифічні молекули, які активують Т-клітини, запропоновані у винаході, або їх фармацевтичні композиції, вводять або застосовують в терапевтично ефективній кількості.
Визначення терапевтично ефективної кількості знаходиться в компетенції спеціалістів в даній галузі, насамперед в світлі представленого детального опису винаходу.
Для системного введення терапевтично ефективну дозу можна спочатку визначати за допомогою аналізів іп міго, наприклад, аналізів з використанням клітинних культур. Потім дозу можна включати в форму для вивчення на тваринних моделях для досягнення концентрації в кровотоці, що знаходиться в діапазіне що включає значення ІС5о, визначене на клітинній культурі. Вказану інформацію можна використовувати для більш точного визначення доз, які можна застосовувати на людях.
Початкові дози можна оцінювати також, виходячи з даних, отриманих іп мімо, наприклад, на тваринних моделях, використовуючи методики, добре відомі в даній галузі. Звичайний спеціаліст в даній галузі легко може оптимізувати застосування на людях на основі даних, отриманих на тваринах.
Рівень доз та інтервал можна регулювати індивідуально для одержання рівней в плазмі бо активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, що є достатніми для підтримання терапевтичної дії. Звичайні дози, призначені для введення пацієнту шляхом ін'єкції, складають від приблизно 0,1 до 50 мг/кг/день, як правило, від приблизно 0,5 до 1 мг/кг/день. Для досягнення терапевтично ефективних рівней в плазмі можна вводити декілька доз щодня. Рівні в плазмі можна оцінювати, наприклад, за допомогою РХВР.
У випадках місцевого застосування або вибіркового поглинання ефективна місцева концентрація активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, може не відповідати концентрації в плазмі. Спеціалист в даній галузі може оптимізувати терапевтично ефективні місцеві дози без надмірних експериментів.
Застосування в терапевтично ефективній дозі активованих протеазою біспецифічних молекул, які активують Т-клітини, представлених в даному описі, повинне, як правило, забезпечувати терапевтичну користь, не викликаючи суттєвої токсичності. Токсичність і терапевтичну ефективність активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т- клітини можна визначати за допомогою стандартних фармацевтичних процедур на культурах клітин або експериментальних тварин. Аналізи на клітинних культурах або досліди на тваринах можна застосовувати для визначення значень І Охо (доза, смертельна для 50 95 популяції) і ЕЮво (доза, терапевтично ефективна для 50 95 популяції). Співвідношення доз, що характеризують токсичну і терапевтичну дії, позначають як терапевтичний індекс, який можна виражати у вигляді співвідношення І ЮО5о/ЕЮво. Активовані протеазою біспецифічні молекули, які активують
Т-клітини, що мають високі терапевтичні індекси, є переважними. В одному з варіантів здійснення винаходу активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, запропонована в даному винаході, характеризується високим терапевтичним індексом. Дані, одержані в аналізах з використанням клітинних культур і в дослідах на тваринах, можна застосовувати для визначення діапазону доз, які можна застосовувати на людях. Доза лежить переважно в діапазоні концентрацій в кровотоці, що включають ЕЮО»5о, мають невисоку токсичність або не мають токсичність. Доза може варіюватись залежно від різних факторів, наприклад, від застосовуваної лікарської форми, запо відношенню до шляху введення, стану індивідуума і т.п. Точну препаративну форму, шлях введення і дозу може вибирати індивідуально лікар залежно від стану пацієнта (див., наприклад, Ріпді та ін. в: Те
Ріпаптасоїіодіса! Вавів ої ТНегарешіїсв, гл. 1, 1975, с. 1, публікація повністю включена в даний
Зо опис як посилання).
Лікарю пацієнтів, яким вводять активовані протеазою біспецифічні молекули, що активують
Т-клітини, запропоновані у винаході, має бути очевидно, як і коли закінчувати, переривати або регулювати введення через токсичність, дисфункції органів і т.п. і, навпаки, лікарю має бути очевидно, як регулювати лікування в бік застосування більш високих доз, якщо клінічна відповідь є неадекватною (попереджуючи при цьому токсичність). Величина введеної дози при лікуванні порушення, що представляє інтерес, повинна варіюватись залежно від серйозності стану, що підлягає лікуванню, шляху введення і т.п. Серйозність стану можна, наприклад, оцінювати поміж іншим за допомогою стандартних прогностичних методів оцінки. Крім того, доза і передбачувана частота введення дози повинні також варіюватись залежно від віку, ваги тіла і відповіді індивідуального пацієнта.
Інші засоби та варіанти лікування
Активовані протеазою біспецифічні молекули, які активують Т-клітини, запропоновані у винаході, при лікуванні можна вводити в поєднанні з одним або декількома іншими засобами.
Наприклад, активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, запропоновану у винаході, можна вводити спільно принаймні з одним додатковим терапевтичним засобом.
Поняття "терапевтичний засобів" включає будь-який засіб, який вводять для лікування симптому або захворювання в індивідуума, що має потребу в такому лікуванні. Вказаний додатковий терапевтичний засіб може являти собою будь-яку діючу речовину, яку можна застосовувати при конкретному показанні, що підлягає лікуванню, переважно з додатковими видами активності, які не чинять негативний вплив одна на одну. В деяких варіантах здійснення винаходу додатковий терапевтичний засіб являє собою імуномодулятор, цитостатичний засіб, інгібітор клітинної адгезії, цитотоксичний засіб, активатор клітинного апоптозу або засіб, що підвищує чутливість клітин до індукторів апоптозу. В конкретному варіанті здійснення винаходу додатковий терапевтичний засіб являє собою протираковий засіб, наприклад, агент, що руйнує мікротрубочки, антиметаболіт, інгібітор топоїзомерази, інтеркалятор ДНК, алкілуючий агент, засіб гормональної терапії, інгібітор кіназ, антагоніст рецептора, активатор апоптозу пухлинних клітин або антиангіогенний засіб.
Вказані інші засоби можуть бути присутніми в комбінації в кількостях, ефективних для вказаних цілей. Ефективна кількість вказаних інших засобів залежить від кількості бо застосовуваної активованої протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, типу порушення або лікування, та інших вищевказаних факторів. Активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, як правило, застосовують в таких же дозах і з використанням вказаних в даному описі шляхів введення, або в дозах, які складають приблизно від 1 до 99 95 від вказаних в даному описі доз, або в будь-який дозі і з використанням будь-якого шляху введення, які відповідно до емпіричних/клінічних даних розглядаються як прийнятні.
Зазначені вище комбіновані терапії передбачають спільне введення (коли два або більша кількість терапевтичних засобів включають в одну і ту ж або в окремі композиції) і роздільне введення, в цьому випадку введення активованою протеазою біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини, запропонованої у винаході, можна здійснювати до, одночасно і/або після введення додаткового терапевтичного засобу і/або ад'юванта. Активовані протеазою біспецифічні молекули, які активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна застосовувати також в поєднанні з променевою терапією.
Вироби
Іншим об'єктом винаходу є виріб, який містить продукти, що застосовуються для лікування, попередження і/або діагностування зазначених вище порушень. Виріб являє собою контейнер і етикетку або листівку-вкладиш в упаковку, яка розміщена на контейнері або додаються до нього. Прийнятними контейнерами є, наприклад банки, бульбашки, шприци, пакети для внутрішньовенного (ІМ) розчину і т.д. Контейнери можна виготовляти з різних матеріалів, таких як скло або пластмаса. Контейнер містить композицію, яка сама по собі або в поєднанні з іншою композицією є ефективною для лікування, попередження і/або діагностування стану, і може мати стерильний порт доступу (наприклад, контейнер може являти собою пакет для внутрішньовенного розчину або пляшечку, оснащену пробкою, яку можна проколювати за допомогою голки для підшкірних ін'єкцій). Принаймні одна діюча речовина в композиції являє собою активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, запропоновану у винаході. На етикетці або листівці-вкладиші в упаковку зазначено, що композицію застосовують для лікування вибраного стану. Крім того, виріб може включати (а) перший контейнер з композицією, що знаходиться в ньому, де композиція містить активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, запропоновану у винаході; і (б) другий контейнер з композицією, що знаходиться в ньому, де композиція містить додатковий цитотоксичний або інший терапевтичний засіб. Відповідно до цього варіанта здійснення винаходу виріб може містити листівку" вкладиш в упаковку, яка містить інформацію про те, що композиції можна використовувати для лікування конкретного стану. В альтернативному або додатковому варіанті виріб може додатково включати другий (або третій) контейнер з фармацевтично прийнятним буфером, таким як бактеріостатична вода для ін'єкцій (БСВІ), забуферений фосфатом фізіологічний розчин, розчин Рінгера і розчин декстрози. Крім того, воно може включати інші матеріали, необхідні з комерційної точки зору і з точки зору користувача, зокрема, інші буфери, розчинники, фільтри, голки і шприци.
Приклади варіантів здійснення винаходу 1. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить (а) перший антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СОЮЗ; (б) другий антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені; і (в) маскуючий фрагмент, ковалентно приєднаний до біспецифічної молекули, що зв'язує Т- клітини, через розщеплюваний протеазою лінкер, де маскуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ідіотипом першого або другого антигензв'язуючого фрагмента, тим самим оборотно приховуючи перший або другий антигензв'язуючий фрагмент. 2. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 1, в якій маскуючий фрагмент ковалентно приєднаний до першого антигензв'язуючого фрагмента і оборотно приховує перший антигензв'язуючий фрагмент.
З. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 1 або 2, в якій маскуючий фрагмент ковалентно приєднаний до варіабельної ділянки важкого ланцюга першого антигензв'язуючого фрагмента. 4. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 1 або 2, в якій маскуючий фрагмент ковалентно приєднаний до варіабельної ділянки легкого ланцюга першого антигензв'язуючого фрагмента. 5. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-4, в якій маскуючий фрагмент являє собою антиідіотиповий ве. б. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із бо варіантів здійснення винаходу 2-5, де активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, містить другий маскуючий фрагмент, що оборотно приховує другий антигензв'язуючий фрагмент. 7. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-6, де протеаза експресується клітиною-мішенню. 8. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-7, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу Раб, в якій або варіабельні, або константні ділянки легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Рабр обмінені. 9. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-8, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент являє собою кросовер-молекулу РаБ, в якій константні ділянки легкого ланцюга Рар і важкого ланцюга Рар обмінені. 10. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-9, в якій перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою канонічну молекулу Раб. 11. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-10, що містить не більше одного антигензв'язуючого фрагмента, який має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ. 12. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-11, що містить третій антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені. 13. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 12, в якій третій антигензв'язуючий фрагмент ідентичний другому антигензв'язуючому фрагменту. 14. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-13, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВ1 або НЕНІТ. 15. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-13, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність
Зо специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, обраним з групи, яка складається з Ео!ІВ1,
НЕВТ і мезотеліну. 16. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-13, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, обраним з групи, яка складається з Ео!ІВ1,
НЕВТ, НЕВНАЗ і мезотеліну. 17. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-16, в якій перший і другий антигензв'язуючі фрагменти злиті один з одним необов'язково через пептидний лінкер. 18. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-17, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем важкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента. 19. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-17, в якій перший антигензв'язуючий фрагмент злитий на С- кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Бар іншого антигензв'язуючого фрагмента. 20. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-19, в якій легкий ланцюг Бар першого антигензв'язуючого фрагмента і легкий ланцюг Бар іншого антигензв'язуючого фрагмента злиті один з одним, необов'язково через пептидний лінкер. 21. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-20, додатково що містить Ес-домен, що складається з першої і другої субодиниць, які мають здатність до стабільної асоціації. 22. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 21, в якій Ес-домен являє собою Ес-домен Іда, зокрема, Ідс або Ідса. 23. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 21 або 22, в якій Ес-домен являє собою людський Ес-домен. 24. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 21-23, в якій Гс-домен характеризується зниженою афінністю зв'язування з Ес-рецептором і/або зниженою ефекторною функцією порівняно з нативним Ес- 60 доменом ІдсСі.
25. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 24, в якій Ес-домен містить одну або декілька амінокислотних замін, які знижують зв'язування з Ес-рецептором і/або ефекторну функцію. 26. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 25, в якій вказана() одна або декілька амінокислотна(ї) заміна(ї) знаходиться(яться) в одному або декількох положенні(ях), вибраній(їх) з групи І 234, 1235 і РЗ29 (нумерація за Кеботом). 27. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 26, в якій кожна субодиниця Ес-домену містить три амінокислотні заміни, які знижують зв'язування з активуючим Ес-рецептором і/або ефекторну функцію, де вказані амінокислотні заміни являють собою І 234А, І 235А і РЗ29а. 28. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 24-27, де Ес-рецептор являє собою Есу-рецептор. 29. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 24-28, де ефекторна функція являє собою антитіло-обумовлену клітинозалежну цитотоксичність (АДОСС). 30. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-29, в якій маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
РУБІН (ЗЕО ІО МО: 20); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 МІМТЕТОЕРАМАВОЕКа (5ЕО ІО МО: 21); і (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ РМОМОМІ ОМ (ЗЕО ІО МО: 22). 31. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-30, в якій маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
ВАБКОУЗТОЗММУМІН (ЗЕО ІО МО: 23); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 УМ5МІ ЕБЗ (ЗЕО І МО: 24) і (є) амінокислотну послідовність СОВА І З ОНБВЕЕРМ/Т (ЗЕО ІО МО: 25). 32. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-31, в якій маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
РУБІН (ЗЕО ІО МО: 20); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 МІМТЕТОЕРАМАВОЕКа (5ЕО ІО МО: 21); (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ РМОМОМІ ОМ (ЗЕО ІО МО: 22); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
ВАБКОЗУЗТОЗММУМІН (ЗЕО ІО МО: 23); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 УМ5МІ ЕБЗ (ЗЕО І МО: 24) і (є) амінокислотну послідовність СОВА І З ОНБВЕЕРМ/Т (ЗЕО ІО МО: 25). 33. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-29, в якій маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
ЗУСМУБ5(5ЕО ІЮ МО: 26); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 ПМУ/сравТмМуНзА ІЗ (5ЕО ІО МО: 27); і (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ СІИТТММООММАМОМ (5ЕО І МО: 28). 34. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-29 і 33, в якій маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
ВАБЕМІЮБМІ А (5ЕО І МО: 29); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 ААТЕГ А (ЗЕО ІО МО: 30); і (є) амінокислотну послідовність СОН І З ОНУМТРМТ (ЗЕО ІО МО: 31). 35. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-29 і 33-34, в якій маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: бо (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
ЗУСМУБ5(5ЕО ІЮ МО: 26); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 ПУ/сравТмМуНзА ІЗ (5ЕО ІО МО: 27); (в) амінокислотну послідовність СО! НЗ СІ ТУМОЮММАМОМ (5ЕО ІО МО: 28); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
ВАБЕМІЮБМІ А (5ЕО І МО: 29); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 ААТЕГ А (ЗЕО ІО МО: 30); і (є) амінокислотну послідовність СОН І З ОНУМТРМТ (ЗЕО ІО МО: 31). 36. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-35, в якій маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВ Н) 1 адууїп (ЗЕО ІО МО: 48); (б) амінокислотну послідовність СОВ НО міпразддідупдпікг (ЗЕО ІО МО: 49); і (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ газудіау (ЗЕО ІО МО: 50). 37. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-36, в якій маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
Кавівміпама (ЗЕО ІО МО: 51); (д) амінокислотну послідовність СОВ 12 уазпгпа (ЗЕО ІО МО: 52) і (е) амінокислотну послідовність СОВА І З ддауївррі (ЗЕО ІЮ МО: 53). 38. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-37, в якій маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВ Н) 1 адууїп (ЗЕО ІО МО: 48); (б) амінокислотну послідовність СОВ Не міпразадідупдпікг (ЗЕО ІО МО: 49); (в) амінокислотну послідовність СОМ НЗ газудіду (ЗЕО ІО МО: 50); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
Кавзівміпама (ЗЕО ІО МО: 51); (д) амінокислотну послідовність СОВ 12 уазпгпа (ЗЕО ІО МО: 52) і (е) амінокислотну послідовність СОВА І З ддауївррі (ЗЕО ІЮ МО: 53). 39. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-38, в якій лінкер, розщеплений протеазою, містить принаймні одну розпізнавану протеазою послідовність. 40. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 39, в якій лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність. 41. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 40, в якій розпізнавана протеазою послідовність вибрана з групи, що складається з: (а) КОАКУММО (5ЕО ІО МО: 36); (б) МНМРІ СР ЄРОКЗКОЗЕР (5ЕО І МО: 37); (в) КОАЕУУМОХХХХХМРІ 51 55 (5ЕО ІО МО: 38); і (г) КОАКУММОМРІ 5І У5О (5ЕО І МО: 39); (д) річіма (ЗЕО ІО МО: 40), де Х позначає будь-яку амінокислоту. 42. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 40, в якій розпізнавана протеазою послідовність вибрана з групи, що складається з: (а) КОАКУММО (5ЕО ІО МО: 36); (б) МНМРІ СР ЄРОКЗКОЗЕР (5ЕО І МО: 37); (в) КОАЕУУМОХХХХХМРІ 51 55 (ЗЕО ІЮ МО: 38); (г) КОАКУММОМРІ 5І У5О (5ЕО І МО: 39); (д) річіма (ЗЕО ІО МО: 40); (є) МНМРІ ОРІ СРКОАКУММа (ЗЕО ІЮ МО: 97); (ж) ЕМОаатТа (5ЕО ІЮ МО: 98); (3) ККААРУМа (5ЕО ІО МО: 99); 60 () РМАККУМа (5ЕО ІО МО: 100);
(к) ОАВАКУМа (5ЕО ІО МО: 101); (л) МНМРІ ОБГ ОР (5ЕО ІО МО: 102); (м) ОАВАК (ЗЕО ІО МО: 103); (н) МНМРІ СР аРРМАКК (5ЕО ІО МО: 104); (о) ККААР (ЗЕО ІО МО: 105); і (п) РМАКК (ЗЕО ІО МО: 106), де Х позначає будь-яку амінокислоту. 43. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 39 або 40, в якій лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність ВОААУМУМа (ЗЕО 10 МО: 36). 44. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 39 або 40, в якій лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність МУНМРІ РІ СРАСАВМУММИ (ЗЕО 10 МО:97). 45. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 39 або 40, в якій лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність ВОАВУММО (5ЕО І1О МО: 36) або розпізнавану протеазою послідовність МНМРІ РІ ЯРАСОАНМУММа (ЗЕО ІО МО: 97). 46. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-45, де протеаза вибрана з групи, що складається з металопротеїнази, серинової протеази, цистеїнової протеази, аспарагінової протеази і протеази катепсину. 47. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 46, де металопротеїназа являє собою матричну металопротеїназу (ММР), переважно ММРОУ або ММР2. 48. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за варіантом здійснення винаходу 46, де серинова протеаза являє собою матриптазу. 49. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-48, в якій перший антигензв'язуючий фрагмент містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОВА) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО ІО МО: 45 ії 5ЕО ІО МО: 46, принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 17, БЕО ІЮО МО: 18 і 5ЕО І МО: 19. 50. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-49, в якій перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1 /ТМАММ (ЗЕО ІО МО: 44); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 ВІВЗЕКУМММАТУМАОБУКа (5ЕО І МО: 45) і (в) амінокислотну послідовність СОН НЗ НОаМЕгаМ5ЗМУБМУРАМ (5ЕБЕО ІО МО: 46); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1 аеЗТаАМТТОММУАМ (ЗЕО ІЮ МО: 17); (д) амінокислотну послідовність СОВ 12 СТМКВАР (5ЕО ІО МО: 18); і (є) амінокислотну послідовність СОВ І З АГ М/УЗМІ ММ (ЗЕО І МО: 19). 51. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-50, в якій перший антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності
ЗЕО ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 90, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 55. 52. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-50, в якій перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 55. 53. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-52, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з Рой! і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОН) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 14, 5ЕО ІЮО МО: 15 ії 5ЕО ІО
МО: 16, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибраний з групи: 5ЕО 10 МО: 17, 5ЕО ІО МО: 18 60 і ЗЕО ІЮ МО: 19.
54. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-53, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоІВІ1 і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
МАМ/М5 (ЗЕО ІО МО: 14); б) амінокислотну послідовність СОВА Н2 ВІКОАКТрастТтОМААРМУКОа (ЗЕО ІО МО: 15); і в) амінокислотну послідовність СОН НЗ РМ/ЕМУБМУМОМ (5ЕО ІО МО: 16); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА |) 1 аеЗТаАМТТОММУАМ (ЗЕО ІЮ МО: 17); д) амінокислотну послідовність СОВА 12 ЯТМКААР (5ЕО ІО МО: 18); і е) амінокислотну послідовність СОВА ІЗ АІГМ/М5МІ ММ (5ЕО І МО: 19). 55. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-54, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності
ЗЕО ІЮ МО: 47, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 90, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 55. 56. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-54, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з РОЇВ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 47, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 55. 57. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-52, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з Рой! і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОН) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 151, 5ЕО ІЮ МО: 152 ії 5ЕО Ір
МО: 153, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибраний з групи: 560 10 МО: 154, 5ЕО ІЮ МО: 1551 5ЕО ІО МО: 156. 58. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-52 або 57, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕРоІВІ1 і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
ЗУУМН (5ЕО ІО МО: 151); б) амінокислотну послідовність СОВА Н2 ПМРЗИаСсОеТеМАОКЕОГ (ЗЕО ІЮ МО: 152) ;і в) амінокислотну послідовність СОН НЗ 5ЕЕТОЕНІГ ОМ (5ЕО ІЮ МО 153); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА |) 1
ВАБОБУББЗОМІ А (5ЕО І МО: 154); д) амінокислотну послідовність СОВА І 2 ЧАБЗ5ЗВАТ (5ЕО ІО МО: 155) і е) амінокислотну послідовність СОАВ ІЗ ОСУТМЕНУМТ (5ЕО ІО МО: 156). 59. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-52, 57 або 58, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 в, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 157, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9Уо, 98 95, 99 95 або 100 95
БО амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО: 158. 60. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-52 або 57, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕРоІВ1 і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 157, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО 10 МО: 158. 61. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-52, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном і містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОВА) важкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 107, 5ЕО ІЮ МО: 108 ї 5ЕО Ір 60 МО: 109, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибраний з групи: 56010 МО: 110, 5ЕО ІЮ МО:
1111560 ІО МО: 112. 62. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-52 або 61, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
СМУТММ (ЗЕО ІЮ МО: 107); б) амінокислотну послідовність СОВА Н2 ГПІТРУМИАБЗУМОКЕВИ (ЗЕО ІО МО: 108) і в) амінокислотну послідовність СОВ НЗ СсИСИСМрОавВавомМм (5ЕО ІЮ МО: 109); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА |) 1
ЗАБЗОУЗУМН (ЗЕО ІО МО: 110); д) амінокислотну послідовність СОН 12 ЮОТОКІ АБЗ (ЗЕО ІО МО: 111); і е) амінокислотну послідовність СОВА ІЗ ОСМ/БКНРІ Т (5ЕО ІО МО: 112). 63. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-52, 61 або 62, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 в, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 113, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9Уо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО: 114. 64. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-52 або 61-63, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 113, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 114. 65. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-52, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична
Зо принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності
ЗЕО ІЮ МО: 32, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 90, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 33. 66. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-52 або 65, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з НЕНІ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 115, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО 10 МО: 116. 67. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-48, що містить (а) перший важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність хЕО ІО МО: 2; (б) другий важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 3; і (в) легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ХЕ ІО МО: 1. 68. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-48, що містить (а) перший важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 4; (б) другий важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 3; і (в) легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ХЕ ІО МО: 1. 69. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-48, що містить а) принаймні один важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮО МО: 32; б) принаймні один легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 34. 70. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-48, що містить (а) перший важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 72; (б) другий важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 3; і (в) легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ХЕ ІО МО: 1. 71. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-48, що містить 60 (а) перший важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 85;
(б) другий важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО: 3; і (в) легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ХЕ ІО МО: 1. 72. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-48, що містить (а) перший важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 73; (б) другий важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮО МО: З; (в) перший легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 1; і (г) другий легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 74. 73. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-48, що містить (а) перший важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 77; (б) другий важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 82; (в) перший легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 78; і (г) другий легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 81. 74. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-48, що містить (а) перший важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 76; (б) другий важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО І МО: 77; (в) перший легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 78; і (г) другий легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 79. 75. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-48, що містить (а) перший важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 132; (б) другий важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність хЕО ІО МО: 136; (в) перший легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 81; і (г) другий легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 133. 76. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-48, що містить (а) перший важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність хЕО ІО МО: 137;
Зо (б) другий важкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 139; (в) перший легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 81; і (г) другий легкий ланцюг, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 138. 77. Ідіотипспецифічний поліпептид, призначений для оборотного приховування анти-СОЗ антигензв'язуючого сайта молекули. 78. Ідіотипспецифічний поліпептид за варіантом здійснення винаходу 77, де ідіотипспецифічний поліпептид являє собою антиідіотиповий 5сгЕУ. 79.Ідіотипспецифічний поліпептид за варіантом здійснення винаходу 77 або 78, де ідіотипспецифічний поліпептид ковалентно приєднаний до молекули через лінкер. 80. Ідіотипспецифічний поліпептид за варіантом здійснення винаходу 79, де лінкер являє собою пептидний лінкер. 81. Ідіотипспецифічний поліпептид за варіантом здійснення винаходу 79 або 80, де лінкер являє собою лінкер, розщеплений протеазою. 82. Ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 79-81, де пептидний лінкер містить принаймні один сайт, який розпізнається протеазою. 83. Ідіотипспецифічний поліпептид за варіантом здійснення винаходу 82, де протеаза вибрана з групи, що складається з металопротеїнази, серинової протеази, цистеїнової протеази, аспарагінової протеази і протеази катепсину. 84. Ідіотипспецифічний поліпептид за варіантом здійснення винаходу 83, де металопротеїназа являє собою матричну металопротеїназу (ММР), переважно ММРО або
ММР2. 85.Ідіотипспецифічний поліпептид за варіантом здійснення винаходу 83, де серинова протеаза являє собою матриптазу. 86. Ідіотипспецифічний поліпептид за варіантом здійснення винаходу 82, де лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність ВОАВУУМа (5ЕО 10
МО: 36) або розпізнавану протеазою послідовність МУНМРІ РІ СРВАВОАВМУМУМа (5ЕО І МО: 97). 87. Ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-86, де молекула являє собою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини. 88. Ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-87, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних 60 послідовностей:
(а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
РУБІН (ЗЕО ІО МО: 20); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 МІМТЕТОЕРАМАВОЕКа (5ЕО ІО МО: 21); і (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ РМОМОМІ ОМ (ЗЕО ІО МО: 22). 89. Ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-88, який містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОЯ
ВАБКОЗУЗТОЗММУМІН (ЗЕО ІО МО: 23); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 УМ5МІ ЕБЗ (ЗЕО І МО: 24) і (є) амінокислотну послідовність СОВА І З ОНБВЕЕРМ/Т (ЗЕО ІО МО: 25). 90. Ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-87, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
РУБІН (ЗЕО ІО МО: 20); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 МІМТЕТОЕРАМАВОЕКа (5ЕО ІО МО: 21); (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ РМОМОМІ ОМ (ЗЕО ІО МО: 22); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
ВАБКОЗУЗТОЗММУМІН (ЗЕО ІО МО: 23); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 УМ5МІ ЕБЗ (ЗЕО І МО: 24) і (є) амінокислотну послідовність СОВА І З ОНБВЕЕРМ/Т (ЗЕО ІО МО: 25). 91. Ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-87, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
ЗУСМ5(5ЕО ІЮО МО: 26); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 ПМУ/сравТмМуНзА ІЗ (5ЕО ІО МО: 27); і (в) амінокислотну послідовність СОВА НЗ СІИТТММООММАМОМ (5ЕО І МО: 28). 92. Ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-87 і 91, який містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить принаймні одну з наступних послідовностей: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
ВАБЕМІЮБМІ А (5ЕО І МО: 29); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 ААТЕГ АВ (ЗЕО ІО МО: 30); і (є) амінокислотну послідовність СОН І З ОНУМТРМТ (ЗЕО ІО МО: 31). 93. Ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-87, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВА Н) 1
ЗУСМ5(5ЕО ІЮО МО: 26); (б) амінокислотну послідовність СОВ Н2 ПУ/сравТмМуНзА ІЗ (5ЕО ІО МО: 27); (в) амінокислотну послідовність СО! НЗ СІ ТУМОЮММАМОМ (5ЕО ІЮ МО: 28); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (гу амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОВА І) 1
ВАБЕМІЮБМІ А (5ЕО І МО: 29); (д) амінокислотну послідовність СОН 12 ААТЕГ А (ЗЕО ІО МО: 30); і (є) амінокислотну послідовність СОН І З ОНУМТРМТ (ЗЕО ІО МО: 31). 94. Ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-93, в якому анти-СОЗ антигензв'язуючий сайт містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО І МО: 55. 95. Виділений полінуклеотид, який кодує активовану протеазою що активує Т-клітини біспецифічну антигензв'язуючу молекулу за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-76 або ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-94. 96. Поліпептид, який кодується полінуклеотидом за варіантом здійснення винаходу 95. 97. Вектор, насамперед експресійний вектор, який містить полінуклеотид за варіантом здійснення винаходу 95. 98. Клітина-хазяїн, що містить полінуклеотид за варіантом здійснення винаходу 95 або вектор за варіантом здійснення винаходу 97. бо 99. Спосіб одержання активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-
клітини, що включає стадії, на яких а) культивують клітину-хазяїна за варіантом здійснення винаходу 98 в умовах, придатних для експресії активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, і б) виділяють активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини. 100. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, одержана способом за варіантом здійснення винаходу 99. 101. Спосіб одержання ідіотипспецифічного поліпептиду, що включає стадії, на яких а) культивують клітину-хазяїна за варіантом здійснення винаходу 98 в умовах, придатних для експресії ідіотипспецифічного поліпептиду, і б) виділяють ідіотипспецифічний поліпептид. 102. Ідіотипспецифічний поліпептид, одержаний способом за варіантом здійснення винаходу 101. 103. Фармацевтична композиція, що містить активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-76 і фармацевтично прийнятний носій. 104. Фармацевтична композиція, що містить ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-94 і фармацевтично прийнятний носій. 105. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-76, ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-94 або композиція за варіантом здійснення винаходу 103, призначені для застосування як лікарський засіб. 106. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, призначена для застосування за варіантом здійснення винаходу 105, де лікарський засіб призначений для лікування або уповільнення розвитку раку, лікування або уповільнення розвитку захворювання, пов'язаного з імунною системою, або підвищення або стимуляції імунної відповіді або функції в індивідуума. 107. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-76, ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-94 або композиція за варіантом здійснення винаходу 103, призначені для застосування для лікування захворювання в індивідуума, що потребує цього.
Зо 108. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, або ідіотипспецифічний поліпептид, призначена/призначений для застосування для лікування захворювання в індивідуума, що потребує цього, за варіантом здійснення винаходу 107, де захворювання являє собою рак. 109. Застосування активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-76 або ідіотипспецифічного поліпептиду за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-94 для приготування лікарського засобу. 110. Застосування за варіантом здійснення винаходу 109, в якому захворювання являє собою рак. 111. Спосіб лікування захворювання в індивідуума, що включає введення зазначеному індивідууму в терапевтично ефективній кількості композиції, яка містить активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1- 76, або композиции за варіантом здійснення винаходу 103. 112. Спосіб індукції лізису клітини-мішені, що включає приведення в контакт клітини-мішені з активованою протеазою біспецифічною молекулою, яка активує Т-клітини за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 1-76 або композицією за варіантом здійснення винаходу 103 в присутності Т-клітини. 113. Спосіб за варіантом здійснення винаходу 112, в якому клітина-мішень являє собою ракову клітину. 114. Спосіб за варіантом здійснення винаходу 112 або 113, в якому клітина-мішень експресує протеазу, що має здатність активувати активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини. 115. Антиідіотипове антитіло до СОЗ або його антигензв'язуючий фрагмент, специфічне/специфічно по відношенню до ідіотипу анти-СОЗ антигензв'язуючої молекули, де антиїдіотипове антитіло до СОЗ або його антигензв'язуючий фрагмент при зв'язуванні з анти-
СОЗ антигензв'язуючою молекулою специфічно блокує зв'язування анти-СОЗ антигензв'язуючої молекули з СОЗ. 116. Антиідіотипове антитіло до СОЗ або його антигензв'язуючий фрагмент за варіантом здійснення винаходу 115, де антиідіотипове антитіло до СОЗ або його фрагмент оборотно асоційовані з анти-СОЗ антигензв'язуючою молекулою через пептидний лінкер, що містить сайт, бо який розпізнається протеазою.
117. Антиідіотипове антитіло до СОЗ або його антигензв'язуючий фрагмент за варіантом здійснення винаходу 115 або 116, де СОЗ являє собою мишачий, мавпячий або людський СОЗ. 118. Спосіб знижчення токсичності іп мімо що активує Т-клітини біспецифічної молекули, що включає приєднання ідіотипспецифічного поліпептиду за будь-яким із варіантів здійснення винаходу 77-94 до біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, за допомогою розщеплюваного протеазою лінкера з одержанням активованої протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, при цьому токсичність іп мімо активованою протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, знижується порівняно 3 токсичністю біспецифічної молекули, яка активує Т-клітини. 119. Винахід як він представлений вище в даному описі.
Приклади
Нижче представлені приклади способів і композицій, запропонованих у винаході. Як має бути очевидно, можна здійснювати на практиці різноманітні інші варіанти здійснення винаходу в цілому з врахуванням представленого вище опису винаходу.
Приклад 1
Синтез одновалентних молекул анти-СОЗ да з антиідіотиповим 5сЕм
В даному описі представлені СОЗ-зв'язуючі агенти, які замасковані за допомогою зв'язаного на М-кінці антиїідіотипового СОЗ зем. Ці конструкції включають який розпізнається протеазою сайт, що розпізнається специфічною для пухлини протеазою. В присутності пухлинних клітин, що експресують протеазу, лінкер, який з'єднує маскуючий фрагмент, може розщеплюватись і в результаті цього відновлюється зв'язування СОЗ СОЗ-зв'язуючим агентом. Одержували декілька одновалентних молекул анти-СОЗ ІдС»ь оз різними антиідіотиповими 5сЕмМ, і вони схематично представлені на фіг. 1А-Д під відповідними їм ідентифікаційними (10) номерами.
Одержували наступні молекули:
Ідентифікаційний Ме.7859: одновалентний СОЗ ІЯГ (антиідіотиповий 5сЕм 4.15.64 - сайт матриптази МКОб62-СОЗ злитий на М-кінці з СОЗ Раб - інертний Ес), злитий на М-кінці з анти-СОЗ 5сЕм 4.15.64 і розщеплюваним протеазою лінкером.
Ідентифікаційний Мо.7860: одновалентний СОЗ ІЯГ (антиідіотиповий 5сЕм 4.32.63 - сайт матриптази МКОб62-СОЗ злитий на М-кінці з СОЗ Раб - інертний Ес), злитий на М-кінці з анти-СОЗ
Зо 5сЕм 4.32.63 ії розщеплюваним протеазою лінкером.
Ідентифікаційний Мо 7857: одновалентний СОЗ дГ (антиїдіотиповий 5сЕм 4.15.64 - нерозщеплюваний лінкер - СОЗ - злитий на М-кінці з СОЗ Раб - інертний Ес), злитий на М-кінці з анти-СОЗ 5сЕм 4.15.64 і розщеплюваним протеазою лінкером.
Ідентифікаційний Мо 7858: одновалентний СОЗ дГ (антиїдіотиповий 5сЕм 4.32.63 - нерозщеплюваний лінкер - СОЗ - злитий на М-кінці з СОЗ Раб - інертний Ес), злитий на М-кінці з анти-СОЗ 5сЕм 4.32.63 і розщеплюваним протеазою лінкером.
Ідентифікаційний Мо 7861: одновалентний СОЗ ІЗ9Г (СО3 Раб - інертний Ес), злитий на М-кінці з анти-СОЗ зсЕм 4.15.64/4.32.63 і (розщеплюваним) протеазою лінкером.
Послідовності антиідіотипових (ІЮ) зв'язуючих агентів одержували за допомогою ВАСЕ-ПЛР (ПЛР зі швидкою ампліфікацією кінців кКДНК) з РНК клітин гібридоми. Клітини гібридоми одержували шляхом імунізації мишей Рар-фрагментом СН2г527 (МІ 7-46(13)/МН 3-23(12)).
Синтез послідовності одноланцюгового Ем (5СЕм), включаючи необходні для клонування сайти рестрикції, замовляли на фірмі Іпийгодеп. Порівнювали афінність шести різних антиідіотипових
СН2г527-зв'язуючих агентів (фіг.2, результати Віасоге-аналізу (фірма АС» М. 5спгаті) при 25 70/37 "С (аналіт: МАК«СЕА/СОЗ»Н)), і два з них клонували у вигляді М-кінцевих злиттів на важкому ланцюзі СОЗ Рар-Ес.
ДНК-послідовності анти-ІЮ одноланцюгових Ем субклонували в рамці зчитування з СОЗ МН- ланцюгом, попередньо вбудованим у відповідний експресійний вектор для клітин ссавців, який застосовується як реципієнт. Експресія білка знаходилась під контролем МРОМ-промотора, а на 3-кінці СО5 була присутня синтетична сигнальна поліА-послідовність. Крім того, кожний вектор містив послідовність Оггі? ЕВУ.
Молекули одержували шляхом спільної трансфекції зростаючих в суспензії клітин НЕК293-
ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліетиленіміну (ПЕЇ).
Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами у співвідношенні 1:1: 2 ("Ес "западина" (СН2-СНЗ)": "Загальний легкий ланцюг (СІ С3": "вектор важкого ланцюга з "виступом" (всЕм-МНАСНІ-СН2-СНЗ).
Для трансфекції клітини НЕК293 ЕВМА культивували в безсироватковій культуральному середовищі Ехсеї)Ї, що містить бмМ І -глутамін і 250 мг/л культурального середовища Сс418. Для виробництва висівали в центрифужні флакони місткістю 600 мл (максимальний робочий об'єм бо 400 мл) 800 млн клітин НЕК29З3 ЕВМА за 24 год. до трансфекції без (3418. Для трансфекції 800 млн клітин центрифугували протягом 5 хв при 210х9, і супернатант заміняли 40 мл попередньо нагрітого середовища СО СНО, яка містить бмМ І -глутамін. Експресійні вектори змішували в 40 мл середовища СО СНО, яка містить бмМ І -глутамін, для одержання кінцевої кількості ДНК 400 мкг. После додавання 1080 мкл розчину ПЕЇ (2,7 мкг/мл) суміш інтенсивно перемішували протягом 15 з і потім інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ!, переносили в 600-мілілітровий центрифужний флакон та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері, яка містить 595 СО». Після інкубації додавали 360 мл середовища ЕхсеіІ!4бмМ І -глутамін ж 5 г/л Рерхоуї1,0ММ УРАкЗ г/л глюкози, і клітини культивували протягом 24 год. перед здійсненням підживлення 7 95 ЕРеєд 7.
Після культивування протягом 6-7 днів супернатант збирали для очистки шляхом центрифугування протягом 20-30 хв при 210хг (центрифуга бідта 8К). Розчин стерилізували фільтрацією (фільтр з розміром пор 0,22 мкм) і додавали азид натрію в кінцевій концентрації 0,01 95 (мас./06б.). Розчин зберігали при 4 "С до очистки. Секретований білок очищували з супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії, застосовуючи афінну хроматографію на білку А, з подальшою(ими) однієї або двома стадією(ями) гель-фільтрації.
Для проведення афінної хроматографії супернатант вносили на колонку НіТгтар білок А ЕЕ (СМ (об'єм колонки) - 5 мл, фірма СЕ Неаїйнсагє), врівноважену 25 мл буфера, що містить 20мММ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію, 0,5М хлорид натрію, 0,01 9о Твін-20, рН 7,5. Незв'язаний білок видаляли промиванням, використовуючи об'єм буфера, який дорівнює принаймні 10 об'ємам колонки, що містить 20мММ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію, 0,5М хлорид натрію, 0,01 95 Твін-20, рН 7,5, необхідний білок елюювали, застосовуючи об'єм буфера, що дорівнює 20 об'ємам колонки (градієнт від 0 95 до 100 95), що містить 20мМ цитрат натрію, 0,5М хлорид натрію, 0,01 95 Твін-20, рН 2,5. Розчин білка нейтралізували шляхом додаванням 1/10 2М Трис, рН 10,5. Необхідний білок кінцентрували за допомогою ультра-концентратора АтісопФОПга-15
ШОШтасеї! ЗОК (фірма Мегск Міїйїроге 4.) до об'єма що складає максимум 4 мл, перед завантаженням на колонку Ні оад Супердекс 200 (фірма СЕ Неайнсагє), врівноважену буфером, який містить 20мМ гістидин, 140мМ хлорид натрію, рН 6,0, 0,01 95 Твін-20.
При здійсненні аналізу білка після гель-фільтрації чистоту і молекулярну масу молекул у вигляді одиничних фракцій визначали за допомогою ДСН-ПААГ за відсутності відновлювача і
Зо здійснювали фарбування кумаси (ІпезіапіВіше "М, фірма Ехредеоп). Застосовували систему гелю
МиРАСЕФ Рге-Саві (4-12 95 Біс-Трис, фірма Іпийтодеп або 3-8 95 Трис-ацетату, фірма Іпмігодеп) відповідно до інструкції виробника.
Концентрацію білків в очищених білкових зразках визначали, вимірюючи оптичну густину (ОГ) при 280 нм, здійснюючи ділення на коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності.
Чистоту і молекулярну масу молекул після кінцевої стадії очистки аналізували за допомогою
КЕ-ДСН в присутності відновлювача і без нього. Застосовували систему Саїїрег ГарсСнір ОХІЇ (фірма Саїїрег І Мезсіепсєе) відповідно до інструкції виробника. Вміст агрегатів молекул визначали з використанням колонки для аналітичної гель-фільтрації Т5Кдє! 23000 ЗМУ ХІ (фірма Тозо!), застосовуючи рухомий буфер, який містить 25мММ КаНРО», 125мМ масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./об.) МаМз, рН 6,7 при 25 "С. Кінцева якість всіх молекул виявилась високою із вмістом мономерів 2 92 95.
Таблиця 2
Узагальнені дані про результати одержання і очистки активованих протеазою одновалентних молекул СОЗ ІДИ 72.9 ЇЇ 775 | ща ввяБияю 777
Приклад 2
Розщеплення і стабільність активованих протеазою Їдс
Активовані протеазою молекули ІдСсї аналізували за допомогою капілярного електрофорезу.
Порівняння необробленого зразка і обробленого зразка продемонструвало, що анти-ІЮО 5сЕм повністю відщеплювали після обробки "п-матриптазою/5114 (фірма НО БЗувієтв), про що свідчило зрушення за розміром при аналізі методом ДСН-ПААГ (фіг. 3). Аналіз зразків, які інкубували протягом 48 год. при 37 "С, підтвердив стабільність молекул в буфері для препаративної форми (фіг. ЗА-Г).
Приклад З
Маскуючий ефект антиідіотипового зсЕм по відношенню до СОЗ да
Ефективність маскування СОЗ-зв'язуючого агента шляхом М-кінцевого злиття антиїідіостипового СОЗ 5сЕм продемонстрована за допомогою репортерного аналізу з використанням дитаї-МЕАТ. Репортерні клітини УшиКаї-МЕАТ (лінія репортерних клітин гострого людського лейкозу з регульованою промотором МЕАТ експресією люциферази, СіоВезропзе
УижЖаї МЕАТ-ВЕ-Інс2Р, фірма Рготеда, Ме 05176501) експресують активну люциферазу світляка, якщо промотор МЕАТ активований в результаті зв'язування з СОЗє. Інтенсивність сигналу люмінесценції після додавання субстрату люциферази пропорціональна інтенсивності активації і передачі сигналу СОЗ. Повністю незамасковані одновалентні молекули СОЗ служили як позитивний контроль. Обробку здійснювали за допомогою /п-матриптази/5114 (фірма НО
Зузієтв) протягом 48 год. при 37 "С. В паралельному експерименті для сенсибілізізації 96- лункового (плоского) планшета з білими стінками і прозорим дном (фірма Стгеїпег Віо-Опе) використовували 8 мкг/мл антитіла до людського Ес-домену (фірма ВіоїЇ едепав5) з розрахунку 0,025 мкл/лунку в ЗФР протягом 48 год. при 4 "С. ЗФР видаляли за допомогою піпетки перед додаванням одновалентних Ідсї у вказаному діапазоні концентрацій 200нМ - 2,5б6пМ. Планшети інкубували протягом приблизно 30 хв при 4 "С. Потім репортерні клітини дигКкаЇ-МЕАТ збирали і оцінювали життєздатність за допомогою пристрою УіСеї). Клітини ресуспендували в середовищі
Уижаї (АВРМІ1Т640, 2 г/л глюкози, 2 г/л МаНСОз, 1095 ЕС5, 25мММ НЕРЕ5, 2мМ І -глутамін, 1ТХхМЕАА, 1 хпіруват натрію) без гігроміцину і додавали 100 мкл на лунку (25000 клітин/лунку) к перехресно зшитим одновалентним СОЗ Ідсї. Клітини інкубували протягом З год. при 37 "С у вологій камері. Планшети вилучали з інкубатора приблизно за 10 хв до зчитування люмінесценції для адаптації др кімнатній температурі. Додавали 100 мкл/лунку розчину ОМЕ-
Сіо (1:11 об./о06. ОМЕ-Сіо і середовища для аналізу на лунку) в лунки та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі в темряві. Визначення люмінесценції здійснювали за допомогою ридера УА АС МісіогЗ ЕГПІЗА (РегкіпЕІтег2030), тривалість детекції 1 лунки складала 1 с. Для
Зо молекул 7857 (маскування за допомогою конструкції 4.15.64 з нерозщеплюваним лінкером) і 7859 (необроблена) обнаружено суттєво снижченноє зв'язування з СОЗє порівняно з незамаскованою (7861) і попередньо обробленої молекулою (7859, оброблена) (фіг. 4А).
Молекулу 7760 включали як контроль для демонстраціх того, що М-кінцеве зв'язування не блокувало зв'язування самого СОЮЗ. Для молекул 7858 (маскування за допомогою конструкції 4.32.63 з нерозщеплюваним лінкером) і 7860 (необроблена) виявлене суттєво знижене зв'язування з СОЗє порівняно з незамаскованої (7861) і попередньо обробленої молекулою (7860, оброблена) (фіг. 4Б). Відповідно до результатів оцінки афінності антиідіотипових СОЗ- зв'язуючих агентів маскування за допомогою конструкції 4.32.63 була суттєво більш ефективною, ніж за допомогою 4.15.64. На основі величин ЕСбзо (фіг. 48) можна вважати, що замаскований 4.32.63 СОЗ-зв'язуючий агент зв'язувався в 54 рази слабкіше, ніж незамаскований
СОЗ-зв'язуючий агент 7861. Масування за допомогою 4.15.64 знижувало зв'язування лише в 16 разів менше порівняно з 7861. Залежно від пухлини-мішені і цільового зв'язуючого агента можна визначати найбільш ефективний маскуючий агент.
Приклад 4
Одержання анти-ЕоІВ1/анти-СОЗ активуючих Т-клітини біспецифічних (ТОВ) молекул з анти-
СОЗ 5сЕм
Одержували декілька активуючих Т-клітини біспецифічних молекул (ТОВ) з різними антиідіотиповими 5сЕм, і вони схематично представлені на фіг. БА-3 под відповідними /0- номерами. Одержували наступні молекули:
І07344: Боїй1 1605 2-41 Ід, класичний формат (антиідіотиповий 5сЕм 4.15.64 - сайт матриптази МКОб2-СО3 злитий на М-кінці з Ро!В1 МН - інертний Ес), зі злитим на М-кінці анти-
СОЗ 5еЕм 4.15.64 і (розщеплюваним) протеазою лінкером (фіг. БА, 5ЕО ІЮО МО: 1, 2 і 3).
І07496: Боїй1 1605 2-41 Ід, класичний формат (антиідіотиповий 5сЕм 4.32.63 - сайт матриптази МКОб2-СО3 злитий на М-кінці з Ро!В1 МН - інертний Ес), зі злитим на М-кінці анти-
СОЗ 5еЕм 4.32.63 і (розщеплюваним) протеазою лінкером (фіг. 58, 5ЕО ІО МО: 1, З і 4).
І07676: Боїй1 1605 2-41 Ід, класичний формат (антиідіотиповий 5сЕм 4.15.64 - сайт матриптази МКОб2 - нерозщеплюваний Ссі5-лінкер- СОЗ злитий на М-кінці з ГоЇВ1 МН - інертний
Ес), зі злитим на М-кінці анти-СОЗ 5сЕм 4.15.64 і (розщеплюваним) протеазою лінкером (фіг. 5Б,
ЗЕОІО МО: 1, З і 6). бо І07611: Боїв1 1605 241 дб, класичний формат (антиїдіотиповий 5сЕм 44.32.63 -
нерозщеплюваний (15-лінкер - СОЗ злитий на М-кінці з РОЇВ МН - інертний Ес), зі злитим на М- кінці анти-СОЗ зсЕм 4.32.63 і (розщеплюваним) протеазою лінкером (фіг. 5Г, БЕО ІО МО: 1, З і 5).
Послідовності антиідіотипових (ІЮ) зв'язуючих агентів одержували за допомогою ВАСЕ-ПЛР (ПЛР із швидкою ампліфікацією кінців кКДНК) з РНК клітин гібридоми. Клітини гібридоми одержували шляхом імунізації мишей Рар-фрагментом СН2г527 (МІ 7-46(13)/МН 3-23(12)).
Синтез послідовності одноланцюгового Ем (5СЕм), включаючи необхідні для клонування сайти рестрикції, замовляли на фірмі Іпмігодеп. Порівнювали афінності шести різних антиідіотипових
СН2г527-зв'язуючих агентів (фіг.2, результати Віасоге-аналізу (фірма АС» М. 5спгаті) при 25 70/37 "С (аналіт: МАК«СЕА/СОЗ»Н)), і чотири з них клонували у вигляді М-кінцівих зливань на НС СО3-ЕоІВ1 1605 ТОВ.
ДНК-послідовності анти-ІЮ одноланцюгових Ем субклонували в рамці зчитування з СОЗ МН- ланцюга, попередньо вбудованої у відповідний застосовний як реципієнт експресійний вектор для клітин ссавців. Експресія білка знаходилась під контролем МРОМ-промотора, а на 3'-кінці
СО5 була присутня синтетична сигнальна поліА-послідовність. Крім того, кожний вектор містив послідовність Оггі? ЕВУ.
Молекули одержували шляхом спільної трансфекції зростаючих в суспензії клітин НЕК293-
ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліетиленіміну (ПЕЇ).
Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами у співвідношенні 1: 3: 2 ("вектор важкого ланцюга з "западиною" (МНА-СНІ-СН2-СНЗ)У": "Загальний легкий ланцюг (СІ С3" "вектор важкого ланцюга з "виступом" (зсЕМ-МН-СНІ-УН-СНІ-СН2-СНЗ)".
Для трансфекції клітини НЕК293 ЕВМА культивували в безсироватковій культуральному середовищі Ехсеїї, яке містить бмМ І -глутамін і 250 мг/л культурального середовища (1418. Для виробництва висівали в центрифужні флакони місткістю 600 мл (максимальний робочий об'єм 400 мл) 800 млн клітин НЕК29З3 ЕВМА за 24 год. до трансфекції без (3418. Для трансфекції 800 млн клітин центрифугували протягом 5 хв при 210х9, і супернатант заміняли 40 мл попередньо нагрітого середовища СО СНО, яке містить бмМ І -глутамін. Експресійні вектори змішували в 40 мл середовища СО СНО, яке містить бмМ І -глутамін, для одержання кінцевої кількості ДНК 400 мкг. Після додавання 1080 мкл розчину ПЕ! (2,7 мкг/мл) суміш інтенсивно перемішували протягом 15 з і потім інкубували протягом 10 хв при кімнатній температури. Потім клітини
Зо змішували з розчином ДНК/ПЕ!Ї, переносили в б0О-мілілітровий центрифужний флакон та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері, яка містить 595 СО». Після інкубації додавали 320 мл середовища ЕхсеіІ!4бмМ І -глутамін ж 5 г/л Рерхоуї1,0ММ УРАкЗ г/л глюкози, і клітини культивували протягом 24 год. перед здійсненням підживлення 7 95 ЕРеєд 7.
После культивування протягом 6-7 днів супернатант збирали для очистки шляхом центрифугування протягом 20-30 хв при 210хг (центрифуга бідта 8К). Розчин стерилізували фільтрацією (фільтр з розміром пор 0,22 мкм) і додавали азид натрію в кінцевій концентрації 0,01 95 (мас./об.). Розчин зберігали при 4 "С до очистки. Секретований білок очищували із супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії, застосовуючи афінну хроматографію на білку А, з подальшою(ими) однією або двома стадією(ями) гель-фільтрації.
Для проведеням афінної хроматографії супернатант вносили на колонку НіТгар білок А ЕЕ (СМУ-5 мл, фірма СЕ Неайнсаге), врівноважену 25 мл буфера, що містить 20мМ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію, 0,5М хлорид натрію, 0,01 95 Твін-20, рН 7,5. Незв'язаний білок видаляли промиванням, використовуючи об'єм буфера, що дорівнює принаймні 10 об'ємам колонки, що містить 20мМ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію, 0,5М хлорид натрію, 0,01 95 Твін-20О, рН 7,5, необхідний білок елюювали, застосовуючи об'єм буфера, що дорівнює 20 об'ємам колонки (градієнт від 0 95 до 100 95), що містить 20мМ цитрат натрію, 0,5М хлорид натрію, 0,01 95 Твін- 20, рН 2,5. Розчин білка нейтралізували шляхом додавання 1/10 2М Трис, рН 10,5. Необхідний білок коцентрували за допомогою ультра-концентратора АтісопебОйга-15 Ойгасе! ЗОК (фірма
Метгск МіПроге ЦЯ.) до об'єма, що складає максимум 4 мл, перед завантаженням на колонку
Ніоай Супердекс 200 (фірма СЕ Неайнсагє), врівноважену буфером, який містить 20мММ гістидин, 140мМ хлорид натрію, рН 6,0, 0,01 95 Твин-20.
При здійсненні аналізу білка після гель-фільтрації визначали чистоту і молекулярну масу молекул у вигляді одиничних фракцій за допомогою ДСН-ПААГ за відсутності відновлювача і здійснювали фарбування кумаси (ІпезіапіВіше "М, фірма Ехредеоп). Застосовували систему гелю
МиРАСЕФ Рге-Саві (4-12 95 Бис-Трис, фірма Іпийгодеп або 3-8 95 Трис-ацетату, фірма Іпийгодеп) відповідно до інструкції виробника.
Концентрацію білків в очищених білкових зразках визначали, вимірюючи оптичну густину (ОР) при 280 нм їі здійснюючи ділення на коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. бо Чистоту і молекулярну масу молекул після кінцевої стадії очистки аналізували за допомогою
КЕ-ДСН в присутності відновлювача і без нього. Застосовували систему Саїїрег ГарсСнір ОХІЇ (фірма Саїрег І Гезсієпсе) відповідно до інструкції виробника.
Вміст агрегатів молекул визначали з використанням колонки для аналітичної гель-фільтрації
ТеКаєї п3000 5МУ ХІ. (фірма Тозо!), застосовуючи рухомий буфер, який містить 25мМ КеНРО», 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./об.) МаМз, рН 6,7 при 2576.
Кінцева якість всіх молекул виявилась високою із вмістом мономерів 2 92 95.
Таблиця 2
Узагальнені дані про результати одержання і очистки активованих протеазою одновалентних молекул СОЗ ІДИ
Приклад 5
Короткочасна експресія активованих протеазою ТОВ
Порівнювали методом гель-фільтрації різноманітні співвідношення плазмід, застосованих для трансфекції, оскільки очикувалось, що ланцюг, який містить "виступ", повинен експресуватись з більш низькими рівнями порівняно з ланцюгом, який містить "западину", і легким ланцюгом. Як продемонстровано На фіг. 6 і 7, застосування плазмід у співвідношенні 1 ("западина"): 2 ("виступ): З (СІ С) (фіг. 7) замість 1 ("западина"): 1 ("виступ"): З (СІ С) (фіг. б) підвищувало вихід правильної молекули (лівий пік) і знижувало кількість гомодимерів типу "западина"-"западина" (правий пік).
Приклад 6
Розщеплення і стабільність активованої протеазою ТОВ
Активовані протеазою ТОВ аналізували за допомогою капілярного електрофорезу.
Порівняння необробленого зразка і обробленого зразка продемонстувало, що анти-ІЮ 5сЕм повністю відщеплювали після обробки гп-матриптазою/5114 (фірма На 5Бувзієтв). Аналіз зразків, які інкубували протягом 48 год. при 37 "С, підтвердив стабільність молекул в буфері для препаративної форми (фіг.12А-Г).
Приклад 7 цитоліз клітин при використанні клітинних ліній, які експресують різноманітні рівні Го!А1
Опосередкований Т-клітинами цитоліз клітин, індукований активованими протеазою ТСВ- молекулами, оцінювали з використанням ліній клітин-мішеней, що експресують різноманітні рівні ГоІйВ1 (фіг. 13). Людські РВМО застосовували як ефекторних клітин, і цитоліз клітин
Зо визначали після інкубації протягом 48 год. з активованими протеазою ТОСВ-молекулами.
Мононуклеарні клітини периферійної крові (РВМС) людини виділяли з свіжеодержаних зразків крові або з лейкоцитарних плівок, які одержували із здорових донорів. При використанні свіжої, для одержання застосовували 50-мілілітрові пробірки Іейсозер (фірма СтгеєїпегВіоОпе). При використанні збагачених лімфоцитами препаратів (лейкоцитарні плівки) для одержання застосовували градієнт густини Нівіорадие-1077. Кров/лейкоцитарну плівку розводили в співвідношенні 1:11 стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Нізіорадие (фірма 5ідта,
МонНВ8г889). Після центрифугування (450х4д, 30 хв, без перерви, кімнатна температура) плазму, що знаходиться над інтерфазою, яка містить РВМС, відкидали і РВМСОС переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400х9, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали і дебрис РВМСО ресуспендували в 2 мл АСК- буфера для лізису еритроцитів. Після інкубації при 37 "С протягом приблизно 2-3 хв пробірки заповнювали стерильним ЗФР до 50 мл і центрифугували при 350х9 протягом 10 хв. Вказану стадію промивання повторювали одноразово перед ресуспендуванням РВМСО в середовищі
ВРМІ1640, що містить 2 95 ЕС5 і їх СішаМах, при 37 "С, 595 СО» в інкубаторі для клітин для подальшого застосування. В цілому, метод полягав у наступному: прикріплені клітини-мішені збирали за допомогою трипсину/ЕДТА, підраховували, перевіряли життєздатність |і ресуспендували з розрахунку 0,4 х109 клітин/мл в середовищі для аналізу (ВРМІ1640, 2 95 ЕС5, 1хбіІшамах). Клітини-мішені висіювали з густиною 20000 клітин/лунку в круглодонні 96-лункові планшети. Для аналізу цитолізу молекули додавали у вказаних концентраціях в трьох повторностях. Го!В1 1605 ТОВ включали як позитивний контроль, а "ненацілену" ТОВ-молекулу
(яка зв'язується з СОЮЗ, але не з антигеном клітини-мішені) включали як негативний контроль.
РВМС додавали до клітин-мішеней в кінцевому співвідношенні Е:Т 10:1. цитоліз клітин-мішеней оцінювали після інкубації протягом 48 год. при 37 "С, 595 СО» шляхом кількісного аналізу вивільнення ЛДГ в клітинні супернатанти апоптозними/некротичними клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма Носпе Арріїєд Зсієпсе, Мо 11644793001). Максимальний лізис клітин- мішеней (- 100 95) досягався при інкубації клітин-мішеней в присутності 1 95 Тритону Х-100 протягом 1 год. до визначення ЛДГ. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без будь-якої ТОВ.
Результати (фіг. 14А, 15А, 16, 17, 18А, 19А і 20А) продемонстрували, що активовані протеазою ТОВ з антиїдіотиповим СОЗ 5сЕм-фрагментом, зв'язаним на М-кінці за допомогою нерозщеплюваного лінкера (Ме 7676 і Мо 7611, фіг. 5Б і Г відповідно), мали здатність суттєво знижувати клітинний цитоліз клітин ліній 5Ком3З і НТ29. конструкція Мо 7611 (фіг. 5Г) забезпечувала знижений цитоліз клітин Неіа, проте антиїідіотиповий СОЗ 5сЕм 4.15.64 в конструкції Мо 7676 (фіг. 5Б) виявився менш ефективним по відношенню до зниження цитолізу клітин. Це узгоджується з афінностями антиіїдіотипового М-кінцевого фрагмента СОЗ зсЕм. 5сЕм- фрагмент, що має більш висок афінність, забезпечував більш ефективне маскування.
Порівнювана ефективність оброблених і необроблених ТОВ дозволяє припустити наявність експресії матриптази на клітинах Неї а і 5коу3. Ймовірно, рівень експресії матриптази нижче в клітинах НТ29. Обробка МКп-45, негативною за ЕоіІВІ1 клітинної лінії, продемонструвала, що при використанні всіх застосовних в даному описі молекул цитоліз був дуже слабким (фіг. 15А).
Приклад 8
Т-клітинна активація після спільної інкубації ліній пухлинних клітин з людськими РВМСО
Т-клітинну активацію, опосередковану активованими протеазою ТОСВ-молекулами, оцінювали з використанням клітин Неїа, 5Ком3 і НТ29. Людські РВМО застосовували як ефекторних клітин і активацію Т-клітин визначали після інкубації протягом 48 год. з клітинами- мішенями і антитілами. Клітини-мішені висіювали з густиною 20000 клітин/лунку в круглодонні 9б-лункові планшети. Молекули додавали у вказаних концентраціях в трьох повторностях.
ЕоІйї 1605 ТОВ включали як позитивний контроль, а "ненацілену" ТОВ-молекулу (яка зв'язується з СОЮЗ, але не з антигеном клітини-мішені) включали як негативний контроль. РВМС додавали до клітин-мішеней в кінцевому співвідношенні ЕТ 10:1. Т-клітинну активацію оцінювали після інкубації протягом 48 год. при 37 "С, 595 СО» шляхом кількісного визначення
СбОр25 ії 6069 на СО4-позитивних і СО8-позитивних Т-клітинах. Результати оцінки Т-клітинної активації узгоджуються з результатами, одержаними в попередньому прикладі, в якому оцінювали цитоліз клітин-мішеней (Приклад 7).
Приклад 9
Т-клітинна активація, опосередкована активованими протеазою ТСВ і лініями клітин- мішеней, які експресують низькі рівні антигена
Т-клітинну активацію, опосередковану активованими протеазою ТОСВ-молекулами, оцінювали з використанням клітин НТ29, які експресують лише низькі рівні Бо!А1 (фіг. 13).
Людські РВМС, виділені з лейкоцитарної плівки, застосовували як ефекторних клітин. При використанні збагачених лімфоцитами препаратів (лейкоцитарні плівки) для одержання застосовували градієнт густини Нівіорадие-1077. Лейкоцитарну плівку розводили в співвідношенні 1:11 стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Нізіорадие (фірма 5ідта,
МонНВ8г889). Після центрифугування (450хд, 30 хв, без перерви, кімнатна температура) плазму, що знаходиться над інтерфазою, яка містить РВМС, відкидали і РВМСОС переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400х9, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали і дебрис РВМСО ресуспендували в 2 мл АСК- буфера для лізису еритроцитів. Після інкубації при 37 "С протягом приблизно 2-3 хв пробірки заповнювали стерильним ЗФР до 50 мл і центрифугували при 350х9 протягом 10 хв. Вказану стадію промивання повторювали одноразово перед ресуспендуванням РВМСО в середовищі
ВРМІ1640, що містить 2 95 ЕС5 і їх СішаМах, при 37 "С, 595 СО» в інкубаторі для клітин для подальшого застосування. В цілому, метод полягав у наступному: прикріплені клітини-мішені збирали за допомогою трипсину/ЕДТА, підраховували, перевіряли життєздатність |і ресуспендували з розрахунку 0,4 х105 клітин/мл в середовищі для аналізу (ВРМІ1640, 2 95 ЕС5, 1хбіІшамах). Клітини-мішені висіювали з густиною 20000 клітин/лунку в круглодонні 96-лункові планшети. Молекули додавали у вказаних концентраціях в трьох повторностях. БОЇВ 1605 ТОВ включали як позитивний контроль, а "ненацілену" ТОВ-молекулу (яка зв'язується з СОЗ, але не з антигеном клітини-мішені) включали як негативний контроль. РВМС додавали до клітин- мішеней в кінцевому співвідношенні Е:Т 10:1. Т-клітинну активацію оцінювали після інкубації 60 протягом 48 год. при 37 "С, 595 СО» шляхом кількісного визначення СО25 і СО69 на СОА-
позитивних і СО8-позитивних Т-клітинах. Ефективність обробленої активованою протеазою ТОВ виявилась зіставною з ефективність 1605 ТОВ (6298). Ефективність 1605 ТОВ (інвертований формат)) виявилась більше високій порівняно з класичним форматом. "Замасковані" ТОВ з нерозщеплюваним лінкером або без попередньої обробки матриптазою не індукували Т- клітинну активацію при використанні вказаній клітинної лінії. Для клітинних ліній з низьким або помірним рівнями експресії Рой! обидва антиїідіотипові 5сЕм забезпечували достатнє маскування СОЗ Раб (фіг. 22А і Б).
Приклад 10
Т-клітинна активація, опосередкована активованими протеазою ТСВ, при використанні первинної клітинної лінії НАСЕ ріс
Т-клітинну активацію, опосередковану активованими протеазою ТСВ- молекулами, оцінювали з використанням первинних епітеліальних клітин кіркової речовини нирок людини (фірма бсіеєпсеСеїІ), які експресують лише дуже незначні кількості Ро!В1 (фіг. 13). Людські
РВМС, виділені з лейкоцитарної плівки, застосовували як ефекторних клітин. При використанні збагачених лімфоцитами препаратів (лейкоцитарні плівки) для одержання застосовували градієнт густини Нівіорадие-1077. Лейкоцитарну плівку розводили в співвідношенні 1:1 стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Нівіорадие (фірма бідта, МоН8889). Після центрифугування (450хд9, 30 хв, без перерви, кімнатна температура) плазму, що знаходиться над інтерфазою, яка містить РВМС, відкидали і РВМСОС переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400х9, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали і дебрис РВМСО ресуспендували в 2 мл АСК-буфера для лізису еритроцитів. Після інкубації при 37 "С протягом приблизно 2-3 хв пробірки заповнювали стерильним ЗФР до 50 мл і центрифугували при 350хд протягом 10 хв. Вказану стадію промивання повторювали одноразово перед ресуспендуванням РВМС в середовищі АРМІ1640, що містить 2 95 ЕС5 і 1х СішамМах, при 37 "С, 5 95 СО» в інкубаторі для клітин для подальшого застосування. В цілому, метод полягав у наступному: прикріплені клітини-мішені збирали за допомогою трипсину/ЕДТА, підраховували, перевіряли життєздатність і ресуспендували з розрахунку 0,4 х105 клітин/мл в середовищі для аналізу (ВРМІ1640, 2 95 РС5, 1хСІШшамах).
Клітини-мішені висіювали з густиною 20000 клітин/лунку в круглодонні 96-лункові планшети.
Зо Молекули додавали у вказаних концентраціях в трьох повторностях. БОЇВ! 1605 ТОВ включали як позитивний контроль, а "ненацілену" ТОВ-молекулу (яка зв'язується з СОЗ, але не з антигеном клітини-мішені) включали як негативний контроль. РВМСОС додавали до клітин- мішеней в кінцевому співвідношенні Е:Т 10:1. Т-клітинну активацію оцінювали після інкубації протягом 48 год. при 37 "С, 595 СО» шляхом кількісного визначення СО25 і СО69 на СОА- позитивних і СО8-позитивних Т-клітинах. "Замаскована" 1605 ТОВ не індукувала Т-клітинну активацію при інкубації з первинними епітеліальними клітинами кіркової речовини нирок людини, незважаючи на низький рівень експресії РоІВ1, при найбільш високій концентрації 10000пМ ТОВ, що демонструє ефективність антиідіотипового маскуючого фрагмента. Невелику активацію Т-клітин вдалось виявити для 1605 ТОВ (інвертований і класичний формат) (фіг. 23).
Приклад 11 анти-ІЮ СОЗ Раб, маскуючий СОЗ-зв'язуючий агент молекули 1605 ТОВ. цитоліз клітин
ОкмсагЗ
Опосередкований Т-клітинами цитоліз клітин-мішеней, викликаний активованими протеазою
ТОСВ-молекулами, оцінювали з використанням клітин ОМСАНЗ (фіг. 24). Людські РВМС застосовували як ефекторних клітин, і цитоліз клітин визначали після інкубації протягом 48 год. з молекулами. Мононуклеарні клітини периферійної крові (РВМОС) людини виділяли з свіжеодержаних зразків крові здорового донора. Для одержання застосовували 50-мілілітрові пробірки І еисозер (фірма СтеєіпегВіоОпе). Кров розводили в співвідношенні 1:1 стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Нізіорадиє (фірма бідта, МеН8889). Після центрифугування (450х9, 30 хв, без перерви, кімнатна температура) плазму, що знаходиться над інтерфазою, яка містить
РВМС, відкидали і РВМСО переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400х9, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали і дебрис РВМСО ресуспендували в 2 мл АСК-буфера для лізису еритроцитів. Після інкубації при 37 "С протягом приблизно 2-3 хв пробірки заповнювали стерильним ЗФР до 50 мл і центрифугували при 350хд протягом 10 хв. Вказану стадію промивання повторювали одноразово перед ресуспендуванням РВМС в середовищі АРМІ1640, що містить 2 95 ЕСЗ5 і їх
СіІшамах, при 37 "С, 595 СО» в інкубаторі для клітин для подальшого застосування. В цілому, метод полягав у наступному: прикріплені клітини-мішені збирали за допомогою трипсину/ЕДТА, підраховували, перевіряли життєздатність і ресуспендували з розрахунку 0,4 х106 клітин/мл в бо середовищі для аналізу (АРМІ1640, 2 906 ЕС5, 1хбіІшамах). Клітини-мішені висіювали з густиною
20000 клітин/лунку в круглодонні 96-лункові планшети. Для аналізу цитолізу молекули додавали у вказаних концентраціях в трьох повторностях. БОЇВ! 1605 ТОВ включали як позитивний контроль, а "ненацілену" ТОВ-молекулу (яка зв'язується з СОЗ, але не з антигеном клітини- мішені) включали як негативний контроль. РВМО додавали до клітин-мішеней в кінцевому співвідношенні Е:Т 1071. цитоліз клітин-мішеней оцінювали після інкубації протягом 48 год. при 37"С, 595 бО2 шляхом кількісного аналізу вивільнення ЛДГ в клітинні супернатанти апоптозними/некротичними клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма Косне Арріїєд 5сіепсе,
Мо 11644793001). Максимальний лізис клітин-мішеней (- 100 95) досягався при інкубації клітин- мішеней в присутності 1 96 Тритону Х-100 протягом 1 год. до визначення ЛДГ. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без будь-якої ТОВ. Результати (фіг. 24) продемонстрували, що в активованій протеазою ТОВ з антиїдістиповим СОЗ 4.15.64, схрещений Бар, зв'язаний на М-кінці за допомогою нерозщеплюваного лінкера, не забезпечується істотна маскування СОЗ-зв'язуючого агента.
Крім того, встановлено, що клітини Оусаг3, ймовірно, експресують матриптазу, оскільки необроблена молекула також індукувала цитоліз вказаних клітин.
Приклад 12
Цитоліз клітин 5КоУЗ і Неї а з використанням людськими РВМО з трьох різних донорів
Цитоліз Т-клітинами, опосередкований активованими протеазою ТСВ- молекулами, оцінювали з використанням двох різних клітинних ліній, які експресували різноманітні рівні
ЕоІВ1 (фіг. 25-27). Людські РВМО застосовували як ефекторних клітин, і цитоліз клітин визначали після інкубації протягом 48 год. з молекулами. Мононуклеарні клітини периферійної крові (РВМС) людини виділяли з лейкоцитарних плівок, які одержували із здорових донорів. При використанні збагачених лімфоцитами препаратів (лейкоцитарні плівки) для одержання застосовували градієнт густини Нівіорадие-1077. Кров/Лейкоцитарну плівку розводили в співвідношенні 1:11 стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Нібіорадиє (фірма бідта, Мо
Н8Вг889). Після центрифугування (450хо9, 30 хв, без перерви, кімнатна температура) плазму, що знаходиться над інтерфазою, яка містить РВМС, відкидали і РВМС переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400х9, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали і дебрис РВМСО ресуспендували в 2 мл АСК-
Зо буфера для лізису еритроцитів. Після інкубації при 37 "С протягом приблизно 2-3 хв пробірки заповнювали стерильним ЗФР до 50 мл і центрифугували при 350х9 протягом 10 хв. Вказану стадію промивання повторювали одноразово перед ресуспендуванням РВМСО в середовищі
АРМІ1640, що містить 2 95 ЕС5 і 1х СішамМах і 10 95 ДМСО. РВМС заморожували протягом ночі при -80 "С в камерах для охолодження клітин (Соо1! Сеї! Бох) до їх перенесення в рідкий азот. За 24 год. до початку аналізу РВМС піддавали відтаванню і витримували в середовищі ВРМІ1640, що містить 10 95 ЕС5 і їх Сішамах, при 37 "С, 595 СО» в інкубаторі для клітин. За 1 день до початку аналізу прикріплені клітини-мішені збирали за допомогою трипсину/ЕДТА, підраховували, перевіряли життєздатність і ресуспендували з розрахунку 0,4х105 клітин/мл у відповідному середовищі. Клітини-мішені висіювали з густиною 20000 клітин/лунку в плоскодонні 96-лункові планшети. За 1 день до початку аналізу підраховували кількість РВМС і перевіряли їх життєздатність. РВМО центрифугували при 350х9 протягом 5 хв і ресуспендували в середовищі для аналізу (АРМІ1640, 295 ЕС5, їх Сішамах). Середовище клітин-мішеней видаляли і додавали РВМС до клітин-мішеней перед додаванням розведених антитіл у вказаних концентраціях в трьох повторностях. Бої! 1605 ТОВ включали як позитивний контроль, а "ненацілену" ТОВ-молекулу (яка зв'язується з СОЗ, але не з антигеном клітини- мішені) включали як негативний контроль. РВМО додавали до клітин-мішеней в кінцевому співвідношенні Е:Т 10:11. цитоліз клітин-мішеней оцінювали після інкубації протягом 48 год. при 37"С, 595 бО2 шляхом кількісного аналізу вивільнення ЛДГ в клітинні супернатанти апоптозними/некротичними клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма Косне Арріїєд 5сіепсе,
Мо 11644793001). Максимальний лізис клітин-мішеней (- 100 95) досягався при інкубації клітин- мішеней в присутності 1 96 Тритону Х-100 протягом 2 год. до визначення ЛДГ. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без будь-якої ТОВ.
Результати (фіг. 25-27) продемонстрували, що РоІВ! ТОВ з зсЕм 4.32.63, зв'язаним на М- кінці за допомогою нерозщеплюваного лінкера (фіг. 5Г), індукувала знижений цитоліз клітин
Неїа в концентрації 100пМ і клітин 5КоУЗ в концентрації 1ОнМ. Роїйї! ТОВ з 5сЕм 4.15.64, зв'язаним на М-кінці за допомогою нерозщеплюваного лінкера (фіг. 5Б), була менш ефективною по відношенню до зниження цитолізу клітин 5КоуЗ в концентрації ТОнНМ. Встановлено, що більше сильне маскування, яке забезпечується антиідіотиповим 5сЕм 4.32.63, що має більш бо високу афінність, є більш ефективною по відношенню до СОЗ-зв'язуючого агента, ніж у випадку більш слабкого антиідіотипового 5сЕм 4.15.64. Порівнювана ефективність оброблених і необроблених ТОВ дозволяє припустити наявність експресії протеази, наприклад, матриптази, на клітинах Неї а і 5Кох3.
Приклад 13
Одержання НЕНІТ-зв'язуючого антитіла (3А201, замаскованого за допомогою антиідіотипового СА2О1 зсЕм
В цьому прикладі описано одержання наступних молекул: 1: антитіло СА2О1 ІдС1-підкласу з М-кінцевим злиттям антиіїдіотипового СА201 зем і сайтом матричної металопротеїнази в гліцин-сериновому лінкері (ЗЕО ІО МО: 32 і 34); і 2: НЕВ1-антитіло ІС1-підкласу СА2О1, що зв'язується (ЗЕО ІО МО: 32 і 33).
Їх схематичне зображення представлені на фіг. 28 і 29. Послідовність антиідіотипового (10) зв'язуючого СЩША2О1 агента одержували за допомогою ЗТ-ПЛР (зворотна транскрипція) з РНК клітин гібридоми, використовуючи вироджені праймери, які зв'язуються з кінцями варіабельних ділянок легкого і важкого ланцюга відповідно. Клітини гібридоми одержували імунізацією мишей.
Синтез послідовності ДНК одноланцюгового Ем (5сЕм) з фланкуючими унікальними сайтами рестриктаз замовляли на фірмі Сепеагп і клонували у вигляді М-кінцевого злиття на легкому ланцюзі СС(А2О1.
Експресійний вектор фірми НКоспе застосовували для створення всіх важких і легких ланцюгів злитого білка, що містить 5сЕм, який кодувався експресійними плазмідами. Вектор складався з наступних елементів: - ген, який обумовлює стійкість до гігроміцину як маркера для селекції, - сайт ініціації реплікації, огіР, з вірусу Епштейна-Барра (ЕВУ), - сайт ініціації реплікації з вектора рРОС18, який забезпечує реплікацію цієї плазміди в Е. соїї, - ген бета-лактамази, що надає стійкості до ампіциліну Е. соїї, - негайно-ранній енхансер і промотор з цитомегаловірусу людини (НСМУ), - сигнальна послідовність поліаденілювання ("полі А") з людського імуноглобуліну 1 і - унікальні сайти рестрикції Ватні і храї.
Молекули одержували шляхом спільної трансфекції клітин нирки людського ембріона 293-Е, зростаючих в суспензії, експресійними векторами для клітин ссавців, використовуючи систему
Зо для експресії Егеебіуїе"Мм 293 відповідно до інструкції виробника (фірма Іпийтодеп, США). В цілому, метод полягав у наступному: суспензійні клітини Егеебіуїетм 293-Е культивували в середовищі для експресії Егеесіуетм 293 при 37"С/895 СО і клітини висівали в свіже середовище з густиною 1-2х106 життєздатних клітин/імл в день трансфекції. Одержували комплекси ДНК-293тесіїп "М в середовищі Орії-МЕМ І (фірма Іпмийгодеп, США), використовуючи 325 мкл 2931есіїп "М (фірма Іпийгодеп, Німеччина) і 250 мкг плазмідної ДНК важкого ("сА201 важкий ланцюг") і легкого ланцюга ("анти-СА2Ої МН-МІ зсЕм розщеплюваний ММР лінкер 145
СА201 легкий ланцюг" або "З4А201 легкий ланцюг") в молярному співвідношенні 1:1 в кінцевому об'ємі суміші для трансфекції 250 мл. Супернатанти клітинних культур, які містять антитіло, збирали через 7 днів після трансфекції шляхом центрифугування при 14000х4 протягом 30 хв і фільтрували через стерильний фільтр (0,22 мкм). Супернатанти зберігали при -20 "С до очистки.
Секретований білок очищували зі супернатантів клітинних культур шляхом афінної хроматографії, використовуючи афінну хроматографію на білку А, з подальшою гель- фільтрацією. В цілому, метод полягав у наступному: стерилізовані фільтрацією супернатанти клітинних культур вносили на колонку НіТгтар білок А НР (5 мл), врівноважену ЗФР-буфером (ТОмМ МагзНРО», їмМ КНеРО», 137мМ Масі і 2,7мМ КС, рН 7,4). Незв'язані білки відмивали врівноважуючим буфером. Антитіло і варіанти антитіла елюювали 0,1М цитратним буфером, рн 2,8, і фракції, що містять білок, нейтралізували 0,1 мл 1М Трис, рН 8,5. Потім елюйовані білкові фракції об'єднували, концентрували за допомогою фільтруючої центрифуги Атісоп га (МУСО: 30 К, фірма Мійіроге) до об'єму З мл і вносили на колонку для гель-фільтрації
Супердекс200 НіЇ оаа 120 мл 16/60 (фірма СЕ Неайнсаге, Швеція), врівноважену буфером, який містить 20мМ гістидин, 140мМ Масі, рН 6,0. Фракції, що містять очищений СА201-анти-СЧА201- 5сЕм або СА201, із вмістом високомолекулярних агрегатів менше 5 95, об'єднували і зберігали у вигляді аліквот з концентрацією 1,0 мг/мл при -80 "С.
При здійсненні аналізу білка після гель-фільтрації чистоту і молекулярну масу молекул у вигляді одиничних фракцій визначали за допомогою ДСН-ПААГ за відсутності відновлювача і здійснювали фарбування кумаси (ІпеіапіВіше "М, фірма Ехредеоп). Застосовували систему гелю
МиРАСЕФ Рге-Саві (4-12 95 Біс-Трис, фірма Іпийтодеп або 3-8 95 Трис-ацетату, фірма Іпмігодеп) відповідно до інструкції виробника. бо Концентрацію білків в очищених білкових зразках визначали, вимірюючи оптичну густину
(ОГ) при 280 нм і здійснюючи ділення на коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу молекул після кінцевої стадії очистки аналізували за допомогою КЕ-ДСН в присутності відновлювача і без нього. Застосовували систему Саїїрег Гарснір СОХІ! (фірма Саїрег І езсієпсеє) відповідно до інструкції виробника.
Вміст агрегатів молекул визначали за допомогою високоефективної ЕС, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації Супердекс 200 (фірма СЕ Неєаїйнсагє, Швеція) в рухомому буфері, що містить 200мМ КНеРО», 250мМ КС, рН 7,0, при 2570. 25 мкг білка ін'єккгували в колонку зі швидкістю потоку 0,5 мл/хв і здійснювали ізократичне елюювання протягом приблизно 50 хв.
Після кінцевої очистки в усіх молекулах вміст мономера складало 2 9595 за даними високоефективної 5ЕС. Молекулярна маса замаскованого антиіїдіостиповим 5сЕм сь,А2гО1, визначена за допомогою КЕ-ДНС-аналізу, складала 216,3 кДа в невідновлюючих умовах (фіг. ЗОА) і 58,3 кДа у відновлюючих умовах по відношенню до важкого ланцюга СА20О1 і 60,3 кДа по відношенню до легкого ланцюга Ср/А2О1, зцепленого з 5сЕм (фіг. ЗОБ) відповідно.
Молекулярна маса, розрахована на основі амінокислотної послідовності, складала 49,2 кДа для важкого ланцюга і 51,9 кДа для легкого ланцюга СА2О1, зціпленого з зсЕм, що свідчить про глікозилюванні обидвох ланцюгів в НЕК293З-клітинах.
Таблиця З
Узагальнені дані про результати одержання і очистки активованих протеазою СА2О1 І9Г (фіг. 28) і контрольних молекул СА201 (фіг. 29)
Приклад 14
Маскуючий ефект антиідіотипового зсЕм по відношенню до СА2О1 Ідс
Ефективність маскування зв'язування НЕНІ (3А201 за допомогою М-кінцевого злиття антиідіотипового СА2ОЇ 5сЕм продемонстровано за допомогою ЕАСб-аналізу на клітинах
НЗ22М, що експресують НЕКТ і за допомогою аналізу методом поверхневого плазмонного резонансу (РЕ) на сенсибілізованій НЕНІ поверхні чипу. Для протеолітичного розщеплення спА2О1-анти-сАг01-5сЕм застосовували рекомбінантну активну людську ММР2 (фірма
Саіріоснет). 1 мг антиїдіотипового СА2ОЇ 5сЕм, зшитого з (1А201 за допомогою гліцин- серинового лінкера, що містить сайт розщеплення ММР, інкубували з 1,2 мкг ММР2 протягом ночі при 37 "С в ЗФР.
Зо Для ЕГАС5-аналізу зв'язування НЕНІ розщепленої і нерозщепленої молекули (А201-анти-
СІА201-5сЕм застосовували лінію клітин немілкоклітинного раку легені НЗ22М. Густину клітин доводили до 1х105/мл і вносили в 9б6-лунковий круглодонний планшет. Додавали молекули та інкубували на льду протягом 30 хв. Клітини промивали одноразово ЕАС5-буфером (ЗФР -- 2 95
ЕС5--0,1 95 азиду натрію) і ресуспендували з кон'югованим з ФІТЦ ЕК(аб")2-фрагментом козячого антилюдського ІдС-ЕБс як вторинного антитіла (фірма ТНептоРізНег Зсієпійіс). Після витримування ще протягом 20 хв на льду клітини промивали двічі і ресуспендували в ЕАС5- буфері та аналізували за допомогою пристрою ВО ГАС5 Сапіо ІІ. Оцінювали 10000 клітин і для аналізу використовували медіану сигналу флуоресценції. До розщеплення за допомогою ММР-2 молекули (сІіА201-анти-ЯА20О1-5сЕм не виявлено зв'язування з НЕКІ, що піддається вимірюванню, на НЗ22М-клітинах, що свідчить про повне маскування зв'язуючих доменів СА2О1 антиіїдіотиповим 5сЕм (фіг.31). Зв'язування нерозщепленої молекули СА201-анти-сА201-5сЕм виявилося зіставним з зв'язуванням неспецифічного запо відношенню дого як контроль ізотипу
Ід антитіла (фіг. 31). На противагу цьому, розщеплення за допомогою ММР антиідіотипового 5сЕм призводило до активації СА20О1, і зв'язування з НЕВІ1 на НЗ2г2М-клітинах відновлювалось до рівней, схожих з рівнями незамаскованого батьківського антитіла СА20О1 (фіг. 31)
Для підтвердження отриманих за допомогою ГАС5 результатів зв'язування замаскованого
СИІА2ОЇ після розщеплення за допомогою ММР при створенні винаходу здійснювали також експеримент із застосуванням 5РА-аналізу як іншого аналітичного методу з використанням пристрою Віасоге Т100 (фірма СЕ Неайнсаге Віозсіепсез АВ, Уппсала, Швеція). НЕВ1 імобілізовували на поверхні біосенсорного чіпа СМ5 за допомогою стандартного методу амінного сполучення. Позаклітинний домен НЕВІ ін'єктували в натрій-ацетатному буфері, рн 5,0 в концентрації 1 мкг/мл. Контрольні проточні референс-комірки обробляли аналогічним чином, але використовуючи тільки буфер як носій. Молекули СА201-анти-СЧА201-5сЕм до і після розщеплення протягом ночі за допомогою ММР ї ЖА201 розводили в їхЗФР, рН 7,4, 0,05 95
Твін2о (фірма Косне Оіадповіїсв СІтрН) та ін'єктували в зростаючих концентраціях від 3,125 і до
Б5ОНМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв. Фаза асоціації складала З хв, а фаза дисоціації складала хв. Зв'язування НЕНІ1 відновлювали шляхом ін'єкції 0,85 96 фосфорної кислоти протягом 30 с зі швидкістю потоку 5 мкл/хв. Кінетичні константи швидкості і константи рівноваги дисоціації розраховували, використовуючи модель зв'язування 1:1 Ленгмюра, за допомогою програмного забезпечення ВіаємаІцайоп. Величина Ко, що складає 1нНМ, що характеризує зв'язування НЕВІ, встановлена для батьківського незамаскованого антитіла СА2О1 (фіг. 32). Після інкубації 10 протягом ночі з ММР-2 для молекули (А201-анти-СА201-5сЕм встановлена величина Ко 2нНМ хі схожими з незамаскованим контрольним антитілом константами швидкості асоціації і дисоціації (Ка і Ка), що свідчить про повне відновлення здатності зв'язуватись з НЕНІ в результаті розщеплення протеазою (фіг. 32). Для нерозщепленої молекули СА2гО1-анти-СА201-5сЕм не виявлено жодне зв'язування з НЕНВІ1 при використанні 5РВ-аналізу (фіг. 32). В сукупності, при створенні винаходу продемонстрована повна втрата здатності зв'язуватись з НЕНІ після злиття антиіїдіотипового 5сЕм з М-кінцем антитіла ІдС31-підкласу СрА?2О1 з використанням двох незалежних аналітичних методів. Крім того, встановлено, що зв'язування з НЕВІ повністю відновлювалось після видалення 5сЕм за допомогою розщеплення протеазою в сайті розщеплення ММР в гліцин-сериновому лінкері.
Приклад 15
Одержання анти-РоІВі/анти-СОЗ і анти-мезотелінл-анти-СОЗ зв'язуючих / Т-клітини біспецифічних (ТОВ) молекул з анти-СОЗ всЕм
Одержували декілька зв'язуючих Т-клітини біспецифічних (ТОВ) молекул з різними антиідіотиповими 5сЕм, і вони схематично зображені на фіг. ЗЗА-К під відповідним їм 1ІО- номером. Одержували наступні молекули:
ІО 8364: "БоІВ1 1605 2-11 Ідс, класичний формат (антиідіотиповий 5сЕм 4.32.63 - сайт ММРО - матриптази МКО62-СОЗ злитий на М-кінці з РОЇВ МН - інертний Ес) зі злитим на М-кінці анти-
СОЗ 5еЕм 4.32.63 і лінкером із сайтом протеази ММРО-МКОб2" (фіг. ЗЗА, 5ЕО ІЮ МО: 1, З і 72).
ІО 8363: "БГоІВ1 1605 2-11 Ідс, класичний формат (антиідіотиповий 5сЕм 4.32.63 - сайт ММРО
Зо - матриптази МКО62-СОЗ злитий на М-кінці з РОЇВ МН - інертний Ес) зі злитим на М-кінці анти-
СОЗ 5еЕм 4.32.63 і лінкером із сайтом протеази катепсину 5/В" (фіг. ЗЗ3Б, 5ЕО 10 МО: 1, З і 85).
ІО 8365: "ГоІВ1 1605 2-11 Ід, інвертований формат (антиідіотиповий 5сЕм 4.32.63 - лінкер із сайтом матриптази МКОб62-СО3З злитий на М-кінці з ОЗ МІ. - інертний Ес) зі злитим на М-кінці анти-СОЗ 5сЕм 4.32.63 і лінкером із сайтом матриптази МКОб2" (фіг. 338, 5ЕО ІО МО: 1, 3, 73 і 74).
ІО 8366: "Боїй1 1605 2-41 ІдС, інвертований формат (антиіїідіостиповий 5сЕм 4.32.63 - нерозщеплюваний Сі5-лінкер - СОЗ злитий на М-кінці з СОЗ МІ. - інертний Ес) зі злитим на М-кінці анти-СОЗ 5сЕм 4.32.63 і нерозщеплюваним С5 -лінкером" (фіг. 33Г).
ІО 8672: "антитіло до мезотеліну (а-мезотелін) 2-41 ІД, класичний формат, М5І М-заряджені варіанти, схрещений СОЗ (антиіїдіотиповий 5сЕм 4.32.63 - сайт ММРОУ - матриптази МКО62-СОЗ злитий на М-кінці з УН антитіла до мезотеліну - інертний Ес) зі злитим на М-кінці анти-СОЗ всЕм 4.32.63 і сайтом ММРО - матриптази МКОб2" (фіг. ЗЗД, 5ЕО І МО: 77, 78, 81, 82).
ІО 8673: "антитіло до мезотеліну 2-1 Ід, класичний формат, М5І М-заряджені варіанти, схрещений СОЗ (антиідіотиповий 5сЕм 4.32.63 -нерозщеплюваний Сс5-лінкер - СОЗ злитий на М- кінці з МН антитіла до мезотеліну - інертний Ес) зі злитим на М-кінці анти-СОЗ всЕм 4.32.63, нерозщеплюваним (25- лінкером" (фіг. ЗЗЕ).
ІО 8674: "антитіло до мезотеліну 2-41 ІдС, інвертований формат, М5І М-заряджені варіанти, схрещений СОЗ (антиідіотиповий 5сЕм 4.32.63 - сайт ММРО - матриптази МКОб62-СОЗ злитий на
М-кінці з СОЗ МН - інертний Ес) зі злитим на М-кінці анти-СОЗ 5сЕм 4.32.63 і сайтом ММРО - матриптаза МКОб2" (фіг. ЗЗЖ, 5ЕО І МО: 76, 77, 78, 79).
ІО 8675: "антитіло до мезотеліну 2-41 ІдС, інвертований формат, М5І М-заряджені варіанти, схрещений СОЗ (антиідіотиповий 5сЕм 4.32.63 -нерозщеплюваний Сс5-лінкер - СОЗ злитий на М- кінці з ОЗ МН - інертний Ес) зі злитим на М-кінці анти-СОЗ 5сЕм 4.32.63 і нерозщеплюваним (25- лінкером" (фіг. 333).
ІО 8505: "антитіло до мезотеліну 241 Ід, інвертований формат, М5І М-заряджені варіанти,
СОЗ (НС антитіла до мезотеліну, злита на М-кінці з СОЗ МІ. - інертний Ес)" (фіг. 331).
ІО 8676: "антитіло до мезотеліну 2-1 Ід, класичний формат, М5І М-заряджені варіанти, схрещений СОЗ (антитіло до мезотеліну Ідс-підкласу з СОЗ - злитому на М-кінці з МН антитіла до мезотеліну - інертний Ес)" (фіг. ЗЗК) бо Варіабельні домени субклонували в рамці зчитування з попередньо вбудованими у відповідний застосовуваний як реципієнт експресійний вектор для клітин ссавців доменами.
Експресія білка перебувала під контролем МРОМ-промотора і на 3"-кінці СО5 була присутня синтетична сигнальна поліА-послідовність. Крім того, кожний вектор містив послідовність ОгіР
ЕВУ.
Молекули (за винятком 8505, цю молекулу одержували шляхом спільної трансфекції СНО- клітин, зростаючих в суспензії, з експресійними векторами для клітин ссавців. Короткочасну трансфекцію здійснювали на фірмі Емійа АГ (Швейцарія)) одержували шляхом спільної трансфекції зростаючих в суспензії клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліетиленіміну (ПЕЇ). Для трансфекції клітини НЕК293 ЕВМА культивували в безсироватковій культуральному середовищі ЕхсеїЇ, що містить бмМ І -глутамін і 250 мг/л культурального середовища (3418. Для виробництва висівали в центрифужні флакони місткістю 600 мл (максимальний робочий об'єм 400 мл) 800 млн клітин НЕК29З3 ЕВМА за 24 год. до трансфекції без (5418. Для трансфекції 800 млн клітин центрифугували протягом 5 хв при 210х9, і супернатант заміняли 40 мл попередньо нагрітим середовищем СО СНО, що містить бмМ І-глутамін. Експресійні вектори змішували в 40 мл середовища СО СНО, яке містить бмМ
ІЇ-глутамін, для одержання кінцевої кількості ДНК 400 мкг. Після додавання 1080 мкл розчину
ПЕ! (2,7 мкг/мл) суміш інтенсивно перемішували протягом 15 с і потім інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ!, переносили в 600- мілілітровий центрифужний флакон та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері, що містить 5 95 СО». Після інкубації додавали 320 мл середовища ЕхсеїІїбмМ |І- глутамін ї- 5 г/л Рерхоуї1,0мММ МРАхЗ г/л глюкози, і клітини культивували протягом 24 год. перед здійсненням підживлення 7 95 Реєй 7. Після культивування протягом 6-7 днів супернатант збирали для очистки шляхом центрифугування протягом 20-30 хв при 210хг (центрифуга бідта 8К). Розчин стерилізували фільтрацією (фільтр з розміром пор 0,22 мкм) і додавали азид натрію в кінцевій концентрації 0,01 95 (мас./об.). Розчин зберігали при 4 "С до очистки. Секретований білок очищували із супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії, застосовуючи афінну хроматографію на білку А, з наступною(ними) однією або двома стадією(ями) гель-фільтрації.
Для проведення афінної хроматографії супернатант вносили на колонку білок А
МабзеївєсізЗите (СМ-5 мл, фірма СЕ Неайнсаге), врівноважену буфером, що містить 20мММ цитрат натрію, 20мМ фосфат натрію, рН 7,5. Незв'язаний білок видаляли промиванням, використовуючи об'єм буфера, який дорівнює принаймні 10 об'ємам колонки, що містить 20мММ цитрат натрію, 20мМ фосфат натрію, рН 7,5, а необхідний білок елюювали, застосовуючи об'єм буфера, що дорівнює 20 об'ємам колонки (градієнт від 0 9о до 100 95), що містить 20мМ цитрат натрію, 100мМ хлорид натрію, 100мМ гліцин, рН 3,0. Розчин білка нейтралізували, додаючи 1/10 0,5М МагНРО», рН 8,0. Необхідний білок концентрували за допомогою ультра-концентратора
АтісопФОйга-15 ОПгасе! ЗОК (фірма Мегск МіПіроге ЦП.) до об'єма, що складає максимум 4 мл, перед завантаженням на колонку НіЇ ода Супердекс 200 (фірма СЕ Неайнсагє), врівноважену буфером, що містять 20мМ гістидин, 140мМ хлорид натрію, 0,01 95 Твін, рН 6,0.
Концентрацію білків в очищених білкових зразках визначали, вимірюючи оптичну густину (ОГ) при 280 нм, здійснюючи ділення на коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності.
Чистоту і молекулярну масу молекул після кінцевої стадії очистки аналізували за допомогою
КЕ-ДСН-аналізів в присутності відновлювача або без нього. Застосовували систему Саїірег
Гарспір ОХІЇ (фірма Саїрег І ІГезсіепсе) згідно з інструкцією виробника.
Вміст агрегатів молекул визначали з використанням колонки для аналітичної гель-фільтрації
ТеКаєї п3000 5МУ ХІ. (фірма Тозо!), застосовуючи рухомий буфер, який містить 25мМ КеНРО», 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./об.) МаМз, рН 6,7 при 25 "С.
Кінцева якість всіх молекул виявилась високою іїз вмістом мономерів 2 95 95.
Таблиця 4
Узагальнені дані про результати одержання і очистки активованих протеазою ТСВ-молекул . АналітичнабЕС
Таблиця 4
Узагальнені дані про результати одержання і очистки активованих протеазою ТСВ-молекул . АналітичнабЕС 708674) | .юЙ36 Б 0.96, | юю бееЗиз
Приклад 16
Контроль якості і стабільність - аналіз методом капілярного електрофорезу в присутності
ДСН різних ТСВ-молекул
Чистоту і молекулярну масу молекул після кінцевої стадії очистки аналізували за допомогою
КЕ-ДСН-аналізів в присутності відновлювача або без нього. Застосовували систему Саїірег
ІГарСпір СХІ! (фірма Саїїрег І Мезсієпсе) відповідно до інструкції виробника. Здійснювали порівняння необроблених молекул (які зберігали при 4 "С), оброблених молекул (які обробляли відповідною рекомбінантною протеазою (фірма НО БЗувієтв) протягом 24 год. при 37 "С і молекули, яку інкубували протягом 72 год. при 37 "С (фіг. 34, ЗБ5А і 35Б).
Порівняння необроблених і оброблених молекул продемонструвало повне розщеплення анти-ІО 5сЕм після обробки "п-матриптазою/5114 у випадку інвертованого формата, що містить лінкер із сайтом матриптази МКОб2, але неповне розщеплення у випадку лінкера із сайтом
ММРО-матриптаза МКОб62. Обробка пп-катепсином В і "п-катепсином 5 також не забезпечувала повне розщеплення. Умови для очищених ферментів не були оптимальними.
Пробіг молекул, інкубованих при 37 "С протягом 72 год., відповідав такій же висоті, що і пробіг чистих молекул, що дозволяє припустити, що молекули були стабільними при 37 "С протягом часу, що відповідає тривалості аналізу іп міго. Попередньо забарвлений білковий маркер Мак 12 (фірма Іпмігодеп) застосовували для визначення правильної молекулярної маси.
Приклад 17
Порівняння різних лінкерів і форматів активованих протеазою Бо!й1-ТСВ
Аналіз активації Уиїкаї МЕАТ. Здійснювали аналіз активації УииКаї МЕАТ для порівняння різних форматів і лінкерів в активованій протеазою ТОВ. Лінія репортерних клітин дигКаї-МЕАТ (фірма Рготеда) являє собою лінію репортерних клітин гострого людського лейкозу з промотором МЕАТ, що експресує людську СОЗє. Якщо ТОВ зв'язується з пухлиною-мішенню і
СОЗ-зв'язуючий агент зв'язується (перехресне зшивання) з СОЗє, то експресію люциферази можна вимірювати на основі люмінесценції після додавання субстрату Опе-Сіо (фірма
Рготеда). 20000 клітин-мішеней висівали в 9б6-лунковий планшет з білими стінками і прозорим
Зо дном (фірма Стгеїпег Віо-Опе), використовуючи 50 мкл /лунку середовища дигкаї (ВРМІ1640, 2 г/л глюкози, 2 г/л МаНсСоО», 10 95 ЕС5, 25мММ НЕРЕЗ5, 2мМ І -глутамін, 1хМЕАА, 1 хпіруват натрію) без гігроміцину. Планшети інкубували протягом приблизно 20 год. при 37 "С. Репортерні клітини
УиЖка-мМЕАТ збирали і визначали життєздатність за допомогою пристрою УМіСеї|. Клітини ресуспендували в середовищі диКкаї без гігроміцину і додавали по 50 мкл на лунку (50000 клітин/лунку). Співвідношення Е:Т складало 2,5:1 (на основі кількості висіяних клітин). антитіла розводили в середовищі диїКаї без гігроміцину і додавали з розрахунку 50 мкл/лунку. Клітини інкубували при 37 "С протягом 6 год. у вологій камері, після чого їх вилучали з камери для адаптації до кімнатної температури приблизно за 10 хв для оцінки люмінесценції. В лунки додавали з розрахунку 50 мкл/лунку розчин ОМЕ-С10о та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі в темряві. Люмінесценцію визначали за допомогою ридера УА ГАС МісіогЗ ЕГІЗА (РеккіпЕІтег2030), тривалість детекції складала 1 с/лунку. Порівняння попередньо обробленої активованою протеазою ТОВ (8364, зафарбовані сірим кольором квадрати) і Го!81-ТСВ (чорні трикутники зі спрямованою вниз вершиною) продемонструвало, що ефективність після розщеплення повністю відновлювалась. Жодної люмінесценції не вдалось виявити в клітинах, які інкубували з замаскованої ТОВ (яка містить нерозщеплюваний (15-лінкер, сірі трикутники зі спрямованою вгору вершиною) і контрольною "ненаціленою" ТОВ (незафарбований трикутник зі спрямованою вниз вершиною) для обидвох ліній клітин у вказаному діапазоні концентрацій.
Штриховою лінією позначена люмінесценція клітин-мішеней і ефекторних клітин без обробки будь-якої ТОВ (фіг. ЗбА і 36Б).
Приклад 18
Цитотоксичність по відношенню до пухлинних клітин, обумовлена різними форматами активованою протеазою ТОВ
Опосередкований Т-клітинами цитоліз пухлинних клітин, обумовлений активованими протеазою ТСВ-молекулами, оцінювали на клітинних лініях, що експресують різноманітні рівні
ЕоІВ1. Мононуклеарні клітини периферійної крові (РВМС) людини виділяли з лейкоцитарних плівок, які одержували із здорових донорів. Лейкоцитарну плівку розводили в співвідношенні 1:1 стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Нізіорадиє (фірма Бідта, Мо НВ8889). Після центрифугування (450х9д, 30 хв, без перерви, кімнатна температура) інтерфазу, що містить
РВМС, переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400х9, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали і дебрис РВМС ресуспендували в 2 мл АСК-буфера для лізису еритроцитів. Після інкубації при 37 "С протягом приблизно 2-3 хв пробірки заповнювали стерильним ЗФР до 50 мл і центрифугували при 350х9 протягом 10 хв. Вказану стадію промивання повторювали одноразово перед ресуспендуванням
РВМС в середовищі АРМІ1640, що містить 2 95 ЕС5 і 1х СішамМах і 10 95 ДМСО. РВМСО повільно заморожували протягом ночі при -80 "С в контейнерах для заморожування клітин СооІСейе (фірма Віосівіоп) і потім переносили в рідкий азот. За 1 день до початку аналізу прикріплені клітини-мішені збирали за допомогою трипсину/ЕДТА, підраховували, перевіряли життєздатність і ресуспендували в середовищі для аналізу (АРМІ1640, 2 90 ЕС5, 1х Сішамах).
Клітини-мішені висіювали з густиною 20000 клітин/лунку в плоскодонні 96-лункові планшети та інкубували протягом приблизно 20 год. при 37 "С у вологій камері. приблизно за 20 год. до початку аналізу РВМС піддавали відтаванню в середовищі АРМІ1640 (10 95 ЕС5, 1х Сішамах).
РВМС центрифугували при 350х49 протягом 7 хв. Дебрис ресуспендували в свіжому середовищі (АРМІ1640, 2 95 ЕС5, 1х Сішамах) та інкубували протягом максимум 24 год. при 37 "С у вологій камері. За один день до початку аналізу РВМО збирали і центрифугували при 350х9 протягом 7 хв. Дебрис ресуспендували в середовищі для аналізу і додавали до клітин-мішеней 0,2 млн
РВМО з розрахунку 100 мкл/лунку (Е:Т 10:1, на основі кількості висіяних клітин-мішеней).
Молекули розводили середовищем для аналізу (АВАРМІ1640, 2 956 ЕС5, 1х Сішамах) і додавали з
Зо розрахунку 50 мкл/лунку у вказаних концентраціях в трьох повторностях, після чого планшети інкубували протягом приблизно 48 год. при 37 "С у вологій камері. цитоліз клітин-мішеней оцінювали після інкубації протягом 48 год. при 37 "С, 595 СО» шляхом кількісного аналізу вивільнення ЛДГ в клітинні супернатанти апоптозними/некротичними клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма Носпе Арріїєй Зсієпсе, Мо 11644793001). Максимальний лізис клітин- мішеней (- 100 95) досягався при інкубації клітин-мішеней в присутності 1 95 Тритону Х-100 протягом 20 год. до визначення ЛДГ. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без будь-якої ТОВ.
Результати (фіг. 37А і 37/Б) представлені у вигляді порівняння двох різних форматів активованих протеазою ТОВ, які обидві містять антиідіостиповий СОЗ 5сЕм 4.32.63, зв'язаний з лінксером із сайтом матриптази МКОб62. Інвертований формат активованою протеазою ТОВ (8365, сірі кружечки), ймовірно, був більш ефективним по відношенню до цитолізу (клітини- мішені НеГа і 5Кох-3), ніж класичний формат активованою протеазою ТОВ (8408, темно-сірі трикутники зі спрямованою вгору вершиною). Проте інвертована молекула, що містить нерозщеплюваний лінкер (8366, світло-сірі квадрати), виявилась менш ефективною з позицій маскування, ніж замаскована класична молекула (8409, темно-сірі трикутники зі спрямованою вниз вершиною).
На фіг. 37В представлені дані про цитотоксичність по відношенню до клітин-мішеней Неї а.
Здійснювали порівняння класичної активованої протеази ТСВ, яка містить антиідіотиповий СОЗ 5сЕм 4.32.63 і (5-лінкери з різними сайтами, що розпізнається, і протеазою. Активована протеазою ТОВ, що містить лінкер із сайтом ММРО-матриптази МКОб2 (8364, сірі квадрати) виявилась більш ефективною, ніж Рой! ТОВ (світло-сірі трикутники зі спрямованою вниз вершиною), в той час як активована протеазою ТСВ, що містить лінкер тільки із сайтом матриптази МКОб2 (світло-сірий ромб), виявилась менш ефективною по відношенню до клітин
НеГа. Ефективність молекул, які містять сайт катепсину (сірі кружечки) або нерозщеплюваний лінкер (чорні трикутники зі спрямованою вниз вершиною), виявилась зіставною.
На фіг. 37Г представлені дані про цитотоксичність по відношенню до клітин-мішеней 5Кох-3.
Здійснювали порівняння класичної активованої протеази ТСВ, яка містить антиідіотиповий СОЗ 5сЕм 4.43.63 і Сб-лінкери з різними сайтами, що розпізнається, і протеазою. активована протеазою ТОВ, що містить лінкер із сайтом ММРО-матриптази МКОб2 (8364, сірі квадрати), бо практично мала таку ж ефективність, що і ГоІВ81-ТСВ (світло-сірі трикутники зі спрямованою вниз вершиною), в той час як активована протеазою ТОВ, що містить лінкер тільки із сайтом матриптази МКОб2 (світло-сірий ромб) виявилась менш ефективною по відношенню до цитолізу клітин 5КоОУ-3. Молекула, що містить сайт катепсину (сірі окружності) виявилась менш ефективною, ніж молекула, що містить тільки сайт матриптази МКОб62, молекула, що містить нерозщеплюваний лінкер (чорні трикутники зі спрямованою вниз вершиною), індукувала у вказаних концентраціях цитоліз лише менше 10 95 клітин ЗКох-3.
Приклад 19
Т-клітинна активація після спільної інкубації епітеліальних клітин кіркової речовини нирок людини або бронхіальних епітеліальних клітин людини з ТОВ і людськими РВМС
Активацію Т-клітин, опосередковану активованими протеазою ТОСВ- молекулами, оцінювали з використанням клітин НАСЕрі (епітеліальні клітини кіркової речовини нирок людини) і НВЕрісС (бронхіальні епітеліальні клітини людини), що експресують лише невисокі кількості Ео!В1.
Людські РВМО використовували як ефекторних клітин і здійснювали фарбування маркерів Т- клітинної активації після інкубації протягом 48 год. з молекулами і клітинами. Мононуклеарні клітини периферійної крові (РВМС) людини виділяли з лейкоцитарних плівок, які одержували із здорових донорів. Лейкоцитарну плівку розводили в співвідношенні 1:11 стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Нізіорадне (фірма бідта, Мо Н8Ф889). Після центрифугування (450х9, 30 хв, без перерви, кімнатна температура) інтерфазу, що містить РВМС, переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400хо, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали і дебрис РВМСО ресуспендували в 2 мл АСК- буфера для лізису еритроцитів. Після інкубації при 37 "С протягом приблизно 2 хв пробірки заповнювали стерильним ЗФР до 50 мл і центрифугували при 350х9 протягом 10 хв. Вказану стадію промивання повторювали одноразово перед ресуспендуванням РВМСО в середовищі
АРМІ1640, що містить 295 ЕС і їх СішамМах і 1095 ДМСО. РВМС повільно заморожували протягом ночі при -80 "С в контейнерах для заморожування клітин СооіІСеїкФ (фірма Віосівіоп) і потім переносили в рідкий азот. За 1 день до початку аналізу прикріплені клітини-мішені збирали за допомогою трипсину/ЕДТА, підраховували, перевіряли життєздатність |і ресуспендували в середовищі для аналізу (АВРМІ1640, 2 956 ЕС5, 1х СіІшамах). Клітини-мішені висіювали з густиною 20000 клітин/лунку в плоскодонні 9б-лункові планшети та інкубували
Зо протягом приблизно 20 год. при 37 "С у вологій камері. приблизно за 20 год. до початку аналізу
РВМС піддавали відтаванню в середовищі АРМІ1640 (1095 ЕС5, їх СіІшаМах)о РВМО центрифугували при 350х9 протягом 7 хв. Дебрис ресуспендували в свіжому середовищі (АРМІ1640, 2 95 ЕС5, 1х Сішамах) та інкубували протягом максимум 24 год. при 37 "С у вологій камері. За один день до початку аналізу РВМСО збирали і центрифугували при 350х9 протягом 7 хв. Дебрис ресуспендували в середовищі для аналізу і додавали до клітин-мішеней 0,2 млн
РВМО з розрахунку 100 мкл/лунку (ЕТ 1071, співвідношення визначали на основі кількості висіяних клітин-мішеней). Молекули розводили середовищем для аналізу (АРМІ1640, 2 95 ЕС5, 1х Сішамах) і додавали у вказаних концентраціях в трьох повторностях, після чого планшети інкубували протягом приблизно 48 год. при 37 "С у вологій камері.
Т-клітинну активацію оцінювали після інкубації протягом 48 год. при 37 "С, 5 956 бОг2 шляхом кількісного визначення СО25 і 2О69 на СО4-позитивних і СО8-позитивних Т-клітинах. Ео!В1 1605 ТОВ (6298) і "ненацілену" ТОВ (яка зв'язується з СОЗ, але не зв'язується з антигеном клітини-мішені, 7235) включали як контролі. Кожна точка відповідає середньому значенню, отриманому за трьома повторностями, для РВМОС з трьох різних донорів. Стандартне відхилення позначено планками похибок. Для статистичного аналізу використовували непарний
І-критерій. Результати продемонстрували підвищення рівня СО6О в СО8-позитивних клітинах при використанні Гоїй1-ТСВ, що суттєво перевищував медіанну інтенсивність флуоресценції, встановлену для активованих протеазою ТОВ (фіг. ЗВА і 38Б).
Приклад 20
Цитотоксичність по відношенню до пухлинних клітин, опосередкована різними форматами активованою протеазою що зв'язується з мезотеліном (МБ М) ТОВ
Опосередкований Т-клітинами цитоліз пухлинних клітин, обумовлений активованими протеазою ТСВ-молекулами, оцінювали на клітинних лініях, що експресують різноманітні рівні мезотеліну (М5І М). Мононуклеарні клітини периферійної крові (РВМСОС) людини виділяли з лейкоцитарних плівок, які одержували із здорових донорів. Лейкоцитарну плівку розводили в співвідношенні 1:11 стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Нізіорадие (фірма 5ідта,
МонВ889). Після центрифугування (450х9, 30 хв, без перерви, кімнатна температура) інтерфазу, що містить РВМС, переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл
ЗФР. Суміш центрифугували (400х9, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали і 60 дебрис РВМС ресуспендували в 2 мл АСК-буфера для лізису еритроцитів. Після інкубації при
37 "С протягом приблизно 2 хв пробірки заповнювали стерильним ЗФР до 50 мл і центрифугували при 3З350х9д протягом 10 хв. Вказану стадію промивання повторювали одноразово перед ресуспендуванням РВМС в середовищі АРМІ1640, що містить 2 95 ЕСЗ5 і їх
СішамМах і 10 95 ДМСО. РВМС повільно заморожували протягом ночі при -80 "С в контейнерах для заморожування клітин СооіІСеїкФ (фірма ВіосСівіоп) і потім переносили в рідкий азот. За 1 день до початку аналізу прикріплені клітини-мішені збирали за допомогою трипсину/ЕДТА, підраховували, перевіряли життєздатність і ресуспендували в середовищі для аналізу (АРМІ1640, 2 95 ЕС5, 1х СішамМмах). Клітини-мішені висіювали з густиною 20000 клітин/лунку в плоскодонні 96-лункові планшети та інкубували протягом приблизно 20 год. при 37 "С у вологій камері. приблизно за 20 год. до початку аналізу РВМС піддавали відтаванню в середовищі
АРМІ1640 (10 95 ЕС5, їх СішаМах). РВМСОС центрифугували при 350х9уд протягом 7 хв. Дебрис ресуспендували в свіжому середовищі (АРМІ1640, 295 ЕС5, їх Сішамах) та інкубували протягом максимум 24 год. при 37 "С у вологій камері. За один день до початку аналізу РВМС збирали і центрифугували при 350х9 протягом 7 хв. Дебрис ресуспендували в середовищі для аналізу і додавали до клітин-мішеней 0,2 млн РВМО з розрахунку 100 мкл/лунку (Е:Т 101, співвідношення визначали на основі кількості висіяних клітин-мішеней). Молекули розводили середовищем для аналізу (АРМІ1640, 295 ЕС5, їх Сішамах) і додавали у вказаних концентраціях в трьох повторностях, після чого планшети інкубували протягом приблизно 48 год. при 37 "С у вологій камері. цитоліз клітин-мішеней оцінювали після інкубації протягом 48 год. при 37 "С, 595 СбО2 шляхом кількісного аналізу вивільнення ЛДГ в клітинні супернатанти апоптозними/некротичними клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма Косне Арріїєд 5сіепсе,
Мо 11644793001). Максимальний лізис клітин-мішеней (- 100 95) досягався при інкубації клітин- мішеней в присутності 1 95 Тритону Х-100 протягом 20 год. до визначення ЛДГ. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без будь-якої ТОВ.
Результати (фіг. З9А і 39Б) дозволили виявити цитоліз клітин-мішеней, опосередкований активованою протеазою М5І М ТОВ (8672) по відношенню до клітинних ліній МС Н5о96 і А5РО-1.
Активовані протеазою ТОВ практично відповідали ефективності М5ІМ ТОВ (8676) по відношенню до клітин МС! Н596 і А5РО-1. Молекула, що містить нерозщеплюваний Ссі5-лінкер
Зо (8673), не індукувала цитоліз обидвох ліній клітин у вказаному діапазоні концентрацій.
Приклад 21
Репортерний аналіз ДдигїкаМЕАТ для моніторингу експресії мішені (РОЇ В1-ТСВ) і протеазної активності (активована протеазою РОЇ НІ ТОВ) в зразках первинних пухлин.
Метою даного аналізу було вивчення експресії пухлинного антигена-мішені (РоїІВ1) і активності пухлинаспецифічних протеаз типу ММРО, матриптази або катепсину, в зразках людськими пухлин.
Лінія репортерних клітин дииїкаї-МЕАТ (фірма Ргтотеда) являє собою лінію репортерних клітин гострого людського лейкозу з промотором МЕАТ, що експресує людську СОЗє. Якщо біспецифічна молекула, що активує Т-клітини зв'язується з пухлиною-мішенню і з СОЗє (перехресне зшивання), то можна вимірювати експресію люциферази. Люмінесценцію вимірюють після додавання субстрату Опе-Сіо (фірма Рготеада).
Зразки первинних пухлин одержували від фірми Іпаімитей СтрнН, Німеччина. Зразки доставляли протягом ночі в середовищі для транспортування. приблизно через 24 год. після хірургічної процедури зразок розрізали на невеликі шматочки. Підготовлювали 96б-лунковий планшет з білими стінками, плоским (прозорим) дном шляхом додавання 18 мкл холодного матригелю (Маїгде! (734-1101, фірма Соптіпа/УМ/В). Планшет інкубували протягом 2 хв при 37"С перед внесенням шматочків пухлини (в трьох повторностях). По 33 мкл холодного матригелю додавали на лунку і планшет інкубували знову протягом 2 хв при 37 "С. По 50 мкл розведення антитіла (в середовищі УцКаї без гігроміцину, але яке містить 2х пеніцилін/стрептоміцин) додавали на лунку і планшет інкубували протягом приблизно 48 год. при 37 "С, 5 965 СО».
Репортерні клітини УиїКаї-МЕАТ збирали і визначали життєздатність за допомогою пристрою міСеїІ. Клітини центрифугували при 350х9, 7 хв, після чого ресуспендували в середовищі УшШигКаї без гігроміцину і додавали по 50 мкл на лунку (50000 клітин/лунку). Планшет інкубували протягом 5 год. при 37 "С у вологій камері, після чого вилучали для визначення люмінесценції.
По 80 мкл вмісту з кожної лунки переносили в 96-лунковий планшет з білими стінками. В кожну лунку додавали 27 мкл/лунку розчину ОМЕ-Сіо та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі в темряві. Люмінесценцію визначали за допомогою ридера УА ГАС МісіогЗ ЕГІЗА (РекіпЕІтег!2030), тривалість детекції складала 1 с/лунку. бо Репортерні клітини ЩдигїКаї МЕАТ активувались після спільної інкубації з бо!81-ТСВ (6298) і активованою протеазою ЕГоІ!В1-ТСВ, яка містить сайт розщеплення ММРО-матриптазою (8364).
Активовані протеазою Рой! ТОВ (8363, 8408) і контрольні ТОВ (8409, 7235) не індукували експресію люциферази. Штриховою лінією позначена базисна лінія люмінесценції для клітин
Уимжаї МЕАТ, які спільно інкубували з пухлиною (фіг. 40).
Приклад 22
Стабільність в сироватці активованих протеазою ТОВ
Капілярний електрофорез активованих протеазою ТСВ після інкубації в людській сироватці.
Молекули інкубували протягом 0 або 14 днів в людській сироватці з низьким вмістом ІДС при 37 "С у вологій камері (5 95 СО»2). Всі молекули очищували афінною хроматографією (білок А) і потім аналізували за допомогою капілярного електрофорезу. 100 мкг кожної молекули додавали або в буфер (гістидиновий буфер (фірма Віснзеї) з 0,01 95 Твін-20), або в людську сироватку (з низьким вмістом ІдС, 5РІ1839, ТІ-15216, 16г5РбЗ814). Концентрація молекул перевищувала 2 мг/мл і кінцева концентраціяскладала 0,5 мг/мл. Попередню обробку однієї молекули (8408) здійснювали за допомогою гп-матриптази (фірма НО бувієтв) протягом 24 год. при 37 "С, 595 СО»: у вологій камері (в іншому випадку значення рН сироватки могло змінюватись). Зразки, відповідні зберіганню протягом 0 днів, безпосередньо заморожували в рідкому азоті і зберігали при - 80"С до аналізу. Зразки, відповідні зберіганню протягом 14 днів, інкубували протягом 14 днів при 37 С, 595 СО» у вологій камері, після чого їх також швидко заморожували.
Перед аналізом методом КЕ-ДСН всі зразки очищували за допомогою афінної РХВР- хроматографії (пристрій Адіїєпі їесппоіодієвз 1200з5егпев, колонка: Орспитсп-специфічна С-1308, матеріал для упаковки колонки: Арріїєй Віозувієте РОНОБ5 20А 60 мкл, буфер: 10мМ Трис, 5О0ММ гліцин, 5200мМ Масі, рН 8,0 і рН 2,0, ін'єктований об'єм: 100 мкл, швидкість потоку 1 мл/хв, збір: на основі піку, нейтралізація: 0,5М Ма-фосфат рН 8,0, 10 95 об'єму). активована протеазою
ТОВ виявилась стабільною в людській сироватці з низьким вмістом Ідсї протягом мінімум 14 днів (фіг. 4АТА-В).
Приклад 23
Створення анти-НЕН2/анти-СОЗ ії /анти-РоІВі/анти-СОЗ (активуючих) // Т-клітини біспецифічних (ТОВ) молекул з анти-СОЗ всЕм
Зо Одержували декілька (активуючих) Т-клітини біспецифічних (ТОВ), і вони схематично зображені на фіг. 42А-Е під відповідним їм ІО-номером. Одержували наступні молекули:
ІО 8955: "Негсеріагу 2-1 Іда, класичний формат, заряджені Негсеріагу варіанти, схрещений
СОЗ (антиідіотиповий 5сЕм 4.32.63 - ММРОУ - матриптаза МКОб2-СО3 злитий на М-кінці з
Негсеріагу МН - інертний Ес) зі злитим на М-кінці анти-СОЗ б5сЕм 4.32.63 і сайтом ММРО - матриптази МКОб2" (фіг. 42А, 5ЕО ІЮ МО: 81, 132, 133 і 136).
ІО 8957: "Негсеріагу 2-1 Іда, класичний формат, заряджені Негсеріагу варіанти, схрещений
СОЗ (антиїдіотиповий 5сЕм 4.32.63-нерозщеплюваний (15-лінкер - СОЗ злитий на М-кінці з
Негсеріагу МН - інертний Ес) зі злитим на М-кінці анти-СОЗ всЕм 4.32.63 і нерозщеплюваним с5- лінкером" (фіг. 42Б, 5ЕО ІО МО: 81, 132, 133 і 135).
ІО 8959: "Негсеріагу 2-1 Іда, класичний формат, заряджені Негсеріагу варіанти, схрещений
СОЗ (Негсеріагу Ідеї з СОЗ злитий на М-кінці з Негсеріагуд МН - інертний Ес)" (фіг. 428, ЗЕО 10
МО: 81, 132, 133 і 134).
І 8997: "Бої! 362 2-41 ІдС, класичний формат, заряджені ЕБоІйї1 ЗбЕ2 варіанти, схрещений СОЗ (антиідіотиповий 5сЕм 4.32.63 - ММРО - матриптаза МКОб62-СО3З злитий на М- кінці з ЕоЇВ1 З6Е2 МН - інертний Ес) зі злитим на М-кінці анти-СОЗ 5сЕм 4.32.63 і сайтом ММРО - матриптази МКОб2" (фіг. 42Г, БЕО ІЮО МО: 81, 137, 138 і 139).
ІО 8998: "БоІйї1 362 2-41 ІдС, класичний формат, заряджені ЕБоІйї1 ЗбЕ2 варіанти, схрещений СОЗ (антиідіотиповий 5сЕм 4.32.63 - нерозщеплюваний Ссі5-лінкер - СОЗ злитий на М- кінці з Бої! ЗбБ2 МН - інертний Ес) з М-кінцевим злиттям анти-СОЗ в5сЕм 4.32.63 і нерозщеплюваним (5-лінкером" (фіг. 42Д, 5ЕО ІЮ МО: 81, 137, 138 і 140).
ІО 8996: "БоІйї1 362 2-41 ІдС, класичний формат, заряджені ЕБоІйї1 ЗбЕ2 варіанти, схрещений СОЗ (Гой! 362 ІдС; з СОЗ злитий на М-кінці з Гойї ЗбЕ2 МН - інертний Ес)" (фіг. 42Е, БЕО ІО МО: 81, 137, 138 і 141).
Варіабельні домени субклонували в рамці зчитування з попередньо вбудованими у відповідний застосовуваний як реципієнт експресійний вектор для клітин ссавців доменами.
Експресія білка знаходилась під контролем промотора МРОМ або СМУ (для Негсеріаго), і синтетична сигнальна поліА-послідовність була присутня на 3-кінці СО. Крім того, кожний вектор містив послідовність Огі? ЕВУ.
Приклад 24 60 Цитотоксичність по відношенню до первинних клітин, опосередкована активованою протеазою ЕоІВ1 ТОВ
Опосередкований Т-клітинами цитоліз, обумовлений активованою протеазою ЕоІВ1-ТСВ- молекулою, оцінювали на первинних клітинних лініях, що експресують низькі рівні Ео!Н1 (фіг. 43). Мононуклеарні клітини периферійної крові (РВМС) людини виділяли з лейкоцитарних плівок, які одержували із здорових донорів. Лейкоцитарну плівку розводили в співвідношенні 1:1 стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Нізіорадиє (фірма Бідта, Мо НВ8889). Після центрифугування (450х9д, 30 хв, без перерви, кімнатна температура) інтерфазу, що містить
РВМС, переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400х9, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали і дебрис РВМС ресуспендували в 2 мл АСК-буфера для лізису еритроцитів. Після інкубації при 37 "С протягом приблизно 2-3 хв пробірки заповнювали стерильним ЗФР до 50 мл і центрифугували при 350х9 протягом 10 хв. Вказану стадію промивання повторювали одноразово перед ресуспендуванням
РВМС в середовищі АРМІ1640, що містить 2 95 ЕС5 і 1х СішамМах і 10 95 ДМСО. РВМСО повільно заморожували протягом ночі при -80 "С в контейнерах для заморожування клітин СооІСейе (фірма Віосівіоп) і потім переносили в рідкий азот. За 1 день до початку аналізу прикріплені клітини-мішені збирали за допомогою трипсину/ЕДТА, підраховували, перевіряли життєздатність і ресуспендували в середовищі для аналізу (АРМІ 1640, 2 906 ЕС5, 1х Сішамах).
Клітини-мішені висіювали з густиною 20000 клітин/лунку в плоскодонні 96-лункові планшети та інкубували протягом приблизно 20 год. при 37 "С у вологій камері. приблизно за 20 год. до початку аналізу РВМС піддавали відтаванню в середовищі АРМІ1640 (10 95 ЕС5, 1х Сішамах).
РВМС центрифугували при 350х4 протягом 7 хв. Дебрис ресуспендували в свіжому середовищі (АРМІ 1640, 2 95 ЕС5, 1х Сішамах) та інкубували протягом максимум 24 год. при 37 "С у вологій камері. За один день до початку аналізу РВМО збирали і центрифугували при 350х9 протягом 7 хв. Дебрис ресуспендували в середовищі для аналізу і додавали до клітин-мішеней 0,2 млн
РВМО з розрахунку 100 мкл/лунку (ЕТ 1071, співвідношення визначали на основі кількості висіяних клітин-мішеней). Молекули розводили середовищем для аналізу (АРМІ1640, 2 95 ЕС5, 1х Сішамах) і додавали у вказаних концентраціях в трьох повторностях, після чого планшети інкубували протягом приблизно 48, 72 і 96 год. при 37 "С у вологій камері. цитоліз клітин- мішеней оцінювали після інкубації протягом 48, 72 і 96 год. при 37 "С, 595 СО» шляхом
Зо кількісного аналізу вивільнення ЛДГ в клітинні супернатанти апоптозними/некротичними клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма ЮНоспе Аррій Зсіепсе, Мо 11644793001).
Максимальний лізис клітин-мішеней (- 10095) досягався при інкубації клітин-мішеней в присутності 1 96 Тритону Х-100 протягом 20 год. до визначення ЛДГ. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без будь-якої
З5 ТОВ.
Токсичність по відношенню до бронхіальних епітеліальних клітин людини, опосередкована людськими РВМСОС і 100нМ або їОнм БоІй1-ТСОВ виявилась вище, ніж при використанні активованою протеазою ТОВ.
Приклад 25 40 Цитотоксичність по відношенню до ЕГоІНК1-негативних клітин, опосередкована активованою протеазою ЕоІВ1 ТОВ
Опосередкований Т-клітинами цитоліз, обумовлений активованою протеазою ЕоІВ1-ТСВ- молекулою, оцінювали на ЕоІН1-негативній клітинній лінії МКи-45 (фіг. 44). Мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) людини виділяли з лейкоцитарних плівок, які одержували із 45 здорових донорів. Лейкоцитарну плівку розводили в співвідношенні 1:11 стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Нізіорадне (фірма бідта, Мо Н8Ф889). Після центрифугування (450х9, хв, без перерви, кімнатна температура) інтерфазу, що містить РВМС, переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400х9, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали і дебрис РВМСО ресуспендували в 2 мл АСК- буфера для лізису еритроцитів. Після інкубації при 37 "С протягом приблизно 2-3 хв пробірки заповнювали стерильним ЗФР до 50 мл і центрифугували при 350х9 протягом 10 хв. Вказану стадію промивання повторювали одноразово перед ресуспендуванням РВМСО в середовищі
АРМІ1640, що містить 295 ЕС і їх СішамМах і 1095 ДМСО. РВМС повільно заморожували протягом ночі при -80 "С в контейнерах для заморожування клітин СооіІСеїкФ (фірма ВіосСівіоп) і потім переносили в рідкий азот. За 1 день до початку аналізу прикріплені клітини-мішені збирали за допомогою трипсину/ЕДТА, підраховували, перевіряли життєздатність |і ресуспендували в середовищі для аналізу (АВРМІ1640, 2 956 ЕС5, 1х СіІшамах). Клітини-мішені висіювали з густиною 20000 клітин/лунку в плоскодонні 9б-лункові планшети та інкубували протягом приблизно 20 год. при 37 "С у вологій камері. приблизно за 20 год. до початку аналізу 60 РВМС піддавали відтаванню в середовищі АРМІ1640 (1095 ЕС5, їх СіІшаМах)о РВМО центрифугували при 350х9 протягом 7 хв. Дебрис ресуспендували в свіжому середовищі (АРМІ1640, 2 95 ЕС5, 1х Сішамах) та інкубували протягом максимум 24 год. при 37 "С у вологій камері. За один день до початку аналізу РВМО збирали і центрифугували при 350х9 протягом 7 хв. Дебрис ресуспендували в середовищі для аналізу і додавали до клітин-мішеней 0,2 млн
РВМО з розрахунку 100 мкл/лунку (ЕТ 1071, співвідношення визначали на основі кількості висіяних клітин-мішеней). Молекули розводили середовищем для аналізу (АРМІ1640, 2 95 ЕС5, 1х Сішамах) і додавали у вказаних концентраціях в трьох повторностях, після чого планшети інкубували протягом приблизно 48 і 72 год. при 37 "С у вологій камері. цитоліз клітин-мішеней оцінювали після інкубації протягом 48, 72 і 96 год. при 37 "С, 595 СО» шляхом кількісного аналізу вивільнення ЛДГ в клітинні супернатанти апоптозними/ некротичними клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма Росне Арріїєд бсієпсе, Мо 11644793001). Максимальний лізис клітин- мішеней (- 100 95) досягався при інкубації клітин-мішеней в присутності 1 95 Тритону Х-100 протягом 20 год. до визначення ЛДГ. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без будь-якої ТОВ. активована протеазою
ТОВ не индукувала цитоліз клітин-мішеней при застосуванні в концентрації 10ОнМ.
ЗЕ
Конструкція Амінокислотна послідовність є
МО
ОАММТОЕРБІ ТМО5РОСТМТІ ТСаЗЗТОАМТТЗММУАМУММОЕК
РООСОАЕВНИа ІС ТМКААРСТРАВЕЗаБІ І ССКААЇ ТІ 5БАОР - - ЕОЕАЕМУСАЇ МУУЗМІ МУМЕСИСТКІ ТМ ФОРКААРБЗМТІ ЕРР
Загальний легкий ланцюг ІС рЕТАКТ3197| ЗБЕ ОАМКАТІ УСИЗОРУРСАУТМАМ/КАОЗ5РУКАСМЕТТ. | 1
ТРОЬКОБММКУААБЗ5УХІ ЗІ ТРЕОСМКЗНАЗУЗСОМТНЕСЗТМЕ
КТМАРТЕС5
ОО МОБОРЕЇ ККРОЕТУВІЗСКАБОМ ТЕТОМ5ІНМУУКОАРО
КСІ К/МОУММТЕТСОЕРАМАВОРКОВЕАЕБІ ЕТ5А5ТАМІ ОЇ
ММ КМЕОТАТЕЕСАНРУЮУ ОМ ОМУСОСТУТУЗЗОСОС5 савсаБасаа5БасОасй5ОТМІТО5РАБІ СМ5І СОВАТІЗСВА
ЗК5У5ТЗМУЗМНУМООКРООРРКИ ІКУУ5МУІ ЕБОМРАВЕ5
Анти-СОЗ (Снагаб527 МН 3-23(12) МІ7- О5Ба5БатоОЕтТІ МІНРУЕЕЕБААТУУСОНОЗВЕЕРМ ТЕС Са,Тткі. 46(13)) всЕм15-сайт матриптази МКО62| ЕІіКСССОСЗОСасаЗВОАВУУМмассосваса,сасоаоЕМ
Снагаб527 УНЗ 23-МНІ2 СНІ БоІАт! 1605 ОГП ЕБССОІ МОРОСІБЗІ ВІ ЗСААЗБОЕТЕЗ ТМАМММ УВОАРО
МН ОСНІ пит о бс "виступ РО ГАГА) КО ЕМУ5ВІВЗКУМММАТУМАрЗУКОаВЕТІЗвООБКМТІ МО рЕТНІ1І5422 МІ5І ВАЕОТАУУУСУВНОаМЕаМЗУМБУ БА СсОСТІ МТУ ою, ЗАЗТКОРЗУЕРІ АРЗЗКЗТЗОСТААГаСІ МКОУЕРЕРУТУЗ ой» М/М5САЇ ТЗОМНТЕРАМІ О5501 У5І 55УМТУРБЗББІ ОСТОТУІ и СМУМНКРОМТКМОККУЕРКЗСОСОСОЗОСССЗЕМОЇ МЕ | 2
ЖЖ кутєюх СОСІ МКРОСЗІ ВІ ЗСААЗОЕТЕЗМАМ МОУ УВОАРОКИЇ Е р с с | муавВІКЗКТрасттруААРУКОВЕТІЗАВОБКМТІ МІ ОММ5
І Ве: з Ї КТЕОТАМУУСТТРИ ЕМ БУМ ОМ СОСТІ МТМ55АВТКОаРБ и Кк МЕРІ АРЗЗКУТЗОСТААІ ССІ МКОУЕРЕРУТУЗМУМЗСА 5 щі. СМНТЕРАМІ 05501 У5І 554УТУРБЗЗБІ СТОТМІСМУМНКРО и МТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕААСОРБУКІ ЕРРКРК шк щі ОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕММ УМО СМЕМНМАКТ
КРАЕЕОУМЗТ УВУ МТМ НОВУ МОКЕУКСКУЗМКАГ аА
РІЕКТІЗКАКООР ВЕРОМУТІ РРСВОЕЇТКМОМБІ ММС УКОИаЕ
МУРББІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБООаЗЕРІ У5КІТМО
КАМ ОСаМмМЕЗСЗММНЕАЇ НМНУТОКБІ БІ РОК
ЕМОГЇ МЕЗО ВСІ МКРОСІБІ ВІ БСААБСЕТЕЗМАМ МБУУМ ОА
РОКаГгЕМмУавІКЗКтраатТрухААРУКОАЕТІЗАНОО5БКМТІ.
МГ ОММ5І КТЕОТАУУУСТТРУЕМ БУ МОУ ВОСТІ МТА
ЗТКОРБЗМЕРІ АРЗЗБКОТЗИааТААГаСІ МКОМЕРЕРУТУБУУ/М " " ЗаАЇГТ5аМНТЕРАМІ О55(01І 51 55 МРБББІ ЕТОТМІСМ
Боеос Та НУ отв: в |УМНКРОМТКУОККУЕРКОСОКТНТСРРСРАРЕААСОРВУНІ. | з " ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМОУ5НЕОРЕУКЕММ УМВС ОМЕ
МНМАКТКРАЕЄОУМОТУАУММІ ТМ НОСУУЛІ МОКЕУКСКМУ5
МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМСТІ РРОВОЕТКМОМ5І 5
САУКагУРЗВІАМЕЖМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБОСЗЕРІ М
ЗКТУЮКЗАМООСММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМАЕТОКБІ 5І РОК
ЗЕ
Конструкція Амінокислотна послідовність в
Мо
ОМОЇГКЕВЗОРОЇГ МАРБОВІ ВІТСТУЗОЕБІ ТЗУСУЗМУВОРР
СКСІ ЕУЛІ СІМ/СО0С5ТМУ НА І5ВІ ВІЗКОМОКЗОМРНІ КІ М5
ІГОТООТАТУХУСАКСІТТМУУООУУАМОУМ СОСТЗУТУВЗЗСО
ССС 0СО50 00500 МТО9РАВІ 5АЗУСЕТМТІТ
СВАБЕМІОЗМІ АМ/МООКОСКОРОП УУААТЕЇ АООУРОВЕВ
Анти-СОЗ (Снг52г7 МН 8-23(12). МІ-71 З5050ТОУІ КІМ ОЗЕОМАВУУСОНУУЗТРУТЕОСОТКІ. 46(13)) зсГм 4.32.63 сайт матриптази| є!КосОС5О058ОАВУУМОСОСО5О 009000 О5ЕУ
МКОб2 СНгбг7 УНЗ 23-УНТ2 СНІ РОІНТІ| С) | Е5СОСІ МОРОСЗІ ВІ ЗСААЗСЕТЕЗ ТУАМММ/УВОАРО 1605 УН СНІ пит Ре "виступ" РО ГАГА) Ко ЕМ/У5ВІВЗКУММУАТУУАОЗУКОВЕТІЗВООКМТІ МО рЕТАТ5599 ща ММ8І.ВАЕОТАУУУСУВНОМЕСМВУУЗМ РАМ СОСТІ ТУ
Ом, жан» | ЗАЗТКОРЗМЕРІ АРЗОЗКЗТЗОСТААГ ОСІ УКОУЕРЕРУТУ В ши в М/МУСАЇ ТЗСУНТЕРАМІ 05501 81 55УУТУРУЗУІ СТОТУЇ ай СМУМНКРОМТКУОККМЕРКЗСОСОСОЗООСО5ЕМОЇ МЕС | 4 оре СССІ УКРОСВІ ВІ ЗСААЗСЕТЕЗМАМ/МОУУВОАРСКСІ Е фр пив най М/УСОВІКЗКТООСТТОМААРУКОВЕТІЗВООВКМТІ МІ ОММ5 бпье а І КТЕОТАУУУСТТРИ/ЕМ/ ЗМУ ОУМСОСТІ УТМ55АВТКОРУ сою КК вхекніщенх МЕРІ АРОЗКЗТЗССТААІ ССІ УКОУЕРЕРУТУЗМ/МЗСАІ Т5 ' | СУНТЕРАМІ 05501 У5І 557 УТУРЗУЗВІ СТОТМІСМУМНКРУ ще ОщЕх МТКУОККУЕРКУЗСОКТНТСРРОСРАРЕААСОРЗУБІ ЕРРКРК ве ОТІ МІЗВТРЕМУТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕММ УМО СМЕМНМАКТ і КРВЕЕОУМ5ТУВУМУМІ ТМІ НОСУМІ МСКЕУКСКУЗМКАЇ СА
РІЕКТІЗКАКСООРВЕРОМУТІ РРСВОБІ ТКМОМЗЛИУСІ МКОЕ
ХРЗОІТАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОЗ0ОС5ЕБІ У5КІ ТО
КЗВУ/ООСМУЕЗС5УМНЕАЇІ НМНУТОКЗІ І РОК
ОМОЇГКЕВЗОРОЇГ МАРБОБІ ВІТСТУЗОСЕБІ ТЗУСУЗМУВОРР
СКСІ ЕУЛІ СІМ/СО0С5ТМУ НА І5ВІ ВІЗКОМУКЗОМРНІ КІ М5
ІГОТООТАТУХУСАКСІТТМУУОЮУУАМОУМ СОСТЗУТУВЗЗСО
ССС О5009050ІОМТО5РАВІ ЗАЗУСЕТМТІТ
СВАБЕМІОЗМІ АМ/МООКОСКОРОП УУААТЕЇ АООУРОВЕВ
Анти-СОЗ (Снаг52г/ МН 3-23(12). МІ-71 О5050ТОУ8І КІМ ОБЕОМАВУУСОНУУЗТРУТЕОСОТКІ. 46(13)) всЕМ 4.32.83 нерозщеплюваний єгікосссЗососзассо5авособО5О0бО5000О5ЕМ лінкер СН2527 МНЗ 23-МНІ2 СНІ РОЇІНІ| Сі | ЕЗСОСІ МОРССБІ ВІ ЗСААЗСЕТЕЗТУАМММУВОАРО 1605 МН СНІ пит Ре "виступ" РО ГАГА) КО ЕМ/УУ5ВІВКУММУАТУХАОЗУКОВЕТІЗВОО5КМТІ МО рРЕТАТ5603 ще ММ8І ВАЕОТАУУУСУВНОМЕСМЗУУЗМЕАУМ СОСТІ УТУВ "Ж; вешех | ЗАЗТКОРУЗМЕРІ АРЗЗКОТ5ОСТААІ ОСІ УКОУЕРЕРУТУВ пан М/М5САІ ТЗСОУНТЕРАМІО55С1 У5І 55 ТУРІ ТОМІ са СМУМНКРЗМТКУОККУЕРКЗСОССССЗОСОС5ЕМОЇ МЕС | 5 й ше СССІ УКРОСВІ ВІ ЗСААЗСЕТЕЗМАМ/МОУУВОАРСКСІ Е дк зов а М/УСОВІКЗКТООСТТОМААРУКОВЕТІЗВООВКМТІ МІ ОММ5
ОО» со І КТЕОТАУУУСТТРИ/ЕМ/ ЗМУ ОУМСОСТІ УТУ55АВТКОРІ дхохенеме З КЕЙ теж» МЕРІ АРОЗКЗТЗССТААІ ССІ УКОУЕРЕРУТУЗМ/МЗСАІ Т5 г СУНТЕРАМІ 05501 У5І 557 УТУРЗУЗВІ СТОТМІСМУМНКРУ ще ще МТКУОККУЕРКУЗСОКТНТСРРСРАРЕААСОРЗУБІ ЕРРКРК шк ОТІ МІЗВТРЕМУТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕММ УМО СМЕМНМАКТ
КРВЕЕОУМ5ТУВУМУМІ ТМІ НОСУМІ МСКЕУКСКУЗМКАЇ СА
РІЕКТІЗКАКСОРВЕРОМУТІ РРСВОБІ ТКМОМЗЛУСІ МКОЕ
ХРЗОІТАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОЗ0ОС5ЕБІ У5КІ ТО
КЗВУ/ООСМУЕЗС5УМНЕАЇІ НМНУТОКЗІ І РОК
ЗЕ
Конструкція Амінокислотна послідовність в
МО
ООГ МОЗОРЕЇ ККРОЕТМВІЗСКАЗОаУТЕТОУВІНМУКОАРО
КСІ КМУ/МОММТЕТОЕРАХАОРОЕКОВЕАЕВІ ЕТ5АБ5ТАХМІ ОЇ
ММІ КМЕОТАТЕЕСАНРУЮУ ОМІ ОМУСОСТіЗУТУВЗЗаСсО5 сасаазаасОаЗоОсО50тТМІТО5РАБІ СУ8І СОВАТІЗСВА
ЗК5УЗТЗМУЗМІНМУООКРООРРКИ КУМ ЕВСОМРАВЕ5 46015) вом нороз висаевтг) С8О5СТОЕТІ МІНРУЕЕЕОААТУУСОНОВЕЕРМТЕОССОТКІ.
СНоБоУ УНЗ оз ні? СНІ ОІВ 1505 ЕІКасосЗосос5асоовасососОБОасО5О0СО5ЕМУ
МНоОСНнІ пит вс "виступ" РО АГА | ОМ ЕЗООСІ МОРОЗІ НІ ЗСААВОЕТЕВ ТУАМММ/УВОАРО
ЕТВІ4759 У ї КОГЕМ/УЗВІВЗКУММУАТУМАОЗУКОаВЕТІЗАООКМТІ МО р шою ММ5І ВАЕОТАМУУСУВНОМЕаМЗУМ ЗУ гАУМ СОСТІ МТУ
Гтрняжеютях ЗАЗТКОРОМЕРІ АРОЗКЗТЗОСТААІ ОСІ МКОУЕРЕРУТУ5 сне в М/МЗСАЇІ ТЗОУНТЕРАМІ О55601І У5І 65 ТУРБББІ СТОТУЇІ со СМУМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОСОСОЗОССО5ЕМОЇ МЕ зр від м: а юн СОСІУКРОСЗІ ВІ БСААЗСЕТЕЗМАМ/ МОМ УВОАРОКОСЇ Е і сх ай МУСВІКЗКТОСОаттТОУААРУКОаВЕТІЗАООЗКМТІ МІ ОММ5 ши ь г МШННИ Ї КТЕОТАМУУСТТРУ ЕМ ЗМУ РУ СОСТІ УТМ55АВЗТКОаРУ т п МЕРІ АРЗЗКУЗТЗОСТААІ СІ МУКОУЕРЕРУТУЗМУМЗСА Т5 сте с. ско» СМНТЕРАМІ О5501 У5І 85УУТУРБЗВЗВІ СТОТМІСМУМНКР шк | ще МТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРСОСРАРЕААСОРОМУБІ ЕРРКРК
З ОРТІ МІЗАВТРЕМУТСУУМОУМЗНЕОРЕМКЕММ УУВОМЕМНМАКТ
КРАЕЕОУМЗТУВМУММІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКУЗМКАЇ СА
РІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРСВОЕБЇ ТКМОМ8ІМ/СІ МКОЕ
ХРУЗОІАМЕМЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ О5РОЗЕРІ УВК ТМО
КЗАУООСММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗВІ І РОК
Лінкер із сайтом протеази МКОб2 ссва,Ас5асОО5ВОАвУУМасосаЗасааЗасос5
Лінкер з об'єднаними сайтами МЕ9/Маї5 сеевзУнмМРІ ОРІ брОнЗАОЗЕРОСОСВ в
Лінкер з об'єднаними сайтами МКО624 СИСОЗОСОаСЗВОАВУУМаСО СО 5МРІ БІ УЗС0сОС5ОО в
ММРО се5
Лінкер з об'єднаними сайтами МКОб62 сСссОа5асаазАОАвАУММаМРІ І БОСсСОаСсаБаСОСЯСО
ММРа
Н2г527, СОВ. НІ за Кеботом ТУАММ
СН2г527, СОВ. Н2 за Кеботом ВІВЗКУММУАТУМАЮВУКОИ
СН2г527, СОВ. НЗ за Кеботом НОаМЕСМЗУУЗУЕдУ
Ео!в1, СОР. НІ за Кеботом МАМУ/М5
Ео!в1, СОВ Н2 за Кеботом ВІКОКТОСОаТТОМААРУКО
Ео!В1, СОВ. НЗ за Кеботом РУУЕМ ЗМО
СС, СОР 11 за Кеботом С55ТОАМТТОММАМ
СІ.С, СОБ 12 за Кеботом СТМКВАР
СІ.С, СОБВ ІЗ за Кеботом АГМ/УЗМІ МУ анти-ІЮ 415.64, СО НІ за Кеботом 0 9ІН анти-ІЮ 415.64, СОВ Но за Кеботом | /МТЕТОЕРАУАООРКО анти-ІО 4.15.64, СОВ. НЗ за Кеботом РУХОМІ ОХ анти-ІО 4.15.64 СОВ 1 1 за Кеботом ВАБКБУЗТЗМУЗТН анти-і0 415.64, СОВА І12заКеботом | УЗ ЕЗ анти-ІО 4.15.64, СОВ ІЗ за Кеботом ОНЗВЕЕРМТ анти-ІО 4.32.63, СОВ НІ за Кеботом зувуз анти-ІЮ 4.32.63,СОВ Но за Кеботом У О0рОБТМУНБАНЬ анти-ІО 4.32.63, СОВ. НЗ за Кеботом СіТТУМОрууАМОУ анти-ІО 4.32.63, СОВ 11 за Кеботом ВАЗЕМІОЗХА анти-ІО 4.32.63, СОВА 12 за Кеботом ААТНАО анти-ІО 4.32.63, СОВ ІЗ за Кеботом ОНУУЗТРУТ
ЗЕ
Конструкція Амінокислотна послідовність в
МО
Анти-НЕБІ (СА201, важкий ланцюг, дуаїмаздаєуккроззукизсказдаітаукіпммтаар рисС-Ехр-СА2О1-НС) дадчіємтадуїпрпзаузіуадкідогйааквівіаут уз еіз5ігзед(амуусапзрадууутаамудадимімзза а зікареміріарезквіздаїааІдсімкауїрермімемп м здаїйвампнрамідззаіузіввУмімрзззідідіуїсп я Сай мпикрзпікхаккуеркзсакнтісррерарещдарзмії 32 до. тТрркркайтів премісуууамзПпедреукіплумхадме
С мппакікргеєедупаіугузммІпаам поКеукскмв с пКаІраріекіізкКакодргердмуПррегаейнКпадмвії : сімкотурзаїамежезпддреппукирруїазадену
У зкимакзпудадпмївсямтпеаінппуїаквівіврак - дідтідерззізазмдамйстазддіппуіпудакра
Анти-НЕКЛТ (СА201, легкий ланцюг, РОС Каркпіупіппідюмрегівдвазогенніввідресії
Ехр-САгО1 тб) ауусідппз!ріддаківїкимаарвміррзаєдікв ї, діазммсіІІпптургеаку«дикмапа|дздпздезмієда 33 «г зкавіувіввзШеКадуєкнкмуасемінадівзрмікві ї пгдес емадієдзармімкрдїзиКктзсКаздуштаууіпмиіїдвпа
Ксіем'ідміпраздаїдупдпікоакаймаквзцаутеїї
Анти-НЕНВІ (анти-СА201 МУН-МІ всем 5іїзедзамуусатазудіаудаошимв59999599 розщеплюваний ММР лінкер 545 СА201| аддхаддозадоазаімнаркпмрадагйтіскавів легкий ланцюг, русС-І (А2ОЇ ММР 1 с) | міпамамудакрдазркПууазпгпадуратоздуд
СЬ апшІдаєаіахусадаузррідсакківїг9доа и озадаазарідмзададазадоозадаозодаїдтіа 34
З ДЗ 5ревівазудагмійсгаздадіппуІпудакроаКаркптії
З упіппід(дмрегіздаздзагейніззідреагаєгуусід ппегргодаківїкпімааремйїррзаедіквдіавзум ща сіІіпптургеакуиджкмапаІдзопздезміедазкавіу вів Кадуекикмуасеміпадіззрміквіпгдес
ОО МОБОаРЕЇ ККРОЕТУНІЗСКАБОУТЕТОУБІНМУУКОАРО
КСІ КУМОУІМТЕТОЕРАМАООЕКОВЕАЕБІ ЕТЗАБТАМІ ОЇ
ММІ КМЕОТАТЕЕСАНРУЮМОМІ ОМ СООСТЗУТУБВОСІОЯСОЯ
4.15.64 антиідіотиповий 5сЕу сасоБасава5асвиаавБОТМІ ТО5РАБІ СУБІ СОВАТІЗСВА ді т ЗКБУБТОМУЗМУНУМООКРООРРКІ ГІКУУЗУІ ЕБОМРАВЕ5 авБаватТОЕТтІМІНРМЕЕЕВБААТУУСОНОЗВЕЕРМТРаСаИткіІ.
ЕК
ОМОЇ КЕБОРОЇ МАРБОБІ БІТСТУМ5БОБ5І ТОМ ОУБУМУМВОРР
СКСГЕУМ СПУ СОТ ММНЗАГІВЗАЇ 5ІЗКОМОКООМРЕЇ КІ М
ГОТООТАТУУСАКСОСІТТУМООХУАМО МУ ВСОСТоУТУВВОаС 4.32.63 антиідіотиповий 5сЕУ сазасос5ааса5ацвоайерІОМТО5РАБІ ЗАБМОЕТМТІТ | 42
СААБЕМІОЗМІ АМ/МООКОСКОРОЇ ЇЇ ММААТЕРІ АЮОУРОАЕЗ аБабБОатТОмБІКІМ5 ОБЕОМАВУУСОНУМЗТРУТРОаСаИТтКІ.
ЕК
ЕМО ЕБОСИОЇ МОРОСБІ ВІ БСААБаЕТЕЗТУАММУУВОА
Варіабельний важкий ланцюг анти-СОЗ РОКИ ЕМ У5АІВНЗЕКУМММАТтУУАоБУКОаВЕТІЗАрОБКМТІ У 43 (УН) ГОММ5І ВАЕОТАМУУУСУ АНаМЕаМЗУУБУ гам ОСТІ МТ
У
ЗЕ
Конструкція Амінокислотна послідовність в
МО
ЕМО МЕВОССІГ МКРОСБІ ВІ ЗСААЗСОЕТЕЗМАМ МОМ УВО
, , РОКОГЕМУОВІКЗКТОСОТТОУААРУКОВЕТІЗВОО5КМТІ.
Варіабельна ділянка анти-Роїй! 1605. ГУ ЗММ8ІКТЕОТАУУУСТТРУ/ЕМ ЗМО СсТтІ УТ
Антиїдіютиповий СА201, СО Н2 за міправовіаупапіко
Антиїді й Аг201, Сов НІ
Антиідіостиповий СА201, СОК 11 за
Антиідіостиповий СА201, СОК 12 за лнтиїдіотиповий СА2ОЇ, СОБ 13 за даауїеррі
МОБатнм/ ВМ а СИ Мам вораМмЕЕМОСІТОТРУКМВІ
ЗОТТМІ ТСРОУРОЗЕП МОНМОКМІСООЕООКМІСЗОЕОНІ. пи СОЗ ЗІ КЕЕЗЕЇ ЕОЗОУУУСУРВОЗКРЕОАМЕТІ МІ ВАВМСЕМС Ба
М МЕМОММ5МАТІМІМОІСІТОС ПІ МУ УМ ЗКМАКАКАКРУТВО
АСАСОВОВСОМКЕВРРРУРМРОХУЕРІВКСОВОЇ УСІ МОВ
ВІ
Загальний легкий ланцюг Г.С ОАММТОЕРБІ ТМУ5РОСТМТІ ТСОЗЗТОАМТТЗММАМУМОЕК рРЕТВ13197, РООАЕВСІИ ІСОТМКВАРСТРАВЕЗОВІ! СОКАЛІ ТІЗСАОР.О | 55
М-ділянка ЕОЕАЕХУСАЇ М УЗМІМУгОСИТткКІ ТМ.
СА2О1, СОВ НІ за Кеботом ауктп
СА2О1, СОВ Н2 за Кеботом уїпризоузіуаакідо
СА2ОЇ, СОВ НЗ за Кеботом ІБродууутаа
СА2ОЇ, СОВ 11 за Кеботом гавадіппути змові 00011116
СА?ОЇ, СОВ І З за Кеботом Ідппвїрі
Конструкція Послідовність ДНК Зоо
САПБИССОТСаТОаАСССАСОААСССАОССТОАСАататостостаОс
СасСАССОТОАСССТОАСАТаТОССАСТТСТАСАСОСаТсСсСОтТОАСС
АССАССААСТАСаССААСТОВаТаСАСОСААААаСССаасСсСАСа сс
ТТСАСАСОАСТОАТСООСОпССАССААСААСАСАСССССТОССАСС
ССТассАСАТТСАССОСАТСТСТаСТаОСАСОАААсСассоссста
АСАСТатТСТОйСОСсССАСССАСААСАТОАСОССОАСТАСТАСТОС
Загальний легкий ланцюї ССССТатТасатТАСАаСААССТО ТаВСОЯТОттосаСОапАвасСАССААДИ
І С рЕТВ13197 СТОАСАСТОСТАСОИТСААСССААСОСТаСССССАССОатТОАСОостТа в2
ТТОССССССАОСАССОАОСААСТаСАСОССААСААСОССАСССТО атстасстаАТСАССОАСТТСТАСССАсОаСсОосСсатадссатассс
ТтОаОААСОаССОАСАасСАаССССатаАлАааССаасСатаспсАСАССАС
САСССССАССААДССАСАССААСААСААИТАСОССОССАССАССТА
ССТаАаССтТОАСССССОаАасСАСТаСААСАОССАСАСОИТССТАСАС
СТаССАСОСТОАСССАСОАОСОСАССАССОСТОСАСААДААССОТОС
СССССАССОАЛаТасСАасСтТОА
САСАТССАССТОСТОСАСАССООСССТОАССТОААСАААСССООС
САСАСАСТОСССАТСАССТОСААСОССАСССОСТАСАССТТСАСС
САСТАСАССАТССАСТОООТСААССАСОССССТОССААСТОССТО
ААСТОСАТОСОСТОСАТСААСАСССАСАСАССССАССССОССТАС
ССССАССАТТТСААСОССАСАТТСОССТТСАСССТОСАААССАСС
СССАССАССОССТАССТОСАСАТСААСААССТОААСААССАССАС
АССОССАССТТТТТСТОСОСССАССССТАССАСТАССАССТОСТО
САТТАТТОСООССАССССАССАССОТСАССОТОТСТАССОСАСОС
СОСАССАТСТОССОССОСАССААСТООСОСАСОСОСАТСТОССО
САССССОСАТСТОАТАССОТОСТОАСАСАСАССССТОССАСССТОС
САСТОТСССТОССАСАСАСАСССАССАТСАОСТОТСОСОССАССА
АСАСССТОТССАССАССААСТАСАССТАТАТССАСТОСТАТСАССА
СААССССССССАСССССССААССТОСТОСАТСАААТАССТОТОСТА
ССТОСААДАССООССТОСССОССАСАТТТТСТОССТСТОССАССоО
САСССАСТТСАСССТОААСАТССАСССССТОСААСАССААСАТОС
СОССАССТАСТАСТОССАССАСАССАСАСАСТТОССТТОСАССТТО
СОСТОСОССАССААССТОСАААТСАААСОСоооосАСОСТоСоС
АСОСОССОСААСТАСАСАСОССАСАСТОСТОААСОСОССАСОСО
СОССААСТОСОСОСОСАСОСАСТООСОСОССАССАТСССАССТ
ССАССТОСТОСААТСТОССООСОСАСТОСТОСАСССТОССОСАТ
СТСТОАСАСТОАОСТОТОССОССАССООСТТСАССТТСАССАССТ
АССОССАТОААСТОССТОСОССАСОССССТООСАААСОССТОСААТ
СОСТаТОССОсАТСАСААОСААСТАСААСААСТАСОССАССТАСТА
СОССОАСАСССТОААССОССОСТТСАССАТСАОССООСАССАСА
ССААСААСАСССТОТАССТОСАСАТОААСАСССТОСОСОСССАСО
АСАССОССОТОТАСТАТТОТОТОСОССАССССААСТТОСССААСА
Анти-СОЗ (СН2Б527 УН 3- ССТАТОТОТСТТОСТТТОССТАСТООООССАССССАСССТССТОА 29(12) МІ7-А6(13)). зсгм154 СССТОТСААССОСТАССАСАААСОССССТАСССТОТТОССТСТОаО сайт матриптази МКОВ2 СССССАССАССААСАССАСААССООСССААСАСССОСССТОСОС
СН2Б27 УНЗ. 23-УНІ2. СНІЇ ТОССТСОТОААССАСТАСТТСССССАССССОТСАСАСТОТСТТОС
РОЇВ 1605 УН СНІ пит Ес ААСАССССАССССТОАСААСССОСОТОСАСАССТТОССТОСССТО "виступб РО 0/0 ГАГА|СТОСАСАОСАОССОССТОТАСТОССТОАССАССОТОСТСАСССТО рЕТВІ15422 ССТАССАССАСССТОСОСАСССАСАССТАСАТСТОСААССТОААС З тут | САСААОСССАССААСАССАААСТОСАСААСААССТОСАССССААО я АССТОТСАТОССОСАССАСОСТОСОСАСОСОСАССАТСССАССТ
ЖК 00 |ОСААТТОСТТОААТСТОСТОСТОСТСТОСТААААСССсОСССсТТо с ак ССТОСатСтТОАОСтТаСОсСООсСтТТоСООАТТСАССТТСТССААСОС ша о ше СТОСАТОАОСТОССТТСОССАСОССССОСССАААСОССТССАСТ не СОСТТОСтСОтТАТСААСТСТААААСТОАСОСТОССАССАСОСАТТА дя СОССОСТОСАСТТАААССТОСТТТТАССАТТТОССОССАССАТАСС
ААДАДАСАСТСТОТАТСТОСАСАТСААСТСТСТОААААСТОААСАСАС
СОСАСТСТАСТАСТОТАСТАССССОТОССААТОСТСТТОСТАССАТ
ТАТТОСССССАСОССАСОСТОСТТАСОСТатСТАССОСТАСТАСС
ААССОССССАССОТСТТОССССТООСАСССАССАССААСАССАСА
ТСТОССООААСАСССОСТСТОСОСТОТСТОСТОАААСАСТАСТТС
СССОАССССОТСАССОТОТСТТОСААСТСТОССОСССТОАССАСС
СОСОТОСАСАССТТТОСАССССТОСТОСАСАССАССОСССТО ТАС
ТОССТатостосатостсАССОТОСССТСТАОСТОССТОСОААСА
САСАСАТАТАТСТСТААТОТСААТСАСААОССТТССААСАССАААСТ
СОАТААСАДАСТССАССССААСАССТОСОАСААААСТСАСАСАТО
СССАСССТОСССАССАССТОААССТОСАСССССАСССТСАСТСТТ
ССТСТТОСССССААААСССААССАСАСССТСАТСАТСТСССОСАСС
ССТОАССТСАСАТОССТООТОСТОСАСОТОАСССАССААСАСССТ
САССТСААСТТСААСТООТАССТОСАССССОТОСАСОТОСАТААТ
СССААСАСААДАСССОССССАСОАССАСТАСААСАССАСОТАСССТ
СТООТСАССОТССТСАССОТССТОСАССАССАСТОССТОААТОСС
ААССАСТАСААСТОСААСОТСТССААСАААССССТоСОСОССССС
АТССАСААААССАТСТССАААСССАААСООСАСССССОАСААССА
САСОТСТАСАСССТОСССССАТОССООСАТСАССТОАССААСААС
САСОТСАСССТОТОСТОССТОСТСАААСОСТТСТАТОССАСССАС
АТСОССОТОСАСТОССАСАССААТОСССАОССОСАСААСААСТАС
ААСАССАСОССТОССОТОСТасАСТОСОАСООСТОСТТСТТОСТСТ
АСАССААОСТСАССОТОСАСААСАССАССТОССАССАССССААС
СТСТТСТСАТОСТОССТОАТОСАТСАСОСТСТОСАСААССАСТАСА
СОСАСААСАСССТСТОССТОТСТОСОООТАААТСА вАСИТаСААТТаатТТААТСОТООТО,СТаВТСтТааТААААССО,вИаТс стсосстасатотада,астасоаСсаасТсСааАТТСАССТТСТОСАА сесатапвАтТаластаваттсасСсАаа,васссСсапаСААА,аасстоо датасаттатсСаТтТАТСААаТСТААААСтТадлсаатааСАССАСОС
АТТАСОСОаСТОСАаТТАААОаТСаТтТтТАССАТТТОССОаСОаАСОА
ТАВСАААААСАСТСТаТАТСТаСАСАТаААСТОТСТОААААСТОаААС
АСАССОаСАаТСТАСТАСТаТАСТАССССТСОЯТаСОААтТаатсттаатТА
СаАТТАТТОСОСсСССАсСОсаСАСсОоСсСТИОСТТАСОССТатсттоСастАс
САССААССССССТСССТОСОЯТа ттососСстТавСССССАаСАССААдСАС
САССАССООССО,ОаСАСА,СсСаСстТотовастасстааТСААаСАСТ
АСТТоСсСсСОаАХасоСсатаАсСсататостТавААСАаСа,аавАасСссСтаА сстососеСатаСАСАССТІОСССОССОЯТаСстТаСАсСАатттавасс тТатАТАаССТОАДаСАсССЯТаватСсАсСЯтТассттстТАаСАасСстас
ЕоІВІ 1605 УНН СНІ Ес! ЗСАСССАСАССТАСАТСТОСААССТОАДАССАСААССССАССААСА "западина" РЗ296 ГАГА ССААСатавАСААСААОСТОаАаСсССААадастасаАСААААСТС
НВУЕ, рЕТВІ15214 АСАСАТаОСССАССОЯТаСССАаСАССТаААОаСТОСАсСасасАССсат 64 " САИТСТТОСТСТТССССССААААСССААДИ,САСАСССТСАТОАТСТО ссопАССССтТаАдсаатСсАСАТОССЯТООСТОаСТапАСОСТОАаССАССОЯ
ААСАСССТадаатТСААатТСААСТОатТАСатасасавасатавАса
ТаСАТААТаССААСАСААДАДОСССООСасаА,аАаСАаТАСААСАССА сатасса,ататаатсАда,аСсатостТАсСсатостасСсАССА0ааАСТоас
ТОААТОССААСОАСТАСААатТаСААсаТтсТоСААСАААаСОоСстТоа вСасСССССАТСОСАСААААССАТСТОСАААаССАААаСОааСАаСССс пАСААССАСсСАСсСатТатасСАссСстасссСсСАтТССасаАтТаАаСтТал
ССААЧААССАсСатсАаассттоавтасасСАаТСАААСастТстТАТОС
САаСаАСсАТСОЯССОСЯТОВСАсСТасОаАаАаСААТавасАа,СсСааАаА
АСААСТАСААСАССАСЯССТОСТСОЯТаСтТасАСТоСаАСОсастостТ тотостТатаАССААдасСстТсАССсатапАСААаАаСАсвсатаасАас
А,вапапААСатсТСстТАТаСтТСатаАТаСАТаАСасСтТоТасСсАСАА
ССОаСТТСАСОСАСААдаАХаССтТоТоССстТатстоСасцсиаТАААТаА
СААСТОСАССТОАААСАСТОСООСССТОСАСТОСТОСССССТАСС
САСАСССТОАССАТСАССТОТАСССЯТОТОСООСТТСАСССТОАСС
АДОСТАСССССТОТСАТОСОСТОСОССАСССТоСАСОСААСТОТСТО
СААТОССТОССОСАТСАТСТОСОССОСАСОССАССАССААТТАССАС
АДОСОСССТОАТСАССАСАСТОАССАТСТОСААССАСААСАССААС
АДОССАСОСТОТТОСТОААОСТОаААСАСССТОСАСАСССАССАСАСС
СССАССТАСТАСТОСОССААССОСАТСАССАСССТОСТОСАССАС
ТАСТАСОСТАТОСАСТАСТОССОССАССОСАССАССОСТОАСАСТО
ТСТАОСОСАСОСОСАССАТСТОССООСОСАССААСТОССОСАСС
СОСАТСТОССССАСОССОААСССАТАТССАСАТОАСССАСАССС
СТОаССАСССТатстасстстатосОсСсАСАСАСТОАССАТСАСАТ
СССОООССАСССАСААСАТССАСАССТАССТООССТОСТАТСАСС
АСАДССАСОСОСААСАССССССАССТОСТОСТОаТАСОССОССАССТ
ТТСТОССССАССАТОТОСССАССАСАТТСАОСОССАССССААЛОСО
ССАСАСАСТАСАСССТОААСАТСААСТОССТОСАСАССОСАССАСО
ТООСССОСТАСТАСТОССАССАСТАСТАСАССАСССССТАСАССТТ
СООСТаСОСсСАССААССТОСАААТСААДАСОоСОсососАСОСсТоСе
САССССОСОСААСТАСАСАСОССАСАСТОСТОААСОсОсОссАСОС
СОВОССААСТОСОСОСССАСОСАСТОСОСОСОСАССАТСССАСО
ТОСАССТОаСТОСААТСТОССООСССАСТОСТОаСАСССТООСОСА
ТСТСТОАСАСТОАССТОТОССОССАССОССТТСАССТТСАССАСС
ТАСОССАТОААСТОССТОаСОССАСОССССТОаССАААСОССТОСАА
ТОСОатТатоссСОсАТСАСААССААСТАСААСААСТАСОССАССТАСТ
АСОСССОАСАСССТОААССОССОСТТСАССАТСАССССОССАССАС
АОСААДСААСАСССТОТАССТОСАСАТОААСАОССТОСОСОСССАС
САСАССОСССТОСТАСТАТТОТОТОСОССАССССААСТТСОССААС
Анти-СОЗ (СнНаг527 МН 94 дсСстТАТСОТОаТСТТОСТТТОССтТАСТОСОСССАССССАСССТОСТО 23(12) МІ-7-46(13)). / ЗсРМ АССстТОТСААССОСТАССАСАААСОССССТАСССТОТТОССТоТа 4.32.63 сайт матриптази зСсСсСсСАССАССААСАССАСААОСООСОСААСАСССОСССстТОСО
МКОб2г сСнабг/ УНЗ 234 СтТаССтТоСтТОААССАСТАСТТОСССОАОССССТОАСАСТОТСТТО
МНТ2г СНІ РоІВТ 1605 МН сддсАсСОСАССССтТОоАСААССОССОТОСАСАССТТОССТОСССТ
СНІ пит Ре "виступ" РОЇ ОССТОСАСАССАССООССТОТАСТОССТОАССАССОСТОСТСАСССТ
ІАГА,рЕТНІ5599 СССТАССАССАСССТОСаСАСССАСАССТАСАТСТОСААСОТОАА в5
Ше ССАСААДССССАССААСАССАААСТОаСАСААСААССТОСАССССАА
У САССТОТОАТОССОСАССАСОСТоСОСОСОСОСАССАТСССАС дурня СТаСААТТОСТТОААТСТОСТОСТОСТоТОСТААААССОЯСсОСОСТ шен БК я тосстасатстодастТасассостТосОоСаттТсАССТТСТОСААС
А. ССОТасСАТОАССТОССатТТСОССАСОССССОСОСААДАСОССТССА ж . Ж СТассттТОстТоОатТАТСААСТСТААААСТОАСОСТОССАССАСОСА ! ТТАСОСОССТССАСТТАААССТССТТТТАССАТТТОССОССАССАТ
АОССАДАДАСАСТСТОТАТСТОСАСАТОААСТСТСТОААААСТОААС
АСАССОСАСТСТАСТАСТОТАСТАСССССТОСОААТОСТСТТОСТА
ССАТТАТТОССОССАССОСАСОСТОСТТАСОСТатстТАССОСтТАС
ТАССААСОСССССАСССОТаттоссссСтаасСАСССАССАССААСАС
САСАТСТОССОСААСАСССОСТСТаСОсСтТОоТСтОСтаАААСАСТА
СТТОСССОАОСССстОсАСССТОТСТТОСААСТСТООСОСССтТОАС
САССОСССТОСАСАССТТТОСАСССОСТОСТОСАСАССАССООССТ стТАСТСОССТОТОСТоСОТОаСтТСАСССТОСОоСТСТАОСТОоССсТОесО
ААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТИатТСААТСАСААСССТТОСААСАССА
ААСТОСАТААСАААСТССАССССААСАССТОССАСАДААСТСАСАС
АТОСССАССОТОСССАССАССТОААССТОСАСОСОСАСССТСАСТ
СТТОСТСТТоСССССААААСССААССАСАСССТСАТСАТСТОСССОС
АССССТОАССТСАСАТОССТОСТОСТОСАССТОАСССАСОААСАС
ССТОАССТСААСТТСААСТОСТАССТОСАСОСССТОСАССТОСАТ
ААТОССААСАСАААОССОСОСОСАСОАОСАСТАСААСАССАССТАС
СсататастсАОСОатосСтТСАССОТОСТОаСАССАССАСТОССТОААТ
СОсСАДОССАСТАСААСТОСААСОТСТОСААСАААССССТоСОСОСС
СССАТССАСААДААССАТСТОСААДАСССАААСОССАССССССАСАА
ССАСАССТОТАСАСССТОСССССАТОССООСАТОАССТОАССААС
ААССАССТСАСССТИатостасстаатсАААСОСТТСТАТСССАСС
САСАТСОССОТОСАСТОСОСАСАССААТОСОСАСССОСАСААСАА
СТАСААСАССАСОЯССТОССОТаСТОСАСТОСОАСОСОСТОСТТСТТ
ССТСТАСАССААССТСАСССТОСАСААСАССАССТОССАССАСсС
СААССТСТТСТСАТОСТОССТОАТОаСАТСАСОСТСТОСАСААССАС
ТАСАСОСАСААДСАСССТСТОССТОТСТоСООСстТАААТОА
СААСТОСАССТОААЛАСАСТОСООСССТОСАСТОСТОСССССТАСС
САСАСССТОАССАТСАССТОТАССОТОТОСООСТТСАСССТаАСС
АССТАССОССТОатТСАТОСОСТОСОССАСССТОСАСОСААСТОТСТО
СААТООСТОСОСАТСАТСТОСОССОАСОССАССАССААТТАССАС
АССОСССТОАТСАССАСАСТОАССАТСТОСААСОСАСААСАССААС
АСССАССТОаТТоСТаААаСТОААСАСССТаСАСАССОАССАСАСС
СССАССТАСТАСТОСОССААССССАТСАССАССОТОСТОСАССАС
ТАСТАСОСТАТОСАСТАСТОСОСССАСООСАССАОССТОАСАСТО
ТСТАССОСАСССОСАССАТСТОССООСОСАССААСТОоССОСсАСО
СОСАТСТОСОССАСОСОСААСССАТАТССАСАТОАСССАСАССС
СТОССАОССТОатТСТасстстотапосСоАСАСАСТОАССАТСАСАТ
СССОСОаССАССОАСААСАТСОАСАССТАССТОСССТОСТАТСАСС
АСААССАСОССААСАССССССАССТОСТОСТОТАСОССОССАССТ
ТТСТООССОАССАТИТОСССАССАСАТТСАССОССАССОСААОСО
ССАСАСАСТАСАСССТОААСАТСААСТОССТОСАСАССОАССАСО
ТОССССОСТАСТАСТОССАССАСТАСТАСАССАСССССТАСАССТТ
СОВаСТаСООсСАССААОСТОСАДАТСАААСОСОСОССАСОСТСоСО
САСОСОССОСААСТОСАСОСООСОСААСТОССОСАСОСОСАСО
СООСОСААСТОСОООСОСАСОСАСТОСОСОСОСАССАТСССАС
СТасСАССТасСтТаСААТСТОССООСОасСАСТОСТОСАСССТОССОоС
АТСТСТОАСАСТОАДОСТОТОССОССАССОССТТСАССТТСАССАС
СТАСОССАТОААСТОССТОСОССАСОССССТООСАААСОССТаСА
АТОСОТОТСССОСАТСАСААССААСТАСААСААСТАСОССАССТАС
ТАСОССОСАСАССОТОААССОССОСТТСАССАТСАОССООСАСОА
САССААДСААСАСССТОТАССТОСАСАТОААСАСССТОСОСОССОА
ССОСАСАССОСССТОТАСТАТТОТОТОСОССАССССААСТТССОСАА
САССТАТОТОТСТТОаСТТТаСсСтТАСТОСООССАСОССАСССТСОСТ
Анти-СОЗ (Снаг527. МН 33 дАССОТОТСААОСОСТАССАСАААССССССТАССОТОТТОССТСТ 23(12) МІ7-46(13)) / ЗоРМ заСССССАССАССААСАССАСААССООСОСААСАОССОСССТОЯ 4.3263 нерозщеплюваний 5стТаСссСтоатадАОСсАСТАСТТОССССОСАСССССОтТОАСАСТОТСТТ лінкер, СН2г527 УНЗ. 231 ЗДДАСАССОСАССССТОАСААОСООСОТОСАСАССТТОССТОСС
МНІ2 СНІ РоІАТ. 1605 УНІ сТоСтоСАСАССАССОСССТОТАСТОССТОАССАССОТОСТСАСС
СНІ пит Рс "виступ" РОЇ УТОССТАССАССАСССТОСОСАСССАСАССТАСАТСТОСААСОТО
ГАГА, рЕТАТ56О3 ААССАСААССССАССААСАССААДАСТОСАСААСААОСТОСАССОС овен | ААСАССТОТОАТООСОСАССАСОСТССОСАСОСОСАСОСТСССА
Шк СОТОСААТТОаСТТОаААТСТОСТОаСТОаатТСТОСтТААААССосОоСса и ТТОССТОСатсталостОоСОсСоОсттосСОсАТТСАССТТСТОСААС ши МН ССаТОСАТСАССТОССТТСОССАСОССССОСОСАААСОССТСОСА пт ад стТасаттостоОотТАТСААСТСТААААСТОАСОСТООСАССАСОСА
КЕ ТТАСОСОССТССАСТТАААССТССОТТТТАССАТТТОССОСОАССАТ
АССАААААСАСТСТОТАТСТОСАСАТОААСТСТСТОААААСТОААС
АСАССОСАСТСТАСТАСТОТАСТАСССССТОССААТОСТСТТОСТА
СОАТТАТТОСООССАССССАСОСТОСТТАСОСТОТСТАССОСТАС
ТАССААССОССССАССОТОТТОССССТайСАСССАССАССААСАС
САСАТСТОССОСААСАСССОСТСТаСОсСтТатстастоАААСАСТА
СТТОССССАССССОТОАССОТОТСТТОСААСТСТОССОСССТОаАС
САССОСОСОТОСАСАССТТТОСАСССОТасСтТасАсСАСс дасоосстатАстосстатостосатостсАССатассстстаас
ТОССТаСаААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТОТСААТСАСААСССТТО
СААСАССАДАСТССАТААСАААСТСОСАССССААСАССТОСОАСАА
ААСТСАСАСАТОСССАССОТОСССАССАССТОААОСТаСАСОСОС
АССОТСАСТСТТОСТСТТОСССССААААСССААССАСАСССТСАТО
АТСТСССОСАССССТОАОСТСАСАТОСОТОСТОСТОСАСОТОАОС
САССААСАСССТОАССТСААСТТСААСТОСТАССТОСАСОССОТО
САССТОСАТААТОССААСАСАААСССОСОССАССАССАСТАСААС
АССАССТАССОТОТОСТСАССОТОСТСАССОТССТОСАССАССАС
ТОССТОААТОССААССАСТАСААСТОСААССТСТОСААСАААССС
СТСИаСОСССССАТССАСААААССАТСТССАААСССАААССССАС
ССССОАСААССАСАССТИатТАСАСССТОСССССАТаССОССАТОАО
СТОАССААСААССАССТСАСССТатостасСстаатсСАААСОСТТС
ТАТСССАСССАСАТСОССОТОСАСТОСОСАСАССААТОСОСАССС
СОАСААСААСТАСААСАССАСОССТОССОТаСТОСАСТОССАСОЯ
СТОСТТСТТОСТСТАСАССААОСТСАСССТОСАСААСАССАССТОС
САССАСОССААССТСТТСТСАТОСТОСОТОАТОСАТОАСОСТСТО
САСААССАСТАСАСОСАСААСАСССТСТОССТОТСТоСОаССтТАААТ
СА
САСАТССАОСТОСТОСАСАССОССССТОАОСТОААСАААСССООС
САСАСАСТОСОСАТСАССТОСААССССАОСОССТАСАССТТСАСС
САСТАСАССАТССАСТООСТСААССАСОССССТООСААСТОССТО
ААСТОСАТОСОСТОаСАТСААСАССОАСАСАСОСОАОСССОССТАС
СССОАСОСАТТТСААСОСОСАСАТТСОССТТСАСССТОСАААССАСС
СССАССАССОССТАССТОСАСАТСААСААССТОААСААССАСОАС
АССОССАССТТТТТСТасСОсСсСсСАССССТАСОАСТАССАСОТОСТО
САТТАТТОССОССАССОСАССАСССТОАССататстАасСасАСОс
СОАСОАТСТаОСООСОСАОСААСТООСОСАСОООСАТСТООСО
САСОСОСАТСТОАТАСССТОСТОАСАСАСАССССТОССАСССТОС
САСТОТОССТОСОАСАСАСАСССАССАТСАОСТатоапОСсСАССА
АСАССИтатосСАССАССААСТАСАОСТАТАТССАСТОСТАТСАССА
СААССССООССАСССССССААОСТОСТОАТСАААТАСОТОТОСТА
ССТОСААДАССОСССТОСССОССАСАТТТТСТООСТСТООСАСССО
САССОСАСТТСАСССТОАДАСАТССАСССССТОСААСАСОААСАТОС
СОССАССТАСТАСТОССАССАСАССАСАСАСТТОССТТОСАССТТС
СасСтТасаОсСАССААОСТОСАААТСАААСОСОСОССАСОСтТоСОО
АСОСООСОСААОТаСАСОСОССОбААСТОССОСАСОаСОаСсАССО вапаСААСТООООасСОСАСОСАСТОпОСОСОСАССАТССОАСО
ТОСАССТОСТОСААТСТООСОССООАСТОСТОСАОССТООСОСА
ТСТСТОАСАСТОАССТОТасССОсСсСАССОССТТСАССТТСАССАСС
ТАСОССАТОААСТООСТаСассАСОССССтТООСАААССССТОСАА
ТОСататоссСапАТСАСААССААСТАСААСААСТАСОССАССТАСТ
АСОССОАСАСССТОАДАОСОССОСТТСАССАТСАОССОСОАССАС
АСССААСААСАСССТОТАССТОСАСАТОААСАОССТОСОСОССсАЯ
САСАССОССОТОатАСТАТТОТаТОСОСОСАСОССААСТТСОССААС
Анти-СОЗ (Снаг527 УН 31 дастАТОТОТСТТОСТТТасстАСТаССОССАССОСАСССТССТО 29(12) МІ-7-46(13)). всРМ15 ДССОТОаТСААССОСТАССАСАААСОССССТАСССТСТТоССТСТО нерозщеплюваний лінкер ЗССсСсСАССАССААСАССАСААЯСООСОСААСАОССОСССТОСО
Снабг7 УНЗ 23-УН12 СНІ СТесСстоатодАСсАСТАСТТОСССОАОСССОТОАСАСТОТСТТО
РоЇВ1 1605 УН СНІ пит Ро здАСАССОСАССССТОАСААССОССОТОСАСАССТТОССТОССОТ виступ Ро ГАГА) ЗСТОСАСАССАОСООССТОТАСТОССТОАОСАСССТОСТСАСССТ рЕТНТЯ759 СССТАССАССАСССТОСОСАСССАСАССТАСАТСТОСААССТСАА в7 опфжеє 0 |ССАСААССССАССААСАССАААСТОСАСААСААССТОСАССССАА и САССТаТОАТОССОСАССАСОСТССООАСОСОСАСОСТОСОАСО др ання ТОСААТТОСТТОААТСТОСТОСТОСТСТООТААААССОСОСОСТТо сш БИ сстОоСатстоластОсСасоастТоСОосбАТТСАССТТСТСОСААСОС шк й СТОСАТОАОСТОСОТТООССАСОССССОапОСАААСОССТОСАСТ ше СсааттаатсотТАТСААСТСТААААСТОАСОСТОССАССАСОСАТТА ' СОСООСтТССАСТТАААСОТСОТТТТАССАТТТОССОСОАССАТАСС
ААДАААСАСТСТОИатТАТСТаСАСАТОААСТСТСТОААААСТОААСАСАС
СОСАСТСТАСТАСТОТАСТАССССОТОССААТОСТСТТОСТАСОАТ
ТАТТОССОССАСССОСАСОСТОСТТАСОСТОТСТАССОСТАСТАСС
ААСООССССАССОататТоСсссСтТаайсАСССАОСАССААСАССАСА
ТСТОССООААСАСССОСТСТОаСОСТОатстТастаАААСАСТАСТТС
СССОАССССОатОАССОТОТСТТООААСТСТОССОСССтТОАССАСС
СасстасСАСАССТТТОССАСССатастОСАСАССАССОСССТОТАС
ТОССТОтосСтоСатоатсАССОТассстотАОСТоССтТапйсААСА
САСАСАТАТАТСТОТААТОТСААТСАСААСССТТССААСАССАААСТ
СОАТААСАААСТССАССССААСАССТОСОАСААААСТСАСАСАТО
СССАСССТОСССАССАССТОААОСТОСАСООССАССОТСАСТСТТ
ССТСТТССССССААДААСССААДОСАСАСССТСАТОАТСТОССОСАСС
ССТОАССТСАСАТОССТОСТОСТаСАСОТОАСССАСОААСАСССТ
САССТСААСТТСААСТОСТАСОТОСАСООСатОсАСОТОСАТААТ
СССААСАСАААСССОСООСАСОАССАСТАСААСАССАСОТАСССТ
СТОТСАССОТОСТСАССОТОСТаСАССАСОСАСТОССТОААТОСС
ААССАСТАСААСТОСААСОТСТОСААСАААССССТоООСаСССсС
АТСОАСАДААССАТСТСОСАААСССАААСОССАСССССОАСААССА
САСОТОатТАСАСССТОСССССАТОССООСАТОАОСТОАССААСААС
САСОТСАСССТОТОТасстастсАААСОСТТСТАТСССАССОАС
АТСОССОТаСАСТОСОАСАССААТОСОСАОССОСАСААСААСТАС
ААСАССАСОССТОССОтТОасСтТОСАСТОСОАСООСТОСТТСТТоСТСТ
АСАССААДОСТСАССОТОСАСААСАССАССТОССАССАСССОСААС
СТСТТСТСАТаСТОСОТаАТОСАТОАСОСТСТОСАСААССАСТАСА
СОСАСААСАСССТСТОССТОТСТОСОСОТАААТОА свФкасассХдсеастСсесАдсасвсассаААдатТАаАСАаасССАСАС
Лінкер, який містить сайт ТССТОААСсОасаасАа,асасасасазА;Ала,атас,аасавАсасАатОос протеази МКОб2 ссаеба,апАдасАТОС саддюсадсюдіссададсддсдссдададаадааасссдд діссістісааддщіса(сааддсіаддсддайсасощаса дасіасааааіссасюдонаддсаддсассіддссааддасіс даадюдаддддіащшсаасссааайцссоддсіасістассіа сссадаадшсаддадаададідасіацасадсідагаададіас садсасідсагасаюдаодсідіссісісцсодсісададдасасс дссодісіасіандідсісддсідадссссодідодсіасіастио аддадсадддддсадддаасаассдіаасадідіссістюсо
Ісдасіаадддесснсадишесасісдсссссадіадсаацді ссасаєсдддодіассосідсссідддсюосснщааадасі ашесссідаассадісасющісаддаагадсддадсссдас сіссддщдасасасайссссосідюносацдісіадіддссід тасадссісіссісюйнаїдассдісссіїсаадсісссіддода
Анти-НЕК! (БА201, важкий! сасадассіагагсідіаасдідааісагаадссаїсіаасасіааа ланцюг, рисС-Ехр-аА2О1- діадаїаазааадіддадсссаададідсдасаааасасасассї не) дісссссдсссадсссссдадсисюдодадосссіадсоісі нсісцоссасссаадссіааддагасістаютюа(йагссаддас сссадааднасадюсоюдісдюдасоісісасасдаддассс сдааддааашаасюдіасоавдадоадюддаадіссаїааї дссаадассаадссіадададдадсааіасаасадіасаїагсос діддіаадсуаюідассонсіссассаддасіддсісаао9од ааадаагасаадіцдіааадщіссаасааадсісюссадсассоса ісдадаадасіацсіааддссаааддссадссссдддадссіс аддісіагасаснссасссісаадддадаасідассаадаасса адщадсидаскоссюдіаааддданеассснссдасаїс дсідщаадщодадісіааддасаассадаааасаанасаааа ссасасссссідіссісдасаддаюдадсадснщшссідіагад сааасцассдндасаадіссададдсадсадддааасдідне ісадіадсдісадсасдаадсщосагаассасіасасасада ааадссісадссідадіссадддаао дасаїссаааюасссацдісассіадіадссісіссдссісю4на дсдасадддащасаацнасадсададсісасадддіагсаасаа нассюаасіддіаїсадсадааассадддааддсссоссаадсод сіндагагагаасассааіаассідсааасдсдісссіадсс99 нсіссддаєсюддіадіддсассдаащшасасісассаїсадсії
Анти-НЕВІ (САО1, легкий сссдсадссададдашсодссасайасіанціснсадсаїаа панцюг, риС-Ехр-СА2О1- нешосссассшоддасааддаасіааасюдадацнаадсої
Іс) асідісдссодсісссістіонсайшссіссаадаюатдадс 70 адсісаааадсодіассдсаїссоноідідссдскаасаасії сіаїссссдддаадссааддіссааєддааддодасаатсісї дсадісаддааасадісаддададсдіаассдадсадданосаа адасістасцасісандадсіссасссщасасісісіааддса дасіадаааадсагааадшціасодссююдадоцнасссассада десдадіадсссідідасааадісєснсааіадаададачіос даддансадсіддадсадісаддассіддсдаюдаадссідод асцнсадюдаадащіссщіааддснсіддагасасацсасід асіасіаіаї(ааасіддагаагасададссаддааадщісндад юдаподаоднацнаассюдасадсодіддіасідасіасаасс адааснсаадддсааддссасайдасщідасаацвдіссіссас сасадссіасаюддаасісасіадссюдасаїсюаддасісюса чісїіабсайддсаадааддданснасоддендасіасюда дссааддсассасісісасадісіссісаддсададдаюадсісад о999299с99іадсддсодадоідосісададодадосовіад сдасайдідсідасссадасісссааацйссідснподссадса даадасаддацассаюдассідсааддссадієютадшдшщасі аащашдіадснддіаїсаасадааассаддосадісіссіааас юсюцйаасіаюсагссааісдсаасдсіддацдісссюдаїса сисасюдсадюодаадоддасддашсасшсассаїсасс
НЕК! (анти-СА201 МН-МЦ асшосадосідаадассіддсадшашсідісадсаддай 5СЕМ розщеплюваний ММРІ агассісіссіссдасуансодноїддсассаадсіадаааєссо лінкер 545 бБА201, легкий! (додасадсоднсасоадададачнсддсссссддоос 74 ланцюг, рисС- аюддадссаддаіддсддсаднсіюдсодададансюдс
І аА20О1 ММР 1С) дадатдосісддсддаюдасаїссааащдасссадісассіаді адссісіссдссістідасдасадддадасаацасаюдсада дсіисасаддагаїсаасаацассідаасіддіаїсадсадааас садддааддсссссаадсдсідайагагаасассааіаассюса аасіддсдісссіадссодісіссодасіддіадіюддсассда ашасасісассаїсадсісссідсадссададдашсдссаса тТасіайцісісадсагаансщтеосссассщоддасааддаас їааасіюдадацаадсодїасщісодссосісссісінсай шессіссаадщаюдадсадсісаааадсоддіассдсагєссона ідссідсцаасаасійсіаїссссдддаадссаададіссаа дааддюдасааюдсісюсадісаддааасадісаддададсої аассдадсадданссааадасісіасцасісандадсіссасс сідасасісісідааддсадасіадаааадсагааадшщіасдссі дідадочасссассаддоассідадіадсссідщасааадієсі ісаа4ї(аддддададвідс
ОМОЇ КЕВЗОРОЇ МАРБОБІ ІТСТУЗОЕ5І ТОМУ МУВОРР
СКС ЕУМІ СПУ СраватмминвіаА! ВІЗІКОМ КООМЕІ КІМ
ГОТООТАТУУСАКСІТТУМОрУМАМОУМ СОСТЗУТУЗ5ОСС соЗоопО5ассО50О00О50ІОМТО5РАБІ БАЗМОЕТМТІТ
СВАЗЕМІОБЗМІ АМ/МООКОСКОРОП МУААТЕЇ АРОМРОВЕВ
Анти-СОЗ (Сн2г527 УН 3-23(112) МІ-71 58080081 КІМЗІ ОВЕОМАВУУСОНУУЗТРУТРОСОТКІ. 46(13)) зсРм 4.32.63 сайт матриптази| єЇіКаасО5УНМРІ аг аРВОАВУУМО Сас О5ЕМО
ММРУ МКОб2 Снаг527 УНЗ 23-УНІ2 | | ЕЗООСІ МОРОСВБІ ВІ БСААЗСЕТЕЗ ТМАМММУВОАРОК
СНІ РОЇВ! 1605 МН СНІ пит Ро ді ЕМ/М5ВІВОКУМММАТУУАОЗУКОВЕТІЗВрОКМТІ МО "виступ" РО ГАГА, рЕТК 16546. ММЗІ-ВАЕОТАУУУСУВНОМЕСМЗУУЗМЕАУМСОСТІ МТУ перо, | ЗАЗТКОРОМЕРІ АРОЗКУЗТЗОСТААІ ОСІ УКОУЕРЕРУТУ5 пив ни | УМСА ТЗОМНТЕРАМІ О5501 УВІ 55 ТУРІВ ато ший СМУМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОСОСОЗОСОСЗЕМОЇ МЕВ5 72
Й у хееютьх СОСІ УКРОСЗІ ВІ ЗСААЗСЕТЕЗМАМУ МОУ УВОАРОКОИЇ Е дірок пав ях М/МОВІКЗКТрОСТТОУААРУКОВЕТІЗВООБКМТІ МІ ОМ
Б: Чак Ї КТЕОТАМУУУСТТРИУ ЕМ ЗМУ ОМ СОСТІ МУТУ55АВЗТКОРО сосен ОЙ пемехорекня МЕРІ АРОЗКОТЗОСТААЇ ОСІ МКОУЕРЕРУТУЗМ МСА Т5
Щі ї. Ще СМНТЕРАМІ 05501 У8І 554 УТУРУЗБЗВІ СТОТМІСМУМНКРУ
М і. ше МТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕААСОРОМРІ ЕРРКРК я РОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕММ МУУОСМЕМНМАКТ
КРВЕЕОУМЗТУВМУМ ЗМІ ТМІ НОБУМІ МОКЕУКСКУЗМКАЇ СА
РІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРСВОЕЇ ТКМОМ8І МСІ КО
ХРЗОІАМЕЖМЕВЗМООРЕММУКТТРРМІ ОЗОСЗЕРІ УЗКІ ТО
КЗАУМООСММУЕВЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ І РОК
ЕМОГУЕБЗСССІГУКРОСЗІ ВІ ЗСААЗСЕТЕЗМАММОМУВОА
РОКОІЕМ/УСВІКЗКТООСТТОУААРУКОВЕТІЗВОО5КМТІ.
МГОММВІКТЕОТАУУУСТТРУ/ЕМ/ М/УОУМСОСТІ УТА
ЗТКОРБЗУЕРІ АРЗЗКУТЗССОТААІ ОСІ УКОУЕРЕРУ ТУЗУУМ ан, ВИсУЛ РТ АСА ОСОБ ЗСАЇ ТЗСУНТЕРАМІ О55С1 51 55УУТУРУЗЗВІ СТОТМІСМ
АГА. ре МЯНКРОМТКУОККУЕРКЗСОСОСОЗООС5ЕМОЦ ЕВЗСО мех» Й СІУОРОСЗІ ВІ ЗСААЗСЕТЕЗТУАМММУВОАРОКСІ ЕМ/У5 пнях ж силах | ВІВЗКУММУАТУУАОВУКОВЕТІВАООВКМТІ М ОММВІ ВАЄ ше ее ЩО ОТАУУУСУВНОМЕСМВУУВМРАУМ ОСТІ УТУЗЗАВТКОР | а с з пужекннненю». | ВУЕРІ АРЗЗКОТЗССТААІ ОСІ УКОУЕРЕРУТУЗМ/МОСАЇТ пон ЯКО Ко хухкхух | ВСУНТЕРАМО55СІ УВІ 55УУТУРБЗВІ СТОТУІСМУМНКР пк ке | СМТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕААССРУУВБІ ЕРРКР ях КОТІМІЗВТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУКЕММУУОСУЕУНМАК шк Е ТКРВЕЕОУМУТУВМУ МІ ТМІ НОМ МОКЕУКСКУЗМКАЇ С ї АРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОМУТІ РРСВОЕІ ТКМОУЗІМУСІТ УКО
ЕУРЗОТАУЕМ'ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОЗОСЗЕНІ УЗКІ ТО
КЗВМЛООСМУЄЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ ЗІ РОК
ОМОЇКЕВЗСРОІГ УАРЗОБІ ЗІТСТУЗОЕБІ Т5УСУЗМУВОРР
СКСІЕУ СІМ/С0С5ТМУНВАЗНІ ЗІЗКОМУКЗОУРІ КІМ
ГОТООТАТУУСАКСІТТУУОВУУАМОУМСОСТеУТУЗЗОС
Са5СОО09ССС50С050ОМТО5РАБІ ЗАЗУСЕТУТІТ
СВАЗЕМІОЗМІ АМ/ГХООКОСКУРОП УУААТЕІ АООУРОВЕ5 "| а5с8стТоу І КІМ О5ЕОУАВУУСОНУУЗТРУТЕСССТКІ. анти Мково сОЗ мов СаИТ ЕІКОСОО5ССССЗАОАНУУМоосссВссос5СоСоО |,
ОЕТК ' 55 44 лямода; УуТОЕРВЗІ ТУЗРОСТМУТІ ТСОЗ5ТОАМТТЗМУАМММОЕКРО р ОАЕВСІПССТМКВАРСТРАВЕЗО5И СОКААЇ ТІ ЗСАОРЕЮ
ЕАЕУУСАЛУУЗМІМУЕСОСТКІ ТМ СОРКААРБЗУТІ ЕРРУ5
ЕЕГОАМКАТІ УСПЗОЕУРСАУТМАМ/КАО55РУКАСМЕТТТР
ЗКОЗММКУААЗУУІ ЗІ ТРЕОМ/УКЗНАЗУЗСОУТНЕСЗТМЕКТ
МАРТЕС5
ОМОЇКЕВЗСРОІГ УАРЗОБІ ЗІТСТУЗОЕВІ Т5УСУ5МУВОРР
СКСІЕУ СІМ/С0С5ТМУНВАЗНІ ЗІЗКОМУКЗОУРІ КІМ
ГОТООТАТУУСАКСІТТУУОВУУАМОУМ СОСТЗУТУЗЗСО
Са5СОО09ССС50С050ОМТО5РАВІ ЗАЗУСЕТУТІТ
СВАЗЕМІОЗМ АМ/ХООКОСКУРОП УУААТЕІ АООУРОВЕ5
С8О9СТОУВІКІМЗІОЗЕОМАВУУСОНУУЗТРУТЕСССТКІ. не розщЩепл кою лінкер соч ЕКСССОЗСОСОЗСссоВСосососВсосссссо50 сглямода отв 6545 АМУУТОЕРЗІ ТУЗРОСТУТІ ТСОЗ8ТСАУТТЗМУАМУМУОЕКР
СОАЕВСІ ССТМКВАРСТРАВЕЗО5ИЇ ССКААЇ ТІ ЗСАОРЕ
ОЕАЕУУСАЛУУЗМІМУЕСОСТКІ ТМ СОРКААРЗМТІ ЕРРЗ
ЗЕЕГОАМКАТІ УСП ЗОЕУРСАМУТМАМ/КАОЗ5РУКАСУЕТТТ
РОКОЗММКУААЗУУІ ЗІ ТРЕОМ/УКЗНАЗУЗСОУТНЕСЗТУЕ
КТУАРТЕСЗ
ОМОГУОЗСАЕМУККРСОАБУКУЗСКАЗОУЗЕТОУТМММУВОА
РСОСІ ЕМ/МСИТРУМСАЗЗУМОКЕВСКАТМТУОТУТУТМУУ
МЕГ.551 АЗЕОТАУУУСАВСОУОСНСЕОУМ СОСТІ УТУЗА
ЗТКОРУУЕРІ АРЗЗКУТЗССТААІ ССІМЕОУЕРЕРУ ТУЗУУМ
ЗСАЇ ТСУНТЕРАМІ 05501 51 55МУТУРУЗЗВІ СТОТМІСМ
ММНКРОМТКУОЕКУЕРКЗСОСОСОЗООСС5ОАМУТОЕРЗІ.
ТУЗРОСТУТІ ТССЗ5ТСАУТТЗМУАММУОЕКРООАЕВСЦО
СТМКААРСТРАВЕЗОЗИ ССКААЇ ТІ ЗСАОРЕОЕАЕУУСАЇ. аву оо М УЗМОМУРОООТКІ ТМ. З5АВТКОРОУЕРІАРУЯКОТВОСТ | 76
ИСТУ"РО АГА, РЕТРІ5445 АЛІ ССІ УКОУЕРЕРУ ТУЗМУМУСАЇ ТЗСУНТЕРАМІ О59С У
ЗІ 59УУТУРУЗЗ8І СТОТХІСМУМНКРОМТКУОККУЕРКУСОК
ТНТСРРСРАРЕААССРУУНІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУ
ОУЗНЕОРЕУКЕММ/УУОСУЕУНМАКТКРАВЕЕОУМТУВУУВ
МІТМІНООУЛІ МОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСООРВЕР
ОМУТІРРСВОЕЇ ТКМОУЗІЛМУСІ УКОЕУРЗОТАУЕМЕЗМСОР
ЕММУКТТРРМІОЗ0С5ЕНІ УЗКІ ТУОКЗВУТООСМУвВСВУ
МНЕАІ НМНУТОКОУІ ВІ ЗРОК м
ОМОГУО5ЗСАЕУККРОАЗУКУЗСКАЗСУЗЕТОУТМММУВОА
РСООСІЕМ/МСИТРУМСАЗЗУМОКЕВСКАТМТУЮТОТОТУУ
МЕ! 551. ВЗЕОТАУУУСАВССОУОСВОРОУМ СОСТІ УТУЗВА
ЗТКОРУМЕРІ АРОЗКУТЗОСТААТ ССІУЕОУЕРЕРУ ТММ
ЗСАЇ Т9СУНТЕРАМІ 05501 51 55УУТУРУЗЗВІ СТОТМІСМ амвім 87787 УН СНІЕЕ Ро УМНКРОМТКУОЕКУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕААССРЯУРІ "западина" РЗ29С ГАГА, рЕТР15444. | ЕРРКРКОТІ МІЗАВТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕМУКЕММ УУОСМЕ
МНМАКТКРАЕЕОУМОТУ МУ МІ ТМІ НОСІ. МОКЕУКСКУ
МКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОУСТІ РРУВОЕЇТКМОМЗІ 5
САУКСЕУРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОЗ0С5ЕРСУ
ЗКІ ТУОКЗВУУООСМУЕЗС5УМНЕАІ НМНУТОКЗВІ І РОК
ПІОМТО5РУЗІ ЗАЗУСОВУТІТОЗАЗ55УЗУМНУУООКСК
АРКЦІМУОТУКІ АЗСУРЗВЕЗС5О5ОТОЕТІ ТЗІ ОРЕОРАТ
УУСООМІЗКНРІ ТЕСОСТКІ ЕІКАТУААРЗУЕІЕРРЗОВКІ КЗ ви МЕООКОСАКУ) СтАВУУСИ ММЕУРВЕАКУОМ/КУОМАЇ ОЗСМЗОЕБУТЕОЮ | ОС 78 р ЗКОСТУВІ 5571 ТІ ЗКАОУЕКНКУХАСЕУТНОСІ З9РУТКОЕ
МАСЕС
ОМОЇКЕВСРСЇГ УАРЗОВІ ЗІТСТУЗОЕВІ Т5УСУВМУВОРР
СКСІЕМІ СІМ/СОС5ТМУНВАОВІ ЗІЗКОМУКОУ КІМ
ГОТООТАТУУСАКСІТТУУОВУУАМОУМ СОСТОУТУЗЗСС
СОЗООСО5СОСО5ССС50ІОМТО5РАЗІ ЗАЗУСЕТУТІТ
СВАЗЕМІОЄМ АМ/ХООКОСКУРОЦ УУААТЕІ АОРУРОВЕ5
С8О5СТОУІКІМЗОЗЕОУАВУУСОНУУЗТРУТЕССОТКІ. ян доки МБО Кого | ЕІКОСОСОВУНМРІ ОРІ СРАОАНУУМССОСОЗОССО5ЕМО | 49
Етвіблв ЇЇ ПЕВЗСССІ МОРОСЗІ ВІ ЗСААЗСЕТЕЗ ТУАМММУВОАРОК р СІ ЕМ/УЗВІВЗКУММУАТУУАОЗУКСВЕТІЗВООКМТІ МО
ММ8І ВАЕОТАУУУСУВНОМЕСМУУУ ЗМ ГАМ СОСТІ УТ
ЗАЗУДАРЗУРІЕРРЗОЕОЇ КУСТАЗМУСИ ММЕУРВЕАКМОМУ
КУРМАГ О5ОМЗОЕЗУТЕООЗКОЗТУ ЗІ 5571 ТІ ЗКАОХЕКН
КУХАСЕУТНОСІ 55РУТКЗЕМВСЕС
ОМОЇКЕБСРСЇГУАРБЗОБІ ЗІТСТУЗОЕВІТ5УСУВМУВОРР
СКСІЕМІ СІМ/СОС5ТМУНВАОВІ ЗІЗКОМУКЗОУКІ М
ГОТООТАТУУСАКСІТТУУОВУУАМОУМ СОСТЗУТУЗЗОС
СОЗООСО5СОСО5ССС50ІОМТО5РАЗІ ЗАЗУСЕТУТІТ
СВАЗЕМІОЄМ АМ/ХООКОСКУРОП УУААТЕІ АОРУРОВЕ5 анти-ІЮ СН2Б27 4.32.63 СОЗ СН2527 С5С5СТОУ5І КІМ ОЗЕОМАВУУСОНУУЗТРУТЕССОТКІ.
МН 23-12 СК, нерозщеплюваний ЕКСООС5ЗСОСС50сс5Сс0с0605с060500СО5ЕУ лінкер, рРЕТЕ16759 ОП ЕЗСОСІ МОРССВІ ВІ ЗСААЗСЕТЕЗТУАМММУВОАРО
КОГЕМУ5ЗВІВЗКУММУАТУУАОЗУКОВЕТІЗВОО5КМТ МО
ММ8І ВАЕОТАУУУСУВНОМЕСМВУУ ЗМ ЕАУМ СОСТІ ТУ
ЗАЗУДАРЗУЕІЕРРЗОЕОЇ КЗСТАЗМУСИ ММЕУРВЕАКМОМУ
КУРМАГ О5ОМЗОЕЗУТЕООЗКОЗТУ ЗІ 5571 ТІ ЗКАОХЕКН
КУХАСЕУТНОСІ 55РУТКЗЕМВСЕС
ЕМОПЕЗСОСІУОРССБІ ВІ ЗСААЗСЕТЕЗТУАМММУВОА
РОКОГЕМ/УЗВІВЗКУММУАТУХУАОЗУКСОВЕТІЗВООКМТІ У
ГОММЗІ ВАЕОТАУУУСУВНОМЕСМОУУЗМ/ЕАУМ СОСТІ МТ в МНО 28712 - СЮ) ув5АеуУДАРОУБІЕРРЗОБОЇ КЗСТАЗУУСИ ММЕУРВЕАКУ | 81 р ОМУКУОТМАГ О5ОМЗОЕЗУТЕООЗКОТУ ЗІ 55ТІ ТІ ЗКАОУЕ
КНКУУАСЕУТНОСІ 59РУТКЗЕМВСЕС
ОМОЇ КЕБОРОЇ МАРБОБІ БІТСТУБОБ5І ТМОМБУУВОРР
СКСГЕУЛ СП ОравТМУНЗА ІЗНВІ 5ІЗКОМОКБОМРІ КІ МО
ГОТООТАТУУСАКСОСІ ТТУМОрУуАМОУУ ССОЮСТВУТУЗВОС созассозасаа5авааеріІОМТО5РАБІ ЗАБМОЕТМТІТ
СААБЕМІОЗМГ АМУООКОСКОРО І МУААТЕГАВОМРОВЕ5 аБОБОТОУБІ КІМ ОБЕОМАНУУСОНУУЗТРУТРОаСа,ТткіІ. гІКОСОССЗУНМРІ СР аРВОААУУМОСсОВОСЗпСОСБОАМ
МТОЕРБІ ТУБбРОСТМТІ ТСО55ТОАМТТЗММАМММОЕКРО
ОАгєВОС Іа ТМКААРСТРАВЕЗОБІ І СОКААЇ ТІ ЗАОРЕЮО
ЕАЕУУСАГ М/УЗМІМУМРИСИТКІ ТМІ БВАЗТКОРОМЕРІ АРЗ
Анти-СОЗ (СНн2г527 МН 3-23(12) МІ 74 БКОТ5ЗОаСТААЇ СІ УКОУЕРЕРУТУБМ/МЗОАІ ТЗОУНТЕРА 46(13)) 5сЕм 4.32.63 сайт матриптази! МГОББОЇ БІ 55ММ ТРУБІ ЯТОТМІСМУМНКРЗМТКМОКК
ММРО МКОб2 ам5іІМ МН СНІ ЕЕ| МЕРКВСОСОССОБИСИИБОМОЇ МОБСАЕМККРОАЗУКУ5СО 82
Сн2гб27-МІ7 46-13 СНІ пит Бо КАБОУ5БЕТаУ ТММ УВОАРООСІ ЕМО ІТРУМОАББУМО "виступ" РО ГАГА, рЕТВ16751 КЕВОКАТМТМОТ5ТЗТМУМЕЇ! 551 ВБЕОТАУУУСАНОСХОС
ВОРОУМСОСТІ МТУ55АЗТКОРЗМУЕРІ АРОБКОТЗОСТААГ.
ССІ МЕОМЕРЕРУТУБУ/МЗСОАІ ТЗаМНТЕРАМІ О5501 51 5
ЗМУТУРБББІ ОТОТМІСМУММНКРОМТКМОЕКМЕРКЗСОКТНТ
СРРОРАРЕААСОРБУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМОМ5
НЕОРЕМКЕМУ УУрОМЕМНМАКТКРАЕЕОУМОТУВМУММІ т
МІ НОРУЛІ МОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСООРАЕРОМ
УТ РРСОВОЕЇ ТКМОМБІ М СІ УКОЕМРЗОІАМЕМЕВМООРЕМ
МУКТТРРМІ О5ВОа5ЕРІ УЗКІ ТМОКЗВУТОССМУЕЗСВУМН
ЕАІНМНУТОКОБІ 5І РОК
ОМОЇ КЕБОРОЇ МАРБОБІ БІТСТУБОБ5І ТМОаМБУМУВОРР
СКСГЕУЛ СП ОравТМУНЗА ІЗНВІ 5ІЗКОМОКБОМРІ КІ МО
ГОТООТАТУУСАКСОСІ ТТУМОрУуАМОУУ ССОЮСТВУТУЗВОС созассозасаа,а5авайеріОМтТО5РАБІ БАБМИаєЕТМТІТ
СААБЕМІОЗМГ АМУООКОСКОРО І МУААТЕГАВОМРОВЕ5 аБОБОТОУБІ КІМ ОБЕОМАНУУСОНУУЗТРУТРОаСа,ТткіІ.
ЕІКОСсосаЗзасоаБасасвававаасасааБавааБО
АММТОЕРБІ ТМ5РОСТМТІ ТСО55ТОАМТТЗММАМУММОЕКР
СОАгВС ІС ТМКААРОТРАВЕЗОБІ І ССОКААЇ ТІ ЗАОРЕ
РЕАЕМУСАЇ М/УЗМІ МУР СИСТКІ ТМІ ББАВТКОаРБЗМУЕРІ АР
Анти-СОЗ (СНн2г527 МН 3-23(12) МІ 74 ББКОТЗОаСТААГ ОСІ МКОУЕРЕРУТУБМУМЗОАІ Т5ОМНТЕР 46(13)) СЕУ 4.32.63Ї АМ'ОББОЇ У5І 55 ТУРБББІЯТОТМІСМММНКРОМТКМОК нерозщеплюваний лінкер ам5М УНІ КХОЕРКЗСОСОЇОаБОСИСБОМОЇ МОЗБСАЕУМККРОАБУКУ5 83
СНІ ЕЕ СНн2г527-МІ7 46-13 СНІ пит СКАБОУЗЕТаУТМММУУВОАРООСІ ЕУУМО ІТРУМОСАББУМ
Ес "виступ" РО ГАГА, рЕТЕ16752 ОКЕВОКАТМТМОТ5Т5ТУУМЕЇ! 55І В5БЕОТАУУУСАНнООВМО
САОБОУМ/СОСТІ МТМ55АЗТКОРОУМЕРІ АРОЗКОТЗОСТА
АГОаСІ МЕОУХЕРЕРУТУ5М/М5ОАІ ТЗОУНТЕРАМ О5501 5
Ї ББМУТМРБББІ ОТОТМІСМУММНКРУОМТКМОЕКМЕРКЗСОКТ
НТОРРСРАРЕААСОРБМУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМММО
МЗ5НЕОРЕУКЕММ УМВОМЕМНМАКТКРАЕЕОУМОЗТ УВУ
І ТМЕНОВУМІ МОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРО
МУТІРРОВОЕЇ ТКМОМБІЛМ/СІ МКОЕМРБОІАМЕУМЕЗМООРЕ
ММУКТТРРМГОБООаБЕРІ МЗКІ ТМОКЗ А ООСММЕЗОБУМ
НЕАГНМНУТОКБІ 5І РОК
ОАМУТОЕРБІ ТУ5БРОСТУТІ ТСОа5БТаАМТТЗММАМУУМОЕК
РООАЕНОГ ІС ТМКААРСТРАНЕБОБІ І СОКААЇ ТІ БАР
ЕСЕАЕХУХУСАГЛМУМОМІ ММУБасСаИТткІ ТМ ББАЗБТКОаРОМЕРІ А
РОБКОТ5ЗОС,СТААІ аСІ МКОМЕРЕРУТУБУММЗОАІ Т5аМУНтТЕ
РАМІ ОББОЇ М5І 55ММТУРБББІ ЯТОТГМІСМУМНКРЗОМТКМО
ККУМЕРКЗССсССОСВБИСИ,БОМОЇ МОБОАЕМККРОАБУКМ
ЗСКАБОХМОЕТОУ ТММ УКОАРОССГЕМ МОЇ І ТРУМОАБВУ
МОКЕВаКАТМТМОТ5ТОТУУМЕЇІ 55І АБЕОТАМУУСАНОСТУ
Сн2г527 ХЕРар ам5і М на7787 НС ЕЕ ВОВОБОУМ СОТ МТМ55АЗБТКОРОУМЕРІ АРОЗКОТЗОСТ ва
Ес "виступ" РО ГАГА, рЕТК16764 АЛІ аСІ МЕОЖМЕРЕРУТУБУУМЗИаАІ Т5ОаМНТЕРАМІ О551 М
ЗІ БМ ТУРБББВІ СТОТМІСМУМНКРОМТКМОЕКМЕРКОСОК
ТНТСРРСРАРЕААДСОРБ5МУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММ
ОМ5НЕОРЕМКЕМУ У«УрРОМЕМНМАКТКРАЕЕОУМОТУВУМ5
МТМ НОБУМІ МОКЕУКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВАВЕР
ОМУТГРРСОВОЕТКМОМБІ М СІ УКОЕУРЗОІАМЕМЖМЕЗМООР
ЕММУКТТРРМІ ОБОСО5ЕБІ КІ ТМОКВАУМОССММЕЗС5М
МНЕАЇ НМНУТОКБІ 5І РОК
ОМОЇ КЕБОРОЇ МАРБОБІ БІТСТУМ5БОБ5І ТОМ ОУБУМУМВОРР
СКСГЕУМ СПУ СОТ ММНЗАГІВЗАЇ 5ІЗКОМОКООМРЕЇ КІ М
ГОТООТАТУУСАКСОСІТТУМООХУАМО МУ ВСОСТоУТУВВОаС сазасоас5асаа5ацвайерІОМТО5РАБІ БАБМОаЕТМТІТ
СААБЕМІОЗМІ АМ/МООКОСКОРОЇ І МУМААТЕРІ АЮОУРОЗАЕБ аБабБОатТОмБІКІМ5 ОБЕОМАВУУСОНУМЗТРУТРОаСаИТтКІ.
ЕІКаоааоЗавоо5асааЗЕУсатававовавааВаООЕМ
ОП'ЕБИСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБСОЕТЕЗТУХАММУМУВОАРаИа
КОаГЕМУ5АВІВНЗКУМММАТУУАреУКОаВЕТІЗАРОБКМТІ МО
ММ5І ВАЕОТАМУУУСУАНОаМЕаМОМУуБУЕАУМ СОСТІ ТУ
Анти-СОЗ (СН2г527 МН 3-23(12) МІ 74 БАБТКОРОМЕРІ АРЗБКЗТЗИасСТААІ аСІ МКОУЕРЕРУТУ5 46(13)) 5сЕм 4.32.63 сайт катепсину, УУМ5САІ ТаМНТЕРАМІ О5501І 5І 55 ТУРЗББІ аТОТУІ 5/В СН2г527 МНЗ 23-МНІ12 СНІ Бо! СМУМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОССОСИаБОСОСОЗЕМОЇ МЕ 85 1605 МН СНІ пит Ес "виступ" РОЇ ас МКРОСБІ ВІ ЗСААБОЕТЕЗМАМУ МОУ УВОАРаТКаї Е
ГАГА, РЕТА16550 мУавІКВКТрааТтТОМААРУКОаВЕТІЗАрОБКМТІ МГ ОММ5
ІЇ КТЕОТАМУХУСТТРИ ЕМ БМ ОМ СОСТІ МТУ5БАВБТКОаРБ
МЕРГАРББОКОТООааТААГ ОСІ МКОМЕРЕРУТУБУУМ5ОАІ То
СМНТЕРАМІ 05521 М5І 55 МРБІББІЯТОГМІСМУМНКРБ
МТКМОККМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААДССОРОМРЕЇ ЕРРКРК
ОТГ МІЗАТРЕМТСУММОУМЗНЕОРЕМКЕММ УМ ОМЕМНМАКТ
КРАЕЕЕОУМОТМАМУБМІ ТМІ НОСУМІ МОКЕУКСКУ5МКАЇ СА
РІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМБІЛМУСІ УКаг
ХРБООІАМЕЖМЕВБМОСОРЕМММКТТРРМІ ОБОО5ЕРІ КІ ТМО
КВРАУМООСММЕЗСВУМНЕАІ НЯМНУТОКОІ 5І РОК ме 7 роеничопогоновоооввооо | ю тент тт т для НЕК!1 87
ККААРУМО // |6б00о5000О5ККААРУМОСОСОЗОсСОсСЗООсо5 | 89
РМАККУМ 7 |сб00бо500бО5РМАККУМОСОСОЗссСосЗоаса5 | 90 пав воо в.
Сайт, який розпізнається протеазою ру т( вв
Сайт, який розпізнається протеазою /ддрум(с 89 сайт, який розпізнається протеазою рудккуме байт, який розпізнається протеазою| -Авдкус
Сайт, який розпізнається протеазою Мр (вс
Сайт, який розпізнається протеазою Здадк
Сайт, який розпізнається протеазою рі (ЕІ СРРМАКК
Сайт, який розпізнається протеазою | ддр байт, який розпізнається протеазою Бм/|дкк ам5-м, Сов НІ за Кеботом СУТММ ам5мМ, Сов Н2 за Кеботом ІТРУМСАЗЗУМОКЕВО ам5мМ, Сов. НЗ за Кеботом саоУравевгру ам5І-мМ, сов 1 за Кеботом ЗА555УБУМН ам5м, Сов 12 за Кеботом РТОКІА5 ам5-м, Сов І-3 за Кеботом ОСМУ5КНРІТ
ОМОЇ МОБСАЕМУККРОАБУКУЗСКАЗОУЗЕТОУ ТММ УВО амвІім. ун РООСГЕМУ МО ІТРИМаАЗЗУМОКЕВакКАТМТУЮТ5Т5ТУУ 113 " МЕ! 55І АБЕОТАУУУСАНОСсСУрОавОаБОоМУ ОСТІ МТУ
ПІОМТО5РБОБІ БАБМОЮВМТІТС5АЗВЗБОЗУЗУМНУУООКВИК амеім, м. АРКГІМОТ5КІ АБСМРОНЕБОаБОаБОТОВЕТІ ТЗІ ОРЕОБАТ 114 " УУСООМ5КНРІТЕСОСТКІ БІК
ОМОЇ МОБЕАЕМУККРОБЗУКУЗСКАЗОЕТЕТОМКІНУУВОАР анєЕВ!І. УН СОСІЕММОМУЕМРМЗамВТМУАОКеОСАМТІТАОКОТОТАХМ 115 " ЕГ/55І АБЕОТАМУУСАВІ БРОСУМУМО Ам СсОСТТУТУБО
ПІОМТО5РБІБІ БАБМООЮВМТІТСВАБОСІМММУІ МУУМООКРаИа аНЕНІ, МІ. КАРКАСІММТММ ОТаМуРОАЕБИаБОБОаТЕРЕТІ ТІ ОРЕОЕ 116
АТУЖСІ ОНМЗЕРТЕСОСТКІ ЕК
Конструкція Послідовність ДНК со
САсСОасСсататаАСССАаИаААСССАаССсТаАСсАста|атстостасс
САССОСТОАСССТаАСАТатТаСаСАСТТСТАСАСсаСсасСсатаАССАС
САССААСТАСОССААСТОСОСЯТаСАСИаААААдассСсвасСсАаасстт
САСАДСаАСТадтааСайСАССААСААаАпАа,аСоССТавСАССС
СстТасСсСАСАТТСАССЯСАТСТСОТаИСТОСОАСОААА,СаССассстаА
САСТИаТСТООССасСССАасССАСААСАТаА,СасСсадатАСТАСТОаСО
Загальний легкий ланцюг С СССстатаатАСАаСААССТаТОСТатсааСавАпаСАССАдОС рЕТА13197 ТтТаАСАСТОСТАСатСААСССААСОЯСТаСССССАсаСса,атаАсоСсТа|ат 117 тоооССССАаСАаСаАааААСТаСАпасССААСААаасССАСССтТа аттасстОАТсАаСагасТСстТАСССАСОСсСаСсС,СтТаАсСсатаасс тавАДасаСсСсаАСАаа,аСсАа,асосСсатаАлсассвасатапАсАССАС
САСССССА,СААССАпСАаСААСААСААсСТАСсассасСАасСАасСтТА
СстТАаССсТАССССС,аАдаСАа,ТапйААСАаССАСАСатосСТАСАС стасСсАватаАСССАСаАда,авасСАаСАСС,ТапАпААААССОаТОас
СсСсССАсССсаАдаТаСАаСтТаА
СААДО);ТОаСАВСТаАААвА,ТоСова!ооСставАСТОИО ТОаССССтТАОС
САСАСССтТОАаСАТСАССТОТАССТССЯТО ТОСООИСтТТСАВССТОАСС дестТАсоеооа,ТатсАТеаватасассАаоСстоСАвасСААаТатТосТа вААТОССТООССАТСАТСТОСОСаСОАСОаСАССАССААТТАССАС деаСаСсСстТОАТСАВСАВАСТОАОСАТСТОСААОСАСААСАССААО
АаСсСсАвататтоСтТаААаСтТаААСАВССТаСАвАССОАСОАСАСО
СССАССТАСТАСТОСОССААОасаСАТСАССАСТСОЯЯТОИТОаВАСОАС
ТАСТАСОСТАТаСАСТАСТОССОССССАСОВСАССАОЯСО,ТВАСАСТОа тотТАвСовАсаСавАсаАтта,аоваСевАсаААстасоавАсоа савАТСТОСОСОСАсСаСОпААаСОАТАТССАВАТОАСССАВАСОС стеабсадосстатотасстотатавасСОАвАСАСТОАССАТСАСАТ ссбовесСАВСОАВААСАТССАСАВСТАССТООССтТОВТАТСАСС
АВААДОСАСааСААвА,асосСсАастаставтатАсаССассСАССТ тетаваСсСОбАСОАТИаТаСССАВСАВАТТСАССОСОСАССсООААаСОЯ
ССАСАСАВТАСАВССТОААСВАТСААСТОССТаСАсСАСОоВАВОаАСа тавооСООТАСТАСТаССАСаСАСТАСТАСАВСАСССССТАСАССТТ севоестаСОаСАССААдаСтТавАААТСААА,сАсаС,а,аСоевААстТОа тТОСАСАТОССССТОСОСТТОоСтТаваССССАВАСАСаССАСАсТоСОЯ тОААСоевосв,оабавА,аСАстававасавАваАтоСвАСаТ сСсАдеСстаСтТавААТСТООСОСОСООАСТОСТОСАОССТООСОасАТ
СстотТОАВАСТОАОСТОТОССОССАсССОасСтТСАССТТСАВСАССТ
АСОССАТОААСТОСОТОСО,ОССАВа,ССССтТааСАААваССтТавААТ савататоСсСООбАТСАСААаСААаТАСААСААСТАСОССАССТАСТА сеССОбАСАССОаТаААОасаССОасТгСсАССАТСАВОоСО,асАСОАСА
ССААСААСАСССТатТАССТаСАСАТОААСАОССТОСОСОеССвАСцО
Анти-СОЗ (СНн2гб527 Мн 34 АСАССОеСС,атТатАСТАТТОТаТаСОССАСОССААСТТОВОСААСА 23(12) МІ7-46(113)) СЕМ СТАТСТОТСТТОаСТТТОССТАСТОСООССАССССАСССТССТОА 4.32.63 сайт матриптази СССТаТтСсААаСасСтТАаСАСАААсСВаСсСстТАаСататтосстотос
ММРО МКОб62 Сн2г527 СССССАВСАВСААСАвСАСААССОВаСевААсА,оСаСССтавОас
МНЗ 23-МНІ2 СНІ РОВІ) ТасСстостТОААаОаАСТАСТТОСССОСАВоССаТОАСАаТаТтстТОв 1605 МН СНІ пит Бо ААСАасбавАаСССтТаАСАА,СОваСатаСАСАССТТОССТОССОаТа "виступ" ра ГАГА СТаСАСАсССАсаовасстатАСтоСсєтаАаСАаСа тат САССОТОа рЕТА1Т6546 ССстТАвСАвСсАвоСтаваСАСССАСАССТАСАТСТОСААСОТОаААС 118
ПЕ нен | САСААВСССАССААСАССАААИТавАСААСААССТасАсОоССАДс - В деастатаАтасСсевАсоАасоатоСсосваСевАваАтоСоАватТ
М ння вСААТТаСТТОаААТСТООСТОСТОИаТСтТаСТААААССвв,Сое!ТтТо бр ее й сстеасетотолдеСтасасовасттоСОООТгСАССТТСТОСААСОС
Че І ставАТОАДОСТООСТТоаССАваСоССвааСАААса,ГсстовАаТ вне тв в сваттавтоатТАТСААСТСТААААСТОаАСОсТааСАССАСОСАТТА в сесОаСтТоСАВТТАААваТтсОаТТТТАССАТТТОССОаСОАСОАТАСЄС п АААДААСАСТСТаИТАТСТаСАСАТОААСТОТСТОААААСТОаДАСАСАС
СОСАВТСТАСТАСТОТАСТАССССОТООСААТОСТоТТОаТАССАТ тТАТТОССОССАсСсаСАСеСтаатТАсоста,атотАаСастАатТАСС
ААд7оаСоССАсСетаттоооССтавСАСССАССАВСААВАСВСАСА тотввСОбААСАсеСсСеСттавастатстааТОАААСАСТАСТТО соббоаеосСатаАСсСсетТатоттавААСТОТОССОСССтТОАССАЄС сасетТаСАСАССТТТОоСАсСосСсетТасСтТаСАсСА,СА,овасстатАС тосстеатостоСатоватсАСсССсТаССсСтотТАаСтоССтОавОААСА
САСАСАТАТАТСТаТААТаТтСААТСАСААаССТТОСААСАССААДАСТ
СОАТААДОАААСТСОАаСССААВАаСТаСсаАСААААСТСАСАСАТО
СССАССОСТОСССАВСАССТОАДАОСТаСАсСОовавАССаТСАаТоСТТ
ССТСТТОСССССААААСССААСОАСАСССТСАТОАТСТОоССОвАСО
ССтТоАваТСАСАТОСОТООСТОСТавАС,ТОАВССАСОААВАСССТ вАВИатТСААатТТСААСТООИСТАСсОатТавАСсоо!СатавАватасСАТААТ
СССААСАСАААСОССОВСвасАсаАаСАСаТАСААСАВСАСИТАССОаТ стеавтоАдаСатоСтТоАССОТОСТаСАССАСОАСТОаССтТОаААТООС
ААСОАС,ТАСАА,ТаСААваТтстоСААСАААаССєтовасасосоо
АТСОАСААААССАТСТОСААА,ССАААСоаСАаоСССвАВААССА
САСОСТатТАСАСССТаАСССССАТОССО!СВАТОАдОаСТОАССААСААС
САсСОСТсАОСсСсСТОТОоСТаССтТааТСАААвасттсТАТСССАССОАС
Атсасс,атевАа,тавОАвАВСААТаваСАаССевАВААСААСТАС
ААВАССАСОССТОССТСОЯТаСТавАСТОСОСАСООСТОоСтТТоТТоСтТотТ
АСАВСААдаСтТоАССатТавАСААСАССсАсата,аСА,САваваААС тот СТСАТаАСТОСОТОАТаСАТОАСОСТоТаСАСААССАСТАСА
СОСАВААСАСОСТОТоССтТатотоСОООаТАААТОАХА вАССТаСААТТОЯВТТОААТСТОСТОИаТааТСтТОаСтТААААССавас сапсосстасатсталастасасвасттоСацсзАТТСАССТТСТОС
ААса,асатавАТаАОаСТОСЯттоаСсСАсСассоСавасСАААаасСстТ саелдатасатаа!ТсатАТСААаТСТААААСТаАСССатТааСАССАС вОАТТАСОаСО,асСТоСАаТТАААсааИтсатТТАССАТТТСОССОЯСО,АС
САТАССААДАААСАСТСТатАТСТаСАСАТаААСТОТСТаААААСТаА
АСАСАССОСАаТСТАСТАСТатТАСТАСССТСЬЮТЬС ТТаССОСААТОСІТСТТОС тТАССАТТАТТаВСЬЬЯССАСОаСАСОСТОСТТАСОССТатоттоСаТст
АВСАСААДАДССО,СССТАсаСататтсосттТаасссССАаСАаСАда
АаСАСААЛССОЯССапААСсАсСсСсассєтавастасстоатаААдааА
СстТАСТІССССОСАССССатаАСАсТатстапААСАа,Сс,апАасСостТ вАСААССОЯССОатТасАСАСТТТОССТаССОСТОаСТаСАСАсССАаСОос сСстТатТАСТоССтТаАдсСсАс,СсатаатсАсСсатасстАасСАасСАасст аваСАСССАаАССТАСАТСТаСААСатаААССАСААДаСССАаСАА
САССАААСТапСАСААаААсСа ТасАааССсСААаАа,аСтТатаАтаасоа
АдааадсватсСса,авАсаса,авАавАТСаАсатасАдастастасААТ стасвссосСавАСТОСТаСсАссСсТвасСасАТСТСТаАаАСТаАастТ атассассСАдаСсайасСТТСАССТТСАаСАССТАСаССАТаААСТОСО тасасСсд,сасссСстааСАААсасставААтТавататсСацзАТСА
СААДССААатТАСААСААСТАСОаССАССТАСТАСОЯССОАСАаСаТтал дача СсАССАТСАСССаспАСОСАСАаСААпААСАСССтТаТт
ЕоІВІ 1605 НС СНоБ27 АССТаСАВАТаААСАСОСССТОСОСаССвАсааАСАСсСса,7асСсататАСТ уні 23-12 НС Ес "виступ! "7 ГОаТОтасСОбсСАССОСААСТТСООСААСАССТАТОТОТОТТОСТТ
РО ГАГА, рСОМ999 тасстАставсасСсАасааСАссСстатаАсСататсААаСастАс 119 " ТАССАДОСОЯССССАОССЯТаттоСооСстТассСАСССАССАССААСаАС
САСАТСТОССОСВААСАС,ССсСасттавастатстааТаАААСАСТА сттеоссСа,ад,асосСсатАссататттаапААСстотТасассстаАс
СсАдаСса,часатТасСАСАССТТТСсСАссСсатастасСАасА;а,аСсАаасвасст атАстосстатостсСа,атаатсАсСсЯстассстотаастосстацва
ААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТОТСААТСАСААО,ССТТССААСАССА
ААСТОСОАТААВАААда,атоадасссААаАастасоАСААААСТСАСАС
АТаССсСАССОЯТаСССАаСАССТаАдАЛаСТасСАа,асасааАсСа,атсА9ат
СОС ССССССААААСССААдаСАСАСССТСАТОАТСТОССОСО
АССССтТаАСатТСАСАТОСОТОСТОИатТасСАСатаАдаССАСЯААСАС сСстТАСатТСААатТсААСсСТОатАасатавасса7асСсатасАватасСАТ
ААТаССААСАСАААЛССТСОЯСОвалсАапАаСАаТАСААСАаСАСаТтАС сататаатсда,аСсатостсАсСсатостасСсАССАааАСТаасСтТОаААТ паСААдаСсАСТАСААаТасСААааТСТоСААСАААаСССтОвасасс
СССАТСОАСААААССАТСТОСАААаССАААдсСОСасАассссвАСАА
ССАСАСОИатТатАСАСССТаСССССАТОССОСаСАТОАДаСТаАССААС
ААССАСОЯТСсАСССТаТаСТОаИССтТайТтСАААааСТТСТАТСССАСС вАСАТСЬСССОЯТОСАСТООаСАпАССААтТа,чаСАаССОапАСААСАА
СТАСААСАССАССЯССТОССОЯТАСТасАСТОСОаАСааСстоСтТтоТтТ
ССТСТАСАВСААаСТСАССатапАСААсАа,САсатааСАасСАссоса
СААСОИТСТТСтТСсАТАСТоСатаАТаСАТОАДИааСТСТаСАСААССАС
ТАСАСОСАЧААСАа,СсСТоТоССсТатстСапатАААТОА
СААДАССТОСАаСтТаАААаАсТоСвассєтавАстаатаассссСтТАас
САСАаСаССсТаАдасСАТСАССТОатТАСССЯТатТоСсОоасттсАассталсс дастТАСсс,асоататсатаватасассСАасстСАсасСААа,аТатста вААТОССТОСОаСАТСАТСТОСОЇСаВСаАСОаСАССАССААТТАССАС да,аСасссСстТаАТСАВСАСАСТаАаСАТСТОСААД,САСААСАаСАдса дасСсАсаататсСтТаААасСтТаААСАассСтТасСсАаАССаАСаАСАСС
СССАССТАСТАСТАСОаССААСасйСАТСАССАССЯТОСТаСАСОАС
ТАСТАСОСТАТаСАСТАСТОСОСССАСсИИаСАССАа,СО,аТаАСА,Та тСтТАсСса,ааАдсасааАсаАттааСссасавАссААа,атааСацАсас свадтотас,савАд,ааСапААаСаАТтТАТССАСАТОАСССАСАаСС стассла,асстатотассттатавасСсАСАСАСТОАССАТСАСАТ сесс,аСсСАаСаАаААСАТСВАСАаСтТАССТВаССтТааТтАТСАСС
АпАДаСАСа,ааСААдсАасссєсАаастаєтаататАсасСсассАССТ тставсСсаАСаАтТатТассСАаСАСАТТСАССОЯаСАа,аСапАласа
ССАСАСАСТАСАаССтТаААаАТСААСТОоССтТаСсАспСАаса,аАасвАСа таасссаатАСТАСТаССАСаСАСТАСТАСАВСАСССССТАСАССТТ анти-ІЮ СОЗ в5сЕм 4.32.63 СЧбССТаСО,ОаСАССААаСтТавАААТСАААсСаСсасвсаавАсвастосСа сайт протеази МКО62 СОЗ3 сАдОссосвсасавААаТАаАСА,васСсСАсА7атсатААСсасваасАаса 120
МІ Сілямбда, рЕТК16544 | ОССсСОСААЛСаТОССО.СВОССсасАсСаса,атасааваС,ааАааАТоССАса сс,татТаАСССАааААСССАаСсСстТаАСсАстаттставсаайсСА сосаТОАСССТаАСАТатТааСАатТТСстТАСА,СасаССатаАССАССА
ССААСТАСОаССААСТОСОЯ ТОСАССААААдасос,аассАвассттСА вАСаАСТаАдтовасайСАССААСААаАсАасссєтаасСАССССтТ сССАСАТТСАССОаАТСТСОТОСТОИаСАСаАААлааССассстТаАСА статставСаСССАаССАСААСАТаАХ,вассаАаТАСТАСТОСОСС статастТАСАаСААССТаТОСОСТатсавсасавАсаасСАССААОаСтТа
АСАИТОСТАайатСсААСССААСОЯСТаСССССА,7СсатаАсостатто сосСССАаСА,аСаАасААСтТасСАааССААСААааССАСССТаатТ стассСстаАТСАаСаАСТТСТАСССАсСОаСсассатаАдссатавоста вААСО,аССаАСАасАаСсССатаААд,сасса,ааоатавАпАССАССА
СССССАВСААаСАСАССААСААСААа ТАСОаССассАасСАастАСс тадасстадссссСссАа,аСАатапААаАаССАСА,атссСстТАСАССТ асСАвпатаАСССАСвАсС,ааСАаСАССаТавАсвААААССсатаасс
СССАССОСАСТаСАаСтТаА
СААДАССТОСАаСтТаАААаАсТоСвассєтавАстаатааСсссСтТАсс
САСАаСаССсТаАдасСАТСАССТОатТАСССЯТатТоСсОоасттсАассталсс дастТАСса,асоататсатаватасасСсАасстСАааСААа,аТатста вААТОССТОСОаСАТСАТСТОСОЇСаВСаАСОаСАССАССААТТАССАС да,аСасссСстТаАТСАВСАСАСТаАаСАТСТОСААД,САСААСАаСАдса дасСсАсаататсСтТаААасСтТаААСАассСтТасСсАаАССаАСаАСАСС
СССАССТАСТАСТОАСОаССААасасСАТСАССАССЬЯ ТОС ТТОСАСОАС
ТАСТАСОСТАТаСАСТАСТОСОСССАСсИИаСАССАа,СО,аТаАСА,Та тСтТАсСса,ааАдсасааАсаАттааСссасавАссААа,атааСацАсас свадтотас,савАд,ааСапААаСаАТтТАТССАСАТОАСССАСАаСС стассла,асстатотассттатавасСсАСАСАСТОАССАТСАСАТ сесс,в,васСсАаСаАаААСАТСВАСАсаСТАССТОИССТаатТАТСАСС
АпАДаСАСа,ааСААдсАасссєсАаастаєтаататАсасСсассАССТ тставсСсаАСаАтТатТассСАаСАаАтТТсАа,аСса,асАаСапАласа
ССАСАСАСТАСАаССтТаААаАТСААСТОоССтТаСсАспСАаса,аАасвАСа анти-ІЮ СОЗ3 СЕУ 432.63 Г3аСССООТАСТАСТОССАСВСАСТАСТАСАВСАСССССТАСАССТТ нерозщеплюваний дінкео СООСтТОСООСАССААДОСТОСАААТСАААСИаЇИСосяовАсОсСтосо соЗз М Сілямбда авАдсеассаСбапАлдатава,ааСс,асоа,ааААлстасоапвАа,васааАсса 121
РЕТВ16545 т ассасадлдатасасассвА,васАаатасвасвавАааАТоССАС ссКсатоатаАСССАааЙААСССАасстадсаататтстааСсоас
АсСатаАСССтТОаАСАТИаТааСАаТТСстТАСАСОЯСасСсаТатаАССАСС
АВСААСТАСаССААСТОСОатаСАааААААлаСсСсавасСАаасстто
АвАаСАСТаАТоОвВасСцваСАССААСААаАаАаСоССстааСАССССТ сССАСАТТСАССОаАТСТСТОСТОИаСАСаАААлааССассстТаАСА статставСаСССАаССАСААСАТаАХ,вассаАаТАСТАСТОАСЯОСС статастТАСАаСААССТаТОСОСТатсавсасавАсаасСАССААОаСтТа
АСАИТОСТАайатСсААСССААСОЯСТаСССССА,7СсатаАсостатто сосСССАаСА,аСаАасААСтТасСАааССААСААааССАСССТаатТ стассСстаАТСАаСаАСТТСТАСССАсСОаСассатаАассатавоста вААСО,аССаАСАасАаСсССатаААд,сасса,ааоатавАпАССАССА
СССССАВСААаСАСАССААСААСААаТАСИаСсСасСАасСАастАСс тадасстадссссСссАа,аСАатапААаАаССАСА,атссСстТАСАССТ асСАвпатаАСССАСвАсС,ааСАаСАССаТавАсвААААССсатаасс
СССАССОСАСТаСАаСтТаА
САсатасластатасАяатстаасассаААаТаААаАААССАСцас асСсАдаСсаТААдсататСстасСсААя,васСАаСайсСстТАСАаСТТСАСС васСтТАСАССАТаААСТОСЬЯ ТОСОССАСОИаСТОоСтТавАСАСССОСа,ССТО вААТОаАСАТОСОССТаАТСАСССССТАСААССЯЯСОССАасСАаТстТАС
ААССАСААХСаттОоСсасайсСАА,аасСсАССАТадсСсатапАСАССАСС
АССТоСАССОТаТтТАТАТОаВААСТаАССАСССТОССОЯСАССа,АасАС
АссассатТатАСТАТТаТаССАСАОСОЯССсОВаСТАСОСАСсОвСасАаАсцаС тТТсвАТТАТТОССОаССАСсССсСасСАСССТОЯСтТаАсСсататосСтСтТастА сСАССААДССОЯССССТОСОСОТОТттоСстТотТаасСсСсСстТоСАаСААСТ
СсСАССТоОТОССОаспСААСТОССОЯСТСТОСОСТОССТаС,СТасААСАТТ
АСТІоСсСсСсОаАсаСсСсСсатадсса,ататосСстапсААтотТааСасСтстТаА сстосоСасаТаСАСАССТТТССАаОоСТаТастТасаатостоСоаасСо татастосстатостоса,атоатаадса,атассстосаасттстава
САСССАСАССТАСАТСТОСААСатаААССАСААаСССТОСААСАСС
ААдсатапАСаАСААд,аатавААСССААХатостасвАсастаасовас
АдсатоСсавд,асоааАдааАТоССАса,астататаАСССАСаААС сстсСтТадсаататтостааСсоасСАССатТаАСССстТалсста,ата вАТСТТСТАССОСОаСастатаАССАССТОСААСТАСОаССААТТОСИТ аСАпаААААлассс,васСАц,асстСАпАасАСТаАтТсаСвасА
ССААСААСАсСАасСоССтавСАССССтТасСссСАаАТстоСастсто тастаасСайаСААлсасстТассстахсттатстастастдасста ам5іМ па7787 МН СНІ ЕЕ ДаСАСОеАдавоСсаАдатТАСТАСТаСасСССстТатааТАСТОСААССТОаТ
СоЗ3 Снагаб52г7-УнЗ 23-42 Му ссататссаСсавсАпаСАССААда,асталссатастатоСсАяасСсаТстт 122
СНІ Ес "виступ РО ГАГАІ ССАССААдОасаАссСсАатататаосостаСССССАастосСААатТ рЕТН15445 СстТАСАТСССССТОССАСАОССТОСССТОС,АТаТтСтТоаТтаААаСсАСТ
АСсСТтТоСсСТОАЛасасСстТатаАдсАа,атТатсттавпААСсАаСсасвАасСсСссСтТОаА
ССАаСасАатТасСАСАСАТТОССТаСАСТОаСТаСАаСАасСАа,Савос тТатАТАаССТОАДаСАСОССЯТоОаСтТаАССЯТассттосСтотТАаСсСстОас
СААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТаТаААТСАТААДаСССАСТААТАСС
ААДИаСТОасАТААСВАААИ,ТапААССТААаАаСТасСспАТААВАСССАСА сстатосссостассстастосСтТаАластастаатаасссСстТАасСа тат стат сСсССССАААаСССААСааАСАСССТОАТаАТСТОССО вАСССССаААХатТаАсСсТасатовтаставАТататоССАСОСАСаА
СоСтТаААаТОААатТТСсААТТОСТтАСсСОатавАСсаваатасАлатасСА
СААСасССААпАССААаССТАВАпАСОААСАаЙТАСААСТОСАССТА ссссатостатоСсатастаАСАаа,атастасСсАССАааАСТааСтТаАА саапСАААпАСТАСААаТаСААсСататССААСААСИаГссстОасвасояс
ТОоССАТССААДААСАССАТСТОСААДСааССААЛдавсассАассССаваА
АССССАССТаТтТАСАСССТАСССССАТОаССОВСАТОАДаСтТалдсСсСАА вААССАСОаЯТтСсАСССТатТаатТасстааТСАААвастТСстТАТСССАС
СаАСАТСЬЯССОЯТОВСАСТасаАаАаСААТавасАасСацвАсСААСА
АСТАСААДСАССАСОЯСТСТОСТСОЯТаСстТааАСТОСОАСОваСТоСтТТоТтТ
ССТСТАСАВСААаСТСАССатапАСААсАа,САсатааСАасСАссоса
СААСОИТСТТСтТосАТАСТОСатаАТаСАТаАДаВасСтСстТасСсАСААССАС
ТАСАСОСАЧААСАа,СсСТоТоССсТатстСапатАААТОА
САсатасластатасАяатстаасассаААаТаААаАААССАСцас асСсАдаСсаТААдсататСстасСсААя,васСАаСайсСстТАСАаСТТСАСС васСтТАСАССАТОААСТОСЬяЯ ТаСОССАСОаСТОоСтТапАСАЛССИаССТта вААТОаАСАТОСОССТаАТСАСССССТАСААССЯЯСОССАасСАаТстТАС
ААССАСААЛДОаттОоСсОасаасСАА,ассАССАТаАССатасАСАССАСС
АССТоСАССОТаТтТАТАТОаВААСТаАССАСССТОССОЯСАССа,АасАС
АссассатТатАСТАТТаТаССАСАОСОЯССсОВаСТАСОСАСсОвСасАаАсцаС тТТсвАТТАТТОССОаССАСсССсСасСАСССТОЯСтТаАсСсататосСтСтТастА аСАССААДССЬЯССССТОССОЯТОттТоСССсСстТааСССССАасСАаСААСА аСАССАССОСОЯСваСАСАСОСТСТСОСТСТОСООСТаССТОатоа,АаСсАС тТАСТТОСССОСАССсССОатТаАССОЯТатоСстТасААСАОССОЯЯСАССССТа
АсСстТоса,асоатасСсАСАССТОСТСТСОЯССОСТастасааАаттстоас
СстТатАТАаССТаАаСАаСсСетТаатсАСсСсЯтТасстСстТАасСсАасстТа ваСАСССАСАССТАСАТСТаСААСатаААССАСААаСССАССААС ам5іМ пОе7787 МН СНІЕЕЇ АССАДОСТОпАСОАаААд,сатапАаСССААаАастасаАСААААСТ
Ес "западина" РЗ3290 ГАГА) САСАСАТИОСССАСсСОЯтТасССАасСАССТаААа,аСсТаСАса,авасАСС 123 рЕТН15444 СТСАатстссСТсТССССССААААСССААОСАСАСССТСАТОАТО тоссавАСсоСсСстТаАСаТСАСАТаСОЯТОаСсСТОИа ТасАСсСатаАасСсСАС вААаАСоСсТаАааТСААаТТСААСстТаатАсатавасавасатавАс атТасСАТААТаССААСАСААдАсССсасСса,вапА,аАаСАаТАСААСАаС
АсатАссататаатТсАдасатссСстТАССатосСстТасСАССАССАСТОаС
СТОААТаССААааАаТАСААаТаСААСаТСТоСААСАААасСсстТо ваСассССССАТСВАСААААССАТСТОСАААаССАААд,СааСАасСосс
СОАСААССАСАССЯТа ТаСАСССТаСССССАТСОССОСОСаАТаластТа
АССААСААССАСО ТСАааССТоТоатТасаСАаТСАААааТстТТстТАТС
СсСАаСаАСАТСОЯССОЯТавчАсСТапасАпАаСААтТасасАаосСа7ацвАс
ААСААСТАСААСАССАСЯаСсСстТоСсСсатаставАСТОСОАСОвасСтТоС тсттостсатаАдаСААаСТАССатапАСААСАаСАсСаТатаасСАс
СА,асапААСатстСсТсАТастоСатаАтТасСАТОАДИааСТСТасСАС
ААССАСТАСАСИаСАСААСАСССТСТоССТаттоСапатТАААТОА
САСАТССАСАТОАСССАСАасаССССАсССсАс,сСстТаттассАасСата саСаАСсАпАатТаАССАТСАССТОТА,аСсасССА,аСАаСсАа,7Ссататос
ТАСАТаСАСТОСТАТСАССАСААС ТССО,аСААсассссСААДаСтТОа
СстТаАТСТАСОАСАССАССААЛОаСТОСССТОСОаоатасССАасСАСА ттстоаСсадас,вастСсааСАССЯАСТТСАСССТОаАСААТСАССТ
ЄоСсТоСАаСССОАаспАСТТСО,ССАССТАСТАСТаССАССАССТОСТ
ССААЧСАСССССТалдсстт тааСсСАаайСАССААдаСтТасАААТСА ам5іМ пОа7787 МІ Ск Ак) даСатТАСс,аатаасСтТаСАССАТСТаТСТТСАТСТТСССассАТСТОА 124 рРЕТАН15443 тоапААСТТОАААТСТОСААСТОИССТОТ ТТ ТИТатТаССтТастОААТ
ААСТТСТАТСССАСАСАпаССАААаТАСАа,атТавААаатааАТААСО
СССТОоСААТСОСИаТААСТОССАСОаАдаАататСАСАСАССАасАСА
ССААСааАСАССАССТАСАИССТСАаСАаСАСССТОАСсасСстадасА
ААССАСАСТАСОАСАААСАСАААаТ; т СсТАСасстасСаААатсАСССА тсАда,асасстаАХастассСатСсАСАААСАаСТТСААСАсСа,ааАаА стеаттда
СААСТОСАССТОАААСАСТОСОССССТОСАСТОСТОСССССТАОС
САСАСССТОАССАТСАССТОСТАССОТОТОСООСТТСАОССТОАСС
АССТАССОССТОТСАТОССТОСОССАСССТОСАСОСААСТО СТО
СААТОССТОСОСАТСАТСТОСОСССАСООСАССАССААТТАССАС
АССОСССТОСАТСАССАСАСТОАССАТСТССААСОАСААСАССААС
АСССАССТОСТТОСТОААССТОААСАОССТОСАСАСССАССАСАСС
СССАССТАСТАСТОСОССААОСОСАТСАССАСССТОСТОСАССАС
ТАСТАСОСТАТОСАСТАСТООСОССАСОССАССАСССТОАСАСТО
ТСТАССОСАСОСОСАСОАТСТООСОССОСАОСААСТОССОСАСО
СССАТСТООСОСАСССОСААСССАТАТССАСАТСАСССАСАССС
СТОССАСССТОСТСТОССТСТСТОООСОАСАСАСТОАССАТСАСАТ
ССССОСОССАОССАСААСАТССАСАССТАССТОСССТООТАТСАСОС
АСААССАССССААСАССССССАССТОСТОСТСТАСОССОССАССТ
ТТСТООССОАССАТСТОСССАССАСАТТСАССОССАОСОСААССО
ССАСАСАСТАСАСССТСААСАТСААСТСССТОСАСАСССАССАСО
ТОСССССОТАСТАСТОССАССАСТАСТАСАССАСССССТАСАССТТ
СОССТОСОССАССААССТОСАААТСАААССАССССОСОСААСТО во о сь С ТОСАСАТОССССТОООСТТОСТОООССССАСАСАОСССАСАСТОЯ |. ов
ММРУ-МКОЄ2, ЕТВблво | ТОААССооСооСоСоСАСОСАСТОСОСООСОАСОАТОССАССТ
ССАССТОСТОСААТСТООСОССОСАСТОСТОСАОССТОССОСАТ
СТСТОАСАСТОАОСТОТОССОССАССООСТТСАССТТСАССАССТ
АСОССАТСААСТООСТОСОССАСОССССТОССАААСОССТОСААТ
ССОТОТСССОСАТСАСААОСААСТАСААСААСТАСОССАССТАСТА
СОСССАСАССОТОААОСОССОСТТСАССАТСАССССОСАССАСА
ССААСААСАСССТОТАССТОСАСАТСААСАСССТОССОССССАСО
АСАССОСССТОТАСТАТТОТСТОСОССАСОССААСТТСОССААСА
ССТАТСТОТСТТООТТТОССТАСТОСОСССАССОСАСССТОСТСА
ССОТОТСААССОСТАСССТООССОСТОССТОСОТОТТСАТСТТОС
САССТТСССАССАССАССТОААСТОСОССАССОСТТСТОТООТОТ
СССТОСТСААСААСТТСТАСССССОССАСОССААССТОСАСТОСА
АССТОСАСААСОСССТОСАСТОССОСААСАСССАССААТОССТСА
ССОАССАССАСТССААССАСАССАССТАСТОССТСТОСТОСАССС
ТОАСССТОТССААОССССАСТАССАСААССАСААССТСТАСОССТ
СССААСТОАСССАССАОСОССТОТСТАССССССТСАССААСТСТТ
ТСААССОСОСССАСТОСТОА
СААДАССТОСАаСтТаАААаАсТоСвассєтавАстаатаассссСтТАас
САСАаСаССсТаАдасСАТСАССТОатТАСССЯТатТоСсОоасттсАассталсс дастТАСса,асоататсатаватасасСсАасстСАааСААа,аТатста вААТОССТОСОаСАТСАТСТОСОЇСЯВСаАСОаСАССАССААТТАССАС да,аСасссСстТаАТСАВСАСАСТаАаСАТСТОСААД,САСААСАаСАдса дасСсАсаататсСтТаААасСтТаААСАассСтТасСсАаАССаАСаАСАСС
СССАССТАСТАСТАСОаССААСасйСАТСАССАССЯТОСТаСАСОАС
ТАСТАСОСТАТаСАСТАСТОСОСССАСсИИаСАССАа,СО,аТаАСА,Та тСтТАсСса,ааАдсасааАсаАттааСссаСсавА;а,асА;Ааа,атаасапАсас свадтотас,савАд,ааСапААаСаАТтТАТССАСАТОАСССАСАаСС стассла,асстатотассттатавасСсАСАСАСТОАССАТСАСАТ сесс,аСсСАаСаАаААСАТСВАСАаСтТАССТВаССтТааТтАТСАСС
АпАДаСАСа,ааСААдсАасссєсАаастаєтаататАсасСсассАССТ тставсСсаАСаАтТатТассСАаСАаАтТТсАа,аСса,асАаСапАласа
ССАСАСАСТАСАаССтТаААаАТСААСТОССТаСАс,САааСа,аАасАСа таасссаатАСТАСТаССАСаСАСТАСТАСАВСАСССССТАСАССТТ анти-ІЮ СнНа2г527 4.32.63 СЮЗ СОССТаСО,ааСАССААаСтТавАААТСАААСсСОаСсаасаавАсвастосСа
Снагаб52г7 МН 23-42. йЙЩ Ск) вдасСсаСапААлатавАаа,,аСас,аСасзААаа,атасС,ааАсасацпАс 126 нерозщеплюваний /лінкер) ССССОСОСОСААСатТасСаЦааСаеавАасасАа,атасаасасавА,аАТоСаАа рЕТН16759 стасдастаставААТСТООСОССОСАСТОСТОСАИССсСТОаСОс
АТСТСтТаАаАСТОАЛАОСТаТаСТСОЯССАаСайасСТТСАССТТСАаСАС
СстТАСаССАТаААСТОСОЯТОаСОССА,СаСсСсССтТааСАААаасставА
АТаСОаТатоССасАТСАВААаСААаТАСААСААСТАСассСсАССТАС тТАСЯССОАСАС,ССсатадАд,а,вассайТтСАССАТСАСССОСИСАСИА
САССААСААСАСССтТатАССТасСАваАТаААСЬСССТаСвавоСаА впАСАССОЯССОЯТатАСТАТТиТа ТОСОСОаСАСО,ОаСААСТТСО,ССАА
САаСтТАТОаТаТСТТаИаТттТаССстТАСТОССОСЯаССАсСавасАсостсат вАССОИТатСсААла,аСсастааСсатавоСсастостСататТсАТСТТ
СССАССТТССОАСадаСАаСсТаААдатосавасАссастстатсат атасстастаААСААСТТІСТАСССССОЯСОСА,СасСсСААлватасАата вААСатасАСААСса,асосстасАатоСааСААСАаССАСаААТОССИатТт вАССОАаСАСаАСТоСААааАСАаСАССТАСТОССТатосСтТоСАС
СсСТОАСССТаТСоСААвасСсСаАСТАСОАСААдаСАСААСИТатТАСаС
СстТасСспААдатаАСССАССАСССОСОССсТатстТАасссСаТтаАССААСТС тТТТсСААССОСОваСалд,тТастаА вААСТаСсАа,аСсТаставААТОСООССЯСсСАС,СаАСстТоа,атТасСсАасстоас сапАТСТСТОаАсАСТаТСТО ТОССОаССстТоСаасСстТтСАССТТСТОоС
АССТАСаССАТаААСТОСОЯ ТИСОСАСсАсСаСстТоСтааСААласасСстОа вААТОСИ,аИТатоССа,ааАТСАаАТССААаТАСААСААСТАСИаССАССТ
АСТАСОЯССОаАСТОСИатТаАдАсаасСсааТТСАССАТСТОТСООСОасСАСИ
АСТОСААСААСАСССТатАССТасСАСАТОААСТОССТОСОСИаССа
АааАСсАСсСсасСсататТАСТАТТаОТаТОСОаСАСОСаСААСТТССасА
СоЗ Сново УН 23-12 - СК АСТОСТАТОТаТСТТЇИаТттТаССсСтТАСТОССОСОСССАсСОаССАСоСстсаТат
ЕТВ1З811 їадсСсатТатсАТоТасСтТАаСатасоастосстСататТСАТСТТО 127 р ССАССТТССОаАСаАдасСАаасСстТаАдАа,атоСсоасАссастстатата тасстасСстаААСААСТТСТАСССССаСадсасСААластТасАатась
ААСЖИИТасСАСААСОЯСТСТСТОаСАатТоСаасСААСАаССАСаААТоСаТта
АСС,АССАСОаАСТоСААдСааАСАаСАССТАСТОССТаТтоСтТоСАСС
СстТаАСССТаТССААдааССОаАСТАСОАЧААСаСАСААдСОСтТатАсасс тасаААатаАСССАССАСЬХЯССТатстТАасСссСатаАССААСТОСТ тТТСААССОСОСОПСОСАаТастаА
СААДАССТОСАаСтТаАААаАсТоСвассєтавАстаатаассссСтТАас
САСАаСаССсТаАдасСАТСАССТОатТАСССЯТатТоСсОоасттсАассталсс дастТАСса,асоататсатаватасасСсАасстСАааСААа,аТатста вААТОССТОСОаСАТСАТСТОСОЇСаВСаАСОаСАССАССААТТАССАС да,аСасссСстТаАТСАВСАСАСТаАаСАТСТОСААДИСАСААСАССААдС дасСсАсаататсСтТаААасСтТаААСАассСтТасСсАаАССаАСаАСАСС
СССАССТАСТАСТАСОаССААСасйСАТСАССАССЯТОСТаСАСОАС
ТАСТАСОСТАТаСАСТАСТОСОСССАСсИИаСАССАа,СО,аТаАСА,Та тСтТАсСса,ааАдсасааАсаАттааСссасавАссААа,атааСацАсас свадтотас,савАд,ааСапААаСаАТтТАТССАСАТОАСССАСАаСС стассла,асстатотассттатавасСсАСАСАСТОАССАТСАСАТ сесс,аСсСАаСаАаААСАТСВАСАаСтТАССТВаССтТааТтАТСАСС
АпАДаСАСа,ааСААдсАасссєсАаастаєтаататАсасСсассАССТ тставсСсаАСаАтТатТассСАаСАаАтТТсАа,аСса,асАаСапАласа
ССАСАСАСТАСАаССтТаААаАТСААСТОоССтТаСсАспСАаса,аАасвАСа таасссоатАСТАСТаССАСаСАСТАСТАСАВСАСССССТАСАССТТ севастасваСАССААаСтТааАААТСАААс,аА,сассаса,аААатоа тТасСАСАТОССССТОСОСТОСТОСаССССАСАСАСИаССАаАсТСа тТаААСЯСОасавасоа,авАас,саСАатасаасасаАааАТоССАсцас сатсатаАСССАСпААСССАаССстТаАСсАататтоставсСассСАС сатаАСССтТаАСАТИТаССАатТотТАСАСОЯСасССатаАССАССАС
СААСТАСаССААСТОСОЯТаСАааААААлассСаасСАсассттсАс дапАСТаАТССОСОааСАССААСААСА,САХаССССтааСАССССстас
САВАТТСАССОВАТСТОТОаСТассСАааАААасассассстаАСАСТ атстасассСсАасССАСААЧАТадааССаАаТАСТАСТОСОСССТ атастТАСАаСААССТОТОСОТаттосаСбацвАсасСАССААаСтТаАСс д,атастадаСАаСасСТСсСАССААд,аавАсССсСсАатататтсссст ваССсСсССАасСтТоСААаТСТАСАТССОЯСТОССАСАОСТОСССТОасССИ
АТатТотТоатаАдАСаАСТАСТТІ ТОСТОАДОаСсСсТатаАСАататсттас
Анти-СОЗ (Сн2гб527 МН 34 ААСАаСасАаасссСтаАССАа,аСапАатасСАСАСАТТОССТаСАаТа 23(12) МІ 7-А46(113)) / 5сЕМ СТОСАСАССАССОСССТОТАТАОССТОАССАСССТСОТОСАСССТО 4.32.63 сайт матриптази ССТССТоТАаССтТаваААСАСАаАСАТАТАТСТОТААТатаААТСА
ММРО МКОб2 ам5іІМ ун тТААаСССАаТтТААТАССАААаТаСАТААСАААдатавААССТААСаАОС 128
СНІ ЕЕ СнНа2г527-МІ7 46-43 ТАИСОАТОбСОСОТЯАсСВАсСаватоСсавАа,аваСса,авсАа,ватССАа,атасСА
СНІ пит Бс "виступ" РО аСТОСТаСсАОСТоТООАСасССаАА,аТаААпАААССА,Са,аСасСАасСо
І АГА, РЕТА16751 таААдса,ататостасСААд,вассАаСОасСстТАСАаСТСАССООСТАСА
ССАТаААСТОСОЯТОаСОСсСАсСОаСстоСстапвАСАа,ааасстаавААТавА тааасСсСстТаАТСАСССССТАСААСОСаСаТассСАаСАасСтТАСААССАСА датсоса,АавасСсААдааССАССАТаАССаТасАСАССА,САССТОСА сс,атТатАТАТайААСТОАааСсАсаСсСсТаСс,асАа,аСаАааАСАССО,СсСсо татАСТАТТаТаССАСАСсСОаСс,аастТАСОСАСВвасАаАаастТСссаАТТ
АТТОСсСИаССАд,асасСАСсССТОСТОАССЯтТатсттТастАаСАССА дсасоасосстосататооосстааСССССАССАССААаАССАССА ссзвсаСсаасСАсСАдассасттосвастасстаатоаАасАСТАСТТО ссСосдасссатадсСсататстааААСАССЯСАаСССстТадсстос севсатасСАСАССТОСССОССсСОЯСТаСстасСсАасАатстТаасстатАТ да,ассталаСсАда,асатаатсАсСсатасстСстТАаСА,осСстасасСАСс
САВАССТАСАТСТаСААСОИТаААССАСААХаСССАаССААСАССААС стапАСаАСАдАдсатасАасСсССААаАдасТасвпАСААААСТСАСАСА тассСсАСССОЯТаСсССАаСАССТаААЛаСТасСАа,аа,псасАСсСатсАатс
ТТОСТСТТоСССССААААСССААСИаАСАСССТСАТОАТСТОССОСА сосСстТОАаатСсАСАТаСОсСТаватоа,атааАСсатТаАдасССАСОСААСАСС стадааТсААдаТтТСААСсТастАаса,атасассасатавдастасСАТА
АТаССААСАСАААЛССТСОСОВЗаАД,аАСаСАаТАСААСА,САСОТАСС статаатТсАдаСсатсСТсАССатоСстТасСсАССАСИаАСТаасСтТОаААТО
ССААСааАаТАСААаТаСААСаТатстоСААСААА,аСССТОСВИаСасСосс
ССАТСОАСААААССАТСТОСАААаССАААЛдсССсасАасссС(аАсААС
САСАССТаТтТАСАСССТАСССССАТОССОВСааАТадаСтТаАССААСА
АССАСЬЯТСсАСССТаТОСТИаАССТааТтСАААСааТстТСстТАТСССАСССИ
АСсСАТСЯВССОЯТОСАСТОСОаАСаАаСААТасвасАасСацвАсСААСААСТ
АСААСАССАСОЯССТОССООЯТОСТОаВАСТОССОСАСОваСТоСтТтСтТтос
ТСТАСАВСААДаСТСАССатасАСААСАааСсАсатааСАаСАсИосаА
АСОаТтТСТСсТСсАТАСТОСОаТОАТаСАТОАДСаССТоТаСАСААССАСТА
САСОСАСААДСАаСССТоТоССтТаТатстоСасатАААТИаА
СААДАССТОСАаСтТаАААаАсТоСвассєтавАстаатаассссСтТАас
САСАаСаССсТаАдасСАТСАССТОатТАСССЯТатТоСсОоасттсАассталсс дастТАСса,асоататсатаватасасСсАасстСАааСААа,аТатста вААТОССТОСОаСАТСАТСТОСОЇСаВСаАСОаСАССАССААТТАССАС да,аСасссСстТаАТСАВСАСАСТаАаСАТСТОСААД,САСААСАаСАдса дасСсАсаататсСтТаААасСтТаААСАассСтТасСсАаАССаАСаАСАСС
СССАССТАСТАСТАСОаССААСасйСАТСАССАССЯТОСТаСАСОАС
ТАСТАСОСТАТаСАСТАСТОСОСССАСсИИаСАССАа,СО,аТаАСА,Та тСтТАсСса,ааАдсасааАсаАттааСссасавАссААа,атааСацАсас свадтотас,савАд,ааСапААаСаАТтТАТССАСАТОАСССАаАССС стассла,асстатотассттатавасСсАСАСАСТОАССАТСАСАТ сесс,аСсСАаСаАаААСАТСВАСАаСтТАССТВаССтТааТтАТСАСС
АпАДаСАСа,ааСААдсАасссєсАаастаєтаататАсасСсассАССТ тставсСсаАСаАтТатТассСАаСАаАтТТсАа,аСса,асАаСапАласа
ССАСАСАСТАСАаССтТаААаАТСААСТОоССтТаСсАспСАаса,аАасвАСа таасссоатАСТАСТаССАаСАСТАСТАСАЯСАСССССТАСАССТТ севастасваСАССААдаСтТапйАААТСАААСсСаТасСсавасавАаастоса авАдсеассаСбапАлдатава,ааСс,асоа,ааААлстааСапвАа,,;авАса свасасвАдаа,атасавсас,авАсасАдатасасааааАааАТСССАС ссКсатоатаАСССАааЙААСССАасстадсаататтстааСсоас
АсСатаАСССтТаАСАТИаТааСАСаТТСстТАСАСОЯСассатаАССАСС
АВСААСТАСаССААСТОСОатаСАааААААлаСсСсавасСАаасстто
АвАаСАСТаАТоОвВасСцваСАССААСААаАаАаСоССстааСАССССТ сССАСАТТСАССОаАТСТСОТОСТОИаСАСаАААлааССассстТаАСА статставСаСССАаССАСААСАТаАХ,вассаАаТАСТАСТОАСЯОСС статастТАСАаСААССТаТОСОСТатсавсасавАсаасСАССААОаСтТа
АСсА,атастадаСАаСасСтСсСАССААСасАссСА,атататтоссс ставСССССАасСТоСААаТСтТАСАТОССОСОСТаССАСАССТОаСССтТа ваАТатотТоатТаААООпАСТАСТТ ТОСтТОАаССстТатОАСАССТатТстТтТ
Анти-СОЗ (Сн2гб527 Мун 34 ФІААСАССОасАасССсСсТАССАаа,аСсапАаТтасСАСАСАТТОССТасАса 23(12) МІ7-46(13)) / ЗвсЕМ ТОСТОСАСАССАССОСОССТОТАТАСССТОАОСАСССТОСТОАССО 4.32.63 нерозщеплюваний ТаССтТТоСтотТАаССстТаваААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТаТОААТ лінксер ам5іМ МН СНІ ЕЕ САТААДаСССАСТААТАССАААИ,ТасСАТААаАААаИтаспААССТААСА 129
СНна2габ527-М17 46-13 СНІ пит ССТаСОаАТасСсасАасасаАдсастСс,ааАсассвАа,асватоССАСат
Ес "виступ РО ГАГА; асАа,астатаслаттавассоаААатТаААаАААССАсасассА рЕТН16752 сасатаАлдаста|атстТасСААСЯССА,аС,аастАСАаСТТСсАССОваТст
АСАССАТОААСТОСЬЯ ТОСОаИССАСаСстТоСтасАСА,,аСсСтТасААТ апАТОСОССТаАТСАСССССТАСААСОСОЯСассАасСАасСтТАСААСС
АвААДСТТОСОСОСааСААдаасССАССАТОАССЯаТасАСАССАаСАССТ
ССАССОатТатТАТАТаСААСТОАДОаСАОСССТОаСОсАа,аСсОаАааАСАССа сс,атТатТАСТАТТаТаОССАСАСОСОВСТАСОСАСа,аасСсАа,вАвасттоа
АТТАТТОСССССАСОСОССАСССТССЯТадсСсататостоТастАасСА
ССААССОЯССССТОСОЯТаттососСстааСССССАаСАаСААаАасСА
СсСАааСса,асоааСАСсАаа,ассасттавастасстасвтаАааАСТАС тесессСбадасссатадсСса,ататСстТапААСАсСавАаССсСсталсс тоса,аасатТасСАСАССТТОСССОСсСОЯТаСстТасСалаАлатстТавсста тТАТАСССТОАаСАаСсатаатсАссатасстттТАасСсАа,сстацас
АСССАПАССТАСАТСТаСААСатаААССАСААаСССАаСААСАССА
Асва,атавАСаАСпААдсатапАаСССААвпАасСтТасоаАСААААСТСАСА
САТИаОСССАССОЯТаСССАаСАССТаААОаСТасСсааа,вававАССаТтсСА аТСТТоСТоТоСССССААААСССААДИаСАСАСССТСАТОАТСТОСС авАСССсСтТаАСатСсАСАТОСОЯТОСТОЯТасвАСатаАдаССАСОАА вАСССтТаАдаСТСААаТТСААСТОСТАСОа ТасалссвсасатавАаата
САТААТаССААСАСАААЛСОСТСОЯСОГГ АД СаА,аСАСТАСААСАаСАСО тАсесСататаатСсАдс!СатосСстТоАсСсатостасСАССАасАСТаасТта
ААТаССААдСааАаТАСААаТасСААваТатсТССААСАААаСССТоваТс
ССССССАТСОАСААААССАТСТССАААСаССАААдСпСасСАассссСаА
СААССАСАСататАСАСССТаСССССАТаССвапАтТаАдасСТалсс
ААСААССАСОТСоАСаССсСТатаатасстаа т САААСаТстТсТАТСССА аСОаАСАТСЯССОЯТОаВСА,СТа,саАпАаСААтТавасАассааАсААС
ААСТАСААВАССАСОЯСТСТОССОЯтТасСставАСТОСЯАСОасСтоСстТто
ТТОСТСТАСАИСААССТСАССИ,аТасАСААаАаасСАасатааСАасСАс аапААСаТСсТСстТсАТаСстТоСатаАтТасСАТОАСаТстоТасСАСААСС
АСТАСАСЯаСАСЧААСАС,СССТОТоССТатстоСааатТАААТОА
САсСОасСсататаАСССАаИСААСССАаССсТаАСАатТатстстаас ваСАССаТаАСССтТаАСАТИТаССАСТТСтТАСАСсОаСсасСатаАсс
АССАВСААСТАСОаССААСТОСОТаСАпаАААА,асСсСаасСАааСс
ТТСАСАДССпАСТаАТСОЯОСОСОаСАССААСААСАпСАасСоССстТавсСАСс сСстТасССАвАТТСТОССОСОЯТтотТТаставаСайаСААлсСастасоста
АСсСТсОТатТотТастасСстодассСтадааАСссА,ассаАатТАСТАСТОС сессстатаатТАСТОСААССТОТОСОСТООттоСсОаСасА,васСсАССААДОа стадсса,атастатСсАаСастсСАССААДаСаАССсСАХатТататто сосстТаСССССАасСТоСААаТСтТАСАТССОЯСТОаСАСАССТаСс ставОАТатстатОААасАСТАСТТТОСТОАаССтТаТОАСАСсТат
СстТапААСАССОЯСсАаСсССстТадсСсАаасСавАатасСАСАСАТТОССТа
СсАатастасСАдаАдсСАа,асаасстатАТАаСсСстадаСсАасСиатСатаА
ССатТасстссСсТстТАаССТааОААСАСАСАСАТАТАТСТатААТОТ
СААТСАТААДаСССАаТААТАССАААДаТтацвАТААпАААатасцвААССТ
ААсСАаа,астасаАатааСсапвАсаАд,асатоСсавАваСавАаааТоССА сетаслдастоастасадаттавасспААатаААаАААССАаваса
СсСАаСатаАдлсататСстТасСААСЯССА,аСИайСтТАСАаСТТСАССО аСтТАСАССАТаААСТОСОЯТОСОССАсСа,астоСстасАСАа,асосСтОас
ААТОСАТОСОССТаАТСАСССССТАСААСОССЯСОаССАаСАССТАСА
АССАВААЛСТТОСООвИССААааССАССАТОАССатапАСАССАССА
ССТоСАССОИТаТтТАТАТаСААСТОАДОаСАОСССТОСОЯОСАа,аСаАсааАСА
СНоБ27 ХЕаб амеі м СассатетАСТАТТОаТОаССАСАСОаСОССТАСОАСОССАСАСОСТ
ВС7787 НС ЕЕ Ес "виступ" тТовАТТАТТаВСССССАСОВИаСАСССТССТаАСсСсататостотТастА 130
РСІАГА, рРЕТН 16764 аСАССААДССЬЯССССТОССОЯТОттТоСССсСстТааСССССАасСАаСААСА " аСАССАССОСОЯСваСАСАСОСТСТСОСТСТОСООСТаССТОатоа,АаСсАС тТАСТТОСССОСАССсССОатТаАССОЯТатоСстТасААСАОССОЯЯСАССССТа
АсСстТоса,асоатасСсАСАССТОСТСТСОЯССОСТастасааАаттстоас
СстТатАТАаССТаАаСАаСЯтТаатсАсСсЯятТасстстТАасСАасста ваСАСССАСАССТАСАТСТаСААСатаААССАСААаСССАССААС
АССААДССЯЯТаСАСаАдаААсатапАасСССААаАастасаАСААААСТ
САСАСАТИАСССАССОЯТаСССАаСАССТОААаСсСТаСсАа,асацвавАСс аТСАатст сс оСССССААААСССААаИаАСАСССТСАТИаАТС тоссавАСсоСсСстТаАСаТСАСАТаСОЯТОаСсСТОИа ТасАСсСатаАасСсСАС пААаАСоСсТаАааТсААаТТСААСстТастасатавАассвсаси,тааАс атТасСАТААТаССААСАСААдАсССсаса,аааАдасАаСАаТАСААСАаС
АсатАссататаатТсАдасатссСстТАССатосСстТасСАССАССАСТОаС
СТОААТаССААааАаТАСААаТаСААСаТСТоСААСАААасСсстТо ваСассССССАТСВАСААААССАТСТОСАААаССАААд,СааСАасСосс
СОАСААССАСАСОИТаТАСАСССТаАСССССАТОаССООВСАТОАЛОСТОа
АССААСААССАСО ТСаСаССТата,;тасстааТтСАААвастТстТАТС
СсСАаСаАСАТСОЯССОЯТавчАсСТапасАпАаСААтТасасАаосСа7ацвАс
ААСААСТАСААСАССАСЯаСсСстТоСсСсатаставАСТОСОАСОвасСтТоС
ТСТоСТСТАСАВСААдаСтТСАССатапАСААсСАХаСАсатТаасСАс
СА,асапААСатстСсТсАТастоСатаАтТасСАТОАДИааСТСТасСАС
ААССАСТАСАСИаСАСААСАИаССТСТоССТатстоСапаТАААТОА
СААДАССТОСАаСтТаАААаАсТоСвассєтавАстаатаассссСтТАас
САСАаСаСсСсТаАдасСАТСсАССТОатТАССКСЯТаИтТоСсОастТтсАасстТалсс дастТАСса,асоататсатаватасасСсАасстСАааСААа,аТатста вААТОССТОСОаСАТСАТСТОСОЇСаВСаАСОаСАССАССААТТАССАС да,аСасссСстТаАТСАВСАСАСТаАаСАТСТОСААД,САСААСАаСАдса дасСсАсаататсСтТаААасСтТаААСАассСтТасСсАаАССаАСаАСАСС
СССАССТАСТАСТАСОаССААСасйСАТСАССАССЯТОСТаСАСОАС
ТАСТАСОСТАТаСАСТАСТОСОСССАасасАССАа,аСатаАСАаТта тСтТАсСса,ааАдсасааАсаАттааСссасавАссААа,атааСацАсас свадтотас,савАд,ааСапААаСаАТтТАТССАСАТОАСССАСАаСС стассла,асстатотассттатавасСсАСАСАСТОАССАТСАСАТ сесс,аСсСАаСаАаААСАТСВАСАаСтТАССТВаССтТааТтАТСАСС
АвАДаСАСааСААдсАасссєсАаастаєтаататАсасСсассАССТ тставсСсаАСаАтТатТассСАаСАаАтТТсАа,аСса,асАаСапАласа
ССАСАСАСТАСАаССтТаААаАТСААСТОоССтТаСсАспСАаса,аАасвАСа таасссаатАСТАСТаССАСаСАСТАСТАСАВСАСССССТАСАССТТ севастасваСАССААдаСтТапйАААТСАААСсСаТасСсавасавАаастоса аАдсассаСбапААда,атасаа,аассаСааААл,аттатасававаАс сесвасеаСс,7спАса,асАдатасавававАааАтС,вааавАтТоСаАа стасдастаставААТСТООСОССОСАСТОСТОСАИССсСТОаСОас
АТСТСтТаАаАСТОАЛАОСТаТаСТСОЯССАаСайасСТТСАССТТСАаСАС
СстТАСаССАТаААСТОСОЯТОаСОССА,СаСсСсССтТааСАААаасставА
АТаСОаТатоССасАТСАВААаСААаТАСААСААСТАСассСсАССТАС тТАСЯССОАСАС,ССсатадАд,а,вассайТтСАССАТСАСССОСИСАСИА
САССААСААСАСССтТатАССТасСАваАТаААСсАаССТаСа,ааассСаА впАСАССОЯССОЯТатАСТАТТиИТаТОСОаССАСО,ОаСААСТТСООССАА
САаСтТАТОаТаТСТТаИаТттТаССстТАСТОССОСЯаССАсСавасАсостсат вАССОатТатСААДасСасСстТАаСАСАААДС,СсасСсСстАаСсататтосстотТ сваСсСсСсССАаСАаСААСАаСАСАА,ССаваСапААСАаССа7ассстас
Анти-СОЗ (СН2Б27. УН зі естарстовтеААааАСТАСТТСССССАОСОСОтОАСАСТОТСТТ 23(12) МІ7-46(13)) СЕ сОААСсАд,аСсааАдаСССтадаСсАласвасатТаСАСАССТТоССстасс 432.83 сайт катепсину вувї ЗТОСтТаСАСАССАсСсоесстатАстосстадасласетастСАСС
СНоБо7 Уунз 23-УНІ? СНІ атасстаяаСсАдасАаасСставаСАСССАСАССТАСАТСТаСААСИата 131
ЕОЇВІ 1605 УН СНІ. пит Ес| ЛАССАСААОСССАССААСАССАЛАС ТОСАСААСАДОСТОСАОССС "виступ" РС ІАГА ААсСАастатадтаавСсавАаа,аавАасаатСс,васваСавАааАТоСаА
ЕТА16550 у" ап;тасСААТТаТТОААТоТОИСИСОТООСТВИ,ТСТаСТААААСсСсавасСос р тесесстасатоталеастасасвасттоСаватТТСАССТТСТОСААС ссКксатавАтТаластасатСсассАда,ааоосСааасСАААаасстоаА стасаттатТсСОатТАТСААаТСтТААААСТОАСОватавСАССАСаОасА тТАСОЯСООСТОСАСТТАААваТИатсаТТТтТАССАТТ ТОССасаАСаАТ
АВСАААДААСАСТОТатТтТАТСТОаСАСаАТОААСТОТСТОААААСТОАда
АСАССОаСАаТСТАСТАСТаТАСТАССССТССЯТОпОААТаатсттОаатТА
СаАТТАТТОСОССССАСОСаСАСОСТЯИаТТАСсОвататстТАаСаТстАСа
ТАССАДОСОЯССССАОССЯТаттоСооСстТассСАСССАССАССААСаАС
САСАТСТОССОСВААСАС,ССсСасттавастатстааТаАААСАСТА сттеоссСа,ад,асосСсатАссататттаапААСстотТасассстаАс
СсАдаСс,часатТасСАСАССТТТСоСАа,асСсатастасАсА;а,аСАдасцвасст атАстосстатостсСа,атаатсАсСсЯстассстотаастосстацва
ААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТОТСААТСАСААО,ССТТССААСАССА
ААСТОСОАТААВАААда,атоадасссААаАастасоАСААААСТСАСАС
АТаССсСАССОЯТаСССАаСАССТаАдАЛаСТасСАа,асасааАсСа,атсА9ат
СОС ССССССААААСССААдаСАСАСССТСАТОАТСТОССОС
АССССтТаАСатТСАСАТОСОТОСТОВИИаОтТасСАСатаАдаССАСОААСАС сСстТАСатТСААатТсААСсСТОатАасатавасса7асСсатасАватасСАТ
ААТаССААСАСАААЛССТСОЯСОвалсАапАаСАаТАСААСАаСАСаТтАС сататаатсда,аСсатостсАсСсатостасСсАССАааАСТаасСтТОаААТ паСААдаСсАСТАСААаТасСААааТСТоСААСАААаСССтОвасасс
СССАТСОАСААААССАТСТОСАААаССАААдСааСАаССССвАСВАА
ССАСАСОИатТатАСАСССТаСССССАТОССОСаСАТОАДаСТаАССААС
ААССАСОЯТСсАСССТаТаСТОаИССтТайТтСАААааСТТСТАТСССАСС вАСАТСЬСССОЯТОСАСТООаСАпАССААтТа,чаСАаССОапАСААСАА
СТАСААСАССАССЯССТОССОЯТАСТасАСТОСОаАСааСстоСтТтоТтТ
ССТСТАСАВСААаСТСАССатапАСААсАа,САсатааСАасСАссоса
СААСОИТСТТСтТСАТОСТОСатОаАтТаСАТОАДИааСТоТаСАСААССАС
ТАСАСОСАЧААСАа,СсСТоТоССсТатстСапатАААТОА
ЕМОГУЕЗООСІ УОРОСБІ ВІ ЗСААЗСЕТЕМОУ ТМОМУВОА
КОГЕМУАРУМРМУСОВІУМАВЕКСВЕТІ ЗУОВЗКМТІ МОМ
МЗІВАЕОТАУУУСАВМІ СРЕЕУРОУМ СОСТІ УТУЗАТКО
РЗМЕРІ АРЗЗКУТЗООТААЇ ОСІ МЕОУЕРЕРУТУЗМУМОСАІ. с. | Т8ОУНТЕРАМІ 05501 УВІ 55УУТУРУЗЗВІ ОТОТМІСМУМНК фФінністю срарівні вано РОМТКУОЕКУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕААСОРБУБІЕРРК 132 западина" РО ГАГА РКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУКЕММУУОСМЕМНМА
КТКРАЕЕОУМОТУВМУУВМІ ТМ НОСІ МОКЕУКСКУЗМКА!.
САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОУСТІ РРЗВОЕЇ ТКМОУВІ ЗСАУК
СЕУРЗОТАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О50О5ЕРІ УЗКІ Т
МОКЗАМООСМУРЗСВУМНЕАІ НМНУТОКЗВІ ЗІ ЗРОК
РІОМТО5РЗБІ ЗАЗУООАУТІТСКАЗОРУЗТАМАМІ УООКРО
КАРКИ У5ЗАЗЕВУТОУРЗВЕЗСЗАУСТОЕТІ ТІЗ8І ОРЕОРА
РЕТЕТ686О загальна / СІКЕКІ ТУУСООНУТТРРТЕСОСТКУВІКВТУААРЗУРІЕРРЗОВКІ К 133
Негсеріаго ЗОТАЗУУСИ ММЕУРВЕАКУСМ/КУЮМАІ О5ОМЗОЕВУ ТЕО
О5КОБТУВІ 5571 ТІ ЗКАОУЕКНКУУАСЕУТНОСІ 55РУТКО
ЕМВСЕС
ОАМУТОЕРВІ ТУЗРОСТУТІ ТССЗЗТСАМТТЗМУАММУМОЕК
РООАЕВСПООТМКААРОТРАВЕЗС8ЗИ СОКААЇ ТІ ЗСАОР
ЕОБАЕУУСАЇ МУ ЗМУ СТКІ ТМ З5АЗТКОРОМЕРІ А
РЗЗКУТЗССТААІ ССІ УКОУЕРЕРУТУЗМУМУСАЇ ТОНЕ
РАМІО5961 УВІ 55УУТУРЗЗВІ СТОТУІСМУМНКРОМТКУЮ
ККУЕРКЗСООСССЗОООС5ЕМОЇ МЕЗСССІ МОРОСВІ ВІ.
ЗСААЗОЕМІКОТУІНМУВОАРОКСІ ЕМ/МАВІУРТМСУТАХА . /О8УКОВЕТІЗАОТУКМТАМІ ОММЗІ ВАЕОТАМУУСЗ ВМ СО
НС заряджені х варіанти КО СЕУАМОУМСОСТІ УТУЗЗАВТКОРОУЕРІ АРЗЗКУТЗОСТ 134 виступ РО АТА АЛІ ОСІ МЕОУЕРЕРУТУЗМУМВСА! ТЗСУНТЕРАМІ 05501 У
ЗІ З5УУТУРЗЗЗІ СТОТМІСМУМНКРОМТКУОЕКМЕРКУСОК
ТНТСРРСРАРЕАДАСОРЗУВІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУУ
ОУЗНЕОРЕУКЕММ/УУОСМЕУНМАКТКРАЕЕОУМОТУВУУВ
МІ-ТМІ НОМ МОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВЕР
ОМУТІ РРСВОБІ-ТКМОУВІМСІ УКСЕУРЗОІАМЕМЕЗМСОР
ЕММУКТТРРМІ ОЗОС5ЕРІУЗКІ ТМОКЗАВУТОООМУєСВУ
МНЕАІ НМНУТОКЗІ ЗІ ЗРОК
ОУОІКЕЗСРОЇ УАРБЗОБІ ЗІТСТУЗСЕВІ ТЗ СМЗММВОРР
СКСІ ЕМ СІМ/СОС85ТМУНЗАПІЗВІ ВІЗКОМУКЗОМРІ КІМ
ГОТООТАТУУСАКСІТТУМУООУУАМОУМ СОСТ5УТУЗВОС
СО50ОС0500005060050ІОМТО5РАВІ ЗАЗУСЕТУТІТ
СВАБЕМІОЗМІ АМ/УООКОСКЗРОЦ УУААТЕІ АООУРЗВЕВ
С5О5СТОУВІ КІВІ ОБЕОМАВУУСОНУУЗТРУТЕОСОТКІ.
ЕКОСоОЗССоо5собо8соосоос5соос8обос8О
АМУТОЕРЗІ ТУЗРОСТУТІ ТСО55ТСАУТТОМУАМММОЕКР
СОАЕВСПСОСТМКВАРОТРАВЕЗО5И СОКАЛІ ТІ ЗСАОРЕ
ОЕАЕУУСАЛУУ ЗМІ МУРОССТКІ ТМ З5АЗТКОРОМЕРІ АР
Мн 32302) пив все ЗЗКОТЗССТААІ СС УКОУЕРЕРУТУЗМУМОСАЇ ТЗСУНТЕР 43263 Черозщеплюваний лінеед АУ 09501 У5І-58УУ ТУРЗ88І ОТОТУІСМУМНКРОМТКУЮК айегерій УНОСНІ ЕЕ снобоу| КУЕРКЗСОССОСООСОСВЕМОЇ МЕВСОСІМОРСОВІ НІ 8 135
МС ЯМ СНІ пит Бо "виступ СААЗОРМІКОТУІНМУВОАРОКСІ ЕМ/УААУРТМСУТАУАО
ГАГА ЗУКОВЕТІЗАЮТОКМТАХІОММЗІ ВАЕОТАУУУСЗВМССЕС
ЕУАМОУМ/ ОСТІ УТУЗ5АВТКОРОУЕРІ АРЗЗКУТЗОСТАА
І ОСІ УЕОУЕРЕРУТУЗМ/МЗСАЇ ТЗСУНТЕРАМІ О55С1 У8І. 55УМУТУРЗЗВІ СТОТХІСМУМНКРОМТКУТЕКУЕРКОСОКТН
ТОРРСРАРЕААССРОУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУУЮМ
ЗНЕОРЕМКЕММ/УУОСУЕУНМАКТКРАЕЕОУМОТУВУУВМІ.
ТМІ НРУ. МОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРО
МУТІРРСВОБІ-ТКМОУВІ М/С УКОЕУРЗОТАМЕМЕВМСОРЕ
ММУКТТРРМОЗОСЗЕРІ УВКІ ТМОКЗВУООСМУЕЗСВУМ
НЕАІЇНМНУТОКЗІ ЗІ ЗРОК
ОМОІКЕБОРСІ УАРЗОБІ ВІТСТУЗОЕВІ-Т5УСУВУММВОРР
СКСІ ЕМ. СІМ/С0О65ТМУНВАЗАІ ІЗКОМЗКОМЕІКІ М8
ГОТООТАТУУСАКСІТТУУОСУХУАМОУМ СОСТВУТУЗВСО
Со5СОС0500с0500С050І0МТО5РАВІ ЗАБУСЕТУТІТ
СВАБЕМІОБУ! АМ/УХООКОСКОРОМ УУААТРІ АООУРОВЕ5
С5О5СТОУВІ КІМ ОЗЕОМАВУУСОНУУЗТРУТЕСССТКІ.
ЕІКСОСОЗУНМРІ СР СРАОАВУУМОСОСО5ОООС5ОАМ
МТОЕРЗВІ ТУЗРОСТМТІ ТССЗ8ТОАУТТОМУАМУМОЕКРО
ОАДЕВСПСОСТМКВАРСТРАВЕЗОЗИ СОКАЛІ ТІ ЗСАОРЕО
ЕАЕУУСАЇ М/УЗМІМУЕСССТКІ ТМІ З5АЗТКОРОМЕРІ АРБ
Мн 323012) пив все ЗК5ТООСТААІ ОСІ УКОУЕРЕРУТУЗМ/ МСА! ТЗСУНТЕРА 43263 сайт матритази. ММРО У-О950ІСУ8І85УУТУРВОВІ ОТО ТМІСМУМНКРОМТКУОКК
МК» аНесеріл УНОСНІ ЕЕ УЕРКОСОСООС8ОСОС5ЕМОЇМЕВСОСІМОРСОВІ НІ 80 136
Снобот я д043 СНІ от. 4 ААЗОЕМІКОТУІНМУВОАРОКСІ ЕМ/МАВІУРТМСУТАУАОВ "виступ" РО ГАГА УКОВЕТІЗАОТЗКМТАХОММЗІ.ВАЕОТАУУУСЗАМОСЕСЕ
УАМОУМ/СОСТІ УТУЗ5АВТКОРБУЕРІ АРЗЗКУТЗОСТАА!.
ССІМЕОУЕРЕРУТУЗМ/М5САЇ ТСУНТЕРАМІ 05501 У518
ЗУУТУРЗВВІ СТОТМІСМУМНКРОМТКУОЕКМЕРКВСОКТНТ
СРРСРАРЕДАССРЗУКІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОМ5
НЕОРЕУКЕММ/УУОСМУЕУНМАКТКРАЕЕОУМТУВУУВМІ Т
МІНОР МОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОМ
УТІРРСВОЕЇІ ТКМОУВІМ/СІ УКОЕУРЗОТАУМЕМЕВМСОРЕМ
МУКТТРРМІ.О5ОСЗЕРІ УЗКІ ТМОКОВУГООСМУєЗСВУМН
ЕАІНМНУТОКЗВІ ВІ РОК
ОМОГУО5САЕУККРОАБУКУЗСКАЗСУТЕТОУУМНМУВОА
РСОСІЕМ/МСІІМРООСЗТУАОКРОСВУТМТНОТОТОТУХ
МЕЇІ-55І-85ЕОТАУУУСАВЗРЕТОЕНІОУМ/ СО СТІ УТА
ТКОРБУЕРІ АРЗЗКОТЗССТААЇ ССІМЕОУЕРЕРУТУЗМУМО
САІ ТЗСУНТЕРАМІ 05561 У5І. 55УУ ТУРІВ СТОТМІСММ
БоіВ! З6Р2 УН СНІ ЕЕ Бо МНКРОМТКУОЕКУЕРКОСОКТНТСРРСРАРЕААССРЯУРІВ | 337 "западина" РО ГАГА рЕТА14797 | РРКРКОТІ.МІЗВТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУКЕММ/УУОСМЕМ
НМАКТКРАЕЕОУМ5ТУВУУВМІ ТМІ НОСІ. МОКЕУКСКУВ
МКА! САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОУСТІ РРЗВОЕЇ-ТКМОМ ЗІ 5
САУКСЕРУРБОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІО5ОС8ЕРІМ
ЗКІ ТУОКЗВУООСМУРЗС5УМНЕАІ НМНУТОКВІ ВІ. РОК
ЕМІГТОЗРСТІ ВІ ЗРОЕВАТІ ЗСААБО5УЗ55У І АМУООКР
СОАРВІ УСАЗЗВАТСІРОВЕ5С5О5СТОЕТІ ТІЗВІЕРЕОБ
АУУУСООУТМЕНУУТЕСОСТКУЕІКАТУААРЗУЕІЕРРЗОВК
ЕсіВІ З6Е2 МІ. Ск ВК, рРЕТА14798 | /КЗСТАБУУСИ ММЕУРВЕАКУОМУКУЮМАГО5ОМБОБВМТЕ 0138
ОО5КОБТУВІ 5571 ТІ ЗКАОУЕКНКУУАСЕУТНОСІ 55РУТК
ЗЕМАСЕС
ОМОІКЕБСРСІУАРЗОБІ ВІТСТУЗОЕВІТ5УСУВУУМВОРР
СКСІЕМІ СІМ/СОб5ТМУНВЗАНВНІ ЗІЗКОМУКЗОМРІ КІ МО
ГОТООТАТУУСАКСІТТУМООУУАМОУМ СОСТ5УТУЗВОС
Со5СОС0500с0500С050І0МТО5РАВІ ЗАБУСЕТУТІТ
СВАБЕМІОБУ! АМ/УХООКОСКОРОП УУААТРІ АООУРОВЕ5
С568СТОУ5ІКІМВІ ОЗЕОМАВУУСОНУУЗ ТРУТЕСССТКІ.
ЕІКОСООС8УНМРІ ОРІ. СРАОАВУУМСОСОСЗОСОСЗОАУ
МУТОЕРВІ ТУЗРОСТУТІ ТСОЗ8ТОАУТТЗМУАММУМОЕКРС
ОАЕАСПОСТМКВАРСТРАВЕЗСЗИ ОСКАА! ТІ ЗСАОРЕО
ЕАЕУУСАІМУЗМІМУРОССТКІ ТМІ З5АЗТКОРОМЕРІ АР5 мо Я6013)) (снеки УМ З ЯЗ) ЗКТВаСТААІ ОСІ УКОУЕРЕРУТУВМ МСА Т5СУНТЕРА матристази ММРУ МКОб?. авоіві| У-О8901 81 85УУТУР ВІ ОТО ТМІСМУМНКРОМТКУЮКК
СНІ КЕ сном 7. 46 УЕРКЗСОССССЗСОСО50М01МОЗСАЕУККРОАБУКУ ВС 139
ТЗ СНІ пит Бо виступ" РО ГАГА КАЗСУТЕТОУУМНУУНОАРООСІ ЕМ/МСПМРВССВТОУАО оетАт вої КРОСВУТМТНОТОТОТУУМЕЇ 581. АЗЕОТАУУУСАНОЕЕТО
ЕН ОУМ/СОСТІ УТУ55АВТКОРБМУЕРІ АРЗЗКОТЗОСТАА.
ССІ УЕОУЕРЕРУТУЗММСАЇ ТЗСУНТЕРАМІО5501 515
ЗМУТУРУВВІ СТОТУІСМУМНКРОМТКУОЕКМЕРКУСОКТНТ
СРРСРАРЕДАССРБУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУУОМВ
НЕОРЕМКЕММ/УУОСУЕУНМАКТКРАЕЕОУМОТУВУУ ЗМІ т
МІ НОСІ МОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОМ
УТІРРСВОЕЇ-ТКМОУВІ М/С УКОЕУРЗОТАМЕМЕЗМСОРЕМ
МУКТТРРМІ О5ОС5ЕРІ УЗКІ ТМОКЗВУООСМУєеСВУМН
ЕАІНМНУТОКЗВІ ВІ РОК
ОМУОЇІКЕБСРСІГУАРЗОБІ БІТСТУЗОЕВІТ5УСУВММВОРР
СКСІЕМІ СІМ/СОб5ТМУНВЗАНВНІ ВІЗКОМУКЗОМРІКІ Мо
ГОТООТАТУУСАКСІТТУМООУУАМОУМ СОСТ5УТУВВОС
СО5СОС0500С0500050І0МТО5РАВІ ЗАБУСЕТУТІТ
СВАБЕМІОБУ! АМ/УООКОСКОРОЦ УУААТРІ АООУРОВЕ5
С568СТОУ5ІКІМВІ ОЗЕОМАВУУСОНУУВТРУТЕСОССТКІ.
ЕКОСоСЗоосо5осоо5осососо5сосо5сосо5О
АМУТОЕРВІ ТУЗРОСТМТІ ТСОЗ8ТСАУТТОМУАМММОЕКР
СОАЕВСПИСОТМКААРОТРАВЕЗО8И СОКАЛІ ТІ ЗСАОРЕ
ОЕАЕУУСАПЛМУУЗМІМУРСОСТКІ ТМІ ЗЗАЗТКОРБМЕРІ АР
Мо 4503)) Ниву о) З5К5ТВОСТААІ ССІУКОУЕРЕРУТУЗММОСАГТ5СУНТЕР нерозшеплюваний лінкер агоїв| АУ-О85С1У8І 88УУТУРУВВІ ОТО ТМІСМУМНКРОМТКУЮК ан пово М Д5| КУЕРКОСОСОСС50О6О50М01 МОЗСАЕУККРСАБУКУВ 140
ТЗ СНІ пит Бо виступ" РО ГАГА СКАЗСУТЕТОУУМНМУНОАРСОСІ ЕМ/МОПМРООСВТВУА оЕТА1762 ОКРОСВУТМТНОТОТОТМУУМЕЇ 551. АЗЕОТАУУУСАВЗЕЕТ
СЕН ОУМ/СОСТІ УТУ58АЗТКОРОУЕРІ АРЗЗКУТЗОСТАА
І ОСІ МЕОУЕРЕРУТУЗМ/М5САЇ ТЗСУНТЕРАМІ О5561УІ. 55УМТУРЗЗВІ СТОТМІСМУМНКРОМТКУОЕКУЕРКЗСОКТН
ТСРРСРАРЕААСОРБУВІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУУОУ
ЗНЕОРЕУКЕММ/УУОСУЕУНМАКТКРАЕЕОУМОТУВУУ МІ.
ТМІНОСУМІ. МОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРО
УХТІРРСВОЕЇ ТКМОУВІ МС УКСЕУРЗОІАУЕМЕВМООРЕ
ММУКТТРРМІО50С5ЕРІ УЗКІ ТМОКЗВУООСМУРеСВУМ
НЕАІНМНУТОКЗВІ І РОК
ОАММТОЕРБІ ТМЗРОСТМУТІ ТСаЗ5ТОАМТТЗМУАМММОЕК
РООАЕВСІ ІСОТМКВАРСТРАВЕЗОВІ І СОКААЇ ТІ ЗаАОР
ЕОЕАЕХМУСАЇ МУЗМІ МУРИСИткіІ ТМІ ЗЗАЗТКОРОЗМЕРІ А
РОЗЗКЗТЗаСТААІ ОСІ УКОУЕРЕРУТУМЗМ МСА! ТЗОаМНТЕ
РАМІО55И УВІ 55 ТУРУЗУЗВІ ТОТМІСМУМНКРЗМТКМО
ККУЕРКВСОСОСОБОСОС5ОМОЇ МОБСАЕМККРОАБУКУ
ЗСКАБОУТЕТЗУУМНИМУВОАРООСІ ЕМ МСТМРІЗСОЗТВУ
- | АОКЕОСАМТМТНОТОТОТМУМЕЇ 551 АВЗЕОТАМУУСАВЗЕЕ
Поу ван о НС Формат ТОЕНІ ОУМ/СОСТІ УТУЗ5АЗТКОРУУЕРІ АРЗЗКУТ5ОСТА і "виступ" РО ГАГА ОЄТР17623 А ОСІ МЕОУЕРЕРУТУЗМУМЗОАІ ТЗОМНТЕРАМІ О5501І 5
У р І З6УУТУРУЗБЗВІ ТОТМІСМУМНКРОМТКМОЕКМЕРКЗСОКТ
НТСРРСРАРЕААСОРБУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМУТСУУМО
МЗНЕОРЕМКЕММУРОМЕМНМАКТКРАВЕЕОУМЗТУВУММ
ІЇ ТМЕНОРУУІ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРО
МУТІРРСВОБЇ ТКМОМВІЛМСІ МКОЕУРЗОІАМЕМЖМЕЗМООРЕ
ММУКТТРРМІ О50О5ЕРБІ УЗКІ ТМОКЗВЖООСМУЕЗС8УМ
НЕАІНМНУТОКЗВІ І РОК
Негсеріп/Отпіагю, СОВА НІ за
Негсеріїп/Отпйатю, СОВ Не за дуурмессемуМввЕкс
Кеботом
Негсеріп/Отпіагю, СОВА НЗ за
Регієїа, СОК НІ за Кеботом ТЗМУАММУ
Регієїа, СОК Н2 за Кеботом СТМКААРОТРАНЕЗОЗИ
Регієїа, СОВ. НЗ за Кеботом ТКС
СІ С СО 11 за Кеботом КАБОРУЗТАХУА
СІ С СОН 12 за Кеботом ЗАЗЕНУТ
СС Сов ІЗ за Кеботом ООНУТТРРТ
З6Е2, СОВ НІ за Кеботом 5ЗУУМН
З6Е2, СОВ Н2 за Кеботом ІПМРВСОЗТЗУАОКЕОС
З6Е2, СОВ НЗ за Кеботом ЗЕЕТОЕНІГОУ
З6Е2, СОВ 1.1 за Кеботом ВАБОЗУЗ55МА
З6Е2, СОВ 12 за Кеботом САЗОЗВАТ
З6Е2, СОВ ІЗ за Кеботом ООМТМЕНУУТ
ОМОЇ МОЗБОАЕМККРОАЗУКУЗСКАЗОУТЕТЗУУМНУМУВОА анти-БоїБ1 362, варіабельна| РООСІ ЕМ/УМОСІМРОСОЗТЗУАОКЕОСВУТМТНОТеТеТУУ 157 ділянка МН МЕ! 558І ВЗЕОТАМУУСАВЗЕЕТОЕНІ ОМ СОСТІ МТУ
ЕМ ТО5РОТІ ЗІ ЗРОЕВАТІ ЗСВАБЗО5ЗМ555УІ АМУООКР анти-БоїБ! З6Е2, варіабельнаї ФСОАРВ ПУСА5ЗЗААТОІРОВЕЗававатовтіІ ТІВ ЕРЕОЕ 158 ділянка МІ. АМУУСООУТМЕНУУТЕСОСТКМЕК
ЕМОЇ МЕВОСОЇ МОРОСІЗІ ВІ ХСААЗОЕТЕМОУТМОМУУВОА
Негсеріагд, варіабельна ділянка РОКаЕММАОММРМЗОаБІММАВЕКаВЕТІ 5МОВКМТІ МІ. 159
УНІ ОММ5І ВАЕОТАУУУСАВМІ СРЕЕМЕВС УМ СОСТІ МТУ
ЕМОЇ МЕВСОГ МОРОСВІ ВІ БСААЗОЕМІКОТМІНУУУВОАР
Негсеріагд, варіабельна ділянка! СКС ЕМ/МАВІУРТМаУТАХАОЗУКОВЕТІЗАОТОКМТАМ О 160
Унаг ММ5І ВАЕОТАМУУСЗ ВМ ОСЕСЕМАМОУМ СОСТІ МТУ55
РІОМТО5РББІ БАЗМОЮВМТІТСКАЗОЮМЗТАМАМ МОКРА
Негсеріагд, загальна варіабельна| КАРКІ ГПІУ5ЗАБЕНУТОМУРБЗАЕЗОЗНАБЗОТОВЕТІ ТІЗБІ ОРЕОБА 181 ділянка МІ. ТУУСООНУТТРРТЕСОСТКМЕЇїК вААСТТсАОаСТааТТаААдАла,ассатаатаастотааттАаа,осстаст сатлесстасатоталастатТасСсАаСААдаСОаСТТТТАССТТТААСа
АТТАТАССАТОСАТТаССЯ ТТ ТОСаТСсАааСАССОпаТАААаатстТацА
АТасаттасСАСАТатТТААТССОААТАОСОО,СТайТАСаСАТТОТТААС
СатсОатТТТТАААса7атсатАссСсталдасаТТаАТСИТАССААДАА
АТАСССТаТАТСТОСАААТОААТАСа ТС ТОаСОатТаСАСАСОАТАССОС
АатОатТАТТАТТаТаСАСаТтТААССТОСатоСаТат СТТСТАСТТТОАТТ
АТТаССсСатТСсАсСаасСАСССТЯаттТАССТтТАаСАаСаТсСстАаСАССА дсасоасосстосататооосстааСССССАССАССААаАССАССА ссвсассасСАсСАдассасттоавастасставатоаАдааАСТАСТТО ссСосдасссатадсСсататстааААСАССЯСАаСССстТадсстос севсатасСАСАССТОСССООССсССОСТаСстасСсАсАатстТааСсСтТатАТ да,ассталаСсАда,асатаатсАсСсатасстСстТАаСА,осСстасасСАСс рЕТА16859 Отпйаг САВАССТАСАТСТаСААСОИТаААССАСААХаСССАаССААСАССААС варіант із дозрілою стапАСаАСАдАдсатасАасСсССААаАдасТасвпАСААААСТСАСАСА афінністю гар су-єб 1абССАССсОатеаСССАаСАССТОаААОСТОСАсосааАссотсАОато 162 "западина" РСТАГА ТТОСТСТТоСССССААААСССААСИаАСАСССТСАТОАТСТОССОСА сосСстТОАаатСсАСАТаСОСТОатТастааАСаТаАаССАСОСААСАСС стадааТсААдаТтТСААСсТастАаса,атасассасатавдастасСАТА
АТаССААСАСАААЛССТСОСОВЗаАД,аАСаСАаТАСААСА,САСОТАСС статаатТсАдаСсатсСтТсАСсСатоСстТасСсАССАСааАСТаасСтТОаААТО
ССААСааАаТАСААаТаСААСаТатстоСААСААА,аСССТОСВИаСасСосс
ССАТСОАСААААССАТСТОСАААаССАААЛдсССсасАасссСсаАсААС
САСАССЯТИаТаСАСССТаСССССАТСОССОСИаСАТаАДаСтТаАССААСА
АССАССЯТСсАОСССТОТСИаТтасСаСАаТСАААваТаст т СстТАТСССАаСаИ
АСсСАТСЯВССОЯТОСАСТОСОаАСаАаСААТасвасАасСацвАсСААСААСТ
АСААСАССАСОЯССТОССОСТОСТапАСТОССОСАСОаСТоСтТтстТтос тса,атадаСААаСсТсАССатацпАСААаАдасСсАавсатааСАасСАсИа
ААСОТСТТСТСАТОСТОСатОАТаСАТОАДОаСТСтТасАСААССАСТ
АСАСОСАСААдСАХаСсСТТоССстТатотоСаааТАААТОА
САСАТССАСАТОАСССАСАасаССССАсССсАс,сСстТаттассАасСата аваСаАСсАпАатТаАССАТСАСАТаСААСЯССАсаССАсСаАдСсататос
АСсАсСссатаасСстаатТАТСАаСАЧААдаССтТааСААСассСсСААдСа стасСстаАТСТАСА,аСОЯСсСАасСсттоСаатТАСАСсСсСОосоатасссСАос
АВАТТСАсССОасаСАаСАСАТССОСаСАССВАСТТСАСССТаАССАТС дастосСстасСсаласСсСсОпАааАСТТСассСАССТАСТАСТаССАССАС
САСТАСАССАССССССССАСАТТТаИССАСССАССААДа,аТапАА рРЕТА1Т6860 Негсеріаго АТСАДОСИатТАСОСВТаССТасСАССАТСТаТСТтСАТСТТОССаТссАТ 163 загальна СІ КАК СТОАТСОСААДаТТОАААТСТаСААСТОССТСОТОТТяаТО ТИИССТОСТ
СААТААСТТСТАТСССАСАаАдсааССАААаТАСАа,атТапААда,атТасАТ
ААСОаСССТОоСААТСОСатААСТОССАсапАпАататСАСАСАаСАС
САСАССААдасСАСАаСАССТАСАСССтТСАаСАаСАСССТаАСаТста
АВСААДАДОаСАСАСТАСОАСАААСАСАААИ,ТСТАСаССстасААаТСА
СССАТСАСЬХаССТОАДастасссаТтСАСАААСАаСТТСААСАССОС вАСАХСТаттАа
СААДАССТОСАаСтТаАААаАсТоСвассєтавАстаатаассссСтТАас
САСАаСаССсТаАдасСАТСАССТОатТАСССЯТатТоСсОоасттсАассталсс дастТАСса,асоататсатаватасасСсАасстСАааСААа,аТатста вААТОССТОСОаСАТСАТСТОСОЇСаВСаАСОаСАССАССААТТАССАС да,аСасссСстТаАТСАВСАСАСТаАаСАТСТОСААД,САСААСАаСАдса дасСсАсаататсСтТаААасСтТаААСАассСтТасСсАаАССаАСаАСАСС
СССАССТАСТАСТАСОаССААСасйСАТСАССАССЯТОСТаСАСОАС
ТАСТАСОСТАТаСАСТАСТОСОСССАСсИ,аСАССАсССатаАСАатТта тСтТАсСса,ааАдсасааАсаАттааСссасавАссААа,атааСацАсас свадтотас,савАд,ааСапААаСаАТтТАТССАСАТОАСССАСАаСС стассла,асстатотассттатавасСсАСАСАСТОАССАТСАСАТ сесс,аСсСАаСаАаААСАТСВАСАаСтТАССТВаССтТааТтАТСАСС
АпАДаСАСа,ааСААдсАасссєсАаастаєтаататАсасСсассАССТ тстаавсСсаАСаАтТатТассСАасСАСАТТСАССЯаСАаСавАласа
ССАСАСАСТАСАаССтТаААаАТСААСТОоССтТаСсАспСАаса,аАасвАСа таасссаатАСТАСТаССАСаСАСТАСТАСАВСАСССССТАСАССТТ севастасваСАССААдаСтТапйАААТСАААСсСаТасСсавасавАаастоса авАдсеассаСбапАлдатава,ааСс,асоа,ааААлстааСапвАа,,;авАса ссвасавАдаа,атасавсаСс,авАсаСАаатасасааааАааАТСССАС ссКсатоатаАСССАааЙААСССАасстадсаататтстааСсоас
АсСатаАСССтТОаАСАТИаТааСАаТТСстТАСАСОЯСасСсаТатаАССАСС
АВСААСТАСаССААСТОСОатаСАааААААлаСсСсавасСАаасстто
АвАаСАСТаАТоОвВасСцваСАССААСААаАаАаСоССстааСАССССТ сССАСАТТСАССОаАТСТСОТОСТОИаСАСаАААлааССассстТаАСА статставСаСССАаССАСААСАТаАХ,вассаАатАСТАСТОСОСС статастТАСАаСААССТаТОСОСТатсавсасавАсаасСАССААОаСтТа
АСсА,атастадаСАаСасСтСсСАССААСасассСАа,атататтососс ставСССССАасСТоСААаТСтТАСАТОССОСОСТаССАСАССТОаСССтТа ваАТатотТоатТаААООпАСТАСТТ ТОСтТОАаССстТатОАСАССТатТстТтТ рЕТК17606 анти-СОЗ ССААСсАаа,аС,ааАхассттаАССАаСааАаТаСАСАСАТТОССТасСАа (СбН2габ527 МН 3-23(12) МІ74 ТОСТаСАСАасССсАс,СсвасстатАТАасСсталаСсАаа,аса ТтеСатТаАССоа 46(13)) СЕМ 44.32.63 ТАССТТОСТоТАаССТОООААСАСАСАСАТАТАТСТаТтТААТОаТОаААТ нерозщеплюваний лінкер САТАДАСССАСТААТАССАААаТтОапАТтТААСАААаТтапААССТААСА 164 аНегсерйіп МН СНІ ЕЕ аСстТасСаАтТасСа,асАас,саАдсастСа,аавАсасапвАсасатоСаАсаат
СНн2габ527-М17 46-13 СНІ пит ССАаСТООСТоСсАатотавАада,асАаа,асАстаатасдасСсСсАа,аСаавАТ
Ес "виступ" РОГАГА СтТтТаАСАСТОАЛОаСсТасСаССассСАаСасАТТСААСАТСААО,САСА
ССстТАСАТССАСТОССЬТОАлсааСсАсСассСсСсТасАААа,асвАстасаАат сватаасССАСААТСТАССССАССААСОСаСтТАСАСААСАТАСаИТсся
АСсСАС;СатОАдапаСАСАТТСАССАТСАССассаАСАССАССААСА
АСАССаССТАССТОаСАПАТаААСсАаССТаАаАаССадасАСАСАС сс,атТатАСТАСТаСТСтТАСАТОСОСАаСИаС,аА,СааСТТСтТАСОССА тапвАСТАСТОССаАСАсСааСАСАСТОСТаАсСсататСАасСастА аСАССААДССЬЯССССТОССОЯТОттТоСССсСстТааСССССАасСАаСААСА аСАССАССОСОЯСваСАСАСОСТСТСОСТСТОСООСТаССТОатоа,АаСсАС тТАСТТОСССОСАССсССОатТаАССОЯТатоСстТасААСАОССОЯЯСАССССТа
АсСстТоса,асоатасСсАСАССТОСТСТСОЯССОСТастасааАаттстоас
СстТатАТАаССТаАаСАаСЯтТаатсАсСсЯятТасстстАасСАасста ваСАСССАСАССТАСАТСТаСААСатаААССАСААаСССАССААС
АССААДССЯЯТаСАСаАдаААсатапАасСССААаАастасаАСААААСТ
САСАСАТИАСССАССОЯТаСССАаСАССТОААаСсСТаСсАа,асацвавАСс аТСАатст сс оСССССААААСССААаИаАСАСССТСАТИаАТС тоссавАСсоСсСстТаАСаТСАСАТаСОЯТОаСсСТОИа ТасАСсСатаАасСсСАС пААаАСССсТаАааТСААаТТСААСсТастаса,атаваса,васстааАса атТасСАТААТаССААСАСААдАсССсаса,аааАдасАаСАаТАСААСАаС
АсатАссататаатТсАдасатссСстТАССатосСстТасСАССАССАСТОаС
СТОААТаССААааАаТАСААаТаСААСаТСТоСААСАААасСсстТо ваСассССССАТСВАСААААССАТСТОСАААаССАААд,СааСАасСосс
СОАСААССАСАСОИТаТАСАСССТаАСССССАТОаССООВСАТОАЗОСТОа
АССААСААССАСО ТСаСаССТата,;тасстааТтСАААвастТстТАТС
СсСАаСаАСАТСОЯССОЯТавчАсСТапасАпАаСААтТасасАаосСа7ацвАс
ААСААСТАСААСАССАСЯаСсСстТоСсСсатаставАСТОСОАСОвасСтТоС
ТСТоСТСТАСАВСААдаСтТСАССатапАСААсСАХаСАсатТаасСАс
СА,асапААСатстСсТсАТастоСатаАтТасСАТОАДИааСТСТасСАС
ААССАСТАСАСИаСАСААСАСССТоТоССсТатстоСапаТАААТОА
СААДАССТОСАаСтТаАААаАсТоСвассєтавАстаатаассссСтТАас
САСАаСаСсСсТаАдасСАТСАССТОатТАССКСЯТОатТоСсОвасттсАассталсс дастТАСса,асоататсатаватасасСсАасстСАааСААа,аТатста вААТОССТОСОаСАТСАТСТОСОЇСаВСаАСОаСАССАССААТТАССАС да,аСасссСстТаАТСАВСАСАСТаАаСАТСТОСААД,САСААСАаСАдса дасСсАсаататсСтТаААасСтТаААСАассСтТасСсАаАССаАСаАСАСС
СССАССТАСТАСТАСОаССААСасйСАТСАССАССЯТОСТаСАСОАС
ТАСТАСаСТАТаСАСТАСТОСОСССАСИИаСАССАа,СО,аТаАСА,Та тСтТАсСса,ааАдсасааАсаАттааСссасавАссААа,атааСацАсас свадтотас,савАд,ааСапААаСаАТтТАТССАСАТОАСССАСАаСС стассла,асстатотассттатавасСсАСАСАСТОАССАТСАСАТ сесс,аСсСАаСаАаААСАТСВАСАаСтТАССТВаССтТааТтАТСАСС
АвАДаСАСааСААдсАасссєсАаастаєтаататАсассСсассСАССТ тставсСсаАСаАтТатТассСАаСАаАтТТсАа,аСса,асАаСапАласа
ССАСАСАСТАСАаССтТаААаАТСААСТОоССтТаСсАспСАаса,аАасвАСа таасссаатАСТАСТаССАСаСАСТАСТАСАВСАСССССТАСАССТТ севастасваСАССААаСтТааАААТСАААс,аА,сассаса,аААатоа тТасСАСАТОССССТОСОСТОСТОСаССССАСАСАСИаССАаАсТСа тТаААСЯСОасавасоа,авАаа,сасАа,атасаасасаАааАТоССАсцас сатсатаАСССАСпААСССАаССстТаАСсАататтоставсСассСАС сатаАСССтТаАСАТИТаССАатТотТАСАСОЯСасССатаАССАССАС
СААСТАСаССААСТОСО.СТаСАссААААлассСаасСАаассттСАс дапАСТаАТССОСОааСАССААСААСА,САХаССССтааСАССССстас
САВАТТСАССОВАТСТОТОаСТаОасСАсааАААсассассстаАСАСТ атстасассСсАасССАСААЧАТадааССаАаТАСТАСТОСОСССТ атастТАСАаСААССТОТОСОТаттосаСбацвАсасСАССААаСтТаАСс д,атастадасСАаСасСТСсСАССААд,аавАСсСсСсАатататсссст ваССсСсССАасСтТоСААаТСТАСАТССОЯСТОССАСАОСТОСССТОасССИ
АТатТотТоатаАдАСаАСТАСТТІ ТОСТОАДОаСсСсТатаАСАататсттас рЕТК17607 анти-СОЗ АХСЛССОСпАаСССтТаАССсАаСацвАаТаСАСАСАТТОССТасСАСТО (СбН2габ527 МН 3-23(12) МІ 74 СТаСАпАасССАс,СсаасСстатТАТАаССТаАдсаСсА,Сса тсатаАсСсата 46(13)) 5зсЕм 44.32.63 сайт ССТСОСтТотТАаССтТаваААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТатаААТСА матриптази ММРОУ МКО62 ТААаСССАСТтТААТАССАААИ,ТОСАТААСАААИ,ТаСААССТААаАОС 165 аНегсеріп МН СНІ ЕЕ тТасСОАТтТОа,аС,ааАдспАассатСсавАаа,ваСс,авАа,ваатСаАааТОоСА
СНна2габ527-М17 46-13 СНІ пит ССТОСТоСаСАатотапАсаАда,ааАстаатасАаСсСАсасаавАТСТОТ
Ес "виступ" РОГАГА вАСАСТОАЛОССТОСОВССасСАасСОапАТТСААСАТСАА,САСАССТА
САТССАСТОСОСЯТаАсСаСА,СасСсССсТавпААА,васАставАатасаа тааССАСААТСТАССССАССААСИайсСтТАСАСААСАТАСИаССОСАСА вСатаАдапасСАаАТСАССАТСА,СОаССОаАСАССАССААСААСА
СсОаСсСтТАССТаСАСАТаААСАаССтТадаАасСаАааАСАСАаСССИЯ тТатАСТАСТаСТотТАСАТОСсСО)васА,сСассАа,аасСТСтТАСаССАТОС
АСТАСТаСОаСАСАСОССАСАСТОСТТОАаССОЯаТатТоСАсССастАасСА
ССААССОЯССССТОСОЯТаттососСстааСССССАаСАаСААаАасСА
СсСАааСса,асоааСАСсАаа,ассасттавастасставтаАааАСТАС тесессСбадасссатадсСса,ататСстТапААСАсСавАаССсСсталсс тоса,аасатТасСАСАССТТОСССОСсСОЯТаСстТасСалаАлатстТавсста тТАТАСССТОАаСАаСсатаатсАссатассттстАасАа,сстацас
АСССАПАССТАСАТСТаСААСатаААССАСААаСССАаСААСАССА
Асва,атавАСаАСпААдсатапАаСССААвпАасСтТасоАСААААСТСАСА
САТИаОСССАССОЯТаСССАаСАССТаААОаСТасСсааа,вававАССаТтсСА аТСТТоСТоТоСССССААААСССААДИаСАСАСССТСАТОАТСТОСС авАССССтТаАСатСАСАТОСОЯТОСТОВТасАСатаАасССАСОАА вАСССтТаАдаСТСААаТТСААСТОСТАСОа ТасалссвсасатавАаата
САТААТаССААСАСАААЛСОСТСОЯСОГГ АД СаА,аСАСТАСААСАаСАСО тАсесСататаатСсАс!СатосСстсАССОИаТСТасСсАССАССАСТОССТО
ААТаССААдСааАаТАСААаТасСААваТатсТССААСАААаСССТоваТс
ССССССАТСОАСААААССАТСТССАААСаССАААдСпСасСАассссСаА
СААССАСАСататАСАСССТаСССССАТОаССОвапАТаАаСтТалсс
ААСААССАСОТСоАСаССсСТатаатасстаа т САААСаТстТсТАТСССА аСОаАСАТСЯССОЯТОаВСА,СТа,саАпАаСААтТавасАассааАсААС
ААСТАСААВАССАСОЯСТСТОССОЯтТасСставАСТОСЯАСОасСтоСстТто
ТТОСТСТАСАИСААССТСАССИ,аТасАСААаАаасСАасатааСАасСАс вапААСаТСТСтТсАТасСстТоСатаАтТасСАТОАСасСтотТасСАСААСС
АСТАСАСЯаСАСЧААСАС,СССТОТоССТатстоСааатТАААТОА
САСОаТаСААТТОаТТСААТСТОСТаСтТОААСтТАААААААССасаса
СТТССатТАААаТОАдасСтТасСАААДаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТО
СТАТТАСАТИаСАСТОСОИа т тТСоИатСсАЛласссСс,авассАаавтотацйА
АТаВАТаВОаСАТСАТТААСССААХСТСЯаТааСсСТотТАССТОСТАСОС
ССАСАААТТоСАСОВатТсаСатСАСОАТОАСССАТОАСАСТАССАС
СТоТАССатТТттТАТАТОСАОаСТОАТоСА,ССТаСаТтТСсТаААСАТАСТ аСбАд,атТатАСТАСТатТасСсАСаСТСТтТтсТтТСсАСТОСТТТОСАТСТОС
АСТАТТаСОСТСААСССАСССТОСТААСОСаТТТотТТотТастТАасСАС
САДСЬЗЯСТСССТСТОСОЯТОа т ТоСсОоСсСстТааСССССАасСАаСААСАсаСАС
СсАдаСс,сасвасСАсАа,ассасттасьстасстаатСсаАааАСТАСТТ сосбадасссатадссататостТавААСсА,аСсавАяассстаАссто с,еа,асатаСАСАССТІОСССОССОСТасТасСАсСАСТсТОИаССТтатА таасстадасаа,асатаатАссатасстСстАаСсАаССстааасСАС
ССАСАССТАСАТСТаСААСИаТаААССАСААДаСССАСаСААСАССАА
ЕОоІВ1 З6БЕ2, МН СНІ ЕЕ го аатавйАСОАвААдаатааАасСССААвАасСтТасСаАСААААСТСАСАС "западина" Ро ГАГА АТаОСССАССЯТассССАасСАССТаААЛаСТаСАа,асасАССатСАСсТ| 166 рЕТА14797 СОС ССССССААААСССААдаСАСАСССТСАТОАТСТОССОСО
АССССтТаАСатТСАСАТОСОТОСТОВИИаОтТасСАСатаАдаССАСОААСАС сСстТАСатТСААатТсААСсСТОатАасатавасса7асСсатасАватасСАТ
ААТаССААСАСАААЛССТСОЯСОв асАапАаСАаТАСААСАаСАСаТтАС сататаатсда,аСсатостсАсСсатостасСсАССАааАСТаасСтТОаААТ паСААдаСсАСТАСААаТасСААааТСТоСААСАААаСССтОвасасс
СССАТСОАСААААССАТСТОСАААаССАААсСИааСАаССССаАцАА
ССАСАССЯТатТасСАСССтТассссСАТОССОспАТОАаСтТаАССААС
ААССАСОЯТСАСССТОТоИаВТасСсаСАаТтСАААаастІ СсСТАТОССАСС вАСАТСЬСССОЯТОаСАСТОаСАпаАССААтТасаСАаССОапАСААСАА
СТАСААСАССАССЯССТОССОЯТАСТасАСТОСОаАСааСстоСтТтоТтТ сстатаАдаСААДасСстТсАССИТапйАСААсАааСАсатааСАссСАСцо
СсААСатсТСсТсАТаСТОСатаАТаСАТОАСаСТоТаСАСААССА
СТАСАСаСАСААСаСАаССТоТоССтТатотоСа,астТАААТОА
САААТСОСТаттТААаСасАатСстТСАаасАссстатсттатстосСАа апаАААдадаССАСсСсСстТтттасСсАа,ааасССАатАпаАататТАасСА аСАасСтТАСТТАИССТОаТАССАССАСАААССТОаССАаастосСсСА васСстТосСтТСсАТСТАТаСАаСАТССАССАС,СасСсСАСТОССАТОССАС
АСсСАСсСОаттоАлатасСАдатавАТСаасвАСАаАСТТСАСТСОТСАССАТ
САаСАаАСсТпАаССТААвАТТттТаСсАатОаТтАТТАСТатТСАасАС
ТАТАССААСОААСАТТАТТАТАСЯТТСОССССАСапаАССАААИа Та
РоІВ1ї 362 МІ Ск АК) АААТСАААСатТАСО)атаасСстаСАССАТСТаТСТТСАТСТТОССасс 167 рЕТА1Т4798 АТСТОАТСОаСААатТАААТСТОаСААСТОССТСОТОТ Та ТаАТОаССТО
СТОААТААСТТСТАТСССАСПСАСАСаССАААаТАСАатТасААсаТатацся
АТААСИаСССтТоСААТСОСОТААСТОССАасАпАаТатСАСАаАСС
АСИАСАССААДаСАСАССАССТАСАСССТСАаСАаСАСССТалсас
ТаАаСАДАаСАСАСТАСОАСАААСАСАААаТСстТАСсассТтасопААСТ
САСССАТСАССХОЯССТаАДаСстТоассСатСАСАААСАОаСТТСААСАС с,вададататТтТАс
СААДАССТОСАаСтТаАААаАсТоСвассєтавАстаатаассссСтТАас
САСАаСаССсТаАдасСАТСАССТОатТАСССЯТатТоСсОоасттсАассталсс дастТАСса,асоататсатаватасасСсАасстСАааСААа,аТатста вААТОССТОСОаСАТСАТСТОСОЇСаВСаАСОаСАССАССААТТАССАС да,аСасссСстТаАТСАВСАСАСТаАаСАТСТОСААД,САСААСАаСАдса дасСсАсаататсСтТаААасСтТаААСАассСтТасСсАаАССаАСаАСАСС
СССАССТАСТАСТАСОаССААСасйСАТСАССАССЯТОСТаСАСОАС
ТАСТАСОСТАТаСАСТАСТОСОСССАСсИИаСАССАа,СО,аТаАСА,Та тСтТАсСса,ааАдсасааАсаАттааСссасавАссААа,атааСацАсас свадтотас,савАд,ааСапААаСаАТтТАТССАСАТОАСССАСАаСС стассла,асстатотассттатавасСсАСАСАСТОАССАТСАСАТ сесс,аСсСАаСаАаААСАТСВАСАаСтТАССТВаССтТааТтАТСАСС
АпАДаСАСа,ааСААдсАасссєсАаастаєтаататАсасСсассАССТ тставсСсаАСаАтТатТассСАаСАаАтТТсАа,аСса,асАаСапАласа
ССАСАСАСТАСАаССтТаААаАТСААСТОоССтТаСсАспСАаса,аАасвАСа таасссоатАСТАСТаССАСаСАСТАСТАСАВСАСССССТАСАССТТ севастасваСАССААаСтТааАААТСАААс,аА,сассаса,аААатоа тТасСАСАТОССССТОСОСТОСТОСаССССАСАСАСИаССАаАсТСа тТаААСЯСОасавасоа,авАас,саСАатасаасасаАааАТоССАсцас сатсатаАСССАСпААСССАаССстТаАСсАататтоставсСассСАС сатаАСССтТаАСАТИТаССАатТотТАСАСОЯСасССатаАССАССАС
СААСТАСаССААСТОСОЯТаСАааААААласссвасСАаассттСАс дапАСТаАТССОСОааСАССААСААСА,САХаССССтааСАССССстас
САВАТТСАССОВАТСТОТОаСТассСАааАААасассассстаАСАСТ атстасассСсАасССАСААЧАТадааССаАаТАСТАСТОСОСССТ атастТАСАаСААССТОТОСОТаттосаСбацвАсасСАССААаСтТаАСс д,атастадаСАаСасСТСсСАССААд,аавАССсСАатататтсссст ваССсСсССАасСтТоСААаТСТАСАТССОЯСТОССАСАОСТОСССТОасССИ
АТатТотТоатаАдАСаАСТАСТТІ ТОСТОАДОаСсСсТатаАСАататсттас
Анти-СОЗ (Сн2гб527 МН 34 ААСАаСасАаасссСтаАССАа,аСапАатасСАСАСАТТОССТаСАаТа 23(12) МІ 7-А46(113)) / 5сЕМ СТОСАСАССАССОСССТОТАТАОССТОАССАСССТСОТОСАСССТО 4.32.63 сайт матриптази ССТССТоТАаССтТаваААСАСАаАСАТАТАТСТОТААТатаААТСА
ММРО МКОб2 авгоІВв! 362 ТААаСССАатТААТАССАААИ,ТОаСАТААСАААИ,ТавААССТААаАОС 168
МН СНІ ЕЕ Сн2г527-МІ7 464 ТаОСОАТОСТТЬСОСАССАСОСТоСа,асА,аса,ас,апвАасаатоССАсатасА 13 СНІ пит Ес "виступ" РО АТТАСТТСААТСТОСТаСТОААаТАААААААСсСсОЗСасасттосатт
ГАГА рЕТА17621 ААДОСТаАдасСстТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТССТАТТАСАТ асСАсТОСаттсатСсААлаССсСсСссвассАа,ваатсТапААТапАТОС
ССАТСАТТААСССААДОаСОаТаастСстТАССТОСТАСаСасСАСАААТТ
СсСАсСааТаСатсАСаАТАСССАТОАСАСТА,САССТСТАССИТ
ТТАТАТЯСАССТОаТоСАа,аССсТасСатСстТОААСАТАСТОаСАСсСтТа,атАС
ТАСТаТаСАСОСТСТТТСТТСАСТООСТТТОСАТСТОСАСТАТТОСОЯ
СТСААааСАСССТОСТААСОСИаТтоТТотТастАаСАССААДССИОСС сстосетаттосоостааССсСССАаСАаСААаАаСАССАССОИС ааСАСАОаССЯСТСТООСООЯСТаССтТаатоаАсааАСТАСТТССССОда сосатТаАссататсСстТаААСсАХа,аСааАаоССстТадсстосоасСат аСАСАССТТОСССОЯОССОЯЯтТастТаСАсАатстаасстТатАТАаССТ авАдсСсАд,7сатаатсАссатассттАасАаа,асставаСАСССАСАС
СТАСАТСТаСААСатаААССАСААаСССАССААСАССААСпаТИТтацА
СсаАвААдватавАасСсССААаАдастаспАСААААСТСАСАСАТОССС
АссатассСсАасСАССТОААдаСсТасСласаваАсСсатсАатстост
СТТоСССССААААСССААССАСАСССТСАТОАТСТОССОПАССССТ вАСОаИТСАСАТОССТОСТООСТОсСАСсатадаССАССААСАСССтТада аТСсААатТтТсААСТООаТАСОтТапСАСсОоссатапАааТаСАТААТОСС
ААСАСААДАДССТСОЯСОСОСсАаСАССАСТАСААСАаСАСсатАссатата атАаСатсСсТсАССсаТСТаСАССА,САСТаасСтТаААТааСААда вАСТАСААаТаСААдааТСТоСААСАААСаСССТоСаСасссссАТС
САСААДААССАТСТОСАААасСсСААА,вааСАасССССаАаААССАСАС атТатАСАСССТаСССССАТОаССОапАТаАДаСтТаАССААСААССАС атлдасстатаатасстТааТСАААаасСТСтТАТСССАаСОСАСАТС ссКксатасдатаасАпАаСААтТавасАасСацАСААСААСТАСАА вАССАСОЯССТОССОЯЯТаАСстТавАСТОСаАСОСОаСТОСТТСТТОСТОТА
САССААДаСТСАССатапАСААпАаСАсатсасАасСАцасаААСа
ТоТСтТесАТОСТоСатОАтТасАТаАСастотасСсАСААССАСТАСАС вСАСААдаАдассттССтатстоСаваТАААТаА д;адатоссеасоставАСТЯОатТОаССССтТАаССАаАасССстТаАасСАТ
САССТаТАСССОЯТОатТОоСсСОаСсТтсАаСсСсТаАССАастТАсвсасатато
АТасСатасасССАаССТоСАСаСААдататстапвААатТаасСставасСАТ
САТСТаСОСОСОСАСО,ааСАаСАССААТТАССАСАС!ССассстаАтТСАа
САВАСТаАДаСАТСТОСААСОАСААСАаСААпСАаССА,ваТатТост
СААаСТаААСАасстТасСАвАССаАСаАСАССОССАССТАСТАСТО
СасСсСААдаааСАТСАССАССОЯТО,СТасСАССАСТАСТАСастАТИаСА
СстТАСТаССХАССАСИаСАССАа,СсатаАСсАатТаттааСа,!пА,асо аАсаАТоТООССОСаСОеаА,асАлатасо,саАаа,саваавАтотавава
АвдасапААаСаАТтТАТССАСАТОАСССАСсСАа,ССсоСсТассАаасстатс тасстотатаваСаАСАСАаТОаАССАТСАСАТОССООЯСИЯССА,СОаА
СААСАТССОАСАаСтТАССТООССТааТтАТСА,САСЧААаСАСааССАА вАссоссСсАастастаататТАсасСсасСАССТІ СстТавоСаАСаА татасСсСАаСАвАТТСсАСсССОоаСАаСапвААласцвасСАСАСАСТАСАС
ССТОААСАТСААСТОССТаСАсСАа,аСаАс,саАСсатааоосСасйтТАСТА
СстТассАаСАСТАСТАСАаСАСССССТАСАССТТССИаВСТаСОСаСАС
САДИСТОаСАААТСАААСОЯСОаСсапАса7астСсааАа,аСавСавАА аставдассс,саСа,авА;Ала,атасСсовАсаасавАда,саасаасААатОас свассаАдсаСсАдатасасааааАааАтТСсСАсСа7ассатсатаАсСс
САСОСААСССАаССтТаАСсАатТаттоставСааСАсСатаАссста
АСАТаТОССАСТТСТАСАСОССОССО,ТАССАССАС,СААСТАСОСС
ААСсСТОаСОЯТаСАпОаАААА,асСсСавССАсассттСАпАасАСТОаАТС сеайпСАССААСААпАсАасссСстаСАССССтТасССАСАТТСАСС авАТСТСОТаИСТОСОСАааАААсСаСсСассстаАСАСТО ТСТОО,СОаСс
СсСАВССАВААаАТадаассСсаАатТАСТАСТОСОЯСССТатастАСАСС
ААсстТатасататссаСсапАасСАССААДастТаАСАастасталас да,аСасСстСсСАССААсСасАсСсСсАХатататооосстаассссСАЯас
ТОоСААССТСТАСАТСССЯ ТаССАСАССТОСССТООСАТО ТСТСО,Та
ААСІАСТАСТТ ТОСТОАЛаСсСсТатаАСсАаататстТаОААСАаСасАС
Анти-СОЗ (Сн2гб527 УнН 34 СССТОАССАа,аС,аспАаТаСАСАСАТТОССТОСАСТОаСтТаСАспСАаСА 23(12) МІ7-46(113)) / 5сЕМ ОСООССТОТАТАСССТОАССАСССТСОТОАССОТОССТТОСТСТА 4.32.63, нерозщеплюваний ОССТОпаААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТаТОААТСАТААаСССАС лінкер агоїк! 36Е2 МН СНІ| ТААТАССААДИ ТОСАТААСАААатТапйААССТААаАастаСаАТОасСІ 169
ЕЕ Сна2г527-МІ7 46-13 СНІ аЧССАсСОаАсаваттасаааСса,ааАасаатсСсСА,атасСсААТТааТттсА пит Ес "виступ РО ГАГА АТСТОСТасСстаААаТАААААААССавасасттСОаТтТАААдатаАас рЕТНІ17622 ТаСААДаСАТСССОСАТАСАССТТСАСТТОСТАТТАСАТОСАСТОСО тСатсААлассссосвассАа,вастстапААТавАТавасСАТСАТТА
АСССАДССТЯИТаССТСоТАССТОСТАСаСаСАСАААТТОСАСОСаИТО вСатСсАСаАТаАСССАТОАСАСТАаСАССТСОТАССОТТТАТАТОаСА аестатоСАХда,асстТа|асСсаТТСстТаОААаАТАСТаСАаТатАСТАСТатОасСА
СастсТстТсАСТаСТТТоСАТСТаСАСТАТТОСОСТСААСпаСА
СоСТоОТААСОаТтттоТтотТастАаСАССААСОЯСоСССстоСа7татт сосостааСССССАаСАСаСААпАаСАССАаСаасааСАСАаССа стотасастасстаатоаАдасАСТАСТТССССО,ВАа,СССаталсса татостТаспААСАСССОСОСАХаСсСсСстТалсстсвасиатаСАСАССТТОС ссесса,атастасАааАааттстаасстатАтТАаССтадасаасиатос тсАсССсСатТасстстТАаСсАаССТаваСАСССАСАССТАСАТСТаСАА
СатаААССАСААаСССАаСААСАССААДСИа ТапАСаАпААспаТатацА
ССССААпАаСТаСаАСААААСТСАСАСАТИАСССАССОЯтТасссАсас
АССТОААХаСсТтасаа,аааааАССатСАатст СТ оСССССААА
АСССАДИСАСАСССТСАТаАТС ТСССОСАССССтТаАСаТСАСАТО сатостаатавАСатаАаССАССААСАСССТаАааТСААаТттсСАА стаатТАсатасвАассасатавпАааТасСАТААТаССААСАСАААдаСС сссасАдасАсаСАаТАСААСАасСсАсатАссататаатсАа,сатост
СсСАССОСТОСТаСАССАСОаАСТааСТОААТаССААаСАСаСТАСААИТОа
СААДСЧСТСТОСААСАААС,ССсССтТоаСаСасссССАТСВАСААААССАТ
СТОоСАААаССАААсСапСАасСсссаАаААССАСАСататАСАСССТ аоССССАТОССОСОС(ОСАТаАдаСтТаАССААСААССАвСатсАасстата атасстаатСАААааСТТСтТАТСССАаСаАСАТоОЯССТСВТавАатТта апАпАаСААтТасасАасСацАпААСААСТАСААСАССАСИ,аССтТОС сатастааАСТОСОАСОааСсСТСТСТоСТоТАСА,СААдасСтТСАСС астапАСААдаАдаСсАсатавСАаСсАа,саваААСаТтсТСсТСАТаСТОоС атТадтасСсАтТадаастстТасСсАСААССАСТАСАСаСАСААСА,ССТо тосстТатстоСапаТАААТаА
САпСассатсатаАСССАСаААСССАасСсСТаАСсАататстостас васСАССаТаАСССтТаАСАТатТааСАаТТСстТАСАсСаСсасСсатаАсс
АССАССААСТАСаССААСТОСОСТасСАсааААААласссавассАавасс
ТТСАаДасвАСТаАТСОСаСОаСАССААСААСАСАСССССтТаасСАСС
СсСстТасССАВАТТСАОСОСсСАТСТСТОСТОСОаАдОаСААлАсСасСса7ассста
АСАСТИТСТОССОаСССАаССАСААСАТаАдааССаАатАСТАСТОС еосСстатаатТАСАаСААСсСсТатасататтааСсапАпйаСАССАДа
СстТаАСсАатастадаСАаСаТстсСАССААСасАССсСАстТататто
СоосСсТасСССССАасСТоСААаТтСТАСАТССОСОСТОССАСАССТОаСС
СставоАтТатстсатаААаСАСТАСТТТОСтТОАДасСсСтТатаАСАатТат
СстТОпААСАаСавАасСССтТаАССАасСацвАаТасСАСАСАТТОССТОа
СдатастаСсАвАсСАдасСсаасстатТАТАаССтТаАаСАаСатоатаА сс,тасстосСтТстТАаССтТааОаААСАСАСАСАТАТАТСТатААТИаТ
СААТСАТААДИСССАСТААТАССАААИ,ТасАТААСАААС ТЕСААССТ
ААдадастасаалтаавСсаАдасАасааттавАасасваласватосСсСА ваТаСААТТОСТТСААТСТОСТаСТтОаААСтТАААААААССОоаа!СаТст
ТОоСаттТАААлатадасСстаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОСТ
АТТАСАТаСАСТОСОТТСИаТСсААОаСсОоСсСсОавасСсАааатсСстТасААТ вОАтТаваСАТСАТТААСССААЛССОСТааСТСТАССТОСТАСаСаС
АПАААТТССАСИаТСасатСАСОАТаАСССАТОАСАСТАаСАССТО
ТАССОТТТАТАТаОСАССТаТССАВССТасСатТТСстТаАдАСАТАСТОаСА
Еої!К1 з6г2 класичний СТаТтТАСТАСТОИТаСАСОСТСТТТСОТТСАСТОСТТТОСАТСТОаСАСТА формат: СН2527 ХРар з36г2і ТТайОСтТСААВаСАСССТООТААСОаТТТСсТТСсТасСстАаСАССААДОа 170
НС ЕЕ Рс "виступ" РО ГАГА ссСссСсСсТОСОататтооссСстааСССССАаСАССААаАаСАССАСС рЕТН17623 саАсоОасСАсСАХассастотавастасстТавтоаАСОаАСТАСТТОССС сласосатадсса,атТатоСстТавпААСсАда,аС,ааАХаСССстаАсстосаа
СатТаСАСАССТТОСССОССОТаСТаСАсСАСТТСТааССтТатАТАС сСтОАдаСсАсаСсатаатсАсСсатасстСстТАаСАаССтТавОасСАСССА
САССТАСАТСТаСААСИТаААССАСААВСССАССААСАССААССТ вОАСсаАдпАА,атапАдаСССААСАаСтТасСсаАСААААСТСАСАСАТО
СсССАСсСсОатТаСсССАаСАССТОААаСТаСсаа,аасасаАсСатсАатстт
ССТСТТОСССССААААСССААСОАСАСССТСАТОАТСТоССОаспАСС
СсСстТОАСатсАСАТОСЯ ТОСаТОСТапйАСатТаАаССАСОААСАСССТ вАааТСсААаТТСААСсТОаатТАСсатасаса,сасатавАаатасАТААТ
СССААСАСААДАОаССОЯавСавадааАасСАаЙтТАСААСАаСАСатТАССИТ стаатсАдасСатосСстТсАССатоСстТасСсАССАВОАСТааСтТОААТаСС
ААССАСТАСААаТаСААааГТтСстоСААСААА,СССТОСВасассссс
АТСОАСААДААССАТСТОССААА,ССАААпВаССАаССССпАСААССА
СсАСТОТАСАСССТАСССССАТАССООСАТаАДаСТаАССААСААС
САсатсадасстатаатассСстТаайТСсАААвасСстСстТАТСССАаСаАС
АтсассатасАХатТааОАСАаСААТаваСАаССайАСААСААСТАС
ААаАССАСОЯсСсТОССсСатаставАСТоСаАСссвастосттсттостот
АСАПСААдасСтТСАССатапйАСААсаАаСсАсатааСАаСАваааААС
СТСТТСТСсАТаАСТОСОаТаАТаСАТОАСОаСТСтТасСАСААССАСТАСА
СсОСАСААдСаАХаССстТоТоССтТатстоСОааатТАААТОА
Хоча представлений вище винахід детально описаний для цілей кращого розуміння за допомогою илюстрацій і прикладів, опис і приклади його слід розглядати як такі, що обмежують обсяг винаходу. Зміст всіх процитованих патентів і наукової літератури повністю включені в даний опис як посилання.
Перелік послідовностей «330» Фохофеманн-лЛя РОШ АГ «1205 Актиновані протеазою біспецифічні молекули, які зв'язують Т-клітини «1302 233331 «160» 170 «170» ВБатептІій мегзісп 3.5 «0 1 «11» 215 «ази РЕ «213» Химерна «4005 1 біп Аїа маї уд! тТигобій б5фід рРгОо 5ег геи Твгомаї 5Зек рго У сіу 1 5 1 1 твгомаї твгоїец тпг Су біу бБегобеб Тввк обі Аїа маї тайг те Баг 3й
Ап о тТуг АТа А5п отгроуаї сів біб фуб5 Рго боїу ой Аа РВе Ага бу без тіе біу о1їу ТНгод5п гу Ага аіа вго бТу Тйг о Рго Аа Ако вве бо
Зег 01у 5ег без їец сіу біу цу5 Аа Аа їен ТВгогїец бег с1у діа 65 70 75 80 бів го 410 д5р бін АТа біб Туг Тук Суз Аїа Бей Тер о Туг бек Авп 85 90 95 меш тгроУуаї ве біу б1іу біу тТвК о буб меб тТйг ому! бе сіу сіп Рго 100 105 о їу5 Аїа Аід бко 5егоуа! ТВгоїец ве Рго Рко бегоб5еє б1іц бін і ец 115 120 125 оіп АТа Аби уз Аа тТигоїєн ма! Суб5 цеч т1е бБег А5р о евВе Туг рРгО 130 135 140 сіу Аіїа маї тТйг оУд! АТа тгробуз5 Аїа бр обег о бег Рго уаї Гуз АТа 145 150 155 160 біу Уа! сій тве твВеотвВе Рко 5ег суб бій баг АбБп Авлогу5 Туг А1а 165 170 175
Аїа зег Бек Тук сечо бег оцец Тігобго бі сія Тер ух 5ек нів Аго 180 1855 130 зег Туг 5ек Суб сіп маії Тк нів біц біу бег о тТвгоуаї сів рух тАг 195 200 205
Уаї ів Бгто ТК бі Суб Баг а іх «ії 9 «ев ВЕЖ хай Химевниа «НК я сіп діє іп цез та? біб его ді» во бів без вує Був кго Фію Те ї 5 б їх
Тег Узі ага їі дев бує їх від бЗагобіж Тек тТве вве тк дав тут "7 за І І Зк щі
М КО -М
Бек жів ні Тк ші вує сів АТ Вее б» іух СУБ Бен суб ТО мех
В ча о
Чі тега їїе вх таг обі тг о бїу бів го вія теє аїя АВ яв вве ха 5 Есе іУу« біУ ва вне їй РВЕ бек їв бів ТК Зек я бег тТвР аа тег та 5 ЩО ву бій їі аб ази іо їУ5 аа Бін дао Твг вів ТК вне вне Сує с чо Ж аїа ні вто ТУк аю Тут ар Уа! сен вав тег оте фіу бів бі Тве що ме що ху тк зебра ин Я жує ше ох ще я яв у их аа г ку у ВЕУ дух
Берг оуці Твг Оу! хек Баг бі бу Ру біж бек біж бі бію бігу бе 315 130 їх бік біб Біт бі бек біу бі бі біж Зак вер о тТне ші без тк бів 119 135 що
Заг Бга Аа бак їв бі Уві Зегосем бі бів ага іа Твг Ків бег та 50 155 їв
Сув ака ів Зеб бує бек заї бек так бег йява ТебК Чек ТУук Фі Міх аа МО МУ тїге ту ів сій ух ВР бів бів вБо бе Ух із ем тів вує Тк
З АВ ХЕ чВі зЗег ТК ін сін чек пі чаї вБео іа або ока ек дію ев ту 5 В «05
Кат сте ТНе Ар вне ТВг ої ази Хі ніб5 РО зі біб біб сій 855
ЖЕ хі ка шедри сжу ВК сошник фо хо чує ду жк фолламе Жоиюи ж кож п
Еге вав зве зба ша Ба ж же І Бі БеО Бе БЕ СУБ ЯК КЕ й шко мух ОК З г
Й 5 В пе Ж: кю ту хх Жди жиди Ж тд в хо У ка попу с яку ох
Зі» шіж Бе ее БІВ БЖ щіжЖ Те бек Бі і бів Бо Уві б бек я - г 7 7 Жод Кук Й
Б ВЕ реч Зм кожи р овррох У мя ВЕ же ки вхо ее щі: же За бак их ж те ши БЕЖ бе ож БЖ Бе ау ЕрУ е БЖМ х ЯЯ СЕН КК ВІ
ШУ ї " Ех ЕХ о
ЗХ Я МК с ше аж ев чех Фо до о КОЖ чі дух пед жи и жи ж вів вже і ве їни вне хек ажи ад тей ЗБЕ ща КО і аку щі доЖХх о? Фо 7 п ов а КВ ще ЗО о вхуши я сфокдлх ша ж овуєі ОК. пеюхі ум ож ака Кук фаху є до. пев СМ Е
Ав ков Бу ріж Б З КЕ; Се аіж вра тв уж г ж ТНК ке ск 7 жах Ват. коетую дах ОКА шою ук ВК зх КК ще Кеш СК ке І Бі їве Те яв Тег Віа йіз ВК жа Бук Ту аг Бе Ме
ОКО ож. ки ЖЖ, ж Я дж пжуде ок я о ФояЖ вих у у с с У. с
Їтв пас Дт Же аа Сж5 аа ТВ БЕ ОТУЄ КЕШ о бію ще ами ее таж хм пе Во що са А ВЕ су Зо т ши ЕВ фак посух Кв ія Бу Р І же Те ві маг же бе юю ТБ ВГ жу ЕМО ї-
ЖЕ І Бе пох в ку КК чно нь ше и ден КВ Же ма о жах о хАТ жди
ТВ о беює ТРротжК же тує Те» сту ей КІ Те БЕ У ТК та ех
БЕ Бе Б що о Три се НН Ко Кия ОК 7 хх сх ко : як В, ет Вій Щек ТВК Був пів БР щее ча) Вбе реа зе Ве щак Бак їм ав Жах біз кож зх жа щік ої ща ОА ва ах Я ж ко
КУБ Як Ж ее оси Фі те Б ід ве ук се в ж їх Я прехою іх сема шик Уа сі ко тю кашу вв до хи
ЖЕ ВЕ р ІМ Буча УЖ їНе Ві Зб оїБе аа ЗБК БРк аз с ВЕ
КВ БВ | БЕ де ях я ЗСЖ хх х каші. Тріо с Фокс я кхоуекио. в су
ЗЕ ОКХ УВІ міх же вне Бк віз ЗІ ба ів Заг зве Біб зів те дк ких веною фо Маю В сф хо их соски се сі фея дещо диня соків аг збе ек Ба а жа Тк фа фе бек ше Яке Севох Тее ІВ ха аск а си 7 7 й коту ж т Кк щі та ож сржсиє Ж у дк ж ЗУ сао коди ХК. Фа Фк ши тд ке ж
МНК ОЖУЄ ЖУК БУВ ВВ ЖІ НУ НЯ вк КО В веке тег КУ а ща т -х. т «хх.
КЕ в 5 хм зе ММ Отак: МЕМ Кошова кт сю а. сх ех шуй яки: ВХ рах
МБ КУ ЖЖ 1 БРе уж ек СЕ ля КУМ пе ВТК Тв Су РКО ВР
Ку т Кк, «а ах я иа їжи У Хо шву ШО жу жа ку ях ву підедки кох яіо щи Ву сут сУуЖ ее ат рт та Вів їх Бе Оу вра Зак ж? б вер Бве веб
НН Я тА 7 7 ОТ
МУВ т тах свидх. коле ж Фдяжк ОК окоеюи о доокмвю Жак .о ккд СКК ос жи анихо Комо Сх ах о пев шах В жах
Бр фе Бе жа вар Те бзе Ве бів бек ак Тк бте бів жа Те
ЗАВ, 7 Й І й ОК І
ЗК Я ж ТМ им ЗЕ за кА жах ку кеко краю Ж хх у шаг ЕК ско сіла Ук
СУБ А жі Уві вер ев Жек Мі ФТБ АБО ге бе УК вух іє абв
Ка бояр и ї Я поля се кою сок Ку жди. я ож же г ку ше ж: М Ну» дує
ІВ ОТЖЕ УВІ ва оте УВІ ів УЩЕ ОНІ хи ів Бу ТВ вує БО аг
З У ск Уа М 7 п сет ме З ше хо. Кс Кк «а С чо СК ЧУ па ок ме ке пк сю ки о іш вію бів ТУ вав ек же ТУБ дж УВІ УВІ Бек жа фам ве У
Хухх Й М шиє МЕ. 7 й ооо дови х
Ви Мі ій Бер оїто іш а СТЮ Б іш ТуК ве Ку ру щі БК
Тов БО о - й вх шк
БІЙ я Ба шк Ж ошеу.. вод ккал джу Ку СК Ккі ково «КЕ СК проду Ск ах и МЕ - с З КЕ ! ЕТ М 7 хх КЗ МЖК кю в шахах соду ОК дідо ж ем ко ік Ікжоик же дк у ок вх ХЕ БРХ кт Б Бек ЄКЕВ жа ТМ ЖБК рев бух БУЄ су як Бо
В Уж ща т ложе ші как бе ваш жов Бі СУ бере ви о Твра беж вам жа ре Кі ТЕ
ЖІ ОБ те вже ж В ЖІ Б КЕ Тева МО ЕК Ж КОКО ВЕК Ви : ду: Ах. 7 жах
ЩЕ Б Кк сок дк Жора жа Ка Во ко ж Яд вм с ЗК де УЖ.
ТК Кр Же еВ її зів жі ЩЕ ТО фі Ват Вл ців ва
УЖ ХХ : 7. аж
ЕВ щу ЩЕ іще шою ха, з ж ги ПЕВ, ее Кит: мих ї ев. ск. ох ся Фо, я Її: о. ся ше ав аж жк ех Бе ЗВУ бр Бе У гер ее ее ве Кр З В: ібез їди тож Зак еш ве ВЕ ща вк піде соведх Женя кож. Ж вх ек
ББе рев Же ек ре ев о ТВе Уа ав бу Яве ак; Тертя НУ у яку : Ку пече тех х т як Ж . я Ох ве З ЗЕ сук пк как шум фон ек ЕХ Кк дн В ши сук «долі пк шко Ки
ХОМ а Не Бак жа ек жі ВХ НІ ці Бе НЯ УЮ В щі г КК лю 7 ? он ща 5 ЗУ В ср й я кум ікаумо Кох В, ке 2 ОМ Дах коти вві ож
Те обі ех ее ее ег без вк ве ші їж
З | У
Кае
КЕ ЕН каса КМ
КО Кк кя ее ЖИМ «хх і еко з дм я дак ши Ж іт сумах пк о я
БТ ЖЕ Бій ев ех фо озек от Те бі; ба чаї вуж ко біб вату
ЖЕ ж ек тк ов КЕ я ух, Не Ж ек, с ен І є су хе
БЕР Ся Ве м Же Суж фа аа ее ім бе ТКБе Ж ее дже 5
З ї Ко 7 ба
ЗИ КК З
ФО ЖК ек ЖЕ ХО их нд Фе зем ж. ши жому м Му жк Ха комах а їв ФУ Ж ик ут, у їв мех ак хто Ма! те ів аа рт Бі бух т» Бевз обів Терожа!
ЗВ а ке щБіж 5ка жів рт Бек БУЄ їВБ аа іш бу тве оте ев тук їж віта х ши 7 Ж 7 мо З т я 7 пе хом якщо Дт ге ско. сук. ТЕ Во ее пд 5 Ж Ж. щоКгм шо поважати КЕ
У т М Зх ши У х - че т Же Я
М ЕЕ Ух З я що Ж 3 скік фа що ках . ЧИНИ ее и с Я Я ре ла за сх ін Тже з; (іє меж вав бее ви бух ТК Фів вщз тТВк обі БР отУк х ЕЗУ) їх «жк же «Жжодко доки хжвоке КИ СЗ біо сх сх У ту жом зум о фбоуєачо Ж кхо ст ухую Ж ух тТте о Сжж бе чне реє оте ін те) ее їте бек ар тек те Зм Б з ХЕ й т сао
ТЗ Ь БВ шо. у шодо Ки ее ку пи кове и дних жо ж шакам Зх ме шо Жокоух Кто во ХЕ
Шу ВК Б ЖЖ ВК І Бек Баг дів Ще ТВК ОБУ сім БР БК УЖ зак я Й зх 115 ЩО їх в пом що Ж що фе бек Мк хол до пасбогм жк. ги У уо Вох З кожож
Вина Без із вія Вт ет Зак жа Чек Те Бек о бім ші Те вів ва лих - ІХ 2 3 135 ЗЕ соль: ке фея Щодо шк ко ак долю даїмом о форм ФМ о фу фа ОО, зд Ж о ох ай пі сфе за: У їі ва бек ве шт ів реч ща Тег ж ее а х КЗ ЗК ШК
Мах КН 155 М жа Ач Фа шою ; ЖЖ хх Ж во п Ко пак Жах ЩЕ Межус ОК ха їв ай ек ів із іже бак бек БіЄ чаї і збе Мб вКОо АТ В ! тож . ори зе
З Й 15 жоажої ев аж уюамо ме щи мо сжркслвко ЕХ «дів Жашує о ко Жах ві Ж сжфрияо ва во
Ева шій ек бак ШіУ фев ТУ бек бе Заг щевт щі За тек жа во поки З ЕЕ. учи
ЗБЕ Я З дахом аку ах 2 ою хв аюк ис в снах бтаж С Жак бе фон 5 жов вк ох
За дак ек ви Бі Твг осів Та тек ів Су5 вай ві Бак міх фу ж х «тло, З 7 худа т
К Я 5 двеак бажає звфуує ж шашно и дануу в окуєо й охомо заз ху фруєако ж фе фомає фтулує Жошжух
Ж его ва ЇМ в щі вав бе У ЖІ Бл ге жа ще сх ЖЕ
З дике Кк За о СУВеух буди фМеех фУку жуки ур в че 7 ска ху ік те Мі Тк СУБ Без Рез Се Без вія ве т Аа вів їж гу хилне х зу їх ХЕ ра В. м хх
Кк В жах МО
Шкдхом баеих жах єжйе 8-х: ФВ ка мое хг Фжеммо ж омадх - ей код з чу
РЕ ег БЖ Бай зе Б ВК ВгРО Бук РО Бе Ж ТВ ба Ве КТ
Ж, " "КУ т ча «ЕХ БЕ жа «ках ох СЖБя дя УЖ ка Я зкакамо смс Ма о ха ж Доу. У: Фоми ж я
Ек ага ТВг вто ів ті ТіК СУ Ва жа а! в Ж! Зак вів і чия хюугіх у
ЖЕ ях УК дзшх дЖок ЦИх спиш Ко доски кб Фоану Же ск о с нир ЗЕ тако пе з. З шодо аж Бе ів же жа ВИиж ен ЖгюЕ тую же аж Ява і «Бе жі веж
Ех 7 Я т 7 ож шо й СК ких в й Ха рога же: З вих Жекжк а Лк фа Як фах дже Же СЕ Стас ках
ЯЖХ ВЕ КК ЗРК Зо ВРХ ЧО БІБ ХМ ж ЖК вав Бек Те Тек вах тку5Іх 7 мох й ж пуп нн т Та Ж
КІ 5 БІ ищО Ж ки дмококі Ж сон Ж ши пі оди. пи Ж дах. Кук ЗК НК КН
Ві жа ек ВІ ри Же УЖ Бе Ві і ЗБ ТК Ба ви щі Був пе: лк пе. " 7 пух
ЗЕ З ХА ЗМ ху с же пд ше у пт шен Ж мишах фшую рон ху шодо у, ем зд Ж
ЩІ ТЕЖ БжЖ Суб Ух ЗВ ЖеЄ ее ще віз ее бік вів в кв Є - їй х ОКХ - е і т сю
ЕХ Ж 5 пе ЖЕ Зв вк ре вія руд те щівВ Б ач у вт с У ше щш Кмж ів ве Б мк КУ і Кж ай МГ МТ З мг БЕ Ж і ад " оп " жк
За 5 ще сф вжо дж де ЖИ і: Ку ке а хх «пт міхи ж вих ом СУК
Те кед Бгто сг) щеб ака ам Фів Беа Те фу дБА жів ах Як щи пу " т ЕЕ " ЖК уки Поойжжх Зх Фо я ШК. с ВЕ. я с ЗехЕМ Ск х сх. п. Ух ї -К т, С дк Ух Ж вк ще Се іа а Бе шу ВН теє Ва ее дав Кі АТЗ Б В Тева
Ми ЗО ЗЕ о я щодоею СВІ кри варом ДК шоесо фокоюдо се а де Ж Вуух ких Вк Бк ку ей баг вка і Бій ре ів ав ща їж фе Тв ТЕ БК БР Ж
Б т Б 7 СУТ их зх З Зх БЕН
Біт: аж аа дек іч вих ЯМ» ях з зас; г сша фон з их чем НУО дека
ВШ МО ЖК БЕ б КУ се МБ КР Я КЕ СКК М БЕ ве Уа: 55
ЯК о ях кому. сажі МІмим тд их. м. аг Ко ижовх ху КОС сх гне ЖЖ аж ч є зак
Ка ек Еш тер бі Фе КУ Як ові фе я Ху ее жа ве вх х Моокм с ях т шу, в За НЕ
ВЛ Ж г хе ноих ох з. ЖК» в х. ше орех Жов ух. жк. ХК ви. чи ах к. Кат ії іа Зав ні ка пе ба Не Бій ГеЕ вк цю БЕе фа век Вга пеки кое ща Ж Ух ; ВІ
ЯЗ
ЕМ СЯ жа ВХ
КК я ва БЕК
ПИТ, як ж се тах иа кичеМВ в жає па Ек ково ож го Ж ий хи іх. даю кос г дк суха Жак БЖ
Є жаЇ Бі се фе біз ек дію тка пік фе ж вів бю ве бів ско ода до я и вдо их сво М са КК с. Я и сх о сті ЕК,
Щек ів ВЕ жі ТЕ св тТВе Уа бю бів Ве ее ідо Б ек ук та Кз | хо ша ман ик и схо ке ще слух сади о коди дет шоу ве см що щІж ЖІ БЕ УРВ УВІ а Тв рови БУ вуж Ку Бевз БНО ТКВ еВ
КУ БЕК Ух мих Ж ж що ами. КИТ. смюх ДО сю Кок сек СКМ ку . хе хо их с -еох щшЖ а ЩЕ КУ УК ВО Ів ЕК Те аа Тук міх Зв вів рев тів
БяКЯ Е ке
Мам. ока сю ох У. Фо дужки до с яку сода пжхю до жк М ор 2.5 ї я
ЕК ЯК Се ше Сів Щек іа а вв ет гу бек щі Ї ВН ЗВ
ЕК т 5 В
БЖ Бе аа ев Бер БІя ЖВР ке Вар вк Бі тве Бек Бек ме аа
Я ще ЕІ
Ж БІВ
З це екю ек - Е а ке «УЖ ож те спожк сою СМ ще ж ше іс ка ж бі Хів їВе їТвт хаї Уві за р ТУ Ту аа: Мах Ер тує ЖЕ сх Бім біс ви 5 Зї тв» б3ї Кв Бек Їх ів 1 єї бак ЄТЬ «їж ів іє ТК ек з ТМиК б хе ща РЕЖ г те ЗЕ ї я жа І Я их з з сх г си ж хх стік ав св Ж
Ж йзїе Жі бак ви вах жі це ах вах фар Кук ою щі ЖЕ Еш ТЕ
Бім бі іш Бе і КЕ БЕК ОбТУ Баг БІК ШУ т» БІУ Б Аед а КІ МО тож хх: Ех ї с ТЕ дона ж ке З ЖЖ
Я ща сранат 2 сеакоуо Ку, ів век ів баг дій еж Ух і ім ЕЕ ів меж тк щі Зек виз вів ек бе ще Ат ще: ча Сх пе
В ва ЗЕ «КУ
А З Я
- ї ск кришок сук. За ша ді сови « дев й чек ке їх чі не ЖІ Тие сСе5 вка бів ек щів ав КТ ав зер тує Бех г У ні є с. скосу, Фк СЯ: вод: 5 ша да Су фо ж : г де пото В ху фо: фо дев В ще: ої ше ДЗ з ВЗ
ТРЕ ТЖК ЩЕ ІЙ ЗБ ЗІ РУ БЖ ек жк ща БМ Бе ща Ге Ж з ; їз дав йо та Кто ке ага Ве его бі ек щу зів їбг бБвіву віз ав ваше УВО ВР Яег дед вне зе у зе : 7 ЯК те й ен І їщ5 «Щ «М з зак се її ай ак іш: «ТА Зв 5; 85 ве БІ Же бій тет век Бу Є и ів а а оч ЕКО ЖК в у ав 7 Ех У
КК САМ КАХ сх си се зЖх: у м екю фоеух Кф ве еф Ж: Ба хо шодо ее бек иМи ую НКУ БЕ во Жаба бар же сор Же у ЗКУ
ТВі із АД ОТуК Тут се б НТЕ Тег оЖву Хе тек ве тик тв ме
ЕК Й виш 7 КК 235 ШУ
ЕЕ Не ж з : - т ; кий кока ва та Мах Ве КО пе пух ах ТК хек сок: же У і спім щі бі ЕЕ щі Ж щіЖ же Кі ТВ Бе іже бів Тв цу щу сту шт сту Х ВОК
ЗК З чЕх т щі ж КОЖ х х до «з ма вах же щі ще ВУ я 5 Хе ех Тихо - ему Ж Ж їжі ку їх. же сах же Зі Бе і ще:
Зі щі ек до вія дії аг ж Ук ЗМ БУКУ ВЕЖ у га З ох Б др м им ик
ЗК як За х ; г са Бій зн вв кі пів іш щік ші хар ще щік те Бі бак щі: ві БіЮ зв ов І «ТК БРЖ Бір б» Жеб бе Бк Бе бів БЕР о жв! Бій в Бе 7 Й ЖЕ Й 7 Те КЕ х я в г кум: Мі бі йЗоез і їду Фхк --із шт ім ег єв
Бе Щі і ш3У ев жі бів ВвКО Су КОРЖ ОЕЗ ве В КО МЕМ Зж у
За 7 7 зу: ЗЕ
КВ КЗ М
У З я хх мах СКМ имо хо їм шах іх ух Слух ба зару же кю ше Вк ві із ак бі ББе Те бе бек ТЕ Тек вів ВЕЖ ваш ТК Ущ яка па ОМх з свят М З Ж
КО ЦЕ Ах З
Зі ів ге і їжЕ «їх Бе; бів; їв аї ек йтгй Ж вка бат ек зів ів Ре іж г іх ем бів те ма! Зег ага ЖЖ дк заг Кже
Зах Ж тах с ми ка бе ста сте Ва вет Жах вне клем бок де БОНХ
Тек аа жав Ту віз Тк Туг тег Вів бле бак Уві я ТЕ га Ве 7 що т з Й т - «Ж. х й Ко
З ЗК Я
З ж Ко : Ф дор і: дев уми З кр тшт ЕЕ Ю ВУ пет тТнг ої Бек аг Же» аж Заг г вв ЗМК вк Те фе ОЗ ВЕК де
І Ком тип
Зк як св
Ух Я 35 ходкле ух си 8 Ж шт, с «ах Ка зо сжЖусте став дю вої жу бю Ус
Щек бен вага 8іЗ бі) що Тит о йіа Уві ТК ТУ бу УВІ Же МВ Фу
І 5 ЗК вк Ве ці веж вк Тек Фа бак їтр Ба вів Тек Тра біж СІЯ ТУ ре г. х хх 7 зоук. У 7 х і
Зх ще 355 я
К кос се Ж пев Ж Жахи фо боже ех ук ж Є: вх Жду пи Кн тТвг о Евм КЕ Тк жа БК БЕК дів Щек ТБе Бе біб БЕ Бек УВІ БР скодж с ОК. я СЯ, Ех суд г о сеїхо жено М Ж лю скоса жа их Ж «Зх ку кг
Бгто ву Вій Бех ее бев фжх бет ТР бек обі ші Бк бів вів бе я Ух т ех т т ДОМ
С ЕХ 3
Си тс м о шук хж й Коди се беолхє КІВ со ХК ки жид с Ко вм ду уже
Ві Су зве; а їз ав тТук ББе те бів Бгто жа те жа! вк тт 7 7 ТЕ, т Й Й ж К с 35 КН У шомом пи Ех Зк обох Ж Жахи Оу сузу ВО Кк ух Ха: бл У и аа бек Біт діа есе Те дек осі Уві Бі ТВЕ о БНе Без вія УВУ Бе а З Бе - и ча ел а Жуках її ук; Жбажако юю и Я зе сжє Зк дМуіт бом йівв жк баг іє бо тег ек офеО бееощег жі м: Те зр ве ве я хо их аск Я
СЕН жа В ше х - ша Я ння 7 хо Мф ска СБ ау дих дет пес ВО ук поки ох ше с іжжнку зак ак ви ію Те Бій Тек оте Щі Сх аа Ущі Аа Ні ЖЕ Беж
Коша я х
З БЕН Зх ссдуе фо сте ко БОЖЕ жи а що фо вка вужа дриу: 8 ди болю кни прю бе
Зак аяи Те ру Я АБ УЖ СУ щі іш Бе ге БЕК СУ; Дар ТУ шу ми шелух
МНЕ КК. БК ти Ж о же о у жк у додат Ж В до шок ж явку,
МІ х щі МО т Ж аг є ТУ 5 і хх їх Х її и ЖЕ Бег ЩІ ЖУР ІЕЕ На и а ІМ же ех 5 я
ЩЕ ХЕ Ж сх жуки іх х пк се акрми х акжи кни ок се го ук КК - чіж і щі ран за вже ве Сів Ту ЗК вве аг сви Бек Сех іа ха ЗИ а х миши киш мо ух ох вх вх, См 5Я чи полк КА ОСИ жом ЖК
Ат ще Я5Зу бе ВР ОББЕЄ ее дея кій ТК Ме ек же УВІ ке ЄВ -Е 7 ЖК ЖЖ 7 овея
ЗЕ ж 555 5
У окх В кох Ко їх : Хв сх у СК ко се ЖИ Ж жо коми Мах щих ЗКЖМх вій РРО БІ жу щі Бе ців ТО БІ віх ага ЖІ гу ак ор Ве
КУ а ї : ка
Ух ж В у Ж у м іноя ка сіє кВ Ким кн, ху пи щокзую Мійм Хна и ЕЕ ТК йо ТуК вів Або Беж УщІ мух СТЖ же ВК Те
Ех ке З
ЕВ Ех я
Ж а бу і ху ЖЖ: дод: жх ск йо Кох хх комі Живої Фк. Кк дах кн дю жів ЗБР агО вав БА Зег оКех а ТК Бе Тебе зем Фіг МЕЖ йхе ее пшЖАТ 7 - ххх 7 Уч ах ОО И5 шо й хує Ка Ки г, ножу М і чи стаю «жк м. вжи ух. обку Адукку хх ск окж я іа іу» Вк дію айва ЗР абз Ві Тег тек ук Те тТвР бує Те б; ках ККУ х ох як ми ОМ Ох
БЕ ЗУ БЕ зр Жихах сббузує Кіхах фо Мроує Мих ую кс МОМ лек хо дк ско Оу, «о хх
ТР БК ТК Тег аю ТеК ТБ Бі (і БТ Ме бр ее ве а Ще гоже Не Я що З 3 щ-Н3 г за ск 2-х пух, рах зі Я Бі ШуеуУх оголв:м Ол :В ку - жо с аг вій ек Же р Їж Бе ве мі фе юр ва Аза В щвеоБа
ЕК дя 7 а 53
Зх хе. М : ож яко содою ж бфЩбЖа: шоу мія дою х ожха Ж хек хх х пе х дя шк ее
БЕ У ВХ
М : ше: СК: Екреє Зв сек з аю тра дом дае і віз а на Бе
Тег вна вКБ Бін бе ба Тек БЕ заг Та Зі ще 51у зів їбжщ В і БЕХ ЧЕ й затгосіт Уві нія ве Ве ге вій ма ев ой ще бе! Ж фе тю ди ЕХ. Ки " зе пак ке Ж дуклю едкц бю доро о ях Баш Кі чег оіши Явге бек БЕ Уа Тк жі вка же бек ак фев бі ТВ пів за ІВ ті Ге
У т ЇМ сх. ха пок ах я свлмує. Клажую аж жа їни ме ще
ТВг Ту їія Суб вав Уа! АЖ НІЖ веж РРО его вева ТР офук ха ВВ в жає У сах ж ДЕ «ЯХ
Зроожк с. : Шк фо фе і це Же Б фе Бек бу; бр
КУБ вже УВІ ів Без гу хаб ую а Бк Те ні Те Єв Бге вез 7 " ав т45 Та вх їх «Ех шо УЖ З з ї- Ж хі шик ав в ех ро ЕМ р
Суб вго та то бТб вів АТ Жіж ту ге его ві Ба ев вме БО
ТУ В ЕЕ екю Ус В сок ; Кк ех пк ЕВ дуже Ж и Вадх вгеа 15 Вб ге ав Те сб Мет Хі Яке АКа те вс БР уд ам я ТТ ТБ . К о х я оч ку паб ЖЖ ооо гусак. кох паху чаю Жах фа св У УЖ! жа й жа! ее Мі ів вав во отв а вух Кна вав уч т Я ах ве тах МЕ тщ5 яка г у, г ка зе ех. їх тт то ча. й пом жах Же їх
ТР тує хі! ар остю Уві бів ат нія аа аа вує Таб Оу ще г
З в сах ЩО. Я
ВО 5 ЖЕ с в . . Фоакае фріх бек вк зах зв форю от баз; Кф ої
ЗНЯТО Ів тек жа Же Те ТР ясо У Ух Зак жі ее тве обі се ех ; х йо Ви хчач ша; СЖахах ж ги тьох їде ма фоиуде жи ні бів же Тк; ме вжи щі же Бі ТуУЄ фе Кужх бух УйІ Жем з - у сх Е с Жов не шик Ко - мет зе ж : ск ап же йїа ьез Бі віза его Хі Біб куб те хів ек вує ів вка о ежх т Ех ЩЕ ка КІЗ ВО спів ів ве аг ів Бе бів УЖ теє ЖНе рве вк ВР СУК Аг жа щу т ких их. хх
Ва Б МІ ЖК ле іЯ ххх З вет Кок жо о фозу рах зум юки ж бій БЦ тТВР зу ав бій Узі Заг ів: ТР Су фу зщі же Фу вне я У. ее. 7 ше
ЗЕ ВХ а л : я косо ни шоку кн У. хо, ще дет ик сохне й тук во Жабо аяр сів йіз Уві! бів їве біз бек ан Бі 165 бе 1 ками. се " чо що Те ие суд у о и и З Но ШИ : вищ со щамм ж хут о ми джих вве вед Тек Бек ої Бе Те щі да Бе ще а ТБ а щі
ЗК ща З вже ді ВБЕ хек ух бер ові Меї нія ій вій сви ні вав не Тк ск ок як х я зх вв. сою Кк, Кто скік те БІВ У его їеа Бек вем ее вга іх мух
М АХ т 7 ща ЗМ «ке ВЗ «ий СКИТ «У жена.
ОМ. Ук.
НК ав Бе ЗвВе Же Зб бе вк а век бі жа ее Бар ву ще. Тек сх 5 Б Фах бах ко о фруєку шк жур ват Ох хто дю: З да Я ук ру кое: щіш щі Ве Ту У а Бі БЕ г мія їж Се зн пе Те Бе і їв ЗБ рее у ек я паж жах коша жи М шо жк Я їди жі щі АЗК МЕ За уУ ах аж ща тяг ОК ТЕХ З: ши від ЖЕ З з КІ КОНІ
КБ Кн АЖ Бее іш Бій Те Бе ов Тон ТНК бе тк єв ЕЕ щОЄ. га с щ5 ще щ їжа щі їТе го тТве Уві Уа аз вав ТУ ТУ ДІ меж дев Бук КЕ
У боже Я ох х ко. ЕЕ М пу и в е я ву. п.ете км я ї се ск полк жа и. їх У т не С Кот джоукн о де щік вів Біт ЖнеЕ Зак бі Ве Уаі бек о ег дію біб 15 іх зе БЕ 7 СУ Ж Ех т т БВ Ж 7 У
КЗ ЖЖ КІ схожа. ую у шов фу с ние щи «они -х. - п іх і ТУ Жак щі бі і біт Бе Бі БУ Бі Бі» ЯЗвк дав її
Ж ї35 ке ЕМ ців Веї БК ців бе вго ія ек о баб ів бек ді і бів ще жи пфоксех т ю І шен Ж хо тя
МІ Я "Ех. я лк зу в. к - 5 Оман з Я ч СА зх с.
Ущі ТВе дів ТвРосу ве) аа хек жін вав тів ар ощае Тег зем їв сфер дя В КМ шо ие ще ко уми . ди доки т доеху ска Ко їй тТУК Тв Бій бек бій біб е5 ве о вг) ТЯ ів сен Уві тує АТ -Ж Ж т І п Й 7 7 ба
Ж Щ ща віз їве вне ів пів зр ов чаї вВга бек аг ве шеє бі Заг ціх додаскх Мк жом я Мт Ми в Ко дкри Во ше опт се є АХ г хи т
Щек шу ЖБК ЄТА тек БР ген вує Кв аж бек іже бів бек (Ле вер
БК 23 а
ЖЕ : яз і 7 хх х ЗЯНЕ
Жити ХО В ЗЕ ях лі бух ве Ку ефрво шо В даща ЕХ Ек Р ск М стро ек вх у жа ж дм сх вІЖ КЕ МІЖ ВЕ ка БЕР БЗЕ ДІВ БУВ БК щі щі іє ак сте ах за Ж ВУ їй з АХ шсраї я оз ох кино ух хх жах фе ВЕЖ в ви ри п одожри ето
Щі бію век ої бік Біж іжЖ ек біж вів ів біЖ бі бі бі Бек риз х Н Фр є х т Ох поки тм лиж со із те і вав ші і Бі» іє бат Бі У ще са пода ЖИ щІЖ щІЖ ЗМ БІЖИ ГУ Ж Ж Ж Б Уві ів Без ев це
КОХ - З я З КЕ СЖЖК Ба КО КТ КАХ
ТК, па тю
ККЗ ЖК их од ал З кит шив ашкоу З я. ло В муці як - до . м
За цк ІЖ пік ее УВО ев Ре бі біУу век б ат ів бек сх
МЕ ст 7 т и, т З ТИ чеки кс 5 З
КК КТ так ма (мс Ж. а дхокош пев им ж в пі хо з аіж жтя Бек вію вне ТвРОоБна Зк таб тег іа З Я Те Уві вка ех Я ї г рт гу м хек У й ї КК, а кЯ Б ЗІ а. ях жук ід шк Жах ск Ми вк штоки АК хх «Те. с ся :
За З Р схе о ко секс Є я КЕ жх Жити бу С с ждя СС хм ОТ о КЗ од
Тео я Гук Ж Те тує тк вій або зе жа! су тв вагу Не срках Ж жи ожек х я ше ах амо Жожаидео Жак СКУ а вуста Ку че п що . їнК Мі ББе АРО аЗВ АЖВ ЗБК Бех ав Твт соб Тук ев бТя МеК ях ще як
Зверху мм у док Жак жо ще спжутие; фун бснаю дек си жен ем АР ТЯ бю жу бе АТ жа іт тує сСух УВК ат нія ОТ
ОКУ УЖ ? -- «АВМ, У Є;
ЕК КУ: З ху Зір ЖЕ хо ве ав Жкх СК КО адже т др ж й лк . Ж с е зав НЕ БІж веж ще їж ча! бек тер реве ан отУЮ ТРО бік бів Те
ХВ З ку у х о як й У
Тв вва Уа те жі вес век віх яБК ТВ бує ту вив хек ві вне ках . іх ЗМО з
Ех С я фета дове що же бики ЖезаМ в овуше ша БЕ лодки хору ну - с
Ве Бе аа ве Щек баг рве Же ТК ее сію бТж ТвВк іа вза ще я го: | 43О
Таро шт ч о фар мо кг Ви сфе ЕХ Ву: Ж, ще ПОМ жо К . т КУ У їх ЕЕ я Ж ЕЕ МУ а Вч БУ тав щі ве м щї щаав оте ях ав ах !
; шо ке в Р «ж седан ск су фут ЕК о ЩО ж КЕ сво вих Ж ЕЕ да ее Сі» із іви тТВК зак бів Ущі нія те вве ве я Уві ву я дет т п о с, кока дк Ж голе зе Ж ска зі да аа бі ЯК ве Біу БЕ ТУуК Баг їжу як Бек ота МА Те У ве М.
СУ ша З х ОК: МСЕ ЖЕ с. се штрих Ж око дек кут ка зе ЕК свекор
ВЕ о жЖек рем обіе Ще ій Те кує Же Се ж Ук а Не й. МЕ
Бак жає сем тю Те З се ЕЕ
Кк Де в се - що, пишних мк кое бує ок Ах пеїща Бюро й зам ук дв ше кої ще как вин Ве Бех ча дар вк ж І 1 ВЕ дух ЕК ск а шу й 7 " ока, з КЕ з з ме Б ЗАВ еле упо ех, сою Ж ку п щи км За пін Я а кру ех ша ча «У біт іж бек їж Зі Бі бі бе БО і ів в А ще й п т 7 Кая ше К
Зі З и «Пет їх ва жі б вро бів Біх ве сб ат Бе Бе" Суж їв
Жов, 5 з ке 58
З ЯМ я
ДІ Бе сіЖ ре Че Біб ее щем вів тт оЖеє Бек тож кто що ше : се ска Ж пд вд их сво. СКК таж Шев Кано Ж оо ТО я со Ся певшсюх о. ВК, ско вк Кк Зо фен Са коза му ке «ах бах ів ТУ Те тн ащов тек іа біз бте Ущі Бех біж ак Ба тв й й БВ ши ща З мА миМо «АХ з н : ши о в ви. жде дод сер шо ше ву п, вихо и ще жк ода
ІБ БЕР Ву АЗОВ Ажр Бек БУЄ ви Ме ев ТУуК каб СІВ МБ аж бе: ви Ух їБе Бій вав те ві У ТУ Тер СБ Ве Те в ТК Б
УББ ж хім ва ІВ УТ ОТ
І БІ БУЄ к хе с соя жк со Жде Я ох сив дао МВ хе а фуд
Те бек Те о ТУК ав ТУ Тк ові ТЯ Бі тве зе ув? Те чаї аг я Ме й ложа мах
ЩІ ЕВ З о : ок с а коша бо Мого дк ре Зб ках со жіні кю дк Ве крах
Щек кіз хек тк руб щік Бе бек Бі ВБе беж бе аа БК дек бер
І ОК 7 Б з
КВК. ЗИ ща : г сх с ме и Ві сек ки Кн я ал Уж жі фоце ЗЕ ково оо : ВО ща КО с у У и по сетвр пса шву ск шодо Кк ЖОВ Од дух у м
ТУк РЕ БР Бі те і ТР ча век тв вен ще БІК Ата зва ТВ 7 Ж Я я є
ЖУК БУК ЯЗ
Фа не Кі ак о дня жан Ку вужа й вок и ххх З з Жук о бурю кот уєю зда жах щег бір ж вія тки Вне еко вів Жаі фев бів ве ВЕ ім БВ ОГу ати ї й ши то ду - пжулниь .
ВЕ т Те
Ко що дя Ох Кк" ффккоу феноовю еко жа деки фу вну Кк, ек рев аг сек жа ті Те ща Бе его ВУ Ве В еВ се ТАК ВВ; я о жів жах жі
ККУ я т а ЕК ї :. сук К ках я с ск: Жах се ек и бек вій: Бош Же бою бак: кю фе ба Од не ТУР ТЕ суб аа Щі вен нів 5 Бре бек еще тне ву ув х зо ин и БЖ які
ТЗ г За ЕХ : пози пехуко офри фда ди при нн З не зак боту ШБКЧх їж фм і ІМ ВТ Ве ак Су Вашу ТНК ТЕ ЕВ сеї МрЕ» КУ т 5 Ка ск. Є кЕ пеіюице и КК Як ен НК НА ЕН хіх ЖЖ КК ув вра ат вке ств жів Кт Кк бу ве ще У вне ве ббе вко о ня Шокуючі дже вою СХ ді ха в да Ж г: ке х У ук веб іув БРО бу5 вро тТвК ювв веж же ее де те ве УСТ же 7 і Се т и КК У : з т та З с яп М зид Б ак ит ми ВЕ «я ох им се Бі Уві та ав мі Баг Мі й вже во бів У дк Не ЯКЖих хх Оу ЩЕ ВК
ТК й МНЕ я Я - п с мазки ку соках жа Бе ж й бл їз ср жом ех юки ії тет зві Без їх Узі бів Уві Кі5 аа АТа кує ТК Ще ие АР х ФУ ЕК, Кох щх Ж не до пз В деки док шкокх жають сбеснх о жов же ж офовас а Ж дю Стр чех сій бТо бів Тук вже Яве Те тує ав ж Уж ек Ж меч ти У що | Ж ха ж зе пута ск жум жах води тки а орди Як ко р ке иа п ЕК хе жукеих їец Мія сів аз ОТО Кен ян бів Ск б тує суб СУ мех Уві ав «ДОК У х т до З шо ж Зк Ж дуг я 8 ле будем пав их дао кое Бе дз й уж ОБ фо: аа ме Ві ек бія віз ве Те б ко ве ж ах с: коря ї зу
ЗВ 35 В хх 7 НН дошок се щи так ФУ кВ жу «Мб дося ВК одуч. хх є хе кеВ доки зве бож щі вка ага Фі Бе Б Ві Кук Ву ев виш РЕЖ Се ВЕ м т ко ще ще ; пий ще ВЕ йо Ж МА 3. ї: с ще шт пе й дбурк розі уко тур БКожк Ор ке, ШЕ ск КІБКвю
НЕ вер Тек рух во щі Узі вк Ве ТеБ ж ж ат еВ Бу ЕН й ІМ дек КХ що Ж ща чвх, ож о ха чия От су У «а ох те ие дже зи аа ЖЕ В
Тут вгОо Бек вав тів аіж Уа) іш ТРОЄ; Же лаяв» В порта
В Ох ЗЕ
З х: Е ке ж ве ж аг 3 Ж два ж ке сх Кк ша ІЗ вав о ащи тек зе БК отв ВР вРО Ма ев де ве ШЕУ Заг Ба аж де є кре ЕЕ
ЗЕ З Я г. 2 з. мк пк тож й з д х лиж своим ТК жах кн ре ву їжкК жег вух Бевз їв отат АВ Бу Зб овго те Вій іа шу ск їх - - КУ т їх
БЕ Зх Я аще щі бе бе су Р о маї меж міх в Аа Се о а нт тує жо я НН м с ук що дю о ок
ТЕ ТЯ су Баг і) ек ву ек о бте бю цех
Ії х Фа : сих
У ща
ЗК в, х як В
ОК КЕ
«ЕХ хо ВЕ. «Же жирна
МКК, де ха ки "Жак Як одну сій оду. скодкух збу ех За вари кла ж тв же Ах віх «ій її бів іер УВІ Бій ек діє єю ін Ме же Бе БК бів В у З. 7 ч 7 т я ей ї 5 їв 5 ївге очі вто біб ее бує вує ВІВ зе бю Бук Те ВБРЖ Бе люр те
ШО Я ЗО
Ох АК ах пошук ОВ що кад прах о шк и ТЕ шк Ж их Я йо Же оду А му ВК
Зее шт нії Тер УЖ: Бех ів АТ БР БіЖ же Се Бе ж ТрРЕОоБеХ м Її з іі ї Ж я МЕМ у Ї їх БІО Зх
ЖЖ: Крук ЯК: їх ж ЗЕ г 5 ро г у ЩІ пе офиЗіх двиту ОО х їх ат а це т ЗК Ів Ба ТМ ЗЕ Те Бі БІВ БО ЕВ леж мій ВО яв пе х дек й Кох. і со 7 щи що 5 їж МУ Ага ББе ій БНБ ек св біз ТК бек дів ек їйк та те» і: ів Кі ай ан ба іже ее Бій а Те віх те Ве еВ Сех й : ЩО я а Ж ЕК З кое Ки ше шою А пове бек жу яки з ся Кок от віз нія ве тег аз тут А Ж фе) еще Те Те бі Вів є т ко, х Кох зх т
ЗК М З дих ка КЕ жінк за я дух ше тов ких 1 пу - мк. Мох о и вх Кк ду
МИ ЯК ЕВ ЖЕ Же С ЖЕ Ж БЖ БЖ ЖЕ ЕН БЕХ ЕЕ БЖ бе КУ СУК ї я йо З Кр 7 7 т з ЕВ т т
МЕ Ж З че сту Ж Ск Ку ду ет жук Жюуш ше г же ко З ша сних ше ж
Щщіж пішж бі бі ек іх ту біж пі бек а тк оба ев Ве БІ храм це 7 Кора є п По сж а 7
Її і З о Я Ж кам дих «Моя ж ки Фара СК ожу Ж жи ИМЯ кою шу с жк о Ж о Кк
Зв Без аа аб іш ів жі Зак фа іж бій ага вія Тв уж ще а М а ЕЕ
Се а авіа Бек і БЕт і Бек ої бак вай Тек Ве Тек Кі ів ' ще а жи : прскк тех ЕМО які коша хм икух ножі, ков. соски по з яв осад жк
ТР отУК Щі су РКО ту бій Бер оче уж ви Бец жів ба тує
ЩІ ВЕК тує СБ БЕ ес ту ДЕ Бе АВ аг вве ер обі ще в -шЗ т ою - «Мою: т т 135 я ЕЕ ех ска Ва з с: уко ско Сх ха кг пе Л.О аа вла я я у дою ох зе ші ТР ОО Бе ТВаК без ав МІ ні Бе ж бі бів Сів ав а ІБ Ка ів АТа ТНК ту тТУуК Су щІіВ ніх зем ака бу Ве бро Тев жне ее
ХОЛ т т З МИ я ЕХ
БЕ що а КАН
КЕ уми В ши Еф са ож ЕК дого «жо и Ж ду око хори, же Су у ТВ; же Бер осів іє ке с ж ях Ну іш ве і В ху. ях ше т ху шЕз з - У з кое» с
КЕ КО жах
Ки дн Фото МЛК у жа УК нету я Кан ук Кі пості ку Кк жу Ук с у іш же ЩІ ж У Я Я с щит ГУ ЯКЕ че і ох ї КУ с г У БЕК
Ж ! З ІК р з МО Ех
ОБ З У як шк евакуатор вна Жде ко Ж, ще сх Як ші Зі ші і ЕК ді Бі і віє че фі Ві щі Б а Ба ша : ! Ж : Я яхті мою ЖЖ ка хх от Ку ко. шо кр покра Хккиж 4 оекх сажа Ук: зак цію сів Бі бен ові ін бе» бу ІК ще у дефови Зв Сех с Ми х сук т пе й: с т хл
М З ЗЕ ЗВ кл е не сля. алу як НН ня ик хо: оку В жу со Фів ВК Кх
ЗІЗ Вів Бе Зі ру БіЖ Бе З ТР У! бек або Зі Ко его ух
ТМ я ОК Уух З БІ я Мо
МО я її тег ав вай туУк Аа ТНК о тугк ТР вів 5Ев ще Уві бух Ов аг вне ж т ШТ я т хни во
З ЖЕ. ДК й фо дк; жк ж Кк же су жа а ще сфе ож ка Ве кое х бо г
БЕ БЕ Р ВУЖ ЗМ Я С КЕ У Ж ОТ Кк УВІ РЕ ВУХ УК
ЗЕ і ЗУ Б аж вза іж вий ек тег УщІ як тр ов ві отже ТКЕВ БЕХ ів пе їВе Сеи і ТК і ще Баг та баг тк реж щіж вро ще Уві бе
ОВ а : чі тки хохвауі й абс ою збе козі що ско: шах ще ж ни сш. Ж ж що ко
ВР Бей Аа Ве ЕР ЖК вух БЕК їВе бек о Біж вію ТНК АЙЗ вія в о в 3 яки о жа ЖЕ лях 55 б кто дом Жах Кн рухам. йо ко пк жк зі дум. уки
ІКОБУХ Бе У Б ер тбюк Ві бух І уч мат Те УДК ее Тер ях С ЯКЕ хо ше сви КК кош сш су Кк «що Ко ха хе "нон КІ сіє ЩО. ки хг
Аза авт щі Дій сво їне ее ді бі нів те вне его Аа Уві сві їі ВЕ Бек ів ве тже бек ве дає ек чаї УВІ тв жд ВО Щек «З я | ях ЗО ха де сні. ска а М в до и з Я я, дує ЖЖ ож ДЕК Я миле дес
Ще ее ве: опію тТвг ож ТВе тує Ще Є а Уйі дам Ні іще БЕ дет ве Тег зу Уа Вар ти же ці бів БР межа ее Сжоа вав ТУ
КУ КОЖ унЯ шу т
ЖЕ ЗНУ З
ТК 0ІЖ сту бек бі БІ БТ У Яее Тв жа ів зіец Уві сів Бее
А ЗО ще я и зви і жа дум и а Фах созуєм Ж дих дб тка ж щіш щіж щі вв жа: Бе руш БІХ іш вт ЕЕ ЗЕ і ее Сх іх хи аж Х
Є :. ж ВЖК. не. ЕК ху Б пф ка: а КЕН НУ аіш аг бів ВВЕ Те Бе бек дев ія ТРе Мет пек те Уві ак ців я «З кА Я КУ юх Кк, тах Б 55 Б аж Ве ТУ УЖ щу ве іш тю УаЗ у МОХ КУ ям ж ТЕ х ше с А де Зх ет т - ХЕ що щих соедию Кр, с жи Ка фо Зжтек ЩО пж Ж сю меду вх з худ ВЕ ж дода ЕК. пескюх. вет Бію ЩІ ТвК їв за тук дів йій Бе Уаі вв Бу вгеоБМе ТЕ
МО УВЕ а
Ск дО с - як 5: м. ж с. о кр, - ж хх я - ЗК
Її ЗБК ага вер ве бек уж жи МР фев теє фе і МЕЖ я ЗК
ХЕ КНУ БОх її ско Тв кт жа вк Ск й г жах ку дела жу щи чу. ви Буш НГ бін ази так аз Уаі бек теє був Ве Те его те БІВ тую 7 ЧЕ ЮХ х що 7 ми т «В 55 КО сою Коаоак пулями КЯ дою Ву сем жі вк зеЖішо ох я ках оо о
Тв Же тт тТук ав Те ТкЕ БУ ія су тн Баш ма тБе ж? Я 5 що ща що ваг Віа Бек Те ру Щі Бк зе жд! ве че кв Бій ве Бек Бак у ау ЕЕ Ех Жх ої ск ЖЕ те Зах с жу ду. кам Бек М дії БЖ ЖЕ рокуж вх
КЕ ЗЕ Мпговве маш ВБАУ ПР ода а ВМ У КОЖ М Ух МОЮ ВЕ
ЗО Ж кін
Ж МАМ. БУ ес орд ОК: Шрі У сві ве ук кху деко о р оку о жох
Тек вве вч і Вга УДІ ТвВтоеа! За» тка вав Шев сіб ків би Те
Ж За У де ях КО БЕЗ
Хаг обі мії Ні Те збе бе аа УВУ Кей бю дек бег Єїж БМ теє
Б ща Р
З, у тах ї г, Кошти сту дя кори зиія ХЕ ані с войжї що с с. с ж ек г. ді его фен бек ви що жі те жд бю ку бе ек фвм бі ЗВТ Бій
Б пні пами ЕХ ау Кк фа се Ж НЯоже, дис Ка му пи. КК СИ ИчТИХ С шижу.
Те ТУ ів ух вжи щі аж БОх Бек Бе ще ай Ве бе Ж а чи 73 ож
Фолжо в вг уф ске Я уа жінки фору Ж фо ша в хі ре ках жах о дтіках вул Жах іже і жі бів Бех же его Єюа а Бех Те М'я ТВКОбюх Бра Бех та 4 ЗХ кт ва ів ге пів іа аїБ іт Бі Ве зве Уві Ббе і БЕ ве
ЕВ. сек " Ук
ТЕ ЩО Тв те ев БУ Бук А Тк Сее Ме жів Беє а ЖВе пее ств ві твк «КТ жук я «іму 87О ТЕ КО їн в сш М ак не Жами вад шо та см ЩЕ шк ке тоди. Ва шу
ЖЖ ВІ МІ ЖК леж: ве ВЕ із кв ча т Уа ім ВЕЖ де суще зе Кор З Тек хх а М ЩЕ скотина що Кк вах Кк шт спі Оу Коша п гоожети пк,
КВ Отже ЖЖ: Яр пі Уа бів а нів дей ЖїВ Бу ВЕ фе ву Ву ямах их, ил кі Кх. г сук. Ен "ах с : ти. п ге " її с вні вд божі бів тже Афе щек ВК тую ак АТ же! фер оз! се тТвкОМаї ан іже вів вем ТУ «ж ве кія сів мух ТМКОХІВ Бек оби ЖК ОБУ
В 55 В бе я пу. соуси в: руч тру Ву, зб в да ра отже У щІЖ сі ре ак ів Кр вя а Тжк Тв вав ше вра ух В ЖЕ
А. 7 2 м КК т ох ху з ах о б сх яки Мо ХВО кодує зт Сх хе «ох а х а ск «ІВ ве отТнК бух жа БЕ УВА Зак сем тез кує бе УВІ у шТЄ Рв
Ту вВке звк вав їїе їз Узі щіб те 51 5ебовхв Тр тв ВЕУ СТВ
З я що ее же Те КУЄ ТВ ТИ вх БФ Уа Бе аж же же лу дже жна
І во ще5
ЗУ хо о си ТА деки Ж жуйку: фбяю Деощ Жук кри миши скит аву в Еоскех. Де хі по. пе кВ МІ БЕ БК Ж ЕЕ щі ВЕЖ МЕЖ Б ЖІ фо а ВЯ Тв е
Ку х г ее с зу щу ЗИ Зх Б сука «ж Шу вки бує же г. З Сон
Те бів кжх его дно Хе же Щек Бе щіж ве «У та жи коки их ух ких ке ку ух х ще з и вх ІК щік і» его бів шу іх Р вег ов ія вів Ат жк
АХ х Та 5
В іш ші іх Ех іх ак ші ах р стеж КакІх КУ. о жулеи Ж мо шу Бо шу ту я Б О ЕЕ. ЖН Бр у аж щі ЗК БЕЖ шажЖ Ж БЕЖ
КО Жх 36
Же овдшк В «а ЖИ каже ВВ «АЖ ХНН ВНВ
КЕ к «НМ В ей пе моя я о. «ака дж шо ЖжУмик Жак койсй хе бжку б хх: ЖК Же КЕ
Оу Б1у ту біу его чаї ніх век РКО Бен бїю Ре цею «іЖж еко бі 1 х іо ії5 : нн и в НН сало жк хни вах дух ага аг ас пі его Вів вге Бі Біж іх Ту ще -- 8 жи ЗЕ « ЕЕ о ех
АЛ О КУ
«АК «ей ХиМаюна я хх що сх си жи ка: ше фіу фе же ся ж м кі -ІЖ БІВ Ре бі яек бів бів бі ЗР Бегоама бій АЧЯ АР УВІ У ї 5 з їх вка Фі щіж бів щі бік як жа век Кеш Щек о вем отже бек біж сту п з ї ох І ке Х ткож з Ко чо на За хе ож хе ек яки актрис жжі дек ців шт бів ще ді Біу Сі іх Як щі я З ей» ІВ «ам ВЩ «ії: ХВ Вна «Я ОБ - щік іх біу БіУ его Фі біу іє бі бек ак: сію іа аго Уві Уві ї 5 1 Кв жк Я Згї біютю Х кзхі ше З вда Стах буре я ВВ ке см ше ші вер КІ ще ван Бін а! БкОо бен сове ія Лек зе іє ЗУ бі БіжЖ шіжЖ бек і 7 м 7 хе 7 ЗЕ 7 З
М ЖО.й «ЖАХ ва се Ж ж. Жах щу бік бір ех «ие їх сеї» 5 «ії» химевна «Ж Т1Х тве ТУ діа мех ях «ке їх «сеї» ЇВ
МК сухо «ЖЕ ЗХ
ЗЕ г о Жожж фр жух ох Кк па ЖЖ чжвках сх ких з се Фк ага лів аг его Тек о йаа ва Те АЇа ївк тТув тек Та дев Щек х - ке х Як їх 5 ЇВ 15 жи сек ЖК щі же БУ
З
«І «иа ВЖЕ хек ХИиМеЕНаХ «щ КХ ушош.одх че сів ри з ехих їбажає гжтіях пу ствах соц Их ее рух вів бі за Бе бі ав бе о ТуБ фа бев ТРО вне дЗУ тек ї х І «ее Ж «ет ВЕЖ ее миМешна «Не ТЕ ве вія Тр ожев Зак ї х хат ж ее 5 «Бі 5 «ВО 5 я ж щи КЕ З Х З ї т дж:
Х 5 В ї5 «вії В
Б; о Тев біз твор одек ЕР Тек ВЕ Ту ї - «ев 3 «і 3 «Кі Хе
Як ЗУ
Же Кох зок ЖК хе шо М фа Ка ки дадя хюнамо нс Ж ко кока щІЖ Зек бак ТР бі й1і8 УВІ Те ТВ Бек акй Тег ВІВ дев и З їх
«кі ЩЕ «Вії» Хусереа «іх ЗВ
Біт ТВР вки їж ага ів вка
З 5 «ее 35 «ії З и дівку июу «а» ХИЕВОВ «ОБ
Зі ів те Тек бек кв м: Же Уві с Бо ! «М В шк
С. ле з во «Ж» Хиверна; з«ежу ках Мк КЕ ку. щх г а«ев тТже аг бів НЕ
ХМ х «в 1 «Б» Хивеина «а 33 пихх та я вух щі че т Кт 3 їхучк 3: з жхеюе Ку х и КЕ «а Ж чи те ів вала Зп оБІіш ЗР ЗЕ б м ту іа ТУК ів б яр МН Б
Х 5 я їх
Фу «ій. вх
ХМ. жар «ее ВК «ка ХИиВВОна
Бе тТук во Тек вве УЗ! сеи а тує ї Зх ох хи «їв 45 «оз ВВ де 0 рах рнизх «Б ях зго аАТа бЗег їууз Бек ві бек Те бег ва Тугє хек Те Ті нів
«ЕМ КВ «У «иа. ВЕ «Їх живи
Тут жа Жек тує вен сів ще «їі З дм дкккклих я «ФЕЇ» жЖиБевня ів вішж ее В Бі Бе ВР ТБ ОТВЕ «й жиму
Ми ЕК «Ме
З У ее єї
КУ « «ії їб «ай ВИТ «Ве я ся ще Феажю КК зо, ек соди г Е хек» я С х г С ож о їі хі8 тт; сіУ а бі зЗег тег ва тут Мі Зее щі зів 16 ет ї 5 Ії ї5 «Ве ЗВ з жа «ів Бе «їх КТ
ЯК я КИ «МАЯ» ЖиИМЕНУ «НЕ яв «о хх 7 х хх х 7 а З «Її «а» РЕТ
Ж З же тх я 0 ЖЕНЯ «На Ол споскхо шою жи фоажрю ж донос ухажя Ж о дасх ж ака їв ак бів ав їі вав бак тТуУук Боб дз «і Й
«Бі ВЕЖ «жа живе а "Кох Кому ж хіх. дя ТЕ з ЖЖ дія дії Те ее зву Та Аво
Ж х
КУ ТЕ» З їх «Їх кимемЗНа «ню її вів нія їже Тук бее ТНК бує Тук тег «ЩЕ З «В КН «ов ВЖЕ я т п'ю ги «ЖК ВИВИХ «НУ» ЗУ ях с ноті « з ТЕ ситу, Ж жо свт м Кі ку АЙ жов як КЛ ізн жі ів се ві БІ хек іт Аза Бім За КЕж Бу вро цію Бак 4 Кк Зі 7 7 що ї У З ЖК сек Ма ж жа Бек Се беж ВЕ ат ів Бе ТАК БЕ тТве ве Те «КЖУХ "Ян и до я КУ се ї Ох 7 з УЖЕ Кт т ск: От ї "і -
ЕЕ ях 33; ї-же їв мі тв Фа ВЕ сі ува бу» ці щЩій Їж ве а Тер мих
ЖЖ МЕЖ ом Кг ху щ МЕ дек КК хі ЛК щі Ж т СОН а со 5
МКМ и як о нед. хх. уки ДК кжко, с оо пк СІК. ск. тк Я о, я 3. пі тує РН аж ге ай ЗК біу Тек ВК ТВР Тек їз бі зв РНе
ЯМ ж ЖЕ тю жахи ам з ж КОЖ ою вка жо з ху дру ЕМ амо дя М же пвх
Пій обіу вагу жі Тв отзе тТВК АТ аз мух Зекотвг щег тТвгбоаів тТее та ух що
МЕЖ іш вве щег зе Ба ака ве Щі дев ТВг ОатЖ а тує тУк Сех шо фодтуюі осі дея я духо а Ву ся ж ДОЮ з дам Ко сжяко деку Ж хів гу Се фам вк бів У Жук тує Уві Зеє ав ЖЕ тк БЕ 1
ОК ЗЕ и жк ще їо5 МЕ ку мкм Жук чу - пошу Ми пр. сЖенкуп о КМ шого ЯКІ са фе ж
Фр тв тв БК не УщУ же ек ата его тек ев ту Веб ощек У й ща КМ Зх Ж ях ка жук пу о т «их, ее Кошика з то є со я М, т, и "ЯК Ка
БЕ Ве вже ЇВ ВО БЕК Бер осух ее тн веє є єр Бе віх кла
Ії її5 ії меу ші Суб ве) ві вух йо ТуК Бе кто Фі еко чаї же сві бек
Її що їх | ав чу я пов у ех З Со жу СВ ме сукном КМ зт 2 че ке шо з їв авт Звг сі» ав іев те ее бі» Мі нів тк вне ве; ав В билин мн ща їі о ІТ се. кож сх 7 Фоодожг Ж код, я хх до а зм КО у хе А меди зів вів звг чек Щі бен їг его ів бБвг о Же Уві Уві ВР оУАаУ вка
КЕ за З
І щі 190 хосаше жамах о фу ж жів ха сит ших Ж вх хо би жодву здсж віді В Ж сив
Зак Бек его ів бі їВе вів ївг Тек 16 Се аж У вий Мі фу
І 7 си " 7 ТУ / ї УК 2
Бе аг ах ТР фу УЖ дО ж СУ ЖІ! біш БР БУ Бве СУБ а
ЗЕ ! кое: З С аа ЩІ ге оса с шк тую хуя шле М ста Дуже ТЕ тих. Ж кох З 5 яю о ких іже ТНе Бі ТВг ЄМ реє бе бує Бгто Аза Бе бів БМ сец шіУ Те ванн й хата 7 - 7 реж 7 жа 225 У я ЗО
Вт баг Ухі Ре іс бне вро Бра із Вга бує ар о їБР ви меж в 24 а 25 22. сах бно вру пика ха с дтаде илха ХЕ т вах дошмуя. жи ру вії ех
Заг ага Тег о врго бів вії ТВ ЄУж та Узі УББ! ще У! Бек ні бів я ване 7 зе 7 ЗК
З ВУХ ж ев кго бін Уа! фуУє Бе аа Тео о Тук Уві аз ів і Зів Ві іх к БЯ я рт я Є У у
ЯЗ Ка Ж ва Вів ж ТК ж го ВР ів БІ БІВ ТУК ази бБег Те тує Ага
А еВ м кО 235 З ки злу медок Х х пуб ж дя вушок дя вок сЖереюх 2 окуха же воза чаї Уа! его УЗІ Бен те УЖ! ве Ні бів аба тк; ем Ахи Ту ух
Яся ту ЕМ Щек Кн
ЕХ Ж ЖЕ Зк бік ТК Був Суб Кт Узі Зег ав ех віз іши Бго вів БР Щі ТВ аа З 135 іуз їБт її Зег оку Бій ух бі їв вт ага бі: ве бі Уві тек со, ба й о
ЗБЕ 45 з
Тве беу вес Без бек вка а біз сви нг оф ве бів У! Щеб вен ж ТЕЖ ЖК 355 ОК ЗБ «еЕре» гхвох вої и с же ре щКфеда сбиже беру. бут дн З «во ву жука же
ТЕ Суз вжм Ж! ще їі ВВЕ Тут Бе; зви щі ї38 вів Уа бів те о, ох г
ЗУ 5 ЗВО
УЖ соусу фан шт ех ку ета жоклжж ен хе ско фах. ех двух лчах 7 іш Бек йахи тк Фів КРБ Сів джй вай тую вже Те тВК Бе га тва
ККУ сек Ж ав оч
З З щО ен Ер яег Ар сіу ет БВе Бе сер тує ет їж ем о їВе Ві дев ях я чІх іт5 Бек аку тт сі Бі бі аж чі вве Заг сСух кого ДЕ Меї нів зом, кож Є жу
Я 385 3
Я "З сах ВК ин Ж І во сн КВ я х я : хо ях
Ім Ат бе Бі а5АаА Ні Тк те бій їв Бек веб Бег Бе Бек Бе ях З я «є поши
БТ ех
Ж жа в ха ак щі «ее ВТ
І Ку «А» кнМевна «ВН ЛІ а ство щї де фе зн муку дм, пох КК пу хомут ЩО. жу би Я и ах тів ій меж те Бій ак Око ек ек Бе ек дій бек Фе іх х х Б ї5 ке сук ел, зсВАЛя св М ж СК о. с тех Кк я ся ту Я сю, чи з: "аж
ЗВ о ачЕ Уві ТВК бів ТВК Сух зго зза дегб ів Бк ків аа ча тує ви а Те ТУ бів Бі бує Бета БЖ беж вів БУЄ фе ваг ев же їх КЗ . о Ж Ка А Ге
БОЮ я
Тут й Твк ве ве Се т ве оту жі ВС) баг ага РЕ ек БТ» в ЗУ ща скско. о жо хо шк т ї У зе КЕ до скін. аку. кю шо Кк
Зате ім хаб цію ве від ее тв зею о ТвР ожтв Бесб о яек ему ія ве з : ме їе й ща я ке В
ЗК у с жодкумо ФМ юн их суху гу: шткхав б а т о ж ух око ЖЕ УКгз жає піз ав вве дід не Тек ТУб се ев бій нів аж жек Ре ре тв де ки ше м шко Ем одно ше жд , на нн У и НН НН НН
МЕ ія БЖ ТАК Б ем М б Су овиБ ТАЄ а дій Бій ке що з о в й т ОК
ЩЕ ККУ я
Заг ча Впе бі збе БеБ бер бек а БТ; Зв вне був ее бю Тве ер хх обкл ух Ох
ФК. Усе хх чо сток Меч - сіжхже тва, ую ; Я щ- Ж ж та заг узі УЗ Сже5 і) бен аа ам вне Ту Бе ага ОТ АТ ж ху жия жук т бо, хх пе що ї35 НЕ
Не ККЗ чок іі жі жк ке щ х За ща Ж уза бах жав бу Б іх
УР Б КОРУ ЖЕ АВ а ВІ З БІЙ ЗВГ жі а БК БЕ БО
АК й дух тую ве и я пд. ях 5 З ча лк США зх З КВ дек ЖК «УМХ. Комо Ок са ЖУК пови ТЕ амимо Ока жах вк жа тТВК ОВ ів Ір они БУш ва Бе Ве От ЕК Бе пек ее ка " те ше
АЕКХ М их
Ме фе ТВ рев обек бух вій ва тує Бін Те ВО Бе УВІ теє ДІВ ех 7 се ща г хх Вон х штюк Ва п кл «-ї ше ге твх аку х ух З фа: в а НА НН НК
СБ м жа Хе Мія бий щі вве ак в Беа бі Ве г еє щее ВН лих худшУтх хх У
АХ ПЕ ак ва аг Фі Зі сУв хи стю 1 ЕХ
З
ЗК
«ща а
КЕ. Зх «Ка Я «ває ВЕ «іх хна «Не» За
З я сш їж ка в Фоачек ке а Жримкж вах З їх а вх бртух ти КБ:
Зі ві бів ів осів бій Зег обі Бе Уві б; а? ве вка 5 Їж КМУ я ЖК шо сжошедх сжеухущияї СЛР у Ж мур ше вий с само бас о з дщаз деек ахмю Ж їує її вх Тер ків жів бій бек ні Щі ву Суб Б ФЛ тер хів
С 5 - ово сті пох я хо фен де ки и Ку клю кс зо о жах ЗЗбх ох іжЖ зві жів аа Бгто АВ Бек біж ту ТНК о вжр Тек аа яі1б аа Бе
З я 7 КЗ У х ? Я
І МЕ З ЯН х Я х. 5у Ж сх Же їх дво Ех де У ФУ шк дух яки би ж Коко ад іт Бі фе із ТНК ів тик УЗ 55 ре ще же тн тТве вів Те я ЯКЕ у ЩО ку с. хх у : Уха яка КЕ хи сваха г аж блуд ке Зал зжлюевю ких ід:
Мес щі бу Тек бек ее Те оЗег бів ар ем вій Уві тТук тег Су в зіяхе ков божих й ажто Ку алі у. Ж и бохштухо Ж ок ХЖг ноги отож к я сек ЮК кю? аій ага ага аю его туг БіУ Бе аа Те тер обтк біз бів Є Тв 1 ме в, чн и: о і у: и а ИН и и НН ИН
Бже о тТве Ущі би бек біж фі бів бу еко єію ж ту бів ве ду чех ! їз зах
Б КМ си них ще ши Ж. шле ши й ж ко ших фашизм ок озек свахи Ка сі Бі бі ак ді бі біб бів Вес йев іє мі ев їв дів їве
Ух з Я Я і УЖЕ
З ЯкКЯ За - Фо ки дм духа ож ах В Ме я Ух я ах КК ау КН о Не
БР Був Бе цез іже за: РРО віз біу зо аг Зі ТВе Ме Тнг оСух 145 5 55 М ; У деко Х ха ау вуж іхіх ви как Беж З о озюх мусу» ках фе й соду вує ДІБ БаР Би бек Уві ТР Ав й жа: лішж те Те Бі бів ж я Що Й зро шх зон х х че т вн в НН НИ НК я теку сов Ху жу жує чо вт БІ ів Бе ВО У СБ сец о фем Тжб ТУЄ вії ЗК Дам ДКЗ ди 7 «шу - я У У з Би
М АЖ Щ5
ТЕ ха см жах, чо ох, хм а Сткех М Как ж Жах о т Сам я Ж ді
Аїв ші Уві КО ав як Ба те Біт ек обі ТУк бію Тк дев РК жах ВО як чек вени СМ свй зей й вожео кх су хе ща шк з. м ух ув їве Бе тТВг жів твг отв бве бів із щі дор ев віз Уа Тек ре аа У Е же 7
Ка яв КЗ йтжажи МЕ ЗК соя. бас Кф Кажу жує дл жах бом ж Ж ооижууш иужв ко сг
СУ Ів БІВ А ТУ Те Бек бро реч; ТМе Бін бі Сує Зх ТНК зе ща КВ «ях Я ик што. щомам тв у вія де ки в жі маша ех ау ва вх пе ух жим, вві біз ів ато бів бік у 1У Зк о біє Бі і бі ек бів вто
Мо " 7 7 Ж 7 7 7 т дір 35, кв: беж Фазк ть жк ке ЖК - ще Б ЕК З з фа кх са же
Си щі КБ ТО Бе ів ік БЕЖ бі БЖ ВЖУ БЖ БР БЖ ВРУ БК - «ж сараю, й 7 " сфтах т я МЕ я кож а ки ЖЖ Жеожу ва ша жук З т : чі же ко занех вух ік щі бі щі Баг офі ву В бів Бій Бех ТВКОБівй Хек ве ет х я - пе т т т У уд дах. Ж о джех зх ух се пис шах прю люкс може тяж й ее ша «5 баків: Баг віз Баг Уа! сіб зв вга Уві Тве їі ЗР СУує ака віх
МК ау що пк хе уя а и жаую окех Мощшк поді жодку тезу: сбраурежо Ех ВУ бозеш шах ах авг пів Бі Кі Ай Бе Тек БВ аа ТР ОТЖжР ФУ і БУ ВК БУ шо З я жк я жк ще Б З же х ВК ках ох оду. Ж оужх око ех кою ОК У оку я. ож люк Ех їз5 Віз в іже ага фо ЕТв Тже аа ВР аа дяй зве Фі Ве ТУ ще ях сх х лик сжклх У
Кк 5 ЗА яко пс Укож соми ди дю м ам жу. до ка Ки зе шк о жк хх
УВІ БгОо Заг аг реа Бк ФфтУ Бек Бе Бає Бу Те бів бе ТК бе п з ях 7 БУ
За 145 я «жі КК іх жду дулю во дих хи ших й «ха ен що
Тв жі Бек бег іви бів Бго бів о Ве Бі тет о Туг Ту Сук ви 355 ЗЕ а лк Кох кех мок ех сс ч де СХУХ Ку вдо З пд зх - Ж Ен ців нія яп бег ВН БкО ТБ Не бі 1 ші ТР фея ів єї Хі
ЕЕ КК ЕК зв аг Ве ті вів вів Без ше Уві МБ іє БИХЖ Ж рес Яке де не К свя же СВ ще З а я зів БІВ ев бух бетг бі ЇЗвВе Аїх бат отв Уві Ск ер бен вам ай я Я 35 пік Жов УФ ас ясВк: і Ко ж око я теку є цих хх г дося З : дух вне Тек віч; ака із вів сте та бій тв іш Уві За ява віз Бе я хсЕж ! с
Я С а
ЖК жає ки йду до кю ж чи с ек Зк в ка ши щі бек бі ва бек бій бів баг жа! Тк обтш 15 ар бог цу аа 435 як 445
ВК Ве Ту БК Бе Заг Щеє ТНК фер о тТвк оіжу ЗвК ої ха вів Б5о Тк
Б ах що
С се БЕХ ато й ха ВЕЖ уся тм их т ще Фамбоде мив дохо Мом зів бу Мі5 вух У Тег ТВ ку; бів УВІ тк ві5 ів біт бе же ек ве У! вк орех бек бБВЕ вва зе бі Сів Су5
КЕ я КТ -
Бе «мк «а ЕТ
ОК МЖ. дииковкіхоня а . ї «ей» ХиМевНа. ех Заг вки соті бовує Ук; вже фер ж Х ке жук їі Во і ві Я їі Же «ів бі і» ші Зак діб фіУ Бі ту Бек огу ВО ев У Б то в х їй І не нки хх шеТЕ. кон вки ж гуже» вх ст шаг ев: же се їза жав єв
Заг вів бі бі Бі БіУ бер ТУ БіУ Бі БІ БЕК Б Їж Бі бу у
КЕ 5 Ко аг щі бі ам же
Ск з чем БТ ее жу нах я» ЗЕ ци ср жо ес в мазку век аме бій віз га Уж! Уві вх іх
Х КЗ
«М У сення сх
УЗ ВУХ
«їж» Жееерна шої ук о фан льох па Ж и жщішу ох сус ча дурну. КТ шк фаху фах дою ОК колу ча! нів вах ве пев бі ве ве бі Бра Біу вга бек Ага ші бек п хх т х р; й що т чи 1 5 18 ї5 внЕ веО хе ЗВ
Ще ее же «кла БЕТ
М сфанекуч мих «ії» Жимерна
Я
ЕМ
«ай» Ж ж Діви т «ЕЕ» ший «Же Б га шжжна КБ, АВ
УК що сжімає ди ще жк ххх УК ху «же Ж й Ха ж жі НОККК ОТ ххх й же ск жо жо око ухю З Мох ех ЖЕу смоую ба Фокс Ук пе фе жк г осзг:
Ба е Тая віз аа щі Єві йхп єї» Хоав Хаз Жав Жав ад і фею Бе ве обер тек бек єру
ЖЕ
МТМ Б
«аа З «ей Б «Бій ВАТ «ех яМеецне
ОК. т «Не ЗЕ
З шо гу шик гої ша же ке Ж ше о Фуко ої да СЖоею им ЖИ аа бів ів аг жі УБІ АБ БЕЖ МЕ вгбз во его сем ту! Бе ІУ
Я с ка хтк ЖК. са «жі ВВ «аа» хи вев ів бі вової бек бів з І СУ
ШТ 2-х я Це Е-Я Х
ЛКК ср «ие ЕТ «СЕТ, дих ка куч ай «Б» Жимаена «Не Я - - в Не ту содков МКЯ, сим. и ох похеко кове Бр ж Я ще Ек щіа їзе бій ев за! бій хек сію РРО бів цер вує Був БО БЮ 1 З 1 15
КЕ І: ЕК я З 7 хх 2 7 ха о Ка за с ох сою бах в КО озоєі кВ аж ок З да З кекс Ко вно пс аж зує «г Ж? ніх ТЕ жа! вуз бій АТ БР бік зує Сея свв бу Ткр МВ 35 во Я бів Тер хів ва Те Бін твк оєїв ЄВ бу Ва ТЕг іш дер аа вне : с СН пФожджеки ЖУрую М о Хк Штук одні Кн Жак ях чи ші зекока їіжв сію вк Ба За вва Беє фев бів їйг бек із бе" Твг ові ТУ хе х - ку хе со
Що я Як ЕВ дет шко СУ м дод Фоатх 4 шує доахах о влмну ж см ше Зо же ха декор
Бен Бій бів аж" ав ме у ат іш ар їв іа тн БЕ пе се 5 ак 7 зу хе док п чав що Ох - се: Ки СЖжту Уж Я сх т ку. Уч у віз нія Ртю Туг азр тує аж Уа! без ар отже тТто РУ бів ою1тю ТЕ хе З шж ств ча Жду ле фах ск ках тю ОВ. жк о аю ев жі тВе жа! Зк бег бік іє Бі біж бек бі бі» біу ту Зерв зу в дещо ве Ваг дує верх фас Жінку ов ау жу бе кодах фо де щІЖ ЩіуУ БІК бів Ще БІ бі БІ Біт вк бе ТВР щі зе: твК вів "чай й й по 7 вав
З ВІ ЖК ге оскеку фею хх що де Кк одчю и ф Ж хе ж луги б ба жк ких Я ех КС ко жує ек БРе ій БК Бе ЗУ УВІ ее ев Зх бів Аа АТ ЖВе КТ 145 М ї55 що сю що чкке Ж ік Мах і сек уві ек Тве За дев ТУ ет ТукК Бів Щі пек ге віз баг ос Бек Уві вт те ве вот зе Бе З БІК су ака Аз Зег іже Жег уві тв 155
ЖЕК У; св с се оту слот. ГУ мо Ко ка сте ще хх вк БЖ ж ас ви Уж Ббече З ОО ее КО їв Ж Ж їев тує Вів зів в ВК піЖж щік во БР БУ Бе БВ т
К тк ях о у те. дбкаує Кат свезв Я о їбахех ж оЗу жа Бах Ж щі НВ щу КЕ чаї шек тТУК вм жін ек щі бі ВГ аа гу вве щег у ї;
ЩЕ шек тую їв у ха аг
ЇВ ка Ка з : же Те іва вий Хі Між веж Уа! 1 біт: б'ю дев
Бек дію тек Аве ее Тв Бе вжи КІ БЖ вРО в я
Ше її / зах КЕ
ФО за ЕЕ тк с чай перхю вх хх вах їа Жвеотев Жее беж Ів Бі вав ой Є Жфбае вка ТБ ТВе ВВ вів аїа те Тук Тує бух Бі» нію бег ага ще М Ок ів ата те т» УГТ су я зав ха з се г кт се яки в жк ді Се йіжЖж ТК о бже бен бів Хі вже
ЕЖ в У муз
КОКО
«ей «ее «ав ВТ «хіх жЖиМеоНна ско хх
Ми Я і а раї ж ту Фо їх
В КЗ З З У 5 В гу ух і щі У ЯК Б с Ж зх ХЕ З пів щі Фін ів вух ів ве пі ве Фіу вве УВІ дія его те ї КУ 15 ї5
Кк ІЗ лм ї х ее «ку и якою беж Же ві сек ін Офне Бек фев ВЕ бе ЖЕ
Бек ібн жен хів Те СУ ТР ові бек о біж Ре бек ев їв ща оту п Шо Б 7 п ж
КНУ 5 З ; : шк ку суку
БУ рок «мохи т г ше ха Желе, п а Ек їз З вхЕ її х В з Ех жи
ФУ У! Бек їтр УВІ Абу ів вт Бго віх Бех сСух меш Тв ТУ м
Й 5 Я Я те З с Зі Баг ЗКг вжи тек Мія дат щ а га Ех в
ФіЖ ів хів Ттв бі дер бію бек Твг о деп тук Мія Зеб Аїа фе пт тіж ЖТв хів Та ОБ Не
ТВ 35 І
Я - їж ар бек ба а жк Фор і ел БтЕе Ех
Бек АгО ж бек Бі бек БЕ йщр аа его УК Заг обі Жаі БМ Еш ше Що Е І т5 ЩІ ща БД їх ї тк . г. хо. г. х с с шаки У. Кк св вс тве від тв тн рою КУ Ід
МБ сво Ажи ЖЕК о Бею Бій ТВ ар аеро тВг йіа ТР оту ТУ сх
Щ НУ а 5
У я хх шох сені ска сх року дже Же Же ві ве бек Журех Же
МуУФ БТ Хі. Тк їне о Уаі заЇ ар ав Туг ТУє їв ше Тук їтв
Шо т «кшщих тра ЛЕ
ЗЕ За З та х за ге - я цю тла їм ке жі ще жк я бі бів 3 тТве ав фаі ТВК Уві бак бек бі 15 БОКУ Заг оЯТу й с / с. я й гу, КЯ -
Її ї25 в ж Ж х до - - и ї СЕ ТЯ х Зі дів ші сте ак оБіє те зе ів бог ве її
ФіК бію ів Зег осіб бів бо біж бек о біж бу Фу Бі бБег яв Св я ве р - поки З 5
М Мах в вк г - в, я ха м ТЕ. сек з. - ОО Ж сх Код У. сх; з ях жо селі ій З см «їв Мет ТБ» Фів Зає Веб вія бек їжи Бев від бек та У і ве ши у «7 сія Усю ши с. ще одрнех ж о Ж шк вах Фоукахо ско Ж жука Ех «ві те ЕР же се ее ТВ ее БИ в Ті ва Зк ЖК ве й т Ки чЕсЖЕЕ 7 Е «у зу, лу. хз : ес ех ропи. пз Жим Ж ашо Ходак аз ШУМ ух ЩО тка тУк вій Бій же бів іж бе зе ба кі ке бе Її Тек ді
М | КЕ : МК
Фе нок. Ж ек г ода вх ох. У ях ду ої ро бу. бу о квт ові Тр шій Тк баб бен Ух Ті вки чего оїва БІВ Хек 015 вжо ще е ит, дім х Кк. Й 3 І Ка тр на т к «ЛЕ : Й т т КК " БСК и еВ ЖЖ ЧИ
Бі Сук ців Те реє бр б 35 5
ІК м КУ Ж Б КОВаА яК К : "вх - хм Я сок ка же од коди ія ока а у ки Жди Ба ех ано тругх ков ку ів Уа щі сен бен г ГЕ МЕЖ БІ БЕ ча і веб у Бу
У шо Б жк
З Ш В Кк шах Я кі Жоусеь та пу утрки Кв жо Жах ех ХК тії іч Ух лав СКЕує кох
Же іо Ак ва яек Кук Я мів же бі ке ОВК Б ер М Ух с " по ва.
Ж шо ЗУ т затую хош с сю . ЗАТВ СКК дока а сш кт ку я ву жо св с аа меє ко тТгр Уж пре бів А1в Бебі куб ту ба бів тт жа! роя : Б Я ге к т пр ям" Ким КЯЖ ке. Ух еко ем ЖИ Ж му Ж умо ТИ "Ж ще 7 вх
М РО Же вер ВК же ТУ дей дже ТУ ід те ТУ тус Ві й
З ВЕ даже РИ соку ж сад вуйхаю ск Же Зфодуют сбффіхею ож дек зу бобах Ж пошео сж дек ЯКУ ег Ма вуж БІЖ вт Ба ТВе Її Бег ве лав Б За Б ДЯ ТН па т й що сам ска ду: Ж фею. фа ЗБуч, пах дошк їж ше Ко хм а ве еле сви тУуг ів: щі век хлй бак сви ага аа БР аа ТНК ав Уві Ту залою сойки п «Аа ЛК сок хм ТУ: Вк дуже Дод Кат и 2. спро - тую Сух Уді ага ніж ТУ я о кНе шу аж чек Тек ці ее тк; ВВЕ зе зах мас
Ж станах жах же вки кож кі жах орі за жом цих лока Мод. дід туге те осі ів ові жВК Бо Уві тТнЕ ші Зак ве кое ї35 Мах
Как А
Кк ВЕТ.. «Я химезня
ЖОлМЕ Ж ха 58 тТНКОжУК ків ех ав х х «ай» Я чел КВ «НКЮ Са
Бе Кі аг Зве гев тТУЄ ав аа бує ВІВ Ме туК Жук лів аж Щек
А зу 18 35 с Ж жориди с Кк ві ух ЩЕ «ех 5 чиїй ВЕК
КВ Ж МИНА
ОВ 0 АК МКНВ. чн ще кими АВ ке ха ми зує ут Од сагаєже ше о роде ніз ші абе вве оту дол Щек отже щаі Беєб терор віта отже «я ЖУ ке СВК «ЖЕЇ» хиМенВ сів чаї ат ешоваї сів же і віж Біж іа жВ цу БЕ кое 4 шк т т я У «КН й ї х КЗ) Її бат іев го ев бек св вів ві Бек вів Бе тнє рве Бекон ка «М Ж ЗО
Хвахаи Вау Удар. Ор сне в хо Ж УК яри кож шк ВОК. Метр шиї га ме бат тва Я! а бій ій во ші бух ее ви бів тер жа с житах КВ шозач бю Ковані Стах ж а СК Зако Ж ко УНК СК
Зіх ага ів ве шк т ТвВе аЗО пі іє ТВе Те ав ТУук АВ аа
БУВ Ж ї- : вт та У іє ага Ре тк їіЄ бек аг ве ах г фе аа ТК іо т їй що іже тже сем обі Ме ваш бвт івм зе ТЕ Бі: ве зве Та МА тує док ша Кан ша. ня Я соку иую. уджахо Мшгам сб хе доти бюро ниж ЖК дк
Ту Кущ Те ТР о бгсо Те бр; ТР бек Те Ту веб оте тТев ле те х Ех 7 ук
ЩО ще о
Ук «ке с от сих м хи Ко бі ТвК ав Уві тТве а Ве Зае ії ЗЕ вух З кВ «о» З «їй ВЕЖ
УТ КЕ
«Не Й доме хх жк Же ЖИ ду шо юя
КИ | їх же ОХ «й у «кій» Вт «ехо «Ка Я
З ЗУ с «хх схо жххкхє тка жк п ож Жде жк ха фак ЩІК хх
УВІ 16 вза во вхо ек бію біу ТР Од ТЖже АБИ 1 яв вве в й в З В «ее 5 кеш ВЕТ «Її» жХищевня я З с 4 ск «кг жв сббжию Юма 0 Ж «ве три ач аа бег ТК 5іУ Ре АЮ ТЕ 3 Х «ее ЗЕ «із ЖЕ «ай ВЕЖ «ії» Хиверка с же а». : пхати тр ох я си дк і вів его іо ав аі тк ва ав чі ЕВ 7 м ж ї з Її «ее УК у. І ее ї «ее ВБЕТ «ай МеиВеавна «Я» Хо
Тк кіз бе аав Ага дя Вій ем 5
«аз ВЕ «Я» Мищес;няа само жх «ке 35 ; 5 свруве КЕ: бе фккхух дже ВХ зів осів зв отже те ощее ве РР ТР
Е х пк а
АЛЕ же и жи я «ій» вт . «813» МОЗ ща «Не Я се : чої щі ре ж дка фтуюж вк ахі З що бак як ак іє Же нія Те о вги чі Би І БВ СУ Б Бу З мес ів Зав Бі ТЕ ні тер оарРе жа вве ту каз сСуз її
КИЙ І | | | І З з «У
К: З » сх : «тк ж; ще з жі бів Жвг х їв ее Жрт; іс ік вк Бі вив ВБР БЕ БЕХ ФУ її я ЕМО ЗУ уві щі Уві тр біЖ ік ак т» вові Ні щу
Ши за Ка ЗУ
З хо сх КЕ фік. КВК К. су ж Фа рові; іх « я зав ів тва жк чаї Зїв рен ТВ
Зі 7 тить Гек зе УВІ ет тів 5 ЕОР ТТ я хо ж х 1 біа Тигб обі Тег уз Уві Зег тів зек бу м
З М щ ХЕ шо КК хх и до кт є не хх гом ма жк КЕ ожукі бек ст Я вк дл з
СУБ ва ій Тек ве біюж же ів жів Бер тк Є ВЕ. БОока суб Вго ів Зк ве бік бек бів т ве ше ЖЗ ЩЕ тах шт бе ж чї її З
Е ч - зе жи ж хе ек іже: ім ще а пін Ва її і Бі ав ів дев шо їхи вав ТЗ о біЖ У у чок ва Кі ЗУ щік в бів дер анр Ух вяк Її ! о й г ен й ї З Жив же сф т лак аю хек: кіз Тк Ще іш тек тех
Мів ки Бек меш вже Фіш бе ек бі фев ів зе Щек бі» а
ЩЕ Ах «ХХ КЕ А кох ще
Кк ЩЕ ж йо г Ук Ж С п Бе Тер і
З з ща з бів Жак З У Бр бів вх вів вах Ве з РО чаї Су теє во АКОЇ БіЖ Хе бе Р бів аз дія ле
ЕК че АХ я ок о К сах ВЕ ще ;: ско лому соду хх. Шк аж Я їЕк ВАЖ Оу Ж ма ЩЕ
Ту ен ага вій ака щі СБ ОМ вжи Су МЕЖ СТВ Мат АЖЕ В
УЖ вим ЯК ОХ хау З ех щі: і ї 3 5 дк У се с » хі г дез ОДАННь ШИ ве 78 с Я чх і щх с с пд себя. Ь Чч я зо дак х к У ЯЗ Кай ЖЕ гне Б ще ГУ 1 КГ
Заг ді вій тк хів Ущі ще Уві Бо Кі се КЕ З 1 З «КК 3 ЖЕ ММК 5. : сумо ком ях ря щи за ЖК Бек тк бек іш вв ага іа вій г від ж іжО їжи зе щі Тек тТуюк тер Зак орех дев ага же ВІ ку м
Ма 1 Ще ЩО а ЖЕ : с г шко о ше ки ух сяодевх . сао екв ха 53 ВК і ба же вті дк І дж ях ТУ щіІВй ве
ВО УЖЕ тн ож ів ів бБіжЖ Вів БУ пк Ага в ага у бів
Мо КВ; м є: ай Мк. Ж о кових сх іх гу; Бе Вт; Ма Бе бЕт уч; вит їчК бів Вуз тів ве іжш БТН ага бе Бра Ви; ща ре а В ау ж, ві, Ї жа ІН АУБ ще тю щЕ 5 - . - пое я і щі: вжи кіш ве вх х в із Щі Фів аг ав іє Тек дев бі ізн аж бів вка Аве Хв му БУ Бі Бе БВ ву Ту» а пів Бе А з З ще М 25
«а «ев ще «І3е химерна ей 55
УК Коко м «дою жк Жах шо ви деки З дет Кеш в сою Буки де фе КУ
Фів ів в! жа? тве бтв ств еко ек рез твк ж жеє ве У Тв
З 5 хо Кі ї З КА Х5 ех си ев хо жі х сеехо ож бідвях Жид а З ж бр СК дже?
ТР Уа ТвБгеоіео Те Суб біж бегозег тТвк ові жій щі як Те ще а «а З че Уггі З у дод чук пек о ПК ук ши вк ох пай их Ж вчи тТУК віз вжи ТО ЖЕ бі бів ве ВО ТХ Іі В я вве ат і5 що ях че У. ук сезх ск похажио доки о ско кт ми сім Вів й ско ВК іже тіж Бі БІК Те дви ух ака дів Бех і те Бо ві або РК
КО 3 БВ хх. ле с 5. ех я с. б. Ж, З теж ЖЖ жук сг. жк с "Ж ху дек сію его бемоіжн Бі СТУ їУ5 АїБ жі ів ЗБК зав Зак бі Віа
Ко 7 ож ака Ки.
Яку фра ЖК шодхаю де. ох тУЖек ЗхУремо Жид жк Б ек оди ж сука фути ку вів вгта Вії ще ші БІВ Біб ТУК Те Сев ія ав отТвБ ТУ беб еВ 7 РУ шк в ЩЕ че хо й руш ек ди ех еВ ев Ж шк де хокук їв тев оУаї ббе бі сію щіжЖ тт ож ев о тве о Ув! Бех же й ЗК
ЩО З
«В «їн З «ях РБЕТ «їз ЖиМевнв «Бе БК же Ех " 5 х ш «Фе 7 «ії: Хневрнча ее кор сан ЖкичУ обов щен ше сЖвощи бака: СКЕжа Жар ох Я Ак їх хо УМ хх
Бек ре ахи ме дей ве іш Те ее ТНе Тек вій бій зве Бе бів ї 5 їх ІЗ
В у «ак «МІЯ» хиевна «Не 5 кру шу «ах ТЕ лав ех ве що 2. СК - івБоБаР вто ів біЖ Тебе тег ом БЖ вер АТ х х З жк СК «ев ВЕТ
КЗ ЖИМЕОКХ де ія ек ія і ЕТ а зняте м а 1 5 зв «їв ХМевНа
ХНН С вав тТВг дБ НЕ бен ців їКЕ
Х х ке Ох «Во ВЕЖ кН Бу ви ів ні ее ее Бе жеб ТНЕ 3 З жк ДНК кий БИМЧеЕНКа сен сцієвЗ мессвшо весен ЗВО стек сек еКа ЩЕ педа юр ку Кук у у хо аюЗ. фонему ви ЯК ет у ги ковтати ва див ГЕ зкасикозса пес тасв «сс зве вас зенсае зас еВа М . хо сучки туя у и А ще авшспсовєєс вестися поцасюмвтє соснова асавонояоє сосок І8О ямі ше мк жор ку у и жк их кв ен НН Зак
ЕХО К еВ СКС ВНУ КеБтерЕеВе БСК КЕ похо сур ку Скидки тую у и питну в Кв ух Ух ква жЕ ЗОЗ. ВЕК КаКТ фе ее НН ЗК ж ум и мому ки у пики м о оку ВУ У ку Урим т дуам у и ЖЕ шк за рОВКНаНХ. КВК ВКБКК М ка ККСВВВ СКК Ма З соду ік кох пк ру У і скор СУ У ковку. ди пк в яКих КУ
ЕЕ пСавеОоВ чес ЗВ СЕС СКК ЗИ по и жду ук мя мкку их ко шах к укуси сек икв им Кук вач ІК
ЗАСТ Є спек оаскоєвНєс собваоюсе вже Котов ЯКО зесикцеов севссеекес сВцсваєєво засво века сао сте В ому у пучку КК ТІК ший КК ок к и оди КК тую оз
ССС СКК ОКО ССС сват я сцІОВКЕВ А ток я шок оснж жест евес себвсеаах зсаеєкоа ща хе й «ак» ЖЕ
«вою дик дня яння «їх жена «Я» ві з кацаксевеє есте сОессстоВа стовауавас седесевцає зесосодае що зестосавоо ссзосщестя сосектсосє озстасзаєа сскастоююї схавєвацоє ща ссбоосивої осстовното схебооостюю весваєвесо новою осссвоюює що чес ссзаеБвево абс Еє вессбоєва ссвессво свессскає я ссавці св везассідах свесралоає лесоєсвекЕ ссросоє ссср З десхасван СОсКвоВевЕ кобобеєво оосаєсоєВ фрассвецеє сазедовооє З поаодатско осоосопаєсу вас сФооосоакеюо содовеас сс ее вх дес ВОесекмєє косою: дессємеоє охсаеаює сасесвесжеє БО туєсоесся осяває зсссеееецс заеєтасяоєх аессВстО ос ссвОоєаВ ще ваасссоюєс зоссссссая схнстооее заатасютОх сетаеєтоюя ззасоосвсо що дазозовано кевскостає «ксаствен сацсасжцка бадаоєжсєє бе е ще
ВОК КОЗИЄТ КеЖАСЄЄОЮ статье кекс Сея сект. тво «кашоссвовО ссотовню Форм доззоєооує осо косо щ-о зуаексаааВ хдсаостцєт пезакс тод Босоцеєтає косаоеєкеца спасе З звцаєнеє зідесоєсва се свсє Сссвосаєєх асесевва сте БЕ
ВОК тО ОсВЯЦеЄЕЕ Фев Є ЕСеСЦеєЄя аа євасаанє що песеетаєх асроєдеєзо сота са снех ковосеВОща фас 15 засатестах зсстосєаої азс соооєсоває асассассяє засо що асо све шеВаскІсООЇ сао ее сте допо сВЗо ве шесскеата себе саво состлвосася азасосссо осотавееєє гецБнесееЄ їзщо зосансзаца се аесвО сно є ЗЄсстОЄт бсстсцква Човсваєєе що кемноссев совка с тббоаеесає дозою свое Зевса є о кещеє сосєвовоєсво соска є сесствоє пев сВЕВеСТЦЄ Я сао сса зсассевцає ЄкзаЕЕає засос Єє паса сс єтаВ М
ККСВНСТЬВНН ему ква к саке оове занеессею зобом М ссєвмеохас застцуетаи зестоцеооє состав вассонеов сесесо ух шко киместмнєе сс еаї зе: вес бесвасосої сатана За сссВа ОБ
ШК КК МАЄТЕ яти єси ени кеВ кк екю Я зе: соте са кави се ссеасках КЕКВ тавсвазаає ТВ вежекотиєс сус цеа сова всововаєв ссвсоваесва сесією 1ЕБО
ВККС СВ ВК ЕВ ЕЕВЕ Коососєз: сЯсОесеВх фе ІВ с деко ечху худий кни сис кккуутьшх фу еВ ВВ ЗИ вести сєсавоцееє своє сессмсяє оса сцєва есаЄу Мао сао ку тих соку юих м ВИВИМИ пи кутики пріо АТ часове се сто КЕКВ ОСТ Еш Бас ша чакра ско сх застає зеосвевВоЕ Ісав зе аВаВе Згх
УКЖЕНЦВЖКСК СВК ОКА КК БЕК ВЕ кеМе хОжю х "екв кегЕтОмк ВесвЕцееІгВ сти сЕЇ педа З ККУ
ВаЗещшшСстКК СЕ ско Се се сех БВ ЖЖ М всвжвІзчісж зва сесаВасєкх ЕсевисаесВ ях еВ ек же "кгс ї зепсававе теасараве сезесогосе сзасвестих вестесавав ОКО
КЕКВ ВИХ МКК а КК Кк К КАК еВ и Еу МУК ОК М Х ЖАКА сіяти сих пеня ту дех риму, пак м Од их кв ка пф "Кл павоссза КЕ сКІЖЕ ссссссвВоа се С СКК се ах КЕН не зу ивукжафю коки ув КО сикавОвеса сао Фа вес сваее ССО св есвВВе КН копа ВКеуСКИЕ еф еВ ЗБОКУ Вера Кае В засзрсаееє асо сзасесх ассоБЕСеКЄ вка цеке фе же заопацтака зу аа скоса ФсесТсцеКе СеКоСВКЕОВ фак я с с сусп рум вику із ху В ЖЖ ксхвиосеа азазсресес ссрзЗаасевВ свопи не соєю ЗНОС ЕКАЕ ж ЕБНМ смерти кекс уста бі всих Шу кі складках Кров ОУН
Бека сся заазссааЕ соосска сс Бест еева єсссаЗецЧає я? МИ сх УК кни о НН нн ши сх вжессозооо омнними: сазсзасне сс асан сс Ж : - сх па ана ач зу коки их чт
ВЕД єодаепОтє КСВ бсацеванє СоВСсНКеа «кеВ Жим тсвскеса пава ств ЕВ КИЕ зу зак де пев КВ ОВ Ки Ва
ТИКИ ВНС СКК Км «М сьо кеКое кю КЕкх МЖК «трава (ее пегежистЕ ЗЕ Щї й москва МКК КС аа МТ «и» Ба
ОК те «ба НЕ «М 0 КВН «НВ Б нд
ВОВК Сита козі овіоах сховав соці сс ВО - ко кошти их суку УЮ твою ему и их пу тих зу адстасвсво секс єси ЗаЄсаО МОЄ ВККС а
МСЕК БЕСККВИ Вес ЗКУ Зак ен ОЦЕ Що о мк м зу ую ук я су вити. пут ик я в. ту ех зас есем ства зас весно зсзасовІа Вис Я ножик вчи суху ут ки фути мк жи и и о зах как езкашаккє кети сж сеазасисво свассоаств сте ВсК БЕК пуск усі су я их, УК ие Кир зга феЕ т шк ру уж рих ока:
СЕОТОЦеВЕ ЕКС ТТНИя сфКТаК фе СеХеОВКЕе «МЕ КеЕКе З цена ЗО ОККСЄ ІЕЕ КККК СВК СВД СКС СУ ноя СЕС сет Вес семи ВККС БО ема ще и Би се жтуміе т Кеш т оуютьі секодуюво а в вх кодеасееєе зафесесчає сіссососо сякассхксє ссВсоосщее Зевс я щБасекцсва щссеаЕ се чес зе СВОИ ще кас Яка сис вис аск сааВ сеанси се БУС - Оу У ЦИ КУ ЦП У 5 КОХ ї ши тяж ОВ соя ку и ух жук ко сід ді фу ке ик у ра ку хутежя жашаекнє ясвнаяаетсв сасатоассся ссеаессве сасстовнеє боса. КМ педа ау жу куща федеує ють мокру жу ек их 0 ходових о шк кг сещсацект сесесккске скоса Зевс севКщаЕсе сс сКЕ КЕ
За сасВХ ОСС обасвснеє сзсозаасє сови єва ЕТ сазстаВ Ве соло ЗІ се ЗиаиВа М
ВС оОВСВ ос цене оса ееє вас ссср вен й ши зіва СВІ есе асВи Вес ОБЖ о асан Те МКК МКК КВК Мою ст 7 соска В Кока У пахви чат сис ССС кКакеииа пи со коза с фоиюдю ре вимими кое ше а АТ казоєсаваю посяаєсюсю аохаєевся акоедсаскя кеесссвкє есе й й
СМ й дна ев ке ков вк БАС ссеораставов весвоєева ссесхоквє долав ее и тн еОБЕЧеЄ ОО ДЕ За ЄКе Веладеноє ве щи шк станів асо х сТхсоюне восаевєв се нсва варених о сх - мужик де ат ТК ДОЗ Х сезони яке ВДЕ ЗОВ Є вкаа СецСксвеВ по 7 . Ж «каовачацеє кстссКщеє ЕСсуююєеВ фе і «ВІ «ке Ж «ий ДНК «и Ми ен В. ж софсестача сота є совосквоЗе сетовОсе ща
КАВУ ЕНО ТОМАОХ Се еювВ БЕ ктВоюєтЧ а Що зи : . ск кякй ж тк В я меси ассо тої ссвесх сзосствнкє зостаВсшсе сеСесоцаЄ ес с
КеКе сао ков тчня ЗЕВ ссвоєВашЄ Фествовато дстбуюрєаєе аесвоюююею асоосзоєає євеєтає Що ме зососссіва ссвосапаєт даосаєстсє звобасежся феваоносся десесето ; м срака иеиетю їх дики ви т аю п вафкжєвасх сосстосзонс сраєсрасвсс зссвессвех ассцуерєвв доцеаекаке зво
Щі 7 о іа ож ве ХК
ВСсокае Ов аеккесєв еуссхтоювє кеесоцевеє ее ев о и ВИНІ еекенннтє пове т
Штовссвієв саєдсєюю сєефрецацнає есеоесвеєт зестрюєюстю пгассвсяв о
ОТ ши ди рожа ЕЕ зво Несе сеКВ деКоЄтОоез таосевеся сет тстнє сосок БО уосивосвенє ссвоспоєво сОоааеє зсесвосасв вссквааває сааскесюва но
Й гоже ху амур Ах, у сх саозоєюнаю асеецеєссю оїстаскеє свесаєюах зевосвеююю стсвсаеює Що пс Оса ссавоєвоюв зекеавноее А аж и пе капоссвове ссубфаасв сооасососю сзаоєовсю осодецюєвю бод еоюа Но сов пек ил К.В. «КН яЦаКССЗаІ хосСаостоєю овекестовє оуєюасков сосзосєюв ск сеско Що
ВС тшвОєк ее се Є Єксвиєвоєх зсссвеова сенс ає що
Й що рел уує с ж дв ЕК се ссЄто осжаваесє уже вес не ааосв саасжаєтає що осн І ух пПесвсствех асфеєзаєте стен стпеттсжеєа тсоеєююа суасвюсвну ще 7 я ще опо о про; жк : Ух кос аєз зсваєстсо сазсаюстат се ствох стосссасто сроссевовє шо оо тАН СЮ ССО соска осасв зас юа ос еееє екв ссее що звевоєввої осзсваов сешайенх. дессзмасї есстсвкодх певетастеє що «ссовоеєв соаевоїажс сова вВає бовессежОВ саазосовсає осзсвеєє ДВ кстесфеве косадаоєве содеєтеєве Беєстовеса осуєвиєво сусвоєтацє М засвосстщо певссєвовс ствсатєтОЄ аВецевеех зКазесеев; савсвеєсвка ме пеоОаєа зобов сажоестех сем сохне весен уо тєсонВОєвс Заст ЖЕК (кеВ аасевацеє хеСсоБх 159 «ес тосо спосте Четсвееєх ессавсцеоє есе веткевеев ши кеш соОєВ зе оВа Фест сфе сезьасе своєю лю зепоаткосо свастесвоЄ саоходтеої тетассВтех сссоєрасх гаосзаааає БО деКеЕЦЕаЕс тагтаватваі стеТЕваНаВ зетанОєВ ссОКВНтЄЕВ стастотасх шо зеессососо аатостстто осзсоаттат соподссвоїв деасоєтоюх сасвоєоте БО
ВО сінОта ссання СВОЄ еК ЄеессБееЄ сс єь ОВ ЕЕет ко сшепдаазсзо севетстдеюв сус оВео зааоастаех есссовоєє сода ка
ІсетаЯВасх стос сєє пассжесюєе Зтеожевеєкх тесКаЗееВЕ ЗЄС тю
ВОСОЮВЮТЄ КЕ кееОсЕККИ Вес такс скккастсав щк ката сє зга шосе КВК НССВ ДКС ОВК Й що сссВВЦООЄЕ оофасваває сасвеає ссассвеє савеаеєт ВСЕ есВВю о сцпассожева сстеєстекжЕ сессоссаааа сссвазанка кесшсвае сТсссВОВе ще сстдавотся сатрсеоє ооіоонетю зоссаедаві ассстоаоає сазестєхає ще
МеЕСВІ нОцеєЕ декесатех десваесва зесюфеою оф е т васвасасне зосуеєує свое зєсвеєєюає аеро сце ТО
ЗВО Мк «КККВСКА ЕКС КеССКВЕКще саке ме кссаввосей ааороєвєс ссовеаасса серєкоєвев ксевшєссюс воросеовах й паретоагез подассввує свосстоїво босетодієв ваоостуєтя тсосвосвве ТЯ десвссосою поїооваову саатосоєво сефоаоваса зстасваває сасдюєтссє ато пефрстцєвет ссоаєсастє се сес тасвосвацє саше сеацадеву що тес зе сесвереск се сеєвеу а хетоеа свассвеє «КО яеОСВОВаЕ СТО ЕКОН жеаеов ще «ее НЕ «айв «Кале ДНК «Же Храве «й сВаОКасно тона є сеосєстОаця сувуеєєє ссафесаа сстовосаює о
ЯКККОКЯКК| БОКС Є свсстюжс аоккаефоєз оуеєжецв ососсзаее що ссвдосалоє дестораато дстуовсетс зестооююсю асоюєвосяє сваттвсєве що
ЗЕ ЄЗС ас ЕееК ще сим ЕЕ а азаестоласа сстеюєвне спаеовевеє оссвссвюх зстекоєеВа Дос Св КЕ зиск асовстлєєя секс ОВе кЗСТОЮ асщенее его ЗК
ЕСЕ ще оС ОККО ЦК БОКВОО Є ща дозаасцаса сксзайецає ссзоашесс сссвексжє сецеетекаМк ОБОЄ СЕ шоаєсакса сесаскОМОс со вгопаєаєє вести екв КБ азасаценса земне есе каепссвоєа сесежесевеє сезоуак БО сеєамна Хсзпеооєво соб асасацевсв сс вацяє свастеюєт (З скасвосоазє зсосносксо бевстастс свя Енех аевОєвекеє ЄВС ВеСВЕе жа
ІМК ЄСНСЮН ЗаКНО ЗОщИшНе сем се ЕКО. ВИ сюсошсооаа ЗБОбсОюОю соожооеосю зозаоєосюоюз основе сен ЧеВ щей
ЕЕ Се ЖК «есе Меч есе сота мВ засн сен еоесве содсксвсє сбсеасєк зебссвмва сс ЕК ставоссскта св сх звана сесєВавсв чекає саасвасве аа декасекВек асоссдаєвао сок собєїсвеєв ссвоссооюа соасваєаае а ззЕнСжстах ЗСсКОСЗОВЕ сан совет зеасеОоєєах зас екВЄ що
Весна сажі свзаєвоєстак З укеКеаЕ Ктесскаєта сс КК;
Вкестсві сс сок аосасєх ав ееа сою ССО ЖІО авезоєааю: оса сова ФсесешНеє ЗЕСТЄОКОВа дуже КО сссозВсєса азс є сс ашє повосссвоз сваосовсех пса Ее ко «сиВскОча сеанс СОС оС сНаея ЗЕМНЕ ЦТК ДНІ зЗсВцесО безос скаеВеме асо ЗОМ сеасаксваа ВВ
ВІЗ ОисВая зе аесє сват осо ооо зеОсеаевВє БЕ казка: зате зжетиатенк оЗЕсонва ЗавесоООсО Ессе ЩО сток ос са см Ес сесвасосВх зок овос Фе оВе ЖЕО дес Зак БОКОМ Кв саВе сао СБС де звснЕасе ес са сяє се вссаЕЕ сова єоВ СВО БЕ сект оКасс сбоаевсева єс зе света ке Ля аесккуеа зате позов є собБоЗссвою своє засо Б зокЗскцси сеВЗСЦССЄ сек сс ссаосаасва Несе Б
Усова се скат ХНН ЕнеЕ ЖеесеОеє Фе е кН
ІСЕсОсяєх СЕесюєссюх зассвневє сосен кіс ство ех
Вис Зевс сессосни зЗекесеессх сах чес а сита Усе дсазсассєва ссасвансї їосзасассв вна пава Ме
Ес осажсванає зсвсмаЄ ссаековесє спосасстох востеєзоца ЗЕНО чес сте сссст сессссваза состава сосессає сесссцеасе тай «сів св сатосвеодх погода аоссвсткваєь весстуа савфексває ОСА авосааєя «зго стксщааа сестро се еВЕСОа аа тв тесваацесЕ зарренвсс седнвасса сіоціцеаса ссстосее жене цає я ані сівска зозассацеє сзеесссвов сосстваєсв алое зоссвОєває ие
ВЕС ЕНЕ ВОК С же ев ЄВС шо зе он ссоазовоєє єс к Хасацсваеє тсвОсекоюає севозеюв о зва сною масок ска осєсє іде свею зе кскес касеВеБВ «БЕ
ВеНСВЕВ ее Кен ВАК Же «ві ще «Ох ву . - дн ке о вк, ск сімпееєє кет асвове соссскво стохааває єс века В мем ссаасоєвх сасстєсвмє застаснася бесастцоу саачеаеоєе КЕ ща е осот оз соо аескасвсс адже сс ЕВє ЩО
Ясна Е ссавврви несе Весстцовав ссаосцеєва сзеєоєєтає ЖАН сира св зсаассжеоах саасовоЄ есцссаєсє Есе аЄ сс: жа
ЯВСТАЄЩМОС ЕБОСБОНЯЄКИ КОЮ КК ЕКО ко ЗБ споводаюсно ссоюеововою засос пебусасво сша и вето о чес еЄ зом есБ света что сстоє оасзоаавоє сам Б
КВКсОцосюь сао есссасеве вассясасє есе час я БЕ заасесвоке пасе ссева вена ее зватасоввє сс вов ааосвоса о
КК жест оо ває са сессоааає сота ЩО
ЩПИМЕОЄЮАВ. ЗО сФаю Же ЮУЄ как Ємекуєтеся ЄееруВеюв т зОстосоОєв єсааостоюа засво ЗМ ссоолоюєве сом Ж
ОКУСОКНСОН. «КСО «кренуКн КАК. «Уколи ВОсОсх вів
ТЕЗЕ МОВ щас покоях тег ацет ее М ант етос соєсаю совекосє ттсзосясстї зеоссаєвав сезон ЗО
СБУ ЖжеЄКО сажа обов оє зесевоакоя баса соасвасвах ще пу я праху жк жук ск вив. по Ка о жаху зерщека срака ра чесссем аспксоо сопе оє соцєтсяссв соОвнеюз созсеоєнаа ЗО хасВеєстОої вестосвВове фас семи Зезесаєсає шезекВеєак не
Вей свої оса сєвасавеіая весе се кедєсеае Ом сен ще кеееннх соски сзаЗ Єпстеневся ас евВ Фокс ОСС БА
Що ; ок сх ие хоже хе ди ххх. сл ета восарєнаов зсаєвносою сроваєвасє сс вестсвкОн вовк аєее ! но . шк уки. дини М «ссовсоЗ сохне є тки леє есте: савосооєої свв тво стиЕвссотес ово сає сзесттяс екв пек касою тя пес х я шк ж кеди ві Я БК
ОСТ Осжсссшає стае ем Ве еою фею ВК ВВ шк - - се г худа. ЧУВ педавсавов заобабвосє ОВНС. ВАН ОНКО Ва КСВ ше ї- човни шє засобів асскОеє поко засно есе сесоє о с се я дсумо уже мим кв и КЕ ставок соте Все БесВасВЕ безеваєєі ЗО ЕОсЕВо ще пе | пев пече ач Ж: їх
Весосрєя верста ще кекєюа жає соки не ее вдих вик
Ве КВе СЮОЄТеЄтИ СЮ: ЕКС Сема зафвааа ШІ зсстщЧеватє сосен а стсессовав заставка седсвокеа света Шк . - хорд КК тії р "ВККЕООЦКаЮє латщоеЄвеш баса тоюеескаює дек ее Яке муху ух у ха «осот ссанюшоєє сао сссстоценс ссвосвоєва пасе ще
ОТ Щі ок есюопваи ФгтКткаве чик Зі часова сенс СОТОК КО паза аєх сс оносю СОУСИ щи о о их жу СЕК: сх тс х стедепкекєс зассвосеє сосок БЕссацеЄцЕ десеосвБє КО аососсссх ЗстСЕКОхЄ сесспшокс ВесаесК СОС ес ее х ж хну Кф стулья, я с зеєвтикавех зав сна сс смх коса свсея засо есе шк сова Є ссвкасВеве сс сотке саосасстов ВоскосВоВе МеВ
СежВаееЄю дес сеаскає своє сВБЄВеєвц пас осоое й ві | : кефік и дна и ітих Зк
ОН ЖККОКаО ТКС ссесесаняй сесавоасВ ЄкстКаКаВХ сЕКесЦИЕ 7 : ШУ ХН
СКК ВТ КР МаККе ев Вис ку Ва а ке щи шина закв
КЕКНЧНСО КН ее сюуюєвю соєва кеосвавасяя ВЕСЬ ДеКУсЕСВКию я
В с с - поши. ЕК ваказевоих асо Очк са сстс асо вссвеоаск еВ а
Що спр мк ккд ЕЕ
ВК ВОК О кое Се секс вНБаК те я зссанаскя засвоєаоєє сбваоваєсєв своє а щ тет тека ЗЕ озостовеса ВЕС Ме соска ОсстОєся заоцевестя гос ме «уж: зва
Вест сецк Весна сВесощеєве ссоєєаея се кас «ЯК щефетмунст сепесоюютє ск ЕЄ каезОсавеє сеВСеотВНх сан ад г. ще ху:
Хосе опис е стєакоєстсє Фватосако застав сват аЄ АЮ
МКМ ЗК ВЕК Ва я За «Ех ДНК «ие кименНХ ва чан о їх пєдтова стеоваооо я Засн еаяа су й
МОЗКУ сх З Е Ле засни ЗОЗ з» ЩЕ хесоовоу сосна
ХХХ укл сект з до ; яке
ТОНН КК ший
Ва ВЕЖУ хи хі ее па не Осо секс
ХЕЕОКЕНЕКЕ
«ЕЕ о зв
КК Я, їх щі І «пі» ДНК зе во «ех НЕ киева о З ЕЕ Я сспсесеєскє азс: : с зок «яки дае СЕМ й со нак Песеєсаае птшжава: канавка » ї ший Що ДСК МУЖХ З є своє зд спек ссао есе їасзазва сесас сах 18 п шк пан і і Ка ех ср уд хх ех пожОН Все БЕК ІВ са ах
З ИН СВК ва ат ССС С сао рес ван КК квас Х С Щ а тен ТаКа ск тпосоеах тес сЄ есе
М с ВУСА ех ЗК ВЕ пт я МЕККА ЕК СВ С ЩЕ и Ка ОМС ЕК сеоаеккаає ЗМ
СС З за ато Все стотоє «скло зу к у ме КК КЗ Що ост сет с ЗИСК Вк ТаО свиж ЗА
ШО скине аск Ке ас ВИТОКИ ; ато повеосх Ме сеанси ВО 58
МОН ПОШИВ КК оіуеху аю евонкх зов СОБКО Я са са
Х. х ку вк ЕЕ КЕ ЕЕ МК Ка і й горе Сі Ух вия тт се г з ств я каси миши Се свв. пи СК КЕНЕ Є За пиши МЖК СЕ сах я
ШО са БЕЗЕ СХ СВТ еВ
КК пе КОТ в каїх псватетав ко СК КЕКВ швжж соц Сх -й ВЕ со па омеестою ВІН КО держ. МН
ДОК "же СВО оо васаєке
Ех ежтиааи ж ее кеесееВ п паса : те
За ОСС СЕК жВа Вес Щі сво ях МИНЕ ЩКХ ОО ЕЕ шк
ОКА КНОКЄ ЩО Тева Щек хаааа ЗМОВ ВСЄ
І СКК ШВЕЯ за сани ЗАМ КЕХ зетжі
М се сука МК хх М ке кае БЕ заевеканам ще КЕ ання какая ЯЗИК зе са
СК па год я пої ок ву та г МЕ її з ще ЗевеаКВ БА оре сосках о
КИЕВЕ В ве ЕС сосни но У ЖАН що Щ с ї івана ЄВИ с ховає свов пе шк пот Її ця са КО че щ виш асссанассх аа а м ВККС ТОВ с и . соєва ана ВК тету миши ЗК СахаНк з шо шк хх мк УКХ. се ї
Шк Ма мае ККиІ с пЕааааа хо пеячим ЗЕ КОКККУ сасавя пса
ВХ ще СН пає сезовооА З шк «Я ме Заг. БК КЕ. хе що зх фаз свх ще пекан Заааск Ж садах оооваа З : пшн . Ки зе ке ОА УК зЕКе тата «СО КОмІ ЖЕЖКЄВКК ВК и п
КЕ ЯКЕ же ЖК ВИК них ц
МАКЕТ я СКК КК зезпасва паста снеа кер к В івеВ КЕ зе Сеат нав оон Ех
КК КЕ КЕН ну ОС КК гово п іще СІМС КаЄ с опехевхи ЗВ
ЕК с саасавацеЕ ст миши
ОВ ПЕКИ касах ссаївсВе гессвесєє Ва 148 ши . се ЗІ я првеих У
УСТА У пани КЕ ЕЕ що ши ма КК ЗОЗ "хевасєє со х БСК ЗВ ЗБК шк пр ЄМ ее В Ух й що
МО КК З че ЕК Ка цех - й пяксно ма ХК ВЕККЕКЕЦЕЄ сказу СЕК а е з зевзааекаК ще я нн з заз ВК пах З
КВК ЖАН теп КВК с сессвоатою
З МАЕ КеОКа степ асВ: Мах шк пшеннни г Ка СКМ КЕ «за
ЧЕН ЕВ СВК Я ї м Ной и ота засваає светакакй :
МАК ек її - В ши і: засос ее З КЕКВ В ЕК не тен ЖЕСТ з- діда КЕКВ о
ТСН ее вес віосасв ск смс Зк Ко
КЕНЕ ЗК т савчам жена Косенка
ДМК КЕКВ
КЕ МАЕК х сег ех я о
ТеКОКХ ек ех в В «Рід, 1 на шк і к ; | Що У ки що мА с «КЗ» хи У СКК СЕВЕКНОЄМ є ов ев ЕЕ М ОКА що п " виш . ПЕВ.
НЕ ВЕ Кс века з зетвтатсв освоааие
КМ ду НОСИ ЩО сеЗевяа ЗЕ КОХ Ка
Ка вок х ще. із мені ЕВ сжає ВЕК : ТВ ПИВ жЖ
СК СВК ВО
ЗК ЕКВ ї подваоцеєє ссзавсоєтх ватвсахаає аесматавєс Защраваст сосеєствює чяб
КЕНЕ ЕККСк Ва ЕсоцкаО св ссОа ЕІ всасвКа се КЕ СеХ не аа КкУсО ссвовтястя кокс вВе свтвайжее КЕКС ее ОО ЗО детаааєтоєв войтезаесе састовеосє ВеЕБЄСЄВЕТІ ЕВЄБННТЕКЕ тест е ВЕ зу еЕНКОНВОСКОх пак ссВКу дана ватаєтееає восени свое ЕЕ
ВщКОТІОМЯ есе севацекею вста Мосс сс еює БІ тствоосасх пстатохвах пеатаават своє зоцісвЕесв ссзопОсето ков нн и п МЕ «Ве. У «її За дені к сь: КОКС осв стокове є коесюк еобваасео Б тостутавою СТКСТх свсаєеЄсьсю дбстастаех схаваєтоак закаккоє ще
СКК КЕН сс акне зежрсеетсю каседаєтає ме п М о о п в о в я яеофкцааюстса сірекояс бетон бстоусвоєк фетою ока зов
ЦОЄе ОВО сФЄНОкає. «оКНСВОВО ФеНЕСаююює. кран совеаевко аю
На СНІКи ТОБНМ ОВ кеВ «еко Вахта зо «ав сенат ає цеси свств Єраксоває сосзаснеє пасе юм СсОетесВох ке доспетонає асвосасоюи ветеасєюює зосатевесв сквер сан єсо ВЕо
КЕН ФСОНУСДЄСЮВ СЕКС «кБНеОеНЯЄ Єтвееєюсих зесостеєвє ТВ віссанато» ссосаотсвсє бацсаосскє фсопестєєю себоєзвсвО зосоаєваєе ще асзтосзову сіїсвсвово тВісвасаає стра сх обтассвосв безасезцо ко
Вес сссюв зе кее: зсасвасвес засавссвоє внесе секс чо
СТЖЖеНБЕК стоотабеєзо сессреатее зкасевеа совок дсзвеєаце заща ши нн о БО те
МеВ КЕсВ вес сОсакесеє песни квас скатксевев кн дк мим сек же у ик з ких сховище плюси юр жи орд качих пк Уа з хз цпажессваце ссання пого савЕ пессфоєв соєва Од Кае 132а зсзассвми наст зов св своя сок Вис сх 138 се офорт Км и ки осо УК а пут кю и Жежуха сиМо же вЕкют х те зажсвевех акозаажеа сем ає Веста стассевеєх зве вів ах їа4о лем жеЕктмАа щи ква нІ МТМ Та В
ЗМК НКИ КІСКИ ЗНОС Ми «ке ЗМ «ТАЖ Хара шо КЕ З й й хм: сій ЖУК; фа ОТ у дек За я Емі ж 1 ж шк бе Ж ж щі щі БІБ Ми ою ЩЕ ОК «є хе МЕ К ЩЕ ев жі вія БК ЗЕ щік шесси опи ше СЯ м ета дек пшоно фо кох. Мою займу жрхли хокаця б оди Сук ек бен вв Щі ЇВг оєЄж5 ТНг оз) Зав бі ВВЕ аг іже тег Бек туї
Ж пожю ока й мк, лі фол. ех кожи с со Ех фогхаж сію ж. 5оосю хе лу г. х сук щі жаі Баг їж У Аг Бі ово БЕ БіЖж іш Су іа Б У Ба ще чию чить жоден дер у сел раю дея САД Моя мох сао укожноя м. сн. ЕХ щі лів 16 ТР обі вч біж ек їн йБа тк між Зег ах ев їі я ща Бо цек ага ішБи авг ів бек зу йо дан ек гжя бек бій уд РН Ге
Ом, х ху ня мих, ща т ях що й г. чн. 9 се м я а БЖ с м ск зх ЗК я є ев с У чо У їж ев ях его ен зів їв оЯБО аз Зйе вів тк оОтТУЄ Теж ос та що че "7 - У У «а
Е с я саке мя; Жах сах 8 я дод шохчо Жан сфбазуг Ат зм ЯЖхЯ божу стою Ст їжя БІУ ЇВ тТне ТК ож! Уаї 5 ази Тут Тег ав Ве зо ту Тер
З МЕ М те З ві тТьЬв ев Уві Тв» Фаї ве ве ів іє Її ві вне дію іш шБР щі кг ОожшК жа тїйпгоУах Бе ех Ж ж Ж ІМ щі ЕК у 7 ЕЕ у - тож 7 я
ЗЕ: в КК си ку ши Жах б з Ж «вх схо жк тквю ктк шк УЖ К паза фо СК кожух т 7 то елюх " х так т пвх фам сжйхук У дзах лах осн мода я г жо жо и ще
Бій щеу тв бій 5ек вт вій Бек ів ек дій хаб уд Ту ФО те се бек ше кед
Зах Ж 355 і
УуЩІ ТР її ТБг су: ага Вів Бек ОБО Аа КЇж вав ЗР о туК же АВ але ме до Є 7 ся і55 У 1
ТВ тую ШЕА бій був єів С1У ву вве вує «Фі ве фев жі чук ка 1 55 Я же 3 ЗУ аіж тТвк вт іс ІЗ 5 АВ Ма! вх Заг ака БОБ 5ек біж Бак ФІ си шучу т се кх т їх
МУ «ЩО ЗУ ця зе. сх ще о Шеоуцовк оду - пе укіс Ву жди УК жолні хек Бі» ТБ ін тує бек вже же Зв вжи ек ев іа ек дів а5о
АК 7 в пом В. я : ж Щи Й
Же ша Жах ЕН ше од си. Ж ша Ж се дтт и Кк това и мк жу ша ку вх ча «1іу Сук СТУ ТР се Бе ІБ Ів же і ві БЕ і ее УЖ Ві
У т т у Т 7 з У У 7 пре шх. щеї вро івО Бі Бе шу Біб вто ага бі 15 ех а а ай щу худ, ї . у пу х г сичЕкЕ 7 т
З Ва о
Фе так ик суша Ко ютвт шкі ех сода важ хе пом жу пі ЩіК бію бі Заг ші БіЖ Бі бік дек бів УЖІ бій ев Би В
Ко КК т їі У ху 7 ак нах. о не ЧИН кох КЕ пт Ж ж Свраоя ке ж ка Кот дк ек: тах: Жах ою ек щік БТ бі кеш ві Бій ве Бі БІ хек фев ага сен ек Су
В ТЕЖ БЕК вів аіз его щі Бе те вве ее тТне ТУ від Ме ва тео ие сін вів ще пів веж Еш зви жів ТО Уві бак ве ЖЕвв дк БЕК ЕВ як ВЕ МУ а БЖ ЕЕ БЕ МІВ ЗВО У МУ ЗК в В а МХ ух
Я 553 35
Тет вжи аа Тек їі ТВ ТЕК ТУК ків ав зак УЖЕ ж бі вт Ве чис ех ах ж ко поживою паж ссвц ко сти кед Коші о кож їБВгт (зів ве гу БВ ВЕ БЕК Бе В ТНЕ Баш тек в Бі МЕЖ кВ у ОЛЯ т 7 а Я зр ща що За сих Ба ях З Б пе 7
Зк их ЗВ даповве бі» аа Щек Тек Уа! Беє Тов оба дів ТЕе Те от вт ОБ» тв фе Узі Те Ж Заг ве ій ЗВЕ ВЕ іже піУ те зве У вка ми ун шу ДМК. них он хх ЖЖ вузом Кук я Я сжінах вин джвах аіЖ ж БВ УБІ Бу а ТУР Бе ВР С; ге Уа тк Ущі чек їв 455 КВ «МЕ вах не Ту аа вам тве фе бл ее НЕ тв фа ве вів хв аз і шеє ее обеж фер отже че сів ек Вже За Уві ТМНе о Уді бр Зак и 7 їх Ж: Де я ЖИ Я ОВК
Ск 2. СОЯ «УК ях КН ЯК жим, ШУ. км ЖК за - ах я. бег хаб ву ді ТВгоБів ТР оТУк Кі Єх5 вх жа! аж Ніж в Бех
СЯ с. жк. я у ЗІ почта гг Фотк ох з ТИ, р вс У позах. жу, к стат я, т.
ЗР аа ТВ ів Уві дев БУує бує За! ст его дб Щек сво Абе ТК
З жЬ З ох жк УЖ т ЖЖ жін в сх чи У ТК Фах ба пет шо ДК,
Ге їж 1х ж ЖЕ у ія діт їх ТУ їх Не КЕ ВІ і Б а я жк
ЕЕ «ОК ЖЕ іх 5 КУ г з. УТ ке Ч зм. а се сю ТЕ, Кг. 5 че с 2 т. ік дик, ою зік біж бі ме Уж бух Бке сг ТУ Хек ку ага без ек Кук іа
Я вч п'є бах му сЖрІх Ки Ба Я сов Км Кадка бли Сх ри тд ВЕ
Віз бек Бім БВ ЇМ Ме Зак жи вія тТКБОВет хаб те ча ака Бій
Кк в. ох дою ЖК ну сало ж на ру с ся до Кк Фк Ж сзжжу СБ зів ргО БІ» іх Бі зе Фів тт ож ЄіЖ а ІТ ву ЕК вух ВК 5 та КЗ сет жи ук жк, уж сені ФВ Кече Фа їх сек довели жим ЗК аа сіж бі Та тНе ЗО тТЕг із віз вто За Ух біЖ ага БЕ ТЕ т я У ям " " жиє є пк сеть. ск ке дуже ікс. Мом. важчий дж ям БА С м ме беж амх Соксюкм о ім веб ТВ сін ев ВК о йтш ді тує тк Су Те тТве Бра тт ДВ
БЖ щі ща тт ув їгв о Тжг о вев Тук тк обі бів Бі їбБт фер жа Же о УДІ бек ех т ОО 7 М Ж їх Б ща Б сх сс, Як дика уже СКК. км. М ух сф я совки сн -ї. з - ж ск кн це се ах Я жк АЇва баг ТК ру Бі Вге бек уві ЗБе БР зви дія Ре» щеє аг цях БО ах ї жах Фахух СУ: ку ха вк Жак я кр зі Ж ме стю Фе и пом ще х іж5 Бере оТвК Бет бі бі Тек о 5і3 Віз Б БУ Сух Бер жа бух дБ
Тук Вів враз іш вто Уді їБг Уа: Зак те ев Зак бі 18 во тв вих БІ 5
Заже п за лк ях сб уко пре Хе кош Кк шк Кт с сі УуУвух щек обі. Уді нів Тек оБве ве аа Уа! бен дів ек ек о біж ев тек ле, Ж КО кр я х в що Тк бок: 3 ххх Шах кіахах ху же ж их ферму фо зу? сша вок Ух а стру ах
ЗЕ Коша па ет та Ма Тк жа тек ек Зве бак вра ів же щіВ
ТАК т 15 т бе оте тів Се йзя Ма! дей НЕ фу ЕН Чек оавшиа ВК був ша ва а ше ке й
ЕК: ФІ Ії ї зе со шу дк са Ура де ок захо ско Кк скбукє у ск -
МУ БЖ ЖІ Фів РгО бух зак суу5 аа Б ТВГ ОН Те Су Бе Вед
ТЯ тах БЕ тую 5 «З хз бу ЕМ Ж ех З с. Хо втіх вне сх жує її У хі хе о тухч бух рУй віз ке бів вів аа Бі Зі БК Бек Уві Ре грец ВВЕ ва
Ви ЖІ се Кк т хх
ТЕЖ т «ща
БР сж5 Бк іч аа ТЕ ів Ме ї35 бек ав Тв зве ів Уущі ТВе ххх. я х з Можу
Те ет "В
Сус Ві мВ! Уві вв УДІ дво мі бів аво ВБрее шів жа їж Вб жк с Є ог кох - узик т ЖЕ т55 В
ТР ТУ У ве бі ЩІ бів ва ная вже Іа ех ТВК ше Ву Я
ЩЕ ЯК щі 3 а; ях буки жатую бою Зі оте де Ж а Еї о зи отвк ча
МОН и ТК дев же ТК т Бе АР ОМ ОА зате В фо тик ша
ЕК як ОА т
ЕМ ах Ж іван оніз БІВ аж Те ви дев шіж і бів Тек Ух Сжа ке Ма Щек щі Я У зсФпоЕн іш і щі із та хів бів іх ТВЕ ЯЗ ше ри дія Бе
ВБР ОК Жь ТЕ МАМ І МІ БТ ХЕ 535 МЕ ЗМК іш о щВК в І БЖ. ек т -
Я ща? Зо пи м їх соя пак Сея я, ск. чої «их. зі ша с чн ля, 2,
Фі іа вка дКО Фів Р; БІ УЩі Тже ТР Бе Бе РУК СВ Би лав ї ; 1 ! ке : я я
ВЕ Ве ВІ ВЕ т би Тк об вом я ді бе ів їмо Су Бе: УЗ) же щі БЕ ке ща : ща ках КЗО ща
Зук Бра Щек ваза їі вів жа: сів їкО Зі ЯЗбг ве ТУ МІЙ вч у ! о КЗ КОН
З Зб І и и. ви ши п св Ве, зе с се я швах. сх кт вия Кг с джп о аза ТЖК іже ТВг о тТВг бує вро хаї би ач) его дов біу Зек вне
ЗІ ще щО5 с с зо стеие Жсьш о З оеко п Фо вує КЕ . м ес не ве гос тТуК ше фу ін Те о жаї вро бує Хек ака ТР» бів біб у я З35 ЗК вки ма) ВН Бе сСУх ет Уа жек міє 5) віз з: ніх два Ві бек
ВОМ ОА ПЕ ОЗ Су зай жа Ме міх ЗМ ІЗ СБ ЗІ дав ТЕ Ту ах зак Ух БО жахи ЕЕ ха Миує З с г х с ще Яд: о сах їбт бій Ух Заг іївц ек їец Бек вка біж ж
ЗЕ Зх «Ав УЗ «каж БВ «ее БЖ «Мі» мира біз ші бів їев УВІ Ти Хег і» 1» бі вес ві вух Бго БІ» Вю ; я З я в З БІ у ї З ща 15
Жак оржи ага сем Баг Сех а1а вів дак Бі ВВЕ ТБе З бе вжи діа о 5 3 скік ау дможсю. кет ВІ шок ЖЕ що хом СЕ колою Кі ше. Туя мух скух їво мех чеє тРБ жа вра цій І Бе Щі Ба йішж ев бів тт ох оояфр " 7 Зк І " кех
ХВ 55 КЕ
Бге УВІ ЗУ Бі яка БбВе тн Ї38 бек зга вав аа Баг же ща Тег
Мох х ов хом - " - їх т Ту ВО я ях
Ту сСуУЄ Тбе Тв вра ТгРв о Біш Тер бек ТР оїує аа Тек те; Бі щівй
НЕ ВК А ут: ре : ям: Ук - Фе «У Е «ве ак хі ж ща че й ек ве ВКОа се щВіх Тиг Бенц УДІ ТЕС УВК Зег 5ег ові г ЗР вуж фев КО ет УЖ чі5 уза аж я Мои см ех то м. ше ех, за м Ф кв: ЧІ ОК Сх вх. дм ов, пе жк ях ро Же пох вва вт) веи ДІ Би Ба ет беж БЕК Бе Баеєб тіж БЕЖ ТНК лів дід о МБ ЛНУ що ЗУ жучок сао ж за охо ку сій жк хх шою ки ОК. фах Ж пд да іви БЕЖ ух Бе: жа! вух ах Тек Ме Бе бів еБеек жі Ме Уж ха і М 155 ЗО зе 17 1755
Зх їГ Іа зм: ФУ е-ео Жарких ЛИХ ж; ча щих 5 Фрези Су ЕК 2 о су ТО мя
БЕН іп его зе біб і Туг Зжк ін ЗВГ о Зже мі УВІ тет ж вга ше ! де З вна З
ІЗ КК ТЕХ
КР ес ма Ти Беж УВі 5 ре БУ ті ів РеБ ве БЕК Скх вах
М А жк
У і Кі діє шаг ші бі бі іо бюБ бів мЖжі бі за їж Ж пу УМ Бу віЖ Бег ів БЖ БіЖ Біж БЕР БіВ УЖЕ СІ БВ Се ши у «КК У т ня кам
Ех ЖЕ т 8 пежае пи же дж са з ж м ат та дю щ я як. ко лу
Зак ші іУ БіЖ ев Узі ОЇ вгО Зі Бі Жек ів дев Бу щеб сух сожюх е пуд - хви у х
МЕ ХО 5 а: о ще. полк ші См. шлак. Моди. СХ Яких «Ж жо фік Я а вл сеіхч
АТ йіа жек бів Бе твк вне бек ве Тек аіз меж пев тТкВ ож ява сви жах вра о фовію шик ве и Ко хх шин Ж ролю ій АїВ вРО ЗУ вуж шіж іже бів тгроувВі Щек ага (15 АгО Мав вух
ЛУ І КУ сет. -. сов. се Те що фах жк - х. . Но - ї - с тТук аж аж Ту Аїв ТВК Тут Тук ків аю Заг та і б» ак Вб
Те її ес вуз Аа дав жк ру дя ЗНгК їжи Ту Бе ЩІ МеЖ й ще З іх Іо а . з - ач, й, діях «яке, пк. хо к тах. с т сиекц. Ек. ях ер іер яр іж шін Во Мові жа тУє їхв Су УВЕ ага НІВ бІУ 7 ще й СЗЗ ШІ ЕЕ й
ЖК З Ха і Жіа ші вет й жує ме ких бу; ЕВ З жи ух «Ее сі в а5и Впе одіж аа Бе Тег щі БЕ ТТГ БЕ ів те ТКБ ЗЕ НЕ Ех
В І зах І що ж Я ВК
ТНК ів ді їМе Уа! ек Зег аіш бжше ЗВГ о фух Фі Бе бат УВІ ВВЕ
Зх З ло
Кт іви ай Брю Зк Яек іу бек Те бек бік біу тТвб АВ ЖТа вжи
ЗО Ух ВО т ж 8одоскю г, ж «що, пло, п с: осика кв хг. яка хек щпіж СУБ Бе Уві їж Б тує ШТ Бек жів Бр жі Тв о Уущі Ще те ме У к кед з зом ж
За З За я ак фек біх від іо ТНК дет бів тй3 міх те вве овке дій зі ву
Ї СТУ я Ех чів бек ве Бі Бе їУує Звг бно бЗегб ер Уді ВІ ТВ УЖЕ БгО аг
Я а З р Щек рем Бі ТБе шій ТВк ТУЮ Хфе Суб Ба жаї ва нія фі Ве а НЕ зах ек ах ТК бух УВІ вав вм і і біб Без гу же Ск ва веж
І т з ох з Кк М є
Б Ж чо тве оміж Тве Су Веб Бе сх Бгто ій века зів вів він 015 щі ве
Бу я З ЗО черв оці БЕ же Ббе Ме уч ев Ве) іже ва Вт ів Ме їі ще ага Тв ве: Бін жа! Тк Су ві жі УЗ дер о жді Зеб Ні Біб аз
Я 7 ди 7 ою 7 що Ба ЗАВ
Ве) ін У ув Мне й тт ТУг а де ші Уді вів Уві ніх хв вок х з я я ОТ ше я
ЇХ рез ВГ озу5 РРО ДР 3 1 ів тек вай его те ТУк вга тд
ОН " ШСЗ т кг 7 У
ЖЖ КН Во. її З т ос в. з Фе и хх тех дяка г г. я, - Сл з бак жі ве тве Уді фев ові «Зв да ТРр іє аа стю зу 15 ш- ХЕ ож ее З т факсу та з За Ва
Тук вух Сує МКує Уві Бек аеи Був АТа їв Сі Аа ве ХЗе Фів же ах Я 5и5 зх але сискк, пи Б скше же ж пах сухих Ер Жужню Кт ер о В бика Кв
ТР Кт Заг ів АЛ ВУЄ бе ів ге РО б РК бій за? тек Я 5 З : се Н соску жк сус ско шах щк ска З я з ке де я шия пот ЖК ве Вке БО су АТО В Біб іш ТВ Був жа бів І Бк ве ее пу яв Уа іч бі вве ТУ ВР Щек йо жів вії УщІ ів Те бів
ГЯУ В Ж М ЕХ ХК ТУ МЕ Б ; Кі ЖІ Б ПЕС АХ ОК
Бас дк бі ів РРО біюш ден йжа Тжк Куж ТВ ОТве вро БР жі ех
БІВ НІ Б» я
У хх. о хх х с тки Же Ж охг З хжугті си баахм ви скл о
АЖЕ Яег йо піж бек Бе Ре век ТуУК Чек їж ен Тег Ж? жав ке х - я хе ох. й Ук де. Ех наз ж 5 г. ї Ео де доз кожи . хай нн и з вро ка
Феє вве Тк іп бів біУ вий УВІ вне бек сСує бек ев! веж ніх бів
Б У пок, 7 ши - зиих
КУ 5-3 «3 ху ком «Ж кю тк Кл у Фо Ж жк ОХ хо жерти тії вів бер нік аа Ві: Тже Те рів ЗБ ек бек Баг ги ве фрЕ» (гу
З ваш БО ее МЕ
КВ Ку «їз ЯЗ люк кеди
АЖ Ж, С СО «ее ЖИВЕ А
МУК у. «Ек ух
ТК сорою З кН ХО жо ОД шко о фол кох я яхта; рек : г. біт 0 Берг тео Бі АР бів ВО Ббє бі Був Ск ви ЯТЬ їте ів 7 ЕЕ " хо КК х х т я
Зх БІ ча іш жів їі тк Біб в БІВ Хек ТК ака Тк нів (аг їх ів їв що 55 ї-
Фк о Фі ОКО, у її с ня Уа ЖК дує й о аж дек Зав Хе о
Ви Ге ем ще КІ ЗВ БУжх й вжи Зак З 5 Жек 3 УВІ РН ів
КЗ т з т т хх дух ща То ТУ Ще
У феод ше Фк божу: Кук Жах боку Фоучц фке тролю іч буске сКксає ча Ж їж5 Бей ап Заг рве ів ТР зо ав ВК дій ТВК ТУк Тук Сеє аа
МЕ біЖ ХТе Ткге їве ув? УВІ вав вар їже тує дій меж а5О Тек ТВ й вия кох Кн я що 5 КО а ци, юю жа вп де кош вІИСХ жошші дах хунку ож де жі ері т десни
СТУ Ба іш тТвк бегє маї тТве жа зе ее ШТУ Ле іже Бек ву
ЗК. пор. 7 " тю т 7 мож ки ою ад З; . ори. Ж Ж шко же ою аю КК ТК ща еко УО що ох ще бів се бек бі вія вію іє хек ші ТУ Бі Ту бак зв ше проку " З. ОХ ЖВх и пляж У
М М я г вок помер ди Жид, джу с ОК сх Род дики дю жк, де пух ше Ж проси до бій ер тве осів ве вро віж ек фев Бек і Бак УНІ щі а Не
ФК Ок в ОК т пратух їз МЕ 155 за жи ху кс кож хе Жуки Ко ши КТ сх КВ писк ОКХ, 2-х. Мам шт 3
ВЕ вне ті Те сСує ага віз его бів аа ів ба З тег Бен Віа : ЕЕ г ЗАС 7. що ЯЗ Ї
В ЖК ау жах кю ака ть м маже век Кук ву я Ж ож кв
ТВ їУує Бі ів веб ЩІ Я жк вк ве бів зве ви В! Тек ТВ с поту я До же ше 7 одну є Мини
ЗО БЕХ ща
ЖК ке Мешо кодмю ЖЖ жо кю довоюю ЯК ри бо «хе зуічах ледує. кт шок хіх «іх те вне се: йіх дав во Уа ве ек вто ре зе яУїх век у па ж, т КУ що т фоююке ти сві Фе Кене фено а Кохан Раш жо о февах З ак тв де ЗК чи хат щі Р щи Тже Бек ем Бех Кі ди его Бе т зе Б АЖ
З 5 я пе ОК кА ця УК а ді ТК і Баш ск уми КМ гу дк лм УМО мкс ж нх се ві а АРФ тує Тк су І НЯ ту тТуб Зег те веб гук твг бве ж ть 7 ек 7 7 тре щ проку
Ж ж «5 я хе жо. де Ж хи кох сек ку ЖЖ фони де жк З сег ж и зе ки и
БІК КУЄ ТК ВР КУЄ Бе ІВ Хе Був я щі біт щі бак ту Фе ик т Е х, таки Я т ок В зо. Тк шко. з Ж кате, а. вх. лях -- у іт те Заг вка бів вів вка Уа: жі ване Тк Щі і бію іж Бек
МЕ 5 | ЕЕ
ЗТ ке КЕ з. мо ан що Кук: шт ше хх Ми Ки кою ми се чКЯ -Е ча шок я хх ТК
ЧЕ бі» вію сту век Бі» Біж бі кТу Жак бів Айа Уж баз тв Тв пн ДЖ Х З Ж я МОЗ МК шах де вел ЖК ве шк рт до р ся жк пев ж уклін дедцо наю ві
ПІК БК ще Те сту іа У ТК те Бек дев тк ВТх ях тва
У плечу ск ї ї хи ож Же о пса Жуан и з З яко ; ла оці ох паї шк к я бів Бук га бу чій 818 бе аке діє вен іє Бе Бі тк Ак сх ї с ї є Е буму 7 хх КЯСЕКЯ 335 ик века ЗХ) бу ки и Ж сх г яю с се
Ж ж АТ ска Щіж Тве овке вв де ВН бек тю Бек оба ве бе я Зак т сжжу, х
В Зх в «и ще слрау З а ом змо Хферя Ко ой дк Уч о хх вик пр, . . сх щІЖ БЖ йта кій Бе те ем Бек жів вів с Бе Біб АД б АТа ках пат г сх, ї я ЩО Зх «Ж бе ее аа ВОК шо цих Ж еко а ук оди тон трах шо чу чів с ТЕС Кук тя ев тив о тТжг бек авт вез Труд вве сту ж
Ве щи ЗЕ І де «Ко т. горе х сеї ХЕ их Фу ї К хи их ку КкоЗх тра ак чук сшкук ил
Щі ТАЕ ге Бе Те жі Бе щу бів ве бе віж вів в зве 5 та -- зКУхих т кує ЗУ
З; КЕ 5 я жк ух ох ФЗїх М поко будую Ук жук дах ж Ко дчку м КК Кук чтхко Ху ЕК
Тк би вка о вгО РУ Бек ек б Бі БВ біб вів а Бу аз ТВ
З 1 85 шому МАУ Ж рих ск ск вау бо дна Жабо ке бхких жи що ек зефвше з Ж о що іже Уві СБ ев їі бегоаже вне ТУк вВко бе вів УЖі ТВОЇ Я о чих о їгв зіує вів а Бек ек КБо ві се вів щі жі шов Те оте ТБе 35 я ще вге хек іт сів Баг Ба вжАй іже тук дів дія вк Бак Тук ев о Бет
Ж а таті нта а є ще хх. жо а ах пе с. Се з шх ях жтваху ЖИ за їев ТВе вт ів цій тго ге5 шЖеє ніЗз ага Заг тує щеб бух (35 Уві я Я 425 о «жЖебжоаюо Мейо Ж п Жедиах СБ ми добовою усною мл Ж. укесх ее ж В ко яку
Те ні біо жі бак отнк ча) бім іже Те Узі Ав виз ТВт Є Су як аа що «аа У о ке РЕ «ва» хинереа «І» Ух цін жа! бів ев фе бів ее бік вк бі» вав УЗ діа Без бдве осів сени ж дент Ми СЕК фев ек сенвою жо мк дфочае и к: Кі хе ; зе Фекюю кр
Зек феш ее КІФ Те оСує ТвКочаЇ бе БУ Бе жЖек зв ТВг о ЗЕК ОТ ве Уа Я ке Ин ни А А НКИ звкомю ЖК ПСЖ у фо. ху шик ст ях ах п оку
ЗІЖ Ма Зег те оУВі ке бів ее БР РУ бух сб рБец 1 бе Б у О ак її те ТЕ З сх і: У Ж ехЕх 2 хх «ри о как Ка ще терка важ ах 1 їх Б одукк я Як
СІК В КІВ хв овІЖ АЖ Бі БВ ТЕГ ОБОИ ТУР МЕ БЕК МІВ Б У ТВ 5 ха щ шоку як за Жак Я у бод сі фа нам Же Кожух о бтахах ска г 0 вхо х
Вр ага см Бек ів ОБГ БУХ ахо АБИ Жег вує 5БК ВІР ча) Ре ів
Й ЗА са Ок -х ТО т ва пожи Ж суда дос а пох я шо СК щжеж в кох ФО Ж. КМ Ж шк ЗК. м ках Я
КУБ ев яв ек БМ БІБ ТР АЗІЮ ВО ТНРовіяз тТВе Тек Тек Се АВ
БІ щі 5
Как жа ск сю сухо зх «хе ожини шо жо си ко в чи чи «юка се
Бе бБіж жів те ТВе Ма:і Фа дев даю тує Тек ах Ве аа Тут Те
МОВ ї05 ме ен нн З А А НН НН НН а
Ві БІЙ Бі ЖнК зве ЗІ Не бал ав ще дія Бі щі бі Бе БІВ
Вк в есери ви чок ве і ки ж о маша в зу пан в ше плвшо ЖК сі сте зу зве ІіУ Бі Бі Щі з біУу БУ бі віх бдеб вав її 7 я лушю. т З 7, т КЕ. що т 7 Ох т ві: їх З жк, раноковко ся що Фосауск Жлодх, я що ах жо жа ушах оо шах о их ско в з ців шеє те бів зве Бе її бек бе ев Аза зве В ТУ 1 Ве 155 ЩО ке КО
М їн ші тне Су зба іх баг бін вза 15 а5о Заг ТУК Зв; ва
ММ. з 7 хе З и «док дві жу ще пав сять хх шоу кожних кусок жо поваха о єр КК Ох
Тк тує ші ців су Бій бі бух Бек РР бе без еф Б: Те АТ як о ж
З Їх ж де шо же чек п аск зииахо Жах : сошано с СК удо Ж оде пу здо веж до обу
ЖЕК оБлжЖ Те Бі Тек ЗБ ви же жів аа Заг зво ОТ Зак Тв АВ
ЗЕ люд бух «З кам же я й же Жук се Є - го ж ер Жінок ве ках ку ж в Р
УВІ Ат Вед оБУЄ тег су БВ НУ БУК отТУЄ Бек ївне Ре ТЕ ри пе же М ІЗ аа біт Сує Ер тве зує веб бів Х36 Бу б! сію Зк тю ее Бі «і т я хиб ам з «ко З ік м ж х
Ка 5
У ки и ам ек яку Ж Кр вид ек, ек вка ще си кеш Ко же ; і щіБ ЗК БІ ШІ ТУ БЖ Бан БІВ Бе бі РУ Ту іЖ щі Баг з ї з КО - Я еф 7 7 сф з У т пеки ке ри бю охо пдв ул КК и ик др: кеди ж жк мови ук «Ж ж дя и,
БЖ НУ ші бу век Я ЗКУ у щі хе віз і дії УЗ же ів т ї 7 які ща ще ся що сах
МЕ КО КЕ мо ки дже двери Зк зе жадає ден жк ке іже жі З вудя. МЕ фткуж іш ге сокг во Твге Уа Бест око 1 ЄїУ Те ув тТве Бер їне Су веж теж сек т 5 З біт хек ее ТВРОСІУ ків Уві Тве Зве ек ав тує ай вав тив
ЗУ З ЗЕ За у тд кад пудини сш мк ОС ож. 5 хо деко Коко ЖК с аю ан ром з
Бін бій ух вва пі вів кі вне ака бі іо Зі Бі КіжЖ ЖБК дЕв " Б. у п вив
ККУ М ВУ
«вик. сову Я Ж г дея ка х ск, Кх: яд ЧК Е ори ще - т - Ко хо же - ов ЛЕ -
У аАгГО вія КО іУ ТВО БРБ БІБ ага Ве бек Біж его рев ев бу се ших пк 7 уки з даю Ко сени и чи Шо ше сис па о пу, -. дз с с. де «і же вів і Бе Тв ее жег ші зів За ВЕ Я; де ів еВ ве ЗВ Зх их сбукрхо ЧЕКх ЖАН хх ЖокшІ СЖеачех Кікю какао щоку З одада Жук прю оф КК, са Я щі їж УК КУуЖ АТ МВ ОТРЕ ТУК зе Ан Бем ТР ОМА Ві Те ліку з т пек. и пере х
ЖЕ Зх З пе ша до в оцавмо коки ках спо нн и НН Не Жкхаких Коуши ух
ЩІ ТАК Бу Бе ТВК ці і ЄЮ вів Бе ех віз ів Бе 5ве Уві чек 7 7 сх хх - я й й селу: с Й Й ВИ зе М ях а сер хх, хіх ЗВ тихих о жежвІм КМ оз Я ех КЗ з З ко Ж дак ВК тез їнНб ее Бе Бе Ре аб бек Бі З ре кі Від ме ж АВ ОТВЕ да шк жу б ЕВ 1 ща. ВДЕ ож В Жах я шо ів вже На Бек шВКУуК Ж вд жк Зфко щі Вів
Би жа Ємш Бе КІ БЕ а БИ Бук Бе ока зів У ЯЗОК І а длЕр: 7 й а " ЗЕ
Кк веж КЯХ «жінає дове жо фокус ік в ве поко се я р ка и їжи БУ Бі Ба ет вк Вч Уві ЗУ Віз БІжЖ ша Ів Те Суве ТВ : ОКХ ІХ т а 7 й п Кей а Зх
РР Зак Ух Бі ще ав а в: ТК ій ві Берг ав те Б ЕЕ я ях Я меш їмне Бге бів бів тео Бу Бе Мія ви же бе ее Се еп за сайноко ай хо м с и кох со п а ТО ж тю де Ж КЕ я де, фах де ЖІ прю
Те Віз біб біж Бее Те а ів бе Ве Уа! Б БеО ТК БІВ Сех 485 аа 3 ж «ие ВИТ
ХК Ж жахи че АЖ КН а» С піп а с кв: та біз бе ів а 1 Уа Сех іже ВЕ ТУ аа ї х т і їх о. саке дк Й Жов ж ект, ск -одок.ук. Кл Сех жук, ак «ке ск ож деко «ц, ей Хек. си. пок ок ща Ма У та ек сує У Вій ак бів Же ее вве ве і тв пуф ее ще Кк чаї Жир У Ж хо ШЕачек ях Ов я КІ вх З зії ке реж зе
ПОМ Км мМ ОК МОМ Оу КОЖ Уж МО ЕКО ПДМ КО ХУЖОК.
МОМ ва ЯМ ЖЕ ЛЕ БВ ж КЕ УК Б Ж ОМ ЗЕ З ЕХ см х - ше з тя паж І 5 а Я мок г ка я вх теж мод жамамь ЕК Жду ну ах умо шк ом Ж оф шо щік Бе Бі Те БО тує дей ге ат Бек бев тег кА мів У ме зи ви ЖомекУ хо шко ОВ хі ожеих СК ж ж Су М ние дж СКД я вага Бі Ух дії те мес тве ва ваз» Не ек ТВе бе ТНК уд тк х т та гі,
ЖК. і п Я, СЯ. кіже, кож, ж с ижж жи ще с «х З зл ке. учи, Сн е вів вга БіЖ бі Тук дав сі ау бі ве йо тк тва пі вв у - ОК Х ве хх ОХ КК ЖК КЕ КУ я Ку як
МВ я ЕЕ я ; 7 а з и з. г. Ж. Ххкювю СОКОВ. Я хан ск хо те: жд за І
Тв Без уві Тв жа! веб его вій кеє тье ув Фіх его бек ха Ре 135 Ти дах з 2. а сххк. с ті Жах и ві ж вх КЗ її
Вк) бе) вів Веб дек ве МЕ щЕРотТне БВ ОБУ ЗЕ Ів ОВІя БЕ БЕ
З М З
З І в ак Те Ве вто бій ке чаї Твк Мі Хоб Тео
От; сСує це ма! бів ах їже БВбЕ БРа ЄБО Бе жа! тяг Ома бе ТВ
М КЗ її ЖЕК
Ж МК і ке « СЕ. х с що Же ак ще шві ніх Же Бе веж щі щі ів век зак БІ АЇВ ОБО Те Бак бі бат нія Тек оРве вро АВ щі ща х - ц що зе ше пока ру зах жи ах ВЖЕ же
ЩО чаї мае і цю ке зшожаг уки у Ух ОХ ОО ХМ
Бій ща Бак бі це те ЕК ов его Ма Ущі кя т З
ЗВТ ЗВг Сей у Ле а ЕН ТУ я у жи я З що я 5 лак аа ТК обу ЖаЗ ев я ЖЕ Ма ТЦ В го іє Жег Кук АВ т
ШИ Бр 7 " с Кк Х
КО М КМ іч зе ве іш і вів їх бек Ів щі ша чаї ТвкОоБіВ щі щі ців щі Зег шіж бів ів щі» бек йій вій а а Твій в п К г х п ж ж ге дк с КК : сії жо де фу ем што Ж пе Ж іже тв ж ЕК
Бе Бек ву ТВЕР уві Бек рев біж бів тбе Уві тк рев ТВЄ св ЮТЬ ши баз ЕЕ У
КЯх З
З т ту тег У оті сх Кік МЕ: о НЯ
КК СУ ЖЕ т Є З с ек ХЕ «ху жу Віо жоае СКВ дв Бех
СН уз реко бі» «ів Ле вве вва Ту кею Тв є» ПІК ТАК де вв 7 а па ТИ ЧК ху у: де ЖЖ 8 му ЖКмух си г Зег їв ГБ 5-2 я щі ж
Ага дів ВР іє ТА го о ага Бе за Ту Заг ен ев У ох ее 35 З х фак жна те че їм ва я дня й «в Бі аз и іє віз із ши Тк бе бег іх вата ів во ІМ ВОЮ БИ БІВ з
З В и ЖИ
З З і КОХ з : 4 сю За дна жук ши КО шх
Кк с хокею прю І дв хуй. СКК ак МЕ щі т В
Ту тує Суб АВ іеб тер їв Бек же ее Рв ОУВЕ вБе тю т їх
ДАХ хи ВУ х і г ех чі іви ек ве авіа бек Тк ту щіЄ вро же чаї
ТВг із вв Тек тЖі їв ва в; о й Згоду 15 сів жк І ша Є 7 КЕ жа СІ
ЗНУ и яУЄ я іх од Зх Уфа оц Жид зе Ковані зе ЗА ЕІ Ж «їі
Вна БеБ рем жів Був був ее фа Зв Тр ояекК те сію не жі я
За З я що - Я осожодможжо песик сани КОЖ вже сь ж док я дис, вав осів Сук ве Ми КУБ йяв ТУ Ве овке За вом ТК МВ ве пишно ння хви Фон ВВ Шк З ек Сива сою вки ен аа ж се Жах се пе дя" ЕТ пі дів бен таб ве і Ж «щі НІВ ТВ Ж КЕ ІВ же жу. У пе М "жук Ух шк
ІЖ5 Ж 5 щк - сі Фекрех Ж га Я сля Стчах сови даю Жака во їх «уч кій дю вжи щів бег Хес Фі без ТУг бек їв сек Хее о Уві чаї Тк Уві Бго ящУ 3 ня аг ок щег ів і Тк бів Те Туг їі8 Су дае Уві вай нів рух че т з ХК - ден У
Зак щих Я хм З хх -ку ж З см 1 ох ХХ ев а ех 7 ех зму шах Км дя Кок ж
Бр его боа Те їх жі АБО Бех З Ві бів ве бе его сує ев са аз а Суєта Ук У ча 0 жу хе срака Коха Ех вх как ук вже тТее ніх Те Сук РРО вгОо Сує вро ді во бів діа Ав бі бу а ух Я твахии бю ВІ ру х км се. фкоєу кози З зем бути Ж за ех СЕЯкІх дозу БД Ж їтее баг жі Ра їв Бе РКО Рг бу ВГ бу Аа ТК гав Мет Щі де ко ! КЕ ше 85 БК я Зк тихою Жоотяк Ка хе Своєю ях ж сх ск ех Фе ок ве ск тур ст кока тег ага Тйгобео бів ба ТНК ос Хі жа! УВІ АБ Ві Баг мі В : Каса я А Ах чах щі З ск кеих о ка бу ї хе жо лю дек суУрежх зи де я м се жк маю Ко вав го бів Уві фо Ре аз те ТтК жа вові Уві ів У Мі5
Бе щь І
Фе. ОВ з 2 ек кох ї п яке Що ет а з ох МОЖУ ями зу Не ех с вл дів фу ТВР о ібУх ВБР Аг бін бів вів Туг дов Заг ТВК о жтжК КВ
ЖЕ Б жа «Ві чаї «ак ба їБви Же а ев Бі Бі вх їгБа ри дев Еш їв
ЖЕ ОУщЕ Же ЖЖ Бей ж же Баш МОЖ ЕК У БКЦ КН Б КЕ Ку х я 5 я
М ее рек ух ітк щщіЇ барв ай З ух дій із сію ів буре Їїв від
СІШ ТУР БУ См іу УДЕ ЗБК БВ ж БЕ фе БЖ мів Бе бі я хм 555 5 «аа Ку СК діжа Я ххх ЯК Уж ші шах бемч о ух ба Буки їх ха рю
КУБ ТНР КІВ бе фу ВІВ У бі дів Бей вк бід ке зів Уві те а БУВ Зх кк та Ще їжи их У шк ги фак Жх її жу тво ов дж шк
Тне БВ Бе Бе Суб ДР дБ Бі: Би Те їж вв бій ва Бек ву
ЗАЙ 55 м
Чат птьких Божі сн ЖК оде жі у ВК сиве Бруси айає фа і Я жа хх бедх
ТВ СУЯ ЕІ ВТ БУ бі БУе тек ВгО щен ар) хів зі жві 51 ТВ екз дю да ух ше зби ВУЖ кома до ки офохи Еех жфшіи фаду вхо ху дій Бек вай пі Бій БК із аз вен тТук вже ТНК ОТВе вка вк Уа
ЩО 5 що і: Бех бек вер фу ее Мее ФР фен ек Бек век веб тве ші Аве сок Кг. 7 Ук З их о я :
Ви Б 5 Мен
Я зд Жодвиях жок бек В сок шу ба їх З сКбих ббдко дфтьсум болях
Хот же КЗ Б ТЕ о ! ож РУ За УЗ і ве я я си БК ж ЕЕ щі я Жди о В ш шах жук У п псшио мешкшА са жи се х шк, 51 АТ вв Вів аа віє Тег Те ОТ бух БЕР БД ЯК ги еко БК
СХ мкА. 7 ох,
ТК БО КВ ех роде «ко ВЕК «ВЕЖ» живе рНА дих здо -х ке с баках ку хо ж; о ий же сх ЖЕ и сій ка бів во Уві ія бе У ві Бін УБі зу у БгО Бі ВХ : Е ЗЕ І 3
Ж КЕ 5 шхкоут Ки пут. прю душ ою Сорок К Ом о ск юю Ж. Кін: Се ук ек щее а Су5 а баг бух вух вія бек обі Зже Бе ВВЕ ТР б Тек жо ке БО
Тв Веб й тво та ага з'ія іа во бі бій іх вав є ТР МЕ пі ев жів ЗБЕ бує тТкгояБи БЖ Віа вт ожег тує век вів боб вне
Е ху 7 х У і: з ще їй м 5 що хом кова ра Ж р о ЕВ з астю ож жодре КВрше лух ж ре ох ге щі сек ві ТВ щей ТБ жа 5 ЗК Бек тне его УЖЕ Ту
У Мт ху Ех р
ВХ З га що кож Код. де фак Еосуєи о жо баку жу; фу и СЕ АС у Кі пек ТК ие час Ів ви г ви Се Яга ТНК дія БР о ТУК Вже КЕ : Ї З З З
В; що ва і Зк сжцеах яке дак Ме Кок ее тек ха ке т В ща ат міш І БУК аа БЖ КК БЕЖ Кеш З УК ТКУ зу дже ІК х я ТЯ - поаце : х тя
МТК ЗУ МІ твБ Бен жа! Тве шві ве ее вів аа ТВе фу Ру веб Бек Ууді Бе ще АВ МВ
Ще Бак ові дк фор ак З м Ех У о БЕРЕ ба у ник вх щі 25 Ех
КЕ ОКНХ бла ву ше я ВУЖ жи ж дже шу жо у ЗМОВІ я ЕЕ
МІ Ех поса 3 а ЖАМ шо Жкг смути ву он щу уро 5 сУуогух а шжуик ДНК В ЗК уах с шеку г Ка
Зі СУБ ів Уа Біб ав ТуУК Ббе во Бі Бо УДІ ЗВКЕ Уві Щек те
ЗЕ Й ух Й Як око їх 3 55 15 дат я сіє жів ви Те ее щі жа Мі Зг Ба бе; іа ва ве сту сх ух у жо за жк Кору з дууж Ж зд ЕЕ Спеа е ще х щі Бак ват і ем тує бю ем ев ек ві Уві же жі ве дає ж г зе ж а хх з ар после СК шо тех се зи Фо, оо я
Бак За ше ТУ ТВеР обі Те те 16 Су вав жі дат нія уж бе
Му дк рах о гум и вач ковукх ЖЖ. Я поко жкмхю о ух щи -. ше ек аж ТвгобУв Уві еВ щі же УВІ ів Ме; ух век Стх Аз Був
Же т ж
Че ві: ба вне ев та Кз йо 513 веж їв ж ах Те в Бре
ТВ онів тТве Сує БЕ БгРО ЄМ Вт 3 бе щі Ра ків ве У ВЕ хи 7 "т т туту 7 7 ска
Кн 3 І я вк УВІ Бе зво) Бе РКО РКО ву КО ве де Те фев Веб їі ее
Бпе ж УК ен Бек зе ах 5 Бе ага Те ве ів ді ЗВе Сея УВІ Ві Узі дев Уві Яее нів ів 55 ! ія ке вв я 255 3 ке (ЗЕ Ж сек жа фе бур ую 3 ет ж аж ж: за щі ж веж
Ек ЗМ УКХ АХ ОК КЕКІ смиЖх хх ж ЖЖ ж хжКх ДУ жах МЕ Жак ЖЕ клю жим
Бе 3 а: У Би вжи ТР Те У дев БУ ВІ ІМ ЖЕ МЕ вої
Бе 7 Ех 7 зуймЕ
ЖК ке З
Те сокик сажі, косу шому Є, де шко и косою же жоке б жо шою А ій іт ТК був во Аг ОВін т Бій Тек дБа ек твк Тек аб Ка
БЕ ха З зако хх зх - е ух З Зк ЕІ р ше Тек охо о ман вик й
УЖІ Шев Узі жи Те УВІ зер ні бів йо тео бе вай іє їж Б ка. хек яю ук Що 7 ск ух
МЕ ЇВ 355 а
Те їж СУ жи За Заг айв вжи дів ве Бі вів ге ів сб уз ! та кі а жі
ТІ в хЗ че «а жд ех чо й їх се Та ої Журау бер й: ка, він Зо дн Бк
Тож ЖБК Би Рі БЖ БЕЖ ЩІ ОКРО Де ОСІВ Ре Ж ЖЕ ж ЛЕ
З Зх я
Ка: вт Бго ве аец вав Біб ев ТВ рух дов бій з Хеб рен хек щу ЗО з сив вій і УЮ ФК Бе Тк бб'є бек йще Ків аів ві 4 те Я пох веж й
ЗУ щу ЗВ ки ж Бі Ва баня. БО: ж живе скеуд че СК Бх СКіх кт пси ак Її ахе
Загб два щі бій вто б аж вай ТУ веб ТвВве тик БР ВР Ві в
Зх ЗНО З Бе ка ях БЖ Пи о дику хіх с т бах пом і кб ків ом сиве вав Бек Аж ію ве Бе Бе вер хз! Зег ому Бе ве У ав ук
ЯМ 35
Коза скуті ка. Я СУ пит ж оо ж :х ее у х кв; ку мож, се се і до. Суяй
Заг ода їв осів біб бі адже Уаї ВБе ее бух Яее Уді Мек міз 1 й ах 7 СЕ є жу
С ях я
ЖіЖ Бу НТБ БК НЯ ТР ОТВЕ сіб ру Шик во баг іб зве Ве віх
З Яка к5 ж кеВ В ж, «Ех 3 «ЛЮК З шву «ее МЕ шк, піни кдуютий хом 0 ЖИВ
Ох Хе т «НЕ Я хе жів щі ва тТве За ее Бк вк Еве ЕзнЕ ве ява ек ша ще
КОХ їх ВЖЕ т МУК Козак ЕК БЕ Еге К КК ЕМ СК КхКх ЖЕК ж Бу З Щох ск. г ж Ок жк пек жир у нки п КК Бедоао МЕоде во до як хх о ук вишу а вка і те жів Ве Су ее дій ее зве ав жа бек Бук ВеЕ 7 З щ "З Кі
КЕ Кк ЖЕ ша кю З рткхо МК я фролюудьо вне Є ки подике : пек. ово ую Ом ООо ке ШК и
Міз тТбО Ту бів бів сСух зе біж руб діва бе бух Бе ев Ме тує х Ми т ша з 7 Ж. 7 а Бе що оброк дк дшеддю о од оо кожно посдехри мушка уж ок ди ве що бок ще Ж веде аа оІнНЕ Хе фе ібн ій пев Бі уд БР ве Бе Б ЗК ЖК Бе 7 БУ У що я ї ж т Ж. й пере ша цк Жах о фе КУ Ка КЕ ди З Ж сх хокаєо і дю «Ка бвна ; піж бек т ве ав Ба тТВе бе те бі бе ек вен бій Бе и ше т т КЕ БИ и ї-е гі т БО
Ко сек їх р «шо еко СЖрядх сус и ко ШК дж род Ж дкох шко ви чК ук Бозхгї ХК ве вне ав Твг отУк теє с бів бфе тТеБОЗВЕ КУ НІ ко веб отв
Б 8 в ша три: роя жа кв а о що дю я йозі фбудудк КЕ слу вк КВЧ горю бе Бір ба Бі Тв бух беу Б Ре БУ Ба тв Уві ве ока ВЕ пу ру Б " Ух - - Не можу, ще її Її дек Уві Вбеа 1 ЕЕ БЖ БКЄ» ее й вт бе БЕ Бже БЕ щу те ро скостех. 7 ж и Ех м що ЕО т85 о Ждкує ве поли хи Кокс щі джу КБ кот Жедояу обат дХфро во ко ід бас ж! Уві Се Бе ее вий ав бе тує бе ее ТБ А Бу кю 7 жк лю. "7 КО "
М 5 Я ші ож Со в НН НН НИ а НЯ п шедюах у Зо сжякоук, ких, ек, миру
Уві Бій ТО У Зі в вам вів Б БІВ Бе Бі ай ЕР БА б ж: 7 7 и пок, й Би З : и
Я З 5 в вах Б ї В їх їв З ек ща ве жк бе Ве ІЖеКи БЕК за Жак бу
СВУ жа БУ КК Ск Ех ХХ їх УЖЕ Ж МКМ СУМ ХХ ХО АХ МУ ЖЕО с зах ' Од ТУ
КК МК ке тт ев ТВ зе а ру вів ев ТЕ ішов ніх Бе УйІ тУук ків
ВК р Бех йо з сок 7
КУМ ІЕ5 та
МБ Б УВІ Тв Ві ее 5 Беб Зб Бк вРО У ТМ ж ее БЕ ке З ФІЗ сошеушо Жди Ук яп дай же діт тв Ух яку ЗЕ жеіфйж ВВЕ «ЯН Ж бін БЕ ів сен бу бо Заг бі Бгто ів ву уз! ія ее хекоєїв є що г пк Н дах 7 Й
КЕ: Я Ка 15
С їподуюту спек КТ ско ску о пох с Ух 278 Зк ат. як 5 шу АВК шкоди -ецо о его сви Щек Же тТВе Су ТК жа? ог Бі Ббе дек ев Те ще тук ке Ех : т ху з «КЗ а Бе
Ж жк шк дух ках КЕ зу сет Жхув Квх де ска сх пе Ку пк огх
Фіж УущІ Бег тт ві дра бів вра бте біж їж СУБ вен бів те оБем
ЯЗ ща У
ВЕУ тв ті тт ці вар Бій ес ТВ аа ЗУ ніх як аїа ем ті
Й. 55 БЕ
У ше як, х жі: Ж Ж шк з сю ого кофе Жак Ск хау Жде УК Ка св од заг ага СБ Щек її ее ве ве вв БЕК рух Заг ФР ЖЖ ВЕ Бо с щ ке шесхиюю Ж ско. с ху гоже, совкеяк туф ко я «би сих Сил й се
Суз сш Бе яв свв шій ВК аа вв Те ат Ве отТУю Тек Се вів шо с 2 -к5 п жваво до жу ЯК я з З пе
КУ і Бі тм ТвК ові Зі йо аю Ук Тує дів Веб ащю Тше ТКУ жи вк ух що жав У жах ЗВ ою сон ит ума и вх ау ші шів сть Твге Бек В! ТВе УДІ Баг бек БІ ТУ бу Щі ве ту їх Кк КЕ ї хо Я " т
Ж ЗХ ща совок как ей жан век век ах с же ої фе иа Ку ж жа Ух сі біж сту бек сік іх бі бі ек ЗТ біж Б ТУ баг вер їв
МК мк Кеди "Кат ил ух Кук ке Казка 2 кош сш дних В Ж кю ж леж мух с 5-х вів ще ТК Бій жекЕ вро вій ак Бе: Хе в'я ек ші б Бу Тер з хх пу Ки и З "7 и зу ща ЩЕ 15 ЩО її с в ЗЕ чеках шк рю Ко жах ЕоНе СК зі сет. їх жк Хвих г й кг я
УВІ ТР охІв8 ТВ СУ веб я Бек БЕН аа ІБ що ее Тек ве в тк ТУ пі жов ої жов шк іх жи руч щім іі вжнх ща Же а
КБКОЖУЄ ЯН ЗБЕТЛЬ БУМ ЗО ЖЕК Вуж Бе БР ки БМ КЕ жа ри жо кіна в фон КОМ око мох ви ше киеідк код ВВ СК вед я із ТР оба Еш Бі ев ах жі Бе ваг ато вне ща ші ве
Е - хрмАх " " «у - -
Ма шщ ЗКУ ях ню жо ско в ов дак сії кі сх шо ЖЖ. з вка Хв кю ак во баг оБіЖ їв БІВ Тек зеб і зує хів аа Бе Бер бів ав ів а ам а ак за шу йо; сКщожо сКЖукхо ск у дак рук лу дух СКМ. вфхкух пе пвх
Бі ВІ аку БУЄ ТжК оС бі НЕ ТУ тТук Фае ТНК вБеО Тек те НЕ шва і яки ах Ел кое Те Как оф Ко і в о їх Жов паї св
МІЖ КК МК БОГ БЕЖ БЕБІ З БУЖ ве б ЖЖ ІВ ЗК В: Б
Б ке - 7 люж
Я. ше а ска шими в жд ШИ джу дж пд Кук дом. САМ ФК ху оо ок виде дах яр
МЕ ОКРш Б ЕК У КО У Бр вищ и а нео «а та же шу
ЕЕ ! пд ва Уржух. т я 5 ЯРИ
ВЕЖ КУ ів щік Жак у бік те ж бек бі жа ія Без вви єв
Ж " Я в се дя М о ск: жо ик пера ша ока и ут вдач я че я Ж ії ех уки ча Жах фл а Ко 1 НЕК Ж УЗ З КИ щщ ФО ГК 5 ЕК їх Її ще КОБЖВЕ І ОБАМИ хх Е
Б шк М г те У Я й ок т
ОО АЖЕ БО ЗО
З т ду мою а. "«Жом ЖЕ Пи ЖЕьк ЖК фони Ж вжи ко одкуху «а жо вії хек іж вве тв в» бек те тує ліз мес ан те КЕ яка
ЗО БЕ З Вк вів вів вк бів сує бів ее шт тер омаї зек ве тів яке лек оюує заз Ощщ ЗЕ се : Зкухах Ж жк мух реф Ж шо юю ви фору ж ко рою ке
Туг ва КН жк ВІ ТК тує ТУЄ яв ав бек хв ГУ ї5 їх га Не
Кк» п хх ТУ ач ке же твкК ож в Яве дер аа ар же ви Р бе р Бе и Вк Ви т п т 7 лк, и - с,
Зх МЕ За що : - п ж колою м: то ака сх сбкугюх ваш в духа ку ЖЖ
ЗР ів аку Аж БІВ Аа те вів жа Тже Тек ее
ТЕ к т т ж т "7 сети -
Бех Ух ЗО с ід Же роко Ріта дк жк фо хо жо ск о жо УЖ з НЕ Оіж вав ек Тек жа Зек Те Бе ів ТУ те ія дів Оу
КК 7 х вже 7 7 пед з ше 7 дк
ТВ Бе 5 що ку ек дещо ек ка жене Ж Ж ак ке о юю «рю каамею Жуйка
Те іже Уж! ТвР Уві Бе ее Аза ще зві та діа ве Бек ж Бпе
Я З же 7 ух охішн и од : ке ху аку дув З ше Ша вх у Кл зе т за
Хі вне ве ово бБегб одаав Ба бій Бе бж5 бек ор те жів ек УЖ хг ке СК М - М
Зх ЗЕ о о ж озжи: йод дек шк жк КУ о од УК соя сх ока СЬКІ дк ЗК дов
Уві Су ве зе вав Бе ВВЕ теє БЕ ве Зі жі ж УБЕ БіЯ Те
НЕ. ях се о з ежо вк Ж хх ато ке пока Еко був кока ск ак их ох ху жі жо
ЖЖ жа ев вка йтй зви с жає бі дя дек Фів ін ек Уві ТЕ
М ах БІ ов они ев МК Мо ки жду и фа уза фбрвие їде с фмю Ждух зефуах й зії Же
ІВ Бій я ек бух ар Баг Те Те бек фен ер о щев ТВ Б ЯНе
КО, 7 ЖК 7 й стек куки
Я Я чх ЗО
Я до ик. кова ох пи есе ве ХЕ пово Зам в окише чу в дю фу жк пою
МеВ ваг вух Ж ав Тщк 3 ЗУ ВТ МБ заз тес він су Бі У - Кок, т чо т хх 5 Б я пак Ки ук о шн ОКк о жука со дк смужок Коли о ем пд ху кЖКу ми о ж дл, сок Ж
ЖВкЕ нія пів біб в чего шев Бра ба ЖБК бе5 бек ВЕ ваз вага ще ту Ек ох з і: що ЗУ в «Мх КО кас що ие ВЗА
ХАТУ, твешту: «Жах В «їж Жищевна «В» ЩО шу ж ую «ін Уві бів ва ру СН бак ттхоо ловлю мясо еле зі Же ж КЕ Ух сін жа Се щу Є о ікц ма? щі; о шо. ї ве т зни Фе шу Мен Уа! та Річ Хег бій й о. ї пра ши -
М їх
Жак а в я кт Ен іх х ск чав зи вве З тТве же Бе ші ее жі ВНе Ек ср Ех ж ЕКО КуЖО ІБ КУ ще Ж БНе ак ЕЕ те ак че
Мод ж ТЕ як щі чві саке тив ка де дія вч шк
Я т. хо ВК ОЖККЯ Ж отже Бра жі Я ве бю Ж окіх чоохжу вк в ожЖа АР БУ 5 х че сіж бе су ев ОТ ТК ву дкурих ж Як ко и у
ЗУ їїв жів Тез іч вав іє Жаб те аа Тек ЗЕ - ще МБТ жев с у Же ТК ав стук БОБ ЧА ків ше ВЕ
ІК 5 жа 5 МеВ
ЕЕ З їв ще яку дами вот с .
ЕК Оу, (ща ЕК КІ Зег Іх Ж: шк о г я скит ДИ ду с й ше ши І ОО щік ма вве ре щ- ще 35 сок яка дк з іч ів ат Щек ЕФ Ер З кує орі ко Ме
Я ГБ МЕ ВЕ ее (ів зве йо вер ве аж ТВ Ту ЗеК Се хів ща І ок БО ен 7 у 55
ЖЕ А ск ке «еле ку зе спиш кою зд - уз бі Хі тер отнк уні У) дер ав тує Тук дів Мет аБрОт
МКМ Зх З Ж В Ж Зі
Тл КЕ іш щі шу ТВК ще шя :
Ще Ж В шу таке ке зе тн де учо КЕ ак. вк -х ке . ' СТУ Те Как жа твк жа! Хек хек бту СТУ бік ТК бек ту ще ї1хо ху Ще шві й
КО ЕК КК і З че кі щи ди; и я Ав: Журі Ка Щх її ше М п а
КУ ЗЕ ї пі МЕЖ Тве Бій ше веж ДЛ
ЩЕ ВН ЖЕО ЗЯВ ЖК рю лі бе З Ваз ди до жо : її ши ій Бег кан Бех та Бек У КЕ ТО ТК
ДУ СЕ У Є ОКХ ГЕ
Мущо осв жов см с . у
СЕ отв та жи ев ее Бк В, се : " Кі ЖЕ Суд ВК ВІВ За секс даю фа фуевио Бк . ше Фів ахи КК АБроЖеє Тек Бао АТ
КК, 17 х шк ; Б 5
ШОУ
Те тек Ж алко г хи а по . я КО ЖУК К ЕХ шо ж Же Кк вехо Биве» Жую пох - х и ВИН Ж щі іш бе ват ми ів Га БЕК З схо я
З межує по те Чів сен ва жаї Тк аа шо ЩО зів ТНе вче сер АВ АВ АК ВІ РОЗ : кх ЕКО ОКА ТО БІО ЕТ ЕКО ЖЕ захв ойлакує ба жа дю Та, В ке
ОО зав Ме Ре оче аг сне Бего бів век тв ше ж зх 7 п тт Ма «ав їм фо об г
ЖК У ЕщЕ чів Утаве Кбизх су кої є .
ОК ЖХК СКК УВК МУ СХ ВКЕ у їмо їв ов ще сек У теки дк о ши: шен в ОО
М А З к яеЖУ ЕХ. «з: віх ака тер Те бує ів вий да КК ММ ЖЕ ЖЕ МК Е ТР ВЕ Ккве рерр же кит сети щу у «й Щі до годек з ве ЖК Я Ве ке хх 7 Се
КА ТМ ії сюе те тв Був сви БУ Кв З с 7 ме ту тв С БЕ «ім же Бек ів ші ше тк и ка
Ж 7 Кх ку КК Ж Я Ж ЕЖ
Е Ве. се 7
Жах шІКХ й к КЗ В «шківи Як фі УЗ ву Жекуу МО щі ї . з Ж щІЖ ках ще їж ца к щі ще «і Ф мн Фі вам бі ві ке
Кк - ем жу ту ЕК ЕМ вік КУ ЗБ
ЖЕ й ох ЕЕ З Ж що КЕ ек вжи я Ж дав ше р ки пока Я СХ ях біу 1у Ту ТУ бек Фу ФВ сту пів бек одів а бів вен мею сті
КТ КО як
Фа їх ож «3 хх 3 ща зе шк кед се ТЕ Уч н й зебр ТУ БТ вен мі Фів Вт щі бі Чек ін Ако ви бек Ск
А т миє я щи й т я а ЩЕ їз 35 арк іо іх Же бе а ОТ ї св ; ака Жек бір Вів ве Ре Бек отвк Тук із Мет ай ТК Уві акад
З ЗІ З1х 350 єї в: ким Ех ве их кож: соя пк г . «і зів віз вт Ту МУ біЖ Би б КЕ ча Щек Ага їів ду его ув
Жах 3 І зеівб дах джу бахаї Ко СЖЕр жах чук Ж ДИН ЧИ кто с о
ГУК ой АБИ ій ів Те отже ТК ятв яв Бек Уж БУК бі аг вне
БЕХ ха І
З аа З зе ; є їх Жане же дае се жд дом шкехк СН хо од Ж око с
ТНК дів ще аго Дер ОАЖЕ же ої йей їбР оц Тек рев БІЯ МЕЖ яЕй ях 5-3 ЗБ
Живе фах дк Зі ві, ках жі Аа лив ст бе де м кі - бек іво аг ія бів вже тВг ОКА Ма Ту туК сув та! яра я бу
ЖИ а ЯщО ях Б Я вето бере ре гі Се ще ах. ж ож ще ск І т Не бів зав же Ук УК Бек тер ке іа Тек тт бі 1 ж
ПщИХ Тр пра З ? Б ху з За ках: Я сф і дю я Стах зай в фах я - си х з -
Тне Бе жі ТВ чі Заг же а1а Бек Уві аів вів вк бек жд! вне
ЯЗ я ях " їЕ З І я: в Бе Вега; Бека; ее па «хе ик скажи ЛЕ. же З г. ї дв вве Вго ве Бе" вер Фін Фів ве кує жежк Фу Те віз Бек ді
Те Ох ї І що
ЗЕ З 4 ЩІ чаї су ів іви ав ДЕ БНЕ Тек рео два бін дів іт чаї З й Сух цец вже аяй ЖЕК БЕ Тек Бо жк бів тя вв Ві бі тер а 3 335 ії-е ва вх веж їз ка ск Жамх єю деко жк ек г:
Ух та ажр овяв вів зе сів Бек біу ба его бів Бів бек чаї те
Я 55 Я «и іп ахю его іх аще ек ТК ТР щаг бе Зег вк ; ! АБВОБег Бу АЗОВ жег ТБК тує жу Са Заг БЕК ТМР о ївц ТЕ
В ЖЕ я ЩЕ іжи чек іє від дж Те бів фу ніх фу ві тек віх ж срок і ак іже Вів ще ТЕР ЕТ Бу нія ву зві тег віх беж бів жа щих За чх ке 5 дж жу жях Барки божу дао У окіх с с і ї.
Ме мів сів і іо Бек Бек те УВІ ВК уз бег ВАЄ дха Ру СТУ й ж З ап Ж Ех
МК З що ін оЄеє ох . «Хром «ії» 3 «каз ВЕ поцея хе» ЖиМмеВна
УЖ ек о сви і Ж до оса УК Ким тк же Жак ву шко ати й сю Зх и не
Зв Уаі біз Би без ви ек іш біб Бію гав та тя Ве ту ГЕ и х. я в ОИ я щи зак ів ваг іеу Щек су вів вів бек щі БВ Те БЕ Щек отв оте - ж З із щої й Тех Уві дк їв мів вра Бі іх ді вк обів тка од віз мех Бл ТБ ожВві БгО бій ві Бе ШК вух Руж КБ ЄВ Тем ОжЖ чкх 7 Кк 7 ях - її ЩО 45 жи Кс. е ил «г ах Ка сно ож, ше уа. ЖИ 5 з о я си Ж Кок, ко . хек ага Вів ака Щек бух Тугоаяв АЖ ТК дів їв тує Ту АТа дер ня 3 БІО
Ж соках о жоном Жуйки Корж Зх Жуки де а ку Фо ож тоди жмижо хг зуежаюх дев ді бу бту ага БЕ Те діє бек Аг вв ар бег зу же ТНЕ тя 7 7 ох о " Ву
ЕН Ж я І зав Ту ве ій Мет вав бег ів: ар Аза біз яр о тТве вів У: о тук дом М хе т ке У 7 ! КЗ т г " жа з мо щк Мо вх с», ж з ст я ся с и З сок ожа шви сек к.е Ку - с ме аіж Ту Тк бів бів бі Твк зве ВІ Те Уві Зеб бег ів деко щі
З и МЕ шоб Зх сих появою «Ко ща: 35) беж. Шу жі Ж яма й дах Я он віж дій вт хе жі БНе Зв ве ве Бе Бек акв бів 5ів ев Кк
ІЗ 15 180 «Ж стоют. оф т 3. с дужку Че с Ж соя. коки ще сив сккч себя сю - ж, ж г
Заг ошіж ЗВе аів Щек чаї жа Ст Бер Бе вача вав фе тує г АРК ху м ох - омох: х как,
Зх А Во ЕЕ я. сх шо ик жк рух шржо Жї дов Я ЖЖ г сук Же о йгещих вк код
ІВ Ві БУХ і ів тт БУ т! яв ак дів Бен бій ек біб КВ
Б М Ж ек бій біз бек Узі ТВк біб іб во ее Бе дО бег Так Жук хат ух хе са 7 ще МЕНЕ КИ пе ож Ж єть ати ад чеках аа ик я коакек їх дж Ж зок
УВІ тує вів су шію жа! Тк вія сів бів веб щегє баг ве уві тве
ИН я як хх х вч У
Ка Ж й М «М1Ць Ко «Ме й о и щи с ях їх» ЖЕН
«ЯН» КУ ях са ож шоку іа у дж мк шт, мех ож кож зх ; ж жів жі іп яв їж Бів Бе бі вт біж фев Уві За Ве ек ЯМА ї | С ко 35 ше Фоошиакі дода ди ЛИЖ ню СВ сю Кок жах сін лів гу СК - ся о ою Ж я Бен Заг тів Тв бе їВРоУВі хеб бі Бе ек ба не Бе Те г пк. От м: т ска У
КВ ша Зо
Ж як Зх щі дів 335 тк Бі вжр біу ее ЗВе аа ту Мія ее Зі вже ЗЛЕ
ЩО 5 ЕОМ чек ак іви Бек ЗК же іУує й и Бак фу вк фія жа Ве ке
Ох т тре ї Ех век щ хм КК ЕК
Же фа вжи бек фе бий Знгоянв а тя ТВ ти те пк я Не й З У ях Ко, жу сют. АН и ВИ ен ША чи ечя -х ск с ху с. чо Фо, кгс ск
КУ щік Щі Тве Ве ящ УЖЕ дя ва ТжР жже дів еб аа же ЖК
МК ща їО ж ще петрушки СКЖОсдевщ ку ХОДТЛЬ осдеку юю дк п. п кю і шко Ку цію їв Бі; їВРе Жак Уві тТНе Ма: Жак ве Бі Бр і іт Я Ту зи и в в о НН НН НИ с ші же щіжЖ ВК бік бі іх іх Бек опію Біж те ін Бек аа ТЕ окт 7 7 че " 7 Є "
В 35 З
Вт щаеж тк ак до рих іх: ек 3 За ів сек ма Бі ТИ Б
ІБ ЖЖ ВО ІМ о МеЕ БРЕШЕ ВІЙ ЕК ви Бе ВІ БК В БУ Р ОВК 155. З | ї55 ЗБ чар ОТне Ті же Сує вка вів Бае і ні те ще Бе Тр Бу вів
ЩО й дФтидя Сасуся Ж о я дош вк Я долосше ЧУ шко СИ п р пу КИ ак тт їЖк вія бів ж в БЖ Ух Ве Бе ій вен ідо ча ту віх що Ех МВ
Оу. вою ккд що ж КК з Ж вуж схожих стшх М Жук ах дк ку іа Те вне ів вів ба ав Уві врОо Звеге ага вне ав бі» ек о єТу щас Бі Те ія тегошек ри їм ЕТе дев бер бу фі ее 53 5 их 7 Мудо. " прерик
ЕЕ АВ У
ТЕ ія ж Вр тек же мк ін вах Бек бур ду сб Ер Кр же Зх
ІЕЕ я КС ОТУТ с уВо я ВЗ ВК ТК БО хе Ме БУЄ ве БЕ хв 7 хУле з я спри ж ак
Ж ке а ЗЕ я я топи Кк ШК ННЯ пока Ж у ух ау же у дек Ку корт - ш щіЖ СК біЖ ТР зуб Се Бі лів руб і і бі» бу век а нів
Мез вто Би Між Ре рев бір бо ве щі» Аза ва жа! ві а сту туя 7 -к т тр т
ФК КІ еВ
- жи я пк, ме ех. кає Ж 7 Я км свіже уві шт ПіК У Бім ве ші ту ЩІК оБік вет міт і в хаї тк ща як У Вів Яр ще Із Ж і
Уа Ж «Ех г сек с У и. ке шт хо сжккає ща ЖЖ ох Жде шу ів Бго баг фен Ве ші ее Бе; Ту Бі В Мі ЕР ав ТК Ж крики КЕ, й ОЕ ж Ки КУ є - ЗАНУ йо ж. Еф рах фо бо кг Ж ав о в чеку ке с іш вер ве ТНЕ БІК між Уві Ве Те б важ тує КТ; АжВ ТКВ в
БЕК ЗВ Зх ем
З ; я я у 5: кое Я Есе хі хх пов ки кує Жак жу Ух я до: жів б» рух вка бі» ів ів в шк БО Ж ВІ» їх жи
З МНК ще 3 ях. З ша з г: як «жує Бер бок шок. У Е- ще дж зр: їх хЗЕх Ж Те іч ага вів ве бБішж Те вро щі го Бе Беє Б цем Ме ту
Ж лю СУу х я ко Я МЕ
ЗК Я БМ ся ї 52 К. шко жом СМ їі саи шви жів хх Ех ме се М
Піх муз вза ві се тве бе; ев «бе тот Бе бів ар бів вія : Фк окт прю з уФ и доп ду уко жк Кук ке УКВ ке шій тує тує суб ж се те БУК Бе ВА Бе ТеБ ЖІ КиБ рю у ща ЕІ Зк т 5 є же Хе ока си Мо. о ово Ж Хв а кю ЖК их ух
ОТ ве овух Бен їв жа! Би бек жве фе овее тн Беж Бу Ре хек
ІК ОТиюскух т ВЕ ТЕН
Я є с с ж Хосе соки реж Тим тя сю жи ках
Уві Ве Бе сен аа го ее БЕР ба ее ТВ Щек обі КІу ПЕОАКТЯ
І вве БР сем а і зе ще
КОВІ ЖЕ ях
Вів сви Біб СУЄ ев ом! КУ ев тек Ва ве Б БЕ ЖЕО ТТНе жа) ши Яка З гм - : секає урн и за ка ко охо ФУ. Зх хх зак отТкБ Ба его і авіа ве Бе обр Бі МЕ НЕ те вве ве Ва
МЕ Ота у Я и - ех ах ща щі 5 сх кт баки фев ва їв Жет бу кам; Жди ее за кі тк тд
УЖ фев ше ак ту Мер же же БИ ке МЕС ЯКЕ мат а ха ща 55 ше с: с: хз Чак: сжЕю у фак кві "как еко вк и Я в вач фе оБеє жає ще бе щі не сі Те оту Х М ОСУв вжи чаї А Ві ї
У ча Я ЗВ о «У тот Жук ж ожеио Кам до сови в зу си чек КВ ен
КЕ ВгО Ве вав ТВ Бе За дев це МК ОМА Б БР ЗУ й У 7 ЗК ЗК: КК
ЗУ НЯ СЕН
У сі м і о ше я туї Вк ат ЕН Зх т «ВЕ ІЙ фею ща
Ахв ві ші Бі фе ее ЩІ ЩІ бу Ту ее ЗЕ В НЕ Бев Уві
МЕ 5 ВМ іа «ух У ек ее Х хз де фу соди в дин Ви о фохож а ВО од ів Зегв бі Та бів УВІ вух Б вро Ту яЕж кає УТ век і Бех ща Б аа х. ТЕ ухт Поу к- пуф пох. ул сг ко жа до м дах В. су вже відає У Тек бек ВО Те сту Тек Же Ме ажи їКкЕ оба - У туя й з шо 7 7 шк -о 5 що ох т с кет сеї с соки т: «У а «х. п с с. жи т КУ акБ ів ка Вч ТУ во їв ев ОТ тер омеє біж це СІВ тТвР ов же ше Ша я ж
У ЗБ Зх ЗМ х. : ше -к ссаськх СКУ ж ке. се -Я док у ми Я жди Жз
ТУР ваза біт аїн ак ща Тут вм Бій У бе ага щі фе ві ту
Ж З я -х док е 7 У хосжк а Б ЗХ
ЗВО 55 Кс л ш ах я чне з Фк жало тжвіжх и Ка пон ЖК КК вч іби гай дет бів аа тве ав жі теє Тук Су віз аг і Єв Тур зм а Баг ІН АТ Х і: у Ж БЕ ЖОКУї ' Зх Е шк с н ск - Я ек маш и зи хх, ис ж ши КИ ц - одое хиаму лудюи
ЗБ пі ака бію Бвбеоже те БР сб же ЗР ве УЖЕ тТЕНе Уж їх КР І Х еще 7 4 щі мое:
У щі ща хат ак іа ек ТВК ж ів ре ек жа! бе БР Бей а ве зве тд : у " Ж ке их
БЕЗ В ще м ща Ж ак о КУ - 2 хе із Те хі. КВ КІ :. К. 1 пк Бо аЗвк ОО хи вон яки лит ЖОВ
ЗОБУ ЗТ КМ ще хе КБ я ж БЕ У був М же жк
Зк ом о Е : дн У з ЗА хх
ЩЕ : БЕК ЇМ соя ож Ех
БО ЩЕ БК же жевж Кі» ах ща СЕН На Беч 5 їж Ма за В же Жак Ше вам;
Мпа ОВКе ха МОСК БУМ БЕ ОКА ср аа ж Ж БЕ а ее Кук Ж БЕ си пк с Я т
БЕ Я Ах т їхк КК ке : х
ТИ 55 Р ск в сюкдких Ск ямки хек. ках І ж Уч я. З хо ех хх У ож Кс ю Житія, дж
ІМ ОЗНе тТУк Ж ста ве Уа аа ніх і БК баб ази Ве бе ща
УЧ ОСЯДЕ ІЗ Тк аа Бі із ЖЖ із Бе їж Б буз ав БУ Те Ні Тв бух Бра 7 З сек Є я хи же ий т КЕ я тах М
Мт Бе ее РЕ БУ Ж ТВБ ве меж хів лег амер і Ба ше ях 7 уки Пк т ОРЕ Ух «фу боугає пет а жуки ва Ко кавою спа ше зе. Фк дк Ж ре водо о ся оц ол
ІНгосвае ба Уві Ущі Б ві беб Ві бій ще ве тв У ія ВНЕ
ХВ ж Ота Ще
ОА я ТМ
Кк тре жу т ит г Фуко «Жак Я ста лі Ша одх шо о ож ба дО ої піжео Ухо,
МетОТКЕВ ТК ЧІ За щІЖ Ууді ін ал нів вив ВІ У ТИК Бе ВР
ЕЕ 7 7 о еВуЖЕ зх З : Од
С ТХ КСВ ХК ста ШО Ка ТЕ: с шо фр ю р Фомокж. подяк. МЕ уч, оз рок, У Е соскою я ет с
АРЕНІ щі тек аа вве Же Тебе ага жа маї ве май вв уве зе б й ПИ
ЩЕ В щІХ
Ж пд тих шк, окт ск кое ра в ка 2 чує я Кок. т «щі Ме нів Фів ар тк Кер щен сбтж уж са же Б бе КВ
КУ жу - 7 - х 2 скпиощ сдови йощи ше прю УК Ж шо кум од я ро сдхвиан с зидя додат коре хх
ЗБЕ вай Ух вій вав ік вія вто ДБ Бі Був ЗВ ів Ве ЕЕ КТ
Ай ах ков с вия ІК дк ж не У х. кошик ЗУ жук СЕТЬн х щи я . Х я Фо суки
Куб щіФ бі его ага пів РРО ів УЗ ТеУє ТВг дви БР ве су Ага я щі ко одн жо усу МУК ує й осєука кое. ЖК до Вій сфе роя «всих Бек возі АЖ Ж фе й Ще жо На Сеа ТРК ех Я Би УВІ БК Се тео Сує Бе яву ще пі» вну тю. м нг, а Ж фе оф шію жк НК ШИ ох де МВ сх
БНЕ ТК ре ще ав БТ дій ха бів тка обі ев дБ фію БІВ БЕЗ пів дев ав їж Те Те БКОУ вро Ні їх вер ще а тр ее
Сех У КУ КІх х тс т ще Ох Зо суб Узі. хе осям ок. КК зах їж, сих, пек Жодкд, Шосе хх. - ЧО до, я УК дк вве Не ве тує бек МУЗ Сер Зне Ві ак уж Бек аква тер Ів ів
КК р НЯ М пики СМОТК й жари ит 5 куки ВК вх ке де ші» вв ж! вве зви Су бек УВІ меж Ні бів Та Ба нія вка ніх
ЖЕ ща ОО же ве БЕ бе ак бе Бе Бе бе веж Бр дей «ее «си ВТ
ШЕ В захв
КО КВАЄ Ковка ХМ дез с ах Бодукі с охо пока «ака ж ху тах о ЖК 4 в пк З з же КІ КИМ ків жаі сія рев У бів ще У вт іх ів Уві вія Бгто ек дів
Ж З М а ек ви ее Бі Не СУ їнРб оУщі Бе Бі БЕ Зав ву Же дев оте 8 КВ 3 т пек сок. ри сою ве хо Жахи дуби в ни ва ах ах ко .
З1Ж УНІ его тк ж ако ке БР Ве СТУ Був Су Бе чів тер бе їх я я
Ж юку Ж ну. якими НЕ, домо Ж шою В то Мезякі о К дх пес ок ее КК
ЗЕ КІВ Ті Тк біб або бі бек о ївг ки тук Ні Хек ів Ба ТЕ о Ух 5
ТЗ й "ЗЕ Що ї ЕК ще
Же Я Ко У
ЗОоМеЖУ 5-25 Кіа 0 Пул, С. ех КЕ я. о ик кох х их КК. Куй жк, кож ж, те.
МЕ фа кб ее ів шій тве вже аа ве яв Те о їве Тек Сех А
КЕ т дея З М Ух й ща КЗ сою чу Ух - ки шо де се. ЖЖ ах ФК. Не З са сут ве іш Її оТне Ве жа ї УяЕ дао ак же бук діа Ме азот отр і і Я щу т авт
ТЕ З А шт вах о УНН що відає. вала Ж шк ск ше ям кий . Код щі Бик цію ТВ Бебі г омаї ЗеК бвг ТУ МУ щі Ж щтж ПЕР ОТЕ з БИ МІХ шийку. ШУ ми аа Живу МИ межи ее у о Кн ие ЕЕ сажа ши В
Щі і ші зве ІК у «У щі Баг бі тк бі пі ве зе Кт ш МІ т су В 7 чех з
Ж 5 ХО чів меж те бів Зв Бр і аг ве) бе дів ек Уві Бі ів Те зим хх т чжвсяи х п ЖК шоку КУ, Кок пе сою Кт. Осока пу ех чаї ТВЕ КІВ Ве су яке вів БЕР Шів ахий ів ар бек отже веб віх
ФЛ т І 7 ж
ІїБ5 о З вх о ещ сек, -е ДУ жк, «Ж домах с со дже шк жо : г ФВ щу гак уж. тт отУЄ БІ Бі вх БІВ ЗУ бук Щек Бее бів се бе за! бук Бій т ух. т 7 са пк ща з ЩЕ я ві мої ак доб Жака ж ши шу фон как со мо дохо пе вход кох аІЖ Тв Бе ви ав яв аж У! Ве бе ге вве ек вію шек Бу дЬНх. кер, Н 7 - Ж 7
Зх ЯК цх лек. т В КУ і 5 СВ за: вів аг тує Ттгб Су ЛВ Ві Те тег ве ЖБК БР; Ту ТВгоОбве зва ек т Є КА т т х Ха т т м
Ех е ех КК які доро ве дя ко ковку ж ще судно вежі Ко у пи дев ЕК ж щік се віж ТНе сх вже ОБ бів вже ту бі Я1ж бі ек олію щі»
КК ха ща ска ки дуают у уко ж Кк мкм таж и в хо ко вк ик ша века вк р сук
Зіж БІУ бетг біт ів БЖ ж ек оз бі іє ЗіУ вік ів вію зве
МК ї . ВІ ! ! | ОК
ЯКЕ ш Б вес як со, хом ок ДЯ дао КН сакдсио КТК, Ж Жду ТЕ здо ів ВЕУ бів Бі ее Біж Бі Бе іт За ій вій ба за тве Бій й КТ т 7 Меч т Ж. ей ах пек о Же Ж се с іх пов и дір хх у жіках ві Кох ШУ с ші Без век ій ТЯкК УЖ Земк рт біб ст Те УВІ ТВж сов Те бух сухих ТЕЖ. У Я п і 90 ща жк
Хі Ж Кеш КК вті У ра сЖаан КБ кова б дк Кр «Кв дов ек Кт В їм зе БЕК ТВ дію вів ЩІ Ве Те ЯК ве Тер аїв ав тТее У
ЩЕ ЗА ща ЗО де ши Фони фуктижі Де УК КВ кока пед ШЕ му ч ка ик до ій ів БУЄ Р Фу бій вів бе аа біж Бе ті бі ж ТР вов ж ик АТ жи 3 ЖК Бе ж ее КН же і Зее їжа фев ща й За т С З я СОУ аЄ Ж Ущ
Зк кози ох Сб коди КВ додіфіш о бони м Ми со дл р одоодияко ко
БУ БЖ Я і Бе ТР Бе Бек ту вій бів вББе ій ве бів а
Бе. що Зх сів жУЄ їТуУук те ія фаст ат ЕК як ях і вес тури тек баг вв рОЄ ще т. :
ЕТО Ер отее заг ож зе Те чаї вав щі Ту
ЯК Зк МОУ меж ша . . . між ще кон жах і ох - .
Фа МИ КО Щи Уві ве его ее вій ве тве м КЕ
Жах Зав Х ЕК МЕ я лк ІЩЕ їж ТЕ У ве хек
М Бек ав ще Бе ВЕБ іа Вів ве ЗИ
Ущі ВВЕ БРОШО БМ ВІВ БР ЕЕ чек огжя Щек тег ет ду я . 5
Кт І Х Я Бій ЗИ КК сте Еш чне віз я Я
Ві СЕ БМ Сх БЕ сих ки. жи Пюрекоиоки. КВ -
Ж КЕ Б УщУ Ух а Яр Ве БЕК БО ще
МЕ МУК ж Я зна вра ЇВ вка ща Те со
Я ? ах Ж ЄКМТ ча те як й БУ : а Ех ве Зк я АСЕ но К
Щек тТгроаха хек бі» вія ев тв ес і5 У ві: те вве ї 35 як ЕКО Ж Ух Ме те БЕ ЗЕ «8.
ЧА а 7 ще
ДИНИ - ча кв щі ек Щек шіу :
МОБ М Ж ОК БЕК Ух їчт Жее ів шеф Ффее чі КС о яр НБН и о Уа жк твк я
ВИХ: ШО Ок; І х
Кук жи ше щи З КІ кр нх ях г ОВК БЕР Км у те ів тве тет Кі беж аж кві й - у Не - шк Ех У Ж ВЕК х сх
ЗХ КК ЖК ЕХ ВАМЖ І ЗБЕ БЕ
2 А пе
Хол ж - ще ь. хек ри ЕК аа Тв ра м я аг ван тТве 5 Уа! 5 КУ т Жаї што веж ех 5 ав ож «Бе У ЩЕ ОКО КЕ бе Ех ка іш іє ясне дів :
ЗА. Ме ско Же В, се ши - 7 м ІК діє бек і бів бів іш ве Бі мов с
МА Ох фр Я Я ЖЕ ж БВ В
М кт 7 пк ів ЖЕ щі я вищ
А я ок В ів Уа Ку іш БР Кі Між хек у Е кож ОКХ ВО КЕ г тМх кож их гію ОКО де вв МОУ ЯК ся я Буя УВЕ ек
КИ гони хх ск. шо іще В ЕК шою ве : г : хе КВ АК ЖК то ее іч Ся ОХ . я ве з БІЮ ук ав Ве т і» Тек зюе о мек ях Тир
ЯМ Вк М Ж ав Мих 55 т зу зд що фот й Б с
З. «ів іа Вус Щі» а : ж а КО МУК М Її 5» фер Б тта ВЕ а. чо .
КК ся МОВЦІВ Же Ух щи м
За ва Ж ТтВ и тіж ям бе ївБк ве
ЖЕ С В тег вав СУ вій бак жав п 2 ТНЕУ Є з ше аг тує ЖЕ щої рі кох кан ще
КЕ х УК ЩЕ ЗІ ЕЛЮЖ ВТ АК 1» їх аж тн
А хо Бо Ех КРИВО СТГ і З пово
ЖК
Мат же ози ск Зк ее Тв ЖИ ще ве шаК о Тьек ве ве ща бе в ще
А КОЖ хе. Ж ГУК Же в іш ек Син
АХ КЗ 7 Кт МО КК У МЕ ЕЕ а АЖ ї
У
МИ т щім ав тнє із сві Ту ТувБ бух дів го в і г Я КОЖ ЕВ щу Как З тр вх щока і СК ЕВ г БЕЖ іх Тщє дав ше ВР ші Бе аа ту
ОН щі Бе аз тує тее бі Тв Бу те о е я
У. Ї: ж Кк: КУ Ка ОК я кс сих и яке
Ж щі У БІБ ФЕУ яне ква жі тве з дав ше у жи Бе р а ВХ ке Я ххх МІОМИ УН ТМ хи КВ МИ м жа. ЩІ я вих ЄОБЕ ХУ КК ее шві Ве Беж ік а Ве
І В 7 я ко веш СЯ аа ВО чек
: ся хм миши чі мо. в док, их. ж хх КА : ері І бек іш щі їх зве ру аг ТВк Зеровіє БТ Те аа вв я ож Су вх че ща Зм МУ
З ет сук ше сжеЕуце дещо х перу «4-х век бів ЕЕ ажо тк БНВ БР» Вів РО У ТВЕ Еї я ОБЕРЕ В ВЕ п дів "а пам шпак М два ЖШазж фУКю КАЖЕ Е ; ії чаї ніх тт Ба Беа віз Ух сво Бій бек Бек БТ СБ те аа т жа ніж зве Вие вив яїа ж ен вів СКОБ г Я
Ек Я ї ВЕУ
ВУХ БЕ
: с СКК дя уд з ж жи ма ве сою ек вае іже вх тм
ТУук щоб зби Беє Бек Уві Уві те ма го 53 Тер бе ев ЄВ
ВМ ВУ я -у г й ак с ве яке ЕЕ поді ДК се то се ще КЗ
ІВ їв Тук хів Сук вай В! ав ВІ гу З век жи їмо ж хе ї ку Ку хо ПОТ ж С Те
Ач я су 4 дЗаз а ожжк Жоди ЖЕьше рія Жук оф, ЕЕ щ з я! шіц вка Бук вас Се аа Ка ТВе Ні Ве Ст Ве вав осі цу жа! шт ке мух ее шує ВарОКув моя се 7 7 Кая ТА ко
Ух св ВР ів дів ві і у БР вк УЖ Ве БЕЗ БНа
БВітє ж Ва віз Ве В Та Віа Б їі Бе зве УЖ ве ТВ й ТЯ КЕ Кл о кує ва ТБг бе ме (16 баб ака ве ва т «ії
Ве ори ж БР МУ ММ УК шк же жЕж его дю па они ві сек КЕ
Та ТБ Та : х Ж і ве жі свв ні бів й уч щі щі їж ВЕЖ їк бух щі жа та вав жа! кеє оніє фі аз ке о мВ вух і шк ТУ5 я
Жтев ба? ов кі» Уві «їв УЗ ні дей вій У ТЕ я ВЕБ ап та Тева 5 віж ща ОК КИ чі КІ ее А ЖЖ МО кН
ХЕ І ї ЖЕМЕ т ВЕН
Е к. . . ря Моска Ж деко пе пок ж с х шк к і би кар ще Ки ськ ще мощі мо ие і шк ака ту Тв ота тег йно Бек отве тук ле поча за! жек ба с В 7 В ка КІ
ММЗ У х ся . соди ховетяо и Же. дова ТЕ Ук я Сук хх чаї бен віє біб жо гр обо Аве біу Куб Ба Тк ув СЛИВ ОБЕО Ж ща ще 3
В ще шт жі кам Ж шк, ші ЖК вд Як з до КУ
Маг вжт ідею арх Бер біт вів Бгб дв ойіч сб НЕ ї з ща ж ЕВ п пане и - я дя вах 5 МАН МО х 4 ах ре в ЩЕ буре З З вка ФУ КМЕу б ке
Са ле БІВ ВР АБО З Бе ів УщЕ бук те їв вто БеО ж АК
Ж ля т ух З ке я З ко ЗЛ дов ам Жкхх ЄУє ре щи З й ще вав ів ши Тв БУ ах ві Уві Зате ви ї ще Сх ве ма: ж п
Ж нш а в І ах ЩУВ З М ск хі . ї ме ПЕ дк. тиж ке че
БнНе тут рка пет бе 38 ія мві 515 їв обі дек ап Ку я Бех гХ В ще С с й о ЖЖ Еш ее іш аз вка стук БУ ТВе ТВК БУВ вто ті с Я Я ще шіжЖ ЕЕ . Же. я крат З
МЕ ЕК КО
Не БЖ іжн зе Звг Бу ен ївВг В: вжр вих бек ага ТК о Фів бів
Зі» о 25
Зі айва ві Бе вт Сех бек ож) Веж ні «зл вій ви Бі аа НІВ м сум м ду т ах
М МЕ За с шк ще козака п озчиач Мшет ж ма Жим бик: сви З хе
ТУК ТВРОБів Бу Бег ів его ма Жек о всж вію БЖ «Ме й «Ме БУЯ «ах вит «МІЯ» Хамерка «ЯК ща ін аіз чаї чаї тТвРоБів йі: БРО бак ів Твт о жаі| Бек ве ту віх ї 5 4 І з з а ен он нн и вик НК в НН
ТБтг УВІ Тк їв ТР ОСУ;5 Біу бек авг ТНК оЗІіж аа Уві тве те ау хі КН ха сухуто в ках Соа яЯ жо аЖіа ф пах лдуючу біг зо щі вад бака ву
Аа Тр вів йий ТК УВІ ів бів б во стю бій ві Бе аа у їх Б У вже ї3і5 бі Фі ТНК ап бе ага від Р Бію ТАгобто Кіа вг вве
Ж 55 шх. жк пом боком ох ши я дозая що а о бою р я йчтуюх вах хх
Заг і зет ів Би Бім і ж віз АРЗ БЕ ТВР озбен бек вія йаїа
У" Же ШУ шко Ж сих бра бака тд Ж а хат Жан Жчує Коль че бі вто 5 а» біз Мі бів Тег Тег ос аївВ ему тб от Бек дав я ще 55 пекоукоя я КО шах Ку и Ки вує ки щи: Жвбжх ка ом шоу фежоє Аз іза Те Узі Ре сте сію ЗТЖ ТНК вує ве ТВ УЩ! Бец бек хек їх
Кк ще ЩО ек Те іже пі ВгРО Жег Уві Ре РРО ів ів Вк бе Зек оку Бер ща ї2а 125
МН Ж іо го біз ве; Уві Те уві Шегє тер аа Зае біж ав ех тее жее бі ух Ж жа дно ЖИМ. Ж ох. ахх ше пе оо ж. сх шода хо дви ек кода Же фо в ві іш Те ЗМ ке м із У Без ія аб даж є У фа їж Бар іш 155 135 їх
ОК г т - я 7 1 їх В
Кк на в нень ка
ЩІ г ска Са мо. ек ЖЖ бах ж сх же ми Я ж їз й
Зі сСує ах Ві хи ія вух БеБ дае дян ТВК вуз Уві а5В Бу ЩО
КЗ Зх «ех кт ха бвуч божа зх щі ста кю ка си шує жо еж а ек их чаї БІВ ве; ех ек Суб вав сію бік бів вію бек біУ бі іх у жа «5 в їх іх ша «їж їі щі; м їж Жак щі З є зкк чаї теж їх БЕЕх ЗКУ ес обі Уа 53 з УдІ ці Бек Бі Мія ІМ ОЖНІ БМ БУ Би Бу 85 ЗИ я35 а ав Бек Уа! їж щі бек сх їж ді щег ою Туб шаг вБе їв сіє «У аа ке
Же ВЕ ВВЕ ве же В З ве її дід Зк г за ВІВ: КІЗ; ї фр; жк: б
УК ОТБе МЕ ОХ ЕКО УЛІ БР БІ вій ЖУЮ Б З ГУ еВ ові Тр мет щіЖ ів Хо Ве р тТУк дал Біж Дія беж бек тб а щі бух
ЗУБ КВ ЖИ пе Фах жи коник й сем как лежу ха коли ВМ. ро. ск бос ду СК дао
Бе ага бі їж дів тк ожет те Уа ва їй ее Те беає Тк Ж їтук Меб бів без Бе бек ев аг бБег бів аз Тебе вів жа Те тут я Ж - - п дже е ел
З ХЕ а сджх ка се ев же я спека жк жо ож ххх фак фе Укоуже еугам У я м
Суб Аід ге у БУ ТЖР Ар оту Ага пі вве ар отТує Тео Бі дів " Я З 7 7 ША з кож
За КВ БУ
Ж дак о до ж іюї «ка пк Фото боки Он т. т-о Ж с з Ку г я, с
У тТВг іє Уді Тк о Ущі Заг оаег вів бек ТК зуб пі» БО Бщеє ж о 355 я не еко ем ав Без Бег бег вуз Бек тТВе Бек бік бі ТВк ав Аа
Жах З ЗУ ва вію се ем уд) бів а ТК Бе во жів вує жі ТВ жа Заг
У З ЩЕ ж га УЕ се ос Ха Кк СК ори сек щоку ше ен и оужім, Жорж тТтеа дав бак піт ІВ ів: те дво іє Уві нія їБговВв Бе Від Уа зах вуж 7 БК аа
Б За 95 ща х «в Елі У ше ж СК ТЕ х «още скид 2. з чн Я. оку каже Сх З ДЕ --5е УМ т «Ух ів: бів зак его єї ее Туг ек іев ев щек щі чі ТВе Ві Бко «а ЗА Ай
Фут Жокею Жак кох: ше сті ко М сткую КЗ схе пек ек З кох пий мяких
Хвг Бер бек воза ія таб ощій тег оТук Жів СУБ аж жі 5 нів ев
ЗАВ ах БЕН
Вуз Жее аже Же фу ЖЖ мер сі Злют З (УЗ уче Коух БК с» жа жах БУ КЗ же Тк ові Тве Сех БР бКО Сез ве Аїд Ве бів ій 13 бів бе 5 З55 я
Я Кая і СО Т З о Ято 5 зво
Бек ак Тв ОВ бів Уві Тве су Ві Уві Уві жо і ек нія 01 сх вч» біль ев фах Ша джем сб тек мах дв пі ша біг ев ніх
ВАВ КЕ міш ша і ж модем ЕК ОТжг У ВХ шу ах біш ві нЗЕ ан АЇВ БК ТЕ бух ВР ХР Дів бів бів ТУК Аа ет Те Ту АРЗ
УЗ ді Хек Уа! без ТВ Уа: ех Мія Ффій а Те сви де шт Бжх
Ж; стаж Еозажу ках В а ЗЕ Я Фа кт ж ї хх ку |: 2 і З же Ку г КУ
ЩІ ТУ БЖ СУ їж Уві жк ДАТ Ук ВІД БВ ТУ Віа БР Ж З каш Кук и п ок В товка кт иа жи фохак 833 Жим порах дк кур іже ЗГТ баг веб Аля фу дію Бій бо ве Ту во сте У ту; зх ЗУ 5
ЗО 585 БЕ
ТРОС ім а КУ ту ВНе Тер Бк баг ар Хі вів Уа З Ко
Ж КЕ їх «Ак кю х Ух ки ж см УЛ мих Фе че та СЕех Сх жах краху ху З бів жег ази Біу бів Бо бів в5Б ва Туг Бе ТВ ТВРг ве Бека; тв хо з КЗ З - кихуку, ща ОО се Аж Бек дев іш ек Біне РНе їжу тук зав бує ев їме Уві аа
БІ БУ БЕХ ДЕ ях Її ее шіз із вен нт ви Мі ТУР ТР бій Бу Бег се) баг рве Зв го
Ж ОК - пнях
КК Ва Гн ке хо -
БЕЖ ШУ
«0» й
КЗ жк. КЕ «ев ЯКІ ка ВТ
Хей» ЖиМевна «Я щХ п ЗЕ Ж оо пе лек В Ви У ож зх як - зам і 5. ох ко т. «ІБпОЖщІ Філ ее З ів Зк і вВго бі зем ож) від ве 5ае ІВ 1 5 15 їх
Фа Кк дет «од дхо КК щу му сода ЗИ ймоюх о кочко де р ДІД мкл о зм. дк ючи кт мае вЕЄ Їж Те Су ТР ож) его обі бе шек ре їйк зе Те деку сх: й хи
КО а КВ
Кт щи доска аск с ще фа бкрдє подих де кая коза ять кова; КЗ 343 СМахево п кі щі жа! дег Те жа! АР Бій БР обге БІВ же бух Би шіВ Тер оба
МЕ с Є бах де од ка усу жі мн іі вх сазахо щої коки ЖК У іт (15 жів ТБ Бі Ак осів Щек Те вжи Тег нів зеб АЇВ ве хе вт вт вен ек їів бее ве вав вай его іт бек Фів Зі ВВ ве я т БО : пк се кож. с. г. м с зу сот. ух с Жозе Са СК ж Жора. те. кож їж сер ап его: бів зве вх вар о Тнг іа Ве Туб Туг СУБ Ві
КК Ким КУ 55 ЗЕ ще хоча КМ о в ня сх її кл ся бруси тую ТЕ аж ж Ж Соютут
З хх. ше я Є зику в, Є
НЕ МО а о оч сю ЖЕ се. гу ХХ хе Жеоках ва б ях щи жк В ЖЖ: ві фія бі Те зек ові те а! бек овег Фіж біу 615 щі Бек іх т З Й саке " Є ях В Я з
ЩІ Ії 125
Я " бак " їжа ! їх З
ІВ Ме їВк біб (ек бро АТ Бек бе бак о аіа Бек Зі шах че та 50 А Іще за ЖЕ - Фе ста: виь З кн «рі ад кі ху жЖахїв базу Жог ззх: аз яаі Б ж ча РО ви БЕ ІМ Ма Кв БЮ БЕР КС КБ ВІ з - кроки, 7 я у за ЕМ МЕЖ ябуююу ках В емо коша же мож. рокакио же дам ах Ж шок оожах во чу тт ТУуК дів бів ру біб сію рух его вто бій бе оієн Узі тує діа
І 155 КН із ївВе Бав ів вів АВ азв УВІ РО бег ага Ре бек бі бек ої хх у сКЕах ВИ Хрект; йо сх ско но Фото кову Шар - ет іш Тве очі ТУ БР іє: фу ів вжи Заб бею бі Бее бів вже
Ка я кі чі Аїа ака тек о тук я Біт Біб ТУК ТУК Чек тво БРО ТУ» ТВе бе
КЕ От 7 зв " ав тав яз "3 235 «КЕ можу ваш вік Жах їз а щи: и: з я и Ко Нв НН
Зі СЕ БІЮ ТВ Ух зб ЄТН КТ ех І ШІ ФфіЖ Бі Бек обі 51 7 Кк сек 7 х т пк - ях ж а
АК «ох шу Же кешу их б вмуюія Мак да ле а смакує о акту ді пок, ік Бі его бі б15 сію біт ще вне Уві У ТУ ТВК Є б1ж 1»
ОО ех ВІ
Же ау кто ж Же вх ЖУК и квт СХ и те зх увах ук вка тА з дика о ера пів щЖег дію Біж Фте Ту зве щік бів Бег бів та! «ій ви іже біт
Фах во жах си хх т оду ккд Мк ке. Фожжаі Жажажо о ах Фі бі сік іже Уві пів бе бі ші» бак ре) зе ів дек Су х зх СКУ
НЕ ах БВ з т 5 чуб що ЩЕ склом За іо ха теру ма ака віз АїВ ЕР Ту БВ ТВе ВВЕ бег Тео Тук АЇа беж аа терем ее тя ж Мт ве ОК Ж ЖИ 505 З Ка . х Бу : МК ра ях баки бе Кіш фохке ще Кк зів вів Бе біу те бю фаз» 51» Тк оба! Бе ага Кі аг ее ре
Фів АТ Беж ЄТУ вт Я веною тТКВ а а т вее их З ЗУ
ВО хх у с жк У хх ах із сек че сіре Ж дк ху МВ | У де вва
ТУж вжи аа Тер вія ТВРотТек тук дів ер я Уа ід ЧК др З
ТВ ЖІ бак ага йо АЖ ЯР іже дБА Як фею те; ев бів зх ЗБ ЗЕ
З Тк: жене ЖвкЕ жів ма фев Хек сек ма вка мія віє ех ев та аа бін а ТР Ат Уа Ку Ту СЕ 5 Уа! ака ніж Ту
БК ке Як х г. у а я лу - щ й . тк ща дкурує 5. 55 тек тк бів ів щі вен ве іх дже Швк ТУ Ущі его тт; Бе жі ТуК ТВ обію фія вік
ІННИ Зо 5 Се
ЗБ ЗО ха - ге пок якіх м ві сфе жа В бі дам Жар рф рр же зга дек ді жа
Твг Бе УДІ ТКУ У беЄ бе ЖІ ЩЕ ще вих бе во За КЕ
З ВЕ сх. й посух жу ЖК Жак що уми
Бгто зи Ай вро бек бак ух Бек Те Зег СТУ біЖ ТВ: ай ЖЕД ОС Е що М Ех вІЯ ща кА
З : с ах Я дух ет хм о сен Кона ж зрузше ШО рух сік ще УЖ твг 8 ет те яіжЖ УЖ Б УВІ БЖ дя УК вне вух Бім Бе Уж їаЄ З 7 г а я БЕ 7 й У я ка З зх ЗУ бою й ж Зк с й ки дев ін щік ав іец ТР яек 1» Уві нія ТВЕ й ВБР віщі ще 350 Ух ЯМ хо жк ж си беж сук мк і ви Тек кат ів ак о бжк ба жа тТве ша ше а сік жЖек жен ді цем тк бер фен зем фе фа ЖІ ТР жа ВР МЕ ра 7 ДЕ чх У
Я иа г - г шо. 5 чо з мя я змен ще паб ще
Зк ШЕ З ж сх же «ік же ТУ Же Бкя и жі ЗИ ЩІ ке Ди «ВЗ Я Я ще дей ТК орж ЗР Аж БУ Б У Я ВР вх З Се АК ВТ,
Бе ЗО З
З х. с. я ен ке ках фіат га зи и г у НЕ Зк Фе
ЗУ БІК Ту бек ау Фію ТК «15 Зек їв ма фік се ваї ФМ ве зах сх
УЗі вже ве ші дію щег ів) аг ів бек СУ Дів
ЄТУ шіє біх ке уві БУ вгРО Б1У ШІію вк зе; ага ев ек сую ді.
Яку що ШИ - ла - - ем ж Уа Без : х Ж сжртею «духи А баз Хклам о ЖЕ Кр аа Жек БіЖ Кве тБе Бе ве ази аїв ТО Мах бек ТРЮ о Уні аг щи рожі М м т т ж Ех еще є ї є Ф- ЧИ чия и ум СЕ вк ше же В зах: СЕК: ів Бе» Бію вже Бію іже бі) Тео Узі 1 ака ів їх ЗБК фУв ТВ
585 зт 75 ав зів ші те оте а їв аій ді БкО та ве піж аг Бра Те
КЗ ї Ех " ТОЖ
КО ЛЯХ З
І18 бек АгО ЩО ар Бек ув аа ТР овен о туК Беб бію ек жа вет ща ВО ГЕ - рок ЗК яка жде «й. Ж Я оз ретуш стек фло Кф бр о сабук ик жи БУ ТВ Зі дав тає вія мя ТУ тує Сук Тве те вва Ттв сте
КЕ ва сх ще щ1х ЕМ тк аг Ттв Тук ащо тує ттр ші вів Бі ЗБг бе УЩі їВг Ж Зак
СВ Вт що БУК ТК ЖЕ зм а що Б ГЕС ек ій ес ТК фе БІ Вт бек У! Бве БР дев жі РК дек дек
УК сн Зх ях ВЕ Тра виз Щек Те бек оці бе ТВе аТа із зів тх бух ви Уві б ев
БО їх ВУ
Тут Бе Бу є» реє Уві тає та ев тт два бек бік Бій бе ве а ю 7. я
БЕ о ЩЕ меж МВ м вай кю суку Ж кот са. ще Фонди Кодут Ух й хі СУ
Зег ція Узі ніх їнг о вбе го аїя ай ББи бій ве Зак о Біж бо тек бек Бе Зек а Уа УВІ те Уаі жу зек ее Жек рев фіх ве вів я У 735 ей
Тве о Тув Кіз сСУх аа УМ! яв мі іжж БР бек дам їТВг ов УВІ ов
ЖЖ вже ЖІ ВЕН БР Ж ще СУ бе ке тв оНтІЕ тва Сук БЕ Ка
Щ Т Тай Й 7 ек. 7 Ех о Тх Ка юю аа оСЖзз дхуух ж і ж я о Но НК тісті 5 суху (Ж х се
Суб вт віз РКО ОТ дів АТа біб сію Бгє хек ща? ВрЕ жи БНЄ го ще м вів
МІ. ТЕХ та іже Бгто вже ев ТР рев МЕЖ Кі Баг вагу Те бра Зі Ущі Ре тела 7 вжи т пе,
А ТУ5 т ша 1» жк ук деки хе стоки ух ку ач ака КК ся сю пк сви. и ска жаї жа! так яер жі ег МТ ОТ вав ге бі жаї Ух вне дей
Та Та т В
Тез ТУК УВІ ажо біб УВІ дію щі НЕ ав МІВ МУ ТВгОогжя Б АР
БО ЯЗ щіх яв я с и ЖК сад сйук оду си ачи тух о Жохк м си кою сюм, Я дет. пк ши. Ком
Зів біз бі» тег оди его твг о Уук АР ОУЖР УХІ ЯР Уві ям ТИР В
Зо их М
Н 315 й яке ве ї с Козх хх дех. ох ска. з дж кас дог г.
МВи НІ зій Ах» ТКР о ЕвО Ма БІіУ фу БІК тує зу Суж ів жі бек
КУ аг ж ща В ща ч . м а сах Ко зх лк Ки мо зи А че коп іт віз іо Бі із в; хів бів Гуз Таке хів як БУ5 вів цух х гі с с ко рух. й за ет УЗ ьах їх дахи Бжккоє Вукяк свак ку дже
Зі» Бі вт аг бів ве бів жі Тек ТВ свв ВР ВЕ СУ ВР то ду Й У Й уж 7 ЖЕ ІЗ ща КІВІ Ех а п : се Рш схо чис ем хо рожа жк зго родакі ож й сш Я дах пів йдеш їйг вує жхй фі Уві ЖК бео Тк осух ев БЕ Бу бі Ре
Щі ще 7 ія вв ВІ
Ж В ща я : З шхт сх ки их -- я Че
Те" Ве хек дав Кі ав Уві Зб тка 35 Шек джий б3у бій вка и
Ж о ТМеЖ ЖК жу Кох й М Є ях -х Е. тю х че Е -х де Ужамеє и х сх ла ЖК Се а зах щи вжи Тек ж ТБ ТВе Бро Бте щі Без ма Зак «58 бр зве БЕ
Ех а 5 й п Мая щу кох полк Жов сему УК я о ЖЕ ке
РВЕ мец ТуК Бек вуз жи ТВгоУді ав; вУв Хек ко ТРБ БТ бів Фу
З 35 як
З - з у к.оофлкаю ок Ходи шко Кк дуі БІЛЕ жар БЕЖ Ж бо ва Уа! вВме Щек се ек жі ех ніх бів ві їв мів хи іх їх ща ЗМ 5 ЗБ ть дія кууа Ек реф Бет сец ще ЕКО Біж ЖЕ я ним «КУ
ЗЕ ЗВ
«ее ЖЕ «А» З «ий ВЕ ке» Химерня «Не В я1у Бі біу біж хек а! іх Мев Ре іби шію ее ви Бі РО ага її 5 Зо щ сх ще п жи сек іх жо ун же веж Жар от ує я І жах сіб віз аг УЖі УЖ еп і ім Фі ж ж Бек щу су МЕЖ жу т среди. З 7 З ее я З З аг «а Ха «МД БЕК «МАЯ» ЖУмечнх «Я КУ ко кл се МК Ко зів кб . доки 4 ау ззіши . во баку о хе
ЗЇЖ ТУ Ту 15 баг УВІ НТ МеЖ БРо зби бі РН жи бі вро дка с зо тк аа Ж ясух як оо вежу у ук жо «жу жду як фах иа хо «ія аа ага чаї жа! й бів ТУ бу піх а!жЖ яек Ту ві ге у й їх Б да ки хе сек БІК ех
Ж
«и коки БК соті диф ТВ Су Жлямих п ж ЕМ му ск Фіз с: «се жах си хо КИжхЖЕ іє Бі бі ші» хе бі Бі Бі бі ше" Її єї» бі СБУ хаб вве 1 Ж нхіЗ КЕ 2 х ник. г. і -чкЯ т п КО . с. ох - п ке со, кю жо ме п
У8ї Тв іх ТВ ТК ІФ ТУ іт жк бів дію т бе век о бію іх
Ок | ТЗ З
ЕК ше їх «аа» РАТ «їж» Химера хх лох ке Ж фею дет жа жежіс ис ба фо мом ко хо кю ких щі і і шу зве фія 1У Зі бі Зв уз вуз аа дів ве уві 4 х 4 її
СЯ с п ау ту ж ск де ск п о шк юю А. ях ее дав бін у ЗіУ Зі» Бі бот бі бік щі бі Щек с1ю Ту ТУ Ту божу 7 7 Поу 7 7 З жу » З
Ка Ж З ат «а 0 «ві» ВТ «ОКОМ. пу емттух «3» Химеваа «ке ОХ та и віх п мг иЖ кожи и кктж их УЖ Же сю уч Зіка тех ди щі Бу де «у зве спі іх ж між шк вт ех іш вжя Бк ж
А 5 Ще їх аж БІ пі «іт їю с5іуУ баг о сбфу жі бі бі ЗБК іх біУ БЖ Ту
В З ві шаг ха» З «СХ, . ее «Я жмуеа «Я В з ск сх сосиекюо «ХК ши их вка с вин іш іх кг іа ки ца щі бі щі бі жк фФіЖ бів ді шт Бак зів Ата ве ків ще тах
В У 1 а - сх лу м сх хг Ждшає Ул да Же и Ж ех Бі В З де Кк х ав ді «ЗУ іт Біж ді Бек Бі Фію ТУ пі ще шіу 51» Бік а " бу ЗЕ Я хм ФО Хтх г «Ме
ТЕ ілі пе ті ув и ии У тож и з чи жук пек З км; ТЯ
ФУ пу Бі У Баг бі Біж щі у Зек | Віз веж вуб вен Є ї х М 15 х С З си и Кк а штрих вуж ки ду ок с кожи
Ве ев ві го бік бі бі бік Бек ост 1 ДІРУ Бу зе Ту ФВ а Ка Зо
Зак «Ск 95 «ее ЗВ а вх «ка ВХ «АЖ ХеБЕНИХ «Ж З яз дет ху д- води ух ут стих шу дог хх ху хо соди ше щік іт Щі бів бек бік ТК ші є1; дер бій іх ве аа вуж Тв ї а КУ 3 я та сш М жа во Та Му пхати якос Ура тк «іУ БУ У Хот іх 1 бі» бі М дів Шу Біф БІ ем БіЖ Бу т " "У ; т У т У тах ка йХ ЗВ 5ЕЕ «Це «вії З чав РК «Же Химера й 7 м: ей сх Б: х чи яко . : - жи Же ую.
ФУ У ші біу его Уаі нія Мет вчу іже бі Бе іш ТУ Бета вро їу їх в : «ок у жи Ка «сивих Шах Мк уу жом инуи стук ках
Мет лів их ЖЖ Зк Ж жін біу дет БТ ші бів щу щеє аж оту
ЖИ роко Ж
«Ме З «ей» РЕТ «ж хво на «ЯМ. 5 сіті бів пік зе щію біж бік «(ТУ вк ме ве АТа вів вке тк ії я з З яхті ху яхти жу г бу ж повіє жо жито жи ке жо ака ха вк 5іФ і бі» баг віх віх біб бів Зеб біу біт бі Біж зав ощіж Фу х - жах х У - Пжх х х ву в сих 7 щ й БІ їх ЗХ «М Ват ек ета окт шк 0 ЖЕННЯ, «В ВЕ ке ска жк пря с ява ма в м и сем: хо Ж ж ух сажі ау
ЯіУу Біт бі бі бБек о Біж біу біжх Бі бек бро Меї й! уз фе Те 3 ку о Ж хи МУ бо жо ел ню дж и. ЖЖ и СК хижі жо жи жук Кар скит їі Щі бі заг бі щі бі бів Чек бі бі Бі бі чего і віх : З яв, З З З У ще З З З їв вх КОХ ПУ аг
ЛКК ех, Я яки «Ав МиМевнв. 8 5 Ка є ох. ге: яхрк пла Ка: З охх Мах (их зу ОМ бе щехух ах зга за ніє ев Ре іаи Бі бе бер СТУ вВее ага ів дів да та У
Я шо У " «ж Ме 7 Я «и В кл же же КН «Ав Миневна «Я В
Ук пд з Я де ше мех
ЕЕ Уд її Ж я КУ їБе Ту х Й с
Я - «еще З
«б ВЖЕ «ії жМНеа «НЕ божі Ху ДК З ху их сту фах КО їз уз вів вів Бго УЗ Аза ож «В «іх ЕЕ яиіїз же «Ж. ЗЕ є. ча я ококх пан -й с як г,
БгО Ма вів БУ БУ Удї Я І
АЖ Кк ке «НЕ ху с хе «іх «іже ВИ «Її» химерна «ще М ке УДО - вого со оожкоа кг «ве Б «ий» ВЕТ
С, срака кся я. ж «Я ХМУОВВ хо а «Я ЩО са ні Мат ет кана ж Фе ев о щім ЕНчЧ
ЩІ НК МНЕ ВЕЖ БЖ ЗМ Ка Бе У КР і 5 за
Х с Х «ее ОЗ «їв БК
ЛК С. з «дв сам як ке 0 ЖЕН ее "рРУчлЕ «ще -- ох ож. ск пів від АК Дів і т к «ЖК а «НЕ НЕ «Щі» 15 «ЯМ ВЕ ку пк еко ха же ЖИМ хек МЕ п х ї їй як : е еру: км аж Кр ме Фуко Ж За хоча й хх чаї мів вк ке газ обі Бее фзна бі реє беую веж аіз вує зве «Ме «і «й ВЕЖ п чржбу то. падку «МІЯ» химерна
«Ве М
Коха БО 515 їж ча ж ву З я КЕ
Х З хе ЗК пау ; Ук. «ак «БІ ЖИМ ИНХ тю аж 5 що хо КУ
ВР ВВЕ АТВ ж ше «ЩА» 3 хеат» ВН «В» химерна. іш ТУР ТЕ меж д5В ї 5 «Не ЦЕ «і У «каш ВК «КА» химерна «інже ЩЕ ів КІВ Те вк ток в5а БіЖ Бі БЕ ВР о тУК дДяМ вів Бе БЕ АТ ї У | Б їх «Ве ЦЕ «Ве 3
ЕЕ» жиКеНя «Енн З іх б1Ж Тук во біт ак БУ ВВЕ Зв тує
Ж, ккІою «вх БЕЖ «МА Хиверня «Ве о аг із баг ве бак ді зве ТуК Меб із х ща «ВІ З чаї ім БЕТ
Ж Ж хх зм Ж же аж ХИМЕВНЕ «Ве ЛІ хх в «аю «аа ВЕ
УВО ех тк. «Ж ХУ «ня ЗУ сів Бій тгОо заг зує тя МЕЖ ВО ТНЕ ї я «а З хаїям РЕТ «ЕЕ ХИКВОНЯ «НЕ КІ»
Бін щі Бі ві (ій ак біж іа бів ма бух ех Бех біЖ ка ям. Б жя ук ки и ях і Фах. оуху ою юю ВВ. и КОЮ. к Шев ОО 73 же
ЕК УЖЕ тех УВІ хек ух ша 33 его Біж ТУ ве вве тн осі тех о а Я «вік жа божа сої ЕВ о ко й жа мо Жахктв и. Ж, СК с З ца она Кахух іт а В ТР А асе бів Кіа вра і Бій Ту ве бів ТР Мет
Ж са КК с. зжце а ко. ие сл пи х г. ее зв су ху: сі
Бір се СТВ тв РКО бує ян Фу Ата Бек ее тек аа Тв БЖ вне
БІ: жа КВ поки КВ ху ях юю ше Кк С ЧО "ЖЖ Ку досві Сак у зриву ке жі рух Аз ТНне Має Те жа: аа Те ек ТВ бе тТвЕ ож тех
КЗ ВО ях и . мера чик о зу ру Ай ак ке. Ва клі Кт ен із аг чі Бе тк аз сту Ага ці РБбєб вав тує тк; бів т бІТу тТвгеобев уві тв УуЗі ве яв «ее 1 «ВЕ ЗО кий ХинеВня
Кк Ж вдо Жуки Ж доц дфууках сейяжо с юю муж оду, сок кх прод и помю ші
КВ Ха вів Мек Тв зів бек Веб ес Бак сви бек вія Бек озаї 15
Х з Б І с. «ок дом в ж "Жим м шогих ЖІ Же дх и ШК ЕН се у я 2: дев Ага УВІ Тнг о їТе тТвк Су ЗБК вів бек ек бег щі зег Туб мес
КУ ТЯ Ж т - хо м вки мк УЖ и колу УЖ Кфачиму Фо як. є яку о хе ніж згв отеє ія ія бує щЗег щі БУБ ЕД Бе БжЖ Мямя Ба жів тує
Зх ща я
Зх ЩІ в. с жд ко деко а охаї дж фоих (жк: Ж ЖЕ вк фак божа туї додаря зх фу мер отит зе цу вен аа Бек «ФІ Ухі Кк; Зег ак ре вег обі 8 х ж У пош У ше щі УЗ У з ж я ож сей Кк хх шо же олудмх дк їі ЕТ ух Ту веж
Зі Заг бі ТВк ж ВВЕ тТвг овен ТВР о ЖТе без бек ви щів РКО в хх - т х дк те
Я Ж ЩЕ ажще вне Аів Тв Те Те Су ія (ів Же обу вух нт Бу фев о тве
ВЕ ЩЕ ща вне зів ій бі Те іш вв Бі ЕТ Кт
МО 5 пе «зе «їх З «А» жиМермВ. «Же 5 дк М дою кот хожюе «М Ж тах 55 фо водах пек ах Мк
Фів очі Бій іем жа! Бій Щек бі ія пів та Бе ух в бі БЕ ї У Зх аа
Заге чаї У Уві Заг се імя вів Щек о бім Бівв же бе ТВге оЯБа тує 265 5 3
КУ х те. Ф Я с Кок Ге гг с з я сг вх. с ота. от. во, вжБ її мі5 Тер Уві ага бів дій Бго ів із бі зви бів тер ожеє
Вік ЗУ БнеЄ вип РО ай его бі ТК яв Те Тек віз 3 жк БВ
Фі" біу га Уа! Те ЖІ Те аї вер іже бе ТБе бек те вів тег
У с Ф пох е мч Жокджко ук с. сек ак сушку
Ме ПІН Без бек щесє ве вк Зег ців азо ТВе вів ма Ту Тек Сух т 7 ери 7 м : ях ща 5 кій КО Вам бек Бе ік 1 туго Тер Зі ек йо від го і Ів т ха. У - - Ше т сок мк не
МУ 5 А ат пе тва А жк пи З о сх жою щі Вт Те оУдДІ тек Уві дер ет
ЩІ зи хи АЖ пе оч «1» БОБ «ій ВТ
«її» ХВО а х 7 кл г - с сх. хх, ; : кто пра Фу сту о жк ав Ів пів мех Вк бій бее бро бак бек сен бек ав яв жа Бу
БИ хх их пом
Ж у. вах «ау ЖК Вик яті ик Ом ок Ок ух жах що бу дев ана уві їБе Хі ЗБЕ Сех ага віза бБе Бі Бі Хі Ба АТ? за й5 За їв аа їБе Тук бі бів су РО Ів ув аів Бе сек аву ее 1
Ту аз їБг вх же ва сів те ту Уві все чего ве Бе бек Ту
Ж ща ща ве і ек бі ТБР ОБР бе тнк рем о їве сів Зеб Зеговев бів ве де . зу Й - гу - о У й и . м ж КУ р
Бін ах бе вів твК тую Тк Суб вен бів Нік ав овес бе вк те
ЩО 4105 жа ВЕ? хадее НЕ в НН у НН ВИ НН НИ ке паском пис чиКеешес Вес скосу СОН Я вм Крах адек ижи. у КЕ С ЕК иа р М. ву в я ск зЗсакатвнсВ зе е ск Кок Вес ВС хНХ ке с НН хо Кук и щи ем ше у вм я скдкт лу у вд, ік. по ку Км. ге зацдессаасс аск еві зоба еЄ песо всааааанио суто ЗК ссіОскаце СовіссенЕе см пола сесецаєвею ска сеКЄ «яв смнисвавао жене віка постати ВовОсаасе ско ще ком сспаоцскає засос са стека сенс ЗО хек Фев зежшЄєвооє васваосюа сем с сема ЯЗИК
ОВсЕкКНкс савОососсОк засо своею сво е Ох аВ а зукосокн севсєнеюює саосиесва зпеваснаасв ее кеє спо я и и НН я здат вищуки декк сек ум. сеаима ХАА В ми і М ек ккд му дк УТ стен КесоссНеа косо ие сне МВВ ОВС КК тхори рі КК вки СК кує мс у дек и тру м о Же Ж
ПН КЕКВ ВСЕ ЄСеВКІНН ще е -Е «Ем. За ак ЕВ, саоваезкл
ВИХ ДОМЕНІВ салат є фазан сє сс сте сао сноах состава ко зсстесасжи ситековиже саке аОСОН ВТК ВСЯКЕ З ссмеевае земна стає аєш иКН ЗО сват же А мене оца се ЩЕ ааефєвася свя пек а вацетеваєв есте севВс сезсевсвее десаекінех ек умена ОО ТККЄ З весни вес всс єс ВОВе ХВО Все сфе сВех ЗБ тетВОсеонЯ ЗСеОВаЧат тес захаеско аа еефикнеен Я
ПЕ ВКА «Ева КИ СККЕ пек МЕН ОЦ Я ша ков самє свесниє весдаснвеєк ассевесто дтахеваена Ж задежривма арецескжев веБасека гаепосфесВ ЄстЕтесЮ сво щК
КЕКВ СВОИ сесавВщсє ака кака ЗКСтцааах касет ЩО сазана сте деасжвстОє свесвстасе азсваЄекек СКК ЕТЕ ЕК
ОО кеВ Все МеВ ЩЕ ОККО В
Ех еЗни ж ссвовсОє сававесоєВ веєВОоОо Зоо коор В
Заст аи фс с севажеавс вч асеою есе сус ще
ЕЕ КОКО СЕРЕ БЕК веж БОКС яна света сова зовакосОю; ссср Е Зааасацеа савасаекає ММЗ зетгасстисх асоссковево сет сце сВ ХевасеОцей сус ща какакжккх есе саюх певовоске сподесоена какао ВЕС В пкоценоЯ ЗО сини ах ЦЕ КЕЄ Ве КаЄюв СВО М всссїскив соотатсава соесжасосвев зва сссюв цес ЕТО за аваоєсав какао себе нкаекс ЕК стОНе КЕ: МУК КВК Е Зо сжещациски СОвсВекс ее є зизОссстив сєеасосаЕ оса є ЗИ пика оеє сова сек ких шко ВуєВ еко СТОК В винесе осасксвовЕ саке аеешЕЦаеЄ Кс ВИ коса кеува ЇмЕ дтшОеох аБОтееє кажете дже сек МО ММ кеспаОє аБЕКкТеВ ато ак екаеав вав сосок За кішок се ссев ВЕС Є хосвасоєвЕ позов пат одееве ЗаКО
КУН Зк етиОВ знах себе савекє стада а смена ШУ
ВеЕаКЕаІ СЕС сВаН СККВСКВКУК КЕКВ пи Сиаае ЗБК австстУкаЕс тосезатова сесесвоани аебовлев сережка сов ЗБЕ
Вес есе пбасювта сви свя зсаеоскнах сао Зав
ММС Ка сем кецеееаіс сесссреВс се ЄВая зрос ЕЕ фесцявеви «спек сне зазовеваєє соссає спо З
ЕЕ сте пассаосоО ЗО шжЕжаНеКа ЗсБокак ЕЕ засос свах зежежеєважс скссекОцих се сю сСВОсЕсЄєт чесна євеву що зкатакавех пев кезсяВске ВесакНсєВ ЖК КСО я сесаацаеєї Зсрасаваає ссвсастює ссвссоюекє сад скоВ даєте аж певсєщЕсао ЕКЖТЕЄТЄВТ ссксжеааоВ сссвасВ СОС СЕС що сскваацокє: самнешеОвт софуоозсоєо зоєєвєцааю осеєтваОоє езацексае жо киска осокою офБосаеває зссвешвсва заоссоча фреремЕає Я засвесвсет зе своє есте юах осо оса Ве ши звсозетаєз ацтоснаоюх стссваєсваа доососедюю соссюатеєда пвааесеее що кусає ВЕНУ елек СВОЄ КК ВОСКУ же
ОВК ЕЯ ВОАС ВООХ ЄВОККВОКО КОКСТЄКВ Вата коса ке вЕсвесці веемееМ сазнєво сершасая ясен се єє тщю
ДЕНСТОНаСХ ес «ЕСЕ КЮС СВСЯОЄВВОС ТЕЖССЕОЄХ євВужесве КН таасвосвоє ООеаєОтСЕт стсвефєтес птоаєасеоо зезстстюдсв свасевстає те ввевцане: ЯсстЕЕскеЕ Фест свОВІ аа оВ Що «еаже ДНК «А» химерна «ха паососват кефстоатє сОООтеве стен кекс себе Бо
МОСТНЯНЕ ЕКС СКК ав СВОИ ССС мо ссоодеєнаво дсстсОМеТО ФО са зесамнхояа завастоаєвю Сюезссаєо ме загтасеєоо стссвектая ЗаесееККЕх вес ее деуВсозЇао гааааасвеї КВ соусажекас завковасеє себе єваоасжєа свосстаєта секс ще
СЕЧНІНИКХ ЯФТСЕТОщЕВ СФЕ СККО ОСС Коста єак зе о зссзасасва зооцсестаО сов сСКЕ стос екон паса ще
ОБаесааКе КеЄЕЄНКО сстссЮююММ всю ссфасее деееюсє Шо
ХО ВеОСКЖЕЦЯЄ Вес свв КК Е де за
ЕСЕ СеСЄБВ СеСМСеКЄ Фсостешєв Фсеоссєюв сасссввно й пе КЕНО ВСОЦНККИ ЄВ КСВ есе еко ве
МВИВЕВЄС ТРК: ВОСКУ ЗК ско сема етектооа ТЕ тсефософоєє застоверта осстросюом КстежОВОИ: севостевеє сессадеє о
СОС ТтЄКя ФеВСЕЖВОВЄ сао помре сеостовеза жісковаа що сини пессс зЗдахсвоаао свастасває ваєтвсвесв сстаєтводе свасвуев ЗО
ЗаЩЦЄех КВссВККНе се заєаефаасв сешежекаких ока ЗБ зе стесо: сезаоюасак хек овееає езеТОЕЄ дека кекс Но зцетитвтох сттоНіттоЄ кто секосвееє кевканеєю десавоєвєх ВО зосвсаво: зссссзовеаї згсссссхв пссвессвоса шевнеєВє ЗеСееВ мо всаоєсосеє мене збо азиає свсттеєско восссум сом еев Ва заскстрєв кхктвасхвО сопе ВЕСЕТКоЄад ес дека За сет тксо МБТ ет сВоСВОО КК ХВОЄЄ скроню вежах їж вс отаато ссвасевсав есе ссвас збсавнеев аеавеанНх со сСВяУ МНЕ зебра св ааакжевкВс зкоссеВесеЇ боссювоєає кое Веде Ма тЕВНЕСВОЕЕ ССС К зВшноссеВО сис такса. ее Ме пишно сови ов сов оон века ста Ба
Фев совси посеоцеосе іваоскаао везе сно вас МК всокассцто соосоВосоє Кетсвеквес сесаксвею ЗскооєковХ коса ТЕН» свразососа се ссавЗ сазацекскє ок ескюв Кеш саке сея 124 хво Косова Вежа сжоека асо Оє сема мим ЗВО ассвераєс аоосавссх Зіни. дссвазносе есБаесоєво совевющее МО ткана ОК пе маса ВОК Кекси ЕЕ аск сНаКО ЗК секс соє ас тКсвюв Меса сус у що сващщеаса тсебсвсвіо стсортоЗоО сабвавосіє сво асазсся МЕДОВІ А ашавежтсє сс Є зав ааца а «ВМ ЛиЮ хай ДЯН «вій НЕ «Ве сЖиМерНа кВ ОКУ саектосаос тазове сопеєссва стос се ав сет е В
В неси сцІспоКІ садсстовсс зосезепосе ге саааае сао сявеєЕ це сеВвеоВа ще ссовнє аеседеОвеЗ всосвоєхе Ваше їж вас са зсецсвОчея дев свеє зас в саке ОБО й ви тонаєв зсктасвиас севеовсаєє песаесєівоє астасосова зооснесвеє КІ еко зеонеаекя ке КСО здав Ока ке хека осодаоонеє тесфсоосое сова есооєахє кецуоював з пане їссваажцас совеВсесЕ песецєстоє стосстсває звасовевея За сесацювене сова ковзааевх ВсвеВОкасв фен сага ОКО савмресве ско о ссастастає своє ев є севе Те шт лОси сет ова жави озоОчаоши ссозаоюсне са УВЕ
СВЕНРСКВОО КСОЕНОВО: Ки фен еуксеє ЗеФецоеса Сеул Ва оче сссицО сспссвЕває КеВООВасКє ЗК МОСК Кемер ЖК вссстовсях охОсветеє тасвовєтеє зсаассвиєя аск свасомние БІ свосваванс сспоєсвеВс сет а ска совео дсассаєва пада ЗК
Ччаесзессеа ссзоасесве соц а ее есе Вася з ска саванах ссср кає сакжосвекє сус етос МО зІфстсочев Зм саа севаавки стада сеззаесеє єсссацсву ЗА деєстостоє ссессаоєво сонзЗавсов сабосєаасв юдесаєкех фас ссва зо джек ВК СОСКИ ОСС Ие ВашССеЕ СБК 55 зашцсесцео срозозвссВе сасксесває вас веваєнафія суще ВО зоствсєтоВ есставсссє спе аетоз забавссвка зтсстасвоа стассаоа нео всссзеваце зсашеесек озон с ЗК сєю соєве сх У «Фк 48 «КАХ ДЕ «Вій» химевнв всстчЕаско Каже сцекЕ свосєтее вескасос тОкснеоеє еще 158
ЕВ Зсув схов Оєвє ЗескОсосю везе саке їх ярсашеесецвВ ковзає вВевся оасвтскеє заОсзеве пса зем есе ща зацставЗся пссждеснаве созсцасвеєє оссасствсє асо пев ее за авосвіи зсоастиа ке ішає свскосесс зас «кова З
ЕКОН КОКВНІ ОХ есте фам ове смикає ее Яж
Зевса їа тссаевтвнс ссвевассєї десаосстеє єтесествє Зевса Вся Я цхааесвеєВ сесозсє сао все сх ас ЗЕ есаВ 5
Наче ЗО МЕС Вес КЕКС СЕМ Ге сессвсваяї тТсвососво собааоєсс зов сестовавих саветсссте Ва сищцноаса схе щас сао зсшасскє се Те зоскесщеаєв сова закеває зБуннеЕ Єсецацосвй сова УВО
ОК ЕКНЯНВИУ ОЕМ соб ееЄ оеХНєсююмІ Оесвуоюєо кеООона вай
ВЕК сопе ссвооавеєє васстовсве теестестє семассва ЗО
ВеКЄОВХ щЕООеЕК тасвечкосє Фкасєсвоєю осаастассєс саассеюоке В
КОВКА осо кеееВя СЕС ЄКТС вс Феавссваєсв позах МО спесвссссте ссзовтісв соте семазоваа звосовсеєх зва се ЕВ осока садах оссонетає двобою ює уко касве севсскУкою зо
Фет соцсе спасає ва ЗствасВаїс стаоцієнає ссавВеЗсЕОє ссеснакВто ЩЕ
ВеКЖжЖВЕВс КЕКС СВЕЕ КОМ сша есе ее КЦК зле зісзосаася їсбзссквов соссаБуаес сце оце садка їз зво ооо ає «зосессвоє аавовоєх зсеасвашев Кессок Ме ес тох осот сфе звОассєвсв зате асна сова КЕ весевсово оснеснеео божа с (есе сезаоссви СТ ше «Ех ее «ах ЯщЕ «ее ДЯК «СЕУ хикерх «ЗЕ са косвоє сс вс сок кемесаяє кое сумом ка Я
ЕКО сен ЄВС стаєте КОН ЕИ февесЄх ї25 «седана бессюЗае и зар кко аїєвескесю вевасоцевє са 185 засно: сесвева есе жесенев ссищеВкет сне І нерва скв зсвоассяв пасе воснвесоа есте се Мк тасзасаєке засзсіссза тебе сввевсвскє сива енх Зк а жесаесанв зкесесссовх ЗЕ сКЕстВ фест еєв вка ссве ссесосоЗа я
МеКшКе Є ТЕС К есооввах ас ЕсессВ осяє СОКУ З аажжекно сесію ЄвесекОсВе Вес ЕссвО сс тюк несе За секс Є фФтекксовЕ спедаєвеОВ скстюсваєє сс сає ссадасжех я
ДЕК) ТЕБЕ НВК ЕЕ ВСУ вва аюеи кувати) Б
ККД хека КОКО Єемюс пох єкс зЗоЗссаксвє пеесспоєдва Р пЕКЖКСКА саке СОС вес ее скща соток ЕС ВеСО ТВЧ
ЕЕ В ЄЕК сек Фу знає щас Х Ба
ОК ЕЮ Зощеєнкках каву ЄВ Ст ссВВЕ стксВЄЮС ТИЖ «тек ОщЦєв бевошест «стаж стЗ стос зоеоставОаше сзавоєєц За тасхвстасв соте све СКК ОКО Кс Фев св єх Кен че че оєстх сеаозевсоє вето сСескцаєсєє сафстеєаВ що кЕЖОСВСССЮ ЧК Кекс Кс сКеВ ца Тест шВаКея Її
ЧкалеваОЕ Єктцнаєва спот весзрсеве сасасаЕе состава МЕ
СТОКУ НОВО зву стсх аж Несе свко сожвеКккє: сксовВесска З сере сежВеесК тил вВах єаеавосссв Зав «Бе аа ва ати стало са вес сасасствЕє се саке що песо зссстаосоє вІБссхОехс сюєсазацє ссавоцаєяе кетаакда з зексрвассє сеанс сто Ооте пуоонеотох Єсевсрвода сестовака ЕК задітсає: отаєотува соусі обоєвезаєд ссаавнєєва осстновова ЕМ
ЗК КЧЕКВ Вт ВК КВН кер кчАеІВ кад юах ще
КОМ ВКЦЄВТЬ УВЕСТИ фУМСМСВОЄНКХ ВКТОВВНКУ ек КСВ ЕТ но зас сакех сепзисєсєва чес Сена ЗБ овВе сКЕКсКеєя Мне
ЖеККОЄаУ весен ан сканує «екв оки дека ее Ех їБ кссвосовся ефожетода огуоовос аатсфоєвос сооаонасях севоавовех че всрстсссо бассодаєтє смасоосісос втстоєєвєє зслосеаосх сассотоєає 5 вассаєтаєв сусаовн ссткткестю зсбссофоє» зада зов; «еще 32 жа жимевна свишкасвеє Б осавес Єросоєсвая това свушевеєео со аоовео що сссдавсвоо дестосзає засне атевсесеєє веваевосоє свостає че зассзцанцє сссоооосяа соссвсвео зесоєоваєв ссзосвесте сассоєдках Ве
ЗЕОНУаАЄТеМ; Кровенеє ен скверах зессесєоє векасесееє ее о.
ТЯсдасВОЄВ дедфктеє «таттОрю седоцеєжеи теуеунеєсвє фесеестде пе аоасвесавою псеестес аткекеюют дкессеженю ев свое Зо
ЗОВОСКВЄТЕ КІОФЄКОЄЄ емукеоену кат жеєксв ВЕС ефе Зо засзосєВово сескзассєс сво кає вестієєссв ссбкунлоса аа кетооє ке
КЕКВ ВККС «МС КК БК В ВЕОЄНЕНОЄ. ккВююх о асжтвсзаси сЗриссакаа оссєвеєває сова зсувовеє дохо ке
ВОК. «ааСКЄВтЬК ВИДЖКНОЮЮЕ Вересавевно квевєтє ВЕК те їовцекттеє ссжтєскссс ваднсссаех овсассстс совоєтсккО асессевай "ва
КОС ККЄКЕ ОНУКОМ є бсввюєт єВеєаеєкт вюсеееВУює «аа тоотае що
ВЕК ЕННЄЄ ЕВНЕНМКУН ЕаМаСеАН весен МООКУа. дирачее ве Же всатаксцей сфоесвоєюе сстсвсєюкс стфсноєвою есторстова сеокжаюцні о тзсавосоєя авокстссав саажссто Фососсєсса зопаднаває саеестесвааа НЕ зсоюцазсс зооговюєт спотосаєв щісваавдєт Тстатоєвад суасвієдее ще
«а сег иа га. -в ем чия ск хлор и см у з й а ки що репо згід. ух же вк ЯК «кооЗекм вовосааЕце сов сове васевствев зе саКек кер Мщю
МЕЖ ВОК КОН ОМС а как яеКНИ як (Ук щи ЕК ж ус ри нку Де жна Ки КУ соки у КК КК р Ж екз Я
УМ ВККС СКК КН ФЕМ КВН КК свт же оК и си в ЛЕК
ВОНО Се ЕКЄ Кк Ва Її ку и Я «ие ЯМ ка БЕ жи НЕ а авта же 0 ЖЕН са ля : асятєсжее гтовсксаООЯ секс стос Че сша що
Квт стик ми екв иа вас мч с уко жирних лу
ЕКОН чека сВесес Все дока фс 3 м НИ НН НК ях оком і оз ми тоих кет АК Зх аваццекссев застосо ства Оса секс песецевех що і пок В я ах. пеки ам их ка а кита кулею вк Фото шк види и их слу ках сна осо сват є ассеванева сем есвЕ єсвосссдао що ик ка кед у у АК Сину ж ее Я списи дує уж щем п ше с уча де рен джюн ко у Як. фев и Ки СЕ
Часте цека себе ссадсвусз сесааевоє сесецуаЕх есе а он НИ В НН ЩІ акценти азс асо нОсх веасКажєте Как скоса ЩО ще сугешуУю. Мак воски супе Фор ких ик кжу В Ку и ЕК де Ж «ассовцзаває зва аастне его стаставакав стікає БВ лусу у Ку ср де у пухким дм КО ки МВ У км КИХ щі ан се каса Мак ВОК ЖЕК КЕКВ ХВ скік ков жо век дек дк ока вила о хз док век дкде іст ей Ки ке р жи Кк
Вис МИСТ сенс Зевс е кКацЕНК ке М суку коки у жо усу кутя ккд лю Жок тки. сюжету те в Же дух КК звсзааосве зстасаая асан сасвеккся аа ВеВОВасСте ЕІ «ка дику ик и Кв як г рив дико ви хкоких, сх ча ек ат ет стека скоса уза ца ж пи хеаов НЕ «иа» хиМевна мафію ЖЕК м ук соків в ФІ рр ж вро вовк мух
КВЖДКВСВЕК МеВ ВОСКУ СТБ СЕКСОМ ек щ- п розв ВІВ еВ пт щи пику фік ех и Фо кет Евксв вес сс сє осо вис Вав НСС Еш липнути Ку дже чу фу а ка свити в ех ее У А
ЕВ ВЕСТИ КОМА есе сек аНееє аа еВ АК зкімусими дим ушу ов пес Я шофер хи фу з окт с пеох ха ване вже ем век з
ВИКО еВ МОСК как ше ЧЕМ ач спади ик вок а диву Кирик му даму у а крику Кан шия ЕЕ заостааеас зссстсиос сзасовсаєс осв ссае песососсая поро єє ке сопе пр КК Кл лим ж п шву а и п'я КК А хх сук м 8. ща века сек сита вежа є ВвеБоснекЯ сера БИ хещемнн сода сеосоєоюе зе о засос сера КВ позацеєя сс спасе есе сс сЕсває Зевса о шІшзесее сгатлес сс аа есе вескацеска пев екацєв БЕ аа еКіє вовеееєюєть засос теєю: сасессаска сс моює созсЗатесо ГЕС
Сеча ММК МЕС сви Ва СЕС ТЕ посцооса ссавостоох аахсаавова досоосооня сбосасвсак песестоцоє тво секс ткє ссвовсвОде свОлеаксцко аасдєоююнюех есе фонове Во пзасссовоєю баса сх зав ст свсоозст фест са Ес ОО зиск атцесєєниа сцеєтесвякє сесаВеовВсох вкессвецаа стю що сводссесєто ссаавансї ср ісссоЗаісва саосаваїа свасвастає ко шовк зсоссозсая спо ве спо есасса они се сне сау що
ВаевВсееецЕ зестосявах пааснаКета сЗаОссЯааВ вес ссВє дасте Кох Я пеня ссвастем саасвоєтає дев сбасскасво одбосводоє за всссЕсвса ссОієве КшселОКО ФОКС Е СЕБЕ ЖСНЕ КЕКСИ 12 кссовсоаНс застава седсассакЕ сота пса каже ї32о
КксссвсоВ сс пооонаає баса Оса ссяк Сак ЗБ зантсспсЗа ссонсаози стесвввває поса спек света ае БО ствтссаас сеЗастясва оззамесаа: КОС зе кекс кю «ОК Кацех ее ЕМВ сен Є АВЕХ «але ДНК «ий3м химерна «а 35 стуки Те сошесстоОе сЕпоКеКЄ смс сс щ встає ско сКх сек авесхакеє хека есе що сиве ЗК ВСЕ ВУСТ есе саке АВ зи та: ссвосачаєї зассакстеє капс беж анока песо І завеннеєв ФоствєвВОас срвсовсяеє ассевсоєтаєт всежесессвя проса саєє З
ВОКОВЦВЕЦ Вата соствтоа касЕБаєе ЗмхнезЕсае секс З тстядсоза оссцаоеес сесошеоуа заз о зо ковзосаовє Я поззваосвава тесаЗнЕає єси сесх зесвокєтах сет сває песо щО
Чиваеєатсов саке сеосовицаає ВсєЗасеКЕ зсКкоВесвВ ЗЗаксВєВа КУХНІ
ВІ Зенон сс тасшекасКа сс «вика щ сКСВОСЦа КСМОКОсУ са Вежа фета Євою я керачуєнет зУссвесссЗ Фіастаєєв: сзосастаєх асаосасоєє сасв є ТЕЙ пис єси тоеве вассвааецє чесне сс со цох Те
ЗОН КОМУН сОМеЄМНМнУ Сема тХМІО «сов нєта ЗК о чук тес зак засо свсвасс се сЕсЕВ З ям КОВНех Зк сс свшсктевех сесмН се зсессвхвая сек оє Зк
ПВС СВО ее сс ваКея Фаза «ака Тло песасствет всОссОаєву свооваоооє содтісаєса тега сдзсвоєюа я
ІНК Є КВК КМЖНеЕРеТЯу Се вежею ВСЕ ЕК М то оуснсв всжаскксво свасвоеже фсвксктЄ ЄС ЕАСЮІ ООсеаМє ще асестсЗс а ссоІпссвай соссвосоке ос сс евах сеоекаее ща мовзанеє мас ниє свмассовІ моУсоию ес сова са МО сестосовояе севацзеоєса зіозее засавсвсес сенс се 13 часова сосна сессаноає засвесювеєх сссткєе света м сниссзао: ссоастакев зЗавезеєасвав стоїте зеозаокоає ссессжє 1508 тека совка ЕСЕ ае ВООЗ Дек па «ев Оу «йАЗ» Хищевня «НЕ ЗВ оман ВОРСКЕВУВИМК ЗО еВНмя КтеенО ОКО еко ща секс ЗестОоЗаЗІа ото саке зееасваєвя сок в хастасоссі встесуювня дооєсєротеє ассассєє Фумецастє савоваєасє ща сЕогасстає змезхОвВНсес сстосаОх зе сасв сс Кя св Осає З поцшасевцк сви сс сси Кос ОсвЕ ВЕК ВСЕ аг пес це сс засн аесскцєва ссвоснаеве сс о зезассве: зебестоєва завсвнвкаєю тасбесстаї сстссаосс ост Есє ВО зас ема саше Зесеови оассєвеся оОасетНея Беж вапксксціша ссВаесстеВ саасосниює дпазхоєеда як ке 5 є ТІ «а ДЕК «І» хневона савеотосвоє кована соєю стоотеєсє сне євовО ссббоесає 5 всех евєка кекс секс Веста кеВ Ва есе а ссвоцсвиї іктоова В стен ЗІстоФвнО ЗсобсвеєВес саке сеВе М засос ХевосвоВсх Заосністєє завис бсазевоєса дес та 2
Задекенав фессюєвх се сессасстве Всеснссва еще КеВее ЩЕ вссомвє зсцастакств состатецас астОюцОєє Биесвесав сотввсзаєе ЕЕ
Зцааосєея тост севовесесї песвоєстх седсежеває фони яко зЗіеештсаксв сет ас ас вісн ЕСЕ ФЕВ ЗО широка мес св беж а гассещека СЕЖЕКсЕОще КОКО БОЗНО сседжаесвахк свв СОщас ве шесеуВаяь еВ хе сараоснує асо св огассаетоє сеОЄВетаех асабєаеесх СЕфЕВККК Р вич асовсв ссезастаа зага сцена веде енеЕ есе та сТесНКНЄ ссзовсвс своВОУсехО засос осоовевсво тозБеВОа я повіє ссасню ссотеокове совоонаєюс адсстовев Тесс се ще яКЖЕКЕЖНЕСВЕ ОіокеКК еВ УВО сСсаєєВ ОВС саВекОе яко сафувааец ссосскеє стжсвоваєВ схов оозсєоваєва фах МО осв севоаКЕсВ СОНАЕККСВВ Кто ВЕК пасе ІК
Фпфощцекони света оссоаекие гескоєвееЄс текоотасВва са веце ща отр шекеєвекая встозовете стзосаюю стксєасква зда іще
ДОК ККсКє ооо ексВО ЄЕССЯМИЖЕ асетссюе какає косо ЗВО сіІсшенемо сша ЗфЗесвВха зсваасх оозасвасв зе Зо
Все вевсаекки сосну своє Вес сота ЗО феном се сстс Ззесстмн весвсвовоах Вес Ва тео есВе іа звасссяста зівссвьевзЕ зБахзазЗааа зкобевсска застає Тео іще
МКК КРИХКІ КНТ ІКОН КОВКА КОКЕКО КК Кора юка. Мне скшщркепа феотижаце ЗЕЄстесеНе ек єюех вкавссЕсвВе свв МО конс Моска хости що твОах пав пЕ ва ЗБК тастаасо севоєвеска спвесвоо сте Все НеевЕ фас за зссвевску ссвссорецта саторавсто внашєсоє оре саседеєвее зе каста сотВ есе свое зозоскеєє зекактовою сов Веє І стрес вже вир асое зе Кос осся Меса зі що нвоки сезесВасев сасв ке сів геоетедарая совет Тео ЗО песо сет е есе всетаки сс еВоВ Ка ЗОН
ЧЕСНЕ ВоБеттете сетосаєне сто мне вес «ню ж сн сскааскжи саке сВЖс дебняссВеВ зосссяева сао ЗА пе киу МеВ ше Зак СНИ СЕ еМ. Ки ккал сесевоовес ФісакстУх стКЖККесеЄ свасссвВ зшасвеКє ЕК відаКскокс Ффроєєєтев ос еє зує зеркоаосса созадс 33 охо свак теаасви сабо збо оє Бані сне даси ся ЖК соц зеевсаасеЕ Сас стос с Боско стека КО кеВ Кене КО Кк еКрониВи КЕ к Вк: НЕК Кк Ве ЗОВ ВЕ зисононан ссвкстесаа зоссоааоою свессснво асо пеасаееств аа сет асс дпа тоєє олссвавиє свеаксвоєє соєю се свааою МеВ тЖЕВВКСЄЮВ ФСК ВОНИ кеМОМееСх ВК ВХ СБ КВ. М писк СсЕССООЦех сНастсеОас вес ЕК ЕСЕ ВО СБС КЕНЕ а зтсвасззза ссаенеоося оспомниає есте стокове паса ВВ коса аква ОВК ЕКеКОКеКК Со В ЯК «Вій 429 хе ЕВ єю дих «ЖЕ ХНеКНа саавтосаає Сб є сеБсесвма секс саше сок сстаВае ее ща втесВесв гос сОЗс сеосежоє аоствеООє Ото є се сВее 320 «евесаацх осо аєє сосооуєю: зт о асо весає саке БО ви ассевіа сеоцеВОНеї бпаевтенеє засне: ев єВ вив а дасстцавєя зессостає єввчневеє соссвостаєє стос ссва осв ЗОВ
ЗксоаеОВе зеоасаета сестаоає кастнє сок соска щі кЕетаосВоні осоаНнає нео е овазоенеєю вина є топаоовоце І
Фаза сссаовВЄ сова ес се СОС ЄВСВає сокеокова Я зи сВеся сакоссоє сеоовоаає вес есе освоєно НЕ а зевессес ЕВ Оцте саке сеєв ССЕЕЕСТ ОЦ совсоце щ сСеваосивах савеоОосво софкацсаеє вес ссствааевх єв еса ТЕ
СВОЄ КНІ ССС ще сша Зевс Каса І васеостюєт сеааоеен жає є песо есе сода Я
ЗЕРООКНСЕНОНЯ. ЯЕНУКННЕ сов себе евео ченко копроозоовя о дека кеВ сек зссхемеве кегоКеве сопсвсєе БОнЕВ
Екс асаХ «кОесВесю: Єзсзовкоєє шсвассюєа чеазєтоє єаеещо ще
Карен сук. ЄБЕСВее сеанс освоєна За СеесЕ це
Месвесостю сексу «сет себе засос засастееее Зо се СВК ЕВ шов вяє зтастасосеє тега свасекаено ДВ ас стещ схов сна остаясвоєо Стаса секссвееви дбвасссвах ЩЕ щЕЩЕТЕКОЄЮ СОС КсюсВ ЄЕОКаВе нев осовоЗ песасацсває сова ВК
КЕСЕКИОВ СЕК ЕКС тевоєска асо Е дес ВОК Її зсвацеце нене снк КОС сзанусачка оса вае ЄежеСкЄ 13 дес асК ТЕС КЕКС К КОВІ зБеЗБнеяВ ЯЗКУ КЕКВ НЕ заасссваЗс: вівссвавиє заз вее зони сКЕа алея тефесая Не
ЗеаЕес Фе ск сВИ СЕЗ ВОХ ТО соеюВХ Весахнаеивя Б жа осоозаОНє тес ос сфОс яенестсєвс єр касою МЕ жтшанескОєн СОСОК КЕСОЦОВЕВИО ПЕС КВОМЯЕ Фк зве НЕ
ІвБсевзе т ссвшєвОстВ сви сессОоЗаса зеокенесвя есе Оєає ЯКЕ весацеасст ссассвіев Сзтовааєі своє доБОсохоВа свого Іо ас ае сезоаоосоО ствер ав ксо ВТК сезеоє ДЕНО сіно вн ке Е ЗаеВекваВ ОСС СТЖКО Тесс ЗО ссКВОє Іо низааеси ссзосовено сс став ствєє ке сунця ЄсежЕсееЄ ІВ зивкссасаа сова пазсвосеця песставеет ока КВК як
Ес ВІщЕ є вен еО сс адє СНО ВОВК ОКССЕСКВОЄ В вассюее ссеввасктв сВЕстЦсвас зеовасеваса засесаасве свесваОева маесвя фасон горе децсецес зевасвєевов св сеаке ЗзЕБессВвока еЖЕМ сет своє шІсвеекіс сесбТжекеє єдажаєссква диво ее ЗаВІ зате Є шоссе стеВ сетсвевкОє Фсобсзахая зсеммесся соБщассеє їй пава енаОє тевестоета сЗЕааВсц остова Зезаксва пис осеВ БЕЗ своє аскесанево сс ассаи ЗО цеВ СС НЕНХ смак а ЯК пастуцстов весела денс веде юся всжвацеюе своєю ХУ пІсдацаєвае ссаЕстосаи гсЗаве свое зассвевеес дев о ХУ
СеСКЕВЕВКЄ сен к Вста сВоЧеєНеє Тека ецеєЕ Фа ее м
КЕТІ сесВ шсовснієве собрнвовоу ешвоєвака песня осяє ене Ж аавассвеє сфіжсецтК осі сспеє дасте ККЕ Ессе ТНеВО св теВее ЗУБ ширмкесявов сс помнає ЕСЕ КСО ВеВсООНЕ ВІ
Канон вка сова еє ЕСЕ СОН ЕНКЕ ЗХ «и НЕ «ей» ЗПЯ5 «ек ДНК «іх хиКевня «а 1 скасоцчскцкея засад Всссаассео зовотаеє сепоєЗесає сатавсесво ОЗ сатин оса віка ккецкщвис ие ВЕщКИЗИ ОН ВЕЦІа 125
ВЕС Вот ЗОЗ ВЄ ес аКся зок кескОеНех 15О сем сновВх етос Мет сВмВ ис сВ СКК Ес ювЕцеЕ чо пас КОВаЄ асом ває кає скота ВетмкеВаеек со ОК
Фасон ссавця сек вка совок СВК я
ЕК сенси ФСК ооо со КОМ я І аа еЕ Стас КОтВаСВЦе ЕСЕКОцаНея еще еех феккацео ЗК
ФЕВ СВНВЕ Вже ЄЄВБТКЕВОЄ Кут Вежа ше ВН
ВЕК КЕ «ЖК ЗК ЕК вита пев ах ТЕКИ НЕ звЕвчиВесв вето сав свое сскааоВОЄх есе важеля ЕС песен сКсссц песто саше Соц а ша ссе Ка песо уа зок сюю сваоєє зассасваєє сеассвесюв свссакаає ТЕ кВщцикКх зе кеквИа вен зесто зве кваВіаа «секс ско вВсаВе ВНІ шецесЗцсВ тав еса сазБа ке (оса ссашасВХ Фе сВеКац КЕ вссєтесвсся Саеатажозв деки сеОсвозасо воцасвееве «пев ке каса Ост вева соб БЕЄаКеаЄ сом саке ЕЕ
ВЕеЦЕЧЕКК СОСОК аК САНОК ТКС сЕЄТВСККК свое ОосВВа ЩЕ азщеВвссаОсє ссоЗсаВсаее систе ОСС Кн есе ТЕ зешисаст ссмюзасяв сооосесюв азс КесасВеСЕК сесеВсКео ВА «тесззаекІ соска свист еє зав сецЕеЄек сВОсацеСВИ їі озсвсскаєа сехаснссв сваха ас сасваоєсска зеовасассва язково ї5О ваЖшчоає ссеваЗаосс сцасяиаяиї сажа єх СВОЄ ЗОсАКеВаВ ії
Фолс Ом Вес саУХ скешжЕсеес сесскаВавє сс свВс сек ДАНЕ вессочассє «сток сає зізсе Бена секоа Зесвконаа Кс ТУ ааОтксаеЕ вве свекор ао зерен КСВ СДС і55 пише хниКя жевшєченя ССС Зак секс сс Ко ке
ЕОМ мес нква еВ Коса сесесецВ сс ЕЕ 16558 иаасеявих севизвеєва вози секс везсажнинес секс Кк
МЕС ЗОСЕННККЯ БК ЗК Чеки Я ІККНХ М скжацко:а тсвссежооя спфецевеє заєдєосевес соззезаєта ссвевБнщеє ЗВ
ВеВСККЕСКО КОСА ЄВС КЕКВ ясен с СВК Тец ще зве сзсвОосВос сао ОКей зиск Часте ща васежекася сфсмрева сететсесм кобосоваа века ях «Ве ж «ше ДЕ «АЖ Хикевна «Ям
СВАЦЄеЄ ОМС Се КОВ сек ствосюав сек ЕЕ мессивсо песо садєстовсс зосівсощею сОесмНВХ соєве 5 ссаобсвишх Зестава) сскауєвеє есе зедасаєвє света ЩО засзсссєоа єсаосаовесє арсвкетеє фнрваєжеєв дожаеньса фест з зссахоЕце асоавсівста суствторає касти воєвосто свое ка З кстадсецно соєва КоБсеФсююа оце: веевощееике КОСОВО а спезаосцаєз їссвовтовс сова есї песвшеєтах стфеєтетає пеосозовсв ящО спец сюакся сажвесоє сумо ЗЄС СХЕМИ що кс ск зав
Івасзаоюся зовєссска стаєте сасееоєєв СЕТ сЄ совсцЯсео сесзпсваає тсзосцОсвВОу соцезесоВс зевсвасеєв зсетшеаає сажею я смишену всетеввссо тестів сеаоеасеах зсмрасоє єквовсюкє ТЕ шестосявка ссзасеєзОа заесваашє ее ЄсОЄВеВев «що ТБ пече МКК КСОКОЄ сБваєсювювіІ Осо сорок яв Ба сФіаіссавой Осн ек свавтскаес зосоваєюо ЄесзаєскнЯ суБаЕее у КН занос піс совстеснеє бесжвнеассх асвссяхаав стеж ЩО сирескєке Фсзазцссї соазісеЗ ссосоЗаксе певен саван ко ссвостясх зсезссвасав стос сецеєсваеса смс вна соаасвосааа о засасестчх ассецеВцеЕ Фасвесей Євюшесваоє зеассщекак Фа ЕаК; М зесовсвсов освасексВе савсаостаї ото тсОсетвсвО оса цає АВОК зЕсссцЕ; ссроеєвав соска вас ва фе Є СВ еЄКЄ їаБа
СССЕНССКО БОСИМИ: СУВДОННОЯОЄ ЗЕ СИС Е МиЗКЗЄСЕІЄ З псдеасизєйх ВООтОенОєє сажаеєках зако сооа джек осо 55
Тссвазцоєє зас ща зоссошкоО ес ласкою курс М стос тоса сова НЕСЕ Зссваовсех обасовоєтО зесососєво АВ звссссоеа Зацшеесткоа зону севаксава ства сс 19590 асо своєтеєвеєх сзавое текс сссосеаом каса аає АВК
ЖЕК Те СЕКЖККИа ЗеБОМае Коосокеа ЄЕС ке
МЕЖЕТЕУТОНМО ЗАТЕНУКЄ ТЕХ МТВ ееКТАЕ КО ВЕВЯ СН Х КОВКИ а
КНОЦВЕВНКОВИІ СБС СЕКТ За КК сеае єм ТЕБЕ кстіОоаасю сс зассезееє зечсвсвеех Кссассває застосо ВО азс ВККС СКС МЕТКИ СТВ ЗК Мі
ЗсЗКАаЕКЄ ціа ЗсвсвашекЕ ЄККаВЕВсСВ ВЦВК давав дО секту зр жи: хустки де и у диву раки рек ку вийду Спок АЖ з КИ сесзловосе псобаоваає зсвсзсвЕцє сспсевоеє саосасєтав застесеоВ ВО хжу. іх гофре як уж о мод ух о вт чн дев у вм пото ит ум де куда туя "УЖ
ІЕЕ МЕС ВЕВ ФК мЕтадОра ЄсСЖсВВХ СЕКС СЦИВоЄ аа серединку кп фу окт и вус сист ох сеїкй сової сур ку ку рикря фу жук рать за кктшесо ка сасЗсцеих пссоосиКе ВОК ВЕККЦаХ УА а «нею вона сасосвкнах оса а щодо а овен ЯН аспаснні зоеосеоВх сама зесатеєтес зссвецєті дсовааоце зЖО доходити ау ли ко «ду ж хоч кви?. уч м. Зк азофаецтнски «ств св стссааснай ссестее секс цИ аванс сяте Ва тссавацеєв вмре ссфаоваеєся сздоБукає сестюеєсос абсо аа заостшасся кекс сжеескевцю оС еВОа зве фе я
ВЕЄЧЄКВОВІ ВеБООВОВО СКОБ ВО сспОвоеєв есе ССС У
ВЕШЕТОЦОНиВ сЕЦаКВуЄтЄ текс кжККЕкх хаеВИсає КсВесВеМх сиве ХАЖ дк акки и сх ДЖ ВК 0 де кв ру дк - яки 5 ис уєюух і пр ж их ЗЕ: тес есеснвО швах ЄЕС за ВИЩЕ Сея СЕК пи, пи а ик Ж се: ою ик сад Ж 53 аспевсваца цесостесек Фест ссовох зако В «ме ЩЕ «її» Я «вах ВТ ха йх Химеснае
Е
«Я ЩЕ «ін УВІ їз ж: уд бів ек бі бі Фі вже тні біз ве тв іх їх х ВЕ М
Заг вва ага ів баг о Сеж ів віз Хек бів кее те ве аа дер Ту я Кі З
ТНК МЕ аз тк Уві БО ій Віа ве біб губ Фів вва бів тер жі ід вва УМі демо бго дих зег бі Вік баб 16 Уа ява ато Ага вне тож. же т " о, х Бі що 5 ща іух щім вра Бе Тек рев Же Ма дар аку Заг гук вай ТР о іБу тТЖе
БЕ МЕ ях Ка ївм Бі Мет дав Зак ев ака аТа Бі: вер те Віа щі Тек тек Суб
ВУ ЗВ Б ів Аг жва зак Зі фе феве ре Тр рбб жаротве тер оЄїУ 01» ту
М вх ще
ТВР о ряц Уа! ТВ УВІ ек бек діа бек ТК цу 15 Рго Беб УВІ вве «око соску, с У яке й
Ж М 5 хктаа фо воно фам ша утім в даю вік ЖЕ жк «ну ях ЖЕ в о о Б одУрх
БР ів. вій веб Бик Заг Бр ев Те ет єї. бі їВР ай ів ев зр - Же 7 Зо ше дику ся дк З жа ке орех ку В Ж ШЕ я і ЖЖ вищі Жах Жих щі Єва іа: ех бін ав тує ВВ БО т БР жа Не уд Бе ти жах во т 7 бух з й и ши стеку т Іще 155 ХВО ож дж п с сви В : й пал я ви Ко ва М пе З ек дофух дке бек сте КТ виш Те бек осі» в вбв тк бе Бке біз Бі во і ВЕ КК, Я че
З а Б о ги. о ва и и о г с ж Кф ВОК с 5 ож шу: КК сія ет ев ді» ів ТУ Заг ів чек жав У ба Те Ущі БР щее я т 5 пох,
ЗО у. ще
Ж про жо. «зрк ОО из тера - З Ж шко чу йо ту і ож жк В з м Ва шко Во Кк,
ЛЕК ЕХ Св Ж КЕ МА БЕХ шо 145. КЕ ЖОВ вся . ва БТ І Бу
З ТЕ т : 5 ех їх Я ке сек оз ЗМ дю дк щ пох сяде ДЖ св мих що Я шик до под. 5 сок Хек я, жк ов
Зако Би ТНК Бе Уві а бів Ух Ж Бі РР Б БЕР Су еВ Ух
ВЕ 7 ик . р НН я
Р З ше
ЖК фа ще щей ке ау. Жкохох фури. вх горю, Со ук ЖЖ ж з стаж и КВ км іще Ні ТК Су БО ВГ С ВР За ВМ Юа ВР ОБУ 515 вч
ТЕ 5 вл В і Ока
Жак з ква й дух М Как ху ки, са Жака 4 ух дич ех вк й ощущло рана В шо вах зве жа Мб: ін бче бе ска іже ре фе ва ТР ев вет іє де
ЗЕ: 7 ЖЖ й І ТЕЖ ях ЗИ Ка жнив ше фо сю рт вим по фа юку вик да, ак щи сек зга те Бгто БІ; УЗ! ТВ Се З Бі Зал а жа ЗЕ Ні в ве 7 дю й ся Ж: ї ст тх сту НИ лих сф у Ж ат хе Спа ит о се хащі я КТК жу се їзч» ЧЕ УщІ г вве хв ТР Те жаї Ав Біж У ТВ Уві ВЕ а
КЕ - 7 хіх т а ше М «5 з ух З шим Ж шк мові їх охух ж КК г ЗК бот ск жк хе пт жою СМ «сяє шах октамо и дів ж їве Ух го ага і Бі бів ТК век бек Те ТК ага сом Ж шоауак ву к ши СфЕокє КО Яд я т пішо сжномх сі же сп в кад Кр та: ще жа! бе Тв жа бер ніх Фів аб Тим бе) ат їж Бу 1 сер ху ах 7 Ток з 7 ск
ЩІ БЖ ЗА ЗУКЕ ек НН НЯ нн НН Не я яко жор г їж Сух Б а бек Ан вт вів ве БІ аа КО Ті 15 еВ їх ше БО ко а КК хЕфах КСВ 05 ба о ходу х бе доку си Же що тки дкслк ШК я ий ск да шен ек
Так ЖІ бе ії-є 53 БУ То Б ро ге Бі бр вів жі Суб Те
ЖК. Ми " т дах - Ії й ож
Ті КУ. ЖЕ
Я хи с ккт е хи км щоки тях ВУ г с ЗА ЕК кодитух сх кі х пижя Код тон ви Бра реє Бегб овага ар бів фо Те Бу 5 ів жі бек ев бве . их - 7 х триих й еле 7 т
ЗЕ За сих НОЯ хх, ше ч пе АВ ви М уч Жим, Ко сек С зу, шо Ж деку ро щи педа М сує він Ма Бжж БЕУ Ве тре фев же» вер жі аіз ба Ти ев ою
А 75 ке ку с як деки КИ рек В 2. згию н ле хуя : ах с :
ЕК ХНА КЗ БЕК ВеЕЧЕ 5 Те хе ва те ме. Те Тве Бе; ех ж іще в : ІВ є У ота о тае БО вед їж
ЗКУ ЗІ ща ще в дж ж, х. шт, сушею КЗ жа сх зша: ВЕ дю ха є а чеку с в. Ак жк ав Заг дае сів Заг РЕ Не зем Уді его бУж Б о тТве Уа др огжх
І Я Ях - к кутя ж аж я хоке ки г ож оди и ек Ж дхумає фак жу жу аг ваги тгвобін в Бі аз жа ва ек сух Заб фа веж ні Бі хх " дв, є ек т І
Я як ОСИ тк в пе пе а ях за фак х Ки : «і са юка ОНУК дів вав вії аа ні те Те б ев Бек ам еб ра Яее ВР ОТ але Оки т ше Кен З 335 4 5 ех
ТЯ трі
ОХ ВЕ
ТЯ. люків «вії» жинесна хо ЧЖ ТЗ жим ск сх кое . оду Колжує ЧУ , Ж з. ге ж коки вже 16 Сів мех тве бів ес Бгбо дек бог бмеи Бог Ат ее чаї Фе
Е 5 1 їх пев ака Уа Не Ете Тк обу бу 15 Бег біз аб ша ее Ти а міх ще чуми Жук ЦК шив у Коша куми им ру вон ск ов сей: до лжаи КОЖ ща р гр тує я ін Бу че і Бе БІ ВК ре За се хе серію Мол, «Си ше о КК. кое грокдкх і д о ін ов дом Дом сш, сКХ до мм
Те? Бе віз зак Бе аг тес Те вів і Ве; Заг Р КК ща
ЗО 5 5 о т т хе с же ща ща КУ В о де таж с. ст пе сани жу же жк виє ток, "Кище суп жар Зк
МІН ЯщЕ БВ я Не ТУ тТУЄ дже б БЕ НІВ Те Те ОТВе кр БР ом А кг ж Ж Мао доти м «Ж и Ж за пи ЖК сх Ж Жод СО їБКоБня іє Фій БІЄ ТК бе БР Бі же Бех вка ївК ба? вів да
КО ау 1 зви и о водо сю ж шо мох о шко жо кое п пкоож. ж вк ЕР Уа! ВВЕ її ВН зо БрРе бве ав БЕ УЮ Бе їх ее ще ке - ЗЕ 7 т 7 вом 7 т що 125 мех А Кі шу и еВ их зуша ок т совшю удо еоу с ск АК сок жнУ ата же Уві УЖЕ Сує ев бе заз Ей Б тує БР де БВ дів
КЕ ВК: КЕ : 7 їла їх 3
МЕ ії ОКО ке паю как З Бех ФАК Мао жона КЕ пк Кк з ж Фашвех вх
Мжщ ЖІ т туф Кн Уві ва ва ій Яна ій сек сі вав ак бів
КЗ ВО ї55 що я. соди ух. я ЖК осжк а ож ї КО се додкіяуМ ажоню СЕУ ас ах сіни ; пити зіва жа! тТвге обі біж ав Заг веб аа чек те тТук фе ОофещІ ее сах жк сх ЖИВИМ Код джу її кЯ до жо КИ, ах їх Кк за т ще ОТГ обер о тке сов ЗВК кт аа аз УК ів ЗУБ Ні зух уд Же кекс зве де
ВО М ЩО
2 ди ек. ну ма ож Жахи с и жо їх щи цкомую шодюУє Жук ск йде лою їв Суб бів а тн міх бій б б беб зак оРгО Уа ТВе вре же «хх й се кру т З
В В. мом, се пок, само ЖКОВох г МТ ох с вне ве ВК ЕК БО же ж «ие Я ев «Кіа З дя оУЕКІВ. «ке 0 РК
ХО Зак ахі же Мена «НЕ За сів аїщ Ух! дії хе ств Фо Звк Бе тне ФК ек везе Дт ТУ х ве м у З свв з же коза КК дек ик си я бек хо св ку Ср вка побу, хакфню. дикою тек ожві ТвВг оби Ве Є щі бек о бЗее ТВК о ОБік ав ба Тв о тТве ее тех 7 ре ЗЕ хода ик я фор но 7 Фк с ще я ів ке соскою жк ух ж ШОВ крик. М дан тик діа ак те ті бі СТВ БУ вк Бі Фів а Бе ге Б»
ЗЕ Я БВ томі сто. ії ма кам жом фоток г. КТК ск. ; ня з, «Куди тЗ- х сх су. ев жі іжЖ Ту ве аа" бух ам аж Без Бі тпеовко аб аг вне пе 7 ХЕ жов, ще ща 5 ЩО я ок жає кохали і и зма В у, с -ху алу ие 7
Чек і щег оіви сев ів б1У їж А Біб фо ТВК офі зве Бі ІВ
Га 7 в т т по ях. Є ще 5 ТО їх щ шко даною мох вк м НН АН по шик трек КУ по цій вБе5 ців ва ів Аа бів ТеР тег Су АВ фе тТеротеР зве ва
Уж - з В ЖК тя З 4 я ах й ща 5 поет: ках Зк Хо яко вух. а зшжщєю их мі о уд о дек де дж Кс
Ми Тк Уа ви біб ів біб їВг БУ ви ТвгРожаї Би ог ЗБЕ вій ще І що зве ТЕ і і Ве ее а Ве еко фев вів В ак зве кт За
Тож т слиз Й с х не
МЕ 153 1 пава ж зол ки пк жо сок ТЕ сх: долу шк : що а о Сх
Твгочек бік бі Те жів ків ее осі» Се без кі ву Аве тре вве
Тих. ІЕМ и «жо КЕ ї т
Іа 5 КЕ коми ИМСВ жде ЖК ЖК сжаж ж вико рах ки щодище как же жкх жо Ж вові В - я кв пів вга УаЕ ТНе щі Зв ЗРО дж Я ВЕУ Аа ЖЕ а ЯЕе зво пратує пу у ах 15 М ЯК ск Ба ко КМ ях як же о КО ве вам ЦК швами ФУ Ж окр син бака од
МЕ В ВККгО ОКУ К ї че ві щі МЕМ 5 Е п овес ЕК БЕЖ Б ур Баг БАЕ
ЗБ ' за 7 я
ЗБ Ж ККУ КК Ж клею ані: ку ше пут ма. сю соки со с проник сх ід, ще «Ж «жу его УдДі Уа Те УЖ Бек ее Яке оба ее я Те ін тТве тур
ХЕ г КІ й дея т в.
З 330 чо б шш о жонжко фк подаю в Ах ск ЖЖ, пк шоп сви шо - - щіжЖ Сук ап УЩІ а НЯ БЕ БО ВЖЕ ЕЕ ТНК же жа ве бе г
ЕК и Й пр / 7 р ПО ва
ЖЖ - 5 ча м шко КУ щи Се ва ія у бі бе ее бі сту ія Ку о КУ з ї ме З о х х ЕХ 2 Ка а яв шви ее ню о шу я г р во в чек обі жі Збій ль жа ів зе ж ші біт фев жа їв ВРХ їх : Що І ОК ї ож ЖЕ КЕ ж Ж й З їх з: хм око У НН Сх пеожа с о и Х
ЩТЖ ЯжК рю АКШ сею ЗБЕ Суб віз їх лег ошію еБе Аши тів суб ар ща ОХ ща с сю с Зх шапок Ж 5 содко ЗК ек су Кі: ож ос вх с ву. о У вхо
ЖКЕе Тек жі Вії Тк УВІ ака бів аа те БіЖх БУв 51» ев ів о тее
МВ ЯМ. КЕ тож и по НН ких ск у ж Жов чаї віз аге 16 тує бр тв ан Фу тже тв АК їЖе ія ВАН У ср оо в о п ж у дю вв ох пово во чі же Фі жк НЕ ТВе тів Же із дев ОтТВе ес зу вве Те жі
М ва З с ух ше 4 Що додко Я вже; жк Ссріфа бо же вад сек
Ту ів із ви ах Ме ів аа вія Біч дв Те АТ ще ек Гу да 7 т по - сухе Бе
З ще З иа
Б сусуродо о а НН Я То кю ши сік б шт п се БВ Б ЕЕ ОБУ іє БІВ щі РНе Турко ва ВЕБ Б те ТБ Оу
ХЕ КК ОК ін Р їви вон жа Ве УЗ! ве бак ді ВК Тв Бе іш БУ БеЕ хх Я Ол -е хро ж
БЕ ВК вго ва вів Бра зак ще з Ве ТНР ще БІ шіЖ ТЕ АТ ся у ях в ЗЕ Зх б фа - году дик «о Жкуу: фбфннх ду Ж; дик зов как ке ів ве бів сю же ат бін ар тек вбе фе же ее жа ве п : о ТЕ ж Я З іє З «в: я сх. . «В сл фах мо шудеух МЛ
За» Тв оахи хек вів Вів рео те Зк бік Узі не тні вне вм вв
Я тк люту: і: Ке їй ЗЕ жі Я і : ет р - шт а жк В поляки се вик о жа жа чу
Ві Бен дів бек бек єї їжи Тег бек же бек вав Ууді бі Ве Узі о кажи ау в за КК яса МКушк тут Фк ви дае
Рг бек бе пек ва бів Те сів тее оте Ті Суб аб ба а ніх аа 5 НЕ срок «шик МК се. де сж шоку я са ВІК ЖК шк В пак одка. ат
ЦК БЕ зе аку ТНК ух ЩІ Коше піц і Уді Бі Ж 5 жа ес Ку т ши пох З ся я ях Ь
Б КЕ Бе жк З хи ВК КЕ СБ» фаски фах фею о ит ко їшкчх с дв у жу аа же ТВ ОНІх Тег Су БРО Бе сухо БгО віз ке в аа За ту пОокув я го ! о с сх т. сип ще роки жчЕя ою фящх пада опе шківи осхдк ук еко ок оджх
КІР ЕХ ВЕР ЯК шва рев о БНЕ век ВУ ке в ух БВ Те МИ мех вх п и ох
Я в ау5 «ко
ЕКЗ де лют жк СУ ге в Ма Сук мок 2» пах че мк лк дже Бех ях їі Бек де Зк кра ців і їйг ою У: жа У Ам ЖЖ Бак іх віз ваза Вб бів Ві ке БВ ап зтроївК за ав ові Уві щім ж
Бе ОХ ЗІ - БУ ськ Ж. 8 пи ВУ я сю вх жк Ж пуд Ко г хо Ер пе я мів ави йїй уз ЗВГ офржх Бко Дер Зі в Вій тТуК 5 Бете ТК Отку 535 жк ТЕХ ака а жа дек ВТ Беш Те УНІ БЕБІ І жав БРВ екю ве щІХ
У КЕ ж їж ів Тек вуз Кв вки Ві щит а їж ВІВ вв вія Б ВЕ КІ
Ша я У з Ух " й. Ж То нн ща Б Зх ЗК ро: у че дек зе о год кре у жу фужмх соди ЛК вик ва аж «ів вух не хЗЕ вт ор Від ж Му дій веж Ате Ба бе ін Уа
ЗМК вк фе вВеа БЕБ Се леу ав бін сем тн БУЄ БЖ Фі жа ЖЕК іи ТК се Са УВЕ вуз ше Ве тує ве Бек ваш Та вія УДО СТВ а ще БО
ТРИ Бас ви ФУ дій З «ов ат Теж фак: вву НЄ Бю Ве
УЖЕ кзе яв Бе ща Бі Бе НЕ же щи теє ЕК ріже фев те Уа
У ВІВ я
Со. сан с ше Бик сек Кая С уже С зможу пек ва де, а. хх ніж ФІ А Бен Ві Ба МІ Тек ТНе ІЙ жа ЗБК їжи Жак ев ек йо Ех КУ и КІ сх вищ шум Бех
КАК
ЗКУ
«Ек КЕ хеов ВЕЖ «її жена. і ж ік ії іс іс ім Р фа мі що ре Ки шР жа М Сем уже Зо хіх РИБ ОБОХ БЕК Ж ІН Ра жк ів ї К: 15 у ТЕ
БеЄ Ка Бе Кф ТК Ж ТК УВІ бек фу Вк Бек вешо тнек зак бук ж їй З дк ше срок кер Кор н ск, - с аж що ч с з ок. «ж, Я щі жаі ев те чі ве бів ба бе шію Бу УЖ і б бер бив їх я а я Кк 7Е З їз Ж ЕЕ рек шуй Бк І Яке в КУ 3 - ВЕ ДК а «. ще хх 5 і Ха
Ж АСК О ОК КК ЯК ИБК Я МОМ ЗМ ЖЕ КУМ СОКОМ ОКХ вла Кк ЕІ
КА У : ДК а Кк зе дич вБежи де жів чек ве ка ант г ге ве Бі Уві шБе Бе
Ом о. люЕм з " УКХ де
В я 5 5 г о сюкиєя доти деку вод, де со г «КМ оду ЖК жк уко сферою лі кокя ФО їуж ібн вен же жи щі ТВе ар ов Ве Вів Ве те жк Се Та ж с хе " лек " Уже кх щу ща ів бі ле їне шве бат Уві вав аа бує те між Мей а тТУк Кер при ші сіни вежах це жу пох сим ноша вк кю ех ки ко
Еко ща ТЕ Бе а це жа ер бек сек ях Ту ск МК у
ВЕ о КІ ян ж виб ке. Жак У ке в шо т вк вух т З за оці же ї 4 Ж питв Кк їх зх КІМ ХК ЖЕЛЕ РЕЖ ЕК ОХ їх КК жа жо Ем ЖЕК АВК «Ек Ваша Ве В. тео Фу уче Зо шахи їв: бу а й аку дир Фев гу сб
ЩЕ її ЖЕ щійв Беб вгж мае ВЕ Бек БЕК Іще Ба БЕЖ їх ЦСК хх Ж хх хх . х «фо жи їЯ5 а Ж З пкт КК м. Че б я х. ву, ФІ м. С я у я чу жк кни З. пе ча
УР ТМ ІБ ТНК се га 3 ес ів аа ЩЕ АБ ЕК ще Бу жа
Я В Ах
ТЕВОТЕЄ БА КВ фа ЕМ щі ж БЖ ЖЕК бе Я Бей Ем бе т та кож чих вві з: З доші. оду тех руш дошеахх жі фе Ки кеди ми ді Те Ре: і ів кр в і Бе ек веех БВ ее іш а ле
Фа ки УК їх щ її фу Фе З вки меж СТ хз і же діва 8 би у шу аг обі Те ОІВ Тер обек фе ре Те св Ве ге Б ве ти ВВ
ЗК кр КІ,
Ж ах МУ жі Аа ЖЕО БК Тут ж Зі не же жк Баг їв ов ТК оте НЕ
УКХ з " З сам, з 7 5 об жу х ек ниж жа уж во шо ока ямі жи хи жу жі дв уко ше имя сі Су Кія Та ге фо 3 ів беж Біб у ЩІм ру Бак мік ту яУ КІВІ Ух «Хе же др Ох І ож: щу гожіаумо бі ак ти ії уки ку ую й Кур
БЕК І БЕР ОІВ У БІ мТж БЕК віє ву БУ Ре БІ БУ Бі ЕЕ
ЖАХ яВУЖ жим
Ж ТК і ШіЖ ЗК жів БЖ ів ві ВК Зв аа за жа Ве Фев
З я «Их шт БО егосвм бувЄ бах Бек веж те ет тк ше фе бе Ве буз
За У ЗО бі бак ак Те бів вів Ууді Те о їне ех аа тжк вів аж тка уд не НИ Я оллюм хх пох т перех, ще З З Те дет з - с со. Тр па шк беж ск сх, коди д сі я КТ хх; шо ох, по ух ів іш бе те зі ща АТ ефе ат сту веб жів шт Зі Бе яви 7 зу щих т ха
ЖИ З ХХ ко у т шко ЖК хо свефа тиж іо жахша Ко Жов ве дк да коди тах вже ага вів го Оу ТВе Вт віз ага не беє біб ЯК ред ве
І Ж ех т За КЕ 7 ЗЕ Й
КМ ке ПОМ ці Уа віх ві ви Тк іви беє оре Мія вія БЖ в ех ів х т жу хх пах х ж м
Я яву са Как мамо шує КО їх г. скду зем вк ям ожача Му хг ее пе и
І ую Тек бе дія Бе ер тек ее аа Кеш тевожВі БУМ ЄМ ЖЖ рум т пу ЗТ У х
КО ЗИ ЗО оЕ ек є з. сеух ї з -хХ ха к зіж пе х я ТВ хх. п ху я тв ж зіву, Тк У 2 СКМ іч
Фі тТВК БУХ С) Те щі ев обее бег вів ек ТВ ОБУ ЦіУ Бк ее че що серии ТЕ 7 КУ
Зх ЗЕ З З «в Ккжкх фер: кі Б бр бак ув аж Жак Ви же УК годи Же хз а МЕ Бе КМ са муч ее Бе БУ Кока Берг ож БМ БАС ОІ : ЗЕ А ах
ЗЕ м ОК ях до скит феод вроді ФО ух рокяж рих Міо жу ВХ пес кеВ с д г ів ваи шу Сух жи УВІ БЖ Ні ТК Важ КЗ ші Бе еВ ТК ОВ
Ж З З Ж С
ВЕ ких «5 ск вк рук, фату п м сим ж вах тв «ФВ зи сті 5 ваш ока пек тк вжи ее фі від Баш Ве его іж жа аж о тве вве Ба ат
З Бе ЯК аа дер; ЕВ КЕ уму Шев її Та Коко уєш ав Ж ви ан Ж Б з же ЖЕ о ма 3 С ЖЕ ОЗ ЖЕ КОЖ Ж ЖОМУ ХХ ж КМ шк Сх ОО ТАгОЖщВі
Б ОВ Б ді Код Фета Жажие і зок Же р ок же рр ЖЕ ро рекет вже ЗЕ ша ЕК
Ре вегощег Бек ев вія Тве бік тве тТеК БРВ СУ аа УВІ! аа Ні
ЗХ оо У ЗВ так Же уж що их коза хх шкіІхі шо оо й хх ши о пи: жопа Жежущ й вух БгО ЩО й Не Сех УВІ бою ях бух Уа! бів ве я хек Ср ся ока й ; ж
Зх Я ча також, и жо ек мн хе В як ек Ше 5-х ше я се ри В ах і і От вів бек бі шт Біб Бі ет вів чаї Бі бер за
ЕН ВК; Ко
Ж вх кеш ТК киян ж зах МК ки Ж ко вт з ж : : х ті ЕР обі Бі їх бе о уаі СБ БЕе бі СТУ беР'ієу аг ів зве кал З т ше 7 " пи я
ЗЕ зе и
Маск в ву ума вх фо хіт ЖК хек зд ЖК сви С ку ве. бе шк сух ані Маг обтх ББе Бо ків Б ашр о вготже Же нів тер ув
КУ; 7 В т " КІ 7
З. ях Б дк ТЕХ їх За Шаучк ж а Ух 3 зе Яхве «ЖЕх ак ха щі щко жі Заг ої ху ех я ЖЖ ХУ тек У аЬЕ ку й Оу Ма Б БЖ ж І Я В ЕКО ЕУ мая не ко З КО я Ж 5 З секс 2-х як жи сша ж ско Кі дохо дек лий дошк дев кох ше сидр ївгодах сіу тує ЗВе атю тТже Та жов ек уні БУЄ Бі вка бів Те
Уї в щи
Як ооаюю. Вже сек Кук паж ож б їх. чи ху Я х х, їз ак лів о ївгоБЕе Ук Бе тп о ГУ ск ів ее а Ве
В МК ее ; сумі я шо ел ЕЯКч хо то, Ж, пек. еНЕНКч до дак ЖЕ се СУ ме вага Ара пів ву ТНК АТ УВІ ТуК Тек Куб бек аку ТР обі СТЕ
ЩЕ ща 7 ЩО «БИК КК и их и фор шою фо вим шк жи ісюю ЗИвхко де св м ; : яю Ук
Єв щіж вне тТУк іх ех ав тТУК Тк дія ші ЗтУ зве сей Узі тв аа я У 7 х У сви. Шо шо
БО 5 5 си Ж, шана ака код ва КЕ кова ВК дкісту кош ме кв пед родові, Зошо вже чаї бек хек аїй зве тн ве зів Бгб бек отв Вб ве б іа ве шу шик З З нс . " оо ах о Бах Б
Му З Жонккя хз дана ЕЕ ки с жі мк що пн они Кетокю ок, дан шаг 5ег Куб Щек тТве бек ді сте ТВе аа вів Ба бію Су веб м х Фах 7 7 гаю іх. 5 БІВ ів авротже вве гг бів Бе жа ївкобаї ее жк дов его їж ЇВ ше асо Й х Й паж !
ГО КЯ УК
Я ха о фбошає ки зе ка я тик шк Кс хх мак вс Фодие З УК
Мен їбБк ее Бі УБЕ нія ТК Ббе Боб вія а! Бешв бів зве бек і 7 3 з г ге т ке ТИ я
МЕ МК ХХ ка упак скхекао ков мікс дашки Ж фак. і о ожриі Як щи шк що с.
ЕВ Бук р ем ее ЗБК Уа Уа) те жі вто ще Бек ще ке Це ефе «шлю хе М дек соку сфе -. дм шк - ее. : чиї с
Тве бін м ТК бів сує а ба ЕМ НІЖ вує РКО бег одже ТНК КУ
М В Те ТВ
Ж ККУ жоЖА ях ЯЗ шк дян шо вра ва по шо сін ик ща хЕ ек таж КУ
Уа ав Б БЖ Б СЕ ВУ Ге ве Се АБО БЖ Тне КтХ Тв КК 7 СК т тич - Шо скуся. БИ
ЖЕ КЕ 5
Же вк ит вки ук шо о жд при сек нгй щу - - т .
Бк веж СК ке ат вее Паші аа бі Біб во Зак офнІ КН Св
Се ї ЕЕ ! заг Уа: важ Се з т я
Зіка ки ШеЖиМ дови КЕ Ку пока шле ТВ с а: ТК пожеж их, ху сах хо.
Ре Б Бе ув ВРО вуж аеЮ ТБ еф вне: Хі Хек дец їВг ве а
ЖЕ сих ха Й
ВОДУ т ТЗ да ух с шху ік жі ко ба ах диско су кт кос. уж з дум - мВ тв ев Я М ж аа зі Бак оці БІ а5Ба веб б УЗ вух мух ой се й Ти Кт,
УЖ ТІ ТБ ккд аж ех сви ве о асе у т пр. паж Ж. же ку КТ сек : с
Роб вен КО тк У ав у жа опе Уа і же Тв кує ТНК ОБЖ
З. ТЕ ме. ЕК їх ХЕ тоди че зж и вх ем У СКК срака яму зу х я се с па АГ об БЕЗ бів тує вав его Та КУє ГО КЕ мах ще Уа ЕВ
МЕ еще - ши нан у я КМ Ву;
ЧЕхах й б одзро паж док к соді, г сша ВК пух жи з
Ме жа ке Ме я тр вав аж щі БУ ЗІБ ТК Бу СУ ух
ЯТЬ ші ЗЕ й К хек А ен КОЖ зд хау ех хо вив Ко щосажак ДОВ мя КК шків. ЗК с когкщ ся с
Уа БЕК Ов цу АТБ Би 3У ів БРБ СТ 10 ке Тае Хе Заб ж о. БІЙ У ТВе ті бек де віз св ців щів вго вка бів вто бів Уаі ТУК ТНг орви Бго рез Кух ситах вчу т с хх 7
КБ в як «га ахв бі) дез те вух вда пів Бі его орвн Те Ск Ве Ух й мое хУбК Ме - т ех ес шиж с сяк НН НН Не ех яки ух КУ ги дув жи а ші вве Туг ве затв й Ї16 хів УВІ ЗіБ ер о Бію бек дев бї1ю б т х. «жо . сш КК своє Мбаху Жахесу У заг чо х окоюе с я вто Бій аей Ба Ту БУ ТВтг о тТБе БР ВКО Ві же аа бег аа Ту
Х 5 ЗА сви Же: ЖЖМиь й «хі йо иа подих шу Ж У мк ба Ж сухо суч У ек овма Бе зе отже Бек зуб зви таб оУді ще Бек КФК сх ме З я Ж МОЖ я
З що чи со я ше Фе ги, й сх ни. - Фета С ковки. ВМТ шум аю и я сх З же хх сх ціп іт вже жа Бе шек Суб Зег УЖ Вес Ні бін АТБ се оНіЖ веж
Я я ЗА нів Ту Те І БЖ Ве іБщ Бек ев ЯК БР оБІЖ БК
ВЕЗеш Я а света
Ме 355 «Ше ЗУ ще со хек ВЕ
З тя. т5 уж «РАЗ» Хименвна пи як «хамое ЩА пз кВ ек З зо в шву жи Кекуч ит і щі м а НН зів щі Бій без жа бін бек Бі Вр бів ів УЖЕ іш ве» Бак обБів
М сх 4 ку ТЕ сек їжі ак Ж оче бе же ла ую в - Вер ба іі Бе жа буре
ЖК БМ Ват ІВ ВК Се їпб ОУщІ Зб дію ВЕ Бе Бе о Змг о шК гуЗ тре ТЕ щ- я ех в ки в НН КК о жорида дет о сжрасиу бкууя у: схжео дет дощі фо: сф с ох щі ЩІ Бак Те; Уві ар бів ке Бра бі же С вве бів Та а 35 яка ях ща лк Ж ж тру, міки ак жа иа СЮ пом Соках «ах ду Зо й суду щі хів ї3і5 теор іє й бі бек ТВ ва Те Мі ек дія іо їж 7 ще 7 7 жо х лк.
КИ 55 5
Шодр ойожла, ож й Б сша . з км ша жиювю зе ом 5 авг аРШ Бев Жег ів бек фе Вар Бе БЕК ув дае ФІ Ма БНО ме ща ТИ ЇВ щі
Ух «г сою Жах фоажи у ох. ми Кб ху ах прищ ЗУ шко трок,
УББ ем Веи БУ Бе бій ТВК о Ажв ащО ТВг о АЇВ їВе о тТжК тТУК Суб Зх ях ща ЗУ вуб ці жів тТвкоїне Уа? ві ще дов Тук Тк вій мет ко ТуУук Ка
ЗЕМНЕ ща 38 хе жи Ву фа бо ха жах ке хау Зах яти ас «ки фкує Я
ЩІіЖ БІЙ І ТНК Бе Уві ТР ожші бе? бек діє і фіж БЗІЖ бе бу
ЗК дк З Оу ме з
Ва їЕ5
У ескуа и жлуох сЯа яЖуг х Фвіх жЖашн ук тах «то ші посуцх з «7. бі» ші бі ек і Бі Біб Бі его ді дію бе а дев ах 15 33 я АВ сів век тТНе пів шетг Вр За бе зам; ее Зі ес му З За зе ЗБ) тее
БІВ ще тТиг оФів шжег БР дія БЕ фев же Мід ВШ ЖЖ «РК КМ ТА;
БУ 35 КЗ її
У ВР Ії ТВ бу до дів Бегобім деп Хтє й) ЗК Тук сви Аїа
Це вне 75 л. «хх. ду в о их сх :. (з ять чума. о а с. о А НЬУ я ї
Зк Тек ів Бій іт Бій БІУ руб Же бече бів іа Би ба! теє вій си «КК. рух "
БО ХХ Аз Н хв ке до дах: сх хе хе веж ха сах щих хо КІ ее хх а вів їйгК о фне ви вів А дво УВІ ВР чег ака Ре Щек Бі звк обу
МЕ ОБ КЕкя зве щі Тв ОБів тУК Зв орви же Хів аа фе вен Вів ее З; ар
Кн ї ЗЕ Я
ЕМ СІ ке
Уві вів аг ЗжК тує Суб БІ Мія Ту ТЕР ше ВР ОККМ ТУ ТК ББе ціх Єжу Біу ЖБК уж вве бін Кі фуз ші бі ді б3ію жек Ууді нів
Ме вго ви бі Бе сем обі Бгто дк бій аїв ака Уві Уві ап 5іЖ зва х як м же - сіє ше зі Бі бек бів біж бі ді баб Фів 3 Кі УВІ Те бік 275 Ж ях
Я с жк шеиедх о хор: Кк р о с и АН НН У ШИ сухі дек,
Сі) ве Заг в ївР Ві ве Ве ЩІК бІЖ Те оУДІ Те ве Те сух "вкагч ку 7 «их 7 кН я ККЗ
Зіж Зае бег тек і вів ві тТве тТне вк вч ТУ Від вх те Ві в З ЗЕ З
ЛЕ ств хх уч 3 КЕР ха ЇКек кг - «ах і ЩІ дя Мт ка ую кі
ЕВ ОоФЕе Ще БУ жі БІЙ бід рве дк бі БО ді БР бю ЖНе вав ж оф 7 жа
За Б З
Я КІ О т г Бу ЖЖ жк яки м ча и в те, Же КЕ Вр Кл, со. ї ї
І уз вів піз ви тМг озец ат Бі ат Бій кг З за ів аа 7 зсик дерсих я 7 ша ОК хх 355 З 5
Щін тує тег Су дід фею о їтй Тук бак йно іже твор ові вве пі «їх
З 7 ж хг 7 7 г КУ ІВ щіЖж ТК фу їжи Тве ба! без дог бек ав екс їВРобжв Бі вра дек
Зо З Зщ5 Я за тя шо СХ духу Как КЕ с до г хх Кк КУ, іх Мах Вк жк чаї Рье вБЕБ сви; ат Ве бек жек фе ек тве во Бе і Бе аа ел й ах «се жено й хро и Во р ще фах СЖнає ВКню жа ур дих з Бо ходів дів Ба КУ СЖ БУД БЖ Б Є БНФ КТ Ре Ме Ж Ве КО о и чНЯ шари «Ки Зоо о шодуєц рік сво и АН ко сов бух В «ве Те аа ек бі від свв оїне зе вів ба Зі тТвК Бе ка Ява й при же Ж доня сок шк фошки Жук йоду х Жожекк сх шо жа зу сю до
Ж ів бій бек Хве іш Кв Тек ве ви БК Бе бі БІ ТВ У
С я З 7 я. 7 Ки
Я Ух ЕН ок ж хау ї осв Ж кх «ТК жк Сумах сжтюіюю. ЗКОК м жом ка я оди Кох
Бе) бак ак мак ба ші ТВ ОБіЙй Те тв Хі Су ва щі дев НЕ
Кох «7 ї Ме ЕС ще ЯК ЩІ Я ів же сх У сх. скажу кл тех вк копа Мі ХК шВо во ша НЕ їж в бек дев їВе фе Ж пав їж Бе У М ВО ж БЕК Ух
КУ ща Зх же зсраг є вва Ж паю кВ «ек ж ко свв а фош их ма жк кома зе ав Бі сіб ту ів Бак бів ія і бі беб бів аз ст ме а як З ІВ «Ти ща Фе ее ще зу; ба «і жу 1» в Щек і ак ер а
ЕМ З ам Ж БЖ Ме жа ЩЕ КЕ буму ЕЕ КЕ БЖ Ек Ко
ЗКеК ще дити 7 т «ХХ т ск Ж ху жк. пул Я: хо о пгах о оудак. шою ВК сет Ж о пд ві сте вії кіш Зак бі БЯш й ЖЕ фр во Тв тТУук Бі БІя ТБ шах Ж їмо фо веж: радо зе Ж оди ер кн вав шо що дома Жде ск о феже ака пів ків кг б1іж се і» Бе іш тер ув: віх ас жів тує вто ще й ск Жх. т т КУ т ї я сою
За В Бу БО «Жук ек. о «ЖЖ Кк тю. Же, м Ж Ж Фе х. ах ск о. ПЕК «ЖЕ іт аа Сі ТУК ТНК орг ТУ Бі БО бек МЖК ХУ БЖ дк БЕ ТВ я і ж, С 7 7 кози т З т ЖУКА
ЕХ КЗ І ех - . Зх лафесми х я фоца семушо ЖБю. ФК о стуьвко ж шк А Кк ока г ' па З Х ху рн ку -
ЗО ЗЕ я
Фоквша божа дн Кік стру Жлу фа ста АК при Жесвам дух Чак Ки
Бер ог мВ а Те та ЖЕО тує тую єр бе ака тез пу 7 ки х шу, т я с пн Я 7 що яка со и «Ж кож козі у жи Кут ки жива Кі. же: с вождя СС ім бі вМе тег аж меж БО Те ТР і ів дів Те рен жа тву пу З зи т ох
ЕН Щ5І5 5 чі ве ек дій ее ЗЕ вух БІ Ве бек о шаЕ Же БР сб 3 ве -ш-2ККЕ ку 7 7 ЖЕ дО ще 5 Осн КЕ уекенд ЕЕ ше Збоде ВЕ Ко ков Ес пжі о ж За а жа ЖК єм хе ж
ХЕЖК ШЕ КОЖ ХХ МОЖ джем Ж ЕКЕ о АВ і вв ЖЖ ЖЖ БЕЗ 7 Бо - кеВ, ї ; как
НАХ ЕН З
Ко кг не що ух Кт сп вро пек З сек вк ух коляд ЗК я
ІМ ВЕ М Тук Бе ру бів Бе ві Тк уві Зее ТО лави Зеє У кіх ме тові хою ючих пек жає де ж дей ст г жд шо КУ, ІК ж сода и, їх ск и
Шев Те ват оєту а) ніх Те вне еко За і Бевожів бек бек бі
У Ж З вух БЕ І
Цемотут дже фев бе ще жа Уа! Зв УЗ! БРе Хе Бек бат ев є
С ах з -
ЗА щх ее зве шій їВЕ тує Жіш шу вав ча вв нів іт Ве Жак дже ТК о гБуї сум. т хх ЗУЛЕОХ. ЖК т Ка ТЕЖ УЖШ чаї ев бін їжа Ві щі; реж іх ШеЄ ух Ж бух ТВК Нє тк Сує і Ж ши ЕЕ й р ОЙ
МОЖ т ях
Зка о бує пк її фер їв вій віз Зм Бі Бе ам За ба з
МЕЖ Ух Б о ді Ме і жо ДАІ шЕУЖ БЖ КЕ Заг жа РМ Се т ТЯ КУ зу ж ДАЧ я вол Ж б дез пюдю СЕ хакі жк фах век КІ внишоРУв ВЖК ее ВІК БУЄ ЯКО ЯН Бе ж Я Б Аг ТЕ ВЕБ Я ве МКК о
Та УВК ТЕ
У Як и я З зе ії дошк ЧУ Кт. и ах УК ох ї ії пек Кола еві Те Суб УВІ УЖ УЗ дев а БЕК НІ ФІб яще Ко він жа ГУ
ТО Туз ОСЖЕ ен НИ дек дб кам В ит ж СКК де ще Жозе зма ккх
Мне вжй ТВ ОЖшК Ві ка БІК маї бід жі Мі ай АВ Ж Те Кт я п су хх ри вх - зим,
ТЕХ тщ5а У ВІК ва а ВІВ Сів Бій Туг аа Зег ТК їв дгу УВІ Уа бек Уа ве
ВОЗ я щІХ скфеш пю Коша вим ок ва ю херняу ко дер ДЮ КЕ а зеиже ЖИМ ж пря кое же Код, тТБЕ ож! се мі БІВ ве ТО іже аа ж же НЕ ТР ж Се БЖ нх ї аа Ну ее З
КО их КІ с ся. ле ок Ж ою. шо ОЕж сеую а зако ЖЕ ех Жду ок
Уві чег аж дж А вер ТУ ві ККЗ Кі І ж Те ХВ Жак ву
ВІЗ Бу Оу ів ЕГО вки БІВ БрРе бів УВІ ТК ТВ ер ве Вее СКЕ с Ух. т. ум 7 т ву я я се сок шк є ою ж Ж жду умивання ми хх, Ук аг АЗИ БІВ ев ТР ге аа м Уя! БК БВ теж ух Бе Ма ув
ЗБ жхЕ ще ВкО
СОВи Х фу. се ше ов сл а що г нефри Ет си, ня СЯ пІЖ РТ ТУЄ вго зве вар оф Аа жа о ТР ів Бек ва б В й 7. Ох. ик ве ях В я сууєдю Кох с дя Зичу яко гум ей дж тези лях пд фо пиши виш ЯІш фо ве Грек фо: Те Ве Бе веб Уві бер вер век ве так Рхх свЕ ше Ту аг вуж їжи ЧНгожаї де ж жу вро їтровів да КО ре
ЗК Я ЗО яп жує би ка мод додам бюст ду ва каса. дод шоп лив с
ЖУМИ ож Ат УВІ Бех Жак ку Жак ЖЖ ще нт ін аїж ев мій ва
ЗО а я
: «ірж фей доуко Жахи З аз бази З 0535 Жлзи фер Фі з ще
Мі ТУР ТККобів бує его їм его їз его Бо бю Кук
Б Ж тих
У Ж
«МЕ 3? «ах ЯК «ее м БЕТ «АН» жиВеБНЕ «мщЕ с с НК стуце У зх «ек мих сш їж фр сх іх сій Уві бів вве Уа! (18 ек Бім лій Фів Уві Був Вже ве ОБІУ Аа
Х У 1 АЖ у т сект с З я ж тех. «Жлуюа МК. «юбмс джю «Жеотюх
ЗаБ ота) БУ щі ЗК Сже вже віж вк вію ТубБ тВе ре НО шаг Отут ші т Бе У 7 В 7 т.
КО ж ЗМ фс ;: с ї т бюуню для «Жрух ухй» дахаа я ке км
Тук меж ні Тк хв! ау бів аїд вБге біж бів бію зо жів тер) Ме ох й Фе 7 ме ж ях я 5 х . о оби шк чі ак ри дек дяю огуй: УК
Щі 15 35 зи БО башт Біб ЩщІшЖ ВК ТЕ ще Туя ів ів зн вне
Ж Ка Аж го ме оту ВВ м
БІ. т5 що 7 с Хор о хек Ку У де Бех осв же І Мк: ьо же бін ді вер ові Тег Мек те міх кер те 5ек ТВк о жЖек ТВ оба ни ща т 5 ВК - зу гоп Фе ен КК. ха Ж ке ие Ук,
Мет щін Б Зав БОГ бе ар ще Ян АВ їйР оаза УВІ Туз ТУ Ку 5 Б У з и. з 3. сміє ки с Кох зок Б бра пак т Кк їв Аг Мег ббе Ре їВгошіу РМе між Без вер Тк Тгтробт» бів ту
У да же Зх
МЕ ЩЕ м - Й с ше с и не и о тВг ораБ ВІ Тв ВЕ аг ща Аа Аг ТвК губ щі ве бек ха! вве ко мав ув й са око я- хо
З з 7. шожа кт їоеах Жука у? Се ухе кожну ке Жак сЖ че й КУ зок
Бгто ве Аа Бго Жег Его сек БЕР Твгобак іх Бу так зів Вів еВ
М ї35 що лк. м Фоми ша жи домом жк Же, жу пси кому че МЕ су жох тус. піж Се їжи за! бів ахр Бук РМНе во Фі Бе» жа! їмк Фа! ще ТВ 5 15 І З
З те х че бо і пвуї хо сті т З бої щ
Же ЕР ФР ЖІ бо ТНК оЗек ія жаї і5 ТВг обме беб аа жа! Бе 7 сах 7 рих ЗЕ
Мао Ма ЕК
З я я и не Фк сдтамх Фожя єю шМ міх зії Зах жа зді шкелу блуд зів век ве бік цм Жук ща сво Бек бак ожжі МВ ТВ; чаї БР ЖЕ
Я 7 аг ЗЕМ за 355 ща
ВГ ОфЕК ем Фі ЖБК бів зе Те їі Сух аа Уві ав нів Бех ге їх А ще хх в 233 Коко Ук кох с жди жк б опако п то сфе Кох пвг ода Ткг рух ха ЗО БІ же ха бів ве ге ще їбух ваш Блюх
З 7 Кз НУ
ВАМ «АХ Ж чех Во жує сх юю скіхшолю ит шен Й с вх г, у. хіх се
ЇВ Ні5 тк Суб Ото ке ста рт БІВ БР бів іа За бік дію ве жеха ссвУуєВ м сВХуХ Я
Я ка ж ско ях йІ5 ЗЕ віх ЗО кх. дове -к са «г фати ка Коко жк хи жкем Св тк Кк оче кв
Заг жі ке мен вве вх то су Бека гу ВВ Те сви Ме ЄЗВ Ха тях ж а сек сю сю сти ке хек ги ких ик пк се кі соку ж, мих Ж фотки 15 ех Фк де ОїВе Ва шІів Уві Те оКжЕ Уа: жа УдІ дев УВІ Зак БТ рн ва
БО ЕЕ та г чим х дек жалю в мих хм пк М зд ц вує із 3 їжз ВБе вази Тер отеє щі ав ік хво бів хв! нія дав кК - Ух х - рух ак як Жеве вхо ках тк Ж може ЖОВ Жах жах Же век ость ве ма іш їж ТВЕР уж вге ака вію іш ОІВ тує жа Бек Ве Тек Р ОВ я 5 см горах ди хіх КА й БУ; що. б Зх сок сли й змо Кох чаі йег Ух? ра ТВвк Ма ів Ніж бів й5рв ге Мед дев ові Бу щі ки Я 5 др
ЕЕ ЗІ З ЗВ їшжк їн Ку ра бВі ит вад сх Ав ви бів да Без Тів З; оре їж У СБ жо Уві Аг о яжп ж ЕВ ЕМ бБіЖ дів веб ді ам уше
КУ З ЗІ5 --к ве до. фл че як с кос кох "ха бек ях заиЖ З даси СКК,
Твг жів Жакоіез ід іш Фі бів Рго ага бів бро ів Уві Су тТве
За І 5 й ЩО
ЧК я ОКА і-ї г Ру Зак во а 5інН ве ТК Був ВИ ІМ МАЕ БВК Бер БЕК ме я ка ке
ЗБ За ес віз Уа гук ші ро тТук фуч» баг йсв їі вій ВВ ів тра ойЯТИ
СЕ БІВ ОУщІ Ку Бі БНш БУЄ Бу БЕР Бр ФІ БІВ УВК ен КРБ оЄєи
Я коУ ет ж ях, о С БУК ск ехх оз «о Жах ож цих дж 1 23х ек дав сі ів Бебо Біб Бай аа Тек о буя ЗМК ТНК Бка БР жі фе яв же дже щію ВЖК Бпе Ве фе ні Як зе іо ЗВГ ожві ярої хв же й Тк» Бій бів бі ше» Заї Ббе его Суб еф Уді ее нів бі
М х Я Й - ло Що ша Шо ше як й в ак ДК ЯЗ су ж да вро Сквре стіфух жах фор Жбдує 3 лі Жожоко хом ско Кулик йхщ іви Вії БЖ нт ТУ ТВкОБіБ БУ Бек зи пог Ба ЗК г іш
С я ах
МЖх шах Ом «ів» БЕТ «ЕК ЖИщЕНЕ сажа КІ паї : «р -Е . ект ше злі СМ шк дж вів Ів ЩІ фев тне бій бер ве сту ТВР оБнш ек рев щас Бе Сію - ке - о х
Х Ж їй ї5 пів о вее дів те ве ее сук вк) ів ек обі ек Зі век бек ще
У Ток т олюж Ух "моо т т гг. ноу. у Со З за їй с Ся Коко, с. ск,
Ту" вав авіа ЖРЕ ТУК КВ Бій же ба Ме вів аа ВР Ак ее Бу
Я БІ 5
Ки «хх сет т. ек с р» хаос ам «ж. ча т се у. ів лек ців віз бек бек ага із Те БУ Ї1Б вБгре ар о вг вве век тем ог. т тк Т що 5 що ех дату хо ем о - сов У ря» 5 У сн се ті щі аг щі ет іє те аа Ве тВе а те жів ояек ах мем Ви сх - - ххх " ху й сх
То т що седжи о, а У КН зе сте Ах ки МИ о шо жк: Те. ДК Віко
Вк бін ва Ре бі жі Тук Ту Сех Б Бі тує тв аа ев нів -: свуави ух Кк си ак КК - ге м о ТЕ чк ; ке, ка
Третє тик вве цію бій Те ТВкоїе5 Бі ів тів ге ау зе 7 ї ЗБ 7 7 ЗЕ 7 З
КІ 5 Ах со Ж й а фл Кл . овлуч ЖЕ - рах се : теж іа вів пт его ба РВе ків вне вт вге беб вав ана ож ем Кук
ЗЕ пу трек 5 Ко їжа дух щі пк ке В З жо Ка у З ста ЄбкЕ Бр же вки щем ана Бек фежу ук: веж ТК а УК ж жа жа ев бе аа Б МВ ЗУ КО БК
Ж ЯКЕ 7 КК Ще
Зо 155 ха зо тро чок зу сажу Якшо ку - и хх з ук. т сеї «ін віз ке жа і Те кеб ма! Ах ащя від без їв Баг Бі ка кі. "7 ефуккд, т едроуу " пу 5 І 5 що 2 ті Те. позна. рем Оу сою и, с клин г риси. с скох. С ТКА Ск, жу у ек вів 53у Бек ча Ве бів ій ав хек ге аа бек Ве їТУуК бе па тк 7 7 ЖЕ тах ВО МУЗ и ле й . г се - с ер. и «ох. с. шах
МемовБеР Р ТВ мезо те зем жее ув ЇВ ах ТУР НЕ р Мі» мех
ОА ЮК Ух 7 -Х я г
ВИ ТК що зх тех Хо сжтномо ку В -у: Жак а хг: с.яжк Ж, за у: ат тег а Су Бі жі ТВе ОІВ 3 і ен его яек БО жа ТВК зро. Ж». ВУХ» паж фе Ве та ту
МБ ше Кее ва БК БУ і ж 7 пк 7 7 у т ха 38 киев СВЕТ еВ иа
ЕН УНК;
А. "г «ВО» ХУ ги су ке шосе стю шк ге" в а тр мок Жде М йів заії бів жи в бі его бік Бо біт ви ма! вів Бе зве тв х 5, - Кк т
Х З о 5
Кр г: Жах СКЛ кУ ЖК мткиж. Ж ке бами КТ СТО с до су ам хг лУ: з Є худ Жах 7 Ж х «т ТА КО
- з і же ух ор ск жи кої дк ге бок кі сту Уа! Баг тер Ущі ага бі го Бко бі Ух Єв ів 615 Те за
З У т 7 ї Кі ща Я х в п с іх. Ку сх ще ожЖшях ее охжіюю МОЯ ха С іх дів ів тк офі ав біж его Твк вх тує ні сег вія ви тів з З ща св ат їж ше Ті БЕ ж Ех ших КК Беж ЕЕ я Ущі ВК їм ; іш: Бе жк ше Бі тн вхо» вав Бе їв ТВЕ оте ТУБ СУ В
Буш КЕ по ВЕК іш ОБ ОТИК ее ваш г дів ТЕ ОТУЄ Ту шеЯ ях в ща - - - ; - ср се аж дбає ки свв жу ди Ки й хх бі бів бід те ожеє Уві ТВК оба Зеб бек ЕК оту в У Ту Бек сту щі ща КЗ х у сито раку фі ие яті жУВі із шк а кі іа стає оду шк СХ З «У щЩіж вІФЖ Біж Бек Бі їж 5 Зі Бек шіжЖ ві ях Зіж вв" аз ТЕ а 5 ДН. : Е дк хе ен сг сек фено ек нак шко яву; жЕрох
ФІ век тик Те хек еф ОАТВ Як фе ее вл ожек жа ду хо тТве ях З ТК це я се я. «вно уко ху -е Тео кою тю жк ех а Фуху пе 1 С жк
УВІ Тве жів те суб ах аа бек Б ріж АК ВГ тує вен ЖІв
ТБ ал ЩІ я гот фор кт хім фреке . ши щ : Ок жу олхх З ївБ ув Бій тв БУ БІВ Бір веж Бек Бе Фів емо ев та, Т.к Віз т ЖЕО 7 ї хх їх х си пір вовк КК хг ше кою би боках я де кл ах Мах Зк кої кг ій Тве бе се АТЕ АЖ во Ма ве) хек вкФф вне щег Я Бак су ї т що му тож Фо Ж дак. Фокс ЯКЕ УЖ дак щагошів ТйК бів Те Звк ої т їв ахи щей мо ін бек т Ав 7 З ч те дих зу бек ри Ек вк ТК тісшм пи г
Уа вза ака тує же бе Бі ніх ТУк тує ВЕК оте веб отУЄ ТВ клЕ:
Зи5 шо я о: ТО кет та. МКМ в дви Код сх пе - са ж кю ни ту х зсвке ав З
ЧІ Се і мг офух Б бі ЗВ бу оту і 1 Бе Бе - 5 ож суху тд Я. ск. о НИ НН НКУ З ва кт щі ЗЕ
Меї Бк ме; Фі Бе Без сіж ре га шал оБіЖж ягРфока бас ав ета й й ска ча ха ща в я - сі п - хх ож мро1ишк КИ до ож оз пилку Вк ух пок
У їж в'я БУ век жу стт БТ» іш Бек ів «в ож 83 їв їв
ОД шК З - то шик шуй руху ши шою я, се Ж смак кох бок перук: пін бро же Бен тн заї его ЗУ бів Бе чаї Те сф ве бух пвх я з - - СЕУ тя Я ЩО.
іже як ТК біж ба ві Ве Тве веб аа ТжК АТа да тех ща х З Жї5 За
Ед Ко шо АКА ска ща, пошу я ННЯ ще себя шо шій б; ей Вт бів сії ав вне вага бу ем ЖІ бів Бі те ах з Зх Ар егу ож БЖ Не жи зол дя ЖК сли щиру Ко Мр хх св охо ОК ди кад виде яка КК їж вке діз Вт бі ве о БРа ів ака БЕ ох БІ бере фев їж ще " - сю х ах я кож т хо я ж Ж о хж з фошайо же Ж а де вки вдмшу с
Бі фр їв аа Би ТВе о бжв ек обіє ав бів бБге Бів вав бів ав
Ех ЗЕ ї ЗЕ шИ 3 ЕЕ р саке оди кжуіам Ж В псує сі сф екю Жойекде Шоохкх бані у жін я
ІБ отУК Тук Се вів Бе теЕ отТЄ ес же ев тТерожву в чу щу
КЕ : 55 Ж сх их щу сшде фо Жак зи В Коувко жо дою С дека: КИ пив виш ів ТНК ве фе Не Ві кев дек Зав іа бек Не реє іє Брер бак пе з іх ж я х х й У каш й вухах фроо фозщо: ЖЖ жаохиц Ваша дух осшео жо: ож сеака Я кс жй Е, ув вве Бе ка їз Ба ее лак фу ее ТВе ве Бі щі Тв ОК
У і я пе з щу я с
Я ЩО «5 я х (м я Кора Я ся, ши ВОозоги ж чия ка ут юку. У. КК: с сек шок віз фев шт» бжх сви Уа ж ща тує Ве бує Бім БР Уа Зк в я их ВХ к КЕ бах лі уд сх ща КУ Е ЕІ. БК о ва ке ли зх Зеве їх да. БЕЖ ч о. д, ков
ЕКО КУ Мі ше Емі ще БЖ Ве оОова ж ЖЖ І СНІ Ве ВЕН БЕ ЖЕ г хай вла М Ж кує жаху мя Кк озшрі сф спожи козу Жар Жах згас пак кр
УщЕ Бви ій ек За сію Бер тк ов Бер Жак ве Уж жа Зк ща
Не от же
Я а Я джек Жов фе фот п вки до код КО «Жах аж ск сиди кою в жо сані вт Бак хе Баг. С іх ів Бі Бе ТУ Вів сь вав щі ан Ві я сЕКу х жк Ин р а я я «6
Яовеже фаза фішки са СЖеае ховеку СвоК і хат ие кою алу дотик в нн
ВУЖ Бгто ЩОговже ТР уж УЖЕ ер б вже маї сот еко му За СК.
КУ що З ен З НК АЖ я пк ДК. ие аж и п ЗА іє ших. отри ав іх 1 бів і бек бію бів об ТУ бек ів а я ке за! : тик - КО УК с ще З ЗІ в бак і а ст Я кою їн ек вух Ж ба о з дк хе жо хз КО щиКу МУ вів Б жа БЖ іще МЕ щі МІВ бек ва Був ЩІ бак
Кі т ху хх и уст. п
Я в а ток екио кого Ж Жож о Жбквах Кк сЖоюсмх сах яю збі ш о Ж фея сжсомо ж шк кам хай семою зов
Сужх фо аа щас Бі Тже Те вна твг Заг отже Тебе Ме ніх те Уд
З ах З моде ті КОЖ пк а В АК па меж ке щих іх пк : ще іа а Же ЗуКх ее КУ же ЖЕ: їв ОВ Ту ЖЖ Жіш о Бех се МЕ . ЖК 7 ж
ЖЕ за У МЕ
НЕ їх т а ще х піша СА КУд, жук. рію ах КТ возр ай ех Ж ех зе, й, ж у око чай век іх ЕК БЕК См с ке Бі ІВ Кк на Я ще Аг чаї ЖВе
ММК ТВе Ні ва тве век ТВ бе ТВ Уйї бук о ме Ви ж Яке жае ее вк ее ОТ аа ВР ояіа ма ЖК тує бух а ве дек вБе ве
Ж БНО ЕЕ вк ші не мні ем Аз теє рр оію БІ ріж Явроджи хащах тик ом
Бер офик Вій Зак їв ож пі ВЕБ бер уні Ббе сБра іже Аж ви ве ше т злих т их сих
ЕВ БІ ЩІ 5
Жет ів Ше ТК ше іх іш Тве ат жі емо є Суб Ба оча ЩІК ща що й до ту Бе ве: 01) Во таж Те ша? жк ТР» аа ев їж КАТЯ Бе шк Я -
Тв Жековіф щі Мі5 Те овББе бо аїв Уві фев Ой беб век Бе ме їУкоБег ім ес Беє Уві жаі Те жаї Вк БегоЗве аб сви У ВЕ
ВО п ТЗ вів те тжк (36 сх аа жа вача мів їжа ге зго ва Те бує ва
ЕК лет, З хе Ко Я
І З ті ТМ аа щі Сея УФ ів ВГ іч ек Са аа фа ЇВ НІЖ Те бух вм) а ІМ Ти5
Ве бує Буб мів вра зів вів Бій сі БіЄ Вей ожев ча ВВ їв ВЕих
ВР БК БЖХ ВР ЖЖ Вар оте бе) же Кі» явг ау тве ве ЗВ ЖВ тв сек щі жа жа ву ваї зав ні біо й Буе ба Ж їжа Ве
КОЖ УНІ Я У Ва ЖІ ще ВЕЖ хм о ваф КУЄ БІ АК м ре
ТВ ТУ ТЕ спо арте окхяу ази ши ХХ доки ся Кк х жк т, шк х с т з «ик 2 р
Ж КВ ТуУг ЖаУ ЖК ку МмаЖі та Уві щі Ази дів У Ви фу Шк»
Ук 7 ММ: сан т х пит х уче СУК жди жу У Кя Ж. Стояв. ска их, г в ср у. п Зоя. У
АРЕШТІВ шій тк овямй Бекоуве Тур ве УТ ві ек жа Бе Те жі ем Бе ків вки те хм атм ж ву У жук мив ух жа У
ЗВГ ока вує віх Без ОБУ аіж ВР З Зі Бех Не КР бак у Вій ах Ве ях '
сю жк У Був фот КО вк рух ак ба Ж Жах КК ом: Ве Жах ж Кх с ве вІУ БІВ КгО та 3 Рг ів уві Жує тег оби бе вге су КВ
ЕЕ З ВЕ хошкж КОХ здиеї СЖККюю дожт. Ком ат ак С ; бу ск ж о ти Кави зав шт ух дев ай Сер ТВт ж ав я Жах же Бей тв Се СБ Ва КУБ ТЕ щи я шу МЕ КЕ я : ди ЕХ ВО с я нн з ск одекни сел. Ж о щі ди охвкжк Ж ого шоетжа ше. щу пвссоя
Вве Тек РКО щег вар ів іа жаі щі їв щі Бе бак ФК щі ве - х н їх зате вк. жк; жк. ке сек сао си « кт ож; же сах т. доомоют. я пек.
Фі ай АЖи тес ру Ти тще веб Бех жа: Бем ем ек ароєі Вк . те х 7 я те гу ГУ т
ЖК ЧК 5 зе се ва Ша ус Жора си ох са к За яух АЖ де ках БК сів ваза мі ЗБи баг о сСух ет жі феї Ні є Вів фев ніх в Ні чО І М
ТУ Твен іх бер ішу кг фія зер бо дію ж лм т я УЖ. Я ча Б жк «Мак БІО «дев ВТ
КМУ, сх Ки «а» химерна. «Це ЗО -вроз З сойвю ї му їн і хв т Ве ве зе Бах У кА ж ауд Ж у жк
КОЖ У БО БЖ БЕ ВР У КРБ БУ БО Ух ів Ме ее Б хо зх ака КЕ у» ку т чи В ко Коди мух ке ща їх: же ще ту
ЗК Еш дак ДІВ Те Сжя Також Еге вве Бе Бе ТИ яке же я з у У суд: що в ях З
Я Жке зиЖ й жом рух В же сі Бчерх де Уха скло кри іду вежі Жак фа
ЖЕКу ЕВ СК ОЦЕ ке Біл КО Бе яКж ж ме емо Бе що
З не Ж їж Ь й З те х
Ж Я Ж пе пе ж Пе жкежеушн ше фо сво уде ет кпк коухокя ам д ше бик, ну я ; щіЖ зе ТІ ТР обіх вав бі Вае НЕ ям Тек віє ее Бі веб
КЕ 5 Ба оку г ех 5 ери о пах я пенк. 2 щ ні пі К с фея ж зроду. их жи. шо, сх зак з 7 ща вка ферм Баг Щі аж руб в ан Бек вух Бак Тв жа бе рев ях т 7 " 7. ;
Що У ух 5
КЯ 2 с н ж-жк. и. щи кВ . хи - аблюях аа зачин лим Су хг, т у Бе вав заг ан бів Те а Аа Же діа ТЕ Зшже ТУк був ща
Ктзажо МОЖ Учня пу зо я жо. - ж т - шою. ск ек,
Бу бі ЇТ1і6 ТЕ оТне Уві ба ях ва тує Ту АВ ЖЕ аз Тек Тур ха МЕ ДЛЬВ ужив У Ук пн с З НЯ ми ах якою кий
Віу Бі Бі ТК дає жа! Тв за Заг овен іє бі Бі У бак щі: о ЗУ арх з "
ЩЕ 128 їи5 зх пед с де іх с: дифе жу жав хи жо дж; ших ке пах ЖЕ хх ці 1У ші заг у Бі бі Бі ве БІ БІ БІ ІЖ Щек АБО ІВ
Ж ї35 За ціп меж їБг олій бек реє 315 Чек ібн ЗК йіз бак УЖЕ Бу лм ТЕ кош З Ж ж ЗУ
ІЖХ мо ї55 що
Уві ТК їхїв ЇВк ст вт ав хвг о Біц де Та вхо щеб Тек ще ЕВ
КХ х ххх з "ОС я ок я " же
За ж х и. зам ях хо : щ як : -омо-к КК Жака ода Сак Я стук тТтв тк ів щій вв Бій Бію ма 5еє БР ТА ев еп В: о тТуК дів 7 ша 7 т " ср, обу
ХЕ В ТО
: «к хі с У кож. соми п тк пе нц чої хз жЖбамох Яка Жи ит ат ТБг ЗБЕ іви дів зв ав щі Бгто бБеР аг рве дет Шію Бак остю зх Ов 5
Хек Біж Тве ів Тек баг офіц ж» Щів ваше Баг вжи ФІ Яек ім а о ВІ БА
Уві віз ага ТУК Тек бе БІЙ Не Тув Теж Ферб Тве ВК Тує Тв вве и у - со СМ о я Ж роса схе ЩА сах Же с МОЖ вк КК
ФіУ Су бі твгофжх емо обів Їів їш5 сію бію бі ші бек Бі Єву паї зах хо і: и ху (жк шо жу ек кі жі ях му вові жу
Ж віт ее І ЕК ГУ ЕК БЕК фу І 5ІЕ Ж БІШЖ БУ лу ЗЕ
С в лк ж т ек и. Жак ї ож, Ж ло дм зу и і бі Бі Кіш дак Бі бі ші бі Бек о бів віз а Мщ їве ств 7 ПО ЖЖх т щі ож т ча
БУХ 2 ях «а: рили ше ко Фах, Ж і ВАВ ку ЯКЕ й жохех ме пін БР его ів їв Уві Бек веб біу ШІ ТК Щі ТК бер тв се
Ка 5 ЩЕ мк фам шою жк Ж «Ес и КО Жим СК жи сво Ко -Я овскк п
Ек ши ї--еж ще в жі. їж ще кити « КН хх їх Й дю й Не джщ
ЩЕ ШиЕК Юлю ОК їз Я ат І МУ АЖ що Е і 155 Ж БЕЗ У те вже 33 я 5 ккак пак ря хуттую о вх Ми ж шок ЖІйног Б и жи соди Я сх р іт Ага Віз Рг бію їВРг ОБР АТ РЕ ВЕ бер біт бек ев іец сту ха ах КЕ
ЖіЖ Був Аза іа бер Те їв Яве Бі вів «ів те бі вав Біц ів як ІБ ЯК цтво Тує Тжг Скз іа вже тк Те ек ве вже Тео жа ве Бі ЗіЖ жу х ж З сим. ж я
У 325 ЗО ета же мс з. о. з : мо дню ке че сх, само кю як я м хг й сіж Те ру зе: ТВг Оу! Бе бег Заг АЇВ баб ТР Був ЩІК во) Зак 7 я БУ 7 х Кк
БУ 3 Іа як сла ож шу х ач фа жк. с-г жк С Фодрує оз ух Ко зві бе Бге ів Дів ве баг барі век о їТВг бер ові бу ТВе да я чі5
Ох поеуьк як ННЯ що си Фо кою "люту КК сю, шт ет іх КУ Як ех т віз ів іш Ст вжи жі їв ав тує Вб ВК бін уж жа те УЖ
ЯМ За 5 се ке доню дк кА ток оду Же шо я р 2 жк Як з а авг Тк хм бек Бі Вів іа ївг Щек бі Уві ніє ТВг Бе бо дів
Соя те шфкаою сло шкоди бук й шої їж с сошлкс кн ях сжкоуєю и чі ее бі» (ве Щек бі іви Те бек беб бве зак Уі ма тТвк ож а У5 зо з г ще Ф. « си Ву. ол й чзхадж СК ек о п хх Кок ко бег чего бве фви ЩіЖ Тв СТ ТВР ОТ ІТ Су аа МАХ ел нт ізо прим чук фімох ЕК поко пе ше Ж еще Кк Ж у: жжщех ї ипвх дух чех іє вто ве ойба ТТ їж Уві аж БУХ БУ Уа Бі БР БЖ ЯР ух
Ве я. 7 КЕ вх і о т я Я 5 ке сі в ке ів ж Бк ка ма ви о. 7Е ек кі КЕ за сх
Аа БУ ж бу Бі бег бі бір біб біу Щек бів ві бій Божа:
За З кХ
У А я ях пек аю и що мк са ни І сш Кох сад я жін ки хх сів зе ші віз бів уя! бух із ге бі аа беє уві ух ат ет
ЗАЛ 5 Зах
Суб5 уз від бек опію Бук ТВе о ВБЕ о ТВК бек Тег тек меж нія тка уд!
УДО ЗІ Б ве її з 1 з Ве ше щі З «- сії Я: же ВЕ йіФ їі її вда вра
РОЙ БІЖ БОЮ бу зі оБІУ Бе Б гКО Вже бу ІБ КК яАБА ГО
За5 ЗЕ УьУ З
Ди дж. щ не де Жачонючеє Сб ик т оса У Кості ях ет посилили дя фе ові бі бе о тТне же ТК аід бів же Бе ба Зі ве щі ве хи ЗА 5 о Зо 50 мае аг адек Фів ар Те дій жа! тек тек су із ге бак бе вне
У ОК а в сей х о ща с 5 су Фк ак ж соку тю фокжк Ов зв
Те пох вне вія ви дер ТЖЕ ТВ гу ій сту ТР оіец жаЇ ТВг Уві
Са Ех КЗ ще В БЕ дек ще аї дО дужеуе ве іт І ру; ак щі ках що дк «і Кіа йта ек
ЗО ТЕЖ У ТК я І КРОН же СО ВХ ОБ І Кг ЧЕ
ВЕУ --- Ба Но бек бух бек Те оЗае бів бу тн жів вів вен Бі Суз веє УВІ бів ща я ща ака зу РН Кта обом кт жі тв уді бек тбо дея ек сте йіа ве
ЕМВ Би БВ че аг і зі ні їбг ВНе вгвовія жа вав Бій бек бат БЖ З «ух пуд рух о и З и в і т ха ку рек ї ще їх ТВ Га іже ак ре жа ке Мах В ТАЄ о Уща г БТ ОВЕС МЕС Се ех у сів жк отук Тіє буж ява Уа ей нія їж Без баб вве Те вх КВ
Її то БУВ ЕКО о ЖК БІВ ЖЖ З ух НК со
М У ЯЗ щ- не є ше жа ж ж и жу жк у сі сих п дх кх
ВРУ беж Бе йіж вк сів ам АТ бішж Бу ВЕ) ЖеБг ожщі Ве ще вче 7 т тах Зк
УЖЕ ФК Та їх сток г ак . св сжфеше ок хо шо жк баг жк СЖає ужх я яК
Бгто вга в ВУ УЖ ВО ТВК Бе Важ РЕ Зеб во ЗБг бе ВІВ Ж т т я сві усу З р ки ди че фі фай Ж; фев фу ж ик не жах
Тве Єше та! узі Уа лев жа! Бек ніх бів 5 Ко пів УВІ ух ВНЕ ще ! пк тах
ТК жи ХМ а бе бр ж вктк і ща ке вв нЕк й 5 В це тТвЕ на ЖК заа кКша тут ВЖЕ АБ ші жа! БІБ Жах НЕ а ЗР ОКУ БК ОКУ Ех Ю
ТЯ а ж ЩО зе Б гот СКевах шак аккО я бе жу ще щ З ва ах за ев о ТВЕ гомін а бій Те а аг Тиг тУК де жах ж Бе УК ЕЕ
Ох о яІ5 палю Зо зд ж ж с. суку Бозі ж ЖЖ вс В КІ буду а вка: днем ши чаї жо Ні сів АБО тео Бем ази біжЖ вУБ Бі ТУ Бе Суб ск У
ТЕ пвх Ка У т ча 7
Ве щА5 щУ соми ВІКИ ко ка у «сл юки КУ реж В хх яжи. Са юи Же МЖК Я хг вай сжжх ів вва іх вів веж 58 ОТ же Не де 5 су ВВ гоп Кон окоркіюю ТК ска ск м живе КВ є оба ср, Кк кер іх бів щі ВгО Аг ів БРЕОБів Ж Тек Те Бевз ве ві Су ау я 55 ВЕ кх «Жук є ою СИ т жо пед же ж бю зі Жорж сутуєм о фак В у ЖЕК жа БТ СИ ТНК бух йжо є ЖЕ! баб ру теру ем жа ке У на тек Зреа Зае ав їі віш чаї бів тра Бі; ак ва діє він вий
ЖІ ОРЕ БЖ шт вм У між жа ОТ ТК ІШОВ А ТК І КЕКВ
Зх ОО ща ях Ух. УУ ся ке ТЕ мех, ж аж -шх. ся пи ч . Кк - од у, - и Т. п жі. пів ваш ап ТК ва ВР ЕВ Бк рт щі жо ав Бек вет ЩІ Щек зе же шо
Ме ші кеи тек жає в ба Же ма вер ку сек дека тва сім ТВ
ЕЕ ІВ ях
Уж ви ки Ж буйжаши Жоиван кулак дух п сової ж с ; о х с с шІу АБИ жі РБш Бек ок ще уд Щеж Ні о іш Бе нією ваш В ше р пк к. 7 7 пу пк т т шо т
КО З МСЕ дума ки вх к нн НН А и ревоОжНК щі КУ ВЕК зав Ве Ба ЗЕ ВР о ВІіМ Бук «вх
Ей БеЯ хе ВВТ «3-5 кВМБрНа спів вів зві жі те оБів щі вус вк оре ТВе УЖ Жак ве біж іх
З х у ї7 7 ї Бкя КО Ах
Те ожЕТ тве во твк оку Чіж пеб БЕК ТВе От вів жаї те тре век тя З 7 тк. т сх за я за дан тує аі8 ва КЕ УВІ іп і ка вт біжу шій вій вве АР ТЕ ше Б Зх з . с. лю, Фк кл хо ще с ж смт В АОЖУ сх че ж жи ум іш хів бі ші: Тег ав ре чу аз БОМ вів те вро щі гш РЕ х 2 М ах
З Уа во сег я Пежо жо ек Жив о одрюі Ж Я шо пол дк ко шах АТ Кр
Зв 5іу Заг іже ізн БІ Бі ік аз вія Б ТБ во Ве БЖ Ж п ФУТ 7 т т: ос
ВЕ То Та що
Ех реа ЖИ у Ж млж с. «в ке жк Сх Уеуеж. СК гом ож Скот дю щоку ків щі: ав дів Вів а тек їє су і Ба ТЖЕ ТКК бек Вк
ВЕ З ЖЕ ОБУ : ко з . ще лож ож ох от. пи «нки коди. до -кжи г. СКЛ хокею меж Кууає х вже тв мМаї вне щіж бі Біж ївК рух в фе жа Без ее бек Аїд
Зако те кУух шт» Вт Заг оч: Ве Бека Би лів Вт Бе ЗЕ Бех Щек
ЗЕ бак вів ТУ ТК овів вів Бе Оу с Би ВІ Бу яю тує БЕ зах КЗ Я си сія о м о: ч Я хх
Вко Бій бе УК Тома? дек тт ват Заг ру жія Беш тТве жек Оу хо вадах ЗМК пу ВУЖ з ме Ж кода клю дак окис кМ ух док ою Ж дм маї нів тне ВМе ке ів ті Бе біб ек ЗБеафію вен лук ек оре
Ж АНх т Ще Я
ІК 17 МУ стиміжм октим пмоЗ же сетер теж Ж зма жо жиокучн жнохю с декко теж сек Ес Же по кн
Щек вне УЖ УЖЕ Те Ка! Ве хек ее Бек меш Фів Бе ів тв тув
ТЕО ЕХ 35 жів Кук ас УЖ аа НІЯ вух би ше а їВге іх мя аа УЖ р як Же та ! схо Ук кожи сб ду Я еп оте с м с ше ех з хижа
УВІ вів вга Ба ее Сех вв Бі 1 БІ пі ак ту БО РУ Бу ух Ух їх т З туту хх й Ж т
Мах ЩО их 5 ха се и содркх вх хз жк кім кохд Ко стек В
ТУКЕ Ба ті ЖЕ а УЖЕ стій ВЕР ОКУ І В чщ ВУХ Ех Ем їх й : ча Ж сов суху зх же - : Кох дж. їв тож кю ро еюрю: Та КВ Стат бе
Зта зег уУуді іт Ві Зек суб бу вія жеб о бію Туб ТК ОБНЕ Те аж мех ех МІХ ДЖ сх Ол Кок ВЕ: спіх ях од пах коту КТК ско ож КЗ ди Жора тут ЖУК Ме: вія Тез сві па Ти Зі ве бу і ще Вів тка
І ОТ дм Ух МКж ко ро Її З сревх н ди хе «я х Фо шх ск, сх. За мл де - «ою ба о іо Ву ме бі ів Хі вжн Бе яв І Кк век те ее У дів аз ух ши Б З вів бів пів де ма! ве має тве нів ав оуне ж Тне ва Жвне УВА
Може щу МО - 7 пух ЕН я ах я же ме їв Бо ет бек оїсе вка зве м бар Ве іа у ее
Я " Ми ту х ау ж
Ж ща Кв ЗА з з и су меж Сбвеше сфер КИ з Вер ск Віа зак Бак бе бін тТвгошаж Бр ків вен ве ТУК ТВ щ1х ЯКЕ ж не скл тулатх. - її
З 335
ФТЖ вт ізо жі тТвКожаї ве Бек ді: бек Яве ее ТУ ве ее тв п чок хх ем
Зк 355 КО ее Бра іа; ія ква бю ак р вт ТК ща щі я кі ТЕ К Ж В ее Бро же ЖТх БО ше Жак ска Бе ТК обег БУ боу Тег ар кв
Й опуде хе Бех як ЗМ З пк ші пи ро фл о ше ско жил фік сфе жк ов ЖЕ св кожух ів Біж СУБ їм За Фін вав Тек Бр Бе бів ех Уві Те ж хе
ЗО і 5 ВО
М п ОМ
Те вжи шек обі іа Бер ВК ее зі У ВІ Так БКе РО ка ще дуди ша т о хмдикх у фе аг
Зх За Б Я маш ів зеК зе су СБ ОТуЄ ес ве г ЗБК Ж СМ кое
ДЯ - ня Ко, я я ЗВУ їх сет сус стю В ше деку ше Жах за доки я де Соню ве Баг ек ка БУ ТНК ОІВ ОТНЕ збе з о С я Уа в аж ж
ТМ ОЛЯ в ши У у ше СЕК 5 5 В с с щока кох ха хи соді Я жо за Бе тк ВК
Вт его аа зго бу МВ ар 3 бух щі сів овке Бук ВР СК АБ їх с ще ххх шахт ошгуркжх ск, Уха. сухим ок. Мо до хх
Б Те нія ТВеоСує Бге Бе сте ре АТ ве 1 віх ата яуне у
У Зах а х КЕ тр я с их - о фокик М хи. Ж де бте его Уа) Бе Би Бе Вб вує уж Бе бує жертв Без Меє С в
ВЕ аа ЕК Я с по сжекжю юю шкадхю и пре зе ев ок сті тла дл ж ух до ЖК
ЗВГ ОАРЕ ТЖК БРО сіш УЖЕ УКР Су жа! Узі Уві ер оз! ек Ні От
АЖ БНО ЯКУ
: кл ще ех : жрхю як щ шк п жа кн Вод дан зано аа вгО бів У! іуш Ве аз отв Тег Уві др жів Ві БІ жа і
«ямах я і ша же й а ко аск вві кі; вії Зою аву Ша жі бю бе аа аа Б Те У БО ага бів Бі Бій Теб ява Заг Тег ОЗ га ках я Я ж 7 ЗВ й й
Ж форкю Ж яю тя фох 7 пи ЗМ кию диму ТЕ с КК и г КС же ще сок Мокія Ж боаорх
Уві ві Баг а зви їнК Уа вве: Ві Ів 55 Те Б ща ж вже
ШСЗ У Ух т хх м З
БЕ 35 З
Ж «вх : ях : піж ск дея є се що ох, ких то друк я ж: і бек обу ше Бу чаї ща Я З кі У ді Меч Ж я о: -ї З ди с Кк шк те я ме шал ет ЖЖ мує їВг лів Щег іух А! рух бі бін бго ко бів фРО бій Уві ту х пд Ку є к.чЖ. 7 ох же т
У о БЕ
ЗБ ща зеркс дк чщ тя БЕК ах Би: ба фу Жкую оон Зо щі 55 ЗЕ бур
ТР Су зів чаї рух Зі Бе Тек Бех чат вав і ві жа! бів тте
У БО ОХ пів Зак вана Бі Бій Вко 5ід Зп вжи те вищ Те ТвК вк КО жві ше т ик я я ж же
БЕ щ5І5 БІВ їв: ав бек дар Ці ат Бе бе вес тег бек уж бо ТВг ОУаХ дав
БУ БЖ ї835 З
Ж ие дк в З ех ях ж м ке зи Е хм пак ММ, пе с я сжа его ага ТР бія іп бі ад жа Бе Бек Сух Бе жі мех нів шо Ж як
У ЩО 55 дк Е а ме кх си ожо стржуєх стеж кт косах Жильчк о Бобул дво тус пбдреж вх щі вів се; нів ам Ні Тег ТБ ОБО бу5 Ще Бе жве ре Бек чу
МО 5 Б ух. с щіЖ ге й живе х ка яке КИиКОКНУ аа тТУуг Те меж дев «Я 393 «їм ЗУ «жах еЩж
ЯК евро шк 0 ДОБ «НЕ» 383
М їх Оу Все Кохю о Вжеух г Ж же пок по с - -- .
Ажр ча! ва го два бек бів «Ту Чет 16 жві ам ага Акфоббе где зд.
СЕУ
«как СЯ «ВУ» ЗМ «ев ВТ ка» хиЩени кож Ж «Ме 1 -е т и Шах се КВ сбчуус ШИХ ку
ЖЕ ім Фів вге Ре ВНе Тег Ра ар тут 3 к їв ее «ії» хек
Пік жає ази тек ід АБ ТК - т Бо ку 5: хе зе «ек я
Ж як р «НТ ник. зм пише дою жк ді Фах ши вн дак, хро с де псує ок
ЗУ ТБР аз бух ага АРа ве бію ТК оБгО ів аг Бе Бек одтк БеК ї х ї їх
Бах вахвк жо ао ко
БИ КБ БРЖ м
ЗУ
КО
«Ів Я «фе ВК
МК. вки юка «ФІ» кЕКеЮНа «СН ЗЕ
Як яв. зкх че
Те ів ем твК ж ск Ух КЕ і х «Ме ЖЕ
КК р у «ек ВН «ее ХичЕВНВ а кує В ії; хх яті щу У аж Сх З «ха З Хм
МЕЖ віш г я ЖЕ чУвЕ Бе Ват М У ВІ хеіж яка ВЕ я и се ажк «аїї» Жимерня
«З
Фахах Б ую ех вна пад Ж СЕК ух щЕг о дІШ БК РЕБЕ як КУ Ж ОК ї 5 «вів З «ій» РЕК «Ме Ким ерНя «Ве 150 ціп сів мія Тег ТВРОтТВе ВР; вРО тТВе
Х З сяк ЗЕ «Ме І
ЗЕ м, ох «Іов РЕ б г -. «її» Жимевня «Ве З п «ж ста, ск се а ек тую тик меж не ех х я х х і «ка 5 «КІ1ї: 3 кий» ВЕК «жаль хи «Же ЗЕ
У МУ. ж, я чі пед и яв Ко сеї г осо жюрі оНКЯ т омккк Ти хх хів зів аа вгОо Зак бі бі За ТНг бек тек Від Бій ву Бе Фів - г 7 - зе ЗЕ ї 5 Її 35
Ж
ШЕ й «їх 30 ха» жи ерна
ВК Зх «ве
Зак ВВЕ вне Тек дію Ре Мія Б дев ТУ 1 5 39 сечею Зк
Зк ке «й БЕ «ЖЖ» жи ервня «Че ОС ї 5 ЧЕ «ее 55 «ЕЛ
«кій ВИХ хе ЖЕНЯ «ве 5 ет ! г г ох З що сера сі віз щжг Зег ага ав Тег
Х 5 «Ще 15 «лік 10 їж» ВИК
Б» я вх. їх са «вії» жиеерна «ЧЕК ЛВ ків ів Же Тве ве ШТ Наеж Же тую Тех
І БІВ ТУ Ки БІВ БІ нт УК ту тп «ж х ше: 7 т их ї З М «ів 157 я В Я «ее ВН ша 0 ММ «Ук 5 к2 Не мк тож ж ОКО, жк жи х ла ЖК ит ше ех Ж кА ї о туди вих чів ві бій іве за! ів бек бів вів бів жві фе губ Рг біж Вів ї Ж 1 ї5 шекокко вах о ЖЖ дкдщоаю о кеуєх сш То, я хи сек. пек фуда Бах боках жк ек За ре У че СУ зжх від зве йіж Тек ЖВгоБВе тТвгозат тує ше ! і ЖЕ ї а . «Й а КВ лож. пожоу я дод сор я речь чи ц дж СЯ ек ден 7, ядчоюжююю. дух їж веж нія ТТ Уві ага бів дів Бе бі Б бі во Бі: Та Беж зу ких х 7 Кжх т ух ств ЯЗ ших я фік Кажу Жан фу жає біде сою Ж кох окоту ВМ щіу пі Кі аха Бе Ябг біб бі Щеє ТВг о Щетг Тек Віз БІВ Був ВЕ мах. й т кис т
З Же що се че КУ о т -- ен ух вки "жу а в. дж. схе ел. ся. см ЗШ "з. як че іх вам КЗ екю ів бі аг Уві ТВг омеВЕ тТвк оніз ащ твК Зевк тТвг Зак тнтг Уві тут ку З шх Ї їх
КК ТО я щИ пишаюся Ж о как М кож дея жил шу -хо Жак ли хо чі хо ек вм ще Щі: Би Заг щег вв дк хе бів вав ве із УВІ тує тує Сук
Ех Б з ре т ж Кум ско. ДА сх У хр шок. ма нах ки ож. КН НК ку Я шк ку
Аіз ага зе Ме ББе Те Біб вче ні ев ака Тек ТР овіу ів 1 лих - «Каші - 7 усю Ж, т ще Б що а о паж З «жі ке зе -х щщ се
Твг без чаї те Уа) Хек дек
Ер ЗК «и» ЩЕ «ЕЕ ХиМОвна сь ях «Не бів тів Уа! ів Те обію беє во бу ТвВкобее Бек ев бек вко ЗУ 3 Ж їв 15 су ин зийах о Фо ахек кох фрудео сб дк з ше сок пет ско ЖК ода «із де аа їйк іо Же Суз ваш Аій Бек дій Бек ущі шко жек бек
ЩІ 5 З жує поахох о я КО Ач за жЖвих ЖУВне т кв, м я г
Тег іве іа ТР ТЕР Фів Біб ре ВР БіЖ бів АЖ Б ду іже ев
Ж кі То боях ж оішеєю вд Ж жи з дю Че с ух; ху
Ття тек щі ат Бер зет яку вів ТНК ТУ ів рУЮ АТ де ВМ ек
Я Ж ух 5х Ех сі жаб бі бек біу ТВР аа вне тТМК цею Те Хі зег аг БА ЯН
Б ЗЕ тк ве г Ж т ІК
Втез Зі дя Бе від Уа) туго отує Суб ія бів тТУб ТВК аа бля ніх 85 ге ща ус ес кох шов Же хе вки СКК пад ва М же жі о дсьукх
ТуУк тек те ва СТ бів І ТК оф МЕКОБіВ Ті ек ке ЗХЖа хат Б «ММ» химерна «НК ОК
Я зе їх Ми: з. ци у Кз. кх. щи м с ск я сеї З К и кот
Фіз Уві Бій Без зві ів бек бі РУ ді вав Уві НЕ вКе щі БЖ заг Бей АРІ ве Бек ще кій ІЙ БЕК СІК Ба теЕ ВК вен А ТуК
КО ей ІЗ сетфуи бхкей охо скхуз зії зум У хз ги й лк ЖЖ вих "хе ша
Те мех ахо тре оУні Ат ЩІ дід вх ФІЖ у ік ев фі Ткв о
Же я 5 ів ав Щі Аа ВР жа ак бі ВУ жек їв а! во ага вка БЕ
А в ще хв ші кю я Зжсв ССМ зах ік их Ух пк т с зер фар вве БІУ гу Бе Твгоїи зегозаї АБИ Аг Бек рух веж ТМ рев тег
ФУ т 5 І щл
І Ка їх ВА зах КЕ Ко: Же сх я с дети ВК ек сект ЗЕ ще и УЧНЯ х ї- ія Вжт аж Заг ве Я ЕВ стін дев тик вів чаї Ту Тук осурю як «М В
З ТЕ ше ко ба жави су і у ЖЖ о дуиооь а зи зах ува осожюх юки, ке пт ве жів АР АЙ ВЕ жу Рг НЕ РЕ Тег о фна ар їже Тте діжЖж бій зу ща ЗК Мо у пн ву и х.
Твгозям Уві тВе зві Бер озвх «ем ЦЕ «ам В «юиж ВЕЖ чия Кк о т жк ХиМЕшНаХ сх ки К. «а З тка пит В я докт сві и да Фоджахо ам ж бору ВВ и ока Ко о жк ами Кк м Яд сів ча жд ія УВІ біз Зеае сік вію біт яв УЖ ів ко віж бе
З 5 це Ка шгднхх. п. ода пуд джує. ЖЕ Ж я С депо сх ож г Же з ри вк СКМ бек ау два і: дек се із аа хе біж ее вай ЗБ вк ВЕБ ТНе хи Є ще З г о жа КІ: же ЖІ ДИ і ки, шик вто она я ков ред: дикі одк М ду ковку Ах тк ЩфтТЕ В тУж б вка М ей КТ ТУ БЖ БЕЖ Сем ІМ ТК Оу
М че щ5
СЕ о пи оо х. си сек хх сова. іх "ев щу кю і хе чия Ж. х с
Мін вка ів Ту Бк їбБг вив іх Туг ТВ зго тже віх де Жак а ж о ом, З З ща Бе: ЩО ш ков кх ха Фо ка я аж Ки су с Ми кяк. ожиц сх вх о у ах ве БІК Кр БВ Те Бі Заг іа ЗБ ТЕ бек у вв Тве оВів УК ща я я ко жи Я зок Ко дк, - щу шк. АЖ. фодокц АЖ сю ЛЕ до кох секту цу коки зн Сів Ме вав бе би ге абз бів вай ТВ ія УДО Тек оту Сук
Бак ак Те Бі БІЖ ІН БЗМ Бе Те ВЕ ес а КК тео 5
М ЩЕ ж пін ТНК сво Уві Тве ущі Бек ек се Ж еше Б
ЗК. СЮ хх хо ж Ям Мена «не ЖЕ
ЯКЕ ХТе ля Мес тТвб бів же веб ве бег Зави век ака ек УЖ оту ї х ЩО їх вже ага УВІ Не жі Те Сех їж вій пег ов вай щі ек о тВе віш
КЕ ЖЕ А ще я «ВХ. зо їх кої жи с ок ка КИ і: се т ож те з У св, Фк с т -
Уа А Те тег бій бів збу ве Бі вже віз вка КУБ ев Бе в худ ово Ж дов зах жах слонова Кв ш кофе спе кох жов соди Ж куки,
Тук Бек аа сфе ве аго те тТВе бік Ма! бто век яко аа ет
З У як я о З Не НК о ек джу: Ж Вдя ЗВ уко дм ож уко до вид сохх
Зв Аа З Бію ТВг да ее Те іж ТВ бів ее ве б бів ве
ЯК. й ЖЖ Зх шо Щі п
Би я у ЕХ
МІ Ак РЕ жа Не бек рух є і ей ба те У КО ЯР Ве; оку З т шк 7 т 7 пкру ше щ СЕ ! щ рф січі пок В пу где ув леж
Тговве сія бів бі» ТВ вче шві Ла жіе я
Ме а «ве БЕ ха КОН «ЕВ» ХНУ азот саоє совет ови; себе сеесеесвеоє стос сссосувте що зоскаєее спас такт авс дата оВеВ ВЦОаКЕЄ тКкМЖаВею З песо євая пеєтоовао бек осВОвХ бтілатскоа збвосеав садеаювюх що зассвієцЕК Сгзааоцієв ГЕттесств востеВІє феЕзбсзннах КассстрЕВХ ша ска зва стасо сукна оеспевекає зе стоє асвеувееєюі ЗО цПЕТЄКУЄТеХ КстВстЕКоВ БКЗЕЕОО сен є Кедсюаюєю саосвесях як миасвнее сссєсіссюк птксссосто осссссва деварсвє сао яко всзцссвкиє всих ос свт ссскоа зеєссвецає спе сс ВО авсацссаш сита сс есас зВсстессКВ сопе вар ЕТ ктосакан свассвВесоЄ ЗОбснсев секессявкВ ОСеКОВеНе сеВБени ОК засчиовех ваасксакає асоскєвссв зМесаоаєве стае Вопоукесе т
ІАЕ КІС ссЮсє веавсссВвВО дОвсассстоВ Ват есоВ Вес т чесати собів секс Зазвенанеє зош: сама ща ізн ссезаошевси Фаза своєю чена згасає КЕ зецзевеся теє: єсесвеєвес сбревсєвмМю асо ва подсеа ЗО писав ВиєЄ шов восасацес сс веесЕВс сссеиекКо ОТО З
МН КЯуаи ЕКС «СКК Ффесвавевкх ета сс ССЦ МО песо зозоєвасоЗ бсзасєдеве засваскаєв зоассщєє соску їаща
ЗасСскаВ ЧЕК Ст Вес За ВацеНІ СВО шо «Мн «іх 5
Я» жива «ВХ да
Песах же сацО скоса стототКєв Зецеовеєва се сє ва
ЗК Оссакка ше фу все состав пове ло
ФВ КЕН КМЄС ОК ЕК КС СБК що кажи есвася осацске соком КККВКККТВе КЕВКСВЦЮЮК ССЦ. з дзозахсттс скасктвика стеки асяа себтасассв косескссвк ЗТеВКая ж пикнссаво Межа шква фени ся скек СкеЖеВЕКї сЕККсКфКОВ З техдясеов дак мавтс сват спуска сх а ак ак сссаввовов созаватакь збо а сатахсвеск тссзатоми: сзаекесеня Я
ФасацковсВ зва цВЕ сабсвацеве аВиаескВеВ ЯКОМУ сс Й кіш слаза саЗагта скине нва ЩЕ КВК сен я ктозахЕсас коса свка ваш теяВс МОУ Є БКУВа я «це» ї5 «Ей ТА єї ла ДЕК хейЖХ» хвора «нка ЩЦУ тхаавіосамо Баазафишес пише скІЦе соб «тав ссмнОкаке о зсстцтаска ОкссОаеКї сицесовог зе СЗТ СВКОЯК ооо їх ссаоцекжаок воску КСО ЗК ВОЗ КВ КВАЕКВУКЖК ЗО зшщевссківа ксвоасацвс двосвекжех вазцнсзака осами сука 345 межтісовакв пссопсвово саден роскІаск вепнессва запенвееКе ще асечіооа зсвзстаксув сестатас кот зас самку ЗБ хстаукцау кое цакк тоаохІКиоЯеВ поза ср ахе КОВепЯВаЄ ЗВ
Япааодажа кссаає секс фонові секс ЯКІВ ЗК пизвссвксв сакозссоємс сеосаак подаю весжоасеко ЗіБ Васх З засн заепйкссска зів овтв такое сте сова ВК сесацсвфах тсапкааса сопеастно зизивекае ос сваавех сацетекис В кеозасноЇ «кокс щозскастох свосасєзех всадквосск стакассккх УТ пост вщеа сени ЗетсВаное Ци сеоцавеа свцааНтаа ТО
ПСВВСОАХ ДеЦВУ ФфУЖОИИ ЗБеЦеи ФМ ес В паж скине ссавинстк ВВоскуВово Кс оєБи СОЦ ВОК БЕЖ сскстааснІ Чмшоанктс киоваосаго пІдаекнеса Чежаскихає кааскеця КНХ спека спиреасеє себе схем енК Кваша секс ТБ покаекоки| соаахексов сво сккО Соня ЗНО сКЄ фасасех МО
ММК СВЩЕНМВ ФфаскнакиК ТаЄКнКВеКК ТуеВс сало МІ пувхссвакО ашесвокав через смраеасв сетесассза асо евх аа пЕЦЦОссме Тесс стека аЦеЕ Воакосука постах соло ВО слЕВКНЕВМІ ВАК КВСЄ Как Тува ВІВекНТсВ доваснеєю адсосециех УЖ
ЯИСКНТ ЗСВЕКСИЄ КОСОВО сеасосацка Фесковакза сх 138)
чека кассЕкссс ізсстаоох зсясадяхат атака яя НВ єВЕ ІБН за есвоїа зінссаванОї оувгаОаах ОКО еєсее воеостєюк кесфефАвх МЕ до есвато пебовевех сувовеєєаог єтоуесоеоє «тодеоюнсоу весно КО скаоосооаЕ єства овоссоснєс ФфесоМОсВе ковша «МКС МО поз м. сек ка в. «ку счутучовох щоку. КК зиесаствне кпк шк сескцсоааа ока как МЕС КАКК БУЄ зесвасоцеї зсасзвоата сдссвасвоє зазоше Зажтєвосак свесесеано В зссвесавиа зсасєцеека согоєсаениі аск Заосеовщ се що заст астееЕ КВОТИ есе кеВ є КУМ ЕНСУЮ Дещо з асасіцаї о се сссвВЕ СОЦ ЗК КЕКС Се БЕК жасвасааов Оевссвосю содеовевекє СОС ост еВ Ке МК, «свв ОВС сКшОМеВОЄ дОЖОсКеО Кекс ОФеМ совет ВЕ ссешесцшє Ост тес засне ема сах ЗА зосацєєтою зсвессаовє стаснюєкох засетозаєс зсааоєскає свасвесаве що чес Ох застою свое баса еє асасжецеєє ВОЗ оВ ЕН зе тавно ство песутсВа СЕКС КОЄ сесєваяаєє сина сшеє ЗВО сжевкцВсех сссцаеккє фак євсВ ОК Зешасеаю ксаеоаачає о сот ссв зожтєзаста скасцоВс ФС Тесс мес жа ссдсое ВОсВосВсаж свеосвсввВе сб аткаЗ епос тене спЕссвщеВе В «мист ошє олова а соатасило Оса севаєван сКЕсвВецеє 5 сссвтсипвов алое сихавссвав есе дцапжассваса ска вие За «нак ско коВ остаассви: вессвоцеєя Бест Сет ТЯ
ОК Кстниє сом овВевВх сессецюова совно ся зви зем НК сасазозвсев сосстессви ос есеї есте ТИ сао ЕЕ межує зааеєвов ссвосяоо ак сеЕсВ СВОЄ тевКОк есе ВЕЦ ВЕ дЕЖСеКВСВЕУ ЗЕЛЕНЕ ВЄ са ВеМЄ СЕКС склер на аа І «М «3 ВУЗ «ее ДЖ «МАЯ» Хнаеона «Ов Ом «вим осаас козааонукс сосок стос стацеє сема ще
ВЕЖУ СЖСК БОКСИ «око ема Кекс екв КЕ ссаасяаик Фостер то осмис см все света еве ІВ
ЗОсОккско ккзоєе заесвсстеє зводжсвеаея зав аека зате а
ЕКС КУННКи ЩОСТОКНЯХ ке КК ветцєвесВа есе ЩЕ ставте оє зспастяєта состатоває таствоосє ядосассве сосок щ
ЖекВНОУЄЮНІ ФСООАЦОНОЄ ТУДеОМНСВНІЯ ЗЕЗеаУКЦЮ «Бек косе я2о пз єв сс ссвовосесє песафестщЄ СЕКС Ффеесцасе Бо шишжссаєса свое є севсоашняє збсвасВесх зестоєєта екассаяя БІ заасвюоєз зваоссссса зскасщО басвоєтеєюи есЕЕТЄТОВ сфноЗа є ВІ сесацсвіай СсзосоцсВО коОжоє: весна зоствааих сжажжеееву М симеоссаоо зкетоссесв сво ассє сафеаскаєє вереск єю а виш а ссичнцоая автісвасоюв Ффеопвове зкесвс соски ТО «Ессе сен овє сан заказ осо екн КО ОВ ща знкессзЗоО ссатсосає сова здесоваєве засо «дес ко ща весстцасах дешеве сВемнеєє зковесвесв сВасіаеає сах ще свовевазоає соцоссвщ: сЕТсаоВОва станіЄєдОюю пеаєсвжеєва сах ке зесвстсссв ссвоазетевВа собак сефацоза зоФесассесх ВасаЄєсх 1пщо зас сво еаа чОсеЗацееє свсжосвеює Єр євевВе сВБеоСсЗ сою їх чека чання сс сецаоср тес сєва ско СаВЕ ще
Іс сяє бос ссва КОС асо освоює соснова кОх 1553 стсвЕчааеа ЯКІС Мороко яса здааєвосим ВеСеСМеЄ що засни аєс зсасвеЕеоє МОВ ствер екю сет ІК птсотовеква есте каОсстццОВ Зенона ВЕСТ ТЯХ ОО Е БАНІ вашсссзоса зтяссвааеє сани зсбщаассти застосо кофсцоя 5
КЕ Ке ЗсеОаЗевЕє совка СТО ЕсоВОЄ ке ВМО Аа «кЕаассВа: Ессе Фацстосцеє ев ЕбСваеажсаа аск ще Ба акссвстоюо ово ссскоднае зас досто све зважає ЕЕ звссавсощех аквсаваита сассовсваєс зів цев чек НО е зе звесВисеаа зас ССС Засн ева цес ес ММ
КВЕСТ ЗК КенеУ аеесожено ЖЕК ООН ска За
ВСВсТОЦХця СОБУЧЕсСеВе СОЄтаеясю ее єс сет що екс Осло єе сефсавех зЗетстее семи Овес В сссавесесВ сезесееєс сова свас деавеєстоВ сет еВ ВСсЕе НУ
КЕКС Ше ТЕКС зесктавосв фев сере є ЕХ ясен зЗевссеак стисатскас зеесвеаасє дезавегее сивина ЗЕ
Еш уженсе есе є ваза засваавстє зезсаенєсс зсоцсоссха иа девсскожно Єтмсеое аосеЕсеє кессКеКЄ ссскаваноє св Все еВ секасвжсї сскодакєсю тот свкя сосни; Оз сотаае сеасоваае ЗВ скіцаФокся зчевсаасОо песо ас фев сяє ска екеу ЖК соки муВемІ КВ свннЕ сеесех Сея ве ксВс Сак екено ОВ сне вщеє ОЗ ОокВа сфовещювай сах ссвасває сс цеє я тсовієомоа аавесаесве Вам пОдеЄВЦсеє Засн сКквеє ВО
СЕС ЄВЕ осо ЕОВ шт весен аск сехерекх Фа пет кежнЕс сЄВОСУВСВЕ ско ЗХ ВККС Фран ТО таєнацакса сс їскєВі етос азс єт есе се еВОСхЄ БУВ хссажовика зезасвОее зсацевене юакевЕее Еко х ща КА пестослев весаЄкасВе дезозоа сескссютак ЄТеЄКеЄНЕВя ЗЕ ше «еще ЕВ «І З «А ДВ «ША Же химера хів За Що «весна соц свате Ме стщеЗ Фоазаааане сус с ска ще востосвзаво сатссвовЕх сВеСТЕсВех сЕстаєкнка бесаснв сс Ал ссзасснва Вістова етос вткадессва ЗеЗеБцеєс ВЕС 5 зсесааави косе ік акоаМ; ев ЕцаеВ см ЄВСКОКЕКаЕ а жан ЕчЕ сеаеестк КСО аНаК збо ВсЕВКцКеє ЕСЕ МЕ зІсВскВетЕ ТсентєтаОВ сОВІнНВ севаацдювВосс оце СКК ВІ засво пссссжсец Бек щегсекевєвз ЗеваоВОосає СОС І ск Заст ВеиЕ Вас ВАЖКЕ ЖеЯ ЗСЖ СОСОК ОН ЗВО засазсзаЗ сестра сосен ВЕТО сс щевЕея цес: що спам тевосваєпх зессвсуєв сет пеленою совок БО
ЕКО ВЕВаВ Знав ВСЕМ Вес Весну Х вом екноме Бе зостосовся звастсаеає ажБсксаєсю сОсКоВСаС ства ОЗ БОсВ Ти ткавісккск кет заавассевВа пвенессстка ва тсвеско Вест ТО чекаю ФІ щсе соки фев адек свастоцквие. Щі
Чинки ее св СВ е Зсившиасевє оце ПЕКИ ВЕБ акпевсеЯВ щи саВосах єсесВесовиє сне Зсевчааа зОасЗац жо така ВОК ЕКсВе кава песессєска сову СКК Не чисаеВа вессссоВоях яскасяОу секс сов ЕсКї штат но вксвацшанес афікс сесцкОВ ОКО ев сск сасКеЄє. 115 са щїаа зозосааєва осв звеваскаєа засснвсвсс тоссвту іх
ЯИСЖСЕНАСВ НЕК ЕКЕХ сексі заротїсвсс) созасваває сао і сафнюаає ККУ СЕС ее є БЕ СЕЗ Мо запа ееєвсЕ сссфевтеє додав ЕОМ «М У «й ДНК. милу ожнеЕрнНа пааатєвкат савсосоваєс есе ЄСТУ тВЕ сте Ваше А сект тосВ ее саеев вас єОЄ ЗОЗ ВаОСС ма ев а 13о
СЕКСІ КК КСВ КЕКВ ар В юю КРОВО кое. ве паса ка шсрсзокою «сс са зчасквее товссвксвО сеоаєтоває ЖИ семан са ти сеЗсТОЕЄяЕ Сб аске аещаноВета ЗЕжЕВеВЕ М шнєпоцд: сслявокоой загс сосок свссавесх СЕКС КО «ев Зако дак ссоов азствестеко БЕК осеінНаВе еВ есклекєся засвовесва заізсвае заздосзовіа зсвесстка века щ чесних соб зсива садове є зазоасвосв єсбаєвцюєх свсваєвеє БІ стзасаєсва осв адя сезон сесааесе асОЄств зас ЖК ше не ж и НН В щи кам ММ хе еВ «яз дик кнаогоє хизанаає спосо свв саше садая ска аКе ЕІ яаеКТОтассу КОКОС сабсстоеаеє зе еко осока Кая ссвцюсаває песен сов еє зістововко вопосвосає хаакЕВЕка Ей ависцЗсествав севОсяЯВо задо сє заапесеася псзяацевска че сеВ ак зас вка ссстоса сокснаєвох бобасстаєє зебвщеєсва зи КІ зесшєОокос зспастаєюа сосузен састееєє ЗОросассве сотовеау З
Фо аєа есе сова Зссасеста: ЄСВ зе ея Б педассвкея векоссовоє ВОСЕНИ сс ВССКОВКВ ЗЕВС Н мат азс сто сасассисся сте оц еовеца се я
ККСНВНЕМИХ КЕТБЕКООКМНКВ КУВОМКАКНСЄВКВХ. КВК ЄТЬСЯ СКК ЕВ жест єєта В
ВХНДЗеМОВеКЕ ЗБК фест КВН ВНЕК веуквеюєює саке тд се жеВещссвем даси «рес ФеРосаєви зок ВЕ
ЗАКОННО Фев ее ВКе авто есе «езеовусна М пат ессвоа сеОбсОКНяЄ сезоджНесє застосо НЕК вОЯ секс ЕВЕа ще
ЗеЄсіва а ЧЕК Басов ФзрОВесВесВ ФоВаЄЕеве сс ецеВ З кан СКК КЕ КксехНВК КН БеЕНм МКК НН Ма посаекосто ссзоааЕесВо спевестств) сода яв есю дасте ЯКЕ ес сеноє свеваоаео Фуссдевяє касвВсвесю ЗМО сеВесорек во
ЗЕОЕКЄОеЄ ОМВО ВссВя ЗсСОХеНОО СОБІ ВЕЮ СЕТКЄАЄСВЯ фею з сів екссс кОщессесВО СтСЄВаОЕ екю кова сто о сен саана азстасєіск мшсстоєо Вени оояеае ясен КО суто ви ур Борщев піки фак Кік фе Кві у Зх ар освцс Как КОКО СаО юь ше ЕТО МЕ шко маєєш ЕМО ЕЄСЕЄ ЄВеКСКОЦК веде МЕ юВа БОКОВХ т заасссзота зіжесанавВх вас зеузаВсєте зозосцевв осв І сок сссорвав сф ЄсаВКіЗеВа КЕ КЕсаВ ЄКООЕВоТе Вугасекеа. ТВ сс сосЕХ состав: Запстосвав дес вовсекЕеєВе КСВ Вата зів еце Кто ЕсаВа: СесОБоссВУ Оса пеажедаєЯк Сава сюй ЗВО зввсозатцюю: ствесієста ЄєдКОєвзоана ЄтсеВшуВює осяває пасок хе зктацсвксх сівесБЕска асо ваєто тебе тює чес СВТ В
Ізсівстако свое кЕ сттсовстацї Бессвсетю Все соце сов єаЄ ЗБ стсцтввІ КеКсЕЕсе таосвссаве дОссестсоЮВ ЩЕ КеКСОСЮ декеекее ЕК воасеномосв ссвЗсесе сис єм є ОВ СОСОК ЗЕ пасесесс ва ссекоесО вас (есе сещокНкаєВ саке ЯН оссаєоєтає аазакеств сек авцє сеоБевоєю КЕ асю се БтЄкав БИ вика еа сесеаєскя свІстОєвяє чеоавесвся Весссвсвя саке 3 сен воза бабою ває имя саме цеЦеоКВОКВ МАО тем сеорощанск Фісвавекеє ЄєЕСЕКеКсКє СВОЄ еВИУ ЕН МВ зковІсКес зиессестви Зевса ає дес е Вес ацесв аа З
ОО аях КОВКИ СКК «КБУ КА ЖКДЄЯ ВТ щю
КОКОН ЕЕ сСНсКаКю СЕН кОе Вест сур я аксвазазав ссвІссссВа зоссазаве сацесссова вика сацВ зм «5 секесацєє сні вАвех с свивевас сам сВасє Єві в свацоє зак
Іва кеса зеЗасвеемє ев ООа дасевеаеЇ осн сєце азс УЦЕ ааиссясе СТСОСООС зоре ЄВС ККЕ КК КВев са ев
ДМЕ ее ювУєт ФвевЕКа КЕКВ Тк кож «ВЕУ тІдсвеваєє вежасвецсВ заз ее ВСЕ «Ока В КВТ
«МЕ заз «жа Ух «кіш ДНЕ «КАЛ хиМмеен «ще ЗБ жилку пса сових сф аеоци док лхаи ву леж дужку ковки ВН зей ссвас сссоовиОа сеисесКка: сема асан Ко БО секс как асоасекекс жа тесве саесстссао сажа кех МО сік вуйко ви корек ори ау ик фаду ке подив я З
ИЖВСТИ пуск се кесасКевяк каска кекс ЗЕ сват оВус ВЕСТ свв ас аше ККССФаОЄ СО ВЦС ЯКЕ дпеажвссвас ззсасквесв сстаекакка соска зеісвЕсжико КОКС ЗМ «ЕЕ аквКх ВЕН М ОС Вея СКС че вес ЗУ мистец дососоваова зебиае ша ссеин богеєсзева осовкатека а пет уза суху т ме ке жим му еюеикічуВи ху ик ке КУ у дув Кр затв ВОссКтцКе КК СК КИц щас Савки ЗБ ско мЕс ера ЕКО кацеаВесІ пес тие саВсвеаНОє за ЗХ о и в В Хо
КІС сов неВ сеБссассЕх стою датетвесся ЗзсВкКвВа що сн заєвнах зиск асає засн сї певен сет ава сс ек І засос внас зн оссває зсфастасва свесссежає вссттєвеєє осо ТЕ сх ект офисе стат секту Зі т вера грмев у ЗХ ув ЗЕ цВстозЗааа есе Кс есе сне со я «я се шеату дну кох суди я с кеди я. университет я їз Ух
КОВКИ ОКО вро яка се ОНаЄ оС во сетавсесао заасссвас тедеаеаєс есе сюще Зевс ово я саке Фо сскв ссвежацдеаа скоса Фоззі заз ву ОО сет с воза аєев Кер сас сжвеаааа шесссеа сссехоєсво ОКО векказсна СЕС тО са соска стВЕсОевв сов сеа М пух ельЕВуУи ле Еа ко. фари жу св шо ик кутики ем А
ВЕТО НВК КК КК УВК КИМ ОЕ ха КК ЕВ Ка сессаяєве аск ЦСЄ свое СКУ ЕСЕ ЩО кПЖИВЕКсС ВЕ сКВКак сек Вест свистка ос КК сЕЕЕКсКОВш сс кОїсквиа са скастуєа о щвее ї32о аж І Таса ЧЕК се БЕце КЕ хе Феве я БУ Ж ВЕЖ ств вик аме и ма Же р ку кує з заг
ВАЄ ЕТ ШО КУА ОБ АЦКАЬЬ КК ВІК ХК КН М ккеветацюк Єва є ЗфасасаівЕ сеанс виссатаває сова КЕ казати заз еве застане стае зе стае Мк
Ме ЕКееМ: есе сао тонка знав ее їй
ЕКО есе ВЕ ссоцевівевК СКК Тата ЕКО МК
ОНИ КСЕ ДС Бе бОщеаеевккх засссдаве тет е ЗБяВ сік сю саке афоптееє сжеювсзВсє сабоасвета зсасстеває 1 «аква ФстакесвВ Фосхесккс сеаазасас чеВаКеЕеек звожекосасо щщк
СЕЕЖЕККТЖК аежОдЕттсс Ззістоввеха сторі досзссстсв зас є З кескаює ассааоєюєє сеКосаТОїЕ сссєстдеєс ссовосвуса зовосвесав що поцБелосвся вет тца сте стеОх спрею текс чОє соцровноках «388
Ессе КН Вовк оє сухе енех КЕКжссВеСЯ КОКСУ зав
Есе затв пес еООХ сасєотеєст ВсбвВшсвОЄє есе яю засстасвеє масова асевсанює СаО ВСВКЄ лося Все відав ссевасаеє со аееная СБеЮВСЖКО екс ке Зак зх осока шесттєстеї сесссєсваа асссзоюювє есствтов кессосоває 225 ксктцаецек пса КОКОС секс оа Яесссхеве кеВ зо стос соох Часосите асо свжая Кесєвиасе есе за зав чан азасвкоа хассамнио заст кКт ссср сете саКкВОоВаєх дфасковасоє за «ване зас ЕК ВІСК ВОК ВСЕ ОВККВ Жак Е зкзв стссззвавеє зазЗеосває сссозанакс Всжуюоєч мекв секс сєвя з588 хости вафкассаюю са к скассес зас екею ВЕК ца вза сатодесвка шецсрошая девакосеєв сдесодеевис ваессесвьвох ссвоедескес ям спек овис сссоВсОцеЕ ССЕЖСТКЄсХ стасвеєзає стсвосесаєх зовзакееяе ТВО інн сооасевик веж сова ПЕК ЖОВ зах саєзвсзозаш засстєтЕєє ОККО ссвцО ах ЗВУ «ВІОв ТВ «вії ЩО «іх ДЖ «ей» хиеена «а» 370
КВЦМСКРИКНХ УМВС КВО ВК еЖЕНО В ват «Вес сера хо вже ект шосе е сс каеЕ жецекаке сБкневах І
МАЯК ЗІБ КЕНІІ ЗИСК Сея ВІННІ КК ВККОВ іо
СЕС тсвВОосоВеє КстОстОВ сао состав есе зо
Сівсроккнванкь ЗРЕНАННІККВ кРЕНСяНк ФСК якою фо зо сен севаастщяє ес оВаЄ зеОсетеа совно сет зва
КККККЕСС КОВШ Кса Дек авсє шко кекс сеоюю жакет за яна тних ТК Зевс еКтшвакУ фев аоєкех саке вай Зк штрсаєвсях ссосбровеє петосараює восорєстох аівосстове серооєсете що
Все ссежтацееВ ЗбОоанесвее зсзкашвскЕ Фев сс е с пюержаатаєссх зезкооатав звана себизовеєх зеоведеасюєх зозиоцесе Й шана сс севов осватІоцеї святе стовасотаха жааассоооє Та остео зако сазаосакс сцен еЕ еВсЕїКста сеаснецеВх зво ток єсоіє зак ссаоассєти двитосетою пев сесавоюцах зв се сестра Зайва сВа БсеВсЕсх сих ка засво ОКО звестсктаєка сетасаеЗоа стю овеє стос аа зве КАЄ БО киска кЕКЕСЕКАК Бу ЕКОКК ФЕВ НЕЕ ООН екс ОК
ВВЕ Е ІЕЕ состав сао сссНеКВЕс сесією каска ЗО кЕсактас зецоевоВцє СеСТСКОЦОЄ ОСС ВІК КеЄКеек ЕВ песзссажа сет СБК ВостесЮЧКИ СВК шекеоюа МАК сенат сжовсса їаоскКаас зсесавесв ССС Ха е В ве поса КІВ Кави Каса Несе СВе «КО ЖЖ ааолтуввиас ссср ео сс ееЕ свсвеасє св века кВя ДНО зЗстаснн пасок сеЕКсКеЕТс єссЕсВВає ссаацевсве СТ я хскеццасєс стващевсас зкоеЗсона дхшенеоєи зессвсове кекс ЖЕ даси є Фев: сш ок атаав ссаваоакляая зссфоава УВО щеня зевесаесозта сен есе скзЕКевВеВ сне зо сісхамна заз авеєив сосен с кссвасзвва сестКцкє секс ва МО зваажссВтсЕ ссзаввоства здо сЗадавсєвВс зе неВе сс УЗ хиссеусато вив сав ЗаажсВиє всем Зоб есза зас кех ВХ ксевшсонеи ссвесмеООя спи аВхеоеє соцаоеаєва сфБесВВее ЕЕ деЕвсЕЕкекаЇ хост цНее севсЦєтеє БЕК сї своє Ваце сис жо ажсвесвовк сосвесвОса свое скке тезі са сен нкав Час ЕКаЄ Я зассасвасєв сосаоаааза себстєсстО Есессовака ВВА ОХ
Claims (5)
1. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, яка містить: (а) перший антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ; (б) другий антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені; і (в) маскуючий фрагмент, ковалентно приєднаний до біспецифічної молекули, що зв'язує Т- клітини, через розщеплюваний протеазою лінкер, де маскуючий фрагмент являє собою антиіїдіотиповий 5сЕм і має здатність специфічно зв'язуватись з ідіотипом першого або другого антигензв'язуючого фрагмента, тим самим оборотно приховуючи перший або другий антигензв'язуючий фрагмент.
2. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за п. 1, в якій маскуючий фрагмент ковалентно приєднаний до першого антигензв'язуючого фрагмента і оборотно приховує перший антигензв'язуючий фрагмент.
3. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за п. 1 або 2, в якій маскуючий фрагмент ковалентно приєднаний до варіабельної ділянки важкого ланцюга першого антигензв'язуючого фрагмента.
4. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1-3, в якій перший антигензв'язуючий фрагмент являє собою канонічну молекулу Раб.
5. Активована протеазою біспецифічна молекула, яка активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1-4, що містить не більше одного антигензв'язуючого фрагмента, який має здатність специфічно зв'язуватись з СОЮЗ.
6. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1-5, Зо яка містить третій антигензв'язуючий фрагмент, що являє собою молекулу Раб, яка має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.
7. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за п. 6, в якій третій антигензв'язуючий фрагмент ідентичний другому антигензв'язуючому фрагменту.
8. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1-7, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, вибраним з групи, яка складається з ГоЇК1, НЕКТ і мезотеліну.
9. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1-8, в якій перший і другий антигензв'язуючі фрагменти злиті один з одним необов'язково через пептидний лінкер.
10. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1-9, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Бар першого антигензв'язуючого фрагмента.
11. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1-9, в якій перший антигензв'язуючий фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Рар другого антигензв'язуючого фрагмента.
12. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1- 11, яка додатково містить Ес-домен, який складається з першої і другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.
13. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за п. 12, в якій Ес- домен являє собою Ес-домен до, зокрема Ідс1 або Ідсаі.
14. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за п. 12 або 13, в якій Ес-домен характеризується зниженою афінністю зв'язування з Ес-рецептором і/або зниженою ефекторною функцією порівняно з нативним Ес-доменом Ідс1.
15. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1- 14, в якій маскуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОК Н) 1 5УСУЗ (ЗЕО ІЮ МО: 26); (б) амінокислотну послідовність СОК Н2 ПУМООС5ТММУНЗАГ ІЗ (5ЕО ІЮ МО: 27); (в) амінокислотну послідовність СОК НЗ ІТТ УМОрУМАМОМ (5ЕО ІЮ МО: 28); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: Зо (г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОК І) 1 ВАБЕМІЮБМІ А (5ЕО І МО: 29); (д) амінокислотну послідовність СОК 12 ААТЕГ АЮ (ЗЕО ІЮ МО: 30); і (є) амінокислотну послідовність СОК ІЗ ОНУУЗТРМУТ (5ЕО ІО МО: 31).
16. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1- 15, в якій лінкер, розщеплений протеазою, містить принаймні одну розпізнавану протеазою послідовність.
17. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за п. 16, в якій лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність КОАКУМУМО (5ЕО ІЮ МО: 36);
18. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1- 17, в якій перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОК Н) 1 ТМАММ (ЗЕО ІО МО: 44); б) амінокислотну послідовність СОМ Н2 КІЕЗКУММУАТУМАОЗМКО (ЗЕО ІО МО: 45); і в) амінокислотну послідовність СОМ НЗ3 НаМЕСМОМУМУ5МУЕАМ 5 (ЗЕО ІЮ МО: 46); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОМ |) 1 аеЗТаАМТТОММУАМ (ЗЕО ІЮ МО: 17); д) амінокислотну послідовність СОМ 2 ЗТМККАР (5ЕО ІО МО: 18); і е) амінокислотну послідовність СОК ІЗ АГ М/УЗМІ ММ (ЗЕО ІЮ МО: 19).
19. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1- 18, в якій перший антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з СОЗ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 43, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 55.
20. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1- 19, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з ЕоїК/ і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить:
а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОВ Н) 1 МАУМ5 (ЗЕО ІО МО: 14); б) амінокислотну послідовність СОМ Н2 КІКЗЕКТООСТТОМУААРМКО (5ЕО ІО МО: 15); і в) амінокислотну послідовність СОМ НЗ РУУЕМУБУУМОМ (ЗЕО ІЮ МО: 16); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОК |) 1 аеЗТаАМТТОММУАМ (ЗЕО ІЮ МО: 17); д) амінокислотну послідовність СОК 12 ЗТМКЕАР (ЗЕО ІО МО: 18); і е) амінокислотну послідовність СОК ІЗ АГ М/УЗМІ ММ (ЗЕО ІЮ МО: 19).
21. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1- 19, в якій другий антигензв'язуючий фрагмент має здатність специфічно зв'язуватись з мезотеліном і містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки 5 важкого ланцюга (СОК Н) 1 СУТММ (ЗЕО ІЮО МО: 107); б) амінокислотну послідовність СОМ Н2 ГПІТРУМОАБЗУМОКЕМО (5ЕО ІЮ МО: 108); і в) амінокислотну послідовність СОМ НЗ3 Урок (5ЕО ІО МО: 109); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОК |) 1 ЗАБЗОУЗУМН (ЗЕО ІО МО: 110); д) амінокислотну послідовність СОМ 12 ОТ5КІ А5 (5ЕО ІО МО: 111); і е) амінокислотну послідовність СОК ІЗ СОМУБЗКНРІ Т (5ЕО ІО МО: 112).
22. Ідіотипспецифічний поліпептид, призначений для оборотного приховування анти-СОЗ антигензв'язуючого сайта молекули, який являє собою антиідіотиповий 5сЕм, ковалентно приєднаний до молекули через пептидний лінкер, який розщеплений протеазою і містить принаймні один сайт, який розпізнається протеазою, де лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність, вибрану із групи, яка включає ЗЕО ІЮ МО: 36-40, 97-101 та 103-106.
23. Ідіотипспецифічний поліпептид за п. 22, де лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність КОАКУММО (5ЕО ІЮ МО: 36).
24. Ідіотипспецифічний поліпептид за п. 22, де лінкер, розщеплений протеазою, містить розпізнавану протеазою послідовність КОАКУММО (5ЕО ІЮ МО: 106).
25. Ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із пп. 22-24, де молекула являє собою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини.
26. Ідіотипспецифічний поліпептид за будь-яким із пп. 22-25, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить: (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки важкого ланцюга (СОР. Н) 1 5УСМ5 5 (ЗЕО ІЮ МО: 26); (б) амінокислотну послідовність СОК Н2 ПУМООС5ТММУНЗАГ ІЗ (5ЕО ІЮ МО: 27); (в) амінокислотну послідовність СОК НЗ ІТТ УМОрУМАМОМ (5ЕО ІЮ МО: 28); і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить: (г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки легкого ланцюга (СОК І) 1 ВАБЕМІЮБМІ А (5ЕО І МО: 29); (д) амінокислотну послідовність СОК 12 ААТЕГ АЮ (ЗЕО ІЮ МО: 30); і (є) амінокислотну послідовність СОК ІЗ ОНУУЗТРМУТ (5ЕО ІО МО: 31).
27. Фармацевтична композиція, що містить активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1-21 і фармацевтично прийнятний носій.
28. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1- 21, призначена для застосування в фармацевтичній композиції.
29. Активована протеазою біспецифічна молекула, що активує Т-клітини, призначена для застосування за п. 28, де фармацевтична композиція призначена для лікування або уповільнення розвитку раку в індивідуума.
30. Застосування активованої протеазою біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1-21 для приготування лікарського засобу.
31. Застосування за п. 30, в якому захворювання являє собою рак.
32. Спосіб лікування захворювання в індивідуума, що включає введення зазначеному індивідууму в терапевтично ефективній кількості композиції, яка містить активовану протеазою біспецифічну молекулу, що активує Т-клітини, за будь-яким із пп. 1-21.
33. Спосіб за п. 32, призначений для лікування або уповільнення розвитку раку в індивідуума.
Се-лінкер з протевзвим сайтом коня 0 ВНТИ-СТУ ясКу ехо 415.84 вити з СН ен Ок загальний легкий ланцюї : Кн ки Я АСУ Ге (западина Ь 5 Бе квистуди Рзава й КУ его ІАлА ОЦ ІА КО, ява
Фіг. ТА СОе-лінкер з протеазним сайтом тих ня антн-Сію 5сгУу Хо 4.39.83 анти-СІ3 УНН». дося СНІ вх Щетоя і фени СОХНЕ стй боту загальний легкий ланцюг днини й дви. ема . ее ря в. ск; о, Ре (єзападннах) гу Бе («вистжп») Рзаза до у Ра ЇМА Ор АХА Б Б
Фіг. 16 с15-лінкер вишня знтиСІ вегу
2 4.15.84 С ні С шир Е ЕК тн че - (о загальний легкий ланцюг Оош ша а В Б Ес («запалина») з Ес («виступ») ГАА А
Фіг. 18 СіБ-лінкер пня антн-Сі») вегу Хо 4.32.53 анти-С3 УНН АТЬ., КО 0 загальний леткий лянцю! Ес («западниа») зі Ес («виступ») РАЗИ Ко РЗРОЮ ІА ПДАА 7558
Фіг. 1Г сх : в ацтн-СОЗ УНН еТЬ, СНІ «щеня / я загальний легкий ланцюг ' ик тВЬ і 54 о о лама АВ А у орігучатях Ге (западина) ув о Бе ісєвиетуп») РЗгВа й у РО Я, я ІАГА й ГАСА с
Фіг. 1Д С 00010 каля 098 бо ЯН 0000 о88ВЕзов 0овавбюює я вової с
0. ОО у од в у ен ші В о и, 550 ба 96 в НМ я ана НН,
НН. ов анна Я 00 Я ОЯ 9503
Фіг. 2
І В ІВ ЇМ Ин сухе ух ккюкююю ЦВ шо ИН ст ши "Ммежвобоовоооофврювво 1 перннніккт надою
Фіг. ЗА І Н ІН М . лилия КІВ Що г : «ке вноВ ши винен кові
Фіг. ЗБ
І І І ГУ нених ніна - м 7 й Шо КК ІВ, х бю промінні ЗК « нн ВУ х ке 1
Фіг. ЗВ і й ІВ ТУ оон я ДЕ сс об тннікініньноь В зюсннноннооовки ЗК.
Фіг. ЗГ
--к- ТБ ант СНОХОТ вору ЗЛ СОЗ Кс -к- уВщоанте і СНОХУУ вок 4154 СЮ Ес оброблений - 7857 ит 1Ю СНОВ27 ясіх 4.15.64, нерозшентюванній шінкер, СОЗ Ге
4. тоді овюважнтний СНОЗІ? і -й- ТІВОбіспеняфізне СНЗАТА З899-СЮЗ
800. ж ря ж - 8500 ЕТ ЗЕ з ж. Я Ж ре і я щи ад К я аа ди Ж зво- ; й 0 о рі й 6 Їск концентрації (М)
Фіг. 4А - 7Т8БО0; анти-10 СНО527 се 44.32.63 СОЮЗ ге -- 7880: анти-ПО СН2527 всем 4.32.63 СОЗ Ес. оброблений -- Т858: антяи- ТО СНО5ЗО? всту 4.32.63, нерозшеплюваний лінкер, СЗЗ Ес -3- 7851: рдяовалентний СН2527 ІРО -к- ТВО: біспедифічне СНІАТА 95/99-СІ)3 по. о БО я - ке ча - ь 5400. з ре і З й г гоб о 2 4 6 ов концентрації (ПМ)
Фіг. 4Б і пк Н Н Е ше В І ; н і у Н і У ЗЛАКІВ о отв пра КВ нова пото я фон ов Осло ло ооо сосиски в ен осісаю (в фс какк о фе вввбас сосні) ся сркрсвомекн Упр висвгоголовіЯх ЖК5О Боку 415.64 М Об, протеязний сайт вен в 15 разів більше, ник для 7881 ТАКИ КИ Ки ДЕ ММ мУмеи умусиинт кмиим ии ШИМ И КТКК ї он ни я 5 ПИ і ПН В МНС М ооо іде вою спон ооо нора ой МБ а и п а и НЯ МНК ВК АК Лу я Ки и КО а ОА и п і . 53 50508 брав менше, ніж лях 7859 х юки М ОМ . КАВА КК МК М р А КО МНН М М М М В я . х ! нн Ол МН о. я п сх ен КВ А КК в о В ВО ее п В В и В і Зв М Ме ЗИ АВ МеВ з х Таз. при Но Ноя - вл З КІВ ОКУ 4.32 63 МК ОВО, протеязний сайт жи на 34 рази більше, ніж для 7861 З МН и ; и В о В ОА дис оповеа оуОхт ним и, о СУ М І ОХ ХОМ ие УККв В НЕ дв ях с 50 ов б4раи менше ніждлє бо ОО В 7 ОА В А Ко і 000000 з судкевавняй БИОМНА АНА МОВО А НК М ОМ М І М М А М М І А І ІН НМ КН М КН І НН а
Фіг. 48 О5-лінкев з протеданим сайтом у ви СО зегх ді су зла антв-СІі УНнВ д Хо ФО дея Ду валрівовя. . Ди СНІ ви доКоаьй МИ загальний легкий ланцюг БО шо и УН о Бащі бра ун ре БУ Пе СНІ СН у і ж спо рі сс загальний пегжнй плавця чі ї Я загальний легкий дан пове Бо ДОА ой ПЕК п ЖЕ СЕ Есі«западина») аг і Те («виступи РАДО Б РОРОС СНИ АКА в З АТА БЕ ша
Фіг. 5А
Ств-лінкер я ВитВ-СІ) еру ск 5 ВА аня СВІ УнВ. Я сн, Су запальний легкий ланцюг Вин о гоіявО5 Мн а ( є у ; дв Сн сн загальний песїкий яжнцюг : ІВ и загальний леукий лави МАУ чи ОК он ВО я Ох . Бе («западина») су Ке («виступ»! вза ШОВ еЗоВО МА Вр р Б 7676
Фіг. 56 О5-лівкер 5 протеазним сайтом тру анти-СЮЗ зору со) адаяЗ антн-СОЗ Ун'а - сн мая Ки з. з поси загальний легкий ланцюг оф ; УН БОЇВ 1605 УН - Фі ; в Шу "ЧИ -54 загальний легкий ланцюг ЦІ р загальний легкий ланцюг У ву а Ес («западина»)! Я У Бсіс«виступ»! ; ж ; РЗ2ОС Ва го ОО ІАА Я АГА в
Фіг. 58
С-зінкер Х ВН Є щі мі 332.53 ант В3 У Б ще шея запальна пегкай ввхнвоє Шірьоно гот звов ун ай, Її ще же Це «сн: сн загальне й легкий лашоє |у У загаленнй земний зви Кк Оу -к ОБ ою 5; ВН у. Бо ізланадннах г. Крічввстувиі зга БОМ РОЮ іа ВИ А В вії
Фіг. ЗГ зити- СО) УНН СНІ я Б ня здщгальнни легкий ляювциеМя ШУ Бо Ні ї605 У а ФІ що 3 мн Шон сад загальний легкий лапдюг | Я ря загальний легкий ланцюг ч Ї не да БО ВЕ Есе («завадина») с Те («виступ») Ра БВ ВЗ ІЛЬА ЕК ІА с 6298
Фіг. ЗД
Бе 1505 51 1Б1х ун у Кия дин СНІ ав - я гові11605 ши загальний йеткий ланцюг - и шо ун ант На о ПС" сні у у й КВ загальний легкий. паншщшаг НиИ Я Загальний легкий лани Ц и Ес («западинах гі Бе (квистуют взгоо Да РОЮ їлЛА ВИН ЛА С у 600 «ріг. ЗЕ вути-ОР47 й У сні ГУ ; рек ТУ шити-ІЗР4А7Ї зитнАСі пі
М. і щИ ї же коро Я ке а му ч З чнк шк сь Ох ши С ДІ рен й о Б 4, , Ессзападина») ЗБ; Бо бхвиступ») дат МБ варом РЗ2ЯЗО ВОК РОгОВ ілА р А
Фіг. ЗЖ хна Бав4.15.4, схретені занпюги па - МА я С35-дівжер з протсазним сайтом МО лі Сі ешвеюя М. . Моя дати-со ОУН, СНІ СНІ сей дн й . АБИ загальний легкий ланцює ; - дек мо ШЩ- ММ БОЇВ 1805 У. зайве» Ії Б ле пошані СНІ ви ьо загальний легкий даншює Й ней 00 загальний легкви пашог м ака в с. я, - ВУ я Кс ісзаналинах У Кеевнстує вза ДВ РОС імА ВАГА ОО У 7454
Фіг. 53 ТК ВК Я ОД ККУ ОВУ Ж у дн Ж ТК НК др ЗК Вр тзскя о правильна молекула / М Гомодимери тету хзапажинаи ви адена і 3 ! і і ії З ї : і у ! ! х их : ! их і і М Я х -і 5 і х , і ї ! й М ! : і : ! і і я ї ж 1 -я Х і ! у і 3 і ; 3 ев і і і і і ! і і Її х ! і ї шо і і ! у Ї ї М і і х я 7 х ; і х : Я Ко ї У і ї т. і Ж й і т чі : т се фанти дру отит Ко кнопок, Мо р упкдтесттіккнпвороосстнте : й а жи г Ї для я . с. у соц и он ожкопттцци т пкт поем зх 3 -іжі зів їжі кішіві і НК ізіх їх 1 кі д Їж Меіиу зада фе з , Зав слллю м яке хкЕ ох ви МЕ
Фіг. 6
ІГ.
КВК ИНА КОКО КИ ВК Ви А "І г і пражильна мелекуна і х «є ГГ ше жк ! і ; ! і томодимери тилу «западина «запазнна» і і 3
- . і ж і 1 ; ! і і ї жк І - ! К у і я / ; -і ї 5 і і / х
/ . то з ! я т ; як І дит - хо сект кжаснн тн - - кю тя х . хг - лення Зі жіюв інн вівіківівіківідлівісівівівівіівівів іі іі він іівінінаівівія й ке ж 5 Ж тях хк хх ще мя
Фіг. 7 С Ах В 355 - комкохкиих Ду еко ен нн, Я В ооо Фото фр
Фіг. 8
Б 4 В ке ді КОХОВВКВКХ . шо Щ х «в мен 5 шо не ще я» оком юв нюх оон Да юю є ді з еооковосоввювмввюсювюво -
Фіг. 9 Е А В Дух пт ух уко й | кв кВ ко венах - ЗК инио ек Де фркоковвювКввх «я "Укоунв вени т
Фіг. 10
Е и В скаже у. . й Не ММК ВХКАК ХК КАКАКАКАХИХХ Дівою «екв и п хо й ! «й Дехто . - й т. : ще й : п: фронт 21 дрвювимиювцн й ооо ав. т Я що . з
Фіг. 11 У І й ІЙ ВІ «вивих дор ех й з у огонуююютктвючюкнккю шо ПЕКИ КАХ '
Фіг. 12А
; : ІК у | ЕЕ ОК В ВЕД еВ х о. ЩО ЕК, ев и код вувннни опи Я МКК КК пи р п її сх ч внесена мав ЖУМИМ УМХ ду ня х Р зжеоінвнавккнкіокх -
Фіг. 126 .". ДК ово н - В КОКО «в КК ооо. пен й ИН
Фіг. 128
ІГ.
І ! НІ М ЗАНОВО КВ КвЬ КЕВАКВАК Он В с. ЕККККОК ОВО Ко ко ВХ ЕНН ВЕК ОВК ОВК ек КВ й Ї кн акнк вок ЯН «ак кохнія К
Фіг. 12Г Людські ліні ютптен ши Густина РНК КОКО ЕВ с ОО ОК . с У а в Я
НН. 53 г с о. о. о. о. с ос с є о. с ХЕ Ка росу і вх се ет уУ МКК ОКХ ОК ТО ТОК я Кп еннотьві клітин КІКОоВоМ с с . печеонини нирки лелици с
Фіг. 13 я со; й М ВОК шо че ЖК Ж аТтх пух, ден хккохкс дух Що Ж осені тт ААУ 00 имя, М «ЕЕ Ж х К х - х х В ПЕ Ок о 8 я 0 ВО ОХ 5 шо БУ мох хх х до, Ка - ОХ Щш Б жо ВО В Ж що ВО КК ОК ВС Бе ЖЕ що Ж х Ж Ж
Е . шо Ж най ОХ ЖЕ ВВІВ зе ! що В ЩО ВО | : х Те С ШЕ коки осо хх як К ж ТИХІ ще м ОХ - В У МОХ Ве до З Еш Т МОХ М. ще ож - В ХЕ К СХ КЕ ЩО дак С. г Ж ОКХ ЩЖХ до ВК С ак ї С ЖЕ ВВ ВОЗ ОО у Її ЗА кс ва З ВК 3 З же кох вобх ПЕ ХК : ВН ня З МК С сере детеет трест досто дроту фегос дог дух дня : : . ї 1 як ай 1 ' ї о Н ХМ ої й З 4 ; БО ще ; То се ее є Ж Да Ж ПО КИ ІБ нене ЕІ Вин І КО сш, Я КО се НО В : 555 я «Ах пе ВАВ о ОБ ЗАМ НЮХ ооо ККД ї -Х ; ї і ї і ге Ї В і ке ЗО - ї її ВИЩ: Я щ 5 о о го жах й палннни: їз 0 ММ МОЮ « Бе Б : ж о зе Є ХОМЕМММ: ЗМИКенюВ ї М Ж Ж г ІН ВК ГУ ІБ: З ЯЗ ЗВ За Ї г БЖ ТК ВН ре ЗО С ЗКУ п ЩО 555 І ВО ОХ ВВ ЕК ВОВВВВВК--ховуввнх ЗНИК екв. Ко ОО В В хе ХХХ МОЖЕ; тк КАК ВАНЯ ВЕДЕ СЕМ ЗМК ДІ ве ЗО АВ ПИ Воля п «ТА пую ВІЗКИ КМУ КИ «ФМ ХОКяХ ВОІВ ІМТ НКК ТЕЛЕКОМ ЖК ВОМ» МКК У ах мормхкхммоМ КМ ПИВ І М : Ії
Фіг. 146 т іа Б З й ст ла за АТа весна 3 яасреа Зав - щі ж 2 щ п о Е з Ж 85881 ко з 505 В 5 25 Ї5 8050 І 5 ри КЯ Е ге В т ї» гу о У 40 їх в Ж В Ж щ Е і я - - ш в ЕЕ ге т 5 - в х е жо 5 Я «7 Ж х 5 З 20 рий ія мя щі с че це ння на жор і у. щ о жо ВЛ Ж. «Ж. пе ВО г ' " в "ЩО щі і й таж
Фіг. 15А 758 о Зо що 4 Во Во 5 70 а 7 В 60 є Ж 5 а З Га! я 0 304 5 юю 234 50 ще | й Я рсолаоваввих викон я ох й 4083 чо 90 0 5 8а 704 5 Уа робо по о яв о БО я 40 я 40 с Зо оо - зо 2о т 10 жим поея 22 к ВЕДВВАЙВьог Ек яв ділу нхв я БИ зах що тм пити ПО СНЯБОТ вору Я.Я МК СОЮЗ 1606 Бе шик со ФАВТЕ СТВО ОХ УМ вкопати СНО вору 415.04 МК СТУ ОБОЄ Бе обройлеви ще діда ПпраТОаЗ ТС Т СНО УЯЧа) жи птн авта ТП СНО соку Я. 1584, верозщетцвневаний вівхер, СТ 1606 Ко
Фіг. 156 в 5 я 5 рак. - х їй в д З шо й зби 435.54 543253 х З Ж Бо щ що Ф щ 5 ж о са З Б бо 3 у о Я 5 в ФВ ; шк в Мои ш з 2 В с дк що Ж 5 В га 2 8 в, Б її ш щ а Ж - - - В в в 5 З в С ц га в - 89: Ж З Ф 2 КЗ хх З 2 Е в їні род а о в Е о Б че . Й іш ч ! шу яке ща о. ві Би о сус
Фіг. 16 5 о 5 З 5о а 5 о в щк їй 5 зач 4158 зору 4 дз53 Ф З Др оно онтоежютннтнннсттнтттния в З є Ф щі - ге у ш. у ; Х Шк 5 8 Я Я 8 8 2 8 ка роя 8 - ГБ) ре лк е з В Ге з Е ще Го: Е Є а в ЖЕ Но а У - - У - Ж Е є в Е е в що Е2З зд ї- щ т 5 Ех - мм ч00- 8 В - уч ; і Б з во1ШЩ В Зово ж 5 !
Фіг. 17 речі - ж я Й ря г що й ее х з зу і і конт о є в о Фе - ре. її же а - с- е с о й че - ік с с | ко ща с ще Ге ще
Фіг. 18А 5 ж я ж Ж о. В бо. зо і ї я ї фер і соні о " ф 4 село в Ж вив 435 зпоенчнктчвчннду че ранню чуття інн че тіякрннісіення а х мок ее да знай я 4 0 а наукою посол ол 4 36 00 чОоУюовю каидкитравя М) коппентрація (НМ) Я щі В. В з о зо в 5 Ї щи а ох Во Же ЕЕ х ! й х АЖ. Ж е кВ Шо ШЕ и вза Я я 010 зо чОчОововюювою оомашаж я а о чоморюювюов концентрація (У) корені СМ) в там ект СНО оку 3.15-59 МКОЄІ союз моб а 8208 БАЛДТВ ВОК БА «й ТВ: ЯН СОВА хор 565, верозитт това лікер, СОЮЗ БО Бе . Фіг 186
-а- ТАЗНВитТИ- ПО СНІВ? вору я 323 МКОБО СТ 1506 с «й тар антнойО СОУ Бекх 84.32.65 МКОВ2 СЮ 1626 Ес опбробзева ен ТО авт ЗУ СНОЗІ? обу 43363, нерозщехтюваний лінкев СОУ ре ге -ж- ВІВ АФІБАЗ-16133-03 КМ) -к- ВВ рра25 ТОВ 5РОНО КО 00 Х в 0 ж В 8 5 2 В В 8 В іс - -е ке
Фіг. 19А «Ян я М
В. 8 5 30 8 з. "ше жо х і Б 2 рр. 8 20 5 яв Ж ї Кооререеюев сснссв і стос і нат зе й Е г і І Ди ту --Я вік я о ви юлят в ооогові вл 4 10 100 юбМобоюєтвю 00010010 3 10 00 (0001000600000 концентрація (М) зонцентрація (ТМ) 5 50 і - я «0 й В б зо В зо в 2 з. їх я і » | і й дж І Бо І х соня . Я ж є Бен: КЕ езофрнно ЦІЯ зо їх х ! іо 4 ооо а ої за зай юоноодюєоює ота о я 0 00 чюю00о000о концентрапія (ІМ) ковоенхращія СИМ те Теббанти ПО Сноу оте 432.53 МКОВ? СОЮЗ 1606 Кс Зд- 5298 ВАШОЮ БУМ тен ТАЗ аяти 1 СНо527 зору 839.83 МКОБО СОЮЗ 1606 Кс оброблена тк БІВО ОРЕТОВ ТОВБСНО УКВ) Як ОТО анти ПО СНОЗОУ вору 3.32.53, нерозтенневаннї зінкер, СОЯ 1606
Фіг. 196 ЗОЗ на М внтвО СНО527 всех 4.15.54 МКОЄІ СОЗ 16036 Бе яко ТЗ аю ПО СНОХО? херх 415,64 МКОВО СОЇ 1606 Кс оброблена таке Тв анти СНІ тТ ясіх А.15.64, нерозщеляюваннй лівкер. СОЗ 1606 -- БУК Ес 8582 дов О-1605-00 ЕМО) о х к й 8 ма о о ЦИ «ж -Ж - «- З є оо Фе в 8 5 я в 55 8 о в 8 а
Фіг. 20А 50 50. е Яд я 403 ге і 2 ! В я Вод Кл х Е т ВО одн Е - В. Ж з ля ДА то Бей 10. м т дос рен НЕ во Х й пф ення поювоногм а я о 00000000 аопооповюооЯ Я чо чабчаоловюОвО0 концентра (М) кохневерація НМ) Я о с о Фе зо
20. 5 23 св жо в Я Є 15 с І 5 в а ; , шк А щи Я Я 000 06 чо зона ал я чо чо чо0онХюєювою ема вена СИ ; . хоннентрацію (Мі Я ЗДА: зити ЗИ як З МОБ М МОУ ГЕ В БНО ОЧОК дк твор я КОКО К ВЕ МОБ СІЯ БОКС ОбРОбаи, дк ВІ62 Пед ТОВ СНО УКОгУ й. КВК дати СВІ ри 5, перохкелниной шик; сра во ге
Фіг. 206
-- ТАВб вет СНІВ27 ку ЗОЗ МКОВО СО ІБО6 Бе -е- ТАЗА затв СНІ сту 43363 МКОВО СОЗ НИЄ Тс оброблена. й ТБ зате 1О СНОЗ27 зебру 432.63, нерозшенлюваннй лінкер, СО 1616 Ко те. ВІ АВ В-Ю- 1615-02 ЕД а 8182 рат ТСВ СНО дов) чн че Е ою ; Ж С 8 8 5 ге в 8 8 8 вв " В ВЕ 8 -- же «2 ще
Фіг. 21А а; ща і ї ж Я - 40 В Ж і т 0 т : : в з чи їі КЕ ли сл в ; 7 " ев т " зщоамо ої я 4 ео хною ожиною лоб юочовоЮювоє конпевтранія (М) пооеневлераєвв СМ "жк 5 -ж В 3 б з | в 30. Б і в. ; і я Н з шт тт ОО ся І ї ни сс дн Щі сн нут нти снення В онов нннрктттннестнтнння вот оаоі я 0 за зеаооооМюєов земна ша Я я НО зло сСОКює пох хра вм концентрація (НМУ ско ТОВ СНІ ех «ЗАДУМ КОК СОЗ ЗУ КЕ а ВІВ АВТО ВІ Ж И за МОВНІ НУ СНІХ? ОБУ 532.63 МКОБУ ЄЮ ІБР КЕ. бровах як ЗО ТРОИСВ ТОВ РОН ЯКО і ЗБІФВНТЖ НСНУ оку 832.63, вахумтвсявний лінком СОЯ МОХ Бе
Фіг. 216
580. во Ж щі - В 8 з т о ж ? ! Я - В 20 В 2 Ж
18. - і 70 зате 04 1 40 оо зо00100О0о0ю ооморт ві я за о чо0р1о00ю0юю концентрація (ЗМ) кенцевтрація (М)
БО. 505 г «. 2 е Я зві Я зві іо Фе - "в 5 в 0 о олМмає аж я жа «во з1поочюОдород0о зом а 04000 06 зожувОомОЮюво конпентранія (ЯМ) - концентрація (ПМ) -- ТВадіанти ТО СНОІЗОЇ «стру 4.15.55 МОКОБ2 3 16136 Бе - 8100 БАЗІВ-О-БОб За) -е- ТЗАасантиіі) СНОВІЇ зобу 5.15:54 МКОВІ СОЗ 1606 Ес обробленя «й 5298 5АВ16-0-1805-0 БЕ -к У57б'ани СНО зок 4.15.54, нерозпвешнований лінкер, - 5182 рЮРАЛОВ ТОВ СНО УК За) СОЮЗ 1606 Ес
Фіг. 22А - 80. з й
Я. е , В о жн Я з Її» Ї ю Х Ж Ж є, ; Кі й і ЗО оошМмоп а я ло зав нихнововювов зл аа о в ж ОдДонНовОвжюОю концехтрая (ПМ) конпентрація (НМ) 53 як з - ; Е Б зо т Зо - я вого В 20 2 зо р 7 к 4 сій Сонник ожноао ат ж не ни ооо зщивооюая я ла 00 обо концентрація СМ) концентрація (М) сук ТОВ: ЗНУНЯЮ СНОВО? жи й 32.63 МКОБХ СОЮЗ 1506 Бе «- 5108 ОАТЯ-Ю-18ОБ 5 УВІ зе Таов: ант З СНІ? зо За БІ МЕЗО СОЮЗ ЗДА Те оброблена «й ВО ЗАВІВ ВО г ВН «ік ЖВ3Я: дно ТО СНОБУЇ вот ж 439.63, верозшенлювиний пнков, СЯ ясел В СВ ЗРСВО ОВУ
Фіг. 2256 о що. ; - е! я «в. В сю В з їх 39; В Ї зі 2 во ? в Я в сей , деептрннсфн цс кофти З сової бл я 000109 10010000 омишог я Я 010 ою 0000000 во 50 8 З В з в 2 їв Я ' . і й оо Ві нос В посту жести чно нта чн зонмоо оя я л0ол00 Зо00овютю одоїо6: 04 4 Ж Х НХКИОМНЮЮОЮ концентрація СМ вонхежеуха нє ОХ а УЗА за СНІ зов ІА МК СОЗ 1606 ре яв о Ба 16 ТУЯ еОТЯЯ.: вит НУСНОКА? зору 41564 МЕТО СОЮЗ ХО Хе оброблена, «й БВЗАВМНЧТ УВА УТ й ТКТЙ. вит ЦО СНІВ зоре ДЗ, нерозтщеплиьзааний зінкер -- ВІЗ Ома ГОМ СМНО УК Ва Союз БО Же
Фіг. 23 ТЗ анти СНУ) зобу 4.15.64 МКОВІ СОЮЗ 1605 Ес КЕ 7594 антнло СНІ527 вору 4.15.64 МКОВ2 СОЮЗ 1605 Ес. оброблена й 7493 антидр СНІЗ27 зору 4.15.64, нерозтенлюваний лінкер, СІЯ 1605 Ес ше ОР Пуратіво 5257 ш 16051605 інвертованз ТОВ з ВО ЖЕ з Е 504 Ко с НШ - : - хі ВЕ щ 2 ЕЕ вия : чи і шк ШИ и ши Зал щ- шо В Ж в о Ф тт в шо В 5 5 З В 5 5 8 в 8 83 85 53 83 85 - БЕ що в що В о В В - ка - З т 8 183558 8 58 во г в ов во во 2 г А кА Ф г: 5 8 8 в В В Е В я
Фіг. 24
БІВ ПРИНЯ ТСВ СНО УКВ) ! ладу зчштопя о уж т чі в 6298 СА УМ їх о !
Є. " | З Е7676: заитн 10 СНОІВІЇ яеку 15,64, 2 нерозщенжюваний лінкер, СОЮЗ 1606 Ке Ж ще а " Е 7344: анти В СНІ «сек 415.63 МК СІ 1606 Ес оброблена
І. 7 І» 7344: зити- 10 СНОВО? зевх 415,64 МКОв СО с я ш в ве ІХО6 Ке сь цитоліве
Фіг. 25 ; 6182 ЮРЯ7ЄВ ТСВ ЗЕ СНО УКОоа) у 5298 САЗ16-0-16054 У) го че і їе в «м 71: авта СНІВ? веку 44.32.63, ро З нерозщенлюваний лінкер, СІЗ 1636 Кс зх х ОА: зни СНІ? зегх 43263 МКОвІ СІ в 16036 Кс оброблена Ех 7344: злити ПО СНОХОІ? я«ску 432,63 МКОвІ СОЗ а та 1606 Бе нива неє Уе цитолізу
Фіг. 26 віх - 6298 СА916-0-1605-02 в МИ) г І 761: авта СНО ех 432.03, -е є нерезшеплювавній пнкер, СВ 1606 ке їх ! - ; ОЗ: зити В СНІВ хо До МК 2 я СО 1616 Ес оброблена з. о Та96: вити ОСНОВІ зеве 32.63 МК а "Срз1606 ке В В ж в Зо цитолізу
Фіг. 27 ВЕУ АООЇ вБЕх вятТи-ОАО Борх Є зв -лівкев з о х сю сил. : оез О5-лінкер з протгазним сайтом Ст-лінкер з врозеазним ДП і в. М УН -» г сайтом у СІНА, я с 7 с Ше СНІ СН я ук ук ке і Я, рою ско лескиб ланцюг САЗОЇ п
Фіг. 28
Ше ун ун ай. УБІК, МИНЕСЯ в шк ЧАННЯ МІХ сво ж тв ШИ ук Б Оу ЧИТ Я б Ве . Око й ше Ж у 0 лЛегкни занцем зити- НЕК ж. , СРАВІ 000 Важени ланцюг
Фіг. 29 Ж) зоб 4 й , я газ учасни У -к о невідновлюютчі умови т това рі 8 ою І б Бо о й ее ї їх ши До тт тлу єю шию т ут тт Кент нив Зеник дити тт тт ляхи ЕЕ її: ож в о те я кДа молекулярна маса
Фіг. ЗОА
НІ яю «и : НЕ Її відновлюючі умови «ж Б Я їх . о і Си» : ок ж ! оО093 В : ї : ц : йо зо. Ек : й : воомоу о кої ге й а фета ян м тт нти ет кт твоя : утрені раттнсснеетутнакстто носно несе жо в 53 5 І з кДа молекулярна маса
Фіг. ЗОБ СА2Оі-анти-САВОІ-веУ контроль САЛО -антя АЛОЕ У без ММРІ ізотипу розщеплена ММЗ Х - М я то і чани автофлуоресценнція Ше щі ї А це І ії - 5 з Б ї ! Б от о. - пт и кі | а о В | ше. я В и я дом аз ОВ ит б п вн Ж -Е па я В о р вд. А тд. А ро. і й | п ОО й ж КЕ і у я у де ВОК КІ Ек. ДИ ТОП ЛИШЕКт Я ки 2 З ! 5 вони т в зо ПА
Фіг. 31
В В В МОБ МО ОО по о ооо ооо ВА их уромижк тр Зреенуту Ше Бахат 8 УАДУ ЕІ гу цАя Молекула о їзетий о їемп. КАМЕНЮ. ОМС З х Я: Я ЩЕ УВО я В й ШЕ Я пок БЕ З 5 З з'н р ФвТ кл флщцн нн т нтннтнчнтнчтнлЛлНн тв НН т Тв т т т І т тот фо ф фщ ь4чящ т тт М ММ п М т м М АК ХО Е МУКХМ ХМ ля с с І их сетвх с 3 і ШИПИ и В КВ п ВИК еру, розщел ММРО вата доле сгоссеегоєєк КВ ОХ МКК КІ ЕК ОК МЕВКЕ Я ще без ММ капа с Ка КН С АХ фе му ОО МОХ КАЖЕМО
Фіг. 32 ВЕТО Сб-дінкер з протеваним сви ки сект кр де ВНТУ ВоКу г г чу взаяз сті мав вити ня СНІ ее до Я аЕТНІ13197 ОЕТНІБІ1А й шу агальний легкий ланцю! о ноя нен вові лере ун УНН екс «дя Я су Я ЕІ о я сл. - ВЕТКІЗІВІ є і І Я йо ОЕТКІЗІЗУ загальний легкий лає З Не, 0 ее загальний легкий яанню В ОО ОО УА пд я гетто Бе ісзваляинаі у ТеієвнстУТМ - я 7 : І вн 0 ше іа КІ ту я 354
Фіг. ЗЗА
РЕТКЗЯ55О ОСб-впінкер з пратеазним сайтом ван анти СІ коту суку 332.83 анти СОтТУН Я. й (4 н і уоКв я ние рЕТКІ3197 оЕТНІ15214 Й я загальний легкий ланиюг Ше Ун оті 1805 УНН Ше. ЕТКІЗ197 та о СН вЕТКІ319 С Ь. Ше ЕТВІ3197 загальний легкий лайцює ; і. ЯК, до загальний легкий ланцюг ж ша ве оо ще Б. . Бе і«запаленах) у Ге с евиступу вза ЖК а Рагов АКА ЛА с
Фіг. 336 всомово Рем чвр5 0 УМ а і у СНІ ре ря - ще оЕТАЗ3197 Бо 1505 Б загальний легкий ланцюг ВЕТВ15214 анти ср й й а авти-Сі КОКО ес що ( Ь Дівинння о бб-лінкер з протедзним сайтом Па СН а рЕТК13197 М дрея де загальний легкий ланцює зі ззгальний легкий ланцюг Ії -а и злитим на М-кінці анти-СОЗ 6 веж зер да зогу у, 4.32.63 Ес («западина») у г Є («кввстув з) РО2ОО ВВ РІО А Др 8365
Фіг. 338 восбічаза коівііво5 0 УН шу ст 5 БОС 0орЕТВІ3197 жеорк в З сія зв я ех зх коіві 105 Б загальний нехкий ватхог рЕТВІі5214 . АУНай ч у анта-СОЮХ «я ше У ОБО пах ( й | Костя Ств-лівкер з протевзним сайтом І і СНІ ния че їй й СН а ц ЗЕТКІВ197 , ФІ З Ко і загальний легкий лазшю мнеальниВ легкни паннцю |; минніЙ ря ретвів5545 злитим на М-кінці ачтв-СО о. яз Есіззападина») у. Ге («виступ РЗгОО ВУ РІО ІА ВЕ (дА ПВ, 8З3Збе
Фіг. ЗЗ3Г ВЕТАЗО5І сС-ліякев з протеазним сайтом Кс г анти-СТІЯ зегу и 432.53 м як ж М. дев ам й КИ «хати з з зузвувак 1 в о... Зряджені варіанти сні Я уУНо ант-сю рЕТВі5ана СНІ КЕ, СЕ ВК й "хпешені ланцюг й ту схрещені ланцюги ВИНИ ч : я ЦО Ж ун на а. са ве РЕТКІЗ831 спе СНІ Сі М Я Ні». СК г рЕТК15443 ка і ГУ З зе Е Я вет.
с. ду со РОБ Тя Вк і вк оон я с ЗИ шо Бе («запалина») ИЙ Ес і«вистеп») Р296 р Ра29о ід) ілі У 8672
Фіг. З3Д рЕТНА16759 сСте-пінкер - анти-СОЗ 5сгх с 438.83 Я тн, Є зм УКХ дай аМзМ сні ай у нти СоЗ ретвізаля Зариджені варіанти дО УН ехрещені ланцюги СНІ ЕК, Ск ВК У й о В и ГЙ Во ун ча, с є Ку РЕТНІЗЯІЇ оо СНІ сна ше Том рЕТКІ54аЗ м. Он гу рЕТВІ5А4З с | за Уж АВ Є я і й ДО Вк і, як Енн ши ча; - А ох : я Кс («запаннях») їх Ес («виступ») Р3гоє | у о РІЗ2ос ОО) лід що
Фіг. ЗЗЕ ЕТВІ5445 Й ; ам5імх лі й - УН г ре Ця лжек 4 Б звик Р зити- СОЮЗ сна я м шо ши , схретені ее пЕТКІ5443 заряджені ланіпоги в-я С залишки , ши Вк М арт: Чі у сні ау о зз-ваикер з пруктеазним сайтом
М. я мн ун ще рЕТК15443 МІ Ь ОБУ с Ме загальний легкий панцює зі СЕ й нон ЩОЯ злиттям на М-кіхні анти-сІ як ХУ РЕЮТЯ вору я у Ес («задалинам З Ес («внетутт РУ2ВО й РЗгЯС їла Кр А 8674
Фіг. З3Ж рЕТНІ5445 . ам ун а заряджені ЙО залишки РК ПИВІ антн-СОЗ спа м ами схрещені й 000 ретві5ааЗ заряджені ланцюги я залишки м я чо Вк «Фьун да Щ---- Ск -лінкер З спшснни рЕТКІ54З фс сні й у Л ік-дінкер з протеазним сайтом ? ЧІ Мун М Лв Б У ун Симу ( Шь бос загальний легкий ланцюг зі ще ї ей ШИ злитим на М-кінні анти Вк й Ку РЕТАЗ659 фвру
0 4.32.53 . «ВО Есіквиступ») Ес («запалинах»! жк й ще зга де РІЗ іїмА ВИЛА 8675
Фіг. 333 ВЕТВІ15445 зМ5М ун, ДУ заряджені щ ; й я залишки рЕТНІНЯ зити- СІ сна ам5м схрещені ШК рЕТКІ54АЗ заряджені ланцюги Б залипки як а ла шу» я Ї Її МК с ІЙ СЮ а м. не сні КМ хн ід шій, деку рЕТНЯЗ811 ЕТ кН (і ; Кв с с Ес («западина з. Бе («виступ») рзгва ДК у Ро у 8505
Фіг. ЗЗІ рЕТА16764 М заряджені варіянти т а ун яитн Я ВЕТВІ5444 . ау скрецені СНІ ЕЕ, СК ВК КВУ занцюги Шь ун ун ть , Ку рЕТНІ1З811 ся шсНі сні мо у, С М. ЕТВІ5443 оон Й " ач ЖЖ ШО со реткаваяз Ес («западина») г Ес («виступ») Рз29в Ку) Рг мА ЦЕ ул 8676
Фіг. З3К сля : ЩІ нерозщеплюваний лінкер, 8366. АС 37 протягом 72 год, 8365 У після обробки гі-матрипазою, 8365 І ь Я. К тя ї 7 після зберігання при 4 "С, 8365 І Ії що маркер вищ | І
: і. | на
Фіг. 34 нерозщеплюваний лінкер, 8409... : о 37С протягом 72 год, 8364 ГЕ та з після обробки гп-матрипазою, 8364 | : я Б л після зберігання при 4 2, 8364 І маркер й ; рі ШИН : з й вк
Фіг. ЗБА нерозщеплюваний лінкер, 8409 ї . 37 протягом 72 год, 8363 З після обробки гп-катепсином 5, а о. ще 8363 Кк м після обробки г-катепсином В, хо ; 8363 ; й після зберігання при 4 2, 8363 7 маркер | | | І й з , хз
Фіг. 35Б молю Ух ЗК СКУ пелет ду ие о ВК й ут ск Са вк пухюютня КВ ЯКУ оку міки ТУ Бо окол зу шх ппвродасни ХВ 7 ща 050 ; ххх пк М Щі .
-. ЗНО - В ек зх р за З дк ай Мк ай піл а ово А Ж -к а КУ дея дяоз ж ' й зей» с - пе щ ЗВ 5 З їх Ка в Ох Я о Ж Е я; як є ; кон по Дер сн ер кн х пнчефрсн» фен т нан й У й є В КИ пух т З Бу я Гоо конпентранії али (ФМ - ях ЗВУ пе 298 пе ОВ сек ке ОХ Я лю хе У. 5, ак ях «КК. Маже хе - Ех
Фіг. З6А плкуістеючнх ОХ мкл Вк коклчкккн фен - З ' пн У сетонн0000 356 У зараптеця. Фе зх ВХ Ам щ- Е - І Ж , б рстулурх - СУ ле о КИЙ Ж. дн щ Ак Во ли с, ЩІ кю зх о вада ух ей «есе суки Вр едгкао домо кіна осоки кофти у сх що кмлекмоюкя ; 2 . в в з Тов ре в уд ж сеееекски ВК глас 6288 «ор концентрації антитіла (ФМ) в вч ІК ти Я е чуже но шхеомну ОО У ке В 1235 пуф Км я
Фіг. З36Б ек у Яку ВЕ Шо Ол ся К ваоє бо І ож є одн . - и АЙ Б Ж Жди г ж Ка х Ку х сх Кт . 355 - У и я Й з ве - а з - й Ко ших ; я ще е я ий Тео мк. р х й -х о НУ а : шо не й с вв. в у ТевННІ тя в жов» ши міки зда ов концентрації антизіла (М) г Ста 735
Фіг. З7А се ие зв У в де т заоя бо с Е 48 НЕ : х х ще не А Янь ЗБЕ й я нет сі ще х щг в КЕ Я й Педди Ку В 2 х Кк а 5 -- Н й Ж 8409 «я пеоадє з ща й 8 Е й с Бов коннентрації азититіла (ФМ) Ста за
Фіг. 3ТБ кре ва ще са ява і - ке ша К | В ні шк Я | Ше й якос КА. зме х 8 ! я я й А себе щі 2о і е я й ах у й КК й щ ке Й ддочнюнинявт й я Ж Ше ще Я й щЩК ; щи Я 0 бедра в ков коли дяк ан фени яко А се заов 7 4 6 8 «ж бов ковнентрий авта М) я 28 се ве цу І 755
Фіг. 378 805 ше св Жов ш «а , ер т киян сх В дюни се ї К Кк є Ї З І я тт ке З ї х Яка КК осн зах до ат «ж ДИ тя кі й. и р Се 7 | а 5 8 яд Кн лоз ов концентрації валаєгіла (ФМ) ях о паж ту» «в Ст 7235
Фіг. 37Г те ще в веов се В он ж Се - жи Б що о тт ш Ж зону ж з и ання нені ікіннкоояотня Й Я Й ря і жи дива я: і лзчкннуххкхняттттяня юю ких ттятяяяяя ОЗ пото «ВЖЕ т ее ж : я ш о : Вк ве мої Зк ще пен В ння хни ММ " Х ФВ зе КЕ о ще КУ "5 о у я х ші о З ж Ше чав . Ве і с. а - же . щ- схе АВ ня 8508 ж нен ще С ше - 8 ВОМ. ви ВО ве ОО з м - дев, ; - - поні Кк Р«0,0903, неспареннй критерій г
Фіг. ЗВА шия ще сло й КУ ся вве з-ж 5 Ж щоб не Ко кжжж ше що зак Чеччнннннннн яння те г ЯК сн зро ИН ш стр сн ВВ сн див -е курю др ХО МК й су бо о я - | ну - я в От в Б ЩІ се 5 оо | як у яд т 7 н, шо ще й дк п зо во о: ех ре ксечрето. осовроо з і де в В ще М мая КО о х хм я з ВМОМООХ МОМ М -к «КК. п ЩЕ в 5 ХЕ ск , сек вл в а стук вок х Р«ФОВОВІ, неспарений ї-критерій щ
Фіг. 386 і І Б як ж Ж в Прлиджх Ф у - ог текї Е я ОВ нн Шо Я хо Ж зо т ок ку ва щ я Ах с х це Ко те й ля й Ко ще Ж ик Фдияанняняя нин де й шт з - к З нн ко й селу ке -о ПЕ В нт Я КЗ 3 5 В за Гор концентрації зититьа (ВМ -к
Фіг. ЗЗА «Вииє хо ке, щей 45 Єтодлу
-е . зго печу з є В КУ Кт де зо р о й хо ех : т: ЖЕ : і : п й ; ме ни в ке , Я х Ж я по т Дртетт - МИ шк : М ЗК раду руту «а Ще ов коннентрації вичтитіла (КМ) ках Що х З ж а т235
Фіг. 396 вх дя вк ще пу уник 15005 Б Кя : у БВ ж . і З ян КК яння с. що Ку й я М Я ще Фе ; а и ся вдова КО - ВО Є ОК ШЕ ОСС ся шо 0МУЗ М о В ж М Б ло як: Е в що ; Ж о я о (Ши в і : МОН О3иІ зай |! ван доки МО її и СЯ В Зх й ваци й і ОЖ МО ЗКУ лжжю ВВА (-х о со ВО - палити: В ентжх ї у І ее
Фіг. 40 ГТ аску КК НН дк дню) 5» с зіяека снроватка,
В 8. ї день В А- Ж як я ТЕ з пенні, рот видінняний завіс о, ГИ ТКУ в о вло здат фена ЕІ ! - 5 ше З : ; річну те же | і п 5 9 венроватий, ТК ст оті ньо « плетений УК дотнцнов денне тестова пек : о Ж - І у под птіттнекеяннянкнтнння і: а о нн пи видівняний час іє сттинн і 4 КИПИККннннтнннннн Е ер каміріюдау пт ВЕЖУ нет ет ши!
ВІ. | | р т х «в. й і: о Кох СУК в єюювах, г М | Й І й день ій - ння Й оте і 7 По ннтуннтнннннтнннннннртнннннненнтнтканнт нення ЕТО, З Ух висівжаний часіс пиття нннєкет нн Фіг МА ше з позив кла : а і ФО і би З тіявха сироватка, о і | зевьб Фу рт дитя тт ння пн, :
ей. Потоки І ! З тет ттттттттф фс, і рот вНниЙ заг ди З возмівікд) і | от « ; ода а т | -ї ки лу : зенкичн .: ев ке ! і ге «се т скроватці, ; зі» КЕ ї ; нині зйшнни дець о м. дн ! іх . х фотккнюті ване в ттттнтитннннтя ТТН оннокнюкудетнсттюннннй люк і «ШИП вирінняний «ек З плит яння ї - Щі Держ ке ОСА КАВА М 1 реамірікдю Е подяк - і дае 83 ї й й А. як ! шн 8348 сироватці В ЩЕ | т і есе Щ стескня Деве й ї ї і ж В пк ко ! 3 ; т ж ІЗ птн ' щ р ТТ дддтх жатки І
Фіг. Б Па СТ ТТ "розм ши нини т в Ме Е
5. Ї Ї7 жк сировахка, НЕ Гй Ії й
У. Я нудну нення В Вот кпк ! день ЕЯ х ни днн НВ а ож Поперек ГК Мне риття нектари птн Кт нетто ткани ТЕ і і гЗ м ї й я КЗ і Гн пткнететтетнтвненн ВНВВНВНН ЯОКкоужнн пон п тва «й рОЗМірікде і Ве ! їі дощу "й «і і оо Я з з Й оскнння х
ТС . 1 о ер ббввснрозаку, дк і й і в з лень о я Пре дитя нет ш-й Ей реж: Я 1 о нн а п а с З розмі кДя) : екон, че З . 3 Вк т З кв , ; ве І ; фен 00 БФ в сироватці, ик і о дець 1 ПІБ ОХ роя
Ж. нн ок нстянтй З по : | спи ЗАВ, розшщепленатв- З хх 5 й: я ОО х. х о Мр м; о! їв ев (фірма ВАО буметх)
Я. жодною М ий М дик лурестанднатнс неон сттготе тет кокнттт ! Е- Аспттнт ТКУ т ут тотттитттттин знуріияннй зас птн
Фіг. 418 реуВ3у5О7 Єра- пінер з тими жвзниМ сайчом ПІЛИИТитХ ккд я пре. вити СО яку и ад283 й СКУ чн ; же В Прззерівки щу Ш » сдчочії зані я ЕН из заряджені вазанти щі Я «в т рітвібв5о СВ ЖК, сь НК 45 "б ехрещені Ку даххюхВ. УК х й МН ун МО са й рЕТВІНЯ5 ее СНІ сні Кей ХЕ А. ; я «а ВЕТКІЄВБО с и ШИ оче а и сь ПЕТЯІБНБО як і як Б Бе сазапалидаві ак Бе едистУНЯ Раою БА РЗОВО ІАБА в. ІЛІА У па 8955
Фіг. 42А ВЕТКІТЯНВ СК-пінкео га анти СОЯ СКУ 1 о зе і: З т оо фумучаеюз
М. Я ; аз Нексерізго шу заряджені варізнуя ЄВ СНІ яд зви акули сплсдец о п лжені вари ЧНІ ОК у зве СЮ схрещені вет БЕ СЕ ВК є щу заз клтя тт тк, КО данини ' шХ в Шь хв УН а. І сівозе ка МЕ; ВЕТО: ссосс Б. зл 2 я Я в СН СНАУ
МД. ко То, . роко ЗІЗ ч ку які, ее Х є сь 00 ДЕК соч ен Ос ВЕТНЗСЯБО як І | як Ох Кобсзападина»і 0 геїв гри ОКО я з пла) А
Фіг. 426
ВЕТКІ ОО
: . М Не кенчго Ди . ний нужж и: У ант СІ схрещені заряджені варіння СП СНІ «М ув ТЕТ ІІ ж хз МО од : вЕТКІвБН5а КЕ, СЕ ВК й данцюги А НХ а Як : у вай аа Є ох а; ВЕТЕЗББЯ5 ве Ще ска ха ой Е ен СНІ СНІ аа мое ах ; а ее ку суку у КС АШКе ва Є Сочі нь ще с, рвЕТНІБНЕЙ як і | як ОН Ке бозапалийає! З 0 бо бевнсгУн ван о ЗІ ІА КО А ОМ в
Фіг. 4281 ЗЕТВІ7523 Сж-лінкер З протецуним сайтом ср ант Сі Ех - « С ДУ Кові ЗБЕ Б; стизатоо заряджені варіанти СНІ сні я хи вити СОЮЗ схротеві Зк КАМ х ДЕК вЕТКІЄ Кк, СЕК у лава ги са й рЕТВ13813 оо СНІ Сн д КВ АН ше х І Ух ре що», Ще З мі Ка Де З пЕТВІЯЗТВИ осо еВ втік Що жу С ВЕТНІ ТОВ ще. . ВЕ... . фо ікзанадннах » Бе евнетути РЗреНІ Ва 339 у ЇАКА БО АА КО Кк 89557
Фіг. 42Г рЕТНІ7622 Сб-яикев сте ВАТНІ яобу - й Те 1. ХА Я гоїні ЗБЕ? й о, ствзауау ЗрНЕжені варізнтн сті я ун анти-СіВ схрещені С сш ЕК сь Ку лавцюги й дай УК СЕ 4 о У У ших як е Ї пат Я у касі сні х оС. в му М. фа ШИЯ рЕТРІ4793 Ко и НИ со ка осі оЕТНІАТВА МКК п ВМО ний ОК ше ї Бсфгззавядниюх г. гобхвястуУйх АКА ОЦ ЕАА СКОБУ 1б'явав
Фіг. 42Д ВЕТНІТВ2В й ок КоЇВІ З6К2 щі с зетвідтву ЗАвяжжені варіанти СНІ С ВО Ж ун янтн-СЮЗ схрещені 1457 ж я о Др И Р ЕК, ВК й у занцюи Фо чн чна и с Ї у ВВ р п че шим рЕЇНІЯ ОВ ой, МК срок Аль й ВЕТА Ж УВВ ДОМ де ЕК 0. як КК У СОНЯ то. - ОЗ, я Кеібєзананнима»м; СО бо (квиступе) ЇЖА Ве АА Я І 896
Фіг. 42Е
. : . ЖЕВЕРІС, озНе метрам МЕМ, лонкоя ЗЕ, ЗосМ НЕБЕС, сайт матрична МАР, ов 1 ЯМ 00 перо, озйт атрилпази МАР. дор 19, 100 м вв як ; - і і щі в я В . ! я: Ж с і: шо що Я Б ще Е Я як Ян ОО м ; Я оводай се НАВ Ж їх ; ср ВИ кн. Ка здо М АК ач я Ж є Її ж вве Й Я: Ех ! Яка Ту і - | ка м в ма з з Ех ат втру і з ВУЖ ЖИ БМИЖ БК БВ НЕ иЖ дн БНЖ ЗНИЖ БЕ 5 ВАВ ВВЯ БВ ВІ БЕ ЕЙ ЗВО ВНВ ВАВ ВВ ВЕБ 58 НЕК св мазрипузи МІМРО, дою 18, ЗАМ 0 НВК, сабу мутуткзя МАОРЯ пово 9, 1ОНМ 0 НВЕрС, ся масрукизи МО. звір З, НИ «і ті й я жо ж Зі Же Що м й й і: й я ї» що ; їх | . й . -- з 5 з : щх - пиття т яти 7 пхфужлужт вн всуєтяф ять хр я уки муть кр тттяуєух вих аж Еш В вииж ше вих Ж ж ших чих вх -: то - ве гро що то 4 З д їх - ча. ї БЕН ВЕБ ВВЕ ВХ ЕБЕ ВВЕ ВЕ ВАВ ВВЕ ЯЕВ ВВЕ БЕЗ ШЕ 5367 ау СНІ? коту КЗ ОСІ ТБ ТОВ сайт матрнтази МКО ЩЕ бант НІ СЗН2527 вет КУ, нерозненвоватвй півжер, СО БИ Бе ща зало Бої 150 ОВ, класи шк ач ТС І
Фиг. 43 Донов А Донор Б Донор В 5 ща ' ї ' - й 5 В 5 Е : я т» ЦО » В я ще Я. Я « НЕ й а «ЯК - кВ. і -жютнь м КВ сю пс ві-як БА доста ЯК о Гщ ДИ дет рт рттретнфнтякенннтрннтюр ють НА догесттуатнттотооттооттеуттецетнстттутттететттеветссутте ОЇ оуннеднетнореттттоететттеттет тт тнтнттяттттютння БИ ша же ВМ я ва ши вн ви ви и ви зв 5 З зм взитантин ТО СНОВ2Ї «сбх 432.63 СОЮЗ 1605 ТОВ сайт метрик МКУ ше ввоБСКА СВ же даповитиі» СНОХОУ всіу 4.-33.б3нерозщеплюваний лівжер, МО3 16016 Ре ши ооо 1605 ТОВ, влажн як вБаФ ОР? тв
Фіг. 44
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP16161740 | 2016-03-22 | ||
| US201662433327P | 2016-12-13 | 2016-12-13 | |
| PCT/EP2017/056556 WO2017162587A1 (en) | 2016-03-22 | 2017-03-20 | Protease-activated t cell bispecific molecules |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA127308C2 true UA127308C2 (uk) | 2023-07-19 |
Family
ID=65529185
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201810280A UA127308C2 (uk) | 2016-03-22 | 2017-03-20 | Активована протеазою біспецифічна молекула, яка зв'язує т-клітини |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US11242390B2 (uk) |
| JP (1) | JP7015244B2 (uk) |
| CL (1) | CL2018002507A1 (uk) |
| DK (1) | DK3433280T3 (uk) |
| ES (1) | ES2947230T3 (uk) |
| FI (1) | FI3433280T3 (uk) |
| HR (1) | HRP20230528T1 (uk) |
| HU (1) | HUE061946T2 (uk) |
| IL (1) | IL260637B2 (uk) |
| LT (1) | LT3433280T (uk) |
| MX (1) | MX2018011542A (uk) |
| PE (1) | PE20231511A1 (uk) |
| PH (1) | PH12018502035A1 (uk) |
| PL (1) | PL3433280T3 (uk) |
| RS (1) | RS64266B1 (uk) |
| RU (1) | RU2018136567A (uk) |
| SI (1) | SI3433280T1 (uk) |
| UA (1) | UA127308C2 (uk) |
| ZA (1) | ZA201804973B (uk) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7175769B2 (ja) * | 2016-06-30 | 2022-11-21 | エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | 改善された養子ｔ細胞療法 |
| CN110114674B (zh) * | 2016-12-13 | 2023-05-09 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 确定肿瘤样品中存在靶抗原的方法 |
| CA3108282A1 (en) | 2018-08-02 | 2020-02-06 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies |
| CN113603783B (zh) * | 2018-12-21 | 2022-07-12 | 浙江时迈药业有限公司 | 蛋白酶可切割的双特异性抗体及其用途 |
| EA202192654A1 (ru) * | 2019-03-29 | 2021-12-30 | Грин Кросс Корпорейшн | Слитый белок, содержащий анти-мезотелин антитело, анти-cd3 антитело или анти-egfr антитело, биспецифическое или триспецифическое антитело, содержащие его, и их применения |
| IL296429A (en) * | 2020-06-19 | 2022-11-01 | Hoffmann La Roche | Protease-activated t-cell bispecific antibodies |
| US20240108746A1 (en) * | 2020-12-16 | 2024-04-04 | Molecular Partners Ag | Novel slow-release prodrugs |
| US11638761B2 (en) | 2021-07-09 | 2023-05-02 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy |
| US11771776B2 (en) | 2021-07-09 | 2023-10-03 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies |
| IL309937A (en) * | 2021-07-09 | 2024-03-01 | Dyne Therapeutics Inc | Muscle targeting complexes and their uses for the treatment of dystrophinopathy |
| WO2023283629A1 (en) * | 2021-07-09 | 2023-01-12 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and formulations thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy |
| CA3226367A1 (en) * | 2021-07-09 | 2023-01-12 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies |
| WO2023025156A1 (en) * | 2021-08-23 | 2023-03-02 | Concept To Medicine Biotech Co., Ltd. | Antibody prodrugs with constant domains |
| US11931421B2 (en) | 2022-04-15 | 2024-03-19 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and formulations for treating myotonic dystrophy |
Family Cites Families (129)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR0184860B1 (ko) | 1988-11-11 | 1999-04-01 | 메디칼 리써어치 카운실 | 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법) |
| DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
| WO1991003493A1 (en) | 1989-08-29 | 1991-03-21 | The University Of Southampton | Bi-or trispecific (fab)3 or (fab)4 conjugates |
| US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
| LU91067I2 (fr) | 1991-06-14 | 2004-04-02 | Genentech Inc | Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines |
| US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
| DE69333807T2 (de) | 1992-02-06 | 2006-02-02 | Chiron Corp., Emeryville | Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür |
| US5798100A (en) | 1994-07-06 | 1998-08-25 | Immunomedics, Inc. | Multi-stage cascade boosting vaccine |
| US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
| US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
| JPH11507535A (ja) | 1995-06-07 | 1999-07-06 | イムクローン システムズ インコーポレイテッド | 腫瘍の成長を抑制する抗体および抗体フラグメント類 |
| US7423125B2 (en) | 1995-08-01 | 2008-09-09 | Vegenics Limited | Antibodies to VEGF-C |
| JP4213224B2 (ja) | 1997-05-02 | 2009-01-21 | ジェネンテック，インコーポレーテッド | ヘテロマルチマー及び共通成分を有する多重特異性抗体の製造方法 |
| ATE283364T1 (de) | 1998-01-23 | 2004-12-15 | Vlaams Interuniv Inst Biotech | Mehrzweck-antikörperderivate |
| US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| WO2002009573A2 (en) | 2000-07-31 | 2002-02-07 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Prognostic classification of endometrial cancer |
| US8501471B2 (en) * | 2000-10-18 | 2013-08-06 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Uses of monoclonal antibody 8H9 |
| EA036531B1 (ru) | 2003-11-05 | 2020-11-19 | Роше Гликарт Аг | Гуманизированное антитело типа ii к cd20 (варианты), фармацевтическая композиция, содержащая эти варианты антитела, и их применение |
| WO2006082515A2 (en) | 2005-02-07 | 2006-08-10 | Glycart Biotechnology Ag | Antigen binding molecules that bind egfr, vectors encoding same, and uses thereof |
| CA2600505C (en) | 2005-03-10 | 2016-05-03 | Morphotek, Inc. | Anti-mesothelin antibodies |
| ES2592271T3 (es) | 2005-03-31 | 2016-11-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Métodos de producción de polipéptidos mediante la regulación de la asociación de los polipéptidos |
| ES2417065T3 (es) | 2005-04-26 | 2013-08-05 | Trion Pharma Gmbh | Combinación de anticuerpos con glucocorticoides para el tratamiento del cáncer |
| CN101228189A (zh) | 2005-05-09 | 2008-07-23 | 格黎卡特生物技术股份公司 | 具有修饰的fc区域和改变的与fc受体的结合的抗原结合分子 |
| CN101370525B (zh) | 2005-08-19 | 2013-09-18 | Abbvie公司 | 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途 |
| ES2616316T3 (es) | 2005-10-11 | 2017-06-12 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Composiciones que comprenden anticuerpos específicos para diferentes especies y usos de los mismos |
| CN103242451B (zh) | 2005-12-16 | 2017-11-21 | Ibc医药公司 | 基于免疫球蛋白的多价生物活性装配体 |
| ES2395969T3 (es) | 2006-03-24 | 2013-02-18 | Merck Patent Gmbh | Dominios de proteínas heterodiméricas genéticamente modificados |
| MX363905B (es) | 2006-06-12 | 2019-04-08 | Aptevo Res & Development Llc | Proteinas de union multivalentes monocatenarias con funcion efectora. |
| JP2009541275A (ja) | 2006-06-22 | 2009-11-26 | ノボ・ノルデイスク・エー／エス | 二重特異性抗体の生産 |
| PT2520590T (pt) | 2007-04-03 | 2018-11-14 | Amgen Res Munich Gmbh | Domínio de ligação específico de espécies cruzadas |
| FI2155783T4 (fi) | 2007-04-03 | 2022-12-15 | Lajien välisesti spesifinen cd3-epsilon-sitoutumisdomeeni | |
| WO2008119566A2 (en) | 2007-04-03 | 2008-10-09 | Micromet Ag | Cross-species-specific bispecific binders |
| US9308257B2 (en) | 2007-11-28 | 2016-04-12 | Medimmune, Llc | Protein formulation |
| US8242247B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-08-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
| US8227577B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-07-24 | Hoffman-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| ES2774337T3 (es) | 2008-01-07 | 2020-07-20 | Amgen Inc | Método para fabricación de moléculas heterodímeras Fc de anticuerpos utilizando efectos de conducción electrostática |
| US20100233079A1 (en) * | 2008-12-04 | 2010-09-16 | Abbott Laboratories | Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof |
| RU2011138951A (ru) * | 2009-02-23 | 2013-03-27 | Сайтомкс Терапьютикс, Инк. | Пропротеины и способы их применения |
| AU2010230563A1 (en) | 2009-04-02 | 2011-09-22 | Roche Glycart Ag | Multispecific antibodies comprising full length antibodies and single chain Fab fragments |
| US20100256340A1 (en) | 2009-04-07 | 2010-10-07 | Ulrich Brinkmann | Trivalent, bispecific antibodies |
| JP2012525149A (ja) | 2009-04-27 | 2012-10-22 | オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | ヘテロ多量体分子を作製するための方法 |
| MX2011011925A (es) | 2009-05-27 | 2011-12-06 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos triespecificos o tetraespecificos. |
| US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
| US8703132B2 (en) | 2009-06-18 | 2014-04-22 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific, tetravalent antigen binding proteins |
| RU2570554C2 (ru) | 2009-08-31 | 2015-12-10 | Роше Гликарт Аг | Гуманизированные моноклональные антитела к сеа с созревшей аффинностью |
| WO2011028952A1 (en) | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Xencor, Inc. | Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens |
| CN105693861A (zh) | 2009-12-29 | 2016-06-22 | 新兴产品开发西雅图有限公司 | 异二聚体结合蛋白及其应用 |
| TW201138821A (en) | 2010-03-26 | 2011-11-16 | Roche Glycart Ag | Bispecific antibodies |
| WO2011143545A1 (en) | 2010-05-14 | 2011-11-17 | Rinat Neuroscience Corporation | Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them |
| AU2011325833C1 (en) | 2010-11-05 | 2017-07-13 | Zymeworks Bc Inc. | Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain |
| CN103429737B (zh) | 2010-11-30 | 2020-07-14 | 中外制药株式会社 | 细胞毒诱导治疗剂 |
| LT3489255T (lt) | 2011-02-10 | 2021-08-25 | Roche Glycart Ag | Mutantiniai interleukino-2 polipeptidai |
| MX354359B (es) | 2011-03-29 | 2018-02-28 | Roche Glycart Ag | Variantes de fragmento cristalizable (fc) de los anticuerpos. |
| EA201892619A1 (ru) | 2011-04-29 | 2019-04-30 | Роше Гликарт Аг | Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2 |
| CN107903325B (zh) | 2011-05-16 | 2021-10-29 | 埃泰美德(香港)有限公司 | 多特异性fab融合蛋白及其使用方法 |
| EP2714733B1 (en) | 2011-05-21 | 2019-01-23 | MacroGenics, Inc. | Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3 |
| UA116192C2 (uk) | 2011-08-23 | 2018-02-26 | Рош Глікарт Аг | Активуюча т-клітини біоспецифічна антигензв'язуюча молекула |
| WO2013026839A1 (en) | 2011-08-23 | 2013-02-28 | Roche Glycart Ag | Bispecific antibodies specific for t-cell activating antigens and a tumor antigen and methods of use |
| LT2748202T (lt) | 2011-08-23 | 2018-09-25 | Roche Glycart Ag | Bispecifinės antigeną surišančios molekulės |
| KR101723273B1 (ko) | 2011-08-23 | 2017-04-04 | 로슈 글리카트 아게 | 2 개의 ｆａｂ 단편을 포함하는 fc-부재 항체 및 이용 방법 |
| US20130078250A1 (en) | 2011-08-23 | 2013-03-28 | Oliver Ast | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
| EP2578230A1 (en) | 2011-10-04 | 2013-04-10 | Trion Pharma Gmbh | Removal of Tumor Cells from Intraoperative Autologous Blood Salvage |
| US10851178B2 (en) | 2011-10-10 | 2020-12-01 | Xencor, Inc. | Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications |
| TWI679212B (zh) | 2011-11-15 | 2019-12-11 | 美商安進股份有限公司 | 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子 |
| US9527927B2 (en) | 2011-12-20 | 2016-12-27 | Medimmune, Llc | Modified polypeptides for bispecific antibody scaffolds |
| KR20170036142A (ko) * | 2012-03-08 | 2017-03-31 | 할로자임, 아이엔씨 | 조건부 활성 항-표피 성장 인자 수용체 항체 및 이의 사용 방법 |
| EA035344B1 (ru) | 2012-04-20 | 2020-05-29 | Мерюс Н.В. | Способ получения двух антител из одной клетки-хозяина |
| WO2014004549A2 (en) | 2012-06-27 | 2014-01-03 | Amgen Inc. | Anti-mesothelin binding proteins |
| US20150203591A1 (en) | 2012-08-02 | 2015-07-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Mutivalent antigen-binding proteins |
| MY175687A (en) | 2012-08-07 | 2020-07-06 | Roche Glycart Ag | Composition comprising two antibodies engineered to have reduced and increased effector function |
| WO2014028560A2 (en) | 2012-08-14 | 2014-02-20 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | T-cell redirecting bispecific antibodies for treatment of disease |
| JOP20200236A1 (ar) | 2012-09-21 | 2017-06-16 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها |
| EP2904016B1 (en) | 2012-10-08 | 2018-11-14 | Roche Glycart AG | Fc-free antibodies comprising two fab-fragments and methods of use |
| UY35148A (es) | 2012-11-21 | 2014-05-30 | Amgen Inc | Immunoglobulinas heterodiméricas |
| EP2930240B1 (en) | 2012-12-07 | 2018-08-01 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Anti-folr1 antibody |
| US9522196B2 (en) | 2012-12-25 | 2016-12-20 | Kagoshima University | Antibody recognizing folate receptors α and β |
| US10968276B2 (en) | 2013-03-12 | 2021-04-06 | Xencor, Inc. | Optimized anti-CD3 variable regions |
| US9605084B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-03-28 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
| US10487155B2 (en) | 2013-01-14 | 2019-11-26 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
| US9701759B2 (en) | 2013-01-14 | 2017-07-11 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
| CA3211863A1 (en) | 2013-01-14 | 2014-07-17 | Xencor, Inc. | Novel heterodimeric proteins |
| US10131710B2 (en) | 2013-01-14 | 2018-11-20 | Xencor, Inc. | Optimized antibody variable regions |
| JP2016507523A (ja) | 2013-02-05 | 2016-03-10 | エンクマフ アーゲー | ＣＤ３εおよびＢＣＭＡに対する二重特異的抗体 |
| JO3529B1 (ar) | 2013-02-08 | 2020-07-05 | Amgen Res Munich Gmbh | مضاد التصاق خلايا الدم البيض من أجل التخفيف من الاثار السلبية الممكنة الناتجة عن مجالات ارتباط cd3- المحدد |
| EP2961771B1 (en) | 2013-02-26 | 2020-01-01 | Roche Glycart AG | Bispecific t cell activating antigen binding molecules specific to cd3 and cea |
| JP2016512421A (ja) | 2013-02-26 | 2016-04-28 | ロシュ グリクアート アーゲー | 二重特異性ｔ細胞活性化抗原結合分子 |
| WO2014131694A1 (en) | 2013-02-26 | 2014-09-04 | Roche Glycart Ag | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
| US10351626B2 (en) | 2013-03-14 | 2019-07-16 | The Scripps Research Institute | Targeting agent antibody conjugates and uses thereof |
| US20140302037A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-10-09 | Amgen Inc. | BISPECIFIC-Fc MOLECULES |
| US10858417B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-12-08 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
| US20140308285A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-10-16 | Amgen Inc. | Heterodimeric bispecific antibodies |
| EP2968535A2 (en) | 2013-03-15 | 2016-01-20 | Glaxosmithkline Intellectual Property (No. 2) Limited | Low concentration antibody formulations |
| AU2014236769B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-09-27 | Amgen Inc. | Heterodimeric bispecific antibodies |
| UA118028C2 (uk) | 2013-04-03 | 2018-11-12 | Рош Глікарт Аг | Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування |
| EP2789630A1 (en) | 2013-04-09 | 2014-10-15 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3e and ROR1 |
| JP2016520600A (ja) | 2013-05-28 | 2016-07-14 | ヌマブ アクチェンゲゼルシャフト | 新規抗体 |
| BR122023002590B1 (pt) * | 2013-07-05 | 2023-12-05 | Genmab A/S | Anticorpo humanizado ou quimérico de ligação ao cd3 humano, anticorpo biespecífico, microrganismo, composição, composição farmacêutica, uso dos mesmos, método para produzir um anticorpo, composição de diagnóstico, método in vitro para detectar a presença de antígeno cd3, ou uma célula expressando cd3, em uma amostra, kit para detectar a presença de antígeno cd3, ou uma célula que expressa cd3, em uma amostra e anticorpo anti-idiotípico |
| RS63152B1 (sr) * | 2013-07-25 | 2022-05-31 | Cytomx Therapeutics Inc | Multispecifična antitela, multispecifična antitela koja mogu da se aktiviraju i postupci za njihovu upotrebu |
| CN105165036B (zh) | 2013-08-09 | 2018-12-28 | 华为技术有限公司 | Csi测量资源的配置方法、csi上报方法、基站及用户设备 |
| EP3733710A1 (en) | 2013-09-25 | 2020-11-04 | Amgen, Inc | Hetrodimeric v-c-fc-v-c antibody |
| PE20210107A1 (es) | 2013-12-17 | 2021-01-19 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-cd3 y metodos de uso |
| AU2014364601A1 (en) | 2013-12-17 | 2016-07-07 | Genentech, Inc. | Methods of treating HER2-positive cancers using PD-1 axis binding antagonists and anti-HER2 antibodies |
| UA117289C2 (uk) | 2014-04-02 | 2018-07-10 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Мультиспецифічне антитіло |
| BR112017001579A2 (pt) | 2014-07-25 | 2017-11-21 | Cytomx Therapeutics Inc | anticorpos anti-cd3, anticorpos anti-cd3 ativáveis, anticorpos anti-cd3 multiespecíficos, anticorpos anti-cd3 ativáveis multiespecíficos e métodos de uso dos mesmos |
| NZ766556A (en) | 2014-08-04 | 2024-02-23 | Hoffmann La Roche | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
| EP2982692A1 (en) * | 2014-08-04 | 2016-02-10 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA |
| WO2016019969A1 (en) | 2014-08-08 | 2016-02-11 | Ludwig-Maximilians-Universität München | Subcutaneously administered bispecific antibodies for use in the treatment of cancer |
| PT3186283T (pt) | 2014-08-29 | 2020-02-21 | Hoffmann La Roche | Terapêutica combinada de imunocitocinas de variante de il-2 dirigidas ao tumor e anticorpos contra pd-l1 humano |
| WO2016036678A1 (en) | 2014-09-02 | 2016-03-10 | Medimmune, Llc | Formulations of bispecific antibodies |
| MA40764A (fr) | 2014-09-26 | 2017-08-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité |
| ES2850325T3 (es) | 2014-10-09 | 2021-08-27 | Engmab Sarl | Anticuerpos biespecíficos contra CD3epsilon y ROR1 |
| CA2963696A1 (en) | 2014-10-09 | 2016-04-14 | Engmab Ag | Bispecific antibodies against cd3epsilon and ror1 for use in the treatment of ovarian cancer |
| US20180125988A1 (en) | 2014-11-11 | 2018-05-10 | Amunix Operating Inc. | Targeted xten conjugate compositions and methods of making same |
| EP3023437A1 (en) | 2014-11-20 | 2016-05-25 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA |
| CN107074955B (zh) | 2014-11-20 | 2021-06-22 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 针对FolR1和CD3的T细胞活化性双特异性抗原结合分子 |
| CA2968162A1 (en) | 2014-11-20 | 2016-05-26 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Common light chains and methods of use |
| EP3029068A1 (en) | 2014-12-03 | 2016-06-08 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA for use in the treatment of diseases |
| RU2725799C2 (ru) | 2015-03-17 | 2020-07-06 | Тилт Байотерапьютикс Ой | Онколитические аденовирусы, кодирующие биспецифические антитела, а также способы и применения, связанные с ними |
| JP2018520642A (ja) | 2015-05-01 | 2018-08-02 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | マスク抗ｃｄ３抗体及びその使用方法 |
| PE20180330A1 (es) | 2015-06-16 | 2018-02-13 | Genentech Inc | Anticuerpos madurados por afinidad y humanizados para fcrh5 y metodos para su uso |
| EP3670535A1 (en) | 2015-08-03 | 2020-06-24 | EngMab Sàrl | Monoclonal antibodies against bcma |
| AR106199A1 (es) | 2015-10-02 | 2017-12-20 | Hoffmann La Roche | Moléculas de unión a antígeno biespecíficas activadoras de células t |
| WO2017055318A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Cd33xcd3 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
| CR20180162A (es) | 2015-10-02 | 2018-05-25 | Hoffmann La Roche | Moléculas biespecíficas de unión a antígeno activadoras de células t |
| EP3356407B1 (en) | 2015-10-02 | 2021-11-03 | F. Hoffmann-La Roche AG | Bispecific anti-cd19xcd3 t cell activating antigen binding molecules |
| CN108026179A (zh) | 2015-10-02 | 2018-05-11 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 结合间皮素和cd3的双特异性t细胞活化性抗原结合分子 |
| AU2016368469B2 (en) | 2015-12-09 | 2023-11-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Type II anti-CD20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies |
-
2017
- 2017-03-20 JP JP2018549865A patent/JP7015244B2/ja active Active
- 2017-03-20 ES ES17711223T patent/ES2947230T3/es active Active
- 2017-03-20 RU RU2018136567A patent/RU2018136567A/ru unknown
- 2017-03-20 RS RS20230438A patent/RS64266B1/sr unknown
- 2017-03-20 LT LTEPPCT/EP2017/056556T patent/LT3433280T/lt unknown
- 2017-03-20 MX MX2018011542A patent/MX2018011542A/es unknown
- 2017-03-20 PE PE2023001613A patent/PE20231511A1/es unknown
- 2017-03-20 HR HRP20230528TT patent/HRP20230528T1/hr unknown
- 2017-03-20 DK DK17711223.2T patent/DK3433280T3/da active
- 2017-03-20 FI FIEP17711223.2T patent/FI3433280T3/fi active
- 2017-03-20 HU HUE17711223A patent/HUE061946T2/hu unknown
- 2017-03-20 SI SI201731359T patent/SI3433280T1/sl unknown
- 2017-03-20 UA UAA201810280A patent/UA127308C2/uk unknown
- 2017-03-20 PL PL17711223.2T patent/PL3433280T3/pl unknown
-
2018
- 2018-07-17 IL IL260637A patent/IL260637B2/en unknown
- 2018-07-24 ZA ZA2018/04973A patent/ZA201804973B/en unknown
- 2018-09-03 CL CL2018002507A patent/CL2018002507A1/es unknown
- 2018-09-21 US US16/138,417 patent/US11242390B2/en active Active
- 2018-09-21 PH PH12018502035A patent/PH12018502035A1/en unknown
-
2021
- 2021-12-02 US US17/541,021 patent/US20220275087A1/en not_active Abandoned
-
2022
- 2022-06-17 US US17/843,565 patent/US20230119537A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2019514850A (ja) | 2019-06-06 |
| FI3433280T3 (fi) | 2023-06-06 |
| CL2018002507A1 (es) | 2018-12-21 |
| US20230119537A1 (en) | 2023-04-20 |
| US20190119383A1 (en) | 2019-04-25 |
| HUE061946T2 (hu) | 2023-09-28 |
| LT3433280T (lt) | 2023-07-10 |
| SI3433280T1 (sl) | 2023-07-31 |
| HRP20230528T1 (hr) | 2023-08-04 |
| RU2018136567A (ru) | 2020-04-22 |
| PE20231511A1 (es) | 2023-09-26 |
| IL260637A (uk) | 2018-09-20 |
| JP7015244B2 (ja) | 2022-02-02 |
| IL260637B1 (en) | 2023-04-01 |
| ES2947230T3 (es) | 2023-08-03 |
| US20220275087A1 (en) | 2022-09-01 |
| PH12018502035A1 (en) | 2019-07-08 |
| ZA201804973B (en) | 2023-02-22 |
| RU2018136567A3 (uk) | 2021-02-19 |
| DK3433280T3 (da) | 2023-06-19 |
| IL260637B2 (en) | 2023-08-01 |
| PL3433280T3 (pl) | 2023-07-31 |
| MX2018011542A (es) | 2019-02-07 |
| RS64266B1 (sr) | 2023-07-31 |
| US11242390B2 (en) | 2022-02-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA127308C2 (uk) | Активована протеазою біспецифічна молекула, яка зв'язує т-клітини | |
| UA124734C2 (uk) | Антитіло проти с5 і його застосування | |
| US20190225702A1 (en) | Innate immune cell trispecific binding proteins and methods of use | |
| US9708412B2 (en) | Trispecific binding proteins and methods of use | |
| UA122676C2 (uk) | Біспецифічна антигензв'язувальна молекула проти folr1 і cd3, що активує t-клітини | |
| CN109069638A (zh) | 用于癌症治疗的三特异性抑制剂 | |
| UA125577C2 (uk) | Антигензв'язуюча молекула, які містить тримерний ліганд сімейства tnf | |
| UA124254C2 (uk) | Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка активує t-клітини | |
| JP2019194180A (ja) | Ｍｉｃａおよびｍｉｃｂタンパク質に対する抗体 | |
| UA125962C2 (uk) | Біспецифічна антигензв'язуюча молекула до ox40 та фібробласт-активуючого білка (fap) | |
| UA125700C2 (uk) | Імунокон'югати антитіла до pd-1 з мутантом il-2 | |
| UA127985C2 (uk) | Сконструйований поліпептид, який зв'язує трансфериновий рецептор | |
| UA126280C2 (uk) | Біспецифічні конструкції антитіл, які залучають т-клітини | |
| UA118749C2 (uk) | Конструкція антитіла до cdh19 і cd3 | |
| UA126441C2 (uk) | Химерні антигенні рецептори, націлені на bcma, та способи їх застосування | |
| UA125611C2 (uk) | Біспецифічні молекули, що мають імунореактивність відносно pd-1 і ctla-4, і способи їх застосування | |
| UA118028C2 (uk) | Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування | |
| UA126275C2 (uk) | Конструкція антитіла для cd70 та cd3 | |
| UA127450C2 (uk) | Рекомбінантний поліпептид, що зв'язується з cd123 | |
| UA119320C2 (uk) | Активуюча т-клітини біспецифічна антигензв'язувальна молекула | |
| UA118950C2 (uk) | Поліпептид, який зв'язує специфічний мембранний антиген простати та комплекс т-клітинного рецептора | |
| UA119673C2 (uk) | Біспецифічне fc-діатіло, здатне імуноспецифічно зв'язуватися з епітопом pd-1 і з епітопом lag-3, та його застосування | |
| UA119570C2 (uk) | Анти-ctla4 моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, фармацевтична композиція і їх застосування | |
| TW202123926A (zh) | 使用her3抗原結合分子的癌症之治療及預防 | |
| SA519402246B1 (ar) | طريقة لعلاج أو تحسين اضطرابات أيضية باستخدام مساعدات مستقبل ببتيد شبيه بالجلوكاجون-1 مقترنة بمناهضات لمستقبل ببتيد مثبط معوي |