UA122676C2 - Біспецифічна антигензв'язувальна молекула проти folr1 і cd3, що активує t-клітини - Google Patents

Біспецифічна антигензв'язувальна молекула проти folr1 і cd3, що активує t-клітини Download PDF

Info

Publication number
UA122676C2
UA122676C2 UAA201706105A UAA201706105A UA122676C2 UA 122676 C2 UA122676 C2 UA 122676C2 UA A201706105 A UAA201706105 A UA A201706105A UA A201706105 A UAA201706105 A UA A201706105A UA 122676 C2 UA122676 C2 UA 122676C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antigen
binding
cell
concentration
tov
Prior art date
Application number
UAA201706105A
Other languages
English (en)
Inventor
Маріна Бакак
Марина Бакак
Петер Брюнкер
Анне Фраймозер-Грундшобер
Ральф Хоссе
Ральф Хоссэ
Крістіан Кляйн
Кристиан КЛЯЙН
Еккехард Мьосснер
Эккехард Мёсснер
Пабло Умана
Тіна Вайнцірль
Тина Вайнцирль
Original Assignee
Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг filed Critical Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Publication of UA122676C2 publication Critical patent/UA122676C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/66—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a swap of domains, e.g. CH3-CH2, VH-CL or VL-CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/74—Inducing cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Abstract

Винахід стосується біспецифічної антигензв'язувальної молекули для активації Т-клітин і перенаправлення їх до специфічних клітин-мішеней. Крім того, у заявці описані полінуклеотиди, що кодують такі біспецифічні антигензв'язувальні молекули, і вектори й клітини-хазяїни, що містять такі полінуклеотиди. У заявці описані також способи одержання біспецифічних антигензв'язувальних молекул, запропонованих у винаході, і способи застосування вказаних біспецифічних антигензв'язувальних молекул для лікування захворювання.

Description

Перелік послідовностей
Дана заявка містить перелік послідовностей, який представлений в електронному вигляді у форматі АЗСІЇ ії тим самим повністю включений як посилання. Вказана копія у форматі АЗСІЇ, створена 9 листопада 2015 р., позначена як 32186 51 (хі і має розмір 445570 байтів.
Галузь техніки, до якої належить винахід
Даний винахід стосується в цілому біспецифічних антигензв'язувальних молекул, призначених для активації Т-клітин, насамперед біспецифічних антитіл, мішенню яких є СОЗ і фолатний рецептор 1 (БОїІК1). Крім того, даний винахід стосується полінуклеотидів, які кодують вказані біспецифічні антигензв'язувальні молекули, і векторів і клітин-хазяїнів, що містять вказані полінуклеотиди. Винахід стосується також способів одержання біспецифічних антигензв'язувальних молекул, запропонованих у винаході, і способів застосування таких біспецифічних антигензв'язувальних молекул для лікування захворювання.
Передумови створення винаходу
У різних клінічних ситуаціях часто потрібна вибіркова деструкція індивідуальної клітини або певного типу клітин. Наприклад, основною задачею при терапії раку є руйнування саме пухлинних клітин зі збереженням при цьому в інтактному і неушкодженому стані здорових клітин і тканин.
Перспективним підходом для досягнення цієї мети є індукція імунної відповіді проти пухлини, при якій імунні ефекторні клітини, такі як природні клітини-кілери (МК) або цитотоксичні
Т-лімфоцити (СТІ), атакують і руйнують пухлинні клітини. СТІ представляють собою найбільш ефективні ефекторні клітини імунної системи, однак вони не можуть активуватися ефекторним механізмом, опосередковуваним Ес-доменом канонічних терапевтичних антитіл.
У цьому плані в останні роки зріс інтерес до біспецифічних антитіл, сконструйованих таким чином, щоб вони зв'язувалися за допомогою одного "плеча" з поверхневим антигеном на клітинах-мішенях, а за допомогою другого "плеча" з активуючим інваріантним компонентом комплексу Т-клітинного рецептора (ТОК). Одночасне зв'язування такого антитіла з обома його мішенями повинно приводити до тимчасової взаємодії між клітиною-мішенню й Т-клітиною, викликаючи активацію будь-якої цитотоксичної Т-клітини й наступний лізис клітини-мішені.
Таким чином, імунна відповідь переорієнтується на клітини-мішені й не залежить від презентації пептидного антигену клітиною-мішенню або специфічності Т-клітини, що має місце при нормальній обмеженій ГКГС активації СТІ. У цьому контексті вирішальне значення має те, що
СТІ. активуються тільки тоді, коли клітина-мішень презентує їм біспецифічне антитіло, тобто має місце імітація імунологічного синапсу. Найбільш переважними є біспецифічні антитіла, для яких не потрібне попереднє кондиціювання або костимуляція лімфоцитів для того, щоб викликати ефективний лізис клітин-мішеней.
РОГ КІ експресується на епітеліальних пухлинних клітинах різного походження, наприклад, клітинах раку яєчника, раку легкі, раку молочної залози, раку нирки, колоректального раку, раку ендометрію. Описано декілька підходів для націлювання на БОЇ К1 терапевтичних антитіл, таких як фарлетузумаб, кон'югатів антитіло-лікарський засіб, або для візуалізації пухлин при адоптивній Т-клітинній терапії (Капааїай і ін., У Тгапе5!І Мей.; 10, З серпня 2012 р., с. 157. адої: 10.1186/1479-5876-10-157; мап бат і ін., Маї Меад.; 17(10), 18 вересня 2011 р., стор. 1315-1319. дої: 10.1038/нм.2472; Сійоп та ін., Нит Массіп.; 7(2), лютий 2011 р., Ериб 1 лютого 2011 р.;
КеїІетеп і ін., пі У Сапсег.; 119(2), 15 липня 2006 р., стор. 243-150; Машіпдат і ін., У Мисі Меа.; 53(7), липень 2012 р. Тепу і ін., 9(8), серпень 2012 р., стор. 901-908. дао: 10.1517/17425247.2012.694863, Ериб 5 липня 2012 р. Було почато декілька спроб спрямованого впливу на позитивні за фолатним рецептором пухлини за допомогою конструкцій, мішенню яких є фолатний рецептор і СОЗ (Кгап? і ін., Ргос Майї! Асай 5сі 0 5 А.; 92(20), вересень 1995 р., стор. 9057-9061; Коу і ін., Адм Огид Оесїїм Кем.; 56(8), 29 квітня 2004 р., стор. 1219-1231; Нийнпа Сиі і ін.
Віо! Спет.; 287(34), 17 серпня 2012 р., стор. 28206-28214; І атегз і ін., Іпі. У. Сапсег. 60(4), 1995, с. 450; Тпотрзоп і ін., МАБ5.; 1(4), липень-серпень 2009 р., стор. 348-356, Ерир 19 липня 2009 р.; Ме27аплапса і ін., Іпі. У. Сапсег, 41, 1988, стор. 609-615. Однак підходи, які здійснювалися дотепер, мають багато недоліків. Молекули, що застосовувалися дотепер, не можна легко й надійно одержувати, оскільки це вимагає здійснення перехресного зшивання хімічним шляхом.
Крім того, гібридні молекули не можна одержувати в промисловому масштабі у вигляді людських білків, і для цієї мети необхідно використовувати щурячі, мишині білки й білки з інших видів, які мають значну імуногенність при введенні людині й, таким чином, мають обмежену терапевтичну цінність. Крім того, багато з відомих молекул зберігають здатність зв'язуватися з
Есав.
Таким чином, зберігається необхідність у створенні нових біспецифічних антитіл, що мають (610) поліпшені характеристики для спрямованої опосередковуваної Т-клітинами імунотерапії. У даному винаході запропоновані біспецифічні антигензв'язувальні молекули, призначені для спрямованої активації Т-клітин, насамперед, біспецифічні антигензв'язувальні молекули, придатні для застосування як ефективні і безпечні терапевтичні засоби, які можна легко одержувати й дозувати.
Короткий виклад суті винаходу
Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, яка містить (І) перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, і який містить принаймні одну амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки (СОМ) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 37, 5ЕО ІЮ МО: 38 і 5ЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІО МО: 33, ЗЕО ІЮ МО: 34 і (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (БоОїК1).
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить перший антигензв'язувальний фрагмент, який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 36 і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 31. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, додатково містить (ІІ) третій антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з РоІК1. В одному з варіантів здійснення винаходу другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися з БоОЇК!, містять ідентичні послідовності гіперваріабельної ділянки (СОК) важкого ланцюга й СОК легкого ланцюга. В одному з варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язувальний фрагмент ідентичний до другого антигензв'язувального фрагменту.
В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, вказаної в представлених вище варіантах здійснення винаходу, принаймні один із другого й третього антигензв'язувальних фрагментів представляє собою молекулу Бар. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, вказана в представлених вище варіантах здійснення винаходу, додатково містить Ес- домен, що складається з першої й другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації. У деяких варіантах здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент і другий антигензв'язувальний фрагмент кожний з'єднаний на С-кінці важкого ланцюга Бар з М- кінцем першої або другої субодиниці Ес-домену. У деяких варіантах здійснення винаходу третій антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Рар з М-кінцем важкого ланцюга Раб першого антигензв'язувального фрагмента, необов'язково через пептидний лінкер.
В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, вказаної в представлених вище варіантах здійснення винаходу, антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕОїІК/л), містить принаймні одну амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 16, ЗЕО ІО МО: 17 і 5ЕО ІО МО: 18, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи БЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІО МО: 33, 5ЕО І МО: 34. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РОЇК), містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 15, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІО МО: 31. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РоОЇК1!), містить принаймні одну амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ
МО: 8, ЗЕО ІЮО МО: 56 і 5ЕО ІО МО: 57, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи
ЗЕО ІО МО: 59, 5БО І МО: 60, 5ЕО І МО: 65. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РБоЇК1), містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 55, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 64.
В іншому варіанті здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (БоЇК1!), містить принаймні одну амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки (СОМ) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІЮО МО: 9 і 5ЕО ІЮО МО: 50, і принаймні одну СОК бО легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮО МО: 52, ЗЕО ІО МО: 53, 5ЕО ІЮ МО: 54. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з ЕоОЇК1, містить (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки 1 важкого ланцюга (СОК-НІ) 5ЕО ІО МО: 8; (б) амінокислотну послідовність СОК-Н2 5ЕО І МО: 9; (в) амінокислотну послідовність СОК-НЗ 5ЕО ІЮ МО: 50; (г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки 1 (СОК-І1) легкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 52; (д) амінокислотну послідовність СОК-І2 ЗЕО ІО МО: 53 і (е) амінокислотну послідовність СОБ-І З БЕ ІО МО: 54. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з БоїК!, містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 49, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 51.
В іншому варіанті здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (БоЇК1!), містить принаймні одну амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки (СОМ) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 16, 5ЕО ІО МО: 275 і 5ЕО ІО МО: 315, і принаймні одну
СОК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮО МО: 32, ЗЕО ІЮ МО: 33, 5ЕО ІЮ МО: 34. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з БОЇК1, містить (а) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки 1 важкого ланцюга (СОБК-НІ) ЗЕО ІЮ МО: 16; (б) амінокислотну послідовність СОК-Н2 5ЕО ІЮ МО: 275; (в) амінокислотну послідовність СОК-НЗ 5ЕО ІО МО: 315; (г) амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки 1 легкого ланцюга (СОК-11) 5ЕО ІО МО: 32; (д) амінокислотну послідовність СОК-І2 ЗЕО ІО МО: 33 і (е) амінокислотну послідовність СОБ-І З БЕ ІО МО: 34. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з ЕБоЇК1!, містить домен варіабельного важкого ланцюга (МН), що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО: 274, і домен варіабельного легкого ланцюга (М), що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 31.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, вказана в представлених вище варіантах здійснення винаходу, зв'язується з людським РоїЇК1. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, вказана в представлених вище варіантах здійснення винаходу, зв'язується з людським БоЇК1! і з БоЇїК! мавп циномолгусє. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, вказана в представлених вище варіантах здійснення винаходу, зв'язується з людським ЕоОїЇК1, Роїк! мавп циномолгус і мишиним ЕоЇїК!1. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, вказана в представлених вище варіантах здійснення винаходу, зв'язується з людським РОЇК1, РоЇК1 мавп циномолгус, але не зв'язується з мишиним ЕоїЇК1.
В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, вказаної в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу, перший антигензв'язувальний фрагмент представляє собою кросовер-молекулу Раб, у якій обміняні або варіабельні, або константні ділянки легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Бар. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, вказана в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу, містить не більше одного антигензв'язувального фрагмента, що має здатність специфічно зв'язуватися з
СО3. В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, перший і другий антигензв'язувальні фрагменти й Ес-домен представляють собою частину молекули імуноглобуліну. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен представляє собою Ес-домен імуноглобуліну ІдСі-класу, конкретно ІдсСі- або ІдбС4-підкласу. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен представляє собою людський Ес-домен.
В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, вказаної в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу, Ес-домен містить модифікацію, яка сприяє асоціації першої й другої субодиниці Ес-домену. В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотний залишок в СНЗ-домені першої субодиниці Ес-домену замінений на амінокислотний залишок, що має більший об'єм бокового ланцюга, що створює опуклість на СНЗ-домені першої субодиниці, яка може поміщатися в порожнину в СНЗ-домені другої субодиниці, а амінокислотний залишок в СНЗ-домені другої субодиниці Ес-домену замінений на амінокислотний залишок, що має менший об'єм бокового ланцюга, що створює порожнину в СНЗ-домені другої субодиниці, в яку може поміщатися опуклість на СНЗ-домені першої субодиниці. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен містить принаймні одну амінокислотну заміну, яка знижує зв'язування з Ес-рецептором та/або ефекторну функцію в (610) порівнянні з нативним Ес-доменом Ідсбі. В одному з варіантів здійснення винаходу кожна субодиниця Ес-домену містить три амінокислотні заміни, які знижують зв'язування з активуючим
Ес-рецептором та/або ефекторну функцію, де вказані амінокислотні заміни представляють собою І 234А, І 235А і РЗ329С (нумерація за Кеботом). В одному з варіантів здійснення винаходу
Ес-рецептор представляє собою Есу-рецептор. В одному з варіантів здійснення винаходу ефекторна функція представляє собою антитіло-зумовлену клітиннозалежну цитотоксичність (АРСО).
В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, вказаної в будь-якому із представлених вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує проліферацію людської СОЗ- позитивної Т-клітини іп мйго. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний людською мононуклеарною клітиною периферичної крові цитоліз експресуючої БОоЇїК! людської пухлинної клітини іп міго. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз експресуючої
ЕОЇК1 людської пухлинної клітини іп міго. В одному з варіантів здійснення винаходу Т-клітина представляє собою СО8-позитивну Т-клітину. В одному з варіантів здійснення винаходу експресуюча БоЇК1 людська пухлинна клітина представляє собою клітину лінії Не а, ЗКОМ-3,
НТ-29 або НеСЕріС. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз експресуючої БоЇК1 людської пухлинної клітини іп міго, що характеризується величиною
ЕСвхо, що становить від приблизно 36 пМ до приблизно 39573 пМ, через 24 год. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз пухлинної клітини, яка експресує ЕОЇК1, іп міго, що характеризується величиною ЕСво, що становить приблизно 36 пМ, через 24 год. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз пухлинної клітини, яка експресує РОЇК, іп міго, що характеризується величиною ЕСзо, що становить приблизно 178,4
ПМ, через 24 год. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз пухлинної клітини, яка експресує ЕБОЇК1, іп міго, що характеризується величиною ЕСво, що становить приблизно 134,5 пМ або більше, через 48 год.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантів здійснення винаходу, індукує підвищувальну регуляцію експресії на поверхні клітини принаймні одного з сСО025 і СО69 на Т-клітині за даними вимірювань методом проточної цитометрії. В одному з варіантів здійснення винаходу Т-клітина представляє собою СО4-позитивну Т-клітину або СО8- позитивну Т-клітину. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу, зв'язується з людським ЕБоЇК1! з уявною величиною Ко, що становить від приблизно 5,36 пМ до приблизно 4 нМ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з ЕБОоїЇК! людини й мавп циномолгус із уявною величиною Ко, що становить приблизно 4 нМ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з мишиним ЕоЇК! з уявною величиною Ко, що становить приблизно 1,5 нМ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з людським РОЇК! з величиною
Ко, що характеризує одновалентне зв'язування, яка становить приблизно 1000 нМ.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу, має специфічність у відношенні Роїк! і не зв'язується з БоЇК2 або ЕоІКЗ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу, характеризується афінністю (одновалентне зв'язування), що становить їмкМ або більш. В одному з варіантів здійснення винаходу афінність до людського РОЇК! становить приблизно 1,4мкМ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантів здійснення винаходу, характеризується авідністю (двовалентне зв'язування), що становить приблизно 1- 100 нм або менше. В одному з варіантів здійснення винаходу авідність становить приблизно 10
НМ або менше. В одному з варіантів здійснення винаходу авідність становить 10 нМ. (610) В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу, зв'язується з БОЇК!, що експресується на людській пухлинній клітині. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу, зв'язується з конформаційним епітопом на людському РоЇК1. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу, не зв'язується з людським фолатним рецептором 2 (БоїК2) або людським фолатним рецептором З (БоЇК3). В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, запропонованої в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу, антигензв'язувальний фрагмент зв'язується з поліпептидом ЕОЇК1, що містять амінокислоти з 25 по 234 людського
ЕоІВт (ЗЕО І МО: 227). В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, запропонованої в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу фрагмент, що зв'язує антиген ЕоЇК1, зв'язується з поліпептидом РОЇК1!, що містять амінокислотні послідовності 560 ІЮ МО: 227, 230 і 231, і при цьому зв'язувальний антиген ЕоїК1 фрагмент не зв'язується з поліпептидом ЕоїЇК, що містить амінокислотні послідовності БЕО ІЮ
МО: 228 і 229.
Іншим об'єктом винаходу є біспецифічне антитіло, що містить а) перший антигензв'язувальний сайт, який конкурує за зв'язування з людським ЕоЇК! з референс- антитілом, що містить варіабельний домен важкого ланцюга (УН), який має 5ЕО ІО МО: 49, Її варіабельний домен легкого ланцюга, який має ЗЕО ІЮ МО: 51; і б) другий антигензв'язувальний сайт, який конкурує за зв'язування з людським СОЗ з референс-антитілом, що містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), який має 5ЕО ІО МО: 36, і варіабельний домен легкого ланцюга, який має 5ЕО ІО МО: 31, де конкуренцію за зв'язування оцінюють методом поверхневого плазмонного резонансу.
Іншим об'єктом винаходу є біспецифічне антитіло, що містить а) перший антигензв'язувальний сайт, який конкурує за зв'язування з людським ЕоЇїК! з референс- антитілом, що містить варіабельний домен важкого ланцюга (УН), який має ЗЕО ІО МО: 274, і варіабельний домен легкого ланцюга, який має ЗЕО ІО МО: 31; і б) другий антигензв'язувальний сайт, який конкурує за зв'язування з людським СОЗ з референс-антитілом, що містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), який має 5ЕО ІО МО: 36, і варіабельний домен легкого ланцюга, який має 5ЕО ІО МО: 31, де конкуренцію за зв'язування оцінюють методом поверхневого плазмонного резонансу.
Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, яка містить перший антигензв'язувальний фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, і другий антигензв'язувальний фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕоїІК), де біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з тим же самим епітопом на людському БоЇК1!, що й перше референс-антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), який має 5ЕО ІЮ
МО: 49, і варіабельний домен легкого ланцюга, який має 5ЕО ІЮ МО: 51; й де біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з тим же самим епітопом на людському СОЗ, що й друге референс-антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга (УН), який має 5ЕО ІО МО: 36, і варіабельний домен легкого ланцюга, який має ЗЕО ІЮ
МО: 31.
Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, яка містить перший антигензв'язувальний фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, і другий антигензв'язувальний фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕоїІК), де біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з тим же самим епітопом на людському БоЇК1!, що й перше референс-антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), який має ЗЕО І
МО: 274, і варіабельний домен легкого ланцюга, який має 5ЕО ІЮО МО: 31 й де біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з тим же самим епітопом на людському СОЗ, що й друге референс-антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга (УН), який має 5ЕО ІО МО: 36, і варіабельний домен легкого ланцюга, який має ЗЕО ІЮ
МО: 31.
Інший об'єкт винаходу стосується антитіла або його антигензв'язувального фрагменту, яке/який конкурує за зв'язування з людським РЕоїК!1 з антитілом, яке містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), що має 5ЕО ІО МО: 274, і варіабельний домен легкого ланцюга, що має
ЗБЕО ІЮО МО: 31, де конкуренцію за зв'язування оцінюють методом поверхневого плазмонного (610) резонансу.
Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, де антигензв'язувальна молекула містить перший, другий, третій, четвертий й п'ятий поліпептидні ланцюги, які утворюють перший, другий і третій антигензв'язувальний фрагменти, де перший антигензв'язувальний фрагмент має здатність зв'язуватися з СОЗ, а другий і третій антигензв'язувальний фрагмент кожний має здатність зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЄОІК1), де а) перший й другий поліпептидні ланцюги містять у напрямку від аміно (М)-кінця до карбоксильного (С)-кінця МІ 01 ії СІ 01; б) третій поліпептидний ланцюг містить у напрямку від М- кінця до С-кінця МІ02 ії СНІ10О2; в) четвертий поліпептидний ланцюг містить у напрямку від М- кінця до С-кінця МНОТ, СНІО1, СН2О1 і СНЗОТ; г) п'ятий поліпептидний ланцюг містить МНО1,
СНІ, МнНО2, СГ02, СНг202 і СНЗО2; де М/01 представляє собою варіабельний домен першого легкого ланцюга, МО02 представляє собою варіабельний домен другого легкого ланцюга, СГО1 представляє собою константний домен першого легкого ланцюга, СІ02 представляє собою константний домен другого легкого ланцюга, МНОЇ представляє собою варіабельний домен першого важкого ланцюга, МНО2 представляє собою варіабельний домен другого важкого ланцюга, СНІОЇ представляє собою константний домен 1 першого важкого ланцюга, СНІО2 представляє собою константний домен 1 другого важкого ланцюга, СН2О1 представляє собою константний домен 2 першого важкого ланцюга, СН2О2 представляє собою константний домен 2 другого важкого ланцюга, СНЗО1 представляє собою константний домен З першого важкого ланцюга, і СНЗЮО2 представляє собою константний домен З другого важкого ланцюга.
В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, (І) третій поліпептидний ланцюг і МНО2 ії СГО02 п'ятого поліпептидного ланцюга утворюють перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність зв'язуватися з СОЮЗ; (І) перший поліпептидний ланцюг ії МНО1 ї СНІО1 четвертого поліпептидного ланцюга утворюють другий зв'язувальний фрагмент, що має здатність зв'язуватися з РОЇК; ї (І) другий поліпептидний ланцюг і МНО1 ї СНІ10О1 п'ятого поліпептидного ланцюга утворюють третій антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність зв'язуватися з БОІК1. В одному з варіантів здійснення винаходу, сн2г2О1, СнНзЗО1, СНгО2 і СНЗО2 утворюють Ес-домен імуноглобуліну ІдсС-класу. В одному з варіантів здійснення винаходу, Ес-домен представляє собою людський Ес-домен. В одному з варіантів здійснення винаходу Рс-домен містить модифікацію, яка сприяє асоціації першої й другої субодиниці Ес-домену. В одному з варіантів здійснення винаходу СНЗО2 містить амінокислотний залишок, що має боковий ланцюг більшого об'єму, який може поміщатися в порожнину в СНЗО1. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен містить принаймні одну амінокислотну заміну, яка знижує зв'язування з Ес-рецептором та/або ефекторну функцію в порівнянні з нативним Ео-доменом Ідсі. В одному з варіантів здійснення винаходу кожна субодиниця Ес-домену містить три амінокислотні заміни, які знижують принаймні одну з таких функцій, як зв'язування з Ес-рецептором і ефекторна функція, де вказані амінокислотні заміни представляють собою 1234А, 1235А і РЗ290 (нумерація за Кеботом). В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-рецептор представляє собою Есу-рецептор. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, індукує проліферацію людської СОЗ-позитивної Т-клітини іп міго. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує
Т-клітину, індукує опосередковуваний людською мононуклеарною клітиною периферичної крові цитоліз експресуючої РОЇК! людської пухлинної клітини іп міго. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз експресуючої ЕБоЇК1 людської пухлинної клітини іп міго. В одному із вказаних варіантів здійснення винаходу експресуюча БоЇїК1 людська пухлинна клітина представляє собою клітину лінії Не а, БКОМ-3, НТ-29 або НЕСЕрісС. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз пухлинної клітини, яка експресує ЕоїКТт, іп міго, що характеризується величиною ЕСзхо, що становить від приблизно 36
ПМ до приблизно 39573 пМ, через 24 год. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз пухлинної клітини, яка експресує ЕоїЇК1, іп міо, що характеризується величиною ЕСво, що становить приблизно 36 пМ, через 24 год. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз пухлинної клітини, яка експресує РОЇК, іп міго, що характеризується величиною ЕСзо, що становить приблизно 178,4
ПМ, через 24 год. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна (610) антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз пухлинної клітини, яка експресує ЕоОїЇКл1, іп міго, що характеризується величиною ЕсСобо, що становить приблизно 134,5 або більше, через 48 год. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує підвищувальну регуляцію експресії на поверхні клітини принаймні одного з СО25 і СОб69 на Т- клітині за даними вимірювань методом проточної цитометрії. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу Т-клітина представляє собою СО4-позитивну Т-клітину або СО8- позитивну Т-клітину. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з людським ЕБоОЇК1! з уявною величиною Ко, що становить від приблизно 5,36 пМ до приблизно 4 нМ. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує
Т-клітину, зв'язується з ЕоЇК1 людини й мавп циномолгус із уявною величиною Ко, що становить приблизно 4 нМ. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з мишиним ЕоЇК1 з уявною величиною Ко, що становить приблизно 1,5 нМ. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з людським Роїк! з величиною Ко, що характеризує одновалентне зв'язування, яка становить приблизно 1000 нМ. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з БОЇК1, що експресується на людській пухлинній клітині В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з конформаційним епітопом на людському ЕоїК1. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, не зв'язується з людським фолатним рецептором 2 (БоІК2) або людським фолатним рецептором З (БоІК3). В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент зв'язується з поліпептидом РОЇК, що містять амінокислоти з 25 по 234 людського БОоЇК1 (ЗЕО ІЮ
МО:227). В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу зв'язувальний антиген ЕоїК1 фрагмент зв'язується з поліпептидом ЕоїК1, що містять амінокислотні послідовності зЕО ІЮО МО: 227, 230 і 231, і при цьому зв'язувальний антиген Роїк! фрагмент не зв'язується з поліпептидом
ЕОїК, що містить амінокислотні послідовності зБЕО ІЮО МО: 228 і 229. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, представляє собою гуманізовану або химерну молекулу. В одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу МНО2 і СНІ1О1 зчеплені за допомогою пептидного лінкера.
В одному із вказаних вище варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, перший й другий поліпептидні ланцюга містять амінокислотну послідовність
ЗБЕО ІЮО МО: 230. В одному із вказаних вище варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, третій поліпептидний ланцюг містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 86. В одному із вказаних вище варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, четвертий поліпептидний ланцюг містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО І МО: 309. В одному із вказаних вище варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, п'ятий поліпептидний ланцюг містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО: 308. В одному із вказаних вище варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, перший й другий поліпептидні ланцюга містять амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 230; третій поліпептидний ланцюг містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО 10 МО: 86; четвертий поліпептидний ланцюг містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 309; і п'ятий поліпептидний ланцюг містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 308.
Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 308. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, представлена в вказаному вище варіанті здійснення винаходу додатково містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 230 ії БЕО ІЮ МО: 86.
Одним з об'єктів винаходу є виділений поліпептид, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 308. Одним з об'єктів винаходу є виділений поліпептид, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 309.
Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО І МО: 276. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, представлена в вказаному вище варіанті здійснення винаходу додатково містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 277 і ЗЕО ІЮ МО: 35. 10) Одним з об'єктів винаходу є виділений поліпептид, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 277. Одним з об'єктів винаходу є виділений поліпептид, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 276.
Одним з об'єктів винаходу є виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, представлену в одному з описаних вище варіантів здійснення винаходу. В одному з варіантів винаходу запропонований виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, що містить нуклеотидну послідовність 5ЕБЕО ОО МО: 169. В одному з варіантів винаходу запропонований виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, що містить нуклеотидну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 246. В одному з варіантів винаходу запропонований виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, що містить нуклеотидну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 247. В одному з варіантів винаходу запропонований виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, що містить нуклеотидну послідовність ЗЕ І МО: 97. В одному з варіантів винаходу запропонований виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т- клітину, що містить нуклеотидну послідовність зЕО ІЮ МО: 198.
В одному з варіантів винаходу запропонований виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, що містить нуклеотидну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 287. В одному з варіантів винаходу запропонований виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, що містить нуклеотидну послідовність 5ЕБЕО ІО МО: 288. В одному з варіантів винаходу запропонований виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, що містить нуклеотидну послідовність зЕО ІЮ МО: 289.
Одним з об'єктів винаходу є виділений поліпептид, який кодується полінуклеотидом, представленим у вказаному вище варіанті здійснення винаходу. Іншим об'єктом винаходу є вектор, насамперед експресійний вектор, що містить полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, представлену в одному з варіантів здійснення винаходу, вказаних у даному описі. Іншим об'єктом винаходу є клітина-хазяїн, що містить полінуклеотид або вектор, представлений у будь-якому одному з варіантів здійснення винаходу, вказаних у даному описі.
Одним з об'єктів винаходу є спосіб одержання біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, і антигеном клітини-мішені, що полягає в тому, що здійснюють стадії, на яких а) культивують клітину- хазяїна, представлену в вказані вище варіантах здійснення винаходу, в умовах, придатних для експресії біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, і б) виділяють антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину.
Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, отримана способом, вказаним у представленому вище варіанті здійснення винаходу.
Одним з об'єктів винаходу є фармацевтична композиція, що містить біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, представлену в будь-якому одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, і фармацевтично прийнятний носій. Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, представлена в одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, або фармацевтична композиція, представлена в одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, призначена для застосування як лікарського засобу.
Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, представлена в одному із представлених вище варіантів здійснення винаходу, або фармацевтична композиція, представлена в одному із представлених вище варіантів здійснення винаходу, призначена для застосування при лікуванні захворювання в індивідуума, який цього потребує. У деяких варіантах здійснення винаходу захворювання представляє собою рак. Одним з об'єктів винаходу є застосування біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, представленої в одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, для приготування лікарського засобу, призначеного для лікування захворювання в індивідуума, який цього потребує.
Одним з об'єктів винаходу є спосіб лікування захворювання в індивідуума, що полягає в тому, що вказаному індивідуумові вводять у терапевтично ефективній кількості композицію, що містить біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, представлену в одному із вказаних вище варіантах здійснення винаходу, у фармацевтично прийнятній формі. У деяких варіантах здійснення винаходу вказане захворювання представляє собою рак. (610) Одним з об'єктів винаходу є спосіб індукції лізису клітини-мішені, що полягає в тому, що приводять у контакт клітину-мішень із біспецифічною антигензв'язувальною молекулою, що активує Т-клітину, представленою в одному із вказаних вище варіантів здійснення винаходу, у присутності Т-клітини.
Одним з об'єктів винаходу є винахід, представлений вище в даному описі.
Короткий опис креслень
На кресленнях показане:
На фіг. 1А-И - проілюстровані приклади конфігурацій біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітину (ТОВ), запропонованих у винаході. Усі конструкції за винятком капа-лямбда-формату (представленого на фіг. ТИ) мають мутації РЗ329С І АГА і містять "КпобБ- іпіо-поїе»-Рс-фрагменти з модифікаціями типу "Кпоб-іпіо-поїе". На фіг. ТА проілюстрована конструкція "бЄоїК1-ТСВ 2-1 інвертована (загальний легкий ланцюг)». БоЇК1-зв'язувальний агент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем першої субодиниці Рс-домену, що містить модифікацію, що приводить до утворення "виступу". Ці конструкції не є "схрещеними" і мають той самий легкий ланцюг, що зустрічається три рази (містять три однакові) МІ СІ. На фіг. 1Б проілюстрована конструкція "РоїК1-ТСВ 1-41 "голова-до хвоста" (загальний легкий ланцюг)». Ці конструкції не є "схрещеними" і мають той самий легкий ланцюг, що зустрічається два рази
МІС. На фіг. 18 проілюстрована конструкція "боОїК1-ТОВ 1-41 класична (загальний легкий ланцюг)». Ці конструкції не є "схрещеними" і мають той самий легкий ланцюг, що зустрічається два рази МІ СІ. На фіг. 1Г проілюстрована конструкція "бЄоїКк1-ТСВ 2-41 класична (загальний легкий ланцюг)». СОЗ-зв'язувальний агент злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої субодиниці Ес-домену, що містить модифікацію, що приводить до утворення "виступу".
Ці конструкції не є "схрещеними" і мають той самий легкий ланцюг, що зустрічається три рази
МІ С. На фіг. 1Д проілюстрована конструкція "боїК!1 ТОВ 241 Сто55ГРабр класична". Ці конструкції містять ланцюг СК-МН для СОЗ-зв'язувального агента замість канонічного ланцюга СНІ1-УН.
СОрЗ-зв'язувальний агент злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої субодиниці
Ес-домену, що містить модифікацію, що приводить до утворення "виступу" На фіг. 1ЕЕ проілюстрована конструкція "БоїК1-ТСВ 2-41 Сго55ЕРар інвертована". Ці конструкції містять ланцюг СК-МН для СОЗ-зв'язувального агента замість канонічного ланцюга СНІТ-МН. РГо!ІН1- зв'язувальний агент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем першої субодиниці Ес- домену, що містить модифікацію, що приводить до утворення "виступу" На фіг. 1Ж проілюстрована конструкція "БоїК1-ТСВ 1-1 Стго55Бар "голова-до хвоста»». Ці конструкції містять ланцюг СК-МН для СОЗ-зв'язувального агента замість канонічного ланцюга СНІ1-МУН. На фіг. 13 проілюстрована конструкція "боїК1-ТОВ 1-1 Сто55таб класична". Ці конструкції містять ланцюг СК-МН для СОЗ-зв'язувального агента замість канонічного ланцюга СНІ1-УН. На фіг. ЛИ проілюстрований капа-лямбда-формат антитіла до СОЗ/РоІК1. Ці конструкції містять "схрещений" загальний легкий ланцюг МІ СНІ ї один "схрещений" ланцюг УНСГ, специфічний у відношенні СОЗ, і один "схрещений" ланцюг УНСІ., специфічний у відношенні ЕоїЇК1; на фіг. 2А-В - графіки, на яких узагальнені дані про зв'язування ЕоІК1-зв'язувальних агентів у вигляді ДО із клітинами НеГа. Зв'язування нових створених ЕоїЇК1-зв'язувальних агентів з
ЕоїІКт, експресованих на клітинах Не/а, оцінювали за допомогою проточної цитометрії. Зв'язані антитіла виявляли з використанням флуоресцентно міченого вторинного антилюдського антитіла; на фіг. ЗА-Б - графіки, на яких узагальнені дані про специфічність ЕоїЇК1-зв'язувальних агентів у відношенні ЕБоЇїК!. Зв'язування дб до Роїк! із клітинами НЕК, короткочасно трансфектованими або ЕоїК1, або РоІК2, аналізували за допомогою проточної цитометрії для ідентифікації клонів, які специфічно зв'язувалися з РОЇК і не зв'язувалися з БоЇІК2. Антитіла виявляли з використанням флуоресцентно міченого вторинного антилюдського антитіла; на фіг. 4А-Б - графіки, на яких узагальнені дані про крос-реактивності БоЇК1-зв'язувальних агентів з СУБОЇК1. Крос-реактивність антитіл до ЕоЇК1 з супогоїК1 аналізували на клітинах НЕК, короткочасно трансфектованих сугоїК1, за допомогою проточної цитометрії. Антитіла виявляли з використанням флуоресцентно міченого вторинного антилюдського антитіла; на фіг. 5 - графік, що ілюструє інтерналізацію ТОВ до ЄоОїК1 (БоІК1-ТСВ) після зв'язування.
Інтерналізацію чотирьох БоїК1-ТСВ після зв'язування з Роїк! тестували на клітинах Неї! а.
ЕоІ81-ТСВ, що залишилися на поверхні, виявляли з використанням флуоресцентно міченого вторинного антилюдського антитіла в вказані моменти часу після інкубації при 37 "с.
Розраховували відсоток інтерналізації; на фіг. бА-Д - графіки, на яких узагальнені дані про зв'язування антитіл до РОЇК у вигляді
Іо із клітинами, що характеризуються різними рівнями експресії БОЇК1. Зв'язування до 9011, 1605 і Мом19 з пухлинними клітинами, що характеризуються різними рівнями експресії ЕоїЇК1, (610) аналізували за допомогою проточної цитометрії. (35 ОР4А7 включали як контроль ізотипу, а
МКМ-45 включали як ЕБоЇК1-негативну клітинну лінію. Антитіла виявляли з використанням флуоресцентно міченого вторинного антилюдського антитіла; на фіг. 7А-М - графіки, на яких узагальнені дані про опосередковуваний Т-клітинами цитоліз клітин НТ-29 і 5КОМ3. ГоІК1-ТСВ застосовували для тестування опосередковуваного Т- клітинами цитолізу пухлинних клітин НТ-29 і 5КОМЗ і підвищувальної регуляції маркера активації на Т-клітинах після цитолізу. На фіг. 7А-Г представлені дані про опосередковуваний Т- клітинами цитолізі клітин НТ-29 і БКОУЗ у присутності ЕоЇїКк1-ТСВ 19011 і ГоІКк1-ТСВ 1605, який оцінювали за вивільненням ЛДГ через 24 і 48 год. ТОВ ОРА7 включали як негативний контроль.
Після інкубації протягом 48 год. оцінювали підвищувальну регуляцію маркерів активації СО25 і сСО69 на СО8-Т-клітинах і СО4-Т-клітинах після цитолізу пухлинних клітин БКОУЗ (фіг. 7Е-3) або
НТ-29 (фіг. 7И-М) за допомогою проточної цитометрії; на фіг. 8 - графік, що демонструє відсутність зв'язування антитіл до БоЇК1 (анти-РОЇК1) з еритроцитами. Еритроцити виявляли за допомогою дискримінаційного вікна як СО235а- позитивну популяцію й зв'язування Ідс 9011, дос 1605, ДО Мом19 і що ОР4А7 із вказаною популяцією виявляли за допомогою проточної цитометрії. Антитіла виявляли з використанням флуоресцентно міченого вторинного антилюдського антитіла; на фіг. ЗА-Г - графіки, на яких представлено узагальнення даних про підвищувальну регуляцію маркера активації в цільній крові. Підвищувальну регуляцію маркерів активації СО25 і сО69 на СО4-Т-клітинах і СО8-Т-клітинах через 24 год. після додавання ЕБоїКк1-ТСВ 9011, РоІВ1-
ТОВ 1605, Го!81-ТСВ Мом19 і ТОВ ОР47 аналізували за допомогою проточної цитометрії; на фіг. 10 - зв'язування аглікозилованих варіантів (а-діусо-варіантів) ТСВ 9011 із клітинами
НеГа. Зв'язування а-діусо-варіантів РоїК1-ТСВ 9011 із клітинами Неїа порівнювали зі зв'язуванням вихідної ТОВ 9011 на клітинах Не а. Антитіла виявляли з використанням флуоресцентно міченого вторинного антилюдського антитіла й зв'язування оцінювали за допомогою проточної цитометрії; на фіг. 11А-Е - графіки, на яких узагальнені дані про опосередковуваний Т-клітинами цитолізі пухлинних клітин з використанням а-гліко-варіантів боЇїК1-ТСВ 9011. а-діусо-варіанти
ЕоІй1-ТСВ 9011 застосовували для тестування опосередковуваного Т-клітинами цитолізу пухлинних клітин 5КОМЗ3, МКМ-45 (у якості БоЇК1-негативного контролю) (фіг. 11А-Г) ї НТ-29 (фіг. 11Д-Е) у порівнянні із цитолізом при використанні вихідної РоїКк1-ТСВ 9011. Як реєстровані дані використовували вивільнення ЛДГ через 24 і 48 год.; на фіг. 12А-Ш - графіки, на яких узагальнені дані про опосередковуваний Т-клітинами цитолізі первинних епітеліальних клітин. Первинні епітеліальні клітини з дуже низькими рівнями
ЕОїК1 застосовували для тестування опосередковуваного Т-клітинами цитолізу з використанням
Ео!В1-ТСВ 1605 і гоІКк1-ТОВ 9011, ТОВ ОРА7 включали як негативний контроль, а клітини НТ29 включали як позитивний контроль. На фіг. 12А-3 представлені дані про вивільнення ЛДГ із людських ретинальних пігментних клітин (НКР), людських кортикальних клітин нирки (НКС), людських бронхіальних клітин (НВ) і НТ29-клітин, виміряного через 24 і 48 год. Підвищувальну регуляцію маркерів активації СО25 і СО69 на СО4-Т-клітинах і СО8-Т-клітинах після цитолізу
НЕР (фіг. 12И-М), НКС (фіг. 12Н-Р), НВ (фіг. 120-Ф) і НТ29 (фіг. 12Х-Ш) оцінювали через 48 год. за допомогою проточної цитометрії; на фіг. 13А-В - порівняння різних форматів ТОВ, що містять 1605. Для чотирьох різних форматів ТСВ, що містять БГоІК1-зв'язувальний агент 1605, представлене порівняння результатів оцінки зв'язування із клітинами Неї а (фіг. 13А), опосередковуваного Т-клітинами цитолізу клітин БКОУЗ через 24 і 48 год. (фіг. 13Б) і підвищувальної регуляції маркерів активації сОр25 і 2069 на СО4-Т-клітинах і СО8-Т-клітинах через 48 год. після цитолізу (фіг. 13В); на фіг. 14А-В - порівняння різних форматів ТОВ, що містять 9011. Для трьох різних форматів ТСВ, що містять БГоІК1-зв'язувальний агент 9011, представлене порівняння результатів оцінки зв'язування із клітинами (А), опосередковуваного Т-клітинами цитолізу клітин
ЗКОМЗ через 24 і 48 год. (Б) і підвищувальної регуляції маркерів активації СО25 і СО69 на СО4-
Т-клітинах і СО8-Т-клітинах через 48 год. після цитолізу (В); на фіг. 15 - ФК-профіль БОЇ К1-ТСВ, отриманий на мишах лінії МОЄ для трьох різних доз; на фіг. 16 - ілюстрація протоколу експерименту з вивчення ефективності РОЇ К1-ТОВ; на фіг. 17А-Б - криві росту пухлини. На фіг. 17А представлені середні величини об'ємів пухлини й значення СКВ для різних груп обробки. На фіг. 17Б представлені графіки росту пухлини для однієї миші у всіх групах обробки. Наведені величини ТО (інгібування росту пухлини), що представляють собою виражене у відсотках відношення середнього об'єму пухлини до відповідної до величини в групі, обробленої наповнювачем; на фіг. 18 - маси пухлин після закінчення досліду; (610) на фіг. 19А-Б - результати ЕАС5З-аналізу інфільтруючих пухлина Т-клітин у день досліду 32.
Суспензії одиничних клітин пухлини фарбували антитілом до людського СО3/С04/С08 і аналізували за допомогою проточної цитометрії (фіг. 19А). На фіг. 1965 представлені середні величини кількості Т-клітин на мг пухлинної тканини й значення СКВ для різних груп обробки; на фіг. 20А-Б - результати ЕАС5З-аналізу активації/дегрануляції Т-клітин і секреції цитокінів у день досліду 32. Інфільтруючі пухлину СО4-- (фіг. 20А) ії СО8:- (фіг. 20Б) Т-клітини фарбували для виявлення цитокінів, маркерів активації й дегрануляції. Представлені середні величини кількості Т-клітин на мг пухлинної тканини й значення СКВ для різних груп обробки; на фіг. 21А-Б - відсоток лізису пухлини. Клітини 5КОМУЗ інкубували з РВМС у присутності або ТОВ до капа-лямбда-БоЇКк1, або ТСВ ОР47. Через 24 год. (фіг. 21А) і 48 год. (фіг. 21Б) оцінювали цитоліз пухлинних клітин на основі вимірювання вивільнення ЛДГ, на фіг. 22А-Г - дані, що ілюструють підвищувальну регуляцію СО25 і СО69 на СО4-1- клітинах. Клітини БКОУЗ інкубували з РВМС у присутності або ТСВ до капа-лямбда-РоЇІК1, або
ТОВ ОРА7. Через 48 год. оцінювали підвищувальну регуляцію СО25 і СО69 на СО4-Т-клітинах (фіг. 22А-Б) і СО8-Т-клітинах (фіг. 228-Г) за допомогою проточної цитометрії; на фіг. 23А-Б - відсоток лізису клітин. Представлені дані про цитоліз клітин 5КОМ-3 (середній рівень ЕоЇК1) Т-клітинами, індукованому ТОВ 362, ТОВ Мом19 і ТОВ 21А5 після інкубації протягом 24 год. (фіг. 23А) і 48 год. (фіг. 23Б) (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС); на фіг. 24А-В - дані про цитоліз людських пухлинних клітин Неї! а (високий рівень ЕоО!їІКт) (фіг. 24А), 5КОУ-3 (середній рівень Роїк) (фіг. 24Б) і НТ-29 (низький рівень ЕоїЇК) (фіг. 248) Т- клітинами, індукованому ТОВ З36Е2, ТОВ 1605, 1605 у форматі "ТСВ класична", 1605 у форматі "ТСВ 14-17" ї 1605 у форматі "ТОВ НТ (голова-до хвоста)» (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС, час інкубації 24 год.). ТОВ ОР47 включали як незв'язувальний контроль; на фіг. 25А-В - дані про підвищувальну регуляцію СО25 і СО69 на людських СО8-- (фіг. 25А,
Б) ї с0а4-- (фіг. 258), Т-клітинах після опосередковуваного Т-клітинами цитолізу клітин Неї а (високий рівень ЕоїКт) (фіг. 25А), клітин БКОМ-3 (середній рівень ЕоїКТ) (фіг. 25Б) і клітин НТ-29 (низький рівень ЕоїЇКТ) (фіг. 258) (Е:Т-10:1, інкубація протягом 48 год.), індукований ТОВ З6Е2,
ТОВ 1605 й ТОВ ОРА7 (незв'язувальний контроль) на фіг. 26А-Е - дані про цитоліз Т-клітинами людських клітин кортикального ниркового епітелію (фіг. 26А, Б людських клітин ретинального пігментного епітелію (фіг. 268, 0) ії клітин
НТ-29 (фіг. 26Д, Е), індукованому ТСВ З6Е2, ТОВ 1605 і ТОВ ОРА7, після інкубації протягом 24 год. (фіг. 26А, В, Д) і 48 год. (фіг. 26Б, Г, Е) (Е-Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські
РВМС); на фіг. 27 - таблиця, у якій узагальнені результати кількісної оцінки сайтів зв'язування БоЇК1 на різних лініях здорових і ракових клітин; на фіг. 28А-Б - дані про зв'язування ТОВ 1605 і її відповідних отриманих шляхом видалення сайтів деамідування СОЗ варіантів ТОВ 1605 МІО0ОА і Тов 1605 5І0бахл і ТОВ 9011 ії отриманих шляхом видалення сайтів деамідування варіантів ТОВ 9011 МІТО0А ї ТОВ 9011 з100аА з людським СОЮЗ, експресованих на Т-клітинах лінії уигкає на фіг. 29А-Б - дані про цитоліз Т-клітинами людських пухлинних клітин БКОМ-3 (середній рівень ЕоОїЇКт1), індукований ТОВ 1605 і її відповідними отриманими шляхом видалення сайтів деамідування СОЗ варіантами ТОВ 1605 МІО0А і ТОВ 1605 5100аА (фіг. 29А) і ТСВ 9011 і її отриманими шляхом видалення сайтів деамідування варіантами ТОВ 9011 М1ТОб0А ії ТОВ 9011
З100баА (фіг. 298) (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС, час інкубації 24
ГгОд.); на фіг. ЗОА-Б - дані про цитоліз Т-клітинами людських пухлинних клітин НТ-29 (низький рівень ЕоОїЇКт1), індукований ТОВ 1605 і її відповідними отриманими шляхом видалення сайтів деамідування СОЗ варіантами ТОВ 1605 МІО0А і ТОВ 1605 5100аА (фіг. ЗОА) і ТОВ 9011 ії її отриманими шляхом видалення сайтів деамідування варіантами ТОВ 9011 М1ТОб0А ії ТОВ 9011 е10баА (фіг. ЗОБ) (Е:Т-10:1, ефекторні клітини являли собою людські РВМС, час інкубації 24 год.); на фіг. З1А-В - результати вимірювань середньої інтенсивності флуоресценції й лізису пухлинних клітин; на фіг. З2А-Д - дані про зв'язування ТОВ З6Е2, ТОВ 1605 і варіантів 1605 НС/Л С з людським
ЕОїІКІ1, експресованих на клітинах Неї! а; на фіг. 33 - дані про зв'язування ТОВ З6Е2, ТОВ 1605 і двох варіантів 1605 зі зниженою афінністю ТСВ 1605 УМУ6У/052Е і ТОВ 1605 5495/593А з людським РОЇК на клітинах Не! а; на фіг. З4А-Д - дані про зв'язування ТОВ З36Е2, ТОВ 1605 і варіантів 1605 НС/ С з людським
ЕОїІКІ1, експресованих на клітинах НТ-29; (610) на фіг. З5А-Г - дані про зв'язування, що мають проміжну афінність РоІК1-зв'язувальних агентів (ТОВ 6Е10, ТОВ 1481 і ТОВ 9С7), ТОВ 1605 і ТОВ З6Б2 із клітинами НЕК293, що експресують або людський, або мишиний ЕоїЇК1 або ГРо!К2; на фіг. З6А-Е - дані про цитоліз Т-клітинами людських пухлинних клітин Неї а (високий рівень експресії БоїК!), 5КОМ-3 (середній рівень експресії БоІК1) ії НТ-29 (низький рівень експресії РОЇК), індукований проміжними ЕоїІК1-зв'язувальними агентами (ТОВ 6Е10, ТОВ 1481 і тов '9с7), ТОВ 1605 і ТОВ зЗ6г2, після інкубації протягом 24 год. (А-В) і 48 год. (Г-Е). Людські
РВМС використовували як ефекторні клітини (Е:Т-10:1); на фіг. З7А-Е - дані про цитоліз Т-клітинами людських пухлинних клітин Неї а (високий рівень експресії БоїК!), 5КОМ-3 (середній рівень експресії БоІК1) ії НТ-29 (низький рівень експресії ЕоЇІКт1), індукований варіантами 1605 зі зниженою афінністю (ТОВ 1605-с2:495/593А, тов 1605-20495/К53А, ТОВ 1605 М/96У, ТОВ 1605 УМ96У/052Е), ТОВ 1605 і ТОВ З6Б2 після інкубації протягом 24 год. (фіг. ЗВА-В) і 48 год. (фіг. З8Г-Е). Людські РВМС використовували як ефекторні клітини (Е:Т-10:1); на фіг. З8А-Е - дані про цитоліз Т-клітинами первинних людських клітин з ретинального пігментного епітелію й кортикального ниркового епітелію, індукований варіантами 1605 зі зниженою афінністю (ТОВ 1605-5495/593А, ТОВ 1605 М/96У/052Е), ТОВ 1605, ТОВ З6Е2 і
Ео!В1-зв'язувальний агентом ТОВ 1481 із проміжною афінністю, який оцінювали після інкубації впродовж 24 год. (фіг. З9А-В) і 48 год. (фіг. З9Г-Е) (Е:Т-10:1, людські РВМС використовували як ефекторні клітини). Клітини НТ-29 (низький рівень експресії БоїК!) включали як контрольну лінію клітин, а ТОВ ОР47 служив як незв'язувальний контроль; на фіг. З9А-Б - результати оцінки ФК при введенні однієї дози конструкцій РОЇ К1-ТОВ на самках мишей лінії МОСС; на фіг. 40А-Ж - результати оцінки ефективності іп мімо конструкцій ОЇ В1-ТСВ (1605, 1605 495/593А і 1605 У/96хУ/052Е) після переносу людських РВМС у клітини мишей лінії МОЄ, що несуть Неї! а; на фіг. 41 - дані, що свідчать про те, що антитіло фарлетузумаб (темно-зелений колір, другий зверху) і Мом19 (сірий колір, зверху) мали здатність зв'язуватися з пиРоОЇК1, захопленим на 1605, це демонструє, що зв'язувальні агенти серії 1605 розпізнають епітоп, відмінний від епітопу, що розпізнається фарлетузумабом або Мом19.
Докладний опис винаходу
Визначення
Поняття, застосовувані в даному описі, мають значення, загальноприйняті в даній галузі, якщо спеціально не вказане інше.
У контексті даного опису поняття "антигензв'язувальна молекула" у найбільш широкому розумінні стосується молекули, яка специфічно зв'язується з антигенною детермінантою.
Прикладами антигензв'язувальних молекул є імуноглобуліни і їх похідні, наприклад, фрагменти.
Поняття "біспецифічна" означає, що антигензв'язувальна молекула має здатність специфічно зв'язуватися принаймні із двома різними антигенними детермінантами. Як правило, біспецифічна антигензв'язувальна молекула містить принаймні два антигензв'язувальні сайти, кожний з яких є специфічним у відношенні різних антигенних детермінант. У деяких варіантах здійснення винаходу біспецифічна антигензв'язувальна молекула має здатність одночасно зв'язуватися із двома антигенними детермінантами, насамперед із двома антигенними детермінантами, експресованими на двох різних клітинах.
У контексті даного опису поняття "валентність" означає наявність певної кількості антигензв'язувальних сайтів в антигензв'язувальній молекулі. Да, поняття "одновалентне зв'язування з антигеном" означає наявність одного (і не більше одного) специфічного відносно антигену антигензв'язувального сайту в антигензв'язувальній молекулі.
Поняття "антигензв'язувальний сайт" стосується сайту, тобто одного або декількох амінокислотних залишків антигензв'язувальної молекули, які забезпечують взаємодію з антигеном. Наприклад, антигензв'язувальний сайт антитіла містить амінокислотні залишки з гіперваріабельних ділянок (ділянок, що визначають комплементарність) (СОК). Нативна молекула імуноглобуліну має, як правило, два антигензв'язувальні сайти, молекула Раб, як правило, має один антигензв'язувальний сайт.
У контексті даного опису поняття "антигензв'язувальний фрагмент" стосується поліпептидної молекули, яка специфічно зв'язується з антигенною детермінантою. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент має здатність направляти субстанцію, до якої він приєднаний (наприклад, другий антигензв'язувальний фрагмент), до сайту-мішені, наприклад, до специфічного типу пухлинної клітини або строми пухлини, що несе антигенну детермінанту. В іншому варіанті здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент має 10) здатність активувати передачу сигналів через його антиген-мішень, наприклад, антиген комплексу Т-клітинного рецептора. Антигензв'язувальні фрагменти включають антитіла і їх фрагменти. Конкретні антигензв'язувальні фрагменти включають антигензв'язувальний домен антитіла, який містить варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла й варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла. У деяких варіантах здійснення винаходу антигензв'язувальні фрагменти можуть включати константні ділянки антитіла, що додатково описане нижче й відомо в даній галузі. Придатні константні ділянки важких ланцюгів включають будь-які з п'яти ізотипів: а, б, є, у або |. Придатні константні ділянки легких ланцюгів включають будь-які із двох ізотипів:
Кі.
У контексті даного опису поняття "антигенна детермінанта" є синонімом понять "антиген" і "епітоп" і стосується сайту (наприклад, ділянці, що складається із суміжних амінокислот, або конформаційної конфігурації, яка складається з різних ділянок несуміжних амінокислот) на поліпептидній макромолекулі, з якою зв'язується антигензв'язувальний фрагмент із утворенням комплексу антигензв'язувальний фрагмент-антиген. Придатні антигенні детермінанти можуть бути присутні, наприклад, на поверхні пухлинних клітин, на поверхні інфікованих вірусом клітин, на поверхні інших хворих клітин, на поверхні імунних клітин, клітин, що знаходяться у вільному стані в сироватці крові та/або в позаклітинному матриксі (ЕСМ). У контексті даного опису білки, що стосуються антигенів, наприклад, РОЇК! і СОЗ, якщо не вказане інше, можуть представляти собою будь-які нативні форми білків з будь-якої застосовуваної як джерело хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) і гризуни (наприклад, миші й щурі). У конкретному варіанті здійснення винаходу антиген представляє собою людський білок. У контексті даного опису при посиланні на конкретний білок мається на увазі "повнорозмірний", непроцесований білок, а також будь-яка форма білка, отримана в результаті процесингу в клітині. Під поняття підпадають варіанти білка, що також зустрічаються в природніх умовах, наприклад, сплайсинговіе варіанти або алельні варіанти. Прикладами людських білків, придатних як антигени, є (але не обмежуючись тільки ними): ЕоЇК1 (фолатний рецептор альфа (ЕКА); фолатзв'язувальний білок (ЕВР); людський ЕРоЇК!, ОпіРгої Мо Р1Т5328; мишиний ЕоїК1,
ОпіРгої Мо РЗ5846; РоЇК1 мавп циномолгус, ОпіРгої Мо (з37РК14) і СОЗ, насамперед епсилон- субодиниця СОЗ (див. ОпіРгої Мо РО7766 (версія 130), МСВІ Кеїзед Мо МР 000724.1, ЗЕО ІЮ МО: 150, людська послідовність; або ОпіРгої Ме 20951 І5 (версія 49), МСВІ СепВапк, Ме ВАВ71849.1, послідовність мавп циномолгус (|Масаса Тавзсісціагібєї). Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована у винаході, зв'язується з епітопом СОЗ або антигеном клітини-мішені, який є консервативним для СОЗ або антигена-мішені з різних видів. У деяких варіантах здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує
Т-клітину, запропонована у винаході, зв'язується з СОЗ і БоЇїК!, але не зв'язується з ЕоЇК2 (фолатний рецептор бета; ЕКВ; людський ЕоЇК2, ОпіРгої Мо Р14207) або ЕБоїКЗ3 (фолатний рецептор гамма; людський ЕоІКЗ, ОпіРгої Мо РА1439).
Поняття "специфічно зв'язується" означає, що зв'язування є вибірковим відносно антигену і його можна відрізняти від небажаних або неспецифічних взаємодій. Здатність антигензв'язувального фрагмента зв'язуватися зі специфічною антигенною детермінантою можна визначати за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу (ЕІ ІЗА) або інших методик, відомих фахівцеві в даній галузі, наприклад, за допомогою методики на основі поверхневого плазмонного резонансу (здійснюючи аналіз за допомогою обладнання ВіАсоге) (Сіфебіаай і ін., СіІусо У 17, 2000, стор. 323-329), і традиційних аналізів зв'язування (Нееє!єу, Епдосг
Кез 28, 2002, стор. 217-229). В одному з варіантів здійснення винаходу рівень зв'язування антигензв'язувального фрагмента з неспорідненим білком становить менше, ніж приблизно 10 95 від рівня зв'язування антигензв'язувального фрагмента з антигеном, при вимірюванні, наприклад, за допомогою РК. У деяких варіантах здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, який зв'язується з антигеном, або антигензв'язувальна молекула, що містить антигензв'язувальний фрагмент, характеризується величиною константи дисоціації (Ко), що становить х їмкМ, х 10ОнНМ, х 1ОНМ, х ІНМ, х 0, 1НМ, х 0,01нНМ або х 0,001нНМ (наприклад, 10 5М або менш, наприклад, від109М до 10'ЗМ, наприклад, від 109М до 10-3М).
Поняття "афінність" стосується сумарної сили всіх нековалентних взаємодій між індивідуальним сайтом зв'язування молекули (наприклад, рецептора) і її партнера по зв'язуванню (наприклад, ліганду). Якщо не вказане інше, то в контексті даного опису поняття "афінність зв'язування" стосується властивої компонентів пари, що зв'язується (наприклад, антигензв'язувального фрагменту й антигену або рецептору й ліганду) афінності зв'язування, що відображає взаємодію за типом 1:1. Афінність молекули Х до її партнера МУ можна, як правило, характеризувати за допомогою константи дисоціації (Ко), яка представляє собою відношення констант швидкості реакції дисоціації й асоціації (Кож і Коп відповідно). Так, 10) еквівалентні афінності можуть відповідати різним константам швидкості, якщо співвідношення констант швидкості залишається таким же. Афінність можна оцінювати загальноприйнятими методами, відомими в даній галузі включаючи представлені в даному описі методи.
Конкретним методом вимірювання афінності є метод поверхневого плазмонного резонансу (БРВ).
Поняття "знижене зв'язування (знижена здатність до зв'язування)», наприклад, знижена здатність до зв'язування з Ес-рецептором, стосується зниження афінності відносно відповідної взаємодії, виміряної, наприклад, за допомогою ЗРК. Для ясності слід зазначити, що поняття включає також зниження афінності до нуля (або нижче межі виявлення аналітичного методу), тобто повну елімінацію взаємодії. І. навпаки, "підвищене зв'язування (підвищена здатність до зв'язування)» стосується підвищення афінності зв'язування відносно відповідної взаємодії.
Поняття "Т-клітинна активація (активація Т-клітин)» у контексті даного опису стосується однієї або декількох клітинних відповідей Т-лімфоциту, зокрема, цитотоксичного Т-лімфоциту, вибраним з: проліферації, диференціювання, секреції цитокінів, вивільнення цитотоксичних ефекторних молекул, цитотоксичної активності й експресії маркерів активації. Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, мають здатність індукувати Т-клітинну активацію. Прийнятні аналізи оцінки Т-клітинної активації, відомі в даній галузі, представлені в даному описі.
Поняття "антиген клітини-мішені" у контексті даного опису стосується антигенної детермінанти, яка присутня на поверхні клітини-мішені, наприклад, клітини в пухлині, такій як ракова клітина або клітина строми пухлини. Зокрема, поняття "антиген клітини-мішені" стосується фолатного рецептора 1.
У контексті даного опису поняття "перший" і "другий" відносно антигензв'язувальних фрагментів і т.д. застосовують із метою зручності розрізнення, коли присутній більше одного типу кожного із фрагментів. Застосування цих понять не має на увазі їх конкретний порядок або орієнтацію в біспецифічній антигензв'язувальній молекулі, що активує Т-клітини, якщо спеціально не вказане інше.
Поняття "молекула Рар" стосується білка, яка складається з МН і СНІ-домену важкого ланцюга ("важкий ланцюг Бар") ії МІ ї СІ-домену легкого ланцюга ("легсий ланцюг Раб") імуноглобуліну.
У контексті даного опису поняття "молекули Раб, що мають ідентичні легкі ланцюги МІ СІ" стосується зв'язувальних агентів, які мають один й той же легкий ланцюг, але, проте мають різні специфічності, наприклад, можуть зв'язуватися з СОЗ або РОЇК. У деяких варіантах здійснення винаходу біспецифічні молекули, що активують Т-клітину, містять принаймні дві молекули Раб, що мають ідентичні легкі ланцюги МІ СІ. Відповідні важкі ланцюги реконструюють і надають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном СОЗ і антигеном клітини-мішені ЕоїЇК1 відповідно, що активують Т-клітину.
Під поняттям "злиті" мається на увазі що компоненти (наприклад, молекула РЕаб і субодиниця Ес-домену) з'єднані пептидними зв'язками, або безпосередньо, або за допомогою одного або декількох пептидних лінкерів.
У контексті даного опису поняття "одноланцюгова" стосується молекули, що містить амінокислотні мономери, зв'язані лінійно за допомогою пептидних зв'язків. У деяких варіантах здійснення винаходу один з антигензв'язувальних фрагментів представляє собою одноланцюгову молекулу Рар, тобто молекулу Раб, у якій легкий ланцюг Раб і важкий ланцюг
Еар з'єднані за допомогою пептидного лінкера з утворенням одного пептидного ланцюга. У конкретному вказаному варіанті здійснення винаходу С-кінець легкого ланцюга Раб з'єднаний з
М-кінцем важкого ланцюга Раб в одноланцюговій молекулі Бар.
Під кросовер-молекулою Бар (яку позначають також як "Сго55Бар") мається на увазі молекула Раб, у якій або варіабельні ділянки, або константні ділянки важкого й легкого ланцюга
Еаб виміняно один на одного, тобто кросовер-молекула Бар містить пептидний ланцюг, який складається з варіабельної ділянки легкого ланцюга й константної ділянки важкого ланцюга, і пептидний ланцюг, який складається з варіабельної ділянки важкого ланцюга й константної ділянки легкого ланцюга. Для простоти розуміння, слід зазначити, що в кросовер-молекулі Раб, у якій обміняні варіабельні ділянки легкого ланцюга Бар і важкого ланцюга Рабр, пептидний ланцюг, що містить константну ділянку важкого ланцюга, позначають у контексті даного опису як "важкий ланцюг" кросовер-молекули Рар. І, навпаки, у кросовер-молекулі Раб, у якій обміняні константні ділянки легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Рар, пептидний ланцюг, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, позначають у контексті даного опису як "важкий ланцюг" кросовер-молекули Бар. Антитіло, яке містить один або декілька Сто55Бар, позначають в даному описі як Сго55МАтТ. (610) На відміну від цього, поняття "канонічна" молекула Рар позначає молекулу Раб у її форматі,
що зустрічається в природніх умовах, тобто що містить важкий ланцюг, який складається з варіабельної й константної ділянок важкого ланцюга (МН-СНІ), і легкий ланцюг, який складається з варіабельної й константної ділянок легкого ланцюга (МІ -СІ).
Поняття "молекула імуноглобуліну" стосується білка, що має структуру антитіла, що зустрічається в природніх умовах. Наприклад, імуноглобуліни класу до представляють собою гетеротетрамерні глікопротеїни з молекулярною масою приблизно 150000 Да, що складаються із двох легких ланцюгів і двох важких ланцюгів, зв'язаних дисульфідними містками. У напрямку від М-кінця до С-кінця кожний важкий ланцюг містить варіабельну ділянку (МН), яку називають також варіабельним важким доменом або варіабельним доменом важкого ланцюга, за яким розташовано три константні домени (СНІ, СН2 ії СНЗ), які називають також константною ділянкою важкого ланцюга. Аналогічно до цього, у напрямку від М- кінця до С-кінця кожний легкий ланцюг містить варіабельну ділянку (МІ), яку називають також варіабельною легким доменом або варіабельним доменом легкого ланцюга, за яким розташований константний домен легкого ланцюга (СІ), який називають також константною ділянкою легкого ланцюга.
Важкий ланцюг імуноглобуліну може належати до одного з п'яти типів, позначених як а (ІдА), б (940), є (ЧЕ), у (до) або | (І9М), деякі з яких додатково поділяють на підтипи, наприклад, у! (ас), уг (402), уз (ІДдСіз), у4 (ДС), оз (ІдА» ї ог (ІдАг). Легкий ланцюг імуноглобуліну може належати до одного із двох типів, позначених як капа (к) і лямбда (Х), на основі амінокислотної послідовності її константного домену. Імуноглобулін, як правило, складається із двох молекул
Еаб і Ес-домену, які з'єднані через шарнірну ділянку імуноглобуліну.
У контексті даного опису поняття "антитіло" використовується в його найбільш широкому розумінні, і воно стосується різних структур антитіл, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) моноклональні антитіла, поліклональні антитіла й фрагменти антитіл, за умови, що вони мають необхідну антигензв'язувальну активність.
Поняття "фрагмент антитіла" стосується молекули, відмінної від інтактного антитіла, яка містить частину інтактного антитіла, що має здатність зв'язуватися з антигеном, з яким зв'язується інтактне антитіло. Прикладами фрагментів антитіл є (але не обмежуючись тільки ними) Ем, Рабр, Раб", Баб'-5Н, К(аб)», димерні антитіла, лінійні антитіла, одноланцюгові молекули антитіл (наприклад, 5сЕм) і однодоменні антитіла. Огляд деяких фрагментів антитіл див., наприклад, в Ниазоп і ін., Маї Мей 9, 2003, стор. 129-134. Огляд 5сЕм-фрагментів див., наприклад, в РІійсСКкІпип в: Те РіагтасоЇоду ої Мопосіопаї Апііродієв5, т. 113, під ред. Козепригу і
Мооге, вид-во Зргіпдег-Мегпіад, Мем ХогК, 1994, стор. 269-315; див. також УМО 93/16185; і 05 МоМо 5571894 і 5587458. Обговорення Рар- і Е(аб)2-фрагментів, що містять залишки епітопу, що зв'язується з рецептором порятунку, що й мають подовжений час напівжиття іп мімо, див. в 05
Мо 5869046. Димерні антитіла (діабоді) представляють собою фрагменти антитіл із двома антигензв'язувальними сайтами, які можуть бути двовалентними або біспецифічними (див., наприклад, ЕР 404097; УМО 1993/01161; Нидзоп і ін., Маї Меа 9, 2003, стор. 129-134; і Ноїподег і ін., Ргос Май Асай сі ОБА 90, 1993, стор. 6444-6448. Тримерні (триабоді) і тетрамерні (тетрабоді) антитіла описані також в Нидвзоп і ін., Маї Меа 9, 2003, стор. 129-134. Однодоменні антитіла представляють собою фрагменти антитіл, що містять увесь варіабельний домен важкого ланцюга або його частину або весь варіабельний домен легкого ланцюга антитіла або його частину. У деяких варіантах здійснення винаходу однодоменне антитіло представляє собою людське однодоменне антитіло (фірма Юотапіїй5, Іпс., Валтам, шт. Масачусетс; див., наприклад, О5 Мо 6248516 В1). Фрагменти антитіл можна створювати за допомогою різних методик, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) протеолітичне розщеплення інтактного антитіла, а також одержувати з використанням рекомбінантних клітин-хазяїнів (наприклад, Е. соїї або фага), як вказано в даному описі.
Поняття "антигензв'язувальний домен" стосується частини антитіла, яка містить ділянку, що специфічно зв'язується і що комплементарною до частини антигену або повногоу антигену.
Антигензв'язувальний домен може представляти собою, наприклад, один або декілька варіабельних доменів антитіла (які називають також варіабельними ділянками антитіла).
Переважно антигензв'язувальний домен містить варіабельну ділянку легкого ланцюга (МІ) антитіла й варіабельну ділянку важкого ланцюга (УН) антитіла.
Поняття "варіабельна ділянка" або "варіабельний домен" стосується домену важкого або легкого ланцюга антитіла, який бере участь у зв'язуванні антитіла з антигеном. Варіабельні домени важкого ланцюга й легкого ланцюга (МН і Мі. відповідно) нативного антитіла, як правило, мають подібні структури, при цьому кожний домен містить чотири консервативні каркасні ділянки (ЕК) і три гіперваріабельні ділянки (НУК) (див., наприклад, Кіпаї і ін., Кибу Іттипо!іоду, б-е вид., вид-во М.Н. Егеетап апа Со., 2007, с. 91). Одного МН- або Мі -домену може бути (610) достатньо для забезпечення специфічності зв'язування антигену.
Поняття "гіперваріабельна ділянка" або "НМЕ" у контексті даного опису стосується кожної з ділянок варіабельного домену антитіла, послідовності яких є гіперваріабельними, та/або які утворюють структури у вигляді петель ("гіперваріабельні петлі"). Як правило, нативні чотириланцюгові антитіла містять шість НМЕ; три в МН (НІ, Н2, НЗ) і три в МІ (11, 12, 3). НМК, як правило, містять амінокислотні залишки з гіперваріабельних петель та/або з "ділянок, що визначають комплементарність" (СОК), останні відрізняються найбільш вираженою варіабельністю послідовності та/або беруть участь у розпізнаванні антигенів. За винятком СОК1 в МН, СОЖК, як правило, містять амінокислотні залишки з гіперваріабельних петель.
Гіперваріабельні ділянки (НМЕК) часто позначають як "ділянки, які визначають комплементарність" (СОК), і ці поняття в контексті даного опису використовують взаємозамінно, і вони стосуються ділянок варіабельної ділянки, які утворюють антигензв'язувальні ділянки. Ця конкретна ділянка описана в КарБаї і ін., 0.5. ЮОері. ої Неайй апа Нитап 5егмісев5, "Зедиепсев ої
Ргоївіп5 ої Іттипоїодісаї! Іпіегез5і", 1983 ї в Споїйіа і ін., У. Мої. Віої. 196, 1987, стор. 901-917, причому ці визначення стосуються амінокислотних залишків, що перекриваються, або піднаборів амінокислотних залишків при їх порівнянні один з одним. Однак у контексті даного опису мається на увазі можливість застосування будь-якого визначення СОЕК. антитіла або його варіантів. Відповідні амінокислотні залишки, з яких складаються СОК, як вони визначені в кожній із процитованих вище посилань, представлені в порівнянні нижче в таблиці 1. Точні номери залишків, які утворюють конкретний СОК, повинні варіюватися залежно від послідовності й розміру СОМ. Фахівці в даній галузі на основі даних про амінокислотну послідовність варіабельної ділянки антитіла легко можуть визначати, які залишки входять у конкретний СОК.
Таблиця 1
Визначення СОК!'
Кебот | Хотіаа | Ам 1 Нумерація всіх вхідних в СОР залишків у таблиці А дана відповідно до номенклатури, запропонованої Кеботом зі співавторами (див. нижче). 2 Позначення "АБМ" із прописною буквою "р", використане в таблиці А, стосується СОР, як вони визначені програмою для моделювання антитіл "АБМ" компанії ОхТога МоїІесшаг сгоир.
Кебот зі співавторами запропонували також систему нумерації (номенклатуру) послідовностей варіабельних ділянок, яку можна застосовувати для будь-якого антитіла.
Звичайний фахівець у даній галузі може однозначно застосовувати цю систему "нумерації за
Кеботом" до будь-якої послідовності варіабельної ділянки, не маючи ніяких експериментальних даних, крім відомостей про саму послідовність. У контексті даного опису поняття "нумерація за
Кеботом" стосується системи нумерації, описаної в Караї і ін., "Зедоепсе ої Ргоїеїп5 ої
Іпптипо!подіса! Іпіегезі", вид-во О.5. Юері. ої Неайй апа Нитап Зегмісе5, 1983. Якщо не вказане інше, то посилання на нумерацію положень конкретних амінокислотних залишків у варіабельній ділянці антитіла дані відповідно до системи нумерації за Кеботом.
Нумерація поліпептидних послідовностей в "Переліку послідовностей" не представляє собою нумерацію відповідно до системи Кебота. Однак у компетенції звичайного фахівця в даній галузі є перетворення нумерації послідовностей в "Переліку послідовностей" у нумерацію за Кеботом. "Каркасні ділянки" або "ЕК»-ділянки представляють собою ділянки варіабельних доменів, відмінні від залишків гіперваріабельних ділянок (НУК). ЕК варіабельного домену, як правило, представлено чотирма Ег-доменами: ЕК1, ЕК2, ЕКЗ і ЕК4. Таким чином, послідовності НМЕК і
ЕЕ, як правило, розташовані в МН (або МІ) у наступному порядку: ЕК1-Н1(11)-ЕВ2-НІ(І2)-ЕВЗ-
НЗ(І3)-ЕНА.
Поняття "клас" антитіла або імуноглобуліну стосується типу константного домену або константної ділянки, що входить у важкий ланцюг. Існує п'ять основних класів антитіл: ІдА, ІдО,
ІЗЕ, дос ії ДМ, а деякі з них можна додатково підрозділяти на підкласи (ізотипи), наприклад,
Ідс, Ідс2, Ідсз, ІДС, ІдАї і ІдА». Константні домени важких ланцюгів, що відповідають різним класам імуноглобулінів, позначають як а, б, є, у і и відповідно.
У контексті даного опису поняття "РГсо-домен" або "Рс-ділянка" стосується С-кінцевої ділянки важкого ланцюга імуноглобуліну, який містить принаймні частину константної ділянки. Поняття стосується нативної послідовності Ес-ділянок і варіантів Ес-ділянок. Хоча пограничні послідовності Ес-ділянки у важкому ланцюзі (ДО можуть злегка варіюватися, як правило, Ес- ділянка важкого ланцюга людського Ідс розташована від Суз226 або від Рго230 до карбоксильного кінця важкого ланцюга. Однак С-кінцевий лізин (І у5447) Ес-ділянки може або бути присутній, або відсутній. Якщо спеціально не вказане інше, то нумерація амінокислотних залишків в Ес-ділянці або константній ділянці відповідає системі Еи-нумерації, яку називають також Еи-індексом, описаної в Караї і ін., Зедиепсе5 ої Ргоївїп5 ої Іттипоїодіса! Іпіегев5і, 5-е вид., вид-во Рибріїс Неакп бегмісе, Маопа! Іпзійшев ої Неак, ВеїШезаа, МО, 1991. Поняття "субодиниця" Ро-домену в контексті даного опису стосується одного із двох поліпептидів, що утворюють димерний Ес-домен, тобто поліпептиду, який містить С-кінцеві константні ділянки важкого ланцюга імуноглобуліну, що мають здатність до стабільної самоасоціації. Наприклад, субодиниця Ес-домену до містить константний домен СН2 Ідс і СНЗ Ід. "Модифікація, що підсилює асоціацію першої й другої субодиниці Ес-домену" представляє собою маніпуляцію з пептидним каркасом або пост-трансляційні модифікації субодиниці Ес- домену, які зменшують або перешкоджають асоціації поліпептиду, що містить субодиницу Ес- домену, з ідентичним поліпептидом з утворенням гомодимеру. У контексті даного опису модифікація, що підсилює асоціацію, включає, насамперед, різні модифікації, здійснювані з кожною із двох субодиниць Ес-домену, призначених для асоціації (наприклад, першої й другої субодиниці Ес-домену), при цьому, модифікації доповнюють одна одну таким чином, щоб підсилювати асоціацію двох субодиниць Ес-домену. Наприклад, модифікація, що підсилює асоціацію, може змінювати структуру або заряд однієї або обох субодиниць Ес-домену таким чином, щоб поліпшувати їх асоціацію стерично або електростатично відповідно. Да, (гетеро)димеризація має місце між поліпептидом, який містить першу субодиницю Ес-домену, і поліпептидом, який містить другу субодиницю Ес-домену, які можуть бути неідентичними, оскільки додаткові компоненти, злиті з кожною із субодиниць (наприклад, антигензв'язувальні фрагменти), не є однаковими. У деяких варіантах здійснення винаходу модифікація, що підсилює асоціацію, представляє собою амінокислотну мутацію в с-домені, зокрема, амінокислотну заміну. У конкретному варіанті здійснення винаходу модифікація, що підсилює асоціацію, представляє собою індивідуальну амінокислотну мутацію, зокрема, амінокислотну заміну, у кожній із двох субодиниць Ес-домену.
Поняття "ефекторні функції", використовуване в даному описі, стосується видів біологічної активності, властивих Ес-ділянки антитіла, які змінюються залежно від ізотипу антитіла.
Прикладами ефекторних функцій антитіла є: здатність зв'язуватися з С14 і комплементзалежна цитотоксичність (СОС), здатність зв'язуватися з Ес-рецептором, антитіло-зумовлена клітиннозалежна цитотоксичність (АОСС), антитіло-зумовлений клітиннозалежний фагоцитоз (АОСР), секреція цитокінів, опосередковане імунним комплексом поглинання антигену антигенпрезентуючими клітинами, знижуюча регуляція рецепторів клітинної поверхні (наприклад, В-клітинного рецептора); і активація В-клітин.
У контексті даного опису мається на увазі, що поняття "конструювання, сконструйований, інженерія" включають будь-яку маніпуляцію з пептидним каркасом або пост-трансляційні модифікації поліпептиду, що зустрічається в природніх умовах, або рекомбінантного поліпептиду або його фрагмента. Інженерія включає модифікації амінокислотної послідовності, схеми глікозилування або групи бокових ланцюгів індивідуальних амінокислот, а також комбінації вказаних підходів.
У контексті даного опису мається на увазі, що поняття "амінокислотна мутація" стосується амінокислотних замін, делецій, інсерцій і модифікацій. Можна застосовувати будь-яку комбінацію заміни, делеції, інсерції й модифікації для створення кінцевої конструкції за умови, що кінцева конструкція має необхідні характеристики, наприклад, знижену здатність зв'язуватися з Ес-рецептором або підвищену асоціацію з іншим пептидом. Амінокислотна послідовність із делеціями й інсерціями включає аміно- та/або карбоксикінцеві делеції й інсерції амінокислот. Конкретними амінокислотними мутаціями є амінокислотні заміни. Для зміни, наприклад, характеристик зв'язування Ес-ділянки, найбільш переважними є неконсервативні амінокислотні заміни, тобто заміна однієї амінокислоти на іншу амінокислоту, що має інші структурні та/або хімічні властивості. Амінокислотні заміни включають заміну на амінокислоти, що не зустрічаються в природніх умовах, або на похідні двадцяти стандартних амінокислот, що (610) зустрічаються в природніх умовах (наприклад, на 4-гідроксипролін, З-метилгістидин, орнітин,
гомосерин, 5-гідроксилізин). Амінокислотні мутації можна створювати за допомогою генетичних або хімічних методів, добре відомих у даній галузі. Генетичні методи можуть включати сайтнаправлений мутагенез, ПЛР, синтез генів і т.п. Мається на увазі, що можна застосовувати також методи зміни бокової групи амінокислоти, відмінні від методів генетичної інженерії, такі як хімічна модифікація. Для позначення однієї й тієї ж амінокислотної мутації можна використовувати різні позначення. Наприклад, заміну проліну в положенні 329 Ес-домену на гліцин можна позначати як 3290, (53329, Озго, РЗ290 або Рго32901у.
У контексті даного опису поняття "поліпептид" стосується молекули, яка складається з мономерів (амінокислот), лінійно зв'язаних амідними зв'язками (які позначають також як пептидні зв'язки). Поняття "поліпептид" стосується будь-якого ланцюга, що складається із двох або більшої кількості амінокислот, і не мається на увазі, що продукт має конкретну довжину.
Так, пептиди, дипептиди, трипептиди, олігопептиди, "білок", "амінокислотний ланцюг" або будь- яке інше прийняте поняття, що стосується ланцюга, що складається із двох або більшої кількості амінокислот, усі підпадають під визначення "поліпептид", і поняття "поліпептид" можна застосовувати замість або взаємозамінно з будь-яким із вказаних понять. Мається на увазі також, що поняття "поліпептид" стосується продуктів, які несуть пост-експресійні модифікації поліпептиду, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) глікозилування, ацетилування, фосфорилування, амідування, дериватизацію з використанням відомих захисних/блокувальних груп, протеолітичне розщеплення або модифікацію за допомогою амінокислот, що не зустрічаються в природніх умовах. Поліпептид можна одержувати з біологічного джерела, що зустрічається в природніх умовах, або можна одержувати за допомогою технології рекомбінантної ДНК, і його не обов'язково транслювати зі створеної нуклеотидної послідовності.
Його можна створювати будь-яким шляхом, включаючи хімічний синтез. Поліпептид, запропонований у винаході, може складатися приблизно з З або більше, 5 або більше, 10 або більше, 20 або більше, 25 або більше, 50 або більше, 75 або більше, 100 або більше, 200 або більше, 500 або більше, 1000 або більше або 2000 або більше амінокислот. Поліпептиди можуть мати різну тривимірну структуру, хоча вони необов'язково повинні мати вказану структуру. Поліпептиди з визначеною тривимірною структурою позначають як поліпептиди, що мають укладку, а поліпептиди, які не мають визначеної тривимірної структури, але які можуть легше адаптуватися до великої кількості різних конформацій, позначають як поліпептиди, що не мають укладки.
Під "виділеним" поліпептидом або його варіантом, або похідним мають на увазі поліпептид, який не знаходиться в його природньому оточенні. При цьому не потрібно наявності якого- небудь конкретного рівня очищення. Наприклад, виділений поліпептид можна видаляти з його нативного або природнього оточення. Отримані шляхом рекомбінації поліпептиди й білки, експресовані в клітинах-хазяїнах, розглядаються як виділені для цілей даного винаходу, якщо вони представляють собою нативні або рекомбінантні поліпептиди, які відділені, фракціоновані або частково або повністю очищені за допомогою будь-якого прийнятного методу. "Відсоток (95) ідентичності амінокислотної послідовності" відносно поліпептидної референс- послідовності визначають як відсоток амінокислотних залишків у послідовності-кандидаті, які ідентичні до амінокислотних залишків у поліпептидній референс-послідовності, після вирівнювання послідовностей і інтродукції при необхідності проломів для досягнення максимального відсотка ідентичності послідовностей, і при цьому які-небудь консервативні заміни не враховуються при оцінці ідентичності послідовностей. Порівняльний аналіз для визначення відсотка ідентичності амінокислотних послідовностей можна здійснювати різними шляхами, які знаходяться у компетенції фахівця в даній галузі, наприклад, з використанням легко доступних комп'ютерних програм, таких як програма ВІ А5Т, ВІ АБ5Т-2, АГІСМ або Меоаїїдп (ОМАЗТАК). Фахівці в даній галузі можуть визначати відповідні параметри для вирівнювання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині порівнюваних послідовностей. Однак для цілей даного винаходу величину 96 ідентичності амінокислотних послідовностей одержують із використанням призначеної для порівняння послідовностей комп'ютерної програми АГІСМ-2. Призначена для порівняння послідовностей комп'ютерна програма АГІСМ-2 розроблена фірмою Сепепіесі, Іпс., і вихідний код поміщений на зберігання разом з документацією для користувача в О.5. Соругідні
Опісе, УМазпіпоюп 0.С., 20559, де він зареєстрований під реєстраційним номером Ш.5. Соругідні
Кедівігайоп, Мо ТХО510087. Програма АГІСМ-2 представляє собою загально доступну програму фірми Сепепіесі!, Іпс., Південний Сан-Франциско, шт. Каліфорнія, або її можна компілювати з вихідного коду. Програму АСГІОМ-2 можна компілювати для застосування в операційній системі
ОМІХ, включаючи цифрову версію ШОМІХ М4.00. У програмі АГІОМ-2 усі параметри для 10) порівняння послідовностей є заданими й не повинні змінюватися. У ситуаціях, коли АГІСМ-2 застосовують для порівняння амінокислотних послідовностей, 95 ідентичності амінокислотних послідовностей даної амінокислотної послідовності А відносно або в порівнянні з даною амінокислотною послідовністю Б (яку іншими словами можна позначати як дана амінокислотна послідовність А, яка має або відрізняється певним 95 ідентичності амінокислотної послідовності відносно або в порівнянні з даною амінокислотною послідовністю Б), розраховують у такий спосіб: 100 х частка Х/У, де Х позначає кількість амінокислотних залишків, оцінених програмою порівняльного аналізу послідовностей АГ ЇОМ-2 як ідентичні збіги при порівняльному аналізі послідовностей А і Б за допомогою вказаної програми, і де У позначає загальну кількість амінокислотних залишків у Б.
Повинно бути очевидно, що, коли довжина амінокислотної послідовності А не дорівнює довжині амінокислотної послідовності Б, то 95 ідентичності амінокислотної послідовності А відносно амінокислотної послідовності Б не повинен дорівнювати 95 ідентичності амінокислотної послідовності Б відносно амінокислотної послідовності А. Якщо спеціально не вказане інше, то в контексті даного опису всі величини 95 ідентичності амінокислотних послідовностей одержують згідно із процедурою, описаною в останньому з попередніх параграфів, за допомогою комп'ютерної програми АСІСМ-2.
Поняття "полінуклеотид" стосується виділеної молекули нуклеїнової кислоти або конструкції, наприклад, матричної РНК (мРНК), РНК вірусного походження або плазмідної ДНК (пднкю).
Полінуклеотид може містити звичайну фосфодіефірний зв'язок або нетрадиційний зв'язок (наприклад, амідний зв'язок, таку, яка присутня у пептидних нуклеїнових кислотах (ПНК)).
Поняття "молекула нуклеїнової кислоти" стосується будь-якого одного або декількох сегментів нуклеїнової кислоти, наприклад, фрагментів ДНК або РНК, присутніх у полінуклеотиді.
Під "виділеною" молекулою нуклеїнової кислоти або полінуклеотидом мається на увазі молекула нуклеїнової кислоти, тобто ДНК або РНК, яка відділена від її нативного оточення.
Наприклад, рекомбінантний полінуклеотид, який кодує поліпептид, що входить до складу вектора, розглядається як виділений для цілей даного винаходу. Іншими прикладами виділеного полінуклеотиду є рекомбінантні полінуклеотиди, присутні в гетерологічних клітинах- хазяїнах, або очищені (частково або повністю) полінуклеотиди, що знаходяться у розчині.
Виділений полінуклеотид включає молекулу полінуклеотиду, що входить у клітини, які в нормі містять молекулу полінуклеотиду, але молекула полінуклеотиду присутня поза хромосомою або має локалізацію в хромосомі, відмінну від її локалізації в хромосомі в природніх умовах.
Виділені молекули РНК включають отримані іп мімо або іп міо РНК-транскрипти, запропоновані в даному винаході, а також форми з позитивним і негативним ланцюгом і дволанцюгові форми.
Виділені полінуклеотиди або нуклеїнові кислоти, запропоновані в даному винаході, включають також вказані молекули, отримані за допомогою синтезу. Крім того, полінуклеотид або нуклеїнова кислота може представляти собою або може включати регуляторний елемент, такий як промотор, сайт зв'язування рибосом або термінатор транскрипції.
Під нуклеїновою кислотою або полінуклеотидом, що має/що мають нуклеотидну послідовність, яка, наприклад, на 95 95 "ідентична" до нуклеотидної референс-послідовності, запропонованої в даному винаході, мається на увазі, що нуклеотидна послідовність полінуклеотиду ідентична до референс-послідовності за винятком того, що полінуклеотидна послідовність може включати аж до 5 точкових мутацій на кожні 100 нуклеотидів нуклеотидної референс-послідовності. Інакше кажучи, для одержання полінуклеотиду, що має нуклеотидну послідовність, яка ідентична принаймні на 95 95 до нуклеотидної референс-послідовності, аж до 595 нуклеотидів у референс-послідовності можна вилучати шляхом делеції або заміняти на інший нуклеотид, або аж до 5 95 нуклеотидів від загальної кількості нуклеотидів у референс- послідовності можна вбудовувати в референс-послідовність. Ці зміни референс-послідовності можуть мати місце в положеннях на 5'- або 3"-кінці нуклеотидної референс-послідовності або в іншому положенні між цими кінцевими положеннями, і їх вбудовують або індивідуально між залишками в референс-послідовності, або їх вбудовують у референс-послідовність у вигляді однієї або декількох суміжних груп. На практиці розв'язок питання про те, чи ідентична конкретна полінуклеотидна послідовність принаймні на 80 95, 85 95, 90 Уо, 95 95, 96 95, 97 Фо, 9895 або 99595 до нуклеотидної послідовності, запропонованої в даному винаході, можна вирішувати, як правило, з використанням відомих комп'ютерних програм, наприклад, вказаних вище для поліпептидів (наприклад, АГІОМ-2).
Поняття "касета експресії" стосується полінуклеотиду, отриманому за допомогою рекомбінації або синтезу, який містить серії специфічних нуклеотидних елементів, які забезпечують транскрипцію конкретної нуклеїнової кислоти в клітині-мішені. Рекомбінантну (610) касету експресії можна вбудовувати в плазміду, хромосому, мітохондріальну ДНК, пластидну
ДНК, вірус або фрагмент нуклеїнової кислоти. Як правило, рекомбінантна касета експресії, що представляє собою частину експресійного вектора, включає серед інших послідовностей нуклеотидну послідовність, що підлягає транскрипції, і промотор. У деяких варіантах здійснення винаходу касета експресії, запропонована у винаході, містить полінуклеотидні послідовності, які кодують біспецифічні антигензв'язувальні молекули, запропоновані у винаході, або їх фрагменти.
Поняття "вектор" або "експресійний вектор" є синонімом поняття "експресійна конструкція" і стосується молекули ДНК, яку застосовують для інтродукції й забезпечення експресії конкретного гена, з якою він функціонально зв'язаний у клітині-мішені. Поняття включає вектор, що представляє собою структуру нуклеїнової кислоти, яка самореплікується, а також вектор, вбудований у геном клітини-хазяїна, у яку він інтродукований. Експресійний вектор, запропонований у даному винаході, містить касету експресії. Експресійні вектори дозволяють здійснювати транскрипцію стабільної МРНК у більших кількостях. Коли експресійний вектор знаходиться усередині клітини-мішені, то молекула рибонуклеїнової кислоти або білок, який кодується геном, продукується в результаті клітинного механізму транскрипції та/або трансляції.
В одному з варіантів здійснення винаходу експресійний вектор, запропонований у винаході, містить касету експресії, яка включає полінуклеотидні послідовності, які кодують біспецифічні антигензв'язувальні молекули, запропоновані у винаході, або їх фрагменти.
У контексті даного опису поняття "клітина-хазяїн", "лінія клітин-хазяїнів" і "культура клітин- хазяїнів" використовуються взаємозамінно, і вони стосуються клітин, у які інтродукована екзогенна нуклеїнова кислота, включаючи потомство вказаних клітин. До клітин-хазяїнів належить ""трансформанти" і ""рансформовані клітини", які включають первинні трансформовані клітини, а також потомство, виведене з них, незалежно від кількості пересівань. Потомство може не бути строго ідентичним до батьківській клітини за складом нуклеїнових кислот, а може нести мутації. Під дане поняття підпадає мутантне потомство, яке має такою ж функцію або біологічну активність, що й відібрана шляхом скринінгу або селекції вихідна трансформована клітина. Клітина-хазяїн представляє собою будь-який тип клітинної системи, яку можна застосовувати для створення біспецифічних антигензв'язувальних молекул, запропонованих у даному винаході. Клітини-хазяїна включають культивовані клітини, наприклад, культивовані клітини ссавців, такі як (але не обмежуючись тільки ними) СВпо-клітини, ВиК-клітини, М50- клітини, ЗР2/О-клітини, клітини мієломи лінії МО, клітини мишиної мієломи лінії РЗ х 63, Рег- клітини, РЕК.Сб-клітини або клітини гібридоми, клітини дріжджів, клітини комах і клітини рослин, але також клітини, що знаходяться у трансгенній тварині, трансгенній рослині або в культивованій рослинній або тваринній тканині. "Активуючий Ес-рецептор" представляє собою Ес-рецептор, який після взаємодії з Ес- доменом антитіла здійснює процес передачі сигналів, які стимулюють клітину, що несе рецептор, здійснювати ефекторні функції. Людські, що активують Ес-рецептори включають
ЕсукКШа (СО16ба), Есук!І (СО64), ЕсукПа (СО32) і Есагі (СО89).
Антитіло-зумовлена клітиннозалежна цитотоксичність (АЮОСС) представляє собою імунний механізм, що приводить до лізису сенсибілізованих антитілом клітин-мішеней імунними ефекторними клітинами. Клітини-мішені представляють собою клітини, з якими антитіла або їх похідні, що містять Ес-ділянку, специфічно зв'язуються, як правило, через ділянку білка, яка є М- кінцевою відносно Ес-ділянки. У контексті даного опису поняття "знижена АЮСС" стосується або зниження кількості лізованих у цей момент часу клітин-мішеней при даній концентрації антитіла в середовищі, що оточує клітини-мішені, шляхом вказаного вище механізму АЮСС, та/або підвищення концентрації антитіла в середовищі, що оточує клітини-мішені, необхідної для досягнення лізису даного кількості клітин-мішеней тепер за допомогою механізму АОСС.
Зниження АЮСс-активності визначають відносно АОСС, опосередковуваної таким же антитілом, яке отримано за допомогою такого ж типу клітин-хазяїн з використанням однакових стандартних методів одержання, очищення, приготування композицій і зберігання (які відомі фахівцям у даній галузі), але яке не піддавали інженерії. Наприклад, зниження АЮСС, опосередковуваної антитілом, яке містить у його Ес-домені амінокислотну заміну, яка знижує АЮСС, визначають відносно АОСС, опосередковуваної таким же антитілом без вказаної амінокислотної заміни в
Ес-домені. Прийнятні аналізи оцінки АЮСС добре відомі в даній галузі (див., наприклад, публікацію РСТ М/О 2006/082515 або публікацію РСТ УМО 2012/130831).
Поняття "ефективна кількість" агента стосується кількості, необхідної для забезпечення фізіологічної зміни в клітині або тканині, у яку його вводять.
Поняття "терапевтично ефективна кількість" агента, наприклад, фармацевтичної композиції, стосується кількості, ефективної при застосуванні в дозах і протягом періодів часу, необхідних (610) для досягнення необхідного терапевтичного або профілактичного результату. Терапевтично ефективна кількість агента, наприклад, елімінує, знижує, сповільнює, мінімізує або попереджає небажані явища захворювання. "Індивідуум" або "суб'єкт" представляє собою ссавця. Ссавці представляють собою (але не обмежуючись тільки ними) одомашнених тварин (наприклад, корови, вівці, кішки, собаки й коня), приматів (наприклад, люди й примати, крім людини, такі як мавпи), кроликів і гризунів (наприклад, миші й щурі). Переважно індивідуум або суб'єкт представляє собою людину.
Поняття "фармацевтична композиція" стосується препарату, який знаходиться в такій формі, що він забезпечує біологічну активність діючої речовини, що входить до його складу, яка повинна маю ефективність, і який не містить додаткових компонентів, які мають неприйнятну токсичність для індивідуума, якому слід уводити композицію. "Фармацевтично прийнятний носій" стосується інгредієнта у фармацевтичній композиції, відмінному від діючої речовини, який є нетоксичним для індивідуума. Фармацевтично прийнятні носії включають (але не обмежуючись тільки ними) буфер, ексципієнт, стабілізатор або консервант.
У контексті даного опису поняття "лікування" (і його граматичні варіації, такі як "лікувати" або "процес лікування") стосується клінічного втручання з метою зміни природнього перебігу хвороби в індивідуума, що піддається лікуванню, і його можна здійснювати або для профілактики або в процесі розвитку клінічної патології. Необхідними діями лікування є (але не обмежуючись тільки ними) попередження виникнення або рецидиву хвороби, полегшення симптомів, зменшення будь-яких прямих або непрямих патологічних наслідків хвороби, попередження метастазів, зниження швидкості розвитку хвороби, полегшення або тимчасове ослаблення хворобливого стану й ремісія або поліпшення прогнозу. У деяких варіантах здійснення винаходу, біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, застосовують для затримки розвитку хвороби або уповільнення прогресування хвороби.
Поняття "антагоніст" застосовують у його найбільш широкому розумінні, і воно включає будь-яку молекулу, яка частково або повністю блокує, інгібує або нейтралізує біологічну активність нативного поліпептиду, вказаного в даному описі. Аналогічно до цього, поняття "агоніст" застосовують у його найбільш широкому розумінні, і воно включає будь-яку молекулу, яка індукує біологічну активність нативного поліпептиду, вказаного в даному описі. Придатні агоністичні або антагоністичні молекули включають конкретно агоністичні або антагоністичні антитіла або фрагменти антитіл, включаючи сконструйовані фрагменти антитіл, фрагменти або варіанти амінокислотної послідовності нативних поліпептидів, пептидів, антисмислові олігонуклеотиди, малі органічні молекули і т.д. Методи ідентифікації агоністів або антагоністів поліпептиду можуть включати приведення поліпептиду в контакт із агоністичною або антагоністичною молекулою-кандидатом і вимірювання зміни, що виявляється, одного або декількох видів біологічної активності, у нормі асоційованої з поліпептидом.
Поняття "листівка-вкладиш в упаковку" у контексті даного опису стосується інструкцій, які звичайно поміщають у упаковку терапевтичних продуктів, що надходять у продаж, які містять інформацію про показання, застосування, дозу, шляхи введення, комбіновані терапії, протипокази та/або запобіжні заходи при застосуванні вказаних терапевтичних продуктів.
Усі посилання, публікації, патенти й заявки на патент, вказані в даному описі, повністю включені в даний опис як посилання.
Докладний опис варіантів здійснення винаходу
Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована у винаході, є біспецифічною, тобто вона містить принаймні два антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися із двома різними антигенними детермінантами, а саме, з СОЗ і з РОЇК. Згідно з винаходом антигензв'язувальні фрагменти представляють собою молекули Раб (тобто антигензв'язувальні домени, що складаються із важкого й легкого ланцюга, кожна з яких містить варіабельну й константну ділянки). В одному з варіантів здійснення винаходу вказані молекули Бар є людськими. В іншому варіанті здійснення винаходу вказані молекули Раб є гуманізованими. Ще в одному варіанті здійснення винаходу вказані молекули гар містять людські константні ділянки важкого й легкого ланцюга.
Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована у винаході, має здатність одночасно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені Роїк! і СО3. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, має здатність до перехресного зв'язування з Т-клітиною і експресуючою
ЕОЇК1 клітиною-мішенню за допомогою одночасного зв'язування з антигеном клітини-мішені
ЕоІК1 ії СОЗ.У ще більш конкретному варіанті здійснення винаходу таке одночасне зв'язування (610) приводить до лізису експресуючою БоЇК1 клітиною-мішені, насамперед експресуючою РГоїЇК1 пухлинної клітини. В одному з варіантів здійснення винаходу таке одночасне зв'язування приводить до активації Т-клітини. В інших варіантах здійснення винаходу таке одночасне зв'язування приводить до клітинної відповіді Т-лімфоциту, насамперед цитотоксичного Т- лімфоциту, вибраному з наступної групи: проліферація, диференціювання, секреція цитокінів, вивільнення цитотоксичної ефекторної молекули, цитотоксична активність і експресія маркерів активації В одному з варіантів здійснення винаходу зв'язування біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, з СЮОЗ без одночасного зв'язування з антигеном клітини-мішені РОЇК не приводить до активації Т-клітини.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, має здатність перенаправляти цитотоксичну активність Т-клітини на експресуючу БоЇК1! клітину-мішень. У конкретному варіанті здійснення винаходу вказаний перенапрямок не залежить від опосередковуваної ГКГС презентації пептидного антигену клітиною-мішенню та/або від специфічності Т-клітини.
Зокрема, згідно з деякими варіантами здійснення винаходу Т-клітина представляє собою цитотоксичну Т-клітину. У деяких варіантах здійснення винаходу Т-клітина представляє собою браз- або СЮО8:-Т-клітину, насамперед СО8--Т-клітину.
Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована у винаході, містить принаймні один антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність зв'язуватися з СОЗ (у даному описі його позначають також як "зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент" або "перший антигензв'язувальний фрагмент"). У конкретному варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить не більше одного антигензв'язувального фрагмента, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЮЗ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, характеризується одновалентним зв'язуванням з СОЗ. У конкретному варіанті здійснення винаходу СОЗ представляє собою СОЗ людини або СОЗ мавп циномолгус, більш конкретно, людський СОЗ. У конкретному варіанті здійснення винаходу зв'язувальний антиген
СО3 фрагмент має перехресну реактивність із (тобто специфічно зв'язується з) людським СОЗ і
СОЗ мавпи циномолгус. У деяких варіантах здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент має здатність специфічно зв'язуватися з епсилон-субодиницію СЮОЗ (див. ОпіРгої Мо
РО7766 (версія 130), МСВІ Кеїхзед Мо МР 000724.1, 5ЕО ІЮ МО: 150, людська послідовність;
ОпіРгої Мо 0951 І5 (версія 49), МСВІ СепВапк Мо ВАВ71849.1, послідовність мавп циномолгус
ІМасаса газсісшагів|).
У деяких варіантах здійснення винаходу зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 37, 5ЕО ІЮО МО: 38 5ЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІО МО: 33, ЗЕО ІЮ МО: 34.
В одному з варіантів здійснення винаходу зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент містить
СОКІ1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 38,
СОМКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 39, СОК!І1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 32,
СОКР2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІО МО: 33, і СОРЗ легкого ланцюга, що має ЗЕО ІО МО: 34.
В одному з варіантів здійснення винаходу зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 31.
В одному з варіантів здійснення винаходу зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, яка принаймні приблизно 95 95, 96 95, 97 У, 98 У, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІО МО: 36, і послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, яка принаймні приблизно 95 95, 96 95, 97 У», 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична до ЕС ІЮ МО: 31.
Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована у винаході, містить принаймні один антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність зв'язуватися з антигеном клітини-мішені Роїк! (у даному описі його позначають також як "зв'язувальний БоїЇК1 фрагмент" або "другий" або "третій" антигензв'язувальний фрагмент). В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність зв'язуватися з антигеном клітини-мішені ЕоїЇК1, не зв'язується з БоЇК2 або БоІКЗ3. У конкретному варіанті здійснення винаходу зв'язувальний антиген БоїК1! фрагмент мати перехресну реактивність із (тобто специфічно зв'язується 3) БоЇК! людини й БоЇК! мавп циномолгус. У конкретних варіантах здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить два антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність зв'язуватися з антигеном клітини-мішені БоЇК1. В одному з таких конкретних варіантів здійснення винаходу (610) кожний із вказаних антигензв'язувальних фрагментів специфічно зв'язується з однією й тією ж антигенною детермінантою. У ще більш конкретному варіанті здійснення винаходу всі вказані антигензв'язувальні фрагменти є ідентичними. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить не більше двох антигензв'язувальних фрагментів, що мають здатність зв'язуватися з ЕоїЇК1.
ЕоІВ1-зв'язувальний фрагмент, як правило, представляє собою молекулу Раб, яка специфічно зв'язується з БОЇК1 і має здатність направляти біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, з якої вона з'єднана, до сайту-мішені, наприклад, до специфічного типу пухлинної клітини, яка експресує ЕоЇК1.
Одним з об'єктів даного винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує
Т-клітину, яка містить (І) перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, і який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 37, 5ЕО ІЮ МО: 38 і 5ЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОМ легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮО МО: 32,
ЗЕО ІЮ МО: 33, БЕО ІЮО МО: 34; і (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕоІАТ1).
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Бар, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 31.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, додатково містить (ІП) третій антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Бар, що має здатність специфічно зв'язуватися з РОЇК.
В одному з таких варіантів здійснення винаходу другий і третій антигензв'язувальний фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися 3 БоЇК1, містять ідентичні послідовності гіперваріабельної ділянки (СОК) важкого ланцюга й СОК легкого ланцюга. В одному з таких варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язувальний фрагмент ідентичний до другого антигензв'язувального фрагменту.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантів здійснення винаходу, додатково містить Ес-домен, що складається з першої й другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент і другий антигензв'язувальний фрагмент кожний злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес-домену.
В одному з варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язувальний фрагмент злитий на
С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем важкого ланцюга Раб першого антигензв'язувального фрагмента, необов'язково через пептидний лінкер.
У наступному конкретному варіанті здійснення винаходу в біспецифічній антигензв'язувальній молекулі, що активує Т-клітину, присутньо не більше одного антигензв'язувального фрагмента, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, (тобто, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, характеризується одновалентним зв'язуванням з СОЗ).
Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, із загальним легким ланцюгом
При створенні даного винаходу було створено біспецифічне антитіло, у якому зв'язувальні фрагменти мають загальний легкий ланцюг, який зберігає специфічність і ефективність батьківського моноспецифічного антитіла до СОЗ і може зв'язуватися із другим антигеном (наприклад, РОЇК!) за допомогою того ж самого легкого ланцюга. Створення біспецифічної молекули із загальним легким ланцюгом, який зберігає характеристики зв'язування, властиві батьківському антитілу, не є очевидним, оскільки загальні СОК гібридного легкого ланцюга повинні забезпечувати специфічність зв'язування з обома мішенями. Одним з об'єктів даного винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить перший і другий антигензв'язувальні фрагменти, один з яких представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, а інший з яких представляє собою молекулу
Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з ГОЇК1, у якій перша й друга молекули Бар мають ідентичні легкі ланцюги МІ СІ. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаний (610) ідентичний легкий ланцюг (МІ СІ) містить СОК легкого ланцюга, що мають 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО
ІЮО МО: 33 і 5ЕО ІО МО: 34. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаний ідентичний легкий ланцюг (МІ СІ) містить ЗЕО ІЮО МО: 35.
В одному з варіантів здійснення даного винаходу запропонована біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить (ЇЇ) перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, і який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 37, 5ЕО ІО МО: 38 і 5ЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОМ легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮО МО: 32,
ЗЕО ІО МО: 33, БЕО ІО МО: 34; (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Бар, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РО!їІК/), і який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО
ІО МО: 16, ЗЕО ІЮ МО: 17 і ЗЕО ІЮ МО: 18, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІО МО: 33, 5ЕО І МО: 34.
В одному з таких варіантів здійснення винаходу зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент містить СОК1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 39, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 33, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 34 антиген й фрагмент, що зв'язує ЕоЇК1, містить СОКІТ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 16, СОК2 важкого ланцюга, що має ЗЕО І МО: 17, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 18, СОКІ легкого ланцюга, що має ЗЕО ІО МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ
МО: 33, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 34.
В одному з варіантів здійснення даного винаходу запропонована біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить (ЇЇ) перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, і який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 31. (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (БоїК!), і який містить варіабельний важкий ланцюг утримуючу амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 15, ії варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 31.
В одному з варіантів здійснення даного винаходу запропонована біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить (ЇЇ) перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, і який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 37, 5ЕО ІЮ МО: 38 і 5ЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОМ легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮО МО: 32,
ЗЕО ІО МО: 33, БЕО ІО МО: 34; (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РО!їІКТ), і який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО
ІО МО: 16, БЕО ІЮО МО: 275 і ЗЕО ІО МО: 315, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІО МО: 33, 5ЕО І МО: 34.
В одному з варіантів здійснення даного винаходу запропонована біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить (І) перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЮЗ, і який містить амінокислотні послідовності гіперваріабельної ділянки (СОК) важкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 37, 5ЕО ІЮО МО: 38 і ЗЕО ІЮ МО: 39, і амінокислотні послідовності СОК легкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 33, 5ЕО ІЮ
МО: 34; (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (БоОЇК1!), і який містить амінокислотні послідовності гіперваріабельної ділянки (СОК) важкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 16,
ЗЕБЕО ІЮ МО: 275 і 5ЕО ІО МО: 315, і амінокислотні послідовності СОК легкого ланцюга ЗЕО ІЮ
МО: 32, ЗЕО ІЮ МО: 33, 5ЕО І МО: 34.
В одному з варіантів здійснення даного винаходу запропонована біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить (І) перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має (610) здатність специфічно зв'язуватися з СОЮЗ, і який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 31; (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (БоЇК!), і який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 274, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 31.
В одному з варіантів здійснення даного винаходу запропонована біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить (І) перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, і який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 31; (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Рар, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (БоЇК!), і який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 15, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 31.
У наступному варіанті здійснення винаходу, антигензв'язувальний фрагмент, який має специфічність у відношенні РОЇК, містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична до ЗЕО ІЮ МО: 15, і послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 ФУ, 98 9, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІЮО МО: 31, або їх варіанти, які зберігають функціональність.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить поліпептидну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 90, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІЮ МО: 36, поліпептидну послідовність, яка принаймні приблизно 95 95, 96 Фо, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІЮ МО: 15, і поліпептидну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІЮ МО: 31.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, додатково містить (ПІ) третій антигензв'язувальний фрагмент (який представляє собою молекулу Раб), що має здатність специфічно зв'язуватися з ЕБОЇК1.
В одному з таких варіантів здійснення винаходу другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися 3 БоЇК1, містять ідентичні послідовності гіперваріабельної ділянки (СОМ) важкого ланцюга й СОМ легкого ланцюга. В одному з таких варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язувальний фрагмент ідентичний до другого антигензв'язувального фрагменту.
Таким чином, в одному з варіантів здійснення даного винаходу запропонована біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить (ЇЇ) перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, і який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 37, 5ЕО ІЮ МО: 38 і 5ЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОМ легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮО МО: 32,
ЗЕО ІО МО: 33, БЕО ІО МО: 34; (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Бар, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕоїІКТт), ії який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО
ІО МО: 16, ЗЕО ІЮ МО: 17 і ЗЕО ІЮ МО: 18, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІО МО: 33, 5ЕО І МО: 34. (І) третій антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Бар, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РО!їІКТ), і який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з БЕО
ІО МО: 16, ЗЕО ІЮ МО: 17 і ЗЕО ІЮ МО: 18, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІО МО: 33, 5ЕО І МО: 34.
В одному з таких варіантів здійснення винаходу зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент містить СОК1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 39, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 33, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 34 фрагмент, що зв'язує антиген РОЇК, містить СОКІ1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 10) 16, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 17, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО:
18, СОК!І легкого ланцюга, що має ЗЕО ІО МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 33, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 34.
В одному з варіантів здійснення даного винаходу запропонована біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить (ЇЇ) перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Рар, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, і який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 31. (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РоїІК1), і який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 15, варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 31. (ІП) третій антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РОЇК), і який містить варіабельну важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 15, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 31.
Так, один з варіантів здійснення винаходу стосується біспецифічних молекул, у яких принаймні два зв'язувальні фрагменти мають ідентичні легкі ланцюги й відповідні реконструйовані важкі ланцюги, які забезпечують специфічне зв'язування з антигеном СОЗ, що активує Т-клітину, і антигеном клітини-мішені РОЇК! відповідно. Застосування так званого принципу "загального легкого ланцюга", тобто об'єднання двох зв'язувальні агентів, які мають однин (і той же!!Й) легкий ланцюг, але мають різні специфічності, запобігає помилковому спарюванню легких ланцюгів. Таким чином, у процесі виробництва утворюється менша кількість побічних продуктів, що полегшує одержання гомогенних біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітину.
Компоненти біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, можна зливати один з одним у різних конфігураціях. Приклади конфігурацій представлені на фіг. ТА-И й більш докладно описані нижче.
У деяких варіантах здійснення винаходу вказана біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, додатково містить Ес-домен, що складається з першої й другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації. У представлені нижче як приклад варіантах здійснення винаходу описана біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить Ес-домен.
Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить кросовер-
Еаб-фрагмент
При створенні даного винаходу був створений другий формат біспецифічного антитіла, у якому один з зв'язувальних фрагментів представляє собою кросовер-Рар-фрагмент. Одним з об'єктів винаходу є одновалентне біспецифічне антитіло, у якому один з Рар-фрагментів молекули дО замінений на кросовер-бар-фрагмент. Кросовер-бар-фрагменти представляють собою Рар-фрагменти, у яких обміняні або варіабельні ділянки, або константні ділянки важкого й легкого ланцюга. Формати біспецифічного антитіла, що містить кросовер-Рар-фрагменти, описані, наприклад, в УМО 2009/080252, УМО 2009/080253, УМО 2009/080251, УМО 2009/080254,
УМО 2010/136172, МО 2010/145792 ії МО 2013/026831. У конкретному варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент представляє собою кросовер-молекулу Раб, у якій обміняні або варіабельні ділянки, або константні ділянки легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Раб. Така модифікація попереджає помилкове спарювання важких і легких ланцюгів з різних молекул Раб, що підвищує вихід і чистоту антигензв'язувальної молекули, що активує Т- клітину, запропонованої у винаході, при її одержанні методами рекомбінації. У конкретній кросовер-молекулі Бар, яку можна використовувати в біспецифічній антигензв'язувальній молекулі, що активує Т-клітину, запропонованій у винаході, обміняні варіабельні ділянки легкого ланцюга ЕаБб і важкого ланцюга Раб. В іншій кросовер-молекулі Раб, яку можна використовувати в біспецифічній антигензв'язувальній молекулі, що активує Т-клітину, запропонованій у винаході, обміняні константні ділянки легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга ЕРар.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить (ЇЇ перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою кросовер-молекулу
Бар, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з 5ЗЕО ІЮ
МО: 37, ЗЕО ІЮ МО: 38 і БЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи 60 5ЕОІЮ МО: 32, 5ЕО ІО МО: 33, ЗЕО ІО МО: 34;
(ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕоЇКт1), який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 8, ЗЕО ІЮ МО: 56 і БЕО ІЮ МО: 57, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮО МО: 59, 5ЕО ІЮО МО: 60, 5ЕО
ІО МО: 65.
В одному з таких варіантів здійснення винаходу зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент містить СОК1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 39, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 33, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 34 антиген й фрагмент, що зв'язує ЕоЇК1, містить СОКІТ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 8, СОК2 важкого ланцюга, що має БЕО ІО МО: 56, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО:57, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 59, СОК2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 60, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО:65.
В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент представляє собою канонічну молекулу Рар.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить (ЇЇ перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою кросовер-молекулу
Еаб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 31. (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕОїК/1), який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 55, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 64.
В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент представляє собою канонічну молекулу Раб.
У наступному варіанті здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має специфічність у відношенні РОЇК, містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична до ЗЕО ІЮ МО: 55, і послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 ФУ, 98 9, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІЮО МО: 64, або їх варіанти, які зберігають функціональність.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить поліпептидну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 9, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІЮ МО: 36, поліпептидну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У», 98 9, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІЮ МО: 31, поліпептидну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична до ЗЕО ІО МО: 55, і поліпептидну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 Фо, 96 о, 97 95, 98 о, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІО МО: 64.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, додатково містить (ПП) третій антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з
ЕоІВ1.
В одному з варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язувальний фрагмент представляє собою канонічну молекулу Бар. В одному з варіантів здійснення винаходу, третій антигензв'язувальний фрагмент представляє собою кросовер-молекулу Еаб.
В одному з таких варіантів здійснення винаходу другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися 3 БоЇК1, містять ідентичні послідовності гіперваріабельної ділянки (СОМ) важкого ланцюга й СОМ легкого ланцюга. В одному з таких варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язувальний фрагмент ідентичний до другого антигензв'язувального фрагменту.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить () перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою кросовер-молекулу
Бар, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з 5ЗЕО ІЮ
МО: 37, ЗЕО ІЮ МО: 38 і БЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи
ЗЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО І МО: 33, 5ЕО ІЮО МО: 34; (610) (ІІ) другий антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕоїКт), який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 8, ЗЕО ІЮ МО: 56 і БЕО ІЮ МО: 57, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮО МО: 59, ЗЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО
ІО МО: 65; (І) третій антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕоїКт), який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 8, ЗЕО ІЮ МО: 56 і БЕО ІЮ МО: 57, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮО МО: 59, 5ЕО ІЮО МО: 60, 5ЕО
ІО МО: 65.
В одному з таких варіантів здійснення винаходу зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент містить СОК1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 39, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮО МО: 33, ії СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 34 антиген й фрагмент, що зв'язує ЕоЇК1, містить СОКІТ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 8, СОК2 важкого ланцюга, що має БЕО ІО МО: 56, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 57, СОКІ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 59, СОК2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 60, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 65.
В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент і третій антигензв'язувальні фрагменти обидва представляють собою канонічну молекулу Раб.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить (ЇЇ перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою кросовер-молекулу
Еаб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 31. (І) другий антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (БоЇК!), який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 55, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 64. (І) третій антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (БоЇК!), який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 55, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 64.
В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент і третій антигензв'язувальний фрагмент обидва представляють собою канонічну молекулу Раб.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить (ЇЇ перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою кросовер-молекулу
Бар, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ
МО: 37, ЗЕО ІЮ МО: 38 і БЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи
ЗЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО І МО: 33, 5ЕО ІЮО МО: 34; (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕоїКт), який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОР) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 8, ЗЕО ІЮО МО: 9 і БЕО ІЮ МО: 50, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮ МО: 52, 5ЕО ІЮ МО: 53, 5ЕО
ІО МО: 54.
В одному з таких варіантів здійснення винаходу зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент містить СОК1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 39, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 33, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 34 антиген й фрагмент, що зв'язує ЕоЇК1, містить СОКІТ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 8, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 9, СОКЗ важкого ланцюга, що має ЗЕО ІО
МО:50, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 52, СОК2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 53, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО:54.
В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент представляє собою канонічну молекулу Рар. В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент представляє собою кросовер-молекулу Еаб.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що (610) активує Т-клітину, містить
(ЇЇ перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою кросовер-молекулу
Еаб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 31. (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Бар, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕОїК/І), який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 49, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 51.
В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент представляє собою канонічну молекулу Рар. В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент представляє собою кросовер-молекулу Еаб.
У наступному варіанті здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, який має специфічність у відношенні РОЇК, містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична до ЗЕО ІЮ МО: 49, і послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 9, 99 956 або 100 95 ідентична до ЗЕО ІО МО: 51 або її варіанти, які зберігають функціональність.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить поліпептидну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІЮ МО: 36, поліпептидну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У», 98 9, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІЮ МО: 31, поліпептидну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична до ЗЕО ІЮО МО: 49, поліпептидну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 Фо, 96 о, 97 95, 98 о, 99 95 або 100 95 ідентична до 5ЕО ІО МО: 51.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, додатково містить (ПП) третій антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з
ЕоІВ1.
В одному з варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язувальний фрагмент представляє собою канонічну молекулу Рар. В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент представляє собою кросовер-молекулу Еаб.
В одному з таких варіантів здійснення винаходу другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися з оїЇК!, містять ідентичні послідовності гіперваріабельної ділянки (СОК) важкого ланцюга й СОК легкого ланцюга. В одному з таких варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язувальний фрагмент ідентичний другому антигензв'язувальний фрагмент.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить (ЇЇ перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою кросовер-молекулу
Баб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЮЗ, який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з 5ЗЕО ІЮ
МО: 37, ЗЕО ІЮ МО: 38 і БЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи
ЗЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО І МО: 33, 5ЕО ІЮ МО: 34; (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РОЇК), який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з БЕО
ІО МО: 8, 5ЕО ІЮО МО: 9 ї БЕО ІО МО: 49, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи
ЗЕО ІО МО: 52, 5ЕО І МО: 53, 5ЕО ІО МО: 54; (І) третій антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РОЇК), який містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО
ІО МО: 8, 5ЕО ІЮО МО: 9 ї БЕО ІО МО: 50, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи
ЗЕО ІО МО: 52, 5ЕО І МО: 53, 5ЕО ІО МО: 54.
В одному з таких варіантів здійснення винаходу зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент містить СОК1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має ЗЕО ІО МО: 39, СОКІ1 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ
МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 33, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 34 антиген й фрагмент, що зв'язує ЕоЇК1, містить СОКІТ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 8, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 9, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ 10) МО: 50, СОКІ легкого ланцюга, що має ЗЕО ІО МО: 52, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ
МО: 53, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 54.
В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент і третій антигензв'язувальний фрагмент обидва представляють собою канонічну молекулу Раб.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить (ЇЇ перший антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою кросовер-молекулу
Еаб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 31. (ІЇ) другий антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Бар, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕОїК/1), який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 49 і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 51. (ІП) третій антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (ЕоїІК), який містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 49, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 51.
В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент і третій антигензв'язувальний фрагмент обидва представляють собою канонічну молекулу Раб.
Так, один з варіантів здійснення винаходу стосується біспецифічних молекул, у яких два зв'язувальні фрагменти забезпечують специфічне зв'язуванням з РоЇК1 і один зв'язувальний фрагмент забезпечує специфічність у відношенні антигену СОЗ, що активує Т-клітину. Один з важких ланцюгів модифікують для забезпечення правильного спарювання важкого й легкого ланцюгів, виключаючи тим самим необхідність застосування підходу, заснованого на використанні загального легкого ланцюга. Наявність двох сайтів зв'язування БоЇК1 дозволяє здійснювати необхідну взаємодію з антигеном-мішенню Роїк! і активацію Т-клітин.
Компоненти біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, можна зливати один з одним у різних конфігураціях. Приклади конфігурацій представлені на фіг. Т1А-И й більш докладно описані нижче.
У деяких варіантах здійснення винаходу вказана біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, додатково містить Ес-домен, який складається з першої й другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації. Нижче описані приклади варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, що містить Ес- домен.
Формати біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину
Як вказано вище й проілюстроване на фіг. 1А-И, в одному з варіантів здійснення винаходу біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітину, містять принаймні два Еар- фрагмента, що мають ідентичні легкі ланцюги (МІ Сі) і різні важкі ланцюги (МНС), які забезпечують специфічності у відношенні двох різних антигенів, а саме, один Гар-фрагмент має здатність специфічно зв'язуватися з антигеном СОЗ, що активує Т-клітину, а інший Рар- фрагмент має здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені ЕоїЇК1.
В іншому варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить принаймні два антигензв'язувальні фрагменти (молекул Раб), один з яких представляє собою кросовер-молекулу Бар, а інший представляє собою канонічну молекулу Раб. В одному з таких варіантів здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, представляє собою кросовер- молекулу Бар, а другий антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з ГБОІР, представляє собою канонічну молекулу Раб.
Вказані компоненти біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, можна зливати один з одним у різних конфігураціях. Приклади конфігурацій представлені на фіг. 1ТА-И.
У деяких варіантах здійснення винаходу перший і другий антигензв'язувальні фрагменти кожний злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес- домену. В одному конкретному такому варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, практично складається з першого й другого антигензв'язувальних фрагментів, Ес-домену, що складається з першої й другої субодиниці, і необов'язково одного або декількох пептидних лінкерів, де перший і другий антигензв'язувальний фрагмент кожний злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес-домену. В одному з таких варіантів здійснення винаходу (610) перший і другий антигензв'язувальні фрагменти обидва представляють собою Раб-фрагменти й
Зо мають ідентичні легкі ланцюги (МІ СІ). В іншому такому варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЮЗ, представляє собою кросовер-молекулу Бар, а другий антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з ЕОЇІє, представляє собою канонічну молекулу Раб.
В одному з варіантів здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент злитий на
С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес-домену, а перший антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Бар другого антигензв'язувального фрагмента. У конкретному вказаному варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, практично складається з першого й другого антигензв'язувальних фрагментів, Есо-домену, що складається з першої й другої субодиниць, і необов'язково одного або декількох пептидних лінкерів, де перший антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Еаб з М- кінцем важкого ланцюга Бар другого антигензв'язувального фрагмента, а другий антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес-домену. В одному з таких варіантів здійснення винаходу перший і другий антигензв'язувальні фрагменти обидва представляють собою Баб-фрагменти й мають ідентичні легкі ланцюги (МІС!) В іншому такому варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, представляє собою кросовер-молекулу Бар, а другий антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з Роїк, представляє собою канонічну молекулу Раб. Необов'язково легкий ланцюг Бар першого антигензв'язувального фрагмента й легкий ланцюг Бар другого антигензв'язувального фрагмента можуть бути додатково злито один з одним.
В інших варіантах здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент злитий на
С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес-домену. У конкретному вказаному варіанті здійснення винаходу другий антигензв'язувальний фрагмент злитий на С- кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Раб першого антигензв'язувального фрагмента. У конкретному вказаному варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, практично складається з першого й другого антигензв'язувальних фрагментів, Ес-домену, що складається з першої й другої субодиниць, і необов'язково одного або декількох пептидних лінкерів, де другий антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Бар першого антигензв'язувального фрагмента, а перший антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес- домену. В одному з таких варіантів здійснення винаходу перший і другий антигензв'язувальні фрагменти обидва представляють собою Еаб-фрагменти й мають ідентичні легкі ланцюги (М С). В іншому такому варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, представляє собою кросовер-молекулу Раб, а другий антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з ЕЄОЇїК, представляє собою канонічну молекулу Бар. Необов'язково легкий ланцюг Бар першого антигензв'язувального фрагмента й легкий ланцюг Бар другого антигензв'язувального фрагмента можуть бути додатково злиті один з одним.
Антигензв'язувальні фрагменти можуть бути злиті з ЕРо-доменом або один з одним безпосередньо або через пептидний лінкер, що містить одну або декілька амінокислот, як правило, приблизно 2-20 амінокислот. Пептидні лінкери відомі в даній галузі, і вони представлені в даному описі. Придатні неімуногенні пептидні лінкери включають, наприклад, пептидні лінкери (45) (ЗЕО ІО МО: 300), (5Оа)п (5ЕО ІО МО: 301), (Саб)п (ЗЕО ІЮ МО: 300) або
С(5Сі4)я (ЗЕО ІЮ МО: 302). Як правило, "п" означає число від 1 до 10, як правило, від 2 до 4.
Найбільш придатним пептидним лінкером для злиття легких ланцюгів бар першого й другого антигензв'язувальних фрагментів один з одним є (б45)2 (ЗЕО І МО: 303). Прикладом пептидного лінкера, придатного для з'єднання важких ланцюгів Бар першого й другого антигензв'язувальних фрагментів є ЕРКЗС(О)-(С145)2 (ЗЕО ІЮ МО: 304 ії 305). Лінкери можуть додатково містити шарнірну ділянку імуноглобуліну (її частину). Зокрема, коли антигензв'язувальний фрагмент злитий на М-кінці субодиниці Ес-домену, то він може бути злитий за допомогою шарнірної ділянки імуноглобуліну або її частини з використанням або без використання додаткового пептидного лінкера.
При створенні даного винаходу було встановлено, що, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить два зв'язувальні фрагменти, специфічні відносно антигену клітини-мішені РОЇК, має більш кращі характеристики в порівнянні з біспецифічною антигензв'язувальною молекулою, що активує Т-клітину, що містить тільки один зв'язувальний (610) фрагмент, специфічний відносно антигену клітини-мішені ЕоїК.
Відповідно до цього в конкретних варіантах здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована у винаході, містить також третій антигензв'язувальний фрагмент, який представляє собою молекулу Еаб, що має здатність специфічно зв'язуватися з РОЇК. В одному з таких варіантів здійснення винаходу другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися з
ЕОїІКТ, містять ідентичні послідовності гіперваріабельної ділянки (СОК) важкого ланцюга й СО легкого ланцюга. В одному з таких варіантів здійснення винаходу третій антигензв'язувальний фрагмент ідентичний до другого антигензв'язувального фрагменту (тобто вони містять однакові амінокислотні послідовності).
В одному з варіантів здійснення винаходу перший і другий антигензв'язувальний фрагмент кожний злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес- домену, а третій антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М- кінцем важкого ланцюга Бар першого антигензв'язувального фрагмента. У конкретному такому варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, практично складається з першого, другого й третього антигензв'язувальних фрагментів
Ес-домену, що складається з першої й другої субодиниць, і необов'язково одного або декількох пептидних лінкерів, де перший і другий антигензв'язувальний фрагмент кожний злитий на С- кінці важкого ланцюга аб оз М-кінцем першої субодиниці Ес-домену, а третій антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Раб першого антигензв'язувального фрагмента. В одному з таких варіантів здійснення винаходу перший, другий і третій антигензв'язувальні фрагменти представляють собою канонічні Гар-фрагменти й мають ідентичні легкі ланцюги (МІ СІ). В іншому такому варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, представляє собою кросовер-молекулу Бар, а другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, що має здатність специфічно зв'язуватися з РОЇК, представляють собою канонічну молекулу Бар. Необов'язково легкий ланцюг Бар першого антигензв'язувального фрагмента й легкий ланцюг Бар третього антигензв'язувального фрагмента додатково можуть бути злито один з одним.
Таким чином, у конкретних варіантах здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована у винаході, містить п'ять поліпептидних ланцюгів, які утворюють перший, другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, де перший антигензв'язувальний фрагмент має здатність зв'язуватися з СОЗ, а другий і третій антигензв'язувальний фрагмент кожний має здатність зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (БоІК1). Перший й другий поліпептидні ланцюги містять у напрямку від аміно- (М)-кінця до карбоксильного (С)-кінця варіабельний домен першого легкого ланцюга (МІ 01) і константний домен першого легкого ланцюга (СІ 01). Третій поліпептидний ланцюг містить у напрямку від М- кінця до С-кінця варіабельний домен другого легкого ланцюга (МІ. 02) і константний домен 1 другого важкого ланцюга (СНІ1О2). Четвертий поліпептидний ланцюг містить у напрямку від М- кінця до С-кінця варіабельний домен першого важкого ланцюга (МНОЇ), константний домен 1 першого важкого ланцюга (СНІ1О1), константний домен 2 першого важкого ланцюга (СН2ОТ) і константний домен З першого важкого ланцюга (СНЗО1). П'ятий поліпептидний ланцюг містить
МНО1, СНІ, варіабельний домен другого важкого ланцюга (МНО2), константний домен другого легкого ланцюга (СІ 02), константний домен 2 другого важкого ланцюга (СН2гО2) і константний домен З другого важкого ланцюга (СНЗО2). Третій поліпептидний ланцюг і МНО?2 і
СІГ02 п'ятого поліпептидного ланцюга утворюють перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність зв'язуватися з СОЗ. Другий поліпептидний ланцюг і МНОЇ і СНІО1 п'ятого поліпептидного ланцюга утворюють третій зв'язувальний фрагмент, що має здатність зв'язуватися з БоЇК1. Перший поліпептидний ланцюг і МНО1 ї СНІО1 четвертого поліпептидного ланцюга утворюють другий зв'язувальний фрагмент, що має здатність зв'язуватися з БОЇК1.
В іншому варіанті здійснення винаходу другий і третій антигензв'язувальний фрагмент кожний злитий на С-кінці важкого ланцюга Раб з М-кінцем першої або другої субодиниці Ес- домену, а перший антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М- кінцем важкого ланцюга Раб другого антигензв'язувального фрагмента. У конкретному такому варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, практично складається з першого, другого й третього антигензв'язувальних фрагментів,
Ес-домену, що складається з першої й другої субодиниць, і необов'язково одного або декількох пептидних лінкерів, де другий і третій антигензв'язувальний фрагмент кожний злитий на С-кінці важкого ланцюга Рабр з М-кінцем першої субодиниці Ес-домену, а перший антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга ЕРар третього (610) антигензв'язувального фрагмента. В одному з таких варіантів здійснення винаходу перший,
другий і третій антигензв'язувальні фрагменти представляють собою канонічні Гар-фрагменти й вони мають ідентичні легкі ланцюги (МІ СІ). В іншому такому варіанті здійснення винаходу перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, представляє собою кросовер-молекулу Раб, а другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися з РОЇ, представляють собою канонічну молекулу
Раб. Необов'язково легсий ланцюг Бар першого антигензв'язувального фрагмента й легкий ланцюг Раб другого антигензв'язувального фрагмента можуть бути додатково злито один з одним.
Антигензв'язувальні фрагменти можуть бути злиті з Ес-доменом безпосередньо або через пептидний лінкер. У конкретному варіанті здійснення винаходу кожний з антигензв'язувальних фрагментів злитий з Ес-доменом через шарнірну ділянку імуноглобуліну. У конкретному варіанті здійснення винаходу шарнірний ділянка імуноглобуліну представляє собою шарнірну ділянку людського Ідс.
В одному з варіантів здійснення винаходу перший і другий антигензв'язувальні фрагменти й
Ес-домен є частиною молекули імуноглобуліну. У конкретному варіанті здійснення винаходу молекула імуноглобуліну представляє собою імуноглобулін Ідс-класу. У ще більш конкретному варіанті здійснення винаходу імуноглобулін представляє собою імуноглобулін Ідс-підкласу. В іншому варіанті здійснення винаходу імуноглобулін представляє собою імуноглобулін Ідса- підкласу. В іншому варіанті здійснення винаходу імуноглобулін представляє собою людський імуноглобулін. В інших варіантах здійснення винаходу імуноглобулін представляє собою химерний імуноглобулін або гуманізований імуноглобулін.
У конкретному варіанті вказаної біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує
Т-клітину, перший і другий антигензв'язувальні фрагменти й ЕБсо-домен є частиною молекули імуноглобуліну, а третій антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Раб першого антигензв'язувального фрагмента, де перший, другий і третій антигензв'язувальні фрагменти представляють собою канонічні Гар-фрагменти й мають ідентичні легкі ланцюги (МІ СІ), де перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, містить принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з БЗЕО ІЮ МО: 37, 5ЕО ІЮО МО: 38 і 5ЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 33 ї ЗЕО ІЮ
МО: 34; і другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися з ГБОЇІК1, містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 16, ЗЕО ІЮО МО: 17 і ЗЕО ІЮ МО: 18, і принаймні одну СОЕК легкого ланцюга, вибрану із групи ЗЕО ІЮ МО: 32, ЗЕО ІО МО: 33 і БЕО ІО МО: 34.
У конкретному варіанті вказаної біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує
Т-клітину, перший і другий антигензв'язувальні фрагменти й Ес-домен є частиною молекули імуноглобуліну, а третій антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Бар першого антигензв'язувального фрагмента, де перший, другий і третій антигензв'язувальні фрагменти представляють собою канонічні Гар-фрагменти й мають ідентичні легкі ланцюги (МС), де перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, містить варіабельний важкий ланцюг, що містить послідовність
ЗЕО ІО МО: 36, варіабельний легкий ланцюг, що містить послідовність ЖЕО ІЮ МО: 31; а другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися з ЕоїЇК1, містять варіабельний важкий ланцюг, що містить послідовність 562 ІЮ МО: 15, варіабельний легкий ланцюг, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО: 31.
У конкретному варіанті вказаної біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує
Т-клітину, перший і другий антигензв'язувальні фрагменти й Ес-домен представляють собою частину молекули імуноглобуліну, а третій антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Бар першого антигензв'язувального фрагмента й перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з СЮОЗ, представляє собою кросовер-молекулу Раб, у якій або варіабельні, або константні ділянки легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Бар вимінян, що містить принаймні один гіперваріабельна ділянка (СОК) важкого ланцюга, вибраний із групи, яка складається з
ЗЕО ІЮ МО: 37, ЗЕО ІЮ МО: 38 і БЕО ІО МО: 39, і принаймні одну СОЕК легкого ланцюга, вибрану із групи 5ЕО ІЮ МО: 32, 5БО ІЮО МО: 33 ї 5ЕО ІО МО: 34; і другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися з РБОЇК1, містять принаймні одну гіперваріабельну ділянку (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з 5ЗЕО ІЮ
МО: 8, ЗЕО ІЮО МО: 56 і 5ЕО ІО МО: 57, і принаймні одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи
ЗЕО ІЮ МО: 59, БЕО ІЮО МО: 60 і ЗЕО ІЮ МО: 65. (610) У конкретному варіанті вказаної біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує
Т-клітину, перший і другий антигензв'язувальні фрагменти й ЕБсо-домен є частиною молекули імуноглобуліну, а третій антигензв'язувальний фрагмент злитий на С-кінці важкого ланцюга Бар з М-кінцем важкого ланцюга Бар першого антигензв'язувального фрагмента, і перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, представляє собою кросовер-молекулу Раб, у якій або варіабельні, або константні ділянки легкого ланцюга
Раб ії важкого ланцюга Раб обміняні, де перший антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ, містить варіабельний важкий ланцюг, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО: 36, варіабельний легкий ланцюг, що містить послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 31; а другий і третій антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватися з ГоЇК1, містять варіабельний важкий ланцюг, що містить послідовність 560 ІЮ
МО: 55, варіабельний легкий ланцюг, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО: 65.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, є одновалентною відносно кожного антигену. У конкретному варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, може зв'язуватися з людським СОЗ і людським фолатним рецептором альфа (БоїЇК1) і вона сконструйована без застосування підходу на основі гетеродимеризації, такого, наприклад, як технологія "Кпор-іпіо-поЇе". Наприклад, молекулу можна одержувати з використанням бібліотеки загальних легких ланцюгів і технології Сто55Мабр. У конкретному варіанті здійснення винаходу варіабельну ділянку СОЗ-зв'язувального агента зливають із СНІі-доменом стандартного людського антитіла у вигляді Ідс1 з утворенням МІ МН-«схрещеної" молекули (злитої з Ес), яка є загальною для обох специфічностей. Для створення схрещених "копій" (МНС) специфічний у відношенні СЮОЗ варіабельний домен важкого ланцюга зливають із людським константним легким к-ланцюгом, у той час як варіабельний домен важкого ланцюга, специфічний у відношенні людського БоЇК! (наприклад, виділений з бібліотеки загальних легких ланцюгів) зливають із людським константним легким к -ланцюгом. Отримана в результаті цього необхідна молекула із правильно спареними ланцюгами містить легкі й капа-, і лямбда-ланцюги або їх фрагменти. Потім ці необхідні види біспецифічної молекули можна очищати від неправильно спарених або гомодимерних видів, здійснюючи послідовно стадії очищення для легкого капа- і лямбда-ланцюгів в будь-якому порядку. В одному з конкретних варіантів здійснення винаходу очищення необхідного біспецифічного антитіла проводять за допомогою послідовних стадій очищення на колонках з Карразеїесі і І атраагБарзеїесі (фірма СЕ Неайсаге) для видалення небажаних гомодимерних антитіл.
Ес-домен
Ес-домен біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, складається з пари поліпептидних ланцюгів, що містять домени важкого ланцюга молекули імуноглобуліну.
Наприклад, ЕРс-домен молекули імуноглобуліну З (40) представляє собою димер, кожна субодиниця якого містить константні домени СНЕ2 і СНЗ важкого ланцюга Ідо. Дві субодиниці Ес- домену мають здатність до стабільної асоціації одна з одною. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована у винаході, містить не більше одного Ес-домену.
В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, представляє собою Ес-домен Ідс. У конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен представляє собою Ес-домен досі. В іншому варіанті здійснення винаходу Ес-домен представляє собою Ес-домен Ідся. У більш конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен представляє собою Ес-домен дб, що містить амінокислотну заміну в положенні 5228 (нумерація за Кеботом), насамперед амінокислотну заміну 5228Р. Вказана амінокислотна заміна знижує іп мімо обмін в РГар-плече антитіл у вигляді Їдса (див. Біирепгаицсі і ін.. ЮОгид Меїароїїзт апа Оізрозйіоп 38, 2010, стор. 84-91). В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен є людським. Приклад послідовності Ес-ділянки людського ІдС1 представлений в ЗЕО ІЮ МО: 245.
Модифікації Ес-домену, що сприяють гетеродимеризації
Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітину, запропоновані у винаході, містять різні антигензв'язувальні фрагменти, злиті з однієї або іншою із двох субодиниць Ес-домену, при цьому дві субодиниці Ес-домену, як правило, містяться у двох неідентичних поліпептидних ланцюгах. Рекомбінантна спільна експресія цих поліпептидів і наступна димеризація приводить до декількох можливих комбінацій двох поліпептидів. Для підвищення виходу й чистоти біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т- клітини, при їх одержанні методами рекомбінації доцільно інтродукувати в Ес-домен біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітини, модифікацію, яка сприяє 10) асоціації необхідних поліпептидів.
Таким чином, у конкретних варіантах здійснення винаходу Ес-домен біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітини, запропонованої у винаході, містить модифікацію, яка сприяє асоціації першої й другої субодиниці Ес-домену. Сайт найбільш сильного білок-білкової взаємодії двох субодиниць Ес-домену людського ЇДО знаходиться в
СНЗ-домені ЕРс-домену. Таким чином, в одному з варіантів здійснення винаходу вказана модифікація знаходиться в СНЗ-домені Ес-домену.
У конкретному варіанті здійснення винаходу вказана модифікація представляє собою так звану модифікацію типу "Кпоб-іп-поЇе" (типу "виступ-впадина"), яка включає модифікацію, що приводить до утворення "виступу" на одній із двох субодиниць Ес-домену й модифікацію, що приводить до утворення "западини" в інший одній із двох субодиниць Ес-домену.
Технологія "Кпоб-іпіо-поЇе" описана, наприклад, в ОЗ Мо 5731168; 5 Мо 7695936; в Кіддулау і ін., Ргої Епо 9, 1996, стор. 617-621 і Сапег, У Іттипої Мейй 248, 2001, стор. 7-15. У цілому, метод включає інтродукцію опуклості ("виступ") на поверхні розділу першого поліпептиду й відповідної порожнини ("западина") у поверхні розділу другого поліпептиду, у результаті опуклість може поміщатися в порожнину, сприяючи тим самим утворенню гетеродимеру й перешкоджаючи утворення гомодимеру. Опуклості конструюють шляхом заміни амінокислот з невеликими боковими ланцюгами на поверхні розділу першого поліпептиду на амінокислоти з більшими боковими ланцюгами (наприклад, на тирозин або триптофан). Компенсуючі порожнини ідентичного або подібного з опуклостями розміру створюють в поверхні розділу другого поліпептиду шляхом заміни амінокислот з великими боковими ланцюгами на амінокислоти з менш великими боковими ланцюгами (наприклад, аланін або треонін).
Таким чином, у конкретному варіанті здійснення винаходу в СНЗ-домені першої субодиниці
Ес-домену біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітини, амінокислотний залишок замінений амінокислотним залишком, який має більший об'єм бокового ланцюга, що приводить до утворення опуклості на СНЗ-домені першої субодиниці, яка може поміщатися в порожнину в СНЗ-домені другої субодиниці, і в СНЗ-домені другої субодиниці Ес-домену амінокислотний залишок замінений амінокислотним залишком, який має менший об'єм бокового ланцюга, що приводить до утворення порожнини в СНЗ-домені другої субодиниці, у яку може поміщатися опуклість на СНЗ-домені першої субодиниці.
Опуклість і порожнину можна створювати шляхом зміни нуклеїнових кислот, що кодують поліпептиди, наприклад, за допомогою сайтнаправленого мутагенезу або шляхом пептидного синтезу.
У конкретному варіанті здійснення винаходу в СНЗ-домені першої субодиниці Ес-домену залишок треоніну в положенні 366 замінений залишком триптофану (Т366ММ), а в СНЗ-домені другої субодиниці Ес-домену залишок тирозину в положенні 407 замінений на залишок валіну (У407М). В одному з варіантів здійснення винаходу в другий субодиниці Ес-домену додатково залишок треоніну в положенні 366 замінений на залишок серину (713665) і залишок лейцину в положенні 368 замінений на залишок аланіну (І3685ХА).
У наступному варіанті здійснення винаходу в першої субодиниці Ес-домену додатково залишок серину в положенні 354 замінений на залишок цистеіну (5354С), а в другій субодиниці
Ес-домену додатково залишок тирозину в положенні 349 замінений на залишок цистеїну (у349С). Інтродукція вказаних двох залишків цистеїну приводить до утворення дисульфідного містка між двома субодиницями Ес-домену, тим самим додатково стабілізуючи димер (Сапег, у
Ітітипої Меїпоаз 248, 2001, стор. 7-15).
У конкретному варіанті здійснення винаходу антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність зв'язуватися з СОЮЗ, злитий (необов'язково через антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність зв'язуватися з антигеном ЕБоОЇК1 на клітини-мішені) з першої субодиницію Ес- домену (яка містить модифікацію, що приводить до утворення "виступу").
Не вдаючись у яку-небудь теорію, злиття антигензв'язувального фрагмента, що має здатність зв'язуватися з СОЮЗ з субодиницею Ес-домену, що містить "виступ", повинно (додатково) мінімізувати утворення антигензв'язувальних молекул, що містять два антигензв'язувальні фрагменти, що мають здатність зв'язуватися з СОЗ (стеричне "зіткнення" двох поліпептидів, що містять "виступ".
В альтернативному варіанті здійснення винаходу модифікація, що сприяє асоціації першої й другої субодиниці Ес-домену, представляє собою модифікацію, що опосередковує обумовлені електростатичною дією впливи, наприклад, описані в публікації РСТ МО 2009/089004. У цілому, вказаний метод включає заміну одного або декількох амінокислотних залишків на поверхні розділу двох субодиниць Ес-домену на заряджені амінокислотні залишки, у результаті чого утворення гомодимеру стає електростатично невигідним, а гетеродимеризація стає 10) електростатично вигідною.
Модифікації Ес-домену, що приводять до анулювання зв'язування з Ес-рецептором та/або ефекторної функції
Ес-домен надає біспецифічній антигензв'язувальній молекулі, що активує Т-клітину, кращі фармакокінетичні властивості, включаючи тривалий час напівжиття в сироватці, що забезпечує хороше накопичення в тканині-мішені й краще співвідношення розподілу в тканині-крові. Однак у той же час він може приводити до небажаної спрямованості біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, до клітин, які експресують Ес-рецептори, а не до переважних клітин, які несуть антиген. Крім того, спільна активація шляхів передачі сигналів Ес-рецептора може приводити до вивільнення цитокінів, що в комбінації із зумовлюючими активацію Т-клітини властивостями й тривалим часом напівжиття антигензв'язувальної молекули, приводить до надлишкової активації цитокінових рецепторів і серйозних побічних дій при системному введенні. Активація імунних клітин (які несуть Ес- рецептор), відмінних від Т-клітин, може навіть знижувати ефективність біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітини, через можливу деструкцію Т-клітин, наприклад, МК-клітинами.
Таким чином, згідно з конкретними варіантами здійснення винаходу Ес-домен біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, запропонованих у винаході, має знижену афінність зв'язування з Ес-рецептором та/або знижену ефекторну функціє в порівнянні з нативним Ес-доменом Ідси. В одному із вказаних варіантів здійснення винаходу Ес-домен (або біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить вказаний Ес- домен) характеризується афінністю зв'язування, що становить менше, ніж 50 95, переважно менше, ніж 20 95, більш переважно менше, ніж 10 95 і найбільш переважно менше, ніж 5 95 від афінності зв'язування з Ес-рецептором нативного Ес-домену дос: (або біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, що містить вказаний нативний Ес-домен
Ідс1х), талабо ефекторною функцією, що становить менше, ніж 50 95, переважно менше, ніж 20 95, більш переважно менше, ніж 10 95 і найбільш переважно менше, ніж 5 95 від ефекторної функції нативного Ес-домену Ідсїі (або біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, що містить вказаний нативний Ес-домен дб). В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен (або біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, яка містить вказаний Ес-домен) практично не зв'язується з Ес-рецептором та/або не індукує ефекторну функцію. У конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-рецептор представляє собою Есу-рецептор. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-рецептор представляє собою людський Ес-рецептор. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес- рецептор являє собою активуючий Ес-рецептор. У конкретному варіанті здійснення винаходу
Ес-рецептор являє собою активуючий людський Есу-рецептор, більш конкретно людський
ЕсукШа, Есук!І або ЕсукКіІІа, найбільш переважно людський ЕсукІШа. В одному з варіантів здійснення винаходу ефекторна функція представляє собою одну або декілька функцій, вибраних із групи, що включає СОС, АОСС, АОСР і секрецію цитокінів. У конкретному варіанті здійснення винаходу ефекторна функція представляє собою АЮСС. В одному з варіантів здійснення винаходу ЕБо-домен характеризується практично такою ж афінністю зв'язування з неонатальним Ес-рецептором (БсКп), що й нативний Ес-домен ІдсбС:ї. Практично таке ж зв'язування з БЕсКп досягається, коли Ес-домен (або біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить вказаний Ес-домен), характеризується афінністю зв'язування, що становить більше ніж приблизно 70 95, переважно більше ніж приблизно 80 95, більш переважно більше ніж приблизно 90 95, від афінності зв'язування нативного Ес-домену
Ід (або біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, що містить нативний Ес домен Ідси) з ЕсКп.
Згідно з деякими варіантами здійснення винаходу Ес-домен конструюють так, щоб він мав знижену афінність зв'язування з Ес-рецептором та/або знижену ефекторну функцію в порівнянні з не підданим інженерії Ес-доменом. У конкретних варіантах здійснення винаходу Ес-домен біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, містить одну або декілька амінокислотних мутацій, які знижують афінність зв'язування Ес-домену з Ес-рецептором та/або ефекторну функцію. Як правило, у кожній із двох субодиниць Ес-домену присутня (ї) одна або декілька однакових амінокислотних мутацій. В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна мутація знижує афінність зв'язування Ес-домену з Есо-рецептором. В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна мутація знижує афінність зв'язування Ес-домену з
Ес-рецептором принаймні в 2 рази, принаймні в 5 раз або принаймні в 10 разів. Згідно з варіантами здійснення винаходу, у яких має місце більше однієї амінокислотної мутації, які знижують афінність зв'язування Ео-домену з Ес-рецептором, комбінація вказаних (610) амінокислотних мутацій може знижувати афінність зв'язування Ес-домену з Ес-рецептором принаймні в 10 разів, принаймні в 20 разів або принаймні в 50 разів. В одному з варіантів здійснення винаходу біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітини, що містить сконструйований Ес-домен, характеризується афінністю зв'язування, що становить менше, ніж 20 95, зокрема, менше, ніж 10 95, більш переважно менше, ніж 5 95 від афінності зв'язування з Ес-рецептором, характерної для біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітини, що містить не підданий інженерії Ес-домен. У конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-рецептор представляє собою Есу-рецептор. У деяких варіантах здійснення винаходу Ес-рецептор представляє собою людський Ес-рецептор. У деяких варіантах здійснення винаходу Ес-рецептор являє собою активуючий Ес-рецептор. У конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-рецептор являє собою активуючий людський Ес- рецептор, більш конкретно людський ЕсукіІШа, ЕсукІ або ЕсукКІПа, найбільш переважно людський ЕсуКШа. Переважно зменшується зв'язування з кожним із цих рецепторів. Згідно з деякими варіантами здійснення винаходу знижується також афінність зв'язування з компонентом системи комплементу, зокрема, афінність зв'язування з С14д. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу не знижується афінність зв'язування з неонатальним Ес- рецептором (БсоКп). Практично таке ж зв'язування з ЕсКп, тобто збереження афінності зв'язування Ес-домену із вказаним рецептором, досягається, коли Ес-домен (або біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітини, що містить вказаний Ес-домен) характеризується афінністю зв'язування з ЕсКп, що становить більше ніж приблизно 70 95 від афінності зв'язування з ЕсКп не підданої інженерії форми Ес-домену (або біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітини, що містить вказану не піддану інженерії форму Ес-домену). Ес-домен або біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т- клітини, запропоновані у винаході, що містять вказаний Ес-домен, можуть характеризуватися афінністю, що становить більше ніж приблизно 80 95 і навіть більше ніж приблизно 90 95 від вказаної вище афінності. У деяких варіантах здійснення винаходу Ес-домен біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітини, створюють так, щоб він мав знижену ефекторну функцію в порівнянні 3 не підданим інженерії Ес-доменом Знижена ефекторна функція може представляти собою (але не обмежуючись тільки ними) знижену (ї) одну або декілька з наступних функцій: знижена комплементзалежна цитотоксичність (СОС), знижена антитіло-зумовлена клітиннозалежна цитотоксичність (АЮСС), знижений антитіло-зумовлений клітиннозалежний фагоцитоз (АОСР), знижена секреція цитокінів, знижене опосередковане імунним комплексом поглинання антигену антигенпрезентуючими клітинами, знижене зв'язування з МК-клітинами, знижене зв'язування з макрофагами, знижене зв'язування з моноцитами, знижене зв'язування з поліморфоядерними клітинами, знижена безпосередня передача сигналу, що індукує апоптоз, знижене перехресне зшивання зв'язаних з мішенню антитіл, знижене дозрівання дендритних клітин або знижене Т-клітинне примування. В одному з варіантів здійснення винаходу знижена ефекторна функція представляє собою одну або декілька функцій, вибраних із групи, що включає знижену СОС, знижену АЮОСС, знижений АОСР і знижену секрецію цитокінів. У конкретному варіанті здійснення винаходу знижена ефекторна функція представляє собою знижену АОСС. В одному з варіантів здійснення винаходу знижений
АрСС становить менше 20 95 від АОСС, індукованої не підданим інженерії Ес-доменом (або біспецифічною антигензв'язувальною молекулою, що активує Т-клітини, що містить не підданий інженерії Ес-домен).
В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна мутація, яка знижує афінність зв'язування Ес-домену з Ес-рецептором та/або ефекторну функцію, представляє собою амінокислотну заміну. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні, вибраному з Е233, 1234, 1235, М297, РЗ331 і РЗ329. У більш конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні, вибраному з 1234, 1235 і РЗ29. У деяких варіантах здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотні заміни І 234А і І 235А. В одному із вказаних варіантів здійснення винаходу Ес- домен представляє собою Есо-домен Ідсі, зокрема, Ес-домен людського ІдсС:і. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні РЗ29. У більш конкретному варіанті здійснення винаходу амінокислотний заміна представляє собою
РЗ29А або РЗ329б, насамперед РЗ3290. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні РЗ29 і, крім того, амінокислотну заміну в положенні, вибраному з Е233, 1234, 1235, М297 і РЗ331. У більш конкретному варіанті здійснення винаходу додатковий амінокислотна заміна представляє собою Е23ЗЗР, 1234А, І1235А, 1235Е, М297А, мМ2970 або РЗ3315. У конкретному варіанті здійснення винаходу Есо-домен містить амінокислотні заміни в положеннях РЗ29, І 234 і 1235. У більш конкретному варіанті здійснення винаходу Ес- (610) домен містить амінокислотні мутації Г234А, 1І235А і РЗ29б ("РЗ290 ГАГА"). В одному із вказаних варіантів здійснення винаходу Ес-домен представляє собою Рсо-домен Ідсі, насамперед Ес-домен людського /Ідсі. Комбінація амінокислотних замін "РЗ2965 ГАГА" практично повністю елімінує зв'язування з Есу-рецептором Ес-домену людського Ідсї, що описано в публікації РСТ МО 2012/130831, яка повністю включена в даний опис як посилання. В
УМО 2012/130831 описані також методи одержання вказаних мутантних Ес-доменів, методи вивчення їх властивостей, таких як зв'язування з Ес-рецептором або ефекторні функції.
Антитіла підкласу ЇдДС4 мають знижену афінність до зв'язування з Ес-рецепторами й знижені ефекторні функції в порівнянні з антитілами підкласу Їдс:ї. Таким чином, у деяких варіантах здійснення винаходу Ес-домен біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т- клітини, запропонованих у винаході, представляє собою Ес-домен Ідся, зокрема Ес-домен людського дб. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен ІдСіа містить амінокислотні заміни в положенні 5228, конкретно амінокислотну заміну 5228Р. Для додаткового зниження афінності зв'язування з Ес-рецептором та/або його ефекторної функції в одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен ІдСія містить амінокислотну заміну в положенні І 235, зокрема, амінокислотну заміну Г235Е. В іншому варіанті здійснення винаходу Ес-домен ІдСя містить амінокислотну заміну в положенні РЗ329, зокрема, амінокислотну заміну РЗ290. У конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен Ідса містить амінокислотні заміни в положеннях 5228, 235 і РЗ329, зокрема, амінокислотні заміни 5228Р, 1235Е і РЗ290. Вказані мутанти Ес-домену
ІдС4 ії їх особливості зв'язування з Есу-рецептором описані в публікації РОСТ МО 2012/130831 РСТ/ЕР2012/055393, яка повністю включена в даний опис як посилання.
У конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен, що характеризується зниженою афінністю зв'язування з Ес-рецептором та/або зниженою ефекторною функцією в порівнянні з нативним Ес-доменом /дсі, представляє собою со-домен людського |дс:ї, що містить амінокислотні заміни І234А, І1235А і необов'язково РЗ3290, або Рс-домен людського ІдС4, ЩО містить амінокислотні заміни 5228Р, І 235Е і необов'язково Р3290.
У деяких варіантах здійснення винаходу елімінували М-глікозиловані Ес-домени. В одному із вказаних варіантів здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотну мутацію в положенні
М297, зокрема, амінокислотну заміну аспарагіну на аланін (М297А) або аспарагінову кислоту (М2970).
Крім Ес-доменів, описаних вище й у публікації РСТ УМО 2012/130831, Ес-домени зі зниженою здатністю зв'язуватися з Ес-рецептором та/"або ефекторною функцією включають також Ес- домени із заміною одного або декількох залишків 238, 265, 269, 270, 297, 327 і 329 (05 Мо 637056). До вказаних мутантів Ес належать мутанти Ес із замінами у дві або більшої кількості з амінокислотних положень 265, 269, 270, 297 і 327, включаючи так званий мутант Ес-домену "РАМА" із заміною залишків 265 і 297 на аланін (05 Мо 7332581).
Мутантні Ес-домени можна одержувати шляхом амінокислотної делеції, заміни, інсерції або модифікації з використанням генетичних або хімічних методів, добре відомих у даній галузі.
Генетичні методи можуть включати сайтнаправлений мутагенез кодуючої ДНК послідовності,
ПЛР, синтез генів і т.п. Правильність нуклеотидних замін можна підтверджувати, наприклад, секвенуванням.
Зв'язування з Ес-рецепторами можна легко визначати, наприклад, за допомогою ЕГІ5А або поверхневого плазмонного резонансу (ЗРЕ) з використанням стандартного обладнання, такого як обладнання ВіАсоге (фірма СЕ Неайсаге), і із застосуванням таких Ес-рецепторів, які можна одержувати методом рекомбінантної експресії. Прийнятний вказаний аналіз зв'язування представлений у даному описі. Альтернативно до цього, афінність зв'язування Ес-доменів або біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують клітини, що містять Ес-домен, з Ес- рецепторами можна оцінювати з використанням клітинних ліній, для яких відомо, що вони експресують конкретні Ес-рецептори, такі як людські МК-клітини, що експресують ЕсуПШа- рецептор.
Ефекторну функцію Ес-домену або біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітини, що містить Ес-домен, можна оцінювати методами, відомими в даній галузі.
Прийнятний аналіз для оцінки АОСС представлений у даному описі. Інші приклади аналізів іп міїго, призначених для оцінки АЮОСсС-активності молекули, що представляє інтерес, описано в 5
Мо 5500362; в Неїїбігот і ін., Ргос Майї! Асай Зсі О5А 83, 1986, стор. 7059-7063 і НеїїЇбігот і ін.,
Ргос Маї! Асад 5сі ОА 82, 1985, стор. 1499-1502; 005 Мо 5821337; в Вгиддетапгп і ін., У Ехр Мей 166, 1987, стор. 1351-1361. Альтернативно до цього, можна застосовувати методи, засновані на нерадіоактивному аналізі (див., наприклад, АСТІ "М - нерадіоактивний аналіз цитотоксичності за допомогою проточної цитометрії (фірма СеШесппоїЇоду, Іпс. Маунтин-Вью, шт. Каліфорнія); і
Суїтох 969 - нерадіоактивний аналіз цитотоксичності (фірма Рготеда, Медисон, шт. (610) Вісконсин)). Прийнятними ефекторними клітинами для таких аналізів є мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМО) і природні клітини-кілери (МК). В альтернативному або додатковому варіанті АЮСС-активність молекули, що представляє інтерес, можна оцінювати іп мімо, наприклад, з використанням створених на тваринних моделей, описаних в Сіупез і ін., Ргос Маї!
Асай 5сі ОБА 95, 1998, стор. 652-656.
У деяких варіантах здійснення винаходу знижують зв'язування Ес-домену з компонентом системи комплементу, зокрема з С1д. Таким чином, у деяких варіантах здійснення винаходу, у яких Рс-домен конструюють так, щоб він мав знижену ефекторну функцію, вказана знижена ефекторна функція включає знижену СОС. Можна здійснювати аналізи зв'язування Сід для вирішення питання про те, чи може біспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка активує Т- клітини, зв'язуватися з С14 і, як наслідок, чи має вона СОсС-активність (див., наприклад, аналізи зв'язування з С14 і СЗс за допомогою ЕГІЗА, описані в УМО 2006/029879 і МО 2005/100402). Для оцінки активації комплементу можна здійснювати аналіз СОС (див., наприклад, бЗа77апо-запіого і ін., У Іттипої Меїпоа5 202, 1996, с. 163; Стадад і ін., Віоса 101, 2003, стор. 1045-1052 і Стадд і
СіІеппіє, Віоса 103, 2004, стор. 2738-2743).
Біологічні властивості й функціональні характеристики біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини
Фахівцеві в даній галузі повинно бути очевидно, що молекула, яка має здатність вибірково розрізняти ракові й неракові здорові клітини має перевагу з погляду ефективності. Одним зі шляхів досягнення вказаної мети є відповідна спрямована селекція. Маркери, які експресуються винятково на пухлинних клітинах, можна застосовувати для вибіркового націлювання ефекторних молекул або клітин на пухлинні клітини, не зачіпаючи здорових клітин, які не експресують такий маркер. Однак, у деяких випадках так звані маркери пухлинних клітин експресуються також і в здоровій тканині, хоча й з більш низькими рівнями. Така експресія в здоровій тканині може викликати токсичність. Таким чином, у даній галузі існує необхідність у молекулах, які можуть більш вибірково націлюватися на пухлинні клітини. У винаході, представленому в даному описі, запропоновані біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітину, які вибірково націлюються на ЕБоЇК1-позитивні пухлинні клітини, а не на здорові неракові клітини, які характеризуються низькими рівнями експресії РоОЇК1 або повною відсутністю його експресії В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить принаймні два, переважно два
Ео!В1-зв'язувальних фрагменти що мають відносно низьку афінність, що забезпечує ефект авідності, який дозволяє розрізняти клітини з високим і низьким рівнем експресії ЕоЇК1. Оскільки пухлинні клітини характеризуються високим або проміжним рівнем експресії ЕоЇКІ1, то молекула, запропонована в цьому варіанті здійснення винаходу, вибірково зв'язується з пухлинними клітинами та/або індукує цитоліз пухлинних клітин, але не здорових неракових клітин, що характеризуються низькими рівнями експресії Роїк! або повною її відсутністю. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, має формат "24-41 інвертована". В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз РоЇК1-позитивних пухлинних клітин, але не непухлинних клітин, і містить зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент, який містить СОКІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має ЗЕО ІО МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 39, СОК1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 33, і СОКЗ легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 34, і два фрагмента, що зв'язують антиген ЕРоїК1, кожний з яких містить СОК1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 8, СОК2 важкого ланцюга, що має ЗЕ
ІО МО: 9, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 50, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО
ІО МО: 52, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 53, і СОКЗ легкого ланцюга, що має ЗЕО
ІО МО: 54.
В одному конкретному варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, не індукує цитоліз здорових клітин, на поверхні яких присутньо менше, ніж приблизно 1000 копій РоїЇК1.
Крім вказаних вище переважних характеристик в одному з варіантів здійснення винаходу для одержання молекули не потрібно здійснювати хімічним шляхом перехресне зшивання або застосовувати підхід на основі гібридів. Відповідно до цього в одному з варіантів здійснення винаходу запропонована біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка може продукуватися в клітинах СНО. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить гуманізовані й людські поліпептиди. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, не приводить до перехресного зв'язування з ЕСокК. В одному з (610) таких варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує
Т-клітину, може продукуватися в клітинах СНО і містить зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент, який містить СОКІТ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має
ЗЕО І МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮО МО: 39, СОКІ1 легкого ланцюга, що має
ЗЕО Ір МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 33, і СОКЗ легкого ланцюга, що має
ЗБО ІЮО МО: 34 і два фрагмента, що зв'язують антиген БоЇїКт!, кожний з яких містить СОК!1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 8, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 9, СОКЗ важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮО МО: 50, СОКІ1 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 52, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮО МО: 53, ії СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 54.
Як вказано вище, у деяких варіантах здійснення винаходу, представлених у даному описі, запропоновані, біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, що мають два зв'язувальні фрагменти, які забезпечують специфічне зв'язування з БоїЇКт, і один зв'язувальний фрагмент, який забезпечує специфічність у відношенні антигену СОЮЗ, що активує
Т-клітину, де кожний індивідуальний зв'язувальний РОЇК! фрагмент характеризується низькою афінністю до антигену. Але, проте, оскільки молекула містить два антигензв'язувальні фрагменти, які забезпечують зв'язування з РОЇК, то загальна авідність молекули забезпечує ефективне зв'язування з клітинами-мішенями, що експресують ЕоїЇК1, й активацію Т-клітин для індукції Т-клітинної ефекторної функції. Враховуючи, що хоча ЕоЇїК! експресується в різних рівнях на пухлинних клітинах, він експресується також у дуже малих рівнях (наприклад, у кількості менше, ніж 1000 копій/поверхню клітини) у певних здорових клітинах, фахівець у даній галузі легсо може зрозуміти, що така молекула має перевагу з точки зору ефективності при застосуванні як терапевтичний агент. Така молекула вибірково націлюється на пухлинні клітини в порівнянні зі здоровими клітинами. Таким чином, вказану молекулу можна вводити індивідуумові, який цього потребує, з меншим побоюванням відносно токсичності у відношенні
ЕоІв1-позитивних здорових клітин у порівнянні з молекулами, які зв'язуються з БОЇК1 з високою афінністю, індукуючи ефекторну функцію. У переважному варіанті здійснення винаходу, біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, характеризуються одновалентною афінністю зв'язування з ПпиРОЇК1, що знаходиться в мікромолярному діапазоні, і авідністю до ПиРОЇК1, що знаходиться в наномолярному діапазоні.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з людським ЕБоЇїЇК! з уявною величиною Ко, що становить від приблизно 10 до приблизно 40 нМ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з людським ЕБоОЇК1! з уявною величиною Ко, що становить приблизно 10 нМ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з людським
ЕоЇКІ! ії БоїЇК! мавп циномолгус із уявною величиною Ко, що становить приблизно 10 НМ і приблизно 30 нМ відповідно. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з людським РОЇК! з величиною
Ко, що характеризує одновалентне зв'язування, що становить принаймні приблизно 1000 нм. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується 3 людським БоїК! з величиною Ко, що характеризує одновалентне зв'язування, що становить 1400 нМ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з людським
ЕоІК1 з величиною Ко, що характеризує одновалентне зв'язування, що становить приблизно 1400 НМ, і з Роїк! мавп циномолгус із величиною Ко, що характеризує одновалентне зв'язування, що становить приблизно 5600 нМ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з людським
ЕоїК! з уявною величиною Ко, що становить приблизно 10 нМ і з величиною Ко, що характеризує одновалентне зв'язування, що становить приблизно 1400 нМ.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з людським ЕБоЇїЇК! з уявною величиною Ко, що становить від приблизно 5,36 пМ до приблизно 4 НМ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з людським ЕоїК! і БоЇК1 мавп циномолгус із уявною величиною Ко, що становить приблизно 4 нМ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з мишиним ЕБоЇК! з уявною величиною Ко, що становить приблизно 1,5 нМ. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується 3 людським БоїК! з величиною Ко, що характеризує одновалентне зв'язування, що становить принаймні приблизно 1000 нМ. У конкретному варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, (610) зв'язується з людським ЕоїК1 і РОЇК! мавп циномолгус із уявною величиною Ко, що становить приблизно 4нНМ, зв'язується з мишиним РОЇК з уявною величиною Ко, що становить приблизно 1,5нМ, і містить зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент, який містить СОКІ важкого ланцюга, що має ЗЕО І МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 39, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЗЕО ІЮ МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮО МО: 33, ії СОМКЗ легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮО МО: 34 і два фрагмента, що зв'язують антиген БОЇК1, кожний з яких містить СОКІ1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 8,
СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 9, СОКЗ важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 50,
СОКТ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 52, СОК2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 53, і
СОМКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 54. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, зв'язується з ЕоЇК! з величиною Ко, що характеризує одновалентне зв'язування, що становить принаймні приблизно 1000 нм ії містить зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент, який містить СОКІ важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 39, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 33, ії СОКЗ легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 34 і два фрагмента, що зв'язують антиген БОЇК1, кожний з яких містить СОКІ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 8,
СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 9, СОКЗ важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 50,
СОКТ легкого ланцюга, що має ЗЕО ІО МО: 52, СОК2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 53, їі
СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 54.
Як вказано вище, біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, представлені в даному описі, можуть індукувати Т-клітинну ефекторну функцію, наприклад, експресію маркера клітинної поверхні, виробництво цитокінів, опосередковуваний Т-клітиною цитоліз. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз клітини-мішені, що експресує ЕОїЇКт1, такої як людська пухлинна клітина, іп міго. В одному з варіантів здійснення винаходу Т-клітина представляє собою СО8-позитивну Т-клітину. Приклади людських пухлинних клітин, які експресують БоЇК!, включають (але не обмежуючись тільки ними) клітини Нега,
ЗКОМ-3, НТ-29 і НЕСЕрісС. Фахівцеві в даній галузі легко доступні й інші БоЇК1-позитивні людські ракові клітини, які можна застосовувати для тестування іп міїго. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз людських пухлинних клітин, які експресують Ео!НІ, іп міго з величиною ЕСзхо, що становить від приблизно 36 пМ до приблизно 39573 пМ, через 24 год. Конкретно запропоновані, біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т- клітини, які індукують опосередковуваний Т-клітиною цитоліз пухлинної клітини, яка експресує
ЕоІК1, іп мйго з величиною ЕС5о, що становить приблизно 36 пМ, через 24 год. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, індукує опосередковуваний Т-клітиною цитоліз пухлинної клітини, яка експресує ЕоОїЇК1, іп міго з величиною ЕСзхо, що становить приблизно 178,4 пМ, через 24 год. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, опосередковуваний Т-клітиною цитоліз пухлинної клітини, яка експресує БоЇК!, іп міго з величиною ЕСзхо, що становить приблизно 134,5 пМ або більше, через 48 год. Величину ЕС5О0 можна вимірювати методами, відомими в даній галузі, наприклад, методами, представленими в даному описі в прикладах.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу, індукує підвищувальну регуляцію експресії на поверхні Т-клітини принаймні одного з сОр25 і 2069 за даними вимірювань за допомогою проточної цитометрії. В одному з варіантів здійснення винаходу Т-клітина представляє собою СО4-позитивну Т-клітину або СО8-позитивну
Т-клітину.
В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантів здійснення винаходу, зв'язується з БОЇК!, що експресується на людській пухлинній клітині. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т- клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантів здійснення винаходу, зв'язується з конформаційним епітопом на людському РоЇК1. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована в будь-якому із представлених вище варіантів здійснення винаходу, не зв'язується 3 людським фолатним рецептором 2 (БоІК2) або з людським фолатним рецептором З (БОІК3). В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, запропонованої в (610) будь-якому із представлених вище варіантів здійснення винаходу, антигензв'язувальний фрагмент зв'язується з поліпептидом ЕОЇК1, що містять амінокислоти з 25 по 234 людського
ЕоІВт (ЗЕО ІО МО: 227). В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, запропонованої в будь-якому із представлених вище варіантів здійснення винаходу фрагмент, що зв'язує антиген ЕоЇК1, зв'язується з поліпептидом РОЇК1!, що містять амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 227, з поліпептидом ЕоОЇК1, що містять амінокислотну послідовність «ЕО ІЮО МО: 230, і з поліпептидом ЕоїЇК1, що містять амінокислотну послідовність
ЗБО І МО: 231, і при цьому зв'язувальний антиген ЕБоїК! фрагмент не зв'язується з поліпептидом ЕоїК, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 228 або 229. В одному конкретному варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить зв'язувальний антиген БоїК! фрагмент, який зв'язується з поліпептидом ЕоОЇК1, що містять амінокислотні послідовності «ЕО ІЮ МО: 227, 230 і 231, і при цьому зв'язувальний антиген РОЇК! фрагмент не зв'язується з поліпептидом РОЇК, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 228 або 229, і містить зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент, який містить СОК1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО І МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 39, СОКІ1 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 33, і СОКЗ легкого ланцюга, що має ЗЕО ІО МО: 34 і два фрагмента, що зв'язують антиген РоЇК1, кожний з яких містить
СОКІ1 важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 8, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 9,
СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 50, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 52,
СОКЗ2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 53, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 54.
В одному з варіантів біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, запропонованої в будь-якому із представлених вище варіантах здійснення винаходу фрагмент, що зв'язує антиген БоЇК1!, зв'язується з поліпептидом ЕоЇК!, що містять амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 227 і з поліпептидом ЕОїЇК1, що містять амінокислотну послідовність
ЗБЕО ІО МО: 231, і при цьому зв'язувальний антиген ЕБоїК! фрагмент не зв'язується з поліпептидом БОЇ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 228, 229 або 230. В одному конкретному варіанті здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, містить зв'язувальний антиген Роїк! фрагмент, який зв'язується з поліпептидом РОЇК, що містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 227, і з поліпептидом
ЕоОІКт, що містять амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 231, і при цьому зв'язувальний антиген ЕБоїК! фрагмент не зв'язується з поліпептидом ЕоїЇК, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 228, 229 або 230, і містить зв'язувальний антиген СОЗ фрагмент, який містить СОК1 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 37, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 38, СОКЗ важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 39, СОКІ1 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 33, і СОКЗ 5ЕО ІО МО: 34 і два фрагмента, що зв'язують антиген ЕоїЇК1, кожний з яких містить СОКІ1 важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 16, СОК2 важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 275, СОКЗ важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ
МО: 315, СОК'І легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 32, СОК2 легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ
МО: 33, і СОКЗ легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 34.
У відношенні РОЇК! біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітину, представлені в даному описі, можуть мати агоністичну, антагоністичну або нейтральну дію.
Приклади агоністичної дії включають індукцію або посилення передачі сигналу через ЕоїЇК1 після контакту зв'язувального РОЇК! фрагмента з рецептором ЕоїК1 на клітині-мішені. Приклади антагоністичної активності включають анулювання або зниження передачі сигналу через РоїЇК1.
Це може, наприклад, мати місце в результаті блокади або ослаблення взаємодії фолату з
БоОїК1. У представлені в даному описі варіантах здійснення винаходу конкретно передбачаються варіанти послідовностей, що мають більш низьку афінність при збереженні описаних вище біологічних властивостей.
Імунокон'югати
Винахід стосується також імунокон'югатів, що містять біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, кон'юговану із цитотоксичним агентом, таким як хіміотерапевтичний засіб, агент, що інгібує ріст, токсин (наприклад, токсин, що має ферментативну активність, бактеріального, грибного, рослинного або тваринного походження або його фрагменти), або радіоактивний ізотоп (тобто радіокон'югат).
Полінуклеотиди
Винахід стосується також виділених полінуклеотидів, які кодують біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітини, представлену в даному описі, або її фрагмент.
Полінуклеотиди, запропоновані у винаході, включають полінуклеотиди, послідовності яких бо принаймні приблизно на 80 95, 85 9», 90 Фо, 95 Фо, 96 9», 97 90, 98 Фо, 99 95, або 100 95 ідентичні до послідовностей, представлених в ЗЕО ІЮ МО: 151-226, включаючи їх функціональні фрагменти або варіанти.
Полінуклеотиди, що кодують біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т- клітини, запропоновані у винаході можна експресувати у вигляді індивідуального полінуклеотиду, який кодує повну біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т- клітину, або у вигляді декількох (наприклад, двох або більшої кількості) спільно експресованих полінуклеотидів. Поліпептиди, які кодуються спільно експресованими полінуклеотидами, можна з'єднувати, наприклад, через дисульфідні зв'язки або іншими шляхами з утворенням функціональної біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину. Наприклад, частина антигензв'язувального фрагмента, що представляє собою легкий ланцюг, може кодуватися полінуклеотидом, відмінним від полінуклеотиду, що кодує частину біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, що містить частину антигензв'язувального фрагмента, що представляє собою важкий ланцюг, субодиницю Ес- домену й необов'язково (частину) іншого антигензв'язувального фрагмента. При спільній експресії поліпептиди важкого ланцюга повинні зв'язуватися з поліпептидами легкого ланцюга з утворенням антигензв'язувального фрагмента. В іншому прикладі частина біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, що містить одну із двох субодиниць Ес- домену й необов'язково один або декілька (частина одного або декількох) антигензв'язувальних фрагментів, може кодуватися полінуклеотидом, відмінним від полінуклеотиду, який кодує частина антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, що містить другу із двох субодиниць Ес-домену й необов'язково (частину) антигензв'язувальний фрагмент. При спільній експресії субодиниці Ес-домену повинні зв'язуватися з утворенням Ес-домену.
У деяких варіантах здійснення винаходу виділений полінуклеотид кодує повну вказану в даному описі біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході. В інших варіантах здійснення винаходу виділений полінуклеотид кодує поліпептиди, що входять у вказану в даному описі біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т- клітину, запропоновану у винаході.
Інший варіант здійснення даного винаходу стосується виділеного полінуклеотиду, що кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує послідовність варіабельної ділянки, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182 иа 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223.
Інший варіант здійснення даного винаходу стосується виділеного полінуклеотиду, що кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує поліпептидну послідовність, представлену в БХЕОІЮО МО: 1,2,3,4,5,6, 7, 8,9, 10, 11, 12, 13, 14,15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24,25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, Аб, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64,65, 66, 67, 68, 69, 70, 1, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111,112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244. Інший варіант здійснення даного винаходу стосується також виділеного полінуклеотиду, що кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка принаймні приблизно 80 9», 85 Фо, 90 9, 95 95, 96 95, 97 Ув, 98 95 або 99 95 ідентична до нуклеотидної послідовності, представленої в
ЗЕО ІО МО: 97, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 12, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 246, 247. Інший варіант здійснення даного винаходу стосується виділеного полінуклеотиду, що кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить нуклеотидну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 97, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 12, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 246, 247. Інший варіант здійснення даного винаходу стосується виділеного полінуклеотиду, що кодує біспецифічну (610) антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує послідовність варіабельної ділянки, яка принаймні приблизно на 8095, 8595, 9095, 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95 ідентична амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮО МО: 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 11,13, 15, 19, 21, 12, 25, 27, 29, 31, 36, 41, 45, 49, 51, 55, 58, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 82, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 12, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135. Інший варіант здійснення даного винаходу стосується виділеного полінуклеотиду, що кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує поліпептид, що містить одну або декілька послідовностей, які принаймні на 80 95, 85 95, 90 9, 95 9, 96 9, 97 У, 98 95, або 99 95 ідентичні амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮО МО: 8, 9, 50, 37, 38 і 39.
Даний винахід стосується виділеного полінуклеотиду, що кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує послідовність варіабельної ділянки, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182 і 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223 з консервативними амінокислотними замінами. Під обсяг винаходу підпадає також виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, або її фрагмент, де полінуклеотид містить послідовність, яка кодує поліпептидну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮО МО: 1, 2, З, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, АЗ, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 1, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111,112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138 і 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244 з консервативними амінокислотними замінами.
У деяких варіантах здійснення винаходу полінуклеотид або нуклеїнова кислота представляє собою ДНК. В інших варіантах здійснення винаходу полінуклеотид, запропонований у даному винаході, представляє собою РНК, наприклад, у формі матричної РНК (мРНК). РНК, запропонована в даному винаході, може бути одноланцюговою або дволанцюговою.
Методи рекомбінації
Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна одержувати, наприклад, шляхом твердофазного пептидного синтезу (наприклад, твердофазний синтез Меріфілда) або методом рекомбінації. Для рекомбінантного одержання один або декілька полінуклеотидів, що кодують біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину (фрагмент), наприклад, описану вище, виділяють і вбудовують в один або декілька векторів для додаткового клонування та/або експресії в клітині-хазяїні.
Вказаний полінуклеотид можна легко виділяти й секвенувати за допомогою загальноприйнятих процедур. Одним з варіантів здійснення винаходу є вектор, переважно експресійний вектор, що містить один або декілька полінуклеотидів, запропонованих у винаході. Методи, добре відомі фахівцям у даній галузі, можна застосовувати для конструювання експресійних векторів, що містять кодуючу послідовність біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т- клітину, (фрагмента) разом із прийнятними контролюючими транскрипцію/трансляцію сигналами. Ці методи включають технології рекомбінантної ДНК іп міт, методи синтезу й рекомбінації/ генетичної рекомбінації іп мімо (див., наприклад, методи, описані в Мапіаїїз і ін.,
Мапіаїйів» і ін., Моїесшаг СіІопіпд А Гарогаїгу Мапиаї, вид-во Со 5ргіпд Нагбог І арогагогу, М.У., 1989; ії А!Мзибеї і ін., Сигтепі Ргоїосої5 іп МоїІесшіаг Віоіоду, вид-во Сгеепе Рибіїзпіпуд Аззосіасев5 апа Уміеу Іпіегесіепсе, М.У., 1989). Експресійний вектор може представляти собою частину плазміди, вірусу або може представляти собою фрагмент нуклеїнової кислоти. Експресійний вектор включає касету експресії у якій полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину (фрагмент) (тобто кодуюча ділянка), клонують із забезпеченням функціонального зв'язку із промотором та/або іншими елементами, що контролюють транскрипцію або трансляцію. У контексті даного опису « кодуюча ділянка » представляє собою частину нуклеїнової кислоти, яка складається з кодонів, трансльованих в амінокислоти. Хоча "стоп-кодон" (ТАС, ТОА або ТАА) не транслюється в амінокислоту, він, у випадку його присутності, може розглядатися як частина кодуючої ділянки, однак будь-які фланкуючі послідовності, наприклад, промотори, сайти зв'язування рибосом, термінатори транскрипції, інтроні, 5'- і З3і-чсетрансльовані ділянки й т.п., не є частиною кодуючої ділянки. Дві (610) або більша кількість кодуючих ділянок можуть бути присутні в індивідуальній полінуклеотидній конструкції, наприклад, індивідуальному векторі, або в окремих полінуклеотидних конструкціях, наприклад, окремих (різних) векторах. Крім того, будь-який вектор може містити одну кодуючу ділянку або може містити дві або більшу кількість кодуючих ділянок, наприклад, вектор, запропонований у даному винаході, може кодувати один або декілька поліпептидів, які пост- або котранляційно розділяються на кінцеві білки за допомогою протеолітичного розщеплення. Крім того, вектор, полінуклеотид або нуклеїнова кислота, запропонований/запропонована у винаході, може кодувати гетерологічні кодуючі ділянки, або злиті, або не злиті з полінуклеотидом, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину (фрагмент), запропоновану у винаході, або її варіант або похідне. Гетерологічні кодуючі ділянки включають (але не обмежуючись тільки ними) спеціалізовані елементи або мотиви, такі як секреторний сигнальний пептид або гетерологічний функціональний домен. Функціональний зв'язок має місце, коли кодуюча ділянка генного продукту, наприклад, поліпептиду, асоційована з однією або декількома регуляторними послідовностями таким чином, щоб експресія генного продукту була під впливом або контролем регуляторної (их) послідовності(ей). Два ДНК-фрагменти (таких як кодуюча ділянка поліпептиду й асоційований з нею промотор) є "функціонально зв'язаними", якщо індукція промоторної функції приводить до транскрипції МРНК, що кодує необхідний генний продукт, і якщо природа зв'язку між двома ДНК-фрагментами не виявляє впливу на здатність регулюючих експресію послідовностей направляти експресію генного продукту, або не виявляє впливу на здатність ДНК-матриці до транскрипції. Таким чином, промоторна ділянка повинна бути функціонально зв'язана з нуклеїновою кислотою, що кодує поліпептид, якщо промотор має здатність здійснювати транскрипцію нуклеїнової кислоти. Промотор може представляти собою специфічний для клітини промотор, який забезпечує значну транскрипцію
ДНК тільки в попередньо відібраних клітинах. Інші контролюючі транскрипцію елементи, крім промотору, наприклад, енхансери, оператори, репресори й сигнали термінації транскрипції, можна функціонально зв'язувати з полінуклеотидом для забезпечення специфічної для клітини транскрипції. Прийнятні промотори й інші контролюючі транскрипцію ділянки представлені в даному описі. Фахівцям у даній галузі відомо широка різноманітність контролюючих транскрипцію ділянок. вони включають (але не обмежуючись тільки ними) контролюючі транскрипцію ділянки, які функціонують у клітинах хребетних тварин, такі як (але не обмежуючись тільки ними) сегменти промоторів і енхансерів із цитомегаловірусів (наприклад, негайно-ранній промотор у комбінації з інтроном-а), мавпячого вірусу 40 (наприклад, ранній промотор) і ретровірусів (таких як вірус саркоми Рауса). Інші контролюючі транскрипцію ділянки включають ділянки, виведені з генів хребетних тварин, таких як ген актину, білка теплового шоку, бичачого гормону росту й кролячого Д-глобіну, а також інші послідовності, які можуть контролювати експресію генів в еукаріотичних клітинах. Додаткові прийнятні контролюючі транскрипцію ділянки включають тканинноспецифічні промотори й енхансери, а також індуцибельні промотори (наприклад, промотори, індуковані тетрациклінами). Аналогічно до цього, звичайним фахівцям у даній галузі відома широка різноманітність контролюючих трансляцію елементів. вони включають (але не обмежуючись тільки ними) сайти зв'язування рибосом, кодоні ініціації трансляції й термінуючі кодоні й елементи, виведені з вірусних систем (зокрема внутрішній сайт зв'язування (посадки) рибосом або ІКЕ5, який позначають також як
Сйпе-послідовність). Касета експресії може включати також інші характерні структури, такі як сайт ініціації реплікації та/або інтегровані в хромосому елементи, такі як довгі кінцеві повтори (І. ТЕ) ретровірусів, або інвертовані кінцеві повтори (ІТК) аденоасоційованого вірусу (ААМ).
Кодуючі ділянки полінуклеотиду й нуклеїнової кислоти, запропоновані в даному винаході, можуть бути асоційовані з додатковими кодуючими ділянками, які кодують секреторні або сигнальні пептиди, які направляють секрецію поліпептиду, кодованого полінуклеотидом, запропонованим у даному винаході. Наприклад, якщо потрібна секреція біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, то ДНК сигнальну кодуючу послідовність можна поміщати проти ходу транскрипції відносно нуклеїнової кислоти, що кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, або її фрагмент. Згідно з гіпотезою, що стосується сигналів, білки, секретовані клітинами ссавців, мають сигнальний пептид або секреторну лідерну послідовність, який/яка відщеплюється від зрілого білка після ініціації експорту зростаючого білкового ланцюга через шорсткий ендоплазматичний ретикулум. Звичайним фахівцям у даній галузі повинно бути очевидно, що поліпептиди, секретовані клітинами хребетних тварин, як правило, мають сигнальний пептид, злитий з М-кінцем поліпептиду, який відщеплюється від трансльованого поліпептиду з утворенням секретованої або "зрілої! форми поліпептиду. У деяких варіантах здійснення винаходу використовують нативний сигнальний пептид, наприклад, сигнальний пептид важкого (610) ланцюга або легкого ланцюга імуноглобуліну або функціональне похідне вказаної послідовності,
яке зберігає здатність забезпечувати секрецію поліпептиду, функціонально зв'язаного з ним.
Альтернативно до цього, можна застосовувати гетерологічний сигнальний пептид ссавців або його функціональне похідне. Наприклад, лідерну послідовність дикого типу можна заміняти на лідерну послідовність людського тканинного активатора плазміногену (ТРА) або мишиної рД- глюкуронідази.
ДНК, що кодує коротку білкову послідовність, яку можна застосовувати для полегшення подальшого очищення (наприклад, гістидинову мітку), або призначену для мічення, біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, можна включати усередину або на кінці полінуклеотиду, що кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує
Т-клітину (фрагмент).
Додатковим варіантом здійснення винаходу є клітина-хазяїн, що містить один або декілька полінуклеотидів, запропонованих у винаході. Деякими варіантами здійснення винаходу є клітина-хазяїн, що містить один або декілька векторів, запропонованих у винаході.
Полінуклеотиди й вектори можуть мати будь-які особливості, індивідуально або в комбінації, вказаними в даному описі відносно полінуклеотидів і векторів відповідно. В одному з таких варіантів здійснення винаходу клітина-хазяїн містить (наприклад, трансформована або трансфектована) вектором, що містять полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході (або її частину).
У контексті даного опису поняття "клітина-хазяїн" стосується будь-якого типу клітинної системи, яку можна конструювати для одержання біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, запропонованих у винаході, або їх фрагментів. Клітини-хазяїна, придатні для реплікації й для підтримки експресії біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, добре відомі в даній галузі. Такі клітини можна трансфектувати або трансдукувати відповідним чином конкретним експресійним вектором і можна вирощувати більшу кількість клітин, що містять вектор, з метою внесення у ферментери для великомасштабних процесів одержання біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, в достатніх для клінічних застосувань кількостях. Прийнятними клітинами- хазяїнами є прокаріотичні мікроорганізми, такі як Е. соїї, або різні еукаріотичні клітини, такі як клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), клітини комах або т.п. Наприклад, поліпептиди можна одержувати в бактеріях, зокрема, коли відсутня потреба в глікозилуванні. Після експресії поліпептид можна виділяти з пасти бактеріальних клітин у розчинну фракцію й можна додатково очищати. Крім прокаріот, як хазяїни для клонування або експресії векторів, які кодують поліпептид, можна використовувати еукаріотичні мікроорганізми, такі як нитчаті гриби або дріжджі, включаючи штами грибів і дріжджів, шляхи глікозилування яких були "гуманізовані", що дозволяє одержувати поліпептид із частково або повністю людською схемою глікозилування (див. Сегпого55, Маї. Віоїесп. 22, 2004, стор. 1409-1414 і І і і ін., Маї. Віотесі. 24, 2006, стор. 210- 215). Клітини-хазяїна, які можна використовувати для експресії (глікозилованих) поліпептидів, одержують також з багатоклітинних організмів (безхребетних і хребетних тварин). Прикладами клітин безхребетних є клітини комах, а також можна застосовувати клітини рослин. Були виявлені численні бакуловірусні штами й відповідні придатні для них як хазяїв клітини комах, насамперед для трансфекції клітин бродорієгта идірегда. Як хазяїни можна застосовувати також культури рослинних клітин (див., наприклад, Є МоМо 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 і 6417429 (опис технології Р АМТІВОСІЕ5"М для одержання антитіл у трансгенних рослинах). Як хазяїни можна застосовувати також клітини хребетних тварин. Наприклад, можна використовувати клітинні лінії ссавців, які адаптовані до росту в суспензії. Іншими прикладами прийнятних ліній клітин-хазяїн ссавців є лінія клітин нирки мавпи СМ1, трансформована за допомогою 5М40 (СО5-7); лінія клітин нирки ембріона людини (293 або клітини лінії 293, субклоновані з метою вирощування в суспензійній культурі, сгапат і ін., У. еп. Мігої!., 36, 1977, с. 59); клітини нирки дитини хом'яка (ВНК); клітини Сертолі миші (ТМа4-клітини, описані, наприклад, в МаїПег, Віої. Кергод., 23, 1980, стор. 243-251); клітини нирки мавпи (СМ1); клітини нирки африканської зеленої мавпи (МЕКО-76,); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітини нирки собаки (МОСК); клітини печінки бичачого щура (ВЕ. ЗА); клітини легені людини (М/138); клітини печінки людини (Нер 02); клітини пухлини молочної залози миші (ММТ 060562); клітини ТК, описані, наприклад, в Маїпег і ін., АппаЇ5 М.У. Асай. 5сі., 383, 1982, стор. 44-68); клітини МКС 5 і клітини Е54. Іншими коштовними лініями клітин-хазяїн ссавців є клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), включаючи ап -СНо-клітини (Опіашцб і ін., Ргос. Маї0. Асад. Зсі. ОА, 77, 1980, с. 4216); і клітинні лінії мієломи, такі як МО, М5О ії 5р2/0. Огляд конкретних ліній клітин- хазяїн ссавців, які можна застосовувати для виробництва білка, див., наприклад, в Малакі і Ми, в: Меїйоаз іп МоїІесціаг Віоіоду під ред. В.К.С. Іо, вид-во Нитапа Ргез5, Тоїоуга, М, т. 248, 2003, (610) стор. 255-268. Клітини-хазяїна включають культивовані клітини, наприклад, культивовані клітини ссавців, клітини дріжджів, клітини комах, клітини бактерій і клітини рослин (але не обмежуючись тільки ними), а також клітини, що знаходяться в організмі трансгенної тварини, трансгенної рослини або культивованої рослинної або тваринної тканини. В одному з варіантів здійснення винаходу клітина-хазяїн представляє собою еукаріотичну клітину, переважно клітину ссавця, таку як клітина яєчника китайського хом'ячка (СНО), клітина нирки людського ембріона (НЕК) або лімфоїдна клітина (наприклад, клітина МО, МБО, Зраг0).
У даній галузі відомі стандартні технології для експресії чужорідних генів у цих системах.
Клітини, що експресують поліпептид, що містить або важкий або легкий ланцюг антигензв'язувального домену, такого як антитіло, можна конструювати таким чином, щоб у них відбувалася експресія інших ланцюгів антитіла, наприклад, таким чином, щоб експресований продукт являв собою антитіло, яке має як важкий, так і легкий ланцюг.
Одним з варіантів здійснення винаходу є спосіб одержання біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, запропонованої у винаході, що полягає в тому, що культивують клітину-хазяїна, що містить полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, представлену в даному описі, в умовах, придатних для експресії біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, і необов'язково виділяють біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину із клітини-хазяїна (або культурального середовища клітини-хазяїна).
Компоненти біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, генетично зливають один з одним. Біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, можна створювати так, щоб її компоненти зливати один з одним безпосередньо або опосередковано через лінкерну послідовність. Склад і довжину лінкера можна визначати за допомогою методів, добре відомих у даній галузі, і можна оцінювати ефективність. Приклади лінкерних послідовностей, розташованих між різними компонентами, біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, представлені в наведені в даному описі послідовностях. Можна включати також додаткові послідовності для вбудовування сайту розщеплення, якщо потрібне поділ індивідуальних компонентів злиття, наприклад, послідовність, яка розпізнається ендопептидазою.
У деяких варіантах здійснення винаходу один або декілька антигензв'язувальних фрагментів біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини містить (ять) принаймні варіабельну ділянку антитіла, що має здатність зв'язуватися з антигенною детермінантою.
Варіабельні ділянки можуть утворювати частину антитіл, що зустрічаються в природніх умовах або антитіл, що не зустрічаються в природніх умовах, або їх фрагментів або можуть бути виведені з них. Методи одержання поліклональних антитіл і моноклональних антитіл добре відомі в даній галузі (див., наприклад, Нагіом/ і І апе, "Апіїбодіев5: а Гарогаїгу Мапиаї!", вид-во
Со 5ргіпд Натог І абогайогу, 1988). Антитіла, що не зустрічаються в природніх умовах, можна створювати за допомогою твердофазного пептидного синтезу, можна одержувати за допомогою методів рекомбінації (наприклад, описаних в И5З Мо 4186567) або можна одержувати, наприклад, шляхом скринінгу комбінаторних бібліотек, що містять варіабельні ділянки важких ланцюгів і варіабельні ділянки легких ланцюгів (див., наприклад, ОЗ Мо 5969108 на ім'я
МеСапйепу).
Антитіла, фрагменти антитіл, антигензв'язувальні домени або варіабельні ділянки з будь- яких видів тварин можна застосовувати в біспецифічних антигензв'язувальних молекулах, що активують Т-клітини, запропонованих у винаході. Прикладами антитіл, фрагментів антитіл, антигензв'язувальних доменів або варіабельних ділянок, які можна застосовувати згідно із даним винаходом, є (але не обмежуючись тільки ними) конструкції, отримані з організму мишей, приматів або людини. Якщо, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, призначена для застосування на людині, то можна використовувати химерну форму антитіла, у якій константні ділянки антитіла одержують із людського антитіла. Гуманізовану або повністю людську форму антитіла можна одержувати також за допомогою методів, добре відомих у даній галузі (див., наприклад, ОЗ Мо 5565332 на ім'я У/піег). Для здійснення гуманізації можна застосовувати різні методи, такі як (але не обмежуючись тільки ними) (а) трансплантація нелюдських (наприклад, з антитіла-донора) СОК у людську (наприклад, антитіло-реципієнт) каркасну ділянку й константні ділянки, що зберігають або не зберігають залишки каркасної ділянки, що мають вирішальне значення (наприклад, залишки, важливі для збереження гарної антигензв'язувальної афінності або функцій антитіла), (б) трансплантація тільки нелюдських визначальних специфічність ділянок (ЗОК або а-СОК; залишки мають вирішальне значення для взаємодії антитіло-антиген) у людські каркасні й константні ділянки, або (в) трансплантація повних нелюдських варіабельних доменів, але їх "маскування" сегментом, що нагадує 10) людський, шляхом заміни поверхневих залишків. Огляд гуманізованих антитіл і методів їх одержання див., наприклад, в АІтадго і Егап55оп, Егопі Віозсі 13, 12008, стор. 1619-1633, і вони описані також, наприклад, в Кіесптапп і ін., Майге 332, 1988, стор. 323-329; Омцееп і ін., Ргос
Май Асаа 5сі ОБА 86, 1989, стор. 10029-10033; 05, МоМо 5821337, 7527791, 6982321 і 7087409;
Чопез і ін., Майиге 321, 1986, стор. 522-525; Моітізоп і ін., Ргос Маї! Асаай зсі 81, 1984, стор. 6851- 6855; Моїттізоп і ОЇ, Адм Іттипої 44, 1988, стор. 65-92; Мептпоеуєеп і ін., зсіепсе 239, 1988, стор. 1534-1536; Радіап, Моїес Іттип 31(3), 1994, стор.169-217; Казптіїгі і ін., Меїподз 36, 2005, стор. 25-34) (опис трансплантації БОК (а-СОК)); Радіап, Мої Іттипої 28, 1991, стор. 489-498 (опис методу зміни поверхні ("повторне покриття")); баІГасдмпа і ін., Меїпоаз 36, 2005, стор. 43-60 (опис "перестановки ЕК") і О5броигп і ін., Меїподз 36, 2005, стор. 61-68, і КіїткКа і ін., Вг у) Сапсег 83, 2000, стор. 252-260 (опис підходу на основі « цілеспрямованої селекції" для перестановки ЕК).
Людські антитіла й людські варіабельні ділянки можна одержувати за допомогою різних методик, відомих у даній галузі. Людські антитіла описані в цілому, в мап рік і мап де У/пкеї,
Сиїт Оріп Ріагпгтасої 5, 2001, стор. 368-374 і Гопрего, Сигг Оріп Іттипої 20, 2008, стор. 450-459.
Людські варіабельні ділянки можуть утворювати частину людських моноклональних антитіл або можуть бути отримані з них за допомогою методу гібридом (див., наприклад, Мопосіопаї
Апіїроду Ргодисійїоп Тесппіднез апа Арріїсайоп5, вид-во Магсеї! Оеккег, Іпс., Мем/ УогК, 1987, стор. 51-63). Людські антитіла й людські варіабельні ділянки можна одержувати також шляхом введення імуногена трансгенній тварині, яка модифікована таким чином, що може продукувати інтактні людські антитіла або інтактні антитіла з людськими варіабельними ділянками у відповідь на контрольне зараження антигеном (див., наприклад, І опрегоу, Маї Віоїесп 23, 2005, стор. 1117-1125). Людські антитіла й людські варіабельні ділянки можна створювати також шляхом виділення послідовностей варіабельних ділянок Ему-клона, відібраних з людських фагових дисплейних бібліотек (див., наприклад, Ноодепроот і ін. в: Меїпод5 іп МоіІесшіаг
Віоіоду, під ред. О'ргівп і ін., вид-во Нитап Ргез5, Тоїома, МУ, 178, 2001, стор. 1-37); і МосСанегу і ін., Маїшге 348, 552-554; СіІіаскбоп і ін., Майшге 352, 1991, стор. 624-628). Фаг, як правило, експонує фрагменти антитіл або у вигляді одноланцюгових Ру- (зсЕм)-фрагментів, або у вигляді
Еаб-фрагментів.
У деяких варіантах здійснення винаходу антигензв'язувальні фрагменти, придатні для застосування згідно із даним винаходом, створюють так, щоб вони мали підвищену афінність зв'язування, наприклад, за допомогою методів, описаних у публікації заявки на патент США Мо 2004/0132066, повний зміст якої включено в даний опис як посилання. Здатність, біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, запропонованої у винаході, зв'язуватися зі специфічною антигенною детермінантою можна оцінювати кількісно або за допомогою твердофазного ферментного аналізу (ЕГІЗА), або іншими методиками, відомими фахівцеві в даній галузі, наприклад, за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу (здійснюючи аналіз із використанням системи ВІАСОКЕ Т100) (І ЩШебіаай і ін., СіІусо У) 17, 2000, стор. 323-329), і традиційних аналізів зв'язування (НевіІєу, Епдосг Кез 28, 2002, стор. 217-229).
Аналізи в умовах конкуренції можна застосовувати для ідентифікації антитіла, фрагмента антитіла, антигензв'язувального домену або варіабельного домену, що конкурує з референс- антитілом за зв'язування з конкретним антигеном, наприклад, антитіла, яке конкурує з антитілом
МУ за зв'язування з СОЗ. У деяких варіантах здійснення винаходу вказане конкуруюче антитіло зв'язується з тим же епітопом (наприклад, лінійним або конформаційним епітопом), з яким зв'язується референс-антитіло. Докладні наведені як приклади методи картування епітопу, з яким зв'язується антитіло, представлені в Могті5, "Ерйоре Марріпуд Ргоїосої5", в: Мешпоаз іп
МоїІесшіаг Віоіоду, вид-во Нитапа Рге55, Тоїожма, МУ, т. 66, 1996. При здійсненні наведеного як приклад аналізу в умовах конкуренції іммобілізований антиген (наприклад, СОЗ) інкубують у розчині, що містить перше мічене антитіло, яке зв'язується з антигеном (наприклад, антитіло
МУ), і другим неміченим антитілом, яке підлягає тестуванню відносно його здатності конкурувати з першим антитілом за зв'язування з антигеном. Друге антитіло може бути присутнє у супернатанті гібридоми. Як контроль іммобілізований антиген інкубують у розчині, що містить перше мічене антитіло, але не містить друге немічене антитіло. Після інкубації в умовах, що забезпечують зв'язування першого антитіла з антигеном, надлишок незв'язаного антитіла видаляють і оцінюють кількість мітки, асоційованої з іммобілізованим антигеном. Якщо кількість мітки, асоційованої з іммобілізованим антигеном, суттєво знижене в тестированому зразку в порівнянні з контрольним зразком, то це свідчить про те, що друге антитіло конкурує з першим антитілом за зв'язування з антигеном (див. Нагіому і І апе. Апіїбодіє5: А І арогаїгу Мапиаї, вид-во
Соа 5ргіпд Нагбог І арогафогу, Соїд 5ргіпд Нагбог, МУ, гл. 14, 1988).
Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, отримані за допомогою представлених у даному описі методів, можна очищати з використанням відомих у даній галузі (610) методик, таких як рідинна хроматографія високого дозволу, іонообмінна хроматографія, гель-
електрофорез, афінна хроматографія, гель-фільтрація й т.п. Фактичні умови, застосовувані для очищення конкретного білка, залежать, зокрема, від таких факторів, як чистий заряд, гідрофобність, гідрофільність і т.д., і вони повинні бути очевидні фахівцеві в даній галузі. Для очищення антитіла за допомогою афінної хроматографії можна використовувати ліганд, рецептор або антиген, з яким зв'язується, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину. Наприклад, для очищення за допомогою афінної хроматографії біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, запропонованих у винаході, можна використовувати матрикс із білююм А або білком 5. Наприклад, послідовне застосування афінної хроматографії на білку А або с і гель-фільтрації можна застосовувати для виділення, біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, практично згідно з методом, описаним у розділі "Приклади". Чистоту біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, можна визначати за допомогою будь-якого із широкої різноманітності добре відомих аналітичних методів, включаючи гель-електрофорез, рідинну хроматографію високого тиску й т.п. Наприклад, встановлено, що злиті білки, що містять важкі ланцюги, які експресували згідно описаним у розділі "Приклади" методам, є інтактними й правильно зібраними, що продемонстроване за допомогою ДСН-ПААГ в умовах, що відновлюють (див., наприклад, фіг. 2). Розділяли три смуги, що відповідають приблизно Мг 25000, Міг 50000 і Мг 75000, які відповідали передбаченим молекулярним масам легкого ланцюга, важкого ланцюга й злитого білкюо важкий ланцюг/легксий ланцюг біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітини.
Аналізи
Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, представлені в даному описі, можна ідентифікувати, піддавати скринінгу або характеризувати їх фізичні/хімічні властивості та/або види біологічної активності за допомогою різних аналізів, відомих у даній галузі.
Аналізи афінності
Афінність біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, до Ес- рецептора або антигену-мішені можна визначати за допомогою методів, викладених у розділі "Приклади", за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК), використовуючи стандартну інструментальну базу, наприклад, обладнання ВіАсоге (фірма СЕ Неайсаге), і рецептори або білки-мішені, які можна одержувати за допомогою рекомбінантної експресії.
Альтернативно до цього, зв'язування біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини з різними рецепторами або антигенами-мішенями можна оцінювати з використанням клітинних ліній, що експресують конкретний рецептор або антиген-мішень, наприклад, за допомогою проточної цитометрії (РГАС5). Конкретний ілюстративний і наведений як приклад варіант вимірювання афінності зв'язування описаний нижче в розділі "Приклади".
Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу величину Ко вимірювали методом поверхневого плазмонного резонансу за допомогою обладнання ВІАСОКЕФ Т100 (фірма СЕ
Неайсаге) при 2596.
Для аналізу взаємодії між Есо-ділянкою й Ес-рецепторами мічений за допомогою Ні рекомбінантний Ес-рецептор "захоплювали" за допомогою антитіла до пента-Ніб5 (фірма
Оіадеп), іммобілізованого на СМ5-чіпах, і біспецифічні конструкції застосовували як аналіти. В цілому, метод полягав у наступному: біосенсорні чіпи з карбоксиметилованного декстрану (СМ5, фірма СЕ Неайвсаге) активували за допомогою гідрохлориду М-етил-п'-(3- диметиламінопропіл)карбодіїміду (ЕЮОС) і М-гідроксисукциніміду (МН) згідно з інструкціями постачальника. Антитіло до пента-Ніз розводили 10 мм ацетатом натрію, рН 5,0 до концентрації 40 мкг/мл перед ін'єкцією зі швидкістю потоку 5 мкл/хв для досягнення рівня іммобілізації, що відповідає приблизно 6500 одиниць відповіді (КО) зв'язаного білка. Після ін'єкції ліганду ін'єкували 1М етаноламін для блокади непрореагованих груп. Потім здійснювали "захоплення"
Ес-рецептора протягом 60 с у концентрації 4 або 10 нМ. Для кінетичних вимірювань ін'єкували чотириразові серійні розведення біспецифічної конструкції (діапазон від 500 до 4000 нм) у буфері НВ5З-ЕРя- (фірма СЕ Неайсаге, 10 мт НЕРЕЗ, 150 мт Масі, З мм ЕДТА, 0,05 95 сурфактанта Р20, рН 7,4) при 252С зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с.
Для визначення афінності до антигену-мішені біспецифічні конструкції "захоплювали" за допомогою специфічного у відношенні людського Бар антитіла (фірма СЕ Неаїйсаге), яке імобілізували на поверхні активованого сенсорного СМ5-чіпа згідно з методом, описаним для антитіла до пента-Ніб5. Кінцева кількість зшитого білка відповідала приблизно 12000 КИ.
Здійснювали "захоплення" біспецифічних конструкцій протягом 90 с у концентрації 300 нм.
Антигени-мішені пропускали через проточні гнізда протягом 180 с у діапазоні концентрацій від (610) 250 до 1000 нМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 180 б.
Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці. Відповідь на стаціонарній стадії використовували для визначення константи дисоціації (Ко) за допомогою апроксимації нелінійної кривої ізотерми зв'язування Ленгмюра. Швидкість реакції асоціації (Коп) і реакції дисоціації (Кок) розраховували з використанням простої моделі зв'язування Ленгмюра 1:1 (програма ВІАСОКЕ Ф Т100 Емаїчаєоп зопймаге, версія 1.1.1) шляхом одночасної апроксимації сенсограм асоціації й дисоціації.
Константу рівноваги реакції дисоціації (Ко) розраховували як співвідношення Кок/Коп (див., наприклад, Спеп і ін., у Мої Віо! 293, 1999, стор. 865-881).
Аналізи активності
Біологічну активність біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, запропонованих у винаході, можна визначати за допомогою різних аналізів, описаних у розділі "Приклади". Види біологічної активності можуть включати, наприклад, індукцію проліферації Т- клітин, індукцію передачі сигналу в Т-клітинах, індукцію експресії маркерів активації в Т-клітинах, індукцію секреції цитокінів Т-клітинами, індукцію лізису клітин-мішеней, таких як пухлинні клітини, і індукцію регресу пухлини та/або підвищення виживаності.
Композиції, препаративні форми й шляхи введення
Наступним об'єктом винаходу є фармацевтичні композиції, що містять будь-яку з біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, представлених у даному описі, наприклад, призначені для застосування в будь-якому із вказаних нижче терапевтичних способів. В одному з варіантів здійснення винаходу фармацевтична композиція містить будь-яку з біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, представлених у даному описі, і фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення винаходу фармацевтична композиція містить будь-яку з біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, представлених у даному описі, і принаймні один додатковий терапевтичний засіб, наприклад, вказане нижче.
Крім того, представлений спосіб одержання біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, запропонованої у винаході, у формі, придатної для введення іп мімо, що полягає в тому, що (а) одержують біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т- клітину, запропоновану у винаході, і (б) поєднують у препаративній формі біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину принаймні з одним фармацевтично прийнятним носієм, де приготовлений препарат біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, придатний для застосування іп мімо.
Фармацевтичні композиції, запропоновані в даному винаході, містять у терапевтично ефективній кількості одну або декілька біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, яка (ї) розчинена (ї) або диспергирована (ї) у фармацевтично прийнятному носії. Поняття "фармацевтично або фармакологічно прийнятний" стосується молекулярних субстанцій і композицій, які, у цілому, нетоксичні для реципієнтів у застосовуваних дозах і концентраціях, тобто не викликають шкідливі, алергічні або інші небажані реакції при введенні при необхідності тварині, такій, наприклад, як люди. Приготування фармацевтичної композиції, яка містить принаймні одну біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину й необов'язково додаткову діючу речовину, повинно бути очевидно фахівцям у даній галузі у світлі даного опису, наприклад, з довідника Кептіпдіоп'є Ріаптасеціїса! Зсіепсе5, 18-е вид., вид- во Маск Ргіпііпд Сотрапу, 1990, включеного в даний опис як посилання. Крім того, очевидно, що препарати, призначені для введення тварині (наприклад, людині), повинні задовольняти вимогам стандартів стерильності, пірогенності й загальної безпеки й чистоти, розроблених відділенням біологічних стандартів ЕСА (Управління контролю харчових продуктів і лікарських засобів) або відповідним уповноваженим органом інших країн. Переважними композиціями є ліофілізовані препаративні форми або водні розчини. У контексті даного опису "фармацевтично прийнятний носій" включає будь-які й усі розчинники, буфери, дисперсійні середовища, покриття, поверхнево-активні речовини, антиоксиданти, консерванти (наприклад, антибактеріальні агенти, протигрибкові агенти), агенти для додання ізотонічності агенти, що сповільнюють абсорбцію, солі, білки, лікарські засоби, стабілізатори лікарських засобів, полімери, гелі, зв'язувальні речовини, ексципієнти, розпушувачі, замаслючачі, підсолоджувальні речовини, коригенти, барвники й подібні матеріали і їх комбінації, які повинні бути відомі звичайному фахівцеві в даній галузі (див., наприклад, Кетіпдіоп'5 Рпагтасеційсаї! Зсіепсев, 18-е вид., вид-во Маск Ргіпіпуд Сотрапу, 1990, стор. 1289-1329, включений у даний опис як посилання). У терапевтичних або фармацевтичних композиціях можна застосовувати будь-який загальноприйнятий носій, за винятком тих випадків, коли він несумісний з діючою речовиною. 10) Композиція може містити різні типи носіїв залежно від того, чи вводять її у твердій, рідкій або 5О0 аерозольній формі, і від того, чи винна вона бути стерильною, як у випадку використання таких шляхів введень, як ін'єкція. Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані в даному винаході (і будь-який додатковий терапевтичний засіб), можна вводити внутрішньовенно, внутрішньошкірно, внутрішньоартеріально, внутрішньочеревинно, усередину ушкодження, усередину черепа, усередину суглоба, усередину передміхурової залози, усередину селезінки, внутрішньоренально, внутрішньоплеврально, внутрішньотрахеально, внутрішньоназально, усередину склоподібного тіла, внутрішньовагінально, внутрішньоректально, усередину пухлини, внутрішньом'язево, внутрішньоочеревинно, підшкірно, підкон'юнктивально, інтравезикулярно, у слизову оболонку, інтраперикардіально, усередину пуповини, інтраокулярно, орально, топікально, місцево, шляхом інгаляції (наприклад, аерозольної інгаляції), ін'єкції, інфузії, безперервної інфузії, локалізованої перфузії, що омиває безпосередньо клітини-мішені, через катетер, за допомогою лаважу, у вигляді кремів, у ліпідних композиціях (наприклад, ліпосомах), або за допомогою будь-якого іншого методу або будь-якої комбінації вищевказаних шляхів, відомих звичайному фахівцеві в даній галузі (див., наприклад,
Ветіпдюп' Рпаптасецшіса! Зсієпсев, 18-е вид., вид-во МаскК Ргіпііпд Сотрапу, 1990, включений у даний опис як посилання). Для введення молекул поліпептидів, таких як біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, найбільш часто застосовують парентеральне введення, зокрема, внутрішньовенну ін'єкцію.
Парентеральні композиції включають композиції, створені для введення шляхом ін'єкції, наприклад, підшкірної, внутрішньошкірної усередину ушкодження, внутрішньовенної, внутрішньоартеріальної, внутрішньом'язової, підоболонкової або внутрішньоочеревинної ін'єкції. Для ін'єкції, біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна включати в препаративні форми у вигляді водних розчинів, переважно у фізіологічно сумісних буферах, таких як розчин Хенкса, розчин Рінгера або фізіологічний соляний буфер. Розчин може містити призначені для одержання препаративної форми агенти, такі як суспендуючі, стабілізуючі та/або диспергуючі агенти. Альтернативно до цього, біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, можуть знаходитися в порошкоподібній формі, призначеної для відновлення перед застосуванням прийнятним наповнювачем, наприклад, стерильною водою, що не містить пірогенів. Стерильні ін'єковані розчини готують шляхом включення біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, запропонованих у винаході, у необхідній кількості у відповідний розчинник при необхідності в комбінації з різними іншими інгредієнтами, перерахованими нижче.
Стерильність можна легко забезпечувати, наприклад, шляхом фільтрації через стерильні фільтруючі мембрани. Як правило, дисперсії одержують шляхом включення різних стерилізованих діючих речовин у стерильний наповнювач, який містить основне дисперсійне середовище та/або інші інгредієнти. У випадку стерильних порошків для одержання стерильних ін'єкованих розчинів, суспензій або емульсій переважними методами одержання є вакуумне сушіння або сушіння виморожуванням, які дозволяють одержувати порошок діючої речовини в комбінації з будь-яким додатковим необхідним інгредієнтом з попередньо стерилізованою фільтрацією рідкого середовища. При необхідності рідке середовище перед здійсненням ін'єкції повинне бути відповідним чином забуферене й рідкому розріджувачу спочатку додана ізотонічність за допомогою достатньої кількості соляного розчину або глюкози. Композиція повинні бути стабільною з умовах приготування й зберігання й захищена від забруднюючої дії мікроорганізмів, таких як бактерії й гриби. Прийнято підтримувати забруднення ендотоксинами на мінімальному безпечному рівні, наприклад, менше 0,5 нг/мг білка. Придатні фармацевтично прийнятні носії включають (але не обмежуючись тільки ними): буфери, такі як фосфатний, цитратний і буфери на основі інших органічних кислот; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту й метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламонійхлорид; гексаметонійхлорид; бензалконійхлорид; бензетонійхлорид; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкилпарабени, такі як метил- або пропілпарабен; катехол, резорцинол; циклогексанол;
З-пентанол і мета-крезол); низькомолекулярні (що містять менше приблизно 10 залишків) поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди й інші вуглеводи, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатуючі агенти, такі як ЕДТК; цукри, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; солеутворюючі протиіїони, такі як натрій; комплекси с металами (наприклад, комплекси 2п- білок); та/"або неіоногенні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (ПЕГ). Водні суспензії для ін'єкцій можуть містити сполуки, які підвищують в'язкість суспензії, такі як натрієва сіль карбоксиметилцелюлози, сорбіт, декстран або т.п. Необов'язково суспензія може містити (610) також стабілізатори або агенти, які підвищують розчинність сполук, що дозволяє одержувати висококонцентровані розчини. Крім того, суспензії діючих речовин можна одержувати у вигляді відповідних масляних призначених для ін'єкції суспензій. Прийнятні ліпофільні розчинники або наповнювачі включають жирні нелеткі масла, такі як кунжутна олія, або синтетичні ефіри жирних кислот, такі як етилолеати або тригліцериди, або ліпосоми.
Діючі речовини можна містити в мікрокапсули, наприклад, отримані за допомогою методів коацервації або міжфазної полімеризації, наприклад у гідроксипропілметилцелюлозні або желатинові мікрокапсули й полі(метилметакрилатні) мікрокапсули відповідно, у колоїдні системи введення лікарського засобу (наприклад, у ліпосоми, альбумінові мікросфери, мікроемульсії, наночастинки й нанокапсули) або в макроемульсії. Такі методи описані в Кептіпдоп'є
РПпаптасешіса! Зсієпсе5, під ред. А. О50І, 1980. Можна готувати препарати з уповільненим вивільненням. Прийнятними прикладами препаратів з уповільненим вивільненням є напівпроникні матриці із твердих гідрофобних полімерів, що включають поліпептид, такі матриці представляють собою вироби певної форми, наприклад, плівки або мікрокапсули. У конкретному варіанті здійснення винаходу для досягнення пролонгованої абсорбції ін'єкованої композиції можна застосовувати в композиції агенти, що сповільнюють абсорбцію, такі, наприклад, як моностеарат алюмінію, желатин або їх комбінації.
Крім описаних вище композицій, біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують
Т-клітини, можна готувати також у вигляді препарату у формі депо. Вказані препаративні форми тривалої дії можна застосовувати шляхом імплантації (наприклад, підшкірної або внутрішньом'язової) або внутрішньом'язової ін'єкції Так, наприклад, біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, можна включати в препаративні форми в комбінації із прийнятними полімерними або гідрофобними матеріалами (наприклад, у вигляді емульсії в прийнятному маслі) або іонообмінними смолами, або у вигляді помірковано розчинних похідних, наприклад, помірно розчинної солі.
Фармацевтичні композиції, що містять біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна готувати за допомогою загальноприйнятих процесів змішання, розчинення, емульгування, капсулування, захоплення або ліофілізації. Фармацевтичні композиції можна включати в препаративні форми за допомогою загальноприйнятого методу з використанням одного або декількох фізіологічно прийнятних носіїв, розріджувачів, ексципієнтів або допоміжних речовин, які полегшують обробку білків, з одержанням препаратів, які можна застосовувати у фармацевтичнох цілях. Відповідна форма залежить від вибраного шляху введення.
Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини можна включати в композиції у вигляді вільної кислоти або вільної основи, у нейтральній формі або у формі солі.
Фармацевтично прийнятні солі представляють собою солі, які практично зберігають біологічну активність вільної кислоти або вільної основи. Вони включають кислотно-адитивні солі, наприклад, солі, утворені з вільними аміногрупами білкової композиції, або утворені з неорганічними кислотами, такими, наприклад, як соляна або фосфорна кислота, або такими органічними кислотами, як оцтова, щавлева, винна або мигдалева кислота. Солі, утворені з вільної карбоксильною групою, можна одержувати також з неорганічних основ, таких, наприклад, як гідроксиди натрію, калію, амонію, кальцію або заліза; або таких органічних основ як ізопропіламін, триметиламін, гістидин або прокаїн. Фармацевтичні солі мають тенденцію до більш високої розчинності у воді й інших протонних розчинниках у порівнянні з відповідними формами у вигляді вільних основ.
Способи й композиції для терапевтичного застосування
Будь-яку з біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, представлених у даному описі, можна застосовувати в терапевтичних способах. Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна використовувати як імунотерапевтичних агентів, наприклад, при лікуванні різних видів раку.
Для застосування в терапевтичних методах, біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна включати до складу препаративних форм, дозувати й вводити відповідно до належної клінічної практики. Розглянуті в цьому контексті фактори включають конкретне порушення, що підлягає лікуванню, конкретний ссавець, що підлягає лікуванню, клінічний стан індивідуального пацієнта, причину захворювання, ділянку введення агента, метод введення, схему введення й інші фактори, відомі практикуючим медикам.
Одним з об'єктів винаходу є біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т- клітини, запропоновані у винаході, призначені для застосування як лікарського засобу.
Наступними об'єктами винаходу є біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т- (610) клітини, запропоновані у винаході, призначені для застосування при лікуванні захворювання.
Деякими варіантами здійснення винаходу є біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, призначені для застосування в способі лікування. Одним з варіантів здійснення винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, представлена в даному описі, призначена для застосування при лікуванні захворювання в індивідуума, який потребує цього. Деякими варіантами здійснення винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітини, призначена для застосування в способі лікування індивідуума, який має захворювання, що полягає в тому, що вводять індивідуумові в терапевтично ефективній кількості біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину. У деяких варіантах здійснення винаходу захворювання, що підлягає лікуванню, представляє собою проліферативне порушення. У конкретному варіанті здійснення винаходу захворювання представляє собою рак. У деяких варіантах здійснення винаходу спосіб полягає також у тому, що вводять індивідуумові в терапевтично ефективній кількості принаймні один додатковий терапевтичний засіб, наприклад, протираковий засіб, якщо захворювання, що підлягає лікуванню, представляє собою рак. Додатковими варіантами здійснення винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, представлена в даному описі, призначена для застосування з метою індукції лізису клітини- мішені, зокрема пухлинної клітини. Деякими варіантами здійснення винаходу є біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, призначена для застосування в способі індукції лізису клітини-мішені, зокрема пухлинної клітини, в індивідуума, що полягає в тому, що вводять індивідуумові в ефективній кількості біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину для індукції лізису клітини-мішені. "Індивідуум" у контексті будь-якого із вказаних вище варіантів здійснення винаходу представляє собою ссавця, переважно людину.
Наступним об'єктом винаходу є застосування біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, запропонованої у винаході для виробництва або приготування лікарського засобу. В одному з варіантів здійснення винаходу лікарський засіб призначений для лікування захворювання в індивідуума, який цього потребує. В одному з варіантів здійснення винаходу лікарський засіб призначений для застосування в способі лікування захворювання, що полягає в тому, що вводять індивідуумові, який має захворювання, у терапевтично ефективній кількості лікарський засіб. У деяких варіантах здійснення винаходу захворювання, що підлягає лікуванню, представляє собою проліферативне порушення. У конкретному варіанті здійснення винаходу захворювання представляє собою рак. В одному з варіантів здійснення винаходу спосіб полягає також у тому, що вводять індивідуумові в терапевтично ефективній кількості принаймні один додатковий терапевтичний засіб, наприклад, протираковий засіб, якщо захворювання, що підлягає лікуванню, представляє собою рак. В іншому варіанті здійснення винаходу лікарський засіб призначений для індукції лізису клітини-мішені, зокрема пухлинної клітини. У наступному варіанті здійснення винаходу лікарський засіб призначений для застосування в способі індукції лізису клітини-мішені, зокрема пухлинної клітини, в індивідуума, що полягає в тому, що вводять індивідуумові в ефективній кількості лікарський засіб для індукції лізису клітини-мішені. "Індивідуум" у контексті будь-якого із вказаних вище варіантів здійснення винаходу представляє собою ссавця, переважно людину.
Наступним об'єктом винаходу є спосіб лікування захворювання. В одному з варіантів здійснення винаходу спосіб полягає в тому, що вводять індивідуумові, що має вказане захворювання, у терапевтично ефективній кількості біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаному індивідуумові вводять композицію, яка містить біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, У фармацевтично прийнятній формі. У деяких варіантах здійснення винаходу захворювання, що підлягає лікуванню, представляє собою проліферативне порушення. У конкретному варіанті здійснення винаходу захворювання представляє собою рак. У деяких варіантах здійснення винаходу спосіб полягає також у тому, що вводять індивідуумові в терапевтично ефективній кількості принаймні один додатковий терапевтичний засіб, наприклад, протираковий засіб, якщо захворювання, що підлягає лікуванню, представляє собою рак. "Індивідуум" у контексті будь- якого із вказаних вище варіантів здійснення винаходу може представляти собою ссавця.
Наступним об'єктом винаходу є спосіб індукції лізису клітини-мішені, зокрема, пухлинної клітини. В одному з варіантів здійснення винаходу спосіб полягає в тому, що приводять у контакт клітину-мішень із біспецифічною антигензв'язувальною молекулою, що активує Т- клітину, запропонованою у винаході, у присутності Т-клітини, зокрема, цитотоксичної Т-клітини.
Іншим об'єктом винаходу є спосіб індукції лізису клітини-мішені, зокрема, пухлинної клітини. В одному із вказаних варіантів здійснення винаходу спосіб полягає в тому, що вводять (610) індивідуумові в ефективній кількості біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-
клітини, для індукції лізису клітини-мішені В одному з варіантів здійснення винаходу "Індивідуум" представляє собою людину.
У деяких варіантах здійснення винаходу захворювання, що підлягає лікуванню, представляє собою проліферативне порушення, насамперед рак. Прикладами раку є (але не обмежуючись тільки ними) рак сечового міхура, рак головного мозку, рак голови й шиї, рак підшлункової залози, рак легені, рак молочної залози, рак яєчника, рак матки, рак шийки матки, рак ендометрію, рак стравоходу, рак ободової кишки, колоректальний рак, ректальний рак, рак шлунку, рак передміхурової залози, рак крові, рак шкіри, плоскоклітинна карцинома, рак кістки й рак нирки. Інші порушення клітинної проліферації, які можна лікувати з використанням біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, запропонованої в даному винаході, включають (але не обмежуючись тільки ними) неоплазмі, локалізовані в: животі, кістці, молочній залозі, травній системі, печінці, підшлунковій залозі, очеревині, ендокринних залозах (надниркова залоза, паращитовидна, гіпофіз, яєчка, яєчник, тимус, щитовидна), ока, голові й шиї, нервовій системі (центральній й периферичній), лімфатичній системі, тазовій дідянці, шкірі, м'якій тканині, селезінці, грудному відділі й сечостатевій системі. Також під обсяг винаходу підпадають передракові стани або ушкодження й метастази раку. У деяких варіантах здійснення винаходу рак вибирають із групи, що включає печінковоклітинний рак, рак шкіри, рак легені, колоректальний рак, рак молочної залози, рак головного мозку, рак голови й шиї. Фахівцеві в даній галузі повинно бути очевидно, що в багатьох випадках біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину не може забезпечувати зцілення, а може тільки виявляти частковий сприятливий вплив. У деяких варіантах здійснення винаходу фізіологічні зміни, що характеризуються деякою сприятливою дією, розглядаються також як терапевтично цінні. Таким чином, у деяких варіантах здійснення винаходу кількість біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, яка забезпечує фізіологічну зміну, розглядається як "ефективна кількість" або "терапевтично ефективна кількість". Суб'єкт, пацієнт або індивідуум, що потребує лікування, являє собою, як правило, ссавця, більш конкретне людину.
У деяких варіантах здійснення винаходу біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, вводять в ефективній кількості в клітину. В інших варіантах здійснення винаходу біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т- клітину, запропоновану у винаході, вводять у терапевтично ефективній кількості індивідуумові для лікування хвороби.
Для попередження або лікування захворювання відповідна доза біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, запропонованої у винаході (при її застосуванні індивідуально або в комбінації з одним або декількома іншими додатковими терапевтичними засобами), повинна залежати від типу захворювання, що підлягає лікуванню, шляху введення, ваги тіла пацієнта, типу біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, серйозності й перебігу захворювання, від того, чи вводять біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітини, в превентивних або терапевтичних цілях, що передують або здійснюються одночасно з терапевтичними втручаннями, історії хвороби пацієнта й відповіді на біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, й призначень лікаря. Практикуючий фахівець, відповідальний за введення, у кожному разі, повинен визначати концентрацію діючої (их) речовини(н) у композиції й відповідну(ї) дозу(и) для індивідуального пацієнта. Різні схеми введення доз включають (але не обмежуючись тільки ними) однократне введення або декілька введень у різні моменти часу, болюсне введення й пульсуючу інфузію.
Біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, можна вводити пацієнтові у вигляді однієї обробки або серій обробок. Залежно від типу й серйозності захворювання можлива початкова доза біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, для введення пацієнтові, наприклад, з використанням одного або декількох індивідуальних введень або за допомогою безперервної інфузії, може становити приблизно від 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, 0,1-10 мг/кг). Типова добова доза може становити від приблизно 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більш залежно від відзначених вище факторів. Для повторних введень протягом декількох днів або більш тривалого періоду залежно від стану, лікування, як правило, повинне тривати до досягнення необхідного пригнічення наявних симптомів захворювання. Як приклад, доза біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, може становити від приблизно 0,005 до приблизно 10 мг/кг. В іншому прикладі (але не обмежуючись тільки вказаним) доза на одне введення може становити від приблизно 1, приблизно 5, приблизно 10, приблизно 50, приблизно 100, приблизно 200, приблизно 350, приблизно 500 мкг/кг ваги тіла, приблизно 1, приблизно 5, приблизно 10, приблизно 50, приблизно 100, 10) приблизно 200, приблизно 350, приблизно 500 до приблизно 1000 мг/кг ваги тіла або більше, і знаходитися в будь-якому вказаному діапазоні. Як приклади (але не обмежуючись тільки ними) вказаного діапазону значень, можна вводити від приблизно 5 до приблизно 100 мг/кг ваги тіла, від приблизно 5 мкг/кг ваги тіла до приблизно 500 мг/кг ваги тіла і т.д. з урахуванням вказаних вище рівнів доз. Так, пацієнтові можна вводити одну або декілька доз, що становлять приблизно 0,5, 2,0, 5,0 або 10 мг/кг (або будь-яку їх комбінацію). Вказані дози можна вводити переривчасто, наприклад, щотижня або кожні три тижні (наприклад, таким чином, щоб пацієнт одержував від приблизно двох до приблизно двадцяти або, наприклад, приблизно шість доз біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину). Можна вводити початкову більш високу ударну дозу, після якої застосовувати одну або декілька більш низьких доз. Однак можна використовувати інші схеми введення доз. Успіх такої терапії легко оцінювати за допомогою загальноприйнятих методик і аналізів.
Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, як правило, слід застосовувати в кількості, ефективній для досягнення поставленої мети. При застосуванні для лікування або попередження хворобливого стану біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, або їх фармацевтичні композиції, вводять або застосовують у терапевтично ефективній кількості.
Визначення терапевтично ефективної кількості знаходиться в компетенції фахівців у даній галузі, насамперед у контексті представленого докладного опису винаходу.
Для системного введення терапевтично ефективну дозу можна спочатку визначати за допомогою аналізів іп міїго, наприклад, аналізів з використанням клітинних культур. Потім дозу можна включати у форму для вивчення на тваринних моделях для досягнення концентрації в кровотоці, що знаходиться в діапазоні, що включає значення ІСво, визначене на клітинній культурі. Вказану інформацію можна використовувати для більш точного визначення доз, які можна застосовувати на людях.
Початкові дози можна оцінювати також, виходячи з даних, отриманих іп мімо, наприклад, на тваринних моделях, використовуючи методики, добре відомі в даній галузі. Звичайний фахівець у даній галузі легко може оптимізувати застосування на людях на основі даних, отриманих на тварин.
Рівень доз і інтервал можна регулювати індивідуально для одержання рівнів у плазмі біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, які Є достатніми для підтримки терапевтичної дії. Звичайні дози, призначені для введення пацієнтові шляхом ін'єкції, становлять від приблизно 0,1 до 50 мг/кг/день, як правило, від приблизно 0,5 до 1 мг/кг/день.
Для досягнення терапевтично ефективних рівнів у плазмі можна вводити декілька доз щодня.
Рівні в плазмі можна оцінювати, наприклад, за допомогою РХВР.
У випадках місцевого застосування або вибіркового поглинання ефективна місцева концентрація біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, може не відповідати концентрації в плазмі. Фахівець у даній галузі може оптимізувати терапевтично ефективні місцеві дози без надмірних експериментів.
Застосування в терапевтично ефективній дозі біспецифічних антигензв'язувальних молекул, що активують Т-клітини, представлених у даному описі, повинно, як правило, забезпечувати терапевтичну користь, не викликаючи істотної токсичності. Токсичність і терапевтичну ефективність біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, можна визначати за допомогою стандартних фармацевтичних процедур на культурах клітин або експериментальних тварин. Аналізи на клітинних культурах або досліди на тваринах можна застосовувати для визначення значень І О5о (доза, смертельна для 50 9о популяції) і ЕЮОво (доза, терапевтично ефективна для 50 95 популяції). Співвідношення доз, що характеризують токсичні й терапевтичні дії, позначають як терапевтичний індекс, який можна виражати у вигляді співвідношення І Ово/ЕЮОво. Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, що мають високі терапевтичні індекси, є переважними. В одному з варіантів здійснення винаходу, біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, запропонована в даному винаході, характеризується високим терапевтичним індексом. Дані, отримані в аналізах з використанням клітинних культур і в дослідах на тварин, можна застосовувати для визначення діапазону доз, які можна застосовувати на людях. Доза лежить переважно в діапазоні концентрацій у кровотоці, які включають ЕЮ5о, що мають невисокою токсичність або що не мають токсичності. Доза може змінюватися залежно від різних факторів, наприклад, від застосовуваної лікарської форми, застосовуваного шляху введення, стану індивідуума й т.п.
Точну препаративну форму, шлях введення й дозу може вибирати індивідуально лікар залежно від стану пацієнта (див., наприклад, Ріпа і ін. в: Тпе Рпаптасоїодіса! Вазі5 ої Тпегарещшіісв5, гл. 1, 1975, с. 1, публікація повністю включена в даний опис як посилання). (610) Лікареві, який лікує пацієнтів, яким вводять біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, повинно бути очевидно, як і коли закінчувати, переривати або регулювати введення через токсичність, дисфункції органів і т.п. І, навпаки, лікареві повинно бути очевидно, як регулювати лікування у бік застосування більш високих доз, якщо клінічна відповідь є неадекватною (запобігаючи токсичності). Величина дози, що вводиться, при лікуванні порушення, що представляє інтерес, повинна змінюватися залежно від серйозності стану, що підлягає лікуванню, шляху введення й т.п. Серйозність стану можна, наприклад, оцінювати серед іншого за допомогою стандартних прогностичних методів оцінки.
Крім того, доза й передбачувана частота введення дози повинні також варіюватися залежно від віку, ваги тіла й відповіді індивідуального пацієнта.
Інші засоби й варіанти лікування
Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, при лікуванні можна вводити в комбінації з одним або декількома іншими засобами.
Наприклад біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході, можна вводити спільно принаймні з одним додатковим терапевтичним засобом.
Поняття "терапевтичний засіб" включає будь-який засіб, який вводять для лікування симптому або захворювання в індивідуума, який потребує такого лікування. Вказаний додатковий терапевтичний засіб може представляти собою будь-яку діючу речовину, яку можна застосовувати при конкретному показі, що підлягає лікуванню, переважно з додатковими видами активності, які не виявляють негативну дію один на одного. У деяких варіантах здійснення винаходу додатковий терапевтичний засіб представляє собою імуномодулятор, цитостатичний засіб, інгібітор клітинної адгезії, цитотоксичний засіб, активатор клітинного апоптозу або засіб, що підвищує чутливість клітин до індукторів апоптозу. У конкретному варіанті здійснення винаходу додатковий терапевтичний засіб представляє собою протираковий засіб, наприклад, агент, що руйнує мікротрубочки, антиметаболіт, інгібітор топоізомерази, інтеркалятор ДНК, алкілуючий агент, засіб гормональної терапії, інгібітор кіназ, антагоніст рецептора, активатор апоптозу пухлинних клітин або антиангіогенний засіб.
Вказані інші засоби можуть бути присутні у комбінації в кількостях, ефективних для вказаних цілей. Ефективна кількість вказаних інших засобів залежить від кількості застосовуваної біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, типу порушення або лікування, і інших вказаних вище факторів. Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, як правило, застосовують у такі ж дозах і з використанням вказаних у даному описі шляхів введення, або в дозах, що становлять приблизно від 1 до 99 95 від вказаних у даному описі доз, або в будь-якій дозі й з використанням будь-якого шляху введення, які згідно емпіричним/клінічним даним розглядаються як прийнятні.
Відзначені вище комбіновані терапії передбачають спільне введення (коли два або більша кількість терапевтичних засобів включають у ту саму або в окремі композиції) і роздільне введення, у цьому випадку введення біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує
Т-клітину, запропонованої у винаході, можна здійснювати до, одночасно та/або після введення додаткового терапевтичного засобу та/або ад'юванта. Біспецифічні антигензв'язувальні молекули, що активують Т-клітини, запропоновані у винаході, можна застосовувати також у комбінації із променевою терапією.
Наступним об'єктом винаходу є біспецифічне антитіло, що містить а) перший антигензв'язувальний сайт, який містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), що має
ЗЕО ІЮ МО: 274, і варіабельний домен легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 31; і б) другий антигензв'язувальний сайт, який містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), що має
ЗЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний домен легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 31, призначене для застосування в комбінації з антитілом до РО-Ї1 або РГАР-4-48ВІ. В одному з варіантів здійснення винаходу біспецифічне антитіло додатково містить третій антигензв'язувальний сайт, який містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), що має 5ЕО ІО МО: 274, Її варіабельний домен легкого ланцюга, що має 5ЕО ІО МО: 31.
Вироби
Іншим об'єктом винаходу є виріб, який містить продукти, застосовувані для лікування, попередження та/або діагностування вказаних вище порушень. Виріб представляє собою контейнер і етикетку або листівку-вкладиш в упаковці, яка розміщена на контейнері або додаються до нього. Прийнятними контейнерами є, наприклад банки, пухирці, шприци, пакети для внутрішньовенного (ІМ) розчину і т.д. Контейнери можна виготовляти з різних матеріалів, таких як скло або пластмаса. Контейнер містить композицію, яка сама по собі або в комбінації з іншою композицією є ефективною для лікування, попередження та/або діагностування стану, і може мати стерильний порт доступу (наприклад, контейнер може представляти собою пакет (610) для внутрішньовенного розчину або пухирець, постачений пробкою, яку можна проколювати за допомогою голки для підшкірних ін'єкцій). Принаймні одна діюча речовина в композиції являє собою біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході. На етикетці або листівці-вкладиші в упаковці вказано, що композицію застосовують для лікування вибраного стану. Крім того, виріб може включати (а) перший контейнер з композицією, що знаходиться в ньому, де композиція містить біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину, запропоновану у винаході; і (б) другий контейнер з композицією, що знаходиться в ньому, де композиція містить додатковий цитотоксичний або інший терапевтичний засіб. Згідно із цим варіантом здійснення винаходу виріб може містити листівку-вкладиш в упаковці, яка містить інформацію про те, що композиції можна використовувати для лікування конкретного стану. В альтернативному або додатковому варіанті виріб може додатково включати другий (або третій) контейнер з фармацевтично прийнятним буфером, таким як бактеріостатична вода для ін'єкцій (БСВІ), забуферений фосфатом фізіологічний розчин, розчин Рінгера й розчин декстрози. Крім того, він може включати інші матеріали, необхідні з комерційної точки зору й з погляду споживача, зокрема, інші буфери, розріджувачі, фільтри, голки й шприци.
Приклади
Нижче представлені приклади способів і композицій, запропонованих у винаході. Як повинно бути очевидно, можна втілювати на практиці різні інші варіанти здійснення винаходу в цілому з урахуванням представленого вище опису винаходу.
Загальні методи
Методи рекомбінантної ДНК
Для маніпуляцій із ДНК використовували стандартні методи, описані в затьгоок .. і ін.,
Моїесшіаг сіопіпуд: А Іарогаїогу тапиаї; вид-во Соїд Зргіпд Нагрог І арогаїогу Ргез5, Соїй 5ргіпд
Нагброг, Мем/ УогК, 1989. Реагенти для молекулярної біології застосовували згідно з інструкціями виробників. Загальну інформацію, що стосується нуклеотидних послідовностей легких і важких ланцюгів людських імуноглобулінів, див. в: Кабраї Е.А. і ін., Зедиепсеб5 ої Ргоївіп5 ої
Іттипоіодісаї! Іпієгеві, 5-е вид., вид-во МІН, публікація М 91-3242, 1991.
Секвеновані ДНК
Послідовності ДНК визначали шляхом стандартного секвенування двох ланцюгів на фірмі зупегдебре (Шлірен).
Синтез генів
Необхідні сегменти генів або створювали за допомогою ПЛР із використанням відповідних матриць, або синтезували на фірмі Сепеагй АС (Регенсбург, Німеччина) із синтетичних олігонуклеотидів і ПЛР-продуктів за допомогою автоматичного синтезу генів. У тих випадках, коли точна генна послідовність не була доступна, створювали олігонуклеотидні праймери на основі послідовностей найближчих гомологів і гени виділяли за допомогою ЗТ-ПЛР із РНК, отриманої з відповідної тканини. Сегменти генів, фланковані одиничними сайтами, що розпізнаються рестрикційними ендонуклеазами, клонували в стандартних клонуючих/секвенуючих векторах. Плазмідну ДНК очищали із трансформованих бактерій і визначали концентрацію за допомогою Уф-спектроскопії. Послідовність ДНК субклонованих фрагментів генів підтверджували ДНК-секвенуванням. Створювали сегменти генів з необхідними сайтами рестрикції, що дозволяють субклонувати їх у відповідних експресійних векторах. Усі конструкції створювали з 5'-кінцевою послідовністю ДНК, що кодує лідерний пептид, який направляє секрецію білків в еукаріотичних клітинах.
Виділення первинних людських пан-Т-клітин з РВМС
Мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМО) одержували шляхом центрифугування в градієнті густини Нібіорадие зі збагачених лімфоцитами препаратів (лейкоцитарні плівки), отриманих з місцевих банків крові або із свіжої крові здорових донорів. У цілому, метод полягав у наступному: кров розводили стерильним ЗФР і обережно нашаровували на градієнт
Нізіорадие (фірма бідта, Н8Ф889). Після центрифугування протягом 30 хв при 450 х д при кімнатній температурі (відключене гальмівне обладнання), частину плазмі, що знаходиться над інтерфазою, що містить РВМС, відкидали. РВМС переносили в нові 50-мілілітрові фальконовські пробірки й пробірки заповнювали ЗФР до повного об'єму 50 мл. Суміш центрифугували при кімнатній температурі протягом 10 хв при 400 х 9 (включене гальмівне обладнання). Супернатант відкидали й дебрис РВМС відмивали двічі стерильним ЗФР (стадії центрифугування при 42С протягом 10 хв при 350 х 9). Здійснювали автоматичний підрахунок отриманої популяції РВМС (обладнання УіСеїЇ) і зберігали в середовищі КРМІ 1640, що містить 10 95 РС5 і 1 95 І -аланіл-І -глутаміну (фірма Віоспгот, КОЗ302) при 372С, 5 96 СО» в інкубаторі аж до початку аналізу. (610) Для одержання фракції, збагаченої Т-клітинами, з РВМС, використовували набір для виділення пан-Т-клітин (Рап Т Сеї| Ізоїайіоп КИ ІІ) (фірма Мінепуї Віоїес, Мо 130-091-156) згідно з інструкціями виробника. У цілому, метод полягав у наступному: клітинний дебрис розводили, використовуючи 40 мкл холодного буфера на 10 мільйонів клітин (ЗФР із 0,5 95 БСА, 2мММ ЕДТА, простерилізований фільтрацією), і інкубували, використовуючи 10 мкл коктейлю біотин-антитіло на 10 мільйонів клітин, протягом 10 хв при 4"С. Додавали 30 мкл холодного буфера й 20 мкл магнітних гранул з антитілом до біотину на 10 мільйонів клітин і суміш інкубували протягом ще 15 хв при 42С. Клітини промивали, додаючи буфер в об'ємі, що перевищує в 10-20 разів об'єм, що був, і потім здійснювали стадію центрифугування при 300 х д протягом 10 хв. Аж до 100 мільйонів клітин ресуспендували в 500 мкл буфера. Магнітну сепарацію немічених людських пан-Т-клітин здійснювали за допомогою І 5-колонок (фірма Мінепуї Віоїес, Ме130-042-401) згідно з інструкціями виробника. Здійснювали автоматичний підрахунок отриманої популяції Т-клітин (обладнання УіСеїЇ) і зберігали їх у середовищі АІМ-М при 372С, 595 СО» в інкубаторі аж до початку аналізу (не більше 24 год.).
Виділення первинних людських наївних Т-клітин з РВМС
Мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМСОС) виділяли шляхом центрифугування в градієнті густини Нібіорадие зі збагачених лімфоцитами препаратів (лейкоцитарні плівки), отриманих з місцевих банків крові або зі свіжої крові здорових донорів. Для одержання фракції, збагаченої Т-клітинами з РВМС, використовували набір для виділення наївних СО8--Т-клітин (Маїме СО8-Т сеї ізоіїайоп Кі) фірми Мінепуї Віоїес (Ме 130-093-244), згідно з інструкціями виробника, але, пропускаючи останню стадію виділення СО8--Т-клітин (див. також опис виділення первинних людських пан- Т-клітин).
Виділення мишиних пан-Т-клітин зі спленоцитів
Вилучали селезінки з мишей С57ВІ/6, переносили їх у С-пробірку СепіемАсС5 (фірма
Мінепуї Віотесп, Ме 130-093-237), що містить МАСЗ-буфер (ЗФР -- 0,5 95 БСА ч 2 мМ ЕДТА), Її розщеплювали за допомогою обладнання для дисоціації тканин сепіемАсС5 з одержанням суспензії одиничних клітин згідно з інструкціями виробника. Клітинну суспензію пропускали через фільтр попереднього очищення для видалення недисоційованих частин тканини. Після центрифугування при 400 х д протягом 4 хв при 40 додавали буфер для лізису АСК для лізування еритроцитів (інкубація протягом 5 хв при кімнатній температурі). Клітини, що залишилися, двічі промивали МАС5-буфером, підраховували й застосовували для виділення мишиних пан-Т-клітин. Негативну (магнітну) селекцію здійснювали, використовуючи набір для виділення пан-Т-клітин фірми Мікепуї Віоїтес (Ме130-090-861) згідно з інструкціями виробника.
Здійснювали автоматичний підрахунок отриманої популяції Т-клітин (обладнання Місеї)) і відразу застосовували для додаткових аналізів.
Виділення первинних РВМС мавп циномолгус із гепаринізованої крові
Мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМО) одержували шляхом центрифугування в градієнті густини зі свіжої крові здорових мавп циномолгус у такий спосіб: гепаринізовану кров розводили в співвідношенні 1:3 стерильним ЗФР і середовище ІутрПпоргер (фірма Ахоп Габ,
Мо1114545) розводили до 90 95 стерильним ЗФР. Два об'єми розведеної крові нашаровували на один об'єм розведеного градієнта густини й фракцію РВМС розділяли шляхом центрифугування протягом 30 хв при 520 х д без гальмування при кімнатній температурі. Смугу, що відповідає
РВМС, переносили у свіжу 50-мілілітрову фальконівську пробірку й промивали стерильним ЗФР шляхом центрифугування протягом 10 хв при 400 х д при 49С. Здійснювали одну стадію низькошвидкістного центрифугування для видалення тромбоцитів (15 хв при 150 х од, 42С) |і здійснювали автоматичний підрахунок отриманої популяції РВМС (обладнання місеї|) і відразу застосовували для додаткових аналізів.
Приклад 1
Очищення злиттів біотинілований фолатний рецептор-Ес
Для створення нових антитіл до людського БоЇК1 конструювали вказані нижче антигени й "Інструменти" для скринінгу у вигляді одновалентних злитих білків, що містять Ес (позаклітинний домен антигену, зчеплений із шарнірною ділянкою Ес з "виступом", який спільно експресували з молекулою, що містить Ес з "западиною"). Гени антигену синтезували (фірма сСепеагїгі,
Регенсбург, Німеччина) на основі послідовностей, отриманих з СепВапк або бм/із55Ргої, і вбудовували в експресійні вектори для створення злитих білків, що містять Ес з "виступом", 3 С- кінцевою Амі-міткою для біотинілування іп мімо або іп міго. Біотинілування іп мімо здійснювали шляхом спільної експресії бактеріального гена БігА, що кодує бактеріальну біотинлігазу, у процесі одержання. Експресію всіх генів здійснювали під контролем химерного промотору
МРБ5БМ на плазміді, що містить елемент огіР для підтримки стабільності плазмід в клітинних лініях, що містять ЕВМА. (610) Для одержання біотинілованих мономерних злитих молекул антиген/Ес, клітини НЕК293
ЕВМА, що ростуть у суспензії на експонентній фазі росту спільно трансфектували трьома векторами, що кодують два компоненти злитого білка (ланцюги з "виступом" і з "западиною"), а також ВігА, фермент, необхідний для реакції біотинілування. Відповідні вектори застосовували в співвідношенні 9,5:9,5:1 ("антиген ЕСО-Ес з "виступом»-амі-мітка" «Ес з "западиною":«ВігА").
Для одержання білка в струшуваних колбах місткістю 500 мл висівали 400 млн клітин
НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 д і супернатант заміняли попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійний вектори ресуспендували в 20 мл середовища СО СНО, що містить 200 мкг векторної ДНК. Після додавання 540 мкл поліетиленіміну (ПЕЇ) розчин перемішували протягом 15 с і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ, переносили в 500-мілілітрову струшувану колбу й інкубували протягом З год. при 37С в інкубаторі в атмосфері, що містить 5 95 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через один день після трансфекції до культури додавали 1 мМ вальпроєву кислоту й 795 Реєй 1 (фірма Гопла). Середовище для виробництва доповнювали також 100 мкМ біотином. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали шляхом осадження центрифугуванням протягом 15 хв при 210 х 49. Розчин стерилізували фільтрацією (фільтр із розміром пор 0,22 мкМ), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./ об.), витримували при 49С.
Секретовані білки очищали із супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії на білку А з наступною гель-фільтрацією. Для здійснення афінної хроматографії супернатант вносили на колонку НіТгтар РгоїеіпА НР (СМ-5 мл, фірма СЕ Неайсаге), урівноважену 40 мл буфера, що містить 20 мМ фосфат натрію, 20 мМ цитрат натрію, рН 7,5.
Незв'язаний білок видаляли промиванням, використовуючи рівний принаймні 10 об'ємам колонки об'єм буфера, що містить 20 мМ фосфат натрію, 20 мМ цитрат натрію, рН 7,5.
Зв'язаний білок елюювали, застосовуючи лінійний рН-градієнт, який створювали, використовуючи рівний 20 об'ємам колонки об'єм буфера, що містить 20 мМ цитрат натрію, 100
ММ хлорид натрію, 100 мМ гліцин, рН 3,0. Потім колонкові промивали, використовуючи рівний 10 об'ємам колонки об'єм буфера, що містить 20 мМ цитрат натрію, 100 мм хлорид натрію, 100
ММ гліцин, рН 3,0.
Величину рН зібраних фракцій регулювали, додаючи 1/10 (об./ об.) 0,5М фосфат кальцію, рН 8,0. Білок концентрували й фільтрували перед внесенням на колонку НіЛоай Супердекс 200 (фірма СЕ Неайсаге), урівноважену буфером, що містить 20 мМ гістидин, 140 мМ хлорид натрію, рН 6,0.
Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту й молекулярну масу БоЇК1-Рсо-злиття аналізували за допомогою капілярного електрофорезу в присутності ДСН (КЕ-ДСН) з відновником і без нього (система
Саїїрег ГарсСпір СХІІ, фірма РегкКіп ЕїІптег) згідно з інструкціями виробника. Вміст агрегатів у зразках білків аналізували за допомогою аналітичної колонки для гель-фільтрації Т5Кдє!ї 13000
ЗМУ ХІ. (фірма Тозой), урівноваженої в рухомому буфері, що містить 25 мМ КеНРО», 125 мМ масі, 200 мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./ об.) Мамі», рН 6,7, при 2596.
Очищені злиті білки антиген-с аналізували за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу з використанням антитіл, що надходять у продаж, для підтвердження правильної конформації антигенів і яка зустрічається в природніх умовах (дані не представлені).
Таблиця 1: Антигени, отримані для здійснення виділення, селекції й зворотної селекції антитіл до людського БоЇК1 (АК) номер МО: людський | 25-234 РІБ5328 ВІАЖМАВТЕ І МУСММАКННКЕКРОРЕОКІ НЕОСАР 227
ЕоІВ1 М АКМАССЗТМТЗОБЕАНКОМУ5МУІ МАЕМУМНОСЕМАР
АСКАНЕРІОСТСІ МЕСЗРМІ аРУОЮОМООБМАКЕВМІ.
МУРІ СКЕОСЕОМУМЕОСАТЗУТСКЗМУНКИаУ МУ
СЕМКСАМаААСОРЕНЕМЕРТРТМІ СМЕМ/ТНЗУКУ5
МУизНазавсіІОМУМгОРАОСМРМЕЕМАВЕУАААМ
(АК) номер МО: людський | 17-230 РІ1І4207 ТМОБАСОВТОГ І ММСМОАКННКТКРОРЕОКІ НООС | 228
ЕоІн2 ЗРМУККМАССТАЗТЗОБЇ НКОТОЗВІ УМЕМУ ОНССЯКМ
ЕРАСКАНЕРІОЮТСІЇ МЕСЗРМ аРУЮОЮММОБУУАКЕВ
ЕГОУРІА СКЕОСОРБММЕОСНТЗНТСКОМУНАСУ ОМ
ТЗаумМкСРАСАЇ САТЕРЕЗУЕРТРААЇ СЕС М ЗНОЗУК
УзМУЗзНазавсСсІОМУгрБАОСМУМРМЕЕМАВЕМАААМ
НУМ людський | 24-243 Р4А1439 ЗАВАВТОЇ І ММУСММАКННКТОРЗРЕОЕ! МБОСОРУМ | 229
Ео!ВЗ ККМАССТАЗТЗОБЕЇ НКОТЗВІ УМЕМУМУ ОНСаКМЕРТ
СКАНРІОЮ5ЗСІ МЕСЗРМІ аРУТВОММОБУУВКЕНІЇ М
МРІСКЕОСЕВУМЕОСАТЗУТСКОМУНКОУУМУТВа
ІМЕСРАСАЇ СЗТРЕЗУМЕРТРААЇ СЕСІЇ М/ЗНЗЕКУЗМУ знНававсІОММУгрзАОСМРМЕЕМАКЕУАААММАСА
РЗВаИапор5 мишиний | 25-232 РЗБ5846 ТВААВТЕ Г/ММОМОАКННКЕКРОРЕОМІ НСОСРУУК | 230
ЕоІВ1 ТЯЗССЗТМТЗОБАНКОІВМІ М!ВЕМУ МНСаТмМТЗЕСК
ВНРІООТСІ МЕСЗРМ аРУЛООСОМОРОБУУВКЕНВІЇГ ОМРІ.
СКЕОСООММЕОСОБЗЕТОКОМУНКаИм МуУЗЗаИанм
ЕСРУСАЗСНРЕТЕУЕРТБЗААІ СЕЕМУЗНЗУКІ МУЗА
,аЗавсІОМУгОРАОСМРМЕЕМАВЕМАЕАМ5
ЕоІВ1 25-234 а7РА14 ЕАОТАТАВАВТЕ І ММСММАКННКЕКРОРЕОКІ НЕО | 231 мавп САРМУККМАССЗТМТЗОЕАНКОУБМУІ УМВЕМУМНОоС,Е диномМолг МАРАСКАНЕРІОЮТСІ МЕСЗРМІ аРУЛООМООБУУАКЕ ус ВМІМУРІ СКЕВОСЕВЕУМ ЕОСАТЗУСКОМУУ НКОИМ МУУ
ТЗагМмкСРУЕААСОРЕНЕМЕРТРТМІ СМЕМ/ТУБУКМ зМузнНазавсіоммгрРАОСМРМЕЕМАВЕМАААМ5
Таблиця 2: Узагальнення даних про вихід і кінцевий вміст мономерів злиттів БоЇБК-Ес
Приклад 2
Створення загального легкого ланцюга, що має специфічність у відношенні СОЗє
Біспецифічні молекули, що активують Т-клітину, представлені в даному описі, містять принаймні один зв'язувальний СОЗ фрагмент. Цей фрагмент можна створювати шляхом імунізації лабораторних тварин, скринінгу фагової бібліотеки або з використанням відомих антитіл до СОЗ. Загальний легкий ланцюг, що має специфічність у відношенні СОЗє, створювали шляхом гуманізації легсого ланцюга батьківського мишиного антитіла до СОЗє (СН2527). Для гуманізації антитіла з організму крім людини СОК-залишки з нелюдського антитіла (донора) необхідно трансплантувати у каркасну ділянку людського (акцепторного) антитіла. Як правило, послідовності акцепторної каркасної ділянки відбирають шляхом вирівнювання послідовності донора з колекцією потенційних акцепторних послідовностей і вибору однієї, яка або має достатню гомологію з донором, або характеризується наявністю подібних амінокислот у деяких положеннях, що мають вирішальне значення з погляду структури й активності. У цьому випадку пошук акцепторної каркасної ділянки антитіла здійснювали шляхом вирівнювання послідовності мишиного Мі -домену батьківського антитіла з колекцією послідовностей людської зародкової лінії й відбору людської послідовності, що характеризується високим ступенем ідентичності послідовності. Несподівано було встановлено, що хороша відповідність із погляду гомології послідовності каркасної ділянки має місце у випадку людського легкого ланцюга, що досить рідко зустрічається, що належить сімейства 7 М- доменів лямбда-типу, більш точно ПМ 7 46 (номенклатура ІМСТ, СепВапК, код доступу 273674). Внаслідок цього вказаний людський легкий ланцюг, що рідко зустрічається, був вибраний як акцепторна каркасна ділянка для гуманізації легкого ланцюга СН2527. Три бо гіперваріабельні ділянки (СОМ) варіабельного домену мишиного легкого ланцюга були трансплантовані у вказану акцепторну каркасну ділянку. Оскільки ділянка каркасної ділянки 4 не є частиною варіабельної ділянки М-гена зародкової лінії, то вирівнювання в цій ділянці «(- елемент) здійснювали індивідуально. Таким чином, послідовність ІСІ923-02 була вибрана для гуманізації вказаного легкого ланцюга.
Було створено тринадцять гуманізованих варіантів (СН2527-МІ 7 46-1-МІ 7 46-10, МІ 7 46- 12-МІ7 46-14). вони відрізнялися залишками каркасної ділянки (і їх комбінаціями), які були піддані зворотній мутації в напрямку послідовності мишиного М-домену, або СОК-залишками (визначення за Кеботом), які могли зберегтися ідентичними до залишків у послідовності людської зародкової лінії. Нижче представлені залишки каркасної ділянки, що знаходяться поза
СОК, які за допомогою зворотної мутації були перетворені в мишині залишки в кінцевому варіанті гуманізованого Мі -домену варіанта МІ7 46-13 (перераховані мишині залишки): МЗ36,
Е38, Е44, 46, 49 і 557, відповідно. Людський .)-елемент ІСІ 23-02 був на 100 95 ідентичний до
У-елементу мишиного батьківського антитіла.
Приклад З
Оцінка методом 5РК гуманізованих варіантів, що мають специфічність у відношенні СОЗє
Оцінювали гуманізовані варіанти МІ у вигляді химери у форматі "2-1 класична" (фіг. 1Г), тобто коли гуманізовані М-домени легкого ланцюга спарені з мишиними М-доменами важкого ланцюга. Оцінку методом ЗРЕ проводили з використанням обладнання РгоїеОп ХРЕЗ6 (фірма
Віо-Кад). Більш точно процедура полягала в наступному. Варіанти імобілізували безпосередньо із супернатанта культури на дериватизованому антитілі до Бар сенсорному чіпі І М (козячий антилюдський /дс, Е(аб")2-фрагмент-специфічний, фірма ЧУаскзоп ІттипоКезеагс!п) у вертикальній орієнтації. Для оцінки зв'язування з СОЗєЄ людини й мавп циномолгус послідовно ін'єкували в горизонтальній орієнтації в одній концентрації перераховані нижче аналіти: Пи
СОЗ(-1-26)-Ес("виступ")-амі (10807), З мкМ, ії су СОЗе-(-1-26)-Ес("виступ")-амі-Ес("западина") (10873), 2,5 мкМ, відповідно. Відповіді, що характеризують зв'язування, якісно порівнювали зі зв'язуванням мишиної контрольної конструкції й ранжували в такий спосіб: ї- (виявлений порівнянний рівень зв'язування), 5 (виявлений знижений рівень зв'язування) і - (не виявлене зв'язування). Захоплююче антитіло регенерували після кожного циклу іммобілізації ліганду й зв'язування аналіту, і після закінчення дослідження повторно ін'єкували мишину конструкцію для підтвердження активності захоплюючої поверхні. Результати узагальнено в таблиці 3.
Таблиця 3 Якісна оцінка методом 5РЕ зв'язування конструкцій, що містять гуманізовані варіанти легкого ланцюга, об'єднані з мишиним важким ланцюгом СН2527. В остаточному підсумку був вибраний тільки гуманізований варіант легкого ланцюга СН2527-МІ7 46-13, виділений жирним шрифтом, який характеризувався порівнянним зв'язуванням з СОЗєЄ людини й мавп циномолгус.
їй Й ЇВ Шо 8. с Но зе.
Приклад 4
Властивості гуманізованого загального легкого ланцюга, що має специфічність у відношенні
СОзЕ
Варіант М-домену легкого ланцюга, який був вибраний для гуманізованої лідерної молекули, являв собою МІ7 46-13. Визначали ступінь гуманізації, тобто гомологію послідовності гуманізованого М-домену з послідовністю М-домену людської зародкової лінії. Для МІ 7 46-13 загальний ступінь ідентичності послідовності з найбільш близьким гомологом людської зародкової лінії становила 65 90 до гуманізації й 80 95 після гуманізації. Якщо виключити СОК- ділянки, то ступінь ідентичності послідовності з найбільш близьким гомологом людської зародкової лінії становив 9295. Як продемонстровано в таблиці 3, МІ7 46-13 є єдиним гуманізованим варіантом МІ. з панелі, що включає 13 варіантів, який характеризувався рівнем зв'язування, порівнянним з рівнем зв'язування батьківського мишиного антитіла, і зберігав також перехресну реактивність із СОЗЄ мавп циномолгус. Цей результат свідчить про те, що гуманізація мишиного Мі -домену без втрати афінності зв'язування з СОЗє, є нетривіальним завданням, яке вимагає здійснення декількох зворотних мутацій для відновлення залишків мишиної каркасної ділянки (зокрема 46), зберігаючи при цьому 524 в СОКТІ. Крім того, цей результат демонструє, що Мі -домен відіграє вирішальну роль у розпізнаванні мішені. Важливим є те, що гуманізований Мі -домен МІ7 46-13 на основі людської зародкової лінії, що рідко зустрічається, що стосується сімейства 7 М-доменів лямбда-типу й зберігає афінність і специфічність у відношенні СОЗє, придатний також для застосування в якості загального легкого ланцюга у фагових дисплейних бібліотеках антитіл ЕРар-формату й дозволяє здійснювати успішну селекцію нових специфічностей, що значно полегшує створення й виробництво біспецифічних молекул, що зв'язуються з СОЗЄє і, наприклад, з мішенню на пухлині, що й мають один й той ж "загальний" легкий ланцюг.
Приклад 5
Створення фагової дисплейної бібліотеки антитіл з використанням загального легкого ланцюга на основі людської зародкової лінії, що має походження з НУК1-39
У декількох підходах до створення біспецифічних антитіл, що нагадують повнорозмірний людський дО, застосовують модифікації Ес-ділянки, які індукують гетеродимеризацію двох різні важкі ланцюгів. Відповідні приклади включають технології "Ккпоб5-іпію-поїев" (Мегспапі і ін., Маї
Віотесппої.;16(7), липень 1998 р., стор. 677-681), технологію ЗЕЕО (БОамів і ін., Ргоївіп Епд ЮОев5 зеї!.; 23(4), квітень 2010 р., стор. 195-202) і технології на основі електростатичної взаємодії (Сипазекагап і ін., / Віої Снет.; 285(25), червень 2010 р., стор. 19637-19646). Хоча ці підходи дозволяють здійснювати ефективну гетеродимеризацію двох різні важкі ланцюгів, правильне спарювання когнатних легких і важких ланцюгів залишається проблемою. Застосування загального легкого ланцюга (С) може дозволити розв'язати цю проблему (Мегеспапі і ін., Маї
Віоїесі 16, 1998, стор. 677-681).
У даній заявці описане створення бібліотеки антитіл для дисплею на фагу М13. Важливим є те, що згідно з винаходом створюють багатокаркасну бібліотеку для важкого ланцюга з одним постійним (або "загальним) легеим ланцюгом. Вказана бібліотека призначена для створення мультиспецифічних антитіл без необхідності застосування складних технологій для того, щоб уникнути помилкового спарювання легких ланцюгів.
За рахунок застосування загального легкого ланцюга одержання вказаних молекул може бути полегшене, оскільки в цьому випадку більше не відбувається помилкового спарювання й полегшує виділення високе очищеного біспецифічного антитіла. У порівнянні з іншими форматами застосування Бар-фрагментів як конструктивних елементів на відміну, наприклад, від застосування 5сЕу-фрагментів, приводить до більш високої термостабільності й відсутності агрегування 5сЕм і утворення міжмолекулярних 5сгЕм.
Створення бібліотеки
Нижче описане створення бібліотеки антитіл для дисплею на фагу М13. Важливим є те, що згідно з винаходом створюють багатокаркасну бібліотеку для важкого ланцюга з одним постійним (або "загальним) легким ланцюгом.
Згідно з винаходом у бібліотеці використовують наступні важкі ланцюги (коди доступу в
Сепвапк вказані в дужках):
ІаНМ1-46701 (Х92343) (БО ІО МО: 104),
ІаНМ1-69706 (122583), (5ЕО ІО МО: 105),
ІаНнМЗ-15701 (Х92216), (ЗЕО ІО МО: 106),
ІЯШНМУЗ-23701 (М99660), (БЕО 10 МО: 107),
ІШНМ4-59701 (АВО19438), (5ЕО І МО: 108),
І2НМ5-51701 (М99686), (5ЕО 10 МО: 109)
У всіх важких ланцюгах застосовували ІСН.)2 як у)-елемент, за винятком ІЗНМ1-69706, у якій застосовували послідовність ІЗН.б6. Здійснювали рандомізацію СОБК-НІ, СОВ-Н2 і СОК-НЗ. Для
СОВ-НІ ї СОК-Н2 була вибрана стратегія "м'якої" рандомізації, і рандомізацію олігонуклеотидів здійснювали таким чином, щоб кодон, що кодує амінокислоту послідовності зародкової лінії, був присутній в 50 96 випадків. На частку всіх інших амінокислот, за винятком цистеїну, у сумі доводилися 50 95, що залишилися. В СОБК-НЗ, у якому була відсутня амінокислота зародкової лінії внаслідок присутності генетичного Ю-елемента, створювали такі олігонуклеотиди, які допускали застосування рандомізованих вставок між У-елементом і дУ-елементом довжиною від 4 до 9 амінокислот. Олігонуклеотиди, що втримувалися в цих рандомізованих ділянках, включали, наприклад, наступні амінокислоти. Три амінокислоти (/Уу/5 були присутні в кількості 15 95 кожна, амінокислоти А/О/Т/К/РЛ. /Л//МЛЛІИЕЛЕ були присутні в кількості 4,6 95 кожна.
Приклади методів створення бібліотек антитіл описані в Ноодепроот і ін., Мисієїс Асіа5 Кев., 19, 1991, стор. 4133-4131 ее і ін., у. Мої. Віої., 340, 2004, стор. 1073-1093.
Легкий ланцюг одержували на основі людської послідовності ПМК1-39 і застосовували в немодифікованій і нерандомізованій формі. Це повинно гарантувати, що можна використовувати той самий легкий ланцюг для інших проектів без додаткових модифікацій.
Приклад селекції з використанням бібліотеки:
Селекцію з використанням бібліотек з дозрілою афінністю здійснювали в розчині відповідно до представленої нижче процедури з використанням мономерного й біотинілованого позаклітинного домену антигена-мішені Х. 1. 1012 фагмідних частинок кожної бібліотеки зв'язували з 100 нМ біотинілованим розчинним антигеном протягом 0,5 год. у загальному об'ємі 1 мл. 2. Біотинілований антиген захоплювали й виділяли специфічно зв'язані фагові частки шляхом додавання -5 х 107 покритих стрептавідином магнітних гранул протягом 10 хв. 3. Гранули промивали з використанням 5-10х1 мл ЗФР/Івін 20 ї 5-10х1 мл ЗФР. 4. Елюцію фагових частинок здійснювали протягом 10 хв шляхом додавання 1 мл 100 мМ ТЕА (триєетиламін) і нейтралізації шляхом додавання 500 мкл 1М Трис/НеІ, рН 7,4, і 5. На наступних раундах селекції здійснювали повторне зараження бактерії штаму ТО1 Е. соїї на експонентній фазі росту, зараження хеллерним фагом МС5МІ3 і наступне осадження фагмідних частинок за допомогою ПЕГ/Масі. Селекції проводили, бО здійснюючи 3-5 раундів з використанням постійних або знижуваних (від 10-7М до 2х109М)
концентрацій антигену. При здійсненні раунду 2 проводили захоплення комплексів антиген/фаг з використанням нейтравідинових планшетів замість стрептавідинових гранул. Усі реакційні суміші для зв'язування доповнювали або 100 нМ бичачим сироватковим альбуміном, або порошкоподібним знежиреним молоком для конкуренції з небажаними клонам, що виникають внаслідок простого липкого зв'язування антитіл із пластиковою основою.
Селекції проводили, здійснюючи три або чотири раунди з використанням знижуваних концентрацій антигену, починаючи з 100 нМ і знижуючи їх до 5 НМ у кінцевому раунді селекції.
Специфічні зв'язувальні агенти визначали за сигналами, що перевищують приблизно в 5 раз фоновий рівень, і ідентифікували за допомогою ЕГІ5ЗА. Специфічні зв'язувальні агенти ідентифікували за допомогою ЕЇ ІЗА у такий спосіб: по 100 мкл 10 нМ біотинілованого антигену на лунку імобілізували на сенсибілізовані нейтравідином планшети. Додавали бактеріальні супернатанти, що містять Бар, й проводили виявлення зв'язаних Бар за їх Ріад-мітками з використанням вторинного антитіла анти-Ріад/НекР. Позитивні за даними ЕГІ5ЗА клони експресували в бактеріях у вигляді розчинних Раб-фрагментів в 9б-лунковому форматі й проводили експеримент зі скринінгу супернатантів відносно кінетичних характеристик за допомогою 5РКЕ-аналізу з використанням РгоїеОп ХРЕЗ6 (фірма ВіоКад). Ідентифікували клони, що експресують Бар, з найбільш високими константами афінності й секвенували відповідні фагміди. Для додаткової характеризації послідовності ар ампліфікували за допомогою ПЛР із фагмід і клонували з використанням відповідних сайтів рестрикції в експресійних векторах для людського ІдДО1 з метою одержання в клітинах ссавців.
Створення бібліотеки антитіл для фагового дисплею з використанням гуманізованого СЮОЗЄ- специфічного загального легкого ланцюга
У даному розділі описане створення бібліотеки антитіл для дисплею на фагу М13. Важливим є те, що згідно з винаходом створювали багатокаркасну бібліотеку для важкого ланцюга з одним постійним (або "загальним) легсим ланцюгом. Цю бібліотеку створювали для конструювання біспецифічних антитіл ізотипу (91 РЗ3290 ГАГА або Ідс4 5РІЕ РО, що містять Ес, але які не мають активності відносно зв'язування з ЕСоК, що активують Т-клітини, у яких один або два Бар розпізнають пухлинний поверхневий антиген, експресований на пухлинній клітині, у той час як
ЕРар-плече антитіла, що залишилося, розпізнає СОЗє на Т-клітині.
Створення бібліотеки
Нижче описане створення бібліотеки антитіл для дисплею на фагу М13. Важливим є те, що згідно з винаходом створювали багатокаркасну бібліотеку для важкого ланцюга з одним постійним (або "загальним) легким ланцюгом. Цю бібліотеку створювали винятково для конструювання біспецифічних антитіл ізотипу (Д1 РЗ3296 І АГА або Ідс4 5РІ Е РО, що містять
Ес, але не мають активності відносно зв'язування з ЕсоК на Т-клітинах.
Різноманітність вносили за допомогою рандомізації олігонуклеотидів тільки в СОКЗ різних важких ланцюгів. Методи створення бібліотек антитіл добре відомі в даній галузі й описані в
Ноодепроот і ін., Мисіеїс Асід5 Кев., 19, 1991, стор. 4133-4413; або в | ее і ін., У. Мої. Віої., 340, 2004, стор. 1073-1093.
При створенні бібліотеки застосовували наступні важкі ланцюги:
ІаНМ1-46701 (Х92343), (5ЕО ІЮ МО 104),
ІаНМ1-69706 (122583), (5ЕО І МО:105),
ІаНМЗ-15701 (Х92216), (5ЕО І МО 106),
ІШНМУЗ-23701 (М99660), (5ЕО 10 МО:107),
ІШНМ4-59701 (АВО19438), (5ЕО 10 МО:108),
ІЯНМ5-51701 (М99686), (ЗЕО І МО:109)
У бібліотеці застосовували легкий ланцюг, отриманий на основі специфічного у відношенні
СОЗє людини й мавп циномолгус гуманізованого антитіла СН2527: (МІ/7 46-13; 5ЕО ІЮ МО 112).
Цей легкий ланцюг не рандомізували й застосовували без додаткових модифікацій для того, щоб гарантувати сумісність із іншими біспецифічними зв'язувальними агентами.
У всіх важких ланцюгах застосовували ІЗНО2 як дУ-елемент, за винятком ІЗНМ1-69706, у якому застосовували послідовність ІЗН.)б6. Стратегія рандомізації була сфокусована тільки на
СОВ-НЗ, і створювали ПЛР-олігонуклеотиди, які дозволяли застосовувати рандомізовані вставки між У-елементом і.-елементом довжиною від 4 до 9 амінокислот.
Приклад 6
Відбір фрагментів антитіл до КБоЇїК! з бібліотек загальних легких ланцюгів (Сі Сі) (утримуючих легкий ланцюг зі специфічністю у відношенні СОЗЄ)
Антитіла 16АЗ, 15А1, 1803, 19Е5, 19А4, 15Н7, 1586, 1605, 15Е12, 2101, 16212, 21А5, 2108, 19Н3, 2006 і 20Н7, що містять загальний легкий ланцюг МІ 7 46-13 зі специфічністю до СОЗеє, 10) одержували за допомогою селекції методом фагового дисплею відносно різних видів
(людського, мавпячого (циномолгус) і мишиного) БоЇїК1. Клони 16АЗ, 15А1, 1803, 19Е5, 19А4, 15Н7, 1586, 2101, 16Е12, 19Н3, 2066 і 20Н7 відбирали з підбібліотеки, у якій загальний легкий ланцюг був спарений зі спектром важких ланцюгів на основі людської зародкової лінії МНІ 46. У цій підбібліотеці СОКЗ УНІ 46 був рандомізований з використанням 6 різних по довжині СОМКЗ.
Клони 1605, 15Е12, 21А5 і 2108 відбирали з підбібліотеки, у якій загальний легкий ланцюг був спарений зі спектром важких ланцюгів на основі людської зародкової лінії МНЗ 15. У цієї підбібліотеке СОКЗ МНЗ 15 був рандомізований з використанням 6 різних по довжині СОКЗ.
Для одержання антитіл, що мають видову крос-реактивність (або реактивність до мишиного
ЕоІКт), при здійсненні З раундів біопенінгу чергували різним способом різні види РоЇК1 (або зберігали постійними): 16АЗ і 15А1 (БоЇК1 людини - мавп циномолгус - людини); 1803 (Роїк 1 мавп циномолгус - людини - мишей); 19Е5 і 19А4 (З раунду селекції проти РОЇК! мишей); 15Н7, 1586, 1605, 15Е12, 2101, 16Е12, 21А5, 2158 (БоЇК! людини - мавп циномолгус - людини); 19Н3, 2006 і 20Н?7 (З раунду селекції проти БоЇК1 мишей).
ЕоОїК1 людини, мишей і мавп циномолгус як антигени для селекцій методом фагового дисплея, а також для скринінгів на основі ЕГІ5А і 5РЕ, короткочасно експресували у вигляді М- кінцевого мономерного Ес-злиття в клітинах НЕК ЕВМА і іп мімо сайт-специфічно біотинілували за допомогою спільної експресії біотинлігази ВігА на розпізнаваній амі-міткою послідовності, розташованій на С-кінці рецепторного ланцюга, що несе Ес-фрагмент (Ес-ланцюг із "виступом".
Для оцінки специфічності у відношенні БоЇК! створювали в такий же спосіб два родинні рецептори, а саме людські Го!ІКа і гоІКЗ.
Раунди селекції (біопенінг) здійснювали в розчині згідно з наступною схемою: 1. Прекліринг «- 1012 фагмідних частинок на планшетах Махізогр сенсибілізованих 10 мкг/мл неспорідненого людського ЇД для виснаження бібліотек антитіл, що розпізнають Ес-ділянку, злиту з антигеном. 2. Інкубація фагмідних частинок, що не зв'язуються з Ес, з 100 нМ біотинілованого людського, мавпячого (циномолгус) або мишиного РоЇК1 протягом 0,5 год. у присутності 100 нм неспорідненої небіотинілованої Рсо-конструкції, сконструйованої за допомогою технології "Кпоб- іпіо-поїе", для додаткового виснаження зв'язувальних Ес агентів у загальному об'ємі 1 мл. 3. Захоплення біотинілованого ЕБоїЇК! і приєднаного фага, що специфічно зв'язується, шляхом переносу в 4 лунки попередньо покритого нейтравідином титраційного мікропланшета протягом 10 хв (у раундах 1 і 3). 4. Промивання відповідних лунок з використанням 5х ЗФР/Івін2гО і 5х ЗФР. 5. Елюювання фагових частинок шляхом додавання по 250 мкл 100 мМ ТЕА (триєетиламін) на лунку протягом 10 хв і нейтралізація шляхом додавання 500 мкл 1М Трис/НеЇІ, рН 7.4 до об'єднаних елюатів, отриманих в 4 лунках. 6. Наступне очищення нейтралізованих елюатів шляхом інкубації на попередньо покритому нейтравідином титраційному мікропланшеті з використанням 100 нМ зв'язаного з біотином
ЕоїК2 або ЕГоЇїКЗ для остаточного видалення агентів, що зв'язуються з Ес, і неспецифічних агентів. 7. Повторне зараження клітин Е. сої ТО1, що знаходяться на логарифмічній стадії, супернатантом елюйованих фагових частинок, зараження хелплерним фагом МС5МТІ3, інкубація на шейкері при 30 "С протягом ночі й наступне осадження фагмідних частинок за допомогою
ПЕГ/Масі для використання на наступному раунді селекції.
Селекції проводили, здійснюючи З раунди з використанням постійних концентрацій антигену, що становили 100 нМ. У раунді 2 для запобігання збагачення агентами, що зв'язуються з нейтравідином, здійснювали захоплення комплексів антиген:фаг шляхом додавання 5,4 х 107 покритих стрептавідином магнітних гранул. Специфічні зв'язувальні агенти ідентифікували за допомогою ЕГІ5А у такий спосіб: 100 мкл 25 нМ біотинілованого людського, мавпячого (циномолгус) або мишиного Бої! і 10 мкг/мл людського дб наносили на нейтравідиновий планшет і планшет Махізогр відповідно. Додавали бактеріальні супернатанти, що містять Еар, й зв'язування Бар виявляли за їх Ріад-мітками з використанням вторинного антитіла анти-РІад/НЕР. Складали шорт-лист клонів, що дають сигнали на людському ЕОЇК1, що й дають негативну відповідь на людському дО, для подальшого аналізу й проводили їх тестування аналогічним способом у відношенні двох видів ЕоїБ!, що залишилися. Їх експресували в бактеріях в об'ємі культури, що становив 0,5 л, здійснювали афінне очищення й проводили додаткову характеризацію за допомогою 5РК-аналізу з використанням біосенсора
РгоїеОп ХРЕЗ6 фірми ВіокКаа.
Афінності (Ко) відібраних клонів вимірювали методом поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК) за допомогою обладнання РгоїеєОп ХРЕАЗб (фірма ВіоКай) при 25 С з використанням 10) біотинілованого БоЇК! людини, мавп циномолгус або мишей, а також БоЇК2 і БоЇїКЗ3 людини
(негативні контролі), іммобілізованих на чіпах МІС за допомогою захоплення нейтравідином.
Іммобілізація антигенів (ліганд): рекомбінантні антигени розводили за допомогою ЗФРТ (10 мМ фосфат, 150 мМ хлорид натрію, рН 7,4, 0,005 95 Твін 20) до 10 мкг/мл, потім ін'єкували зі швидкістю 30 мкл/хв у вертикальній орієнтації. Ін'єкція аналітів: Для вимірювань кінетичних характеристик за один прогін ("опе-5пої»-кінетика) напрямок ін'єкції змінювали на горизонтальну орієнтацію, ін'єкували дворазові серійні розведення очищеного Бар (змінюючи діапазони концентрацій) одночасно уздовж окремих каналів 1-5, тривалість асоціації становила 200 с, а тривалість дисоціації становила 600 с. Уздовж шостого каналу ін'єкували буфер (ЗФРТ), створюючи "паралельний" ("іп-Іїпе") порожній контроль для співставлення. Константи швидкості дисоціації (Коб) розраховували з використанням простої моделі зв'язування 1:11 Ленгмюра за допомогою програми РгоїеОп Мападег м3.1 шляхом одночасної апроксимації сенсограм асоціації й дисоціації. Константу рівноваги дисоціації (Ко) розраховували у вигляді відносини
Кон/Коп. У таблиці 4 перераховані константи рівноваги дисоціації (Ко) відібраних клонів, що мають специфічність у відношенні ЕоїЇК1.
Таблиця 4: Константи рівноваги дисоціації (Ко) для антитіл до ЕоЇК1 (Раб-формат), відібраних методом фагового дисплею з підбібліотек загальних легких ланцюгів, що містять
МІ 7 46-13, гуманізований легкий ланцюг, специфічний у відношенні СОЗє. Величини Ко дані в
НМ.
Сотклов ШО ЛеРОВІЯМЕ 00 сУРОВІ(ИМІ 00 пооївіінМм); ОВУВКОФЯМЕ 000 еРАЗ ЯМІ : тва : 217 / 18 / джюке слайнеджне нема зв зування доню за взування
ВА ВВ слабке дуже одонема зв'язування доолема зв'яхуєвння 3803838 1001408 сяене сі мехв хи язування ее 15 'язування Що ша селищ нн АК НИ НН зв'язування солена зв'язування що
М) с НА НИ: ЗНА Ка зв'язування (лем ха язування я Мн я вування Що ше І Шк Ал НИК І зв'язувдний пляма зв'язування ян тв взуванне Ще 38051 395650110000014111нема зв'язування (лена хв язування ла звоязування ! їз Е Б. і 137 : нама з зування Ї нема зв'язування і нема зв сування ! ог : нема зв'язування / з : нема зв'язування нема зв'язування пронема зв'язуаання ! їде : В 8 | 34 Г нема зв'язування | нема зв'язування ро немазв'язування ще ! пів В 13 І немазв'язування 0 Немазвазрвання нехашзування нама зв зування пон ні Зо ин ій - кни інн дов ву реле зн за язудання 7 од 0-5 0095 опевіаює 00пебріжна 020765
Приклад 7
Відбір фрагментів антитіл з генеричних (родових) мультикаркасних бібліотек до БоЇК1
Антитіла 11Е8, З36Е2, 9011, 509, 686 і 14Е4 одержували шляхом селекцій методом фагового дисплею з використанням родових мультикаркасних підбібліотек проти ЕоЇК1! різних видів (людини, мавп циномолгус або мишей). У цих мультикаркасних підбібліотеках різні МІ -домени з рандомізованими СОМКЗ (3 різні довжини) спаровували з різними МН-доменами з рандомізованими СОКЗ (6 різних довжин). Відібрані клони мали наступні спарені М /УН: 11Е8 (МК 1 5/МН 1 69), збг2 (МК З 20/УН 1 46), 9011 (Мк20 28/УНІ 46), 509 (МКЗ 20/УНІ1 46), 6вб (КЗ 20//Н1 46) і 144 (МКЗ3 20//НЗ 23). Для одержання антитіл, що мають видову крос- реактивністю (або реактивність до мишиного ЕоїЇК1), при здійсненні З або 4 раундів біопенінгу чергували по-різному ЕБоЇїК! різних видів (або зберігали їх постійними): 118 (БоЇК!1 мавп циномолгус - мишей - людини); З36Е2 (БОЇїК! людини - мишей - мавп циномолгус - мишей); 9011 (Роїк! мавп циномолгус - людини - мавп циномолгус); 509 (РОЇК! людини - мавп циномолгус - людини); 686 (БОоЇК1 людини - мавп циномолгус - людини) і 14Е4 (З раунду проти
ЕОЇК1 мишей).
ЕОїК1 людини, мишей і мавп циномолгус, що застосовували як антигени для селекцій методом фагового дисплея, а також скринінгів на основі ЕГІБА і РК, короткочасно експресували у вигляді М-кінцевого мономерного Ес-злиття в клітинах НЕК ЕВМА і сайт- специфічно біотинілували іп мімо за допомогою спільної експресії біотинлігази ВігА на послідовності, що розпізнаються амі-міткою, розташованій на С-кінці рецепторного ланцюга, що несе Ес-ділянку (Ес-ланцюг із "виступом"). Для оцінки специфічності у відношенні ЕоїК1 створювали в такий же спосіб два родинні рецептори, а саме людські БоїІКа2 і гоІКЗ.
Раунди селекції (біопенінг) здійснювали в розчині згідно з наступною схемою: 1. Прекліринг «- 1012 фагмідних частинок на планшетах тахізогр сенсибілізованих 10 мкг/мл неспорідненого людського ЇД для виснаження бібліотек антитіл, що розпізнають Ес-ділянку, злиту з антигеном. 2. Інкубація фагмідних частинок, що не зв'язуються з Ес, з 100 нМ біотинілованого ЕоїК1 людини, мавп циномолгус або мишей протягом 0,5 год. у присутності 100 нМ неспорідненої небіотинілованої Ес-конструкції, створеної за допомогою технології "Кпор-іпіо-поЇе", для додаткового виснаження зв'язувальних Ес агентів у загальному об'ємі 1 мл. 3. Захоплення біотинілованого БоїК!1 і приєднаного, що специфічно зв'язується фага шляхом переносу в 4 лунки попередньо покритого нейтравідином титраційного мікропланшета протягом 10 хв (у раундах 1 і 3). 4. Промивання відповідних лунок з використанням 5х ЗФР/Івін2гО і 5х ЗФР. 5. Елюйованя фагових частинок шляхом додавання по 250 мкл 100 мМ ТЕА (триєтиламін) на лунку протягом 10 хв і нейтралізація шляхом додавання 500 мкл 1М Трис/НеСІ, рН 7.4 до об'єднаних елюатів, отриманих в 4 лунках. 6. Наступне очищення нейтралізованих елюатів шляхом інкубації на попередньо покритому нейтравідином титраційном мікропланшеті з використанням 100 нМ зв'язаного з біотином БоЇК2 або ЕРОЇКЗ для остаточного видалення, що зв'язуються з Ес і неспецифічних агентів. 7. Повторне зараження клітин Е. соїї, що знаходяться на логарифмічній стадії, ТО1 супернатантом елююваних фагових частинок, зараження хеллерним фагом МСЗМТІ13, інкубація на шейкері при 30 "С протягом ночі й наступне осадження фагмідних частинок за допомогою
ПЕГ/Масі для використання на наступному раунді селекції.
Селекції проводили, здійснюючи З раунди з використанням постійних концентрацій антигену, що становили 100 нМ. У раундах 2 і 4 для запобігання збагачення агентами, що зв'язуються з нейтравідином, здійснювали захоплення комплексів антиген:фаг шляхом додавання 5,4 х 107 покритих стрептавідином магнітних гранул. Специфічні зв'язувальні агенти ідентифікували за допомогою ЕГІБА у такий спосіб; 100 мкл 25нМ біотинілованого ЕоїІВ1 людини, мавп циномолгус або мишей і 10 мкг/мл людського ЇдД наносили на нейтравідинові планшети й планшети Махізогр відповідно. Додавали бактеріальні супернатанти, що містять
ЕаБ. й зв'язування Раб виявляли за їх РІад-мітками з використанням вторинного антитіла анти-
Ніад/НкР. Складали шорт-лист клонів, що дають сигнали на людському БоЇК!, що й дають негативну відповідь на людському ДО, для подальшого аналізу й проводили їх тестування аналогічним чином у відношенні ЕоЇБ1, що залишилися двох видів. Їх експресували в бактеріях в об'ємі культури, що становив 0,5 л, здійснювали афінне очищення й проводили додаткову характеризацію за допомогою ЗРЕ-аналізу з використанням біосенсора РгоїеОп ХРКЗ3б6 фірми
Віокад. Афінності (Ко) відібраних клонів вимірювали методом поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК) за допомогою обладнання РгоїеОп ХРКЗб (фірма ВіоКай) при 25С з використанням біотинілованого РОЇК! людини, мавп циномолгус або мишей, а також ЕоїК2 і
ЕоЇїКЗ людини (негативні контролі), іммобілізованих на чіпах МІС за допомогою захоплення нейтравідином. Іммобілізація антигенів (ліганд): рекомбінантні антигени розводили за допомогою ЗФРТ (10 мМ фосфат, 150 мм хлорид натрію, рН 7,4, 0,005 95 Твін 20) до 10 мкг/мл, потім ін'єкували зі швидкістю 30 мкл/хв у вертикальній орієнтації. Ін'єкція аналітів: Для вимірювань кінетичних характеристик за один прогін ("опе-5пої»-кінетика) напрямок ін'єкції змінювали на горизонтальну орієнтацію, ін'єкували дворазові серійні розведення очищеного Бар (змінюючи діапазони концентрацій) одночасно уздовж окремих каналів 1-5, тривалість асоціації становила 200 с, а тривалість дисоціації становила 600 с. Уздовж шостого каналу ін'єкували буфер (ЗФРТ), створюючи "паралельний" ("іп-Іпе") порожній контроль для зіставлення.
Константи швидкості дисоціації (Кок) розраховували з використанням простої моделі зв'язування 171 Ленгмюра за допомогою програми РгоїеОп Мападег м3.1 шляхом одночасної апроксимації сенсограм асоціації й дисоціації. Константу рівноваги дисоціації (Ко) розраховували у вигляді відносини Кок/Коп. У таблиці 5 перераховані константи рівноваги дисоціації (Ко) відібраних клонів, що мають специфічність у відношенні ЕоїЇК1.
Таблиця 5: Константи рівноваги дисоціації (Ко) для антитіл до ЕоЇК1 (Раб-формат), відібраних методом фагового дисплею з родових мультикаркасних бібліотек. Величини Ко представлені в нМ.
....3168 77717777 638 0001954 00010 1200 немае язування с немазе зування
ЗвЕй ! 18510 ! 18-40 ї 7Зу нема зв язування нема зв язивавня Й
С..8010 В.Б нем зв'язування іже зв'язування донема зв'язування . ! БО ! а : 5. і немазв'язування меха знязувания : нежмхзв'язування і ва : 145 : За : НЕМАЕ жН ЗУВАННЯ века зв'язування її нема за взивдння 7 / 384 | немезв'янвтння емезвєзування БОЮ немазв'язування емазе'язування
Приклад 8
Одержання й очищення нових ЕоїЇК1-зв'язувальних агентів у форматі дсС ії форматах біспецифічних молекул, що активують Т-клітину
Для ідентифікації БоІК1-зв'язувальних агентів, які мають здатність індукувати залежний від
Т-клітин цитоліз вибраних клітин-мішеней, антитіла, виділені з бібліотеки загальних легких ланцюгів або Рар-фрагментів перетворювали у відповідний формат людського ІдсС1. У цілому метод полягав у наступному. Варіабельні важкі й варіабельні легкі ланцюги унікальних ЕБоїЇК1- зв'язувальних агентів, отриманих за допомогою фагового дисплея, ампліфікували, здійснюючи стандартні ПЛР-реакції з використанням клонів Бар як матриці. ПЛР-продукти очищали й вбудовували (або за допомогою клонування, заснованого на застосуванні рестрикційної ендонуклеази й лігази, або за допомогою "рекомбінації" з використанням набору Іптизіоп фірми
Іпмійгодеп) у придатні експресійні вектори, у яких їх зливали з відповідним людським константним важким або людським константним легким ланцюгом. Касети експресії в цих векторах включали химерний промотор МР5ЗМ і синтетичний сайт поліаденілування. Крім того, плазміди містили ділянку огіР з вірусу Епштейна-Бара для підтримки плазмід у стабільному стані в клітинах НЕК293, що несуть ядерний антиген ЕВМ (ЕВМА). Після опосередкованої ПЕЇ трансфекції антитіла короткочасно продукували в клітинах НЕК293 ЕВМА і очищали за допомогою стандартної афінної хроматографії з використанням білка А і наступної гель- фільтрації згідно з описаним методом:
Короткочасна трансфекція й одержання
Усі використовувані згідно із даним винаходом (біспецифічні) антитіла (якщо їх не отримували в комерційних постачальників) короткочасно одержували в клітинах НЕК293 ЕВМА із застосуванням описаної нижче процедури опосередковуваної ПЕ! трансфекції з використанням відповідних векторів. Клітини НЕК293 ЕВМА культивували в безсироватковій суспензії в середовищі СО СНО. Для одержання в струшувану колбу місткістю 500 мл висівали за 24 год. до трансфекції 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА (для інших масштабів виробництва всі кількості регулювали відповідним чином). Для здійснення трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х 9, супернатант заміняли на 20 мл попередньо нагрітого середовища СО
СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО до одержання кінцевої кількості 200 мкг ДНК. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с і потім інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ, переносили в 500-мілілітрову струшувану колбу й інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 95 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали 1мМ вальпроєву кислоту й 7 95 ЕРеей 1. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали для очищення шляхом центрифугування протягом 15 хв при 210 х 9, розчин стерилізували фільтрацією (фільтр із розміром пор 0,22 мкМ), додавали азид натрію в кінцевій концентрації 0,01 95 (мас./ об.) і витримували при 4 "С. Після завершення виробництва супернатанти збирали, фільтрували супернатанти, що містять антитіло, через стерильні фільтри з розміром пор 0,22 мкМ і зберігали при 4 "С до очищення.
Очищення антитіл
Усі молекули піддавали двостадійному очищенню із застосуванням стандартних процедур, таких як афінне очищення з використанням білка А (фірма АКіа Ехріогег) і гель-фільтрація.
Значення рН супернатанта, отриманого за допомогою короткочасного виробництва, доводили до рН 8,0 (використовуючи 2М Трис, рН 8,0) і вносили в колонку НіТтар РА ЕЕ (фірма СЕ
Неапйсаге, об'єм колонки (см) - 5 мл), урівноважену взятим в об'ємі, що дорівнює 8 об'ємам колонки (сх), буфером А (20 мМ фосфат натрію, 20 мМ цитрат натрію, рН 7,5). Після промивання з використанням 10 см буфера А, білок елюювали, застосовуючи градієнт рН до буфера Б (20 мМ цитрат натрію, рН 3, 100 мМ масі, 100 мМ гліцин) з використанням об'єму, що дорівнює 12 су. Об'єднували фракції, які містять білок, що представляє інтерес, і значення рн розчину обережно доводили до рН 6,0 (використовуючи 0,5М МагНРО», рн 8,0). Зразки концентрували до 2 мл з використанням ультра-концентраторів (Мімазріп 15 30.000 МУУСО НУ, фірма Запогіи5) і потім вносили в колонку для препаративної хроматографії Ні Поаа"м16/60
Зирегаєх "М 200 (фірма СЕ Неайпсаге), урівноважену буфером, що містить 20 мМ гістидин, рН 6,0, 140 мм Масі, 0,01 95 Твін-20. Вміст агрегатів в елюйованих фракціях аналізували за допомогою аналітичної гель-фільтрації. Для цього по 30 мкл кожної фракції вносили в колонку для аналітичної гель-фільтрації Т5Каде! 3000 МУ ХІ (фірма Тозо!й), урівноважену рухомим буфером, що містить 25мММ К»НРО», 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./ об.) МаМ», рН 6,7 при 25 "С. Фракції, що містять менше 2 95 олігомерів, об'єднували й концентрували до кінцевої концентрації 1-1,5 мг/мл з використанням ультра-концентраторів (Мімазріп 15К 30.000 МУУСО НУ, фірма Запогіи5). Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту й молекулярну масу конструкцій аналізували за допомогою капілярного електрофорезу в присутності ДСН із відновлюючим агентом і без нього згідно з інструкціями виробника (обладнання Саїїрег ГавспірсхХ, фірма
Регккіп ЕІтег). Очищені білки заморожували в рідкому М?» і зберігали при -80 "С.
На основі результатів характеризації іп міго відібрані зв'язувальні агенти конвертували у формат біспецифічної молекули, що активує Т-клітину. У цих молекулах зв'язувальні БоІЇК1:СО03 фрагменти розташовані відповідно до схеми 2:1, при цьому зв'язувальні БОІїЇК1 Рар-фрагменти локалізовані на М-кінці. Для клонів, виділених зі стандартної бібліотеки Гар, СОЗ-зв'язувальний фрагмент створювали у вигляді Сто55Бар (схрещування СНІСк), у той час як для клонів, отриманих з використанням бібліотеки загальних легких ланцюгів, схрещування не було потрібно здійснювати. Вказані біспецифічні молекули одержували й очищали аналогічно до процедури, яку застосовували для дос.
Таблиця 6: Вихід і вміст мономерів нових ЕоЇК1-зв'язувальних агентів у форматі Ід і Тов відповідно /Ме| клон |бібліотека | вихід (мг/л) | мономер (95) | вихід (мг/л) | мономер (96) 1|л11е8| вас | 803 | 9626 | - | - 2|7144| вар | 890 | 9842 | - | - зіІл15в6| сс | 772 | лоб00 | - | - 4|15Е12| сс | бло | лоб | - | -
БІТ5НЯ| сс | 894 | лоб | - | - б|т6АЗ| сСІС | 060 | па | - | - 8і162а| сс | 573 | 9747 | - | - 9|т1803| сс | 080 | па | - | - 1795 | сс | 4609 | лоб | - | - лгртянза| сс | 764 | лоб | - | - 3І2006| сСІС | г2гао | лоб | - | - л4|г2гоня| сс | 4559 | 70000 | - | - лбі21рі| сс | 547 | лоб00 | - | -
СІ С: загальний легкий ланцюг
Приклад 9
Формати "2-1" ії "14-41" біспецифічних молекул, що активують Т-клітину
Одержували чотири різні формати біспецифічних молекул, що активують Т-клітину для зв'язувального агента, що має один загальний легкий ланцюг (1605) і три формати для одного зв'язувального агента з бібліотеки Раб (9011) для порівняння їх здатності до цитолізу іп міго.
Стандартним форматом є вже описаний формат "241 інвертована" (БоІК1:СО3-зв'язувальні фрагменти, розташовані відповідно до схеми 2:1, де ЕБоЇК1-зв'язувальні Бар знаходяться на М-
кінці). У класичному форматі 24-41 БоІКк1:СО03-зв'язувальні фрагменти розташовані відповідно до схеми 2:11, де СОЗ-зв'язувальний Бар знаходиться на М-кінці Одержували також два одновалентні формати. У форматі "14-41 "голова-до хвоста»» БоІїК1:СО3-зв'язувальні фрагменти розташовані відповідно до схеми 1:11 на тому самому плечі молекули, при цьому ЕоїК1- зв'язувальний Бар знаходиться на М-кінці. У класичному форматі "1-1" присутні по одному з
ЕоІВ1:С03-зв'язувальних фрагментів, кожний з яких знаходиться на одному плечі молекули.
Для клону 9011, виділеного зі стандартної бібліотеки Раб, СОЗ-зв'язувальний фрагмент створювали у вигляді Сто55Бар (схрещування СНІСк), у той час як для 1605, отриманого з використанням бібліотеки загальних легких ланцюгів, схрещування не було потрібно. Вказані біспецифічні молекули одержували й очищали аналогічно до процедури, яку застосовували для стандартного інвертованого формату біспецифічної молекули, що активує Т-клітину.
Таблиця 7: Узагальнення даних про вихід і кінцевий вмісті мономерів для різних форматів біспецифічних молекул, що активують Т-клітину (за даними ГФ)
Приклад 10
Визначення біохімічних характеристик ЕоЇК1-зв'язувальних агентів за допомогою поверхневого плазмонного резонансу
Зв'язування ГоІК1-зв'язувальних агентів у вигляді ДС або у форматі біспецифічної молекули, що активує Т-клітину з різними рекомбінантними фолатними рецепторами (людські
ЕОІКТ, 2 ї 3, мишиний РЕоїК/1 і БОоїК1 мавп циномолгус; усе у вигляді злиттів з Ес) оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Усі експерименти із застосуванням
ОРЕ здійснювали на обладнанні ВІіАсоге Т200 при 25 "С з використанням НВ5-ЕР як рухомий буфер (0,01М НЕРЕЗ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗммМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактант Р20, фірма ВіІАсоге,
Фрейбург, Німеччина).
Однократні ін'єкції
Спочатку аналізували анти-БоїК!1 Ідс, здійснюючи однократні ін'єкції (таблиця 1) для характеризації їх крос-реактивності (до БоїЇК!ї людини, мишей і мавп циномолгус) і специфічності ("у відношенні людського БОоЇК1, людського БоЇК2, людського ЕоІКЗ). Здійснювали безпосереднє сполучення злиттів рекомбінантного біотинілованого мономерного Ес з фолатним рецептором 1 людини, мавп циномолгус і мишей (БоЇК1-Рс) або людським фолатним рецептором 2 і З (БоІК2-Ес, ГоІВЗ-Ес) з За-чіпом згідно з інструкцією зі здійснення стандартної комбінації (фірма ВіАсоге, Фрейбург, Німеччина). Рівень іммобілізації становив приблизно 300- 400 КИ. ідо ін'єкували протягом 60 с у концентрації 500 нМ. Зв'язування дос з пигоїКа2 і пиБоїКЗ відбраковували внаслідок відсутності специфічності. Більшість зв'язувальних агентів мали крос- реактивність тільки до людського й супоБоїЇК1, додаткова крос-реактивність до мишиного БоЇК1 у більшості випадків супроводжувалася втратою специфічності.
Таблиця 8: Крос-реактивність і специфічність 25 нових зв'язувальних фолатний рецептор 1 агентів (у вигляді дО), а також двох контрольних ЇдС (Мом19 і фарлетузумаба). ї- позначає наявність зв'язування, - позначає відсутність зв'язування, ж позначає наявність слабкого зв'язування клону пиЕо!А1 сугої!В1 тивРо!В1 пиго!Н2 пиЕГо!вЗ
Момяї////// Їх Ї71717яю 1111-11-11 офарлетууумаб| я | (я | 7-1 - 1 -
ЛвАЗ/ Її Їж Її -1ї11- во Її Її клону пиЕо!А1 сугої!В1 тивРо!В1 пиго!Н2 пиЕГо!вЗ
ПЕТ ПО ОНИ ПО ПН КО ОН НО КО еО
ВЕГТх ГОЛИ ПОП ОНИ ПОП ОН НО ОН КОН КО
ЛВ Її Їж Її 7лво5 Їх Її
ЕМ ПОЛ ИН ПОП ОН ПО УНН КОН КО вла Її 7-5 Її 1111-11-11 21А5 Її ЇЇ -1ї1к 2108 Її ЇЇ 1111-1111 лен Її 11111711 206 Її 11111111 20ну Її -171Г111171-171111ю1111-ї1- зт Їх Їж 1111-11-11 5рУ 7 Їх Ї111яю 1111-1111 6677771 Їж Їж 1111-1111
ПЕТ:ІвР ПИ ПОП ОО ПОХООП ОНН НО ОН КОН КО
ПЕТ: уд ПО ОО ПО ОН КО ОН КОН КО
Авідність до фолатного рецептора 1
Авідність взаємодії між анти-РоІК1 Ідс або біспецифічними молекулами, що активують Т- клітину, й рекомбінантними фолатними рецепторами визначали відповідно до описаного нижче методу (таблиця 9).
Здійснювали безпосереднє сполучення злиттів рекомбінантного біотинілованого мономерного Ес з фолатним рецептором 1 людини, мавп циномолгус і мишей (БоЇК1-Ес) з за- чіпом згідно з інструкцією зі здійснення стандартної комбінації (фірма ВіАсоге, Фрейбург,
Німеччина). Рівень іммобілізації становив приблизно 300-400 КО. Анти-БоїК! дб або біспецифічні молекули, що активують Т-клітину, в діапазоні концентрацій від 2,1 до 500 нМ пропускали зі швидкістю 30 мкл/хв через проточні гнізда протягом 180 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 600 с. Усі відмінності в коефіцієнті заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці з іммобілізованим злиттям рекомбінантний біотинілований рецептор ІІ 2-Ес. Для аналізу взаємодії між 19Н3 ІдО і мишиним фолатним рецептором 1, додавали фолат (фірма Зідта, каталожний номер Е7876) у проточному буфері НВ5-ЕР у концентрації 2,3 мкМ. Криві зв'язування, отримані в результаті двовалентного зв'язування /дс або біспецифічних молекул, що активують Т-клітину, апроксимували на основі моделі зв'язування за типом 1:1 Ленгмюра й підганяли до цієї моделі (що не є коректним, але дозволяє судити про авідності). Уявні константи авідності, що характеризують взаємодії, одержували на основі констант швидкості, визначених у результаті припасування з використанням програми Віа ЕмаЇІцайоп (фірма СЕ Неайвсаге).
Таблиця 9: Двовалентне зв'язування (авідність, що характеризується уявною величиною Ко) відібраних ЕБоЇК1-зв'язувальних агентів у вигляді Їд або у вигляді біспецифічних молекул, що активують Т-клітину (ТОВ) з РоЇК1 людини й мавп циномолгус збгг до
Афінність до фолатного рецептора 1
Афінність взаємодії між анти-РоІВ1 Ідсї або біспецифічними молекулами, що активують Т- клітину, й рекомбінантними фолатними рецепторами визначали відповідно до описаного нижче методу (таблиця 10).
Для вимірювання афінності здійснювали безпосередню комбінацію антилюдського Еар- специфічного антитіла (набір для захоплення Раб, фірма СЕ Неайпсаге) до досягнення рівня, що відповідає приблизно 6000-7000 резонансних одиниць (КО), на СМ5-чіпі при рН 5,0 з використанням набору для здійснення стандартного амінного сполучення (фірма СЕ
Неансаге). Анти-ЕоЇК1 ІдО або біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, в концентрації 20 нМ захоплювали при швидкості потоку 10 мкл/хв протягом 20 або 40 с, у проточній референс-комірці захоплення не здійснювали. Через усі проточні гнізда пропускали серійні розведення (від 6,17 до 500 нМ або від 12,35 до 3000 нМ) злиттів людський або мавпячий (циномолгус) фолатний рецептор 1-Ес при швидкості потоку 30 мкл/хв протягом 120 або 240 с для реєстрації фази асоціації. Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом 240 с і для запуску заміняли розчин для зразка на НВ5З-ЕР. Поверхню чіпа регенерували після кожного циклу, використовуючи дві ін'єкції по 60 с із використанням 10 мМ гліцину-НСІ, рн 21.
Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці 1. Константи афінності, що характеризують взаємодії, визначали на основі констант швидкості шляхом припасування до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра, використовуючи програму Віа ЕмаЇІцайоп (фірма СЕ Неайвсаге).
Таблиця 10: Одновалентне зв'язування (афінність) відібраних ЕРоїЇК1-зв'язувальних агентів у вигляді до або у вигляді біспецифічних молекул, що активують Т-клітину (ТСВ) з людським
ЕОІКІ їі супогоїК1
Афінність до СОЗ
Афінність взаємодії між анти-РоЇК1 біспецифічними молекулами, що активують Т-клітину, й злиттям рекомбінантний людський СЮОЗеєб-Ес визначали відповідно до описаного нижче методу (таблиця 11).
Для вимірювання афінності здійснювали безпосередню комбінацію антилюдського Еар- специфічного антитіла (набір для захоплення Раб, фірма СЕ Неайпсаге) до досягнення рівня, що відповідає приблизно 9000 резонансних одиниць (КО), з СМ5-чіпом при рН 5,0 з використанням набору для здійснення стандартного амінного сполучення (фірма СЕ
Неайсаге). Анти-ЕоЇК1, біспецифічні молекули, що активують Т-клітину в концентрації 20 нм захоплювали при швидкості потоку 10 мкл/хв протягом 40 с, у проточній референс-комірці захоплення не здійснювали. Через усі проточні гнізда пропускали серійні розведення (від 6,17 до 500 НМ) злиття людський СЮОЗеєб-Ес при швидкості потоку 30 мкл/хв протягом 240 с для реєстрації фази асоціації. Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом 240 с і для запуску заміняли розчин зразка на НВ5З-ЕР. Поверхню чіпа регенерували після кожного циклу за допомогою двох ін'єкцій гліцину-НСІ у концентрації 10 мМ, рН 2,1, протягом 60 с кожна.
Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці 1. Константи афінності, що характеризують взаємодії, визначали на основі констант швидкості шляхом припасування до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра, використовуючи програму Віа ЕмаІнайоп (фірма СЕ Неайсагеє).
Таблиця 11: Одновалентне зв'язування (афінність) відібраних РоїЇК1-зв'язувальних біспецифічних молекул, що активують Т-клітину (ТОВ) зі злиттям людський СОЗ3-Ес
СОЗ-зв'язувальний фрагмент був однаковим для всіх конструкцій і афінність виявилася подібною для проаналізованих біспецифічних молекул, що активують Т-клітину (величини Ко знаходилися в діапазоні від 60 до 90 нМ).
Приклад 11
Одночасне зв'язування біспецифічних молекул, що активують Т-клітину з фолатним рецептором 1 і СОЗ
Одночасне зв'язування анти-БОоЇїК! біспецифічних молекул, що активують Т-клітини, з рекомбінантним фолатним рецептором 1 і злиттям рекомбінантний людський СОЗеб-Ес визначали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу відповідно до описаного нижче методу. Здійснювали безпосереднє сполучення злиттів рекомбінантного біотинілованого мономерного Ес з рецептором 1 людини, мавп циномолгус і мишей (БоІК1-Ес) з БА-чіпом згідно зі стандартними інструкціями по здійсненню комбінацій (фірма ВіІАсоге, Фрейбург, Німеччина).
Рівень іммобілізації становив приблизно 300-400 КИ. Анти-РоЇК1 біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, в концентрації 500 нМ ін'єкували протягом 60 із при швидкості потоку 30 мкл/хв через проточні гнізда, після чого здійснювали ін'єкцію пи СОЗеб-Ес у концентрації 500 нм протягом 60 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці з іммобілізованим злиттям рекомбінантний біотинілований рецептор І/2-Ес. Чотири протестовані біспецифічні молекули, що активують Т- клітини, (1605 ТОВ, 21А5 ТОВ, 51С7 ТОВ і 4502 ТСВ), як і очікувалося, мали здатність до одночасного зв'язування з фолатним рецептором 1 і людським СОЗ.
Приклад 12
Групування залежно від епітопу
Для визначення групування залежно від епітопу здійснювали безпосередню іммобілізацію анти-РОЇК1 до або біспецифічних молекул, що активують Т-клітини, на СМ5-чіпі при рН 5,0 з використанням набору для стандартного амінного сполучення (фірма СЕ Неакрсаге) до досягнення кінцевої відповіді, що відповідає приблизно 700 КИ. Після цього здійснювали захоплення 500 нМ ПиБоїК1-Рс протягом 60 с, а потім різних зв'язувальних агентів у концентрації 500 нМ протягом 30 с. Поверхня регенерували, здійснюючи дві ін'єкції з використанням 10 мМ гліцину, рН 2, протягом 30 с кожна. Оцінювали, чи можуть різні зв'язувальні агенти зв'язуватися з пПиРоОЇК1!, захопленому іммобілізованими зв'язувальними агентами (таблиця 12).
Таблиця 12: Характеризація залежно від епітопів на людському БоОЇК1 відібраних ЕБоїЇК1- зв'язувальних агентів у вигляді (ДС або у вигляді біспецифічних молекул, що активують Т- клітину (ТОВ). ї позначає наявність зв'язування, - позначає відсутність зв'язування, ж позначає наявність слабкого зв'язування. 11111100 Аналітиврозчині/////ССсС1С напиєоівт | 1605 ТСВІ 21А5 ТСВІ 9011 ТОВ Збгг ідо | Моу19 ІдО| фарлетузумаб
Іммобіл-|1605 ТОВ |. - 1717-17-17. Їх 1 зовані (21А5ТСОВ | /- | - | - ЇЇ х5 | зт | ч-
МоуядсЇ я | я | ж | - ЇЇ - Ї -
На основі цих результатів і додаткових даних про одночасне зв'язування на іммобілізованому пПиЕоОЇК! зв'язувальні агенти були розділені на три групи. Залишилося нез'ясованим, чи має 9011 окремий епітоп, оскільки його витісняють усі інші зв'язувальні агенти. 1605 і 21А5, ймовірно, входять в одну групу, а Мом19, фарлетузумаб (Сопеу і ін., Сапсег Кев., 51(22), 15 листопада 1991 р., стор. 6125-6132; Каїї і ін., Сигг Оріп Іпмезіїд Огид5., 8(12), грудень 2007 р., стор. 1067-1073) і З36Е2 входять в іншу групу (таблиця 13). Однак З36Е2 зв'язується з епітопом, відмінним від того, з яким зв'язуються Мом 19 і фарлетузумаб, оскільки він зв'язується з ЕОЇКТ людини, мавп циномолгус і мишей.
Таблиця 13: Групування залежно від епітопу на людському БоОЇК1 відібраних РГоїК1- зв'язувальних агентів у вигляді (ДС або у вигляді біспецифічних молекул, що активують Т- клітину (ТОВ) 21АБ | | фарлетузумаб) 1177771 |136є2
Приклад 13
Відбір зв'язувальних агентів
Здійснювали скринінг БоЇК1-зв'язувальних агентів у форматі до за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (РЕ) і аналізу іп міго на клітинах для відбору найбільш перспективних кандидатів.
Анти-ЕРОЇКІ1 до аналізували за допомогою 5РЕК для характеризації їх крос-реактивності (до
ЕоОїК1 людини, мишей і мавп циномолгус) і специфічності (у відношенні людського ЕоїК1, людського БоЇК2, людського ЕоЇКЗ3). Неспецифічне зв'язування з людським РоїКа і З розглядали як критерій виключення. Дані про зв'язування й специфічності у відношенні людського ЕоїЇК1 підтверджували на клітинах. Деякі зв'язувальні агенти не зв'язувалися на клітинах, що експресують РОЇК, навіть незважаючи на те, що вони розпізнавали рекомбінантний людський
ЕОЇКІ1 за даними аналізу методом 5РЕК. Визначали температуру агрегації, але її не розглядали як критерій виключення, оскільки всі відібрані зв'язувальні агенти були стабільними. Відібрані зв'язувальні агенти тестували за допомогою ЕГІЗА для визначення поліреактивності з метою перевірки наявності неспецифічного зв'язування, що привело до виключення чотирьох зв'язувальних агентів. У результаті цього процесу спочатку були відібрано три зв'язувальні агенти: 362 (бібліотека Раб), 9011 (бібліотека Раб) і 1605 (загальний легкий ланцюг).
Дисоціація 362 з комплексу з пиЕБоОЇК! відбувалася занадто швидко й отже відразу було очевидно, що він не мав переваги.
Приклад 14
Специфічне зв'язування нових сконструйованих ЕоїЇК1-зв'язувальних агентів з позитивними за людським ЕРОЇК1 пухлинними клітинами
Нові ЕоІК1-зв'язувальні агенти конструювали за допомогою методу фагового дисплею з використанням або бібліотеки Раб, або бібліотеки загальних легких ланцюгів (СІ СІ), створених з використанням легкого ланцюга СОЗ3. Ідентифіковані зв'язувальні агенти конвертували у формат людського ІдДС1 і аналізували зв'язування з, що характеризуються високим рівнем експресії РОЇК1 клітинами НеГа. Як референс-молекулу застосовували зв'язувальний людський
БоОїК1 клон Мом19. Більшість із протестованих у цьому досліді зв'язувальних агентів характеризувалися рівнем зв'язування з РОЇК! від проміжного до високого, при цьому деякі клони мали такою ж здатність до зв'язування, що й Мом19 (див. фіг. 2). Клони 16АЗ, 1803, 15Н7, 1586, 2101, 14Е4 і 16Е12 були виключені, оскільки їх зв'язування з РОЇК на клітинах не вдалося підтвердити за допомогою проточної цитометрії. На наступній стадії відібрані клони тестували відносно специфічності до людського ЕоОїЇК1, крім клонів, які зв'язувалися із близько родинним людським ЕБоЇК2. Для аналізу специфічності клітини НЕК короткочасно трансфектували або людським РоЇК1, або людським ЕоЇК2. Клони З6Е2 і 9011, отримані з бібліотеки Раб, і клони 1605 ії 21А5, отримані з бібліотеки СС, специфічно зв'язувалися з людським РБОоїЇК1 і не зв'язувалися з людським ЕоЇК2 (див. фіг. ЗА-Б). Усі інші протестовані клони мали принаймні невелику здатність зв'язуватися з людським ЕоЇК2 (див. фіг. ЗА-Б). Внаслідок цього вказані клони були виключені при проведенні подальшої характеризації. Паралельно аналізували крос- реактивність зв'язувальних РОЇК! клонів з супоБоОоЇїК!, вивчаючи здатність до зв'язування із клітинами НЕК, короткочасно трансфектованими супоБоїкК1!1. Усі протестовані клони мали здатність до зв'язування з супогоїЇК1, а чотири відібрані специфічні у відношенні людського
ЕОЇК1 клону 362, 9011, 1605 і 21А5 мали порівнянну високу здатність до зв'язування з людським БЕоЇК! і супобоїкК! (фіг. 4). Потім три специфічні у відношенні людського ЕоїЇК1 зв'язувальних агента, що мають крос-реактивність з супогоЇ!К1, конвертували у формат ТСВ і тестували відносно індукції опосередкованого Т-клітиною цитолізу й активації Т-клітин. Вказані клони являли собою клон 9011, отриманий з бібліотеки Раб і клони 1605 і 21А5 з бібліотеки
СІ С. Як референсо-молекулу у всіх дослідженнях застосовували ЕБоїК1-ТОВ Мом19. Потім вказані БоїК1-ТОВ застосовували для порівняння індукції інтерналізації після зв'язування з
ЕоїКІ1 на клітинах НегГа. Усі три протестовані клони характеризувалися інтерналізацією після зв'язування з РОЇК, порівнянною з інтерналізацією після зв'язування БоїКк1-ТСВ Мом'19 (фіг. 5).
Вивчення ЕоЇК1-ТСВ 21А5 припинили внаслідок виявлення ознак поліреактивності.
Приклад 15
Опосередковуваний Т-клітиною цитоліз пухлинних клітин-мішеней, що експресують ЕОїЇК1, індукований антитілами БоЇКк1-ТСВ
ЕоІ81-ТСВ застосовували для оцінки опосередковуваного Т-клітиною цитолізу пухлинних клітин, що експресують ЕоїЇК1. Для визначення сайтів зв'язування ЕоЇК1 за допомогою аналізу з використанням набору ОйКії застосовували панель ліній потенційних клітин-мішеней.
Застосовувана панель пухлинних клітин включала пухлинні клітини з високим, проміжним і низьким рівнем експресії ЕоїЇК1 і БоІК1-негативну лінію клітин.
Таблиця 14: Сайти зв'язування РОЇК на пухлинних клітинах
Оцінювали зв'язування трьох різних БоІК1-ТСВ (включаючи зв'язувальні агенти 9011, 1605 і
Мом19) із вказаною панеллю ліній пухлинних клітин і було продемонстровано, що ЕоЇКк1-ТОВ специфічно зв'язувалися з пухлинними клітинами, що експресують ЕоїЇК1, й не зв'язувалися з
ЕоІВ1-негативною лінією пухлинних клітин. Кількість зв'язаних конструкцій пропорційно до рівня експресії ЕОоЇїК1 і при цьому виявилося можливим виявити усе ще досить високе зв'язування з лінією клітин НТ-29, що характеризується низьким рівнем експресії БоЇК1. Крім того, не було виявлено зв'язування, що служить як негативний контроль ТОВ ЮР47 з жодною з клітинних ліній, що застосовувалися (фіг. бА-Д).
Потім клітинну лінію БКОМЗ, що характеризується проміжним рівнем експресії, і клітинну лінію НТ-29, що характеризується низьким рівнем експресії, використовували для тестування опосередковуваного Т-клітинами цитолізу й активації Т-клітин з використанням ТОВ 1605 і ТОВ 9011; ТОВ ОРА7 включали як негативний контроль. Обидві клітинні лінії гинули вже в присутності низьких рівнів ТОВ 1605 і ТОВ 9011 їі при цьому не було виявлено відмінності в активності між обома ТОВ навіть незважаючи на те, що ТСВ 9011 мала більш сильну здатність до зв'язування з РОЇК1, ніж ТОВ 1605. Загальний рівень цитолізу клітин ЗКОМЗ був вище в порівнянні з НТ-29, що відображає більш високі рівні експресії РОЇК1 на клітинах ЗКОМЗ (фіг. 7А-Г). Із цим узгоджується й те, що була виявлена сильна підвищувальна регуляція маркера активації СО25 і СО69 на СО4--Т-клітинах і СО8:-Т-клітинах. Активація Т-клітин виявилася дуже подібною в присутності як клітин 5КОМ3, так і клітин НТ-29. Застосовувана як негативний контроль ТСВ ОРА7 не індукувала цитоліз у застосовуваних концентраціях і не було виявлено значимої підвищувальної регуляції СО25 і СОб69 на Т-клітинах.
Таблиця 15: Величини ЕСвхо, що характеризують цитоліз пухлинних клітин і рівень активації
Т-клітин у присутності клітин БКОМЗ
Конструкція | Цитоліз, | Цитоліз, | СО4-0069- | Сб0р4-0025- | СО8-0069-4 | СО8-0025-- 24 год. АВ год. (Ус) (Ус) (Ус) (У) (ПМ) (ПМ)
ЕоІВ1-ТОВ 1,1 0,03 0,51 0,46 0,019 0,03 9011
ЕоІВ1-ТОВ 0,7 0,04 0,34 0,33 0,025 0,031 1605
Таблиця 16: Величини ЕСвхо, що характеризують цитоліз пухлинних клітин і рівень активації
Т-клітин у присутності клітин НТ-29
Конструкція | Цитоліз, | Цитоліз, | СО4-0069- | Сб0р4-0025- | СО8-0069-4 | СО8-0025-- 24 год. 48 год. (У) (У) (У) (Ус) (ПМ) (ПМ)
ЕоІВ1-ТОВ 2,3 0.1 1,22 1,11 0,071 0,084 9011
ЕоІВ1-ТОВ 2,6 0,1 0,62 0,021 0,028 1605
Приклад 16
Зв'язування з еритроцитами й активація Т-клітин у цільній крові
Для доказу того, що спонтанна активація не має місця за відсутності пухлинних клітин, що експресують ЕоїЇК1, при створенні винаходу було проведено дослідження питання про те, чи відбувається зв'язування ЕоЇК1-зв'язувальних клонів з еритроцитами, які потенційно можуть експресувати ЕоЇК1. Не було виявлено ніякого специфічного зв'язування Ідс 9011, Іде 1605 і
Іцо Мом19 з еритроцитами, при цьому як негативний контроль застосовували до ОР4А7 (фіг. 8).
Для того, щоб виключити будь-яке інше неспецифічне зв'язування із клітинами крові або неспецифічну активацію через БоІК1-ТСВ, у цільну кров додавали ТОВ 9011, ТОВ 1605 і ТОВ
Мом19 і аналізували підвищувальну регуляцію СО25 і СО69 на СО4--Т-клітинах СО8:-Т-клітинах за допомогою проточної цитометрії. ТОВ ОР4А7 включали як негативний контроль. При аналізі підвищувальної регуляції СО25 і СО69 на СО4--Т-клітинах СЮО8:-Т-клітинах не було виявлено активації Т-клітин будь-якої із протестованих конструкцій (фіг. 9).
Приклад 17
Видалення сайту М-глікозилування в легкому ланцюзі 9011
При аналізі різних БоЇК1-зв'язувальних агентів з метою ідентифікації потенційних « гарячих точок" у послідовності був ідентифікований передбачуваний сайт М-глікозилування на кінці СОК
ЇЗ клону 9011. Як правило, консенсусний мотив для М-глікозилування має вигляд М-Х-5/Т-Х (де
Х не означає Р). Послідовність СОК ІЗ (МОАБІММАКТ) (ЗЕБЕО ІО МО: 61) ідеально відповідає цьому консенсусному мотиву, тому що несе послідовність М-В-Т. Оскільки глікозилування може не повністю відтворюватися серед різних партій продукту, то це може впливати на зв'язування з
ЕОїІКІ, якщо глікозилування в СОК ІЗ вносить вклад у зв'язування з антигеном. Для оцінки того, чи важливий цей сайт М-глікозилування для зв'язування з Роїк, або його можна заміняти без погіршення зв'язування, конструювали різні варіанти легкого ланцюга 9011, у яких сайт М- глікозилування був замінений за допомогою сайтспецифічного мутагенезу. 1. Короткочасна трансфекція й одержання
Чотири біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, короткочасно одержували в клітинах
НЕК293 ЕВМА із застосуванням описаної нижче процедури опосередковуваної ПЕЇ трансфекції з використанням відповідних векторів. Клітини НЕК293 ЕВМА культивували в безсироватковій суспензії в середовищі СО СНО. Для виробництва в струшувану колбу місткістю 500 мл висівали за 24 год. до трансфекції 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА (для інших масштабів виробництва всі кількості регулювали відповідним чином). Для здійснення трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х 9, супернатант заміняли на 20 мл попередньо нагрітого середовища СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО до одержання кінцевої кількості ДНК 200 мкг. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с і потім інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ!Ї, переносили в 500-мілілітрову струшувану колбу й інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 595 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали 1мММ вальпроєву кислоту й 7 95 Реєа 1. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали для очищення шляхом центрифугування протягом 15 хв при 210 х д, розчин стерилізували фільтрацією (фільтр із розміром пор 0,22 мкМ), додавали азид натрію в кінцевій концентрації 0,01 95 (мас./ об.) і витримували при 4 "С. Після завершення виробництва супернатанти збирали, фільтрували супернатанти, що містять антитіло, через стерильні фільтри з розміром пор 0,22 і зберігали при 4 "С до очищення. 2. Очищення антитіл
Усі молекули піддавали двостадійному очищенню із застосуванням стандартних процедур,
таких як афінне очищення з використанням білка А (фірма АКіа Ехріогег) і гель-фільтрація.
Значення рН супернатанта, отриманого за допомогою короткочасного виробництва, доводили до рН 8,0 (використовуючи 2М ТРИС, рн 8,0) і вносили в НіТгар РА ЕЕ (фірма СЕ Неайсаге, об'єм колонки (су) - 5 мл), урівноважену взятим в об'ємі, що дорівнює 8 об'ємам колонки (су), буфером А (20 мМ фосфат натрію, 20 мМ цитрат натрію, рН 7,5). Після промивання з використанням 10 см буфера А, білок елюювали, застосовуючи градієнт рН до буфера Б (20 мМ цитрат натрію, рН 2,5, 0,5 мМ Масі, 0,01 95 Твін 20) з використанням об'єму, що дорівнює 12 су.
Об'єднували фракції, які містять білок, що представляє інтерес, і значення рН розчину обережно доводили до рН 6,0 (використовуючи 2М Трис, рН 8,0). Зразки концентрували до 1 мл з використанням ультра-концентраторів (Мімазріп 15К 30.000 МУУСО НУ, фірма Загогіцив) і потім вносили в колонку для препаративної хроматографії Ні оаа"м16/60 бирегаєх"М 200 (фірма СЕ
Неансаге), урівноважену буфером, що містить 20 мМ гістидин, рН 6,0, 140 мМ Масі, 0,01 95
Твін-20. Вміст агрегатів в елюйованих фракціях аналізували за допомогою аналітичної гель- фільтрації. Для цього по 30 мкл кожної фракції вносили в колонку для аналітичної гель- фільтрації ТЗКде! 3000 ЗМУ ХІ (фірма Тоз5о!), урівноважену рухомим буфером, що містить 25мММ КеНРО»х, 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./ об.) Мам», рН 6,7 при 25 "С. Фракції, що містять менше 2 95 олігомерів, об'єднували й концентрували до кінцевої концентрації 1-1,5 мг/мл з використанням ультра-концентраторів (Мімазріп 15К 30.000 МУСО
НУ, фірма Запогіи5). Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту й молекулярну масу конструкцій аналізували за допомогою капілярного електрофорезу в присутності ДСН із відновлюючим агентом і без нього згідно з інструкціями виробника (обладнання Саїірег Гарспірсх, фірма РегкКкіп ЕІтег). Очищені білки заморожували в рідкому Мі» і зберігали при -80 "С. 3. Температура агрегації
Стабільність чотирьох конструкцій тестували за допомогою обладнання Орійт1000 (Амасіа, фірма РА Согрогайоп), здійснюючи градієнтний нагрівання від 25 до 80 "С зі швидкістю 0,1 "С/хв. Реєстрували температуру початку агрегації.
Таблиця 34: Вихід, вміст мономерів і температура агрегації чотирьох мутантів зв'язувального агента у форматі біспецифічної молекули, що активує Т-клітину, 9011 "241 інвертована" з "виключеним" сайтом М-глікозилування. Усі чотири мутанти мали характеристики, подібні до характеристик зв'язувального агента 9011 дикого типу ері; - | 26 | л00 | РХБ 57
Створювали варіанти з наступними мутаціями: М1005 (МО55); МТ00О (М950), Т102А (Т97А) і
Т102М (Т97М) (у дужках вказані положення згідно з нумерацією за Кеботом) і конвертували у формат біспецифічної молекули, що активує Т-клітину. Після короткочасного одержання в клітинах НЕК293 ЕВМА і очищення різне варіанти аналізували відносно зв'язування з мішенню й цитолітичної активності в порівнянні з вихідним клоном 9011.
Таблиця 17: Праймери, що застосовувалися для видалення сайту М-глікозилування в СОК
ЇЗ клону 9011 (послідовності представлені нижче) "Ме (Амінокислотна заміна | Праймер для мутагенезу
Приклад 18
Зв'язування й опосередковуваний Т-клітинами цитоліз при використанні а-діусо-варіантів 9011
Оскільки в СОК присутній сайт глікозилування, то створювали чотири різні варіанти 9011 з видаленим за допомогою мутації сайтом глікозилування (приклад 17). Ці чотири варіанти тестували в порівнянні з вихідним 9011 відносно зв'язування з РОЇК! на клітинах Нега (фіг. 10) і індукції цитолізу пухлинних клітин 5БКОМЗ ї НТ-29 (фіг. 11А-Б, Д-Е). Ні для одного із вказаних варіантів не було виявлено відмінностей у зв'язуванні або індукції цитолізу пухлинних клітин.
Паралельно аналізували неспецифічний цитоліз ЕБоЇК1-негативних клітин лінії МКМ-45 (фіг. 118-
Г). При цьому також не було виявлено відмінностей між варіантами й вихідним зв'язувальним агентом. Жодна з конструкцій не індукувала неспецифічний цитоліз БоЇК1-негативних пухлинних клітин.
Приклад 19
Експресія РОЇК! на первинних епітеліальних клітинах
Первинні епітеліальні клітини характеризуються низькими рівнями експресії БоїК1. При створенні винаходу виявилося бажаним протестувати, чи є ці рівні достатніми для індукції опосередковуваного Т-клітинами цитолізу в присутності БоїЇК1-ТСВ. Для цього тестування використовували первинні людські бронхіальні епітеліальні клітини, первинні людські епітеліальні клітини хоріоїдального сплетення, первинні людські клітини кортикального ниркового епітелію й первинні людські клітини ретинального пігментного епітелію. Як позитивний контроль застосовували ЕоЇК1-позитивні клітини або лінії ЗКОМУЗ, або лінії НТ-29.
Спочатку перевіряли наявність експресії БоОоїК! на застосовуваних первинних клітинах і визначали кількість сайтів зв'язування ЕОЇК1 на цих клітинах. Бронхіальні епітеліальні клітини, клітини кортикального ниркового епітелію й клітини ретинального пігментного епітелію характеризуються дуже низькими, але значимими рівнями експресії Роїк! у порівнянні з рівнями, експресованими на пухлинних клітинах. Епітеліальні клітини хоріоїдального сплетення не експресують значимі рівні ЕоїЇК1.
Таблиця 18: Сайти зв'язування РОЇК на первинних епітеліальних клітинах
Первинні епітеліальні клітини, що характеризуються експресією БоїК1 на поверхні, використовували для розв'язку питання про те, чи можуть вказані клітини зазнати цитолізу Т- клітинами в присутності БоЇК1-ТСВ. Не було виявлено значимих рівнів цитолізу, але була виявлена індукція активації Т-клітин у присутності клітин ретинального пігментного епітелію, бронхіальних епітеліальних клітин і клітин кортикального ниркового епітелію, що приводить до підвищувальної регуляції СО25 і СО69. Найбільш сильна активація була виявлена у випадку клітин ретинального пігментного епітелію, вона приводила до підвищувальної регуляції СО25 і
СО69 як на СО4--Т-клітинах, так і на СО8--Т-клітинах. У присутності бронхіальних епітеліальних клітин індукувалась більш низька активація Т-клітин, що супроводжується підвищувальною регуляцією СО69У на СО4--Т-клітинах і СО8:-Т-клітинах, але дуже низькою підвищувальною регуляцією СО25, яка мала місце тільки на СО4--Т-клітинах, але не на СО8:-Т-клітинах.
Найменша активація Т-клітин була виявлена в присутності клітин ниркового епітелію, у цьому випадку підвищувальна регуляція СО25 на СО4--Т-клітинах і СО8:-Т-клітинах не мала місця, а підвищувальна регуляція СО69 мала місце тільки на СО8--Т-клітинах (фіг. 12А-Ш).
Приклад 20
Порівняння різних форматів ТСВ, що містять або зв'язувальний агент 1605, або зв'язувальний агент 9011
Для визначення того, чи є формат ТОВ "2-41 інвертована" найбільш активним форматом при використанні відібраного ЕоЇІК1-зв'язувального агента, створювали молекули, що містять 1605 або 9011, в різних форматах і проводили порівняння відносно зв'язування із клітинами- мішенями, опосередковуваного Т-клітинами цитолізу й активації Т-клітин. Зв'язувальний агент 1605 тестували у форматах "ТСВ 2-41 інвертована" (фіг. ТА), "ТОВ 241 класична" (фіг. 1Г), "св 14-41 класична" (фіг. 18) і "ТОВ 141 "голова-до хвоста»» (фіг. 1Б); зв'язувальний агент 9011 тестували у форматах "ТСВ 241 інвертована" (фіг. 1А), "ТОВ 14-41 класична" (фіг. 18) і "ТОВ 1-1 "голова-до хвоста»» (фіг. 1Б).
Усі конструкції тестували відносно зв'язування з Роїк! на клітинах Неї а. Двовалентні відносно зв'язування з БОоЇК1 молекули внаслідок авідності характеризувалися більш сильним зв'язуванням у порівнянні з одновалентними конструкціями. Відмінність між двовалентними й одновалентними конструкціями було більш вираженим у випадку 1605. Причина може полягати в тому, що внаслідок більш низької афінності 1605 ефект авідності для даного зв'язувального агента виявився більш сильним. Між двома форматами "ТОВ 14-41" не було виявлено значимої відмінності у зв'язуванні, але була виявлена відмінність між двома конструкціями у форматі "2-41". Конструкція "241 інвертована" зв'язувалася з РОЇК! більш сильно, ніж конструкція "2-1 класична". Це свідчить про те, що в конструкції "241 класична" на зв'язування з ЕБоЇК1 впливає присутність Раб до СОЗ, у той час як в інвертованій конструкції цей вплив на зв'язування є менш сильним.
Шляхом аналізу опосередковуваного Т-клітинами цитолізу в присутності вказаних конструкцій виявилося можливим продемонструвати, що більш сильне зв'язування конструкції "ТОВ 241 інвертована" супроводжується більш вираженим цитолізом пухлинних клітин і активацією Т-клітин у порівнянні з конструкцією "ТОВ 2-1 класична". Зв'язувальна Еої!Н1 молекула 1605 у форматі "ТВ 241 класична" мала лише трохи більшу активність, ніж відповідна конструкція "141 "голова-до хвоста»». Конструкція "141 "голова-до хвоста»» мала значимо більшу активність, ніж конструкція "141 класична". Це не корелює з результатами аналізу зв'язування й може бути обумовлене більш вираженим перехресним зшиванням з конструкцією у форматі "голова-до хвоста". У цілому рівень цитолізу пухлинних клітин і активації
Т-клітин був порівнянним для всіх протестованих конструкцій, відмінності в рівнях проявлялися тільки у величинах ЕСво. У цілому можна зробити висновок про те, що формат зв'язувальної
ЕОЇК1 молекули "ТСВ 2-41 інвертована" незалежно від застосовуваного зв'язувального агента є переважним форматом з погляду індукції опосередковуваного Т-клітинами цитолізу пухлинних клітин і активації Т-клітин (див. фіг. 13А-В і фіг. 14А-В).
Таблиця 19. Величини ЕС»о, що характеризують зв'язування із клітинами-мішенями й опосередковуваний Т-клітинами цитоліз, для різних форматів ТСВ
ЕСво (НМ) 24 год. (пм) 48 год. (пм)
Боіві-ТОВ'я1 толова-до хвоста»» 1605 | 1026 | 2624 | 606
Таблиця 20. Величини ЕСво, що характеризують активацію Т-клітин у присутності клітин
ЗКОМЗ, для різних форматів ТСВ
Чо Чо Чо Чо
Приклад 21
Лінії пухлинних клітин і первинні клітини
Клітини Не! а (ССІ -2) одержували з АТСС і культивували в середовищі ОМЕМ з 10 95 ЕС5 і 2 ММ глутаміном, клітини БКОМУЗ (НТВ-77) одержували з АТСС і культивували в середовищі
КРМІ з 1095 ЕС5 і 2 мМ глутаміном, клітини ОМСАК5 одержували з МСІ і культивували в середовищі ЕРМІ з 10 95 ЕС5 і 2 мМ глутаміном, клітини НТ-29 (АСО-299) одержували з О5МА і культивували в середовищі Маккоя (МесСоу) 5А з 10 95 ЕС5 і 2 мМ глутаміном, клітини МКМ-45 (АСОС-409) одержували з Ю5ЗМ2 і культивували в середовищі КРМІ з 1095 ЕС5 і 2 мМ глутаміном.
Усі тестовані первинні епітеліальні клітини одержували від фірми ЗсіепСеї! Кезеагсп
І абогагогіех. Людські бронхіальні епітеліальні клітини (НВЕріС, каталожний номер 3210) культивували в середовищі для бронхіальних епітеліальних клітин (ВЕрісм, каталожний номер 3211, фірма 5бсієепСеїЇ). Людські епітеліальні клітини ободової кишки (НСОЕрісСс, каталожний номер 2950) культивували в середовищі для епітеліальних клітин ободової кишки (СОЕрісм,
каталожний номер 2951, фірма 5сіепСеїІ). Людські клітини ретинального пігментного епітелію (НКРЕріС, каталожний номер 6540) культивували в середовищі для епітеліальних клітин (Ерісм, каталожний номер 4101, фірма 5сіепСеїІ). Людські клітини кортикального ниркового епітелію (НКСЕріС, каталожний номер 4110) культивували в середовищі для епітеліальних клітин (ЕріСм, каталожний номер 4101, фірма зсіепСеї). Людські епітеліальні клітини хоріоїдального сплетення (НСРЕріС, каталожний номер 1310) культивували в середовищі для епітеліальних клітин (Ерісм, каталожний номер 4101, фірма зЗсіепсСеї!|).
Приклад 22
Аналіз зв'язування з мішенню за допомогою проточної цитометрії
Вказані клітини-мішені збирали з використанням буфера для дисоціації клітин, промивали
ЗФР і ресуспендували в ЕБАС5-буфері. Фарбування антитіл здійснювали в 96б-лунковому круглодонному планшеті. Для цього висівали по 200000 клітин на лунку. Планшет центрифугували протягом 4 хв при 400 х д і видаляли супернатант. Тестовані антитіла розводили в ГАСЗ-буфері й до клітин додавали по 20 мкл розчину антитіла протягом 30 хв при 4 "С. Для видалення незв'язаного антитіла клітини промивали двічі РЕАС5-буфером перед додаванням розведеного вторинного антитіла (кон'юЮгованого з ФІТЦ Е(ар)2-фрагмента козячого антилюдського дсС, Есд-фрагмент-специфічного, АйіпіРиге, фірма Часкбоп
ІптітипоКезеагсі, каталожний номер 109-096-098, або кон'югованого з РЕ Е(ар')2-фрагмента козячого антилюдського дсС, Есд-фрагмент-специфічного, АйЙіпіРиге, фірма Часкбоп
ІптітипоКезеагсй, каталожний номер 109-116-170). Після інкубації протягом 30 хв при 4 "С відмивали незв'язане вторинне антитіло. Перед вимірюванням клітини ресуспендували в 200 мкл БЕАСб5-буфера й аналізували за допомогою проточної цитометрії з використанням обладнання ВО Сапіо ІІ або ВО Еогезза.
Приклад 23
Інтерналізація
Клітини збирали й оцінювали їх життєздатність. Клітини ресуспендували у свіжому холодному середовищі до 2 млн клітин/мл і для кожного антитіла суспензію клітин переносили у фальконівську пробірку місткістю 15 мл. Антитіла, що підлягають тестуванню у відношенні інтерналізації, додавали до клітин у кінцевій концентрації 20 мкг/мл. Пробірки інкубували протягом 45 хв у холодній кімнаті на шейкері. Після інкубації клітини тричі промивали холодним
ЗФР для видалення незв'язаних антитіл. Переносили по 0,2 млн клітин/лунку в планшет для
ЕАС5, цей момент часу ухвалювали за 0. Мічені клітини ресуспендували в теплому середовищі й інкубували при 37 "С. У вказані моменти часу переносили по 0,2 млн клітин/лунку в холодний
ЗФР, промивали й висівали на планшет для ЕАС5. Для виявлення конструкцій, які залишилися на поверхні, клітини фарбували міченим РЕ вторинним антитілом до людського Ес. Для цього додавали по 20 мкл розведеного антитіла/лунку й планшет інкубували протягом 30 хв при 4 "с.
Потім клітини двічі промивали для видалення незв'язаних антитіл і після цього фіксували за допомогою 1 95 ПФА для попередження якої-небудь подальшої інтерналізації. Флуоресценцію вимірювали за допомогою обладнання ВО БАС5 СапіоіїЇ.
Приклад 24
Аналіз із використанням набору ОІРІКІТФ
Набір ОІРІКІТФ містить гранули діаметром 10 мкМ, покриті різними, але строго визначеними кількостями молекул мишиного МАт (що має високу афінність до людського СО5, клон СКІЗ-1, ізотип Ідсга). Гранули імітують клітини з різними щільностями антигену, мічені первинним мишиним МАт ізотипу дб. У цілому метод полягав у наступному. Клітини мітили первинним мишиним моноклональним антитілом до антигену, що представляє інтерес. В окремій тест- лунці клітини мітили нерелевантним мишиним моноклональним антитілом (контроль ізотипу).
Потім клітини, "настроєні" гранули Зеї-Ор і калібровані гранули мітили кон'югованим із флуоресцеїном вторинним антимишиним антитілом, включеним у набір. Первинне антитіло, застосовуване для мічення клітин, слід використовувати в насичуючій концентрації. Первинне антитіло може представляти собою будь-яке мишине антитіло ізотипу ДОС. У цих умовах кількість зв'язаних молекул первинного антитіла відповідає кількості антигенних сайтів, що присутні на клітинній поверхні. Вторинне антитіло застосовували також в насичуючій концентрації. Після цього встановлювали кореляцію флуоресценції з кількістю зв'язаних молекул первинного антитіла на клітинах і на гранулах.
Приклад 25
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз пухлинних клітин і активація Т-клітин
Клітини-мішені збирали з використанням трипсину/ЕДТА, підраховували й оцінювали життєздатність. Клітини ресуспендували у відповідному для них середовищі до кінцевої (610) концентрації 300000 клітин/мл. Потім переносили по 100 мкл суспензії клітин-мішеней у кожну лунку 96-лункового плоскодонного планшета. Планшет інкубували протягом ночі при 37 "С в інкубаторі для того, щоб дати клітинам прикріпитися до планшета. Наступного дня виділяли
РВМС із цільної крові здорових донорів. Кров розводили ЗФР у співвідношенні 271 і нашаровували на 15 мл Нізіорадие-1077 (каталожний номер 10771, фірма 5ідта-Аїагісп) у пробірках Геисозер і центрифугували протягом 30 хв при 450 х 9д без перерви. Після центрифугування збирали смугу, що містить клітини, за допомогою піпетки місткістю 10 мл і переносили в пробірки місткістю 50 мл. Пробірки заповнювали ЗФР до об'єму 50 мл і центрифугували (400 х д, 10 хв, кімнатна температура). Супернатант видаляли й дебрис ресуспендували в ЗФР. Після центрифугування (300 х д, 10 хв, кімнатна температура), супернатанти відкидали, об'єднували вміст двох пробірок і повторювали стадію промивання (у цьому випадку центрифугували при 350 х 9, 10 хв, кімнатна температура). Після цього клітини ресуспендували й об'єднували дебриси в 50 мл ЗФР для підрахунку клітин. Після підрахунку клітини центрифугували (350 х д, 10 хв, кімнатна температура) і ресуспендували з розрахунку 6 млн клітин/мл у середовищі КРМІ, що містить 2 95 ЕС5 і 2нМ глутамін. Середовище видаляли з висіяних клітин-мішеней і додавали тестовані антитіла, розведені в середовищі КРМІ, що містить 2956 ЕС5 і 2нМ глутамін. У кожну лунку переносили розчин ефекторних клітин, що містить 300000 клітин, що забезпечувало співвідношення Е:Т-10:1. Для визначення максимального вивільнення клітини-мішені лізували Тритоном Х-100. Вивільнення ЛДГ визначали через 24 год. і 48 год. з використанням набору для виявлення цитотоксичності (каталожний номер 1644793, фірма Коспе Арріїєа 5сіепсе). Підвищувальну регуляцію маркера активації на Т-клітинах після цитолізу пухлинних клітин вимірювали за допомогою проточної цитометрії. У цілому метод полягав у наступному. РВМСО збирали, переносили в 96-лунковий круглодонний планшет і фарбували за допомогою антитіл до СЮО4-РЕ-Су7 (каталожний номер 3557852, фірма ВО Віозсіепсе), до СО8-ФІТЦ (каталожний номер 555634, ВО Віозсієепсе), до
СОр25-АРС (каталожний номер 555434, фірма ВО Віозсіепсе), до СО69-РЕ (каталожний номер 310906, фірма ВіоїЇ едепа), розведених в РАС5-буфері. Після інкубації протягом 30 хв при 47 клітини двічі промивали ЕАС5-буфером. Перед вимірюванням флуоресценції за допомогою ВО
Сапіо ІІ клітини ресуспендували в 200 мкл ЕАС5-буфером.
Приклад 26
Активація Т-клітин у цільній крові
Додавали 280 мкл свіжої крові в 9б-лунковий планшет із глибокими конічними лунками.
Потім до крові додавали 20 мкл розведених ТОВ і добре перемішували шляхом струшування планшета. Після інкубації протягом 24 год. при 37 "С в інкубаторі кров перемішували й переносили 35 мкл в 96-лунковий круглодонний планшет. Потім додавали 20 мкл суміші для фарбування антитіл, яка складається з антитіл до СО4-РЕ-Су/7 (каталожний номер 3557852, фірма ВО Віозсіепсе), до СЮО8-ФІТЦ (каталожний номер 555634, фірма ВО Віозсієпсе), до СО25-
АРС (каталожний номер 555434, фірма ВО Віозсіепсе), до СО69-РЕ (каталожний номер 310906, фірма ВіоїЇ едепа) і до СО45-У500 (каталожний номер 560777, фірма ВО Ногіоп), і інкубували протягом 15 хв у темряві при кімнатній температурі. Перед вимірюванням до крові додавали 200 мкл свіжо приготовленого розчину для лізису ВО РГАС5 (каталожний номер 349202, фірма
ВО ЕСАЗБ). Після інкубації протягом 15 хв при кімнатній температурі клітини аналізували за допомогою обладнання ВО Еогіезза.
Приклад 27
Дослідження БОРК (однодозове фармакокінетичне дослідження) гуманізованої БОЇ К1-ТОВ (клон 1605) на мишах лінії МОБ/5Ппі-5сіал/ЛІ -2Купиї! (МОСС) з імунодефіцитом
Самок мишей лінії МОБ/5Ппі-5сіалі -2Купиї! (МОСС) віком 6-7 тижнів при початку експерименту (вирощених на фірмі Тасопіс, Данія) утримували в умовах, вільних від специфічних патогенів, при добових циклах 12 год. світла/12 год. темряви згідно із відповідним посібником (Су-501а5;
ЕеіІаза; Тіегєспс). Протокол експериментального дослідження був розглянутий і схвалений місцевим урядовим органом (Р 2011/128). Після доставки тварин витримували протягом 1 тижня для того, щоб вони могли звикнути до нових умов, і для обстеження. На регулярній основі здійснювали постійний моніторинг стану здоров'я.
Мишам вводили шляхом і.м.-ін'єкції в дозі 10, 1 або 0,1 мкг/мишу РОЇ К1-ТСВ, при цьому в кожній групі й у кожний момент часу брали кров в З мишей. Усім мишам вводили шляхом ін'єкції відповідний розчин у загальному об'ємі 200 мкл. Для одержання потрібної кількості РОЇ К1-ТСОВ на 200 мкл маточні розчини при необхідності розводили ЗФР. Зразки сироватки брали через 5
ХВ, 1 год., З год., 8 год., 24 год., 48 год., 72 год., 96 год. і 168 год. після ін'єкції терапевтичного засобу.
На фіг. 15 продемонстровано, що БОЇ К1-ТСВ 1605 мала типові й пропорційні дозі ФК- (610) характеристиками в організмі МОС-мишей, подібними з характеристиками Ідс, з повільним кліренсом.
Таблиця 21: Умови експерименту (мг/мл) 1605 мг/кг) 140 мм масі, рН 6,0 розчин) 1605 мг/кг) 140 мм масі, рН 6,0 розчин) 1605 0,005 мг/кг) 140 мм масі, рН 6,0 розчин)
Приклад 28
Ефективність іп мімо РОЇ К1-ТСВ (клон 1605) після переносу людських РВМС у МОС-мишей, що несуть БКОМУЗ
ЕОЇ В1-ТСВ тестували з використанням клітин людської лінії карциноми яєчника ЗКОМЗ, які ін'єкували 5.65. МОб-мишам із трансплантованими РВМС.
Клітини карциноми яєчника БКОМЗ одержували з АТОС (НТВ-77). Лінію пухлинних клітин культивували в середовищі КРМІ, що містить 10 956 ЕС5 (фірма сірсо) при 37 "С у насиченій водяною парою атмосфері, що містить 5 95 СО». Для трансплантації використовували пасаж 35 з життєздатністю » 95 95. 5х106 клітин/тварину вводили шляхом 5.с.-ін'єкції в правий бік тварин у загальному об'ємі 100 мкл середовища для клітинної культури ЕРМІ (фірма сібсо).
Самок мишей лінії МОБ/5Ппі-5сіалі -2Купиї! (МОСС) віком 6-7 тижнів при початку експерименту (вирощених на фірмі Тасопіс, Данія) утримували в умовах, вільних від специфічних патогенів, при добових циклах 12 год. світла/12 год. темряви згідно із відповідним посібником (Су-501а5;
ЕеіІаза; Тіегєспс). Протокол експериментального дослідження був розглянутий і схвалений місцевим урядовим органом (Р 2011/128). Після доставки тварин витримували протягом 1 тижня для того, щоб вони могли звикнути до нових умов, і для обстеження. На регулярній основі здійснювали постійний моніторинг стану здоров'я.
Відповідно до протоколу (фіг. 16), мишам вводили шляхом 5.с.-ін'єкції в день досліду 0 5х105 клітин лінії Ком 3. У день досліду 21 виділяли людські РВМС здорового донора за допомогою методу з використанням РісоїїЇ і вводили 10х105 клітин шляхом і.р.-ін'єкці мишам, що мають пухлину. Через два дні мишей рандомізували й рівномірно розділяли на п'ять груп обробки (п-12), після чого вводили шляхом і.м. ін'єкції один раз у тиждень протягом трьох тижнів по 10, 1 або 0,1 мкг/мишу БОЇК1-ТСВ або контрольну ТОВ ОР4А7 у дозі 10 мкг/мишу. Усім мишам вводили шляхом і.м.-ін'єкції відповідний розчин в об'ємі 200 мкл. Мишам у групі, оброблюваної наповнювачем, ін'єкували ЗФР. Для одержання потрібної кількості ТОВ на 200 мкл маточні розчини при необхідності розводили ЗФР. Ріст пухлини оцінювали один раз у тиждень шляхом вимірювання за допомогою кронциркуля (фіг. 17) і об'єм пухлини розраховували по наступній формулі:
Ту: (МУ2/2)), х І (МУ: ширина, І: довжина)
Введення РОЇ К1-ТСВ шляхом ін'єкції один раз у тиждень приводило до залежного від дози протипухлинної дії. При цьому дози, що становлять 10 мкг/мишу й 1 мкг/мишу, індукували скорочення пухлини, а доза 0,1 мкг/мишу приводила до стазу пухлини (фіг. 17, таблиця 22).
Максимальне скорочення пухлини в порівнянні із введенням ненаціленої контрольної ТОВ ОР47 досягалося при введенні дози 10 мкг/мишу.
Таблиця 22: Ефективність іп мімо пухлини
Для одержання даних про ФК умертвляли в день 32 по три миші на групу обробки, вилучали пухлини й готували суспензію одиничних клітин за допомогою ферментативного розщеплення колагеназою У, диспазою ІІ і ДНКазою для наступного ГАС5-аналізу (фіг. 19 ї 20). Одиничні клітини використовували або безпосередньо для фарбування позаклітинних антигенів і маркерів активації, або їх повторно стимулювали з використанням 5 нг/мл ФМА й 500 нг/мл іономіцину в присутності інгібітора транспорту білка монензину протягом 5 год. у нормальному культуральному середовищу. Після повторної стимуляції клітини фарбували для виявлення поверхневих антигенів, після чого здійснювали стадію фіксації й пермеалізації. Здійснювали внутрішньоклітинне фарбування фіксованих зразків для виявлення ТМЕ-а, ІРМ-у, 1-10 ї 1-2 їі проводили аналіз за допомогою проточної цитометрії. Таку ж процедуру проводили для оцінки дегрануляції клітин, але в період повторної стимуляції додавали антитіло до СО107а і фіксовані зразки фарбували для виявлення вмісту внутрішньоклітинного перфорину й гранзиму-В. ЕАС5- аналіз виявив наявність статистично значимої більш високої кількості інфільтруючих СО4-- і
СО8:-Т-клітин у пухлинній тканині після обробки РОЇ К1-ТСВ у порівнянні з обробкою наповнювачем і ненаціленої контрольної ТСВ. Крім того в оброблених БОЇ К1-ТСВ пухлинах були виявлені більші кількості продукуючих ТМЕ-а, ІЄМ-у ї 1-2, а також перфорин-"/гранзим-
ВебО4-- ії СО8:-Т-клітин. Інфільтруючі пухлину Т-клітини, оброблені РОЇ К1-ТСВ, характеризувалися також більш високими рівнями дегрануляції в порівнянні з контрольними групами.
У день 38 закінчення досліду всіх тварин умертвляли, вилучали пухлини й зважували (фіг. 18). Маса пухлин, оброблених дозами РОЇ К1-ТСВ, що становили 10 ї 1 мкг/мишу, статистично значимо відрізнялися від маси пухлин у контрольних групах.
Таблиця 23: Умови експерименту
ЗФРССС1 140 мм масі, рН 6,0 (- маточний розчин) 140 мм масі, рН 6,0 («маточний розчин) 140 мм масі, рН 6,0 («маточний розчин) 140 мм масі, рН 6,0 («маточний розчин)
Приклад 29
Створення біспецифічного антитіла до ГоїКк1/С03-капа-лямбда
Для створення біспецифічного антитіла (одновалентного відносно кожного антигену), яке може одночасно зв'язуватися з людським СОЗ і людським фолатним рецептором альфа (ЕОІК), без застосування якого-небудь заснованого на гетеродимеризації підходу (наприклад, технології "Кпоб-іпіо-поїе"), застосовували комбінацію підходу, заснованого на використанні бібліотеки загальних легких ланцюгів і так званої технології Сгто55Мар: варіабельну ділянку гуманізованого СОЗ-зв'язувального агента (СН2г527 МІ7 46/13) зливали з СНІ1-доменом стандартного людського антитіла у вигляді (9051 з утворенням молекули зі схрещеними МІ МН (злитої з Ес), що є загальної для обох специфічностей. Для створення схрещених копій (НС),
СОЗ-специфічний домен варіабельного важкого ланцюга (СН2527 МН 23/12) зливали з константним людським легким А-ланцюгом, у той час як домен варіабельного важкого ланцюга, специфічний у відношенні людського РОЇК (клон 1605, виділений з бібліотеки загальних легких ланцюгів), зливали з константної людської легкої к-ланцюгом. Це дозволяло здійснювати очищення необхідного біспецифічного антитіла шляхом застосування наступних стадій очищення з використанням колонок з Карразеїесі і | атрааБарзеїесії (фірма СЕ Неайсаге) для видалення небажаних гомодимерних антитіл.
Усі експресійні вектори для антитіл створювали із застосуванням стандартної технології рекомбінантної ДНК, описаної в Затигоок, 5. і ін., Моїесціаг сіопіпд: А Іарогагогу тапиаї; вид-во
Соій Зргіпд Нагрог Гарогаїогу Рге55, Соїй Зргіпд Нагрог, Мем/ мок, 1989. Реагенти для молекулярної біології застосовували згідно з рекомендаціями виробника. Гени або фрагменти генів або ампліфікували за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР), або створювали із синтетичних олігонуклеотидів на фірмі Сепеаг Ас (Регенсбург, Німеччина) за допомогою автоматичного синтезу генів. Ампліфікуванні за допомогою ПЛР або субклоновані ДНК- фрагменти підтверджували секвенуванням ДНК (фірма БЗупегдепе три, Швейцарія).
Плазмідною ДНК трансформували придатні штами-хазяїна Е. соїї і ампліфікували в них для одержання плазмідної ДНК із придатного для трансфекції ступенем чистоти з використанням стандартних наборів Махіргер (фірма Оіадеп). Для одержання біспецифічних молекул клітини
НЕК293 ЕВМА трансфектували плазмідами, що кодують відповідні гени, за допомогою стандартного методу, заснованого на застосуванні поліетиленіміну (ПЕ). Застосовували співвідношення плазмід для трьох експресійних векторів, рівне 1:1:1. Трансфектовані клітини культивували протягом 7 днів, після чого збирали супернатанти для очищення. Біспецифічні антитіла ГоїКк1/С03-капа-лямбда одержували й очищали в такий спосіб.
Короткочасна трансфекція й одержання
Біспецифічні капа-лямбда-антитіло короткочасно одержували в клітинах НЕК293 ЕВМА за допомогою процедури опосередковуваної ПЕЇ трансфекції з використанням відповідних векторів відповідно до описаного нижче методу. Клітини НЕК293 ЕВМА культивували в безсироватковій суспензії в середовищі СО СНО. Для виробництва в струшувану колбу місткістю 500 мл висівали за 24 год. до трансфекції 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА (для інших масштабів виробництва всі кількості регулювали відповідним чином). Для здійснення трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х 9, супернатант заміняли на 20 мл попередньо нагрітого середовища СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО до одержання кінцевої кількості ДНК 200 мкг. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с і потім інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!, переносили в 500-мілілітрову струшувану колбу й інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 595 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали 1мММ вальпроєву кислоту й 7 95 Реєа 1. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали для очищення центрифугуванням протягом 15 хв при 210 х д, розчин стерилізували фільтрацією (0,22 мкМ-фільтр), додавали азид натрію в кінцевій концентрації 0,01 95 (мас./ об.) і витримували при 4 "С. 2. Очищення
Здійснювали тристадійне очищення біспецифічного капа-лямбда-антитіла, застосовуючи стадію афінного очищення, специфічну у відношенні легких капа-ланцюгів, потім стадію афінної очищення специфічну у відношенні легких лямбда-ланцюгів і, нарешті, стадію гель-фільтрації для видалення агрегатів. Значення рН супернатанта, отриманого в результаті короткочасного виробництва, доводили до рН 8,0 (з використанням 2М Трис, рН 8,0) і вносили в колонку з матриксом, що має афінність до капа-ланцюга Саріиге Зеїесї, (Саріиге 5еїесі Карра айіпйу таїйіх) або НіТгар Карразеїесі, фірма СЕ Неайсаге, об'єм колонки (см) - 1 мл, урівноважену буфером А, узятому в об'ємі, що дорівнює 5 об'ємам колонки (см) (50 мМ Трис, 100 мМ гліцин, 150 мм масі, рН 8,0). Після промивання за допомогою 15 см буфера А білок елюювали з використанням градієнта рН до буфера Б (50 мМ Трис, 100 мМ гліцин, 150 мм Масі, рН 2,0) в обсязі 25 см. Фракції, які містять білок, що представляє інтерес, об'єднували й значення рн розчину доводили до рН 8,0 (з використанням 2М Трис, рН 8,0). Нейтралізовані об'єднані фракції вносили в колонку з матриксом Саріцйге Зеїесі, що має афінність до лямбда-ланцюга (у цьому випадку: НіТгар ГатраагБарзеїесі, фірма СЕ Неакрсаге, об'єм колонки (см)-1 мл), урівноважену буфером А, узятим в об'ємі, що дорівнює 5 об'ємам колонки (сх) (50 мМ Трис, 100
ММ гліцин, 150 мМ Масі, рН 8,0). Після промивання за допомогою 15 см буфера А білок елюювали з використанням градієнта рН до буфера Б (50 мМ Трис, 100 мМ гліцин, 150 мМ масі, рН 2,0) в об'ємі 25 су. Фракції, які містять білок, що представляє інтерес, об'єднували й значення рН розчину доводили до рН 8,0 (з використанням 2М Трис, рН 8,0). Цей розчин концентрували з використанням ультра-концентраторів (Мімазріп 154 30.000 МУМУСО НУ, фірма
Запогіи5) і потім вносили в колонку Зирегдех"М 200 10/300 СІ (фірма СЕ Неаїївсаге), урівноважену 20 мМ гістидином, рН 6,0, 140 мМ Масі, 0,01 95 Твін-20. Після гель-фільтрації об'єднані фракції знову концентрували з використанням ультра-концентраторів (Мімазріп 15К 30.000 МУУСО НУ, фірма Загіогіи5).
Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту й молекулярну масу конструкцій аналізували за допомогою капілярного електрофорезу в присутності ДСН із відновлюючим агентом або без нього згідно з інструкціями виробника (обладнання Саїїірег Гарспірох, фірма Регкіп ЕІтег). Виявилося можливим очистити лише дуже малі кількості білка, кінцевий вихід становив 0,17 мг/л.
Приклад 30
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз у присутності біспецифічного капа-лямбда-антитіла до ГоОІК1/СО03
Активність капа-лямбда-РоІй1-ТСВ тестували на клітинах 5КОМЗ у присутності свіжо виділених РВМО. Як негативний контроль застосовували ТОВ ОР47. Опосередковуваний Т- клітинами цитоліз клітин ЗКОУЗ оцінювали через 24 год. і 48 год. за вивільненням ЛДГ. Через 48 год. Т-клітини збирали й вимірювали підвищувальну регуляцію СОб6Я і С025 на СОра4-тТ- (610) клітинах і СО8-Т-клітинах за допомогою проточної цитометрії.
Зв'язувальна ЕоЇК1 капа-лямбда-конструкція індукувала залежний від концентрації цитоліз клітин БКОМЗ, який супроводжувався підвищувальною регуляцією СОб6У і СО25 як на СО4-тТ- клітинах, так і СО8-Т-клітинах.
Клітини ЗКОМЗ інкубували з РВМС у присутності або капа-лямбда-РоІВ1-ТСВ, або ТСВ
ОРА7. Через 24 год. і 48 год. оцінювали цитоліз пухлинних клітин шляхом вимірювання вивільнення ЛДГ (фіг. 21). Клітини БКОУЗ інкубували з РВМС у присутності або капа-лямбда-
ЕоІВ81-ТСВ, або ТОВ ОРА7. Через 48 год. вимірювали підвищувальну регуляцію СО25 і СО69 на
Сра-Т-клітинах і на СО8-Т-клітинах за допомогою проточної цитометрії (фіг. 22).
Приклад 31
Біохімічна характеризація РоІК1-зв'язувальних агентів 1605 і 362 за допомогою поверхневого плазмонного резонансу
Зв'язування анти-РоЇїК! 1605 у різних одновалентних або двовалентних біспецифічних форматах, що активують Т-клітину, і анти-БоЇК1 З36г2 у вигляді дО або у вигляді біспецифічної молекули, що активує Т-клітину з рекомбінантним фолатним рецептором 1 людини, мавп циномолгус і мишей (усі у вигляді злиттів з Ес) оцінювали методом поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Усі БРЕ-експерименти здійснювали на обладнанні ВІАсоге Т200 при 25 С з використанням НВ5З-ЕР як рухомий буфер (0,01М НЕРЕ5, рН 7,4, 0,15М масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактант Р20, фірма ВіІАсоге, СЕ Неайпсаге).
Тестовані молекули
Застосовувані для оцінки афінності й авідності, описано в таблиці 24.
Таблиця 24: Позначення й опис 6 конструкцій, що застосовувалися в 5РЕ-аналізі легкий ланцюг)» 1605 легкий ланцюг)» ланцюг)» (загальний легкий ланцюг)» 2. Авідність до фолатного рецептора 1
Авідність взаємодії між анти-РоїК1 Ід або біспецифічними молекулами, що активують Т- клітину, й рекомбінантними фолатними рецепторами визначали відповідно до описаного нижче методу (таблиця 25).
Здійснювали безпосереднє сполучення злиттів рекомбінантного біотинілованого мономерного Ес з фолатним рецептором 1 людини, мавп циномолгус і мишей (БоЇК1-Ес) з за- чіпом згідно з інструкціями за стандартною комбінацією (фірма ВіАсоге, Фрейбург, Німеччина).
Рівень іммобілізації відповідав приблизно 300-400 КИ. Анти-БоїК!1 Ід або біспецифічні молекули, що активують Т-клітини, в діапазоні концентрацій від 3,7 до 900 нМ пропускали при швидкості потоку ЗО мкл/хв через проточні гнізда протягом 180 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 240 або 600 с. Поверхню чіпа регенерували після кожного циклу за допомогою подвійної ін'єкції 10 мМ гліцину-НСІ, рн 2, протягом 30 с.
Усі відмінності в коефіцієнті заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референо-комірці з іммобілізованим злиттям рекомбінантний біотиніллваний мишиний СО134-Ес. Криві зв'язування, отримані в результаті двовалентного зв'язування дос або біспецифічних молекул, що активують Т-клітину, апроксимували на основі моделі зв'язування за типом 1:1 Ленгмюра (навіть незважаючи на те, що в цьому випадку має місце зв'язування за типом 1:2) і підганяли до цієї моделі для одержання уявної величини Ко, що характеризує авідність двовалентного зв'язування. Уявні константи авідності, що характеризують взаємодії, одержували на основі констант швидкості, визначених у результаті припасування з використанням програми Віа ЕмаІнайоп (фірма СЕ Неакрсаге). Для формату 141 біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, взаємодія дійсно здійснюється за типом 11 і величина Ко характеризує афінність, оскільки в такій конструкції присутній тільки один ЕоїК1- зв'язувальний агент.
Таблиця 25: Двовалентне зв'язування (авідність, що характеризується уявною величиною
Ко) анти-ЕоїІК1 1605 і 36Е2 у вигляді до або у вигляді біспецифічних молекул, що активують Т-
клітину (ТОВ) з РОЇК! людини, мавп циномолгус і мишей ка (1/Мс)| ка (с) пиБоІВі | 2,07Е-061,3Б-02 |бМ 00000001
Ід ЗбЕ2 сугоїВ! 2,78Е06|1,75БЕ-02 ІбнМ. 00001111111сСсС тивоїВІ | 4,28Е:-05 | 8,23Е-04 пиЕоІВІ | 2,45Е-06 | 9,120Е-О3 тов З6Ег суго!В1 | 4,31Е-06 | 1,45Е-02 тиво!ВІ | 6,97Е-05 | 9,51Е-04 пиЕоІВІ | 1,57Е-05| 3,92Е-04
ТОВ 1605 суго!В1 | 2,01Е--05| 3,81Е-04 пиБоІВі | 2,04Е-051,84Б-04 |б9НМ.0011111111С
ТОВ 1605 класична 7сУБоївї | 2,50Е-051 3,05Е-04 пиЕо!ВІ1 | 5,00Е-04 | 2,25Е-03 тво5 Тов НТ Гоуроівя 57522041 40-03 пиЕо!ВІ | 3,65Е--04 | 2,04Е-0О3 1605 ТОВ Ти сугоїв! 1409104 36003 |80нМ 33030330
Афінність до фолатного рецептора 1
Афінність взаємодії між анти-РоЇК1 ІдсС або біспецифічними молекулами, що активують Т- клітину, й рекомбінантними фолатними рецепторами визначали відповідно до описаного нижче методу (таблиця 26).
Для вимірювання афінності здійснювали безпосередню комбінацію антилюдського Еар- специфічного антитіла (набір для захоплення Бар, фірма СЕ Неайвсаге) до досягнення рівня іммобілізації, що відповідає приблизно 12000 резонансних одиниць (КІ), на СМ5-чіпі при рН 5,0 з використанням набору для стандартного амінного сполучення (фірма СЕ Неайсаге). Анти-
ЕоїК! ІдсС або біспецифічні молекули, що активують Т-клітину, в концентрації 20 нм захоплювали при швидкості потоку 10 мкл/хв протягом 40 с, у проточній референс-комірці захоплення не здійснювали. Через усі проточні гнізда пропускали серійні розведення (від 12,3 до 3000 НМ) злиття фолатний рецептор 1 людини, мавп циномолгус або мишей з Ес при швидкості потоку ЗО мкл/хв протягом 240 с для реєстрації фази асоціації. Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом З00 с і для запуску заміняли розчин зразка на НВЗ-ЕР.
Поверхню чіпа регенерували після кожного циклу, використовуючи дві ін'єкції по 60 с із використанням 10 мМ гліцину-НСЇ, рН 1,5. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референос-комірці 1. Константи афінності, що характеризують взаємодії, визначали на основі констант швидкості шляхом припасування до моделі зв'язування 1:11 Ленгмюра, використовуючи програму Віа ЄЕмаїчайоп (фірма СЕ
Неайнсаге).
Таблиця 26: Одновалентне зв'язування (афінність) анти-РоїК1 1605 і З6Е2 у вигляді Їдо або у вигляді біспецифічних молекул, що активують Т-клітину (ТОВ) з БоЇїК! людини, мавп циномолгус або мишей ка (1/Мс) ка (1/с)
ПиЕо!В1 9,10Е--04 6,65Е-02 730 нм
ЗбЕг да суБо!В1 1,02Е-05 5,78Е-02 570 нм тиво!В1 8,32Е--04 1,78Е-02 210 нм
ПиЕо!В1 5,94Е--04 6.13Е-02 1000 нм з6г2 тов суБо!В1 6б,29Е--04 5,42Е-02 860 нм тиво!В1 5,68Е--04 1,75Е-02 300 нм пиЕоІВ 2,23Ег--04 7,33Е-04 1605 ТОВ суБо!В1 1,57Е 404 1,60Е-ОЗ 100 нм пиЕоІВ 1,036: 04 7,59Е-04 1605 ТОВ класична сугоїві 9,18Е03 1,61Е-03 175нМ
ПЕВ 2,05Е-04 7,08Е-04 1605 ТОВ НТ СУЄОЇВІ 1,67Е-04 1,БЗЕ-О3 пПИЕОІ В 1,43Е--04 9,91 Е-04 бом 1605 ТОВ Ти суБо!В1 1,20Е--04 1,80Е-ОЗ 150 нм
Афінність (одновалентне зв'язування) ТОВ 362 зі злиттям людський ЕоЇК1-Ес і супоєоїІК1-
Ес виявилася подібною й в обох випадках становила приблизно 1000 нМ, у той час як афінність до злиття мишиний ЕоЇК1-Рс була трохи вище й становила приблизно 300 нМ. 362 можна застосовувати для досліджень на створені на мишах і приматах моделях, при цьому не потрібно використовувати сурогатну молекулу.
Авідність (уявна величина Ко) ТОВ 362 до людського РОЇК! виявилася приблизно в 30 менше, ніж афінність ТОВ 1605 до людського БоЇК1. У двовалентному форматі для ТОВ З6Е2 вона знаходилася в нижньому наномолярному діапазоні, у той час як для ТСВ 1605 вона знаходилася в нижньому пікомолярному діапазоні (1000-кратна відмінність).
ЕоОїК1 експресується на пухлинних клітинах, у цьому випадку для нього характерна понадекспресія, проміжні й високі рівні експресії, на поверхні ракових клітин при широкому спектрі епітеліальних злоякісних захворювань, включаючи рак яєчника, молочної залози, нирок, колоректальний рак, рак легені й інші види солідних раків, а також експресується на апікальній поверхні обмеженої субпопуляції поляризованих епітеліальних клітин у здоровій тканині. Для таких неканцерогенних здорових клітин характерні лише низькі рівні експресії, до них належать, наприклад, бронхіальні епітеліальні клітини на поверхні альвеол, клітини канальців кортикального шару нирки на повернутій до просвіту стороні, ретинальний пігментний епітелій (базолатеральна мембрана) і хоріоїдальне сплетення.
ТОВ 1605 зв'язувався із клітинами здорових тканин, що характеризуються низькими рівнями експресії ЕБоїК!, що приводило до їх цитолізу, опосередкованого Т-клітинами. Це може, принаймні частково, пояснювати обмежену толерантність, виявлену в мавп циномолгус при введенні дози 10 мкг/кг. При створенні винаходу виявилося бажаним визначити, чи може зниження афінності біспецифічної молекули, що активує Т-клітини, підвищувати здатність розрізняти тканини з високою й низькою щільністю мішені й, завдяки цьому знижувати токсичність за рахунок використання двовалентного зв'язування й ефекту авідності. Звичайно зв'язувальні агенти з низькою афінністю не відбирають як придатні кандидати для подальшого аналізу, оскільки низька афінність часто асоціюється з низькою активністю й ефективністю.
Проте, був створений ЕоЇК1-зв'язувальний агент З36Е2, що має низьку афінність у декількох форматах і були охарактеризовані його біологічні властивості. Для З6Е2, застосовуваного у форматі двовалентої біспецифічної молекули, що активує Т-клітину, ефект авідності (тобто різниця між одновалентним і двовалентним зв'язуванням) виявився приблизно 250-кратним (1000 нМ у порівнянні з 4 нМ). При низькій щільності мішені афінність, що визначає взаємодію й становить 1000 нМ, приводила до низької активності ТСВ. Однак при високій щільності мішені починає відігравати роль авідність і при величині 4 нМ вона приводила до високої активності
ТСВ (див. приклад 32).
З використанням іншого підходу при створенні винаходу були сконструйовані одновалентні формати 1605 і варіант 1605 с низькою афінністю (афінність приблизно 10-40 нМ) у двовалентному форматі. Зв'язувальний агент 1605, застосовуваний в одновалентному форматі (1471), мав афінність, що становить приблизно 50 нМ. Здатність відрізняти тканини з високою від тканин з низькою щільністю мішені може бути досягнута краще, якщо скористатися перевагами, які дає ефект авідності.
Приклад 32
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз клітин ЗКОМ-3, індукований ТСВ 362, ТСВ Мом'19 і
ТОВ 21А5
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз, індукований ТОВ З36Е2, ТОВ Мом19 і ТОВ 21А5, оцінювали на клітинах 5КОМ-3 (середній рівень БоїК1). Людські РВМС використовували як ефектори, цитоліз оцінювали після інкубації протягом 24 і 48 год. у присутності біспецифічних антитіл. У цілому метод полягав у наступному. Клітини-мішені збирали з використанням трипсину/ЕДТА, промивали й висівали із щільністю 25000 клітин/лунку в плоскодонні 96-лункові планшети. Клітинам давали прикріпитися протягом ночі. Мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) одержували шляхом центрифугування в градієнті густини Нізіорадие зі збагачених лімфоцитами препаратів (лейкоцитарні плівки), отриманих із крові здорових донорів. Свіжу кров розводили стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Ніхорадие (фірма 5ідта, Н8г889). Після центрифугування (450 х 9, 30 хв, кімнатна температура) частину плазмі, що знаходиться над інтерфазою, що містить РВМС, відкидали й РВМС переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400 х д, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали й дебрис РВМС відмивали двічі стерильним ЗФР (стадії центрифугування при 350 х 9, 10 хв). Здійснювали автоматичний підрахунок отриманої популяції РВМС (обладнання МмісСеї|) і зберігали в середовищі КРМІ1640, що містить 10 95 ЕС5 і 1 96 І -аланіл-І -глутаміну (фірма Віоспгот, КО302) при 372С, 5 95 СО» в інкубаторі для клітин до (610) подальшого використання (не більше 24 год.). Для аналізу цитолізу антитіло додавали в вказаних концентраціях (у діапазоні від 0,005 пМ до 5нМ у трьох повторах). Додавали РВМС до клітин-мішеней у кінцевому співвідношенні Е:Т-10:1. Цитоліз клітин-мішеней оцінювали після інкубації протягом 24 і 48 год. при 37 "С, 5 У5 СО» шляхом кількісної оцінки вивільнення ЛДГ у клітинні супернатанти апоптозними/некротичними клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма
Коспе Арріїєа Зсіепсе, каталожний номер 11 644 793 001). Максимальний лізис клітин-мішеней (- 100 95) досягався при інкубації клітин-мішеней у присутності 1 95 Тритону Х-100. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без біспецифічних конструкцій.
Результати свідчать про те, що індукований З36Е2 рівень цитолізу був суттєво менше, у порівнянні із цитолізом, індукованим ТОВ Мом19 і ТОВ 21А5 (фіг. 23А-Б). Дані про величини
ЕСво, отриманих в аналізах цитолізу, які розраховували з використанням програми
СгтарпРадРгіхтвб, узагальнено в таблиці 27.
Таблиця 27: Величини ЕСво (пМ) для опосередковуваного Т-клітинами цитолізу Клітин
ЗКОМ-3-що експресують РОЇК, індукованого ТСВ З6Е2, ТСВ Мом19 і ТСВ 21А5 777... ЕСвюором " крива не досягла насичення, тому наведена гіпотетична величина
Приклад 33
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз, індукований ТОВ 362 і ТОВ 1605 у різних одновалентних і двовалентних форматах біспецифічної молекули, що активує Т-клітину
Оцінювали опосередковуваний Т-клітинами цитоліз людських пухлинних клітин Неї а (високий рівень ЕОЇК1, приблизно 2 млн копій, таблиця 14, фіг. 27), ЗКОМ-3 (середній рівень
ЕоЇїК!, приблизно 70000-90000 копій, таблиця 14, фіг. 27) і НТ-29 (низький рівень ЕоїК1, приблизно 10000 копій, таблиця 14, фіг. 27), індукований антитілами ТОВ З36Е2, ТОВ 1605, ТОВ 1605 у форматі "ТОВ класична", ТОВ 1605 у форматі "ТОВ 1-41" ї ТОВ 1605 у форматі "ТОВ НТ".
Антитіло, що представляє собою ТОВ ОР4А7, включали як негативний контроль. Людські РВМСО застосовували як ефекторні клітини, цитоліз оцінювали після інкубації протягом 24 год. з біспецифічним антитілом. У цілому метод полягав у наступному. Клітини-мішені збирали з використанням трипсину/ЕДТА, промивали й висівали із щільністю 25000 клітин/лунку в плоскодонні 96-лункові планшети. Клітинам давали прикріпитися протягом ночі. Мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) одержували шляхом центрифугування в градієнті густини
Нісорадие зі збагачених лімфоцитами препаратів (лейкоцитарні плівки), отриманих із крові здорових донорів. Свіжу кров розводили стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт
Ніхорадние (фірма 5ідта, Н8889). Після центрифугування (450 х 49, 30 хв, кімнатна температура) частину плазмі, що знаходиться над інтерфазою, що містить РВМС, відкидали й РВМС переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400 х 4д, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали й дебрис РВМС промивали двічі стерильним ЗФР (стадії центрифугування при 350 х 49, 10 хв). Здійснювали автоматичний підрахунок отриманої популяції РВМС (обладнання МіСеїЇ) і зберігали в середовищі КРМІ 1640, що містить 1095 ЕС5 і 1 95 І-аланіл-І -глутаміну (фірма Віоспгот,
КО302) при 372С, 5 95 СО» в інкубаторі для клітин до подальшого використання (не більше 24 год.). Для аналізу цитолізу антитіло додавали в вказаних концентраціях (у діапазоні від 0,01 пмМ до 100 нМ у трьох повторах). Додавали РВМС до клітин-мішеней у кінцевому співвідношенні
Е:Т-10:1. Цитоліз клітин-мішеней оцінювали після інкубації протягом 24 год. при 37 "С, 5 95 СО» шляхом кількісної оцінки вивільнення ЛДГ у клітинні супернатанти апоптозними/некротичними клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма Коспе Арріїєд 5сіепсе, каталожний номер 11 644 793 001). Максимальний лізис клітин-мішеней (- 100 95) досягався при інкубації клітин-мішеней у присутності 195 Тритону Х-100. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без біспецифічних конструкцій.
Результати свідчать про те, що мішень-специфічний цитоліз усіх трьох ліній БоЇК1:-клітин- мішеней, індукований ТОВ 362, виявився набагато слабше, ніж цитоліз, індукований ТСВ 1605 (на фіг. 24А-В, таблиця 29). Мішень-специфічний цитоліз, індукований одновалентними ТОВ 1605 (1605 НТ і 1605 1411), виявився слабкіше, ніж індукований двовалентними ТСВ 1605 (ТОВ 1605 ії Тов 1605 "класична"). Дані про величини ЕСв5о, отримані в аналізі цитолізу, які розраховували з використанням програми СгарпРадРгізтб, узагальнено в таблиці 28. Важливо відзначити, що представлені дані свідчать про те, що застосування ЕоїЇК1-зв'язувального агента
З6Е2 у двовалентному форматі "ТОВ 24-41" дозволяє розширити терапевтичне вікно в порівнянні з РОЇ К1-ТСВ 1605 (фіг. 24А-В). У той час як ефективність 1605 у порівнянні з РОЇ К1-ТСВ ЗбЕ2 є більш низькою приблизно в 45 раз відносно клітин Не! а (високий рівень експресії БОЇ КІ, див. таблицю 28:0,8 для ТСВ 1605 у порівнянні з 36,0 для ТСВ З6Е2) і приблизно в 297 раз відносно клітин ЗКОМЗ (середній рівень експресії РОЇКІ, див. таблицю 28: 0,66 для ТОВ 1605 у порівнянні з 178,4 для ТОВ З36Е2), це зниження виявилося майже 7000-кратним відносно клітин
НтТ29, що характеризуються низьким рівнем експресії РОЇ К1 (див. таблицю 28:5,7 для ТОВ 1605 у порівнянні з 39573 для ТОВ З36Е2). Таким чином, РОЇ К1-ТСВ 362 розрізняє клітини з високим і низьким рівнем експресії, що є особливо важливим з погляду зниження токсичності, оскільки клітини деяких здорових неканцерогенних тканин характеризуються дуже низькими рівнями експресії РОЇК! (приблизно менше 1000 копій на клітину). З отриманими даними узгоджуються результати, обговорені в наведеному нижче прикладі 35, які демонструють, що
ТОВ 36Б2 не індукує опосередковуваний Т-клітинами цитоліз первинних клітин (фіг. 26А-Г), у той час як при застосуванні ТОВ 1605 виявилося можливим виявити певний рівень цитолізу клітин НКСЕріС і НЕРЕріС після інкубації протягом 48 год. (фіг. 26Б і В). Ця важлива характеристика ТОВ 362 дозволяє здійснювати дозування при лікуванні ЕоЇК1-позитивних пухлин таким чином, щоб воно забезпечувало сильний цитоліз пухлинних тканин з високим або середнім рівнем експресії РОЇ К1, але не здорових тканин з низьким рівнем експресії (частково поляризованих). Важливо відзначити, що ця характеристика, ймовірно, обумовлена авідністю
ТОВ 362 у двовалентному форматі "2-1 інвертована", оскільки вона не виявлена при застосуванні такого зв'язувального агента З6Е2, що ж має низьку афінність в одновалентних форматах "1-1".
Іншими словами, ТОВ 362 у двовалентному форматі "2-1" містить зв'язувальні ЕоїЇК1 фрагменти з відносно низькою афінністю, але має ефект авідності, який дозволяє розрізняти клітини з високим і низьким рівнем експресії ЕОЇК1. Оскільки пухлинні клітини характеризуються високими або проміжними рівнями експресії БоЇК!, то вказана ТОВ вибірково зв'язується з пухлинними клітинами, але не зі здоровими неканцерогенними клітинами, які характеризуються низькими рівнями або відсутністю експресії БоЇК1.
Крім вказаних вище кращих характеристик ТОВ 362 у двовалентному форматі "2-1 інвертована" має також перевагу, що полягає у тому, що для її одержання не потрібно здійснювати хімічне перехресне зшивання або застосовувати інший заснований на гібридизації підхід. Це робить її придатною для приготування лікарського засобу для лікування пацієнтів, наприклад, пацієнтів, що мають ЕоЇК1-позитивні злоякісні пухлини. ТОВ З6Е2 у двовалентному форматі "241 інвертована" можна одержувати з низьким вмістом агрегатів за допомогою стандартних процесів, заснованих на використанні СНО. Крім того, ТОВ З36Е2 у двовалентному форматі "2-1" містить людські й гуманізовані послідовності, тобто вона має перевагу в порівнянні з молекулами, у яких застосовують щурячі й мишині поліпептиди, що мають високу імуногенність при введенні людині. Крім того, ТОВ З36Б2 у двовалентному форматі "2-1" сконструйована так, щоб елімінувати зв'язування з ЕсокК і тому вона не викликає перехресного зшивання з Есом і реакцій на інфузію, що ще більш підвищує її безпека при введенні пацієнтам.
Описані вище результати демонструють, що завдяки своїй геометричній конфігурації "голова-до хвоста" ТСВ 36Е2 у двовалентному форматі "24-11 інвертована" є високо ефективною молекулою, яка індукує повний цитоліз клітин-мішеней. Двовалентність підвищує її авідність і ефективність, але також забезпечує здатність розрізняти клітини з високим і низьким рівнем експресії. Її вибірковість відносно клітин з високим або середнім рівнем експресії, обумовлена її авідністю, приводить до зниження токсичності, що викликається опосередкованим Т-клітинами цитолізом здорових клітин, що характеризуються низькими рівнями експресії БоЇК1.
Ще однією перевагою ТСВ 36Е2 у двовалентному форматі "2-1" ї інших варіантів, представлених у даному описі, є те, що їх створення для клінічного застосування не вимагає використання сурогатних молекул, оскільки вони зв'язуються з РОЇК! людини, мавп циномолгус і мишей. Представлені в даному описі молекули самі по собі розпізнають епітоп, відмінний від епітопу, що розпізнається раніше описаними антитілами до Ео!їКТ, які не розпізнають ЕоїК1 усіх трьох видів.
Таблиця 28: Величини ЕС5о (пМ), що характеризують опосередковуваний Т-клітинами цитоліз пухлинних клітин, що експресують ЕоОЇК1, індукований ТОВ З6Е2 і ТОВ 1605 у різних одновалентних і двовалентних форматах біспецифічної молекули, що активує Т-клітину, після інкубації протягом 24 год.
рівень ЕоїЇК1) рівень ЕоЇК1) рівень ЕоїЇК1) товібр5 77777771 11117108 Ї17111711106 1111115 " крива не досягла насичення, представлена тільки гіпотетична величина
У таблиці 29 представлене порівняння величин ЕСзо для ТСВ 1605 і ТОВ З36Е2, отримані для різних протестованих клітинних лініях. На основі отриманих величин ЕСзхо були розраховані величини різниці (А, дельта) (ЕСво для ТСВ 1605 мінус ЕСво для ТСВ ЗбЕг2) і х-кратна різниця (ЕСзо для ТСВ 1605, ділена на ЕСзо для ТСВ З6бЕ2).
Таблиця 29: Порівняння величин ЕСво для ТСВ 1605 і ТСВ ЗбЕ2 (високий рівень ЕоЇК1) | (середній рівень РОЇК) | (низький рівень ЕоїІК1)
А 11111111185И71 11111111 17777 | 3956727...-:ШЬ"« " крива не досягла насичення, представлена тільки гіпотетична величина
Розраховані величини ЕСбо чітко демонструють, що різниця між ТОВ З36Е2 і ТОВ 1605 стає тим більше, ніж нижче рівень експресії РоЇІК1 на клітинах-мішенях.
Такі ж розрахунки з метою порівняння величин ЕСво для ТОВ 1605 і ТОВ 362 минулого зроблені для ТСВ 1605 і двох одновалентні ТСВ 1605 (ТОВ 1605 НТ і 1605 1411). У таблицях 30 і 31 представлене порівняння величин ЕСво для ТСВ 1605 с ТОВ 1605 НТ (таблиця 30) і ТСВ 1605 с ТОВ 1605 1-41 (таблиця 31), а також відповідні величини різниць (дельта) (ЕСхо для 1605
ТОВ мінус ЕС5о для ТСВ 1605 НТ/11) і х-кратних різниць (ЕСзо для ТСВ 1605, ділена на ЕСзхо для ТСВ 1605 НТ/Л я1).
Таблиця 30: Порівняння величин ЕСво для ТСВ 1605 "2411 інвертована" і ТСВ 1605 НТ (високий рівень ЕоЇІК1) | (середній рівень РоЇК1) | (низький рівень ЕоІК1)
А 11111711111111710,79777777171717171717111111165777771717711111111189598 1
Таблиця 31: Порівняння величин ЕСхо для ТСВ 1605 і ТОВ 1605 141 (високий рівень Ео!їІКт) | (середній рівень ЕоїІКт1)) (низький рівень ЕоїЇК1)
А 111111111771111112302 77717171 48,24 | 87805 " крива не досягла насичення, представлена тільки гіпотетична величина
Порівняння величин ЕСво для ТОВ 1605 і ТОВ З6Е2 (таблиця 29) продемонструвало, що різниця у величинах ЕСво стає тим більше, ніж нижче рівень експресії БоЇК! на клітинах- мішенях. Цей ефект не виявлений при порівнянні ТОВ 1605 і одновалентних ТОВ 1605 (таблиця 29 і таблиця 30). Для ТОВ 1605 141 (таблиця 31) має місце також невелике збільшення різниці між величинами ЕСво для ТСВ 1605 і ТОВ 1605 1-41 при зниженні рівня експресії ЕОоЇКт, однак це не так сильно виражене, як можна бачити при порівнянні ТОВ 1605 с тов ЗбЕг2.
Приклад 34
Підвищувальна регуляція СО25 і СО69 на ефекторних СО8:- і СОра4--клітинах після опосередковуваного Т-клітинами цитолізу пухлинних клітин, що експресують ЕоїЇК1, індукованого антитілом ТОВ З6БЕ2 і антитілом ТСВ 1605
Активацію СО8:- їі СО4:-Т-клітин після цитолізу Т-клітинами пухлинних клітин, що експресують РОоЇК1 НеГа, БКОМ-3 НТ-29, опосередковуваного ТОВ 362 і ТОВ 1605, оцінювали за допомогою ЕГАСоб-аналізу з використанням антитіл, що розпізнають маркери активації Т- клітин СО25 (маркер пізньої активації) і СО69 (маркер ранньої активації). ТОВ ОРА47 включали як незв'язувальний контроль. Антитіло й умови проведення аналізу цитолізу були практично такими ж, що описані вище (приклад 32), використовували такий же діапазон концентрацій антитіла (0,01 пмМ-100 нМ у трьох повторах), співвідношення Е:Т дорівнювало 10:1 і час інкубації становив 48 год.
Після інкубації РВМС переносили в круглодонний 96-лунковий планшет, центрифугували при 400 х д протягом 4 хв і двічі промивали ЗФР, що містять 0,1 95 БСА. Фарбування поверхні для виявлення СО8 (кон'юговане з РЕ антитіло до людського СО8, ВО Мо 555635), СО4 (мічене
ВгіШапі Міоіеї 421 7м антитіло до людського СО4, ВіоЇ едепа Мо 300532), СО69 (кон'юговане з
ФІТЦ антитіло до людського СО69, ВО Мо 555530) і СО25 (кон'юЮюговане з АРС антитіло до людського СО25 ВО Мо 555434) здійснювали згідно з інструкціями виробника. Клітини промивали двічі з використанням по 150 мкл/лунку ЗФР, що містить 0,195 БСА. Після центрифугування зразки ресуспендували в 200 мкл/лунку ЗФР із 0,1 95 БСА для вимірювань методом ЕАСЗ5. Зразки аналізували за допомогою обладнання ВО ГАСЗ Сапіо ІІ.
ТОВ 36Б2 індукувала мішень-специфічну підвищувальну регуляцію маркерів активації (25025, 2069) на СО8:- і СО04--Т-клітинах після цитолізу клітин Неї а (фіг. 25А) і ЗКОМ-3 (фіг. 25Б). ТСВ 36Е2 індукувала підвищувальну регуляцію СО25 і СО69 на СО8-- і СО4--Т-клітинах набагато слабше в порівнянні з ТСВ 1605.
На клітинах НТ-29 (низький рівень ЕБоїК1) підвищувальну регуляцію маркерів активації виявилося можливим виявляти тільки при найбільш високій концентрації ТОВ З6Е2. На відміну від цього, при застосуванні ТОВ 1605 підвищувальну регуляцію СО25 і СО69 виявилося можливим виявляти вже при набагато менших концентраціях антитіла (фіг. 253).
Аналогічно до того, як це було встановлено в експерименті з лізису пухлини, аналіз маркерів активації (С025 і СОб69) на Т-клітинах (СО4-- ї СЮ8:-) після цитолізу чітко продемонстрував, що різниця між ТСВ 1605 і ТСВ 36Е2 проявляється тим більше, ніж менше рівень експресії ГоЇїйК1 на клітинах-мішенях.
Приклад 35
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз первинних клітин, індукований ТОВ З36Е2 і ТСВв 1605
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз, індукований ТОВ З6Е2 і ТОВ 1605 оцінювали на первинних клітинах (людські клітини кортикального ниркового епітелію (НЕКСЕрісС) (фірма зсіепСеї! Кезеагсп Гарогафогіеє; каталожний номер 4110) і людські клітини ретинального пігментного епітелію (НКРЕріС) (фірма ЗсіепСеї! Кезеагсп Іарогаїогіеє; каталожний номер 6540)). Клітини НТ-29 (низький рівень ЕоїЇК1) включали як контрольну клітинну лінію. ТОВ ОРА7 служили як незв'язувальний контроль. Людські РВМОС застосовували як ефектори, і цитоліз оцінювали після інкубації протягом 24 год. і 48 год. у присутності біспецифічних антитіл. У цілому метод полягав у наступному. Клітини-мішені збирали з використанням трипсину/ЕДТА, промивали й висівали із щільністю 25000 клітин/лунку в плоскодонні 96-лункові планшети.
Клітинам давали прикріплюватися протягом ночі. Мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) одержували шляхом центрифугування в градієнті густини Нізіорадие зі збагачених лімфоцитами препаратів (лейкоцитарні плівки), отриманих від здорових донорів. Свіжу кров розводили стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт Ніхорадие (фірма 5ідта, Н8г889). Після центрифугування (450 х 9, 30 хв, кімнатна температура) плазму, що знаходиться над інтерфазою. що містить РВМС, відкидали й РВМС переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400 х д, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали й дебрис РВМС промивали двічі стерильним ЗФР (стадії центрифугування при 350 х 9, 10 хв). Здійснювали автоматичний підрахунок отриманої популяції РВМС (обладнання МісСеї|) і зберігали в середовищі КРМІ 1640, що містить 10 95 ЕС5 і 1 96 І -аланіл-І -глутаміну (фірма Віоспгот, КО302) при 372С, 5 95 СО» в інкубаторі для клітин до подальшого використання (не більше 24 год.). Для аналізу цитолізу антитіло додавали в вказаних концентраціях (у діапазоні від 0,01 пМ до 10 нМ у трьох повторах). Додавали РВМС до клітин-мішеней у кінцевому співвідношенні Е:Т-10:1. Цитоліз клітин-мішеней оцінювали після інкубації протягом 24 і 48 год. при 37 "С, 5 95 СО» шляхом кількісної оцінки вивільнення ЛДГ у (610) клітинні супернатанти апоптозними/некротичними клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма
Коспе Арріїєй Зсіепсе, каталожний номер 11 644 793 001). Максимальний лізис клітин-мішеней (- 100 95) досягався при інкубації клітин-мішеней у присутності 1 95 Тритону Х-100. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без біспецифічних конструкцій.
Результати свідчать про те, що ТОВ 36Е2 не індукувала опосередковуваний Т-клітинами цитоліз первинних клітин (фіг. 26А-Г), у той час як виявився можливим виявити певний рівень цитолізу, індукований ТОВ 1605 на клітинах НКСЕріС і клітинах НЕРЕрісС після інкубації протягом 48 год. (фіг. 26Б і Г). Як описано вище, була виявлений значна різниця між опосередковуваним Т-клітинами цитолізом клітин НТ-29, індукованому ТОВ 1605 і ТСВ зб6Е2 (фіг. 26Д, Е).
Приклад 36
Одержання ТОВ ОР47 5 ("241 Стго55Рар-ідд РЗ3290 І АГА інвертована", тобто "ненацілена
ТОВ") "Ненацілену ТОВ" застосовували як контроль в описаних вище експериментах.
Біспецифічне антитіло зв'язується з СОЗе, але не зв'язується ні з яким іншим антигеном і тому не може забезпечувати перехресне зшивання Т-клітин з якими-небудь клітинами-мішенями (їі отже не може індукувати цитоліз). Тому її застосовували в аналізах як негативний контроль для виявлення будь-якої неспецифічної активації Т-клітин. Вказану "ненацілену ТОВ" одержували згідно з методом, описаним в М/О 2014/131712. У цілому метод полягав у наступному.
Варіабельну ділянку послідовностей ДНК важкого й легкого ланцюга субклонували в рамці зчитування або з константним важким ланцюгом, або з константним легким ланцюгом, попередньо вбудованим у відповідний реципієнтний експресійний вектор для клітин ссавців.
Експресія антитіла перебувала під контролем промотору МР5М і вектор ніс синтетичну сигнальну поліА-послідовність на 3-кінці СО5. Крім того, кожний вектор містив послідовність
Огір ЕВУМ.
Молекулу одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліеєтиленіміну. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами в співвідношенні 1:2:1:1 ("вектор для важкого ланцюга
Ес(западина)»:«вектор для легкого ланцюга":«вектор для легкого ланцюга Стго55Еар": «вектор для важкого ланцюга Ес(виступ)-РавСтозвтар").
Для трансфекції клітини НЕК293 ЕВМА культивували в безсироватковій суспензії в культуральному середовищі СО СНО. Для одержання в 500-мілілітрові струшувані колби засівали 400 млн клітин НЕК29З3 ЕВМА за 24 год. до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х 4д і супернатант заміняли 20 мкл попередньо нагрітого середовища СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО, до одержання кінцевої кількості ДНК 200 мкг. Після додавання 540 мкл полієтиленіміну (ПЕЇ) розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!, переносили в 500-мілілітрову струшувану колбу й інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 95 СО».
Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції в культуру додавали їмММ вальпроєву кислоту й 7 95 Реєй 1. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали для очищення шляхом центрифугування протягом 15 хв при 210 х 9, розчин стерилізували фільтрацією (фільтр із розміром пор 0,22
МКМ), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./ об.) і витримували при 476.
Секретований білок очищали із супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А. Супернатант вносили в колонку НіТгар РгоївіпА НР (СМУ-5 мл, фірма СЕ Неайсаге), урівноважену 40 мл буфера, що містить 20 мМ фосфат натрію, 20 мМ цитрат натрію, рН 7,5. Незв'язаний білок видаляли шляхом промивання буфером, що містить 20 мМ фосфат натрію, 20 мМ цитрат натрію, О0,5М хлорид натрію (рН 7,5), використовуючи його в обсязі, кратному по меншій 10 об'ємам колонки. Необхідний білок елюювали буфером, узятим в об'ємі, що дорівнює 20 об'ємам колонки, використовуючи градієнт від 20 мМ цитрату натрію, О0,5мм хлориду натрію, рН 7,5 до 20 мМ цитрату натрію, 0,5М хлориду натрію, рН 2,5. Розчин, що містить білок, нейтралізували, додаючи в кількості, що становить 110, 0,5М фосфат натрію, рН 8. Необхідний білок концентрували й фільтрували перед внесенням в колонку НіПоай Зирегаєех 200 (фірма СЕ Неайпсаге), урівноважену розчином, що містять 20 мМ гістидин, 140 мМ хлорид натрію, рН 6,0.
Концентрацію білка в очищених зразках, що містять білок, визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм із використанням коефіцієнта молярної екстинкції, (610) розрахованого на основі амінокислотної послідовності.
Чистоту й молекулярну масу молекул аналізували за допомогою КЕ-ДСН-аналізу в присутності й за відсутності відновника. Застосовували систему Саїїрег ГарСпір ОХІ! (фірма
Саїїрег Іпезсіепсе) згідно з інструкціями виробника. Для аналізів використовували зразок масою 2 мкг.
Вміст агрегатів у зразках антитіла аналізували з використанням аналітичної колонки для гель-фільтрації Т5Кде! 3000 5МУУ ХІ (фірма Тозой) у рухомому буфері, що містить 25 мМ
К2НРО», 125 мм Масі, 200 мМ І-моногідрохлорид аргініну, 0,02 95 (мас./ об.) МаМз, рН 6,7, при 2576.
Таблиця 32: Узагальнення даних про одержання й очищення ТОВ ОРА7 5
Імг/лі мг/лі стадії очищення (Об | до туо| | мономерів (9о товоРА7О5 | 10377 | 804 | (8 7 щ | 23 | 69| 918
Таблиця 33: Результати КЕ-ДСН-аналізу ТОВ ОР47 65 11111111 |Пік! кда | Відповіднийланцюг./:-7--ГО
ПІП Ба іі ііі іісо Й ланцюг
ПІП Бі іі піні глікозилування 11111111. 14 0198,98|правильнамолекула././:/.././.:/:::ХИ 11111111 1213574 |легкийланцюгписнНа527. -:/ ./ БК 11111111 13 163,57|Рс(ззападиною.//-:|//:.))/././/:КЕ 11111114 19302|Рс(звистуломд///:/:.//:К/ЗОС(
Приклад 37
Зв'язування ТОВ 1605 і ТСВ 9011 і їх відповідних зв'язувальних СОЗ варіантів з вилученими сайтами деамідування М1О0А і 5100аА з клітинами Уигкаї, що експресують СОЗ
Зв'язування ТОВ 1605 і відповідних зв'язувальних СОЗ варіантів з вилученими сайтами деамідування ТОВ 1605 М1О0А і ТОВ 1605 5100аА і ТОВ 9011 і варіантів з вилученими сайтами деамідування ТОВ 9011 МІО0А і Тов 9011 5100а4 з людським СОЗ оцінювали на СО3- експресуючій імморталіваній лінії Т-лімфоцитів (игКка). У цілому метод полягав у наступному.
Клітини збирали, підраховували, перевіряли на життєздатність і ресуспендували в концентрації 2х105 клітин/мл у буфері для ЕАС5 (100 мкл ЗФР, 0,1 95 БСА). 100 мкл суспензії клітин (що містить 0,2х106 клітин) інкубували в круглодонних 96-лункових планшетах протягом 30 хв при 4 "С з узятими в різних концентраціях біспецифічними антитілами (686 пмМ-500 нМ). Після двох стадій промивання холодним ЗФР, що містить 0,1 95 БСА, зразки повторно інкубували ще протягом 30 хв при 4 "С з кон'югованим з РЕ Е(аб')2-фрагментом козячого антилюдського Ідс,
Есд-специфічного АйіпіРиге (фірма Щдаскзоп ІттипоКезеагс!, каталожний номер 109-116-170).
Після дворазового промивання зразків холодним ЗФР, що містять 0,195 БСА, їх відразу аналізували за допомогою РГАС5З з використанням обладнання РГАС5 Сапіосї! (програма ГАС5
Оіма). Криві зв'язування одержували за допомогою програми сгарпРаадРгізтб (фіг. 28А-Б).
Результати свідчать про знижене зв'язування варіантів з вилученими сайтами деамідування
МІ1О0А і 5100аА з СОЗ у порівнянні з батьківськими антитілами ТСВ 1605 (фіг. 28А) і ТОВ 9011 (фіг. 28Б).
Приклад 38
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз клітин ЗКОМ-3 і НТ-29, індукований ТСВ 1605 і ТСВ 9011 і їх зв'язувальних СОЗ варіантів з вилученими сайтами деамідування М100А і 51О0бах
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз, індукований ТОВ 1605 і відповідними зв'язувальними СОЗ варіантами з вилученими сайтами деамідування ТСВ 1605 М1О0А і ТОВ 1605 5100аА і ТОВ 9011 і деамідированними варіантами ТОВ 9011 МІТОбА ії ТОВ 9011 5100аА, оцінювали на клітинах БКОМУ-3 (середній рівень ЕОїЇК'т) і НТ-29 (низький рівень ЕоїІК1). Людські
РВМС застосовували як ефектори, і цитоліз оцінювали після інкубації протягом 24 год. з біспецифічними антитілами. У цілому метод полягав у наступному. Клітини-мішені збирали з використанням трипсину/ЕДТА, промивали й висівали із щільністю 25000 клітин/лунку в плоскодонні 96-лункові планшети. Клітинам давали прикріпитися протягом ночі. Мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) одержували шляхом центрифугування в градієнті густини
Ністорадие зі збагачених лімфоцитами препаратів (лейкоцитарні плівки), отриманих від здорових донорів. Свіжу кров розводили стерильним ЗФР і нашаровували на градієнт
Ніхіорадние (фірма 5ідта, Н8889). Після центрифугування (450 х 49, 30 хв, кімнатна температура) плазму, що знаходиться над інтерфазою. що містить РВМС, відкидали й РВМС переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400 х 9, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали й дебрис РВМС промивали двічі стерильним ЗФР (стадії центрифугування при 350 х 494, 10 хв). Здійснювали автоматичний підрахунок отриманої популяції РВМС (обладнання МмісСеї|) і зберігали в середовищі КЕРМІ 1640, що містить 10 95 ЕС5 і 1 95 І -аланіл-Ї -глутаміну (фірма Віоспгот, КО302) при 372С, 5 956 СО» в інкубаторі для клітин до подальшого використання (не більше 24 год.). Для аналізу цитолізу антитіло додавали в вказаних концентраціях (у діапазоні від 0,01 пМ до 10 нМ у трьох повторах). Додавали РВМС до клітин-мішеней у кінцевому співвідношенні Е:Т-10:1. Цитоліз клітин-мішеней оцінювали після інкубації протягом 24 при 37 "С, 595 СО» шляхом кількісної оцінки вивільнення ЛДГ у клітинні супернатанти апоптозними/некротизованими клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма Коспе Арріїєй Зсіепсе, каталожний номер 11 644 793 001).
Максимальний лізис клітин-мішеней (- 100 95) досягався при інкубації клітин-мішеней у присутності 195 Тритону Х-100. Мінімальний лізис (- 095) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без біспецифічних конструкцій.
Результати свідчать про те, що для клітин 5КОМ-3 рівень цитолізу, індукований зв'язувальними СОЗ варіантами з вилученими сайтами деамідування ТСВ 1605 МІ1О0А і ТОВ 1605 5100аА, був порівнянний з рівнем, індукованим ТОВ 1605 (фіг. 29А). Такий же результат був отриманий для ТСВ 9011 і її варіантів ТОВ 9011 МІО0А ї ТОВ 9011 5100аА (фіг. 29Б). У випадку, що характеризуються низьким рівнем експресії БОЇК1 клітин НТ-29 варіант 5100аА мав знижену ефективність відносно цитолізу як у випадку ТСВ 1605 (фіг. ЗОА), так і у випадку ТСВ 9011 (фіг. З0ОБ). Величини ЄЕСво, отримані при аналізі цитолізу, які розраховували з використанням програми сСгарпРаадРгізітб, представлено в таблиці 35.
Таблиця 35: Величини ЕСво (ПМ), що характеризують опосередковуваний Т-клітинами лізис клітин ЗКом-3, що експресують ЕоїКл, їі НТ-29, індукований ТОВ 1605 і ТОВ 9011 і їх варіантами з вилученими сайтами деамідування М1О0бА і АТОбахд зо 11101111 ЕОМ " не визначали
Приклад 39
Біохімічна характеризація методом поверхневого плазмонного резонансу двох ТОВ, що містять варіанти СОЗ-зв'язувального агента (МІООА і 5ІОбад) з вилученим сайтом деамідування)
Зв'язування двох ТОВ 1605, що містять варіанти СОЗ-зв'язувального агента (МІО0А або
З100ах), з людським рекомбінантним СОЗ (гетеродимер СОЗепсилон-саЗдельта у вигляді злиття 3 Ес) оцінювали методом поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Усі 5РЕ- експерименти здійснювали з використанням ВіАсоге Т200 при 25 "С, застосовуючи як рухомий буфер НВ5Б-ЕР (0,01М НЕРЕЗЄ, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта Р20, фірма
ВІАсоге, Фрейбург/Німеччина).
Афінність до СОЗеа-Ес
Афінність взаємодії між анти-РоЇК1 біспецифічними молекулами, що активують Т-клітину, й рекомбінантним гетеродимером СОЗ-епсилон-дельта- оцінювали відповідно до описаного нижче методу (таблиця 36).
Для вимірювання афінності здійснювали безпосередню комбінацію антилюдського Еар- специфічного антитіла (набір для захоплення Бар, фірма СЕ Неайвсаге) до досягнення рівня іммобілізації, що відповідає приблизно 6000 резонансних одиниць (КУ), на СМ5-чіпі при рН 5,0 з використанням набору для стандартного амінного сполучення (фірма СЕ Неайсаге). Анти-
ЕОІКТ, біспецифічні молекули, що активують Т-клітину в концентрації 200 нМ захоплювали при швидкості потоку 20 мкл/хв протягом 60 с, у проточній референс-комірці захоплення не здійснювали. Через усі проточні гнізда пропускали серійні розведення (від 4,1 до 3000 нм злиття рецептор 1 людини, мавп циномолгус або мишей з Ес (рецептор 1-Ес) при швидкості потоку 30 мкл/хв протягом 240 с для реєстрації фази асоціації. Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом 240 с і для запуску заміняли розчин зразка на НВ5-ЕР. Поверхню чіпа регенерували після кожного циклу, використовуючи дві ін'єкції по 60 с із використанням 10 мМ гліцину-НСІ, рН 1,5. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці 1. Константи афінності, що характеризують взаємодії, визначали на основі констант швидкості шляхом припасування до моделі зв'язування 171 Ленгмюра, використовуючи програму Віа ЕмаІчайоп (фірма СЕ Неайсаге).
Таблиця 36: Одновалентне зв'язування (афінність) двох варіантів 1605 у вигляді ТСВ з вилученими сайтами деамідування в СОЗ-зв'язувальному агентові з людським СОЗед-Ес
Два варіанти з СОЗ-зв'язувальним агентом з вилученими сайтами деамідування мали небагато більш низьку афінністю в порівнянні з молекулою, що містить СОЗ-зв'язувальний агент дикого типу (СН2527), однак відмінність не була дуже важливою.
Приклад 40
Одержання й очищення двох варіантів біспецифічної молекули, що активує Т-клітину 1605 с мутаціями для видалення сайту деамідування в СОЗ-зв'язувальному агентові: ТОВ 1605 М1О0А, тов1605 510баА
Короткочасна трансфекція й одержання
Два варіанти ТСВ 1605 с вилученими сайтами деамідування короткочасно одержували в клітинах НЕК293 ЕВМА за допомогою опосередкованої ПЕЇ процедури трансфекції необхідними векторами відповідно до описаного нижче методу. Клітини НЕК293 ЕВМА культивували в безсироватковій суспензії в культуральному середовищі СО СНО. Для одержання в 500- мілілітрові струшувані колби засівали 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції.
Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х 9 і супернатант заміняли 20 мкл попередньо нагрітого середовища СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО, до одержання кінцевої кількості 200 мкг ДНК. Після додавання 540 мкл поліетиленіміну (ПЕЇ) розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ, переносили в 500- мілілітрову струшувану колбу й інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 96 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції в культуру додавали 1мМ вальпроєву кислоту й 7 95 Рееа 1.
Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали для очищення шляхом центрифугування протягом 15 хв при 210 х 9, розчин стерилізували фільтрацією (фільтр із розміром пор 0,22 мкМ), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./ об.) і витримували при 4 "С.
Очищення
Здійснювали двостадійне очищення двох варіантів ТОВ 1605 с вилученими сайтами деамідування за допомогою стандартних процедур, таких як афінне очищення з використанням білка А (фірма Акіа Ехріогег) і гель-фільтрація. Значення рН супернатанта, отриманого за допомогою короткочасного виробництва, доводили до рН 8,0 (використовуючи 2М ТРИС, рн 8,0) і вносили в Марзеїесії Зи!иге (фірма СЕ Неайсаге, об'єм колонки (сум) - 2 мл), урівноважену взятим в об'ємі, що дорівнює 8 об'ємам колонки (су), буфером А (20 мМ фосфат натрію, рН 7,5, 20 мМ цитрат натрію). Після промивання 10 см буфера А, білок елюювали, застосовуючи градієнт рН до буфера Б (20 мМ цитрат натрію, рН 3, 100 мМ Масі, 100 мМ гліцин) з використанням об'єму, що дорівнює 20 см. Об'єднували фракції, які містять білок, що представляє інтерес, , і значення рН розчину обережно доводили до рН 6,0 (використовуючи 0,5М МагНРО», рН 8,0). Зразки концентрували до 1 мл з використанням ультра-концентраторів (Атісоп Шіга-15, 30.000 МУУСО, Мійіроге) і потім вносили в препаративну колонку НіПІоаа "16/60
Зирегаєх "М 200 (фірма СЕ Неайпсаге), урівноважену буфером, що містить 20 мМ гістидин, рН 6,0, 140 мм Масі. Вміст агрегатів в елюйованих фракціях аналізували за допомогою аналітичної гель-фільтрації. Для цього 30 мкл кожної фракції вносили в колонку для аналітичної гель- фільтрації ТЗКде! 3000 ЗМУ ХІ (фірма Тоз5о!), урівноважену рухомим буфером, що містить 25мММ КеНРО»х, 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./ об.) Мам», рН 6,7 при 25 "С. Фракції, що містять менше 2 95 олігомерів, об'єднували. Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту й молекулярну масу конструкцій аналізували за допомогою капілярного електрофорезу в присутності ДСН із відновлюючим агентом і без нього згідно з інструкціями виробника (обладнання Саїїрег Гарспірсх, фірма Регкіп ЕІтег). Очищені білки заморожували в рідкому М2 і зберігали при -80 "С.
Таблиця 36: Вихід, вміст мономерів і чистота за даними аналізу методом КЕ-ДСН двох варіантів 1605 с вилученими сайтами деамідування у форматі біспецифічної молекули, що активує Т-клітину, агентові мг/лі до за даними КЕ-ДСН (Оо товібр5 |МІО0А 77777779 11111700 | 89 2 лтовібо5 |дикийтиї////777777777777717 | 19 77111700 | 7777177 93 2
Обидві ТСВ одержували з високою якістю, подібною до якості конструкції, що містить СОЗ3- зв'язувальний агент дикого типу.
Приклад 41
Одержання й очищення двох варіантів зв'язувального агента 1605 (0524Е ії 052909) у форматі до з вилученою « гарячою точкою" в СОК
Короткочасна трансфекція й одержання
Дві молекули у форматі дсС короткочасно одержували в клітинах НЕК293 ЕВМА за допомогою опосередкованої ПЕ! процедури трансфекції необхідними векторами відповідно описаній нижче процедурі. Клітини НЕК293 ЕВМА культивували в безсироватковій суспензії в культуральному середовищі СО СНО. Для одержання в 500-мілілітрові струшувані колби засівали 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції (для одержання в інших масштабах усі кількості регулювали відповідним чином). Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х 4д і супернатант заміняли 20 мкл попередньо нагрітого середовища СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО, до одержання кінцевої кількості 200 мкг ДНК. Після додавання 540 мкл полієтиленіміну (ПЕЇ) розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!, переносили в 500-мілілітрову струшувану колбу й інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 95 СО».
Після інкубації додавали 160 мл середовища РЕ17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції в культуру додавали їмММ вальпроєву кислоту й 7 95 Реєй 1. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали для очищення шляхом центрифугування протягом 15 хв при 210 х 9, розчин стерилізували фільтрацією (0,22 мкМ-фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./ об.) і витримували при 4 "С. Після одержання супернатанти збирали й супернатанти, що містять антитіло, фільтрували через стерильні фільтри з розміром пор 0,22 мкМ і зберігали при 4 "С до очищення.
Очищення антитіла
Здійснювали двостадійне очищення двох ІДС за допомогою стандартних процедур, таких як афінне очищення з використанням білка А (фірма Акіа Ехріогег) і гель-фільтрація. Значення рн супернатанта, отриманого за допомогою короткочасного виробництва, доводили до рН 8,0 (використовуючи 2М ТРИС, рн 8,0) і вносили в колонку РОКО5 МабрсСарішйге А (фірма Арріїей
Віозузіетв5, об'єм колонки (см) - 1 мл), урівноважену взятим в об'ємі, що дорівнює 8 об'ємам колонки (сх), буфером А (20 мМ фосфат натрію, 20 мМ цитрат натрію, рН 7,5). Після промивання 10 см буфера А, білок елюювали, застосовуючи градієнт рН до буфера Б (20 мМ цитрат натрію, рН 3, 100 мМ Масі, 100 мМ гліцин) з використанням об'єму, що дорівнює 20 су. 5 мл середовища, що містить інтерес, що представляє, білок, запасали в петлі на АКіа Ехріогег і потім вносили в Ні оай 16/60 ЗБирегаех"М 200 (фірма СЕ Неайсаге) урівноважену 20 мМ гістидином, рН 6,0, 140 мМ Масі (Твін не застосовували).
Об'єднували фракції що містять ІдсС і концентрували з використанням ультра- концентраторів (Атісоп ОКга-15, 30.000 МУУСО, фірма МійШіроге) і потім вносили в колонку для препаративної хроматографії Ні Поай"М16/60 бирегфех"М 200 (фірма СЕ Неайпсаге. Вміст агрегатів у кінцевому пулі аналізували за допомогою аналітичної гель-фільтрації. Для цього 30 мкл вносили в колонку для аналітичної гель-фільтрації Т5Кде! 53000 ЗМУ ХІ (фірма То5оп), урівноважену рухомим буфером, що містить 25мМ К»аНРО», 125мМ Масі, 200ммМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./ об.) МаМ»з, рН 6,7 при 25 "С. Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту й молекулярну масу конструкцій аналізували за допомогою капілярного електрофорезу в присутності ДСН із відновлюючим агентом і без нього згідно з інструкціями виробника (обладнання Саїїірег Гарспірсх, фірма РегкКіп ЕІтег). Очищені білки зберігали при 4 "С.
Таблиця 37: Вихід, вміст мономерів і чистота за даними аналізу методом КЕ-ДСН двох варіантів 1605 у форматі дос з вилученими « гарячими точками" 1605) ргає | 24 | -(ОЛлОЇГ/1777777777777777сс7с7967сСсСсСсСс2шС б1605| рбгай | 20 | ХГ лоб ї7777777171717171717179611СсСсС2С
Обидві молекули у форматі Іде одержували легко й з гарною якістю.
Приклад 42
Біохімічна характеризація методом поверхневого плазмонного резонансу двох варіантів зв'язувальної молекули 1605 (052аЕ і 05242) у форматі ідо з вилученою « гарячою точкою" в сов
Зв'язування двох варіантів зв'язувальної молекули 1605 (0529Е і 05240) у форматі Ідс з рекомбінантним фолатним рецептором 1 людини й мавп циномолгус (обидва у вигляді злиттів з
Ес) оцінювали методом поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Усі 5РК-експерименти здійснювали з використанням ВіАсоге 1200 при 25 "С, застосовуючи як рухомий буфер НВ5О-ЕР (0,01М НЕРЕЗ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта Р20, фірма ВіАсоге,
Фрейбург/Німеччина). 1. Авідність до фолатного рецептора 1
Авідність взаємодії між анти-РоІК1 Ідс або біспецифічними молекулами, що активують Т- клітину, й рекомбінантними фолатними рецепторами оцінювали відповідно до описаного нижче методу (таблиця 38).
Здійснювали безпосереднє сполучення злиттів рекомбінантного біотинілованого мономерного Ес з фолатним рецептором 1 людини, мавп циномолгус і мишей (БоЇК1-Ес) з за- чіпом згідно з інструкціями за стандартною комбінацією (фірма ВіАсоге, Фрейбург, Німеччина).
Рівень іммобілізації відповідав приблизно 160 КО. Анти-РоЇК1 Ід або біспецифічні молекули, що активують Т-клітину, в діапазоні концентрацій від 3,7 до 900 нМ пропускали при швидкості потоку 30 мкл/хв через проточні гнізда протягом 180 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 600 с. Усі відмінності в коефіцієнті заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці з іммобілізованим злиттям рекомбінантний біотинілований мишиний рецептор 1/2-Ес. Криві зв'язування, отримані в результаті двовалентного зв'язування Ідс або біспецифічних молекул, що активують Т-клітину, апроксимували на основі моделі зв'язування за типом 1:1 Ленгмюра (навіть незважаючи на те, що в цьому випадку має місце зв'язування за типом 1:2) і підганяли до цієї моделі для одержання уявної величини Ко, що характеризує авідність двовалентного зв'язування. Уявні константи авідності, що характеризують взаємодії, одержували на основі констант швидкості, визначених у результаті припасування з використанням програми Віа Емаїцайоп (фірма СЕ
Неайнсаге).
Таблиця 38: Двовалентне зв'язування (авідність, що характеризується уявною величиною
Ко) двох варіантів 1605 у форматі дО з вилученою « гарячою точкою" з РОЇК! людини, мишей і мавп циномолгус (зв'язування з тигоїК1 не мало місця, як і слід було сподіватися).
Афінність до фолатного рецептора 1
Афінність взаємодії між анти-РоЇїК1 Ідс або біспецифічними молекулами, що активують Т- клітину, й рекомбінантними фолатними рецепторами оцінювали відповідно до описаного нижче методу (таблиця 39).
Для вимірювання афінності здійснювали безпосередню комбінацію специфічного у відношенні людського Бар антитіла (набір для захоплення Раб, фірма СЕ Неайсаге) до досягнення рівня іммобілізації, що відповідає приблизно 10000 резонансних одиниць (КО), на
СМм5-чіпі при рН 5,0 з використанням стандартного набору для амінного сполучення (фірма СЕ
Неансаге). Анти-ЕоЇК1 Ідо або біспецифічні молекули, що активують Т-клітину, в концентрації 20 нМ захоплювали при швидкості потоку 10 мкл/хв протягом 40 с, у проточній референос-комірці захоплення не здійснювали. Через усі проточні гнізда пропускали серійні розведення (від 12,35 до 3000 нМ злиття фолатного рецептора 1 людини й мавп циномолгус із Ес при швидкості потоку 30 мкл/хв протягом 240 с для реєстрації фази асоціації. Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом 300 с і для запуску заміняли розчин зразка на НВ5-ЕР. Поверхню чіпа регенерували після кожного циклу, здійснюючи дві ін'єкції по 60 с із використанням 10 мМ гліцину-НСІ, рН 1,5. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці 1. Константи афінності, що характеризують взаємодії, визначали на основі констант швидкості шляхом припасування до моделі зв'язування 171 Ленгмюра, використовуючи програму Віа ЕмаЇІчайоп (фірма СЕ Неайсаге).
Таблиця 39: Одновалентне зв'язування (афінність) двох варіантів 1605 у форматі Ідс з вилученою « гарячою точкою" з БОЇК1 людини й мавп циномолгус звовтов 0 ГУнт НИ незоя т во оо ям
Два варіанти 1605 з вилученою « гарячою точкою" мали подібну авідність (двовалентне зв'язування) у порівнянні зі зв'язувальною молекулою 1605 дикого типу. Авідність варіанта з рб52до була трохи нижче, і ця відмінність була ще більш виражена при порівнянні афінностей (одновалентне зв'язування).
Приклад 43
Одержання й очищення дванадцяти варіантів зв'язувальної молекули 1605 у форматі до з мутаціями у важкому й легкому ланцюзі, що приводять до зниження афінності до ЕоїК1
Короткочасна трансфекція й одержання
Дванадцять молекул у форматі дос короткочасно одержували в клітинах НЕК293 ЕВМА за допомогою опосередкованої ПЕЇ процедури трансфекції необхідними векторами відповідно описаній нижче процедурі. Клітини НЕК293 ЕВМА культивували в безсироватковій суспензії в культуральному середовищі СО СНО. Для одержання в 500-мілілітрові струшувані колби засівали 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції (для одержання в інших масштабах усі кількості регулювали відповідним чином). Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х 4 і супернатант заміняли 20 мкл попередньо нагрітого середовища СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО, до одержання кінцевої кількості 200 мкг ДНК. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ!Ї, переносили в 500-мілілітрову струшувану колбу й інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 595 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища РЕ17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції в культуру додавали ї1мМ вальпроєву кислоту й 7 95 ЕРееай 1. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали для очищення шляхом центрифугування протягом 15 хв при 210 х 9, розчин стерилізували фільтрацією (0,22 мкМ-фільтр), додавали азид натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./ об.) і витримували при 4 "С. Після одержання супернатанти збирали й супернатанти, що містять антитіло, фільтрували через 0,22 мікрометрові стерильні фільтри й зберігали при 4 "С до очищення.
Очищення антитіл
Здійснювали двостадійне очищення всіх молекул за допомогою стандартних процедур, таких як афінне очищення з використанням білка А (фірма Акіа Ехріогег) і гель-фільтрація.
Значення рН супернатанта, отриманого за допомогою короткочасного виробництва, доводили до рН 8,0 (використовуючи 2М ТРИС, рн 8,0) і вносили в колонку РОКО5 МабсСарішге А (фірма
Арріїед Віозуєіет»5, об'єм колонки (см) - 1 мл), урівноважену взятим в об'ємі, що дорівнює 8 об'ємам колонки (см), буфером А (20 мМ фосфат натрію, 20 мМ цитрат натрію, рН 7,5). Після промивання 10 см буфера А, білок елюювали, застосовуючи градієнт рН до буфера Б (20 мМ цитрат натрію, рН 3,0, 100 мМ Масі, 100 мМ гліцин) з використанням об'єму, що дорівнює 5 су. 5 мл середовища, що містить інтерес, що представляє, білок, запасали в петлі на АКіа Ехріогег і потім вносили в колонку НіПіоай 16/60 Зирегаех"М 200 (фірма СЕ Неайпсаге) урівноважену буфером, що містить 20 мМ гістидин, рН 6,0, 140 мМ Масі, 0,01 95 Твін-20. Об'єднували фракції, що містять Ід і концентрували з використанням ультра-концентраторів (Атісоп Окга-15, 30.000
МУУСО, фірма Міїйїїроге). Вміст агрегатів у кінцевому пулі аналізували за допомогою аналітичної гель-фільтрації. Для цього 30 мкл вносили в колонку для аналітичної гель-фільтрації ТеКаеї (53000 5МУ ХІ. (фірма Тозой), урівноважену рухомим буфером, що містить 25мМ К»НРО», 125мММ
Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./ об.) Мам», рН 6,7 при 2576.
Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту й молекулярну масу конструкцій аналізували за допомогою капілярного електрофорезу в присутності ДСН із відновлюючим агентом і без нього згідно з інструкціями виробника (обладнання Саїїрег Гаьспірсх, фірма Регкіп ЕІтег). Очищені білки зберігали при 46.
Таблиця 40: Вихід, вміст мономерів і чистота за даними КЕ-ДСН дванадцяти варіантів 1605 у форматі до 1605 МЗ6У/В9ЗА | 25 | Ю.ЮюЮюЮюЮИиВ 11111111 л6р5) вБОБЖБЗА | 10 | -:( и 98...7771717171777111111л10011с1С
Усі дванадцять до одержували легко й з гарною якістю.
Приклад 44
Біохімічна характеризація варіантів 1605 у форматі ІдсС з різними комбінаціями важкої й легкої ланцюгів методом поверхневого плазмонного резонансу
Зв'язування варіантів Го!К1-1605 с різними комбінаціями важкої й легкої ланцюгів у форматі дО з різними рекомбінантними фолатними рецепторами (БоїЖ! людини, мишей і мавп циномолгус; усе у вигляді злиттів з Ес) оцінювали методом поверхневого плазмонного резонансу (5РК). Усі ЗРК-експерименти здійснювали з використанням ВіІАсоге 1200 при 25 С, застосовуючи як рухомий буфер НВЗ-ЕР (0,01М НЕРЕ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта Р20, фірма ВіІАсоге, Фрейбург/Німеччина).
Авідність до фолатного рецептора 1
Авідність взаємодії між анти-РоІК1 Ідс або біспецифічними молекулами, що активують Т- клітину, й рекомбінантними фолатними рецепторами оцінювали відповідно до описаного нижче методу (таблиця 41).
Здійснювали безпосереднє сполучення злиттів рекомбінантного біотинілованого мономерного Ес з фолатним рецептором 1 людини, мавп циномолгус і мишей (БоЇК1-Ес) з за- чіпом згідно з інструкціями за стандартною комбінацією (фірма ВіАсоге, Фрейбург, Німеччина).
Рівень іммобілізації відповідав приблизно 300 КО. Анти-РоЇК1 Ід або біспецифічні молекули, що активують Т-клітину, в діапазоні концентрацій від 11,1 до 900 нМ пропускали при швидкості потоку 30 мкл/хв через проточні гнізда протягом 180 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 240 або 600 с. Усі відмінності в коефіцієнті заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці з іммобілізованим злиттям рекомбінантний біотинілований мишиний рецептор 1/2-Ес. Криві зв'язування, отримані в результаті двовалентного зв'язування Ідс або біспецифічних молекул, що активують Т-клітину, апроксимували на основі моделі зв'язування за типом 1:1 Ленгмюра (навіть незважаючи на те, що в цьому випадку має місце зв'язування за типом 1:2) і підганяли до цієї моделі для одержання уявної величини Ко, що характеризує авідність двовалентного зв'язування. Уявні константи авідності, що характеризують взаємодії, одержували на основі констант швидкості, визначених у результаті припасування з використанням програми Віа ЕмаїЇчайоп (фірма СЕ
Неакйсаге)о. У випадку низкоафінної кінетики, коли фази асоціації й дисоціації проходили занадто швидко, щоб їх можна було підігнати до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра, застосовували модель для аналізу стаціонарного стану з використанням програми Віа
Емаїнайоп (фірма СЕ Неайпсаге). Аналіз стаціонарного стану дозволяв одержати величини Ко для реакції зв'язування в стані рівноваги.
Таблиця 41: Двовалентне зв'язування (авідність, що характеризується уявною величиною
Ко) дванадцяти варіантів зв'язувальних молекул 1605 у форматі дос з Роїк! людини, мишей і мавп циномолгус
Аналіт .
МІ9ВМКЕЗА погоївт! 00017000 |слабкезвязування сугоїв!| | 0 |слабкезв'язування//-:/
ПиЕо!ІВ1 |2,10Е--04 | 2,91 Е-02 | 1400 нм
ЗЗоН/КЗА сугоїв1 13,47Е10414,04Е-021 1100 НМ
У/96У/КБЗА пиБоіВї! 00000100 1580 нМ (стаціонарний стан) субоіВ! | 0000001 0000000001660 НМ (стаціонарний стан)
МОВУ пПигоІАт |1,36Е--05 | 3,28Е-02 | 240 нм суго!В1 |1,71Е--05 | 3,61 Е-02 | 200 НМ побоїв! |2,43Е05|220Е-02|80НМ..///ССССС1С
З35Н/ЗУЗА суго!В1 |6,12Е--05 | 6,77 Е-02 | 110 нм побоїв! 190ЕО5| БЕ б2ІвОНМ77711111111111
СА9БКЗА сугоів! |393ЕО5 ЗоВЕО2|ВОНМ 11111111 побоїв! 328Е05|197Е02ІвОНМ771
НоОБ/КОЗА сугоіві |БОЕОБ 1ББЕО2|ВОНМ 1111111
ЗБН/М побоїв! 132ЕО5|56ВЕ-ОЗІЯОНМ1 сугоіві1 |2,23ЕО5|124Е-02|І55НМ.ОС/С/: НСС пигоів1|1,25ЕО5|323Е-03|З3ОНМ.7717121
НоОБ/БеЗА сугоів! (439Ез051 780 О3|2онМ 11111111 побоїв! беБЕОБ| ве 02ІЗОНМ 1
МЗБувеВА сугоіві |б5ЕО5 1 74Е2|3ОНМ 11111111 побоїв! т52Е05|3О6Е-о3І2онМ11 сА9Б/55ЗА сугоіві |З58ЕЗОБ б ОЗ|2онМ 11111111 пигоів1|1,29Е05|2И3Е-03|Ї20НМ..7777777717171 м сугоїв! 1.73ЕзОБІ2ИТЕОЗІЛОНМ 111111 пигоів1|2,44Е:06|1,37Е-02|6НМ. /:Л/СС С з6Ег2 ТОВ субоів! І42ЕО6І2ЯБЕОДІВНМССС000 тиРоів1(|4,86Ез05 Т2оБ-о3|І25НМ11171С1 пигоів1 |1,41Ез05|І425Е-04|ЗНМ/:ЛОСССС771 7605 ТОВ сугоіві |1.78ЕзОБІвеЕОд|ЗБнМ 1111111
Афінність до фолатного рецептора 1
Афінність взаємодії між анти-РоЇїК1 Ідс або біспецифічними молекулами, що активують Т- клітину, й рекомбінантними фолатними рецепторами оцінювали відповідно до описаного нижче методу (таблиця 42).
Для вимірювання афінності здійснювали безпосередню комбінацію антилюдського Еар- специфічного антитіла (набір для захоплення Бар, фірма СЕ Неайвсаге) до досягнення рівня іммобілізації, що відповідає приблизно 10000 резонансних одиниць (КО), на СМ5-чіпі при рН 5,0 з використанням набору для стандартного амінного сполучення (фірма СЕ Неайсаге). Анти-
ЕоїК! дб або біспецифічні молекули, що активують Т-клітину, в концентрації 200 нм захоплювали при швидкості потоку 10 мкл/хв протягом 40 с, у проточній референс-комірці захоплення не здійснювали. Через усі проточні гнізда пропускали серійні розведення (від 12,35 до 3000 нМ злиття людський фолатний рецептор 1-Ес при швидкості потоку 30 мкл/хв протягом 240 с для реєстрації фази асоціації. Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом 300 с і для запуску заміняли розчин зразка на НВЗ-ЕР. Поверхню чіпа регенерували після кожного циклу, використовуючи дві ін'єкції по 60 с із використанням 10 мМ гліцину-НСІ, рн 1,5.
Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці 1. Константи афінності, що характеризують взаємодії, визначали на основі констант швидкості шляхом припасування до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра, використовуючи програму Віа ЕмаЇІцайноп (фірма СЕ Неайвсаге).
Таблиця 42: Одновалентне зв'язування (афінність) дванадцяти варіантів 1605 у форматі Ід з ЕОЇКТ людини, мавп циномолгус і мишей
ОУМУВУ/КБЗА 0 (ймбоВ!! | 0 зв'язуваннявідсутнє//
ЗЗБНКБЗА 0 (ймбоВМ! | слабкезв'язуванняд//-/-
ОУМУбУ/КБЗА 0 (ймбоВї! | слабкезв'язування.//-/-
МВА 11111111 фймРоІВМ! | 77771717 (5400 нМ (стаціонарний стан) лво5 тов 0 (пого! 18ЕО4|722е041./////// вбонМ11ш
Дванадцять варіантів "зі зниженою афінністю" ЕоЇК1-зв'язувального агента 1605 аналізували методом поверхневого плазмонного резонансу в порівнянні з зв'язувальним агентом 1605 дикого типу і зв'язувальним агентом 36Е2. Ціль полягала в тому, щоб знайти варіант 1605 с афінністю й авідністю, порівнянною з З36Е2. При вимірюванні одновалентного зв'язування (афінність) були виявлені варіанти з більш високої й варіанти з більш низькою афінністю в порівнянні з З36Е2. Однак при оцінці двовалентного зв'язування (авідність) виявилося, що всі варіанти характеризувалися більш високими уявними величинами Ко у порівнянні з 362. Це обумовлено в основному швидкою швидкістю асоціації (Ка) З6Е2, що приводить до малої уявної величини Ко З36Е2. Ймовірно, ефект великий авідності при двовалентнім зв'язуванні 362 є унікальним, властивим цьому зв'язувальному агентові. Як відзначалося вище, З36Е2 виявився єдиним зв'язувальним агентом, що має крос-реактивність до рецептора людини, мишей і мавп циномолгус, який удалося ідентифікувати.
Приклад 45
Зв'язування варіантів 1605 с різними НС/ С з людським ЕоїЇК1, експресованих на клітинах
Нега
Зв'язування ТОВ 362, ТОВ 1605 і варіантів 1605 с різними НС/ЛС з людським ЕоїК1 аналізували на клітинах Неіа. У цілому метод полягав у наступному. Клітини збирали, підраховували, перевіряли на життєздатність і ресуспендували з розрахунку 2х106 клітин/мл у буфері для ЕАС5 (100 мкл ЗФР, 0,1 95 БСА). 100 мкл суспензії клітин (що містить 0,2х106 клітин) інкубували в круглодонних 9б-лункових планшетах протягом 30 хв при 4 "С в узятими в різних концентраціях біспецифічними антитілами (229пМ-500 нМ). Після двох стадій промивання холодним ЗФР, що містять 0,1 95 БСА, зразки повторно інкубували протягом ще 30 хв при 4 "С з кон'югованим з РЕ Е(авБ')2-фрагментом козячого антилюдського /дсСс, Есд-фрагмент- специфічного, АйіпіРиге (фірма даскзоп ІттипоКезеагсі, каталожний номер 109-116-170).
Після дворазового промивання зразків холодним ЗФР, що містять 0,1 95 БСА, їх фіксували з використанням 1 95 ПФА протягом ночі. Потім зразки центрифугували, ресуспендували в ЗФР, що містить 0,1 95 БСА й аналізували за допомогою ЕАС5 з використанням обладнання ЕАС5
Сапо!! (програма ЕБАС5 Оіма). Криві зв'язування одержували за допомогою програми
СгарпРаадРгізтб (фіг. 32А-Д). ТОВ З36Б2, що зв'язується з ЕоЇК2, не мав гарної переносимості для мишей і не мав необхідної ефективності.
Приклад 46
Одержання й очищення чотирьох варіантів біспецифічної молекули 1605, що активує Т- клітини, з мутаціями, що знижують афінність до ГоЇїК! людини й мавп циномолгус: ТОВ 1605 с495/593А, 1495/К5ЗА, М96У, УМ96У/052Е
Короткочасна трансфекція й одержання
Чотири додаткові варіанти ТОВ 1605, що володіють зниженою афінністю до РОЇК, короткочасно одержували в клітинах НЕК293 ЕВМА за допомогою описаної нижче опосередковуваної ПЕ! процедури трансфекції клітин з використанням необхідних векторів. Для трансфекції клітини НЕК293 ЕВМА клітин культивували в безсироватковій суспензії в культуральному середовищі Ехсеїї, що містить бмМ І-глутамін і 250 мг/л культурального середовища (35418. Для виробництва висівали в центрифужний флакон місткістю 600 мл (максимальний робітник об'єм 400 мл) 600 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції.
Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х 9, супернатант заміняли 20 мл попередньо нагрітого середовища СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища
СО СНО до одержання кінцевої кількості ДНК 400 мкг. Після додавання 1080 мкл розчину ПЕЇ (2,7 мкг/мл) суміш інтенсивно перемішували протягом 15 с і потім інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!, переносили в 600- мілілітровий центрифужний флакон і інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері, що містить 5 95 СО». Після інкубації додавали 360 мл середовища ЕхсеїЙебмМ І - глутамін «5 г/л Рерзоуїн1,0 мМ МРА, і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали 7 95 Реєй 7. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали для очищення шляхом центрифугування протягом 20-30 хв при 3600 х д (центрифуга Зідта 8К), розчин стерилізували фільтрацією (фільтр із розміром пор 0,22 мкМ) і додавали азид натрію в кінцевій концентрації 0,01 95 (мас./ об.) і зберігали при 4 "С.
Очищення
Здійснювали двостадійне очищення варіантів ТОВ 1605 зі зниженою афінністю за допомогою стандартних процедур, таких як афінне очищення з використанням білка А (фірма
Акіа Ехріогег) і гель-фільтрація. Значення рН супернатанта, отриманого за допомогою короткочасного виробництва, доводили до рН 8,0 (використовуючи 2М ТРИС, рН 8,0) і вносили в НіТтгар Ргоївеіп А (фірма СЕ Неайнпсаге, об'єм колонки (см) - 5 мл), урівноважену взятим в об'ємі, що дорівнює 8 об'ємам колонки (сх), буфером А (20 мМ фосфат натрію, рн 7,5, 20 мМ цитрат натрію). Після промивання 10 см буфера А, білок елюювали, застосовуючи градієнт рН до буфера Б (20 мМ цитрат натрію, рН 3,0, 100 мМ Масі, 100 мм гліцин) з використанням об'єму, що дорівнює 20 см. Об'єднували фракції, які містять білок, що представляє інтерес, , і значення рН розчину обережно доводили до рН 6,0 (використовуючи 0,5М ма-нео4, рН 8,0).
Зразки концентрували до об'єму 1 мл з використанням ультра-концентраторів (Атісоп ОКга-15, 30.000 МУУСО, фірма Мійроге) і потім вносили в колонку для препаративної хроматографії
Нійоай 16/60 буирегаех М 200 (фірма СЕ Неайпсаге) урівноважену буфером, що містить 20 мМ гістидин, рН 6,0, 140 мМ Масі, 0,01 95 Твін-20. Вміст агрегатів в елюйованих фракціях аналізували за допомогою аналітичної гель-фільтрації. Для цього 30 мкл кожної фракції вносили в колонку для аналітичної гель-фільтрації Т5Коде! (3000 БУМ Хі (фірма Тоз5оп), урівноважену рухомим буфером, що містить 25мМ КаНРО», 125мМ Масі, 200мМмМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./ об.) Мам», рН 6,7, при 25 "С. Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту й молекулярну масу конструкцій аналізували за допомогою капілярного електрофорезу в присутності ДСН із відновлюючим агентом або без нього згідно з інструкціями виробника (обладнання Саїїрег Гарспірсх, фірма Регкіп ЕІтег). Очищені білки заморожували в рідкому М2 і зберігали при -80 "С.
Таблиця 43: Вихід, вміст мономерів і чистота за даними КЕ-ДСН варіантів 1605 зі зниженою афінністю у форматі біспецифічної молекули, що активує Т-клітину,
Мутації, що приводять до Вихід |Вміст мономерів | Чистота за даними КЕ- товібр5| /// б495КБ5ЗА 7777 | 223 | 2 щ 985 2ЮЩ | 96 Ж товібр5| / УбУО52Е | 99 | 2 щ 9953 2 2 щ | ФП 92598 щ КСВКВ отові6бр5| дикийтиї/////// | 54 | 96 25ЮщЩщ | щ 96
Усі варіанти зі зниженою афінністю можна одержувати з гарною якістю.
Приклад 47
Зв'язування ТОВ З36Е2, ТОВ 1605 і двох варіантів 1605 зі зниженою афінністю ТОВ 1605
У96У/052Е і ТОВ 1605 5495/593А з людським ЕоОїК1, експресованих на клітинах НеїГа
Зв'язування ТОВ 362, ТОВ 1605 і двох варіантів 1605 зі зниженою афінністю ТОВ 1605
М96У/052Е і ТОВ 1605 5495/593А з людським ЕоЇК1 оцінювали на клітинах НегГа. У цілому метод полягав у наступному. Клітини збирали, підраховували, перевіряли на життєздатність і ресуспендували при концентрації 2х106 клітин/мл у буфері для ЕАСЗ (100 мкл ЗФР, 0,1 95
БСА). 100 мкл суспензії клітин (що містить 0,2х105 клітин) інкубували в круглодонних 96- лункових планшетах протягом 30 хв при 4 "С з узятими в різних концентраціях біспецифічними антитілами (ЗО0пМ-500 нМ). Після двох стадій промивання холодним ЗФР, що містять 0,1 95 БСА, зразки повторно інкубували протягом ще 30 хв при 4 "С з кон'югованим з ФІТЦ Е(аб)2- фрагментом козячого антилюдського дО, Есу-фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма УЧаскзоп
ІтітипоКезеагсі, каталожний номер 109-096-098). Після дворазового промивання зразків холодним ЗФР, що містять 0,195 БСА, зразки центрифугували, ресуспендували в ЗФР, що містить 0,195 БСА й аналізували за допомогою БАС5З з використанням обладнання БГАС5
Сапіо!! (програма ЕБАСЗ5 Оіма). Криві зв'язування одержували за допомогою програми
СгарпРаадРгізтвб (фіг. 33).
Приклад 48
Одержання й очищення трьох біспецифічних молекул, що активують Т-клітину із проміжною афінністю до БОоЇК1 людини й мавп циномолгус: 1481, 6Е10, 207
Короткочасна трансфекція й одержання
ТСВ із проміжною афінністю короткочасно одержували в клітинах НЕК293 ЕВМА за допомогою описаної нижче опосередковуваної ПЕЇ процедури трансфекції клітин з використанням необхідних векторів. Для трансфекції клітини НЕК293 ЕВМА культивували в безсироватковій суспензії в культуральному середовищі ЕхсеїЇ, що містить ЄмММ І -глутамін і 250 мг/л культурального середовища (3418. Для виробництва висівали в центрифужний флакон місткістю 600 мл (максимальний робітник об'єм 400 мл) 600 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х 39, супернатант заміняли 20 мл попередньо нагрітого середовища СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО до одержання кінцевої кількості ДНК 400 мкг. Після додавання 1080 мкл розчину ПЕЇ (2,7 мкг/мл) суміш інтенсивно перемішували протягом 15 сі потім інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином
ДНК/ПЕЇ, переносили в 600-мілілітровий центрифужний флакон і інкубували протягом З год. при 37"С в інкубаторі в атмосфері, що містить 595 СО». Після інкубації додавали 360 мл середовища Ехсеїїї-бмМ ГІ -глутамін «Ж 5 г/л Рерзоуї1,0 мМ МРА, і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали 7 95 Реєеай 7. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали для очищення шляхом центрифугування протягом 20-30 хв при 3600 х д (центрифуга зЗідта 8К), розчин стерилізували фільтрацією (0,22 мкМ фільтр) і додавали азид натрію в кінцевій концентрації 0,01 95 (мА./ об.) і зберігали при 4 "С.
Очищення
Здійснювали двостадійне очищення варіантів ТОВ 1605 із проміжною афінністю за допомогою стандартних процедур, таких як афінне очищення з використанням білка А (фірма
Акіа Ехріогегї) і гель-фільтрація. Значення рН супернатанта, отриманого за допомогою короткочасного виробництва, доводили до рН 8,0 (використовуючи 2М ТРИС, рН 8,0) і вносили в НіТтгар Ргоївеіп А (фірма СЕ Неайнпсаге, об'єм колонки (см) - 5 мл), урівноважену взятим в об'ємі, що дорівнює 8 об'ємам колонки (сх), буфером А (20 мМ фосфат натрію, рН 7,5, 20 мМ цитрат натрію). Після промивання 10 см буфера А, білок елюювали, застосовуючи градієнт рн до буфера Б (20 мМ цитрат натрію, рН 3,0, 100 мМ Масі, 100 мМ гліцин) з використанням об'єму, що дорівнює 20 см. Об'єднували фракції, які містять білок, що представляє інтерес, і значення рН розчину обережно доводили до рН 6,0 (використовуючи 0,5М МагНРО», рН 8,0).
Зразки концентрували до об'єму 1 мл з використанням ультра-концентраторів (Атісоп ОКга-15, 30.000 МУУСО, фірма Міїїроге) і потім вносили в препаративну колонку НіПоай 16/60 Зирегаех"М 200 (фірма СЕ Неаксаге) урівноважену буфером, що містить 20 мМ гістидин, рН 6,0, 140 мМ масі, 0,01 95 Твін-20. Вміст агрегатів в елюйованих фракціях аналізували за допомогою аналітичної гель-фільтрації. Для цього 30 мкл кожної фракції вносили в колонку для аналітичної гель-фільтрації Т5Кде! 3000 БУМ Хі (фірма То5ой), урівноважену рухомим буфером, що містить 25мМ КеНРО», 125мМ Масі, 200 мм моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./ об.) МамМз, рН 6,7, при 25 "С. Об'єднували фракції, що містять менше 2 95 олігомерів. Концентрацію білка визначали шляхом вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм, використовуючи коефіцієнт молярної екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності. Чистоту й молекулярну масу конструкцій аналізували за допомогою капілярного електрофорезу в присутності ДСН із відновлюючим агентом або без нього згідно з інструкціями виробника (обладнання Саїїрег Гарспірсх, фірма Регкіп ЕІтег). Очищені білки заморожували в рідкому Ме2 і зберігали при -80 "С.
Таблиця 44: Вихід, вміст мономерів і чистота за даними КЕ-ДСН варіантів 1605 із проміжною афінністю о тсв9с7 | 34 | РЧОЯЯЯ | 777777777сСс/с7л9944477с7с72О
Вдалося одержати всі біспецифічні молекули, що активують Т-клітину із проміжною афінністю. Виходи виявилися невисокими. Якість була гарною для 9С7 і прийнятним для 1481 і бЕТ10.
Приклад 49
Зв'язування варіантів 1605 с різними НС/ С з людським ЕоїЇК1, експресованих на клітинах
Ннт-29
Зв'язування ТСВ З6Е2, ТОВ 1605 і варіантів 1605 с різними НС/ С (фіг. 34А-Д) з людським
ЕоІК1 оцінювали на клітинах НТ-29. У цілому метод полягав у наступному. Клітини збирали, підраховували, перевіряли на життєздатність і ресуспендували при концентрації 2х105 клітин/мл у буфері для ЕАС5 (100 мкл ЗФР, 0,1 95 БСА). 100 мкл суспензії клітин (що містить 0,2х106 клітин) інкубували в круглодонних 96-лункових планшетах протягом 30 хв при 4 "С з узятими в різних концентраціях біспецифічними антитілами (229пМ-500 НМ). Після двох стадій промивання холодним ЗФР, що містять 0,1 95 БСА, зразки повторно інкубували протягом ще 30 хв при 4"С з кон'югованим з ФІТЦ Е(авр')2-фрагментом козячого антилюдського Ідс, Есу- фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма даскзоп ІттипокКезеагсі, каталожний номер 109-116- 170). Після дворазового промивання зразків холодним ЗФР, що містять 0,1 96 БСА, зразки центрифугували, ресуспендували в ЗФР, що містить 0,1 95 БСА й аналізували за допомогою
ЕАС5 з використанням обладнання ЕАС5 Сапіої! (програма БАС5 Оіма). Криві зв'язування одержували за допомогою програми сгарпРааРгіз тб (фіг. 33).
Приклад 50
Зв'язування ЕоІК1-зв'язувальних агентів із проміжною афінністю з людським і мишиним
ЕоІК! і ЄоїК2
Крос-реактивність ЕоІН1-зв'язувальних агентів із проміжною афінністю (ТОВ бЕ10, ТОВ 1481 і Тов 9С7), а також ТСВ 1605 і ТОВ 36Е2 з людським і мишиним ЕоїЇК1 і ЕБоЇК2, оцінювали шляхом аналізу зв'язування методом ЕАС5 на трансфектованих НЕК 293Т-клітинах.
У цілому метод полягав у наступному. Клітини збирали, підраховували, перевіряли на життєздатність і ресуспендували при концентрації 2х106 клітин/мл у буфері для ЕАС5 (100 мкл
ЗФР, 0,1 95 БСА). 100 мкл суспензії клітин (що містить 0,2х106 клітин) інкубували в круглодонних 9б-лункових планшетах протягом 30 хв при 4 "С з біспецифічними антитілами в концентрації 100 нм. Після двох стадій промивання холодним ЗФР, що містять 0,1 95 БСА, зразки повторно інкубували протягом ще 30 хв при 4 "С з кон'югованим з ФІТЦ Е(аб')2-фрагментом козячого антилюдського Ід, Есу-фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма даскзоп ІттипокКезеагсі, каталожний номер 109-096-098). Після дворазового промивання зразків холодним ЗФР, що містять 0,1 96 БСА, зразки центрифугували, ресуспендували в ЗФР, що містить 0,1 95 БСА й аналізували за допомогою РГАС5 з використанням обладнання ГАС5 Сапіої! (програма ЕАС5
Оіма). Графіки одержували за допомогою програми СгарпРааРгізтвб (фіг. З5А-Г).
Результати свідчать про те, що ТОВ 362 і ТСВ 1481 мали крос-реактивність до мишиного
ЕОЇК1 ії до людського й мишиного БоІ22. Для ТОВ 6Е10 виявилося можливим виявити слабке зв'язування з людським ЕоЇК2. ТОВ 1605 і ТОВ 9С7 мали специфічність у відношенні людського
ЕОїЇКІ і не мали крос-реактивності до мишиного БоЇК1 або до людського й мишиного Ео!На2.
Приклад 51
Біохімічна характеризація методом поверхневого плазмонного резонансу варіантів 1605 зі зниженою афінністю й додаткових зв'язувальних агентів із проміжною афінністю у форматі біспецифічної молекули, що активує Т-клітину
Зв'язування варіантів анти-РоїКк1 1605 зі зниженою афінністю й додаткових зв'язувальних агентів із проміжною афінністю у форматі двовалентної біспецифічної молекули, що активує Т- клітину з рекомбінантним фолатним рецептором 1 людини, мавп циномолгус і мишей (усе у вигляді злиттів з Ес) оцінювали методом поверхневого плазмонного резонансу (РК). Усі 5ЗРЕА- експерименти проводили на обладнанні ВіАсоге Т200 при 25 "С з використанням НВЗ-ЕР як рухомий буфер (0,01М НЕРЕЗ, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта Р20, фірма
ВІАсоге, СЕ Неайпсаге). Молекули, що застосовувалися для оцінки афінності й авідності, описано в таблиці 45.
Таблиця 45: Позначення, опис дев'яти конструкцій, що застосовувалися в аналізі методом
ОРЕ, і посилання на відповідні креслення ши тик НИ
Позначення Опис креслення
Варіанти 1605 зі формат біспецифічної молекули, що активує Т- фіг. 1А зниженою афінністю клітину, "211 інвертована" (загальний легкий тТоВв1605 ланцюг) тов 1605 2495/593А тов 1605 2495/К5ЗА
ТОВ 1605 М/96У тов 1605 М/96У/052Е
Зв'язувальні агенти із формат біспецифічної молекули, що активує Т- фіг. 1Е проміжною афінністю клітину, "2-1, СтозетТар) тов збЕ2
ТОВ бЕТО0 тов 1481 тов 907
Однократні ін'єкції
Спочатку анти-РоЇїК1 ТОВ аналізували, здійснюючи однократні ін'єкції (таблиця 46), для характеризації їх крос-реактивності (до БоїЇК!ї людини, мишей і мавп циномолгус) і специфічності ("у відношенні людського БОоЇК1, людського БоЇК2, людського ЕоІКЗ). Здійснювали безпосереднє сполучення злиттів рекомбінантного біотинілованого мономерного Ес з фолатним рецептором 1 людини, мавп циномолгус і мишей (БоЇК1-Бс) або з людським фолатним рецептором 2 і З (БоїК2-Ес, ЕРоІНЗ-Ес) з За-чіпом згідно з інструкціями за стандартною комбінацією (фірма ВіАсоге, Фрейбург/Німеччина). Рівень іммобілізації становив приблизно 300- 400 КИ. ТОВ ін'єкували протягом 60 с у концентрації 500 нМ.
Таблиця 46: Крос-реактивність і специфічність до фолатного рецептора 1 7 біспецифічних агентів, що активують Т-клітину. ї- позначає наявність зв'язування, - позначає відсутність зв'язування, х позначає наявність слабкого зв'язування клону пиЕо!А1 сугої!В1 тиво!В1 пиго!Н2 пиЕГо!З товібо5 17777171 Її 1111-11-11
Ех - ИН НННЕЗНН НИЄ НОЯ НОЯ НОЯ
С495/593А Й Й
Ме: уд НЕННЯ НИМИ НОЯ НОЯ НЕННЯ
М96У/052Е Й Й товзвг2177777сю ЇЇ Її товвЕО 177777 Її Її левів 171 111113 ЇЇ 1 - тсв9с7. | жк | з-1 Ї - 1-11 -
Авідність до фолатного рецептора 1
Авідність взаємодії між анти-РоїК1 біспецифічними молекулами, що активують Т-клітину, й рекомбінантними фолатними рецепторами оцінювали відповідно до описаного нижче методу (таблицю 47).
Здійснювали безпосереднє сполучення злиттів рекомбінантного біотинілованого мономерного Ес з фолатним рецептором 1 людини, мавп циномолгус і мишей (БоЇК1-Ес) з за- чіпом згідно з інструкціями за стандартною комбінацією (фірма ВіІАсоге, Фрейбург, Німеччина).
Рівень іммобілізації відповідав приблизно 200-300 КИ. Анти-БоїК!1 дб або біспецифічні молекули, що активують Т-клітину, в діапазоні концентрацій від 11,1 до 900 нМ (для варіантів 1605 зі зниженою афінністю) або від 0,2 до 500 нМ (для додаткових зв'язувальних агентів із проміжною афінністю й З6Е2) пропускали при швидкості потоку 30 мкл/хв через проточні гнізда протягом 180 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 240 або 600 с. Поверхню чіпа регенерували після кожного циклу за допомогою дворазової ін'єкції по ЗО с 10 мМ гліцину-НСЇ, рН 1,5. Усі відмінності в коефіцієнті заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референо-комірці з іммобілізованим злиттям рекомбінантний біотиніллований мишиний рецептор 1І/2-Рс (неспоріднений злитий з Ес рецептор). Криві зв'язування, отримані в результаті двовалентного зв'язування ідо або біспецифічних молекул, що активують Т-клітину, апроксимували на основі моделі зв'язування за типом 1:11 Ленгмюра (навіть незважаючи на те, що в цьому випадку має місце зв'язування за типом 1:2) і підганяли до цієї моделі для одержання уявної величини Ко, що характеризує авідність двовалентного зв'язування. Уявні константи авідності, що характеризують взаємодії, одержували на основі констант швидкості, визначених у результаті припасування з використанням програми Віа
Емаїнайоп (фірма СЕ Неайсаге).
Таблиця 47: Двовалентне зв'язування (авідність, що характеризується уявною величиною
Ко) анти-РоЇїК1 біспецифічних молекул, що активують Т-клітину (ТСВ) з БоЇК! людини, мавп циномолгус і мишей тов збе осугоів! |1,97Е:О6І1ЛОЕ-02| бнмМ ( тов 1481
З. Афінність до фолатного рецептора 1
Афінність взаємодії між анти-РоЇК1 біспецифічними молекулами, що активують Т-клітину, й рекомбінантними фолатними рецепторами визначали відповідно до описаного нижче методу (таблиця 48).
Для вимірювання афінності здійснювали безпосередню комбінацію антилюдського Еар- специфічного антитіла (набір для захоплення Бар, фірма СЕ Неайвсаге) до досягнення рівня іммобілізації, що відповідає приблизно 10000 резонансних одиниць (КО), на СМ5-чіпі при рН 5,0 з використанням стандартного набору для амінного сполучення (фірма СЕ Неайсаге). Анти-
ЕОІКТ, біспецифічні молекули, що активують Т-клітину в концентрації 20 нМ захоплювали при швидкості потоку 10 мкл/хв протягом 40 с, у проточній референс-комірці захоплення не здійснювали. Через усі проточні гнізда пропускали серійні розведення (від 12,35 до 3000 нм злиття фолатного рецептора 1 людини, мавп циномолгус або мишей з Ес (фолатний рецептор 1-Ес) при швидкості потоку 30 мкл/хв протягом 240 с для реєстрації фази асоціації. Моніторинг фази дисоціації здійснювали протягом 300 с і для запуску заміняли розчин зразка на НВ5-ЕР.
Поверхню чіпа регенерували після кожного циклу, використовуючи дві ін'єкції по 60 с із використанням 10 мМ гліцину-НСІ, рН 2,1. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці 1. Константи афінності, що характеризують взаємодії, визначали на основі констант швидкості шляхом припасування до моделі зв'язування 1:11 Ленгмюра, використовуючи програму Віа ЄЕмаїчайоп (фірма СЕ
Неакрсаге). У випадку низькоафінної кінетики, коли фази асоціації й дисоціації проходили занадто швидко, щоб їх можна було підігнати до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра, застосовували модель для аналізу стаціонарного стану з використанням програми Віа
Емаїнайоп (фірма СЕ Неайпсаге). Аналіз стаціонарного стану дозволяв одержати величини Ко реакції зв'язування в стані рівноваги.
Таблиця 48: Одновалентне зв'язування (афінність) анти-РоїК1 біспецифічних молекул, що активують Т-клітину (ТОВ) з ЕоЇК1 людини, мавп циномолгус і мишей товівовое зов 1500 НМ налів стаціонарного стану опогоїВ! у | 777777 71400 нМ (аналіз стаціонарного стану) /товвовмевутвоє Гоуаві 1 веоо нм онале стацюнарного стану 7 опогоїВ! у | 777777 71400 нМ (аналіз стаціонарного стану) тов збгг осугоів! || 777777 | 1500 нМ (аналіз стаціонарного стану) совевто 0-5 - Ро але таці стан осугоів! || 7777777 | 1500 нМ (аналіз стаціонарного стану) тов 1481 осугоів! || 7777/1200 нМ (аналіз стаціонарного стану) совесї 009 ВА---ом іонарног сТау
І сугоів! | | 7 1400 нМ (аналіз стаціонарного стану)
Мутації, інтродуковані в зв'язувальні агенти 1605, знижували їх афінність до боЇїК1 людини й мавп циномолгус за даними оцінки методом поверхневого плазмонного резонансу. У порядку зниження афінності зв'язувальні агенти ранжувались у такий спосіб: 1605 МУТ (57нМ)» УМ/9бУ (нижче в 6, 5 рази)» 5495/593А (нижче в 14,5 раз)» У/96М/052Е (нижче в 24, 5 рази)» 495/К53А (нижче в 30 разів). Аналогічне ранжирування можна здійснювати й для величин авідності, однак кратність відмінностей у цьому випадку менше: 1605 УМТ (ЗнМ)» УМ9бУ, 495/593А, УМ96У/052Е (нижче в З рази)» 5495/К5ЗА (нижче в 13 раз).
Зв'язувальні агенти із проміжною афінністю ранжувались залежно від афінності в такий спосіб: 1605 (57нМ)»1481 (нижче в 8, 5 рази)» 9С7 (нижче в 15 раз) » 6Е10 (нижче в 21 раз)»36Б2 (нижче в 24, 5 рази). Однак такі відмінності не були виявлені при порівнянні результатів вимірювань авідності: 1481, 927, 6Е10 (Інм)» 1605 (Знм) » ЗбЕ2 (7нм).
Тов 1605 МУ/96У/052Е дозволяє вирішувати проблеми, характерні для попередніх кандидатів. Основою ТОВ 1605 УМ96У/052Е був зв'язувальний агент 1605 із загальним легким ланцюгом і ця молекула мала дві точкові мутації у важкого ланцюга в порівнянні з батьківським зв'язувальним агентом 1605. Мутація УУ9Є6М знижувала афінність зв'язувального агента до
ЕоїК! у порівнянні з батьківським зв'язувальним агентом, а мутація ЮО52Е видаляла сайт деамідування й також вносила вклад у зниження афінності. ТОВ 1605 М/96У/052Е зв'язувалася з БОЇК! людини й мавп циномолгус, але не з мишиним ЕоЇК1. Вона мала специфічність у відношенні РОЇК! і не зв'язувалася з рекомбінантним людським ЕБоЇК2 або людським Еої!К3.
Афінність (одновалентне зв'язування) 1605 УМО6М/052Е до людського БоЇК1 становила приблизно 1,4мкМ (в 24, 5 рази нижче, ніж афінність батьківського зв'язувального агента 1605), а авідність (двовалентне зв'язування) становила приблизно 10 нМ (в З рази нижче, ніж авідність батьківського зв'язувального агента 1605).
Приклад 52
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз клітин Нега, 5КОМ-3 і НТ-29, індукований анти-
ЕОІК!Т ТОВ із проміжною афінністю
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз, індукований ЕоЇК1-зв'язувальними агентами із проміжною афінністю (ТОВ 6Е10, ТОВ 1481 ї ТОВ 9С7), оцінювали на клітинах Неї а (високий рівень ЕоЇІК1), БКОУ-3 (середній рівень ЕоїІКт) і НТ-29 (низький рівень ЕоІК1). ТСВ 1605 і ТОВ 362 включали в якості еталонів. Людські РВМСОС застосовували як ефектори, і цитоліз оцінювали після інкубації протягом 24 год. і 48 год. у присутності біспецифічних антитіл. У цілому метод полягав у наступному. Клітини-мішені збирали з використанням трипсину/ЕДТА, промивали й висівали із щільністю 25000 клітин/лунку в плоскодонні 96-лункові планшети.
Клітинам давали прикріпитися протягом ночі. Мононуклеарні клітини периферичної крові
(РВМС) одержували шляхом центрифугування в градієнті густини Нізіорадие зі збагачених лімфоцитами препаратів (лейкоцитарні плівки), отриманих від здорових донорів. Свіжу кров розводили стерильним ЗФР і обережно нашаровували на градієнт Нізхіорадие (фірма 5ідта,
Не8г889). Після центрифугування (450 х 49, 30 хв, кімнатна температура) плазму, що знаходиться над інтерфазою. що містить РВМС, відкидали й РВМС переносили в нову фальконівську пробірку, яку потім заповнювали 50 мл ЗФР. Суміш центрифугували (400 х 9, 10 хв, кімнатна температура), супернатант відкидали й дебрис РВМС відмивали двічі стерильним ЗФР (стадії центрифугування при 350 х 9, 10 хв). Здійснювали автоматичний підрахунок отриманої популяції РВМС (обладнання МмісСеї|) і зберігали в середовищі КРМІ1640, що містить 10 95 ЕС5 і 1 96 І -аланіл-І -глутаміну (фірма Віоспгот, КО302) при 372С, 5 95 СО» в інкубаторі для клітин до подальшого використання (не більше 24 год.). Для аналізу цитолізу антитіло додавали в вказаних концентраціях (у діапазоні від 0,01 пМ до 10 нМ у трьох повторах). Додавали РВМС до клітин-мішеней у кінцевому співвідношенні Е:Т-10:1. Цитоліз клітин-мішеней оцінювали після інкубації протягом 24 год. і 48 год. при 37 "С, 5 95 СО» шляхом кількісної оцінки вивільнення ЛДГ у клітинні супернатанти апоптозними/некротичними клітинами (набір для виявлення ЛДГ, фірма
Коспе Арріїєй Зсіепсе, каталожний номер 11 644 793 001). Максимальний лізис клітин-мішеней (- 100 95) досягався при інкубації клітин-мішеней у присутності 1 95 Тритону Х-100. Мінімальний лізис (- 0 95) відповідав лізису при спільній інкубації клітин-мішеней з ефекторними клітинами без біспецифічних конструкцій.
Результати свідчать про те, що рівень лізису пухлини, індукований ЕоїЇК1-зв'язувальними агентами із проміжною афінністю (ТОВ бЕ10, ТОВ 1481 і ТОВ 9С7) знаходиться між рівнями, отриманими для ТОВ 1605, що має високу афінність, й ТОВ З6Е2, що має низьку афінність(фіг.
ЗбА-Е). Серед ЕоїІК1-зв'язувальних агентів, що мають проміжну афінність, ТОВ 14В1 індукувала найбільш сильний цитоліз після інкубації протягом 48 год. (фіг. З6Г-Е). Величини ЕсСово, розраховані за результатами аналізу цитолізу після інкубації протягом 24 год. і 48 год. за допомогою програми сгарпРааРгіх:тб, представлено в таблиці 49 і таблиці 50.
Таблиця 49: Величини ЕС5о (пМ), що характеризують опосередковуваний Т-клітинами цитоліз клітин НеГа, БКОМ-3 і НТ-29, індукований анти-РоїКк1 ТОВ із проміжною афінністю після інкубації протягом 24 год. зо 77. ЕСююрмМм " не визначали
Таблиця 50: Величини ЕС5о (пМ), що характеризують опосередковуваний Т-клітинами цитоліз клітин НеГа, БКОМ-3 і НТ-29, індукований анти-РоїКк1 ТОВ із проміжною афінністю після інкубації протягом 48 год. 77. ЕСююрмМм " не визначали
Приклад 53
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз клітин Неї а, 5КОМ-3 і НТ-29, індукований варіантами 1605 зі зниженою афінністю
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз, індукований варіантами 1605 зі зниженою афінністю (ТОВ 1605-25495/593А, ТОВ 1605-20495/К53А, ТОВ 1605 М/96МХ, ТОВ 1605
М96У/052Е), оцінювали на клітинах Неї а (високий рівень ЕоЇК1), 5КОМ-3 (середній рівень
ЕоІКТ) ї НТ-29 (низький рівень РоїКк1!). ТОВ 1605 і ТОВ З36Е2 включали як еталони. Аналіз здійснювали згідно з методом, описаним вище (приклад 52).
Результати свідчать про те, що рівень лізису пухлини, індукований варіантами 1605 зі зниженою афінністю (ТОВ 1605-с2495/593А, ТОВ 1605-2495/К53А, ТОВ 1605 М/96У, ТОВ 1605
М96У/052Е), знаходився між рівнями, отриманими для ТСВ 1605, що має високу афінність, й
ТОВ 36Б2, що має низьку афінність. Величини ЕСво, розраховані за результатами аналізу цитолізу після інкубації протягом 24 год. і 48 год. за допомогою програми СгарпРадРгіхтб, представлено в таблиці 51 і таблиці 52 (фіг. 37А-Е).
Таблиця 51: Величини ЕС5о (пМ), що характеризують опосередковуваний Т-клітинами цитоліз клітин НеГа, 5КОМ-3 ії НТ-29, що експресують ЕоЇК1!, індукований ТОВ 1605 і її варіантами зі зниженою афінністю після інкубації протягом 24 год. нин БЕ ОТ " не визначали
Таблиця 52: Величини ЕС5о (пМ), що характеризують опосередковуваний Т-клітинами цитоліз клітин НеГа, 5КОМ-3 ії НТ-29, що експресують ЕоЇК1!, індукований ТОВ 1605 і її варіантами зі зниженою афінністю після інкубації протягом 48 год. 11111111 ЕОМ.
Тов1605-6495/593А 0,9 | 95,9 | 993 товібо5уобУ/Ю52Е 0,9 | 93,0 | 399,4 " не визначали
Таким чином, як і описана вище анти-ОЇ 81 ТОВ З6Е2, ТОВ 1605 УМ96У/052Е розрізняє клітини з високим і низьким рівнем експресії, що є особливо важливим з погляду зниження токсичності, оскільки клітини деяких здорових неканцерогенних тканин характеризуються дуже низькими рівнями експресії РОЇК1 (менше, ніж приблизно 1000 копій на клітину). ІЗ цими даними узгоджуються результати, обговорені в наведеному нижче прикладі 54, які свідчать про те, що тов 1605 УУ96У/052Е індукує набагато більш низькі рівні опосередковуваного Т-клітинами цитолізу первинних клітин (фіг. ЗВА-Е) у порівнянні з батьківською ТСВ 1605. По суті, ТОВ 1605
М96У/052Е опосередковує ефективне знищення пухлинних тканин, що характеризуються високим або середнім рівнем експресії РОЇ К1, але не здорових тканин, що характеризуються низьким рівнем експресії. ТОВ 1605 УМ96У/052Е у двовалентному форматі "2441" містить БоїК1- зв'язувальні фрагменти, що мають відносно низьку афінність, але вона характеризується ефектом авідності, який дозволяє розрізняти клітини з високим і низьким рівнем експресії БоїК1.
Оскільки пухлинні клітини характеризуються високими або проміжними рівнями експресії РОЇК, то вказана ТСВ вибірково зв'язується з пухлинними клітинами, але не зі здоровими неканцерогенними клітинами, які характеризуються низькими рівнями експресії Роїк! або повною її відсутністю. Додатковою перевагою ТОВ 1605 М/96У/052Е у порівнянні з описаною вище анти-РОЇ К1 ТОВ зЗбгЕ2, є те, що вона специфічно зв'язується з ЕОЇК1, але не з БоЇК2 або
ЕоІКЗ, що додатково підвищує її безпеку при лікуванні іп мімо.
Крім описаних характеристик, що вище дають перевага, ТОВ 1605 УУ96У/052Е у двовалентному форматі "241 інвертована" має також перевагу, що полягає у тому, що для її одержання не потрібно застосовувати хімічне перехресне зшивання або інший заснований на гібридизації підхід. Це робить її придатною для приготування лікарського засобу для лікування пацієнтів, наприклад, пацієнтів, що мають ГоЇК1!-позитивні ракові пухлини. ТОВ 1605
М96У/052Е у двовалентному форматі "241 інвертована" можна одержувати з низьким вмістом агрегатів за допомогою стандартних заснованих застосуванні СНО процесів. Крім того, ТСВ 1605 УУ96хУ/052Е у двовалентному форматі 24-41 містить людські й гуманізовані послідовності,
тобто вона має перевагу в порівнянні з молекулами, у яких застосовують щурячі й мишині поліпептиди, що мають високу імуногенність при введенні людині. Крім того, ТОВ 1605
М96У/052Е у двовалентному форматі 2-1 сконструйована так, щоб елімінувати зв'язування з
ЕсСОоБК, і тому вона не викликає перехресного зшивання з Есок і реакцій на інфузію, що ще більш підвищує її безпека при введенні пацієнтам.
Описані вище результати демонструють, що завдяки своїй конфігурації "голова-до хвоста" тов 1605 У/96У/052Е у двовалентному форматі "241 інвертована" є високо ефективною молекулою, яка індукує повний цитоліз клітин-мішеней. Двовалентність підвищує її авідність і ефективність, але також забезпечує здатність розрізняти клітини з високим і низьким рівнем експресії. Її вибірковість відносно клітин з високим або середнім рівнем експресії, обумовлена її авідністю, приводить до зниження токсичності, що викликається опосередкованим Т-клітинами цитолізом здорових клітин, що характеризуються низькими рівнями експресії ЕоїЇК1.
Ще однією перевагою ТОВ З36Е2 у двовалентному форматі "2-1" і інших варіантів здійснення винаходу, представлених у даному описі, є те, що їх створення для клінічного застосування не вимагає використання сурогатних молекул, оскільки вони зв'язуються з БоЇїЇК! людини й мавп циномолгус. Представлені в даному описі молекули самі по собі розпізнають епітоп, відмінний від епітопу, що розпізнається раніше описаними антитілами до ЕоїКл, які не розпізнають ЕоїЇК1 обох видів (див. також фіг. 41).
Приклад 54
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз первинних клітин, індукований варіантами 1605 зі зниженою афінністю й ТОВ із проміжною афінністю до ЕоїЇК1
Опосередковуваний Т-клітинами цитоліз, індукований варіантами 1605 зі зниженою афінністю (ТОВ 1605-5495/593А, ТОВ 1605 УМ96У/О52Е) і БоЇК1-зв'язувальней молекулою ТОВ 1481 із проміжною афінністю, оцінювали на первинних клітинах (людські клітини кортикального ниркового епітелію (НКСЕріС) (фірма 5сіепсСеї! Кезеагсй ГІ арогайгіез; каталожний номер 4110) і людські клітини ретинального пігментного епітелію (НКРЕріС) (фірма зсієпСеїЇ Кезеагсп
І арогаїогіеє; каталожний номер 6540)). Клітини НТ-29 (низький рівень Роїк!) включали як контрольну клітинну лінію. ТОВ 1605 і ТОВ З36Е2 включали в якості еталонів, а ТСВ ОРА47 служила як незв'язувальний контроль.
Аналіз проводили згідно з методом, описаним у прикладі 52, у діапазоні концентрацій антитіл 0,1 пМ-100 нМ (у трьох повторах).
Коли як мішені використовують людські первинні клітини, то загальний лізис виявляється набагато менше внаслідок більш низького рівня експресії РОЇК1 на цих клітинах (фіг. ЗВА-Е). У випадку БГоЇК1-зв'язувальної молекули ТСВ 1605, що має високу афінність, виявилося можливим виявити опосередковуваний Т-клітинами лізис обох типів первинних клітин. Як раніше встановлено, коли як мішені використовують пухлинні лінії клітин, то рівень лізису, індукований ЕоЇК1-зв'язувальною молекулою ТОВ 14 ВІ1 із проміжною афінністю й варіантами 1605 зі зниженою афінністю (ТОВ 1605-5495/593А, ТОВ 1605 УМ96У/052Е), знаходиться між рівнями, індукованими ТОВ 1605 с високою афінністю й ТОВ З36бЕ2 с низькою афінністю.
Значимо знижений рівень лізису клітин, що характеризуються низькими рівнями експресії Роїк, узгоджується з низькою нецільовою активністю й, таким чином, слід очікувати, що варіанти 1605
Тов 1605-5495/593А і ТОВ 1605 УУ96У/052Е, , що мають знижену афінність, повинні добре переноситися іп мімо.
Приклад 55
Однодозове дослідження ФК конструкцій РОЇ К1-ТСВ на самках мишей лінії МОЄ
Самок мишей лінії МОБ/5Ппі-5сіалі -2Купиї! (МОСС) віком 6-7 тижнів при початку експерименту (вирощених на фірмі Тасопіс в Зоргі-віварії (в умовах, вільних від специфічних патогенів), Данія) утримували в умовах, вільних від специфічних патогенів, при добових циклах 12 год. світла/12 год. темряви згідно із відповідним посібником ((бу-БоЇає; Реїаза; Тіег5спОо). Протокол експериментального дослідження був розглянутий і схвалений місцевим урядовим органом (4НІ193/2014). Після доставки тварин витримували протягом 1 тижня для того, щоб вони могли звикнути до нових умов, і для обстеження. На регулярній основі здійснювали постійний моніторинг стану здоров'я.
Однодозове фармакокінетичне дослідження (5ОРК) проводили для оцінки експозиції конструкцій ОЇ К1-ТСВ (36Е2, 1605, 1605 С495/593А і 1605 М96У/052Е). Їх вводили МОС- мишам шляхом болюсного і.м-введення з розрахунку 0,5 мг/кг і брали зразки крові в певні моменти часу для оцінки фармакокінетичних характеристик. Зразки мишиної сироватки аналізували за допомогою ЕГІЗА. Поетапно додавали біотиніловану конструкцію а-пиИС03-СОВ (тАБ-І0-птАр-«СО3»»М-4.25.93-Ідс-ВІі), тестовані зразки, мічене дигоксигеніном а-пиЕс-антитіло (610) (тАБ-Н-ЕС. рап»М-Н1028Е9-ід9-дід) і ідентифікуюче антитіло до дигоксигеніну (РОЮ) в 96-
лунковий стрептавідиновий титраційний мікропланшет і інкубували після кожного етапу протягом 1 год. при кімнатній температурі. Планшет тричі промивали після кожної стадії для видалення незв'язаних субстанцій. На завершення візуалізували зв'язаний з пероксидазою комплекс шляхом додавання розчину субстрату АВТ5 для одержання пофарбованого продукту реакції. Інтенсивність фарбування продукту реакції, яку визначали фотометрично при 405 нм (довжина референс-хвилі 490 нм), пропорційна концентрації аналіту в зразку сироватки.
Калібрований діапазон стандартної кривої для конструкцій становив 0,078-5 нг/мл, при цьому нижня межа кількісної оцінки (00) дорівнював 1,5 нг/мл.
ЗОРК-дослідження виявило ІдсС-подібний ФК-профіль для конструкцій 1605, 1605
УМ96У/052Е і 1605 5495/593А (фіг. З39А-Б). Внаслідок цього для дослідження ефективності був вибраний графік, що передбачає проведення вимірювань один раз на тиждень (фіг. 40Б). Час напівжиття З6Е2 був менший, ніж час напівжиття інших клонів. З36Е2 виявився єдиної із чотирьох протестованих молекул, яка мала крос-реактивність до мишиного БОЇ КТ, що може пояснити менший час напівжиття цієї молекули, і який вказує на те, що має місце ТМОО (опосередкований мішенню розподіл лікарського засобу (Тагдеї Медіагед Огид рірозйіоп)).
Приклад 56
Ефективність іп мімо конструкцій РОЇ К1-ТСВ (1605, 1605 5495/593А і 1605 УМО6хУ/052Е) після переносу людських РВМС у несучих клітини Не а МОбС-мишей
Конструкції РОЇ К1-ТСВ тестували на МОС-мишах із трансплантованими шляхом 5.бс.-ін'єкції людськими клітинами раку шийки матки лінії Неа, що експресують РОЇ КІ, яким вводили
РВМО.
Клітини лінії Не а спочатку одержували з АТСС (ССІ 2) і після розмноження депонували у внутрішньому банку клітин фірми Коспе-діусай. Лінію пухлинних клітин культивували згідно зі стандартною процедурою в середовищі КРМІ, що містить 10 95 ЕС5 (фірма сірсо) при 37 "С у насиченій водяною парою атмосфері, що містить 5 95 СО». Для трансплантації використовували пасаж 13 з життєздатністю » 95 95. Вводили шляхом 5.с.-ін'єкції в правий бік тварин по 1х105 клітин/тварину в загальному об'ємі 100 мкл середовища для клітинної культури КРМІ (фірма сірсо). 60 самок мишей лінії МОС віком 6-7 тижнів при початку експерименту (вирощених на фірмі
Тасопіс, Данія) утримували в умовах, вільних від специфічних патогенів, при добових циклах 12 год. світла/12 год. темряви згідно із відповідним посібником (Су-боЇав; ЕеїЇаза; ТієтвспО).
Протокол експериментального дослідження був розглянутий і схвалений місцевим урядовим органом (2Н193/2014). Після доставки тварин витримували протягом 1 тижня для того, щоб вони могли звикнути до нових умов, і для обстеження. На регулярній основі здійснювали постійний моніторинг стану здоров'я.
Відповідно до протоколу (фіг. 40Б), мишам вводили шляхом 5.с.-ін'єкції в день досліду 0 по 1х106 клітин лінії Не а. У день досліду 30, коли розмір пухлини досягав приблизно 150 мму3, виділяли людські РВМОС здорового донора за допомогою методу із застосуванням Фікол і вводили 10х105 клітин шляхом і.р.-ін'єкції мишам, що мають пухлину. Через два дні (день 32) мишей рандомізували й рівномірно розділяли на шість груп обробки (п-10), після чого вводили шляхом і.м.ін'єкції 1605 (0,5 мг/кг), або 1605 5495/5934А (2,5 або 0,5 мг/кг), або 1605 УМУ6У/052ЄЕ (2,5 або 0,5 мг/кг). Ін'єкції у всіх групах обробки здійснювали один раз на тиждень у цілому протягом З тижнів. Мишам вводили шляхом і.м.-ін'єкції відповідний розчин в об'ємі 200 мкл.
Мишам у групі, оброблюваної наповнювачем, ін'єкували ЗФР. Для одержання потрібної кількості
ТСВ на 200 мкл маточні розчини при необхідності розводили ЗФР. Ріст пухлини оцінювали один раз у тиждень шляхом вимірювання за допомогою кронциркуля (фіг. 408В-Д) і об'єм пухлини розраховували по наступній формулі:
Ту: (МУ2/2)), х І (МУ: ширина, І: довжина)
Введення БОЇ К1-ТСВ шляхом ін'єкції один раз на тиждень приводило до значимого регресу пухлини (фіг. 408-Д). Ефективність 1605 (0,5 мг/кг) ії 1605 М/96У/052Е1605 (0,5 мг/кг) виявилася порівнянною, у той час як ефективність 1605 (3495/593А (0,5 мг/кг) була небагато менше. Більш високі дози, а саме 2,5 мг/кг, 1605 УУ96У/052Е1605 і 1605 0495/593А не приводили до підвищення ефективності в порівнянні з дозами 0,5 мг/кг. Для одержання Фк-даних мишей умертвляли в день досліду 52, пухлини вилучали, зважували й готували суспензії одиничних клітин за допомогою ферментативного розщеплення з використанням колагенази У, диспази І! і
Днкази для наступного РГАС5-аналізу. Експлантовані пухлини у всіх групах обробки в день закінчення досліду мали значиме меншу масу в порівнянні з масою пухлин у контрольній групі, обробленої наповнювачем (фіг. 40Е). Суспензії одиничних клітин пухлин фарбували для виявлення пиСО45 і пиСОЗз ї САРІ для виключення загиблих клітин і аналізували на фірмі ВО (610) Еопезза. ГАС5-аналіз виявив статистично більші кількості інфільтрованих СОЗ-позитивних людських Т-клітин у пухлинній тканині після обробки 1605, а також 1605 М/О6У/052Е1605, у порівнянні з пухлинами в контрольній групі, обробленої наповнювачем (фіг. 408).
Приклад 57
Дослідження токсичності на мавпах циномолгус
Проводили дослідження фармакокінетичних характеристик (ФК), фармакодинамічних характеристик (ФД) і переносимості для вивчення переносимості, впливів на ФК і ФД однократної дози, що вводиться внутрішньовенно, варіантів ТОВ 1605 зі зниженою афінністю (наприклад, ТОВ 1605-05495/593А, ТОВ 1605 УМ96У/052Е) на мавпах циномолгусє. У цьому досліді наївним мавпам циномолгус (1 самець і 1 самка мавпи/групу), вводили шляхом однократної внутрішньовенної ін'єкції дозу варіантів ТОВ 1605 зі зниженою афінністю, включаючи ТСВ 1605 УУМО6М/О052Е, згідно із протоколом підвищення доз. Прикладами рівнів доз були 0,003, 0,03 ї 0,09 мг/кг. Оцінювали стандартні параметри токсичності (клінічні ознаки, вага тіла, гематологічні й клінічні хімічні показники) і кінетику кількості й статусу активації Т-клітин у крові й кінетику вивільнення цитокінів. Брали також зразки крові для Фк-аналізу протягом періоду, що становив 28 днів, для аналізів варіантів ТОВ 1605 зі зниженою афінністю, включаючи ТСВ 1605 УМО6У/О52Е, і антитіл до лікарського засобу.
Амінокислотні послідовності для представлених як приклад варіантів здійснення винаходу 1) го!ІВ-зв'язувальні агенти, придатні для застосування у форматі із загальним легким ланцюгом, варіабельний важкий ланцюг
МО: 16АЗ МОЇ МО5БИАЕУККРОІАБУКУЗСКАЗИаМТеЕТЗУУМНУУВОАРОССІ ЕМ МС 1
МРєРІССаБГТЗУАОКЕОСАМТМТАОТЗТЗТМУМЕЇІ 551 А5ЕОТАУМУСАВМУМА есМУТРЕОУМСОСТІ МТУ 1803 (ЮМОЇ МО5аАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИаМТеЕТЗУУМНУУВОАРИОаСИІ ЕМ МС 2
МРєРІССаБТЗУАОКЕОСАМТМТАОТЗТЗТМУМЕЇІ 551 АЗЕОТАУУУСАВНМУУТИ аз5АєОУМмаОоаТті МТУ 15Нн7 (ЮМОГ МО5БОАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИаМТеЕТЗУУМНУМУУВОАРОССІ ЕМ МС З
МРєРІССаБІТЗУАОКЕОСАМТМТАОТЗТЗТМУМЕЇІ 55ІАЗЕОТАМУУСАВМУМІ ГЕ зІБЕОУмасатімМтУз 1586 (ЮМОЇ МО5аАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИаМТеЕТЗУУМНУУВОАРИаСИІ ЕМ МС 4
МРєРІССаБТЗУАОКЕеОСАМТМТАОТЗТЗТМУМЕЇ 551 А5ЕОТАУМУСАВМУ МІСІЇ
УРЕОУМСОСТІ МТУ55 2101 (ЮМОГ МО5ОАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИаМТЕТЗУУМНУМУУВОАРООССІ ЕМ МС 5
МРєРІССаБТЗУАОКЕОСАМТМТАОТЗТЗТМУМЕЇ 551 А5ЕОТАУУУСАВМУ УМ сУ5РЕрЮОУМасОаТті УТУЗ5 1612 (ІОМОЇ МОБ АЕУККРОАБУКУЗСКАЗИаМТЕТ5МУМНУМУУВОАРОССІ ЕМ МС
МРєРІЗСЧасаБГТЗУАОКЕОСАМТМТАОТЗТЗТМУМЕЇ 551 АЗЕОТАМУМУСАВМЕТМІ.
АУРЕОУМмасОоаТті ТУ 15А1 (ЮМОЇ МО5БОАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИаМТеЕТЗУУМНУМУУВОАРОССІ ЕМ МС 7
МРєРІСОСИаБГТЗУАОКЕеОСАМТМТАОТЗТЗТМУМЕЇІ 55І А5ЕОТАУМУСАВМУ МІС
УМТЕрУмаості ТУ
В ошютю 333331
СОВ1
Ніс ННЯ МОЯ сова2 сОовЗ 19Е5 ЮМОЇ МО5БОАЕУККРОІАБУКУЗСКАЗИаМТеЕТЗУУМНУУВОАРОССІ ЕМ МС 11
МРєРІСсСавГТЗУАОКЕОСАМТМТАОТЗТЗТМУМЕЇІ 551 А5ЕОТАУУУСАНИаЕМ В витЗЕрмусоатімтУзз
ВЕ пов 33331
СОВ1
КО Ні я НБН сова2 сОовЗ
МО: 19А4 (МОЇ МОБОАЕУМККРОАБУКУЗСКАБОаМТЕТ5МУМНУУВОАРИОаОССІ ЕМ МО 13
МРОЬСОавтТуУАОКЕОсСАМТМТАОТ5Т5ТМУМЕЇ 551 АЗЕОТАУУУСАНО СУМІ
ВЖМЕНЕОУМСОСТтТІ МТУ
Ст ВН МБ
Сов пере 000001 сОова2
СсОовЗ 1605 (ІЕМОЇ МЕССІ УКРОСБІ ВІ БСААБИЕЄЕТЕЗ5МАМУМОУМУУВОАРОКОІ ЕМ МОВІ 15 кКОКТраатТТОУААРУКОВЕТІЗАВОБКМТІ МІ ОММ5ІКТЕОТАММУСТТРМУЕ
УзУУрВУма,осатІУТУЗ5
Сов сОова2
СсОовЗ 15Е12 І|(ЕМОЇ МЕЗО ССІ УКРОСБІ ВІ ЗХСААБОЕТЕЗМАМУМОМУУВОАРОКОІ ЕМ МОВІ. 19 кокКТраатТОУААРУКОаВЕТІЗАООБКМТІ МІ ОММ5ІКТЕОТАММУСТТРМУЕ
УзУєрума,адатіУтУзо 15Е12 ІМАУ М5 16 сов 4 15Е12 ІВІКАКТОВСТТОМААРУКО 17 сов 2 15Е12 РМ ЕМ 5 У 20 сов
З
21А5 |ЕМОЇ МЕБОССІ УКРОСБІ ВІ ЗХСААБОЕТЕЗМАМУМО5УМУУВОАРОКОЇ ЕММОВІ| 021 кКОКТраатТТОУААРУКОВЕТІЗАВОБКМТІ МІ ОММ5ІКТЕОТАММУСТТРМУЕ
МАМ ЕрУМмИасОаТтІУТУЗ
Сов сОова2
СсОовЗ 2128 ІЕМОЇ МЕССІ УКРОСБІ ВІ ЗХСААБОЕТЕЗМАМУМОУМУМУВОАРОКОЇ ЕММОВІ|Ї 023 кКОКТраатТТОУААРУКОВЕТІЗАВОБКМТІ МІ ОММ5ІКТЕОТАММУСТТРМУЕ
МАУЕрУМмаОсТтІ ТУ
Сов сОова2
СсОовЗ 19Н3 (ЮМОЇ МОБОАДЕУМККРОАБУКУЗСКАБОаМТЕТ5МУМНУУВОАРИОаОССІ ЕМ МО 25
МРОЬСОавтТуУАОКкЕОсАМТМТАОТО5Т5ТМУМЕЇІ 551 АЗЕОТАУУУСАНТОМУ5 вмсУМмоУУсОостІ МтУ55 де аю 3333301
Сов поря 00011 сОова2
СсОовЗ
МО: 2026 (ЮМОЇ МО5БОАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИаМТЕТЗУУМНУУВОАРООСИІ ЕМ МС 27
МРєРІССаБ'ТЗУАОКЕеОСАМТМТАОТЗТЗТМУМЕЇІ 551 А5ЕОТАУУУСАВИТємв
УУнЕрумуаоатіМтУз5
БЕ юю 33333331
СОВ1 сю 1 сова2 сОовЗ 20н7 (ЮМОГ МО5аАЕУККРИАЗУКУЗСКАЗамМТЕ ТЗ УУМНУУВОАРООССІ ЕМ МС 29
МРєРІССаБ'ТЗУАОКЕОСАМТМТАОТЗТЗТМУМЕЇІ 55І А5ЕОТАУМУСАвУамму вмаеауУмоумасоаті туз сін ШО
СОВ1 рт 7711 сова2 сОовЗ 2) СО3-зв'язувальний агент, загальний легкий ланцюг (СІ С)
МО:
СОЗ-зв'язувальний ОАМУТОЕРБІ ТУ5РОСТУТІ ТСа5ЗЗІСАМТТЗММАМУУМОЕ| 31 агент, загальний легкий КРООАЕВа Іст МкКВвВАРСТРАВЕБИаБІі І С КААЇ ТІ 5аА ланцюг (МІ. ОРЕОЕАЕММСАЇ М/УЗМІ МУУгсаатТкКІітТМІ.
СОЗ-зв'язувальний а5ЗТаАМТТЗМУАМ 32 агент, загальний легкий ланцюг СОВІ1
СОЗ-зв'язувальний СТМКААР З3 агент, загальний легкий ланцюг СОВ2
СОЗ-зв'язувальний АГМУУЗМІ ММ 34 агент, загальний легкий ланцюг СОВЗ
СОЗ-зв'язувальний ОАМУТОЕРБІ ТУ5РОСТУТІ ТСа5ЗЗІСАМТТЗММАМУУМОЕ| 35 агент, загальний легкий КРООАЕВа Іст МкКВвВАРСТРАВЕБИабІі І С КААЇ ТІ БаА ланцюг (МІ СІ) ОРЕОЕАЕМУСАЇ М/УЗМІ УМУРасСИткІ ТМ аЧ(ОРКААРБЗМТІ.
ЕРРЗЗЕЕГ ОАМКАТІ МСІПІЗОЕМРЕІАМТМАМУКАОЗЗРУКАС
МЕТТТРОЬКОЗММКМУААБЗЗМІ 5І ТРЕОСМУКЗНАЗУЗСОМТНЕ
СЗІМЕКТМАРТЕС5 3) СОЗ3-зв'язувальний агент, важкий ланцюг
Мо
СОЗ-зв'язувальний ЕМО ГЕЗСаСОІ МОРОСБІ ВІ ЗСААЗаєТЕЗТМАММУМ УВО 36 агент, варіабельний АРОКаГЕМУ5ЗВІВНЗКУМММАТУУАрзуУкКкаквеЕтІЗнрорБкм важкий ланцюг (МН) ТЕМ'ОММ5І ВАЕОТАУУУє У НЕ МЕа МУ ЗУ Ам, ат МТУЗ5
СОЗ-зв'язувальний ТУМАММ 37 агент, важкий ланцюг
УнН) СОВ1
СОЗ-зв'язувальний ВІВЗКУММУАТУМАрЗУКОИ 38 агент, важкий ланцюг ун) сов2
Мо агент, важкий ланцюг
Ун) СсОоВвЗ агент, повнорозмірний І(АРОКаї ЕМ УЗВІВЗКУМММАТУМАОоБУКО ВЕТІЗАВОБКМ важкий ланцюг ТЕМ 'ОММ5І ВАЕОТАУУ УС У А НЕО МЕаМЗУУБУУЕАдУМ а, (УНСНІ) СТІ МТУ55АЗТКОаРБЗМЕРІ АРІЗКЗТЗОСТААГ ас МкКомМЕ
РЕРУТУБУМУМЗаИаАЇ Т5СУНТЕРАМІ О5БИЇ МІ 55УМТУРБ
ЗО атТОгМІСМУМНКРОМТКМОККМЕРКЗО
СОЗ-зв'язувальний АЗТКаРБОЗУЕРІГ АРЗЗКЗТЗасСТААГаСІ МКОУЕРЕРУТУЗ 84
БИ вва ділянка важкого МІСМУМНКРОЬМТКМОККМЕРКЗС ланцюга, СНІ 4) ЕБоІВ-зв'язувальні агенти, які можна застосовувати для Сто55їар-формату
МО:
ГЕУМасСПРІГЄТАММАОКЕеОСАВМТІТАОКЗТЗТАММЕЇ 55І АБЕО
ТАМУУСАВАМЕУВАМУЗЕОУМУСаОСсТ ТУТ
ГИІМВАБЗЗІЕЗаУРЗАЕЗОаБИаЗОТЕНЕТІ ТІЗ5І ОРОВЕАТУУСООУ
Т5ЗРРРТРСОСТКМЕїК агЕУМапМмРєзасвТзУАОКЕОос,АУМТМТНОТЗТЗТУМУМЕЇІ 551 85
ЕОТАМУУСАВЗЕЕТаЕНІ ОМУСОСТІ ТУ
Збгг МН осСоВІ І(ІЗМУМНЇ 71111111 18
Збг2г МН Сова ПМРОСОБЗТЗУАОКРОЯ /:777111111111Ї1 9
ВГ гІМадВЗВАТСОІРОВЕЗаЗавзато ТІВ ЕРЕОГАУУУСОО
УТМЕНУУТРСОС ТК ЕК агЕУМапМРєЕЗзасРТІЗУАОКЕОоС,САУТМТАОТЗТЗТУМУМЕЇІ 551 85
ЕОТАУУУСАНСОВЕАМІ ЮОУУусОос,ТтІ МТУ 9рії мн осові! ІЗМУМНО 11111111 18 сОо5РОПІМ аЗМВАЗаУєРовпЕЗзазавзаторЕТтІКІЗАМЕАЕО УС МУ
УУСМОАБІММАТЕаОСТКМЕК 9рії Мі сова Дама 77777771 бо
М955 сОо5РОПІМ аЗМВАЗаУєРОовЕЗаЗавзаторЕТтІКІЗАМЕАЕО УМО М
УУСМОАЗІМЗАТРОаОаТкКМЕїК
МО: ме955 СОоВЗ
МО5О СОРОМ 5МАВАБаУРОВЕЗаБОа5аторЕТІ КІЗАМЕАЕО МО М
УУСМОАБІМОВТЕСОСТКМЕК м95Оо СсОоВвЗ
Т97А СОРОМ 5МАВАБаУРОВЕЗаБОа5аторЕТІ КІЗАМЕАЕО МО М
УУСМОАБІММАВАРСОСТКМЕК
Т97А 9011 М РІММТО5РІ БІ РУТРОЕРАБІЗБСН5ЗБОБІІ НОМОУММІ ОМ/ МІ ОКР
УУСМОАБІММА!АМЕСОС ТКМЕК
СЕУ ііі НН НЕ
Тт97М СОоВЗ
СГЕУМОапМРІаС5ТЗУАОКЕОСАУТМТАОТ5Т5ТУУМЕЇІ 551 85
ЕОТАУУУСАНЗМІЮМОУМСОСТІ МТУ55 5ре мносовіІ І(БМУМНСС////////77711171171111111111111111111111111111111117118 5ре Мн сова ф(МРЗСОЗТЗ5УАОКРОЯСЇ С/://:///////7/є/є/:/:/ 6 ./ ЇЇ. 9
В ГІМОАБЗВАТОІРОВЕЗаБОаБОТОЕТІ ТІВ ЕРЕОЕГАУУМСОО
ВОМУ ЗРТРСОСТКМ ЕК
СГЕУМОапМРІаС5ТЗУАОКЕОСАУТМТАОТ5Т5ТУУМЕЇІ 551 85
ЕОТАУУУСсАНОЗУМОМОУМСсОСсСТтІ ТУ б6вб МНносСоВІ І(БМУМНСС////////777111111111111111111111111111111111111111171ї18 66 Мн оСоВв2 (МРОСОБТЗУАОКРОЯСЇ С/:///: СС: (7 / | 9
В ГІМОАБЗВАТОІРОВЕЗаБОаБОТОЕТІ ТІВ ЕРЕОЕГАУУМСОО
ВІМЗРТРС,СОСТКМЕїК
ГЕ УБАІЗОа5СаСБТУМАрЗУКаВЕТІЗВНОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕ
ОТАМУУСАКОЗЗУМЕММАЕрУМаОстІ УТУ55 144 Мн СоВ2 І|ДІОБОСЗТУУАЮЗУКаИЇЛЛ/: СОС: 7777777 во
В ЛГІМОАБЗВАТОІРОВЕЗаБОаБОаТОБТІ ТІВ ЕРЕОЕАУМУСОО
РТБЗБЗРІТРа ОСТ КМЕїК
5) СО3-зв'язувальні агенти, які можна застосовувати для сго55тар-формату
МО
СОЗ-зв'язувальний агент ЕМО! ГЕЗОСИІЇ МОРОЗІ ВІ ЗСААБЗаєТЕЗТМАММУУМ 36 важкий ланцюг (МН) ВОАРОКагЕМУМУЗВІВНЗКУМММАТтУУАрЗУКОа ВЕТІЗНО оБКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАУУхсУвнамеЕамемм ЗМУ г дума,сатімтУз5 важкий ланцюг (МН) СОВ1 важкий ланцюг (МН) СОН2 важкий ланцюг (МН) СОВЗ
СОЗ-зв'язувальний агент |(ФАММТОЕРБОЗІ ТМ5РОСТМІІ Та ИаАМТТЗММАММ/ 31 легкий ланцюг (МІ) МОЕКРООАЕєЕНСОСІ пас, ТМКААРСТРАВЕЗИОВІ І СИ,КАА
ГТ. ЗаАОРЕОЕАЕУУСАЇ МУМЗМІ МУ гРСсасатТКкітТМІ. легкий ланцюг СОК1 легкий ланцюг СОК2 легкий ланцюг СОКЗ
РЕТА12940: схрещений(ФАММТтОЕРБІ ТМ5БРОСТМТ ТСса5ЗТаАМТТЗММУАММ загальний легкий ланцюг мМОЕКРИаОАЕгЕВаИТг іа ТМкААРИТРАВЕЗОБІ ЇЇ СИКАА
СОЗ-зв'язувального агента! ТІ ЗСАОРЕОЕАЕМУМСАІ М УЗМІ МуУРаасаТКІ МІ 55 (МІ СНІ) АЗТКаРБЗУЕРІ АРЗБКОЗТЗасТАА ас МКОМЕРЕРУТ
УБМУМЗаАІТ5аМНТЕРАМІ О5ЗИІ М5І 55ММТУРБЗББІ. атОоТМмІСМУМНКРОМТКМОККМУЕРКЗС схрещений важкий ланцюг МОГ ЕЗСССИІ МОРОЗІ ВІ ЗСААБаЕТЕЗТМАММУУ М 87
СОЗ-зв'язувального агентаїПНОАРОКаїГ ЕМ УЗВІВНЗКУМММАТтУУАрБУКОа ВЕТІЗНО (УНСО); например, вІОЗКМТІ М ОММЗІ ВАЕОТАУХУуСУВ НЕ МЕа МОУ УМ росОоМм1057 АУМаОСаТтТІ УТУ55АВМААРЗУРІЕРРБЗОЕОЇ КЗатТАБУ
МСГ СММЕМРВЕАКМОУКМ ОМА О5аМЗОЕЗМТЕООЗК
О5ТУ5І55ТІТІЗКАЮМЕКНКУМАСЕМТНОІ 55РУТК
ЗЕМАСаЕС
Сбор3-СНІ АЗТКаРБЗМУЕРІ АРЗБКЗТЗасСТААГ аСІ МКОУМЕРЕРМУТ 85
УБМУМЗаАІТ5аМНТЕРАМІ О5ЗИІ М5І 55ММТУРБЗББІ. атОТМмІСМУМНКРОМТКМОККМУЕРКЗС бО03-Скапа МААРБЗУРІЕРРЗОЕОЇ КБаТАЗУМСІ І ММЕМРАЕАКМО 88
МКМОМАГОБаМЗОЕЗМТЕООЗКОЗТУ5І ЗІ ТІ ЗКА
ОМЕКНКУМУАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМНИаЕС
6) Приклади амінокислотних послідовностей біспецифічних антитіл до СОЗ-ЕРоЇАВ в форматі "241 інвертована, Сто55тар"
ІО МО:
МНеОНІ(90111 УНСЦСОЗІ Ес("вис- | ОМОЇ МОБЕАЕМККРЕИАБУКУЗСКАБИаУТЕТУУМНІ 094 туп» МУВОАРОСИЇ ЕУМСПМРЗаСсРТЗМАОКеОСВМУТ РаГАГА МТРеОТ5ОТЗТУУМЕЇ 551 ВБЕОТАМУУСАВИарЕАМІ роСОМ1057 рУмсОстІ МГМ55АЗТКОаРЗМУЕРІ АРЗЗКЗТЗОСИТ
ААЇ аСІ МКОМЕРЕРУТУБВУУМЗИАІ Та МНТЕРАМІ.
ОББИЇ У5І 55ММГУРБЗЗІаТОГМІСМУМНКРЗМТК
МОоккМЕРКЗСВОСОСВвбаЗЦИ,СИЗЕМО ЕВЗОСИ МО
РОаСБІ ВІ ЗСААЗаЄТЕЗТМАММУМУУВОАРИаКаї ЕМ
М5ВІВЗЕКУМММАТУМАрЗУКОаВЕТІЗАВОЗКМТІ МІ.
ОММ5І ВАЕОТАУУУСУВНОИамМЕеамБУмМУгАУМа
ОСТІ МУТУ55АЗМААРЗУРІЕРРЗОЕОЇ КБИатАБУМО
ГЕММЕМРАЕАКМОМ КМОМА! ОБИМЗОЕЗМТЕОО5
КОБТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМУТНОСІ 55Р
МТК5ЕМАСЕСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСОИРБУНІ ЕРР
КРКОТІ МІЗАТРЕМУТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕМУ ММ О
СМУМЕМНМАКТКРАЕЕЄОУМЗТ УВУ ТМ НОМУ М
СКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОММТІ
РРСОВОЕТКМОМУ5БІ УСІ УКаЕМРЗОІАМЕМЕЗМОО
РЕММУКТТРРМІ ОБравзЕРІ ЗК ТУИОКЗ!УООбСМ
МЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУ ТОКБІ БІ Рак 9011 РсУ("впадина") РОГАГА НУ | ОМОЇ МОБЧАЕУККРИИАБУКУЗСКАБИаУТЕТЗУУМНІ 095
ВЕ МУВОАРОСИЇ ЕУМСПМРЗаСсРТЗМАОКеОСВМУТ
МТРеОТ5ОТЗТУУМЕЇ 551 ВБЕОТАМУУСАВИарЕАМІ рУмсОстІ МГМ55АЗТКОаРЗМУЕРІ АРЗЗКЗТЗОСИТ
ААЇ аСІ МКОМЕРЕРУТУБВУУМЗИАІ Та МНТЕРАМІ.
ОБОЇ У5І 55ММГУРБЗЗІЯТОГМІСМММНКРЗМТК
МОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБЗУРБІ ЕРР
КРКОТІ МІЗАТРЕМУТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕМУ ММ О
СМУМЕМНМАКТКРАЕЕЄОУМЗТ УВУ ТМ НОМУ М
СКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОМСТІ.
РРЗОВОЕГТКМОМ5І БСАУКагУРЗОІАМЕМЕЗМОИО
РЕММУКТТРРМІ ОБравзЕН УЗКІ ТУОКЗАаМмООСМ
МЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУ ТОКБІ БІ Рак 901116 РІММТО5РІ 5І РУТРІЕРАБІЗСНЗЗОБІ І НОМИа УМ росоОмМ1063 М ОМУМ ОКРООБРОГ Мі аЗМА!ААБамМРОВЕЗаБа
ЗатоОРТКІЗВМЕАЕОМаУМУСМОАБВІММАТЕаОС
ТКМЕІКАТМААРБЗМУРІЕРРБЗОЕОЇІ КБИаТАБМУМСІ І ММ
ЕМРАВЕАКМОМКМОМАГОБаИмМЗОЕЗМТЕООБКОЗТ
У5І З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМУТНОСІ 55Р ТК
ЕМАСЕС
МІ СНІСОЗІ ОАММУМТОЕРБІ ТИБРОС,ТМТІ ТСИаЗТОаАМТТЗММА рЕТН1Т2940 МУМОЕКРООАЕВИа Іа ТМКкААРИТРАВЕЗОаБ5І І С
СКААГІ ТІ ЗАОРЕОЕАЕМУСАЇ М УЗМІЛ М УгБасСаИТт
КІГ ТМ ЗБАБТКОаРОЗМЕРІ АРОЗКЗТЗИасСТАА СС М
КОМЕРЕРУТУБУУМЗИаАаІ Т5СУНТЕРАМІ О55П11175
І 554/.М ТУРБО аТОТМІСМУМНКРУМТКМОККМЕР ко
СНІ АБТКОаРБЗМУЕРІ АРЗЗКЗТЗИаСТААГ ОСІ МКОМЕРЕРІ 307
МТУБМУМЗаИаАІ Т5аУНТЕРАМІ О5501І 51 55УМТУ
РБЗБЗІ ЕТО МІСМУМНКРОМТКМОККМЕРКЗОСО
ІО МО:
МНеНІ|ІЗ6Е2І МНСЦІСОЗІ Ре(вист | ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАБОМУТЕТЗУММНІ 308 уп"). РОГАГА УМУВОАРООСІЕУМОПМРЗСИТЗУАОКРОСАМТ роОмМ1056 МІТНОТ5ТЗТУММЕ 55І. А5ЕОТАМУУСАНЗЕЕТОЕ
НГОУМ/ ВОСТІ МТУ5ЗАЗТКОРБМЕРІ АРОК
СТААІ СС УКОМЕРЕРУТУБМУМЗСАТ5ОМУНТЕРА
МГ ОБОЇ БІ БУМ ТМРБЗББІ ОТО МІСМУМНКРБМ
ТткКМоОккУЕРКЗСОСОСсОЗОСОСЗЕМО І ЕЗОСОЇ.
МОРОСБІ ВІ ЗСААБИРТЕЗТУАММУУНОАРИКОЇ.
ЕМУ5БВІВЗКУМММАТУМАОБУКОаАЕТІЗАОЗКМТІ.
МУГОММБІВАЕОТАУУУСУАНОаМЕОМЗУМ БУ ЕАМУМ/
СОСТІМТУ5ЗАБМААРБЗМУРІЕРРБОЕОЇ КО ТАБМУМ
СПЛУМЕМРАЕАКМОМУКМОМАГОБОМЗОЕЗУМТЕОЮ
ЗКОБТУБІ ЗТ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55
РУТК5ЕМАСЕСОКТНТОРРСОРАРЕААССОРБЗУНІ ЕР
РКРКОТІМІБАТРЕМТОСУУМОУ5БНЕОРЕМКЕММ/ УМ
РОМЕМНМАКТКРАЕЄОУМОТУАММБМІ ТМ НОВУ.
МОКЕМКОСКУЗМКАЇІ САРІЕКТІЗКАКООРААЕРОММУТ
ГРРОВОЄСТКМОМБІ М/С УКОРУРЗОІАМЕМ/ЕЗМО
ОРЕММУКТТРРМОБОСОЗЕРІ УЗКІТУрКЗАМООС
ММЕЗСВУМНЕАІНМНУТОКБІ БІ РОК
Збг2-Ес("впадиана") РОГАГА ОМОГ МОБИАЕМККРОАЗУКУЗСКАЗОМТЕТОМУМН 309 роОмМ1о50 УМУВОАРООСІЕУМОПМРЗСИТЗУАОКРОСАМТ
МІТНОТ5ТЗТУММЕ 55І. А5ЕОТАМУУСАНЗЕЕТОЕ
НГОУМ/ ВОСТІ МТУ5ЗАЗТКОРБМЕРІ АРОК
СТААІ СС УКОМЕРЕРУТУБМУМЗСАТ5ОМУНТЕРА
МГ ОБОЇ БІ 55УМТМРБЗББІ ОТО МІСМММНКРБМ
ТКМОККУМЕРКЗСОКТНТОРРОРАРЕААСОРБЗУРІ ГЕ
РРКРКОТ.МІЗАТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕММУ У
МООМЕУНМАКТКРАЕЕЄОУМЗТУАМУМСТМ НОМ
ГМаКЕУКСКУЗМКА САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМО
ТГРРЗАОЄ ТКМОМБІ БСАМКОЕУРБОІАМЕМЕБМ
СОРЕММУКТТРРМ'ОБОСБЗЕРІ КІ ТМОКЗАМОЮ
СММЕЗСЗУММНЕАСНМНУТОКБІ БІ РОК
ЗбЕ21с ЕІМГТО5РОТІ БІ ЗРОЕВАТІ БСНАБОБУБООМІАМУ!| 310 росОомМ1о62 УООКРООАРАЇ ПУСАБЗНААТОІРОНЕЗОЗОБОТО
РІ ТІБЗАГЕРЕОРАУМУУСООМ ТМЕНУУ ТРОС ТКМЕ
ІКАТМААРЗУРІРРРБОЕОЇ КО ТАБММСГ І ММЕМРА
ЕАКМОМ/КМОМАГОБОМЗОЕЗМТЕООБКОБТУБІ 5
ЗПТІЗКАОМЕКНКУУАСЕМУТНХаІ 55РУТКОЕМАС
ЕС
СОоЗ МІ СНІ ОСОАМУТОЕРБІ ТУИЗРОСТУТІ ТСО5БЗТОАМТТЗМУА рЕТНІ2940 МУМОЕКРООАРВОГ ІС ТМКААРСТРАНЕЗО5І І С
СКААГГ ТІ ЗСАОРЕОЕАЕМУСАЇ М/УЗМІ МУУгОаТ
КТМІ.ЗБАЗТКОРБМЕРГАРБОЗКЗТЗОСТААГ ОСІ М
КОУЕРЕРУТУБМ МЗСАСТЗОМНТЕРАМІ О5501І 5
І 55УМТУРБББІ ТО ГМСМУМНКРОЬМТКМОККМЕР ко
7) Приклади амінокислотних послідовностей біспецифічних антитіл до СОЗ-ЕоІВ з загальним легким ланцюгом
УНеНІ(1605| МУНОНІ|СОЗ)| | ЕМО МЕЗО СІ УКРОСБІ ВІ БСААБИЕТЕЗМАМУМБУУНО
Ес(С"виступ") АРОКа! ЕУМавІіКЗКТтрасТтТрхААРУКОаВЕТІЗАВрОЗКМТ роСОМмо99 ГМ'ОММ5І КТЕОТАУУУСТТ РИ ЕМ БУУОММ ОСТІ МТУ
ЗАЗБТКОаРБЗМЕРІ АРОЗКОТЗИаСсТААГаСІ МКОУЕРЕРУТУ5
М Малі Т5аМНТеЕРАМ О5ЗИЇ УБІ 55БММТУРЗББІ ТОМІ
СМУМНКРОЬМТКУОККМЕРКЗСОСССОСВЗОСИаСЗЕМО ЕЗ вас мМОРИаСБІ ВІ ЗСААЗИЕТЕЗТМАММУМУУВОАРИаКаї Е
МУЗВІВЗКУМММАТУМАрБУКОаВЕТІЗАВОЗКМТІ М ОММ5
ГАВАЕОТАУУуУСУАЗНОаМеамоУУ5УМЕАУМмаОатіІ МТА
ТКОаРБМЕРІ АРІЗБКЗТЗИааТАА ас МКОМЕРЕРУТУВУУ МО
СА Т5аУНТЕРАМІ О55(021І 51 55 МР С ТОТМІСММ
МНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСІИРБУРНІ Е
РРКРКОТІ МІЗВАВТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУМКЕМУ УМО МЕМ
НМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОМ МСОКЕУКСКУЗ
МКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРРАЕРОММУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМ5І МУ
СІ УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОаИБЕРІ М
ЗКТМОКЗАМОСаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУ ТОК БІ Рак
МНеНІ11605) Ес(Свпадина") | ЕМО МЕБС СИ МКРОСБІ ВІ ЗСААБОЕТЕЗМАМУ МЗУУУ ВО росОмМо83 АРОКа! ЕУМавІіКЗКТтрасТтТрхААРУКОаВЕТІЗАВрОЗКМТ
ГМ'ОММ5І КТЕОТАУУУСТТ РИ ЕМ БУУОММ ОСТІ МТУ
ЗАЗБТКОаРБЗМЕРІ АРОЗКОТЗИаСсТААГаСІ МКОУЕРЕРУТУ5
М Малі Т5аМНТтТеЕРАМ О5БЗИЇ УБІ 55БММТУРЗБЗБІ ТОМІ
СМУМНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕАДДССОРБО
МЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУМ УМО
СМЕМНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВУУМІ ТМ НООУУЛІ МЕКЕМК
СКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМСТІ РРІОАОЕЄЇТКМО
М5І ЗСАУКагЕУРБОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБрИа
ЕРГУЗКІ ТМОКЗАУМ ОСС ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМАЕТОКІ 51 5
РОК
СОЗ загальний легкий ОАММТОЕРБІ ТУИ5РОСТМУТІ ТС ОАМТТЗММУАММУУМОЕ | 35 ланцюг КРОаОАЕВИа Іа ТМКкКААРСТРАВЕЗОа5І І СС КААЇ ТІ БА рЕТА13197 РЕОЕАЕМУСАЇ М/МЗМІ МУУРааИТткКІ ТМ а(ОоРКААРБМТІ ЕР
РЗБЗЕЕГ ОАМКАТІ МС ІЗОЕМРЕАМТМАМУКАрЗЗРУКАСМЕ
ТТТРОЬКОЗММКМУААБЗБЗУІ ЗІ ТРЕОСМУКЗНАЗУЗСОМТНЕС5
ТМЕКТМАРТЕС5
МНеНІІСОЗІ| МНОНІ(1605| | ЕМОП ЕЗСССІ МОРОЗІ ВІ БЗСААБИЕТЕЗТМАММУУМВОА | 91
Ес(" виступ") РОГАГА РОКаї ЕМ/УЗВІВЗКУМММАТУМАОЗУКОаВЕТІЗАВОЗКМТІ. рРЕТА13932 МГ ОММ5І ВАЕОТАУУУСУВНОМЕеаМЗУУ ЗУБА СсОИТІ.
МТУ55ЗАБТКОаРБЗМУЕРІ АРЗЗКОЗТЗИаСТААІ СІ МКОМЕРЕР
МТУБМУМЗаИаАІ Т5аУНтТЕРАМІ О5501І 51 55УУТУРБЗББІ С
ТОТМІСМУМНКРОМТКУМОККУЕРКЗСССВССОСЗИаЗЕМО
ГМЕЗЦСИЇ МКРОСІБІ ВІ БСААЗИає ТЕМАМ МБУУУВОА Ра кагеємумУанвІікзКктрасатрмААРУКСОВЕТІЗАВОЗКМТІ МІ.
ОММ5ЗІ КТЕОТАМУУСТТРИУ ЕМ У ВУМУСОСТІ МТУ5БАБ
ТКОаРБМЕРІ АРІЗБКЗТЗИааТАА ас МКОМЕРЕРУТУВУУ МО
СА Т5аУНТЕРАМІ О55(021І 51 55 УРБЗББІ СТОТМІСММ
МНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСІИРБУРГІ Е
РРКРКОТІ МІЗВАВТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУМКЕМУ УМО МЕМ
НМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОМ МСОКЕУКСКУЗ
МКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРРАЕРОММУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМ5І МУ
СІ УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОаИБЕРІ М
ЗКТМОКЗАМОСаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ БІ Рак
СОЗ Ре(виступ") РЕГАГА | ЕМО ЕБОССЇ МОРОЗІ ВІ ЗСААБОЕТЕЗТМАММУУМНОА | 92 рЕТА13917 РОКИагЕМУЗВІВЗКУМММАТУМАрЗУКОаАЕТІЗНООЗКМТІ.
МГ ОММ5І ВАЕОТАУУУСУННОаМЕаМОУУ БУМ ГАМ И,ОСТІ.
МТУ5БАБТКаРЗМЕРІ АРБЗКЗТЗИСТААГасСІ МКОМЕРЕР
МТУБММЗИал6І Т5аМНТЕРАМІГ ОБОЇ БІ ММ МРБЗЗБІ С
ТОТМІСМУМНКР2УМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕАА сваРЗМЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕМ
М УМраТамЕУНМАКТКРАЕЄОУМЗТУАМММІ ТМ НОВУ МО
КЕУКСКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКСООРАВЕРОМУТІ РРСОАОБЇГ.
ТКМОМБІЛУСІ МКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСЕОРЕММУКТТРРМІ О зразЕгі УК ТМКЗАМООСМУЕЗОСЗУМНЕАІ НМНУТОК
ЗІ БІ РОК
Ес "»впадина") РОГАГА НУ | ОКТНТСРРСОРАРЕЇ ЇЇ СОРБМЕ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМ| 93
Аг МУМОМЗНЕОРЕМКЕММ УМО МЕМНМАКТКРАЕЄОММЗТ УМ рЕТА1Т0755 МБМІ ТМ НОБУ/ЛІ МЕКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСИа ОР А
ЕРОМСТІ РРІАОЕЄТКМОМ5І БСАМКОЕМРЗОІАМЕМ ЕМО
ОРЕММУКТТРРМІ ОБрИавЗЕРІ ЗК тМОоКАМОСО,ММЕЗО
ЗММНЕАНМАЕТОКВІ БІ РОК
МНОСЦСОЗІ Ес("виступ") РО | ЕМОП ЕЗОСИЇ МОРОЗІ ВІ ЗСААБОЕТЕЗТУАММУММВОА
ГАГА РОКИагЕМУЗВІВЗКУМММАТУМАрЗУКОаАЕТІЗНООЗКМТІ. рЕТА13378 МГ ОММ5І ВАЕОТАУУУСУННОаМЕаМОУУ БУМ ГАМ И,ОСТІ.
МТУ5БАБМААРЗМРІЕРРЗОБОЇ КЗИатТАБУМСТІІЇ ММЕМРАЕА
КМОМУКМОМАГОБаМЗОЕЗМТЕОрЗКОЗТУБІ ЗЗТІ ТІ ЗКА
ОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСЕСОКТНТСРРОР
АРЕААСОИРБОЗМУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУММОМЗНЕОР
ЕУКЕМУ УМОВИ МЕМНМАКТКРАЕЕєОУМЗТУАМММІ ТМ НО
МІ МЕ КЕМКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКИИОРАЕРОММТІ Р
РСОВОЄЕСТКМОМБІЛЛУСІ МКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУК
ТТРРМ'ОБОраБЕРІ ЗК ТМОКЗАУМООСММЕЗСЗМУМНЕАЇ.
НМНУТОКБІ 5І 5РОК 1605, інвертована, 2-1 з| ЕМОЇ МЕБОСССІ МКРОСБІ ВІ БСААБає ТЕМАМ МБО
М1ТО0А в СОВ НЗ АРОКОаГЕММУавВІКЗКТОООСТТОМААРУКИаВЕТІЗАВОЗКМТ рЕТА14096 ГМ'ОММ5ІКТЕОТАМУУСТТРИ ЕМ БУМ ОМУСОСТІ МТУ
ЗАБТКОРЗМЕРІ АРБЗКЗТЗСИСТААІ аСІ МКОУЕРЕРУТУЗ
ММА Т5ОМНТЕРАМІ ОББИЇ БІ ББУМТУРБЗУ ОТО
СМУМНКРОЬМТКМОККМЕРКЗОрСОлОБОСОИЗЕМО ЕЗ свацімМорРасцвіівВІіЗСААБагТЕЗТМАММУУВОАРИКИЇ Е
МУЗВІВЗКУМММАТУМАроЗУКОИВЕТІЗАВОБКМТІ М 'ОММ5
ГААЕОТАУУУСУАНамеаАБУМ5УЕАММСОСТІ МТГМЗБА5
ТКаРБЗМЕРГАРЗЗКЗТЗОСТААГасії МКОМЕРЕРУТУБУУМ5
САГТЗОМНТЕРАМІ ОБОЇ БІ БМ УРЗББІ ЕТО МІСММ
МНКРУМТКМОККМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААСОРБМРНІ Б
РРКРКОТІ МІЗАТРЕМУТОСМУМОУЗНЕОРЕМКЕМУМ УМОСМЕМ
НМАКТКРАЕЄОУМЗТУАММУБМІ ТМ НОВУ МОКЕУКСКУ
МКАЇ САРІЕКТІЗКАКСИОРАЕРОММТІ РРСАОЄСТКМОМБІ МУ
СГ УКаЕУРБОІАМЕМ ЕМО ОРЕММУКТТРРМІ ОБООЗЕРІМ
ЗКІ ТМОКЗАУМООСММЕЗСЗММНЕАСНМНУТОКІ БІ РОК
1605, інвертована, 2-41 з ЕМО МЕЗО СОЇ МКРОСБІ ВІ БСААБОЕТЕЗМАМУМОУМВО | 100
Зз10баА в СОВ НЗ АРОКОаГ ЕМ МаВІККТрастТтОМААРУКОаВЕТІЗАВОБКМТ рРЕТАН14097 ІГМ'ОММ5І КТЕОТАМУУСТТРИ ЕМ БМ ОМ СОСТІ МТУ
ЗАБТКОРОМЕРІ АРОБКОТОИаатТАА аСІ МКОМЕРЕРУТМУМ5
М/МБаАЇ Т5ОМНТЕРАМІ 05501 У5І 55 УРБББІ ТОМІ
СМУМНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСВСОСОСССЗИСаСОЗЕМО Е5
СО МОРОСОБІ ВІ БСААЗОЕТЕЗТУАМММ М ВОА РОКИ Е
М УБАВІНЗКУМММАТУМАрБУКОаВЕТІЗВОО5КМТІ МІ ОММ5
ГААЕОТАУУУСУВНаТмМмЕеаМАММУМ5М гам СпОСТІ МТМ5БАБ
ТКОРОМЕРІ АРОБКОТЗОаСТААГ аСІ МКОМЕРЕРМТУБУУ МО
САГТ5ОаМНТЕРАМІ 05502 5І 55 УРБББІ ЕТО ТМІСММ
МНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕАДАСОИРБМНІ ЕЕ
РРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОМЗНЕОРЕМКЕММ УМрИаМЕМ
НЯІАКТКРАЕЄОУМОТУНММУБМІ ТМ НОВУМІ МСОКЕУКСКМУ5
МКАЇ аАРІЕКТІЗКАКСЕОРАВЕРОММТІ РРСОВОЄЇ ТКМОМБІ МУ
СГ УКОаЕМРБОІАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОСБЗЕРІ М
ЗК ТКА ОССММЕЗСОУММНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5І РОК
СОЗ-зв'язувальний агент, ОСОАММТОЕРБІ ТМ5РОСТМТІ ТС ОАМТТ5ММАММУМОЕ | 101 легкий ланцюг, злитий з КРИОаСАЕВИ Іа ТМкКАвАРСТРАНВЕБОаБІ І ССКААЇ ТІ БИКА
СНІ; Ес РОГАЇ А; РЕОЕАЕМУУСАЇ М/УОМІ МУМгсСсИткІ ТМ ББАБТКОаРОМЕРІ.
РЕТНА1З3862 АРББОК5ОТОСТААІ асСІі МКОУМЕРЕРУТУБУУМЗИаАІ Т5аМУНнтТ
ЕРАМІ О5БОИЇ М5І 55 МРБЗББІ ЕТО МІСМУМНКРОМТКМ
ОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕААСОРОМУНБІ ЕРРКРКОТІ М
ІЗАВЕТРЕМТСМУМОМЗ5НЕОРЕМКЕМУ УМО МЕМНМАКТКРАЕ
ЕОММОТУВМУБМІ ТМ НОБУУ/ЛІ МЕ КЕМКСКМУ5МКАЇ САРІЕК
ТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРОВОБЇ ТКМОМ5БІ ТСІ МКаЕМРБЗО
ІАМЕЖМЕЗБМИОРЕММУКТТРРМІ ОБОСБЕРІ МК ТМОКОАМ
ОсОСММЕЗСЗУМНЕАЇІ НЯНУТОКВІ 5І РОК 1605, МН, злитий з ЕМО МЕЗО СОЇ МКРОСБІ ВІ БСААБОЕТЕЗМАМУМОУМВО | 102 константним капа-ланцюгом; | АРИКаї ЕМ МОавВІКЗКТОСатТтТОУААРУКОаВЕТІЗАООЗКМТ рРЕТН13859 ІГМ'ОММ5І КТЕОТАМУУСТТРИ ЕМ БМ ОМ СОСТІ МТУ
ЗАБМААРБОМЕІЕРРБОЕОЇ КИ ТАБУМСІ І ММЕМРАЕАКМО
М/КМОМАЇГ ОБЕМ5ОЕЗМТЕОО5КОБЗТУБІ ОТ ТІ ЗКАОМЕК
НКУМАСЕМТНОСІ 55 УТКЕМАС ЕС
СОЗ, МН, злитий з ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСОІ ВІ БСААБИаЕТЕЗТМАММУУУВОА | 103 константним лямбда- РОКОаГ ЕМ М5ВІВБКУМММАТУМАОБУКОаВЕТІЗАрОБКМТІ. ланцюгом; М ОММ5І ВАЕОТАМУМСУВНа МЕС МОУ М ЕАУ М ОСТІ.
РЕТН1Т3860 МТУМ55АЗРКААРБМТІ ЕРРОБЕЕЇ ОАМКАТІ МСГПІЗОБГМРаИаА
МТМАМУКАОЗЗРУИКАЯСМЕТТТРУКОЗММКМААБОМІ БІ ТРЕО
МКЗНАЗУЗСОМТНЕСЗТМЕКТМАРТЕС5
ІЯНМ1-46701 (Х92343), плюс | ОМОЇ МОБСАЕУККРОАЗБУКУЗСКАБОМТЕТ5УУМНУУМАВОА 104
УНа-елемент РОСаСГЕМУМСПМРЗааЗТоУАОКЕеЕОоВАУТМТАОТ5Т5ТМУ
МЕ! 55І В5БЕОТАУУУСАнСссасзЕрМмМмаОстІ мМТУ55
ІЯНМ1-69706 (122583), плюс: | ОМОЇ МОБСАЕУККРОЗБЗУКУВСКАВБОСТЕОБУАІВУМУМВОА | 105
УНб-елемент РОСС, ЕМ МасПРІГЕТАМУМАОКРОСАМТІТАОКОТОТАММЕ
І 551 85ЕОТАУУУСАнИаБасйоМОАМмаОосТтТ ТУ
ІШНМУЗ-15701 (Х92216), плюс | ЕМОЇ МЕЗО СІ МКРОСБІ ВІ БСААБОЕТЕЗМАМУМОУУМУНО | 106
УН4і-елемент АРОКОаГ ЕМ МаВІККТрастТтОМААРУКОаВЕТІЗАВОБКМТ
І М'ОММ5І КТЕОТАУМУСТТОааЗааоЕруУмаОостІ мМтУ55
ІШНМУЗ-23701 (М99660), плюс | ЕМО ЕЗССОСЇ МОРОСБІ ВІ БСААБОЕТЕЗЗМАМОМУВОА | 107
УН4і-елемент РОКаОаГ ЕМ МЗАІЗОБИаЗТУМАОБУКИавЕТІЗНОМ5ОКМТІ МІ.
ОММ5І ВАЕОТАУМУСАКОРЯЗССЗЕеЕОМУМУСОСТІ МТУ55
ІСНМ4-59701 (АВО19438), ОМОГ ОББОаРИЇ МКРБОЕТІ 5І1ТСТУБаСБІЗОМУУМУБУМІВОРР | 108 плюс УН4-елемент акагеЕмамуМвавтТМУМРБІ КОАМТІЗМОТ5КМОБІ КІ 5
ЗМТААОТАУМУСАнаавасвЕриУмаОостІ мМ'У55
ІЯНМ5-51701 (М99686), плюс | ЕМОЇ МОБСАЕМККРОЕБІ КІЗСКаБОаУЗЕТЗУУІСММВОМ | 109
УН4і-елемент РОаКОаЇ ЕМ МСОаПпуРарБОТАМЗРОБОСОМТІЗАОК5ІЗТАМІ О
М 551 КАБОТАМУУСАНОЦСЗСЗЕВУМСОСТІ МТУ55
СОЗ-специфічне антитіло, ОТММТОЕРБІ ТМ5РОСТМТІ ТТ ОАМТТ5ММАММУМОЕ | 110 сконструйоване на основі КРИОаСАЕВИ Іа ТМкКАвАРСТРАНВЕБОаБІ І ССКААЇ ТІ БИКА гуманізованого легкого РЕОЕАЕМУСАЇ М/УЗМІ МУУРсаатТкКІтТМІ. ланцюга СН2г527 де
КАРКІ ГІМААБЗІ ОБаМРЗНЕЗОБОБаИаТОгеТІ ТІВ ОРЕОГ
АТУУСОО5УЗТРІ ТГСОСИТКМУЕЇїК легкий ланцюг антитіла до КРОаОАЕВИа Іа ТМКкКААРСТРАВЕЗОа5І І СС КААЇ ТІ БА
СоЗ РЕОЕАЕМУСАЇ М/МЗМІ МУМгСаасаТткі тм. 8) Приклади варіантів 1605 з пониженою афінністю а. Приклади варіантів легкого ланцюга з пониженою афінністю
МО:
АК АРВаГ Іс ТМАВАРСТРАВЕЗИа5І ССаКААІ ТІ ЗАМОРЕОЕАЕМУ
СА МУуМЗМІ МУУгсаасатТКкітМІ.
АРНа Іа ТМКА!ААРСТРАНЕЗОБІ І СС КААЇІ ТІ БаМОРЕОЕАЕМУ
СА МАМІ МУМгссаткКітМІ. б. Приклади варіантів важкого ланцюга з пониженою афінністю
МО: агГгєммавікЗКктрасатТрмААРУКОаВЕТІЗАВОЗКМТІ МІ ОММ5І.
КТЕОТАУУУСТТРИУ ЕУУЗУУВВУМУСОСТІ МТА агЕМУЗВІКЗКТраСсСТТОМААРУКОа ВЕТІЗАВОЗКМТІ МІОМІ
КТЕОТАУМУСТТРМУ ЕУУЗУ УМ СаОСстТІ МТА агГгєммазІкЗКкТрастТрмААРУКОаВЕТтТІЗАВОЗКМТІ МІ ОММ5І.
КТЕОТАУУУСТТРИУ ЕУУЗУУВВУМУСОСТІ МТА агГгєммавікЗКктрастгрмААРУКОаВЕТІЗАВОЗКМТІ МІОМІ.
КТЕОТАУУУСТТРУХЕМУ ЗМУ МОМ СсОСТІ МТА агГгєммавікЗКктрастгрмААРУКОаВЕТІЗАВОЗКМТІ МІОМІ.
КТЕОТАУУУСТТРИУ ЕМ МОМ СОСТІ МУЗА
МО: 9) Додаткові приклади варіантів здійснення винаходу, створених з використанням фагової дисплейної бібліотеки (СО підкреслені)
ІО МО: аг ЕУМапМРЕзасвьтЗМАОокКЕоавУТМтТАОТЗТЗТУММЕЇ 551 5
ЕОТАМУУСАВМУТІМУЗРЕОУМУССОСТІ МТМ5БА5 9007 Мн сСоВІЇ5УУМН 17111111 8 9007 МН сСоВ2 | ПМРІСОЗТЗУАОКРОЯ Я //:/7777777777777771111111111Ї19 аг ЕУМапМмРЕзасвьтзУАОокКЕОоаАУТМТАОТЗТЗТУММЕЇ 551 5
ЕОТАМУУСАВММЕгІСЗМАМО УМ ОСТІ МУЗА осі Мн осСовВіЇ5УУМН 17111111 8 90с1 Мн сСов2 | ПМРІСОБТЗУАОКРОЯЇ //:7777771111111111Ї19 аг ЕУМапМРЕзасвьтЗМАОокКЕоавУТМтТАОТЗТЗТУММЕЇ 551 5
ЕОТАУУУСАНСОЇ ТУЗМО УМ СсОСТІ МУЗА
БЕВ МН СОВІ |ЗМУМН. 71111118
БЕВ МН Сова |ПМРІСОБТЗУАОКРОЯ /-/::.///-:///-/- ЛГ: 52 ЇЇ. 9
О5РО МІ а45МААЗаУРОоВЕЗИаЗазаИтОЕТІКкІЗВМЕАЕО УС УМХ
СМОАГОІРМТЕСОСТКМУБ КАТ
БЕВ МІ Сова фаЗмМвАВ 77777777777777777777111111111111111111111111111111111сС|16о
ГЕМУЗАІЗСаЗСаЗГгУУАрЗУКОаВЕТІЗАОМЗКМТІ МГ ОММ5І ВАЄ ртТАМУУСАКУАМАЇ ВОВУмСсОсаТтІ МУЗА л2А4 ун сСонг|дІЗОЗссЗТУУАр5УКа, 77777771 во
ВГ ГІМадоЗвВАТСОІРОВЕЗаЗавзатов ТТ ТтІЗА ЕРЕОБГАУУУСООН азвЗГгаОстТкМУєІКкАТ аг ЕУМапМРЕзасвьтЗМАОокКЕоавУТМтТАОТЗТЗТУММЕЇ 551 5
ЕОТАМУУСсАНОВЕЗАСВІ МОУМмСОСТІ МУЗА 7АЗ МН ОСОВІ ІЗМУМН 11111111 7АЗ МН Сова |ПМРІСОБТЗУАОКРОЯ /:: 77777711 9
О5РО МІ а45МААЗаУРОоВЕЗИаЗазаИтОЕТІКкІЗВМЕАЕО УС УМХ
СМОАГОТРРІТРСОСТКМЕ КАТ
7АЗ МІ Сова а5МВАВ 77777777777777777777111111111111111111111111111111111сС|1бо
ІО МО: аг ЕУМапМРЕзасвьтЗМАОокКЕоавУТМтТАОТЗТЗТУММЕЇ 551 5
ЕОТАМУУСАНСООУМАРєЮОЮУУМСНИтІі мтУЗЗА бЕТО Мн сСОоВІІ5УУМН 71111111 бЕТО Мн СОовг | пМРОСОБТЗУАОКРОЯ Я /::.///єєєєє///./С( Я. 9
О5РО МІ а45МААЗаУРОоВЕЗИаЗаЗатОЕТтІКкІЗАМЕАЕВОУСУХУ
СМОАДУУНЗРТРОаОСТКМЕ КАТ бЕТО М. сова ГаЗМВАВ ////7777777777777777771111111111111111111111111111111111сС|1бо аг ЕУМапМРЕзасвьтЗМАОокКЕоавУТМтТАОТЗТЗТУММЕЇ 551 5
ЕОТАМУУСАВСАТУТМОММУСсОСТІ МТ УЗА л2ггя МН оСОоВІ|Ї5УУМН 71111111 29 МН Сова пМРІСОБТЗУАОКРОЯЇ /::.1111111111119
АК 129 МІ РІММТО5РІ БІ РМТРОЕРАБІЗСВНЗБОБІІНЗМОаМУММ ОМ ОКР) 131
СМОАГОТГРІТРСОСТКМУЄІКАТ гг Мі сова Лама 77777771 бо 10) Глікозиловані варіанти 9011: варіабельний легкий ланцюг представлених як приклади варіантів здійснення винаходу (СОВ підкреслені)
ІО МО:
ЗРОПІМ азМвВАЗаУворвЕЗзазазатОвтТІКІБАУМЕАЕОУМСУУСМ
ОАБІМЗАТРСаОса ТК ЕК 29 Мі сСовгпОо5МВА 77777771
ЗРОПІМ азМвВАЗамУвовЕЗзазазатовЕТтіКІЗВМЕАЕОУМС У УС М
ОАБІМОВТЕРСОСТКМЕК
4 зовн сік ПН БК 2
З
ЗРОПІМ азМвВАЗаУворвЕЗзазазатОвтТІКІБАУМЕАЕОУМСУУСМ
ОАБІММААгСОСТКМЕК т97А Мі сов ОоЗМВА 77777777
ЗРОПІМ азМвВАЗаУворвЕЗзазазатОвтТІКІБАУМЕАЕОУМСУУСМ
ОАБІММАМЕеСсСОСТКМЕК тем М. срвггаЗМВА 77777771 97мМ М. сСовзЗІМОАБІММАМ -:: 77111111
11) Варіанти з видаленими сайтами деамідування
ІО МО: 1605 ЕМОЇ МЕССІ МКРОаСБІ ВІ ЗХСААБОЕЄТЕЗ5МАММОУМУВОАРОИК | 248
Ун рогає а,гЕМУУаВІКЗКТЕВОТТОМААРУКОаВЕТІЗАВОБКМТІ МІОМІ.
КТЕОТАМУУСТТРИ ЕМ БУ ОМ СОСТІ МТМ55 1605 ЕМОЇ МЕССІ МКРОаСБІ ВІ ЗХСААБИЕТЕЗМАММОУМУУВОАРОК | 249 мн рога агЕМУУаВІКЗКТОСатТОМААРУКОаВЕТІЗВОО5КМТІ МІ ОММ5І.
КТЕОТАМУУСТТРИ ЕМ БУ ОМ СОСТІ МТМ55 сСоЗз ун ЕМО ЕЗБОСИЇ МОРССБІ ВІ ЗХСААБИЕТЕЗТМАММУМВОАРОКИ | 250
МІО0А ГЕММ5АВІВ5КУМММАТУМАрБУКОаВЕТІЗВОО5КМТІ МІ ОММ5І ВА
ЕОТАУМУСУВНОаМЕСАБУМУ5У Ам СОСТІ МТУ сСоЗз ун ЕМО ЕЗБОСИЇ МОРССБІ ВІ БХСААБИаЕЄТЕЗТМАММУУВОАРИаКИ | 251 з10бад ГЕММ5АВІВ5КУМММАТУМАрБУКОаВЕТІЗВОО5КМТІ МІ ОММ5І ВА
ЕОТАУУМСУВНОИаИМЕеОаСМАМУУМ5БУ гам СсОСстТІ МТЗ 1605 ЇМНОНІ1-| ЕМО МЕЗО СОЇ УКРОСБІ ВІ ЗСААЗИЕТЕЗМАММЗУУМУВОАРОК | 252
СОЗІМНОНІ-МІТО0А|- | ас єУмавІікЗКктрастрмААРУКОаВЕТІЗАВОЗКМТІ М ОММ5І.
Ес("виступ") РОГАГА | КТЕОТАМУУСТТРУ ЕМ БУМОМУМУСОСТІ МТГМЗ5АЗТКОаРЗМЕРІ А
РОБКОТОЗОаСТААІ аСІ МКОМЕРЕРУТУБУМУ М5ИАЇ Т5ОаМНТЕРАМІ.
О5БаЇ У5І 5ББММТУРББІ СТОТМІСМММНКРОЬМТКУМОККМЕРКЗС рассавБаспйИасеЕМОЇ І ЕЗОСИІ МОРОСБІ ВІ 5ЄСААБОЕТЕЗТУА
ММ УАОСАРИаКаИїЕМУ5АІВЗКУМММАТУМАрБУКаИаИВЕТІЗВОО5
КМТ МГ ОММ5І ВАЕОТАУМУСУВНаМЕаАБУМБУ гамма ОаИ Ті М
ТУМ55АБТКОаРБОМЕРІ АРББКОТЗИОСТААГаСІ МКОМЕРЕРМТУБМУ
МБаИаАаІТ5амНТЕРАМІГ О55(02І М5І 55 МРБЗББІаТОТМІСМММН
КРОЬМТКУМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕААСОРБОМРІ ЕРРКРКО
ТЕМІЗВТРЕМТСМУМОУМЗ5НЕОРЕУМКЕММУ УМО МЕМНМАКТКРАЕЕ
ОММОТУВУМ5МІ ТМ НООУМІ МСКЕМКОСКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРСОВОЕ!ТКМОМ5І М СІ УКИЕМРБОІАМЕМ ЕМ
СОРЕММУКТТРРМІ О5равЗЕРІ ЗК ТУКА ООаММЕЗС5УМ
НЕАЇНМНУТОКБІ 5І РОК 1605-Рс(Свпадина")- | ЕМОЇ МЕССІ МКРОСІБІ ВІ БСААБОЕЄТЕЗМАМУМОУУУВОАРОК | 253
РОГАГА агЕМУУаВІКЗКТрИасТТОМААРУКОаВЕТІЗАрОБКМТІ МІ ОММ5І.
КТЕОТАМУУСТТРИ ЕМ ЗМУ МОМ ,ОСТІ МТМ55АБТКОРУМЕРІ А
РОБКОТОЗОаСТААІ аСІ МКОМЕРЕРУТУБУМУ М5ИАЇ Т5ОаМНТЕРАМІ.
О5БаЇ У5І 5ББММТУРББІ СТОТМІСМММНКРОЬМТКУМОККМЕРКЗС
ОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБОМУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУМУМОМ
ЗНЕОРЕМКЕММУ УСС МЕМНМАКТКРАЕЄєОУМОТМАМУ5МІ ТМІ НН
ОМ МЕОКЕУКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОМСТІ РРЗВ
РЕСТКМОМ5І БСАМКОЕМРБОІАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ 05 равбвЕвг Кк МОоКкБАМОСИаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМАЕТОКОБІ 5І ЗР ак
СО3-СІС ОСОАММТОЕРБІ ТМ5РОСТМТІ ТС ОАМТТ5МУАМУМУМОЕКРОО | 254
АРВОС ПІСТ МКААРСТРАНЕБОБІ ЇЇ СОКААЇ ТІ ББАОРЕСЕАЕМУ
СА М/М5МІ М УгИасаИТткІ ТМ ЧдоОРКААРБМТІ ЕРРОБЕЕЇ ОАМКАТ
ГМСГПІБОгЕУРИИАМТМАМКАОЗОРУКАСМЕТТТРУьКОЗММКМААБО
М ЗБ ТРЕОСМУКЗНАЗУЗСОМТНЕСЗТМЕКТМАРТЕСЗ
ІО МО: 1605 (МНОНТІ |- ЕМО МЕЗО СОЇ МКРОСЇБІ ВІ БСААБСОЕТЕЗМАМУМЗУУМНОАРОК | 255
СОоЗІМНеНІ-5100баА|-| ОСГЕМУМСВІКЗКТОСОТТОМААРУКОАВЕТІЗАВОЗКМТІ МІОМІ.
Ес("виступ") РОГАГА | КТЕОТАМУУСТТРИ/ЕМЗУУУОУМУСОСТІ МТУЗБАЗБТКОРБЗМЕРІ А
РББКЗТООСТААГ ОСІ МКОМЕРЕРУТУБУ/МЗСИАІ ТЗОМНТЕРАМІ.
О5ББОЇ БІ 55ММТМРБЗББІ ОТО МІСМУМНКРЗМТКМОККМЕРКЗО расаазавааБЕМОЕЗОСИЇ МОРОЗІ ВІ ЗСААБСОЕТЕБТМА
ММУ/УАОАРОЕКОГ ЕМ УЗАВІНБЕКУМММАТУМАОБУКОаАЕТІЗНОО5
КМТ М ОММ5ІВАЕОТАУУУСУАВНОаМеаМАМУУЗМ ГЕАМУСОСТІ М
ТУББАБТКОРБМЕРІАРББКЗТЗОСТААІ СС УКОМЕРЕРМТУБМУ
МБОАІ Т5СИМНТЕРАМГ ОББООЇСМБІ 55ММ ТУРБО ТОТМІСМУМН
КРУЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТОРРОРАРЕААССОРБУРГІ ЕРРКРКО
ТЕМІЗАТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУУМОСМЕУМНМАКТКРАЕЕ
ОУМЗТУАМУБМІ ТМ НОВУЛ.МОКЕМКОСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАК
СОРАЕРОМУТІ РРСОВОЄЇТКМОМБІ МУСІ МКагуРБЗОІАМЕМЕЗМ
СОРЕММУКТТРРМ'ОБОСБЗЕРІ УК ТМОоКЗАМООСММЕБОЗУМ
НЕАІНМНУТОКБІ БІ 5РОК 9011 (МНОНІЇ- ОМОГ МОБИАЕМККРИАБУКУЗСКАБЗОМТЕТЗУУМНУМАОАРОС | 256
СОЗІМНОЇ -МІО0А|- | аГЕМУМИапМРЗаСРТЗУАОКРОСАМТМТАОТЗТЗТМУМЕЇ БІ 5
Ес("виступ") РОГАГА | ЕОТАМУУСАНОСОРАМ ОМУСОСТІ МГУЗЗАБТКОРЗМУЕРГАРБ5
КЗТЗОСТААІ ОСІ МКОМЕРЕРУТУБУУМЗОАІ Т5ОМНТЕРАМГ О55
СІ М5І 5БММТУРБЗББІ СТО ТМІСМУМНКРЗМТКМОККМЕРКВСОС ссавБасОО5ЕМОГЕЗОСОІМОРОСБІ НІ ЗСААБОЕТЕЗТУАММ
У УВОАРОКагЕММУЗНІАЗКУМММАТУМАрЗУКОВЕТІЗАВОЗКМТ
ГМ'ОММЗІВАЕЄЕОТАУУУСУВАНОаМЕаАЗУМ5БМ/ГАУМ СОСТІ МТУ
ЗАБМААРБМУРІЕРРРЗОЕОЇ КБИТАБУМСІ І ММЕМРАЕАКМОМУКМО
МАГОБОМООЕЗМТЕОрБКОБТУБІ ЗТ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМ
ТНОВІ 55РУТК5ЕМАСЕСОКТНТОРРОРАРЕААСОРБЗУБІ ЕРРКР
КОТІМІЗАТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМОСМЕМНМАКТКРА
ЕЕОУМБТУВУУЗМІТМ НОВУ МОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗК
АКОСОРАЕЕРОМУТІ РРСАОЕСТКМОМБІ М/С УКОЕМРБОІАМЕМЕ5
МООРЕММУКТТРРМ'ОБОСБЕРІ УК УОКЗАМООСМУЕОБМ
МНЕАСНМНУТОКБІ 5І 5РОК 9011-Рс(впадина"). | ОМОЇ МОБСАЄУККРОАБУКУБСКАБОУТЕТЗУУМНУУМАОАРОО | 257
СЕМ МИпчРєРЗайРТЗМАОКРОСАУТМТАОТ5ТОТМММЕІ ЗІ 5
ЕОТАМУУСАНООРАМ/Л ОУМУСОСТІ МТУ5БЗАЗТКОРЗМЕРІ АР
КЗТЗОСТААІ ОСІ МКОМЕРЕРУТУБУУМЗОАІ Т5ОМНТЕРАМГ О55
СІ М5І БУМ ТУРБЗББІ СТОТМІСМУМНКРЗМТКМОККМЕРКВСОКТ
НТОРРОРАРЕААСОРБМУРІГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУММОМУЗНЕ
ОРЕМКЕМУУМОСМЕМНМАКТКРАЕЄОУМЗТУАМУБМІТМІ НОМУ
ГМОКЕУКСКУЗМКАГ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРЗАОБЇ Т
КМОМБІ ЗСАУКОЕУРБОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОСЗЕ
ЕСУ5КІіТУОКАМООСММЕЗСОСЗУМНЕАІ-НМНУТОКБІ 5І 5РОК 9011 ІС (М95ОЇ РІММТО5РІ Б РУТРОЕРАБІЗСНЗБЗОБІИЇ НЗМОМММІ ОМ ОКР | 258 вОБРОПІМ СЗМА!ААБОМРОВЕЗОЗОБОТОЕТІКІЗВУЕЄЕАЕОМОМУ
УСМОАБІМОНТРООСТКУБІКАТМААРЗМРІЕРРБОЕОЇ КИ ТАМ
МСПЛЯІМЕУРАЕАКМОУКМОМАГООМЗОЕЗМТЕООБКОБТУБІ 5
ЗГПТІЗКАОМЕКНКУМАСЕУТНОСІ 55РУТКЗЕМНОЕС
СОоЗ МІ СН! ОСОАМУТОЕРБІ ТУ5БРОСТМТІ ТСО5БЗТОАМТТ5МУАМУУМОЕКРОО | 259
АРРОГІШОСТМКААРСОТРАНЕЗОБИЇ СОКААГТІ ЗСАОРЕОЕАЕМУ
САГМ/УЗМІ МУР СИатТКІТМІ 5БАЗТКОРБМЕРІГАРЗБКЗТЗОСТА
АГ ОСІ УКОУЕРЕРУТУЗМУМЗСОАСТЗОМНТЕРАМІ О551 У5І ЗМ
МТУМРБББІОТОТМІСМУММНКРУОЬМТКУМОККМЕРКВО
ІО МО: 9011 (МНОНІТ|- ОМОІЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАВИахуТЕТЗУУМНУМУВОАРОО | 260
СОоЗІМНеНІ-5100баАІ-| СЕМ МСПУРєРБЗасРТЗУАОКРОСАМТМТАОТ5ТЗТМУМЕЇ БІ 5
Ес("виступ") РаГАГА | ЕОТАМУУСАВИарЕАМІ ОММУСОС,СТІ МТУЗ5АЗТКОаРБМУЕРІ АРЗ5 кЗТЗастААасі УКЩОМЕРЕРУТУБУУМЗСИАІ ТЗаУНТЕРАМІ О55
СІ М5І 55 ТУРІ ТО МІСМУМНКРОМТКМОККМЕРКЗООС ссвазасаа5ЕМОЕЗИСИІЇМОРИОСБІ ВІ ЗСААБагєТтЕЗТМАММ
МУВОАРИаКаї ЕМУЗВІВЗКУМММАТтУМАрЗУКОаВЕТІЗАВОЗКМТ
ГМ'ОММ5І ВАЕОТАУУУСУВНаТамМмБЕамМмАМУЗУБгАУМСОСТІ МТУ
ЗАБМААРЗУРІЕРРБЗОЕОЇ КЗатАБУМСТ І ММЕМРАЕАКМОМКМО
МАГ О502М5ОЕЗМТЕООЗКОЗТУБІ 551ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУММАСЕМ
ТНОІ 55РУТКЗЕМАСЕСОКТНТСРРОРАРЕААДСИРБЗМУРІ ЕРРКР
КОТГМІЗАВТРЕМУТСМУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМАКТКРА
ЕЕОММЗТУВУМ5МІ ТМ НОБМ/ЛІ МСКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗК
АКОСОРВЕРОМУТІ РРСВОЕЇТКМОМУБІ МУСІ УКОЕМРЗОІАМЕМЕЗ
МаОРЕММУКТТРРМІ ОБравзЕРІ ЗК ТМОКЗАМОС,аМУЕЗОБМ
МНЕАІНМНУТОКБІ БІ Рак 12) Представлені як приклади варіанти ТОВ на основі Мом19 (СО підкреслені)
МО: рЕТНІ11646 ОМОГ ОО5аАЕЇ УКРОАЗУКІЗСКАЗОУЗЕТамМЕММУМУКО 136
Мом19 УН-СНІ1-І| БНаОКОЗ ЕМІа ВІНРУИСВЕИОТЕУМОМЕКОКАТ ТМОКЗЗМТА
Ес(«впадина») НМЕГІ5І Т5ЕОЕДАУУУСсТА у развАМмОоУМмасОоаттУТУЗо
РЕЛАГА АЗТКаРБОЗУЕРІГ АРЗЗКЗТЗасСТААГаСІ МКОУЕРЕРУТУЗ
М МЗаАГТЗОМНТЕРАМГО5ЗОЇ БІ Б5БУУМТУРєРЗЗУИТОТ
МСМУМНКРЗЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕАДАДСС
РЗУЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕМУУ У
МВамЕУНМАКТКРАЕЄєОУМЗТУНУМУЗМІ ТМ НОСУЛ МОаК
ЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМСТІ РРЗАОЕЇ.
ТКМОМ5І ЗСАУКОаЕУРЗОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ. рзразЕгіу5КктМоКАМООСММЕ5СЗММНЕАСНМНУТ
ОК ві ЗРак рЕТН11647 ОМОГ ОО5аАЕЇ УКРОАЗУКІЗСКАЗОУЗЕТамМЕММУМУКО 137
Мом19 Ун-СнІ1-с03| ЗНаКО ЕМО ВІНРУВаОТтТЕУММОМЕКОКАТІ ТМОКЗОМТА
МН-СІ-ЕРс(«виступ») НМЕГІ5І Т5ЕОЕДАУУУСсТА у развАМмОоУМмасОоаттУТУЗо
РЕЛАГА АЗТКаРБОЗУЕРІГ АРЗЗКЗТЗасСТААГаСІ МКОУЕРЕРУТУЗ
М МЗаАГТЗаМНТЕРАМГО5ЗОЇ У5І ББММТУРєРЗЗБІ ОТО
МСМУМНКРЗМТКМОККМЕРКЗСОсССОССОсСЗаЧаСсавБЕМОЇ М
ЕЗОИСІ МОРКОа5ЗІ КІ БСААЗає ТЕМ У-УАММУ УВОАРОКИ
ГЕММАВІВЗКУММУАТУМАВЗУКОАЕТІЗАВОЗОБИ МОМ
ММІ КТЕОТАМУУСУВ НЕаМЕеЕСМЗУМУ БУМ ЕАУМс,сОстТІ ТУ
ААЗМААРБЗМЕРІЕРРБЗОБЕОЇ К5ИТАЗУМСІ І ММЕМРАЕАКМО
М КМОМАГОБамМЗОЕЗМТЕООЗКОЗТУБІ ЗІ ТІ ЗКАОМЕ
КНКУМАСЕУТНОСІ 55РУТК5ЕМАСЕСОКТНТСРРОРАРЕ
ААСаРЗМЕ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМОУЗНЕОРЕМУК
ЕМ УУрамЕМНМАКТКРАЕЕОУМТМАУУЗМІ ТМ НОМУ
ГчМакКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУМТІ РРО
ВОЕГТКМОМ5І СІ УКагМРБЗОІАМЕМ ЕБМЕОРЕММУКТТ
РРУГО5разеЕРІ Зк ТМОКЗАМООаММУЕЗСЗУМНЕАЇ Н
МнУТОКБІ БІ ЗРаТк рЕТНІ11644 ОІЕГТО5РАБІ АМ5І аа иОВАПЗСКАБЗОБУБЕА,ИатТтІ МНУ УН 138
Мом1910 ОКРОООРКІЛІМАВАЗМГЕДаМ РТВ ЕЗаБаЗКТОЕТІМІНРУ
ЕЕЕОААТУУСООЗВЕУРУТРИаСаИткКІ ЕІКАТМААРЗУРІЕР
РБЗБОЕОЇ КЗатАЗУМСТІ І ММЕУРАЕАКМОУКМОМАГОБаИам
ЗОЕЗУМТЕООЗКОБЗТУБ5І ЗІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТН опа 55РУТКЗЕМАСЕС
ІО МО:
Ниїза1 Ес | ОКТНТСРРСОРАРЕЇ І. СаРБМУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУУММОМ5НЕОРЕ | 245
УКЕМУ УМВаМЕМНМАКТКРАЕЕОММО т УВУМ5МІ ТМ НОВУ МОКЕМКОК
М5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОММУТІ РРОНОЄЇТКМОМ5І ТСІ МКагМР
ЗБІАМЕЖМЕЗБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОСЗЕРІ КІ ТМОКЗАМОСИММЕ5
С5ММНЕАЇ НМНУТОКОІ 5І РОК 13) Додаткові ЕоІВ1-зв'язувальні ТОВ з проміжною афінністю (СОВ, визначені згідно із
Кеботом, підкреслені):
ІО МО: 1605, варіант УУ96М/052Е ЕМОІЇ МЕЗОСОЇ МКРИОаСБІ ВІ БЄСААЗБИаЕТЕЗМАМУМ5| 274
УН МУМВОАРаТКаі ЕМУМаВІКОКТЕССТТОМААРУКО ВЕ
ТІБВОО5КМТ МГ ОММ5ІКТЕОТАУМУСТТРМЕМ/ БМ
УрУжмаостІіУТУ55 1605, варіант УУ96М/052Е ОСОАММТОЕРБІ ТМБРОСТМТІ ТСО55ТОАМТТ5ММА 31
МІ. ММУМОЕКРООСАЕВИаЇ ІСТ МКААРСТРАВЕЗОаБІ І СІ
СКААГТІ Б0АОРЕОЕАЕМУСАГ М МЗМІ МУУрБасаИТтк
І ТМ. м96У/052Е С03- ЕМОІЇ МЕЗОСОЇ МКРИОаСБІ ВІ БЄСААЗБОЕТЕЗМАММ5| 276
УНеСНІ1 Ес(«виступ») РОГАЇ | ММАОАРИаКаї ЕМ МавіІКЗКТЕССТТОМААРУКОа ВЕ
А ТІБВООБКМТ М ОММ5ІКТЕОТАМУУСТТРМЕМ/ МУ рЕТНІ1І4945 Оу сОаТІ УТМ55АЗТКОаРБОМЕРІ АРОЗКОТИаС
ТААГасСІ МКОМЕРЕРУТУБММЗИаАІ Та МНТЕРАМІ.
О550І15І 55 РОБІТ ОТМІСМУМНКРБЗМТК
МОоккМЕРКЗСВсОСОсСОаБасСаСсоЕМОЇ ГГ ЕЗОССИЇ МО
РОСБІ ВІ ЗХСААЗБОЕТЕЗТМАМММ МВОАРИаКаї ЕМ
М5ВІВ5БКУМММАТУМАОБУКОаВЕТІЗВООБКМТІ МІ.
ОММ5І ВАЕОТАУМУСУВНамМмЕамМм5УмМУ ЕАММ СаО
СТ МТМ55АЗТКОаРОМЕРІ АРЗЗКОТЗИаатТАА ас.
МКОМЕРЕРМУТУБММЗОАІ Т5аМНТЕРАМІ О55.Ц1 М
З 55ММТУРОБОБЯТОТМІСМУМНКРОМТКМОККМ Е
РКЗ5СОКТНТСРРСОРАРЕААСОРОМЕЇ ЕРРКРКОТІ.
МІЗВТРЕМТСМУМОУМЗ5НЕОРЕМКЕММУ МВ ИаМЕМНМ
АКТКРАЕЕОУМОТУВМУМ5МІ ТМ НОВУ МОКЕУКС
КУ5МКАЇ аАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОММУМТІ РРСОВОЕ
ІГТКМОМБІ УСІ УКаЕМРБОІЇАМЕМ ЕБМООРЕММУК
ТТРРМІГО5БОО5БЕР ЗК ТМОКЗАМОСОММЕВСВМ
МНЕАІНМНУТОКБІ БІ Рак
М96У/052ЄЕ БЕс- ЕМОІЇ МЕЗОСОЇ МКРОаСБІ ВІ ЗЄСААЗБОЕТЕЗМАММ5| 277 («впадина») РОГ АГА НУВЕ | МУВОАРИаКа! ЕМ МавВІКЗКТЕССТТОМААРУКОа ВЕ рЕТНІ14946 ТІБВООБКМТ М ОММ5ІКТЕОТАМУУСТТРМЕМ/ МУ
Оу сОаТІ УТМ55АЗТКОаРБОМЕРІ АРОЗКОТИаС
ТААГасСІ МКОМЕРЕРУТУБММЗИаАІ Та МНТЕРАМІ.
О550ІМ5І1 55 РУБ ЕТОГМІСМУММНКРЗМТК
МОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕААДССРОМЕІЇ ЕР Р
КРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУУМОМЗНЕОРЕМКЕММ УМО
СМЕМНМАКТКРАЕЕОММОЗТУВМУМУМІ ТМ НОМ М
СКЕМКСКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕЕРОМСТІ.
РРОНОЕЇ ТКМОМ5І ЗХСАУКОаЕМРБОІАМЕМЕЗМОО
РЕММУКТТРРМІ О5ВОа5ЕРІ МК ТМОКЗНУООСМ
МЕЗСЗУММНЕАІ НМАЕТОК5І БІ Рак
ІО МО: 1481 ЕМО! ГЕБОСИІ МОРИаСБІ ВІ БЄСААЗБИаЕТЕ55УАМ5 278
УН МУМВОАРаКаІЕММУЗАІЗаЗОсаЗТММАрВУКОНЕТІ
ЗВОМОКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАУУУСсАнархУнУвУ
ЕрУМмасостІ УТУ55 1481 З5ЕГ ТООРАМУМБМАЇ ЧааИСОТУВІТСОСОБІ ВУ МАМУ 279
МІ ОСООКРИОаОАРМІ МІМЕОКММА РІаІРОВЕБИаБОБаИмтТА
ЗГ/ТІТОАОАЕОЕАОУМСМЗАЕБРРТОаЇ ММгсСИааткіІ.
ТМ. 1481ІЕЕЇ СОЗІМІ СНІ) Бс- ЕМО! ГЕБИСИІ МОРОСБІ ВІ БСААЗБИаєТЕБО5МАМ5 280 («виступ») РОГАГА ММВОАРаТКа! ЕМУЗАІЗИЗайОТММАОЗУКОВЕТІ рЕТНІ14976 ЗВОМОКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАУУУСАнарУвУу ВУ
ЕОУМаОсСтІ МТМ55АЗТКОаРОМЕРІ АРЗБЗКоТВОС
ТААЇ аСІ МЕОМЕРЕРУТУБМУМ5аАЇ Та УНТЕРАМІ.
О5Б5а1М5І55УММТУРБОІББІИТОТМІСМММНКРОМТК
МОЕКМЕРКЗССОЯВаИЦЧ4 ССЗ БОАММТОЕРБІ ТМ5
РОСТМТІ ТСО55ТаАМТТ5ММАМУМОЕКРИООАЕВ а
ІИТМКААРСТРАВЕБОБІ І С СКААЇ ТІ БАОРЕОЕ
АЕМУСАГ МУЗМІ МУвгасаИткі ТМ 55АБТКаРБМЕ
РГАРБЗ5ЗКОТ5ИааТАА аСІ МКОМЕРЕРУТУБМУ МО
А ТЗаУНТЕРАМ О550І 5І БМР СИТО
МСМУМНКРОЬМТКУОККМЕРКЗСОКТНТСОРРОРАРЕ
ААааРБОЗМЕГ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМОМЗНЕ
ОРЕМКЕММ УУраМЕМНМАКТКРАЕЄєОУМЗТУВУМ5
МІ ТМ НОМ МАКЕУКСКУЗМКАЇ АРІЕКТІЗКАК
СОРАЕРОМУТІ РРСОВОБЇ ТКМОМУБІ УСІ МУКаЕХРБ
ОІАМЕМЕЗБМООРЕММУИКТТРРМІ О5БРОИЗЕРІ М5КІТ
УоКЗАМОСаММЕЗСО5УМНЕАІ НМНУТОКОІ 5І БР (е154 1481ЕЄ, Бс- ЕМО! ГЕБИСИІ МОРИаСБІ ВІ БСААЗБИаЕєЕТЕ55УАМ5 281 («впадина») РОГАГА ММВОАРаТКа! ЕМУЗАІЗИЗайОТММАОЗУКОВЕТІ рЕТН14977 ЗВОМОКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАУУУСАнарУвУу ВУ
ЕОУМаОсСтІ МТМ55АЗТКОаРОМЕРІ АРЗБЗКоТВОС
ТААЇ аСІ МЕОМЕРЕРУТУБМУМ5аАЇ Та УНТЕРАМІ.
О5Б5а1М5І55УММТУРБОІББІИТОТМІСМММНКРОМТК
МОЕКМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААДСОРОМЕЇ ЕР Р
КРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОУЗ5НЕОРЕМКЕММУ УМО
СМЕМНМАКТКРАЕЕОММОЗТУВМУМУМІ ТМ НОМ М
СКЕМКСКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМСТІ
РРОНОЕЇ ТКМОМ5І БСАУКаєМРБОІАМЕМЕЗМИОО
РЕММУКТТРРМІ О5ВОа5ЕРІ МК ТМОКЗНУООСМ
МЕЗБСВЗУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І РОК 1481 І С КК) З5ЕГТООРАМБ5БМАЇ аОтТУВІТ СОС О5І ВН5ММАБМУ 282 константна ділянка лямбда- ООКРИАОАРМІ МІМАКММА РБСІРОВЕЗИаЗВБаТмМтТА ланцюга ЗІ/ТІТОАОАЕОЕАОУМСМОАЕБРРТИЇ УМЕсСИаИТтКІ. рЕТНІ14979 ТМ Г СОРКААРБМТІ ЕРРЗБККІ ОАМКАТІ МСГ ІЗОБУ
РаАУТМАМКАОЗЗРУКАОМЕТТТРОЬКОЗММКУААБ
ЗМ 5 ТРЕОМКЗНАЗУЗСОМТНЕСЗТМЕКТМАРТЕ с5 9с7 УН ОМОІ МОБ АЕУККРИОаАБУКУЗСКАБИаИМТЕТЗУММН 283
МУВОАРОаССаГ ЕМ МО ІМРІСТавТОМАОКЕОа ВМТ
МТВОТ5Т5ТУУМЕЇІ 55Іі АБЕОТАУУУСАНОа СМ ЗМУ моУмсосаті УТ 9с7 МІ РІММТО5РІ БІ РИТРОЕРАБІЗСВАЗБОБІІ НОМОаММ 284
М ОММ ОКРООБРО Мі а МАВАЗаУРОВЕЗО5а
ЗатоОЕТІ КІЗВМЕАЕОМО У УСМОАВОТРТтгС ОСТ
КМЕїІК
ІО МО: 9С7(ЕЕЇ СОЗІМІ СНІ) Ес- ОМОІ МОБОАЕУМККРИОИАБУКУЗСКАБИаМУТЕТОМММН| 285 («виступ») РОГАГА МУВОАРОаССГ ЕМ МОМ. І ИЦСВТЗМАОКЕОоС,АМТ рЕТНІ14974 МТАОТ5Т5ТУММЕЇ 551 АВ5БЕОТАУУУСАВарм/БмУ
МОМ аОСсТІ МТМ55АЗТКОаРБОУМЕРІ АРББЗКоТЗОИС
ТААГаСІ МЕОМЕРЕРУТУБММЗИаАІ Та МНТЕРАМІ.
О550ІМ5І1 55 РУБ ЕТОГМІСМУММНКРЗМТК
МОРЕКМЕРКЗСВсО СОС С ЗИаСИС5ОАММТОЕРБІ ТУ5 рРаатмМті тат аАМТТ5МУАММУМОЕКРООСАБВ а ПаастТМкКвВАРСТРАВЕБИаИбі І пСаКААЇІ ТІ БАОРЕ
РЕАЕМУСАЇ ММ УМвасаИТткІ ТМІ ББАЗТКаРБ
МЕРГАРББЗКЗТ5ИастТтААГасСІ МКОМЕРЕРУТУБМУ/М 5ОаАЇГТ5аМНТЕРАМІ 05501 М5І 55УМТУРЗББІ СТ
ОТМІСМММНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРА
РЕААДССОРБОМЕЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМУОМ5
НЕОРЕМКЕММУ УМрОаМЕМНМАКТКРАЕЄєОММОТМ ВМ
ММ ТМ НОМ МЕАКЕМКСКМУЗМКАЇ САРІЕКТІЗК
АКОаОРАЕРОМУТІ РРСВОЕТКМОМ5І СІ Каву
РООІАМЕЖЕЗБМООРЕММУКТТРРМІ ОБОРОИЗЕРІ МК
ГУКА ООаММЕВСОУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 51 5
РОК
9С7ЕЕЇ Ес- ОМОІ МОБОАЕУМККРИОАБУКУЗСКАБИаМУТЕТОМММНі| 286 («впадина») РОГАГА МУВОАРИаСаГ ЕМ МО ІМРІИа ТОМ АОКвЕОоаВНМтТ рЕТНІ14975 МТАОТ5Т5ТУММЕЇ 551 АВ5БЕОТАУУУСАВарм/БмУ
МОМ аОСсТІ МТМ55АЗТКОаРБОУМЕРІ АРББЗКоТЗОИС
ТААГаСІ МЕОМЕРЕРУТУБММЗИаАІ Та МНТЕРАМІ.
О550ІМ5І1 55 РУБ ЕТОГМІСМУММНКРЗМТК
МОЕКМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕААДССРОМЕІЇ ЕР Р
КРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУУМОМЗНЕОРЕМКЕММ УМО
(Є)
МЕМНМАКТКРАВЕЕєОУМЗТивУММІ ТМ НОВУ Ма
КЕУКСКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМСТІ Р
РОВОЕЇТКМОМ5І БСАУКИаЕМРООІАМЕМ ЕБМИаО Р
ЕММУКТТРРМІГО5БОС5ЕБРГ МК тУЮКЗАМмодаТамм
ЕЗБСЗМУММНЕАЇ НМНУТОКОІ 5І Рак 9С7 1 С ГАКІ РІММТО5РІ БІ РУИТРОЕРАБІЗБСНЗВОВІ НОЗМИамМмМ 316 рЕТН14980 МГ ОМУМ ОКРООБРОГ ІМ Ї5МААЗаМРОВЕЗОЗа
ЗаТтОгтКкІЗАМЕАЕОМО УМ УСМОАВОТРТтРСа ОСТ
КУЕІКВТМААРОЗУРІЕРРБЗОВКІ КБаТАБММСІ С ММЕ
УМРАЕАКМОМУКМОМАГО5амМЗОЕЗМТЕООКОБТУ 95571 ТІ БЕКАОМЕКНКММАСЕМТНОСІ 55РУТКЕ
МАаЕС 14) Послідовності антигенів
ІО МО: пи ЕоІВ1 МАОВМТТОГ ГУМУ МАУМИаЕАОТАІАМАВТЕЇ! І ММОСММА | 139
КННКЕКРОЕРЕОКІ НЕОСАРЖУАВКМАССЗТМТ5ОЕАНКОМ5
ХМ УВЕМУМНОСОСЕМАРАСКАНЕІОЮЮТСІ МЕСЗРМІ аРУЛОЮ
МРОБМУВКЕНМІ МУРІ СКЕОСЕОМУ М ЕОоСАТОУТ СКМ НК
СУМУТ5аЕМКСАМИаААСОРЕНЕМЕРТРТМІ СМЕІМУТНВЗУК
УЗМУЗвававсСІОМУМУБЕОРАОСМРМЕЕМАВЕМАААМ5ИаАОа
РМААМУРЕЇ ЇЇ 5ІАЇ МІ УМ І 5
ІО МО: пиБоІ81 ЕСО-АсТеу-| ВІАМ'АВТЕ ММ СММАКННКЕКРОРЕОКІ НЕОСАРМ/АКМА | 140
Ес(«виступ»)-Амі міткаї СЗТ МТ ЗОБАНКОУЗУ УАЕММУ МНССЕМАРАСКАНЕРІОЮТ
СГУЕС5РМ ЯРУЛООМВВОБМ АКЕНМІ МУРІСКЕОСЕОМЛУ
ЕОСАТ5УТСК5МУНКОМУММУТЗОЕМКСАМОААСОРЕНЕМЕ
РТРТІМ СМЕМ/ТНЬУКУИБМУВ НОЗО ВСІОМУ ГОРАОСМРМ
ЕЕМАНЕУАААМУОЕОГ УгОБСБРКЗАОКТНТСРРОРАРЕЇ
ГФОРБМЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕ
МУ УМаМЕУНМАКТКРАЕЄєОУМЗТМАМУБМІ ТМ НОВУ М
СКЕУКСКУЗМКАГРАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОММУ ТІ РРСОВО
ЕСТКМОУБІ МС УКОЕМРБОІАМЕМЕБМИОРЕММУКТТРР
МГ ОБООБЕРУЗКІТУоКЗАМООСМУЕЗСЗУМНЕАСНМНУ
ТОКБІ БІ ЗРОКБОСІ МОТРЕАХОКІЕМНЕ
Ес(«впадина») ОКТНТСРРОРАРЕГ ЯСРЗМЕГЕРРКРКОТСМІЗАТРЕМТОСМ | 141
УМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМВОМЕМНМАКТКРАЕЕєОУМЗТ УАНМ
УБМІТМНООМ І МаКЕУКСКУЗМКАСРАРІЕКТІЗКАКООР
ВЕРОМСТІГРРЗАОЕ! ТКМОУБІ 5САМКОЕМРБОІАМЕМ ЕМ
СОРЕММУКТТРРУСОБОСБЕРС УЗКІОТУМоКЗАУООСММУЕ5
С5УМНЕАСНМАЕТОКБІ БІ РОК ти ЕГої!В1 МАНІГМТМОГ І УМУМАЕСАОБААТААНТЕГІ МУСМОАКН | 142
НКЕКРОРЕОМІГНООСЗРМУКТМЗОСЗТМТЗОЕАНКОІЗМІ М
ВЕМУМНОоОТМТЗЕСКАНЕІОЮТСГМЕСЗРМ Я РУЛООМОСО
ЗМ АКЕВІ ОМРІСКЕОСООММЕОВСОБЕТОКМУУНКОИМ
МУ 5ЗЕНМЕСРУФАЗСНРЕТЕМЕРТБААЇІ СЕЄІМ/ЗНЗУКІ 5 мУзназавсІОМУРОРАОСМРМЕЕМАНЕМАЕАМЗОАСІН
СТМ/РІГОБІ БІ МСЛМУМІВ ти Го!АТ1 ЕСО-АсТеу-і ТВАВТЕ ММС МОАКННКЕКРОРЕОМІНООСЗРУУКТМОС | 143
Ес(«виступ»)-Амі-міткаї БЗТМТЗОЕАНКОІЗМІ УАЕМУ/МНСаТМТ5ЕСКАНРІОЮТСЇ У
ЕСЗРМГЯРУТООМОВОБМУВАКЕВІСОМРІСКЕОСООММЕОС
ОБЗЕТСКБММНКОММУ5ЗЗанмМмЕСРУСАБСНРЕТЕМЕРТ5
ААЇ СЕБІМ/ ЗНЗУКІ БМУЗНававВсСІОМУМУБОРАОСМРМЕЕМ
АВЕУМАЕАММУОЕОІ ХгОССОРКБАОКТНТСРРОРАРЕЇ ГО
РЗМЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕММ/У
УВОМЕУМНМАКТКРАЕЄєОУМЗ ТУ! МІТМ НОВУ МОаКЕ
УКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКОРАЕРОМУТІГ РРСОНОЕГСТК
МОМБІМСІ УКОЕУРЗОІАМЕМ ЕЗМООРЕММУКТТРРМІО5 разгЕггУЗктУркЗАМОООМУЕЗС5УМНЕАСНМНУТОКЬ
І БІ. БРОКБОСІ МОТРЕАОКІЕМ/НЕ су Ео!Н1 МАОАМТТОГ УМ МАУММОЕАОТАТАНАВТЕГ ГММОСММА | 144
КННКЕКРОРЕОКІНЕОСАРУККМАССЗТМТЗОБЕАНКОМ5
УМ УАЕММУУМНОССЕМАРАСКАНЕРІОЮТСІ МЕСЗРМ Я РУЛООС
УБОБМ/АКЕНМІМУРІСКЕОСЕВМУ МЕС ТУТ СКМ НК
СУМУ Т5ЕМКСРУСААСОРЕНЕМЕРТРТМІ СМЕМУ/ТУБУК
УЗзМУЗНазвансСІОММРОРАОСОСМРМЕЕМАНЕУАААМЗОАС
РМУААМ/РІЇГ І ЗГАГСТІ УМ 5 су Гойї ЕСО-АсТеу-| НТАВАВТЕ ГМУСММАКННКЕКРОРЕОКІ НЕОСАРМ/ККМА | 145
Ес(«виступ»)-Амі-міткаї СЗТ МТ 5ОБАНКОУЗУ УАЕММУ МНССЕМАРАСКАНЕРІОЮТ
СГУЕС5РМ ЯРУЛООМВВОБМ АКЕНМІ МУРІСКЕОСЕОМЛУ
ЕОСАТ5УТСК5МУНКОМУММУТЗОЕМКОСРУСААСОРЕНЕМЕ
РТРТІМ СМЕМ/ТУВУКУИЗМУВ НОЗОВСІОМУГОРАОСМРМ
ЕЕМАНЕУАААМУМОЕОГУгОСОБРКЗАОКТНТСРРОРАРЕЇ
ГФОРБМЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕ
МУ УМраМЕУНМАКТКРАЕЄєОУМЗТМАМУБМІ ТМ НОВУ М
СКЕУКСКУЗМКАГРАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОММУ ТІ РРСОВО
ЕСТКМОУБІ МС УКОЕМРБОІАМЕМЕБМИОРЕММУКТТРР
МГ ОБООБЕРУЗКІТУоКЗАМООСМУЕЗСЗУМНЕАСНМНУ
ТОКБІ БІ ЗРОКБОСІ МОТРЕАХОКІЕМНЕ
ІО МО: пи ЕБоІВ2 МУМУКУМРІГІ Г ГМСМАТМОСЗАООВТО І ММСМОАКННКТК | 146
РОРЕОКІ НФОСЗРМККМАССТА5ЗТООЕЇ НКОТЗВІ УМЕММУ
ОНСОКМЕРАСКАНЕІО0ЮТСІ МЕСЗРМІ аРУМІОЮЮСММО5У АК
ЕВЕГОМРІА СКЕВССОВММЕВСНТЗНТСКОММУнННСаМ ОТ
СУМКСРАСАЇ СВТЕЕЗУЕРТРААЇ СЕСІЇ МЗНОЗУКУЗМУЗВ а5аАСІОМУ ЕО5БАОСМРМЕЕМАВЕМАААМНУМАСЕМІ НО
ТасСі1 І 5ГАЇГ МОЇ У пи БоІ82 ЕСО-АсТех-І ТМОС5БАОВОАТОГ І ММСМОАКННКТКРОРЕОКІ НВОС5РМК | 147
Ес(«виступ»)-Амі-міткаї КМАССТА5БТЗОЕБЕЇ НКОТ5ВІ ММЕММ ОНСОКМЕРАСКАНЕЇ
ООТСІ МЕСЗРМ аРУМООММОБ5БМУУАКЕВРЕІ ОМРІ СКЕОСОВ
ММЕОоСНТЗНТСКЗММУНАСМ ОМ Т5аММКкСРАССАІ СВТЕЕ
ЗУЕРТРААЇ СЕСІЇ М ЗНОІУКУЗМУЗНИЗавВсСсІОММБОоБАОС
МРМЕЕМАВЕУАААМНМУМОЕОЇ МЕОСОаЗРКЗАОКТНТСРРО
РАРЕГ са РБОБМЕБ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМОМЗНЕО Р
ЕМКЕММ УУрОаМ ЕМНМАКТКРАВЕЕєОММОТМАММУБМІ ТМІ НО
ОМ МаКЕМКОСКМ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ Р
РСОВОЕТКМОМБІ М/С УКОЕМРБОІАМЕМЕЗМООРЕММУК
ТТРРМІГО5БОСО5ЕБГ У5КІ ТМОКЗАМООСММЕЗСОУМНЕАЇ.
НМНУТОКОБІ БІ Рака МОІРЕАОКІЕМ НЕ пи ЕГоІВЗ МАМОММОЇ! ГІ АГ МТАДаИБАОРАБАВАНТОІ ЇЇ ММСММАКН | 148
НКТОРБОРЕОЕГ МОСЗРМККМАССТАЗТ5ОЕЇ НКОТОВІ У
МЕМ ОНСЯаКМЕРТСКВАНЕІО05СІ МЕСЗРМ аРУТНОММО
ЗМ АКЕВІ-МУРІА СКЕОСЕВММЕВСАТОУТСКОМУ НКОМУМ
МТ5аІМЕСРАСАЇ С5ТЕЕЗМЕРТРААІ СЕСІЇ М/5НОЗЕКМ ЗМУ
ЗНавансСІОММУгЕОБАОСМРМЕЕМАКЕМАААММАСАРЗВИІ
Іо пи БоІ8З3 ЕСО-АсТех-| БАВАВТОГ І ММСММАКННКТОРОЗРЕОЕЇ МОС5РМККМАС | 149
Ес(«виступ»)-Амі-міткаї СТАБТЗОБІ НКОТЗВІ УМЕМУ ОНСОКМЕРТОСКАНЕІО05С
ГМЕСЗРМІ аРУМІВОМУМОБУВКЕВІ МУРІ СКЕОСЕВУМУУМ ЕО
СсСеТ5УТСКОММУНКаТмМмМуУТЗаІМмЕСРАСАЇ С5ТЕЕЗМУЕРТР
ААЇ СЕСІЇ М ЗНОЗЕКУЗМУЗНававВсІОММРЕОБАООМРМЕЕ
МАКЕМАААММАСАРЗАСИОЗМОЕОЇ МЕОСОаЗРКЗАОКТНТ
СРРСОРАРЕГІ ЯСОРБОБМУБГ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУУОМ 5
НЕОРЕМКЕМУ УМраМЕМНМАКТКРАЕЕОММОТУВУМ5МІ т
МГЕНОРМІ МОКЕМКСКМ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМ
МТ РРСОВОЕТКМОМ5І УСІ УКаОаЕМРБОБОІАМЕМ ЕМО РЕ
МММКТТРРМГО5БОС5ЕРІ КІ ТМЮОКЗвМОООаММЕЗСБУМ
НЕАЇНМНУТОКОБІ 5І 5РаКЗасІ МОІРЕАОКІЕМ НЕ пи СОЗГ МмОоЗатнУуУвмІ а Сі БмаммаОорамЕгЕМИаСІТОТРУКМ5БІ | 150
ЗаттМ тТоРОУРаБЕПГ МОНМОоКМИаарЕВОКМИаТвоЕоНн
І 5 КЕЕЗЕГЕОБаУУУСУРАВОБКРЕВСАМЕМІ МІ ВАВМСЕМС
МЕМОММ5МАТІМІМОІСІТаСІ ГУМУ 5КМАКАКАКРМУТ В пвАпАдаавВОВаоОМкЕНВРРРУРМРОМЕРІВКОаОВОЇ БИ М
ОВ
15) Нуклеотидні послідовності для представлених як приклади варіантів здійснення винаходу
МО: 16АЗ СсАВСТаСААТТОСТТСААТСТОИНТастаААаТАААААААССса,авсасСа 151
СТТССаТТАААдатаАасСстТасСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТОСАСТОСОСТтоИаТтСсААласосСссавассАа,васатостацААТ саАТапйаСАТСАТТААСССААХд,аСсаатаасСТстТАССТОСТАСасасСА
САААТТоСсАасасТасСаТтСсАСаАтТаАССсСатаАСАСТАаСАССТОСТ
АССаТТтТАТАТОСАССТИа ТССАЛаССстТаТасаТТтСсТаААСАТАСТаСАИТ
СТАСТАСТатТаСАСИаСААСТАСТАССЯСТОИСТаТттТАСТОоСИаТТСОаАСТ
АТТаСОССОаТСААСасСсАСССТОСТААСасТт тот
МО: 15А1 СсАааТасСААТТааТТСААТСТаСТастаААСТАААААААССсааваса 152
СТТССаТТАААаТаАХасСстТасСАААасСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТОСАСТОСИТтТоатСсААл,асосСс,авасСАда,ааатстТасААТ ваАТаСаСАТСАТТААСССААХСаССсСваИаТтаасСсТСстТАССТОСТАСасСасА
САААТТоСАСвОСТСаСатСсАСаАТаАСССатаАСАСТАИСАССТОСТ
АССаТТтТАТАТОСАЛСаСТИАТоСАаСсСсТаТасатСстТаААСАТАСТасСАСТ
СТАСТАСТаТаСАСИСААСТАСТАСАТСЯ Ста ТТатТАСТТТСОаАСТ
АТТОИСИаСТСААСИаСАСССТСОСТААСасСТтТ тс 1803 СсАаСТаСААТТаСТТСААТСТИаИТасталдАаТАААААААССса,аавчаса 153
СТТССаТТАААаТаАХасСстТасСАААасСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТОСАСТОСИТтТоатСсААл,асосСс,авасСАда,ааатстТасААТ ваАТаСОаСАТСАТТААСССААХСаССсСаатаасСТСстТАССТОСТАСасСасА
САААТТоСАСвОСТСаСатСсАСаАТаАСССатаАСАСТАИСАССТОСТ
АССаТТТАТАТОСАЛИаСТИТоСАаСсСсТаТасатСстТаААСаАТАСТаСАаТ
СТАСТАСТаТаСАСИСААСТАСТАСАСТОСТОСТТСТтСсТастттса
АСТАТТИОССИСТСААЧССАСССТСОИТААСастттсТТстТ 19Е5 СсАааТасСААТТаИТТСААТСТаСТасСтаААСТАААААААССаваса 154
МІТССаТтТАААДаИТадастасСАААасСАТССИСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТОСАСТОСИТтТоатСсААл,асосСс,авасСАда,ааатстТасААТ ваАТаСаСАТСАТТААСССААХСаССсСваИаТтаасСсТСстТАССТОСТАСасСасА
САААТТоСАСвОСТСаСатСсАСаАТаАСССатаАСАСТАИСАССТОСТ
АССаТТТАТАТОСАЛИаСТИТоСАаСсСсТаТасатСстТаААСаАТАСТаСАаТ атТАСТАСТатТасСАСаСааТтаААТа,СаТатсатТАСАСТТСТТТСОАСТ
АТТОаСааСТСААпаСАСССТСОСТААСасСТтТтсТТстТ 19А4 СсАаСТаСААТТаСТТСААТСТИаИТасталдАаТАААААААССса,аавчаса 155
СТТССаТТАААаТаАХасСстТасСАААасСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТОСАСТОСИТтТоатСсААл,асосСс,авасСАда,ааатстТасААТ ваАТаСаСАТСАТТААСССААХСаССсСЯватТИТтаасСсТСстТАССТОСТАСасСасА
САААТТоСАСвОСТСаСатСсАСаАТаАСССатаАСАСТАИСАССТОСТ
АССаТТТАТАТОСАЛИаСТИТоСАаСсСсТаТасатСстТаААСаАТАСТаСАаТ атТАСТАСТОТаСсАСОЯСЯЯМЯТОИИТтТапАТССИаттасппААСАТТТСИаАС тТАТТОВИСТСААаССАСССТСИТААСОасСТТсТТстТ 15Н7 СсАаСТаСААТТаСТТСААТСТИаИТасталдАаТАААААААССса,аавчаса 156
СТТССаТТАААаТОАасСТаСАААасСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТОСАСТОСИТтТоатСсААл,асосСс,авасСАда,ааатстТасААТ ваАТаСаСАТСАТТААСССААХСаССсСваИаТтаасСсТСстТАССТОСТАСасСасА
САААТТоСАСвОСТСаСатСсАСаАТаАСССатаАСАСТАИСАССТОСТ
АССаТТТАТАТОСАЛИаСТИТоСАаСсСсТаТасатСстТаААСаАТАСТаСАаТ
СТАСТАСТаТаСАСИаСААСТАСТАССТатТсСТСоТтТАСТТСТТТСИАСТА тавапаТСсААдааСАСССТСИТААСасТТсТстТ 1586 СсАааТасСААТТааТТсСААТСТОИаТастаАдасаСтТАААААААССсаваса 157
СТТССаТТАААаТаАХасСстТасСАААасСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТОСАСТОСИТтТоатСсААл,асосСс,авасСАда,ааатстТасААТ ваАТаСаСАТСАТТААСССААХСаССсСваИаТтаасСсТСстТАССТОСТАСасСасА
САААТТоСАСвОСТСоасСаТтСАСадтТаАСССаТтаАСАСТАИСАССТОСТ
АССаТТТАТАТОСАЛИаСТИТоСАаСсСсТаТасатСстТаААСаАТАСТаСАаТ
СТАСТАСТаТаСАСИаСААСТАСТАСАТСЯСТАТСИТТоСОаТТСОаАСТ
АТТОаСааСТСААпаСАСССТСОСТААСасСТтТтсТТстТ 1605 свАдаатТасААТТОаТТаААТоТОИССЬТОСЯТааТСсТастТААААССасасСИ | 158 астссестасатсталастасСасСаасСсТСсСааАТТСАССТТСТОСАА сасатавАтТаАХластасатсасСсАд,васссСапаСАААаасстТоСаА атаваттааТСсатАТСААатТСтТААААСтТаАСа,ааТтайСАССАСИааАТ
ТтТАСЯСОИаСТССАСаТТАААааТСОТТТТАССАТТТОССасаАСаАТАС
СААДДААСАСТСТатАТСТаСАСАТОААСТСТСТаААААСТаААСАСА
ССасАатстТАСТАСТаТтТАСТАСССТССЯТОаСААТа,аТтСсТТаСтТАСОаАТ тТАТТОСССССАСОСОСсАСсасТааттАСсааТтатстос
МО: 15Е12 свАасТасСААТТСаТТаААТСТОИСТОИТОаТСТасСтТААААССасОсСО | 159 тессмасатотаад,астасасаасСстСсСапАТТСАССТТІСТОСАА сасставАТОАЛОСТОССтТтсаСсСАдвасссСсапаСАААаасСсСтТоОА стат ОаТСсОаТАТСААИТСТААААСТОАСОаТОССАССАСОСАТ
ТтТАС,СООСТОССАСТТАААСаТСаТТтТТТАССАТ ТСССОаСОАСОАТАСЙ
САДАААСАСТСТаТАТСТаСАСАТОААСТСОТСТОААААССОААСАСА
СсСасСАИТСТАСТАСТОТАСТАССССОСтТааСААТОСТСТТАСТТСОАТ тТАТТаОССОсССсССАсСсасСсАСсастааттТАсааТтатсттос 2101 САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССсававасСО 160
СТТССаТтТАААаСТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТаОСАСТОСОИТТСИаТСсААааСсссСс,аваСсСАваатстТасААТ вОАтТОпаСАТСАТТААСССААдаСааТаасСТСТАССТОСТАСОаСОаСА
САААТТССАОСВаТСаСаТСАСВАТОАСССОаТОАСАСТАИВСАССТСОСТ
АССОТТТАТАТОСАИСТА ТССАаССТаСОаТтТСсТОААСАТАСТОИаСАСТ
СТАСТАСТаТаСАСОаСААСТАСТАСЬТ ТОСТаТтттоТоСатТТсОАСТ
АТТОСОаСТСААСОаСАСССТССТААСасСстТТТСоТТСтТ 16212 САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССсававасСО 161
МІТССаТтТАААаИТОАдаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТаОСАСТОСОИТТСИатТСсАА,асосСс,авассАцвааЙТстТасСААТ вОАтТОпаСАТСАТТААСССААдаСааТаасСТСоТАССТОМТАСаСасСА
САААТТССАОСВаТСаСаТСАСВАТОАСССОаТОАСАСТАИВСАССТСОСТ
АССОТТТАТАТОСЯАИСТОаТССА,ССТаСОаТТСстТОААСАТАСТОаСАСТ
СТАСТАСТаТаСАСИаСААСТТСАСТОТТСоТОСаТаттоСатТсСОАСТ
АТТОСОаСТСААСОаСАСССТССТААСасСстТТТСоТТСтТ 21А5 сАасТасСААТТСаТТаААТСТОИСТОИТОаТСТасСтТААААССасОсСО | 162 тесстасатсталастСасСсаасТСсСОаОАТТСАССТТСТОСАА сасставАТОАЛОаСТОССтТтсаСсСАвасссСапаСАААаасСсСтТосА стат ОаТСсОаТАТСААИТСТААААСТОАСОаТОССАССАСОСАТ
ТтТАС,СООСТОССАСТТАААСаТСаТТтТТАССАТ ТСССОаСОАСОАТАС
САДАААСАСТСТаТАТСТаСАСАТОААСТСОТСТОААААСТОААСАСА сСасСсА5аТСстТАСТАСТОТАСТАССССООТаССААТОвасСтТТааТТСаА тТТАТТОСОСОСССАСОССАСсОСсТаатАСОваТатсттос 2108 вАасТасСААТТОСТТаААТСТООИОТОСТОСТСТааТААААССасОаСО | 163 тесстасатсталастСасСсаасТСсСОаОАТТСАССТТСТОСАА сасставАТОАЛОСТОССтТтсаСсСАдвасссСсапаСАААаасСсСтТоОА стат ОаТСсОаТАТСААИТСТААААСТОАСОаТОССАССАСОСАТ
ТтТАС,СООСТОССАСТТАААСаТСаТТтТТАССАТ ТСССОаСОАСОАТАС
САДАААСАСТСТаТАТСТаСАСАТОААСТСОТСТОААААССОААСАСА
СсСасСАСТСТАСТАСТОТАСТАССССТТаСОААТОСОСТТАСТТСОАТ тТАТТОСОСОСССАсСОСаСсАСсастаєтТАсааТтатсттос 19нЗ САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССсававасСО 164
СТТССаТтТАААаСТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТаОСАСТОСОИТТСИатТСсАА,асосСс,авассАцвааЙТстТасСААТ вОАтТОпаСАТСАТТААСССАА,ССсааТаасСТСсТАССТОСТАСОаСОаСА
САААТТССАОСВаТСаСаТСАСВАТОАСССОаТОАСАСТАИВСАССТСОСТ
АССОТТТАТАТОСАИСТА ТССАаССТаСОаТтТСсТОААСАТАСТОИаСАСТ астТАСТАСТОТаСАСОаЯСсСАСТОСТТОССТоТоОСТТОпааТТАСАТаСАС тТАТТИЙССОССААСаСАСССТССТААСасСтТТТСоТТСтТ 2006 САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААСсСсваасСа 165
СТТССаТтТАААаСТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТаОСАСТОСОИТТСИатТСсАА,асосСс,авассАцвааЙТстТасСААТ вОАтТОпаСАТСАТТААСССААдаСааТаасСТСТАССТОСТАСОаСОаСА
САААТТССАОСВаТСаСаТСАСВАТОАСССОаТОАСАСТАИВСАССТСОСТ
АССОТТТАТАТОСАИСТА ТССАаССТаСОаТтТСсТОААСАТАСТОИаСАСТ атТАСТАСТОТаСсСАСОИаСОаСТаААТаСАТССОТТАСТАССАТТТСОАСТ
АТТОСОаСТСААСОаСАСССТССТААСасСстТТТСоТТСтТ
МО: 20Нн7 САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССсававасСО 166
СТТССаТтТАААаСТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТаОСАСТОСОИТТСИатТСсАА,асосСс,авассАцвааЙТстТасСААТ вОАтТОпаСАТСАТТААСССААдаСааТаасСТСТАССТОСТАСОаСОаСА
САААТТССАОСВаТСаСаТСАСВАТОАСССОаТОАСАСТАИВСАССТСОСТ
АССОТТТАТАТОСАИСТА ТССАаССТаСОаТтТСсТОААСАТАСТОИаСАСТ астТАСТАСТОТаСсАСООСЯТтТОСТтаатАССаТТпасСТТАСАТОСАС тТАТТОСОСТСААдаССАСССТССТААСОаТТ СТ 118 УН СсАвдатТаСААТТОСТОСАОСТСоТОСОаСТаАааТтОААпАА,ассТОваа 167 тоСсТааТОААааТСсТоСТасСА5ААвасстосапАпОаСАСАТТСАССА
ССТАСОСТАТАДОСТОСИатТаСОАСАваССССтТапАСАА,састТСа атТавАТаВйСАСОаСАТСАТСОССТАТСТТТОСТАСАССААДАСТАСОС
АСАСААХИТТССАпаСпСАСОСТААССАТТАСТОСАСАСАААТССАССО
АВСАСАЯССТАСАТОСАЛаИаСТОАаСАаССсТаАаАТСТаАдаСАСАССИ сСатаТтТАТТАСТОтТаСОАпАасСТаТат ттстТАССатТастТаСатТАСТСОСТ
ТТсОАСТАСТОСОСОаССААааСАССАССИаТаАССаТСТоСтТСА 118 М САСАТССАВАТОАСССАаТСТОСТТССАСССТаТСтТаСАТСТОаТАСИ| 168
АВАССИТаТСАССАТСАСТТаССОаТаССАСТСАСАСТАТТАСТАСОСТ ват ааСсСсТатТАТСАССАСАААССАпапАААаССССтТААаСТосСтТ
САТСТАТОАТаССТОоСАСТТТАСААдАХаТапааТСССАТСАССТТТСА всваСАаТапАТССОСОПАСАСААТТСАСТСТСАССАТСАС,САССТТ
ССАаССТОАТаАТТТТаСААСТТАТТАСТаССААСАСТАТАССАОСС
САССАССААСЯТТТОСССАааССАССАААСТСОАСАТСААО
ЗбЕ2 ун САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССсававасСО 169
СТТССаТтТАААаСТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТаОСАСТОСИТтСИаТтСсАА,асосс,аВвасСАсаатТсТасААТ вОАтТОпаСАТСАТТААСССААдаСааТаасСТСТАССТОСТАСОаСОаСА
САААТТССАОСПаТСаСаТСАСВАТОАСССАТОАСАСТАССАССТОСТ
АССОТТТАТАТОСАИСТА ТССАаССТаСОаТтТСсТОААСАТАСТОИаСАСТ
СТАСТАСТОТаСАСИаСТСОТ ТТ СТ САСТОаСТТТОСАТСТОаСАСТАТТО ваапТСсААааСАСССТССТААСОаСТТ СТ
ЗбЕ2 М САААТСИТаТТААСаСАаТтСсТоСАпаСАСССстТаТтстттатстоСАциИ| 170 впААдадасССАСоСсттттаса,аваСсСАаТсАвАстаттАасСАас
АаСтТАСТТАаССТОСТАССАВСАСАААССТааССАвастоссСАсвас
ТОСТСАТСТАТОСАИСАТССАСаСАпааССАСТО,ВСАТСССАСАСАС ат сАатТааСАаТаСАТССОССАСАСАСТТСАСТСТСАССАТСАСС
АВАСТаСАаССТОААСАТТ ТТОСАСТатТАТТАСТаТтСАаСАСТАТАС
СААСОААСАТТАТТАТАССЯТТСОСаССАпОСОАССАААИаТОаСАААТСА
АА
9011 УН САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССсававасСО 171
СТТССаТтТАААаСТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТаОСАСТОСОИТТСИатТСсАА,асосСс,авассАцвааЙТстТасСААТ вОАтТОпаСАТСАТТААСССААд,аВСааТааСССТАССТОСТАСОаСОаСА
САААТТССАОСВаТСаСаТСАСВАТОАСССОаТОАСАСТАИВСАССТСОСТ
АССОТТТАТАТОСАИСТА ТССАаССТаСОаТтТСсТОААСАТАСТОИаСАСТ стТАСТАСТОТаСсСАСОЯаЯСОСТОаАСсСТТСЯСТЯааСТасСАСТАТТОСОСТ
САДСССАСССТСОТААСОаСТТТ СТ 9011 М САТАТТОТТАТОАСТСААТСТОСАСТО ТСТоТаССОаТОАСТоСАцИ | 172
СвААдосааСспАаСАТТоттасСсатТсСАаССАатстсТастОасСАС
ТОоСААСООаСТАСААСТАТСТСОАТТааТАССТаСААДАААССасСаИТтсА вАаСсСсСсТсАаСсТа|стТтОАТСТАССТОааСТСтТААСсСсЯСОаСсттоСОаатТ атТАССООАССатТТсАаСаасСТСстТапАТССООСАССОАТТТСАССОТ
ТаААДААТСАСЯССИататТтаААаСАпААсАСса,атТаааСОаТТтТАТТАСТИаТ
АТаСАСОаССААДИСАТТАТОААССОСаАСТТ ТТ ИТСААСОСАССААЛСС
ТССААДАТТААА
МО: 9011 М САТАТТОТТАТОАСТСААТСТОСАСТО ТСТоТаССОатТОАСТоСАцИ | 173
Мо55 СсвААдосааСсвАаСАТсоттассаттсСсА,аСсСсАсатотстастасАс
ТОоСААСООаСТАСААСТАТСТСОАТТааТАССТаСААДАААССасСаИТтсА вАаСсСсСсТсАаСсТа|стТтОАТСТАССТОааСТСтТААСсСсЯСОаСсттоСОаатТ атТАССООАССатТТсАаСаасСТСстТапАТССООСАССОАТТТСАССОТ
ТаААДААТСАСЯССИататТтаААаСАпААсАСса,атТаааСОаТТтТАТТАСТИаТ
АТаСАСИССААДОСАТТАТаАДаССОСАСТТТТОСТСААПССАССААСО
ТССААДАТТААДА
9011 М САТАТТОТТАТОАСТСААТСТОСАСТО ТСТСТаССОаТОАСТоСАСцИ | 174
М95О СсвААдосааСсвАаСАТсоттассаттсСсА,аСсСсАсатотстастасАс
ТОоСААСООаСТАСААСТАТСТСОАТТааТАССТаСААДАААССааватТсСА вАаСсСсСсТсАаСсТа|стТтОАТСТАССТОааСТСтТААСсСсЯСОаСсттоСОаатТ атТАССООАССатТТсАаСаасСТСстТапАТССООСАССОАТТТСАССОТ
ТаААДААТСАСЯССИататТтаААаСАпААсАСса,атТаааСОаТТтТАТТАСТИаТ
АТаСАСССААДОСАТТАТаСАаСОаСАСТТТТОСТСААПССАССААСО
ТССААДАТТААА
9011 М САТАТТОТТАТОАСТСААТСТОСАСТИОТСТСТаССОСТОАСТоСАСа | 175
Т97А СсвААдосааСсвАаСАТсоттассаттсСсА,аСсСсАсатотстастасАс
ТОоСААСООаСТАСААСТАТСТСОАТТааТАССТаСААДАААССасСаИТтсА вАаСсСсСсТсАаСсТа|стТтОАТСТАССТОааСТСтТААСсСсЯСОаСсттоСОаатТ атТАССООАССатТТсАаСаасСТСстТапАТССООСАССОАТТТСАССОТ
ТаААДААТСАСЯССИататТтаААаСАпААсАСса,атТаааСОаТТтТАТТАСТИаТ
АТаСАПИСААдаСАТТАТОААССЯаСТ ТТ ТО СТСААпаСАССААСО
ТССААДАТТААА
9011 М САТАТТОТТАТОАСТСААТСТОСАСТО ТСТоТаССОаТОАСТоСАцИ | 176
Тт97М СсвААдосааСсвАаСАТсоттассаттсСсА,аСсСсАсатотстастасАс
ТОоСААСООаСТАСААСТАТСТСОАТТааТАССТаСААДАААССасСаИТтсА вАаСсСсСсТсАаСсТа|стТтОАТСТАССТОааСТСтТААСсСсЯСОаСсттоСОаатТ атТАССООАССатТТсАаСаасСТСстТапАТССООСАССОАТТТСАССОТ
ТаААДААТСАСЯССИататТтаААаСАпААсАСса,атТаааСОаТТтТАТТАСТИаТ
АТаСАСИаСААДИаСАТТАТОААССОСААТТТТОСТСААпССАССАДдОС
ТССААДАТТААА
5ра Ун САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССсававасСО 177
СТТССаТтТАААаСТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТаОСАСТОСОИТТСИатТСсАА,асосСс,авассАцвааЙТстТасСААТ вОАтТОпаСАТСАТТААСССААдаСааТаасСТСТАССТОСТАСОаСОаСА
САААТТССАОСВаТСаСаТСАСВАТОАСССОаТОАСАСТАИВСАССТСОСТ
АССОТТТАТАТОСАИСТА ТССАаССТаСОаТтТСсТОААСАТАСТОИаСАСТ
СТАСТАСТаТаСАСаСТСоТТАСАТСОАСАТОСАСТАТТИСОСТСАдО
ССАСССТСОСТААСОаТТ СТ 509 М САААТСИТаТтТААСасСсАатСсТоСАааСАСССтТаТтстттатстоСАСОС| 178 впААдадасССАСоСсттттаса,аваСсСАаТсАвАстаттАасСАас
АаСтТАСТТАаССТОСТАССАВСАСАААССТааССАвастоссСАсвас
ТОСТСАТСТАТОСАИСАТССАСаСАпааССАСТО,ВСАТСССАСАСАС ат сАатТааСАаТаСАТССОССАСАСАСТТСАСТСТСАССАТСАСС
АВАСТаСАаССТОААСАТТТТОаСАСТатТАТТАСТИТСАСаСАССАТАА
СсТапАОСССААСаттсапСсСАСайсСАССАААСТасСАААТСААдДА 6вб ун САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССсававасСО 179
СТТССаТтТАААаСТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
ТАТТАСАТаОСАСТОСОИТТСИатТСсАА,асосСс,авассАцвааЙТстТасСААТ вОАтТОпаСАТСАТТААСССААХд,аСсватаасСсТстТАССТОСТАСасСасА
САААТТССАОСВаТСаСаТСАСВАТОАСССОаТОАСАСТАИВСАССТСОСТ
АССОТТТАТАТОСАИСТА ТССАаССТаСОаТтТСсТОААСАТАСТОИаСАСТ
СТАСТАСТаТаСАСаСТСоТТАСОТТОАСАТОСАСТАТТИСОСТСАдО
ССАСССТСОСТААСОаТТ СТ
МО: 66 МІ. САААТСОСаТаТттТААСсасАатстоСАсасАсоста,атсттатстоСАасі| 180 вОАААвАаССАССоСтТотсттасАа,ааассСАаТСАсА,ататТАасАос
АВСТАССТАСССТаСТАССАССАСАААССТОаССАСаИстосСАвас
ТОСТСАТСТАТОССАаСАТССАИСАИ,СИааССАСТОССАТСССАСАСАС есТсАстТааСАатааАТоСОапАСАвАСТТСАСТСТСАССАТСАСОС
АаАСТОСАОССтТОААаАттттасАататАТТАСТатСАасСсАСааАТАТ тТапАОсСССААСатТСаваСсСАСаСсАССАААСТОСААДАТСААА 144 УН вАасТаСААТТаттасааттаасасаса7асттастАсАассТацва 181 ссватосСстТаАаАСтТотТоСстТатасСАасстоСааАТТСАССТТТАОСА сТТАТаССАТОЛССТОСОИаТоСсОаСсСАсСастосАа,аааАдАда,ава,сСстоа датаватстсдастАттАстаатдатастаайТАаСАСАТАСТАСОС аАСТоСОатТаАддапвассСааТТСсАССАТСТОСАСАСАСААТТОСАДО
ААСАСОСТаТАТСТаСАСАТОААСАССССТОАаАасСсаАасСАСАСОС
ССатТАТАТТАСТатТасСОдДААСАСТОТТСТТАСаТтТаААтТастТАСОаСТ
ТТССАСТАСТаСОаСССААдОСААСССсТасТсАССсОстстоаАаТт 144 МІ САААТСОСаТаТттТААСсасАатстоСАсасАсосста,атсттатстоСдасі 182 вОАААвАаССАССоСТотсттаса,ааассСАаТСАсА,ататтТАасСАас
АОССТАСТТАСССТаСаТтТАССАаСАСЧАААССТОИАССА,ЧастоссСАцас
ТОСТСАТСТАТОССАаСАТССАИСАИ,СИааССАСТОССАТСССАСАСАС естТсАстТааСАатТавАтТоСОапАСАвАСТОСАСТСТСАССАТСАСС
АаАСТОВСАОССтТОААаАтттасАаТатАТТАСТатСсАасСсАассСААС
СсСАаВСАОСССААТТАССОСТТСОаССССАСасСсАССАААСТаСАААТСАДА
СО3, важкий сасатасластаставААТСТООСОСаССсааАстТастасаасстассСі| 183 ланцюг (МНСНІ) | «бАТСТотТаАсАстТадастатасса,ассХасвасттсАССТТСАасА
СсСстТАСЯаССАТаААСТОСО ТаСОИЯасСАсСассССтааСАААсасстась
ААТОВОТаТтоССОаСАТСАСАДаСААСаСТАСААСААСТАСОаССАССТА
СстТАСОСССОАСсАааСсТадАл,аавассаа т ТтсАССАТСА,СССОасАССИА
САССААСААСАСССТатАССТаСАСАТаААСАССССТОСЯСОССОАС вАСАССОЯССОЯТаТАСТАТТаОТО ТаСОсССАСОИСААСТТССССААСА асСстАТОТатСсСТтТаОатттассСтТАСТОСОсСасССАасаасСАссстсаТатаАс сатаТсАдасасСстАатТАССААсвасосСАа,асататтооооСстаасСА
СССАаСАССААСАССАСАТСТЯССОССААСсАасСССастотавастат
СстТастаАААСАСТАСТТССССОСА,вСССОСтТадсСса,ататсттТаадпААСТ ставсаССсСстТаАССсА,аСсааСсТасСАСАССТІ ТОССАС,СССаТтасСтТОс
АдадосАда,ассасстатастосстатостосатаатсассатасссто тТАастооСстТапОпААСАСАСАСАТАТАТСТаТААТаТСААТСАСАДОС
СТТССААСАССАААСТСОАТААСААддаИатАаССсСААдаАасСтас
СО3, схрещений | ЗАСЬИТОСАЯСТОАСТавААТСТОССЯОаССсОВАСТОСТасСАа,ССтовасСі| 184 важкий ланцюг | ССВАТСТСТОАСсАСТОАсаСТатТасСасбА,аСаасСТтСАССТТСАаСА (МНСк) СсСстТАСЯаССАТаААСТОСО ТаСОИЯасСАсСассССтааСАААсасстась
ААТОВОТаТтоССОаСАТСАСАДаСААСаСТАСААСААСТАСОаССАССТА
СстТАСОСССОАСсАааСсТадАл,аавассаа т ТтсАССАТСА,СССОасАССИА
САССААСААСАСССтТатАССТасСАСАТаАдАССССТОСОЯО,СОоССОАса вАСАССОЯССОЯТаТАСТАТТиОТО ТаСОССАСОИСААСТТССаСААСА асСстАТОТатСсСТтТаОатттассСтТАСТОСОсСасССАасаасСАссстсаТатаАс сатаТсАдасастаататаасСса,астосстоСататТАТСТТТоССос
САТССОАТОААСАасСстаААААласа,сасАассасстосатса;ата,ататст
ССТОААСААТТТТТАСССТАпаСААасСтТАдАатасСсАатааАААаТтас
АТААСаСАСТаСАаТССОаСААСТОССАСИаААТСТаТаАСАСААСА вОАСТоСААСаАСАССАССТАСТОССТатосСТоСАСССТаАСАСТОа
ТСТААСаСТаАТТАТОАДСАААСАСАААИаТСсТАСассТтасСоААаТтсАСс
ССАТСАСОСОСССТОАастоаСССОТСАСАААаАзастІСсААСАасасА сАатТатТ праймер для вСсАааСАДасСАТТАТОСАЛИаСааАСТТТТОаТСАдОас 185 мутагенезу
САВ7734
МО95О
МО: праймер для САЧСаСААДаСАТТАТаЛДОаССаспАСТТ ТТОСТСААДСС 186 мутагенезу
САВ7735
Мо55 праймер для САТТАТаААССОЯСОастТ Та СААпаСАССААЛДСИТО 187 мутагенезу саАВ7736
Т97А праймер для САТТАТОААССОСААТТТТааТСААпаСАССААСИато 188 мутагенезу
САВ7737
Т97М
УНеНІ|1605) свАдаатТасААТТОаТТаААТоТОИССТЬСЬССТааТтСстТастТААААССоасасСИ | 189 мМнНенІіІСОЗІ г атссостасатотадастасасвастсСапАТТСАССТТСТОСАА
ЕсС виступ") сасатавАтТаАХластасатсасСсАд,васссСапаСАААаасстТоСаА / РОЇАГА атаваттааТСсатАТСААатТСтТААААСтТаАСа,ааТтайСАССАСИааАТ росОмМо99 ТтТАСЯСОИаСТССАСТТАААааТСОТТТТАССАТТТОССасаАСОАТАС (інверт. ТОВ с СААДДААСАСТСТатАТСТаСАСАТОААСТСТСТаААААСТаААСАСА 1605 2-41: ССасАатстТАСТАСТаТтТАСТАСССТССЯТОаСААТа,аТтСсТТаСтТАСОаАТ росОоме999-рСОМ | ТАТТасс,асСАассасАасастасттАсвататсТССасСтТАасСАСАА 983-рЕТА13197)ї АСОСОЯСОССТАОСОО ТИаТТоССстТоТааСССССАпСАаСААОАаСАСАА аАссвасапААсАл,ассассстаавастасстСсаТаААасАСТАСТТОС ссадасссатаАСАаататставаААСсАасававАасСссСсСстТаАСААдасСа асатТасСсАСАСТІТОССТОаИССЯТаСстТаСсАааАдаСсАа,аСсаасстТаТтАСТОС сстадасла,асатааТсАсСсатТа|асстАа,аСсАасСАасстТапасСАСССА
САССТАСАТСТаСААСаТаААССАСААДаСССАаСААСАССАААИатТа сАСАДадАд,аатавАдаССсСААд,аАХ,7статалтасвссаавАдавА,ааатТос савдсвасавАавАтТоСсад,аатТасАдастасСстаААтстаасвасацА стаатасласстааСсавАтотталаАсталастатасСсассХас вастТсСАССТТСАаСАССТАСаССАТОаААСТОССТОСасССАсСаТссс стТаСААдда,васстТвААтТавататССацпАТСАСААИаСААИаТтТАСАА
СААСТАСаССАССТАСТАСОЯССОАдСсАЛаСсатаАла,аавассаатТТсАСС
АТСсАИаССапОАСОАСАаСААСААСАСССТатАССТаСАСАТОААСА авсстасасасСсвАдсапАСАсСсассататАСТАТТОТОТИаИСИасасСАСО аСААСТТсааСААСАаСТтТАТИаТО СТ ОсСатттассСтТАСставаассСА саасАссстсатаАсСсататсАдасСсасСстТАаТАССААДа,авассссСАа сататссСсСССсТаСАСССАаСАайСААСАаСАСАТСТаССасСААСА асастставастТатстТааТАААаАСТАСТТССССалаСсСссСаТтаА ссататсттавААстотаа,асасссСстТАсСсАа,аСсаасСаТтасСАСАССТТ тосдассатастасСсАдаХдасСсАда,асаасстатастосстатостосата аТсАССатТассстТстТАасСсТССсТааОпААСАСАСАСАТАТАТСТатТАА
ТатСсААТСАСААДасСсСТТсССААСАССАААИТСИАТААПСАААатСадас
ССААДВАДОаСТаСаАСААААСТСАСАСАТаСССАССЯИТтассСсАасСАСС тТаАдАХдастасдас,вапАССаТсСАаТатст сс СсСССССААААССС
ААВСАСАСССТСАТОАТСТОССОВаАСССсСсТАаатТСсАСАТОСИТаС таатааАСсатаАаССАСОААСАСССТаАааТСААаТТТСсААСТааТтА сатапдссасатаАваТасСАТААТаССААСАСААдАа,асССсасСаавад ваАаСАаТтТАСААСАаСАСсатассататаатсХасатсстсАссаТтс стТасАсСсАаапАСТаасСТаААТааСААасаАаТАСААаТасАдсатст
ССААСАДАСаСССТСОСасСсасСссСссССАТСОАСААААССАТСТССАААОС
СААДДОССаСАаССССОАСпААССАСАпСТаИтТАСАСССТасСссСсСсСсСАТО ссапвпАТаАдасСстТаАССААаААССАсатсАа,асстатаата7асстаат
СААДОСЯСТТСТАТСССАаСОАСАТСоОаСсСсЯатапвАаа тТапйаАсАасСААТ ,АваасАаСсСсапйАпААСААСтТАСААСАССсАсасстоссатастацвАс
ТеСсаАСОааСТОСТ СТ ССТСТАСАИСААДасСТСАССатТтацАСААДСА асдсста,аСсАдаСсАаапаААСаТатсТсТсАТастТоСатаАТтТасСАТИаА вастотТаСАСААССАСТАСАСОЯСАаСАХАдсСАХасстотосстатстоса
СИТАдАА
МО:
УНеНІ(1605 | адаСТаСААТТааТтТаААтТотТаататаатоТастААААССасОсСо| 190
ЕсСвпадина") Р | СТІОССТОСОСтТотТОЛаСсТасСасСвастсСОСАТТСАССТТСТОСАА
СІАГА НУВКЕ |ІсасатавАаталастасатсасСсАд,васссСаааСАААаасСсСстТСаА росомМов83 атаваттаатСсатАТСААатСсСТААААСТаАСа,аатаайСАССАСИаСаСАТ
ТтТАСЯСОИаСТССАСаТТАААааТСОТТТТАССАТТТОССасаАСаАТАС
СААДДААСАСТСТатАТСТаСАСАТОААСТСТСТаААААСТаААСАСА
ССасАатстТАСТАСТаТтТАСТАСССТССЯТОаСААТа,аТтСсТТаСтТАСОаАТ тТАТТаСОИаССАСОСИ,аСсАСсастааттАсаататсссСастАасСАССА дасасаеасссстосататссоостасСссссССАасСАасСААОаАасСАССА авссвассвасСсАсАХд,ассасттавастТассСстТааТСААаСсСАСТАСТТОС ссадасссатадссататстТааААсАласаваласссСстАСстоса а,асатТасСсАсСАССТОСССЯВссатастаСсАааАда т сТасСссСстТатАТАСЙ ссталасла,асатаатсАссатасстстТАаСАаССсТавасСАСССА
САССТАСАТСТаСААСаТаААССАСААДаСССАаССААСАССАДИИТа
САСАДадАасСатапАаССсСААаАХастасСаАСААААСТСАСАСАТИаСС
СсАсССсСатТасСсСсСАаСАССТаАдАХдастТаса,аававАсСатсАатсттсстТ
СТТССССССААААСССААапАСАСССТСАТОАТСТОССапАССССТ чвАааТСсАсАТаСсОТОИаВТтаатааАСсаТтаАаССАСаААаАСССстТаАа аТсААаТТСААСТОатАсатасас,васатавАдайТасСсАТААТаССА
АвАСААДАХДОЯССЯаЯСавааАпаАдасСАаЙТАСААСсАасСАСсаТтАсса|ататасі тТСсА,асатостсАсСсатсСстТасСсАССАааАСТаасСтТаААТОаСАдасА
СТАСААДИТаСААааТТСТоСААСАААДИаСсоСсТОИаЦасСсасссСсССАТССАДОа
АААДАССАТСТССАААДаССААдАд,чЧасАасСсссспАСААССАСАсаТтат аСсАСССТасссСсССАТСССОВаСпАТаАдаСТаАССААаААССАСаТтсСА асстотсатасСаСАаТСсАААваТстТ СсСТАТСССАаСОаАСсСАТСЯСсСаТт садатаапАдпАаСААтТаваСАаССапАпААСААСТАСААаАССАС асстоссатаставАСстТоСаАдсавастстстсСстсатаАасСААДС
СстТсАсСатапАСсААдсдасСАааастасвСАаСсАааапаААСаТтсТсТсСАТ аСсТСатОаАтТаСАТОАДааЙСТСТасСАСААССаТсСстТТСсАСасСсАаААдОада
ЄСсТсТоССсТатсТосСаааТААА
СОЗ загальний | САаИСССО,атТСаТаАСССАппААСССАаССТаАСАа,а тато 191 легкий ланцюг вдасАсСатаАСССТаАСАТатТаасСсАаТТСстТАСА,васСсасСсСатаАсСсСА рЕТА13197 ССАССААСТАСасССААСсСТаИаатТасСАапААААдасссЧчвассСаавасст
ТсАСАзапАСсТаАтТИааСааСАССААСАдаАдаАдаССССсТаасСАССС стТасСсАпАТТСсА,аСсааАТоТТаСТЯаСАппАдААл,ваССсасссСстТаАс
АсСТОТсТОИаСасСссССАасССАпААаАТаАХааССсаАаТАСТАСТОСасСс статаатТАСАаСААсСТатТавчата тсаасСсапАспаСАССАДОаСТОаА
СсАатоСстТАпйаЙТСсААСССААлсСастассссСсАаа,асатаАсостаттссс ссСбблдасАасСспАапААСтТасСАаасССААСАА,аасСссСАссстаатстТа
СсСстТаАТСАаСаАСТТСТАСССсА,сСасассатаадссатаасстацААа асСсаАСсАда,асда,ассоссатадлсассвасатайАпАССАССАССССС
АЧВСААДаСАпСАаСААСААСААдатАс,асСсСассАХасАастТАсСстадасс таАссссСсадасАХаТапААаАасССАСАааТТСсСсТАСАаСсТассСАса тТаАСССАСсСОАчСааСАаСАССатапйАпААААССаИТтасСсССССАССЯ датаслас
МО:
УНеНІ|СОЗІ сластасластаставйААтТтТаавсавасавАстаатасСАаСссТаасСі| 192
УНеНІ|1605) аваАТСстТотТаАдсаАстТаластатасСсассСАаСаасСсТТСсАССТТСАаСА
Есевиступ") СсСстТАСаССАТаАдАСТЯОСОИЯТаСсасСсАа,ЧасссстаСААдАл,васстаа / РОЇАГА ААТОСИаТатсСсСасцсАТСАЧААаСААаТАСААСААСТАСаССАССТА рРЕТА13932 СстТАсасСсСсаАСсАаСсатаАдАлаЧвасСссСасТ СсСАССАТСАаССаасАСИА (класична ТОВ з | САЯССААСААСАСССтТаТатАССТасСАаАТОААСЬЯССТаСОваССада 1605; 2-41: вАСАССОЯССЯТатАСТАТТВИТаТаСсСаасСАСИИСААСТТСОаСААСА рЕТА13932-рО | аСстТАТОТаТСТТОСТТ ТаССтТАСТОСОВаСсСАсСвасАсоСстосаТатаАдс
ОМ983-рРЕТНІЗ | ССТаТСАТСТаСТАаСАСАдАдссассстаасататтосостотавос 197) СсСсСсАасСсАаСсААаАаСАСААдаСсаасавААсАаассассставастас статаААаСпАСТАСТІ сССсСаАдасСссСсатаАСАатТатстТТапйААСА а,аАсададассСстТАСсАд,асаасатасСАСсАсСсттсстассиатастас
АдадасАда,асаасст|атАстсСсталасАаа,асатааТСсАССатасстТА аСсАаСсАаССсТааСАСССАСПАССТАСАТСТаСААСаИТаААССАСАА аСССАаСААСАССАААДа ТИСАСААплАпСатапвАаССсСААдада7стТат авАТОсССОсСАСОЧАМСОТОСЯТоСсОосавСАсСасааАдсадлтСсаАдаатТасААТТа аТТОААТСТОСТОИаТааТтсСтТааЙТтТААААсСсосасаасттссста|асатс тадастасасаастсСаайАТТСАССТІСТОСААСсСаСаИатааАТада ставаттсасССсАда,вассоСсаааСААдАлсасстссаатаават ат
ТАТСАДИТСТААДААСТОАСсОатаасСАССАСааАТТАСаЧасСаастосСА
СТТАААаатсСаТтТТАССАТ ТОССасаАСОАТАИСАААААСАСТСТ
СТАТСТаСАСАТОаААСТСТСТОААААСТаААСАСАССасАаТтстТАСТ
АСТаТтТАСТАСССССЯТаааААТОСсСТСтТТааЙТтАССАТТАТТИаСИ,аССА саасалсастааттАс,аататстТасСсастАаТАССАда,авассссАа сататссСсСССсТаСАСССАаСАайСААСАаСАСАТСТаССасСААСА асастставастТатстТааТАААаАСТАСТТССССалаСсСссСаТтаА ссататсттавААстотаа,асасссСстТАсСсАа,аСсаасСаТтасСАСАССТТ тоСсАдассатастасСсАааХдаСсАаа,аСсаасстатАстсстатостосата аТсАССатТассстстТАасСсТССсТааОпААСАСАСАСАТАТАТСТатАА
ТатСсААТСАСААДасСсСТТсССААСАССАААИТСИАТААПСАААатСадас
ССААДВАДОаСТаСаАСААААСТСАСАСАТаСССАССЯИТтассСсАасСАСС тТаАдАХдастасдас,вапАССаТсСАаТатст сс СсСССССААААССС
ААВСАСАСССТСАТОАТСТОССапАССССТаАаСТСсАСАТаСаИтась таатааАСсатаАаССАСОААСАСССТаАааТСААаТТТСсААСТааТтА сатапдссчасатТавйАааТаСАТААТаССААСАСАААаССсасСаааА ваАаСАаТтТАСААСАаСАСсатассататаатсХасатсстсАссаТтс стТасАсСсАаапАСТаасСТаААТааСААасаАаТАСААаТасАдсатст
ССААСАДАСаСССТСОСасСсасСссСссССАТСОАСААААССАТСТССАААОС
СААДДСОССАаССССаАаААССАСАПИСТатАСАСССТасСссСсСсСсСАТО сс,вппАТаАдаСТаАССААаААССАсатсА,асстатаастасстаат
СААДОСЯСТТСТАТСССАаСОАСАТСоОаСсСсЯатапвАаа тТапйаАсАасСААТ ,АваасАаСсСсапйАпААСААСтТАСААСАССсАсасстоссатастацвАс
ТеСсаАСОааСТОСТ СТ ССТСТАСАИСААДасСТСАССатТтацАСААДСА асдсстасдаСсАдааапААСаТатсТсТсАТаСТоСатаАТаСАТОА вастотТаСАСААССАСТАСАСОЯСАаСАХАдсСАХасстотосстатстоса
СИТАдАА
МО:
УНСНІ|СОЗІ сластасластаставйААтТтТаасавасавАстаатасАасСстасСі| 193
Ес(свиступ") Р | «ФбАТСТСТаАСАСТОаОСТОа ТОССЯХаССАаСаасСТТСсАССТТСАСаСА
СІАГА СсСстТАСаССАТаАдАСТЯОСОИЯТаСсасСсАа,ЧасссстаСААдАл,васстаа рЕТА13719 ААТОСИаТатсСсСасцсАТСАЧААаСААаТТАСААСААСТАСасСсСАССТА (1605, формат | СТАСИССОАСсАаСатТОАдА,ваасСсСсасТТСАССАТСАИаВССОООАСОА
Іда, 1-41: САаСААСААСАСССтТаТатАССТасСАВАТаААСАОССТаСЯВсвасСсСаАла рЕТА13719-рС. | ОЗАСАССОЯССОЯЙтТатАСТАТТИОТИ ТОСаССАСасССААСТТСОаСААСА
ОМ983-рЕТНІЗ | ОСТАТОТаТСТТОСТТ ТаССтТАСТОСОвссСсАсСвасАсоСстосаТатаАдс 197) сататсАТСТасСтТАаСАССААЛДапвасСссСАтааТтстоСссСстТаасСА
СоСсТоСсТоСсААсАХасСАсСстТтасвсааасСАсАХасаа,асоставастас стТатТСсСААдаСАСТАСТТССССаААсСсваталс,ататсаТтаслдАСТ сдассассстаАассАда,асаасаТасСАСАССТІСССва7астатсстАС
АаТоСТоАСаОАСТСТАСТОССТСАаСсАсасатаатаасса,атасссто
СсАдасАастааасСАСССАЧАССТАСАТСТаСААСаИтОААТСАСАДОИ
СССАаСААСАССААпаТапАСААСАААаИтТаАассСссСАААТСТТИатТа
АСААДААСТСАСАСАТаСССАСсСсатасСсСсСсАасСАССТаААастасСсАса вапАСсСаТатсАатсТ сс СсСССССААААСССААИСАСАСССТО
АтТаАТСТОССООАСсСоСстТаАаатТтсСАСАТОаСЯТОСТОаСТапАСаТатаА аССАСЧАдАаАСсСсСсталааТСсААаТТСААСстТаатлсатаавасвасат ваАдаатТаСАТААТАССААДЧАСААдАдассасававАапАасСАатТАСАА
СсАдасАдсатассатататсАХаСсатссТсАССатссСстТасСАССАССАС таастТаААТОаСААдОпАаТАСААаТаСААааТСТоСААСААдАасССс тсааСасСсСсСССАТСИАСААААССАТСТОСААДАДаССАААдсСаасСсАасСс
ССОАпААССАСАвататАСАСССстассссСсСАТасССсаваАТаАХаТст
САССААДСААССАсатсаасстатаатасстаайТСАААаасСтТТсСтТАТ сСсСАасСсаАСсАТСавСсСатасАХатТаапАпАаСААтТаса7асАаасСсацАа
ААСААСТАСААСАаСсСсАСОЯИсССТОССЯтТастасАСстоСсадсаастост
ТСТССТСТАСАаСААаСТСАСсСатапАСсААл,аАдасСса,ватаасСАасСА ваапААСатТтсТсТсАТаСТоСатаАТаСАТаАдааЙСТСТасСАСААС
САСТАСАСОСАСААдаАХаССТоТССсСтТаТатстсСааатААА
Ес(Свпадина") САСААДААСТСАСАСАТаСССАССИатасСссСсСАаСАССТаААСТОоСТОСс| 194 /РОГАГА НУВЕ | «ЙйпСАССаИатсАаТтс ТС сСССССААААСССААИаСАСАСССТ рЕТА10755 СсАТОАТСТОССОаАСССсСсТАасТСсАСАТаСатастаастасвАсата (1605, голова-до| ААССАСОАдАпАоССсталаатТСААатТСААстаатяса,атавАясвасо хвоста, 1-41: тапАватТаСАТААТаССААСАСААдАда,асоасСса,ааваАаавАасСАаТтАСАА рсоОмМоО99 - СсАасАсатАссататаатАааСатссТсАССаТаТтсстТасСАССАСаСАС рЕТА10755-рРЕТ | ТІВСТОАДАТО,СААСОаАаТАСААСТаСААСаТТСТоСААСАААаСОоС 813197) ТеССАаСССССАТСОАСААААССАТСТССАААДаССААдА,СвасСсАасСс
СсСсОаАпААСсСсАСсАвататасАссСстассссСсСАТОССЯваАТОаАаСтТ
САССААДСААССАсаТатсАасстстаТатасСаСАаТСАААааТстТсСтТАТ
СсСсСсАасСсаАсАТСОвСсСатасАатТаапАпАаСААтавасАХассСоаа Аа
ААСААСТАСААСАСсСсСАСОЯЄССТСТОССЯ ТаСстТасАСТоСсадсаастост тспесестсатаАдаСААасСТсАССатапАСААд,АХа,асСсАааватаасСАасСА ваапААСатТтсТсТсАТаСТоСатаАТаСАТаАдааЙСТСТасСАСААС
СсаСсТСсАСОСАСААпАаСсСТСТоСсСТаТатстСаааТААА
МО:
МНеОНІ190111 СсАаСТаСААТТаСТТСААТСТИаИТасталдАаТАААААААССса,аавчаса 195 пане ще) СТТССаТТАААаТаАХасСстТасСАААасСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС о Ес(евиступ") Р | ТАТТАСАТаСАСТОСОСТТоО,СТСсААХа,асооСса,асваССАсаатСстТааААТ
СІАГА ваАТаСаСАТСАТТААСССААХаСсваТИаТтаасСсСссСстТАССТОСТАСасасА роСОМ1057 САААТТоСАСвОСТСоасСаТтСАСадтТаАСССаТтаАСАСТАИСАССТОСТ (9011, АССаТТТАТАТОСАЛИаСТИТоСАаСсСсТаТасатСстТаААСаАТАСТаСАаТ інверт.формат, | «ІТАСТАСТИТаСАСОЯСОООЯТОАСсТсасттаастааАСТАТТОСОСТ 2-1: СААСЙИСАСССТСИаТтТААСОЯаТ СОТ СТастТАаСАСАААДОСаасССССА росомМм1057-рСО І аСЯТаттосстотаассссСстАаСАаСААДаАаСАСАТСТааСасцААС
М1051-рСОМ10 | АаСсСаЯсостава7астасстоаТтаААдаСАСТАСТІ ТоССсОСАа,аССТата 63-рЕТАН12940) | СС ТОТОСтТапААСТОТООССаСССТаАСААда,аСсаасаТтасСАСАССТ тсоесАд,ассатастасдадасХдасасстатАстстталасАасСат сатсАдссатасстТАаСсАаСсАаСсСсТвасСАСССАСАССТАСАТСТОаС
ААСИаТаААССАСААДаСССАССААСАССАААИ ТИСАСААпАдАсаТтас даСсСсСАдадастатаадтасаЧвАдсасасАасааатСсаавАда,авасааАдааАТ ссадаатасда,аста|аставААТсТСЬТСЯвСОоваАСсТаИаТаСАасСстТа асапАТСТСТаАсАстТаАластатассасСсАаСаасСсТСсАССТТСАС
САССТАСаССАТОААСТОСИЯ ТВаСИаССсСАаЧСаИсСССсСстТааСАААдСаТсст ваААТавататссСайайАТСАСААаСААаТтТАСААСААСТАСаТссСАСс
ТтТАСТАСЯССОаАСсАХаа,аСсатадла,а,вассааТТСсСАССАТСАИ,ВСсСОвасАС
САСАЧЙСААСААСАСССТаТатАССтТасСсАаАТаААсАассТтасавсасса
АваАСсАсСсассататАСТАТТа Та ТасСааСАСааСААСТТСОаСАА сАхасТтАтТататстааттасстАстававассАваасСАСССсТСаТта
АосататсАддасастлататаасастсстоСататтТАТСТТТОС
СССАТССОАТаААСАасСтТаААААдасСсаасАссасстосатса7татат
СсТасСстТаААСААТТТТТАСССТАаСОААДасСтТАААДатасяХатасАААаТт
СаАТААСасСАСТаСАатоСаасСААСТОССАСОААТСТаТаАСАСАА
САаСАСТОСААДОСАСАаСАССТАСТОССТатосСТоСАСССТОАСАС
ТтТатстТААаасСтТОаАТТАТОАСАААСАСАААатстТАСсасстасСспААатс
АСССАТСАСОСсИаСсСсТОАастоасСсссСаТтСАСАААаАасСтТТсААСсАсаа вАпАатаТтаАСААаАСССАСАССТаТоСоСсСстТаТатостТасссСсСтТаА дастастасссчаассстстТататСссТатСсСССсССАААДасСсСсСАДО
САСАСССТОАТаАТСАОСССОВаАСССССОаААдстТаАсстТасатаата аАтапвАТатТатТСССАСОАдаСАСССТаААаТтТаААатТТСААТТаСсСТАСа тасдса,а,вСатТапААатТасСАСААСаССААпАСААдАдассасавсадца
АССАаТАСААСАасСАСсатАссататаатсАааСсатссСстсАССсатсст аСАССАСаАСТааЙсСтТаААТаССААДаСАаТАСААИаТаСААСИаТтстос
ААСААдАДИаСССстТоИаЙсасСсссСсССАТСИАСААААССАТСТОСАААДИаССА
ААДОСИ(ИЧСАаССССОаАпйААССАСАСатаТАСАСССТасСсссСсСсСАТИаСС вапАТаАдасСтТаАССААаАдАССАсСатса,асстТатаТасстааТсСАА
АвдастТстТАТСССАаСОАСАТСОЯССЯтТааАХ,атТапаАаАасСААТИаС аСсАаСсСайАСпААСААСТАСААаАССсАса,асстоссатастааАСтТос
АСаасСТоСТ СТ ССТСстТАСАВСААДасСТСАССатапАСААаАдасСА сатааСсАдаСсАдапаспААСаТтсТсТсАТастоСатаАТтасСАТаАЛОаСс
ТСсТаСАСААССАСТАСАСОЯСАсСААсСАХ,ассттосстатстсасат
ААД
МО: 9011 Ес(свпади | САССТаСААТТОСТТСААТСТОСТаСТаААаТАААААААССасвСаса 196 на) СТТССаТТАААаТаАХасСстТасСАААасСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
РОГАГА НУНКЕ | ТАТТАСАТаСсСАСТОИасаТттоаТтСААХд,асосСса,авассАда,аааЙтстТааААТ росОМ1051 ваАТаСаСАТСАТТААСССААХаСсваТИаТтаасСсСссСстТАССТОСТАСасасА
САААТТоСАСвОСТСаСатСсАСаАТаАСССатаАСАСТАИСАССТОСТ
АССаТТТАТАТОСАЛИаСТИТоСАаСсСсТаТасатСстТаААСаАТАСТаСАаТ атТАСТАСТОТаСсАСОЯСЧСУОатТаАстттра7астта,аастаайАСТАТТОСИаИТ
СААДАССЧСАСССТСИаТтТААСЯСТ СОТ СсТастТАаСАССААДОСасСССсстТ ссататссоссстасвоссСССАаСАаСААдаздаСсАСсСсАХа,асСаасаасСА сла,ассастотасаста|асстТаайТСААаСАСТАСТТССССаАдасССссСаТт авАссСатТатоСстТавпААСсАаСсасвАассстАсстсааСаТтасСсАСАС стоссса,ассатастасдаАда,аттстаасстТатАтТАассталасСАас атаатсАссатасстСстТАаСАасСссТааСАСССАСАССТАСАТСТ
ССААСаТтаААССАСААаСССАаСААСАССААДИаа ТасАСААДаААсаИт ваАасССсСААаздасСсТасСаАСААААСТСАСАСАТаСССАССатасссСА аСАССТОАдАдастТасаа,ааавапАССаТтсАатст ССС СсСССССАА
ААСССААДИСАСАСССТСАТаАТСТОССОаАССССтТаАааТСАСАТОа сатаатаасйтТавАСатаАаССАСОААСАСССТаАсаТСААСТТСААС таатасатасдсс,часатаАааТасСАТААТаССААСАСАдАаСсСа сваавАдапАдаСАаТАСААСАаСАсатАсса,а тата САасатссСтСА ссатсстТасАССАавАСТааСТаААТааСААаСАСтТАСААДаТтасяАА
СатстТоСААСААЛассстсаавсасСсССссССАТСОАСААААССАТСТОС
ААДИССААд,аавасАассСсСаАпААССАСсА,аататасСАсостассс
ССАТСССОИаСАТОАДаСТаАССААаААССсАааастсАассттатасСа
САИЙТСААДАСОасСТТСтТАТСССАСаСаАСсАТСЯССОЯТаОСАаИ,чТтасвОоАаАда
СААТОСИСАСССацпАСААСААСТАСААаАССАСсасстосса,таста вАСТоСОАСОавВастТостТсТСоСсТСатаАаСААДасСТсАССатОааАСА
АдадасдсатаасдасСАааааААСаТтсТсТсАТаСТоСаТатаАТаСА
ТтТаАпасСсТСстТаСАСААССАСТАСАСаСАСАлАсСАХассттоСсстатст
СсСапатТААА 90111с САТАТТаТтТТАТОАСТСААТСТОСАСТОТСТСТасСсСсасастТаАСТСОСАСаИ | 197 росоОмМ1063 СсОААссааСсаАХасСАТтсТассаттосАаассаатстста|астасАс
ТССААСОаСТАСААСТАТСТСОАТТаСТАССТаСАААААССаватсА авАдасссТАастТастТаАТСТАССТОавастТСтТААССЯСЯСТТССсОваТат атТАссасАассаттсАдасаасттавАТССааСАССИАТТТСАСИаТ
ТОААААТСсАО!ЯССОЯТаттТаААасСАпаАдАаАса,а тасасСо ПП ТАТТАСТИат
АТаСсСАСИСААДИСАТТАТОААССОааАСТ ПТ ТОСТСААПИаСАССААДСС
ТСОАААТТАААСИатТАсСОЧатаастасАССАТСТатТсСТТсСАТСТТСССа
ССАТСТОАТаАдаСАСТТаАААТСТасСААСТОИССТСТОТ ТОТаИТасст асСтТаААТААСТТСТАТСССАСАСпАпаССАААаТтАСАХИатТааААааТта
САТААСаСССТоСААТСОЯааТААСТоССАаапАаАдатаТСсАСАадас
АЧВаАСАпССААДапАСАаСАССТАСАаССТСАаСАаСАСССсТаАСаст
САаСААДАДаСАпйАСтТАСОАСАААСАСААдАатСстТАсассТтасСаААаТтс
АСССАТСАСОСсИаСсСсТОАастоасСсссСаТтСАСАААаАасСтТТсААСсАсаа сАаАатат
МО:
МІ СНСОЗІ сда,сосатсатаАСССАпйпААСССАасстаАСАататстстаас 198 рЕТНА12940 вдасАсСатаАСССТаАСАТатТаасСсАаТТСстТАСА,васСсасСсСатаАсСсСА
ССАССААСТАСаССААСТЯСИаатТасСАапААдААдасоссЧчассСсАаасст
ТсАСАзапАСсТаАтТИааСааСАССААСАдаАдаАдаССССсТаасСАССС стТасСсАпАТТСсА,аСсааАТоТТаСТЯаСАппАдААл,ваССсасссСстТаАс
АсСТОТсТОИаСасСссССАасССАпААаАТаАХааССсаАаТАСТАСТОСасСс статаатТАСАаСААССТОТОСОСТатпто,часСацпАпаСАССАДасСтТОаА сАда,атастАаСАаСаТстТсСсАССААдАл,аасссттссататсстост авастоСстТАастТоСААдатссСАссттавАаЧчвасАссастастотСацА тасстТсатаАдАасаАТТАТТТТОоСТаАаССстТаТатаАСАаТататсстТаайАА таасчвадаСсАСстТАссттасАатТасАТАСТТТОСССЬЬСТОТасСтТа сАХатосттааАСТатАСсАа,ассталасСАаасатаайТаАСАатаСсСсСА аСсАаСсАаССсТааСАСССАСПАССТАСАТСТаСААСаИТаААССАСАА аСССАаСААСАССААСИ ТАСАСААаААас ТаСААСССААИаТТСТТаТт
УНСЦСОЗІ. сластасластаставйААтТтТаасавасавАстаатасАасСстасСі| 199
ЕсС виступ") аваАТСстТотТаАдсаАстТаластатасСсассСАаСаасСсТТСсАССТТСАаСА / РОЇАГА СсСстТАСаССАТаАдАСТЯОСОИЯТаСсасСсАа,ЧасссстаСААдАл,васстаа рЕТА13378 ААТОСИтТатоССасцсАтТСАаААасСААаТАСААСААСТАСасСсСАССТА (9011, формат | СТАСИССОАСсАаСатТОАдА,ваасСсСсасТтСАССАТСАИаВССОООАСОА
Стоз5Мар, 1-41: | САССААСААСАСССТатТАССТаСАСАТаААСсА,аСсСсТаСса,аавассСс да рЕТА1337в8-рС. | ОПАСАССОЯССОЯТатАСТАТТИОТИТОСаССАСасССААСТТСОаСААСА
ОМ1051-рСОМ!І | астТАТОТОаИТСТТОСТт ТасСстТАСТОСОваССсАасвасСАсоСстосаТатаАдс 063-рЕТА12940)ї СОТОТСАТСТОСТАОСОа ТС ССОаСТоССстТоСсататТТАТСТТТоСоС
САТССОАТОААСАаСТаАААдАХа,асСсаасассасстосатсата,7ататст аСТаААСААТТТТТАСССТАСОСаААасСТААА,атТасАаТапайАААХатТаа
АТААСаСсСАСТаСсСАатТоСааЙсСААСТОССАСИаААТСТатТаАСАСААСА
СаАСТоСААСПАСАаСАССТАСТОССТатосСТоСАСССТаАСАСТО
ТСТААВИасСтТаАТТАТОАСАААСАСАААИаТСстТАСсасстТасСаААаТсСАС
СсСАТСАССОаСсСсТАастасСсссСа ТСАСАААСАасСТСААСАаасаА вАататаАСААаАСССАСАССТатТоССсСсстТаТатостТассссСстТаААа стастаассассстсТа|атат СсстТатСсСсССССАААасСССААОСаА
СсАСССТаАТаАТСАЛОаССОЯпаАССсСсСсСадааталсста7асатаатаат ваАТатТатоССАСИАдасаАССсСТаААаТаААаТТСсААттаатАСата авАс,с,аСсатТапААаТаСАСААСасССААпАСААдАда,ассасаа,вадаасАа
САаТтТАСААСАСаСсСАСсОатАсса татаатсАаасСсатссТСАссатостас
АССсСАСаАСТааЙсСтТаААТОаСААСаАаТАСААаТаСААааТСТоСАА
СААДОАСССТСИааСассСссССАТСВАСААААССАТСТОССАААИаССААДА ваасСАаССССОАпйААССАСАааТаТАСАСССТасСсссСсССАТОАССОС
САТОАДаСтТаАССААСААССАватса,асстатаатасстааТСААДАа асСстТстТАТСССАаСаАСсАТСЯССЯТасСАатТаайпАпАаСААТапасА аСсСапАСААСААСТАСААаАССсАсасстоссатастааАсСтосСаАс вастоСсТсТссСТСстТАСАаСААДасСтТСАССаТТтапАСААдадасАаат вчасАдаСсАппсппААСаТатсТСсТсАТастоСатаАТаСАТОАЗСаСТотТ аСАСААССАСТАСАСасСАаАА,АХасстотсСстаТатстоСааатТААА
МО: 1605, свАдаатТасААТТОаТТаААТоТОИССЬТОЯаТаатстастТААААССсасасСИ| 200 інвертована, 241! СТІОССТОСО,СтТСстТОАЛаСсТасСасСвастсСОСАТТСАССТТСТОСАА сп МІО0А в СОК | СЯаСЯтТасАТОАХЛ,аСТасСаттсасСсАа,вВасссСаааСАААаасстТоСаА нЗ атаваттааТСсатАТСААатТСтТААААСтТаАСа,ааТтайСАССАСИааАТ рЕТА14096 тТАСЯСОИаСТССАСаТТАААааТСОаТТТТАССАТТ ТОССасаАСОАТАС (РЕТА140964рС | САААААСАСТСОТатАТСТаСАСАТОДАСТСТСТОаААААСТОААСАСА
ОМ983-РЕТНІЗ | ССОСАаТСТАСТАСТаТтТАСТАССССОСТОСОААТОааСТоТТастАСИАТ 197) тТАТТаСОВИаССАСОСССсСАСсастаа втТтТАсаатаСсТССастАасСАСАА дачдассстТАд,аса,атато оуюстсТасСсСсСсССАаСАасСААаСАаСАСАА аАссвасапААсАл,ассассстаавастасстСсаТаААасАСТАСТТОС ссадассСсатаАСАататстТапААСсАасСсапАаСССстТаАСАла Са асатТасСсАСАСТІТОССТОаИССЯТаСстТаСсАааАдаСсАа,аСсаасстТаТтАСТОС сстадасла,асатааТсАсСсатТа|асстАа,аСсАасСАасстТапасСАСССА
САССТАСАТСТаСААСаТаААССАСААДаСССАаСААСАССАААИатТа сАСАДадАд,аатавАдаССсСААд,аАХ,7статалтасвссаавАдавА,ааатТос савдсвасавАавАтТоСсад,аатТасАдастасСстаААтстасавасацА стаатасласстааСсавАтотталаАсталастатасСсассХас вастТсСАССТТСАаСАССТАСаССАТОаААСТОССТОСасССАсСаТссс стТаСААдда,васстТвААтТавататССацпАТСАСААИаСААИаТтТАСАА
СААСТАСаССАССТАСТАСОЯССОАдСсАЛаСсатаАла,аавассаатТТсАСС
АТСсАИаССапОАСОАСАаСААСААСАСССТатАССТаСАСАТОААСА авсстасасасСсвАдсапАсСАсСсассататАСТАТТОТИОТИаИСасасСАСО аСсААСТТССССсСасССсА0асСтТАТЯаИТОИ СТО ОатттасСссСтТАСТОСааЙсСсСА саасАссстсатаАсСсататсАдасСсасСстТАаТАССААДа,авассссСАа сататссСсСССсТаСАСССАаСАайСААСАаСАСАТСТаССасСААСА авсастставастТатстТааТАААаАСТАСТТСОаАдаСССаТатаАСсСа таттавААстТотТааСасСсссСстАСсСсАасавасСсаТасСАСАССТТТОС дассатастаСсядсдасСАд,асаасстатастосстатстосатаато
АССОСаСТассстТстТАастоссСсТааСААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТИаТ
СААТСАСАДаССТТССААСАССАААИаИТтСаАТтТААачААИа ТСИаласСсСсСА
АПСАаСТасСаАСААААСТСАСАСАТаСССАССаТтасСссСсСАасСАССТаА да,астасд,аавапАССатсАатст СС СсСССССААААСССАдДа
САСАСССТСАТаАТСТОССОСВАСоСсСсТаАааТтСсАСАТаСсатасаТаС тааАСсатаАаССАСаААаАСССТаАпаТСсААаТТСсААСстаатАСат садссасатаАваТасСАТААТаССААаАСААдАда,аСсСса,асСаааАдОааА аСАСТАСААСАааСсАСсатАосататаатСАасСаТтссСсТСАССаИтостТа
САССАПаСАСТааЙСТаААТайСААдаСпАаТАСААаТасААааТтстТосСА
АСААдДИАСССТоИаВааСасссСССАТСИАСААААССАТСТОСАААДОССАА дваасСАасССССаАаААССАСАааТтТатТАСАСССТасссСсСсСАТИаССОЯ ваАТОАдОаСТОАССААДЧАдАССАСватса,асстатаатасстаатТСААА вастТстТАТСССАаСаАСсСАТСЯССООТааАсСТапаАОпАасСААТИаСаИ
СсАассапйАайААСААСТАСААаАССАсасстсса,атаставАСТоСа
АСОаСТОСТТСТССТСТАСАаСААДасСТСАССаТтТапАСААадасАа стасаСсАдаСсАааааААСаТаТтсТСсТсАТасСстТоСатОаАТаСАТаАСаТстТ
СсТтТаСАСААССАСТАСАСаСАпйАаАсСАаа,асстотосстаТатстосааатА
АА
МО: 1605, свАдааТасСААТТОаТТаААТСТОСТОИ,ОТааТтстТааТААААСсСсасвасСО | щЩ 201 інвертована 2-41 | ст оССТОСОИОтТСстТОЛаСсТасасСваст ССОСАТТСАССТТСТОСАА з Б10баА в СОК | СаС)атасвАТОаАЛаСсТасатсасСсАас,чассссаавасСАААаасСсСстТоаА нЗ атаваттааТСсатАТСААатТСтТААААСтТаАСа,ааТтайСАССАСИааАТ рЕТА14097 ТтТАСЯСОИаСТССАСаТТАААааТСОТТТТАССАТТТОССасаАСаАТАС (РЕТА140974рс | САААААСАСТОТатАТСТаСАСАТОДАСТСОТСТОаААААСТОААСАСА
ОМ983-РЕТНІЗ | ССОСАаТСТАСТАСТаТтТАСТАССССОСТОСОААТОааСТоТТастАСИАТ 197) тТАТТаОСОСИаССАСОСОССсСАСОасТаа йттТАсаататСстССастАасСАСАА дачдассстТАд,аса,атато оуюстсТасСсСсСсССАаСАасСААаСАаСАСАА аАссвасапААсАл,ассассстаавастасстСсаТаААасАСТАСТТОС ссадасссатаАСсАататсТТапААСАасСсапАаССсСстТаАСАдасСа асатТасСсАСАСТІТОССТОаИССЯТаСстТаСсАааАдаСсАа,аСсаасстТаТтАСТОС сстадасла,асатааТсАсСсатТа|асстАа,аСсАасСАасстТапасСАСССА
САССТАСАТСТаСААСаТаААССАСААДаСССАаСААСАССАААДИТта сАСАДадАд,аатавАдаССсСААд,аАХ,7статалтасвссаавАдавА,ааатТос савдсасавАавАтТоСсал,аатТасадастасСстаААттаасваСааА стаатасласстааСсавАтотталаАсталастатасСсассХас вастТсСАССТТСАаСАССТАСаССАТОаААСТОССТОСасССАсСаТссс стТаСААдда,васстТвААтТавататССацпАТСАСААИаСААИаТтТАСАА
СААСТАСаССАССТАСТАСЯССОАдСсАЛаСсатаАла,аавассааТТсАСС
АТСсАИаССапОАСОАСАаСААСААСАСССТатАССТаСАСАТОААСА авсстасасасСсвАдспАСАсСсасСсататАСТАТТИ ТИОТОСИаасСАСИ аСААСТТоааСААСОЯССТАТИаТО ТСсСТТОСИатТтТасСсСтТАСТаСааССА саасАссстсатаАсСсататсАдасСсасСстТАаТАССААДа,авассссСАа сататссСсСССсТаСАСССАаСАайСААСАаСАСАТСТааСИаспААСА асастставастТатстТааТАААаАСТАСТТССССалаСсСссСаТтаА ссататсттавААстотаа,асасссСстТАсСсАа,аСсаасСаТтасСАСАССТТ тоСсАдассатастасСсАааХдаСсАаа,аСсаасстатАстсстатостосата аТсАССатТассстТстТАасСсТССсТааОпААСАСАСАСАТАТАТСТатТАА
ТатСсААТСАСААДасСсСТТсССААСАССАААИТСИАТААПСАААатСадас
ССААДВАДОаСТаСаАСААААСТСАСАСАТаСССАССЯтТассСсАасСАСС тТаАдАХдастасдас,вапАССаТсСАаТатст сс СсСССССААААССС
ААВСАСАСССТСАТОАТСТОССапАССССТаАаСТСсАСАТаСаИтась таатааАСсатаАаССАСОААСАСССТаАааТСААаТТТСсААСТааТтА сатапдссасатаАваТасСАТААТаССААСАСААдАа,асССсасСаавад ваАаСАСТАСААСАаСАСсатассататаатсХасатсстсАсСсатс стТасАсСсАаапАСТаасСТаААТааСААасаАаТАСААаТасАдсатст
ССААСАДАСаСССТСОСасСсасСссСссССАТСОАСААААССАТСТССАААОС
СААДДСОССАаССССаАаААССАСАПИСТатАСАСССТасСссСсСсСсСАТО ссапвпАТаАдасСстТаАССААаААССАсатсАа,асстатаата7асстаат
СААДОСЯСТТСТАТСССАаСОАСАТСоОаСсСсЯатапвАаа тТапйаАсАасСААТ ,АваасАасСсапйАпйААСААСтТАСААаАССсАсасстссатастацАс
ТеСсаАСОааСТОСТ СТ ССТСТАСАИСААДасСТСАССатТтацАСААДСА асдсстасдаСсАдааапААСаТатсТсТсАТаСТоСатаАТаСАТОА вастотТаСАСААССАСТАСАСОЯСАаСАХАдсСАХасстотосстатстоса
СИТАдАА
МО:
СОЗ3, легкий сАдадассаТсатаАСССАппААСССАассСстТАСАаТатстоСстаОас 202 ланцюг, злитий з| йСАССаТаАСССТаАСАТатТааСАСТТСсТАСАваСасСссСсаТаАССА
СНІ; СсСАВСААСТАСаССААСТОВатаСАппАААА,асоСсааССАвасСстТ
Ес РОГАЇ А; тЄАаАдапАСТОАТСИааСОаапСАССААСААпАсАа,аСооСстаасСАССС рЕТА13862 СстТасСсСАвАТТСсАОаСОпАТоТСТаСТаООСаАаСААдАд,ваССасСссСстТОАс (капа-лямбда- АсСТИтТСтТааСаСССАаССАВААвАтТаАваССаАаТАСТАСТИАСИаСС антитіло з статаатТАСАаСААССТОТОСОСТатпто,часСацпАпаСАССАДасСтТОаА загальним сАдатасталаСсАаСасСсТАаСАССААлапаСССАтТааТсТоССсстТ легким ваСАСССТоСТоСААвАдаСсАСсСстотасовасвСсАсАл,аСса,сосстааа ланцюгом анти- | СТасССстТасТСААСаАСТАСТТССССОаАдАсСсоватоассататсатоа
СОЗ3, злитим з ААСТСАСОИаСсасССссСстТаАССсА,ВСсааСаТасСАСАССТТОССЯасСтТаТто
СНІ-Ес РИгАЇ. | СТАСАЯТОСТСАСОАСТСТАСТОССТоАасА,7са таатаАСсатас
А. МН, злиття з. | ССТОСсСАЛааСсАасСтТТапаСАСССАСАССТАСАТСТаСААСаИТтаААТСА константною СААДИЙСССАССААСАССААДИааТапйАСААпАААатТТаАласСсСсСАААТСТ ділянкою капа- | ТаТЗАСААДААСТСАСАСАтТассСсАСсСатассСАаСАССТадАастТа або лямбда- сда,чапАССаТтсСАаТтсТ сс СсСССССААААСССААОСАСАС ланцюга ССТСАТОАТСТОССООаАССССтТаАасСТСАСАТаСОЯТОИСТОИаИТтОаАС рЕТА13859-РЕТ | атадаССАСОААаАСССтТаАпатСААСТТСААСстТастАсатаавАсСа
В813860-ЕТНІ1З | асСОсОсТапйАчСатТасСсАТААТЯаССААСАСААдАа,асСсаса,вааАдсадасСА,тТ 862) АСААСсСАаСсАСсатАсСсататаатсАаСаТССстТСсАССИаТССТасСАССА аваАСТааСТаААТааСААДИСАаСТАСААаТаСААсатТСТоСААСААА аДоСсТСОпаСасСсССССАТСОАСААААССАТСТОССАААОаССАААааваС
АВССССОАСААССАСАВ,ТОТАСАСССТаСсССССАТСОССОСОСАТОА
ССТОАССААСААССАватсАасСсСсТАССсТасстааТСАААСастТТо
ТАТСССАССОАСАТСЯССОЯТОсСАасСТаппАпАдаСААтТавсасАассСа
САСААСААСТАСААВАССАСсасстоСсСсИастаставАСТОСаАСОаасСтТ
ССТТСТССТСТАСАаСААДаСТСАССатапАСААладасСсАаатаасСА всСАВСпСААСаТтсСТстТСАТаСТоСаТаАТаСАТаАдОааСТСТасСАС
ААССАСТАСАСИаСАСЧААаАдассттСсСстаТатстосСацатААА 1605, МН, свАдаатТасААТТОаТТаААТоТОИССЬТОЯаТаатстастТААААССсасасСИ| 203 злитий з астссестасатсталастасСасСаасСстТССааАТТСАССТТСТОСАА константною сасставАТОАЛОСТОССтТтсаСсСАдвасссСсапаСАААаасСсСтТоОА ділянкою капа-. | 0СТОССТТаИТСИатАТСААИТСТААААСТаАСаатайСАССАСОСАТ ланцюга; ТтТАСЯСОИаСТССАСаТТАААааТСОТТТТАССАТТТОССасаАСаАТАС рЕТА13859 СААДДААСАСТСТатАТСТаСАСАТОААСТСТСТаААААСТОААСАСА
ССасАатстТАСТАСТаТтТАСТАСССТССЯТОаСААТа,аТтСсТТаСтТАСОаАТ тТАТТаОСОСОССАСсСОсаСсАСсастааттАссататсттса7астаасатоа
ДастоссСТоСаТтаТСсАТСТТСССАССТТССОАСОАдОаСАОСТОАА стоссасСсалосасттстатататТасСсСтТасСстТаААСААСТТСТАСССС сасвАдпаСсСААл,ваТасСсАаТапААааТапАСААсассстасСАаТос
СОСААСАаССАСаААТССИаИТаАССпАаСАСОАСТоСААпаАСАСС
АССТАСТОССТаТоСТоСАСССТаАСССТаТССААпаССаАСТАСО
АСААОСАСААдсататАсасстасСаААаТаАСССАССсАцваасстТатТо тТАаССССаТОАССААаТСТТ ТСААСС,аса,а,СаАИаТас
МО:
СО3, МН, злитий | АДХСОТОСА,аСТаСТавААТОСЯавССОоСаАасаАдстТаастасАассТаОсС | 204 з константною ааАТСТотТаАлсАстТатта,атаСсасстосаастТТсСАССТТСТОСАС ділянкою СстТАСасСсСАТОААСТОСИаЯтТасСОаАдСсАЧастостаасСАада,авасстааА лямбда- АГаСвататоССОапАТСАСАТССААСТАСААСААСТАСасСсСАССТАСТ ланцюга; дса,ассаАстСатадла,аавассСай тСсАССАТСТСТС,СаСАСаАСТО рРЕТА13860 СААСААСАСССТаТаТтАССтТасАВАТаААСТОССТаСЯоО,васСсадааАС
АссассататАСТАТТОТИО ТИСИааСАСаСаСААСТТСИСаСААСТОСТ
АТататоттаеааттасстТАстассасСсАа,саасСсАсостатаАссат атТсАТСТаСсСтТАаССССААСсСастТассссСсАаа,асатаАссстаТттосс
СсСсСАаасАдаСсаАдапААСсТасСАпасССААСААдсассассстаатстас
СстТаАТСсАаСаАСТТСТАСССсАсСасассаталссатвассСстааААда асСсаАСсАда,асда,ассосСсатадл,аасс,васСсатааАпАССАССАССССС
АЧВСААДаСАпСАаСААСААСААдатАс,асСсСассАХасАастТАСсталасСс таАссссСсадасАХаТапААаАасССАСАааТТСсСсТАСАаСсТассСАса тТаАСССАСсСОАчСааСАаСАССатапйАпААААССаИТтасСсССССАССЯ датаслас
МО:
МНОНІ|ЗбЕг1 СсАааТасСААТТаИТТСААТСТаСТасСтаААаТАААААААССааваса 246 "МнНеЦІСоЗзІ ге | СТТССИТТАААДатТаАдаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС "виступ") ТАТТАСАТОСАСТОСИТтТоатСсААл,асосСс,авасСАда,ааатстТасААТ / РОЇАГА ваАТаСаСАТСАТТААСССААХСаССсСваИаТтаасСсТСстТАССТОСТАСасСасА росОмМ1056 САААТТССАаОСааТтСаСатСсАСаАТаАСССАТОАСАСТАССАССТСТ
АССаТТТАТАТОСАЛИаСТИТоСАаСсСсТаТасатСстТаААСаАТАСТаСАаТ
СТАСТАСТаТаСсСАСИаСТСТТТСТТСсАСТОСТТТОСАТСТаСАСТАТТОа вааТсСААдпаСАСССТСИаТтТААСасатттсСТстТастТАаСАСАААасаС сссласататссосттасссСссСстТАаСАаСААаАасСАСАТСТОССО вААсАдасса,ассставастасстатаААапАСТАСТТоССадасСс татаодсса,ататостТааААсТоТаАИСасСсСсСстТАСААла,аСсааСсаТтасАс
АССТІТоСсАС!СССОЧТасСстТасСАаа,аАХда,аСсАХ,аСсаасСсСстТаТатАСТСОТСТаАаСА авсатаатсАассатасстаасдасСсХасстайаСАСССАСАССТАСАТ
СТтТаСААСИТаААССАСААДасСсССАасСААСАССАААИатасаАСААСААа атавдасССсСААдсАХастТатаадтааСсавАдсал,ваватос,асаАавасСца дваАТоСсаАХдосатасХда,астастааААТСТОССЯСвСаваАСсТаатасА а,асстаасаваАТСТСтТаАдаАстТаАл,аста,атассасСсХ,сааЙстТсСАС
СТТСАаСАССТАСаССАТаААСТОСЯЯ ТВаСсИасССАпвассссСстТаасСААА васстапААТавВататссСацпАТСсАЧААаСААаТАСААСААСТАСаИ
ССАССТАСТАСЯССаАСсАХаСсатаАлд,авассаайТТСсСАССАТСАЛСССаИ ваАСОАСАаСААайААСАСССТаИатТАССТаСАСАТОААСАаССТасавс а,ассададАСсАсСсассататАСТАТТИТаОТаСсааСАСИССААСТТСОа аСсААСАОСтТАТИТОИТСТОЯаСТОрТасСссСтТАсТа,аВвасСссСАапасСАСССТ сатаАссатаТсАл,асастаататавсосастсстосСататТТтТАТС
ТТСССССАТССОАТОаААСАаСТалААлласавВасассасстосатса тататстТастТаААСААТТ ТТАСССТАСССПААасСТАААатасАатась
ААДОСТасСАТААСОЯСАСТасСАатоСсаасСААСТОССАаСААТСТатаА
САПСААСАЧСАСТССААапАСАасСАССТАСТОССТатосСТоСАСССТ
САСАСТаТтТсСТАДааСТОАТТАТИаАСАААСАСАААИ,ТСТАСаИТссТасСа
ААИТСАСССАТСАССХаССТОаАЛастасссСаТСАСАААДаАасСтТТСАА сдасапАаАдаТатаАСААпйАСССАСАСсСТатоссссттаТтостасс
ССстТаАдАХдастаставсаассстсТТтат сстТатСсСССССААДОаС
ССААДВСАСАСССТаАТаАТСАССсСОапАССССсСадАаталхсстасат атастТавАТатТаТтоССАСИАДаСаАСССТОААаТОаААаТТСААТТОС тАсСатТасвАСсааСсатТапААаТаСАСААСасССААЧАСААдАассасиась авАдапАдаСсАаТАСААСАаасСсАсатАссататаатСАасСатсстТсАССа теСстТасСсАССАаСвАСТааСТаААТааСААаСпСАСТАСААаТтасАдаатТ
СТоСААСАААДаСССстСаавсасСссссССАТСОАСААААССАТСТОСААДА аССААДОпчасСсАасссСсСспаАПААССАСАСаТатТАСАСССТасссСсСсСА тассаапАТОАДаСТаАССААайААСсСАасастоАасстатаатасста аТСсАААвастТстТАТСССАаСаАСсАТСавВсСсатааАдатаайаАпАасСА
АТасСасСАаССапАСААСААСТАСААСАССАСсасстосса,атастааА
СсТоСаАХсаасСсТсСТсТссСТСстТАСАаСААДасСТСАССатапсАСАда дасла,аатаасХаСсАдавапААСаТтсТСсТАТаСтТоСатаАТОаСАТОа
АЧВастостТаСАСААССАСТАСАСОСАСААаАдасСсттосстТаТатстос ааатТААДА
МО:
ЗбЕг2- СсАаСТаСААТТаСТТСААТСТИаИТасталдАаТАААААААССса,аавчаса 247
Ес(Свпадина") СТТССаТТАААаТаАХасСстТасСАААасСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОС
РЕИГАГА ТАТТАСАТОСАСТОСИТтТоатСсААл,асосСс,авасСАда,ааатстТасААТ росОмМ1050 ваАТаСаСАТСАТТААСССААХСаССсСваИаТтаасСсТСстТАССТОСТАСасСасА
САААТТССАаОСааТтСаСатСсАСаАТаАСССАТОАСАСТАССАССТСТ
АССаТТТАТАТОСАЛИаСТИТоСАаСсСсТаТасатСстТаААСаАТАСТаСАаТ
СТАСТАСТаТаСсСАСИаСТСТТТСТТСсАСТОСТТТСоСАТСТаСАСТАТТОа адаатТсААдааСАСССТСатААСваТт т стстТастТАаСАССААДО,СаС ссестосататссосстаассССсСсСсАаСАаСААпАдаСАССАаСсИаас авасСАсАд,7ассастотааастТасстТаТСААдаСАСТАСТТССССада сссатаАдссататстТааААСАа,аСсасаа,асссталсстосасвссата
СсАСАССТТССССЯССОЯАТастТасСАаАдаТ тт сТасСссСстТатАТАаССТОА асала,асатаатсАссатасстСстТАаСсАасстааСАСССАСАССТА
САТСТаСААСИаТаААССАСААДаСССАаСААСАССААДИ,СатааАСААа
ААдсатапвАасСссССААаАдастТтасСсаАСААААСТСАСАСАТаСССАССИТ аДСсСсАаСАССТАдАда,аСстТасСсааавасаАдссатсАатстсстстосс
СССААДААСССААаСАСАСССТСАТаАТСТОССОвВаАССоСсТаАаатТо
АсАТОССОТОСТОИаТОпАСатаАасССАСОААСаАСССтТаАсаТтсСААИТ тТСсААСТОСтТАСОЯатТасАсавасатавАдасТасСАТААТИССААСАСААА аАвссасававАдадпАаСАатТАСААСсАаСсАСсатАссататастАХасат
СсСТСсАСсСсатосСстТасСАССАаСАСТааСТаААТаССААСаАаТАСАДОа
ТтТаСААВИТСТоСААСАААаИассстааСасСССсССАТСОАСААААССА
ТСТСсСААДОССААд,аааСсАаССССаАаААССАСсА,аататасАссст аДоСсСсСсСсАТСССОааАТаАаСТаАССААаААСсСАаатСАасстстса тасаСсАаТСсАААвастТстТАТСССАаСОаАСсСАТсОавСсСсатаалатаца
АвАаСААТОСИаСАассапАаААСААСТАСААЧАССАСасстоссат а,аститаАстТСсаАдсаастстстссТатаАаСААДаСТСАССаТта вАСАдадасаХаатасАаСсАа,аапапААСаТатсТСсТСАТастоСаТатаА
ТтТасАТаАДааСТСТасАСААССАСТАСАСИаСАЧАчАаАаСсСТСТосстТ аТстТоСацатТААА
ЗбЕ21С САААТСОИатТатТтТААСсасаатстСАаасАСССстТатстТатсТСссСАСцИ| 97 рсоОмМм1062 ваААдАдадасСсСсАссстттасаавааССАаТСсАсАхататТАасСАас
АССТАСТТАЯССТОааСТАССАаСАСАААСсСсТвассСсАавастоссСсАаас
ТОоСТСАТСТАТОСАаСАТССАаСАпЧаасССАСТаАССАТСССПпАСАСА аватСсАдатаЙСсАаТапАТССИСайСАСАСАСТТСАСТСТСАССАТСАС
СсАаАстТаАдасСсСстТаААаАТТТасСАаТатАТТАСТатСсАасСАСТАТА
ССААСОААСАТТАТТАТАСЯТ ТССаЯСССАСИаасСАССАААИаТтасАААТС
АААДАСОИаИтТАСОИЧОаТаасСтТасАССАТСТаТтСсСТТсСАТСТТСССассСАТСТОаА
ТтТаАОСАСТТОАААТСТОСААСТаАССТОТО ТТИТИатТасстастОаААТА
АСТТСТАТСССАСАЧАдпаССАААатАСсАатапАдАаатасАТААСаСс
ССТоСААТСОСОаТААСТОССАсСаАд,аАХататСсАСАаАдаСАааАСАсС
ААВСАСАаСАССТАСАаССТСАаСАаСАСССТаАСастаАасСААДАДО
САПСАСТАСОАИАААСАСАААИаТ тСсТАСаИаТсстасСаААаТСАСССАТСА маавсотАдастасСссССатСАСАААаАдастТТСсААСАаа,асасАаАаТтат
СОЗ МІ СНІ сда,сосатсатаАСССАпйпААСССАасстаАСАататстстаас 198 рЕТНА12940 вдасАсСатаАСССТаАСАТатТаасСсАаТТСстТАСА,васСсасСсСатаАсСсСА
ССАССААСТАСасССААСсСТаИаатТасСАапААААдасссЧчвассСаавасст
ТсАСАзапАСсТаАтТИааСааСАССААСАдаАдаАдаССССсТаасСАССС стТасСсАпАТСсА,аСсааАТоТТаСТЯОаСАппАдААл,васСассстаАс
АсСТОТсТОИаСасСссССАасССАпААаАТаАХааССсаАаТАСТАСТОСасСс статаатТАСАаСААССТОТОСОСТатпто,часСацпАпаСАССАДасСтТОаА сАда,атастАаСАаСаТстТсСсАССААдАл,аасссттссататсстост авастоСстТАастТоСААдатссАссттавАадчвасАссастастотсааА тасстТсатаАдАасаАТТАТТТТОоСТаАаССстТаТатаАСАаТататсстТаайАА таласчвадаСсАСстТАссттапвАаТтТасСАТАСТТ ТОССССОЯСТ,аТасСтТа сАХатосттааАСТатАСсАа,ассталасСАаасатаайТаАСАатаСсСсСА аСсАаСсАаССсТааСАСССАСПАССТАСАТСТаСААСаИТаААССАСАА аСССАаСААСАССААСИ ТАСАСААСПААасТаСААСССААИаТТсСТТат
МО:
КБЗА САдаАссатаТАСССАапААСССАасССстАСсАаататстстааСаасСА| 205 пі сСатОАСССТаАСАТатТаасСсАаТстТАСсАасСасСсасСаТаАССАССАаСАА
СстТАСасСсСААСстасиИатасСсАааСАЧаААда,аСсАаа,аасСАавчастсСАадасАСТа
АТССсСИаИСааСАССААСсСОасСАсАаасооСстааСАсосСстассСАаАТТСАасСа аАТоОТоОТаСТОасАсСОаААдАасасСсассстадсАстаТатстаасатасАасс тТаААСАтТадсаасСсаАаТАСстТАСстТас,асоСстатасаТАСАаСАдоСстаТатас ататссвсассаАСпаСАССААДасСТаАСАСсСТоСтТА 59ЗА САдаАссатаТАСССАапААСССАасССстАСАаа тТатстоСстааСсасСА| 206 пі сСатОАСССТаАСАТатТаасСсАаТстТАСсАасСасСсасСаТаАССАССАаСАА
СстТАСасСсСААСстасиИатасСсАааСАЧаААда,аСсАаа,аасСАавчастсСАадасАСТа
АТССЯИСИапСАССААСААдаАХсАасоСоСтаасСАССССТасСсСАВАТТСАССаИ аАТоОТоОТаСсСТООаСпАсСалдАдАадсасСсассстаАСАСстатстассатасСсАасс тТаААСАтТадсаасСсаАатТАСстТАСстТас,асоСстатасТАСасСссСААССТаТатас ататссаассаАааСАССААасСтТаАСАаТоСтТА
МО:
ЗЗ35Н сАд,аатТасСсААТттОеатапАддаСсаавАасаассвсасствтаАдАасстаасСОасАТ| 207 пі сттТаАвАстТаластатасСасСАаСаасСТ САССТТСАСаСААСаТасста вАТаИсСАСТОССаЯТОСОСССАсСасссстасАААдАдасАстаХатасватацся
АсаспАТСААпдаСАдаАССссАтаавсааСАССАССОАСТАТасСассосст стаддасасСсасТТСАССАТСАДаСАаааАСОсАСАасСААСААСАСССтТаИТт
АССТаСАСпАТаААСАасССтТаААААССО,АасАСсАсСсассСа ТаТАСТАСТОаС
АССАСсСсСсССТООСОсАатТастоттаатТАСаАСТАТТаСОЯаоСАасааСАССС тсатаАассататосттастАас а495 сАд,ааТасСсААТТОеатаспАдд,аСсасвАа,аассвса7асствтаААасстаасСОасАТ| 208 пі сттТаАвАсталастатасСасСАаСаасСТСАССТТСАаСАДСОаССсСтТа свАТОДОСТОСОСТаСсОаСССАвассссСтасАААдАлдсааАаствАатааа7татос
СсаОАТСАдадасСсААаАдССаАдтааСсайСАССАССОАСТАТасСсассоста тТаАдАаса,аасСайТТСсАССАтТоАасСсАдасаАСаАСАаСААаААСАСССТатА
СсСТаСАСАТаААСАаССТаААААССадапАСАССасСаТатАСТАСТОаСА
СсСсАСсССсСсССТОСООСАасСТастттастТАСаАСтТАТТасовасСАаа,асасАссстТ сеталдссататсттТастАас 8505 сАд,ааТасСсААТТОеатаспАдд,аСсасвАа,аассвса7асствтаААасстаасСОасАТ| 209 пі сттТаАвАсталастатасСасСАаСаасСТ САССТТСАаСАдСасста свАТОДОСТОСОСТаСсОаССА,аассССтаайАААдАсаАастсАатасатасва
АТСТАТСААДадасААсАдоСсадсавасааСАССАССаАСтТАтТа7асСсасссст стаддасасСсасТТСАССАТСАДаСАаааАСОсАСАасСААСААСАСССтТаИТт
АССТаСАСпАТаААСАасССтТаААААССО,АасАСсАсСсассСа ТаТАСТАСТОаС
АССАСсССсСССТОВСОСАас,СТастоттааТАСаАСТАТТаСООСоСАасааСАСоС тса,;атаАдссататосттТастАас
М9бУ сАд,ааТасСсААТТОеатаспАдд,аСсасвАа,аассвса7асствтаАдАасстаасСОасАТ| 210 пі сттТаАвАсталастатасСасСАаСаасСТСАССТТСАаСАДСОаССсСтТа свАТОДОСТОСОСТаСсОаССА,аассССтаайАААдАсаАастсАатасатасва
АсаспАТСААпдаСАдаАССссАтаавсааСАССАССОАСТАТасСассосст стаАдасасСсасТТСАССАТСАДаСАаааАСаАСАаСААапСААСАСССтТаИТт
АССТаСАСпАТаААСАасССтТаААААССО,АасАСсАсСсассСа ТаТАСТАСТОаС
АССАСССССТАСОЯаАлСсСТастоттааЙтТАСаАСТАСТОССВвасСАсасвсСАСос тсатаАсСатТатСсАТСТаТастАас
М98У сд,ааТасСсААТттОеатавпАдд,аСсасвАасаассвса7асствтаАдАассТааСОасАТІ 211 пі сттТаАвАсталастатасСасСАаСаасСТСАССТТСАаСАДСОаССсСтТа вАТОДОАСТОСОСТаСсОаССА,аассССтТапАААдАасаАастсАатасатасва
АсаспАТСААпдаСАдаАССссАтаавсааСАССАССОАСТАТасСассосст стаддасасСсасТТСАССАТСАДаСАаааАСОсАСАасСААСААСАСССтТаИТт
АССТаСАСпАТаААСАасССтТаААААССО,АасАСсАсСсассСа ТаТАСТАСТОаС
АССАсСсСсССсТОаасАатТАСстоттаатТАСОАСТАСТОСЬЯаСсСАа,аспСАСос тсатаАдссататсАТтСТастАас
МО: 9007 САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССааасСОасСТІ | 212 пі ССаТТАААИТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТСОСТАТТАС
АТаСсСАСТОСОИТТСаТтСсААдасосСс,ввассАцвастСсТпААТОаАТасОС
АТСАТТААСССААДОаСОВИСТаОСТСТАССТОСТАСОСОСАСАААТТССАСО аТсаСаТтСАСОАТОАСССОаТОАСАСТАВСАССТСОТАССОТТТАТАТОаСА аДСсТатссСА5аСсСсТСаТтСстТОААСАТАСТаСАСТатАСТАСТИаТОСАСОС
ААСТАСАСТАТСИТТаТТТСоТоСОаТТсОАСТтТАТТОСССТСААпасСсАСССТ
СатААСсааттстстастАас 90С1 САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССааасСОасСтТІ | 213 пі ССаТТАААИТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТСОСТАТТАС
АТаСсСАСТОСОИТТСаТтСсААдасосСс,ввассАцвастСсТпААТОаАТасОС
АТСАТТААСССААДОаСОВИТааСТСТАССТОСТАСОСОСАСАААТТССАСОИ аТсаСаТтСАСОАТОАСССОаТОАСАСТАВСАССТСОТАССОТТТАТАТОаСА аДСсТатссСА5аСсСсТСаТтСстТОААСАТАСТаСАСТатАСТАСТИаТОСАСОС
ААСТАСТТСАТСЯССТТоТаТтТастАТОСАСТАТТИСОСТСААпаСАСССТ
СатААСсааттстстастАас
БЕВ УН САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССааасСОасСТІ | 214 пі ССаТТАААИТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТСОСТАТТАС
АТаСсСАСТОСОИТТСаТтСсААдасосСс,ввассАцвастСсТпААТОаАТасОС
АТСАТТААСССААДОаСОВИТааСТСТАССТОСТАСОСОСАСАААТТССАСОИ аТсаСатТСсАСОАТОАСССОаТОАСАСТАВСАССТСОТАССОТТТАТАТОаСА аДСсТатссСА5аСсСсТСаТтСстТОААСАТАСТаСАСТатАСТАСТИаТОСАСОС ватстТОАСТТАСТСОТАТОСАСТАТТОСССТСААпаСАСССТОСТААСОа тет стТасСстТАсс
БЕВ МІ САТАТТОТТАТОАСТСААТСТОСАСТО ТСТСОТОССОатТОАСТоСАпасСОА| 215 пі АссЧвасСсаАаСАТТТСТТассСатТсСАаССАаТСсТСТасСтТаСАСТОСААС
СОаСтТАСААСТАТСТСОАТТОСТАССТОаСАААААСсСсОвватсАпАасСосстТо дастастаАТСТАССТавасСТСстТААсСсЯаСсасттосвататТАССоаАССа
ТПсАаВСОааСТСТаОАТССООСАССОАТТТСАСОСТТОААААТСАСССИТ
СТТОДАаСАСААДаАдСатТавасСОаТТтТАТТАСТОТАТаСАСОаСАСТаСАСА
ТТоСАААСАСТТ ТТОИТСААСОСАССААСИаТСОАААТТАААСОТАСО 12А4 УН сАдасТасСААТТЯТТВСЛАСТОТОСОоСЯваАасС,аСсттастТАСсАХаа,аСсСстТвасОосИ 216 пі ТоССТОАвАСТоТОСТатаСсАасССсТоСОаСпАТТСАССТТТАССАСТТАТИОаС
САТОлХОСТасСОастоСасСсАас,васСстТоСА,соаАдАлса,асаставаатаастосто
А,аСТАТТАСТОСТАИСТОаТОаТАСаСАСАТАСТАСОСАСАСТОСИаИТОААС васССОпаТТСсАССАТСТОСАСАСАСААТТССААСААСАСаТсСстТатАТСТаС
АВАТОААСАОЯССТаАас,САаа,аССаАдапАСАСааССОаТАТАТТАСТатаСаАА
АТАСОЯСТТАСОЯаСтТотТааАСТАСТОСОСаССААаСААСССТааТСАССаТтс тоаАаТасСтТАсс 12А4 М САААТСИТаТтТААСасСсАатСсТоСАааСАСССтТаТтст татстоСАпОсО | 217 пі АААаАХаСсСАСССТотттасСса,ввасСссСАаТСсАсАасастаттАасСАасСАастА
СсТТАаССтТОаТАССАВСАСАААССТааССАвастосСАвасСтТосСтТСАТС
ТАТОСАЗОСАТССАССАИВааССАСТОССАТСССАСАСАСИатТтСАсТаОс датТапАТССИСаСАСАЧАСТТСАСТСТСАССАТСАССАСАСТааВАаСсСтТО
ААСАТТТТаСсСАСТаТАТТАСТаТСАаСАССАТОССАССАССАСаСАССОТТ
СаасССАСОСаАССАААаТаСАААТСАААСИаТтТтАСО
ТАЗ УН САВИТОСААТТОСТТСААТСТОСТаСТОААСТАААААААССасОсСа СТІ | 218 пі ССаТТАААИТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТСОСТАТТАС
АТаСсСАСТОСОИТТСаТтСсААдасосСс,ввассАцвастСсТпААТОаАТасОС
АТСАТТААСССААДОаСОВИТааСТСТАССТОСТАСОСОСАСАААТТССАСОИ аТсаСаТтСАСОАТОАСССОаТОАСАСТАВСАССТСОТАССОТТТАТАТОаСА аДСсТатссСА5аСссСсТСаТтСстТОААСАТАСТаСАСТатТАСТАСТаТаСАСОС сатаАстоттастааТСсаТСстТОАТаСАСТАТТОааСТСААпаСАСОСС
ТСсатТААСсааТтотстТастАсс
МО: 7АЗ М. САТАТТаТтТТАТОАСТСААТСТОСАСТО ТСТСОТИССОаТтаАСТОСАСОаСаА| 219 пі Аоса,аасвАдаСАТтсТассСсаТттССсАаССАаТатсТсТастТасСАСТОСААС аасСстТАСААСТАТСТСОАТТааСТАССТаСАААААССОЯватсАаАасссто дастТа|астТаАТСТАССТОСастТотТААССКОЯОСЯСТОСЯвататАССасвАССа т тсАасаасСсТсТапАТССОаСАССОАТТТСАСИТТОААААТСАОСССИат аТТОдАаСАпААд,аАса,ТтавасСаТ ТТАТТАСТОаТАТаСАСаСАСТаСАСА
ССССАССААТТАССТТ ТАС ТСААСИаСАССААСИТСИАААТТАААСИатАСИ бЕТО МН СсАаСТаСААТТаИТТСААТСТааТасТтаААаТАААААААССааасСастт | 220 пі ССатТАААаИТаАдасСтТасСАААасСАТССЯаСАТАСАССТТСАСТТССТАТТАС
АТаСАСТЯОССЯТтТСОаТтСсААХа,асосСса,асассАа,ававатстацпААтТасвАТасвас
АТСАТТААСССААХДОССсСОВааИтааТстСсТАССТОСТАСаСасСсАСАААТТССАСаИ аТасСсатТСсАСаАТаАСССатаАСАСТАВСАССТСТАССатТТТАТАТОСА а,астатоСсАдасстТасаТтТСсТОААаАТАСТасАататАСТАСТатТасАсас ватаАСТАСААСОЯасСТТтсСаАСтТАТТОССаИТСАСИаСАСССТСИатТААСОаС птспстТастаас бЕТО МІ. САТАТТаТТАТОАСТСААТСТОСАСТО ТСТСОТИССОаТтаАСТОСАСОасСаХі| 221 пі Аоса,аасвАдаСАТтсТассСсаТттССсАаССАаТатсТсТастТасСАСТОСААС аасСстТАСААСТАТСТСОАТТааСТАССТаСАААААССОЯватсАаАасссто дастТа|астТаАТСТАССТОСастТСТААССОЯСЯСТІТ ССОСиататАССапавАССа т тсАасаасСсТсТапАТССОаСАССОАТТТСАСИТТОААААТСАОСССИат аТТОАдАаСАпААдаАса,атавасСаТ ТТАТТАСТОТАТаСАСаСАТаССАТА
ССССААСТТ ТТОСТСААПССАССААСИТСОАААТТАААСИаТАСИ 12Е9 МН СсАаСТаСААТТаИТТСААТСТааТасТтаААаТАААААААССааасСаст | 222 пі ССатТАААаИТадастТасСАААасСАТССЯаСАТАСАССТТСАСТТССТАТТАС
АТаСАСТЯОССЯТтТСОаТтСсААХа,асосСса,асассАа,ававатстацпААтТасвАТасвас
АТСАТТААСССААХДОССсСОВааИтааТстСсТАССТОСТАСаСасСсАСАААТТССАСаИ аТасСсатТСсАСаАТаАСССатаАСАСТАВСАССТСТАССатТТТАТАТОСА а,астатоСсАдасстТасаТтТСсТОААаАТАСТасАататАСТАСТатТасАсас ватастАСТТАСАСТАТаСАСТАТТаСИаСаТСААСаСАСССТСИаТААСОаС тспстТастАас 12Е9 МІ. САТАТТаТтТТАТОАСТСААТСТОСАСТО ТСТСОТИССОаТтаАСТоСАСОаСаХ| 223 пі Аоса,аасвАдаСАТтсТассСсаТттССсАаССАаТатсТсТастТасСАСТОСААС аасСстТАСААСТАТСТСОАТТааСТАССТаСАААААССОЯватсАаАасссто дастТа|астТаАТСТАССТОЧСастТоТААССОЯСЯСТІССОататАССапавАССа т тсАасаасСсТсТапАТССОаСАССОАТТТСАСИТТаААААТСАСССаТт аТТОдАаСАпААд,аАса,ТтавасСаТ ТТАТТАСТОаТАТаСАСаСАСТаСАСА
ССССААТТАСТ ТТ СТСААСССАССААДИИСТСОАААТТАААСОТАСаИ
ІО МО: рЕТА11646 сАдсастасластасдасХдатстаавСасСаАасСсТСатаАААССсТасСОаС | 224
Мом19 УН-| СТССаТОААпАТтсАасСстТасСААс,сасСАХасСсцвасСстТАСАаСТТСсАССаастА
СНІ- СТТСАТОААСТОаСааИтСсААдаСсАпАасССАС,аСААаАдасСсСтТасААТИаСАТ
Ес("впадина") | ССССАаААТССАССССТАСИаАСааСОаАСАССТТСТАСААССАСААСТТО
РОЛАГА ААДПЙСАСААдСасСсСАСССТаАССатайпйАСсААаАасСАасСААСАССаТасссАСс
АТОСААСсТастТаАХасстТаАСсСсАаа,аСсаАдааАсТсассатаТАСТАСТОаС
АССАПАТАСОАСОЯСаСсА0а,аСсавасСссСАТааАТТАТТаСВаСсСсАаСааЙсСАС
СсАССОЯтТаАСсАатТаТатсСсАаСсаТсСстТАасСАССААл,аса7асссстосататтссс сстаасСсССсСАаСАаСААдаАдаСАсСсАХ,асавасСсааСсАСАаСссастостас а,астасСсстТааТСААаСаАСТАСТТОСССОСА,ВСсССОаВтТалссататостааА
АСсСАаСсасАХа,асосталстосаасатасСсАСАССТОСССООсСсЯатТастас далатстаасстТатАТАаССТаАлаСсАХаСсатааТСсАСссатассттсСтТА аСА,аСссТаасСАСССАЧАССТАСАТСТаСААСаТаААССАСААДИаСССА
ССААСАССААДа,СТаСАСААаАдА,аатапАасССсСААаАДастасСспАСАААА
СТСАСАСАТИаСССАССОЯТаСССАасАССТаАдАаСсТасАаа,аа,схиааАСсСаТт
САатсТ ССС сСССССАААдАСССААДИаСАСАСССТСАТаАТСТОССО вАССССтТаАдсаатТСсАСАТаСОТОСОСТаИ,аВтТааАСатаАаССАСОААСАССС тТаАСаТСсААИТТСсААСсСТаатАсатавадс,а,асатапАааТасСАТААТИаС
ІО МО:
СААСАСААдАСССОЯСОапАаСАССАСТАСААСАаСАСОаТАССОТатасТт
СсАасСатостСАСсСсатоСтТаСАССАааАСТааСтТОААТааСААасАа ТА
СААДСТОСААЛСОТСТОСААСААдАССОСТССИСаСССССАТОСАСААААС
САТСТОСАААаССАААСавасАасссєаАвААССАСАаатТатасСАСССТ аоССССАТОССОСОСаАТтаАЛдаСтТОАССААаААССАватсаасстотоата сасСАатТСсАААааСТТСстТАТСССАССаАСАТООССОСТОСАСТОаааАсАС
СсААТОСОИСАСССасАаААСААСТАСААСАССАСОССТОСТСТастааА стосаассастосттоттоСстостТаАаСААдаСтТоАССОСтТаайАСААСАс
СсАсатавСсАдаСАаасапААСатсттстСАТастосотТаАтТасСАТаАООСс тТоТаСАСААССАСТАСАСОЯСАСААСАИаССТОТоССтТатстоСаастААДА рЕТНІ1647 | САаОСТаСАССТаСАССАстТотТавсаССОАасСТоаТОАААССТоаСОС | 225
Мох19 Ун-| СТССаТтОААаАТСАССтТаСААСОССАаСОаСтТАСАИСТТСАССОаСтТА
СНІ-СО3 МУН-| СТТГСАТОААСтТавйатТСсАДаСАаАСССАСсаа,СААаАаоСтааААТаСАТ
СІ- сайСАВААТССАССССТАСВАСОСОСОАСАССТТСТАСААССАСААСТТС
Ес(виступ") | ААаСАСААДСИаССАСССТОАССОТаСАСААСАаСАССААСАССасссАс
РОЛАГА АТОаБААСТОСТАаИССТОАССАсССаАсаАСсттоассататАСТАСТОС
АССАБАТАСОАССЯОСАОССОпИаССАТОСАТТАТТОСОСОССсСАбаОаСАС
СсАССОТаАСАСТОТОоСсАССаСтТАаСАСАААССОЯССССАОССИЯТаттосс тотавсосссСтТАаСАаСААСАаСАСАТСТІИСОпААСсАасСассставо стасстоатТаАдАОвАСТАСТТІТОССОСАСССТОТаАССОТатоСтТОааЙАА стостасбаростаАСсАдаСсо,СОТасСсАСАССТІ ТССАСССИТасСтТОасСА сласалоссасстатАстототаласАассатастосАссстасстАасАа
СсАасСстТаваСАСССАВАССТАСАТСТИаСААСОТОААССАСААЛИСССАС
СААСАССАААСТасАСААаААсатавАаСССААвАасСстТатадтааСас досахссатосавсАдааСОаАввАТоСаААстТасаастаатТапАААаСО асооасосстоатасАаССстТААлааастототаАХасталастатасс аоСсАаСааСТТСсАССТТСААСАССТАСИССАТОААСТОСОСТИАСаССАС аооосСстТааСАААсасставАатаватовассСсавАТСАаААаСААИтА
СААСААТТАСОИССАССТАСТАСЬССОСАСАОССО,тТаААССАССасТТСАС
СсАТСАОаССОСАСИАСАЯССАСАССАТОСТОТАССТаСАСАТИААСАА
ССТаААААССаАсаАСАССассСАТатАСТАСТОСЬСТОСОаСАСИИСАА
СсТтоООСААСАаСсСтТАТаТОТСТТООТтТасСстТАСТОСОСОаССАсаасАс сстоатоАдсАаататотастастаасатаооСастосСстоСатТатттТАТС
ТТТОССССАТОСВАТИААСАССТаААААССОаСАССОасСстТоСОа тата тТатстТасСтОААСААТТТТТАСССТАСОСААССТАААатасСсааТасАААС тТапвАТААСОСАСТаСАСТОСОаСААСТОССАСаААТСТИтОаАСАСААС
АВСАСТОСААСОАСАССАССТАСТОССТатоСтТоСАСССТОАСАСТОТС
ТААСОЕСТОАТТАТОАСАААСАСААДАСТТСТАСОССтТасаААатСАСССАТ
СсАасаасстадастСаСССатТСАСАААСАаСТТСААСАаааавАсАаТаТ впАСААСАСССАСАССТОТОССССТОТоСсТОаССССтТОоАдАаастТастаас сасссттотТататсосСстТатТсСССССАААаСССААапАСАСССТОАТОА тоАасСсОпАСосСССОААстаАсстТасатаатаатавАТаИТаТтоССАСО
АВаАСССТОААаИТтаААаТТСААТТЯСТАСОСТасАСОССаТасвААС,ТаС
АСААСОаССААшАСАААОССОСООСОАСИАаСАСТАСААСАССАСОТАСС статавтодаСсатТоСсТсАсСатоСстТасСАССАССАСТОаСТОААТайСА
АСОАСТАСААСТасСсААааТтСсТССААСАААаСССтТовасСассСССАТСО
АСААААССАТСТОСАААОаССАААССассАассссювАВААССАСАаОИ Та
АСАСССТОСССССАТОССОСОВАТаАаСТОАССААСААССАСОаТСАССС татастассСтТОатСАААвасСтТТСстТАТСССАССаАСАТСОССОТОССАИТ савАСАдаСААтТосасаласСсавАаААСААСТАСААЧАССАСасстосо стаставАСТоСаАСОСаСТОСТТСТТоСТСТАСАВСААОСТСАССОТа впАСААСАССАСССТОССАаСсАаааОААСаТСсТТСсТСАТастоСатТаАТОИ
САТОАОСССТСТОСАСААССАСТАСАСОСАВААСАСССТСТоССтТатсто
СаватАдДА рЕТНІ1644 | САСАТСАЛаСтТОАСССАсСАсссСсТаСстоттасоСататототаООА | 226
Мом191 0 САСАСАВССАТСАТСАССТИАСААСОСССАССсСсАСаАсСататостттасСо васСАССТОТСТОАТаСАСТОСТАТСАССАСААЛССССЯаСсСАаСАаССС
ААДИ!ИСТаСТОАТСТАСАСАДОССАаСААССТОСААСсСсваСаТасссСАСА
ІО МО:
АСАТТТТОСОСООСАаСООСАССААаАССОАСТТСАСССТОААСАТОСАС сосбатавбААаАдАсдавАСаССасССАССТАСТАСТИССАССАСАасСАаА вАСТАССССТАСАССТТОСОСООбаАСОСАССАДасСстасАААТСААОСОТ
АсСООСТаВСТОСАССАТСТОТСТТСАТСТТОССОССАТСТОАТИАСИСАСТ
ТОАААТотТааААСТОССТОТОТТатТатасСтастОААТААСТТСТАТОСС
АВАСАпасССАААаТАСАсСТавпААлсСатааАТААСаСССтТоСААТСОСССИТ
ААСТоССАСаАаАСТатсАСАСАССАавАСАаСААдаСАСАаСАССТАС дасСстсАаСсАаСАСССтТадсаСтТаласСАААаСАСАСТАСОСАСАААСАС
АААСТоТАСОЯССТасСпААатСАСССАТСАОСЮОЯССТОАОСТОССТССИТо
АСААДАДИАДССТТСААСАасСасоАсАсаТаИт
ІО МО: 1605 вАСОаТаСААТттасТТаААТСТОСТОСТОаТСТОСТААААССсовасСОат | 261
Мн рогає тосстасаототаластасосавасттсСОбАТТСАССТТСТОСААСОаСОТ авАТОХОСТОСИаИттоаСсСАсасосСавОаСАААлаасСстовАСсТаСОТТ ватТСатАТСААСТСТААААСТалааатааСАССАСИаАТТАСОСвасСтТ
ССАИТТАААСОИТСОТ ТТ ТАССАТТТОССОаСаАСОАТАССАААААСАСТОСТ
СТАТСТОСАВАТОААСТОТСТаААААСТОААЧАСАССаСАСТСТАСТАС татАСТАССССОЯТОаОпААТОСсТоттаатАСаАТТАТТаСОСасСАсСОоаС дсеастааттАассататоттос 1605 вАСОТаСААтТтасТТаАдАТСТОСТОСТОИТСТаСТААААССОоваСОст | 262 мн'рогао | тосстасототаластасоаастсСОбАТТСАССТТСТОСААСОСаИт авАТОХОСТОСИаИттоаСсСАСсасосСавОаСАААлаесСстовАСсТаСОТТ ватТСатАТСААСТСТААААСТСАсСаатайСАССАССОСВАТтТАСОСОваСТ
ССАИТТАААСОИТСОТТТАССАТТТОССОСОАСОАТАССАААААСАСТОСТ
СТАТСТОСАВАТОААСТОТСТаААААСТОААЧАСАССаСАСТСТАСТАС татАСТАССССЯТОаОпААТОСсТоттаатАСОАТТАТТаСОСОоСсСАСавОаС дсеастааттАассататоттос соз Ун сластасдастаставААТоТОВСОСаСсО,оАСТОСТОСсАаСсСстТОваСаа | 263
МІО0А АТСТоТОАаАСТОАЛССТОТаССОЯССАССааСТТСАССТТСАССАССТАС
ВСсСАТОААСТОСОСТОСОССАСОИССССтТааСАААвОаСсСстТааААТОвИТ аТоССОабАТСАСААИСААСТАСААСААСТАСОССАССТАСТАСОСССВАС дасотТаАдАдссассайТТсАССАТСАСССаайАСОАСАССААаААСАСС
СстТатАССТОСАСАТОААСАОССТОСОЯОСОССОАСаАСАСсСсаССататАС тТАТТОТаТОСОССАСОСОСААСТТоСОСаСсСсАаСтТАТОТОТСТТвИаТтТтО
СсСстТАСТаСОБССАсСССасСАСССТОСТадоСататСсААОас соз Ун сластасадастаставААТоТОВСОСаСсО,ОАСсТОСТОаСАаСсСстТОоосСаа | 264 зіббад АТСТоТОАаАСТОАЛССТОТаССОЯССАССОаСТТСАССТТСАВСАССТАС
ВСсСАТОААСТОСОСТОСОССАСОИССССтТааСАААвОаСсСстТааААТОвИТ аТоССОабАТСАСААИСААСТАСААСААСТАСОССАССТАСТАСОСССВАС дасотТадАдасассайТТСАССАТСАСССайОАСОАСАССААаААСАСо
СстТатАССТОСАСАТОААСАОССТОСОСОССОАСаАСАСсСсаССататАС тТАТТОТаТОСОССАСОССААСТТСООСААСОССТАТОТОТСТТОСТТТО
СсСстТАСТаСОБССАсСССасСАСССТОСТадоСататСсААОас
ІО МО: 1605 сАасТаСААТТОСТТОААТоТОСТОССТаСТоТаСтТААААССоваТсаат | 265
ІМНеНТІ- тосстасаототаластасосавасттсСОбАТТСАССТТСТОСААСОаСОТ
СОоЗ|МнНеОенН!І1- | аваАТадаСстоваттсассавасосссаваСАААлаосСстовАСТаСОТТ
МТОбА|- ватсатТАТСААСТСТААААСТалсастааСАССАСОаСАТТАСОСООСТ
Ес("виступ"). | ССАТТАААСОаТтоОаТТТТАССАТТТОССОаСОАСОАТАССАААААСАСТОТ
РОГАГА СТАТСТОСАВАТОААСТОТСТаААААСТОААЧАСАССаСАСТСТАСТАС татАСТАССССОЯТОаОпААТОСсТоттаатАСаАТТАТТаСОСОСоСАсСОоаС дсастааттАссататотоСасСтТАаСАСАААСОоесССстАааса тато сстотаасоосСсСАаСАаСААвАаСАСААХаСавСсОавААсА,аССассст свеостасстоатаААаСАСТАСТТССССОАХасСсСатТОАСсАататостта пААСАХССсОпАаСССтТаАСААССОСаСО,ТаСАСАСТТТОССТОСССТОСТ аСАаАассАссавасстатАСТоССтТаАаСАаСсатастоАсСатасстАС
СсАасАасСстТОааСАСССАСАССТАСАТСТИаСААСОТААССАСАЛИСС
САССААСАССАААСТОПАСААСААсСа ТасАаСССААаАаСсТатаАтав саслдасАхосатобавАавасавАавАТоСОАХсатасластастааААТ ставосасасАстастасадасстааСОвАТоТотТОАаАСсТОАаСТаТтО ссассАвоааСТСсАССТТСАВСАССТАСОССАТОААСТОСССТОСОСС дасобоСстайСААдАлдааССтаваААтТавататоССапАТСАСААССААИТ
АСААСААСТАСИаССАССТАСТАСОССОСАСАОСОСТОААОССССааИТТСА
ССАТСАСССОССПАСОАСАЙСААСААСАСССТаТАССТОСАСАТОААСА сестасосасСсаАдавАСАССсОоССатТатАСТАТТаТаТаСсвасСАСаваС
ААСТТІССОССЯаССАССтТАТОТОТСТ ОСТ ТасСстТАСТОСОСООССАСИаОС
АссстоатТаАССОТаТСАдаСаСтТАаТАССААХсвассСсСАссататто сооСстТаОСАСССАССАССААвАССАСАТСТОССОПААСсАаССастота састатоставтТаАААСАСТАСТТОСССОСАССССОСтТОоАсСсОотТатсттаа
ААСТСОТОССОЯаСОСтТОАССАсССаасаТаСАСАССТІ ТсоСсАОаСсСсОаТОаСтОа
СсАВАССАОССОСОССТИТАСТОССТОТОСТОСОЯТОСТСАССОТОСОСТоТ
АаСсТоССстТаООААСАСАСАСАТАТАТСТИТААТаТСААТСАСААОССТТО
СААСАССАААСТССАТААСАААСТСОАаСССААаАаСТаСоАСААААСТ
САСАСАТОСССАССОТаСССАССАССТОААОСТОСАССООаАССаТтсСА аТСТТОСТСТТОСССССААААСССААаСАСАСССТСАТОАТСТОССОСА сооСтТаАдааТсАСАТаСОТОСбТОИСТОСАСОТОАСССАСОААИАСОСТОа
АВОаТСААСТТСААСТОаТАСатасАсасосоставАватТасСАТААТОССА
АБАСААДАДОССОСОСоаАСаАаСАСТАСААСАаСАСсаИтАсСататаатсА асатТоСсТоАССОТоСТаСАССАСОАСТаОСтТаААТОаСААСаАСТАСА
АВТОаСААВИаИТСТоСААСАААаСССстТоваСаССоССАТСОАСААААССА
ТСТОСААДаССАААаааСАаСоССОАпААССАСАСОтТатАСАСОоСтТас сооСАТаОССООаОАТОАдДаСтТОАССААСААССАсИЯтоАасстТатаатасс тТапастсАААаасттСстТАТОССАаСОАСАТСОЯССОЯТОвАСТайОАСАССА дтасасласСадвАаААСААСТАСААЧАССАСЯССТОСТСССТОСтТасАСТ сСаАсвасСТоСТсТоСТСтТАСАИСААаСТоАССОСТОПАСААИАИСА савтавСсХдасАдаааОпААСаТсТсТСАтТастоСатоАтТасСАТИАСИСТО
ТаСАСААССАСТАСАСОИСАСААдСАасССТоТоССтаТтстоСапатТААА
ІО МО: 1605- сАасТаСААТТОСТТОААТоТОСТОССТаСТоТаСтТААААССОовасСаат | 266
Ес(Свпадина") | ТСССТОСОСТоТОАааСстТасобаасттоСОабАТТСАССТТСТОСААСОСОТ -РОГАГА авАТОХОСТОСИаИттоаСсСАСсасосСавОаСАААлаесСстовАСсТаСОТТ ватТСатАТСААСТСТААААСТалсаатТаСАССАСОСВАТтТАСОСОваСТ
ССАИТТАААСОИТСОТТТАССАТТТОССОСОАСОАТАССАААААСАСТОСТ
СТАТСТОСАВАТОААСТОТСТаААААСТОААЧАСАССаСАСТСТАСТАС татАСТАССССОЯТОаОпААТОСТоттаатАСОАТТАТТаСОСаСсСсАСОоаС дсеастааттАссататсттобастАааСАССААХссесссСстоСсататто ссоставососСССАаСАССААдаАаСАсСсАаСсасоваСАсАаССастотТ свостарстаатТоСААаСАСТАСТТССССОСАХОССССОСОТаАСССсТатоста пААСАаСсОвАасоСстТаАсстосва!сСсатасСАСАССТТОоСССОССЯТасСтТ аСсАаАсттотаасстатТАТАаССТСТЯаАСаСАССЯтТастоАССОТаСстТто тТАССАОСССТСОСАСССАСАССТАСАТСТИСААСОТОААССАСААСИСО
САФСААСАССААСИаИтаспАСААаААСОСТааАаСССААвАаСтТаСОАСАА
ААСТСАСАСАТОСССАССОЯ ТаСССАВСАССТОААОаСТОСАСовааАСо аТсАаТСТоСТСТТОСССССААААСССААаОАСАСССТСАТОАТСТОС савАсссСстТаАдаСТСАСАТаСОТОСТОСТавАСОТОАСССАСОААСАС сСтаАваТсААдатТсААСТаа тасатасасвасатасАаатасСАТААТ
СССААСАСААХАДОаССОСОапАСсАСаСАСТАСААСА,САСаИтТАССаТтатоа атодасатоСстТоАССОтТоСтТасСАССАССАСТОССТаААтТавСААаада
ТАСАДИТОСААСИ ТСТОСААСАААССССТОСаСасссССАТСВАСААА
АССАТСТОСАААДаССАААСсС,САаССССвАаААССАСАСИаТатаСАСС стасссССАТОСТСОООАТОАаСТОАССААСААССАсСИа САТ тарасСАаТСАААаасСтТТСстТАТОССАаСаАСАТСОССОСТОСАИСТасала
АВСААТаСОаСАаССОапАСААСААСТАСААЧАССАСОССТОССОСТаста вАСТОСОАСООСТОоСТТоттоСтостТаАаСААОаСтТСАССОТОАСААО дасааатавСАдасАаааспААсатстстсАтТастосатОАТтасСАТИаАс аСсТотТасСАСААССасСстТТсАСаСАСААЛОСАЛИЯССТОТОССТОТСТОСОООТ
ААА
С03-С1С СсАсСОаСсСатоатТаАСССАаОААсСсСАХасстаАСсАататотоставсоасі 267
АсССсатОАСССтТаАСАТОТИаССАСТТСТАСАСОСасСатаАССАССАСС
ААСТАСОЯССААСТОСОЯтТаСАапААААласссавасСАаасСттСАпАаОА
СстаАТСООСОаСАССААСААаАаАаСсоССтТаваСсАСССттТасСссСАСАТТО дасоваАТОТСОТОСТаОСАаОАААвасСассстаАСАСТОТоТООСОСо
СсАаССАСААаАТалааССвАатАСТАСТОаСЯСССТатТаатТАСАССААС статавататтосеСсааАаОаСАССААдаСтТОАСАатссСтТАаОТСААСССс
АдаастассоссАХаСсатаАсостатсосССССАОСАаСаАСаААСТО
САБИССААСААОСаССАСССТООСТСТаССТОАТСАОСОАСТТСТАСССА савссосостаАдосатааосСтТОвААвасСаАСАсСАаСсССатаААаас саосотТааАйАССАССАСССССАаСААаСАвАаСААСААСААа ТАСОаС сасСАвСАаСтТАССТОАаССтТахгсссссавАХаСАатТавААдадассСсАСАС атТоСтТАСАаСсТаССАааТОАСССАСвАаавСАаСАССатТасАСААААС сатаасоссСсАсСсосАХастТасСАОас
ІО МО: 1605 сАасТаСААТТОСТТОААТоТОСТОССТаСТоТаСтТААААССОоваТсСаИт | 268
ІМНеНТІ- тосстасатоталастасоСавасттсСОбАТТСАССТТСТОСААСОСОТ
СОоЗ|МнНеОенН!І1- | аваАТадаСстоваттсассавасосссаваСАААлаосСстовАСТаСОТТ з1обаА|- ватТСатАТСААСТСТААААСТалсаатТаСАССАСОСВАТтТАСОСОваСТ
Ес("виступ"). | ССАТТАААСОаТтоОаТТТТАССАТТТОССОаСОАСОАТАССАААААСАСТОТ
РОГАГА СТАТСТОСАВАТОААСТОТСТаААААСТОААЧАСАССаСАСТСТАСТАС татАСТАССССЯТОаОпААТОСсТоттаатАСОАТТАТТаСОСаСсСАавОаС дсастааттАссататотоСасСстТАаСАСАААСОоесСсСстАааса тато сстотаасоССсСАаСАаСААСАХаСАСАдаСсваСсОвпААсАаССасосст свеостасстоатаААаСАСТАСТТССССОАХасСсСатТОАСсАататостта пААСАХССсОпАаСССтТаАСААССОСаСО,ТаСАСАСТТТОССТОСССТОСТ аСАаАассАссавасстатАСТоССтТаАаСАаСсатастоАсСатасстАС
СсАасАасСстТоааСАСССАСАССТАСАТСТОСААСОТОААССАСААСИСО
САФСААСАССАААС ТОСАСААСААСОТапСАаСССААвАаСтТатаАТаС саслдасАхосатобавАавасавАавАТоСОАХсатасластастааААТ ставосасасАстастасадасстааСОвАТоТотТОАаАСсТОАаСТаТтО ссассАвоааСТСсАССТТСАВСАССТАСОССАТОААСТОСССТОСОСС дасообостааСААдАлдааССтаваААтТавататоССоаАТСАСААССААСТ
АСААСААСТАСИССАССТАСТАСОССОСАСАОСОСТОААОССоСааИТТСА
ССАТСАСССОССАСОАСАЙСААСААСАСССТОаТАССТаСАСАТОААСА сестасосасСсадавАСАсСсОоССатТатАСТАТТаТаТаСсвасСАСааС
ААСТІСОССААСОССТАТОТОТСТТЯСТТТаССтТАСТОСОСОССАаООСА состоатТОАсСОаТаТСААдаСастАатТАССААлаСсОСсоССАасататтос
СоСтТапСАСССАССАаСААваАССАСАТСТОССОПААСсАХа,СсСсасСтотОас астатотастаАААвАСТАСТТОССССОСАССССИтТОАССаТатСстТадАА стествасасосСстТаАССАссваСатаСАСАССТІ ТССАОССОСТОаСтТасА сласалоса,асстТатАстосстатостосатавтоАССаТаСосСтостТАС
СстТооСтТаООААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТИТСААТСАСААДОССТТОСА
АСАССААДАСТоОАТААСАААаТСПАаСССААСАаСТаСоАСААААСТСА
СсАСАТОСССАССОЯТОСССАВСАССТаААОСТОСАсСО,а,ОАССаТСАСТ
СТТОСТСТТоСССССААААСССААОСАСАСССТСАТОАТСОТОСТСОАСО сстТаАваТсАСАТОСОТОСТаИтОавАСсОТаАИССАСОААдаАСССтТада аТСААаИтТТСААСТОСТАСО ТОСАСсСООКИССО,ТОаАаа!ТаСАТААТаССААС
АСААДОаССОСсесаАдааАдаСАСТАСААСАаСАСсатАссататаатсАОс аТоСТсАССОТОСТОСАССАССАСТОССТОААТОССААСОСАСТАСААС тТасСсААватстоСААСАААаСССТоваСасоссСАТСОСАСААААССАТСТ
ССААДаССААдАаа,СА,ооССаАаААССАСАВаТаТАСАСССТаСосСо
САТОССОСОАтТОАДаСтТаАССААаААССАСсСОИТСсАСаСсСсТатоатасстав
ТСАААСССТТСТАТСССАССОАСАТСОЯССОО ТОСАСТОСОАСАССААТИ ваСсАаССОабпАСААСААСТАСААЧАССАСОЯССТСТОСТСОЯЯТОСсТавАСТОСО
АСООСТОСТТСТТОСТСТАСАВСААХаСтТСАССаИТапАСААСАССАСИТа аСсАдаСсАСаппААсатстстТоАТаСтТоСатоАТаСАТаАИасСтТоТасСА
СААССАСТАСАСЯСАСААСАОССТОТоССТатСтоСаватААА
ІО МО: 9011 САССТОСААТТОСТТСААТСТОСТОаСТОААСТААААДАААССИСИ Сас | 269
ІМНОНІІ- ССОТТАААСТОаЛаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОСТАТТАС
СОЗІМНОЇ- |АТасСАСТаИСОТТСОСтТСААЛаСсСсСсСсОасооСАаоОотТСстТавААтТасСАтТасас
МІТООА- АТСАТТААСССАДОСООСТОИСССТАССТОСТАСОЯСОаСАСАААТТоСАСО
Ес("виступ"). | ОСТСОСОТСАССАТОАСССИаТаАСАСТАВСАССТСОТАСССТТТАТАТОСА
РОГАГА сстТатоСсАвоСстТаСОатТТсСТОААСАТАСТОСАСТатАСТАСТОТаСАСОаС саватаадсттсасттваставАСТАТТаСОаТСААСаСАСССТОСТААСО атттотстТастАааСАСААдАсааСссСсА,аСсатат состав осСосСтТА
ВСсАаСААвАаСАСАТСТОССОПААСАссСсОосстТавастасстоатаоА
АаОАСТАСТТІТОСССОСАСССТОТОАССОТаИтТоСТОаААСТСТОССОаСОС тТаАСАДОСООССОтТаСАСАССТІ ТССАОСССОЯТОСТаСАСАССАОСОваСС татістототаласаасатастоАсСсатасСстАаСАаСАсоСставасА
СССАБАССТАСАТСТОСААСОТИААССАСАДИСССАССААСАССАААСТ пОАСААСААаатавАаСсСААаАастатаалтааСсавАсоАсаатосСоа слдссСОбАСаАтТоСаАсотТасАастаставАаттаассеСавАста атасадасстаасавАТСТСТаАСАСТОАЛОСТОТОССОЯОССАООСОВбаСТТо
АССТТСАВСАССТАСЯССАТаААСТОСЯ ТОСОССАСОСОССТаа!сСААА сеосСстТОбААТосататоСсСацпАТСАЧААОСААаЙтАСААСААСТАСИаСс
АССТАСТАСЯССОАСАССОТаААсСоаССайТтсАССАТСА,аССООСАС
САСАССААДаААСАССЄСТтатАССтасСсАаАтТаласАаасстасавасса Аа вАСАССОССОТатАСТАТТОТаТОСаИСАСОЯСААСТТОСОСОССАСС тТАТОТОТСТТаСТ ТасССстТАСТОСОСОССАсСОвасСАСССТОСТаАСССТОТ
СсААДАОСОСТАСТаТОСССЯСТоССтТоСатат ТАТСТТТСССССАТОСОА тТаААСАИСТОААААССсОааСсАссасстосатостататстасСстаААСААТ
ТТТТАСССТАВОСААССТАААатТасаатавАААа ТасАТААСОСАСТОС
АатТоСООСААСТоССАСалАТСТатаАСАвААСАааАСТоСААасАСА
ССАССТАСТОССТатоСтТоСАСССТОаАСАСТОТСТААСОСТаАтТТАТОА
САААСАСАААСТСТАСОаСсСстТасаАдАатСАСССАТСсАОООоСТаАаСто
ВсССОаТСАСАААаАХасСТТСсСААСАасаааАаАататаАСААЧАСССАСАС статососсттатостасосСталаастастасссасссттотататто стат сСССССАААаСССААааАСАСССТОАТОАтоАаСсСапАСССОС вААСТОАСсСТаСОатТостТоатавАТОТатТоССАСОСОАааАСССТОААОаТО
ААСТТСААТТОСТАСОТОСАСОбССатТапААаТаСАСААСИССААСАСА ддассаСсасалдапАаСАатТАСААСАаСАСсатАССсататаатоАасатТо
СстТоАССЯатТоСтТаСАССАССАСТИСТОААтТайСААаСпАатТАСААОаТОаС
ААДИСТСТОСААСАААаСоСсТОВаСаСССССАТСВАСААААССАТСТОСА
АДИССАААДСОСаСАаССССаАаААССАСАСОТатАСАСССТасссссСАТ ассвОбАТОАДаСтТаАССААаААССАССсТСсАОаоСсТатастТасстаатсСА
ААДЙССТТСТАТСССАИСаАСАТСОССОТОСАСТтОСОАаАССААТОаСОаС
АаСсСавАВААСААСТАСААВАССАСсасСстоссИтаставАСТОСВАСО стос СсТТоСтТотТАСАСААОаСтТСАССОТасАСААДаАДаСАватаасСА аСсАааапОААСаТсТотТСАТастоСаТаАтТасСАТаАвастоТаСАСАА
ССАСТАСАСЯСАСААДОСАЯСССТОТОССТОТСтТоСасатААДА
ІО МО: 9011- САСИТОСААТТОСТТСААТСТОСТОаСТОААСТАААААААССОСвОСО,СТ | 270
Ес("впадина") | ССОТТАААСТаАаСтТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОСТАТТАС
АТаОСАСТОСОТТтоИТСсААОСсОоСсСОЯваеасСАсасТотТавААТавАТаСвОС
АТСАТТААСССАДОСООСТОИСССТАССТОСТАСОЯСОаСАСАААТТоСАСО сТсОаСОТСАССАТОАСССОТаАСАСТАВСАССТОТАССОТТТАТАТИСА астатоСсАдасстТасраттСстТаААСАТАСТаСАСТатАСТАСТОТаСАСОС саватаадсттсасттваставАСТАТТаСОаТСААСаСАСССТОСТААСО атттотпстТастАааСАССАХаСсОоссСсТосСетаттосоостТаасСсССосСА вСсАаСААвАдаСАССАаСсваСсоаСАСАсСсСсаСстотавастасстасто
ААавАСТАСТТОСССОСАИСССОЯтТОАССОСОТатоСтТавААСАХаСсааАОСо стадсстосваСОтТасСАСАССТТОСССОССОТОСтТаСАСАСТТСТОСС статАТАаССталасСсАааСсатаатАссатассттотаасАХасставОос
АСССАВАССТАСАТСТОСААСОТОААССАСААДИСССАССААСАССААС атТОпАСААДаАХАсСатавАасСсССААаАасСтТаСаАСААААСТСАСАСАТОС
СсСАССОСТаАСССАССАССТОАХАЛССТОСАСССОВСаАСсСатСАаТсТТосСто
ТТОСССССААААСССААССАСАСССТСАТОАТСТОССОСАССССтТала аТсАСАТОСОТОСТОСТОСАСИТОАОССАСОСААСАСССТОАОИТСААС
ТТсСААСТОСТАССОЯТОСАСОоосСсТасдастасСсАТААТаССААаАСАААС ссаСсаобАСаАдОСАСТАСААСАасАсатАсСсататаатоаасатосто
АсСсатТоСтТасСАсСсАаОАСстТааСстТаААТОаСААааАСТАСААатасСААС
СТСТОСААСААдАаСсоСстТовасрассссСАТОВАСААААССАТСТОСАААС
ССАААДСОСОаСАаСсСССОпАВААССАСАОСаТатаСАСССТаСССССАТОССО вабАТОАаСтТаАССААаААССАОИОСТСсАаССстТотсаИтасСсасСАСТСАААС аСстТТотТАТСССАССОАСАТСОССОТОСсСАатТаСаАпАаСААТаваСАСС сапАвААСААСТАСААСАССАССЯССТОССТСОЯТОСТОСАСТОСОСАСОвИаСТ ссттсотостбаТаАаСАдасСстСАССатапАСААвАХаСсАсватоасАаас
АавапААСаТСсТТСсТсАТаСТоСОаТОАТаСАТОАДООСТСТОСАСААССА
СТАСАСОСАСААСАСССТСОТОССТОИтотоСОаватААА 9011 1С САТАТТОТТАТОАСТСААТСТОСАСТОТСТОТОССОСИТаАСТоСАСОСО | 271
ІМО5О)Ї ААССОЯСИСОАаСАТТТоТТаССаТТоСАВССАсСТоТоТОаСтТасСАСТОСАА
СООСтТАСААСТАТСТОСАТТОСТАССТаСААДААДАССООСОТСАСАССССТ сАХастастОАТСТАССТОСИСТотТААсСсСОСсОастТтоСаататТАССОСАС сатттслассастотавАТоСааСАССВАТТТСАСОСТТаААААТСАССС стат ОААаСАаААаАСсаТтавасо ТТАТТАСТОТАТОаСАСОСААССАТ тТАТОСАССОСАСТТТТОСТСААСаСАССААИИТССАААТТАААСИТАСО стаасСстасСАССАТСТОТСТТСАТСТТОССОаССАТСТОАтТалаСАатТТаА
ААТСТОБААСТОССТСОТОТТатТОТтТаССтТасСтОААТААСТТСТАТСОССАСА вАпаССАААаТАСАатТапААааТаСАТААСаСССТОСААТСОСИИТААС тТобСАОаАвАСТатСсАСАСАаСАаОАСАССААДадпАСАССАССТАСАСО
СТСАаСАССАСССТОАСОИСТОАССАААДаСАаАСТАСОСАСАААСАСААДА аТстТАСОССТаСаААатТСАСССАТСАССЯСССТОАДОСтТоаСССатСАСА
ААДСАаСТ ТСААСАаааасвАсАс тат
СоЗ МІСНІ | САаСЬОССатоОтТаАСССАаОААСССАасСстаАСсАататотоставсовасі 272
АсССатОАСССтТаАСАТОТИаССАСТТСТАСАСОСассатаАССАССАСС
ААСТАСОЯССААСТОСОЯтаСАапААААласссваССАаасСсттСАвАаОА
СстаАТСООСОаСАССААСААаАаАаСсоССтТаваСсАСССттТасСссСАСАТТО дасовАТСОТОТОСТаОСАаОАААваССассстТаАСАСТОТСсТавСОсс
СсАаССАСААаАТалаассСвАатАСТАСТОСОСССтТатТаатТАСАССААС статавататтосоСавАдааСАССААХаСтТОАсАатастаАаСАаСОстТ
ТОСАССАААОСОЯСССТТОСОЯТОТтТОоСтТотТааСтТоСтТАОСтТоСААСТОССА сстотовАСОСАССОСТАСТоТСОвпАТаССТоОСТаААСОсАТТАТТТТОС тадасстТатТаАСАСТатосСтавААтТАаСавАаСАСТадлгсстотасАСТ
ВпСАТАСТІ ГОСССОСТОТаСТОСАСТОСТоТОвАСТатТАСАОСССТОАСО дасотавтТаАСАатТасСсСАсСАсСАасставасСАСССАВАССТАСАТО тТасСААСОТаААССАСААаСССАаСААСАССААаИаТапАСААСААОИТа
СААСССААаИтсттат
ІО МО: 9011 САСИТОСААТТОСТТСААТСТОСТОаСТОААСТАААААААССОСО, Сас | 273
ІМНОНІІ- ССОТТАААСТОаЛаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТТОСТАТТАС
СОоЗ|МнНеНІ1- | АТасСАСТасасТттоатТсААласосСсасесСсАаоотставААтТасСАтасас з1обаА|- АТСАТТААСССАДОСООСТОИСССТАССТОСТАСОЯСОаСАСАААТТоСАСО
Ес("виступ"). | ОСТСОСОТСАССАТОАСССИаТаАСАСТАВСАССТСОТАСССТТТАТАТОСА
РОГАГА сстатосАоСтТаСОатТТСсТОААвАТАСТаСАСТаТАСТАСТОТОСАСОС саватаадсттсасттвастасАСТАТТаСОаТСААСаСАСССТОСТААСО атттотстТастАааСАСААдАсааСссСсА,аСсатат состав осСосСтТА
ВСсАаСААвАаСАСАТСТОССОПААСАссСсОосстТавастасстоатаоА
АаОАСТАСТТІТОСССОСАСССТОТОАССОТаИтТоСТОаААСТСОТОССОаСОС тТаАСАДОСОСОСОТаСАСАССТІ ТССАОСССОЯТОСТаСАСАИСАОСОООо татістототаласаасатастоАсСсатасСстТАаСАаСАсосСставасА
СССАБАССТАСАТСТОСААСОТИААССАСАДИСССАССААСАССАААСТ пОАСААСААаатавАаСсСААаАастатаалтааСсавАсоАсаатосСоа слдссСОбАСаАтТоСаАсотТасАастаставАаттаассеСавАста атасадасстаасавАТСТСтТаАаАСТОАЛАОСТОТОССОЯССАОСООаСТТо
АССТТСАВСАССТАСИССАТаААСТОСЯ ТОСОССАОСОССССТОССААА сеосСстТОбААТосататоСсСацпАТСАЧААОСААаЙтАСААСААСТАСИаСс
АССТАСТАСЯССОАСАССОТаААсСоаССайТтсАССАТСА,аССООСАС
САСАССААДаААСАССЄСТтатАССтасСсАаАтТаласАаасстасавасса Аа вАСАССОССОТатАСТАТТОТИТОСОССАСОИСААСТТСОССААСОСО тТАТОТОТСТТСТ ТасСтТАСТОСОСОССАСОССАСССТССТОАССаТаТ
СсААДАОСОСТАСТаТОСССЯСТоССтТоСатат ТАТСТТТСССССАТОСОА тТаААСАИСТОААААССсОааСсАссасстосатостататстасСстаААСААТ
ТТТТАСССТАВОСААССТАААатТасаатавАААа ТасАТААСОСАСТОС
АатТоСООСААСТоССАСалАТСТатаАСАвААСАааАСТоСААасАСА
ССАССТАСТОССТатосСтоСАСССТОАСАСТаТСТААСОСТОаАТТАТОА
САААСАСАААСТоТАСОасСстТасаААаТСАСССАТСАОСваССтаАОСТо
ВсССОаТСАСАААаАХасСТТСсСААСАасаааАаАататаАСААЧАСССАСАС статососсттатостасосСталаастастасссасссттотататто стат сСССССАААаСССААааАСАСССТОАТОАтоАаСсСапАСССОС вААСТОАсСсТаСОатостаатавАТОТатТоССАССОСАХааАСССтТаАлАстТа
ААСТТСААТТОСТАСОТОСАСООССатТапААаТаСАСААСОССААСАСА ддассаСсасалдапАаСАатТАСААСАаСАСсатАССсататаатоАасатТо
СстТоАССЯатТоСтТаСАССАССАСТИСТОААтТайСААаСпАатТАСААОаТОаС
ААДИСТСТОСААСАААаСоСсТОВаСаСССССАТСВАСААААССАТСТОСА
АДИССАААДСОСаСАаССССаАаААССАСАСОТатАСАСССТасссссСАТ ассвОбАТОАОаСТаАССААаААССАастСАаостатастарстаатсСА
ААДЙССТТСТАТСССАИСаАСАТСОССОТОСАСТтОСОАаАССААТОаСОаС
АаСсСавАВААСААСТАСААВАССАСсасСстоссИтаставАСТОСВАСО стос СсТТоСтТотТАСАСААОаСтТСАССОТасАСААДСаАДаСАватаасСА аСсАааапОААСаТсТотТсАТастТоСатТаАтТаСАТОДааСтТСТтасСАСАА
ССАСТАСАСОЯСАСААДОАЗСССТОТоССТатстоСаААА
ІО МО: 1605, варіант авАпаИтаСААТТаСтТаСАААаСаавАаасасвеосстостТаААОСста | 287
М96У/052Е асавАТСТСТаАСАСТОАЛССТОТОССОССсАОССОасСтТТСАССТТо ун АВСААсасстапваталастасатасаосСсАвасооссСстааААААс аАСТОССАСТОСОСТаСОАСОСАТСААаАДаСААвАССВАСИаа,СОС
САССАССВАСТАТОССОЯССССТИАТОААСООССОСТТСАССАТСА аСАаапАСИАСАССААЧААСАСССТатАССтТасСсАаАТалАСАСС
СТаААААССаАапАСАССасся ТаТАСТАСТаСАССАСССОССТА салатастотТтаСтТАСОАСТАСТОССОСсСАаОаСАСССТоИТОА
СсСататсАТСТ
ІО МО:
М96У/052Е СО3- | бАСОСОТаСААТТСТавАААОССсОВАСОСсаасстостТаААОсСсСтТО | 288
МНеНІ. Ес(виступ"| асСОааАТСТоТОАСАСстТОАостатассаССАаСвОсСтТТСсАССТТо ) РОГАГА АВСААсасстапваталастасатасаосСсАвасооссСстааААААс рЕТНІТ4945 аАСТОССАСТОСОСТаСОАСОСАТСААаАДаСААвАССВАСИаа,СОС
САССАССВАСТАТОССОЯССССТИАТОААОСООССОаТТСАССАТСА аСАаапАСИАСАССААЧААСАСССТатАССтТасСсАаАТалАСАСС
СТаААААССаАапАСАССасся ТаТАСТАСТаСАССАСССОСТА салатастоттаСтТАСОАСТАСТОССОСсСАаОаСАСССТоИТОА ссататсАТСтТасСстАааСАСАААсСССаСсССстАасататтосстотоа сообобСАаСАаСААСдасСАСАлаСсваСсОапААсАаСассставо стасстоатТаААаСАСТАСТТССССОАХаСССОтТОАСАСТаИтстта вААСАССОпСАаСССтТОАСААдасвасатаСАСАССТТССТаСсСс тастаСсаядаласадасаасстатАСтТоССтТаласАааСсатоатсАСо атасСстТдаСсАа,аСсАадасставасСАСССАаАССТАСАТСТОСААСИТ
СААССАСАДИСССАССААСАССАААС ТИСАСААаААСатаавАас
СсСААСАЛССсТОатТаАТасСаоАасаАасоатосавАасоСааАсааАТо саадаатасАаастастТавААТСТОССЯОСООАСТОСТаСАаССТ сасабАТСтТотТаАааАСТОАЛОСТОТаССЯССАССааСТТСАССТТ
СсАаСАССТАСОЯССАТаААСТОСОаТОСОССАВаССССтТООСАААС воСстТавбААТаСаТатТоССОаОпАТСАСААССААСТАСААСААСТАС аССАССТАСТАСОССОСАСсАССатоААлаааССООТТСАССАТСАСЄ ссапоАСаАСАССААаААСАСССТатАССтасСсАаАТталАСАаСС тасасоССвАСОАСсАСсСсасСсататТАСТАТТИТОТИСООСАСОСС
ААСТТоОСОаСААСАаСТАТОТОТСТТООСТтТОеСсСстТАСТОСОИССАС сасСАСсСсСТОтТОАсСатаТтСсААХаСасСтТАаТАССААСаССССАС сататтосоостТааСАСССАаСАССААСАССАСАТотТааСОапАА слоссестотавестатотастаАААаАСТАСТТОСССАССОС стадссататоттавадАстотвасрассстАсСАсоааСатТОсСА
СсАССТІТОССАСССОЯТаСТаСАСАССАО,СсваССтТаТтАСТОССТаТ сстосатаатТоАССОТОСССтТотТАаСстТоССтТаваААСАСАСВАСА
ТАТАТСТОТААТИТСААТСАСААИССТ ТССААСАССААДАСТТСИАТА
АВСАААИСТСОАаСССААалаСстТаспАСААААСТСАСАСАТОСССА ссатассСАаСАССТаААХаСсТасСАасвасАсСсатсАаатсттост
СсТТОСССССААААСССААССАСАСССТСАТИАТСТОССООАСССо таАСОТСАСАТОСОЯТОСТОСТОаПАСаИТтОАаССАСОААСАСССТО
АВОаТСААДИИТТСААСТОСТАСОЯаТОасСАСсОасОатавАаатТасАТААТ
ВССААвАСААдАаСсСасавапАасАаСАСТАСААСАаСАСОТАССО татастоадосатостсАсСсатостаСАССАССАСТаВСТОААТО
ССААаСАСТАСААСТаСААаатСТоСААСАААОСССТОСОСаСо
СССАТСОАСААААССАТСТОСАААасССААдАСа,всАаССССаАСА
АССАСАОССТатАСАСССТОСССССАТОССООПАТОАХИСТОАССА
АВААССАОССТСАОССТИаТОСТаССТаСТСАААваТсСтТсСтТАТОССА аСаАСАТСОСССсТОСАСТОСОАМаАаСААТОвСсасСсАсоСавАаЙлдА
СААСТАСААВАССАСОЯССТТОСТСОТОАСТавАСТОСОАСООСТОСТ
ТОТТоСТСТАСАИСААаСТСАССОТОпАСААСАаСАСсОИТа!САС
СсАСайОаААСаТсСТСсТсАТаСТоСатОАТаСАТОАСаСтСТасСАС
ААССАСТАСАСОСАСААЛСАСССТОТОССТОТотТоСасатТААДА
ІО МО:
М/96У/052Е РсСвп ) ОбАССТаСААТТСТавАААХОССсОаАасеСсаасстоотТаААОсСсСтТО | 289 адина") асавАТСТСТаАСАСТОАЛССТОТОССОССсАОССОасСтТТСАССТТо -РОГАГА НУВЕ АВСААсасстапваталастасатасаосСсАвасооссСстааААААс рЕТНІТ4946 аАСТОССАСТОСОСТаСОАСОСАТСААаАДаСААвАССВАСИаа,СОС
САССАССВАСТАТОССОЯССССТИАТОААОСООССОаТТСАССАТСА вСАаапАСИАСАССААСААСАСССТатАССтТасСсАаАТалАСАСС
СТаААААССаАапАСАССасся ТаТАСТАСТаСАССАСССОССТА салатастоттаСтТАСОАСТАСТОСОСОСсСАаОаСАСССТоИТОА ссататсАтСстастАааСАССААХасоесссстосататтососста аСсСооСАвСАаСААСАаСАССАсСсавасваСАСА,аосастотас астасстоаатТСААваАСТАСТТОССССОСАССсССОСТОАСсСОТОаТтоС тавААсСдасавАдаСсССстТОАсСстоСваратаСАСАССТТОСССаС сатастаСАСАСТІСоТОСоСтТатАТАаССтТаАаСАаСаТастсА ссатассттстАааСАОСоСстТаваСАСССАСАССТАСАТСТОСААС аТаААССАСААДИСССАаЙсСААСАССААСОТапАСААаААсатацА
ССССААВАаСТаСОАСААААСТСАСАСАТаАСССАССОТаСССАС
СсАССТОААХОСТОСАССВавАССИТСАаТСТТОСТСТТоССССсСА
АААСССААССАСАСССТСАТаАТСТоССОпАССССтТадастсСАСА тасатоастаставАСатОАаССАСОААСАСССТОАаОТСААСТТ
СсААСТОСТАСОТОСАСОССОТавАвОаТасСАТААТОССААСАСАА дассаСсоааАавадаСАСатТАСААСАССАСсатассататавтоАос атТоСстТсАССатТоСтТаСАССАИСАСТОССТаААТааСААСсСАСТА
СААДСТОСААОСИТСТОСААСАААаСсССТОСОаСаСССССАТСВАСА
АААССАТСТОССАААИССАААдавсаСАаСсСССаАвААССАСАСаИта тасСсасосстасСоССАТОССООПАТаАаСтТаАССААаААССАССТ сАаасстТотратаСОСАСТСАААааст ТГСТАТСССАаСОАСАТСИС сатавдатайОАвАаСААтТаваСАасСсоапАвААСААСТАСААИА ссАСОССТОССОТОСТОВАСТОСОАССОСТОСТІСТТОоСТОСТОа
АВСААаСтТоАСсСсатавАСААсАаСсАватавСАаСАааааААСОТ
СстТТотТсАТОСТоОСИТтаАТОСАТОАСОСТСТаСАСААССОСТТСАС аСсАШААЛСЛСССТСОТОССТОТСтТоСасатААА 1481 вАшатаСААТТОТТОСАСТОТОСОСааАаасттастАСАаСстТас | 290 ун сесотосстаАдаАСТОТОСТОТаСАаССстТоСаспАТТСАССТТТАС
СсАСТТАТОССАТОЛССТОСОатТоСОССАОСССТоСАаапААОаоООо теасдатасатостТоАасСтТАТТАСТОСТАСТаСТастТАаСАСАТАСТ
АсСОСАаАСТОСОИСтТаААаааССООтТТСАССАТСТОСАСАСАСААТТ
ССААПААСАСОСТИТАТСТаСАСАТОААСАСССТОАСАСССОаАС пАСАСОСССОТАТАТТАСТИиТОСОСОСТОСТОАСТАСССТТАСССИТ тТАСТТССАСТАСТИСОСОССААаОААСсСТОаТСАССаИтстоОАСТ 1481 ТСТТСТОААСТОАСТСААСАТССАОСТОТТАООСОТООСТСТОССОТ | 291
МІ. САСАСТОТАСОТАТСАССТаССААОССОАТТСТОТИАСОаСТОСТАС тТАСССААЛССТОСТАССАССАВАААССЯватсАваСоССАСаТТоТ ватОАТТТАСИОСАААААСААСССОСтТоСатотасаатосСсавАСо аттсотоссасаХастоттоСаайТААСАСваСаАасССтТСАССАТСА ставСсОаСтТСААдаСАаААвАСаАаасССОАСТАТТАСТОТААСТОСТО вапАААаСССАССААСССЯОсСсТааттатотсоостасосоотТАСо
ААДаАСТОАССаИатосСтА
ІО МО: 1481ТЕє) СОЗІМ'Є | АСОТОСААТТОТТОСАСТОТОСОСССОАсСОаСттаСТАСАССоСтТас | 292
НІ сесотосстаАдаАСТОТОСТОТаСАаССстТоСаспАТТСАССТТТАС -.ЕсСвиступ") РОГА| САСТТАТаОССАТОЛаСТОСИаИтоСсасССсАсСа,аСстоСАааапААаооао
ІА теасдатасатТотТоАасСтТАТТАаТОТАСТОаСТастАасСАСАТАСТ рЕТНІТ4976 АсСОСАаАСТОСОИСтТаААаааССООтТТСАССАТСТОСАСАСАСААТТ
ССААПААСАСОСТИТАТСТаСАСАТОААСАСССТОАСАСССОаАС пАСАСОСССОТАТАТТАСТИиТОСОСОСТОСТОАСТАСССТТАСССИТ
ТАСТТССАСТАСТИСОСОССААИСААССсСТОИТСАССатстоОАСТ аСстТАаСАССААССОСССССТОСОТаИтттоСстотТааССССтТТосСАС
СсААСТоСАССТСОТОССОВААСТОССОСТСОТОСОСТОССТОСТОС
ААаАТТАСТТОСССОАДОСССОСтТОАсСсОатТатоСтТасСААтТтотОоаса стотТОаАсстоСсваСсоТасСсАСАССТІТОСАОСТОТОСТОСАСТОСТ ссаасстатАстосстатостосатоатаАсАстТасосстосАас тотТотТавОаСАСССАСАССТАСАТСТОСААСИТОААССАСААОССС
ТОСААСАССААСОТапАСОАвААСаИтапсААСССААатостасаА ссастоассааасаттоСаваааСабАСаАтТоССАсОестатоата
АСССАСОААСССтТоССтТОАСсАататотоставСсваСАСсСсотТалдсо сСтаАССТатОовАТСТТСТАССООССОСТатОАССАССТОСААСТА
СасССААТТОсСООТасСАСОААААаСоСсааССАсассттСАаАсаАс таАТССССООСАССААСААЧАСАОаССССТааСАССССТОаССАСА тетосеатстотаставаСавСААсастасссСтТОАСТСТатестТ сатеастоалдассталдавАСсаАсаасСсаАатАСТАСТОСОСОСТОТО аТАСТОСААССТОТОСОТаттоСаСОапАвОаСАССААДаСтТалссо тастатосСАдаСОаСтТТоСАССААааОАССсСАатТататтосссста аоСооСАаСТоСААИИТСТАСАТСОСОЯСТОССАСАОСТОСОССТОСО
АТОТСТоСТаААавАСТАСТТІ ТОСТОАОСССТОТОАСсАСТаТатстта вААСАССсОСАХаСССстТаАССсАсоааАаТаСАСАСАТТОССТОаСАС тастаСсаялаласСадасавасстатАТАаССТСТЯаАаСАОССсОатТоаИтаАСс стассттосТстТАассСстТаООААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТИатО
ААТСАТАДЕСССАСТААТАССААДАИа ТасАТтААаАААа ТасААССТ
ААдадастТасСсаАТААвАСССАСАССТО ТОСССССТОСОССТОаСТОСТ вААОСОСТОСТОСТОССССТАИСОТатТосСтТатСсСССССАААОСС
СААДОСАСАСССТаАТаАТСОТОССОЯИАСССССвААЛИТОАССТаСО тестаставАТИТаТоССАСОАСаАСССтТалАаталАатТСААТТ сатдсатовАассасатавААСТасСАСААСаССААвАССААасстТ
АсдадавААСАаТАСААСТОСАССТАСССЬССТОСТОТоСОТОаСТ вАСАСТОСтТаСАССАСОАСТОИСтТаААСаССАААвАСТАСААСТ пСААСОИТаИтоСААСААвассставасасСтоССАТССААААСАСС
АТСТоСААСИаССААлсСвасСАсоооСаавпААССССАсИаТтатАСАС сстассоссАТаССааОпАТОАИСТОАССААААССАСОаТСАССо татастасСсСтТОатСАААвасСтТТСтТАТСССАССОАСАТСОССОТа сХдатайОАвАаСААтТаваСАаССОапАЧААСААСТАСААСАССАС ссестоссстаставАСТоСОАСааСТОСТТСТТоСТСтТАСАОСАА аСстТосАССтТапАСААСАааСсАватТаСАаСАсаапААсаТтсттст
САТОСТОСИаИтТОАтТОСАТОАСИСТСТаСАСААССАСТАСАСОСАСА дсдасстотосстатстосОаватААА
ІО МО: 1481ГТЕЕ) Ессвпадиї САаСТасСААТТОТТОСАСТоТасаасАа,асСстаатАСАаТасстаа | 293 на") РОГАГА свааатсссСстТАаАСсТстСсТаТатасСАаСсСТсСааАТТСАССТТТАС рЕТА14977 СсАатТАТассСАТаАДОССТЯОСЯВтоСсасСсСсАа,ВастоСсАаа,авапААлавасвас тасвдатааатстТСАастТАтАатаатАааатТааТАасСАСАТАСТ
АсасАаАСсТСатТаАлавасСссСааТТСсАССАТСТОСАСАСАСААТТ
ССААДСААСАСаТастТатАТСТаСАСАТОААСАа,аСсСстТададасСсСИада вАСсСАСсОаасСссСатАТАТТАСТОТаСЯаСООТаС,ТаАСТАССОаТТАССИатТ
ТАСТТСОАСТАСТОСИЧаССААДаСААсоСсТаатсАссатстосадат аСстТАаСАССАлдссасссстосататссссстаассссССАасСАа
СсААДсдасАассАХдасаасаасАсАХа,ассасттавастасстаато авАавАСТАСТІоСсСсСсОаВАХа,асссатадссататстТапААСАасСаа дассстаАдсстса,аасСсатасСАСАССТІТССССОЯВсСсатТастасАцА атстаасстТатАтТАаасССстадасСсАаа,асатааТСсАССатасстТТсСтТА аСАаСсСсТаасСАСССАЧАССТАСАТСТаСААСаИтаААССАСАДОа
СССАЧСААСАССААдсатапАСсаАаАдАватапвАасСссСсСАдадаста
СОАСААААСТСАСАСАТасСсСсСАСсСсатаССсСАаСАССТадАаста сдасапаАССаТтсАатсТсСсТСТССССССААААСССАдаСАС
АСССТСАТОАТСТОССОСАССССТаАпааТСАСАТОаСОЯТОИаЯТа,аат ваАСатаАаССАСЧААЧАСССТаАааТСААатТТСААСТасСтТАСа тасдссасатТавАааТасСАТААТЯаССААСАСААдАдассасацвада вАаСсАаТтТАСААСсАасСАсатассататаатсАасСатссТсАССаТт
СсСстТаСАССАС,АСТааСТаААТИаИСААССАСТАСААИТасАдИаИ
ТСТССААСААдАаССсСсТСИаасСасСсссСссССАТСИАИААААССАТСТОСА
ААДВАССААдАДСсСИаасАХасссСсаАпААССАСАсататасСсАсостассс
СсСсАТСССООСАТаАДаСТаАССААайАчдАССАа,аатСАасстотата
СсасСАаТтСсАААаасСТСстТАТСССАасСаАсСАТСОавсСсЯатаавАатаца алаСсААтТавасСАХасСсСсапАпААСААСТАСААСАССАСаТасстосс атаставАСтТоСсаАсвастстстТсСсТатаАасСААДОСТСАСС атТапАСсСАдаХдасааатааСАаСАсааапААСаТтсТсТСАТОаСТО
СатОАТаСАТаАдааТстоТаСАСААССАСТАСАСИаСАСААдО,СлаСс тстоостТТатстоСасаатААА 1481 І С (КК)І ТСТТСТОАДдАСТОаАСТСААаАтТоСсАастТа пА;ласатаастстацт | 294 константна ділянка) САЯММАСТаТтТАСаТАТСАССТасССААДааСадтсТтТасСсасСтссСтТАС лямбда-ланцюга ТтТАСИСААДаСТааТтТАССАаСАСАААССсавастоАЧвассссСАаТттст рЕТА14979 ватТаАТТТАСОССААДАААСААСсСсатосатстаапАтТоССасцАсс а,аттстосвасСсАастсТСсСааТААСАСавсСаАласСсСсТСАССАТСА сТаСастТСсААДаСАпйАдАаАдСаАдааССОаАСТАТТАСТОаТтААСТСТСО вдавпААдАдаССсСАССААсссасстаататсттсаставСаатТАСс
АДОаСсСтТаАсСатосСстТАааТСсААСССААХл,аастассссСсАХасатаАс
СсСсТатсССсСсССсСАаСАаСААДаАААСТаСАСаССААСААпасСсСА ссстаатстассСстТаАтТсАасСаАСТТСТАСССсАсСасСсассатаАсс атаасстваААд,сасСсаАСсАХа,асСсАаа,ассосСсатадла,аассаавсатась
АПАССАССАСССССАаЙСААИаСАСАаСААСААСАдатАсассасс асАдастТАССсТаАдасстАсСсссСадасСсАаТтапйААаАдасСсСАСАС атТоСстТАСсАаСстТасСссСАватаАСССАСсаАдс,савасАасСсАсСсатааАСаА
АААССОИСЯТТИааСССССАСсСсадатасАас 9с7 УН САССТаСААТТаСаТТСААТСТИаИ,ТасСстТаААаСТтАААААААССаа,ас | 295 астсСатТАдАатаАаСсТаСАААасСАТССИаСАТАСАССТТСАСТ
ТОоСТАТТАСАТИаСАСТОСОЯ ТС ТтсСААХИ,асоссасассаааатст впОААТапАТаСаСАТСАТТААСССААХДО,ССсаатаастстТАССТОСТА
СсасСаСАСАААТТССАаааТСаСатСсАСОАТаАСССаТатаАСАСТА аСАССТСТАССОТТТАТАТОСАЛИ,аСТИТСоСАасстТасСсаТ Стала
АтТАСТасСсАСсСтТатАСТАСТаТтТасСсАСсасаватаАсСТаатСсТТАСТАСА
ТтТапАСТАТТаСОаСТСААаССАСССТСОИТААСастттсТТстТ
ІО МО: 907 МІ. САТАТТаТтТАТОАСТСААТСТОСАСТОТСТСТОСССОТОАСТОСАСІ 296 аСаААССОСОСаАОСАТТТСсТТОСсСсСаттоСАсоСсАатстотаста
САСТОСААСОааСТАСААСТАТСТОСАТТИСТАССТОаСАААААССО сатсадалассстоАаастасСтТОАТСТАССТСаСТоТААССсаСОаСс теоса,естатАссавАСсСсатттоАссвеСстоТабАТОСОаСАССС
АТТТСАСОТТОААААТСсАаССа тат ТаААаСАСААСАСатТавОаСо
ТТТАТТАСТаТАТОСАСОСАСОССАВАССССААСТТ ТТОСТСААС
ССАССАДОаСТСОСАААТТААА 9С7ЕЕ) СОЗІМ СН) САБИТОСААТТОСТТСААТСТОИТасСтТалАаЙТАААААААССавиИс | 297 1| Ес- СТТоСОТТАААаТОАаСТаСАААаСАТССОСАТАСАССТТСАСТ ("виступ") РОГАГА | ТССТАТТАСАТаОСАСТОСИТТтоСТСААаОасосСсовасСсАсаатотТ рЕТНІ4974 вОААтТавАТОСОСАТСАТТААСССААССОСТОСТСОТАССТОСТА сасСаСАВАААТТОСАСОСТоОаСатСАСаАТаАСССОатТаАСАСТА впСАССТСОТАССОТТТАТАТОСАОССТИтТоСсАИаССТаСатТТСтТОААО
АТАСТаСАСТаИТтТАСТАСТОТОСАСОСОСТОАСТОСТОТТАСТАСА тТеабАСТАТТаСОСТСААДСОСАСССТОСТААСОСТТТСТТоТОасСтТА пСАССААССОССССТОСОТОТТТОоСстТотТааССССтТТоСАССААС тоСАССТСОТОССОСААСТОССООСТСОТОСОССТОССТОИТааААСА тТТАСТТоСССОСОАХаССсСсСсОСОТОАССсОСТатТоСтТавААТТСТОИССОСТОТ аАССТоОСОЯСОаСатОаСАСАССТІ ТОСАОСТОТИСТОСАСТОСТоСаИ асстатастосстатостосатостаАсАатассстосАастото тавасСАСССАВАССТАСАТСТОСААСОСТаААССАСААаСССТОСА
АСАССААСИЯТОпАСОАСААаатаСААСССААСсСТоСсТаСаАСааИтТ сасавассттоСасАасассаадааАтТоССАвастатостОАСос
АВОААсСсСстоССтТахдсАастатстостаавсааСАССаТОАСосСта
АССсСТОТаВАТСТТСТАССОСОССасСтТатТаАССАССТОСААСТАСОСС
ААТТаСЯТОСАЙОААААХаСсоСсааССАвассСтТтсАвАасОАСТОАТ сааСсОпОСАССААСААвАвАасосСставСАССтєстТассСсАСАТТСТ ссеастсототастоваСаОСААХсаСстТассстаАСТСОТОИтСстТОоаТт астолассталасАсаАаса,асСсаАатАСТАСТОСОСССТОТаСтТА
СстТоСААССТОТОСОСТОТттосоСбавАаасСАССААХаСТОАССсатОас татосАдаСасСстсСАССААСОсвАсСсСсАстататтосоостаасс
СоССАаСТоСААИТСТАСАТСОСОССТОССАСАОСТОСОСТАСОСАТО тотТоатОАдАаСАСТАСТІ ТОСТОАССсСТатОАСАаТатсттацАА сАааСааАдсосССТаАССАаСавпАаТОаСАСАСАТТОССТОСАИаТОС тасСавадаСсАааСссооСстТатАтТласставаасАасатсаталссата ост оСстТостТАвССтТайОААСАСАСАСАТАТАТСТОТААТОТОААТО
АТАДИСССАСТААТАССААДАС ТЕСАТААПАААСТасСААССТААСА аДСстТасСОАТААаАСССАСАССТИТоССссСсТаСССтастосСтТадА астастоаастааССсСстТАаСаТататТосСтТаТТоСОСССАААОСССАА ваАСАСССТОАТОАТСТОССОСАСССССОААдатОАССсТаСатос тестабАТОТаТОССАСОАавАСССТОаААатТОААСТТСААТТаСтТ
АСОСОТОвАСОСЯСО,ТОВПААИТОСАСААСаССААаАССААасстстТАаА вАшаААСАИТАСААСТОСАССТАСССЯСЯ ТОСТОТОСОТаСтТОАС
АдатТастаСАССАСОАСТОаСТОААСОааСАААСАаТАСААИаТасСА
АватТатсСААСААСЯСССТавСаСОаСтТоССАТСОСААААСАССАТС тТоСААДССССААсСвасСсАсооССвааААССССАаИаТтаТАСАСССТ асосооСАТаССОапАТОАИСТОАССААААССАСО ТСАСССтТат сатасстааТСсААдАаастІСсСтТАТСССАаСОАСАТоОССсСсатасАС тассдаАдаСААтТасиСАассавАвААСААСТАСААВАССАСОСС тоссстастабАСТоОСаАСОЯСТОСТСТТОСТСтТАСАИСААОСТ
СсАССОтТайАСААДОАДИаСАсСатТавСАаСАаапаААСаТтстТстТСАТ аСстТоСатОАтТаСАТаАвастотаСАСААССАСТАСАСОСАСААС дасстотосстатстоСаватААА
ІО МО:
ОСТ7ЕЄЕ) Ес- СсАватасСААТТаСТТСсААТСТОСТасСстТаААсСТАААААААССавас | 298 ("впадина") РОГАГЇ | СТ ОСОТТАААдатадастаСААдасСАТоСасАТАСАССТТСАСТ
А ТОоСТАТТАСАТОаОСАСТОСС ПОСТ СААдасоСсСа,асвассА,асаТстТ рЕТА14975 асаААтасАтавасСАТСАТТААСССААда,аСсаатаасСТотТАССТОСТА са,аСаСАСАААТТОСАСОасТоаСОаТСАСПАТаАСССаТтаАСАСТА
ВсСАССТОТАССатТтТТАТАТаСЬССТОТоСАССсСсТаСаИаттстТаААС
АТАСТаСАСТтТатТАСТАСТИаТаСАСсОСватаАСтТааТсСТТАСТАСА тапвАСТАТТасСО,ТСААдсасСсАСССТСИ,аТтААСсааТптстстастА всСАССААСОСаСсоостоса,ататсосоостааСССССАасСАасСААС
АаСАССсА,аСссабвасАсАаа,ассастотасваеастасстаатосАса
АСТАСТТоССССОСАСсСОоСсСсатаАссататоСстасААдсАда,аСса,аавАасс стаадостосвасаТасСсАСАССТТОССТСТЬЯСсСсЯатастасда,адатто таасСстТатАТАаССтавАааСсАасасСсатасТСАсСатасстстТАасСА аостапаСАСССАпАССТАСАТСТаСААСИаТаААССАСАдаСоС
АаСААСАССААлаатавсАсвАсААд,сатацпАаССсСААаАасСТассА
СААДААСТоАСАСАТИСССАССВЯтТасССАасСсАССтТадАаастасАс аеапАсСатсАатсТосСТСсТоСССССААААСССААааАСАСо
СстТоСАТаАТСТОССООСАССССТОАсСОаТСАСАТОСОЯТООСТаатТацА сатадасССАСаААаАСССтТаАааТСААаТСААСстТаатТАСатас
АдссасатасАдаатТасСАТААТасССААаАСААдАда,асСсасСасадсасА ,сСАатТАСААСАаасСАСсатАссататастАа,аатостСАссатос тасАсСсАд,ааАСстааСТААтТааСААапАаТАСААдатТасСАдаато
ТОоСААСАААДаСсоСстТосасассСССАТССАСААААССАТСТОСААА ссСААдАдсасасАаССССпАпААССАСсАасСататасСсАсоста7асооосс
АТОССЯвОапАТОАдаСтТаАССААаААССАсСИа ТСаасстотатасСа
САатТСсААДАДЦСИасСТТотТАТСССАаСаАСАТССССсСЯТтапсАатасаАда
АаСААТасасАдасСацАспААСААСТАСААаАССАСасстоссат астааАСстТоСссАссастостстсостатаАаСАдастТСАССаТт ааАСААдпАдасСсАасатасАаСА,ацаавААсатсттсТСАТастосСа таАТаСАТаАДааСТСТасСАСААССАСТАСАСаСАсСААаА,асССсСтТОТ ооСстатстоСааатААА 9С7 І С ІВКІ сСАТАТТаТтТтТАТаАСТСААТСТОСАСТО ТСТОТаСССОСОАТОаАСТОоСАСІ 299 рЕТА14980 абаААдсСссСаосАаСАТтТСотта,ассаттоСсАаассАаатстта7аста
САСТОСААСаасСтТАСААСТАТСТССАТТааТАССТаСААДАААССаИ сатсадсАаассстсАа,аста|астаАТСТАССТаСсастоТААсСсасСас тпессататАдсСа,асАсСсаеаттсАа,аСссастотасвАТтоСсвасАСса
АТТТСАСаТтТаААААТСАССССОЯТаттаААаСАсСАдаАСсатасасся
ТПТАТтТАСТаТтТАТОаСАСИаСАССаСАСаАССССААСТТТТОааТСААС аСАССААдСатСсаАААТТАААСИаТтАСсса тат аСАССАТСТатотТ
ТСАТСТТоССассСАТСТаАТСаСпСААатТТаАААТСТасаААСТасст статататасстТастаААТААСТТСТАТСССАЧАпАаасССАдАс тТАСАСТОаСААаСОаТавАТААСаСССтТоСААТС,ааТтТААСТОССАС сяладататСАСАапАасАапАСАаСААапАСАаСАССТАСАаССТ сдасАдасСсАссСстаАдСасСстаАаСАААаСАвАСТАСИ,АСАДАСАСА
ААатотТАсасстаспААдатСАСССАТСАСССЯЯОСТОАа,аСстоаСос
С,СТСАСААДДадастТ ТСААСАаа,асадсаАатат
Хоча представлений вище винахід докладний описаний для цілей кращого розуміння за допомогою ілюстрацій і прикладів, опис і приклади не слід розглядати як обмежуючі обсяг винаходу. Зміст усіх процитованих патентів і наукової літератури повністю включено в даний опис як посилання
Перелік послідовностей «1105 ЕЕ. НОЕЕМАММ-ГА ВОСНЕ АС «1205 БІСПЕЦИФІЧНІ АНТИГЕНЗВ ЯЗУВАЛЬНІ МОЛЕКУЛИ ПРОТИ КОЇВІ І СО3, ЩО
АКТИВУЮТЬ Т-КЛІТИНИ
«1305» 32186 «1415 «1505 ЕРІ4194147.6 «1515 2014-11-20 «1605 316 «1705 РавептІп версія 3.5 «2105 1 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 1
Сбіп Маі сбіп Гец Уаії Сіп бек б1у Аїа сіц Уаї пув Гув Рго сіу Аїа 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПе ТПх бек Тук 20 25 30 зо
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бек ТПх бек Тут Аїа сбіп гув РІПе 35 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80 40 Меєс сій Гец бег бек Гец Агуд Бех сіц Авр ТПх Аїа Уаї Тут Тук Сув 85 Зо 95
Аза Ат Авп о Тут Тут Аїа сіу Уа1і! ТПї Рго Рібе Авр Тут Тгтр С1у сіп 100 105 110 45 сіу ТпПг Гей Уаії ТПтІ Уаї бек бек 115 120 «2105 2 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид"
«4005 2 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зетк Уаії пув Маі1ії Бек Сув Гпув Аїа бБет Сіу Тут ТПт Рпе ТПтг бек Туг 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп с1іу те бі Тгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд Уаії ТПт Меє ТПІ АкКуд Авр о ТБПтг бет ТПт бБет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
А1а Агд Авп о Тут Тут ТПг сСіу с1у бек бБехт Аїа Рпе Авр Туг Тгр С1Уу 100 105 110 сбіп сб1у ТПт Гец УМаі ТПт Уаї 5бег 115 120 «2105 З «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність зо «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 З сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15 бек Уаї Кпув Уаї бБет Сув Кгув А1їа бек СсС1у Тук ТПтг Рре ТПг бек Туг 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа сбіп Гув РІПе бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 50 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уаії Тут Тук Сув 85 Зо 95 55 Аза Агуд Авп о Тут Тут Гец РірПе бек ТПг бег РПпе Авр Тут Тгр с1у сСіп 100 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег
115 120 «2105 4 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 4 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 Тут Месє Нів Тгр Маї Агуд сіп Аза Рго СсС1у с1п сС1у їец Сі Тгр Меє с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе бо 25 сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бБет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 30 85 Зо 95
Аза Ат Авп о Тут Тут Ії1е сіу І1е Уа1і Рго Рібе Авр Тут Тгтр с1у сіп 100 105 110 35 сСі1у ТБкг Іеец Уа1! ТрПтІ Уа1ї! бек 5бег 115 120 «2105 5 «2115 120 40 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело 45 «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 5 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 50 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30 55 Тут Месє Нів Тгр Маї Агуд сіп Аза Рго СсС1у с1п сС1у їец Сі Тгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе
50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тук Сув 85 Зо 95
Аза Ат Авп о Тут Тут Уаії сіу Уаї бек Рго Рібе Авр Тут Тгтр С1у сіп 100 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 «2105 6 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 6 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 с1у Іїе Іїе Авп Рго бек біу сіу Бек ТПг бет Тут Аїа сбіп ув РПе бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80 40
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Ат Авп о Рпе ТПтІ Уаії Ггец Акд Уаі Рго Рібе Авр Тут Тгр с1у сіп 45 100 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 50 «2105 7 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність 55 «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид"
«4005 7 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо
Сбіп б1у Акд Уа1! ТПг Меє ТрІ Агуд Авр о ТПтг бБеїт ТПт бБег ТПтг Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Ат Авп о Тут Тут І1ї1е сіу Уаї Уа1ї ТПїх Рібе Авр Тут Тгр С1у сіп 100 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 «2105 8 «2115 5 «212» Білок
Зо «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 8 бек Тук Туг Меє Нів 1 5 «2105 9 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 9
І1їе І1їе Авп Рко бБет сіу сіу бБет ТПї бек Тут Аїа біп пув Рпе сіп 1 5 10 15 «1У «2105 10
«2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 10
АвпоТут Тут Іїе сіу Уаї Уаї ТПї Робе Авр Туг 1 5 10 «2105 11 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 11
Сбіп Маі сбіп Гец Уаії Сіп бек б1у Аїа сіц Уаї пув Гув Рго сіу Аїа 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє до 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 35 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меєс сій Гец бег бек Гец Агуд Бек сій Авр ТПт Аїа Уаії Тут Тук Сув 85 90 35
Аза Атуд сб1у бі Тер Агкуд Акуд Тут ТБбтї бек Робе Авр Тут Тгтр С1у сіп 100 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 «2105 12 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
«4005 12 сіу бій Тер Агу Агуд Тут ТБПт бет Рпе Авр Туг 1 5 10 «2105 13 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 13 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бек біу сіу Бек ТПг бет Тут Аїа сбіп ув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80 зо
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 90 95
А1ї1а Агуд сС1у б1у Тгр І1ї1е Агд Тгр Сі Нів Рібе Азр Тут Тгр С1у сб1п 1600 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 «2105 14 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 14
Сіу б1у Тгр І1їе Агд Тгр Сі Нів Роре Азр Туг 1 5 10 «2105 15 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 15 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15 бек Тец Агд Тец бегт Сув А1їа А1їа бек сС1у Рбе ТПтї Ріре бег Авп Аї1а 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПтІ Авр сСіу Сб1у ТПІ ТПгІ Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПг ТПт Рго Тгр сбіц Тегр бБет Тгр Тут Авр Тут Тгтр С1у сіп 100 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 зо «2105 16 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 16
Авп Аїа Ттр Меє 5ег 1 5 «2105 17 «2115 19 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 17
Атуд Іїе пув бБет Пув ТПтІ Авр сіу сі1у ТПїх ТПгІ Авр Тут Аза Аїа Ркго 1 5 10 15 уаї гув -Щ1У «2105 18 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 18
Рго Тктр біцш Тгр бек Тгр Тут Авр Туг 1 5 «2105 19 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 19 сі Маї сб1іп Гец УМаі сі бек сіу сіу с1у Іїец Уаі ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меєс бБет Тгр Уаі Агд сіп Аза Рго сСіу Гув с1у Гец сій Тгр Уаї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПтІ Авр сСіу Сб1у ТПІ ТПгІ Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тут Рпе Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сСі1у ТБкг Іеец Уа1! ТрПтІ Уа1ї! бек 5бег 115 120 «2105 20 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 20
Рго Тгр бі Тгр бек Тук Рпе Авр Туг 1 5 «2105 21 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 21 сі Ма1! сі1іп Пец Уа1 сі бек с1у сС1у с1у їец Уа1 Пув Рго сС1у С1Уу 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у РпПе ТПї Рібре бек Авп Аза 20 25 3о
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Гув ТПтІ Авр сі1у с1у ТПІ ТПг Авр Тут Аїа А1а 50 55 6о
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80
Тецп Тук Гей біп Меє Авп бек Гец Гуз ТПкт сій Авр ТПтІ Аїа Уаї Туг 85 90 95
Тук Сув ТПтІ ТПїІ Рго Тгр бі Тгр Аїа Тгр Рпе Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сіу ТпПг Гей Уаії ТПтІ Уаї бек бек 115 120 «2105 22 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 22
Рго Тгр б1іцш Тгр Аїа Тгр Рібе Авзр Туг 1 5 «2105 23
«2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 23 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї до 45 20 сС1у Акд І1е Пув бет Пув ТПї Авр сС1у с1у ТПг ТПІ Авр Тут А1а А1а 50 55 216)
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5бБет Гув Авп о тТиПк 65 70 75 80 25 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 90 95
Тук Сув ТПтІ ТПїІ Рго Тгр бі Тгр Аїа Тухт Рпе Авр Тут Тгр Шу біп 30 100 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 35 «2105 24 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 24
Рго Тгр бі Тгр Аїа Тук Рпе Авр Туг 1 5 «2105 25 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид"
«4005 25 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15 зетк Уаії пув Маі1ії Бек Сув Гпув Аїа бБет Сіу Тут ТПт Рпе ТПтг бек Туг 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
А1а Акд ТПт с1у Тгр бБег Агуд Тгр СсС1у Туг Ме Авр Туг Тгр С1у сіп 100 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 «2105 26 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність зо «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 26
ТПк сі1у Ткр бБет Агд Тгр біу Тук Ме Авр Туг 1 5 10 «2105 27 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 27 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо
Сбіп б1у Акд Уа1! ТПг Меє ТрІ Агуд Авр о ТПтг бБеїт ТПт бБег ТПтг Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
А1ї1а Агуд сС1у бі Тгр І1е Агуд Тут Тут Нів Ріре Азр Тут Тгр С1у сб1п 100 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 «2105 28 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 28 сСіу б1іш Тгр І1їе Агуд Тут Тук Нів Ріре Азр Туг 1 5 10 зо «2105 29 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 29 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15 зетк Уаії пув Маі1ії Бек Сув Гпув Аїа бБет Сіу Тут ТПт Рпе ТПтг бек Туг 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 90 95
Аза Атуд Уаї с1і1у Тгр Тут Акд Тктр сСіу Тух Мес Авр Тут Тгр С1у сіп 100 105 110
Сіу ТПт Гец Уа1ї! ТіПтІ Уаї бек бег 115 120 «2105 30 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 30 уаї о1у Тер Тут Акд Ткр сі1у Тут Меє Авр Туг 1 5 10 «2105 31 «2115 109 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо поліпептид" «4005 31 сбіп Аїа уаї УМаї ТПтг сіп сід Рко бБет Гей ТПт Уаії бБет Рго б1у 1У 1 5 10 15
ТПкх Уаї ТПт Ггецп ТПї Сув біу бек бек ТПт с1у Аїа Уа1і ТПк ТПк бек 20 25 30
Авп Тут Аїа Авп Тгр Уаі сіп сі пузв Рго біу біп Аїа Рпбе Агд 01Уу 35 40 45 теп Ії1е с1у с1у ТПжї Авп гув Агуд Аза Рго с1у ТПїІ Рго Аїа Акд РіГе 50 55 бо зек біу бБет Пецп Гей с1і1у сіу ув Аї1а Аїа Гей ТПт Гец бек С1у Аї1а 65 70 75 80 біп Рго бій Авр сіц Аза сіц Тут Тут Сув Аза гей Тгр Тут 5ет Авп 85 Зо 95 теп Ткр Уаі Рпе сі1іу сСіу с1у ТПкх пув їГец ТПт Уаї Іец 100 105 «2105 32 «2115 14 «212» Білок «213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 32 сіу бек бБет ТПІ с1у Аїа Уаі! ТПтї ТПт бБет Авп Тут Аза Авп 1 5 10 «2105 33 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 33 сіу ТПг Авп Гув Агд Аїа Ркго 1 5 «2105 34 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 34
Аїа теп Тгр Тут Бек Авп Пец Тгр Уаї 1 5 «2105 35 «2115 215 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 35 сбіп Аїа уаї УМаї ТПтг сіп сід Рко бБет Гей ТПт Уаії бБет Рго б1у 1У 1 5 10 15
ТПкх Уаї ТПт Ггецп ТПї Сув біу бек бек ТПт с1у Аїа Уа1і ТПк ТПк бек 20 25 30
Авп Тут Аїа Авп Тгтр Уаі Сіп сіц Ггув Ркго сС1у сіп Аї1а Рбе Агд С1уУ 35 до 45 теп Ії1е с1у с1у ТПжї Авп гув Агуд Аза Рго с1у ТПїІ Рго Аїа Акд РіГе
50 55 бо
Зек біу Бек Ггеп ге біу б1у пув Аїа Аїа їецп ТПтї Ге бек с1у Аїа 65 70 75 80 біп Рго бій Авр сіц Аза сіц Тут Тут Сув Аза гей Тгр Тут 5ет Авп 85 Зо 95 теп Ткр Уаі Рпе сіу сіу б1у ТПКх пув Гей ТПтІ Уаі Ге с1у сіп Рго 1600 105 110
Туз Аїа А1їа Рко бБет Уаі1і ТП Ггецп Рпе Рго Рго бБет бБет сі сіц Гец 115 120 125 біп Аза Авп о Ггув Аїа ТПт Гец Уаї Сув Гей І1е бек Авр РпПе Тут Рго 130 135 140 с1у Аїа Уаії ТПт Уаії Аїа Ткр пув А1ї1а Авр бет бет Рго Уаі! тув А1а 145 150 155 160 сіу Маії бі ТПг ТПкг ТБПт Рко бБет Гпув біп бБет Авп Авп Гуз Тут А1а 165 170 175
А1ї1а бБет бек Тут Іец бек їец ТПт Рго біц сіп Тгр Гуз бек Нів Агд 180 185 190 бек Тук бБет Сув Сіп Уа1ї ТрІ Нів біцш с1у бБетг ТПтІ Уаї Сі Гуз ТіК 195 200 205 уаї Аїа Рго ТПг сі Сув бег 210 215 «2105 36 «2115 125 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 36 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПтІ РПпе бек ТПк Тук 20 25 30
А1їа Меєс Авп Тгр Уаі Агу сбіп Аза Рго сСіу уз с1у Гей сіц Тгр Уаї 35 40 45 зек Агкуд І1ї1е Агд бек пув Тут Авп Авп Тут Аїа ТПІ Тут Тух Аїа Авр 50 55 бо
Ззек Уаії пузв б1у Агд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80
Те Тут Ггец сіп Меє Авзп бек Ге Агуд Аїа біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 90 95
Тут Сув Уаі1ї Агуд Ніз с1у Авп Рпе СсС1у Авп бек Тут Уа1ї! бек Тгр РБГе 100 105 110
А1їа Тут Тер с1у сіп сіу ТПтї Ггец Уа1і! ТПї Уаї бек бекг 115 120 125 «2105 37 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 37
ТПк Тут Аїа Меє Авп 1 5 «2105 38 «2115 19 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 38
Ак чІ1е Агуд бег ув Тут Авп Авп Туг Аїа ТПт Тут Тут Аїа Авр 5ег 1 5 10 15 уаї гув -Щ1У «2105 39 «2115 14 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 39
Ніз с1у Авп Робе сС1у Азп бетг Тут Уа1ї! бБег Тгр Робе Аїа Туг 1 5 10 «2105 40 «2115 228 «212» Білок «213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 40 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПтІ РПпе бек ТПк Тук 20 25 30
А1їа Мес Авп ТгІр Уаі Акд сіп Азїа Рго сбіу пув біу їец бі Тгр Уаї 35 40 45 зек Агкуд І1ї1е Агд бек пув Тут Авп Авп Тут Аїа ТПІ Тут Тух Аїа Авр 50 55 бо зек Уаії пув бі1у Акд Рпе ТПІ Іїе 5егт Агуд Авр Авр бБет Гув Авп о тТІПг 65 70 75 80
Те Тут Ггец сіп Меє Авзп бек Ге Агуд Аїа біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тут Сув Уаі1ї Агуд Ніз с1у Авп Рпе СсС1у Авп бек Тут Уа1ї! бек Тгр Ріє 100 105 110
А1їа Тут Ттр сі1у сіп сіу ТПтї Ггец Уа1і ТПїх Уаї бБет бБет Аїа бБет ТПг 115 120 125
Туз сіу Рко бБет Уаі Рібе Рго Гецп Аїа Рго бет бБетї Кпув бек ТІК бек 130 135 140 сі1у бі1у ТПпк Аїа Аїа їец сіу Сув Гецп Уаї гув Авр Тут Рпе Рго сій 145 150 155 160
Рго Уа1 ТіПт Уаї бек Тгр Авп бек б1у Аїа тєц ТртІ бек Сбіу Уа1! Нів 165 170 175
ТПЕ Рпе Ркго Аїа Уаії Гей біп бек бек біу Гецп Тут бБет Ге бек бек 180 185 190 уаї Маї ТПт УМаї Рко бБет бет бБет Гей б1у ТПг сіп ТПт Тут І1е Сув 195 200 205
Авп оуаі1і Авзп Нів Гуз Рго бег Авп ТПтї Кув Уа1ї Азр Гуз туз Уаї с1ц 210 215 220
Рго пуз бек Сув 225 «2105 41 «2115 121 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 41 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго б1у бБег 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у с1у ТПтї РПпе бек бек Тук 20 25 30
А1їа Іїе Бех Тгр Уаі Акд сіп Азїа Рго сСіу біп сС1у їец біц Тгр Меє 35 40 45 сі1у б1у Іїе Іїе Рго Іїе Рпе сСіу ТПКх Аїа Авп Тут Азїа сіп Гув РПе 50 55 бо біп б1у Атуд УМаії ТПтІ Іїе ТПтІ Аїа Авр Гуз бет ТПтІ бет ТПтІ Аїа Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Ату Аїа Уаії Рпе Тут Акуд Аїа Ткгр Тут бБет РпПе Авр Тут Тгр 01Уу 100 105 110 сбіп с1у ТПт ТПт Уаї ТПт Уаї бек 5бег 115 120
З0 «2105 42 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 42 бек Тут Аїа Ії1їе бек 1 5 «2105 43 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 43
СсСі1у ч1І1е І1їе Рго І1е Рбе СсС1іу ТБІ АТїа Авзп Тут Аїа СсСіп ув Роре сіп 1 5 10 15 ов1у
«2105 44 «2115 12 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 44
А1їа уаії Рпе Тут Агуд Аїа Ткр Тут бБет РПе Авр Туг 1 5 10 «2105 45 «2115 107 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 45
Авр Іїе сбіп Меєсє ТПт сіп бет Рко бБетї ТПї Гей бегт Аза бБет Уа1ї 01Уу 1 5 10 15
Авр Атуд УМаії ТПт Іїе ТПт Сув Акуд Аїа бек біп бет Іїе бБет бБет Тктгр 20 25 30 теп Аїа Ткр Тут Сіп біп ув Рго біу Гув Аїа Рго Гуз Гецп Гец І1е 35 40 45
Тук Авр А1їа бет бБет Гей бі бек біу Уа1 Рго бБет Ат9д Рпе Бех щу 50 55 бо бек сі1у бБехт С1у ТПт сС1іц Рре ТПт Гецй ТПт І1е бег 5Бехг їец Сіп Рго 65 70 75 80
Авр Авр Рпе Аїа ТПтІ Тут Тут Сув біп біп Тут ТПг бБет Рго Рго Ркго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіп с1у ТПжї Кпуз Уаі бі Іїе Гуз 100 105 «2105» 46 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
«4005» 46
Атуд Аїа бБет сіп бет І1е бБет бБет Тгр І Аза 1 5 10 «2105 47 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 47
Авр Аїа бБет бБет Гец сіц бег 1 5 «2105 48 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 48 сСіп б1п Тут ТБг бет Рго Рго Рго ТПг 1 5 «2105 49 «2115 119 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 49 сбіп Маі сбіп Гец Маі сіп бек с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тут Месє Нів Тгр Маї Агуд сіп Аза Рго СсС1у с1п сС1у їец Сі Тгр Меє 35 до 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 216) сСіп б1у Агд Уа1ї! ТПт Меє ТБбЕ Нів Авр ТПтг бет ТПт бетг ТІНІ Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
А1ї1а Агд бек РібПе Робе ТПх сі1у Рібе Нів Іец Авр Туг Тгр сС1у сС1іп 01уУ 100 105 110
ТП Гец Уа1ї ТПтІ Уаї бек бек 115 «2105 50 «2115 10 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 50 бек Ріпе РоПе ТПт СсС1іу Робе Ніз Ггец Авр Туг 1 5 10 «2105 51 «2115 109 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 51 сі Іїе Маї Гецп ТПг біп бБет Рго с1у ТПг Гецп бек Гей Бех Рго Щ1Уу 1 5 10 15 січ Агуд Аза ТПт Гец бет Сув Акуд Аїа бБет Сбіп бБет УМаі! бБет бет 5бег 20 25 30
Тут ге Аїа Ткр Тут біп біп ув Рго б1іу біп Аза Рго Агд Гей ГІец 35 40 45
І1е Тук сіу Аїа бБет бБет Агуд Аїа ТПІ С1у Іїе Рго Авр Акд РПе 5ег бо сіу бек сб1у Бек с1іу ТПтІ Авр РпПе ТПтї Гецп ТПІ Іїе бБегт Агд Іец С1ц 65 70 75 80 50 Рго сС1п Авр Рбе Аїа Уаї Туг Туг Сув біп сбіп Туг ТПг Авп сіц Нів 85 Зо 95
Тук Тут ТПтІ Рпе сі1у біп б1у ТПх пув Уа1і січ І1їе Гув 100 105 55 «2105 52 «2115 12 «212» Білок
«213» Штучна послідовність «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 52
Атуд Аїа бБет сСіп бБет Уаі! бБет бет бет Тухк Іесц Аїа 1 5 10 «2105 53 «2115 7 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 53 с1у Аїа бБегт Бегт Агд Аїа ТПг 1 5 «2105 54 «2115 10 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 54
Сіп б1іп Туг ТПкг Авп сбіц Нів Тут Тухг ТіК 1 5 10 «2105 55 «2115 117 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 55 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу Рко ТПт бек Тут Аїа сбіп Гув РІПе 50 55 216)
Сбіп б1у Акд Уа1! ТПг Меє ТрІ Агуд Авр о ТПтг бБеїт ТПт бБег ТПтг Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уаії Тут Тук Сув 85 90 95
Аза Атуд сб1у Авр Рпе Аїа Ткгр Гец Авр Тут Тгр Сі1у біп сбіу ТПтг Іец 100 105 110 уа1ї Тк Уа1ї Бек 5ег 115 «2105 56 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 56
І1їе І1їе Авп Рко бет сіу с1і1у Ркго ТПїх бек Тут Аїа біп пув Рпе сіп 1 5 10 15 ов1у «2105 57 «2115» 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 57 с1у Авр Рпе Аїа Тгр Гец Авр Туг 1 5 «2105 58 «2115 112 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 58
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткгр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35 40 45
Рго Сіп їец Гец Іїе Тук Гей Сіу 5Бегт Авп Агд Аїа бБет Сіу Уаї1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 Зо 95
Ззек І1е Мес Авп Агуд ТПх Рпе сіу сбіп с1у ТПтї Гуз Уаії сі Іїе Гуз 100 105 110 «2105 59 «2115 16 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо пептид" «4005 55
Атд бБет бБет біп бБегт Гец Гец Нів бБетг Авп сС1у Тут Авп Тугк Іец Авр 1 5 10 15 «2105 60 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 60 теп сіу бБет Авп Агд Аза бек 1 5 «2105 61 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
«4005 61
Меє біп Аїа бБег Іїе Меє Авп Агд ТіК 1 5 «2105 62 «2115 112 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 62
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго с1Уу 1 5 10 15
Сі Ркго А1їа бек І1е Бек Сув Агд бБет бБет Сіп бБет Іец Іец Нів 5ег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Тктр Тут Гей біп Гув Рго сіу сіп бег 35 40 45
Ркто Сіп Гей Ггеп Іїе Тухк пГец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бех сіу Уаі1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет Сіу ТПІ Авр Рпе ТПтІ Їїец Гув І1е 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 Зо 95 зет Іїе Меє бБегт Агуд ТПг Рпе сСіу біп с1у ТПг пув Уаї бі Іїе Гуз 100 105 110 «2105 63 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 63
Меє біп Аїа бБег Іїеє Меє бБет Акд ТПг 1 5 «2105 64 «2115 112 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело
«223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 64
Авр Ії1е Уа1ї Мес ТПг Сіп бет Ркго Гей бег Гей Рго Ма1і ТПг Рго Щ1У 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткгр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35 40 45
Ркто Сіп Гей Ггеп Іїе Тухк пГец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бех сіу Уаі1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 бек Агд Уаії Сі Аїа сС1ц Авр Уаї сСіу Уаї Тухг Тут Сув Меєсє сіп Аї1а 85 Зо 35
Ззек І1е Меє біп Агуд ТПх Рпе сіу сбіп с1у ТПтї Гуз Уаї сі І1е Гуз 100 105 110 «2105 65 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність зо «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 65
Меє біп Аїа бБег Іїе Меє сіп Акд ТПг 1 5 «2105 66 «2115 112 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005» 66
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткгр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35 40 45
Ркто Сіп Гей Ггеп Іїе Тухк пГец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бех сіу Уаі1ї Рго 50 55 бо
Авр Акуд Рпе бег Сіу бБет сбіу Бек с1у ТПг Авр Рпе ТПІ Гец Ггувз Іе 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 90 95
Ззек І1е Меє Авп Агуд Аза Рпе сіу сбіп с1у ТПтї Гуз Уаї сі І1е Гуз 100 105 110 «2105 67 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 67
Ме сіп А1ї1а бБег І1е Мес Авзп Агд А1а 1 5 «2105 68 «2115 112 зо «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 68
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп обіу Тут Авп Тут Гец Авр Ттр Тут Гей біп Пув Рго с1у сіп бБег 35 40 45
Ркто Сіп Гей Ггеп Іїе Тухк пГец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бех сіу Уаі1ї Рго бо 50
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сбіп Аїа 55 85 Зо 95
Ззек І1е Мес Авп Агуд Авп Рпе сСіу сбіп с1у ТПтї Гуз Уаї сі І1е Гуз 100 105 110
«2105 69 «2115 9 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 69
Меє біп Аїа бБег Іїе Меє Авп Агд Авп 1 5 «2105 70 «2115 116 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 70 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15 бек Уаї Кпув Уаї бБет Сув Кгув А1їа бек Сіу Тук ТПт Ріе ТПг бек Туг 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бек ТПх бек Тут Аїа біп гув РПе бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 40 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Ггецп Агуд бек бій Авр ТПтІ Аїа Уаї Тут Тут Сув 85 90 95 45 Аза Акуд Бек Тут І1їе Авр Ме Авр Тут Тгтр сС1у біп сіу ТПтг Іец Уаї 100 105 110
ТБІ Уа1і! бек 5ег 115 5о0 «2105 71 «2115 7 «2125» Білок «213» Штучна послідовність 55 «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 71 бек Тут І1е Авр Мес Авр Тукг 1 5 «2105 72 «2115 107 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 72 січ Іїе Маії Гецп ТПг сіп бет Рко сіу ТПї Гей бегт Ггец бет Рго б01Уу 1 5 10 15 січ Агуд Аза ТПт Гец бет Сув Акуд Аїа бек біп бет Уаі1! бет бет 5бег 20 25 30
Тут ге Аїа Ткр Тут біп біп ув Рго б1іу біп Аза Рго Агд Гей ГІец 35 40 45
І1е Тук сіу Аїа бБет бБет Агуд Аїа ТПх С1у Іїе Рго Авр Аг9д РПе 5ег 50 55 бо сСі1у бек сСі1іу Бек С1у ТПг Авр Робе ТПї Іеєц ТПг І1ї1е бБег Агд Ієц С1ц 65 70 75 80
Рго б1п Авр Рпе Аїа Уаі1і Тук Тугк Сув біп біп Авр Авп Тгр бек Рго 85 Зо 95
ТПЕ Рпе сіу сіп с1у ТПжї Кпуз Уаі бі Іїе Гуз 100 105 «2105 73 «2115 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 73 біп біп Авр Авп Ттгр бБет Рго ТІПг 1 5 «2105 74 «2115 116 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 74 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бек біу сіу Бек ТПг бет Тут Аїа сбіп ув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Атуд бБет Тут Уаі Авр Меє Авр Тут Тгр Сбіу біп сіу ТПт Іец Уаї 100 105 110
ТПк Уаї бек 5бег 115
З0 0 «2105 75 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 75 бек Тут Уаі Авр Меє Авр Тукг 1 5 «2105 76 «2115 107 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 76
Сі ч1І1е Уаї теп ТПг Ссіп бек Рго с1іу ТБбг ТІец бег ІТец Бех Рго Щ1уУ 1 5 10 15 січ Агуд Аза ТПт Гец бет Сув Акуд Аїа бек біп бет Уаі1! бет бет 5бег
20 25 30
Тут ге Аїа Ткр Тут біп біп ув Рго б1іу біп Аза Рго Агд Гей ГІец 35 40 45
І1е Тук сіу Аїа бБет бБет Агуд Аїа ТПх С1у Іїе Рго Авр Аг9д РПе 5ег 50 55 бо сіу бек сб1у Бек с1іу ТПтІ Авр РпПе ТПтї Гецп ТПІ Іїе бБегт Агд Іец с1ц 65 70 75 80
Рго б1п Авр Рпе Аїа Уаі1і Тухк Тугк Сув біп сбіп Авр І1е Тгр бек Рго 85 Зо 95
ТПг Рпе сіу біп сіу ТПпх Гув Уаї Сіц І1їе Гуз 100 105 «2105 77 «2115 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 77 біп біп Авр Ії1е Тгр бБет Ркго ТПг зо 1 5 «2105 78 «2115 121 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 78 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПтІ РПе бек бек Тук 20 25 30
А1їа Мес бБег Тгр Уаі Акд сіп Аїа Рго сбіу пув біу їец бі Тгр Уаї 35 40 45 зек Аї1а І1їе бек біу бек біу сіу бек ТПІ Тут Тут А1їа Авр бек Уаї1ї 50 55 бо пув с1у Акд РпПе ТПтї Іїе Бек Агд Авр Авп бетг Гув Авп ТПт Іец Туг 65 70 75 80 теп сіп Меє Азп бет Гец Агд Аїа бі Авр ТПтІ Аїа Уаї Тут Тут Сув
85 90 95
А1їа гув Авр бБет бБет Тут Уаії сі Ткгр Тут Аза Рібе Авр Тут Тгр 01Уу 100 105 110 сбіп с1у ТПт Гец Маі! ТПт Уаї бек 5бег 115 120 «2105 79 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 79 бек Тук А1їа Ме 5ег 1 5 «2105 80 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело
Зо «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 80
А1їа Іїе Бек сіу бБет сіу сіу бБет ТПї Тухк Тут Аза Авр бБет Уаї1ї Гуз 1 5 10 15 ов1у «2105 81 «2115 12 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 81
Авр бБет бБет Тут Уаі сіц Ткр Тут Аїа Рпбе Авр Туг 1 5 10 «2105 82 «2115 108 «212» Білок «213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 82 січ Іїе Маії Гецп ТПг сіп бет Рко сіу ТПї Гей бегт Ггец бет Рго б01Уу 1 5 10 15 бі Агуд Аза ТПг оТецй бБет Сув Агуд Аїа бБег біп бек Маії Бек бет бБег 20 25 30
Тут ге Аїа Ткр Тут біп біп ув Рго б1іу біп Аза Рго Агд Гей ГІец 35 40 45
І1е Тук сіу Аїа бБет бБет Агуд Аїа ТПх С1у Іїе Рго Авр Аг9д РПе 5ег 50 55 бо сіу бек сб1у Бек с1іу ТПтІ Авр бБет ТПтІ Гей ТПІ Іїе бБегт Агд Іец С1ц 65 70 75 80
Рго б1п Авр Рпе Аїа Уаі1 Тухк Тугк Сув біп сбіп Рго ТПт бек бек Рго 85 Зо 95
Іїе ТПпПк Рпе сСіу Сіп сіу ТПпкх Ггув Уаї Січ І1е Гуз 100 105 «2105 83 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 83 біп біп Рго ТПт бБет бБет Рго І1е ТПг 1 5 «2105 84 «2115 103 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 84
А1а бБет ТПт Гув сіу Рко бБет Уаі Рібе Рго гец Аза Рго бБет бБет Гувг 1 5 10 15 бек ТПтї бек біу бі1у ТПх Аїа Аїа Іїецй с1у Сув Ге Уаі1і Гуз Авр Тук 20 25 30
Рпе Рго бі Рго Уаі1 ТПх Уаі1і бек Ттр Авп бБет с1у Аїа Ге ТПкК бек 35 40 45 сіу Маї Ніз ТП Рібе Рго Аїа Уаї їєц Сіп бет бек С1у Гец Тук бег 50 55 бо теп бБет бБет Уаі1ії Уаі1ії ТПї Уаі1і Рго бек бек бБет Гец с1у ТПк сіп ТЕПкК 65 70 75 80
Тут І1ї1е Сув Авп УМа1ї! Авп о Нів Гуз Рго бет Авп о ТПкг Туз Уа1! Авр Гув 85 Зо 95 туз УМаії сіц Рко пув бБет Сув 100 «2105 85 «2115 103 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 85
А1а бБет ТПт Гув сіу Рко бБет Уаі Рібе Рго гец Аза Рго бБет бБет Гувг 1 5 10 15 бек ТПкг бБехт сСі1іу с1у ТБх Аїа А1їа їец сС1у Сув їец Уа1! цув Авр Туг 20 25 30
Рпе Рго бі Рго Уаі1 ТПх Уаі1і бек Ттр Авп бБет с1у Аїа Ге ТПкК бек 35 сіу Маї Ніз ТП Рібе Рго Аїа Уаї їєц Сіп бет бек С1у Гец Тук бег бо теп бБет бБет Уаі1ії Уаі1ії ТПї Уаі1і Рго бек бек бБет Гец с1у ТПк сіп ТЕПкК 40 65 70 75 80
Тут І1е Сув Авп Уа1! Авп Нів Кпуз Рго бБет Авп ТПт Гуз Уа1! Авр Гуз 85 90 95 45 пув Уаї бі1ц Рго Пув бек Сув 100 «2105 86 «2115 214 50 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело 55 «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 86 сбіп Аїа уаї УМаї ТПтг сіп сід Рко бБет Гей ТПт Уаії бБет Рго б1у 1У 1 5 10 15
ТПкх Уаї ТПт Ггецп ТПї Сув біу бек бек ТПт с1у Аїа Уа1і ТПк ТПк бек 20 25 30
Авп Тут Аїа Авп Тгр Уаі сіп сі пузв Рго біу біп Аїа Рпбе Агд 01Уу 35 40 45 їецп І1їе с1у СсСіу ТБкЕ Авп о гув Агуд Аза Рго сС1у ТПг Рго А1ї1а Агд РБГе 50 55 бо
Зек біу Бек Ггеп ге біу б1у пув Аїа Аїа їецп ТПтї Ге бек с1у Аїа 65 70 75 80 біп Рго бій Авр сіц Аза сіц Тут Тут Сув Аза гей Тгр Тут 5ет Авп 85 90 95 теп Ткр Уаі Рпе сіу сіу б1у ТПКх Кпув Гей ТПтІ Уаії Гец бек бек Аїа 1600 105 110 бек ТПжї Кгузв бі1у Рго бек Уаі1 Рпе Рго Гей Аїа Рго Бек бек Ппув бек 115 120 125
ТПтг бек сіу бі1у ТПїІ Аїа Аїа ей сС1у Сув Гей Уаії Гпув Авр Тук РПе 130 135 140
Рко бій Рго Уаі1 ТПх Уаі1і бек Ттгр Авп бБехт с1у Аїа еп ТПт бБех ШУ 145 150 155 160
Зо уаї Нів Тржї Рібе Рго Аїа Уа! Ієц СсСіп бег Бек СсС1у їец Тук бетг Іеєц 165 170 175
Зек бБет Уаії Уаі1і ТПк Уа1і Рго бек бБет бБет Гец с1у ТПк сіп ТПк Тук 180 185 190
І1е Сув Авп Уаі1ї Авп Нів Пув Рго бек Авп ТПт Кпув Уа1і1 Авр Гуз Гуз 195 200 205 уаї бі Ркго Пув бек Сув 210 «2105 87 «2115 232 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 87 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПтІ РПпе бек ТПк Тук 20 25 30
А1їа Мес Авп ТгІр Уаі Акд сіп Азїа Рго сбіу пув біу їец бі Тгр Уаї 35 40 45 зет Акуд І1е Агуд Бек Пув Тут Авп Авп Тут Аїа ТПтІ Тут Тут А1а Авр 50 55 бо
Ззек Уаії пузв б1у Агд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80
Те Тут Ггец сіп Меє Авзп бек Ге Агуд Аїа біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тут Сув Уаі1ї Агуд Ніз с1у Авп Рпе СсС1у Авп бек Тут Уа1ї! бек Тгр РБГе 1600 105 110
А1їа Тут Ттр сі1у сіп сіу ТПтї Ггецп Уа1і ТПх Уаї бБет бБет Аїа бБет Уаї 115 120 125
А1а А1ї1а Рго Бек Уа1 Ріре І1е Ріре Рго Рго бБег Авр біц Ссіп ей Гув 130 135 140 бек бі1у ТПїх Аїа бек Уаі1 Уа1 Сув Тей Гей Авп Авп Рпе Тухк Рго Агд 145 150 155 160 січ Аїа Ггув Уаії сіп Тер пув Уаі Авр Ап Аза ей біп бет С1Уу Авп 165 170 175
Ззек біп бі бек Уа1 ТПк бі біп Авр бБегт Гув Авр бБеїт ТПх Тук бек 180 185 190
Пец бБетг бек ТПт Гец ТПг Гей бег гув Аїа Авр Тут Сбіц Ппув Нів Гуз 195 200 205
Ууаї Тук А1ї1а Сув сіц Уа1! ТПг Нів сіп с1у їец бБет бек Рго Уа1! ТЕГ 210 215 220 туз бБет Рпе Авп Агд б1у біц Сув 225 230 «2105 88 «2115 105 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 88 уаї Аза Аїа Рго бБет Уаі Рпе І1е Робе Рго Рго бегт Авр біц сСіп ТГец 1 5 10 15 пув бек сіу ТПтІ АїТа бек Уа1і Уаї Сув Гецп Гей Авп Авп Рпе Тук Рго 20 25 30
Атуд бі Аїа Ггув Уаі сіп Ткр пув Уаі Авр Авп Аза їец біп бет 01У
35 40 45
Авп обет біп сіц бБет Уаі ТПтї сі біп Авр бет пув Авр бет ТПтІ Туг 50 55 бо бек Ггец бет бБет ТПг Гей ТПІ Кгец бегт Кпуз Аїа Авр Тугк Сіц Гуз Нів 65 70 75 80 пуз Уаї Тугк Аїа Суз Сі Уаї ТрІ Нів біп сС1у Гей бет бек Рго Уаї 85 Зо 95
ТПк гув бБет Рпе Авп Агд с1у біц Сув 100 105 «2105 89 «2115 689 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 89 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа зо 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 с1у Агуд Іїе Гпув бБетг Кгув ТПтІ Авр с1і1у сіу ТПї ТПг Авр Тут Аїа Аїа бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 40 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 45 1600 105 110 сіу ТпПг тей Маї ТПтІ МУМаії бБет бБет Аїа бет ТПт Ггувз бі1іу Рго бБет Уаї 115 120 125 50 Рпе Ркго Гец Аза Рго бек бетг Гув бБет ТПтї бБег с1у сіу ТПг Аїа Аї1а 130 135 140 теп сіу Сув Гец Уаії Гуз Авр Тухк Рпе Рго біц Рго Уаі1і ТПт Уаї1ї бек 145 150 155 160 55
Тгр Авп бек б1у Аїа Гец ТПт бек СсСіу Уа1ї Нів ТПт Рібе Рго А1їа Уаї 165 170 175 теп сіп бет бБет біу Гей Тук бек Гпецп бет бБет Уаі Уаі1і ТПхг Уаі1ї Рго 180 185 190 бек бек бБет Гец С1у ТПт сіп ТПк Тут І1їе Сув Авп Уа1! Авзп Ніз Гув 195 200 205
Рко Бек Авп о ТПх Кгув Уаі1 Авр Гуз їГув Маії сі Рго Гуз Бек Сув Авр 210 215 220 сі1іу сб1у с1у с1у бек с1у сС1у с1у сС1у бек Сі Уа1 сСіп теп Ієц С1ц 225 230 235 240 бек бі1у б1у б1у пгецп Уаі1і біп Рго сіу с1у Бек Гецп Акд Гец бек Сув 245 250 255
Аза Аза бек сіу Рпе ТПт РПе бет ТПї Тут Аза Меєсє Авп Тгр Уаї Акгд 260 265 270 біп Аїа Рго с1у Ппув сіу Гец сіц Ткр Уаії бБехт Агкуд І1е Агуд бБет Гуз 275 280 285
Тук Авп Авп Тут Аїа ТПх Тухк Тухк Аїа Авр бБет Уаі гуз б1у Агд РіПе 290 295 300
ТПІ І1їе бБег Агуд Авр Авр Бек ГПув Авп ТПт Гей Тут Гец Сіп Меє Авп 305 310 315 320 бек гец Агд Аїа Сі Авр ТБПІ АТїа Уаї Тут Тут Суз Уаї Акд Ніз С(1У 325 330 335
Зо
Авп о Рпе с1у Авп бБет Тут Уаії бБет Тгтр Рпе Аза Тут Тгр сС1у сбіп 01Уу 340 345 350
ТПх Гец Уаї ТПтї Уаї бек бек Аїа бек ТПт пув с1у Ркго Бек Уа1ї! РіПе 355 З6о0 365
Рко гецп Аза Рго бек бет КГув бБет ТПт Бех сіу с1у ТПт Аїа Аїа Гей 370 375 380 сі1у Сув їец Ма1! пув Авр Тук Ріре Рго СсС1іц Рго Уа1 ТПг Уа1ї бБег Тгр 385 390 395 400
Авп о бек СсС1у Аїа Іїецш ТПтї бег сіу Уаї Нів Тртх Рре Рго Аїа Уаї Ієц 405 410 415
Сбіп бек бБет с1у Гецп Тут бек Гей бек бБет Уаї Уаії ТПг Уаї Рко 5Бег 420 425 430 бек бек Гей С1у ТПк біп ТІ Тук І1їе Суз Авзп Уа! Авп Нів Гуз Рго 435 440 445 зек Авп ТПї гув Уаії Авр пув Гпув Маї бі Рко Гуз Бек Сув Авр Гуз 450 455 460
ТБт Нів ТБк Сув Ркго Рго Сув Рго Аїа Рго с1ц Аї1а Аїа СсС1у сС1у Рго 465 470 475 480
Ззек Уаії РіПе Гей Рбе Рго Рго Пув Рго Пув Авр ТПтїІ Гецп Меї І1е бек
485 490 495
Атуд ТПт Рго бі Уа1і ТПх Сув Уа1ї Уаї Уа1і! Авр Уаії бБет Нів Сс1ц Авр 500 505 510
Рго Сі Уаї пуз Рібе Авп Тгр Тук Уаії Авр сС1іу Уа1і с1іц Уаї Ніз Авзп 515 520 525
А1їа пув ТПт Гув Рго Акд сід бі біп Ту Авп обет ТПтІ Тут Агд Уаї 530 535 540
Ууаї Бек Уаї їец ТПт Уаї їец Нівз Сіп Авр Тгр їец Авп с1у Гув б1цЦ 545 5Б5О 555 5б6О
Тут Гпув Сув Гпув Уаії бек Авп Гув Аїа їец сС1іу Аза Рго І1е січ Гуз 565 570 575
ТпПї Іїе бБет Гпув Аїа гуз С1у біп Рго Агд бід Рго сіп Уаі1і Тук ТЕПкК 580 585 5ЗО
Те Рко Рко Сув Агд Авр бі Гецп ТПхг Гув Авп о біп Уаії бек Гец Тгр 595 бо 605
Сув Гец Уаї пув с1у Рбе Тухк Рго Бех Авр Іїе Аїа Уаі сій Тгр с01ц 610 615 620 зек Авп біу біп Рго бій Авп о Авп Тут Гув ТПх ТПк Рко Рко Уаї Гей 625 630 635 64
Авр Бех Авр сіу Бек РПе Рбе Гей Тут бек Кув Пец ТПтгІ Уаії Авр Гувг 645 650 655 бек Агд Тгр б1іп Сіп сб1у Авп Уа1ї Ріе бБет Сув бБет Уаі1ї! Меє Ніз с1ц бо 665 670
А1ї1а те Нів Авп Нівз Тут ТПг сіп Гпув бег ІТец бег їец бек Рго 01уУ 675 680 685
Туз «2105 90 «2115 450 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 90 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе бек Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПтІ Авр сіу б1у ТПІ ТПг Авр Тут Аїа А1а 50 зо бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 їец Тут їец Сіп Меєб Авп бек ІТец Пув ТПхї Сі Авр ТПт Аїа Уа1ї Туг 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сіу ТпПг тей Маії ТПтІ УМаії бБет бБет Аїа бек ТПх пув сб1у Рго бБет Уаї 115 120 125
Рпе Рго гей Аза Рго бек бек Ппув бБет ТПтІ бБет с1у с1у ТПх Аїа Аїа 130 135 140 теп сіу Сув Гец Уаїії Гуз Авр Тут РПе Ркго сіц Рко Уаі1і ТПх Уаї1ї бек 145 150 155 160
ТЕр Авп о бек Сіу Аїа Іецй ТПг бет с1у Уа1 Нів ТПК Рібе Рго А1а Уаї1ї 165 170 175 теп сіп бет бБет Сбіу Гей Тут бБет Гец бет бБет Уа1і Уаі1і ТПхК Уаі1ї Рго 180 185 190
Зо бек бек бБет Гец С1у ТПт сіп ТПк Тут І1їе Сув Авп Уа1! Авзп Ніз Гув 195 200 205
Рко Бек Авп о ТПтІ гув Уаії Авр Гуз їГув Маії сі Рго Гуз Бек Сув Авр 210 215 220 пуз Тк Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аза Рго бі1ц Аза Аїа СсС1у 01У 225 230 235 240
Рго Бек Уаі Рпе Гей РПе Рго Ркго Пув Рго Гув Авр ТПтї Гец Меє Іїе 245 250 255 бек Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаі1ї бБетг Ніз с1ц 260 265 270
Авр Рго сі Уа1! Пув Рпбе Авзп Тгр Тут Уа! Авр сС1у Уаї сіц Уа1ї Нівз 275 280 285
Авп Аїа Гув ТПт Гув Рго Акд сі бі біп Туг Авп о бет ТПтІ Тут Акгд 290 295 300
Ууаї уаї бек Уаї Гец ТПтї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр гей Авп с1у Гуз 305 310 315 320
Сіш Тут пув Сув пув Ма1!ї бек Авп Гув Аїа їец С1у Аїа Рго І1їе Сс1ц 325 330 335
Туз ТПтІ І1е бБет Гпув Аїа пуз б1у біп Рго Агкд біц Рго Сбіп Уаї Сув
340 345 350
ТпПк Гец Рко Рко бБет Агд Авр бі їец ТПт Гув Авп біп Уаії бек Гец 355 360 365
Ззек Сув Аї1а Уа1ії пув біу Рпе Тут Рго бБегт Авр Ії1е Аїа Уаі1і сі Тгр 370 375 380 біц бек Авп б1у біп Рго с1іц Авп Авп Тут Гуз ТПт ТБПг Рго Рго Уаї 385 390 395 400 теп Авр бБет Авр Сіу бек РпПе Рібе їец Уа1! бБет пув Гей ТПї Уа1ї Авр 405 410 415 пув бБет Акд Тгр сіп сСіп с1у Авп Уа1 РіПе бБетг Сув бБет Уа1 Меє Нів 420 425 430
Сі Азїа їец Нів Авп Агуд Рбе ТПт сСіп пув бБет Гец бет Гец бек Рго 435 440 445 соі1у Гуз 450 «2105 91 «2115 689 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 91 сі Маї сбіп Гецп Гей біц бек сіу сі1у сі1у Гей Уаі1і сіп Рго сі1у щу 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у РпПе ТПтї Рібе бек Тік Тук 20 25 30
А1їа Мес Авп ТгІр Уаі Акд сіп Азїа Рго сбіу пув біу їец бі Тгр Уаї 35 40 45 зек Агкд І1їе Агд бек пув Тут Авп Авп Тут Аїа ТПтї Тух Тут Аїа Авр бо
Ззек Уаії пузв б1у Агд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 50 Тецп Тук Гей біп Меє Авп бек Гец Агуд Аїа сій Авр ТПтІ Аїа Уаї Туг 85 Зо 95
Тут Сув Уаі1ї Агуд Ніз с1у Авп Рпе СсС1у Авп бек Тут Уа1ї! бек Тгр РБГе 100 105 110 55
А1їа Тут Ттр с1і1у сіп сіу ТПх Ггец Уа! ТПтІ Уаї бБет бБет Аїа бБет ТПг 115 120 125
Туз сіу Рко бБет Уаі Рібе Рго Гецп Аїа Рго бет бБет КГув Бек ТПкК бек 130 135 140 сіу б1у ТПІ АТїа Аїа Гей сіу Сув Гец Уа1! Гув Авр Тут Рпе Рго с1ц 145 150 155 160
Рго Уа1 ТіПт Уаї бек Тгр Авп бек б1у Аїа Гєц ТПтІ бек СсС1і1у Уа1ї Нів 165 170 175
ТПг Рпе Рго Аїа Уаії Гей сіп бег бек біу Гей Тугк бБет Гец бек 5бег 180 185 190 уаї Маї ТПт УМаї Рко бБет бет бет Гей С1у ТПтг біп ТПтІ Тут Ії1їе Сув 195 200 205
Авп оуаі1і Авзп Нів Гуз Рго бег Авп ТПтї Кув Уа1ї Азр Гуз туз Уаї с1ц 210 215 220
Рко пуз Бек Сув Авр біу сбіу с1у с1у Бек сіу сі1у с1у с1у бек б1ц 225 230 235 240 уаї б1п Гец Уаі сіц бет сіу с1у с1у Ггеп Уаії пув Рго біу с1у бБег 245 250 255 теп Агд їей Бех Сув Аїа Аїа бег Сіу Ропе ТПг Рпе бетг Авп Аза Тгр 260 265 270
Меє бБег Ттр УМаі Агд сіп Аїа Ркго сСі1у гуз бі1у гец біц Тгр Уа1ї 1У 275 280 285
Зо
Атуд Іїе пув бБет Пув ТПтІ Авр сіу сі1у ТПїх ТПгІ Авр Тут Аза Аїа Ркго 290 295 300 уаї пув б1у Акд РПпе ТПтї І1е бБет Агд Авр Авр бет пув Авп о ТПт ТІец 305 310 315 320
Тут Гец сіп Меє Азп бек Ггецп пув ТПкг бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тук Тук 325 330 335
Сув ТПг ТПг Рго Тгр бій Тгр бег Тгр Тут Авр Тут Тгр сС1іу сбіп ШУ 340 345 350
ТПх Гец Уаї ТПїІ Уаї бек бек Аїа бек ТПт пув с1у Рго Бек Уа1ї! РіПе 355 360 365
Рко гецп Аза Рго бек бет КГув бБет ТПт Бех сіу с1у ТПт Аїа Аїа Гей 370 375 380 сіу Сув Гецш Маії Гув Авр Тут РпПе Ркго бій Рго Уаі ТПт Уаії бБет Ткгр 385 390 395 400
Авп о бек СсС1у Аїа Іїецш ТПтї бег сіу Уаї Нів Тртх Рре Рго Аїа Уаї Ієц 405 410 415
Сіп бек бек с1іу Гей Тут бБет ТГецп бек бБетг Уаі1і Уаі1 ТПпг Уаії Рго 5ег 420 425 430 бек бек Гей С1у ТПк біп ТІ Тук І1їе Суз Авзп Уа! Авп Нів Гуз Рго
435 440 445 зек Авп ТПї Кгув Уаі1і Авр пув пув Маії бій Рго Гуз Бек Сув Авр Гуз 450 455 460
ТПЕ Нів ТБкг Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сб1цп Аїа Аїа с1у С1у Рго 465 470 475 480
Ззек Уаії РіПе Гей Рібе Рго Рго Пув Рго Пув Авр ТПтїІ Гецп Меї І1е бек 485 490 495
Атуд ТПт Рго бі Уа1і ТПх Сув Уа1ї Уаї Уа1і! Авр Уаії бБет Нів Сс1ц Авр 500 505 510
Рго сі Уаії Пув Рпе Авп Тгр Тут Уаї Авр сСіу Уаї сід Уаї Нів Авп 515 520 525
А1їа пув ТПт Гув Рго Акд сід бі біп Ту Авп обет ТПтІ Тут Агд Уаї 530 535 540
Ууаї Бек Уаї їец ТПт Уаї їец Нівз Сіп Авр Тгр їец Авп с1у Гув б1цЦ 545 5Б5О 555 5б6О
Тук гув Сув пув Уаії бБет Авп гув Аза теп біу Аїа Рго Іїе с1ц Гуз 565 570 575
ТпПї Іїе бБет Гпув Аїа гуз С1у біп Рго Агд бід Рго сіп Уаі1і Тук ТЕПкК 580 585 5ЗО
Теш Ркго Ркго Сув Агуд Авр сі Гей ТПт пув Авп о сбіп Уаі! бБет Гец Тгр 595 бо 605
Сув Гец Уаї пув с1у Рбе Тухк Рго Бех Авр Іїе Аїа Уаі сій Тгр б1ц 610 615 620 зек Авп біу біп Рго бій Авп о Авп Тут Гув ТПх ТПк Рко Рко Уаї Гей 625 630 635 640
Авр бБегт Авр сіу бБет РПе РпПе Гецп Тут бек гув Гец ТПт Уаї Авр Гуз 645 650 655 бек Агд Тгр б1іп Сіп сб1у Авп Уа1ї Ріе бБет Сув бБет Уаі1ї! Меє Ніз с1ц бо 665 670
А1а пец Нів Авп Нівз Тугк ТПт сСіп Пув бБет Тец бет Іец бетг Рго С1Уу 675 680 685
Туз «2105 92 «2115 455 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 92 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПтІ РПпе бек ТПк Тук 20 25 30
А1а Мес Авп Тгр Уаі1 Агд сСіп Аза Рго сі1у Пув сС1у їец сі Ткр Уаї 35 40 45 зек Агкуд І1ї1е Агд бек пув Тут Авп Авп Тут Аїа ТПІ Тут Тух Аїа Авр 50 55 бо
Ззек Уаії пузв б1у Агд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80
Те Тут Ггец сіп Меє Авзп бек Ге Агуд Аїа біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тут Сув Уаі1ї Агуд Ніз с1у Авп Рпе СсС1у Авп бек Тут Уа1ї! бек Тгр РБГе 100 105 110
Аїа Тут Тгр сіу Сіп сіу ТПї Гецп Уа! ТПг Уаї бек 5Бег Аїа бБет ТПг 115 120 125
Туз сіу Рко бБет Уаі Рібе Рго Гецп Аїа Рго бет бБет КГув Бек ТПкК бек 130 135 140
Зо сіу б1у ТПІ АТїа Аїа Гец сіу Сув Гец Уа1і гув Авр Тут Рпе Рго с1ц 145 150 155 160
Рго Уа1 ТіПт Уаї бек Тгр Авп бек б1у Аїа Гєц ТПтІ бек СсС1і1у Уа1ї Нів 165 170 175
ТПЕ Рпе Ркго Аїа Уаії Гей біп бек бек біу Гецп Тут бБет Ге бек бек 180 185 190
УуУаї Ма1 ТрПтїІ Уа1 Рго бБетг бек бБет Тец сС1у ТПг Сіп ТПг Тук І1е Сув 195 200 205
Авп оуаі1і Авзп Нів Гуз Рго бег Авп ТПтї Кув Уа1ї Азр Гуз туз Уаї с1ц 210 215 220
Рго пув бБет Сув Авр Гуз ТПтІ Нів ТПт Суз Рго Рго Сув Рго Аїа Рго 225 230 235 240 бі Аїа Аза с1у с1у Рго Бек МУМаі! РпПе Гецп РпПе Рго Рго Гув Рго Гув 245 250 255
Авр ТПІ Гец Меє Іїе бБет Акуд ТПтІ Рго бі Уаії ТПт Сув Уаї Уаї Уаї 260 265 270
Авр Уа1 бек Нів с1іц Авр Рго сіш Уа1ї Кгув Рібе Авп Тгр Тухг Уа1і Авр 275 280 285 сіу Ммаї сіц Уаї Нів Авп Аїа Пувз ТртІ Кпув Рго Агд Сі б1іц с1п Туг
290 295 300
Авп о бБет ТПтї Тут Агуд Уа1ї Уа1! Бех Уаї їецш Трх Уаї їец Нів Ссіп Авр 305 310 315 320
ТЕр гец Авп с1у пузв бі Тук гув Сув пув Уаії бБет Авп Гуз Аїа Гец 325 330 335 с1у Аза Рго Іїе сіц Ппув ТПтІ І1е бБехт Гуз Аза гув б1іу біп Рго Агд 340 345 350 біц Ркго біп Маї Тут ТПт Гец Рко Рко Сув Акгд Авр бій Гей ТПг Гуз 355 360 365
Авп обіп Уа1ї бБег Ге Тгр Сув Гецп Уаї Кпув б1у Рпе Тут Ркго 5ег Авр 370 375 380
І1ї1е Аїа Уаії сіц Ткр сі бБегт Авп б1у біп Рго біц Авп Авп Тут Гувг 385 390 395 400
ТПЕ ТПт Рко Рко Уаії Гей Авр бек Авр сіу бБет РПе РПе Гецп Тук бек 405 410 415
Туз Гецп ТПт Уаїії Авр Гуз бек Агуд Тгр біп сбіп сб1у Авп Уаі1і РоПе бек 420 425 430
Суз бек Уаї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПт Сіп Гуз 5бег 435 440 445 їец бек КГец бек Рко СсС1у Гув 450 455 «2105 93 «2115 227 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 93
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Сбіц Іец Ієцш 01У 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
І1е Бех Акуд ТПт Ркго Сіц Уа! ТПт Сув Уа1 Уа1ї Уаї Авр Уа1! бек Нів 35 40 45 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 50 55 бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Іец Авп с01У 85 Зо 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза Тецй Рго Аїа Рго Ше 1600 105 110 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго сіп Уаї 115 120 125
Сув ТПг Гей Рго Рго Бех Агд Авр біц Ге ТПг Гув Авп біп Уаї 5ег 130 135 140
Те бБет Сув Аї1а Уаі Гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр І1е Аїа Уа1 б1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175 уаї гейш Авр бБет Авр сіу бБет РПе РіПе Гей Уаії бек пув Гецп ТПт Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Нів сСіц Атїа тТец Нів Авп Акуд Рбе ТПт СсСіп Ггув бек ІГец бек Гец 5бег 210 215 220
Рко с1У Гувг 225
Зо «2105 94 «2115 690 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 94 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15 зетк Уаії пув Маі1ії Бек Сув Гпув Аїа бБет Сіу Тут ТПт Рпе ТПтг бек Туг 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу Рко ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Атуд сб1у Авр Рпе Аїа Ткгр Гец Авр Тут Тгр Сі1у біп сбіу ТПтг Іец 1600 195 110
Ууа1ї Трпї Уаі1ї бБег Бек Аїа бБет ТПт Гпув сіу Рго бек Маії РПпе Рго Гей 115 120 125
А1а Рто бБет бБет пув бБет ТПтІ бехт біу б1у ТПІ Аза Аза їец О1Уу Сув 130 135 140 теп Уаії пув Авр Тут РіПе Рго бі Рго Уа1 ТПтІ Уаії 5Беїт Тгр Авп бек 145 150 155 160 сСі1у Аї1а їеєц ТПг о бег сСіу Уаї Нів ТрІ Рібе Рго Аїа Уаї їец сіп 5бег 165 170 175
Зек сі1у Гей Тук бек Гей бек бБет Уа1ї УМаї ТПтІ Уаі1ї Рго Бек бек бек 180 185 190 їец сСіу ТПк сСіп ТБк Тут І1ї1е Сув Авп Уа1і Авп Нів Ппув Рго бБет Авп 195 200 205
ТпЕх гув Уаі Авр Гуз пуз Уа1ї бі Рго пув бБет Сув Авр с1у СШ1у ЩУ 210 215 220 сіу бек б1у сб1у сі1у сіу бБехт сіц Уаії сСіп Гей тей біц бехт б1у 1У 225 230 235 240 с1у їец Маії сбіп Рго сіу сіу бБет Ггец Агд Гей бет Сув Аїа А1їа 5ег зо 245 250 255 с1іу Рпе ТПІ РПе бБет ТПтІ Тут Аїа Ме Авзп Тгр Уаі Агду сіп Аза Ркго 260 265 270 с1у пув с01у Гецп сій Тгр Уа1і Бек Агд І1ї1е Акуд Бек Ппув Тут Авп Авп 275 280 285
Тут Аїа ТПт Тут Тут Аїа Авр бек Уа1 пув С1у Атуд РПпе ТПтї І1е бек 290 295 300
Ат Авр Авр бБет Гув Авп ТПтІ Гецп Тут Гей біп Мес Авзп бБет Гец Агд 305 310 315 320
А1ї1а сбіп Азр ТБг Аїа Уаї Туг Тут Сув Уа1! Агд Нів б1у Авп Рпе 01уУ 325 330 335
Авп обет Тут Уаії бБет Тер Рпе Аїа Тут Тгтр с1у сіп сіу ТПт Гец Уаї 340 345 350
ТПІ УМа1! бБег бБет Аїа бек Уаі Аїа Аїа Рго бБегт Уаі Рпе І1е РпоПе Рго 355 З6о0 365
Рко Бек Авр бі біп Гей Гув бет с1у ТПїх Аза бек Уаі1 Уаї1ї Сув Іец 370 375 380 теп Авп Авп Рпе Тут Рго Агд біш Аїа пув Уаї сбіп Тгр Гуз Уа1ї Авр 385 390 395 400
Авп Аїа Ге сіп бет с1іу Авп бек біп бій бБехт Уаії ТПг сбіцЧ сб1іп Авр 405 410 415
Ззек Гуз Авр бек ТПх Тук бек Гей бет бБет ТПтї Гецп ТПтх Гецп бек Гуз 420 425 430
А1ї1а Авр Тут біш Гуз Нів пуз Уа1ї Тут Аїа Сув сі Уа1! ТрЕ Нів с1п 435 440 445 с1у Пец Бек бек Рко Уаі! ТПтї пув бек Рпе Авп Агд сб1іу сіц Сув Авр 450 455 460 пуз Тк Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аза Рго бі1ц Аза Аїа СсС1у 01У 465 470 475 480
Рко Бек Уаії Рібе гецп Рпе Рго Рго Гув Рго Гув Авр ТПх Гей Меє Те 485 490 495 бек Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаі1ї бБетг Ніз с1ц 500 505 510
Авр Рго сі Уа1! Пув Рпбе Авзп Тгр Тут Уа! Авр сС1у Уаї сіц Уа1ї Нівз 515 520 525
Авп Аза Гпув ТПг Ггув Рго Агуд бі сі сбіп Тут Авп о бБег ТПт Тут Агд 530 535 540
Ууаї уаї бек Уаї Гец ТПтї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр гей Авп с1у Гуз 545 5Б5О 555 56О
Зо січ Тук Ппув Сув Гпув Уаі бБет Авп пув Аїа ей С1у Аїа Рго Іїе Сс1ц 565 570 575
Туз ТПтІ І1е бБет Гпуз Аїа пув б1у біп Рго Агд бі Рго сіп Уа1ї Тук 580 585 5ЗО0
ТПкх Гец Рко Рко Сув Агд Авр бі їец ТПт Гув Авп біп Уаії бек Гец 595 бо 605
ТЕр Сув їец Уа1ї пув СсСіу Рібе Тут Ркго бет Авр І1е Аї1а Уа1! сій Тер 610 615 620 біц бек Авп б1у біп Рго с1іц Авп Авп Тут Гуз ТПт ТБПг Рго Рго Уаї 625 630 635 640 теп Авр бБет Авр Сіу бек РпПе РібПе їецп Тут бБет пув Гей ТПх Уа1ї Авр 645 650 655 пуз бБег Агд Тгр Сіп сіп сб1у Авп Уа! Рібе бек Сув бБет Уа1! Меє Ніз 6б6о 665 670
Сіш Азїа їец Нів Авп Ніз Тук ТПт с1іп пув бБет Гец бет Гец бек Рго 675 680 685 с11у ГПув 690 «2105 95
«2115 447 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 95 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сі Маї Гпув Гув Рго с1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сС1у біп с1іу Те Сі Тгр Меє 20 сС1у І1е І1е Авп Рго бек С1іу с1у Рго ТПт бек Тут Аїа сіп Гув РІе бо сбіп б1у Атуд Уаії ТПт Меє ТПт Агуд Авр о ТБПтг бет ТПт бБет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80 25
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Атуд б1у Авр Рпе Аза Тгр Ггецп Авр Тут Тгтр С1у біп сіу ТпПтг Іец 30 1600 105 110 уаї ТПІ МУМаї Бек бБет Аїа бет ТПтІ Гпузв біу Рго бБет Уаі! РпПе Рго Іец 115 120 125 35 Аза Ркго Бек бБет Гув бек ТПг Бек сіу сСі1у ТПт Аза Аїа Гец с1у Сув 130 135 140 теп Уаії пув Авр Тут РіПе Рго бі Рго Уа1 ТПтІ Уаії 5Беїт Тгр Авп бек 145 150 155 160 40 сСі1у Аї1а їеєц ТПг о бег сі1у Уаї Нів ТрІ Рібе Рго Аїа Уаї їец сіп 5бег 165 170 175
Зек сі1у Гей Тук бек Гей бек бБет Уа1ї УМаї ТПтІ Уаі1ї Рго Бек бек бек 45 180 185 190
Пец с1у Тк с1іп Тпхї Туг І1їе Сув Авп Уа1і Авзп Ніз Тув Рго бБет Авп 195 200 205 50 ТВт гув Маї Авр пув пув Ма1! СсСіц Ркго Кпув бБет Сув Авр Тув Тіт Нів 210 215 220
ТПк Сув Рко Ркго Сув Рго Аза Рго біц Аїа Аїа с1у с1і1у Рко бек Уаї1ї 225 230 235 240 55
Рпе Гей Рібе Рго Рго пув Рго Пув Авр ТПтІ Гецп Меє І1ї1е бек Акд Тік 245 250 255
Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бег Ніз сб1ц Авр Рго с1ц 260 265 270 уаї пув Рпе Авзвп Тгр Тут Уаі! Авр сС1у Уаї! с1іц Уа1ї Нів Авп Аїа Гуз 275 280 285
ТПк Гпув Рго Акд бі бі біп Тук Авп обет ТПтІ Тут Агтд Уаі1і Уаї1ї бек 290 295 300 уаї Ппецп ТПї Уа1ї! теп Нів сСіп Авр Тер тїецш Авп с1у Пув сі Тут Гув 305 310 315 320
Сузв пув Уаї бБет Авп гув Аза ге Сб1у Аїа Рго Іїе сі Гуз ТПк Ше 325 330 335
Ззек Гуз Аїа гув Сб1у біп Рго Агуд бій Рго сбіп Уаі Сув ТПкК Гец Рго 340 345 350
Рко Бех Агд Авр бі Гецп ТПхг Гуз Авп обіп Уаі1ї бБет Гецп бек Сув Аїа 355 360 365 маї пув с1у РПе Тут Рко бБет Авр І1е Аїа Уаії біц Тгр біц бБет Авп 370 375 380 с1у біп Рко сій Авп Авп Тут Гуз ТПг ТПг Рго Рго Уаії Гец Авр 5ег 385 390 395 400
Авр сб1у Бек РПе Рпе Гец Уаії бет Кгпув Гей ТПтІ Уаії Авр Гуз бБет Агд 405 410 415
Зо
Тегр с1п сбіп сб1у Азп Уа1 Рібе бехг Сув бБет Уа1 Меє Нів СсС1іп АїТа Іец 420 425 430
Ніз Авп Нів Тут ТПтІ Сіп Пув бег КГец бетг Гєц бег Рго с1уУу Гув 435 440 445 «2105 96 «2115 219 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 96
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго с1Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткр Тут Гей біп ув Рго сіу сіп бег 35 40 45
Ркто Сіп Гей Ггеп Іїе Тухк пГец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бех сіу Уаі1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Гец Гпув І1е 65 70 75 80 зет Акд Уаі бі Аїа сі Авр Уаії Сіу Маі1і Туг Тук Сув Меє сіп Аї1а 85 30 35
Ззек І1е Мес Авп Агуд ТПх Рпе сіу сбіп сб1у ТПї Ггуз Уаї бі Іїе Гуз 1600 195 110
Атуд ТП Маі Аза Аїа Рко бет Уаі! РпПе І1ї1е Рбе Рго Рго бБет Авр б1ц 115 120 125 біп Гей Гув бБет с1у ТПтІ Аїа бек Уаі1і Уа1 Сув Гей Гей Авп Авп Ріє 130 135 140
Тухк Рго Акд сі Аїа Гуз Уаії біп Тгр пув Уаії Авр Авп Аїа Гец сіп 145 150 155 160 бек б1у Авп бек Сбіп сб1ц бек Уа1і ТПкг біц сСіп Авр Бех Пув Авр 5Бег 165 170 175
ТПт Тут бБет Ггец бет бек ТПх Ггецп ТПх Гей бет Гув Аїа Авр Тух с1ц 180 185 190 пуз Ніз пув Маї Туг Аїа Суз сі Уаї ТрІ Нів Сіп с1у Гец бег 5бег 195 200 205
Рхто Уа1і ТПї Кпув бек Рпе Ап Агуд о1у сії Сув 210 215 «2105 97 «2115» 648 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «2205 «221» модифікована основа «222» (603)..(603) «223» а, с, її, д, невідома або інша «4005 97 чааассдрєдеЕ гаасдсадесс сссаддсасс сЕдеЕсеЕеЕвдс сЕссадддда аададссасс бо сЕСсСЕСЕсдса дддссадсса дчадесдеЕсадс адсадстасе гадссгіддва ссадсадааа 120 ссЕддссадд сісссаддсс ссесаєстає додадсаєсса дсадддссас єддсаєссса 180 часаддеєса дсдодсадсда аєссоддддаса дасессассс єсассаєсад сачаседдвад 240 ссЕдаачасєє еЕсосадесдва свгассдесад садстасбасса асдаасаєта євасасчаєєс чддссадддада ссааадсдда аассааасді асддеддстд сассаєстує серсасусетєс
З6о ссдссасєстд асчадсадесс дчааасстудда асЕдссеЕсс ЕсЯЕЯДсдсс дседааєсаас 420
ЕСсСвтаєссса дададдссаа адсасадсдд ааддсддаса асдсссоісса аєсддадачесаас 480
Есссаддада дсдссасада дсаддасадс ааддасадса сссасадссо садсадсасс 540 сЕдасдсеєда дсааадсада страсдадааа сасааадесс асдссрдсда адссасссає бо сапддсестда дсЕсдсссдЕІ сасааададс єєсаасадда дадчадеЕде 648 «2105 98 «2115 459 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело
Зо «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 98 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 19 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПтІ РПпе бек ТПк Тук 20 25 30
А1а Мес Авп Тгр Уаі1 Агд сСіп Аза Рго сі1у Пув сС1у їец сі Ткр Уаї 35 40 45 зек Агкуд І1ї1е Агд бек пув Тут Авп Авп Тут Аїа ТПІ Тут Тух Аїа Авр 50 зо бо
Ззек Уаії пузв б1у Агд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 7о 75 80
Те Тут Ггец сіп Меє Авзп бек Ге Агуд Аїа біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 30 35
Тут Сув Уаі1ї Агуд Ніз с1у Авп Рпе СсС1у Авп бек Тут Уа1ї! бек Тгр РБГе 1600 195 110
А1ї1а Тут Ттр сС1у с1іп с1іу ТБг Іец Уа1! ТІ Уа1ї бег бБет Аїа бетг Уаї 115 120 125
Аза Аза Рто бБет МУМаі! Рпе І1е РоПе Рго Рго бБегт Авр біц сбіп Гец Гуз
130 135 140 бек бі1у ТПїх Аїа бек Уаі1 Уа1 Сув Тей Гей Авп Авп Рпе Тухк Рго Агд 145 150 155 160 січ Аїа Ггув Уаії сіп Тер пув Уаі Авр Ап Аза гей біп бБет с1Уу Авп 165 170 175
Ззек біп бі бек Уа1 ТПк бі біп Авр бБегт Гув Авр бБеїт ТПх Тук бек 180 185 190
Пец бБет бек ТПт Гец ТПг Гей бег гув Аїа Авр Тут сСіц Кпув Нів Гуз 195 200 205
Ууаї Тук А1ї1а Сув сіц Уа1! ТПг Нів сіп с1у їец бБет бек Рго Уа1! ТЕГ 210 215 220 пуз бек Рібе Авп Агд сС1у біц Суз Авр Гуз ТПк Нів ТБрт Сув Рго Рго 225 230 235 240
Сув Рго Аїа Рго сій Аза Аза сіу сіу Рго бБет Уаі1і! РПпе Гецп Рое Рго 245 250 255
Рко пув Рго Гуз Авр ТПх Гец Меєсє Іїе бБет Акд ТПтї Рго сіц Уа1ї! Тік 260 265 270
Суз Уаї Уа1 уаї Азр Уа! Бек Нів бі Авр Рго біц Уаї пув Рібе Авзп 275 280 285
Тер Тук Уаї Авр с1у Уа1 сіц Уаї Нів Авп Аїа Пув ТПт Тув Рго Агд 290 295 300 бі бі біп Тут Авп обБет ТПтІ Тут Акуд Уаії Уа1і1 бек Уа1ї гей ТПг Уаї 305 310 315 320
Пец Ніз Сіп Авр Тгр Гец Авп с1у Гув біц Тук пув Сувз Кпув Уаї бБег 325 330 335
Авп о гув Аїа їец сіу Аїа Ркго І1е сі гув ТПтІ Іїе бБет їув Аїа Гуз 340 345 350 сіу біп Рго Атд сі Рго сіп Уаі! Тут ТПїх Гей Рго Рго Сув Агд Авр 355 360 365 бі Пец ТП Гув Авп о біп Уаі! бек Гей Тгр Сув Гей Уа1ї Ппув о1Уу РПе 370 375 380
Тук Рко бБет Авр І1е Аїа Уаі бі Тгр бі бет Авп со1у сіп Рго сі1ц 385 390 395 400
Авп о Авп оТут Гув ТПт ТПт Рко Ркго Уаії Гей Авр бБет Авр сбіу бБет РПе 405 410 415
Рпе Ге Тук бек Кпув пецй ТПт Уаії Авр Гуз бек Акд Ттр сі1іп с1п Щ1Уу 420 425 430
Авп о Уаі1і Ріпе бег Сув Бех Уа1! Меє Ніз бі Аїа Ієцш Ніз Авп Нів Туг 435 440 445
ТПЕ сіп пув бБет Гец бет Гепп бек Рго б1УуУу Гув 450 455 «2105 99 «2115 689 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 99 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 с1у Агуд Іїе Гпув бБетг Кгув ТПтІ Авр с1і1у сіу ТПї ТПг Авр Тут Аїа Аїа 50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80
Зо теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 1600 105 110 сіу ТпПг тей Маї ТПтІ МУМаії бБет бБет Аїа бет ТПт Ггувз бі1іу Рго бБет Уаї 115 120 125
Рпе Рго тей А1їа Рго бехт бет Кув бБет ТПх бек С1у С1у ТПг АїТа Аї1а 130 135 140 теп сіу Сув Гец Уаії Гуз Авр Тухк Рпе Рго біц Рго Уаі1і ТПт Уаї1ї бек 145 150 155 160
Тгр Авп бек б1у Аїа Гец ТПт бек СсСіу Уа1ї Нів ТПт Рібе Рго А1їа Уаї 165 170 175 теп сіп бет бБет біу Гей Тук бек Гпецп бет бБет Уаі Уаі1і ТПхг Уаі1ї Рго 180 185 190 бек бек бБет Гец С1у ТПт сіп ТПк Тут І1їе Сув Авп Уа1! Авзп Ніз Гув 195 200 205
Рго Бек Авп ТПтї Гуз Уаі Авр гув пув Маі бій Рго пув Бек Сув Авр 210 215 220 сіу сб1у сб1у с1у Бек сіу сіу сі1у с1у бек біц Уаії біп їец Те С1ц
225 230 235 240 бек бі1у б1у б1у пгецп Уаі1і біп Рго сіу с1у Бек Гецп Акд Гец бек Сув 245 250 255
Аза Аза бек сіу Рпе ТПт РПе бет ТПї Тут Аза Меєсє Авп Тгр Уаї Агд 260 265 270 біп Аїа Рго с1у Ппув сіу Гец сіц Ткр Уаії бБехт Агкуд І1е Агуд бБет Гуз 275 280 285
Тук Авп Авп Тут Аїа ТПх Тухк Тухк Аїа Авр бБет Уаі1і ув с1у Акд РБГе 290 295 300
ТПІ І1їе бБег Агуд Авр Авр Бек ГПув Авп ТПт Гей Тут Гец Сіп Меє Авп 305 310 315 320 бек гец Агд Аїа Сі Авр ТБПІ АТїа Уаї Тут Тут Суз Уаї Агд Ніз 01У 325 330 335
Авп о Рпе с1у Аїа бБет Тут Уаії бБет Тгтр Рпе Аза Тут Тгр сС1у сбіп 01Уу 340 345 350
ТПх Гец Уаї ТПїІ Уаї бек бек Аїа бек ТПт пув с1у Рго Бек Уа1ї! РіПе 355 360 365
Рко гецп Аза Рго бек бет КГув бБет ТПт Бех сіу с1у ТПт Аза Аїа Іецй 370 375 380 сі1у Сув їец Ма1! пув Авр Тут Ріре Рго Сі Рго Уа1 ТПг Уа1і бБег Тгр 385 390 395 400
Авп о бек СсС1у Аїа Іїецш ТПтї бег сіу Уаї Нів Тртх Рре Рго Аїа Уаї Ієц 405 410 415
Сіп бек бБет с1у Гецп Тут бБет Ггец бет бБеїт Уаї Уа1ї ТПтг Уаї Рго 5бБег 420 425 430 бек бек Гей С1у ТПк біп ТІ Тук І1їе Суз Авзп Уа! Авп Нів Гуз Рго 435 440 445 зек Авп ТПї Кгув Уаі1і Авр пув пув Маії бій Рго Гуз Бек Сув Авр Гуз 450 455 460
ТБт Нів ТБк Сув Ркго Рго Сув Рго Аїа Рго Сі Аїа Аїа с1у сС1у Ркго 465 470 475 480
Ззек Уаії РіПе Гей Рібе Рго Рго Пув Рго Пув Авр ТПтїІ Гецп Меї І1е бек 485 490 495
Атуд ТПт Рго бі Уа1і ТПх Сув Уа1! Уа1ї Уаї1ії Азр Уаї бБет Нів Сс1іц Авр 500 505 510
Рго Сі Уаї пуз Рібе Авп Тгр Тук Уаії Авр сС1іу Уа1і с1іц Уаї Ніз Авзп 515 520 525
А1їа пув ТПт Гув Рго Акд сі бі біп Тут Авп о бБет ТПтІ Тут Акд Уаї 530 535 540
Ууаї Бек Уаї їец ТПт Уаї їец Нівз Сіп Авр Тгр їец Авп с1у Гув б1цЦ 545 5Б5О 555 5б6О
Тут Гпув Сув Гпув Уаії бек Авп Гув Аїа Гей с1у Аїа Ркго І1е січ Гуз 565 570 575
ТпПї Іїе бБет Гпув Аїа гуз С1у біп Рго Агд бід Рго сіп Уаі1і Тук ТЕПкК 580 585 5ЗО
Те Рко Рко Сув Агд Авр біц Гецп ТПхг Гув Авп біп Уаії бек Гец Тгр 595 бо 605
Сув Гец Уаї пув с1у Рбе Тухк Рго Бех Авр Іїе Аїа Уаі сій Тгр с01ц 610 615 620 зек Авп біу біп Рго біц Авп Авп Тут Гув ТПх ТПк Рко Рко Уаї Гей 625 630 635 640
Авр Бех Авр сіу Бек РПе Рбе Гей Тут бек Кув Пец ТПтгІ Уаії Авр Гувг 645 650 655 бек Агд Тгр б1іп Сіп сб1у Авп Уа1ї Ріе бБет Сув бБет Уаі1ї! Меє Ніз с1ц бо 665 670
А1ї1а те Нів Авп Нівз Тут ТПг сіп Гпув бег ІТец бег їец бек Рго 01уУ 675 680 685
Туз
Зо «2105 100 «2115 689 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 100 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПтІ Авр сСіу Сб1у ТПІ ТПгІ Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рго Уаі пув бі1у Акуд Рпе ТПІ Іїе 5егт Агуд Авр Авр бет Гув Авп о ТІПг 65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук
85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгтр Шу біп 100 105 110 сіу ТпПг тей Маї ТПтІ МУМаії бБет бБет Аїа бет ТПт Ггувз бі1іу Рго бБет Уаї 115 120 125
Рпе Рго гей Аза Рго бек бек Ппув бБет ТПтІ бБет с1у с1у ТПх Аза Аїа 130 135 140 теп сіу Сув Гец Уаії Гуз Авр Тухк Рпе Рго біц Рго Уаі1і ТПт Уаї1ї бек 145 150 155 160
ТЕр Авп о бек Сіу Аїа Іецй ТПг бет с1у Уа1 Нів ТПк Рре Ркго А1ї1а Уаї1ї 165 170 175 теп сіп бет бБет біу Гей Тук бек Гпецп бет бБет Уаі Уаі1і ТПхг Уаі1ї Рго 180 185 190 бек бек бБет Гец С1у ТПт сіп ТбПк Тут І1їе Сув Авп Уа! Авп Ніз Гув 195 200 205
Рко Бек Авп о ТПх Кгув Уаі1 Авр Гуз їГув Маії сі Рго Гуз Бек Сув Авр 210 215 220 сіу б1у сб1у с1у Бек сіу сіу сі1у сіу бек біц УМаі сіп їец їец с1ц 225 230 235 240 бек с1у с1у с1у їец Уаї с1іп Рко СсСіу сС1у бек Гей Агд Гей бек Сув 245 250 255
Аза Аїа бек сіу Рпе ТПтІ РПе бек ТПІ Тут Аїа Месє Авзп Тгр Уаї Акгд 260 265 270 біп Аїа Рго с1у Ппув сіу Гец сіц Ткр Уаії бБехт Агкуд І1е Агуд бБет Гуз 275 280 285
Тук Авп Авп Тут А1їа ТПІ Тут Тут Аїа Авр бБет Уаі Гуз с1у Акд РБГе 290 295 300
ТпПї Іїе бБет Акд Авр Авр бек пув Авп о ТПт Тец Тут Гец сіп Меє Авп 305 310 315 320 бек Тец Агд Аїа Сіш Авр ТПтІ Атїа Уаї Тух Тук Сув Уа1ї Акд Нів С1У 325 330 335
Авп о Рпе сб1у Авп Аїа Тут Уаії бет Тгтр Рпе Аза Тут Тгр сС1у сбіп 01Уу 340 345 350
ТПх Гец Уаї ТПїІ Уаії бБет бек Аїа бек ТПт пув с1у Рго Бек Уа1ї! РіПе 355 360 365
Рко гецп Аза Рго бек бет КГув бБет ТПт Бех сіу с1у ТПт Аїа Аїа Гей 370 375 380 сіу Сув Гецш Маії Гув Авр Тут РпПе Ркго бій Рго Уаі ТПт Уаії бБет Ткгр 385 390 395 400
Авп о бек СсС1у Аїа Іїецш ТПтї бег сіу Уаї Нів Тртх Рре Рго Аїа Уаї Ієц 405 410 415
Сіп бек бек с1іу Гей Тут бБет ТГецп бек бБетг Уаі1і Уаі1 ТПпг Уаії Рго 5ег 420 425 430 бек бек Гей С1у ТПк біп ТІ Тук І1їе Суз Авзп Уа! Авп Нів Гуз Рго 435 440 445 зек Авп ТПї Кгув Уаі1і Авр пув пув Маії бій Рго Гуз Бек Сув Авр Гуз 450 455 460
ТПЕ Нів ТБкг Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сб1цп Аїа Аїа с1у С1у Рго 465 470 475 480
Ззек Уаії РіПе Гей Рібе Рго Рго Пув Рго Пув Авр ТПтїІ Гецп Меї І1е бек 485 490 495
Акуд ТБг Рго сі Уа1! ТБг Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уа1! бек Нів сС1цп Авр 500 505 510
Рго Сі Уаї пуз Рібе Авп Тгр Тук Уаії Авр сС1іу Уа1і с1іц Уаї Ніз Авзп 515 520 525
А1їа пув ТПт Гув Рго Акд сід бі біп Ту Авп обет ТПтІ Тут Агд Уаї 530 535 540
Ууаї Бек Уаї їец ТПт Уаї їец Нівз Сіп Авр Тгр їец Авп с1у Гув б1цЦ 545 550 555 5б6О
Тук гув Сув пув Уаії бБет Авп гув Аза теп біу Аїа Рго Іїе с1ц Гуз 565 570 575
ТПІ І1їе Бех гув Аза Гуз с1у сіп Рго Агуд бій Рго сіп Уаі1і Тук ТіПг 580 585 5ЗО
Те Рко Рко Сув Агд Авр бі Гецп ТПхг Гув Авп о біп Уаії бек Гец Тгр 595 (51049) 605
Сув Гец Уаї пув с1у Рбе Тухк Рго Бех Авр Іїе Аїа Уаі сій Тгр с01ц 610 615 620 зек Авп біу біп Рго бій Авп о Авп Тут Гув ТПх ТПк Рко Рко Уаї Гей 625 630 635 640
Авр бБегт Авр сіу бБет РПе РпПе Гецп Тут бек гув Гец ТПт Уаї Авр Гуз 645 650 655 бек Агд Тгтр СбСіп сіп сС1у Авп Уаї Ріре бех Сув бБет Уаі1ї! Меєсє Нів с1ц 6ббо 665 670
А1ї1а те Нів Авп Нівз Тут ТПг сіп Гпув бег ІТец бег їец бек Рго 01уУ 675 680 685
Туз
«2105 101 «2115 441 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 101 сбіп Аїа уаї УМаї ТПтг сіп сід Рко бБет Гей ТПт Уаії бБет Рго б1у 1У 1 5 10 15
ТПт Ма1і! ТПг Ггец ТПт Сув сіу бБет бБеїт ТПкт сіу Аїа Уаії ТПхг ТПкК 5ег
Авп Тут Аїа Авп Тгр Уаі сіп сі пузв Рго біу біп Аїа Рпбе Агд 01Уу 20 теп І1ї1е с1у с1у ТПг Авп о гув Агуд Аза Рго сіу ТПІ Рго Аїа Акд РіГе бо
Зек біу Бек Ггеп ге біу б1у пув Аїа Аїа їецп ТПтї Ге бек с1у Аїа 25 65 70 75 80 біп Рго бій Авр сбіц Аїа сіц Тут Тут Сув Аза гей Тгр Тут 5ет Авп 85 Зо 95 30 Тїецп Тгр Уаї Рпе сі1у сСіу с1у ТПтІ Пув теп ТПт Уаї Іец бек бБет А1а 100 105 110 бек ТПжї Кгузв бі1у Рго бек Уаі1 Рпе Рго Гей Аїа Рго Бек бек Ппув бек 115 120 125 35
ТПх бБехт сі1у с1у ТПї Аза Аза Гецш сіу Сув Гец Уаі Гуз Авр Тук РІПе 130 135 140
Рко бій Рго Уаі1 ТПх Уаі1і бек Ттгр Авп бБехт с1у Аїа еп ТПт бБех ШУ 40 145 150 155 160 уаї Нів Тржї Рібе Рго Аїа Уа! Ієц СсСіп бег Бек СсС1у їец Тук бетг Іеєц 165 170 175 45 зет бБет Уаі Маі1і ТП Уа1! Рго бБетк бБет бБет Гей с1у ТПт Сбіп ТПк Туг 180 185 190
І1е Сув Авп Уаі1ї Авп Нів Пув Рго бек Авп ТПт Кпув Уа1і1 Авр Гуз Гуз 195 200 205 50 уаї біц Рго Пув бБет Сув Авр Туз ТПх Нів ТПтх Сув Рго Рго Сув Рго 210 215 220
Аза Ргто біц Аза Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 55 225 230 235 240
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 245 250 255
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 260 265 270
Ууаї Авр с1у Уа1 сіц Уа1! Нів Авп А1ї1а їГув ТПг Гуз Рго Агд Сі Сс1ц 275 280 285
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 290 295 300 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 305 310 315 320
Аїа тецш с1у Аїа Ркго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 325 330 335
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго бек Агкд Авр бій Гей 340 345 350
ТВт гув Авп Сіп Уаї бБетг Гец ТПт Сув теп Ма1і пув с1у Ропе Туг Рго 355 360 365 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 370 375 380
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 385 390 395 400
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї зо 405 410 415
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 420 425 430
Кпув бек Гей бБет Пец бек Рго сіу Гув 435 440 «2105 102 «2115 227 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 102 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
Тер Меє бек Тгр Уаії Агуд сб1п Аїа Рго сС1у пув СсС1іу еп сі Тгр Уаї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПтІ Авр сСіу Сб1у ТПІ ТПгІ Авр Тут Аїа А1а
50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 1600 105 110 сіу ТпПг тей Маії ТПтІ УМаії бБет бБет Аїа бБет Уа1і А1ї1а Аза Рго бБетг Уаї 115 120 125
Рпе Іїе РпПе Рго Рго бБегт Авр біц біп Пец Гуз бек сіу ТПг Аїа 5ег 130 135 140 уаї Маї Сув Гец Гец Авп Авп Рпе Тут Рго Агуд біц Аїа пув Уаї сіп 145 150 155 160
ТЕр гув Уаі Авр Авп Аза Ггецп біп бек б1у Авп бБет сіп сі бек Уаї1ї 165 170 175
ТПкх сі с1іп Авр обет Гуз Авр бек ТПх Тут бет Гецй бБет Бек ТіПх Ієц 180 185 190
ТЕ їец бек Гув АТїа Авр Тут сі Пув Нівз Ппув Уа1! Тут Аїа Суз Сс1ц 195 200 205
УуУаї Тркг Нів сіп сС1у Іїец бек бБет Рго Уа1ії ТПг Гуз Бек Ропе Авп Агд 210 215 220 сіу біц Сув 225 «2105 103 «2115 231 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 103 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 10 15 зет Гей Агд Пец бек Сув Аїа Аїа бБет сСіу Рпе ТПтІ Рпе бБетг ТПк Туг 20 25 30
А1їа Мес Авп ТгІр Уаі Акд сіп Азїа Рго сбіу пув біу їец бі Тгр Уаї 35 40 45 зек Агкуд І1ї1е Агд бек пув Тут Авп Авп Тут Аїа ТПІ Тут Тух Аїа Авр 50 55 бо
Ззек Уаії пузв б1у Агд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80
Те Тут Ггец сіп Меє Авзп бек Ге Агуд Аїа біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 90 95
Тут Сув Уаі1ї Агуд Ніз с1у Авп Рпе СсС1у Авп бек Тут Уа1ї! бек Тгр РБГе 100 105 110
А1а Тук Тгр с1у с1іп с1у ТПг Ієц Уа1 ТПтї Уа1ї! бехг бБег А1їа бБег Рго 115 120 125
Туз Аїа А1їа Рко бБет Уаі1і ТП Ггецп Рпе Рго Рго бБет бБет сі сіц Гец 130 135 140 біп Аїа Авп о Гув Аїа ТПт Гец Уаї Сув Гей Іїе бБет Авр Рпе Тут Ркго 145 150 155 160 с1у Аїа Уаії ТПт Уаії Аїа Ткр пув А1ї1а Авр бет бет Рго Уаі! тув А1а 165 170 175 сіу Маії бі ТПг ТПкг ТБПт Рко бБет Гпув біп бБет Авп Авп Гуз Тут А1а 180 185 190
А1а Бек бет Тутк Іец бек Тец ТПтІ Рго Сі Сіп Тгр Пув бБетг Нів Агд 195 200 205 бек Тук бБет Сув Сіп Уа1ї ТрІ Нів біцш с1у бБетг ТПтІ Уаї Сі Гуз ТіК 210 215 220
Зо уаії Аза Рго ТПт сіц Сув бег 225 230 «2105 104 «2115 118 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 104
Сбіп Маі сбіп Гец Уаії Сіп бек б1у Аїа сіц Уаї пув Гув Рго сіу Аїа 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Акуд с1у сіу Бек біу сіу Бек Рпе Авр Тут Тгр б1іу сіп сіу ТрПг 100 105 110 теп УМа1і ТПтІ Уаї бек 5бег 115 «2105 105 «2115 118 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 105 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго б1у бБег 1 5 10 15 зетк Уаії пув Маі1ії Бек Сув Гпув Аїа бБет Ссіу сіу ТПт РПпе бБектк бек Туг 20 25 30
А1їа Іїе Бех Тгр Уаі Акд сіп Азїа Рго сСіу біп сС1у їец біц Тгр Меє зо сСіу б1у Іїе Іїе Рго Іїе Рпе сіу ТПтІ Аза Авп Тут Аїа біп гув РПе бо біп б1у Атуд УМаії ТПтІ Іїе ТПтІ Аїа Авр Гуз бет ТПтІ бет ТПтІ Аїа Туг 35 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95 40 А1а Акд сС1і1у с1у бек сі1у сСі1у Бех Меє Авр Аї1а Тгр сС1у с1іп С1у ТЕГ 100 105 110
ТПк Уаї ТПтІ Уаї бек 5бег 115 45 «2105 106 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність 50 «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" 55 «4005 106 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меєс бБег Тгр Уаі Агуд сіп Аза Рго сСіу Гув с1у Гец сій Тгр Уаї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПтІ Авр сСіу Сб1у ТПІ ТПгІ Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПтІ ТПтї сі1іу сбі1іу бек біу біу бек Рпе Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сСі1у ТБкг Іеец Уа1! ТрПтІ Уа1ї! бек 5бег 115 120 «2105 107 «2115 118 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело
Зо «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 107 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПтІ РПе бек бек Тук 20 25 30
А1а Меєс бет Тгр Уаі1 Агд сСіп Аза Рго сі1у Пув сС1у їец сі Ткр Уаї 35 40 45 зек Аї1а І1їе бек біу бек біу сіу бек ТПІ Тут Тут А1їа Авр бек Уаї1ї 50 55 бо
Туз с1у Акд РпПе ТПї Іїе бек Агуд Авр Авп о бет Гув Авп ТПт Гец Тук 65 70 75 80 теп сіп Меє Азп бет Гец Агд Аїа бі Авр ТПтІ Аїа Уаї Тут Тут Сув 85 Зо 95
А1їа пув с1у сіу бБет сіу сіу бБет РпПе Авр Тут Тгр С1у біп с1у ТПг 100 105 110 печ Уа1ї ТПк Уаї Бек бек 115 «2105 108
«2115 117 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 108 сбіп Маі сбіп Гец сіп сіц бек сіу Рго с1і1у Гей Уаії пув Рго бБет б1ц 1 5 10 15
ТпПжх Гец бБет Гецп ТПтї Сув ТПх Уа1і бек сіу с1іу бБет І1їе Бек бек Тук
Тут Ткр бБет Тгтр І1е Агу Сбіп Рго Рго сбіу Ппув с1у Гей сі Тктр Ше 20 сі1у Тут Іїе Тук Тут Бек біу Бек ТПК Авп Тут Авп Рго бБет Гец Гув бо зек Акд Уа1і ТПх Іїе бБет Уаії Авр ТПт бБет Гув Авп сбіп РоПе бБег Гей 65 70 75 80 25
Туз Гец бБет бБет Уаі ТПйх Аза Аза Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тук Сув Аїа 85 Зо 95
Атуд б1у сб1у Бек сіу сіу бБет РпПе Авр Тут Тгр С1іу біп сбіу ТПтг Іец 30 1600 105 110
Ууа1ї1 ТрпЕ Уаі1ї бек 5бБег 115 35 «2105 109 «2115 118 «212» Білок «213» Штучна послідовність 40 «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" 45 «4005 109 сі Маї сбіп Гец Уаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї гув ув Рго с1у с1ц 1 5 10 15
Ззек Ггецп Гуз Іїе бек Сув пув біу бек с1у Тут Бек РПе ТПх бек Тук 50 20 25 30
ТЕр І1е с1у Ткр Уаі Агд біп Меє Рго с1і1у їув о1Уу Гец сі Тер Меєс 35 40 45 55 с1у Іїе Іїе Тук Рго С1у Авр бБет Авр ТПг Агу Тут Бек Рго бек РПе 50 55 бо біп б1у біп Маії ТПІ Іїе бБехт Аїа Авр Гуз бБет Іїе бБет ТПтІ Аїа Туг
65 70 75 80 теп сіп Тер бБет бБет Гей Гуз Аїа бек Авр ТПтІ Аїа Меє Тут Тук Сув 85 Зо 95
Аза Атуд с1у сіу бБет сіу сіу бБет РпПе Авр Тут Тгр С1у біп с1у ТПг 100 105 110 теп Ма1! ТПг Уаї бек 5бег 115 «2105 110 «2115 109 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 110
Сбіп ТПг Уаї Маї ТПтг сіп сід Рко бБет Гей ТПт Уаії бБет Рго б1у 1У 1 5 10 15
ТПкх Уаї ТПт Ггецп ТПї Сув біу бек бек ТПт с1у Аїа Уа1і ТПк ТПк бек 20 25 30
Авп Тут Аїа Авп Тгр Уаі сіп сі пузв Рго біу біп Аїа Рпбе Агд 01Уу теп Ії1е с1у с1у ТПжї Авп гув Агуд Аза Рго с1у ТПїІ Рго Аїа Акд РіГе бо 35 зек біу бБет Пецп Гей с1і1у сіу ув Аї1а Аїа Гей ТПт Гец бек о1Уу Аї1а 65 70 75 80 біп Рго бій Авр сіц Аза сіц Тут Тут Сув Аза гей Тгр Тут 5ет Авп 85 Зо 95 40 теп Ткр Уаі Рпе сі1іу сСіу с1у ТПкх пув їГец ТПт Уаї Іец 100 105 «2105 111 45 «2115 107 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 50 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 111 55 Авр І1е сіп Меє ТПт сіп бегк Рго бет бБет Гецп бБег Аїа бек Уа1! ФУ 1 5 10 15
Авр Атуд УМаії ТПт Іїе ТПт Сув Акуд Аїа бек біп бет Іїе бБет бет Туг
20 25 30 теп Авп Ткр Тут біп біп ув Рго біу ГПув Аїа Ркго Гуз Гей Гец Те 35 40 45
Тут Аїа А1їа бет бБет Гей біп бек біу Уа1 Рго бБет Ат9д Рпе Бех щу 50 55 бо бек біу бБек бі1у ТПх Авр Рпе ТПт Тец ТПтІ І1е бБетг Бек Гей сіп Рго 65 70 75 80 біЧ Авр Рпе Аїа ТПтІ Тут Тут Сув біп біп бет Тут бБет ТПтг Рго ТГец 85 Зо 95
ТПг Рпе сіу сіу сі1у ТПг ув Уаї сі І1е Гуз 100 105 «2105 112 «2115 109 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 112 біп Аїа уаї Уаї ТПтг сіп сі Рко бБет Гей ТПт Уаії бБет Рго б1у 1У 1 5 10 15
ТПкх Уаї ТПт Ггецп ТПї Сув біу бек бек ТПт с1у Аїа Уа1і ТПк ТПк бек 20 25 30
Авп Тут Аза Авп Тктр Уаі Ссбіп бій Гув Рго б1у біп Аїа Рпе Агд Щ1У 35 40 45 теп Ії1е с1у с1у ТПжї Авп гув Агуд Аза Рго с1у ТПїІ Рго Аїа Акд РіГе 50 55 бо
Зек біу Бек Ггеп ге біу б1у пув Аїа Аїа їецп ТПтї Ге бек с1у Аїа 65 70 75 80 біп Рго бій Авр сіц Аза сіц Тут Тут Сув Аза гей Тгр Тут 5ет Авп 85 Зо 95 теп Ткр Уаі Рпе сі1іу сСіу с1у ТПкх пув їГец ТПт Уаї Іец 100 105 «2105 113 «2115 109 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид"
«4005 113
Сбіп ТПг Уаї Маї ТПтг сіп сід Рко бБет Гей ТПт Уаії бБет Рго б1у 1У 1 5 10 15
ТПкх Уаї ТПт Ггецп ТПї Сув біу бек бек ТПт с1у Аїа Уа1і ТПк ТПк бек 20 25 30
Авп Тут Аїа Авп Тгр Уаі сіп сіп Гуз Рго б1іу біп Азїа Рго Агд 01Уу 35 40 45 теп Ії1е с1у с1у ТПї Авп Аза Агуд Аза Рго с1у ТПїІ Рго Аїа Акд РіГе 50 55 бо зек біу бБет Пецп Гей с1і1у сіу ув Аї1а Аїа Гей ТПт Гец бек сіу Уаї 65 70 75 80 біп Рго бій Авр сіц Аза сіц Тут Тут Сув Аза гей Тгр Тут 5ет Авп 85 90 95 теп Ткр Уаі Рпе сі1іу сСіу с1у ТПкх пув їГец ТПт Уаї Іец 100 105 «2105 114 «2115 109 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 114
Сіп Тпкї Уаї Уа1і! ТПг біп бі Рго Бек Гей ТПтї Уа1і бБехг Рго сі1у щу 1 5 10 15
ТПкх Уаї ТПт Ггецп ТПї Сув біу бек бек ТПт с1у Аїа Уа1і ТПк ТПк бек 20 25 30
Авп Тут Аїа Авп Тгр Уаі сіп сіп Гуз Рго б1іу біп Азїа Рго Агд 01Уу 35 40 45 теп Ії1е с1у с1у ТПжї Авп гув Агуд Аза Рго с1у ТПїІ Рго Аїа Акд РіГе бо
Ззек біу Бек Ггеп ге біу б1і1у пув Аїа Аїа Гецп ТПт Гецп бек с1і1у Уаї 65 70 75 80 50 біп Рго бі Авр сі Азїа сі Тухк Тук Сув Аїа Гецп Тгр Тут Аїа Авп 85 Зо 95 теп Ткр Уаі Рпе сі1іу сСіу с1у ТПкх пув їГец ТПт Уаї Іец 100 105 55 «2105 115 «2115 122 «212» Білок
«213» Штучна послідовність «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 115 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бет б1у Рпе ТПї Рібе бБехг Авп Аза 20 25 30
Тер Месє Нів Тгр Маї! Агуд сіп Аїа Рго сС1у Пув СсС1у їец Сі Тгр Уаї1ї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Гув ТПтІ Авр сіу с1у ТПІ ТПг Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80
Те Тут Ггец сіп Меє Авп о бетг Гецп пув ТПтІ сі1ц Авр ТПтІ Аїа Уаї1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сСі1у ТБг Тец Уа1! ТПг Уа1ї бек бег А1а 5ег 115 120 «2105 116 «2115 122 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 116 сі Маї сб1іп Гец Маі сіц бек сіу сіу с1у їецй Уаі ув Рго бі1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меєс бБег Тгр Уаі1і Агд сіп Аза Рго сі1у Ппув с1у Гец сій Тгр Уаї 35 40 45 зек Акд І1ї1е пув бек пув ТПг Авр сі1у с1у ТПтїІ ТПІ Авр Тут Аїа Аїа 50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агд РПе ТПтІ Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сіу ТПг тей Маії ТПтІ Уаії бБет бБет Аїа 5ег 115 120 «2105 117 «2115 122 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 117 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 сСі1іу бек І1е Пув бет Пув ТПї Авр сС1у с1у ТПг ТПІ Авр Тут А1а А1а 50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сіу ТПг тей Маії ТПтІ Уаії бБет бБет Аїа 5ег 115 120 «2105 118 «2115 122 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 118 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПтІ Авр сСіу Сб1у ТПІ ТПгІ Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рго Уаі пув бі1у Акуд Рпе ТПІ Іїе 5егт Агуд Авр Авр бет Гув Авп о ТІПг 65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжї ТПтІ Ркго Тухк бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сіу ТПг тей Маії ТПтІ Уаії бБет бБет Аїа 5ег 115 120 «2105 119 «2115 122 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо поліпептид" «4005 119 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПтІ Авр сСіу Сб1у ТПІ ТПгІ Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рго Уаі пув бі1у Акуд Рпе ТПІ Іїе 5егт Агуд Авр Авр бет Гув Авп о ТІПг 65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тук бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сіу ТПг тей Маії ТПтІ Уаії бБет бБет Аїа 5ег 115 120 «2105 120 «2115 122
«212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 120 сСіп Ма1 с1іп Пец Уа1ї сі1іп бек с1у А1ї1а сіш Уа1ї! Гуз Пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меєс сій Гец бег бек Гец Агуд Бек сій Авр ТПт Аїа Уаії Тут Тук Сув 85 Зо 95
Аза Ат Авп о Тут ТПтІ Ії1е Уаї Уаї бек Рго Рібе Авр Тут Тгтр С1у сіп 100 105 110 зо сіу ТПг тей Маії ТПтІ Уаії бБет бБет Аїа 5ег 115 120 «2105 121 «2115 122 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 121
Сбіп Маі сбіп Гец Уаії Сіп бек б1у Аїа сіц Уаї пув Гув Рго сіу Аїа 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Агуд Авп о Тут Рпе І1ї1е сіу Бек Уаі Аїа Меє Авр Тут Тгр с1у сСіп 100 105 110 сіу ТПг тей Маії ТПтІ Уаії бБет бБет Аїа 5ег 115 120 «2105 122 «2115 119 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 122 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15 зетк Уаії пув Маі1ії Бек Сув Гпув Аїа бБет Сіу Тут ТПт Рпе ТПтг бек Туг 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє зо с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 35 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тук Сув 85 Зо 95 40 А1а Акд сС1у їец ТПт Тугк бек Меєс Авр Тут Тер сС1у сСіп сС1у Тбг Гец 100 105 110 уаї ТПІ Уаї Бек бБет Аїа 5ег 115 45 «2105 123 «2115 114 «212» Білок «213» Штучна послідовність 50 «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" 55 «4005 123
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп обіу Тут Авп Тут Гец Авр Ттр Тут Гей біп Пув Рго с1у сіп бБег 35 40 45
Ркто Сіп Гей Ггеп Іїе Тухк пГец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бех сіу Уаі1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 Зо 95 теп сіп І1е Рко Авп ТПтІ Рпе біу біп б1іу ТПпт пув Уаії січ І1їе Гуз 100 105 110
Агкд Тег «2105 124 «2115 118 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело
Зо «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 124 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПтІ РПе бек бек Тук 20 25 30
А1а Меєс бет Тгр Уаі1 Агд сСіп Аза Рго сі1у Пув сС1у їец сі Ткр Уаї 35 40 45 зек Аї1а І1їе бек біу бек біу сіу бек ТПІ Тут Тут А1їа Авр бек Уаї1ї 50 55 бо
Туз с1у Акд РпПе ТПї Іїе бек Агуд Авр Авп о бет Гув Авп ТПт Гец Тук 65 70 75 80 теп сіп Меє Азп бет Гец Агд Аїа бі Авр ТПтІ Аїа Уаї Тут Тут Сув 85 Зо 95
А1їа пув Тут Аїа Тут Аїа гец Авр Тут Тгр біу біп сіу ТПт Іец Уаї 100 105 110
ТНІ Уаї Бек бБег Аїа бек 115 «2105 125
«2115 109 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 125 січ Іїе Маії Гецп ТПг сіп бет Рко сіу ТПї Гей бегт Ггец бет Рго б01Уу 1 5 10 15 січ Агуд Аза ТПтї Гец бек Сув Акуд Аїа бек біп бет Уаі1! бет бет 5бег
Тут ге Аїа Ткр Тут біп біп ув Рго б1іу біп Аза Рго Агд Гей ГІец 20 І1е Тук с1у Аїа бек бБехг Акд Аїа ТПг сС1іу І1е Рго Авр Агд Роре 5ег бо сіу бек сб1у Бек с1іу ТПтІ Авр РпПе ТПтї Гецп ТПІ Іїе бБегт Агд Іец С1ц 65 70 75 80 25
Рго Сіц Авр Рпбе Аїа Уаї Тут Тук Сув сб1іп Сіп Ніз с1у бБет бБетг Бек 85 Зо 95
ТПЕ Рпе сіу сіп с1у ТПїх Кгуз Уаі1і біш Іїе Гув Агд ТПг 30 100 105 «2105 126 «2115 122 «212» Білок 35 «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний 40 поліпептид" «4005 126 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15 45
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 50 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо 55 сСіп б1у Акуд Уа1ї! ТБг Меє ТП Агуд Авр о ТПт о бет ТБПт бет Тіт Уа1ї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув
85 Зо 95
Аза Атуд сб1у Авр Рпе бет Аїа с1у Акд Гей Мес Авр Тут Тгр С1у сіп 100 105 110 сіу ТПг тей Маії ТПтІ Уаії бБет бБет Аїа 5ег 115 120 «2105 127 «2115 115 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 127
Авр І1е Уа1 Мес ТрПї сіп бек Рго Іїец бБетг Тец Рго Уа1! ТПг Рго СсС1Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткгр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35 40 45
Ркто Сіп Гей Ггеп Іїе Тухк пГец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бех сіу Уаі1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 зет Акд Уаі бі Аїа сі Авр Уаії Сіу Маі1і Туг Тук Сув Меє сіп Аї1а 85 Зо 95 теп сіп ТПт Ркго Рго Іїе ТПх Рпе сіу сбіп с1у ТПтї Гуз Уаі1і сі Ше 100 105 110
Туз Акд ТПг 115 «2105 128 «2115 119 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 128
Сіп Маї сіп теп Уаї сіп бек с1у Аїа сі Уаї Ггув Ппув Рго с1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук
20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
А1а Акд сС1у Авр Тут Авп А1ї1а Рібе Авр Тут Тгр сС1у Нів с1у ТПг Гец 100 105 110
Ууа1ї1 ТПпї Уаі1ї бБег Бек А1їа 5ег 115 «2105 129 «2115 113 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" зо «4005 129
Авр Іїе Маії Меєсє ТПтІ сіп бек Рго Гей бБет Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сі Ркго А1їа бек І1е Бек Сув Агд бБет бБет Сіп бБет Іец Іец Нів 5ег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Ггецп Авр Тктр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35 40 45
Ркто Сіп Гей Ггеп Іїе Тухк пГец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бех сіу Уаі1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бек сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 Зо 95
ТЕр Нів бек Рго ТПк Рпе с1у сіп с1у ТПхІ пув Уаї сі І1е Гуз Агд 100 105 110 тах «2105 130 «2115 119 «212» Білок
«213» Штучна послідовність «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 130 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тут Месє Нів Тгр Маї Агуд сіп Аза Рго СсС1у с1п сС1у їец Сі Тгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Атуд с1у Аза ТПт Тут ТПІ Меє Авзр Тут Тгр С1у біп сіу ТпПтг Іец 100 105 110
Уаї Трг Уа1ї Бек бег А1а 5бег 115 «2105 131 «2115 114 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 131
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп обіу Тут Авп Тут Гец Авр Ттр Тут Гей біп Пув Рго с1у сіп бБег 35 40 45
Ркто Сіп Гей Ггеп Іїе Тухк пГец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бех сіу Уаі1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 Зо 95 теп сіп ТПт Рко І1е ТПїІ Рпе сбіу біп бі1у ТПпт пув Уаії січ І1їе Гуз 1600 105 110
Атд ТПг «2105 132 «2115 112 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 132
Авр Іїе Ма1і Меєсє ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткгр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35 40 45
Рго Сіп їец Гец Іїе Тук Гей Сіу 5Бегт Авп Агд Аїа бБет Сіу Уаї1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 Зо 95
Ззек І1е Меєс бек Агуд ТПх Рпе сіу сбіп с1у ТПтї Гуз Уаї сі І1е Гуз 100 105 110 «2105 133 «2115 112 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 133
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткгр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35 40 45
Ркто Сіп Гей Ггеп Іїе Тухк пГец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бех сіу Уаі1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 бек Агд Уаії Сі Аїа сС1ц Авр Уаї сСіу Уаї Тухг Тут Сув Меєсє сіп Аї1а 85 Зо 95
Ззек І1е Меє біп Агуд ТПх Рпе сіу сбіп с1у ТПтї Гуз Уаї сі І1е Гуз 100 105 110 «2105 134 «2115 112 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 134
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сі Ркго А1їа бек І1е бБег Сув Агд бек бБет сСіп бБетг їец Іец Нів 5ег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткгр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35
Рхто Сіп Гей Ггеп Іїе Тут Гец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бек сіу Уаі1ї Рго бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 40 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 Зо 95 45 5ет Іїе Меє Авп Агуд Аза Рпе СсСіу Сіп сіу ТПтг Гпув Уаі1і с1іп І1е Гуз 100 105 110 «2105 135 «2115 112 50 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело 55 «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 135
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткгр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35 40 45
Рго Сіп їец Гец Іїе Тук Гей Сіу 5Бегт Авп Агд Аїа бБет Сіу Уаї1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 Зо 95
Ззек І1е Мес Авп Агуд Авп Рпе сСіу сбіп с1у ТПтї Гуз Уаї сі І1е Гуз 1600 105 110 «2105 136 «2115» 448 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо поліпептид" «4005 136 сбіп Маі сбіп Гец сіп сіп бехт с1у Аїа сій Гей Маії Гув Рго с1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пузв Іїе бек Сув пув Аїа бек с1у Тут Бек РПпе ТПх с1Уу Тук 20 25 30
Рпе Меє Авп Тгр Уаї Пув Сіп бБетг Ніз с1у Пув бБетг їец Сі Тгр І1е 35 40 45 сС1у Агд І1їе Нів Рго Тут Авр б1у Авр ТПк Рібе Туг Авп біп Авп Ріе 50 55 бо ув Авр Гув Аїа ТПтї ІТец ТПт Уаї Авр гув бБет бек Авп ТПг Аїа Нів 65 70 75 80
Меє біц Гецп Гец бет Гец ТПтІ бет бій Авр Рпе Аїа Уаі1! Тут Тут Сув 85 Зо 95
ТПЕ Акуд Тут Авр о біу бБег Агуд Аза Меєс Авр Тут Тгтр с1у сіп с1у ТЕПкК 100 105 110
ТПх Уаї ТПтІ Уаї бек бек Азїа бек ТПх пув б1у Рго Беїт Уаі1і Ропе Рго 115 120 125 теп Аїа Рко бет бБет Гуз бек ТПх бек б1іу с1іу ТПтІ Аза Аїа Гей щу 130 135 140
Сув Гец Уаї Гпув Авр Тут Рібе Рго бі Рго Уаі! ТПтІ Уаії 5еїг Тгр Авп 145 150 155 160 бек с1у А1ї1а Тїец ТПт бек сі1у Уаї Нів ТПх Рре Рго Аїа Уаї Ієц с1п 165 170 175
Зек бек біу Ггецп Тук бек Гпецй бет бБет Уаії Уаі1і ТПтїІ Уаі1ї Рко бек бек 180 185 190 бек гец біу ТПт Сіп ТБт Тут І1е Сув Авп Уаї Авп Нів Ппув Рго бБекг 195 200 205
Авп оТПт гув Маі Авр Гпув пув Уаї бій Рго пув бБет Сув Авр Гув ТПг 210 215 220
Ніз Трпї Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго бі1ц Аза Аїа сСіу с1у Рго 5бег 225 230 235 240
Ууа1ї Рпе Гецп Рпе Ркго Рго Пув Рго Гув Авр ТПтї Гец Мес І1ї1е 5ег Агд 245 250 255
ТБЕ Рго сі Ууаї ТрІ Сув Уаї Уа1ї Уаї Авр Уа1ї бег Ніз сб1цп Авр Рго 260 265 270 сСіш Маї пувз Рібе Авп Тгр Тук Уа1ії Авр сС1у Уа1ї с1іц Уаї Ніз Авп Аїа 275 280 285
Туз ТПт пув Рго Агкд бі бі біп Тук Авп обет ТПтІ Тут Акд Уа1ї Уаї 290 295 300 бек Уаї Пец ТртІ Уаї Гецш Ніз Сіп Авр Тгр Гец Авп с1у Ппув біц Туг 305 310 315 320 пув Сув пув Уаії бБет Авп Гув Аїа їец СсСіу Аза Рго І1е сі пуз ТІПг 325 330 335
І1ї1е Бек ув Аїа пув с1у сіп Рго Агд бі Рго біп Уаії Сув ТПтг Іец 340 345 350
Рко Рго Бек Агд Авр бі Гей ТПг Гув Авп о сіп Уаії бек Гец бек Сув 355 360 365
А1їа уаї пув сіу Рпе Тут Рко бБет Авр І1ї1е Аза Уаії сбіц Тгр січ 5бег 370 375 380
Авп о б1у біп Рго сіц Авп Авп Тут Гуз ТБПї ТБбтІ Рго Рго Уаіїі Іец Авр 385 390 395 400 ет Авр біу бек РПпе РПпе Гей Уаії бБет Пув Гей ТПт Уаії Авр пуз 5Бег 405 410 415
Атуд Тгр сб1іп біп с1у Азп Уа! Рібе Бех Сув Бек Уа1ї Меє Ніз сій Аї1а 420 425 430
Пец Нів Авп Нів Тут ТПг сіп Гпуз бек Гей бек Гей бет Рго СсС1у Гуз 435 440 445
«2105 137 «2115 691 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 137 сбіп Маії сбіп Гец сіп сіп бехт с1у Аї1а сій Гей Маії Гув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаії пув Іїе Бек Сув Ппув Аїа бБет Сіу Тут Бек Рпе ТПкг с1Уу Туг
Рпе Меє Авп Тгр Уаї Пув Сіп бетг Ніз с1у Пув бБег Гец Сі Тгр І1е 20 сС1у Агд І1їе Нів Рго Тут Авр б1у Авр ТПк Рібе Туг Авп біп Авп Ріе бо пуз Авр гув Аза ТПтї тец ТрПт Уаї Авр Пуз бек бБетг Авп ТПг Аїа Ніз 25 65 70 75 80
Меє біц Гецп Гец бет Гец ТПтІ бет бій Авр Рпе Аїа Уаі1! Тут Тут Сув 85 Зо 95 30 ТВІ Агуд Тухкх Авр о сС1іу Бех Агуд Аїа Мес Авр Тут Тер сС1у сСіп сС1у ТЕГ 100 105 110
ТПх Уаї ТПтІ Уаї бек бек Азїа бек ТПх пув б1у Рго Беїт Уаі1і Ропе Рго 115 120 125 35 теп Аїа Рко бет бБет Кпув бет ТПх бек б1іу с1іу ТПтІ Аза Аїа Гей щу 130 135 140
Сув Гец Уаї Гпув Авр Тут Рібе Рго бі Рго Уаі! ТПтІ Уаії 5еїг Тгр Авп 40 145 150 155 160 бек сб1у Аї1а їеєц ТПг бет с1іу Уаї Нів ТртІ Рібе Рго Аїа Уаї Іец с1іп 165 170 175 45 зет Бек біу Пец Тук Бек Гей бБет бБет Маі1і Уаї ТПт Уаї Рко бек 5ег 180 185 190 бек гец біу ТПт Сіп ТБт Тут І1е Сув Авп Уаї Авп Нів Ппув Рго бБекг 195 200 205 50
Авп оТПт пув Маі Авр Гпув пув Уаї сі Рго гув бБет Сув Авр с1у 01Уу 210 215 220 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бБехт сі Уаі Сбіп гей Уаі біц бех 01У 55 225 230 235 240 сіу б1у Гец Маії сіп Рко Ппув сіу бБет Гей гув гей бБет Сув Аїа А1а 245 250 255 бек бі1у Рпе ТПх Рібе Авп ТПт Тут Аїа Мес Авп Тгр Уаі Агд сіп Аїа 260 265 270
Рго сС1у ув біу Ге сіц Ткр Уаі Аза Агд І1е Акуд Бек Пув Тут Авп 275 280 285
Авп Тут Аїа ТПтІ Тут Тут Аїа Авр бБет Уа1і гув Авр Агд Рпе ТПтІ І1е 290 295 300 зек Агд Авр Авр бек біп бет Іїе Гец Тут Гей сіп Меє Авп Авзп Гей 305 310 315 320 пуз ТПхї бі Авр ТБтІ АТїа Меєсє Тут Тук Сув Уа1! Агд Ніз С1у Авзп Ріє 325 330 335 с1у Авп бБет Тут МУМаії бБет Ттр Рпе Аїа Тут Тгр С1у біп сіу ТпПтг Іец 340 345 350
УуУаї Трг Уаї Бек А1ї1а А1ї1а бек Уа1ї А1а Аза Рго бБехт Уа1і1 Рпе І1їе Ріє 355 360 365
Рко Рго Бек Авр бі біп Гей пув бет со1у ТПІ Аїа бек Уа1ї Уа1ї Сув 370 375 380 теп Ггец Авп Авп Рпе Тут Рго Агуд біц Аїа Гпув Уаі сіп ТкЕр Гуз Уаї1ї 385 390 395 400
Авр Авп Аїа Гец сіп бет с1і1у Авп бБехт біп бій бехт Уаі ТПпг січ сіп зо 405 410 415
Авр бБет Гув Авр бБет ТПтІ Тут бет Гец бек бет ТПт Гец ТПт Іец 5бег 420 425 430 ув А1їа Авр Тут сі Гпув Нів пузв Ма1! Тут А1ї1а Сув сіц Уа1! Тік Нів 435 440 445 біп сб1у Гей бБет бБет Рго Уаі ТПтІ пув бет Рпе Ап Агуд б1у біц Сув 450 455 460
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго б1ц Аза Аїа с01уУ 465 470 475 480 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 485 490 495
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз 500 505 510 бі Авр Рго сіц Уаї Гпув Рпе Авп Тгтр Тук Уаі Авр с1у Ма1 сіц Уаї 515 520 525
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 530 535 540
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 545 5Б5О 555 5б6О
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аїа Тед с1у Аїа Рго Пе 565 570 575 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 580 585 5ЗО
Тук ТПт Ггец Рко Рго Сув Агд Авр бі Гей ТПтІ Гув Авп о сіп Уа1ї бек 595 бо 605 їец Тгр Сув Гец УМаї Ггув с1у Рпе Тук Рго бБетг Авр І1е А1ї1а Уа1ї СсС1іц 610 615 620
ТЕр сіц бБет Авп сбі1іу біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТБПкг Рго Рго 625 630 635 640 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Тут бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 645 650 655
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і РПе бБег Сув бБет Уа! Меє бо 665 670
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 675 680 685
Рго сС1у ГПув 690 «2105 138 «2115 218 зо «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 138
Авр Іїе біц Гец ТПт сіп бет Рго Аїа Бех гей Аїа Уаі! бет Іеєц 01Уу 1 5 10 15 біп Агуд Аза Іїе Іїе бБет Сув пув Аїа бек біп бет Уаі! бБет Рпе А1а 20 25 30 сСі1у ТБг бет Пец Ме Нів Тгр Туг Нів сіп Пув Рго С1у Ссіп с1іп Рго 35 40 45
Туз Гечп їГец І1е Тут Агд Аза бек Авп їей біц Аїа с1і1у Уаі1і Ркго ТПкК бо 50
Ат РіПе бехг Сіу бБет С1у бек Пув ТПтІ Авр Роре ТПг Ієц Авп І1е Нівз 65 70 75 80
Ро Уаі бі бі бі Авр Аїа Аїа ТПг Тут Тут Сув сбіп сіп бек Агд 55 85 Зо 95 біц Тук Рго Тут ТПт Рпе сіу сіу с1у ТПїх гув еп біц Іїе Гув Акгд 100 105 110
Тпх Уаі Аїа А1їа Рго бек Уаі Рбе Іїе Рпе Рго Рго 5еї Авр сі сіп 115 120 125
Тецп Гпув бБегк біу ТПїІ Аїа бек Уаї Уаї Сув Гей Гей Авп Авп РпПе Туг 130 135 140
Рго Акд бі Аза гуз Уа1 біп Тгр Гув Маі Авр Авп Аїа Гей сіп бек 145 150 155 160 сб1у Авп бБет біп сіц бБет Уа! ТПтї сі біп Авр бет пув Авр бБет ТПг 165 170 175
Тук бБет Ггец бет бет ТПтї Гей ТПх Ггецп бек пув Аїа Авр Тут со1цЧ Гуз 180 185 190
Ніз пуз Уа1ї Тут Аїа Сув біц Уа1ї ТПк Нів с1іп сС1у Пец бек бег Рго 195 200 205
УуУаї ТБг Кпув бБет Ріпе Авп Акд сС1у с1цЧ Сув 210 215 «2105 139 «2115 257 «212» Білок «213» Ношто зарієпз «4005 139
Меє Аза сбіп Акуд Меє ТПт ТПтї сСіп Гей Гецп гец Гец Гец Уаії Ткр Уаї зо 1 5 10 15
А1їа уаї Уаії с1у сіц Аза сіп ТПІ Агд І1е Аза Тгр Аїа Агуд ТПтг с1ц 20 25 30 їец Гец Авп Уаї Сув Меє Авп Аїа Пув Нів Нів пув СсСіц Пув Рго с1УуУ 35 40 45
Рго Сі Авр Гуз Гец Нів Сіц Сіп Сув Агд Рго Тгр Агд Гуз Авп А1а 50 55 бо
Суз Сув бек ТПт Авп ТПг о бег сбіп Сб1іц АТїа Нів Пув Авр Уаї бБег Туг 65 70 75 80
Пец Тут Агуд Робе Авп Тгр Авп Ніз Сув бі1у Сі Меє АТїа Рго А1а Суз 85 Зо 95 уз Агуд Нів Робе І1е сбіп Азр ТПг Сув Тїец Туг біц Сув бБег Рго Авп 100 105 110
Тецп с1у Ркго Тгр Іїе сбіп сіп Уаі Авр Сбіп бБег Тгр Агд Гув б1п Агд 115 120 125 уаї гейш Авп УМаії Ркго Гецп Сув пув бій Авр Сув біц біп Тгр Тгтр с1ц 130 135 140
Авр Сув Атуд ТБтг бБет Тут ТПг Сув Кпув бБег Авп Тгр Ніз туз С1у Тгр 145 150 155 160
Авп оТтр ТПт Бек сіу Рібе Авзп пув Сув Аїа Уаі сС1у Аїа Аза Сув сіп 165 170 175
Рго Рібе Нів Ріпе Тук Рібе Рго ТПк Рго ТПтІ Уаї Гец Сув Авзп біц І1е 180 185 190
Тгр ТПг Нів бБет Тут Кпув Маії бБет Авзп Тут бек Агуд біу бек С1у Агд 195 200 205
Сув І1е сі1п Меє Тер Рпе Авр Рго Аїа СсСіп с1у Авп Рго Авп с1ц Сс1ц 210 215 220 уаї Аза Атуд Рпе Тут Аїа Аїа Аїа Меє бек Сб1у Азїа сС1іу Рго Тгр А1а 225 230 235 240
А1їа Ттр Рго РпПе Гец Гец бет Гец А1їа Гей Мес гей їец Тгр Іец Іец 245 250 255 зекг «2105 140 «2115» 468 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо поліпептид" «4005 140
Атуд чІїе Аїа Тгтр Аїа Акуд ТПтї сід Гей Гей Авп Уаї! Сув Меє Авп А1а 1 5 10 15 пуз Ніз Нів ув Сі пув Рго СсС1у Рго сбіц Азр Гуз Іец Нів біц с1іп 20 25 30
Сув Акд Рко Тгр Агд Гуз Авп Аза Сув Сув бБет ТПтІ Авп ТПт бек сіп 35 40 45
Сі Азїа Ніз пув Авр Уа! бек Тут Гїеец Туг Агд Робе Авзп Тгр Авп Нівз 50 55 бо
Сув сСі1у бі Меє АТїа Рго Аїа Сув Пув Агуд Нів Рпе І1е СсС1іп Авр ТЕГ 65 70 75 80
Сув Гецп Тут сі Сув бек Рго Авп Гей С1іу Рго Ттр І1їе сіп сіп Уаї 85 Зо 95
Авр біп бБет Тгр Акд пув сі Акуд Уаї Ггецп Авп Уаі! Рго ІТец Сув Гуз 100 105 110 січ Авр Сув бі біп Тгр Тгр сіЧ Авр Сув Акуд ТБПт бет Тут ТПг Сув 115 120 125 пуз бБег Авп Тгр Ніз пув біу Тгр Авзп Тгр ТПг бетг сі1у Рібе Авп Гуз 130 135 140
Суз Аїа Уаї с1у Аїа Аїа Сув сСіп Рго Робе Нів Ріпе Тут Роре Рго ТЕПг 145 150 155 160
Рго ТПкг Уаї їец Сув Авп бі І1ї1е Тгр ТПк Нів бБетг Тут Кгув Уа1ї 5ег 165 170 175
Авп оТут бБет Агд сіу бБет с1і1у Акд Сув І1ї1е біп Меєсє Тгр Рпе Авр Ркго 180 185 190
Аза біп б1у Авп Рго Авп сід бі Уаі Аза Агуд Рпе Тут Аїа Аїа А1а 195 200 205
Меє Уаії Авр сіц сіп Гец Тут Рпе Сіп сбіу біу бБет Рго пув бБет А1а 210 215 220
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сі Іец Ієц О1У 225 230 235 240 сС1у Рго Бек Ма1 Рпе Гец Рпе Рго Рго Пув Рго ПЦув Авр ТПт Гец Меє 245 250 255
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уа! ТБк Сув Уа1ї Уаї Уаї Авр Уаї1ї! бег Ніз 260 265 270 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 275 280 285
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Ггув Рго Агд Сі бі Сіп Тут Авп бек ТПг Туг 290 295 300
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 305 310 315 320 пув сі Тук гпув Сув Гув Уаії бБег Авп ув Аїа Гей Рго Аїа Рго Іїе 325 330 335 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 340 345 350
Тук ТПт Ггец Рко Рго Сув Агд Авр бі Гей ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 355 360 365 теп Ткр Сув Гец Уа1ії гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 370 375 380
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 385 390 395 400
Ууаї Гей Авр бБег Авр біу бек РПпе РПпе Гей Тут бек Ппув Гец ТПт Уаї 405 410 415
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 420 425 430
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 435 440 445
Рхто сі1у пузв бек біу біу Гей Авп Авр Іїе Рпе сій Аїа сіп пувз Ше 450 455 460
Сі Тер Ніз Сс1ц 465 «2105 141 «2115 227 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 141
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Сбіц Іец Ієцш 01У 1 5 10 15 с1іу Рго бБет Маії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго Гув Авр ТПтІ Гец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз 35 40 45 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тгр Тух Уа1 Авр с1у Уаї сіц Уаї 50 55 бо
Нів Авп о Атїа Ггув ТПкг Гуз Рго Агд сі сі сб1п Тук Авп бек Тіт Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уа1ії їец ТПт Уаї їецш Ніз СсСіп Авр Тгр Тед Авп с01У 85 Зо 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза Тецй Рго Аїа Рго Ше 100 105 110 біц пув ТПтІ Іїе Бех Гуз Аїа пув сіу сіп Рго Агуд бій Рго біп Уаї 115 120 125
Сузв ТПт Ггец Рко Ркго бек Агуд Авр бій Гей ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140
Тец бек Сув Аїа Уаї Ггув с1у Рпе Тут Рго бБег Авр І1е Аїа Уа1ї сі1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175 уаї гейш Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Уаії бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Ніз Авзп Агд Рбе ТП Сіп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рко с1У Гувг «2105 142 «2115 255 «212» Білок «2135» Ми5 шивсчіцв «4005 142
Месє Аїа Ні їєц Меє ТПх Уа1! сіп їец їец їец їец Уа1ї Меє Тгр Меє 1 5 10 15
Аї1а біц Сув Аїа сіп бегт Акуд Аї1а ТПІ Агуд Аза Агу ТпПт бід Тецч ТГец
Авп оуаії Сув Мес Авр АТїа їув Нівз Нів Гуз Сі Пув Рго с1у Рго с1ц 20 Авр Авп о Тец Нів Авр сСіп Сув бБет Рго Тгр Пув ТПтІ Авп бБекг Сув Сув бо бек ТПг Авп ТІ бек біп бі АТїа Ніз Гув Авр І1їе бек Тут Гєц Туг 65 70 75 80 25
Атд Рпбе Азп Тгр Авп о Ніз Сув сіу ТПх Мес ТртІ бБег бі Сув КГув Агд 85 Зо 95
Ніз Рпе Іїе с1п Азр ТПт Сув Гїец Тут с1п Сув бБет Рго Авп Іец О1У зо 1600 195 110
Рго Тгтр Іїе біп біп Уаі Авр біп Бех Тгр Акд пувз с1п Акуд І1е Гей 115 120 125 35 Авр УМаі1ї Рго Гец Сув Пув бій Авр Сув Сіп біп Тгр Тгр с1ц Авр Сув 130 135 140
Сіп бБетг бек Рібе ТПт Суз Кпув бБет Авп Тгр Ніз Гуз С1у Тгр Авп Тгр 145 150 155 160 40 бек бек біу Ніз Авп біц Суз Рго Уаї сС1у Аїа бет Сув Нів Рго РІе 165 170 175
ТПЕ Рпе Тут РпПе Рго ТПї бек Аза Аїа Гей Сув бі сі І1е Ткгр бек 45 180 185 190
Ніз бБехк Тук Пув Гец бек Авп Тут бек Агд С1у бБетг б1у Агд Сув Ії1е 195 200 205 50 Сбіп Меє Тер Рпе Авр Рго Аза сбіп с1у Авп Рго АвБп бій сі Уаї Аїа 210 215 220
Атд Рпе Тут Аїа сіцш Аїа Мес бБехг С1у Аїа с1у їец Ніз с1у ТПг Тгр 225 230 235 240 55
Рко Ггецп Гей Сув бек Гей бек Гей Уаії Гей Гей Тгр Уаї І1е 5ек 245 250 255
«2105 143 «2115» 466 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 143
ТЕ Агд Аза Агуд ТБПтї Сі Гей ТГец Азп Уаї Сув Меє Авр Аїа Гуз Ніз 1 5 10 15
Нів пув бі Був Рко Сіу Рко Сіц Авр Авп Гец Нів Авр сСіп Сув бек
Ркто Ткгр Гуз ТПх Авп о бек Сув Сув бБет ТПтІ Авп ТПтІ Бек сіп с1ц Аїа 20
Ніз пузв Авр І1їе бек Туг Гей Тут Агуд Робе Азп Тгр Авп Нів Суз 01У бо
ТПЕ Меє Тбг бек сі Сув ув Атгуд Нів Робе І1е біп Авр ТіПг Суз Іец 25 65 70 75 80
Тук січ Сув бБет Рго Авп Ге біу Рго Тгтр Іїе біп сіп Уаі Авр сіп 85 Зо 95 30 ет Тер Агуд Пув бій Агуд І1е Гец Авр Маі1і Рго Гец Сув Гув 61 Авр 100 105 110
Сув сіп сіп Ткр Тгр бій Авр Сув біп бек бет РПпе ТПІ Сув пув бек 115 120 125 35
Авп оТгр Ніз пув с1іу Тгр Авп Тгр бБехт бег с1у Нів Авп сб1ц Сув Рго 130 135 140 уаї сб1у Аїа бек Сув Нів Рко Робе ТПх Рібе Тут Ріре Рго Трт бетг Аї1а 40 145 150 155 160
А1ї1а теп Сув бі сіц І1е Ткр бБет Нів бБетг Тут Кпув Гїец бек Азп Туг 165 170 175 45 зет Акуд біу бек б1у Агуд Сув І1е сбіп Меєсє Тгр Рпе Авр Рго Аїа сіп 180 185 190 сб1у Авп Рго Авп біц сбіц Уаі Аза Акуд Рпе Тут Аї1а бій Аїа Месє Уаї 195 200 205 50
Авр біц біп Гец Тут Рпе сіп сіу сіу бек Рго пув бБет Аза Авр Гуз 210 215 220
ТПЕ Нів ТБбкг Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго С1ц їй Іїєц С1у С1у Рго 55 225 230 235 240
Ззек Уаії РіПе Гей Рібе Рго Рго Пув Рго Пув Авр ТПтїІ Гецп Меї І1е бек 245 250 255
Атуд ТПт Рго бі Уа1і ТПх Сув Уа1ї Уаї Уа1і! Азр Уаї бБет Нів б1ц Авр 260 265 270
Рго сі Уаії Пув Рпе Авп Тгр Тут Уаї Авр сСіу Уаї сід Уаї Нів Авп 275 280 285
А1їа пув ТПт Гув Рго Акд сід бі біп Тут Авп о бБет ТПтІ Тут Акд Уаї 290 295 300
Ууаї Бек Уаї їец ТПт Уаї їец Нівз Сіп Авр Тгр їец Авп с1у Гув б1цЦ 305 310 315 320
Тук гув Сув пув Уаії бБет Авп гув Аїа ге Рго Аїа Рго Іїе сб1Ч Гуз 325 330 335
ТпПї Іїе бБет Гпув Аїа гуз С1у біп Рго Агд бід Рго сіп Уаі1і Тук ТЕПкК 340 345 350
Тецп Ркго Ркго Сув Агуд Авр сіц Гецп ТПї пув Авп о сіп Уаі! бБет Гец Тгр 355 360 365
Сув Гец Уаї пув с1у Рбе Тухк Рго Бех Авр Іїе Аїа Уаі сій Тгр с01ц 370 375 380 зект Авп біу біп Рго біц Авп Авп Тут Гуз ТПх Тк Рго Ркго Уаї Гей 385 390 395 400
Авр бБегт Авр сіу бБет РПе РпПе Гецп Тут бек гув Гец ТПт Уаї Авр Гуз зо 405 410 415 бек Агд Тгр б1іп Сіп с1у Авп Уа1ї! Ріе бБет Сув бБет Уаі1ї! Меє Ніз с1ц 420 425 430
А1а пец Нів Авп Нівз Тугк ТПт сСіп Пув бБет Тец бБет Іец Бех Рго С1Уу 435 440 445 туз бБет сіу с1у гей Авп Авр Іїе Рпе сій Аза сбіп Гуз Ії1е сі Тгр 450 455 460
Нів сіц 465 «2105 144 «2115 257 «212» Білок «213» Масаса Гавсісціагів «4005 144
Меєс Аза сбіп Агуд Меєс ТПтї ТПї сбіп Гей Гей гей Гецп Гей Уаії Тгр Уаї 1 5 10 15
А1їа уаї Уаії с1у сіц Азїа сіп ТПІ Агкуд ТБї Аза Агу Аза Агуд ТпПтг с1ц 20 25 30
Пец тїец Авп Уаї Сув Мес Авп АТїа їув Нів Нів туз Сі Пув Рго С01У 35 40 45
Рго Сі Авр Гуз Гец Нів Сіц Сіп Сув Агд Рго Тгр Гуз Кпув Авп А1а 50 55 бо
Суз Сув бек ТПтІ Авп ТПг о бегт Сіп Сб1іц АТїа Нів Пув Авр Уаї бБег Туг 65 70 75 80
Пец Тут Агуд Робе Авп Тгр Авп Ніз Сув бі1у Сі Меє АТїа Рго А1а Суз 85 Зо 95 пув Агуд Нів Рбпе Іїе СсСіп Авр ТПт Сув їец Туг Сі Сув бек Рго Авп 100 105 110 теп сі1у Рко Тктр І1е біп біп Уаі1і Авр сбіп бет Тгр Агд Гув с1ц Агд 115 120 125 уаї гейш Авп УМаії Ркго Гецп Сув пув бій Авр Сув біц Агд Тгр Тгтр с1ц 130 135 140
Авр Сув Атуд ТБтг бБет Тут ТПг Сув Кпув бБег Авп Тгр Ніз туз С1у Тгр 145 150 155 160
Авп оТтр ТПт бек сіу Рібе Авп Гпув Сув Рго Уаі Сі1у Аїа Аза Сув сіп 165 170 175
Рго Рпе Нів Ріпе Тут Ріе Рго ТПх Рго ТПх Уаї Гей Сув Авп сіц І1е 180 185 190
ТЕр ТПтІ Тут бБет Тут Гуз Уаі1і бек Авп Тут бБет Атуд сіу Бек с1у Агд 195 200 205
Зо
Сув І1ї1е сіп Меє Тгр Рпбе Авр Рго Аїа сбіп с1у Авп Рго Авп сій 01 210 215 220 уаї Аза Атуд Рпе Тут Аїа Аїа Аїа Меє бек Сб1у Азїа сС1іу Рго Тгр А1а 225 230 235 240
А1їа Ттр Рго Гец Гец Гец бет Гец А1їа Гей ТПІ гей їец Тгр Іец Іец 245 250 255
Бек «2105 145 «2115» 468 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 145
Атуд ТП Аза Агуд Аза Акуд ТПт бід Гей Гей Авп Уаї! Сув Меє Авп А1а 1 5 10 15 пуз Ніз Нів ув Сі пув Рго СсС1у Рго сбіц Азр Гуз Іец Нів біц с1іп 20 25 30
Сув Акд Рко Ткр Гуз Гуз Авп Аза Сув Сув бБет ТПтІ Авп ТПт бек сіп 35 40 45 сі Аїа Ніз пув Авр Уа1 бек Тут Тецп Тут Агкд Рпе Авп Тгр Авп Нів 50 55 бо
Суз сС1у бі Мес АТа Рго Аїа Суз Кпув Агуд Нів Ропе І1їе с1п Азр ТПг 65 70 75 80
Сув Гецп Тут сі Сув бек Рго Авп Гей С1іу Рго Ттр І1їе сіп сіп Уаї 85 Зо 95
Авр біп бБет Тгр Акд пув сі Акуд Уаї Ггецп Авп Уаі! Рго ІТец Сув Гуз 1600 105 110 січ Авр Сув бі біп Тгр Тгр сіЧ Авр Сув Акуд ТБПт бет Тут ТПг Сув 115 120 125 пув бек Авп Тгр Нів Кпув с1у Тгр Авп Тгр ТПт бек сСіу РобБе Авп Гув 130 135 140
Сув Рго Уаї с1у Аїа Аїа Сув сСіп Рго Робе Нів Ріпе Тут Роре Рго ТЕПг 145 150 155 160
Рко ТПжї Уаї гецп Сув Авп о біц Іїе Ттр ТПІ Тут бБет Тут Ггув Уа1ї бек 165 170 175
Авп оТут бБет Агд сіу бБет с1і1у Акд Сув І1ї1е біп Меєсє Тгр Рпе Авр Ркго зо 180 185 190
Аза біп б1у Авп Рго Авп сід бі Уаі Аза Агуд Рпе Тут Аїа Аїа А1а 195 200 205
Меєс Маі Авр сіц Сіп Гец Тут Рпе сіп сіу біу бек Рго Ппув бБет Аїа 210 215 220
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сі Іец Ієц О1У 225 230 235 240 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 245 250 255
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уа! ТБк Сув Уа1ї Уаї Уаї Авр Уаї1ї! бег Ніз 260 265 270 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 275 280 285
Нів Авп о Атїа Ггув ТПтг Гув Рго Агд бі сі С1іп Тук Авп бек Тіт Туг 290 295 300
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 305 310 315 320
Туз січ Тут пув Сув гув Уаії бек Авп Гув Аїа Тецй Рго Аїа Рго Ше 325 330 335 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 340 345 350
Тук ТПпх Гец Рко Рго Сув Агд Авр бі Гей ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 355 360 365 теп Ткр Сув Гец Уа1ії гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 370 375 380
ТЕр сій бБег Авп о сбіу сбіп Рго сій Авп Авп Тут Гув ТПтІ ТПкг Рго Рго 385 390 395 400 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Тут бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 405 410 415
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 420 425 430
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 435 440 445
Рхто сі1у пузв бек біу біу Гей Авп Авр Іїе Рпе сій Аїа сіп пувз Ше 450 455 460 сСіц Тер Нівз с1ц 465 «2105 146 «2115 255 зо «212» Білок «213» Ношто зарієпз «4005» 146
Меє Ууаї Ттр Гув Тер Меє Рго Ггецп Гей гей Гей ге Уаії Сув Уаї А1а 1 5 10 15
ТПх Меє Сув бБет Аїа біп Авр Агуд ТПхг Авр Тец Гец Авп Уаі1і Суз Ме 20 25 30
Авр А1ї1а тув Нів Нів Гуз ТПг тув Рго сС1у Рко С1іц Авр Гув Ієц Нів 35 40 45
Авр біп Сув Бек Рго Тктр пув Гпув Авп Аїа Сув Сув ТПт Аїа бет ТПг 50 55 бо бек біп б1іцш їец Нів Пув Авр ТП бетг Агд Гц Тут Авп Роіе Авп Тгр 65 70 75 80
Авр Нів Сув б1і1у Гуз Меє бі Рго Аїа Сув Туз Агуд Ніз Рпе І1е с1п 85 Зо 95
Авр ТПІ Сув Гецп Тут сіц Сув бБет Рго Авп Гей Сбіу Рго Тгр Іїе сіп 100 105 110 біп Маі Авп о сіп бег Тгр Агуд Гуз бі Агуд Ропе Гец Авр Уаї Рго Гей 115 120 125
Сузв був бі Авр Суз біп Агд Тгр Тгр бі Авр Сув Ніз Тркг бег Ніз
130 135 140
ТПЕ Сув пув бБетг Авп Тгр Нів Агд СсС1у Тгр Авр Тгр ТПтІ бек СсС1у Уаї 145 150 155 160
Авп опув Сув Рго Аїа сіу Аїа Гецп Сув Агд ТПтІ Рпе біц бет Тут РПе 165 170 175
Рго ТПг Рго Аїа Аїа їец Суз Сі б1у Гїец Тгр бет Нів бБет Тут Гув 180 185 190 уаї бБет Авп Тут бБет Акуд сіу бБехт б1у Агд Сув Іїе біп Меє Тгр РПе 195 200 205
Авр б5Бехт Аїа сіп С1у Авп Рго Авп сі сій Уаі Аза Аг9д Рпе Тут Аїа 210 215 220
А1ї1а Аза Меє Нів уа1ї Азп Аїа сіу сі Меєсє ТІец Нів сбі1у Трпх сС1у 0Щ1уУ 225 230 235 240
Те Гецп Гец бет Гей Аїа Ггецп Меє Гей сіп Тецп Тгр Гецй Ге с1УуУ 245 250 255 «2105 147 «2115 472 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 147
ТПт Меє Сув Бех Аза біп Авр Агд ТПт Авр Гей Гей Авзп Уаі1і! Суз Меєс 1 5 10 15
Авр Аза Гпуз Нів Нів Кпуз ТПг пув Рго С1у Рго Сі Авр Гуз Ієц Нівз 20 25 30
Авр біп Сув Бек Рго Тктр пув Гпув Авп Аїа Сув Сув ТПт Аїа бет ТПг 35 40 45 бек біп б1іцш їец Нів Пув Авр ТП бетг Агд Гц Тут Авп Роіе Авп Тгр бо
Авр Нів Сув б1і1у Гуз Меє бі Рго Аїа Сув Туз Агуд Ніз Робе І1е с1іп 65 70 75 80 50 Авр ТП Сув Гей Тук біц Сув Бек Рго Авп Гей Сіу Рго Тгр І1е сСіп 85 Зо 95 біп Маі Авп о біп бБет Тгр Акд пув бі Агуд Рбе гей Авр Уа! Рго Іец 100 105 110 55
Сузв був бі Авр Суз біп Агд Тгр Тгр бі Авр Сув Ніз Тркг бег Ніз 115 120 125
ТПЕ Сув пув бБетг Авп Тгр Нів Агд СсС1у Тгр Авр Тгр ТПтІ бек Сі1у Уаї1 130 135 140
Авп опув Сув Рго Аїа сіу Аїа Гецп Сув Агд ТПтІ Рпе біц бет Тут РПе 145 150 155 160
Рго ТПг Рго Аїа Аїа їец Суз Сі б1іу Гец Тгр бБет Нів бБет Тут Гув 165 170 175
Уаї Бек Авп Тугк бет Агуд Сіу Бех С1у Агд Сув І1е сбіп Меє Ткгр Ріє 180 185 190
Авр бБехт Аїа сіп с1і1у Авп Рго Авп бій бі Уаі Аза Агд РпПе Тут А1а 195 200 205
А1ї1а Аза Меє Нів уаї Уаі1ї Авр сіц Ссіп їєц Тухк Робе сбі1іп с1у СсС1у бег 210 215 220
Рго пув бБет АТїа Авр Гуз ТПк Нів ТПртІ Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго 225 230 235 240 січ Гей Гей с1у с1у Рго Бек МУМаі! РпПе Гецп РпПе Рго Рго Гув Рго Гув 245 250 255
Авр ТпПїІ Гец Мес І1їе бек Агуд ТПг Рго сіц Уа1і ТПг Сув Уаії Уаї Уаї 260 265 270
Авр Уаіїії бек Нів сбіцп Азр Рго сіц Уа1ї Пув Рібе Азп Тгр Тук Уа1ї! Авр 275 280 285
Зо сіу Ммаї сіц Уаї Нів Авзп Аїа Пувз ТртІ Кпув Рго Агд Сі б1іц с1п Туг 290 295 300
Авп о бБет ТПтї Тут Агуд Уа1ї Уа1! Бех Уаї їецш Трх Уаї їец Нів Ссіп Авр 305 310 315 320
ТЕр гецп Авп с1у пузв бі Тук гув Сув пув Уаії бБет Авп Гуз Аїа Гец 325 330 335
Рго А1ї1а Рго І1їе Ссіш Пув ТПтї І1ї1е бек Пув Аїа Пув С1у сб1п Рго Агд 340 345 350 біц Ркго біп Маї Тут ТПт Гец Рко Рко Сув Акгд Авр бій Гей ТПг Гуз 355 360 365
Авп о біп Уаії бБет Гец Ткр Сув Гец Уа1ії гузв біу Рпе Тут Рго бБетї Авр 370 375 380
І1ї1е Аїа Уаії сіц Ткр сі бБегт Авп б1у біп Рго біц Авп Авп Тут Гувг 385 390 395 400
ТПЕ ТПт Рко Рко Уаії Гей Авр бек Авр сіу бБет РПе РпПе Ге Тук бек 405 410 415 пув теп ТПк о УМаї Авр Ггув бБегт Агуд Тгр бі1іп с1іп сС1у Авп Уа1! РПе 5ег 420 425 430
Суз бек Уаї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПтІ с1іп Ппув бег
435 440 445 теп бБет Ггец бет Рго біу пув бек біу б1і1у Тед Авп Авр Ії1е Рпе сіц 450 455 460
Аїа сіп гув Іїе сі Тгр Нів Сс1ц 465 470 «2105 148 «2115 243 «212» Білок «213» Ношто зарієпз «4005 148
Мес Аїа Тгр сіп Месє Меє сСіп Гецп Гей Гей Те Аза Гей Уаі ТПг Аїа 1 5 10 15
А1їа сб1у Бех Аїа сіп Рго Акуд бехт Аїа Агд Аза Агу ТПтІ Авр Іец Іец 20
Авп оуаїії Сув Меєс Авп АТа їув Нів Нів пув ТПт Сіп Рго бек Рго б1ц
Авр біш Гецп Тут сіу сіп Сув бБет Рго Тгр гув пув Авп Аїа Сув Сув 25 50 зо бо
ТПг АТа бек Тіт Бех Сіп біцш Гїец Нів Пув Авр ТПт бетгт Агд Ієц Туг 65 70 75 80 30 Авп о Рпе Авп Тгр Авр Нів Сув с1у Пув Месє С1іц Рго ТПг Сув Кув Агд 85 90 95
Нівз Рпе Іїе с1п Азр бек Сув їец Туг біц Сув бБет Рго Азп Іец О01У 100 105 110 35
Рго Тгр Іїе Агд біп Уаі Авп о біп бБег Тгр Акд пувз с1п Акуд І1е Гей 115 120 125
Авп оуаії Рго Гец Сув пув с1п Авр Сув бі Агуд Тгр Тгр б1Ч Авр Сув 40 130 135 140
Ат ТБт бБехк Туг ТПт Сув пув бБет Авзп Тер Нів Кпув біу Тгр Азп Тгр 145 150 155 160 45 ТПг Бек сіу І1ї1е Авп бій Сув Рго Аїа сСіу Аїа Гец Сув бБетк ТПкК РПе 165 170 175 біц бек Тут РПпе Рго ТПтІ Ркго Аїа Аїа Гей Сув біц біу Гец Тгр 5ег 180 185 190
Ніз бек Рібе пув Уа! бек Авп Тут бек Агд СсС1у бБег б1у Агд Сув Ії1е 195 200 205 біп Меє Ттр Рпе Авр б5Бет Аїа сіп с1у Авп Рго Авп біц біц Уаї А1а 210 215 220
Туз Рпе Тут Аї1а Аїа Аза Мес Ап Аза сС1у Аза Рго Бех Акд с1у Ше 225 230 235 240
І1е Авр 5ег «2105 149 «2115 479 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 149 зехт А1ї1а Агд Аза Агуд ТПх Авр Гей Гей Авп Уаі Сузв Меєс Авп А1їа Гуз 1 5 10 15
Ніз Ніз пув ТПт біп Рго бБетг Рго Сі Авр С1п Ієц Тут с1у Сс1іп Сувз 20 25 30 бек Рго Тгр гув пув Авп Аїа Сув Сув ТПтІ Аїа бек ТПт бек біп б1ц 35 40 45 їец Нів Пув Авр ТПг о бет Акд теп Тугк Авп Робе Авп Тгр Авр Ніз Сув 50 55 бо сСіу пув Меє сі Рго ТПт Сув Пув Агуд Нів Роре І1їе Сіп Авр бек Сув 65 70 75 80 зо теп Тут сіц Сув Бек Рго Авп Ге біу Рго Ттр Іїе Атд сіп Уа1і Авп 85 Зо 95 біп бехт Тгтр Агд Гув сіц Акуд І1е Гец Авп Уаї Рго їец Сув Гув б1ц 1600 105 110
Авр о Сув біц Агуд Тер ТкЕр бі Авр Сув Агуд ТБбт бет Тут ТПтІ Сув Гуз 115 120 125 бек Авп Ттгр Нів Кгув С1іу Тгр Авп Тгр ТПт бек Сс1у І1е Авп с1іц Сув 130 135 140
Рго Аї1а сСі1іу Аїа Ггецп Сув бек ТПт Рпе бій бБет Тут РПпе Рго ТПкК Рго 145 150 155 160
А1ї1а Аза їеец Сув сбіц сС1у їец Тгр Бех Нів Бек Рре Гуз Уаї1ї бБетг Авп 165 170 175
Тук бБет Акуд сіу бек б1у Агд Сув Іїе сбіп Меє Тгтр Рпе Авр 5ех Аїа 180 185 190 біп б1у Авп Рго Авп о сіц сі Уаї Аїа Гуз Рпе Тут Аїа Аїа Аїа Меє 195 200 205
Авп Аза с1у Аїа Рго бек Акуд с1іу І1їе І1їе Авр бег Уаі Авр сі сіп 210 215 220
Пец Тук Рбе сбіп сС1у СсСіу бБетг Рго пув бБегт Аїа Азр Гуз ТПЕ Нів ТіПг
225 230 235 240
Сув Рко Рко Сув Рго Аза Рго біцш Гей їецй с1і1у с1у Рго Бек Уа1ї! РіПе 245 250 255
Те Рпе Рко Рко Гуз Рго гув Авр ТПх Гей Меє Іїе 5еїт Агд ТПкК Рго 260 265 270 сСіц Маї Трї Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бек Ніз сі Авр Рго с1іц Уаї 275 280 285 пузв Рпе Авзп Тгр Тут Уаі! Авр сСі1у Уаї біцш Уа1ї Нів Авп Аїа Гуз ТіПг 290 295 300
Кпув Рго Акд бі бі біп Тук Авп о бБет ТПтї Тут Агуд Уаії Уа1ї бек Уаї 305 310 315 320
Пец ТПт Уаї Пец Ніз Сіп Авр Тгр їец Авп с1у пув б1іц Тук Кпув Сув 325 330 335 туз Уаії бБет Авп Гуз Аїа гей Рго Аїа Рго Іїе сі Гуз ТПг І1е бек 340 345 350
Туз Аїа пув с1у Сбіп Рго Агд бі Рго біп Уаї Тут ТПтї Гец Рго Рго 355 360 365
Сув Акд Авр сі Гей ТБПх гув Авп о біп Уаї бБет Гецп Тгр Сув Гец Уаї1ї 370 375 380 пув сСіу РобПе Туг Ркго бБет Авр І1ї1е Аїа Уа1і сі Тгр сі бек Авп с1Уу 385 390 395 400 біп Ргто бій Авп Авп Тут Гпув ТПтї ТПтї Рго Рго Уаії Гец Авр 5етї Авр 405 410 415 сіу бек Рпе РпПе Гец Тут бет пув Ггецп ТПї Уаї Авр Гуз бБет Акгд Ттгр 420 425 430 сСіп б1іп с1у Авзп Уа1ї Ріре бек Сув бехт Уаї Меє Нів сій Аїа Ієц Нівз 435 440 445
Авп о Нів Тут ТПг сіп Гуз бег Іец бБет ІТец бек Рго с1іу Кпув бБех О01У 450 455 460 сС1у пец Авп Авр І1е Ррбе СсСіц Аїа сіп ув І1е с1ц Тгр Нівз с1ц 465 470 475 «2105 150 «2115 207 «212» Білок «213» Ношто зарієпз «4005 150
Меє сіп бек с1у ТПт Нів Ткгр Агуд Уаї їєцш сС1у їец Сувз Іец Ієц 5ег 1 5 10 15 уаї с1у Маії Тер сі1у сіп Авр с1у Авп бі бі Меє сіу с1у Іїе ТПг 20 25 30 біп ТПг Рго Тут Ппув УМаії бБет І1е бет Сбі1у ТПтІ ТПт Уаї Іїе Тец ТПг 35 40 45
Сув Ркго біп Тук Рко Сіу Бек Сіц І1е Тецп Тгр Сіп Нів Авп Авр Гув 50 зо бо
Авп о Іїе с1у с1у Авр сбі1ц Авр Авр Гуз Авп о Іїе біу бБет Авр б1ц Авр 65 70 75 80
Нівз їец бек Гей пуз Сі Робе бехг Сі їецш бі Сіп бехт с1у Туг Туг 85 90 35
Уаї Сув Тук Рго Акд сіу бБет Гпув Рго бій Авр Аза Авп Рпе Тут Іец 1600 195 110
Тут ге Акуд Аї1а Акд Уаі Сув біш Авп Сув Меє б1іц Ме Авзр Уа1 Меє 115 120 125 бек Уаї Аїа ТПї І1їе Уаї І1їе Уаї Авр Іїе Сув І1їе ТПх с1і1у С1Уу Гец 130 135 140 теп Гецп Гец Уаї Тут Тут Тгр бек гув Авп Агд пув Аїа їув Аїа Гуз 145 150 155 160
Рго Уаі ТПх Агуд С1у Аїа сС1у Аїа с1у с1у Акд сіп Акд с1у б1п Авп 165 170 175
Туз січ Акд Ркго Рго Рго Уаі1і Рго Авп Рго Авр Тут сій Рго І1е Агд зо 180 185 190 туз сі1у сіп Акд Авр Гей Тут бек біу Ге Авп біп Агуд Агуд І1е 195 200 205 «2105 151 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 151 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕСсСЕддааєд дасдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 дсодсадааає сссадддеЕсд сдссасдаєд асссдеЕдаса стадсассес тассаєєтає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає аседсадрдес ассасрдедс асдсаастас гасдсрддеєд єсасеЕссудєє счастаєсодд ддеЕсааддса сссеЕСЧЯЄВаас ядеЕсЕссессяе
З6о «2105 152 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 152 саддеєдсаає ЕддеЕЕСааєс сддЕєдсеЕдаа дсааааааас сдддсдсЕвсС сассааадчтід бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 аєдчадстдеЕ ссадсстдсд єссСЕдаадає астдсадсдс астасерддсдс асдсаастас 300 гасассудерд ЕсЧстасЕсс содастаєсодд ддеЕСсааддса сссеЕСЯєЄВас ядеЕсессессь
З6о «2105 153 «2115 363 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 153 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адстсдсааад саєссуддаєба сассессасе єсстаєтаса гсдсастдддеЕ ссдЕсаадсс 120 ссдддссадч дЕЕСсддааєсо чаєсдддсаєс асваасссаа дсоддЕддсЕс бассесстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає аседсадрдес ассасрдедс асдсаастас
Гасасрудесд чдсЕСссСЕСССддсС ЄЕЄСЧСастає сддддессаад дсассстсде аасоддЕсссь
З6о
СЕ
363 «2105 154 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «2205 «221» модифікована основа «2225 (47)..(47) «223» а, с, її, д, невідома або інша «4005 154 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсудпЕЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс зо 120 ссдддссадчд дЕЕСсддааєсо чаєсдддсаєс асраасссаа дсоддЕддсЕС басстсстас 180 дсодсадааає сссадддеЕсд сдссасдаєд асссдеЕдаса стадсассес тассаєєтає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадчає аседсадедес ассассдедс асоадсддадеєдаа 300 гЧддсуссЯєє асасеЕссессє сдастаєсодд ддеЕсааддса сссеЕСЯЄВас ЯядеЕсссессяе
З6о «2105 155 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 155 саддсдсаає ЄддЕссааєс єддЕдстдаа десааааааас сдддсдсесеєс сдесааачтід бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 аєдчадстдеЕ ссадсстдсд єЕссСтЕдаачаєс астдсадсЧчє астастдсдс асасоадедае 300 гддаєссЯдєс додоадаасаєєє сддастаєсдд ддеЕСааддса сссеЕСЯЇєЄВас ядеЕсеЕсессь
З6о «2105 1556 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 1556 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адстсдсааад саєссуддаєба сассессасе єсстаєтаса гсдсастдддеЕ ссдЕсаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає аседсадрдес ассасрдедс асдсаастас 300 гассрдесесь стасеЕссссєу сддастаєсодд ддеЕСсааддса сссеЕСЯєЄВас ядеЕсессессь
З6о «2105 157 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 157 саддеєдсаає ЕддесЕСааєс сддЕєдседад дсаааааавас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєсвтаса сдсассдддс єсдссаадсс ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 аєдчадстдеЕ ссадсстдсд єЕссСЕдаадає астдсадсдс астасердсдс асдсаастас 300 гасасєсддсра ЕсСЯсЕССЯЄ сдастаєсодд ддеЕСааддса сссеЕСЯЇєЄВас ядеЕсессессь
З6о «2105 158 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 158 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕЯдЧЕ СсСЕддсаааас сдддсЯадЕЕС сстдсаєсвд бо адстдсдсудд сеЕєссудаєє сассЕссесс аасдсдідда сдадседддЕ ссдссаддесс 120 ссдддсааач дссоісдадсд чассддЕсЧЕ ассаадеЕсса ааасеєдасддд єддсассасд 180 чаєстасдсдд сіссадессаа аздздссдЕссЕ ассассеєссс дсдасдаєад сааааасасе 240 сЕдвгаєстдс адаєдаассс ссгдаааасі даадасассуд садЕСТаста сеЕдсастасс 300 ссдЕддддаає ддссЕсЯдЧса сччаєсаєсоод ддссадддса сасеЕддсвтас ддсдЕСССсСсС
З6о «2105 159 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «2205 «221» модифікована основа «2225 (53)..(53) «223» а, с, її, д, невідома або інша
«4005 159 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕдЧЕ сЕддсаааас садддсддЕЕсС сспдасоаєсстд бо адсЕдсдсд сЕсссоддасєс сасссеЕсСссс аасодсдєдда єдчадссдддІ Есдссаддсес 120 ссдддсааач дссоісдадсд чассддЕсЧЕ ассаадеЕсса ааасеєдасддд єддсассасд 180 чаєстасдсдд сіссадессаа аздздссдЕссє ассарсєссс дсдасдаєад сааааасасе 240 сЕЧЯдТтаєстдс адаєдаасоіс єСсдаааасс даадасассу садсстаста стьдтастасс 300 ссдЕддадчаає ддссеЕсасес сччаєсаєсоод додссадддса сасеЕддсвтас ддсдЕСССсСсС
З6о «2105 160 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид"
Зо «4005 160 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адстсдсааад саєссуддаєба сассессасе єсстаєтаса гсдсастдддеЕ ссдЕсаадсс 120 ссдддссадч дЕЕСсддааєсо чаєсдддсаєс асваасссаа дсоддЕддсЕс бассесстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає аседсадрдес ассасрдедс асдсаастас 300 тасчессудеьЯ ЕСССЕССЯЄЄ сдастаєсодд ддеЕСааддса сссеЕСЯЇєЄВас ядеЕсессессь
З6о «2105 161 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид"
«221» модифікована основа «2225 (47)..(47) «223» а, с, її, д, невідома або інша «2205 «221» модифікована основа «2225 (177)..(177) «223» а, с, Є, д, невідома або інша «4005 161 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсудпЕЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕСсддааєд дасдддсаєс астаасссаа дсоддЕддсЕСсС бассеЕСптсас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 аєдчадстдеЕ ссадсстдсд єЕссСЕдаадає астдсадсдс астаседєдс асдсаасеьєсс 300 асЕдеЕсстдс дЕЧдЧеЕЕССЯЄЄ сдастаєсод ддеЕсааддса сссеЕСЧЯЄВаас ядеЕсЕссессяе
З6о
Зо «2105 162 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 162 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕдЧЕ СсСЕддсаааас сдуддсадЕЕС сстдсЯєсстд бо адстдсдсудд сеЕєссудаєє сассЕссесс аасдсдідда сдадседддЕ ссдссаддесс 120 ссдддсааач дссоісдадсд чассддЕсЧЕ ассаадеЕсса ааасеєдасддд єддсассасд 180 чаєстасдсдд сіссадессаа аздздссдЕссє ассарсєссс дсдасдаєад сааааасасе 240 сЕдвгаєстдс адаєдаасес ЕСЕсдаааасе даадасассуд садеЕСТаста сеЕдсастасс 300 ссдЕддддаає дадасЕсЯЧЧЄєєЄ сччаєсаєсоод ддссадддса ссеЕддсвтас ддсдЕСССсСсС
З6о
«2105 163 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 163 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕЯдЧЕ СсСЕддсаааас сдддсЯадЕЕС сстдсаєсвд бо адсЕдсдсд сЕсссоддасєс сасссеЕсСссс аасодсдєдда єдчадссдддІ Есдссаддсес 120 ссдддсааач дссісдадсд чассддЕсСЧЕ ассаадеЕСсСса аааседас єЄддсассасд 180 чаєстасдсдд сіссадессаа аздздссдЕссє ассарсєссс дсдасдаєад сааааасасе 240 сЕЧЯдТтаєстдс адаєдаасес єСсдаааасс даадасассу садесстаста стьдтастасс 300 ссСЕєЧдооддаає ддадсеЕсасес сччаєсаєсоод додссадддса сасеЕддсвтас ддсдЕСССсСсС
З6о
Зо «2105 164 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 164 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адстсдсааад саєссдддаста сассессасес ссстаєстаса содсастдддеЕ ссдЕсаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧаадає асеєдсадеЕдс асстастдедс асддасаст дае 300 гчсдЕСЕСЯЄЕ ддадЕсасає ддастаєсодда ддссааддса сссеЕСЧЯдєЄВаас ядеЕсессессь
З6о
«2105 165 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 165 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадсєсд сдессасдаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 аєдчадстдеЕ ссадсстдсд єЕссСЕдаадчає астдсадсде астаседсдс асдсодвдедаа 300 гддасєссдєс астассарєє сччастаєсдд ддеЕСааддса сссеЕСЯЇєЄВас ядеЕсессессь
З6о
Зо «2105 166 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 166 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адстсдсааад саєссдддаєба сассессасео єсстаєтаса гсдсастддЧдє ссаєссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 асддадседеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає асеЕдсадеЕдс ассаседедс асдасдЕсадавЧеЕ 300 гддрассдєс ддоадеЕсасає ддасстаєсодд ддеЕСааддса сссеЕСЯєЄВас ядеЕсеЕсессь
З6о
«2105 167 «2115 363 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 167 саддесдсаає ЕдадсдсадеЕсС єддддседад деЕдаадаадс стдддЕссЕС даєсдааддеЕс бо
ЕссрЕдсаадд ссіссоддада сасасеєсадс адстасдсста гаадссдддІ дсдасаддсес 120 ссгЕддасаач додсссдадсд часдодаддад ассасєссста ЕСЕЕЕддвас адсааастас 180 чдсасачаадс Ессаддадсад ддсаассасе асеєдсадаса аасссасдад сасадсстас 240 аєддадстда дсадсстдад ассеєдаддас ассдссуєдє аєстаседесдс дададседаеє 300
ЕСсСтассга сеЕсоодсассс сеЕсСЧастас сддддссаад ддассассдс дассдЕСссс
З6о
Зо са 363 «2105 168 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 168 часаєсєссада сдасссадес єссеЕєссасс сЕдЕсвЕдсає седчсаддада ссдедссасс бо ассасеЕсдсс дсдссадсса дадсаєстадеЕ адсеЕддеЕєдд сссддсаєса дсадааасса 120 чадааадссс стаадсссст дасстаєдає дссеЕссадеЕс єддааадеєда ддссссаєса 180
СЯ ссадсу дсадедчдасєс сдддасадаа сссасссьса ссаєсадсад сЕєЄдсадссь 240 чаєчасєсеЕсдч саасесаєса седссаасад сбавбассадсс сассассаас дЕссдассад 300 часассааадч Есдадаєсаа 4дЧ «2105 169 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 169 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 дсодсадааає сссадддесуд сдссасдаєд асссаєдаса стадсассес тассаєєттає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає асеЕдсадедс асстасудеєдс асдсЕсесес 300
Зо
ЕссастддеЕє єссаєстоода стассдддадє сааддсассс ЕСЧдєЄаасуадеЕ ЄССЕССЕ 357 «2105 170 «2115 327 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 170 чааассддеЕ саасдсадес єссаддсасс сЕдссЕссдЕ сЕССадддда аададссасс бо сЕСсСЕСЕсдса дддссадсса дчадесдеЕсадс адсадстасос садсссддса ссадсадааа 120 ссЕддссадд сісссаддсс ссесаєстає додадсаєсса дсадддссас єддсаєссса 180 часаддеєса дсдодсадсда аєссоддддаса дасессассс єсассаєсад сачаседдвад 240 ссЕдаачасєє еЕсосадесдса свгассдесад садстасбасса асдаасаєта євасасчаєєс 300 чассадддда ссааадсдда ааєсааа «2105 171 «2115 351 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 171 саддєдсаає ЕддесЕСсСааєс єддаєдстдаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяастсааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсоддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕддссс БбассеЕсстас 180 дсодсадааає сссадддеЕсд сдссасдаєд асссдєдаса стадсассєс гассаєетає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадчає аседсадеЕдес ассассдедс асодсддасдас 300
Зо гЕЕсСЯсЕсддс гддастаєсу дддссааддс асссеЕсдеєаа сЯадеЕсЕсСЕвс є 351 «2105 172 «2115 336 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 172 частасвєдеЕвта сдастсааєс єссастдесІ сеЕдссддсда сеЕссаддсда ассддсдвадс бо асЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСсд сасессаасуд дссасааста ЕСЕсСсСдаєссда 120 тассрдсааа аассддадсса дадсссісад седстдчаєсс асседддсеЕс Єаассдсдсе 180
Ессддеєдвас соодчассЯяссс садсуддсссЕ ддаєссддса ссдарсссас дЕсДдааааєс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсУаєЕ саєстаседса єдсаддсаад саєсаєдаас 300 сдадасЕсесд дссааддсас сааддеЕсдаа астсааа «2105 173 «2115 336 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 173 чавгасєдеЕса єдасеЕсааєс сссастЕдссеЕ сеЕдссоддеЕда сіссаддсда ассддадасдадс бо асЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСсд сасессаасуд дссасааста ЕСЕсСсСдаєссда 120 тассрдсааа аассддадсса дадсссісад седстдчаєсс асседддсеЕс Єаассдсдсе 180
ЕссуддеЕдстас судассуєсєс садсддасеЕстІї ддасєссддса ссчдаєтєєссас деЕєдаааатс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсУаєЕ саєстаседса єдсаддсаад саєсаєдадс 300
Зо садасЕсесд дссааддсас сааддеЕсдаа аствааа 336 «2105 174 «2115 336 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 174 частасвєдеЕвта сдастсааєс єссастдесІ сеЕдссддсда сеЕссаддсда ассддсдвадс бо асЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСсд сасессаасуд дссасааста ЕСЕсСсСдаєссда 120 тассрдсааа аассддадсса дадсссесад седстдаєсєссі асседддсес саассдсдси 180
Ессддеєдвас соодчассЯяссс садсуддсссЕ ддаєссддса ссдарсссас дЕсДдааааєс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсУаєЕ саєстаседса єдсаддсаад саєсаєдсад 300 садасЕсесд дссааддсас сааддеЕсдаа аствааа «2105 175 «2115 336 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 175 чавгассєдеЕса єдасеЕсааєс сссастЕдссеЕ седссддеЕда сіссаддсда ассддсдадс бо асЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСсд сасессаасуд дссасааста ЕСЕсСсСдаєссда 120 тассрдсааа аассддадсса дадсссісад седстдчаєсс асседддсеЕс Єаассдсдсе 180
ЕссуддеЕдстас судассуєсєс садсддасеЕстІї ддасєссддса ссчдаєтєєссас деЕєдаааатс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсЧЕЕ баєєстаседса сдсаддсаад саєсаєдаас 300
Зо сСЯдасСЕсеЕсЯ дссааддсас сааддеЕСсдаа аствааа 336 «2105 176 «2115 336 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 176 частасвєдеЕвта сдастсааєс єссастдесІ сеЕдссддсда сеЕссаддсда ассддсдвадс бо асЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСсд сасессаасуд дссасааста ЕСЕсСсСдаєссда 120 тассрдсааа аассддадсса дадсссісад седстдчаєсс асседддсеЕс Єаассдсдсе 180
Ессддеєдвас соодчассЯяссс садсуддсссЕ ддаєссддса ссдарсссас дЕсДдааааєс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсУаєЕ саєстаседса єдсаддсаад саєсаєдаас 300 садаассесд дссааддсас сааддеЕсдаа аствааа «2105 177 «2115 348 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 177 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєсвтаса сдсассдддс єсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 дсодсадааає сссадддеЕсд сдссасдаєд асссдеЕдаса стадсассес тассаєєтає 240 асддадседеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає асеЕдсадеЕдс асстаседедс асдсеЕстстсас 300
Зо ассдасаєдч астаєсдддуа ссааддсасс сссдсаасд ЕСЕсСЕССЕ 348 «2105 178 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 178 чааассддеЕ саасдсадес єссаддсасс сЕдссЕссдЕ сЕССадддда аададссасс бо сЕСсСЕСЕсдса дддссадсса дчадесдеЕсадс адсадстасе гадссгіддва ссадсадааа 120 ссЕддссадд сісссаддсс ссесаєстає додадсаєсса дсадддссас єддсаєссса 180 часаддеєса дсдодсадсда аєссоддддаса дасессассс ссассаєсад сачассддвад 240 ссЕдаачасєє еЕсосадесдса свассдесад саддаєсаасоі ддадсссаас дЕсССддссад 300 чадассааач гддааассаа а «2105 179 «2115 348 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 179 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 дсодсадааає сссадддеЕсд сдссасдаєд асссдеЕдаса стадсассес тассаєєтає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає асеЕдсадеЕдес ассасудедс асдсеЕсттас 300
Зо деЕЕЧасаєдч астаєсддда Есааддсасс сЕСЯєЄВасдча ЕСЕСЕССЕ 348 «2105 180 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 180 чааассдудеЕ саасдсадес єссаддсасс сЕдсесЕссЧЧЄ сЕСсССсСадддда аадчадссасс бо сЕСсСЕСЕсдса дддссадсса дчадесдеЕсадс адсадстасс тгадсстіддва ссадсадааа 120 ссЕддссадд сісссаддсс ссесаєстає додадсаєсса дсадддссас єддсаєссса 180 часададеєса дсдодсачдсда аєссоддддаса дасессассс єСсассаєсад садчасеєддвад 240 ссЕдаачасєє еЕсосадесдса свгассдесад садчасаєсс ддадсссаас дЕсССддссад 300 чадассааач гддааассаа а «2105 181 «2115 363 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 181 чададєдсаає ЕДЧдДЕсСоОвЧадесс соддоаддаддс ссдасасадс сіддддддЕС, ссурдадасес бо
ЕссЕдєдсад ссіссоддасєс сасссеЕсадс адеЕсаєдсса ЕдчадстсдддЕ ссдадассаддсе 120 ссаддчаадч доассддадсд ддЕсЕсадсеЕ асвтадсдаєа дсддЕддсад сасатсастсас 180 чдсачасеєссд сдаадддсесуд деЕссассаєс єссададаса арсссаадаа сасдстатає 240 сгдсачаєда асадсстодад адссдаддас асддссдтає асссасєдедс дааадасесь 300
Зо
ЕсСЕвасуєс аасддсасудс ЄЕЄсСЯСЧастас сддддссаад даассстддЕ сассдєуєсссд
З6о ачеЕ 363 «2105 182 «2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 182 чааассдєдеЕ гаасдсадесс сссаддсасс сЕдсЕсеЕеЕвдЕ сіЕссадддда аададссасс бо сЕСсСЕСЕсдса дддссадсса дчадесдеЕсадс адсадстасе гадссгіддва ссадсадааа 120 ссЕддссадд сісссаддсс ссесаєстає додадсаєсса дсадддссас єддсаєссса 180 часаддеєса дсдодсадсда аєссдддаса дасессассс сассаєсад садчасеєддвад 240 ссЕдаачаєє еЕсосадесдса сврассдесад садссаасса дсадсссаає басдЕєсдддас сачдддасса аадесддааає сааа 324 «2105 183 «2115 684 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 183 чаддесдсадс гдссдоддаасєс сдодсоддсоода сгддсдсадс сгддсодадаєс ЕСЕСдЧдЧадасед бо адсЕдсдссу ссадсддсесс сасссесадс асстасдсса єдаассдддЕІ дсдссаддес 120 ссгддсааад дссеЕддааєд ддсдЕсссдуа аєсадаадса адсасаасаа стасдссасс 180 тбасврасудссу асадсдєдаа дддссддЕсс ассассадсс додоадасдасад саадаасасс 240 20) сЕдвасстрдс адаєсдаасад ссгрдсдддасс даддасассуд ссдЕдстаста єЕЕДдсдЕдЧс9о 300 сасддсаасе Есддсаасад стасдЕдссеЕ содЕСсдссЕ ассддддсесса ддадсасссес
З6о чЕдассдЕдЕ саадсдссад бассаадддс сссадсдедЕ Ессссстддс асссадсадс 420 аачадсасає сгддсддаас адссдсєсстд ддсЕдЕСтду сдааадаста сеЕссссдад 480 сссдаєдассЯ ЕДдЕСЕсоОдаа сЕССддсодсс сідассадсуд дсдедсасас сЕссссадсс 540
ЧЕдссдсада дсадсддссо драссссстд сссЕССЯдрдд Есассуасдес сЕСТадсссс бо сЕдддаасас адасасасає сеЕдсаардсс ааєсасаадс сЕсссаасас сааадесдчає бо аадааадесуд адсссаадад сьдс 684 «2105 184 «2115 696 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 184 чаддесдсадс гдссдоддаасєс сдодсоддсоода сгддсдсадс сгддсодадаєс ЕСЕСдЧдЧадасед бо адсЕдсдссу ссадсддсес сасссесадс асстасдсса єдаассдддІ дсдссаддесс 120 ссЕддсааач дссіддаасд ддсдссссдд ассадаадса адсасаасаа стасдссасс 180 тбасврасудссу асадсдєдаа дддссддЕсс ассассадсс додоадасдасад саадаасасс 240 сЕЧЯдтасстдс адаєдаасад ссгрдсдддсес даддасассу ссуєсообасста Єсоєсосос9аО 300 сасддсаасе Есддсаасад стасдЕдссеЕ содЕСсдссЕ ассддддсесса ддадсасссес
З6о чЕдассдрдЕ саадсдсстад сЄдЕддссудсЕ сссЕССЯДрДЄ Есаєсьсьсс сссаєссвває 420 чаасадсеєда ааадсддсас сдссоссуаєс дЕдЕДЧДЕСЕдс Едаасаасєт євассстада зо 480 чаадссааач єдсадсдоддаа адсддасаас дсассдсадс ссддсаасес ссаддаассь 540 дЕЧчасадаас аддассссаа ддасадсасс гасеЕссстдс ссессассст дасастдесе бо ааддсєчдасс асдадаааса сааадеЕсстас дсстгдсдаад єсасссаєса дддссеЕдадс бо
Есдсссуєса сааададсес саасадддадача дадеЕде 696 «2105 185 «2115 36 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер" «4005 185 чдсаддсаадс астаєсєдсадс дчадасЕсєссдуа ссаачд9ч
Зб «2105 186
«2115 35 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер" «4005 186 саддсаадса Есасдадссу часЕсеЕсодЧдЕ саад 35 «2105 187 «2115 37 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер" «4005 187 саєстаєдаас суддсеЕєесд дессааддсас сааддес 37 «2105 188 «2115 37 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер" «4005 188 саєтаєдаас содачаасссс деЕСааддсас сааддіс 37 «2105 189 «2115 2067 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 189 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕЯдЧЕ СсСЕддсаааас сдддсЯадЕЕС сстдсаєсвд 216)
адсеЕдсдсдд сЕсссододаєсєс сасссеЕсссс аасодсдєдда сЄдадссдддІ єсдссаддес 120 ссдддсааач дссоісдадсд чассддЕсЧЕ ассаадеЕсса ааасеєдасддд єддсассасд чаєстасдсдд сіссадессаа аздздссдЕссє ассарсєссс дсдасдаєад сааааасасе 240 сЕдвгаєстдс адаєдаассс ссеЕдаааасе даадасассуд садеЕСтаста сеЕдсастасс 300 ссагдодадаає чдєсеЕсддса счаєвтаєвсдуа ддссадддса сдстддеЕстас дурдеЕсессс
З6о дсЕадсасаа адддссстад сдЕдсЕсссЕ седдссссса дсадсаадад сасаадсддас 420 ччваасадссу сссіддоассд ссеЕсдЕдаад дастасеЕссс ссдадсссаєс дасадеЕдссь 480 гддаасадсуд дадссстідас аадсддсуаєд сасассессс срдссоасдсІ дсададсадс 540 часстрдсасе сссідадсад сдсддеЕсасс дсдссстадса дсадсссддда сасссадасс бо тасаєсвєдса асдедаасса саадсссадс аасассааадч сддасаадаа ддеЕддадссс бо аачдзадссдсд асдодсодада адддсссоода доадсодадчає ссдаддсдса дсгідстододаа 720 20)
ЕсСЕЧДдсоддсо дассддсдса дссгіддсоода ссЕСтсдадас єдадссдедс сдссадсдадс 780
Еессасссеса дсасстасудс саєдаасодд дсЕдсдссадда сссстгддсаа аддсседдаа 840 гдддсдсссс ддаєссадаад саадсасаас аастасдсса сстассасдс сдасадсдаед 900 аадддссдді ссассаєсад ссдддасдас адсаадааса ссстдтасст дсадаєдаас 960 адссідсддд ссддаддасас сдссдєдсас гтаєєдесЕдеЕдс доадасасоддсаа сЕссддсаас 19020 ачдстасдеЕдеЕ0 сеЕСоЧдЕеЕссддс свтассддддс садддсассс ЕСЯдЕдчассЯдс дЕСВадсосе 1980 адеЕассаадд дссссадсдс дЕссссссвд дсасссадса дсаададсас аєссддсдада 1140 асадссусесс гЕдЧдодстЯссЕ ддсдааадас сбасЕсссссд адсссаєдас сасдЕСЄТС9 1200 аасістддсд сссеЕдассад сддсдідсас ассЕсеєссад сссдстдса дадсадсдадс 1260 сЕдвтассссс гЕДдЕССсСЕСсСсСдЄ ддесассуєд сссЕСТадсс ссседддаас асадасатсає ассеЕдсааєсдд єсааєсасаа дссосссаас ассааадссд асаачдааадс сдадсссаад 1380 адсеЕдсдаса ааасесасас ардсссассд гбдсссадсас ссодаадсвєдс адддддассд 1440
ЕсадеЕсеЕссс ссЕєсссссс аааасссаад дасассстса сдаєссеьсссду дасссстдад 1500 чдЕсасаєсдся гЕдЧсдадсдда сдсдадссас даадассстд аддеЕсаадес саасєддсас 1550 чЕддасддса гдчаддеєдса баасдссаад асааадссодс доададдадса деасаасадс 1620 асдтассдбд гддссадсудс ссісассуєс срдсассадча ассддссдаа єЄддсааддвад 1680 тасаадсдса аддсссссаа сааадсссес ддсдссссса сСсдадаааас саєстсссааа 1740 дссааадддс адссссдада ассасаддед гасассстдс ссссагдссду ддаєдачЧчстд 1800 ассаадаасс аддссадсс чдЕЧдЧдсдссод дссаааддсс ЕСсСсарсссад сдасаєсдсс 1860 20) чЕддачдсддд ададсаасдуда дсадссддад аасаасвраса адассасдес Есссагодстд 1920 часеЕссдасу дссссЕссЕс ссеСсСсасадс аадсссассд гддасаадад саддеЕддсад 1980 садддачаасч ЕСЕсСсСссаєсдуд сЕССЧдЕЧаєд саєдаддссс гдсасаасса стасасвсад 2040 аададссеьсь сссеЕдЕСьЬсс ддадеааа 2067 «2105 190 «2115 1350 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 190 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕЯдЧЕ СсСЕддсаааас сдддсЯадЕЕС сстдсаєсвд бо адсЕдсдсдд сЕсссоддарс сассеЕеєсссс аасодсдєдда єдчадссдддІ Есдссаддсес 120 ссдддсааач дссоісдадсд чассддЕсЧЕ ассаадеЕсса ааасеєдасддд єддсассасд чаєстасдсудд ссссадеЕєаа адздрсууєєьс ассаєеєсссс дсдасдасад сааааасась 240 сЕдвгаєстдс адаєдаассс ссеЕдаааасе даадасассуд садеЕСТтаста стдсастасс 300 ссдЕддддаає ддссЕсЯдЧса сччаєсаєсоод ддссадддса сасеЕддсвтас ддсдЕСССсСсС
З6о дсЕадсасса адддссссос сдЕдсЕсссс сгддссссса дсадсаадад сассадсдадас 420 часасадссо сЕссддассдЯд сстрддеЕсаад дастасессс ссдадсссдєс дассдеЕдссс 480 гддаасадсуд дадссстдас сІссддсдеЕд сасасстссс ссуссдедсеЕ дсададеЕссяе 540 часстрдсаса дссодадсад сдсддеЕсасс дЕдсссЕСта дсадсссддар сасссадасс бо тасаєссдса асдсдаасса саадсссадс аасассаадд гддасаадаа ддсддадссс бо аададссдсд асаааассса сасаєдссса ссдедсссад сасседаадс єдсадоавдводада зо 720 ссдеЕсадеЕсе ЕссЕсеЕсссс сссаааассс ааддасассс єсаєдаєсьс ссодадассссь 780 чачадаєссасає дсдЕддЕдад ддасдідадс сасдаадасс сеЕдчаддесаа деЕсСсаастд9д 840 гасдєсддасо дсояасддаддс дсасаардсс аадасааадс содсддададда дсадсасаас 900 ачдсасчдбасс дЕдсддсєсад сдессесасс деЕсстдсасс аддассддсс даасддсаад 960 чадсасааде дсааддсссс саасааадсс сісддсдссс ссаєсдадаа аассаєусссс 19020 ааггдссааад ддсадссссд адаассасад деЕдеЕдсассс гдсссссаєс ссоаддаєсвад 1980 сЕдассаада ассаддесад ссЕсЕСдЕдс дсадессааад дсеЕсстаєссс садсдасатєс 1140 чссасддадеі дододададсаа сбдддсадссд дадаасаасс асаадассас дссосссдаед 1200 сЕддассссу асддсссссє сЕсссеЕСУЯЄдд адсаадсеса ссдЕддасаа дадсадчвсд 1260 садсадчддда асчссессссавдссссоаєсд аєсдсаєдадда сісеєдсасаа ссдсесссасд садаачадсс ЕСЕСсСстдЕСсС сссоаддатааа 1350 «2105 191 «2115» 645 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 191 саддссдЕсЯ Едасссадда асссадсстд асадедЕСсс стддсоддсас сасдасссвд бо асаєдесддса деЕсстасадд сдссдеЕдасс ассадсаасоі асдссаастд ддсдсаддваа 120 аадсссддсс аддссоссад аддасеєдасєс додсддсасса асаачададс ссстрддсасс 180 ссгЕдссадає єсадсодчасєс ссЕдсЕдодада дддаааддссд сссеЕдасасі дЕСсддсдсс 240 садссадаад асдаддссда дстастасрдс дссстдсддЕ асадсаасст дЕдадЧдєаєс 300 часоддаддса ссаадсрдас адссстаддеЕ саасссаадд срдсссссад сдудасссвд
З6о реЕссссссса дсадсдадда ассдсаддсс аасааддсса ссстддсстд ссурдаєссадс 420 часеЕссстасс саддсдссдс дассдеЕддсс сддааддссд асадсадссс сдасдааддесс 480 чдасадгддада ссассасссс садсаадсад адсаасааса адсасдссдс садсадстас 540 сЕдчадсстда сссссдадса дсддаададс сасаддіссІї асадсрдсса доасдасссас бо чададдсадса ссдсддадаа аассдеЕддсс сссассдаді дсадс 645 «2105 192 «2115 2067 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 192 чаддесдсадс гдссдоддаасєс сдодсоддсоода сгддсдсадс сгддсодадаєс ЕСЕСдЧдЧадасед бо адсЕдсдссу ссадсддсесс сасссесадс асстасдсса єдаассдддІ дсдссаддесс 120 ссгддсааад дссеЕддааєд ддсдЕсссдуа аєсадаадса адсасаасаа стасдссасс 180 тбасврасудссу асадсдєдаа дддссддсс ассассадсс дддасдасад саадаасасс 240 сЕдвасстрдс адаєсдаасад ссгрдсдддасс даддасассуд ссдЕдстаста єЕЕДдсдЕдЧс9о 300 сасддсаасе Есддсаасад стасдЕдссеЕ содЕСсдссЕ ассддддсесса ддадсасссес
З6о чЧЕдассдрєдЕ сасстедссад сасааадддс сстадсдЕдс єСсссЕссддс ссссадсадс 420 аачадсасаа дсддсддаас адссдссстд ддстдссссЯ сдааддаста серссссдад 480 сссдєсдасадч ЕДдЕСсСЕсоддаа садсддадсс сідасаадсдд дсдеЕдсасас сЕССссстдсс 540 20)
ЧЕДдссдсада дсадсддссоі драсссссод адсадсдедд єсассдсдес бадсадсадс бо сгЕдддсассс адасстасає седсаасуєд аассасаадс ссадсаасас сааадеддас бо аачдзааддедчд адсссаачад сеЕдсдчаєсдоадас двдвадчаддаді ссддаддсда аддаєссдвад 720
ЧдЕЧсааєстда Єесдаасстду ЕЧ9ФЧЕдУЧЄєсвд деаааассод дсддеЕєссст дсдЕСТтСдЧадс 780 гдсодсоддсес ссоодаєсссас сЕссСЕСсССсСаас дсдєддаєда дссдддссд ссаддссссд 840 часаааддсесс ЕСЧчадсдддеЕ сЄдодссдадртаєс аадеЕссаааа ссдасддедда сассасдоадває 900 гасдсддсесс садстааадд СсЯсЕсасс асвссссоасд асдаєгадсаа ааасассстд 960 таєссдсада єдаассссст даааасрдаа дасассдсад ЕСсастасьд бассассссд 19020 гдддааєддеЕ сЕєддчсасда єтаєєддддс садддсасдс гдаєтасадеЕ дЕСТадсдасе 1980 адеЕассаадд дссссадсдс дЕссссссгд дсасссадса дсаададсас аєссддсдада асадссусесс гЕдЧдодстЯссЕ ддсдааадас сбасЕсссссд адсссаєдас сасдЕСЄТС9 1200 аасЕссддсд сссідассад сддсдеЕдсас ассеЕссссад ссдЕдссдса дадсадсдадас 1260 сЕЧдЧчтасеЕссс гдЕССЕССсСЯЄ ддаєсассудєд сссеЕСтадсо ссстдддаас асадасатаєсє 1320 ассеЕдсааєсдд єсааєсасаа дссосссаас ассааадссд асаачдааадс сдадсссаад 1380 адсеЕдсдаса ааасесасас ардсссассд сдсссадсас ссдаадсєдс аддддадвассд 1440 гсадессссс ЕСЕссссссс аааасссаад дасассстса єдаєсссссо дасссстодад 1500 чдЕсасаєсдся гЕдЧсдадсдда сдсдадссас даадассстд аддеЕсаадес саасєддсас 1550 чЧдЕЧддасддсд сддаддеєдса бааєдссаад асааадссдс дддаддадса дсасаасадс 1620 асдтассдбд гддссадсудс ссісассуєс срдсассадча ассддссдаа єЄддсааддвад 1680 20) тасаадсдса аддсссссаа сааадсссоіс ддсдссссса Есдадаааас сассессааа 1740 чдссааадддс адссссддада ассасаддєд басассстрдс ссссаєсдссо дчваєсдадсед 1800 ассаадаасс аддеЕсадсс дЕддЕдсстд дсЕсаааддсс ЕСсСсарсссад сдасаєсдсс 1860 чЧдЕЧчдвадеддд ададсааєду дсадссуддад аасаасстаса адассасдсес гсссагоастд 1920 часеЕссдасу дссссЕссЕс ссеСсСсасадс аадсссассд гддасаадад саддеЕддсад 1980 саддадачаасч ЕСЕсСсСссСасдд сЕССЧдЕЧаєд саєдаддссс сбдсасаасса стасасосад 2040 аададссеЕсе сссдеЕсессс ддатсааа 2067 «2105 193 «2115 1365 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело
«223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 193 чачаєсдсадс гдсеЕддааєс єддсддсдда сеЕддеЕдсадс сеЕддсдчаєс сстЕдчадастд бо адсЕдсдссу ссадсддсесс сасссесадс асстасдсса єдаассдддІ дсдссаддесс 120 ссЕддсааач дссіддаасд ддсдссссдд ассадаадса адсасаасаа стасдссасс 180 тасврасдссу асадсдєдаа дддссддЕсс ассассадсс додоадасдасад саадаасасс 240 сЕдвасстрдс адаєсдаасад ссгрдсдддасс даддасассуд ссдЕдстаста єЕЕДдсдЕдЧс9о 300 сасддсаасе ссддсаасад стаьфдеЕуєсс сдаєєвєдсся асгддддсса дддсассстс
З6о чЕдассдрєдЕ сасствдссад сассаадддс ссаєсддеісс сссссстддс ассстсссьсс 420 аададсассе сгддддадсас адсддсссод додсЕдссвда ЕСааддаста сеЕсссссдаа 480 ссдадєдчасдч ЕДдЕСЯдсддаа сЕсаддсодсс сідассадсуд дсдедсасас сЕсСсСссоддсь зо 540 дЕССсСтасадеі ссісаддасе стасссссоіс адсадсдедд Едассдсдсс сеЕССадсадс бо
Егдддсассс адасстасає стдсаасдеєд аассасаадс ссадсаасас сааддсддвас бо аадзааадесд адсссааасс сЕдсдасааа асесасасає дсссассдед сссадсассь 720 чаадссдсад додоаддассуєс адсссЕссоіс и ссссссссаа аасссаадда сасссесаєд 780 ассЕсссдда ссссеЕдаддс сасаєдсуаєд дсддсддасд єдадссасда адассстодад 840
ЧдЕСсаадсеєса асрддсасдс ддасддсоаєд даддсдсаса асдссаадас ааадсс9ас4дад 900 чаччадсаде асаасадсас дтассуєдеЕд дЕСадсудссс ссассдеусстя дсассаддас 960 гддссдаасуд дсааддадса саадсдсаад дсЕсЕСсСсааса аадсссосдуа сдсссссаєс 19020 чадаааасса Ессссааадс сааадддсад ссссддадаас сасаддесдта сассстдссс 1980 ссаєдссддвч асчадссдас саадаассад дсЕсадсстдЕ додасдсссдаєс саааддссес таєсссадс асассдссодс ддадсдодадад адсаасдддс адссддадаа саастєасаад 1200 ассасдссіс ссагбдстдда сеЕссчасуддс сСсСсЕссСЕсс ЕСсасадсаа дсісассдаед 1260 часаададса ддеЕддсадса ддддаасдеЕСсС ЕЕСЕСассСЕ ссаєсдаєдса сдадасест 1320 сасаассасо асасдсадаа чдадссеЕсссс сЕдЕСССсСсСЯд дсааа 1365 «2105 194 «2115 681 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 194 часаааасєсс асасасдссс ассдсдссса дсассідаас ЕССЕдддддачд ассдеЕсадеЕс бо гЕЕсСсСЕсСЕссс ссссаааасс сааддасасс сеЕсаєдаєссо сссддасссс гсдададєсаса 120 гЧдсодсодЧдеда єдчдасдаєдад ссасдаадас ссеЕдаддеса адсесаастд деасдеддас 180 часадвсддадад єдсаваасдс саадасааад ссдсодддадда адсадсасаа садсасчдасас 240 сЯчЕДдсдЧдеЕса дсодсссісас сдЕсстдсас саддасеєддс Едааєддсаа ддадсасаад 300 гдсааддеЕсс ссаасааадс ссісссадсс сссассдада ааассассес сааадссааа
З6о чддадсадсссс дадаассаса ддсдеЕдсасс седсссссає сссодддаєда дсеЕдассаад 420 аассаддеса дссоссссдєсд сдсадеЕсааа ддсеЕсстаєсс ссадсдасає сдссдЯдЕддвад 480 гдддадчадса асдддсадсс ддадаасаас сбасаадасса сдссЕСссдЯдс дсгддасссс 540 часддссссє ЕСЕсСссЕсдс дадсаадссс ассдсддаса адчадсаддед дсадсаддадад бо аасдсєссеЕсь сасдсессдєс чаєсдсаєдад дсЕСсдсаса ассдссссас дсадаададс бо сЕсСЕСССтЯДЕ сЕССЯДддЯДсаа а «2105 195 «2115 2070 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 195 саддеєдсаає ЕддеЕЕСааєс сддЕєдсеЕдаа дсааааааас сдддсдсЕвсС сассааадчтід бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсоддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕддссс БбассеЕсстас 180 дсодсадааає сссадддеЕсд сдссасдаєд асссдеЕдаса стадсассес тассаєєтає 240 асддадседеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає аседсадеЕдес ассассдедс асодсддасдас 300
Зо гЕЕсСЧЯсЕсддс гддчастаєссу дддссааддс асссісдраа СЯдЕЕССЕЕС єдссадсаса
З6о аадддсссса дсЯасдеЕсссс ссрддссссЕ адсадсаада дсасассвддда сддаасадсс 420 дсссгдддсеЕ дссісодсдаа ддастасьсеЕ сссдадсстд ЄдчассуєдеЕс сЕддаасеось 480 ддсдссстіда саадсддсдІ дсасассееєс ссадссдсдс гсдсададсад сддсестдтас 540 гсСЕСЕсдадса дсоасддессас сдсдсстадс адсадсстдд дсасссадас стасаєссдс бо аасдсдаасс асаадсссад саасассааа дсддасаача аддеддадсс саададседе бо чаєддсддад дадддсссдуда аддсддадда єссдаддаєдс адстдстдда ассгддсдадс 720 ччасрддеЕдс адссЕддсдда аєссстЕдадча сеідадсвдсд ссдссадсдд сеЕссассес 780 адсасстасуд ссаєдаасвєд ддсдсдссад дсссстеддса ааддсстдда асддаЧдеуЧесс 840 сддассадаа дсаадсасаа саассасдсс асстасвасд ссдасадсадс даадддсс4дд ссассаєса дссдддасда садсаадаас ассстідвасс гдсачаєсдаа садсстдс4дад 960 чдссдаддаса ссодссуаєбдса стассдрдсєд соддсасддса ассесддсаа садстаєсдчед 19020
ЕСЕсУДдДЕСЯ сстассддадд ссадддсасс сеЕСдЕдассу ЄдЕсаадсодс тачЧдедсддасс 1980 дсЕСССІСсСсСЯ Е9ДЕсвтассіє ссссссаєсс даєдаасадс гдаааадсда сассдесосс 1140 дЕСЯСЧЯСдЕсС гДСсСсдаасаа ЄЕссассся адддаадсста аадеєдсадед дааадеєддває 1200 аасдсасрдс адсссддсаа сЕСсСссаддаа ссЕдсдасад аасаддасес сааддасадс 1260 асстассссс гЕдЕсСсСІсСсас сстдасасід ссвеЕааддсод ассаєдадаа асасааадес 1320 тасдсстрєдсуд аадесассса єсадддсстд адсссдсссуд ссасааадад сессаасада 1380 ччачадсдсд асаадассса сассудсссс ссЕдЕєсстд ссссеЕдаадс єДдссддадсдадо 1440 20) ссСЕКЕСЕУЧвЯЄ ЕССЕДдДеЕсссс сссааадссс ааддасассс єдаєдаєсад ссддассссс 1500 чаадесчассеЕ дсасододсдЧаЧес ддаєдеЕдссс сасдаддасс ссдаадсдаа дЕсСВаєсс9ва 1550 тасдєсддасо дсодсддаадс дсасаасудсс аадасааадс содсддададда дсадеасаас 1620 адсасдтєасс дЕдЕддеЕсад сдєсстсасс дЕССтДдсасс аддастєддсоІ дааєсддвсаад 1680 чадсасааде дсааддсссс саасааадсс сісддсдссс ссаєсдадаа аассаєусссс 1740 ааггдссааад ддсадссссуд адаассасад десдсасассс гдсссссава ссоддаєсвад 1800 сеЕдассаада ассаддссад ссрдсддаєдс сгддссааад дссЕєстаєсс садсдасаєс 1860 чссасддадеі дододададсаа сбдддсадссд дадаасаасс асаадассас дссосссдаед 1920 сЕддасессу асуддсЕссеЕс сЕссссстас адсаадссса ссуагсддасаа дадсадачєд 1980 садсадддда асчссеЕссссавдссссооєсд асєдсаєдадд сісЕдсасаа ссастасасд садаачадсс ЕСЕСсСстдЕСсС сссоаддатааа 2070 «2105 196 «2115 1341 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 196 саддєдсаає ЕддесЕСааєс сддєдсеЕдаа дсааааааас сдвддсдсЕєсс сассааадчтід бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсоддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕддссс БбассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 аєдчадстдеЕ ссадсстдсд єЕссСЕдаадчає астдсадсде астаседсдс асдсдвдедас 300 гЕЕсСЧЯсЕсддс гддчастаєссу дддссааддс асссісдраа СЯОДЕЕССЕЕС єДдссадсасс
З6о аадддссссі ссадрдеЕсссс ссгрддссссс адсадсаада дсассадсддд сддсасадсс 420 дсСЕСТЯдддсЕ дссгддессаа ддастассс сссдадсссд ЕдассдсдеЕсС сЕддаасадс 480 ччадссстрда ссіссддсудс дсасассесс сссдссдеЕдс гЕдсададеЕєс єддассвдтсає; 540 адсстдадса дсдЕддесас сагдесЕссІ адсадсстду дсасссадас стасаєсстдс бо аасдєдаасс асаадсссад саасассаад деддасаача аддсддадсс саададседс бо часаааассіс асасасдссс ассдсдссса дсассідаад ссдсаддддчд ассдеЕсадеЕс 720 гЕссЕссесс ссссаааасс сааддасасс сісаєсдаєсеі сссддасссс єдаддесаса 780 гЧдсодсодЧдеда єдчдасдаєдад ссасдаадас ссеЕдаддеса адсесаастд деасдеддас 840
Зоо часадвсддадад єдсаваасдс саадасааад ссдсодддадда адсадсасаа садсасчдасас сдЕЧсддЕса дсдЕсСсЕсас сдссстдсас саддастддс сдаасддасаа ддадсасаад 960 гдсааддеЕсс ссаасааадс ссісддсодсс сссассдада ааассассес сааадссааа 19020 чадсадсссс дадаассаса ддесдсдсасс седсссссає сссдодадаєда дссдассаад 1980 аассаддеса дссоссссдєсд сдсадеЕсааа ддсеЕсстаєсс ссадсдасає сдссдЯдЕддвад 1140 гдддадчадса асдддсадсс ддадаасаас сбасаадасса сдссЕСссдЯдс дсгддасссс 1200 часуадсеЕссе ЄсСЕЄССЕСЯдЄ дадсаадсес ассдєрддаса ададсаддсд дсадсачав9д 1260 аасдсєссеЕсь сасдсессдс дчаєсдсаєдад дсЕСсдсаса ассастсасас дсадаададс 1320 сЕсСЕСССтЯДЕ сЕССЯДддЯДсаа а 1341 «2105 197 зо «2115 657 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 197 частасвєдеЕвта сдастсааєс єссастдесІ сеЕдссддсда сеЕссаддсда ассддсдвадс бо асЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСсд сасессаасуд дссасааста ЕСЕсСсСдаєссда 120 тассрдсааа аассддадсса дадсссісад седстдаєссо асседддсЕеЕс Єаассдсдсе 180
Ессддеєдвас соодчассЯяссс садсуддсссЕ ддаєссддса ссдарсссас дЕсДдааааєс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсУаєЕ саєстаседса єдсаддсаад саєсаєдаас 300 сдчасЕєссд дссааддсас сааддісдаа аєсааасва сддадєддстодс ассасстдес
З6о ссасссвсс содассаєстда сдадсадессд ааасстддаа сСдсссстає єдЕдЕДДСсСвд сЕдаасаасе єСтаєсссад ададдссааа дсасадедда аддеддаєаа сдсссессаа 480
Есдддсаасоі сссаддачад Сбдссасадад саддасадса аддасадсас стасадссес 540 адсадсассс гдасдсрдад сааадсадас гасдадааас асааадесста сдсестдсдаа бо дЕсасссаєсс адддссодад сЕСдсссдсс асааачадсо єсаасаддавда ачдадеде 657 «2105 198 «2115 642 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 198 саддссдЕсЯ Едасссадда асссадсстд асадедЕСсс стддсоддсас сасдасссвд бо асаєдеддса дЕЕстасаддд сдссдідасс ассадсаасої асдссаастд ддеЕдсаддаа 120 аадсссддсс аддссоссад аддасеєдасс додсддсасса асаачададс сссгддсасс 180 ссгЕдссадає єсадсодчасєс ссЕдсЕдодада дддаааддссд сссеЕдасасі дЕСсддсдсс 240 садссадаач асдчаддссда дчеасстасрдс дсссдЕддЕ асадсаассі дЕЧ9оОдеєс 300 часоддаддса ссаадссдас адсдсеЕдадс адсдсоєсса ссаааддесесс ЄЕЕСсССсСЯЧЕЧЕКЕ
З6о ссЕСтДДДСсСЕС стадссссаа діЕссассестї ддаддсассу стЕдсЕстсууд асдссесчтд 420 аадчаєсаює еєсссеЕЧадсс сдеЕдасадеьдяд ссстддааса дсддадсасі дассеЕСтсдда 480 чеЕдсасасеьс ЕссссастдеЕ дседсадессс ссеЕддасьдес асадсссдад садсЯдеЕдаЧвеЕд 540 асадсдссса дсадсадссі дддсасссад асстасасйсс дсаасудєсєдаа ссасаадссс бо адсаасасса аддсддасаа дчааддеддаа сссаадеЕссе де 642 зЗо02
«2105 199 «2115 1377 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 199 чаддесдсадс гдссдоддаасєс сдодсоддсоода сгддсдсадс сгддсодадаєс ЕСЕСдЧдЧадасед бо адсЕдсдссу ссадсддсесс сасссесадс асстасдсса єдаассдддІ дсдссаддесс 120 ссЕддсааач дссіддаасд ддсдссссдд ассадаадса адсасаасаа стасдссасс 180 тбасврасудссу асадсдєдаа дддссддЕсс ассассадсс додоадасдасад саадаасасс 240 сЕЧЯдтасстдс адаєдаасад ссгрдсдддсес даддасассу ссаєдстаста ЄЕсЧдєЧдсос9ад 300 сасддсаасе Есддсаасад стасдЕдссеЕ содЕСсдссЕ ассддддсесса ддадсасссес
З6о 20) чЕдассдвадєс сасстдсвтад сдеддссудсЕ сссеЕССЯДЄЯДЄ Есаєстсьсс сссаєссвває 420 чаасадсеєда ааадсддсас сдссоссуаєс дЕдЕдЕСсСтдс Едаасааєтс євассстад 480 чаадссааач єдсадсдоддаа адсддасаас дсассдсадс ссддсаасес ссаддаассь 540 дЕЧчасадаас аддассссаа ддасадсасс гасЕссстд сстссассст дасастдесе бо ааддсєчдасс асдадаааса сааадеЕсстас дсстгдсдаад єсасссаєса дддссеЕдадс бо
Есдсссуєса сааададссс! саасадддача чдадедсдаса адасссасас сЕдссссссь 720
ЄЧЕССЕддсссС сгдаадссдс СуддсудсессЕ ССЕДЕЯДЕЄСС гД9ДЕЕсСссссс ааадсссаад 780 часассстда єдаєссадссуд дасссссддаа деЕдасстдсда гдЯдЕЧддсдда єДдедЕсссас 840 чаччассстд аадеєдаадес сааєєддрас деЕддасддсд сддаадсдса саасдссаад 900
ЗОЗ асааадссдс доададдадса деасаасадс асдрассдєд гддЕСадсдЕс ссісассдЕс сгдсассадч ассддссдаа сбдоадасааддад сбасаадедса аддЕСсСсссаа сааадсссес 19020 дадасадссссса ссдадаааас сассеєссааа дссаааддадс адссссдада ассасаддєд 1980 тасассстдс ссссагсдссу ддаєдадсвд ассаадаасс аддссадссе дЕдадедсстд 1140
ЧдЕсаааддсс ЕСТтаєсссад сдасаєсдсс дгддадедад адчадсааєду дсадссодад 1200 аасаассаса адассасудсс Ссссрдсод дасессдасд дсссссссс ссЕсвасадс 1260 аадсссассд гддасаачад саддсддсад саддддаасд ЕСЕЕСсСсСавд сЕССЯДЕЧаєд 1320 саєдаддссс гдсасаасса страсасдсад аададссеЕсс сссгдЕСЄСсСсС ддаддсааа 1377 «2105 200 «2115 2067 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність
З0 0«2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 200 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕЯдЧЕ СсСЕддсаааас сдддсЯадЕЕС сстдсаєсвд бо адсЕдсдсдд сЕсссоддарс сассеЕеєсссс аасодсдєдда єдчадссдддІ Есдссаддсес 120 ссдддсааач дссоісдадсд чассддЕсЧЕ ассаадеЕсса ааасеєдасддд єддсассасд 180 чаєстасдсудд ссссадеЕєаа адздрсууєєьс ассаєеєсссс дсдасдасад сааааасась 240 сЕдвгаєстдс адаєдаассс ссеЕдаааасе даадасассуд садеЕСТтаста стдсастасс 300 ссдЕддддаає ддссЕсЯдЧса сччаєсаєсоод ддссадддса сасеЕддсвтас ддсдЕСССсСсС
З6о дсЕадсасаа адддссстад сдЕдсЕсссЕ седдссссса дсадсаадад сасаадсддас 420 ччваасадссу сссіддоассд ссеЕсдЕдаад дастасеЕссс ссдадсссаєс дасадеЕдссь 480 гддаасадсуд дадссстідас аадсддсуаєд сасассессс срдссоасдсІ дсададсадс ддассрдвасеЕ сссеЕдадсад сдсддІсасс деЕдсстадса дсадсстддд сасссадасс бо тасаєссдса асдсдаасса саадсссадс аасассааад гддасаадаа ддсддадссс бо аачдзадссдсд асдодсодада адддеЕссодда ддсодадчає ссдаддсдса дсесдстсддаа 720
ЕсСЕЧДдсоддсо дассддсдса дссгіддсоода ссЕСтсдадас єдадссдедс сдссадсдадс 780
Еессасссеса дсасстасудс саєдаасодд дсЕдсдссадда сссстгддсаа аддсседдаа 840 гдддсдЕсСсс ддаєсадаад саадсасаас аастасдсса сстастасдс сддасадсаєд 900 аадддссддЕ Есассаєссад ссдддасдас адсаадааса ссседсассо дсадаєдаас 960 адссідсддд ссддаддасас сдссдєдсас гтаєєдесЕдеЕдс доадасасоддсаа сЕссддсдсс 19020 ачдстасдеЕдеЕ0 сеЕСоЧдЕеЕссддс свтассддддс садддсассс ЕСЯдЕдчассЯдс дЕСВадсосе зо 1980 адеЕассаадд дссссадсдс дЕссссссгд дсасссадса дсаададсас аєссддсдада 1140 асадссдсес гудддсЕдЕСЕ ддєдааадас гасеЕсссссу адсссдєдас сакЧдесеє9 1200 аасЕссддсд сссідассад сддсдеЕдсас ассеЕссссад ссдЕдссдса дадсадсдадас 1260 сЕдвтассссс гЕДдЕССсСЕСсССсСдЄ ддесассуєбд сссЕСТадсо ссседддаас асадасатсає 1320 ассеЕдсааєсдд єсааєсасаа дссосссаас ассааадссд асаачдааадс сдадсссаад 1380 адсеЕдсдаса ааасесасас ардсссассд гбдсссадсас ссодаадсвєдс адддддассд 1440
ЕсадеЕсеЕссс ссЕєсссссс аааасссаад дасассстса єдаєссеьсссу дасссстдад 1500 чдЕсасаєсдся гЕдЧсдадсдда сдсдадссас даадассстд аддеЕсаадес саасєддсас 1550 чЕддасддса гдчаддеєдса баасдссаад асааадссодс доададдадса деасаасадс 1620
Зо5 асдтассдбд гддссадсудс ссісассуєс срдсассадча ассддссдаа єЄддсааддвад тасаадсдса аддсссссаа сааадсссоіс ддсдссссса Есдадаааас саєсессааа 1740 чдссааадддс адссссддада ассасаддєд басассстрдс ссссаєсдссо дчваєсдадсед 1800 ассаадаасс аддеЕсадсст дЕддЕдссвд дЕСаааддсес сстаєссссад сдасаєсд9сс 1860 чЕддачдсддд ададсаасдуда дсадссддад аасаасвраса адассасдсесс Есссагодстд 1920 часеЕссдасу дссссЕссЕс ссеСсСсасадс аадсссассд гддасаадад саддеЕддсад 1980 садддачаасч ЕСЕсСсСссаєсдуд сЕССЧдЕЧаєд саєдаддссс гдсасаасса стасасвсад 2040 аададссеЕсе сссдеЕсессс ддатсааа 2067 «2105 201 «2115 2067 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність
З0 0«2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 201 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕЯдЧЕ СсСЕддсаааас сдддсЯадЕЕС сстдсаєсвд бо адсЕдсдсд сЕсссоддарс сасссеЕсссс аасодсдєдда єдчадссдддІ Есдссаддсес 120 ссдддсааач дссоісдадсд чассддЕсЧЕ ассаадеЕсса ааасеєдасддд єддсассасд 180 чаєстасдсудд ссссадеЕєаа адздрсууєєьс ассаєеєсссс дсдасдасад сааааасась 240 сЕдвгаєстдс адаєдаассс ссеЕдаааасе даадасассуд садеЕСТтаста сеЕдсастасс 300 ссдЕддддаає ддссЕсЯдЧса сччаєсаєсоод ддссадддса сасеЕддсвтас ддсдЕСССсСсС
З6о дсЕадсасаа адддссстад сдЕдсЕсссЕ седдссссса дсадсаадад сасаадсддас 420 ччдаасадссу сссуддоассд ссЕСсСЧдЕДдаад дастасеЕсс ссдадсссдає дасадеЕдссь 480 гддаасадсуд дадссстідас аадсддсуаєд сасассессс срдссоасдсІ дсададсадс ддассрдвасеЕ сссеЕдадсад сдсддІсасс деЕдсстадса дсадсстддд сасссадасс бо тасаєссдса асдсдаасса саадсссадс аасассааад гддасаадаа ддсддадссс бо аачдзадссдсд асдодсодада адддЕссоода додсодадчає ссдаддсдса дсгдседдаа 720
ЕсСЕЧДдсоддсо дассддсдса дссгіддсоода ссЕСтсдадас єдадссдедс сдссадсдадс 780
Еессасссеса дсасстасудс саєдаасодд дсЕдсдссадда сссстгддсаа аддсседдаа 840 гдддсдЕсСсс ддаєсадаад саадсасаас аастасдсса сстастасоус сддасадсаєд 900 аадддссддЕ Есассаєссад ссдддасдас адсаадааса ссседсассо дсадаєдаас 960 адссідсддд ссддаддасас сдссдєдсас гтаєєдесЕдеЕдс доадасасоддсаа сЕссддсаас 19020 дсстасдеЕдеЕ0 сЕсоддеЕсєсдс сЕассддддс садддсассс ЕСЯдЕдчассЯдс дЕСВадсосе зо 1980 адеЕассаадд дссссадсдс дЕссссссгд дсасссадса дсаададсас аєссддсдада 1140 асадссдсес гудддсЕдЕСЕ ддєдааадас гасеЕсссссу адсссдєдас сакЧдесеє9 1200 аасЕссддсд сссідассад сддсдеЕдсас ассеЕссссад ссдЕдссдса дадсадсдадас 1260 сЕдвтассссс гЕДдЕССсСЕСсСсСЯєЄ ддессассодврд сссЕСТадсо ссседддаас асадасатсає; 1320 ассеЕдсааєсдд єсааєсасаа дссосссаас ассааадссд асаачдааадс сдадсссаад 1380 адсеЕдсдаса ааасесасас ардсссассд гбдсссадсас ссодаадсвєдс адддддассд 1440
ЕсадеЕсеЕссс ссЕєсссссс аааасссаад дасассстса гєдаєссісссу дасссстдад 1500 чдЕсасаєсдся гЕдЧсдадсдда сдсдадссас даадассстд аддеЕсаадес саасєддсас 1550 чЕддасддса гдчаддеєдса баасдссаад асааадссодс доададдадса деасаасадс 1620 асдтассдбд гддссадсудс ссісассуєс срдсассадча ассддссдаа єЄддсааддвад тасаадсдса аддсссссаа сааадсссоіс ддсдссссса Есдадаааас саєсессааа 1740 чдссааадддс адссссддада ассасаддєд басассстрдс ссссаєсдссо дчваєсдадсед 1800 ассаадаасс аддеЕсадсст дЕддЕдссвд дЕСаааддсес сстаєссссад сдасаєсд9сс 1860 чЕддачдсддд ададсаасдуда дсадссддад аасаасвраса адассасдес Есссагодстд 1920 часеЕссдасу дссссЕссЕс ссеСсСсасадс аадсссассд гддасаадад саддеЕддсад 1980 садддачаасч ЕСЕсСсСссаєсдуд сЕССЧдЕЧаєд саєдаддссс гдсасаасса стасасвсад 2040 аададссеЕсе сссдеЕсессс ддатсааа 2067 «2105 202 «2115 1323 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність
З0 0«2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 202 саддссдЕсЯ Едасссадда асссадсстд асадедЕСсс стддсоддсас сасдасссвд бо асаєдесддса деЕсстасадд сдссдеЕдасс ассадсаасоі асдссаастд ддсдсаддваа 120 аадсссддсс аддссоссад аддасеєдасєс додсддсасса асаачададс ссстрддсасс 180 сстгдссадає ссадсддаєс єСсгдстддда ддаааддссу ссстдасасе дЕСтддсдасс 240 садссадаач асчаддссда деастассдс дсссдЕдЧЕ асадсаассо дЕЧдодЕдсес 300 часоддаддса ссаадсрдас адсдсеЕдадс адсдссадса ссаадддсесс агсддЕссес
З6о ссссгддсас ссісссссаа дадсассосЕ дддддсасад сддсссгдд сЕдсстддЕсС 420 аадчассасе Ессссдаасс дадєдасддеєд ссдЕддаасоі саддсдсссІ дассадсддас 480 зов чдЕдсасассе ЕСсСссддстдеЕ сстасадессс ссаддасесс асссссссад садсдеЕдаЧвеЕд ассдсдссс ссадсадсеєс дддсасссад асстасасєсої дсаасдесдаа ссасаадссс бо адсаасасса аддсддасаа чааадеєсдад сссаааєссс дсдасаааас єсасасаєсдс бо ссассдсдсс садсассода адссдсаддд ддассдесад єсСЕЕссесес ссссссаааа 720 сссааддаса сссісаєсдаєс сЕССсСсддасс ссеЕдаддеса саєсдсаяасдаєс дасдодасаед 780 адссасдаач асссеЕдаддс саадсеєсаас соддеасдеда асддсадаєсдда ддеєдсахсаає 840 дссаадасаа адссдсддда ддадсадсас аасадсасчє ассєаєддЕ садсуєсстс 900 ассдЕсстдс ассаддассд дсгдаасдудс ааддадеаса адсдсааддс сеЕССаасааа 960 дсссісддсуд сссссаєсда даааассаєс сссааадсса аадддсадсс ссдадаасса 19020 саддедсаса сссрдссссс аєсссдддаає дадссдасса адаассадді садсстрдасс зо 1980 гдссрддеєса ааддсессста ссссадсдас ассдссдєда адсдодоададад саасддадсад 1140 ссддадааса астрасаадас сасдсестссс дЕдстддасеі ссчасудвсесес сьестсссяс 1200
Гасадсаадс єсассдєдда саачадсадд сбддсадсадча ддаасдсєсес сесаєдсссс 1260 чЧЕдаєдсаєсд аддсеЕссдса саассастас асдсадаада дссЕСссссЕЕ дЕСЕСССЯдддвЕ 1320 аваа 1323 «2105 203 «2115 681 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 203 зо9 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕЯдЧЕ СсСЕддсаааас сдддсЯадЕЕС сстдсаєсвд бо адсЕдсдсд сЕсссоддасєс сасссеЕсСссс аасодсдєдда єдчадссдддІ Есдссаддсес 120 ссдддсааач дссісдадсд чассддЕсСЧЕ ассаадеЕСсСса аааседас єЄддсассасд 180 чаєстасдсудд ссссадеЕєаа адздрсууєєьс ассаєеєсссс дсдасдасад сааааасась 240 сЕдвгаєстдс адаєдаассс ссгдаааасі даадасассуд садЕСТаста сеЕдсастасс 300 ссдЕдададаає дадссЕсЯдЧва счаєсаєсддда ддссадддаса сстЕддевас дасдесссс
З6о
ЧдсЕадсдєду ссЯсЕсСссСЕС сдЕдЕЕсСаєюс сссссассос ссдасчадса дссдаадссс 420 часассусеЕс срдссусЧвЯа сседсеЕдаас аасеЕсстасс сссдсдаддадс сааддедсад 480 гддааддсдд асаасдсесст дсадсссоддс аасадссаду аасссаєдас сддадсаддас 540
Ессааддаса дсасстасес ссрЕдЕсссІсс ассстдассс сдсссааддс сдчастасчад бо 20) аадсасаадд Едсасдсствд сдаадедасс сассадддсс гбдДдЕСсСтадссс сасбдассаад бо
ЄсСЕЕсСсаасс доадасдадед с 681 «2105 204 «2115 693 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 204 чаадсдсадс гдссддаасс сддсододадча срддсдсадс сгддсодадаєс ЕСЕсдЧдЧадасед бо гЕсСЕвЧ9ЕдссСЯ ссссуддсеє сасссеєсссс асстасдсса ЕдаассдддІ дсдасаддсе 120 ссЕддсаадчд дссгіддаасд ддсдссссдд ассадаєсса адсасаасаа стасдссасс 180 тасврасдссу асіссдєдаа дддссоддЕсс ассасфсессс доадасдасес саадаасасс 240 сЕдвасстдс адчаєдаассс ссгдсдддсс даддасассуд ссдЕдстаста єЕЕДдсдЕдЧс9о сасддсаасе ссддсаасес стасусуєсєсЮ сєддаєссдссІ асгсддддсса ддадсассстс
З6о чЧЕдассдрєдеЕ сасстдссад ссссааддсеЕ дсссссадсуд Едассстдеьс єссссссадс 420 адсдаддаас гдсаддссаа сааддссасс сіддЕсЕдсс Едаєсадсда сеЕсствассса 480 часдссдєда ссдсддссод дааддссдас адсадссссд Едааддсс садсддвадасс 540 ассассссса дсаадсадад саасаасаад сбасдссдсса дсадссассо дадсстдасс бо сссдадсадсі ддаададсса саддеЕсстас адсгсдссадд сдасссасда дддсадсасс бо чЧЕддадчаааа ссдсддсссс сассдадесдс адс 693 «2105 205 «2115 327 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 20) «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 205 садассдесЯ Едасссадда асссадсстд асадедЕСсс стддсддсас сасдасссвд бо асаєдеддса дЕЕстасаддад сдссуєдасс ассадсаасої асдссаастд ддеЕдсадсад 120 аадссаддсс аддсссссад аддаседаєс ддсддсасса асдссададс ссседдсасс 180 ссгЕдссадає єсадсодчасєс сстЕдсЕддда ддаааддссд сссеЕдасасі дяЕСТсддадсаЕд 240 садссідаач асдчдаддссда деасстасрдс дссстідеЕдЧдс асадсаассо дЕдоддЕдЧеЕс 300 часддаддса ссаадссдас адесста 327 «2105 206 «2115 327 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 206 садассдесЯ Едасссадда асссадсстд асадедЕСсс стддсддсас сасдасссвд бо асаєдесддса деЕсстасадд сдссдеЕдасс ассадсаасоі асдссаастд ддсдсадсад 120 аадссаддсс аддсссссад аддаседаєс ддсддсасса асаадададс ссседдсасс 180 ссгЕдссадає єсадсодчаєс ЕСЕдсЕдоода дддаааддссд сссеЕдасасі дяєЕСТсддадсаЕд 240 садсстеЕдаад асдаддссда дстастасрдс дссстдсддЕ асдссаасст ддадЧаєаєс 300 часддаддса ссаадссдас адесста 327 «2105 207 «2115 366 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність
Зо «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 207 чаддєдсаає єдЧасоддааад сддаддсддс сіЕсдсдаадс сгддсоадаєс ЕСЕьСдЧдЧадасевд бо адстдедссуд ссадсуддсеєс сассеЕссадс аасдсестдда сдсасрддЧдє дсоассаддес 120 ссгЕддаааач дасссдадсд ддсдоддасду ассаададса адассдаєдда сддсассасс 180 частаєдссд сссстдсдаа дддссддЕсс ассассадса додоадасдасад саадаасасс 240 сЕдвассрдс адасєдаасад ссгідаааасс даддасассд ссдеЕдсаста седсассасс 300 сссЕддЧчадеЕ ддссЕсЯдЧдва сдастаєсодд ддссадддса сссеЕсдєдас сдЕдеЕссесье
З6о дстадс
Збб «2105 208
«2115 366 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 208 чаддєдсаає єдЧасоддааад сддаддсддс сіЕсдсдаадс сгддсоадаєс ЕСЕьСдЧдЧадасевд бо адсЕдсдссу ссадсддсесс сасссеЕсадс аасдсстдда єдчадссдддІ дсдссаддесс 120 ссгЕддаааач дасссдадсд ддсдссссодд ассаачадса адассчдаєдуа сддсассасс 180 частаєдссуд сссстдесдаа дддссддеЕєс ассаєсадса дддасдасад саадаасасс 240 сЕдвассрдс адасєдаасад ссгідаааасс даддасассд ссдеЕдсаста седсассасс 300 сссЕддЧчадеЕ ддссЕсЯддса сдастаєсодд ддссадддса сссеЕсдєдас сдЕдеЕссесье
З6о чсЕадс зо Збб «2105 209 «2115 366 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 209 чаддєдсаає єдЧасоддааад сддаддсддс сіЕсдсдаадс сгддсоадаєс ЕСЕьСдЧдЧадасевд бо адсЕдсдссу ссадсддсесс сасссеЕсадс аасдсстдда єдчадссдддІ дсдссаддесс 120 ссгЕддаааач дасссдадсд ддсдддассе ассаададса адассдасдд сддсассасс 180 частаєдссд сссстрдсдаа дддссддо сс ассассадса дододасдасад саадаасасс 240 сЕЧдтасстдс адаєдаасад ссгдаааасс даддасассу ссуаєсдсаста срдсассасс 300 сссЕддЧчадеЕ ддссЕсЯддса сдастаєсодд ддссадддса сссеЕсдєдас сдЕдеЕссесье
З6о чсЕадс
Збб «2105 210 «2115 366 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 210 чаддєдсаає єдЧасоддааад сддаддсддс сіЕсдсдаадс сгддсоадаєс ЕСЕьСдЧдЧадасевд бо адсЕдсдссу ссадсддсес сасссеЕСсадс аасдсстдда єдчадссдддІ дсдссаддесс 120 ссгЕддаааач дасссдадсд ддсдоддасду ассаададса адассдаєдда сддсассасс 180 частаєдссд сссстдсдаа дддссддЕсс ассассадса додоадасдасад саадаасасс 240 сЕЧдтасстдс адаєдаасад ссгдаааасс даддасассу ссуєсдтбаста срдсассасс 300 ссстасчадеЕ ддссЕсЯддса сдассассддд ддссадддса сссеЕсдєдас сдедеЕсаєсь
З6о чсЕадс
Збб «2105 211 «2115 366 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 211 чачаєсдсаає сддЕддааад сододаддсддс сЕСдЕдаадс сеЕддсдчаєс сстЕдчадастд бо адсЕдсдссу ссадсддсесс сасссеЕсадс аасдсстдда єдчадссдддІ дсдссаддесс 120 ссгЕддаааач дасссдадсд ддсдоддасду ассаададса адассдаєдда сддсассасс 180 частаєдссд сссстдсдаа дддссддЕсс ассассадса додоадасдасад саадаасасс сЕдвассрдс адасєдаасад ссгідаааасс даддасассд ссдеЕдсаста седсассасс 300 сссгЕдддаде асісеЕсддса сдассассдуда ддссадддса сссеЕсдєдас сдудеЕСаєсь
З6о дстадс
Збб «2105 212 «2115 366 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 212 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадд чдЕСЕЧддааєд даєсдддасаєс аєсаасссаа дсуддеЕддсеЕсС тасстсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає аседсадрдес ассасрдедс асдсаастас 300 астассуєсд єсссЕССЯЄЄ сддастаєсодд ддеЕСааддса сссеЕСЯЇєЄВас ядеЕсессессь
З6о чсЕадс
Збб «2105 213 «2115 366 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 213 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдваддсодсЕєсС сассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссадддссд сдесасдаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассаєєтсає 240 аєдчадстдеЕ ссадсстдсд єЕссСЕдаадає астдсадсдс астасерддсдс асдсаастас 300 еЕсассудеЕс,Ю срдсвдстає ддасстаєсодд ддеЕСааддса сссеЕСЯєЄВас ядеЕсессессь
З6о чсЕадс
Збб «2105 214 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 214 саддсдсаає ЄддЕссааєс єддЕдстдаа десааааааас сдддсдсесеєс сдесааачтід бо адсеЕдсааач сасссддаса сассеєесасеЕ ссстаєстаса єдсассдддс Есдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 асддадседеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає асеЕдсадеЕдс асстастдедс асдсдЧчестд 300 асеЕстасеєста гсоддастаєєд дддеЕсааддс ассссуєтаа СЯДЧЕСЕСЕЄСсС годстадс 357 «2105 215 «2115 342 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 215 чавгассєдеЕса єдасеЕсааєс сссастЕдссеЕ седссддеЕда сіссаддсда ассддсдадс бо асЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСсд сасессаасуд дссасааста ЕСЕсСсСдаєссда 120 тассрдсааа аассддадсса дадсссісад седстдчаєсс асседддсеЕс Єаассдсдсе 180
ЕссуддеЕдстас судассддєсс садсуддсеЕстІї ддасєссддса ссчдаєтєєссас деЕєдаааатс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсУаєЕ сбаєстаседса єдсаддсасоі дсадаєссса 300 аасасЕсесд десааддсас сааддеЕсдаа ассааасдта сд 342 «2105 216 «2115 354 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 216 чачаєсдсаає ЄЧдФЕєЧОдадеЕС єдддддаддс Еєддтасадс сЕддддддеЕсС сстеЕдадастьс бо
ЕссЕдєдсад ссіссоддасє сассстерадс адеЕваєдсса ЕдадстдддЕ ссдссаддсе 120 ссаддчаадч доассддадсд ддЕсссадсеЕ ассвтадсдадсра дсддЕддсад сасаєастсас 180 чсачзасссся Едаадддссд дЕеЕссассаєс сссададаса ассссаадаа сасдсеєдтсає; 240 сгдсачаєда асадсстодад адссдаддас асддссдтає асссасєдеєдс дааасасдсе 300 тасдсеЕстддд астассдддд ссааддаасс стддесассу сЕсдадесдс гадс 354 «2105 217 «2115 327 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 217 чааассдєдеЕ гаасдсадесс єССсСаддсасс сЕдСссЕеЕсдЕ сіЕссадддда аададссасс бо сЕСсСЕСЕсдса дддссадсса дчадесдеЕсадс адсадстасе гадссгіддва ссадсадааа 120 ссЕддссадд сісссаддсс ссесаєстає додадсаєсса дсадддссас єддсаєссса 180 часаддеЕсса дсддсадеду асссддадаса дасессасес ссассаєсад сачассодад 240 ссЕдаачаєє еЕсосадесдса сврассдесад садсаєсддса дсадсадсас дЕсСсддссад 300 чадассааач гєддааассаа асчдрасд 327 «2105 218 «2115 366 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 218 саддсдсаає ЄддЕссааєс єддЕдстдаа десааааааас сдддсдсесеєс сдесааачтід бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕСсСсоддааєд дасдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадчає аседсадеЕдес ассассдедс асодсддасдас 300
ЕЕСЕСТЯДСтЯ ЧдЕСЯдДЕСтДЯдає ддастаєвсдуа ддссааддса сссусудєсаас дассссесяе
З6о чсЕадс
Збб «2105 219 «2115 345 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 219 чавгассєдеЕса єдасеЕсааєс сссастЕдссеЕ седссддеЕда сіссаддсда ассддсдадс бо асЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСсд сасессаасуд дссасааста ЕСЕсСсСдаєссда 120 тассрдсааа аассдддеса дадсссісад сеЕдседаєссті асстдддсес гаассдсдасе 180
ЕссддеЕдвас соодчассЯясеЕс садсуддсссЕ ддаєссддса ссдарсссас дЕсДдааааєс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсуаєЕ сбаєстаседса гєдсаддсасоі дсадасссса 300 ссааєсстассеє ЕсддЕСаадд сассааддес дааассааас дсасд 345 «2105 220 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо полінуклеотид" «4005 220 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс єсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 аєдчадстдеЕ ссадсстдсд єЕссСЕдаадчає астдсадсде астаседсдс асдсдвдедас 300 гасаасудсес єсдчастаєс дддссасддс ассссдеєаа СЯДЕЕЕСЕЕСсС сдсгадс 357 «2105 221 «2115 339 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 221 чавгассєдеЕса єдасесаарс єссастЕдссе сеЕдссддеЕда сіссаддсда ассддсдадс бо асЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСсд сасессаасуд дссасааста ЕСЕсСсСдаєссда 120 тассрдсааа аассдддеса дадсссісад сеЕдседаєссті асстдддсес гаассдсдасе 180
Ессддеєдвас соодчассЯяссс садсуддсссЕ ддаєссддса ссчдаєсєссас деЕсдааааєс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсУаєЕ саєстаседса єдсаддсаєда дсасадссса 300 асЕЕссддеЕс ааддсассаа ддеЕСЧчаааєсс ааасдсасд 339 «2105 222 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо полінуклеотид" «4005 222 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕСсСсддааєд часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 аєдчадстдеЕ ссадсстдсд єЕссСЕдаадає астдсадесде астаседсдс асдсдедсь 300 асЕвасаста гддчастаєсд дддссааддс асссісдєаа сСЧдЕСсЕссСЕссС сдсгадс 357 «2105 223 «2115 342 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 223 чавгасєдеЕса єдасеЕсааєс сссастЕдссеЕ сеЕдссоддеЕда сіссаддсда ассддадасдадс бо асЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСсд сасессаасуд дссасааста ЕСЕсСсСдаєссда 120 тассрдсааа аассдддеса дадсссісад сеЕдседаєссті асстдддсес гаассдсдасе 180
Ессддеєдвас соодчассЯяссс садсуддсссЕ ддаєссддса ссдарсссас дЕсДдааааєс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсуаєЕ сбаєстаседса гєдсаддсасоі дсадасссса 300 асвтасЕсесд деЕсааддсас сааддеЕсдаа ассааасдта сд 342 «2105 224 «2115 1344 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо полінуклеотид" «4005 224 саддесдсадс гдсадсадсс сддсодссдад сісдсдааас сіддсдссЕС сдасдаадаєс бо адсеЕдсаадд ссадсддсса садссесасс додстасесса єдаассдддІ саадсададс 120 сасддсаада дссіддаасд чассддсада асссассссо асдасддсда сассеєсстас 180 аассадаасе сСсааддасаа ддссассстд ассдсддаса ададсадсаа сассдсссас 240 аєддаастдс сдадсстрдас садсдаддас єЕЕСсСдссудєрдЕ астасрдсас садатсасдас 300 часадссддчд ссасдчаєса сЕддддссад ддсассассдд ЕдасадсдеЕс садсдстсадс
З6о ассаадддсес ссіссдсдеЕс сссссрддсс сссадсадса ададсассад сддсддсаса 420
ЧдссодсЕсСвдЧа дседссрдде саадчдасстас ссссссдадс ссдеЕдассЯдс дЕССвєддаас 480 адсддадссс Едассіссдда сдесдсасасс ссссссдссдя гдсеЕдсадад ЕЕСсдоадссвд 540 таєадсседа дсадсдсддс сассдеЕдссЕ ссвадсадсс гдддсассса дасстасаєс бо гдсаасдаєда ассасаадсс садсаасасс ааддсддаса адчааддсдда дсссаададс бо гдсдасаааа ссісасасаєсуд сссассдсбдс ссадсассод аадсеєдсаддд ддадассааєсса 720 дЕСЕСсСсСЕсСе ЕСсссссааа асссааддас асссісаєда ЕСссссддас ссседадачіс 780 асаєдсчдєда гЕдЧдсддасді дадссасддаа дасссідадд ЕСсаадесссаа сЕддеасаед 840 часддсдєда аддсдсасаа сбдссаадаса аадссдсд9дд аддадсадта саасадсасд 900 тассдрєдсдд ссадсдеЕсст сассдісстд сассаддасої ддссдаасдд сааддачтас 960 аадедсаадд ЕСсСЕсСсаасаа адсссесддс дсссссаєсд адаааассає сеЕссааадсс 19020 ааадддсадс сссддадаасс асаддеЕдсдс ассстідсссс саєссссдддаа Єдадседасс 1980 аадаассадд єсадссоіссс деЕдсдсадес аааддсеЕсі ассссадсда сассдссдаед зо 1140 чадеЕдддада дсааєдддса дссоддадаас аастрасаада ссасдсессеЕсс сдсдстгддвас 1200
ЕссчдасддасеЕ ссЕєСЕЕсСсС сдєдадсаад сеЕсассуєсдуд асаададсад дсддсавсад 1260 чадаасчдеєсе ЕСЕСсСасрдсес сдєдаєдсає даддссстьдс асаассаста сасдсадаад 1320 адссессссс гдЕСЕССЯОд бааа 1344 «2105 225 «2115 2073 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 225 саддсдсадс сдсадсадес єддсдссдад сеЕСсдЕдааас сеЕддсдсессесС сдєдаачатсс бо адсеЕдсаадд ссадсддсса садссесасс додстасесса єдаассдддІ саадсададс сасддсаада дссіддаасд чассоддсада асссассссо асдасддсда сассеЕестас 180 аассадаасе сСсааддасаа ддссассстд ассдсддаса ададсадсаа сассдсссас 240 аєддаастдс сдадсстдас садсчадчас сєЕсдссуєЧЯєЄ астассдсас садатсасдас 300 часадссддчд ссасдчаєса сЕддддссад ддсассассдд ЕдасадсдеЕс садсдстсадс
З6о асааадддсс ссадсєдеЕс сссісЕддсс сстрадсадса ададсасаєс єддсддааса 420 дссдссстда дсгдссісде даадчдасстас ЄЕЕССсССсСдадс сЕдЕЧдассЯяєс дЕССтодаас 480
ЕсЕддсудссс Едасаадсудд сдсдсасасс ссЕсСсадссдя гдсЕДдсадад садсддассед 540 тасЕсеЕстда дсадсдеддІ сассдідссІ адсадсадсс гдддсассса дасстасатєс бо гдсаасдаєда ассасаадсс садсаасасс ааадсддаса ачдчааддсдда дсссаададс бо 20)
ЕдЕЧчаєдоасу даддадддеЕс сододаддсдда ддасссдаад сдсадстддеЕ ддааадсдадс 720 ччаддсстда Едсадссстаа доддсссЕссд аадссдадсе дсдссдссад сддсеєсасс 780
Еессаасассо асодссаєсдаа сЕдддЕдсдс саддсссстд дсаааддсс ддааєдоаЧчед 840 дсссддаєсса даадсаадса саасаассас дссасстасо асодссдасад сдєсдаадчдас 900 саддЕссасса гсадссоддда сдасадссад адсассстдс асседсадає даасаассвд 960 ааггассдадд асассдссаєс деассасрдс дегЕдсддсас дсаасессдд саасадстає; 19020 чЕдЧЕСЕСоЯЯдДЕ Есодсстасод дддссадддс асссісдеєда садеЕдсстдс єдссадсатд 1980 дссодсЕсссеЕ ссардрссас сеЕссссссса сссодааєдаас адсеєдаааад сддсассдсс 1140 гЕсСсСуассСудсудє дЕСЕдСсСЕДдаа саарєєєвтас сстадддаад стааадсдса дчеддааачЧчтд 1200 чаєаасдсас гдсадсссдда саасссссад чдаасєссдеЕда садаасадда сеЕссааддас адсасстасе сссудсссеЕсС сассстдаса седеЕСстаадд ссдаєсаєда дааасасааа 1320 дЕСтасудссо дсдаадссас ссассадддс сідадсеЕсдс ссдЕСасааа дадсеесаас 1380 адчадвчададсі дсдасаадас ссасасстдс сссссЕгудЕсС сеЕдсссстда адстдстддс 1440 досссЕссгрЧа гДЕссСсрдсс ссссссааад сссааддаса ссседаєсдає садссоадасс 1500 сссдаадеда ссідсодасодЧдЕ доагододчаєдеьд ссссасдадча асссеЕдаадс даадееєсаає 1550 гддрасдєда асддсдєдда адсдсасаас дссаадасаа адссдсддда ддадсадсас 1620 аасадсасдє ассдЕдсдудс садсдеЕсСстьс ассдссстьдс ассаддастд дседаасдас 1680 аадччадсаса адесдсаадді сІссаасааа дсссЕсддсуд сссссаєссда даааассатєс 1740
Ессааадсса аадддсадсс ссдадаасса саддсдбаса ссседссссс агдссдадває 1800 20) чадссдасса адаассаддс садсстЕдсдд сдсстддЕса ааддсесста Еєсссадсдас 1860 ассдссдєда адсдддадчад саасдддсад ссддадааса ассасаадас сасдсстіссс 1920
ЧЕдссддасе ссчасуддссєс сЕссСсЕССЕСсС сасадсаадс ссассодєсдда саададсадд 1980 гддсадсадуд ддаасдрсеЕс стсаєдсесс деЕЧдчаєдсаєд аддссстдса саассастас 2040 асдсачаада дссссссссЕ дЕСЕССсСддЧдЕ ааа 2073 «2105 226 «2115 654 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 226 часассдадс єдасссадад сссудссссЕ сЕддссдЕдЕс сЕСєдддаса дададссаєс бо ассадссдса аддссадсса чдадсдеЕдссс сЕгЕдссддса ссісЕСТЄСЯдає дсасеєдатсає сассадаадс ссддссадса дсссаадсвд сеЕдаєстаса дадссадсаа ссрддаадсс 180 часдсдссса саачарсссс сддсадсддс адсаачассдд ассесасссі даасаєссас 240 сссдсддаач аачаддасдс сдссасстас сбасрдссадс ададсадада деасссстас 300 ассЕссоддсо даддсассаа дсгддааасс аадсдбрасудд ЕддсЕДдсасс асстдеЕСстс
З6о арсЕссссодс сасєстдчаєда дсадсеЕЧдааа ссеЕддаасьд ссостудстає дЕдСсСтЧдСсвд 420 аасаасеЕсст ассссадада ддссааадса садсоддаачу бддасаасодс сстіссааєс9 480 чдабаассссс адчачадсдс сасададсад дасадсаадд асадсасста садссесадс 540 адсассстрда содссдадсаа адсачассас дадааасаса аадЕСсСстасдс сЕдсдаадес бо асссаєссадд дссідадссс дсссдеЕсаса аададсеєєса асаддоаоадада адЕде зо 654 «2105 227 «2115 209 «212» Білок «213» Ношто варієепв «4005 227
Атуд чІїе Аїа Тгтр Аїа Акуд ТПтї сід Гей Гей Авп Уаї! Сув Меє Авп А1а 1 5 19 15 пуз Ніз Нів ув Сі пув Рго СсС1у Рго сбіц Азр Гуз ІТец Нів сіц сіп 20 25 30
Сув Акд Рко Тгр Агд Гуз Авп Аза Сув Сув бБет ТПтІ Авп ТПт бек сіп 35 40 45
Сі Азїа Ніз пув Авр Уа! бек Тут Гїец Тугк Агд Рібе Авп Тгр Авзп Нівз зо бо 50 Сув сСі1у бі Меє АТїа Рго Аїа Сув Пув Агуд Нів Рпе І1е СсС1іп Авр ТЕГ 65 70 75 80
Сув Гецп Тут сі Сув бек Рго Авп Гей С1іу Ркго Тгтр І1е Сбіп біп Уаї1ї 85 30 35
Авр біп бБет Тгр Акд пув сі Акуд Уаї Ггецп Авп Уаі1! Рго Тец Сув Гув 1600 195 110 січ Авр Сув бі біп Тгр Тгр січ Авр Сув Агуд Тбг о бет Тут ТПкг Сув 115 120 125 пуз бБег Авп Тгр Ніз пув біу Тгр Авзп Тгр ТПг бетг біу Роре Азп Гуз 130 135 140
Суз Аїа Уаї с1у Аїа Аїа Суз Сіп Рго Рбе Нів Рібе Тут Ріе Рго ТПг 145 150 155 160
Рго ТПкг Уаї їец Сув Авп бі І1ї1е Тгр ТПк Нів бет Тут пув Уа1ї 5Бег 165 170 175
Авп оТут бБет Агд сіу бек сіу Агуд Сув Іїе сбіп Меєс Тгр РпПе Авр Ркго 180 185 190
Аза біп б1у Авп Рго Авп сід бі Уаі Аза Агу Рпе Тут Аза Аїа А1а 195 200 205
Меєс «2105 228 «2115 214 «212» Білок «213» Ното зарієпв «4005 228
ТПх Меє Сув бБет Аїа біп Авр Агуд ТПхг Авр Тец Гец Авп Уаі1і Суз Ме 1 5 10 15
Зо
Авр Аза Гпуз Нів Нів Кпуз ТПг пув Рго С1у Рго Сі Авр Гуз Ієц Нівз 20 25 30
Авр біп Сув Бек Рго Тктр пув Гпув Авп Аїа Сув Сув ТПт Аїа бет ТПг 35 40 45 бек біп б1іцш їец Нів Пув Авр ТП бетг Агд Гей Тут Авп Роіе Авп Тгр 50 55 бо
Авр Нів Сув с1у пув Мес сС1іц Рго А1ї1а Сув їув Агуд Нів Рпе І1е Сс1іп 65 70 75 80
Авр ТПІ Сув Гецп Тут сіц Сув бБет Рго Авп Гей біу Рго Тгр І1е сіп 85 Зо 95 біп Маі Авп о біп бБет Тгр Акд пув бі Агд Рбе Гей Авр Уаії! Рго Іец 100 105 110
Сузв був бі Авр Суз біп Агд Тгр Тгр бі Авр Сув Нівз ТПг бег Нівз 115 120 125
ТПЕ Сув пув бБетг Авп Тгр Нів Агд СсС1у Тгр Авр Тгр ТПтІ бек СсС1у Уаї 130 135 140
Авпопув Сув Рго Аїа сС1у Аїа Іїец Сув Акд ТПх Рібе сіц бек Тук РіГе 145 150 155 160
Рго ТПг Рго Аїа Аїа їец Суз Сі б1у Гїец Тгр бет Нів бБет Тут Гув
165 170 175 уаї бБет Авп Тут бБет Акуд сіу бБет б1у Атуд Сув Іїе сіп Меє Ткр РПе 180 185 190
Авр бБехт Аїа сіп с1і1у Авп Рго Авп бі бі Уаі Аза Агд Рпе Тут А1а 195 200 205
А1а А1ї1а Ме Нів Уаї1ї Авп 210 «2105 229 «2115 220 «212» Білок «213» Ното зарієпв «4005 229 зехт А1ї1а Агд Аза Агуд ТПх Авр Гей Гей Авп Уаі Сузв Меєс Авп А1їа Гуз 1 5 10 15
Ніз Нівз пув ТПт біп Рго бБет Рго Сі Авр С1п Гей Тут С1у с1іп Сув 20 25 30 бек Рго Тгр гув пув Авп Аїа Сув Сув ТПтІ Аїа бек ТПт бек біп б1ц 35 40 45
Пец Ніз пув Авр ТПт бек Агд їец Туг Авп Рібе Авп Тгр Авр Нівз Суз 50 55 бо сі1у пув Меє сі Рго ТПг Сув Тув Агуд Нів Робе І1ї1е сСіп Авр бег Сув 65 70 75 80
Те Тут сіц Сув бек Рго Авп Гец біу Рго Ттр І1е Акд сіп Уа1ї Авп 85 Зо 95 біп бехт Тгтр Агд Гув сіц Акуд І1е Гец Авп Уаї Рго їец Сув Гув б1ц 100 105 110
Авр о Сув біц Агуд Тер ТкЕр бі Авр о Сув Атуд ТБПт бет Тут ТПт Сув Гув 115 120 125 бек Авп Тгр Ніз пув біу Тгр Авзп Тгр ТПІ бег Сбіу І1їе Авзп с1іц Сув 130 135 140
Рго Аїа сСіу Аїа Гей Сув бБет ТПтї Рпе Сіц бег Тут РПе Рго ТПк Рго 145 150 155 160
А1ї1а Аза їеец Сув сбіц сС1у їец Тгр Бех Нів Бек Рре Гуз Уаї1ї бБетг Авп 165 170 175
Тук бБет Акуд сіу бек С1у Агуд Сув Іїе біп Меє Тгтр Рпе Авр 5ех Аїа 180 185 190 біп б1у Авп Рго Авп о сіц сі Уаї Аїа Гуз Рпе Тут Аїа Аїа Аїа Меє 195 200 205
Авп Аїа сб1у Аїа Рго бБет Акуд с1і1у І1е І1е Авр бег 210 215 220
«2105 230 «2115 208 «212» Білок «213» Мив тивси1ив5 «4005 230
ТЕ Агд Аза Агуд ТБПтї Сі Гей ТГец Азп Уаї Сув Меє Авр Аїа Гуз Ніз 1 5 10 15
Ніз пуз січ Пув Рго Сіу Рго С1іц Авр Авп Тїєц Нів Авр с1іп Сув 5бег 20 25 30
Ркто Ткгр Гуз ТПх Авп о бек Сув Сув бБет ТПтІ Авп ТПтІ Бек сіп с1ц Аїа 35 40 45
Ніз пузв Авр І1їе бек Туг Гей Тут Агуд Робе Азп Тгр Авп Нів Суз 01У 50 55 бо
ТІ Месє ТПЕ бек сі1ц Сув Пув Агуд Нів Рпе І1е СсСіп Авр ТПг Сув Іец 65 70 75 80
Тук січ Сув бБет Рго Авп Ге біу Рго Тгтр Іїе біп сіп Уаі Авр сіп 85 Зо 95
Ззек Тгр Агд Гуз бі Агуд Іїе Гей Авр Уаї Рго Гецй Сув Гув с1ц Авр 100 105 110
Сув сіп сіп Ткр Тгр бій Авр Сув біп бек бет РПпе ТПІ Сув пув бек 115 120 125
Авп оТгр Ніз пув с1іу Тгр Авп Тгр бБехт бег с1у Нів Авп сб1ц Сув Рго 130 135 140 уаї сб1у А1ї1а Бек Сув Нів Рго Робе ТПг Рпе Тугк Рпе Ркго ТПтІ бег А1а 145 150 155 160
А1ї1а теп Сув бі сіц І1е Ткр бБет Нів бБетг Тут Кпув Гїец бек Авзп Туг 165 170 175
Ззехт Агд біу бек б1у Акуд Сув Іїе сіп Меє Тетр Рпе Авр Рго Аїа сіп 180 185 190 сб1у Авп Рго Авп о сбіц сід Уаі Аїа Акуд Робе Тут Аїа біц Аїа Меє 5ег 195 200 205 «2105 231 «2115 213 «212» Білок «213» Масаса Гавсісціагів «4005 231 бі Аза сбіп ТПгІ Агуд ТБт Аза Агуд Аїа Акуд ТП бій Гей Гей Авп Уаї 1 5 10 15
Сув Мем Авзп Аїа Гуз Нів Нів Кпуз Сі Пув Рго Сіу Рго б1п Авр Гуз 20 25 30
Пец Ніз сі б1іп Сузв Агд Рго Тгр Гув Пув Авп Аїа Суз Сув бет ТЕГ 35 40 45
Авп о ТПт бек біп сіш АТа Нів Туз Азр Уаі1! Бех Тут Гец Туг Агд РБГе 50 55 бо
Авп оТгр Азп Нів Сув С1у біц Меє АТїа Рго Аїа Сув Гуз Агд Нів РіГе 65 70 75 80
Іїе біп Авр ТПг Сув Ге Тук сіц Сув Бек Рго Авп Гей с1у Рго Тгр 85 Зо 95
І1їе сбіп сіп Уаі Авр сіп бет Тгр Агд Гуз бі Агкд Уаії Тец Авп Уаї 100 105 110
Рко Ггецп Сув гув бі Авр Сув бій Агуд Тетр Тгтр б1п Авр Сув Акд Ток 115 120 125 бек Тук Сув Ппуз бек Авп Тгр Нів Пув с1у Тгр Авп Тгр ТПгт бехг 01У 130 135 140
Рпе Азп Гув Сувз Рго Уаї сС1у Аїа Аїа Суз Сіп Рго Рбе Нів Ре Туг 145 150 155 160
Рпе Рко ТПтІ Рго ТПх Уаії Гей Сув Авп обіц Іїе Тгр ТПтї Тут бек Туг 165 170 175 туз Уаії бБет Авп Тут бек Агуд біу бек Сб1у Агуд Сув Іїе сіп Меє Тгр 180 185 190 зо
Рпе Авр Рго Аза біп б1іу Авп Рго Авп біц бід Маі Аїа Акд РоПе Тук 195 200 205
Аза Аїа Аїа Месє 5ег 210 «2105 232 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 232
Рго Тгр бі Тук бек Ттгр Тут Авр Туг 1 5 «2105 233 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 233
Авп оТут ТПтїІ Іїе Уаії Уаї бБет Рго Рпе Авр Туг 1 5 10 «2105 234 «2115 11 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 234
Авп Тут Рпе Іїе сіу бБет Уаії А1їа Ме Авр Туг 1 5 10 «2105 235 «2115 8 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 235 сі1у Гей ТПІ Тут Бек Меє Авр Туг 1 5 «2105 236 «2115 9 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 236
Меєсє сіп Аїа Гецп сіп чІ1е Рго Авп Тк 1 5 «2105 237 «2115 7 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид"
«4005 237
Тут Аїа Тут А1ї1а Гецп Авр Тукг 1 5 «2105 238 «2115 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 238
Сіп б1іп Ніз сС1у бБетг бБет бек ТЕГ 1 5 «2105 239 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 239 сС1у Авр Рпе бБег А1ї1а с1у Агд Іїец Меє Авр Туг 1 5 10 «2105 240 «2115 10 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 240
Мекє сіп Аза Ге сіп ТПг Рго Рго І1е ТПг 1 5 10 «2105 241 «2115 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 241 с1у Авр Тут Авп Аїа Рпе Авр Туг
1 5 «2105 242 «2115 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 242
Меє сб1іп АТа Ткр Ніз бек Рго ТПг 1 5 «2105 243 «2115 8 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 243 с1у Аїа ТПІ Тут ТПтІ Меє Авр Туг 1 5 «2105 244 «2115 9 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005» 244
Меєсє сіп Аїа Гецп сіп ТБПг Рго І1е Тік 1 5 «2105 245 «2115 227 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 245
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Сбіц Іец Ієцш 01У 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сіц Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз 35 40 45 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 50 55 бо
Нів Авп о Атїа Ггув ТПкг Гуз Рго Агд сі сі сб1п Тук Авп бек Тіт Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 Зо 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза Тецй Рго Аїа Рго Ше 100 105 110 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агуд Авр бій Гей ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140
Тецп ТПг о Сув Ггец УМаї Гуз с1у Рпе Тут Рго бБег Авр І1е Аїа Уа1ї сі1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175
Зо уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Тут бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рго сС1у ГПув 225 «2105» 246 «2115 2076 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «400» 246 саддесдсаає ЕддесЕСсСааєс сддєдсеЕдаа дсааааааас сдвддсудсЕЄс сдассааадсд бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас дсодсадааає сссадддеЕсд сдссасдаєд асссаєдаса стадсассес гассдуарєетає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає асеЕдсадедс асстасудеєдс асдсЕсесес 300
ЕссастддеЕє єссаєстоода стассдддЧде сааддсассс ЕСЯєаВГаасдддесЕ ЄЕЕСЕЕсСтдсе
З6о адсасааадд дссссадсудєс дчЕссссЕссд дссссгадса дсаададсас аєссддсдада 420 асадссдссс гЕдддстдсс сдсдааддас сбасЕссссс адсстЕдсдас сасдЕССТ9д 480 аасістддсд сссеЕдасаад сддсдідсас ассЕсеєссад сссдстдса дадсадсдадс 540 сЕдвтассссс Едадсадсді ддссассуєд сстрадсадса дссеЕдддсас ссадасстас бо ассеЕдсаасуд Егдаассасаа дсссадсаас ассааадесдд асаачаадчачі ддадсссаад бо адсЕдеЕЧчаєсд дсодадчада дЕССододаддс ддваддаєссд аддеЕдсадсе дседдаассь зо 720 часаддсддас гдадсдсадсс сдоадсоодассеЕ седачаседа дссдЕдссдс садсддсеєс 780 асстссадса сстасдссає даасєдддед сдссаддсесс сгддсааадд сстддаає9 840
ЧдЕдЕССсСсСдда гсадаадсаа деасаасаас басдссассоє ассасдссда садсдедаад 900 чассддссса ссассадссу ддасдасадс аадаасассс гдсасссдса даєсдаасадс 960 сгЕдсдддссо аддасассдс сдедсастає єдеЕдсдсоддс асддсаасьс сддсаасадс 19020 таєгдеЕЧчссЕє адеЕсвдссста сеЕддддссад ддсасссісуд ЕдчассдєдЕС аадсдстаде 1980
ЧдЕЧЧдСсСсСдДсСЕС ссЕССДрДЯДЕЄ вгассЕссссс ссаєссдаєд аасадссдаа аадсддсасс 1140 дссСЕСсССсСУЧЄсСЯ ЕЯ9ФЕЧЕСТддсСе даасаарєєє сассстаддад аадстааадс дсадеддааа 1200 чЕддасаасуд сассдсадсс сддсаасссс саддааєссд Едасадааса ддавассссаад 1260 часадсассо асіссстдсс сессассстд асасрдеЕСста аддседаєта єдадааасас ааадсссасуд ссрдсдаадс сасссаєсад ддссідадс содсссдаєссас ааададссес 1380 аасададчач адсдеЕдасаа дасссасасс сдЕСсСсСссСЕс дЕССЕДсСсссС єдаадстдсье 1440 ддсСудсссЕЄ СЕДЕЧДЕЕСсСсС дЕсСсСссссса аадсссаадд асассстдає даєсадсс9ад 1500 асссссддаач Едасстдсаєс дадсддеЕддає дадедеЕсссас аддассстда адсдаадсес 1550 аагєддсаса єддасддсді ддаадедсас аасдссаада сааадссдс ддаддадсад 1620
Тасаасадса сдрассасдЕ ддесадсудесс сссассдесс бдсассадда сЕддстсдаає 1680 часаачдчадеі асаадсдсаа ддсссссаас ааадсссісд дсдсссссаєс сдадаааасс 1740 аєссссааад ссааадддса дссссдадаа ссасаддсдс асассстдсс сссагсдсс9ад 1800 чаєчадседа ссаадаасса ддесадссоід соддЕДдсстда ЕСаааддсес свтаєсссадс 1860 20) часаєсєсдсся гдчадсдодда дадсааєсддд садссддада асаассасаа дассасдссе 1920 сссдсдседуч асуіссдасудЮ сЕсссЕСЕссС сЕСсСтасадса адсеЕсассдІ ддасаададс 1980 аддеЕддсадс аддддаасудс сЕсССссаєсдс сссасдаєрдс асдаддсесо дсасаассас 2040 тасасдсада ададссеЕсесс ссрдеЕСЕсСс ддатгааа 2076 «2105 247 «2115 1347 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 247 саддєдсаає ЕддесЕСсСааєс єддсдседаа дсааааааас сдддсдсЕєсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас дсодсадааає сссадддеЕсд сдссасдаєд асссаєдаса стадсассєс гассаєетає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає асеЕдсадедс асстасудеєдс асдсЕсесес 300
ЕссастддеЕє єссаєстоода стассдддЧде сааддсассс ЕСЯєаВГаасдддесЕ ЄЕЕСЕЕсСтдсе
З6о адсассаадд дссссіссдс дЕссссссгд дсссссадса дсаададсас садсддсдадс 420 асадссусесс гЕддодстЯдссІ ддссааддас басЕсссссд адсссоаєдас сасдЕССТ9д 480 аасадсддад сссеЕдассес сддсдідсас ассеЕрссссу ссуагдседса дадеЕсстоддс 540 сЕдвтасадсс Едадсадсдс ддссассуєд ссЕЕсСсадса дсседддсас ссадасстас бо ассеЕдсаасуд Егдаассасаа дсссадсаас ассааддсдда асаачаадді ддадсссаад бо адсеЕдсдаса ааасесасас ардсссассд гбдсссадсас ссодаадсвєдс адддддассд зо 720 гсадессссс ЕСЕссссссс аааасссаад дасассстса єдаєсссссо дасссстодад 780 дЕСасаєдсд гддЕдЧдЕдда сдєдадссас даадассстуд аддссаадесє саассдатас 840 чЕддасддса гдчаддеєдса баасдссаад асааадссодс доададдадса деасаасадс 900 асдтассдбд гддссадсудс ссісассуєс срдсассадча ассддссдаа єЄддсааддвад 960 тасаадсдса аддсссссаа сааадсссоіс ддсдссссса Есдадаааас сассессааа 19020 чдссааадддс адссссддада ассасаддєд бдсассстрдс ссссаєссссо ддчвдаєсдадсед 1980 ассаадаасс аддеЕсадсст сгсдЕдсдса деЕСсаааддсесс сстаєссссад сдасаєссд9сс 1140 чЕддадсддд ададчсаасдуда дсадссддад аасаасвраса адассасдсес ЕсссдЯдЕгдсед 1200 часеЕссдасу дссссЕссеЕс ссЕсСдЕДДадс аадсссассд бддасаадад саддсддвсад 1260 садддачаасч ЕСЕсСсСссаєсдуд сЕССЧдЕЧаєд саєдаддссс гдсасаасса стасасвсад аададссеЕсе сссдеЕсессс ддатсааа 1347 «2105 248 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005» 248 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бет б1у Рпе ТПтї Ріе 5ег Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 с1у Агкуд Іїе Ппув Бек Гуз ТПх сі сіу с1у ТПгІ ТПг Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рго Уаі пув бі1у Акуд Рпе ТПІ Іїе 5егт Агуд Авр Авр бет Гув Авп о ТІПг 65 70 75 80
Те Тут Ггец сіп Меє Авп о бет Гецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сіу ТпПжІ Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 «2105 249 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 249 сі Маї сб1іп Гец Маі сіц бехт сіу сіу с1у Гей Маі Гув Рго бі1у «1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меє бет Ткр Уаі Агд Сбіп Аїа Рго сСіу пув с1у Гей сі Тгр Уаї1ї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПт сіп сі1у сб1у ТБПІ ТПг Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд РПе ТПІ Іїе бБет Агд Авр Авр бБеїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 їец Тут їец Сіп Меєб Авп бек ІТец Пув ТПІ сі Авр ТПтІ А1їа Уа1 Туг 85 Зо 95
Тук Сув ТПтІ ТПтІ Рго Ттр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 «2105 250 «2115 125 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 250 сі Ма! сіп Пец теп сі бек с1у сС1у с1у їец Уа1 сСіп Рго сС1у С1Уу 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бет б1у РпПе ТПтї Рібе бек Тік Тук 20 25 30
А1їа Мес Авп ТгІр Уаі Акд сіп Азїа Рго сбіу пув біу їец бі Тгр Уаї 35 40 45 зек Агкуд І1їе Агд бек пув Тут Авп Авп Тут Аїа ТПІ Тут Тут Аїа Авр 50 55 бо
Ззек Уаії пузв б1у Агд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80
Тецп Тук Гей біп Меєс Авп о бБег Гец Агуд Аїа сій Авр ТПтІ Аїа Уаї1ї Туг 85 Зо 95
Тут Сув Уаі1ї Агуд Ніз с1у Авп Рпе СсС1у А1їа бек Тут Уа1ї! бек Тгр РБГе 100 105 110
Аза Тут Ттр с1у сіп сіу ТПт Ггец Уа1і! ТПї Уаї бек бекг 115 120 125 «2105 251 «2115 125 «212» Білок «213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 251 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 10 15 бек Тец Агд Тец бегт Сув А1їа А1їа бек сС1у Рбе ТПтї Ріре бег ТПх Туг 20 25 30
А1їа Мес Авп ТгІр Уаі Акд сіп Азїа Рго сбіу пув біу їец бі Тгр Уаї 35 40 45 зек Агкуд І1ї1е Агд бек пув Тут Авп Авп Тут Аїа ТПІ Тут Тух Аїа Авр 50 55 бо
Ззек Уаії пузв б1у Агд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80
Те Тут Ггец сіп Меє Авзп бек Ге Агуд Аїа біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тут Сув Маї Акуд Нів СсСіу Авп Рпе сС1у Авп А1їа Тук Уа1і1 бек Тгр РіГе 100 105 110
А1їа Тут Тер с1у сіп сіу ТПтї Ггец Уа1і! ТПї Уаї бек бекг 115 120 125 зо «2105 252 «2115 689 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 252 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15 зет Гей Агд Пец бек Сув Аїа Аїа бБет сСіу Рпе ТПтІ Рпе бег Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПтІ Авр сСіу Сб1у ТПІ ТПгІ Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 с1у ТПхї Гей Уаі1! ТПг Уаії бБет бБегт Аїа бек ТПтї Гпув б1у Рго Бетг Уаї 115 120 125
Рпе Рго гей Аза Рго бек бек Ппув бБет ТПтІ бБет с1у с1у ТПх Аїа Аїа 130 135 140 теп сіу Сув Гец Уаії Гуз Авр Тухк Рпе Рго біц Рго Уаі1і ТПт Уаї1ї бек 145 150 155 160
Тгр Авп бек б1у Аїа Гец ТПт бек СсСіу Уа1ї Нів ТПт Рібе Рго Аїа Уаї 165 170 175 теп сіп бет бБет біу Гей Тук бек Гпецп бет бБет Уаі Уаі1і ТПхг Уаі1ї Рго 180 185 190 бек бек бБет їец сС1у ТПкх Сіп ТПх Туг І1їе Сув Авп Уаї Авп Нів Гув 195 200 205
Рко Бек Авп о ТПх Кгув Уаі1 Авр Гуз їГув Маії сі Рго Гуз Бек Сув Авр 210 215 220 сіу б1у сб1у с1у Бек сіу сіу сі1у с1у бек біц Маії сіп Гец Гец с1ц 225 230 235 240 бек бі1у б1у б1у пгецп Уаі1і біп Рго сіу с1у Бек Гецп Акд Гец бек Сув зо 245 250 255
Аза Аза бек сіу Рпе ТПт РПе бетї ТПї Тут Аїа Мес Авзп Тгр Уаїії Акгд 260 265 270
Сбіп Аза Ркго с1у пув С1у еп бій Тгр Уа1! бБет Агуд І1їе Аг9д Бекг Гув 275 280 285
Тук Авп Авп Тут Аїа ТПх Тухк Тут Аїа Авр бБет Уаі гувз с1у Агд РіПе 290 295 300
ТпПї Іїе бБет Акд Авр Авр бек пув Авп о ТПт Тец Тут Гец сіп Меє Авп 305 310 315 320 бек гец Агд Аїа Сі Авр ТПг АТїа Уа1ї Тук Туг Суз Уаї Агд Ніз 01Уу 325 330 335
Авп о Рпе с1у Аїа бБет Тут Уаії бБет Тгтр Рпе Аза Тут Тгр сС1у сбіп 01Уу 340 345 350
ТПт Гец Уаї ТПт Уаі1ї бБег Бек Аїа Бек ТПт Ппув с1у Рго Бек Уа1ї РПе 355 360 365
Рко гецп Аза Рго бек бет КГув бБет ТПт Бех сіу с1у ТПт Аїа Аїа Гей 370 375 380 сіу Сув Гецшц Маії Гув Авр Тухк РпПе Ркго бій Рго Уаі ТПт Уаії бБет Ткгр 385 390 395 400
Авп о бек СсС1у Аїа Іїецш ТПтї бег сіу Уаї Нів Тртх Рре Рго Аїа Уаї Ієц 405 410 415
Сіп бек бБет с1у Гецп Тут бБет Ггец бет бБеїт Уаї Уа1ї ТПтг Уаї Рго 5бБег 420 425 430 бек бек Гей С1у ТПк біп ТІ Тук І1їе Суз Авзп Уа! Авп Нів Гуз Рго 435 440 445 зет Авп о ТПтІ пуз Маії Авр пув пув Уаії сій Ркго Гпув бек Сув Авр Гув 450 455 460
ТПЕ Нів ТБкг Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сб1цп Аїа Аїа с1у С1у Рго 465 470 475 480
Ззек Уаії РіПе Гей Рібе Рго Рго Пув Рго Пув Авр ТПтїІ Гецп Меї І1е бек 485 490 495
Атуд ТПт Рго бі Уа1і ТПх Сув Уа1ї Уаї Уа1і! Авр Уаії бБет Нів Сс1ц Авр 500 505 510
Рго Сі Уаї пуз Рібе Авп Тгр Тук Уаії Авр сС1іу Уа1і с1іц Уаї Ніз Авзп 515 520 525
Аїа гув ТПк пув Рго Агуд бій бі сіп Тут Авп обет ТПІ Тут Аг9д Уаї 530 535 540
Ууаї Бек Уаї їец ТПт Уаї їец Нівз Сіп Авр Тгр їец Авп с1у Гув б1цЦ 545 5Б5О 555 5б6О
Зо
Тук гув Сув пув Уаії бБет Авп гув Аза теп біу Аїа Рго Іїе с1ц Гуз 565 570 575
ТпПї Іїе бБет Гпув Аїа гуз С1у біп Рго Агд бід Рго сіп Уаі1і Тук ТЕПкК 580 585 5ЗО
Те Рко Рко Сув Агд Авр бі Гецп ТПхг Гув Авп о біп Уаії бек Гец Тгр 595 бо 605
Сув Гец Уаї Ггув с1у Рпе Тук Рго Бек Авр І1е Аїа Уа1ї сі Тгр СсСІ1ц 610 615 620 зек Авп біу біп Рго бій Авп о Авп Тут Гув ТПх ТПк Рко Рко Уаї Гей 625 630 635 64
Авр бБегт Авр сіу бБет РПе РпПе Гецп Тут бек гув Гец ТПт Уаї Авр Гуз 645 650 655 бек Агд Тгр б1іп Сіп сб1у Авп Уа1ї Ріе бБет Сув бБет Уаі1ї! Меє Ніз с1ц 6б6о 665 670
А1ї1а те Нів Авп Нівз Тут ТПг сіп Гпув бег ІТец бег їец бек Рго 01уУ 675 680 685
Тув «2105 253
ЗА
«2115 450 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 253 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бет б1у Рпе ТПї Ріре б5ехг Авп Аза
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 20 сС1у Акд І1е Пув бет КГув ТПг Авр сС1і1у с1у ТБг Тірї Авр Тут А1а А1а бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 25
Те Тут Ггец сіп Меєс Авп о бет Гецп пув ТПтІ сі1ц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 30 1600 105 110 сіу ТпПг тей Маії ТПтІ УМаії бек бБет Аїа бет ТПт Гпувз бі1іу Рго бБет Уаї 115 120 125 35 Рпе Ркго Гец Аза Рго бек бетг Гув бБет ТПтї бБег с1у сіу ТПг Аїа Аї1а 130 135 140 теп сі1у Сув Гец Уаії Гуз Авр Тухк Рпе Рго біц Рго Уаі1і ТПт Уаї1ї бек 145 150 155 160 40
Тгр Авп бек б1у Аїа Гец ТПт бек СсСіу Уа1ї Нів ТПт Рібе Рго А1їа Уаї 165 170 175 теп сіп бет бБет біу Гей Тук бек Гпецп бет бБет Уаі Уаі1і ТПхг Уаі1ї Рго 45 180 185 190 бек бек бБет Гец С1у ТПт сіп ТПк Тут І1їе Сув Авп Уа1! Авзп Ніз Гув 195 200 205 50 Рго Бек Авп ТПтї Гуз Уаі Авр гув пув Маі бій Рго пув Бек Сув Авр 210 215 220 пуз Тк Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аза Рго бі1ц Аза Аїа СсС1у 01У 225 230 235 240 55
Рко Бек Уаії Рібе гецп Рпе Рго Рго Гув Рго Гув Авр ТПх Гей Меє Те 245 250 255 бек Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаі1ї бБетг Ніз с1ц 260 265 270
Авр Рго сі Уа1! Пув Рпбе Авзп Тгр Тут Уа! Авр сС1у Уаї сіц Уа1ї Нівз 275 280 285
Авп Аїа Гув ТПт Гув Рго Акд сі бі біп Туг Авп о бет ТПтІ Тут Акгд 290 295 300
УуУаї Ма1! бек Уа1 теп ТПг Уаї Іецш Нів сСіп Авр Тгр Гей Авп с1у Гув 305 310 315 320 січ Тук Ппув Сув Гпув Уаі бБет Авп пув Аїа ей С1у Аїа Рго Іїе Сс1ц 325 330 335
Туз ТПтІ І1е бБет Гпув Аїа пуз б1у біп Рго Агкд біц Рго Сбіп Уаї Сув 340 345 350
ТпПк Гец Рко Рко бБет Агд Авр бі їец ТПт Гув Авп біп Уаії бек Гец 355 36 365
Ззек Сув Аї1а Уа1ії пув біу Рпе Тут Рго бБегт Авр Ії1е Аїа Уаі1і сі Тгр 370 375 380 бі бек Авп о с1іу сіп Рко біц Авп Авп о Тук Гпув ТПї ТПк Рго Рго Уаї 385 390 395 400 теп Авр бБет Авр Сіу бек РпПе Рібе їец Уа1! бБет пув Гей ТПї Уа1ї Авр 405 410 415
Зо пуз бБег Агд Тгр Сіп сіп сб1у Авп Уа! Рібе бек Сув бБет Уа1! Меє Ніз 420 425 430
Сі Азїа їец Нів Авп Агуд Рбе ТПт сСіп пув бБет Гец бет Гец бек Рго 435 440 445 соі1у Гуз 450 «2105 254 «2115 215 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 254 сбіп Аїа уаї УМаї ТПтг сіп сід Рко бБет Гей ТПт Уаії бБет Рго б1у 1У 1 5 10 15
ТПкх Уаї ТПт Ггецп ТПг Сув біу бБет бБет ТПтІ сіу Аїа Уа1і ТПк ТПкК бек 20 25 30
Авп Тут Аїа Авп Тгр Уаі сіп сі пузв Рго біу біп Аїа Рпбе Агд 01Уу 35 40 45 теп Ії1е с1у с1у ТПї Авп гув Агуд Аза Рго с1у ТПїІ Рго Аїа Акд РіГе 50 55 бо зек біу бБет Пецп Гей с1і1у сіу ув Аї1а Аїа Гей ТПт Гец бек С1у Аї1а 65 70 75 80 біп Рго бій Авр сіц Аза сіц Тут Тут Сув Аза гей Тгр Тут 5ет Авп 85 Зо 95 теп Ткр Уаі Рпе сіу сіу б1у ТПКх пув Гей ТПтІ Уаі Ге с1у сіп Рго 100 105 110
Туз Аїа А1їа Рко бБет Уаі1і ТП Ггецп Рпе Рго Рго бБет бБет сі сіц Гец 115 120 125 біп Аїа Авп о Гув Аїа ТПт Гец Уаї Сув Гей Іїе бБет Авр Рпе Тут Ркго 130 135 140 с1у Аїа Уа1 ТБг Уа1ї Аїа Тгр ув А1ї1а Авр бек бБет Ркго Уа1! Кув А1а 145 150 155 160 сіу Маії бі ТПг ТПкг ТБПт Рко бБет Гпув біп бБет Авп Авп Гуз Тут А1а 165 170 175
А1ї1а бБет бек Тут Іец бек їец ТПт Рго біц сіп Тгр Гуз бек Нів Агд 180 185 190 бек Тук бБет Сув Сіп Уа1ї ТрІ Нів біцш с1у бБетг ТПтІ Уаї Сі Гуз ТіК 195 200 205 уаії Аза Рго ТПт сіц Сув бег 210 215 «2105 255 «2115 689 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 255 сі Маї сбіп Гец Маії сі бек сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меєс бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 сС1у Акуд І1ї1е Гпув бет пув ТПкг Авр с1у СсС1у ТІ ТБПг Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк
65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжІ ТПтІ Рго Тгр бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сіу ТпПг тей Маї ТПтІ МУМаії бБет бБет Аїа бет ТПт Ггувз бі1іу Рго бБет Уаї 115 120 125
Рпе Рго гей Аза Рго бек бек Ппув бБет ТПтІ бБет с1у с1у ТПх Аїа Аїа 130 135 140
Теш с1у Сув Ггец УМа1ії Гуз Авр Тут РпПе Рго бій Рго Уаі! ТПтї Уаї 5ег 145 150 155 160
Тгр Авп бек б1у Аїа Гец ТПт бек СсСіу Уа1ї Нів ТПт Рібе Рго А1їа Уаї 165 170 175 теп сіп бет бБет біу Гей Тук бек Гпецп бет бБет Уаі Уаі1і ТПхг Уаі1ї Рго 180 185 190 бек бек бБет Гец С1у ТПт сіп ТПк Тут І1їе Сув Авп Уа1! Авзп Ніз Гув 195 200 205
Рко Бек Авп о ТПх Кгув Уаі1 Авр Гуз їГув Маії сі Рго Гуз Бек Сув Авр 210 215 220 сі1іу сб1у с1у с1у бек с1у сС1у с1у сС1у бек Сі Уа1 сСіп теп Ієц СІ1ц 225 230 235 240 бек бі1у б1у б1у пгецп Уаі1і біп Рго сіу с1у Бек Гецп Акд Гец бек Сув 245 250 255
Аза Аза бек сіу Рпе ТПт РПе бет ТПї Тут Аза Меєсє Авп Тгр Уаї Агд 260 265 270 біп Аїа Рго с1у Ппув сіу Гец сіц Ткр Уаії бБехт Агкуд І1е Агуд бБет Гуз 275 280 285
Тук Авп Авп Тут Аїа ТПх Тухк Тухк Аїа Авр бБет Уаі1і ув с1у Акд РБГе 290 295 300
ТПІ І1їе бБег Агуд Авр Авр Бек ГПув Авп ТПт Гей Тут Гец Сіп Меє Авп 305 310 315 320 бек гец Агд Аїа Сі Авр ТБПІ АТїа Уаї Тут Тут Суз Уаї Агд Ніз 01У 325 330 335
Авп о Рпе сб1у Авп Аїа Тут Уаії бет Тгтр Рпе Аза Тут Тгр сС1у сбіп 01Уу 340 345 350
ТПх Гец Уаї ТПїІ Уаї бек бек Аїа бек ТПт пув с1у Рго Бек Уа1ї! РіПе 355 З6о0 365
Рко гецп Аза Рго бек бет КГув бБет ТПт Бех сіу с1у ТПт Аїа Аїа Гей 370 375 380 сіу Сув Гецш Маії Гув Авр Тут РпПе Ркго бій Рго Уаі ТПт Уаії бБет Ткгр 385 390 395 400
Авп о бек сС1у Аїа Тец ТПг бек сі1у Уа1ї Нів ТПг Рпе Рго Аїа Уаі1 Іец 405 410 415
Сіп бек бБет с1у Гецп Тут бБет Ггец бет бБеїт Уаї Уа1ї ТПтг Уаї Рго 5бБег 420 425 430 бек бек Гей С1у ТПк біп ТІ Тук І1їе Суз Авзп Уа! Авп Нів Гуз Рго 435 440 445 зек Авп ТПї Кгув Уаі1і Авр пув пув Маії бій Рго Гуз Бек Сув Авр Гуз 450 455 460
ТПЕ Нів ТБкг Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сб1цп Аїа Аїа с1у С1у Рго 465 470 475 480 зек Уаії Рпе Гецп Рпе Рго Рго Гув Рго Пув Авр ТПт Гец Меє І1е 5ег 485 490 495
Атуд ТПт Рго бі Уа1і ТПх Сув Уа1ї Уаї Уа1і! Авр Уаії бБет Нів б1ц Авр 500 505 510
Рго Сі Уаї пуз Рібе Авп Тгр Тук Уаії Авр сС1іу Уа1і с1іц Уаї Ніз Авзп 515 520 525
А1їа пув ТПт Гув Рго Акд сід бі біп Ту Авп о бБет ТПтІ Тут Акд Уаї 530 535 540
Ууаї Бек Уаї їец ТПт Уаї їец Нівз Сіп Авр Тгр їец Авп с1у Гув б1цЦ 545 5Б5О 555 5б6О
Тут Гпув Сув Гпув Уа1ї бек Авп о Гув Аїа Гей с1у Аїа Ркго І1е січ Гув 565 570 575
ТпПї Іїе бБет Гпув Аїа гуз С1у біп Рго Агд бід Рго сіп Уаі1і Тук ТЕПкК 580 585 5ЗО
Те Рко Рко Сув Агд Авр бі Ге ТПт Гпув Авп біп Уаі1ї Бек Гец Тгр 595 бо 605
Сув Гец Уаї пув с1у Рбе Тухк Рго Бех Авр Іїе Аїа Уаі сій Тгр с01ц 610 615 620 зект Авп біу біп Рго бій Авп Авп Тут Гуз ТПх Тк Рго Рго Уаї Гей 625 630 635 640
Авр Бех Авр сіу Бек РПе Рбе Гей Тут бек Кув Пец ТПтгІ Уаії Авр Гувг 645 650 655 бек Агд Тгр б1іп Сіп с1у Азп Уаі1ї Рібе бек Сув бБет Уа1ї Меє Ніз с1ц бо 665 670
А1ї1а те Нів Авп Нівз Тут ТПг сіп Гпув бег ІТец бег їец бек Рго 01уУ 675 680 685
Туз «2105 256 «2115 690 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 256
Сбіп Маі сбіп Гец Уаії Сіп бек б1у Аїа сіц Уаї пув Гув Рго сіу Аїа 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу Рко ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 25 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80 30 Меєс сій Гец бег бек Гец Агуд Бек сій Авр ТПт Аїа Уаії Тут Тук Сув 85 Зо 95
Аза Атуд сб1у Авр Рпе Аїа Ткгр Гец Авр Тут Тгр Сі1у біп сбіу ТПтг Іец 100 105 110 35 уаї ТПІ МУМаї Бек бБет Аїа бет ТПтІ Гпузв біу Рго бБет Уаі! РпПе Рго Іец 115 120 125
А1а Рто бБет бБет пув бБет ТПтІ бехт біу б1у ТПІ Аза Аза їец О1Уу Сув 40 130 135 140 теп Уаії пув Авр Тут РіПе Рго бі Рго Уа1 ТПтІ Уаії 5Беїт Тгр Авп бек 145 150 155 160 45 сС1у Аїа теп ТБПг бехт с1у Уа1 Нів ТПг Рре Рго Аїа Уаі1ї! їец Сіп 5бег 165 170 175
Зек сі1у Гей Тук бек Гей бек бБет Уа1ї УМаї ТПтІ Уаі1ї Рго Бек бек бек 180 185 190
Пец с1у Тк с1іп Тпхї Туг І1їе Сув Авп Уа1і Авзп Ніз Тув Рго бБет Авп 195 200 205
ТпЕх гув Уаі Авр Гуз гуз Уа1ї бі Рго пув бБет Сув Авр с1у с1у щу 210 215 220 сіу бек б1і1у сб1у сі1у сіу бБет сіц Уаі сіп Гей гец сіц Бех сі1у «1У 225 230 235 240 с1у їец Маії сбіп Рго сіу сіу бБет Ггец Агд Гей бегт Сув Аїа Аїа 5ег 245 250 255 с1у Рпе ТПт РПе бег ТПтІ Тут Аїа Мес Авп Тгр Уаі Агд Сіп Аза Рго 260 265 270 сіу пув с1у Гец сіц Тер Уаі бБет Акуд І1е Агуд бет пув Тут Авп Авп 275 280 285
Тут Аїа ТПт Тут Тут Аїа Авр бек Уа1 пув с1у Акд Рпе ТПї Іїе бек 290 295 300
Ат Авр Авр бБет Гув Авп ТПтІ Гецп Тут Гей біп Меєс Авп бет Іец Агд 305 310 315 320
А1ї1а сбіп Азр ТБг Аїа Уаї Туг Тут Сув Уа1ї Агд Нів с1у Азп Рое с1Уу 325 330 335
А1а бек Тут Уа1 бет Тгр Рпе Аїа Туг Тгр сС1у с1іп сС1у ТПхг Івц Уаї 340 345 350
ТПІ УМа1! бБег бБет Аїа бек Уаі Аїа Аїа Рго бег Уаі Рпе Іїе РПпе Рго 355 360 365
Рко Бек Авр бі біп Гей Гув бет с1у ТПтІ Аїа бек Уа1 Уа1ї! Сув Гей 370 375 380 теп Авп Авп Рпе Тут Рго Атуд біц Аїа пув Уаї б1іп Ткгр Гуз Уа1ї Авр 385 390 395 400
Авп Аїа Ге сіп бет с1іу Авп бет біп бі бет Уаії ТПг біц сбіп Авр 405 410 415 зетк Гув Авр бет ТПт Тут бБет Гец бБет бет ТПтІ Гец ТПтї Гецп бек Гуз 420 425 430
А1ї1а Авр Тут біш Гуз Нів пув Уа1! Тут Аїа Сув сі Уа1! ТрЕ Нів с1п 435 440 445 сі1у Гец бБет бБет Рго Уаі! ТПт пув бет Рпе Авп Агд біу біц Сув Авр 450 455 460 пуз Тк Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аза Рго бі1ц Аза Аїа СсС1у 01У 465 470 475 480
Рко Бек Уаії Рібе гецп Рпе Рго Рго Гув Рго Гув Авр ТПх Гей Меє Те 485 490 495 бек Агуд ТПтІ Ркго Сіц Уаї ТПт Сув Уаї Уаї Уа1 Авр Уаї Бех Нів с1ц 500 505 510
Авр Рго сі Уа1! Пув Рпбе Авзп Тгр Тут Уа! Авр сС1у Уаї сіц Уа1ї Нівз 515 520 525
Авп Аїа Гув ТПт Гув Рго Акд сі бі біп Туг Авп о бет ТПтІ Тут Акгд 530 535 540
Ууаї уаї бек Уаї Гец ТПтї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр гей Авп с1у Гуз 545 5Б5О 555 5б6О січ Тук Ппув Сув Гпув Уаі бБет Авп пув Аїа ей С1у Аїа Рго Іїе Сс1ц 565 570 575
Туз ТПтІ І1е бБет Гпуз Аїа пув б1у біп Рго Агд бі Рго сіп Уа1ї Тук 580 585 5ЗО
ТПг Гец Ркго Рго Сув Агуд Авр сій Гец ТПт Пув Авп осіп Уаі1і! бек Гец 595 бо 605
ТЕр Сув гец Уаї Гпуз бі1у Рбе Тук Рго Бех Авр Іїе Аїа Уаі1і сі Тгр 610 615 620 біц бек Авп б1у біп Рго с1іц Авп Авп Тут Гуз ТПт ТБПг Рго Рго Уаї 625 630 635 64 теп Авр бБет Авр Сіу бек РпПе РібПе їецп Тут бБет пув Гей ТПх Уа1ї Авр 645 650 655 пуз бБег Агд Тгр Сіп сіп сб1у Авп Уа! Рібе бек Сув бБет Уа1! Меє Ніз бо 665 670 сі Аїа теп Нів Авп Нів Тут ТПтг Сіп Гув бек Іец бег ІТец бег Рго 675 680 685 соі1у Гуз 690
Зо «2105 257 «2115 447 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 257 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15 зетк Уаії пув Ма1ії Бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПт РпПе ТПт бек Туг 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу Рго ТПх бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бек Ггецп Агуд бек бій Авр ТПтІ Аїа Уаї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Атуд сб1у Авр Рпе Аїа Ткгр Гец Авр Тут Тгр Сі1у біп сбіу ТПтг Іец 100 105 110
Ууа1ї Трпї Уа1ї бБег Бек Аїа бек ТПт Гпув сіу Рго бек Маії РПпе Рго Гей 115 120 125
А1а Рто бБет бБет пув бБет ТПтІ бехт біу б1у ТПІ Аза Аза їец О1Уу Сув 130 135 140 теп Уаії пув Авр Тут РіПе Рго бі Рго Уа1 ТПтІ Уаії 5Беїт Тгр Авп бек 145 150 155 160 сСі1у Аї1а їеєц ТПг о бег сСіу Уаї Нів ТрІ Рібе Рго Аїа Уаї їец сіп 5бег 165 170 175
Зек сі1у Гей Тук бек Гей бек бБет Уа1ї УМаї ТПтІ Уаі1ї Рго Бек бек бек 180 185 190 їец сСіу ТПк сСіп ТБк Тут І1ї1е Сув Авп Уа1і Авп Нів Ппув Рго бБет Авп 195 200 205
ТЕ пуз Уа1ї Авр Гуз пув Маї Сіц Рго Пув бек Сув Авр Гув ТПг Ніз 210 215 220
ТПк Сув Рко Ркго Сув Рго Аза Рго біц Аїа Аїа с1у с1і1у Рко бек Уаї1ї 225 230 235 240
Рпе Гей Рібе Рго Рго пув Рго Пув Авр ТПтІ Гецп Меє І1ї1е бек Акд Тік зо 245 250 255
Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бег Ніз сб1ц Авр Рго с1ц 260 265 270
Ууаї Ппув Рпе Авп Тгр Тухг Уа1 Авр сС1у Уаї Сі Уа1 Нів Авп А1їа Гув 275 280 285
ТПк Гпув Рго Акд бі бі біп Тук Авп обет ТПтІ Тут Агтд Уаі1і Уаї1ї бек 290 295 300 уаї Гец Трпхї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр Гец Авп сС1у пув біц Тук Гув 305 310 315 320
Сузв пув Уаї бБет Авп гув Аза ге Сб1у Аїа Рго Іїе сі Гуз ТПк Ше 325 330 335
Ззек Гуз Аїа гув Сб1у біп Рго Агуд бій Рго сбіп Уаі Сув ТПкК Гец Рго 340 345 350
Рго бБет Агуд Авр бій Гецп ТПг Гув Авп обіп Уаії бБет Гец бБекгк Сув Аїа 355 360 365 маї пув с1у РПе Тут Рко бБет Авр І1е Аїа Уаії біц Тгр біц бБет Авп 370 375 380 сіу біп Рго біц Авп Авп Тут пув ТПтї ТБПї Рго Рго Уаії їец Авр 5ег 385 390 395 400
Авр сб1у Бек РПе Рпе Гец Уаії бет Кгпув Гей ТПтІ Уаії Авр Гуз бБет Агд 405 410 415
Тегр с1п сбіп сб1у Азп Уа1 Рібе бехг Сув бБет Уа1 Меє Нів СсС1іп АїТа Іец 420 425 430
Ніз Авп Нів Тут ТПтІ Сіп Пув бег КГец бетг Гєц бег Рго с1уУу Гув 435 440 445 «2105 258 «2115 219 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 258
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гєц Нів 5бег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткгр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35 40 45
Рго Сіп їец Гец Іїе Тук Гей Сіу 5Бегт Авп Агд Аїа бБет сіу Уа1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1! сСіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 Зо 95
Ззек І1е Меє біп Агуд ТПх Рпе сіу сбіп с1у ТПтї Гуз Уаї сі І1е Гуз 1600 105 110
Атуд ТП Маі Аза Аза Рко бек Уаі1 Рпе Іїе Рпе Рго Рго бБет Авр с1ц 115 120 125 біп пецп пув бек сіу ТПг Аза бек Уа1ї Уа1ї Сув Гей Гецп Авп Авп РІПе 130 135 140
Тухк Рго Акд сі Аїа гув Уаії біп Тгр пув Уаії Авр Авп Аза Гец сіп 145 150 155 160 бек б1у Авп бек біп бі бек Уа1! ТПг бі сбіп Авр бек Гув Авр бек 165 170 175
ТПт Тут бБет Ггец бет бБет ТПтІ Ггецп ТПх Гей бет Гув Аїа Авр Тух с1ц 180 185 190 пуз Ніз пув Маї Тут Аїа Сув Ссіц Уаї ТрІ Нів СсСіп сб1у Гєц бег 5бег 195 200 205
Рхто Уа1і ТПїх Кпув бек РПпе Авп Агуд о1у сії Сув 210 215 «2105 259 «2115 214 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 259 сбіп Аїа уаї УМаї ТПтг сіп сід Рко бБет Гей ТПт Уаії бБет Рго б1у 1У 1 5 10 15
ТПкх Уаї ТПт Ггецп ТПї Сув біу бек бек ТПт с1у Аїа Уа1і ТПк ТПк бек 20 25 30
Авп Тут Аїа Авп Тгр Уаі сіп сі пузв Рго біу біп Аїа Рпбе Агд 01Уу 35 40 45
Тїечш Іїе сіу б1у ТПї Авп о Гув Агд Аза Рго сіу ТПг Рго Аїа Агд РІПе 50 55 бо
Зек біу Бек Ггеп ге біу б1у пув Аїа Аїа їецп ТПтї Ге бек с1у Аїа 65 70 75 80
Зо біп Рго бій Авр сіц Аза сіц Тут Тут Сув Аза гей Тгр Тут 5ет Авп 85 Зо 95 теп Ткр Уаі Рпе сіу сіу б1у ТПКх Кпув Гей ТПтІ Уаії Гец бек бек Аїа 1600 105 110 бек ТПжї Кгузв бі1у Рго бек Уаі1 Рпе Рго Гей Аїа Рго Бек бек Ппув бек 115 120 125
ТІ бек с1у сСіу ТБк АТїа Аїа Іеец с1у Сув ПГец Уа1! Гув Авр Тук РБГе 130 135 140
Рко бій Рго Уаі1 ТПх Уаі1і бек Ттгр Авп бБехт с1у Аїа еп ТПт бБех ШУ 145 150 155 160 уаї Нів Тржї Рібе Рго Аїа Уа! Ієц СсСіп бег Бек СсС1у їец Тук бетг Іеєц 165 170 175
Зек бБет Уаії Уаі1і ТПк Уа1і Рго бек бБет бБет Гец с1у ТПк сіп ТПк Тук 180 185 190
І1е Сув Авп Уаі1ї Авп Нів Пув Рго бек Авп ТПт Кпув Уа1і1 Авр Гуз Гуз 195 200 205 уа1ї бі Ркго Гпув бек Сув 210 «2105 260
«2115 690 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 260 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 20 сС1у І1е І1е Авп Рго бек С1іу с1у Рго ТПт бек Тут Аїа сіп Гув РІе бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80 25
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Атуд сб1у Авр Рпе Аїа Ткгр Гец Авр Тут Тгр Сі1у біп сбіу ТПтг Іец 30 1600 105 110 уаї ТПІ МУМаї Бек бБет Аїа бет ТПтІ Гпузв біу Рго бБет Уаі! РпПе Рго Іец 115 120 125 35 Аза Ркго Бек бБетг Гув бБет ТПтї Бек сіу сСі1у ТПт Аза Аїа Гец с1у Сув 130 135 140 теп Уаії пув Авр Тут РіПе Рго бі Рго Уа1 ТПтІ Уаії 5Беїт Тгр Авп бек 145 150 155 160 40 сСі1у Аї1а їеєц ТПг о бег сСіу Уаї Нів ТрІ Рібе Рго Аїа Уаї їец сіп 5бег 165 170 175
Зек сі1у Гей Тук бек Гей бек бБет Уа1ї УМаї ТПтІ Уаі1ї Рго Бек бек бек 45 180 185 190
Пец с1у Тк с1іп Тпхї Туг І1їе Сув Авп Уа1і Авзп Ніз Тув Рго бБет Авп 195 200 205 50 ТПг Ггув Уаії Авр пувз Гуз Уа1ї сій Рко пув Бех Сув Авр сі1у С1у щу 210 215 220 сіу бек б1у сб1у сі1у сіу бБехт сіц Уаії сСіп Гей тей біц бехт б1у 1У 225 230 235 240 55 с1у їец Маії сбіп Рго сіу сіу бБет Ггец Агд Гей бегт Сув Аїа Аїа 5ег 245 250 255 с1іу Рпе ТПІ РПе бБет ТПтІ Тут Аїа Ме Авзп Тгр Уаі Агду сіп Аза Ркго 260 265 270 сіу пув с1у Гец сіц Тер Уаі бБет Акуд І1е Агуд бет пув Тут Авп Авп 275 280 285
Тут Аїа ТПт Тут Тут Аїа Авр бек Уа1 пув С1у Атуд РПпе ТПтї І1е бек 290 295 Зо
Аг Авр Авр обетг Гув Авп о ТПт Гей Тут Гей біп Мес Авп бБег Гец Агд 305 310 315 320
А1ї1а сбіп Азр ТБг Аїа Уаї Туг Тут Сув Уа1! Агд Нів б1у Авп Рпе 01уУ 325 330 335
Авп Аза Тут Уаії бБет Тер Рпе Аїа Тут Тгр сбіу біп сіу ТПт Іец Уаї 340 345 350
ТПІ УМа1! бБег бБет Аїа бек Уаі Аїа Аїа Рго бБегт Уаі Рпе І1е РпоПе Рго 355 З6о0 365
Рко Бек Авр бі біп Гей Гув бет с1у ТПтІ Аїа бек Уа1 Уа1ї! Сув Гей 370 375 380 теп Авп Авп Рпе Тут Рго Агтд сій Аїа пувз Ма1ї сіп Тгр Гуз Уа1ї Авр 385 390 395 400
Авп Аїа Ге сіп бет с1іу Авп бет біп бі бет Уаії ТПг біц сбіп Авр 405 410 415
Зо
Ззек Гуз Авр бек ТПх Тук бек Гей бет бБет ТПтї Гецп ТПї Гей бек Гуз 420 425 430
А1ї1а Авр Тут біш Гуз Нів пув Уа1! Тут Аїа Сув сі Уа1! ТрЕ Нів с1п 435 440 445 с1у Гей бБет бБет Рго Уаі! ТПт пув бет Рпе Авп Агд біу сіц Сув Авр 450 455 460 пув ТПт Нів ТБбт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сС1ц Аї1а Аї1а с1у СсС1У 465 470 475 480
Рко Бек Уаії Рібе гецп Рпе Рго Рго Гув Рго Гув Авр ТПх Гей Меє Пе 485 490 495 бек Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаі1ї бБетг Ніз с1ц 500 505 510
Авр Рго сі Уа1! Пув Рпбе Авзп Тгр Тут Уаї Авр сСіу Уаї сіц Уаї Нівз 515 520 525
Авп Аїа Гув ТПт Гув Рго Акд сі бі біп Туг Авп о бет ТПтІ Тут Акгд 530 535 540
УуУаї Ма1! бек Уа1 теп ТПг Уаї Іїецш Нів с1п Авр Тгр тей Авп с1у Гув 545 5Б5О 555 5б6О січ Тук Ппув Сув Гпув Уаі бБет Авп пув Аїа ей С1у Аїа Рго Іїе Сс1ц
565 570 575
Туз ТПтІ І1е бБет Гуз Аїа гув б1іу біп Рго Акд сід Рго сіп Уа1ї Тук 580 585 50
ТПкх Гец Рко Рко Сув Агд Авр бі їец ТПт Гув Авп біп Уаії бек Гец 5З5 6бО0 605
ТЕр Сув гец Уаї Гпуз С1у РПпе Тут Рго бБет Авр І1ї1е Аї1а Уаї сі Тгр 610 615 620 біц бек Авп б1у біп Рго с1іц Авп Авп Тут Гуз ТПт ТБПг Рго Рго Уаї 625 630 635 640
Тецш Авр бБег Авр сСіу бБетг Рпе Рпе Гец Тут бБет Пув Гец ТПт Уа1ї Авр 645 650 655 пуз бБег Агд Тгр Сіп сіп сб1у Авп Уа! Рібе бек Сув бБет Уа1! Меє Ніз 6б6о 665 670
Сіш Азїа їец Нів Авп Нів Тук ТПт сіп пув бБет Гец бет Гец бек Рго 675 680 685 соі1у Гуз 690 «2105 261 «2115 360 «2125 ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 261 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕЯдЧЕ СсСЕддсаааас сдддсЯадЕЕС сстдсаєсвд бо адсЕдсдсд сЕсссоддасєс сасссеЕсСссс аасодсдєдда єдчадссдддІ Есдссаддсес 120 ссдддсааач дссісдадсд чассддЕСсСЧЕ ассаадеЕСсСса ааасеєдада Єддсассасд 180 чаєстасдсдд сіссадессаа аздздссдЕссє ассарсєссс дсдасдаєад сааааасасе 240 сЕЧЯдТтаєстдс адаєдаасес єСтсдаааасі даадасассу садесстаста стьдтастасс 300 ссдЕддддаає ддссЕсЯдЧса сччаєсаєсоод ддссадддса сасеЕддсвтас ддсдЕСССсСсС
З6о «2105 262 «2115 360 «2125 ДНК
«213» Штучна послідовність «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 262 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕЯдЧЕ СсСЕддсаааас сдддсЯадЕЕС сстдсаєсвд бо адсЕдсдсдд сЕсссоддарс сассеЕеєсссс аасодсдєдда єдчадссдддІ Есдссаддсес 120 ссдддсааад дссеЕСЧдадед ддаєгдаєсдІ аєсаадесста ааасссаддд сддадсассасд 180 чаєстасдсдд сіссадессаа аздздссдЕссє ассарсєссс дсдасдаєад сааааасасе 240 сЕдвгаєстдс адаєдаассс ссеЕдаааасе даадасассуд садеЕСТтаста стдсастасс 300 ссдЕддддаає ддссЕсЯдЧса сччаєсаєсоод ддссадддса сасеЕддсвтас ддсдЕСССсСсС
З6о «2105 263 «2115 375 «2125 ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 263 чаддесдсадс гдссдоддаасєс сдодсоддсоода сгддсдсадс сгддсодадаєс ЕСЕСдЧдЧадасед бо адсЕдсдссу ссадсддсесс сасссесадс асстасдсса єдаассдддІ дсдссаддесс 120 ссЕддсааач дссіддаасд ддсдссссдд ассадаадса адсасаасаа стасдссасс 180 тбасврасудссу асадсдєдаа дддссддЕсс ассассадсс додоадасдасад саадаасасс 240 сЕЧЯдтасстдс адаєдаасад ссгрдсдддсес даддасассу ссаєдстаста ЄЕсЧдєЧдсос9ад 300 сасддсаасе Есддсдссад стасдЕдссЕ содЕСсдссЕ ассддддсесса ддадсасссес
З6о чЕдассдрдЕ саадс 375
«2105 264 «2115 375 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 264 чаддесдсадс гдссддаасс сддсоддсоода сгддсдсадс сгддсодадаєс єССсдадастд бо адстдедссуд ссадсуддсеєс сассеЕссадс асстасдсса сдаасрдддЕ дсдссаддсс 120 ссЕддсааач дссіддаасд ддсдссссдд ассадаадса адсасаасаа стасдссасс 180 тбасврасудссу асадсдєдаа дддссддЕсс ассассадсс додоадасдасад саадаасасс 240 сЕдвассрдс адасєдаасад ссгрдсдддсс даддасассуд ссдЕдстаста єЕЕДдсдЕдЧс9о 300 сасддсаасе Есддсаасуддс стьасдЕдссЕ содЕСсдссЕ ассддддсесса ддадсасссес
З6о дЕдассдеЕдЕ саадс 375 «2105 265 «2115 2067 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 265 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕЯдЧЕ СсСЕддсаааас сдддсЯадЕЕС сстдсаєсвд бо адсеЕдсдсдд сЕсссододасєс сасссеЕсссс аасдсаяаєдда сЄдчадссддадс єсдссаддес 120 ссдддсааад дссеЕСЧдадед ддаєгдаєсдІ аєсаадесста ааассдасдд сддадсассасд 180 чаєстасдсдд сіссадессаа аздздссдЕссє ассарсєссс дсдасдаєад сааааасасе 240 сЕдвгаєстдс адаєдаассс ссгдаааасі даадасассуд садЕСТаста сеЕдсастасс 300 ссдЕддддаає ддссЕсЯдЧса сччаєсаєсоод ддссадддса сасеЕддсвтас ддсдЕСССсСсС
З6о дсЕадсасаа адддссстад сдЕдсЕсссЕ седдссссса дсадсаадад сасаадсддас 420 ччваасадссу сссіддоассд ссеЕсдЕдаад дастасеЕссс ссдадсссаєс дасадеЕдссь 480 гддаасадсуд дадссстрдас аадсддсудєд сасасеЕсссс стдссаєгдсе дсададсадс 540 часстрдсасе сссідадсад сдсддеЕсасс дсдссстадса дсадсссддда сасссадасс бо тасаєссдса асдсдаасса саадсссадс аасассааад гддасаадаа ддсддадссс бо аачдзадссдсд асдодсодада адддсссоода доадсодадчдає ссдаддсдса дсідстододаа 720
ЕсСЕЧДдсоддсо дассддсдса дссгіддсоода ссЕСтсдадас єдадссдедс сдссадсдадс 780
ЕЕСассеєєсса дсасстасдс саєсдаастдда деЕдсдссадд сссстддсаа аддсстоддаа 840 гдддсдсссс ддаєссадаад саадсасаас аастасдсса сстассасдс сдасадсдаед 900 20) аадддссддЕ сассаєссад ссдддасдас адсаадааса ссседсассо дсадаєдаас 960 адссідсддд ссддаддасас сдссдєдсас гтаєєдесЕдеЕдс доадасасоддсаа сЕссддсдсс 19020 ачдстасдеЕдеЕ0 сеЕСоЧдЕеЕссддс свтассддддс садддсассс ЕСЯдЕдчассЯдс дЕСВадсосе 1980 адстассаадд дссссадсд дЕсссссстд дсасссадса дсаачадсас асстддсдада 1140 асадссусесс гЕдЧдодстЯссЕ ддсдааадас сбасЕсссссд адсссаєдас сасдЕСЄТС9 1200 аасЕссддсд сссідассад сддсдеЕдсас ассеЕссссад ссдЕдссдса дадсадсдадас 1260 сЕдвтассссс гЕДдЕССсСЕСсСсСдЄ ддесассуєд сссЕСТадсо ссседддаас асадасатсає 1320 ассеЕдсааєсдд єсааєсасаа дссосссаас ассааадссд асаачдааадс сдадсссаад 1380 адстсдсдаса ааасссасас асдсссассд гдсссадсас сеЕдаадстсдс аддоаддассд 1440 гсадессссс ЕСЕссссссс аааасссаад дасассстса єдаєсссссо дасссстодад чдЕсасаєсдся гЕдЧсдадсдда сдсдадссас даадассстд аддеЕсаадес саасєддсас 1550 чЕддасддса гдчаддеєдса баасдссаад асааадссодс доададдадса деасаасадс 1620 асчтассуєда сддЕсадсд сстсассдеЕсС сеЕдсассадд ассддссдаа сддадасааччад 1680 тасаадсдса аддсссссаа сааадсссіс ддсдссссса ссдадаааас сасссссааа 1740 чдссааадддс адссссддада ассасаддєд басассстрдс ссссаєсдссо дчваєсдадсед 1800 ассаадаасс аддссадсс чдЕЧдЧдсдссод дссаааддсс ЕСсСсарсссад сдасаєсдсс 1860 чЕддадсддд ададчсаасдуда дсадссддад аасаасвраса адассасдсес ЕсссдЯдЕгдсед 1920 частссдасуд дсЕсСсЕЕсСЕЄ ссЕСсСвасадс аадсесассу гсддасаадад саддсдасад 1980 садддачаасч ЕСЕсСсСссаєсдуд сЕССЧдЕЧаєд саєдаддссс гдсасаасса стасасвсад 2040 20) аададссеЕсе сссдеЕсессс ддатсааа 2067 «2105 266 «2115 1350 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 266 чадчаєдсаає ЄддЕсЧдааєс єддчЕдЧдчеЕддЕ сЕддтаааас сдддсудЧчєєс сстдсаєст бо адсЕдсдсдд сЕсссододаєсєс сасссеЕсссс аасодсдєдда сЄдадссдддІ єсдссаддес 120 ссдддсааач дссоісдадсд чассддЕсЧЕ ассаадеЕсса ааасеєдасддд єддсассасд 180 чаєстасдсдд сіссадессаа аздздссдЕссє ассарсєссс дсдасдаєад сааааасасе 240 сЕдвгаєстдс адаєдаассс ссеЕдаааасе даадасассуд садеЕСтаста сеЕдсастасс 300 ссдЕддддаає ддссЕсЯдЧса сччаєсаєсоод ддссадддса сасеЕддсвтас ддсдЕСССсСсС
З6о дстадсасса адддссссЕс сагдЕссссс сеЕддссссса дсадсаадад сассадсдадс 420 часасадссо сЕссддассдЯд сстрддеЕсаад дастасессс ссдадсссдєс дассдеЕдссс 480 гддаасадсуд дадссстдас сЕССддсудєд сасассеЕєсс ссдссаєдсе дсададесссь 540 часстрдсаса дссодадсад сдсддеЕсасс дЕдсссЕСта дсадсссддар сасссадасс бо тасаєссдса асдсдаасса саадсссадс аасассаадд гддасаадаа ддсддадссс бо аачадсєдсд асаааасєса сасаєдссса ссдрдсссад сасссдаадс сосадоававдава 720 ссдеЕсадеЕсе ЕссЕсеЕсссс сссаааассс ааддасассс єсаєдаєсьс ссодадассссь 780 чаддесасає дсояасддвсдЧас ддасдеєдадс сасдаадасс сідаддссаа дЕсССВвассд 840 гасдєсддасо дсоасддаддс дсасаасрдсс аадасааадс содсддададда дсадеасаас зо 900 ачдсасчдбасс дЕдсддсєсад сдессесасс деЕсстдсасс аддассддсс даасддсаад 960 чачтасааде дсааддесес саасааадсс сеЕСсддсдссс ссассдадаа аассаєсустсс 19020 ааггдссааад ддсадссссд адаассасад деЕдеЕдсассс гдсссссаєс ссоаддаєсвад 1980 сеЕдассаада ассаддссад ссісЕсдсдс дсадссааад дссЕстаєсс садсдасаєс 1140 чссасддадеі дододададсаа сбдддсадссд дадаасаасс асаадассас дссосссдаед 1200 сЕддассссу асддсссссє сЕсссеЕСУЯЄдд адсаадсеса ссдЕддасаа дадсадчвсд 1260 садсадддада асдЕСЕссеЕс асдсеЕссдеєд аєдсаєдадд сЕСТтдсасаа ссоассссасдч 1320 садаачадсс ЕСЕСсСстдЕСсС сссоаддатааа 1350 «2105 267 «2115» 645 «2125 ДНК збо
«213» Штучна послідовність «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 267 саддссдЕсЯ Едасссадда асссадсстд асадедЕСсс стддсоддсас сасдасссвд бо асаєдесддса деЕсстасадд сдссдеЕдасс ассадсаасоі асдссаастд ддсдсаддваа 120 аадсссддсс аддссєссад аддастсдаєс ддсддсасса асаадачадс ссстддсасс 180 ссгЕдссадає єсадсодчаєс ЕСЕдсЕдооада дддаааддссд ссседасасі дЕСсддсдсс 240 садссадаач асдчаддссда дчеасстасрдс дсссдЕддЕ асадсаассі дЕЧ9оОдеєс 300 часоддаддса ссаадсрдас адссстаддеЕ саасссаадд срдсссссад сдудасссвд
З6о реЕссссссса дсадсдадда асгрдсаддсс аасааддсса ссстддсстд ссрдаєссадс 420 часеЕсстасс саддсдссдІ дассдіддсс гддааддссу асадсадссс сдедаадчдсс 480 чдасадгддада ссассасссс садсаадсад адсаасааса адсасдссдс садсадстас 540 сЕдадссрда сссссдадса ЧдеЕддаададс сасаддеЕссоІ асадссдсса ддсдасссас бо чададдсадса ссдсддадаа аассдеЕддсс сссассдаді дсадс 645 «2105 268 «2115 2067 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 268 чаддєдсаає ЕдЧсЕЧЧааєс содЕЧдЧдЕЯдЧЕ СсСЕддсаааас сдддсЯадЕЕС сстдсаєсвд бо адсЕдсдсд сЕсссоддасєс сасссеЕсСссс аасодсдєдда єдчадссдддІ Есдссаддсес 120 ссдддсааач дссоісдадсд чассддЕсЧЕ ассаадеЕсса ааасеєдасддд єддсассасд чаєстасдсдд ссіссадессаа адздссдЕссє ассассеєссс дсдасдасад сааааасасуі 240 сЕдвгаєстдс адаєдаассс ссгдаааасі даадасассуд садЕСТаста сеЕдсастасс 300 ссагдодадаає чдєсеЕсддса счаєвтаєвсдуа ддссадддса сдстддеЕстас дурдеЕсессс
З6о дсЕадсасаа адддссстад сдЕдсЕсссЕ седдссссса дсадсаадад сасаадсдадас 420 ччваасадссу сссіддоассд ссеЕсдЕдаад дастасеЕссс ссдадсссаєс дасадеЕдссь 480 гддаасадсуд дадссстідас аадсддсуаєд сасассессс срдссоасдсІ дсададсадс 540 часстрдсасе сссідадсад сдсддеЕсасс дсдссстадса дсадсссддда сасссадасс бо тасаєсвєдса асдедаасса саадсссадс аасассааадч сддасаадаа ддеЕддадссс бо аачдзадссдсд асдодсодада адддсссоода додсодадчає ссдаддсдса дсгдседдаа 720 20)
ЕсСЕЧДдсоддсо дассддсдса дссгіддсоода ссЕСтсдадас єдадссдедс сдссадсдадс 780
Еессассесеса дсасстасудудс саєдаасодд дедсдссадда ссссгддсаа аддсстддаа 840 гдддсдсссс ддаєссадаад саадсасаас аастасдсса сстассасдс сдасадсдаед 900 аадддссдді ссассаєсад ссдддасдас адсаадааса ссстдтасст дсадаєдаас 960 адссідсддд ссддаддасас сдссдєдсас гтаєєдесЕдеЕдс доадасасоддсаа сЕссддсаас 19020 дсстасдеЕдеЕ0 сЕсоддеЕсєсдс сЕассддддс садддсассс ЕСЯдЕдчассЯдс дЕСВадсосе 1980 адеЕассаадд дссссадсдс дЕссссссгд дсасссадса дсаададсас аєссддсдада 1140 асадссусесс гЕдЧдодстЯссЕ ддсдааадас сбасЕсссссд адсссаєдас сасдЕСЄТС9 1200 аасістддсд сссеЕдассад сддсдєдсас ассеЕссссад сссдстдса дадсадсдадс 1260 сЕдвтассссс гЕДдЕССсСЕСсСсСЯєЄ ддесассуєбд сссЕСТадсо сссвдддаас асадасатсає; ассеЕдсааєсдд єсааєсасаа дссосссаас ассааадссд асаачдааадс сдадсссаад 1380 адсеЕдсдаса ааасесасас агрдсссассд сбдсссадсас ссдаадсєдс аддддадчвассд 1440
ЕсадеЕсеЕссс ссЕєсссссс аааасссаад дасассстса сдаєссеьсссду дасссстдад 1500 чдЕсасаєсдся гЕдЧсдадсдда сдсдадссас даадассстд аддеЕсаадес саасєддсас 1550 чЕддасддса гдчаддеєдса баасдссаад асааадссодс доададдадса деасаасадс 1620 асдтассдбд гддссадсудс ссісассуєс срдсассадча ассддссдаа єЄддсааддвад 1680 тасаадсдса аддсссссаа сааадсссоіс ддсдссссса Есдадаааас сассессааа 1740 дссааадддс адссссдада ассасаддед гасассстдс ссссагдссду ддаєдачЧчстд 1800 ассаадаасс аддссадсс чдЕдЧдсЕдссвд дЕСаааддсс сстарсссад сдасаєссдсс 1860 20) чЕддадсддд ададчсаасдуда дсадссддад аасаасвраса адассасдсес ЕсссдЯдЕгдсед 1920 часеЕссдасу дссссЕссЕс ссеСсСсасадс аадсссассд гддасаадад саддеЕддсад 1980 саддадачаасч ЕСЕсСсСссСасдд сЕССЧдЕЧаєд саєдаддссс гдсасаасса стасасосад 2040 аададссеьсь сссеЕдЕСьЬсс ддадеааа 2067 «2105 269 «2115 2070 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 269 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсоддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕддссс БбассеЕсстас дсодсадааає сссадддесуд сдссасдаєд асссудєдаса стадсассес тассаєєтає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадчає аседсадеЕдес ассассдедс асодсддасдас 300 гЕЕсСЧЯсЕсддс гддчастаєссу дддссааддс асссісдраа СЯдЕЕССЕЕС єдссадсаса
З6о аадддсссса дсЯасдеЕсссс ссеЕддссссЕ адсадсаада дсасассвду сддаасадсс 420 дсссгдддсеЕ дссссдєдаа ддастасьсеЕ сссдадсстд ЕдассдєдЕС сЕддаасесь 480 ддсдссстіда саадсддсдІ дсасассееєс ссадссдсдс гсдсададсад сддсестдтас 540 гсСЕСЕсдадса дсоасддессас сдсдсстадс адсадсстдд дсасссадас стасаєссдс бо аасдсдаасс асаадсссад саасассааа дсддасаача аддеддадсс саададседе бо чаєддсддад дадддсссдуда аддсддадда єссдаддаєдс адстдстдда ассгддсдадс зо 720 ччасрддеЕдс адссЕддсдда аєссстЕдадча сеідадсвдсд ссдссадсдд сеЕссассес 780 адсасстасуд ссаєдаасвєд ддсдсдссад дсссстддса ааддсестдда асдчоддесдесс 840 сддассадаа дсаадсасаа саассрасдсс асстастрасд ссдасадсадс даадддсс4дд 900 ссассаєса дссдддасда садсаадаас ассстідвасс гдсачаєсдаа садсстдс4дад 960 чдссдаддаса ссодссєбдса стассдедесд соддсасддса ассссддсдс садстаєсчЧчід 19020 гСсСЕкЧЧЄєсЧЯ сстассодддау ссадддсасс сісдєдасся гдссаадсдс гадсдеЕддсс 1980 дсЕсСссЕсСсСЯЯ гдЕєтаєсьє єсссссаєсс даєсдаасадс сдаааадсддд сассддсстсс 1140 дЕСЯСЧЯСдЕсС гДСсСсдаасаа ЄЕссассся адддаадсста аадеєдсадед дааадеєддває 1200 аасдсасрдс адсссддсаа сЕСсСссаддаа ссЕдсдасад аасаддасес сааддасадс 1260 асстассссс гЕдЕсСсСІсСсас сстдасасід ссвеЕааддсод ассаєдадаа асасааадес тасдссодсуд аадссассса ссадддссод адсесдсссд сасааадад сЕсСсаасад 1380 ччачадсдсд асаадассса сассудессс ссЕдЕсстд сссстдаадс єДдсеЕдасоадаес 1440 сСсСЕсСЕдЕддЕ ЄССЕДЕЕсСсс сссааадссс ааддасассс сдаєсдаєсад ссддассссс 1500 чаадесчассеЕ дсасододсдЧаЧес ддаєдеЕдссс сасдаддасс ссдаадсдаа дЕсСВаєсс9ва 1550 тасдєсддасу дсодсддаадсі дсасаасоудсс аадасааадс содсддададда дсадсасаас 1620 ачдсасчдбасс дЕдсддсєсад сдессесасс деЕсстдсасс аддассддсс даасддсаад 1680 чадсасааде дсааддсссс саасааадсс сісддсдссс ссаєсдадаа аассаєусссс 1740 аа9аадссааад ддсадссссуд адаассасад деЕдстасассс гдсссссагд ссдодвдваєдвад 1800 сеЕдассаада ассаддссад ссЕдеЕддсєдс сгддссааад дссЕєстаєсс садсдасаєс 1860 20) чссасддадеі дододададсаа сбдддсадссд дадаасаасс асаадассас дссосссдаед 1920 сЕддассссу асддсссссє сеЕсссЕСТас адсаадсеса ссдЕддасаа дадсадчсд 1980 садсадчддда асчссессссавдссссоєсд асдсаєдадд сссеЕдсасаа ссастасасд 2040 садаададсс ЕсЕсссьдЕсС сссдддаєааа 2070 «2105 270 «2115 1341 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 270 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсоддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕддссс БбассеЕсстас дсодсадааає сссадддесуд сдссасдаєд асссдеЕдаса стадсассес тассаєєтає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадчає аседсадеЕдес ассассдедс асодсддасдас 300 гЕЕсСЧЯсЕсддс гддчастаєссу дддссааддс асссісдраа СЯОДЕЕССЕЕС єДдссадсасс
З6о аадддссссі ссадрдеЕсссс ссрддссссс адсадсаада дсассадсду сддсасадсс 420 дсСЕСТЯдддсЕ дссгддесаа ддасстасьсс сссдадсссд ЕдассдсдЕСсС сЕддаасадс 480 чдчдадссстда ссеЕссддсдІ дсасассеЕєс сссдсесдєдс гдсададеєс гддсстоатає 540 адссідадса дсодсддссас сддссЕссЕ адсадсстдуда дсасссадас стасаєссдс бо аасдєдаасс асаадсссад саасассаад деддасаача аддсддадсс саададстдс бо часаааассіс асасасдссс ассдсдссса дсассідаад ссдсаддддчд ассдеЕсадеЕс зо 720 гЕссЕссесс ссссаааасс сааддасасс сісаєсдаєсеі сссддасссс єдаддесаса 780 гдсЧдсддсда сддасдеєдад ссасдаадас сстдаддсса адессаастд дсасдаєсоддас 840 часадвсддадад єдсаваасдс саадасааад ссдсодддадда адсадсасаа садсасчдасас 900 сЯчЕдсдЧдЕса дсодсссісас сдсстдсас саддаседдс єдааєддсаа ддадеасаад 960 гдсааддеЕсс ссаасааадс ссісддсодсс сссассдада ааассаєссос сааадссааа 19020 чадсадсссс дадаассаса ддсдсдсасс сгдсссссає сссддчаєда дседассаад 1980 аассаддіса дссЕСЕСсСдеЕд содсадссааа ддсеЕєстаєс ссадсдасає сдссагсодад 1140 гдддадчадса асдддсадсс ддадаасаас сбасаадасса сдссЕСссдЯдс дсгддасссс 1200 часддссссє ЕСЕсСссЕсдс дадсаадссс ассдсддаса адчадсаддед дсадсаддадад 1260 аасдсєссеЕсь сасдсессдс дчаєсдсаєдад дсЕСсдсаса ассастсасас дсадаададс сЕсСЕСССтЯДЕ сЕССЯДддЯДсаа а 1341 «2105 271 «2115 657 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 271 чавгассєдеЕса єдасеЕсааєс сссастЕдссеЕ седссддеЕда сіссаддсда ассддсдадс бо аьЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСод сасессаасу дссасааста ЕССсСсСвдаєсс9в 120 тассрдсааа аассддадсса дадсссісад седстдчаєсс асседддсеЕс Єаассдсдсе 180
Ессддеєдвас соодчассЯяссс садсуддсссЕ ддаєссддса ссдарсссас дЕсДдааааєс 240 адссдЕдеЕсд аадсадаада счдсдддсдЕЄ гастастдра сдсаддсаад саєсаєвсад 300 сдадасЕсеЕсд дссааддсас сааддеЕсдаа ассрааасдсра сддЕддсвдс ассаєстдеЕс
З6о ссасссвсс содассаєстда сдадсадессд ааасстддаа сСдсссстає єдЕдЕДДСсСвд 420 сЕдаасаасе єСтаєсссад ададдссааа дсасадедда аддеддаєаа сдсссессаа 480
Есдддсаасоі сссаддадад Єдссасадад саддасадса аддасадсас стасадссес 540 адсадсассс гдасдсрдад сааадсадас гасдадааас асааадесста сдсестдсдаа бо дЕсасссаєсс адддссодад сЕСдсссдсс асааачадсо єсаасаддавда ачдадеде 657 «2105 272 «2115 642 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 272 саддссдЕсЯ Едасссадда асссадсстд асадедЕСсс стддсоддсас сасдасссвд бо асаєдесддса деЕсстасадд сдссдеЕдасс ассадсаасо асдссаасвд ддсдсаддаа 120 аадсссддсс аддссєссад аддастсдаєс ддсддсасса асаадачадс ссстддсасс 180 ссгЕдссадає єсадсодчасєс ссЕдсЕдодада дддаааддссд сссеЕдасасі дЕСсддсдсс 240 садссадаач асдчаддссда дчеасстасрдс дсссдЕддЕ асадсаассі дЕЧ9оОдеєс 300 часоддаддса ссаадсєдас адсдсеЕдадс адсдсоєсса ссаааддесесс ЄЕЕСсССсСЯЧЕЧЕКЕ
З6о ссСЕСТЯддсСЕсС стадссссаа деЕСсССсассіст ддаддсассуд судсЕСсССЯДЧЯд аєгдссеЕсвед 420 аачдччаєтаєє єссстдадсс єдеЕдасадед єСстддааса дсододадсасе дасстстодда 480 чеЕдсасасьс ЕссссастдЕеЕ дседсадссс ссеЕддассдс асадссодад садсадсдЧаєд 540 20) асадсдссса дсадсадссі дддсасссад асстасарсс дсаасудєсєдаа ссасаадссс бо адсаасасса аддсддасаа дчааддеддаа сссаадеЕссе де 642 «2105 273 «2115 2070 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 273 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕСсСсддааєд часдддсаєс асраасссаа дсоддЕддссс БбассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадчає аседсадеЕдес ассассдедс асодсддасдас гЕЕСУЧЇСЕєДдсС гододастаєсд дддеЕсааддс асссісдсаа счедЕСсСЕсСеЕсС гдстсадсаса
З6о аадддсссса дсЯасдеЕсссс ссрддссссЕ адсадсаада дсасассвддда сддаасадсс 420 дсссгдддсеЕ дссссдєдаа ддастасьсеЕ сссдадсстд ЕдассдєдЕС сЕддаасесь 480 часдсссрда саадсддсудс дсасассесеЕ ссадссдедс гЕдсададсад сддсстдсас 540 гсСЕСЕсдадса дсоасддессас сдсдсстадс адсадсстдд дсасссадас стасаєссдс бо аасдєдаасс асаадсссад саасассааа деЕддасаада аддсддадсс саададст де бо чаєддсддад дадддсссдуда аддсддадда єссдаддаєдс адстдстдда ассгддсдадс 720 ччасрддеЕдс адссЕддсдда аєсссеЕдадча сеідадсвдсд ссдссадсдд сеЕссассес 780 адсасссасуд ссаєсдаассд ддсдсдссад дссссгіддса ааддсссдда агд9ддеЕдссс зо 840 сддассадаа дсаадсасаа саассрасдсс асстастрасд ссдасадсадс даадддсс4дд 900
ЕЕєСсассаєса дссддадасда садсаадаас ассстдстасс сбдсачаєдаа садссодс9д 960 чдссдаддаса ссодссуаєбдса стассдрдсєд соддсасддса ассесддсаа сдсстаєсдчед 19020 гСсСЕкЧЧЄєсЧЯ сстассодддау ссадддсасс сісдєдасся гдссаадсдс гадсдеЕддсс 1980 дсЕСССІСсСсСЯ Е9ДЕсвтассіє ссссссаєсс даєдаасадс гдаааадсда сассдесосс 1140 дЕСЯСЧЯСдЕсС гДСсСсдаасаа ЄЕссассся адддаадсста аадеєдсадед дааадеєддває 1200 аасдсастдс адеЕссддсаа сІсссаддаа єСссдеЕдасад аасаддассс сааддасадс 1260 асстассссс гЕдЕсСсСІсСсас сстдасасід ссвеЕааддсод ассаєдадаа асасааадес 1320 тасдссодсуд аадссассса Есадддссвд адсесдсссд Есасааадад сеЕсСсаасад 1380 ччачадсдсд асаадассса сассудсссс ссЕдЕєсстд ссссеЕдаадс єДдссддадсдадо ссСЕКЕСЕУЧвЯЄ ЕССЕДеЕсссс сссааадссс ааддасассс єдаєдаєсад ссодадассссс 1500 чаадесчассеЕ дсасоддсдЧаЧє ддваєдеЕдссс сасдаддасс ссдаадсдаа дЕсССВваєссоач 1550 тасдєсєддасуд дсдЕддаадс дсасаасдсес аадасааадс сдсдддадда дсадтсасаас 1620 ачдсасчдбасс дЕдсддсєсад сдессесасс деЕсстдсасс аддассддсс даасддсаад 1680 чадсасааде дсааддсссс саасааадсс сісддсдссс ссаєсдадаа аассаєусссс 1740 ааггдссааад ддсадссссуд адаассасад десдсасассс гдсссссава ссоддаєсвад 1800 сеЕдассаада ассаддссад ссрдсддаєдс сгддссааад дссЕєстаєсс садсдасаєс 1860 чдссодасддадеі доддададсаа єдддсадссу дадаасаасої асаадассас дсстісссагд 1920 сЕддассссу асддсссссє сеЕсссЕСТас адсаадссса ссдЕддасаа дадсаччасд 1980 20) садсадддда асчссеЕссссавдссссооєсд асєдсаєдадд сісЕдсасаа ссастасасд 2040 садаачадсс ЕСЕСсСстдЕСсС сссоаддатааа 2070 «2105 274 «2115 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 274 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 19 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПт сі сі1у сб1у ТБПІ ТБбг Авр Тут Аїа А1а 50 зо бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80
Тецп Тук Гей біп Меє Авп бек Гей Гув ТПтІ бій Авр ТПтІ Аїа Уаї Туг 85 Зо 95
Тук Сув ТПжї ТПтІ Ркго Тухк бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 сіу ТПг Гей Маії ТПт Уаї бек 5бег 115 120 «2105 275 «2115 19 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 275
Ак чІ1е Ппув бБетг Гув ТПкх бі сі1у сі1іу ТПї ТПх Авр Тут Аїа Аза Рго 1 5 10 15 уаї гув -Щ1У зо «2105 276 «2115 689 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 276 сі Маї сб1іп Гец Маії сіц бехт сіу с1у с1у Гей Уаії ув Рго б1у 1У 1 5 10 15 зет Гей Агд Пец бек Сув Аїа Аїа бБет сСіу Рпе ТПтІ Рпе бег Авп Аїа 20 25 30
ТЕр Меє бет Тктр Уаі Агд біп Аза Рго с1іу Ппув с1у Гей сі Ткр Уаї1ї 35 40 45 с1у Акуд Іїе Ппув Бек Пув ТПт сі сі1у сб1у ТБПІ ТіПг Авр Тут Аїа А1а 50 55 бо
Рхто Уаі пув б1у Агуд Рпе ТПї Іїе бБег Агуд Авр Авр 5Беїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПжї ТПтІ Ркго Тухк бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 100 105 110 с1у ТПхї Гей Уаі1! ТПг Уаії бБет бБегт Аїа бек ТПтї Гпув б1у Рго Бетг Уаї 115 120 125
Рпе Рго гей Аза Рго бек бек Ппув бБет ТПтІ бБет с1у с1у ТПх Аїа Аїа 130 135 140 теп сіу Сув Гец Уаії Гуз Авр Тухк Рпе Рго біц Рго Уаі1і ТПт Уаї1ї бек 145 150 155 160
Тгр Авп бек б1у Аїа Гец ТПт бек СсСіу Уа1ї Нів ТПт Рібе Рго А1їа Уаї 165 170 175 теп сіп бет бБет біу Гей Тук бек Гпецп бет бБет Уаі Уаі1і ТіПхК Уаі1ї Рго 180 185 190 бек бек бБет їец сС1у ТПх Сіп ТПх Тут І1їе Сув Авп Уаї Авп Нів Гув 195 200 205
Рко Бек Авп о ТПх Кгув Уаі1 Авр Гуз їГув Маії бі Рко Гпув бек Сув Авр 210 215 220 сіу сб1у сб1у с1у Бек сіу сіу сі1у с1у бек біц Уаії біп їец Те С1ц 225 230 235 240
Ззек бі1у б1у б1у пгецп Уаі1і біп Рго сіу сб1у бБет Гей Агд Ггецп бек Сув зо 245 250 255
Аза Аза бек сіу Рпе ТПт РПе бет ТПї Тут Аза Меєсє Авп Тгр Уаї Агд 260 265 270
Сбіп Аза Ркго с1у пув С1у еп бій Ткр Уаії 5Бегт Агуд Іїе Аг9д Бек Гув 275 280 285
Тук Авп Авп Тут Аїа ТПх Тухк Тухк Аїа Авр бБет Уаі1і ув с1у Акд РБГе 290 295 300
ТпПї Іїе бБет Акд Авр Авр бБет Кпув Авп о ТПт Гец Тут Гецп сіп Меє Авп 305 310 315 320 бек гец Агд Аїа Сі Авр ТБПІ АТїа Уаї Тут Тут Суз Уаї Агд Ніз 01У 325 330 335
Авп о Рпе с1у Авп бБет Тук Уаі1і бек Тгр Рпе Аза Тут Тгтр сС1у сбіп 01Уу 340 345 350
ТПт Гец Уаї ТПт Уаї бек Бек Аїа бек ТПт Гув с1у Рго Бек Уа1ї РПе 355 360 365
Рко гецп Аза Рго бек бБет КГув бБет ТПт Бех сіу с1у ТПт Аїа Аїа Гей 370 375 380 сіу Сув Гецш Маії Гув Авр Тут РпПе Ркго бій Рго Уаі ТПт Уаії бБет Ткгр 385 390 395 400
Авп о бек СсС1у Аїа Те ТПг бег сіу Уаї Нів Тртх Рре Рго Аїа Уаї Ієц 405 410 415
Сіп бек бБет с1у Гецп Тут бБет Ггец бет бБеїт Уаї Уа1ї ТПтг Уаї Рго 5бБег 420 425 430 бек бек Гей С1у ТПк біп ТІ Тук І1їе Суз Авзп Уа! Авп Нів Гуз Рго 435 440 445 зет Авп о ТПтІ пуз Маії Авр пув пув Уаії сій Ркго Гпув бек Сув Авр Гув 450 455 460
ТПЕ Нів ТБкг Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сб1цп Аїа Аїа с1у С1у Рго 465 470 475 480
Ззек Уаії РіПе Гей Рібе Рго Рго Пув Рго Пув Авр ТПтїІ Гецп Меї І1е бек 485 490 495
Атуд ТПт Рго бі Уа1і ТПх Сув Уа1ї Уаї Уа1і! Авр Уаії бБет Нів Сс1ц Авр 500 505 510
Рго Сі Уаї пуз Рібе Авп Тгр Тук Уаії Авр сС1іу Уа1і с1іц Уаї Ніз Авзп 515 520 525
Аїа гув ТПк пув Рго Агуд бій бі сіп Тут Авп обет ТПІ Тут Аг9д Уаї 530 535 540
Ууаї Бек Уаї їец ТПт Уаї їец Нівз Сіп Авр Тгр їец Авп с1у Гув б1цЦ 545 5Б5О 555 56О
Зо
Тук гув Сув пув Уаії бБет Авп гув Аза теп біу Аїа Рго Іїе с1ц Гуз 565 570 575
ТпПї Іїе бБет Гпув Аїа гуз С1у біп Рго Агд бід Рго сіп Уаі1і Тук ТЕПкК 580 585 5ЗО0
Те Рко Рко Сув Агд Авр бі Гецп ТПхг Гув Авп о біп Уаії бек Гец Тгр 595 бо 605
Сув Гец Уаї Ггув с1у Рпе Тук Рго Бек Авр І1е Аїа Уа1ї сі Тгр СсСІ1ц 610 615 620 зек Авп біу біп Рго бій Авп о Авп Тут Гув ТПх ТПк Рко Рко Уаї Гей 625 630 635 640
Авр бБегт Авр сіу бБет РПе РпПе Гецп Тут бек гув Гец ТПт Уаї Авр Гуз 645 650 655 бек Агд Тгр б1іп Сіп сб1у Авп Уа1ї Ріе бБет Сув бБет Уаі1ї! Меє Ніз с1ц 6б6о 665 670
А1ї1а те Нів Авп Нівз Тут ТПг сіп Гпув бег ІТец бег їец бек Рго 01уУ 675 680 685
Тув «2105 277
«2115 450 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 277 сі Маї сб1іп Гец Маі сіц бехт сіу сіу с1у Гей Маі Гув Рго бі1у «1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПІ Рпе 5еїг Авп Аїа
ТЕр Меє бет Ткр Уаі Агд біп Аїа Рго сСіу пув с1у Гей сі Тгр Уаї1ї 20 сС1у Акд І1е Пув бет Ппув ТПг сі сС1у с1у ТБг ТПІ Авр Тут А1а А1а бо
Рхто Уаі пув б1у Агд РПе ТПІ Іїе бБет АкКд Авр Авр бБеїт Гув Авп о ТПк 65 70 75 80 25 теп Тут Ггец сіп Меє Авп бек Ггецп пув ТПг біц Авр ТПтІ Аїа Уаі1ї Тук 85 Зо 95
Тук Сув ТПтІ ТПх Рго Тут бі Тгр бек Тгр Тут Авр Тут Тгр с1у сіп 30 1600 105 110 сіу ТпПг тей Маї ТПтІ МУМаії бБет бБет Аїа бет ТПт Ггувз бі1іу Рго бБет Уаї 115 120 125 35 Рпе Ркго Гец Аза Рго бБет бетг Гув бБет ТПтї бБег с1у сіу ТПг Аїа Аї1а 130 135 140 теп сіу Сув Гец Уаії Гуз Авр Тухк Рпе Рго біц Рго Уаі1і ТПт Уаї1ї бек 145 150 155 160 40
Тгр Авп бек б1у Аїа Гец ТПт бек СсСіу Уа1ї Нів ТПт Рібе Рго А1їа Уаї 165 170 175 теп сіп бет бБет біу Гей Тук бек Гпецп бет бБет Уаі Уаі1і ТПхг Уаі1ї Рго 45 180 185 190 бек бек бБет Гец С1у ТПт сіп ТПк Тут І1їе Сув Авп Уа1! Авзп Ніз Гув 195 200 205 50 Рго Бек Авп ТПтї Гуз Уаі Авр гув пув Маі бій Рго пув Бек Сув Авр 210 215 220 пуз Тк Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аза Рго бі1ц Аза Аїа СсС1у 01У 225 230 235 240 55
Рко Бек Уаії Рібе гецп Рпе Рго Рго Гув Рго Гув Авр ТПх Гей Меє Те 245 250 255 бек Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаі1ї бБетг Ніз с1ц 260 265 270
Авр Рго сі Уа1! Пув Рпбе Авзп Тгр Тут Уа! Авр сС1у Уаї сіц Уа1ї Нівз 275 280 285
Авп Аїа Гув ТПт Гув Рго Акд сі бі біп Туг Авп о бет ТПтІ Тут Акгд 290 295 300
УуУаї Ма1! бек Уа1 теп ТПг Уаї Іецш Нів сСіп Авр Тгр Гей Авп с1у Гув 305 310 315 320 січ Тук Ппув Сув Гпув Уаі бБет Авп пув Аїа ей С1у Аїа Рго Іїе Сс1ц 325 330 335
Туз ТПтІ І1е бБет Гпув Аїа пуз б1у біп Рго Агкд біц Рго Сбіп Уаї Сув 340 345 350
ТпПк Гец Рко Рко бБет Агд Авр бі їец ТПт Гув Авп біп Уаії бек Гец 355 360 365
Ззек Сув Аї1а Уа1ії пув біу Рпе Тут Рго бБегт Авр Ії1е Аїа Уаі1і сі Тгр 370 375 380 бі бек Авп о с1іу сіп Рко біц Авп Авп о Тук Гпув ТПї ТПк Рго Рго Уаї 385 390 395 400 теп Авр бБет Авр Сіу бек РпПе Рібе їец Уа1! бБет пув Гей ТПї Уа1ї Авр 405 410 415
Зо пуз бБег Агд Тгр Сіп сіп сб1у Авп Уа! Рібе бек Сув бБет Уа1! Меє Ніз 420 425 430
Сі Азїа їец Нів Авп Агуд Рбе ТПт сСіп пув бБет Гец бет Гец бек Рго 435 440 445 соі1у Гуз 450 «2105 278 «2115 119 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 278 сі Маї сбіп Гец Гец сі бек сіу сіу с1у Гей Уаі біп Рго сС1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПтІ РПе бек бек Тук 20 25 30
А1їа Мес бБег Тгр Уаі Агуд сіп Аї1а Рго сбіу пув біу їец бі Тгр Уаї 35 40 45 зек Аї1а І1їе бек біу бек біу сіу бек ТПІ Тут Тут А1їа Авр бек Уаї1ї 50 55 бо пув с1у Акд РпПе ТПтї Іїе Бек Агд Авр Авп бетг Гув Авп ТПт Іец Туг 65 70 75 80 теп сіп Меє Азп бет Гец Агд Аїа бі Авр ТПтІ Аїа Уаї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Атуд б1у Авр Тут Акуд Тут Акуд Тут Робе Авр Тут Тгр с1у сбіп 01Уу 100 105 110
ТПт Гец Уаї ТПт Уаї Бек 5ег 115 «2105 279 «2115 109 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 279
Зек бек бі Ггеп ТПх біп Авр Рго Аїа Уаі бек Уаі Аї1а тей С1у сіп 1 5 10 15 зо
ТПкх Уаії Акуд І1е ТПїх Сув біп б1у Авр бБет Ггец Акд бБеїт Тут Тухк Аїа 20 25 30 бек Тгр Тут біп біп пув Рго біу біп Аїа Ргто Уаі Ге Уаї І1е Тук 35 40 45 сі1у гув Авп Авп Агуд Рго бек сіу Іїе Рго Авр Атд РпПе бБет с1у 5бБег 50 55 бо бек бек с1у Авп ТПтІ АТїа бБег Іїец ТПт Іїе ТПг СсС1у Аїа с1п Аїа с1ц 65 70 75 80
Авр біш Аїа Авр Тут Тук Сув Авп бБет Агд бій бет Рго Рго ТПтІ 01Уу 85 Зо 95 теп Уаії Уаії Рпе сі1у сі1у с1у ТПкх пув їГец ТПт Уаї Іец 100 105 «2105 280 «2115 674 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид"
«4005 280 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 10 15 зет Гей Агд Пец бек Сув Аїа Аїа бБет сСіу Рпе ТПтІ РпПе бБетг бек Туг 20 25 30
А1їа Мес бБег Тгр Уаі Акд сіп Аїа Рго сбіу пув біу їец бі Тгр Уаї 35 40 45 зек Аї1а І1їе бек біу бек біу сіу бек ТПІ Тут Тут А1їа Авр бек Уаї1ї 50 55 бо
Туз с1у Акд РпПе ТПї Іїе бек Агуд Авр Авп о бет Гув Авп ТПт Гец Тук 65 70 75 80 теп сіп Меє Азп бет Гец Агд Аїа бі Авр ТПтІ Аїа Уаї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Акуд б1у Авр Тут Агу Тут Агуд Тут Рпе Авр Тут Тгр б1у сіп Щ1Уу 100 105 110
ТПх Гец Уаї ТПїІ Уаї бек бек Аїа бек ТПт пув с1у Рго Бек Уа1ї! РіПе 115 120 125
Рко гецп Аза Рго бек бет КГув бБет ТПт Бех сіу с1у ТПт Аїа Аїа Гей 130 135 140 сіу Сув Гец Маі сіц Авр Тут РпПе Ркго бій Рго Уаі ТПт Уаії бБет Ткгр 145 150 155 160
Авп о бек СсС1у Аїа Іїецш ТПтї бег сіу Уаї Нів Тртх Рре Рго Аїа Уаї Ієц 165 170 175
Сіп бек бек с1іу Гей Тут бБет ТГецп бек бБетг Уаі1і Уаі1 ТПпг Уаії Рго 5ег 180 185 190 бек бек Гей С1у ТПк біп ТІ Тук І1їе Суз Авзп Уа! Авп Нів Гуз Рго 195 200 205 зек Авп ТПх гув Уа1 Авр бійш пув Маі сіц Рко пувз бек Сув Авр ШУ 210 215 220 сіу б1у б1у Бек сіу сіу сіу сі1у бБехт біп Аїа Уаї Уаї ТПпг сіп с1ц 225 230 235 240
Рко Бек Гей ТПх Уаі1і бек Рго сбі1у с1у ТПт Уаї ТПкх Гец ТПг Сувз ШУ 245 250 255 зетк бБет ТПтІ сбіу Аїа УМа1і ТПг ТПт бБег Авп Тут Аїа Авп Тгр Уаї сіп 260 265 270 біц пув Рго б1у сбіп Аїа Рпе Акд сіу їецп І1е сС1у б1у ТПг Авп Гуз 275 280 285
Атуд Аза Рхто сіу ТПтІ Ркго Аїа Акуд РоПе бехт біу бБет ІЇец їец сб1у с1Уу 290 295 300
Туз Аїа Аїа Гей ТПї Гей бек б1у Аїа сбіп Рго б1ц Авр сій Аїа с1ц 305 310 315 320
Тук Тут Сув Аїа Гей Тгр Тухк бек Авп Гей Ттр Уаі Рпе с1у с1у щу 325 330 335
ТП Гпув Гецп ТПтї Уаї Ге бек бек Аїа бек ТПтІ пув с1і1у Рко бек Уаї1ї 340 345 350
Рпе Рго тей А1їа Рго бехт бет Кув бБет ТПх бек С1у С1у ТПг АтТа Аї1а 355 360 365 теп сіу Сув Гец Уаії Гуз Авр Тухк Рпе Рго біц Рго Уаі1і ТПт Уаї1ї бек 370 375 380
Тгр Авп бек б1у Аїа Гец ТПт бек СсСіу Уа1ї Нів ТПт Рібе Рго Аїа Уаї 385 390 395 400 теп сіп бет бБет біу Гей Тук бек Гпецп бет бБет Уаі Уаі1і ТПхг Уаі1ї Рго 405 410 415 бек бек бБет Гец С1у ТПт сіп ТПк Тут І1їе Сув Авп Уа! Авп Ніз Гув 420 425 430
Рго Бек Авп ТПтї Гуз Уаі Авр гув пув Маі бій Рго пув Бек Сув Авр 435 440 445 пуз Тк Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сіц Аїа Аїа с1у С.1У 450 455 460
Зо
Рко Бек Уаії Рібе гецп Рпе Рго Рго Гув Рго Гув Авр ТПх Гей Меє Те 465 470 475 480 бек Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уа1ї Уаї Уаї Авр Уаї бБег Ніз Сс1ц 485 490 495
Авр Рго сі Уа1! Пув Рпбе Авзп Тгр Тут Уа! Авр сС1у Уаї сіц Уа1ї Нівз 500 505 510
Авп Аза Гпув ТПг Ггув Рго Агд бій сід сбіп Тук Авп бБег ТПтг Тут Агд 515 520 525
Ууаї уаї бек Уаї Гец ТПтї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр гей Авп с1у Гуз 530 535 540 січ Тук Ппув Сув Гув Маії бек Авп пув Аїа їей С1у Аїа Рго Іїе Сс1ц 545 5Б5О 555 5б6О
Туз ТПтІ І1е бБет Гпуз Аїа пув б1у біп Рго Агд бі Рго сіп Уа1ї Тук 565 570 575
ТПкх Гец Рко Рко Сув Атуд Авр бі їец ТПт Гув Авп біп Уаії бек Гец 580 585 5ЗО
ТЕр Сув теп УМаї пув сС1у Робе Тут Рго бБег Авр І1е Аїа Уа1! сій Тгр 595 бо 605 біц бек Авп б1у біп Рго сіц Авп Авп Тут Гуз ТПт ТБПг Рго Рго Уаї
610 615 620 теп Авр бБет Авр Сіу бек РпПе РібПе їецп Тут бБет пув Гей ТПх Уа1ї Авр 625 630 635 640 пуз бБег Агд Тгр Сіп сіп сб1у Авп Уа! Рібе бек Сув бБет Уа1! Меє Ніз 645 650 655
Сіш Азїа їец Нів Авп Ніз Тук ТПт с1іп пув бБет Гец бет Гец бек Рго 6б6о 665 670 соі1у Гуз «2105 281 «2115 449 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 281 сі Маї сбіп Гец Гец сіц бехт сіу сі1у с1у Гей Уаі біп Рго сб1і1у 1У 1 5 10 15
Ззек Гей Агд Гецп бек Сув Аїа Аїа бек с1у Рпе ТПтІ РПе бек бек Тук зо 20 25 30
А1їа Мес бБег Тгр Уаі Акд сіп Аїа Рго сбіу пув біу їец бі Тгр Уаї 35 зет Аїа І1е бек сіу Бек сіу Сіу бБет ТПтї Тут Тут Аїа Авр бек Уаї1ї бо
Туз с1у Акд РпПе ТПї Іїе бек Агуд Авр Авп о бет Гув Авп ТПтх Гей Тук 65 70 75 80 40 теп сіп Меє Азп бет Гец Агд Аїа бі Авр ТПтІ Аїа Уаї Тут Тут Сув 85 Зо 95
Аза Атуд б1у Авр Тут Акуд Тут Акуд Тут Робе Авр Тут ТІтр с1у сіп с1Уу 45 1600 105 110
ТПх Гец Уаї ТПїІ Уаї бек бек Аїа бек ТПт пув с1у Рго Бек Уа1ї! РіПе 115 120 125 50 Рго Ггец Аза Рго Бек бБег КГув бБет ТПтї Бек сіу сіу ТПпх Аїа Аїа ГІец 130 135 140 сіу Сув Гец Маі сіц Авр Тут РпПе Ркго бій Рго Уаі ТПт Уаії бБет Ткгр 145 150 155 160 55
Авп о бек СсС1у Аїа Іїецш ТПтї бег сіу Уа1ї Ніз ТПх Рібе Рго Аїа Уаї Ієц 165 170 175
Сіп бек бБет с1у Гецп Тут бБет Ггец бет бБеїт Уаї Уа1ї ТПтг Уаї Рго 5бБег 180 185 190 бек бек Гей С1у ТПк біп ТІ Тук І1їе Сув Авп Уа1ї Авп Нів Гуз Рго 195 200 205 зек Авп ТПї гув Уа1 Авр біш Ггув Маії бій Рго Гуз Бек Сув Авр Гуз 210 215 220
ТБт Нів ТБк Сув Ркго Рго Сув Рго Аїа Рго Сі Аїа Аза сС1іу с1у Ркго 225 230 235 240
Ззек Уаії РіПе Гей Рібе Рго Рго Пув Рго Пув Авр ТПтїІ Гецп Меї І1е бек 245 250 255
Атуд ТПт Рго бі Уа1і ТБг Суз Уаї Уа1ї Уаї1ї Азр Уаї бБет Нів Сс1ц Авр 260 265 270
Рго Сі Уаї пуз Рібе Авп Тгр Тук Уаії Авр сС1іу Уа1і с1іц Уаї Ніз Авзп 275 280 285
А1їа пув ТПт Гув Рго Агд сі бі біп Ту Авп обет ТПтІ Тут Агд Уаї 290 295 300
Уаї Бек Уаї Гец ТПг Уа1! теп Нів сСіп Авр Тер теп Авп с1у пув СсС1ц 305 310 315 320
Тук гув Сув пув Уаії бек Авп Гуз Аза теп біу Аїа Рго Іїе с1ц Гуз 325 330 335
Зо
ТпПї Іїе бБет Гпув Аїа гуз С1у біп Рго Агкд бід Рго сіп Уаії Сув Тік 340 345 350
Те Рко Рко бБет Агд Авр бі Гецп ТПхг Гув Авп о біп Уаі1ї Бек Гец бек 355 З6о0 365
Сузв Аїа Уаї пув сі1у Рбе Тухк Рго Бех Авр Іїе Аїа Уаі сій Тгр с01ц 370 375 380 вет Авп о біу біп Рго сій Авп Авп Тут Гуз ТПт ТПтї Рго Рго Уаї Гец 385 390 395 400
Авр бБегт Авр сіу бБет РПе РпПе Гецп Уаії бек гув Гец ТПт Уаї Авр Гуз 405 410 415 бек Агд Тгр б1іп Сіп сб1у Авп Уа1ї Ріе бБет Сув бБет Уаі1ї! Меє Ніз с1ц 420 425 430
А1ї1а те Нів Авп Нівз Тут ТПг сіп Гпув бег ІТец бег їец бек Рго 01уУ 435 440 445
Туз «2105 282 «2115 215 «212» Білок «213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 282
Зек бек бі Ггеп ТПх біп Авр Рго Аїа Уаі бек Уаі Аї1а тей С1у сіп 1 5 10 15
ТПкх Уаії Акуд І1е ТПїх Сув біп б1у Авр бБет Тец Агуд бБеїт Тут Тух Аїа 20 25 30 бек Тгр Тут біп біп пув Рго біу біп Аїа Ргто Уаі Гей Уаії Іїе Тук 35 40 45 сі1у гув Авп Авп Агуд Рго бет сіу І1е Рго Авр Агуд Ропе бет С1у 5бБег 50 55 бо бек бек с1у Авп ТПтІ АТїа бБег Тїец ТПт Іїе ТП СсС1у Аїа с1іп А1т1а СсС1ц 65 70 75 80
Авр біш АТа Авр Тут Тут Сув Авп бБет Агд бій бет Рго Рго ТПтІ 01Уу 85 Зо 95 теп Уаії Уаії Рпе сі1іу сіу б1у ТПкК пув Гей ТПтІ Уаї Гей С1у біп Рго 100 105 110
Туз Аїа А1їа Рко бБет Уаі1і ТП Ггецп Рпе Рго Рго бБет бБет Гуз Гув ГІец 115 120 125 біп Аїа Авп о Гув Аїа ТПт Гец Уаї Сув Гей Іїе бБег Авр РпПе Тут Ркго 130 135 140 с1у Аїа Уа1ї ТПг Уаії Аза Тгр ув Аїа Авр бБеїт бек Рго Уаії Гуз Аїа 145 150 155 160 сіу Маії бі ТПг ТПкг ТБПт Рко бБет Гпув біп бБег Авп Авп Гуз Тут А1а 165 170 175
А1ї1а бБет бек Тут Іец бек їец ТПт Рго біц сіп Тгр Гуз бек Нів Агд 180 185 190 бек Тук бБет Сув Сіп Уаї ТП Нів біц с1у бБег ТртІ Уаї сі буз ТіК 195 200 205 уаії Аза Рго ТПт сіц Сув бег 210 215 «2105 283 «2115 118 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид"
«4005 283 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПтІ бек Тут Аїа сбіп Гув РІПе 50 55 бо
Сбіп б1у Акд Уа1! ТПг Меє ТрІ Агуд Авр о ТПтг бБеїт ТПт бБег ТПтг Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уаії Тут Тук Сув 85 Зо 95
Аза Атуд сб1у Авр Тгр бБет Тут Тут Мек Авр Тут Тгр С1у біп с1у ТПг 100 105 110 теп Ма1! ТПг Уаї бек 5бег 115 «2105 284 «2115 111 «212» Білок
Зо «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 284
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткгр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35 40 45
Ркто Сіп Гей Ггеп Іїе Тухк пГец сіу бБег Авп Агтуд Аїа Бех сіу Уаі1ї Рго бо 50 Авр Акуд Рпе бег Сіу бБет сбіу Бек с1у ТПг Авр Рпе ТПІ Гец Ггувз ІШе 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 Зо 95 55
Атуд біп ТПг Рго ТПт Рпе сіу сіп с1у ТПї Гпув Уаії біцш Іїе Гув 100 105 110 зЗ82
«2105 285 «2115 673 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 285 сбіп Маі сбіп Гец УМаі сіп бек с1у Аїа сі Маї пув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зетк Уаії пув Маі1ії Бек Сув Гпув Аїа бБет Сіу Тут ТПт Рпе ТПтг бек Туг
Тук Меє Нів Тгр Уа1! Агуд сіп Аїа Рго сС1іу біп с1у Те Сі Ткгр Меє 20 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе бо сбіп б1у Атуд Маії ТПт Ме ТІ Акуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 25 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95 30 А1а Акд сС1у Авр Тгр бБег Тухк Тут Меє Авр Туг Тгр С1у с1іп С1у ТЕГ 100 105 110 теп Уаії ТПтІ Уаї бек бек Азїа бек ТПх пув б1у Рго Беїт Уаі1і Ропе Рго 115 120 125 35 теп Аїа Рко бет бБет Гуз бек ТПх бек б1іу с1іу ТПтІ Аза Аїа Гей щу 130 135 140
Сув Гец Уаії сі Авр Тухк Рібе Рго бі Рго Уаі! ТПтІ Уаії 5ег Тгр Авп 40 145 150 155 160 бек с1у Аїа їеєц ТПг бет с1іу Уаї Нів ТртІ Рібе Рго Аїа Уаї Іец с1іп 165 170 175 45 зет Бек біу Пец Тук Бек Гей бБет бБет Маі1і Уаї ТПт Уаї Рко бек 5ег 180 185 190 бек гец біу ТПт Сіп ТБт Тут І1е Сув Авп Уаї Авп Нів Ппув Рго бБекг 195 200 205 50
Авп оТПтІ гув Маі Авр сіц пув Уаї сі Рго гув бБет Сув Авр с1у 01Уу 210 215 220 сіу сб1у бек с1у сіу сіу сіу бБехт біп Аї1а Уаї Уаї ТПг сбіп сб1цЧ Ркго 55 225 230 235 240
Ззек Гей ТПї Уаії бек Рго біу сіу ТПг Маї ТПтІ Гей ТПкК Сув сі1у бек 245 250 255 з83 бек ТПхїх бі1у Аїа Уа1 ТПг ТПг бБег Авп Тут Аза Авп Тктр Уа1 сіп с1ц 260 265 270 пув Рго сіу біп Аза Рпе Агуд сіу їец Іїе сіу сб1у ТПтї Авп Гуз Агд 275 280 285
Аза Рхто с1у ТПтІ Рго Аїа Акуд РоПе бек біу бБет їец їец сб1іу о1У Гув 290 295 300
Аза Аїа їецп ТПт Гец бет с1у Аїа Сіп Рго біц Авр біц Аїа сбіцЧ Туг 305 310 315 320
Тук Сув Аїа Гей Тгр Тухк бек Авп Гей Тгтр Уаі Рпе с1у сі1у с1у ТЕПкК 325 330 335
Туз Ге ТПт Уаї Ггецп бек бек Аїа бек ТПт пув с1у Рго Бек Уа1ї! РіПе 340 345 350
Рго їец А1їа Рго бБет бехт КГув бех ТПт бек СсСіу сС1у ТПх Аїа А1їа Гец 355 360 365 сіу Сув Гецш Маії Гув Авр Тут РпПе Ркго бій Рго Уаі ТПт Уаії бБет Ткгр 370 375 380
Авп о бек СсС1у Аїа Іїецш ТПтї бег сіу Уаї Нів Тртх Рре Рго Аїа Уаї Ієц 385 390 395 400
Сіп бек бБет с1у Гецп Тут бБет Ггец бет бБеїт Уаї Уа1ї ТПтг Уаї Рго 5бБег зо 405 410 415 бек бек Гей С1у ТПк біп ТІ Тук І1їе Суз Авзп Уа! Авп Нів Гуз Рго 420 425 430 зет Авп о ТПтІ пуз Маії Авр пув пув Уаії сій Ркго Гпув бек Сув Авр Гув 435 440 445
ТПЕ Нів ТБкг Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сб1цп Аїа Аїа с1у С1у Рго 450 455 460
Ззек Уаії РіПе Гей Рібе Рго Рго Пув Рго Пув Авр ТПтїІ Гецп Меї І1е бек 465 470 475 480
Атуд ТПт Рго бі Уа1і ТПх Сув Уа1ї Уаї Уа1і! Авр Уаії бБет Нів Сс1ц Авр 485 490 495
Рго Сі Уаї пуз Рібе Авп Тгр Тук Уа1ії Авр сС1іу Уа1і с1іц Уаї Ніз Азп 500 505 510
Аїа гув ТПк пув Рго Агуд бій бі сіп Тут Авп обет ТПІ Тут Аг9д Уаї 515 520 525
Ууаї Бек Уаї їец ТПт Уаї їец Нів Сіп Авр Тгр їец Авп сС1у Пув С1ци 530 535 540
Тук гув Сув пув Уаії бБет Авп гув Аза теп біу Аїа Рго Іїе с1ц Гуз 545 5Б5О 555 5б6О
ТпПї Іїе бБет Гпув Аїа гуз С1у біп Рго Агкуд бід Рко сСіп Уаї Тук Тік 565 570 575
Те Рко Рко Сув Агд Авр бі Гецп ТПхг Гув Авп о біп Уаії бек Гец Тгр 580 585 5ЗО
Сув Гец Уаї пув с1у Рбе Тухк Рго бек Авр І1е Аї1а Уаі сій Тгр б1ц 595 бо 605 вет Авп о біу біп Рго сій Авп Авп Тут Гуз ТПт ТПтї Рго Рго Уаї Гец 610 615 620
Авр бБегт Авр сіу бБет РПе РпПе Гецп Тут бБет пув Ге ТПт Уаї Авр Гуз 625 630 635 640 бек Агд Тгр б1іп Сіп сб1у Авп Уа1ї Ріе бБет Сув бБет Уаі1ї! Меє Ніз с1ц 645 650 655
А1ї1а те Нів Авп Нівз Тут ТПт сіп Гув бБет Гец бег Гїец Бех Рго 01У 6б6о 665 670
Туз «2105 286 «2115» 448 «212» Білок «213» Штучна послідовність
З0 0«2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005» 286 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бек біу сіу Бек ТПг бет Тут Аїа сбіп ув РПе бо сбіп б1у Атуд УМаії ТПт Меє ТІ АкКуд Авр о ТБПт бет ТПт бет ТПт Уаї Туг 65 70 75 80 50
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 90 95
Аза Атуд сб1у Авр Тгр бБет Тут Тут Мек Авр Тут Тгр С1у біп с1у ТПг 55 1600 195 110 теп Уаії ТПтІ Уаї бек бек Азїа бек ТПх пув б1у Рго Беїт Уаі1і Ропе Рго 115 120 125 теп Аїа Рко бет бБет Гуз бек ТПх бек б1іу с1іу ТПтІ Аза Аїа Гей щу 130 135 140
Сув Гец Уаії біц Авр Тук Рпе Рго Сбіц Рго Ма! ТПг Уаї бБетг Тгр Авп 145 150 155 160 бек с1у Аїа їеєц ТПг бет с1іу Уаї Нів ТртІ Рібе Рго Аїа Уаї Іец с1іп 165 170 175
Зек бек біу Ггецп Тук бек Гпецй бет бБет Уаії Уаі1і ТПтїІ Уаі1ї Рко бек бек 180 185 190 бек гец біу ТПт Сіп ТБт Тут І1е Сув Авп Уаї Авп Нів Ппув Рго бБекг 195 200 205
Авп оТПтІ гув Маі Авр сіц пув Уаї бій Рго пув бек Сув Авр Гув ТПг 210 215 220
Нів ТПт Сув Рго Ркго Сув Рго Аї1а Рго Сі Аїа Аї1а сі1у СсС1у Рго бег 225 230 235 240 уаї Рпе Гецп Рпе Ркго Рко Ппув Ркго Гуз Авр ТПтІ Ггец Меє Іїе бБет Агд 245 250 255
ТБЕ Рго сі Ууаї ТрІ Сув Уаї Уа1ї Уаї Авр Уа1ї бег Ніз сб1цп Авр Рго 260 265 270 сСіш Маї пувз Рібе Авп Тгр Тук Уа1ії Авр сС1у Уа1ї с1іц Уаї Ніз Авзп Аїа зо 275 280 285
Туз ТПт пув Рго Агкд бі бі біп Тук Авп обет ТПтІ Тут Акд Уа1ї Уаї 290 295 300 бек Уаї теп ТПк Уаї їец Нів сСіп Авр Тгр Гец Авп сС1у Ггув Сс1ц Туг 305 310 315 320
Туз Сув пув Уаї бек Авп гув Аза теп С1у Аїа Рго Іїе сі Гув ТЕПкК 325 330 335
І1ї1е Бек ув Аїа пув сі1у сіп Рго Агд бі Рго сіп Уаії Сув ТПЕ Іец 340 345 350
Рко Рго Бек Агд Авр бі Гей ТПг Гув Авп о сіп Уаії бек Гец бек Сув 355 360 365
А1їа уаї пув сіу Рпе Тут Рко бБет Авр Іїе Аїа Уаії сіц Ткгр січ 5бег 370 375 380
Авп о біу біп Рго біц Авп о Авп Тук Гув ТПг ТПт Рго Рго Уаії Гец Авр 385 390 395 400 зект Авр біу бек РПе Рпе їец Уаії бет пув Гецп ТПтї Уаі1і Авр Гуз бек 405 410 415
Атуд Тгр сб1іп біп с1у Азп Уа! Рібе Бех Сув Бек Уа1ї Меє Ніз сій Аї1а 420 425 430
Пец Нів Авп Нів Тут ТПт сіп Гув бБетг Пец бек Гей бБет Рго СсС1у Гуз 435 440 445 «2105 287 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 287 чачаєсдсаає сддЕддааад сододаддсддс сЕСдЕдаадс сеЕддсдчаєс сстЕдчадастд бо адсЕдсдссу ссадсддсесс сасссеЕсадс аасдсстдда єдчадссдддІ дсдссаддесс 120 ссгЕддаааач дасссдадсд ддсдоддасду ассаададса адассдаддд сддсассасс 180 частаєсдссд сссстдсдаа дддссддЕ сс ассассадса додоадасдасад саадаасасс 240 сЕдвассрдс адасєдаасад ссгідаааасс даддасассд ссдеЕдсаста седсассасс 300 ссстасдадеЕ ддЕСЕсддса сдастаствдуа ддссадддса сссусдеЕдас сддедесаєсье
З6о «2105 288 «2115 2067 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 288 чаддєдсаає єдЧасоддааад сддаддсддс сіЕсдсдаадс сгддсоадаєс ЕСЕьСдЧдЧадасевд бо адсеЕдсдссу ссадсддсесс сасссеЕСсадс аасдсстдда гєчадссддадс дсодссаддесс 120 сстгддаааад часеєсдадед ддсдддасда аєсаададса адассдаддд сддсассасс 180 частаєдссд сссстдсдаа дддссддЕсс ассассадса додоадасдасад саадаасасс 240 сЕдвассрдс адасєдаасад ссгідаааасс даддасассд ссдеЕдсаста седсассасс 300 ссстасчадеЕ ддссЕсЯддса сдассассддд ддссадддса сссеЕсдєдас сдедеЕсаєсь
З6о дсЕадсасаа адддссстад сдЕдсЕсссЕ седдссссса дсадсаадад сасаадсддас 420 ччваасадссу сссіддоассд ссеЕсдЕдаад дастасеЕссс ссдадсссаєс дасадеЕдссь 480 гддаасадсуд дадссстрдас аадсддсдєд сасасстссс стдссЧаєгбдсе дсададсадс 540 часстрдсасе сссідадсад сдсддеЕсасс дсдссстадса дсадсссддда сасссадасс бо тасаєссдса асдсдаасса саадсссадс аасассааад гддасаадаа ддсддадссс бо аачдзадссдсд асдодсодада адддсссоода доадсодадчає ссдаддсдса дсідстододаа 720
ЕсСЕЧДдсоддсо дассддсдса дссгіддсоода ссЕСтсдадас єдадссдедс сдссадсдадс 780
ЕЕСассеєєсса дсасстасдс саєсдаастдда деЕдсдссадд сссстддсаа аддсстоддаа 840 гдддсдсссс ддаєссадаад саадсасаас аастасдсса сстассасдс сдасадсдаед 900 20) аадддссддЕ сассаєссад ссдддасдас адсаадааса ссседсассо дсадаєдаас 960 адссідсддд ссддаддасас сдссдєдсас гтаєєдесЕдеЕдс доадасасоддсаа сЕссддсаас 19020 ачдстасдеЕдеЕ0 сеЕСоЧдЕеЕссддс свтассддддс садддсассс ЕСЯдЕдчассЯдс дЕСВадсосе 1980 адтассаадд дссссадсд дЕссссссвд дсасссадса дсаачадсас асстддсдада 1140 асадссусесс гЕдЧдодстЯссЕ ддсдааадас сбасЕсссссд адсссаєдас сасдЕСЄТС9 1200 аасЕссддсд сссідассад сддсдеЕдсас ассеЕссссад ссдЕдссдса дадсадсдадас 1260 сЕдвтассссс гЕДдЕССсСЕСсСсСдЄ ддесассуєд сссЕСТадсо ссседддаас асадасатсає 1320 ассеЕдсааєсдд єсааєсасаа дссосссаас ассааадссд асаачдааадс сдадсссаад 1380 адстсдсдаса ааасссасас асдсссассд гдсссадсас сеЕдаадстсдс аддоаддассд 1440 зЗ88 гсадессссс ЕСЕссссссс аааасссаад дасассстса єдаєсссссо дасссстодад чдЕсасаєсдся гЕдЧсдадсдда сдсдадссас даадассстд аддеЕсаадес саасєддсас 1550 чЕддасддса гдчаддеєдса баасдссаад асааадссодс доададдадса деасаасадс 1620 асчтассуєда сддЕсадсд сстсассдеЕсС сеЕдсассадд ассддссдаа сддадасааччад 1680 тасаадсдса аддсссссаа сааадсссіс ддсдссссса ссдадаааас сасссссааа 1740 чдссааадддс адссссддада ассасаддєд басассстрдс ссссаєсдссо дчваєсдадсед 1800 ассаадаасс аддссадсс чдЕЧдЧдсдссод дссаааддсс ЕСсСсарсссад сдасаєсдсс 1860 чЕддадсддд ададчсаасдуда дсадссддад аасаасвраса адассасдсес ЕсссдЯдЕгдсед 1920 частссдасуд дсЕсСсЕЕсСЕЄ ссЕСсСвасадс аадсесассу гсддасаадад саддсдасад 1980 садддачаасч ЕСЕсСсСссаєсдуд сЕССЧдЕЧаєд саєдаддссс гдсасаасса стасасвсад 2040 20) аададссеЕсе сссдеЕсессс ддатсааа 2067 «2105 289 «2115 1350 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 289 чачаєсдсаає сддЕддааад сододаддсддс сЕСдЕдаадс сеЕддсдчаєс сстЕдчадастд бо адсеЕдсдссу ссадсддсесс сасссеЕСсадс аасдсстдда сЄдадссддадс дсодссаддес 120 ссгЕддаааач дасссдадсд ддсдоддасду ассаададса адассдаддд сддсассасс 180 частаєдссд сссстдсдаа дддссддЕсс ассассадса додоадасдасад саадаасасс 240 сЕдвассрдс адаєсєдаасад ссгдаааасс даддасассуд ссдеЕдстаста седсассасс 300 з85 ссстасчадеЕ ддссЕсЯддса сдассассддд ддссадддса сссеЕсдєдас сдедеЕсаєсь
З6о дстадсасса адддссссЕс сагдЕссссс сеЕддссссса дсадсаадад сассадсдадс 420 часасадссо сЕссддассдЯд сстрддеЕсаад дастасессс ссдадсссдєс дассдеЕдссс 480 гддаасадсуд дадссстдас сЕССддсудєд сасассеЕєсс ссдссаєдсе дсададесссь 540 часстрдсаса дссодадсад сдсддеЕсасс дЕдсссЕСта дсадсссддар сасссадасс бо тасаєссдса асдсдаасса саадсссадс аасассаадд гддасаадаа ддсддадссс бо аачадсєдсд асаааасєса сасаєдссса ссдрдсссад сасссдаадс сосадоававдава 720 ссдеЕсадеЕсе ЕссЕсеЕсссс сссаааассс ааддасассс єсаєдаєсьс ссодадассссь 780 чаддесасає дсояасддвсдЧас ддасдеєдадс сасдаадасс сідаддссаа дЕсССВвассд 840 гасдєсддасо дсоасддаддс дсасаасрдсс аадасааадс содсддададда дсадеасаас зо 900 ачдсасчдбасс дЕдсддсєсад сдессесасс деЕсстдсасс аддассддсс даасддсаад 960 чачтасааде дсааддесес саасааадсс сеЕСсддсдссс ссассдадаа аассаєсустсс 19020 ааггдссааад ддсадссссд адаассасад деЕдеЕдсассс гдсссссаєс ссоаддаєсвад 1980 сеЕдассаада ассаддссад ссісЕсдсдс дсадссааад дссЕстаєсс садсдасаєс 1140 чссасддадеі дододададсаа сбдддсадссд дадаасаасс асаадассас дссосссдаед 1200 сЕддассссу асддсссссє сЕсссеЕСУЯЄдд адсаадсеса ссдЕддасаа дадсадчвсд 1260 садсадддада асдЕСЕссеЕс асдсеЕссдеєд аєдсаєдадд сЕСТтдсасаа ссоассссасдч 1320 садаачадсс ЕСЕСсСстдЕСсС сссоаддатааа 1350 «2105 290 «2115 357 «2125 ДНК
«213» Штучна послідовність «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 290 чададєдсаає ЕДЧдДЕсСоОвЧадесс соддоаддаддс ссдасасадс сіддддддЕС, ссурдадасес бо
ЕссЕдєдсад ссіссоддасєс сасссеЕсадс адеЕсаєдсса ЕдчадстсдддЕ ссдадассаддсе 120 ссадддаадд додсеЕддадед ддссеЕсадст аєєтадеддта дчеЕдЧдчсдЧчсад сасатастас 180 чсачзасссся Едааддадссд дЕссассаєс сссададаса ассссаадаа сасдсеєдтсає; 240 сгдсачаєда асадсстодад адссдаддас асддссдтає ассассдедс дсояасдаєсдвас 300 гассдєсасс деЕсасеЕссда срассддддс сааддаассс єддссассдЯдеЕ сеЕсдаде 357 «2105 291 «2115 327 «2125 ДНК
Зо «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 291
ЄсСЕЄСЕдаас ЕдасеЕсаада сссадстдесе адсдсддсес гЕдддЕСадас єдсасдатаєс бо асстрдссаач дсчавєссссЕ дсодсессстас сасдсаадсо ддасассадса дааассоддаи 120 саддссссад ЕсСсддеєЧдає свасоддсааа аасаассдсс сдасстЕдддає сссдододассде 180 гЕСсСЕССОддса дсЕсЕсссддда саасасоддсуд адссссасса гсаседдсдс ЕСсаадсадаа 240 часчдаддссд астаєстасвєд єаасеЕсссдав дааадсссас саассудасст дддсєЕдесес 300 чаєддсоддсра ссаадссдас сдеЕсста 327 «2105 292 «2115 2022 «2125 ДНК
«213» Штучна послідовність «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 292 чададєдсаає ЕДдДЕсСоОвЧадесс єдадвддаддаддс Есдадасасадс сіддддддЕС, ссудадасес бо
ЕссЕдєдсад ссіссоддасєс сасссеЕсадс адеЕсаєдсса ЕдчадстсдддЕ ссдадассаддсе 120 ссадддаадд додсеЕддадед ддссеЕсадст аєєтадеддта дчеЕдЧдчсдЧчсад сасатастас 180 чсачзасссся Едаадддссд дЕссассаєс сссададаса асрсссаадаа сасдстдтсає 240 сгдсачаєда асадсстодад адссдаддас асддссдтає ассассдедс дсояасдаєсдвас 300 гассдєсасс деЕсасессда срассддддс сааддаассс гддЕСассЯяє сЕСЧадсдсье
З6о адсассаадд дссссіссдєЄ дЕССсСсСЕсСгд дссссосЕсСса дсаадсссас сЕСТЄСддсоада 420 асеЕдссдсЕсС гдддстдссЕ дасддаадає гасеЕсссссу адсссдєдас сдрдєсст9 480 ааєеєстддсо сЕСсСсдассеіс сддсдеЕдсас ассеЕссссадЇЩ сЕдЕДдссдса дЕССЕСсСддас 540 сЕдвтассссс гЕДдЕССсСЕСсСсЯєЄ сдсдасадсд сссессадсс сісрдддсас ссадасстас бо ассеЕдсаасуд Егдаассасаа дсссіссаас ассааддсдда асчдачаадді ддаасссаад бо
ЕссрЕдсдася дсдодсодада СЕССоодаддс ддваддаєссс аддсеЕдссас дасссаддваа 720 сесІссстда садеЕдссеЕсс єддсддсасс деЕдассстда сстдсдчаєс єЕстассоадес 780
ЧдсЕДдсдасса ссіссаасса сдссааєсдд дсЕдсаддааа адсссддсса ддссессада 840 ччассдаєсу дсоддсассаа саачададсс ссеЕддсассс стдссадавьєє сЕССЯядсссь 900 сЕдссдддсу дсааддссдс ссрдасіссд ссЕддЕдсесС адссеЕдадда сддаддссдад 960 гасвтассдсуд сссудсддса сессаасстід гддЯасЯдЕеЕса дсддаддсас саадседасс 19020
ЧЕДдсЕдссса дсодсеЕсссас саадддассс азеЕдсдеЕрсс сссвддсссс садсессаад
ЕСТтасаєссдя дсддсасадс єдссстдддда гєДдЕсСЕСЧдєЄда аддастасьє єсстЕдадсся 1140 чЧЕдасадедеЕ сеЕсдддаасад сддадсссод ассадсддад гдсасасаєєс ссссдсадед 1200 сгЕдсададса дсоддсстдса сбадссеЕдадс адсдссдеєда ссдЕдссеЕсс сеЕСТадсстд 1260 чддаасасада сасавтаєссд сааєдедаає саєаадссса дсаасассаа адсдодасаад 1320 ааадсддаас стаададссд сдасаадасс сасасстдсс ссссстдссс гдсессстгдаа 1380 дсЕдсСЕдУЧєд дссстадсдє дЕссстдеЕЕсС сссссааадс ссааддасас сстдаєчатсс 1440
Есссодадассс ссддаадесдас сЕдсЧчЕЧ9ЧєЄЧЯЧ дсддаєдедс сссасддадда ссстсдаадед 1500 аадеЕссаасс додасасдєдда сддсдЕддаа дсдсасаасуд ссаадассаа дсссададад 1550 чаасадсаса ассссассста ссддЧдЕдаєдЯд сссасдседа садедссдса ссаддассдд зо 1620 сЕдаасуддса аачадсасаа деЕдсааддеєд сссаасаадд сссеЕдддсдс Есссаєсдаа 1680 аачассаєссе ссааддссаа дддссадссс сддадаасссс аддсдсасас сстрдссссса 1740 гдссоддаєсд адссдассаа даассаддес адсстдеЕддс дссеЕддссаа аддсеЕестає 1800 сссадсдаса Есодссоасдда ЧчеЕдддададс ааєдддсадс соддадаасаа сгсасаадасс 1860 асдссіссся гдссддассс сддасуддсссс СЄСЕСсСЕсСсСсСЕСЄ асадсаадсо сассдеддас 1920 аадзадсаддЕ ддсадсаддд даасЧчеЕССсс ссардсессдя Едаєдсаєда ддсестьдсас 1980 аассастаса сдсадаадад ссІсЕссста ЕСсСЕССсСдддддта аа 2022 «2105 293 «2115 1347 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 293 чададєдсаає ЕДЧдДЕсСоОвЧадесс соддоаддаддс ссдасасадс сіддддддЕС, ссурдадасес бо
ЕссЕдєдсад ссіссоддарєєс сасссесадс адеЕсаєдсса ЕдчадстсдддЕ ссдадассаддсе 120 ссаддчаадч доассддадсд ддЕсссадсеЕ ассвтадсдадсра дсддЕддсад сасаєастсас 180 чдсачасеєссд сдаадддсесуд деЕссассаєс єссададаса арсссаадаа сасдстатає 240 сгдсачаєда асадсстодад адссдаддас асддссдрає ассассдеЕдс дсдєсдаєсдвас 300 гассдєсасс деЕсасессда срассддддс сааддаассс гддЕСассЯяє сЕСЧадсдсье
З6о адсассаадд дссссіссдс дЕссссссгд дсссссадса дсаададсас садсддсдадс 420 асадссусесс гЕддодстЯдсс ддссдаддас басЕсссссд адсссоаєдас сасдЕССТ9д 480 аасадсддад сссеЕдассес сддсдідсас ассеЕрссссу ссуагдседса дадеЕсстоддс 540 сЕдвтасадсс Едадсадсдс ддссассуєд ссЕЕсСсадса дсседддсас ссадасстас бо ассеЕдсаасуд Егдаассасаа дсссадсаас ассааддедд асдачаадді ддадсссаад бо адсеЕдсдаса ааасесасас аєдсссассд сдсссадсас ссдаадсвєдс адддддассд 720 гсадессссс ЕСЕссссссс аааасссаад дасассстса єдаєсссссо дасссстодад 780 дЕСасаєдсд гддЕдЧдЕдда сдсєдадссас даадассстуд аддссаадесє саастдчачтас 840 чЕддасддса гдчаддсдса сбаасдссаад асааадссодс дододаддадса дсасаасадс 900 асдтассдбд гддссадсудс ссісассуєс срдсассадча ассддссдаа єЄддсааддвад 960 тасаадсдса аддсссссаа сааадсссоіс ддсдссссса Есдадаааас сассессааа 19020 чдссааадддс адссссддада ассасаддєд бдсассстрдс ссссаєссссо ддчвдаєсдадсед 1980 ассаадаасс аддссадссс сЕСЯдсдсодса дссаааддсс ЕСсСсарсссад сдасаєсдсс чЧдЕЧчдвадеддд ададсааєду дсадссуддад аасаасстаса адассасдсес гсссагоастд 1200 часеЕссдасу дссссЕссЕс ссЕсдЕЧДадс аадсссассдя гддасаадад саддеЕддсад 1260 садддачаасч ЕСЕсСсСссаєсдд сЕССсСЯдЕЧдЧаєд саєдаддсосс сбдсасаасса стасасдсад 1320 аададссеЕсе сссдеЕсессс ддатсааа 1347 «2105 294 «2115» 645 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 294
ЄсСЕЄСЕдаас ЕдасеЕсаада сссадстдесе адсдсддсес гЕдддЕСадас єдсасдатаєс бо 20) асстрдссаач дсчаєсссст дсодсссстас сасдсаадсо ддасассадса дааассдадддве 120 саддссссад ЕсСсддеєЧдає свасоддсааа аасаассдсс сдасстЕдддає сссдододассде 180 гЕСсСЕССОддса дсЕсЕсссддда саасасоддсуд адссссасса гсаседдсдс ЕСсаадсадаа 240 часчдаддссд астаєстасвєд єаасеЕсссдав дааадсссас саассудасст дддсєЕдесес 300 чЧаЕддсоддсра ссаадсрдас сдссстаддеЕ саасссаадд ссдсссссад сдудасссвд
З6о реЕссссссса дсадсаадаа ассдсаддсс аасааддсса сссЕддсстд ссрдаєсадс 420 часеЕссстасс саддсдссдс дассдеЕддсс сддааддссд асадсадссс сдасдааддесс 480 чдасадгддада ссассасссс садсаадсад адсаасааса адсасдссдс садсадстас 540 сЕдчадсстда сссссдадса дсддаададс сасаддіссІї асадссдсса доадасдасссас бо чададдсадса ссдсддадаа аассдеЕддсс сссассдаді дсадс «2105 295 «2115 354 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 295 саддсдсаає ЄддЕссааєс єддЕдстдаа десааааааас сдддсдсесеєс сдесааачтід бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадсєсд сдессасдаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадчає аседсадеЕдес ассассдедс асодсддасдас 300 гдЧдЕсСЕвасе асаєддаста єсддддєсаа ддсассстсу гаасадееєсс сь 354 «2105 296 «2115 333 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 296 чавгассєдеЕса єдасеЕсааєс сссастЕдссеЕ седссддеЕда сіссаддсда ассддсдадс бо аьЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСтд сасессаасу дссасааста ЕССсССсСЯвдаєсс9в 120 тассрдсааа аассдддеса дадсссісад сеЕдседаєссті асстдддсес гаассдсдасе 180
Ессддеєдвас соодчассЯяссс садсуддсссЕ ддаєссддса ссдарсссас дЕсДдааааєс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсуаєЕ саєстаседса єдсаддсасу дсадасссса 300 асЕЕссддеЕс ааддсассаа ддадассчааасе ааа «2105 297 «2115 2019 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 297 саддсдсаає ЄддЕссааєс сддЕдссдаа дчіааааааас содддсасеєс сдєсааачтід бо адсеЕдсааач сасссддаса сасссесасеЕ ссстаєвтаса гдсассдддс ЕСсдссаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссадддссд сдесасдаєд асссдєдаса ссадсассес бассаєєстсає 240 асддадсвЕдеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадчає аседсадеЕдес ассассдедс асодсддасдас 300 гдЧдЕсСЕвсасе асаєддаста єсддддєсаа ддсассстсу гаасуадееєєс єсстодстадс
З6о ассаадддсес ссіссДсдсєЕ ссссвддсс ссЕЕсСсадса адсссассс єддсдадаась 420 дссЯсЕсСвЯдЧа дседсстддеЕ ддаачаєсас сЕссссдадс ссдяєдассЯяє дЕССЕєддаає 480
ЕсЕддсудсесС Едассіссодда сдрдсасасс ссЕСсССсСадстд ЕдДдсЕДдсадеЕс сЕССЯДЯДССТ 540 тасеЕссстдє ссссудєссЯє дасадедссс сссадсеЕссс гдддсассса дасстасаєс бо гдсаасдсда ассасаадсс сІссаасасс ааддсддасу ачаададєдда асссаадчессс бо гдсдасоддсд дсоаодададесс соодаддсоода двчдассссадда сурдЕСсСдсдас ссаддаассс 720
Ессстрдасадч єдЕсСЕССТду сддсассуєбд ассстдассо дсддассеЕвстассддсдсе 780
ЧдЕдассассо ссаассрасудс саасєсдоддєд саддаааадс ссддссаддс сЕсСсададва 840 сеЕдасєсддсуд дсассаасаа чдчададссссе ддсасссстд ссадасссес садесесессвд 900 сЕдддсддса аддсеЕдссст дасссЕдссЕ ддЕдсссадс ссдаддасда ддассдадсас гастдсдссс гдЕддсасес саасстдедуа дЕдЕссддасд даддсассаа дседассаєд 19020 сЕдЕссадсуд сЕсссассаа дддасссадеЕ дЕдЕсссссс гддсссссад Щ сЕССВвадессь 1980 асаєссддесд дсасадссдс сстдддасдЕеЕ сЕСЧдєсдаадд ассасеЕсесс єдадсстдвед 1140 асадсдессес ддаасадсдда адссседасс адсододадесдс асасассссс гєдсадедсвд 1200 сададсадсч дссідсасад сседадсадс дЕсдсдассу ЄдссЕсссс гадсстодва 1260 асасадасає асгаєстєдваа єдсдааєссає аадсссадта агсассаааду ддаєсаадааа 1320 чЧЕддаасста ададссдсда сбаадасссас ассЕдссссс ссдсссвдс єЕССтсдаадсь 1380 дсЕЯДЯдЕддсс стадсардеЕє ссрдсЕсссс ссааадссса аддасассст даєдаєссессс 1440 сддасссссу аачдсдассод содсдЧчеЕдаєд даєдедеЕссс асдаддассс єдаадедаад зо 1500
ЕЕСсааєсддЕ асчдсддасдд сдсддаадсд сасаасдсса адассаадсс гадададдаа 1550 садтасаасе ссасстассу доасддЕдеЕссС дЕДдсеЕдасад гдстдсасса ддастдастд 1620 аасддсааач адсасаадьд сааддеЕдссс аасааддссс гдддсдсЕсс сассдаааад 1680 ассассссса аддссааддд ссадссссдд даассссадда Едсасасссо дсссссасдс 1740 садчаєдадс єдассаадаа ссаддеЕсадс сЕдЕдЧдЕдсс гддЕСааадд сЕЄСТасссс 1800 адсдасаєсуд ссодсддадсд ддададсаає доддсадссудда адаасаасса саадассасд 1860 ссЕСССсСДдДгдсС гддасессда суддсЕссЕвЕєс ЕЕєСсСЕСТаса дсаадстсас сдєрддасаад 1920 ачсаддсддс адсаддадаа сдсссЕСССсСа сдсЕССЯдЕда єдсаєдаддс ЕСсСсдсасаас 1980 састасасдс адаададссеЕ сЕССсСсСЕдЕСсСЕ ссдддатгааа 2019
«2105 298 «2115 1344 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 298 саддеєдсаає гЕддесЕСааєс сддєдседаа дсааааааас сдддсдсЕсС саяассааадед бо адстсдсааад саєссдддаста сассессасес єсстаєтаса гсдсастдддеЕ ссдЕсаадсс 120 ссдддссадчд дЕЕСсСсддааєсо часдддсаєс асраасссаа дсоддЕДддсеЕСсС бассеЕсстас 180 чдсдсачааає єссаддадєсд сдссасддаєд асссдєдаса стадсассеЕс бассдЯявстсає 240 асддадседеЕ ссадсстдсд ЄЕСЕЧдаадає аседсадесдс ассасідедс асодсдасдас 300 годдЕСЕсасеі асаєсддасса сЕддддЕсаа ддсассстсд гаасддасеес ЕЕСТЄСЯДСсСтадс
З6о ассаадддсес ссеЕссЯярдеЕс ссссстддсс сссадсадса ададсассад сддсддсаса 420
ЧдссадсЕсСвдЧа дседссрддеЕ сдаддасстас сЕссссдадс ссдаєдассЯд дЕССєддаас 480 адсддадссс Едассіссдда сдесдсасасс ссссссдссдя гдсеЕдсадад ЕЕСсдоадссвд 540 гаєадсседа дсадсдєддс сассдЕдссЕ ссврадсадсс гдддсассса дасстасаєс бо гдсаасдаєда ассасаадсс садсаасасс ааддсддасд адчааддсдда дсссаададс бо гдсдасаааа сісасасаєд сссассдрдс ссадсасстуд аадссдсадд ддадассчаєса 720 дЕСЕСсСсСЕсСЕ ЕСсСсссссааа асссааддас асссісаєда ЕСЕссссддас сссудаддЕс 780 асаєдсчдєда гЕдЧдсддасді дадссасддаа дасссідадд ЕСсаадесссаа сЕддеасаед 840 часдадсдєда аддсдсасаа сбдссаадаса аадссодсддад аддадсадса саасадсасд 900 тассєдеЕду єсадсудссся сассдеЕсстсд сассаддасс ддасеєдааєда сааддадсас 960 аадедсаадд ЕСсСЕсСсаасаа адсссесддс дсссссаєсд адаааассає сеЕссааадсс ааадддсадс сссдадаасс асаддедсдс ассстрдсссс саєсєсссоддда сдадседасс 1980 аадаассадд єсадссоіссс деЕдсдсадес аааддсеЕсі ассссадсда сассдссдаед 1140 чадеЕдддада дсааєдддса дссододадаас аастрасаада ссасдссеЕсс сдудсеЕддас 1200
Ессдасуддсс ссЕссеЕсссе сдедадсаад сісассдедда асаададсад дЕддсадсад 1260 чадаасчдЕєсе ЕСЕСсСасдсес сдяєдаєдсає даддссстдс асаассаста сасдсадаад 1320 адссЕсЕссс гдЕСсСьсСсодду саава 1344 «2105 299 «2115 654 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело
Зо «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний полінуклеотид" «4005 299 чавгассєдеЕса єдасеЕсааєс сссастЕдссеЕ седссддеЕда сіссаддсда ассддсдадс бо асЕсеЕсдсс деЕсссадсса дЕСЕСЕДДСсСсд сасессаасуд дссасааста ЕСЕсСсСдаєссда 120 тассрдсааа аассдддеЕса дадссстсад сеЕдседаєссті асстдддсес гаассдсдасе 180
Ессддеєдвас соодчассЯяссс садсуддсссЕ ддаєссддса ссдарсссас дЕсДдааааєс 240 адссєдЕеЕсд аадсадаача сдсдддсуаєЕ саєстаседса єдсаддсасу дсадасссса 300 асЕЕссддеЕс ааддсассаа ддссдааасє ааасччрасудд ЕддсЕДдсасс асстдеЕСстс
З6о арсЕссссодс сасєстдчаєсу даадесеєдааа ссеЕддаасьд ссостудстає дЕдсстЧдСсвд 420 аасаасеЕсст ассссадада ддссааадса садчсддааддч сддасаасдс ссессааєсу 480 чдабаассссс адчачадсдс сасададсад дасадсаадд асадсасста садссесадс адсассстрда содссдадсаа адсачассас дадааасаса аадеЕссасдс стдсдаадсс бо асссаєссадд дссідадссс дсссдеЕсаса аададсеєєса асаддоаоадада адЕде 654 «2105 300 «2115 50 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «2205 «221» тівс Геасиге «2225 (1)..(50) «223» /примітка-"Ця послідовність може включати 1-10 "с1у сСі1у б1у 01У
Бек!" повторюваних одиниць, де можуть бути відсутні деякі позиції" «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Див. заявку, як вказано в докладному описі
Зо заміщень і переважних варіантів здійснення" «4005 300 сіу б1у сб1у с1у Бек сіу сіу сіу сі1у бек біу б1у біу біу бБех 01У 1 5 10 15 сіу б1у сб1у Бек сіу сіу сіу сіу бБехт сіу сбіу б1у с1у Бех с1у «1У 20 25 30 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бБехт сіу сі1у сі1у сС1у бек бі1у б1у 1У 35 до 45 сіу бБег 50 «2105 301 «2115 50 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «2205 «221» тівс Геасиге «2225 (1)..(50)
«223» /примітка-"Ця послідовність може включати 1-10 "Бек сСі1у б1у С01У сту" повторюваних одиниць, де можуть бути відсутні деякі позиції" «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Див. заявку, як вказано в докладному описі заміщень і переважних варіантів здійснення" «4005 301 бек сі1у сбі1у б1у бі1у бек біу сі1у сі1у с1у Бех с1у с1у б1у с1у бек 1 5 10 15 сіу б1у сб1у с1у Бек сіу сіу сіу сі1у бек біу б1у біу біу бБех 01У сіу б1у сб1у Бек сіу сіу сіу сіу бБехт сіу сбіу б1у с1у Бех с1у «1У до 45 20 сіу С1У 50 «2105 302 «2115 54 25 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело
Зо «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «2205 «221» тівс Геасиге 35 «222» (5)..(54) «223» /примітка-"Ця ділянка може включати 1-10 "бек сбі1у сіу СсС1у с1у"' повторюваних одиниць, де можуть бути відсутні деякі позиції" «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Див. заявку, як вказано в докладному описі заміщень і переважних варіантів здійснення" «4005 302 сі1іу сбі1у сб1у сіу бек біу сіу сіу сі1у бек с1у сб1у с1у с1у Бех щу 1 5 10 15 сіу б1у сб1у Бек сіу сіу сіу сіу бБехт сіу сбі1у б1у біу бБехтх б1у «1У 20 25 30 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бБехт сіу сі1у сі1у сС1у бек бі1у б1у 1У 35 до 45 сіу бек о1у с1у с1у с«1У 50 «2105 303 «2115 10
«2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 303 сі1іу сб1у сС1у с1у бек сі1у сС1у сС1у сС1у 5Бег 1 5 10 «2105 304 «2115 15 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 304 біц Ркго Ппув бБет Сув сіу сіу сіу сіу бехт сі1у сС1у сб1у с1у бБекг 1 5 10 15 «2105 305 «2115 16 «2125» Білок
Зо «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 305 біц Рго Ппув бБет Сув Авр сіу сіу сіу с1у бБехт б1іу біу сбіу с1у бБег 1 5 10 15 «2105 306 «2115 5 «2125» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетична
Репра-Нів мітка" 5о0 «4005 306
Нів Нів Нів Нів Нівз 1 5 «2105 307 «2115 104 «2125» Білок «213» Штучна послідовність
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 307
А1а бБет ТПт Гув сіу Рко бБет Уаі Рібе Рго гец Аза Рго бБет бБет Гувг 1 5 10 15 бек ТПтї бек біу бі1у ТПх Аїа Аїа Іїецй с1у Сув Ге Уаі1і Гуз Авр Тук 20 25 30
Рпе Рго бі Рго Уаі1 ТПх Уаі1і бек Ттр Авп бБет с1у Аїа Ге ТПкК бек 35 40 45 сіу Маї Ніз ТП Рібе Рго Аїа Уаї їєц Сіп бет бек С1у Гец Тук бег 50 55 бо
Тїец бек бек Уаі1ї Ма1! ТПт Уа1ї! Рго бек бет бБет Іїец сС1у ТПкгЕ с1іп ТЕГ 65 70 75 80
Тут І1е Сув Авп Уа1! Авп Нів Кпуз Рго бБет Авп ТПт Гуз Уа1! Авр Гуз 85 Зо 95 туз УМаії сіц Рко Гпув бек Сув Авр 100 «2105 308 зо «2115 692 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 308 сСіп Ма1 с1іп Пец Уа1ї сі1іп бек с1у А1ї1а сіш Уа1ї! Гуз Пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тук Меє Нів Тгр Уаії Агд сіп Аїа Рго сіу Сіп сС1у Те Сі Ткгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сСіп б1у Агд Уа1ї! ТПт Меє ТБбЕ Нів Авр ТПтг бет ТПт бетг ТІНІ Уаї Туг 65 70 75 80
Меєс сій Гец бег бек Гец Агуд Бек сій Авр ТПт Аїа Уаії Тут Тук Сув 85 Зо 95
А1ї1а Агд бек РібПе Робе ТПх сі1у Рібе Нів Іец Авр Туг Тгр сС1у сС1іп 01уУ
100 105 110
ТПх Гец Уаї ТПїІ Уаї бек бек Аїа бек ТПт пув с1у Рго Бек Уа1ї! РіПе 115 120 125
Рко гецп Аза Рго бек бет КГув бБет ТПт Бех сіу с1у ТПт Аїа Аїа Гей 130 135 140 сіу Сув Гецш Маії Гув Авр Тут РпПе Ркго бій Рго Уаі ТПт Уаії бБет Ткгр 145 150 155 160
Авп о бек СсС1у Аїа Іїецш ТПтї бег сіу Уаї Нів Тртх Рре Рго Аїа Уаї Ієц 165 170 175
Сіп бек бек с1іу Гей Тут бБет ТГецп бек бБетг Уаі1і Уаі1 ТПпг Уаії Рго 5ег 180 185 190 бек бек Гей С1у ТПк біп ТІ Тук І1їе Суз Авзп Уа! Авп Нів Гуз Рго 195 200 205 зек Авп ТПх гув Уа1 Авр Гув Ппув Маі сіц Ркго Гпувз бек Сув Авр ШУ 210 215 220 сіу б1у сб1у Бек сіу сіу сіу сі1у бек бі Уаї біп Гец Гец сіц бег 225 230 235 240 сіу б1у сб1у Гец Маі сіп Рко сіу сіу Бек Гей Агд Гец бБет Сув А1а 245 250 255
А1а бек сі1у Робе ТПт Ріе бетг ТПтІ Тут Аїа Мес Авзп Тгр Уа1 Агд сіп 260 265 270
Аза Рхто с1у Гпув сіу Гец сіц Ткр Уа1і бек Агу Іїе Агд бБет Гув Туг 275 280 285
Авп о Авп Тут Аїа ТПтІ Тут Тут А1ї1а Авзр бБет Уаії Гпув с1у Акд РПе ТПг 290 295 300
І1е Бех Агд Авр Авр бБет Гув Авп ТПх Гей Тут Ге біп Меє Авп 5бег 305 310 315 320 їец Агд Аїа сіц Азр ТБг Азїа Уа1! Тут Тут Сув Уа1ї Агд Нів С1у Авзп 325 330 335
Рпе сі1у Авп бБет Тук Уа1і бег Тгр Рпе Аза Тут Тгр сіу Сіп сС1у ТіПг 340 345 350 теп Ма1і! ТПг Уаї бБет бБег Аїа бБет Уаі Аза Аїа Ркго бет Уаі1і Рпе Іїе 355 360 365
Рпе Рго Рго бек Авр бі біп Гей Гув бБет с1у ТПтІ Аїа бек Уаі1ї Уаї 370 375 380
Сув Гец Ггец Авп Авп Рпе Тут Рго Атуд біц Аїа пув Уаї сіп Тгр Гуз 385 390 395 400 уаї Авр Авп Аїа Гец сіп бет с1у Авп бек біп біц бет Уаі1і! ТПтг с1ц 405 410 415 біп Авр бБет пув Авр бек ТПтІ Тут бет Гец бет бет ТПт їец ТПт ТІец 420 425 430 бек пув Аїа Авр Тут сС1іц Кгув Нів Кгув Уаї Туг Аїа Сув сі Уа1ї! Трг 435 440 445
Ніз сіп с1у Гец бек бек Рго Уа1! ТПг Гуз бБег Рібе Авп Агуд С1у с1ц 450 455 460
Сув Авр Гув ТПт Ніз ТБ Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сб1п АТїа Аї1а 465 470 475 480 сіу б1у Ркго бБет Маі! Рпе Гец РпПе Ркго Рго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец 485 490 495
Меє Іїе бБег Агд ТПт Рко сіц Уа1і ТПїх Сув Уаї Уаї Уаії Авр Уаї 5ег 500 505 510
Нів Сіц Авр Рго сі Уа1ї Пув Рпе Авп Тгр Туг Уа1! Авр сС1у Уа1 СсС1іц 515 520 525 уаї Нів Авп АТїа Гуз ТПхїх Кпув Рго Атд бі бі Сіп Тут Авп бег ТЕПг 530 535 540
Тут Агд Уа1! Уаї бек Уа1! Ге ТПх Уаї Ієц Нів біп Авр Тгр Іец Авзп 545 5Б5О 555 5б6О сі1у гув бій Тук Гув Сув пув Уаії бБет Авп гув Аза їец С1у Аїа Ркго зо 565 570 575
Іїе сіц пув ТПтІ І1е бБехт Гпув Аїа Гуз С1у біп Рго Агд біц Рго сіп 580 585 5ЗО
Ууа1ї Тук ТПК Гей Ркго Рго Сув Агд Авр Сіц гей ТПг Гув Авп сіп Уаї 595 бо 605
Ззек Гей Тгр Сув Ггец Уа1 пув с1у Рпе Тут Рго 5еїт Авр І1е А1їа Уаї1ї 610 615 620 бі ТкЕр бій бБег Авп сіу сіп Рко бі Авп Авп Тут Гуз ТПтї ТпПг Ркго 625 630 635 64
Рко Уаії гей Авр бек Авр біу бек РПпе РпПе Гецй Тут Бек Гпув Гец ТЕПкК 645 650 655 уа1ї Авр Ггув бБет Акд Тктр сіп сіп с1у Авп Уаі РпПе бет Сув бБет Уаї бо 665 670
Меє Нів сіц Аїа Тец Нів Авп Нів Тук ТПт Сіп Гуз бБетк Іїец бекг Гец 675 680 685 бек Рго б1УуУу Гуз 690 «2105 309 «2115 449 «212» Білок
«213» Штучна послідовність «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 309 сбіп Маі сбіп Гец УМаії сіп бехт с1у Аї1а сій Уаї пув пув Рго С1у А1а 1 5 10 15
Ззек Уаії пуз Уа1ії бек Сув пув Аїа бек с1у Тут ТПтї РПпе ТПх бек Тук 20 25 30
Тут Месє Нів Тгр Маї Агуд сіп Аза Рго СсС1у с1п сС1у їец Сі Тгр Меє 35 40 45 с1у Іїе Іїе Авп Рго бБет сіу сіу бБет ТПт бек Тут Аїа біп гув РПе 50 55 бо сСіп б1у Агд Уа1ї! ТПт Меє ТБбЕ Нів Авр ТПтг бет ТПт бетг ТІНІ Уаї Туг 65 70 75 80
Меє бій Гец бБет бБет Гец Акд бет бій Авр ТПтІ Аїа Уа1ї Тут Тут Сув 85 Зо 95
А1ї1а Агд бек РібПе Робе ТПх сі1у Рібе Нів Іец Авр Туг Тгр сС1у сС1іп 01уУ 100 105 110
ТІ Гец Уаї ТртІ Уаї бБетг Бек А1їа бек ТПтІ Пув СсС1у Рго бек Уа1 РБГе 115 120 125
Рко гецп Аза Рго бек бет КГув бБет ТПт Бех сіу с1у ТПт Аїа Аїа Гей 130 135 140 сіу Сув Гецш Маії Гув Авр Тут РпПе Ркго бій Рго Уаі ТПт Уаії бБет Ткгр 145 150 155 160
Авп о бек СсС1у Аїа Іїецш ТПтї бег сіу Уаї Нів Тртх Рре Рго Аїа Уаї Ієц 165 170 175
Сіп бек бБет с1у Гецп Тут бБет Ггец бет бБеїт Уаї Уа1ї ТПтг Уаї Рго 5бБег 180 185 190 бек бек Те С1у ТПт бСіп ТПт Тухк І1їе Сув Авп Уаії Авп Нів Гув Рго 195 200 205 зек Авп ТПї Кгув Уаі1і Авр пув пув Маії бій Рго Гуз Бек Сув Авр Гуз 210 215 220
ТПЕ Нів ТБкг Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сб1цп Аїа Аїа с1у С1у Рго 225 230 235 240
Ззек Уаії РіПе Гей Рібе Рго Рго Пув Рго Пув Авр ТПтїІ Гецп Меї І1е бек 245 250 255
Атуд ТПт Рго бі Уа1і ТПх Сув Уа1ї Уаї Уа1і! Авр Уаії бБет Нів Сс1ц Авр 260 265 270
Рго Сі Уаї пуз Рібе Авп Тгр Тук Уаії Авр сС1іу Уа1і с1іц Уаї Ніз Авзп 275 280 285
Аїа гув ТПк пув Рго Агуд бій бі сіп Тут Авп обет ТПІ Тут Аг9д Уаї 290 295 Зо
Ууаї Бек Уаї їец ТПт Уаї їец Нівз Сіп Авр Тгр їец Авп с1у Гув б1цЦ 305 310 315 320
Тук гув Сув пув Уаії бБет Авп гув Аза теп біу Аїа Рго Іїе с1ц Гуз 325 330 335
ТпПї Іїе бБет Гпув Аїа гуз С1у біп Рго Агкд бід Рго сіп Уаії Сув Тік 340 345 350
Те Рко Рко бБет Агд Авр бі Гецп ТПхг Гув Авп о біп Уаі1ї Бек Гец бек 355 360 365
Сув Аї1а Уаї Ггув с1у Рпе Тук Рго Бек Авр І1е Аїа Уа1ї сі Тгр СсСІ1ц 370 375 380 зек Авп біу біп Рго бій Авп о Авп Тут Гув ТПх ТПк Рко Рко Уаї Гей 385 390 395 400
Авр бБегт Авр сіу бБет РПе РпПе Гецп Уаії бек гув Гец ТПт Уаї Авр Гуз 405 410 415 бек Агд Тгр б1іп Сіп сб1у Авп Уа1ї Ріе бБет Сув бБет Уаі1ї! Меє Ніз с1ц 420 425 430
А1ї1а те Нів Авп Нівз Тут ТПг сіп Гпув бег ІТец бег їец бек Рго 01уУ 435 440 445
Тув «2105 310 «2115 216 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «2205 «221» МОР ВЕ5 «222» (201)..(201) «223» Будь-яка амінокислота «4005 310 січ Іїе Маії Гецп ТПг сіп бет Рко сіу ТПї Гей бегт Ггец бет Рго б01Уу 1 5 10 15 січ Агуд Аза ТПт Гец бет Сув Акуд Аїа бек біп бет Уаі1! бет бет 5бег 20 25 30
Тут ге Аїа Ткр Тут біп біп ув Рго б1іу біп Аза Рго Агд Гей ГІец 35 40 45
Іїе Тук с1у Аїа бБет бБегт Агуд Аїа ТПг сС1і1іу І1їе Рго Авр Агд РПе 5ег 50 55 бо сіу бек сб1у Бек с1іу ТПтІ Авр РпПе ТПтї Гецп ТПІ Іїе бБегт Агд Гїец с1ц 65 70 75 80
Рго Сі Авр Рпе Аїа Уаї Тут Тук Сув Сбіп Сіп Тут ТБг Авп с1ц Нів 85 Зо 95
Тук Тут ТПжт Рпе сі1у біп б1у ТПх пув Маї сбіЧ Іїе Гуз Агд ТПх Уаї 1600 105 110
Аза Аза Рто бБет МУМаі! Рпе І1е РоПе Рго Рго бБегт Авр біц сіп Гец Гуз 115 120 125 зек сіу ТПтІ Аїа бек Уа1і Уаї Сув Гец Пец Авп Авп Рпе Тут Рго Агд 130 135 140 січ Аїа Ггув Уаії сіп Тер пув Уаі Авр Ап Аза ей біп бет С1Уу Авп 145 150 155 160
Ззек біп бі бек Уа1 ТПк бі біп Авр бБегт Гув Авр бБет ТПх Тук бек 165 170 175
Пец бБетг бек ТПт Гец ТПг Гей бег гув Аїа Авр Тут Сбіц Ппув Нів Гуз 180 185 190
Ууаї Тут Аїа Сув сіц Уа1ї ТБг Нівз Хаа сі1іу Гец бетг бБет Рго Уаї Трг 195 200 205
Кпув Бек Рпе Авп Агуд с1у сіц Сув 210 215 «2105 311 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 311 сіу ТПг Авп Аза Агд Аїа Ркго 1 5 «2105 312 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело
«223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 312
Аїа теп Тгр Тут Аїа Авп Гецп Тгр Уаї 1 5 «2105 313 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 313
Авп А1а Тгр Меє Нівз 1 5 «2105 314 «2115 19 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний
Зо пептид" «4005 314
Ззек І1е пувз бек гув ТПх Авр сіу с1у ТПтІ ТПІ Авр Тут Аза Аза Рго 1 5 10 15 уаї гув -Щ1У «2105 315 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид" «4005 315
Рго Тут біц Тгр Бек Тгр Тут Авр Туг 1 5 «2105 316 «2115» 218 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205
«221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 316
Авр Іїе Маії Мес ТПтІ сіп бет Рко Гец бБеїт Гей Рго Уа! ТПг Рго 01Уу 1 5 10 15
Сіш Рго Аїа бек І1е бБег Сув Агд бБет бек біп бек Гей Гец Нів 5бег 20 25 30
Авп о б1у Тут Авп Тут Гец Авр Ткгр Тут Гей біп ув Рго біу сбіп 5бег 35 40 45
Рго Сіп їец Гец Іїе Тук Гей Сіу 5Бегт Авп Агд Аїа бБет Сіу Уаї1ї Рго 50 55 бо
Авр Атуд Рпе бБет сіу бБет сіу бБет біу ТПх Авр Рпе ТПтІ Іец Гув І1е 65 70 75 80 зехт Акд Уаі бі Аїа біш Авр Уа1і! сіу Маї Тут Тут Сув Меє сіп Аїа 85 Зо 95
Атуд біп ТПг Рго ТПт Рпе сіу сіп с1у ТПх гув Уаії сбіц Іїе Гув Акгд 100 105 110
ТПкх Уаі Аїа А1ї1а Ркго бБет Уаі Рбе Іїе Рбе Рго Рго бБет Авр Ат9д Гувг 115 120 125
Тецп Гпув бБегк біу ТПїІ Аїа бек Уаї Уаї Сув Гей Гей Авп Авп РпПе Туг 130 135 140
Рго Акд бі Аза гуз Уа1 біп Тгр Гув Маі Авр Авп Аїа Гей сіп бек 145 150 155 160 сб1у Авп бБет біп сіц бБет Уа! ТПтї сі біп Авр бет пув Авр бБет ТПг 165 170 175
Тук бБет Ггец бет бет ТПтї Гей ТПх Ггецп бек пув Аїа Авр Тут со1цЧ Гуз 180 185 190
Ніз пуз Уа1ї Тут Аїа Сув біц Уа1ї ТПк Нів с1іп сС1у Пец бек бег Рго 195 200 205
Ууа1ї ТрпЕ Ппув бек Рпе Авп Агуд с1у сіц Сув

Claims (8)

210 215 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить: (І) перший антигензв'язувальний фрагмент, який являє собою молекулу Раб, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЮЗ, і що містить щонайменше одну амінокислотну послідовність гіперваріабельної ділянки (СОК) важкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 37, ЗЕО ІЮ МО: 38 і ЗЕО ІЮ МО: 39, і щонайменше одну СОК легкого ланцюга, вибрану із групи, яка складається з ФЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІО МО: 33, 5ЕО ІЮО МО: 34; (І) другий антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (БоОїК); де антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з РОЇК, містить: а11 а) СОКІ1 важкого ланцюга послідовності 5ЕО ІЮ МО: 16, СОК2 важкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮ МО: 17, СОКЗ важкого ланцюга послідовності 5ЕО ІЮ МО:18, СОКІ1 легкого ланцюга послідовності «ФЕО ІЮ МО: 32, СОК2 легкого ланцюга послідовності 5ЕО ІЮ МО: 33 та СОКЗ легкого ланцюга послідовності зЗЕО ІЮ МО: 34; б) СОКІ важкого ланцюга послідовності 5ЕО ІЮ МО: 8, СОМ2 важкого ланцюга послідовності ЗЕО Ір МО: 56, СОКЗ важкого ланцюга послідовності 5ЕО ІЮ МО:57, СОКІ1 легкого ланцюга послідовності «ФЕО ІЮ МО: 59, СОК2 легкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮ МО: 60 та СОКЗ легкого ланцюга послідовності ЗЕО ІО МО: 65; або в) СОК1 важкого ланцюга послідовності зЕО ІЮ МО: 16, СОК2 важкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮ МО: 275, СОКЗ важкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮ МО: 315, СОКІ1 легкого ланцюга послідовності «ФЕО ІЮ МО: 32, СОК2 легкого ланцюга послідовності 5ЕО ІЮ МО: 33 та СОКЗ легкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮО МО: 34.
2. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за п. 1, у якій перший антигензв'язувальний фрагмент містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 36, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 31.
3. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за п. 1 або п. 2, яка додатково містить: (ПІ) третій антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з ЕБоЇІК1.
4. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за будь-яким із пп. 1-3, у якій щонайменше один другий і третій антигензв'язувальні фрагменти являють собою молекулу
Еаб.
5. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за будь-яким із пп. 1-4, що додатково містить: (ІМ) Ес-домен, що складається з першої й другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.
6. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за будь-яким із пп. 1-5, у якій антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РоЇК1), містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 15, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 31.
7. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за будь-яким із пп. 1-5, у якій антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з фолатним рецептором 1 (РБоЇК1), містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 55, і варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 64.
8. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за будь-яким із пп. 1-5, у якій антигензв'язувальний фрагмент, що має здатність специфічно зв'язуватися з РОЇК, містить варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 274, ії варіабельний легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 31.
9. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за п. 7, у якій перший антигензв'язувальний фрагмент являє собою кросовер-молекулу Бар, у якій обміняні або варіабельні, або константні ділянки легкого ланцюга Раб і важкого ланцюга Раб.
10. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за будь-яким із пп. 5-9, у якій Ес-домен являє собою Ес-домен імуноглобуліну Ідо-класу, насамперед Ес-домен дос: або
ІС.
11. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за будь-яким із пп. 5-10, у якій Ес-домен являє собою людський Ес-домен.
12. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за будь-яким із пп. 5-11, у якій Ес-домен містить модифікацію, що сприяє асоціації першої й другої субодиниці Ес- домену.
13. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за п. 12, у якій в СНЗ- домені першої субодиниці Ес-домену амінокислотний залишок замінений на амінокислотний залишок, що має більший об'єм бокового ланцюга, що приводить до утворення опуклості на СНЗ-домені першої субодиниці, яка може поміщатися в порожнину в СНЗ-домені другої субодиниці, а в СНЗ-домені другої субодиниці Ес-домену амінокислотний залишок замінений на амінокислотний залишок, що має менший об'єм бокового ланцюга, що приводить до утворення порожнини в СНЗ-домені другої субодиниці, у яку може поміщатися опуклість на СНЗ-домені першої субодиниці.
14. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за будь-яким із пп. 5-13, у якій Ес-домен містить щонайменше одну амінокислотну заміну, яка знижує зв'язування з Ес- рецептором та/або ефекторну функцію в порівнянні з нативним Ес-доменом Ідс.
15. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, за п. 14, у якій кожна субодиниця Ес-домену містить три амінокислотні заміни, які знижують зв'язування з активуючим Ес-рецептором та/або ефекторну функцію, де вказані амінокислотні заміни являють собою І 234А, І 235А і РЗ290 (нумерація згідно із Кеботом).
16. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО: 276 та додатково містить амінокислотну послідовність ЗЕОІЮ МО: 277 і ЗЕО ІЮ МО: 35.
17. Виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину за будь-яким із пп. 1-15 або її фрагмент.
18. Поліпептид, який кодується полінуклеотидом за п. 17.
19. Вектор, зокрема експресійний вектор, що містить полінуклеотид за п. 17.
20. Клітина-хазяїн, що містить полінуклеотид за п. 17 або вектор за п. 19.
21. Спосіб одержання біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, що має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ і антигеном клітини-мішені, що включає стадії, на яких а) культивують клітину-хазяїна за п. 20 в умовах, придатних для експресії біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, і б) виділяють біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину.
22. Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, що активує Т-клітину, отримана способом за п. 21.
23. Фармацевтична композиція, що містить біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину за будь-яким із пп. 1-16, і фармацевтично прийнятний носій.
24. Застосування біспецифічної антигензв'язувальної молекули, що активує Т-клітину, за будь- яким із пп. 1-16 для приготування лікарського засобу для лікування захворювання в індивідуума, який цього потребує.
25. Спосіб лікування захворювання в індивідуума, що включає введення вказаному індивідуумові в терапевтично ефективній кількості композиції, що містить біспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що активує Т-клітину за будь-яким із пп. 1-16 у фармацевтично прийнятній формі.
26. Застосування за п. 24 або спосіб за п. 25, у якому вказане захворювання являє собою рак.
27. Спосіб індукції лізису БоЇК17-клітини-мішені, що включає приведення в контакт клітини- мішені з біспецифічною антигензв'язувальною молекулою, що активує Т-клітину, за будь-яким із пп. 1-16 у присутності СЮОЗ--Т-клітини. жа ОО ще С АЙ Є / о ша ях ох й й й її, й ЗУ, ОВЕН 0 Фіг ІА о Фіг. 18 Фіг 15 ж о и" й ща
. їх - Б Й «у ч. й с. сн й 3 Фіг. 1Е йо - щі щі и. й і. ТУ Фіг. 13 п Фігіж у ч "и й т Фіг ти
ЯН. А БЕН -зЕязувальні агенти. сталежні Фіг. 25 : - я о НКТ Боні -ав'язувальні вгтанти, створені з ск З ввкористанням пібпіотеки п пр д Й сор вихористанням СС мя загальних пегпях панцюпа Я СІ І то 5б983т че КЗ МОЖ ня знак ОЗ Ме ТА г : х -- кі: в «ев пав З чех пис т все да такт тях т- : - я «хх НИЗ 1 ТЕ Пк ше ВВЕЩЕУ - іх 1 я і й ов щазані ВЗ я рн ЗП з ЗМУ 4 х - ва Шк Е 5 тещі 2ВНО ї і 2 я же НЕ Бад ДОД Ееяно- КЗ ї: у щка да Доосвевої Їй ЕЕ Ше ешеівна х : я оз їх - ІЙ й ІЗ зво ме М Жозе» З я БО р ва Ян М чи ї з й фе Ж а Не
З З. б і 5 я її У 58 ТУ ру внтмтіо імлі звититіпо пихпмлі х де З В Р -зБ'яЗуУвалЬНІ агенти стВсранів Ноя використанням Бібпістеки аю з5ее1 шее ККЗ Мох я І КЕ ї «ее КН ЕТЕВ Ка а 4 коли ЕЕ рек ско КО ЗБЕ т ї хни : з 5 Ї зей сеї 14ЕЯ фодоговоея не а -ва зо ЖЕ і в СВЙ сів тБОВ мк З КИ ДОЗ» захо КК че ми ВВА КЕ Е я мк вве шЕ І ва дж х е А зам нс зам - з за з тв 159 авнтитіа іметнхлі Я ВІ Ек що ОВ Е ОМ ще І ЧЕ жщ- Звава иИЧКЕЗ здох дея ї - звабв Й ї : ; Е ДК Б мож КЕ Б в як ЩЕ і що Б ях ЧЕТ ОЗ Ох с««х З КНЕУ пе те Х Ж 29586» де я ж: ВЕН З - ї м ЛЕМ РІ З що Може ше я Я х ї меЕВіяо - 1508е й м ТА ге В | заввінІ Ж ЧЕК КЕ ; ; ву КЕНЕ іш й й ЧЕ ТЕТея МІЯ ях че Ї пек еютьших в МЧЕНКН я БЕН. се взЕвті на Меврої З неєвтивним контроль що я "Ж. : хд
Фк. ЗА за Но ЗК г . ооо в
ТЕ. Е з пеня ЖЕ І Ко Ех Я ЩЕ, си 5 ке ВА «ШИ: ка ї5ЕЛа щ Ж МУК ех ж х зичае : о ко КН ше: ІЗ ТЕХ и з Не ВК ; ж ява Й ЧИ КК я і ЕЗ босі Ко т ТАЗ ре 2 В щі З За « Ж ; ТЗ ку яке Ку Мч Н КЕ о ток Мох а гу ІЧ х га - Р ЧЕКУ : х х пе шин я я. ЕІ Я ЕК «ї х ян кр КОН «ЛИ Чи. ВАВ В пива каві в? негативний хонтрота
Фіг. ЗБ кощл-зв'язуваньні агенти, створені БОЖІ -зв'язувальні агенти, створені з звикорж танням Бай використанням Спблюмези СІК КЗ пока» з -е КН: ЗОЗ во гЗ 8 А -« КН Мохів 5 зе «ча 5 ЗО х В жо і -в Кк ЗВЕІ гі Ес ден хує ЩО ЛІАВ Е 5 ХА кит вва ЩО С -- іх Матта жо У шк --- кр: ВВА Е 8 б «ок я кн Зп о Міла хо різ ї за ВОМ ЩЕ 134 ФроОЕЕ КЗ -« З ЕВ жо це Я ж ков КЕ ва Кий ях заг що ау Шк и й ШЕ з іо з я с Фах Фа 1 18 155 таб ва «а ї І8 чав зтабе снтктлю пдКлУВЕЙ внтитіле мкл б. ЯА Фк. АБ Ф- Боіва-тоВ 18Оо5 58 м 1 се ! --- вШВ-ТОВ ЯВНІ ді Е - К аж шт си 5 Е БВ ТВ Мощі та ТЗ | Я нт якьні Й - Е са нка З | сени ге 55 5 й й Е В 35 ще їж 24В чає хі Ф | 5
І Г. 1 ях Неїх ш Зхвих е оче г М ру У ї Же ХО Кк зкоху г: дк Зк сок У СИ і г і СЕУ і дея ТЕ х ік ех ВИНУ : ШО Ж зх сок КО НІ 5 і ПН х ї З Мо а КС ЯН її Е темі о. кое ІНН З Ж схо МО Ж за кох Я Я ЯН ЕС т МОВИ рн РЕВНННН ЩОж : БО і о КОКОЯ МН з Іжа риня ПЕ ЖЕ : «ХЕ : ОО НН ЖОЖ іш Ко ВЕВНН во МОЖ ів ІН озон п же ПІНИ МВ о ам се НИ к й Я се а З ІІТ щу ї - ми росогі Ж пем с ИН ШЕ і . | В НЕ ШЕ с БІ Б з ог дя Се ПІ Н . Кен ПН я ІБ о ВЕН ї ох Боже НН каялннняя. ВЕНЯННН З в Ж
34. 5 ще м о ще ЕНН ц я В 5 Я нн З ЗАВ ОХ зззззза ШИК ВОНИ яке ж ту а ях я їх с зх Я Ре СОЯ д в З ХЕ д РУ Є х Ж У З ї «3 їх га я су СЯ се 5 5 «а Гоа Я їх Я КУ га Б Кз Ка 5 Як Б Б 5
ФІ. БА п Б шо Фіг. бБ Фіг, 68 яка щ Ммекк5 ря В кову У - тваот х і о. МЕ ї їжевії й КУ тк У ї СЯ ї к | і в |і г й дев В Які Ж ія НВ Н чех Ек ї- У чх ще ро їх хх хе Ка Ба хх що Ж КУ ш КУ 3 Б я Ж ле ще І ге зу зщ
«НГ. Б сг. 6Д и ий ярі
ЯНГ. А Фіг. У - зе з88 т Е ра з ЕЕ іс ЩЕ ек щ- 55 й 58 і і ЕЯ я НТ с; й х 2 г: з й дк й к ії дк й ж
М В. фани тов спання й ие ду и и СА пиво вав вві 1 83 18238 т-2881 5.5 . зва айв ханцентраців антитіла 1 хонцентрація антитіаа їм - -
ФІГ. в Віг г 188 : «Е те Е ре їх Ко я Я ей Бі» й хх кв» і оку Е: Є Е ЗКОУЗ г 5 с г г х " А Е ще же КО аю кю фот их мир юфх йо ж В стос жсюд жсютфуютє флютки жфрьк кю кою тера жа АХ За з зи ВК пове ва У КУ НЯ хютцуантинів антУтнця ММ хоннЕНТДрЯЦіЯ ЗНтМтілВ 1 - ЯКІС БО зар 3-1 СВОЇ -в ІОВА ;з 1 Жук 7 чн УД Фіг. УГ тав та г ЩІ гео г : за с ЗИ З г ще те й з Е не Как й Гас : се ж й М ща х Е Є я 88. Ж я І г З Й їх а о : в хо В ПЕ и и и с й жав: М Ж и
5Б.2авї аз 3 тяг 13885 з.ав8:ї ах з ща тва концентрацій антитіла спе концентинція витуріне сп ща Ж Ка 7 Фк УЖ «Фіг. 73 ав і 58-х з; Е " р Г ки їх Я жк ж Г й т я - Ії й ід й : - в КУ Г іх ї5 - : ш а Аї ж 5 а Же ще - Е - є : ще ; о Сай и! о 1 й. в НЯ - ШЕ ЩЕ зни ее ЖК ша и ЧИ р-н Г тт Я тре в. вві З тах зав зва ща Е 18 тевае ханцантранів антитіля гл хонцектавція знлятіва сп) - БЯКЛ- ТС БОБ осяє РОБЧГА ТС ЗБ «в СВІ Я
Я т Ж
Фі. Фе. Кк та» зва: Зх май -к є т ай ща «В З й ї3 й до ЖВ: Же жк ВЕ іі зе Х зе є ш ж гаї Кк їх і о ж Кс Кок КЯ о й є і Же ян ее фон ме не нь ефе нь зе фон ОВ. і; ефе не оефеснь зе фу есте еефре ек ек фр тя о В
5.в851 5.23 ї зо тва в.п зд З за» заваз концентеція антутіла Я занчцемнтрація аититіла спе Ян - Ян - Фіг Ул Фіг УМ ІЯ де В шли: ламали зва шк я - за х т ж ІЗ - Ж; т ї її М ща щі - В: ж з Ве до зх г ех но т Ж в шен а - ника що й. - і ефек КК Е Шини я в.вайз п.п ї 12ж тво паз з. З з5а зав25 : перо ве ентрацея вити С хонцентрація антитіла ТМ чентрацін в нин - БЯБ-РСВ ЗВО за БЕЛА СВ ЗБ СВ ОРЯЄ дк ря ш Ж ЕН Я - : Ши а- ва пра є : -- во БО- хе МУ і х З ФЧХ - ГУБУ де ЗХ ж Б 408 р: КВ; тав ЕЖКЗЕН ковцентиею антит ін ріг. о
Фіг. ЗА Фіг. ЗБ т ББЖ У Фе ЖЕ в ях БУ -к «і З «в й м 5еове Ж в ев ж ав- як Ж хв т їз кет кер ее - та
2.83 З зав іввае за З ча ча58а хонцентвація вититіов (пі : сам отут. г 7" я | кізмицентрація затяті ЗМ фіг. ЗВ Фіг. ЗГ і ЯН Ж Ж я ВЕ Ж а5а5 з - З ра ч вай ке вх г: БО - ша ях - З в жо в 340582 щ Ж 25 0 Евев- адм 4 чав завеа Я 8.8 : тов тата СНИ г. щих тіл сх Й . с кохентрацін антитіна сам) хонцентоаація антитіа (ЛА я ТОВКЕСУТ ж СВО за ТОБОЮ -к ТОВ ОСРЯУ - Ж апп Бей Ки з, - хх «: Ба З «рова ж дя тво пох Е дих -- ОБ СВ ВОЯ : К- - БощтістеВ зраз -тНюМ ге і. ож ВО СТВ ЗОМ ОА Бе й шва течдо птах мито ЕЗ зав /» «еко -тСВ ЯСЕН ка з. Бе тв оре Мк ку де да кев ет ВОМ ВГНЕК Ж МЕ - ой і; ШИ як а йо вас ян я : : ;
й. З ча за това концентрація вититіна са 1 О0
- Н ; ж збе ФА Е зак с, -е - пе Е г і Ес ФНг 116 БУ - як с уч « а КМЗ х Ба 8: х 8 Ех ве 5 ; х ех ШЕ ЗЕ х й гЯ » й й - жо БшВЯ ТОВ ЗП АТОМ ин : свв о я хоче ее Ж роилевБреетІогА канценвтроців антитіна 1 концентрація антіятутя г .ошошя я Й пн Я вожтастов ор -міпоЗ че ще Ж в З БВ ТОВ ОВ -ННОМО яка Б кя я х я « фіг їв є Фіг ЖЕ - у х хе ре в: ї 58 і. м ся МКМ У г. Гі їй в КЗ Ж Я Ан» садах дув Є МИ ен СЯ кни и и і Е кое Я хх к-я чи ся дк Ж шов 285 1 не зсо5к в.о 33 ві іх трабе концентрація внтита МІ концентра антизіла М чЕ ШО азше» Ж олав ке -- -- РЯКІ-ТОВ ВО І т г - : -кк. БЯБА-ТОВ ЗО -Т3О2М т Х З «ЕЯЕ сцоцояж теля нта Б 52 Ж Бо й ся. БЕНКІЛТЮВ РТ ІПоА Ко - Я « ш - вода лис ра нер ї Ь -а. вава-тов вра -клоюв е х е КУ «аю Вастов зо -мідва
КУ . ї
- . : й хі й оо: чив ва в 1 т їаабЕ зевзйох осла: з 1 155 за153е коицентрація зититіла с концентрація антитіла МИ Фіг ід й Н.Я 1Е тод як зр. і5 ня Фо 2 ка Ір тв «г Зх х х в 125 ож ве р СА ВЕ х КУ а ЕЯ Х ян ЕЕ В В оре що мож Мт Ме К їх Ж х Е У шк свище сени се ше всех М ї зке ков ФАВУє вах їх тка тихе МВУКІ хх 2 хо чковУ. хх «ЖІ х тах хх яскщентряція дететеча мі кокцентраців зититла М кодцентвація вктиту ів ханцектадція змтитучя му Яд ян. ЗЕ Фр іш тн, ІЗ ря М: ГоЖЕЕи чех Е по ге і; Н г ЖЕК г - Ка Є і Б де «в Е «и СУМІ ех ля х БЕ : СУ Я 5 С їх ВК Е кн. - В Ж й СЗШ - х г пер - і і оте Н за
Хе . з ак 52 Шк ст орех СУ ве си на е їн т ї т М Я у за І інн Ж Ж в пеня г З й я ее ше Я шо КН тканих ЗМІ ЗКБАХ КДЛВ МАНВ ТН я А- кн Ліна АК ЯК; Вес М а М «аа. АД. ЗАД ЗеКНЕА На: ЗК ї ГЕ зн: Ява ЗНАК ЗНА: са АНА й ЗлУкі 555 1 Зк зт м ду Ки -е з5жеу х кУжі жах х о хаем' є еУкх ках Н ех чех Е Я з. -. г Н (Я с. л т хонцантрація хтів Хомин рекція антМмтій А ш концентиавцівантитоя іп хХанцектрація змтитича пу 5 -- БІ ТОВЛБОВ яю БАЗА СНОГЯІ са ТОВ БР ЯХ
Фр. І19и НЕ жи. 39К зач зва Е що Я де -к "У раку раку я 55 їа ЕІ . - як з Е Зк ча льне 2 2-х вух є; : Що ; Ж Шк ее зн з дитя й р ка ее п ж фронтит ннтнюян ння з ши зи и нн з.ават 5.43 ї за заха5 вва В.Б з зак 5688 концентрація антитав М - тов знцентраці антинва вМ) концентржція зніктійя БМ ут Ко т Я ЧК вік. 12 нг 12 М 125 зва ж з з Фе од со. Гек її й У Я зв» С вг- схе Ся с «ЖЕ ж г Кк Ко Е. З Ге, «а й ж ж К. Не пзецищннь й ще с-к Ге овнсни. койне йсею» родом не ХИЬИ в рнекідсткожірес вишню коле шо. ИН з.е53ї 5.35 З 393 заз 3081 3.25 ' 125 зтг5а: хинцанттація днтмтнеа Рі концентряція яититін СМ -- БЯБІАТСН ЗБЕ на БВ ТОВ ГК «СВ ОРЯЯ фі. ІН Фіг. 120 же ЕЕ . НЕС й Б її са в ру т т І Ки . зов й З єв МК вв. Дня шия и Еся Кт с и АТЕТ м Б Кук ї її Ку ж о за ж Й ш й Ач що жах з ї55 ВЕНА Вч а ї 355 за кзнцаентранія антуитіва ЯМ) хонцентвація внтиткля ГІ пес вух зв ФІ Фн.12Р хх 395 ж я т « Гек й меч т Я ав. З 85 я е -Е 5 їз їз яті
Га. їз ' ' ! Шк ще щі а 1 тий ЕКС Фк В ї 155 з5ощ концентрація антитіла кховценнцовція знтитиа М -- БОЛТ ОВ ЗО яю БОБ -ТСВ ЗЕ жо тов
Фін. 12с Фк. 12Т тав чіяй- ж Я Кя м на х гу ян в - ря - св звів є З 4 с о - ЗУ г ей Оп ЧК у г «офрсгя З стат роннйннкія ж я ва ТТ МИ Ж лтвьсяни пи інн ні синя аава Б.Я з «ба звава влад ав 4 аа захо концентрація антитіла см коннентизція антитна ЗАМ
Фн. 17 Фн.12Ф 158 МУ ж я ко» «і «4 гля є їз М 5е зов ж Кк е з» ях Енн їн а . ж х Шк я вда 2.84 : за тая завд злі ї 155 135235 концЕнтИаЦція анититіпа СМ Й соди тав концантранів антитіла М --- БНО ОО не БЯБІ-ТСВЯСН зах СА ГБРЯЇ осо жи - х се кох
Фіг. 12Х Фе, 13 ! Я Й ж я Е і - і ЩЕ Е в, ФО ква і ЖЕ я Е Б чк ! ї- : - Е яз о ї2 Ї ж сво же са о п и | фея оно оо оов фр я хр ння ш.БЯЕ яд І йжя ЗИ ОЇ КІЗ Ж 125 тарев концентрація знтитіпа НМ кочцентрація антитіла 1 Ех я Бук. Жук
Фіг. 129 Фо, 12 185 а Ки ж ! Я ря в с в жк З а м й й у Е ї 9 58 9 вв ; ж ж | Е хх вх З - Ге | і та ЩЕ Її жа ;» Ж ; ж ! я З Я ТТ отже нфа тв я вт
5.а 553 У ї 753 тав 5. ЕД У ї З ВНУ концентрація антітіла спі концентраців антитита З - Ба ТЕС «чає НОМ -ТСВ ЗГТ «жк: СВО РЯЇ
Е тазове се здемс ще й -к- БМ ТСН КОХ клеї Швертованах в щи - ; ; ЕЕвіНй-А ТС БОМ хх клзомичнах звеов кт. ЕФІНЙ-СТСВ ІБО кої кпвсична» КЕ аш- ГОЛА ТСВ ЗДО «Те красична» я шви ; ей КОНІ ТСВ МОЄ клеї голова до хвостах а Еабаф " с св. ; Ж з 7 щі Ше шк 5 чавав РА А Ж Ж т БУ « х : о се 28595 шику З нь; Ф у ї. ЕКНУУ чу м
5 щ.х р 18 1 їпок ханцантрація знтитка (А
Фіг. ІЗА й Е. « і ч т їй т Е У ве -- БЮТ ТО хтї МЕФОрТОВанях у: Е до жі КИБЛТОВ БОБ алеї хеасюназ Ж ! че - ЕМЕІ-ТОВ ТОБ х Ті ходеучнхо ж ! Е сон кни ши | ск БЕВА-ТОВ ІЩОХ хін пхлдесноо хвосх вх Ж ї8 а 5 як /й я. Я Е ж яе М ГП м Е ще ї цк ОО їх Е ШИ В Е які ж г їй (ле АННА за ее нн ВР я ване ЯН ЕК 2-51 З їз таз в.Ехї І вх Щі я І Ух чкоки концентрація аитинлпа сп хонцентрація знтятине ств) Фіг 1356 жа я гу т Е: 47 І т Е Я. -е ек Е. ТК г у Е з: У є Шк ; - зе ж 553 к ій петля ж - Е ї ї а Ти є Е ? ш й ж ! з Кл
К. 2 й Е .7. 9 шій, - в Шоіній Й жа шо 3 ах тсв8й З. КН і їп2 зга хоннектиація антитита КІ хинцентриція знІМтіла ІП) 25 жа я и щ- в К. шк : т іс Е. Б жк Е. ж 2 У джен ту - Е а Е «а Ї т У за гі ж я Е ж їй е Е в « ,! Е Га Е р - 2: ж ! ! " їй ш 1 " В 2 ж Е й 8 й 55 вій х -.
в.япат з.ах ї тв тва: вові вд ' 158 зї2азе хонцентовція антутіва сім канцентвація вититіпа м -р ВОНА ЗБЕ кі інвертую. я «й БОВМ-ТСВ ЗБЕ кої класична - БОЯ-ТСВ БОБ «ті класична «же ЖОНВЙ-ТСВ ЗБЕ «КЗ пепова-де хвоста к .1538 5 Фіг. 138 м- гу г ха З -- ЕВ -ТСВ УГНЕЯХ «дні наевртованах у дО вагах -- БТ РЮВ ЯН х35 класична В І як. БОЩЛАТСВ ДЕ ІЗ полова до хвОостя» ре Ко КУ ваваа КОЖ рожеве су ,
їх. дз я зв825 й Ж ай В 5 сет: сов КЗ В вві я я щ.ї ї Ж 356 тав: концентрація антитіла ЕЕ р Ж З Фіг 14А щ « В Е - - «32 чі тах дея тво дгтєх от: . х -- --- ЕК -ТОВ ОВ кої нвертованяя - Б з БОБ-ТОВ ЯВНІ ківі класюмна й х ях с ВЕЖА Л-ТСВ ВО кт голова-до хвоста» я хляля г; хо ч К В зштщо я ї ї ше ГУ : г І Ні їх ЕОЯ ї Шо ї ще Ку в т і ні п вч най я й а Же п
5.0Кох хх х хок занах зд 8.55 . 85 пнмт концентрація знтатвя хомцвнтоаців яктитіка ст
Фіг. 146 І 5 ч З 32 ТЕБ т уч Ки : ж Фе : 5 е : а в Н є й о - :ї х 56 їй ве : як ПЕ ЧИ Ек 2:24 І; о : ї: а : я. зав яз х 83 захв вові 8-3 : ЕК зевах СК Зіни в тілам й й : . концентрація внтютісня ств; концентізація внтазіла ПМ ж е 88 Е шик Ен Ф 1 дк у Е вс Ф се 1 М ж в Ї ; Б З м ЗНУ. їх Е - Е З і 554 7 й 58 з Е х жк в Ге Е; М Ге г Е; ї ГІ това РУ ' та чаш дово 8.23 1 за зво; концентрація датитіва БМ хомуентуація янтитіпя СМ --- ЕФІНЗ-ТОВ ЗОЇ «23 інверт» -а- БОНВА-ТОВ ЗО ТТ яїз 1 класич з. БОЇВ1-ТОВ ЗОМ «19 голова-до хвоста» (Ві В
Фіг. 148
1ЕнО5-я доза час Е мЕгмМишу наптажиття У 0 1ЕНМ- : Б; Ну КЕКККН НН я КК А В Кн х З х седоняя як й - од гемо: КИМ ІЕШИННИНИНИ НИ г. Цен туф тет я ев ОЗ, Е кламу; МО 4 ка В ще -кр- 1 МхтУкшу; МОЗ же: ж потяг ВНИХ -н- ЗВ МИПКИВУ, ВН ВИИШИНИКЕ
З. В ніеня хор кої, ОВО В в У ЗК У баб ее оду с Щ т ши Ж х Ге ж ВО 74 за 73 ча їх її Б ФІ г 1 5 час ігоді шк тварини для папереднься шцвнкх Я маш тях, ек их У соб п пет: ПЕН мс: Мі Дін лу; ста ГК т ККУ ії 2 Оа ква В; хм хо 5 Со, їх Ба ЦЕ З С в' Я пвх МК Я ее п ТК Е5333 аж ЯЗ чи Я хамінчемня доквіду нення клітин ЗВУ ін'єкція пюдсеких РВК ін'єкція лікарського офім'євція лікашевкаго ЗКенНія лікаревкаго їзда їв засзіе і зв собу ії звсойу мі Ж и
Фіг. 16 Фіг 17А Зо 2ю А ря іє ак наповнювач ЕЇ й --о БЕА-ТСВ ПО ме 5 ча Бо-ТСВБіР мкг Е т ; фо БОВ-ТСВ Ві яко Я Ж - ТОВ ПРА? Ід Кг Ж ще ї хх сер ГУ що 21 5 З дні ФфіМ17Е Ку наповнювач ї- Терра? ТО жк 5 РОР-ТОВО ММ о БОТК-ТКВ Я зак з Бо-ТеВ о Ек Її У» Я Ж 3. ще х рей х Н - 3 хі ЕЯ їй ГУ зді С НН НЕННЯ НН мах Ж КІ х її х М. НД тп Ж тео тах 1 таелУх Е лк ж жи я хо» 1 І-й 523 ше Я я ж дент СЗШ СУК: кі х сх од У | р хі БУ пакео а Я ци СКК спсед - Код у-нй--й і рю вн. ОО вшир | Бк ж. і ее зе - Ук ха « «г ак - М з Зк «« я ях М Го з» Б Е я КЗ - веЯ ях я зх хе «с Ук за хх 5 ще дк дя дя дя
ЧО. З ! 2 Я ме БЯ пе З Е 00 ОХ жж і ШИНИ ЩЕ ПИПИПНИИИИИНИ хо ШИНИ ї ВО як У : : ся КО ІЗ же ВЕДЕ Нв они кНі з пожтюво, ПОродленко а ОБО КЗ х З напсвнуеачемі - ш- - ше в Т-крктеріх: непарним, дасстодання С Ж 5 т ї х - «а т - МЕ -- х ма є її йо Б яд щк хх с КУ тх
Ж щ. рн У щи й : ж я те не Як о - Й де Ко ще - т к- й ве Ь- У
Фіг. 18 - зх кві ОСИ УХТ х рад ОК ет бот м шк ДА ТЕ Іі - зк Біид и КОМ ану Н жк Ки Я їли Ф ліс пеки Му од ува: З З М Спа -Т-каітяки ї п й ІВ В наповнена ї Н ЕК ОС -Т-клітяня я ли Ж ит ПИ лих Н хх І інн вч й НЕОН п ДУ й СН Н й Н ЕЕ ОВТ «пегнни - ВЕ пи Я МЕ НЯ Н М Н пе: ОО Б жі ; «ВАМ 0 Шу ннння З ех жк ма и м ЗО яюдови ШО х Я Е оАІСУМУУЄЕЮЮМИМХ рт 5 ШЕ ЧИ ЩО те м тя торфом І У и УЖ "в Н Й хх ше Я о вдвіле ЕЕ З о, моя ПЖКИХХ о У КН зе -ТОв де не є ан кс НН | З В ї, зе ун ж МОВО ЕМ МІ ; Ф ї Ве М У ФО осмис в БЖ СК 11 кг - 24 вк Кя н ЕК НЕ З З Й й З наюовиюває ЗОВШРоЇ ХБІ-СВ ВОМІЛСВ о БОТОК о Шан ШЕ ЕЗ паж кі КВК ЖЕО фен нн лак гом о сж о мож мим й Й ЕС людський СТА тд ОЇ а поренянніз:рупою, обробленою якклх Б пошко в наповнювачем Тож стя д- да рат уетрита кі НИ У Т-критедій: непзоний, дностовонній
Янг. ЗА
Ффн. ОБ іт ЗАЙ тот Фі гра ФНн. хо ЕОНЯ їі з | шо х І МК УзловУюви У З шк Е хи ЖЕ ПОВ РИХ ЗВ МУ Ж : ай клловкюеуі ї Е 53 ккАтловІнняті ХЕ ! тивпратс ак хх її БК кар тТОВІННАКІ хі : жк тов лева по юкі хо | Ж вомтовВ и же х З Н ; ЖЖ кшнх-тоВінак) 5 і В З вав тов ЮА мк) ЕЕ я ср Ж Реве ТОВІ я ЖЕ ї З й Й Ж З Я Бо В ккал ги хат ш 3 й й щ КУ З яя НЕЗ й х ї у хх ВУ ВУ З «Ж ке ; ІВ ав ї й й У ЗЕУУ в Н В х: З і ік ЗШ ї о | Я В Ух ї о Іх о го р 31 ВІ 3 ШЕ БІ М. Я. ЙО ЖАВ он фосонофанс вв МК. й Й щ й т Й ; Же йо -О 0 ТКех БІ Ноя М т МЕ-а і жк ГУ ; Н зх хменювиа Е ї Й Й й Ж о їі жеТоВОгітсюхв Зк В НЕ зей
5. Її б уважне пох ї Й Ко вра рН пами 7 Е р й ах М дехто кед с Ж щі КО Ху ТоВи Мі х ДО вки тоВ т Ві КО жукжятовів я Х з «КО БИРЧЯЕТОВ І ЯЖУ х І р й Х Мо ХОМА тСВ М М Х хі Іо г ОО і х : КЕ Еш п КІ: В їх, й ї ох мох У ОМ - її Ка ї Її С Х : - з І Ж дя ПХ КежШИ х Ех ще : В 5 з З : дае ; Х сля СІВ чав сОо8е со вв ям ке З і «хе Ж а Е Ха ТОВ бе? СН ях ГУ Н як катжнюех ї я : Я певні тоя тнвАсі і яК ТОБ ОР По мкг) ї | УТ ЕТОВИ Ж х З да гвнетмапомк ї і Ку ЕЖШН ТОВ ВЖИ х ЗКУ МО Еш -тоВИ Мк КУ | ША КІВ г х ЗК 3 т М Р. ЖОВО вккг Е КЕ З РЖЕ-ТОВ ЮА век Ж ох Ї Мох Кр кі з яку Кр ; ко ї : ЦО ї й 5 5 ї 5 05 КЕ в г се Ж в РЕЯ - Я вх В г г
АВ. лено ЗИчЕсЯ 200 ЗАМ, вен ЗК ва КК вах. ств севфорюн о сродтх соптьсхв АЖ перфоржи СТО ТХ КІТ їв та - ку НЯ З У ї с- Ж, гу І ва» Я ХУ і й ЕЗ / Е ї ї і в а Е Н т р й 2 и іл ше ек шен миши ЖЕК вина шен й що ше ие них ши ше с: аа 5. ї 125 тва пово 8.81 ї тав зво концент: янтютіля БМ концЕНТрація антитіпа ТЛА тод -а. ТОВ ОРАТ -а- БОЇНІ-ТСВ капа-пямодя Ки
Фіг. ТА Ше «В. з15 г; ; сук 1865 ФГ. 22А тає Фі. 225 Ка КЗ Ж з а с як Н «4 3 ї к ат 5 і З і Н о в уй а ни Ні ж ; ж Й - / я і 5 й 5 ІЗ за Е о Е б і ще КЯ ни и щи у и КН МИ І вва М. І 85 заз5а З 3 ЕН ї зп та055 хоншентояціяв внтитіпа лм хпнцентовиія знтитіпа сл «Фіг. 298 Фіг. 22Г ит -Щф хе ж м се 7 2 р і-й о вв ФО ве ! ж ся е Н «з Мі че ! 2 / в ! о ї КУ Н й л Є / вт пи ше пи ев и БО М І в ЩІ есе ее сти жене НЕ на а М ОБ 5.1 ї ха ОО з. Б. 1 а забав хониаЕнтрація антитіла ТАМ концентрація знтитіпа ТА в ТОВ ПРЯУ ак БЯНІ-ГСОВ-капа-пяМола 5 - тах З - «ге я : я - ІЗ це - с Ж | Ж, жк ТОВ ОБЕЗ щ- ї " 5 : : 5 г Дах ВЕ З Я а екю ще ЧЕ я рі ЩА ча оживе є реве з. ТОВ Мом х | яст щ хе З ОТО віда х. я ле М ї5 ї. я Бо Я ї Ку : т в. 1 ви Кк 5 хі х ках чохла ; ня клнцентранія антитіла (ям концентазація антитьля САМ Канцентрація вітитіла ств
Фіг. 23А ФІ.
«нг. зад Янг. АБ « З х бе 5 - ГКУ Ж ж» ЩЕ -еоооав 2 ие НИК - Й Ж дрнх В Її : 5 ск Ше БЕЗ ще -- СНУ тя ух са 55 б ЗБ ху ся ЕКЗ Ж ж ХХ к СІ ше ка КУ о. Е й мм З - з Кз Кі у У в Ян ВЕК один нннннннннннинннннннннннтннннннннннннння с 5 4-Й сх дення Бе Ба
Ж. З тах кава Ех 3 ства запах концеЕНнтЮВція дититіля НМУ концентоація антитин па
Фіг. 248 Я отед осо ч ТОВ ЗБЕ шк ря КИ ї- Я ЖЖ лі Ж ще в- тов'Я ся аг: яе ТВ 1605 кпасечна Яся вче же ї- рем 8: же ЕК Я совно ЗЕ ЯК 7 х Е с ШИ а БОБ х ж Ки вжи ОБ Я о рез Кк» х х хх рнКя Мене Й яЕь т х фай «ж. ТОВ рРЯУ А З З ваш хопіентувая антитіл спа - їж м май х 5 ш ре з тав 5 вет В У К:ї р-й ! ї- що - - Ну 5. АК я я й Кі ї ХЕ 7 тх щ' 5 Б, 8 в " х Ку г З о ру пет г їв я ОВО БЕ Гу -
й ж.д з за зво ЕЗ 8.8 З тях зах че ТвВ'яЄ - хониентрація знтепна Ми - концентрація антитіла (МИ «в ПОВІТРЯ Т Є ш щ ФІ в. ! т ! « З : х зв й ; ХЕ НК Е ; ще ох з пня я | Е де фрася 5 : «7 в я ї ї й. Кк ; Ге є і Кз як ща Я т Гр Гл х ро 5 з ї : : . це Ух Ж : зх їх 1 їх че : У ж. в! заз кв 7 щ.05 З БЖ ява концентрація знтитія У концентрацій амтитита (М
ФН.25А
Б З Е я КЗ БУ ж вве КУ ів Шен лини ш Е І В и дар-а-я ще ох ре .ї т ви ж: ШИ о / їй же в м 5 я5 я й ща у; рі де Н їх геЗ г я ес в - х р шк м їз -- «3 Б їх КЖЗ ча В ЩА Ж ІЗ хзЗап5 : пиши : ДОЩ «тсСвідпа я концентрація виття ке концентрація зитизіла А СВО Е: Е тов ора7 Ж ; ще Е тав сер оті сті реж я ня ван ве Б дреди Е в : - е ) Ей п ; х І фо К : їз вк . / Ж) ЕВ КЗ ; те я М їх - її Ж ї те а-7 нак т з й з й
5.пз З хх таввя й щ.хЗ х Я хавях сонне Вот їх І хаонцентрація антитіва (п кенцентрація взититіла (М хода фіг. 2556 « Е З 5 ж г х Зак гя Ба т Е Ф-о Щщ Кв: Знав М й ви У ще; тк як ш КУ 55 і ше ї щ й яйани шо З Кя ра в С ; зе «т ак ї-23 ет щи - т пря Ян 5-4- сор я Вот В Й, ж в. ре прин пп т ї3 -е ха в й т х ож с; те ще КЗ
8.3 4 зая ч5БЕ: У аз х зве зазев сзвоакео - концентрація дититкиа КІ концентрація днтитнія І -- ОВ ЗБЕ Ге Е т М -к дет У в «з. ТтСВібО5 Е : й че тов ОПР? де зва Бо їх З КІ З 1 З - ке ! в Я дао з 1 За Бажаї х Е аз вв кі о з же а ! їні КУ г я Е к гак , я Кс си: ще ШИ вик І г не о них, Ж БВ щ Е щ Е Х АБ 1 ех Ж ЯКЯ ж. х 185 чзачЗи хонцентавинвя антитіла ТБ хонцпентовція внтинппа М оз
Фіг. 258
Б "я ех : ду су х «ФНг. БА за Фі. 55 Й за ях ка Е : ри мк ж х ! | 5 с ик Й шк ши и С В ШТ п вин ж З россюовккчаккісоссююсоро ов россоюссює кт россовсстесює - тт й тя мащи 4 «ж чав що п 7 і педт мам ч концентрація антитіла їй концентрація антитіла М) Є З ї5о ї чищення з що ще шої Фіг. 288 рі Фіг. 25 -к за у тд ка си пит ай ! Зк ж- ТАЗ Ез з Я й шок ди Е хай ке зе чк ТВ Ж ШЕ р уеюь ЕЕ З ! з в---в з ТОВ ОРЯ? х ЖЕ тазах ч 152 т3ааЕ хонцантичація антитіга (п й концентрація антитіа ам я ФМ. зд 5 Фк. ЗБЕ З їжа Ї ге: ха 8 в сх, і її ! рота Е: я Ф а с ВИД б, в. се о 4 --Пвесоооофіф рання В піде У Й їх во «43 «в8вЕ з ооо концентрація антитіва (п концентрація антитіа тях Лінія І. сайти Лінія клітин Сайти |. ою по т 00000 ання, дя ск епітеній хопнлального но дклуЗ пів епітеній хоріюєлального 104 ПЕКИ плетення ж. ииии КИНЕ НИКИ М со "епітелій Шо Со ПИ и ни ПИ и ин сеТеНВ ПИЙИЙИ ПИПИИНИ НИ Ин нИинИ ЕС
Фіг. 27 ще А Шк Б Б гг БЕ тав: й У 2888 що . Б е: МК ЕШК ж з ОТОовВС Я тов 'їБОБ МІОоА 7 5 В ОТОВО0И МОбА ря Ба ех дит пл й вх ЗВИК соя г одя 5 ще тло над Ж 5 я Товсті ВОЗА ш « й Гей З Й М Б зово Е що Е 855 Кі Кк Ж і її г - я" Ж Ку ва в я й я т АК й юш - г ва за м Ж яв м я Е - ни Ж Е ше ШО ож ш вай Кс х ж си нн о сс М т ще КИ КЗ ший п ще КУ У 7 Що | І Ж З ї8 зай трах ще Н 18 тва зач 2 й Ж . : кзясентранія внититіпа ТИМ монцентовція вититіла пі ФА ро
Фіг. 2ВБ - В Є - щ не т содонетннх Зк К жк яв -й. Ух ї ШИ й і це ш о се ХО УМ -- тов'я ен КУ Ех Ки «о ТС МА 5 28 В а. Тов'яСВ(5100аА) ве ох т Е й ж ТОВ пра ет я о б з Ко І ЩЕ оз Ж хро ж і З сон У що З Би -К Ж Я че ж Й лел -за ; : тн, ння
5. ІЗ ЕЗУ тва концентрація антитіла М пзіг і
Сг. ЗА ш 65 М хе те Воейей в 38 ни В ше: ще Кі пт як тсовзО З Км шк З ЖИ В тов зріз (мова) ге в їй 5 ; ККЗ ж Тиша НЮвВА с УТ : г й НК
Б. З аб За555 Б фіг. 2956
КУ Б КЕ рсЯ жо же Ж о тов'івоє з ЩОБ тов'яремюоа) Ж т х З Ж ссйакя що сеу пичтют рєжуне, ; х рн Ж Я ТОВ НюЮвВА;Х їЕ дор офі нен рве дян нн -ш. тив рраї КУ и Мети Б КІ З За: Кер МН ї І що ж -29 етятя я а. і БЕ това концентраців антитіла спі ін НД
ФЕ. ЗПА я я я Кк - т га -В Ше тов зай 4 вікні ТВОЄ КУ: ра м -х кА Я одлккй, т ичту й паї. -. а, в Ж си ШИ «Ще товгНі пера т: -4- ее сУК ЩЕ -- й в и и не ИН її дон нт а ДУ нн ин фннння т фе п6 М Кк зе щ ХМ я - -25 й й ї
5.53 4 ЕК тва55 концентрація днтята Мі
«нг. ЗОБ ре І г Ж Е як ЗЕ т К - 2886 т і -в г оп довня Яся 4 шен ен НЄ ш ян ані-теВ-О-18Б5 с ре НЕ: В ее гол -ТОБ-С- ВО -ОВ 5 ЛОВ Ж Как се я- оф -тов-о-1арям СІ пОА) З 295 Ж
Е. 4506 В Ж Е фе гат-товВ-с-вОНЯ КЗ й с й «М Бей - ТВА З-213-05 МВА) й Е Ре М би ан нн а В» оф -тОов-о-оДі ов іш пОХ) Бо ши ни ни шк х тоев З де вторинне антитито и Ко об ок, пуд -3іо г Ж нн лін й й У 283 Е- «88 з8298 Е й -вй конісентраців змити спаму щщКкЯ р ель ен МУ : дк Ше я « Фіг. 3156 5 ДК х дах олння око х г кб ) - - Уч Е З КЗ хх щ тек 1 ЩЕ 455 Год коннентранії знтитіла М ш ! З центрац ММ Ж с Е . У Ще
Фіг. З1А 50285 ! гу | ; - Е нт се Е ! ШЕ Б Др ннннф нн фен нфрннн ни Пн ня шннн ше и и «ВВ інет виіея невніктрненннн ва я їб8 зчавог кончентриція шнтмтля сп
Фі. ЗІВ
ЧНг. З2А Фіг. 325 Чнг. 328 в ЯОЖО іх мех Е се ЖЖ Кюх хх ХУ вжмер и Б д РН Зх щ ркох Ж - йо Ек жо умхюмх З -, Ге мохоме 5 що що, й; оМоЖ мое Гж мох шоложим й Ге пкокхххх а ж очка М же хв имох - ВЕ хо хомеютхюю Е М тр. хви Ку бої щ ЖОФ домо яю сехомеемих і - ГЕ | да В - ЕВ ще Ж | щ-х що ее ща й з Е Е «он шоб ше Ж й Ж ж. Е Є щ ит КЕ Ж Є гзско 1 г ЖЕ 5 Мт І й віз що хом І са ЕЕ й ЕН! й с ко ТЕ и г у х оф 5 я Мк па Поч шенйвив щк фнй зо с ЗК ЧИ дб со а КО сНОИ в ее ол В вия зл чих жом тату о БЕ жи зт агивмт типа Ж ках иа їла злих концентрацію внтатпа вк «онцентрація вититлх (ВМ концентрація внтитіня сп В - й з : - ш : 5 ЧУ. З2г г. Фіг. 32Д - ч ГЯ х 5 оКоМо реж Ж же уче К-я ях 8 Гак м ЕХ -А фо 00 вх нохих Бе з як в ст Гак схе хом ї КЗ ков р Е я «мих й мех рі Е из В | 8 Ж зва Щи У же Ще і т й 5 ! и ш є - п г акт ІЗ жовт 5 Е ве м щ- : ее ИН 5 х ша а У 4ЗЕ Ух зкеох жах зхозоом х хе жухе зхомУ хахаме. Усохохи концантовція вятиатпа сам концентовція вятитлпа ПМ Ж ш- сові См 5 Я лпуз зате х Дани ев гвовв їх з Же «б» тер зер воду х і «ще ТОВ ТБСЮю У гЕ ре ГУ г ж в
І. Щи : х - ще я Я ять чи а Е ато - А й тов 1вра-сязавазА 5 я Й сов ; НУ свй -- ДНО ЮЛ МНИ КУ вис Я я як Ж в- ГКІ Це ДИЛИ дні дк й ре . М й - мі томи АНТ во хх хх 5 В ХМ УТЕЕІ ин вм ААКККК сеереічння й й я то ЖЕ го За обоз концентрація внтитею см Т | 3 3 й І Г. ай
ФІ. ЗАА нн. 34
МВ. з «нг. ЗАВ і. ЗВ Кк шої ВЕ рН Че Ук ж - го: Е ЕЕ ішхе В хх Оде г я Ів уми хе м В пк ох ІЗ Орооеера се ЩО і пежх Ка х вка К що НД ч. ї- ЗМОХ Щ.х ее «ях а Т М г Н р в Ж зрад м ем й ЕЗ - наван ля ШЕ БОХосоні до Ж заллажуку чи рай В : я ри т ра Е х кової МсАжУм А р. й І: я ЕЕ ї жі й Б обої х М х С ї й Ж Од - М о х СЯ Н р. й х В : р, воБо жо Ку дО Н у -к К ДРУ ке ЩЕ ра ДОЗА мі ї рей Н Фхоо5о комгоно «Фа ох «032 7 ПИ сх в поь концентрація знтятіпа (МИ яса 0 озреве хохоохо 195 тях Миж хонцентрація антитна (Ба пеню " канцентранкя антідтита сп в. Фі. ЗАГ Фк зип ге з. ріг. ЗАД х М бат ідьсхо Б Ж Щи Щеожхх З я У ї- Ї що Зою» ЩщЖ Їж мозком я В зам КУ ЕЯ ІМомовенхкя ж З як. ЕЗ З ді Е ЕЕ: фомлохуєеху м о ї їх жо хх се х Ку : й Ж Б тож ій Ж В : ж вн й - р зжохї й РЗК м Ба я ЕЕ й з І: : й т до зоні Кі т : -7 щОЕ - ЕК жиди, ший ж я х М кине нені ВАНН яви, Шен ї; ния 42525 сожож зо і Шо и вик К ж й джеми 2 у й педжекня концентрація внтитіла (ЯМУ ооя ке має пеня Я: концентрація антитіла зл З ЗА
Фі. 35 Фіг З мг. Б в Б 5 вве ХЕ Жо- Жозе - о че ша тп шко ві ОБ Ве Ж Ява ж Ж ї що Мол, Ж ї ві с ее ШЕ й 1 і: Сай ї ИН В У 1 щи МУ ШИО ої БИ А т с же 2 ВО ших МОУ Же: КЕНЕ Ж Що ВОЗ ШЕННЯ і кі ВВ да з 1 Є ххх Я КВ 5 те НИ КО БО Шеще ОСБМН. еВ: В БОБ опе: рес - ВВ ї ОО БНННИНИ ЛОБ Б ОХ : Е АК ПИКА Ко 7 й ШИНИ ІК ОХ Ко ї Во с ШИНА гу Пплютттн ше Б пня тещоівПМ тедох т Щ і й паза. ТА СМИЕХ Ото ВО тв 2ВЗАЗйЙЙ5Й - Ж - Ж Ж «- - 6 ЗХ - « - - - - - « -ої 5-х с 5 това тові: тові ПВ щЩщ60780-6- Сех ЕРКЕТ МДЕ ЕХ ТОБІ ВВЕ І кт й ІБ БВ СБ тя ЕТО ТОВ Дт вибої Ко ші це ро шк вій й Ж пдохаж Ж шої гу тк Я от ї Щі Коен ї Же У 5: ос 1 п у ї ОМ яв х Ж І м - | шпон й ща «і Ох Н шИПШІцЕ х ї ОО Фі шення опаюдеюх БК о шшданеш пп ВЕ ШИН гЗ Кз Б й па дея Ж Ко Ї пИЙИИВ - ТоБАСЕ ТСБЗКІ ТС В: ТСВЯві ТОВОСУ 5 Хннчжнннннмннннннннфенннн й : г Й | ш тсв'ж тов: тОв'яєВ: ТОВЯБН ТОВОСт зх - а Бо КО
Фіг. З5В Фіг 357 с ед що щ бив зе
Фіг. ЗА Фіг. 365 й фіг. 3658 її. неї еко т «г г-а - вкпУу-У «ї нт-ІЗ « В 5 я шо товоєре тк БЕ -- з. що БЧя тов'сУ га Н яся ся і Н : сх КЗЯ З Я тсв ев не «84 се А Тов авЕг Кл й - Ке; БУ - Ту У з Є шо й свій запи ді «ке В, ща: 5 ні я отовеете Ше: х щлМІВ са Е ТЕ щ : я й дО а й Де З Н с тидлащя ке і ї р З яко. й мк вику 5 3 е тов : Е Е ще о. са 3 : «ех, У щ мі 5 и а тсоввсх ФО дфбунюннючннеяннююьюютююттнняня ВО за : й Ех вд ними ним вані мав лань й що вх ' 485 рвав вві 1 їва о зварю я з тег тасове хонцентрація антитіла (Б) концентрація антитіяя (М концентрація витутіха ЯКО - - - 8 ня - ян - пня «з ва я кова Ковач Ко ї-28ЇХ0Х ї -ї нинама паамваннвнни яв У Е -О х Н Ра ; ; ші вих ий Кит що ія З ; БІ ще КУ ДИ: «ВА сл В ХЕ я еттів А «ла. Хв рн» «р Ехо й К я ж ВІ ши т Н Мен ков г Ся Б Не ее ес о щи 5000 авиній хе г : о: с МЕ ак аа З і НК я т. ЇЙ се ШИНИ ее за МУК НИ я ва в 8 чин ни М СЗШ т Ш в ши щк ші і я Н -к р. Моя з нн Мити М лан зі ма вве : ї5е о зевз» зла з теооовнюта БО З Пашко канцентрація явити (п концентрація вити ах концентрація ант хм Ь З їх то звп ЩІ сек
Фіг. З6Г Фіг. ЗД Фне ЗеЕ
Фіг. 37А Фіг. 375 «Фу. 3У
З Я. и Що г. 38 -Щ Неї: В вка х-3 г нт-з8 Гей ра Б вві Я «ві Я вх Ж тов ов - Н зі Н о! «виє ІЩЕ Б і М, ЯК теБбег Б Фо сові 24 тод їх і г й Ж і : и г : ета І15р5-авБинаа ЯК ее 2 зр Е Жжолах з ВЕ в 4 ОО й саке ГНН де: ШЕ зд 1БО5-ОФеКеА - Н - й Б дюн кі щ Н -е Ши Я Н й Й Е 5 ДО ння Во й в ее Як с ще сх ШИ МЕС ВОИ у ч КІ Х х не ее а ші Я й ЕЕ вай Ф ЗОБОВ ФУ тб оку тсквчткьчюсєюютсючтен «І укчпрлллалалевлллухлччеттртчхмчуют Я ни Й Й є паї 5 ай залах 2533 я 186 чвсва СЕ пах т Ко НО : канцентрація антитіла М. цпентрація антиті : КЗ інцвнтряцею амтитева М концентрація антезіля (по копувнзряцІя антитіпя спе в ї г ї т Ь ЛУ ЕВ. с г» і с во в що ХЕ 1 ще 1 р Н що 94 са у ШИХ Ж вні шини - Н ї Я се - 1 ке шен -й Н ра Кк КЗ 3 Де еви ЕЗ і Н сяк ЗВ год 8 884 ї. Во Я: Я ВЕН ВЕ РОШЕН ак. т ко | о Ж, ІВ ВЕ жи з 1 й я ее шиї ни Н її ей и о и ВИНИ 5 ра Ка ик не: ВМИВННя мі се с о ї 1 5 1 я ЇЇ Кн «3 Н Мо ДІ ре сей за ще хх 3 - З Е Н пар ста М свв духу єю кюєютртюєєєчєємиє ХО -йЖ Н Ко ї - Ге й й окуня ш УДК А умуттютт юю ут ув 4 руку ж ую ую я ууюарєюувчаььимухих Я ва тоне о00товах Е: тя , ве зва м Н ївш 18098 я юищантраців антитіла Мі хончентрація внтитеа ТМ хонцентревія вити ле М се роя
Фіг. З фіг, 37Д нг ОЗ я фіг. 37, б аТЕ
Є Межі туї сї Фіг ВА ж. зВБ Фіг. ЗЯВ т й клітиви ветнанпвнико клітини ксартІнжЕал»ногО НТ-25 пігментного гдітаялню. ниркового епітелію чк інквЕВТІі й іннсСЕВК ТЕ - як пса ма Може шо я Жов Як отовлвоє х Ж | ЖЕ. ЕІ СЕ БЕ зе ТОВ ОБ ЗЯНУВОХА
Ж. ВЕК х т т Затад ЗЕ Х і Же і тов ервличауАюсЕ Хо -о ТОЖ ям ХК зві дО : нь З Н » пера вк З ш Н зо Е Ол шин В У іден нин З шо добери «Вк тов орат зе - пит ан ї: Еш як па КК Е. Бити й концентрація антитіла тпм ме концентрація внтитнт Зп концентрація антитіла слМ Кк щу що ж - га зх - ох Жооожох ше джу Ш. Ви 8 В ній Фо ЖЕ ЕК хо ї - Ж то їв 253 і ЕІ Я ЕІ, я і й Зоя В хр І од Ж МІ ї ЕК ж шик о ШИ ше пише : : дор - Зно ЩА. ш її не дн. х Мой а й у у в: ОЕОЖТ У й НЕ зай пін с он. "я 3 че 735939 Ж З я ізо Е ї ча5 їхово концентрація антитіла сп т концентрація витати п ханцентрдація внитатіла ЇМ «Чнг. ЗВГ Фіг. ЗяДд днк. ЗБЕ - Мининий Доза Зв'язувальний чес йтвзах Крута Конструкція й Пухтина: ех затішенктя | ЖК звана імк/юи агент Явні фапих ват 3 Ана ООН с ЗВ сх ни ОС п КК со М о Ко З на - 003.8. А винне НН м М о пп пілоти г а оно ВН КЕ НВ В В В В В В В В В В ВВ В В В ВВ
ЧНг. З9А - 08
ШК. о и ш00ШСШШПШПШПШШШПШПШШПШПШШШПШЦШШЦШШО с си ні Як БЕР УНН почну я поле мете нн у Ж ПЕНІ ТОВ Вр УЗЕ УОЗ ка ПІ яа-внВі тов Вл саоемазА) 1 чферонві-тов Я Іо во -ТоВ (ЗБЕ п 2 ТЕ о во зва о 140 еВ іщО час після пернюї інчкці споді Б Фі. ЗБ
UAA201706105A 2014-11-20 2015-11-17 Біспецифічна антигензв'язувальна молекула проти folr1 і cd3, що активує t-клітини UA122676C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14194147 2014-11-20
PCT/EP2015/076739 WO2016079076A1 (en) 2014-11-20 2015-11-17 T cell activating bispecific antigen binding molecules agiant folr1 and cd3

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA122676C2 true UA122676C2 (uk) 2020-12-28

Family

ID=52100988

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201706105A UA122676C2 (uk) 2014-11-20 2015-11-17 Біспецифічна антигензв'язувальна молекула проти folr1 і cd3, що активує t-клітини

Country Status (33)

Country Link
US (3) US20160208019A1 (uk)
EP (1) EP3221356B1 (uk)
JP (2) JP7146395B2 (uk)
KR (1) KR102648966B1 (uk)
CN (1) CN107074955B (uk)
AR (1) AR102732A1 (uk)
AU (1) AU2015348595B2 (uk)
BR (1) BR112017007086A2 (uk)
CA (1) CA2960929A1 (uk)
CL (1) CL2017000954A1 (uk)
CO (1) CO2017003048A2 (uk)
CR (1) CR20170203A (uk)
DK (1) DK3221356T3 (uk)
EA (1) EA201791121A1 (uk)
ES (1) ES2829829T3 (uk)
HR (1) HRP20201747T1 (uk)
HU (1) HUE051715T2 (uk)
IL (1) IL251292A0 (uk)
LT (1) LT3221356T (uk)
MA (1) MA40972B1 (uk)
MX (1) MX2017006571A (uk)
MY (1) MY184889A (uk)
PE (1) PE20170585A1 (uk)
PH (1) PH12017500939A1 (uk)
PL (1) PL3221356T3 (uk)
PT (1) PT3221356T (uk)
RS (1) RS61010B1 (uk)
SG (1) SG11201702976TA (uk)
SI (1) SI3221356T1 (uk)
TW (2) TWI756164B (uk)
UA (1) UA122676C2 (uk)
WO (1) WO2016079076A1 (uk)
ZA (1) ZA201701843B (uk)

Families Citing this family (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
MX341921B (es) 2011-02-28 2016-09-07 Hoffmann La Roche Proteinas de union a antigeno.
WO2012116927A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent antigen binding proteins
WO2013026839A1 (en) 2011-08-23 2013-02-28 Roche Glycart Ag Bispecific antibodies specific for t-cell activating antigens and a tumor antigen and methods of use
CN104704004B (zh) 2012-10-08 2019-12-31 罗切格利卡特公司 包含两个Fab片段的无Fc的抗体及使用方法
WO2014131694A1 (en) 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
JP6133444B2 (ja) 2013-02-26 2017-05-24 ロシュ グリクアート アーゲー 二重特異性ｔ細胞活性化抗原結合分子
CA2922912A1 (en) * 2013-10-11 2015-04-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific domain exchanged common variable light chain antibodies
EA038958B1 (ru) 2014-08-04 2021-11-15 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биспецифические антигенсвязывающие молекулы, активирующие т-клетки
SI3221355T1 (sl) 2014-11-20 2021-01-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Kombinirano zdravljenje z bispecifičnimi molekulami CD3, ki aktivirajo celice T in vežejo antigene in folatni receptor 1 (FoIR1) ter antagonisti za vezavo osi PD-1
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
AR106201A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche Moléculas biespecíficas de unión a antígeno activadoras de células t
CN108290954B (zh) 2015-12-09 2022-07-26 豪夫迈·罗氏有限公司 Ii型抗cd20抗体用于降低抗药物抗体形成
US10596257B2 (en) 2016-01-08 2020-03-24 Hoffmann-La Roche Inc. Methods of treating CEA-positive cancers using PD-1 axis binding antagonists and anti-CEA/anti-CD3 bispecific antibodies
PL3433280T3 (pl) 2016-03-22 2023-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Dwuswoiste cząsteczki limfocytów T aktywowane przez proteazy
EP3519437B1 (en) * 2016-09-30 2021-09-08 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antibodies against p95her2
ES2898025T3 (es) * 2016-11-02 2022-03-03 Jounce Therapeutics Inc Anticuerpos contra PD-1 y sus usos
WO2018108759A1 (en) * 2016-12-13 2018-06-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Method to determine the presence of a target antigen in a tumor sample
MX2019006955A (es) * 2016-12-19 2019-08-01 Hoffmann La Roche Terapia de combinacion con agonistas de 4-1bb orientados (cd137).
TWI690538B (zh) 2017-04-05 2020-04-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 特異性結合至pd1至lag3的雙特異性抗體
EP3638697A4 (en) 2017-06-12 2021-07-07 Bluefin Biomedicine, Inc. ANTI-IL1RAP ANTIBODIES AND ANTIBODY INGREDIENT CONJUGATES
KR20200026995A (ko) 2017-07-14 2020-03-11 이매틱스 바이오테크놀로지스 게엠베하 향상된 이중 특이성 폴리펩티드 분자
MX2020004573A (es) * 2017-11-01 2020-09-25 Hoffmann La Roche Terapia de combinacion con agonistas de ox40 dirigidos.
EP3502140A1 (en) 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
US20200339685A1 (en) * 2017-12-27 2020-10-29 Teneobio, Inc. Cd3-delta/epsilon heterodimer specific antibodies
CN111712261A (zh) 2018-02-08 2020-09-25 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗原结合分子和使用方法
WO2019177854A1 (en) * 2018-03-13 2019-09-19 Phanes Therapeutics, Inc. Anti-folate receptor 1 antibodies and uses thereof
US20200407434A1 (en) * 2018-03-13 2020-12-31 Vascular Biogenics Ltd. Bispecific antibodies to mospd2 and t cell- or nk cell-specific molecules
CA3105415A1 (en) * 2018-07-09 2020-01-23 Multitude Inc. Antibodies specific to folate receptor alpha
WO2020028269A2 (en) * 2018-07-30 2020-02-06 Invenra Inc. Multispecific treg binding molecules
JP6935383B2 (ja) * 2018-09-27 2021-09-15 公益財団法人実験動物中央研究所 免疫不全マウス
CN116121302A (zh) * 2018-09-27 2023-05-16 公益财团法人实验动物中央研究所 免疫缺陷小鼠
WO2020127618A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Tumor-targeted agonistic cd28 antigen binding molecules
US11672858B2 (en) 2018-12-21 2023-06-13 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific antibody molecules binding to CD3 and TYRP-1
JPWO2020246563A1 (uk) * 2019-06-05 2020-12-10
CA3140192A1 (en) 2019-06-19 2020-12-24 Johannes Auer Method for the generation of a multivalent, multispecific antibody expressing cell by targeted integration of multiple expression cassettes in a defined organization
KR20220024637A (ko) 2019-06-19 2022-03-03 에프. 호프만-라 로슈 아게 정의된 조직의 다수 발현 카세트들의 표적화 통합에 의한 3가 항체 발현 세포의 생성 방법
WO2020260326A1 (en) 2019-06-27 2020-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel icos antibodies and tumor-targeted antigen binding molecules comprising them
US20220348648A1 (en) * 2019-07-11 2022-11-03 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Dll3-targeting antibodies and uses thereof
CN111018969A (zh) * 2019-12-27 2020-04-17 上海药明生物技术有限公司 采用轻链select联合层析色谱纯化双特异性抗体的方法
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
AU2021291005A1 (en) 2020-06-19 2023-01-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to CD3 and FolR1
MX2022015204A (es) * 2020-06-19 2023-01-05 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3.
WO2021255146A1 (en) * 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cea
MX2022016069A (es) * 2020-06-19 2023-02-02 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y cd19.
EP4225786A2 (en) * 2020-10-07 2023-08-16 Amgen Inc. Rational selection of building blocks for the assembly of multispecific antibodies
TW202233684A (zh) * 2020-11-18 2022-09-01 美商泰尼歐生物公司 結合於葉酸受體α之重鏈抗體
CN112794911B (zh) * 2021-04-14 2021-08-03 上海偌妥生物科技有限公司 人源化抗叶酸受体1抗体及其应用
WO2023079493A1 (en) * 2021-11-03 2023-05-11 Affimed Gmbh Bispecific cd16a binders
WO2023161457A1 (en) 2022-02-27 2023-08-31 Evobright Gmbh Bispecific antibodies against cd277 and a tumor-antigen

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2011010158A (es) 2009-04-07 2011-10-17 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos anti-erbb-2/anti-c-met.
PL3321286T3 (pl) * 2011-08-23 2021-05-31 Roche Glycart Ag Dwuswoiste cząsteczki wiążące antygen aktywujące limfocyty T
RS60217B1 (sr) * 2012-08-31 2020-06-30 Immunogen Inc Dijagnostički testovi i kompleti za detekciju folatnog receptora 1
WO2014087863A1 (ja) * 2012-12-07 2014-06-12 協和発酵キリン株式会社 抗ｆｏｌｒ１抗体
US9522196B2 (en) 2012-12-25 2016-12-20 Kagoshima University Antibody recognizing folate receptors α and β
WO2014131694A1 (en) * 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
CA2903258C (en) * 2013-03-15 2019-11-26 Amgen Inc. Heterodimeric bispecific antibodies
KR20150130349A (ko) * 2013-03-15 2015-11-23 메르크 파텐트 게엠베하 4가 이중특이적 항체
UA118028C2 (uk) * 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
US20160257748A1 (en) * 2013-09-25 2016-09-08 Amgen Inc. V-c-fc-v-c antibody

Also Published As

Publication number Publication date
MY184889A (en) 2021-04-29
RS61010B1 (sr) 2020-11-30
KR20170081188A (ko) 2017-07-11
AU2015348595B2 (en) 2021-06-10
PL3221356T3 (pl) 2021-01-11
JP7146395B2 (ja) 2022-10-04
AU2015348595A1 (en) 2017-04-20
BR112017007086A2 (pt) 2018-01-16
HUE051715T2 (hu) 2021-03-29
JP2021058189A (ja) 2021-04-15
CN107074955A (zh) 2017-08-18
CA2960929A1 (en) 2016-05-26
MA40972B1 (fr) 2020-11-30
ES2829829T3 (es) 2021-06-02
HRP20201747T1 (hr) 2020-12-25
IL251292A0 (en) 2017-05-29
US20160208019A1 (en) 2016-07-21
PE20170585A1 (es) 2017-05-11
PH12017500939A1 (en) 2017-11-27
KR102648966B1 (ko) 2024-03-19
EA201791121A1 (ru) 2018-04-30
CR20170203A (es) 2017-06-29
ZA201701843B (en) 2018-05-30
EP3221356B1 (en) 2020-09-02
WO2016079076A1 (en) 2016-05-26
CO2017003048A2 (es) 2017-07-11
CN107074955B (zh) 2021-06-22
CL2017000954A1 (es) 2017-12-29
TW201632556A (zh) 2016-09-16
SI3221356T1 (sl) 2021-01-29
MX2017006571A (es) 2017-09-29
AR102732A1 (es) 2017-03-22
SG11201702976TA (en) 2017-05-30
US20220220224A1 (en) 2022-07-14
DK3221356T3 (da) 2020-11-02
EP3221356A1 (en) 2017-09-27
TWI756164B (zh) 2022-03-01
JP2017536121A (ja) 2017-12-07
PT3221356T (pt) 2020-10-29
US20190031784A1 (en) 2019-01-31
LT3221356T (lt) 2020-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA122676C2 (uk) Біспецифічна антигензв'язувальна молекула проти folr1 і cd3, що активує t-клітини
JP7068736B2 (ja) Ｃｄ３９と結合する抗体及びその使用
JP6794348B2 (ja) ヒト化抗ｏｘ４０抗体及びその使用
US20190225702A1 (en) Innate immune cell trispecific binding proteins and methods of use
UA125818C2 (uk) Химерні рецептори антигенів на основі однодоменних антитіл і способи їх застосування
UA125717C2 (uk) Конструкція антитіла до flt3 і cd3
UA126657C2 (uk) ОДНОЛАНЦЮГОВА КОНСТРУКЦІЯ АНТИТІЛА ДО BCMA І CD3<font face="Symbol">e</font>
UA125611C2 (uk) Біспецифічні молекули, що мають імунореактивність відносно pd-1 і ctla-4, і способи їх застосування
UA126280C2 (uk) Біспецифічні конструкції антитіл, які залучають т-клітини
UA124417C2 (uk) БІСПЕЦИФІЧНИЙ КОНСТРУКТ АНТИТІЛА, ЩО ЗВ'ЯЗУЄ EGFRvIII І CD3
UA125577C2 (uk) Антигензв'язуюча молекула, які містить тримерний ліганд сімейства tnf
ES2894335T3 (es) Reducción mejorada de células objetivo con bloqueo de CD47 y un agonista coestimulador inmune
UA127372C2 (uk) Моноспецифічне pd-1-сполучне моноклональне антитіло
UA118749C2 (uk) Конструкція антитіла до cdh19 і cd3
UA127308C2 (uk) Активована протеазою біспецифічна молекула, яка зв'язує т-клітини
EA030147B1 (ru) Биспецифические антигенсвязывающие молекулы, активирующие т-клетки
UA126188C2 (uk) Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка містить домен зв'язування з fap та домен зв'язування з сd40
UA127450C2 (uk) Рекомбінантний поліпептид, що зв'язується з cd123
UA119320C2 (uk) Активуюча т-клітини біспецифічна антигензв'язувальна молекула
JP5273689B2 (ja) ヒトプロスタグランジンｅ２受容体ｅｐ４に対する抗体
EA029793B1 (ru) Антитела к ох40 и способы их применения
US20230027475A1 (en) Anti-oncolytic virus antigen antibodies and methods of using same
KR102412805B1 (ko) 세포 면역 요법을 위한 조성물 및 방법
UA124732C2 (uk) Введення біспецифічної конструкції, що зв'язується з сd33 і сd3, для використання в способі лікування мієлоїдного лейкозу
US20230149460A1 (en) Methods for generating engineered memory-like nk cells and compositions thereof