UA125962C2 - Біспецифічна антигензв'язуюча молекула до ox40 та фібробласт-активуючого білка (fap) - Google Patents

Abstract

Біспецифічна антигензв’язуюча молекула, яка містить два фрагменти Fab, які мають здатність специфічно зв’язуватись з OX40; фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з фібробласт-активуючим білком (FAP); Fc-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації, і де Fc-домен містить одну або декілька амінокислотних замін, які знижують афінність зв’язування антитіла з Fc-рецептором і/або ефекторну функцію. Винахід також стосується полінуклеотиду, який кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, фармацевтичної композиції, застосування біспецифічної антигензв'язуючої молекули для виготовлення лікарського засобу для застосування для лікування раку, та застосування біспецифічної антигензв'язуючої молекули для виготовлення лікарського засобу для застосування для лікування раку, де біспецифічну антигензв'язуючу молекулу вводять в комбінації з хіміотерапевтичним засобом, випромінюванням і/або іншими агентами, призначеними для застосування в протираковій імунотерапії.

Description

(54) БІСПЕЦИФІЧНА АНТИГЕНЗВ'ЯЗУЮЧА МОЛЕКУЛА ДО ОХ40 ТА ФІБРОБЛАСТ-АКТИВУЮЧОГО

БІЛКА (ЕАР) (57) Реферат:

Біспецифічна антигензв'язуюча молекула, яка містить два фрагменти Раб, які мають здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40; фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з фібробласт-активуючим білком (БАР); Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації, і де Ес-домен містить одну або декілька амінокислотних замін, які знижують афінність зв'язування антитіла з Ес-рецептором іабо ефекторну функцію. Винахід також стосується полінуклеотиду, який кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, фармацевтичної композиції, застосування біспецифічної антигензв'язуючої молекули для виготовлення лікарського засобу для застосування для лікування раку, та застосування біспецифічної антигензв'язуючої молекули для виготовлення лікарського засобу для застосування для лікування раку, де біспецифічну антигензв'язуючу молекулу вводять в комбінації з хіміотерапевтичним засобом, випромінюванням і/або іншими агентами, призначеними для застосування в протираковій імунотерапії.

Галузь техніки, до якої належить винахід

Даний винахід відноситься до нових біспецифічних антигензв'язуючих молекул, що містять (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації. Винахід відноситься також до способів одержання вказаних молекул і способів їх застосування.

Передумови створення винаходу

Функцією декількох представників сімейства рецепторів фактора некрозу пухлини (ТМЕК) є підтримання Т-клітинних відповідей після початкової активації Т-клітин, і тому вони відіграють основну роль в організації і функціонуванні імунної системи. СО27, 4-14188 (С0137), ОХ40 (20134), НМЕМ, СОЗ30 і СІТК можуть мати костімуляторні дії по відношенню до Т-клітин, це означає, що вони підтримують Т-клітинні відповіді після початкової активації Т-клітин (Умайв5 ТН

Аппи. Кем. Іттипої. 23, 2005, сс. 23-68). Впливи вказаних костімуляторних представників сімейства ТМЕК часто можуть бути відокремлені функціонально, за часом або в просторі від впливів СО28 і один від одного. Послідовна і короткочасна регуляція сигналів активації/виживаності Т-клітин різними костімуляторами може виконувати функцію забезпечення тривалості відповіді, підтримуючи при цьому суворий контроль виживаності Т- клітин. Залежно від хворобливого стану стимуляція через костімуляторних представників сімейства ТМЕ може загострювати або полегшувати захворювання. Незважаючи на вказані складності, стимуляція або блокада сімейства костімуляторів ТМЕК є перспективною для терапевтичних застосувань при деяких показаннях, включаючи рак, інфекційне захворювання, трансплантацію та аутоімунітет.

Серед декількох костімуляторних молекул представник сімейства рецепторів фактора некрозу пухлини (ТМЕ) ОХ40 (СО134) відіграє основну роль у виживаності та гомеостазі ефекторних Т-клітин і Т-клітин пам'яті (Стоїй М. та ін., Іттипоїодіса! Кеміем5 229 2009, сс. 173- 191). 0Хх40 (20134) експресується в декількох типух клітин і регулює імунні відповіді проти інфекцій, пухлин і аутоантигенів, його експресія була виявлена на поверхні Т-клітин, МКТ-клітин і МК-клітин, а також нейтрофілів (Ваштапп К. та ін., Еиг. У. Іттипої. 34, 2004, сс. 2268-2275), і

Зо було продемонстровано, що вона є строго індуцибельною або піддається сильній підвищуючій регуляції у відповідь на різні стимуляторні сигнали. Функціональна активність молекули була виявлена в кожному типі клітин, який експресує ОХ40, що дозволяє припустити наявність складної регуляції опосередкованої ОХ40 активності іп мімо. У поєднанні із запуском Т- клітинного рецептора контакт ОХ40 на Т-клітинах з його лігандом, який зустрічається в природних умовах, або агоністичними антитілами призводить до синергетичної активації шляхів передачі сигналів РІЗК ї МЕкКВ (50п9 9. та ін., У. Іттипоіоду 180 (11), 2008, сс. 7240-7248). В свою чергу, це призводить до посиленої проліферації, підвищеного вироблення цитокінового рецептора і цитокінів і покращеної виживаності активованих Т-клітин. В останні роки було продемонстровано, що на додаток до його костімуляторній активності в ефекторних СО4-- або

СО8:-Т- клітинах, запуск ОХ40 пригнічує розвиток та імуносупресивну функцію регуляторних Т- клітин. Ця дія, ймовірно, відповідально, принаймні частково, за підвищену активність ОХ40 по відношенню до протипухлинних або протимікробних імунних відповідей. З урахуванням того, що контакт з ОХ40 може призводити до збільшення популяцій Т-клітин, посилення секреції цитокінів і підтримці пам'яті Т-клітин, агоністи, включаючи антитіла і розчинні форми ліганду

ОХ401Ї, успішно застосовували на різних доклінічних моделях пухлин (Умеіпрегуд та ін., 5.

Ітітипої. 164, 2000., сс. 2160-2169). 4188 (С0137), представник суперсімейства ТМЕ-рецепторів, вперше був ідентифікований як молекула, експресія якої індукується Т-клітинною активацією (Кмоп МН і МУвєіззтап 5М, Ргос.

Май. Асад. бсі. ОБА 86, 1989, сс. 1963-1967). В подальших дослідженнях продемонстрована експресія 4-188 в Т- і В-лімфоцитах (5пеї! І М та ін., Іттипої. Веу. 244, 2011, сс. 197-217 або «папа Х. та ін., уУ. Іттипої. 184, 2-10, сс. 787-795), МК-клітинах (І іп МУ. та ін., Віоса 112, 2008, со. 699-707, МКТ-клітинах («Кіт РН та ін., У. Іттипої. 180, 2008, сс. 2062-2068), моноцитах (КіепгІе а. і моп Кетрів ., Ійї. Іттипої. 12, 2010 сс. 73-82 або 5сНуаг Н. та ін., Віоса 85, 1995, сс. 1043- 1052), нейтрофілах (Неїпібсп ІМ та ін., Еиг. У. Іттипої. 30, 2000., сб. 3441-3446), огрядних клітинах (Мібпітоїо Н. та ін., Віоса 106, 2005, сс. 4241-4248) і дендритних клітинах, а також в клітинах негематопоетичного походження, таких як ендотеліальні клітини і клітини гладких м'язів (Вгої! К. та ін., Ат. 9. Сіїп. Раїйої. 115, 2001., сс. 543-549 або Оіоїввоп РБ та ін., Сігсшайоп 117, 2008, сс. 1292-1301). Експресія 4-188 в різних типух клітин є в значній мірі індуцибельною і запускається різними стимуляторними сигналами, такими як сигнали, які запускаються Т- бо клітинним рецептором (ТС) або В-клітинним рецептором, а також передачею сигналів,

індукованою костімуляторними молекулами або рецепторами прозапальних цитокінів (Оієйі ї. та ін., У. Іттипої. 168, 2002 сс. 3755-3762; моп Кетрівз У. та ін., Овіеоаннітйй5 Сапіаде 5, 1997, сс. 394-406; пап Х. та ін., у. Іттипої. 184 2010, сс. 787-795).

Відомо, що передача сигналів СО137 стимулює секрецію ІЄМу і проліферацію МК-клітин (Впеснеїйе С. та ін., Єшиг. У. Іттипої. 42, 2012 сс. 737-748; І іп МУ. та ін., Віоса 112, 2008, сс. 699- 707; Меїего І. та ін., СеїЇ Іттипої. 190, 1998, сс. 167-172), а також підвищує активацію ОС, що продемонстровано за їх збільшеною виживаністю і здатністю секретувати цитокіни і здійснювати підвищувальну регуляцію костімуляторних молекул (Сної В. К. та ін., у). Іттипої!. 182, 2009, сс. 4107-4115; ЕРшадауча Т. та ін., Ії. Іттипої. 14, 2002, сс. 275-286; УМіЇсох ПН. А. та ін., у. Іттипої. 168, 2002, сс. 4262-4267). Проте СО137 найбільш добре охарактеризований як костімуляторна молекула, що модулює індуковану ТСВ активацію як СО4--, так і СО8-субпопуляцій Т-клітин. В поєднанні із здійснюваною ТСА стимуляцією агоністичні 4-1ВВ-специфічні антитіла підвищують проліферацію Т-клітин, стимулюють секрецію лімфокінів і знижують чутливість Т-лімфоцитів до індукованої активації смерті клітин (5пеї| І.М. та ін., Іттипої. Веу. 244, 2011, сс. 197-217). Згідно із вказаною костімуляторною дєю антитіл до 4-188 на Т-клітини іп міо, їх введення мишам, які несуть пухлини, призводило до ефективних протипухлинних дій на багатьох експериментальних моделях пухлин (Меїего І. та ін., Маї. Мей. 3, 1997, сс. 682-685; Магалакі Н. та ін., Віоса 115, 2010, сс. 1941-1948). В експериментах із виснаження іп мімо продемонстровано, що СОВ8--Т- клітини відіграють найбільш важливу роль в протипухлинному впливі 4-18В-специфічних антитіл. Проте, залежно від моделі пухлини або комбінованої терапії, що включає антитіло до 4- 188, описана участь і інших типів клітин, таких як ОС, МК-клітини або СО4--Т-клітини (Мито 0. та ін., Єшиг. У. Іттипої. 39, 2009, сс. 2424-2436; Зіада 9. та ін., Ргос. Май). Асай. 5сі. ОБА 108, 2011, сс. 7142-7147).

Крім їх безпосередніх впливів на різні субпопуляції лімфоцитів, агоністи 4-188 можуть індукувати також інфільтрацію та утримування активованих Т-клітин у пухлині за допомогою опосередкованої 4-18 молекули міжклітинної адгезії 1 (САМІ), що підвищує регуляції, і адгезивної молекули судинних клітин 1 (МСАМІ) на судинному ендотелії пухлини (Раїаоп А. та ін., Сапсег Вез. 71, 2011, сс. 801-811). Стимуляція 4-188 може також звертати стан Т-клітинної анергії, індукований експозицією розчинного антигена, що може робити внесок в порушення

Зо імунологічної толерантності в мікрооточенні пухлини або при хронічних інфекціях (ММіЇсох ВА та ін., Віоса 103, 2004, сс. 177-184).

Певне, для прояву імуномодулюючих властивостей агоністичних антитіл до 4-188 іп мімо потрібна присутність Ес-ділянки дикого типу в молекулі антитіла, це свідчить про те, що зв'язування Ес-рецептора є важливою подією, необхідною для фармакологічної активності вказаних реагентів, що описано для агоністичних антитіл, специфічніх по відношенню до інших індукуючих апоптоз або імуномодулюючих представників ТМЕВ-суперсімейства (І і Е. ії Вамеїсн

УМ., Зсієпсе 333, 2011, сс. 1030-1034; Тепа ММУ. та ін., У. Іттипої. 183, 2009, сс. 1911-1920).

Проте системне введення 4-18В-специфічніх агоністичних антитіл з функціонально активним

Ес-доменом індукує також експансію СО8:-Т-клітин, з якою асоційована токсичність для печінки (Оцбгої у. та ін., Сапсег Іттипої. Іттипоїйег. 59, 2010 сс. 1223-1233), що знижується або в значній мірі виводиться за відсутності функціональних Ес-рецепторів у мишей. В клінічних випробуваннях на людях (СіїпісаІТгіа!є. дом, МСТ0О0309023) було встановлено, що Бо-компетентні агоністічні антитіла до 4-188 (ВМ5-663513) при їх введенні один раз кожні три тижні протягом 12 тижнів індукували стабілізацію хвороби у пацієнтів з меланомою, рак яєчника або нирково- клітинною карциномою. Проте це ж антитіло в іншому випробуванні (МСТ0О0612664) викликало гепатит 4-ого ступеня, що призвело до припинення випробування (5ітеопе Е. і Азсіепо Р.А...

ІтітипоїохісоЇоду 9, 2012 сс. 241-247). Таким чином, існує потреба в новому поколінні агоністів, які повинні не тільки ефективно залучати 4-188 до поверхні гематопоетичних і ендотеліальних клітин, але також повинні мати здатність досягати цього за допомогою механізмів, відмінних від зв'язування з Ес-рецепторами, щоб уникнути неконтрольованих побічних дій.

Доступні результати доклінічних і клінічних випробувань чітко демонструють, що існує значна клінічна потреба в ефективних агоністах представників сімейства костімуляторних

ТМЕК, таких як ОХ40 ії 4-188, які мають здатність індукувати та підвищувати ефективні ендогенні імунні відповіді проти раку. Проте практично ніколи ефекти не обмежувались одним типом клітин або дією за допомогою одного механізму, і дослідження, проведені для виявлення між- і внутрішньоклітинних механізмів передачі сигналів, виявили підвищені рівні складності.

Таким чином, існує потреба в "націлених (забезпечують таргетінг)» агоністах, які переважно діють на один тип клітин. В антигензв'язуючих молекулах, зазапропонованих у винаході, фрагмент, який має здатність зв'язуватись переважно з пухлино специфічними або 60 асоційованими з пухлинами мішенями, об'єднаний з фрагментом, який має здатність до агоністичного зв'язування з костімуляторними ТМЕ-рецепторами. Антигензв'язуючі молекули, запропоновані в даному винаході, можуть мати здатність запускати (стимулювати) ТМЕ- рецептори не тільки ефективно, але також і дуже вибірково в необхідному сайті, знижуючи тим самим небажані побічні дії.

Короткий виклад суті винаходу

Даний винахід відноситься до біспецифічних антигензв'язуючих молекул, в яких об'єднаний принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, тобто принаймні один антигензв'язуючий сайт, мішенню якого є костімуляторні ТМЕ-рецептори, принаймні з одним фрагментом, що має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, тобто принаймні з одним антигензв'язуючим сайтом, що таргетує антиген клітини-мішені. Ці біспецифічні |і антигензв'язуючі молекули мають перевагу, обумовлену тим, що вони можуть переважно активувати костімуляторні ТМЕ-рецептори в сайті, в якому експресується антиген клітини- мішені, завдяки їх здатності зв'язуватись з антигеном клітини-мішені. У винаході запропоновані також нові антитіла, які мають здатність до специфічного зв'язування з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів. Порівняно з відомими антитіламі до костімуляторних ТМЕ-рецепторів ці антитіла мають здатності що дають перевагу по відношенню до їх включення в біспецифічні і антигензв'язуючі молекули в комбінації з фрагментами, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

В конкретному об'єкті винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, де представник сімейства костімуляторних ТМЕ-

Зо рецепторів вибраний з групи, що складається з ОХ40 і 4-188, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Гс-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

В одному з об'єктів винаходу представник сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів являє собою ОХ40. Так, в конкретному об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, зв'язується з поліпептидом, який містить амінокислотну послідовність ХЕО 10 МО-1.

Наступним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, де вказаний фрагмент містить МН-домен, який містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:2 і БЕО ІЮ МОЗ, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮО МО:4 ії БЕО ІО МО:5, і (І) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:6, 5ЕО ІЮ МО:7, ЗЕО І МО:8, 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО ІЮ МО:10, 5ЕО 10 МО:11 ї БЕО ІЮ

МО:12, і МІ -домен, який містить (ІМ) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:13, 5ЕО І МО:14 і БЕО ІЮ МО:15, (М) СОВ-1І2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:16, 5ЕО І МО:17 і БЕО ІЮ МО 18, (МІ) СОВ-І3, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:19, 5ЕО ІЮ МО:20, 5ЕО ІЮ МО:21, 5ЕО ІЮ МО:С22, 5ЕО ІЮ МО:23 і БЕО ІЮ МО 24.

Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 9в, 97 У», 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності, вибраної з групи, що складається з 5ЕО І0

МО:25, 5ЕО ІЮ МО:27, 5ЕО ІЮ МО:29, 5ЕО ІО МО:31, 5ЕО І МО:33, 5ЕО ІЮО МО:35 ї 5ЕО І

МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність, яка бо принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності, вибраної з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО:26, 5ЕО 10 МО:28, 5ЕО І МО:30,

ЗЕО ІЮ МО:32, ЗЕО ІО МО:34, 5ЕО І МО:36 і БЕО 10 МО:З38.

Зокрема, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:25, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:26, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО С28, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:29, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:З0, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:31, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:32, (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:34, (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:36, або (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:З8.

В іншому об'єкті винаходу представник сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів являє собою 4-188. Так, в конкретному об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, зв'язується з поліпептидом, який містить амінокислотну послідовність ФЕО 1О МО:39.

Зо Крім того, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188В, де вказаний фрагмент містить МН-домен, який містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:40 і БЕО ІЮ МО:С41, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:42 і 5ЕО ІЮ МО 43, і (І) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:44, 5ЕО ІЮ МО:45, 5ЕО ІЮ МО:46, 5ЕО ІЮ МО:47 ії БЕО ІЮ МО:48, і МІ -домен, який містить (М) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:49 і БЕО ІЮ МО:50, (М) СОВ-1І2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:51 і БЕО ІО МО:52, і (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:53, 5ЕО ІЮ МО:54, 5ЕО ІЮ МО:55, 5ЕО ІЮ МО:56 і БЕО ІЮ МО:57.

Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 о, 99 Фо або 100 95 який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ

МО:58, 5ЕО І МО:60, 5ЕО ІЮ МО:62, 5ЕО І МО:64 і 5ЕО ІЮО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У», 98 90, 99 95 або 100 95 який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО:59, 5БЕО ІО МО:61, 5ЕО ІО МО:63, 5ЕО І МО:65 і 5ЕО І МО:67.

Зокрема, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:58, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:59, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО бо ІО МО:60, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:61, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:62, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:63, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:64, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:65, або (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:67.

Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, являє собою Рарб-фрагмент. В одному з об'єктів винаходу, якщо біспецифічна антигензв'язуюча молекула містить більше одного фрагмента, що має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, то всі молекули, що мають здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, являють собою Раб-фрагменти.

В іншому об'єкті винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, де антиген клітини-мішені вибраний з групи, що включає фібробласт-активуючий білок (БАР), асоційований з меланомою хондроїтинсульфат- протеоглікан (МС5Р), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК), карциноембріональний антиген (СЕА), СО19, СО020 ї СОЗ33, і (в) ЕГс-домен, який складається з першої та другої

Зо субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації. Більш конкретно, антиген клітини- мішені являє собою фібробласт-активуючий білок (ЕАР).

Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН-домен, який містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:68 і 5ЕО ІЮ МО:69, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:70 і БЕО ІЮ МО-71, і (І) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:72 і БЕО ІЮ МО:73, і МІ -домен, який містить (М) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:74 і БЕО ІЮ МО:75, (М) СОВ-1І2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:76 і БЕО І МО:77, і (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:78 і БЕО ІЮ МО:79.

Таким чином, наступним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій () фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО І

МО:25, 5ЕО ІЮ МО:27, 5ЕО ІЮ МО:29, 5ЕО ІО МО:З31, 5ЕО ІЮ МО:33, 5ЕО І МО:35 або 5ЕО ІЮ

МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО:26, 5ЕО ІЮ МО:28, 5ЕО І МО:30, 5ЕО І МО:32, 5ЕО ІЮ МО:34, 5ЕО

ІО МО:36 або 5ЕО ІО МО:38, і (І) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО І 60 МО:80 або 5ЕО ІО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 90, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО:81 або 5ЕО ІО МО:83.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій () фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:28, і (І) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО:83.

Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій () фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО І

МО:58, 5ЕО ІЮ МО:60, 5ЕО І МО:62, 5ЕО ІО МО: 64 або 5ЕО ІЮО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ХЕО 10 МО:59, 5ЕО

ІО МО:61, БЕО ІО МО:63, 5ЕО ІЮ МО:65 або 5ЕО ІО МО:67, і (І) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО І

МО:80 або 5ЕО ІО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 90, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО:81 або 5ЕО ІО МО:83.

Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, де вказана молекула містить (а) перший Рар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) другий РГар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Згідно з одним об'єктом винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула являє собою людське, гуманізоване або химерне антитіло. Зокрема, Ес-домен являє собою РЕс-домен людського Іда, зокрема, Ес-домен ІдДИ1 або Ес-домен Ідсаса.

Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій Ес-домен містить одну або декілька амінокислотну(их) заміну(н), яка(ї) знижує (ють) афінність зв'язування антитіла з Ес-рецептором і/або ефекторну функцію. Зокрема, Ес-домен являє собою Ес-домен людського ІдДСа1-підкласу з амінокислотними мутаціями І 234А, І 235А і РЗ29а (нумерація згідно з ЕЄЮ-індексом Кебота).

Наступним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій Ес-домен містить модифікацію, що підсилює асоціацію першої і другий субодиниць РЕс-домену.

Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій перша субодиниця Ес-домену містить "виступи", а друга субодиниця Ес-домену містить "западини" згідно з технології "Кпор-іпіо-поЇе" ("виступ-у западину"). Більш конкретно перша субодиниця Ес- домену містить амінокислотні заміни 53540 і ТЗ366МУ (нумерація згідно з ЕО-індексом Кебота), а друга субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни 3490, 13665 і М407МУ (нумерація згідно з ЕЮО-індексом Кебота).

Зокрема, у винаході запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Таким чином, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, де Біспецифічна антигензв'язуюча молекула є двовалентною як по відношенню до представника сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, так і по відношенню до антигена клітини-мішені.

Згідно з конкретним об'єктом винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула містить (а) два легких ланцюги і два важких ланцюги антитіла, що містить два Гар-фрагменти, які бо мають здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-

рецепторів, і Ес-домен, і (в) два додаткових РГар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, в якій кожний із вказаних додаткових РГар-фрагментів з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцями важких ланцюгів, вказаних у підпункті (а). Більш конкретно, два додаткових

Еаб-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являють собою крос-Рар-фрагменти, в яких варіабельні домени МІ і МН замінені один на одного і кожний з МІ -СН-ланцюгів з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем важких ланцюгів, вказаних у підпункті (а).

Згідно з одним із об'єктів винаходу два Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, являють собою два

Еаб-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з ОХ40 або 4-188, а два додаткових Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини- мішені, являють собою крос-Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з ЕАР.

Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Таким чином, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, де Біспецифічна антигензв'язуюча молекула є двовалентною по відношенню до представника сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів і одновалентною по відношенню до антигена клітини-мішені.

Згідно з конкретним об'єктом винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула містить (а) два легких ланцюги і два важких ланцюги антитіла, що містить два Гар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ- рецепторів, і Ес-домен, і (б) МН- і Мі-домени, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені, де МН-домен з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів і де

Зо МІ-домен з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем другого важкого ланцюга.

Іншим об'єктом винаходу є антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40, де вказане антитіло містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:25, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:26, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО С28, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:29, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:З0, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:31, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:32, (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:34, (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність БЕОІО МО:36, або (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:З8.

Іншим об'єктом винаходу є антитіло, яке специфічно зв'язується з 4-188, де вказане антитіло містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:58, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:59, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО бо ІО МО:60, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:61, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:62, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:63, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:64, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:65, або (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:67.

Іншим об'єктом винаходу є виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, вказану вище в даному описі, або антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40, вказане вище в даному описі, або антитіло, яке специфічно зв'язується з 4- 188, вказане вище в даному описі. У винаході зазапропонований також вектор, зокрема, експресійний вектор, який містить виділений полінуклеотид, зазапропонований у винаході, і клітина-хазяїн, що містить виділений полінуклеотид або вектор, зазапропонований у винаході.

Згідно з деякими об'єктами винаходу клітина-хазяїн являє собою еукаріотичну клітину, зокрема, клітину ссавця.

Іншим об'єктом винаходу є спосіб одержання біспецифічної антигензв'язуючої молекули, вказаної вище в даному описі, або антитіла, яке специфічно зв'язується з ОХ40, вказаного вище в даному описі, або антитіла, яке специфічно зв'язується з 4-188, вказаного вище в даному описі, що включає стадії, на яких (І) культивують клітину-хазяїна, зазапропоновану у винаході, в умовах, придатних для експресії антигензв'язуючої молекули, і (ІЇ) виділяють антигензв'язуючу молекулу. Винахід відноситься також до біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, що специфічно зв'язується з ОХ40, або антитіла, що специфічно зв'язується з 4-188, одержаної/одержаного за допомогою способу, зазапропонованого у винаході.

У винаході запропонована також фармацевтична композиція, що містить біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, вказану вище в даному описі, або антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40, вказане вище в даному описі, або антитіло, яке специфічно зв'язується з 4-

Зо 188, вказане вище в даному описі, і принаймні один фармацевтично прийнятний ексципієнт.

Винахід відноситься також до біспецифічної антигензв'язуючої молекули, вказаної вище в даному описі, або антитілу, яке специфічно зв'язується з ОХ40, вказаного вище в даному описі, або антитілу, яке специфічно зв'язується з 4-188, вказаного вище в даному описі, або фармацевтичної композиції, що містить біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40, або антитіло, яке специфічно зв'язується з 4-188, для застосування як лікарського засобу.

Згідно з одним об'єктом винаходу запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, вказана вище в даному описі, або антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40, вказане вище в даному описі, або антитіло, яке специфічно зв'язується з 4-188, вказане вище в даному описі, або фармацевтична композиція, запропонована у винаході, для застосування для (І) стимуляції Т-клітинної відповіді, (І) підтримання виживаності активованих Т-клітин, (І) лікування інфекцій, (ІМ) лікування раку, (М) уповільнення прогресування раку або (МІ) пролонгування часу життя пацієнта, що страждає на рак.

Конкретним варіантом здійснення винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, вказана вище в даному описі, або антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40, вказане вище в даному описі, або антитіло, яке специфічно зв'язується з 4-188В, вказане вище в даному описі, або фармацевтична композиція, запропонована у винаході, для застосування для лікування раку.

Іншим конкретним варіантом здійснення винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, вказана вище в даному описі, або антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40, вказане вище в даному описі, або антитіло, яке специфічно зв'язується з 4-188, вказане вище в даному описі, або фармацевтична композиція, запропонована у винаході, для застосування для лікування раку, в якому біспецифічну антигензв'язуючу молекулу застосовують в комбінації з хіміотерапевтичним засобом, променевою терапією і/або іншими агентами, призначеними для застосування в протираковій імунотерапії.

Наступним об'єктом винаходу є спосіб інгібування росту пухлинних клітин в індивідуума, що бо включає введення індивідууму в ефективній кількості біспецифічної антигензв'язуючої молекули, вказаної вище в даному описі, або антитіла, яке специфічно зв'язується з ОХ40, вказаного вище в даному описі, або антитіла, яке специфічно зв'язується з 4-188, вказаного вище в даному описі, або фармацевтичної композиції, зазапропонованої у винаході, для інгібування росту пухлинних клітин.

Запропоновані також застосування біспецифічної антигензв'язуючої молекули, вказаної вище в даному описі, або антитіла, яке специфічно зв'язується з ОХ40, вказаного вище в даному описі, або антитіла, яке специфічно зв'язується з 4-188В, вказаного вище в даному описі, для приготування лікарського засобу для лікування захворювань в індивідуума, який потребує цього, зокрема, для приготування лікарського засобу для лікування раку, а також спосіб лікування захворювання в індивідуума, що включає введення вказаному індивідууму в терапевтично ефективній кількості композиції, що містить антигензв'язуючу молекулу, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, зазапропоновану у винаході, в фармацевтично прийнятній формі. В конкретному об'єкті винаходу захворювання являє собою рак. В будь-якому з вищевказаних об'єктів винаходу індивідуум являє собою ссавця, насамперед людину.

Короткий опис креслень

На кресленнях показано: на фіг. ТА - мономерна форма Ес-зчепленого антигена ТМЕ-рецептора, яку застосовували для одержання антитіл до ТМЕ-рецептора. На фіг. 1Б представлена злита молекула, що містить антиген димерного людського ТМЕ-рецептора і Ес, з С-кінцевою На-міткою, яку застосовували для тестування зв'язування антитіл до ТМЕ-рецептора в присутності ліганду для ТМЕ (здатність блокувати ліганд). Схематичний план експерименту, описаного в прикладі 2.4, представлений на фіг. 18; на фіг. 2 - дані про зв'язування антитіл до ОХ40 з активованими СО4-- і СО8:-Т-клітинами.

ОХ40 не експресувався на людських РВМС в стані спокою (фіг. 2А і 28). Після активації людських РВМС виявлена підвищувальна регуляція ОХ40 на СОа4-- ії СО8--Т-клітинах (фіг. 2Б і 2Г). Експресія ОХ40 на людських СО8--Т-клітинах нижче, ніж на СО4--Т-клітинах. Вказані клони мали різну силу зв'язування (величини ЕСво, а також сила сигналу) з ОХ40-позитивними клітинами. Представлені дані про зв'язування у вигляді медіанного значення інтенсивності флуоресценції (МЕЇ) міченого за допомогою ФІТЦ Е(ар')2-фрагмента козячого ЇДО до людського

Зо Ід, Есу-специфічного, що застосовували як вторинне ідентифікуюче антитіло. МЕЇ вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію на вихідний рівень шляхом вирахування МРЇ "порожнього" контролю. На х-осі відкладена концентрація конструкцій антитіл.

Всі клони ОХ40 могли зв'язуватись з активованими людськими СО4--Т-клітинами, що експресують ОХ40 і меншою мірою з активованими людськими СО8--Т-клітинами; на фіг. З - дані про зв'язування антитіл до ОХ40 з активованими мишачими СО4-- і СО8:-Т- клітинами. ОХ40 не був виявлений на мишачих спленоцитах в стані спокою (фіг. ЗА і 3В). Після активації виявлена підвищувальна регуляція ОХ40 на СО4-- і СО8:-Т-клітинах (фіг. ЗБ і ЗГ).

Мишачі спленоцити виділяли шляхом гемолізу за допомогою АСК-буфера для лізису механічно гомогенізованих селезінок, одержаних з самок мишей лінії С57ВІ/6 віком 6-8 тижнів.

Зв'язування антитіл до ОХ40 з білками клітинної поверхні визначали з використанням вторинного козячого антитіла до людського дос, Ес-специфічного, кон'югованого з ФІТЦ, використовуючи ЕАСб-аналіз. МЕ! вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію на вихідний рівень шляхом вирахування МЕ "порожнього" контролю. На х-осі відкладена концентрація конструкцій антитіл. Тільки клон 2087 міг зв'язуватись з активованими мишачими СО4- і СО8 Т-клітинами, що експресують ОХ40, але не з Т-клітинами в стані спокою; на фіг. 4 - дані про зв'язування антитіл до ОХ40 з активованими СО4-- і СО8--Т-клітинами мавп ціномолгус. Вказані клони мали різну силу зв'язування (величини ЕСв5о, а також сила сигналу) з активованими ОХ40-позитивними СО4--Т-клітинами мавп ціномолгус (фіг. 4А).

Експресія ОХ40 на активованих СО8--Т-клітинах була нижче в цих умовах і практично жодного зв'язування відібраних клонів не виявлено (фіг. 4Б). Зв'язування антитіл до ОХ40 з білками клітинної поверхні визначали з використанням вторинного козячого антитіла до людського дос,

Ес-специфічного, кон'югованого з ФІТЦ, використовуючи РАС5-аналіз. МЕЇ вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію на вихідний рівень шляхом вирахування МЕРЇ "порожнього" контролю. На х-осі відкладена концентрація конструкцій антитіл.

Всі клони антитіл до ОХ40 могли зв'язуватись з активованими СО4--Т-клітинами мавп ціномолгус, які експресують ОХ40, і меншою мірою з активованими СО8:-Т-клітинами мавп ціномолгус; на фіг. 5 - дані, що демонструють відсутність зв'язування з ОХ40-негативними пухлинними бо клітинами. Вказані клони не мали здатність зв'язуватись з ОХ40-негативними 0-78 МО (фіг. 5А) і

М/мМ266-4 лініями пухлинних клітин (фіг. 5Б). Представлені дані про зв'язування у вигляді медіанного значення інтенсивності флуоресценції (МЕЇ) міченого за допомогою ФІТЦ Е(ав)2- фрагмента козячого (ДО до людського до, Есу-специфічного, що застосовували як вторинне ідентифікуюче антитіло. МЕЇ вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію на вихідний рівень шляхом вирахування МЕ! "порожнього" контролю. На х-осі відкладена концентрація конструкцій антитіл. Всі клони в Ід-форматі не зв'язувались з ОХ40- негативними пухлинними клітинами. Зв'язування було специфічним для ОХ40 на активованих лейкоцитах; на фіг. бА-6Е - дані про взаємодію між антитілами до ОХ40 8НО (фіг. бА), 2087 (фіг. 6Б), 154 (фіг. 68), 4984 (фіг. 6Г), СІ С-563 (фіг. б6Д) і СІ С-564 (фіг. б6Е) і попередньо одержаним комплексом ліганд пиИОХ40 / пиОХ40-Ес, виміряні за допомогою поверхневого плазмонного резонансу; на фіг. 7 - дані про вплив антитіл до людського ОХ40, запропонованих у винаході, на клітини

Нега, які експресують людський ОХ40 і репортерний ген МЕ-кВ-люциферази. Представлені дані про активацію шляху передачі сигналу МЕ-кВ в репортерній лінії клітин різними анти-ОХ40- зв'язуючими агентами в форматі РЗ29ОІ АГА Ппиїдс1 з (фіг. 7Б) або без (фіг. 7А) перехресного зшивання вторинним антитілом. Репортерні клітини культивували протягом 6 год. в присутності конструкцій антитіл до ОХ40 в вказаних концентраціях з або без вторинного антитіла, що перехресно зшиває, у вигляді Е(аб')2-фрагмента поліклонального козячого ДО до пиЇдст1, Есу- специфічного в співвідношенні 1:2. Активність характеризували, будуючи графік кількості одиниць світла (КІ), що випускається, при вимірюванні протягом 0,5 с залежно від концентрації (в Нт) тестованої конструкції антитіла до ОХ40. Випускання КІ. відбувається в результаті опосередкованої люціферази окислення люциферина з утворенням оксилюциферина. Всі клони мали здатність індукувати активацію МЕкВ, коли вісь ОХ40 стимулювалась в людській репортерній клітинній лінії ОХ40:. Таким чином, всі клони мали агоністичну дією і здійснювали активацію залежно від дози. Перехресне зшивання вторинними

Ес-фрагмент-специфічними Ат істотно підвищувало вказану агоністичну дію; на фіг. 8А-8 Е - дані про біологічну активність антитіл до людського ОХ40 в попередньо активованих людських СО4-Т-клітинах. Костімуляція іммобілізованими на планшеті анти-ох40-

Зо зв'язуючими агентами (формат пиїдс!і РЗ290І АГА) посилювала клітинну проліферацію і дозрівання субоптимально рестимульованих людських СО4-Т-клітин та індукувати фенотип підвищеної активації. Попередньо активовані ФГА-Ї мічені СЕБЕ людські СО4-Т-клітини культивували протягом 4 днів на планшетах, попередньо сенсибілізованих мишачими Ідс, Есу- специфічними антитілами, людськими дс, Есу-специфічними антитілами (обидва в концентрації 2 мкг/мл), мишачими антитілами до людського СОЗ (клон ОКТЗ, |З нг/млі) і титрувати анти-ОХ40-зв'язуючими агентами (формат пиЇдс1 РЗ290І АГА). Представлені дані про кількість випадків (присутності живих клітин) (фіг. 8А), відсоток проліферації (СЕЗЕЇОм) клітин (фіг. 8Б), відсоток ефекторних Т-клітин (С0О127ожм/СО45МКАЇОм/) (фіг. 88) і відсоток сО62Цом (фіг. 8Г), ОХ40-позитивних (фіг. 8 Е) або Тіт-З-позитивних клітин (фіг. 8Д) в день 4.

Вираховували вихідні рівні, одержані для зразків, що містять тільки іммобілізоване на планшеті антитіло до людського СОЮЗ. Таким чином, результати свідчать про зростаючий вплив стимуляції

ОХ40, але про відсутність впливу субоптимальної стимуляції антитілом до СОЗ рег 56. Всі клони мали здатність підтримувати субоптимальну стимуляцію ТС в ОХ40-позитивних попередньо активованих СО4-Т-клітинах, коли ними сенсибілізували планшет. Для клітин характерна більш висока виживаність і більш висока проліферація. Це могло призводити до підвищеної протипухлинної активності Т-клітин в мікрооточенні пухлини; на фіг. 9 - узагальнення величин ЕСовзо (для всіх біомаркерів) як запобіжний захід агоністичної активності відповідного клону (величини розраховані на основі кривих, представлених на фіг. 8).

Ефективність зростала зліва направо. Будували графік залежності кількості випадків, відсотка проліферації (СЕЗЕ-Іом/)-клітин і відсотка СОб21І -Іом/-, СО45ВА-Іом- або Тіт-3-позитивних клітин в день 4 від концентрації антитіла до ОХ40, і величини ЕСво розраховували на основі побудованої з використанням котирувань сигмовидної кривої доза-відповідь, закладених в програму Ргіз:т4 (програмне забезпечення СгарпРайд, США); на фіг. 10А-10Е - дані про біологічну активність антитіл до людського ОХ40 для попередньо активованих людських СО4-Т-клітин в розчині. Жодного впливу на проліферацію, дозрівання або статус активації субоптимально рестимульованих людських СО4-Т-клітин не виявлено за відсутності іммобілізації на планшеті анти-ОХ40-зв'язуючих агентів (формат ПиЇдс1

РЗ290І АГА). Попередньо активовані ФГА-Ї мічені СЕБЕ людські СО4-Т-клітини культивували протягом 4 днів на планшетах, попередньо сенсибілізованих мишачими Ідс, Есу-специфічними бо антитілами, і мишачими антитілами до людського СОЗ (клон ОКТЗ, |З нг/млі). Титровані анти-

ОХ40-зв'язуючі агенти (формат пиде1 РЗ290| АГА) додавали в середовища, і вони були присутні в розчині протягом експерименту. Представлені дані про кількість випадків (фіг. 10А), відсоток проліферації (СЕЗЕЇОм/) клітин (фіг. 10Б), відсоток ефекторних Т-клітин (СО127Лом/Ср45КАїоМ) (фіг. 108) і відсоток СОб21І -Іоум/ (фіг. 10Г), ОХ40-позитивних (фіг. 10Е) або Тіт-З-позитивних клітин (фіг. 10Д) в день 4. Вираховували вихідні рівні для зразків, що містять тільки іммобілізоване на планшеті антитіло до людського СОЮЗ. Таким чином, результати свідчать про зростаючий вплив стимуляції ОХ40, але про відсутність впливу субоптимальної стимуляції антитілом до СОЗ рег 5е. Не виявлена підвищена стимуляція ТОК за відсутності сильного перехресного зшивання (формат РЗ29СІ АГА в розчині). Таким чином, перехресне зшивання є важливим для того, щоб аОХ40 (антитіла до ОХ40) в двовалентному форматі спричиняли агоністичну дію на Т-клітини. Вказане перехресне зшивання обумовлюється ЕАР, що експресується на клітинній поверхні пухлинних клітин або клітин строми пухлини при застосуванні "націлених" (які забезпечують таргетинг) форматів; на фіг. 11 - дані про кореляцію сили зв'язування і агоністичної активності різних клонів антитіл до ОХ40. Зв'язування клонів антитіл до ОХ40 (формат пидс1 РЗ290ГАГА) на активованих СО4-Т-клітинах здійснювали згідно з методом, описаним в прикладі 2.1.2. Рівні плато стандартизували по відношенню до величини, отриманої при використанні клону ЗНО (формат пшде1 РЗ2901 АГА). Оцінку біологічної активності клонів антитіл до ОХ40 (формат пшдое1 РЗ2901І АГА) здійснювали за методом, описаним в прикладі 3.2, і рівні плато експресії

РО-1 стандартизували по відношенню до рівнів, отриманих для клону 8НУ (формат пиїдс1

РЗ29И1 АГА). Будували графік залежності стандартизованих рівнів зв'язування по відношенню до стандартизованої біологічної активності для визначення кореляції між силою зв'язування і агоністичною активністю. Для більшості клонів виявлена пряма кореляція (представлений графік, отриманий предметом лінійної регресії, р-значення 0,96; кут нахилу 0,91). Проте для двох клонів (4984, 1054) виявлена істотно сильніша біологічна активність, ніж можна було прогнозувати на основі їх сили зв'язування. Вказана підгрупа клонів, для якої виявлена несподівано висока аноністатична здатність, незважаючи на низьку активність зв'язування, є особливо цікавою як біспецифічні антигензв'язуючі молекули, запропоновані в даному винаході; на фіг. 12А - схематичне зображення наведеної як приклад біспецифічної двовалентної

Зо антигензв'язуючої молекули, запропонованої у винаході, що містить два БГаб-фрагменти, що зв'язуються з ОХ40, і два крос-Рар-фрагменти, які зв'язуються з ЕАР (формат 22). На фіг. 126 представлене схематичне зображення наведеної як приклад біспецифічної одновалентної антигензв'язуючої молекули (формат 1-41), запропонованої у винаході, яка містить один Еар- фрагмент, який зв'язується з ОХ40, і один крос-Рар-фрагмент, який зв'язується з ЕАР. На фіг. 128 представлена схема 5РК-експериментів, які демонструють одночасне зв'язування з іммобілізованим людським ОХ40 або людським 4-18В8 і людським БАР. На фіг. 12Г представлене схематичне зображення наведеної як приклад біспецифічної антигензв'язуючої молекули, яка є двовалентною по відношенню до зв'язування ОХ40 і одновалентною по відношенню до зв'язування ЕАР. Вона містить два Рар-фрагменти, що зв'язуються з ОХ40, і МН- і МЕ-домени, що зв'язуються з ЕАР. Жирної чорною крапкою позначені модифікації типу "КпоБ- іпіо-поїе" (Кій) у важких ланцюгах. На фіг. 12Д представлена схема 5РЕ-експериментів, які демонструють зв'язування з ЕАР, що описані в прикладі 5.4.1. На фіг. 12Е представлений шлях вимірювання одночасного зв'язування з іммобілізованим людським ОХ40 і людським БАР (приклад 5.4.1); на фіг. 13А-13Г - 5РА-діаграми, які описують одночасне зв'язування біспецифічних двовалентних конструкцій 22 (аналіт 1) з іммобілізованим людським ОХ40 і людським ЕАР (аналіт 2). На фіг. 13Д-133 представлені дані про одночасне зв'язування біспецифічних одновалентних конструкцій 1-1 (аналіт 1) з іммобілізованим людським ОХ40 і людським БАР (аналіт 2). На фіг. 13К-13М представлені дані про одночасне зв'язування біспецифічних конструкцій 2-1 (аналіт 1) з іммобілізованим людським ОХ40 і людським БАР (аналіт 2). На фіг. 13Н представлені дані про зв'язування з пиИОХ40 біспецифічних конструкцій 2-1, одержані за допомогою клітинного ЕКЕТ-аналізу (фірма Таді йе) (приклад 5.4.2). Дані показують, що два анти-0Х40 Раб-домени в конструкціях 2-1 зв'язуються з пшОХ40 аналогічно звичайному антитілу ІдОо-типу; на фіг. 14А-14Г ї 14Д-143 - дані про зв'язування відібраних анти-ОХ40-зв'язуючих агентів (клон 8НУ, 154) в націленому на БАР одновалентному або двовалентному форматі з активованими або такими, що в стані спокою, людськими РВМС відповідно. Характеристики зв'язування з ОХ40-позитивними Т-клітинами (фіг. 14Б і 14Г) виявились порівнянними для клонів в канонічному двовалентному пиЇдсі-форматі (зафарбований квадрат) і націлений на БАР бо двовалентному форматі (зафарбований квадрат). Зв'язування одного і того ж клону в націленому на БАР одновалентному форматі (зафарбований трикутник) виявилось більш слабким вираженим через відсутність авідності зв'язування. За відсутності клітин, які експресують людський ОХ40, не вдалося виявити жодного зв'язування (клітини в стані спокою, ліві графіки). Представлені дані про зв'язування у вигляді медіанного значення інтенсивності флуоресценції (МЕ) міченого за допомогою ФІТЦ Е(ар')2-фрагмента козячого ЇДО до людського

Іда, Есу-специфічного, яке застосовували як вторинне ідентифікуюче антитіло. МЕ! вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію на вихідний рівень шляхом вирахування МРЕЇ "порожнього" контролю (див. приклад 4.3.2.1). ОРВ8 пиИїдО1 РЗ29О ГАГА являє собою антитіло, що застосовується як контроль ізотипу. На х-осі відкладена концентрація конструкцій антитіл. На фіг. 14А-14Г продемонстровано, що клон 1034 зв'язувався з активованими людськими СО4-Т-клітинами, що експресують ОХ40, і меншою мірою з активованими людськими СО8-Т-клітинами. Двовалентна конструкція зв'язувалась сильніше, ніж одновалентна конструкція. Конструкції не зв'язувались з ОХ40-негативними Т-клітинами в стані спокою. На фіг. 14Д-143 продемонстровано, що клон 8НО зв'язувався з активованими людськими СО4-Т-клітинами, що експресують ОХ40, і меншою мірою з активованими людськими СО8 Т-клітинами. Двовалентна конструкція зв'язувалась сильніше, ніж одновалентна конструкція. Конструкції не зв'язувались з ОХ40-негативними Т-клітинами в стані спокою. На фіг. 14К-14Н продемонстровано також, що двовалентні націлені на ЕАР ОХ40- конструкції мали характеристики більш сильного зв'язування з ОХ40-позитивними клітинами порівняно з відповідним клоном в форматі одновалентного антитіла. На фіг. 140-140 продемонстровано, що різні конструкції 2-41 зв'язувались з подібною силою з ОХ40-позитивними

Т-клітинами незалежно від другого зв'язуючого фрагмента; на фіг. 15А і 155 - дані про зв'язування відібраних анти-ОХ40-зв'язуючих агентів (клон 8НО, 1654) в націленому на ЕАР одновалентному або двовалентному форматі з РЕАР-позитивними пухлинними клітинами. Трансгенні модифіковані фібробласти мишачих ембріонів лінії МІН/3Т3-

ПИЕАР, клон 39 або клітини УУМ266-4 експресують високі рівні людського фібробласт- активуючого білка (ПпПиРАР). Тільки націлені на ЕАР одно- і двовалентні анти-ОХ40 конструкції (зафарбований квадрат і трикутник), але не цей же клон в форматі людського (901 РЗ29ОГ АГА (зафарбований квадрат) зв'язувались з клітинами МІН/3Т3-ПиЕАР, клон 39 (фіг. 15А) і клітинами

Зо МумМ266-4 (фіг. 15Б) відповідно. Представлені дані про зв'язування у вигляді медіанного значення інтенсивності флуоресценції (МЕ!) міченого за допомогою флуоресцеїінізотіоціаната (ФІТЦ) (ар )2-фрагмента козячого дО до людського дО, Есу-специфічного, яке застосовували як вторинне ідентифікуюче антитіло. МЕ! вимірювали за допомогою проточної цитометрії. На х- осі відкладена концентрація конструкцій антитіл. Двовалентна ЕАР-конструкція зв'язувалась сильніше, ніж одновалентна конструкція. Дані про зв'язування з пухлинними клітинами, що експресують людський ЕАР представлені також на фіг. 158, 15Г, 15Д їі 15Е (детальніше див. у прикладі 4.5.4.2); на фіг. 16А-16Ж - дані про активацію МЕКВ відібраними зв'язуючими агентами (8НО, 164) в одновалентному або двовалентному націленому на ГАР форматі в присутності перехресного гіпер-зшивання або без нього. Представлені дані про активацію шляху передачі сигналу МЕ-кВ в репортерних клітинах відібраними зв'язуюючими агентами 104 (фіг. 16А-16Г) і 8НО (фіг. 16Д- 16Ж) в одновалентному (зафарбований трикутник) або двовалентному (зафарбований квадрат) націленому на БАР форматі або у вигляді "ненацілених" антитіл йпидо РЗ290Г АГА (незафарбований квадрат). Перехресне гіпер-зшивання забезпечували або за допомогою анти- пи Ід, Есу-специфічних вторинних антитіл (співвідношення первинних і вторинних антитіл 1:2), або за допомогою пухлинних клітин МІН/3Т3-пиЕАР, що експресують ЕАР, клон 39 і М/М266-4 (співвідношення пухлинних ЕАР»-клітин і репортерних клітин 2:1). Опосередковану МЕ-кВ люциферазну активність характеризували шляхом блотингу одиниць світла (КІ), що випускається, при вимірюванні протягом 0,5 с залежно від концентрації (в нМ) тестованої конструкції антитіла до ОХ40. Випускання КІ відбувається в результаті опосередкованої люциферази окислення люциферина з утворенням оксилюциферину. Здійснювали корекцію значень на вихідний рівень шляхом вирахування КІ "порожнього" контролю. На фіг. 16А продемонстровано, що всі конструкції, які містять клон 1054, мали здатність індукувати активацію МЕКВ в репортерних ОХ40:-клітинах Не а. Перехресне зшивання вторинним анти-

Іо, Есу-специфічним антитілом сильно підвищувало активацію МЕКВ. Проте додавання ЕАР- позитивних клітин (МІН або УММ266-4) призводило до підвищення тільки агоністичного потенціалу націлених на ЕАР молекул, але не молекул формату РЗ29ОГАГА дО. Двовалентні конструкції мали виражено більш високу активність, ніж одновалентні конструкції. На фіг. 16Д- 16Ж продемонстровано, що всі конструкції, які містять клон 8НО, мали здатність індукувати бо активацію МЕКВ в репортерних ОХ40-- клітинах Не а. Перехресне зшивання вторинним анти-

ІцО, Есу-специфічним антитілом сильно підвищувало активацію МЕКВ. Проте додавання ЕАР- позитивних клітин (МІН) призводило до підвищення тільки агоністичного потенціалу націлених на БАР молекул, але не молекул формату РЗ29ОГАГА Ід. Двовалентні конструкції мали виражено більш високу активність, ніж одновалентні конструкції. На фіг. 163, 16К і 1бл продемонстровано, що конструкції з одновалентним зв'язуванням з ОХ40 (1-41) виявились менш ефективними, ніж конструкції з двовалентним зв'язуванням з ОХ40 (конструкції 2-1 і 2-2).

Додаткові дані представлені на фіг. 16М, 16Н і 160 і в прикладі 5.1. на фіг. 17А і 17Б і фіг. 18А-18Г - дані про підтримання субоптимальної рестимуляції ТС попередньо активованих СО4-Т-клітин іммобілізованими на планшеті націленими на ЕАР одно- і двовалентними конструкціями анти-0Х40 (154 і 8НО). Костімуляція іммобілізованими на планшеті анти-ОХ40-зв'язуюючими агентами (формат пиїде1 РЗ2901І АГА) посилювала клітинну проліферацію і дозрівання субоптимально рестимульованих людських СО4-Т-клітин та індукувала фенотип підвищеної активації. Попередньо активовані ФГА-Ї мічені СЕ5Е людські

СОра-Т-клітини культивували протягом 4 днів на планшетах, попередньо сенсибілізованих мишачими Ідс, Есу-специфічними антитілами, людськими Ідс, Есу-специфічними антитілами (обидва в концентрації 2 мкг/мл), мишачими антитілами до людського СОЗ (клон ОКТЗ, |З нг/мл!) і титрувати анти-ОХ40-зв'язуюючими агентами (формат ПпидсС!1 РЗ2961АГА).

Представлені дані про кількість випадків, відсоток проліферації (СЕЗЕЇОм/) клітин, відсоток ефекторних Т-клітин (СО127ом/Сра4БкКАїом) і відсоток СОб2 ом, ОХ40-позитивних або Тіт-3- позитивних клітин в день 4. Вираховували вихідні рівні для зразків, які містять тільки іммобілізоване на планшеті антитіло до людського СОЮЗ. Таким чином, результати свідчать про зростаючий вплив стимуляції ОХ40, але про відсутність впливу субоптимальної стимуляції антитілом до СОЗ рег 5е. На фіг. 17 продемонстровано, що всі конструкції, які містять клон 8НО, мали здатність підтримувати субоптимальну стимуляцію ТС попередньо активованих

Оох40:004-Т-клітин при їх застосуванні для сенсибілізації планшета. Клітини мали більш активований (Тіт3"Е5С) фенотип. Двовалентні конструкції мали дещо більш високу активність, ніж одновалентні конструкції. На фіг. 18 продемонстровано, що всі конструкції, які містять клон 1654, мали здатність підтримувати субоптимальну стимуляцію ТОК попередньо активованих

Оох40004-Т-клітин при застосуванні для сенсибілізації планшета. Клітини характеризувались

Зо більш високим рівнем проліферації та активованим (Тіт3"Ох40) фенотипом. Двовалентні конструкції мали дещо більш високу активність, ніж одновалентні конструкції. Обидві двовалентні конструкції мали порівняну активність при застосуванні для сенсибілізації планшета; на фіг. 19 - величини ЕСво, розраховані на основі підтримання субоптимальної стимуляції

ТСЕ іммобілізованими на планшеті націленими на ЕАР одно- і двовалентними конструкціями анти-ОХ40 (клон 1054). Будували графік залежності відсотка проліферуючих (СЕЗЕЇОму) клітин і відсотка СО127ЦІом/, Тіт-З-позитивних і ОХ40-позитивних клітин в день 4 від концентрації антитіла до ОХ40, і розраховували величини ЕСво як запобіжну агоністичну активність на основі побудованої за допомогою котирувань сигмовидної кривої доза-відповідь в програмі Ргізт4 (програмне забезпечення СгарпРайд, США). Всі конструкції, що містять клон 164, мали здатність підтримувати субоптимальну стимуляцію ТСЕ попередньо активованих ОХ40-С04-Т-клітин при застосуванні для сенсибілізації планшета. Проте двовалентні конструкції (242) перевищували за активністю одновалентному (1--1) конструкції; на фіг 20А-203 - дані про опосередковану ОХ40 костімуляцію субоптимально стимульованих ТСК людських РВМС в стані спокою і ролі перехресного гіпер-зшивання за допомогою ЕАР, що знаходиться на клітинній поверхні. Тільки конструкції, що містять ЕАР- зв'язуючий фрагмент, мали здатність підтримувати субоптимальну стимуляцію ТСЕ попередньо активованих ОХ40-С04-Т-клітин, коли перехресне зшивання забезпечувалось ЕАР-позитивними клітинами (МІН). Представлені дані або про кількість випадків (фіг. 20Б і 20Г), відсоток клітин з низьким рівнем проліферації (СЕЗЕ-Ппідн) (фіг. 20А і 208), або МРІЇ для СОб2І. (фіг. 20Е їі 203),

С0127 (фіг. 20Д) або живі СО4--клітини, що містять гранзім В (фіг. 20Ж), ії СО8:-Т-клітини.

Вираховували фонові значення, отримані для зразків, що містять тільки антитіло до людського

СОЗ (клон МУ, пиЇдо1), людські РВМС в стані спокою і клітини МІН/3Т3-ПиРАР, клон 39. Таким чином, продемонстровано підсилюючу дію костімуляці Х40, але відсутність впливу субоптимальної стимуляції антитілом до СОЗ рег 5е. В клітинах виявлено вищий рівень виживаності, проліферації та фенотип, характерний для більш сильної активації (СО62І. і 0127

Іом/). Націлені двовалентні конструкції мали лише дещо більш високу активність порівняно з одновалентними конструкціями. Клон 8НО в "ненаціленій" конструкції пПи!дДсС1ТРЗ29ОГАГА не мав здатність підтримувати субоптимальну стимуляцію ТСК за відсутності додаткового бо перехресного зшивання. В мікрооточенні БАР-позитивних пухлин це могло призводити до підвищеної протипухлинної активності Т-клітин, уникаючи при цьому системну активацію ОХ40; на фіг. 21А-218 - дані про активацію людської СО4-клітини в стані спокою з використанням іммобілізованих на поверхні націлених на БАР одно- і двовалентних анти-0ОХ40 (1(4) конструкцій. Костімуляція "ненаціленою" конструкцією анти-0ОХ40 (144) НшШдСсі не мала здатність підтримувати субоптимально стимульовані ТОВ СО4- і СО8-Т-клітин (дані не представлені). Перехресне гіпер-зшивання націлених на ЕГАР одно- і двовалентних анти-ОХ40 конструкцій завдяки присутності МІН/3Т3-пиЕАР, клон 39 сильно збільшувало проліферацію, виживаність (дані не представлені) та індукувала підвищений активований фенотип людських

Сра4-клітин. Представлені дані про величини МЕЇ, що характеризують експресію СО25 на СЮ4-Т- клітинах, і про відсоток СО25:-С204-Т-клітин. Вираховували фонові значення, отримані для зразків, що містять тільки антитіло до людського СОЗ (клон МОУ, пиЇдо1), людські РВМС в стані спокою і МІН/З3Т3-пиРАР, клон 39. Агоністичну дію сполук оцінювали кількісно за площею під кривою з використанням програмного забезпечення із вбудованою функцією СсгарпРад, і дані представлені для трьох різних конструкцій анти-0Х40 (1054). Націлені двовалентні (2-2) конструкції мали більш високу активність, ніж одновалентні (1 41) конструкції; на фіг. 21Г-213 і 21К-210 відповідно - дані, отримані в другому експерименті. Одновалентна анти-ОХ40 конструкція (14-41; зафарбований трикутник) меншою мірою була здатна підтримувати стимуляцію ТСЕ, ніж двовалентні анти-ОХ40 націлені конструкції (наполовину зафарбований кружок, зафарбований квадрат). Двовалентна ЕГАР-зв'язуюча конструкція 242 була здатна вже в більш низьких концентраціях підтримувати субоптимальну стимуляцію ТСЕК порівняно з одновалентними ЕАР-зв'язуюючими конструкціями 2-1. В форматі 24-11 клон 489, що має високу афінність зв'язування з ЕАР, виражено перевищував за активністю низькоафінний клон 28Н1 (фіг. 21К-210). Це дозволяє припустити, що величини ЕСвхо, які характеризують біологічну активність, обумовлювались зв'язуванням з БАР (2825 241 (489)» 2-41 (28Н1). На фіг. 21Р представлені дані про агоністичну активність кожної конструкції, отримані шляхом кількісної оцінки аналізованих маркерів за площею під кривою, і представлені на графіку один відносно одного. Виявлена біологічна активність виявилась найвищою для конструкції ЕАР (28НІ1) (2-2), за нею в порядку зменшення слідувала конструкція ЕАР (489) (24-41), а потім конструкція ЕАР (28НІ1) (2-1); на фіг. 22А їі 22Б - дані, які демонструють, що антитіла до ОХ40, які містять Ес-ділянки людських ІдДС!, можуть індукувати лізис ОХ40-позитивних клітин. Мічені РКН2б клітини

Нега пОх40 МЕКВ Гис1 їі свіжевиділені МК-клітини спільно культивували при співвідношенні

ЕТ 3:1 протягом 24 год. в присутності антитіл до ОХ40 (людський ІДС1 і людський ІдС1

РЗ2гОСІ АГА). Вміст ОН аналізували через 4 год., використовуючи набір для детекції цитотоксичності-Ї/ОН (фірма Коспе, каталожний Мо 11644793001). Через 24 год. клітини фарбували барі і аналізували за допомогою проточної цитометрії. Відсоток Юарі-позитивних мертвих клітин використовували для розрахунку специфічного лізису. Анти-ОХ40-зв'язуючі агенти в форматі людського ДС зв'язувались з Ес-рецепторами на МК-клітинах і індукували

Арсс ОхХ40-позитивних клітин-мішеней. Використання замість вказаного вище формату пи ІдС1

РЗ2901І АГА попереджало АОСС ОХ40-позитивних клітин (наприклад, безпосередньо перед цим активованих Т-клітин); на фіг. 23А-23Г - дані про зв'язування з активованими або такими, що в стані спокою, Т- клітинами чотирьох клонів, специфічних по відношенню до людського 4-188, представлених у вигляді формату пиЇдст! РЗ290 ГАГА (зафарбований ромб: клон 2507, зафарбований квадрат: клон 1283, зафарбована зірочка: клон 1105, трикутник вершиною догори: клон 9В11), ї одного специфічного по відношенню до мишачого 4-188 клону 20052, представленого у вигляді формату Ппшдое1 РЗ295 АГА (трикутник вершиною вниз). Як негативний контроль застосовували специфічне по відношенню до 4-188 антитіло пиЇде!ї РЗ290 І АГА, клон ОР47 (зафарбований сірий кружок). На верхніх панелях представлені дані про зв'язуванні з СО4--Т- клітинами в стані спокою (фіг. 23А) і активованими СО4--Т-клітинами (фіг. 23Б), а на нижніх панелях представлені дані про зв'язування з СО8-Т-клітинами в стані спокою (фіг. 23В) і активованими СО8--Т-клітинами (фіг. 23Г). Зв'язування характеризували за допомогою графіка залежності медіанної інтенсивності флуоресценції (МЕЇ) міченого за допомогою ФІТЦ або міченого за допомогою РЕ К(ар')2-фрагмента козячого дО до людського дО, Есу-специфічного, яке застосовували як вторинне ідентифікуюче антитіло, від концентрації (в нМ) тестованих первинних анти-4-18В-зв'язуючих антитіл пиЇде1 РЗ2905 ГАГА. МЕЇ вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію значень на вихідний рівень шляхом вирахування

МРЇ "порожнього" (без первинного антитіла); на фіг. 24А-24Г - дані про зв'язуванні з мишачими Т-клітинами, що експресують 4-188В. 60 Представлені дані про зв'язування з активованими або такими, що в стані спокою, мишачими Т-

клітинами чотирьох клонів антитіла пидоеї РЗ290 ГАГА, що зв'язується з людським 4-188 (зафарбований ромб: клон 25057, зафарбований квадрат: клон 1283, зафарбована зірочка: клон 1105, трикутник вершиною догори: клон 9В11) і одного клону 2002, що зв'язується з мишачим 4-188 антитіла пд! РЗ290 ГАГА (трикутник вершиною вниз). Як негативний контроль застосовували неспецифічне для 4-18 антитіло ОР47 пидс1 РЗ290 ГАГА (зафарбований сірий кружечок). На верхніх панелях представлені дані про зв'язування з мишачими СО4--Т- клітинами в стані спокою (фіг. 24А) і активованими СО4--Т-клітинами (фіг. 24Б), а на нижніх панелях представлені дані про зв'язування з мишачими СО8:-Т-клітинами в стані спокою (фіг. 248) і активованими СО8--Т-клітинами (фіг. 24Г). Зв'язування характеризували за допомогою графіка залежності медіанної інтенсивності флуоресценції (МЕ) міченого за допомогою ФІТЦ

Карв')2-фрагмента козячого (Дб до людського ДС, Есу-специфічного, яке застосовували як вторинне ідентифікуюче антитіло, від концентрації (в нМ) тестованих первинних анти-4-1ВВ- зв'язуючих антитіл пидоеї РЗ290 ГАГА. МЕЇ вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію значень на вихідний рівень шляхом вирахування МЕЇ "порожнього" (без первинного антитіла); на фіг. 25А-25Г - дані про зв'язування мишачих дб з мишачими Т-клітинами, що експресують 4-188. Представлені дані про зв'язування з активованими або такими, що в стані спокою, мишачими Т-клітинами, антитіла клону 20052, що зв'язується з мишачим 4-188, представленого у вигляді форматів мишачий їд51 БАРО і мишачий ІдС1 дикого типу (м/). Як негативний контроль застосовували мишачий Ідс1 ул, що надходить у продаж, який не зв'язується з 4-188 (контроль ізотипу) (незафарбований сірий кружечок, фірма Віої едепа, каталожний Мо 400153). На верхніх панелях представлені дані про зв'язування з СО4--Т- клітинами в стані спокою (фіг. 25А) і активованими СО4--Т-клітинами (фіг. 25Б), а на нижніх панелях представлені дані про зв'язування з СО8--Т-клітинами в стані спокою (фіг. 258В) і активованими СО8--Т-клітинами (фіг. 25Г). Зв'язування характеризували за допомогою графіка залежності медіанної інтенсивності флуоресценції (МЕЇ) міченого за допомогою ФІТЦ Е(ар)2- фрагменти козячого ЇД0 до мишачого дос, Есу-специфічного, яке застосовували як вторинне ідентифікуюче антитіло, від концентрації в нМ тестованих первинних анти -4-18В-зв'язуючих антитіл тоЇдс. МЕЇ вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію

Зо значень на вихідний рівень шляхом вирахування МРЇ "порожнього" (без первинного антитіла); на фіг. 26А і 26Б - дані про зв'язування з Т-клітинами мавп ціномолгус, які експресують 4- 188. Представлені дані про зв'язування з активованими Т-клітинами мавп ціномолгус чотирьох клонів антитіла пиїде1 РЗ3295 І АГА, що зв'язується з людським 4-188 (зафарбований ром: клон 25057, зафарбований квадрат: клон 1283, зафарбована зірочка: клон 1105, трикутник вершиною догори: клон 9811). Як негативний контроль застосовували антитіло ОР47 пиде1!ї РЗ29ОС АГА, що не зв'язується з 4-188 (зафарбований сірий кружечок). Представлені дані про зв'язування з активованими СО4--Т-клітинами (фіг. 26А) і з активованими СО8--Т-клітинами (фіг. 26Б) відповідно. Зв'язування характеризували за допомогою графіка залежності медіанної інтенсивності флуоресценції (МЕ) міченого за допомогою ФІТЦ ЕК(ар')2-фрагмента козячого Ід до людського дО, Есу-специфічного, яке застосовували як вторинне ідентифікуюче антитіло, від концентрації (в нМ) тестованих первинних анти-4-1ВВ-зв'язуючих антитіл пд! РЗ29О ГАГА.

МЕЇ вимірювали за допомогою проточної цитометрії і здійснювали корекцію значень на вихідний рівень шляхом вирахування МЕЇ "порожнього" (без первинного антитіла); на фіг 27А-27Д - дані про здатність зв'язуватись з лігандом антитіл до 4-188, запропонованих у винаході, визначеної за допомогою поверхневого плазмонного резонансу.

Представлені дані про взаємодію між людськими антитілами до 4-188 ІдСі-типу 25057, 1105, 9811 ї 1283 і попередньо одержаним комплексом ліганд пи4-188 / пи4-188, а також про взаємодію мишачого анти-4-188 клону 2002 і попередньо одержаного комплексу ліганд ти4- 188 / ти4-188; на фіг. 28А-288 їі 28Г-28Е - результати експериментів з конкурентного зв'язування. На фіг. 28А-288 - дані про взаємодію між анти-4-188 Ід клонами 1283, 1105 і 25057 і попередньо одержаним комплексом клону 9811 і пи4-188. На фіг. 28Г-28Е - дані про взаємодію анти-4-188

ЧО клонами 1283, 9811 ї 25057 і попередньо одержаним комплексом клону 1105 і пи4-188.

Продемонстровано, що анти-4-18В клони 1283, 1105 і 9811 характеризуються відмінним від 25057 просторовим епітопом, оскільки два антитіла могли зв'язуватись одночасно з людським 4- 1вВ; на фіг. 29А-29Г - дані про зв'язуванні гібридних варіантів 4-188 Ес (Кі!) з антитілами до 4- 188, тобто зв'язування варіантів пи4-18801 / ти4-18802-Ес (Кіпй) і ти4-18801 / пи4-18802-Ес (КІй) з антитілами до 4-188. Підкреслений 4-18В-домен, який розпізнається антитілом; 60 на фіг. ЗОА-3ЗОГ - дані про зв'язування антитіл до людського 4-188 1105, 1283, 25057 і 9811 з доменом 1 людського 4-188. Антитіла до людського 4-ІВВ 1105, 1283 і 9811 зв'язувались з конструкціями, що містять домен 1 людського 4-188; на фіг. ЗТА-31Г - дані про функціональні властивості різних клонів антитіл до людського 4- 188 іп міго. Попередньо активовані людські СО8--Т-клітини активували за допомогою взятих у різноманітних концентраціях іммобілізованих на поверхні специфічних по відношенню до людського 4-188 антитіл пиїдс! РЗ3295 ГАГА за відсутності антитіла до людського СОЗ (фіг.

З1А і 318) або в присутності в субоптимальній концентрації іммобілізованого на поверхні антитіла до людського СОЗ (фіг. 31Б і 31Г). Представлені дані про частоту зустрічальності ІЕМу я (А і Б) і ТМЕа « (В ії Г) СО8--Т-клітин у всій популяції СО8--Т-клітин залежно від концентрації іммобілізованого на поверхні 4-1 ВВ-зв'язуючого пиЇдсе1 РЗ290 І АГА (в пМ). У присутності СЮОЗ- стимуляції костімуляція 4-1ВВ могла підвищувати секрецію ІЄМу» (фіг. 31Б) і ТМЕсє (фіг. З31Г) залежно від концентрації. За відсутності СОЗ-стимуляції активація 4-18 не впливала на секрецію ІЄМу" (фіг. З1А) і ТМЕаг (фіг. 31); на фіг. З2А і 32Б - дані про функціональні властивості антитіла до мишачого 4-188 клону 2002 іп міго. Мишачі спленоцити інкубували в присутності 0,5 мкг/мл дО хом'яка до мишачого

Ід21-СО3 (клон 145-2С11) і взятих в різних концентраціях антитіл до мишачого 4-188 (зафарбований чорний ромб: мишачий Ідс, незафарбований чорний ромб: мишачий дос ВАРС) або відповідних контролів ізотипів (зафарбований сірий кружечок: мишачий Ідс1, незафарбований сірий кружечок: мишачий Ід01 САРС) в розчині. Концентрація відкладена на х- осі в НМ. Тільки, якщо антитіло до мишачого 4-188 у вигляді клону 20052 мишачого ІдС1 (чорні ромби) було перехресно зшите через клітини, що експресують ЕСЕ, активація гранзіма В (фіг.

З2А) і еомезодерміна (фіг. 32Б) могли зростати залежно від концентрації; на фіг. 33 - дані про функціональні властивості антитіла до мишачого 4-188 клону 2002 іп мімо. Представлені результати, отримані при використанні трьох мишей на групу. Після обробки мишачим ІдсСї до мишачого 4-188 клону 2002 (сірі прямокутники) відбувалось накопичення загальної кількості СО8--Т-клітин в печінці (а). Крім того, виявлено підвищувальну регуляцію маркера проліферації Кіб7 в поняттях частоти зустрічальності (б) і загальної кількості (в) на

СО8:-Т-клітинах. Обробка індукувала також петлю позитивного зворотного зв'язку, шляхом підвищувальної регуляції 4-А188 (СО137) в поняттях частоти зустрічальності (г) і загальної

Зо кількості (д) на СО8--Т-клітинах. Найбільш сильну дію виявлено в день 1 після третьої ін'єкції.

Якщо мишей обробляли мишачим ІдсС1 ОАРС до мишачого 4-188 клону 2002 (чорні прямокутники), то перехресне зшивання антитіла попереджалось і не відбувалась активація 4- 188. Отже, СО8:-Т-клітини в печінці виявилися подібними за кількістю і фенотипом з клітинами оброблених ЗФР мишей (білі прямокутники); на фіг. З34А - схематичне зображення наведеної як приклад біспецифічної двовалентної антигензв'язуючої молекули, запропонованої у винаході, яка містить два Бар-фрагменти, що зв'язуються з 4-188, і два крос-бГар-фрагмента, що зв'язуються з РАР (формат 2-2). На фіг. 345 представлена схема ЗРК-експериментів, які демонструють одночасне зв'язування з іммобілізованим людським 4-18В і людським БАР. На фіг. 348 представлено схематичне зображення наведеної як приклад біспецифічної одновалентної антигензв'язуючої молекули, запропонованої у винаході, яка містить один Рар-фрагмент, який зв'язується з 4-188В, і один крос-Гар-фрагмент, який зв'язується з ЕАР (формат 1-1); на фіг. З5А-35Г - дані про одночасне зв'язування біспецифічних двовалентних анти-4- 1ВВ/анти-РАР конструкцій. Біспецифічні конструкції застосовували як аналіт 1 до іммобілізованого людського 4-188 і людський БАР застосовували як аналіт 2. Всі біспецифічні конструкції могли зв'язуватись одночасно з людським 4-188 і людським ЕАР; на фіг. ЗбА і 36Б - зображення наведених як приклади біспецифічних антигензв'язуючих молекул, які представляють собою двовалентну анти-4-188 і одновалентну анти-РАР пиїдас1

РЗ29ОІ АГА конструкції, позначені також як формат 2-41. Біспецифічні антигензв'язуючі молекули містять два Рар-фрагмента, які зв'язуються з 4-188В, і МН- і МІ-домени, що зв'язуються з ЕАР; на фіг. 37А-37В - дані про одночасне зв'язування біспецифічних анти-4-188- і анти-ЕАР- конструкцій в форматі 2-1. На фіг. 37А представлена піктограма схеми аналізу; на фіг. 37Б і 378 - дані про виявлене одночасне зв'язування біспецифічних антигензв'язуючих молекул в форматі 241 (аналіт 1) з іммобілізованим людським 4-188В і людським БАР; на фіг. ЗВА-38Е - дані про зв'язування з СО4-- в стані спокою (верхні панелі) і СО8:-Т- клітинами (нижні панелі) специфічних по відношенню до людського 4-188 клону 1105 (фіг. З8А і

В), 1283 (фіг. 38Б ії Г) їі 25217 (фіг. З38Д і Е). Дані про зв'язування представлені у вигляді середнього геометричного інтенсивності флуоресценції вторинного ідентифікуючого 60 кон'югованого з РЕ Е(аб')2-фрагмента козячого дб; до людського ІДС, Есу-специфічного залежно від концентрації первинного 4-1В8В-зв'язуючого антитіла. На всіх графіках як негативний контроль представлені дані для ЮОР4А7- "ненаціленого" пшШдс! РЗ2гОа І1АГА (незафарбований чорний кружечок, пунктирна лінія). Для жодної з конструкцій не виявлено специфічне зв'язування з людськими СО4--Т-клітинами в стані спокою (фіг. 38 А, Б і Д) або

СО8:-Т-клітинами в стані спокою (фіг. 388, Гі Е); на фіг. З9А-39Е - дані про зв'язування з активованими СО4-- (верхні панелі) і СО8:-Т- клітинами (нижні панелі) специфічного по відношенню до людського 4-188 клону 1105 (фіг. З9А і В), 1283 (фіг. 395 ї Г) і 25257 (фіг. З9Д і Е). Дані про зв'язування представлені у вигляді середнього геометричного інтенсивності флуоресценції вторинного ідентифікуючого кон'югованого з РЕ Е(аб')2-фрагмента козячого дб; до людського ІДС, Есу-специфічного залежно від концентрації первинного 4-1В8В-зв'язуючого антитіла. На всіх графіках як негативний контроль представлені дані для ЮОР4А7- "ненаціленого" пшШдс! РЗ2гОСа І1АГА (незафарбований чорний кружечок, пунктирна лінія). Всі конструкції зв'язувались головним чином з активованими людськими СО8--Т-клітинами (фіг. 39 В, Г ії Е), для яких характерний більш високий рівень експресії 4-188, ніж для активованих людських СО4--Т-клітин (фіг. 40 А. Б і Д); на фіг. 40 - узагальнення даних про зв'язування з активованими людськими СО8:-Т- клітинами різних клонів і різних форматів, отримані за площею під кривою (АС) для кривих зв'язування. Різні формати і застосовувані анти-ЕАР-зв'язуючі клони вказані у вигляді піктограм під графіком, 4-18В-зв'язуючі клони позначені розфарбуванням колонок: контрольна молекула рРА7 позначена білим кольором, молекули, які 25217, чорним кольором, якщо "ненацілений"

РРА7 позначений чорним кольором з білими смужками, то клон 1105 позначений сірим кольором, клон 1283 позначений біло/лорною шаховою кліткою; на фіг. 41А-41Е - дані про зв'язування з лінією клітин меланоми УММ-266-4, що експресує людський ЕАР (фіг. 42 А, Б ї Д) і клітин МІН/3Т3-ПиРАР, клон 19 (фіг. 42 В, Г ї Д). Дані про зв'язування представлені у вигляді середнього геометричного інтенсивності флуоресценції вторинного ідентифікуюючого кон'югованого з РЕ Е(аб')2-фрагмента козячого ЇДО до людського

Ід, Есу-специфічного залежно від концентрації первинного 4-18В-зв'язуючого антитіла. Криві зв'язування, отримані з використанням конструкцій, що містять 4-18В-зв'язуючий клон 1105, представлені на фіг 41А і 418, клон 1283 - на фіг. 4А1Б і 4А1Г, а клон 2507 - на фіг. 41д і А1Е. На всіх графіках як негативний контроль представлені дані для ОР47- "ненаціленого" пшдса1 РЗ2гОУС

ГАГА (незафарбований чорний кружечок, пунктирна лінія). Тільки націлені на ЕАР формати зв'язувались з клітинами, що експресують ЕАР, і не зв'язувались з їх батьківськими антитілами до 4-188 питдо1РЗ295 І АГА. Таким чином, продемонстровано, що незалежно від формату все націлені на БАР молекули мали ЕАР-специфічну таргетувальну властивість. Залежно від формату ЕАР-зв'язуючого клону і таргетувального фрагмента деякі молекули мали кращу ЕАР- таргетувальну властивість порівняно з іншими; на фіг. 42 - узагальнення даних про зв'язування з клітинами МІН/3Т3-пПиБАР. Представлені площі під кривою (АОС) для кривих зв'язування. Застосовувані антитіла вказані у вигляді піктограм під графіком, 4-18В-зв'язуючі клони позначені кольором колонок: контрольна молекула ОР47 позначена білим кольором, молекули, які містять 25217, чорним кольором, якщо ненацілений ОРА47 позначений чорним кольором з білими смужками, то клон 1105 позначений сірим кольором, а клон 1283 біло/лорною шаховою кліткою. На графіку продемонстровано, що тільки націлені на БАР молекули, але не їх 4-1В8В-зв'язуючий батьківський пиЇдсе!ї РЗ29С ГАГА, ні націлені на ОРА47 4-188 (2527)-зв'язуючі молекули не могли зв'язуватись з клітинами, що експресують ЕАР; на фіг. 43А-43| - дані про опосередковану МЕ-КВ люциферазну активність в репортерній клітинній лінії НеГа-пи4-188-МЕКВ-ис, що експресує 4-188. Люциферазна активність відкладена на у-осі у вигляді одиниць світла (ШК), що випускається, по відношенню до доданої концентрації агоністичних молекул, які зв'язують людський 4-1ВВ, після інкубації протягом 6 год.

На фіг. 43А, Г ї Ж представлені результати, отримані без додавання пухлинних клітин, що експресують БАР. На фіг. 43Б, Д ї З представлені результати, отримані при додаванні до репортерних клітин клітинної лінії людської меланоми М/М-266-4, що експресує ЕАР, а на фіг. 43

В, Е їі І - при додаванні трансфектованих людським ЕАР клітин МІН/З3ТЗ у співвідношенні 5:1 та інкубації протягом 6 год. Криві активації, отримані з використанням конструкцій, що містять 4- 1ВВ-зв'язуючий клон 1105, представлені на фіг. 4З3А, 43ЗБ і 43В, клон 1283 - на фіг. 43Г, 4Зд і 4З3Е, а клон 25057 - на фіг. 43Ж, 433 і 431. Тільки націлені на ГАР формати індукували люциферазну активність в присутності пухлинних клітин, які експресують ЕАР. Рівні активації залежали від клону, формату і лінії пухлинних клітин, що експресує ЕАР; бо на фіг. 44А і 44Б - узагальнення даних про опосередковану МЕ-КкВ люциферазну активність в репортерній клітинній лінії Неї а-пи4-188-МЕКВ-с, що експресує 4-188, в присутності клітин

МІН/З3Т3-пиЕАР. Дані представлені у вигляді площі під кривою (АОС) для кривих активації в присутності клітин МІН/З3Т3-пигАР. Застосовувані формати антитіл і клони антитіл до ЕАР вказані у вигляді піктограм під графіком, різні клони агоністичних антитіл до 4-188 позначені кольором колонок: контрольна молекула ОР47 позначена білим кольором, молекули, що містять 250217 - чорним кольором, клон 1105 - сірим кольором, а клон 1283 - білоорною шаховою кліткою. На графіку продемонстровано, що тільки націлені на ЕАР молекули могли індукувати сильну активацію, яка перевищує фоновий рівень. Рівні активації залежали від клону, ЕАР- таргетування і формату.

Детальний опис винаходу

Визначення

Якщо не вказано інше, то технічні і наукові поняття, що застосовуються в даному описі, мають значення, які звичайно використовують в галузі техніки, до якої належить винахід. Для цілей інтерпретації даної заявки слід застосовувати наведені нижче визначення, і якщо це можливо, то поняття, що застосовуються в однині, включають також їх застосування в множині і навпаки.

У контексті даного опису поняття "антигензв'язуючих молекула" в найбільш широкому сенсі відноситься до молекули, яка специфічно зв'язується з антигенною детермінантою. Прикладами антигензв'язуючих молекул є антитіла, фрагменти антитіл та антигензв'язуючі білки-каркаси ("скаффолд-білки").

В контексті даного опису поняття "фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені" відноситься до поліпептидної молекули, що специфічно зв'язується з антигенною детермінатною. В одному з об'єктів винаходу антигензв'язуючий фрагмент має здатність активувати передачу сигналу через антиген його клітини-мішені. В конкретному об'єкті винаходу антигензв'язуючий фрагмент має здатність направляти субстанцію, з якої він зв'язаний (наприклад, тримерний ліганд сімейства ТМЕ) до сайту-мішені, наприклад, до певного типу пухлинних клітин або строми пухлини, що несуть антигенну детермінанту. Фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, включають антитіла і їх фрагменти, більш детально представлені в даному описі. Крім того, фрагменти, які мають

Зо здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, включають антигензв'язуючі білки-каркаси, більш детально представлені в даному описі, наприклад, зв'язуючі домени, основою яких є створені повтори білків або створені повтори доменів (див., наприклад, МО 2002/020565).

Стосовно антитіла або його фрагменти поняття "фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені" відноситься до частини молекули, що містить ділянку, яка специфічно зв'язуються, і комплементарну частину антигена або всього антигена. Фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, може являти собою, наприклад, один або декілька варіабельних доменів антитіла (які називають також варіабельними ділянками антитіла). Зокрема, фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, містить варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла (М) ії варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла (МН). В конкретному об'єкті винаходу "фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені" являє собою Раб-фрагмент або крос-Раб-фрагмент.

Поняття "фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів" відноситься до поліпептидної молекули, яка специфічно зв'язується з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів. В одному з об'єктів винаходу антигензв'язуючий фрагмент має здатність активувати передачу сигналів через представника сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів. Фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, включають антитіла та їх фрагменти, додатково вказані в даному описі. Крім того, фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, включають каркасні антигензв'язуючі білки, додатково вказані в даному описі, наприклад, зв'язуючі домени, сконструйовані білки, що базуються на повторах або сконструйовані домени, що базуються на повторах (див., наприклад, МО 2002/020565). Зокрема, фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, містить варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла (МІ) і варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла (МН). В конкретному об'єкті винаходу "фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів", являє собою ГРар- фрагмент або крос-Рар-фрагмент. бо В контексті даного опису поняття "антитіло" використовується в його найбільш широкому сенсі, і воно відноситься до різних структур антитіл, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, моноспецифічні і мультиспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла) і фрагменти антитіл, за умови, що вони мають необхідну антигензв'язуючу активність.

Поняття "моноклональне антитіло" в контексті даного опису відноситься до антитіла, одержаного з популяції практично гомогенних антитіл, тобто індивідуальні антитіла, що входять в популяцію, є ідентичними і/або зв'язуються з одним і тим же епітопом, за винятком можливих варіантів антитіл, наприклад, які містять мутації, що зустрічаються в природних умовах або виникають в процесі виробництва препарату моноклонального антитіла, вказані варіанти, як правило, присутні в мінорних кількостях. На відміну від препаратів поліклональних антитіл, які, як правило, включають різні антитіла до різних детермінантів (епітопів), кожне моноклональне антитіло з препарату моноклонального антитіла спрямовано проти однієї детермінанти на антигені.

В контексті даного опису поняття "моноспецифічне" антитіло означає антитіло, яке має один або декілька сайтів зв'язування, кожний з яких зв'язується з одним і тим же епітопом одного і того ж антигену. Поняття "біспецифічна" означає, що антигензв'язуюча молекула має здатність специфічно зв'язуватись принаймні з двома різними антигенними детермінантами. Як правило, біспецифічна антигензв'язуюча молекула містить два антигензв'язуючі сайти, кожний з яких є специфічним по відношенню до різних антигенних детермінант. В деяких варіантах здійснення винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула має здатність одночасно зв'язуватись з двома антигенними детермінантами, перш за все з двома антигенними детермінантами, які експресуються на двох різних клітинах.

В контексті даного опису поняття "валентність" означає наявність певної кількості сайтів зв'язування, специфічних по відношенню до однієї конкретної антигенної детермінанти в антигензв'язуючій молекулі, яка є специфічною по відношенню до однієї конкретної антигенної детермінанти. Таким чином, поняття "двовалентна", "чотирьохвалентна" і "шестивалентна" означає присутність двох сайтів зв'язування, чотирьох сайтів зв'язування і шести сайтів зв'язування, специфічних по відношенню до певної антигенної детермінанти відповідно в антигензв'язуючій молекулі. В конкретних об'єктах винаходу біспецифічні антигензв'язуючі

Зо молекули, запропоновані у винаході, можуть бути одновалентними по відношенню до певної антигенної детермінанти, це означає, що вони мають тільки один сайт зв'язування із вказаною антигенною детермінантою, або вони можуть бути двовалентними по відношенню до певної антигенної детермінанти, це означає, що вони мають два сайти зв'язування із вказаною антигенною детермінантою.

Поняття "повнорозмірне антитіло", "інтактне антитіло" і "незбиране антитіло" в контексті даного опису використовують як взаємозамінні для позначення антитіла, що має структуру, практично схожу з нативною структурою антитіла. Поняття "нативні антитіла" відноситься до молекул імуноглобулінів, які зустрічаються в природних умовах з різними структурами.

Наприклад, нативні антитіла Ідс-класу є гетеротетрамірні глікопротеїни з молекулярною масою приблизно 150000 Да, що складаються з двох ідентичних легких ланцюгів і двох ідентичних важких ланцюгів, зв'язаних дисульфідними містками. Починаючи з М-кінця до С-кінця, кожний важкий ланцюг має варіабельну ділянку (МН), яку називають також варіабельним важким доменом або варіабельним доменом важкого ланцюга, за якою слідує три константні домени (СНІ, СНО ї СНЗ), які називають також константної ділянкою важкого ланцюга. Аналогічно цьому, починаючи з М-кінця до С-кінця, кожний легкий ланцюг має варіабельну ділянку (МІ), яку називають також варіабельним легким доменом або варіабельним доменом легкого ланцюга, за якою слідує константний домен легкого ланцюга (СІ), який називають також константної ділянкою легкого ланцюга. Важкий ланцюг антитіла може належати до одного з п'яти типів, які позначають як а (ІдА), б (190), є (9Е), у (до) або цн (І9М), деякі з яких можна додатково поділяти на підтипи, наприклад, у! (Ідс1), у2 (192), УЗ (1953), у4 (404), а1 (ДАТ) ї 2 (ІДА2г). Легкий ланцюг антитіла може належати до одного з двох типів, які називають каппа (к) і лямбда (Х), залежно від амінокислотної послідовності її константного домену.

Поняття "фрагмент антитіла" відноситься до молекули, відмінної від інтактного антитіла, яка містить частину інтактного антитіла, що має здатність зв'язуватись з антигеном, з яким зв'язується інтактне антитіло. Прикладами фрагментів антитіл є (але не обмежуючись тільки ними) Ем, Раб, Раб", Рар'-5Н, К(ар)2, димерні антитіла (діабоді), тримерні антитіла (тріабоді), тетрамерніантитіла (тетрабоді), крос- Габ-фрагменти; лінійні антитіла: одноланцюгові молекули антитіл (наприклад, 5сЕм); і однодоменні антитіла. Огляд деяких фрагментів антитіл див., наприклад, у Нидзоп та ін., Маї Меса 9, 2003 сс. 129-134. Огляд 5сЕм-фрагментів див., наприклад,

Ге) у РІйсКІпип в: Тпе Рпагтасоїоду ої Мопосіопаї! Апііродієв, т. 113, під ред. Нозепригу і Мооге, вид-

во Зргіпдеї-Мепад, Мем Могк, 1994, сс. 269-315; див. також УМО 93/16185; і О5 МоМо 5571894 і 5587458. Обговорення ГРар- і Каб )2-фрагментів, які містять залишки епітопа, що зв'язується з рецептором порятунку, і які мають подовжений час напівжиття іп мімо, див. в Ш5 Мо 5869046.

Димерні антитіла являють собою фрагменти антитіл з двома антигензв'язуючими сайтами, які можуть бути двовалентними або біспецифічними (див., наприклад, ЕР 404097; УМО 1993/01161;

Нидзоп та ін., Маї Меа 9, 2003 сс. 129-134; і Ноїпдег та ін., Ргос Маї! Асай 5сі ОА 90, 1993, со. 6444-6448. Тримерні та тетрамерні антитіла описані також у Ниазоп та ін., Маї Меса 9, 2003 сс. 129-134. Однодоменні антитіла являють собою фрагменти антитіла, що містять весь варіабельний домен важкого ланцюга або його частину або весь варіабельний домен легкого ланцюга антитіла або його частину. В деяких варіантах здійснення винаходу однодоменне антитіло являє собою людське однодоменне антитіло (фірма Ротапії5, Іпс., Валтен, шт.

Массачусетс; див., наприклад, 5 Мо 6248516 В1). Фрагменти антитіл можна створювати за допомогою різних методик, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) протеолітичне розщеплення інтактного антитіла, а також одержувати з використанням рекомбінантних клітин- хазяїнів (наприклад, Е. соїї або фага), як зазначено в даному описі.

Розщеплення інтактних антитіл папагтом призводить до утворення двох ідентичних антигензв'язуючих фрагментів, які називають "Баб»-фрагменти, кожний з яких містить варіабельні домени важкого і легкого ланцюгів, а також константний домен легкого ланцюга і перший константний домен (СНІ) важкого ланцюга. В контексті даного опису поняття "Рар- фрагмент" відноситься до фрагмента антитіла, що містить фрагмент легкого ланцюга, який містить МіІ--домен і константний домен легкого ланцюга (СІ), ії МН-домен і перший константний домен (СНІ) важкого ланцюга. Рар'-ррагменти відрізняються від Гар-фрагментів додаванням декількох залишків на карбоксильний кінець СНІ1-домену важкого ланцюга, включаючи один або декілька залишків цистеїну з шарнірної ділянки антитіла. Гар'ЄЗН позначає Рар'-фрагменти, в яких залишок (шки) цистеїну константних доменів несе(уть) вільну тіольну групу. Обробка пепсином дозволяє одержувати Е(абр)2-фрагменти, які мають два антигензв'язуючі сайти (два

Еаб-фрагмента) і частина ділянки. Згідно з даного винаходу поняття "Гар-фрагмент" включає також "крос-Габ-фрагменти" або "кросовер-Рар-фрагменти", описані нижче.

Поняття "крос-БГар-фрагмент" або "хРаб-фрагмент" або "кросовер-Рар-фрагмент" відноситься до Гар-фрагмента, в якому або варіабельні ділянки, або константні ділянки важкого і легкого ланцюга обмінені. Можливі дві різні композиції ланцюга кросовер-молекули Раб, і вони можуть входити в біспецифічні антитіла, запропоновані у винаході: з одного боку, має місце обмін варіабельними ділянками важкого і легкого ланцюга Раб, тобто кросовер-молекула Бар містить пептидний ланцюг, що складається з варіабельної ділянки легкого ланцюга (МІ) і константної ділянки важкого ланцюга (СНІ), і пептидний ланцюг, що складається з варіабельної ділянки важкого ланцюга (МН) і константної ділянки легкого ланцюга (СІ). Вказану кросовер- молекулу Рар позначають також як Сго55Рар (МІ МН). З іншого боку, коли одна на одну обмінені константні ділянки важкого і легкого ланцюга Раб, то кросовер-молекула Раб містить пептидний ланцюг, що складається з варіабельної ділянки важкого ланцюга (МН) і константної ділянки легкого ланцюга (СІ), і пепгидний ланцюг, що складається з варіабельної ділянки легкого ланцюга (МІ) і константної ділянки важкого ланцюга (СНІ). Вказану кросовер-молекулу Бар позначають також як Сто55Еаб'(сі сні). "Одноланцюговий Еар-фрагмент" або "бсБар" являє собою поліпептид, що складається з варіабельного домену важкого ланцюга (УН) антитіла, константного домену 1 (СНІ) антитіла, варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) антитіла, константного домену легкого ланцюга (СІ) антитіла і лінкера, в якому вказані домени антитіла і вказаний лінкер мають один з наступних порядків розташування в напрямку від М-кінця до С-кінця: а) МНА-СНІ -лінкер-МІ -СІ, 6) МІ-СІ - лінкер-МН-СНІ, в) МН-СІ -лінкер-МІ-СНІ або г) МІ-СНІ-лінкер-УН-СІ ; і в якому вказаний лінкер являє собою поліпептид, що складається принаймні з 30 амінокислот, переважно приблизно від 32 до 50 амінокислот. Вказані одноланцюгові Раб-фрагменти стабілізують за допомогою дисульфідного зв'язку між Сі -доменом і СНІ-доменом, що зустрічається в природних умовах.

Крім того, вказані одноланцюгові молекули Бар можна додатково стабілізувати за допомогою створення міжланцюгових дисульфідних зв'язків шляхом вбудовування залишків цистеїну (наприклад, в положення 44 в варіабельному важкому ланцюзі та в положення 100 в варіабельному легкому ланцюзі за нумерацією Кебота). "Одноланцюговий кросовер-Раб-фрагмент" або "х-5сбар" являє собою поліпептид, що складається з варіабельного домену важкого ланцюга (МН) антитіла, константного домену 1 (СНІ) антитіла, варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) антитіла, константного домену легкого ланцюга (СІ) антитіла і лінкера, в якому вказані домени антитіла і вказаний лінкер бо мають один з наступних порядків розташування в напрямку від М-кінця до С-кінця: а) МН-СІ -

лінкер-МІ-СНІ ії 6) МІ-СНІ- лінкер-МН-СІ:; де МН і МІ разом утворюють антигензв'язуючий сайт, який специфічно зв'язується з антигеном, і в якому вказаний лінкер являє собою поліпептид, що складається принаймні з 30 амінокислот. Крім того, вказані молекули х-5:сСбар можна додатково стабілізувати за допомогою створення міжланцюгових дисульфідних зв'язків шляхом вбудовування залишків цистеїну (наприклад, в положення 44 в варіабельному важкому ланцюзі та в положення 100 в варіабельному легкому ланцюзі за нумерацією Кебота). "Одноланцюговий варіабельний фрагмент (5СЕм)» являє собою злитий білок варіабельних ділянок важкого (МН) і легкого (Мі) ланцюгів антитіла, з'єднаних коротким лінкерних пептидом, який містить від 10 до приблизно 25 амінокислот. Лінкер, як правило, являє собою багатий на гліцин лінкер для додання гнучкості, а також багатий на серин або треонін для забезпечення розчинності, і він може з'єднувати або М-кінець МН з С-кінцем Мі, або навпаки. Вказаний білок зберігає специфічність вихідного антитіла, незважаючи на видалення константних ділянок та інтродукцію лінкера. Антитіла у вигляді 5сЕм описані, наприклад, у Ноивіоп .).5., Меїпоавз іп

Еплутої. 203, 1991, сс. 46-96). Крім того, фрагменти антитіл містять одноланцюгові поліпептиди, які мають характеристики МН-домену, а саме, мають здатність до збирання з Мі-доменом, або характеристики Мі, а саме, мають здатність до збирання з МН-доменом з утворенням антигензв'язуючих сайта, і тим самим мають антигензв'язуючу властивість повнорозмірних антитіл. "Антигензв'язуючі білки-каркаси (скаффолд-білки)») відомі в даній галузі, наприклад, фібронектин і створені білки (ОАРРІп), які містять анкіринові повтори, застосовували як альтернативні каркаси для антигензв'язуючих доменів (див. Серацег і 5Кеїта, Епаіпеєгтей ргоївїп зсаноїде аз пехі-депегайоп апібоду Тнегарешісв. Сит Оріп Спет Віо! 13, 2009, сс. 245-255 і зЗіштрр та ін., Оагріпе: А пему депегаїййоп ої ргоїєїп Тнегареціїсв. Огид Різсом Тодау 13, 2008, сс. 695-701). В одному з об'єктів винаходу антигензв'язуючий білок-каркас вибраний з групи, що включає СТІ А-4 (евібоді (Еміроду)), ліпокаїни (антикалін (Апіїсаїйпй)), одержану з білка А молекулу, таку як 7-домен білка А (Айіроду, 5рА) А-домен (авіимер/максибоді (Амітег/Махіроду)), сироватковий трансферин (транс-боді), сконструйований білок, який містить анкіринові повтори (ОАРВРІіп), варіабельний домен легкого ланцюга або важкого ланцюга антитіла (однодоменне антитіло, 5аАБ), варіабельний домен важкого ланцюга антитіла

Ко) (нанободі, амН), Мчлв-фрагменти, фібронектин (аднектин (Аамесійп)), лектиновий домен С-типу (тетранектин), варіабельний домен нового антигенного рецептора бета-лактамази (Ммадв- фрагменти), людський гамма-кристалін або убіквітин (молекули-афіліни (АНіїп), домен Кунітц- типу людських інгібіторів протеаз, мікрободі, такі як білки з сімейства Кпоціп (кноттіни, інгібітори цистеїнового вузла), пептидні аптамери та фібронектин (аднектин). СТІ А-4 (асоційований з цитотоксичними Т-лімфоцитами антиген 4) відноситься до СО28-сімейства рецепторів, які головним чином експресуються на СО4--Т-клітинах. Його позаклітинний домен має укладку, що нагадує укладку варіабельного домену Ід. Петлі, відповідні СОР. антитіл, можна замінювати на гетерологічну послідовність для додання різних зв'язуюючих властивостей. Молекули СТІ А-4, сконструйовані таким чином, що вони мають різні зв'язуючі специфічностями, відомі також як евібоді (див., наприклад, ЮШ5 Мо 716669781). Евібоді мають приблизно такий же розмір, що і виділена варіабельна ділянка антитіла (наприклад, доменного антитіла. Додаткові відомості див. у Уоигпаї ої Іттипоїіодісаи! Меїподь5 248 (1-2), 2001., сс. 31-45. Ліпокаїни відносяться до сімейства позаклітинних білків, які транспортують малі гідрофобні молекули, такі як стероїди, білини, ретиноїди та ліпіди. Вони мають жорстку вторинну структуру у вигляді бета-складки з рядом петель на відкритому кінці конічної структури, їх можна створювати для зв'язування з різними антигенами-мішенями. Антикаліни складаються з 160-180 амінокислот та їх одержують з ліпокаїнів. Додаткові відомості див. у Віоспіт Віорпуз Асіа 1482, 2000, сс. 337-350, в О5 Мо 7250297 В1 і 05 Мо 2007/0224633. Аффбоді являє собою каркас, одержаний з білка А зіарпуіососси5 аийгеи5, який можна створювати для зв'язування з антигеном. Домен складається з триспірального пучка, що містить приблизно 58 амінокислот. Бібліотеки були створені шляхом рандомізації поверхневих залишків. Додаткові відомості див. у Ргоїеіп Епод. ЮОев5. Зеї. 17, 2004, сс. 455-462 і ЕР 1641818А1. Авімери являють собою мультидоменні білки, одержані з А-домену сімейства білків-каркасів. Нативні домени, що складаються приблизно з 35 амінокислот, адоптують певну зв'язану дисульфідом структуру. Різноманітність створюють шляхом "перестановки" варіацій, які зустрічаються в природних умовах, характерних для сімейства А- доменів. Додаткові відомості див. у Маїшге ВіоїесппоЇоду 23 (12), 2005, сс. 1556-1561 і Ехреп

Оріпіоп оп Іпмевіїдайопа! ЮОгидв 16 (6), червень 2007, сс. 909-917. Трансферин є одновимірним сироватковим транспортним глікопротеїном. Трансферин можна створювати для зв'язування з різними антигенами-мішенями шляхом вбудовування пептидних послідовностей в прийнятну бо поверхневу петлю. Приклади сконструйованих трансферинових каркасів включають транс-боді.

Додаткові відомості див. у 9. ВіоЇ. Спет 274, 1999, сс. 24066-24073. Сконструйовані білки, що містять анкіринові повтори (ОАКРІп), одержують з анкірину, який відноситься до сімейства білків, які опосередковують приєднання інтегральних мембранних білків до цитоскелету. Один анкіриновий повтор являє собою мотив, який складається з 33 залишків, що включає дві альфа- спіралі і бета-вигин. Їх можна створювати для зв'язування з різними антигенами-мішенями шляхом рандомізації залишків в першій альфа-спіралі і бета-вигині кожного повтору. Їх зв'язуючу поверхню роздіення можна збільшувати шляхом збільшення кількості модулів (метод дозрівання афінності). Додаткові відомості див. у .). Мої. Віо!. 332, 2003 сс. 489-503, РМАБ5 100 (4), 2003 сс. 1700-1705 і 9. Мої. Віої. 369, 2007, сс. 1015-1028, а також в 05 Мо 2004 / 0132028А1.

Однодоменне антитіло являє собою фрагмент антитіла, що складається з одиничного мономерного варіабельного домену антитіла. Вперше одиничний домен був одержаний з варіабельного домену важкого ланцюга антитіла верблюдів (нанабоді або МНН-фрагменти).

Крім того, поняття однодоменне антитіло включає автономний варіабельний домен людського важкого ланцюга (амн) або ММАК-фрагменти, одержані з акул. Фібронектин являє собою каркас, який можна створювати для зв'язування антигену. Аднектини складаються з каркаса з амінокислотної послідовності 10-го домену, що зустрічається в природних умовах, з 15 повторюваних одиниць людського фібронектину типу ЇЇ (ЕМ3). Можна створювати три петлі на одному кінці "бета-сендвіча", що дозволяє аднектину специфічно розпізнавати терапевтичну мішень, яка представляє інтерес. Додаткові відомості див. у Ргоївеіп Епо. Ое5. Зеї. 18, 2005, сс. 435-444, 5 Мо 2008/0139791, УМО 2005/056764 і 5 Мо 681841881. Пептидні аптамери являють собою комбінаторні молекули, що розпізнаютьякі складаються з константного білка-каркаса, як правило, тіоредоксину (ТгіхА), який містить обмежену варіабельну пептидну петлю, вбудовану в активний сайт. Додаткові відомості див. у Ехрегі Оріп. Віо!. ТНЕК. 5, 2005, сс. 783-797. Мікрободі одержують з мікробілків, які зустрічаються в природних умовах, що складаються з 25-50 амінокислот, які містять 3-4 цистеїнових містка - приклади мікробілків включають Каїаїаві і конотоксин і кноттіни. Мікробілки мають петлю, яку можна піддавати інженерії таким чином, щоб вона включала аж до 25 амінокислот, без впливу на загальну укладку мікробілка. Додаткові відомості про створення кноттін-доменів див. В УМО 2008/098796.

Поняття "антигензв'язуюча молекула, що зв'язується з таким же епітопом", що і референс-

Зо молекула, відноситься до антигензв'язуючої молекули, яка блокує зв'язування референс- молекули з її антигеном на 50 95 або більше при оцінці в умовах конкуренції, і, навпаки, референс- молекула блокує зв'язування антигензв'язуючих молекули з її антигеном на 50 95 або більше при оцінці в умовах конкуренції.

Поняття "антигензв'язуючий домен" або "антигензв'язуючий сайт (центр)» відноситься до частини антигензв'язуючої молекули, яка містить ділянку, що специфічно зв'язується і є комплементарною частиною антигену або повного антигену. Якщо антиген є великим, то антигензв'язуюча молекула може зв'язуватись тільки з конкретною частиною антигену, яку називають епітопом. Антигензв'язуючий домен може являти собою, наприклад, один або декілька варіабельних доменів антитіла (які називають також варіабельними ділянками).

Переважно антигензв'язуючий домен містить варіабельну ділянку легкого ланцюга (МІ) антитіла і варіабельну ділянку важкого ланцюга (УН) антитіла.

В контексті даного опису поняття "антигенна детермінанта" є синонімом понять "антиген" і "епітоп" і відноситься до сайту (наприклад, ділянки, що складається із суміжних амінокислот, або конформаційної конфігурації, що складається з різних ділянок несуміжних амінокислот) на поліпептидній макромолекулі, з якою зв'язується антигензв'язуючий фрагмент з утворенням комплексу антигензв'язуючих фрагмент-антиген. Придатні антигенні детермінанти можуть бути присутніми, наприклад, на поверхні пухлинних клітин, на поверхні інфікованих вірусом клітин, на поверхні інших хворих клітин, на поверхні імунних клітин, клітин, що знаходяться у вільному стані в сироватці крові і/або у позаклітинному матриксі (ЕСМ). Білки, які можна застосовувати як антигени в даному винаході, якщо не вказано інше, можуть являти собою будь-які нативні форми білків з будь-якого застосовуваної як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) і гризуни (наприклад, миші та щури). В конкретному варіанті здійснення винаходу антиген являє собою людський білок. В контексті даного опису при посиланні на конкретний білок мається на увазі "повнорозмірний", непроцесований білок, а також будь-яка форма білка, одержана в результаті процесингу в клітині. Під поняття підпадають також варіанти білка, що зустрічаються в природних умовах, наприклад, сплайсингові варіанти або алельні варіанти.

Поняття "специфічно зв'язується" означає, що зв'язування є виборчим по відношенню до антигену і його можна відрізняти від небажаних або неспецифічних взаємодій. Здатність бо антигензв'язуючої молекули зв'язуватись зі специфічним антигеном можна визначати за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу (ЕГІЗА) або інших методик, відомих спеціалісту в даній галузі, наприклад, за допомогою методики на основі поверхневого плазмонного резонансу (здійснюючи аналіз за допомогою пристрою ВіАсоге) (І ЩШебіай та ін.,

СіІусо У 17, 2000., сс. 323-329), і традиційних аналізів зв'язування (Нееїеу, Епдосг Кез 28, 2002 сб. 217-229). В одному з варіантів здійснення винаходу рівень зв'язування антигензв'язуючої молекули з неспорідненим білком становить менш ніж приблизно 10 95 від рівня зв'язування антигензв'язуючої молекули з антигеном, при вимірюванні, наприклад, за допомогою З5РЕ. В деяких варіантах здійснення винаходу молекула, яка зв'язується з антигеном, характеризується величиною константи дисоціації (Ко), що становить х їмкМ, х 100нМ, х 1ОнНМ, хх їНМ, х 01 НМ,

О,О1нМ або «х 0,001нНМ (наприклад, наприклад, 108М або менше, наприклад, від 109М до 1073М, наприклад, від 109М до 1079М).

Поняття "афінність" або "афінність зв'язування" відноситься до сумарної сили всіх нековалентних взаємодій між індивідуальним сайтом зв'язування молекули (наприклад, антитіла) і її партнера із зв'язування (наприклад, антигену). Якщо не вказано інше, то в контексті даного опису поняття "афінність зв'язування" відноситься до афінності зв'язування, властивої компонентами пари, що зв'язується (наприклад, антитіла і антигену), яка відображає взаємодію за типом 1:1. Афінність молекули Х до її партнера У можна, як правило, характеризувати за допомогою константи дисоціації (Ко), що являє собою відношення констант швидкості реакції дисоціації і асоціації (Ког і Коп відповідно). Таким чином, еквівалентні афінності можуть відповідати різним константам швидкості, якщо співвідношення констант швидкості залишається таким же. Афінність можна оцінювати загальноприйнятими методами, відомими в даній галузі включаючи представлені в даному описі методи. Конкретним методом вимірювання афінності є метод поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК).

Антитіло "з дозрілою афінністю" відноситься до антитіла з одним або декількома змінами в одному або декількох гіперварібельних ділянках (НМЕК) порівняно з батьківським антитілом, яке не несе вказані зміни, вказані зміни призводять до покращення афінності антитіла до антигена.

В контексті даного опису поняття "антиген клітини-мішені" відноситься до антигенної детермінанти, присутньої на поверхні клітини-мішені, наприклад, клітині в пухлині, такої як ракова клітина або клітина строми пухлини. В деяких варіантах здійснення винаходу антиген

Зо клітини-мішені являє собою антиген на поверхні пухлинної клітини. В одному з варіантів здійснення винаходу антиген клітини-мішені вибирають з групи, що включає фібробласт- активуючий білок (ГАР), карциноембріональний антиген (СЕА), асоційований з меланомою хондроїтинсульфат-протеоглікан (МОС5Р), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК),

СОр19, 6020 ї СО33. Зокрема, антиген клітини-мішені являє собою фібробласт-активуючий білок (ЕАР).

Поняття "фібробласт-активуючий білок (БАР)», відомий також як пролілендопептідаза ЕАР або сепраза (КФ 3.4.21), якщо не вказано інше, відноситься до будь-якої нативної форми ЕАР з будь-якого застосовуваної як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус (яванська макака- крабоїд) і гризуни (наприклад, миші та щури). Поняття відноситься до повнорорзмірного непроцесованого ЕАР, а також до будь-якої форми ЕАР, одержаної в результаті процесингу в клітині. Під поняття підпадають також варіанти ЕАР, які зустрічаються в природних умовах, наприклад, сплайсингові варіанти або алельні варіанти. В одному з варіантів здійснення винаходу антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, має здатність специфічно зв'язуватись з БАР людини, мишей і/або мавп ціномолгусє. Амінокислотна послідовність людського ЕАР представлена в ОпіРгої (млуим.ипіргоїогу), код доступу Мо 2012884 (версія 149,

ЗЕО ІЮО МО:84) або в МСВІ (м/мли.псобі.піт.піпй.дом/) КеїзЗед МР 004451.2. Позаклітинний домен (ЕСО) людського ЕАР простягається від амінокислотного положення 26 до 760. Амінокислотна і нуклеотидна послідовності міченого Ні5 людського ЕАР-ЕСО представлені в зЕО ІЮО МО:85 і 86 відповідно. Амінокислотна послідовність мишачого РАР представлена в ОпіРгої, код доступу Мо

РУО7321 (версія 126, 5ЕО ІЮ МО:87) або МСВІ Кеїзед МР. 032012.1. Позаклітинний домен (ЕС) мишачого ЕАР простягається від амінокислотного положення 26 до 761. В 5ЕО ІЮО МО:88 і 89 представлені амінокислотна і нуклеотидна послідовності міченого Ніє мишачого БАР-ЕСО відповідно. В 5ЕО ІЮ МО:90 і 91 представлені амінокислотна і нуклеотидная послідовності відповідно міченого ЕАР-ЕСО мавп ціномолгусє. Переважно анти-РАР-зв'язуючого молекула, запропонована у винаході, зв'язується з позаклітинним доменом ЕАР.

Поняття "карциноембріональний антиген (СЕА)», відомий також як споріднений з молекулою клітинної адгезії 5 карциноембріональний антиген (СЕАСАМ5), якщо не вказано інше, відносяться до будь-якої нативної форми СЕА з будь-якого застосовуваної як джерела 60 хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського СЕА представлена в ОпіРгої, код доступу Мо РОЄ731 (версія 151, 5ЕО

ІЮ МО:92). Поняття "асоційований з меланомою хондроїтинсульфат-протеоглікан (МО5Р), відомий також як хонроїтинсульфат-протеоглікан 4 (СРО), якщо не вказано інше, відносяться до будь-якої нативної форми МО5Р з будь-якого застосовуваної як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського

МСО5Р представлена в ОпіРгої, код доступу Мо ОбИМКІ1 (версія 103, 5ЕО ІЮ МО:93). Поняття "рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК)» відомий також як протоонкоген с-ЕгОВ-1 або рецепторна тирозинпротеїнкіназа егоВ-1, відноситься, якщо не вказано інше, до будь-якої нативної форми ЕСЕК з будь-якого застосовуваної як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського ЕСЕК представлена в ОпіРгої, код доступу Мо РОО533 (версія 211, 5ЕО ІЮ МО:94). Поняття "СО19" відноситься до антигену СО19 лімфоцитів, відомому також як поверхневий антиген 84 В- лімфоцитів або антиген Т-клітинної поверхні І еи-12, і відноситься, якщо не вказано інше, до будь-якої нативної форми СО19 з будь-якого застосовуваної як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського

СО019 представлена в ОпіРгої, код доступу Мо РІ1Т5391 (версія 160, 5ЕО ІЮ МО:95). Поняття "СО020" відноситься до антигену В-лімфоцитів СО20, відомому також як трансмембранний чотирьохдоменний представник 1 підродини А (М54А1), поверхневий антиген В1 В-лімфоцитів або антиген поверхні лейкоцитів Геци-16, і відноситься, якщо не вказано інше, до будь-якої нативної форми СО20 з будь-якої застосовуваної як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського СО2О0 представлена в ОпіРгої, код доступу Мо Р11836 (версія 149, 5ЕО ІЮ МО:96). Поняття "СО33" відноситься до поверхневого антигену мієлоїдних клітин СОЗ33, відомого також як БІС ЕСЗ або одрб7, і відноситься, якщо не вказано інше, до будь-якої нативної форми СОЗ33 з будь-якої

Зо застосовуваної як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури). Амінокислотна послідовність людського СОЗЗ3 представлена в ОпіРгої, код доступу Мо. Р20138 (версія 157, ЗЕО ІЮ МО:97).

Поняття "варіабельна ділянка" або "варіабельний домен" відноситься до домену важкого або легкого ланцюга антитіла, який бере участь у зв'язуванні антигензв'язуючої молекули з антигеном. Варіабельні домени важкого ланцюга і легкого ланцюга (МН і Мі відповідно) нативного антитіла, як правило, мають схожі структури, при цьому кожний домен містить чотири консервативні каркасні ділянки (ЕК) і три гіперваріабельні ділянки (НУК) (див., наприклад, Кіпайї та ін., Кибу Іттипоїоду, 6-е вид., вид-во М/Н Егеетап апа Со., 2007, с. 91). Одного УН- або МІ - домену може бути достатньо для забезпечення специфічності зв'язування антигену.

Поняття "гіперваріабельна ділянка" або "НМА" в контексті даного опису відноситься до кожної з ділянок варіабельного домену антитіла, послідовності яких є гіперваріабельні, і/або які утворюють структури у вигляді петель ("гіперваріабельні петлі"). Як правило, нативні чотирьохланцюгові антитіла містять шість НМЕ; три в МН (НІ, Н2, НЗ)ітри вм (11,12, 3).

НМЕ, як правило, містять амінокислотні залишки з гіперваріабельних петель і/ бо з "ділянок, які визначають компліментарність" (СОМ), останні відрізняються найбільш вираженою варіабельністю послідовності і/або беруть участь в розпізнаванні антигенів. Наведені як приклад гіперваріабельні петлі включають амінокислотні залишки 26-32 (11), 50-52 (12), 91-96 (3), 26-32 (НІ), 53-55 (Н2), і 96-101 (НЗ) (Споїйіа і І е5К, У. Мої. Віої. 196, 1987, сс. 901-917).

БО Наведені як приклад СОМ (СОБК-11, СОВ-І2, СОВ-І 3, СОВ-НІ, СОВ-Н2 і СОК-НЗ) включають амінокислотні залишки 24-34 (11), 50-56 (12), 89-97 (13), 31-358 (НІ), 50-65 (Н2г) і 95-102 (НЗ) (Кабаї ЕА та ін., зедиепсез ої Ргоївіп5 ої Іттипоїодісаї! Іпіегев5і, 5-е вид., вид-во Рибіїс Неайп

Зегмісе, Маїййопаї! Іпзійшев ої Неайй, Веїпезаа, МО, 1991). Гіперваріабельні ділянки (НМК) часто позначають як "ділянки, що визначають компліментарність" (СОК), і ці поняття в контексті даного опису використовують як взаємозамінні, і вони відносяться до ланок варіабельної ділянки, які утворюють антигензв'язуючі ділянки. Ця конкретна ділянка описана в КарБбаї та ін.,

И.5. Оері. ої Неайй апа Нитап 5егмісе5, "Зедоепсез ої Ргоївїн5 ої Іттипоіодісаї! Іпієгеві", 1983 і в Споїйіа та ін., У. Мої. Віої. 196, 1987, сс. 901-917, причому ці визначення відносяться до амінокислотних залишків, які перекриваються, або піднаборам амінокислотних залишків при їх бо порівнянні один з одним. Проте в контексті даного опису мається на увазі можливість застосування будь-якого визначення СОК антитіла або його варіантів. Відповідні амінокислотні залишки, з яких складаються СОК, як вони визначені в кожному з процитованих вище посилань, представлені в порівнянні нижче в таблиці А. Точні номера залишків, які утворюють конкретний

СОК, повинні варіюватися залежно від послідовності та розміру СОК. Спеціалісти в цій галузі на основі даних про амінокислотну послідовність варіабельної ділянки антитіла легко можуть визначати, які залишки входять в конкретний СОК.

Таблиця А

Визначення СОВ!' 11111111 Кебот/// | // Хоїта./// | - Ам 1 Нумерація всіх залишків, які входять в СОК, в таблиці А дана згідно з номенклатури, запропонованої Кеботом із співавторами (див. нижче). 2 Позначення "АВМ" з великою літерою "р", використане в таблиці А, відноситься до СОК, як вони визначені програмою для моделювання антитіл "АБМ" компанії Охіога МоІесшаг сСгоир.

Кебот із співавторами запропонували також систему нумерації (номенклатуру) послідовностей варіабельних ділянок, яку можна застосовувати для будь-якого антитіла.

Звичайний спеціаліст в даній галузі може однозначно застосовувати цю систему "нумерації за

Кебот" до будь-якої послідовності варіабельної ділянки, не маючи жодних експериментальних даних, крім відомостей про саму послідовність. В контексті даного опису поняття "нумерація за

Кебот" відноситься до системи нумерації, описаної в Кабраї та ін., "Зедоепсе ої Ргоїєїп5 ої

Іпптипо!подіса! Іпіегезі", вид-во О.5. Юері. ої Неайй апа Нитап Зегмісе5, 1983. Якщо не вказано інше, то посилання на нумерацію положень конкретних амінокислотних залишків у варіабельній ділянці антитіла дані згідно з системи нумерації за Кебот.

За винятком СОКІ в УН, СОК, як правило, містять амінокислотні залишки, які утворюють гіперваріабельні петлі. СОК містять також "залишки, що визначають специфічність" або "5ОК", що являють собою залишки, які контактують з антигеном. ОК, які містяться в ділянках СОВ, позначають як вкорочені -«СОК або а-СОК. Наведені як приклад а-СОВ (а-СОВ-11, а-СОВ-Ї 2, а-

СОВ-І3, а-СОВ-НІ, а-СОВ-Н2 ї а-СОВ-НЗ) містять амінокислотні залишки 31-34 (І 1), 50-55 (І 2), 89-96 (І 3), 31-358 (НІ), 50-58 (Н2) і 95-102 (НЗ) (див. АІтадго і Егапззоп, Егопі. Віозсі. 13, 2008, сс. 1619-1633). Якщо не вказано інше, залишки НМЕК та інші залишки в варіабельний домен (наприклад, залишки ЕК) в цьому описі нумерують згідно КарБбаї та ін., вище. "Каркасні ділянки" або "ЕК" являють собою ділянки варіабельних доменів, відмінні від залишків гіперваріабельних ділянок (НУК). ЕК варіабельного домену, як правило, представлені чотирма ЕК-доменами: ЕК, ЕК2, ЕКЗ ії ЕК4. Таким чином, послідовності НМК і ЕК, як правило, розташовані в МН (або МІ) в наступному порядку: ЕК1-НІ1 (І 1) -ЕВ2-Н2 (12) -ЕВЗ3-НЗ (І 3) -ЕВ4.

Поняття "химерне" антитіло відноситься до антитіла, в якому частина важкого і/або легкого ланцюга походить з конкретного джерела або конкретних видів, а інша частина важкого і/або легкого ланцюга відбувається з іншого джерела або інших видів.

Поняття "клас" антитіла відноситься до типу константного домену або константної ділянки, який/яка входить в важкий ланцюг. Існує п'ять основних класів антитіл: ІдА, дО, ІДЕ, дос і дм, а деякі з них можна додатково поділяти на підкласи (ізотипи), наприклад, Ідси, ІДС», Ідсз, ІДС,

ІдА: і ІдА». Константні домени важких ланцюгів, які відповідають різним класам імуноглобулінів, позначають як а, б, є, у і н відповідно.

Поняття "гуманізоване" антитіло відноситься до химерного антитіла, яке містить амінокислотні залишки з нелюдських НМЕК і амінокислотні залишки з людських ЕК. В деяких варіантах здійснення винаходу гуманізоване антитіло може містити практично всі з принаймні одного і, як правило, двох варіабельних доменів, в яких всі або практично всі НМЕ. (наприклад,

СОК) відповідають ділянкам нелюдського антитіла, а всі або практично всі ЕК відповідають ділянкам людського антитіла. Гуманізоване антитіло необов'язково може містити принаймні частину константної ділянки антитіла, що походить з людського антитіла. Поняття "гуманізована форма" антитіла, наприклад, нелюдського антитіла, відноситься до антитіла, яке піддавали гуманізації. Інші форми "гуманізованих антитіл", підпадають під обсяг даного винаходу, являють собою антитіла, в яких константна ділянка додатково модифікована або змінена порівняно з вихідним антитілом для створення властивостей, які потрібні згідно з винаходу, перш за все по відношенню до зв'язування С14 і/або зв'язування з Ес-рецептора (ГСК). "Людське антитіло" являє собою антитіло, яке має амінокислотну послідовність, яка відповідає послідовності антитіла, що продукується людиною або людської клітину, або одержану з джерела, відмінного від людини, з використанням спектра людських антитіл або інших послідовностей, які кодують людське антитіло. Із вказаного визначення людського антитіла спеціально виключено гуманізуване антитіло, що містить нелюдські антигензв'язуючі залишки.

В контексті даного опису поняття "Гс-домен" або "Ро-ділянка" відноситься до С-кінцевої ділянки важкого ланцюга антитіла, яка містить принаймні частину константної ділянки. Поняття відноситься до нативної послідовності Ес-ділянок і варіантів Ес-ділянок. Ес-ділянка дос містить

СН2г-домен ІдсС і СНЗ-домен Ідс. "СН2-домен" Ес-ділянки людського Ідс, як правило, простягається від амінокислотного залишку, що знаходиться приблизно в положенні 231, до амінокислотного залишку, що знаходиться приблизно в положенні 340. В одному з варіантів здійснення винаходу до СН2-домену приєднаний вуглеводний ланцюг. В контексті даного опису

СН2г-домен може мати нативную послідовність СН2-домену або послідовність варіанта СН2- домену. "СНЗ-домен" містить сегмент С-кінцевих залишків до СН2-домену в Ес-ділянці (тобто від амінокислотного залишку, що знаходиться приблизно в положенні 341, до амінокислотного залишку, що знаходиться приблизно в положенні 447 Ід). В контексті даного опису СНЗ-домен може мати нативную послідовність СНЗ-домену або послідовність варіанта СНЗ-домену (наприклад, СНЗ-домен з інтродукованої "опуклістю" ("виступ") в одному його ланцюзі та з відповідною інтродукованою "порожниною" ("западина") в іншому його ланцюзі; див. 05 Мо 5821333, спеціально включений в даний опис як посилання). Вказані варіанти СНЗ-доменів можна застосовувати для посилення гетеродімерізації двох неідентичних важких ланцюгів антитіла, згідно з описаного в даному описі методу. В одному з варіантів здійснення винаходу

Ес-ділянка важкого ланцюга людського дб простягається від Суб226 або від Рго230 до карбоксильного кінця важкого ланцюга. Проте С-кінцевий лізин (Гуз447) ЕРсо-ділянки може або бути присутнім, або бути відсутнім. Якщо спеціально не вказано інше, то нумерація амінокислотних залишків в Ес-ділянці або константній ділянці відповідає системі ЕО-нумерації, яку називають також ЕО-індексом, описаної в КарБбаї та ін., зхедоепсез ої Ргоїеіп5 ої Іттипо|одісаї

Іпієтеві, 5-е вид., вид-во Рибіїс Неанй 5егмісе, Маїйіопаї! Іпзійшез ої Неайй, Ве пезаа, МО, 1991.

Технологія "Кпоб-іпію-поїЇе" описана, наприклад, в ОБ Мо 5731168; О5 Мо 7695936; в Ніддмау та ін., Ргої Епо 9, 1996, сс. 617-621 і Сапег, у Іттипої Мей 248, 2001., сс. 7-15. В цілому, метод включає інтродукцію опуклості ("виступ") на поверхні розділення першого поліпептиду і відповідної порожнини ("западина") в поверхні розділення другого поліпептиду, в результаті опуклість може поміщатись в порожнину, посилюючи тим самим утворення гетеродимера і перешкоджаючи утворенню гомодимеру. Опуклості конструюють шляхом заміни амінокислот з невеликими бічними ланцюгами на поверхні розділення першого поліпептиду на амінокислоти з більшими бічними ланцюгами (наприклад, на тирозин або триптофан). Компенсуючі порожнини ідентичного або схожого з виступами розміру конструюють в поверхні розділення другого поліпептиду шляхом заміни амінокислот з великими бічними ланцюгами на амінокислоти з меншими бічними ланцюгами (наприклад, аланін або треонін). Опуклість і порожнину можна створювати, змінюючи нуклеїнову кислоту, яка кодує поліпептиди, наприклад, за допомогою сайтспецифічного мутагенезу або з використанням пептидного синтезу. В конкретному варіанті здійснення винаходу модифікація, яка веде до утворення "виступу", включає амінокислотну заміну Т366МУ в одній з двох субодиниць Ес-домену, і модифікація, яка веде до утворення "западини", включає амінокислотні заміни 73665, І З3684А і 407 в іншій одній з двох субодиниць

Ес-домену. В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу субодиниця Ес-домену, яка містить модифікацію, що призводить до утворення "виступу", додатково містить амінокислотну заміну 5354С, а субодиниця Ес-домену, яка містить модифікацію, що призводить до утворення "западини", додатково містить амінокислотну заміну У349С. Інтродукція цих двох залишків цистеїну призводить до утворення дисульфідного містка між двома субодиницями Ес-домену, додатково стабілізує димер (Сапег, У Іттипої Мейоз 248, 2001., сс. 7-15).

Мається на увазі, що "ділянка, еквівалентна Ес-ділянці імуноглобуліну" включає алельні варіанти Ес-ділянки імуноглобуліну, що зустрічаються в природних умовах, а також варіанти, які 60 мають зміни, що призводять до замін, додаванням або делецій, які не знижують істотно здатність імуноглобуліну опосередковувати ефекторні функції (такі як антитіло-обумовлена клітинозалежна цитотоксичність). Наприклад, одну або декілька амінокислот можна вилучати шляхом делеції з М-кінця або С-кінця Ес-ділянки імуноглобуліну без істотного зниження біологічної функції. Вказані варіанти можна вибирати згідно з загальних правил, відомих в даній ділянці, так, щоб чинити мінімальний вплив на активність (див., наприклад Вом/іе .). О. та ін., зсієпсе 247, 1990, сс. 1306-1310).

Поняття "ефекторні функції" відноситься до видів біологічної активності, властивих Ес- ділянці антитіла, які варіюються залежно від ізотипу антитіла. Прикладами ефекторних функцій антитіла є: здатність зв'язуватись з С14 і комплементзалежна цитотоксичність (СОС), здатність зв'язуватись з Ес-рецептором, антитіло-обумовлена клітинозалежна цитотоксичність (АОС), антитіло-обумовлений клітинозалежний фагоцитоз (АОСР), секреція цитокінів, опосередковане імунним комплексом поглинання антигену антигенпрезентуючими клітинами, знижувальна регуляція рецепторів клітинної поверхні (наприклад, В-клітинного рецептора) і активація В- клітин.

Залежні від зв'язування Ес-рецептора ефекторні функції можуть опосередковуватись взаємодією Ес-ділянки антитіла з Ес-рецепторами (БСК), що являють собою спеціалізовані рецептори клітинної поверхні гематопоетичних клітин. Ес-рецептори належать до суперсімейства імуноглобулінів і, як встановлено, опосередковують як видалення "вкритих" антитілом патогенів шляхом фагоцитозу імунних комплексів, так і лізис еритроцитів і різних інших клітинних мішеней (наприклад, пухлинних клітин), "вкритих" відповідним антитілом за допомогою антитіло-обумовленої клітинозалежної цитотоксичності (АОСС) (див., наприклад,

Мап де У/іпке! Ус і Апдегхоп СІ, У. ГеиКос. Віої. 49, 1991, сб. 511-524). ЕсК класифікують на основі їх специфічності по відношенню до ізотипів імуноглобулінів: Ес-рецептори для Антитіл

ІдСс1-тип позначають як ЕсукК. Зв'язування з Ес-рецепторами описано, наприклад, у Камеїсй .).М. і

Кіпеї 9У.Р., Аппи. Кем. Іттипої. 9, 1991, сс. 457-492; Сареї! Р.). та ін., Іттипотеїйовз 4, 1994, сс. 25-34; де Наах М. та ін., 9. Габ. Сіїй. Меа. 126, 1995, сс. 330-341; і Сеззпег У.Е. та ін., Апп.

Нетагїйо!. 76, 1998, сс. 231-248.

Перехресне зшивання рецепторів для Ес-ділянки антитіл ІдСі-типу (ЕсуйВ) запускає широке розмаїття ефекторних функцій, включаючи фагоцитоз, антитіло-обумовлену клітинозалежну

Зо цитотоксичності і вивільнення медіаторів запалення, а такоже кліренс імунного комплексу і регуляцію виробництва антитіл. У людини охарактеризовано три наступні класи ЕсуВ: - ЕсукКІ (СО64) зв'язується з мономірним Ід: з високою афінністю і експресується на макрофагах, моноцитах, нейтрофілах та еозинофілах. Модіфікація в Ес-ділянці с принаймні одного з амінокислотних залишків Е233-(с3236, Р238, 0265, М297, АЗ27 і РЗ29 (нумерація згідно з

Еи-індексом Кебота) знижує зв'язування з ЕсуВІ. Залишки в їдСбе в положеннях 233-236, замінені на залишки, присутні в ІдсСИ і 4054, знижують зв'язування з ЕсувВіІ в 103 разів і елімінують відповідь людських моноцитів на сенсибілізовані антитілом еритроцити (Аптоиг КІ. та ін., Єшк. у. Іттипо). 29, 1999, сс. 2613-2624). - Есукі! (СО032) зв'язується з ЇдС, що входить в комплекс, з афінністю від середньої до низької і характеризується широким спектром експресії. Цей рецептор можна поділяти на два підтипи, ЕСсуКІІА і ЕСуКІІВ. ЕсукІА виявлений на багатьох клітинах, що беруть участь в цитолізі (наприклад, макрофаги, макроцити, нейтрофіли) і, ймовірно, може активувати процес цитолізу.

ЕсуМІІВ, ймовірно, відіграє роль в процесах інгібування і виявлений на В-клітинах, макрофагах і огрядних клітинах і еозинофілах. На В-клітинах його функцією, ймовірно, є придушення додаткового виробництва імуноглобулінів і перемикання ізотипу, наприклад, на ІДЕ-клас. На макрофагах дія ЕсСукКіІІВ полягає в інгібуванні фагоцитозу, опосередкованого ЕсукІА. На еозинофілах і огрядних клітинах В-форма може сприяти придушенню активації цих клітин через

ІДЕ-зв'язування з його окремим рецептором. Знижене зв'язування ЕсукІА виявлено, наприклад, в антитіл, які містять Ес-ділянку (ДО з мутаціями принаймні одного з амінокислотних залишків

Ег233-с236, Р238, 0265, М297, АЗ27, РЗ29, 0270, 0295, АЗ27, К292 і Ка14 (нумерація згідно з

Еи-індексом Кебота). - ЕсукП (С016) зв'язується з Да з афінностю від середньої до низької та існує у вигляді двох типів. ЕСУКША виявлений на МК-клітинах, макрофагах, еозинофілах і деяких моноцитах і на Т-клітинах та опосередковує АОСОС. Для ЕсукІВ характерний високий рівень експресії на нейтрофілах. Знижене зв'язування з ЕсуКкПА виявлено, наприклад, в антитіл, які містять Ес- ділянку їдСї з мутацією принаймні одного з амінокислотних залишків Е233-с236, Р238, ре265,

М297, АЗ27, РЗ29, 0270, 0295, АЗ27, 5239, Е269, Е293, У296, М303, АЗ27, К338 і 0376 (нумерація згідно з ЕО-індексом Кебота).

Картування сайтів зв'язування на людському ЇД51 для Ес-рецепторів, вказані вище сайти бо мутації і методи вимірювання зв'язування з ЕсукКІ і ЕСсуКІА описані в Зпівїа5 К.Г. та ін., 9. Віої.

Спет. 276, 2001., сс. 6591-6604.

Поняття "ХДОСС" або "антитіло-обумовлена клітинозалежна цитотоксичність" відноситься до функції, опосередкованої зв'язуванням з Ес-рецептором і відносіться до лізису клітин-мішеней антитілом, зазначеним в даному описі, в присутності ефекторних клітин. Здатність антитіла індукувати початкові стадії що опосередковують АЮСС, вивчають шляхом вимірювання їх зв'язування з експресуючими Есу-рецептори клітинами, такими як клітини, що рекомбінантно експресують ЕсукКІ і/або ЕсукІА, або МК-Клітини (експресують в основному ЕсукПША). Зокрема, вимірюють зв'язування з Есук на МК-клітинах. "Активуючий Ес-рецептор" являє собою Ес-рецептор, який після взаємодії з Ес-ділянкою антитіла здійснює процес передачі сигналів, які стимулюють здійснення клітиною, що несе рецептор, ефекторних функцій. Активуюючі Ес-рецептори включають ЕсукКПШа (СО16ба), ЕсукіІ (СО64), ЕсукКПа (2032) і ЕсаКкІ (СО89). Конкретний активуючий Ес-рецептор являє собою людський ЕсукПа (див. ОпіРгої, код доступу Мо РО8637, версія 141). "Суперсімейство рецепторів фактора некрозу пухлини" або "суперсімейство ТМЕ- рецепторів" на даний час складається з 27 рецепторів. Воно являє собою групу цитокінових рецепторів, що характеризується здатністю зв'язувати фактори некрозу пухлини (ТМЕ) через позаклітинний домен, багатий на цистеїн (СКО). Вказані псевдо повтори відрізняються наявністю всередині ланцюгових дисульфідних зв'язків, утворених високо консервативними залишками цистеїну в ланцюгах рецепторів. За винятком фактора росту нервів (МОБ) всі ТМЕ є гомологами архетипу ТМЕ-альфа. В іншій активній формі більшість ТМЕ-рецепторів утворюють тримерні комплекси в плазматичній мембрані. Таким чином, більшість ТМЕ-рецепторів містять трансмембранні домени (ТМО). Деякі з цих рецепторів містять також внутрішньоклітинні домени смерті (00), які здійснюють рекрутмент взаємодіючих з каспазою білків після зв'язування з лігандом, ініціюючи зовнішній шлях активації каспази. Інші рецептори суперсімейства ТМЕ, в яких відсутні домени смерті, зв'язують асоційовані з ТМЕ-рецептором чинники та активують внутрішньоклітинні фактори передачі сигналів, які можуть призводити до проліферації і диференціювання. Ці рецептори можуть ініціювати також апоптоз, але вони здійснюють це через опосередковані механізми. На додаток до регуляції апоптозу деякі рецептори суперсімейства ТМЕ беруть участь в регуляції функцій імунних клітин, таких як гомеостаз і

Зо активація В-клітин, активація природних клітин-кілерів і костімуляція Т-клітин. Деякі інші регулюють спеціфічні по відношенню до типу клітин відповіді, такі як розвиток фолікул волосся і розвиток остеокластів. Представники суперсімейства ТМЕ-рецепторів включають: рецептор фактора некрозу пухлини 1 (1А) (ТМЕКЗЕТА, СО120а), рецептор фактора некрозу пухлини 2 (18) (ТМЕКЗЕ1В, СО12060), рецептор лімфотоксин бета (І ТВЕ, СО18), ОХ40 (ТМЕКБЕ4, СО134),

СОра40 (Вроо), Раз-рецептор (Аро-1, СО95, ЕА5), рецептор-пастку З (ТЕб, Мб68, ТМЕКЗЕ6В), С027 (5152, Трб55), СО30 (Кі-1, ТМЕВ5Е8), 4-188 (00137, ТМЕВ5Е9), ОВА (ТВА, Аро-2, С0261,

ТМЕВЗЕТОА), ОА5 (ТВА К2, СО0262, ТМЕКЗЕ108), рецептор-пастку 1 (ТКА КЗ3, СО263,

ТМЕКЗЕ10С), рецептор-пастку 2 (ТКАЇІЇК4, 0264, ТМЕКЗЕ100), КАМК (20265, ТМЕНЗЕ11А), остеопротегерін (ОСІР, ТК, ТМЕЕЗЕ118), ТУУЕАК-рецептор (Еп14, СО266, ТМЕНЗЕ12А), ТАСІ (Сбр2гб7, ТМЕВ5Е138), ВАРЕ-рецептор (С0268, ТМЕКЗЕ13С), медіатор проникнення вірусу герпесу (НМЕМ, ТК2, 20270, ТМЕКЗЕ14), рецептор фактора росту нервів (р/5МТК, СО271,

МОЕК), антиген В-клітинного дозрівання (20269, ТМЕКЗЕ17), індукований глюкокортикоїдом споріднений ТМЕК (СІ, АІЇТК, СО357, ТМЕВБЕ18), ТОМ (ТМЕВБЕ19), ОАб (С0358,

ТМЕВБЕ21), ОВЗ (Аро-3, ТВАМР, М/5-1, ТМЕВ5Е25) і рецептор ектодісплазіна А2 (ХЕБАБК,

ЕОПА2В).

Деякі представники сімейства рецепторів фактора некрозу пухлини (ТМЕК) функціонують після початкової Т-клітинної активації, підтримуючи відповіді Т-клітин. Поняття "представник сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів" або "сімейство костімуляторного ТМЕ-рецептора" відноситься до підгрупи представників сімейства ТМЕ-рецепторів, які мають здатність костимулювати проліферацію і виробництво цитокінів Т-клітинами. Поняття відноситься до будь-якого нативного представника сімейства ТМЕ-рецепторів з будь-якої застосовуваної як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди), примати крім людини (наприклад, мавпи ціномолгус) і гризуни (наприклад, миші та щури), якщо не вказано інше. В конкретних варіантах здійснення винаходу представник сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів вибирають з групи, що складається з ОХ40 (СО134), 4-188 (Сб0137), б027, НУЕМ (00270), СО30 ї СІТА, які всі можуть надавати костімуляторні дії на Т-

Клітини. Більш конкретно представник сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів вибирають з групи, що складається з ОХ40 і А-188.

Додаткову інформацію, зокрема, про послідовності представників сімейства ТМЕ-рецепторів, бо можна почерпнути з публічно доступних баз даних, таких як Шпіргої (м/мли.ипіргої. ого).

Наприклад, людські костімуляторні ТМЕ-рецептори мають наступні амінокіслотні послідовності: людський ОХ40 (ОпіРгої, код доступу Мо РА3489, БЕО ІЮ МО:98), людський 4-188 (ОпіРгої, код доступу Мо 207011, 5ЕО ІЮ МО:99), людський СО27 (ОпіРгої, код доступу Мо Р26842, 5ЕО 10

МО:100), людський НМЕМ (піРгої, код доступу Ме 092956, 5ЕО ІЮО МО:101), людський СОЗО (ОпіРгої, код доступу Мо Р28908, 5ЕО І МО:102) і людський СІТК (ОпіРгої, код доступу Мо 09У505, 5ЕО ІЮ МО:103).

В контексті даного опису поняття "ОХ40" відноситься до будь-якого нативного ОХ40 з будь- якого застосовуваного як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) і гризуни (наприклад, миші та щури), якщо не вказано інше. Під поняттям розуміють "повнорозмірний", непроцесований ОХ40, а також будь-яку форму ОХ40, одержану в результаті процесінгу в клітині. Під поняття підпадають також варіанти ОХ40, які зустрічаються в природних умовах, наприклад, сплайсингові варіанти або алельні варіанти. Амінокіслотна послідовність наведеного як приклад людського ОХ40 представлена в ЗЕО ІЮ МО:98 (піргої

Р4і3489, версія 112), а амінокіслотна послідовність наведеного як приклад мишачого ОХ40 представлена в 5ЕО ІЮ МО:104 (Опіргої РА7741, версія 101).

Поняття "антитіло анти-ОХ40", "анти-ОХ40", "антитіло до ОХ40" і "антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40" відноситься до антитіла, що має здатність зв'язуватись з ОХ40 з афінністю, достатньою для застосування антитіла як діагностичного і/або терапевтичного агента, мішенню якого є ОХ40. В одному з варіантів здійснення винаходу рівень зв'язування антитіла до ОХ40 з неспорідненим білком, що не являє собою ОХ40, становить менше ніж приблизно 10 95 від рівня зв'язування антитіла до ОХ40 при вимірюванні, например, за допомогою радіоіїмуноаналізу (РІА) або проточної цитометрії (БАС5). У деяких варіантах здійснення винаходу антітіло, яке зв'язується з ОХ40, характеризується величиною константи дисоціації (Ко), що становить «1мкМ, х 100ОнНМ, х ТОнНМ, х 1ТнНМ, х 0, 1нНМ, х 0,01нНМ або «х 0,001нНМ (наприклад, 102М або менше, наприклад, від 109М до 107ЗМ, наприклад, від 109М до 1079М).

В контексті даного опису поняття "4-188" відноситься до будь-якого нативного 4-188В з будь- якої застосовуваної як джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) і гризуни (наприклад, миші та щури), якщо не вказано інше. Під поняттям розуміють "повнорозмірний", непроцесований 4-188, а також будь-яку форму 4-188, одержану в

Зо результаті процесингу в клітині. Під поняття підпадають також варіанти 4-188, які зустрічаються в природних умовах, наприклад, сплайсингові варіанти або алельні варіанти. Амінокислотна послідовність наведеного як приклад людського 4-1ВВ представлена в ЗЕО ІЮ МО:99 (Опіргої

РАЗ3489, код доступу Ме 207011), амінокислотна послідовність наведеного як приклад мишачого 4-188 представлена в 5ЕБО І МО:105 (Опіргої, код доступу Ме Р20334), а амінокислотна послідовність наведеного як приклад 4-188 мавп ціномолгус (з Масаса тшиіаца) представлена в

ЗЕО ІЮ МО:106 (Опіргої, код доступу Мо ЕбУУ5Об).

Поняття "антитіло анти-4-188", "анти-4-188", "антитіло до 4-188" і "антитіло, яке специфічно зв'язується з 4-188" відноситься до антитіла, яке має здатність зв'язуватись з 4-188 з афінністю, достатньою для застосування антитіла як діагностичного та/або терапевтичного агента, мішенню якого є 4-188. В одному з варіантів здійснення винаходу рівень зв'язування антитіла до 4-148Щ8 з неспорідненим білком, що не являє собою 4-188В, становить менш ніж приблизно 1095 від рівня зв'язування антитіла до 4-18В8 при вимірюванні, наприклад, за допомогою радіоіїмуноаналізу (РІА) або проточної цитометрії (БГАС5). В деяких варіантах здійснення винаходу антитіло, яке зв'язується з 4-188, характеризується величиною константи дисоціації (Ко), що становить х 1мкМ, х 100нМ, х 1ОНМ, х ІНМ, х 0. 1нНМ, х 0,01нМ або х 0,001нМ (наприклад, 105М або менше, наприклад, від 102М до 10-73М, наприклад, від 109М до 1079М).

Поняття "пептидний лінкер" відноситься до пептиду, який містить одну або декілька амінокислот, як правило, приблизно 2-20 амінокислот. Пептидні лінкери відомі в даній галузі та вказані в даному описі. Прийнятними неіммуногеннимі лінкерних пептидами є, наприклад, 5О пептидні лінкери (Сі25)п, (5С4)п або Сд(5С4)п, в яких "п", як правило, означає число від 1 до 10, як правило, від 1 до 4, зокрема 2, тобто пептиди, вибрані з групи, що складається з ССС (5ЕО

І МмОл107);) сосов5саспо!се (5БО 10 МОол08) Басай (5ЕО 10 МО:109) і саасосБасаабБасос (5БО ІО МО:110), але також включають послідовності ОБРОЗБВ5БЗБИО5 (ЗЕО І МО: 111), (245) З (5ЕО І МО: 112), (245) 4 (5ЕО І МО 113), СБОаБОБаЗ (5ЕО Ір

МО:114у, аБаБамМмОає (5ЕБО ІЮ МО-15), со,БаБавБа (5ЕО ІЮ МО 16), спаБавБа (5ЕО Ір

МО:117), Час5а (5ЕО 10 МО 118), СОВЗОаМОава (5ЕО ІО МО:119), ССМОаБава (5ЕО ІО МО:120) і самава (5ЕО Ю МО:121). Найбільший інтерес представляють пептидні лінкери (245) (5ЕО І

МО:107), (245) 2 або сСаСсОЯБОСОО (ЗЕО І МО:108) і а5РОБЗБЗБЗБИБ (ЗЕО І МО-111).

Поняття "амінокислота" в контексті даного опису позначає групу карбоксі-а-амінокислот, які бо зустрічаються в природних умовах, таких як аланін (трибуквений код: аіа, однобуквений код: А),

аргінін (аку, Р), аспарагін (азп, М), аспарагінова кислота (азр, 0), цистеїн (суз, С), глутамін (діп,

О), глутамінова кислота (дім, Е), гліцин (діу, Сх), гістидин (пів, Н), ізолейцин (іє, І), лейцин (Ієи, І), лізин (Іуз5, К), метіонін (теї, М), фенілаланін (рнеє, Е), пролін (рго, Р), серин (зег, 5), треонін (ІНг,

Т), триптофан (ігр, МУ), тирозин (уг, У) і валін (маї, М).

Поняття "злитий" або "з'єднаний" має на увазі, що компоненти (наприклад, важкий ланцюг антитіла і Рар-фрагмент) зчеплені пептидними зв'язками або безпосередньо, або через один або декілька пептидних лінкерів. "Відсоток (95) ідентичності амінокислотної послідовності" по відношенню до поліпептидної (білкової) референс-послідовності визначають як відсоток амінокислотних залишків в послідовності-кандидата, які ідентичні амінокислотним залишкам в поліпептидній референс- послідовності, після вирівнювання послідовностей та інтродукції за необхідності проломів для досягнення максимального відсотка ідентичності послідовностей, і при цьому будь-які консервативні заміни не враховуються при оцінці ідентичності послідовностей. Порівняльний аналіз для визначення відсотка ідентичності амінокислотних послідовностей можна здійснювати різними шляхами, які знаходяться в компетенції спеціаліста в даній галузі, наприклад, з використанням публічно доступних комп'ютерних програм, таких як програма ВІ А5Т, ВІ А5Т-2,

АСОМ 5АМ/І або Медаїдп (ОМА5ТАВ). Спеціалісти в цій галузі можуть визначати відповідні параметри для вирівнювання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині порівнюваних послідовностей. Проте для цілей даного винаходу величину 95 ідентичності амінокислотних послідовностей одержують з використанням призначеної для порівняння послідовностей комп'ютерної програми АГІСМ-2.

Призначена для порівняння послідовностей комп'ютерна програма АГІСМ-2 розроблена фірмою

Сепепіесі, Іпс., і вихідний код поміщений на зберігання разом з документацією для користувача в 0.5. Соругідпі ОПісе, Умазпіпдіоп О0.С., 20559, де він зареєстрований під реєстраційним номером О.5. Соругідні Кедівігайоп, Ме ТХО510087. Програма АГ ІСМ-2 являє собою публічно доступну програму фірми Сепепіесії, Іпс., Південний Сан-Франциско, шт. Каліфорнія, або її можна компілювати з вихідного коду. Програму АГІОМ-2 можна компілювати для застосування в операційній системі ОМІХ, включаючи цифрову версію ОМІХ М4.00. В програмі АСГІСМ-2 всі параметри для порівняння послідовностей є заданими і не повинні змінюватись. В ситуаціях, коли АГІСМ-2 застосовують для порівняння амінокислотних послідовностей, 95 ідентичності амінокислотних послідовностей даної амінокислотної послідовності А по відношенню до або порівняно з даною амінокислотною послідовністю Б (яку іншими словами можна позначати як дана амінокислотна послідовність А, яка має або відрізняється певним 95 ідентичності амінокислотної послідовності по відношенню до або порівняно з даною амінокислотною послідовністю Б), розраховують наступним чином: 100 х частка Х/У, де Х позначає кількість амінокислотних залишків, оцінених програмою порівняльного аналізу послідовностей А ІСМ-2 як ідентичні збіги при порівняльному аналізі послідовностей А та Б за допомогою вказаної програми, і де У позначає загальну кількість амінокислотних залишків в Б.

Мабуть очевидно, що, коли довжина амінокислотної послідовності А не дорівнює довжині амінокислотної послідовності Б, тоб9о ідентичності амінокислотної послідовності А по відношенню до амінокислотної послідовності Б не мав би дорівнювати 95 ідентичності амінокислотної послідовності Б по відношенню до амінокислотної послідовності А. Якщо спеціально не вказано інше, то в контексті даного опису всі величини 95 ідентичності амінокислотних послідовностей одержують згідно з процедурою, описаною в останньому з попередніх параграфів, за допомогою комп'ютерної програми АГІСМ-2.

Деякими варіантами здійснення винаходу є "варіанти амінокислотних послідовностей" антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд ТМЕ, представлених в даному описі.

Наприклад, може виявитися бажаним підвищувати афінність зв'язування і/або інші біологічні властивості антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд МЕ. Варіанти амінокислотних послідовностей антигензв'язуючих молекул, які містять тримерний ліганд ТМЕ, можна одержувати шляхом інтродукції відповідних модифікацій в нуклеотидну послідовність, що кодує молекули, або шляхом пептидного синтезу. Вказані модифікації включають, наприклад, делеції і/або інсерції, або заміни залишків в амінокислотних послідовностях антитіла. Для одержання кінцевої конструкції можна використовувати будь-яку комбінацію делецій, інсерцій та замін, за умови, що кінцева конструкція має необхідні характеристики, наприклад, здатність зв'язуватись з антигеном. Сайти для заміщуючого мутагенезу, що представляють інтерес, включають НМ і каркасні ділянки (ЕК). Консервативні заміни представлені в таблиці Б під заголовком "переважні заміни" і додатково описані нижче з посиланням на класи (1) - (6) бічних бо ланцюгів амінокислот. Амінокислотні заміни можна інтродукувати в молекулу, що представляє

Зо інтерес, і продукти піддавати скринінгу по відношеннюдо необхідної активності, наприклад, збереження/підвищення здатності до зв'язування антигену, зниженою імуногенності або покращеної АОСС або СОС.

Таблиця Б

Ше() 71111111 (бешМа;МесАюв; Рпеснорлейцин.///// їв цец(Ю 71111111 |норлейциноМе; Ма; МесАвіРйє.їдЗ ес

Амінокислоти можна групувати на основі спільних властивостей бічних ланцюгів наступним чином: (1) гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, Маї, І єи, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: Сувз, Зег, ТНг, Азп, Сп; (3) кислотні: Авр, Спи; (4) основні: Нів, І ув, Агу; (5) залишки, які впливають на орієнтацію ланцюга: Спу, Рго; (6) ароматичні: Тр, Гуг, РНе.

Під неконсервативними замінами розуміють заміну представника одного із вказаних класів на представника з іншого класу.

Поняття "варіанти амінокислотної послідовності" включає одержані в результаті заміни варіанти, в яких мають місце амінокіслотні заміни одного або декількох залишків в гіперваріабельній ділянці батьківської антигензв'язуючої молекули (наприклад, гуманізованого або людського антитіла). Як правило, утворений (ї) варіант (ї), обраний (ї) для подальшого вивчення, повинен (ні) мати модифікації (наприклад, покращення) певних біологічних властивостей (наприклад, підвищена афінність, знижена імуногенність) по відношенню до батьківської антигензв'язуючої молекули і/або повинен (ні) практично зберігати певні біологічні властивості батьківської антигензв'язуючої молекули. Прикладом одержаного в результаті заміни варіанта є антітіло з дозрілою афінністю, яке можна легко одержувати, наприклад, за допомогою методів дозрівання афінності на основі фагового дисплея, що вказані в даному опісі.

В цілому, метод полягає в наступному: один або декілька залишків НУК піддають мутації і варіант антигензв'язуючих молекул експонують на фаги та піддають скринінгу по відношенню до конкретної біологічної активності (наприклад, афінності зв'язування). В деяких варіантах здійснення винаходу заміни, інсерції або делеції можуть зачіпати один або декілька НУК, якщо

Зо вказані зміни не знижують істотно здатність антигензв'язуючої молекули зв'язуватись з антигеном. Наприклад, в НМК можуть бути зроблені консервативні зміни (наприклад, консервативні заміни, вказані в даному описі), що не знижують істотно афінність зв'язування.

Цінним методом ідентифікації залишків або ділянок антитіла, що можна піддавати мутагенезу, є так званий "аланін-скануючий мутагенез", описаний в Сиппіпоапат В.С. ії УуеїЇ5 9.А., Зсіепсе 244, 1989, сс. 1081-1085. При здійсненні цього методу залишок або групу залишків-мішеней (наприклад, заряджені залишки, такі як Аго, Ав5р, Нів, Гуз і Сім) ідентифікують і замінюють на нейтральну або негативно заряджену амінокислоту (наприклад, аланін або поліаланін) для вирішення питання про те, чи буде це впливати на взаємодію антитіла з антигеном. Додаткові заміни можна інтродукувати в ті положення амінокислот, для яких продемонстрована функціональна чутливість до початкових замін. В альтернативному або додатковому варіанті вивчають кристалічну структуру комплексу антиген-антигензв'язуюча молекула для ідентифікації точок контакту між антитілом і антигеном. Вказані контактуючі залишки та сусідні залишки можна розглядати як мішені або не враховувати при розгляді як кандидатів для заміни.

Варіанти можна піддавати скринінгу для вирішення питання про те, чи мають вони необхідні властивості.

Амінокіслотні інсерції включають аміно- і/або карбоксикінцеві злиття, які варіюють за довжиною від одного залишку до поліпептидів, які містять сто або більше залишків, а також інсерції одного або декількох амінокислотних залишків всередину послідовності. Прикладами результату здійснення кінцевих інсерцій є біспецифічні та антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, з кінцевим метіонільним залишком. Інші інсерційні варіанти молекули включають злиття М- або С-кінців з поліпептидом, який подовжує час напіввиведення в сироватці біспецифічніх антигензв'язуючих молекул.

В деяких варіантах здійснення винаходу біспецифічні та антигензв'язуючі молекули, представлені в даному описі, змінюють з метою підвищення або зниження ступеня глікозилювання антитіла. Варіанти глікозилювання молекул легсо можна одержувати шляхом такої зміни амінокислотної послідовності, що дозволяє створювати або видаляти один або декілька сайтів глікозилювання. Якщо антигензв'язуюча молекула, що включає тримерний ліганд ТМЕ, містить Ес-ділянку, то можна змінювати приєднаний до неї вуглевод. Нативні антитіла, які продукуються клітинами ссавців, як правило, містять розгалужений біантенний олігосахарид, який, як правило, приєднаний за допомогою М-зв'язку до А5зп297 СН2-домену Ес- ділянки (див., наприклад, УУтідні А. і Могтізоп 5, ТІВТЕСН 15, 1997, сс. 26-32). Олігосахарид може включати різні вуглеводи, наприклад, манозу, М-ацетилглюкозамін (СІСМАс), галактозу та сіалову кислоту, а також фукоза, приєднану до СіІсСМАс в "стеблі" біантенної олігосахаридної структури. В деяких варіантах здійснення винаходу модифікації олігосахариду в антигензв'язуючій молекулі, що містіть тримерний ліганд сімейства ТМЕ, зазапропонованої у винаході, можна здійснювати для створення варіантів з певними покращеними властивостями.

Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуючі молекули, що містять тримерний ліганд сімейства

ТМЕ, які мають вуглеводну структуру, в якій знижений вміст фукози, приєднаної (прямо або опосередковано) до Ес-ділянки. Вказані фукозильовані варіанти можуть мати покращену АОСО- функцію (див., наприклад, О5 Мо 2003/0157108 (Ргевіа І.) або 5 Мо 2004/0093621 (фірма Куотма

Накко Кодуо Со., ЦЯ). Іншим об'єктом винаходу є варіанти біспецифічніх антигензв'язуючих молекул, зазапропонованих у винаході, що містять олігосахариди, які розтинаються надвоє, наприклад, в яких біантенний олігосахарид, приєднаний до Ес-ділянки, що розтинається надвоє, за допомогою сіІсСМАс. Вказані варіанти можуть мати знижений рівень фукозилювання і/або покращену АЮОСС-функцію, див., наприклад, УХО 2003/011878 (еап-Магїгеї та ін.); 05 Мо 6602684 (ртапа та ін.) ії 05 2005/0123546 (тпапа та ін.). Запропоновані також варіанти принаймні з одним залишком галактози в олігосахариді, приєднаному до Ес-ділянки. Такі варіанти антитіл можуть мати підвищену СОС-Функцію, і вони описані, наприклад, УМО 1997/30087 (Рагїеї! та ін.);

МО 1998/58964 (Ваши 5.) і МО 1999/22764 (Ра)! 5.).

В деяких варіантах здійснення винаходу може виявитися бажаним створювати "сконструйовані за допомогою цистеїну варіанти" біспецифічних антигензв'язуючих молекул, зазапропонованих у винаході, наприклад, "тіоМАт", в яких один або декілька залишків в молекулі замінені на залишки цистеїну. В конкретних варіантах здійснення винаходу замінені залишки знаходяться в доступних сайтах молекули. Шляхом заміни цих залишків на цистеїн реакційноздатні тіольні групи поміщаються в доступні сайти антитіла, їх можна використовувати для кон'югації антитіла з іншими фрагментами, такими як фрагменти, що являють собою лікарський засіб, або фрагменти, що являють собою лінкер, зв'язаний з лікарським засобом, із створенням іммунокон'югата, вказаного нижче в даному описі. В деяких варіантах здійснення винаходу будь-який(ї) один або декілька наступних залишків може(уть) бути замінений(ї) на цистеїн: М205 (нумерація за Кебот) легкого ланцюга; А118 (ЕО-нумерація) важкого ланцюга і 5400 (ЕБО-нумерація) Ес-ділянки важкого ланцюга. Сконструйовані за допомогою цистеїну антигензв'язуючі молекули можна одержувати згідно з методом, наприклад, описаним в 05

Мо7521541.

Поняття "полінуклеотид" відноситься до виділеної молекули нуклеїнової кислоти або конструкції, наприклад, матричної РНК (мРНК), РНК вірусного походження або плазмідної ДНК бо (пДНК). Полінуклеотид може містити звичайний фосфодіефірний зв'язок або нетрадиційний зв'язок (наприклад, амідний зв'язок, присутній в пептидних нуклеїнових кислотах (ПНК)).

Поняття "молекула нуклеїнової кислоти" відноситься до будь-якого одного або декількох сегментів нуклеїнової кислоти, наприклад, фрагменти ДНК або РНК, присутніх в полінуклеотиді.

Під "виділеною" молекулою нуклеїнової кислоти або полінуклеотидом мають на увазі молекула нуклеїнової кислоти, тобто ДНК або РНК, яка відокремлена від її нативного оточення.

Наприклад, рекомбінантний полінуклеотид, який кодує поліпептид, що входить в вектор, розглядається як виділений для цілей цього винаходу. Іншими прикладами виділеного полінуклеотиду є рекомбінантні полінуклеотиди, присутні в гетерологічних клітинах-хазяїнах, або очищені (частково або повністю) полінуклеотиди, що знаходяться в розчині. Виділений полінуклеотид включає молекулу полінуклеотиду, що входить в клітини, які в нормі містять молекулу полінуклеотиду, але молекула полінуклеотиду присутня поза хромосоми або має локалізацію в хромосомі, відмінну від її локалізації в хромосомі в природних умовах. Виділені молекули РНК включають одержані іп мімо або іп міго РНК-транскрипти, запропоновані в даному винаході, а також форми з позитивним і негативним ланцюгом і дволанцюгові форми. Виділені полінуклеотиди або нуклеїнові кислоти, запропоновані в даному винаході, включають також вказані молекули, одержані за допомогою синтезу. Крім того, полінуклеотид або нуклеїнова кислота може являти собою або може включати регуляторний елемент, такий як промотор, сайт зв'язування рибосом або термінатор транскрипції.

Під нуклеїновою кислотою або полінуклеотидом, що має/мають нуклеотидну послідовність, яка, наприклад, на 95 95 "Ішідентична" нуклеотидній референс-послідовності, зазапропонованої в даному винаході, мають на увазі, що нуклеотидна послідовність полінуклеотиду ідентична референс-послідовності за винятком того, що полінуклеотидна послідовність може включати аж до 5 точкових мутацій на кожні 100 нуклеотидів нуклеотидної референс-послідовності. Інакше кажучи, для одержання полінуклеотиду, що має нуклеотидну послідовність, яка ідентічна принаймні на 95 95 нуклеотидної референс-послідовності, аж до 5 9о нуклеотидів в референс- послідовності можна вилучати шляхом делеції або замінювати на інший нуклеотид, або аж до 590 нуклеотидів від загальної кількості нуклеотидів в референс-послідовності можна вбудовувати в референс-послідовність. Ці зміни референс-послідовності можуть мати місце в положеннях на 5'- або 3'-кінці нуклеотидної референс-послідовності або в іншому положенні між

Зо цими кінцевими положеннями, та їх вбудовують або індивідуально між залишками в референс- послідовності, або їх вбудовують в референс- послідовність у вигляді однієї або декількох суміжних груп. На практиці вирішення питання про те, чи ідентична конкретна полінуклеотидна послідовність принаймні на 80 95, 85 95, 90 9, 95 95, 96 95, 97 Уо, 98 95 або 99 95 нуклеотидної послідовності, зазапропонованої в даному винаході, можна вирішувати, як правило, з використанням відомих комп'ютерних програм, наприклад, вказаних вище для поліпептидов (наприклад, АГІСМ-2).

Поняття "касета експресії" відноситься до полінуклеотиду, одержаного за допомогою рекомбінації або синтезу, що містіть серії специфічніх нуклеотидних елементів, які забезпечують транскрипцію конкретної нуклеїнової кислоти в клітині-мішені. Рекомбінантну касету експресії можна вбудовувати в плазміду, хромосому, мітохондріальну ДНК, пластидну

ДНК, вірус або фрагмент нуклеїнової кислоти. Як правило, рекомбінантна касета експресії, що являє собою частинину експресійного вектора, включає серед інших послідовностей нуклеотидную послідовність, яка підлягає транскрипції, і промотор. В деяких варіантах здійснення винаходу касета експресії, зазапропонованої у винаході, містить полінуклеотидні послідовності, які кодують біспецифічні та антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, або їх фрагменти.

Поняття "вектор" або "експресійній вектор" є синонімом поняття "експресійна конструкція" і відноситься до молекули ДНК, яку застосовують для інтродукції і забезпечення експресії конкретного гена, з якою він функціонально пов'язаний в клітині-мішені. Поняття включає вектор, що являє собою структуру нуклеїнової кислоти, яка реплікується сама по собі, а також вектор, вбудований в геном клітини-хазяїна, в яку він інтродукований. Експресійний вектор, зазапропонований в даному винаході, містіть касету експресії. Експресійні вектори дозволяють здійснювати транскрипцію стабільної МРНК в великих кількостях. Коли експресійній вектор знаходиться всередині клітини-мішені, то молекула рибонуклеїнової кислоти або білок, який кодується геном, продукується в результаті клітинного механізму транскрипції і/або трансляції.

В одному з варіантів здійснення винаходу експресійний вектор, запропонованій у винаході, містіть касету експресії, яка включає полінуклеотидні послідовності, що кодують біспецифічні та антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, або їх фрагменти.

В контексті даного опису поняття "клітина-хазяїн", "лінія клітин-хазяїнів" і "культура клітин- 60 хазяїнів" використовуються як взаємозамінні, і вони відносяться до клітин, в які інтродукована екзогенна нуклеїнова кислота, включаючи потомство вказаних клітин. До клітин-хазяїнів відносяться "трансформанти" і "трансформовані клітини", які включають первинні трансформовані клітини, а також потомство, виведене з них, незалежно від кількості пересівань.

Потомство може не бути строго ідентичним батьківській клітині за складом нуклеїнових кислот, а може нести мутації. Під дане поняття підпадає мутантне потомство, яке має таку ж функцію або біологічну активність, що і відібрана шляхом скрінінгу або селекції вихідна трансформована клітина. Клітина-хазяїн являє собою будь-який тип клітинної системи, яку можна застосовувати для створення біспецифічніх антигензв'язуючих молекул, зазапропонованих в даному винаході.

Клітини-хазяїни включають культивовані клітини, наприклад, культивовані клітини ссавців, такі як (але не обмежуючись тільки ними) СНО-клітини, ВНК-клітини, М5О-клітини, ЗР2/О-клітини, клітини мієломи лінії ХО, клітини мишачої мієломи лінії РЗ х 63, РЕК-клітини, РЕК.Сб-клітини або клітини гібридоми, клітини дріжджів, клітини комах і клітини рослин, але також клітини, що знаходяться в трансгенній тваринній, трансгенній рослині або в культивованій рослинній або тваринній тканині.

Поняття "ефективна кількість" агента відноситься до кількості, необхідної для забезпечення фізіологічної зміни в клітині або тканині, в яку його вводять.

Поняття "терапевтично ефективна кількість" агента, наприклад, фармацевтичної композиції, відноситься до кількості, ефективної при застосуванні в дозах і протягом періодів часу, необхідних для досягнення необхідного терапевтичного або профілактичного результату.

Терапевтично ефективна кількість агента, наприклад, елімінує, знижує, уповільнює, мінімізує або попереджає небажані явища захворювання. "Індивідуум" або "суб'єкт" є ссавцем. Ссавці являють собою (але не обмежуючись тільки ними) одомашнені тварини (наприклад, корови, вівці, кішки, собаки та коні), примати (наприклад, люди та примати крім людини, такі як мавпи), кролики та гризуни (наприклад, миші та щури). Переважно індивідуум або суб'єкт являє собою людину.

Поняття "фармацевтична композиція" відноситься до препарату, який знаходиться в такій формі, що він забезпечує біологічну активність входить до його складу діючої речовини, яка повинна мати ефективність, і яка не містіть додаткові компоненти, що мають неприйнятну токсичність для індивідуума, якому слід вводити композицію.

Зо "Фармацевтично прийнятний носій" відноситься до інгредієнта в фармацевтичній композиції, відмінному від діючої речовини, що є нетоксичним для індивідуума. Фармацевтично прийнятні носії включаютьь (але не обмежуючись тільки ними) буфер, ексципієнт, стабілізатор або консервант.

Поняття "лист-вкладиш в упаковку" в контексті даного опису відноситься до інструкцій, які звичайно поміщають упаковки терапевтичних продуктів, що надходять у продаж, які містять інформацію про показання, застосування, дози, шляхи введення, комбіновану терапію, протипоказання і/або запобіжні заходи при застосуванні вказаних терапевтичних продуктів.

В контексті даного опису поняття "лікування" (і його граматичні варіанти, такі як "лікувати" або "процес лікування") відноситься до клінічного втручання з метою зміни природного перебігу хвороби у індивідуума, що підлягає лікуванню, і його можна здійснювати або для профілактики або в процесі розвитку клінічної патології. Необхідними діями лікування є (але не обмежуючись тільки ними) попередження виникнення або рецидиву хвороби, полегшення симптомів, зменшення будь-яких прямих або непрямих патологічних наслідків хвороби, попередження метастазів, зниження швидкості розвитку хвороби, полегшення або тимчасове ослаблення хворобливого стану і ремісію або покращення прогнозу. В деяких варіантах здійснення винаходу молекули, запропоновані у винаході, застосовують для затримки розвитку хвороби або уповільнення прогресування хвороби.

В контексті даного опису поняття "рак" відноситься до проліферативних захворювань, таких як лімфоми, лімфолейкози, рак легені, недрібноклітинний рак легені (М5СІ), альвеолярно- клітинний рак легені, рак кістки, рак підшлункової залози, рак шкіри, рак голови або шиї, шкірна або внутрішньоочна меланома, рак матки, рак яєчника, ректальний рак, рак анальної ділянки, рак шлунка, гастральний рак, рак ободової кишки, рак молочної залози, рак матки, карцинома фаллопієвих труб, карцинома ендометрія, карцинома шийки матки, карцинома піхви, карцинома вульви, хвороба Ходжкіна, рак стравоходу, рак тонкого кишечника, рак ендокринної системи, рак щитовидної залози, рак паращитовидної залози, рак надниркових залоз, саркома м'яких тканин, рак сечовипускального каналу, рак пеніса, рак передміхурової залози, рак сечового міхура, рак нирки або сечоводу, нирково-клітинна карцинома, карцинома ниркової балії, мезотеліома, печінково-клітинний рак, біліарний рак, неоплазми центральної нервової системи (ЦНС), пухлини хребта, гліома стовбура головного мозку, мультиформної гліобластоми 60 астроцитоми, шваноми, епендимоми, медулобластоми, менінгіоми, плоскоклітинні карциноми,

аденома гіпофіза і саркома Юінга, включаючи рефрактерні варіанти будь-якого з указаних вище видів раку та комбінації одного або декількох видів раку.

Біспецифічні антитіла, запропоновані у винаході

У винаході запропоновані нові біспецифічні і антигензв'язуючі молекули з найбільш переважними властивостями, такими як технологічність, стабільність, афінність зв'язування, біологічна активність, ефективність цілеспрямованої дії (таргетинг) і знижена токсичність.

Приклади біспецифічних антигензв'язуючих молекул

Одним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

В конкретному об'єкті винаходу ці біспецифічні і антигензв'язуючі молекули відрізняються здатністю агоністично зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів.

Зокрема, представника сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів вибирають з ОХ40 і 4-188.

Біспецифічні антигензв'язуючі молекули, що зв'язуються з ОХ40

Згідно з одним із об'єктів винаходу представник сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів являє собою ОХ40. Зокрема, у винаході запропоновані біспецифічні антигензв'язуючі молекули, в яких фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, зв'язується 3 поліпептидом, який має амінокислотну послідовність 5ЕО 1О МО-1.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, в якій вказаний фрагмент містить МН-домен, який містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:2 і БЕО ІЮ МОЗ, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

Коо) ЗЕО ІЮО МО:4 ії БЕО ІО МО:5, і (І) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:б6, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІЮО МО:8, 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО 10 МО 10, 5ЕО ІЮ МО:11 ї ЗЕО І

МО:12, і МІ -домен, який містить (М) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:13, 5ЕО 10 МО:14 і 5ЕО І МО:15, (М) СОВ-1І2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:16, 5ЕО І МО:17 і БЕО ІЮ МО 18, (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:19, 5ЕО ІЮ МО:20, 5ЕО ІЮ МО:21, 5ЕО ІЮ МО:С22, 5ЕО ІЮ МО:23 і БЕО ІЮ МО 24.

Зокрема, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, в якій вказаний фрагмент містить (а) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:4, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:б, ії Мі-домен, який містить СОВ-І1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:13, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:16, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО ІО МО:19, (б) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО2,

БО СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:4, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:7, ії Мі-домен, який містить СОВ-І1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:13, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:16, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО І МО:20, (в) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО2,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:4, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:8, ії Мі-домен, який містить СОВ-І1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:13, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:16, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО 1Ю МО:21, (г) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність БЕО 10 МО2, 60 СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:4, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:9, ії Мі-домен, який містить СОВ-І1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:13, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:16, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:22, (д) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МОЗ,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:5, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:10, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:14, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:17, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮО МО:23, (є) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО 3,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:5, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:11, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:14, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:17, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО:23, або (ж) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МОЗ,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:5, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:12, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:15, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:18, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:24.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, в якій вказаний фрагмент містить МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І

МО:2, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:4, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:7, ії Мі-домен, який містить СОВ-І1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:13, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:16, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:20.

Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга

МН, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраної з групи, що складається з

Коо) ЗЕО І МО С25, БЕО ІЮ МО:27, 5ЕО ІЮ МО:29, 5ЕО ІЮ МО:З31, 5ЕО І МО:33, 5ЕО І МО:35 і 5ЕО

ІО МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 9», 98 90, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО:26, 5ЕО ІЮ МО:28, 5ЕО І МО:30, 5ЕО І МО:32, 5ЕО ІЮ МО:34, 5ЕО

ІО МО:З36 ії БЕО ІЮ МО:З8.

Зокрема, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:25, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність БЕО 10

МО:26, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:28, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:29, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:З0, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:31, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:З2, (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:З4, (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:З36, або (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:З8.

Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого 60 ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:27, і варіабельну ділянку

Зб легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність ЖЕО 10 МО:28.

Біспецифічні антигензв'язуючі молекули, що зв'язуються з 4-188

Згідно з одним із об'єктів винаходу представник сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів являє собою 4-188В. Зокрема, у винаході запропоновані біспецифічні антигензв'язуючі молекули, в яких фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, зв'язується 3 поліпептидом, який має амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:39.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, в якій вказаний фрагмент містить МН-домен, який містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО 40 і БЕО ІЮ МО:41, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:42 і БЕО І МО 43, і (І) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:44, 5ЕО 10 МО:45, 5ЕО І МО:46, 5ЕО 1О МО:47 і 5ЕО ІО МО:48, і МІ -домен, який містить (М) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:49 і БЕО І МО:50, (М) СОВ-1І2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:51 і БЕО І МО:52, і (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:53, 5ЕО 10 МО:54, 5ЕО ІЮО МО:55, 5ЕО 10 МО:56 і 5ЕО І МО:57.

Зокрема, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, в якій вказаний фрагмент містить (а) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І

МО:40, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:42, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:44, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить

Ко) амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:49, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:51, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮО МО:53, (б) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕС І

МО:41, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:43, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:45, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:50, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:52, ї СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО:54, (в) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10

МО:40, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:42, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:46, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:49, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:51, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО:55, (г) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:40,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:42, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:47, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:49, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:51, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ХЕ ІО МО:56, або (д) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І

МО:40, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:42, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:48, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить

БО амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:49, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:51, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО І МО:57.

Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга

МН, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраної з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:58, 5ЕО ІЮ МО:60, 5ЕО 0 МО:62, 5ЕО І МО:64 і 5ЕО ІО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 90, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності, вибраної з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО:59, 5ЕО ІЮ МО:61, 5ЕО ІЮ МО:63, 5ЕО ІЮ МО:65 і 5ЕО І бо МО:67.

Зокрема, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 188, містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:58, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:59, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:60, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:61, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:62, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:63, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:64, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:65, або (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:67.

Біспецифічні і антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, додатково відрізняються тим, що містять принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені. Таким чином, біспецифічні і антигензв'язуючі молекули мають перевагу порівняно з канонічними антитілами, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, яка полягає в тому, що вони можуть вибірково індукувати відповідь костімуляторних Т-клітин на клітинах-мішенях, які, як правило, являються собою ракові клітини. В одному з об'єктів винаходу антиген клітини- мішені вибирають з групи, що складається з фібробласт-активуючого білка (БАР), асоційованого з меланомою хондроіїтинсульфат-протеоглікану (МС5Р), рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК), карциноембріонального антигена (СЕА), СО19, СО20 і СО33.

Біспецифічні і антигензв'язуючі молекули, в яких антиген клітини-мішені являє собою БАР

В конкретному об'єкті винаходу антиген клітини-мішені являє собою фібробласт-активуючий

Зо білок (ЕАР). ЕАР-зв'язуючі фрагменти описані в УУО 2012/02006, яка повністю включена в даний опис як посилання. ЕАР-зв'язуючі фрагменти, що представляють особливий інтерес, описані нижче.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН-домен, який містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:68 і 5ЕО ІЮ МО:69, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:70 і БЕО ІЮ МО-71, і (І) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:72 і БЕО ІЮ МО:73, і МІ -домен, який містить (М) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:74 і БЕО ІЮ МО:75, (М) СОВ-1І2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:76 і БЕО І МО:77, і (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:78 і БЕО ІЮ МО:79.

Зокрема, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить (а) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І

МО:68, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:70, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:72, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:74, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:76, і СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ХЕ ІО МО:78, або (б) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕС І

МО:69, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:71, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:73, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:75, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:77, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО ІО МО:79. бо В конкретному об'єкті винаходу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з

ЕАР, містить МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ

МО:69, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:71, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:73, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:75, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:77, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО ІО МО:79.

Зокрема, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:81, або (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:83.

Біспецифічні антигензв'язуючі молекули, що зв'язуються з ОХ40 і ЕАР

Наступним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій () фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 956 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО І

МО:25, 5ЕО ІЮ МО:27, 5ЕО ІЮ МО:29, 5ЕО ІО МО:З31, 5ЕО ІЮ МО:33, 5ЕО І МО:35 або 5ЕО ІЮ

МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 в, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО:26, 5ЕО ІЮ МО:28, 5ЕО І МО:30, 5ЕО І МО:32, 5ЕО ІЮ МО:34, 5ЕО

ІО МО:36 або 5ЕО ІО МО:38, і (І) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 956 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО І

МО:80 або 5ЕО ІО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО:81 або 5ЕО ІО МО:83.

Зо Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій (а) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:25, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:26, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ МО:81, (б) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:25, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:26, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:83, (в) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:28, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ МО:81, (г) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну

БО ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:28, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ МО:83, (д) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:29, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:30, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну 60 ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:81,

(є) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:29, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:30, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:83, (ж) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:31, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:32, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:81, (3) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:31, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:32, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО І МО:83, () фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:34, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:81, (кю) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:34, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну

Ко) ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО І МО:83, (лу фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:З5, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:З36, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:81, (м) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:З5, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:З36, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО І МО:83, (н) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС 10 МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:38, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕ ІЮ МО:81, або (о) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну

БО ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС 10 МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:38, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО І МО:83.

Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, містить амінокислотну послідовність 128, гмент, який м егкого ланцюга, що міс амінокисло ослідовність 5ЕО ІЮО МО:28, а фрагме ає здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність :80, і варі льну ділянку легкого ланцюга, 60 с амінокисло ослідовність ФЕО ІЮО МО:80, і варіабе егкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:81, або в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮО МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:28, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:83.

Біспецифічні антигензв'язуючі молекули, що зв'язуються з 4-188 і ЕАР

Наступним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій () фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 956 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО І

МО:58, 5ЕО ІЮ МО:60, 5ЕО І МО:62, 5ЕО ІО МО: 64 або 5ЕО ІЮО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 9, 96 95, 97 9», 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності «ЕО ІЮ МО:59, 5ЕО ІЮ

МО:61, 5ЕО ІО МО:63, 5ЕО ІО МО:65 илиг 5ЕО ІО МО:67, і (І) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 956 або 100 95 амінокислотній послідовності ФЕО І

МО:80 або 5ЕО ІО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка ідентична принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО:81 або 5ЕО ІО МО:83.

Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій (а) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС 10 МО:58, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:59, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:81,

Зо (б) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС 10 МО:58, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:59, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:83, (в) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188В, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:60, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:61, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:81, (г) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:60, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:61, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:83, (д) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:62, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:63, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:81, (є) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:62, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:63, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:83, бо бю) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись 34-18В, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:64, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:65, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:81, (3) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись 34-18В, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:64, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:65, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:83, () фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:67, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:81, або (юю фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:67, а фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:83.

Біспецифічні одновалентному антигензв'язуючі молекули (формат 1-1)

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічні і антигензв'язуючі молекули, що містять (а) один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Зо Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, де вказана молекула містить (а) перший Рар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) другий РГар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, де вказана молекула містить (а) перший РГар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, (б) другий РГар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Наступним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, де вказана молекула містить (а) перший РГар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, (6) другий Гар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, і (в) Рс-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:303, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО:182, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:229, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО:217, або (б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:231, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:186, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:229, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО:217, або 60 (в) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:233, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:190, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:229, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО:217, або (г) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:235, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО І МО:194, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:229, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО:217, або (д) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:237, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:198, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:229, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО:217, або (є) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:239, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:202, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:229, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕ І МО:217.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, де вказана молекула містить (а) перший РГар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, (б) другий РГар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Наступним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, де вказана молекула містить (а) перший РГар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, (6) другий Гар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить

Зо (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:295, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО 10 МО:261, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:229, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО:217, або (б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:297, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО 10 МО:265, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:229, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО:217, або (в) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:299, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:269, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:229, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО:217, або (г) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:301, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:273, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:229, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕ І МО:217.

Біспецифічні двовалентні антигензв'язуючі молекули (формат 2-2)

Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Згідно з одним із об'єктів винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула є двовалентною як по відношенню до представника сімейства костімуляторних ТМЕ -рецепторів, так і по відношенню до антигена клітини-мішені.

Згідно з одним із об'єктів винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, містить (а) два легких ланцюги і два важких ланцюги антитіла, що містить два Гар-фрагменти, які бо мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-

рецепторів, і Ес-домен, і (б) два додаткових РГаб-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, де кожний із вказаних двох додаткових ЕРар-фрагментів з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцями важких ланцюгів, вказаних у підпункті (а).

В конкретному об'єкті винаходу пептидний лінкер являє собою ((345)4.

В іншому об'єкті винаходу два додаткових Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, являють собою кросовер-Раб-фрагменти, в яких варіабельні домени МІ і МН замінені один на одного і кожний з МІ -СН-ланцюгів з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем важких ланцюгів, вказаних у підпункті (а).

Зокрема, винахід відноситься до біспецифічних антигензв'язуючих молекул, в яких два Еар- фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, являють собою два Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з ОХ40 або 4-188, і два додаткових Рар-фрагменти, що мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, являють собою кросовер-ЕРабр- фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з ОХ40, (б) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з ЕАР, і (в) Гс-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Конкретним варіантом здійснення винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО 216, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:182, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:217, або (б) два важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:219, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:186, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:217, або (в) два важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:221, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:190, і другий легкий

Ко) ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:217, або (г) два важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:223, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:194, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:217, або (д) два важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:225, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:198, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:217, або (є) два важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:227, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮО МО:202, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:217.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з 4-188, (б) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з ЕАР, і (в) Гс-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Конкретним варіантом здійснення винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО 287, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:261, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:217, або (б) два важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:289, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:265, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:217, або (в) два важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:291, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:269, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:217, або (г) два важкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:293, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:273, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:217.

Біспецифічні і антигензв'язуючі молекули, які є двовалентними по відношенню до зв'язування з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів і одновалентними по бо відношенню до зв'язування з антигеном клітини-мішені (формат 2-1)

Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Таким чином, запропонована біспецифічна антигензв'язуюча молекула, де Біспецифічна антигензв'язуюча молекула є двовалентною по відношенню до зв'язування з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів і одновалентною по відношенню до зв'язування з антигеном клітини-мішені.

В конкретному об'єкті винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула містить (а) два легких ланцюги і два важких ланцюги антитіла, що містить два Гар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ- рецепторів, і Ес-домен, і (б) МН- ї Мі-домени, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини- мішені, де МН-домен з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів і де

МІ-домен з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем другого важкого ланцюга.

В іншому конкретному об'єкті винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула містить (а) два легких ланцюги і два важких ланцюги антитіла, що містить два Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, і Ес-домен, і (б) МН- і Мі -домени, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, де МН-домен з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем важкого ланцюга Ес з "виступом" ії Мі -домен з'єднані через пептидний лінкер з С-кінцем важкого ланцюга Ес із "западиною".

В іншому конкретному об'єкті винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула містить (а) два легких ланцюги і два важких ланцюги антитіла, що містить два Гар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ- рецепторів, і Ес-домен, і (б) МН- і Мі-домени, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини- мішені, де МН-домен з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем важкого ланцюга Ес із "западиною" і МІ -домен з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем важкого ланцюга Ес з "виступом". Зокрема, у винаході запропоновані біспецифічні антигензв'язуючі молекули, в яких два ЕРар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, являють собою два Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з ОХ40 або 4-18В, і УН- і МІ -домени, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, мають здатність зв'язуватись з ЕАР.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два РГаб-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з ОХ40, (6) МН- і МІ- домени, які мають здатність специфічно зв'язуватися з ЕАР, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два легкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 186, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:306, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:307, або (б) два легкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:186, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:310, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:З311.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два

Еар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з 4-188, (6) УН- і МІ -домени, які мають здатність специфічно зв'язуватися з ЕАР, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два легкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МОС261, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:318, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:319, або (б) два легкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІО МО:265, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:322, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:323, або (в) два легкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:269, бо перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:326, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:327, або (г) два легкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:273, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:330, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:331, або (д) два легкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:261, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:334, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:335, або (є) два легкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:265, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:338, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:339, або (ж) два легкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:269, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:342, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:343, або (3) два легкі ланцюги, кожний з яких містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:273, перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:346, і другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:347.

Модифікації Ес-домену, що призводять до зниження зв'язування з Ес-рецептором і/або ефекторної функції

Біспецифічні і антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, містять також Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

В деяких об'єктах винаходу одну або декілька амінокислотних модифікацій можна інтродукувати в Ес-ділянку антитіла, представленого в даному описі, створюючи тим самим варіант Ес-ділянки. Варіант Ес-ділянки може містити послідовність людської Ес-ділянки (наприклад, Ес-ділянки людського Ідс1, Ідс2, ІдОеЗ або Ідс4), що містить амінокислотну модифікацію (наприклад, заміну) в одному або декількох амінокислотних положеннях.

Ес-домен надає біспецифічним антитілам, запропонованайм у винаході, переважні фармакокінетичні властивості, включаючи тривалий час напівжиття в сироватці, що забезпечує хороше накопичення в тканині-мішені і переважне співвідношення розподілу в тканині-крові.

Проте в той же час він може призводити до небажаної спрямованості біспецифічних антитіл,

Зо зазапропонованих у винаході, до клітин, які експресують Ес-рецептори, а не для найчастіше використовуваних клітин, які несуть антиген. Таким чином, згідно з конкретним варіантом здійснення винаходу Ес-домен біспецифічніх антитіл, зазапропонованих у винаході, має знижену афінність зв'язування з Ес-рецептором і/або зниженою ефекторною функцією порівняно з нативним Ес-доменом до, зокрема Ес-доменом ІдС1 або Ес-доменом Ідс4. Більш переважно Ес-домен являє собою Ес-домен Ідс1.

В одному з об'єктів винаходу Ес-домен (або біспецифічна антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, що містить вказаний Ес-домен) характеризується афінністю зв'язування, що становить менше ніж 50 95, переважно менше ніж 20 9565, ще переважніше менше ніж 10 95 і найбільш переважно менше ніж 5 95 від афінності зв'язування з Ес-рецептором нативного Ес-домену Ідс1 (або біспецифічної антигензв'язуючої молекули, запропонованої у винаході, що містить вказаний нативний Ес-домен Іда1) і/або ефекторну функцію, що становить менше ніж 50 95, переважно менше ніж 20 956, ще переважніше менше ніж 10 95 і найбільш переважно менше ніж 5 95 від ефекторної функції нативного Ес-домену ІдДа1 (або біспецифічної антигензв'язуючої молекули, запропонованої у винаході, що містить вказаний нативний Ес- домен ІдС21). В одному з об'єктів винаходу Ес-домен (або біспецифічна антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, що містить вказаний Ес-домен) практично не зв'язується з

Ес-рецептором і/або не індукує ефекторну функцію. В конкретному об'єкті винаходу Ес-рецептор являє собою Есу-рецептор. В одному з об'єктів винаходу Ес-рецептор являє собою людський

Ес-рецептор. В одному з об'єктів винаходу Ес-рецептор являє собою активуючий Ес-рецептор. У конкретному об'єкті винаходу Ес-рецептор являє собою активуючий людський Есу-рецептор, більш конкретно людський ЕсукШа, ЕсукіІ або ЕсукКІа, найбільш переважно людський ЕсукІПа.

В одному з об'єктів винаходу Ес-рецептор являє собою інгібуючий Ес-рецептор. У конкретному об'єкті винаходу Ес-рецептор являє собою інгібуючий людський Есу-рецептор, більш конкретно людський ЕСУуКІіІІВ. У конкретному об'єкті винаходу ефекторна функція являє собою одну або декілька функцій, вибраних з групи, что включає СОС, АОСС, АОСР і секрецію цитокінів. В одному з об'єктів винаходу ефекторна функція являє собою АОСС. В одному з об'єктів винаходу

Ес-домен характеризується практично такою ж афінністю зв'язування з неонатальним Ес- рецептором (БсКп), що і нативний Ес-домен ІдС1. Практично таке ж зв'язування з ЕсКп досягається, коли Ес-домен (або біспеціфічна антигензв'язуюча молекула, запропонована у бо винаході, що містить вказаний Ес-домен), характеризується афінністю зв'язування, що становить більш ніж приблизно 70 95, переважно більш ніж приблизно 80 95, більш переважно більш ніж приблизно 9095, від афінності зв'язування нативного Ес-домену І|дс1 (або біспецифічної антигензв'язуючої молекули, запропонованої у винаході, що містить нативний Ес домен Іде) з ЕсКп.

Згідно з конкретним об'єктом винаходу Ес-домен конструюють так, щоб він мав знижену афінність зв'язування з Ес-рецептором і/або знижену ефекторну функцію порівняно з Ес- доменом, що не піддається інженерії. В конкретному об'єкті винаходу Ес-домен біспецифічної антигензв'язуючої молекули, запропонованої у винаході, містіть одну або декілька амінокислотних мутацій, які знижують афінність зв'язування Ес-домену з Ес-рецептором і/або ефекторну функцію. Як правило, в кожній з двох субодиниць Ес-домену присутня(і) одна або декілька однакових амінокислотних мутацій. В одному з об'єктів винаходу амінокислотна мутація знижує афінність зв'язування Ес-домену з Ес-рецептором. В іншому об'єкті винаходу амінокислотна мутація знижує афінність зв'язування Ес-домену з Ес-рецептором принаймні вдвічі, принаймні в 5 разів або принаймні в 10 разів. В одному з об'єктів винаходу біспеціфічна антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, що містіть сконструйований Есо-домен, характеризується афінністю зв'язування, що становить менше ніж 20 95, зокрема, менше ніж 1095, ще більш переважно менше ніж 595 від афінності зв'язування з Ес -рецептором, характерною для біспецифічніх антитіл, запропонованих у винаході, які містять Ес-домен, що не піддається інженерії. В конкретному об'єкті винаходу Ес-рецептор являє собою Есу-рецептор. В інших об'єктах винаходу Ес-рецептор являє собою людський Ес-рецептор. В одному з об'єктів винаходу Ес-рецептор являє собою інгібуючий Ес-рецептор. У конкретному об'єкті винаходи Ес- рецептор являє собою інгібуючий людський Ес-рецептор, більш конкретно людський ЕсуКІІВ. В деяких об'єктах винаходу Ес-рецептор являє собою активуючий Ес-рецептор. В конкретному об'єкті винаходи Ес-рецептор являє собою активуючий людський Ес-рецептор, більш конкретно людський ЕсукІШа, ЕсукІ або ЕсукІПа, найбільш переважно людський ЕсукІПа. Переважно зменшується зв'язування з кожним з цих рецепторів. Згідно з деякими об'єктами винаходу знижується також афінність зв'язування з компонентом системи комплементу, зокрема, афінність зв'язування з С1д. Згідно з одним з об'єктів винаходу не знижується афінність зв'язування з неонатальним Ес-рецептором (РсКп). Практично таке ж зв'язування з ЕсКп, тобто

Зо збереження афінності зв'язування Ес-домену із зазначеним рецептором, досягається, коли Ес- домен (або біспеціфічна антигензв'язуюча молекула, запропонована у винаході, що містить вказаний Ес-домен) характеризується афінністью зв'язування з ЕсКп, що становить більш ніж приблизно 70 95 від афінності зв'язування з ЕсСКп форми Ес-домену, що не піддається інженерії (або біспецифічної антигензв'язуючої молекули, запропонованої у винаході, що містіть вказану форму Ес-домену, що не піддається інженерії). Ес-домен або біспецифічна антигензв'язуюча молекула, запропонований(а) у винаході, що містить вказаний Рсо-домен, може характеризуватись афінністю, що становить більш ніж приблизно 80 95 і навіть більш ніж приблизно 90 95 від вказаної вище афінності. В деяких варіантах здійснення винаходу Ес-домен біспецифічної антигензв'язуючої молекули, запропонованої у винаході, створюють так, щоб він мав знижену ефекторну функцію порівняно з Ес-доменом, що не піддається інженерії. Знижена ефекторна функція може являти собою (але не обмежуючись тільки ними) знижену(ї) одну або декілька з наступних функцій: знижена комплементзалежна цитотоксичність (СОС), знижена антитіло-обумовлена клітинозалежна цитотоксичність (АЮСС), знижений антитіло-обумовлений клітинозалежний фагоцитоз (АЮСР), знижена секреція цитокінів, знижене опосередковане імунним комплексом поглинання антигену антигенпрезентуючими клітинами, знижене зв'язування з МК-клітинами, знижене зв'язування з макрофагами, знижене зв'язування з моноцитами, знижене зв'язування з поліморфноядерними клітинами, знижена безпосередня передача сигналу, що індукує апоптоз, знижене дозрівання дендритних клітин або знижений Т- клітинну примірування.

Антитіла зі зниженою ефекторною функцією включають також Ес-домени із заміною одного або декількох залишків 238, 265, 269, 270, 297, 327 і 329 (05 Мо 637056). До вказаних мутантів

Ес відносяться мутанти Ес із замінами в двох або більшій кількості з амінокислотних положень 265, 269, 270, 297 і 327, включаючи так званий мутант Ес-домену "САМА" із заміною залишків 265 і 297 на аланін (05 Мо 7332581). Описані деякі варіанти антитіл з підвищеною або зниженою здатністю зв'язуватись з ЕСА (наприклад, в 05 Мо 6737056; УМО 2004/056312 і у 5ПпівїЇд5 В.І. та ін., У. Віої. Спет. 276, 2001., сс. 6591-6604).

В одному з об'єктів винаходу Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні Е233,

І 234, 1235, М297, РЗ31 і РЗ29. В деяких об'єктах Ес-домен містить амінокислотні заміни І 234А і

І 2З35А ("| АГ А"). В одному із вказаних варіантів здійснення винаходу Ес-домен являє собою Ес- 60 домен Іда1, зокрема Ес-домен людського ІДС1. В одному з об'єктів винаходу Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні РЗ329. В більш конкретному об'єкті винаходу амінокислотна заміна являє собою РЗ2ОА або РЗ29С, зокрема РЗ290. В одному з варіантів здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні РЗ29 і додатково амінокислотну заміну, вибрану з групи, що складається з Е2З3ЗР, І234А, 1235А, 1235Е, М297А, М2970О0 або

РЗЗ315. В більш конкретних варіантах здійснення винаходу Ес-домен містить амінокислотні мутації І 234А, І 235А і РЗ29а ("РЗ29О І АГА"). Комбінація амінокислотних замін "3295 І АГ А" практично повністю елімінує зв'язування з Есу-рецептором Ес-домену людського ІДС, і вона описана в опублікованій заявці на патент УМО 2012/130831 АТ. У вказаному документі описані методи одержання вказаних мутантних Ес-доменів і методи визначення їх властивості, таких як зв'язування з Ес-рецептором або ефекторні функції. Вказане антитіло являє собою ІдсС1 з мутаціями 1 234А і І 235А або мутаціями 1 234А, І 235А і РЗ32905 (згідно з ЄО-нумерацією Кебота, описаною в Караї та ін., ЗХедоепсев ої Ргоївїпв5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві, 5-е вид., вид-во Рибіїс

Неане Зегмісе, Маїйопаї! Іпвійшез ої Неай, Веїпезаа, МО, 1991).

В одному з об'єктів винаходу Ес-домен являє собою Ес-домен Ідс4. В більш конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен являє собою Ес-домен Ідас4, який містить амінокислотні заміни в положенні 5228 (нумерація за Кеботом), конкретно амінокислотну заміну 5228Р. В більш конкретному варіанті здійснення винаходу Ес-домен являє собою Ес-домен Ідс4, який містить амінокислотні заміни в положеннях І 235Е і 5228Р, і РЗ290. Вказана амінокислотна заміна знижує іп мімо обмін в Раб-плечі антитіл у вигляді 4034 (див. бибрепгацсі та ін., Огид

Меїабоїїзт апа різрозійоп 38, 2010, сс. 84-91).

Антитіла з подовженим часом напіввиведення і підвищеною здатністю до зв'язування з неонатальним Ес-рецептором (ЕсКп), відповідальним за перенесення материнських дос ембріону (Сиуег КІ. та ін., 9. Іттипої. 117, 1976, сс. 587-593 і Кіт УК та ін., у. Іттипої. 24, 1994, сс. 2429-2434), описані в 05 2005/0014934. Ці антитіла містять Ес-ділянку з однією або декількома замінами, які підвищують зв'язування Ес-ділянки з ЕсКп. Вказані варіанти Ес-ділянки включають варіанти із замінами одного або декількох наступних залишків ЕРс-ділянки: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434, наприклад, заміну залишку 434 в Ес-ділянці (5 Мо 7371826). Додаткові приклади, що стосуються інших варіантів Ес-ділянки, описані також у бипсап А.Р. і М/іпівг С., Майиге 322, 1988,

Зо сс. 738-740; в 5 Мо 5648260; 05 Мо 5624821 та МО 94/29351.

Зв'язування з Ес-рецепторами можна легко визначати, наприклад, за допомогою ЕГІ5А або поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК), використовуючи стандартний інструментарій, такий як пристрій ВІАсоге (фірма СЕ Неайсаге), і Ес-рецептори, наприклад, які можна одержувати за допомогою рекомбінантної експресії. В даному описі представлений прийнятний такий аналіз зв'язування. Альтернативно цьому, афінність зв'язування Ес-доменів або клітин з активуючими біспецифічними антигензв'язуючими молекулами, які містять Ес-домен для Ес- рецепторів, можна оцінювати, використовуючи клітинні лінії для яких відомо, що вони експресують конкретні Ес-рецептори, такі як людські МК- клітини, які експресують ЕсуПІ- рецептор. Ефекторну функцію Ес-домену або біспецифічних антитіл, зазапропонованих у винаході, які містять Ес-домен, можна оцінювати методами, відомими в даній галузі.

Прийнятний аналіз для оцінки АОСС представлений в даному описі. Інші приклади аналізів іп міго, призначених для оцінки АЮОСсС-активності представляють інтерес молекули, описані в 05

Мо 5500362; у НеїїЇ5ігот та ін., Ргос Майї! Асай сі ОА 83, 1986, сс. 7059-7063 і Неїїбігот та ін.,

Ргос Маї! Асай 5сі ОА 82, 1985, сс. 1499-1502; 05 Мо 5821337; у Вгиддетапп та ін., У Ехр Мей 166, 1987, сс. 1351-1361. Альтернативно цьому, можна застосовувати методи, засновані на нерадіоактивному аналізі (див., наприклад, АСТІ "м - нерадіоактивний аналіз цитотоксичності за допомогою проточної цитометрії (фірма СеїІесппоїІоду, Іпс. Маунтін-В'ю, шт. Каліфорнія), і

Суютох 969 - нерадіоактивні аналіз цитотоксичності (фірма Рготеда, Медісон, шт. Вісконсін)).

Прийнятними ефекторними клітинами для таких аналізів є мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) і природні клітини-кілери (МК). В альтернативному або додатковому варіанті

АрСб-активність молекули, що представляє інтерес, можна оцінювати іп мімо, наприклад, з використанням створених на тваринах моделей, описаних в Сіупе5 та ін., Ргос Май! Асай зЗсі

БА 95, 1998, со. 652-656.

В наступному розділі описані переважні аспекти біспецифічних антигензв'язуючих молекул, зазапропонованих у винаході, які містять модифікації Ес-домену, що знижують зв'язування Ес- рецептора і/або ефекторну функцію. Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в). Ес- 60 домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації, в якій Ес-домен містить одну або декілька амінокислотну(их) заміну(н), яка(ї) знижує (ють) афінність зв'язування антитіла з Ес-рецептором, зокрема, Есу-рецептором. Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені, ї (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації, в якій Ес-домен містить одну або декілька амінокислотну(их) заміну(н), яка(ї) знижує(ють) ефекторну функцію. В конкретному об'єкті винаходу ЕГс-домен являє собою

Ес-домен людського ІдСі-підкласу з амінокислотними мутаціями І234А, 1235А і РЗ2гОД (нумерація згідно з ЕЄО-індексом Кебота).

Модифікації Ес-домену, що сприяють гетеродимерізації

Біспецифічні та антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, містять різні антигензв'язуючі сайти, злиті з однією або іншою з двох субодиниць Ес-домену, при цьому дві субодиниці Ес-домену, як правило, містяться в двох неідентичних поліпептидних ланцюгах.

Рекомбінантна спільна експресія цих поліпептидів і подальша димеризація призводить до виникнення декількох можливих комбінацій двох поліпептидов. Для підвищення виходу і чистоти біспецифічніх антитіл, зазапропонованих у винаході, при їх одержанні методами рекомбінації доцільно інтродукувати в Ес-домен біспецифічних антигензв'язуючих молекул, зазапропонованих у винаході, модифікацію, яка сприяє асоціації необхідних поліпептидів.

Таким чином, конкретними об'єктами винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації, в якій Ес-домен містить модифікацію, яка сприяє асоціації першої та другої субодиниць Ес-домену. Сайт найбільш сильної білок-білкової взаємодії двох субодиниць Ес-домену людського ІдСї знаходиться в СНЗ- домені Ес-домену. Таким чином, В одному з об'єктів винаходу вказана модифікація знаходиться в СНЗ-домені Ес-домену.

В конкретному об'єкті винаходу вказана модифікація являє собою так звану модифікацію

Зо типу "Кпоб-іп-поїе" (типу "виступ-у западину"), яка включає модифікацію, що призводить до утворення "виступу" на одній з двох субодиниць Ес-домену і модифікацію, що призводить до утворення "западини" в іншій одній з двох субодиниць Ес-домену. Таким чином, винахід відноситься до біспецифічної антигензв'язуючої молекули, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ- рецепторів, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації в якому перша субодиниця Ес-домену містить "виступи", а друга субодиниця Ес-домену містить "западини" згідно з методом "Кпобвв іпіо по/ев".

В конкретному об'єкті винаходу перша субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни 53540 і ТЗ366МУ (БЄО-нумерація), а друга субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни

УЗ49С, 13665 і 407 (нумерація згідно з ЕЄО-індексом Кебота).

Технологія "Кпор-іпіо-поЇе" описана, наприклад, в ОБ Мо 5731168; 05 Мо 7695936; у Кіддул"ау та ін., Ргоої Епо 9, 1996, сс. 617-621 і Сапег, у Іттипої Мей 248, 2001., сс. 7-15. В цілому, метод включає інтродукцію опуклості ("виступ") на поверхні розділення першого поліпептиду і відповідної порожнини ("западина") в поверхні розділення другого поліпептиду, в результаті опуклість може міститись в порожнину, сприяючи тим самим утворенню гетеродимера і перешкоджаючи утворенню гомодимеру. Опуклості конструюють шляхом заміни амінокислот з невеликими бічними ланцюгами на поверхні розділення першого поліпептиду на амінокислоти з більшими бічними ланцюгами (наприклад, на тирозин або триптофан). Компенсуючі порожнини ідентичного або схожого з виступами розміру створюють в поверхні розділення другого поліпептиду шляхом заміни амінокислот з великими бічними ланцюгами на амінокислоти з менш великими бічними ланцюгами (наприклад, аланін або треонін).

Згідно з одним із об'єктів винаходу в СНЗ-домені першої субодиниці Ес-домену біспецифічних антигензв'язуючих молекул, зазапропонованих у винаході, амінокислотний залишок замінений амінокислотним залишком, який має більший об'єм бічного ланцюга, що призводить до утворення опуклості в СНЗ-домені першої субодиниці, яка може поміщатись в порожнину в СНЗ-домені другий субодиниці, і в СНЗ-домені другий субодиниці Ес-домену амінокислотний залишок замінений амінокислотним залишком, який має менший об'єм бічного ланцюга, що призводить до утворення порожнини в СНЗ-домені другий субодиниці, в яку може бо поміщатись опуклість в СНЗ-домені першої субодиниці. Опуклість і порожнину можна створювати шляхом зміни нуклеїнових кислот, як кодують поліпептиди, наприклад, за допомогою за допомогою сайтнаправленого мутагенезу або шляхом пептидного синтезу. В конкретному об'єкті винаходу в СНЗ-домені першої субодиниці Ес-домену залишок треоніну в положенні 366 замінений залишком триптофану (Т36бУМ), і в СНЗ-домені другий субодиниці Ес- домену залишок тирозину в положенні 407 замінений залишком валіну (У407М). В одному з об'єктів винаходу в другій субодиниці Ес-домену додатково залишок треоніну в положенні 366 замінений залишком серину (13665) і залишок лейцину в положенні 368 замінений залишком аланіну (І З68А).

В наступному об'єкті винаходу в першій субодиниці Ес-домену додатково залишок серину в положенні 354 замінений залишком цистеїну (5354) і в другій субодиниці Ес-домену додатково залишок тирозину в положенні 349 замінений залишком цистеїну (У349С). Інтродукція цих двох залишків цистеїну призводить до утворення дисульфідного містка між двома субодиницями Ес- домену, додатково стабілізує димер (Сапег, уд Іттипо! Меїйоде 248, 2001, сс. 7-15). В конкретному об'єкті винаходу перша субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни 53540 і ТЗ366МУ (ЕО-нумерація), а друга субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни 3490, т3665 і у407М (нумерація згідно з ЕО-індексом Кебота).

В альтернативному об'єкті винаходу модифікація, що сприяє асоціації першої і другої субодиниць Ес-домену, є модифікацією, яка опосередковує визначені електростатичними силами впливи, наприклад, описані в публікації РСТ УМО 2009/089004. В цілому, вказаний метод включає заміну одного або декількох амінокислотних залишків на поверхні розділення двох субодиниць Есо-домену на заряджені амінокислотні залишки, в результаті чого утворення гомодимеру стає електростатично невигідним, а гетеродімерізація стає електростатично вигідною.

С-кінець важкого ланцюга біспецифічного антитіла, представленого в даному описі, може являти собою повний С-кінець, який закінчується амінокислотними залишками РОК. С-кінець важкого ланцюга може являти собою вкорочений С-кінець, в якому один або два С-кінцевий|і) амінокіслотний (ї) залишок(ки) був видалений(ї). В одному з переважних об'єктів винаходу С- кінець важкого ланцюга являє собою вкорочений С-кінець, який закінчується РО. В одному з об'єктів всіх вказаних в даному описі об'єктів винаходу біспецифічне антитіло, яке містить важкий ланцюг, що включає С-кінцевий СНЗ-домен, вказаний в даному описі, містить С-кінцевий гліцин-лізиновий дипептид (05446 і К447, нумерація згідно з ЕО-індексом Кебота). В одному з варіантів здійснення всіх об'єктів винаходу, вказаних в даному описі, біспецифічне антитіло, що містить важкий ланцюг, який включає С-кінцевий СНЗ-домен, вказаний в даному описі, містіть

С-кінцевий залишок гліцину (5446, нумерація згідно з ЕЮО-індексом Кебота).

Модифікації в Раб-доменах

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) перший Раб-фрагмент, який має здатність зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) другий Раб-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації, де в одному з Раб-фрагментів або варіабельні домени МН і Мі, або константні домени СНІ і Сі обмінені. Біспецифічні антитіла одержують згідно з Стозвітар-технологією.

Мультиспецифічне антитіло із заміною/обміном доменів в одному зв'язуючому плечі (Стов5МаБУнН-МІ. або Сто55Марьсн-сїІ) детально описані в МО 2009/080252 і у Зспаєїтег МУ. та ін., Ргос. Май. Асай. сі. ОБА, 108, 2011, сс. 11187-11191. При їх застосуванні виражено знижується утворення побічних продуктів, пов'язане з помилковим спарюванням легкого ланцюга, що зв'язується з першим антигеном, з "неправильним" важким ланцюгом, що зв'язується з другим антигеном (порівняно з підходами, в яких не використаний вказаний обмін доменами).

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) перший Раб-фрагмент, який має здатність зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) другий Раб-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації де в одному з Рар-фрагментів константні домени СІ і СНІ замінені один на одного, в результаті чого СНІ-домен є частининою легкого ланцюга, а Сі -домен є частининою важкого ланцюга. Більш конкретно, в другому ЕРар- фрагменті, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, константні домени СІ ї СНІ замінені один на одного, в результаті чого СНІ-домен є частининою легкого ланцюга, а Сі -домен є частининою важкого ланцюга. бо Одним з об'єктів винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) 5О0 перший Раб-фрагмент, який має здатність зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) другий Раб-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, в якому константні домени Сі ї СНІ замінені один на одного, в результаті чого СНІ1-домен є частининою легкого ланцюга, а Сі -домен є частининою важкого ланцюга. Вказану молекулу називають одновалентною біспецифічною антигензв'язуючою молекулою.

Іншим об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два легких ланцюги і два важких ланцюги антитіла, що містить два Рар-фрагменти, які мають здатність зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, і Ес-домен, і (б) два додаткових Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, де кожний із вказаних додаткових Рар-фрагментів з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцями важких ланцюгів, вказаних у підпункті (а). В конкретному об'єкті винаходу додаткові Гар-фрагменти являють собою ЕРаб-фрагменти, в яких варіабельні домени МІ і УнН замінені один на одного, в результаті чого МН-домен є частининою легкого ланцюга, а Мі -домен є частининою важкого ланцюга.

Таким чином, конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) два легких ланцюги і два важких ланцюги антитіла, що містить два Гар-фрагменти, які мають здатність зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, і

Ес-домен, і (б) два додаткових Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, де вказані два додаткових Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, являють собою кросовер-Рар-фрагменти, в яких варіабельні домени МІ. і МН замінені один на одного і кожний з МІ -СН-ланцюгів з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем важких ланцюгів, вказаних у підпункті (а).

В іншому об'єкті винаходу для подальшого покращення правильного спарювання біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) перший Еаб-фрагмент, який має здатність зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) другий

Еаб-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес- домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації, може включати різні заміни заряджених амінокислот (так звані "заряджені залишки").

Зо Ці модифікації інтродукують в схрещені або несхрещені СНІ1- і СІ -домени. Конкретним об'єктом винаходу є біспецифічна антигензв'язуюча молекула, в якій в одному з Сі -доменів амінокислота в положенні 123 (ЕО-нумерація) замінена на аргінін (К) і амінокислота в положенні 124 (БО- нумерація) замінена на лізин (К) і в якій в одному з СНІ1-доменів амінокислоти в положенні 147 (ЕЄО-нумерація) і положенні 213 (ЕО-нумерація) замінені на глутамінову кислоту (Е).

Більш конкретно, винахід відноситься до біспецифічної зв'язучої молекули, що містить Раб, в якому в Сі -домені, що примикає до представника сімейства лігандів ТМЕ, амінокислота в положенні 123 (ЕО-нумерація) замінена на аргінін (А) і амінокислота в положенні 124 (БО- нумерація) замінена на лізин (К), і в якій в СНІ-домені, що примикає до представника сімейства лігандів ТМЕ, амінокислоти в положенні 147 (ЕО-нумерація) і положенні 213 (ЕюО-нумерація) замінені на глутамінову кислоту (Е).

Приклади антитіл, зазапропонованих у винаході

Одним з об'єктів винаходу є нові антитіла і фрагменти антитіл, які специфічно зв'язуються з

ОХа40. Ці антитіла мають істотні переваги порівняно з відомими антитілами до ОХ40, що робить їх найбільш придатними для включення в біспецифічні та антигензв'язуючі молекули, що містять інший антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.

Зокрема, запропоновані антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40, де вказане антитіло містить (а) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО,

БО СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:4, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:б, ії Мі-домен, який містить СОВ-І1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:13, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:16, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО ІО МО:19, (б) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО2,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:4, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:7, ії Мі-домен, який містить СОВ-І1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:13, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:16, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:20, (в) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО2, 60 СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:4, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:8, ії Мі-домен, який містить СОВ-І1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:13, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:16, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО 1Ю МО:21, (г) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО2,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:4, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:9, ії Мі-домен, який містить СОВ-І1, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:13, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:16, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:22, (д) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МОЗ,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:5, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:10, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:14, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:17, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:23, (є) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО 3,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:5, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:11, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:14, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:17, ії СОВ-:3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:23, або (ж) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МОЗ,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:5, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:12, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:15, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:18, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:24,

Одним з об'єктів винаходу є антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40, де вказане антитіло містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:25, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:26,

Зо (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО С28, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:29, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:З0, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:31, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:32, (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:34, (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:36, або (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:З8.

Наступним об'єктом винаходу є антитіло, який конкурує за зв'язування з антитілом, яке специфічно зв'язується з ОХ40, де вказане антитіло містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:25, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:26, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО С28, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:29, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:З0, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО бо ІО МО:31, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮО МО:32, (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:34, (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:36, або (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:38.

Одним з об'єктів винаходу є антитіло, який конкурує за зв'язування з антитілом, яке специфічно зв'язується з ОХ40, де вказане антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:28. Зокрема запропоновані антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40, де антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС І МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО:28.

Іншим об'єктом винаходу є антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40 і має перехресну реактивність з людським і мишачим ОХ40, де вказане антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:31, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ.,, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:32.

Іншим об'єктом винаходу є нові антитіла і фрагменти антитіл, які специфічно зв'язуються з 4-188. Ці антитіла мають істотні переваги порівняно з відомими антитілами до 4-188, що робить їх найбільш придатними для включення в біспецифічні і антигензв'язуючі молекули, що містять інший антигензв'язуючий фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені.

Зокрема, запропоновані антитіло, яке специфічно зв'язується з 4-188, де вказане антитіло містить (а) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І

Ко) МО:40, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:42, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:44, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:49, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:51, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮО МО:53, (б) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕС І

МО:41, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:43, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:45, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:50, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:52, ї СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО:54, (в) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10

МО:40, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:42, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:46, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:49, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:51, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО:55, (г) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:40,

СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:42, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:47, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:49, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:51, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ХЕ ІО МО:56, або (д) МН-домен, який містить СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І

БО МО:40, СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:42, СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:48, і Мі-домен, який містить СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:49, СОВ-12, який містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО:51, ії СОВ-Ї 3, який містить амінокислотну послідовність ФЕО І МО:57.

Одним з об'єктів винаходу є антитіло, яке специфічно зв'язується з 4-188, де вказане антитіло містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:58, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:59, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО бо ІО МО:60, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:61, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:62, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:63, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:64, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:65, або (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:67.

Наступним об'єктом винаходу є антитіло, який конкурує за зв'язування з антитілом, яке специфічно зв'язується з 4-188, де вказане антитіло містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:58, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:59, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:60, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:61, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:62, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:63, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:64, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:65, або (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:67.

Полінуклеотиди

Винахід відноситься також до виділених полінуклеотідів, які кодують біспецифічну

Зо антигензв'язуючу молекулу, вказану в даному описі, або її фрагмент.

Виділені полінуклеотиди, що кодують біспецифічні антитіла, запропоновані у винаході, можна експресувати у вигляді індивідуального полінуклеотиду, який кодує повну антигензв'язуючу молекулу, або у вигляді декількох (наприклад, двох або більшої кількості) полінуклеотидів, які спільно експресуються. Поліпептиди, що кодуються полінуклеотидуми, які спільно експресуються, можна з'єднувати, наприклад, через дисульфідні зв'язки або іншими шляхами з одержанням функціональної антигензв'язуючої молекули. Наприклад, частина імуноглобуліну, що являє собою легкий ланцюг, може кодуватись полінуклеотидом, відмінним від полінуклеотиду, який кодує частину імуноглобуліну, що являє собою важкий ланцюг. При спільній експресії поліпептиди важкого ланцюга повинні зв'язуватись з поліпептидуми легкого ланцюга з утворенням імуноглобуліну.

В деяких об'єктах винаходу виділений полінуклеотид кодує поліпептид, який міститься в біспецифічній молекулі, зазапропонованої у винаході, яка вказана в даному описі.

Одним з об'єктів винаходу є виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Іншим об'єктом винаходу є виділений полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації.

Наступним об'єктом винаходу є виділений полінуклеотид, який містить послідовність, яка кодує антитіло або фрагмент антитіла, яке/який специфічно зв'язується з ОХ40.

Іншим об'єктом винаходу є виділений полінуклеотид, який містить послідовність, яка кодує антитіло або фрагмент антитіла, яке/який специфічно зв'язується з 4-188.

В деяких варіантах здійснення винаходу полінуклеотид або нуклеїнова кислота являє собою

ДНК. В інших варіантах здійснення винаходу полінуклеотид, зазапропонований в даному винаході, являє собою РНК, наприклад, у формі матричної РНК (мРНК). РНК, запропонована в 60 даному винаході, може бути одноланцюговою або дволанцюговою.

Методи рекомбінації

Біспецифічні антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, можна одержувати, наприклад, шляхом твердофазного пептидного синтезу (наприклад, твердофазний синтез

Мерріфілд) або методом рекомбінації. Для рекомбінантного одержання один або декілька полінуклеотидів, що кодують біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або її поліпептидні фрагменти, наприклад, описані вище, виділяють і вбудовують в один або декілька векторів для додаткового клонування і/або експресії в клітині-хазяїні. Вказаний полінуклеотид можна легко виділяти і секвенувати за допомогою загальноприйнятих процедур. Одним з об'єктів винаходу є вектор, переважно експресійний вектор, що містить один або декілька полінуклеотидів, запропонованих у винаході. Методи, добре відомі спеціалістам в даній галузі, можна застосовувати для конструювання експресійних векторів, що містять послідовність, що кодує біспецифічну антигензв'язуючух молекулу (фрагменти) поряд з прийнятними сигналами, що контролюють транскрипцію/трансляцію. Ці методи включають технології рекомбінантної ДНК іп міго, методи синтезу і рекомбінації/генетичної рекомбінації іп мімо (див., наприклад, методи, описані в Мапіаї55 та ін., Мапіайі5 та ін., Моїесшціаг Сіопіпу А І арогаїогу Мапааї, вид-во Соїа 5ргіпд

Нагбог І абогагогу, МУ, 1989; і Аизибеї та ін., Ситепі Ргоїосої5 іп МоїІесшіаг Віоіїоду, вид-во сСгеепе

Рибіїєпіпуд Авб5осіаге5 апа Уміеу Іпіегосіепсе, МУ, 1989). Експресійний вектор може являти собою частину плазміди, вірусу або може являти собою фрагмент нуклеїнової кислоти. Експресійний вектор включає касету експресії, в якій полінуклеотид, що кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або її поліпептидні фрагменти (тобто кодуючи ділянку), клонують із забезпеченням функціонального зв'язку з промотором і/або іншими елементами, що контролюють транскрипцію або трансляцію. В контексті даного опису "кодуюча ділянка" являє собою частину нуклеїнової кислоти, яка складається з кодонів, що транслюються в амінокислоти. Хоча "стоп-кодон" (ТАС,

ТОА або ТАА) не транслюється в амінокислоту, він, в разі його присутності, може розглядатись як частина кодуючої ділянки, проте будь-які фланкуючі послідовності, наприклад, промотори, сайти зв'язування рибосом, термінатори транскрипції, інтрони, 5'- і 3'і-чсетрансльовані ділянки і т.п., не є частиною кодуючою ділянки. Дві або більша кількість кодуюючих ділянок може бути присутньою в індивідуальній полінуклеотидній конструкції, наприклад, в індивідуальному векторі, або в окремих полінуклеотидних конструкціях, наприклад, в окремих (різних) векторах.

Крім того, будь-який вектор може містити одну кодуючу ділянку, або може містити дві або більшу кількість кодуючих ділянок, наприклад, вектор, запропонований в даному винаході, може кодувати один або декілька поліпептидів, які пост- або котранляційно розподіляються на кінцеві білки за допомогою протеолітичного розщеплення. Крім того, вектор, полінуклеотид або нуклеїнова кислота, запропонований/запропонована у винаході, може кодувати гетерологічні кодуюючі ділянки, або злиті, або не злиті з полінуклеотидом, який кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, запропоновану у винаході, або її поліпептидні фрагменти або варіанти, або похідні. Гетерологічні кодуюючі ділянки включають (але не обмежуючись тільки ними) спеціалізовані елементи або мотиви, такі як секреторний сигнальний пептид або гетерологічний функціональний домен. Функціональний зв'язок має місце, коли кодуююча ділянка генного продукту, наприклад, поліпептиду, асоційована з однією або декількома регуляторними послідовностями таким чином, щоб експресія генного продукту перебувала під впливом або контролем регуляторної(их) послідовності (ей). Два ДНК-фрагмента (такі як кодуююча ділянка поліпептиду і асоційований з нею промотор) є "функціонально зв'язаними", якщо індукція промоторної функції призводить до транскрипції мРНК, що кодує необхідний генний продукт, і якщо природа зв'язку між двома ДНК-фрагментами не чинить вплив на здатність послідовностей, що регулюють експресію, направляти експресію генного продукту, або не чинить вплив на здатність ДНК-матриці до транскрипції. Таким чином, промоторних ділянка повинна бути функціонально зв'язана з нуклеїнової кислотою, що кодує поліпептид, якщо промотор має здатність здійснювати транскрипцію нуклеїнової кислоти. Промотор може являти собою специфічний для клітини промотор, який забезпечує значну транскрипцію ДНК тільки в попередньо відібраних клітинах. Інші елементи, що контролюють транскрипцію, крім промотора, наприклад, енхансери, оператори, репресори і сигнали термінації транскрипції, можна функціонально зв'язувати з полінуклеотидом для забезпечення специфічної для клітини транскрипції.

Прийнятні промотори та інші контролюючі транскрипцію ділянки представлені в даному описі. Спеціалістам в даній галузії відоме широке розмаїття контролюючих транскрипцію ділянок. Вони включають (але не обмежуючись тільки ними) контролюючі транскрипцію ділянки, які функціонують в клітинах хребетних тварин, такі як (але не обмежуючись тільки ними) сегменти промоторів і енхансерів з цитомегаловірусів (наприклад, негайно-ранній промотор в бо поєднанні з інтроном-А), мавпячого вірусу 40 (наприклад, ранній промотор) і ретровірусів (таких як вірус саркоми Рауса). Інші контролюючі транскрипцію ділянки включають ділянки, виведені з генів хребетних тварин, таких як ген актину, білка теплового шоку, бичачого гормону росту і кролячого р-глобіну, а також інші послідовності, які можуть контролювати експресію генів в клітині. Додаткові прийнятні контролюючі транскрипцію ділянки включають тканеспецифічні промотори і енхансери, а також індуцибельні промотори (наприклад, промотори, індуковані тетрациклінами). Аналогічно цьому, звичайним спеціалістам в даній галузі відоме широке розмаїття контролюючих трансляцію елементів. Вони включають (але не обмежуючись тільки ними) сайти зв'язування рибосом, кодони ініціації трансляції та термінуючі кодони та елементи, виведені з вірусних систем (зокрема внутрішній сайт зв'язування (посадки) рибосом або ІКЕ5, який позначають також як СІТЕ-послідовність). Касета експресії може включати також інші характерні структури, такі як сайт ініціації реплікації і/або інтегровані в хромосому елементи, такі як довгі кінцеві повтори (ІТК) ретровірусів, або інвертовані кінцеві повтори (ІТК) аденоасоційованого вірусу (ААМ).

Кодуючі ділянки полінуклеотиду і нуклеїнової кислоти, запропоновані в даному винаході, можуть бути асоційовані з додатковими кодуюючими ділянками, що кодують секреторні або сигнальні пептиди, які направляють секрецію поліпептиду, що кодується полінуклеотидом, запропонованайм в даному винаході. Наприклад, якщо потрібна секреція біспецифічної антигензв'язуючої молекули або її поліпептидних фрагментів, то ДНК, що кодує сигнальну послідовність, можна поміщати проти ходу транскрипції відносно нуклеїнової кислоти, що кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, зазапропоновану у винаході, або її поліпептидні фрагменти. Згідно з гіпотези, що стосується сигналів, білки, що секретуються клітинами ссавців, мають сигнальний пептид або секреторну лідерну послідовність, який/яка відщеплюється від зрілого білка після ініціації експорту зростаючого білкового ланцюга через шорсткий ендоплазматичний ретикулум. Звичайним спеціастам в даній галузі має бути очевидно, що поліпептиди, що секретуються клітинами хребетних тварин, як правило, мають сигнальний пептид, злитий з М-кінцем поліпептиду, який відщдеплюється від трансльованого поліпептиду з утворенням секретованої або "зрілої! форми поліпептиду. В деяких варіантах здійснення винаходу використовують нативний сигнальний пептид, наприклад, сигнальний пептид важкого ланцюга або легкого ланцюга імуноглобуліну або функціональне похідне зазначеної

Зо послідовності, що зберігає здатність забезпечувати секрецію поліпептиду, функціонально зв'язаного з ним. Альтернативно цьому, можна застосовувати гетерологічний сигнальний пептид ссавців або його функціональне похідне. Наприклад, лідерну послідовність дикого типу можна замінювати на лідерну послідовність людського тканинного активатора плазміногену (ТРА) або мишачої рВ-глюкуронідази.

ДНК, що кодує коротку білкову послідовність, яку можна застосовувати для полегшення подальшої очистки (наприклад, гістидинову мітку), або призначену для мічення злитого білка, можна включати всередину або на кінці полінуклеотиду, що кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або її поліпептидні фрагменти.

Іншим об'єктом винаходу є клітина-хазяїн, що містить один або декілька полінуклеотидів, запропонованих у винаході. Деякими об'єктами винаходу є клітина-хазяїн, що містить один або декілька векторів, запропонованих у винаході. Полінуклеотиди і вектори можуть мати будь-які особливості, індивідуально або в поєднанні, зазначеними в даному описі по відношенню до полінуклеотидів і векторів відповідно. В одному з об'єктів винаходу клітина-хазяїн містить (наприклад, трансформована або трансфектована) вектором, що містить полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, запропоновану у винаході (або її частину). В контексті даного опису поняття "клітина-хазяїн" відноситься до будь-якого типу клітинної системи, яку можна конструювати для одержання злитих білків, запропонованих у винаході, або їх фрагментів. Клітини-хазяїні придатні для реплікації і для підтримання експресії антигензв'язуючих молекул, добре відомі в даній галузі. Такі клітини можна трансфектувати або трансдукувати відповідним чином конкретним експресійним вектором і можна вирощувати більшу кількість клітин, які містять вектор, з метою внесення в ферментери для великомасштабних процесів одержання антигензв'язуючої молекули в достатніх для клінічних застосувань кількостях. Прийнятними клітинами-хазяїнами є прокариотичні мікроорганізмами, такі як Е. сої, або різні еукаріотичні клітини, такі як клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), клітини комах або т.п. Наприклад, поліпептиди можна одержувати в бактеріях, зокрема, коли відсутня потреба в глікозилюванню. Після експресії поліпептид можна виділяти 3 пасти бактеріальних клітин в розчинну фракцію і можна додатково очищати. Крім прокаріотів, як хазяїни для клонування або експресії векторів, які кодують поліпептид, можна використовувати еукаріотичні мікроорганізми, такі як нитчасті гриби або дріжджі, включаючи штами грибів і 60 дріжджів, шляхи глікозилювання яких були "гуманізовані", що дозволяє одержувати поліпептид з частково або повністю людською схемою глікозилювання (див. Сегпагов5, Маї. Віоїеси. 22, 2004, со. 1409-1414 і | і та ін., Маї. Віоїесн. 24, 2006, сс. 210-215).

Клітини-хазяїни, які можна використовувати для експресії (глікозильованих) поліпептидів, одержують також з багатоклітинних організмів (безхребетних і хребетних тварин). Прикладами клітин безхребетних є клітини комах, а також можна застосовувати клітини рослин. Були виявлені численні бакуловірусні штами і відповідні придатні для них як хазяїни клітини комах, перш за все для трансфекції клітин зродоріега Ігидірегада. Як хазяїни можна застосовувати також культури рослинних клітин (див., наприклад, 5 МоМо 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 та 6417429 (опис технології РГАМТІВОСІЕЗТМ для одержання антитіл в трансгенних рослинах). Як хазяїни можна застосовувати також клітини хребетних тварин. Наприклад, можна використовувати клітинні лінії ссавців, які адаптовані до зростання в суспензії. Іншими прикладами прийнятних ліній клітин-хазяїнів ссавців є лінія клітин нирки мавпи СМ1, трансформована за допомогою 5М40 (СО5-7); лінія клітин нирки ембріона людини (293 або клітини лінії 293, субклонування з метою вирощування в суспензійний культурі, сгапат та ін., у.

Сеп. Мігої!., 36, 1977, с. 59); клітини нирки дитинчати хом'яка (ВНК); клітини Сертолі миші (ТМ4- клітини, описані, наприклад, в Майїнег, Віої. Кергоад., 23, 1980, сс. 243-251); клітини нирки мавпи (СМ1); клітини нирки африканської зеленої мавпи (МЕКО-76,); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітини нирки собаки (МОСК); клітини печінки бичачого щура (ВК. ЗА); клітини легені людини (У/138); клітини печінки людини (Нер 02); клітини пухлини молочної залози миші (ММТ 060562); клітини ТКІ, описані, наприклад, в Майег та ін., Аппаї!5 М.У. Асай. зсі., 383, 1982, сс. 44-68); клітини МКС 5 і клітини Е54. Іншими цінними лініями клітин-хазяїнів ссавців є клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), включаючи апіт - СНО-клітини (пацб та ін., Ргос. Май.

Асай. сі. ОБА, 77, 1980, с. 4216); і клітинні лінії мієломи, такі як МО, М5О і 5р2/0. Огляд конкретних ліній клітин-хазяїнів ссавців, які можна застосовувати для виробництва білка, див., наприклад, в Хаакі і УМи, в: Меїйод5 іп МоїІесшіаг Віоіоду під ред. В.К.С. Го, вид-во Нитапа

Ргевз5, Тоїуа, Му, т. 248, 2003 сс. 255-268. Клітини-хазяїни включають культивовані клітини, наприклад, культивовані клітини ссавців, клітини дріжджів, клітини комах, клітини бактерій і клітини рослин (але не обмежуючись тільки ними), а також клітини, що знаходяться в організмі трансгенної тварини, трансгенної рослини або культивованої рослинної або тваринної тканини.

Зо В одному з варіантів здійснення винаходу клітина-хазяїн є еукаріотичною клітиною, переважно клітиною ссавця, такою як клітина яєчника китайського хом'ячка (СНО), клітина нирки людського ембріона (НЕК) або лімфоїдна клітина (наприклад, клітина 0, М50, бра). В даній галузі відомі стандартні технології для експресії чужорідних генів в цих системах. Клітини, що експресують поліпептид, який містить або важкий, або легкий ланцюг імуноглобуліну, можна конструювати таким чином, щоб в них відбувалась експресія інших ланцюгів імуноглобуліну, наприклад, таким чином, щоб експресований продукт був імуноглобулін, який має як важкий, так і легкий ланцюг.

Одним з об'єктів винаходу є спосіб одержання біспецифічної антигензв'язуючої молекули, запропонованої у винаході, або її поліпептидних фрагментів, де спосіб включає культивування клітини-хазяїна, що містить полінуклеотиди, які кодують біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, запропоновану у винаході, або її поліпептидні фрагменти, представлені в даному описі, в умовах, придатних для експресії біспецифічної антигензв'язуючих молекули, запропонованої у винаході, або її поліпептидних фр гментов і виділення біспецифічної антигензв'язуючої молекули, запропонованої у винаході, або її поліпептидних фрагментів з клітини-хазяїна (або культурального середовища клітини-хазяїна).

Біспецифічні молекули, запропоновані у винаході, одержані за допомогою представлених в даному описі методів, можна очищати з використанням відомих в даній галузі методик, таких як рідинна хроматографія високого розділення, іонообмінна хроматографія, гель-електрофорез, афінна хроматографія, гель-фільтрація і т.п. Фактичні умови, що застосовуються для очистки конкретного білка, залежать, зокрема, від таких факторів, як чистий заряд, гідрофобність, гідрофільність і т.п., і вони повинні бути очевидні спеціалісту в даній галузі. Для очистки за допомогою афінної хроматографії можна використовувати антитіло, ліганд, рецептор або антиген, з яким зв'язується біспецифічна антигензв'язуюча молекула. Наприклад, для очистки за допомогою афінної хроматографії злитих білків, запропонованих у винаході, можна використовувати матрикс з білком А або білком 0. Наприклад, послідовне застосування афінної хроматографії на білку А або с і гель-фільтрації можна застосовувати для виділення антигензв'язуючої молекули практично згідно з методом, описаним в розділі "Приклади".

Чистоту біспецифічної антигензв'язуючої молекули або її фрагментів можна визначати за допомогою будь-якого з широкої різноманітності добре відомих аналітичних методів, включаючи гель-електрофорез, рідинну хроматографію високого тиску і т.п. Наприклад, встановлено, що бо біспецифічні антигензв'язуючі молекули, експресія яких описана в розділі "Приклади", є інтактними і правильно зібраними, що продемонстровано за допомогою ДСН-ПААГ у відновних і невідновних умовах.

Аналізи

Антигензв'язуючі молекули, представлені в даному описі, можна ідентифікувати, піддавати скринінгу або характеризувати їх фізичні/хімічні властивості і/або види біологічної активності за допомогою різних аналізів, відомих в даній галузі. 1. Аналізи афінності

Афінність біспецифічних антигензв'язуючих молекул, антитіл і фрагментів антитіл, представлених в даному описі, до відповідного ТМЕ-рецептора можна визначати за допомогою методів, викладених в розділі "Приклади", з використанням поверхневого плазмонного резонансу (РЕ), застосовуючи стандартну інструментальну базу, наприклад, пристрій ВіАсоге (фірма СЕ Неайсаге), і рецептори або білки-мішені, які можна одержувати за допомогою рекомбінантної експресії. Афінність біспецифічної антигензв'язуючої молекули до антигену клітини-мішені можна визначати також за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ЗРЕ), застосовуючи стандартну інструментальну базу, наприклад, пристрій ВіАсоге (фірма СЕ

Неасаге), і рецептори або білки-мішені, які можна одержувати за допомогою рекомбінантної експресії. Конкретний наведений з метою ілюстрації і прикладу варіант вимірювання афінності зв'язування представлений в прикладі 2. Згідно з одним із об'єктів винаходу величину Ко вимірювали методом поверхневого плазмонного резонансу за допомогою пристрою ВІАСОКЕФ

Т100 (фірма СЕ Неайвсаге) при 2526. 2. Аналізи зв'язування та інші аналізи

Зв'язування біспецифічної антигензв'язуючої молекули, представленої в даному описі, з клітинами, експресуючими відповідний рецептор, можна оцінювати з використанням клітинних ліній, які експресують конкретний рецептор або антиген-мішень, наприклад, за допомогою проточної цитометрії (ГАС5). В одному з об'єктів винаходу в аналізі зв'язування використовують мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС), які експресують ТМЕ-рецептор. Ці клітини застосовують безпосередньо після виділення (наївні РМВС) або після стимуляції (активовані

РМВС). Згідно з іншим об'єктом винаходу для демонстрації зв'язування біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, запропонованої/запропонованого у винаході, з

Зо клітинами, експресуючими відповідний ТМЕ-рецептор, використовують активовані мишачі спленоцити (експресують молекулу ТМЕ-рецептора). Згідно з іншим об'єктом винаходу для демонстрації зв'язування біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла з клітинами, експресуючими відповідний ТМЕ-рецептор мавп ціномолгус, використовують РВМС, виділені з гепаринізованої крові здорових Масаса Газсісціагів.

Згідно з наступним об'єктом винаходу для демонстрації зв'язування антигензв'язуючих молекул з антигеном клітини-мішені використовують лінії ракових клітин, що експресують антиген-мішень, наприклад, ЕАР.

Згідно з іншим об'єктом винаходу для ідентифікації антигензв'язуючої молекули, яка конкурує зі специфічним антитілом або антигензв'язуючою молекулою за зв'язування з мішенню або ТМЕ-рецептором відповідно, можна застосовувати аналізи в умовах конкуренції. В деяких варіантах здійснення винаходу зазначена конкуруюча антигензв'язуюча молекула зв'язується з тим же епітопом (наприклад, лінійним або конформаційним епітопом), з яким зв'язується специфічне антитіло до мішені або специфічне антитіло до ТМЕ-рецептора. Докладні наведені як приклади методи картування епітопів, з яким зв'язується антитіло, представлені у Могтів, "Еріюре Марріпа Ргоїосо!5", в: Меїпоаз іп МоїІесшаг Віоіоду, вид-во Нитапа Ргез5, Тоїоула, Му, т. 66, 1996. 3. Аналізи активності

Одним з об'єктів винаходу є аналізи, призначені для ідентифікації біспецифічних антигензв'язуючих молекул, які зв'язуються зі специфічним антигеном клітини-мішені та зі специфічним ТМЕ-рецептором, які мають біологічну активність. Біологічна активність може включати, наприклад, агоністичну активність по відношенню до передачі сигналу через ТМЕ- рецептор на клітинах, які експресують антиген клітини-мішені. Запропоновані також антигензв'язуючих молекули, що містять тримерного ліганд сімейства ТМЕ, які ідентифіковані за допомогою аналізів як такі, що мають біологічну активність іп міїко.

В деяких об'єктах винаходу біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, запропоновану у винаході, тестують в рамках такої біологічної активності. Крім того, аналізи для детекції клітинного лізису (наприклад, шляхом вимірювання вивільнення Г ОН), кінетики індукції апоптозу (наприклад, шляхом вимірювання активності каспаз 3/7) або апоптозу (наприклад, з використанням ТИМЕЇ -аналізу) добре відомі в даній галузі. Крім того, біологічну активність бо вказаних комплексів можна оцінювати за їх впливом на виживаність, проліферацію і секрецію лімфокінів різними субпопуляціями лімфоцитів, такими як МК-клітини, МКТ-клітини або убт- клітини, або оцінювати за їх здатністю модулювати фенотип і функцію антинепрезентуючих клітин, таких як дендритні клітини, моноцити/макрофаги або В-клітини.

Фармацевтичні композиції, препаративні форми та шляхи введення

Наступним об'єктом винаходу є фармацевтичні композиції, що містять будь-яку/будь-яке з біспецифічних антигензв'язуючих молекул або антитіл, представлених в даному описі, наприклад, призначені для застосування в будь-якому із вказаних нижче терапевтичних способів. В одному з варіантів здійснення винаходу фармацевтична композиція містить будь-яку з біспецифічних антигензв'язуючих молекул, представлених в даному описі, і принаймні один фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення винаходу фармацевтична композиція містить будь-яку з біспецифічних антигензв'язуючих молекул, представлених в даному описі, і принаймні один додатковий терапевтичний засіб, наприклад, вказаний нижче.

Фармацевтичні композиції, запропоновані в даному винаході, містять в терапевтично ефективній кількості одну або декілька біспецифічних антигензв'язуючих молекул, якаїї) розчинена() або диспергована (її в фармацевтично прийнятному носії. Поняття "фармацевтично або фармакологічно прийнятний" відноситься до молекулярних субстанцій та композицій, які, в цілому, нетоксичні для реципієнтів в застосовуваних дозах і концентраціях, тобто не викликають шкідливі, алергічні або інші небажані реакції при введенні за необхідності тварині, такій, наприклад, як людина. Приготування фармацевтичної композиції, яка містить принаймні одну біспецифічну антигензв'язуючу молекулу і необов'язково додаткову діючу речовину, має бути очевидне спеціалістам в даній галузі в світлі даного опису, наприклад, з довідника Кетіпдіоп'є Рпагтасеціїса! бсіепсев, 18-е вид., вид-во Маск Ргіпіїпд Сотрапу, 1990, включеного в даний опис як посилання. Зокрема, композиції являють собою ліофілізовані препаративні форми або водні розчини. В контексті даного опису "фармацевтично прийнятний носій" включає будь-які і всі розчинники, буфери, дисперсійні середовища, покриття, поверхнево-активні речовини, антиоксиданти, консерванти (наприклад, антибактеріальні агенти, протигрибкові агенти), агенти для додання ізотонічності, солі, стабілізатори та їх комбінації, які повинні бути відомі звичайному спеціалісту в даній галузі.

Парентеральні композиції включають композиції, створені для введення шляхом ін'єкції, наприклад, підшкірної, внутрішньошкірної, всередину пошкодження, внутрішньовенної, внутрішньоартеріальної, внутрішньом'язової, підоболонкову або внутрішньочеревну ін'єкції. Для ін'єкції біспецифічні антигензв'язуючі молекули або антитіла, запропоновані у винаході, можна включати в препаративні форми у вигляді водних розчинів, переважно у фізіологічно сумісних буферах, таких як розчин Хенкса, розчин Рінгера або фізіологічний соляний буфер. Розчин може містити призначені для одержання препаративної форми агенти, такі як суспендуючі, стабілізуючі і/або диспергуючі агенти. Альтернативно цьому, біспецифічні антигензв'язуючі молекули або антитіла можуть перебувати в порошкоподібній формі, призначеній для відновлення перед застосуванням прийнятним наповнювачем, наприклад, стерильною водою, яка не містить пірогенів. Стерильні розчини для ін'єкцій готують шляхом включення антигензв'язуючих молекул, запропонованих у винаході, в необхідній кількості в відповідний розчинник за необхідності в поєднанні з різними іншими інгредієнтами, що вказані нижче.

Стерильність можна легко забезпечувати, наприклад, шляхом фільтрації через стерильні фільтруючі мембрани. Як правило, дисперсії одержують шляхом включення різних стерилізованих діючих речовин в стерильний наповнювач, який містить основне дисперсійне середовище і/або інші інгредієнти. В разі стерильних порошків для одержання стерильних розчинів для ін'єкцій, суспензій або емульсій переважними методами одержання є вакуумне сушіння або сушіння виморожуванням, які дозволяють одержувати порошок діючої речовини в поєднанні з будь-яким додатковим необхідним інгредієнтом з попередньо стерилізованою фільтрацією рідкого середовища. За необхідності рідке середовище перед здійсненням ін'єкції може бути відповідним чином забуферене і рідкому розріджувачу спочатку додана ізотонічність за допомогою достатньої кількості соляного розчину або глюкози. Композиція повинна бути стабільною в умовах приготування і зберігання і захищена від забруднюючої дії мікроорганізмів, таких як бактерії і гриби. Прийнято підтримувати забруднення ендотоксинами на мінімальному безпечному рівні, наприклад, менше 0,5 нг/мг білка. Придатні фармацевтично прийнятні носії включають (але не обмежуючись тільки ними): буфери, такі як фосфатний, цитратний і буфери на основі інших органічних кислот; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту та метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламмонійхлорид; гексаметонійхлорид; бензалконійхлорид; бензетонійхлорид; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкіллпарабени, такі як метил або пропілпарабен; катехол, резорцинол; циклогексанол; 3- бо пентанол і мета-крезол)у; низькомолекулярні (містять менше приблизно 10 залишків)

поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші вуглеводи, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатуючі агенти, такі як ЕДТА; цукри, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; солетворні протиїіони, такі як натрій; комплекси з металами (наприклад, комплекси 2п-білок); і / або неіоногенні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (ПЕГ). Водні суспензії для ін'єкцій можуть містити сполуки, які підвищують в'язкість суспензії, такі як натрієва сіль карбоксиметилцелюлози, сорбіт, декстран або т.п. Необов'язково суспензія може містити також стабілізатори або агенти, які підвищують розчинність сполук, що дозволяє одержувати висококонцентровані розчини. Крім того, суспензії діючих речовин можна одержувати у вигляді відповідних масляних суспензій, призначених для ін'єкції. Прийнятні ліпофільні розчинники або наповнювачі включають жирні нелеткі олії, такі як кунжутне масло, або синтетичні ефіри жирних кислот, такі як етилолеат або тригліцериди, або ліпосоми.

Діючі речовини можна укладати в мікрокапсули, наприклад, одержані за допомогою методів коацервації або міжфазної полімеризації, наприклад в гідроксипропілметилцелюлозні або желатинові мікрокапсули і полі (метилметакрилатні) мікрокапсули відповідно, в колоїдні системи введення лікарського засобу (наприклад, в ліпосоми, альбумінові мікросфери, мікроемульсії, наночастинки і нанокапсули) або в макроемульсії. Такі методи описані в Ветіпаїоп'5

Рпагтасешііса! Зсієпсез (18-е вид., вид-во Маск Р'їпіпуд Сотрапу, 1990). Прийнятними прикладами препаратів з уповільненим вивільненням є напівпроникні матриці з твердих гідрофобних полімерів, які включають поліпептид, такі матриці являють собою вироби певної форми, наприклад, плівки або мікрокапсули. В конкретному варіанті здійснення винаходу для досягнення пролонгованої абсорбції композиції, що ін'єктгують, можна застосовувати в композиції агенти, які пригнічують абсорбцію, такі, наприклад, як моностеарат алюмінію, желатин або їх комбінації.

В контексті даного опису фармацевтично прийнятні носії включають також диспергуючі агенти інтерстиціальних лікарських засобів, такі як розчинні активні в нейтральному середовищі глікопротеїни гіалуронідази (5НАБЕСР), наприклад, людські розчинні глікопротеїни гіалуронідази РН-2О0, такі як гНиРН2гО (НУ ЕМЕХФО, фірма Вахієг Іпегпаїйопаї!, Іпс.). Деякі

Зо приклади 5НАБЕСР і методи їх застосування, в тому числі "НиРН2О, описані в публікаціях патентів США 2005/0260186 і 2006/0104968. Згідно з одним із об'єктів винаходу ЗНАБЕСР об'єднують з одним або декількома додатковими глікозаміногліканазами, такими як хондроїтінази.

Приклади ліофілізованих композицій антитіл описані в 5 Мо 6267958. Водні композиції антитіл включають композиції, описані в Мо О5 6171586 та УМО 2006/044908, останні композиції включають гістидин-ацетатний буфер.

Крім описаних вище композицій, антигензв'язуючі молекули можна готувати також у вигляді препарату в формі депо. Вказані препаративні форми тривалої дії можна застосовувати шляхом імплантації (наприклад, підшкірної або внутрішньом'язової) або внутрішньом'язової ін'єкції. Так, наприклад, злиті білоюи можна включати в препаративні форми в поєднанні з прийнятними полімерними або гідрофобними матеріалами (наприклад, у вигляді емульсії в прийнятному маслі) або іонообмінними смолами, або у вигляді помірно розчинних похідних, наприклад, помірно розчинної солі.

Фармацевтичні композиції, які містять біспецифічні антигензв'язуючі молекули або антитіла, запропоновані у винаході, можна готувати за допомогою загальноприйнятих процесів змішання, розчинення, емульгування, капсулювання, захоплення або ліофілізації. Фармацевтичні композиції можна включати в препаративні форми за допомогою загальноприйнятого методу з використанням одного або декількох фізіологічно прийнятних носіїв, розріджувачів, наповнювачів або допоміжних речовин, які полегшують обробку білків, з одержанням препаратів, які можна застосовувати в фармацевтичних цілях. Відповідна форма залежить від обраного шляху введення.

Біспецифічні антигензв'язуючі молекули можна включати в композиції у вигляді вільної кислоти або вільної основи, в нейтральній формі або у формі солі. Фармацевтично прийнятні солі є солі, які практично зберігають біологічну активність вільної кислоти або вільної основи.

Вони включають кислотно-адитивні солі, наприклад, солі, утворені з вільними аміногрупами білкової композиції, або утворені з неорганічними кислотами, такими, наприклад, як соляна або фосфорна кислота, або такими органічними кислотами, як оцтова, щавлева, винна або мигдальна кислота. Солі, утворені з вільною карбоксильною групою, можна одержувати також з неорганічних основ, таких, наприклад, як гідроксиди натрію, калію, амонію, кальцію або заліза; бо або таких органічних основ як ізопропіламін, триметиламін, гістидин або прокаїн. Фармацевтичні бо солі мають тенденцію до більш високої розчинності у водних та інших протонних розчинниках порівняно з відповідними формами у вигляді вільних основ.

Композиція, представлена в даному описі, може містити також більше однієї діючої речовини, якщо це необхідно для конкретного показання, що підлягає лікуванню, переважно речовини з додатковими видами активності, які не роблять негативного впливу одна на одну.

Такі діючі речовини повинні бути присутніми в комбінації в кількостях, ефективних для вирішення поставленого завдання.

Композиції, призначені для застосування іп мімо, як правило, повинні бути стерильними. Це легко можна здійснювати шляхом фільтрації через стерильні фільтруючі мембрани.

Способи та композиції для терапевтичного застосування

Будь-яку з біспецифічних антигензв'язуючих молекул, представлених в даному описі, можна застосовувати в терапевтичних способах.

Для застосування в терапевтичних способах біспецифічні антигензв'язуючі молекули або антитіла, запропоновані у винаході, можна включати до складу препаративних форм, дозувати і вводити згідно з належної клінічної практики. Розглянуті в цьому контексті чинники включають конкретне порушення, яке підлягає лікуванню, конкретне ссавець, що підлягає лікуванню, клінічний стан індивідуального пацієнта, причину захворювання, ділянку введення агента, метод введення, схему введення та інші чинники, відомі практикуючим медикам.

Одним з об'єктів винаходу є біспецифічні і антигензв'язуючі молекули або антитіла, запропоновані у винаході, призначені для застосування як лікарського засобу.

В наступних об'єктах винаходу біспецифічні і антигензв'язуючі молекули або антитіла, запропоновані у винаході, призначені для застосування (І) для стимуляції або підвищення Т- клітинної відповіді, (ІІ) підтримання виживаності активованих Т-клітин, (І) для застосування лікування інфекцій, (ІМ) для застосування для лікування раку, (М) для застосування для уповільнення прогресування раку або (МІ) для застосування для пролонгування часу життя пацієнта, що страждає на рак. Одним з об'єктів винаходу є антигензв'язуючі молекули або антитіла, які містять тримерний ліганд сімейства ТМЕ, запропоновані у винаході, призначені для застосування при лікуванні захворювання в індивідуума, зокрема для застосування для лікування раку.

Зо В деяких об'єктах винаходу біспецифічні антигензв'язуючі молекули або антитіла, запропоновані у винаході, призначені для застосування в способі лікування. Одним з об'єктів винаходу є біспецифічні антигензв'язуючі молекули або антитіла, представлені в даному описі, для застосування для лікування захворювання у індивідуума, який потребує цього. Деякими об'єктами винаходу є біспецифічні антигензв'язуючі молекули або антитіла для застосування в способі лікування індивідуума, який має захворювання, що включає введення індивідууму в терапевтично ефективній кількості біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла. В деяких об'єктах винаходу захворювання є рак. Суб'єктом, пацієнтом або "індивідуумом", що потребує лікування, є ссавець, більш конкретно людина.

Одним з об'єктів винаходу є спосіб (І) стимуляції або підвищення Т-клітинної відповіді, (11) підтримання виживаності активованих Т-клітин, (Ії) лікування інфекцій, (ІМ) лікування раку, (М) уповільнення прогресування раку або (МІ) пролонгування часу життя пацієнта, що страждає на рак, де спосіб включає введення в терапевтично ефективній кількості біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, запропонованої/запропонованого у винаході, індивідууму, який потребує цього. Наступним об'єктом винаходу є застосування біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, запропонованої/запропонованого у винаході, для одержання або виробництва лікарського засобу, призначеного для лікування захворювання в індивідуума, який потребує цього. В одному з об'єктів винаходу лікарський засіб призначений для застосування в способі лікування захворювання, що включає введення індивідууму, який має захворювання, лікарського засобу в терапевтично ефективній кількості. В деяких об'єктах винаходу захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою проліферативне порушення, зокрема рак. Приклади видів раку включають (але не обмежуючись тільки ними) рак сечового міхура, рак головного мозку, рак голови та шиї, рак підшлункової залози, рак легені, рак молочної залози, рак яєчника, рак матки, рак шийки матки, рак ендометрія, рак стравоходу, рак ободової кишки, колоректальний рак, ректальний рак, рак шлунка, рак передміхурової залози, рак крові, рак шкіри, плоскоклітинна карцинома, рак кістки і рак нирки. Інші приклади раку включають карциному, лімфому (наприклад, лімфому Ходжкіна і неходжкінську лімфому), бластому, саркому та лейкоз. Інші порушення, пов'язані з проліферацією клітин, які можна лікувати за допомогою біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, запропонованої/запропонованого у винаході, включають (але не обмежуючись тільки ними) 60 неоплазми, локалізовані в: черевному відділі, кістці, молочній залозі, травній системі, печінці,

підшлунковій залозі, черевній порожнині, ендокринних залозах (наднирники, паращитовидна, гіпофіз, яєчка, яєчник, тимус, щитовидна залоза), очах, голові та шиї, нервовій системі (центральній і периферичній), лімфатичній системі, тазовій ділянці, шкірі, м'якій тканині, селезінці, грудній ділянці і сечостатевій системі. Також вони включають передракові стани або пошкодження і метастази раку. В деяких варіантах здійснення винаходу рак вибирають з групи, що складається з нирково-клітинного раку, раку шкіри, раку легкого, колоректального раку, раку молочної залози, раку головного мозку, раку голови та шиї. Спеціалісту в даній галузі має бути очевидно, що в багатьох випадках біспецифічна антигензв'язуюча молекула або антитіло, запропонована/запропоноване у винаході, не може забезпечувати зцілення, а може тільки надавати сприятливий вплив. В деяких об'єктах винаходу фізіологічні зміни, які характеризуються деяким сприятливим впливом, розглядаються також як терапевтично цінні.

Таким чином, в деяких об'єктах винаходу кількість біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, запропонованої/запропонованого у винаході, яка забезпечує фізіологічну зміну, розглядається як "ефективна кількість" або "терапевтично ефективна кількість".

Для попередження або лікування захворювання відповідна доза біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, запропонованої/запропонованого у винаході (при застосуванні індивідуально або в комбінації з одним або декількома іншими додатковими терапевтичними агентами) повинна залежати від типу захворювання, що підлягає лікуванню, шляху введення, маси тіла пацієнта, специфічності молекули, серйозності та перебігу захворювання, від того, чи вводять біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або антитіло в превентивних або терапевтичних цілях, попередніх або здійснюваних одночасно терапевтичних втручань, історії хвороби пацієнта і відповіді на злитий білок, і від припису лікуючого лікаря.

Практикуючий спеціаліст, відповідальний за введення, в будь-якому разі, повинен визначати концентрацію діючої(их) речовини в композиції та відповідну(ї) дозу(ї) для індивідуального пацієнта. Різні схеми введення доз включають (але не обмежуючись тільки ними) одноразове введення або декілька введень в різні моменти часу, болюсне введення і пульсуючу інфузію.

Біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або антитіло, запропоновану/запропоноване у винаході, можна вводити пацієнту у вигляді однієї обробки або серії обробок. Залежно від типу і серйозності захворювання можлива початкова доза антигензв'язуючої молекули, що містить тримерний ліганд сімейства ТМЕ, для введення пацієнту, наприклад, з використанням одного або декількох індивідуальних введень або за допомогою безперервної інфузії, може становити приблизно від 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, 0,1-10 мг/кг). Типова добова доза може становити від приблизно від 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше залежно від вказаних вище факторів. Для повторних введень протягом декількох днів або більш тривалого періоду залежно від стану лікування, як правило, має тривати до досягнення необхідного придушення наявних симптомів захворювання. Як один приклад, доза біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, запропонованої/запропонованого у винаході, може складати від приблизно 0,005 до приблизно 10 мг/кг. В іншому прикладі (але не обмежуючись тільки зазначеним) доза на одне введення може становити від приблизно 1, приблизно 5, приблизно 10, приблизно 50, приблизно 100, приблизно 200, приблизно 350, приблизно 500 мкг/кг маси тіла, приблизно 1, приблизно 5, приблизно 10, приблизно 50, приблизно 100, приблизно 200, приблизно 350, приблизно 500 до приблизно 1000 мг/кг маси тіла або більше, і перебувати в будь-якому вказаному діапазоні. Як приклади (але не обмежуючись тільки ними) вказаного діапазону значень, можна вводити від приблизно 5 до приблизно 100 мг/кг маси тіла, від приблизно 5 мкг/кг маси тіла до приблизно 500 мг/кг маси тіла і т.п. із врахуванням вказаних вище рівнів доз. Так, пацієнту можна вводити одну або декілька доз, що становлять приблизно 0,5, 2,0, 5,0 або 10 мг/кг (або будь-яку їх комбінацію). Вказані дози можна вводити переривчасто, наприклад, щотижня або кожні три тижні (наприклад, таким чином, щоб пацієнт отримував від приблизно двох до приблизно двадцяти або, наприклад, приблизно шість доз злитого білка). Можна вводити початкову більш високу ударну дозу, після якої застосовувати одну або декілька нижчих доз. Проте можна використовувати інші схеми введення доз. Успіх такої терапії легко оцінювати за допомогою загальноприйнятих методик і аналізів.

Біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або антитіло, запропоновану/ запропоноване у винаході, як правило, слід застосовувати в кількості, ефективній для досягнення поставленої мети. При застосуванні для лікування або попередження хворобливого стану біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або антитіло, запропоновану/запропоноване у винаході, або їх фармацевтичні композиції, вводять або застосовують в терапевтично ефективній кількості.

Визначення терапевтично ефективної кількості знаходиться в компетенції спеціалістів в даній галузі, перш за все в світлі представленого докладного опису винаходу. 60 Для системного введення терапевтично ефективну дозу можна спочатку визначати за допомогою аналізів іп міго, наприклад, аналізів з використанням клітинних культур. Потім дозу можна включати в форму для вивчення на тваринних моделях для досягнення концентрації в крові, що знаходиться в діапазоні, що включає значення ІСвхо, визначене на клітинній культурі.

Вказану інформацію можна використовувати для більш точного визначення доз, які можна застосовувати на людях.

Початкові дози можна оцінювати також, виходячи з даних, одержаних іп мімо, наприклад, на тваринних моделях, використовуючи методики, добре відомі в даній галузі. Звичайний спеціаліст в даній галузі легсо може оптимізувати застосування на людях на основі даних, одержаних на тварин.

Рівень доз та інтервал можна регулювати індивідуально для одержання рівнів в плазмі біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, запропонованої/запропонованого у винаході, які є достатніми для підтримання терапевтичної дії. Звичайні дози, призначені для введення пацієнту шляхом ін'єкції, складають від приблизно 0,1 до 50 мг/кг/день, як правило, від приблизно 0,5 до 1 мг/кг/день. Для досягнення терапевтично ефективних рівнів в плазмі можна вводити декілька доз щодня. Рівні в плазмі можна оцінювати, наприклад, за допомогою РХВР.

У випадках місцевого застосування або виборчого поглинання ефективна місцева концентрація біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, запропонованої/запропонованого у винаході, може не відповідати концентрації в плазмі.

Спеціаліст в даній галузі може оптимізувати терапевтично ефективні місцеві дози без надмірних експериментів.

Застосування в терапевтично ефективній дозі біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, запропонованої/запропонованого у винаході, які представлені в даному описі, має, як правило, забезпечувати терапевтичну користь, не викликаючи суттєвої токсичності.

Токсичність і терапевтичну ефективність злитого білка можна визначати за допомогою стандартних фармацевтичних процедур на культурах клітин або експериментальних тварин.

Аналізи на клітинних культурах або досліди на тваринах можна застосовувати для визначення значень І Охо (доза, смертельна для 50 95 популяції) і ЕОзо (доза, терапевтично ефективна для 50 95 популяції). Співвідношення доз, що характеризують токсичні і терапевтичні дії, позначають як терапевтичний індекс, який можна виражати у вигляді співвідношення І ЮО50/ЕЮзо. Біспецифічні

Зо антигензв'язуючі молекули, які мають високі терапевтичні індекси, є перважними. В одному з варіантів здійснення винаходу біспецифічна антигензв'язуюча молекула або антитіло, запропонована/запропоноване у винаході, характеризується високим терапевтичним індексом.

Дані, одержані в аналізах з використанням клітинних культур і в дослідах на тваринах, можна використовувати для визначення діапазону доз, які можна застосовувати на людях. Доза лежить переважно в діапазоні концентрацій в кровотоці, які включають ЕЮзхо, що мають невисоку токсичність або які мають токсичність. Доза може змінюватись в вказаному діапазоні залежно від різних факторів, наприклад, від застосовуваної лікарської форми, застосовуваного шляху введення, стану індивідуума і т.п. Точну препаративну форму, шлях введення і дозу може вибирати індивідуально лікар залежно від стану пацієнта (див., наприклад, Ріподі та ін. в: Те

РПпаптасоїодіса! Ваві5 ої Тпегарешіісв, гл. 1, 1975, с. 1, публікація повністю включена в даний опис як посилання).

Лікарю пацієнтів, яким вводять злиті білки, запропоновані у винаході, має бути очевидно, як і коли закінчувати, переривати або регулювати введення через токсичність, дисфункції органів і т.п. Ї. навпаки, лікарю повинно бути відомо, як регулювати лікування в бік застосування більш високих доз, якщо клінічна відповідь є неадекватною (запобігаючи токсичність). Величина дози, що вводиться при лікуванні порушення, яке представляє інтерес, повинна варіюватися залежно від серйозності стану, що підлягає лікуванню, шляха введення і т.п. Серйозність стану можна, наприклад, оцінювати серед іншого за допомогою стандартних прогностичних методів оцінки.

Крім того, доза і передбачувана частота введення дози повинні також варіюватися залежно від віку, маси тіла і відповіді індивідуального пацієнта.

Інші засоби та варіанти лікування

Біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або антитіло, запропоновану/запропоноване у винаході, можна вводити в комбінації з одним або декількома іншими агентами для здійснення терапії. Наприклад, біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або антитіло, запропоновану/запропоноване у винаході можна вводити спільно принаймні з одним додатковим терапевтичним засобом. Поняття "терапевтичний засіб" включає будь-який засіб, який вводять для лікування симптому або захворювання в індивідуума, який потребує такого лікування. Вказаний додатковий терапевтичний засіб може бути будь-якою діючою речовиною, яку можна застосовувати при конкретному показанні, що підлягає лікуванню, переважно з 60 додатковими видами активності, які не чинять вплив один на одного. В деяких варіантах здійснення винаходу додатковий терапевтичний засіб являє собою інший протираковий агент, наприклад, агент, який руйнує мікротрубочки, антиметаболіт, інгібітор топоїзомерази, ДНК- інтеркалятор, алкілуючий агент, засіб гормональної терапії, інгібітор кіназ, антагоніст рецептора, активатор апоптозу пухлинних клітин або антиангіогенний агент. В деяких об'єктах винаходу додатковий терапевтичний засіб являє собою імуномодулятор, цитостатичний агент, інгібітор клітинної адгезії, цитотоксичний або цитостатичний агент, активатор апоптозу клітин або агент, який підвищує чутливість клітин до індукторів апоптозу.

Вказані інші засоби можуть бути присутніми в комбінації в кількостях, ефективних для вказаних цілей. Ефективна кількість вказаних інших засобів залежить від кількості вживаного злитого білка, типу порушення або лікування, та інших вказаних вище факторів. Біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або антитіло, запропоновану/запропоноване у винаході, як правило, застосовують в таких же дозах і з використанням вказаних в даному описі шляхів введення, або в дозах, що становлять приблизно від 1 до 99 95 від вказаних в даному описі доз, або в будь- якій дозі і з використанням будь-якого шляху введення, які згідно з емпіричних/клінічнихи даних розглядаються як прийнятні.

Відмічені вище комбіновані терапії передбачають спільне введення (коли два або більша кількість терапевтичних засобів включають в одну й ту ж або в окремі композиції) та роздільне введення, в цьому разі введення біспецифічної антигензв'язуючої молекули або антитіла, запропонованої/запропонованого у винаході, можна здійснювати до, одночасно і/або після введення додаткового терапевтичного засобу і/або ад'юванта.

Вироби

Іншим об'єктом винаходу є виріб, який містіть продукти, що застосовуються для лікування, попередження і/або діагностування вказаних вище порушень. Виріб являє собою контейнер і етикетку або листівку-вкладиш в упаковку, що розміщені на контейнері або додаються до нього.

Прийнятними контейнерами є, наприклад банки, пляшечки, шприци, пакети для внутрішньовенного (ІМ) розчину тощо. Контейнери можна виготовляти з різних матеріалів, таких як скло або пластмаса. Контейнер містіть композицію, яка сама по собі або в поєднанні з іншою композицією є ефективною для лікування, попередження і/або діагностування стану, і може мати стерильний порт доступу (наприклад, контейнер може являти собою пакет для

Зо внутрішньовенного розчину або пляшечку, оснащену пробкою, яку можна проколювати за допомогою голки для підшкірних ін'єкцій). Принаймні одна діюча речовина в композиції являє собою біспецифічну антигензв'язуючу молекулу або антитіло, зазапропоновану/зазапропоноване у винаході.

На етикетці або листі-вкладиші в упаковку зазначено, що композицію застосовують для лікування вибраного стану. Крім того, виріб може включати (а) перший контейнер з розташованою в ньому композицією, де композиція містіть біспецифічну антигензв'язуючу молекулу, зазапропоновану у винаході; і (б) другий контейнер з розташованою в ньому композицією, де композиція містіть додатковий цитотоксичний або інший терапевтичний засіб.

Згідно з цим варіантом здійснення винаходу виріб може містити лист-вкладиш в упаковку, який містіть інформацію про те, що композиції можна використовувати для лікування конкретного стану.

В альтернативному або додатковому варіанті виріб може додатково включати другий (або третій) контейнер з фармацевтично прийнятним буфером, таким як бактеріостатична вода для ін'єкцій (БСВІ), забуферений фосфатом фізіологічний розчин, розчин Рінгера і розчин глюкози.

Крім того, він може включати інші матеріали, необхідні з комерційної точки зору і з точки зору споживача, зокрема, інші буфери, розріджувачі, фільтри, голки і шприци.

Таблиця В

Послідовності

ЗЕО

ІО Позначення Послідовність

МО: 2087), СОВ-НІ1 17А9), СОВ-НІ1 мули 000000000опяет

ІО Позначення Послідовність

МО:

Оох40(8нНО 498414,

ОХ40(С10-563, СІ О-564, б охад(8НнеЇсСоОВНнІ 00 ЕМОМУМОМЇГС/С/: ССС 8 оха0поадсовВ-нІ 00 ЕМОБМОМЇГС/С//7711111111111111111 9 |ОХ40(2087) СОВ-НЗІ 0 УМУРУБУМООВОМ ГГ 771111111111111111111

Оох40(8нНО 498414,

Оох40(8нНО 498414,

ОХ40(С10-563, СІ С564),

ОХ40(С10-563, СІ 0-164),

ОМОЇ МОБСОАЕУККРОББЗУКУЗСКАВБИСТЕОЗМУАІЗУМУНО

ММЕЇІ 55І В5ЕОТАУУУСАНЕУХСУ МОМУ ОСТ УТ сефрннннтян ОЛОтЕЕ и ннитА 26 |ОХ40(8НО), МІ КАРК ПМОАБОІ ЕЗМРОВЕЗОаБИаБаИтЕНТІ ТІЗБІ ОРОЮСБА

ТУУСООМІ ТУ5ВЕТЕСОСТКМЕК

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаБЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

ЕІ 55І ВБЕОТАМУУСАВНЕУУВа РУЮУИМУСОЮСТТУТУО ефрннннани ЛОТ оннияА 28 |ОоХ40(4984), М КАРК ПМОАБОІ ЕЗМРОВЕЗОаБИаБаИтЕНТІ ТІЗБІ ОРОЮСБА

ТУУСООМ5БЗОРМТЕСОСТКМЕЇК

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

ЕІ 55І ВБЕОТАМУМСАНЕМСЗМОМУ СЮСТТУТУ55 офрннювня: Ли оннитА |охХ40(104), МІ КАРКГ ІМОАББОІ ЕБИМРОНЕЗабБаватЕРЕТІ ТІ5БІ ОРОЮСЕБА

ТУУСООМІБУ5МІ ТЕИОСТКМЕІК

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

ЕІ 55І ВБЕОТАМУМСАНУМУРУБУ МСБО УМ СОС УТУЗ5 сефрннентни ПОЛЕ ая 32 | ОохХ49(2087), М КАРКГ ІМОАББОІ ЕБИМРОНЕЗабБаватЕРЕТІ ТІ5БІ ОРОЮСЕБА

ТУУСООМОАЕБІ ТЕСОСТКМЕК офдржнююютня Кивре нн 33 |ОХ40(СІ 0-563), МН РОКИ! ЕМ УБАІЗОБИайЗТУМАреУКОаВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАМУМСАГ ОМаАБОММ ОСА ТУ

ЗЕО

МО:

НІ НН Ен кос ввів

УУУСООмавоРІ ТЕЙОСТКМЕІК сехюююєчно ПЕК | ОХАО(СІ 0-564), МН СКагЕМУБАІЗабБайЗТУМАОБУКОВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОО

МІМ5І ВАЕОТАМУУСАГОМОРЕО УМ СОСТІ ТУ секр ПАНЕ ення 36 | ОХАО(СІ С-564), МІ. ОАРАПІІМОАБОВАТОаІРОВЕЗавзаватОо ТІ ТІВ ЕРЕОБА

УУУСООмавоРІ ТЕЙОСТКМЕІК

ЕМО ГГ ЕБОСИОЇ МОРОСБІ ВІ БСААБОЕТЕ55УАМОУУУВОАР

МІМ5І ВАЕОТАУУУСАВУгУВОсСУЗМО УМУСОСТІ МТУ55 сеохюєтняя Ото е 38 | ОХ40(17А9), МІ АРМІ МІМАКММА РОСІРОВЕБОИ555ОМТАБІ ТІТОАОАЕОЕАО

УУСМЗАУМРНМАМгСсаТтТтКІтМ 4-88(1283,1105, 9811, 4-88(1283,1105, 9811, 4-88(1283,1105, 9811, 4-88(1283,1105, 9811,

ОМОГ МОБСОАЕУККРИОЗБУКУВСКАБИОСТЕЗУ АВМ

' КОТО5ТАУМЕЇ 55І В5ЕОТАУУУСАВЗЕРВЕМАВСЕрУ жмсоатТтУТУ55

РІОМТО5РБ5ТІ БАБМОЮВМТІТСВАБОБІЗБУМ АМ/МО

ЗІ ОРОВСЕГАТУМСООУНОМРОТРа,ОСТКМЕК

ЕМО ГГ ЕБОСИОЇ МОРОСБІ ВІ БСААБОЕТЕ55УАМОМУУМ 4-188(2507), УН ВОАРОКОЇ ЕМ УБАІЗОБОСЗТУМАОБУКОаВЕТІЗНОМ ' ЗКМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМУМСАВООРМУРРЕС УМ СТО ст УТУ55 невоюльх оои 61 /4-188(2507), МІ. КРООСАРМІ МІМЕКММА РЗаІРОВЕ5Оа555ОМТАВІ ТІТО

АОАЕОЕАВрУМСМЗІ ОВНаМУУгсааТткітм

ОМОЇ МОБСАЕУККРИОЗБУКУВСКАБИОСТЕОБУАІВУММ

' Т5ТАМУМЕЇ 55І В5ЕОТАУУУСАВОЗТІ ІМ МЕС УМО

ТТУТУ55

ЗЕ

ІО Позначення Послідовність

МО: о ПОН Етно півввна

ОРООБАТУУСООЇ МОМ РОТЕаОСТКМЕІК

ОМОЇ МОБСАЕУККРОИаББЗУКУВСКАБИСТЕББМАІБММ в4 | 4-188(9811), УН ВОАРИОаОСІ ЕМ МИастТтРІБЕТАММАОКЕОСВМТІТАОК5 й Т5ТАММЕЇ 55І ВА5ЗЕОТАУУУСАНЗБОаАМ РОМЕО УМ,О аТтМТУ55

ІОМТО5РБ5ОТІ БАБМОаОВМТІТСВАБОБІББУМ АМ/ МО 65 |4-188(9811), МІ КРОКАРКІО ІМОАБ5БІ ЕБОУРОВЕЗИаБОЗБОИтЕЕТІ ТІБ5І.

ОРОЮОБАТУУСООСОММОМРОТЕСаОСТКМЕЇК

ОМОЇ МОБСОАЕУККРОИаББЗУКУВСКАБИСТЕББМАІБМУВ 4-188(2022), УН ОАРООСІ ЕМ МаспРІЄЕТАММАОКЕеОСАМТІТАОКоТ " ЗТАУМЕЇ 55І ВА5БЕОТАМУУСАВЗУММ ЕБМРЕО УМ СХОСЯ

ТТМТУ55

ІОМТО5РБ5ОТІ БАБМОаОВМТІТСВАБОБІББУМ АМ/ МО 67 14-188(2022), МІ КРОКАРКІО ІМОАБ5БІ ЕБОУРОВЕЗИаБОЗБОИтЕЕТІ ТІБ5І.

ОРОЮОБАТУУСОСОНОМУТРадОатТкМК 68 РАРІВНІ СОВ-НІ ОО 5НАМ5ГС/С/С/:ОСССССССССС7777777777777111111111111111 69 РАРІВУ),СОВАНІ // 05МАМБСС/С////777777777777777711111111111111111

ЕМО ЕЗОаСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИЕТЕЗ5ЗНАМОМУ

ЕАР(28НІ), УН МАОАРИаКаїГЕМУ5БАМАБагЕОУМАреУКаВЕТІВНО " МОКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАУМУСАКСОСУМ МЕМ

Ост МТУ55

ЕІМГТО5РИТІ 5І 5РОЕВАТІ 5ХСВАБОБМУЗАОМІ АМ/МО 81 | ЕАР(28НІ), МІ. ОКРООАРВІ ПСАЗБТВАТОаІРОВЕЗИаБИаБаИтТОгТІ ТІ

ВГЕРЕОРАУУУСООСОМІРРТРаОСИТКМЕК

ЕМОГІ ЕЗОаСИЇ МОРОСБІ ВІ БЄСААБОЕТЕ55МАМОМУ 82 | ЕАР(489), МН МАОАРИЕаКаї ЕМУ5ЗАПИаВаАвТУМАрВБУКаОаВеЕТІЗНО " МОКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАУМУСАКОИМ СС ЕМ

Ост МТУ55

ЕІМГТО5РИТІ 5І 5РОЕВАТІ 5СВАБОБМТ55МІ АМ/У 83 | РАР(489), МІ ОСООКРООАРВЦП ІММаАЗААВАТаІРОНЕЗОаБИаБаИтовті.

ТІЗАГЕРЕОЕАМУМСООСІМІ РРТЕСОС ТКМУЕІК

ВАВРОВМНМ5ЗЕЕМТМВА! ТІ КОП.МОаТЕЗМУКТЕЕРМУЛО

СОЕМІ НОБАОММІМІ УМІЕТао5БМУТІ 5МАТМКОУМ

АБМУИІ 5РОВОЕММ ЕБОМБКІ М ВУБУТАТУМІМО

І 5ЄМаЕЕМВаМЕЇ РАРІОМІ СМ/З5РМОаБКІ АМУМОММ

ІМІКОВРООРРЕОЇТЕМОа ВЕМКІЕМСТ РОМ УМЕЕЕМІ. ектодомен пи БАР «полі- АТКУМАЇ М/М5РМОаКЕЇ АМАЕЄЕМОТОІРМАМБУМИарЕ 85 іув-міткачпівв-мітка ОУРВТІМІРУРКАСАКМРМУМВІБПОТТМРАММОаРОЕМР

МРАМІАББОУМЕБУ/Л ТМ МТ ОЕВМСІ СМ КАМОМУБМ

І БІССЕВЕОМОТМ ОСРКТОЕНІЕЕБВ ТОМ АССИЕЕМ5ТР

МЕБМОАІ5УМКІЕЗОКОИМКНІНМІКОТМЕМАОЮТБОаК

МЕАІМІЕЕМТОО5І ЕМ55МЕРЕЕМРОВАМІМВІБІСОМ РР

ЗККСУТСНІ ВКЕНСОМУТАБЕБОМАКУМАЇ МСС РИ

РІЗТІ НОСАТООБЇІКІЇ ЕЕМКЕЇ ЕМАЇ КМІОЇІ РКЕЕЇККІ.

ЗЕО

ІО Позначення Послідовність

МО:

ЕМОЕПТ М/УКМІ-РРОБОВЗККУРІ ПОУУСаРОСБОБМ

ВАВЗМЕАММУМІЗУІ АБКЕСММІА Ура ватАгОоаОоКи м

АМУВКІ ММ ЕМЕВОІЇТАУМАКЕРІЕМСРІВЕКАВІАМ/ СМ

УСамУМУ55І А АБатаї ЕКСОИАМАРУЗБЗУМЕУМАЗМУМУТЕ

ВЕМаї РТКООМГЕНУКМЗ ТУМАВАЕМЕАММОМІ ГІНСс

ТАВБОМУНЕОМЗАСІАКАЇ УМАОМОРОАМУ УЗВРОМНаИ г заг зТМНІМТНМТНЕІ косе ЗраккккккКка|анннн

НН сдсссіїсаададнсаїаасісдаадаааагасаа

Щададсасісасасідааддайіанааад даас ашснаїіаааасаншіссааасіддаїй ісаддасаадааіаіснсаїсааісідсадаїааса азаіадіасшаїааандааасаддасааїсаїаї ассашіодадіааіїіадаассаюдаааадідідааїс

Нсааацнасдодснаїсассідаїсддсаацціаїа ісїадааадіщданайсаааастоддадаїасісна сасадсаасаїацнасаїсіаїдасснадсааддад аашдіаададдаааюдадснссісдіссаайнсад їашагцдсюддісдссюдададіааанадсаваї дісіаїсаааасааіаісіатндааасааадассадд адаїссассійсаааіаасаціааддаададааа аїааааїашааддааісссадасіддднаюаад аддааацдснодсіасааааіаюдсісісюдідасіс сіаза(ддаааантодасатаюдсдаааніааюаїа сддаїаіїассаднапйодссіанссіанадасдаїд аасааіаїссіадаасааіаааіайссаїасссааадд сюдадсіаадааїсссоноансддаїашацнаїсда іїІассаснасссідсдіаюіаддіссссаддаадідссі дНссадсааідаїіадссісааддайнананісадії дасісасдідддНасідадаасдаваднодсадчд нуклеотидна послідовність дсіааааададіссадаай шсадіссідісіаїаці конструкції ектодомен пи даснсадддаадасіддсадасаддодайцдіссааад

ЕАР «полі-Іув-міткачтпівв- асссаддадсаїаіадаадааадсадаасіддаяадсі уз 6 мітка даюдайстоцшсаасассадінсадсіаюадс сашсаіасіасааааїашадідасааддаїддсіас ааасаїайсасіаіаіїсааадасасідіддаааадсіа

Псааацйасаадщдодсаадідддаддссаїааататан сададіаасасаддансасіціШайсіадсаадааї пПоаадааіасссіддаадаадааасаіїсіасадаанад санддаадсіаїссіссаадсаадаадіяіднасндсс аїсіааддааадаааддідссааіїанасасадсаадцнй садсдасіасдссаадіасіаїдсасйцаісідсіасадсс саддсаїссссашссасссисаїдаддасдсасідаїс аадааанааааїіссіддаадаааасааддаанддаааа тдсшодаааааіаіссадсідссіааададдааайнаада аасндаадіададааанасшадчадіасаадаїданс

ПеосіссісаанідасадаїсааадаадіаїсссНносіааї їсаадіїадаюдісссідсадісададіцдіааддієд тїашосінНаанодаїаіснаісндсаадчіааддаад даададісандсснпдаюддадчаісдаддадаасадсцщс сааддідасааасіссісіаїдсадідіаїсдаааодсідад тШатдаадндаадассаданасадсідісадааааї іїсаїадааадцдадшсандаїдаааааадааіадссаїа тдаадсюдіссіаїддаддаїасоцсагсасіддсссі тдсаїсюдаасіддісннсааацдідаагадсадіад сіссадісіссадсідддааіанасосадісідісіасаса дададансаїдддісісссаасаааддадаїаасняо

ЗЕО

ІО Позначення Послідовність

МО: адсасіаїаадаансаасідіда(ддсаададсадааїа

ШшШсадааашдіадасіаіснсісаїссасддаасадса даюдаїаадідсасцісаааасісадсасадандсіа аадсісїідднааюсасаадддашссаддсаацід діасістассадаассасддсНаїссоддссщіссасд аассаснНаїасасссасаїдасссаснссіааадсаді дшсісндісадасддсааааадааааадааааадад дссассассаїсассаїсас

АРЗБАУУКРЕСМТКВАЇ! ТІ КОП. МаТЕЗУКТМЕРМУМІЗЕОЕ

М НОЗЕВОМІМЕУМІЕТАВЕЗМИ ММЗ МКЗУМАТОМИІ ЗР

ОВОЕММІ ЕБОУЗКІ М/ ВУЗУ ТАТУМІМ ОЇ ОМИаЕЕУВамЕ

ГРАРІОМІ СМУ5РУСЗКІ АМУМОММІМІ КОВРЕОРРЕОЇІТУ

ТавеЕМАІЕМаіРрУМУМЕЕЕМІ АТКМАГ М/МУЗРОСКНЕ ААУ

МЕЕМО5ОІРПАМЗУУСОСОМРАТІМРУРКАСАКМРУУАМ

ЕІМОТТУРННУаРМЕМРУРЕМІАЗЗОМУЕБУ ТУУЗЗЕВМ

СГ ОМ КАМОМУЗМІ БІСВСЕВЕОМ НАМ ЕСРКМОЕНМЕЕЗА ектодомен мишачого АР тТаМАаагЕМЗТРАЕБОВАТОЗУМУКІЕЗОКрИТчжкнІНМІКОТ 88 «полі-Іув-міткачпівв-мітка МЕМАЮІТЗОаКУ/ЕАІМІЕВМТОО5І ЕМ55МЕРЕ СУ РО ВАМІУ

ВІЗІСМЗРРУККСУТСНІ АЯВКЕВНСОМУ ТАЗЕЗУКАКМУМАЇ МО

УуарРаї РІБТІ НОСАТООБЇОМІ ЕЕМКЕГ ЕМ5І ВМІОЇ РКМЕЇ

Кк красі тлу УкмМІ РРОБОВЗККУР ПОУМасРОЗОВ

МКЗУМЕАУМУТМІ АЗКЕСІМІАЇ Ура ВатАБОСОКРІ НАМ

УВвВКГаММЕМЕВОЇ ТАМАКЕРІЕМОРІОЕЕВІА МС ЗУСО

ММУ5БІ АГ АБатаїі ЕКС,ИІАМАРУБЗБЗМ ЕУУАБІМЗЕВЕМОИЇ

РТКООМГ'ЕНУКМЗТУМАВАЕМЕАМУМОМ ПІНСТАВОММ

НЕОМЗАОСІАКАЇ МУМАОМОБГРОАМУ хБВОМНИЇ ЗавБОМ

НЕУТНМТНЕСКОСЕ5І З реКкКкКкКкКкКкаТанннннн сдісссісаададШасааассідааддааасасааа дададсіснассідааддагатшааа!ю даасаї ісісаїаїаааасаїаннсссаасіяддац садаасаадааїіаїснсаїсааїсідаддаїдаїаас азадіаннаіааїайдааасаададаа!саїаїатєс ашоадіааіїіадсассадаааадідудааюдсіас аданадодцндісассідаїсддсааштоіаїаїсі адааадщанайсааадсісіддсодаайсаїаса садсдасаїасіасаїсіасдасснсадаацадддаа шоїаададо агїасдадсісссісдіссаансадіаї сіа(дсіддісдссіднаддадіааацнадсаїащіаї аїсаааасааїашаніааасааадассаддадаїсс нуклеотидна послідовність асстісаааіааснНайасіддаададааааіадаааї конструкції ектодомен НааюддаагассадасідддоащШаїдаададдааадсі : їдссасааааіацсістоддіддісіссадагдааааанна мишачого ЕАР «кполі-Іув- міткачпівв-мітка дсайаіадаашаадансадаїаіассаананяд ссіайснайадддаюддасавдіаїссіадаасіаї аааіїанссаїіаїссаааддсюдадсіаадааїссдчкі тнсоаншадндасассассіасссісассас дідддсссааддаадідссаднссадааатдаїйадсс їсаадідасіананісадсіддсісасаддщісс аддаасодадіаїснодсадіддсіааааададідса даащісісадіссідісіаїа(ціданісадддаада сюдсадсадддаацдіссааадаассаддадсаїці адаадааадсадаасаддаїдасюдідчанстоі

ПсдасассадсішадссаддаїдссаснеоНасіас ааааїаштадсдасааддаданНасааасатайнсас іІасаїсааадасасюіддаааадсіансааанаса аддодсааддададаоссаїааіаайссодсдіааса

ЗЕО

ІО Позначення Послідовність

МО: саддайсасідішансіадсааюаатодаачдаой асссіддаадаадааасаїсіасадаанадсанддаа асісіссіссдадсаадаадідіднаснодссаїсіаад дааадаааддідссааіацасасадсаадцсадсіа сааадссаадіасіаїдсасісдісюсіаддсссіддс сіссссашссасссіссаїдаддссодсасадассаад аааіїасаадіайадаадаааасааадаасіддаааай сісідадаааіаіссадсідссіааадддаданаадаа дсісааадасдддадасідасшсідаїасаадаїдай сідссіссісадтндасадаїсааадаадіассстосі аайсаадідіаїддадддіссноїадссачадюонаацчі сю4дшасінНаанддаїааснаїсісдсаадіаа дааддддаїадісайдсссюдіададнцдісддддсас їдсшссаадддасааайссюдсаюдссоддіаїса аааасіддддіаїадаадндаддассадсісасадс іїдісадаааайнсаїадаааюдонсайнодатдаада аадааіадссаїадддасіддаіссіасададонаті

Нсаїсссіддсссндсаїсюдаасіддістісааа ідіддсаїадсадіддсіссадісіссадсідддаааї іїасдсаїсіаісіасісадададансаюддссіссса асаааддасдасааїсісдаасасіаїааааансаас ідідадодсаададсадааїашсадаааюіадасі аїснсісаїссасддаасадсадаїдаїаацідсас

Шсадаасісадсасадандсіааадстоднаа їдсасаадіддашссадоасдаїдідаїасісідасс адаассаюддіаганаїсюдосодсісссадааїсаї

Найагасссасаїдасдсасіїссісаадсааені ісшаїсадасддсааааадааааадааааадддсс ассассаїсассаїсас

ВАРРАУМНМЗЕЄЕМТМВАВА ТІ КОП.'ЧатТЕЗУКТЕЕРМУ/ЛЗИаОСЕМ

ГНОБАОММІМІ ММЕТООБМТЗМАТМКОУМАЗММИ ЗРО

ВОЕММІ ЕБОУБКІ М/ ВУЗУ ТАТУМІМОЇ 5ЗМОЕРМВОаМЕЇ РА

РІОМІ СМ/5РУСБЗКІ АМУМОММІМІ КОВРЕОРРЕОІЇТЕМаВЕ

МКІЕМСТ РОМ УМЕЕЕМІ АТКМАГ М/МУЗРМОКЕГ АМАЕЕМО

ТОІРМАУЗУМарЕОУРВАТІМІРУРКАСАКМРЕМАІРНОТТУ

РАУУаРОЕМРУРАМІАЗЗОММУЕБУІ ТУМТРЕВМСТ ОМ К

ВМОММУ5МІ БІССОЕВЕОМЖМ ОТ ОСРКТОЕНІЕЕЗА ТО МУАСОИЕ ектодомен ЕАР мавп ЕМ5ТРУЕБМУВАІЗУУКІЕЗОКРИачмкнІНМІКОТМЕМАОЇІТ5 ціномолгус кполі-Іув- СКМЕАІМІЕВУТОО5І ЕМ55МЕРЕОМРОВАМІМВІВІСОУРРО міткаяпізв-мітка ККСУТСНІ ВКЕНСОУУТАЗЕБЗОМАКУМАЇ УСУаРЇРІЗТІ.

НООАТООБЇІКІЇ ЕЕМКЕГ ЕМАЇ КМІОЇ РКЕЕІККІГЕМОЕЇТІ.

МУКМІ РРОБОВЗККУРІ ГПОУУааРОБОЗУВАЗМЕАММУМІВ

М АЗКЕСММІАІ УравВатАРОСОКІ І МАУУАКаУМЕМЕ

РОІТАМАКЕРІЕМОаРІСЕКАІА М СМУуЗМОСУМУБОІ АГ АБИТа

ГЕКСИаїАМАРУБЗБЗУ ЕУУАЗУМТЕВЕМаї РТКООМГЕНУКМ

ЗТУМАВАЕМЕАММОМ ГІНИТАВОМУНЕОМЗАОТІАКАЇ М

МАОМОРОАМУ РОМНИ За 5 ТМНІ МТНМТНЕ КОСЕ зі 5ерае7ккккккКа|анннннн сдсссіссаададнсаїаасісідаадааааїасааї дададсасісасасідааддаїанніааа ддааса

Нуклеотидна послідовність ІсНнаіаааасанціссааасіддашес .. ЕАР аддасаадааіаіснНсаїсааісідсадаїаасаа 91 конструкції ектодомен. їаїадїтасЩаіааіандааасаддасааїсаїа мавп ціномолгус кполі-Іув- міткачпівв-мітка їассайнодадіаасадаассадааааддюаа їдснсааанаюддснагсассідаїсддсаані діаїаіїстадааадічанансааадсщодадаїа сісцасасадсаасаїанасаїсіаюдассцадса

ЗЕО

ІО Позначення Послідовність

МО: аддадаацшдіаададдааададснссісдієса ансадіашаюдсюддісдссіднаддадіааай адсаїацісіаїсаааасааіаєсіанідааасааа дассаддадаїссассінсаааіаасашааюдчава ададааааіааааїашааюддааісссадасідаді

Наюдаададдааадсндсіасааааадвчсісісі даюдісіссіаадаааанноддсайадсадааї

Нааюаїйасадаїагассаонандссіанссіай аддсдаїюдаасааіаісссадаасааїааатайнсса іїІасссаааддссодадсіаадааіїссітнонсддаїа

ШапнНаїсдагассаснасссідсодіаюіаддісєссс аддаадідссіднссадсаадаїадссісаадщай ацашсаоноддсісасдаіддоанасдаїдаасдацді адшосадіддсіааааададісєсадааїй сода сндісіаїаі(цдіданісадддаадасіддсадасаїд9 дандіссааадасссаддадсаїаіїадаадааадсада асіюдададсівддданстдщтсаасассадн іїсадсіадаїдссашсаїасіасааааїашадідас ааддаюддсіасааасаіайнсасіаіаіїсааадасасід тддаааафдсіайсааанасаадіддсаадідччдаддс саїаааіаіайсададіаасасаддайсасюннай сіадсаадаашодааданасссіддаадаадааасаї сіасадаанадсайддаадсіаїссіссаадсаадаад тдідНасндссаїсіааддааадаааддідссааїай асасадсаадшсадсдасіасдссаадіасіаюсасі ідісідсіаїддсссаддсаїссссацшссассснсаю асддасодсасідаїсаадааанааааїссіддаадааа асааддаанддааааїсцодаааааіаїссадсідс сіааададдазанаадааасндаадіадаюдааана сшащдаїасаадаїданснссіссісаашдасада іїсааадаацдіаіїсссндсіаайсаадюацдаюдаісс сюсадісададідіааддієюташдсювнаанода їаїснаїсндсаадіааддаадддаддісайцоссца діоддададісддддаасадстссааддщдасааасісс щіаюдсадщіаіїсдааадсідддіщтагцдааднодаа дассаданасадсщдісадаааансаїадааатддні сандаїдаааааадааіадссаіададасіодіссіад даддаїаднсаїсасіддсссндсаїсіддаасідчдіс

Ійсааадюдадагадсадідадсіссадісіссадсідчвава ааїанйасосдісіцісіасасадададайнсадднчоісісс саасаааддаїдаїаасідадсасіаїаадаансаасід аїддсаададсадааіашсадаааюіадасіаїснсї саїссасддаасадсадацаїаадідсаснісаааасіс адсасадандсіааадсісідднНаадсасаадддат ссаддсаадіддіасісідассадаассасдаснаїсса дссідіссасдаассаснНаіасасссасаюдасссаснсос іІааадсадідшсістодісадасддсааааадааааад ааааадддссассассаїсассаїсас 96 |людськийСО2О0 0 |ОпіргоїМе РІТВ36ЇГ/:7777777777711111111111111111с1С 98 |людськийОХ4О | ОпіргоїМе Р4АЗ489/-/: КД 99 |людський4-1ВВ | ОпіргоїМе 007011.

ЗЕО

МО: пептидний лінкер

Ес-ланцюга із "западиною нуклеотидна послідовність конструкції людський 125 антиген ОХ. Ес ланцюг з | ЗМИВ. таблицю 2 "виступом" нуклеотидна послідовність мавп ціномолгус- Ес- ланцюг з "виступом" нуклеотидна послідовність конструкції мишачий 127 антиген ОХА0-Ес-ланцюг з | ЗМИВ. таблицю 2 "виступом" ее ол с ПО 129 | антиген ОХ40-Ес-ланцюг з | див. таблицю 2 "виступом" ср не 130 | мавп ціномолгус-Ес- див. таблицю 2 ланцюг з "виступом» конструкція мишачий "виступом" нуклеотидна послідовність іа Й кис НО 133 | легкого ланцюга Бар див. таблицю 4

УКІ1 5

ЗЕО

МО:

МК ан кс 135 | важкого ланцюга Гар див. таблицю 4

УНІ 69 зерен дення 148 | легкого ланцюга Гар див. таблицю 7

УкЗз 20 нуклеотидна послідовність

УНЗ 23 удо фен 159 | легкого ланцюга Бар див. таблицю 10

МІЗ 19

ЗЕ

ІО Позначення Послідовність

МО: нуклеотидна послідовність

ОХА40(2087), УН див. таблицю 12 нуклеотидна послідовність

ОХАО(СІ С-563), МІ. див. таблицю 12 нуклеотидна послідовність

ОХАО(СІ С-563), УН див. таблицю 12 нуклеотидна послідовність

ОХАО(СІ С-564) МІ. див. таблицю 12 нуклеотидна послідовність

ОХАО(СІ С-564), УН див. таблицю 12 нуклеотидна послідовність

ОХАО(17А9), МІ. див. таблицю 12 нуклеотидна послідовність

ОХА0(17А9), УН див. таблицю 12 8НУО РЗ2г9ОІ АГА Ід . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13 8НУО РЗ2г9ОІ АГА Ід . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13 182 ВНЗ РЗ29ОІ АГА ДС див. таблицю 13 (легкий ланцюг) 8НУО РЗ2г9ОІ АГА Ід 4984 РЗ29ИЇ АГА да . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13 4984 РЗ29ИЇ АГА да . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13 4984 РЗ29ИЇ АГА да 187 4984 РЗ29ОБІ АГА ІДС див. таблицю 13 (важкий ланцюг) 124 РЗ2О9СІ АГА Іде . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13 124 РЗ2О9СІ АГА Іде . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13 124 РЗ2О9СІ АГА Іде 194 104 РЗ29БІ АГА да див. таблицю 13 (важкий ланцюг) 2087 РЗ29Иї АГА да . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13 2087 РЗ29Иї АГА да . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13 194 2087 РЗ2ЗОІ-АГА ди див. таблицю 13 (легкий ланцюг) 2087 РЗ29Иї АГА да

СІ С-563 РЗ29СІ АГА Іде . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13

СІ С-563 РЗ29СІ АГА Іде . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13

СІ С-563 РЗ29СІ АГА Іде

СІ-С-563 РЗ29С1Г АГА 1961 див. таблицю 13 (важкий ланцюг)

СІ С-564 РЗ29СІ АГА Іде . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13

ЗЕО

ІО Позначення Послідовність

МО: важкий лан ди нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13 202 СІ С-564 РЗ29СІ АГА Іде ив. таблицю 13 (легкий ланцюг) див. В 203 СІ С-564 РЗ29СІ АГА Іде ив. таблицю 13 (важкий ланцюг) див. В 1789 РЗ29ОІ-АГА ди нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13 легкий ланцюг 17А9 РЗ29Иї АГА Іда1 . . нуклеотидна послідовність, див. таблицю 13 17А9 РЗ29С1ГАГА Ід див. таблицю 13 легкий ланцюг 17А9 РЗ29СІГ АГА Ід див. таблицю 13 важкий ланцюг людський ОХ40-Нів людський ОХ40-Нів див. таблицю 15 мишачий ОХ40-Нів мишачий ОХ40-Нів див. таблицю 15 нуклеотидна послідовність 212 | конструкції димерний див. таблицю 21 людський антиген ОХ40-Ес конструкція димерний 213 | людський антиген ОХ40-п | див. таблицю 21

Ес (889) МНСНІ -важкий . . 214 ланцюг-(28НІ) УНСІ. нуклеотидна послідовність, див. таблицю 25 дв -легкий ланцюг 2 нуклеотидна послідовність, див. таблицю 25 (889) МУНСНІ -важкий 216 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. див. таблицю 25

МІСНІ легкий ланцюг 2 див. таблицю 25 (4984) МНОСНІ -важкий . . 218 ланцюг-(28Н1) УНСІ. нуклеотидна послідовність, див. таблицю 25 (4984) МНОСНІ -важкий 219 панцюг-(28Н1) УНСІ. див. таблицю 25 (124) МНОСНІ-важкий . . 220 ланцюг-(28Н1) УНСІ. нуклеотидна послідовність, див. таблицю 25 (124) МНСНІ-важкий 221 ланцюг-(28Н1) УНСІ. див. таблицю 25 (2087) МНСНІ -важкий . . 222 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. нуклеотидна послідовність, див. таблицю 25 (2087) МНСНІ -важкий 223 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. див. таблицю 25 (СІ 6б-563) МНОСНІ -важкий . . 224 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. нуклеотидна послідовність, див. таблицю 25 (СІ 6б-563) МНОСНІ -важкий 225 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. див. таблицю 25 (СІ 6б-564) МНОСНІ -важкий . . 226 ланцюг-(28Н1) УНСІ. нуклеотидна послідовність, див. таблицю 25 (СІ 6б-564) МНОСНІ -важкий 227 ланцюг-(28Н1) УНСІ. див. таблицю 25 (евнт) УНОЇ важкий нуклеотидна послідовність, див. таблицю 27 ланцюг із "западиною» (2вНІ) МНОЇ--важкий див. таблицю 27 ланцюг із "западиною»

ЗЕО

ІО Позначення Послідовність

МО: (4984) МНОСНІ -важкий . . 230 ланцюг з "виступом» нуклеотидна послідовність, див. таблицю 27 (4984) УНСНІ -важкий див. таблицю 27 ланцюг з "виступом» (164) МНОНІ "важкий нуклеотидна послідовність, див. таблицю 27 ланцюг з "виступом» (1024) УНСНІ -важкий див. таблицю 27 ланцюг з "виступом» (2087) УНСНІ важкий нуклеотидна послідовність, див. таблицю 27 ланцюг з "виступом» (2087) УНСНІ -важкий див. таблицю 27 ланцюг з "виступом» (С1-0-563) МНОНІ важкий нуклеотидна послідовність, див. таблицю 27 ланцюг з "виступом» (СІ-С-563) УНСНІ -важкий див. таблицю 27 ланцюг з "виступом» (С1-С-564) УНН важкий нуклеотидна послідовність, див. таблицю 27 ланцюг з "виступом» (СІ-С-564) УНСНІ -важкий див. таблицю 27 ланцюг з "виступом» свв мавп ціномолгус, | ду 24186 мишачий 4-188, ЕСО Р2ОЗ334, аа 24-187 конструкція людський 242 | антиген 4-18В-Ес-ланцюг з| нуклеотидна послідовність, див. таблицю 37 "виступом» конструкція антиген 4-188 243 | мавп ціномолгус-Ес- нуклеотидна послідовність, див. таблицю 37 ланцюг з "виступом» конструкція мишачий 244 | антиген 4-18В-Ес-ланцюг з| нуклеотидна послідовність, див. таблицю 37 "виступом» конструкція людський 245 | антиген 4-18В-Ес-ланцюг з| див. таблицю 37 "виступом» конструкція антиген 4-188 246 | мавп ціномолгус-Ес- див. таблицю 37 ланцюг з "виступом» конструкція мишачий 247 | антиген 4-18В-Ес-ланцюг з| див. таблицю 37 "виступом» праймер М563 див. таблицю 43 нуклеотидна послідовність 4-188В(1283), М. див. таблицю 44 нуклеотидна послідовність 4-18В(1283), МН див. таблицю 44 нуклеотидна послідовність 4-188(25С7), М. див. таблицю 44 нуклеотидна послідовність 4-188(25С7), МН див. таблицю 44 нуклеотидна послідовність 4-1ВВ(1105), МІ. див. таблицю 44 нуклеотидна послідовність 418ВВ(1105), МН див. таблицю 44 нуклеотидна послідовність 4-18В(9811), М. див. таблицю 44

ЗЕ

ІО Позначення Послідовність

МО: нуклеотидна послідовність 4-1ВВ(9811), МН див. таблицю 44 нуклеотидна послідовність 4-18В(20с2), М. див. таблицю 44 нуклеотидна послідовність 4-188(20с2), УН див. таблицю 44 1283 РЗ29ИЇ АГА ІдСа1 . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 45 1283 РЗ29ИЇ АГА ІдСа1 . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 45 1283 РЗ29С1ГАГА Ід див. таблицю 45 легкий ланцюг 262 1283 РЗ29ОГ АГА ІДС див. таблицю 45 (важкий ланцюг) 250217 РЗ29СИІ АГ А Іде . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 45 250217 РЗ29СИІ АГ А Іде . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 45 250217 РЗ29СИІ АГ А Іде 250217 РЗ29СИІ АГ А Іде 1105 РЗ2О9ОІ АГА Ід . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 45 1105 РЗ2О9ОІ АГА Ід . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 45 1105 РЗ2О9ОІ АГА Ід 1105 РЗ29Б01 АГА ІДС див. таблицю 45 (важкий ланцюг)

ЗВ РЗ29ОІ-АГА ди нуклеотидна послідовність, див. таблицю 45 (легкий ланцюг)

ЗВ РЗ29ОІ АГА ди нуклеотидна послідовність, див. таблицю 45 важкий ланцюг 273 9811 РЗ29ОГАГА ІДС див. таблицю 45 (легкий ланцюг) 9811 РЗ29Б1 АГА ІДС див. таблицю 45 (важкий ланцюг) 20022 РЗ29СІ АГ А Іде . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 45 20022 РЗ29СІ АГ А Іде . й нуклеотидна послідовність, див. таблицю 45 277 2002 РЗ29ОІ АГА де див. таблицю 45 (легкий ланцюг) 278 2002 РЗ29ОІ АГА Ідс1 див. таблицю 45 (важкий ланцюг) ти4-188 01 / пи4-188 0- див. таблицю 56

Ес з "виступом» пи4-188 01 / ти4-188 02- пи4-188 01-Ез "виступом» | див. таблицю 56 мишачий 4-188, домен 01 людський 4-188, домен 02

ЗЕ

ІО Позначення Послідовність

МО: людський 4-188, домен 01 мишачий 4-188, домен 02 (1283) МНОСНІ -важкий . й 286 ланцюг-(28Н1) УНСІ. нуклеотидна послідовність, див. таблицю 60 (1283) МНОСНІ -важкий 287 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. див. таблицю 60 (2507) МНОСНІ -важкий . . 288 ланцюг-(28Н1) УНСІ. нуклеотидна послідовність, див. таблицю 60 (2507) МНОСНІ -важкий 289 панцюг-(28Н1) УНСІ. див. таблицю 60 (1105) МНСНІ-важкий . . 290 ланцюг-(28Н1) УНСІ. нуклеотидна послідовність, див. таблицю 60 (1105) МНСНІ-важкий 291 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. див. таблицю 60 (9811) МНОСНІ-важкий . й 292 ланцюг-(28Н1) УНСІ. нуклеотидна послідовність, див. таблицю 60 (9811) МНОСНІ-важкий 293 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. див. таблицю 60 (1283) УНСНІ важкий нуклеотидна послідовність, див. таблицю 65 ланцюг з "виступом» (1283) УНСНІ -важкий див. таблицю 65 ланцюг з "виступом» (2507) МНОСНІ -важкий . . 296 ланцюг з "виступом» нуклеотидна послідовність, див. таблицю 65 (2507) УНСНІ -важкий див. таблицю 65 ланцюг з "виступом» (1105) МНСНІ-важкий . . 298 ланцюг з "виступом» нуклеотидна послідовність, див. таблицю 65 (1105) УНСНІ -важкий див. таблицю 65 ланцюг з "виступом» 300 | анцюг з "виступом 100) панцюг з "виступом» нуклеотидна послідовність, див. таблицю 65 (9811) УНСНІ -важкий див. таблицю 65 ланцюг з "виступом» (8НУ) МНОНІ важкий . .

З02 ланцюг з "виступом» нуклеотидна послідовність, див. таблицю 27 (8НУ) МНОНІ важкий 303 ланцюг з "виступом» див. таблицю 27 (4984) УНСНІ-Ес з "виступом»-МН (489) 304 | (нуклеотидна див. таблицю 30 послідовність важкого ланцюга 1) (4984) УНОСНІ-Ес із "западиною»-МІ (489) 305 | (нуклеотидна див. таблицю 30 послідовність важкого ланцюга 2 (4984) УНСНІ-Ес з 306 | "виступом" -МН (489) див. таблицю 30 (важкий ланцюг 1) (4984) УНОСНІ-Ес із 307 | "западиною»-МІ (489) див. таблицю 30 (важкий ланцюг 2)

ЗЕО

ІО Позначення Послідовність

МО: (4984) УНСНІ-Ес з "виступом" -МН (28НІ1) 308 | (нуклеотидна див. таблицю 30 послідовність, важкий ланцюг 1) (4984) УНОСНІ-Ес із "западиною»-М/. (28Н1) 309 | (нуклеотидна див. таблицю 30 послідовність, важкий ланцюг 2) (4984) УНСНІ-Ес з 310 | "виступом»-МН (28НІ1) див. таблицю 30 (важкий ланцюг 1) (4984) УНОСНІ-Ес із 311 | "западиною»-МІ. (28Н1) див. таблицю 30 (важкий ланцюг 2) (4984) УНСНІ-Ес з "виступом»-МН (ОР47) 312 | (нуклеотидна див. таблицю 30 послідовність, важкий ланцюг 1) (4984) МНОНІ1-Ес із "западиною»- МІ (ОР47) 313 | (нуклеотидна див. таблицю 30 послідовність, важкий ланцюг 2) (4984) УНСНІ-Ес з 314 | "виступом" -МН (ОРА7) див. таблицю 30 (важкий ланцюг 1) (4984) УНОСНІ-Ес із 315 | "западиною»-МІ (ОРА7) див. таблицю 30 (важкий ланцюг 2) (1283) МНОНІ-Ес з 316 (нуклеотидня (189) див. таблицю 70 послідовність НС 1) (1283) МНОНТІ1-РЕс із 317 укпвотидна (189) див. таблицю 70 послідовність НС) (1283) МНОНІ-Ес з 318 | "виступом" МН (489) див. таблицю 70 (важкий ланцюг 1) (1283) МНОНТІ1-РЕс із 319 | "западиною»-МІ (489) див. таблицю 70 (важкий ланцюг 2) (25217) МНСНІ-Ес з "виступом»-МН (489) 320 | (нуклеотидна див. таблицю 70 послідовність, важкий ланцюг 1) (25217) МНСНІ-Ес із "западиною»-МІ (489) 321 | (нуклеотидна див. таблицю 70 послідовність, важкий ланцюг 2)

ЗЕО

ІО Позначення Послідовність

МО: (25217) МНСНІ-Ес з 322 | "виступом»-МН (489) див. таблицю 70 (важкий ланцюг 1) (25217) МНСНІ-Ес із 323 | "западиною»-МІ (489) див. таблицю 70 (важкий ланцюг 2) (1105) МНОСНІ-Ес з "виступом»-МН (489) 324 | (нуклеотидна див. таблицю 70 послідовність, важкий ланцюг 1) (1105) МНОНІ-Ес із "западиною»-МІ (489) 325 | (нуклеотидна див. таблицю 70 послідовність, важкий ланцюг 2) (1105) МНОСНІ-Ес з 326 | "виступом»-МН (489) див. таблицю 70 (важкий ланцюг 1) (1105) МНОНІ-Ес із 327 | "западиною»-МІ. (489) див. таблицю 70 (важкий ланцюг 2) (9811) МУНСНІ-Ес з "виступом»-МН (489) 328 | (нуклеотидна див. таблицю 70 послідовність, важкий ланцюг 1) (9811) МНОНТІ1-Ес із "западиною" МІ. (489) 329 | (нуклеотидна див. таблицю 70 послідовність, важкий ланцюг 2) (9811) МУНСНІ-Ес з 330 | "виступом»-МН (489) див. таблицю 70 (важкий ланцюг 1) (9811) МНОСНІ-Ес із 331 | "западиною»-МІ (489) див. таблицю 70 важкий ланцюг 2 (1283) МНОНІ-Ес з 332 (нуклеотидна (189) див. таблицю 71 послідовність НС 1) (1283) МНОНТІ1-РЕс із 333 лесная (185) див. таблицю 71 послідовність НС) (1283) МНОНІ-Ес з 334 | "виступом»-МІ (489) див. таблицю 71 (важкий ланцюг 1) (1283) МНОНТІ1-РЕс із 335 | "западиною»-УН (489) див. таблицю 71 (важкий ланцюг 2) (25217) МНСНІ-Ес з "виступом»-МІ. (489) 336 | (нуклеотидна див. таблицю 71 послідовність, важкий ланцюг 1)

ЗЕО

ІО Позначення Послідовність

МО: (25217) МНСНІ-Ес із "западиною»-УН (489) 337 | (пуклеотидна див. таблицю 71 послідовність, важкий ланцюг 2) (25217) МНСНІ-Ес з 338 | "виступом»-МІ. (489) див. таблицю 71 важкий ланцюг 1 (25217) МНСНІ-Ес із 339 | "западиною»-УН (489) див. таблицю 71 (важкий ланцюг 2) (1105) МНОСНІ-Ес з "виступом»-МІ. (489) 340 | (нуклеотидна див. таблицю 71 послідовність, важкий ланцюг 1) (1105) МНОНІ-Ес із "западиною»-УН (489)

ЗА1 | (нуклеотидна див. таблицю 71 послідовність, важкий ланцюг 2) (1105) МНОСНІ-Ес з 342 | " виступом»-МІ. (489) див. таблицю 71 (важкий ланцюг 1) (1105) МНОНІ-Ес із 343 | "западиною»-УН (489) див. таблицю 71 (важкий ланцюг 2) (9811) МУНСНІ-Ес з "виступом»-МІ. (489) 344 | (нуклеотидна див. таблицю 71 послідовність, важкий ланцюг 1) (9811) МНОНТІ1-Ес із "западиною»-УН (489) 345 | (нуклеотидна див. таблицю 71 послідовність, важкий ланцюг 2) (9811) МУНСНІ-Ес з 346 | "виступом»-МІ. (489) див. таблицю 71 (важкий ланцюг 1) (9811) МНОСНІ-Ес із 347 | "западиною»-УН (489) див. таблицю 71 (важкий ланцюг 2)

Всі нуклеотидні послідовності представлені без відповідних послідовностей стоп-кодону.

Нижче перераховані специфічні варіанти здійснення винаходу: 1. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула, що містить (а) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації. 2. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за п. 1, де представник сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів вибраний з групи, що складається з ОХ40 і 4-188. 3. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за п. 1 або п. 2, де представник сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів являє собою ОХ40.

4. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-3, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ- рецепторів, зв'язується з поліпептидом, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО. 5. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-4, що містить принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, де вказаний фрагмент містить МН-домен, який містить (І) СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:2 і БЕО ІЮ МОЗ, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮО МО:4 ії БЕО ІО МО:5, і (І) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:6, 5ЕО ІЮ МО:7, ЗЕО І МО:8, 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО ІЮ МО:10, 5ЕО 10 МО:11 ї БЕО ІЮ

МО:12, і МІ -домен, який містить (М) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:13, 5ЕО І МО:14 і БЕО ІЮ МО:15, (М) СОВ-1І2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:16, 5ЕО І МО:17 і БЕО ІЮ МО 18, (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:19, 5ЕО ІЮ МО:20, 5ЕО ІЮ МО:21, 5ЕО ІЮ МО:С22, 5ЕО ІЮ МО:23 і БЕО ІЮ МО 24. 6. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-5, в якій фрагмент, який має здатність зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 9в, 97 У», 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності, вибраної з групи, що складається з 5ЕО І0

МО:25, 5ЕО ІЮ МО:27, 5ЕО ІЮ МО:29, 5ЕО ІО МО:31, 5ЕО І МО:33, 5ЕО ІЮО МО:35 ї 5ЕО І

МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності, вибраної з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО:26, 5ЕО 10 МО:28, 5ЕО І МО:30,

ЗЕО ІЮ МО:32, ЗЕО ІО МО:34, 5ЕО І МО:36 і БЕО 10 МО:З38.

Зо 7. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-5, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:25, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:26, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО С28, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:29, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:З0, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:31, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:32, (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:34, (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:36, або (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:З8. 8. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за п. 1 або п. 2, де представник сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів являє собою 4-188. 9. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1, 2 або 8, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ- рецепторів, зв'язується з поліпептидом, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО І

МО:39. 10. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1, 2, 8 або 9, що містить бо принаймні один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, де вказаний фрагмент містить МН-домен, який містить (І) а СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:40 і БЕО ІЮ МО:С41, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:42 і 5ЕО ІЮ МО 43, і (І) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:44, 5ЕО ІЮ МО:45, 5ЕО ІЮ МО:46, 5ЕО ІЮ МО:47 ії БЕО ІЮ МО:48, і МІ -домен, який містить (ІМ) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:49 і БЕО ІЮ МО:50, (М) СОВ-1І2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:51 і БЕО ІО МО:52, і (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:53, 5ЕО ІЮ МО:54, 5ЕО ІЮ МО:55, 5ЕО ІЮ МО:56 і БЕО ІЮ МО:57. 11. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1, 2, 8, 9 або 10, в якій фрагмент, який має здатність зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Уо, 98 95, 99 95 або 100 95 який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО:58, 5ЕО ІЮ МО:60, 5ЕО ІЮ МО:62, 5ЕО І МО:64 і 5ЕО ІЮО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 9595, 9695, 9795, 9895, 99595 або 10095 який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО:59, 5ЕО ІЮ МО:61, 5ЕО ІО МО:63,

ЗЕО ІЮ МО:65 і БЕО ІЮ МО:67. 12. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за пп. 1, 2, ії 8-11, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:58, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:59, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

Зо ІО МО:60, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:61, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:62, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:63, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:64, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:65, або (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:67. 13. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-12, де антиген клітини- мішені вибраний з групи, що включає фібробласт-активуючий білок (БАР), асоційований з меланомою хондроїтинсульфат-протеоглікан (МСО5Р), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕВ), карциноембріональний антиген (СЕА), СО19, СО20 і СО33. 14. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-13, де антиген клітини- мішені являє собою фібробласт-активуючий білок (ЕАР). 15. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-13, в якій фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить МН-домен, який містить (І) а СОВ-НІ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:68 і 5ЕО ІЮ МО:69, (І) СОВ-Н2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:70 і БЕО ІЮ МО-71, і (І) СОВ-НЗ, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:72 і БЕО ІЮ МО:73, і МІ -домен, який містить (М) СОВ-11, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:74 і БЕО ІЮ МО:75, (М) СОВ-1І2, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІО МО:76 і БЕО І МО:77, і бо (МІ) СОВ-І 3, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:78 і БЕО ІЮ МО:79. 16. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-7, в якій () фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО І

МО:25, 5ЕО ІЮ МО:27, 5ЕО ІЮ МО:29, 5ЕО ІО МО:З31, 5ЕО ІЮ МО:33, 5ЕО І МО:35 або 5ЕО ІЮ

МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО:26, 5ЕО ІЮ МО:28, 5ЕО І МО:30, 5ЕО І МО:32, 5ЕО ІЮ МО:34, 5ЕО

ІО МО:36 або 5ЕО ІО МО:38, і (І) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО І

МО:80 або 5ЕО ІО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 90, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО:81 або 5ЕО ІО МО:83. 17. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1, 2 або 8-12, в якій () фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з 4-188, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 560 ІЮ

МО:58, 5ЕО ІЮ МО:60, 5ЕО І МО:62, 5ЕО ІО МО: 64 або 5ЕО ІЮО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності ЗХЕО ІЮ МО:59, 5ЕО

ІО МО:61, БЕО ІО МО:63, 5ЕО ІЮ МО:65 або 5ЕО ІО МО:67, і (І) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 Зо, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО І

МО:80 або 5ЕО ІО МО:82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка принаймні приблизно на 95 95, 96 95, 97 95, 98 90, 99 95 або 100 95 ідентична

Ко) амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО:81 або 5ЕО ІО МО:83. 18. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-17, де вказана молекула містить (а) перший Рар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) другий РГар-фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації. 19. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-18, в якій Ес-домен являє собою Ес-домен людського Іда, зокрема, Ес-домен ІДИ або Ес-домен Ідса. 20. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-19, в якій Ес-домен містить одну або декілька амінокислотну(их) заміну (н), яка (ї) знижує (ють) афінність зв'язування антитіла з Ес-рецептором і/або ефекторну функцію. 21. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-20, в якій Ес-домен являє собою Ес-домен людського Ідс11-підкласу з амінокислотними мутаціями І234А, І 235А і РЗ2гОС (нумерація згідно з ЕО-індексом Кебота). 22. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-21, в якій Ес-домен містить модифікацію, що сприяє асоціації першої і другої субодиниць Ес-домену. 23. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-22, в якій перша субодиниця Ес-домену містить "виступи", а друга субодиниця Ес-домену містить "западини" згідно з технології "Кпор-іпіо-поїе". 24. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-23, в якій перша субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни 53540 і ТЗ66МУу (нумерація згідно з ЕО- індексом Кебота), а друга субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни М349С, 73665 і

У407М (нумерація згідно з ЕЮО-індексом Кебота). 25. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-24, що містить (а) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, (516) і

(в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до стабільної асоціації. 26. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за п. 25, де біспецифічна антигензв'язуюча молекула є двовалентною як по відношенню до представника сімейства костімуляторних ТМЕ- рецепторів, так і по відношенню до антигена клітини-мішені. 27. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-24, що містить (а) два легких ланцюги і два важких ланцюги антитіла, що містить два Гар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ- рецепторів, і Ес-домен, і (в) два додаткових Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, в якій кожний із вказаних додаткових РГар-фрагментів з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцями важких ланцюгів, вказаних у підпункті (а). 28. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за п. 27, в якій два додаткових Гар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, являють собою кросовер-Рар-фрагменти, в яких варіабельні домени МІ і УН замінені один на одного і кожний з

МІ-СН-ланцюгів з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцями важких ланцюгів, вказаних у підпункті (а). 29. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за п. 27 або п. 28, в якій два Гар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ- рецепторів, являють собою два Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з

ОХ40 або 4-188, а два додаткових РГар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном клітини-мішені, являють собою кросовер-Рар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з ЕАР. 30. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із попередніх пунктів, що містить (а) два фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ-рецепторів, (б) один фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини-мішені, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до

Зо стабільної асоціації. 31. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за п. 30, де біспецифічна антигензв'язуюча молекула є двовалентною по відношенню до представника сімейства костімуляторних ТМЕ- рецепторів і одновалентною по відношенню до антигена клітини-мішені. 32. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із попередніх пунктів, що містить (а) два легких ланцюги і два важких ланцюги антитіла, що містить два Гар-фрагменти, які мають здатність специфічно зв'язуватися з представником сімейства костімуляторних ТМЕ- рецепторів, і Ес-домен, і (б) МН- і Мі-домени, які мають здатність специфічно зв'язуватись з антигеном клітини- мішені, де МН-домен з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів і де

МІ-домен з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем другого важкого ланцюга. 33. Полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу за будь-яким із пп. 1-32. 34. Антитіло, яке специфічно зв'язується з ОХ40, де вказане антитіло містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:25, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність ЕС

ІО МО:26, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО С28, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:29, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:З0, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:31, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:32, (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:34, (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО бо ІО МО:35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:36, або (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:З8. 35. Антитіло, яке специфічно зв'язується з 4-188, де вказане антитіло містить (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ

МО:58, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:59, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:60, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:61, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:62, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:63, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:64, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІЮ МО:65, або (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ФЕО

ІО МО:66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність

ЗЕО І МО:67. 36. Полінуклеотид, який кодує антитіло за п. 34 або п. 35. 37. Фармацевтична композиція, що містить біспецифічну антигензв'язуючу молекулу за будь-яким із пп. 1-32 або антитіло за п. 34 або п. 35 і принаймні один фармацевтично прийнятний ексципієнт. 38. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-32, або антитіло за п. 34 або п. 35, або фармацевтична композиція за п. 37, призначені для застосування як лікарського засобу. 39. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-32, або антитіло за п. 34 або п. 35, або фармацевтична композиція за п. 37, призначені для застосування для (І) стимуляції Т-клітинної відповіді, (І) підтримання виживаності активованих Т-клітин, (І) лікування інфекцій, (ІМ) лікування раку, (М) уповільнення прогресування раку або (МІ) пролонгування часу життя пацієнта, що страждає на рак. 40. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-32 або антитіло за п. 34 або п. 35, або фармацевтична композиція за п. 37, призначені для застосування для лікування раку. 41. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-32 або антитіло за п. 34 або п. 35, або фармацевтична композиція за п. 37, призначені для застосування для лікування раку, в якому біспецифічну антигензв'язуючу молекулу вводять в комбінації з хіміотерапевтичних засобом, променевою терапією і/або іншими агентами, призначеними для застосування в протираковій імунотерапії. 42. Спосіб інгібування росту пухлинних клітин в індивідуума, що включає введення індивідууму в ефективній кількості біспецифічної антигензв'язуючої молекули за будь-яким із пп. 1-32 або антитіла за п. 34 або п. 35, або фармацевтичної композиції за п. 37 для інгібування росту пухлинних клітин.

Приклади

Нижче представлені приклади способів і композицій, зазапропонованих у винаході. Як повинно бути очевидно, можна втілювати на практиці різні інші варіанти здійснення винаходу в цілому з урахуванням представленого вище опису винаходу.

Методи рекомбінантних ДНК

Для маніпуляцій з ДНК використовували стандартні методи, описані в ЗатргоокК .. та ін.,

Моїесшіаг сіопіпд: А Іабогайгу тапиаї!; вид-во Соїд ргіпд Нагбог І арогаїогу Рге55, Соїд Зргіпа

Натбог, Мем ХоїКк, 1989. Реагенти для молекулярної біології застосовували згідно з інструкціями виробників. Загальну інформацію, що стосується нуклеотидних послідовностей легких і важких ланцюгів людських імуноглобулінів, див. у: Кабраї Е.А. та ін., бедиєепсе5з ої Ргоївїп5 ої

Іттипоіодісаї! Іпіегеві, 5-те вид., вид-во МІН, публікація М 91-3242, 1991.

Секвенування ДНК 60 Послідовності ДНК визначали шляхом секвенування двох ланцюгів.

Синтез генів

Необхідні сегменти генів або створювали за допомогою ПЛР з використанням відповідних матриць, або синтезували на фірмі Сепеагй АС (Регенсбург, Німеччина) з синтетичних олігонуклеотидів і ПЛР-продуктів за допомогою автоматичного синтезу генів. У тих випадках, коли точна генна послідовність не була доступною, створювали олігонуклеотидні праймери на основі послідовностей найближчих гомологів і гени виділяли за допомогою ЗТ-ПЛР з РНК, одержаної з відповідної тканини. Сегменти генів, фланкіровані одиничними сайтами, розпізнаваними рестрикційними ендонуклеазами, клонували в стандартних клонуючих/секвенуючих векторах. Плазмідну ДНК очищали з трансформованих бактерій і визначали концентрацію за допомогою Уф-спектроскопії. Послідовність ДНК субклонованих фрагментів генів підтверджували ДНК-секвенуванням. Створювали сегменти генів з необхідними сайтами рестрикції, що дозволяють субклонувати їх у відповідних експресійних векторах. Всі конструкції створювали з 5'-кінцевою послідовністю ДНК, що кодує лідерний пептид, який направляє секрецію білків в еукаріотичних клітинах.

Очистка білків

Білки очищали з профільтрованих супернатантів клітинних культур згідно зі стандартним протоколом. В цілому, метод полягав у наступному: антитіла вносили в колонку з білок А- сефарозою (фірма ЗЕ Неайсаге, Швеція) і промивали за допомогою ЗФР. Елюцію білків здійснювали при значенні рН 2,8, після чого негайно проводили нейтралізацію зразка.

Агреговані білки відокремлювали від мономерних антитіл за допомогою гель-фільтрації (Супердекс 200, фірма СЕ Неайсаге) в ЗФР або в буфері, що містить 20мм гістидин, 150мМ масі, рн 6,0. Фракції мономерних антитіл об'єднували, концентрували (за необхідності), використовуючи, наприклад, центрифужний концентратор МІС 'ІРОКЕ Атісоп ОйКга (30 МУУСО), заморожували і зберігали при температурі -207 С або -807 С. Частинина зразків використовували для подальшого аналітичного аналізу білків і аналітичної характеризації, наприклад, за допомогою ДСН-ПААГ, гель-фільтрації (ЗЕС) або мас-спектрометрії -20 "С або - 80 "С. Частинину зразків використовували для подальшого аналітичного аналізу білків і аналітичної характеризації, наприклад, за допомогою ДСН-ПААГ, гель-фільтрації (ЗЕС) або мас-спектрометрії.

Коо) ДСН-ПААГ

Гелеву систему МИиРАСЕФ Рге-Савзі (фірма Іпмігодеп) застосовували згідно з інструкції виробника. Зокрема, застосовували 10 95 або 4-12 95 гелі МИІРАСЕФ МомехФфФ Віб5-ТВІ5 Рге-Саві (рН 6,4) і рухливий буфер МиИРАСЕФ МЕЗ (відновлені гелі з антиоксидантною добавкою для рухомого буфера МиРАСЕФ) або МОР: (невідновлені гелі).

Аналітична гель-фільтрація

Гель-фільтрацію (ЗЕС) для визначення агрегованого та олігомерного стану антитіл здійснювали за допомогою РХВР-хроматографії. В цілому, метод полягав у наступному: очищені на білку А антитіла вносили в колонку Тоз5оп ТЗКде! З30005УМ в ЗО0мМ масі, 50мММ

КН2РОЯ / КОНРОХЯ, рн 7,5, в РХВР-системі Адіїепі 1100 або в колонку Супердекс 200 (фірма СЕ

Неанййсаге) в 2 х ЗФР в РХВР-системі Оіопех. Елюйовані білки оцінювали кількісно за допомогою Уф-абсорбції та інтегрування площ піків. Як стандарт служив ВіоКай сеї Рійгайоп

Зіапаага 151-1901.

Мас-спектрометрія

В цьому розділі описана характеризація мультиспецифічніх антитіл з МН/Л/Л -обміном або

СН/СіІ -обміном (Сто55Мар) по відношенню до їх правильного складання. Очікувані первинні структури аналізували за допомогою мас-спектрометрії з використанням іонізації електроспреєм (Е5І-МС) деглікозільованих інтактних Сто55МаБб і деглікозільованих розщеплених плазміном або в альтернативному варіанті деглікозільованих/ обмежено розщеплених І узс

Сто55Маб.

Сто55МаБб деглікозілювали за допомогою М-глікозідази Е в фосфатному або Тріс-буфері при 37 "С протягом аж до 17 год. з використанням білка в концентрації 1 мг/мл. Розщеплення плазміном або обмежене розщеплення І уз (фірма Восіє) здійснювали з використанням 100 мкг деглікозільованих МН/МІ -Сто55Маь в Тріс-буфері, рН 8 при кімнатній температурі протягом 120 год. і при 37 "С протягом 40 хв відповідно. Перед здійсненням мас-спектрометрії зразки знесолювали за допомогою РХВР на колонці Сефадекс 225 (фірма СЕ НеєайНсаге). Загальну масу визначали за допомогою Е5І-МС з використанням МС-системи тахХіє 44 ОНА-ОТОЕ (фірма Вгикег багопік), оснащеною джерелом ТгіМегза МапоМаїгїе (фірма Адміоп).

Приклад 1

Створення антитіл до ОХ40 і застосовуваних як "інструменти" зв'язуючих агентів бо 111 Одержання, очистка і характеризація антигенів і скринінг "інструментів" для створення нових ОХ40-зв'язуючих агентів за допомогою фагового дисплея

Послідовності ДНК, які кодують екгодомени ОХ40 людини, мишей або мавп ціномолгус (Таблиця 1),субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗ-доменами важкого ланцюга людського ЇДС1 на ланцюзі з "виступом" (МегспНапі та ін., 1998). Сайт розщеплення протеазою

АсТЕМ інтродукували між ектодоменом антигена і Ес людського Ідсі. Амі-мітку для спрямованого біотінілювання інтродукували на С-кінець конструкції антиген-Ес з "виступом".

Комбінація ланцюга антиген-Ес з "виступом", що містить мутації 5354С/Т366МУ, з Ес-ланцюгом із "западиною", що містить мутації У349С/713665/ З68А/У407У, дозволяє створювати гетеродимер, який включає одиничну копію ланцюга, що містить екгодомен ОХ40, одержуючи тим самим мономірну форму зчепленого з Ес антигена (фіг. 1А). В таблиці 1 представлені амінокислотні послідовності різних ектодоменів ОХ40. В таблиці 2 представлені послідовності КкДНК і амінокислотні послідовності мономерних злитих молекул, які містять конструкцію антиген-

Ес(Кій), представлених на фіг.1.

Таблиця 1

Нумерація амінокислот ектодоменів (ЕСО) антигена та їх походження

Таблиця 2

Послідовності кДНК і амінокислотні послідовності мономерних злитих молекул, які містять антиген-Ес(Кінй) (одержаних шляхом комбінації одного Ес-ланцюга із "западиною" з одним ланцюгом конструкції антиген-Ес з "виступом")

ЗЕО

ІО Антиген Послідовність

МО:

САСААААСТСАСАСАТаСССАССВЯтТассСАасСАССТИалдАСТОСТ ссассапАССаТатсАаТсТоСсТТСоСССССААААСССАдДацдАСА

СоСстТСАТаАТСТОССОСОвАССССТОаАсСаТСАСАТОСССТОИТаИ,Та сАсатадасСсАСпААаАСССтаАааТСААаТТСААСтТастАСа тасвассабатапАвпатасСАТААТаССААпАСААдасСсассосоавА сапАааСАсатТАСААСАаСАСсатАссататаатАаСаТссСТСАСС

Нуклеотидна стобтТасСасСсАаа,асАСстТааСстТаААтТааСААапАаТАСААдатТасА 124 послідовність Ес АВТ СТОСААСАААассСтТОССАасссССАТССПСАСААААССАТ ланцюга із СТССААДаССАААссасАасссєаАпААССАСАвсататасСАсо "западиною» стассСССАТоСССЯСасАтТадасСстаАССААаААССА,аа САС тотсатасаСАаТСАААсаастсТАТСССАаСаАСАТСОЯССИаТтОа слатасаАдаАаСААтТас,7аСАаССацпАпААСААСТАСААСАСС дсасстосса,атаставАстосаАссастстстсостсатаАа

САДаАСТСАСсСсОЯТапйАСААсСА,аСАасатасбА,СА,сапААСаТто

Пп стТсАТОаОСТОСОИатТаАТаСАТаАДИааСтТоТаСАСААССАСТАСАС сСАСААдсСАаасстотосстаТатстоСасатААА

ЗЕО

МО: стасастасатавасСОпАСАССТАССССАаСААСаАсСваТатаст аССАСсдотТасСсааАсСсСсааСААСса,аасАатаататссаатасСАа ссааТоССАпААСАссататасасАаосттаса,состаасттот

АСААСсОСАСсатаатТаТССАасСААлассСстТасСсАласстТаТатАсстТта стТасСААдоСстТас,сада,ассвасАдасавХаСсапАдАда,аСАастатаТАСс аССАСССАСаАТАСССЯТаТОССОСОСТатТАаАда,аСсСааСАСССАСС

ЄоСсТааАСАасСТАСААДАСССОСЯССсостТасАстТаса,асоосттасостТт сСстТасССАСТТСАОСССтТааСапАСААССАасвСасстасСсАдасстТтТа

САССААСТасСАСсСсСстТавоСайпСААаСАСАСССТасАасоСсасСо асСААТДаСАааСсаАСассСАаАтотассдавАсСа,аааАтоСстоста

ССАСССАИССТСАСаАААСССАсСаассСстоССассСсАЧАСССАТ

СсАССОЯТаСАаССтТАСАСАсСасставСССАСААССАассАацссось

СсСтТАВСАССАСАСССОТаСААХастТасстааСасаСАсСАооСатоа

Нуклеотидна АСОСААСАСТТАТАТТ ТТСДАОСОаСОаСТоСАСССАААТСТасСАСАС послідовність ААДААСТСАСАСАТИАСССАСсСатассСАаСАССТалАСТОСТОас; 125 | конструкції людський | ФСОССАССатсАатсТ ОСТ оСССССААДААСССААааАСАСС антиген ОХ40-Ес- СстТосАТаАТСТОССОпАССССтТаАваТСАСАТасСОосОТасСТасТОааА ланцюг з "виступом» |сСатТадаСсСАСаААаАСССсТаАсаТСААаТТСААстТа7асатАсата сасса,асатавдаайТаСАТААТаССААДаАСААдАдассасавсасАс вАаСАСТАСААСАаСАСсастАссататаатоАдасатостСАСса тостТасСсАССАааАСТОаСТОААТааСААааАсСТАСААИТасАА

СатстТоСААСААДасссСтоССАассосССАТСОАСААААССАТСТ

ССААДаССАддапваСАаССССпАСААССАСАСаТататАСАСССТ воСоССАТаССапаАТаАаСТАССААпААССАа,аТатсАасста таатасстаатТСАААаасСТСстТАТСССАаСаАСАТСОССССсСтТасАя стаапАдсСДасСААтТавасСсАасССапАСААСААСТАСААСАССАС есостоос,стасСстапАСТОСОАСОасСтосСТсСТосСТСтТАСАОСА дастАССсатапАСсАдадасАаватавСАасСАасаспААСаТтстт

СсТСсАТАСТОоСаТтТОаАТаСАТаАСастоТтасСАСААССАСТАСАСОС

АвАДОАХасстотоостТ,атстоСацваТАААТОСОСпАдСасстадА

СОАСАТСТТСОАдОааСССАСААСАТТОаААтТасаСАСОАа

СстТоСАСТОТатТСапОапАСАССТАССССАССААСсалосваТатаста тСбА7вад,атасАд,васСсАаасСААлсвавАтастАасСастасААС сасСстоССАВААСАССОССТатТасСсатосатасса,аосСвастТстТА

СААСОСАдсстТаатАасасСсСАдассстасСААвасстасСАСАТОС тТасСсААССсТсАСАА,атасаатадаСапАААСАасс,атасСАСОаа

СсСАСАСАСаАСАСАСаТоТассастассававсеС,ааСАСССАСОСС

ССстТапАСАасСтТАСААд,асСстТаслаттаастатасссостасссто

СсАСОааСАСТІСТОСССОВаССОАСААССАсСаССсТасСААасссто

САССААСТаСАССТТСИСССОСапААдаСАСсАСоСстТасАассАасс

Нуклеотидна асСсААТДАаСТОСОСОСАСсасССАТОТатТаАдапАСАдаааАССССССАС послідовність ССАСАСАДСЯССССАаСАаАСССсАсСа,сооооосвассАвасссСсАСс конструкції антиген САСТатосСАасСссССАСТОАдАасстааСсССАпААССТСАСАПАСА 126 ОХ40 мавп состТосАСсСсСсОЯвОСссСсатававатососАасасососта7асастоо ціномолгус- Ес- АСОСААСАСТТАТАТТ ТТСДОСИСОаСТСАСССАААТСТаСАСАС ланцюг з "виступом» ААДДАСТСАСАСАТИСССАССЧЯтТасссАасАССТОаААСТОСТОаа вавпаАССатсАатТсТ ОСТ оСССССААДААСССАДапАСАСС

СстТосАТаАТСТОССОпАССССтТаАваТСАСАТасСОосОТасСТасТОааА сатадасССАСаААСАСССтТаАОаТСААаТТСААСстТаатАСата сасса,асатавдаайТаСАТААТаССААДаАСААдАдасоасавСасАса вАаСАСТАСААСАаСАСсастАссататаатоАдасатостСАСса тостТасСсАССАааАСТОаСТОААТааСААааАсСТАСААИТасАА

СатстТоСААСААДасссСтоССАассосССАТСОАСААААССАТСТ

ССААДаССАддапваСАаССССпАСААССАСАСаТататАСАСССТ воСоССАТаССапаАТаАаСТАССААпААССАа,аТатсАасста таатасстааТСАААд,васСсТСстТАТСССАаСаАСсСАтТсасССсаТтасцА

ЗЕ

ІО Антиген Послідовність

МО: стасададасСААдтТасаСАаССааАспААСААСТАСААСаАССАС сестоссатасСставАСтТоСаАСаастсСТсСсТсосСТСтТАСАСОСА асСстТсАсСсатТапАСАА,аАдаСАасватасоАаСА,ааааААСаТтстт

СТСсАТОаСТоСОаТаАТтТаСАТаАдаасСтТСТасСАСААССАСТАСАСИЯС

АвАдсАХассттоста7атстоСаайаТАААтоСаавдаасСсСтТаАА

СОАСАТСТТСОАЧаСССАСААСАТТаААТОССАСОАС стаАдссаСсСАаАСвасСТААСТасСсиаТаААаСАСАССТАССССА абааССАСАДатастасасАаавАаатассХасосааСсСАСааСАТ сататсСАпАтТасСаАССАСАСАСаавАСАСССТаТатассСАСССТТ абаАпАСАаасСсТСстТАСААСадДаасССатаААСТАСОаАТАССТа

СААДаСАСТаСАСССАаТасСААССАСАаАХАд,аСсааСАасСадаста

ААССАСААСТаСАСССССАСССАССИАТАССсОаИТтаИатасСсАаАтТасСА вАссСааСАСССАаСССАпАСАс,асАСАааСаасСТАСАдаСТасча сатасАдстасатассстассстСстааСсСАСТТСсАаССсСсСпасСА

АСААСсСсАда,ааСсСсТасСсААдассСстацпАССААСТасСсАСССтТаласСаа

СААДаИСАСАССАпАдСАсСсССасСАаСаАСАаасстапвАтасси та тасавдапАСсАдаАдАд,асстастааСсСАсостастатасаАсАСАС дасвасСсССАССТТСАЧАСССАССАССатТасСАпАаСАССАССИТ стааСССАаААСсСАа,аСадасТассСАаТсСсТоСтТАСССТСИаТОаА

Нуклеотидна СсАсстТадасваССССаТСсаАСОаААСАаТТАТАТТТТСАаСОЇвСсааС послідовність ТСАСССААДАТСТаСАСАСААДААСТСАСАСАтТассССАсСсатасос 127 | конструкції мишачий АаСсАсСстТалдАстстасасавАсСатСАатстостстоссос антиген ОХА0--Ес- СААДАСССАДасАСАСССТСАТаАТотоССс,ааАСосСстаАсааТт ланцюг з "виступом» СсАСсАТаСОТаватТаатасасатадасССАСЧАдАаАСссСстадаито

ААаТТСсААстТаатасатасАас,васатавАсватасСАТААТаССА

АпАСААДДОаСсСсаСса,асаА,саАдаСАсСТАСААСАаСАСатАсСсатат сатодасатостТсАсСсатоСсТасСАССАСаАСТаасСстТаААТаасСА

АсаАаТАСАдатасСААайаТСсТоСААСААДАаСССсТоССАасСссс

САТСОАСААДААССАТСТОСАААДаССААддааваСАасссспАаАА

СсСАСАДСсТатАСАСССстТасссСССАТассвавАтаАасСтТаАсСсСА

АвААссАа,аатсАаа,асстатсатасстааТСАААаастсСстТАТОСС

АаСспАСсАТСОЯССОСТОвАсСТасосАХаАаСААдтавасАаССасАс

ААСААСТАСААСАСсСсАСсСОасстоссатастасАстоСадсааст

ССТСТССТСТАСАОСАдасСстТоАССатапАСАдадаСАатас

СсдасАдааапААСатсТсТсАтТастСатТаАтТасСАТОАСаТстот

ССАСААССАСТАСАСаСАсААдсА,ассттсСстаТатстСсааатА

ААТССОпАСасстаААСаАСАТСТТСИаЛдаасСССАПСААСАТТОА

АТасССАССОАдИ

ОКТНТСРРСОРАРЕЇЇ СОаРБМРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМОМ5

Ес-ланцюг із НЕОРЕМКЕМУ УМВамМЕМНМАКТКРАЕєОММО ТВ МММІ ТМ НО 128 "западиною» ОМ МаКЕМКСКМ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМСТІ РРОНОЕ

І ТКМОМ5І БСАМКаєМРООІАМЕМЖМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ 0502

ЗЕРМЗКІТМОКЗАМОССММЕЗСЗММНЕАІНМНУТОКБІ 5І 5РаК

ІГНСУаОТУРОМОАССНЕСВРОМОаМУЗАСЗАЗОМТУСАРСОаРОЕУМ

ОУМ55КРОКРСОТМУСМІ А5аЗЕВКОЇ СТАТОЮТМСАСНАСТОРІ 05

УКРОМОСАРСРРаНЕЗРОЕЮМОАСКРМТМСТІ АОКНТІ ОРАБМО5О

Конструкція людський АІСЕОВОРРАТОРОЕТОСРРАВРІТМОРТЕАМ РАТ5ОСРОТАРМЕМР 129 | антиген ОХ4А0-Ес- СОавВАМОЕОЇ УЄОСОаЗРКОЗАОЮОКТНТСРРОРАРЕГ І аСРОУМГБІ ЕРРКР ланцюг з "виступом» КОТ МІЗАВТРЕМТСМУМОМЗ5НЕОРЕМКЕМУ ММРИМЕМНМАКТКР

ВЕЕОММОТУВМУМ5МІ ТМ НОМ МСОКЕМКОСКУ5МКАЇ РАРІЕКТІ

ЗКАКООРАЕРОММТІ РРСАВОЕСТКМОМБІ М/С МКагМРБОІАМЕМУ

ЕЗБМИООРЕММУКТТРРМІ О5БООБЕРІ КІ ТМОКЗВУМОСОММЕ5О5

ММНЕАЇІ НМНУТОКБІ БІ РОКИ МОІРЕАОКІЄМ НЕ антиген ОХ40 мавп І НСМОЮТУРОБМОАВССОЄСВРОМОаМУЗАСМАЗОМТМСАРСОРО БУ 130 | ціномолгус- Ес- МОМУМ5АКРСКАСТМУСМІ ВБИ5ЕВНКОРСТАТООСТУМСВАСВАСТОРІ. ланцюг з "виступом» О5УКРОМОСАРСРРаНЕЗБРИОЮОМОАСКРМУТМСТІ АСКНТІ ОРАБМ5

ЗВАІСЕОВОРРРТОРОЕТОСРРАВРТТМОРТЕАМРАТ5ОВРОТАРМЕ

ЗЕО

ІО Антиген Послідовність

МО:

МРАаРАМОЕОЇ УГОСИаЗРКЗАОКТНТСРРОРАРЕЇ І СОСРБУБІ ЕРР

КРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕУКЕМУ МУХИ МЕМНМАКТ

КРАЕЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОВУ МЕКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕК

ТІЗКАКИаОРАЕРОМУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМБІ М/С УКаЕМРЗОІАМЕ

МЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕРІ УЗКІ ТМОКЗАМООСМУБо

ЗММНЕАСНМНУТОКБІ ЗІ ЗРЕаКЗаИаСсМОРЕАОКІЕМ НЕ

МТАВВІ МСУКНТУРЗІНКССВЕСОРОНОМУЗАСОНТАОТІ СНРО

ЕТОаЕРУМЕАУМУОТСКОСТОСМНАБазЕЇ КОМСТРТОЮСТУСВСВАРОа

ТтТОРАСОЗаУКкКІ амоСуУРСРРаНЕЗРОММОАСКРУТМСТІ БСКОТА

Конструкція мишачий НРАБОБІ ОАМСЕОВЗИ АТ ГМЕТОАРТЕАРТТМОЗТТУМУРАТЗЕЇ. 131 | антиген ОХ40-Ес- РЗРРТ МТРЕСРМУОЕОЇ МЕОСОаЗРКЗАОКТНТОСРРОРАРЕЇ І СОРБЗМУ ланцюг з "виступом» ЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУММОУМЗНЕО РЕУКЕМУ Ума МЕМН

МАКТКРАЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОМ МСКЕМУКОСКУЗМКАЇ Р

АРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І МУСІ УКаЕМРБ

ПІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБравзЕРІ МК ТУМОКЗАМООСС

ММЕЗСЗУММНЕАСНМНУТОКВІ БІ ЗРОКЗИаСІМОІРЕАОКІЕМНЕ

Всі послідовності, які кодують злиття ОХ40-Ес, клонували в плазмідному векторі, в якому експресія вставки контролюється промотором МР5БУ і який містить синтетичну сигнальну полід- послідовність, локалізовану на 3'-кінці СОБ5. Крім того, вектор містив послідовність ОгіР ЕВМ для підтримання епісомальної форми плазміди.

Для одержання біотинільованих мономерних злитих молекул антиген/нс зростаючі в суспензії клітини НЕК293 ЕВМА на експоненційній фазі росту спільно трансфектували трьома векторами, що кодують два компонента злитого білка (ланцюга з "виступом" і "западиною", а також ВігА, фермент, необхідний для реакції біотинілювання. Відповідні вектори застосовували в співвідношенні 2:1:0,05 ("ЄСО антигена-АСТЕМ-Ес з "виступом":«Ес із "западиною":«ВігА").

Для одержання білка в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х ді супернатант замінювали попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори ресуспендували в 20 мл СО СНО, що містить 200 мкг векторної ДНК. Після додавання 540 мкл поліетиленіміну (ПЕЇ) розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ, переносили в 500- мілілітрову збовтану колбу та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 96 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали їмММ вальпроєву кислоту і 7 956 Ееєй. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 15 хв при 210 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22-мікрометровий фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./об.) і витримували при 4 "С.

Секретовані білки очищали із супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А з подальшою гель-фільтрацією. Для здійснення афінної хроматографії супернатант вносили в колонку НіТгтар РгоївїпА НР (СмМ-5 мл, фірма СЕ

Неансаге), врівноважену 40 мл буфера, що містить 20мМ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію (рН 7,5). Незв'язаний білок видаляли шляхом промивання буфером, що містить 20мМ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію і 0,5М хлорид натрію (рН 7,5), використовуючи його в об'ємі, кратному принаймні 10 об'ємам колонки. Зв'язаний білок елюювали, використовуючи лінійний

Зо градієнт хлориду натрію (від 0 до 500мм), утворений за допомогою розчину, що містить 20мМ цитрат натрію, 0,01 об. 95 Твін-20, рН 3,0, який застосовували в об'ємі, кратному 20 об'ємаммм колонки. Потім колонку промивали за допомогою розчину, що містить 20мМ цитрат натрію, 500мм хлорид натрію і 0,01 об. 95 Твін-20, рН 3,0, який застосовували в обсязі, кратному 10 об'ємам колонки.

Значення рН зібраних фракцій регулювали, додаючи 1/40 (об./06.) 2М Тріс, рН 8,0. Білок концентрували і фільтрували перед внесенням в колонку Ні ой Супердекс 200 (фірма СЕ

Неапйрсаге), врівноважену розчином, що містить 2иМ МОРБ5Б, 150мММ хлорид натрію, 0,02 Фо (мас./об.) азида натрію, рн 7,4. 1.2 Відбір ОХ40-специфічних антитіл ЗНО, 2087, 4984, 1054, СІ С-563, СІ 0-564 і 17А9 з родових бібліотек Раб і бібліотек клонів із загальним легким ланцюгом

Антитіла до ОХ40 відбирали з трьох різних родових фагових дисплейних бібліотек: ОР88-4

(клони 2087, 8НО 164 і 4984), бібліотека клонів із загальним легким ланцюгом УКЗ 20 /МНЗ 23 (клони СІ С-563 і СІ С-564) і лямбда-ОРА?7 (клон 17А9).

Бібліотеку ОР88-4 конструювали на основі генів людської зародкової лінії, використовуючи

М-домен зі спареними МК! 5 (легкий каппа-ланцюг) і МНІ 69 (важкий ланцюг), що містить рандомізовану ділянку послідовності в СОКЗ легкого ланцюга (13, З різні довжини) і СОКЗ важкого ланцюга (НЗ, З різні довжини). Створення бібліотек здійснювали шляхом складання З ампліфіковані за допомогою ПЛР фрагментів, застосовуючи ПЛР для "зрощування (генома) розширеннями, що перекриваються" (З5ОЕ). Фрагмент 1 містив 5'-кінець гена антитіла, включаючи рандомізований ІЗ, фрагмент 2 являв собою центральний константний фрагмент, що тягнеться від ІЗ до НЗ, а фрагмент З містив рандомізований НЗ і 3'-ділянку гена антитіла.

Наступні комбінації праймерів застосовували для створення вказаних фрагментів бібліотек для бібліотеки ОР88-4: фрагмент 1 (прямий праймер І МВЗ в комбінації зі зворотними праймерами

МК1 5 ІЗг 5 або МК! 5 ІЗг 5М або МК1 5 ІЗг 5РУ), фрагмент 2 (прямий праймер КУНЗІ1 в комбінації зі зворотним праймером КУНЗ2) і фрагмент З (прямі праймери ОР88-м4-4 або ОР88- м4-6, або ОР88-м4-8 в комбінації зі зворотним праймером йк5едіопо) відповідно. Параметри ПЛР для одержання фрагментів бібліотек були наступними: 5 хв початкова денатурація при 94 "С, 25 циклів по 1 хв при 94 "С, 1 хв при 58 "С, 1 хв при 72 "С і фінальне подовження протягом 10 хв при 72 "С. Для ПЛР-збирання при використанні еквімолярних співвідношень очищених на гелі одиничних фрагментів як матриці застосовували такі параметри: З хв початкова денатурація при 94 "С і 5 циклів по 30 с при 94 "С, 1 хв при 58 "С, 2 хв при 72 "С. На цій стадії додавали зовнішні праймери (МВ3З і тазедіопо) і здійснювали 20 додаткових циклів перед фінальним подовженням протягом 10 хв при 72 "С. Після збирання в достатній кількості повнорозмірних рандомізованих конструкцій Бар їх розщеплювали за допомогою Месо|/Мпеі! і вбудовували шляхом лігування в оброблений аналогічним чином акцепторний фагмідний вектор. Очищені одержані лігуванням конструкції застосовували для «я 60 трансформацій електрокомпетентних клітин Е. соїї ТО1. Фагмідні частки, що експонують бібліотеку Бар, виділяли ("рятували") і очищали за допомогою ПЕГ/МасСі для використання для селекцій. Ці стадії конструювання бібліотек повторювали тричі з одержанням кінцевої бібліотеки розміром 4,4 х 109. Відсотки функціональних клонів, визначені на основі детекції С-кінцевої мітки методом дот-блот, становили 92,6 95 для легкого ланцюга і 93,7 956 для важкого ланцюга відповідно.

Бібліотеку із загальним легким ланцюгом МКЗ 20/Л/НЗ 23 конструювали на основі генів людської зародкової лінії, використовуючи М-домен зі спареними МКЗ 20 (легкий каппа-ланцюг) і

МНЗ 23 (важкий ланцюг), що містить загальну константний нерандомізований легкий ланцюг

МКЗ 20 ї рандомізовану ділянку послідовності в СОКЗ важкого ланцюга (НЗ, З різні довжини).

Створення бібліотек здійснювали шляхом складання 2 ампліфікованих за допомогою ПЛР фрагментів, застосовуючи ПЛР для "зрощування (генома) розширеннями, що перекриваються" (ЗОЕ). Фрагмент 1 являв собою константний фрагмент, що тягнеться від І З до НЗ, а фрагмент 2 містив рандомізовану НЗ і 3'-ділянку гена антитіла. Наступні комбінації праймерів застосовували для створення вказаних фрагментів бібліотеки для бібліотеки із загальним легким ланцюгом

МКЗ 20 / МНЗ 23: фрагмент 1 (прямий праймер М564 в комбінації зі зворотним праймером

ОРА7СОВЗ ра (тод.)) і фрагмент 2 (прямі праймери ОР47-м4-4, ОЮРА7-м4-6, ЮР4А7-м4-8 в комбінації зі зворотним праймером ї45едіопуд) відповідно. Параметри ПЛР для одержання фрагментів бібліотек були наступними: 5 хв початкова денатурація при 94 "С, 25 циклів по 1 хв при 94 "С, 1 хв при 58 "С, 1 хв при 72 "С і фінальне подовження протягом 10 хв при 72 "С. Для

ПЛР-збирання при використанні еквімолярних співвідношень очищених на гелі одиничних фрагментів як матриці застосовували такі параметри: З хв початкова денатурація при 94 Сі циклів по 30 с при 94 "С, 1 хв при 58"С, 2 хв при 720. На цій стадії додавали зовнішні праймери (М564 і тазедіопод) і здійснювали 18 додаткових циклів перед фінальним подовженням протягом 10 хв при 72 "С. Після складання в достатній кількості повнорозмірних рандомізованих конструкцій МН їх розщеплювали за допомогою Мипі/Мої! і вбрудовували шляхом лігування в оброблений аналогічним чином акцепторний фагмідний вектор. Очищені одержані лігуванням конструкції застосовували для -ї 60 трансформацій електрокомпетентних клітин Е. соїї ТО1.

Фагмідні частки, що експонують бібліотеку Раб, "рятували" і очищали за допомогою ПЕГ/Ммасі для використання для селекцій. Одержували кінцеву бібліотеку розміром 3,75 х 109. Відсотки функціональних клонів, визначені на основі детекції С-кінцевої мітки методом дот-блот, становили 98,9 95 для легкого ланцюга і 89,5 95 для важкого ланцюга відповідно.

Бібліотеку лямбда-ЮР47 конструювали на основі генів людської зародкової лінії, використовуючи М-домен зі спареними: МІЗ 19 (легкий лямбда-ланцюг) і МНЗ 23 (важкий ланцюг). Бібліотеку рандомізували в СОКЗ легкого ланцюга (І 3) і СОКЗ важкого ланцюга (НЗ) та бо збирали з З фрагментів, застосовуючи ПЛР для "зрощування (генома) розширеннями, що перекриваються" (ЗОЕ). Фрагмент 1 містив 5'-кінець гена антитіла, включаючи рандомізований

ІЗ, фрагмент 2 являв собою центральний константний фрагмент, що тягнеться від кінця ІЗ до початку НЗ, а фрагмент З містив рандомізовану НЗ і 3'-ділянку Рар-фрагмента. Наступні комбінації праймерів застосовували для створення вказаних фрагментів бібліотеки для бібліотеки: фрагмент 1 (І МВ3-МІ З 19 І|Зг М// 3 19 І|Зг НУ/М З 19 ІЗг НІМ), фрагмент 2 (НІНВО-ОР47СОКЗ ра (той)) і фрагмент З (ОР47-м4-4/ЮОРА7-м4-6/0Р47-м4-8-тазедіопа).

Параметри ПЛР для одержання фрагментів бібліотек були наступними: 5 хв початкова денатурація при 94 "С, 25 циклів по 60 с при 94 "С, 60 с при 55 "С, 60 с при 72 С і фінальне подовження протягом 10 хв при 72"С. Для ПЛР-збирання при використанні як матриці З фрагментів в еквімолярних співвідношеннях застосовували такі параметри: З хв початкова денатурація при 94 "С і 5 циклів по 60 с при 94 "С, 60 с при 55 "С, 120 с при 72 "С. На цій стадії додавали зовнішні праймери і здійснювали 20 додаткових циклів перед фінальним подовженням протягом 10 хв при 72 "С. Після збирання в достатній кількості повнорозмірних рандомізованих Еар-фрагментів їх розщеплювали за допомогою Месоі/МпеІ! паралельно з аналогічною обробкою акцепторного фагмідного вектора. 15 мкг вставки у вигляді бібліотеки

Раб вбудовували шляхом лігування в 13,3 мкг фагмідного вектора. Очищені одержані лігуванням конструкції застосовували для 60 трансформацій з одержанням 1,5 х 109 трансформантів. Фагмідні частки, що експонують бібліотеку Бар, "рятували" і очищали за допомогою ПЕГ/Масі для використання для селекцій.

Людський ОХ40 (СО134) як антиген для селекцій методом фагового дисплея короткочасно експресували у вигляді М-кінцевого злиття з мономерним Ес в клітинах НЕК ЕВМА і здійснювали іп мімо сайтспецифічне біотинілювання за допомогою спільної експресії біотин-лігази ВігА в послідовності з амі-міткою, що розпізнається, локалізованої на С-кінці Ес-ділянки, що несе ланцюг рецептора (Ес-ланцюг з "виступом".

Раунди селекції (біопеннінг) здійснювали в розчині згідно з наступною схемою: 1. прекліринг «- 1012 фагмідних частинок на планшетах тахізогр, сенсибілізованих 10 мкг/мл нерелевантного людського ЇДС для виснаження бібліотек антитіл, які розпізнають Ес-ділянку антигена, 2. інкубація фагмідних частинок, які не зв'язуються з 100нНМ біотинільованих людським ОХ40

Зо протягом 0,5 год. в присутності 100НМ нерелевантної небіотинільованої конструкції Ес "виступ»- у-«западину" для подальшого виснаження зв'язуючих Ес агентів в загальному об'ємі 1 мл, 3. захоплення біотинільованих пиОХ40 і приєднання фага, що специфічно зв'язується, шляхом перенесення в 4 лунки попередньо сенсибілізованого нейтравідином титраційного мікропланшета протягом 10 хв (в раундах 1 і 3), 4. промивка відповідних лунок з використанням 5 х ЗФР / Твін2го і 5 х ЗФР, 5. елюція фагових частинок шляхом додавання 250 мкл 100мММ ТЕА (триєтиламін) на лунку протягом 10 хв і нейтралізація шляхом додавання 500 мкл 1М Тріс/НеСІ, рН 7,4 до об'єднаних елюатів з 4 лунок, 6. пост-кліринг нейтралізованих елюатів шляхом інкубації на попередньо сенсибілізованому нейтравідином титраційному мікропланшеті з 10О0нМ захопленої біотином конструкції Ес "виступ»-у-«западину" для остаточного видалення зв'язуючих Ес агентів, 7. повторне зараження на Іод-фазі клітин Е. соїї Т51 супернатантом елююваних фагових частинок, зараження хелперним фагом МСЗМТІ3, інкубація при струшуванні при 30 "С протягом ночі і подальше осадження за допомогою ПЕГ/Масі фагмідних частинок для застосування в наступному раунді селекції.

Селекції здійснювали з використанням З або 4 раундів, застосовуючи постійну концентрацію антигена 100Нм. Для підвищення ймовірності того, що зв'язуючі агенти будуть мати перехресну реактивність не тільки з ОХ40 мавп ціномолгус, але і з мишачим ОХ40, в деяких раундах селекції замість людського ОХ40 як мішень застосовували мишачий. В раундах 2 і 4 для того, щоб уникати збагачення зв'язують нейтравідин агентами, здійснювали захоплення комплексів антиген: фаг, додаючи 5,4 х 107 покритих стрептавідином магнітних гранул. Специфічні зв'язуючі агенти ідентифікували за допомогою ЕГІЗА наступним чином: 100 мкл 25нМ біотинілбованого людського ОХ40 і 10 мкг/мл людського до застосовували для сенсибілізації нейтравідинових планшетів і тахіхогр-планшетів відповідно. Додавали бактеріальні супернатанти, які містять Бар і зв'язування Бар оцінювали за допомогою їх Ріад-міток, використовуючи вторинне антитіло до Ріад/НЕР. Клони, що дають сигнали на людський ОХ40 і є негативними по відношенню до людського до, включали в шорт-лист для додаткових аналізів і тестували також аналогічним чином по відношенню до ОХ40 мавп ціномолгус і мишей. Їх експресували в бактеріях в обсязі культури 0,5 л, очищали на основі афінності та додатково бо характеризували за допомогою ЗРЕ-аналізу, використовуючи біосенсори РгоїеОп ХРКЗ36 фірми

ВіоВаа.

В таблиці З представлена послідовність родової фагової дисплейної бібліотеки антитіл (ОРЗ8-4), в таблиці 4 представлені послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності бібліотечної матриці зародкової лінії ОР8Ф8-4, а в таблиці 5 представлені Праймерні послідовності, застосовувані для створення матриці зародкової лінії ОР88-4.

Таблиця З

Послідовність родової фагової дисплейної бібліотеки антитіл (ОР88-4)

ЗЕ

МО:

ТОАААТАССТАТТОССТАСОЯСССАСССастасАТТаТТАТТАСТСЯС сасссАдассааСсСАТааССаАСАТССАСаАТаАСССАаТТтсТосСтТТо сСАсостТатстасСАТСТатТАаасСАсаАССатТатСсАССАТСАСТТОССИТ асСсАдатсАаАатАТттАСсТАаСсТааттаассСстааТАТСАасСАСАДА

СсСАСОаСПАААдаСсСССтТААдастосСтТаАТСТАТаАТасстоСАатТТТаС

ААдатасаайТСССАТСАСОСТттсАа,аСаасАа,атавАтоСасваАсСАа

ААТТСАСТСТСАССАТСсАССАаСтТТасАасСсСтТаАТОАТТТТаСААдС

ТТАТТАСТаССААСАСТАТААТАСТТАТТСТАСОЯ ТТ ТОСССАСИасо

АССААДОСТСОСАпАТСАдасСа,атТАСа,аа таасСстасСАССАТСТаИтстТто

Нуклеотидна АТСТТоССассСАТСТаАТОАдаСАсаТТаАААтТотТасААСстТасстота послідовність пататТасстТастаААТААСТТСТАТСССАСАаАпасССАААатТАСА бібліотечної матриці | 1тасААдасТасАтТААСасСсссСТоСААтоаасТААСТоССАапАсАС раАУнзз для тТатСсАСАпдаСАаспСАСАаСАДапАСАаСАССТАСАаССТСАасСАС бібліотеки ОР88-4; СсАсоСстТаАсасСстТаАаСАААДаСАпАСТАСОАаАААСАСАДАаТтстТА повна кодуюча са,асстасСсаААдатТСАСССАТтоА,авасстАасСсТСассСатСАСАДА ділянка Раф, що вАасСТСсААСАсСассасаАаататавАасССасСАСпААСАААААСТСАТ містить лідерну СсТСАПААаАасааАтТоТаААтТасаасСасСАваАСТАСААасАСсаАСс 132 послідовність АСсСаАСАдДасасаТасСасСАТААТААДССаСаСасССААТТСТАТТТСАДО

РеІВ-МКІ1 5 каппа У- | ВбАФАСАСТСАТАТОАААТАССТОаСТИаССОСАСсСсОаСсТастастаатст домен «т константний | аСТаСсТтТОСтТоастассСсАаассвсасаАтаассСсСАааТасСААТТОСТ домен Сі легкого асдаттасаастаАааатаАдсАддасставатстсастТаАдаатТ ланцюга і СсТоСсТасСсААСЯССТОСОСаАааСАСАТТСА,САаСТАСасСТтТАТААС

РеІВ-МНІ1 69 м- ставатаСсаАСсАасассоСстацпсАСсАлдаса7астосАастТавА9таавасаАсас домен «т константний | ФСАТСАТСССТАТСТТТАСТАСА,ССАААСТАСа САСАСААИа ТТ оСАа домен СНІ важкого |саСАаспатТСАССАТТАСТаСАСАСАААТССАСОАДаСАСАаСсСтТАС ланцюга, включаючи | АТаОСАССТЯА,ССАаа,асСстаАаАтотада,асАСАсСассататАТТАС мітки татаСсОАОАСТАТССССАвасСсааТтТАСТАТОТТАТааАТасстацво вСсСАдапаАСсСАсСсатаАссатстСстАасСстТАасСАССАДАвасСс

САТССОаТСТттоСоССстТаСАСССТОСТоСАдаАдасСАсстотасаа сАсдасс,7асоставастасстааТСААаСаАСТАСТТССССОААСС сатаАдссататсатапйААСстАаа,асоассстАссАХа,асвасатасСА

СсАССТТОоССсвасСстТатссСтТАСАатосСтТСАаСАСТСОТАСТОССТСАаС дасатаатаассатассстоСсАаасАХаста,авасСАСССАСАССТАС

АТСТаСААСИТОААТСАСАДаТсссАасСААСАССАААа ТасАСААа

ААДСОТТОдДаСССАААтотаТ,атааСасСсааоСасСААаСАСстАатасСс

САТСАССАТСАССАТСАСОССОасаасСА

Таблиця 4

Послідовність КкДНК і амінокислотні послідовності матриці для бібліотеки зародкової лінії ОР88-4

САСАТССАВАТОАСССАаТСТОСТТССАСССТаТтсСтТасСА тотТатАапАвАССОаТатСсАССАТСАСТТаССООТассСАСТ

СсАПАСаТАТТАИТАОаСТаАСТТООССТОСТАТСАССАСААА

СсСАпИаСАААаССССтТААаСТоСТОАТСТАТаАТОССТОС атТТасАААлатТавааТсССАТСАССЯТТТсА,аСсваСАИаТ ваАТССОСОАСАСААТТСАСТСТСАССАТСАИаСАОСТТОа

СсАассСстТаАТОАТТТТаСААСТТАТТАСТаССААСАСТАТ

ААТАСТТАТТСТАСОСТТТОСССАСИааСАССАААС ТС

Нуклеотидна послідовність АТСААаСатАСасСсТаасСсТаСАССАТСТаТСТТСАТСТТСО 133 легкого ланцюга Ба УК. 5 ССаССАТСТОАТОАОСАСТТОАААТСТаСААСТаССтТоТ

ЖтЖ ат ататасстТаСтТОААТААСТТСТАТСССАСАСАСОаСС

АААИТАСАСТОаПААпатТапАТААСасСссстоСААТСОСО

ТААСТоССАСаАаАаТаТСАСАпАдаСАапАСАССААса

АСАССАССТАСАаССТСАССАВСАСССТОАСасСстаАасСА

ААДССАСАСТАСОАСАААСАСАААИТСТАСассСстТтаспАА

СТСАСССАТСАСОСаССТаАаСТСасСсСсСОаТтСАСААдОадаС

ТПСААСАССОСпАпА,атТатТпАдаССасСАСААСААААдАСТ

САТСТСАСААСАСОСАТСТОААТаСАаССасСАСПАСТАСАА ваАСаАСаАСаАСААа,аатассасСА

РІОМТО5РБ5ОТІ БАБМООВМТІТ СВАБОБІЗБУМ АММООКРа

КАРК МБА5Б5І ЕБОУРОВЕБО5БО5ОТЕНЕТІ ТІЗ5І ОРОЮБА й ТУУСООУМ5УЗТЕЧОСТКУБІКВТМААРЗМРІЕРРЗОЕОЇІ К 134 |Летжий ланцюг Раб УКТ. 5. | ЗСТАБУУСИ ММЕУРВЕАКУОМ/КУ ОМА! О5СМ5ОЄУТЕ

О0БКО5БТУБІ 55ТІ ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55Р М

ТК5ЕМАВСЕСОААЕОКІІЗЕЕОЇ МІААВУКОРООКаИаАА

СсАвдатаСААТТОСОТОаСАСТоТОСИаасСтТОАпатОаААСАА аеставатостоваТААааТсТоСсТаСААваСсСстосоас

АВИСАСАТТСсАаСАаСТАСОСТАТАДИАСТОСОИаТаСаАСА св,асссСстТаАСААдсаастаАаТвАтТааспАсОаАТСА

ТОССТАТСТТТОСТАСАС,СААДАСТАСОСАСАСААЛИТТОоС двавасСсАаасСТСсАССАТТАСТОаСАСАСАААТССАСОдОС

АСАСССТАСАТОСАЛССТОАЛаСсАаССтТаАаАТСТОАдИааА

СсАССОЯаССататТАТТАСТОТаСаАСаАСТАТССССАОСОСИаС нуклеотидна послідовність ГТТАСТАТЕОТТАТОСАТаССТОСОЇаССААдсСасАССАССИТ 135 |важкого ланцюга Раб сАССаТтсТоСстТСАасСтТАаСАССАДАвассССАТСССОТСТТ

МНІ 69 соССсСсТаСАСССТОСТоСААаАаСАССстТотавасОасСАС дла,ассвассставастаССстТаТСсААОаАСТАСТТССССОА

АсССсСОЯОатТаАСсОатТТоатапААСТоАаВаСасСсСсСТОАССАЙ са,сСсаТасСАСАССТТСССвастаТтСсСстТАСАСТОСТСАСО

АСТСТАСТОССТоАЛО,сСсАсССсСатаатаАССатассстосСАа

САастаапаСАСССАСАССТАСАТСТаСААСОТОААТСА

САДИСССАССААСАССАААИТОПАСААСАААаттадас

ССАААТСТТатТОАдСсОасвассСсаСААдаСАСТАИТаСССАТС

АССАТСАССАТСАСОЯССОСОаСА

ОМОЇ МОБСОАЕУККРОББУКУВСКАБИСТЕЗБУАІЗММВОА

РОВІ ЕМ/МОСТРІЕЄСТАММАОКЕОСВМТІТАОКОТЗТАУМ 136 | важкий ланцюг габ УНІ. 69 ЕГ55І АВБЕОТАУУУСАВІ БРОСУМУМОрАМСОСТТУТМУ55 -7 1 АБТКОаРБОМЕРІ АРОЗКОТ5ОаСТАА аСІ МКОМЕРЕРУТУБМУУ

МОСАЇ ТЗОМНТЕРАМІ 05501 М5І 55 ТУРБББІ ИТОТМІСМ

ММНКРОМТКМОККМЕРКЗСОАААЗТЗАННННННААА

Таблиця 5

Праймерні послідовності, застосовувані для створення бібліотеки ОР88-4

ЗЕО

ІО |Назва праймера Праймерна послідовність 5" -- 3"

МО: стосАсттаеаста,асСсссСстТаасССАААСаТОвВААТА СОААТТАТА статтаасСАСТААТААСТТаСААААТСАТ 138 МК БІЗ В підкреслені: 60 то основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ -У-Ж-НО- рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 60 95 вихідних основ, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М стосАСсСтттестТа7асссСстТасССАААСаТтМнАЗавАТАСС,ААТТА тТАСТОТТааСАаТААТААИТТаСАААДАТСАТ 139 | УК1 5 ІЗг 5У підкреслені: 60 бе основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 60 95 вихідних основ, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М стосАСсСТтІтеаста7ассстТаасССАААСаТтМннМ555авАТАССАА

ТТАТАСТОаТТаСаСАСаСТААТААДИТТасСАдДААТСАТ 140 |Укі 5 ІЗг РУ підкреслені: 60 бе основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 60 95 вихідних основ, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М ааАСсАСсССсСОаоСататАТТАСТИатТассаАсаА-1-2-2-3-4-4АС-ТАС- тасадасССААвасвАСсСАсСсатаАсСа7атстос 143 | ОР8ЗВ-м4-4 1: с0/0-20 96, Е/ЛИБ-10 96, А/Р/ВЛИ/1/У-5596; 2: (/М/5-15 Ор,

А/ОЛ/В/РЛ /ЛИ/МАМ/ЕЛ/Е-4,6 90; 3: СИА/М-20 96, РЛМ/Б/0/1-8 95; А: Е-46 р,

Г/М-15 965, СИЛ/М-8 9. ааАСсАСсССсСЯаоСататАТТАСТИАТтассаАсаА-1-2-2-2-2-3-4-БАС-ТАС- тасадасССААвасвАСсСАсСсатаАсСа7атстос 144 | ОР8В-м4-6 1: с0/0-20 96, Е/ЛИБ-10 96, А/Р/ВЛИ/1/У-5596; 2: (/М/5-15 Ор,

А/ОЛ/В/РЛ /ЛИ/МАМ/ЕЛ/Е-4,6 90; 3: СИА/М-20 96, РЛМ/Б/0/1-8 95; А: Е-46 р,

Г/М-15 965, СИЛ/М-8 9. аапАСсАСсССсСЯаоСататАТТАСТИатТасаАсаА-1-2-2-2-2-2-2-3-4-7АС-ТАС- тасадасССААвасвАСсСАсСсатаАсСа7атстос 145 | ОР88-м4-8 1: с0/0-20 96, Е/ЛИБ-10 96, А/Р/ВЛИ/1/У-5596; 2: (/М/5-15 Ор,

А/ОЛ/В/РЛ /ЛИ/МАМ/ЕЛ/Е-4,6 90; 3: СИА/М-20 96, РЛМ/Б/0/1-8 95; А: Е-46 р,

Г/М-15 965, СИЛ/М-8 9.

В таблиці 6 представлена послідовність родової фагової дисплейної бібліотеки антитіл із загальним легким ланцюгом (МКЗ 20/УНЗ 23), в таблиці 7 представлені послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності матриці бібліотеки зародкової лінії із загальним легким ланцюгом (МКЗ 20/УНЗ 23), а в таблиці 8 представлені праймерні послідовності, застосовувані для створення бібліотеки із загальним легким ланцюгом (МКЗ 20/УНЗ 23).

Таблиця 6

Послідовність родової фагової дисплейної бібліотеки антитіл із загальним легким ланцюгом (МкЗ 20/УНЗ 23), застосовуваної як матриці для ПЛР іще,

МО:

АТОАААТАССТАТТИССТАСОСОССсАХ,ССсСсастТасАттатТАТТАСТСО са,сссСсдасСааССАТайССОпАААТСаТатТтАдсасАатсТосСАС

ВСАСССТатТоттТатстТоСАа,аСасаАААдадасССАСсСсттсттасАа сасСсАатТсАсАатТа|атдасАаасСсАастТАСТТАасстТааТАССАасСА вААддостасоСАаастсСАаастосСТСАТСТАТаСАССАТССАС

СсАд,асасСАСстТааСАТСССАпАСАасаттсАа,атаасСАа,атасАТССОС

САСАСАСТТСАСТСТСАССАТСАсССАсАСсТасвслассСстТтаААсаАТТТ аСсАсСтТатАТТАСТОатТсАаасСАатТАтТаатАасСстоАсСсастаАСаттса асСсАдапапАССАААдаТапйАААТСсАААСсатасаастааСсТасСАССАТ бібліотечна матриця | СТаТтсТтТСсСАТСТТоССасССАТСТаАТадаСАаТТОАААТСТОСААдС

ВУНІ10 бібліотеки із | ТИССТОТатататасстастаААТААСТТСТАТСССАпСАдапАИасСс загальним легким АААДИТАСАИаСТапААдасСТапАТААСаСССТССААТСОССИТААСТОоС ланцюгом СсАд,асАадатТаТСАСАаАдасСАааАСАаСААаспСАСАаСАССТАСАС

УКЗ 20/УНЗ 23; СсСсТСсАаСАОаСАСсоСстТадсастТаАасСААДаСАСАСТАСО,АаАААСА повна кодуюча САААДОТСстТАсСОасССсТасСсаААатСАСССАТтоАсСавассталастасс ділянка Рар, що СаТтСАСААДИАдаСТТСсСААСАСИасаАасАа татасАасССасСАСАТСА містить лідерну ССАТСАССАТСАССЯСАДаССасСсАСАСТАСААДааАСаАСаАСОсАСАА 147 послідовність саатТасСсСсаСАТААТАД,ааСасСассСААТТСТАТТ ТСААааАСАСАС

РеІВв-МКЗ 20 каппа | ТСАТАТОДААТАССТастасСссАссастастастастотастасто

У-домен їх стсастасссдасссасСсвАатасоСсад,аасТасСААтастасьяатст константний домен |ЇссспсОезАдеаастасатТАсАдасстаавававаТсССсТаАвАСТСТоСтТат

СІ легкого ланцюга і | асАааСсСстоСасАТТСАССТтТАааСсАаТтТТАТаССАТОДОаСсТааатТос

РеІв-МНЗ 23 У- асСсАдаасСсТоСАсасвАдадасаастаавАаатасваТсСТСАасСтТАТТАСТОа домен ж константний | СТАООТОСТаСТтАаСАСАТАСТАСОСАСаАСТоСатадл,саасоцпаТт домен СНІ важкого | ТСАССАТСТОСАСАСАСААТТССААСААСАСаТсСстТатАТСТаСАаА ланцюга, включаючи | ТФААСАСССТаАсАаа,асСсасА,ааАСАСвСасСаТАТАТТАСТИОТасСаА мітки ААССОИТтттОоСатАТТТТаАСТАСТОСИааССААДапСААСоСТастСАс сатстбаАХаТастТАаСАССАААдааСССАтаатсттоССосСтТавсСА

СоСсТоСстТоСААдадаСсАсСсттасвасасСАсАа,асас,ссоста7авастас

СстТаТСААааАСТАСТТоСССаАдАсСсастаАаса,аастатсатасААдс тЄбАсасассстАСсСсА,аСсвасаТасСАСАССТТССсавастТатссСтТАс аТатоСстТсАапАСТСТАСТоССтТоАласСАа,аСсатааталссатасссто сдасластапаСАСССАЧАССТАСАТСТаСААСаТталдАТСАСАА аСССАаСААСАССАДАаТаспАСААаАААа т ТаДассСААДАТСТТОа таАсасСсааССасСАпААСАААААСТСАТСТСАаААдаАасАТСТадА тассасСаасСА

Таблиця 7

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності матриці бібліотеки зародкової лінії із загальним легким ланцюгом (УкЗ 20Л/НЗ 23)

САААТССИаТатТААСасСсАаатстоСА,СасСАсостатсттатс тоСсАпа,аспаАААаАааССАсостттаса,ваАассСАатСАСа дататА9аСАааСАаСТАСТтТАаССтТаавтТАССАаСАСАААСо таасСсАсСастосСАаасТоСтТоАТСТАТасСАаСАТССАСаСА сааССАСсТааСАТОССАСАСАСОС оАаа,ата,аСАа,тТацаАТОоС сапАСАСАСТТСАСТОТСАССАТСАаСАаАСстТавлдасстад

АаАТттгтасаатТатАТТАСТатосАаСАаТтАТааТтАастоСАСс нуклеотидна сестадсаттссвсарссАаа,ааааАССАААаТацпАААТСАААСИ 148 | послідовність пегкого тАсааатаасСтТасСАССАТСТаТСТТСАТСТТОССассСАТСТОаА ланцюга Га УКЗ. 20 таАдаСАатТТаАААТоТасААСсТОаССТоТатататасстас - ТаААТААСТТСТАТОССАСАсСАсСасСсАААатТАСАа,ТасцсьА сатасАТААСаСССтТоСААТоСвСааТтТААСТОССАсСсаАсАаТтТ аТсАСАСАааСАсаСаАСАаСАдааАСАаСАССТАСАаССТСА аСАаСАСССТаАСасТаАаСАААаСАсаАСТАСсСАсСАААСА

САДАСТСТАСОЯОССТаСаААаИТтСАСССАТСАССОСТОАС,СТ сассСаТтСАСАААдадасСстТСААСАсассАсАа,ататасвАсс

СаСАСАТСАССАТСАССАТСАСОСОВАаИ,ССОаСАСАСТАСАДаИа вАСаАСаАСаАСААс,саатассСасСА

ЕІММГТО5РИТІ ЗІ ЗРОЕВАТІ БСВАБОБУЗЗОЗУ А МООКРОЮ

АРВ ПУСАЗЗААТОаІРОВЕЗазавзатовтІ ТІЗАВІЕРЕОБГАММУ 149 легкий ланцюг Еаф СООМа5зоРІ ТЕФОСТКУЄІКАТУМААРЗУРІЕРРБЗОЕОЇ КИТА

УкЗ 20 МУСІСММЕМРАЕАКМОУУКМОМА! О5125М5ОЕЗМТЕООЗКОЗЗТ

У5І 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСЕС сСААННННННЯААрУКОВрркаддАа сластасСААаттастасаатсотасасаАсастайТАСАсас ставассесатосСстаАдаАстотоста7атасдасстоСацАТТО

АССтТТтТАаасАатТАтТассСАТталаСстТасатоСбасСАаастос

АдасаАддасе7сстасАаа,атаватстАастТАТТАСсСТа,тТАаТтТт сатастАдаСАСАТАСТАСОЯСАаАСТОССОСтТадАас,саасССоаатТтТ

САССАТСТОСАСАСАСААТТССААСААСАСсастатАТСТас

АпАТВААСАааСсСстала,вАаа,асССаАда,асАСАСааосСОаТтАТАТТА нуклеотидна статаСсАААсСсатттоСатАТТТаАСТАСТОССОаССААС 150 | послі . вААСССТОСТСоАСсСсОСтТотосСАатТастАаСАССАААааСССА довність важкого ланцюга аб УНЗ. 23 тсесетотосоостасСАСССТОСТОСААпАаСАССТОТас - сааСАсАаасссасостасаста7асстааТСААааАСТАСТТОС

ССпААдсСссвсатаассататса7атавААСстТоАсасассстаАСо дасса,асатТасСсАСАССТТОССЯЯЯаСстТа|атосСТтАСАИ,ТОСТСАсаа

АСТСТАСТОССТСАсССсА,аСсатаатаасСсатассстоСАасСА сеотта,асасСсАСССАСаАССТАСАТСТаСААСаТтТаААТСАСААС

СССАаСААСАССАААаТапАСААпАААа ТТаАаСССААДАТ сттатадСсасааССаСАСпААСАААААСТСАТСТСАСААСАС вСАТСТаААТаСсСсасаасСА

ЕМО ГЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗИаЕТЕ55УАМОУУВОАРИ кагеЕмУзАаізазаав г УАрБУКОаВЕТІЗАОМЗКМТІ М ОММ 151 важкий ланцюг Раб 5 ВАЕОТАМУМСАКРЕРУРЮОУМУСОСТІ МТУ55АВТКаРОЗМЕР

УнЗ 23 (ОРА7) ГАРББЗКОТЗОаИТААГ ас МКЩОМЕРЕРУТУБУУМЗСИАІ Т5ИаМНТЕ

РАМ О55Д2І 51 55 ГУРБББІ ТО ТМІСМУМНКРОМТКМУОК

КМЕРКЗСОАААЕОКІ ІЗЕЕОІ МААА

Таблиця 8

Праймерні послідовності, застосовувані для створення бібліотеки ОР88-4

ЗЕ Н - - : : то тасдпаССАдОпААссСстасатсАссатстса тасайССААдаспААссСтасатоАСсСсаТатстос тасайССААдаспААссСтасатоАСсСсаТатстос 1: 2/0-20 95, Е///5-10 9в, А/Р/АЛ./Т/У-5 90; 2: 1/М/5-15 96, А/О//В/Р/Л. /ЛИ/МЛИЛЕЛ/Е-4,6 9; З:

Сид/У-20 96, РЛМ/Б/0/Т-8 906; А: Е-46 96, 1 /М-15 95, СЛ/У-8 905; 5: К-70 96, Н-З0 Ор.

В таблиці 9 представлена послідовність родової фагової дисплейної бібліотеки лямбда-

ОРА7 (МІЗ 19/УНЗ 23), застосовуваної як матриці для ПЛР, в таблиці 10 представлені послідовності КДНК і амінокислотні послідовності матриці бібліотеки зародкової лінії лямбда-

ОБРА? (МІЗ 19/УНЗ 23), а в таблиці 11 представлені Праймерні послідовності, застосовувані для створення бібліотеки лямбда-ОРА7 (МІЗ 19/УНЗ 23).

Таблиця 9

Послідовність родової фагової дисплейної бібліотеки лямбда-ОРА7 (МІЗ 19/УНЗ 23), застосовуваної як матриці для ПЛР іще,

ІО Опис Послідовність

МО:

АТОАААТАССТАТТИССТАСОСОССсАХ,ССсСсастТасАттатТАТТАСТСО са,ассСсда,ассааСсСАТаасстТИаттадастаАСТСАааАСосСтТа стататстатаассттасваАСАпАСАаТСАсааАТСАСАТаССАДОа пАпАСАаССТСАСпААаТТАТТАтТаСААдастТасаТАССАаСАсАдас бібліотечна матриця | СДАССАСАСасссстатАСТТаТтСАТСТАТаСТАААААСААССОоас рАУН5З бібліотеки. |!ССТСАсСацпАТСССАСАССаАТТСоТоТвДИаСТоСАаСТСАааАААСА лямбда-ОР47 СсАастТосСТТаАССАТСАСТОСВЯаСстоАа,сСааавАдсАтТалиааста

МІЗ 19/УНЗ 23; АСТАТТАСТатТААСТОССОТаАтТАаатТАасСааТААТСАТатастАТТ повна кодуюча сасссаАдпапАССААдасСсТАССаТатсСстТАаспАСААСССАдассТас ділянка Раб, що ссосда,асатАсостатсоссоСсССАаасСсАааСаАасААттасАсаас містить лідерну СААСААдаасСсАссстаатстасстаАтсАасСаАСТСТАСССАца послідовність сассатаодсс,атаасставАдаасСсАСАаа,асСсАаасооСаТаАлаас 158 РеІВ-МмІЗ 19 лямбда| СЧЦССОСТОСАСАССАССАСССССАССААаСАсАаСААСААСАДдИТ

У-домен ж АсСсаСсСсасСсАааСАасСтТАсСстаХассСстАССсоССадаСАаТапйААаА константний домен | АССАСсАсатсстТАСсАасСстасСсАааТаАСССАСсадапаСАасСАССС

Сі легкого ланцюга і! ТЕСАСААААассатаасССССАсСсадатаса,аСапАасССасСАСАА

РеІВв-МНЗ 23 М- СААДАДАДАСТСАТСТСАСАдсАХапАТСТаААтТасаасСасСАсаАсСтТАСс домен ж АдапАСаАСаАСаАСАда,аваТасСасСАТААТААДааСаСаТсСсСААТ константний домен | ТСТАТТТСАДИСАСАСАаТСАТАТОАААТАССТОСТаССвАССаТст

СНІ важкого астастасатотастастостосСстассСсАа,асосаасаАтаассвАаа ланцюга, включаючи! ТаСсСААТТаСТОСАСТоТасасаАасае7астсаатАсАаа,асстасаваатТ мітки ссстаАааАсттстатасдасстоСапйАТТСАССТТТАаСАСТТА тассАТаластаватоСсасСсАавастсАаа,аааАл,асаастасвАата аватсТсАастТАТТАсТОаатАаатастастАаСАСАТАСТАСасСАаА

СсТСатТаААдаваССОасТСАССАТСТОСАСАСаАСААТТССАДСАА

САСОаСТатАТСТасСсАсаАТаААСАаСсСстаАсАасССаАааАСАСОасо

Таблиця 9

Послідовність родової фагової дисплейної бібліотеки лямбда-ОРА7 (МІЗ 19/УНЗ 23), застосовуваної як матриці для ПЛР

СаТАТАТТАСТОТаСОаАААсСсатттоСатАТТТаАСтТАСТОваааСс

СААДЧСААсСоСстТаатсАасСсаТ ттсаАатасСстТАаСАССАААааСССА тсаатстооооСсТаСАСССТОСТоСААсдасСАсСсттаТасасвасА сла,ас,асоостасастасстаайТСААдасСАСТАСТТоСССадАсСа таАдсс,сататсатавААСстТсАсасСсассстАССА,аСсааСаТасСАСА ссттоссаасСстТатСссСтТАСАаТСсСТСАасСАСТСТАСТОССТСАаСАа сатаастаАдсса,атассстСАасАастапаСАСССАаАССТАСАТ

СТаСААСИТаААТСАСАДаСССАССААСАССАААДаТаСпСАСАдаА

АдаттадасСсССАААТоТттИатаадСаСсавасСаСААдасСАстАатассс

АТСАССАТСАССАТСАСОССасаасСА

Таблиця 10

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності матриці бібліотеки зародкової лінії лямбда - ОР47 (МІЗ 19/УНЗ 23) тса,7атстадастТаАстТсАд,асАсосстастататтатасстт сацпАСсАпАСАаТСАааАТСсАСАТасССАд,асАаАСАасСстТо

АСААдСТТАТТАТаСААдастааТтАСсСАаСАпААаССАасАСс васСссссСтТатАСТТаТтСАТСТАТОСТАААААСААССсавассс тСсАСааАТоССАпАССаАдтсттаасСсТСАасСтТСАацААА

САСАаСТТССТТаАССАТСАСТОСОСОССтТоАа,ааСасААсаАТОа

А,пастТаАСТАТТАСТаТтТААСТОССатОаАТтТАатТАасСасатТААТ нуклеотидна СсАТОТОСТАТТССССОАсСапАССАдастТаАССаТтостТАаа 159. | послідовність легкого АСААСССАДОЯССТаССсСсСсСАаСатаАСССсТатоССССсССА ланцюга аб МІЗ. 19 аСсд,абадапААтасАаасССААСАдаассСАссСсТаатстТа - ССтТаАтТсАаСаАСсТстТАСССсАасасасс,астаАсСсатаасстТ саддаасспАдСсАда,асАаасосСсатадл,сассаваоставАсАСс

САССАСССССАаСАДаСАСАаСААСААСАдатАсассасс дасАдастТАсСстадассСстАасосСсСадаСАаатапААадасСо

АСсАаатТтссСтТАСсАДаСстТассАаа,аатаАСССАСссАасаасСАасСАс сатТапАпААдАдАдссатаассССсСАсСсвАатасаласа,аадасс

ССАСААСАААДААСТСАТСТСАСААСАаСАТСТОААТасАс

СсСаСАСАСТАСААааАСаАСаАСаАСААдааваТтассСсасСА

З5Е ТООРАМБМАЇ аОТУВІТСОСО5І ВБММАБМУМУООКРИООА

РМ МІМЕАКММАРБОИаї РОВЕ5Иа5ОБОМТАБІ ТІТОАОАЕОЕАВУУ 160 легкий ланцюг Бар СсМЗАО55амМнУМвгасаТткКІ ТМ ФаОРКААРБЗМТІ ЕРРЗБЕБЕЇ ОД

МІЗ 19 МКАТ МСБО ЕМ РІАМТМАМКАОЗОРУКАСМЕТТТРОКО5М

МКМААББОЗМІ БІ ТРЕОСМКЗНАЗУЗСОУТНЕВЗТМЕКТМАРТЕС

ЗСААЕОКІ ІЗЕЕОІ МОААВУКООООКИадА нуклеотидна 150 |послідовність важкого | Див. таблицю 7 ланцюга ар МНЗ 23

Таблиця 11

Праймерні послідовності, застосовувані для створення бібліотеки лямбда-ОР4А7 (МІЗ 19/УНЗ 23)

ЗЕО

ІЮО | Назва праймера Праймерна послідовність 5" - 3"

МО: іїМвЗ САССАДАСАИСТАТОАССАТОАТТАС сзассостоласта,аТооСстТоСасСсСпААТАС УНМ АТ АСС аСтТ

АСТ АТО АСа ЧапйАаТТАСАИТААтТАаТтСАасСсСтТСАТСТТОССЯаС 162 М 31913г М підкреслені: бо бо основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 6095 вихідних основ, а 4095 основ рандомізовані з використанням суміші М сзасесоатоласта,асТооСстоСассСпААТАС СММ АТО АТТ АСС аСтТ АСТ АТО Або апАсаТТАСАаТААтТАаТтСАасСсСТСАТСТТОСас 163 МІ З 19 ІЗ НМ підкреслені: бо бо основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 6095 вихідних основ, а 4095 основ рандомізовані з використанням суміші М сзассоатодаста,асТооСстоСассСпААТАС ВНМ УМ АТО АТТ

АСС СТ АСТ АТО АСа аадатТАСАСТААТАатСАасСсСтТСАТСТТО

Сас 164 |МІ З 19 І Зг НІМ підкреслені: 60 95 основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 6095 вихідних основ, а 4095 основ рандомізовані з використанням суміші М

НВО т свасСаОАйОаСАсСсСААасСтТаАССаТтос

Додаткові праймери, що застосовуються для конструювання бібліотеки лямбда-ОР4А7, тобто

ОРА7СОВЗ Ба (тоа.), ОРА7-м4-4, ЮРА7-м4-6, ЮРА7-м4-8 і тазедіопа, ідентичні праймерів, які застосовували для конструювання бібліотеки загального легкого ланцюга (МКЗ3 20//НЗ 23), і вони вже перераховані в таблиці 8.

За допомогою описаної вище процедури клони 8НО, 2087, 4984, 102:4, С1 060-563, С1 0-564 і 17А9 ідентифіковані як специфічні зв'язуючі людський ОХ40 агенти. послідовності КДНК їх варіабельних ділянок представлені нижче в таблиці 12, відповідні амінокислотні послідовності представлені в таблиці В.

Таблиця 12

Послідовності пар основ варіабельних ділянок одержаних за допомогою фагів антитіл до ОХ40.

Гіперваріабельні ділянки (СОР) підкреслені о Клон (ЗХЕОІЮ МОЇ 77717171 Послідовність тса,атстадастТаАСстоАссАссостастататста,атаасстааапАСАа

АСАСТСАаСПСАТСАСАТаССАда,апАпАСАасСсСстАСААаТтТАТТАТИС

ААдастаатТАССАаСАсАда,асСА,аАСАвасссєтатАСТТатСАТСТ вно 166 (М) І(АТапТААДАААСААССв,вассстоАааааАТоССАпАССаАтоттаас тосАасСстоАасАААСАСАастТоСтТТаАССАТСАСТОССВИаСстоАааса

САдаАдтТадааСсТаАСТАТТАСТатТААСТОССИатТаттТАТасСсСтТСАТААТ са,асататтссаса,аавАдасаАССААдасСТаАсСато

Таблиця 12

Послідовності пар основ варіабельних ділянок одержаних за допомогою фагів антитіл до ОХ40.

Гіперваріабельні ділянки (СОР) підкреслені сдаатТасСсААтатааааттасвасвАасвасттастАсАаасставссо атосСтАвАсттстатаСсАаСсСстТоСапАТТСАССТТТАаСАСТТА тассАТаластасватоСсассАавастСсА,аасАла,аса,аставАатаца 167 (ун) тТотТсАаСтТАТТАСТОСТАСТОасСТастТАаСАСАТАСТАСОаСАСаАСТОоСИ

ТтТаААСИаИаССОсаТТСсАССАТСТССАПАСАСААТТССААСААСАСаТста

ТАТСТаСАСАТОААСАааСсСсТаАаАдаССадапАСАСаасССаТтАТАТТА статасасататтттстТАссатастастат т СТАТасАСТАСТОСОС

ССААДССААСсССТастоАСсаТатстоаАсатТ

САСАТССАСАТаАСССАаТтсТоСТСсСАССсСТатстТасАТСТатАаад чвАссататСсАССАТСАСТТаССОЯтТасСсАатТСАаАаТТАТТАаТАаСтТаС таасстасТАТСАаСАСАААССАаапААдАасСссссСтТАДастосСтТаАТ 168 (М) ІСТАТОАТаСсСстоСсАатттапААдАлатасааТоССАТСАССОСТТТсАаСас сдатааАтТоСайОАСАСААТТСАСТСТСАССАТСАЛССАСаСТТаСАаСс

ТОаАТОАТТТТаСААСТТАТТАСТаССААСАСТАТАСТТСсИаСАаССаИТтА тТАсатт,аасСсСАасасСАССАААаТСаАсАТСААС 4984 СсАд,астасААтаатасалатстаавастадааТаААпААа,асстасвато стсаатТАдАдаатстоСсТСАлда,асостСаспАааСАСАтСАдасАастТ

АСастТАТАХОСТОСОЯТтаСсаАдСАасассостасАСАд,асастоаАаТаС 169 (УН) АтасадапсаАТтТСАТСССТАТСТТТаСТАСАИСАААСТАСаСАСАСАА ат сСсАд,сапСАаааТСАССАТТАСТаСАайАСААДАТССАСОАдИаСАСАС

СсСстТАСАТаСсСАХсаСсТаАаа,аСАаасССстаАаАтТотТАааАСАССассаТаТтАТ тТАСТОаТаСОАСАСААТАСТАСССЯТОИаТоСатАСаАСстТАСстТаавсаассСА дапйсАСсСАсСатаАССаТтсТосСТСА

САСАТССАСАТаАСССАаТтсТосСТСсСАССсСтТатстТасАТСТатАаад чвАссатаТтСсАССАТСАСТТаССОЯТасСсСАаТСсАпАаТтАТТАИаТАаСтТас таасстасТАТСАаСАСАААССАаапААдАасСссссСтТАДастосСтТаАТ 170 (М) ІСТАТОАТаССстоСсАатттТапААдАлатасааТоССАТСАССОСТТТсАаСас сдатааАтТоСайОАСАСААТТСАСТСТСАССАТСАЛССАСаСТТаСАаСс

ТОаАТОАТТТТаСААСТТАТТАСТаССААСАСТАТАТТТСОСТАТТССАТО тОоАдсаттавсСсАаааСАССААДАатсаАСсАТСАДИ 104 СсАд,астасААтаатасалатстаавастадааТаААпААа,асстасвато стсаатТАдАдаатстоСсТСАлда,асостСаспАааСАСАтСАдасАастТ

АСастТАТАХОСТОСОЯТтаСсаАдСАасассостасАСАд,асастоаАаТаС 171 (ун) АтасадаапсаАТСАТСССТАТСТТТОСТАСАИСАААСТАСаСАСАСАА атсСсАд,сапСАаааТСАССАТТАСТаСАаАСААДАТССАСОАдИаСАСАС

СсСстТАСАТаСсСАХсаСсТаАаа,аСАаасССстаАаАтТотТАааАСАССассаТаТтАТ тТАСТОаТаСОАСАпААТАСОааТТСсТАТаСАСТАСТССасСААасваАс

САССОТаАССаИаТтстоСтТСА

САСАТССАСАТаАСССАаТтсТосСТСсСАССсСтТатстТасАТСТатАаад чвАссататСсАССАТСАСТТаССОЯтТасСсАатТСАаАаТТАТТАаТАаСтТаС таасстасТАТСАаСАСАААССАаапААдАасСссссСтТААастостаАТ 172 (М) ІСТАТОАТОССтТоСсАатТттапААдАла,а тав, оССАТСАССОСТТТсАаСас сдатааАтТоСайОАСАСААТТСАСТСТСАССАТСАЛССАСаСТТаСАаСс

ТОаАТОАТТТТаСААСТТАТТАСТаССААСАСаТАТСАСОСТТТТТСасСтТТ

АсССсСтттааСсСАаааСАССАААаТСаАсСАТСАДОИ 2087 СсАдастасААтаатасалатстаавастадаатаААпААа,асстааваТо стсаатТАдАдаатстоСсТСАлда,асостСаспАааСАСАтСАдасАастТ

АСастТАТАХОСТОСОЯТтаСсаАдСАасассостасАСАд,асастоаАаТаС 173 (ун) АтасадаапсаАТСАТСССТАТСТТТОСТАСАИСАААСТАСаСАСАСАА ат сСсАд,сапСАаааТСАССАТТАСТаСАайАСААДАТССАСОАдИаСАСАС

СсСстТАСАТаСсСАХсаСсТаАаа,аСАаасССстаАаАтТотТАааАСАССассаТаТтАТ тТАСТаОтТаСОАСАсСТТААСТАСССатАСТСОТТАСТОСВВИатТалдсттСаАс тТАСТОСОСОСССААсаасАССАССатаАССаТтсТоСтСА

Таблиця 12

Послідовності пар основ варіабельних ділянок одержаних за допомогою фагів антитіл до ОХ40.

Гіперваріабельні ділянки (СОР) підкреслені сАдаАтса,атастаАСССАсАаассССааСАСАСТОТОССТатотоСстТацса

СААдАдсаасСсСАСССТТСсАТаСАсСАааССАаССАстоСа,атстстАатТАас тТАССТОаССАТИСТАТСсАааСАпААдасССАааАСААа,асооооСасстост 174 (М) (зАТТТАСОСОсССОСсТтоСтотбаааСААСТОИТАТОССТаАСАСИТТСТо

АдсасасдаСбапАлдаСасААСАСвСАТТТТАССТТаАСТАТТТСТАСАСТОаС

АдасСсАааАХапАстсаоСсататАТТАСТатСсАаСАатТАСсватАатАасс сі с- СсоСстТсАССТІ ТОаОаСсСАас,СасСсАСААААаТСаАААТСААС 53 сааатасСсААата,аттаса,аттасасаАасеастаатТАсАаа,асстасасо стосстаАдаАСТОТОСТатТасАаССтТоСасцсАТТСАССТТТАасСАаИТттТА тассАТалдаСстТтаватосассаавастосааасьаасЯастацвАатаса 175 (УН) тТСстТсАасСтТАТТАСТОСТАаТтаатТааТтАаСАСАТАСТАСОЯСАСАСТОоСа таАдаасассааТТСАССАТСТОСАСАСАСААТТССААпААСАСаТста тТАТСТаСсСАСАТОААСАаССТаАлаАаССаАааАСАСаОоСатАТАТТА статасеасттаАсаттаа,атасттсаАСТАСстТасаасСААдасАаСостТ аватТсАасСса,атстоаАат сАдаАтса,атастаАСССАсАаассССааСАСАСТОТОССТатотоСстТацса

СААдАдсаасСсСАСССТТСсАТаСАсСАааССАаССАстоСа,атстстАатТАас тТАССТОаССАТИСТАТСсАааСАпААдасССАааАСААа,асооооСасстост 176(М) Г(зАТттТАСсОСОсССастТтоСсттоаасаСААСТОИТАТОССТаАСАСИ ТТоТо

АдсасасдаСбапАдаСацпААСАвпАТТТТАССТТаАСТАТТТСТАСАСТОС

АдасСсАааАХапАстсаоСсататАТТАСТатСсАаСАатТАСсватАатАасс сі с- СсоСстТсАССТІ ТОаОаСсСАас,СасСсАСААААаТСаАААТСААС

ББА сааатасСсААата,аттаса,аттасасаАасеастаатТАсАаа,асстасасо стосстаАдаАСТОоТОСТатТасАаа,аССстоСадвАТТСАССТттАасСсАаТТА тассАТалдаСстТтаватосассаавастосаасасвАласяастаадатасся 177 (ун) тТСстТсАасСтТАТТАСТОСТАаТтаатТааТтАаСАСАТАСТАСОЯСАСАСТОоСа таАдаасассааТТСАССАТСТОСАСАСАСААТТССААпААСАСаТста тТАТСТаСсСАСАТОААСАаССТаАлаАаССаАааАСАСаОоСатАТАТТА статасаттссАсаттаеа,атоСаттСаАСТАСсТасааССАдапААССсСТ аатсАассатстоаАат тса,атсталдастаАстоАассАасосстастататста,атвасстасаАСАс

АСАСТСАаСПСАТСАСАТаССАда,апАпАСАасСсСстАСААаТтТАТТАТИС

ААдастаатТАССАаСАсАда,асСА,аАСАвасссєтатАСТТатСАТСТ 178 (М) І(АТапйТААДАААСААССсв,вассстАааааАТоССАпАССаАтоттаас тосАасСстоАасАААСАСАастТоСтТТаАССАТСАСТОСаСстСАааСсо сАдаАтТадааСсТаАСТАТТАСТатААСТОССататТАТаСсСТСАТААТ са,асататтссаса,аавАдасаАССААдасСТаАсСато 17А9 сааатасСсААата,аттаса,аттасасаАасеастаатТАсАаа,асстасасо стосстаАдаАСТОоТОСТатТасАаа,аССстоСадвАТТСАССТттАасСсАаТТА тассАТалдаСстТтаватосассаавастосааасьаасЯастацвАатаса 179 (УН) тТСстТсАасСтТАТТАСТОСТАаСТтаатТааТтАаСАСАТАСТАСИаСАСАСТОСОЯ таАдаасассааТТСАССАТСТОСАСАСАСААТТССААпААСАСаТста тТАТСТаСсСАСАТОААСАаССТаАлаАаССаАааАСАСаОоСатАТАТТА статасасстаттсотАсса,атаатастатг т стТАТасАСТАСТОСССО

СААДаСаААСсоСстТастоАсСатСстосАаТ 1.3 Одержання, очистка і характеризація антитіл до ОХ40 в форматі дс1і РЗ2ОСІ АГА послідовності ДНК варіабельних ділянок важких і легких ланцюгів вибраних анти-ОХ40- зв'язуючих агентів субклонували в рамці зчитування або з константною важкого ланцюга, або з константною легкого ланцюга людського Ідс21. Інтродуковали мутації РгоЗ29с1пу, І ен234АЇа і

Гец235АЇїа в константну ділянку важких ланцюгів з "виступом" і "западиною" для елімінації зв'язування з рецепторами Ес-гамма згідно з методом, описаним в міжнародній заявці на патент

МО 2012/130831 АТ. послідовності КДНК і амінокислотні послідовності анти-ОХ40 клонів, представлені в таблиці

13. Всі послідовності, які кодують злиття анти-0Х40-Рс клонували в плазмідному векторі, в якому експресія вставки контролюється промотором МР5БУ і який містить синтетичну сигнальну поліА-послідовність, локалізовану на 3'-кінці СО. Крім того, вектор містив послідовність ОгіР

ЕВМ для підтримання епісомальної форми плазміди.

Таблиця 13

Послідовності клонів анти-ОХ40 в форматі людського ІДС! РЗ2ОСІ АГА

САСАТССАСАТаАСССАаТСТОСТТССАСССТаТтСстТасСАТСТИатА садпАССатаТтСАССАТСАСТТОаССОЯТасСсСАатТСАсАатТАТТАС тластасттаасстаатТАТСАаСАСАААССАаасААдАасссстТА

АССТОСТОАТСТАТОАТасССтТоСАаТтттапААдАда тасасаТоСсСАТ

СсАсСстттсАдаСса,аасАаатапАтСасваАСАСААТТСАСТСТСАСС 180 АТтТСсАСаСсАастТтасСАасСссСстТаАТОАТТТТасСААСТТАТТАСТаССАА (нуклеотидна СсАатТАТттТаАСОаТАТТСОССОсСтТТАСсаттааССАаааСАССАДА послідовність легкого стоаАпАТСААдсаСсатАасааТаасСТасСАССАТСТОаТСТТСАТСТТО ланцюга) СсСасССАТСТОАТОдаСАСаСТТаАААТСТОСААСТОССТОТИатТата тасстТастОаААТААСТТСТАТСССАСАдаАааССАААаТАСА,Та вААдсатаайАтТААсассстоСААтТоасватААСТоССАс,саАадата

ТСсАСАаСсСАДасАдапАСАаСААсаАСАаСАССтТАСАасстоАасАс

СсАсоСстТаАсасСстТаАасСААДаСАпАСТАСОАаАААСАСАДАИТСТ досасстасСсаААДаТтСсАСССАТСАСВСОССстТаАасСТСасссСатсСАСА

ААСАДСаСТТСААСАсСасадаАлатат

СсАасатасСсААдта7аатасаатстааавастА,ааТаААаААасССсТаС стостосватадАдаатстСсТасСсАл,ааостСавАаасСАСАТТСА вСАаСстТАСасСтТАТААДОСТОСЯВТтаСаАСАаасссСТасАСАдОаса стссдатавАатТасаАХаааАТСАТОССТАТСТТТаСТАСАСаСААА

СстТАбасСАСАадАдаттсСсАаа,авасАдааатСАССАТТАСТаСАаАСА

ААТССАСОаАдаСАСАаССтТАСАТОасСАа,аСстТаАдаСАаСсСстТаАсАТСТ сМдапАсАасСсасСсататТАтТАСсТатасСадаАаААтТАСааТТааАТ саАСТАСТасСааСсСААдаапАССАССатаАССаТтстТосСтТСАастА вСсАССААХСаСсассСАтТоИваТтстооооСТааСАСССТОСТОСАдаА вво асАсстотасасасАасАа,асасооставастасстааТСААласАс тТАСТТССССОАдАсСсОватаАдссататсатасвААСстсАсааТасассст сАослдассасаТаСАСАССТТССОСастТатссСтТАСАаТОоСтТоСАа вАСТСТАСТОССТоАдаСсАа,асатастадссата,ассстоСАасСсАастТ 181 таваСАСССАаАССТАСАТСТаСААСаТаААТСАСАДассСАас (нуклеотидна ААСАССАДааТасАСААаААДАаТТаАаСССАААТСТТаТаАСАА послідовність важкого ААСТСАСАСАТаСССАССОЯ ТОСССАсаСАССтТаАддасСстасАцвасяЯя ланцюга) САСсСатсАатсТ сс ССССССАДААСССААасАСАСССТСА тТаАТСТОССОСОАсоСсСстТаАлдааТтСАСсАТтасатастаставАСата

АаССАСаАдАдаАдооСстадааТСААаТТСААСстаатАсатаавАСасяь сатавбдасаТаСАТААТаССААаАСАААдасСсасСсасвссасласвАасСАс тТАСААДСАЛАССАССЯТтАССОСТОтТастоАа,аСсатостоАасса|атостасАс сАдавАСсТааСсТаААтТааСАдааАаТАСАДатаСААдааТсСТоСАА

СААдДОАСССТОЧасСасссСсССАТССАСААДААССАТСТОСАДАасСсСА

АдсааСАаСсСССОпАпААССАСАаататТАСАСССТассссССАТОСС

СсаппАтТАдаСстТАССААпААССАасаатсАаасстаАасста|асстаат

СААДОССТТСТАТСССАаСОАСсАТСоСОСССсСОтавАааставаАсАасСА

АТаСОСсАаССОааАСААСААСТАСААДаАССАСасстссатаста вАСсСТоСсаАСсОасСТоОСтТ СТ осСТСстТАСАаСААдасСТСАССатацАс

ААдадасааатааСА,САассавААСаТатстСсТСАТаСстоСаИатаАТ вСсАТОАДСаСтТоТасАСААССАСТАСАСаСАпаААдаАдасстоТосс татстоСасатТААА

ІОМТО5РБ5ОТІ БАБМОаОВМТІТСВАБОБІБЗББУ/ЛІ АММООКРОаКАРКІ. 182 (легкий ланцюг) ПИрАББІ ЕБОМРУОНЕЗОа5Оа5атТЕРНЕТІ ТІЗ5І ОРОЮОБГАТУУСООМІ ТУ

ЗВЕТЕЧОСТКМЕІКАТМААРОМУРІЕРРБОЕОЇ КИ ТАБММСІ І ММЕМР

ВЕАКМОМКМОМАГ О5ИМЗОЕЗУМТЕООЗКОЗТМОІ 55ТІ ТІ ЗКАВУ

Таблиця 13

Послідовності клонів анти-ОХ40 в форматі людського ІДС! РЗ2ОСІ АГА 77717171 Ф|ЕКНКУМАСЕМТНОСІЗ5РУТКВЕМВОЕС.Д//: 777771

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІЗБМУНОАРИаОИІ.

ЕМ МасСИТтРІГЄИТАММАОКЕОСАМТІТАОКОТОЗТАУМЕЇ 551 А5ЕОТА

УМУУСАВЕМОМУ МО УМ СОС ТУТ М55АЗБТКОРОМЕРІ АРОБКОТВОС

ТААГаСІ МКОМЕРЕРУТУМ5УУМ5ИАІ Та МНТЕРАМІ О55ИІ М5І 55 183 (важкий ланцюг) МУТУМРБУББВІ атОТМІСМУМНКРУОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОСР

АРЕАДССРБОМНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУММОМЗНЕОРЕМКЕМ

МУМрамЕМНМАКТКРАЕЄЕОУМОТМАМУ5МІ ТМ НООМ/І МОКЕМК

СКУ5БМКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМУТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І ТО

ГУКаЕМРООІАМЕМЕБМООРЕММУКТТРРМІ О5ООаБЕРІ МКІТМО

КЗАМООСММЕЗСОУМНЕАІ НМНУТОКОІ 5І РОК

САСАТССАСАТаАСССАаТСТОСТТССАСССТаТтСстТасСАТСТИатА садпАССатаТтСАССАТСАСТТОаССОЯТасСсСАатТСАсАатТАТТАС тластасттаасстаатТАТСАаСАСАААССАаасААдАасссстТА

АССТОСТОАТСТАТОАТасССтТоСАаТтттапААдАда тасасаТоСсСАТ

СсАсСстттсАдаСса,аасАаатапАтСааваАСАСААТТСАСТСТСАСС 184 АТтТСсАСаСсАастТтасСАасСссСстТаАТОАТТТТасСААСТТАТТАСТаССАА (нуклеотидна САатТАТАСТТСсОаССАаССаТтАТтАСОИаттТааССАпааСАССААДАСТ послідовність легкого СсОАпАТСААХдаСсатАас,сатаасТасСАССАТСТатсСТтТСАТСТТОСС ланцюга) асССсАТтСотТаАТаАдаСАаТтТаАААтТоТаспААстаТассттаТттатата

ССТасСтТОААТААСТТСТАТСССАСАдсАпасССААдАаТтАСАатааА

Ад,аатааАтТААСаССсСТоСААтоааатААСТоССАсаАадатТато

АсАда,аАдаСАапАСАаСААапАСАаСАССТАСАасСсСстТоАасСАаСА

СсССтТОАСасСстТаАаСАААдасСАаАСтТАСОАСАААСАСАдАаТтстАСс аДоСТасСОААдаТСАСССАТСАИ,свасСстаАасТассСОаТСАСАДА вАаСТСсААСАсасаАсАаТтТат

СсАасатасСсААдта7аатасаатстааавастА,ааТаААаААасССсТаС стостосватадАдаатстСсТасСсАл,ааостСавАаасСАСАТТСА вСАаСстТАСасСтТАТААДОСТОСЯВТтаСаАСАаасссСТасАСАдОаса стссдатавАатТасаАХаааАТСАТОССТАТСТТТаСТАСАСаСААА

СстТАбасСАСАадАдаттсСсАаа,авасАдааатСАССАТТАСТаСАаАСА

ААТССАСОаАдаСАСАаССтТАСАТОасСАа,аСстТаАдаСАаСсСстТаАсАТСТ 4984 сМдапАсАдсСсасСсататАТАСсТатасСсаАсаАСаААТАСТАССИТОас тоСатТАСаАСТАСТаСааССААсапАССАссатаАССа7тстостТ

СсАастТАаСАССААл,саассСАтаатсооооСТаСАСССТОоСТ

СсСАДЧАДаСАССТотасаса7асСАсАа,аСсааоостааастаостасто

ААапАСТАСТТССССаАдАссаатадлсавсатататасААСТСАсас сассстАсСсА,аСсвасаТасСАСАССТТССсаастТатссСТАСАСТО 185 СстТСАааАСТСТАСстТоСсСстодасАа,ссатааталсс,атассстТосСАа (нуклеотидна сдасттаааСАСССАаАССТАСАТСТаСААСаТаААТСАСАдасС послідовність важкого ССАССААСАССААс,атайпйАСААпАААаТТаАасСССАААТСТТИаТт ланцюга) САСАДААСТСАСАСАТассСАсСсатасСсСАаСАССстадаастас дассааАСсСаТСАаТТтсСТоСТСТССССССААААСССААсСаАсСА

СоСстТСАТаАТСТОССОССАСсСсССТОАХааТСсАСсАТОаСЯТтааЙта,сТас доса,атаАдаССАСОААаАСССТаАааТСсААаТТСсААСстааТтАсата садссссатасАааТасСАТААТаССААСАСАдАдасса,аСаавадас

АССАаТАСААСАааСАСсатАассататаатАаСаТатссСТСАССИатТо

СстТасСсАСсСАаавАСстТаасСсТаААтТапСААааАаТАСАдатасСАдОастТ

СТоСААСАДАОССССТОИааСаСССССАТССАСААААССАТСТОСА

ААДИССААдАасСааСАаасссСаАпААССАСАсатаТАСАСсоСста7ассс

СсСАТСССОЯСОапАТОАдаСТаАССААСаААССАааатСАасстТаАсстТа

Стат СААдаасСТстТАТСССАаСОАСАтТоаСсСсатавАатасаИ

АвАдаСсААдтасасдасСсапАаААСААСТАСААЧАССАСасстос сатаставпйАСстоСаАсаасСТосСтТсСТССТСсТАСАаСАдасСтТСАС сатТасАСАдсАдаСАсатасоАаСАсааааААСаТтсТсТСАТОаСтТ

Таблиця 13

Послідовності клонів анти-ОХ40 в форматі людського ІДС! РЗ2ОСІ АГА

НІШ ЕЕ піна стстоссТатстоСасаТААА

ІОМТО5РБ5ОТІ БАБМОаОВМТІТСВАБОБІБЗББУ/ЛІ АММООКРОаКАРКІ.

ПМОАББІ ЕБОУМРОВЕБавБазатеЕРНТІ ТІЗБІ ОРОЮОБАТУУСООУВО 186 (легкий ланцюг) | РУТЕБОСТКУБІКАТМААРЗМЕІЕРРБЗОЕОЇ К5СТАБМУММСТ І ММЕМР

ВЕАКМОМ/КМОМАГО5аИМЗОЕЗУТЕООБКОБЗТМБІ 55ТІ ТІ КАВУ

ЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАОЕС

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІЗБМУНОАРИаОИІ.

ЕМ МасСИТтРІГЄИТАММАОКЕОСАМТІТАОКОТОЗТАУМЕЇ 551 А5ЕОТА

МУУСАВЕУУВаРУМЮММ ОСТ ТУТМ55АВБТКОаРОУМЕРІ АРЗбУК5ОТбоа

СТААГ ОСІ МКОМЕРЕРУТУБМ/МЗОАІ Та МНТЕРАМІ 05501 51 5 187 важкий ланцюг) ЗММТМРББІ ато МміСМММНкКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОР

АРЕАДССРБОМНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУММОМЗНЕОРЕМКЕМ

МУМрамЕМНМАКТКРАЕЄЕОУМОТМАМУ5МІ ТМ НООМ/І МОКЕМК

СКУ5БМКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМУТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І ТО

ГУКаЕМРООІАМЕМЕБМООРЕММУКТТРРМІ О5ООаБЕРІ МКІТМО

КЗАМООСММЕЗСОУМНЕАІ НМНУТОКОІ 5І РОК

САСАТССАСАТаАСССАаТСТОСТТССАСССТаТтСстТасСАТСТИатА садпАССатаТтСАССАТСАСТТОаССОЯТасСсСАатТСАсАатТАТТАС тластасттаасстаатТАТСАаСАСАААССАаасААдАасссстТА

АССТОСТОАТСТАТОАТасССтТоСАаТтттапААдАда тасасаТоСсСАТ

СсАсСстттсАдаСса,аасАаатапАтСааваАСАСААТТСАСТСТСАСС 188 АТтТСсАСаСсАастТтасСАасСссСстТаАТОАТТТТасСААСТТАТТАСТаССАА (нуклеотидна САСТАТАТТТСИаТАТТССАТИТТОАСсСООТТТааССАпасайСАССААА послідовність легкого атоаАпАТСААаСсатАсаатТаасСТасСАССАТСТОаТСТТСАТСТТО ланцюга) СсСасССАТСТОАТОдаСАСаСТТаАААТСТОСААСТОССТОТИатТата тасстТастОаААТААСТТСТАТСССАСАдаАааССАААаТАСА,Та вААдсСатаайАтТААСасСсссСстТоСААТССатААСТоССАаа,асАадата

ТСсАСАаСсСАДасАдапАСАаСААсаАСАаСАССтТАСАасстоАасАс

СсАсоСстТаАсасСстТаАасСААДаСАпАСТАСОАаАААСАСАДАИТСТ досасстасСсаААДаТтСсАСССАТСАСВСОССстТаАасСТСасссСатсСАСА

ААСАДСаСТТСААСАсСасадаАлатат

СсАасатасСсААдта7аатасаатстааавастА,ааТаААаААасССсТаС стостосватадАдаатстСсТасСсАл,ааостСавАаасСАСАТТСА вСАаСстТАСасСтТАТААДОСТОСЯВТтаСаАСАаасссСТасАСАдОаса 164 стссдатавАатТасаАХаааАТСАТОССТАТСТТТаСТАСАСаСААА

СстТАбасСАСАадАдаттсСсАаа,авасАдааатСАССАТТАСТаСАаАСА

ААТССАСОаАдаСАСАаССтТАСАТОасСАа,аСстТаАдаСАаСсСстТаАсАТСТ сдапАсАассасСатТтатАТТАСсТатасСсаАаАСаААТтТАСасатТТсСтТАТ саАСТАСТасСааСсСААдаапАССАССатаАССаТтстТосСтТСАастА вСсАССААХСаСсассСАтТоИваТтстооооСТааСАСССТОСТОСАдаА 189 асАсстотасасасАасАа,асасооставастасстааТСААласАс (нуклеотидна тТАСТТССССОАдАсСсОватаАдссататсатасвААСстсАсааТасассст послідовність важкого сАослдассасаТаСАСАССТТССОСастТатссСтТАСАаТОоСтТоСАа ланцюга) вАСТСТАСТОССТоАдаСсАа,асатастадссата,ассстоСАасСсАастТ таваСАСССАаАССТАСАТСТаСААСаТаААТСАСАДассСАас

ААСАССАДааТасАСААаААДАаТТаАаСССАААТСТТаТаАСАА

ААСТСАСАСАТаСССАССОЯ ТОСССАсаСАССтТаАддасСстасАцвасяЯя

САСсСатсАатсТ сс ССССССАДААСССААасАСАСССТСА тТаАТСТОССОСОАсоСсСстТаАлдааТтСАСсАТтасатастаставАСата

АаССАСаАдАдаАдооСстадааТСААаТТСААСстаатАсатаавАСасяь сатавбдасаТаСАТААТаССААаАСАААдасСсасСсасвссасласвАасСАс тТАСААДСАЛАССАССЯТтАССОСТОтТастоАа,аСсатостоАасса|атостасАс сАдавАСсТааСсТаААтТааСАдааАаТАСАДатаСААдааТсСТоСАА

СААДОСССтТОвасСсассссСАТССАСААААССАТСТСОСАДАаССА

Таблиця 13

Послідовності клонів анти-ОХ40 в форматі людського ІДС! РЗ2ОСІ АГА

АдсааСАаСсСССОпАпААССАСАаататТАСАСССТассссССАТОСС

СсаппАтТАдаСстТАССААпААССАасаатсАаасстаАасста|асстаат

СААДОССТТСТАТСССАаСОАСсАТСоСОСССсСОтавАааставаАсАасСА

АТаСОСсАаССОааАСААСААСТАСААДаАССАСасстссатаста вАСсСТоСсаАСсОасСТоОСтТ СТ осСТСстТАСАаСААдасСТСАССатацАс

ААдадасааатааСА,САассавААСаТатстСсТСАТаСстоСаИатаАТ вСсАТОАДСаСтТоТасАСААССАСТАСАСаСАпаААдаАдасстоТосс татстоСасатТААА

ІОМТО5РБ5ОТІ БАБМОаОВМТІТСВАБОБІБЗББУ/ЛІ АММООКРОаКАРКІ.

ПМОАББІ ЕБОУРОНЕБавБазатеЕНТІ ТІЗБІ ОРОЮБАТУУСООМІВУ5 190 (легкий ланцюг) | МСТРЯОСТКМЕІКАТУААРБМУРІЕРРБОБОЇ КО ТАБУМСІ І ММЕМР

ВЕАКМОМ/КМОМАГО5аИМЗОЕЗУТЕООБКОБЗТМБІ 55ТІ ТІ КАВУ

ЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАОЕС

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІЗБМУНОАРИаОИІ.

ЕМ МасСИТтРІГЄИТАММАОКЕОСАМТІТАОКОТОЗТАУМЕЇ 551 А5ЕОТА

МУУСАВЕМИаЗМО УМ ОСТ УТУМ55АЗБТКОаРОМЕРІ АРОЗКОТЗОСТ

АЛІ аСІ МКОМЕРЕРУТУБУУМООИАІ Т5аМНТЕРАМІ 05511 У5І 55М 191 (важкий ланцюг) МТУРББЗБІ аТОТМІСМУМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОСРАР

ЕААСОРБОМЕЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУУМОУМЗНЕОРЕМКЕМУ У

МОамЕУНМАКТКРАЕЄОУМОТУВУМБМІ ТМ НОВУ МОКЕМКОК

М5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І ТОЇ М

КОаЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5РОБЕРІ МК ТОК

ВУМОООСМУЕЗСВУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І Рак

САСАТССАСАТаАСССАаТСТОСТТССАСССТаТтСстТасСАТСТИатА садпАССатаТтСАССАТСАСТТОаССОЯТасСсСАатТСАсАатТАТТАС тластасттаасстаатТАТСАаСАСАААССАаасААдАасссстТА

АССТОСТОАТСТАТОАТасССтТоСАаТтттапААдАда тасасаТоСсСАТ

СсАсСстттсАдаСса,аасАаатапАтСааваАСАСААТТСАСТСТСАСС 192 АТтТСсАСаСсАастТтасСАасСссСстТаАТОАТТТТасСААСТТАТТАСТаССАА (нуклеотидна САатАТСАССЯСТІттоасСстТтАСсОаттааСсСАаааСАССААДИТО послідовність легкого вАпАТСАДОаСсатасаатаастТасСАССАТСТаТтСсСТТСАТСТТОоССа ланцюга) ССАТСТОАТтТаАДаСАСТТаАААТСтТаспААСстТассттаттатиатас

СТаСтТОААТААСТТСТАТСССАСАдСаАдаасССААДАаТАСАИТасаАА сатасАТААСасСсссСтТоСААТСОЯСааТТтТААСТоССАасСаАаАаТтатсА

САа,САаСсАдапАСАаСААапАСАаСАССТАСАаСсСстоАдасАасАс

ССстТОАСастаАаСААДАдаСАпАСТАСОАаАААСАСААДАСаТСТАСа

Стаса АДатТСсАСССАТтоА,асвасстаАаСсТассСатСАСАДАС

АССТТСААСАсСасадаАаТтат 2087 СсАасатасСсААдта7аатасаатстааавастА,ааТаААаААасССсТаС стостосватадАдаатстСсТасСсАл,ааостСавАаасСАСАТТСА вСАаСстТАСасСтТАТААДОСТОСЯВТтаСаАСАаасссСТасАСАдОаса стссдатавАатТасаАХаааАТСАТОССТАТСТТТаСТАСАСаСААА

СстТАбасСАСАадАдаттсСсАаа,авасАдааатСАССАТТАСТаСАаАСА

ААТССАСОаАдаСАСАаССтТАСАТОасСАа,аСстТаАдаСАаСсСстТаАсАТСТ 193 сМдапАсАдссасСататАТАСсТатасСсаАдаАаТтТААСТАСССИТА (нуклеотидна СсТсттАСТаСОаТаАСТТоаАСТАСТОСООССААапаАССАССаИ послідовність важкого тАССОаТсСТоСТоАаСстТАаСАССАдДа,асСасСссССАтИваТтстосссс ланцюга) таасСсАСССТоСТоСААдсАХасСАссттаТасасасАсАаСаассстТа састасстатСААСаАСТАСТТССССОААдсСсаваталса,аатТато стапААстоАавасасссСстАсСсАаСссаСаТтасСАСАССТТОССОоа

СсТа|атссСстТАСАИТОСТоАасаАСТСТАСТОССТоАа,аСсАасССсатаатаА ссатассстоСсАдаСсАасСстапасСАСССАСАССТАСАТСТОаСАДС стТаААТСАСААдаСССАаСААСАССАдасТасАСААСАААИтТТа

АаВСССАДАТСТТатаАСААААСТСАСАСАТасСссСАССатасссСА вСсАССТадАаастасАааасавАССаТСсАаТСТ ОСТ оСССССА

Таблиця 13

Послідовності клонів анти-ОХ40 в форматі людського ІДС! РЗ2ОСІ АГА

АААСССААдаСпСАСАСССТСАТаАтТотоССа,ааАСооСсТаАастТСАС

АтасатастастасАдСатадасССАСаААвАССсСстадааТСААаТт тТсСААСТОСТАСОТасАассасатапАдасТасСАТААТасСсСААСАСА

АдассасСса,асадавАаСАсТАСААСАаСАСатАССататаатсСА аатссСсТсАсСатоСсТасСАССАааАСсТааСсТААТааСАдаада

ТАСАДОТаСАДасСТСТоСААСАдАа,асостовасСсасссСССАТССА

СААДАССАТСТСОСААДАдаССАдАд,аааСсАаССССаАСпСААССАСАС статАСАСССТассСссССАТоССЯвасвАТадастаАССААИААССА сатодассСстАсСсТасстТтайТСАААдаасСТСстТАТСССАаСОСАСАТ сассатасХатасаАдпАаСААтТасасАаССаспАСпААСААСТАС

ААпаАссАас,асстссатаставАстоСаАсаастостстТосто тТАСАЯаСААДасСтТСАСсСсатасАСАда,аАласСса,асттассАаСАааасаА

АсатстТстТсАТаИСТОСОЯтТаАТтТаСАТОДаСаСТСТасСАСААССАСТ

АСАСаСАпААдаАдасстосостаТтстСасатТААА

ІОМТО5РБ5ОТІ БАБМОаОВМТІТСВАБОБІБЗББУ/ЛІ АММООКРОаКАРКІ.

ПМОА5ББІ ЕБОУРОНЕБавБазатеЕРНТІ ТІЗБІ ОРООБАТУУСООМОАЕ 194 (легкий ланцюг) | ФБІГТЕЕОСТКМЕІКАТМААРОМЕРІЕРРБОЕБОЇ К5ИатАБМУМСЇ І ММЕМР

ВЕАКМОМ/КМОМАГО5аИМЗОЕЗУТЕООБКОБЗТМБІ 55ТІ ТІ КАВУ

ЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАОЕС

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІЗБМУНОАРИаОИІ.

ЕМ МасСИТтРІГЄИТАММАОКЕОСАМТІТАОКОТОЗТАУМЕЇ 551 А5ЕОТА

МУУСАВУМУРУБУМСОГєОММУСОСТТУТУ5ББЗАЗТКОаРОМЕРІ АРБЗБ

К5ТЗаатТААГасі МКЩОМЕРЕРМТУБУМУМ5ИаАЇТ5ОаМНТЕРАМ О5502а 195 (важкий ланцюг) ЇМ5І 55ММТМРБББІ атТОТМІСМУМНКРУОМТКМОККМЕРКЗСОКТН

ТОРРСРАРЕАДАСОаРБ5БМРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОМЗНЕО Р

ЕУМКЕММУ УМО МЕМНМАКТКРАЕЕЄОУМОТМАММБМІ ТМ НОВУМІ М

СКЕМКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМУТІ РРОВОБЇ ТКМ

ОМ5І ТС УКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБООЗЕРІ МБ

КТУОКЗВУМОССММЕЗСОММНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І РОК сАдаАдтсатастАССсСАадасСССайСАСАСТОТОССТатстостТ сапаААдаваСсСАСССТТСсАТтТаСсАа,адасСсАааССАатосатсто тТАатАаасСтТАССтТааСАТОСТАТСАаСАСАдаССАааАСАДаСос сссассСстТоСстТаАТТАСсСОСЯвСасСстосСтотапаСААСТаатТАТОСС

СстТАСсАсСатпстсАа,асадаСавАдаСасААСАСАТТТТАССТТа 196 АСТАТ ТСТАСАСТОаСсСАаСсСАпСАаа,асАСстСасСсататАТТАСТатТт (нуклеотидна САдасХатТАссатАатТАасссСсСсТАССсттааСсСАпапйаАСААА послідовність легкого АСТСаАААТСААДОаСатАСсастаастасСАССАТСТатТтсСТтТСАТСТТ ланцюга) СсССОаССАТСТаАтТадасСАаТТаАААТСстТасААСстТа,асстотаттат стасстастаААТААСТТСТАТСССАаАдадайССАААсСТАСАСТ саддсаатапАтТААСассСсСстТоСААтТоаааТтААСтТоССАсаАаАатТ

СТСсАСсАадасСАапАСАаСАДапАСАаСАССТАСАасСссСстТСАасСА

СІ С- вСсАСССТаАСастаАдаСАААаСАпАСТАСаАаАААСАСАдАСТ 563 СстТАсасстТасСсаААатСАСССАТСАСсСОаСсСсТаластаСсССаТтсА

СААДОадастТтоААСАсасасаАсаАс тат сд,аатТасСсААтата,асвадасттасасаХаасттасаТАСАаССсТася сасатосСстадаАсттстатасАассСстоСаспАТТСАССТТТАС

СсАаТатАТтасСсАТаАХлаСТваатоСсассАа,вастоСАаЧчапАлаааас 197 тавдатасатсТАасСтТАТАСсТаатаа,атаатастАасСАСАТАС (нуклеотидна тТАСОСАВАСТоСатадАда,аааССас т САССАТСТОСАСАСАСАА послідовність важкого ТССААСАдАСсАСастатАТСТаСАСАТаААСсАХДасстадалассся ланцюга) АваАСсАСОСаССаТтАТАТТАСТОТОССЯСТІОАСССТОаТаИастттса

АСстТАСТаОСОССАдасАаСсоСстастоАсСсатстсаАдатастАас

АССААДСОИИаСССАТООСатСсТоСоССТааСАСССТОСТОСААдадаС

АдостТоОтассвсасСсАасАд,ассасоставастасстаайТСААСааАСТА

СстоСсССаААдсссаталссататсатасААСТоАааСассстаА

Таблиця 13

Послідовності клонів анти-ОХ40 в форматі людського ІДС! РЗ2ОСІ АГА ссАа,аСсвасаТасСАСАсСстсСсСсаастТатсСстТАСАаТоСтТодасАС

ТстТАСТоССсТодасСАссатасталсса,атассстСсАасСАастТаа

ССАСССАПАССТАСАТСТаСААСаИТаААТСАСАДаСССАсССААС

АССААДСИаТтаспйАСААпАААаТтТаДассСсАААТСТТатаАСАдДААС

ТСАСАСАТОСССАССОЯтТаССсСАаСАССТадАаСстТасСсаласаасАяс

СсатсАаТатст сс ССССССАААДАСССААДаспСАСАСССТСАТОА тстосСссаАсоосстаАдааТСАСсАтТаса,атаастаатасАСс,тадас

САСОААсАссСстадааТСААаТтТТсААСстаатаясатаасАаСсса7сат садасТтасСАТААТаССААДаАСААдасСсасСса,асаАасаадасСАатАс

ААСАаСсАСсатАСсСсСОаЯтатаатсАасатсстСАССаТоСТасСсАССА садстапсСстТаААтТааСААдапАаТАСААатасСсААааТтСстТоСААСА

АдасостаасасссСССАТСОСАПААААССАТСТОСАДАИаССАДА саваСсдасссСпАпААССАСАсаТаТАСАСССтТассссСсСАТОСССИ саАтТаАдаСТАССААаААССАаватсаасстаАасста|асстаатсА

ААвчастТстТАТСССАаСаАсСАТтоОосСССсСатасАаатаацАсАасСААТ савасдасСсапАсаААСААСТАСААпАССАсасстоссатастацА

СсТоСОАсаасСТоСТ СТ СоСтТотТАСАОСАдаТсСтТСАССатТасАСАА сласадсатааСАд,абА,ааапААСаТтсТСсТоАтТастоСатаАТас

АТаАХааСсТСТасСАСААССАСТАСАСОЯСАсАда,адасстоссстаТт

СстоСасатТААА

ЕІМГТО5РИТІ 5І 5РОЕВАТІ 5СВАБОБМ555МУІ АМУООКРООСАРВІ.

ПУСАБОААТОаІРОВНЕЗИаБИабБаИтовТІ ТІВ ЕРЕОЕАМУМСООМИав5 198 (легкий ланцюг) | РІТЕЕОСТКМЕІКАТМААРОМЕРІЕРРБОЕБОЇ К5ИатАБМУМСЇ І ММЕМР

ВЕАКМОМ/КМОМАГО5аИМЗОЕЗУТЕООБКОБЗТМБІ 55ТІ ТІ КАВУ

ЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАОЕС

ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИЕТЕ55УАМЗУУНОАРОКИЇ Е

М МУБАІВОБИаВТУМАрВУКОаВЕТІЗНОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТА

МУХСАГ ОМаАБО УМ СОВА МУТУ55АЗТКОаРБОМЕРІ АРЗКоТВОС,Т

АЛІ аСІ МКОМЕРЕРУТУБУУМООИАІ Т5аМНТЕРАМІ 05511 У5І 55М 199 (важкий ланцюг) МТУРББЗБІ аТОТМІСМУМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОСРАР

ЕААСОРБОМЕЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУУМОУМЗНЕОРЕМКЕМУ У

МОамЕУНМАКТКРАЕЄОУМОТУВУМБМІ ТМ НОВУ МОКЕМКОК

М5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І ТОЇ М

КОаЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5РОБЕРІ МК ТОК

ВУМОООСМУЕЗСВУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І Рак сАдаАдтсатастАССсСАадасСССайСАСАСТОТОССТатстостТ сапаААдаваСсСАСССТТСсАТтТаСсАа,адасСсАааССАатосатсто тТАатАаасСтТАССтТааСАТОСТАТСАаСАСАдаССАааАСАДаСос сссассСстТоСстТаАТТАСсСОСЯвСасСстосСтотапаСААСТаатТАТОСС

СстТАСсАсСатпстсАа,асадаСавАдаСасААСАСАТТТТАССТТа 200 АСТАТ ТСТАСАСТОаСсСАаСсСАпСАаа,асАСстСасСсататАТТАСТатТт (нуклеотидна САдасХатТАссатАатТАасссСсСсТАССсттааСсСАпапйаАСААА послідовність легкого АСТСаАААТСААДОаСатТАСс,астаасТаСАССАТСТатсСТтТСАТСТТ ланцюга) СсССОаССАТСТаАтТадасСАаТТаАААТСстТасААСстТа,асстотаттат

СІ С- стасстастаААТААСТТСТАТСССАаАдадайССАААсСТАСАСТ 564 саддсаатапАтТААСассСсСстТоСААтТоаааТтААСтТоССАсаАаАатТ

СТСсАСсАадасСАапАСАаСАДапАСАаСАССТАСАасСссСстТСАасСА вСсАСССТаАСастаАдаСАААаСАпАСТАСаАаАААСАСАдАСТ

СстТАсасстТасСсаААатСАСССАТСАСсСОаСсСсТаластаСсССаТтсА

СААДОадастТтоААСАсасасаАсаАс тат 201 сд,аатТасСсААтата,асвадасттасасаХаасттасаТАСАаССсТася (нуклеотидна сасатосСстадаАсттстатасАассСстоСаспАТТСАССТТТАС послідовність важкого СсАаТатАТтасСсАТаАХлаСТваатоСсассАа,вастоСАаЧчапАлаааас ланцюга) тавдатасатсТАасСтТАТАСсТаатаа,атаатастАасСАСАТАС

ТтТАСаСАСАСТоСатаААдаааССсаа САССАТСТСОСАСАСАСАА

Таблиця 13

Послідовності клонів анти-ОХ40 в форматі людського ІДС! РЗ2ОСІ АГА

ТССААСАдАСсАСастатАТСТаСАСАТаААСсАХДасстадалассся

АваАСсАССаССаТтАТАТТАСТОТОССЯТттсосСАСаЯттааТоСаттСа

АСТАСТОСОСсаССАДасСААдссСстТаатсассатстосаатастАас

АССААДСОИИаСССАТООСатСсТоСоССТааСАСССТОСТОСААдадаС

АдостТоОтассвсасСсАасАд,ассасоставастасстаайТСААСааАСТА

СстоСсССбаАддсссаталссататсатацвсААСтТоАаваСассстаА ссАа,аСсвасаТасСАСАсСстсСсСсаастТатсСстТАСАаТоСтТодасАС

ТстТАСТоССсТодасСАссатасталсса,атассстСсАасСАастТаа

ССАСССАПАССТАСАТСТаСААСаИТаААТСАСАДаСССАсССААС

АССААДСИаТтаспйАСААпАААаТтТаДассСсАААТСТТатаАСАдДААС

ТСАСАСАТОСССАССОЯтТаССсСАаСАССТадАаСстТасСсаласаасАяс

СсатсАаТатст сс ССССССАААДАСССААДаспСАСАСССТСАТОА тстосСссаАсоосстаАдааТСАСсАтТаса,атаастаатасАСс,тадас

САСОААсАссСстадааТСААаТтТТсААСстаатаясатаасАаСсса7сат садасТтасСАТААТаССААДаАСААдасСсасСса,асаАасаадасСАатАс

ААСАаСсАСсатАСсСсСОаЯтатаатсАасатсстСАССаТоСТасСсАССА садстапсСстТаААтТааСААдапАаТАСААатасСсААааТтСстТоСААСА

АдасостаасасссСССАТСОСАПААААССАТСТОСАДАИаССАДА саваСсдасссСпАпААССАСАсаТаТАСАСССтТассссСсСАТОСССИ саАтТаАдаСТАССААаААССАаватсаасстаАасста|асстаатсА

ААвчастТстТАТСССАаСаАсСАТтоОосСССсСатасАаатаацАсАасСААТ савасдасСсапАсаААСААСТАСААпАССАсасстоссатастацА

СсТоСОАсаасСТоСТ СТ СоСтТотТАСАОСАдаТсСтТСАССатТасАСАА сласадсатааСАд,абА,ааапААСаТтсТСсТоАтТастоСатаАТас

АТаАХаасСТСТасСАСААССАСТАСАСаСАпаАдАдадасстотосста тотоСасаТАдА

ЕІМГТО5РИТІ 5І 5РОЕВАТІ 5СВАБОБМ555МУІ АМУООКРООСАРВІ.

ПУСАБОААТОаІРОВНЕЗИаБИабБаИтовТІ ТІВ ЕРЕОЕАМУМСООМИав5 202 (легкий ланцюг) | РЕІТЕФОСТКМЕІКАТМААРБЗМРІЕРРБОЕОЇІ КЗИТАБММСІ І ММЕМР

ВЕАКМОМ/КМОМАГ ОБаМ5ОЕВМТЕООБКОБТУВІ 551Т1І ТІ КАВУ

ЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАОЕС

ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИЕТЕ55УАМЗУУНОАРОКИЇ Е

М МУБАІВОБИаВТУМАрВУКОаВЕТІЗНОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТА

МУУСАБРОМаРЕВУМСИОСТІ МТУ55АЗТКОаРОМЕРІ АРЗЗКОТЗОСТ

ААЇ аСІ МКОМЕРЕРУТУБМУМ5ЗИадІ Т5аТмНтТЕРАМІ 05501 51 55 203 (важкий ланцюг) МТУМРББЗБІ СТО ТМІСМУМНКРУОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСРАР

ЕААСОаРБМНЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМУТСМУМОУМЗНЕОРЕМКЕММ/ У

МОамЕУНМАКТКРАЕЄОУМОТУВУМБМІ ТМ НОВУ МОКЕМКОК

М5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І ТОЇ М

КаЕМРБОІАМЕЖМЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ ОБОСБЗЕРІ М5КІ ТОК

ВУжМООСММЕЗСЗУМНЕАІ НМЯНУТОКОБІ 5І ЗРаК тса,7атстадасСстТАстТоАсасАассстастататтатавасстаааА

САПАСАСТСАССАТСАСАТасССААдааАпАСАасСсСтТСАпААаТТА тПАТаСААсаСсСТаатТАССАаСАаАдасССАасаАСАасасссстатАс

ТТатсСАТСТАТаСТААДАААСААдСсСсвассстАаасАТоССАСАС

СОАТСТоТаастоСАасСсТСАпаСпАААСАСАаТсСТссСТТаАССАТС 204 дстаса,састода,ааСапААаАТаАдаасСтТаАСТАТТАСТОаТААСТО 1749 (нуклеотидна сса7атаТтТАТасСсСтТоАТААТСОЯСОЯТАТТССЯССОвадсасАССАДОаС послідовність легкого | ТЖАССИаТтСоСстТАпатСсААСССААл,састасссссАаасСатаАСосСста ланцюга) тесесосссСбАдасдаСсаАапААСТасСсАааССААСАдааССАСССТ саетотасСстаАТСАаСаАСТСсТАсССсАсасасса,атадссатась

СтТавААдваССаАСАдаСсА,ассССатадАд,аасссасатааАсАс

САССАСССССАаСАДаСАСАсаСААСААСААдатасассасСАас дастТАссталасСстадсссСсСаасСсАаатасАдадасСсСАСАаато сСтТАСАССТасСсСсАасатТалдссССАСвАсааСАаСАССатацАСААА

Таблиця 13

Послідовності клонів анти-ОХ40 в форматі людського ІДС! РЗ2ОСІ АГА 7711111..р.рюрюрюЮю ФАССоТООСССССАССбАСТОСАЮС 77777777 саастасАаататтасааттасаассасАааасттаатТАСАасстас саатосСсталаАастотостатасдасстоСааАТТСАССТТТАС

САатТтАТтассАТтоАдаставатсасСсАаа,аастосАаасаддацвиоао таслатасатстСАаастТАттАатаатаатааТааТАаСАСАТАС тТАСЯСАСАСТОСИЯтТаглсавассааТтСсАССАТСТОСАСАСАСАА

ТТСоСААСААСАСОЯСтТатАТСотТасСсАпАТаААСсАХасСсталадассс дапАСсАСссассСатАТАТТАСТОТОСССОЯТОТтттотТАсСспВТааТтОа стат сСтТАТааАСТАСТаСОвасСААдасААссстаТастоАссатст ссдатастаасСАСсСАдасасссСАатовсатстосоостаасСАСССТ

СсСстТоСААСАЛаСАССТОТаССССаСАСсАаСсвасоставИастасста всТСсААаСАСТАСТТССССадАССЯСсТаАСсватататааААСТСО дассассстаАсСсАдаСсаассатасСсАСсАссттосса,встатосСтТАС датоСстТосАапАСТоТАСТоССТСАаСсА0аСсатастаАссатасСост 205 сбАаасаасттапваСАСССАаАССТАСАТСТаСААСИатТаААТСАС (нуклеотидна ААДаСССАСаССААСАССААДСатТацпАСААпАААдатТаАаСССАДдАТ послідовність важкого СсТТатаАСААААСТСАСАСАТасссСАсСсатассСАасСАССТадА ланцюга) сстасдасаааАССатсСАаТтст ССС ССССССААААСССАА саАСАСССТСАТаАТСТОСССОЯСАСсСсСсСТаАсСаТатсАСсАтТасатас таатасаС,тадасСсСсАСаддадссстадаатСААаТТСААСТтас тАССсТООСАСсавоссатасАаастасСсАТААТасССААаАСААдАДаССИасСс садоссдасСАаТАСААСАаасСсАСсатАассататастСАасСатссСтсСА ссатостасСсАССАСаОсСАСТОИСтТалдАтТааСАдасАаТАСААатас

ААДПСТСТОСААСАААаСсоСстосасСассСССАТСССАСААААССАТ

СТоСАААДИССАдАасСаасАаасссСаАаААССАСАССИататАСАСос тассссСсАТОоССОСааАтТадасСстадСсСААаААССАаИа ТСАасСста

АдостасстааТСсААддаастТстТАТОССАаСаАСАТССЯСТССЯТаасА стааададасСсААатТаЧчасАаасСацАаААСААСТАСААаАССАСаИ сстоссатаставАСстТоСсОАсаасТосСТСсТосСТСТАСАасСААс

СстТсАсСсатаайАСААЧАа,аСсАаватасодасааасаААСа7Ттстсто

АтастобатТаАтТаСАТадаастоТасСсАСААССАСТАСАСасАаА дала,асстотосстатстоСаастАДА

ЗЗЕГТООРАМБМАЇ ОТУВІТСОСОБІ ВБУМАБУМУМООКРИОИОАРМІ М

ІМакмМмМмАРЗСаРОВЕЗазОЗБамтТАБІ ТІТАОАЕОЕАОМУСМЗАУМР 206 (легкий ланцюг) | НМАМЕСаСОИаткІ ТМ ФЧОРКААРЗМТІ ЕРРЗЗЕБЇ ОАМКАТІ МСГ ІЗОБ

УРОАМТУМАМКАВЗБРУКАСМЕТТТРУКОЗММКУААБЗЗУІ ЗІ ТРЕО

МКЗНАЗУЗСОМТНЕСЗТУМЕКТМАРТЕСО

ЕМО ГЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗИаЕТЕ55МАМОУУВОАРИКаї Е

МмУАІЗазаЗТУУАрБУКОаВЕТІЗАОМЗКМТІ М ОММ5І ВАЕОТА

МУУСАВУЕУВССУЗМОУМСОСТІ МТГУ55ЗАЗТКОаРОЗМУЕРІ АРЗОЗКО твасастААасі УКЩОМЕРЕРУТУБММЗСИАІ ТЗаУНТЕРАМІ О55О01 5 207 (важкий ланцюг) І 554/ УТ УРБЗБЗІ С ТОТМІСМУМНКРУОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСР

РСРАРЕААСОРБЗУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУМЗНЕОРЕМК

ЕМУУУрамЕМНМАКТКРАЕЄєОУМЗТУАУММІ ТМ НОБУУІ МОаКЕ

УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОММТІ РРІОВОЄТКМОМ БІ.

ТС УКагМРЗБІАМЕМЕЗМИООРЕММУКТТРРМІ О5ОСБЗЕРІ КІТ

МОоКЗАМОСамММЕЗСЗУМНЕАЇІНМНУТОКБІ 5І Рак

Антитіла до ОХ40 одержували шляхом котрансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійної векторами для клітин ссавців, використовуючи поліетиленімін. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами в співвідношенні 1:1 ("вектор важкого ланцюга": "вектор легкого ланцюга").

Для одержання в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 400 млн. клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х ді супернатант замінювали попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори (200 мкг загальної ДНК) змішували з 20 мл середовища СО СНО. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!, переносили в 500-мілілітрову збовтану колбу та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 95 СО».

Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали їмММ вальпроєву кислоту і 7 96 Реейд. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 15 хв при 210 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22-мікрометровий фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./об.) і витримували при 4 "С.

Очистку молекул антитіл з супернатантів клітинної культури здійснювали за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А згідно з методом, описаним вище для очистки злиттів антиген-Ес.

Білок концентрували та фільтрували перед завантаженням на колонку НіїЇ оаа Супердекс 200 (фірма СЕ Неайсаге), врівноважену розчином, що містить 20мМ гістидин, 140мМм масі, рн 6,0.

Концентрацію білка визначали на основі вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм з використанням коефіцієнта молярної екстинкції, розрахованого на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу антитіл аналізували за допомогою капілярного електрофорезу в присутності додецилсульфату натрію (КЕ-ДСН) в присутності відновника (фірма Іпмийгодеп, США) або без нього за допомогою пристрою Іарьспірохі! (фірма Саїірег).

Вміст агрегатів в зразках аналізували, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації

ТеКаеї! 53000 5ММ ХІ. (фірма Тоз5ой), врівноважену рухомим буфером, що містить 25мМ К»НРО», 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І! -аргініну, 0,02 95 (мас./об.) МаМз, рН 6,7, при 25 76.

В таблиці 14 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст антитіл до ОХ40 в форматі РЗ29С

І АГА ІдДа1.

Таблиця 14

Дані біохімічного аналізу клонів антитіл до ОХ40 в форматі РЗ29С І АГ А ІдСІ1 мг/л Зо відновника відновником 1,2 96 (176 кДа) о

ВНУ ОРЗ29СІ АГА ІДС 7 100 96,1 95 (158 кДа) щх й (в кда, 1,3 95 (142 кДа о 99 Фо (163 кДа) 81 95 (61,7 кДа) 4984 РЗ29ИЇ АГА да 7,5 100 1 95(149 кДа 18 95 (28,9 кКДа 38,9 т ВО 95 (63,4 кДа) 124 РЗ2О9СІ АГА Іде 1 100 (167,4 кДа) 19 5, (28,9 кДа) 1,1 95 (151 кДа пт о 79,8 95 (65,4 кДа) 2087 РЗ29Иї АГА да 17 93 97,9 Фо (174 кДа) 19,9 95 (29,5 кДа

СІ С-563 РЗ29ИЇ АГ А о 77,7 Чо (60 кДа)

ІдСІ б2 100 97,7 Чо (160 кДа) 19,8 95 (26,4 кДа

СІ 0-564 РЗ29ИІ АЇ А) о 79,3 95 (60,1 кДа)

ІдСІ 15,5 100 98,4 95 (155 кДа) 19,8 95 (26,5 кДа 17А9 РЗ29Иї АГА Іда1 7,5 100 1,4 95 (153 кДа 25,5 95 (38 кДа

Приклад 2

Характеризація антитіл до ОХ40 2.1 Зв'язування з людським ОХ40 2.1.1 Поверхневий плазмонний резонанс (авідність ж афінність)

Зв'язування одержаних за допомогою фагів ОХ40-специфічних антитіл з конструкцією рекомбінантний ОХ40-Ес(Кій) оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (5РК). Всі експерименти на основі 5РЕ здійснювали за допомогою пристрою Віасоге 1200 при 25"С з використанням НВЗ-ЕР як рухомий буфер (0,01М НЕРЕ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗммМ

ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта Р20, фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина).

В цьому ж експерименті визначали видову вибірковість і авідність взаємодії між одержаними за допомогою фагового дисплея клонами антитіл до ОХ40 8НО, 4984, 124, 2087, СІ С-563, СІ С-

564 і 17А9 (всі в форматі людського ДС! РЗ29Иї АГА) і рекомбінантним ОХ40 (людини, мавп ціномолгус (супо) і мишей). Конструкції, що містять біотинілювання ОХ40 людини, мавп ціномолгус і мишей в злитті з Ес(Кіп), безпосередньо зшивали з різними проточними комірками стрептавідінового (ЗА) сенсорного чіпа. Використовували рівень іммобілізації, що відповідає аж 600 резонансним одиницям (КО).

Одержані за допомогою фагового дисплея антитіла до ОХ40 в форматі людського Ідс1

РЗ29О1 АГА пропускали через проточні комірки, використовуючи діапазон концентрацій від 2 до

Б500нМ (З-кратне розбавлення), зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с. Моніторинг дисоціації комплексу здійснювали протягом 210 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці, в якій був відсутній іммобілізований білок.

Кінетичні константи визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге Т200

Емаїнайоп (мМАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:11 Ленгмюра, і застосовували для якісної оцінки авідності (Таблиця 16). В цьому ж експерименті визначали афінність взаємодії одержаних за допомогою фагового дисплея антитіл 8НО, 4984, 1234, 2087, СІ С-563 і СІ б-564 (формат людського ді РЗ2гОСІАГА) з рекомбінантним ОХ40. Для цієї мети ектодомен людського або мишачого ОХ40 також субклонували в рамці зчитування з амі-міткою (СІ МОІРЕАОКІЕМУНЕ) і гексагістидиновою міткою (послідовності див. в таблиці 15) або одержували шляхом розщеплення протеазою АсСТЕМ і видалення Ес хроматографічним методом.

Таблиця 15

Нуклеотидні та амінокислотні послідовності мономерних людського і мишачого ОХ40 з Нів- міткою

ГНСУаЮТтуУРЗМОВССНЕСА РОМОаМУЗАСЗАЗОМТУСАРСС

РаЕєЕММОУМ5ЗКРОКРСОТМСМІ А5аЗЕВКОЇ СТАТОЮТУСА 209 людський ОХА0-НІв СВАС,ТОРІ О5УКРаАМОСАРСРРАНЕЗРИЮОМОАСКРУТМСТ

ГАСКНТ ОРАБМЗЗОАІСЕОВОРРАТОРОЕТОСТРРАВРІТМ

ОРТЕАМРАТЗОСРОЗТАРУЕМРОаСВАМОЕОЇ МгОСавБаї Мо

ІГЕАОКІЕУУНЕАВАНННННН

ТАВВІ МСУКНТУРЗСІНКОССВЕСОРОНОаМУЗАСОНТАОТІ.

СНРСЕТаРУМЕАУМММОТСКОСТОСМНАБОЗЕЇ КОМСТРТО 214 мишачий ОХ40-Нів ОТУСАСАРИатТОРАВОЮЗИаУкКІ ОСМОСУРСРРОНЕЗРОММОАС

КРИУТМСТІ БЗаКОТАНРАБОБІ ОАМСЕОВЗИЇ АТ МЕТОВ

РТЕАВРТТМОЗТТУМРАТЗЕЇ РЗРРТІ МГТГРЕСРУОСЕОЇ МЕОСО

ЗзаІМОІгЕАОКІЄМНЕАВАНННННН

Очистку білків здійснювали згідно з методом, описаним вище для злитого з Ес білка.

Секретовані білки очищали із супернатантів клітинних культур за допомогою хелатованої хроматографії з наступною гель-фільтрацією.

Першу хроматографічну стадію здійснювали з використанням картриджа МіІМТА Зирепом (5 мл, фірма Оіадеп) врівноваженого в буфері, що містить 20мММ фосфат натрію, 500нМ хлорид натрію, рН 7,4. Елюцію здійснювали з використанням градієнта від 5 95 до 45 95 буфера для

Зо елюції (20мм фосфат натрію, 500нМ хлорид натрію, 500мММ імідазол, рН 7,4), застосовуючи об'єм, кратний 12 об'ємам колонки.

Білок концентрували і фільтрували перед завантаженням на колонку Ні оаа Супердекс 75 (фірма СЕ Неайсаге), врівноважену розчином, що містить 2иМ МОР5, 150мМ хлорид натрію, 0,02 95 (мас.об.) азида натрію, рН 7,4.

Визначення афінності здійснювали з використанням двох стадій.

Стадія 1) Антитіло до людського Раб (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина) безпосередньо зшивали з СМ5-чипом при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного поєднання (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Рівень іммобілізації відповідав приблизно 9000 КИ.

Одержані за допомогою фагового дисплея антитіла до ОХ40 захоплювали протягом 60 с в концентраціях від 25 до 5ОНМ. Конструкцію рекомбінантний людський ОХ40-Ес (Кі) пропускали через проточні комірки в діапазоні концентрацій від 4 до 1000ОнНМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс- комірці. В ній антигени пропускали по поверхні з іммобілізованим антитілом до людського Раб, але ін'єктували НВЗ-ЕР, а не антитіла.

Стадія 2) Антитіло до людського Раб (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина) безпосередньо зшивали з СМ5-чипом при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного поєднання (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Рівень іммобілізації відповідав приблизно 8000 КИ.

Одержанії за допомогою фагового дисплея антитіла до ОХ40 захоплювали протягом 60 с в концентрації 20нМ. Конструкцію рекомбінантний людський ОХ40-амі-Ніє пропускали через проточні комірки в діапазоні концентрацій від 2,3 до бООнНМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс- комірці. В ній антигени пропускали по поверхні з іммобілізованим антитілом до людського Раб, але ін'єктували НВЗ-ЕР, а не антитіла.

Кінетичні константи визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге Т200

Емаїнайоп (мМАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра.

Клони 4984, 104 і СІ С-564 зв'язувались з конструкцією людського ОХ40-Ес (Кій) з більш низькою афінністю, ніж клони 8НеО, 2087 і СІ С-563.

Константи афінності, що характеризують взаємодію між анти-0Х40 РЗ29ОГАГА !ІдС1 і конструкцією людського ОХ40-Ес (Кій), визначали, здійснюючи підгонку до моделі зв'язування 1: 1 Ленгмюра.

Таблиця 16

Зв'язування антитіл до ОХ40 з рекомбінантним людським ОХ40 . - | Конструкція рекомбінантний Конструкція рекомбінантний

Рекомбінантний людський! Людський ОХА0-Ес(кій) (формат

Клон|ОХх40 (формат для оцінки й я й й . ' авідності) для оцінки афінності) для оцінки афінності) 2.1.2 Зв'язування з клітинами, що експресують людський ОХ40: наївні і активовані мононуклеарні лейкоцити периферичної крові людини (РВМС).

Лейкоцитарні плівки одержували з центру донорської крові Цюріха. Для виділення свіжих мононуклеарних клітин периферичної крові (РВМС) лейкоцитарну плівку розводили таким же

Зо об'ємом О-ЗФР (фірма Сібсо на фірмі І Ше Тесппоіодієх, каталожний Мо 14190 326). У 50- мілілітрові поліпропіленові центрифужні пробірки (фірма ТРР, каталожний Мо 91050) вносили 15 мл Нізіорадиеє 1 077 (фірма 5ІСМА І їе Зсієпсе, каталожний Мо 10771, полісахароза і діатризоат натрію, густина доведена до 1,077 г/мл) і нашаровували розчин розведеної лейкоцитарної плівки на Нізіорадне 1077. Пробірки центрифугували при кімнатній температурі протягом 30 хв при 400 х д, при невеликому прискоренні і без перерви. Потім РВМС збирали з інтерфази, промивали тричі Ю-ЗФР і ресуспендували в середовищі для Т-клітин, що складається з середовища КРМІ 1640 (фірма Сібсо на фірмі І їе Тесппоїоду, каталожний Ме 42401-042), доповненої 10 95 фетальної бичачої сироватки (ЕВ5, фірма Сібсо на фірмі І їе Тесппоіоду, каталожний Мо 16000-044, партія 941273, оброблена гамма-променями, вільна від мікоплазм та інактивована тепловою обробкою при 56 "С протягом 35 хв), 1 об. 95 СішамАХ-Ї (фірма СІВСО на фірмі І їе ТесппоЇодіех, каталожний Мо 35050 038), 1мММ піруватом натрію (фірма 5ІСМА, каталожний Мо 58636), 1 об. 95 містить замінні амінокислоти середовища МЕМ (фірм 5ІСМА, каталожний Мо М7145) і 5Х0мкМ р-меркаптоетанолом (фірма 5ІСМА, М3148).

РВМС використовували безпосередньо після виділення (зв'язування з наївними людськими

РВМС) або стимулювали для індукції сильної експресії людського ОХ-40 на клітинній поверхні

Т-клітин (зв'язування з активованими людськими РВМС). Для цього наївні РВМС культивували протягом 5 днів в середовищі для Т-клітин, доповненого 200 од./мл пролейкіна і 2 мкг/мл ФГА Її, в б-лунковому планшеті для культури тканини і потім протягом 1 дня в попередньо сенсибілізованих 6 ямкових планшетах (2 мкг/мл антитіла до людського СЮОЗ (клон ОКТЗ) і 2 мкг/мл антитіла до людського СО28 (клон СО28.2)) в середовищі для Т-клітин, що містить 200 од./мл пролейкіна, при 37 "С і 5 95 СО».

Для детекції ОХ40 змішували наївні людські РВМС і активовані людські РВМСО. Для того, щоб відрізняти наївні клітини від активованих людських РВМС, клітини в стані спокою мітили перед аналізом зв'язування за допомогою барвника для оцінки проліферації клітин еРійогб70 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 65-0840-85).

Для здійснення мічення клітини збирали, промивали попередньо нагрітим (37 "С) О-ЗФР і густину клітин доводили до 1 х 107 клітин/мл в ЮО-ЗФР. Барвник для оцінки проліферації клітин еБійогб70 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 65-0840-85) додавали до суспензії наївних людських РВМС в кінцевій концентрації 2,5мМ і при кінцевій густині клітин 0,5 х 107 клітин/мл в

О-ЗФР. Потім клітини інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі в темряві. Для припинення реакції мічення додавали 2 мл ЕВ5 і клітини промивали тричі середовищем для Т- клітин. Потім суміш 1:1 1 х 105 наївних клітин, мічених еРішогб70О людських РВМС і немічених активованих людських РВМС додавали в кожну лунку круглодонних 96-ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Сгеїіпег ріо-опе, Сеїїєтаг, каталожний Мо 650185).

Планшети центрифугували протягом 4 хв при 400 х д і 4 "С і супернатант відкидали. Клітини промивали одноразово, використовуючи 200 мкл холодного (4) РАС5-буфера (0-ЗФР, доповнений 2 956 ЕВ5, 5мм ЕДТА, рН 8 (фірма Атгезсо, каталожний Мо Е177) ії 7,5 мм азидом натрію (фірма бідта-Аїагісп, 52002)). Клітини інкубували в 50 мкл/лунку холодного (4 "С) ЕАС5- буфера, що містить титровані конструкції антитіла до ОХ40, протягом 120 хв при 46с.

Планшети промивали чотири рази, використовуючи 200 мкл/лунку холодного (4 7С) ЕАС5- буфера для видалення незв'язаної конструкції.

Клітини фарбували протягом 30 хв при 4 "С в темряві, використовуючи 25 мкл/лунку холодного (4 "С) РАС5-буфера, що містить флуоресцентно мічене антитіло до людського СО4 (клон КРА-Т4, мишачий Ідс1 К, фірма Віої едепа, каталожний Мо 300532), антитіло до людського

СО8 (клон КРа-Т8, мишачий дк, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 3010441), антитіло до людського СО45 (клон НІЗО, мишачий ДСК, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 304028) і кон'югований з флуоресцеїнізотіоціанатом (ФІТЦ)У Е (аб) 2-фрагмент козячого Ідс проти людського ІдСь Есу-фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма аскКбоп ІттипокКезеагсій, каталожний Мо 109 096 098).

Планшети промивали двічі, використовуючи 200 мкл/лунку ГЕАС5-буфера (4 "С), остаточно ресуспендували в 80 мкл/лунку ГЕАСЗ-буфера, що містить 0,2 мкг/мл ОАРІ (фірма Запіа Сти7

Віоїес, каталожний Мо 5со-3598) і одержували дані в цей же день з використанням пристрою з 5 лазерами І 5К-Рогіезза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОБІМА.

Як продемонстровано на фіг. 2А-2М, жодна з конструкцій антитіл, специфічних по відношенню до ОХ40, не зв'язувалась з людськими СО4--Т-клітинами в стані спокою або СО8:-

Т-клітинами, що не експресували ОХ40. На противагу цьому, всі конструкції зв'язувались з активованими СО8: - або СО4--Т-клітинами, які могли експресувати ОХ40. Зв'язування з СО4--

Т-клітинами виявилося істотно більш сильним, ніж з СО8---Т-клітинами. Активовані людські

СО8:-Т-клітини могли експресувати тільки частину від рівнів ОХ40, виявлених на активованих

Сра--Т-клітинах. Різниця залежала від донора, а також від часу. Проаналізовані клони антитіл до ОХ40 варіювалися за силою зв'язування. Величини ЕСхо представлені в таблиці 17. Для додаткового вивчення двовалентних і одновалентних націлених на ЕАР конструкцій були обрані клони з високою (8НО) і низькою (4984/1054) здатністю до зв'язування.

Таблиця 17

Величини ЕсСозо, які характеризують зв'язування з активованими людськими СО4-

Т-клітинами

2.2 Зв'язування з мишачим ОХ40 2.2.1 Поверхневий плазмонний резонанс (авідністькафінність)

Зв'язування одержаного за допомогою фагів ОХ40-специфічного антитіла 2087 з конструкцією рекомбінантний ОХ40-Ес (Кіп) оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (5РЕ), описаного вище для зв'язування з людським ОХ40 (див. Приклад 2.1.1).

Кінетичні константи визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге Т200

Емаїнайоп (мМАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра, і застосовували для якісної оцінки авідності (таблиця 18).

Для визначення афінності через неспецифічну взаємодію злитого з Ес білка з проточною референс-коміркою застосовували конструкцію мишачий ОХ40 Ніх (див. Приклад 2.1.2) або

ОоХх40-Ес (Кі), розщеплену протеазою АСТЕМ. Антитіло до людського Ес-домену (фірма Віасоге,

Фрейбург/Німеччина) безпосередньо зшивали з СМ5-чипом при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного поєднання (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Рівень іммобілізації відповідав приблизно 8000 КО. Одержані за допомогою фагового дисплея антитіла до ОХ40 захоплювали протягом 60 с в концентрації 25нМ. Рекомбінантний мишачий ОХ40 (розщеплений

АСТЕМ згідно з інструкцією постачальника) пропускали через проточні комірки в діапазоні концентрацій від 4,1 до 100О0нМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці. В ній антигени пропускали по поверхні з іммобілізованим антитілом до людського Раб, але ін'єктували НВ5З-ЕР, а не антитіла.

Кінетичні константи визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге Т200

Емаїнаїйоп (УАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала / Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра. Встановлено, що клон 2087 зв'язувався з мишачим ОХ40 (таблиця 18).

Константи афінності взаємодії між молекулами анти-0Х40 РЗ29СІ АГА ІдСІТ і мишачим

Зо ОХ40 визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге Т200 ЕмаїЇнайоп (хАА, фірма

Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра.

Таблиця 18

Зв'язування антитіла до ОХ40 2087 з мишачим ОХ40

Рекомбінантний мишачий ОХ40

Клон |ІПоходження (формат для оцінки авідності) (формат для оцінки афінності) дисплей 2.2.2 Зв'язування з клітинами, що експресують мишачий ОХ40: наївні і активовані мишачі спленоцити (відібрані клони)

Селезінки мишей збирали в З мл ЗФР і одержували суспензію поодиноких клітин з використанням м'яких пробірок МАС (фірма Мійепуї Віоїес, каталожний Мо 130-096-334) і м'якого руйнівника МАС5 Осію (фірма Мінепуї Віоїес). Потім спленоцити фільтрували через З30- мікрометрові фільтри для попереднього розділення (фірма Мігнепуї Віоїес, каталожний Ме 130- 041-407) і центрифугували протягом 7 хв при 350 х 9 і 4 "С. Супернатант видаляли аспірацією і клітини ресуспендували в середовищі ВРМІ 1640, доповненому 10 об. 95 ЕВ5, 1 об. 95 СішщамАХ

Ї, їмМ піруватом натрію, 1 об. 95 МЕМ, що містить замінні амінокислоти середовища, 50мкМ р- меркаптоетанолом і 10 95 пеніциліну-стрептоміцину (фірма 5ІСМА, каталожний Мо Р4і333).

Культивували 109 клітин/"мл протягом З днів в б-лунковому планшеті для культури тканини, сенсибілізованому 10 мкг/мл ІдСї вірменського хом'яка до мишачого СОЗє (клон 145-2С11,

ВіоЇ едепа, каталожний Ме 100331) і 2 мкг/мл ІдС сирійського хом'яка до мишачого СО28 (клон

37.51, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 102102). Активовані або свіжі спленоцити мишей збирали, промивали в О-ЗФР, підраховували кількість клітин і 0,1 х 105 клітин переносили в кожну лунку 9б-ямкового планшета з О-подібним дном, не оброблені тканинної культурою.

Клітини промивали ЗФР і фарбували в 50 мкл ЕАС5-буфера, що містить в різних концентраціях антитіла до ОХ40 в форматі людського їдс1 РЗ29а1 АГА (тільки відібрані зв'язуюючі агенти).

Клітини інкубували протягом 120 хв при 4 "С. Потім клітини промивали двічі РАС5-буфером і фарбували, використовуючи 25 мкл/лунку ЕАСО-буфера, що містить антитіло до мишачого

СОВЬ у вигляді щурячого ІдДс2грк-АРОС-Су7 (фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 100714, клон 53- 6.7), антитіло до мишачого СО4 у вигляді щурячого ІдСерк-РЕ-Су/7 (фірма Віої! едепоа, каталожний Ме 100422, клон СКІ1.5) і кон'югований з ФІТЦ К(аб' )2-фрагмент козячого ІЇдСї проти людського ІдСь Есу-фрагмент-специфічного АНіпіРите (фірма даскбвоп ІттипоВезвеагси, каталожний Мо 109 096 098), протягом З0 хв при 4"С. Планшети промивали двічі, використовуючи 200 мкл/лунку ГЕАС5-буфера (4 С), клітини остаточно ресуспендували в 80 мкл/лунку ЕАС5-буфера, що містить 0,2 мкг/мл САРІ (фірма Запіа Сти? Віоїес, каталожний Мо

Зо-3598), і одержували дані в цей же день за допомогою пристрою з 5 лазерами І 5АВ-Ропезза (фірма ВО Віозсієпсе, програмне забезпечення ОІМА).

Як продемонстровано на фіг. ЗА-З3Г, тільки клон 2087 і добре охарактеризоване мишаче специфічне еталонне антитіло ОХ86 зв'язувались з активованими мишачими СО4-- і СО8:-Т- клітинами. Не виявлено жодного зв'язування з мишачими спленоцитами в стані спокою. 2.3 Зв'язування з ОХ40 мавп ціномолгус

Для оцінки реактивності відібраних анти-ОХ40-зв'язуючих агентів з клітинами мавп ціномолгус виділяли РВМО здорових Масаса газсісціагі5 з гепаринізованої крові за допомогою центрифугування в градієнті густині згідно з методом, описаним для людських клітин, з незначними модифікаціями. РВМС мавп ціномолгус виділяли шляхом центрифугування в градієнті густини з гепаринізованої свіжої крові, використовуючи середовище Іутрпоргер (90 об.95, Фірма Ахоп ар, каталожний Мо 1114545), розведене в О-ЗФР. Центрифугування здійснювали при 520 х д без перерви при кімнатній температурі протягом 30 хв. Суміжне центрифугування при 150 х д при кімнатній температурі протягом 15 хв здійснювали для зменшення кількості тромбоцитів з подальшими декількома стадіями центрифугування при 400

Зо х д при кімнатній температурі протягом 10 хв для промивання РВМС стерильним О-ЗФР. РВМС стимулювали для досягнення сильної експресії ОХ40 на клітинній поверхні Т-клітин (зв'язування з активованими РВМС мавп ціномолгус). Для цього наївні РВМС культивували протягом 72 год. на попередньо сенсибілізованих 12-ямкових планшетах для культури тканини (10 мкг/мл антитіла до людського СОЗ, що має перехресну реактивність по відношенню до мавп ціномолгус, (клон 5РЗ4)| і 2 мкг/мл антитіла до людського СО28, що має перехресну реактивність по відношенню до мавп ціномолгус (клон СО28.2)| в середовищі для Т-клітин, доповненому 200 од./мл пролейкіна, при 37 "С і 5 95 СО».

Потім додавали 0,5 х 105 активованих РВМС мавп ціномолгус в кожну лунку круглодонних 9б-ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Огеїпег Біо-опе, сеПеФаг, каталожний Мо 650185). Клітини промивали одноразово, використовуючи 200 мкл холодного (47) РАС5- буфера і інкубували в 50 мкл/лунку холодного (4 7С) БАС5-буфера, що містить титровані конструкції антитіл до ОХ40, протягом 120 хв при 4 "С. Потім планшети промивали чотири рази, використовуючи 200 мкл/лунку холодного (4 "С) ЕАС5З-буфера. Клітини ресуспендували в 25 мкл/лунку холодного (47) РБАСб5-буфера, що містить флуоресцентно мічене антитіло до людського СО4, що має перехресну реактивність по відношенню до мавп ціномолгус (клон ОКТ- 4, мишачий ДСК, фірма ВО, каталожний Мо. 317428), антитіло до людського СОВ8 (клон НіІТва, мишачий ДСК, фірма ВО, каталожний Мо 555369) і кон'югований з ФІТЦ Е(аб' )»-фрагмент козячого ІдбС проти людського ІдсС, Есу-фрагмент-специфічного АйЙіпіРиге (фірма Часкзоп

ІтітипоКезеагсії, каталожний Мо 109 096 098), та інкубували протягом 30 хв при 4 "С в темряві.

Планшети промивали двічі, використовуючи 200 мкл/лунку БАСЗ-буфера (4 С), клітини остаточно ресуспендували в 80 мкл/лунку ГАС5-буфера, що містить 0,2 мкг/мл САРІ (фірма запіа Стги? Віоїес, каталожний Мо 5со-3598), і одержували дані в цей же день за допомогою пристрою з 5 лазерами І 5К-Рогіезза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОІМА).

Як продемонстровано на фіг. 4А і 4Б, більшість конструкцій зв'язувались з активованими бра-Т-клітинами мавп ціномолгус. Зв'язування з СО4--Т-клітинами було істотно більш сильним, ніж з СЮО8--Т-клітинами. Кінетичні характеристики і сила стимуляції залежали від рівнів експресії

ОХ40, і вони були оптимізовані для СО4--Т-клітин мавп ціномолгус, але не для СО8:-Т-клітин мавп ціномолгус, так, що лише незначна експресія ОХ40 індукувалась на СО8:-Т-клітинах.

Проаналізовані клони антитіл до ОХ40 варіювалися за силою зв'язування. Величини ЕСво бо представлені в таблиці 19. Через нетипову підгонку кривої не вдалося розрахувати величини

ЕСвхо для клонів 8НО, 4984, 21Н4.

Таблиця 19

Величини ЕсСозо, які характеризують зв'язування з активованими СО4-Т-клітинами мавп ціномолгус 2.3.1 Поверхневий плазмонний резонанс (авідність кафінність)

Зв'язування одержаних за допомогою фагів ОХ40-специфічних антитіл (всі в форматі людського Ідс1 РЗ290Г АГА) з конструкцією рекомбінантний ОХ40 мавп ціномолгус-Ес (Кін) оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Всі експерименти на основі РК здійснювали за допомогою пристрою Віасоге 1200 при 25 "С з використанням НВ5Б-

ЕР як рухомого буфера (0,01М НЕРЕЗБ, рН 7,4, 0,15М масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта

РО, фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина).

Конструкції, що містять біотинільований ОХ40 мавп ціномолгус в злитті з Ес (КІйЙ), безпосередньо зшивали з різними проточними комірками стрептавідінового (ЗА) сенсорного чипа. Використовували рівень іммобілізації, що відповідає аж 800 резонансним одиницям (НІ).

Одержані за допомогою фагового дисплея антитіла до ОХ40 в форматі людського Ідс1

РЗ29О1 АГА пропускали через проточні комірки, використовуючи діапазон концентрацій від 2 до 50ОнмМ (З-кратне розведення), зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с. Моніторинг дисоціації комплексу здійснювали протягом 210 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці, в якій був відсутній іммобілізований білок.

Кінетичні константи визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге 7200

Емаїнайоп (мМАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра, і застосовували для якісної оцінки авідності (таблиця 20).

В цьому ж експерименті визначали афінність взаємодії одержаних за допомогою фагового дисплея антитіл (в форматі людського (91 РЗ2901 АГА) з конструкцією рекомбінантний ОХ40 мавп ціномолгус-ЕРс (Кіп). Антитіло до людського Бар (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина) безпосередньо зшивали з СМ5-чипом при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного з'єднання (фірма Віасоге, Фрейбург / Німеччина). Рівень іммобілізації відповідав приблизно 9000 КО. Одержані за допомогою фагового дисплея антитіла до ОХ40 захоплювали

Зо протягом 60 с в концентраціях від 25 до 5ОнНМ. Конструкцію рекомбінантний ОХ40 мавп ціномолгус- Ес (Кій) пропускали через проточні комірки в діапазоні концентрацій від 4 до 1000нМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці В ній антигени пропускали по поверхні з іммобілізованим антитілом до людського Раб, але ін'єктували НВЗ-ЕР, а не антитіла.

Кінетичні константи визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге Т200

Емаїнайоп (мМАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра (таблиця 20).

Клони 4984, 1654 і СІ С-564 зв'язувались з конструкцією ОХ40 мавп ціномолгус-Ес (КІій) з більш низькою афінністю, ніж клони 8НО, 2087 і СІ С-563.

Константи афінності, які характеризують взаємодію між анти-0Х40 РЗ290| АГА ІДО1 і конструкцією 0Х40 мавп ціномолгус-Ес (Кі) визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге Т200 Емаїчайоп (мМАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1

Ленгмюра.

Таблиця 20

Зв'язування антитіл до ОХ40 з конструкцією ОХ40 мавп ціномолгус-Ес(Кій)

Рекомбінантний ОХ40 мавп

Клон | Походження ціномолгус (формат для оцінки (формат для оцінки афінності авідності) дисплей дисплей дисплей фаговий ве ш 2.3.2 Зв'язування з клітинами, що експресують ОХ40 мавп ціномолгус: активовані мононуклеарні лейкоцити периферичної крові (РВМС) мавп ціномолгус

Зв'язування з ОХ40-негативними пухлинними клітинами

Відсутність зв'язування з ОХ40-негативними пухлинними клітинами тестували з використанням клітин УУМ266-4 (АТС СВІ -1676) і пухлинних клітин 0-87 Ма (АТОСС НТВ-14).

Для одержання можливості розрізняти обидва типи пухлинних клітин М/М266-4-клітини попередньо мітили за допомогою набору РКН-26б6 Кей Ріцогезсепсе Сеї! ІпКег (фірма Зідта, каталожний Мо РКН2бОЇ). Клітини збирали і промивали тричі середовищем КРМІ 1640. Дебріс фарбували протягом 5 хв при кімнатній температурі в темному місці при кінцевій клітинній густині 1 х 107 клітин в свіжеприготованому розчині барвника РКН26-Кеай (кінцева концентрація

ПНМіІ у вказаному розчиннику В). Надлишок ЕВ5 додавали для припинення реакції мічення і клітини промивали 4 рази середовищем КРМІ 1640, доповненим 10 об.95 ЕВ5, 1 об.95

СішамАХ-Ї, для видалення надлишку барвника.

Суміш, яка містить 5 х 107 мічених РКН2б клітин УУ/М266-4 і немічених клітин 0-87 Ма, додавали в Ю-ЗФР в кожну лунку круглодонних 96-ямкових планшетів для суспензійних клітин.

Планшети центрифугували протягом 4 хв при 400 х 49, 4 "С і супернатант відкидали. Клітини промивали одноразово 200 мкл О-ЗФР і дебрис ресуспендували за допомогою короткочасного і обережного перемішування. Всі зразки ресуспендували, використовуючи 50 мкл/лунку холодного (4 "С) ГЕАС5З-буфера, що містить титровані концентрації конструкцій антитіл до ОХ40 в форматі людського ЇДс1 РЗ290І АГА протягом 120 хв при 4 "С. Планшети промивали 4 рази, використовуючи 200 мкл/на лунку БАСб5-буфера (47С). Клітини ресуспендували, використовуючи 25 мкл/на лунку холодного (4 "С) ЕАС5-буфера, що містив кон'югований з ФІТЦ

Карв')»--фрагмент козячого дб проти людського ІдсС, Есу-фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма Щдаскзоп ІттипоКезеагсі, каталожний Мо 109 096 098), та інкубували протягом 30 хв при 4 "С в темряві. Планшети промивали двічі, використовуючи 200 мкл/лунку РАС5-буфера (4 С), клітини остаточно ресуспендували в 80 мкл/лунку ГЕАС5-буфера, що містить 0,2 мкг/мл РАРІ (фірма Запіа Сги7 Віоїес, каталожний Мо 5с-3598), і одержували дані в цей же день за допомогою пристрою з 5 лазерами І З5К-Рогіезза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення

Коо) рІМА).

Як продемонстровано на фіг. 5А і 5Б, жодна з конструкцій антитіл, специфічних по відношенню до ОХ40, не зв'язувалась з ОХ40-негативними людськими пухлинними клітинами

МуМм266-4 і 0-78 МО. 2.4 Здатність блокувати ліганд

Для визначення здатності молекул ОХ40-специфічних людських антитіл ЇД001 РЗ29ОГ АГА впливати на взаємодії ОХ40/ліганд ОХ40 застосовували людський ліганд ОХ40 (фірмак 5 0 5укетв5). Через низьку афінність взаємодії між ОХ40 і лігандом ОХ40 готували злиту молекулу, яка містить дімерний людський ОХ40-Рс з С-кінцевою На-міткою (фіг. 1Б). Нуклеотидна та амінокислотна послідовності вказаної злитої молекули, що містить димерний людський ОХ40-

Ес, представлені в таблиці 21. Одержання та очистку здійснювали згідно з методом, описаним для мономерної форми ОХ40-ЕсС(КІій) в прикладі 1.1.

Таблиця 21

Послідовність КкДНК і амінокислотна послідовність злитої молекули, що містить димерний людський ОХ40-Ес (що складається з двох Ес-ланцюгів) стасастасатаваСаАСАССТАССССАаСААСаАССО стастасСсАСссАаата,асАааАссСасаСААСасасСАтао!тат сесссестаслассааТосССАЧаААСсАсСсататасСАвАССТ тассаеабоСстТаасСТСстТАСААСаАдСсатапТатсСАасСАА сооббтасСсАлдасстатАсстаатаСААССТОСавАИ,асСаИ асбад,ассАаСапААдаСАа,астататАсСасСАСССАСаИАТ дссататасссататаадасСааСАссСАасооСстасцА

САаСТАСААДАСССОСССОСОЯСТтОоспсАСсТасасоосттассстос тааССАСТТСсАСОоССсТваСсАСААССАсасстасАдас сттасАССААСТаСАСССТОЗИАСС,СаСААДасСАСАСССтТа садасоСсасСАаСААтТАаСсАаа,аСсаАСсасСАатотасцвАацА ссасОпАТоСТоСТассАСССАаСсСтТСАааСАААСССАСаИ есооСсТоССасССАпАСССАТСАССОЯТаСАасСсСтТАСАСАС ссстааСсСсСАаААсСАаасСсАаасасспассСстАасСАССАЧАСо са,атавдадатасставссасСАавАасСатоаАСсААСАаТ

ТАТАТТ ТТСАССХИаСИ,аСТоАСССАААТСТаСАСАСАДА нуклеотидна послідовність АСТСАСАСАТИСССАСсСсатасоСАаСАССТОаААСТОСТОа 212 |димерного людського са,ааАССатсАато тост оСССССААААСССААс антигена ОХ40 в злитті з Ес | ВАСАСССТСоАТаАТСТОССОСАСсСсССтТаАасТСАСАТИаС стастаатасАСатаАдаССАС,ААаАСССтТаАаатсСАА сТТсААСстТастАса7атацвас,васстасАаатасСАТААТОа

ССААпАСАААДаСсСсасаааАапАаСАаТАСААСАаСАС стассататаатАа,СатосТсАсСатостТасСАССАВаИаА стааСстТаААТааСАдааАаТАСАдаТасСсААааТСТОоСА

АСАААДаСсоСстосасассСССАТСВАСААААССАТОСТОС

АААИССААдАдсаасаа,аСоССаАпААССАСА,ататАСАС сстТасссССАТОоССЯВапАтТадасСстТаАССААпААССАцО тсдасстаАдоста|асстааТСАААдаасСТСстТАТСССАаСаИ

АСсАТСЯССОЯТОСАСТОасаАсСАаСААТасвСаСАасСОацАс

ААСААСТАСААСаАССАСсасстосСсатаставАСТОоСаА с,аасТосСТсТосСТоТАСАасСААасСтТСАССатасАСАА слабадсатаабАда,абА,ааацпААСаТтсТСсТСАТаСтТоСОа

ТаАТаСАТОДИОССТСТаСАСААССАСТАСАСасСсАсаААс дасстотосстатстоСаапатТАААТОСааСтТАСССАТАС вСАТаТТосСАСАТТАСОаСТ

ГНСУМаЮТуУРЗМОВССНЕСАРОМОМУЗАСЗАЗОМТУСАРОС

СРЕИаГєУМОУУЗЗКРОКРОТУМУСМІ ВБаЗЕВКОЇ СТАТОЮСТМУ

САСВАС,ТОРІ О5УКРИаАМОСАРСРРАНЕЗРИЮОМОАСКРМИТ

МОСТІ АЕКНТ ОРАБЗМЗЗВАІСЕОВОРРАТОРОЕТОСРРАВР

ІГМОРТЕАМ РАТЗОСРОТАРУЕМРЕаСВАМОЕОЇ МЕОС5Р 213 димерний людський антиген КОСАДОКТНТСРРСРАРЕЇЇ аСРБ5МРБІ ЕРРКРКОТІ МІБАТРЕ

ОХ40 в злитті з Ес МТСУММОУЗНЕОРЕМКЕМУМУраМЕМУМНМАКТКРАЕЄОСУ

МОТУАМУУБМІ ТМ НОУМІ МЕАКЕМКСКУЗМКАЇ САРІЕКТ

ІЗКАКИОРАЕЕРОММУТІ РРОВОЕБЇ ТКМОМ5І ТС УКагМРБО

ІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О5ООаЗЕРІ ЗК ТУКА

МОдаммЕ5СЗУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І ЗРОКБамРУОМУР

ОМА

Людський ліганд ОХ40 (фірма Е 8. О 5узіет5) безпосередньо зшивали з двома проточними комірками СМ5о-чипа з рівнем, що дорівнює приблизно 2500 КИ, при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного з'єднання (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Конструкцію рекомбінантний людський ОХ40-Ес пропускали через другу проточну клітинку в концентрації

200Нм зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 90 с. Дисоціацію виключали і одержане за допомогою фагів антитіло до ОХ40 в форматі людського ІДО1РЗ29Г АГА пропускали через обидві проточні комірки в концентрації 50О0нНМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 90 с.

Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 60 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референос-комірці. В ній антитіла пропускали по поверхні з іммобілізованим людським лигандом ОХ40, але ін'єктували

НВ5-ЕР замість конструкції рекомбінантний людський ОХ40-Ес. На фіг. 18 представлена схема експерименту.

Одержаний за допомогою фагів клон 2087 зв'язувався з комплексом людського ОХ40 з його лігандом ОХ40 (таблиця 22, фіг. 6Б). Таким чином, це антитіло не могло конкурувати з лігандом за зв'язування з людським ОХ40, і тому його позначали як "неблокуючий ліганд". На противагу цьому, клони 8НО, 104, 4984, СІ С-563 і СІ С-564 не зв'язувались з людським ОХ40 в комплексі з його лігандом, і тому їх позначали як "блокуючий ліганд".

Таблиця 22

Здатність зв'язувати ліганд клонів антитіл до ОХ40, визначена за допомогою поверхневого плазмового резонансу

Приклад З

Функціональні властивості клонів антитіл, що зв'язуються з лодським ОХ40 3.1 Клітини Нега, які експресують людський ОХ40 і репортерний ген МЕ-кВ-люціферази

Агоністичне зв'язування ОХ40 з його лігандом індукує передачу сигналів в прямому напрямку за допомогою активації ядерного чинника каппа В (МЕкВ) (А. 0. М/віпбего9 та ін., у.

І еикКос. Віо!І. 75 (6), 2004, сс. 962-972). Рекомбінантну репортерну лінію клітин НеГа пОхХ40

МЕКВ ис1 створювали для експресії людського ОХ40 на їх поверхні. Вона несла також репортерну плазміду, що містить ген люциферази під контролем чутливого до МЕКВ енхансерного сегмента. Стимуляція ОХ40 індукує залежну від дози активацію МЕкКВ, що транслокується в ядро, в якому він зв'язується з чутливим до МЕКВ енхансером репортерної плазміди, підвищуючи експресію білка люциферази. Люцифераза каталізує окислення люциферина, що призводить до утворення оксилюциферина, що випускає світло. Це можна оцінювати кількісно за допомогою люмінометра. Таким чином, в одному експерименті аналізували здатність різних анти-ОХ40-зв'язуючих агентів в форматі РЗ29СІГ АГА пиЇда

Зо індукувати активацію МЕКВ в репортерних клітинах Неба пОх40 МЕКВ ис.

Прикріплені клітини Неїа пОх40 МЕКВ ис! збирали, використовуючи буфер для дисоціації клітин (фірма Іпмігодеп, каталожний Мо 13151-014), протягом 10 хв при 37 "С. Клітини одноразово промивали О-ЗФР і густину клітин доводили до 2 х 105 в середовищі для аналізу, що містить МЕМ (фірма Іпмігодеп, каталожний Мо 22561-021), 10 об. 95 інактивованої тепловою обробкою ЕВ5, 1мМ піруват натрію і 1 об. 95 замінних амінокислот. Клітини висівали з густиною 0,3 х 105 клітин на лунку в стерильний білий плоскодонний 96-ямковий планшет для культури тканини з кришкою (фірма Стгеїіпег Біо-опе, каталожний Мо 655083) і витримували протягом ночі при 37 "С в інкубаторі (Нега СеїІ 150) в атмосфері з 5 95 СО».

На наступний день Неіа пОх40 МЕКВ ис! стимулювали протягом б год., додаючи середовище для аналізу, що містить в титрованих кількостях різні анти-ОХ40-зв'язуючі агенти в форматі РЗ29ОГ АГА пПидео1. Для тестування впливу перехресноого гіпер-зшивання на антитіла до ОХ40 додавали 50 мкл/лунку середовища, що містить як вторинне антитіло Е(аб')2-фрагмент козячого ІдсС проти людського Ідс, Есу-специфічне (фірма аскзоп ІттипокКезеагсі, каталожний Мо 109-006-098) у співвідношенні 1:2 (2-кратне перевищення кількості вторинного антитіла по відношенню до первинного одиничного анти-0Х40 РЗ290І АГА ПпиЇдс1). Після інкубації супернатант аспірували та планшети промивали двічі О-ЗФР. Кількісне визначення випускання світла здійснювали з використанням системи для аналізу люциферази 100 і репортерного лізуючого буфера (обидва фірми Рготеда, каталожний Мо Е4550 і каталожний Мо

Е3971) згідно з інструкціями виробника. В цілому, метод полягав у наступному: клітини ціалізувались протягом 10 хв при -20"С шляхом додавання 30 мкл на лунку 1-кратного лізуючого буфера. Клітини піддавали відтаванню протягом 20 хв при 37 "С, після чого додавали 90 мкл на лунку реагенту для аналізу люциферази. Випускання світла негайно оцінювали кількісно за допомогою рідера для мікропланшетів ЗресігаМах М5/М5е (фірма МоїІесшіаг

ОРемісе5, США), для чого здійснювали інтегрування протягом 500 мс без використання будь- якого фільтра для обліку всіх довжин хвиль. Рівень світла, що випускається (у відносних одиницях світла, що випускається КІ) коректували з урахуванням вихідної люмінесценції клітин Неіа пОх40 МЕКВ ис! і будували графік залежності від логарифма концентрації первинного антитіла, використовуючи програму Ргізт4 (фірма СгарпРад Зоймжаге, США). Криві апроксимували на основі закладеної в програму сигмоїдальної дозової відповіді.

Як продемонстровано на фіг. 7А і 7Б, обмежена залежна від дози МЕКВ-активація індуквалась вже при додаванні антитіл до ОХ40 РЗ2ОСІАГА пис (лівий графік) до репортерної лінії клітин. Перехресне гіпер-зшивання антитіл до ОХ40 за допомогою антилюдських Ідсі-специфічних вторинних антитіл призводило до сильного підвищення індукції опосередкованої МЕкВ активації люциферази залежно від концентрації (правий графік).

Величини ЕСзо, що характеризують активацію, узагальнені в таблиці 23.

Таблиця 23

Величини ЕСзхо, що характеризують активацію МЕкВ в репортерній клітинній лінії Неба пОх40

МЕКВ ст, яку спільно інкубували з анти-ОХ40-зв'язуюючими агентами (формат пиЇдс1

РЗ2901 АЇ А) і вторинними антитілами проти людського до, Есу-специфічними нших нини пиши 3.2 Опосередкована ОХ40 костімуляція субоптгимально стимульованих ТОК попередньо активованих людських СО4-Т-клітин

Лігування ОХ40 забезпечує синергетичний костімуляторний сигнал, що підвищує розподіл і виживаності Т-клітин після субоптимальної стимуляції Т-клітинного рецептора (ТСЕ) (М. Стой та ін., ІттипоїЇ. Кем., 229 (1), 2009, сс. 173-191). Крім того, підвищується виробництво деяких цитокінів та поверхнева експресія маркерів Т-клітинної активації (І. сгатадіїа та ін., у. Іттипої., 161 (12), 1998, сс. 6510-6517; 5М депзеп та ін., Зетіпаг5 іп ОпсоіІоду, 37 (5), 2010 сс. 524-532).

Для тестування агоністичних властивостей різних анти-ОХ40-зв'язуючих агентів попередньо

Зо активовані ОХ40-позитивні СО4-Т-клітини стимулювали протягом 72 год. застосовуваними в субоптимальній концентрації іммобілізованими на планшеті антитілами до СОЗ в присутності антитіл до ОХ40 або в розчині, або в іммобілізованій формі на поверхні планшета. Вплив на виживаність і проліферацію Т-клітин аналізували, здійснюючи моніторинг загальної кількості клітин і розведення СЕБЕ в живих клітинах за допомогою проточної цитометрії. Додатково клітини фарбували спільно флуоресцентно міченими антитілами проти маркерів активації і диференціювання Т-клітин, наприклад, СО127, СО45КА, Тіт-3, СОб2І. і самого ОХ40.

Людські РВМС виділяли шляхом центрифугування в градієнті густини фікола і стимулювали протягом З днів з використанням ФГА-Ї (2 мкг/мл) і пролейкіна (200 од./мл)і згідно з методом, описаним в прикладі 2.1.2. Потім клітини мітили СЕЗЕ при клітинній густині 1х105 клітин/мл з використанням СЕОА-5Е (складний М-сукциніміділовий ефір 5(6) - карбоксифлуоресцеїндіацетату, фірма Зідта-АЇдгісй, каталожний Мо 2188) в кінцевій концентрації (5ОнНМіІ протягом 10 хв при 37 "С. Потім клітини промивали двічі надлишком Ю-ЗФР, що містить ЕВЗ (10 об. 95). Мічені клітини витримували в середовищах для Т-клітин при 37 С протягом 30 хв. Потім неконвертований СЕЮОА-5Е видаляли шляхом двох додаткових стадій промивання за допомогою Ю-ЗФР. Виділення СО4-Т-клітин з попередньо активованих мічених

СЕБЕ людських РВМС здійснювали з використанням набору для виділення СО4-Т-клітин на основі негативної селекції МАС5 (МАС5 педаїйме СО4 Т-сеї!!) (фірма Мінепуї Віоїес.) згідно з інструкціями виробника.

Могтіє із співавторами продемонстрували, що агоністична костімуляція за допомогою канонічних антитіл до ОХ40 заснована на поверхневій іммобілізації (М. Р. Могтті5 та ін., Мої.

Ітітипої., 44 (12), 2007, сс. 3112-3121). Так, козячі антимишачі антитіла, Есу-специфічні (фірма

Уаскзоп ІттипоКезеагсй, каталожний Ме 111-500-5008) наносили на поверхню 96-ямкового планшета для культури клітин з О-подібним дном (фірма Сгеїпег Віо Опе) в концентрації 2 мкг/мл в ЗФР протягом ночі при 4 "С в присутності (антитіло до ОХ40, іммобілізоване на поверхні) або за відсутності (антитіло до ОХ40 в розчині) козячого антилюдського, Есу- специфічного антитіла (фірма даскбоп ІттипоКезеагс, каталожний Мо 109-006-098). Потім поверхню планшета блокували Ю-ЗФР, що містить БСА (1 95 (об./мас.). Всі Т-клітини піддавали стадіях інкубації при 37 "С протягом 90 хв в ЗФР, що містить БСА (1 95 (об./ мас.). Між стадіями інкубації планшети промивали Ю-ЗФР.

Мишаче антитіло до людського СОЗ (клон ОКТЗ, фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 16-0037- 85, фіксована концентрація |З нг/млі|) захоплювали на наступній стадії інкубації за допомогою нанесених на поверхню антимишачих, Есу-специфічних антитіл. В одному експерименті потім на планшеті іммобілізували титровані людські антитіла до ОХ40 (людський ДС1 РЗ29С ГАГА) за допомогою додаткової стадії інкубації в О-ЗФР. В другому експерименті антитіла до ОХ40 додавали в процесі аналізу активації безпосередньо в середовище до планшетів, які не сенсибілізували попередньо антитілами до людського дО, Ес-специфічними.

Мічені СЕЗЕ попередньо активовані СО4--Т-клітини додавали в попередньо сенсибілізовані планшети при клітинній густині 0,6х105 клітин на лунку в 200 мкл середовища для Т-клітин і культивували протягом 96 год. Клітини фарбували комбінацією мічених флуорохромом мишачих антитіл до людського ОХ40 (клон ВегАСТЗ35, фірма Віоїєддепа, каталожний Мо 35008),

ТІМ-3 (клон Е38-2Е2, фірма Віоіїєдепа, каталожний Мо 345008), СО127 (клон АО1905, фірма

Віоїєдепа, каталожний Мо 351 234), СО62ІЇ (клон ОКЕС 56, фірма Віоієдепа, каталожний Мо 304834) і СО45КА (клон НІ1Т00, фірма ВО Віозсіепсе5, каталожний Мо 555489) протягом 20 хв при 4 "С в темряві. Планшети промивали двічі, використовуючи 200 мкл/на лунку (4 "С) ЕАС5- буфера, клітини остаточно ресуспендували в 80 мкл/на лунку ЕАС5-буфера, що містить 0,2 мкг/мл ОАРІ (фірма Запіа Сги? Віоїес, каталожний Мо 50-3598), і отримували дані в цей же день

Зо за допомогою пристрою з 5 лазерами І5К-Еогіезза (фірма ВО Віозсіеєпсе, програмне забезпечення ОІМА). рАРІ-негативні живі клітини аналізували по відношенню до зниження медіанної СЕБЕ- флуоресценції як маркера проліферації. Здійснювали моніторинг відсотка ОХ40-позитивних,

СО62ЦПом і ТІМ-З-позитивних Т-клітин як маркера Т-клітинної активації. Експресію СО45КА і

СОр127 аналізували для визначення змін в статусі дозрівання Т-клітин, а СО45КАЇом СО127ІОму- клітини відносили до категорії ефекторних Т-клітин.

Костімуляція за допомогою іммобілізованих на планшеті антитіл сильно, залежно від дози, підвищувала субоптимальну стимуляцію попередньо активованих людських СО4-Т-клітин при використанні іммобілізованого на планшеті антитіла до людського СОЮЗ (фіг. 8А-8 Е).

Проліферація Т-клітин була сильнішою, вона характеризувалась більш зрілим фенотипом з більш високим відсотком ефекторних Т-клітин і більш високими відсотками СОб2Мом/, Тіт-3- позитивних і ОХ40-позитивних активованих клітин. Зв'язування деяких клонів (8Н9, 2087) з клітинним ОХ40 не піддавалось оцінці з використанням засобів для детекції антитіл, які надходять у продаж. Для них виявилось неможливим розрахувати величину ЕСбво і тому всі величини ЕСво, що характеризують індукцію ОХ40, були виключені при розрахунку всіх величин

ЕСво. Зміни, що становлять половину від максимального всіх інших параметрів Т-клітинної активації, досягались в діапазоні концентрацій від З до 700 пМ, дані узагальнені на фіг. 9 їі в таблиці 24. Жодного посилення субоптимальної стимуляції ТСЕК не виявлено, коли антитіла до

ОХ40 додавали в розчин за відсутності іммобілізації на поверхні (фіг. Т0А-10Е). Ці результати знову демонструють сильну залежність осі ОХ40-активації від перехресного гіпер-зшивання

ОХ40-рецептора.

Кореляція між силою зв'язування і агоністичною активністю (біологічна активність) антитіл до ОХ40 (формат ІдсС1 РЗ290І АГА) продемонстрована на фіг. 11. Для більшості клонів виявлена пряма кореляція, проте для двох клонів (4984, 1054) несподівано виявлена сильніша біологічна активність порівняно з передбаченою на основі їх сили зв'язування.

Таблиця 24

Величини ЕСзо, що характеризують збереження субоптимальної ТОВ-стимуляції за допомогою іммобілізованих на планшеті анти-ОХ40-зв'язуючих агентів (формат пиїдс1 РЗ2901І АГ А)

Приклад 4

Створення біспецифічних конструкцій, мішенями яких є ОХ40 і фібробласт-активуючий білок (ЕАР) 4.1 Створення біспецифічних двовалентних антигензв'язуючих молекул, мішенями яких є

ОХ і фібробласт-активуючий білок (ЕАР) (формат 2--2)

Одержували біспецифічні агоністичні антитіла до ОХ40, які мають двовалентним зв'язуванням з ОХ40 і ЕАР. Технологію Сто55іптар, описану в міжнародній заявці на патент МО 2010/145792 А1, застосовували для зниження утворення неправильно спарених легких ланцюгів.

Розробка та одержання зв'язуючих ЕАР агентів описані в УУО 2012/020006 Аг, що вклюється в даний опис як посилання.

В цьому прикладі "схрещений" модуль Еар (УНСІ) зв'язуючого ЕАР агента 28НІ зливали на

С-кінці з важким ланцюгом антитіла до ОХ40 пиЇдс1, використовуючи послідовність-коннектор (245) 4. Вказане злиття, що містить важкий ланцюг, спільно експресували з легсим ланцюгом антитіла до ОХ40 і відповідним "схрещеним" легким ланцюгом антитіла до БАР (МІ СНІ).

Інтродуковані мутації Рго32901у, Гец234АЇїа і Гец235Аїа в константну ділянку важких ланцюгів для елімінації зв'язування з Ес гамма рецепторами, згідно з методом, описаним в опублікованій міжнародній заявці на патент ММО 2012/130831 А1. Новоутворена біспецифічна двовалентна конструкція представлена на фіг. 12А.

В таблиці 25 представлені відповідно нуклеотидні і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних двовалентних анти-ОХ40/анти-РГАР людських антитіл в форматі да

РЗ2гОИ АГА.

Таблиця 25

Послідовності біспецифічних двовалентних анти -ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА сАсатасСсААаттаатасаастотаававастАаатаААапААас ставатостосатаАдАлсатсотостасАдсасстоСааАаас

АСАТТсАИаСсАаСтТАСОаСтТАТАДОаСТОСОаТаСаАСАцасосос тасвАСАДссастосАа,атавАтТасаАаааАТСАТОССТАТСТ таатАСАаСАААСТАСасСАСАаААаТТоСАс,СасасСАцваИТт

САССАТТАСТАаСАСАСАААТСОСАСОСАДИаСАСАаССТАСАТОаСЯ (889) УНСНІ-важкий АаСТОАдаСАа,аСсСстТаАдаАтТотаАда,апАСсАсСсасСататАТТАС 214 ланцюг-(28НІ1) МНОГ. татасаАпАСпААТАСССЯ п ТапАтТасАСТАСТЯвИасассСААда (нуклеотидна апАССАССОЯтТаАдсСсатстостсАастТАаСАССААлсСааСССА послідовність) тоса,ататсосстотааоСССТоСАаСААдаТтсТАССстотаас сасАдсалассастотавеастасстаТаААдааАСТАСТТОСС сслдасстатадсдататстасаААсттааСассстаАсСАТ ссасСсатасСсАСАССТТІТоСАССТОаТаСТаСАСТОСТОСОасС статастосстатостосатсатадсаатассстосдастст ставаСАСССАпАССТАСАТСТаСААСаТТтаААССАСААИаСС

СТоСААСАССААлСсСа ГасАСААдаАдАа,аатасААСССАдатос

Таблиця 25

Послідовності біспецифічних двовалентних анти -ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА тТасСспАСААаАСССАСАССтТаИТатоосстаТтостТассссСстТаА дастастасса,аасСссСстТА,аСаТатат г ссСсТат СсСССССААдОаС

ССАДИСАСАСССтТадтТаАттССааАСССССаААатТаАСс тасатаатаставАтТататоССАСадапАСССтТаААаТадА стТТсААтта,7аатасатасАассаСатасвсАдатаСАСААТаССА

АСАССАДасСсСстТАпАсаАасААСАСТАСААСТОСАССТАССО сатеататосатастаадсСсста|астасСсАсСАапАТТааСтТаА

АС,ВССАААДаАИаТАСААДаТасСААдааЙТатоСААСААСвасСсстТ вапАдаСССССАТСИААААаАССАТСТССААЧСасСАдДасОас сдасстсасСсаАдасСсСсТАсататТАСАсоСстасссссСстТАасСАа

АвАТтТадаСтТаАССААаАдАССсАвататосСстаАсСсТатстоса

ТОААдаасСсТстТАССССТоСОАТАТСЯССЯТасСААТасада

АпВСААсаасСАаСССпАпААСААСТАСААСаАССАСССССо статастасАСТоСаАСаасСТсСАТТСТТОСТатАСТСТАДОаС тТОАсАдатТапАСАдатосаатасСАа,аСАаа,авасСААСаТтатт стостТа|астоСатОАТасСАСаАдааСССтТасСАСААССАСТАСА

СсССАадАХаатосстатосостатстссасассАасасСсапАсаА тотасвссаАдсаСсааАтссатстасасАттасвасваса стасвАтТоТтТалдсатТасаастаставААтотаасвсасвсАасАСТ сатаСбдассАасасасАтотталсвастатстаСсастастТт сса,аасТттТАССТТСТоСАааСсСАСасСссСАТтТаХлатаватаСас

САдааСАСсоСааАААддавАСтавААтТасвататсСАасСсСАТСТ саасстоСа,асовАаСАатТАСтТАСсасСсСаАтТАаСатадАасаИ

СсСааТТСсАССАТСТСТСС,СИаСАТААСАССААСААТАСТСТИтТ

АостТа|асСсАпАТаААСстТосСстасСсасасСтТаААаАтТАССаТстата тТАТТАСТОаСОаССААДОСсастТаастацвасСААСТТСОаАТТАСТа сааСсСАсСаспААссстса;таастатстсалаСастсТатась ссастосстоСатаТТСсАТСТТОССАССТттоСадСадасАас тОАдАдатоСсаасАастассттаТатсаЇататасстасСстТаААСААС

Пп стТАСССТСОСОаАдасСсСААлсаа,атТтасАатассАААдатТасАТА дса,ассстаслатоСааСААСТоССАапААтоСсатаАССада

СсАапАСТоСАДапАСАаСАССТАСТОССТадасАасСАСССТ вАСсССТатоСААлааССаАСтТАСаАСААаСАСААдсататАс асстТатадАдатаАСССАСсСсАасаса,аасстатоСАассоСатТаАс

СААССТОСТТСААССасасаасаАа тає

МІ Сі -легкий ланцюг 1 180 нуклеотидна див. таблицю 13 послідовність) сАдаАтсатастаАссСАаатстСсСбааСАсоста7аласстада ссстааСбададсасАХасССАсоСстаАа,аСтасСАасАасССАассСАа дасаталдасСсссАХа,астТАсстаасстастАТСсАаСАаАдАас сса,аасСсАдавассСсССАаАСстТа|астТтаАТСАТтСоССЯСасСАаСАСС саваСсСсАССпаСАТССССОаАТАСАттоАдассасСАаСсаастТо

МІСНІ-легкий ланцюг 2 сСОаСАСССАСТТСАСССТаАССАТСАССССОСОЯССсТасААСССИ 215 (28НІ1) дааАсттсасСататАСТАСТаССАа,аСАас,свасСАваТтаАтТо (нуклеотидна СоССССАссттовасСсАаа,аааСАССААдасатТасАААТСААИА послідовність) астобасСстТАааСАСсСАдасасоостсатат остова сССАаСАаСААспдасСАссттаавсааААсАаСсассстась астасстТааТаАААаАсСтТАСТТОоСССОвАМ,аооСсатаАССата тоСтТавААстота,аассстАсСАааСсаваСаТасСАСАССТТ тосаХасс,атастасда,адасАааСсаассСТатАСТоССТадасСА ссатааТаАСсАаатТассстоСсАаСАасСстасваСАСССАсаАСс

Таблиця 25

Послідовності біспецифічних двовалентних анти -ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

НІ ПИЙ Косові тТапАСААдаААдасТасААСССААадаСТассАс

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУЗСКАБИСТЕЗЗМАІЗМУУВОАРа

ОС ЕМ МОСТИ РІБЄЕТАМУМАОКЕОСВАМТІТАОКЗТЗТАММЕЇ 55

ІГАЗБЕОТАУУУСАВЕМОМУ МОМ ОСТ ТУТ М5БЗАБТКаРОМЕР

ГАРБЗКОТОЗОаСТААІ аСІ МКОМЕРЕРУТУБМУМБИаАІ Т5аТмнтЕ

РАМ О55БОИЇ М5І 55 МРБЗББІ а ТОТМІСМУМНКРОМТКМОК

КМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕАДАСОРБОБМРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТР

ЕМТСУММОМЗНЕОРЕМКЕМУ УМВС МЕМНМАКТКРАЕЕОММ5 (889) УНСНІ-важкий ТУАММ5БМІ ТМ НОМ МЕОКЕМКОСКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАК 216 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. СОРВЕРОМУТІ РРОВОБЇ ТКМОМ5І ТС МКОЕУРБЗОІАМЕМ Е5

МООРЕММУКТТРРМІ О5БО5ЕБРІ УК ТОКЗВУМОСОММЕС

ЗММНЕАЇ НМНУТОК5БІ 5І БРОСССОЗССЗавСа,БОСОаВасСаО

ЕМО ЕЗОССИЇ МОРОИБІ ВІ БСААБОЕТЕ55НАМОУУВОАРОа

КОаГЕМУМБАМ АЗБИаєгОМУАрБУКаИаВЕТІЗАОМОКМТІ М ОММ5

ІГВАЕОТАУУМСАКОСУМ МЕС УМ С,ОСТІ МТГМ55АБМААРБЗМЕ

ІЕРР5ОЕОЇ КБатАБММУСІ І ММЕМРАЕАКМОМКМОМАГОБаМ

ЗОЕБМТЕООБКОБТМУ5І 55ТІ ТІ ЄКАОМЕКНКУМАСЕУТНОС

І 55РУТКЗЕМАОЕС

ЕІМГТО5РИтТтІ 5І 5РОЕВАТІ 5ХСВАЗОЗУЗАОМІ АММООКРИаО

МІСНІ-легкий ланцюг 2 АРВІ ПІСАБТВАТИаІРОНЕЗИабБИаватОо вті ТІ АГЕРЕОБГАМУУ 217 (28НІ) СООСОМІРРТЕЙОСТКМЕІКЗ5АЗТКОаРОЗМЕРІ АРЗБЗКОТОСТ

ААЇ аСІ МКОМЕРЕРУТУБММ5ИададІ Т5аТмНтТЕРАМІ О55О0І 5

І 55УМТМРБОБОІ ТО ГМІСМММНКРОМТКМОККМЕРКВОСО

СсАасатТасСсААдта7атасаатстасаастаАааТаААСАдас стасватостоватаАдд,асттоСтасСАдсаасстоСавАасо

АСАТтТсАдаСсАасСстТАСастАТААХДаСсТтаатасаАСА,васссс тавдАСАдасастовАа,атасвсАтасаАаааАТСАТСОССТАТСТ тастАСАаСАААСТАСасСАСАаАдАдаттоСАа,ссасасАа,асат

САССАТТАСТаСАСАСААДАТССАСИаАДаСАСАаССТАСАТОИС дастадаСсАаасСссСсТаАвАтТотТАапАСАССсасСсататАТТАС татаСсОАпАСпААТАСТАСССЯТОСТоСатАСОАСТАСТОСИС

ССАДСОасСАССАСсСсатадсСаТатстоСстСАасСстТАасСАССАдИаС

ВСССАТСССОТаттОоСсСсТТаассссСтТСсСАасСААСТСТАССТ стааСбааСсАСсАХа,ассастотсасста|асстоатТаААааАСТАС (4984) / УНСНІ-важкий тесессссл,асстатадсХдататоСстаавААстотааСасСосстТ ланцюг-(28НІ1) УНСІ. вАСАТССЯССОСтТаСАСАССТ ТоОСАСаСТОатТасСстасСАатТостТ 218 (нуклеотидна ссса7асстатастосстатостосатсатАсАатассстос послідовність) дасТоТстТпаСАСССАпАССТАСАТСТаСААСаТаААССА

СААДИСССТОСААСАССААдс,СаИтапйАСААаААааТасААСос

ААСТСоСТасоАСААаАСССАСАсСстатососссттатостас

СоСстТОАддастастасссассстласатаТат стос

СААДаСССАДаспАСАСССТаАтТаАттоСасвАСССССаА датаадсстасатастаатааАтТататсСсСАСсасАааАСоста

ААдатТадАдатТСААТттастАсатасасасоТавАдатТасА

СААТаССААпАССААдасСссСстТАаладасААСАСаСТАСААСТоС

АостТтАссЯесатеастатоса,атастаадсСса,ата|астасСсАССАааА таапсСстаоААСайпСАААпАаТтАСААаатТасСсадаататссСААСс

ААдс7васоставаАасСССССАТСИАААДаАССАТСТОСАдИаС

СсСсАДССсСОасСсА,асстоаСа,аассСстАааТаТАСАСССТассс

ССТАаСАСАСпАТаласСстТаАССААСААССАсаТататоссталд

Таблиця 25

Послідовності біспецифічних двовалентних анти -ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА сстТатстатаААдАаасСТсСтТАССССТоСаАТАТСОССИ,ТОа вААТОаСОСАпАаСААдСсааСсСАаСССпАаААСААСТАСАДОА

СсСсАСсССсСсСсСсСсСТатТаСставаАСстТоСадСсаасСсТСАТТСТТОСТИаТт

АСТСТАДаСтТОАСсАаатТапАСсААдатоссаастаасСАаСАаИс

СААсСататпстстастСсатТаАтТаСАСсаАааСсСссСстТасСАСА

АССАСТАСАСССАСААХСТоССТОТоССТатотосСсасасаА сасссвАдссАтотТаасавАасаСсааАтссатаатааСасАТ ставссаеасСссатааАтотал,аатасаастаставААТСТОС сапдасАастаатаСсдасССАасасасАтотстаАвастатост ссастасттоСаастТтТАССТТСТОСАаССАСОаССАТОаАСТТ састаСсасСсАдаасСсАсССапАААдАдапАСстТаТасААатааиатато дасСсАТСТаОСООССТОСЯСаСаАаСАаТАСТАСасССаАТАаСа тТОАдАдапвасСайТТСАССАТСТСТСОасОАТААСАСаСААСААТ

АСтТотТатТАСсСстТасСсАпаАтТаААстооСстаТасСсасСастТаААСАТАС састататАТТАСТаСсасСсСсАд,асвсастааставасСААСТТСа

АТТАСТОСОСОСССАас,аапААсостоаталстатстоадасСастТ тстатасоастоостСататТСсАТСТТСССАССТТССОаАС слдасадастадАада,атоСссаасАстасстотатсататасстаст

СААСААСТТСТАСССтТосСасАдасССААдааТатасСсАаТацААА стаспАТтТААСасСоСстасСсАаТоСайСААСТоССАасСААТССИТ чвАоСсадаСАаспАСТоСАдаспАСАасСАССТАСтТоССстадас

АВСАСССтТаАСССТаТатсСАДааССаАСтТАСОАСААДОСАСА даататТАдсасстатаАдатТаАСССАССАасасвостатоСАас оса аАССААатосСсТСААССасвсаасаАстТас

МІ Сі -легкий ланцюг 1 184 і нукпеотидна див. таблицю 13 послідовність)

МІ СНІ-легкий ланцюг 2 (28НІ1) 215 (нуклеотид Див. вище послідовність)

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУЗСКАБИСТЕЗЗМАІЗМУУВОАРа

ОС ЕМ МОСТИ РІБЄСТАМУМАОКЕОСАМТІТАОКОТЗТАУМЕЇ 55

ІГА5ЕОТАМУУУСАВЕУУВаРУВЮУМ СОТ УТУ5ЗАВБТКаРБМЕ

РГАРББ5КОТЗОаСТААасі МКОМЕРЕРУТУБМУМЗИаАІТБамУнтТ

ЕРАМІ О5БИїЇ 5І 55 УРБББІ СТО ТМІСМММНКРОМТКМО

ККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕАДССОРБУГІ ЕРРКРКОТІ МІЗ А

ТРЕМТСУММОМЗНЕОРЕМКЕМУ УМрИаМЕМНМАКТКРАЕЕОУ (4984) / УНСНІ-важкий МТ УАММ5МІ ТМ НОМ МЕКЕУКСКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗК 219 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. АКСООРАЕЕРОМУМТІ РРОВОБЇ ТКМОМ5І ТС МКОЕУРБОІАМЕМУ

ЕЗБМСОРЕММУКТТРРМІ О5ВОаБЕРІ УК ТУЮОКВАМОСаММЕ

ЗС5УМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5І БРСОСССОЇСЗОСВОСБИССОВБаИасвяаї а5ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОССИБІ ВІ БСААБИаЄТЕЗ5З5НАМОУМУВОА

РОКИ ЕММУ5АМ АБавЕОУМАоЗУКОаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОМ

МО ВАЕОТАУУМСАКСОМІ СМЕО УМ ,О,ТІ МТМЗ5АБМААРБ

МЕІЕРРБОЕОЇІ КБатАБМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОУУКМОМА О5

СМБОЕЗБМТЕООБКОБТУБІ 55ТІ ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕМТН

ОСІ 55РУТКЗЕМАОЕС

Таблиця 25

Послідовності біспецифічних двовалентних анти -ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

СсАасатТасСсААдта7атасаатстасаастаАааТаААСАдас стасватостоватаАдда,аатстСсТасСсАлсасстосавАсас

АСАТтТсАдаСсАасСстТАСастАТААХДаСсТтаатасаАСА,васссс тавдАСсАдасастсадатааАатасаАдаааАТСАТОССТАТСТ тастАСАаСАААСТАСасСАСАаАдАдаттоСАа,ссасасАа,асат

САССАТТАСТаСАСАСААДАТССАСИаАДаСАСАаССТАСАТОИС дастадаСсАаасСссСсТаАвАтТотТАапАСАССсасСсататАТТАС татаСсОАдОпАаААтТАСасатстТАТасАСТАСТОСОвасСсСААа саАссАсСсатаАсСатсТСсТСАасСстТАаСАССАДасвасСсСсСА тоесатапссстотаассСсСстТсСАасСАдатстТАССстотас сасАдсАлассастттасаста|асстаТаААдасаАСТАСТТОСС

Ссадеасста|атаАсАХдататсСсТавААсттааЙСасссСстТаАСАТ ссса,асатаСАСАССТТІТОСАСССТаТастасаатостосавас статТАстосстатостосатсатаАСАаа,атасссСстоСАастТотТ

СсТааСАСССАСАССТАСАТСТаСААСаТаААССАСАДаСс

СТоСААСАССАДваТапйАСАдаААдасТапААСССАдаТатос тТасСспАСААаАСССАСАССтТаИТатоосстаТтостТассссСстТаА дастастасса,аасСссСстТА,аСаТатат г ссСсТат СсСССССААдОаС

ССАДИСАСАСССтТадтТаАттССааАСССССаААатТаАСс тасатаатаставАтТататоССАСадапАСССтТаААаТаАА стТТсААтта7аатасатасАассаСатаавААаТасСАСААТаССА

АСАССАДасСсСстТАпАсаАасААСАСТАСААСТОСАССТАССО сатеататосатастаадсСсста|астасСсАсСАапАТТааСтТаА (1с4) унсні-важкий СЯ ОСАДАВАСВТАСААО ТОаСААОО ГаТССААСААВОаССсСТ ланцюг-(28НІ) УНСІ. вапАдаСССССАТСИААААаАССАТСТССААЧСасСАдДасОас 220 (нуклеотидна сдасстсасСсаАдасСсСсТАсататТАСсАсоСстасососстАасСАа послідовність) АвАТадаСтТаАССААаАдАССсАсататосстаАсста|атстоса

ТОААдаасСсТстТАССССТоСОАТАТСЯССЯТасСААТасада

АпВСААсаасСАаСССпАпААСААСТАСААСаАССАСССССо статастасАСТоСаАСаасСТсСАТТСТТОСТатАСТСТАДОаС тТОАсАдатТапАСАдатосаатасСАа,аСАаа,авасСААСаТтатт стоста|астоСатОАТасСАСаАдааСсССТасСАСААССАСТАСА

СсССАадАХаатосстатоостатстссасаоссАасваСапАсалд тотасвссаАдсаСсааАтссатстасасАттасвасваса стасвАтТоТтТалдсатТасаастаставААтотаасвсасвсАасАСТ сатаСбдассАасасасАтотталсвастатстаСсастастТт сса,аасТттТАССТТСТоСАааСсСАСасСссСАТтТаХлатаватаСас

САдааСАСсоСааАААддавАСтавААтТасвататсСАасСсСАТСТ саасстоСса,а,авАаСАатТАСтТАСасСсСаАтТАаСатадАасаИ

СсСааТТСсАССАТСТСТСС,СИаСАТААСАССААСААТАСТСТИтТ

АостТа|асСсАпАТаААСстТосСстасСсасасСтТаААаАтТАССаТстата тТАТТАСТОаСОаССААДОСсастТаастацвасСААСТТСОаАТТАСТа сааСсСАсСаспААссстса;таастатстсалаСастсТатась ссастосстоСатаТТСсАТСТТОССАССТттоСадСадасАас таАдАдатоссасАста7асстотатсаТтТасстасСстаААСАдС

Пп стТАСССТСОСООаАдасССААл,аа,атТтасАаТасАААДатТасйАТА дса,ассстаслатоСааСААСТоССАапААтоСсатаАССада

СсАапАСТоСАДапАСАаСАССТАСТОССТадасАасСАСССТ вАСсССТатоСААлааССаАСтТАСаАСААаСАСААдсататАс асстТатадАдатаАСССАСсСсАасаса,аасстатоСАассоСатТаАс

СААССТОСТТСААССасасаасаАстТас

Таблиця 25

Послідовності біспецифічних двовалентних анти -ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

МІ Сі -легкий ланцюг 1 188 і пуклеотидна див. таблицю 13 послідовність)

МІ СНІ-легкий ланцюг 2 (28НІ1) 215 (нуклеотидна див. вище послідовність)

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУЗСКАБИСТЕЗЗМАІЗМУУВОАРа

ОС ЕМ МОСТИ РІБЄЕТАММАОКЕОСАМТІТАОКОТЗТАУМЕЇ 55

ІГА5ЕОТАМУУУСАНЕУаЗМО УМ ,аОСТТУТУ55АБЗБТКОаРОМЕРІ.

АРББОК5ОТ5ЗОСТААЇ асі МКОМЕРЕРУТУБУУМЗалді Т5амнНтЕР

АМІ О55(2І 5І 55 УРБББІ ТО ТМІСМУМНКРОМТКМОКК

МЕРК5СОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБ5БМУРІ ЕРРКРКОТІ МІБАТРЕ

МТСМММОМ5НЕОРЕМКЕМУ УВО МЕМНМАКТКРАЕЕЄОММ5Т (су УНСНІ-важкий МУВМУМБМІ ТМІ НОМ МЕКЕУКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКО 221 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. ОРВЕРОМУТІ РРОВОЄЇ ТКМОМ5І ТС МКОЕМРБОІАМЕМ ЕМ

СОРЕММУКТТРРМІ ОБОСЗЕРІ КІ ТМОКЗАМмОССМУгО5

ММНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І РОСС СЗСССЗЗВвСсСОСВаИааасаОЕ

МОПЕБИСИОЇ МОРССБІ ВІ БСААБаєТтЕЗ5НАМ5ОУМУУВОАРИаК

СГЕМУБАМ/ АБаЕОУМАрОБУКОаАЕТІЗВОМОКМТІ МІОМІ.

ВАЕОТАУУМСАКСОСУЛ аМЕеЕОУМаТОсатІ МГМ55АВБМААРБУЕГІ

ЕРРБОЕОЇ К5атАБММСІ І ММЕМРАЕАКМОМКМОМАГОБаМО

ОЕБМТЕООБКОБТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ.

ЗЗРУМТКЗЕМНОЕС

СсАасатТасСсААдта7атасаатстасаастаАааТаААСАдас стасватостоватаАдд,асттоСтасСАдсаасстоСавАасо

АСАТтТсАдаСсАасСстТАСастАТААХДаСсТтаатасаАСА,васссс тавдАСсАдасастсадатааАатасаАдаааАТСАТОССТАТСТ тастАСАаСАААСТАСасСАСАаАдАдаттоСАа,ссасасАа,асат

САССАТТАСТаСАСАСААДАТССАСИаАДаСАСАаССТАСАТОИС дастадаСсАаасСссСсТаАвАтТотТАапАСАССсасСсататАТТАС татаСсОдОаАдаТтТААСТАСССатАСТСТТАСсТасвсасатТаАСТТ

СОАСтТАСТаОвасССАдапаАССАССатаАсСатстосСстоАс

СстТАаСАССАДасСасСсССАтосататсосттаасссстТос (2087) /УнНеСнНІ-важкий АФСААХСТоТАССТОТОССЯасСАсАа,ассастотавастасст 222 ланцюг-(28НІ1) МНОГ. СсатаАдАааАСтТАСТОСсСсСсадасСстаТатаАСАа тТатоСстТасА (нуклеотидна АСсСТСОТОССасССсСтТаАСсАТоСООЯаСатаСАСАССТТТОСАасСтТ послідовність) стастаслатостоссасстатАстосстатостоСсатсата

АСсАСТтассстоСАдастотСТаваСАСССАСАССТАСАТСТОа

СААСИаТтаААССАСААаСССтТоСААСАССААдаатасаАсСАда

ААСИТТаСпСААСССАДаИтоСсТасСсаАСААСАСССАСАССтТаТатс сссесттатостассоСстадлдастастасссвсасостА;асСатТа

ТПоСТат СсСССССАДДаСССААДасСАСАСССТаАТОаАТСТО сбавАСсСССсСадАаталсстасатастаатаадтататсс

АсадапАССсСсТаААаТаААсТСсААттаатасатааАСасяь сатапААатаСАСААТасССААаАССААасСсСстТАаАдаАасаАА

САаТтТАСААСТОСАССТАССОСОТЯСОЯТОаСТОтоСсОаСтаТастТадссСаИт астасСсАССАааАТТааСсТаААСсаСАААСАсСТАСААаТтас

Таблиця 25

Послідовності біспецифічних двовалентних анти -ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

ААСИТаТтоСААСААХСсСасоСстасаАасССССАТССАДАдДОаА

ССАТСТОСААсСассСАалда,асассАаа,асста,асаАаСсСстАвата

ТАСАСССТОСССССТАаСАСАпАТаДасСстТаАССААСаААСс даататооСсталхсстатстСаТтаАААаастСстТАСССсСтТос вАТАТСЯССОЯТааААтТасаАсАаСААдСаасСАаСССадсА

АСААСТАСААДаАССАсссоссСстатаставАстоСаАСасо

ТСАТТСТТОСТатАСТСТАДаСТаАСАаТасАСААИ,ТоССа стасвСсдаСсАдаваСААдсатапстоста|астоСатаАТтасАСа

АСОССССТаСАСААССАСТАСАСССАСсСААХИатосСстаТатооста ттосссасасад,васссАаааАдттааСасАасаасацвАтосСа стастеасссасаАтотсассасСссатсаадтстал,аатасАастТ астапААТттТасссаАсаАастастасАаасССАавасасАТСТ стадсастатостасастастсбаасТтТАССТТСТОСАОаС

СсАсСаССАТОАХаСсТасатаСсасСсАЧаасСАСССОапАААдасАс таваААтТаса7ататСАаСсСАттасвасстосвасвАасСАатТАс тТАсСаССОаАтТАааСатаАдд,ааасСай ТСсАССАТСТСТОСаслал

ТААСАаСААДСААТАСТСОТаТАССТасСАаАТаААСТоССтТас ,аастТаААвАтТАсСсастататТАТТАСТаСсасСсСсАдасастась стааОаСААСТТСаАТАСсСТааааССАпаспААсССстатТаАс татстсадасастстатаассастсстоСатат САТСТТ

СсССАССТТоСбаАСадасАасСстААдатоСсаасСАСТасстота тса,7татасстастаААСААСТТСТАСССТСапаААасССАдДа стасдатТасААддатТаспАТтТААСсасоста|асСАаатоСаасСААСТ

СсССАапААтТоСсатадсСсадаСАааАСсТоСАдасАСАасСАс

СстТАСстТооСстТаАаСАаСАСССТаАСССТатТСсСААаассаАсСтТ

АСОАСАДаСАСААДСваИтатАсасстатаААаТаАСССАССА саасстатосСсАааСсССсСатаАССААатТосСТСсААсСсавсасса датас

МІ Сі -легкий ланцюг 1 192 і рукпеотидна див. таблицю 13 послідовність)

МІ СНІ-легкий ланцюг 2 (28НІ1) 215 (нуклеотидна див. вище послідовність)

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУЗСКАБИСТЕЗЗМАІЗМУУВОАРа

ОС ЕМ МОСТИ РІБЄЕТАМУМАОКЕОСАМТІТАОКОТЗТАУМЕЇ 55

І АБЕОТАМУМСАВУМУРУБУМ СОБєОММ СОТ МТУ55АВЗТК

СРБОМЕРІ АРБЗ5КОТЗИасСТААЇ аСІ МКОМЕРЕРУТУБМУМ5аИаА т

ЗОМНТЕРАМІ 05501 51 55 МРБЗББІ ЕТО МІСМУММНКРБ

МТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕАДССРОМГБІ ЕРРКРКОТ

ІГМІЗАВТРЕМТСУУМОУМ5НЕОРЕУКЕМУ УМССМЕМНМАКТКР (2087) / УНСНІ-важкий ВЕЕОУМОЗТУВУМ5МІ ТМ НОВУ МОКЕМКСКМУ5МКАЇ САРІ 223 ланцюг-(28НІ1) УНСІ. ЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І ТС МКагМРБ

РІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О5ОрОИБЕРІ КІ ТМОКБАМ

ОООММЕ5СОЗММНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І БРОС;СОССОЯВООСОЯСОСИ савасасйоЕМОЇ І ЕВОСИЇМОРОСБІ ВІ ЗСААЗагєтТЕ55НАМ

ЗМ УВОАРОаКаї ЕМУБАМАБаєОУМАрВУКОаВЕТІЗВОМОК

МТМ ОММ5І ВАЕОТАМУМСАКСУ аМмЕОУМмаоатІі Мт

ЗАБМААРОЗМЕІЕРРБОЕБОЇ К5ЗИатАБМУМСТ І ММЕМРАВЕАКМОМУК

МОМАГОБамМ5ОєВМТЕОО5КОБТУБІ 557 ТІ БКАОМЕКНКМ

МАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАОЕС

Таблиця 25

Послідовності біспецифічних двовалентних анти -ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА сд,аатТасСсААтатпа,асвадаттасасаХсаасттасТАСАаСо тасассватосСсТАсвАстотстатасСсАаСсСстТоСацпАТТСА

Ст АОаСАаТТАТаССАТОДОСТОСОСТоСсаССАааТастосСА сасвдада,асаеаастаадатаааТсТАасСтТАТТАСТаатТАаТта стастТАааСАСАТАСТАСаСАсаАСстоСатадлда,авсассаИтТо

АССАТСТОСАСАСаАСААТТССААСААСАСаТастТтатАТСТаСА вАТОААСАааСсСсТаладаССа,адасАСАСаасССОаТАТАТТАС татасастоАасата7аата|асттОаАСтТАстТасваасССАдОсаИ дасостаатсАассатстоаХлатастАаСАССАДавасссСАТ ссататосстотааСссСССсТсСАасСААХатстТАссттаасоа асАдсдассастотасаста|асстаТаААСаАСТАСТТОСОС сласстатаАдСсАд,атТатоСставпААСстотаасСсасссСтТадсСАТС саасаТасСАСАССТІ ТоСсАсСсТатастасаатостоСасос татастосстатостосатосатаасАаатассстоСАастосто таваСАСССАСАССТАСАТСТаСААСаТаААССАСАдаСос

ТоСААСАССАДОИаСТапАСАдаАдАдасТапААСССААаТтостТ аСОпАСААдаАСССАСАсСстТатоссСстаТатостТассссСстТадА астастасссассстТАаСататссСстТат ССССССААдасСс

СААДССАСАСССтТаАТаАТСТОССОСПАСССССаАдаТаАСсСТ ссатастаатасвАтТататоССАСаАдааАСССтТаААаТадА стТТсААтта7аатасатасАассаСатаавААаТасСАСААТаССА

АСАССАДасСсСстТАпАсаАасААСАСТАСААСТОСАССТАССО (СІ 0-563) умнеоні- аатастатосатастаассатастасСАССАспАТТаастаА важкий /ланцюг-(28Н1) АССаСАААСпАаТТАСААдатасСсАда,ататоСААСАдаасСостТ 224 |МНО. вапАдаСССССАТСИААААаАССАТСТССААЧСасСАдДасОас (нуклеотидна сдасстсасСсаАдасСсСсТАсататТАСАсоСстасссссСстТАасСАа послідовність) АдаАТтТадасСстаАССААайААССАасататосстаАсстатстоа

ТОААдаасСсТстТАССССТоСОАТАТСЯССЯТасСААТасада

АпВСААсаасСАаСССпАпААСААСТАСААСаАССАСССССо статастасАСТоСОаАСаасСТсСАТТСТТСОСТОаТАСТСТАдаС тТОАсАдатТапАСАдатосаатасСАа,аСАаа,авасСААСаТтатт стостТа|астоСатОАТасСАСаАдааСССтТасСАСААССАСТАСА

СсССАадАХаатосстатоостатстссасаоссАасваСапАсалд тотасвссаАдсаСсааАтссатстасасАттасвасваса стасвАтТоТтТалдсатТасаастаставААтотаасвсасвсАасАСТ сатаСбдассАасасасАтотталсвастатстасастастт сса,аасТттТАССТТСТоСАааСсСАСасСссСАТтТаХлатаватаСас

САдааСАСсоСааАААддавАСтавААтТасвататсСАасСсСАТСТ саасстоСа,асовАаСАатТАСтТАСсасСсСаАтТАаСатадАасаИ

СсСааТТСсАССАТСТСТСС,СИаСАТААСАССААСААТАСТСТИтТ

АостТа|асСсАпАТаААСстТосСстасСсасасСтТаААаАтТАССаТстата тТАТТАСТОаСОаССАДОСОаСсТаваставасСААСТТСОаАТТАСТОа сааСсСАсСаспААссстса;таастатстсалаСастсТатась ссастосстоСатаТТСсАТСТТОССАССТттоСадСадасАас тОАдАдатоСсаасАастассттаТатсаЇататасстасСстТаААСААС

Пп стТАСССТСОСООаАдасССААл,аа,атТтасАаТасАААДатТасйАТА дса,ассстаслатоСааСААСТоССАапААтоСсатаАССада

СсАапАСТоСАДапАСАаСАССТАСТОССТадасАасСАСССТ вАСССТатоСААасасССсаАСТАСаАСААССАСААдсаТтатАс

Таблиця 25

Послідовності біспецифічних двовалентних анти -ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА нн ЕЕ

СААССТОСТТСААССасасаасаАа тає

МІ Сі -легкий ланцюг 1 196 о суклестидна див. таблицю 13 послідовність)

МІ СНІ-легкий ланцюг 2 (28НІ1) 215 (нуклеотидна див. вище послідовність)

ЕМО ГГ ЕЗОСИЇ МОРОИБІ ВІ БСААБОЕТЕ55У АМОМУУВОАРО кКагЕММУ5БАІВаЗааВТиМАОБУКОаВЕТІЗВОМОКМТІ М ОММ

ЗІ ВАЕОТАУУМСАЇ ОМОАБєО УМ аОСсАЇ МТ У5БЗАВТКОаРОМЕ

РГАРББ5КОТЗОаСТААасі МКОМЕРЕРУТУБМУМЗИаАІТБамУнтТ

ЕРАМІ О5БИїЇ 5І 55 УРБББІ СТО ТМІСМММНКРОМТКМО

ККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕАДССОРБУГІ ЕРРКРКОТІ МІЗ А

ТРЕМТСУММОМЗНЕОРЕМКЕМУ УМрИаМЕМНМАКТКРАЕЕОУ (СІ 0-563) МНеОеНІ1- М5ТУВУМУБМІ ТМ НОВУ МЕКЕМУКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІВК 225 |важкий ланцюг-(28Н1) АКООРВЕРОМУУТІ РРОВОЕЇ ТКМОУБІ ТС УКИЕМРЗОІАМЕМУ

МНО. ЕЗБМСОРЕММУКТТРРМІ О5ВОаБЕРІ УК ТУЮОКВАМОСаММЕ

ЗС5УМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5І БРСОСССОЇСЗОСВОСБИССОВБаИасвяаї а5ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОССИБІ ВІ БСААБИаЄТЕЗ5З5НАМОУМУВОА

РОКИ ЕММУ5АМ АБавЕОУМАоЗУКОаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОМ

МО ВАЕОТАУУМСАКСОМІ СМеЕОУМ,ОС,ТІ МТМЗ5АБМААРБ

МЕІЕРРБОЕОЇІ КБатАБМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОУУКМОМА О5

СМБОЕЗБМТЕООБКОБТУБІ 55ТІ ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕМТН

ОСІ 55РУТКЗЕМАОЕС сд,аатТасСсААтатпа,асвадаттасасаХсаасттасТАСАаСо тасассватосСсТАсвАстотстатасСсАаСсСстТоСацпАТТСА

Ст АОаСАаТТАТаССАТОДОСТОСОСТоСсаССАааТастосСА сасвдада,асаеаастаадатаааТсТАасСтТАТТАСТаатТАаТта стастТАааСАСАТАСТАСаСАсаАСстоСатадлда,авсассаИтТо

АССАТСТОСАСАСаАСААТТССААСААСАСаТастТтатАТСТаСА вАТОААСАааСсСсТаладаССа,адасАСАСаасССОаТАТАТТАС татасатСссАсата7астосатСсаАСтТАСсТааваасССАДОС (СІ. С-564) уненя- ААсСсоСсСТОИаТсАСсССОСТотоаАа,атТасСстТАасСАССААдавасСсСсСАТ важкий ланцюг-(28НІ1) ссататосстотааСссСССсТсСАасСААХатстТАссттаасоа 226. |УНСІ. асАдсдассастотасаста|асстаТаААСаАСТАСТТОСОС (нуклеотидна сласстатаАСсАд,атТатоСставпААсттаасСсасссСстТадсСАТС послідовність) саасаТасСАСАССТІ ТоСсАсСсТатастасаатостоСасос татастосстатостосатосатаасАаатассстоСАастосто таваСАСССАСАССТАСАТСТаСААСаТаААССАСАдаСос

ТоСААСАССАДОИаСТапАСАдаАдАдасТапААСССААаТтостТ аСОпАСААдаАСССАСАсСстТатоссСстаТатостТассссСстТадА астастасссассстТАдасатат т ссСстТат ССССССААдасСс

СААДССАСАСССтТаАТаАТСТОССОСПАСССССаАдаТаАСсСТ ссатастаатасвАтТататоССАСаАдааАСССтТаААаТадА стТТсААтта7аатасатасАассаСатаавААаТасСАСААТаССА

АСАССАДасстТАаАсАсасААСАсСТАСААСТОСАССТАССС

Таблиця 25

Послідовності біспецифічних двовалентних анти -ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА сатеататосатастаадсСсста|астасСсАсСАапАТТааСтТаА

АС,ВССАААДСаАИаТАСААДаТасАДааТатСсСААСААаасСсстТ вапАдаСССССАТСИААААаАССАТСТССААЧСасСАдДасОас сдасстсасСсаАдасСсСсТАсататТАСАсоСстасссссСстТАасСАа

АвАТадаСтТаАССААаАдАССсАсататосстаАсста|атстоса

ТОААдаасСсТстТАССССТоСОАТАТСЯССЯТасСААТасада

АпВСААсаасСАаСССпАпААСААСТАСААСаАССАСССССо статастасАСТоСОаАСаасСТсСАТТСТТСОСТОаТАСТСТАДаС тТОАсАдатТапАСАдатосаатасСАа,аСАаа,авасСААСаТтатт стостТа|астоСатОАТасСАСаАдааСССтТасСАСААССАСТАСА

СсССАадАХаатосстатоостатстссасаоссАасваСапАсалд тотасвссаАдсаСсааАтссатстасасАттасвасваса стасвАтТоТтТалдсатТасаастаставААтотаасвсасвсАасАСТ сатаСбдассАасасасАтотталсвастатстасастастт сса,аасТттТАССТТСТоСАааСсСАСасСссСАТтТаХлатаватаСас

САдааСАСсоСааАААддавАСтавААтТасвататсСАасСсСАТСТ саасстоСа,асовАаСАатТАСтТАСсасСсСаАтТАаСатадАасаИ

СсСааТТСсАССАТСТСТСС,СИаСАТААСАССААСААТАСТСТИтТ

АостТа|асСсАпАТаААСстТосСстасСсасасСтТаААаАтТАССаТстата тТАТТАСТОаСОаССАДОСОаеСсТавааставасСААСТТСОаАТТАСТОа сааСсСАсСаспААссстса;таастатстсалаСастсТатась ссастосстоСатаТТСсАТСТТОССАССТттоСадСадасАас тОАдАдатоСсаасАастассттаТатсаЇататасстасСстТаААСААС

Пп стТАСССТСОСООаАдасССААл,аа,атТтасАаТасАААДатТасйАТА дса,ассстаслатоСааСААСТоССАапААтоСсатаАССада

СсАапАСТоСАДапАСАаСАССТАСТОССТадасАасСАСССТ вАСсССТатоСААлааССаАСтТАСаАСААаСАСААдсататАс асстТатадАдатаАСССАСсСсАасаса,аасстатоСАассоСатТаАс

СААССТОСТТСААССасасаасаАа тає

МІ Сі -легкий ланцюг 1 200 нуклестидна див. таблицю 13 послідовність)

МІ СНІ-легкий ланцюг 2 (28НІ1) 215 (нуклеотидна див. вище послідовність)

ЕМО ГГ ЕЗОСИЇ МОРОИБІ ВІ БСААБОЕТЕ55У АМОМУУВОАРО кКагЕММУ5БАІВаЗааВТиМАОБУКОаВЕТІЗВОМОКМТІ М ОММ

ЗІ ВАЕОТАУУУСАБОМаРЕОММ ОСТІ МТГМ55АВБТКаРОМЕР

ГАРБЗКОТБИаСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБМУ МИХ Т5аМНтТЕ

РАМ О55БОИЇ М5І 55 МРБББІ ЕТО МІСМУМНКРОоМТКМОК

КМЕРКЗСОКТНТОСРРСОРАРЕДАСОРБМУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТР

(СІ. С-564) уненя- ЕМТСУММОМЗНЕОРЕМКЕМУ УМВС МЕМНМАКТКРАЕЕОММ5 227 |важкий ланцюг-(28НІ) ТУВММУМ5МІ ТМ НОМ МЕОКЕМКСКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАК

МНС. СОРВЕРОМУТІ РРОВОБЇ ТКМОМ5І ТС МКОЕУРБЗОІАМЕМ Е5

МИасотТЕММУКТТРРМІ ОБОС5ЗЕРІ ЗК ТМОКЗАМОС,ММУЕо

ЗММНЕАЇ НМНУТОКБІ 5І БРООСССОЯЗчИВСО,ЗИСОвасао

ЕМО ЕЗОССИЇ МОРОИБІ ВІ БСААБОЕТЕ55НАМОУУВОАРОа

КагЕМУУ5АМАБЗаєОУМАрзУКОаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОММ5

ІГВАЕОТАУУМСАКОСУМ МЕ УМ СОСТІ МТГМ55АБМААРБМЕ

ІЕРР5ОЕОЇ КБатАБММУСІ І ММЕМРАЕАКМОМКМОМАГОБаМ

ЗОБЗМТЕОр5КОБЗТМ5І 55 ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ.

Таблиця 25

Послідовності біспецифічних двовалентних анти -ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА 11111111 155РУТКЗЕМВОЕСЇГ/: 77777777

Всі гени короткочасно експресували під контролем химерного промотора МРБМ, що складається з коров'ячого промотора МР5ЗУ, об'єднаного з енхансерним фрагментом промотора

СММ. Експресійний вектор містив також ділянку огіР для епісомальної форми реплікації в клітинах-хазяїнах, що містять ЕВМА (ядерний антиген вірусу Епштейна-Барр).

Біспецифічні анти-ОХ40, анти-РАР-конструкції одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліетиленіміну. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами в співвідношенні 1:1:1 ("вектор важкого ланцюга": "вектор легкого ланцюга": "вектор легкого ланцюга").

Для одержання в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х д і супернатант замінювали попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО до досягнення кінцевої кількості ДНК 200 мкг. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ, переносили в 500-мілілітрові збовтані колби та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 96 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали їмММ вальпроєву кислоту і 7 956 Ееєй. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 15 хв при 210 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22-мікрометровий фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./об.) та витримували при 4 "с.

Очистку біспецифічних конструкцій з супернатантів клітинної культури здійснювали за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А згідно з методом, описаним вище для очистки злиттів антиген-Ес і антитіл.

Білок концентрували і фільтрували перед завантаженням на колонку Ні оай Супердекс 200 (фірма СЕ Неайвсаге), врівноважену розчином, що містить 20мМ гістидін, 140мМ Масі, рН 6,0.

Концентрацію білка визначали на основі вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм з використанням коефіцієнта молярної екстинкції, розрахованого на основі амінокислотної

Зо послідовності. Чистоту і молекулярну масу біспецифічних молекул аналізували за допомогою

КЕ-ДСН в присутності відновника (фірма Іпмігодеп, США) або без нього за допомогою пристрою

Гарспірахі! (фірма Саїіре!). Вміст агрегатів в зразках аналізували, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації ТЗКодєї 23000 МУ Хі (фірма То5ой), врівноважену рухомим буфером, який містив 25мМ К»НРО», 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./об.) Мам», рН 6,7, при 25 76.

Таблиця 26

Дані біохімічного аналізу наведених як приклад біспецифічних двовалентних анти-ОХ40/анти-

ЕАР антигензв'язуючих молекул в форматі ІДС! РЗ2ОСІ АГА лон ї . мг/лі ЩО відновника) відновником)

З,2 Чо (114 кДа) 8НО/ЕАР РЗ29СІ АГ А да 58 100 95,3 Фо (254 кДа) 71,3 Уо (90,7 кДа) 2-2 З Чо (237 кДа) 13,3 95 (28,9 кДа) 11,9 95 (26,2 кДа

Таблиця 26

Дані біохімічного аналізу наведених як приклад біспецифічних двовалентних анти-ОХ40/анти-

ЕАР антигензв'язуючих молекул в форматі ІДС! РЗ2ОСІ АГА лон ї . мг/лі ЩО відновника) відновником)

З о (116 кДа) 49В4/РАР РЗ29ИЇ АГА да о 71,4 У (92 кДа) 242 17 Зв, е(253кДа) | 12995 (28,9 кДа) 12,1 95 (25,7 кДа 93,9 9» (234 кДа) 55,5 95 (90,6 кДа) 1,2 У (244 кДа 21,6 95 (25 кДа 91,5 95 (244 кДа) о 20В7/БАР РЗОСІАГАЮСІ| 972 2,3 95 (227 кДа) МА (89 кДа) ; о (27 кДа) 2-2 1,4 у (218 кДа) 25 95 (24 кДа) 1,5 95 (202 кДа 4.2 Створення біспецифічних одновалентних антигензв'язуючих молекул, мішенями яких є

ОХ40 і фібробласт-активуючий білок (ЕАР) (формат 14-41)

Одержували біспецифічні агоністичні антитіла до ОХ40 з одновалентним зв'язуванням с

ОХа0 і ГАР. Технологію Сто55таб, описану в міжнародній заявці на патент УМО 2010/145792 А1, застосовували для зниження утворення неправильно спарених легких ланцюгів.

В цьому прикладі "схрещений" модуль Бар (МНС) зв'язуючого ЕАР агента 28НІ зливали з важким ланцюгом пиЇдс1і, який містить "западину". Бар проти анти-0ОХ40 зливали з важким ланцюгом, який містить "виступ". Комбінація націленої конструкції анти-РАР-Ес, що містить "западину", з конструкцією анти-ОХ40-Рс, що містить "виступ", дозволяла одержувати гетеродимер, який включав ЕГАР-зв'язуючий Раб і ОХ40-зв'язуючий Га (фіг. 12Б).

Інтродуковали мутації РгоЗ29Сс1у, Іец234Аїа і Іец23Б5БАїа в константну ділянку важких ланцюгів для елімінації зв'язування з рецепторами Ес гамма згідно з методом, описаним в опублікованій міжнародній заявці на патент УУО 2012/130831 АТ.

Одержана біспецифічна одновалентна конструкція представлена на фіг. 12А, а нуклеотидні і амінокислотні послідовності представлені в таблиці 27.

Таблиця 27

Послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі дс1 РЗ2гОСІ АГА Кін вААХастТасадастТастасвААатосвассааАсасстаатасА ссстааСсасвАТоТоТаАСсАСсСТатТостТасасс,асстоСас

СсТТсАССТІСТоСТоССАСОСсСАТаТОСТОСИтТоСОАСАС сстостаасСАААла,оСстаавАатасвататСассСсАТСТас ссстосааСсаАдаСсАаТАСТАСОССсСсаАСстТотТаТатадлааас саатТСсАССАТСТОССОаваайАСААСТССААаААСАСССтТа тТАССТаСАВАТаААСТОССТОСОСОИССсАа,аАСАССаИсс (г8НІ) МНС -важкий стТатТАСТАСТИаТаССААдасастааставасСААСТТоаАСс 228. | ланцюг із "западиною» тАСТВОСССАСАССеСАСссСсТасстоАассататоСсАаасИаст (нуклеотидна послідовність) дасатаасСастосСАаСаТаТТСАТСТТСССАСССАСС вАСОСсАасССсАастадалатосавасАсАаассАаасатаатата сстТасСстаААСААСТТСТАССсСсССсСсОоСсаАлаассСсАдаатасА стааддаатТасвсАСААсасосСстасАааадасаасСААСАасСо давААтТосатадсСсадасСсАаааАСсАаСАдасаАСТоСАСс тТАСАСССТОаАааСсАаСсАСсоСстадсостадасСААлаассяА

СстТАСОАЧддасСАСААСИЯТатасасстасСссвААаатаАсос дослдасе7асстатосдасссСсатаАССАдадластТСААСС ссаасссАааТтасСсоАСААдаАСССАСАСсСстТатоссосттасс

Таблиця 27

Послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі дс1 РЗ2гОСІ АГА Кін стассоСтТаАдАдаестастаатаасоостсоСсататостатт

ССССССАААаСССАдапАСАСССТаАтТаАтоАаССацА соссСбаАдатаадсстасата,атаатоаАТаТататосСАСС

АдапАсоСТаААдатТаААаТТСААТттаатТАСсатасАссас стапАддатТасСАСААТасСААаАССААдасСсасцваавАсасА есСАаТАСААСАаасСАСсатАссататастАаатостСАС са,атоСтасСсАССАаССсАСТОасСтТаААтТааСААааАатАСА датТаСАдДааТСсТоСААСААдАа,асоСствасасСССССАТССЯ

АПВААААССАТСТССААДАаССАААла,асасАассссаАсАА

СсСАСсСАсСататасСАасостТассссССАТОСССЯССССАТаАастТа

АССААСААССАсИатоа,асстотса7атасаСАаТСАААСс

СсТстТАТСССАаСаАСАТСОЯСССОЯТасАаа,атаааАапАасСАА тасасдасСбацвАпААСААСТАСААаАССАСасстосса таставАСТоОСЯаАСсвастостєттсєтСатаАасСАлас тТсАССОЯатТапйАСААсСАаСАасата,сбА,аСА,сацпААСатТо

Пп стТоАТОаОСТОСОИатТаАТаСАТаАдааСтТоТасСАСААССАС тТАСАСОЯаСАпААдсСАаасстотосСстаТатстоСасстТААА (28НІ1) МІ СНІ -легкий 215 |ланцюг 2 (нуклеотидна| див. таблицю 25 послідовність)

ЕМО ГЕЗССИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗИаЕТЕЗЗНАМОУУВОА

РОаКаГЕМУБАМ АЗаєЕОУМАрзуУкавеЕтІізвоМКкМтІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАУУУСАКСУМ СОМЕО ММ ПОСТІ МТУ5БА5

МААРБУРІЕРРБОЕОЇ К5ИаТАБМУМСІ І ММЕМРВЕАКМОМУК

МОМАГОБаМЗОЕЗУТЕООЗКОБЗТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКН 229 (28НІ1) МНОЇ -важкий КУХАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАвЕСОКТНТСРРОРАРЕАА ланцюг із "западиною» саРЗМЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУММОУМЗНЕОРЕМКЕМ

М УУрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУАУУМІ ТМ НОВУМІ.

МОаКЕМУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМСТІ РРЗА

РЕСТКМОМ5І ЗСАУКИа ЕМ РБЗОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТР

РМ ОБразЕР ЗК ТОКЗАМОС,МУЕЗСЗУМНЕАЇ НМ

НУТОК5БІ 5І 5РОК ланцюг 2 сАсатасСсААатаатасаастотаасавастаАаатаААпАА сстасатсСтосатААдсаТсТоСТасСсААавасстоСася

АпдасСАСАТТсАааСАаСсСтТАСастТАТААЛаСТОвСатТасСсаАСА сасосоСстасАСАдаСсаестовАатасАата,саАа,ацАТСА

ТОоССТАТСТТТОИСТАСАС,САДАСТАСИаСАСАСАДИТТОС даса,асАдапаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадаС

АСАаССтТАСАТОСАССТОАа,аСАаасстаАаАтТоТадасА сАсСсасСсататАТтАСсСТатТаСаАаАСвААТАСсСВ!аТТацАТ (8НО) УНеСНІ-важкий ССАСТАСТОСОСаССААдаСапйАССАССатТаАсСа,атостосто 302 |ланцюг з "виступом» асСстТАасСАССААЛСОССЯЯСССТАОаСатаТаттосстстаасоссо (нуклеотидна послідовність) ТААСАССААсСАаСАСААатасАааААСАаССа7аСостас сстасстаатТСАдавАСТАСТТОСССОСЯАаСОоССстТаАССа татоСбтасААТТОТООСсаСССТаАСААдаСавасатасСАСА

СсАТТТоСАССсСсатастасАасАаа,аСАаа,аСсвасстатАСТОоТо тадаСбАассстса,атаАассатассстстаастттаТацвасСА

СССАВАССТАСАТСТаСААСИаТаААССАСААдаСССАаСА

АСАССААдА,аТтаспсАСААдаААсатацпААСССААвАаСТас пАСААпАСССАСАССТОТоСсСССТТа,аСсоСстТассссСтТаАА ссостастаатаасСсСстоСаТатат ТОСТатсСсССССАДАаС

Таблиця 27

Послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі дс1 РЗ2гОСІ АГА Кін

ССАДИСАСАСССтТаАТаАТтСАаССапАСССССапАдА,тТа достасатаатастаАтТаТатаТСССАСадааАССсСтТаАдА астТаААаТсСААТттаатТАсастасАаСааоатасААаТасСАс

ААТасСсСААаАдСсСАХдассаСа,ааадасАасСАсТАСААСАС

СсАсСатТАссСатаТатаатСАасСаТссСТСАССИаТСосСтТасАССА садстапСсТаААтТааСААдаспАаТАСААа,атасАдсатст

ССААСАДАассоСстовасасссосССАТССАСаСААААССАТСТ

ССАДДаССАддасвасАасссССаАспААССАСАааТтатАс

АсостТ,ассссССсАТаСсСсОвааАТаАдаСтТаАССААСААССА сатодасстатаатТасстайТСАААаасСТсСтТАТСССАС

СсОАсСАТСЯССОЯТОСАсаСТаасАпАаСААтТасасАасСося

АСААСААСТАСААСАССАсасстоссастаставАСТоСа

АсаТ,аастосТстТссСТСстТАСАаСАдасСстТСАССатасАСА д;адасадсатасАдаСАаааапААСаТтсТстТСАТастосСа

ТОАТаСАТОАДСаСТСТаСАСААССАСТАСАСасАадАс дассТоТоосТатстСасатТААА (нуклеотидна послідовність)

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

РОС ЕМ МастПпРІБЄИТАММАОКРОСАМТІТАОКОТЗТАУМ

ЕГ55І ВБЕОТАУУУСАВЕУХСМУ МО МУ СОЮ, ТТ УТ

АБТКОаРБМЕРІ АРОБКОТЗОСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБМУ

МИХ! Т5аМНТЕРАМІ 05501 У5І 55 МРБОББІ С ТОТМІС 303 (8НО) МНеОНІ-важкий МУИМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕАДСОа РОМ ланцюг з "виступом» ЕГЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСМУМОМЗНЕО РЕМКЕМУУ УМО

СМЕУНМАКТКРАЕЄєОММОТМАУМБМІ ТМ НОВУ МЕКЕМ

КСКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОМУТІ РРСОВОБЇ ТК

МОМ5БІ СІ МКОЕМРБОІАМЕЖМЕЗБМООРЕММУКТТРРМІ 05 равггм5кІіГМКЗАМООСМУЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК

ЗІ БІ 5РаК до7аатаСсААтсеата7асалатстасаасТаАдааТаААсСААа сставатостосатаАдАдсатстСстасСАдлаасСстоСасА свасСАСАТТсАдаСсАасСтТАСаТсСтТАТААДОСТОСаТассаАСАсС асооСстТаАСАдАлссастосаатааАатааадасаАтТСАТ

СССТАТСТТ ТИИТАСАССААДАСТАСаСАСАСААИТТОСА сааСсАдапаТСсАССАТТАСТаСАСАСАААТССАСОаАаСА

СсАассСстТАСАтТасластадаСАааСсСсТАаАтоТадасАСс

АдосассатТатАТАСТатТасСсаАаАСААТАСТАСССЯТОаваИт сбатАСаАСТАСТОСОасССААа,асаАССАсСса,атаАссато (4984) УНСНІ-важкий ТОоСТСАСТАаСАССААЛСССаСсССТАОаВСсатТаТаттосстотаС 230 | ланцюг з "виступом» ссСтТАаСАаСААаАаСАСсААда,атТасАасААСАаССасСс (нуклеотидна послідовність) стасвастасстааТтСААааАСТАСТТОСССОбАчааСсССаТата

У д д АССОТОТССТОСААТТСТОССОСССТОАСААсСОосСсТО

САСАСАТТТоСАСССОЯТаСсТасСАсСАа,аСсАа,аСвасстатАс тсототадасАа,ссатсаталсс,ата7ассстстАастотосТа васСсАСССАСАССТАСАТСТаСААСИаТаААССАСАДИаСОс

АССААСАССААДатТапйсАСААдадАдастасААСССАдадаИ

СстТаСОпАСААпАСССАСАССТИтТоссоСсттассстаСосс тадаастастастааоостсосатат Стат сСССсСсСА

ААДАЧСССААСаАСАСССТаАТаАтТоАаССасАсССССсСаА датаасстасатаастаатсаАдтататоСсСАСаАаспАСос

ТаААаТтаААатТТсСААТТастТАСсатасАСааСаТаспсААаИтТ

Таблиця 27

Послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі дс1 РЗ2гОСІ АГА Кін вСАСААТаССААдаАССААлаСсСассапАпаАаСАаТАСА

АСАааСАСОСТАССЯТатаастоАаа,аСатостсАссатостас

АССАсСОсАСстТааСтТаААтТааСАда,апАаТАСААдаТтасСсААс аТСТоСААСАААХа,ассстовасасССССАТОСАСААААСС

АТСТОСААДДаССААдАасСаасАассссцвАпААССАСАСИтТ атТАСАСССТАСССССАТаСССОааАТаАдасСтТаАССААСАА ссАаса;атса,асстата,атасстайТСАААвастТСстТАТОС сАдаСспАСсАТССЯССССОСТОаА,атТасаАдс,сАаСААтТасасСАас

СапАпААСААСТАСААаАССАСсасстсюсатастацАСТ сСбаАСсССасСТОСТСсТоСТотТАСАаСААасСтТСАССа ас

АСААСАа,САасата,сАа,аСА,аасасаААСаТтСсТСсТСАТОаС тосатаАтТасСсАТаАдааСтТоТасСАСААССАСТАСАСасСАс

ААдсСвАаа,асстстосстТатстоСасатТААА (4984) МІ СІ -легкий ланцю 184 |1 (нуклеотидна)| див. таблицю 13 послідовність)

ОМОЇ МОБЕАЕУККРОЗЗУКУЗСКАВОСТЕЗЗУАІЗУМУМВОА

РОС ЕУМСИаапПРІБЄТАММАОКЕеОСАМТІТАОКЗТЗТАУМ

ЕГ55І АВАБЕОТАУУУСАВЕУУВаРУИЮУУСООСТТУТУЗо

АЗТКОаРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБМУ

МОаАЇ ТЗамМНТЕРАМІ О5501І 51 55УУТУРБЗБІ ТОМІ 231 (4984) УМНеОНІ-важкий МИМНКРУОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТОСРРОРАРЕАДСИа РОМ ланцюг з "виступом» ЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУММОУМЗНЕОРЕУМКЕМУ УМО

СМЕМНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВУММІ ТМ НОСУМІ МОКЕМ

КСКМЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКЕИОРАЕРОМУТІ РРСОВОЄСТК

МОМ УСІ УКЕЕМРЗОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5 разгЕг мк тМокЗАМООСММЕЗСЗУМНЕАІНМНУТОК

ЗІ БІ РОК сАсатасСсААатаатасаастотаасавастаАаатаААпАА сстасатсСтосатААдсаТсТоСТасСсААавасстоСася

АпдасСАСАТТсАааСАаСсСтТАСастТАТААЛаСТОвСатТасСсаАСА сасосоСстасАСАдаСсаестовАатасАата,ааАсацАТСА

ТОоССТАТСТТТОИСТАСАС,САДАСТАСИаСАСАСАДИТТОС даса,асАдапаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадаС

АСАаССтТАСАТОСАССТОАа,аСАаасстаАаАтТоТадасА сАСсССсСОаССсСсОатТатАТТАСТаТаСаАСаАСААТАСИаСТТСтТАТ ааАСТАСсТаСссасСААдаааАССАССатаАсСа,атостосто дастТАаСАССААдсааоостАасатагоссттааоооо (104) УНеОНІ-важкий ТАаСАаСААдСАаСАСААастТасАа,сААСАаССасостоас 232 | ланцюг з "виступом» сстасстаатТСАдавАСТАСТТОСССОСЯАаСОоССстТаАССа (нуклеотидна послідовність) ТИТОоСтТасААтсотаасассстТаАСААлаСааСатТасСАСА

СсАТТТоСАССсСсатастасАасАаа,аСАаа,аСсвасстатАСТОоТо тадаСбАассстса,атаАассатассстстаастттаТацвасСА

СССАВАССТАСАТСТаСААСИаТаААССАСААдаСССАаСА

АСАССААдАд,аТтасАСААдаААсатацпААСССААвАаСТас пАСААпАСССАСАССТОТоСсСССТТа,аСсоСстТассссСтТаАА сстастаатсаасссттоСсататгсСТатСсСССССАДАСС

ССААдапАСАСССТаАТаАтТсАаСсСапАСССССпААатТа достасатаста,атадтататССАСаАааАСССтТадА астТаААатТТСААТТаатТАсСатацвАаСса,сасатапААаТасАс

ААТаССААпаАССАд,асСса,аСасаАааАасСАсТАСААСАС

Таблиця 27

Послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі дс1 РЗ2гОСІ АГА Кін

СсАсСатТАссСатаТатаатСАасСаТссСТСАССИаТСосСтТасАССА садстапСсТаААтТааСААдаспАаТАСААа,атасАдсатст

ССААСАДАассоСстовасасссосССАТССАСаСААААССАТСТ

ССАДДаССАддасвасАасссССаАспААССАСАааТтатАс

АсостТ,ассссССсАТаСсСсОвааАТаАдаСтТаАССААСААССА сатодасстатаатТасстайТСАААаасСТсСтТАТСССАС

СсОАсСАТСЯССОЯТОСАсаСТаасАпАаСААтТасасАасСося

АСААСААСТАСААСАССАсасстоссастаставАСТоСа

АсаТ,аастосТстТссСТСстТАСАаСАдасСстТСАССатасАСА д;адасадсатасАдаСАаааапААСаТтсТстТСАТастосСа

ТОАТаСАТОАДСаСТСТаСАСААССАСТАСАСасАадАс дассТоТоосТатстСасатТААА (нуклеотидна послідовність)

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

РОС ЕМ МастПпРІБЄИТАММАОКРОСАМТІТАОКОТЗТАУМ

ЕГ55І АВБЕОТАМУУСАВЕУМС ЗМО МУ СОЮСТТУТУ55

АБТКОаРБМЕРІ АРОБКОТЗОСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБМУ

МИХ! Т5аМНТЕРАМІ 05501 У5І 55 МРБОББІ С ТОТМІС 293 (104) МНеОНІ-важкий МУИМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕАДСОа РОМ ланцюг з "виступом» ЕГЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСМУМОМЗНЕО РЕМКЕМУУ УМО

СМЕУНМАКТКРАЕЄєОММОТМАУМБМІ ТМ НОВУ МЕКЕМ

КСКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОМУТІ РРСОВОБЇ ТК

МОМБІ МС МКОЕМРООІАМЕМЕБМСООРЕММУКТТРРМІ 05 равггм5кІіГМКЗАМООСМУЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК

ЗІ БІ 5РаК

СсАасатасСААдта7аатасаатстааавастАааТаААСАА асестасатостсаатадАдсатстостасСсАдл,асстосоаа

АпаСАСАТТСсАаСсАастТАСастТАТАДОСТОСОаТасСсаАСА сасоостТапАСААлсаастосвсАстТасАатаавАаасАТСА

ТОоССТАТСТТ ТИСТАСАИаСАДАСТАСОСАСАСААИтТТос дасаСАдаспаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадас

АСсСАаССТАСАТОСАССТаАдаСАассСсТаАаАТСТадацА сАссассатаТАТАСТатасСсаАаАаТТААСТАСССаТтА

СсТсттАСТаСОаТОАСТТСаАСТАСТОСОСОаССААдсСаТсАс сАссатаАсСатсТоСстсАасСстТАаСАССАДапаСасСсСсСтТАс сататсосстотавссСсСстТАаСАаСААпАаСАСАдИа Та (2087) УНеНІ-важкий АдсдаААдсдассасостасвсастасстааТСАдДасСАСТАСТТ 234. | ланцюг з "виступом» ссос,аласссаталссататстапААтсотаасассст (нуклеотидна послідовність) вАСАдаСсаа,асСсатасСАСАСАТІ ТОСАаСсСсатастасСАсАс

У д д САаСООССТОТАСТСТСТОАОСАССОоТСстТОоАССатТОСс стстТАаастотстТаасСАСССАСАССТАСАТСТаСААСИТт

СААССАСААДасСсССАаСААСАССААДАатаайАСААДаААса тТапААСССАдадастТасСсаАСААаАСССАСАССТаТатосос стта,асостасссСстаддастастастаассстосатаТтт

СсСТаТтоСССССАААаСССААСаАСАСССТОаАТаАТСАС сбапАСсСсСССадАаталсстасатаатаатаАтатато

СсСАСсСадОапАСССтТаААаТаААаТТСААтаатАСатааА саасаТапААаТасСсАСААТаССААСАССАдаССсасасся

Ад,ааАдаСсАаТАСААСАаасСсАсатАссататаатСАаСато

СсТсАсСсатоСсТасСсАССАасаАСстТааСсТААтТааСАдасАС

ТАСАДСИТасСААДаатТоТоСААСАдАассстоваСаСоСсс

Таблиця 27

Послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі дс1 РЗ2гОСІ АГА Кін

АТССАСАДААССАТСТОССАААаССААдАс,Саа,асСАасСоССса

АПВААССАСАпСататТАСАсостасрсссєсАТаССсвавАТОА аСстТаАССААпйААСсСАсва,атоАа,асостататасстаатТСАА

АвдастТСстТАТСССАаСОсАСАТСЯССОЯТасАатасоаАцАса

СААТОСОССАааССа,апАпААСААСТАСААЧАССАСассто сса,атаставАСсТоСаАсааСТОСТ СТ оСТотТАСАаСА дастоАсСатапйАСААлаАааСАасата,абАа,аСА,асацААС аттсТсАТаСТОСОСТтТаАТаСАТИаАСаСастоТасСАСААДС

САСТАСАСОИСАпААсСАасСстотосСстаТатстоСасстТААА (2087) МІ СІ -легкий ланцю 192 |1 (нуклеотидна)| див. таблицю 13 послідовність)

ОМОЇ МОБЕАЕУККРОЗЗУКУЗСКАВОСТЕЗЗУАІЗУМУМВОА

РОС ЕУМСИаапПРІБЄТАММАОКЕеОСАМТІТАОКЗТЗТАУМ

ЕГ55І АВАБЕОТАУУУСАВУМУРУИЗ УМ СОЮЕОУМСОС,ТТУТМ

ЗЗАЗТКОаРОЗМЕРІ АРЗЗКЗТЗИасТАА СС МКОУЕРЕРУТУВ

ММЗаАЇ ТЗаУНТЕРАМІ О55О01 51 55УМТУРЗББІ ИТОТУ 235 (2087) МНеОНІ-важкий ІСМУМНКРУОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТОСРРОРАРЕАДОСРО ланцюг з "виступом» МЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУММОУЗНЕОРЕМКЕМУУ УМ рРОМЕУНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВУММІ ТМ НООУУЛІ МОаКЕ

УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУУТІ РРСВОЕЇ Т

КМОМУБІ М СІ УКаЕМРЗОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОЮ зразеЕнг Ук ток АМОСОСММЕЗС5УМНЕАСНМНУТО

Кб 5І РОК сластасСсАдАататта,асааттасавсаАдсаасттаатТАСАС сставсссатосСстаАаАстотостТа7атасдасстоСааА

ТТ?сАССТТтТАаасАатТАтТассСАТаАлаСставатоСасСАс аСстоСАсапААд,асасастасвсАаатаватсТСАастАТТАСТ сатлатастаатТАаСАСАТАСТАСаСАсСАСТоСатаААа саббаатТСАССАТСТОСАСАСАСААТТОСААСПААСАСОа статТАтТотасСАпАтТаААСАа,аССстТад,вАассаАдацпАСАС сабСбатАТАТТАСТОТаОСОСТТОсАСсСсТтаатТастттосаА

СстТАСТаОСОСаССААлсСаАасостааТСсАсСсатстосАаТт аСстТАаСАССААдссассстАаасСсататоостстаассост дасАдаСсААаАдаСАСААдатасАаа,сААСАа,асасссставо стасСтапТСААдасаАСТАСТТОоСССОСАсСооСатаАССат (С10-563) УнНСсСнНІ-важкий СТОСТапйААТТОоТОСОСаСССТаАСсАда,аса,вассТасСАСАС 236 |ланцюг з "виступом» АТтттоСсАаа,асСсатастасСАасАаа,аСАаа,ассасстТатАСТСТОСТ (нуклеотидна послідовність)! САС!САССЯтостаАасса,атассстстАастттасасСАс

ССАВАССТАСАТСТаСААСОИСТИААССАСАДаСССАаСА

АСАССААдАд,ТтасАСААдаААсатапААСССААвАаСТас пАСААпАСССАСАССТОТоСсСССТТа,аСсоСстТассссСтТаАА сстастаатсаасссттоСсататгсСТатСсСССССАДАСС

ССААдапАСАСССТаАТаАтТсАаСсСапАСССССпААатТа достасатаста,атадтататССАСаАааАСССтТадА астТаААатТТСААТТаатТАсСатацвАаСса,сасатапААаТасАс

ААТаССААпАССАд,асСсаСасаАапАаСАсТАСААСАС

САССтТАСССТОаАтТаатоАаСатосСстСАССатоСстТасСсАССА саАастаасСстТаААтТааСАда,авАаТАСАдаТтасСААааТтст

ССААСАААДасоСстоса7асасССССАТССВАСААААССАТСТ

ССАААдаССАдда,асасАаасссЄаАсвААССАСАсаа ТаТАС

Таблиця 27

Послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі дс1 РЗ2гОСІ АГА Кін

АсостТ,ассссССсАТаСсСсОвааАТаАдаСтТаАССААСААССА сатодасстатаатТасстайТСАААаасСТсСтТАТСССАС

СсОАсСАТСЯССОЯТОСАс,СТаасАпАаСААтТаса,асАасСося

АСААСААСТАСААСАССАсасстоссастаставАСТоСа

АсаТ,аастосТстТссСТСстТАСАаСАдасСстТСАССатасАСА д;адасадсатасАдаСАаааапААСаТтсТстТСАТастосСа

ТОАТаСАТОАДСаСТСТаСАСААССАСТАСАСасАадАс дассТоТоосТатстСасатТААА (СІ 0-563) МІ СІ -легкий 196 |ланцюг 1 (нуклеотидна| див. таблицю 13 послідовність)

ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИаєТтЕ55УАМОММУНОА

РОаКагЕММУ5АІЗаЗааТУМАОоБУКаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАМУМСАГ ОМаАБєОММпОСАЇ УТМ55

АБТКОаРБМЕРІ АРОБКОТЗОСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБМУ

М5ИаАІ Т5аМНТЕРАМІ 05501 М5І 55 МРБОББІ ТОМІ 2957 (С10-563) /УнНСНІ-важкий МИМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСИ РОМ ланцюг з "виступом» ЕГЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСМУМОМЗНЕО РЕМКЕМУУ УМО

СМЕУНМАКТКРАЕЄєОММОТМАУМБМІ ТМ НОВУ МЕКЕМ

КСКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОМУТІ РРСОВОБЇ ТК

МОМ5БІ СІ МКОЕМРБОІАМЕЖМЕЗБМООРЕММУКТТРРМІ 05 равгг мк МрКЗАМОСамММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОК

ЗІ БІ 5РаК сдсатТасСсААтатпасвАдсаттасасаАаасттасТАСАС сставссоатосСстАааАсттстатасАдассСстоСацА

ТТСАССТТТАааСАаТтТАТаССАТаДОИаВСТОСаТоСассСАс аСсТоСАсасвАдАассааСстааАдатаваТСсТСАасСтТАТТАСТ сатлатастаайТАаСАСАТАСТАСОаСАпАСТОоСатадАс вас САССАТСТОССАСАСАСААТТССААСААСАСИ

СстТатТАТСТаСАСАТОААСАааСсСстТадалассвАасаАСАСс сасСатТАТАТТАСТОТаСОТтосАсапастоСаттсалд

СстТАстТапвааССАдасААосстатсАассатстоадат аСстТАаСАССАдасассстаасата т оосттаасссстТ

АасАаСАдаАдаСАСсААХдатасАапААСА,аоассстава стасстТааТСААдаспАСТАСТттосСсСаАХа,асоСатаАоссат (СІС-5б4) / УНСНІ-важкий стостааААТТСоТаИаСсасссСстТаАСАл,аСсааСИстТасСсАСАС 238 | ланцюг з "виступом» АТ тоСсАсесСсатастаСсда,адасАдасСаасстатАСТСТОСТ (нуклеотидна послідовність) сласласатсатадссатасссттадастсттавасСАСс

У А А ССАСАССТАСАТСТОСААСОТОДАССАСААОСССАССА

АСАССАдДАДаИТасАСААДаАддаастапйААСССААдадастТас

САСАДаАСССАСАССТИтТоСсСоСсСсттассстасСсссстТадА астастаатааооСстоСаТататТссСстТатСсСССССААДдОаС

ССАДИСАСАСССтТаАТаАТтСАаССапАСССССапАдА,тТа достасатаатастаАтТаТатаТСССАСадааАССсСтТаАдА астТаААаТсСААТттаатТАсастасАаСааоатасААаТасСАс

ААТасСсСААаАдСсСАХдассаСса,ааадасАасСАаТАСААСАС

СсАсСатТАссСатаТатаатСАасСаТссСТСАССИаТСосСтТасАССА садстапСсТаААтТааСААдаспАаТАСААа,атасАдсатст

ССААСАДАассоСстовасасссосССАТССАСаСААААССАТСТ

ССАДДаССАддасвасАасссССаАспААССАСАааТтатАс

АСССТаСССССАТОаССОССаАТаАДасСтТаАССААСААССА

Таблиця 27

Послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-ОХ40/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі дс1 РЗ2гОСІ АГА Кін сатоласстатаатасстааТСААдАаастТСстТАТСССАС

СвАСсСАТСЯаССОЯТОаасАХАсСТасаАаАдаСААтТасасАаассос

АВААСААСТАСААДССАаСсСсАСсасстоссатастасАстосСа

АсСОСасСстТоСсСтТсСТссСтТСстТАСАССААастоАССатацАСА дадасадаастааСАдасСАдаававААСатсТСсТСАТаСТоСа

ТаАТаСАТОДИОССТСТаСАСААССАСТАСАСасСсАсаААс дасстотосстатотоСасватАдА (СІ 0-564) МІ СІ -легкий 200 |ланцюг 1 (нуклеотидна| див. таблицю 13 послідовність)

ЕМО ГЕБОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБагТтЕЗЗУАМЗУММУВОА

РакагЕМУЗАІЗаза,автУииАрзуУкаквеЕтІзАОМКкМТтІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАУУУСАРОМаРЕЮ УМ СОа,тТІ МТУ

АЗТКОаРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБМУ

МЗаАСТЗОаМНТЕРАМІ О5БИЇ М5І 55ММТУРБЗЗБІ ТОМІ 239 (С10-564) /УнНСНІ-важкий МИМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСИ РОЗУ ланцюг з "виступом» ЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУММОУМЗНЕОРЕУМКЕМУ УМО

СМЕМНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВУММІ ТМ НОСУМІ МОКЕМ

КСКМЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКЕИОРАЕРОМУТІ РРСОВОЄСТК

МОМ УСІ УКЕЕМРЗОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5 разгЕг мк тМоКкЗАМООСММЕЗСЗУМНЕАІНМНУТОК

ЗІ БІ РОК ланцюг 1

Всі гени короткочасно експресували під контролем химерного промотора МРБУ, що складається з корового промотора МРЗМУ, об'єднаного з енхансерним фрагментом промотора

СМУМ. Експресійний вектор містив також ділянку огіР для епісомальної форми реплікації в клітинах-хазяїнах, які містять ЕВМА (ядерний антиген вірусу Епштейна-Барр).

Біспецифічні анти-ОХ40, анти-РАР-конструкції отримували шляхом котрансфекції клітин

НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням полієтиленіміну.

Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами в співвідношенні 1:1:1:1 (вектор важкого ланцюга із "западиною »:«вектор важкого ланцюга з "виступом": "вектор легкого ланцюгаї1":«вектор легкого ланцюгаг").

Для одержання в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х д і супернатант замінювали попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО до досягнення кінцевої кількості ДНК 200 мкг. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ, переносили в 500-мілілітрові збовтані колби та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 96 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали їмММ вальпроєву кислоту і 7 956 Ееєй. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 15 хв при 210 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22-мікрометровий фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./об.) і витримували при 4 "С.

Очистку біспецифічних конструкцій із супернатантів клітинної культури здійснювали за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А згідно з методом, описаним вище для очистки злиттів антиген-Ес і антитіл.

Білок концентрували і фільтрували перед завантаженням на колонку Ні оай Супердекс 200 (фірма СЕ Неайвсаге), врівноважену розчином, що містить 20мМ гістидин, 140мМ масі, рн 6,0.

Концентрацію білка визначали на основі вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм з використанням коефіцієнта молярної екстинкції, розрахованого на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу біспецифічних молекул аналізували за допомогою

КЕ-ДСН в присутності відновника (фірма Іпмігодеп, США) або без нього за допомогою пристрою

Гарспірахі! (фірма Саїіре!). Вміст агрегатів в зразках аналізували, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації ТЗКодєї 23000 МУ Хі (фірма То5ой), врівноважену рухомим буфером, який містив 25мМ К»НРО», 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./об.) Мам», рН 6,7, при 25 76.

В таблиці 28 узагальнені результати біохімічного аналізу біспецифічних одновалентних анти-Ох40/анти-ЕАР антигензв'язуючих молекула в форматі дсаст РЗ2ОСІ АЇ А Кін.

Таблиця 28

Дані біохімічного аналізу біспецифічних одновалентних анти-Ох40/анти-ЕАР антигензв'язуючих молекул в форматі ІДС21 РЗ2ОСІ АГА КІН лон ї . мг/лі ЩО відновника) відновником) 92,1 95 (164 кДа) 67,7 95 (63,6 кДа) 3,6 95 (120,1 кДа) 16,5 95 (25,7 кДа) 85,2 95 (157 кДа) 69,5 9о (64,2 кДа) 2,8 95 (139,5 кДа 16,7 95 (26,2 кДа 80 Фо (153 кДа) 70,4 95 (63,5 кДа) 4,3 Фо (120 кДа) 13,7 95 (25 кДа) 20В7/ЕАР РЗ29С1 АГА ІС 97595 (166 кда) | 09257 5 (56,2 кДа) 144 22 100 1,3 95 (149 кДа) 8,2 90 (27,2 кДа) ' 8,1 95 (24,3 кДа) 4.3 Характеризація біспецифічних конструкцій, мішенями яких є ОХ40 і ЕАР 4.3.1 Поверхневий плазмонний резонанс (одночасне зв'язування)

Здатність зв'язуватись одночасно з конструкцією людський ОХ40-Ес (Кій) і з людським ЕАР оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Всі експерименти на основі 5РЕК здійснювали за допомогою пристрою Віасоге Т200 при 25 "С з використанням НВ5З-

ЕР як рухомого буфера (0,01М НЕРЕЗ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта

РО, фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина).

Конструкції, що містять біотинільовані людський ОХ40 в злитті з Ес (Кій), безпосередньо зшивали з різними проточними осередками стрептавідинового (ЗА) сенсорного чипа.

Використовували рівень іммобілізації, що відповідає аж 1000 резонансним одиницям (КІ).

Біспецифічні конструкції, мішенями яких є ОХ40 і БАР, пропускали через проточні комірки, використовуючи концентрацію приблизно 250Нм, зі швидкістю потоку 30 мкл/хв і дисоціацію встановлювали на 0 с. Людський БАР ін'єктгували в проточні комірки як другий аналіт зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 90 с в концентрації 250нНМ (фіг. 128). Моніторинг дисоціації комплексу здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці, в якій був відсутній іммобілізований білок.

Як продемонстровано на графіках, представлених на фіг 13А-133, всі біспецифічні конструкції мали здатність зв'язуватись одночасно з людським ОХ40 і людським ЕАР.

Зо 4.3.2 Зв'язування на клітинах 4.3.2.1 Зв'язування на наївних порівняно з активованими людськими РВМС націлених на

ЕАР антитіл до ОХ40

Людські РВМС виділяли шляхом центрифугування в градієнті густини фікола згідно з методом, описаним в прикладі 2.1.2. РВМС використовували безпосередньо після виділення (зв'язування з людськими РВМС в стані спокою) або їх стимулювали для досягнення високого рівня експресії людського ОХ40 на клітинній поверхні Т-клітин (зв'язування з активованими людськими РВМС). Для цього наївні РВМС культивували протягом 4-7 днів в середовищі для Т- клітин, доповненої 200 од./мл пролейкіна і 2 мкг/мл ФГА-Ї, в б-лунковому планшеті для культури тканини і потім 1 день в попередньо сенсибілізованих б -лункових планшетах для культури тканини |10 мкг/мл антитіла до людського СЮОЗ (клон ОКТЗ) і 2 мкг/мл антитіла до людського

СО28 (клон СО28.2)| в середовищі для Т-клітин, доповненому 200 од./мл пролейкіна, при 37 "С і о Со».

Для детекції ОХ40 наївні людські РВМС і активовані людські РВМС змішували. Для того, щоб відрізняти наївні клітини від активованих людських РВМС, клітини в стані спокою мітили перед аналізом зв'язування за допомогою барвника для оцінки проліферації клітин еРІйогб70 5 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 65-0840-85). Потім суміш 1: 1 1 х 105 наївних клітин, мічених еБійогб70 людських РВМС, і немічених активованих людських РВМС додавали в кожну лунку круглодонних 96-ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Огеїпег Бріо-опе, сеїЇвїтаг, каталожний Мо 650185) і здійснювали аналіз зв'язування згідно з методом, описаним в прикладі 2.1.2. Потім суміш 1:1 1 х 105 наївних клітин, мічених еРішогб70 людських РВМС, і немічених активованих людських РВМС додавали в кожну лунку круглодонних 96-ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Сгеіпег Біо-опе, сейїеїаг, каталожний Мо 650185) і здійснювали аналіз зв'язування згідно з методом, описаним в розділі 2.1.2.

Первинні антитіла являли собою титровані конструкції антитіл до ОХ40, інкубовані протягом 120 хв при 4 "С. Розчин вторинного антитіла був сумішшю флуоресцентно міченого антитіла до людського СО4 (клон КРА-Т4, мишачий ІдсС1К, фірма Віої едепа, каталожний Мо 300532, антитіло до людського СО8 (клон КРа-Т8, мишачий ДСК, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 3010441) і кон'югований з флуоресцеїінізотіоціанатом (ФІТЦ) Е(ар)2-фрагмент козячого дО проти людського ІдсС, Есу-фрагмент фрагмент-специфічного АйЙіпіРиге (фірма Часкзоп

ІтітипоКезеагсі, каталожний Мо 109 096 098), інкубували протягом 30 хв при 4 "С в темряві.

Вміст планшетів остаточно ресуспендувалиі в 80 мкл/лунку ГЕАС5-буфера, що містить 0,2 мкг/мл

БАРІ (фірма Запіа Стги? Віоїес, каталожний Мо 5о-3598) і одержували дані в цей же день з використанням пристрою з 5 лазерами І5К-ЕБопезза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОІМА).

Як продемонстровано на фіг. 14А-14С, жодна з антигензв'язуючих молекул, специфічних по відношенню до ОХ40, не зв'язувалась з людськими СО4--Т-клітинами в стані спокою або СО8:-

Т-клітинами. На противагу цьому, всі антигензв'язуючі молекули зв'язувались з активованими

СОрВ8:- або СО4--Т-клітинами. Зв'язування з СО4--Т-клітинами виявилось істотно більш сильним, ніж з СО8:-Т-клітинами, аналогічно тому, що вже було описано в прикладі 2.1.2. Як продемонстровано на фіг. 14А-14С, двовалентна націлена на БАР конструкція ОХ40 мала

Зо подібні характеристики зв'язування з ОХ40-позитивними та негативними клітинами з відповідними клонами в форматі канонічного антитіла І(дсС-типу, в той час як одновалентні антитіла мали істотно більш низьку здатність зв'язуватись з ОХ40-позитивними клітинами через зниження авідності. 4.3.2.2 Зв'язування з пухлинними клітинами, що експресують людський ЕАР

Зв'язування з БАР, що перебувають на клітинній поверхні, тестували з використанням клітин, що експресують людський фібробласт-активуючий білок (ПпиЕАР) лінії МІН/3Т3-пПиЕАР, клон 39 або клітин УУМ266-4 (АТСС СВІ -1676). Лінію МІН/3Т3-пиБАР, клон 39 створювали шляхом трансфекції лінії клітин фібробластів мишачих ембріонів МІН/3Т3 (АТСС СІ -1658) експресійним вектором рРЕТК4921 для експресії ПИЕАР при селекції пуроміцином в концентрації 1,5 мкг/мл. В деяких аналізах клітини У/М266-4 попередньо мітили за допомогою набору РКН-26

Кеа Ріногезсепсе Сеї| ІпКег (фірма 5ідта, каталожний Ме РКН2бОЇ), згідно з методом, описаним в прикладі 2.3.2, для отримання можливості відрізняти ці пухлинні клітини від інших присутніх клітин (наприклад, людських РВМС).

Потім 0,5 х 105 клітин МІН/3Т3-пПиБАР, клон 39 або М/М266-4, додавали в кожну лунку круглодонних 9б-ямкових планшетів для суспензійних клітин ((згеіпег бБіо-опе, сеїІвтак, каталожний Мо 650185) і здійснювали аналіз зв'язування аналогічно методу, описаному в прикладі 2.3.2. Планшети центрифугували протягом 4 хв при 400 х 9 при 4 "С їі супернатант відкидали. Клітини промивали одноразово 200 мкл Ю-ЗФР і дебрис ресуспендували шляхом короткочасного і обережного струшування. Всі зразки ресуспендували в 50 мкл/на лунку холодного (4 "С) РГАС5-буфера, що містить біспецифічні антигензв'язуючі молекули (первинне антитіло) в зазначеному діапазоні концентрацій (титровані) та інкубували протягом 120 хв при 4 "С. Потім клітини промивали 4 рази, використовуючи 200 мкл (4"С) РАС5З-буфера та ресуспендували шляхом короткочасного струшування. Потім клітини фарбували, використовуючи 25 мкл/на лунку холодного (4"С) розчину кон'югованого з флуоресцеінізотіоціанатом (ФІТЦ) Е(ар')2-фрагмента козячого ДО проти людського Ід, Есу- фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма Удаскзоп ІттипокКезеагсії, каталожний Мо 109-096-098) як вторинне антитіло, та інкубували протягом 30 хв при 4 "С в темряві. Вміст планшетів остаточно ресуспендували в 80 мкл/лунку ГАС5-буфера, що містить 0,2 мкг/мл САРІ (фірма

Запіа Сти? Віоїес, каталожний Мо 5с-3598) і отримували дані в цей же день з використанням бо пристрою з 5 лазерами І ЗК-Рогіезза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОІМА).

Як продемонстровано на фіг. 15А і 15Б, націлені на БАР одно- і двовалентні анти-0ОХ40 антигензв'язуючі молекули, на відміну від таких же клонів в форматі пидое1! РЗ29ОГАГА, ефективно зв'язувались з експресуючими людський ЕАР клітинами-мішенями. При цьому тільки націлені на БАР одно- і двовалентні анти-ОХ40-антигензв'язуючі молекули мали властивості, що безпосередньо таргетують пухлину. В двовалентній конструкції (зафарбований квадрат) виявлено більш сильне зв'язування з ЕАР, ніж у одновалентних конструкцій, що пояснюється підвищенням авідності в двовалентному форматі порівняно з одновалентним форматом. Це є більш вираженим для клітин МІН/3Т3-пПиГАР, які відрізняються високим рівнем експресії БАР, клон 39 (фіг. 15А) порівняно з клітинами УУМ266-4, які мають більш низький рівень експресії ЕАР (фіг. 15Б). Більш низька густину ЕАР на поверхні клітин У/М266-4 може не забезпечувати тісну близькість з молекулами ЕАР для того, щоб завжди здійснювати двовалентне зв'язування анти-

ОХх40-конструкцій. Величини ЕСво, що характеризують зв'язування з активованими людськими

Сра-Т-клітинами і РАР-позитивними пухлинними клітинами, узагальнені в таблиці 29.

Таблиця 29

Величини ЕсСзо, що характеризують зв'язування відібраних клонів ОХ40-зв'язуючих агентів (клон 8НО, 124) в націленому на ЕАР одно- або двовалентному форматі з розташованими на клітинній поверхні людським ЕАР і людським ОХ40

ЕАР"-клітини ОХ40:-клітини

СУмебе (МАТ ПоГАР, клон 59 4.4 Створення біспецифічних антигензв'язуючих молекул, мішенями яких є ОХ40 і фібробласт-активуючий білок (БАР), які є двовалентними по відношенню до ОХ40 і одновалентними по відношенню до ЕАР (формат 2--1)

Біспецифічні агоністичні антитіла до ОХ40 з двовалентним зв'язуванням по відношенню до

ОХ40 і одновалентним зв'язуванням по відношенню до ЕАР, одержували, використовуючи технологію "виступ»-у-«западину", яка дозволяла здійснювати збирання двох різних важких ланцюгів.

В цьому прикладі перший важкий ланцюг (НС 1) містив один модуль Бар (МНеНІ) анти-

ОХ40-зв'язуючого агента 4984, за яким розташовувався Ес-ланцюг з "виступом", злитий за допомогою (545)-лінксера з МН-доменом анти- РАР-зв'язуючого агента 28Н1 або 489. Другий важкий ланцюг (НС 2) конструкції містив один модуль Раб (УНСНІ) анти-ОХ40-зв'язуючого агента 4984, за яким розташовувався Ес-ланцюг із "западиною", злитий з допомогою (545)- лінкера з МІ -доменом анти-ЕАР-зв'язуючого агента 28НІ або 489.

Конструювання і одержання зв'язуюючих ЕАР агентів описано в МО 2012/020006 А2, яка

Зо включена в даний опис як посилання.

Мутації Рго32901уУ, Гец234Аїа і Геи235Аїа інтродукували в константні ділянки важких ланцюгів для елімінації зв'язування з рецепторами Ес гамма згідно з методом, описаним в опублікованій міжнародній заявці на патент М/О 2012/130831 АТ. Злиті білки важких ланцюгів спільно експресували з легким ланцюгом анти-ОХ40-зв'язуючого агента 4984 (СІ МІ). Одержані біспецифічні конструкції двовалентні по відношенню до зв'язування з ОХ40 представлені на фіг. 12Г, а опис їх нуклеотидних і амінокислотних послідовностей представлений в таблиці 30.

Крім того, одержували "ненацілену" конструкцію 2-1, в якій МН- і Мі -домени анти-ЕАР- зв'язуючого агента замінювали на контрольну зародкову лінію, позначену як ОР47, яка не зв'язувалась з антигеном.

Таблиця 30

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних двовалентних анти-

ОХ40/одновалентних анти-ЕАР антитіл пиЇдат РЗ29СІ АЇ А Кін (формат 2-1) і "ненаціленої" (ОР47) конструкції 2-41

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО: (нуклеотидна послідовність) сАсатасСсААатаатасаастотаасавастаАаатаААпАА сстасатсСтосатААдсаТсТоСТасСсААавасстоСася

АпдасСАСАТТсАааСАаСтТАСастТАТААДаСТОСатТасСаАСА ссасосоСстасАСАДаСсаеСстовАатТасАата,ссАсацвАТСА

ТОоССТАТСТТТОИСТАСАС,САДАСТАСИаСАСАСАДИТТОС даса,асАдапаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадаС

АСАаССтТАСАТОСАССТОАа,аСАаасстаАаАтТоТадасА сАсСсасСсататАТтАСТатТаСаАСаАСаААТАСТАСССЯТОав тобатАСаАСтТАСТаСсвасСААл,СасАСсСАССатаАсСаТт стостоАасСстАаСАССАдД,СваСССАТОСаТСсТоСоСсстТ аваСбАСССТоСТоСААпаАасСсАассттасаааСАСАасСИасяс сставастасСтасТСАдадвАСТАСТТСССС,СААСсСаваИат слссататсатасААСстТсАвсасассстаАсСАасаасСат

ВсСАСАССТТОССЯасСтТатссСтТАСАСТоСТСАааАСТОТА стосСстТсАасАаа,аса,атаатаассатассстСАасСАастТТ аааСАСССАпАССТАСАТСТаСААСаИтаААТСАСАДаСс

САВСААСАССАда,ааТацпАСААСпАААатТадассССАААТ

СстТатаАСААААСТСАСАСАТассСАсСса,атассСАасСАС

СстТаААаСстасаасаааАсСатсАатстостстососос

САДААСССААапАСАСССТСАТаАТСОТОССсО,аАСоССтТОа

АдатСАСАТОСОЯТОСТООСТОасАСсСтТадаССАС,ААСАС (4984) УНСНІ Ес зсСбтТаАасаТСААатТСААСстТаатАсатасАасасасатацАс 304 "виступом" УН (4893 Та САТААТаССААСАСАдАасСсСасава,сАааАаСАстТА (нуклеотидна послідовність СААСАааСАСсатАсса,ататастода,асатсстсАССатост важкого ланцюга 1) ВСАССАСОаАСсТОаасСТаААтТайайСААдсааАаТАСААатТтасА

АЧИатТтСсТоСААСААдАа,аСсоСстоаарассСССАТССПСАСААДА

АССАТСТОССАААДаССАААдаааСАаСоССаАпААССАСА сататАСАссСстТассоооСтТасСАаАаАТаДасСтТаАССАА вААССАСЯТОТоССТОТОСТатотааТтСААдааастТотТА соссАдасаАТАТСЯССОЯТОавСАаа,атасаАпАаСААСааос дасСстТаАпААСААСТАСААаАССАСоооооста7атастас

АСсАааСбадссасАастСстССТатАСТОСАААСТаАССа тапАСАДдОАХа,асссата,абАаСАсааСААСсататтоАас тасбалдасбатаАтТасСсАСсадаасссТасСАСААССАСТАСАСС

СсАСААХатоссталассталасоссвас,асАа,ааСбососоа

АдаСсасАас,асАасасаАасаАаттасспаба,авАасаатобааАс ссбсасАдсапаАтТоСссАасатаСбАа,аСстастопАддасаасоасвА сзвастастасаасстасссаСбАа,асСстаАсАста,атсттас совсасСбАх,ассастСАССТТСсАаСАаСтТАСасССАТИаАаС тасатоСбасСсАдсассостааСААда,аасАСтасвААтТацат стосасСссСАТСАТОСССЯСТОТОДОССсасСАаСАССТАСТАСОЯС баАсАДаСсатадлдсавассааТ т САССАТСАДа,ВССасаАСА

АСАССААДПААСАСССтТатАССТасСсАСаАТаААСАаССстТа сесаббаАдапАСАсСсасСсататАСТАСстТасрасССААдацсягХ яатасатпсосабвастТСсААСТАСТОСИааАСсАа,асаСАСССТ сатосАдссататоСАас

Таблиця 30

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних двовалентних анти-

ОХ40/одновалентних анти-ЕАР антитіл пиЇдат РЗ29СІ АЇ А Кін (формат 2-1) і "ненаціленої" (ОР47) конструкції 2-41

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО: сАсатасСсААатастасаастотаавсвастаАватаААсСАА сстасатсСтосатААдсаТсТоСТасСсААавасстоСася

АпдасСАСАТТсАааСАаСсСтТАСастТАТААЛаСТОвСатТасСсаАСА ссасосоСстасАСАДаСсаеСстовАатТасАата,ссАсацвАТСА

ТОоССТАТСТТТОИСТАСАС,САДАСТАСИаСАСАСАДИТТОС даса,асАдапаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадаС

АСсАаССтТАСАТОСАССТОАа,аСАаасстаАаАтотТадацА сАсСсОасСсататАТТАСТатТасСаАСаАСААТАС тАССЯстТаатТОоСатАССАСТАСТОСИаССААлИ,асАССАСС стадссатсТоСТСАаСсТАасСАССААл,ааСССАТССИато тсесобоСбтТааСАСССТоСТоСАдадасАссттавасас

АсАассаасостасастасстааТСААааАСТАСТТОСОС вААСССОСОССТаАСсвататоставААСТоАса7аСассстаАсс дасс,асатТасСсАСАССТТССсвастатосСтТАСАаТтосСтТСА апАСТСТАСТОССТоАа,аСсАа,асатаатаАссатасостос дасласттааваСАСССАЧПАССТАСАТСТаСААСИТадАТ

САСААДаСССАаСААСАССААХ,а ТапАСААпАААИа Та ,СССАААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТаСССАССаИта соСАаСАсСстТаАдАда,астасСсаассвасАсСатСАатсТостТ

СТТССССССААААСССААааАСАСССТСАТаАТСТОССС вАССССТаАдсСатСАСАТОСЯТОСТОСТасАСсатаАаССА (4984) мУненІ1 Ес їз сСпХАаАдССоСтТадааТСААаТТСААСсТастАса,атацАса 305 "западиною" М. (4899 Са тасАсатасСАТААТасССААпАСАААда,ассасацссдс (нуклеотидна послідовністю САИСАСТАСААСАа,аСАСса тТАССОССТатаатоАаа,аСа7тосто важкого ланцюга 2) АсСсатосСтТасСсАССАСаАс таавСстТаААТааСААдааАсаТАСААатТасСААдааТсСТоСАА

САДАССССТОВСаСасссССАТССПСАСПСААААССАТСТОСАА даСсСААд,а,сасАаССССаАспААССАСАвататаСАСос тассссСАТОСССЯСИапАТадаСТаАССААпААССАааТтсА сстстса,атаСсасСАаТСАААаасСТСстТАТСССАаСаАСА тса,ассатасалатаасАсАаСААтТасасАаа,аССа,ацпАСААС

ААСТАСААСАССАСсСЯсСстосСсатастапйАСтоСаАСИасть тостсотостбатаАаСААдасТСАССатаспАСАдаАас даатааСсАдаСАсаапААСатстТтТСАТаСстоСатаАТта

САТОаАХСОИСТСТасСАСААССАСТАСАСасСАаААаАаССстТо тосстатотоса,асатавАасасваСс,асАда,аСа,асА,сАса дапаАТоССОСОСсваСс,асАасапоСсавАавасастасзАТтоТа даАТсСатастаадссСА,тотоССааСАСоСстаТатстстТалх сосстааСаАсАсСАааССАсоСстТатоСстасСсАааАассСТосс да,атосатаАСсТоСсТосСтТАсСсТСОоСсТаатТАТСАаСАаА дасссса,ассда,асосствастастаАТСААСВТацвасА стбсасАдадасСсАасСба,ааСАтТоССстТадсссатстоСсааст стаастоСасасСАССаАСТТСАСССТОАССАТСТОССОИС тасвААссСсаАас,ссаАстсасСбататАСтТАСсТассАасСАцс

ВсСАТСАТИОСТОССССССАССТ ТаДаСсСАааасСАССАдДОаС тасАААТСАдДО (4984) УНСНІ Ес з ОМОЇ МОБЕАЕУККРОЗЗУКУЗСКАВОСТЕЗЗУАІЗУМУМВОА 306 | "виступом" МН (489) РОС ЕУМСИаапПРІБЄТАММАОКЕеОСАМТІТАОКЗТЗТАУМ (важкий ланцюг 1) ЕГ55І ВБЕОТАМУУСАВЕУУ Ва РУВЮУМ СЩСОСТТУТУБАБТ

КаРЗМУЕРІ АРЗЗКЗТЗасТААГ ас МКЩОМЕРЕРУТУБУМЗСИ

Таблиця 30

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних двовалентних анти-

ОХ40/одновалентних анти-ЕАР антитіл пиЇдат РЗ29СІ АЇ А Кін (формат 2-1) і "ненаціленої" (ОР47) конструкції 2-41

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО:

А Т5аОУНТЕРАМІ 055011 51 55УМ ТУРІ ИТОТМІСММ

МНКРОМТКМОККУЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААСИаРБЗУНІ Е

РРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕМУУУрамМЕ

МНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВУУБМІ ТМ НОУМІ МЕОКЕУКСК

МЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКЕОРВЕРОМУТІ РРСВОЕТКМОМ

ЗІ МС УКаЕМРЗОІАМЕЖМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОС

ЕРГУЗКІ ТМОКЗАУМООСМУЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 51. згеасавсазаааазасасвзасааЗЕМО І ЕЗОИИІ МОРС

ЗІ ВІ ЗСААБОаЕТЕЗЗУАМОЗУУУВОАРОКаїі ЕМУУЗАНИ,ЗИАБ

ТУМАРБЗУКОаВЕТІЗАОМЗКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАМУУСА камгРасаЕМУМУуссоатІ МТУ

ОМОЇ МОБЕАЕУККРОЗЗУКУЗСКАВОСТЕЗЗУАІЗУМУМВОА

РОС ЕУМСИаапПРІБЄТАММАОКЕеОСАМТІТАОКЗТЗТАУМ

ЕГ55І АВАБЕОТАУУУСАВЕУУВаРУОЮМУУУСОСТТУТУ5БАЗТ

КаРБЗМУЕРІ АРЗЗ5КЗТЗаИаатАА ас УКЩОМЕРЕРУТУБУМЗСИ

А Т5аОУНТЕРАМІ 05501 51 55 МУРБЗББІИТОТМІСМУ

МНКРОМТКМОККУЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААСИаРБЗУНІ Е (4984) УненІ1 Ес їз РРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕМУУУрамМЕ 307 |"западиною" МІ. (489) МНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВУУБМІ ТМ НОУМІ МЕОКЕУКСК (важкий ланцюг 2) МЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКЕОРВЕРОМСТІ РРОВОЕЇТКМОМ

ЗІ ЗСАУКагУРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОСЗЕ

ЕМЗ5КІТУОКЗАМОСС,ММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І 5

РасасазасасзассоававиасеЕ МІ ТОЗРОТІ ЗІ 5РОЕВА

ТІ ЗСВАБОЗМТ ЗМ АММООКРОСОАРА ІММаЗАНАТИЇР рагзазавзатовЕтІі ТІВ ЕРЕОБАУУМСООСІМІ РРТРЕаОС

ТКМУЕїІК (нуклеотидна послідовність) сАсатасСсААатаатасаастотаасавастаАаатаААпАА сстасатсСтосатААдсаТсТоСТасСсААавасстоСася

АпасСАСАТТсАааСАасСтТАСастТАтТААХаСсТасвсатасцАСА ссасосоСстасАСАДаСсаеСстовАатТасАата,ссАсацвАТСА

ТОоССТАТСТТТОИСТАСАС,САДАСТАСИаСАСАСАДИТТОС даса,асАдапаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадаС

АСАаССтТАСАТОСАССТОАа,аСАаасстаАаАтТоТадасА сАсСсасСсататАТтАСТатТаСаАСаАСаААТАСТАСССЯТОав тоСбатАСаАСТАСТаОСсвасСААл,СасАССАСсСатаАССаТт (4984) нені Ес з стостоАдасСстАаСАССААд,СаваСССАТОоСаТсТоСоСсстТ "виступом" МН (28н1) аваСбАСССТоСТоСААпаАасСсАассттасаааСАСАасСИасяс 308 (нуклеотидна послідовність сставастасСтасТСАдадвАСТАСТТСССС,СААСсСаваИат важкий ланцюг 1) "алдссататсатТавААСТоАСЯСЯаСоССстаАсСАа,СсаваСат

ВсСАСАССТТОССЯасСтТатссСтТАСАСТоСТСАааАСТОТА стосСстТсАасАаа,аса,атаатаассатассстСАасСАастТТ аапСАСССАпАССТАСАТСТаСААСаИтаААТСАСАДаСс

САВСААСАССАда,ааТацпАСААСпАААатТадассССАААТ

СстТатаАСААААСТСАСАСАТассСАсСса,атассСАасСАС

СстТаААаСстасаасаааАсСатсАатстостстососос

САДААСССААапАСАСССТСАТаАТСОТОССсО,аАСоССтТОа

АдатСАСАТОСОЯТОСТООСТОасАСсСтТадаССАС,ААСАС сСстТАдсатТСААдаТТСААСстТасатаСатасАассаСатацАса атТасСАТААТаССААаАСсААдАасССа,аСа,ассаАа,аАа,сСАатТА

Таблиця 30

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних двовалентних анти-

ОХ40/одновалентних анти-ЕАР антитіл пиЇдат РЗ29СІ АЇ А Кін (формат 2-1) і "ненаціленої" (ОР47) конструкції 2-41

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО:

СААСсАаСАСсОастТАсСсататаа,атсАаа,асСатосТСАССаТатост

ВСАССАСОаАСсТОаасСТаААтТайайСААдсааАаТАСААатТтасА

АЧИатТтСсТоСААСААдАа,аСсоСстоаарассСССАТССПСАСААДА

АССАТСТОССАААДаССАААдаааСАаСоССаАпААССАСА сататАСАссСстТассоооСтТасСАаАаАТаДасСтТаАССАА вААССАСЯТОТоССТОТОСТОтотТасТСАда,аавасттстТА соссАдасаАТАТСЯССОЯТОавСАаа,атасаАпАаСААСааос дасСстТаАпААСААСТАСААаАССАСоооооста7атастас

АСсАааСбадссасАастСстССТатАСТОСАААСТаАССа тапАСАДдОАХа,асссата,абАаСАсааСААСсататтоАас тасбалдасбатаАтТасСсАСсадаасссТасСАСААССАСТАСАСС

САСААХатоссталассталасоссваСс,аавА,ас!соваСва

АдаСасАд,асасАас,саАда,ааАтоСапвА,асаАасасасацпААатТасо сасссАааАтотаАасатасаа,астаставААтТоСссвсаСась даасстастаса,асста,аоааАтототаАаАСсТа,атоста сеасс,асстоСсаасСТСАССТТСТОСТоССАСсассАТа7атосс тасатоСбаАСсАсСастоСстаайСАААс,СасставААтацатТ стосассСАТоОТОВСЯСОСТОСЯваСа,аАаСАаТтТАСТАСЯССИаА стотатадлд,асасСасТ гСАССАТСОТОСС,васАСААСТо

САДПААСАСССТаТАССТасСАСАТаААСТОССТОСОЯвИаС

С,аАдаспсАСсАсСса,ассататАСТАСТатТасСсААла,асастаастТ сааСААСТТССАСТАСТОСОСОССАсаасАсостастТСАС сататосСА9ас сАсатасСсААатаатасастотаавсвастаАватаААсСАА сстасатсСтосатААдсаТсТоСТасСсААавасстоСася

АпдасСАСАТТсАааСАаСсСтТАСастТАТААЛаСТОвСатТасСсаАСА ссасосоСстасАСАДаСсаеСстовАатТасАата,ссАсацвАТСА

ТОоССТАТСТТТОИСТАСАС,САДАСТАСИаСАСАСАДИТТОС даса,асАдапаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадаС

АСсАаССтТАСАТОСАССТОАа,аСАаасстаАаАтотТадааА сАсСсасСсататАТтАСТатТаСаАСаАСаААТАСТАСССЯТОав тоСбатАСаАСТАСТаОСсвасСААл,СасАССАСсСатаАССаТт стостоАасСстАаСАССАдД,СваСССАТОСаТСсТоСоСсстТ аваСбАСССТоСТоСААпаАасСсАассттасаааСАСАасСИасяс сставастасСтасТСАдадвАСТАСТТСССС,СААСсСаваИат (4984) мУненІ1 Ес їіззсАссататсатТапААСТоАаСсСаСсассоСстаАсСАа,аСааСат 309 "западиною" МІ (28Н19) асСАСАССТТОСсСссСастатссСтТАСАИТОСТтСАааАСТОТА (нуклеотидна послідовність) СТОССТтоАс,сСАа,ссатаатАссатассстоСАа,асАастт важкий ланцюг 2) аапСАСССАпАССТАСАТСТаСААСатаААТСАСАДИаСС

САВСААСАССАда,ааТацпАСААСпАААатТадассССАААТ

СстТатаАСААААСТСАСАСАТассСАсСса,атассСАасСАС

СстТаААаСстасаасаааАсСатсАатстостстососос

САДААСССААапАСАСССТСАТаАТОТОССОИАССССтТа

АдатСАСАТОСОЯТОСТООСТОасАСсСтТадаССАС,ААСАС сСстТАдсатТСААдаТТСААСстТасатаСатасАассаСатацАса атасСсАТААТаССААаАСААдАааССаС,ааасА,ааА,САаТтА

СААСсАаСАСсОастТАсСсататаа,атсАаа,асСатосТСАССаТатост

ВСАССАСОаАСсТОаасСТаААтТайайСААдсааАаТАСААатТтасА

АЧИатТтСсТоСААСААдАа,аСсоСстоаарассСССАТССПСАСААДА

АССАТСТОССАААДаССАААдс,ааСАаСооСаАпААССАСА сагатТасАсосТасссССАТоСсСОСапАТаАдаСТаАССАА

Таблиця 30

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних двовалентних анти-

ОХ40/одновалентних анти-ЕАР антитіл пиЇдат РЗ29СІ АЇ А Кін (формат 2-1) і "ненаціленої" (ОР47) конструкції 2-41

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО:

СААССАСОИтоАсОостотата,асрасСАаТСАААаасСтТТотТА тоссАдасвАСсАТоСОоСсСЯвтасАиата,асАсАаСААТацвИас дасСсапАпААСААСТАСААаАССАСсасстосса7атаста вАСТОСОСАСОСССстТоСтотостСбатаАаСААастСАСо стапАСААдаАдаСАасатааСАаСАсаапААСаТтсттсто

АТастобатаАаТасСсАТаАдСастотТасСАСААССАСТАСАС

ВСАСААдСАааСсСсТотТоССстТаттосасатацвАаа,васастсос

АдаСсасАас,асасАаааАасаАатоссатсатаабавАТоТасвсся ссатасАтТотаАсАтТсатастаАСССАаТтосТоССасйсСА состадассталасосєтаа,аСаАааАа,сАааССАСССстаАастТ аСбАааАа,аобАаа,асСбАсАа,аСсатадасСапАяастАсстааос тастТАТсАаСАсСАаАда,асоСавасСА,асССССАСАСТаСтТа

АТСсАТСССаСОССАаСАСсСсСсвасСАССспасСАТССССИАТ

АаАТТсАСССсО,аСАаа,аСсавастобааСАССаАСТТСАСОСТа

АССАТСАСССЯСаСтТапйААСССаАсаАасттоаоса7ататАс тТАСТаССАааСАаса,аасСсАа,ватаАтооооооСАССстовас сАдапаСАССААдааТаспсАААТСААС

ОМОЇ МОБЕАЕУККРОЗЗУКУЗСКАВОСТЕЗЗУАІЗУМУМВОА

РОС ЕУМСИаапПРІБЄТАММАОКЕеОСАМТІТАОКЗТЗТАУМ

ЕГ55І АВАБЕОТАУУУСАВЕУУВаРУОЮМУУУСОСТТУТУ5БАЗТ

КаРБЗМУЕРІ АРЗЗ5КЗТЗаИаатАА ас УКЩОМЕРЕРУТУБУМЗСИ

А Т5аОУНТЕРАМІ О55О0123І1751 55УМТУРЗББ ИТОТМІСММ

МНКРОМТКМОККУЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААСИаРБЗУНІ Е (4984) УНСНІ Ес з РРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕМУ УУрамМЕ

З10 | "виступом" ун (28Н1У МНМАКТКРАЕЕОУМЗТУВУМУМІ ТМ НОБУУІ МЕКЕУКОК (важкий ланцюг 1) МЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКЕОРВЕРОМУТІ РРСВОЕТКМОМ

ЗІ МС УКаЕМРЗОІАМЕЖМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОС

ЕРГУЗКІ ТМОКЗАУМООСМУЕЗСЗУММНЕАЇІ НМНУТОКОІ 51. згеасавсазаааазасасвзасааЗЕМО І ЕЗОИИІ МОРС

ЗІ ВІ ЗСААБаЕТЕЗЗНАМОУ УВОАРОКИЇ ЕМ УЗАЇМАБИає

ОМУАрБУКОаВЕТІЗАОМЗКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАУУУС

АКОСУГаМмЕрУмадатІі му

ОМОЇ МОБЕАЕУККРОЗЗУКУЗСКАВОСТЕЗЗУАІЗУМУМВОА

РОСС ЕМ МСИаапПРІБЄТАММАОКЕеОСАМТІТАОКТЗТАУ

МЕ! 55І А5БЕОТАУУУСАВЕУУВаРУЮУМ ОСТ УТА

ЗІКаРЗМЕРІ АРОЗКЗТЗаИаатАА СІ УКОМЕРЕРУТУВУУМ

ЗаАІ Т5аУНтТЕРАМІ О55И:1 5 55 УРЗБ ИаТОТМІСМ

ММНКРОЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСИаРБЗМУЕ (4984) УненІ1 Ес (їз ГЕРРКРКОТІ МІЗАВТРЕМУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУМ УВС 311 |"западиною" МІ. (28Н1) МЕМНМАКТКРАЕЕОУМЗТУАМУМУБМІ ТМ НОБУУІ МЕОКЕМК (важкий ланцюг 2) СКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОМСТІ РРЗВОЕЇТКМ

ОМ5І ЗСАУКа РУ РЗВІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ 050 азЕРУЗКІТУОКЗАМООаММУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОК

ЗЗРОСОСЗС,ОВЗа,авасвасеЕ МІ ТОРИТІ БІ ЗР

СЕВАТІ БСВАБОЗУЗНАОМІ АМ/МООКРООАРВАВІ ПСАЗТВА тТатРОовЕЗазазатовтІтТІЗА ЕРЕОЕАМУМСООСОМІРРТ га,ОаТтТКкУєїК (нуклеотидна послідовність)

Таблиця 30

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних двовалентних анти-

ОХ40/одновалентних анти-ЕАР антитіл пиЇдат РЗ29СІ АЇ А Кін (формат 2-1) і "ненаціленої" (ОР47) конструкції 2-41

ЗЕО

МО: "виступом" УН (ОРА7 сСССТОСОСТоСсТовсИ,КтТаААсатстстасСАдааСстСва (нуклеотидна послідовність) АйОСІСАСАТТСоАааСАастАСастТАТААИ,СТОИОСТасСсАСА важкий ланцюг 1) ссасосоСстасАСАДаСсаеСстовАатТасАата,ссАсацвАТСА

ТОоССТАТСТТТОИСТАСАС,САДАСТАСИаСАСАСАДИТТОС даса,асАдапаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадаС

АСАаССтТАСАТОСАССТОАа,аСАаасстаАаАтТоТадасА сАсСсасСсататАТтАСТатТаСаАСаАСаААТАСТАСССЯТОав тоСбатАСаАСТАСТаОСсвасСААл,СасАССАСсСатаАССаТт стостоАдасСстАаСАССААд,аааСССАТОСаТсТоСоСсстТ аваСбАСССТоСТоСААпаАасСсАассттасаааСАСАасСИасяс сставастасСтасТСАдадвАСТАСТТСССС,СААСсСаваИат слссататсатасААСстТсАвсасассстаАсСАасаасСат

ВсСАСАССТТОССЯасСтТатссСтТАСАСТоСТСАааАСТОТА стосСстТсАасАаа,аса,атаатаассатассстСАасСАастТТ аапСАСССАпАССТАСАТСТаСААСатаААТСАСАДаСс

САВСААСАССАда,ааТацпАСААСпАААатТадассССАААТ

СстТатаАСААААСТСАСАСАТассСАсСса,атассСАасСАС

СстТаААаСстасаасаааАсСатсАатстостстососос

САДААСССААапАСАСССТСАТаАТСОТОССсО,аАСоССтТОа

АдатСАСАТОСОЯТОСТООСТОасАСсСтТадаССАС,ААСАС сСстТАдсатТСААдаТТСААСстТасатаСатасАассаСатацАса атасСсАТААТаССААаАСААдАааССаСаавсАа,ааА,сСАаТтА

СААСсАаСАСсОастТАсСсататаа,атсАаа,асСатосТСАССаТатост

ВСАССАСОаАСсТОаасСТаААтТайайСААдсааАаТАСААатТтасА

АЧИатТтСсТоСААСААдАа,аСсоСстоаарассСССАТССПСАСААДА

АССАТСТОССАААДаССАААдаааСАаСоССаАпААССАСА сататАСАссСстТассоооСтТасСАаАаАТаДасСтТаАССАА вААССАСЯТОТоССТОТОСТОтотТасТоАда,аавасттсСтТА соссАдасаАТАТСЯССОЯТОавСАаа,атасаАпАаСААСааос дасСстТаАпААСААСТАСААаАССАСоооооста7атастас

АСсАааСбадссасАастСстССТатАСТОСАААСТаАССа тапАСАДдОАХа,асссата,абАаСАсааСААСсататтоАас тасбалдасбатаАтТасСсАСсадаасссТасСАСААССАСТАСАСС

САСААХСТОССТЯвАаС,аСсСТаА,аСсооСсавасасаааасаасос

АдаСасАд,асасАас,саАда,ааАтоСапвА,асаАасасасацпААатТасо сасспАаасаАтотаАаса7атасСсААта,аттавлааттавасювк

АсасттаатАсадасстасаааатооСТаАаАСТОТОоСТОа тасласСАдаСацпАТТСАССТТТАаСАсСТТАТаССАТОСАС ставатосасСсасастосАаа,асааААлсадвастацАаТаца

ТстТсАасСстТАТТАСТОСТАСТаатТааТтАаСАСАТАСТАСС

САвАСсТОСОаСтТадАа,сааССасаТ ТСАССАТСТОСАПАСПСАСА

АТТОСААСААСАСастТатАТСТасСАСаАТтТаААСАасСсСтТад слаббаАаспАСАСаасСОатТАТАТТАСТОТасСаАдАдвас да,асаспАТТТаАСТАСТасСО,аасСсСААааААСоСтаатсАСс астотсадас сАсатасСсААтаатасаастотаавсвастаАаатаААсСАА (4984) УнеснНІ1 Ес іззесстасатСстсатААдсатстоСсТасСсААавасстосася 313 "западиною" МІ. (ОР47) АпдасСАСАТТсАааСАаСсСтТАСастТАТААЛаСТОвСатТасСсаАСА (нуклеотидна послідовність) ССС асзАСААлссастссвсАаа,атавАтасаАвасзАТСА важкий ланцюг 2) ТОоССТАТСТТТОИСТАСАС,САДАСТАСИаСАСАСАДИТТОС дасасАдасаТСАССАТТАСТаСАСАСАААТоСАСадас

Таблиця 30

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних двовалентних анти-

ОХ40/одновалентних анти-ЕАР антитіл пиЇдат РЗ29СІ АЇ А Кін (формат 2-1) і "ненаціленої" (ОР47) конструкції 2-41

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

АСсАаССТАСАТОСАССТаЛдаСАассСсТаАаАТСТадаслА сАссассататТАТАСТатасСсапАаАСААТАСТАСССЯТас тоСатТАСОаАСТАСТаСааССААсапАССАсСатаАССсатТ

СсТоСсТсАасСстТАаСАССААд,аааСсССАТСаТтстоССссстТ свасСсАСССТоСТоСААдсАасСсАассттаТасваааСАСАасСОоас сставастасстааТСсААдасСАСТАСТТССССОАдСсСсоваТат сАдссатататапААСстАаа,асоаосСстаАсСА,асаасСат вСАСАССТТоССсвастТтатоссСтТАСАатосСтТСАсасАСТСТА стосстодасАа,асатаатассатассстоСАасАастТтТ ваапСАСССАСАССТАСАТСТаСААСаТаААТСАСАдасСс

САаСААСАССАдааТасАСААпАААаТТаАДаСССАААТ

СТТаТОАСААААСТСАСАСАТаСССАсСсО,ВтассСАасАс

СстТАдАХда,астТасСсаласасаАсСсатСАатстсстстососсс

СААДДАСССАДасАСАСССТСАТалтотосСсасвАсссста

АсдатсАСсАТОСЯТОСТОСТаспАСатТаАаССАССААСАС сстАдасТоААаТТсСААСстТаатасатасАсавасатааАс астТасСАТААТасССААаАСАдАаассасавсавАс,аАасСАаТтА

СААСсАдаСАсатАссатататАаСатссСсТсАССаТтост вСсАССАсСаАСстаастТаААтТаайСААдасАСТАСАдатТасА

АВатСстТоСААСААдассстааСассССССАТССАСАДА

АССАТСТОСАААДаССАдАасСаасСсАассссаАпААССАСА сататасСсАСССсТасССсСССАТСССОСааАТаДасСтТаАСсСАА вААСсСсАсатоаассттаИатасСсаСАаТСАААаасСТТсСтТА тоссАдаСсОаАСсАТсОаССсСсаСТаслаатасададасСААТавОас асСсСсапАспААСААСтТАСААаАССАСсасстоссатаста вАстТосаАссастостстостатаАаСАДасСтТСАСС стапАСсАдадасасатааСбАааСАа,ааааААСаТтсттсто

АТОаОСТОСИЯаТОАтТасАТалДаасСТСсТасСАСААССАСТАСАС вСАвбАдсАаассттостатстсассватаслаавоаваСося

АдаСсасаасАасасасАтСасАсвасаабазАдаСааА сасасАдааСсТоТаАААт,атастаАдсССАа,ВАасоосоа

СсАсСсСсТатсАСстТаТатстоСАаа,аасСсаААдаАасССАСССстТада стаСсдадаСсСсА,аСсСАаа,сАдасататСАастстАСсСстаас стаатТАТСАаСАСАдАдаСсСсСсаАдСАа,ааСССССАаАСТастТ вАТСТАСОСОССсасстсоТстТАпАдаССАССОССАТОСССОА тТАаАТТоАаа,аСсаасАа,аСсвастСаасСАССОаАСТТСАСССТ

САСААТСАаСАСАСтТавААССсСаАааадсттассататА

ГАСТаСсСсАаасСАаатТАаСсаасСсАаасАаСоСССсТаАссТттаС

ССАсСайайСАССААдастТасаАААТСААА

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

РОС ЕМ МастПпРІБЄИТАММАОКРОСАМТІТАОКОТЗТАУМ

ЕГ55І ВБЕОТАМУМСАНЕУУ Ва РУЮУМ ОСТ ТУТУББАВТ

КаРБМЕРІ АРОБКОТЗИаСТААІ СІ УКОМЕРЕРМТУБМУ МИ (4984) УНСНІ Ес зі АТО МНТЕРАМІ О550І М5І 55 УРБЗББІ ИТОТМІСММ 314 |"виступом" УНН (ОРА7) МНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕАДОСРБМБІ ЕЕ (важкий ланцюг 1) РРКРКОТІ МІЗАВТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ МУВСИаМЕ

МНМАКТКРАВЕЕЄЕСУМОТУВАММ5МІ ТМ НОМУ МЕОКЕУКОСК

М5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОММТІ РРСОВОЄЇ ТКМОМ

ЗІ СІ УКОЕМРБЗОІАМЕМ ЕБМЕОРЕММУКТТРРМІ О5ОСО

ЕРГМ5КІТМОКОВУМООСММЕЗ5С5УМНЕАЇ НМНУТОКОІ БІ.

Таблиця 30

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних двовалентних анти-

ОХ40/одновалентних анти-ЕАР антитіл пиЇдат РЗ29СІ АЇ А Кін (формат 2-1) і "ненаціленої" (ОР47) конструкції 2-41

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО: згеасавсазаааазасасвзасааЗЕМО І ЕЗОИИІ МОРС

ЗІ ВІ ЗСААБОаЕТЕЗЗУАМОЗУУУНОАРОКаї ЕМУЗАІВИаВас

ЗГУУАрБУКОаВЕТІЗАОМЗКМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАУУУО

АказаєгрУимсоаті ТУ

ОМОЇ МОБЕАЕУККРОЗЗУКУЗСКАВОСТЕЗЗУАІЗУМУМВОА

РОСТ ЕМУМОСТПРІРЄИТАММАОКЕРОСАМТІТАОКТЗТАХУМ

ЕГ55І АВАБЕОТАУУУСАВЕУУВаРУОЮМУУУСОСТТУТУ5БАЗТ

КаРБЗМУЕРІ АРЗЗ5КЗТЗаИаатАА ас УКЩОМЕРЕРУТУБУМЗСИ

А Т5аОУНТЕРАМІ 05501 51 55 МУРБЗББІИТОТМІСМУ

МНКРОМТКМОККУЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААСИаРБЗУНІ Е (4984) УненІ1 Ес їз РРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕМУУУрамМЕ 315 | "западиною" МІ. (ОР47) МНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВУУБМІ ТМ НОУМІ МЕОКЕУКСК (важкий ланцюг 2) МЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКЕОРВЕРОМСТІ РРОВОЕЇТКМОМ

ЗІ ЗСАУКагУРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОСЗЕ

ЕМЗ5КІТУОКЗАМОСС,ММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І 5

РасасазасасвзассаавБацс(аеЕ М ТО5РИтТІ 5І 5РОЕВА

ТІ ЗСВАБОБВУЗБЗОЗМІ АММООКРООАРВ ПС АЗЗВАТИаїР рагзазавзатовЕті ТІВ ЕРЕОБАУУУСООМОаБоРІ ТРИаЄО аТКкМЕїК

Всі гени короткочасно експресували під контролем химерного промотора МРБУ, що складається з корового промотора МРЗУ, об'єднаного з енхансерним фрагментом промотора

СММ. Експресійний вектор містив також ділянку огіР для епісомальної форми реплікації в клітинах-хазяїнах, що містять ЕВМА (ядерний антиген вірусу Епштейна-Барр).

Біспецифічні анти-ОХ40/анти-БАР /(2--1)-конструкції одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліетиленіміну (ПЕ; фірма Роїузсіепсе5 Іпс.). Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами в співвідношенні 1:1:2 ("вектор НС1":«вектор НС2": «вектор І С").

Для одержання 200 мл в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 250 млн клітин НЕК293

ЕВМА за 24 год. до трансфекції в середовище ЕхсеїЇ (фірма Зідта) з добавками. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х 9 їі супернатант замінювали попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО до досягнення кінцевого кількості ДНК 200 мкг. Після додавання 540 мкл

ПЕЇ (1 мг/мл) (фірма Роїузсіепсез Іпс.) розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином

ДНК/ПЕЇ, переносили в 500-мілілітрові збовтані колби та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 95 СО» і струшували при 165 об/хв. Після інкубації додавали 160 мл середовища Ехсеї! з добавками (1мМ вальпроєва кислота, 5 г/л Рерзоу (соєвий пептид), бмМ 1 - глутамін) і клітини культивували протягом 24 год. Через 24 год. після трансфекції до клітин додавали добавку, що містить амінокислоти та глюкозу 12 95 в кінцевому об'ємі (24 мл) і З г/л глюкози (1,2 мл з маточного розчину з концентрацією 500 г/л). Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 45 хв при 2000-3000 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22-мікрометровий фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./об.) і витримували при 4 "С.

Очистку біспецифічних конструкцій з супернатантів клітинної культури здійснювали за допомогою афінної хроматографії з використанням МарзеїесіЗиге. Білок концентрували і фільтрували перед внесенням в колонку Ні оадй Супердекс 200 (фірма СЕ Неайсаге), врівноважену розчином, що містить 20мМ гістидин, 140мМ Масі, 0,01 9о Твін-20, рН 6,0.

Зо Для здійснення афінної хроматографії супернатант вносили в колонку РгоїА Марзеїесі Зиге (СУ-5 мл, фірма СЕ НеайПсаге), врівноважену 30 мл розчину, що містить 20мм цитрат натрію, 20мММ фосфат натрію, рН 7.5. Незв'язаний білок видаляли шляхом промивання буфером, що містить 20мМ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію (рН 7,5), використовуючи його в об'ємі, кратному 6-10 об'ємам колонки. Зв'язаний білок елюювали, використовуючи лінійний рн- градієнт, 20 СМ (від 0 до 100 95) буфера, що містить 20мМ цитрат натрію, 100мм хлорид натрію, 100мМ гліцин, 0,01 об. 95 Твін-20, рН 3,0. Потім колонку промивали, застосовуючи в об'ємі, кратному 10 об'ємам колонки, розчин, що містить 20мМ цитрат натрію, 100мМ хлорид натрію, 100мМ гліцин, 0,01 об. 95 Твін-20, рН 3,0, з подальшою стадією повторного врівноваження.

Значення рН зібраних фракцій регулювали, додаючи 1/10 (об./06.) 0,5М фосфату натрію, рн 8,0. Білок концентрували і фільтрували перед внесенням в колонку Ні оай Супердекс 200 (фірма СЕ Неайпсаге), врівноважену розчином, що містить 20мММ гістидин, 140мМ хлорид натрію, 0,01 об. 95 Твін2о, рН 6,0.

Концентрацію білка визначали на основі вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм з використанням коефіцієнта молярної екстинкції, розрахованого на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу біспецифічних конструкцій аналізували за допомогою КЕ-ДСН в присутності і за відсутності відновника (фірма Іпмігодеп), використовуючи пристрій Гавспірохі! (фірма Саїїрег). Вміст агрегатів біспецифічних конструкцій аналізували, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації Т5Каде! (3000 БУМ ХІ (фірма То5оп), врівноважену рухомим буфером, що містить 25мММ фосфат калію, 125мМ хлорид натрію, 200мММ моногідрохлорид аргініну, 0,02 95 (мас. / Об.) Мам3, рН 6,7, при 25 "С (таблиця 31).

Таблиця 31

Результати біохімічного аналізу наведених як приклад біспецифічних чотирьохвалентного анти-

ОХ40/анти-ЕАР Іда1 РЗ29С І АГА антигензв'язуючих молекул (конструкції 2-1) лон ї . (мг/лі до відновника) відновником) 97,25 73,7 У (81,6 кДа)

НМУ 26,8 95 (29,5 кДа)

ОХа0(49В4уРАР(АВО) РЗ2ОСІАСА в (075 100 58,71 95 (80,44 кДа) дат 2-41 НМ 41,29 9о (28,91 кДа) 97,63 73,47 96 (81,39 кДа)

НМУУ 26,42 95 (29,42 кДа) 4.5 Характеризація біспецифічних конструкцій, мішенями яких є ОХ40 і ЕАР, в форматі 2-41 4.5.1 Зв'язування з ЕАР (поверхневий плазмонний резонанс)

Здатність біспецифічних конструкцій зв'язуватись з ЕАР людини, мишей і мавп ціномолгус оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Всі 5РА-експерименти здійснювали за допомогою пристрою Віасоге 200 (фірма Віасоге) при 25 "С, використовуючи

НВ5Б-ЕР як рухомий буфер (0,01М НЕРЕФ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта

Р20О, фірма Віасоге).

Мічений за допомогою Ні5 димерий ЕАР людини, мишей або мавп ціномолгус захоплювали на СМ5-чипі (фірма СЕ Неайпсаге) з іммобілізованим антитілом до Ніх (фірма Оіадеп,

Зо каталожний Мо 34660) шляхом ін'єкції БЗООНМ РиЕАР протягом 60 с зі швидкістю потоку 10 мкл/хв, 1О0нМ мишачого ЕАР протягом 20 с зі швидкістю потоку 20 мкл/хв і 10нНМ супоЕБАР протягом 20 с зі швидкістю потоку 20 мкл/хв. Застосовувані рівні іммобілізації антитіла до Ні5 відповідали аж 18000 резонансним одиницям (КК). Схема аналізу представлена на фіг. 12Д.

Після стадії захоплення біспецифічні конструкції, а також контрольні молекули негайно 35 пропускали по поверхні чипа в концентраціях в діапазоні від 0,78 до 100 нМ зі швидкістю потоку мкл/хв протягом 280 с і з фазою дисоціації 180 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці, в якій був відсутній іммобілізований БАР. Афінність визначали, здійснюючи підгонку кривої до моделі зв'язування 1:11 Ленгмюра. Для двовалентного зв'язування використання таку ж підгонку до моделі 1:1, що дозволяло одержували уявну величину Ко.

Таблиця 32

Зв'язування наведених як приклад біспецифічних анти-ОХ40/анти-ЕАР антигензв'язуючих молекул з рекомбінантним людським ЕАР, мишачим ЕАР і ЕАР мавп ціномолгус . Ни БАР | ти БАР | супо ГАР

Примітка: всі величини Ко залежали від конкретних умов експерименту. 4.5.2 Зв'язування з людським ОХ40 - конкурентне зв'язування з двовалентним зв'язуванням 9)

Для підтвердження здатності обох двох анти-0Х40 Рар-доменів зв'язуватись з пиОхХ40 аналогічно зв'язуванню Ідс, застосовували клітинний ЕКЕТ (флуоресцентний резонансний перенос енергії) -аналіз (фірма Тадійе). Для цього 10000 Нек293 ЕВМА клітин/на лунку, трансфектованих злиттям пиОХ40-5МАР і мічених за допомогою застосовуваного як донора в

ЕВЕТ-аналізі тербія (фірма Сі5біо), змішували з 0,2нМ (4984) до, міченим застосовуваним в

ЕВЕТ-аналізі акцептором а2 (фірма Сівббріо). Крім того, додавали, використовуючи розведення концентрацій від 0,004 до 75О0нНМ, або (4984) Ідс, або біспецифічну конструкцію 4984/28Н1 (2-41), та інкубували протягом 2-4 год. при КТ. Флуоресцентний сигнал вимірювали при 620 нм для донора флуоресценції (тербій) і при 665 нМ для барвника-акцептора флуоресценції (М100

Рго, фірма Тесап). Розраховували співвідношення 665/620 х 1000 і вираховували значення для контролю (тільки клітини) (фіг. 1З3Н). Для визначення ЕСвхо результати аналізували за допомогою

Сгарі Рай Ргізіт5. Встановлені величини ЕСво представлені в таблиці 33. Для всіх конструкцій в форматі 241 виявлені величини ЕСзхо, подібні величинами для двовалентного Ідс, в вказаних експериментальних умовах.

Таблиця 33

Величини ЕСво, що характеризують конкурентне зв'язування дос порівняно з двовалентними 2-1

ОХ40-антигензв'язуючих молекулами; 1-2 год. 4.5.3 Одночасне зв'язування з ОХ40 і ЕАР

Здатність зв'язуватись одночасно з конструкцією людський ОХ40-Ес (Кін) і з людським ЕАР оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (РА). Все 5РА-експерименти здійснювали за допомогою пристрою Віасоге 200 (фірма Віасоге) при 25 "С, використовуючи

НВ5-ЕР як рухомий буфер (0,01М НЕРЕЗБ, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗммМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта

Р2О, фірма Віасогє).

Конструкцію біотинільований людський ОХ40 в злитті з Ес (Кін), безпосередньо зшивали з різними проточними комірками стрептавідинового (ЗА) сенсорного чипа. Використовували рівні іммобілізації, що відповідали аж 1000 резонансним одиницям (2).

Біспецифічні антитіла, мішенями яких є ОХ40 і ЕАР, пропускали через проточні комірки в концентрації 250ніМ зі швидкістю потоку З0 мкл/хв протягом 90 с і режим дисоціації встановлювали на 0 с. Людський РАР ін'єктували в проточні комірки як другий аналіт зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 90 с в концентрації 250ОнНМ (фіг. 12Е). Моніторинг дисоціації комплексу здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референос-комірці, в якій був відсутній іммобілізований білок.

Всі біспецифічні конструкції мали здатність зв'язуватись одночасно з людським ОХ40 і людським ЕАР (фіг. 13К-13М). 4.5.4 Зв'язування на клітинах

4.5.4.1 Зв'язування з наївними порівняно з активованими людськими РВМСО біспецифічних антитіл, мішенями яких є ОХ40 і ЕАР

Людські РВМС виділяли шляхом центрифугування в градієнті густини фікола згідно з методом, описаним в прикладі 2.1.2. РВМС застосовували безпосередньо після виділення (зв'язування людських РВМС в стані спокою) або їх стимулювали для забезпечення високого рівня експресії людського ОХ40 на клітинній поверхні Т-клітин (зв'язування на активованих людських РВМС). Для цього наївні РВМС культивували протягом 4 днів в середовищі для Т- клітин, доповненої 200 од./мл пролейкіна і 2 мкг/мл ФГА-Ї, в б-лунковому планшеті для культури тканини і потім 17 день в попередньо сенсибілізованих б-ямкових планшетах для культури тканини |4 мкг/мл антитіла до людського СОЗ (клон ОКТЗ) і 2 мкг/мл антитіла до людського сра28 (клон СО28.2)| в середовищі для Т-клітин, доповненої 200 од./мл пролейкіна, при 37 "С і 5 Зо Со».

Для детекції ОХ40 наївні людські РВМС і активовані людські РВМС змішували. Для того, щоб відрізняти наївні клітини від активованих людських РВМС, клітини в стані спокою мітили перед аналізом зв'язування за допомогою барвника для оцінки проліферації клітин еРійогб70 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 65-0840-85). Потім суміш 1:1 1х105 наївних клітин, мічених еБійогб70 людських РВМС, і немічених активованих людських РВМС додавали в кожну лунку круглодонних 96-ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Огеїпег Бріо-опе, сеїЇвїтаг, каталожний Мо 650185) і здійснювали аналіз зв'язування згідно з методом, описаним в прикладі 2.1.2. Потім суміш 1:1 1х105 наївних клітин, мічених еРішогб70 людських РВМС, і немічених активованих людських РВМС додавали в кожну лунку круглодонних 96-ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Сгеіпег Біо-опе, сейїеїаг, каталожний Мо 650185) і здійснювали аналіз зв'язування згідно з методом, описаним в розділі 2.1.2

Первинні антитіла являли собою титровані конструкції антитіл до ОХ40, інкубовані протягом 120 хв при 4 "С. Розчин вторинного антитіла був сумішшю флуоресцентно міченого антитіла до людського СО4 (клон КРА-Т4, мишачий ДСК, фірма ВіоЇедепа, каталожний Мо 300532), антитіла до людського СО8 (клон КРа-Т8, мишачий ДСК, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 3010441) і кон'югованого з флуоресцеїінізотіоціанатом (ФІТЦ) Е(ар')2-фрагментом козячого дО проти людського Ід, Есу-фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма даскбзоп ІттипоНезвеагси,

Зо каталожний Мо 109 096 098), інкубували протягом 30 хв при 4 "С в темряві. Вміст планшетів остаточно ресуспендували в 90 мкл/лунку ГАС5-буфера, що містить 0,2 мкг/мл САРІ (фірма запіа Сги? Віоїес, каталожний Мо 5с-3598) і отримували дані в цей же день з використанням пристрою з 5 лазерами І 5К-Рогіезза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОІМА).

Як продемонстровано на фіг. 14К і 14С, жодна з антигензв'язуючих молекул, специфічних по відношенню до ОХ40, не зв'язувалась з людськими СО4--Т-клітинами в стані спокою або СО8:-

Т-клітинами. На противагу цьому, всі антигензв'язуючі молекули зв'язувались з активованими

СО8-4- або СО4--Т-клітинами. Зв'язування з СО4--Т-клітинами виявилось істотно більш сильним, ніж з СО8:-Т-клітинами, аналогічно тому, що вже було описано в прикладі 4.3.2.1. Як продемонстровано на фіг. 14Л і 14Н, двовалентні націлені на ЕАР конструкції антитіла до ОХ40 мали більш сильні характеристики зв'язування з ОХ40-позитивними клітинами, ніж відповідні клони в форматі одновалентного антитіла, завдяки підвищенню авідності. Всі сконструйовані формати 241 зв'язувались з подібною силою з ОХ40-позитивними клітинами незалежно від зв'язуючого фрагмента другої специфічності (фіг. 14П і 14С). 4.5.4.2 Зв'язування з пухлинними клітинами, що експресують людський ЕАР

Зв'язування з ЕАР, що знаходиться на клітинній поверхні, тестували з використанням клітин

МУМ266-4 (АТОС СВІ -1676), що експресують людський фібробласт-активований білок (ПпиЕАР).

Відсутність зв'язування з ОХ40-негативними РАР-негативними пухлинними клітинами тестували з використанням клітин Аб549 Мис ід м Кей (фірма Ез5зепбіозсіепсе, каталожний Мо 4491), що експресують флуоресцентний білок Мисі дп Кеа, фарбування яких обмежено ядрами, що дозволяло відрізняти їх від немічених позитивних за людським ЕАР клітин М/М266-4. Батьківські клітини Аб549 (АТСС ССІ-185) трансдукували лентивірусом Ев55еп СеїППРіауєг Мис ідні ВАєй (фірма Еззепріозсіепсе, каталожний Мо 4476; ЕЕтТа, пуроміцин) при МОЇ! З (Ті/клітина) в присутності 8 мкг/мл полібрена, слідуючи стандартним протоколом Еб55еп. Це дозволяло досягати ефективності трансдукції 270 9.

Суміш з 5х107 немічених клітин УУМ266-4 і немічених клітин А549 Мис ід м Кей в РГАС5- буфері додавали в кожну лунку круглодонних 96-ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Огеїіпег Біо-опе, СеїЇвіаг, каталожний Мо 650185) і аналіз зв'язування здійснювали згідно з методом, описаним в прикладі 4.3.2.2. Планшети центрифугували протягом 4 хв при 400 х д при 4"С і супернатант відкидали. Клітини промивали одноразово 200 мкл О-ЗФР і дебрис 60 ресуспендували шляхом короткочасного і обережного струшування. Всі зразки ресуспендували в 50 мкл/на лунку холодного (4 "С) РАС5З-буфера, що містить біспецифічні антигензв'язуючі молекули (первинне антитіло) в зазначеному діапазоні концентрацій (титрованих) та інкубували протягом 120 хв при 4 "С. Потім клітини промивали 4 рази, використовуючи 200 мкл (4 "с)

ЕАСб-буфера, і ресуспендували шляхом короткочасного струшування. Потім клітини фарбували, використовуючи 25 мкл/на лунку холодного (4 С) розчину кон'югованого з флуоресцеінізотіоціанатом (ФІТЦ) Е(ар')2-фрагмента козячого ДО проти людського Ід, Есу- фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма Удаскзоп ІттипокКезеагсії, каталожний Мо 109-096-098) як вторинне антитіло та інкубували протягом 30 хв при 4 С в темряві. Вміст планшетів остаточно ресуспендували в 90 мкл/лунку ГАС5-буфера, що містить 0,2 мкг/мл САРІ (фірма запіа Стги? Віоїес, каталожний Мо 5со-3598), і отримували дані в цей же день з використанням пристрою з 5 лазерами І ЗК-Еопезза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОІМА).

Як продемонстровано на фіг. 15В і 15Д, націлені на БАР одно- і двовалентні анти-ОХ40 антигензв'язуючі молекули ефективно зв'язувались з клітинами-мішенями, що експресуюють людський БАР. При цьому, тільки в націлених на БАР одно- і двовалентних анти-ОХ40 антигензв'язуючих молекулах виявлені властивості, що безпосередньо таргетують пухлину. Для клону 489, що має високу афінність зв'язування з БАР в одновалентній конструкції, продемонстровано більш сильне зв'язування з людським ЕАР, ніж для відповідного клону 28НІ1, що зв'язує ЕАР в такому ж одновалентному форматі (фіг. 15Д). Жодного зв'язування з ЕАР не виявлено в 2--1-конструкцій, в яких був відсутній БАР-зв'язуючий домен (незафарбований кружечок, фіг. 15Е). Величини ЕСво, що характеризують зв'язування з активованими людськими браг-Т-клітинами і ЕАР-позитивними пухлинними клітинами, узагальнені в таблиці 34.

Таблиця 34

Величини ЕСзо, що характеризують зв'язування ОХ40-зв'язуючого агента (клон 4984) в націленому на ЕРАР одно- або двовалентному форматі з розташованими на клітинній поверхні людським ЕАР і людським ОХ40

ЕАР"-клітина ОХ40:-клітина 4984, 28НІ1 7 4984,489 |РАР2Т | 7 47777777 Ї7771111111190с1С

І 4984,0Р47 |гАР2Т | 7 599.4.....МЮЇ Й | .Й.ЙБК 90. ЙДЙБЩЖ

Приклад 5

Функціональні властивості біспецифічних молекул антитіл, зв'язуючих людський ОХ40 5.1 Клітини НегГа, які експресують людський ОХ40 і репортерний ген МЕ--кКВ-люциферази

Як продемонстровано в прикладі 3.1, обмежена залежна від дози МЕКВ-активація індукувалась при додаванні антитіл до ОХ40 РЗ29СІ АГА пиЇдст! до репортерної лінії клітин

Нега пОХ40 МЕКВ Гис1. Перехресне гіпер-зшивання антитіл до ОХ40 за допомогою

Зо антилюдських Ідс-специфічних вторинних антитіл сильно підвищувала індукцію опосередкованої МЕкКВ активації люциферази залежно від концентрації. Таким чином, при створенні винаходу тестували активуючу здатність МЕКВ відібраних анти-ОХ40-зв'язуючих агентів (8НО, 124, 4989) в одновалентному і двовалентному націленому на БАР форматі індивідуально і з перехресним гіпер-зшианням конструкцій за допомогою або вторинного антитіла, або ЕАР--лінії пухлинних клітин.

Як описано в прикладі 3.1, прикріплені клітини Неїа пОх40 МЕКВ сі культивували протягом ночі при клітинній густині 0,3х105 клітин на лунку і стимулювали протягом 5-6 год. середовищем для аналізу, що містить титровані анти-ОХ40-зв'язуючі агенти (клон 8НЗ і 1с4) в націленому на ГАР одновалентному (ЕАР 1-11) і двовалентному (БАР 2--) форматі і у вигляді конструкцій РЗ2ОСІ АГА пи 401. Для тестування впливу перехресного гіпер-зшивання за допомогою вторинних антитіл додавали 25 мкл/лунку середовища, що містить як вторинне антитіло Е(ар' )2-фрагмент козячого Ідсї проти людського ІдСсї, Есу-специфічного (фірма дасквоп

ІттипоНевзеатгсі, каталожний Мо 109 006 098) в співвідношенні 1:12 (первинне антитіло до вторинного антитіла). Для оцінки впливу перехресного гіпер-зшивання за допомогою зв'язування з БАР, що знаходиться на клітинній поверхні 25 мкл/на лунку середовища, що містить пухлинні ЕАР"-клітини (М/М266-4 і/або МІН/3Т3-ПиЕАР, клон 39), спільно культивували у співвідношенні 2:11 (дворазове перевищення пухлинних ГАР'-клітин по відношенню до репортерних клітин на лунку). Кількість активованого МЕКВ оцінювали шляхом вимірювання випускання світла з використанням системи для аналізу люциферази 1000 і репортерного лізуючого буфера (обидві фірми Рготеда, каталожний Мо Е4550 і каталожний Ме Е3971) згідно з методом, описаним в прикладі 3.1.

Як продемонстровано на фіг. 16А-16Ж, присутність всіх конструкцій анти-ОХ40 індукувала обмежену активацію МЕКВ. Перехресне гіпер-зшивання через вторинне пиЇдо Есу-специфічне антитіло підвищувало активацію МЕКВ при використанні обох зв'язуюючих агентів в форматі пшдое1 РЗ29ОІ АГА, а також в націленому на ЕАР одно/двовалентному форматі. При цьому одновалентне зв'язування з ОХ40 виявилось менш ефективним, ніж двовалентне зв'язування з

ОХ40, що демонструє необхідність в олігомеризації ОХ40-рецептора для повної активації осі передачі сигналів ОХ40. Пухлинна клітина, що експресує ЕАР, сильно підвищувала індукцію опосередкованої МЕКВ активації люциферази залежно від концентрації, коли застосовували націлені на ЕАР молекули (зафарбований квадрат і трикутник). Така дія не виявлена, коли ці ж клони застосовували в "ненаціленому" форматі пиЇдое1 РЗ290Г АГА, оскільки конструкція не могла піддаватися додатковому перехресному гіпер-зшиванні за допомогою пухлинних ЕАР"- клітин. | в цьому разі двовалентна молекула перевищувала за активністю одновалентну молекулу. Високий рівень експресії ЕАР гарантував більш високе перехресне зшивання і в результаті більш високу агоністичну дію націленої на ЕАР конструкції (порівняно з позначеною зафарбованим ромбом лінією з високим рівнем експресії ЕАР. МІН/3Т3-ПиГАР, клон 39 і ЕБАР- позитивними клітинами М/М266-4). Для двовалентної націленої на ЕАР конструкції виявлений в присутності пухлинних ЕАР--клітин пік активності при концентрації -«- від 0,1 до їнНМ. Подальше підвищення концентрації сполуки фактично знижувало її здатність індукувати МЕКВ. Найбільш ймовірно, двовалентні конструкції, що зв'язуються тільки з однієї мішенню (БАР або ОХ40), були присутні в більш високих концентраціях, перевершуючи конструкції, що зв'язуються одночасно з

ЕАР ї ОХ40. В свою чергу, зазначене зменшення перехресного зшивання знижувало агоністичну передачу сигналів ОХ40.

В іншому експерименті прикріплені клітини Неба пОХ40 МЕКВ І Шс1 культивували протягом ночі при клітинній густині 0,2х105 клітин на лунку і стимулювали протягом 5 год. середовищем для аналізу, що містить титровані анти-ОХ40-зв'язуючі агенти (клон 4989) в націленому на ЕАР

Зо одновалентному (ЕАР 1-1) і двовалентному (БАР 2-1 і ЕАР 2-2) форматі і у вигляді конструкцій

РЗ29И1І АГА пи Іда1. Таргетінг ЕАР в форматі 241 забезпечувався двома різними клонами, що зв'язують ЕАР, 28НІ з низькою афінністю до ЕАР і 489 з високою афінністю до ЕАР. Для оцінки впливу перехресного гіпер-зшивання за допомогою вторинних антитіл додавали 25 мкл/лунку середовища, що містить як вториннн антитіло К(аб')2-фрагмент козячого ЇдДС проти людського

Ід, Есу-специфічного (фірма даскзоп ІттипоНевзеагсі, каталожний Мо 109 006 098) у співвідношенні 1:2 (первинне антитіло до вторинного антитіла). Для оцінки впливу перехресного гіпер-зшивання за допомогою зв'язування з ЕАР, яуі перебувають на клітинній поверхні 25 мкл/на лунку середовища, що містить пухлинні ЕАР--клітини (МІН/3Т3-ПиЕАР, клон 19), спільно культивували в співвідношенні 2:1 (чотирикратне перевищення кількості пухлинних ЕАР"-клітин по відношенню до кількості репортерних клітин на лунку). Кількість активованого МЕКВ оцінювали шляхом вимірювання випускання світла з використанням системи для аналізу люциферази 1000 і репортерного лізуючого буфера (обидва фірми Рготеда, каталожний Мо

Е4550 і каталожний Мо Е3971) згідно з методом, описаним в прикладі 3.1.

Як продемонстровано на фіг. 163-160, в цьому експерименті також продемонстровано, що присутність всіх анти-0Х40 конструкцій індукувала обмежену активацію МЕкКВ. Перехресне гіпер-зшивання через вторинне ПпшдОос Есу-специфічне антитіло підвищувало зазначену активацію МЕКВ при використанні всіх зв'язуюючих агентів в націленому на ЕАР одно/двовалентному форматі. При цьому одновалентне зв'язування з ОХ40 виявилось менш ефективним, ніж двовалентне зв'язування з ОХ40, що демонструє необхідність в олігомеризації

ОХ40-рецептора для повної активації осі передачі сигналів ОХ40 (фіг. 16К, порівняння величин

ЕС»во). Пухлинні клітини, що експресують ЕАР, сильно підвищували індукцію опосередкованої

МЕКВ активації люціферази залежно від концентрації, коли застосовували націлені на ЕАР молекули (зафарбований квадрат, трикутник, наполовину зафарбовані кружечки). Така дія не виявлена, коли 241-формат ЕРАР-зв'язуючого фрагмента замінювали на незв'язуючий модуль

ОРА7 (зафарбований кружечок), оскільки конструкція не могла піддаватись додатковому перехресному гіпер-зшиванні за допомогою пухлинних ЕАР--клітин. І в цьому разі двовалентна молекула перевищувала за активністю одновалентну молекулу (при порівнянні величин ЕСво).

Для одновалентної націленої на БАР і двовалентної націленої на ОХ40 конструкції (2-41) виявлена в присутності пухлинних ЕАР--клітин найбільш висока активність на рівні плато. На бо противагу одновалентної ОХ40-зв'язуючої 1--1-конструкції двовалентна зв'язуюча ОХ40 конструкція в форматі 241 мала підвищену агоністичну активність в результаті олігомеризації

ОХ40 (вплив на величину ЕСво). Однак, ймовірно, що через одновалентне зв'язування 21- конструкцій з ЕАР могло перехресно зшивати подвійну кількість вказаних молекул порівняно з двовалентним ЕАР-зв'язуючим форматом 2-2, що можна пояснити більш високою активацією

ОХ40 на рівні плато (фіг. 16Л, більш високий рівень плато). 5.2 Опосередковувана ОХ40 костімуляція субоптимально індукованих ТОК попередньо активованих людських СО4-Т-клітин

Відібрані зв'язуюючі агенти (клони 8НО їі 1054) в націленому на ЕАР одновалентному або двовалентному форматі тестували по відношенню до їх спроможності спільно активувати Т- клітини при їх іммобілізації на поверхні.

Як описано в прикладі 3.2, попередньо активовані мічені СЕБЕ ОХ40-позитивні СО4-Т- клітини стимулювали протягом 72 год. взятими в субоптимальній концентрації іммобілізованими на планшеті антитілами до СОЗ в присутності титрованих антитіл до ОХ40, іммобілізованих на поверхні планшета. Вплив на виживаність і проліферацію Т-клітин аналізували, здійснюючи моніторинг загальної кількості клітин і розведення СЕБЕ в живих клітинах за допомогою проточної цитометрії. Додатково клітини фарбували спільно флуоресцентно міченими антитілами проти маркерів активації і диференціювання Т-клітин, наприклад СО127, СО45КА,

Тіт-3, СОб62І. і самого ОХ40.

Костімуляція за допомогою іммобілізованих на планшеті біспецифічних анти-ОХ40 антигензв'язуючих молекул сильно підвищувала залежно від дози субоптимальну стимуляцію попередньо активованих людських СО4-Т-клітин при використанні іммобілізованого на планшеті антитіла до людського СОЮЗ (фіг 17А і 17Б). Проліферація Т-клітин була сильнішою, характеризуючись більш зрілим фенотипом з більш високим відсотком СОб2ГІом, Тіт-3- позитивних і ОХ40-позитивних активованих клітин (підвищення гранулярності (5532) виявлено тільки для клону 8НУ). При цьому одновалентні зв'язування (символ у вигляді трикутника) з

ОХ40 виявилося менш ефективним, ніж двовалентне зв'язування (символ у вигляді квадрата) з

ОХ40, що свідчить про необхідність олігомеризації ОХ40-рецептора для повної активації осі передачі сигналів ОХ40. Зміни, що становлять половину від максимального всіх проаналізованих параметрів Т- клітинної активації, досягались в діапазоні концентрацій від З до

Зо 2300пМ, і вони узагальнені для клону 1654 на фіг. 18А-18Г і в таблиці 35.

Таблиця 35

Величини ЕСзо, що характеризують збереження субоптимальної ТОВ-стимуляції за допомогою іммобілізованих на планшеті націлених на ЕРАР одно- і двовалентних конструкцій анти-охХ40 (клон 1054) 164 5.3 Опосередковувана ОХ40 костімуляція субоптимально індукованих ТОВ людських РВМСО в стані спокою і перехресне гіпер-зшивання за допомогою ЕАР, присутнього на клітинній поверхні

Як було продемонстровано в прикладі 5.1, додавання пухлинних ЕАР»--клітин може призводити до сильного підвищення активності МЕКВ, індукованої націленими на ЕАР одно- і двовалентними конструкціями анти-ОХ40, в людських ОХ40-позитивних репортерних лініях клітин за допомогою вираженої олігомеризації рецепторів ОХ40. Крім того, при створенні винаходу тестували націлені на ГАР одновалентні (1--1) і двовалентні (2--1, 2-2) конструкції анти-ОХ40 в присутності клітин МІН/З3Т3-пиЕАР, клон 39, по відношенню до їх здатності підтримувати субоптимальну стимуляцію ТСА людських РВМО-клітин в стані спокою.

Препарати людських РВМСО містили (1) ОХ40-негативні СО4-- і СО8:-Т-клітини в стані спокою і (2) антигенпрезентуючі клітини, що несуть різні молекули Есу-рецептора на своїй поверхні, наприклад, В-клітини і моноцити. Антитіло до людського СОЗ людського Ідса1-ізотипу могло зв'язуватись за допомогою своєї Ес-ділянки з присутніми молекулами Есу-рецептора і опосередковувати пролонговану активацію ТСА на ОХ40-негативних СО4-- і 2О8:-Т-клітинах в стані спокою. Потім ці клітини протягом декількох годин починали експресувати ОХ40.

Функціональні з'єднання-агоністи ОХ40 можуть передавати сигнал через рецептор ОХ40, присутній на активованих СО8:- і СО4--Т-клітинах, і підтримувати опосередковану ТОВ стимуляцію.

Мічені СЕБЕ людські РВМС в стані спокою стимулювали протягом 4-5 днів взятим в субоптимальній концентрації антитілом до СОЗ в присутності клітин ЕАР--МІН/З3Т3-ПиЕАР, які піддавали опроміненню, клону 39 і титрованих анти-ОХ40 конструкцій. Аналізували вплив на виживаність і проліферацію Т-клітин, здійснюючи за допомогою проточної цитометрії моніторинг загальної кількості клітин і концентрації СЕ5БЕ в живих клітинах. Додатково клітини спільно фарбували флуоресцентно міченими антитілами до маркера Т-клітинної активації і дозрівання

СО25, гранзіми В, СО62Ї ії СО0127. В другому експерименті клітини спільно фарбували флуоресцентно міченими антитілами до маркера Т-клітинної активації і дозрівання СО25 і Тіт- 3.

Збирали клітини мишачих ембріональних фібробластів МІН/3Т3-пПиБАР, клон 39 (див. приклад 4.3.2.2) з використанням буфера для дисоціації клітин (фірма Іпийгодеп, каталожний Мо 13151-014) протягом 10 хв при 37 "С. Клітини одноразово промивали О-ЗФР. Клітини МІН/ЗТ3-

ПИЧЕАР, клон 39 культивували при густині 0,2х105 клітин/лунку в середовищі для Т-клітин в стерильному круглодонному 9б6-лунковому планшеті для прикріпленої культури тканини (фірма

ТРР, каталожний Ме 92097) протягом ночі в інкубаторі (Нега Сеї!І 150) при 37 "С і в атмосфері, що містить 5 95 СО». На наступний день клітини опромінювали в рентгенівському опромінювачі дозою 4500 радій для попередження подальшого надмірного розростання людських РВМС під впливом лінії пухлинних клітин.

Людські РВМС виділяли шляхом центрифугування в градієнті густини фіколла і мітили за допомогою СЕБЕ згідно з методом, описаним в прикладі 2.1.2. Клітини додавали при густині 0,75х105 клітин на лунку (перший експеримент) або 0,5х105 клітин на лунку (другий експеримент). Додавали антитіло до людського СОЗ (клон МО, людський ДОСІ) в кінцевій концентрації Т1ОНМ і націлені на ЕАР одно- і двовалентні анти-ОХ40 антигензв'язуючі молекули в вказаних концентраціях. Клітини активували протягом 4-5 днів при 37 "С і в атмосфері, що містить 5 95 СО», в інкубаторі (Нега СеїІ 150). Потім фарбували поверхню клітин кон'югованими з флуоресцентним барвником антитілами до людського СО4 (клон КРА-Т4, фірма Віої едепа, каталожний Мо 300532), СО8 (клон КРа-Т8, фірма ВіоЇ едепі, каталожний Мо 3010441), 025 (клон М-А251, фірма Віої едепа, каталожний Мо. 356112), СО127 (клон АО1905, фірма ВіоїІедепа,

Зо каталожний Мо 351234) і СО62І (клон ОКЕС 56, фірма Віоіїеєдепа, каталожний Мо 304834) або

Тіт-3 (клон Е38-Е2Е, фірма Віоієдепа, каталожний Мо 345012) протягом 30 хв при 4 "С. Для підвищення проникності клітинної мембрани клітинний дебрис промивали двічі РАС5-буфером, потім ресуспендували в 50 мкл/на лунку свіжоприготованого буфера ЕохР3 Ріх/Регт (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо. 00-5123 ії 00-5223) протягом 45 хв при кімнатній температурі в темряві. Після триразового промивання Регт-М/азп-буфером (фірма еВіозсіепсе, каталожний

Мо 00-8333-56) здійснювали внутрішньоклітинне фарбування клітин, використовуючи 25 мкл/на лунку Репт-УУазнп-буфера, що містить антитіло до людського гранзіма В (клон 58-11, фірма ВО

Віозсіепсе, каталожний Мо 561142), протягом 1 год. при кімнатній температурі в темряві. Клітини ресуспендували в 85 мкл/лунку ГАС5-буфера і дані отримували з використанням проточного цитометра Еогіезза з 5 лазерами (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОІМА).

Як продемонстровано на фіг. 20А-203, костімуляція "ненаціленою" конструкцією анти-0хХ40 (8НО) йшШо9с1 РЗ2ОСІАГА (незафарбований квадрат) не підтримувала субоптимально стимульовані ТК СО4- ії СО8-Т-клітини. Перехресне гіпер-зшивання націлених на БАР одно- (зафарбований трикутник) і двовалентних (зафарбований квадрат) анти-ОХ40 конструкцій завдяки присутності клітин МІН/3Т3-пиБАР, клон 39 сильно підвищувало проліферацію, виживаність та індукувало підвищений активований фенотип людських СО4- і СО8-Т-клітин. У разі високо афінного клону 8НУ (фіг. 20А-203) одновалентна і двовалентна біспецифічна антигензв'язуюча молекула мала порівняну здатність зберігати субоптимальну стимуляцію ТС.

В обох конструкцій і в цьому разі виявлений пік активності при «- 0,1 - 1нНМ і знижену відповідь при більш високій концентрації. Аналогічно даним, отриманим при застосуванні МЕКВ- репортерної клітинної лінії (фіг. 16А-16Н), це може бути наслідком конкуренції за зв'язування з мішенню між конструкціями, які зв'язувались тільки з ЕАР або ОХ840, і тими, які зв'язувались одночасно з обома мішенями і таким чином, мали необхідне перехресне зшивання. Цей ефект є менш вираженим, коли тестували клон 154, що має низьку афінність в націлених на БАР одновалентних конструкціях порівняно з двовалентними анти-ОХ40 конструкціями (фіг. 21 А-21

В). При цьому одновалентне антитіло чітко поступалось за активністю двовалентної конструкції.

Це вдалось найбільш чітко продемонструвати, коли агоністичну здатність кожної конструкції кількісно оцінювали за площею під кривою і будували графік однієї відносно іншої (фіг. 21А- 218). бо Результати, отримані при здійсненні другого експерименту, представлені на фіг. 21Г-213 і

21К-210 відповідно. Як продемонстровано на фіг. 21Г-213, костімуляція ненаціленим форматом анти-0Х40 (4984) 2-41 ОР47 (незафарбований кружечок) не підтримувала субоптимально стимульовані ТК СО4- ії СО8-Т-клітини. Перехресне гіпер-зшивання націлених на БАР одно- (зафарбований трикутник) і двовалентних (зафарбований квадрат, наполовину зафарбований кружечок) анти-0ОХ40 конструкцій завдяки присутності клітин МІН/3Т3-ПиЕгАР, клон 39 сильно підвищувало виживаність та індукувало підвищений активований фенотип людських СО4- і СО8-

Т-клітин. Одновалентна анти-ОХ40 конструкція (141; зафарбований трикутник) мала меншу здатність зберігати ТСК-стимуляцію, ніж двовалентні анти-ОХ40 націлені конструкції (наполовину зафарбований кружечок, зафарбований квадрат). Двовалентна по відношенню до зв'язування БАР 2-ж2-конструкція в більш низьких концентраціях вже мала здатність зберігати субоптимальну ТСВ- стимуляцію порівняно з одновалентними по відношенню до зв'язування з

ЕАР 2--1-конструкціями. В форматі 24-41 клон 489, що має високу афінність зв'язування ЕАР, явно перевищував за силою зв'язування клон 28Н1 (фіг. 21К-210), що має низьку афінність. Це дозволяє припустити, що величини ЕСво, що характеризують біологічну активність, були обумовлені зв'язуванням з БАР (22» 241 (489)» 241 (28Н1)). Це вдалось найбільш чітко продемонструвати, коли агоністичну здатність кожної конструкції кількісно оцінювали для аналізованого маркера за площею під кривою і порівнювали між собою відповідні графіки (фіг. 21Р). 5.4 Попередження АОСС шляхом застосування формату людського ІдДс1 РЗ29ОГ АГА

Антитіла людського Ідс1-класу можуть індукувати антитіло-обумовлену клітинозалежну цитотоксичність (АОСС) позитивних за антигеном клітин-мішеней завдяки зв'язуванню з Есу- рецепторами (Есук) на АЮСС-компетентних клітинах, наприклад МК-клітинах. Таким чином, компетентне по відношенню до АОСС антитіло до ОХ40 може опосередковувати лізис недавно активованих ОХ40--Т-клітин і зменшувати пул реактивних по відношенню до пухлини Т-клітин.

Інтродукція мутації ІДС1РЗ2ОСГ АГА в Ес-ділянці антитіла попереджає зв'язування з Есук (публікація міжнародної заявки на патент МО 2012/130831 АТ) і тим самим АОСС в присутності

МК-клітин. Однак зв'язування з ЕсМ-рецептором не змінюється, що гарантує Ідс-подібну фармакокінетику антитіла.

Відібрані клони конвертували в канонічний формат людського ІдДС1 для оцінки їх здатності індукувати АОСС. Для оцінки компетентності по відношенню до АЮСС мічені за допомогою

РКн26 ОХ40-позитивні пухлинні клітини (репортерна клітинна лінія Неба пОХ40 МЕКВ І ис) і свіжовиділені МК-клітини спільно культивували при співвідношенні Е до Т 3:1 в присутності ряду серійних розведень антитіл до ОХ40 (формат людського ЇДО1 або людського Ідс1-РЗ29СДІ АЇ А).

Кількісну оцінку опосередкованої МК-клітинами АЮСС здійснювали на основі вивільнення лактатдегідрогенази (І ОН) і кількості ОАРІ-позитивних клітин.

В цілому, метод полягав у наступному: клітини Неса пОхХ40 МЕКВ Гис1 (приклад 3.1) мітили за допомогою набору РКН-26 Кей РіІногезсепсе Сеї! ІпКег (фірма бідта, каталожний Мо

РКН2бОЇ) згідно з методом, описаним в прикладі 2.3.2. Мічені РКН-26 клітини

Нега пОх40 МЕКВ Інс1 висівали з густиною 0,5х105 клітин на лунку в середовище АЇМ М (фірма сСірсо, каталожний Мо 12055-09) стерильного 96-ямкового круглодонного планшета для адгезійної культури тканини (фірма ТРР, каталожний Мо 92097) протягом ночі при 37 "Сі 5 95

СО» в інкубаторі (Нега Сей 150). На наступний день людські РВМС виділяли шляхом центрифугування в градієнті густини фікола згідно з методом, описаним в прикладі 2.1.2.

Виділення МК-клітин здійснювали за допомогою набору для виділення МАС5-негативних людських МК-клітин (фірма Мікепуї Віоїес, каталожний Мо 130-092-657) згідно з інструкціями виробника. МК-клітини додавали з густиною 1,5х105 клітин на лунку в середовище АЇМ М до досягнення співвідношення Е до Т, що становить 3:1. Антитіла до ОХ40 (формат людського

Ід51 або людського Ідс1 РЗ290|АГА) додавали в вказаних концентраціях і планшети інкубували протягом ночі при 37 "С і 5 95 СО» в інкубаторі (Нега Сеї! 150). Через 4 год. відбирали проби супернатанта по 100 мкл для здійснення аналізу ІОН і середовище замінювали свіжим середовищем АЇМ-У. І ОН-активність кількісно оцінювали, використовуючи набір для детекції цитотоксичності - ОН (фірма Коспе, каталожний Мо 11644793001) згідно з інструкціями виробника, застосовуючи рідер для мікропланшетів ЗресігаМах М5/М5е (фірма МоїіІесшаг

Оемісевз) (фільтр: 490-650 нм, час інтегрування 1 мс).

Через 24 год. клітини відкріпляли за допомогою трипсину. Клітини фарбували міченими антитілами до людського СО56 (клон МСАМ16.2, мишачий Ідс1 к, фірма ВіоїЇ едепа, каталожний

Мо 562751), людського СО25 (клон МА251, мишачий ІдсС1 к, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 356116) і людського СОб6У (клон ЕМ5О, мишачий Ідс1 к, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 356116), інкубували протягом 20 хв при 4"С в темряві. Вміст планшетів остаточно бо ресуспендували в 80 мкл/на лунку ЕАСЗ-буфера, що містить 0,2 мкг/мл БАРІ (фірма Запіа Сти?

Віоїес, каталожний Мо 5606-3598), дані отримували з використанням пристрою І ЗК-Рогезза з 5 лазерами (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОІМА).

Всі антитіла в форматі АОСС-компетентного людського ЇдДО1 мали здатність індукувати лізис

ОХ40-позитивних клітин в ступені, аналогічному ступеню, характерному для АОСС- компетентного референс-антитіла (зЗА201) проти ЕСЕК. Клони в форматі ІДСРЗ290Г АГА не могли опосередковувати АОСС (див. Фіг. 22А і 22Б).

Інтродукція мутації Ідс1 РЗ2ОСІАГА в Ес-ділянці вказаних в цьому описі націлених форматів попереджала зв'язування з ЕсукК (публікація міжнародної заявки на патент М/О 2012/130831 АТ), і тим самим АЮСС в присутності МК-клітин. Однак зв'язування з ЕсМ- рецептором не змінювалось, що забезпечувало ІдбС-подібну фармакокінетику антитіла. На противагу вже відомим антитілам до ОХ40, перехресне гіпер-зшивання, необхідне для оптимальної агоністичної передачі сигналів ОХ40, було присутнє в біспецифічних антитілах, запропонованих у винаході, завдяки зв'язуванню з ЕАР-позитивними пухлинними клітинами або фібробластами. Наявність РАР-позитивності або на асоційованих з пухлиною фібробластах, або на самих пухлинних клітинах, описана при багатьох пухлинних станах. Таким чином, біспецифічний формат має потенціал сильного опосередкованого ОХ40 агоністичної дії в мікрооточенні пухлини за відсутності системної активації, яка може попереджати зв'язану з імунітетом токсичність. На відміну від канонічних антитіл до ОХ40, біспецифічні антигензв'язуючі молекули, запропоновані у винаході, що не індукували АОСС активованих незадовго до цього

ОХ40-позитивних ефекторних Т-клітин. Таким чином, біспецифічні антитіла потенційно можуть реактивувати раніше існуючу, але пригнічену адаптивну імунну відповідь проти пухлинних клітин та їх можна ефективно застосовувати для лікування пацієнтів, які страждають на рак.

Приклад 6

Створення антитіл до 4-188 і застосовуваних як "інструментів" зв'язуючих агентів 6.1 Одержання, очистка і характеризація антигенів і скринінг "Інструментів" для створення нових 4-188В-зв'язуючих агентів за допомогою фагового дисплея

В таблиці 37 представлені послідовності КДНК та амінокислотні послідовності злитих конструкцій антиген-Ес. Послідовності ДНК, які кодують ектгодомени 4-18В людини, мишей або мавп ціномолгус (Таблиця 36), субклонували в рамці зчитування з СН2- і СНЗ-доменами

Зо важкого ланцюга людського ІДСі на ланцюзі з "виступом" (Мегсйапі та ін., 1998). Сайт розщеплення протеазою АсСТЕМ інтродукували між ектодоменом антигену і Ес людського ІдО1.

Амі-мітку для спрямованого біотинілювання інтродукували на С-кінець конструкції антиген-Ес з "виступом". Комбінація конструкції антиген-Ес-ланцюг з "виступом", яка містить мутації з354С/1366МУУ, з Ес-ланцюгом із "западиною", яка містить мутації У349С/13665/І 368А/У407У,

З5 дозволяє створювати гетеродимер, який включає одиничну копію ланцюга, що містить ектодомен 4-188, отримуючи тим самим мономірну форму зчепленого з Ес антигену (фіг. ТА). В таблиці 37 представлені послідовності КДНК та амінокислотні послідовності злитих конструкцій антиген-Ес.

Таблиця 36

Нумерація амінокислот ектодоменів (ЕСО)) антигена та їх походження

Таблиця 37

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності мономерних які містять антиген-Ес(Кій) злитих молекул (одержаних шляхом комбінації одного Ес-ланцюга із "западиною" з одним ланцюгом конструкції антиген-Ес з "виступом")

ЗЕО

ІО Антиген Послідовність

МО:

Нуклеотидна 124 | послідовність Ес-ланцюга див. таблицю 2 із "западиною"

Таблиця 37

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності мономерних які містять антиген-Ес(Кій) злитих молекул (одержаних шляхом комбінації одного Ес-ланцюга із "западиною" з одним ланцюгом конструкції антиген-Ес з "виступом")

ЗЕО

ІО Антиген Послідовність

МО: стаСсАдсаАсооСтТасСсАаСААСсТасоєстассцвасСАССТТста

СаАСААСААССацпсААССАаАтотасАаасооєтТтасоссСсСсССА

АсСАаСсттсАсстТотТассвсасСс,асАсАа,аСавАсСстТасцпАСАТС таСАпАСсАДатТасСсАл,асасатат г САпААСССапАААс,АаТт абАаСАаСАССАаСААСсассвАаатасаАСсТасСАвСССсс

СсТоСсАТТатотТассАХаСбСса,астасСАааСАтТатасцдсАаа,асСАас

АСсТаСсСАДаСсАасаасСА,аААСтТаАССААаААла,аавастТтасАА ссзастастасттсаасСАССТТСААССАССАаСААлаСасвИсо

АТСТОССОЯСОаССсСтТапАССААСТатТАасСтТасАСа,васСААаА сстастааТСААСааСАССАААаААСа,асаАсатсатата ссасбссбСбАааосстастаатотатстстассасасСАа,аСАаса таАССсСсСТОСТОаССССТаСсСсА,САа,ЧАаасстаасССАСТОТОСТ сАаатсаАСапААСАаТТАТАТТ ТТСсАаСИ,аСсастоАСССАА

АТСТаСАСАСААДААСТСАСАСАТИАСССАССЯТаСССА,САС

Нуклеотидна СстТаААСстТОоСТаСсИа!савАССаТтСсАаТтст ост оСССССА 242 послідовність конструкції АААСССАдасСАСАСССТСАТаАТСОТОССОЯСАССССтТалаат людський антиген 4-188- САСАТасатеастастасАаСатадаССАСаААаАСоСТаАа

Ес-ланцюг з "виступом' |шТСААатТСААСсТасатасатавАассасатавАсатасСАТА

АТаССААДпАСААдАда,ассаСасаАапАаСАаТАСААСАаСАС стассататаатАа,аСатосТсАсСатостТасСАССАС,ИАСТ сасСстТаААтТаайСААасАсТАСААаТасСААааТтсТоСААСАА ассСсТосСАаСССССАТСВАСААААССАТСТОСАААаССА

АдспсасХдасосСаАпААССАСАсСататАСАсоСстТассссс

АтасссаспАтТадаСТаАССААпААССАватсАасстатас тасстаайТСАААаасСТТсТАТоСсСсАасСаАСАТСсСоСатТааА стассАдаАаСААтТасасАаа,аССа,ацпАспААСААСТАСААаАСо дсасстосса,атастававАстоСаАСаасСТоСТСТосСтТоТАС

АасСсААластСАсСатапАСААсСсАа,САасатааАаСАа,асаА

АСатсТтстТосАТаАСТОСОЯТаАТасСАТОАаСасСтТСтТасАСААС

САСТАСАСОЯСАПААсСАасстотосстатотоСассТАААТС

СсаеасАасассСсТаААСаАСАТСТТсаАдааСССАСпААпАТТИаАА тапСАССАС тасдсааАтота7ататАяатААСстТассСсАаастасТАСАТТОСТОа тТаАТААТААСАСКСЯАСТСАпАттта,асАатооСтТатосСтТоСАА

АТАСТтотТосАаа,аСса,асСАа,сатавАСАААасАССТаТатаАСАТА тасСлаааСАаТаТатАААааТа ПТСААаАССАсадАасАатТ

ВТ ТоСсТоСАССАаСААТаСАсАа ТатаАСТасСАТТТСАсСаа тТАТСАСТОаССТОСОСОСОсСАСсСАСсСТаСсАасСАТаТататаААСАСцс

АТТаТтТАДАСААСИТСААСААТТИАСАААААААСаИТтТатАА

Нуклеотидна дадст,атасттассАСАТТТААТаАССАСАААСаТтаасСА послідовність конструкції ТСТИаТСсЯаССССтТасАсСАААсСТаттстттасАТапАдАатст 243 | антиген 4-188 мавп СТИаСТТаТтаААтТасаАСаААдааАпАса,псАсатаатотаса ціномолгус-Рс-ланцюг з САССАТСОТоСАааССаАССстототоСА,саАаСАТОСТОТаСсе "виступом" дссссасстасссстаСсаАд,аАаа,адасСАааАСАСТСТОСасСА ааТтопАСапААСАсаТтТАТАТ ТТСАасавасраасСтТСАСССАААТ

СсТаСАСАСААААСТСАСАСАТаАСССАСсСОСТаСССАасСАССТ вААСТОСТОаСсОаапаАССаИтсАатсСтТоСТСсТССССССАДА

АСССААССАСАСССТСАТОАТСТОССОЯСАССССтТалааТтсА сАТасСатеастаастасАасстадаССАСпААаАСоСстаАсват

САДИТТСААСТОИтТАСОСТасАСс,ааоастасАсатасСАТААТ сССААпАСААдда,ассасасасавАааспсАаСАсаТАСААСАаСАСИТт

Таблиця 37

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності мономерних які містять антиген-Ес(Кій) злитих молекул (одержаних шляхом комбінації одного Ес-ланцюга із "западиною" з одним ланцюгом конструкції антиген-Ес з "виступом")

ЗЕО

ІО Антиген Послідовність

МО: дссататаатсАд,аСсатосТсАсСсатосТасСсАССАасаАСТас

СсТтТОААТаСААпИаАаТАСААдИаТасСсААааТСТоСААСААдАС

СССТоССАаСССССАТСПСАСПСААААССАТСТОСАААаССААА сааСсАдасСССпАпААССАСАСвСатаТАСАСССТасссссСАТ соасаАдтТадаСТаАССААайААСсСАвсатоАаа,аостатаата сСстТаТСААДАДвастТТстТАТСССАаСаАСАТСОЯСССОЯТацпАаТт сасАсАдаСААтТасИаСАаССацАспААСААСТАСААСаАССАС состоссатаставАСТоСаАСаасСтТоСтТсСТосСТсСТАСАС

САДаСТоАСсСсОВтТапйАСААсСА,аСАасатасбАа,САс,асацпААС ат сТсАТаСТОСОСТаАТаСАТаАИаасСтТоТасСАСААССА

СТАСАСЯСАСААДСаСАааСсСстотоСсСстТаТатстоСасаТАААТОССИЯ авдапсСТаААСаАСАТСТТсаАааСССАСпСААСпСАТТаААТОа сСАСИАС стаСсАпйААсАааСтТа|асСаАСААСстТ,ассаасоСааСАССТТСТОа сбапААатТАСААсссСсататаСААлаСАа,стассссссСАссо

АССТТСсАаСАаСАТОСЬЯСЯаССАаСССААСТаСААСАТСТО сАасАаататасасбвастАСстоСааТСААпАдаТаттстТасА

ВСАаСАСССАСААСОаСссвАстассАд,атасСсАтсавсАаасастт ссАСсСТаИССТОСОаоССССАсСтТасСсАССАаАатТасаАдаАдацАСс тасСааАссСа,ааоСАсааААСТаАССААаСАа,ааасСТатТААаА сстасдасстапваСАССТТСААСаАССАпААСаааАСова сататасссасстасАССААТттасаасстасАаса,аааАаА дасатасСстаААААССааСАССАСССТАСААдсаАСсатоатат ссассостосса,атаатТатосСтТсАаСССтТАаСАССАССАТО да,асатаАсооСтаАдАдасасав,аооставасадвАСАСТОТСТасСА сагСстаатТосАСсААСАаТТАТАТТТТСсАдсасаабОсастоАС

ССАААТСТаСАСАСАДААСТСАСАСАТИаСССАСС,ТасссСА нуклеотидна ВсСАССТаААСТОСТОСОССОВсСАСсСаТСАаТСстоСстоТооо 24А послідовність конструкції СССААААСССААапАСАСССТСАТаАТОТоССсапАССССтТОа мишачий антиген 4-188- АИТСАСАТОССЯТОСТОСТОацпСсАСсатаАдаССАСС,ААСЧАСОС

Ес-ланцюг з "виступом" |ТаАпатСААаТТСсААСТСОатТАСсСОатасАссасаСсста,асАсата

САТААТаССААСАСААдАааСсСаС,аааАа,аАа,СА,аТАСААСА аСбАССтТАССССТатТаатТСоАааСатосСстСАССатосСстТасСсАССАС сАСсТааСтТаААТааСААаспАаТАСАдатасСААааТСТОоСА

АСААДасСсссСтоССАаСССССАТОСАСААААССАТСТОСААА

ВССААдАСОаСАа,аСССС,АпААССАСА,а ТаТАСАСССТас сосСАТаСсСссапАТаАХаСтТаАССААСпААССАваТатСАасст стаатасстааТСААдАдаастТСсТАТСССАаСаАСАТСЯССОА таслатассАаАаСААтТавсасСАа,аССацАсААСААСТАСАА вАССАСОЯССТОССОСТОаСсТапаАСТОССОСАСОССЯСТОСТТСТТос

ТСТАСАаСАДИСТСАСсСаВтТасАСААдаАдасСАааватааСАасСА сасаААдсатсТсТоАТаСТОСОСтТаАТасСАТОАСаСсТотТас

АСААССАСТАСАСасСсАаААсСА,сСстотоСстатстосСсаават

АААТСОССООСАСИассСстТаААСсАСАТСТТОСАСассССАСААаА

ТТаААтТааСАСИАС

ГООРСЗМСОСРАСТЕСОММАМОЇСЗРОРРМЗЕЗБЗАСИаОВТСОІСВ конструкція людський ОСКаМЕАТАКЕСЗЗТЗМАЕСОСТРОЕНСЇ СССОСКОСЗМСЕООСКО 245 |антиген 4-188-Ес-ланцюп СОЄЇ ТККИСКОССЕаТтТЕМрОоКАаісАРМУТМОБІ ЮВСКОМІ ММ з "виступом" СТКЕВОУУСОаРБЗРАВІ 5РОАЗЗУТРРАРАВЕРЕНОЗРОМОЕОЇ У

ЕОсСаЗРКЗАОЮКТНТОСРРСОРАРЕЇ сСаРЗМЕГЕРРКРКОТІ МІЗА

Таблиця 37

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності мономерних які містять антиген-Ес(Кій) злитих молекул (одержаних шляхом комбінації одного Ес-ланцюга із "западиною" з одним ланцюгом конструкції антиген-Ес з "виступом")

ЗЕО

ІО Антиген Послідовність

МО:

ТРЕМТСУМУМОУЗНЕОРЕУМКЕМУУУраМЕМНМАКТКРАЕЕЄОСУ

МОТУАМУБМІ ТМ НОМ МЕКЕМКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗК

АКОСОРВЕРОМУУТІ РРСВОЕТКМОМУБІ МС УКаЕМРЗОІАМЕ

МЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕРІ ЗК ТМОКЗеАМОВСМ

МЕЗСЗУММНЕАСНМНМУ ТОК ЗІ. ЗРаКЗаСССсМОТРЕАОКІЕМ НЕ

ГОРІ С5МСРАСТЕСОММАБЗОІЇСЗРОРРМЗЕЗЗАСОСОВТСОІСНО

СКаМЕКТАКЕСЗЗТЗМАЕСОСІЗаУНСІ САЕСЗМСЕООССКОС ог ткКкаскоосСРатЕМрОокКАаісАРИУТМСОВІ сСКеМІ УМИатТ конструкція антиген 4-18В КЕВОУМСОаРБРАВІ БРЕАЗБЗАТРРАРАВЕРЕНОЗРОМОЕОЇ ЕГО 246 | мавп ціномолгус-Ес- са5зРКЗАЮОКТНТСРРОРАРЕГЇ СОРЗМУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТР ланцюг з "виступом" ЕМТСУМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУУУраМЕМНМАКТКРАЕЄОМ МО

ТУВУМ5МУІ ТМ НОМ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК

СОРВЕРОМУТІ РРСВОЕЇТКМОУБІ М СІ УКаЕМРЗОІАМЕМЕ

ЗМИаОРЕММУКТТРРМІ О5БОСЗЕРІ ЗК ТУОКЗеАУООСС,ММУЕ

СЗУМНЕАІ НМНУТОКБІ ЗІ РОКИ МОТРЕАОКІЕУМУНЕ

МОМЗСОМСОРОТЕСАКУМРУСКЗСРРОТЕЗБІССОРМОМІСВМУ

САСУЕВЕККЕСЗЗТНМАЕСЕСІЕСЕНСЇ аРОСТАСЕКОСАРОЮ

ЕСТКОССКТОоБ ЯТЕМООМИаТамМСсАРУТМСОБВІ ВОСАЗМІ КТИаТ

Конструкція мишачий ТЕКОМУМСаРРУМБЕЗРЗТТІЗМТРЕСОРИаСНОЇ ОМІ МОБЕОЇ МЕ 247 |антиген. 4-188-Ес-ланцю ОсОаЗРКЗАОКТНТСРРОРАРЕЇГЇ СОРБМУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТ з "виступом" РЕМТСУУМОУМЗНЕОРЕУКЕМУУУраМЕМНМАКТКРАЕЄОММ

ЗГУВУМБМІ ТМ НОМ МСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКА

КаОРВЕРОМУУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМУБІЛ М/С УК ЕМРЗОІАМЕМ

ЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ ОБравзЕРІ КІ ТМОКЗАМООСММЕ

ЗС5ММНЕАСНМНУТОКБІ ЗІ ЗРЕКЗаСсІМОРЕАОКІЕМНЕ

Всі послідовності, які кодують злиті молекули 4-188-Ес, клонували в плазмідному векторі, в якому експресія вставки контролюється промотором МР5БУ і який містить синтетичну сигнальну поліА-послідовність, локалізовану на 3'-кінці СО. Крім того, вектор містив послідовність ОгіР

ЕВМ для підтримання епісомальної форми плазміди.

Для отримання біотинільованих мономерних злитих молекул антиген/Ес зростаючі в суспензії клітини НЕК293 ЕВМА на експоненційній фазі росту спільно трансфектували трьома векторами, що кодують два компонента злитого білка (ланцюга з "виступом" і "западиною", а також ВігА, фермент, необхідний для реакції біотинілювання. Відповідні вектори застосовували в співвідношенні 2:1: 0,05 ("ЕСО антигена-АсТЕМ-Ес з "виступом":«Ес із "западиною":«ВігА").

Для отримання білка в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 400 млн клітин НЕК29З3 ЕВМА за 24 год. до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х ді супернатант замінювали попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори ресуспендували в 20 мл СО СНО, що містить 200 мкг векторної ДНК. Після додавання 540 мкл поліетиленіміну (ПЕЇ) розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с і інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ, переносили в 500- мілілітрову збовтану колбу та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 96 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Середовище для виробництва доповнювали 5мкм кіфунензіном. Через 1 день після трансфекції в культуру додавали їмММ вальпроєву кислоту і 7 96 Реєд. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 15 хв при 210 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22-мікрометровий фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас. / Об.) І витримували при 4 "С.

Секретовані білки очищали з супернатантів клітинних культур за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А з подальшою гель-фільтрацією. Для здійснення афінної хроматографії супернатант вносили в колонку НіТгар РгоївіпА НР (СМ-5 мл, фірма СЕ

Неансаге), врівноважену 40 мл буфера, що містить 20мМ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію, рН 7,5. Незв'язаний білок видаляли шляхом промивання буфером, що містить 20мМ фосфат натрію, 20мМ цитрат натрію і 0,5М хлорид натрію (рН 7,5), використовуючи його в об'ємі, кратному принаймні 10 о'бємам колонки. Зв'язаний білок елюювали, використовуючи лінійний градієнт хлориду натрію (від 0 до 500мм), створений за допомогою розчину, що містить 20мММ цитрат натрію, 0,01 об. 95 Твін-20, рН 3,0, який застосовували в об'ємі, кратному 20 об'ємам колонки. Потім колонку промивали за допомогою розчину, що містить 20мМ цитрат натрію, 500мММ хлорид натрію і 0,01 об. 95 Твін-20, рН 3,0, який застосовували в об'ємі, кратному 10 об'ємам колонки. Значення рН зібраних фракцій регулювали, додаючи 1/40 (об./о6.) 2М Тріс, рн 8,0. Білок концентрували і фільтрували перед внесенням в колонку Ні оай Супердекс 200 (фірма СЕ Неайвсаге), врівноважену розчином, що містить 2иМ МОР5, 150мМ хлорид натрію, 0,02 95 (мас./об.) азида натрію, рН 7,4. 6.2 Відбір 4-18В-специфічних антитіл 1283, 25057, 1105, 9811 ї 2002 з родових бібліотек

Каб)

Антитіла 1105, 9811 і 1283, що мають специфічність по відношенню до 4-188 людини і мавп ціномолгус, відбирали з родової фагової дисплейної бібліотеки антитіл (ОР88-4) в Рар-форматі.

З цієї бібліотеки відбирали також додаткове антитіло, клон 2002, що має реактивність по відношенню до мишачого 4-188. Цю бібліотеку конструювали на основі генів людської зародкової лінії, використовуючи М-домен зі спареними МК1 5 (легкий каппа-ланцюг) і МНІ 69 (важкий ланцюг), що містить рандомізовану ділянку послідовності в СОКЗ легкого ланцюга (ІЗ,

З різні довжини) і СОМКЗ важкого ланцюга (НЗ, З різні довжини). Створення бібліотек здійснювали шляхом складання З ампліфікованих за допомогою ПЛР фрагментів, застосовуючи

ПЛР для "зрощування (генома) розширеннями, що перекриваються" (ЗОЕ). Фрагмент 1 містив 5-кінець гена антитіла, включаючи рандомізований І 3, фрагмент 2 являв собою центральний константний фрагмент, що тягнеться від ІЗ до НЗ, а фрагмент З містив рандомізований НЗ і 3'- ділянку гена антитіла. Для створення вказаних фрагментів бібліотек для бібліотеки ОР88-4 застосовували такі комбінації праймерів: фрагмент 1 (прямий праймер І МВ3З в комбінації зі зворотними праймерами МК! 5 ІЗг 5 або МК! 5 ІЗг 5М або МКІ 5 ІЗг 5РУ), фрагмент 2 (прямий праймер КУНЗ1І в комбінації зі зворотним праймером КОНЗ2) і фрагмент З (прямі

Зо праймери ОР88-м4-4 або ОРВ88-м4-6, або ЮРВ88-м4-8 в комбінації зі зворотним праймером тазедіопо) відповідно. Параметри ПЛР для отримання фрагментів бібліотек були наступними: 5 хв початкова денатурація при 94 "С, 25 циклів по 1 хв при 94 "С, 1 хв при 58 "С, 1 хв при 72 "Сі фінальне подовження протягом 10 хв при 72"С. Для ПЛР-збирання при використанні еквімолярних співвідношень очищених на гелі одиничних фрагментів як матрицю застосовували такі параметри: З хв початкова денатурація при 94 "С і 5 циклів по 30 с при 94 "С, 1 хв при 58 С, 2 хв при 72 "С. На цій стадії додавали зовнішні праймери (І. МВЗ3 і газедіопо) і здійснювали 20 додаткових циклів перед фінальним подовженням протягом 10 хв при 72 "С. Після складання в достатній кількості повнорозмірних рандомізованих конструкцій Бар їх розщеплює за допомогою Мсоі/МпеІ і вбудовували шляхом лігування в оброблений аналогічним чином акцепторний фагмідний вектор. Очищені одержані лігуванням конструкції застосовували для - 60 трансформацій електрокомпетентних клітин Е. соїї ТО1. Фагмідні частки, що експонують бібліотеку Раб, "рятували" і очищали за допомогою ПЕГ/Масі для використання для селекцій. Ці стадії конструювання бібліотек повторювали тричі з отриманням кінцевої бібліотеки розміром 4,4х109. Процентні вмісти функціональних клонів, визначені на основі детекції С-кінцевої мітки методом дот-блот, становили 92,6 95 для легкого ланцюга і 93,7 95 для важкого ланцюга відповідно.

Антитіло 25057, що має специфічність по відношенню до 4-188 людини і мавп ціномолгус, відбирали з родової фагової дисплейної бібліотеки антитіл (А-ОРА7) в Рар-форматі. Цю бібліотеку конструювали на основі генів людської зародкової лінії, використовуючи М-домен зі спареними: МІЗ 19 (легкий лямбда-ланцюг) і МНЗ 23 (важкий ланцюг). Бібліотеку рандомізували в СОКЗ легкого ланцюга (3) і СОКЗ важкого ланцюга (НЗ) та збирали з З фрагментів, застосовуючи ПЛР для "зрощування (генома) розширеннями, які перекриваються" (5ОЕ).

Фрагмент 1 містив 5'-кінець гена антитіла, включаючи рандомізований ІЗ, фрагмент 2 являв собою центральний константний фрагмент, що тягнеться від кінця І З до початку НЗ, а фрагмент

З містив рандомізований НЗ і З'-ділянку ЕРаб-фрагмента. Наступні комбінації праймерів застосовували для створення вказаних фрагментів бібліотеки для бібліотеки: фрагмент 1 (ІМВ3-МІ З 19 13 М/М/І 3 19 ІЗ НМУ//І З 19 ІЗг НІМ), фрагмент 2 (КОН8ВО-ОРА7СОВЗ ра (тоа)) і фрагмент З (ОР47-м4-4/ОР47-у4-6/0Р47-му4-8-тазедіопд). Параметри ПЛР для отримання фрагментів бібліотек були наступними: 5 хв початкова денатурація при 94 "С, 25 циклів по 1 хв бо при 94 "С, 1 хв при 58 "С, 1 хв при 72 "С. Для ПЛР-збирання при використанні еквімолярних співвідношень очищених на гелі одиничних фрагментів як матрицю застосовували такі параметри: З хв початкова денатурація при 94 "С і 5 циклів по 30 с при 94 "С, 1 хв при 587С,2 хв при 72 "С. На цій стадії додавали зовнішні праймери і здійснювали 20 додаткових циклів перед фінальним подовженням протягом 10 хв при 72 "С. Після збирання в достатній кількості повнорозмірних рандомізованих Рар-конструкцій їх розщеплювали за допомогою Месо1/Мпеї паралельно з аналогічною обробкою акцепторного фагмідного вектора. Очищені отримані лігуванням конструкції застосовували для -«- 60 трансформацій електрокомпетентних клітин Е. соїї ТО1. Фагмідні частки, що експонують бібліотеку Бар, "рятували" і очищали за допомогою

ПЕГ/Масі для використання для селекцій. Отримували кінцеву бібліотеку розміром 9,5х109.

Відсотки функціональних клонів, визначені на основі детекції С-кінцевої мітки методом дот-блот, становили 81,1 95 для легкого ланцюга і 83,2 95 для важкого ланцюга відповідно.

В таблиці 38 представлена послідовність родової фагової дисплейної бібліотеки антитіл (ОРЗ88-4), в таблиці 39 представлені послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності матриці для бібліотеки зародкової лінії ОР88-4, а в таблиці 40 представлені Праймерні послідовності, застосовувані для створення матриці зародкової лінії ОР88-4.

Таблиця 38

Послідовність родової фагової дисплейної бібліотеки антитіл (ОР88-4)

ЗЕО

МО: тТаАААТАССТАТТИССТАССЯСССАСССОСтТасвсАТТаТтТТАТТАСТСЯС сасбсСсАда,ассвасСАТааССаАСАТССАСАТаАСССАаТСТосСтТто

САСССТОтТотТасСАТСТОТтАасАсАСсСаТтатсАССАТСАСТТО,ВСССТ аССАатТСАсАсаТАТТАаТАсСсТаСИетт,асасоСстасаТАТСА,САСААДА ссАсапААддассССстТАдастостТаАТСТАТОАТОаССТтоСАИ,СТТТаС

ААдАдатасасТоССАТСАССЯТтТсАааСссасАаатавАтоСасаАСАс

ААТТСАСТСОТСАССАТСАССАССТТасАассСстТаАТаАТТТТасАдСс

ТТАТТАСТаССААСАСТАТААТАСТТАТТСТАСЯ ТТ ТЯавИаССАСОССС

Нуклеотидна АССААДИАТССсСАСАТСААСССЯТАССатТааСтТасСсАССАТОСТИТСТТО послідовність АТСТІОСсСсассСАТСТаАТаАдаСАсСТТаАААТСТасААСТасстотТа бібпіотечної тпататасстастаААТААСТТСТАТСССАЧСАпАпасССАААатТАСА матриці. рВУНЗЗдля стапАддаатТацсАтТААСасссСстоСААТСОСЯСТААСТоССА,аАсаАС бібліотеки ОРВВ-4: татсАСАадаСАааАСАаСААласАСАаСАССТАСАасстАасСАС повна кодуюча САСССТаАСсастТаАдаСАААаСАСпАСТАССАсСАААСАСАдАаТтстА ділянка Бар, що с,еасстасСспААдатоАСССАТСАССЯСОССТОАа,аСТоасСссССатТСАСААДА містить лідерн вАаСТТСсААСА,ааасАсАататавАаССасСАпААСАААААСТСАТ послідовність СсТСАПААаАасааАтТоТаААтТасаасСасСАваАСТАСААасАСсаАСс 132|РеіВі:УКІ 5 каппа АсСаАСсАДОСсаТассСсаСАТААТААДСаСаСасСасСААТТСТАТТТСАда

М-домен - й вАСАСАаТСАТАТИАААТАССТОСТИАССЯСАССЯСТОСТаСстТааТатст константний домен ссотастостса,астасссаа,асссасвАтаассСАсатасСААТТИаСТ

СІ. легкого ланцюга сслааттасавастаадсатаААдаАлд,асставатстсастаАдаат ії Реів:УНІ 69. У- стостасСсаддаа,асстоСапАааСАСАТТСАаСАаСтТАСасСтТАТААС домен - й ставатассАСсАдвсассоСставАСААлссастовсАа,атаавАтасвсАсса константний домен САТСАТСССТАТСТТТааТАСАССАААСТАСаСАСАСЧААИСТТОСАС сні важкого сабАасаСаатТСАССАТТАСТаСАаАСАААТССАССАаСАСА,ССТАС ланцюга АТтТасваа,астада,асАаа,асстАсаАтотала,асАСАсСсаССатТатАТТАС включаючи мітки татасаАвАСТАТССССАЧСОСа,аТттТАСТАТИАТТАТОСАТО,ВСсСТава

ВоСААДСИ!СпАССАСсСОЯтТаАсСсатотоСстсАасТтАаСАССААДАсСасс

САТСССТСТТоСсСсоСстТааСАСССТОСТОоСААсСАаСАССТОТаваИса

САСАССОЯСсССсСсСТаСаСсТасстастСАдаСаАСТАСТТССССОААСС саетадссатататасААСТСАсасассстаАсСАа,аСсвсасатТасА

САССТІОССЯСасСстТатсосСтТАСАаТоСтТоАааАСТСТАСТОССТСАСаС дасатастаадссста7ассстоСАаСАаасттасасСАСССАСаАССТАС

АТСТаСААСИТаААТСАСААаСССАаСААСАССААдаТасАСАда

АААСИТТалдасСсССАААТСОТТатТаАСсаСа,ааССаСААдаСАСТАСТасс

САТСАССАТСАССАТСАСОЯССОаСОсасСА

Таблиця 39

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності матриці бібліотеки зародкової лінії ОР88-4

САСАТССАСАТаАСССАатсТСсСТсСАСССТатстТасА тсотатаасАвАССаТтатСсАССАТСАСТТаССОЯТассСсАаТтТ

СсАаАдатТАТтТтАХАатТАасТааТаттасСссСстТаатТАТСАИСАаЧААдА

СсСсАаапААДасссССстТАДастосСТаАТстТАТаАТОССТОоС атТтТапААдАл,атавпаТсССАТСАССЯТТтсАаа,аСсвсаТсАат паАТССИаСОаАСАСААТТСАСТСОТСАССАТСАИЧСАаТстта

СсАасстТаАТОАТ ТТаСААСТТАТТАСТаССААСАСТАТ

ААТАааТТАТТСтТАСЯатттааСсСАпааСАССАААДИТтСада

Нуклеотидна послідовність АТСААХдОСаСсатасаатааЙСТасСАССАТСТаТтТСсСТТСсСАТСТТОС 133 легкого ланцюга Габ КІ. 5 СсСасСсСАТСТОАТаАдаСАаТТаАААТСТОпСААСТаТасстТтеотТ

Ж фатпататасстТастаААТААСТТСТАТСССАСаАадИаасСс

АААаТАСАСтТасвАдАлааТасАтТААСассстСААТСОССЯ

ТААСТоССАСОИаАлаАдататСсАСсАаадасСсАаайАСАасАдса

АСАССАССТАСАСССТСАаСсАасАссСстадсастаАасА

ААДаСАПАСТАСИАСАААСАСАААаТТСТАСаИаТсстасСаАА аТСсАСССАТСАСОЯСССТаАастоасссСаТСАСААдадас т сААСАЛАСЬдОСАаАсСАаатТатапласСасСАпСААСАААААСТ

САТСТСАСААДаАдапАТСТОААТапВАасССасСАСАСТАСАА аДаАСаАСаАСаАСАда,ааватассасА

РІОМТО5РБОТІ БАБМаАОАМТІТСНКАБЗОБІЗОБУ АММООКРа

КАРКГ ІМОАББОІ ЕБИМРОНЕЗабБаватЕРЕТІ ТІ5БІ ОРОЮСЕБА - ТУМСООУМОУТЕ СОС ТКМУБІКАТМААРБЗМУРІЕРРБОЕОЇІ К 134 |Легкий ланцюг Раб УКТ. 5. | остА5УУСИЇ ММЕУРВЕАКУОМ/КУ ОМА О5СМ5ОЕБУТЕ

ОО5КОБТУ5БІ 55171 ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РМ

ТК5ЕМАСПЕССОИААЕОКІ ІЗЕЕОІЇ МІААОУКООВОКадА сАдсдатасААатаатасалатставаастадаатадАаАА асстасатостоеаватаяддаатстСсТасАдаасстосас

АВасСАСАТтТсАИаСсА0асСтТАСастТАТААЛДаСТааатасаАсСА свассостаавАСААХд,асастоадатасАатТаайсАсааАТСА

ТОССТАТСТТТа,аТАСАИаВСААДАСТАСаСАСА,ЧААИаТТос авасАаайаТсСАССАТТАСТаАСАЧАСАААТССАСОИвдас

АСАаССТАСАТОСАССТОаЛДаСсАасСсСстТаАаАТСТаласА сАссассататАТТАСТатТасСсаАаАСТАТССССАЦСИЦсаа

Нуклеотидна послідовність ТТАСТАТИОТТАТОСАТОаССТОСОСОаССААа,СаспАССАССаИТт 135 |важкого ланцюга Раб сАССаТтсТоСстТСАасСтТАаСАССАДАвассССАТСССОТСТТ

УНІ 69 ост асСАСССТоСТоСААаАдасАассттавасасАс дасчаассстасвастасстаайТСсААааАСТАСТТССССОА

АдссааталссататсатаайААСстТсАда,аасСсасссСстТаАСсСАа саасатасАСАССТІТСССЯастатосСтТАСАаТоСтТСАСаа

АСТСТАСТОССТСАа,аСсАасатаатадссатассстосАа

СсАасСсТТапаСАСССАпАССТАСАТСТаСААСИатТаААТСА

СААДаСССАаСААСАССАААаИтТтапАСААпАААа Тала

ССАААТСТІатаАдса,асчвасСсасСсАдасАСТАаТтасссСАТС

АССАТСАССАТСАСОЯССОСИасСА

ОМОЇ МОБОАЕУККРИаББЗУКУЗСКАБИааТТЕ5ЗУАІЗММУВОА

РИСІ ЕМУМОСИПРІБЄВТАММАОКЕРОСАМТІТАОКОТЗТАУМ

- ЕІ 55І ВБЕОТАУУУСАВІ БРОаСУМУМОрАУМвО,ТТУТУ5 136 |Важкий ланцюг Раб УНІ. 69) деТКОРБУЕРІ АРЗОЗКОТЗССТАА! ССІ УКОУЕРЕРУТУ ЄМ

МОаАІТ5аМНтТЕРАМГ О55(Ц2І М5І 55 МРБББІаТОТМІСМ

УММНКРОЬМТКУМОККМЕРКЗСОАААЗТЗАННННННААА

Таблиця 40

Праймерні послідовності, застосовувані для створення бібліотеки ОР88-4

ЗЕО

ІО |Назва праймера Праймерна послідовність 5" - 3"

МО: стосАсттаеаста,асСсссСстТаасССАААСаТОвВААТА СОААТТАТА статтаасСАСТААТААСТТаСААААТСАТ 138 УК! БІЗ 5 підкреслені: 60 бо основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 60 95 вихідних основ, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М стосАСсСТттестТа7асссСстТаасССАААСаТтМнАЗавАТАССОСААТТА тТАСТОТТааСАаТААТААИТТаСАААДАТСАТ 139 | Мк1 5 І3г У підкреслені: бо бо основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 60 9о вихідних основ, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М стосАСсСТтІтеаста7ассстТаасССАААСаТтМннМ555авАТАССАА

ТТАТАСТОаТТаСаСАСаСТААТААДИТТасСАдДААТСАТ 140 |МК1 5 ІЗ Р підкреслені: бо бо основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 60 95 вихідних основ, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М ааАСсАСсССсСОаоСататАТТАСТИатТассаАсаА-1-2-2-3-4-4АС-ТАС- тасадасССААвасвАСсСАсСсатаАсСа7атстос 143 | ОР88-м4-4 1: с/0-20 об, Е/ЛУБ-10 ор, А/Р/АЛ./17/У-5 90; 2: сим/5-15 ор,

А/ОЛ/В/РЛ /ЛИ/МАМ/ЕЛ/Е-4,6 90; 3: СИА/М-20 96, РЛМ/Б/0/1-8 95; 4: Е-46 р,

Г/М-15 965, СИЛ/М-8 9. ааАСсАСсССсСЯаоСататАТТАСТИАТтассаАсаА-1-2-2-2-2-3-4-БАС-ТАС- тасадасССААвпаспАССАсСатаАсСа7атстос 144 | ОР88-м4-6 1: с/0-20 об, Е/ЛУБ-10 ор, А/Р/АЛ./17/У-5 90; 2: сим/5-15 ор,

А/ОЛ/В/РЛ /ЛИ/МАМ/ЕЛ/Е-4,6 90; 3: СИА/М-20 96, РЛМ/Б/0/1-8 95; 4: Е-46 р,

Г/М-15 965, СИЛ/М-8 9. аапАСсАСсССсСЯаоСататАТТАСТИатТасаАсаА-1-2-2-2-2-2-2-3-4-7АС-ТАС- тасадаСсСААвпаспАССАсСатаАсСа7атстос 145 | ОР88-м4-8 1: с/0-20 об, Е/ЛУБ-10 ор, А/Р/АЛ./17/У-5 90; 2: сим/5-15 ор,

А/ОЛ/В/РЛ /ЛИ/МАМ/ЕЛ/Е-4,6 90; 3: СИА/М-20 96, РЛМ/Б/0/1-8 95; 4: Е-46 р,

Г/М-15 965, СИЛ/М-8 9.

В таблиці 41 представлена послідовність родової фагової дисплейної бібліотеки лямбда-

ОРА7 (МІЗ 19/УНЗ 23), застосовуваної як матриці для ПЛР. В таблиці 42 представлені послідовності КДНК і амінокислотні послідовності матриці бібліотеки зародкової лінії лямбда-

ОБРА? (МІЗ 19/УНЗ 23), а в таблиці 43 представлені Праймерні послідовності, застосовувані для створення бібліотеки лямбда-ОРА7 (МІЗ 19/УНЗ 23).

Таблиця 41

Послідовність родової фагової дисплейної бібліотеки лямбда-ОРА7 (МІЗ 19/УНЗ 23), застосовуваної як матриці для ПЛР

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

АТОАААТАССТАТТОССТАСОЯСсСАСССОСТасАТТаТТАТТАСТССО савассСсдасссасСсАтТаасстатстадастТаАСсТСАапАСоссСтТа стататотатаасстт,апаАСАпАСАаТСАасАТСАСАТасСсСААда

САпАСАаССТСАСААаТТТАТТАТаСАДастТастАССАаСАаАдас

СсАапАСсАааССССтТатАСТТИаТСАТСТАТаСТАААААСАдССИаас

ССстТсА,СапйАТоССАпАССаАтстоТастоСАасСТСАпСОСАААСА

СсАастТТоссСТТаАССАТСАСТОСОСОССсСТоАлс,сСаСасААдаАтТалааста

АСТАТТАСТатТААСТОССОТОаАТтАаТтАаСОаТатААТСАТИаТасатТАТТ

Бібліотечна сава,аСсососАдаасвсАСсСААдаСсТАССатссСстТАапАСААСССАдаасСТас матриця рАУНБЗ ссссд,асатаАасостаТатссоссСсСАаа,асСАаа,аСаАапААтта7асАсаас бібліотеки лямбда- СААСААаСсСОасСАсоСстасттасстаАТСАаСаАСТТСсСТАСССАСаа

ОРа7 сассатаАссатааосСстапААдвасСаАСАааСАассССатадАаас

МІЗ 19/УНЗ 23: сааСсаТапАСАССАССАСССССАССАдасСАсАаСААСААСАдаИТ повна "кодуюча дса,ассасСсАдасАХастТАсстадасстаАссСССадаСАаТапйААаА ділянка аб, що ВСсСАСАСатТосСтТАСсАдаста|асСсАаааТаАСССАСад,аааСАаСАССО містить лідерн тапАпАДААдссатапссСССАсСссвсАаатаСадаСасАласСасСАсаАА послідовність СААДААСТСАТСТСАсСАдадасАТСТалАтТасаассСасСАСаАСтТАС 158! РеіВв-УІЗ 19 ААдСчаАдСсаАСОаАСаАСААда,асватассСасСАТААТАла,ааСаСаТссСААТ лямбда У-домен й ТСТАТТТСАДИСАСАСАСТСАТАТОАААтТАССТОаИСТаССаАССаТст константний домен астастастотастастостосстассСд,ассавасаАтааССапАОас

СІ. легкого ланцюга тТасААТТаСТООСАХСТоТаса,!саАасастсатАсд,асстассасат ії РеіВУНЗ 23. У- соЄСтаАааАстотстатасАласстоСапйАТТСАССТТТАССАСТТА домен - й тасСсАТОДОСТаСОСТоСсаССАЧастоСАаа,аааААлсаваставАатТа константний домен светсТсАасСстТАТТАСТОаТАа,атТаатТастТАаСАСАТАСТАСаСАаА сні важкого стСатОдАдапаССасТСсАССАТСТОСАСАСАСААТТССААСАА ланцюга СсАсасСстатАТСТасСсАСАТОААСАаСсСсТадсАаССаАааАСАСасс включаючи мітки СаТАТАТТАСТатасапАААсСаТттоСаТтАТТТТаАСстТАСТОСССаИаСс

СААДССаАдАсСсСстТастТСАСсСсатстадаТасСстТАаСАССАААсвасссА тссатстсооооСтТасСАСССТоСТоСААсАаСсАсСсттаТасвасасСА сла,асса,асоставсастасстайаТСсААаСАСТАСТТССССОААССОоа тадссататсатТапААСтТсАсасассстаАССАа,аСааСаТасСАСА сстоссаасСсТаТСсСстТАСАатосСТСсАааАСТСТАСТОССТСАасАс сатаатАасса,атассстоСсАасСАастапаСАСССАаАССТАСАТ

СТаСААСИаТаААТСАСАДаСССАаСААСАССАААаТаСАСАдДаА

ААдСИТТОДаСССАААТСТТатТОдДСсОСвасСасСААасСАСтТАаТассс

АТСАССАТСАССАТСАСОСССОааСОаасА

Таблиця 42

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності матриці бібліотеки зародкової лінії лямбда - ОР47 ("МІЗ 19/УНЗ 23) тса,7атстадастТаАстТсАд,асАсосстастататтатасстт сацпАСсАпАСАаТСАааАТСсАСАТасССАд,асАаАСАасСстТо

Нуклеотидна АПСААСТТАТТАТОСААаСаССтТастТАССАаСАсАдасССАцаАс 159 |послідовність легкого АЕІССССТатАСТТаТтсСАТСТАТЯОСТАААААСААССаваССс ланцюга Раб МІЗ 19 тСсАСааАТоССАпАССаАдтсттаасСсТСАасСтТСАацААА

САСАаСТТССТТаАССАТСАСТОСОСОССтТоАа,ааСасААсаАТОа

АсСастТадсСтТАТТАСТатААСТОССОаТаАТАаТАаСастТААТ

Таблиця 42

Послідовності кКДНК і амінокислотні послідовності матриці бібліотеки зародкової лінії лямбда - ОР47 ("МІЗ 19/УНЗ 23) сАТОТОаОСТАТТССЬЯСОСОсСАсСацсАССААастТаАССатосСтТАса

АСААСССААдСсастасссєєсАааСаТаАСоСТаттОССССССА абад,аСбсАасаААтасСАааССААСААсСасСАвостаатота сСстТаАтТСсАасСсаАСТТСТАСССАсСаСсаосстаАсса,атаасстТ ааААд,аасспАСАаСАа,асоссєатаАдАавасса,ваСбатасАсАС

САССАСССССАСаСАдаСАпАаСААСААСААда ТАСасСасо дасдастАассталасстаАссссСссАа,аСАа,атапААаАаСо

АСсСАСатоссСтТАСАССТаСсСсАаа,аатаАСССАСсАс,аСАасСАС сатапАпААААссаста,аоооССАсСсвАаатТасааСсапАасСс

ССАСААСАААААСТСАТСТСАСААсСАааАТСТаААТасАс сСаСАСАСТАСАДаСАСаАСаАСаАСААл,саа ГаССасСА

ЗЗЕГ ТООРАМБМАЇ СОЮТУВІТСОСОБІ В5УМАБУМУМООКРИаСА

РМ МІМЕКММАРБа РОВЕЗИаЗЗБЗОаМТАБІ ТІТЕАОАЕРЕАОМУ 160 Легкий ланцюг Раб СМ5врЗзаМнУУРасаткі ТМ аоРКААРБЗМТІ ЕРРЗОБЕЕГ ОА

МІЗ 19 МКАТІ МСТІЗВЕМРЕИАМТМАМУКАОЗЗРУКАСМЕТТТРОЬКОЗМ

МКУААББЗУІ ЗІ ТРЕОМУКЗНАЗУЗСОУТНЕВЗТУМЕКТУАРТЕС

ЗаААЕєЕОКІІЗЕЕОІ МаААрУКОрООКадА

Нуклеотидна 150 |послідовність важкого Див. таблицю 7 ланцюга ар УНЗ 23

Таблиця 43

Праймерні послідовності, застосовувані для створення бібліотеки лямбда-ОРА7 (МІЗ 19/УНЗ 23)

ЗЕО

ІО | Назва праймера Праймерна послідовність 5" - 3"

МО: сзассатодастта,ааТоССстТоСассСопААТАЄС УНМ АТТ АСО ОСТ АСТ

АТО АСа апАсСТТАСАСТААТАСТСАаССТоАТСТТОСас 162 МІ З 19 ІЗ М підкреслені: 60 96 основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 6095 вихідних основ, а 4095 основ рандомізовані з використанням суміші М сзассстодаста,асТооСстоСасССпААТАС СММ АТ АТ АСС аСтТ АСТ АТО Або апАсаТТАСАаТААтТАаТтСАасСсСТСАТСТТОСас 163 МІ 3 19 ІЗ НМ підкреслені: 60 96 основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ 5 рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 6095 вихідних основ, а 4095 основ рандомізовані з використанням суміші М сзассстодаста,асТооСстоСассСпААТАС ВНМ Ус АТО АТТ

АСС СТ АСТ АТО Або апАдатТТАСАСТААТАатСАасСсСтТСАТСТТО

Сас 164 |МІ З 19 І Зі НІ М підкреслені: 60 95 основ являють собою вихідні основи, а 40 95 основ рандомізовані з використанням суміші М; жирний шрифт і курсив: 6095 вихідних основ, а 4095 основ рандомізовані з використанням суміші М

Таблиця 43

Праймерні послідовності, застосовувані для створення бібліотеки лямбда-ОРА7 (МІЗ 19/УНЗ 23)

ЗЕО

ІО | Назва праймера Праймерна послідовність 5" - 3"

МО: тассаСсСААдапААсоСстасатсАссатстоса тассасССААдаспААсоСстТа7астСАссатстоса тАС-ТаСОСОсССААсасААсоСстастоАссаТтстоа 17777111 |0АСОТТАСТАААТОААТТТІСТОТАТОАДОЯ /-/:://: С 1: 25/0-20 95, Е///5-10 95, А/Р/В/Л /Т/У-5 95; 2: С1/М/5--15 96, А/О/Л/В/РЛ /ЛИ/МЛМ/ЛЕЛ/Е-4,6 90; З:

СИА/У-20 96, РЛМ/Б/0/1-8 95; 4: БЕ-46 95, І /МА-15 95, СИЛ/У-8 90; 5: К-70 96, В-З30 Об. 4-88 (СО0137) людини, мишей і мавп ціномолгус як антиген для селекцій методом фагового дисплея і скринінгів на основі ЕГІЗА і 5РА короткочасно експресували у вигляді М-кінцевого злиття з мономірним Ес в клітинах НЕК ЕВМА і здійснювали іп мімо сайтспецифічне біотинілювання за допомогою спільної експресії біотин-лігази ВігА в послідовності з амі-міткою, що розпізнається, локалізованої на С-кінці Ес-ділянки, що несе рецепторний ланцюг (Ес-ланцюг з "виступом").

Раунди селекції (біопеннінг) здійснювали в розчині за такою процедурою. Перша стадія - прекліринг х- 1012 фагмідних частинок на планшетах тахізогр, сенсибілізованих 10 мкг/мл нерелевантного людського ЇДС для виснаження бібліотек антитіл, які розпізнають Ес-ділянку антигена; друга стадія - інкубація фагмідних частинок, що не зв'язуються, з 100нМ біотинільованим людським або мишачим 4-18В протягом 0,5 год. в присутності 100нМ нерелевантної небіотинільованої конструкції Ес "виступ»-у-«западину" для подальшого виснаження зв'язуюючих Ес агентів в загальному об'ємі 1 мл; третя стадія - захоплення біотинільованого пи4-188 і приєднання специфічно зв'язуючого фага шляхом перенесення в 4 лунки попередньо сенсибілізованого нейтравідином титраційного мікропланшета протягом 10 хв (в раундах 1 і 3); четверта стадія - промивка відповідних лунок з використанням 5 х ЗФР / Твін2о і 5 х ЗФР; п'ята стадія - елюція фагових частинок шляхом додавання 250 мкл 100ММ ТЕА (триетиламін) на лунку протягом 10 хв і нейтралізація шляхом додавання 500 мкл 1М Тріс/Нсі, рН 7,4 до об'єднаних елюатів з 4 лунок; шоста стадія - пост-кліринг нейтралізованих елюатів шляхом інкубації на попередньо сенсибілізованому нейтравідіном титраційному мікропланшеті з 100нМ захопленої біотином конструкції Ес "виступ»-у-«западину" для остаточного видалення зв'язуюючих Ес агентів; сьома стадія - повторне зараження на Іод-фазі клітин Е. соїї ТО1 супернатантом елюйованих фагових частинок, зараження хеллплерним фагом МС5МТ13, інкубація при струшуванні при 30 С протягом ночі і подальше осадження за допомогою ПЕГ/Масі фагмідних частинок для застосування в наступному раунді селекції. Селекції здійснювали з використанням З або 4 раундів, застосовуючи постійну концентрацію антигену 100нМ. В

Зо раундах 2 і 4 для того, щоб уникати збагачення зв'язуюючими нейтравідін агентами, захоплення комплексів антиген:фаг здійснювали, додаючи 5,4х107 покритих стрептавідином магнітних гранул. Специфічні зв'язуюючі агенти ідентифікували за допомогою ЕГІЗА таким чином: 100 мкл 25нНМ біотинільованого людського або мишачого 4-18ВВ і 10 мкг/мл людського до застосовували для сенсибілізації нейтравідінових планшетів і тахіхогр-планшетів відповідно. Додавали бактеріальні супернатанти, що містять Раб, і зв'язування Рар оцінювали за допомогою їх Ріад- міток, використовуюючи вторинне антитіло до Ріад/НЕР. Клони, що дають сигнали на людський або мишачий 4-188В і є негативними по відношенню до людського ДС, включали в шорт-лист для додаткових аналізів і тестували також аналогічним чином по відношенню до двох інших видів 4-188. їх експресували в бактеріях в об'ємі культури 0,5 л, очищали на основі афінності і додатково характеризували за допомогою 5РК-аналізу, використовуючи біосенсор фірми

ВіоВай РгоїєОп ХРАЗ6.

З використанням описаної вище процедури клони 1283, 25057, 1105 і 9811 ідентифіковані як специфічні для людського 4-188 зв'язуючих агентів. З використанням описаної вище процедури клон 200 ідентифікований як специфічний для мішаного 4-188 зв'язуючий агент. Послідовності

КДНК їх варіабельних ділянок представлені нижче в таблиці 44, відповідні амінокислотні послідовності можна знайти в таблиці В.

Таблиця 44

Послідовності пар основ варіабельних ділянок одержаних за допомогою фагів антитіл до 4-100.

Гіперваріабельні ділянки (СОР) підкреслені

САСАТССАСАТаАСССАаТСТОСТССАСССТатСстТасАТСТатАасА вАсСатаТСАССАТСАСТТаСТССЯтТасССАаТтТСАОаАаТТАТТАИаТАаСтТаС тааЙсстТаатТАТСАаСАСАААССАаапАААасСссСсссСстТАДастосСтТаАТ 249 (М) ІСТАТаАТасССстоСсАатттасААдАла тапсаТоССАТСАССОСТТТСАаСса сдатааАтТоСайОпАСАСААТТСАСТСТСАССАТСАЛССАСаСТТаСАаСс

ТОаАТОАТТТТаСААСТТАТТАСТаССААСАСТАТСАТТСИаТАТССОСА сдссптаасСАаааСАССАААаТСсаАсАТСААС 1283 СсАд,аатасСсААдта,аатасаатстаавастАааТаААпААа,асстасвато стсаатадАдсаатстСстСАлда,а,остСассАаасСАСАтТтСдасСсАастТ

АСастТАТАХаСТасСатТасСсапАСсАасассостасАСсАда,асСастоаА,аТаС 250 (МН) АтасадаспйсаАТСАТСССТАТСТТТОСТАСАССАААСТАСаСАСАСАА атоСсАд,сааСАаспаТСАССАТТАСТаСАайАСААДАТССАСОАдИаСАСАС

СсСстТАСАТОСАС,ССсСТОАаа,аСАаасСсталаАТСоТАасАСАССассиаТаТтАТ тТАСТОаТаСОаАСаАТСТОААТТОСаТтттстТАСастТаАСТТСОАСТАСТас паССАдДаспаАССАССаТаАссСаТатстосСтТсСА тса,атстдастТАСстТоАдссАссстастататстатаасстаапАСАС

АСсАаТСсАаСсАТСАСАТаССАДапАпАСАасСсСтТСАСААСТТАТТАТИаС

АДОСсСТОаатТАСсСАаСсАаАдАдаССАсадСАаа,васссєтатАСТТОТСАТСТ 251(М) ТАТОаИТААДАДААСААССЯвассстАаапАТоССАпАССаАатототаас

ТоСАВСТСАСаАААСАСАаст ост аАССАТСАСТОСОВПІПАСТСАаасСаИ

СААпАдТадайсСсТаАСТАТТАСТатТААСТОССТТаАтТАа,а,асСа,СаатАТаИ тасатАтсосасаСсасАаавАССАдаСТаАССатТо 25127 сдаатТасСААта,аттаавАаатстасвасвАасвасттастТАсАасстависс атТсСтТАсвАсттстатасСсАаСсСстТоСапйАТТСАССТТТАаСАСТТА тасСсАТОДОаСТОСССТоСсСаСсСАвастоСсА,сасАл,асаваставАаТацво 252 (МН) тТСстТСсАасСтТАТТАСТОССТАСТОСТасТАаСАСАТАСТАСОаСАСаАСТОоСИ

ТтТаААСОИааССОааТтСсАССАТСТССАПАСАСААТТССААСААСАСаТста

ТАТСТаСАСАТаААСсАаСсСсТаАлаАдаССадапАСАСаасСатТАТАТТА статасасатадссАасссата,асСсассатСсОаАСстТАСсТаасвассСАДда

СААСоСТасТСсАССаТатстовАаТ

САСАТССАСАТаАСССАаТСТОСТССАСССТаТтСТасАТСТатАСаИад вАсСатаТСАССАТСАСТТаСТССЯтТасССАаТтТСАОаАаТТАТТАИаТАаСтТаС тааЙсстТаатТАТСАаСАСАААССАаапАААасСссСсссСстТАДастосСтТаАТ 253 (М) ІСТАТаАТаОССтоСсАатттасААдАла тассаТоССАТСАСССТТТСАаСас сдатааАтТоСайОпАСАСААТТСАСТСТСАССАТСАЛССАСаСТТаСАаСс

ТОаАТОАТТТТаСААСТТАТТАСТаССААСАаСТТААТТСОаТАТССТСАС

АсССсСтттааСсСАасасСАССАААаТСаАсСАТСАДИ 1105 СсАд,аатасСсААдта,аатасаатстаавастАааТаААпААа,асстасвато стсаатадАдсаатстСстСАлда,а,остСассАаасСАСАтТтСдасСсАастТ

АСастТАТААХаСТаСсСЯатТасаАдСАасассостацпАСАада,аса7астсаАаТаС 254 (МН) АтасадаспйсаАТСАТСССТАТСТТТОСТАСАССАААСТАСаСАСАСАА атоСсАд,сааСАаспаТСАССАТТАСТаСАСАСАААТССАСОАдаСАСАС

СсСстТАСАТОСАС,ССсСТОАаа,аСАаасСсталаАТСоТАасАСАССассиаТаТтАТ тТАСТОТаСОаАаАТСТАСТОТОаАТСТАСИЯаИтТтТАСТТСОАСТАСТОСОСОаС

СААдапаАССАсСатаАССатстосСтСА

САСАТССАСАТаАСССАаТСТОСТССАСССТатСстТасАТСТатАасА вАсСатаТСАССАТСАСТТаСССЯтТасССАаТтСсАпАаТТтАТТАаТАаСтТОас; тааЙсстТаатТАТСАаСАСАААССАаапАААасСссСсссСстТАДастосСтТаАТ 9811 255 (М) ІСТАТаАТОССтТоСсАатттасААдАла тассаТоССАТСАСССТТТсАаСас сдатааАтТоСайОпАСАСААТТСАСТСТСАССАТСАЛССАСаСТТаСАаСс

ТаАТОАТТТТаСААСТТАТТАСТаССААСАСОИТТААТТСТТАТССОаСА сдссптаасСАаааСАССАААаТСсаАсАТСААС

Таблиця 44

Послідовності пар основ варіабельних ділянок одержаних за допомогою фагів антитіл до 4-100.

Гіперваріабельні ділянки (СОР) підкреслені стосатаАдАдсатстстТасСАдаасстоСааАпаСАСАТТСсАаСАаСтТ

АсасСстТАТАДаСТОСИатаСаАсАадча7асссСстапАСААл,асСса7астсаАаТас

АТасСаАасааАТСАТОССТАТСТТ ТИИСТАСАС,САААСТАСаСАСАСАА ттосд,асасСАаааТСАССАТТАСТаСАвАСАААТССАСОСАаСАСАС

СсСстТАСАТОСАС,ССТОАаа,аСАаССтТаАаАТСтТадапАСАССассататАТ тАСТаОТаСОСОАСАТСТТСТОСТОаСТТАСССОаааттТАСТТОСАСТАСТОаС аваСбСАдапсаАССАССаТаАССаТатстосСтТСА сСАСАТССАВАТаАСССАа,ТоТоСАТССАСССТОТСТасСАТСТОТАСаИА сАсСсатТатоАССАТСАСТТаССОЯТаСсСАатСАаАаТтТАТТАСТАасСтТОась таа,ЙсстаатТАТСАаСАСАААССАцацпААдАассссСтТААастосСтТаАТ 257 (М) ІСТАТаОАТОССтТоСсАатттасААдАлатасааТоССАТСАССТТТсАаСас садатапАтТоСасваАСАСпААТТСАСТСТСАССАТСАССАССТТаСАС,аСС тТаАТаАТТТТаСААСТТАТТАСТаССААСАаСАаСАСТСИ,ТАТТАТАС сттта,аа,асСсдасаСАССАААаТСсаАаАТСААС 20с2 сАса,атасСсААатастасастотаасвсастаАватаААсАА,асстацвато стеватаАдАдсатстоСстТасСсАдаасстоСапАаасСАСАТТСсАаСАаСтТА састАТААХаСТОСОСТассвАСАаса7асоосєтасвАСАда,аса7астовАатТас 258 (МН) АТасСаАасааАТСАТОССТАТСТТ ТИИСТАСАС,САААСТАСаСАСАСАА ттосд,асасСАаааТСАССАТТАСТаСАвАСАААТССАСОСАаСАСАС

СсСстТАСАТОСАС,ССТОАаа,аСАаССтТаАаАтотТадапАСАсСассататАТ тАСТаТаСОсСАСАТСТТАСТАСТАССОСААТСТТАСССОаТТосСАСТАСТОаС аваСбСАдасаАССАсСсатаАсСсатстоСАас 6.3 Одержання, очистка і характеризація антитіл до 4-188 Іс РЗ2ОСІ АГА

Послідовності ДНК варіабельних ділянок важких і легких ланцюгів відібраних анти-4-188- зв'язуючих агентів субклонували в рамці зчитування або її константною важкого ланцюга, або з константною легкого ланцюга людського Ідс21. Інтродуковали мутації РгоЗ29с1пу, І ен234АЇа і

Гец235АЇїа в константну ділянку важких ланцюгів з "виступом" і "западиною" для елімінації зв'язування з рецепторами Ео-гамма згідно з методом, описаним в публікації міжнародної заявки на патент УМО 2012/130831 А1.

Нуклеотидні і амінокислотні послідовності анти-4-188 клонів представлені в таблиці 45. Всі послідовності, які кодують злиття анти-4-188-Ес, клонували в плазмідному векторі, в якому експресія вставки контролюється промотором МР5БМУ і який містить синтетичну сигнальну полід- послідовність, локалізовану на 3'-кінці СОБ5. Крім того, вектор містив послідовність ОгіР ЕВМ для підтримання епісомальної форми плазміди.

Таблиця 45

Послідовності клонів анти-4-188 в форматі РЗ29ИІ АГ А людського ІдС1

САСАТССАСАТаАСССАС,ТСТОСТТССАСССТатСстТасАТСТатА саАапАсСатТатСАССАТСАСТТаСССЯТасСАатТСАпАатТАТТАС таастааттаесаоСтасастТАТСАаСАСАААССАаапАААаССоСтТА дастоСстТаАТСТАТаАТаССтТоСАатттапАААХа,атТтапвасТоССАТ 259 СсАСЯТТТсАсаСссасСсАаа,атавАаАтоСасвсАСАСвААТТСАСТСТСАСС (нуклеотидна АТсАда,аСсАаасттасСсАассСстТаАТаАТТТТасСААСТТАТТАСТасССАА 1283 послідовність легкого САСТАТСАТТОСИТАТОСОаСАсСАСатттааССА,асааСАССААдаИТтТт ланцюга) баАСАТСААСССЯТтТАСватааСсТасСАССАТСТатсСТТСАТСТТОоСС

ВсССАТСТаАтТаАдаСАсТТаАААТОоТОСААСсСТОССТОТОТТаТа7та сСстТасСстаААТААСТТСТАТСССАСАсСАсСасСсАААаТАСАИаТааА

АсватаспАТААСасссСстоСААТСОСОаТААСТоСсСА,саАдс,сАаТтато

АСАсСАаСАапАСАаСАдапАСАаСАССТАСАаССтТСАаСАасСА состТАсасСсТаАаСААдаСАпАСТАСПАСпАААСАСАААИаТСТАС

Таблиця 45

Послідовності клонів анти-4-188 в форматі РЗ29ИІ АГ А людського ІдС1

НИ Есе си нин вАаСТСсААСАсасаАсАаТтТат

СсАасатасСсААдта7аатасаатстааавастА,ааТаААаААасССсТаС стостосватадАдаатстСсТасСсАл,ааостСавАаасСАСАТТСА вСАаСстТАСасСтТАТААДОСТОСЯВТтаСаАСАаасссСТасАСАдОаса стссдатавАатТасаАХаааАТСАТОССТАТСТТТаСТАСАСаСААА

СстТАбасСАСАадАдаттсСсАаа,авасАдааатСАССАТТАСТаСАаАСА

ААТССАСОаАдаСАСАаССтТАСАТОасСАа,аСстТаАдаСАаСсСстТаАсАТСТ сдапАСсАссасСатТатАТТАСТатасСсаАСаАТСТаААТТОСОаТТТо тТАСОаСтТАСтТТСаАСТАСТОСОааССАА,СасвАССАССа,атТаАСсСатТ

СсТоСсТосАасСстТАаСАССААсааЙСсССАтоаатстосооСстаасСАСС

СсТоСТоСАДЧАдаСАССстотасиасаСАсАа,асавасостаавасСсТаСс таатСсААласАСТАСТТССССаАдАдсСссатсаса,аастатсатааААс тЄсАсасассстАСсСсАа,аСса,ааатасСАСАсстсссаастатсстА

СсАатоСстТоСАасаАСТСТАСТоССТоАс,аСсАХ,аСсатаатаАссатаСсс 260 тоСбАасдастапаСАСССАЧАССТАСАТСТаСААСаТтТадАТСА (нуклеотидна СААДаСССАССААСАССАдастТасАСААСаАААатТаласСССАДА послідовність важкого ТСТТатОАСААААСТСАСАСАтТасссАассатассСАасСАССТал ланцюга) дастасда,асаааАССатсАаТСТ ССС СоСССССААААСССА

АваАСАСССТСАТаАТСТОССОСАССССсТаАааТСсАСАТаСаИта стастасАасатаАдаССАССААЧАСССТаАааТСААаТтТСААСТа атТАса,атасАасс,асатааАааТаСАТААТасССААСаАСААдаСсСас сапда,асАдасСАатТАСААСАаасСсАСсатАсСсататаатсАасСаТосто

АосатсСстТасСсАССАСсССаАСсСТаасСсТаААтТааСААасаАаТАСААИТа

СААСИТСТоСААСАдАдаСоСстоааСаСССССАТСПАСАДААССА

ТСТоСАДДаССААддасасАассССаАаААССАСАсаТатТАСАСС стасСсссСсСАТтТоСсСсаспаАТаАаСТАССААпААССАасатсАасст сАсста|асстааТСсААДАвастстТАТОССАасСсаАСАтсаССсаТатась датасаАдпАдаСААдтавасАаССапйАсААСААСТАСААДаАССАС аестоссатаставАСТоСаАСаасСТосСТ СТ осСТСТАСАССАА аСсТоАсСатТапйАСАдадасСсасатасоАа,аСАас,саапААСаТтсттст

СсАТаСТоСатОаАТаСАТаАДааСсСТСТасСАСААССАСТАСАСИасАа

ААСАСССТОТОССТатстоСасаТААА

ІОМТО5РБ5ОТІ БАБМОаОВМТІТСВАБОБІБЗББУ/ЛІ АММООКРОаКАРКІ.

ПМОАББІ ЕБОУМРОНЕБавБабатеЕРНТІ ТІЗБІ ОРООБАТУУСООУНОУ 261 (легкий ланцюг). | РОТЕЕОИаТКМЕІКАТМААРЗМРІЕРРБЗОЕБОЇ К5атАБМУМСІ І ММЕМР

ВЕАКМОМКМОМАГОБаМООЕЗМТЕООБКОБТМ5І 55ТІ ТІ 5КАОМЕ

КНКУМУАСЕМТНОСІ 55Р М ТКЗЕМАОЕС

ОМОЇ МОБОАЕУККРИББЗУКУЗСКАБИСТЕБОМУАІЗММНОАРИОСІ.

ЕМ МасСИТтРІГЄИТАММАОКЕОСАМТІТАОКОТОЗТАУМЕЇ 551 А5ЕОТА

МУХУСАВЗЕЕВНЕМАОБгЕО ММ СОС ТУТ У55АЗБТКОаРБОУМЕРІ АРОБКОТ

ЗаС,ТААГасСІ МКЩОМЕРЕРУТУМ5УМУМ5ОАІ Та МНТЕРАМІ О5501І 5 262 (важкий ланцюг) І 55УММТУРБУБОІ ЕТОТМІСМММНКРОЬМТКМОККМЕРКОЗСОКТНТСРР

СРАРЕААДССРБОМРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОМ5НЕОРЕМКЕ

ММ УМраТамЕМНМАКТКРАЕЄЕОММОТУВММ5МІ ТМ НОСОМ МаОКЕМ

КСКМУБМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І Т

СГ УКОаЕУРБОІАМЕМЖМ ЕБМИСОРЕММУКТТРРМІ О5ОСЗЕБРІ МКМ

ОоКБАМООСММЕЗСОУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І Рак тса,7атстадасСстТАстТоАсасАассстастататтатавасстаааА 263 САПАСАСТСАССАТСАСАТасССААдааАпАСАасСсСтТСАпААаТТА (нуклеотидна тПАТаСААсаСсСТаатТАССАаСАаАдасССАасаАСАасасссстатАс 2507 послідовність легкого ТТатсСАТСТАТаСТААДАААСААдСсСсвассстАаасАТоССАСАС ланцюга) СОАТСТоТаастоСАасСсТСАпаСпАААСАСАаТсСТссСТТаАССАТС дстаса,састода,ааСапААаАТаАдаасСтТаАСТАТТАСТОаТААСТО

ССсТТаАТАСОССОССсвсаТатАтТаТатааатТАттсааСавАасааАССААдас

Таблиця 45

Послідовності клонів анти-4-188 в форматі РЗ29ИІ АГ А людського ІдС1 тТАССатоСстТАааТСсААСССАдсастасссссАаа,сатаАСоста тесесосссСбАдасдаСсаАапААСТасСсАааССААСАдааССАСССТ саетотасСстаАТСАаСаАСТСсТАсССсАсасасса,атадссатась

СтТавААдваССаАСАдаСсА,ассССатадАд,аасссасатааАсАс

САССАСССССАаСАДаСАСАсаСААСААСААдатасассасСАас дастТАссталасСстадсссСсСаасСсАаатасАдадасСсСАСАаато сСтТАСсСАсСсСТасСсСсАаасастТаАСССАСаАасаасСАаа,аСАсСсаТатааАСААА досатаасссССАСсСсадатасАас сд,аатТасСсААтата,асвадасттасасаХаасттасаТАСАаССсТася сасатосСстадаАсттстатасАассСстоСаспАТТСАССТТТАС

СсАаТатАТтасСсАТаАХлаСТваатоСсассАа,вастоСАаЧчапАлаааас тавдатасатсТАасСтТАТАСсТаатаа,атаатастАасСАСАТАС тТАСОСАВАСТоСатадАда,аааССас т САССАТСТОСАСАСАСАА

ТССААСАдАСсАСастатАТСТаСАСАТаААСсАХДасстадалассся

АсваАСсАСааССаТтАТАТТАСТОТОаСОССОЯТадссАсссатаассСа сСаттСсОАСТАСТО,ааССАдасААсоСстаатСАсса стада тастАаСАССАдДаспсасСсССАтастоттосоостаасСАСССтТоСсто

СААдачдасАассттасасасСАсАаассвсасостваста7асстаатсА

АсаАСТАСТТССССОААСсСсосатТоАассататсатасААСТСАсас асостаАссАдассаасСсатасСсАСсАсСсттоссвастатссСстТАСАатосс тТсАваАСТСТАСТоССтТоАа,аСсАа,асатаатАссатассСстоСАас 264 даставаСАСССАСАССТАСАТСТаСААСаТтаААТСАСААСаСС (нуклеотидна САаСААСАССАдастТасАСААаАААатТаАДассССАААТСТТИатТа послідовність важкого АСАДААСТСАСАСАТОСССАСсСвтасСссСсСАаСАССтТадАастТасА ланцюга) савапАСсСатсАатсТосСТсТССССССААДААСССААасСАСАС

ССстТСАТОАТСТОССООАСсСоСсСсТаАасСатсАСсАТасатаатастас доса,атаАдаССАСОААаАСССТаАааТСсААаТТСсААСстааТтАсата садссссатасАааТасСАТААТаССААСАСАдАдасса,аСаавадас

АССАаТАСААСАааСАСсатАассататаатАаСаТатссСТСАССИатТо

СстТасСсАСсСАаавАСстТаасСсТаААтТапСААааАаТАСАдатасСАдОастТ

СТоСААСАДАОССССТОИааСаСССССАТССАСААААССАТСТОСА

ААДИССААдАасСааСАаасссСаАпААССАСАсатаТАСАСсоСста7ассс

СсСАТСССОЯСОапАТОАдаСТаАССААСаААССАааатСАасстТаАсстТа

Стат СААдаасСТстТАТСССАаСОАСАтТоаСсСсатавАатасаИ

АвАдаСсААдтасасдасСсапАаААСААСТАСААЧАССАСасстос сатаставпйАСстоСаАсаасСТосСтТсСТССТСсТАСАаСАдасСтТСАС сатТапАСсАдсАХаСсАасатасоАаСАа,аасваААСаТтсТсСТСАТОаСтТ

ССатОаАТаСАТаАааСТСТаСАСААССАСТАСАСОСАадАаАдИаС стстоссТатстоСасаТААА

З5ЕЇ ТООРАМБМАЇ аОТУВІТСОСО5І ВБММАБМУМООКРИаСАРМІ М

ІМЕКММАРЗаї РОВЕБИа5БОЗОаМТАБІ ТІТаАОАЕОЕАОММСМОІ ОВ 265 (легкий ланцюг) | ОМУУгсИсаИткі ТМ аоРКААРБМТІ ЕРРОБЗЕБЇ ОАМКАТІ МС ЗО

ЕУРОАМТУМАМУКАОЗОРУКАСМЕТТТРУКОЗММКМУААБОМІ БІ ТРЕО

МКЗНАЗУЗСОМТНЕСЗТМЕКТМАРТЕС5

ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИЕТЕ55УАМЗУУНОАРОКИЇ Е

М МУБАІВОБИаВТУМАрВУКОаВЕТІЗНОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТА

МУХСАВВОРМРРЕО УМ СОСТІ МТГМ55АВБТКОаРОМЕРІ АРОБК5оТ5ОИ

СТААГ ОСІ МКОМЕРЕРУТУБМ/МЗОАІ Та МНТЕРАМІ 05501 51 5 266 (важкий ланцюг) ЗММТМРББІ ато МміСМММНкКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОР

АРЕАДССРБОМНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУММОМЗНЕОРЕМКЕМ

МУМрамЕМНМАКТКРАЕЄЕОУМОТМАМУ5МІ ТМ НООМ/І МОКЕМК

СКУ5БМКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМУТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І ТО

ГУКаЕМРООІАМЕМЕБМООРЕММУКТТРРМІ О5ООаБЕРІ МКІТМО

КЗАМООСММЕЗСОУМНЕАІ НМНУТОКОІ 5І РОК

Таблиця 45

Послідовності клонів анти-4-188 в форматі РЗ29ИІ АГ А людського ІдС1

САСАТССАСАТаАСССАаТСТОСТТССАСССТаТтСстТасСАТСТИатА садпАССатаТтСАССАТСАСТТОаССОЯТасСсСАатТСАсАатТАТТАС тластасттаасстаатТАТСАаСАСАААССАаасААдАасссстТА

АССТОСТОАТСТАТОАТасССтТоСАаТтттапААдАда тасасаТоСсСАТ

СсАсСстттсАдаСса,аасаатапАтСааваАСАСААТТСАСТСТСАСС 267 АТтТСсАСаСсАастТтасСАасСссСстТаАТОАТТТТасСААСТТАТТАСТаССАА (нуклеотидна СсАасСТтТААТТоатАТССТоАсаАаСсатттааСсСАпасйСАССААДИТО послідовність легкого вАпАТСАдаСсатасааЙтааЙсСТасСАССАТСТаТтСТтСсАТСТТОССО ланцюга) ССАТСТОАТтТаАДаСАСТТаАААТСтТаспААСстТассттаттатиатас

СТаСтТОААТААСТТСТАТСССАСАдСаАдаасССААДАаТАСАИТасаАА сатасАТААСасСсссСтТоСААтТоасатААСТоССАсаАаАаТтатсСА

САа,САаСсАдапАСАаСААапАСАаСАССТАСАаСсСстоАдасАасАс

ССстТОАСастаАаСААДАдаСАпАСТАСОАаАААСАСААДАСаТСТАСа сСтТасСсОаААДатТСсАСССАТСАСвасСстАаСсТассССатСАСАДАС

АССТТСААСАсСасадаАаТтат

СсАасатасСсААдта7аатасаатстааавастА,ааТаААаААасССсТаС стостосватадАдаатстСсТасСсАл,ааостСавАаасСАСАТТСА вСАаСстТАСасСтТАТААДОСТОСЯВТтаСаАСАаасссСТасАСАдОаса стссдатавАатТасаАХаваАТСсАТОСССТАТСТТТасСстТАСАССААдАА

СстТАСбасСАСАадАдаттсосАаа,авасАдасатСАССАТТАСТаСАСАСА

ААТССАСОаАдаСАСАаССтТАСАТОасСАа,аСстТаАдаСАаСсСстТаАсАТСТ сАдапАСсАссасСсатТатАТТАСТатасСсаАСаАТСТАСТСОТОАТСТАС сватТАСТТСОАСтТАСсТасааССАд,асаАСсСАсСс,атаАССаТтсто

СстТсАасСстТАаСАСсСААл,авасссСАтИватстоСооСсТаасСАСССТО

СстТоСААСАДОаСАССТОТОСОСсасСАСАа,аСсавасостава7астасста

ТСААССАСТАСТТССССОаАдАсСсаватаАаса,вататоатацААСТСА сасассстадссАд,аСсавасаТасСАСАССТТССсаастТатсосСТАСА 1105 атТоСсТоАаСпАСТСТАСТоССтТодасСАассатасталссатасссто 268 СсдасдастапасСАСССАаАССТАСАТСТаСААСОаСТаААТСАСА (нуклеотидна АаСССАаСААСАССААдааТасАСААаАААсСТТаАасСССАААТСТ послідовність важкого тТатаАСААААСТСАСАСАТассСАсСсатасссСАасСАССТадАас ланцюга) тасдасаваАСсСаТсАСТСТ ССС ССССССААААСССАдОс

АСАСССТСАТаАТСОТОССОООМАССССТаАдааТСАСАТОСИаТа,тТа стасвАдсатТадаССАСаААдсаАСоСсталааТСААаТтТТСААСТаатА сатасдсса7асатааАдааТасСАТААТаССААпАСАдАаССсаИассвся сАда,апсАасСАаТАСААСАааСАСссатАссататаатАасСатТссСтТСАС сатоСстТаСАССАасаАСтТаасСТаААтТааСААсааАаТАСААИ,ТаСА

АВатСстТоСААСААдассстааЙсассССССАТССАСАДААССАТС

ТОоСАДАИССААдАдсСасАаССССаАаААССАСАаа ТаТАСАСССТ

ВосССССАТоСсСсвапАтТаАдасСстТаАССААДаААССАааТСАаССтТаА

СстТассСстТааТСсАААдаасСТСстТАТСССАаСОАСАтТоаССсатапАстТ савАдсАдаСААтТасасСсАасСапАспААСААСТАСААСАССАСаСс тоссатаставАСстоСаАссааТастосСТСсТоСТСсТАСАаСАДОСТ

СсАссатапйАСАдадаСАасатасоАа,аСАаа,аасацпААСаТтсТсСТСАТ астоСбатаАтТасСАТОАДааЙсСТСтТасАСААССАСТАСАСасСАаАда дассТоТоосТатстСасатТААА

ІОМТО5РБ5ОТІ БАБМОаОВМТІТСВАБОБІБЗББУ АММООКРОКАРКІ.

ПМОА5ББІ ЕБОУМРОВЕБавБазатеЕРНТІ ТІЗБІ ОРОЮБАТУМУСООЇ МУ 269 (легкий ланцюг). | РОТЕЕОИТКМЕІКАТМААРЗМРІЕРРБОЕБОЇ К5атАБМУМСІ І ММЕМР

ВЕАКМОМ/КМОМАГО5аИМЗОЕЗУТЕООБКОБЗТМБІ 55ТІ ТІ КАВУ

ЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАОЕС

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІЗБМУНОАРИаОИІ. 270 (важкий ланцюг) ЕМ МасСИТтРІГЄИТАММАОКЕОСАМТІТАОКОТОЗТАУМЕЇ 551 А5ЕОТА

МУХУСАВЗТИМамЕриМуаОаТУТУ55АВБТКОаРОМЕРІ АРЗБК5оТВа

СТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБМ/МЗОАІ ТИ МНТЕРАМІ О55ИІ 51 5

Таблиця 45

Послідовності клонів анти-4-188 в форматі РЗ29ИІ АГ А людського ІдС1

ЗММТМРББІ ато МміСМММНкКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОР

АРЕАДССРБОМНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУММОМЗНЕОРЕМКЕМ

МУМрамЕМНМАКТКРАЕЄЕОУМОТМАМУ5БМІ ТМІ НОВУ МОКЕМК

СКУ5БМКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМУТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І ТО

ГУКаЕМРООІАМЕМЕБМООРЕММУКТТРРМІ О5ООаБЕРІ МКІТМО

КЗАМООСММЕЗСОУМНЕАІ НМНУТОКОІ 5І РОК

САСАТССАСАТаАСССАаТСТОСТТССАСССТаТтСстТасСАТСТИатА садпАССатаТтСАССАТСАСТТОаССОЯТасСсСАатТСАсАатТАТТАС тластасттаасстаатТАТСАаСАСАААССАаасААдАасссстТА

АССТОСТОАТСТАТОАТасССтТоСАаТтттапААдАда тасасаТоСсСАТ

СсАсСстттсАдаСса,аасАаатапАтСааваАСАСААТТСАСТСТСАСС 271 АТтТСсАСаСсАастТтасСАасСссСстТаАТОАТТТТасСААСТТАТТАСТаССАА (нуклеотидна СсАасаТТААТТСТТАТоСаСАсСАаСссттаасСАаасасСАССААдаИТ послідовність легкого СсОАпАТСААХдаСсатАас,сатаасТасСАССАТСТатсСТттСАТСТТОСС ланцюга) асССсАТтСотТаАТаАдаСАаТтТаАААтТоТаспААстаТассттаТттатата

ССТасСтТОААТААСТТСТАТСССАСАдсАпасССААдАаТтАСАатааА

Ад,аатааАтТААСаССсСТоСААтоааатААСТоССАсаАадатТато

АсАда,аАдаСАапАСАаСААапАСАаСАССТАСАасСсСстТоАасСАаСА

СсССтТОАСасСстТаАаСАААдасСАаАСтТАСОАСАААСАСАдАаТтстАСс аДоСТасСОААдаТСАСССАТСАИ,свасСстаАасТассСОаТСАСАДА вАаСТСсААСАсасаАсАаТтТат

СсАасатасСсААдта7аатасаатстааавастА,ааТаААаААасССсТаС стостосватадАдаатстСсТасСсАл,ааостСавАаасСАСАТТСА вСАаСстТАСасСтТАТААДОСТОСЯВТтаСаАСАаасссСТасАСАдОаса стссдатавАатТасаАХаааАТСАТОССТАТСТТТаСТАСАСаСААА

СстТАбасСАСАадАдаттсСсАаа,авасАдааатСАССАТТАСТаСАаАСА

ААТССАСОаАдаСАСАаССтТАСАТОасСАа,аСстТаАдаСАаСсСстТаАсАТСТ сАдапАСсАсСсасСататАТТАСсТатТасСсаАсаАтототаастасттТАС сса,васаТТАСТТСОАСстТАСсТаасасССАдапаАССАсСсатаАссат

СсТоСсТосАасСстТАаСАССААсааЙСсССАтоаатстосооСстаасСАСС 9811 СсТоСТоСАДЧАдаСАССстотасиасаСАсАа,асавасостаавасСсТаСс таатСсААасАСТАСТТССССаАдАдсоСссатсАасастатсатааААс тЄсАсасассстАСсСсАа,аСса,ааатасСАСАсстсссаастатсстА

СсАатоСстТоСАасаАСТСТАСТоССТоАс,аСсАХ,аСсатаатаАссатаСсс 272 тоСбАасдастапаСАСССАЧАССТАСАТСТаСААСаТтТадАТСА (нуклеотидна СААДаСССАССААСАССАдастТасАСААСаАААатТаласСССАДА послідовність важкого ТСТТатОАСААААСТСАСАСАтТасссАассатассСАасСАССТал ланцюга) дастасда,асаааАССатсАаТСТ ССС СоСССССААААСССА

АваАСАСССТСАТаАТСТОССОСАССССсТаАааТСсАСАТаСаИта стастасАасатаАдаССАССААЧАСССТаАааТСААаТтТСААСТа атТАса,атасАасс,асатааАааТаСАТААТасССААСаАСААдаСсСас сапда,асАдасСАатТАСААСАаасСсАСсатАсСсататаатсАасСаТосто

АосатсСстТасСсАССАСсСОаАСсТаасСсТаААтТааСААасаАаТАСААИТа

СААСИТСТоСААСАдАдаСоСстоааСаСССССАТСПАСАДААССА

ТСТоСАДДаССААддасасАассССаАаААССАСАсаТатТАСАСС стасСсссСсСАТтТоСсСсаспаАТаАаСТАССААпААССАасатсАасст сАсста|асстааТСсААДАвастстТАТОССАасСсаАСАтсаССсаТатась датасаАдпАдаСААдтавасАаССапйАсААСААСТАСААДаАССАС аестоссатаставАСТоСаАСаасСТосСТ СТ осСТСТАСАССАА аСсТоАсСатТапйАСАдадасСсасатасоАа,аСАас,саапААСаТтсттст

СсАТаСТоСатОаАТаСАТаАДааСсСТСТасСАСААССАСТАСАСИасАа

ААСАСССТОТОССТатстоСасаТААА

ІОМТО5РБ5ОТІ БАБМОаОВМТІТСВАБОБІБЗББУ/ЛІ АММООКРОаКАРКІ. 273 (Легкий ланцюг) ПП ІМОАББІ ЕБОМРОВЕЗОаБОаБаИтЕНЕТІ ТІЗ5І ОРООБАТУУСООУМУ

РОТЕСФОСТКМЕІКВТМААРОЗМЕРІЕРРЗОЕОЇ К5ИаТАБММСТ І ММЕМ Р

Таблиця 45

Послідовності клонів анти-4-188 в форматі РЗ29ИІ АГ А людського ІдС1

ПИШНЕ ісьсох винна

ЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАОЕС

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІЗБМУНОАРИаОИІ.

ЕМ МасСИТтРІГЄИТАММАОКЕОСАМТІТАОКОТОЗТАУМЕЇ 551 А5ЕОТА

МУУСАВБЗаАУРаУЕОМММ ОСТ УТМ55АЗТКОаРОМЕРІ АРОЗК5ОТ

ЗаС,ТААГасСІ МКЩОМЕРЕРУТУМ5УМУМ5ОАІ Та МНТЕРАМІ О5501І 5 2714 (важкий ланцюг) І 55УММТУРБУБОІ ЕТОТМІСМММНКРОЬМТКМОККМЕРКОЗСОКТНТСРР

СРАРЕААДССРБОМРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОМ5НЕОРЕМКЕ

ММ УМраТамЕМНМАКТКРАЕЄЕОММОТУВММ5МІ ТМ НОСОМ МаОКЕМ

КСКМУБМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І Т

СГ УКОаЕУРБОІАМЕМЖМ ЕБМИСОРЕММУКТТРРМІ О5ОСЗЕБРІ МКМ

ОоКБАМООСММЕЗСОУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І Рак

САСАТССАСАТаАСССАаТСТоСАТССАСССТатстТасАТСТатА садпАССатаТтСАССАТСАСТТОаССОЯТасСсСАатТСАсАатТАТТАС тластасттаасстаатТАТСАаСАСАААССАаасААдАасссстТА

АССТОСТОАТСТАТОАТасССтТоСАаТтттапААдАда тасасаТоСсСАТ

СсАсСстттсАдаСса,аасАаатапАтСааваАСАСААТТСАСТСТСАСС 275 АТСсАЧаСАаСТТасСАасССтТаАТаАТТТТаСААСТТАТТАСТаССАА (нуклеотидна СсАаСАаСАСТСОСТАТТАТАСЯТ ТТТОаСССАаасСАССАдАатСад послідовність легкого САТСААДОССОЯтТАСвИатТаастасСАССАТСТатсСТТсСАТСТТСССОаСС ланцюга) АтТстТаАТтТаАдаСАаТтТТаАААТСТасСААСсТассттаТттататасст аСтТаААТААСТТСТАТСССАСАас,САааССАААСТАСАСТасАдОс

ТтТаСАТААСаСССТоСААТСОаасСТААСТоССАасСаАаАдатТатСАСА сдасАапАСсАаСАДапАСАаСАССТАСАаССтТСАаСАасСАСССТ вАСаСсТАаСАААДаСАпАСТАСОАСАААСАСАААаТСТАСаТсст вСсаААатСАСССАтоА,саассталастоасссСаТСАСААддадас

ТТСсААСАасСОССсАаАсИТтаИт

СсАасатасСсААдта7аатасаатстааавастА,ааТаААаААасССсТаС стостосватадАдаатстСсТасСсАл,ааостСавАаасСАСАТТСА вСАаСстТАСасСтТАТААДОСТОСЯВТтаСаАСАаасссСТасАСАдОаса стссдатавАатТасаАХаааАТСАТОССТАТСТТТаСТАСАСаСААА

СстТАбасСАСАадАдаттсСсАаа,авасАдааатСАССАТТАСТаСАаАСА

ААТССАСОаАдаСАСАаССтТАСАТОасСАа,аСстТаАдаСАаСсСстТаАсАТСТ 20с2 сдапАсАдссасСататАТТАСТатасСсаАаАТСТТАСТАСТасад

АТСТТАСССаттоОаАСТАСТОаСОвасСААда,асааАССАсСсатаАссСа тотоСсАдаСсасСстТАаСАССАдДаЧвассСсСАтаатстсооостаасСАС

ССТоСТоСАдаАХаСсАсстотассасиаСсАасАа,асава7асоставастас стаатТСсААааАСТАСТССССаАдАсСс,аатаАСса,аататсатацсАА

СстсАас,асассстАсСсАд,ассаСатасСАСАСсСстсСсва7астатост 276 АСсСАатТоСтТСАааАСТСТАСТОССтТСсАсССсАХасатастаАссатасс (нуклеотидна СсТоСАаСсАастапаСАСССАСАССТАСАТСТаСААСОаТОаААТС послідовність важкого | АСАДХИСССАССААСАССААааТапйАСААпАААатТаласссАА ланцюга) АТСТТатТОаАСАДААСТСАСАСАТасСссСсАСсСатассСАасСАССТа

АдастасаасаасаАССаТтсАаТтстссСТСТСсСССССААААСосс

ААССАСАСССТСАТОАтТотТоСсСасвсАсСсСсСстадасТСАСАТасат сатсатасАаСатадаССАСОАдАаАССсСсТаАласТСААаТТСААСТ сатАдсатасассасатапвАааТасСАТААТаССААСАСАдАаСс асавсаАд,асАаСАсСТАСААСАсСАСсатАассататаатАасСатос

ТСсАССОСЯТОоСтТасСАССАсаСАСстТаасСстТаААТааСААаспсАсаТАСАда

ТтТаСААДСаТСТоСААСААдАдасосстоаавСасссССАТССАСААААС

САТСТССААДАаССАдДАас,СааСАассссаАпААССАСАСаИатаТАСА

СсоСстТассССсССАТСоССЯДавпАтТаАдасСТаАССААаААССАааа ТС стАсст|ассСстаТтСААдАааТсСТСстТАТСССАаСОАСАТСОССИаТОа слатасадаАдаСААтТасвасдаССацпАспААСААСТАСААаАССА сесстоссатастасАСсТСаАСаасСТсСТ СТ оСТСстТАСАССА

Таблиця 45

Послідовності клонів анти-4-188 в форматі РЗ29ИІ АГ А людського ІдС1 дастоАдссатапАСАдада,аСАаасатасСХасАаасасааААСаТтстто тТСАТОСТОСИаТтОаАТаСАТОАХИаастСТтасСАСААССАСТАСАСасА вААСАССсСТОТоССТатотоСасатААА

РІОМТО5РБТІ БАБМООВМТІТ СВАБОБІЗБЗУМ АМУООКРОКАРКІ.

ПМОРАБ5ОІ ЕБИУРОВЕЗОаЗОаЗОТЕЕТІ ТІЗ5І ОРООБГАТУУСООСОНБУ 277 (легкий ланцюг). | УТЕЕОСТКУЄІКАТМААРЗМУРІЕРРРБЗОЕОЇ КЗаТтАБМУМУСІ І ММЕМРА

ЕАКМОМ/КМОМАЇ О512М5ОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ З55ТІ ТІ ЗКАОМЕ

КНКУММАСЕМТНОІ 55РУТКЗЕМАСЕС

ОМОЇ МОБЕАЕУККРОЗЗУКУЗСКАВОС,ТЕЗЗУАІЗУМУУВОАРООСІ.

ЕУМаанпПРІБЄИТАММАОКЕРОСАМТІТАОКОТОТАММЕЇ 551 В5ЕОТА

УМУУСАВЗУУМ ЕЗУРЕО УМ СОСТТУГУ5ЗАЗТКОаРЗМЕРІ АРЗЗК5Т вааТтТААЇ ас УКЩОМЕРЕРУТУБУМЗИАІ ТЗаМНТЕРАМІ О550І 5 278 (важкий ланцюг) І 5548. УТ УРБЗБЗІ С ТОТМІСМУМНКРУОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРР

СРАРЕАДАСОИРБУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМУТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕ

МУУУрамЕУНМАКТКРАЕЄОУМОЗТУАМММІ ТМ НОБУУІ МЕОКЕМ

КСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРАВЕРОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І Т

СІ УКаЕМРЗОІАМЕЖМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕРІ МКУ

КЗАМОСаММЕЗСЗУМНЕАЇІНМНУТОКОІ 5І Рак

Антитіла до 4-188 одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців, використовуючи поліетиленімін. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами в співвідношенні 1:1 ("вектор важкого ланцюга": "вектор легкого ланцюга").

Для одержання в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х гі супернатант замінювали попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори (200 мкг загальної ДНК) змішували з 20 мл середовища СО СНО. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕ!, переносили в 500-мілілітрову збовтану колбу та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 95 СО».

Після інкубації додавали 160 мл середовища РЕ17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали 1мМ вальпроєву кислоту і 7 96 Реейд. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 15 хв при 210 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22-мікрометровий фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас. / Об.) І витримували при 4" С.

Очистка молекул антитіл з супернатантів клітинної культури здійснювали за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А згідно з методом, описаним вище для очистки злиттів антиген-Ес.

Білок концентрували і фільтрували перед завантаженням на колонку НіЇ осад Супердекс 200 (фірма СЕ Неайвсаге), врівноважену розчином, що містить 20мМ гістидин, 140мМ масі, рн 6,0.

Концентрацію білка визначали на основі вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм з використанням коефіцієнта молярної екстинкції, розрахованого на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу антитіл аналізували за допомогою КЕ-ДСН в присутності відновника (фірма Іпмігодеп, США) або без нього за допомогою пристрою

Гарспірохі! (фірма Саїірег). Вміст агрегатів в зразках аналізували, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації Т5Кде! 53000 ЗМУ Хі (фірма Тозой), врівноважену рухомим буфером, що містить 25мМ К2НРОЯ4, 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95

Зо (мас. / Об.) Мам3, рн 6,7, при 25 "С.

В таблиці 46 узагальнені дані про вихід і кінцевий вміст антитіл до 4-18В в форматі РЗ29С

І АГА ІдДа1.

Таблиця 46

Дані біохімічного аналізу клонів антитіл до 4-188 в форматі РЗ2ОСІ АГ А ІдС1 1283 РЗ2ОС1 АГА о 22,5 95 (29 кДа) обр я 16 | о вветотода | еда 25027 РЗ2ОСІ АГА о 76,8 95 (65 кДа) 1105 РЗ2ОСІ АГА о тра (підлягає 2 Чо (127 кДа) 24,6 95 (37,1 кДа 20022 РЗ2ОСІ АГА о 80,2 9о (62,8 кДа)

Приклад 7

Характеризація антитіл до 4-1В8В 7.1 Зв'язування з людським 4-188 7.1.1 Поверхневий плазмонний резонанс (авідність ж афінність)

Зв'язування одержаних за допомогою фагів 4-18В-специфічних антитіл з конструкцією рекомбінантний 4-188-Ес (Кі) оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (5РК). Всі експерименти на основі 5РЕ здійснювали за допомогою пристрою Віасоге Т200 при 25"С з використанням НВЗ-ЕР як рухомий буфер (0,01М НЕРЕ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗммМ

ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта Р20, фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина).

В цьому ж експерименті визначали видову вибірковість і авідність взаємодії між одержаними за допомогою фагового дисплея клонами антитіл до 4-188 1283, 25057, 1105, 9811 і 2002 (всі в форматі людського Ідс1 РЗ290БІ АГА) і рекомбінантним 4-188 (людини, супо і мишей).

Конструкції, що містять біотинільований 4-188 людини, мавп ціномолгус і мишей в злитті з Ес (кіп), безпосередньо зшивали з різними проточними комірками стрептавідинового (ЗА) сенсорного чипа. Використовували рівень іммобілізації, що відповідає аж до 100 резонансним одиницям (КО). Одержані за допомогою фагового дисплея антитіла до 4-188 в форматі людського ІдСс1 РЗ29ОГАГА пропускали через проточні комірки, використовуючи діапазон концентрацій від 4 до 450НМ (3-кратне розведення), зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 сб. Моніторинг дисоціації комплексу здійснювали протягом 220 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референос- комірці, в якій був відсутній іммобілізований білок.

Кінетичні константи визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге Т200

Емаїнайоп (хАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:11 Ленгмюра, і застосовували для якісної оцінки авідності (таблиця 47).

В цьому ж експерименті визначали афінність взаємодії одержаних за допомогою фагового дисплея антитіл (людський ДС РЗ29аИ1 АЇ А) з рекомбінантним 4-188В (людини, супо і мишей).

Зо Антитіло до людського Рар (фірма Віасогєе, Фрейбург/Німеччина) безпосередньо зшивали з

СМб-чипом при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного з'єднання (фірма

Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Рівень іммобілізації відповідав приблизно 7500 КО. Одержані за допомогою фагового дисплея антитіла до 4-18Щ8 захоплювали протягом 60 с в концентраціях порядку 25НМ. Конструкцію рекомбінантний людський 4-188-Ес (Кі!) пропускали через проточні комірки в діапазоні концентрацій від 4,1 до 1000нМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референос-комірці. В ній антигени пропускали по поверхні з іммобілізованим антитілом до людського Раб, але ін'єктували

НВ5-ЕР, а не антитіла. Кінетичні константи визначали за допомогою програмного забезпечення

Віасоге 1200 ЕмаїІчайоп (мАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра.

Клони 2507 і 9811 зв'язувались з конструкцією людський 4-188-Ес (Кі!) з більш низькою афінністю, ніж клони 1283 і 1105. Клон 20052 не зв'язувався з людським 4-188В. Константи афінності, що характеризують взаємодію між анти-4-188 РЗ29ОІГ АГА Ідс1 і конструкцією людський 4-188-Ес (Кіп), визначали, здійснюючи підгонку до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра.

Таблиця 47

Зв'язування антитіл до 4-188 з рекомбінантним людським 4-188

К Рекомбінантний людський 4-188 лон |Походження (формат для оцінки авідності) формат для оцінки афінності дисплей дисплей дисплей дисплей 7.1.2 Зв'язування з клітинами, що експресуюють людський 4-1ВВ: активовані та такі, що в стані спокою мононуклеарні лейкоцити периферичної крові (РВМС) людини

Експресія людського 4-18 відсутня на наївних та таких, що в стані спокою людських Т- клітинах (Кіеплгіє С. і моп Кетрівз .)., пі. Іттипо). 12 (1), 2000., сс. 73-82, Меп Т.та ін., у. Іттипо). 168, 2002 сс. 4897-4906). Після активації іммобілізованим агоністичним антитілом до людського

СОЗ відбувається підвищувальна регуляція 4-188 на Сра-- і СО8:-Т-клітинах. Експресія 4-188 описана також на активованих людських МК-клітинах (Ваєзвзів" Т. та ін., Віооа 115 (15), 2010 сс. 3058-3069), активованих людських МКТ-клітинах (СоЇє 5І та ін., у). Іттипої. 192 (8), 2014, сс. 3898-3907), активованих людських В-клітинах (Папа та ін., у). Іттипої. 184 (2), 2010 сс. 787- 795), активованих людських еозинофілах (Неїпізсп та ін., 2001), конститутивно на людських нейтрофилах (Неїіпізсп ІМ, / АйПегду Сіїп Іттипої. 108 (1), 2000., сс. 21-28), активованих людських моноцитах (І апдзівїп у. та ін., У Іттипої. 160 (5), 1998, сс. 2488-2494, Куазапй М. і

Зспулаг? Н., Єиг ) Іттипої. 40 (7), 2010 сс. 1938-1949), конститутивно на людських регуляторних

Т-клітинах (Васпег Р. та ін., Мисовза! Іттипої. 7 (4), 2014 року, сс. 916-928), людських фолікулярних дендритних клітинах (Рашу 5. та ін., / ГешКос Віої. 72 (1), 2002 сс. 35-42), активованих людських дендритних клітинах (Папа І. та ін., СеїЇ Мої Іттипої. 1 (1), 2004, сс. 71- 76) і на кровоносних судинах злоякісних людських пухлин (Втгої| К. та ін., Ат .) Сіїп Раїйної. 115 (4), 2001., сс. 543-549).

Для оцінки зв'язування одержаних при створенні винаходу клонів анти-4-188 з клітинами, що зустрічаються в природних умовах, які експресують людський 4-188, застосовували свіжовиділені мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) в стані спокою або попередньо активовані ФГА-І /пролейкіном і реактивовані СОЗ/С028 РВМО. РВМО з лейкоцитарних плівок, отриманих з центру донорської крові Цюріха, виділлли шляхом центрифугування в градієнті густини фікола, використовуючи Нізіорадиє 1077 (фірма 5БІСМА І йе Зсієпсе, каталожний Мо 10771, полісахароза і діатризоат натрію, густина доведена до 1,077 г/мл)), і ресуспендували в

Зо середовищі для Т-клітин, що складається з середовища ЕРМІ 1640, фірма Сірсо на фірмі І Те

Тесппоіоду, каталожний Мо 42401-042), доповненого 10 95 фетальної бичачої сироватки (ЕВ5, фірма Сібсо на фірмі Ге Тесипоіоду, каталожний Мо 16000-044, партія 941273, оброблена гамма-променями, вільна від мікоплазм та інактивована тепловою обробкою при 56 "С протягом

З35 хв), 1 об. 95 СішамАХ-Ї (фірма СІВСО на фірмі І Те ТесппоЇодієх, каталожний Мо 35050 038),

ТММ піруватом натрію (фірма 5ІСМА, каталожний Мо 58636), 1 об. 95 середовища МЕМ, що містить замінні амінокислоти (фірма 5ІСМА, каталожний Мо М7145) і 5Б0мкМ Вр- меркаптоетанолом (фірма 5ІСМА, М3148). РВМСОС використовували безпосередньо після виділення (клітини в стані спокою) або стимулювали для індукції експресії 4-188 на клітинній поверхні Т-клітин шляхом культивування протягом 3-5 днів в середовищі для Т-клітин, доповненого 200 од./мл пролейкіна (фірма Момайіє Рпапта 5спмуєї; АС, СНО В-Р-476-700- 10340) і 2 мкг/мл ФГА Ї (фірма 5ІСМА, каталожний Мо І 2769), в б-лунковому планшеті для культури тканини і потім протягом 2 днів в б-лунковому планшеті для культури тканини, сенсибілізованому 10 мкг/мл антитіла до людського СОЗ (клон ОКТЗ, фірма Віої! едепоа, каталожний Мо 317315) і 2 мкг/мл антитіла до людського СО28 (клон СО28.2, фірма Віої! едепа, каталожний Мо 302928), в середовищі для Т-клітин при 37 "С і 5 95 СО».

Для визначення зв'язування з людським 4-18В, що експресується людськими РВМС, 0,1- 0,2х105 свіжовиділених або активованих РВМСОС додавали в кожну лунку круглодонних 96- ямкових планшетів для суспензійних клітин (фірма Стгеїпег Бріо-опе, сеїЇІвїаг, каталожний Мо 650185). Планшети центрифугували протягом 4 хв при 400 х 9 при 4 "С і супернатант відкидали.

Клітини промивали, використовуючи 200 мкл/на лунку О-ЗФР, і потім інкубували протягом 30 хв при 4 "С з 100 мкл/мл Ю-ЗФР, що містить розведений у співвідношенні 1: 5000 барвник для оцінки життєздатності клітин (Ріхаріе Міаарійу бує) еРіног 450 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 64-0863-18) або Ріхабіе Міарійу Буе еРіног 660 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 65-0864-18).

Потім клітини промивали одноразово, використовуючи 200 мкл/на лунку холодного ЕАС5- буфера (0О-З3ФР, доповнений 2 об. 95 ЕВ5, 5ММ ЕДТА, рН 8 (фірма Атгезсо, каталожний Мо

Е177) і 7,5мМ азидом натрію (фірма 5ідта-Аїагісп, 52002)). Потім додавали 50 мкл/на лунку холодного (4 "С) ГАСЗ-буфера, що містить титровані зв'язуюючі агенти до людського 4-188В і клітини інкубували протягом 120 хв при 4 "С. Клітини промивали чотири рази, використовуючи 200 мкл/лунку холодного (4 "С) РАС5-буфера для видалення незв'язаних молекул. Після цього клітини додатково інкубували з 50 мкл/на лунку холодного (4 "С) ЕАС5З-буфера, що містить 2,5 мкг/мл кон'югованого з РЕ Е(ар')2-фрагмента козячого до проти людського дО, Есу-фрагмент- специфічного АйіпіРиге (фірма даскзоп ІттипоКезеагсі, каталожний Мо 109-116-098) або 30 мкг/мл кон'югованого з ФІТЦ Р(аб')»-фрагмента козячого ДС проти людського Ідс, Есу- фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма даскзоп ІттипоКезеагсі, каталожний Мо 109-096-098, антитіло до людського СО45 АЕ488 (клон НІЗО, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 304019), 0,67 мкг/мл кон'югованого з АРС/Су7 тоЇдСік до людського СОЮЗ, (клон ОСНІ, фірма Віої едепа, каталожний Мо 300426) або 0,125 мкг/мл кон'югованого з РЕ мишачого ІЇдс1к до людського СОЗ (клон 5К7, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 344806) або 0,67 мкг/мл кон'югованого з

Регср/Су5.5 мишачого ІдДСсік до людського СОЗ (клон ОСНТІ, фірма Віої едепа, каталожний Мо 300430), 0,125 мкг/мл кон'югованого з ВМ421 тоЇїдсік до людського СО4 (клон КРА-Т4, фірма

ВіоЇ едепд, каталожний Мо 300532), або 0,23 мкг/мл кон'югованого з ВМ421 мишачого Ідс2Бк до людського СО4 (клон ОКТ4, фірма ВіоЇедепа, каталожний Мо 317434), або 0,08 мкг/мл кон'югованого з РЕ/Су/ мишачого (ДСбік до людського СО4 (клон 5КЗ3, фірма ВіоЇ ед епа каталожний Мо 344612), 0,17 мкг/мл кон'югованого з АРС/Су7 антитіла до людського СО8

Зо (мишачий ІдСік, клон КРА-Т8, фірма ВіоЇ едепі, каталожний Мо 301016) або 0,125 мкг/мл кон'югованого з РЕ/Су7 антитіла до людському СОва (тоЇдск, клон КРА-Т8, фірма Віої! едепа, каталожний Мо 301012), або 0,33 мкг/мл антитіла до людського СО8 ВМ510 (тоЇдсик, клон ЗК, фірма ВіоЇедепа, каталожний Мо 344732) і 0,25 мкг/мл кон'югованого з АРС антитіла до людського СО56 (мишачий ІдСсік, клон НСОБ56б, фірма Віої едепа, каталожний Мо 318310), або 1 мкл кон'югованого з АБ488 антитіла до людського СО56б (тоЇдСиік, клон В159, фірма ВО

РПпагтіпдеп, каталож ний Мо 557699) і 0,67 мкг/мл антитіла до людського СО19-РЕ/Су7 (тоїдсик, клон НІВ19, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 302216), та інкубували протягом 30 хв при 4 "С.

Клітини промивали двічі, використовуючи 200 мкл ЕБАС5-буфера/на лунку, і фіксували шляхом ресуспендування в 50 мкл/на лунку О-ЗФР, що містить 1 96 формальдегіду (фірма

Зідта, НТ5О0О1320-9.5І3. Отримували дані для клітин в цей же або на наступний день з використанням пристрою з З лазерами Сапіо ІІ (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення рімМА) або з 5 лазерами Еопевза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОМА), або оснащеного З-лазерами аналізатора МАСЗОцапі 10 (фірма Мікепуї Віотесп). Дискримінаційні вікна встановлювали на СО8:- і СО4--Т-клітини і визначали медіанне значення інтенсивності флуоресценції (МЕ!) або геометричне середнє значення інтенсивності флуоресценції вторинного ідентифікуююче антитіло, яке застосовували для аналізу зв'язування первинних антитіл. З використанням програми Сгарпй Рай Ргізт (фірма сСгарпй Рай боймаге Іпс.) дані стандартизованих по відношенню до фонового рівня шляхом віднімання значень для "порожнього" контролю (без додавання первинного антитіла) і розраховували величини ЕСво на основі підгонки кривої нелінійної регресії (надійний підбір).

На людських Т-клітинах в стані спокою була відсутня експресія 4-188, але мала місце підвищувальна регуляція 4-188 після активації. Для людських СО8:-Т-клітин характерна сильніша підвищувальна регуляція, ніж для СО4--Т-клітин. Створені антитіла, специфічні по відношенню до людського 4-188, могли зв'язуватисьь з людським 4-188, експресованим активованими людськими Т-клітинами, що продемонстровано на фіг. 23А-23Г. Представлені клони антитіл до людського 4-18В можна класифікувати як такі, що мають сильне зв'язування (клони 1283 ї 1105) і слабке зв'язування (клони 2507 і 9811). Відмінності виявлені не тільки за величиною ЕС5о, але також і за МЕЇ. Величини ЕС5о, що характеризують зв'язування з бо активованими СО8-Т-клітинами, представлені в таблиці 48. Антимишачий 4-18В-специфічний клон 20052 не зв'язувався з людським 4-188 і, отже, не мав перехресну реактивність з людським антигеном.

Таблиця 48

Величини ЕСво, що характеризують зв'язування з активованими людськими СО8-

Т-клітинами 7.2 Зв'язування з мишачим 4-18 7.2.1 Поверхневий плазмонний резонанс (авідність ж афінність)

Зв'язування одержаного за допомогою фагів 4-18В-специфічного антитіла 20052 з конструкцією рекомбінантний 4-188-Ес (Кіп) оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (5РЕ), описаного вище для конструкції людський 4-188-Ес (Кі!) (див. приклад 7.1.1).

Кінетичні константи визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге 1200 ЕмаїІчайоп (МАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра, і застосовували для якісної оцінки авідності (таблиця 44).

Для визначення афінності через неспецифічну взаємодію злитого з Ес білка з проточною референс-коміркою застосовували конструкцію мишачий 4-188-Ес (Кіп), розщеплену протеазою

АСТЕУ, і Ес-ділянку видаляли хроматографічним методом. Антитіло до людського Ес-домену (фірма Віасогє, Фрейбург/Німеччина) безпосередньо зшивали з СМоб-чипом при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного з'єднання (фірма Віасоге,

Фрейбург/Німеччина). Рівень іммобілізації відповідав приблизно 7500 КО. Одержані за допомогою фагового дисплея антитіла до 4-148(8 захоплювали протягом 60 с в концентрації 25нМ. Рекомбінантний мишачий 4-188, розщеплений АСТЕМ, пропускали через проточні комірки в діапазоні концентрацій від 4,1 до 100О0нМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с.

Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці. В ній антигени пропускали по поверхні з іммобілізованим антитілом до людського Раб, але ін'єктували

НВ5-ЕР, а не антитіла.

Кінетичні константи визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге Т200

Емаїнайоп (мАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала / Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра. Встановлено, що клон

Зо 2002 зв'язувався з мишачим 4-188 (таблиця 49).

Константи афінності взаємодії між молекулами анти-4-188 РЗ29СГАГА ІДО1 і мишачим 4- 188 визначали за допомогою програмного забезпечення Віасоге 1200 ЕмаїЇчайоп (мМАА, фірма

Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра.

Таблиця 49

Зв'язування антитіла до 4-188 2022 з мишачим 4-188

Рекомбінантний мишачий 4-188 й . й дисплей 7.2.2 Зв'язування з клітинами, що експресуюють мишачий 4-188В: активовані та такі, що в стані спокою мишачі спленоцити (відібрані клони)

Аналогічно людським Т-клітинам, свежовиділені мишачі Т-клітини в стані спокою не експресують 4-188, але експресію можна індукувати шляхом активації ТОА за допомогою підданих імпульсній обробці пептидом АРС (Саппопзв У.та ін., у. Іттипої!. 167 (3), 2001., сс. 1313- 1324) або іммобілізованим антитілом до мишачого СОЗ або комбінацією антитіла до мишачого

СОЗ і антитіла до мишачого СО28 (Роїк К. та ін., Епгореап у. Іттипої. 25 (2), 1995, сс. 488- 494). Встановлено, що після активації за допомогою іммобілізованих на поверхні антитіла до

СОЗ експресія 4-188 була вищою на СО8:-Т-клітинах (ЗпЇйога МУ. та ін., У. ої Ехрептепіа! Меа. 186 (1), 1997, сс. 47-55), але це могло залежати від протоколу активації. Крім того, експресія 4- 188 описана також на активованих мишачих МК-клітинах (Меїего та ін., СеїЇ Іттипої. 190 (2), 1998, сс. 167-172), активованих мишачих МКТ-клітинах (Міпау 0. та ін. У Іттипої. 173 (6), 2004, сс. 4218-4229), активованих мишачих В-клітинах (Міпау, Кжмоп, СеїЇ Мої Іттипої. 8 (4), 2011, сс. 281-284), конститутивно на мишачих нейтрофілах (І ее 5. та ін., ІпТесі Іттип. 73 (8), 2005, сс. 5144-5151) і мишачих регуляторних Т-клітинах (Саміп та ін., Маї Іттипої. З (1), 2002 сс. 33-41), мишачих ІДЕ-стимульованих огрядних клітинах (Мібпітоїо та ін., Віоса 106 (13), 2005, сс. 4241- 4248), мишачих клітинах мієлоїдної лінії диференціювання (І ее та ін., Маї Іттипої. 9 (8), 2008, со. 917-926), мишачих фолікулярних дендритних клітинах (Мідаепаогр та ін., Віоса 114 (11), 2009, сб. 2280-2289) і активованих мишачих дендритних клітинах (У/ісох, Спаромаї та ін., У

Іттипої. 168 (9), 2002 сс. 4262-4267).

Зв'язування специфічних антитіл до 4-18В8 тестували безпосередньо після виділення спленоцитів із здорових самок мишей лінії С57ВІ /6, а також після активації іп міго протягом 72 год. за допомогою іммобілізованих на поверхні агоністичного антитіла до мишачого СОЗ і антитіла до мишачого СО28. Самок мишей лінії С57ВІ /6 (віком 7-9 тижнів) купували у фірми

СНнапез Вімег, Франція. Після доставки тварин витримували протягом 1 тижня для акліматизації до нових умов навколишнього середовища і для обстеження. Мишей містили в умовах відсутності специфічних патогенів з добовим циклом 12 год. світла/12 год. темряви, і вони мали вільний доступ до корму і води згідно з відповідною інструкцією (М-5оїав; Ееїаза; ТіетвспО).

Постійний моніторинг стану здоров'я здійснювали на регулярній основі. Мишей змертвляли шляхом зміщення шийних хребців. Селезінки висікали і зберігали на льоду в середовищі ЕРМІ 1640, доповненого 10 об. 95 інактивованою тепловою обробкою ЕВ5 і 1 об. 95 СішамАХ-Ї. Для одержання розчину одиничних клітин селезінки гомогенізували, пропускаючи через 70-

Зо мікрометрове клітинне сито (фірма ВО Раїсоп; Німеччина) і піддавали гемолізу протягом 10 хв при 37 "С в лізуючому буфері АСК (0,15М МНАСІ, 10мМ КНСО», 0,1мМ ЕДТА в аанго, рн 72).

Після двох стадій промивання стерильним ЮО-ЗФР спленоцити відновлювали в середовищі для

Т-клітин. Або застосовували свіжовиділені клітини (в стані спокою), або 105 спленоцитів/мл додатково стимулювали протягом 72 год. в середовищі для Т-клітин, що складається з середовища КРМІ 1640, доповненого 10 об. 95 ЕВ5, 1 об. 95 СІШамАХ І, їмМ піруватом натрію, 1 об. 95 середовища МЕМ, що містить замінні амінокислоти і 5Х0мкМ р-меркаптоетанолом, в 6- лункових планшетах для культури клітин, сенсибілізованих 1 мкг/мл антитіла до мишачого СОЗ (щурячий ІдС2Б, клон 17А2, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Ме 100223) і 2 мкг/мл антитіла до мишачого СО28 (антитіло сирійського хом'яка, клон 37.51, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 102112).

Для визначення зв'язування з мишачим 4-188В свіжовиділені або активовані мишачі спленоцити ресуспендували в О-ЗФР і 0,1х109 спленоцитів/на лунку переносили в круглодонний 9б-ямковий планшет для суспензійних клітин (фірма Огеїіпег ріо-опе, сейПеФаг, каталожний Мо 650185). Клітини центрифугували протягом 4 хв при 400 х 49 при 4 "С і супернатант видаляли.

Після ресуспендування в 100 мкл/лунку О-ЗФР, що містить розведений у співвідношенні 1:5000 барвник для оцінки життєздатності клітин (Ріхабіє Міарійу бує) еРіног 450 (фірма еВіозсієепсе, каталожний Мо 65-0863-18) або Ріхабіе Міабійу Ббуе еРіног 660 (фірма еВіозсіепсе, каталожний

Мо 65-0864-18), клітини інкубували протягом 30 хв при 4 "С. Клітини промивали ГЕАС5З-буфером і додавали 50 мкл/на лунку РБАС5-буфера, що містить титровані концентрації антитіл до людського 4-188 Ншдсі РЗ2965 ГАГА, клони1283, 25057, 1105, 9811, і специфічний по відношенню до мишачого 4-188 клон 2002 у вигляді пиЇдс1 Р3295 І АГА або мишачого Ідс1, або мишачого ІдсС1 рАРО. Після інкубації протягом 1 год. при 4 "С клітини промивали 4 рази для видалення надлишку антитіл. Якщо оцінювали зв'язування антимишачого 20052 в форматі мишачого Ідс1 і мишачого дес! рАРС, то клітини інкубували в 50 мкл РЕАС5З-буфера/на лунку, що містить 30 мкг/мл кон'югованого з ФІТЦ К(аб' )»-фрагмента козячого до проти мишачого Ідс,

Есу-фрагмент-специфічного АйЙіпіРиге протягом 30 хв при 4 "С і промивали двічі ЕАС5- буфером. Якщо оцінювали зв'язування анти-4-188 зв'язуюючих агентів, що містять Ес-фрагмент людського ЇДС1 РЗ3290 І АГА, то цю стадію пропускали. Після цього клітини інкубували в 50 мкл

ЕАС5-буфера/на лунку, що містить 0,67 мкг/мл кон'югованого з РЕ антитіла до мишачого СОЗ 60 (щурячий ІдСігак, клон 17А2, фірма ВО РІіаптіпдеп, каталожний Мо 555275) або кон'югованого з

АРО-Су/ антитіла до мишачого СОЗ (щурячий ІдСгак, клон 53-6.7, фірма Віої едепа, каталожний Мо 100708), 0,67 мкг/мл кон'югованого з РЕ/Су/ антитіла до мишачого СО4 (щурячий ІдСгак, клон (К1.5, фірма ВіоЇедепі, каталожний Мо 100422), 0,67 мкг/мл кон'югованого з АРС/Су7 антитіла до мишачого СО8 (щурячий ІдСхеак, клон 53-6.7, фірма

Віої едепа, каталожний Мо 1007141) або кон'югованого з РЕ антитіла до мишачого СО8 (щурячий ІдСігак, клон 53-6.7, фірма Віої едепа, каталожний Мо 100708), 2 мкг/мл кон'югованого з АРС антитіла до мишачого МК1.1 (мишачий ІдСсега, к, клон РК136б, фірма Віої едепа, каталожний Мо 108710) або кон'югованого з РегСР/Су5.5 антитіла до мишачого МК1.1 (мишачий

ІдсСіда, к, клон РК13б6, фірма Віої едепа, каталожний Мо 108728) і 10 мкг/мл антитіла до мишачого СО16/С032 (мишачий Ес-блок, щурячий Ідсебр к, клон 2.452, фірма ВО Віозсіепсе, каталожний Мо 553142). Якщо оцінювали зв'язування анти-4-188 зв'язуючих агентів, що містять

Ес-фрагмент людського ІдДсС1 РЗ3290 І АГА, то додавали також 30 мкг/мл кон'югованого з ФІТЦ

Каб ')2-фрагментом козячого дО проти людського Ід, Есу-фрагмент-специфічного АНіпіРите (фірма Часкзоп ІттипоКезеагсі, каталожний Мо 109 096 098). Клітини інкубували протягом 30 хв при 4"С, промивали двічі використовуючи 200 мкл/на лунку ЕАС5З-буфера, і ресуспендіровалі для фіксації за допомогою 50 мкл/на лунку Ю-ЗФР, що містить 1 об.95 формальдегіду. На наступний день клітини ресуспендували в 200 мкл/на лунку ЕАС5-буфера і отримували дані з використанням пристрою з 2 лазерами Сапіої! (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення БІМА) або з 5 лазерами Еогпевзза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОІМА). Дискримінаційні вікна встановлювали на СО8:- і СО4--Т-клітини і визначали медіанне значення інтенсивності флуоресценції (МЕ) вторинного ідентифікуючого антитіла, яке застосовували для аналізу зв'язування первинних антитіл. З використанням програми Сгарп Рай Ргізт (фірма Сгарп Рай бБоймжаге Іпс.) дані стандартизованих по відношенню до фонового рівня шляхом віднімання значень для "порожнього" контролю (без додавання первинного антитіла) і розраховували величини ЕСв5хо на основі підгонки кривої нелінійної регресії (надійний підбір).

Як продемонстровано на фіг. 24Б і 24Г, клон 2002, що зв'язується тільки з мишачим 4-188, зв'язувався з активованими мишачими СО8:- ії СО4--Т-клітинами, в той час, як клони 9811, 1105, 1283 ї 25057, що зв'язуються з людським 4-1ВВ, не зв'язувались з мишачим 4-18В, і, отже,

Зо не мали перехресну реактивність з мишачим антигеном. Тільки клон 20052 з протестованих клонів можна застосовувати як мишачий аналог. Як і очікувалось, жоден з анти-4-188- зв'язуючих клонів не зв'язувався зі свіжовиділеними мишачими Т-клітинамив стані спокою (фіг. 24 А і 248). Аналогічно активованим людським СО4--Т-клітинам, також і активовані мишачі браз-Т-клітини експресували більш низькі рівні 4-188 порівняно з активованими мишачими

СОр8:-Т-клітинами. Проте різниця була не настільки значною, як у разі людських Т-клітин, що може бути пов'язано також з іншим протоколом активації. Величини ЕСзхо представлені в таблиці 50.

Таблиця 50

Величини ЕСвзо, що характеризують зв'язування з активованими мишачими СО8- і СО4-Т- клітинами

Як продемонстровано на фіг. 25Б і 25Г клон 2002, який зв'язується з мишачим 4-188В, зв'язувався з активованими мишачими СО8:- і С0О4--Т-клітинами аналогічно зв'язуванню тоїЇдс1 дикого типу (мії) або антитіла в форматі тоді БАР. Зв'язування виявилось схожим зі зв'язуванням, продемонстрованим на фіг. 24Б і 24Г; отже, зміна формату не впливала на особливості зв'язування. При створенні винаходу клон 20052 конвертували в тод для попередження запуску утворення антитіл до лікарських засобів (АБА) в імунокомпетентних мишей. Мутація ЮАРОС еквівалента мутації РЗ290 ГАГА в конструкціях людського ІдДС1, наприклад, вона перешкоджає перехресному зшиванню через імунні ЕсЕ"-клітини. Величини

ЕСово представлені в таблиці 51.

Таблиця 51

Величини ЕСвзо, що характеризують зв'язування з активованими мишачими СО8- і СО4-Т- клітинами 7.3 Зв'язування з 4-188 мавп ціномолгус 7.3.1 Поверхневий плазмонний резонанс (авідність ж афінність)

Зв'язування одержаних за допомогою фагів 4-18В-специфічних антитіл 1283, 25057, 1105 і 9811 з конструкцією рекомбінантний 4-188 мавп ціномолгус-Ес (Кіп) оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (5РЕ) згідно з методом, описаним вище для конструкції людський 4-188-Ес (Кій) (див. приклад 7.1.1). Всі експерименти на основі ЗРК здійснювали за допомогою пристрою Віасоге Т200 при 25 С з використанням НВЗ-ЕР як рухомого буфера (0,01М НЕРЕ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта Р20, фірма Віасоге,

Фрейбург/Німеччина). Кінетичні константи визначали за допомогою програмного забезпечення

Віасоге 1200 ЕмаїІчайоп (мАА, фірма Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра, і застосовували для якісної оцінки авідності (таблиця 52).

В цьому ж експерименті визначали афінність взаємодії одержаних за допомогою фагового дисплея антитіл (людський ІдсС1 РЗ290І АГА) з конструкцією рекомбінантний 4-188 мавп ціномолгус-Ес (Кій). Антитіло до людського Бар (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина) безпосередньо зшивали з СМ5-чипом при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного з'єднання (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Рівень іммобілізації відповідав приблизно 9000 КИ. Одержані за допомогою фагового дисплея антитіла до 4-188 захоплювали протягом 60 с в концентраціях від 25 до 100нМ. Експеримент здійснювали згідно з методом, описаним для конструкції людський 4-1 ВВ-Ес (Кі!) (приклад 7.1.1).

Клони 1283, 25057, 1105 і 9811 зв'язувались з конструкцією 4-188 мавпи ціномолгус-Ес (Кій) з подібними афінностями (таблиця 52), а клони 1283 і 1105 зв'язувалися з більш високою авідністю з клітинами, що експресують 4-188 мавп ціномолгус. Константи афінності взаємодії між антитілами до 4-188 в форматі РЗ29И1 АГА Іда1 і конструкцією 4-188 мавп ціномолгус-Ес (Кії) визначали за допомогою програмного забезпечення Віасогте Т200 ЕмаїЇцайоп (хАА, фірма

Віасоге АВ, Уппсала/Швеція), здійснюючи підгонку шляхом чисельного інтегрування рівнянь для швидкості до моделі зв'язування 1:1 Ленгмюра.

Таблиця 52

Зв'язування антитіл до 4-188 з конструкцією рекомбінантного 4-188 мавп ціномолгус-Ес(Кій)

Рекомбінантний 4-188 мавп

Клон |Походження ціномолгус (формат для оцінки (формат для оцінки афінності) авідності) дисплей дисплей дисплей дисплей

Коо) 7.3.2 Зв'язування на клітинах, що експресують 4-18В8 мавп ціномолгус: активовані мононуклеарні лейкоцити периферичної крові (РВМС) мавп ціномолгус

Для оцінки перехресної реактивності клонів антитіл, що зв'язуються з людським 4-188, з клітинами мавп ціномолгус РВМО здорових Супото|!див Тазсісціагі5 виділяли з гепаринізованої крові центрифугуванням в градієнті густини, згідно з методом, описаним для людських РВМС (7.1.2) з невеликими змінами. Виділені РВМО культивували протягом 72 год. при клітинній густині 1,5х106 клітин/мл в середовищі для Т-клітин, що містить середовище АРМІ 1640,

доповнене 10 95 ЕВ5, 1 об. 95 СІшщамАХ-Ї, їмМ піруватом натрію, 1 об. 95 середовища МЕМ, що містить замінні амінокислоти, і 50мкМ В-меркаптоетанолом, в б0О-ямкових планшетах для культури клітин (фірма Стгеєїпег Віо-Опе, Німеччина), сенсибілізованих антитілом до СОЗ, що має перехресну реактивність для мавп ціномолгус в концентрації 10 мкг/мл (то ІдДаЗ АХ, антитіло до людського СОЗ, клон 5РЗ4, фірма ВО РІаптіпдеп, каталожний Мо 556610) і маж перехресну реактивність для мавп ціномолгус антитілом до СО28 в концентрації 2 мкг/мл (тоїЇдсік, антитіло до людського СО28, клон СО28.2, фірма ВіоїЇ едепа, каталожний Мо 140786). Через 72 годин після стимуляції клітини збирали і висівали в круглодонний 96-ямковий планшет для суспензійних клітин (фірма Стеєїпег Бріо-опе, сеїЇвїаї, каталожний Мо 650185) в концентрації 0,1х105 клітин/уна лунку. Клітини інкубували в 50 мкл/уна лунку ЕАС5 -буфера, що містить в різних концентраціях первинні антилюдські 4-1ВВ-специфічні антитіла в форматі піде РЗ2гОа

І АГ А, протягом 2 год. при 4 "С. Потім клітини промивали 4 рази, використовуючи 200 мкл/на лунку ЕАС5-буфера та інкубували протягом ще 30 хв при 4 "С з 50 мкл/на лунку ЕАС5-буфера, що містить 2 мкл кон'югованого з РЕ має перехресну реактивність для мавп ціномолгус антитіла до СОВА (тоЇдСігак, антитіло до людського СО4, клон М-Т477, фірма ВО РНапгтіпдеп, каталожний

Мо. 556616), 1 мкг/мл кон'югованого з РегСбР/Суб5.5 антитіла до СО8, що має перехресну реактивність для мавп ціномолгус (тоЇдсік, антитіло до людського СО8, клон ВРА-Т8, фірма

ВіоЇ едепа, каталожний Мо 301032) і 30 мкг/мл кон'югованого з ФІТЦ К(аб' )»--фрагмента козячого ідо проти людського дб, Есу-фрагмент-специфічного АНіпіРите (фірма дасквоп

ІттипоВНевзеагси, каталожний Мо 109 096 098). Клітини промивали двічі ЕАС5-буфером і ресуспендували в 100 мкл/на лунку ЕАСб5-буфера, доповненого 0,2 мкг/мл ОАРІ, для дискримінації мертвих і живих клітин. Клітини негайно аналізували за допомогою пристрою з 5 лазерами І ЗВ-Ропезза (фірма ВО Віозсіеєпсе, програмне забезпечення ОІМА). Дискримінаційні вікна встановлювали на СО8:- і СО4:-Т-клітини і медіанне значення інтенсивності флуоресценції (МЕІ) для вторинного ідентифікуючого антитіла застосовували для аналізу зв'язування первинних антитіл. З використанням програми Старі Рай Ргізт (фірма Старий Рай

Зойпмаге Іпс.) дані стандартизованих по відношенню до фонового рівня шляхом віднімання значень для "порожнього" контролю (без додавання первинного антитіла) і розраховували величини ЕсСово на основі підгонки кривої нелінійної регресії (надійний підбір).

Як продемонстровано на фіг. 26А і 26Б, принаймні три клони антитіл до людського 4-188, а саме, 1283, 1105 ії 25057, мали перехресну реактивність до 4-1ВВ мавп ціномолгус, який експресувався на активованих СО4-- і СО8:-Т-клітинах. Важливо відзначити, що криві зв'язування виглядали подібно кривим для людського 4-188, наприклад, для клонів 1283 і 1105 виявлені найбільш високі значення МРЇ і найбільш низькі значення ЕСзхо для всіх протестованих конструкцій, а 25057 був найслабшим зв'язуючим агентом, що характеризувалось найбільш низьким значенням МРЇ і найбільш високим значенням ЕсСбзо (таблиця 53). Клон 9811 зв'язувався тільки при найбільш високій концентрації 100ОнМ. Це відрізняється від зв'язування з людським 4- 188, при аналізі якого встановлено, що клон 9811 перевершував клон 25057. Інші відмінності рівнів експресії 4-188 на активованих СО4-- і СО8:-Т-клітинах мавп ціномолгус були подібними з відмінностями для активованих людських Т-клітин, наприклад, СО4--Т-клітини експресували більш низькі рівні 4-188, ніж СО82-Т -клітини.

Таблиця 53

Величини ЕСзо, що характеризують зв'язування з активованими СОВ8- і СО4-Т-клітинами мавп ціномолгус 7.4 Здатність блокувати ліганд

Для визначення здатності молекул 4-18В-специфічних людських антитіл (991 РЗ29ОГ АГА впливати на взаємодії 4-188 / ліганд 4-188 застосовували людський ліганд 4-188 (фірма КО 5учетв5). Аналогічно цьому, мишачий ліганд 4-18В (фірма КУО 5узієтв5) застосовували для оцінки здатності блокувати ліганд антимишачого 4-18В-специфічного антитіла 2052 ІдС1

РЗ2ОИІ АГА.

Людський або мишачий ліганд 4-188 безпосередньо зшивали з двома проточним комірками

СМо5-чипа з рівнем, що відповідає приблизно 1500 КИ, при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного зєднання (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Конструкцію рекомбінантний людський чи мишачий 4-188-Ес (Кіп) пропускали через другу проточну комірку в концентрації 50О0нМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 90 с. Дисоціацію виключали і одержане за допомогою фагів антитіло до 4-188 в форматі людський ІдсС1РЗ29ГАГА пропускали через обидві проточні комірки в концентрації 200нМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 90 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 60 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референос- комірці. В ній антитіла пропускали по поверхні з іммобілізованим людським або мишачим лігандом 4-1В88, а ін'єккгували НВ5-ЕР замість конструкції рекомбінантний людський 4-188-Ес (КІН).

Отриманий за допомогою фагів клон 25057 зв'язувався з комплексом людського 4-188 з його лігандом 4-18 (таблиця 54, фіг. 27А). Таким чином, це антитіло не могло конкурувати з лігандом за зв'язування з людським 4-1ВВ, і тому його позначали як "неблокуючий ліганд". На противагу цьому, клони 1283, 1105 і 9811 не зв'язувались з людським 4-188В в комплексі з його лігандом, і тому їх позначали як "такі, що блокують ліганд"'. Мишачий аналог 20052 не зв'язувався з мишачим 4-1В8В, асоційованим з його лігандом, і тому також був позначений як "такий, що блокує ліганд".

Таблиця 54

Здатність зв'язувати ліганд клонів антитіл до 4-188В, визначена за допомогою поверхневого плазмового резонансу фаговий - : А : ' фаговий - ! ' ово диоллей поло вто звяцванн фаговий - ! . . ' фаговий - ! . . ' фаговий - ! . . ' 7.5 Характеризація епітопу

Епітоп, який розпізнається одержаним за допомогою фага антитілом до 4-188, характеризували за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. По-перше, здатність антитіл конкурувати за зв'язування з людським 4-188 оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. По-друге, оцінювали зв'язування антитіл до 4-188 з двома різними доменами людського і мишачого 4-188 за допомогою 5РКЕ, вказаного вище в даному описі. Для цієї мети створювали гібридні злиті білки 4-188-Ес (Кіп). Вони містили ектодомени 4-188 або людського, або мишачого домену. Гібридні варіанти 4-188 зливали з ланцюгом з "виступом" Ес (КІй), аналогічно злиття антигенів-Ес, яке застосовували для селекції за допомогою фагового

Зо дисплея і яке описане вище. Метою цих експериментів було визначення "групи епітопу".

Антитіла, які конкурують за подібний або перекритий епітоп не можуть зв'язуватися одночасно з 4-188 і належать до "групи епітопу". Антитіла до 4-1В8, які можуть зв'язуватись одночасно з 4- 188, не мають загального епітопу або його частини і тому їх відносять до іншої групи епітопу. 7.5.1 Конкурентне зв'язування (ЗРК) 35 Для вивчення конкурентного зв'язування з людським або мишачим рецептором антитіл до людського 4-188 в форматі людського 951 РЗ29ОГАГА (фіг. 28А-28Е) одержані за допомогою фагів анти-4-АВВ клони 9В11 їі 1105 безпосередньо зшивали з СМ5-чипом з рівнем іммобілізації, який відповідав 1400 і 2200 КИ, при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного з'єднання (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Конструкцію 40 рекомбінантний людський 4-1В8В-Ес (Кі!) ін'єктували в концентрації 200нМ зі швидкістю потоку мкл/хв протягом 180 с. Дисоціацію виключали і друге антитіло до 4-188 в форматі людського

ІЧО1 РЗ29О1І АГА пропускали в концентрації 100ОнМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 90 с.

Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці.

ЗРЕА-експерименти здійснювали за допомогою пристрою Віасоге 7200 при 25"С з використанням НВ5З-ЕР як рухомого буфера (0,01М НЕРЕЗ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта Р20, фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Експеримент за оцінкою конкурентного зв'язування продемонстрував, що одержані за допомогою фагів анти-4-188 клони 1283, 1105 ї 9811 розпізнають просторовий епітоп, відмінний від епітопу 2557, оскільки два антитіла могли зв'язуватись одночасно з конструкцією людський 4-188-Ес (Кі!) (таблиця 55).

Таблиця 55

Узагальнення результатів експериментів з конкурентного зв'язування 77117171 9В11 17111111 |людський41ВВ-РО(КіЙ)./З | 1 | 0 | Х | 0 77111111 05 0 |людський41ВВ-Ро(КіЙ)./З | 1 | 0 | 0 | х

О позначає відсутність зв'язування; 1 позначає наявність зв'язування; Х позначає, що зв'язування не визначали, оскільки для другої ін'єкції використовували таке ж антитіло, що і антитіло, іммобілізоване на чипі. 7.5.2 Зв'язування з варіантами рецептора (5РЕ)

Епітопи, які розпізнаються одержаними за допомогою фагів клонами антитіл до 4-188 1283, 25057, 1105, 9811 і 2002, характеризували з використанням гібридних варіантів злитих молекул 4-188-Ес (Кій), які містили комбінацію людського і мишачого доменів або тільки один одиничний домен (таблиця 56). Гібридний 4-188 зливали з Ес (Кій) згідно з методом, описаним в прикладі 6.1 для антигенів 4-188-Ес (Кіп). В таблиці 52 представлені послідовності доменів 4-18В8В, які використовували для одержання гібридних варіантів 4-188.

Конструкція 1 складається з М-кінцевої ділянки (позначена як домен 1) мишачого 4-188, злитою з С-кінцевою ділянкою (позначена як домен 2) людського 4-18В8 (таблиця 56).

Конструкція 2 складається з М-кінцевою ділянкою (позначена як домен 1) людського 4-188, злитою з С-кінцевою ділянкою (позначена як домен 2) мишачого 4-188 (таблиця 57). Такі гібридні молекули створювали, так як експресія домену 2 не призводила до одержання функціональної молекули. М-кінцеву ділянку (домен 1) людського 4-188 експресували також у вигляді злитої з Ес (Кіп) молекули (конструкція 3). Експресію та очистку гібридних варіантів 4- 188-Ес (Кій) здійснювали за методом, описаним в прикладі 6.1.

Таблиця 56

Амінокислотні послідовності гібридних молекул 4-1ВВ-Ес(Кій)

ОСОЕЕ нтенннх

ЗЕО І МО:

МОМЗСОМСОРОТЕСАКУМРУСКЗСРРОТЕЗБІССОРМОМІСЯ

МСАСУЕВЕККЕСЗЗТНМАЕСЕСІЕСЕНСІЇ ЧаРОСТАСЕКОСВ

РаОє тТКОССКОССРаТатЕМООКАССІСВРМУТМОБІ СВСКОМІ ти4-188 01 / пи4- УМ ТКЕВОСУМСОаРБРАВІ БРІАЗЗМТРРАРАВЕРИНОЗРОМО 1вв 02 -Е с з ЕОЇ МЕОСОаЗРКЗАОКТНТСРРОРАРЕЇЇ СО РБЗУБІ ЕРРКРКО "виступом» ТЕМІЗАТРЕУТСУММОУМЗНЕОРЕУКЕММУ УУрИаМЕМНМАКТ (279) КРАЕЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОВУ МЕОКЕУКСКУЗМКАЇ.

Конструк- РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМУУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМБІ М/С М ія 1 КагУРБОІАМЕМЕЗМИСОРЕММУКТТРРМІ ОБОРОИЗЕРІ У5КІ. ція ТУОКЗАУМООСММУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗВІ І ЗРОКЗО сСМОТРЕАОКІЕМ НЕ

ОКТНТОРРСРАРЕАДАСИаРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВАВТРЕМТОСМ

МУВОУЗНЕОРЕУКЕМУ УУраМЕМНМАКТКРАЕЄОСУМОТУВ

Ес "западина» МУБМІТМ-НОРУМІ МЕКЕУКСКМУ5ЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОА (128) ОРАБЕРОМСТІ РРЗВОЕЇ ТКМОУ5І БСАУКИаЕМРБОІАМЕМ Е

ЗМИаОРЕММУКТТРРМІ О5БОСЗЕР КОТ ОКЗеАУОВСС,ММ

ЕЗСЗУМНЕАЇІ НМАЕТОКБІ І Рак

Таблиця 56

Амінокислотні послідовності гібридних молекул 4-1ВВ-Ес(Кій)

НИ НЕ сс НН ЗНО

ЗЕО ІЮ МО:

ГООРСЗБМСРАСТЕСОММАМОІСЗРОРРМЗЕЗБАСИООВТСОВІС

ВОСКОМЕАТАКЕСЗЗТЗ5МАЕСОСТРОЕНОСЇ аААССОМСЕОЮ

СКОСОЕЇ! ТККаСКТО5І атЕМрОоМатаМСАРМУТМСО5І ОС ни4-1вВ ОО Оз/тид- В5МІ КТаТттТЕКОУУСОаРРУМБЕЗРОТТІЗМТРЕССРОСНОГО 188 ро-Ес З МІ. МОЕОЇ МЕОСИа5РКЗАОКТНТСРРОРАРЕЇ І СОРОМ БЕЇ ЕР "виступом» РКРКОТ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ УМО МЕМ (280) НМАКТКРЕЕЕОУМОТУВУММІ ТМІ НОЮ МЕИКЕМКСКМ

Конструк- ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОММТІ РРСОНКОБЇ ТКМОМ5І. й МІСІЇ УКОЕУРБОІАМЕЖМ ЕБЄМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОСЗЕНІ. ція 2 УЗКІ ТМОКЗВМОООМУЕЗС5УМНЕАІ НМНУТОКВІ 5І РО каса МОІгЕАОКІЄМНЕ

ОКТНТСОРРСОРАРЕАДССРБОМУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМ

МУОМ5НЕОРЕМКЕММУ УМРИаМЕМНМАКТКРВЕЄОУМОТУВ

Ес "западина» МУБМ ТМ НОРМІ МаКЕМУКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКС (128) ОРРЕЕРОМСТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І БСАМКОЕМРБЗБОІАМЕМ Е

ЗМИаоРЕММУКТТРРМІ ОБВОа5БЕРІ МК ТоКВАМОСаММ

Е5СО5ММНЕАІ НМАЕТОКОІ 5І РОК

ГООРСЗБМСРАСТЕСОММАМОІСЗРОРРМЗЕЗБАСИООВТСОВІС

ВОСКОМЕАТАКЕСЗЗТЗ5МАЕСОСТРИОЕНСІ Час С5МСЕОЮ

СКОСОЕЇ ТККаСКМОБОЇ МЕОСО5РКЗ5АОКТНТСРРСРАР пи4-188 01-Ес. з ЕП ЯСОРУОМЕЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОМЗНЕОРЕМ "виступом» КЕММУ Мура МЕМНМАКТКРАЕЄєОММОТМАММБМІ ТМ НОЮ (281) МІ МаКЕМКСКМУ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОММТІ РР

Конструк- СВОЕТКМОМБІ МС МКОЕМРБОІТАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТ ція З ТРРМ'ЮОБООаБЕРІ МК ТМОКВАМОССММЕЗСОУМНЕАЇ Н

МНУТОКОІ 5І 5РаКЗааі МОРЕАОКІЕМ НЕ

ОКТНТСОРРСОРАРЕАДССРБОМУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМ

МУМОМ5НЕОРЕМКЕММУ УМРИаМЕМНМАКТКРВЕЄОУ МОУ В

Ес "западина» МУБМ ТМ НОРМІ МаКЕМУКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКС (128) ОРРЕЕРОМСТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І БСАМКОЕМРБЗБОІАМЕМ Е

ЗМИаоРЕММУКТТРРМІ ОБВОа5БЕРІ МК ТоКВАМОСаММ

Е5СО5ММНЕАІ НМАЕТОКОІ 5І РОК

Таблиця 57

Амінокислотні послідовності людських і мишачих доменів 4-188, застосовуваних для одержання гібридних конструкцій

ПИ НН НО НН ЗНО

ЗЕОІЮО МО: мишачий 4-188 01 (М-МОМ5СОМСОРаТЕСАКУМРУСКОЗСРРОТЕЗЗІССОРМО кінцевої) МІСВМСАСМЕВЕККЕСЗ5ТНМАЕСЕСІЕСЕНСІ аРОСТ

Конструкція | (282 ВАСЕКОСАРООЕ тТКОССК ! кінцевої, 47188. 02 (С ОССЕСТЕМООКВСІСВРМ/ТМСВІ ОСКБМ УМСТКЕВО 283 МУСаРБРАВІ 5РАЗОМТРРАРАВНЕРОНОЬРО людський 4-188 01 (МАГ О0РСЗМСОСРАСТЕСОММАМОІСЗРОРРМЗЕЗБЗАСИаОВТ кінцевої) СОПІСВОСКОаМЕАТВКЕСЗЗ5ТЗМАЕСОСТРИаЕНСІ СаВАСС

Конструкція | (284 ЗМСЕООСКОСОБтТККасК 2 кінцевої 4788 02 (С тові сСТЕМООМОТОУСАРМУТМСВІ ОСВ5МІКТОТТЕК 285 ОММСОаРРМУБЕЗРОТТІЗМТРЕСОРОСНОЇ ОМІ.

Таблиця 57

Амінокислотні послідовності людських і мишачих доменів 4-188, застосовуваних для одержання гібридних конструкцій

ПИ НН с НН

ЗЕО ІЮ МО:

Конструкція людський 4-188 01 (МАГ О0РСЗМСОСРАСТЕСОММАМОІСЗРОРРМЗЕЗБЗАСИаОВТ

З кінцевої) СОПІСВОСКаМЕАТАКЕС55ТЗМАЕСОСТРОЕНОСЇ ДСС 284 ЗМСЕООСКОСОБІ тТККа,аск

ЗРЕА-експерименти здійснювали за допомогою пристрою Віасоге 7200 при 25"С з використанням НВ5З-ЕР як рухомого буфера (0,01М НЕРЕЗ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта Р20О, фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина). Антитіло до людського Бар (фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина) безпосередньо зшивали з СМб-чипом при рН 5,0, використовуючи набір для стандартного амінного з'єднання (фірма Віасоге,

Фрейбург/Німеччина). Рівень іммобілізації відповідав приблизно 8000 КО. Одержані за допомогою фагового дисплея антитіла до 4-188 захоплювали протягом 60 с в концентрації 10О0нМ. Варіанти конструкцій рекомбінантний гібридний людський/мишачий 4-188В-Ес (Кін) пропускали через проточні комірки в концентрації 200нМ зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 120 с. Моніторинг дисоціації здійснювали протягом 120 с (фіг. 29А-29Г).

Людський 4-188-01 (конструкція 3) зшивали безпосередньо з СМ5-чипом з рівнем іммобілізації, що вілповідає приблизно 1000 КО. Антитіла до 4-188 пропускали в концентрації 200нМ зі швидкістю 30 мкл/хв протягом 180 с і моніторинг дисоціації здійснювали протягом 60 с (фіг. ЗОА-30Г). Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референос-комірці. В ній антитіла пропускали по поверхні з іммобілізованим антитілом до людського Раб, але ін'єктували НВ5-ЕР замість антитіл.

Одержані за допомогою фагів клони 1283, 1105 і 9811 зв'язувались з обома молекулами 4- 188-Ес (Кіп), що містять людський домен 1. Одержані за допомогою фагів клони 25057 зв'язувались з гібридною молекулою 4-188-Ес (Кіп), що містить людський домен 2. Одержані за допомогою фагів клони 2002 зв'язувались з гібридною молекулою 4-18В-Ес (Кій), що містить мишачий домен 1. Узагальнення результатів представлено в таблиці 58.

Таблиця 58

Зв'язування гібридних варіантів 4-1 ВВ-Ес(Кій) з антитілами до 4-1ВВ 1 позначає наявність зв'язування; 0 позначає відсутність зв'язування.

КЛОН мишачий 4-188 | людський 4-188 | людський 4-188 | мишачий 4-188 | людський 4-188

БР: ПО ПОН КОН НОЯ КОХ НО

Бай 11111011 проб! 01111111 еВ! 777111701111111111111111111111111111111111111111 2говбаЇ 111111111111011111111Ї10

Приклад 8

Функціональні властивості клонів антитіл, що зв'язують 4-188 8.1 Функціональні властивості клонів антитіл, що зв'язують людський 4-188 4-188 служить як костімуляторний рецептор і підвищує експансію, виробництво цитокінів та функціональні властивості Т-клітин залежно від ТСА. Активація ТСА за допомогою

Зо іммобілізованого на поверхні антитіла до СО3З або імпульсна обробка пептидом антигенпрезентуючих клітин індукують підвищувальну регуляцію 4-188 на Т-клітинах (РоїїокК та ін., У. Іттипої. 150 (3), 1993, сс. 771-781) і підтримує після контакту імунну відповідь шляхом посилення експансії і вивільнення цитокінів (Нимадо та ін., ) Іттипоіоду 155 (7), 1995, сс. 3360- 3367). Для оцінки підсилюючої імунну відповідь здатності створених антитіл до людського 4-188 круглодонні 96-ямкові планшети для суспензій (фірма Стгеєїпег Біо-опе, сеїІвїаг, каталожний Мо 650185) сенсибілізували протягом ночі О-З3ФР, що містить 2 мкг/мл К(аб')»»-фрагменти козячого ідо проти людського дб, Есу-фрагмент-специфічного АНіпіРите (фірма дасквоп

Іттипогезєагсі, каталожний Мо 109-006-008) і 2 мкг/мл козячого ЇДЕ проти мишачого да, Есу- фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма даскзоп Іттипогевзеєагсі, каталожний Мо 115-005-008).

Планшети промивали О-ЗФР для видалення надлишкових молекул і блокували протягом 90 хв при 37 "С 0О-ЗФР, що містить 1 95 (мас./0б.) БСА (фірма 5ІСМА-АЇїагісп, каталожний Мо АЗО59- 1000). Супернатант видаляли та планшети інкубували з О-ЗФР, доповненим 1 95 (мас./06б.) БСА і 10 нг/мл антитіла до людського СОЗ (фірма ВіоїЇ едепа, каталожний Мо 317315, клон ОКТЗ), або без вказаного антитіла протягом 90 хв при 37 "С. Планшети промивали О-ЗФР та інкубували з

О-ЗФР, доповненим 1 95 (мас./об.) БСА та застосовуваними в різних концентраціях титрувати антитілами до людського 4-188 Ідс1 РЗ29 с ГАГА. Планшети промивали О-ЗФР і супернатант видаляли аспірацією.

Людські РВМС виділяли згідно з описаним вище методом (7.1.2) і активували в середовищі

ВРМІ 1640, що містить 10 об.95 ЕВ5, 1 об.95 СішамАХ-ї, 2 мкг/мл ФГА-Ї і 200 од./мл пролейкіна, протягом 5 днів. Клітини додатково культивували в КРМІ 1640, що містить 10 об. 95

ЕВ5, 1 об. 965 СішамАХ-Ї і 200 од./мл пролейкіна, протягом ще 21 дня при густині 1-2х105 клітин/мл. Після тривалого культивування РВМС збирали, промивали і виділяли СО8-Т-клітини згідно з протоколом виробника, використовуючи набір для виділення людських СЮО8--Т-клітин (фірма Мійепуї Віоїес, каталожний Мо 130-096-495). Преактивовані і відсортовані СО8--Т-клітини висівали з густиною 7х107 клітин/на лунку в 200 мкл/на лунку середовища для Т-клітин, що складається з середовища КРМІ 1640, доповненого 1095 ЕВ5, 1 об.95 СішамАХ-Ї, 1мММ піруватом натрію, 1 об. 95 середовища МЕМ, що містить замінні амінокислоти і 50мкМ р- меркаптоетанолом. Клітини інкубували протягом 72 год., останні 4 год. в присутності стоп- реагенту Гольджі (Соїді єр) (інгібітор білкового транспорту, що містить монезін, фірма ВО

Віозсіепсе, каталожний Мо 554724). Клітини промивали О-ЗФР та інкубували протягом 30 хв при 4 "С в 100 мкл/на лунку О-ЗФР, що містить розведений в 1: 5000 разів зелений фіксує барвник для визначення життєздатності (ІМЕ/ОЕАО Ріхаріє Сгеєп Оєай СеїЇ 5іаіп) (фірма МоїІесшаг

Ргорех5, І їе ТесппоЇодіех, каталожний Мо І-23101). Потім клітини промивали та інкубували протягом 30 хв при 4 "С в 50 мкл/на лунку ГЕАС5-буфера, що містить 0,5 мкг/мл кон'югованого з

РегСрР/Су5.5 антитіла до людського СО8 (мишачий Ідсі к, клон КРА-Т8, фірма Віої! едепа, каталожний Мо 301032), 0,5 мкг/мл кон'югованого з РЕ/Су/ антитіла до людського СО25 (мишачий Ідас1 к, клон ВС9б, фірма ВіоїЇ едепа, каталожний Мо 302612) і 1 мкг/мл кон'югованого з АРС/Су7 антитіла до людського РО-1 (мишачий Ід к, клон ЕН12.2Н7, фірма Віої! едепа, каталожний Мо 329922). Клітини промивали РАС5-буфером і ресуспендували в 50 мкл/на лунку свіжоприготованого розчину для фіксації/пермеабілізації (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 00- 5523-00). Після інкубації протягом 30 хв при 4 "С клітини промивали свіжоприготованим буфером для пермеабілізації (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 00-5523-00) та інкубували протягом 1 год. при 4 "С в 50 мкл/на лунку Регт-буфера, що містить 2 мкг/мл міченого за допомогою АРС антитіла до людського ІЕМУу (то ІДС к, клон В27, фірма ВО РВаптіпдеп, каталожний Мо 554702) і 2 мкг/мл кон'югованого з РЕ антитіла до людського ТМЕа (то ІДС к, клон МАБІ11, фірма ВО РІагтіпдеп, каталожний Мо 554513). Клітини промивали і фіксували за допомогою О-ЗФР, що містить 1 95 формальдегіду. Клітини аналізували на наступний день з використанням пристрою з 2 лазерами Сапіо Ії (фірма ВО, програмне забезпечення ОІМА).

Дискримінаційні вікна встановлювали на СО8--Т-клітини і визначали частоту зустрічальності секретуючих ТМЕРа і ІЕМу СО8--Т-клітин. З використанням програми сгарп Рай Ргізт (фірма

Сгарп Рай БопПмаге Іпс.) дані наносили на графіки і криві розраховували на основі підгонки кривої за методом нелінійної регресії (надійний підбір).

Як описано вище, за відсутності ТСК- або СОЗ-стимуляції контакт з 4-1ВВ не впливав на функцію СО8--Т-клітин (РоїоК 1995), в той час як при субоптимальній СОЗ-активації костімуляції 4-188 зростала секреція цитокінів (фіг. З31А або 318). Субоптимальна активація за допомогою антитіла до СОЗ індукувала секрецію ІЄМУу в 30 95 С2О8:-Т-клітин у всій популяції СО8--Т-клітин.

Додавання костімуляції 4-АаВВ підвищувало популяцію ІРМУ"бО8-Т-клітин аж до 55 95 залежно від концентрації (фіг. З31Б). В таблиці 59 представлені відповідні величини ЕСз»о. Секреція ТМЕа могла підвищуватись з 23 95 до 39 95 у всій популяції СО8--Т-клітин (фіг. З1Г). Аналогічно їх здатності до зв'язування клони 1283 і 1105 підвищували частоту експресії ІМЕуУ більшою мірою, ніж клони 25057 і 9811 і величини ЕСвзо. Таким чином, розроблені при створенні винаходу клони були функціональними і могли підвищувати ТСОК-опосередковану активацію і функцію Т-клітин.

Якщо 4-18В-специфічні антитіла не були іммобілізовані на поверхні, вони не могли підвищувати активацію СО8--Т-клітин (дані не представлені).

Таблиця 59

Величини ЕСво, що характеризують підвищення секреції ІЕМу в активованих

СО8:-Т-клітинах лло5 | //7/7/7/р/л0067117С21С1 8.2 Функціональні властивості клону 20222, що зв'язує мишачий 4-18В, іп мйко

Для попередження перехресного зв'язування агоністичних антитіл до 4-188 через Бс- рецептори інтродукували мутацію в Ес-ділянку антитіл. Аналогічно мутації РЗ2ОСї ГАГА в людських антитілах ІДС1-типу, мутацію ЮАРСї інтродукували в Ес-ділянку мишачих молекул

Ідс21. Для вирішення питання про те, чи попереджає це перехресне зшивання через ЕсСВ і отже здатність до активації, мишачі спленоцитах активували за допомогою антитіла до мишачого

СОЗ в субоптимальній концентрації і застосовуваного в різних концентраціях клону 20032 як мишачого ІДС і мишачого Сі рАР.

Селезінки виділяли зі здорових самок мишей С57ВІ /6 (вік 7-9 тижнів, фірма Спапез Вімег,

Франція) і гомогенізували в З мл МАС5-буфера з використанням С-пробірок (Мінепуї Віоїес, каталожний Мо 130-096-334) і м'якого дисоціатора МАС5 Осю (фірма Мінепуї Віоїєс, каталожний

Мо 130-095-937). Після центрифугування (400 х 9, 8 хв, КТ) клітинний дебрис ресуспендували в 7 мл буфера для лізису АСК і гемоліз здійснювали протягом 10 хв при 37 "С. Гемоліз припиняли, додаючи Т-клітинне середовище, що складається з середовища НРМІ 1640, доповненого 10 95 ЕВ5, 1 об. 95 СішамАХ І, їмМ піруватом натрію, 1 об. 95 середовища МЕМ, що містить замінні амінокислоти, та 5х0мкМ В-меркаптоетанолом. Спленоцити промивали О-3ФР і фільтрували через 70-мікрометрове клітинне сито (фірма Согпіпд, каталожний Мое- 431751).

Спленоцити ресуспендували до густини 2х107 клітин/мл в 37 "С в Ю-ЗФР і додавали барвник для оцінки клітинної проліферації еРіІшог 670 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо- 65-0840-90) до кінцевої концентрації 2,5ММ. Клітини інкубували протягом 10 хв при 377" С, процес мічення припиняли, додаючи ЕВ, і клітини промивали. Додавали 200 мкл/на лунку середовища для Т- клітин, що містить 0,5 мкг/мл антимишачого СОЗ-специфічного (ДС хом'яка (клон 145-2С11, фірма ВО Віозсіепсе, каталожний Мо 553057), 0,01-508М титрований антимишачий 4-188- специфічний клон 20052 мишачого Д51 або мишачого (901 БАРОС, або застосовуваного як контроль ізотипу МОРО-21 мишачого Ідс1 (фірма ВО Віозсіепсе, каталожний Мо 554121) або застосовуваного як контроль ізотипу ОР47 тоЇдс1 БАРО, і 1х105 спленоцитів переносили в лунки 96 -лункового круглодонного планшета для культури тканини (фірма ТРР, каталожний Мо 2097). Планшети інкубували протягом 48 год. Клітини промивали, ресуспендували в 25 мкл/на

Зо лунку БАС5-буфера, що містить 1 мкг/мл кон'югованого з ВМ711 щурячого ІдсСга проти мишачого СОВ8 (клон 53-6.7, фірма ВіоїЇ едепа, каталожний Ме 100748) і 2 мкг/мл кон'югованого з

ВМ421 щурячого ІдДс2а проти мишачого СО4 (клон КМ4-5, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 100544), та інкубували протягом 20 хв при 4 "С. Клітини промивали і ресуспендували в 100 мкл/на лунку свіжоприготованому розчині для фіксації/пермеабілізації (фірма евВіозсієепсе, каталожний Мо 00-5523-00). Після інкубації протягом 30 хв при 4 "С клітини промивали Ю-ЗФР і ресуспендували в 100 мкл/на лунку свіжоприготованого буфера для пермеабілізації (фірма еВіозсіепсе, каталожний Ме 00-5523-00), що містить 10 мкг/мл кон'югованого з БіІйог 488 щурячого Їде2а проти мишачого Еотез (еомезодермін) (клон ОАМ11МАС, фірма евВіозсіепсе, каталожний Ме 53-4875-82) і 2 мкг/мл кон'югованого з РЕ щурячого їдДСб2а проти мишачого гранзіми В (клон МО28В, фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 12-8898-82). Клітини інкубували протягом 1 год. при КТ в темряві, промивали буфером для пермеабілізації, ресуспендували в

ЕАС5-буфері та отримували дані за допомогою пристрою з 5 лазерами Еогіеєзза (фірма ВО

Віозсіепсе, програмне забезпечення БІМА). Дискримінаційні вікна встановлювали на СО8:-Т- клітини і визначали частоту зустрічальності СО8--Т-клітин, які експресують Еотез і гранзім В. З використанням програми Сгарп Рай Ргізт (фірма Сгарп Рай Боїймаге Іпс.) дані наносили на графіки і криві розраховували на основі підгонки кривої нелінійної регресії (надійний підбір).

Оптимальна активація СО8--Т-клітин індукувала експресію еомезодерміна (Еотевз), фактора транскрипції Т-боксу, що регулює цитолітичні ефекторні механізми СО8:-Т-клітин (Сійтсвпег та ін., 2004), і цитолітичних ферментів типу гранзіми В. Як продемонстровано на фіг. З2А їі 32Б,

застосовувана концентрація 0,5 мкг/мл антитіла до мишачого СОЗ була субоптимальна і частота СО8:-Т-клітин, які експресують гранзім В, не перевищувала 3095, а частота зустрічальності СО8--Т-клітин, які експресують еомезодермін (еотев5), не перевищувала 18 95.

Тільки при додаванні в достатній кількості клону 20052 мишачого Їдс1 проти мишачого 4-188 збільшувалась кількість СО8:-Т-клітин, які починали експресувати гранзім В (фіг. З32А) і еомезодермін (фіг. З2Б). Це доводить, що клон 2002 є агоністичним зв'язуючим агентом і має здатність активувати Т-клітини шляхом залучення мишачого 4-188. Якщо перехресне зшивання клону 20052 порушували за допомогою мутації ЮСАРОС, то жодного підвищення активації не виявлено, це свідчить про те, що і в разі мишачих клітин перехресне зшивання антитіла до 4- 188 необхідне для індукції передачі сигналів 4-18В в прямому напрямку. Таким чином, мутація

БАРО перешкоджає достатньому перехресному зшиванню і презентації антитіла через Ес- зв'язуючий рецептор. Неспецифічні по відношенню до мишачого 4-188 контролі ізотипів не чинили впливу на Т-клітинну активацію. 8.3 Функціональні властивості клону 20222, що зв'язує мишачий 4-18БВ, іп мімо

Обробка мишей агоністичним щурячим /дсбСг2а до мишачого 4-188 призводить до накопичення активованих Т-клітин в печінці в мишей, що не мають пухлини (Юиргої та ін.,

Сапсег Іттипої ІттипоїНег. 59 (8), 2010 сс. 1223-1233; Міи та ін., У Іттипої. 178 (7), 2007, сс. 4194-4213) і мишей, які несуть пухлини, (У/апд та ін. У Іттипої. 185 (12), 2010 сс. 7654-7662;

Косак та ін., Сапсег Кез. 66 (14), 2006, сс. 7276-7284) та індукує запалення печінки. Аналогічно цьому, фаза ІІ клінічних випробувань з використанням антитіла до 4-188 урелумаба (пиїдса), яку проводили на пацієнтах з меланомою ІМ стадії, була припинена через незвично високу частоту зустрічальності гепатиту четвертої стадії (Азсіепо Р.та ін., Зетіп Опсої.37 (5), 2010 сс. 508-516). Для вирішення питання про те, чи може мишачий ІдсОї проти мишачого 4-18 індукувати накопичення Т-клітин в печінці, що описано для агоністичних антитіл до мишачого 4- 188 у вигляді щурячих Ідсг2а, а також для вирішення питання про те, чи може мутація ОАРО перешкоджати цьому, наївних здорових самок мишей лінії С57ВІ/6 (вік 7-9 тижнів, фірма

Спагіеє5 Кімег, Франція) обробляли ЇдДс1 до мишачого 4-188 і клоном Їдо САРО 20052. Мишей витримували і розміщували відповідно до представленого вище в даному описі протоколу. 150 мкг антитіла ін'єктували внутрішньовенно в хвостову вену щотижня протягом З тижнів. Мишей

Зо змертвляли шляхом зміщення шийних хребців через 1 день після другої ін'єкції і через 1 день і 8 днів після третьої ін'єкції. Селезінки і печінку висікали і зберігали на льоду в середовищі КРМІ 1640, доповненому 10 об.95 інакстивованою тепловою обробкою ЕВ5 і 1 об.95 СішамАХ-Ї.

Спленоцити виділяли згідно з описаним вище методом (розділення 8.2). Лейкоцити з печінки виділяли наступним чином: кожну печінку переносили в С-пробірку (фірма Мінепуї Віогес, каталожний Мо 130-096-334), що містить 5 мл КРМІ 1640, доповненої 0,3 мг/мл діспази ІІ (фірма

Коспе Арріїед 5сіепсе, каталожний Мо 04942078001), 1 мкг/мл ДНКази І (фірма Коспе Арріїєей зЗсіепсе, каталожний Мо 11284932001) та 2 мг/мл колагенази О (фірма Коспе Арріїед 5сіепсе, каталожний Мо 11 088 882 001), тканину руйнували за допомогою м'якого дисоціатора МАС5

Осіо, використовуючи програму "т Іїмег 01" (фірма Мінепуїі Віоїес, каталожний Мо 130-095-937) та печінки інкубували протягом 30 хв при 37 "С. Розщеплені печінки руйнували вдруге за допомогою дисоціаатора МАС5 Осіо, використовуючи програму "т Іїмег 02". Після центрифугування (400 х д, 8 хв, КТ) клітинний дебрис ресуспендували в 7 мл буфера для лізису

АСК і гемоліз здійснювали протягом 10 хв при 37 "С. Гемоліз припиняли, додаючи середовище

ЕРМІ 1640, доповнене 1095 ЕВ5, 1 об. 95 СішамАХ 1. 105 клітин/на лунку спленоцитів або лейкоцитів з печінки переносили в круглодонний 96б-ямковий планшет для суспензії клітин (фірма Сгеїіпег ріо-опе, сеїІєїаг, каталожний Мо 650185) і одноразово промивали О-ЗФР.

Клітини ресуспендували в 100 мкл/на лунку розчину, що містить розведений в 1: 5000 разів зелений фіксуючий барвник для визначення життєздатності (І МЕ/ОЕАО Ріїхавбіє Сгееп Оєай СеїЇ

Заїп) (фірма І їме Тесппоіодіе5, каталожний Мої -23101), та інкубували протягом 30 хв при 4 "С.

Потім клітини промивали і ресуспендували в 50 мкл/на лунку в ЕАС5-буфері, що містить 6 мкг/мл кон'югованого з РЕ дО сирійського хом'яка проти мишачого СО137 (клон 1785, фірма

Віої едепа, каталожний Мо 106106) або застосовуваного як контроль ізотипу антитіла сирійського хом'яка (клон 5НО-1, фірма Віоїедепа, каталожний Мо 402008), 2 мкг/мл кон'югованого з РегСР/Су5.5 дО вірменського хом'яка проти мишачого ТОК-В (клон Н57-597, фірма ВіоїЇ едепа, каталожний Мо 109228), 5 мкг/мл кон'югованого з РЕ/Су7 щурячого ІдДС1 проти мишачого СО25 (клон РСЄ1, фірма ВО Віозсіепсе, каталожний Ме552880) або застосовуваного як контроль ізотипу щурячого ЇдСИ1 А (клон А110-1, фірма ВО Віозсіепсе, каталожний Мо 552869), 2 мкг/мл міченого за допомогою АїЇеха Ріног 700 щурячого ІдДс2а к проти мишачого СОва (клон 53-6.7, фірма ВО Віозсіепсе, каталожний Мо 557959), 0,25 мкг/мл кон'югованого з ВМУ421 бо щурячого ІдС2б к проти мишачого СО4 (клон СК1.5, фірма ВіоїЇ едепід, каталожний Мо 100438), 4 мкг/мл кон'югованого з ВМб6О5 Ід вірменського хом'яка проти мишачого СО11с (клон М418, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 117333) або застосовуваного як контроль ізотипу антитіла вірменського хом'яка (клон НТК888, фірма ВіоЇ едепа, каталожний Мо 400943), та інкубували протягом 30 хв при 4 "С. Клітини промивали і ресуспендували в 100 мкл/на лунку свіжоприготованого розчину для фіксації/пермеабілізації (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 00- 5523-00). Після інкубації протягом 30 хв при 4"С клітини промивали за допомогою свіжоприготованого буфера для пермеабілізації (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 00-5523-00) і ресуспендували в 50 мкл/на лунку буфера для пермеабілізації, що містить 0,2 мкг/мл кон'югованого з егб660 щурячого ІдСга к проти мишачого Кіб7 (клон ЗОЇА15, фірма еВіозсієепсе, каталожний Мо 50-5698-82). Клітини інкубували протягом 30 хв при 4 "С, промивали двічі буфером для пермеабілізації та фіксували, використовуючи 50 мкл/на лунку О-ЗФР, що містить 1 95 формальдегіду. На наступний день отримували дані для клітин за допомогою пристрою з 5 лазерами Рогіезза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОІМА). Дані аналізували за допомогою РіІомлщо (Ріом/л)о, фірма ГІС), дискримінаційні вікна встановлювали на СО8:- або бра--Т-клітини і визначали частоту зустрічальності СО137:-, бОр25-, СО11с- і Кіб7:-Т-клітин.

Дані наносили на графіки з використанням програми Сгарп Рай Ргізєт (фірма Сгарп Рай зЗопмаге Іпс.).

Як продемонстровано на фіг. 33, тільки обробка мишей клоном 20052 мишачого ІдсС1 проти мишачого 4-188 індукувала накопичення, проліферацію і підвищення експресії 4-188 (20137) на СО8:-Т-клітинах в печінці, в той час як попередження перехресного зшивання шляхом Есі- зв'язування за допомогою мутації ЮАРОС не призводило до активації СО8:-Т-клітин.

Попередження ЕсК-перехресного зшивання за допомогою мутації ЮАРОС перешкоджало активації СО8:-Т-клітин в печінці (фіг. 33), хоча обидві молекули мали подібні особливості зв'язування з мишачим СО137, експресованим на Т-клітинах (фіг. 255 і 25Г), і тому мали однакові потенційні здібності до активації.

Приклад 9

Одержання, очистка і характеризація біспецифічних двовалентних антитіл, мішенями яких є 4-188 і асоційований з пухлиною антиген (ТАА) 9.1 Створення біспецифічних двовалентних антитіл, мішенями яких є 4-188 і фібробласт-

Зо активуючий білок (ЕАР) (формат 242)

Одержували біспецифічні агоністичні антитіла до 4-188, які мають двовалентне зв'язування з 4-188 і ЕАР. Технологію Сто551іптар, описану в міжнародній заявці на патент УМО 2010/145792

А1, застосовували для зниження утворення неправильно спарених легких ланцюгів.

Створення і одержання зв'язуючих ЕАР агентів описано в УМО 2012/020006 А2, яка включена в даний опис як посилання.

В цьому прикладі "схрещений" модуль Еар (УНСІ) зв'язуючого ЕАР агента 28НІ зливали на

С-кінці з антитілом, що містить "западину" важкого ланцюга, до 4-188 пи їдсС1 за допомогою конекторної послідовності ((5345)4. Це злиття важкого ланцюга спільно експресували з легким ланцюгом антитіла до 4-188 і відповідним "схрещеним" легким ланцюгом антитіла до БАР (М СНІ). Інтродуковані мутації Рго32901Уу, І ец234АЇйа і І ен235Аїа в константну ділянку важких ланцюгів для елімінації зв'язування з рецепторами Ес гамма згідно з методом, описаним в опублікованій міжнародній заявці на патент М/О 2012/130831 А1. Зазначена одержана біспецифічна двовалентна конструкція є аналогом однієї із вказаних на фіг. З34А.

В таблиці 60 представлені відповідно нуклеотидні і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних двовалентних анти-4-18В/анти-ЕАР людських антитіл їдс1 РЗ2ОСІ АГА.

Таблиця 60

Послідовності біспецифічних двовалентних анти-4-1ВВ/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО: сАсатасСсААаттаатасаастотаававастАаатаААапААас (1283) /УнНеСнНІ-важкий СТаОСЧТОСТОССОСТОаААасСатотоСтасСсАл,сасстосасАцвас 286 ланцюг-(28НІ1) МНОЦ АСАТТСАаСАасСтТАСастАТААХСОССТОСЯСТаСс,АСАаааСССс (нуклеотидна тасвАСАДссастосАа,атавАтТасаАаааАТСАТОССТАТСТ послідовність) таатАСАаСАААСТАСасСАСАаААаТТоСАс,СасасСАцваИТт

САССАТТАСТаСАСАСАААТССАСО,ВА,САСАаССТАСАТИас

Таблиця 60

Послідовності біспецифічних двовалентних анти-4-1ВВ/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО: дастадаСсАдасСссСсТаАвАтТстТАапАСАсСсасСсататАТТАС татаСсОАпАТСТОААТттоСсаттстТАСастадгстТсСОаАСТА стааваССАдаСппАССАССатаАССаТтсТосСтТСАастТАОасСА

СсСсАДССсСОаСССАТОСОЯТаИаттооСстсТассссСсТССАасСАДО тстТАсстотасСссасасАсАХ,асса7асттавастасстоатаАА саАСТАСТІОСССОСХДИаСсСсТатадсАаатаТатостасААСТОСТа аассСстТаАСАТОСЯЯаСОаТасСАСАССТТТоСсАИаСТаТтТаста саатостоссасстатастсстатстоСса,атсатаАСАаТт ассстосАластоттавасСАСССАЧАССТАСАТСТаСААСа

ТОААССАСААлаСССТоСААСАССАдааТасАСАдадАСаИТт ваААСССАдаТоСсТасСсаАСААпАСССАСАССТаТатосссстТ стостасссСстаАдлдастастасоссасостАа7асататоста

ПССССССААДаСССААаСпСАСАСССТаАТОаАТСТОССОасАС ссСббаАддатоадсстасатаастаата7азсататаТСсСАСИадас

АСССТОаААаТаААаТТСААТттаатасатааассасатацвА

АСТаСАСААТаССААДаАССАдассСстТАаАаАдааААСАатТАс

ААСТоСАССТАССОССЯбТаастТатосатастаАасСсатастасА

СсСАсаАтта,аасСтТаААСОаасСАААпАсСТАСААатТасААСаИа та

ТоСААСАДОССОССТОИааАдаСССССАТССАААДАСПАССАТСТО

СсААдаасСсСАдасасСАа,асстасадассСстСАсааТаТАСАСС ст|ассссСстТАаСАпАаАТаласСТаАССААСаААССАсатат

СоСстТаАСсСсТатстатаАААдааСТСсТАССССТОоСаАТАТС сссатТапААтТасадсАасСсААсаасСАасСССаАсСААСААСТ

АСААдаАССАСсоСссСосСстТатаставАСТОСаАСаасСтТСАТТС т еоСстТатАСТСТААДастТаАСАасТасАСАдатсСсасатаасСА аСсАдссасАдсатапстстастСатТАтТаСАСаАвассс

ТтТаСАСААССАСТАСАСССАСаАдАатосостатоостатстосс сас,асаасосалдапАттааосаАлавассаАтосастаста ссасАдаттасвасассаастасвАтотАасатасАХ,аСстТастТацА

АТСТОсСсоссАа,оАстТастасаасСАаа,ааСадвАТСТСТадОас статостасастасттоса,аастТ ТАССТСсТоСсАаССсАСОаСс

АТОХООТТСОаСтаСбасСАаасСАСССапАААДасАСтТасААТ сасататсАдасССсАТТОВоСТоСваСсАасСАсСтТАСТАСасСс вАТАаСатТаАдлд,авасСсаст ТсАССАТСТОТоС,СасАТтААСАС

СААСААТАСТОТатАССтТасСсАаАТтТаААСсСТОССТасСа7асСаста

ААСАТАССОЯСТатТатАТТАСТОСасССАда,авсастааСтавоас

ААСТТСОАТАСсТаасСсвасСсАа,ааспААсостоатадстатсто сласастпстатаабСастссСстТоСатТат САТСТТСССАСС тоСбаАСбадаСсАаасСстададатоСсаасАастасстотатсатат аСсСстТастТОААСААСТТСтТАсСоСсТовасААлассСсААлааТтТасАс тТапАдАдаТасАТААСсасоСстаТасСсаатоСаасСААСТОССАСИ

ААТССОЯтТаАССсаАдаСАасаАСТоСААаспАСАасСАССТАСТО сЄтаАаСАаСАСССТаАСССтТатсСАДааССаАСТАСОДОСА

АВСАСААДСОСТаТатасасСстатаАдатаАСССАССАа,ааюсст атСАдасСССатаАССААатсСсТСсААСсСасаасаАаТтас

МІ Сі -легкий ланцюг 1 259 | (1283) (нуклеотидна)| див. таблицю 40 послідовність)

МІ СНІ-легкий ланцюг 2 АСАТССЯТОСТОАССсСАСТОоТоССсСЯвВасСАСССТОАаССтТаАа 215 (28НІ1) ссстааСбададсасАХасССАсоСстаАа,аСтасСАасАасССАассСАа (нуклеотидна дасаталасСсавА;астАсстаассСтастАТСАаСАСААСаС послідовність) сс,сасСсАааассСсСсСАаАСсТастаАТСАТССВСаСасСАсаСАСс

Таблиця 60

Послідовності біспецифічних двовалентних анти-4-1ВВ/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО: саваСсСсАССпаСАТССССОаАТАСАттоАдассасСАаСсаастТо саасСАССОАСТТСАСССТаАССАТСАЛСССОИаСТасААСССа дааАсттсасСататАСТАСТаССАа,аСАас,свасСАваТтаАтТо

СоССССАссттовасСсАаа,аааСАССААдасатТасАААТСААИА астобасСстТАааСАСсСАдасасоостсатат остова

СсССАаСАаСААсдасСАссттааСсавААсАассассстась астасстТааТаАААаАсСтТАСТТОоСССОвАМ,аооСсатаАССата тоСтТавААстота,аассстАсСАааСсаваСаТасСАСАССТТ тосаХасс,атастасда,адасАааСсаассСТатАСТоССТадасСА ссатаатТаАсАдаста7ассосстосАаа,асаасстаааСАСССАсаАСс

ТАСАТСТаСААСатаААССАСАДассстАасСААСАССААДАс тТапАСААдаААдасТасААСССААадаСТассАс

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУЗСКАБИСТЕЗЗМАІЗМУУВОАРа

ОС ЕМ МОСТИ РІБЄЕТАМУМАОКЕОСВАМТІТАОКЗТЗТАММЕЇ 55

ІГА5БЕОТАМУМСАВЗЕЕВЕМАОЕО УМ ИОСТ ТУТ У5БАЗТКОаРБО

МЕРГАРББКОЗТЗОСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБМУ МИХ ТИМ

НТЕРАМГ О5501І 51 55 МРБІББІ С ТОТМІСМММНКРЗМТК

МОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕААСОРБМРІ ЕРРКРКОТІ МІ

ЗВАТРЕМТСУММОМ5НЕОРЕУКЕМУ УМО МЕМНМАКТКРАЕЕ (1283) УНСНІ-важкий ОММОТУВУМ5МІ ТМ НОМ МЕОКЕМКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІ 287 ланцюг-(28НІ) УНСІ. ЗКАКООРАЕРОММТІ РРОВОЕБЕЇ ТКМОМ5І ТС МКОЕМРЗОЇАМ

ЕМЕЗБМООРЕММУКТТРРМІ О5БОСОЕРІ МК тМОоКЗАМОСсСМ

МЕБСБУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 5І БРССССССТВСОСОВИСИва аваавЕМОНП ЕЗОСИИСІМОРИаСБІ ВІ ЗСААБОЕТЕ5ЗНАМОУМУВ

ОСОАРОКаИЇ ЕМ УМ5БАМАБаЕОУМАОоБУКИаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАМУМСАКОСУ СМЕО МУ СОСТІ МТМ5БАБМА

АРБМЕІЕРРБОЕОЇ КБИТАБМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОУМКМОМА

ГОБаМ5ОЕЗМТЕООБКОБТУБІ 55ТІ ТІ ЄКАОМЕКНКУМАСЕ

УМТНОІ 55РУТКЗЕМАСЕС

ЕІМГТО5РИтТтІ 5І 5РОЕВАТІ 5ХСВАЗОЗУЗАОМІ АММООКРИаО

МІСНІ-легкий ланцюг 2 АРВІ ПІСАБТВАТИаІРОНЕЗИабБИаватОо вті ТІ АГЕРЕОБГАМУУ 217 (28НІ) СООСОМІРРТЕЙОСТКМЕІКЗ5АЗТКОаРОЗМЕРІ АРЗБЗКОТОСТ

ААЇ аСІ МКОМЕРЕРУТУБММ5ИадІ Т5аТмНтТЕРАМІ 0О55О01 5

І 55УМТМРБОБОІ ТО ГМІСМММНКРОМТКМОККМЕРКВОСО сд,аатТасСсААтатпа,асвадаттасасаХсаасттасТАСАаСо тасассватосСсТАсвАстотстатасСсАаСсСстТоСацпАТТСА

Ст АОаСАаТТАТаССАТОДОСТОСОСТоСсаССАааТастосСА сасвдада,асасстаалдатаатстАасСстТАТттАатаатТАатТа стастТАааСАСАТАСТАСаСАсаАСстоСатадлда,авсассаИтТо

АССАТСТОСАСАСаАСААТТССААСААСАСаТастТтатАТСТаСА (25217) /УМнНеоСНІ-важкий ОСАТаАдАСАсаСсСстТаАд,сАаасСпАааАСАСаассСаТАТАТТАС 288 ланцюг-(28НІ1) УНСО татасаСсатТаАссАсссстасосассатСаАСстТАСсТавас (нуклеотидна СсСААааААсоСстасатсАссатстаАдатастАаСАССААСас послідовність) ВСССАТСССОТаттоСсСсТотТаагасссстСсСАасСААСТСТАССТ стааСбааСсАСсАХа,ассастотсасста|асстоатТаААааАСТАС тесессссл,асстатадсХдататоСстаавААстотааСасСосстТ вАСАТССЯССОСтТаСАСАССТ ТоОСАСаСТОатТасСстасСАатТостТ ссса7асстатастосстатостосатсатАсАатассстос дасТоТстТпаСАСССАпАССТАСАТСТаСААСаТаААССА

СААаСССТОСААСАССААсаИатапАСААпААааТасААССс

Таблиця 60

Послідовності біспецифічних двовалентних анти-4-1ВВ/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

ААСТСоСТасоАСААаАСССАСАсСстатососссттатостас

СоСстТОАддастастасссассстласатаТат стос

СААДаСССАДаспАСАСССТаАтТаАттоСасвАСССССаА датаадсстасатастаатааАтТататсСсСАСсасАааАСоста

ААдатТадАдатТСААТттастАсатасасасоТавАдатТасА

СААТаССААпАССААдасСсСстТАаАаАааААСАСТАСААСТоС

АостТтАссЯесатеастатоса,атастаадсСса,ата|астасСсАССАааА таапсСстаоААСайпСАААпАаТтАСААаатТасСсадаататссСААСс

ААдс7васоставаАасСССССАТСИАААДаАССАТСТОСАдИаС

СсСсАДССсСОасСсА,асстоаСа,аассСстАааТаТАСАСССТассс

СсСстТАааСАпАпАТадасСТаАССААпААССАсататосстТалд сстТа|атстатаААдАаасСТсСтТАССССТОСОАТАТСОССИ,ТОа вААТОаСОСАпАаСААдСсааСсСАаСССпАаААСААСТАСАДОА

СсСсАСсССсСсСсСсСсСТатТаСставаАСстТоСадСсаасСсТСАТТСТТОСТИаТт

АСТСТАДаСтТОАСсАаатТапАСсААдатоссаастаасСАаСАаИс

СААсСататпстстастСсатТаАтТаСАСсаАааСсСссСстТасСАСА

АССАСТАСАСССАСААХСТоССТОТоССТатотосСсасасаА сасспвАдссАтотаасавАасаСссааАатссатаатаасааАТ ставссаеасСссатааАтотал,аатасаастаставААТСТОС сапдасАастаатаСсдасССАасасасАтотстаАвастатост ссастасттоСаастТтТАССТТСТОСАаССАСОаССАТОаАСТТ састаСсасСсАдаасСсАсССапАААдАдапАСстТаТасААатааиатато дасСсАТСТаОСООССТОСЯСаСаАаСАаТАСТАСасССаАТАаСа тТОАдАдапвасСайТТСАССАТСТСТСОасОАТААСАСаСААСААТ

АСсСтТотТатТАсСстТасСсАСаАтТаААстооСстасСсасСастТаААСАТАС састататАТТАСТаСсасСсСсАд,асвсастааставасСААСТТСа

АТТАСТОСОСОСССАас,аапААсостоаталстатстоадасСастТ тстатасоастоостСататТСсАТСТТСССАССТТССОаАС слдасадастадАада,атоСссаасАстасстотатсататасстаст

СААСААСТТСТАСССтТосСасАдасССААдааТатасСсАаТацААА стаспАТтТААСасСоСстасСсАаТоСайСААСТоССАасСААТССИТ чвАоСсадаСАаспАСТоСАдаспАСАасСАССТАСтТоССстадас

АВСАСССТОАСССтТатсСАДааССаАСТАСОаАДаААДаСАСААД сататАдсасстатаААаТаАСССАССАСвасСсТаТатоСАас оса аАССААатосСсТСААССасвсаасаАстТас

МІ Сі -легкий ланцюг 1 263 б уклеотидна див. таблицю 40 послідовність)

МІ СНІ-легкий ланцюг 2 (28НІ1) 215 (нуклеотидна див. Вище послідовність)

ЕМО ГГ ЕЗОСИЇ МОРОИБІ ВІ БСААБОЕТЕ55У АМОМУУВОАРО кКагЕММУ5БАІВаЗааВТиМАОБУКОаВЕТІЗВОМОКМТІ М ОММ

ЗІ ВАЕОТАУУУСАВООРМУРРЕЮММУ ОСТІ МТУ55АВБТКОаРБ (2527) / УНСНІ-важкий МЕРГАРББКОЗТЗОСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБМУ МИХ ТИМ 289 ланцюг-(28НІ) УНСІ. НТЕРАМГ О5501 51 55 ГУРБББІ СТОТМІСМУМНКРЗМТК

МОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕААСОРБМРІ ЕРРКРКОТІ МІ

ЗВАТРЕМТСУММОМ5НЕОРЕУКЕМУ УМО МЕМНМАКТКРАЕЕ

ОМУМОТУВУМ5МІ ТМ НОМ МО КЕМКСКУ5МКАЇ САРІЕКТІ

ЗКАКООРАЕРОММТІ РРОВОБЇ ТКМОМ5І ТС МКаЕМРЗОЇАМ

Таблиця 60

Послідовності біспецифічних двовалентних анти-4-1ВВ/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

КУМ ПИ ПО

ІО Опис Послідовність

МО:

ЕМЕЗБМООРЕММУКТТРРМІ О5БОСОЕРІ МК тМОоКЗАМОСсСМ

МЕБСБУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І БРСОССЗССЗСССВбБИа,ВИ аваавЕМОНП ЕЗОСИИСІМОРИаСБІ ВІ ЗСААБОЕТЕ5ЗНАМОУМУВ

ОСОАРОКаИЇ ЕМ УМ5БАМАБаЕОУМАОоБУКИаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАМУМСАКОСУ ЯМЕОММУ ПОСТІ МТМ55БАБМА

АРБМЕІЕРРБОЕОЇ КБИТАБМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОУМКМОМА

ГОБаМ5ОЕЗМТЕООБКОБТУБІ 55ТІ ТІ ЄКАОМЕКНКУМАСЕ

УМТНОІ 55РУТКЗЕМАСЕС

СсАасатТасСсААдта7атасаатстасаастаАааТаААСАдас стасватостоватаАдд,асттоСтасСАдсаасстоСавАасо

АСАТтТсАдаСсАасСстТАСастАТААХДаСсТтаатасаАСА,васссс тавдАСсАдасастсадатааАатасаАдаааАТСАТОССТАТСТ тастАСАаСАААСТАСасСАСАаАдАдаттоСАа,ссасасАа,асат

САССАТТАСТаСАСАСААДАТССАСаАДаСАСАСССТАСАТИаС дастадаСсАаасСссСсТаАвАтТотТАапАСАССсасСсататАТТАС тТатаСОАСаАТСТАСТСОТаАТСТАСОСТТАСТТСОСАСТАСТОа свааСсСАдДасааАССАССатаАССаТатстоСстТСАасСтТАаСАССА дасаСсССсАТоСсЯТатосстотааСССсСТСсСАасСААдаТтст

АоСсТоОТасСссаСсАсАда,ассастотаса7стасстатТаААсад

СстТАСТІоСсСсСсОсАХа,асстТатаАСАа,атаТатостТасААСТТаасСа

СоСстТОАСАТОССОСОЯСВСОИатТасСсАСАССТІ ТОСАОаССТОаТтасСстТасАа тоестоссасстатАстосстатостСсатСаТАСАаТасСосс тосХастотстаайаСАСССАСАССТАСАТСТаСААСаИатаАдА

ССАСААДаСССТоСААСАССААдСаТтаайАСААпААааТтасаАА

СССАДОСТОоСТасСсавАСААпАСССАСАСсСсТатосссстТаТтос тассоСстаАдлдастастаавссаосстАаасататстаттос (1105) /УнНеНІ-важкий ССССААдАаСССАдасАСАСССтТаАтТаАтстоССапАСоооо 290 ланцюг-(28НІ1) УНСО вААХсталсста7асатаатаатаатататССАСаАааАСос (нуклеотидна тТОААатаААаТТсСААТТ,аатАсатасаАСа,васатасвсААата послідовність) САСААТаССААпАССАдасстАаАаАасААСАсСТАСААСТ

СсСАССТАСССвИтТеа татосатастаасСсата|астасСсАсСсСАС вАТТааСтТОаААСайпйСАААДаАатАСААаТасААДааЙТаТтсСА

АСАДОССсоСстТасваАдаССсСССАТСОСААААПАССАТСТОСАА саСсСАлдавсассАдасстаадасстАааТатАСАСоСстТас

СосСстТАасСАпАпАТаАаСТаАССААаААССА,аТтатосст вАССТатсТСаИТтаАААаасСТСсТАССССТоСОАТАТСОССО таваААтТасасаАпАдаСААдСсааССАаСССапАаААСААСТАСАА вАссАсссосостатаставАСтТоСаАСаасСТСАТТСТТОоС татАСТСТААдаСсТАСАаатасвАСАХлатосссатаасСАасСАС васСААсатапсотстастоСатаАтТасСсАссАвасссСтТасСА

СААССАСТАСАСССАСААХсатТоСсСстТатоостатстоссавас сласасасасааАаАттаасасАасасавАтосаатаастаасоас

АТСТОССОСОсССссеатасАатотаасИатасдастастасААТСТа сасадсасАстаастасХдассАасвасавАтотталаасСстато стасастТастоСаасСсТТАССТТСТОСАаССАСОаССАТОА стаеасатаСсасСсАааСАСССайпАААдссаАСТааААтасат атодассАТСОТаСОаСоСстТоСасоаАаСАаЙТАСТАСассСаАТА асатадАаасассаа г САССАТСТСТСсасСАТААСАаСАА

Таблиця 60

Послідовності біспецифічних двовалентних анти-4-1ВВ/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

СААТАСТОТатАССТаСАСАТаААСТОССТаСОаВСастаАда

АТАССОЯСТОатТатАТТАСТОСасССААДавсастааставасСААС тсСаїдатАСТасвасСсАаапААсосСстоаТатаАстатстосАа сеастсотатааССастосстСатТатТ САТСТТСОСССАССТТО

СбоАссАд,асАХастададатоСссасАастассттатсататасс тТастОААСААСТТСТАСССТОСОСаАдасССААд,аа7тасАатас

ААДОТтасСАТААССЯСССТаСА,атТоСааЙсСААСТОССАССААТ сСатаАССаАаСАаСпСАСТоСААаайАСАаСАССТАСТОССТа

АаСсСАаСАСССТОАСССТатсСАдааССаАСТтТАСОАОАдаС

АСсААдсаастатасасстатаАддатТАСССАСсСАХИавасстатос дасоССатТаАССААатссТСсААССасаасавАстТас

МІ Сі -легкий ланцюг 1 267 і пуклеотидна див. таблицю 40 послідовність)

МІ СНІ-легкий ланцюг 2 (28НІ1) 215 (нуклеотидна див. вище послідовність)

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУЗСКАБИСТЕЗЗМАІЗМУУВОАРа

ОС ЕМ МОСТИ РІБЄЕТАМУМАОКЕОСАМТІТАОКОТЗТАУМЕЇ 55

ІГА5ЕОТАУУУСАНОЗТ ІМамЕрумавватУ55АВТКаРБМ

ЕРГАРБОЗКОТ5ИастТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБМУМЗОАІ ТСОМН

ТЕРАМІ О55(2ЇІ М5І 55 УРБББІІ а ТОТМІСМУММНКРОМТКМ

ОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕАДССРБМРГБІЇ ЕРРКРКОТІ МІ5

ВТРЕМТСУММОМЗНЕОРЕУМКЕМУ УМО МЕМНМАКТКРАЕЕО

(1105) УНСНІ-важкий УМЗТУВУМ5МІ ТМ НОБУМІ МЕОКЕМКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІВ 291 ланцюг-(28НІ) УНСІ. КАКООРАВЕРОМУТІ РРОНОЄЕЇТКМОМ5І ТС МКаОЕМРБЗОІАМЕ

МЕБМИаОРЕММУКТТРРМІ ОБОСЗЕРІ ЗК ТМОКОАМСОСМ

МЕБСБУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І БРСОССЗССЗСССВбБИа,ВИ аваавЕМОНП ЕЗОСИИСІМОРИаСБІ ВІ ЗСААБОЕТЕ5ЗНАМОУМУВ

ОСОАРОКаИЇ ЕМ УМ5БАМАБаЕОУМАОоБУКИаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАУУМСАКСОСУМ МЕМ СОСТІ МТМ55АБМА

АРБМЕІЕРРБОЕОЇ КБИТАБМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОУМКМОМА

ГОБаМ5ОЕЗМТЕООБКОБТУБІ 55ТІ ТІ ЄКАОМЕКНКУМАСЕ

УМТНОІ 55РУТКЗЕМАСЕС

СсАасатТасСсААдта7атасаатстасаастаАааТаААСАдас стасватостоватаАдд,асттоСтасСАдсаасстоСавАасо

АСАТтТсАдаСсАасСстТАСастАТААХДаСсТтаатасаАСА,васссс тавдАСсАдасастсадатааАатасаАдаааАТСАТОССТАТСТ (9811) /УнНеНнІ-важкий ТТЕСТАСАаСАААСТАСаСАСАСАдаттоСАасвасАа,ааатТ 292 ланцюг-(28НІ1) УНСО САССАТТАСТаСАСАСААДАТССАСаАДаСАСАСССТАСАТИаС (нуклеотидна дасталасАдаСсСТаАаАтоТадапАСАССассататТАТТАС послідовність) татасвбАаАтопсотаатастТАСССасатТАСТТССАСТА стааваССАдаСппАССАССатаАССаТтсТосСтТСАастТАОасСА

СсСсАДССсСОаСССАТОСОЯТаИаттооСстсТассссСсТССАасСАДО тстТАсстотасСссасасАсАХ,асса7асттавастасстоатаАА сааАСТАСТТОССССАаСсСстТаТатаАСАататостТасААСТОСТа

Таблиця 60

Послідовності біспецифічних двовалентних анти-4-1ВВ/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО: ссассСстТаАСАТОССЯСаСаТтасАСАССТТТоСсАастатТаста саатостоссасстатастсстатстоСса,атсатаАСАаТт ассстосАластоттавасСАСССАЧАССТАСАТСТаСААСа

ТОААССАСААлаСССТоСААСАССАдааТасАСАдадАСаИТт ваААСССАдаТоСсТасСсаАСААпАСССАСАССТаТатосссстТ стостасссСстТаАдлдастастасссвсассстАасататостТа

ПССССССААДаСССААдапСАСАСССТадгТтаАТСТССасАСс ссСббаАддатоадсстасатаастаата7азсататаТСсСАСИадас

АСССТОаААаТаААаТТСААТттаатасатааассасатацвА

АСТаСАСААТаССААДаАССАдассСстТАаАаАдааААСАатТАс

ААСТоСАССТАССОССЯбТаастТатосатастаАасСсатастасА

СсСАсаАтта,аасСтТаААСаасСАААпАсСТАСААДаТасСАдОааТтТа

ТоСААСАДОССОССТОаИ,СПАаСССССАТССАААДАСаАССАТСТО

СсААдаасСсСАдасасСАа,асстасадассСстСАсааТаТАСАСС ст|ассссСстТАаСАпАаАТаласСТаАССААСаААССАсатат

СоСстТаАСсСсТатстатаАААдааСТСсТАССССТОоСаАТАТС сссатТапААтТасадсАасСсААсаасСАасСССаАсСААСААСТ

АСААдаАССАСсоСссссСстТатаставАСТоСаАСаасСтТСАТТО тестТатАСТСТАдастТаАСАааТапАСААХатооссаастаасСА аСсАдссасАдсатапстстастСатТАтТаСАСаАвассс

ТтТаСАСААССАСТАСАСССАСаАдАатосостатоостатстосс сас,асаасосалдапАттааосаАлавассаАтосастаста ссасАдаттасвасассаастасвАтотАасатасАХ,аСстТастТацА

АТСТОсСсоссАа,оАстТастасаасСАаа,ааСадвАТСТСТадОас статостасастасттоСса,аастт ТАССТСсТоСАасССАСасс

АТОХООТТСОаСтаСбасСАаасСАСССапАААДасАСтТасААТ сасататсАдасССсАТТОВоСТоСваСсАасСАсСтТАСТАСасСс вАТАаСатТаАдлд,авасСсаст ТсАССАТСТОТоС,СасАТтААСАС

СААСААТАСТОТатАССтТасСсАаАТтТаААСсСТОССТасСа7асСаста

ААСАТАССОЯСТатТатАТТАСТОСасССАда,авсастааСтавоас

ААСТТСОАТАСсТаСсСсСасСАа,ааспААсостоаталдстатсто сласастпстатаабСастссСстТоСатТат САТСТТСССАСС тоСбаАСбадаСсАаасСстададатоСсаасАастасстотатсатат аСсСстТастТОААСААСТТСтТАсСоСсТовасААлассСсААлааТтТасАс тТапАдАдаТасАТААСсасоСстаТасСсаатоСаасСААСТОССАСИ

ААТССОЯтТаАССсаАдаСАасаАСТоСААаспАСАасСАССТАСТО сЄтадаСАаСАСССТаАСССТаТатсСАДааССаАСТАСОДОСА

АВСАСААДСОСТаТатасасСстатаАдатаАСССАССАа,ааюсст атСАдасСССатаАССААатсСсТСсААСсСасаасаАаТтас

МІ Сі -легкий ланцюг 1 271 (9811) див. таблицю 40 (нуклеотидна послідовність)

МІ СНІ-легкий ланцюг 2 (9811) 215 (нуклеотидна див. вище послідовність)

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУЗСКАБИСТЕЗЗМАІЗМУУВОАРа (9811). / УНСНІ-важкий ОС ЕМ МОСТИ РІБЄЕТАМУМАОКЕОСАМТІТАОКОТЗТАУМЕЇ 55 293 ланцюг-(28НІ) УНСІ. І А5ЕОТАМУУУСАНЗЗИАУ РОМЕО УМИОСТТМТУ5БАБТКОаРБ

МЕРГАРББКОЗТЗОСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБМУ МИХ ТИМ

НТЕРАМІ О55(21І 51 55УМ ГРЗ ОТО ГТ МІСМУМНКРЗМТК

Таблиця 60

Послідовності біспецифічних двовалентних анти-4-1ВВ/анти-РАР людських антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО:

МОККУЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСИРБУНІ ЕРРКРКОТІ МІ

ЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕУКЕМУ УУрамЕУМНМАКТКРАЕЕ

ОММОТУАУМ5МІ ТМ НОБУ/ЛІ МЕКЕМКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІ

ЗКАКОИОРВЕРОМУТІ РРЗВОЄЇ ТКМОМУБІ ТС УКаЕМРЗОІАМ

ЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5ООЗЕРІ ЗК ТУроКЗеАМмОВИМ

МЕБСЗММНЕАЇ НМНУТОКБІ БІ РОСС СТЇЯЗСССИЗИЦСОИОИ аааЗЕМОП ЕЗОСИЇ МОРИаСБІ ВІ ЗСААБаєТЕЗЗНАМОУУВ

ОСАРИЕКИЇ ЕМ УБАМ/АЗаЕОУМАрЗУКаОаВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАУУУСАКСУМ СМЕОММУСОСТІ МГУЗ5ЗАБМА

АРБЗМЕІЕРРБОЕОЇ КЗатАБУМСТЇ ММЕМРАЕАКМОУУКМОМА

ГОБОаМЗОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕ

УТнНОвІ 55РУТКЗЕМАСЕС

Всі гени короткочасно експресували під контролем химерного промотора МРБМ, що складається з корового промотора МРЗМУ, об'єднаного з енхансерним фрагментом промотора

СММ. Експресійний вектор містив також ділянку огіР для епісомальної форми реплікації в клітинах-хазяїнах, що містять ЕВМА (ядерний антиген вірусу Епштейна-Барр).

Біспецифічні анти-4-18В/анти-РАР-конструкції одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліетиленіміну. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами в співвідношенні 1:1:1 ("вектор важкого ланцюга: "вектор легкого ланцюгаї1": «вектор легкого ланцюгаг").

Для одержання в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х д і супернатант замінювали попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО до досягнення кінцевої кількості ДНК 200 мкг. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ, переносили в 500-мілілітрову збовтану колбу та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 96 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали їмММ вальпроєву кислоту і 7 956 Ееєй. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 15 хв при 210 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22-мікрометровий фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./об.) і витримували при 4 "С.

Очистку біспецифічних конструкцій з супернатантів клітинної культури здійснювали за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А згідно з методом, описаним вище для очистки злиттів антиген-Ес і антитіл.

Білок концентрували і фільтрували перед завантаженням на колонку Ні оай Супердекс 200 (фірма СЕ Неайвсаге), врівноважену розчином, що містить 20мММ гистидин, 140мМ масі, рн 6,0.

Концентрацію білка визначали на основі вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм з використанням коефіцієнта молярної екстинкції, розрахованого на основі амінокислотної

Зо послідовності. Чистоту і молекулярну масу біспецифічних конструкцій аналізували за допомогою КЕ-ДСН в присутності відновника (фірма Іпмігодеп, США) або без нього за допомогою пристрою Гарспірахі! (фірма Саїїре»). Вміст агрегатів в зразках аналізували, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації ТОКадєї 13000 ЗМУ ХІ (фірма Тозоп), врівноважену рухомим буфером, який містить 25мМ КеаНРО»:», 125мМ Масі, 200мМмМ моногідрохлорид І -аргініну, 0,02 95 (мас./06.) Мам», рН 6,7, при 25 "С (Таблиця 61).

Таблиця 61

Дані біохімічного аналізу біспецифічних двовалентних анти-4-18В/анти-РАР антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА 11111 Л2ВЗ/БАРРЗ2ОСІАГАЮСТ22 | 7777976 | Й 68 ж Ж ю-еКЕж 111 9ВІ/БАРРЗ2ОСІАГАЮДвТ22 | 7777/7994. |... о 2 2жщюжфю 9.2 Зв'язування біспецифічних двовалентних антитіл, мішенями яких є 4-188 і ЕАР 9.2.1 Поверхневий плазмонний резонанс (одночасне зв'язування)

Здатність зв'язуватись одночасно з конструкцією людський 4-188-Ес (Кіп) і людським ЕАР оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Всі експерименти на основі РК здійснювали за допомогою пристрою Віасоге 1200 при 25 "С з використанням НВ5Б-

ЕР як рухомого буфера (0,01М НЕРЕЗБ, рН 7,4, 0,15М масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта

РО, фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина).

Конструкцію, яка містить біотинільований людський 4-188В в злитті з Ес (Кій), безпосередньо зшивали з різними проточними комірками стрептавідінового (5А) сенсорного чипа.

Використовували рівень іммобілізації, відповідний аж до 1000 резонансним одиницям (ВШ).

Біспецифічні антитіла, мішенями яких є 4-18 і БАР, пропускали через проточні комірки, використовуючи концентрацію порядку 250 нМ, зі швидкістю потоку 30 мкл/хв і дисоціацію встановлювали на 0 с. Людський БАР ін'єктгували в проточні комірки як другий аналіт зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 90 с в концентрації 250 нМ (фіг. 34Б). Моніторинг дисоціації комплексу здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці, в якій був відсутній іммобілізований білок. Всі біспецифічні конструкції мали здатність зв'язуватись одночасно з людським 4-1В8 і людським ЕАР (фіг. ЗБА-35Г). 9.2.2 Зв'язування на клітинах 9.2.2.1 Зв'язування на клітинах, які експресують людський 4-188: активовані та такі, що в стані спокою мононуклеарні лейкоцити периферичної крові (РВМС) людини

Людські РВМС виділяли, активували для індукції 4-188 і застосовували для оцінки здатності до зв'язування антитіл з людським 4-188 згідно з методом, описаним вище в прикладі 7.1.2.

Для демонстрації того, що пов'язаний з Ес ГАР-таргетинг не впливає на зв'язування 4-188- специфічних клонів антитіл або на детекцію за допомогою кон'югованого з РЕ Е(аб')-фрагмента козячого ІдСь проти людського ІдС, Есу-фрагмент-специфічного при створенні винаходу оцінювали здатність до зв'язування націлених на ГАР або "ненацілених" ОР4А7-конструкцій в форматі 242 порівняно з батьківськими форматами пшдс: РЗ2гОСІ ГАГА з людськими СО4-- і

Зо СО8:-Т-клітинами в стані спкокою (фіг. З8А-38Е) і активованими людськими СО4-- ії СО8:-Т- клітинами (фіг. З9А-39Е). Аналогічно результатам, представленим на фіг. 23, і в цьому разі націлені на ЕАР або націлені на ОР47 специфічні по відношенню до людського 4-18В молекули не зв'язувались з Т-клітинами в стані спокою (фіг. ЗВА-38Е), а зв'язувались в основному з активованими СО8--Т-клітинами (фіг. 39 Г, Д ї Е). Перетворення на націлені на БАР або "ненацілені" ОР47-формати 2-42 не змінювало значно особливості зв'язування з Т-клітинами, що експресуюють 4-188. Відмінності можна пояснити тим, що для детекції застосовували Ес- специфічне поліклональне вторинне антитіло (наприклад, Рсо-з'єднання може маскувати епітопи і знижувати детекцію). Величини ЕСвхо варіювались від донору до донору залежно від кількості експресованого 4-1В8 після активації. Це пояснює розходження величин ЕСзо, представлених в таблиці 62, порівняно з величинами для батьківських антитіл, які наведені в таблиці 48. Площі під кривою зв'язування з активованими СО8--Т-клітинами представлені на фіг. 40.

Таблиця 62

Величини ЕСво, що характеризують зв'язування з активованими людськими СО8-

Т-клітинами

Таблиця 62

Величини ЕСво, що характеризують зв'язування з активованими людськими СО8-

Т-клітинами 9.2.2.2 Зв'язування з пухлинними клітинами, що експресуюють людський ЕАР

Для аналізу зв'язування з фібробласт-активуючим білком (БАР), що експресується на клітинній поверхні, застосовують клітинну лінію МІН/3Т3-пиРАР, клон 19 або клітинну лінію людської меланоми УММ-266-4 (АТОС СВІ -1676). Лінія МІН/3Т3-пиЕАР, клон 19 створювали шляхом трансфікування лінії клітин фібробластів мишачих ембріонів МІН/З3ТЗ (АТС СКІ -1658) з експресійною плазмідою РЕТК4921, що кодує людський ЕАР під контролем промотора СМУ.

Клітини підтримували в присутності 1,5 мкг/мл пуроміцину (фірма Іпмімосеп, каталожний Мо апі- рі-5). 2 х 105 пухлинних клітин, які експресують ЕАР, додавали у кожну лунку круглодонних 96- луночних планшетів для суспензійних кліток (сгеїпег Біо-опе, сеїІвїаї, каталожний Мо 650185).

Клітини промивали одноразово 200 мкл О-ЗФР, ресуспендували в 100 мкл/лунку холодного (47С) О-З3ФР-буфера, що містить розведений в 1:5000 разів зелений закріплюючий барвник для визначення життєздатності Ріхабіе Маріїйу буе еРіног 450 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 65 0863 18) або Ріхаріеє Міабійу Оуе еРіцог 660 (фірма еВіозсіепсе, каталожний Мо 65-0864-18), та інкубували протягом 30 хв при 4 "С. Клітини промивались одноразово 200 мкл холодного (4 7С)

О-ЗФР-буфера, ресуспендували в 50мкл на лунку холодного (4 "С) ЕАС5-буфера, що містить в різних титрованих концентраціях 4-18В-специфічні націлені на ЕАР ії "ненацілені" антитіла, з подальшою інкубацією протягом 1 год. при 4 "С. Після чотирикратного промивання з використанням 200 мкл/лунку клітини фарбували з використанням 50 мкл/лунку холодного (4 "С) ЕАС5-буфера, що містить 2,5 мкг/мл кон'югрованого з РЕ К(арв' )2-фрагмента козячого Їдсї проти людського дО, Есу-фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма Чдаскбзоп ІттипокКезеагсі, каталог Мо 109-116-098) або 30 мкг/мл кон'югованого з ФІТЦ Е(аб')»»-фрагмента козячого Ідс проти людського дО, Есд-фрагмент-специфічного АйіпіРиге (фірма даскзоп ІттипокКезеагсй, каталог Ме 109-096-098), протягом 30 хвилин при 4 "С. Клітини промивали двічі, використовуючи 200 мкл холодного (4 "С) РГАС5-буфера та клітини ресуспендували в 50 мкл/лунку О-З3ФР, що містить 195 формальдегіду для фіксації. В цей же або на наступний день клітини ресуспендували в 100 мкл БАС5-буфера та отримували дані за допомогою пристрою з 5 лазерами І 5К-Рогіезза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення ОІМА) або аналізатора

МАСБОМмапі 10 (фірма Мінепуї Віоїес).

Зо Як продемонстровано на фіг. 41А-4А1Е, всі протестовані на цілі на ЕАР молекули у форматі 2-2, на відміну від націлених на ЮР47 або батьківських форматів пиідсі Р2930 ІАГА, включаючи 4-1В8В-зв'язуючі клони 25037, 1105 і 1283, зв'язуються ефективно з людськими клітинами, що експресують БАР. Таким чином, вивчені ЕАР (28НІ1)-нацелені конструкції 2-2 могли специфічно зв'язуватись з клітинами, що експресують ЕАР. На фіг. 42 загальні дані про площу під кривою (АС) для кривих, які характеризують зв'язування з МІН/3Т3-пиГАР. Вивчені формати та ЕБАР-зв'язуючі клони представлені нижче на графіку у вигляді піктограм. З них видно, що всі вивчені націлені на ЕАР формати 2:42 характеризувалися схожі АОС.

Таблиця 63

Величини ЕСзо, що характеризують зв'язування з клітинними лініями МІН/3Т3-пиЕАР, що експресують ЕАР, клон 19 і УММ-266-4

ПЧЕАР, клон 19 М мМ-266-4

Мао ій НН ИН НО: зННННЯ 12 п.й. 2-2 2-2 1105/ЕАР 28НІ1 ой ПИ Столи ПО М 9.2.3 Активація МЕКВ 9.2.3.1 Створення клітин НеГа, що експресують людський 4-188 і МЕ-кКВ-люциферазу

Клітинну лінію карциноми шийки матки Нега (АТСС ССІ-2) трансдукували плазмідою, основою якої є експресійний вектор рРЕТК10829, що містить послідовність людського 4-188 (Опіргої, код доступу 207011) під контролем СММ-промотора та ген, що обумовлює стійкість до пуроміціну. Клітини культивували в середовищі ОМЕМ, доповненому 10 об.95 ЕВ5, 1 об. 95

СсішамАХ-Ї та З мкг/мл пуроміціну.

Трансдуковані 4-1888 клітини Неіа тестували по відношенню до експресії 4-188 за допомогою проточної цитометрії: 0,2х105 живих клітин ресуспендували в 100 мкл ЕАС5-буфера, що містить 0,1 мкг кон'югованого з РегСР/Су5.5 мишачого ІдСк, клон 484-1 до людського 4- 188 (ВіоЇедепа, каталожний Мо 309814) або контроль ізотипу (кон'юговане з РегсС/Су5.5, застосовуване як контроль ізотипу мишаче антитіло (ДСік, клон МОРС 21, фірма Віої! едепа, каталог Мо 400150), та інкубували протягом 30 хв при 4 "С. Клітини промивали двічі ЕАС5- буфером, ресуспендували в 300 мкл ГАС5-буфера, що містить 0,06 мкг САРІ (фірма Запіа Сти:

Віоїес, каталожний Мо 5606-3598), і дані отримували при використанні пристрою з 5 лазерами

ІЇ5А-Ропезза (фірма ВО Віозсіепсе, програмне забезпечення РІМА). Здійснювали серіальні розведення для створення одиничних клонів з використанням наступного методу: трансдуковані людським 4-188 клітинами НеГа ресуспендували в середовищі до досягнення густини 10, 5 і 2,5 клітин/"мл і 200 мкл клітинних суспензій переносили в оброблені круглодонні 96 лункові планшети для культури тканини (по б планшетів для кожної концентрації клітин, фірма ТРР, каталожний Мо 92697). Одиничні клони збираються, розмножуються та тестуються по відношенню до експресії 4-1АВВ згідно з описаним вище методом. Клон з найвищим рівнем експресії 4-188 (клон 5) відбирали для подальшої трансфекції експресійним вектором для МЕ- кВ-люциферази 5495р Тгапіисепі НудВ. Вектор надавав трансфектованим клітинам як стійкість до гігроміцину В, так і здатність експресувати люциферазу під контролем МЕ-КВ-реагуючого елемента (фірма Рапотісв5, каталог Мо І КО051). Для трансфекції клон 5 клітин Неї а з людським 4-1888 культивували до 7095 конфлюенцій. Вводили 50 мкг (40 мкл) лінеаризованого (з

Зо використанням рестриктаз АзеІ! і 5АЇ!) експресійного вектора 5495р Тгапіисепі НудВ в стерильну кювету модульної системи для електропорації Сепе Риїзег/МісгоРиібег з 0,4- сантиметровою щілиною (фірма Віогад, каталожний Мо 65-2081). Додавали 2,5х109 клітин клону 5 Гела з людським 4-188 в 400 мкл середовища ОМЕМ без добавок та обережно змішували з розчином плазмід. Трансфекція клітин здійснювалась за допомогою загальної системи Сепе

Риївег Хсеї! (фірма Віогаай, каталожний Мо 165 2660), застосовуючи наступні установки: експоненціальний імпульс, ємність 500 мкФ, напруга 160 В, опір со. Негайно після імпульсної обробки трансфектовані клітини переносили в см--колбу для культури тканини (фірма ТРР, каталожний Мо 90075) з 15 мл теплого (37 "С) середовища ОМЕМ, доповненого 10 об. 95 ЕВ5 і 1 об. 95 сІШамАХ І. На наступний день додавали культуральне середовище, що містить З мкг/мл пуроміцину і 200 мкг/мл гігроміцину В (фірма Роспе, каталожний Ме 10843555001). Клітини, що вижили, розмножились і реалізували їх серійне розведення згідно з описаним вище методом з одержанням одиничних клонів.

Клони тестували по відношенню до експресії 4-18В згідно з описаним вище методом і по відношенню до МЕ-кВ-люциферазної активності наступним чином: клони збирали в селекційному середовищі та підраховували за допомогою пристрою СеїЇ Соципіег Мі-сеї! хг 2.03 (фірма ВесКктап Сошцег, каталожний Ме 731050). Густину клітин доводили до 0,33х105 клітин/мл і 150 мкл вказаної клітинної суспензії переносили в кожну лунку стерильного білого плоскодонного 96-ямкового планшета для культури тканини з кришкою (фірма Стгеїіпег Біо-опе, каталожний Мо 655083). Клітини інкубували при 37 "С і 5 95 СО» протягом ночі в інкубаторі для клітин (Нега Сеїї). На наступний день додавали 50 мкл середовища, що містить в різних концентраціях рекомбінантний людський фактор некрозу пухлини альфа (гпТМЕ-а, фірма

РергоТесії, каталожний Ме 300-0О1А), в кожну лунку 96-ямкового планшета, одержуючи кінцеву концентрацію "ПТ МЕ-а 100, 50, 25, 12,5, 6,25 і 0 нг/лунку. Клітини інкубували протягом 6 год. при 37"Сб ії 595 СО і потім промивали тричі, застосовуючи 200 мкл/лунку Ю-ЗФР. Додавали репортерний буфер для лізису (фірма Рготеда, каталожний Мо Е3971) в кожну лунку (40 мкл) та планшети витримували протягом ночі при -20 "С. На наступний день заморожені клітини та ідентифікуючий буфер (система для аналізу люциферази 1000, фірма Рготеда, каталожний Мо

Е4550) піддавали відтаванню, доводячи до кімнатної температури. Додавали 100 мкл ідентифікуючого буфера в кожну лунку і планшет аналізували максимально швидко з використанням рідера для мікропланшетів ЗресігаМах М5/М5е і програмного забезпечення

ЗоПМах Рго (фірма Моїіесшіаг Оемісе5). Люциферазну активність оцінювали за кількістю виміряних одиниць світла (ШК), що випускається, протягом 500 мс/лунку, що перевищує рівень в контролі (без додавання гпТМЕ-а). Для подальшого дослідження був відібраний клон 26 МЕ- кВ-Іс-4-А488-Не а, що характеризується найбільш високою люциферазною активністю і значним рівнем експресії 4-188. 9.2.3.2 Активація МЕ-кВ в репортерних клітинах Неїа, що експресують людський 4-188, при спільному культивуванні з пухлинними клітинами, що експресують ЕАР

Клітини Неї а-пи4-188-МЕ-кВ-Ішс, клон 26 збирали і ресуспендували в середовищі ОМЕМ, доповненому 10 об.95 ЕВ5 і 1 об. 95 СішамАХ-Ї, до концентрації 0,2х106 клітин/мл. 100 мкл (2х107 клітин) вказаної клітинної суспензії переносили в кожну лунку стерильного білого плоскодонного 96-лункового планшета для культури тканини з кришкою (фірма Стгеєїпег Біо-опе, каталожний Мо 655083) і планшет інкубували при 37 "С і 5 95 СО» протягом ночі. На наступний день додавали 50 мкл середовища, що містить в титрованих концентраціях націлені на ЕАР конструкції до людського 4-18В або їх батьківські антитіла пиїдсі РЗ2гОСсї АГА. Клітини

МІН/ЗТ3-пиЕБАР, що експресують ЕАР, клон 19 або М/М-266-4 ресуспендували в середовищі

Ко) ОМЕМ, доповненого 10 об. 95 ЕВ5 і 1 об. 95 СішамАХ-Ї, до концентрації 2х105 клітин/мл.

Суспензію пухлинних клітин (50 мкл), що експресують БАР, або тільки середовище як негативний контроль (без пухлинних ГАР:"-клітин) додавали в кожну лунку і планшети інкубували протягом 6 год. при 37 "С і 5 95 СО» в інкубаторі для клітин. Клітини промивали двічі, використовуючи 200 мкл/лунку Ю-ЗФР. Додавали в кожну лунку 40 мкл свіжоприготованого репортерного буфера для лізису (фірма Рготеда, каталожний Мо Е3971) і планшет витримували протягом ночі при -20"С. На наступний день планшети із замороженими клітинами та ідентифікуючий буфер (система для аналізу люциферази 1000, фірма Рготеда, каталожний Мо

Е4550) піддавали відтаванню, доводячи до кімнатної температури. Додавали 100 мкл ідентифікуючого буфера в кожну лунку і максимально швидко вимірювали люциферазну активність за допомогою рідера для мікропланшетів ЗресітамМах М5/М5е і програмного забезпечення 5ойМах Рго (фірма МоїІесшціаг ЮОемісев).

Націлені на ЕГАР (28НІ) конструкції 242 (клон 25057, 1105 або 1283) ініціювали активацію шляху передачі сигналів МЕКВ в репортерній клітинній лінії в присутності клітин МІН/3Т3-пиЕАР (фіг. 43 В, Е ї І) залежно від концентрації. На противагу цьому, "ненацілена" контрольна молекула (4-188 (251217) х ОР47 2-2) або батьківські антитіла РЗ3290 ГАГА не ініціювали таку ж дію при застосуванні в будь-яких протестованих концентраціях. Зазначена активність вивчених націлених на ЕАР антитіл до людського 4-188 в форматі 2-2 строго залежала від експресії ЕАР на клітинній поверхні доданих перехреснозшиваючих клітин, оскільки жодної активації МЕ-КВ не вдалося виявити за відсутності пухлинних клітин, які експресують ЕАР (фіг. 43 А, Г і Ж) або в присутності лінії пухлинних клітин, що експресує низькі рівні ЕАР. (УММ-266-4) (фіг. 43 Б, Д і 3).

Таким чином, активація залежала від рівня експресії ЕАР, а не від сили афінності анти-4-188- зв'язуючого агента, оскільки ступінь активації при порівнянні конструкцій 25037 х ЕАР 2-2, 1105 хХЕАР 252 і 1283 х БАР 252 (фіг. 44А і 445 і таблиця 64) не корелювала з їх афінністю зв'язування з 4-188 (фіг. 42).

Таблиця 64

Величини ЕСзо, що характеризують активацію контрольованої МЕКВ люциферази в репортерних клітинних лініях, які експресують 4-188, в присутності клітин МІН/3Т3-пПиЕАР, що експресують

ЕАР, клон 19

Приклад 10

Одержання, очистка і характеризація біспецифічних одновалентних антитіл, мішенями яких є 4-188 і асоційований з пухлиною антиген (ТАА) 10.1 Створення біспецифічних антитіл, мішенями яких є 4-188 і фібробласт-активуючий білок (ЕАР), в одновалентному форматі (формат 1-1)

Одержували біспецифічні агоністичні антитіла до 4-188, що мають одновалентне зв'язування з 4-188 і ЕАР. Для зниження утворення неправильно спарених легких ланцюгів застосовували технологію Сто55іпар, описану в міжнародній заявці на патент УМО 2010/145792

А1.

Створення та одержання агентів, що зв'язують БАР, описано в УМО 2012/020006 А2, яка включена в даний опис як посилання.

Біспецифічна конструкція характеризувалась одновалентним зв'язуванням з 4-188 і з ЕАР (фіг. 348). Вона містила "схрещений" модуль Рар (УНСІ) агента 28НІ, що зв'язує БАР, злитий з важким ланцюгом антитіла, який містить "виступ", до 4-188 ПпиЇдсе! (що містить мутації з354С/1366УМ). Важкий ланцюг Ес із "западиною" (що містить мутації

У349Сс/13665/ 368А/У407У) зливали з Гар-фрагментом антитіла до 4-188. Комбінація націленої анти-РАР-Ес конструкції, що містить "виступ", з анти-4-188-Ес конструкцією, що містить "западину", дозволяла одержувати гетеродимер, який включав Раб, що специфічно зв'язується з ЕАР, і Раб, що специфічно зв'язується з 4-188.

Інтродуковали мутації РгоЗ29Сс1у, Іец234Аїа і Іец23Б5БАїа в константну ділянку важких ланцюгів для елімінації зв'язування з рецепторами Ес гамма згідно з методом, описаним в опублікованій міжнародній заявці на патент УУО 2012/130831 АТ.

Біспецифічні одновалентні анти-4-1ВВ і анти-РАР о пшідсі РЗ2ОСІАЇА конструкції одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців, використовуючи поліетиленімін. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами в співвідношенні 1:1:1:1 ("вектор важкого ланцюга з "виступом): "вектор легкого ланцюгаї1": "вектор важкого ланцюга із "западиною":«вектор легкого ланцюгаг).

Зо В результаті одержували біспецифічні одновалентні конструкції і очищали їх згідно з методом, описаним для біспецифічних двовалентних анти-4-188 і анти-ЕАР пиЇдсі РЗ2ОСІ АГА (див. приклад 9.1). Нуклеотидні і амінокислотні послідовності представлені в таблиці 65.

Таблиця 65

Послідовності КкДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-4- 1ВВ/анти-ЕРАР антитіл пиїдсаї РЗ29аг АГА Кій

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО: вААХастТасадастТастасвААатосвассааАсасстаатасА ссстааСсасвАТоТоТаАСсАСсСТатТостТасасс,асстоСас

А сСТТсАССтТСтТоСсТоССсАСсассАататостаава т оСадсАс (2ВНИ) у МНСІ-важкий ССТоСТОССАААСОССТОСААТОСОТОТССОССАТСТОС ланцюг із "западиною» 228 (нуклеотидна ссстосааСсаАдаСсАаТАСТАСОССсСсаАСстТотТаТатадлааас послідовність) саатТСсАССАТСТОССОаваайАСААСТССААаААСАСССтТа тТАССТаСАВАТаААСТОССТОСОСОИССсАа,аАСАССаИсс стТатТАСТАСТИаТаССААдасастааставасСААСТТоаАСс тТАСТОСССАСАСИасСАссстТаатсАассата,атосАа,са|аст

Таблиця 65

Послідовності КкДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-4- 1ВВ/анти-ЕРАР антитіл пиїдсаї РЗ29аг АГА Кій

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО: дасатаасСастсСАаСататТсСАТСТТСССАСССАСОС вАссА,аСбАХасСсТАдатСасСАсА,аоСАасатааТатТта

ССсТасСстТОААСААСТТСТАсСсСсСсСсасСсадаасССААдаатТасА ставАд,ааТавАСААдСса,асостаса,сдасаасСААСАсаСс

АсдаААтосатТалдсСсаАдаСАасАСАаСААааАСТоСАСС тТАСАСССТОаАаСАаСАСССТаАсСсСстадасСААавассаА

СстТАСОаАпАдАдаСАСАдс,астатАсасстасСсаААдатаАСос

АССсСАсСа,аооТаТтсСсАаССССатТаАССААпАасСтТТСААСо сасасаАдатТасСсаАСААпАСССАСАсстаТатосоостасс стасссСстТаАдластастастааосстсосататтостатт

ССССССААДАаСССАДапАСАСССТаАТаАТСАаССасА

СоСССОАдАсталсстасатаастаТСаАТаТататосССАСа

Ад,даАСсССтТаААдаТаААаТТСААтастАасатасАСаас стапАдаТасСАСААТасСссСсААаАССААХ,аСсаСасвсадацА впсСАСТАСААСАааСсАСсатАасСсататаатАасаТСсСтТСАС сатоСстТаСАССАаааАСТааСТаААтТааСААсадаТАСА

АСТаСААДааТСТоСААСАдАдасостоИаавсассСсССАТССЯ

АСААДААССАТСТСОСАДАасССАдд,асасСсАассССаАСАА

СсСАСсСАсСатТатасАассстасссСсСАтооСсаааАТаластТа

АССААСААССАСИЯтоАдасстотсаИаТтаСаСАаТСААдОас

СТСТАТСССАаСОАсСАТСОЯССОСТОСсАСТасаАаАасСАА тасвасСАаССапАСААСААСТАСААаАССАСаССсТосса таставАстоСссАсаастостстоСсТатаАаСАДОаС

ТсАССОСТапАСАд,аАХасСсааастасоАаСсАасаасваААсСИаТтТо

ПСТСсАТОСТоСОатТаАТаСАТОАЗСастТоТасАСААССАС

ТАСАСОаСАаААааАдассттССтаТатстСасатТААА сАдаАдтсатастаАассСАатстСсСбааСАсоСстТаласста дасостааСбаАдсАаАаСсСАссСстаАд,аСстасСсАаАассСАа

СсСсАсСАаа,асаталда,асСавАасСстАсстааосСстааЙтТАТСАСИСА вААХдасоСсасасСсАасасссСсСбАаАСстТа|астТтаАТСАТССОСОС сдасАдссс,вааСсСАССааСАТССССОАТАСАТТСАСаСОаС сласаастСсааСАССаАСТТСАСССТаАССАТСАИаССИ астапбААссСссАсасадстсасСататАСТАСТасСсСАСаСА (28НІ1) МІ СНІ-легкий СВСВССАСИаТтаАТоССССССАССТТоЧвасСсСА,ваасСАССАА 215 |ланцюг 2 (нуклеотидна ТаСАААТСААсСАаСстоСасСстАаСАССААД,ааваССССстТ послідовність) ссататостотаасссСсСАаСАаСААдаАасСсАССстТотТа аСбапАдАсАда,асса,асостасастасстааТтаАААСАСТАСТ тоссСсодасссатАассата|атоСстасААСстота,вСсасосс тАсСсАдаса,асоатасСАСАССТІ ТоСсАа,аСсСсатастасСАСаА асд,асаа,асстатАстссталаса,асатааТаАСАаТас сстоСАаасАдасСстТаасСАСССАСпАССТАСАТСТаСААСО

ТОААССАСААаСССАаСААСАССААдДаИТтааАСААСААДа атаспсААСССААадаСТассАс

ЕМО ГГ ЕЗОССИЇ МОРОСИБІ ВІ БСААБИЕТЕ55НАМОМУУВОА

РОаКаї ЕМУ5БАМ АБИаєгєОУМАОоВБУКаВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАМУМСАКСОСУЛ СМЕО ММ СОСТІ МТ М55А5 (28Н) УНСІ -важкий УАРЗУРІЕРРЗОЕОІ КО ТАЗУМСПАММЕУРНЕАКМОМУК 229 ланцюг із "западиною» МОМАГОБамМ5ОєВМТЕОО5КОБТУБІ 55171 ТІ ЗКАЮМЕКН

КУМАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАВСЕСОКТНТСРРСОРАРЕАА

СОРБМУБГЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУМММОМЗНЕОРЕМКЕМ

М УУрамЕУНМАКТКРАЕЄєОММОТУВУМБМІ ТМ НОСОМ

МОКЕМКСКМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРО

Таблиця 65

Послідовності КкДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-4- 1ВВ/анти-ЕРАР антитіл пиїдсаї РЗ29аг АГА Кій

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

РЕСТКМОМ5І БСАУКОаЕМРООІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТР

РМ О5БОраБЕРІ МК ТМОКЗАМОСаММЕ5СЗУМНЕАЇ НМ

НУТОКБІ 5І 5РИаК

ЕІМГТО5РИтТІ 5І 5РОЕВАТІ 5ХСВАБОБУМЗАОМІ АММООКР

СОАРАЇ ПСАБТВАТОІРОВЕБаБЗаватТоОгТтІ ТтІЗАГ ЕРЕОЕ 217 (28НІ1) МІ СНІ-легкий АМУМХСООСОМІРРТРЧОСТКМУЕІК5БАВБТКОаРОМЕРІ АРББ ланцюг 2 К5ТЗаатТААГасі МКЩОМЕРЕРУТУБММЗИаАЇ Т5ОаМНтТЕРА

МГ О5ББИЇМ5І 55УМТМРБЗББІ а ТОТМІСМУМНКРОМТКМОК

КМЕРКЗОСЮО

СсАасатасСААдта7аатасаатстааавастАааТаААСАА асестасатостсаатадАдсатстостасСсАдл,асстосоаа

АпаСАСАТТСсАаСсАастТАСастТАТАДОСТОСОаТасСсаАСА сасоостТапАСААлсаастосвсАатавАатавАвацАТСА

ТОоССТАТСТТ ТИСТАСАИаСАДАСТАСОСАСАСААИтТТос дасаСАдапаТСАССАТТАСТаСАСпАСАААТССАСадас

АСсСАаССТАСАТОСАССТаАдаСАассСсТаАаАТСТадацА сАссассатТатТАТАСТатТасСсаАаАТСТалдАТТССИТТТ

СтТАсастаАСТТСОАСТАСсТасаасСАдаааАсСАСсСсат сАссатстоСстСсАасСстТАаСАССАдасвсассстАа,асаТтатт ссестотаасСССсТАаСАасСААпАдаСАСАдатасАацАА сласса,асостасастасстаспстТСсААдааАСТАСТТОСССО дасссатадссататстапААтстасСсассстТаАСАА ссаваСсаТасСАСАСАТТТОоСАаСССОСТастТасАаадасАаса асстатАастсотстадасАа,аСсатсатаАсСатасСссСтТотТА (1283) УНеНІ-важкий астототасаСАСсССАпАССТАСАТСТаСААСИатадАсс ланцюг з "виступом» АСАДаСсССАаСААСАССААддатапАСААадАассттТасяА 294 (нуклеотидна СССАДОСДасСтТасСсапАСААаАСССАСАССстТаТатоосссттас послідовність) сстасссСстададастастастаасссттосататпсстат

ТоСССССААДаСССАДасАСАСССтТаАТаАтТоАаССасА

СоСССОАдАсталсстасатаастаТСаАТаТататосССАСа

АсдаАСССтТаААдаТаААаТТСсААТттаатТАСсатасАСаас стапАдаТасСАСААТасСссСсААаАССААХ,аСсаСасвсадацА впсСАСТАСААСАааСсАСсатАасСсататаатАасаТСсСтТСАС сатоСстТаСАССАаасаАСстааСсТаААтТааСААааАсаТАСА

АСТаСААДааТСТоСААСАдАдасостоИаавсассСсССАТССЯ

АСААДААССАТСТСОСАДАасССАдд,асасСсАассССаАСАА

СсСАСАДСаТатАСАСССстТассСсССАтТассасасаАТаластТа

АССААСААССАСИЯтоАласстаТатастасстайТСААдсас

СТСТАТСССАаСОАсСАТСОЯССОСТОСсАСТасаАаАасСАА тасвасСАаССапАСААСААСТАСААаАССАСаССсТосса таставАСсТоСаАСаасСТосСТсСТссСТСстТАСАаСАдас

ТсАССОСТапАСАд,аАХасСсааастасоАаСсАасаасваААсСИаТтТо

ПСТСсАТОСТоСОатТаАТаСАТОАЗСастТоТасАСААССАС

ТАСАСОаСАпААааАдассттССтаТатстоСасатТААА (1283) МІ Сі -легкий 259 |ланцюг 1 (нуклеотидна| див. таблицю 40 послідовність)

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

А РООСГЕММасТтпРІЕЄЕТАММАОКЕеОСАМТІТАОКОТЗТАММ 295 анцют й нова ЕГ551 ВБЕОТАУУУСАВЗЕЕВЕУАОРОУМСОСТТУТУЗА

ЗТКОаРБМЕРІ АРОЗБКОТЗОСТААГ СС МКОМЕРЕРМТУБУМУМ

ЗА Т5ОаМНТЕРАМІ 0О55ОЦ01І 5 55 УРБОББІСТОТМІСМ

Таблиця 65

Послідовності КкДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-4- 1ВВ/анти-ЕРАР антитіл пиїдсаї РЗ29аг АГА Кій

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

УММНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕАДИаСРОМЕ

ГЕРРКРКОТ МІЗАТРЕМТСМУУМОМЗ5НЕОРЕМКЕМУ МУ С

МЕМНМАКТКРАЕЄОУМОТМАММУ5МІ ТМ НОСОМ МЕОКЕУК

СКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМУТІ РРСВОЕЇТКМ

ОМБІЛМСІ МКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 050

СЕР МК ТМОКЗАМОСОММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК

І 5І 5РОК сдсатТасСсААтатпасвАдсаттасасаАаасттасТАСАС сставссоатосСстАааАсттстатасАдассСстоСацА

ТТСАССТТТАааСАаТтТАТаССАТаДОИаВСТОСаТоСассСАс аСсТоСАсасвАдАасссастаадатасваТСсТСАасСтТАТТАСТ сатлатастааТАаСАСАТАСТАСОаСАпАСТОоСатадАс вас САССАТСТОССАСАСАСААТТССААСААСАСИ

СстТатТАТСТаСАСАТОААСАааСсСстТадалассвАасаАСАСс сасСатТАТАТТАСТОТаСОСОСтТОАСса,аАсссатаасСасс атадстТАста,вааССАдапААСССсТааТСАССатТсТо сАдатТасСстАаСАССАдасассСстА,асатат сота

СоСстТАаСАаСААдаАаСАСААХдатасАасААсАаССасос тасастасстааТСААласАСТАСТІССССОСМаСССаТтаА ссататоСстТапААтТсоТааСсассСстаАСАдасСассиатас

АСАСАТІТ ТОСАСССОЯТаСсСТаСсАсСАаа,аСсАааСаасСсСстТаТтАСТ стотадасада,асатсатадссатассстотАастстстаа (2507) УНеНІ-важкий ССАСССАаАССТАСАТСТаСААСаТаААССАСАДОаСССА ланцюг з "виступом» ССААСАССААДАДаТапАСААсААаатаайААСССААсаАас 296 (нуклеотидна тТасСспАСААСАСССАСАСсСсТатососСстта7ассстасссст послідовність) вАаастастаатсассстссатат сс сСССсСсСА

ААДАЧСССААСаАСАСССТаАТаАтТоАаССасАсССССсСаА датаасстасатаастаатсаАдтататоСсСАСаАаспАСос тТОААатаААдатТТсСААТТОеОТАСатТасассвсаСатааААаИТт

ССАСААТасССААдаАССАдассаСассаАааАдаСАсаТАСА

АсАдаСсАСсатАссататаастАааСсатоСсТСАссатостас

АСсСАасадстТасСТаААтТааСААСаАаТАСААаТтасСАдДа

СТСТоСААСААДОСОоСТОИЧВаСассСсСсССАТССАСАДААСС

АТСТОСААДаССАдДАасСааСсАаасССоСаАпААССАСАСаИат сСтТАСАСССТаСССССАТОССОЯИапАТаАХастадсССАДаАА

СсСсАсатсласстататасстаТСАААаасСТТсСтТАТОС

СсАдаСсаАСАТСЯССОЯТасАатТасАпАаСААтТасасАас

СсапАСААСААСТАСААЧАдССАСсасстоссастастасвАсСтТ сбаАсвастосТсТосСТстТАСАаСАдаСстоАсСсатас

АСсСАдадасАаасата,аСАаСАа,ааааААСатсТсТСАТОаС тоСатТОаАтТаСАТаАДааСсСТСТаСАСААССАСТАСАСасАс

ААСАСССТОТОССТатстоСасаТААА (2507) МІ СІ -легкий 263 |Іланцюг 1 (нуклеотидна| див. таблицю 40 послідовність)

ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИаєТтЕ55УАМОММУНОА (2507) УНеНІ-важкий РОаКагЕММУ5АІЗаЗааТУМАОоБУКаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ. 297 ланцюг з "виступом» ОММ5І ВАЕОТАМУМСАВООРМ РРЕОММ ОСТІ МТМ55А5

ТКОаРБМЕРІ АРОБКОТЗОаСТААГ СС МКОМЕРЕРУТУБУММО

САГТ5ОаМНТЕРАМІ О55(:І1 51 55ММ ТУРБО ТОТМІСМ

Таблиця 65

Послідовності КкДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-4- 1ВВ/анти-ЕРАР антитіл пиїдсаї РЗ29аг АГА Кій

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

ММЯІНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСРАРЕАДАДССРОМЕ

ГЕРРКРКОТ МІЗАТРЕМТСМУУМОМЗ5НЕОРЕМКЕМУ МУ С

МЕМНМАКТКРАЕЄЕОУМОТМАУМБМІ ТМ НОЮ МЕОКЕМХК

СКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМУТІ РРСВОЕЇТКМ

ОМБІЛМСІ МКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 050

СЕР МК ТМОКЗАМОСОММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК

І 5І 5РОК

СсАасатасСААдта7аатасаатстааавастАааТаААСАА сестасатостоватадда,астотСстасСсАд,васстоСасцА свасСАСАТТсАааСсАасСстТАСастТАТААДаСТа,ватасаАСА сасоостТапАСААлсаастосвсАстТасатаавАаасАТСА

ТОоССТАТСТТ ТИСТАСАИаСАДАСТАСОСАСАСААИтТТос дасаСАдаспаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадас

АСсСАаССТАСАТОСАССТаАдаСАассСсТаАаАТСТадацА

СсАссасСсаТтаТАТТАСТатасСсаАаАТСТАСТСОТОАТСТА саатТАСТТСОаАСТАСТОСОСаССАдаппАССАсСсатаАс сатсТоСсТсАаСстТАаСАССААлсаасостАасататосс тсотавсСССстАаСАаСАдаАаСАСААа,атТасАласасААСАа ссасостасастасстаТСсААапаАСТАСТТОСССОСАаС сс,атаАссататостааААтотТаавСасссСстТаАСАдасСа аСатТаСАСАСАТТТОоСАСсСССОСТаСстТасСАа,аАдасСАаасСааос татастототадаСсАаа,асатсатадсс,ата|ассстстТАастТ (1105) УНеНІ-важкий стстТаваСАСССАСаАССТАСАТСТаСААСаИТаААССАСА ланцюг з "виступом» АпВСССАаСААСАССААдатапАСААадАааатТасААСос 298 (нуклеотидна АдачадастасаАСААаАСССАСсАССстаТатосссосєсттассст послідовність) асссСстТАддастастастаассстсататостаттос

ССССААдДаСССААлаСАСАСССТаАТаАТсАаССааАСс

СоСОАдстаАасстасатаататадтатассССАСОаАа вАСССтТаААаТаААаТТсААТттаатАсатасАСавасСата

СААСТаСАСААТасССААДаАССАдасса,асасвсадааАасСА

СТАСААСАССАСИатАсСсататаатАаасатосСстТСАССаТт

ССстТасСАССАСаАСстТаасСстТаААтТааСААааАаТАСААИТ

ССААааТСТоСААСААддасоСствасассссСАТССАаА

АААССАТСТОСАдДАасСсСАдАа,асасСсАасСССпАСААССА

СсАа,СататАСАсостТассСсССАТассавсаАтадастТаАсс

ААПААССАСсСИатоАаасстаТатастасстаайТСААдаастТТо тТАТСССАаСОаАСАТСоОСССсавтасвсАа,атасаАаАасСААТИаС вСсАаССапАСААСААСтТАСААСАССАс,асстооСсатас тавАСстТоСаАсаасСсТосСтТсТссСТСстТАСАасСАдастсА ссатТапАСАдадаСсасаа,атасАаСАаапааспААСаТтсто

ТСсАТОСТОоСИатТОаАТаСАТаАДааСТСТасСАСААССАСТАС

АСсасСАаААдсАассттоСстаТатстСаааТАдА (1105) МІ СІ -легкий 267 |ланцюг 1 (нуклеотидна| див. таблицю 40 послідовність)

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

А РООСГЕММасТтпРІЕЄЕТАММАОКЕеОСАМТІТАОКОТЗТАММ 299 анцюг й нова ЕІ. 551 ВЗЕОТАУУУСАВЗТИУСУРОУМ СОСТТУТУЗВАВТ

КаРБМЕРІ АРОБКОТЗИаСТААІ СІ УКОМЕРЕРМТУБМУ МИ

АЇ Т5ОМНТЕРАМІ О5БИЇ М5І 55 УР О ТО ГМІСММ

Таблиця 65

Послідовності КкДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-4- 1ВВ/анти-ЕРАР антитіл пиїдсаї РЗ29аг АГА Кій

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

МНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО РОМЕН Е

РРКРКОТІ МІЗАВТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ МУВСИаМЕ

УМНМАКТКРВЕЕОММОЗТУАМУ5МІ ТМ НООМ/ЛІ МЕКЕМКОК

М5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОММТІ РРСОВОЄЇ ТКМОМ

ЗІ СІ УКОЕМРБЗОІАМЕМ ЕБМЕОРЕММУКТТРРМІ О5ОСО

ЕРГУ5КІ ТМОК5АМОСаМУЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 5.

Рак

СсАасатасСААдта7аатасаатстааавастАааТаААСАА асестасатостсаатадАдсатстостасСсАдл,асстосоаа

АпаСАСАТТСсАаСсАастТАСастТАТАДОСТОСОаТасСсаАСА сасоостТапАСААлсаастосвсАстТасатаавАаасАТСА

ТОоССТАТСТТ ТИСТАСАИаСАДАСТАСОСАСАСААИтТТос дасаСАдаспаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадас

АСсСАаССТАСАТОСАССТаАдаСАассСсТаАаАТСТадацА сАссассататТАтАСсСТатТасСсадалдтстстаатасттТА ссс,аоаттТАСТТСОАСТАСТаСИЦаЯвасСсСАдаасАССАССИат сАссатстоСстСсАасСстТАаСАССАдасвсассстАа,асаТтатт ссестотаасСССсТАаСАасСААпАдаСАСАдатасАацАА сласса,асостасастасстасптСсАдасАСТАСТТССССа дасссатадссататстапААтстасСсассстТаАСАА ссаваСсаТасСАСАСАТТТОоСАаСССОСТастТасАаадасАаса асстатАастсотстадасАа,аСсатсатаАсСатасСссСтТотТА (9811) УНеНІ-важкий астототасаСАСсССАпАССТАСАТСТаСААСИатадАсс ланцюг з "виступом» АСАДасСССАаСААСАССААддатаайАСААпАдАааИтТтасяАА 300 (нуклеотидна СССАДОСДасСтТасСсапАСААаАСССАСАССстТаТатоосссттас послідовність) сстасссСстададастастастаасссттосСсататсостат

ТоСССССААДаСССАДасАСАСССтТаАТаАтТоАаССасА

СоСССОАдАсталсстасатаастаТСаАТаТататосССАСа

АсдаАСССтТаААдаТаААаТТСсААТттаатТАСсатасАСаас стапАдаТасСАСААТасСссСсААаАССААХ,аСсаСасвсадасА впсСАСТАСААСАааСсАСсатАасСсататаатАасаТСсСтТСАС сатоСстТаСАССАаааАСТааСТаААтТааСААсадаТАСА

АСТаСААДааТСТоСААСАдАдасостоИаавсассСсССАТССЯ

АСААДААССАТСТСОСАДАасССАдд,асасСсАассССаАСАА

СсСАСАДСаТатАСАСССстТассСсССАтТассасасаАТаластТа

АССААСААССАСИЯтоАласстаТатастасстайТСААдсас

СсТсСтТАТСССАаСОаАсСАТСОСССЯТасАс,СтТасаАаАасСАА тасвасСАаССапАСААСААСТАСААаАССАСаССсТосса таставАСсТоСаАСаасСТосСТсСТссСТСстТАСАаСАдас

ТсАССОСТапАСАд,аАХасСсааастасоАаСсАасаасваААсСИаТтТо

ПСТСсАТаАСТоСаТаАТаСАТОАдСасСтТСсТасСАСААССАСТ

АСАСаСАпААдаАдасстосостаТтстСасатТААА (9811) МІ СІ -легкий 271 |ланцюг 1 (нуклеотидна| див. таблицю 40 послідовність)

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

А РООСГЕММасТтпРІЕЄЕТАММАОКЕеОСАМТІТАОКОТЗТАММ 301 Танцю й нова ЕІ. 551 ВЗЕОТАУУУСАВЗЗСАУРОУРОУМ СОСТТУТУЗА

ЗТКОаРОМЕРІ АРОБКОТЗИаатААЇ аСІ МКОМЕРЕРУТУБУУМ

ЗА Т5ОаМНТЕРАМІ О55ОЦ01І 5 55 УРБОББІСТОТМІСМ

Таблиця 65

Послідовності КкДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних одновалентних анти-4- 1ВВ/анти-ЕРАР антитіл пиїдсаї РЗ29аг АГА Кій

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО:

ММНКРОЬМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСИаРБЗМУЕ

ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ Ура

МЕМНМАКТКРАЕЕОУМЗТУАМУМУБМІ ТМ НОБУУІ МЕОКЕМК

СКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМУТІ РРСОВОЄТКМ

ОМБІ МС УКОЕМРБОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ 050

СЕР У5КІ ТОК АУМОСОСММЕЗСЗММНЕАСНМНУТОК

І 5І РОК ланцюг 1

Всі гени короткочасно експресували під контролем химерного промотора МРБУ, що складається з корового промотора МРЗМУ, об'єднаного з енхансерним фрагментом промотора

СММ. Експресійний вектор містив також ділянку огіР для епісомальної форми реплікації в клітинах-хазяїнах, що містять ЕВМА (ядерний антиген вірусу Епштейна-Барр).

Біспецифічні анти-4-18В/анти-РАР-конструкції одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням поліетиленіміну. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами в співвідношенні 1:1:1:1 ("вектор важкого ланцюга з "виступом":«вектор важкого ланцюга із "западиною":«вектор легкого ланцюга1": "вектор легкого ланцюгаг").

Для одержання в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 400 млн клітин НЕК293 ЕВМА за 24 год. до трансфекції. Для трансфекції клітини центрифугували протягом 5 хв при 210 х д і супернатант замінювали попередньо нагрітим середовищем СО СНО. Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО до досягнення кінцевої кількості ДНК 200 мкг. Після додавання 540 мкл ПЕЇ розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином ДНК/ПЕЇ, переносили в 500-мілілітрову збовтану колбу та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 96 СО». Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17 і клітини культивували протягом 24 год. Через 1 день після трансфекції додавали їмММ вальпроєву кислоту і 7 956 Ееєй. Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 15 хв при 210 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22-мікрометровий фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./об.) і витримували при 4 "С.

Очистку біспецифічних конструкцій із супернатантів клітинної культури здійснювали за допомогою афінної хроматографії з використанням білка А згідно з методом, описаним вище для очистки злитих молекул антиген-Ес або антитіл. Концентрацію білка визначали на основі вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм з використанням коефіцієнта молярної екстинкції, розрахованого на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу біспецифічних конструкцій аналізували за допомогою КЕ-ДСН в присутності відновника (фірма

Іпмігодеп, США) або без нього за допомогою пристрою Гарспірохі! (фірма Саїірег). Зміст

Зо агрегатів в зразках аналізували, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації

ТеКаеї! 53000 5ММ ХІ. (фірма То5ой), врівноважену рухомим буфером, що містить 25мМ К»НРО», 125мМ Масі, 200мМ моногідрохлорид І! -аргініну, 0,02 95 (мас./об.) МаМз, рН 6,7, при 25 76.

Таблиця 66

Дані біохімічного аналізу біспецифічних одновалентних анти-4-18В/анти-РАР антигензв'язуючих молекул в форматі Ід РЗ2ОСІ АГА 10.2 Одержання, очистка і характеризація антигенів ЕАР як "інструменту" для скринінгу

Для того, щоб оцінювати зв'язування з ЕАР, послідовності ДНК, які кодують ектодомени ЕАР людини, мишей або мавп ціномолгус, злиті з С-кінцевою Нібв-міткою, клонували в експресійному векторі, який містить химерний промотор МРБОУ, що складається з корового промотора МРБУ, об'єднаного з енхансерним фрагментом промотора СМУ. Експресійний вектор містив також ділянку огіР для епісомальної форми реплікації в клітинах-хазяїнах, що містять ЕВМА (ядерний антиген вірусу Епштейна-Барр). Амінокислотна та нуклеотидна послідовності міченого Ні ЕСО людського ЕАР представлені в 5ЕО ІЮ МО:85 і 86 відповідно. У 5ЕО ІЮО МО:88 і 89 представлені амінокислотна та нуклеотидна послідовності відповідно міченого Ніз ЕСО мишачого ЕАР. У 5ЕО

ІО МО:90 і 91 представлені амінокислотна та нуклеотидна послідовності відповідно міченого Нів

ЕСО ЕАР мавп ціномолгус.

ЕАР-антигени одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців з використанням полієтиленіміну (ПЕ; фірма Роїузсієпсез Іпо.).

Для одержання 200 мл в 500-мілілітрові збовтані колби засівали 300 млн клітин НЕК29З

ЕВМА за 24 год. до трансфекції в середовище 100 95 Е1716мМ глутамін. Для трансфекції 400 млн клітин центрифугували протягом 5 хв при 210 х ду і супернатант замінювали 20 мл попередньо нагрітим середовищем СО СНО (фірма Сібсо). Експресійні вектори змішували в 20 мл середовища СО СНО до досягнення кінцевої кількості ДНК 200 мкг. Після додавання 540 мкл

ПЕЇ (1 мг/мл) (фірма Роїузсіеєпсе5 Іпс.) розчин інтенсивно перемішували протягом 15 с та інкубували протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини змішували з розчином

ДНК/ПЕЇ, переносили в 500-мілілітровузбовтану колбу та інкубували протягом З год. при 37 "С в інкубаторі в атмосфері з 5 95 СО» і струшували при 165 об/хв. Після інкубації додавали 160 мл середовища Е17І і добавки (мМ вальпроєва кислота, 5 г/л Рербоу (соєвий пептид). бмМ І- глутамін) і клітини культивували протягом 24 год. Через 24 год. після трансфекції до клітин додавали добавку, що містить амінокислоти і глюкозу, в кількості, що складала 12 95 від кінцевого об'єму (24 мл). Після культивування протягом 7 днів супернатант збирали центрифугуванням протягом 45 хв при 2000-3000 х д. Розчин стерилізували фільтрацією (0,22- мікрометровий фільтр), доповнювали азидом натрію до кінцевої концентрації 0,01 95 (мас./об.) і витримували при 4 "С.

Очистку антигенів з супернатантів клітинних культур здійснювали за допомогою двох стадій

Зо очистки з використанням першої стадії афінної хроматографії із застосуванням або 5- мілілітрової колонки ІМАС (фірма Коспе), або 5-мілілітрової колонки МіМТА (фірма Оіадеп) з подальшим застосуванням гель фільтрації з використанням колонки Ні оаай Супердекс 200 (фірма СЕ Неайсаге), врівноваженої буфером, що містить 20мМ гістидин, 140мМ Масі, рН 6,0 або 2 мм МОР5, 150мМ Масі, 0,02 95 Мам3, рН 7,3, відповідно.

При застосуванні афінної хроматографії на колонці ІМАС (фірма Коспе) урівноваження здійснювали буфером, що містить 25мМ Тріс-НСІ, 500мМ хлорид натрію, 20мМ імідазол, рН 8,0, використовуючи 8 СУ. Вносили супернатант і незв'язаний білок відмивали 10 СМ буфера, що містить 25мМ Тріс-НСІ, 500мМ хлорид натрію, 20мМ імідазол, рН 8,0. Нев'язаний білок елюювали за допомогою лінійного градієнта 20 СМ (від 0 до 100 95) буфера, що містить 25мММ

Тріс-НСІ, 500мММ хлорид натрію, 20ММ імідазол, рН 8,0, з подальшою стадією при 100 95, використовуючи 8 СМ буфера.

При застосуванні афінної хроматографії на колонці МІМТА (фірма Оіадеп) врівноваження здійснювали буфером, що містить 50мМ фосфат натрію, ЗО0мММ хлорид натрію, рН 8,0, використовуючи 8 СУ. Вносили супернатант і незв'язаний білок видаляли шляхом промивання буфером, що містить 5Х0ММ фосфат натрію, З00мМ хлорид натрію, рН 8,0 використовуючи його в об'ємі, кратному 10 об'ємам колонки. Зв'язаний білок елюювали за допомогою лінійного градієнта 20 СМ (від 0 до 100 95) буфера, що містить 50мММ фосфат натрію, З00мМ хлорид натрію, 500мМ імідазол, рн 7,4, з подальшою стадією, на якій використовували 5СМ буфера, що містить 50ММ фосфат натрію, ЗО0мММ хлорид натрію, 500мММ імідазол, рН 7,4. Потім колонку знову врівноважували, використовуючи 8 СМ буфера, що містить 50мММ фосфат натрію, ЗО0ММ хлорид натрію, рН 8,0.

До зібраних фракцій потім додавали 1/10 (об./06.) 0,5М ЕДТА, рН 8,0. Білок концентрували за допомогою колонок Мімазріп (номінальна відсікаюча маса 30 кДа, фірма зЗапогіи5) і фільтрували перед внесенням в колонку Ні оадй Супердекс 200 (фірма СЕ Неаїїсаге) врівноважену буфером, що містить 2иМ МОРБ, 150мМ Масі, 0,02 95 Мам3, рН 7,3 або 20ммМ гістидин, 140мМм масі, рН 6,0.

Концентрацію очищених антигенів визначали на основі вимірювання оптичної густини (ОГ) при 280 нм з використанням коефіцієнта молярної екстинкції, розрахованого на основі амінокислотної послідовності. Чистоту і молекулярну масу антигенів аналізували за допомогою бо КЕ-ДСН в присутності відновника (фірма Іпмйгодеп) або без нього за допомогою пристрою

Гарспірохі! (фірма Саїірег). Вміст агрегатів антигенів аналізували, використовуючи колонку для аналітичної гель-фільтрації Т5Кде! 53000 ЗМУ Хі (фірма Тозой), врівноважену рухомим буфером, що містить 25мМ фосфат натрію, 125мМ хлорид натрію, 200мМ моногідрохлорид І - аргініну, 0,02 95 (мас./об.) Мамі», рН 6,7, при 25 76. 10.3 Зв'язування біспецифічних одновалентних антитіл, мішенями яких є 4-188 і ЕАР 10.3.1 Поверхневий плазмонний резонанс (одночасне зв'язування)

Здатність зв'язуватись одночасно з конструкцією людський 4-188-Ес (Кіп) і людським ЕАР оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Всі експерименти на основі РК здійснювали за допомогою пристрою Віасоге 1200 при 25 "С з використанням НВ5Б-

ЕР як рухомого буфера (0,01М НЕРЕЗ, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта

РО, фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина).

Конструкцію, яка містить біотинільований людський 4-1ВВ в злитті з Ес (Кій), безпосередньо зшивали з проточною коміркою стрептавідинового (ЗА) сенсорного чипа. Використовували рівень іммобілізації, відповідний аж 1000 резонансним одиницям (КО).

Біспецифічні антитіла, мішенями яких є 4-188 і БАР, пропускали через проточні комірки, використовуючи концентрацію порядку 25О0нНМ, зі швидкістю потоку ЗО мкл/хв і дисоціацію встановлювали на 0 с. Людський БАР ін'єктгували в проточні комірки як другий аналіт зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 90 с в концентрації 250нМ. Моніторинг дисоціації комплексу здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці, в якій був відсутній іммобілізований білок. Всі біспецифічні конструкції мали здатність зв'язуватись одночасно з людським 4-188В і людським ЕАР. 10.3.2 Зв'язування на клітинах 10.3.2.1 Зв'язування на клітинах, що експресують людський 4-18В: активовані та такі, що в стані спокою мононуклеарні лейкоцити периферичної крові (РВМС) людини

Людські РВМС виділяли, активували для індукції 4-188 і застосовували для оцінки здатності до зв'язування антитіл з людським 4-188 згідно з методом, описаним вище в прикладі 7.1.2.

Для порівняння одновалентно зв'язуюючих 4-188 націлених на 4-18В/ЕАР конструкцій 1-1 і двовалентних зв'язуючих 4-1888 батьківських анти-4-188-специфічних клонів пиЇдс1 РЗ2905

Зо ГАГА конструкції інкубували з активованими та такими, що в стані спокою РВМС, що експресують людський 4-1В8В і здійснювали детекцию за допомогою кон'югованого з РЕ Е(аб')»- фрагмента козячого ДО проти людського Ід, Есу-фрагмент-специфічного згідно з описаним раніше методом. Як продемонстровано на фіг. 39Г і З9Е, конверсія в одновалентні націлені на 4-18В/ЕАР формати 14-41 підвищувала величини ЕСвзо, що характеризують зв'язування з 4-188 (таблиця 67), і знижували значення МРЇ (фіг. 39Б/Д і 39В/Е) в порівнянні з їх батьківськими конструкціями пиЇдс!і РЗ290 ГАГА. Вказане збільшення ЕСв»о і зниження МЕЇ призводило до одержання більшою або меншою мірою поділу навпіл площі під кривою (АС) кривих зв'язування, як продемонстровано на фіг. 40.

Таблиця 67

Величини ЕСво, що характеризують зв'язування з активованими людськими СО8--

Т-клітинами

І ЛеВЗ/АРоВНІ ТЯ | 8 10.3.2.2 Зв'язування з клітинами, що експресують людський ЕАР

Зв'язування з пухлинної клітинною, що експресує ЕАР, вже описане вище в розділі 9.2.2.2.

Як продемонстровано на фіг. 41, націлені на ЕАР молекули в форматі 1-41 на відміну від націлених на ОР47 молекул в форматі 14-41 або клонів батьківських антитіл пиЇдсаї Р2ОЗа АГА 2567 і 1283, зв'язувались ефективно з клітинами, що експресують людський ЕАР (фіг. 41Б/Г та 41Д/Е). Таким чином, конструкції в форматі 1-1 також могли специфічно зв'язуватись з клітинами, що експресують ЕАР, хоча в результаті одновалентного таргетингу ЕГАР з трохи більш високими величинами ЕС5О в порівнянні з націленими на ЕАР форматами 2-2 (таблиця

68 і фіг. 41Б/Г ї 41Д/Е). Проте це чинило лише мінімальну дію на АОС кривих зв'язування (фіг.

Таблиця 68

Величини ЕСвзо, що характеризують зв'язування з клітинними лініями МІН/3Т3-ПиЕгАР, що експресують ЕАР, клон 19 і УММ-266-4

ПЧЕАР, клон 19 М мМ-266-4 11 11 10.3.3. Активація МЕКВ

Протокол аналізу функціональної здатності з використанням репортерної клітинної лінії

НеГа-пи4-188-МЕкКВ-Інс, що експресує людський 4-188, вже вже описаний детально в прикладі 9.2.3.2.

Націлені на БАР (28НІ) конструкції клону 25057 або 1283 в форматі 14-41 ініціювали активацію передачі сигналу МЕКВ в репортерній клітинній лінії в присутності клітин. МІН/3Т3-ПиЕАР (фіг.

АЗЕ і І). На противагу цьому, "ненацілена" контрольна молекула (4-188 (250557) х ОР47 141) або батьківські антитіла РЗ29с ГАГА не ініціювали таку ж дію при застосуванні в будь-яких тестованих концентраціях. Вказана активність націлених на ЕАР антитіл до людського 4-188 в форматі 14-41 строго залежала від високого рівня експресії ЕАР на клітинній поверхні доданих

ЕАР--клітин, так як жодної активації МЕ-КВ не вдалось виявити за відсутності пухлинних клітин, які експресують ЕАР (фіг. 43Г ї Ж) або в присутності лінії пухлинних клітин, що експресує низькі рівні ЕАР. (М/М-266-4) (фіг. 4Зд і 3). При порівнянні встановлено різну поведінку клонів 1283 і 2507 націлених на ЕАР молекул в форматі 1--1 і націлених на ЕАР молекул в форматі 242. Клон 1283 націленої на ЕАР конструкції 14-41 мав більш високу величину ЕСбо, а також плато на кривій активації, розташоване на більш високому рівні, ніж у клона 1283 націленої на БАР конструкція 2-2 (фіг. 43Е) і, таким чином, обидві конструкції мали подібні АОС (фіг. 44А), в той час як клон 2507 націленої на БАР конструкції 141 мав більш високу величину ЕСзо і плато на кривій активації, розташоване на такому ж рівні, що і у клона 25057 націленої на ЕАР конструкції 2-42 (фіг. 441), і в результаті меншу АШС (фіг. 44А), наприклад, клон 25057 націленої на ЕАР молекули 1-41 явно мав меншу ефективність, ніж клон 250557 націленої на ЕАР молекули 242. Причинами цього могли бути відмінності між сильним (наприклад, 1283) і слабким (наприклад, 250557) 4-188- зв'язуючим агентом, які могли ставати більш вираженими при одновалентному 4-18В- зв'язуванні.

Таблиця 69

Величини ЕСзо. що характеризують активацію шляхів передачі сигналів МЕКВ в присутності пухлинних кліїтин, що експресують ЕАР лон клон 19 пи ЕЕ ТЛ ПЕ НЯ ПОН Ж ПО

Коо)

Приклад 11

Одержання, очистка та характеризація біспецифічних антитіл з двовалентним зв'язуванням з 4-188 і одновалентним зв'язуванням з асоційованим з пухлиною антигеном (ТАА) 11.11 Створення біспецифічних антитіл з двовалентним зв'язуванням з 4-188В і одновалентним зв'язуванням з асоційованим з пухлиною антигеном (ТАА) (формат 2-1)

Одержували біспецифічні агоністичні антитіла до 4-188В, що мають двовалентне зв'язування з 4-188 і одновалентне зв'язування з БАР (позначені також як антитіла в форматі 2-1), відповідно до процесу, представленому на фіг. 36.

В цьому прикладі перший важкий ланцюг НС1 конструкції містив наступні компоненти:

МНеСНІ анти-4-1ВВ-зв'язуючого агента, за яким перебувала Ес-ділянка з "виступом", з С-кінцем якої злитий МІ - або МН анти-ЕРАР-зв'язуючого агента. Другий важкий ланцюг НС2 містив УНСНІ1 анти-4-188, за яким перебувала Ес-ділянка із "западиною", з С-кінцем якої злитий МН- або МІ. відповідно анти-РАР-зв'язуючого агента (клон 489). Конструювання і одержання зв'язуючого

ЕАР агента 489 описано в У/ЛО 2012/020006 А2, яка включена в даний опис як посилання.

Зв'язуючі 4-188 агенти (1283, 9811, 1105 і 25557) створювали за методом, описаним в прикладі 6. Комбінація ланцюгів націленої конструкції анти-РАР-Ес-ланцюг з "виступом" і конструкції анти- 4-188-Ес-ланцюг із "западиною" дозволяла одержувати гетеродимер, який включав фрагмент, який зв'язуює ЕАР, і два Раб, що зв'язують 4-188 (фіг. ЗбА і 36Б).

Інтродуковали мутації РгоЗ29Сс1у, Іец234Аїа і Іец23Б5БАїа в константну ділянку важких ланцюгів з "виступом" і "западиною" для елімінації зв'язування з рецепторами Ес-гамма згідно з методом, описаним в публікації міжнародної заявки на патент МО 2012/130831 А1.

Біспецифічні антитіла в форматі 241 анти-4-18В/анти-ГАР пиїдс1 РЗ290І АГА одержували шляхом спільної трансфекції клітин НЕК293-ЕВМА експресійними векторами для клітин ссавців, використовуючи поліетиленімін. Клітини трансфектували відповідними експресійними векторами в співвідношенні 1:1:11 ("вектор важкого ланцюга з "виступом":«вектор легкого ланцюга":«вектор важкого ланцюга із "западиною"). Конструкції одержували і очищали згідно з методом, описаним для біспецифічних двовалентних антитіл анти-4-18В і анти-РАР пида1

РЗ291 АГА (див. приклад 9.1).

Послідовності пар основ та амінокислотні послідовності анти-4-188, анти-РАР-конструкцій в форматі 241 з МН а-ЕАР, злитої з ланцюгом з "виступом", і МІ, злитої з ланцюгом із "западиною", представлені відповідно в таблиці 70.

Таблиця 70

Послідовності КкДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних анти-4-188, анти-ЕАР людських ІДС РЗ29аї АГ А в форматі 241 (Конструкції з МІ. а-РАР, злитої з ланцюгом із "западиною", і МН, злитої з ланцюгом з "виступом", позначені нижче в таблиці 72 як "западина»-Ммі)

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО: вАСАТССАСАТаАСССАаТСТоСТТсСАСССТатстТасА тотатаасАаАССаТтатСАССАТСАСТТОаСТССЯТаССАСТ

СсАсАатТАТТАаСТАаСТОСТТааССсТааТтТАТСАССАСААА ссАасапААдасСсССстТАдастостТаАТСТАТаАТОССТОоС

АдаттаспААдАлатавсааТоССАТСАССЯСТТтсАасССсва7асАат саАтоСаапАСАпААТТСАСТСТСАССАТСАДИаВСАаТстта

СсАаССстТаАТОАТТТТаСААСТТАТТАСТаССААСА,ТАТ (1283) МІ. СІ -легкий ланцюг САТТСаТтТАТССОЯСАаАСОтТасасССАсаСааСАССААдИТО 259 (нуклеотидна послідовність) вАСАТСААСССЯТтТАСВИтТааСТасСАССАТСТатсСТТСАТС тсосСсасСссАТСТаАтТаАдаСАаТТаАААТСтТапААСТасс тстаттататасСстастаААТААСТТСТАТоССАсСАсцАС

ВсССААдАаТАСсАаатТавААда,ааТацзАТтТААСассстТсСААТС саптТААСстТоССАсСсАсАа,аТатСАСАасСАаа,аСАа,аАСАасСА апАСАаСАССТАСАаССтСАасСсАасАСССстадсаста

АЧВСАААдаСАпАСТАС,АСААДАСАСАААИаТСТАСасста

СаАДИТСАСССАТСАСЯОСОССТОАаИ,СТСасСССатСАСАДА сАаСТТСсААСсАа,ааасАсАаТтат м ПО УДО

ІО Опис Послідовність

МО:

СсА7СатасСсААТТЯОСТОСАСТОТОПСасСстТаАдааТОадДАаАА сесстасатостватОААасТоТоСТСААасоСстоСаа

АВОСАСАТтТоАаСсАастАСастТАТАДаСТОСатасСаАСА сессосСстТавАСААдсСа,ааСставАаа,атаддтовацАаааАТСА

ТОССТАТСТТТаСТАСАССАДАСТАСаСАСАСААИтТТос давасСсАаааТСсАССАТТАСТаСАСАСААДАТССАСОДОС

АСАСССТАСАТОСАЛаСстТОдДасСсАаСсСтТаАвАТСТаАССА

СсАсСсСасССататАТТАСТИАаТасСсаАСАТСТОААТТОСИТТ

СстТАСОЯСТОАСТТсОАСстТАстТа,ваасССААдасппАССАССИатТ сАссатотсадатТасСстАаСАССАдавассСАтаатТстТТ соооСстТасСАСССТОоСТоСААСАдОаСАССТТОаваасСАС дассасостасастасстааТСААаСАСТАСТТССССОА досссатоадссататотТааспсААСТСАСасСсассстТОАССАС свасатТасАСАССТТСССОСОаСТатосСтТАСАаТОоСТСАСа

АСТоТАСТОССТСсАааСсАсСсатастадсса,атассстосАО сАасттаваСАСССАСАССТАСАТСТаСААСаИтаААТСА

СААДИСССАССААСАССАДОа Тай АСААСААдатТадас

ССАААТСТТаТтТаАСАДААСТСАСАСАТИАСССАССОСТОаСС

СсАасСсАсСстТАдХа,астасд,асасаАсСатсАатстсстотТ

ТОСССССААДААСССАДаСАСАСССТСАТОаАТСТОССОСА соостТадасТсАСАТОСОТВСТОСТаСАСатаАОсССАСО (1283) МНеНІ-Ес з ААСАСССтТадОатТСААаТтТСААСТОатАсатасАсвас 316 |" виступом»-УН (489) СТаСАВИтасСсАТААТаССААаАСсААдАдасСсассвасяаацА (нуклеотидна послідовність САСТАСААСАа,аСАСатАссататаатАаСатосСтСАС

Не 1) са,атостТасАССсАавАСТааСтТаААТаайСААаСпАСатТАСА

А,ВТаСААСИатСсТоСААСАААХаСоСстТоаасаСсССССАТСС

АПАДААССАТСТССААДОССААдапваСАаССССОпАСАА

ССАСАССТОаТАСАСССТОСССОССТасСАСАаАТталастОа

АССААвААссАасататостатаататстаатосдАдавас т сТАССССАасСаАтТАТСОЯССОЯТтасАатТасаАдаАасСААС вассАаСсСтТаАпААСААСТАСААЧАССАСоСсоостаТата стапвдсдасаАдсвасСАасСТ СТ оСТатАСТОСААДАСТОа

АосатОпАСАдасАХда,асссата,аСАаСАапаСААСаТтатт сла,астасдаСатаАТасСсАСаАваССсСтТасСАСААССАСТА

СсАСССАВААСТоССтТОАдасСстадасоссвасавАвасСОо ссаваААд,аСсавАа,асАасааАсаатотассас,саАааттос сваасосасеаТавАТоТаАа,сатасСАаСТасСТопААдА,Сас ссваАдсаАстастасалда,асстаавсаваСАаасстоАаАСста|ат сттасасСсасСсАдаСсаасСТСсАССТТСАССАаСтТАСассА тадластасатосаССсАсСоСооСсТаСААСапАСТацАА тасстатосассСАТСАТСОСССТСОТаССаССАасСАССТАС тТАСЯССОАСАССОаТаАдАсС,ассоаТТСАССАТСАСССО

СОАСААСАаСААСААСАСССТаТатТАССТаСАаАТИаААСА сесстасасасСсвдапАСсАсСсасСсаТатАСТАСТАСаССА дасадтаатссвасаасСстТТСААСТАСТОСОасАсАдасСас

АсССсСТаатТсАССЯТатссСАОас

СсА7СатасСсААТТЯОСТОСАСТОТОПСасСстТаАдааТОадДАаАА сесстасатостосатаАдАдасТоТоСТаСААласосСстососа

АВОСАСАТтТоАаСсАастАСастТАТАДаСТОСатасСаАСА (1283) УМНеОНІ-Ес із ЧСССсСсТаспсАСААХс,асастасаатавАТаааАаасАТСА 317 "западиною»-МІ. (489) ТСССТАТСТТТОИСТАСАССАДАСТАСОаСАСАСААИ ТО (нуклеотидна послідовністьї АСССАСАСа,ТСАССАТТАСТаСАСАСАААТССАССОСАСаС нег) АСАСССТАСАТОСАЛаСстТОдДасСсАаСсСтТаАвАТСТаАССА

СсАсСсСасССататАТТАСТИаТасаАСАТСТОААТТОСИТТТ

СстТАСОЯСТОАСТТсОАСстТАстТа,ваасССААдасппАССАССИатТ сАссатстсалатТасСстАаСАССАдасвассСАтастТстТТ

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО:

СССССТООСАСССТОСТОСААСАССАССТСТОООСОСАС дасавссстаайостасстаатТсААСОАСТАСТТОСССОА

АССООТОАСОаСТОаТСатТаОААСТСАСОСОСССТОАСсСАС

СООСатасАсСАССТТОССООСтТатсстТАСАСТОСТСАСО

АСТСТАСТОССТСАОСАОСОТОСТОАССОТОССсСтТосАС

САОСТТаСОСАСССАСАССТАСАТСТОСААСОТОААТСА

САДИСССАССААСАССААССТОСАСААСАЛАСТТОАОС

ССАААТСТТОТОАСААААСТСАСАСАТОСССАСССТОСС

САССАССТОААОСТОСАСОСОСАСССТСАСТСТТОСТСТ

ТОСССССАДААСССАДОСАСАСССТСАТОАТСТОССОСА

ССССТОАСОТСАСАТОСОТОСТОаОТООАСОТОАОССАСО

ААСАСССТОАСОТСААСТТСААСТОСТАССТОСсАСООС

СТОСАСОТОСАТААТОССААСАСАДАОССОСОСОАССА

ССАСТАСААСАССАСОТАССОТОИТОСТСАОСОТССТСАС

СатсстасАССАССАСТООСТаААТаасСААССАСТАСА

АСТаСААДОСТСТОСААСАААОСССТСООСОССССсСАТСО

АСАДААССАТСТССАААСССАДАОСОСАСССССОСАСАА

ССАСАОСТОТОСАСССТОСССССАТОССОООАТОАОСТОа

АССАДСААССАССТСАСССТСТСИТОСОСАСТСАААСО

СТТСТАТСССАСССАСАТСОССОТОСАСТООСАСАССАА

ТОСОаСАСССОСАСААСААСТАСААСАССАСОССТСССО

ТОСТОаСАСТОСОАСООСТОСТТСТТОСТСаТОАОсСААСС

ТСАССИТаСАСААСАССАССТОССАССАССССААССТС

ТТСТСАТОСТОСОТОАТОСАТОСАСОСТСТОСАСААССАС

ТАСАСОСАСААСАОССТСТосСТотстосвааставАаОс васабААаСабАаСАСйСАСОАтТосассоссасАСсТтТо

СООДОССОСАСОАТоСОАСАТСОТОСТОАСССАСТСТОС

СООСАСССТатстотОАасССсСтТОасСОАОАСАОсСсСАСССТ

СтТоСТасаадДОсстТосСсСАСТОСатадсстостостАССТ

СОСсСтТаатАТСАайСАСААОСССОосСсСАСОССССТСООСТ

ССТОАТСААСОТОООСАОТСаСАСАОССАССООСАТСС стадссасттстосвастстаастосаасСАССОАСТТСА

СССТОАССАТСТОССООСТаСААСССОАСОАСТТСОССа

ТОТАСТАСТОССАССАССОСАТСАТОИСТаССССССАССТ

ТТаЙССАССССАССААДОСТОСАААТСААС

ПІОМТОРУТІ ЗА5УСОВМУТІТСВАЗОВІЗЗУ АМ/ХООКРО

КАРКИ У ОА5У5І ЕЗОУРЗВЕЗО5О5СТЕЕТІ ТІЗ5І ОРООБА

Й ТУУСООУНеУРОТЕСОСТКУЕІКВТУААРУМУЕІЕРРЗОЕОЇ. 261 (1283) МІ -Сі--легкий ланцюг | КесТАЗУУСИ ММЕУРВЕАКУСМ/КУОМА! О5ОМОЕБМТ

ЕООБКОБТУ І 55ТІ ТІ ЗКАОУЕКНКУУАСЕМТНОСІ 55Р

МТКЗЕМВСЕС

ОМОГУОЗСАЕУККРОЗЗУКУЗСКАЗОСТЕЗ5УАІЗМУВОА

РООСІ ЕМ/МОСІІРІЕЄСТАМУАОКЕОСВУТІТАОКОТОТАУМ

ЕІ 551 ВХЕОТАМУУСАВОЕЕВЕУАСЕОММУ СОСТТУТУ А

ЯТКОРОМУЕРІ АРОЗ5КОТЗССТААІ СІ УКОУЕРЕРУТУЄМУ М

ЗСАЇ ТЗОУНТЕРАМІ 05501 У5І 557УТУРУЗВІ ОТОТУІСМ

ММІНКРОМТКУОККУЕРКОСОКТНТОРРСРАРЕААСОРОМЕ

(1283) МНСНІ-Ес 0/3 ГЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УУОС 318 |"виступом»-УН (489) МЕМНМАКТКРВЕЕОУМеТУВУМ МІ ТМІ НОРУМІ МОКЕУК (важкий ланцюг 1) СКУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОУУТІ РРОВОБЇ ТКМ

ОМІЛУСІ УКСЕУРУЗОТАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50

СЗЕРІ УЗКІ ТМОКЗВУУООСМУЕ5С5УМНЕАІ НМНУТОКО

І Зі 8РОСОСО50 00500050 О5ЕМО ІП ЕЗОССІ МОР

СОБІ ВІ ЗЄСААЗСЕТЕЗ5УАМОУУВОАРОКСІ ЕМ/У5АС

САБТУУАОЗУКСВЕТІЗВОМеКМТІ М ОММІ ВАЕОТАМУ

УСАКСМЕССЕМУМУ СОСТІ УТ

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

ОМОЇ МОБОАЕУМККРИаББЗУКУЗСКАБИОСТЕБОМАІЗММУНОА

РОС ЕМ МастПпРІБЄИТАММАОКРОСАМТІТАОКОТЗТАУМ

ЕГ55І ВБЕОТАМУМСАНЗЕЕВЕМАВЕО УМ ПОСТ УТУ5А

ЗТКОаРБМЕРІ АРОЗБКОТЗОСТААГ СС МКОМЕРЕРМТУБУМУМ

ЗА! Т5аМНТЕРАМІ 05501 М5І 55 УРБББІИТОТМІСМ

ММЯІНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСРАРЕАДАДССРОМЕ

(1283) МНеОНІ1-Ес із ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОУМЗНЕОРЕУМКЕММУ У УС 319 |"западиною»-МІ (489) МЕМНМАКТКРАЕЄЕОУМОТМАУМБМІ ТМ НОЮ МЕОКЕМХК (важкий ланцюг 2) СКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМСТІ РРОНОЄБЇТКМ

ОМ5І ЗСАМКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 050

С5БЕР МК ТМОКАМОССММЕЗСОУМНЕАЇ НЯМНУТОКо

БРОСССОСЗваИааБОСИВаВасасеБ МІ ТОЗРОТІ БІ БР

СЕВАТІ ЗХСНАБОБМТ55МІ АМУООКРООСОАРА ІМС

АТОаІРОВЕЗабБаб5БатОвТ ТІЗАГЕРЕОБГАМУМСООСІМІ РР

ТтТРсОСТКМЕїК тса,7атстадасСстТАстоАсаАасосстастататстатаасс т апОпАСАпАСАаТСАапАТСАСАТаССААДССАСАСАС

ССТСАСААСТТАТТАТаСААЛаСТастАССАаСАпАдАаСс

АВОАСсАааССССтТатАСТТаТСАТСТАТОСТАААДААСААд сса,вассСстсАа,савАТоССАаАССсаАтсоттаастосСАа

СТСАСОСАдААСАСАасСТТоСТТаАССАТСАСТОСИаасСтТСА васСсОапААдаАтТаАааЙсСТаАСТАТТАСТатТААСТОССТТаА (25227) МІ. Сі -легкий ланцюг тдасс,ассаатАтТатасатАтсавассадаапАССАдас 263 (нуклеотидна послідовність) тТАССатТоСстТАааТСсААСССАдсасСстасссссАаасСатаА ссстатсосооссСсСАдасСсАдаСсаАапААСТаСАаасССААСА да,аассАассстаатста|ассСстаАТСАаСОаАСТТСТАСССАС ссассатаадос,атасставАдЧчвасСаАСАасСАасСсос стаддсасосааоатапйАпАССАССАСССССАаСАДасА

САаСААСААСААдатасасса,асАасСсАастТАССтадасс таАссссСсосАа,аСАдатаспАдаАасССсАСАасТоСТтАСАСС тасСсАадватаАССсСАСаАдаааСАаСАССатацАСААдАС сатааосССсСАСсСадаТасСАас слаата7асластастааААтТтааСсаасаАсТаатТасСА аесстасСсаваАТтототаАдаАстадастатасСсассдасась

СстТсАССТТсАдасСсАастТАСсассСсАТОАХаСсСТаатТасассА сасбооСстТапАААдд,аасСстапАадтасвататСассСАТСТО таасласваСсааСАаСАССТАСТАСасСссСадлтстТатаАА сааССаспТСАССАТСАаССассаАСААСАаСААСаААСА ссстатАсСстТасСАваАТААСсА,асстТасасвасСаАдасАс

АосассатТатАСТАТТаСОЯССАсСасАСаАсоостаасос

ЄоСстТтТаАТТАТт,аСасОпАСАа,саасСсАасостсаТатаАссСатТа тобАаасасСстТАаСАССАда,аваСССАТосСатстоссоста (25С7) УНСНІ-Ес з ваСсАСССТоСТоСАдДсАХаСАсСстотаассчвасАсАасСавос "виступом»-УН (489) стасвастасстааТтСААааАСТАСТТССССОадАСсСсаста 320 (нуклеотидна послідовність Адса,астатсатавААСТоАдсас,аСсассстаАсСАааСсаасата важкий ланцюг 1) "САСАССТІТоССОВаСтТатссСтТАСАаТССтТСАСааАСТОСТАС тосстсАд,асада,асатаатАсСсатассстСАаСАастТТа васСсАСССАСАССТАСАТСТаСААСОТаААТСАСАдассс

А,ВСААСАССААлаСТапАСААСАААаИТТаАДасСссСАААТС

ТТатОаАСААДААСТСАСАСАТаСССАСсСсатасссСАасСАСс тоАдАдастасда,асаасАсСатсАатстостстосссос

ААДАСССААДаСАСАСССТСАТОАТСТОССОССАССССТаА саТтСАСсАТаСООТОСТОоаастасвАсатаАаССАССААСАСС

СстТаАдааТСААдаТТсААстаатасатасассаСатасАс аТаСАТААТИаССААЧАСААдАаСсСсаСа,асаАсадасСАаТтА

СААСсАдаСАсатАссатататАаСатссСсТсАССаТтост

ССАССАСаАСТааСТаААТаССААдасСАСТАСААИаТасСА

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО:

АВаТтСсТоСААСАААХасСссСстТоасСаСССССАТССАСАДА

АССАТСТСОСААДаССААА,аааСАаССССОпАСААССАСА вататАСсАСССсТассосССсТасСсАаАваАТОАдастТаАССАА вААССАСОСТОТОоССТаТастТатотаатТСАдавастТстТА

СсоССАаСаАтТАТСОЯССОЯТавАаатаваАСАаСААСааСс

АаССТОАСААСААСТАСААДаАССАСсСсСсососстатастаа

Асда,аСсаАсвасАастСстІсСтТатАСТОСАААСТОаАССО тТааАСсААдсдассастааСАХа,аСАаа,авасСААдса,ататтсАас тасдасатТаАтТаСсАСадааССсСтТасАСААССАСТАСАСС

СсАСААХССТОССТОАаО,аСсСТОАДасосСсвас,асАасасава!сСас

АДОаСсСОааАласАассАХасАтотасасасасвАа,аатоСасАа ссаставАтТотТадастасХасТасСТСсаАдАдд,аСсаавСацА сеадстастасдасставсса,аСАаа,асстТалсАстатстас ссс,ассдаспастСсАССТТСАасСАасСТАСасСсСАТИаДОаС тасатосассда,аооостаасСсАд,аапАСстТааААТтасаИт сТосасСссСсАТСАТСОСССТОТОаВСасССАаСАССТАСТАСОС

СсОАсд,асатаддасвассааТТСсАССАТСАДаССаСОсАСА

АСАССААСААСАСССТатТАССТасСАСАТОААСАОССтТа севсвасСбадапАСАсСсассаТатАСТАСТаСассАдаса

Атааттса,ааеСаасСТТСААСТАСТОсасАСАдавасАСсстТ ватсАссататссАОас саластасластаставААтотаасвсасааАстТаатТасА ссстаасавАТотТотТалдсАдстТадастатасс,ссАасова

СТТСАССТТСсАааСсАОСтТАСасСсАТОАЛОаСТОааатТасСсассСА васссСстТапААААсасстасАатТавататосСассАТСТо таасласааСааСАССАССТАСТАСаССОаАТТСТатаАА ваасСасТСАССАТСАаССОСОпАСААСАаСАдДаААСА

ЄоСстТатАССТасСсАВАТаААСАСаССТаСОСа,аСсСОпАцалс досассатТатТАСТАТТаОСОССАа,аОпАСаАСоостааСос сосСТтТаАТТАТТаСОСАСсАХда,асасСАссстатаАссста тосАдасасСстТАаСАССАлдавасСсССАтастотооооста аСАСССТОСТоСААСАдасСсАсстотававасСАСАсвСсаЯос ставастассСтТаатТСсААааАСТАСТТССССОАдАССасастТОа доесвататсатапвАдАстсАд,аа,асассстаАссАасавасата

САСАССТТОССОЯбИасСтТатосСтТАСАаТОСТСАааАСТСТАС тосстодаслас,атастадссатассстоСсАасСАОстТтТа

СаСАСССАСАССТАСАТСТаСААСОТОаААТСАСААЛИаСОС (25027) МНеОНІ-Ес із АЯАСААСАССАДаСсТапсАСААСАААаТТаАласСССАААТС 324 "западиною»-МІ. (489) ПТТАТОАСАДААСТСАСАСАТаСССАССИЧаТасссАасСАСС (нуклеотидна послідовність) ТЕААаСстТасАа,аспасАсСа,атсАатстосттососооо важкий ланцюг 2) ААДААСССААдасСАСАСССТОАТаАТСТОССОСаАССССтТаА ватсАсАТасСстТаатаставАСаТаАаССАСПААдаАСС стадвдатСсААаТТсААстаатасатавасвсасстааАс

СТаСАТААТаССААаАСАААа,асСсасаа,аадавАасСАСтТА

СААСАССАСсОстТАсСсататаатоАдасатосСтТСАССаТтост

СсСАССАССАСТааСТаААТааСААСаАаТАСААИаТаСА

АВаТтСсТоСААСАААХасСссСстТоасСаСССССАТССАСАДА

АССАТСТСОСААДаССААА,аааСАаССССОпАСААССАСА сататасАасоСстТассСССАТСССОСааАТаАаСТаАСсСАА

СААссАдастоАаассттатасСасСАСТСАААСаТстТстТА тоСсСАВСОАСАТСОЯВССОЯтТасА,стТаасАаАаСААТааас асСссапАСпАДАСААСтТАСААДаАССсАСсасстоссатаста вАСТОСОАСООЯСТоСттСоттоСстоатаАасСААастсАСс сТапАСААдадасАасатаасАдаСАсаавААсаТатстсто

АТаСсСтТоСатТОАтТОСАТОАДОааСТСТаСАСААССАСТАСАС аСАСААсСАсоСстТотосСстатотосаасатасасаса,!сас

Адасасд,асАдс,ссАа,асаАтосса,асс,аасаса,сттосасАс

5ЕО

ІО Опис Послідовність

МО:

ССОСАССАТСССАСАТОСТОСТОАСССАСТСТОССООСА

СССТОСТСТСТОАССССТОСССАСАСАСССАССОСТОТОСТ

ССАСАСССТОССАСТСССТОАССТОСТОСТАССТССОССТ

СОТАТСАССАСААССССОСССАСОССССТООССТОСТСА

ТСААССТОСОСАСТОСОСАСАСССАССОСОСАТСССТОАСС

СОТТСТОСООСтТСТООсСтТоСООсСАССОАСТТСАСССТОА

ССАТСТОСССОСТООААСССОАССАСТТСССССТСТАСТ

АСТОССАССАСССОСАТСАТОСТОССССССАССТТТОССС

АССОСАССААССТОСАААТСААС

З5ЕГТООРАУБМАІ СОТУВІТСОСОЗІАБУХУАБМУООКРО

ОАРМІ МІУОКММАРОСІРОВЕЗО555СМТАВІ ТІТСАОАЕОЕ - АОУУСМБІ ОВВСМУ/УЕСОСТКІ ТМ СОРКААРБУТІ ЕРР 265 (2567) МІ-Сі -легкий ланцюг | сЗєг| ОАМКАТІ УСІ ІЗОРУРСАУТМАМ/КАОЗ5РУКАСУЕ

ТТТРОКОЗММКУААВОХІ ЗІ ТРЕОМ/КЗНВ5УЗСОУТНЕСВТ

МЕКТУАРТЕСЗ

ЕМОПЕ5СССІ УОРОСБІ ВІ ЗСААЗОЕТЕВ5УАМОМУВОА

РОКСІ ЕМ/УЗАІЗС5СС5ТУУАОЗУКСОВЕТІЗВОМеКМТІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАУУУСАВООРМ/РРЕОУМСОСТІ УТУЗ5А5

ТКОРОУЕРІ АРЗЗКУТЗСОТААІ ОСІ УКОУЕРЕРУТУЗМ/М5

САЇ ТСУНТЕРАМІ 05501 У5І 55УУТУРУБУІ СТОТМІСМ

УМНКРОМТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕААСОРОМЕ

(2507) УНСНІ-Ес 0/3 ГЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУКЕММУУОС 322 |"виступом»-УН (489) МЕУНМАКТКРВЕЄОУМОТУВУМУ МІ ТМ НОСІ МОКЕУК (важкий ланцюг 1) СКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОМУТІ РРСВОБЇТКМ

ОМ8ІМ/СІ УКСЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50

СБЕРІУЗКІ ТМОКЗВУТООСМУЄЗС5УМНЕАІ НМНУТОКО

ІІ ЗРОСОСО50000500005С0О5ЕМО ЕЗСОСІ МОР

СОБІВІ ЗСААЗСЕТЕЗ5УАМОМУВОАРОКСІ ЕМ/У5АІС

САЄТУУАО5ЗУКСВЕТІЗВОМеКМТІ М ОММЗІ ВАЕОТАМУ

УСАКОМ/ЕССЕМУМ ОСТІ УТ

ЕМОПЕ5ССОІГ УОРОСЗБІ ВІ ЗСААЗОЕТЕВ5УАМОМУВОА

РОКСІ ЕМ/УЗАІЗС5СС5ТУУАОЗУКОВЕТІЗВОМеКМТІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАУУУСАВООРМ/РРЕОУМСОСТІ УТУЗ5А5

ТКОРОМЕРІ АРЗЗКУТЗССОТААІ ОСІ УКОУЕРЕРУТУЗМ/М5

САЇ ТСУНТЕРАМІ 05501 У5І 55УУТУРУБУІ СТОТМІСМ

УМНКРОМТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕААССОРОМЕ

(2507) УНСНІ-Ес о/з ГЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУКЕММУУОС 323 |"западиною»-м. (489) МЕУНМАКТКРАВЕЕОУМТУ ВУ ЗМІ ТМІ НОСОМ МОКЕУК (важкий ланцюг 2) СКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОУСТІ РРУВОБЇТКМ

ОМ8І ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О50

С5ЕРІУЗКІ ТМОКЗВУООСМУЄЗС5УМНЕАІ НМНУТОКО

І 8ІЗРОСОСО5000050005СС0О5БМІ ТО5РСТІ І ОР

СЕВАТІ ЗСВАБО5УТУ АМ/ХООКРООАРАЦ МУЗА

АТСІРОВЕЗО9О5СТОЕТІ ТІЗВІ ЕРЕОРАУУУСООСІМІ РР

ТЕСОСТКУЕІК

САСАТССАСАТОАСССАСТСТОСТТОСАСССТОСТСТОСА

ТСТСТАССАСАСССТОТСАССАТСАСТТОССОТОССАСТ

САСАСТАТТАСТАССТОСТТОСССТОСТАТСАССАСААА

ССАСССАААСССССТААОСТОСТОАТСТАТСАТОССТСОС

АСТТТОСАААСТОСОСТСССАТСАССТТТСАССОССАСТ обу | 1105) МІ.Сі--легкий ланцюг | ССАТСССССАСАСААТТСАСТСТСАССАТСАССАССТТе (нуклеотидна послідовність) | САИССТаАТаАТТТТаСААСТТАТТАСТаССААСАСаСТТ

ААТТССТАТССТСАСАССТТТООССАССОСАССАААСТС

САСАТСААОССТАСОСТООСТОСАССАТСТОТСТТСАТС

ТТОССОССАТСТОАТОАССАСТТОАААТСТОСААСТОСС

ТСТСтТатОтТасстОсСтТОААТААСТТСТАТСССАСАСАС

СССААДАСТАСАСТОСААССТОСАТААСОСССТССААТС

ЗЕО м ПО УДО

МО: вОатТААСТОССАапАаАдатТатСАСАСАаСАСаАСАаСА

ПОСАСАССАССТАСАаССТСАССАаСАСССТОАСасСтТО

АВСАААДаСАпАСТАСОАСААДАСАСААдАаТИтСсТАСаТасста

СОААИТСАСССАТСАСЯСССТаластоасссаТСАСААА вАССТТсСААСАсСа,асосАсАатат

САСОатасаостаатаСсАа,астотааСасСсСпААатТаААСАА

Ассса,ааСсАсСАа,аСсатадлда,аататостТасСсадавасттосас свасСАССТТСАаСАасСтТАСОССАТТ СТ ОааТОСасСсСА сассостаазАСсАсааСсСсТадпААтТасатавасавасАТСА

ТОоСССАТСТТСОССАССОаССААСТАСасСсСсСАСАААТТОС

А7аавасСсАпАдатаАССАТСАССИаССОпАСААСАССАССАСС

АССОССТАСАТаСААСТОАаСсАасстТаса,аадасаАдасА

СсАССОЯССОСтТатАСТАСТатТаССАСААДаСАСССТИалдтТсСтТА савастАСТТСаАСТАСТОВСОаССАаСасСАССАССЯТОаАС сататстТАаСастАОСАССАДаСаасСсССАТСЯСТОТТоСС сстаасСсАСССТоСТоСААладаСАсСстТотТававасСАСАаС сессставастасстаайТСААаспАСТАСТТССССОААСС свтадссататосатавААСТСАаС,СаСсСсСтТаАССАссСа ссатасСАСАССТІОССОСОЯСтТатосСТтАСАСТОСТСАасАС

ТсТАСТоССТСсАааСсАасСсатастТаАссоТассстосСАасСА ессттаваСАСССАСАССТАСАТСТаСААСИаТадАТСАСА

АВСССАССААСАССАДастТацсАСААСАААаТТОАаСос

АААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТаСССАССатасссА аСАССТаААОСТаСсАсСа,ааацАССаТСАсТоТостеТо

СССССААААСССААСаАСАСССТСАТаАТСТОССОАСС сстТадасТсАСсАТаССОЯТОИСИСТОИСТапАС,СТаДасССАССА (1105) МНеОНІ-Ес з АЧАСССТОАДОааТСААаТтТТоСААСТООСтТАСсатасасцвасст дод | "Ввиступом»-УН (4899) асйАСатасАТААТаССААЧАСАдАдассасаапАааАОс (нуклеотидна послідовність! АШТАСААСАа,САСсатАассстатаатАаСатсСстТСАССс важкий ланцюг 1) тостТасСсАССАааАСТОаСТОААТаайСААааАСТАСАДа

ТтТасАдпатСсТсСААСААДАДОСССТООСаСассссСАТССАС

ААААССАТСТССАААасССАААласасСАасСССпАСААСС

АСсАСОаИтТатАСАСССТаССсСооСстасСсАаАаАтТОАастаАс

СсААСААССАССЯТатТоСсСстТатаататотастодда,аавастт

СстТАССССАСаСаАТАТСЯССОЯТОСАСТапаАаАаТсСААСа аССАаССтТОАаААСААСТАСААСАССАСССсСсоСста7атас таавАСсАдаСсаАССасСАасСТ СТ ССтТаТАСТОСАААСТОаА сосстТаспАСААЧАСаССЯСатТааСАаСАсСааСААСаТатитто да,астасдаСатТаАтТОСАСаАдааСССтТасСАСААССАСТАС

АСССАаАдАатоосталассталассссвас,вАа,ва7Сас сапАддаСапАаааАдсаАасалдттасавоса,вАаИатТоСО саассатазАатотадсатасдастастоаАААасСовОс сва,асАстаатасаласставосвасАаСсСсТаАаАСТаТтст тасассосСсАда,саастІсСАССТТсАасСАастАСассСАТа даставстосассда,аассоСставСААласваАСтТасаААТО саевтатосассСАТСАТССЯСТОТааСОаССАасСАССТАСТА сасСаАСсАХд,аСсатаддааваССасТТСАССАТСАОСССЯОС

АСААСАаСААСААСАСССТаТИтАССТаСАСАТОААСАаС стасасаСсСОАСпАСсАССассоТатАСТАСТАСИаССААС сеАтаатса,аасаОасСТТСААСТАСТаСавАСАа,асасАсс стастосдссататосА;ас

САСОатасаостаатаСсАа,астотааСасСсСпААатТаААСАА (1105) МНеОНІ-Ес із АСССсСОЯаСсССА,аСАаа,асСа,атадлсататстасСсадвасттосас 325 "западиною»-МІ. (489) свасСАССТТСАаСАасСтТАСОССАТТ СТ ОааТОСасСсСА (нуклеотидна послідовність) СОС азАСАсааоставААтТавАатасасаваСАТСА важкий ланцюг 2) ТОоСССАТСТТоСаСАССасССААСТАСИаСССАСАААТТОС

АдсдпваСАСАаТаАССАТСАССасССОАСААСАОСАССАСС

5ЕО

ІО Опис Послідовність

МО:

АССОССТАСАТОСААСТОАССАСССТОСОСАСССАСОА

САСССОССОТСТАСТАСТОТОССАСААССАСССТОАТСТА

СООСТАСТТССАСТАСТОООСССАССОСАССАСССТОАС

ССТСТСТАССОСТАССАССААССОСССАТСССТСТТОСС

ССТОССАСССТОСТОСААСАССАССТСТОСОСОСАСАСС

СОСССТОСОСТОССТОСтТСААССАСТАСТТССССОААСС

ССТОАСОСТОСТООТОСААСТСАСОСОСССТОАССАССО

СССТОСАСАССТТОССОСОСТОСТОСТАСАСТОСТСАССАС

ТСТАСТОССТСАССАСССТОСТОСАСССТОСССТОСАССА

ССТТОСОСАСССАСАССТАСАТСТОСААССТСААТСАСА

АССССАССААСАССААСОТОСАСААСАААСТТОАОССС

АААТСТТОТСАСААААСТСАСАСАТОСССАСССТОСССА

ССАССТОААССТОСАССОСОАСССТСАСТСТТОСТСТТС

СССССААААСССААОСАСАСССТСАТОАТСТОССОСАСС

ССТСАССТСАСАТОССТОСТОСТООАСОТСАСССАСОСА

АСАСССТОАОСТСААСТТСААСТОСТАСОТОСАСОССОТ

СОАССТОСАТААТОССААСАСАААСССОССОССАССАСС

АСТАСААСАССАСОТАСССТСТОСТСАОССТОСТСАССО

ТОСТОСАССАССАСТОССТОААТООСААССАСТАСААС

ТОСААССТСТОСААСАДАОСССТСОССОСССССАТСОАО

ААДАССАТСТССАААСССАДАСОССАССССССАСААСС

АСАССТОСТОСАСССТОСССССАТСССОССАТСАССТСАС

СААСААССАССТСАСССТСТОСТОСОСАСТСАААСССТТ

СТАТСССАСССАСАТСОССОТОСАСТООСАСАССААТО

СОСАСССССАСААСААСТАСААСАССАСОССТОСССТО

СТОСАСТОССАССОСТОСТТСТТОСТООТОАОСААССТС

АССОТООАСААСАССАСОТОССАССАССОСААСОТСТТ

СТСАТОСТОСОТСАТОСАТОАОССТСТОСАСААССАСТА

САСОСАСААСАССОСТСТОССТоТСТоСоостТосАССССО

СОСААОСССАСОАОСАССАТССОСССОСССАСОТТоСО

САСССОСАССАТСССАСАТСОТОСТОАСССАСТСТОССО

ССАСССТОТСТСТОАОСССТОСССАСАСАСССАССОСТОТ

ССТОСАСАСССТОССАСТОССТОАССТОСТОСТАССТСС

ССТОСТАТСАССАСААССССОСССАСОССССТССОСТОС

ТОАТСААССТОСОСАСТСОСАСАСССАСССОСАТСССТО

АСССОТТСТОСОССТСТООаСТоСОСсСАСССАСТТСАССС

ТОАССАТСТОССОССТООААССССАССАСТТСОСССТСТ

АСТАСТОССАССАССОСАТСАТОСТОССССССАССТТТО

СССАСОССАССААОСТОСАААТСААО

ПІОМТОРУТІ ЗАЗМСОВМУТІТСВАЗОЗІЗЗМ АМУУООКРО

КАРКИ УОАЗЗІ ЕЗСУРОВЕЗСЗС9СТЕЕТІ ТЗІ ОРООБА й ТУУСООІ М5УРОТЕСОСТКУЕІКАТУААРЗУЕІЕРРЗОЕОІ. 269 | (1105) МІ-СіІ -легкий ланцюг | КеЗТАЗУУСІИ ММЕУРВЕАКУСМУКУОМАІ О5СМЗОЕМТ

ЕОО5КОСТУЗІ 9511 ТІ ЗКАОУЕКНКУУАСЕМУТНОСІ 59Р

МТКЗЕМАСЕС

ОМОГМО5САЕУККРОЗЗУКУЗСКАЗОСТЕЗОУАІВММВОА

РСОСІ ЕМ/МОСІІРІЕЄСТАМУАОКЕОСВУТІТАОКОТОТАУМ

ЕІ 581 ВЗЕОТАУУУСАВОТИУСУЕОУМ СОСТТУТУЗЗАЄТ

КОРОМЕРІ АРЗОЗКУТЗОСТААІ ОСІ УКОУЕРЕРУТУЗМИ МЗС

(105) о УНСНнісс з АСТ8ОМУНТЕРАМСО85О1У8І85УУТУРВОБІ СТОТУІСМУ зов виступом МНС (489) УНКРОМТКУОККУЕРКОСОКТНТСРРОРАРЕААСОРБУІ (важкий панцюг 1) РРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕМКЕМУУУУОСУЕ

МНМАКТКРВЕЕОУМТУВУМ ЗМІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСК

МЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРНЕРОМУТІ РРСВОЕЇ ТКМОМ

ЗІМ/СІ УКСОЕУРЗОТАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМ О5005

ЕРІ УЗКІ ТУОКУВМ/ООСМУЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТОКВІ І.

ЗРОСОСО5СОС0500С0500СО5ЕМО ЕЗОСОІ ОРОС

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО:

ЗІ ВІ БСААЗОЕТЕ55УАМОМ УВОАРОКИЇ ЕМ/М5АПОБОА5

ТУМАОБУКОаАВЕТІЗВОМЗКМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМУМСА кам гРасаєМУМУсОстІ МТУ

ОМОЇ МОБАЕУККРИаЗБЗУКУВСКАБИаСТЕ5УАІВМУМВОА

РОС ЕУМОСТРІГЄСТАМУАДОКЕОСВАМТІТАОКОТЗТАУМ

ЕІ 55І АВБЕОТАМУУСАВ5ТІ ІМ МЕОУМУ ОСТ МТУ5БАБТ

КОаРБМУЕРІ АРОЗ5КОТЗИаСТААІ СІ МКОУЕРЕРУТУБМУ МО

А ТБОУНТЕРАМІ О5501І У5І 55ММТУРБББІ СТОТМІСММ

МНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТОРРОРАРЕАДОСРБМУРГІ Е

(1105) МНеНІ-Ес із РРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУУМОУМЗНЕОРЕМКЕМИУ УМВОМЕ 327 |"западиною»-МІ. (489) МНМАКТКРАЕЄОУМОТУВМУМУМІ ТМ НОБУМІ МСОКЕУКОК (важкий ланцюг 2) М5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМСТІ РРОВОЕЄТКМОМ

ЗІ ЗСАУКаЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБВОБЕ

ЕГУЗКІ ТМОК5АМОСа ММ Е5С5УММНЕАЇІ НМНУТОКБІ 5І 5

Расасазасса5асаавБассавЕІМІ ТОЗРОТІ 5І5РОЕВА

ТІ ЗСВАБОЗМТ ЗМ АММООКРОСОАРА ІММаЗАНАТИЇР

ОАЕБабБазатТОвЕТтІ ТІЗВГЕРЕОРАМУМСООСІМІ РРТРаОС

ТКМЕїІК

САСАТССАСАТОАСССАаТСТоСТТССАСССТатстТасА тотатАаааАвАССаТтаТСАССАТСАСТТаССОЯСтТассАатТ

СсАаАдатТАТТАСТАОаСТОСТТааССТааЙТтАТСАССАСАДА

ССАПИаСААДасСсСССтТААаСТоСТОаАТСТАТаАТОаССТОС аттавАдАдатТасасТоССАТСАСОСтттсАааСвасАат ваАТоСапаАСАСААТТСАСТСТСАССАТСДаСАаСтТТОа

САаССТОаАТОАТТТТОаСААСТТАТТАСТаССААСАСИТТ (9811) МІ. СІ -легкий ланцюг ААТТСТТАТССЯаСАСАСОТТТОСССАССаСАССААДАСТО 271 (нуклеотидна послідовність) САСАТСАДОаСсаТтАСастаасСтТасСАССАТСТОаТСТТСАТС т оССассСАТСТаАТОАОаСАСТТаАААТСТОСаААСТасс тотатттатасстТастаААТААСТТСТАТСССАСАСАС

СССААдДаТАСАатТапАДастааАТтТААСаТссстосСААТС ваатТААСТоССАапАаАататСАСАвАаСАСпаАСАасА

АВОАСАЧСАССТАСАаССтТодасАасСАСссСстТаАсаста

АВСАААДаСАпАСТАСОАСААДАСАСААдАаТИтСсТАСаТасста

СОАдатсАСССАТСАСОВИаССсТаАдастоаСССатсСАСАДА вАаСТТСААСсАдасаспАсАатТат

СсА7СатасСсААТТЯОСТОСАСТОТОПСасСстТаАдааТОадДАаАА ссстасатостоастадда,атоТоСстТаСААдасвостосас

АВОСАСАТтТоАаСсАастАСастТАТАДаСТОСатасСаАСА сасссСстТапАСААлсасостадатТавАтавадасаАТСА

ТОССТАТСТТТаСТАСАССАДАСТАСОаСАСАСААИ То давасСсАаааТСсАССАТТАСТаСАСАСААДАТССАСОДОС

АСАСССТАСАТОСАЛаСстТОдДасСсАаСсСтТаАвАТСТаАССА

СсАсСсСОаСсСсататАТТАСТатТасСсаАаАТСТТСТОатастТтТА сосапатТАСТТСОАСТАСТОСИааССААСапАССАССаИТт (9811) МНеОНІ-Ес з ВАССЯТоТоСтТсАастАаСАССААд,савасссСАтоватстт 328 "виступом»-УН (4899 СССССтТОаСАСССТОСТоСААСАаасСАССТОТОСИаСасСАС (нуклеотидна послідовність) АССО)СасоєтавастасстааТСААапАСТАСТТоСССаА важкий ланцюг 1) Адос,аатаассататса,атавААстоАа,сарассстаАССАСа ссвасатТасСАСАССТТОСсСсОвИаСсТаТатссСстТАСАаТОоСТСАСа

АСТоТАСТОССТСсАааСсАсСсатастадсса,атассстосАО сАасттаваСАСССАСАССТАСАТСТаСААСаИтаААТСА

СААДИСССАССААСАССАДОа Тай АСААСААдатТадас

ССАААТСТТаТтТаАСАДААСТСАСАСАТаАСССАСсСОСТасс

СсАасСсАсСстТАдХа,астасд,асасаАсСатсАатстсстотТ

ТОСССССААДААСССАДаСАСАСССТСАТОаАТСТОССОСА сссСстТаАааТсАСсАТтасСатастастаАСаТОАдасСсСАСаИ

АдадссстТаАдаСаТСсААаТТСААСстТастасатасвАсасс кВ ПО о

ІО Опис Послідовність

МО: стасвАдааТасСАТААТасСссСААаАСАдАд,асСса,аСасвсадасА впСАСТАСААСАааСсАСсатАасСсататаатАасаТссСстТСАС сатоСстТаСАССАаааАСТааСТаААтТааСААсадаТАСА

АСТаСААДааТСТоСААСАдАдасостоИаавсассСсССАТССЯ

АСАДААССАТСТССАААДаССААдда,аавасАассссаАаАА

СсСАСАСОаТатАСАСсСстассСССсСстасСАаАаАТадаста

АССААСАдАсСсАсататсостатаататстаатСдА;асчас

Пп стТАССССАаСОаАТтТАТСЯСССЯТОСАсСТаасасАсАсасСААС вдассАасстТаАаААСААСТАСААСАССАССССССсСстата стааАСсАаСаАдСсааСсАаТст ст сосСтТатАСТОСААДАСТа

АосатапАСсАдаАХда,аСссастасоАааСАа,савСААСаТтатт сластасдасатаАТасСАСадааСССТасСАСААССАСТА

САСССАСААХдИатосстадассталасоссава,аСсааАаасСа асасддаСасаасАассасАа,аавАаАттасасаСавАаатТос садасосатасАтотаАасатасАасСсТастСспАдАаСас сасвАдсаАастасастасласстааСсавасАаассСстТАвАСТатТ стас,асСсасСсАдаСсаасСсТСсАССтТСАасСАасСсТАСассА тадастасатСсасСАд,аосоСтааСАдасааАСтТасАА тасастатоСсассСАТСАТССОССЯСТОТвДОаСасСсСАасСАССТАС тТАсСаСсСОаАдсАдаСсатадлавасСааТСсАССАТСАаССС

СОАСААСАИСААСААСАСССТаИатАССТасСАСАТОААСА ссстасссасСпАдааАСАсСасСатТатАСТАСТаСасСсСА дасосАтастссаСаасТТСААСстТАСсТасааАСсАсСаас

АСсСсССсСТасатТСАСсСсататосСАсас

СсАватТасСААТТОСТОСАСТоТОСваСсТаАдааЙтТаААСАА асетасатстсаатадАдсатстостасСсАл,асстосаа

АВИаСАСАТТСАаСАасСстТАСОаСТАТААХИСТОаСатТасцАСА сасоостТапАСААлсаастосвсАатавАатавАвацАТСА

ТОССТАТСТТТОСТАСАССАААСТАСИаСАСАСААИтТТос даваСсАапаТСсСАССАТТАСТаСАСАСАААТССАСИдаС

АСАЧССТАСАТОСАаИаСТаЛлаСАасстаАаАТСТаАцаА

СсАССОЯСсСсатТатАТАСТатТасСаАаАтТстсТаатТасттТА ссс,соаттТАСТТСОАСсСтТАСстТасааССААдсапАССАССИТ сАссатстоСстсАасСстТАаСАССАдааСаСССАТССВИТСТТ ссссстасСАСССТоСТоСАд,адасАассттасвсааасСАс дассассстасастасстааТСАДаспАСТАСТТССССаА доса,аатадссатататаайААСсТАааСаСССТаАсСсСАс сааСсаТаСАСАССТОССсвастТатсСстТАСАатосСстТСАсас (9811) УНеНІ-Ес в АСТСТАСТОССТоАОСАОСОТОатОадоСОеТОеСосСтосСАС "западиною»-мІ. (489) СсАасСсТТапаСАСССАпАССТАСАТСТаСААСИатТаААТСА 329 (нуклеотидна послідовність САДИСССАЧСААСАССАД,СатапйАСААпАААаТТалас важкий ланцюг 2) "ССАААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТасССсСАССсатасс

СсАасСсАСсСтТАдастаса,асасваАсСаТтСАаТтстостостТ

ТоСССССАААДАСССААСаАСАСССТСАТаАТСТОССОасАА состава ТсАСсАТаСОаЯТОИТастасАсаИатадасСсСАСа

ААдаАдсостТадааТСсААатТТСсААСстТаатАсатацвАсавас стасвАдааТасСАТААТасСссСААаАСАдАд,асСса,аСасвсадасА впсСАСТАСААСАааСсАСсатАасСсататаатАасаТСсСтТСАС сатоСстТаСАССАаааАСТааСТаААтТааСААсадаТАСА

АСТаСААДааТСТоСААСАдАдасостоИаавсассСсССАТССЯ

АСАДААССАТСТССАААДаССААдда,аавасАассссаАаАА

СсСАСсСАсСатТатасАассстасссСсСАтооСсаааАтТаластТа

АССААСААССАСИЯтоАдасстотсаИаТтаСаСАаТСААдОас

СТСТАТСССАаСОАсСАТСОЯССОСТОСсАСТасаАаАасСАА тасвасСАаССапАСААСААСТАСААаАССАСаССсТосса таставАстоСссАсаастостстоСсТатаАаСАДОаС

ТсАССО.СТаспАСААдсСАасСАасаасТасоАаСАсаасааААСИатТо

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

ПСТСсАТОСТоСОатТаАТаСАТОАЗСастТоТасАСААССАС тТАСАСОЯСАСААХаСсСАХаСсСсТотоСсСстатстосасатавАасо сабапАдаСсапАасаласАааадтссасааСсавАсаТТо саавдсасаадавАТоСаАсАтатастТаАСССАаТСсТос саасСАсссТаттотадласоста,аСаАд,аАадаССАСССтТ стостасдосХассТССАатоСатТаАСсСТосСТосСтТАССТ са,асстастТАТСАаСсАсАддасоСса,вассАава7асоостваст аСстТаАТСААаСООЯТаСсСаСАаатоасАдаАасССАССаасСАТОС сталоссапстосасасттааостоСаасСАССаАСТТСА

СоСстТОАССАТСТОССаСсТапААсССсАааАСсттасса татАСстТАстТасСсдасСАааааСАТСАТаСТасСссСсСсССАССТ таесоСАдаааСАССААДасТасАААТСАДОИ

РІОМТО5РБ5ОТІ БАБМОаОЮВМТІТСВАБОБІББУ/Л АММООКРОа

КАРК ПМОАБОІ ЕЗИМРОВЕЗИаБабБатеЕНТІ ТІЗБІ ОРОЮСБА - ТУУСООУМ5УРОТЕООСТКМЕІКАТМААРЗМРІЕРРБОЕОЇ. 213 (9811) Мі-Сі легкий ланцюг | К5ЗТАЗУУСИ ММЕУРВЕАКУОМ/КУОМАІ О5СМ5ОЕУТ

ЕООБКО5ТУ5І 5511 ТІ 5КАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55Р

МТК5ЕМНОСЕС

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕБЗМАІБММУНОА

РОС ЕМ МастПпРІБЄИТАММАОКРОСАМТІТАОКОТЗТАУМ

ЕІ 55І ВБЕОТАМУУСАВНЗБЗИаАУ РОМЕО УМ аОСТТМТУ55А

ЗТКОаРБМЕРІ АРОЗБКОТЗОСТААГ СС МКОМЕРЕРМТУБУМУМ

ЗОАЇ Т5аМНТЕРАМІ 0550 5І 55 УРБББІИТОТМІСМ

ММЯІНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСРАРЕАДАДССРОМЕ

(9811) МНеОНІ-Ес зі ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУМЗ5НЕОРЕМКЕМУ УВС 330 | "виступом»-МН (489 МЕМНМАКТКРАЕЕОУМЗТ УАМУБМІ ТМ НОБУУІ МСОКЕМК (важкий ланцюг 1) СКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМУТІ РРСВОЕЇТКМ

ОМБІЛМСІ МКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 050

СЕР МК ТМОКЗАМОСОММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК

БРОСОЮЗСОСЗвВСОСОСЗССасВасасеЕМО ЇЇ ЕБОСИЇ МОР сСО5І ВІ ЗСААБаЕТЕ55УАМОУМУВОАРИаКИ ГГ ЕМ М5АПИа

САБТУМАрОУКаОаИавВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМУ

УСАКСОМ ЄСОСЕММУУ СпОСТІ МТУ

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

РОС ЕМ МастПпРІБЄИТАММАОКРОСАМТІТАОКОТЗТАУМ

ЕІ 55І ВБЕОТАМУУСАВНЗБЗИаАУ РОМЕО УМ аОСТТМТУ55А

ЗТКОаРБМЕРІ АРОБКОТЗОаСТААГ ас МКОМЕРЕРМТУБУМУМ

ЗОАЇ Т5аМНТЕРАМІ 0550 5І 55 УРБББІИТОТМІСМ

ММЯІНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСРАРЕАДАДССРОМЕ

(9811) МНеОНІ1-Ес із ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОУМЗНЕОРЕУМКЕММУ У УС 331 |"западиною»-МІ (489) МЕМНМАКТКРАЕЄЕОУМОТМАУМБМІ ТМ НОЮ МЕОКЕМХК (важкий ланцюг 2) СКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМСТІ РРОНОЄБЇТКМ

ОМ5І ЗСАМКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 050

СЕР МК ТМОКЗАМОСОаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК 5 БРОСССОСЗваИааБОСИВаВасасеБ МІ ТОЗРОТІ БІ БР

СЕВАТІ ЗХСНАБОБМТ55МІ АМУООКРООСОАРА ІМС

АТОаІРОВЕЗаБабатовЕт тАГЕРЕОБГАМУМСООСІМІ РРТ гаОатТКкМЕїКк

Послідовності пар основ і амінокислотні послідовності анти-4-188, анти-РАР-конструкцій в форматі 2441 з МІ а-ЕАР, злитої з ланцюгом з "виступом", і МН, злитої з ланцюгом із "западиною", представлені відповідно в таблиці 71. 5

Таблиця 71

Послідовності КкДНК і амінокислотні послідовності зрілих біспецифічних анти-4-188, анти-ЕАР людських ІДС РЗ29аї АГА в форматі 2-41 (Конструкції з МН а-ЕАР, злитої з ланцюгом із "западиною", і МІ, злитої з ланцюгом з "виступом", позначені нижче як "западина»-МН) п І

ІО Опис Послідовність

МО: (1283) МІ Сі -легкий ово | Ланцюг див. таблицю 70 (нуклеотидна послідовність)

СсАасатасСААдта7аатасаатстааавастАааТаААСАА асестасатостсаатадАдсатстостасСсАдл,асстосоаа

АпваСАСАТТсАдаСсАастТАСастТАТАДОСТОСОаТасСсаАСА сасосостТапАСААлсаастааАаатасвАатасаАаацАТСА

ТОоССТАТСТТ ТИСТАСАИаСАДАСТАСОСАСАСААИтТТос дасаСАдаспаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадас

АСсСАаССТАСАТОСАССТаАдаСАассСсТаАаАТСТадацА сАссассатТатТАТАСТатТасСсаАаАТСТалдАТТССИТТТ

СтТАсастаАСТТСОаАСТтТАСсТасСаасСсСсААдаааАССАССаТт сАосатстсадатТастАаСАССААдаЧвасСсСАТССаТтстТТ ссссстасСАСССТоСТоСАд,адасАассттасвсааасСАс дассассстасастасстааТСАДаспАСТАСТТССССаА доса,аатадссатататаайААСсТАааСаСССТаАсСсСАс сааСсаТаСАСАССТОССсвастТатсСстТАСАатосСстТСАсас

АСТСТАСТоССТСсАсаССсАаа,аСсатаастаАсСатассстосСАа сАдасттааСАСССАЧАССТАСАТСТаСААСаТаААТСА

СААДИСССАССААСАССАдастТасАСААСАААаттаТадас

ССАДАТСТТатаАСАДААСТСАСАСАТасссСАССсатТасс

СсАасСсАСсСтТАдастаса,асасваАсСаТтСАаТтстостостТ

ТоСССССАААДАСССААСаАСАСССТСАТаАТСТОССОасАА (1283) УНеНІ-Ес з ССССтТОАаИтсАСАТОСОТОСТОоСтТасАСатадосСсСАСО "виступом»-мі. (дво) МАОАСССсТалевтоААОТтТоААстостАсоеТасАсоос 332 (нуклеотидна стасвАдааТасСАТААТасСссСААаАСАдАд,асСса,аСасвсадасА послідовність НС 1) впсСАСТАСААСАааСсАСсатАасСсататаатАасаТСсСтТСАС сатоСстТаСАССАаааАСТааСТаААтТааСААсадаТАСА

АСТаСААДааТСТоСААСАдАдасостоИаавсассСсССАТССЯ

АСААДААССАТСТСОСАДАасССАдд,асасСсАассССаАСАА

СсСАСАСОаТатАСАСсСстассСССсСстасСАаАаАТадаста

АССААСАдАсСсАсататсостатаататстаатСдА;асчас

Пп стТАССССАаСОаАТтТАТСЯСССЯТОСАсСТаасасАсАсасСААС вассАассСстТаАаААСААСТАСААаАССАСССоСоСстата стааАСсАаСаАдСсааСсАаТст ст сосСтТатАСТОСААДАСТа

АосатапАСсАдаАХда,аСссастасоАааСАа,савСААСаТтатт сластасдасатаАТасСАСадааСССТасСАСААССАСТА

САСССАСААХИатосСстадасстадасоссваСсаасАа!ссСс асасддаСасаасАассасАа,аавАаАттасасаСавАаатТос садасосатавАтТоТАвАтатастТаАСССАатсТосс сасАассста,атстоталдасоста,аАаАвАасССАСССТтТа тостасладасстсСсАатоСатаАССТОСТоСтТАССТо асстааТАТСАаСАсАдАдассСсвассАаа,ааооостаастТа сСтТОАТСААСсатасасАа,атос,аадаАасСсСАССааСАТОСССТ слоссесапстссасттаастСааСАССОАСТТСАСС

СстТОАсССсСАТСТОоССОЯООСтТапААсСсСадсалдстсассата

ТАСТАСТОССАССАапаСАТСАТаСТасСсСССССАССТТТ сасСбАдасасСАССААаатТасьААТСААС

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

СсАасатасСААдта7аатасаатстааавастАааТаААСАА асестасатостсаатадАдсатстостасСсАдл,асстосоаа

АпаСАСАТТСсАаСсАастТАСастТАТАДОСТОСОаТасСсаАСА сасосостТапАСААлсаастааАаатасвАатасаАаацАТСА

ТОоССТАТСТТ ТИСТАСАИаСАДАСТАСОСАСАСААИтТТос дасаСАдаспаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадас

АСсАаССсТАСАТОСАИаСсСТадаСАасСсТаАаАТСТадацА сАссассатТатТАТАСТатТасСсаАаАТСТалдАТТССИТТТ

СтТАсастаАСТТСОАСТАСсТасаасСАдаааАсСАСсСсат сАосатстсадатТастАаСАССААдаЧвасСсСАТССаТтстТТ ссссстасСАСССТоСТоСАд,адасАассттасвсааасСАс дассассстасастасстааТСАДаспАСТАСТТССССаА доса,7атадссататсатааААстАаааваоССстТаАсСсСАС сааСсаТаСАСАССТОССсвастТатсСстТАСАатосСстТСАсас

АСТСТАСТоССТСсАсаССсАаа,аСсатаастаАсСатассстосСАа сАдасттаваСАСССАЧАССТАСАТСТаСААСаТаААТСА

СААДИСССАССААСАССАдастТасАСААСАААаттаТадас

ССАДАТСТТатаАСАДААСТСАСАСАТасссСАССсатТасс

СсАасСсАСсСтТАдастаса,асасваАсСаТтСАаТтстостостТ

ТоСССССАААДАСССААСаАСАСССТСАТаАТСТОССОасАА состава ТсАСсАТаСОаЯТОИТастасАсаИатадасСсСАСа (1283) МНеОНІ-Ес із ААЯАСССТаАдастТСААаТТСААСстаатаСсатааАсасас 333 "западиною»-УН (4899 сСТасАСОИТасСАТААТаССААпАСАдАа,асСсасас!сАссаА (нуклеотидна есСАаТАСААСАаасСАСсатАссататастоа,асатостСАС послідовність НОСг) сатоСстТаСАССАаааАСТааСТаААтТааСААсадаТАСА

АСТаСААДааТСТоСААСААдАдасосстоааСасссСсСАТССЯ

АСААДААССАТСТСОСАДАасССАдд,асасСсАассССаАСАА

СсСАСсСАсСатТатасАассстассссССАтосСсаааАталаста

АССААСААССАСИЯтоАдасстотсаИаТтаСаСАаТСААдОас

СТСТАТСССАаСОАсСАТСОЯССОСТОСсАСТасаАаАасСАА тасвасСАаССапАСААСААСТАСААаАССАСаССсТосса таставАстоСссАсаастостстоСсТатаАаСАДОаС

ТсАССОСТапАСАд,аАХасСсааастасоАаСсАасаасваААсСИаТтТо

ПСТСсАТОСТоСОатТаАТаСАТОАЗСастТоТасАСААССАС тТАСАСОЯаСАСААХаСсСАХаСсСстТотосСстатстосасатавАасо сабапАдаСсапАасаласАааадтссасааСсавАсаТТо сасвдсассааАавАтоСадаатасАасСсТасСстоапААдасСа асасадасАастасастасаласстаасаасСдасстТаАаАсСтТа тстпаса,ассасСсдаСаасСсТСсАСсСстСАасСАасСстТАСаСс

АТОДОСТОСИатоСасСАасассостааСАдасаАсСтТаасА

АТасатТатоСасСссСАТСАТССССТОТОССасССАасСАССТА

СстТАсасСсОАдСсАХа,аСатадАдавассоасТСАССАТСАСаССО ваАСААСАаСААСААСАСССТатАССтТасСАСаАТадАСА ссестасссасСпАдапАСАсСасСататАСТАСТаСаТассА дасосАтастссаСаасТТСААСстТАСсТасааАСсАсСаас

АСсСсССсСТасатТСАСсСсататссСАсас ланцюг

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

РОС ЕМ МастПпРІБЄИТАММАОКРОСАМТІТАОКОТЗТАУМ

ЕГ 55І АБЕОТАМУУСАВЗЕЕРВЕМАВСЕР УМ ОСТ МТУ5БА (1283) МНеОНІ1-Ес зі ЗТКОРОМЕРІ АРОБКОТ5ЗОаСТАА СІ МКОУЕРЕРУТУБУУМ 334 | "виступом»-МмІ. (489) ЗОАЇ Т5аМНТЕРАМІ 0550 5І 55 УРБББІИТОТМІСМ (важкий ланцюг 1) ММНКРОМТКМОККУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСОРБМЕ

ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМУТСМУМОУМЗНЕОРЕУМКЕМУ УМ РСС

МЕМНМАКТКРАЕЕОСУМОТУВММБМІ ТМ НОБУУІ МОКЕМК

СКУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРСОВОЄСТКМ

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

ОМ5І МС УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 050

СЕР МК ТМОКЗАМОСОММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК

БРОСССОСЗваИааБОСИВаВасасеБ МІ ТОЗРОТІ БІ БР

СЕВАТІ ЗХСНАБОБМТ55МІ АМУООКРООСОАРА ІМС

АТОаІРОВЕЗОаБаватТОвТтІ ТІЗВІ ЕРЕОБЕАМУУСООСІМІ РР

ТтТРсОСТКМЕїК

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБИСТЕЗЗМАІБММУНОА

РОС ЕМ МастПпРІБЄИТАММАОКРОСАМТІТАОКОТЗТАУМ

ЕГ55І ВБЕОТАМУМСАНЗЕЕВЕМАВЕО УМ ПОСТ УТУ5А

ЗТКОаРОМЕРІ АРОБКОТЗИаатААЇ аСІ МКОМЕРЕРУТУБУУМ

ЗОАЇ Т5аМНТЕРАМІ 0550 5І 55 УРБББІИТОТМІСМ

УММНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕАДСОРБМЕ

(1283) МНеОНІ-Ес із ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУММОМ5НЕОРЕМКЕММУ МУОС 335 | "западиною»-МН (489) МЕМНМАКТКРАЕЄОУМОТМАММУ5МІ ТМ НОСОМ МЕОКЕУК (важкий ланцюг 2) СКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМСТІ РРОНОЄБЇТКМ

ОМ5І БСАУКОаєМРБОІАМЕМЕЗМСИОРЕММУКТТРРМІ 050

СЕР МК ТМОКЗАМОСОаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК 5 БРОССЮСОЯЗвОСССОСОасвавасасеЕМО І ЕС МОР сабБіІВІЗ5СААБаєТЕ55УАМОМУМУВОАРИаКаїі ЕММА

САБТУМАрОУКаОавВЕТІЗАОМОКМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМУ

УСАКОМ СС ЕМУМ СОСТІ МТУ

(2507) МІ СІ -легкий 263 ан Тидна див. таблицю 70 послідовність) сдсатТасСсААтатпасвАдсаттасасаАаасттасТАСАС сставссоатосСстАааАсттстатасАдассСстоСацА

ТСсАССТТТАаСАаТтТАТаСсССсАТаДОаСсСТОС,атоСассАа аСсТоСАсасвАдАасссастаадатасваТСсТСАасСтТАТТАСТ сатлатастаайТАаСАСАТАСТАСОаСАпАСТОоСатадАс вас САССАТСТОССАСАСАСААТТССААСААСАСИ

СстТатТАТСТаСАСАТОААСАааСсСстТадалассвАасаАСАСс сасСатТАТАТТАСТОТаСОСОСтТОАСса,аАсссатаасСасс атадстТАста,вааССАдапААСССсТааТСАССатТсТо слдатТасСстТАаСАССАдасааССсСАтоаатстоооостаас

АСССТоСТоСААдсАХасСАссттаТасасаасСАСАасСаасСосстТ сасстасстаайТСААааАСТАСТТССССОААСсСсаваТатаАс сатататТаспААстТсАсаса,асостадлссХасааСатТасА (2507) УНСНІ-Ес З САССТІоССОвбасСтТатссСТтТАСАаТСОСТСАааАСТСТАСТОС "виступом»-мІ. (489) стсАда,асда,асатаатаадссатассСстСАаСАастасвиас 336 | (нуклеотидна АСССАСАССТАСАТСТаСААСОТОААТСАСАДасссАас послідовність важкий ААСАССААДИааТаспйсАСААсСАААаТтТаласСсССАААТСТТа ланцюг 1) ' ТОАСАДААСТСАСАСАТассСсАсСсатассСсСАасСАССТаА дастасда,асаааАССаТтТСсАСТСТ ОСТ СоСССССААА

АСССААДИСАСАСССТСАТаАтТотТОоСсСсавАССССсТаАОатТ

СсАСсАТаСОоОТвИСТаататасАаСатадасССАСПААЧАССсСтТа

АсатСсААдаТСсААстТаатасатасАссасСсастасАаиата

САТААТаССААДСАСААддасСсасацвсадапАасСАаТтТАСАА

СсАдасАса,атАссататастАасСсаТССсТСАССатТосСстТасСА

СсСсАсаАСстТаасСсТаААтТааСААапАаТАСААаТасАдаа

ТСТоСААСААддасостсИаавсассссСАТСОСАСААААССА

ТСТоСАДДаССААддасасАасССССаПАаААССАСАсИаТта

ТАСАСССТОССССССтТаСАСАСАТаДасСтТаАССААСААС сластатосостатаататтаспстАдаваст СТАС дасаАТтТАТСОЯССОЯтТОсСАХ,аСтТасааАсАаСААСаасССАсаСс

ТОАСААСААСТАСААСАССАсСоСсоСсостаТатастацвАсСАс

СОАСсааСАастсТоСсТатАСТОСАААСТалХссатасА

ЗЕ

І І З

МО:

СсАдадассаатааСАаСАЧаваСААСсататСАастасА аДСатОаАТаСАСаАдаасССсСтТасСАСААССАСТАСАСССАС

ААДАСОТОССТОАХО,аСсССТаАЛа,асосс,васасалвасавасааАдАда сваадсадавАдсаАтотаса,асвсасасьаапсоСса,авАаасСа ставАТСтТаАдаАтТатастТаАСССАатстсСааЙсСАССс татототалассстасСсОАпАдаАдаССАСССтТаТтссСстТасА сласстоссдатосатаАСсСТСсТосСтТАССТСаСсСстТа,тТ

АТсАаСсСАаАдАХ,асоса,аассАд,аассостаастТастаАТСА дсатавасдста,авАаАдаСсСАССсааСАТСССТаАССсОва тестосвастотаастСааСАССОАСТТСАСССТаАСС

АТСТОССОЯОСОИаСТОаОААсСсСалапвАСсТтсассСатаТАСТАС тассдасдаваСАТСАТаСТаССССССАССТІ ТаАСССАС

СаСАССААСИаТОаСАААТСААДИ свдаатТасААТа,атасвАдсатстасасвадаасттааТАСАаЙ сставасаатосСстТаАдаАсттста|атасСсАасстосСааА

ТПСАССТТТАаСАСаТТАТаССАТОДОСТОСИаИТССасСсСАС астСАаапААл,асвастааАдатаватСсТСсАасСтТАТТАСТ сватТдатТатаатТАаСАСАТАСТАСИаСАаАСТоСатаААа васспатТТСсАССАТСТОСАСАСАСААТТССААСААСАСИа

СТатТАТСТОаСАСАТОААСАИаССтТалаАдасСсаАасАСАС авасСсатТАТАТТАСТОТаСОССЯтТОАСсаВАссСсата,всСсасс аттсаАСТАСТЯапасССААДапААСССсТааЙТсСАССаТтстТо авАатастТАаСАССААДсааСссССАтсва7атстссосстаас

АСССТоСТоСААдсСАХасСАсстТтТачвавасСсАсАасСаасСсстТ саастасстТаТСсААааАСТАСТТССССаААСсСсаатаАс сатататТапААСстТсАасасасссталссАХасавасСатасА

СсАССТІСССОастТатссСтТАСАаТСОСТСАааАСТСТАСТОС стсАда,асла,асатаатадссатасссСстСАасСсАаастацвас

АСССАСАССТАСАТСТОаСААСОаТаААТСАСААДаССсСАас

ААСАССААДИС,СТапйАСААСАААаИТтТаАасссСАААТСТТа

ТОАСАДААСТСАСАСАТасСссСсСАССаТатасСссСсАасСАССТОаА да,астасда,ааваааАССатсСАаТтсСТ ССС ССССССААА (2507) УНСНІ-Ес із АСССААДОСАСАСССТСАТОАТСТОССОСАССССТОАОСТ "западиною»-УН (489) САСАТОСОТОВТОСТОСАСОТОАОССАСОААВАСССТО 337 | (нуклеотидна АватСсААатТСсААСстТаатаса,атасвАс,васатаавдаата послідовність важкий САТААТОССААСАСАААСССОСОасАасАесСАСТАСАА ланцюг 2) ' СсАдасАасатАосататавтАасатссСсТсАССатсстТасА

В СсСсАСаАСсТаасСТаААтТааСААапАаТАСАА,СТаСАдОса

ТСТоСААСАААДаССсСстСИаИТавсасссСсССАТСОАСААААССА

ТСТоСАААДОССААд,ааасСАаССССаАаААССАСАааТта тТасяаосССстТассссССАТСССИВаСАТаАаСТаАССААСААС сАдастсдасстстатасСсасСсАаТСАААаастТстТАТССС даСсаАСсАТСЯССОЯТОааВАа,сСтТасаАаАдаСААтТадасАасс ваАСпААСААСТАСААаАСссАсасстоссатастааАсСТо сАсаастостстсСстатаАаСААастТСАССатааА

СсААДсСАДаСсАХдасатааСсАаСсАааапААСаТтсТСсТСАТОаСтТо

СсатаАТаСАТаАаасСТСТасСАСААССАСТАСАСасСАСаАА сласстотосстатотоса,асата,ал,ава,асвасваддасСаа

Ад7ааХдапАда,аалтосавасавасачвА;аапосавАаа,аСааАа вАТССОАаСОТтасСсАХаастастоаААдАл,аСсавасСсавАааАсСтТа стасласстаасаасСсХассталаастатсттасассасс да,асвастТсСАССТТСАаСсАастТАСассСАтаХастацато сасслдса,ассосстааСсААдаааАСстТаваААтТавататосас

САТСАТССССТСОТОИаСасССАаТсСАССТАСТАСаССОАСАа сатаддавасСсайТТСсАССАТСАаССайСпСАСААСАасСА

АСААСАСССТатАССТаСАСАТаАдАСЬСССТОСЯСваИсСс авАдапАСсАссасСсататАСТАСТасСассСААд,аавАТасТТс

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО: орд пане ататосСАас (2507) МІ Сі -легкий

ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИаєТтЕ55УАМОММУНОА

РОКОаГЕМУБАІЗОБОСБТУМАрБУКОаВЕТІЗАОМОКМТІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАУУУСАВКООРМ РРЕО УМ СОСТІ МТМ55АБ

ТКОаРБМЕРІ АРОЗ5КОТЗОСТААІ СІ МУКОМЕРЕРМТУБМУ МО

САГТ5ОаМНТЕРАМІ О550І М5І 55 УРБББІИТОТМІСМ

ММНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕААСОРБОМЕ

(2507) МНеОНІ1-Ес зі ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОМЗНЕОРЕМКЕМУ УП 338 | "виступом»-МІ. (4899 МЕМНМАКТКРАЕЄОУМОТУВАУМУБМІ ТМІ НОБУМІ МСОКЕУК (важкий ланцюг 1) СКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМУТІ РРСВОЕЇТКМ

ОМБІ МСІ УКОЕУРБОІАМЕЖМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 050

СЕР МК ТМОКЗАМОСОММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОК5

БРОСССОСЗваИааБОСИВаВасасеБ МІ ТОЗРОТІ БІ БР

СЕВАТІ ЗСВАБОБВМУТ55УЇ АММООКРООАРАЦН ІММИаЗАА

АТОаІРОНЕЗОаБаватОвТтІ ТІЗВІ ЕРЕОБЕАМУУСООСІМІ РР

ТтТРсОСТКМЕїК

ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИаєТтЕ55УАМОММУНОА

РОКОаГЕМУБАІЗОБОСБТУМАрБУКОаВЕТІЗАОМОКМТІ МІ.

ОММ5І ВАЕОТАУУУСАВКООРМ РРЕО УМ СОСТІ МТМ55АБ

ТКОаРБМЕРІ АРОЗ5КОТЗОСТААІ СІ МУКОМЕРЕРМТУБМУ МО

САГТ5ОаМНТЕРАМІ О55(2І М5І 55УМ ТУРБО аТОТМІСМ

ММНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕААСОРБОМЕ

(2507) МНеОНІ1-Ес із ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕММ УМО 339 |"западиною»-УН (489) МЕМНМАКТКРАЕЄОУМОТУАМУ5МІ ТМ НОМ МЕОКЕМУК (важкий ланцюг 2) СКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМСТІ РРОНОЄБЇТКМ

ОМ5І БСАУКаєМРБОІАМЕЖМ ЕМО ОРЕММУМКТТРРМІ 050

СЕР МК ТМОКЗАМОСОаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК 5 БРОСОЗСОСЗОВССОСЗСааБаСаСеОЕМО І ЕБОСИОЇ МОР

СОБІ ВІ ЗСААБОЕЄТЕ55ХАМОМ УВОАРИаКаИїЇ ЕМ МАПИ

САБТУУАОВУКОаВЕТІЗВОМОКМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМУ

УСАКОМ ЕС ЕМУМ СХОСТІ МТУ

(1105) МІ СІ -легкий 267 ан Тидна див. таблицю 70 послідовність)

СсАасатасСААдта7аатасаатстааавастАааТаААСАА асестасатостсаатадАдсатстостасСсАдл,асстосоаа

АпаСАСАТТСсАаСсАастТАСастТАТААДОСТОСаТассаАСА сасоостТапАСААлсаастосвсАатавАатавАвацАТСА

ТОоССТАТСТТ ТИСТАСАИаСАДАСТАСОСАСАСААИтТТос дасаСАдаспаТСАССАТТАСТаСАпАСАААТССАСадас

АСсСАаССТАСАТОСАССТаАдаСАассСсТаАаАТСТадацА (1105) МНеОНІ-Ес з САСсоаСсСататТАТТАСТатасСсаАаАТСТАСТСОТОАТСТА "виступом»-МІ. (48993) ССС ТТАСТТСИаАСТАСТОСсОВасСсСААа,аасвАССАССатаАс 340 | (нуклеотидна сатсТоСсТсАаСстТАаСАССААдаааСССАТоваИтсттосс послідовність, важкий ССТІССАСССТоСТоСААдаАдаСАсСстотасасасСАсАас ланцюг 1) сассостасаста|асстаТСААдаспАСТАСТССССаААСс сатзАдссататсатаавААстоАа,ваСассСсТаАССАасСа аСатаСАСсАсстоссвсаста|атссСстТАСАаТтосСстТСАааАс

ТстТАСТоСсСсТодасСАс,ССсатасталсс,атасссСстоСАасА ас апаСАСССАСАССТАСАТСТаСААСИаТаААТСАСА

АВСССАаСААСАССААпСаТапйАСААдаАдАаа тала

АААТСТТатТаАСААААСТСАСАСАТаСССАССаТтасссСА вСсАССтТадАаастасАааасавАССаТСсАаТСТосСТСТТо

ЗЕ ее 0000000

МО:

СССССААААСССААССАСАСССТСАТаАТСТОССОИАСС

ССстТАОаТсАСАТОСОЯТОСТОСТапАСО,аТаАдаССАСИА

АВАСССтТОАпаТСААаТТСсААСсТастТАСсатасАсва7сат ваАваТаСАТААТаССААСАСААдАа,асСа,аСас,ссАсааАас

АСТАСААСАаСАСсОатТАСсСсЯатТатаатСАаСатсстТСАСса

ТОСТаСАССАСОАСТааСТОААТаССААдИаСпАСТАСААСО

ТтТасАлАдааТСсТоСААСААдАассСстоваСасСсссСсСАТССАС

ААДААССАТСТОСААДАДаССАААапвасСАаССССпАСААСс

АСАСИаТатАСАСССТаССССССТаСАСАСАТОАдОаСТОАС

СААДАДАССАОСС ТИ ТоССТатТаататстааТСсААсаСастТТ

СТАССССАВСОАТАТСЯССОЯОТапА,СТОпОАСАОССААСа

СССАаССТОАСААСААСТАСААВАССАССсСССССстаТтас тааАСсАдаСсаАСаасСАасСТ СТ СссСтТатАСТОСАААСТИаА ссатаОАСсААдсАХд,ассватаСАаСАаааСААСататтс да,астасАдаСсаТаАтТаСАСОАааСССТаСАСААССАСТАС

АСССАСАаАХОатТоСсСсТОаАаа,аСсСсТаА,асоссва,асСсасА,васСоа

СсавАХдаСсасАдспАХсаАХавАттвасассаАааттоса сдасССсОаТапАТСТОАСАтоатастАСсССАатстосса вСсАСССТОТотТоТаАаОаСсосСсТаЇИсСаАвАпАасССАСССТОИтТ

ЄСстТасСАвАдаССсТССАаТоСаТаАССТОСТОСТАССТоО

ССстТатТАТСАССАСАдА,аСссСс,вСаССАасасооставастас тТаАТСААСООТОСОСАсСтоапАвАаССАССаССАТОССТО

АсССсСОЯОСТтІСсТоСаВасСтТсТастосСОааСАССОАСТТСАССС тТаАССАТСТОССООС,СТОПААСССОАдсаАСсттса,асСсаТтат

АСТАСТаСсСАаСАпйСаСАТСАТИАСТаССССССАССТТТО всСАпСаСАССААСИаТОаСАААТСААС

СсАвдатаСААТТОСТОСсСАСТоТОВСИаасСТОАпатОААСАА аеставатостоваТААааТсТоСсТаСААваСсСстосоас

АЧВаСАСАТТСсАаСАасСтТАСасСтТАТААДОСТОСИаТасСаАСА св,асссСстТаАСААдсаастаАаТвАтТааспАсОаАТСА

ТОССТАТСТТТИИТАСАИСААДАСТАСОСАСАСААИТТоС двавасСсАаасСТСсАССАТТАСТОаСАСАСАААТССАСОдОС

АСАСССТАСАТОСАЛИССТОАдаСсАаССтТаАваАТСТаАаСсА

СсАССОИаССатаТтТАТТАСТатТаСОаАаАТСТАСТСТОаАТСТА

СаатТТАСТТСОАСТАСТаЙСОССААСпООАССАССаТОАС

СатсТсСстТсАасСстТАаСАССААдСпаСССАТСИваТСсТТоСс

СсСсТаСАСССТОСТОСААвАаСАССТСТОИаСОаСАСАСС сассстааасТасстааТСсААаСАСТАСТТССССОААСС савтадсасТаТсаТапААСТСАСаСасСсссСстТаАССАасСО (1105) МНеОНІ1-Ес із СОСТаСАСАССТТСССвбастатосСтТАСАИТОСТСАааАС "западиною»-МН (489) ТстТАСТОоССТСсАаСсАОССОатТаатОАССатТассстоСАасСА 341 | (нуклеотидна аДСстапаСАСССАСАССТАСАТСТаСААСИаИТаААТСАСА послідовність, важкий АЯСССАССААСАССААдпаТапАСААпАААда тала ланцюг 2) АААТСТТатТаАСААААСТСАСАСАТаСССАССатасссСА

ВСАССТОАдАОаСТаСАасСасапАССатсАатстостестто

СССССААААСССААССАСАСССТСАТаАТСТОССОИАСС

ССстТАОаТсАСАТОСОТОСТОСТасСАСО,СТаАдаССАСИА

АВАСССтТОАпаТСААаТТСсААСсТастТАСсатасАсва7сат ваАватТаСАТААТАССААСАСААдАа,асоа,аСас,чаАааАОс

АСТАСААСАаСАСсОатТАСсСсЯатТатаатСАаСатсстТСАСса

ТОСТаСАССАСОАСТааСТОААТаССААдИаСпАСТАСААСО

ТтТасАлАдааТСсТоСААСААдАассСстоваСасСсссСсСАТССАС

ААДААССАТСТОСАААДаССААдА,апваСАаССССспАСААСс

АСсСАСОИатТатаСАСССТасСсссСсССАТОССОСОаАТОАаСТОАС

СААДСААССАспаТСАасСсСттатасСаСАСТСАААСастТтТ

СТАТСССАОаСОАСАТСОЯССИТапА,ТОпОпАСАССААТО ваСАасССапАСААСААСТАСААСАССАСасстосса та

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО: стааАСстТоСссАссастостстостоатаАдаСАдасто

АСсССсСатТайпйАСААДОСАХа,аСсАасатасАаа,аСАсаасААСаТатстт

СстТсАТаСТОСОСтТаАТаСАТОДИааСТСТаСАСААССАСТА

СсАСЯаСАпААсСАаасстотюста7атстосасатасАсасася

СапААлаСасАасаАсассаАааАтоСса,асосасавАааТтоСоа ласосавАаааАтоссАасатабАд,аСтастосАААаСИасо ссассАстаатасаа,асстасосасАаа,асСстаАаАСста,атст таса,асбасСсАд,асвастсСАССТТСАаСАасСсТАСассСсАТОа дластаватоСбасСсАасасосєтаасСАда,аааАСтТацААТа сапатоСбасСссСАТСАТСОСЬЯСТОТаДаСасСсСАасСАССТАСТА сасббаАсАда,асатадлда,аавасСас тсАССАТСАИ,СССОС

АСААСАЧСААСААСАСоСТаТатАССтасСАаАтТаААСА,аС стасасасСсАасАСАсСасСататАСТАСТасСассСААс сзватасттссабдастТТСААСТАСстТасасАСАас,сааСАСс стаайтТсАсСсатТатсСАас (1105) МІ Сі -легкий

ОМОЇ МОБЕАЕУККРОЗЗУКУЗСКАВОСТЕЗЗУАІЗУМУМВОА

РОС ЕУМСИаапПРІБЄТАММАОКЕеОСАМТІТАОКЗТЗТАУМ

ЕГ55І АВАЗБЕОТАУУУСАВЗТ ІМаМЕрмиусоатТУТУ5БАЗТ

КаРБЗМУЕРІ АРЗЗ5КЗТЗаИаатАА ас УКЩОМЕРЕРУТУБУМЗСИ

А Т5аОУНТЕРАМІ 05501 51 55УМТУРЗББІ аТОТМІСММ

МНКРОМТКМОККУЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААСИаРБЗУНІ Е (1105) УМНОНІ-Ес зі РРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕМУ УУРсВИаМЕ 342 | "виступом»-МІ. (4899 МУНМАКТКРАЕЄєОУМЗТУВУМ5МІ ТМ НОМ МОКЕУКОК (важкий ланцюг 1) МЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКЕОРВЕРОМУТІ РРСВОЕТКМОМ

ЗІ МС УКаЕМРЗОІАМЕЖМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОС

ЕРГУЗКІ ТМОКЗАУМООСМУЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5. зреасавсазааасзасвасеасиасеЕ МІ ТОЗРОТІ 5І 5РИЕВ

АТІ БСВАБОЗМТ ЗМУ АММООКРИИОСОАРАЦ ІММИЗАВАТИЇ

РОВЕЗаЗазатовтІ ТІЗВІ ЕРЕОЕАМУМСООСІМІ РРТРаЮ аТКкМЕїК

ОМОЇ МОБЕАЕУККРОЗЗУКУЗСКАВОСТЕЗЗУАІЗУМУМВОА

РОС ЕУМСИаапПРІБЄТАММАОКЕеОСАМТІТАОКЗТЗТАУМ

ЕГ55І АВАЗБЕОТАУУУСАВЗТ ІМаМЕрмиусоатТУТУ5БАЗТ

КаРБЗМУЕРІ АРЗЗ5КЗТЗаИаатАА ас УКЩОМЕРЕРУТУБУМЗСИ

А Т5аОУНТЕРАМІ 05501 51 55 МУРБЗББІИТОТМІСМУ

МНКРОМТКМОККУЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААСИаРБЗУНІ Е (1105) УНеНІ1-Ес із РРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУМОУМЗНЕОРЕУКЕМИ УМрИаМЕ 343 | "западиною»-МН (489) МНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВУУБМІ ТМ НОУМІ МЕОКЕУКСК (важкий ланцюг 2) МЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКЕОРВЕРОМСТІ РРОВОЕЇТКМОМ

ЗІ ЗСАУКагУРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОСЗЕ

ЕМЗ5КІТУОКЗАМОСС,ММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І 5

РасасазасасвасасзацосавЕМО І ЕЗОСИЇ МОРОС5

ІВ ЗСААБаєТЕ55УАМОБУУВОАРИаКаИї ЕМУУЗАпИаЗИаАЗТ

УУАрБУКОаВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМУМСА камгРасаЕМУМУуссоатІ МТУ (9811) МІ СІ -легкий 271 | ланцюг див. таблицю 70 (нуклеотидна послідовність) (9811) УНСНІ-Ес З сАсатасСсААатаатасаастотаасавастаАаатаААпАА "виступом»-мІ. (489) сстасатсСтосатААдсаТсТоСТасСсААавасстоСася 344 | (нуклеотидна АпасСАСАТТсАааСАасСтТАСастТАтТААХаСсТасвсатасцАСА послідовність важкий ссасосоСстасАСАДаСсаеСстовАатТасАата,ссАсацвАТСА ланцюг 1) ' ТОоССТАТСТТТОИСТАСАС,САДАСТАСИаСАСАСАДИТТОС дасасАдасаТСАССАТТАСТаСАСАСАААТоСАСадас ее 0000000

ІО Опис Послідовність

МО:

АСАЧССТАСАТОСАаИаСТаЛлаСАасстаАаАТСТаАцаА

СсАССОЯСсСсатТатАТАСТатТасСаАаАтТстсТаатТасттТА ссс,аоаттТАСТТСОАСТАСТаСИЦаЯвасСсСАдаасАССАССИат сАссатстоСстсАаастТАасСАССААла,ааСССАТССВИТСТТ ссссстасСАСССТоСТоСАд,адасАассттасвсааасСАс дассассстасастасстааТСАДаспАСТАСТТССССаА доса,аатадссатататаайААСсТАааСаСССТаАсСсСАс сааСсаТаСАСАССТОССсвастТатсСстТАСАатосСстТСАсас

АСТСТАСТоССТСсАсаССсАаа,аСсатаастаАсСатассстосСАа

СсАасСсТапаСАСССАпАССТАСАТСТаСААСаИтТОаААТСА

САДИСССАЧСААСАССАД,СатапйАСААпАААаТТалас

ССАААТСТТатОаАСААДААСТСАСАСАТаСССАССсаИатасс

СсАасСсАСсСтТАдастаса,асасваАсСаТтСАаТтстостостТ

ТоСССССАААДАСССААСаАСАСССТСАТаАТСТОССОасАА состава ТсАСсАТаСОаЯТОИТастасАсаИатадасСсСАСа

ААдаАдсостТадааТСААаТтТСсААСстТаатАсатацвАсавас стасвАдааТаСАТААТасСссСААаАСАдАд,асСса,аСасвсадасА впсСАСТАСААСАааСсАСсатАасСсататаатАасаТСсСтТСАС сатоСстТаСАССАаааАСТааСТаААтТааСААсадаТАСА

АСТаСААДааТСТоСААСАдАдасостоИаавсассСсССАТССЯ

АСАДААССАТСТССАААДаССААдда,аавасАассссаАаАА

СсСАСАСОаТатАСАСсСстассСССсСстасСАаАаАТадаста

АССААСАдАСсСсАСсСИаИтатосостаТатаататстааТСААсваас

Пп стТАССССАаСОаАТтТАТСЯСССЯТОСАсСТаасасАсАсасСААС вассАассСстТаАаААСААСТАСААаАССАСССоСоСстата стааАСсАаСаАдСсааСсАаТст ст сосСтТатАСТОСААДАСТа

АосатапАСсАдаАХда,аСссастасоАааСАа,савСААСаТтатт сластасдасатаАТасСАСадааСССТасСАСААССАСТА

САСССАСААХдИатосстадассталасоссава,аСсааАаасСа асасддаСасаасАассасАа,аавАаАттасасаСавАаатТос садасосатавАтТоТАвАтатастТаАСССАатсТосс сасАассста,атстоталдасоста,аАаАвАасССАСССТтТа тостасладасстсСсАатоСатаАССТОСТоСтТАССТо асстааТАТСАаСАсАдАдассСсвассАаа,ааооостаастТа сСтТОАТСААСсатасасАа,атос,ааАдаАасСсСАССааСАТОССТ слоссесапстссасттаавстСааСАССОАСТТСАСС

СстТОАсССсСАТСТОоССОЯООСтТапААсСсСадсалдстсассата

ТАСТАСТОССАССАапаСАТСАТаСТасСсСССССАССТТТ сасСбАдасасСАССААаатТасьААТСААС

СсАватТасСААТТОСТОСАСТоТОСвИаСсТаАдааЙтТаААСАА асестасатостсаатадАдсатстостасСсАдл,асстосоаа

АВИаСАСАТТСАаСАасСстТАСОаСТАТААХИСТОаСатТасцАСА сасоостТапАСААлсаастосвсАатавАатавАвацАТСА

ТОССТАТСТТТОСТАСАССАААСТАСИаСАСАСААИтТТос даваСсАапаТСсСАССАТТАСТаСАСАСАААТССАСИдаС (9811) УНеНІ-Ес іі АСАСССТАСАТОСАССТОИдДОСАСССТОАСАТСТОАОСА "западиною»-УН (489) СсАССОЯСсСсататАТАСТатТасСсаАаАТсТсТаатТасттТА 345 | (нуклеотидна ссс,аоаттТАСТТСОАСТАСТаСИЦаЯвасСсСАдаасАССАССИат послідовність важкий ЗАССсОтТСтТоСтоАасСтАаСАССААОСОаСССАТСОСТСТТ ланцюг 2) ' ссссстасСАСССТоСТоСАд,адасАассттасвсааасСАс дассассстасастасстааТСАДаспАСТАСТТССССаА доса,аатадссатататаайААСсТАааСаСССТаАсСсСАс сааСсаТаСАСАССТІОСсСсвастатссСтТАСАаТтосСстТСАса

АСТСТАСТоССТСсАсаССсАаа,аСсатаастаАсСатассстосСАа

СсАасСсТТапаСАСССАпАССТАСАТСТаСААСИатТаААТСА

САДИСССАЧСААСАССАД,СатапйАСААпАААаТТалас

ССАААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТаСССАССаТатасс

ЗЕ

ІО Опис Послідовність

МО:

СсАасСсАСсСтТАдастаса,асасваАсСаТтСАаТтстостостТ

ТоСССССАААДАСССААСаАСАСССТСАТаАТСТОССОасАА состава ТСАСсАТаСООТОИаТастасАасатадасСсСАСа

ААдаАдсостТадааТСААаТтТСсААСстТаатАсатацвАсавас стасвАдааТасСАТААТасСссСААаАСАдАд,асСса,аСасвсадасА впсСАСТАСААСАааСсАСсатАасСсататаатАасаТСсСтТСАС сатоСстТаСАССАаааАСТааСТаААтТааСААсадаТАСА

АСТаСААДааТСТоСААСАдАдасостоИаавсассСсССАТССЯ

АСАДААССАТСТССАААДаССААдда,аавасСАасссспАцАА

СсСАСсСАсСатТатасАассстассссССАтосСсаааАталаста

АССААСААССАСИЯтоАдасстотсаИаТтаСаСАаТСААдОас

СТСТАТСССАаСОАсСАТСОЯССОСТОСсАСТасаАаАасСАА тасвасСАаССапАСААСААСТАСААаАССАСаССсТосса таставАстоСссАсаастостстоСсТатаАаСАДОаС

ТсАССОСТапАСАд,аАХасСсааастасоАаСсАасаасваААсСИаТтТо

ТСТСсАТаСТоСатаАТаСАТаАдаасСТСТаСАСААССАС тТАСАСОЯаСАСААХаСсСАХаСсСстТотосСстатстосасатавАасо сабапАдаСсапАасаласАааадтссасааСсавАсаТТо сасвдсассааАавАтоСадаатасАасСсТасСстоапААдасСа асасадасАастасастасаласстаасаасСдасстТаАаАсСтТа тстпаса,ассасСбдаСбаасСсТсАсСстсАаСсАасСтТАСасс

АТОДОИСТОСИатоСсасСАасассостаасСАла,аааАСтТасА

АТасатТатоСасСссСАТСАТССССТОТОССасССАасСАССТА

СстТАсасСсОАдСсАХа,аСатадАдавассоасТСАССАТСАСаССО

СОАСААСАИСААСААСАСССТаИатАССТасСАСАТОААСА ссестасссасСпАдапАСАсСасСататАСТАСТаСаТассА дасосАтастссаСаасТТСААСстТАСсТасааАСсАсСаас

АСсСсССсСТасатТСАСсСсататосСАсас ланцюг

ОМОЇ МОБОАЕУМККРИаББЗУКУЗСКАБИОСТЕБОМАІЗММУНОА

РОС ЕМ МастПпРІБЄИТАММАОКРОСАМТІТАОКОТЗТАУМ

ЕІ 55І ВБЕОТАМУУСАВНЗБЗИаАУ РОМЕО УМ аОСТТМТУ55А

ЗТКОаРБМЕРІ АРОЗБКОТЗОСТААГ СС МКОМЕРЕРМТУБУМУМ

ЗА! Т5аМНТЕРАМІ 0550 5І 55 УРБББІИТОТМІСМ

ММЯІНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСРАРЕАДАДССРОМЕ

(9811) МНеОНІ1-Ес зі ГЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСМУУМОУЗНЕОРЕУКЕММУ У УС 346 | "виступом»-МІ. (4899 МЕУНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВУУЗМІ ТМ НОСІ МОКЕУК (важкий ланцюг 1) СКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМУТІ РРСВОЕЇТКМ

ОМБІЛМСІ МКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 050

С5БЕР МК ТМ КАМ ОССММЕЗСОУМНЕАЇ НЯМНУТОКо

БРОСССОСЗваИааБОСИВаВасасеБ МІ ТОЗРОТІ БІ БР

СЕВАТІ ЗХСНАБОБМТ55МІ АМУООКРООСОАРА ІМС

АТОаІРОВЕЗабБаб5БатОвТ ТІЗАГЕРЕОБГАМУМСООСІМІ РР

ТтТРсОСТКМЕїК

ОМОЇ МОБОАЕУМККРИББЗУКУЗСКАБИОСТЕВБОМАІВБММНОА

РОС ЕМ МастПпРІБЄИТАММАОКРОСАМТІТАОКОТЗТАУМ

ЕІ 55І ВБЕОТАМУУСАВНЗБЗИаАУ РОМЕО УМ аОСТТМТУ55А

ЗТКОаРБМЕРІ АРОЗБКОТЗОСТААГ СС МКОМЕРЕРМТУБУМУМ (9811) уНСНІ-Ес із ЗОАЇ Т5аМНТЕРАМІ 0550 5І 55 УРБББІИТОТМІСМ 347 |западиною»-УН (489) ММЯІНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСРАРЕАДАДССРОМЕ (важкий ланцюг 2) ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМОМЗ5НЕОРЕМКЕМУ УМ ОС

МЕМНМАКТКРАЕЄЕОУМОТМАУМБМІ ТМ НОЮ МЕОКЕМХК

СКМУМ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМСТІ РРОНОЄБЇТКМ

ОМ5І ЗСАМКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 050

С5БЕР МК ТМОКАМОССММЕЗСОУММНЕАЇІ НЯМНУТОКо

І 5І БРСОСОЗСОСЗвИСаБСсааВасасеЕМО ЕВ МОР

ЗЕО

ІО Опис Послідовність

МО: аа5іІ ВІ ЗСААЗагєТтЕ55иАМЗУУВОАРИаКаї ЕМУЗАнИа

САБТУМАрБУКОаВЕТІЗАОМЗКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАМУ

УСАКСОМУРСсаЕМУМСаОСстІ МТУ

Таблиця 72

Результати біохімічного аналізу біспецифічних конструкцій з двовалентним зв'язуванням з 4-18883 і одновалентним зв'язуванням з ЕАР (2--1 4-АЇВВ/РАР людський Ід РЗ29ИІ АГ А) (мг/лі Фо (без відновника) 11.2. Зв'язування біспецифічних одновалентних антитіл, мішенями яких є 4-188 і ЕАР 11.2.1. Поверхневий плазмонний резонанс (одночасне зв'язування)

Здатність зв'язуватись одночасно з конструкцією людський 4-188-Ес (Кіп) і людським ЕАР оцінювали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). Всі експерименти на основі РК здійснювали за допомогою пристрою Віасоге 1200 при 25 "С з використанням НВ5Б-

ЕР як рухомого буфера (0,01М НЕРЕЗ5, рН 7,4, 0,15М Масі, ЗмМ ЕДТА, 0,005 95 сурфактанта

РО, фірма Віасоге, Фрейбург/Німеччина).

Конструкцію, что містіть біотинільований людський 4-188В в злітті з Ес (Кіп), безпосередньо зшивали з проточною коміркою стрептавідинового (ЗА) сенсорного чипа. Використовували рівень іммобілізації, відповідний аж до 400 резонансним одиницям (КО). Біспецифічні антитіла, мішенями яких є 4-188 і РАР, пропускали через проточні комірки, використовуючи концентрацію порядку 200ОНМ, зі швидкістю потоку 30 мкл/хв і дисоціацію встановлювали на 0 с. Людський ЕАР ін'єктували в проточні комірки як другий аналіт зі швидкістю потоку 30 мкл/хв протягом 90 с в концентрації 5ХО0НМ. Моніторинг дисоціації комплексу здійснювали протягом 120 с. Відмінності всіх показників заломлення коректували шляхом вирахування відповіді, отриманої в проточній референс-комірці, в якій був відсутній іммобілізований білок.

Як продемонстровано на фіг. 37Б і 37В, всі біспецифічні конструкції мали здатність зв'язуватись одночасно з людським 4-188 і людським ЕАР. 11.2.2. Активація МЕКВ

Створення МЕкВ- репортерної клітинної лінії Не а-пибО0137-МЕкВ-Ійс, клон 26, а також протокол аналізу активації вже описані детально в прикладі 9.2.3.2.

Вивчені націлені на БАР (489) конструкції у форматі 24-41, що містять клон 1105 (фіг. 44А-В) або клон 25057 (фіг. Ж-Ї), ініціювали активацію передачі сигналу МЕКВ в репортерній клітинній лінії в присутності пухлинних клітин, які експресують ЕАР. Вказана активність строго залежала від рівня експресії ЕАР на клітинній поверхні пухлинних клітин, що експресують ЕАР, так як жодної активації МЕ-КВ не вдалося виявити за відсутності пухлинних клітин, які експресують

ЕАР (фіг. 43 Г і Ж). На відміну від інших протестованих форматів (наприклад, 2-2, 14-11) націлені

Зо на ЕАР (489) конструкції у форматі 241 могли індукувати також активацію в присутності клітин

МУМ-266-4, які відрізняються більш низьким рівнем експресії ЕАР (фіг. 44Д їі 3). У присутності клітин МІН/3Т3-пиБАР, клон 19 зв'язуюючі агенти в форматі 2-41 також перевищували за активністю націлені на БАР (28НІ) конструкції 242 або 1--1 (фіг. 43Е і І, фіг. 44Б). Це можна пояснити більш сильною здатністю агента до зв'язування ГАР (489» 28НІ), при цьому формат між ЕАР-зв'язуючим ділянками і 4-1 ВВ-зв'язуючими ділянками (1:2 у співвідношенні 1:1).

Таблиця 73

Величини ЕсСзхо, що характеризують активацію шляхів передачі сигналів МЕКВ в присутності пухлинних клітин, які експресують ЕАР ою Денне чне Есе чорт

Клон клон 19 266-4 д- 'ввоБогу ом оз (489) 21 д- 1вв(1105)/ 03 ОА

ЕАР(489) 21

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1105 Ф. ХОФФМАНН-ЛЯ РОШ АГ «1205 БІСПЕЦИФІЧНІ АНТИТІЛА, СПЕЦИФІЧНІ ПО ВІДНОШЕННЮ

ДО КОСТІМУЛЯТОРНОГО ТМЕ-РЕЦЕПТОРА «1305 РЗЗ3116-М0 «1505 ЕРІ5188095.2 «1515 2015-10-02 «1505 ЕРІбЄ170363.2 «1515 2016-05-19 «1605 347 «1705 РабепбеІп уегвзіоп 3.5 «2105 1 «2115 186 «2125 РЕТ «213» Ното 5арієпь «4005 1

Теч Ніз Суб Уа1 сіу Авр ТП Тугк Рго бек АБп Авр Агуд Суб Суб Нів 1 5 10 15 біч Сув Акуд Рго сбіу Авп сіу Меє Уаі! бек Агу Суб бБег Агуд бек сіп 20 25 Зо

Авп о Тпг оУаї Сув Агуд Рго Сув Сіу Рго Сс1іу Рре Туг Авп Авр Уа1ї Уаї 35 40 45

Зек Бек Пув Рго Сув Гув Рго Суб ТПг Тер Суб АвБп Геї Агу бек б1у 5о0 ів) бо

Зек бі Акуд пу5 біп Теч Сув ТПг Аза ТПг сбіп Абр Тс Уаї Су5з Агд 65 7о 75 80

Сув Акуд Аїа сіу ТпПг о біп Рго Геї АБр бек Тук Гув Рго біу Уаі1і Авр 85 90 95

Сув Аза Ркго Суб Рго Рго сіу Ні Роре бек Рго біу АвБр АвБп сбіп Аза 100 105 110

Сув ПЦув Рго Тер Тіпг Авп Суб Трпг Тез Азїа сіу Ппув Нів ТіПг Іеч Сіп 115 120 125

Рго Аза Бек АБп бек бек АБр Аза Іїе Суб сії АБр Агу АБр Рго Рго 130 135 140

Аза ТПпг сбіп Рго сбіп біп ТБ біп біу Рго Рго Аіїа Агу Рго І1е ТЕГ 145 150 155 160

Уаї біп Рго ТЕ біц Аза Тер Рго Акуд ТБ беє біп біу Рго бек ТіПг 165 170 175

Агуд Рго Уаі сії Маї Рго біу б1у Агкуд Аза 180 185 «2105 2 «2115 5 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» оХх40(8НеО,4984,1с54, 2087) СсОрВв-НІ «4005 2 зек Туг Аїа І1е 5ег 1 5 «2105 3 «2115 5 «212» РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОоХхХ40(сСІсС-563, СІС-564, 17А9) Ссрв-НІ1 «4005 3 бек Туг А1їа Меє бег 1 5 «2105 4 «2115 17 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОоХхХ40(8Нне,4984,1с04, 20887) СсОов-НО2 «4005 4 біу І1їе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пу5 Рпе сіп 1 5 10 15 свіу «2105 5 «2115 17 «212» РЕВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОоХхХ40(сСІС-563, СІС-564, 17А9) СсОов-Н2 «4005 5

А1ї1а І1їе бег Сіу бек сіу сСіу бек ТПг Туг Туг А1їа Авр бек Уа1ї Був 1 5 10 15 свіу «2105 6 «2115 7 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОоХхХ40(8Нне) сСсорв-НнЗ «4005 6 біч Тук біу Тер Меє Авр Туг 1 5 «2105 17 «2115 39 «212» РЕВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОохХ40(4984) Ссов-НЗ «4005 7 сі Тує Тук Агуд сС1у Рго Туг Авр Туг 1 5 «2105 8 «2115 7 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОоХхХ40(1с4) СсОрв-НЗ «4005 8 біч Тук біу бек Меє Авр Туг 60 1 5 «2105 139 «2115 13 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність 65 «2205 «223» ОохХ40(208в7) Ссрв-НЗ «4005 9

Уаї АБп о Тук Рго Тук бек Тук Тер б1іу АБр Роре АБр Туг

1 5 10 «2105 10 «2115 7 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОоХхХ40(сСІСсС-563) СсОов-НЗ «4005 10

Авр Уа1і с1іу Аїа Роре АБр Туг 1 5 «2105 11 «2115 7 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОоХхХ40(сСІСсС-564) СсОов-НЗ «4005 11

Авр Уа1 сіу Рго Роре АБр Туг 1 5 «2105 12 «2115 11 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОХ40(17А9)-СсСрв-нЗ «4005 12

Уаї Рре Туг Акуд біу сіу Уа1і Бек Меє АБр Туг 1 5 10 «2105 13

Зо «2115 11 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОохХ410(8Н9О,4984,154, 208в7) СсСОоВв-І1 «4005 13

Агу Аза Бек біп бек І1е бег бег Тер Геч Аза 1 5 10 «2105 14 «2115 12 «212» РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОоХхХ410(сІС-563, СсСІСсС564) СсОов-І1 «4005 14

Агуд Азїа бег Сіп бег УМа1! бЗег бек бБег Туг Іеєч А1а 1 5 10 «2105 15 «2115 11 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОХ40(17А9) СОВ-І1 «4005 15 біп біу Авр бек Гец Агуд бБег Туг Туг Аїа 5ег 1 5 10 «2105 16 «2115 7 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність (516) «2205 «223» ОоХхХ40(8Не,4984,1с04, 2087) СсОов-І2 «4005 16

Авр Аза Бек Бек ІГеч бі 5ег 1 5 65 «2105 17 «2115 7 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність

«223» ОХхХ40(сСІсС-563, СсСІС564) сСоВ-І2 «4005 17 біу А1їа бег бег Агуд Аїа ТПг 1 5 «2105 18 «2115 7 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОХ40(17А9) СОВ-1І2 «4005 18 біу губ Авп АБп Агуд Рго бБег 1 5 «2105 19 «2115 10 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОХ40(8НО) сСОоВ-ІЗ «4005 19 біп біп Тук Гей ТпПг Туг Бек Аку Рое ТЕГ 1 5 10 «2105 20 «2115 9 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОоХхХ40(4984) СОВ-ІЗ

Зо «4005 20 біп біп Тук бек бек біп Рго Тує Тс 1 5 «2105 21 «2115 10 «212» РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОХ40(1с04) СсСОВ-ІЗ «4005 21 сіп біп Туг І1їе бег Туг БбБег Меє Ієч Тс 1 5 10 «2105 22 «2115 39 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ОоХхХ40(208В7) СсОВ-ІЗ «4005 Д 22 біп біп Тук біп Аза Роре бек Іеч Тс 1 5 «2105 23 «2115 39 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» ОХхХ40(сСІС-563, СІС-164) СсСОВ-ІЗ «4005 23 біп біп Тук сіу Бек Бек Рго Іеч Тс 1 5 (516) «2105 24 «2115 10 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» 65 «223» 0ОХ40(17А9) СОоВ-ІЗ «4005 24

АБп бек Акуд УМаї Меє Рго Ніб Ап Агуд Уаї! 1 5 10

«2105 25 «2115 116 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» оОХхХ40(8НУ) УНН «4005 25 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15 бек Ма1 Ппув Ма1ї БбБег Сув їув А1їа бег Сіу С1у ТіПг Рре бег бег Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Агд сії Тує б1у Тер Меє Авр Туг Тер Сіу Сіп сіу Тпг Тс Уаї 100 105 110

ТВгЕ Уаї бек 5ег 115 «2105 26 «2115 108 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 0ОХ40(8НУ) МІ,

Зо «4005 26

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр 20 25 Зо їПеч Аїа Тер Тук біп сбіп Ппуз Рго біу Пув Аїа Ркго Пув Іеч їеч І1е 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 5о0 ів) бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 7о 75 80

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Суб біп біп Тук Геч ТПг Туг бек Агд 85 90 95

Рпе Тпг Рре сіу біп біу ТБ Ппуз Уаі сі Іе Гуз 100 105 «2105 27 «2115 118 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» ОоХхХ40(4984) УН «4005 27 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо 60 сіп б1іу Агуд Ма1 Трг І1їе ТПг АТїа Авр Пув бБег ТіПг бек ТіПг Аїа Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд бій Туг Тугк Аку біу Рго Туг Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 65 100 105 110

ТВгЕ Уа1і! Трпг Уаї1ї бег 5ег 115 «2105 28

«2115 107 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 0ОХ40(4984) У, «4005 28

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 5о0 ів) бо бек біу бек С1іу Тпг Сі Рре ТіПг теп Тс І1е бБег бег Іеч Сіп Рего 65 70 75 80

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Суб біп біп Тук Бек Бек біп Рго Туг 85 90 95

ТЕ Рбе бі1у біп біу Тпйг Ппуз Уаі сі ІШе Гув 100 105 «2105 29 «2115 116 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 0ОХ40(164) УН «4005 29 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15 бек Ма1 Ппув Ма1ї БбБег Сув їув А1їа бег Сіу С1у ТіПг Рре бег бег Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 35 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95 40 Аза Агд сії Тує біу бБег Меє Авр Туг Тер Сіу Сіп сіу Тпг Тіг Уаї 100 105 110

ТВгЕ Уаї бек 5ег 115 «2105 30 45 «2115 108 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 0ОХ40(164) У, «4005 30

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр 20 25 Зо їПеч Аїа Тер Тук біп сбіп Ппуз Рго біу Пув Аїа Ркго Пув Іеч їеч І1е 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 5о0 ів) бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 60 65 7о 75 80

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тугє Тук Суб біп біп Туг Іїе бБег Туг бек Меє 85 90 95

Теч ТП Рпе сіу сіп сіу Тс Гуз Уаї бічЧ Іїе Був 100 105 65 «2105 31 «2115 122 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність

«223» оОХхХ40(2087) УН «4005 31 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45 сіу б1у І1е І1їе Рго Іїе Рбе сіу ТБ Аза Ап Туг Аїа біп пув Ре 5о0 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд Уа1і АБвБп о Тугє Рго Тук бек Туг Тер біу Авр Роре АБр Тугє Тгр 100 105 110 біу біп біу ТПг Тпг Уа1! Тбг Уаї бек б5ег 115 120 «2105 32 «2115 107 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 0ОХ40(2087) У, «4005 32

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр

Зо 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 5о0 ів) бо 35 бек біу бек С1іу Тпг Сі Рре ТіПг теп Тс І1е бБег бег Іеч Сіп Рего 65 70 75 80

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Суб біп біп Тук сбіп Аза Роре бек Іеч 85 90 95

ТЕ Рбе бі1у біп біу Тпйг Ппуз Уаі сі ІШе Гув 40 100 105 «2105 33 «2115 116 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність 45 «220» «223» оОХхХ40(Сс1с-563) УН «4005 33 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15 век Геч Агуд Гей бег Сув Аза Аїа бек біу Рпе ТП Роре бек бБег Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї 50 55 бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 95 60 Аза теч Авр Уаі1ї С1у Аїа Рре Авр Туг Тер Сіу Сіп сіу Аїа Ієч Уаї 100 105 110

ТВгЕ Уаї бек 5ег 115 «2105 34 65 «2115 108 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205

«223» 0ОоХ40(С1с-563) МІ, «4005 34 біч Іїе Уаії Гей ТПг сіп Бек Рго біу Тбг Те бек Гец бек Рго с1у 1 5 10 15 бі Агу Аза ТБ Гей бек Суз Агу Аза бБег біп бек Уа1! бег бек бег 20 25 Зо

Тук Геї Аїа Ткр Тук біп біп пуб Рго сіу біп Аза Рго Агу Іеч Гец 35 40 45

Іїе Тук сі1іу А1їа бек бек Агу Аїа ТПг сіу Іїе Рго АБр Аку Рое б5ег 50 ів) бо біу бек біу бек сіу ТПг АБр Роре ТПг ІТечп ТБПг І1їе бег Агкд Геч сій 65 70 75 80

Рго бій АБр Рпре Аїа Уа1! Туг Тук СувБ біп сбіп Туєк біу бек бег Рго 85 90 95

Теч Ти Рпе сіу Сіп Сіу Тпг Гпув УМа1і Січ Іїе Гув 100 105 «2105 35 «2115 116 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» оОХхХ40(Сс1с-564) УНН «4005 35 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 бек Аїа І1е бек біу бек Сіу біу бек ТЬг Туг Туг А1їа АБр Бег Уаї 5о0 ів) бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Рпе Авр Уа1ії біу Ргро Рбе Авр Туг Тер сіу сбіп сіу ТіПг Іеч Уаї 100 105 110

ТВгЕ Уаї бек 5ег 115 «2105 36 «2115 108 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 0оОХ40(С1с0-564) УМ, «4005 36 біч Іїе Уаії Гей ТПг сіп Бек Рго біу Тбг Те бек Гец бек Рго с1у 1 5 10 15 біч Акуд Аза Тбг Гей бек Сув Агу Азїа бек біп бек Уаії бек Бек бБег 20 25 Зо

Тук Геї Аїа Ткр Тук біп біп пуб Рго сіу біп Аза Рго Агу Іеч Гец 35 40 45

Іїе Тук сі1іу А1їа бек бек Агу Аїа ТПг сіу Іїе Рго АБр Аку Рое б5ег 5о0 ів) бо сіу бЗек Сі1іу Бек сС1іу ТБг Авр Рре Тс їец ТПг І1е бек Агд Іеч Січ 65 70 75 80

Рго бій АБр Рпре Аїа Уа1! Туг Тук СувБ біп сбіп Туєк біу бек бег Рго 85 90 95

Теч ТП Рпе сіу сіп сіу Тс Гуз Уаї бічЧ Іїе Був (516) 100 105 «2105 37 «2115 120 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність 65 «220» «223» 0ОХ40(17А9) УН «4005 37 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у

1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї 5о0 ів) бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Авп бег їеч Агуд Аїа Січ Авр Трг Атїа Уа1ї Туг Туг Сув 85 90 95

Аза Акуд Уа1і Рре Туг Аку біу біу Уаії бек Меє А5вр Тугє Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Гей Уа! ТПг Уаї бек 5ег 115 120 «2105 38 «2115 106 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 0ОХ40(17А9) У, «4005 38

Зек Бек біш Геї Тс біп АбБр Рго Аїа Уа! бек Уаі Аїа Іечзч с1у сіп 1 5 10 15

Тис Уаї Аку І1е ТБс Сув Сбіп Сбіу Авр бег Іеп Агуд бБег Туг Туг А1а 20 25 Зо ек Тер Тук біп біп Гуз Рго біу біп Аїа Рго Уаі Геч МУаї І1е Туг біу ув Авп Авп Агуд Рго бек біу І1е Рго АБр Агку Рре бек сіу бБег

Зо 50 55 бо

Бек Бек біу АБп ТПг Аза бек їецп ТПг Іїе ТПг сіу Аїа сіп Аза січ 65 70 75 80

Авр січ Аза АБр Тук Тук Суб АБп бег Акуд Уа1і Меє Рго Ні АБп Агд 85 90 95 35 Уаї Рпе сі1у сіу сіу Тпгс Пув ТГеч Тіг Уаї 100 105 «2105 39 «2115 163 «2125 РЕТ 40 «213» Ното варієпв «4005 39

Теч біп Авр Рго СувБ Бек АБп Суб Рго Аїа біу ТБПг Рре Суб Авр АБп 1 5 10 15

АБп Агуд Абп обіп І1е Сув бек Рго Суб Рго Рго Авп бБег Роре бег 5ег 45 20 25 Зо

Аза сіу сіу біп Аку ТБ Суб Авр Іїе Суб5 Акуд біп Суб КГув5 біу Уаї 35 40 45

Рпе Аку Тс Агу Гуз біч Суб бек бек ТПг Бек АБп Аїа бі Сув Авр 5о0 ів) бо

Сув ТпЕ Рго біу Рре Нів Сув їеч Сіу Аїа сіу Сув бек Мебє Сув С1Ч 65 70 75 80 біп АвБр о Сув пуб біп сіу біп сії Тез ТБкг Гуз пувз б1іу Сув Пув Авр 85 90 95

Сув Сув Рпе сіу ТпПг Рре АБп АБр о біп Гуз Агу біу Іїе Суб Агд Рего 100 105 110

Тер Тс АБп о Сув бек Ге Авр сіу пуб Бек УМаі Іеч УМаії АБп б1іу Тр 115 120 125

Туз бічЧ Агуд Авр о Уа1ї Уаї Суб сіу Рго бек Рго Аза Авр Гей бек Рго 130 135 140 60 сіу Аза бек бег Уаі1і Ті Рго Рго Аїа Рго Аїа Аку Січ Рго С1у Нів 145 150 155 160 век Рго сіп «2105 40 65 «2115 5 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205

«223» 4-188(1283,1105, 9811, 20602) СсОов-НІ1 «4005 40 зек Туг Аїа І1е 5ег 1 5 «2105 41 «2115 5 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 4-188(25607) СсОов-НІ «4005 41 зек Туг Аїа Меє 5ег 1 5 «2105 42 «2115 17 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 4-188(1283,1105, 9811, 20602) СсОов-Н2 «4005 42 біу І1їе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пу5 Рпе сіп 1 5 10 15 свіу «2105 43 «2115 17 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220»

Зо «223» 4-188(2567) СсОовВ-Н2 «4005 43

Аза Іїе Бек сіу бек біу біу бек ТПг Туг Тук Аза АБр бек Уа1ї! Гуз 1 5 10 15 свіу «2105 44 «2115 11 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 4-188(1283) СсОов-НЗ «4005 44

Ззек бі Рпбе Аку Рбе Туг Аза Авр Рпре Авр Туг 1 5 10 «2105 45 «2115 39 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 4-188(2567) СсОов-НЗ3 «4005 45

АБр Авр Рго Тгр Рго Рго Робе Ар Туг 1 5 «2105 46 «2115 10 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 4-188(1105) СсОов-НЗ (516) «4005 46 ек ТПг Геї І1їе Тук біу Тук Робе Авр Туг 1 5 10 «2105 47 «2115 11 65 «212» РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 4-188(9811) СсОов-НЗ

«4005 47

Зек Бек сбіу Аїа Тук Рго біу Тук Рпре Авр Туг 1 5 10 «2105 48 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(2002) Ссрв-НЗ «4005 48

Бек Тугк Тугк Тер біц бек Тук Рго Рпре Авр Туг 1 5 10 «2105 49 «2115 11 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(1283,1105, 9811, 2002) СсОов-І1 «4005 49

Агуд Азїа бег Сіп бег І1е бег бек Тгр Іеєч Аї1а 1 5 10 «2105 50 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(25607) СсСоВ-І1 «4005 150 біп біу Авр бек Гец Агуд бБег Туг Туг Аїа 5ег 1 5 10 «2105 51 «2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність

З5 «220» «223» 4-188(1283,1105, 9811, 2002) СсОоВ-1І2 «4005 51

Авр Аза Бек Бек ІГеч бі 5ег 1 5 «2105 52 «2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(25607) СсСоВ-І2 «4005 Д 52 біу губ Авп АБп Агуд Рго бБег 1 5 «2105 53 «2115 9 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(1283) СсСоВ-ІЗ3 «4005 53 біп біп Тук Нів Бек Туг Рго біп ТЕбг 1 5 «2105 54 «2115 10 бо «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(25607) СсСоВ-ІЗ3 «4005 54 65 АБп о бБег Теч Авр Агуд Агуд С1іу Меє Тгр Уаї 1 5 10 «2105 55 «2115 9

«2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(1105) СсСОоВ-ІЗ «4005 55 біп біп Гей Авп бБег Туг Рго біп ТЕбг 1 5 «2105 56 «2115 39 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(9811) СОВ-ІЗ «4005 156 сбіп біп Уаі1ї Авп бег Тугє Рго біп Тис 1 5 «2105 157 «2115 8 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(2062) СсСОВ-ІЗ «4005 57 біп біп біп Нібв бБег Туг Тукє Тс 1 5 «2105 158 «2115 120 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» 4-188(1283) УН «4005 58 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15 бек Ма1 Ппув Ма1ї БбБег Сув їув А1їа бег Сіу С1у ТіПг Рре бег бег Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Агуд бек Січ Рпре Акуд Рбе Туг Аїа Авр Ріе Авр Туг Тгр С1у сіп 100 105 110 біу ТЕ Трг Уа! Тбг Уаї бек 5ег 115 120 «2105 59 «2115 107 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(1283) УМІ, «4005 59

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр 20 25 Зо 60 їПеч Аїа Тер Тук біп сбіп Ппуз Рго біу Пув Аїа Ркго Пув Іеч їеч І1е 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 5о0 ів) бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 65 7о 75 80

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Суб біп біп Тук Нів бБег Тугк Рго біп 85 90 95

ТЕ Рбе бі1у біп біу Тпйг Ппуз Уаі сі ІШе Гув

100 105 «2105 60 «2115 118 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(2567) УН «4005 60 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 бек Аїа І1е бек біу бек Сіу біу бек ТЬг Туг Туг А1їа АБр Бег Уаї 5о0 ів) бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Агуд АвБр АБр о Рго Тер Рго Рго Роре Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

Печ Уаї ТП Уаї Бек 5ег 115 «2105 61 «2115 106 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205

Зо «223» 4-188(2567) У «4005 61

Зек Бек біш Геї Тс біп АбБр Рго Аїа Уа! бек Уаі Аїа Іечзч с1у сіп 1 5 10 15

ТЕ Маії Аку І1ї1е ТБг Сув біп біу Авр Бек Геї Агу бек Туг Туг Аза 20 25 Зо ек Тер Тук біп біп Гуз Рго біу біп Аїа Рго Уаі Геч МУаї І1е Туг 35 40 45 біу ув Авп Авп Агуд Рго бек біу І1е Рго АБр Агку Рре бек сіу бБег 5о0 ів) бо бек бек Сіу АБп ТПг Аїа бек їеч Трг І1е Тпг сС1у Аза Сіп Аз1а січ 65 70 75 80

АвБр січ Аза АБр Тугк Тук Суб АБп бег Гей Авр Агуд Акуд сбіу Меє Тгр 85 90 95

Уаї Рре біу біу біу ТПг Ппув Геч ТПг Уаї 100 105 «2105 62 «2115 119 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 4-188(1105) УН «4005 62 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15 бек Ма1 Ппув Ма1ї БбБег Сув їув А1їа бег Сіу С1у ТіПг Рре бег бег Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе (516) 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95 65 Аза Агуд бег Тип Іеч І1е Тує С1іу Туг Рре Авр Туг Тер С1у Ссіп СШ1У 100 105 110

ТВг Тс Уаї Трг Уаї бег 5ег 115

«2105 63 «2115 107 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 4-188(1105) У, «4005 63

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

Авр Агуд УМаї Таг І1е Трг Сув Агу Аза бег Сіп бек І1їе бег бекг Тгр 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 50 ів) бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 70 75 80

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Суб біп біп Гей Абзп бБег Туг Рго біп 85 90 95

ТаЕ Рпе сіу Сіп С1іу Тпг Ппув УМа1і Січ Іїе Гув 100 105 «2105 64 «2115 120 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(9811) УН «4005 64 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег

Зо 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 сіу б1у І1е І1їе Рго Іїе Рбе сіу ТБ Аза Ап Туг Аїа біп пув Ре 5о0 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 40 85 90 95

Аза Агуд Бек бек біу Аїа Тук Рго біу Тук Рпе Авр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Трг Уа! Тбг Уаї бек 5ег 115 120 45 «2105 65 «2115 107 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4-188(9811) У «4005 65

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 5о0 ів) бо 60 бек біу бек С1іу Тпг Сі Рре ТіПг теп Тс І1е бБег бег Іеч Сіп Рего 65 70 75 80

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Суб біп біп Уаі А5зп бБег Тугк Рго біп 85 90 95

ТЕ Рбе бі1у біп біу Тпйг Ппуз Уаі сі ІШе Гув 65 100 105 «2105 66 «2115 120 «2125 РЕТ

«213» Штучна послідовність «223» 4-188(2062) УН «4005 66 біп Уаії біп Пеп Уаї сіп бек сбіу Аїа біц Уаї Ппув Ппув Рго біу бег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє бій Іей бег бек ГПеп Агу бек біш АвБр ТБг Аза Уаї Тугк Тук Сув 85 90 95

Аза Агуд бБег Туг Тук Тер біч бек Тук Рго Рпе Авр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Трг Уа! Тбг Уаї бек 5ег 115 120 «2105 67 «2115 106 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 4-188(2062) УМ, «4005 67

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

Авр Агуд УМаї Таг І1е Трг Сув Агу Аза бег Сіп бек І1їе бег бекг Тгр 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 35 50 55 бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 70 75 80

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Суб біп біп сбіп Нібв бБег Тугє Тук Тс 85 90 95 40 Рпе сіу Сіп С1у Тпг Ппув УМа1і Січ І1їе Гув 100 105 «2105 68 «2115 5 «2125 РЕТ 45 «213» Штучна послідовність «2205 «223» ЕАР(І28НІ) СсОоВ-НІ «4005 68 зек Нів Аїа Меє 5ег 1 5 «2105 69 «2115 5 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» БЕАР(4В9) СсОоВ-НІ «4005 69 зек Туг Аїа Меє 5ег 1 5 60 «2105 70 «2115 16 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 65 «223» ЕАР(28Н1І) СсОовВ-Н2 «4005 70

Аза Ії1е Тер Аїа бек біу бічЧ біп Туг Тук Аза Авр Бек Уаїі Гуз б1Уу 1 5 10 15

«2105 71 «2115 17 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» ЕБЕАР(4В9) СсСовВ-Н2 «4005 71

Аза Іїе Іїе сіу бек біу Аза бек ТПг Туг Тук Аза АБр бек Уа! Гуз 1 5 10 15 с1уУ «2105 172 «2115 8 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ЕБЕАР(28НІ) СсОов-НЗ «4005 Д /72 біу Тер Ге сбіу Авп Рре АБр Туг 1 5 «2105 173 «2115 8 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ЕБЕАР(4В9) СсОрвВ-НЗ «4005 7Т13 біу Тер Рпе сіу сіу Рре АБп Туг 1 5

Зо «2105 74 «2115 12 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ЕАР(28НІ1) СсОоВ-І1 «4005 74

Агуд Аза Бек біп бек Уаі! бек Агу бег Туг Геч Аза 1 5 10 «2105 175 «2115 12 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ЕБЕАР(4В9) СсОВ-І1 «4005 175

Агуд Аза Бек біп бек УМаі! ТіПг бег бег Туг Геч Аза 1 5 10 «2105 76 «2115 7 «212» РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ЕАР(28НІ) СсОоВ-1І2 «4005 76 сі1у Аа бЗеє ТіПг Агуд Аїа Тс 1 5 «2105 177 «2115 7 «2125 РЕТ 10) «213» Штучна послідовність «220» «223» ЕБЕАР(4В9) СсСОВ-І2 «4005 77

Уаї б1у 5ек Агуд Акуд Аїа Тр 65 1 5 «2105 178 «2115 39 «2125 РЕТ

«213» Штучна послідовність «223» ЕАР(28НІ) СсСОВ-ІЗ «4005 78 сіп біп сС1у біп Уаї І1їе Рго Рго Тс 1 5 «2105 79 «2115 39 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» БЕАР(4В9) СОоВ-ІЗ «4005 179 біп біп біу Іїе Меє Гей Рго Рго Тс 1 5 «2105 80 «2115 116 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» ЕАР(2ВНІ) УН «4005 80 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15 бек Геч Агуд їеч бБег Сув Аїа Аза бБег Сіу Рре ТіПг Рре бег бек Нів 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 зек Аїа І1ї1е Тгр Аїа бек біу бі біп Ту Тук Аза АБр бек Уаї Гуз 50 55 бо біу Аку Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бек Гу5 АБп Тс Геч Тукгк Гей 65 70 75 80 біп Месб Абзп бек Гей Агуд Аза сії АБр ТБг Аза Уаі! Туг Туг СувБ Аза 85 90 95

Пув біу Тер Геч С1іу АБп Рбе Авр Туг Тгр сіу Сіп С1іу ТіПг Іеєч Уаї 100 105 110

ТВгЕ Уаї бек 5ег 115 «2105 81 «2115 108 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» ЕАР(2ВНІ) У1, «4005 81 біч Іїе Уаії Гей ТПг сіп Бек Рго біу Тбг Те бек Гец бек Рго с1у 1 5 10 15 біч Акуд Аза Тбг Гей бек Сув Агу Азїа бек біп бек Уаі бек Агд бБег 20 25 Зо

Тукг Ген Аїа Тер Туг біп біп Пу5 Рго сбіу біп Аїа Рго Аг Іеч Іеч 35 40 45

Іїе Іїе сі1іу Азїа бек ТБПг Агу Аїа ТрПг сіу Іїе Рго АБр Аку Рое б5ег 5о0 ів) бо біу бек біу бек сіу ТПг АБр Роре ТПг ІТечп ТБПг І1їе бег Агкд Геч сій 65 7о 75 80

Рго бій АБр Рпре Аїа Уа1! Туг Тук СувБ біп сбіп сі1іу біп Уаі Іїе Рго 85 90 95

Рго ТПгЕ Ррпе сіу біп біу ТБ Ппуз Уаі сі Іе Гуз 100 105 60 «2105 82 «2115 117 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 65 «223» ЕАР(4В9) УН «4005 82 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 зек Аїа Іїе І1їе сбіу бек біу Аїа бек ТПг Тук Тук Аїа АБвр бег Уаї 5о0 ів) бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Ппув сіу Тер Рпрпе біу біу Рбе Авп Туг Тер сіу сбіп сі1іу ТіПг Іеч 100 105 110

Уа1 ТргЕ Уаї бегк 5ег 115 «2105 83 «2115 108 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» ЕАР(4В9) МІ, «4005 83 біч Іїе Уаії Гей ТПг сіп Бек Рго біу Тбг Те бек Гец бек Рго с1у 1 5 10 15 біч Аку Аза Тбг Гей бек Сув Агу Азїа бек біп бек Уаі! ТПг бек бБег 20 25 Зо

Тук Геї Аїа Ткр Тук біп біп пуб Рго сіу біп Аза Рго Агу Іеч Гец 35 40 45

І1їе АвБп Уа1і сіу бек Агу Акуд Аїа ТП сіу Іїе Рго АБр Аку Рое б5ег 5о0 ів) бо сіу бЗек Сі1іу Бек сС1іу ТБг Авр Рре Тс їец ТПг І1е бек Агд Іеч Січ 65 70 75 80

Рго бій АБр Рпре Аїа Уа1! Туг Тук СувБ біп сбіп сі1іу І1е Меє Іеч Рго 85 90 95

Рго ТПгЕ Ррпе сіу біп біу ТБ Ппуз Уаі сі Іе Гуз 100 105 «2105 84 «2115 760 «2125 РЕТ «213» Ното 5арієпь «4005 84

Меє Гуз Тйг Тер Уаії пуб Іїе Уаі1і Рре сіу Маі Аза ТПг бек Аїа Уаї1ї 1 5 10 15

Теч Аїа Гей Гецш Уа1ї Меє Суб І11е УМаі! Іеч Агу Рго бег Агуд Уаі1ї Нів 20 25 Зо

АБп бек біп біч Авп Тс Меє Агу Аїа теп Тіг тТеч Гпув Ар І1е Ієеч 35 40 45

Авп осіу ТПЕ Роре бек Тук Гув ТП Рре Рпре Рго А5Бп Тгр І1е бек б1Уу 5о0 ів) бо біп біч Тук Гей Нів сіп Бек Аїа АБр АБп АБп І1їе Уаї Геч Тук АБп 65 7о 75 80

Іїе бій Тс сіу біп бек Туг ТПг Іїе Гей Бек Аб5п Акуд Тс Меє Гуз 85 90 95

Зек Уаі АБп Азїа бек АБп Тук біу Пец бек Рго АБр Аку біп Робе Уаї 100 105 110

Тукє Ген бій бек Авр Туг бек Пу5 Пе Тгр Агу Туг бег Туг ТПг Аї1а 115 120 125

ТПг Тук Тук І1їе Туг АБвБр Гей бек Абп сіу сії Рре Уаі Агу б1у Авп 130 135 140 біч Те Рго Акуд Рго Іїе сіп Тук ІГеч Сув Тгр бек Рго Уаі1і сіу бБег 60 145 150 155 160

Туз Теч Аза Тук Уа1і Тук сбіп АБп АБп І1е Туг ІТеч Пу5з біп Агд Рго 165 170 175 біу АБр Рго Рго Рпе сіп Іїе ТПг Роре АБп біу Акуд біц АБп пуб Ше 180 185 190 65 Рпе Авп сС1іу І1е Рго Авр Тгр Уаі Туг Сі Січ біц Меє Іеч Аз1а ТЕГ 195 200 205

Туз Тук Аїа Гей Тер Тер Бек Рго АБп біу Гувз Рпе їец Аза Туг Аза 210 215 220 біч Рре Авзп Авр ТПг Абр І1е Ркго Маі Іїе Аїа Туг бег Туг Туєк с1Уу 225 230 235 240

АвБр сій біп Туг Рго Агку ТБ Іїе АБп Іїе Рго Туг Рго пу5 Аїа б1Уу 245 250 255

Аза Ппув АБп о Рго Уаі Уаі Аку Іїе Рпбе Іїе Іїе Авр ТПг ТПг Туг Рго 260 265 270

Аа Тук Уа1і сіу Рго біп біч Уаі! Рко Уаі Рго Аїа Меє І1їе Аза 5ег 275 280 285 век Авр Туг Тук Ріре бек Тгр Гей ТПг Тер Уаі ТПг АБр бій Агсуд Уаї 290 295 300

Сув ТГеч біп Тер Ге пуб Акуд УМаії біп Абп Уа! бег Уаі Гей бек Ше 305 310 315 320

Сув АБр Рпе Агуд бій Авр Тгр біп ТБ Теср АБр о Сув Рго пуб ТПг сіп 325 330 335 сій Нів І1е бі Сі бек Агуд Тбг біу Тер Аїа сС1іу С1у Рпе Рре Уаї 340 345 350

Бек ТПЕ Рго Маі Ріре бек Туг Авр Аза Іїе бБег Туг Тук Гуз Іїе Ре 355 360 365 век Авр Пув АБр біу Тук їув Нів Іїе Нів Тугк І1їе Пу5 АБр ТПг Уаї 370 375 З8о бічЧ АБп Аза Іїе сіп Іїе ТПг бек біу Гуз Тсрр бі Аїа І1е А5Бп Ше 385 390 395 400

Рпе Акуд Уа1і ТП біп Авр о бек Ге Рпе Туг бек Бек АБп сії Рое січ 405 410 415 біц Тук Рго біу Агу Агуд АБп І1е Туг Агкуд І1е бег Іїе біу бек Туг 420 425 430

Ркго Ркго Бек Пув КПув Сув Уаі ТіПг Суб Нів Геч Агуд пуб5 бій Аг Сув 435 440 445 біп Тук Тук ТПг Аза Бек Ріре бек АБр Туг Аза Пу5з Туг Тугк Аїа Гей 450 455 460

Уаї Сув Тук біу Рго біу Іїе Рго Іїе Бек ТПг Іечп Ні5з АБр сб1у Агд 465 470 475 480

ТЕ АБр біп біч Іїе Гуз Іїе Гей сій сі АБп Гуз біш Теч біцЧ Авп 485 490 495

Аза теч Ппув АБп І1е Сіп теп Рго Пув Сі Січ Іїе Пув Кув Іеєч січ 500 505 510

Уаї АБр бічЧ Іїе Трг Гей Тер Тук Ппув Меє І1їе Теч Рго Рго біп Ріе 515 520 525

АБр Акуд Бек Ппув пуб Тук Рго Теч їец Іїе сіп Уаі Тук сіу с1у Рго 530 535 540

Сув бек біп бек Уаі Акуд Бек УМаі Рре Аїа Уа! АБ5Бп Тер І1їе бек Туг 545 550 555 560

Теч Аза бек пу сіц сіу Меє Уаі Іїе Аїа Іїец Уаі Авр сіу Акуд с1Уу 565 570 575

Таг Аза Рре Сіп С1у Авр Пув Теч їеч Туг Аїа Уа1ї Туг Агд Кув Іеч 580 585 590 біу Уаі Тук біц Уаі сій АБр сбіп І1е Тс Аза Уаі Аку пуб Рпе Пе 595 6о0 605 біч Меє сіу Рпе Іїе Аб5Бр сії пуб Агу Ії1е Аїа Ії1е Тер сіу Тер бБег 610 615 620

Тук сі1у біу Тук Уаії бек бек Ге Аза Геї Аїа бек біу ТПг с1у Гец 625 630 635 640

Рпе Ппув Сув біу Іїе Аїа Уаі! Аза Ркго Уаі! бек Бек Тер січ Тукє Туг 645 650 655

А1тїа Бек Маї Тує Тпг бі Аку Ре Меє сіу Гей Рго Тпг Пув Авр Авр 66о 665 670

АвБп о Геч січ Нів Тук Гуз АБп бег ТПг Уа! Меє Аза Агу Аїа січ Туг 675 680 685

Рпе Акуд АБп оМаі АБр Тук ІТеч їец Іїе Нів5 сіу ТПг Аза АБр АБр АБпП 60 690 695 700

Уаї Нібв Рре біп Абзп бек Аза сіп І1їе Аїа Гуз Аза Те Уаї А5п Аза 705 710 715 720 біп Уаі Авр Рпе сіп Аза Меє Ткр Тук бек АБр біп Авп Нів сіу Гей 725 730 735 65 бек біу Гей бек ТПг Авп Нів їеч Туг Тпг Нів Меє Трг Нів Рре Іеч 740 745 750

Туз біп Суб Ррпе Бек Геч бег АБр 755 760

«2105 85 «2115 748 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» БП БАР ектодоменінполі-1і1ув5-мітканнівзб-мітка «4005 85

Агуд Рго Бек Акуд Маі Нів АБп бек біц бій Абп Тбг Меє Агу Аза Іеч 1 5 10 15

ТаЕ їеч Ппув Авр І1е їеч Авп Сіу ТПг Ре бек Тук Пув ТіПг Рре Ріре 20 25 Зо

Рго АБп Тер І1е бек біу біп біц Тук Пец Нів сіп Бек Аїа АБр АБп 35 40 45

АБп о Іїе Уа1і Геї Тук АБп І1їе біш Трг сіу сіп бБег Туг ТПг І1е Іеч 50 55 бо век Авп Акуд Тс Меє Гуз бек Уаі Авп Аза бек А5п Туг сбіу Іеч 5ег 65 70 75 80

Рго АБр Акуд біп Рбе Уа! Тук Гей бій Бек Авр Туг бек ГУув5 Іеч Тгр 85 90 95

Акуд Туг бек Туг Тпйг Аїа ТрПг Туг Туг Іїе Тук Авр Гей 5ег АБп сб1УуУ 100 105 110 біч Рпе Уаі Акуд сіу АвБп сії Геї Рго Агу Рго Іїе біп Тук Геч Сув 115 120 125

Тер Бек Ркго Ма! біу бек Ппув Ге Аїа Тугк Уа1і Тук біп АБп АБп Іе 130 135 140

Тук Геч Гуз біп Агу Рго біу Авр Рго Рго Роре біп І1е ТБг Рре Авхп 145 150 155 160 біу Акуд бій Авп пуб Іїе Робе АБп біу Іїе Рго АвБр Тер Уа1і Тук сій 165 170 175 сій біз Меє їеч Атїа Тйг Гув Туг Аїа їеч Тгр Тер бек Рго Авп С1У 180 185 190

Туз Рпе Гецч Аза Тук Аза сії Робе АБп АБр ТПг АБр І1їе Рго Уаі Ше 195 200 205

Аза Тук Бек Туг Тук б1і1у АБр біч біп Туг Рго Агуд Тбг І1їе АБп І1е 210 215 220

Рго Тук Рго пу5 Аїа біу Аїа пуб Авп Рго Уаі Уаі Аку Ії1е Рбе Те 225 230 235 240

І1їе АвБр ТіПг Тс Тук Рго Аїа Тук Уа1і! сіу Рго сбіп сії Маї Ркго Уаї 245 250 255

Рго Аїа Меє Іїе Аїа бег бБег Авр Туг Тук Роре бБег Тгр Гей ТПг Тгр 260 265 270

Уаї ТЕ АБр бічЧ Акуд Уаї Суб Геч біп Тер Геч Гуз Агку Уаї біп Авп 275 280 285

Уаї бек Уаї Іеч бек Іїе Суб АвБр Ррбе Агу біцп АБр Тгр біп ТПг Тер 290 295 300

Авр о Сув Рго Пув ТПг біп біз Ні5 І1їе бій бі бек Аку ТБ с1у Тер 305 310 315 320

Аа сіу сіу Рре Роре Уаі! бек Тйг Ркго Уаі Рре бек Туг АБр Аїа І1е 325 330 335

Бек Тук Тук Ппув Іїе Ріпе бег Авр Пу5 Авр біу Тук Ппуз Нівз І1е Нів 340 345 350

Тук І1ї1е Ггу5 АБр ТПг Уаі біц А5п Аза Іїе сіп І1е ТБг бек б1іу Пув 355 360 365

Тер бі Аза Іїе АБп Іїе Рпре Аку Уаі ТПг сіп АБр бек Теч Рое Туг 370 375 З8о

Зек Бек АБп бі Рре біп біч Туг Рго біу Агуд Агуд АБп І1е Тугє Агд 385 390 395 400

Іїе Бек І1їе сіу бек Тук Рго Рго бек пуб Пув Суб УМа1і ТПг Сув Нів 405 410 415 60 Печ Агу пуз біз Агуд Суз біп Тугє Туг Тпйг Аза бек Рре бег Авр Туг 420 425 430

Аа Ппув Туг Тугк Аїа Іеч Уаї Суб Тук сіу Рго сіу І1їе Рго І1е 5ег 435 440 445

ТПг Геч Ні Авр біу Агку ТБг Ар о сбіп сії Ії1е Гу5 Іїе Іеч січ сіц 65 450 455 460

Авп о пуб бій Геї бій АБп Аза Теч Пуз АвБп Іїе сіп Геї Рго Гу5 б1Ч 465 470 475 480 біч Іїе Ппув пуб Ге сі Уаі АБр сії І1їе ТБг Те Тер Тук Ппув Меє

485 490 495

Іїе Ггечп Рго Рго біп Рбе Абвр Акуд бек пуб Пув Туг Рго Іеч Іеч І1е 500 505 510 біп Уаі Тук сіу сіу Рго Суб Бек біп бек Уаі Агку бек Уаі Рпе Аза 515 520 525

Уаї АБп Тгр І1е бек Тук Ге Аза бек Гу5 бі біу Меє Уаі Іе Аза 530 535 540

Теч Уаі Авр сіу Акуд сіу ТПг Азїа Роре біп біу Авр Пуб5 Геч Геч Туг 545 550 555 560

Аза Ма1 Туг Агу ув Теч Сіу Уаі Туг сі Уаї1ї бі Авр Сіп І1е Тіг 565 570 575

Аа Уаі Аку пув Рре І1їе біп Месє сбіу Рпре Іїе А5р сії Пуб5 Агу І1е 580 585 590

Аза Ії1е Тер сіу Ткгр бек Тук біу біу Тук Уа1! Бек Бек Іеч Аїа Іеч 595 6о0 605

Аза Бек сіу ТПг біу ІГеч Рбе Гуз Суб сіу Іїе Аїа Уаі Аза Ркго Уаї 610 615 620

Зек Бек Тер січ Тук Тук Аза бек Уаі Тук ТПг сій Акуд Рре Меє с1Уу 625 630 635 640

Пес Рго ТПг Ппуз АБр АБр АБп Гей бій Нів Туг Пув Авп бек ТПг Уаї 645 650 655

Меє Азїа Аку Аїа біц Тук Рпе Акуд Абп Уаі АБр Тугк ІТеч Іеч Іїе Ні 6ббо 665 670 біу ТЕ Аза Авр Авр А5п Уаі Ні Роре біп АБп бег Аїа сбіп І1е Аза 675 680 685

Туз Аза Гей Уаі Абзп Аза сіп Маі АБр Рбе біп Аїа Меє Тер Тукг бБег 690 695 700

Авр о сбіп Абп Нів біу Геї бек біу Пец бек ТПг А5п Ні Геч Тук Тс 705 710 715 720

Нів Меє Трг Нів Рпе їеч Ппув Сіп Суб Рре бек Ге бег Авр С1Уу Гув 725 730 735

Туз пуб пуб пуб пуб с1у Нів Нів Нів Нів Нів Нів 740 745 «2105 86 «2115 2244 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» БП БАР ектодоменінполі-1і1ув5-мітканнівзб-мітка «4005 86 сдсссЕссаа дадсєсасаа сеЕСєдаадаа аасасаасда дадсасссас асєдааддає бо асєссаааєд даасаєсеєсс єсасааааса СЄССЕСсСсссаа ассдчаєсссаддасаадаа 120 баєсєссаєс аасссудсада Єаасаасаєса дсасссєсаса асассдааас аддасааєса 180 баєассасєс сдадсааса аассасєчааа адсудєЧаасу ссссаааєса суддсевсаєса 240 ссЕдаєсддс аассєдсаєа Єсвбадаааде дассаєссаа адсссвєддад абасесссас 300 асадсаасає аєсасаєсса єдасссвсадс аасудчдадчаає ЄсСууєЄбаадчадуа аааєдадсес 360 ссеЕсдЕССяа ЕсССадсасеЕс аєдссддеЕсдд ссЕдЕсддда деЕаааєсадс асасдестсає 420 саааасааса Єсвтаєсєдаа асааадасса ддадасєссас сЕСЕсСсСааає аасаєстєаає 480 ччаачачааа асаааасасєє сєаасудааєс ссачассудач ЄСсаєдаача дчааасдсеесес 540 дсгасаааає асудсссеЕссу дсддаєсЕсСсСЕ ааєддаааасє ЄССєддсаєа Єдсдоддааєсс 60 ааєчасасуд абаєсассаде баєсусссає сссвсаєсаєд дсчаєдааса асаєсссада ббо асааєсаааса Сеєссаєсассс ааадчдсєдча дссаадчаасс ссуєсєдеЕссу дасаєєсаєс 720 ассдасасса сЕсСасссвєдс дсасусбадудс ссссаддаач ЄдссеЕдеЕссс адсааєдаєа 780

Чдесссаадеуд аєсасєвтаєсе садсеєддсеЕс асуєддудудЕса ссдаєдаасу адсасуєєс 840 садеддссаа ааададссса даасдЕєссу дЕССЕДдСсСсва Саєдсдасесє садддаадас 900

Еддсачасасє доадасєдесс ааадассса дадсаєаєад аадааадса аасєдчаєд 960

ЧсеЕддЕдчає сссесудсесс аасассадеьє єЕєсадсваєд аєдссаєсеєсс дсассасааа 1020 асаєсвсаєу асаауддаєдуд сбасааасає аєєссасваєа сСсааадасас сдеддаааає 1080 чдсбасєсааа ссасаадєудд саадедддад дссаєаааса сасєсададс аасасаддає 1140 60 ссассдсєссє ассссадсаа єЄдааєєсєдаа даасасссвуд даадаадааа сасссасада 1200 аєсадсаєсу даадстаєсс Ессаадсаад аадеєдеЕдеєва сеЕсдссаєсс ааддааадаа 1260 аддедссаає ассасасадс аадееєссадс дассасусса адсассаєдс асесдеЕСствдс 1320 басуддсссад дсаєссссає Есссасссесє саєдаєддас дсасєдаєса адаааєсааа 1380 аєсссддаа аааасаадда ассддаааає дсеЕсєдаааа асаєссадсс дссєааадад 1440 65 чааассаада аасеєсдаадеЕ адаєдаааєє асеЕєЄвтаєддуає асаадаєдає сссессссссяе 1500 сааєєєдаса даєсааадаа деаєсссєсу сеаасєсаад єЄдеаєдаєда Есссєдсаді 1550 сададедєаа ддЕСЕдваьє сдсеЕдЕсаає сєдчдчасаєсьє ассеєдсаад Єааддаадачу 1620 аєддеєсаєсу сссбддєдда єддеЕсдадда асадсеєеєссс ааддсдасаа ассссестає 1680 чсадсдсаєс дааадссдучд ЕДдЕсєваєдаа деЕсдаадасс адаєсасадс сдесесадаааа 1740 беєсасадааа сдддеєЕссає єдаєдааааа адаасадсса сасддчадсеєд дЕССсаєсдда 1800 ччаєасуєес сассассддс ссеЕсЄдсаєсе ддаасєддеЕс СЕсСЕєСсСаааєд сСддєаєсадса 1860 чЧчЕддсЕсса СЄссссадссд ддаасаєсас дсдЕСЕєдЕСсСс асасадада аєссаєдаддЧче 1920 сеЕсссаасаа адчаєдаєсаа сСссєдадсас Сасаадааєсє саасєдеєдає ддсаададса 1980 чааєсаєсєса дааасдсада ссаєсьсєсес аєссасудаа садсадаєда сСааєдедсас 2040 рЕссаааасе садсасадає єдссааадсе сЕєддеЕсааєу сасаадсуда сЕеЕсссаддса 2100 аєдеддсасе седассадаа ссасуддсеєвба Ессуддсссбдс ссасудаасса сеЕсСасасасс 2160 сасаєдассс асеЕєсстааа дсадесуеєсєс ссессдесад асуддсааааа дааааадааа 2220 аадддссасс ассаєсасса єсас 2244 «2105 87 «2115 761 «2125 РЕТ «2135 Ми5 тизсчій5 «4005 87

Меє Гуз Тпг Тер Гечп пуб Тпг Уа1ї Рре сіу Ма! Тйг ТБг Гец Аза Аза 1 5 10 15

Теч Аїа Гей Уаі! Уаі Іїе Суб І1ї1е Уаі Іеч Агу Рго бег Агкуд Уа1ї Туг

Зо 20 Пцув Рго бі біу АБп Тс Ппуз Агуд Аза Тей Тпг о Теч Гув Авр І1е Гей 35 40 45

Авп осіу ТПЕ Роре бек Тук Гувз ТПг Тук Рре Рго А5п Тгр І1е бек січ 5о0 ів) бо біп біч Тук Гей Нів сіп Бек сії АБр АвБр АБп І1їе Уаї Рпе Тукг АБп 25 65 7о 75 80

Іїе бій Тбг Аку бій бесє Туг І1їе Іїе Гей Бек АбБп Бек ТПг Меє Гуз 85 90 95

Зек Уаі АБп Аїа ТПг Авр Тук біу Пец бек Рго АБр Аку біп Робе Уаї 100 105 110

Тукє Ген бій бек Авр Туг бек Пу5 Пе Тгр Агу Туг бег Туг ТПг Аї1а 115 120 125

ТПг Тук Тук Іїе Туг АБр Гей біп Абзп сіу сії Рре Уаі Агку б1іу Тусг 130 135 140 біч Те Рго Акуд Рго Іїе сіп Тук ІГеч Сув Тгр бек Рго Уаі1і сіу бБег 145 150 155 160

Туз Теч Аза Тук Уа1і Тук сбіп АБп АБп І1е Туг ІТеч Пу5з біп Агд Рго 165 170 175 біу АБр Рго Рго Рпе сіп Іїе ТПг Тує Тс б1у Акуд біц АБп Агд Ше 180 185 190

Рпе Авп сС1іу І1е Рго Авр Тгр Уаі Туг Сі Січ біц Меє Іеч Аз1а ТЕГ 195 200 205

Туз Тук Аїа Гей Тер Тер бек Рго Авр біу Пу5з Рпе Ге Аза Туг Уаї 210 215 220 біч Рре Азп Авр бБег АвБр І1їе Рго І1їе Іїе Аза Туг бег Туг Тугєк с1Уу 225 230 235 240

Авр сіу біп Туг Рго Агку ТБ Іїе АБп Іїе Рго Туг Рго пу5 Аїа б1Уу 245 250 255

Аа пуб Авп о Рго УМаії Уаі Аку Уа! Рпе Іїе Уаії Авр ТПг ТіПг Туг Рго 260 265 270

Нів Нів Ма1 СсСіу Рго Меє Сі Уа1ї Рго Ма1і Рго Сіц Меє І1е А1їа 5ег 275 280 285 век Авр Туг Тук Ріре бек Тгр Гей ТПг Тер Уа1і Бек бек бій Агуд Уаї 290 295 300

Сув ТГеч біп Тер Ге пуб Акуд УМаії біп Абп Уа! бег Уаі Гей бек Ше 305 310 315 320

Сув АБр Рпе Агуд бій Авр Теср Ніб5 Аза Тгкр біч Суб Рго пуб АвБп сіп 325 330 335 біч Ніз Уаі сі сій Бек Аку Тс біу Тср Аїа сіу сіу Рпе Ріре Уаї 340 345 350 60 бек ТрПг Рго Аза Рре бег Сіп Авр Аїа Тс бек Туг Туг ув І1е Рре 355 360 365 век Авр Пув АБр біу Тук їув Нів Іїе Нів Тугк І1їе Пу5 АБр ТПг Уаї 370 375 З8о бічЧ АБп Аза Іїе сіп Іїе ТПг бек біу Гуз Тсрр бі Аїа І1е Ту Ше 65 385 390 395 400

Рпе Акуд Уа1і ТП біп Авр о бек Ге Рпе Туг бек Бек АБп сії Рое січ 405 410 415 біу Тук Рго біу Агуд Агуд АБп о І1е Туг Агу І1їе бек Іїе с1іу Авп бБег

420 425 430

Ркго Ркго Бек Пув КПув Сув Уаі ТіПг Суб Нів Геч Агуд пуб5 бій Аг Сув 435 440 445 біп Тук Тук ТПг Аза Бек Ріре бек Тук Гуз Аїа Ппу5з Туг Тугк Аїа Гей 450 455 460

Уаї Сув Тук біу Рго біу Гей Рго Іїе Бек ТПг Іечп Ніз АБр б1у Агд 465 470 475 480

ТЕ АБр біп біЧ Іїе біп Уаі Гей сій сі АБп Гуз бічш Теч біцЧ Авп 485 490 495 век Геч Агу АБп Іїе біп Тїечй Рго Ппуз УМаї біш І1їе Ппуз Ппувз Геч Гуз 500 505 510

Авр сіу сіу Геї ТПг Роре Ткр Тук Ппувз Меє Іїе Гей Рго Рго сіп Ріе 515 520 525

АБр Акуд Бек Ппув пуб Тук Рго Теч їец Іїе сіп Уаі Тук сіу с1у Рго 530 535 540

Сув бек біп бек Уа1і пуб Бек Маі Рре Аїа Уа! АБп Тер І1е ТпПг Туг 545 550 555 560

Теч Аїа бек пу сіц сіу І1їе Маі Іїе Аїа Іїец Уаі Авр сіу Акуд с1у 565 570 575

Тис Аза Рре Сіп С1у Авр Пув Ріе їеч Нів Аїа Уа1ї Туг Агд Кув Іеч 580 585 590 біу Уаі Тук біц Уаі сій АвБр сбіп Геї Тс Аза Уаі Аку пуб Рпе Те 595 6о0 605 біч Меє сіу Рпе Іїе Аб5Бр сії сії Аку Ії1е Аїа Ії1е Тер сіу Тер бБег 610 615 620

Тук сі1у біу Тук Уаії бек бек Ге Аза Геї Аїа бек біу ТПг с1у Гец 625 630 635 640

Рпе Ппув Сув біу Іїе Аїа Уаі! Аза Ркго Уаі! бек Бек Тер січ Тукє Туг 645 650 655

А1їа Бек І1е Тує бек біц Аку Рбе Меє сіу Те Рго Тпг Пув Авр Авр 66о 665 670

АвБп о Геч січ Нів Тук Гуз АБп бег ТПг Уа! Меє Аза Агу Аїа січ Туг 675 680 685

Рпе Акуд АБп оМаі АБр Тук ІТеч їец Іїе Нів5 сіу ТПг Аза АБр АБр АБпП 690 695 700

Уаї Нібв Рре біп Абзп бек Аза сіп І1їе Аїа Гуз Аза Те Уаї А5п Аза 705 710 715 720 біп Уаі Авр Рпе сіп Аза Меє Тгр Тугк бек АБр біп А5Бп Ні сіу Ше 725 730 735 бек бек С1іу Агуд Бек Сіп Авп Нів Гечп Тує ТПг Нів Меє Тіг Нів Рре 740 745 750

Теч пу біп Суб Рпе Бек Геч бег АБр 755 760 «2105 88 «2115 749 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Мишачий КАР ектодоменіполі-1у5-мітканнізб-мітка «4005 88

Агуд Рго Бек Акуд Ма1і Тук Гувз Рго біц біу АвБп ТПг Ппуб5 Агуд Аза Іеч 1 5 10 15

ТПЕ Геч ув АБр Ії1е Теч Авп сіу ТпПг Рре бБег Тук Гуз ТПг Тук Ре 20 25 Зо

Рго Авп Тер І1е бБег СсСіш Сіп біц Туг Те Нів біп бег Січ Авр Авр 35 40 45

АвБп о Іїе Уа1і Рре Туг АБп І1їе біп Трг Агуд бій бБег Туг І1їе І1їе Іеч 5о0 ів) бо

Бек Авп Бек ТПг Меє Гуз бек Уаі Авп Аза ТПг Азр Туг с1іу Іеч 5ег 60 65 7о 75 80

Рго АБр Акуд біп Рбе Уа! Тук Гей бій Бек Авр Туг бек ГУув5 Іеч Тгр 85 90 95

Агуд Тук Бек Туг ТПг Аза ТПг Туг Тук Іїе Тук Авр Геч біп АБп б1Уу 100 105 110 65 сій Ре Уаії Акуд сСіу Тук біц Гечп Рго Агуд Рго І1е Сіп Туг Ієч Сув 115 120 125

Тер Бек Ркго Ма! біу бек Ппув Ге Аїа Тугк Уа1і Тук біп АБп АБп Іе 130 135 140

Тук Геч Гуз біп Агу Рго біу Авр Рго Рго Роре біп І1е ТБбг Тує Тр 145 150 155 160 біу Акуд бій Авп Агуд Іїе Рбе АБп біу Іїе Рго АвБр Тер Уа1і Тук сій 165 170 175 бішц бій Меє Геп Аїа ТПг Ппуз Туг Аїа ІТечй Тер Тер б5ег Рго АвБр б1У 180 185 190

Туз Рпе Геч Аїа Тук Уаі сії Робе АБп Авр б5ег АБр Іїе Рго Іе Ше 195 200 205

Аза Тук Бек Туг Тук бі1у АБр біу біп Туг Рго Агуд ТПг І1їе АБп І1е 210 215 220

Рго Тук Рго пу5 Аїа біу Аїа пуб Авп Рго Уаі Уаі Аку Уаі Рбе Те 225 230 235 240

Уаї АБр Тс Тс Тук Рго Нів Нів МУМа1і сіу Рко Меє біц Уаї Рго Уаї1! 245 250 255

Рго бій Меє Іїе Аза бег бБег Авр Туг Тук Роре бБег Тгр Гей ТПг Тгр 260 265 270

Уаї бек бек бічЧ Акуд Уаії Суб Геч сбіп Тер Геч Гуз Агку Уаї біп Авп 275 280 285

Уаї бек Уаї Іеч бек Іїе Суб АвБр Ррбе Агу біцп АБр Тер Ніб5 Аїа Тгр 290 295 300 біч Сув Ркго Пув Авп біп бі Нів УМаії бі біч бег Агу ТПг сіу Тер 305 310 315 320

Аза сіу сіу Рре Роре Уаі! бек Тйг Рго Аїа Рпре бек сбіп АБр Аїа ТЕГ 325 330 335

Бек Тук Тук Ппув Іїе Ріпе бег Авр Пу5 Авр біу Тук Ппуз Нівз І1е Нів 340 345 350

Тук І1ї1е Ггу5 АБр ТПг Уаі біц А5п Аза Іїе сіп І1е ТБг бек б1іу Пув 355 360 365

Тер бі Аза Іїе Туг І1їе Рпре Аку Уаі ТПг сіп АБр бек Теч Рое Туг 370 375 З8о

Бек Бек АБп біп Роре біц біу Туг Рго біу Агуд Агуд АБп І1е Тугє Агд 385 390 395 400

Іїе Бек І1їе сі1у АБп бек Рго Рго бек пуб Пув Суб УМа1і ТПг Сув Нів 405 410 415 їПеч Агу пуз бій Агуд Суз біп Тугє Туг Тпг Аза бег Рре бек Тук Пув 420 425 430

Аа Ппув Туг Тугк Аїа Іеч Уаї Суб Тук біу Рго сіу Геї Рго І1е 5ег 435 440 445

ТПЕ Геч Ні Авр біу Агку ТБг Ар о сбіп бі І1ї1е сбіп Уаі! Іеч січ сіц 450 455 460

Авп о пуб бі Геч бій АБп о бег Тец Агуд Авп Іїе сіп Тез Ркго Гуз Уаї 465 470 475 480 біч Іїе Ппув пуб Геч пуб АБр о сіу біу ТГечп Тйг Рбе Тер Тук Ппув Меє 485 490 495

І1е Гей Рго Рго біп Рре Азр Агу бек Ппувз Ппуз Туг Рго Іеч Іеч Ії1е 500 505 510 біп Уаі Тук сіу сіу Рго Суб Бек біп бек Уа! пувз бек Уаі Рпе Аза 515 520 525

Уаї АБп Ткр І1їе Трг Тук Ге Аза бек Гуз бі біу Іїе Уаі Ше Аза 530 535 540

Теч Уаі Авр сіу Акуд сіу Тс Азїа Роре біп біу Авр Пув5 Рпе Геч Нів 545 550 555 560

Аа Уа1 Тук Акуд Ппуб5 Іеч біу Уаі Тук біц Уаі сій Ар сіп Іеч ТЕбг 565 570 575

Аза УМа1 Аку їув Рпе І1їе Сі Меє сС1іу Рре І1їе АБр бі сії Агу І1е 580 585 590

Аза Ії1е Тер сіу Ткгр бек Тук біу біу Тук Уа1! Бек Бек Іеч Аїа Іеч 595 6о0 605

Аза Бек сіу ТПг біу ІГеч Рбе Гуз Суб сіу Іїе Аїа Уаі Аза Ркго Уаї 60 610 615 620

Зек Бек Тер січ Тук Тук Аза бек Іїе Тук Бек бі Акуд Рре Меє с1Уу 625 630 635 640

Теч Ркго ТПг пуб Авр АвБр АБп о Геч бі Нів Тук Пув Авп бек ТПг Уаї 645 650 655 65 Меє Аза Агуд Аїа сії Тус Рре Аку Авп Уаі! Авр Туг Іеч Іеч І1е Нів 66о 665 670 біу ТЕ Аза Авр Авр А5п Уаі Ні Роре біп АБп бег Аїа сбіп І1е Аза 675 680 685

Туз Аза Гей Уаі Абзп Аза сіп Маі АБр Рбе біп Аїа Меє Тер Тукг бБег 690 695 700

АвБр о сбіп Абп Нів сбіу І1е Іеч бек біу Агуд бек біп АБп Нібв Іеч Туг 705 710 715 720

ТВг Нів Меє Трг Нів Рпе Гпешп Ппуз біп Суз Ріе б5ег Гей бег АвБр б1У 725 730 735

Туз пуб пуб пуб пуб пуб сб1у Ніб Нів Нів Нів Нів Нів 740 745 «2105 89 «2115 2247 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Мишачий КАР ектодоменіполі-1у5-мітканнізб-мітка «4005 89 сдЕсссссаа дадсєсасаа ассєдаадда аасасааада дадссссвас сеєдааддає бо асєссаааєд даасаєсссс асасааааса Сасєссссса ассдчаєссс адаасаадаа 120 баєсєссаєс аасссудадчда Єдчасаасаєса дсаєсєсаса асассдааас аададааєса 180 баєсаєсасєс сдадсааса сассаєддааа адсуєдЧаасу ссасадчаєса СддеЕсвсдесса 240 ссЕдаєсддс аассєдсдна Єсвбадаааде дассаєссаа адсссєддсу абаєсєсасас 300 асадсдасасє ассасасєсса сасссєса аасоддоачдаає Єсдсаадчадча аєасЧадсес 360 ссеЕсдЕССяа ЕсССсСадсаєсс аєдссддеЕсд ссЕдЕсддда деЕаааєсадс асасдесаєває 420 саааасааса Есваєсєдаа асааадасса ддадаєссас сЕСЕсССсСааає аассвсавасес 480 ччаачачааа асачаасасєє сєаасудааса ссачассудч ЄСсаєдаача дчааасдсеесес 540 дссасаааає асусссЕєсу деддЕсЕССса даєддаааає ЄССєддсаєа Єдеадааєсс 60 ааєчасєєса асаєсассаає сасєсусссає ссесаєсає чсчЧаєсєддаса дсаєсссада ббо асєтаєаааса сСеєссаєсаєсс ааадчадсєдчу дссаачдчаасс сучЕсуЧДєссу Єчаесесесаєсс 720

ЧеЕєдасасса сссасссєса ссасусєдудудс ссаасуддаач ЄдссадеЕссс адаааєдаєа 780

Чдесссаадеуд ассасвтаєсеє садсєддсеЕс асаєдудддеЕдЕ ссадєдаасу адсасусеЕєс 840 садеддссаа ааададсдса даасдЕСсСсса дЕССЕДдСсССва Саєдсдассє садддаадас 900

Еддсасдсасє доадааєдеЕсс ааадаасса дЧадсаєдеад аадааадса аасадчаєдУ 960

ЧсеЕддЕдчає сссесудсесс дасассадсе ЕЄгадссадуд аєдссасеєсс ссассасааа 1020 асаєсвсадсу асааддаєдуд Єсбасааасає аєссасвраса сСсааадасас сдеддаааає 1080 чдсбасєсааа ссасааєудд саадедддад дссаєаєаєа сасеєссудсудс аасасаддає 1140 ссассдсєсє ассссадсаа єдааєєєдаа дудєсасссвуд даадаадааа сасссасада 1200 аєсадсаєсу дааасесесс Ессдадсаад аадеєдеЕдеєва сеЕсдссаєсс ааддааадаа 1260 аддедссаає ассасасадс аадееєссадс басааадсса адсассаєдс асесдеЕСтвдс 1320 басддсссвуд дссеЕссссає єсссасссеєс саєдаєдудсс дсасадасса адааасасаа 1380 чеаєсадаау аааасааада асєддаааає ЕсеЕСЕєЧдадаа абаєссадсс дсстааадед 1440 чачаєсаада адсєсааада сдддодадасеєд асЕєєсєддеє асаадчаєдає ссдссесссяе 1500 садеєєдаса даєсааадаа усассссєсу сеаасссаад єдеаєддеєдуа ЕссЕєдеадс 1550 сададедеЕса адздзеЕсЕдеуєє сдсеЕдЕсаає сєдччаєаассє ассссдсаад Єааддадччуу 1620 асадссаєсу ссседдсада єддеЕсддддс асеЕдсьессс ааддсдасаа ассссвдсає 1680 чдссуєдсаєс даааассдуд Єдбаєсаєдаа деЕсдадддасс адсєсасадс Єдесесадаааа 1740 бєсасадааа сдддаєєЕссає єдаєдаадаа адаасадсса Сасуддддсеєд дЕССсССасоада 1800 часваєдеьсс сасссссддс ссеЕсЄдсаєсеі ддаасєддеЕс СЕсСЕеєсаааєд Сддсаєадса 1860 чЧчЕддсЕсса СЄссссадссд ддаасаєсас дсаєссаєсс асссадада аєссаєдддас 1920 сеЕсссаасаа аддасудасаа сСсссдаасас бСасаааааєє саасєдеєдає ддсаададса 1980 чааєсаєсєса дааасдсада ссаєсьсєсес аєссасудаа садсадаєда сСааєдедсас 2040

СеЕссадаасе садсасадає єдссааадсе ЕєЄдДУЄсСааєд сасаадсдда СЕсСссаддадс 2100 аєдеддсасе сеєдассадаа ссаєддбаєа Есаєсєддудс дсесссадаа Ссаєставає 2160 асссасаєда сдсасеЕсссеЕ саадсааєдс ЕЕЕЕЄсСЕеєсасє садасудсаа ааадааааад 2220 ааааадддсс ассассаєса ссаєсас 2247 «2105 190 «2115 748 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Ціномолгус ЕКЕАР ектодоменіполі-1у5-мітканнівзб-мітка бо «4005 90

Агуд Рго Рго Акуд УМаі Нів АБп бек біц бій Абп Тбг Меє Агу Аза Іеч 1 5 10 15

ТПЕ Геч ув АБр Ії1е Теч Авп сіу ТпПг Рре бБег Тук Гуз ТПг Ропе Ре 20 25 Зо 65 Рго Авп Тер І1е бБег Сс1іу Сіп біц Туг Те Нів біп бег Аза Авр Авп 35 40 45

АБп о Іїе Уа1і Геї Тук АБп І1їе біш Трг сіу сіп бБег Туг ТПг І1е Іеч 50 55 бо век Авп Акуд Тс Меє Гуз бек Уаі Авп Аза бек А5п Туг сбіу Іеч 5ег 65 70 75 80

Рго АБр Акуд біп Рбе Уа! Тук Гей бій Бек Авр Туг бек ГУув5 Іеч Тгр 85 90 95

Акуд Туг бек Туг Тпйг Аїа ТрПг Туг Туг Іїе Тук Авр Гей 5ег АБп сб1УуУ 100 105 110 біч Рпе Уаі Акуд сіу АвБп сії Геї Рго Агу Рго Іїе біп Тук Геч Сув 115 120 125

Тер Бек Ркго Ма! біу бек Ппув Ге Аїа Тугк Уа1і Тук біп АБп АБп Іе 130 135 140

Тук Геч Гуз біп Агу Рго біу Авр Рго Рго Роре біп І1е ТБг Рре Авхп 145 150 155 160 біу Акуд бій Авп пуб Іїе Робе АБп біу Іїе Рго АвБр Тер Уа1і Тук сій 165 170 175 сій біз Меє їеч Атїа Тйг Гув Туг Аїа їеч Тгр Тер бек Рго Авп С1У 180 185 190

Туз Рпе Гецч Аза Тук Аза сії Робе АБп АБр ТПг АБр І1їе Рго Уаі Ше 195 200 205

Аза Тук Бек Туг Тук б1і1у АБр біч біп Туг Рго Агуд Тбг І1їе АБп І1е 210 215 220

Рго Тук Рго Пу5 Аїа біу Аїа пуб Авп Рго Рбе Уаі Агу Іїе Рбе Те 225 230 235 240

І1їе АвБр ТіПг Тс Тук Рго Аїа Тук Уа1і! сіу Рго сбіп сії Маї Ркго Уаї 245 250 255

Рго Аїа Меє Іїе Аїа бег бБег Авр Туг Тук Роре бБег Тгр Гей ТПг Тгр 260 265 270

Уаї ТЕ АБр бічЧ Акуд Уаї Суб Геч біп Тер Геч Гуз Агку Уаї біп Авп 275 280 285

Уаї бек Уаї Іеч бек Іїе Суб АвБр Ррбе Агу біцп АБр Тгр біп ТПг Тер 290 295 300

Авр о Сув Рго Пув ТПг біп біз Ні5 І1їе бій бі бек Аку ТБ с1у Тер 305 310 315 320

Аа сіу сіу Рре Роре Уаі! бек Тйг Ркго Уаі Рре бек Туг АБр Аїа І1е 325 330 335

Бек Тук Тук Ппув Іїе Ріпе бег Авр Пу5 Авр біу Тук Ппуз Нівз І1е Нів 340 345 350

Тук І1ї1е Ггу5 АБр ТПг Уаі біц А5п Аза Іїе сіп І1е ТБг бек б1іу Пув 355 360 365

Тер бі Аза Іїе АБп Іїе Рпре Аку Уаі ТПг сіп АБр бек Теч Рое Туг 370 375 З8о

Бек Бек АБп біп Роре біцш АвБр Туг Рго біу Агуд Агуд АБп о І1е Тугє Агд 385 390 395 400

Іїе Бек І1їе сіу бек Тук Рго Рго бек пуб Пув Суб УМа1і ТПг Сув Нів 405 410 415

Печ Агу пуз біз Агуд Суз біп Тугє Туг Тпйг Аза бек Рре бег Авр Туг 420 425 430

Аа Ппув Туг Тугк Аїа Іеч Уаї Суб Тук сіу Рго сіу І1їе Рго І1е 5ег 435 440 445

ТПг Геч Ні Авр біу Агку ТБг Ар о сбіп сії Ії1е Гу5 Іїе Іеч січ сіц 450 455 460

Авп о пуб бій Геї бій АБп Аза Теч Пуз АвБп Іїе сіп Геї Рго Гу5 б1Ч 465 470 475 480 біч Іїе Ппув пуб Ге сі Уаі АБр сії І1їе ТБг Те Тер Тук Ппув Меє 485 490 495

І1е Гей Рго Рго біп Рре Азр Агу бек Ппувз Ппуз Туг Рго Іеч Іеч Ії1е 500 505 510 біп Уаі Тук сіу сіу Рго Суб Бек біп бек Уаі Агку бек Уаі Рпе Аза 515 520 525

Уаї АБп Тгр І1е бек Тук Ге Аза бек Гу5 бі біу Меє Уаі Іе Аза 60 530 535 540

Теч Уаі Авр сіу Акуд сіу ТПг Азїа Роре біп біу Авр Пуб5 Геч Геч Туг 545 550 555 560

Аа Уа1 Тук Акуд Ппуб5 Іеч біу Уаі Тук біц Уаі сій АБр сіп І1е ТЕбг 565 570 575 65 Аза Ма1 Аку їув Рпе І1їе СсСіп Меє сСіу Рре І1їе Ар бі Ппувз Агу І1е 580 585 590

Аза Ії1е Тер сіу Ткгр бек Тук біу біу Тук Уа1! Бек Бек Іеч Аїа Іеч 595 6о0 605

Аза Бек сіу ТПг біу ІГеч Рбе Гуз Суб сіу Іїе Аїа Уаі Аза Ркго Уаї 610 615 620

Зек Бек Тер січ Тук Тук Аза бек Уаі Тук ТПг сій Акуд Рре Меє с1Уу 625 630 635 640

Пес Рго ТПг Ппуз АБр АБр АБп Гей бій Нів Туг Пув Авп бек ТПг Уаї 645 650 655

Меє Азїа Аку Аїа біц Тук Рпе Акуд Абп Уаі АБр Тугк ІТеч Іеч Іїе Ні 6ббо 665 670 біу ТЕ Аза Авр Авр А5п Уаі Ні Роре біп АБп бег Аїа сбіп І1е Аза 675 680 685

Туз Аза Гей Уаі Абзп Аза сіп Маі АБр Рбе біп Аїа Меє Тер Тукг бБег 690 695 700

Авр о сбіп Абп Нів біу Геї бек біу Пец бек ТПг А5п Ні Геч Тук Тс 705 710 715 720

Нів Меє Трг Нів Рпе їеч Ппув Сіп Суб Рре бек Ге бег Авр С1Уу Гув 725 730 735

Туз пуб пуб пуб пуб с1у Нів Нів Нів Нів Нів Нів 740 745 «2105 91 «2115 2244 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Ціномолгус ЕКЕАР ектодоменіполі-1у5-мітканнівзб-мітка «4005 91 сдсссЕсСсаа дадсєсасаа сеЕСєдаадаа аасасаасда дадсасссас асєдааддає бо асєссаааєд дчасаєсеєсс єсасааааса СЄССЕСсСсссаа ассдчаєсссаддасаадаа 120 баєсєссаєс аасссудсада Єаасаасаєса дсасссєсаса асассдааас аддасааєса 180 баєассасєс сСдадсааса аассасєчааа адсудєЧаасу ссссаааєса Сддсеєсаєса 240 ссЕдаєсддс аассєдсаєа Єсвбадаааде дассаєссаа адсссвєддад абасесссас 300 асадсаасає аєсасаєсса єдасссвсадс аасудчдадчаає ЄсСууєЄбаадчадуа аааєдадсес 360 ссеЕсдЕССяа ЕсССадсасеЕс аєдссддеЕсдд ссЕдЕсддда деЕаааєсадс асасдестсає 420 саааасааса Єсвтаєсєдаа асааадасса ддадасєссас сЕСЕсСсСааає аасаєстєаає 480 ччаачачааа асаааасасєє сєаасудааєс ссачассудач ЄСсаєдаача дчааасдсеесес 540 дсгасаааає асудсссеЕссу дсддаєсЕсСсСЕ ааєддаааасє ЄССєддсаєа Єдсдоддааєсс 60 ааєчасаса асаєсассаде баєсусссає сссвсаєсаєу дсччаєдааса асассссада ббо асааєсаааса сСеєссаєсассс аааддссуда дссаачдаасс сЕсссуєссу дасаєєсаєс 720 ассдасасса сЕсСасссвєдс дсасусбадудс ссссаддаач ЄдссеЕдеЕссс адсааєдаєа 780

Чдесссаадеуд аєсасєвтаєсе садсеєддсеЕс асуєддудудЕса ссдаєдаасу адсасуєєс 840 садеддссаа ааададссса даасдЕєссу дЕССЕДСсСсСва Саєдсдассє садддаадас 900

Еддсачасасє доадасєдесс ааадассса дадсаєаєад аадааадса аасєдчаєд 960

ЧсеЕддЕдчає сссесудсесс аасассадеьє єЕєсадсваєд аєдссаєсесс асассасааа 1020 асаєсвсаєу асаауддаєдуд сбасааасає аєєссасваєа сСсааадасас сдеддаааає 1080 чдсбасєсааа ссасаадєудд саадедддад дссаєаааса сасєсададс аасасаддає 1140 ссассдусєсє ассссадсаа єдааєєєдаа даєсасссвуд даадаадааа сасссасада 1200 аєсадсаєсу даадстаєсс Ессаадсаад аадеєдеЕдеєва сеЕсдссаєсс ааддааадаа 1260 аддедссаає ассасасадс аадееєссадс дассасусса адсассаєдс асесдеЕСствдс 1320 басддссса дсаєссссає Есссасссес саєдасудас дсассдаєса адаааєсааа 1380 аєсссддаа аааасаадда ассддаааає дсеЕсєдаааа асаєссадсс дссєааадад 1440 чааассаада аасеєсдаадеЕ адаєдаааєє асеЕєЄвтаєддуає асаадаєдає сссессссссяе 1500 сааєєєдаса даєсааадаа деаєсссєсу сеаасєсаад єЄдеаєдаєда Есссєдсаді 1550 сададедєаа ддЕСЕдваьє сдсеЕдЕсаає сєдчдчасаєсьє ассеєдсаад Єааддаадачу 1620 аєддеєсаєсу сссбддаєдчда єддеЕсдаддчда асадсееєссс ааддсдасаа ассссвднає 1680 чсадсдсаєс дааадссдучд ЕДдЕсєваєдаа деЕсдаадасс адаєсасадс сдесесадаааа 1740 бєсасадааа сдддаєєЕссає єдаєдааааа адаасадсса Сасуддддсеєд дЕСССсаєсдда 1800 ччавєаєдеЕсс сассассддс ссеЕсЄдсаєсеі ддаасєддеЕс СЕсСЕеєСсааає сддадаєадса 1860 чЧчЕддсЕсса СЄссссадссд ддаасаєсас дсдЕСЕєдЕСсСс асасадада аєссаєдаддЧче 1920 сеЕсссаасаа аддаєдаєаа сссєдадсас сасаадааєе саасєдеєдає ддсаададса 1980 чааєсаєсєса дааасдсада ссаєсьсєсес аєссасудаа садсадаєда сСааєдедсас 2040 60 СЕссаааасо садсасадає єдссааадсе сеєдудєсааєд сасаадсудда СЕсСссаддса 2100 аєдеддсасе седассадаа ссасуддсеєвба Ессуддсссбдс ссасудаасса сеЕсСасасасс 2160 сасаєдассс асеЕєсстааа дсадесуеєсєс ссессдесад асуддсааааа дааааадааа 2220 аадддссасс ассассасса єсас 2244 «2105 12 65 «2115 702 «2125 РЕТ «213» Ното 5арієпь «4005 92

Меє бі бек Рго бек Аза Рго Рго Ніб5 Агу Тгр Суб5 Ії1е Рго Тгр сіп 1 5 10 15

Агуд Геч Геч Геї Тс Аза бек Те Ге ТПг Рпе Тер АБп Рго Рго ТЕГ 20 25 Зо

ТВгЕ Аїа Пув Теч ТПг Іїе бій бек ТП Рго Робе АБп Уаі Аїа бі с01У 35 40 45

Туз біч Уаії Гей Гечп Гечп УМаїії Ні АБп Теч Рго біп Ніє Геч Рое с1Уу 5о0 ів) бо

Тук Бек Тгр Тук Гуз біу біц Акуд Уаі Ар сі1іу АБп Аку біп Іїе Те 65 7о 75 80

Сбіу Ту Уаі Іїе сіу ТПг сіп сбіп Аза ТБг Рго біу Рго Аїа Тукг бБег 85 90 95 біу Аку біц Іїе Іїе Тук Рго АБп Аїа бек ІТеч Те Іїе сіп Ап Ше 100 105 110

І1е біп Авп Авр Тс о сСіу Рре Туг Трг Тез Нів Ма1 І1е Пув БбБег Авр 115 120 125

Теч Уаі АБп біц сіц Аза Тс сіу біп Рбе Агку Уаі Тук Рго січ Гей 130 135 140

Ркго пуб Рго бек І1е бек бек АбБп Авп бек Пув Рго Уа1і бі АБр Гуз 145 150 155 160

АвБр Аїа Уаі Аїа Рре ТПг Суз біц Рго бій ТпПг біп АБр Азїа Тс Туг 165 170 175

Теч Тер Тер Уаі Авп Абп о біп бек Гей Рго Уа! бек Рго Агуд Геч сіп 180 185 190

Пес бек Авп біу АБп Агуд ТБг Гей ТБг Гей Рбре Азп Уа! ТПг Агу Авп 195 200 205

АБр ТпПг Аза Бек Тук Гув Сув біц ТБ біп Абп Рго Уаі бек Аїа Агд 210 215 220

Агуд Бек Авр Бек Маі Іїе Іечш АБп Уа! Гей Тук сіу Рго АБр Аза Рго 225 230 235 240

ТПг І1е бек Рго Те АбБп ТПг бег Туг Агуд бек біу бі АБп Теч Авп 245 250 255

Теч бек Суб Ні Аза Аза Бек АБп Рго Рго Аїа біп Туг бек Тер Ріе 260 265 270

Уаї Авп біу Трг Рре Сіп біп бег Тип біп бі Те Рбе І1їе Рго Авп 275 280 285

І1їе Тпг УМа1ї АБп АБп о бек біу бек Тук ТПг СувБ біп Аза Нібв АБп 5ег 290 295 300

Авр ТПпг сіу Геї АБп Агу ТБ ТБ Уа! Тс Тбг І1їе Тбг Уаї Туг Аї1а 305 310 315 320 біч Ркго Ркго пуб Рго Рбре І1їе ТПг бек АБп АБп бег Авп Рго Уаі1і сій 325 330 335

Авр сії Абр Аза Уаі Аза ІТеч ТБбг Субз бій Рго бій Іїе сіп АБп Тс 340 345 350

ТВг Тук ес Тер Тер Уаі Авп Авп біп бек Гей Рго Уаії бБег Рго Аг4д 355 360 365

Теч біп Пец бек Абвп Авр АБп Агу ТБ Теч ТБг Гец Гей бек Уа1і Тс 370 375 З8о

Агуд Авп АвроУаї сбіу Рго Тук бічЧ Сув сіу Іїе сіп АвБп Пув5 Іеч б5ег 385 390 395 400

Уаї АБр Нів бек Авр Рго Уаі Іїе Геї АБп Уаії Іеч Ту с1іу Рго Авр 405 410 415

АвБр Рго ТПг І1їе бек Рго бек Туг ТПг Туг Тук Акуд Рго сіу Уаі1і АБп 420 425 430

Пес бек Ппеп бек Сув Ніз Аїа Аза 5ег АБп Рго Рго Аїа біп Тугк 5ег 435 440 445

Тер Геч Іїе АБр біу АБп Іїе сіп сіп Ніб ТПг сбіп бій Теп Робе Ії1е 450 455 460

Бек АБп І1їе Тс бічп Гуз АБп бек біу Гей Тук ТПг Сув біп Азїа АБп 60 465 470 475 480

АБп обБек Аза бек біу Нів бек Аку ТПг Тпг о Уа1ї Ппуб5 Тс І1е Тс Уаї 485 490 495 зек Аїа сії Гей Рго ГПувз Рго бек І1їе Бек Бек АБп АБп бек КТув5 Рго 500 505 510 65 Уаї біч Авр Пув Авр Аїа Ма1 Аїа Рре ТПг Сув Сі Рго бі Аїа сСіп 515 520 525

АБп оТпг Тс Тує Геї Тер Тер Уаі АвБп сіу біп Бек Геї Рго Уа1ї 5ег 530 535 540

Рго Акд Геї біп Гей бек АБп біу АвБп Агуд Тпг о Геч Тс Тез Роре АБп 545 550 555 560

Уаї ТЕ Агу АБп Абр Аза Агуд Аза Тугк Уа1ї Суб біу І1їе біп Авп 5бег 565 570 575

Уа1ії бек Аза Авп Агу бек Авр Рго Уа! ТПг Гей Авр Уаї Іеч Ту ЩШ1У 580 585 590

Рго АБр ТПг Рго І1їе Іїе бек Рго Рго Авр бБег бБег Туг Іеч бек б1Уу 595 6о0 605

Аза Авп Геї АБп о Геч бек Суб Нібв бек Аза бек Аб5п Рго бек Рго біп 610 615 620

Тугк Бек Тер Аку Іїе АБп сіу Іїе Рго сіп сіп Ні ТБг біп Уаї Гец 625 630 635 640

Рпе Іїе Аїа Гу5 І1е ТБг Рго Авп Авп Ап сіу Тс Тук Аїа Сув Ре 645 650 655

Уаї бек Авп Теч Аза Тпг сіу Агу Авп Авп бег І1е Уа1ї Пув бег І1е 66о 665 670

ТПг Маї бек Аза бек біу ТПг бек Рго сіу Геї бек Аїа сіу Аїа Тр 675 680 685

Уаї б1у Іїе Месє Іїе сіу Уаі! Гечш Уаі сіу Маі Аза Іїеч Пе 690 695 700 «2105 193 «2115 2322 «2125 РЕТ «213» Ното 5арієпь «4005 93

Меє біп бек біу Рго Акуд Рго Рго Геї Рго Аїа Рго Сбіу Іеч Аїа Гец 1 5 10 15

Аа Гечш Тпг Геї Тс Меє Іеп Аза Агу Гец Аза бек Аза Аза бек Ріе 20 25 Зо

Рпе сіу Сі Авп Нів Теч Січ Уаі! Рго Уаі Аїа ТрПг Аїа Іїеч ТіПг Авр

І1їе АвБр Геї сіп ІТечп біп Рбе бег ТрПг бек біп Рго сіп Аїа Іеч Іеч 5о0 ів) бо

Теч теч Аза Аза сіу Рго Аїа АБр Нів5 Іеч Іеч Ге біп Гечп Туг бБег 35 65 7о 75 80 біу Акуд Гей біп Уаі Акуд Геї Уаії Іеч сбіу біп біц біц Гец Агкуд Гей 85 90 95 біп ТЕ Рго Аїа сії Тбг Геч Гей бек АБр бег І1їе Рго Нів ТіПг Уаї 100 105 110 40 Уаї цеч Тпг Маї Уаі1і Сі сіу Тер Аїа ТіПг ІТеп бек Уаі Авр с1у Ріє 115 120 125

Теч АБп Аза бег бек Аза Уаі Рго біу Аза Рго Ге біц Уа1і Рго Туг 130 135 140 біу Теч Рпе Уаі! сіу сіу Тс сбіу ТБ Іеч біу Пец Рго Тугк Геч Агд 45 145 150 155 160 біу ТБ бек Акуд Рго Геї Акуд біу Суб Теч Ні5 Аїа Аза ТпПг Геч АБп 165 170 175 біу Акуд бек Гей Гечп Агуд Рго Геї ТіПг Рго АБр Уаі Нів сі сіу Сув 180 185 190

Аза бі сій Рре бБег Аїа бек Авр Авр Уаі Аїа Іеч Ссіу Рре бек СЩ1У 195 200 205

Рго Нів Бек Геї Аза Аза Робе Рго Аїа Тер сіу ТПг сіп АБр біч с1Уу 210 215 220

ТПЕ Геч сії Роре ТБбг Тецп Трг Тпг біп Бек Агуд біп Аза Рго Іеч Аїа 225 230 235 240

Рпе сіп Аїа сіу бі1у Агку Акуд біу Авр Рбе Іїе Туг Маі АБр Іїе Ре 245 250 255 біч бі1у Ні5 Гей Агуд Аза Уаі Уаї біч Гуз біу біп сіу ТпПг Уаї Гей 260 265 270 60 Теч Нів Авп бег Уаі Рго Маі Аїа Авр Сі1іу Сіп Рго Нів бі МУМаї 5Зег 275 280 285

Уаї Нібв Іїе АБп Аза Ніб5 Агку Геї сії І1е бек Уаі Ар біп Тук Рго 290 295 300

ТПЕ Ні ТБг бек АБп Агуд сіу Уа1ї Гечс бБег Тугк Іеч бі Рго Агдудщ с1у 65 305 310 315 320

Ззек Геч Геч Геч біу біу Теч АвБр Аза сіц Аза Бек Агу Ні Іеч бсіп 325 330 335 біч Ні Акуд Пец сіу Геї Тбг Рго бі Аза ТБг Абп Аза бек Геч Гей

340 345 350 біу Сув Меє бій Авр Геч бек УМаі АБп біу біп Агуд Агуд сіу Геч Агд 355 360 365 біч Аїа Гей Гей ТпПг Агуд Абп Меє Аза Аза біу Суз Акд Геч січ сій 370 375 З8о біч біч Тук біц Авр Ар Аїа Тук біу Ніз Туг біц Аза Рпре бБегє ТПг 385 390 395 400

Теч Аза Рго біц Аза Тер Рго Аїа Меє біч Ге Рго бій Рго Сув Уаї 405 410 415

Рго бій Рго С1іу Геч Рго Рго Уаі Рре Аза АвБп Рре ТрПг Сіп Іеч Іеч 420 425 430

ТПг І1е бек Рго ІТеч Уаі Уаі Аза сі сіу сіу Тс Аза Тгр Іеч сіц 435 440 445

Тер Аку Ніб УМаї біп Ркго ТБПг Гей Азр Гечп Меє біп Аза січ Іеч Агд 450 455 460

Туз бек біп Уаі! Гей Рре бек Уаі ТПг Агку біу Аїа Аку НівБ сіу сій 465 470 475 480

Теч біч Гец Авр Іїе Рго сіу Аїа біп Аїа Аку Ппу5з Меє Рпе ТпПг Гей 485 490 495

Теч Авр Уаї Ма1 Авп Агу Гу5 Аза Аку Рпе І1їе Нівз Авр Ссіу бег Січ 500 505 510

АвБр ТПг Бек АБр біп ІТеч Уа! Іїеч біц Уа! Бек Уаі Тс Аза Агкуду Уаї 515 520 525

Ркго Меє Рго бек Суб5 Теч Агуд Акгуд сіу сбіп Тбг Туг Іеч Іечп Рго І1е 530 535 540 біп Уаі Авп Рго Уаі АвБп АБр Рго Рго Ні5 Іїе Іїе Рре Рго Нів5 с1Уу 545 550 555 560

Ззек Геч Меє Маї Іїе Іеч Січ Ніб ТрПг сіп пуб Рго Геч сіу Рго січ 565 570 575

Уаї Рпе біп Аза Ту Авр Рго Авр бек Аза Сув Січ С1у їеч Трг Ріє 580 585 590 біп Уаі Гей сіу ТПг Бек Бек біу Гей Рго Уаі біц Агуд Агуд АвБр сіп 595 6о0 605

Рго сіу бій Рго Аїа ТПг бі Рре бек Суб Акд сії Гезч біп Аза с1Уу 610 615 620 зек Геч Маї Тук УМаі Ніз Аку сіу сіу Рго Аїа сіп АБр ІТечп Тбг Ре 625 630 635 640

Агуд Уа1і Бек АБр біу Іеч біп Аза бек Рго Рго Аїа ТПг Іеч Гуз Уаї 645 650 655

Ууаї Аїа І1їе Акуд Рго Аїа Іїе Сіп І1їе Ніб5 Агуд бегє Тіг Сс1у Іеч Агд 66о 665 670

Теч Аїа сіп сіу Бек Аза Меє Рго Іїе Те Рго Аза А5п Ге бБег Уаї 675 680 685 біч ТЕ Авзп Аїа Уаі сіу сіп АБр Уаії бек Уаі Ге Рре Агкуд Уаі1і Тс 690 695 700 біу Аїа Гей сіп Рпе сіу сії ІГеч біп Гуз біп сіу Аїа сіу сіу МУаї 705 710 715 720 біч бі1у Аїа сій Тер Тер Аїа Тс біп Азїа Рбе Ніб5 сіп Агуд Авр Уаї 725 730 735 сій біп с1у Агуд УМа1і Агу Туг Геч бек ТіПг Авр Рго Сіп Нів Нів А1а 740 745 750

Тук АБр ТПг Уаії бічЧ Аб5п Гец Аза Гечш сі Уаії біп Уаі сСіу біп сіц 755 760 765

І1їе Геч Бек АБп ТГецп бек Рпе Рго Уа! ТПпг Іїе сіп Аку Аїа ТБПг Уаї 77о 715 780

Тер Меє Іечп Агу Теч біц Рго Геш Ніб ТПг сіп АБп Тс біп біп сіц 785 790 795 800

ТПг Геї Тс ТБ Аза Ні5 Гей сіц Аза ТПг Геч сії бій Аза с1у Рго 805 810 815 60 бек Рго Рго Тіг Рре Нів Тує біц Ма1 Уаі1ї Сіп Аза Рго Акуд Пув СЩ1У 820 825 830

АвБп о Геч біп Геї біп біу ТБ Агуд Гей бег Авр сіу біп с1у Рое ТЕбг 835 840 845 біп АБр Авр Іїе сіп Аїа сіу Аку Уаі ТБг Туг біу Аїа ТПг Аза Агд 65 850 855 860

Аза бек бі Аїа УМаії бії АвБр Тйг Рре Акуд Рре Акуд Уаі ТіПг Аза Рго 865 870 875 880

Ркго Тук Роре бек Рго Теч Туг ТПг Рпре Рго Іїе Ніб5 Іїе сб1іу б1іу Авр

885 890 895

Рго АБр Аїа Ркго Уаі Іеч ТБг Абп Уаії Гей Геч Уаі Уаї1і Рго біч с1Уу 900 905 910 біу біч сіу УМаі! Гей Бек Аїа АБр Ніб5 Іеч Рбе Уаі Пубв5 бек Геч АБп 915 920 925 зек Аїа Бек Тугк Іеч Тук біч Уаі Меє сій Агуд Рго Агку Ні б1у Агд 930 935 940

Теч Аїа Тер Акуд сіу Тпг біп АБр Губ5 ТБ ТБг Меє Уаї! ТрПг бек Роре 945 950 955 960

ТВгЕ АБп бій Авр ІТеч еп Агу біу Агу Ге Уаї Туг біп Нібвз Авр Авр 965 970 975

Бек бі Тбг Тс бі Авр АБр Іїе Рго Рпе Уаі Аза ТПг Агку біп с1Уу 980 985 990 біч бек бек біу Авр Меє Аїа Ткгр сі сі Уаі Агу біу Уа1і Рпе Аг4д 9395 1000 1005

Ууаї Аїа Іїе біп Рго Уаі АБп о АБр Ніб5 Аза Рго Уаі Сбіп ТПг І1е 1010 1015 1020 зек Акд І1їе Рбе Ні5 Уаі Аїа Агу сіу сіу Агуд Акд Геч Геч ТЕГ 1025 1030 1035

Таг Авро Авр о Уаї Аїа Рпе бек Авр Аза Авр бек біу Рре А1а Ар 1040 1045 1050

Аза сбіп Гей Маії Геї ТПг Агуд їуб5 Авр о Гей Ге Рпе біу бек Ії1е 1055 1060 1065

Уаї Аїа Уаї АБр бій Рго Тбйг Агуд Рго І1е Ту Ак Рре ТпПгЕ біп 1070 1075 1080 бічЧ А5р ТІеч Агу Гуз Агуд Агуд УМаї Тез Роре Уа! Ні5 бек біу Аїа 1085 1090 1095

АБр Акуд біу Тер Іїе сбіп Геї біп Уаі бек АвБр сбіу біп Ні сіп 1100 1105 1110

Аза Тпг АТа їеч Гечш бі Уаї Сіп Аза бек Сі Рго Тукг Іеч Агд 1115 1120 1125

Уаї Аїа АБп о біу бек бек Ге Уа1і Уаі Рго біп б1у с1і1у біп Ш1У 1130 1135 1140

ТБПг Ії1е АБр ТПг Аїа Уаії їеч Ні Гечп АбБр Тс АБп о Геї Ар Ше 1145 1150 1155

Агуд Бек біу АвБр бій Уаії Нів Тук Ні Уаі ТПг Аїа с1у Рго Агд 1160 1165 1170

Тер б1у біп Ге УМаі Агу Аїа сіу сбіп Рго Аїа ТБПг Аїа Роре 5ег 1175 1180 1185 сСіп біп о Авр о Тез Геч Авр о сСіу Аїа Уаії Іїеч Туг бек Нів АвБп С1У 1190 1195 1200 ек Пес бек Рго Агуд АБр ТПг о Меє Аза Рпе Бек Уаі сі Аїа с0щ1У 1205 1210 1215

Рго Уаі Нів ТПг АБр Аза ТПг Ге сіп Уа! ТПг Іїе Аїа Ггеч сій 1220 1225 1230 біу Ркго ТГеч Аїа Ркго ГПецш пуб Іеч Маі Агку Ніб Ппуз КТув І1е Туг 1235 1240 1245

Уаї Рпе сіп сбі1у бі Аїа Аїа сії Іїе Агу Агу АБр сіп Тез сбіЧ 1250 1255 1260

Азїа Аїа Сіп бі Аїа Уаї Рго Рго Аїа Авр І1їе Ма1! Рре Бег Уаї 1265 1270 1275

Тув бек Рго Рго бек Аїа сіу Тук Іеч Уа! Меє Уа! 5бег Агудуд 01Уу 1280 1285 1290

Аза Ггеч Аїа АБр сій Рго Рго бек Гец Авр Рго Уаі біп бек Ре 1295 1300 1305

Ззек біп бі Аїа Уаі Авр ТПг біу Акуд Уа1ї Геч Ту Ге Нів 5Бег 1310 1315 1320

Агуд Рго бі Аза Тер Бек АвБр Аза Рре бек Гей Абр о Уаії Аїа 5Бег 1325 1330 1335 60 с1у їеш біу Аїа Рго їеч СсСіш сСіу Уаі їеч Ма1! сії ТІєч січ Уаї 1340 1345 1350

Пе Рго Аїа Аза Іїе Рго Гей бі Аїа біп АБп Рре 5Бег Уаї Рго 1355 1360 1365 біч біу біу бек Ге ТБ Гешп Аза Рго Рго Іїец Гей Агуд Уаї 5бег 65 1370 1375 1380 біу Рко Тук Робе Рго ТПг Геп Іеч біу Теч бек Ге біп Уаї Гец 1385 1390 1395 бі Рго Рго біп Ніз біу Аїа Іеч біп Гуз біц АвБр біу Рго біп

1400 1405 1410

Аза Аку ТБг Гей бек Аза Рре обег Тер Акуд Меє Уа1і сі січ сіп 1415 1420 1425

Теч Іїе Агу Тук Уаії Ніб5 Авр біу бек біч ТБг Гец Тібг АБр бег 1430 1435 1440

Рпе Уаі Гей Меє Аза АвБп Аїа бек біц Меє А5р Аг біп бБегє Нів 1445 1450 1455

Рго Уаі Аїа Рібе ТПг Уаї ТПг Уаї Гей Рго Уаі АБп АБр сіп Рго 1460 1465 1470

Рго І1е Ппеч ТіПг Тбг Авп Тбго сС1іу їечп Сіп Меє Тгр Січ Сс1у А1а 1475 1480 1485

ТПпгЕ Аза Рго Іїе Рго Аїа бі Аїа Геї Агу Бек ТПг АБр о б1у Авр 1490 1495 1500

Зек сбіу Бек бі АБр Геї УМаі! Туг ТП Іїе сій біп о Ргро Бек Авп 1505 1510 1515 біу Аку Уаї Уаії Ге Агуд сіу Аа Рго біу Тбйг біц Уаї Агуду бег 1520 1525 1530

Рпе Тпг біп Аза сіп Геї Авр о біу біу ГПечш Уаі Геї Ріре бБегє Нів 1535 1540 1545

Агкуд біу Тс Геч Авр біу С1у Рпе Агуд Рре Агу Те бЗег Авр С1У 1550 1555 1550 біч Нів Тбг бек Рго біу Ні Рре Рбе Аку Уаі ТПг Аїа біп Був 15655 1570 1575 біп Уаії ТІеч Ге бек Ге пуб біу бек біп Тбйг Гей ТіПг Уаї Сув 1580 1585 1590

Рго сіу Бек Маі сіп Рго Геї бек бек біп ТПг Геї Агуд Аза бБег 1595 1600 1605

Зек Бек Аїа сіу ТПг АвБр Рго біп Геп Геч Геї Туг Агд Уа1ї Уаї 1610 1615 1620

Агкуд біу Рго біп Геш Сіу Акд ТІеч Рре Нів Аїа біп Сбіп Авр 5ег 1625 1630 1635

Тіп бі1у сій Аза Гез Уаі А5п о Рпе ТпПг сіп Аїа сії Уаї Тугєк Аза 1640 1645 1650 біу АБп Іїе Геч Тук біц Ні сій Меє Рго Рго біц Рго Робе Тгр 1655 1660 1665 біч Аза Нівз АвБр ТП Гей бі Геч біп Те бек бек Рго Рго Аа 1670 1675 1680

Агуд Авр о Уаї Аза Аза ТБПг Геї Аза Уаі Аза Уаі бек Ріе сіц Аа 1685 1690 1695

Аза Сув Рго біп Агуд Рго бек Нівз Геї Тгр Пув АБп о Ппув б1іу ТІеч 1700 1705 1710

Тер Ма1і Рго сі сіу біп Агд Аїа Агку І1їе Тс Уаі Аїа Аза Те 1715 1720 1725

Авр Аза бек АБп Геї Геї Аїа бек Уаі Рго бек Рго біп Агкд бБег 1730 1735 1740 біч Нібз Авр Уаії Ге Робе сіп Ма! ТБ біп Рре Рго 5бег Агудуд б1Уу 1745 1750 1755 біп Геч ТГеч Уаії бек біц біш Рго Іечп Ні5 Аїа сбіу біп Рго Ні 1760 1765 1770

Рпе їеч біп бБег Сіп їеч Аїа Азїа сіу Сіп їеч Ма1ї Туг АїТа Нів 1775 1780 1785 сбіу бі1у Сбіу біу ТЕ біп біп о АвБр о біу Рбе Ні5 Рпре Агу Аа Ні 1790 1795 1800

Теч біп біу Рго Аїа сбіу Аза бек Маі Аза біу Рго біп ТПг 5бег 1805 1810 1815 бічЧ Аїа Рбе Аїа І1е ТПг Уаі Агу АБр Уаі АБп о біц Агу Рго Рго 1820 1825 1830 біп Рго біп Аїа бек УМаії Рго Іеч Агу Іїеч ТБйг Акд біу бег Агд 1835 1840 1845 60 Аза Рго Іїе Бег Агуд Аїа Сіп Іец бег Уаі Уаі Авр Рго Авр 5ег 1850 1855 1860

Аза Рго сіу бі Іїе сіп Ту бі Уаі сбіп Агд Аїа Ркго Нів Авп 1865 1870 1875 біу Рпе ТІеч бек Геч Уаії сіу сіу біу Теч біу Ркго Уаї ТПг Агд 65 1880 1885 1890

Рпе ТП біп Аза Авр УМаі Азр бек сбіу Акд Геї Аїа Ріре Уаії Аза 1895 1900 1905

АвБп осіу бек бек УМаі Аїа сіу Іїе Рре сбіп Гей бек Меє бек АБр

1910 1915 1920 біу Аїа Бек Рго Рго Пец Рго Меє бек ІТеч Аїа Уаі АвБр І1е Гец 1925 1930 1935

Рго Бек Аїа Іїе сіп Маі біп Гей Агуд Аїа Рго Геї сії Уаї Рго 1940 1945 1950 біп Аїа ТІеч біу Агу бек бек Іеч бек біп біп біп Геч Агуд Уаї 1955 1960 1965

Уаї 5ек АвБр Агу бій бі Рго сії Аза Аїа Ту Ак Іеч Іїе сбіп 1970 1975 1980 с1у Рго біп Тує С1у Ні Геї Ієш Уаі1і сСіу с1у Агу Рго ТіПг бег 1985 1990 1995

Аза Рпе бек біп Рбе сіп Іїе АБр біп сіу біц Уаі Уаї Ріе Аїа 2000 2005 2010

Рпе Тпг Авп Рре бБег бек бек Нібв Авр Ніб Рре Аку Уаії Іечзч Аза 2015 2020 2025

Теч Аїа Агу біу Маі АБп Аза бек Аїа Уа! Уаі АвБп Уа! Тік Уаї 2030 2035 2040

Агуд Аїа Гей Ге Ні Уаі Тгр Аїа сіу сіу Рго Тер Рго сбіп с1У 2045 2050 2055

Аза Тпг о Геч Агд Ге Авр о Рго Тс о Ма1і! теп АБр Аїа сіу Січ Геч 2060 2065 2070

Аза А5п о Агуд ТБг о сіу Бек Маі Рго Акуд Рпе Акд Геї Геч сій с1Уу 2075 2080 2085

Рго Акд Нів сіу Акуд Уаі Уаі Агу Уаі Рго Агд Аїа Агуду ТП сій 2090 2095 2100

Рго сіу біу Бек біп Ге УМаі бі біп Рпе ТПг сбіп о біп Ар Гей 2105 2110 2115 бічЧ Ар біу Агуд Геч біу еп бі Маі! бі1іу Акуд Рго бічЧ б1у Агд 2120 2125 2130

Аза Рго Сіу Рго Аїа Сіу Авр бег їеч Тпг їеч бі Іеч Тер Аї1а 2135 2140 2145 біп біу Маї Рго Рго Аїа Уаі! Аза бек ІТеч АбБр Рпе Аїа Тс сі1ц 2150 2155 2160

Рго Ту АБп Аїа Аза Агу Рго Туг бек Уаі Аїа Геї Ге бБег Уаї 2165 2170 2175

Рго бі Аїа Аза Агку ТБ бі Аза сбіу пуб Рго бій бек бек ТЕГ 2180 2185 2190

Рго ТП сіу бій Рго сіу Рго Меє Аїа Бек Бек Рго сій Рго Аіїа 2195 2200 2205

УуУаї Аїа Ппув Ссіу с1у Рбе їеш бек Рпе їеч Сіп Аїа Ап Меє Рре 2210 2215 2220

Ззек Уаї Іїе Іїе Ркго Меє Суб5 Гец Уаії Геш Гечп Геї Гечп Аїа Гей 2225 2230 2235

Іїе Геї Рго Геч Геї Рре Ту Ге Агуд пуб Агуд АБпо пуб Тпгє с1У 2240 2245 2250

Туз Ні Авр Уаі біп Уаії Гешп ТПг Аза Гуз Рго Акд АБп біу Гец 2255 2260 22565

Аза с1іу АБр ТБПг бій ТБкє Рре Агу пуб Уаі бій Рго сбіу біп Аза 2270 2275 2280

І1е Рго Пец Тіг Аза Уаі1ї Ркго Сіу Сіп Сіу Рго Рго Ркго с1у С1Уу 2285 2290 2295 біп Рго Авр Рго біц Гец Геш біп Рбе Суз Агу ТП Рго АБп Рго 2300 2305 2310

Аза Ггеч пуб АБп о сіу біп Тує Тгр Уаї 2315 2320 «2105 94 «2115 1210 «2125 РЕТ «213» Ното 5арієпь бо «4005 94

Меє Агу Рго бек біу ТПг Аза сіу Аїа Аза Іечп Іеч Аза Гей Геч Аза 1 5 10 15

Аа Геч Суб Рго Аїа бек Агку Аїа Гечп біц сі Ппу5 Ппув Маї Сув біп 20 25 Зо 65 сі1у ТЬг бек Авп Пув Тїеч ТПг о біп Те Сі1іу Тпг Рре Січ Авр Нів Ріе 35 40 45

Теч бек Гей біп Акуд Меє Ррбе АБп АБп Суз біч Уаії Уаї Ге с1у АБп 5о0 ів) бо

Теч бічЧ Іїе ТпПг Тук Уаі сіп Аку АбБп Туг Абр Гей бек Рпе Геч Гув 65 70 75 80

ТЕ І1ї1е сбіп біп Уаі! Аза сіу Тук Уаі! Геї Іїе Аїа Іеч АБп ТБПг Уаї 85 90 95 бі Агу Іїе Рго Ге сі АБп Гей біп Іїе І1їе Акуд біу Авп Меє Туг 100 105 110

Тук біп АБп бек Туг Аїа гейш Аїа Уаії Ге бек АБп Туг АБр Аза Авп 115 120 125

Туз ТП біу Пес пуб бій Ге Рго Меє Агу АБп Тїец сбіп сі Іїе Гей 130 135 140

Нів сі1у Аїа Уаії Агу Ріпе бег Авп Ап Рго Аїа Тез Суз АБп Уаї сіц 145 150 155 160 зек Іїе біп Тер Аку АБр І1е Уаї бек Бек Авр Роре Геї бек АБп Меє 165 170 175 век Меє Авр Рпе біп Азп Нів Гпечп біу бек Сув біп Ппуз Сув АБр Рго 180 185 190 ек Сув Рго АБп біу бек Сув Тгр біу Аїа сіу сій бі АБп Сув біп 195 200 205

Туз Теч ТП пуб Іїе Іїе Су Аїа біп біп Суб бек біу Агуд Суб Аг4д 210 215 220 біу Ппув бек Рго Бек Авр Сув Суб Нібв АБп біп Су5х Аза Аза сіу Сув 225 230 235 240

ТЕ бі1у Рго Аку бі бек Авр Суб Геч Уа1і Сув Аку Гуз Роре Агу Авр 245 250 255 бі Аїа ТП о Сув Ппув Авр оТБг Суб Рго Рго Іеч Меє Іеч Туг Авп Рго 260 265 270

ТПг Тс Тук біп Месб Авр Уаії Авп Рго січ сіу Гуз Туг бек Рпе с1Уу 275 280 285

Аа ТПпг Суб Ма1ї Куб Гуз Сув Рго Агуд Авп о Тук Уа1і Уа1ї Тс АБр Нів 290 295 300 біу бек Сув Уаі Аку Аїа Сув сбіу Азїа АвБр бег Тук бі Меє січ сій 305 310 315 320

Авр о сіу Уаі Аку Гпув5 Сув Тув пуб Сув бі с1іу Рго Суб Агу Гуз Уаї 325 330 335

Сув Авп С1у Іїе Сс1у Іїе сі1у сій Рре ПЦув Авр бег Іеч бБег І1е Авп 340 345 350

Аза ТпПг АвБп о І1е Ппуб5 Ні Рбе Гу5 АБп Суб ТПг бек Іїе Бек сб1у АБр 355 360 365

Теч Ні Іїе Гей Рго Уаі Аїа Рре Аку біу АБр бек Роре ТПг Нібє ТіПг 370 375 З8о

Рго Ркго Геї АБр Рго біп бічЧ Гец Азр Іїе Геч пуб ТПг Уаї Ггу5з січ 385 390 395 400

Іїе Тпг сіу Роре Іечп Іїеч Іїе сбіп Аза Тер Рго сії АБп Агу ТБ Авр 405 410 415

Теч Нів Аза Рпе Сі АБп їеч Сі І1е І1е Агуд сС1у Агу Тс Був Сіп 420 425 430

Нів сіу біп Робе бек їец Аїа Уа! Уа1ї! Бек Геї АБп І1е ТПг бек Гец 435 440 445 біу Теч Акуд бек Геч Ппув сії І1їе бек Авр біу АвБр Уаі І1е Іе 5Бег 450 455 460 біу АБп о Гпубв Авп о Геч Суб Туг Аїа АБп о ТБг Іїе АБп Тер Пув пуб Гей 465 470 475 480

Рпе сіу ТПг бек біу біп Гуз Тбг пуб Іїе Іїе Бек АБп Аку б1іу січ 485 490 495

АБп обБег Сув їув Аза Тпг сС1іу Сіп Ма1ї Сув Нів Аїа Іеч Сув бек Рго 500 505 510 біч б1у Сув Тер сіу Рго бі Рго Агу Авр Суб Уаії бек Суб Агд АБп 515 520 525

Уаї бек Аку біу Аку біц Сув Уа1і АвБр Гпув5 Суб АБп Теч Іеч біц с01УуУ 60 530 535 540 бічЧ Рго Акуд бі Рбе Уаі сії АБп бек біп Сув Ії1е біп Суб Нів Рго 545 550 555 560 біч Сув Гей Рго біп Аза Меє АБп І1е ТПг Су5з ТПг сб1у Агуд с1у Рего 565 570 575 65 Авр Авп о Сув Ії1е біп Сув Аїа Нів Туг І1е Авр Сі1іу Рго Нів Сув Уаї 580 585 590

Туз ТВ Суб Рго Аїа сіу Уа1і Меє сб1у біп АБп АбБп Тс Гей Уаі1! Тгр 595 6о0 605

Туз Тук Аза АвБр Аза сіу Нів Ма1ї Суб Нів ІТеч Суб Нібв Рго Ап Сув 610 615 620

ТПг Тук бі1у Сув ТПг біу Рго сіу Геч січ сбі1у Сув Ргро Тбйг АвБп с1Уу 625 630 635 640

Рго Ппув І1їе Рго бек Іїе Аїа Трг сбіу Меє Уаї сіу Аза Гей Гей Іецй 645 650 655

Теч Геч Уаії Уаі Аза Геї сіу І1їе біу Теч Рре Меє Агу Агу Агуд Ні 66о 665 670

Іїе Уаі1і Аку пуб Агу ТБ Тез Агуд Агуд Гей Гей сбіп бі Акуд січ Іеч 675 680 685

Уаї бій Рго Ге Трг Рго бек сіу бі Аза Рго АБп біп Аїа Іеч Гец 690 695 700

Агуд Іїе Геч Ппув бі ТБ біч Рбе Ппуз пуб Іїе пуб Уа1і Іеч сбіу б5ег 705 710 715 720 сі1у Аїа Рпе сіу Тпг Уаї Туг Ппув Сіу їеч Тгр І1е Рго січ с1у січ 725 730 735

Туз Уаії пуб Іїе Рго Уаі Аїа І1ї1е Гуз біч ІечЧ Акгуд біц Аза ТпПг бБег 740 745 750

Рго ПЦув Аїа АБп Гуз біш Іїе Гец Авр біц Аза Тугк Уа1і Меє Аза 5ег 755 760 765

Уаї АБр АБп о Рго Ніз Уаії Суб Акд Геї Геч сіу І1їе Су5з Іеч Трг 5бег 770 775 780

ТПг Маї біп Течп Іїе Тбг сбіп Гецш Меє Рго Рре сіу Су5 Іеч Іеч Авр 785 790 795 800

Тук Маі Акуд біч Нів Пув Авр Авп І1їе сіу Бек біп Туг Геч Іеч Авп 805 810 815

Тер Сув Маії біп Іїе Аїа пуб сіу Меє А5п Тугє Тез біцп АБр Агуд Агд 820 825 830

Теч Уаі Ніз Агуд Авр Геї Аза Аїа Агку АБп Уа! Іеч Уаї Ппуб5 ТпПг Рго

Зо 835 840 845 біп Ніз Уаії пуб Іїе ТПг АвБр Роре сбіу Іечп Аза їу5 Геч Ге сіу Аза 850 855 860 біч бічЧ пуз бі Тук Ні5 Аїа січ сіу біу Гуз Уаі Рго Іїе Пув Тгр 865 870 875 880

Меє Аїа Іеч сій бек І1їе Іїеч Нів Агу І1е Туг ТЬг Нів біп бег Авр 885 890 895

Уаї Тер бек Тук біу Уаі ТПпг Уаі! Тер сії Тез Меє Тбг Рбе сіу бег 900 905 910

Туз Рго Тук Авр сіу Іїе Рго Аїа бек біцш Іїе бек бек Іїе Геч сій 915 920 925

Туз біу біц Акуд Гей Рго біп Рго Рго І1їе Суб5 ТБПг І1їе Авр Уаі1ї Туг 930 935 940

Меє Іїе Месє Уаї пуз Суб Тер Меє Іїе АБр Азїа АБр б5ег Агу Рго Пув 945 950 955 960

Рпе Агд Сі їеч Іїе І1е Сі Рпе бег Пув Меє Аза Агу АБр Рго сіп 965 970 975

Агуд Тукє Геч Уаії Ії1е біп б1у АБр біц Акуд Меє Ні Гей Рго бег Рго 980 985 990

ТПЕ АБр бек АБп Рпе Туг Акуд Аїа ТГецп Меє АвБр бій сії Авр Меє Ар 9395 1000 1005

Авр Уа1і Уаї АБр Аїа АБр сії Туг Ге Іїе Рго біп біп с1у Ре 1010 1015 1020

Рпе бБег бек Рго Бек ТПг бек Агу Тс Рго Геч Геї бек бек Гей 1025 1030 1035 бек Аза Тірг обБег Авп Авп о бБег Тпг оУаії Аїа Суб І1е Авр Агд Ап 1040 1045 1050 біу Тїеч біп бек Суб Рго Іїе ПГуб5 біш Авр бек Рпе Іеч біп Агд 1055 1060 1065

Тук Бек Бек АБр Рго ТПг біу Аїа Геї ТПг сії АБр Бек Іїе Ар 60 1070 1075 1080

Авр ТП Робе Гей Рго Уаі Рго бі Туг Іїе АвБп біп бек Уаі1ї! Ркго 1085 1090 1095

Туз Агуд о Рго Аїа біу бек Уаі! біп АБп Ргко Уаі Тук Нів АБп біп 1100 1105 1110 65 Рго Гей АвБп Рго Аїа Рго бек Агу АБр Рго Нів Туг біп АБр Рго 1115 1120 1125

Нів Бек ТіК Аїа Маі біу АБп о Рго сії Туг Геї АБп о ТПгс Уаї біп 1130 1135 1140

Рго Тпг Суб Маі АвБп бек ТПг о Рре Авр бек Рго Аїа Ні Тгр Аза 1145 1150 1155 біп гуз біу бек Ні біп І1е бек Іеч АБр АБп Рго АБр Тукг біп 1160 1165 1170 біп Авр о Рбпе Рпе Рго Пуз бій Аїа Пу5 Рго АБп сіу Іїе Ропе Гуз 1175 1180 1185 біу бек ТіПг Аза бі АБп Аза січ Тук Те Акуд Уаі Аїа Рго сіп 1190 1195 1200

Зек Бек бі Рбе Іїе с1іу Аза 1205 1210 «2105 195 «2115 556 «2125 РЕТ «213» Ното 5арієпь «4005 95

Меє Рго Рго Рго Акуд Пец Геч Рбе Робе ІГеч Іечп Робе Те ТПг Рго Меє 1 5 10 15 біч Уаі Аку Рго бій бій Рго Геч УМаії Уаї Гуз Уаі бі сі с1у Авр

Зо 20 Авп Аїа Уаї їеч біп Сув Теч Пув біу Тпг бек Авр Сі1у Рго ТіПг сіп 35 40 45 біп Течп Трг Тер бек Акуд бій бек Рго ТГеч Гу5 Ркго Рпе Геч Пув Гей 5о0 ів) бо

Зек Геч сіу Геї Рго біу Тец сбіу Іїе Ніб Меє Агу Рго Іеп Аза Іе 25 65 7о 75 80

Тер Геч Ре Іїе Рбе Абп Уаі! бек сбіп сіп Меє сіу біу Рбе Тук Гец 85 90 95

Сув біп Ркго біу Рго Рго Бек біп Гуз Аза Тгр біп Рго сіу Тер Тс 100 105 110

Уаї АБвп Уаї сі сіу бек біу Сіш Те Рбе Агуд Тер Авп Уа1! бег Авр 115 120 125

Теч бі1у біу Ге сіу Сув сіу Геч Губ5 АБп Агуд бег бек біц сіу Рго 130 135 140

Бек Бек Рго бек біу ГПув Геч Меє бек Рго Пув Геч Тугк Уаї Тгср Аза 145 150 155 160

Туз АБр Агуд Рго бій Іїе Тер сії б1іу бій Ргро Рго Сув Гей Рго Рго 165 170 175

Агу Авр Бек Геї АБп обіп бек Теч бек біп Авр Гей ТПг Меє Аза Рго 180 185 190 біу бек ТПг Гпечп Тер Гей бБег Сув біу Маії Рко Рго Азр бБег Уаії 5ег 195 200 205

Агуд сіу Ркго Геч бек Тер ТБПг Нів Уаії Нібв Рго пуб сіу Рго Пув 5ег 210 215 220

Теч Геч бек Ге бі Геч Пу5 АБр АБр Агу Ргро Аїа Агу Ар Меє Тгр 225 230 235 240

Уаї Меє біч ТБ сіу Пец Гечп Гей Рго Агу Аза Тйг Аза сбіп Ар Аза 245 250 255 біу пув Тук Тук Сув Нів Аку біу АБп Те ТПг Меєсє бек Рпре Ні Гей 260 265 270 сій І1е Тс Аза Аку Рго Ма1ії ІГечп Тгр Нів Тгр їеч Іеч Агд Трг С1У 275 280 285 біу Тер Пув Уа1! бек Аза Уа1і Тс Іечп Аза Туг Ге Іїе Рпе Су Гей 290 295 300

Сув бек Ге Уаі! сіу Іїе Геї Ніє Іеп біп Аку Аїа Гей Уа1і Геч АгдФ 305 310 315 320

Агуд Ппув Агуд Пув Агу Меє ТБг Абр оРго Тбпг Агуд Агуд Ре Роре Гуз Уаї 325 330 335

ТПЕ Рго Рго Рго біу бек біу Рго біп АбБп сбіп Тук біу АБп Уаї Гец 340 345 350 60 бек Геч Рго Тіг Рго Трг бек сі1у Те С1іу Агуд Аїа СсСіп Агу Тгр А1а 355 360 365

Аза сіу Геч сіу сбі1у Тс Аза Рго бек Тук біу Авп Рго бБег 5бег АБр 370 375 З8о

Уаї біп Азїа АБр біу Аза Геп сіу Бек Агу бек Рго Рго біу Уаі Ш1У 65 385 390 395 400

Рго бі бі сі біз бі1у бічЧ біу Ту біц бій Рго АБр бек біч січ 405 410 415

Авр Бек січ Рре Тук біцш АБп АБвр о бег Авп Геч сіу біп АБр біп Іеч

420 425 430 ек біп АБр сіу бек біу Тук біц АвБп Рго бі АвБр бій Рго Іеч с1Уу 435 440 445

Рго бій АБр бій АБр бек Рпе бег АбБп Аза сій бБег Тугк сії АБп січ 450 455 460

АвБр бій бі Геї Тс о біп Рсро Уаі Аза Аку ТпПг Меє Авр Рое Іеч 5ег 465 470 475 480

Рго Нів сіу бек Аїа Тгр АБр Рго бег Агуд бі Аза ТіПг бек Іеч с1Уу 485 490 495 бек біп бек Тук біц Авр Меє Агуд сіу І1е їеч Туг Аза Аза Рго сіп 500 505 510

Теч Агку бек Іїе Агуд сіу біп Рго біу Рго АБп Ні5 біц бій Авр Аза 515 520 525

Авр Бек Тук сії АБп Меє АБр АБп Рго Авр біу Рго АвБр Рго Аїа Тгр 530 535 540

Сіу бі1у біу сіу Акуд Меє сіу ТПг Тер бек Тійг Агд 545 550 555 «2105 1196 «2115 297 «2125 РВТ «213» Ното 5арієпь «4005 196

Меє ТЕ ТБг Рго Агуд Авп бек Уаі АБп о біу ТБ Робе Рго Аза сій Рго 1 5 10 15

Меє цув с1у Рго І1е Аїа Меє Сіп бек С1у Рго Пув Рго Іїеч Рре Агд 20 25 Зо

Агуд Меє Бек Бек Геч Ма! біу Рго ТПг біп бек Рпе Ррбе Меє Агу січ

Зек пуб ТПг ІГеч біу Аїа Уаі біп Іїе Меє А5Бп сіу Іеч Робе Ніз І1е

Зо 50 55 бо

Аза Геч сіу сіу Геч Іечп Месє Іїе Рго Аїа сіу Іїе Туг Аза Рго І1е 65 70 75 80

Сув Уаі ТрЕ Уа1! Тер Тук Рго Геї Тгр біу біу І1їе Меє Тує Ше Ше 85 90 95 35 зек біу бек Гей Гей Аїа Аїа ТрПг бій Ппуз Авп бек Агу Ппуз Сув Іецй 100 105 110

Уаї Гпув біу Ппувз Меє Іїе Меє А5п бБег Ге бек Те Рпіе Аїа Аїа Ше 115 120 125 бЗек сіу Меє Іїе Іеп бек Іїе Мес А5р Іїе Гей А5п Іїе Гу5 І1е 5ег 40 130 135 140

Нів Рре ІГеч Гуз Месє біц бек Гей Абзп Рбе І1їе Агу Азїа Ніб5 ТПг Рго 145 150 155 160

Тук І1їе АБп І1їе Туг АБп Суб5 бі Рго Аза АБп Рго бек біч Гу5 Авп 165 170 175 45 век Рго бек Тйг біп Туг Сув Туг бек Іїе біп бек Ге Роіе Ге с1Уу 180 185 190

І1е Гей бек Уаі! Меє Те Іїе Рпе Аїа Рібе Робе сіп сії Гей Уаї Ії1е 195 200 205

Аза сіу Іїе Уаі сії АБп о біч Тер Гуз Агуд Тбг Суб Бек Агу Рго Гуз 210 215 220

Бек АбБп І1ї1е Маі Іеч Іеч бек Аїа сіц сі Ппув Ппув бі біп Тбг Іе 225 230 235 240 біч Іїе Ппувз біц бі Уа1ї Уаї сіу Геї ТЕ біч Трг бек бек біп Рго 245 250 255 пув АБп обіч біз Авр Ії1е Січ І1їе І1їе Рго Іїе СсСіп Січ січ січ с1іц 260 265 270 біч біч ТБ бі Тбг Абп Рре Рго бій Рго Рго біп Авр біп січ бБег 275 280 285

Бек Рго Іїе сії АБп АБр бег бег Рго (516) 290 295 «2105 137 «2115 364 «2125 РЕТ «213» Ното 5арієпь 65 «4005 97

Меє Ркго ІТеч Іеч Гей Гец Гечп Рго Геї Іеїп Тгр Аїа сіу Аза Геч Аза 1 5 10 15

Меє АБр Рго АБп Рпе Тер Гей сіп Уаі сіп сії бек Уа! ТБПг Уаї сіп

20 25 Зо біч бі1у Печш Суб Уа1ї Гечш Уаії Ркго Суб ТПг Робе Робе Ніб5 Рго Іїе Рго 35 40 45

Тук Тук АБр Гу5з АБп бек Рго Уаі Нів сіу Тує Тер Рбе Акду біц с01Уу 50 55 бо

Аза Ії1е Іїе Бек Агу АБр бек Рго Уаі Аза ТпПг А5п Пуб5 Геч АБр біп 65 70 75 80 біч Уаі біп біц бій Тбпг сбіп сб1у Аку Рбе Агу Те Ге сіу Авр Рго 85 90 95 век Агу АБп АБп Суб бег Їїеч бег Іїе Уаі АвБр Аїа Агу Агу Агу АБр 100 105 110

Авп осіу Бек Тук Роре Рре Агку Месє біц Акуд сіу Бек ТПг Ппув Тук б5ег 115 120 125

Тук Ппув бек Рго біп Гец бек Уаі Нібв Уа1! ТПг АБр Те Тбг Ні5з Агд 130 135 140

Рго Пув І1їе Геї Іїе Рго біу ТБг Гей бі Рго сіу Нів бек Гув5 АБп 145 150 155 160

Теч Тпг Суб бек Уа1і Бек Тер Аїа Суб бі біп біу Трг Рго Рго Ше 165 170 175

Рпе бег Тер їеч бБег Аза Аза Рго Трг бек їеч Сіу Рго Агу ТПг ТЕГ 180 185 190

Нів Бек бек Маії ІТеч Іїе Іїе ТпПг Рго Агкуд Рго біп АБр Нівз біу Тр 195 200 205

АвБп о Геч Тпг Сув біп Маії Гуз Рпе Аїа сіу Аїа сіу Уа1і Тс Тс сб1Ч 210 215 220

Агуд ТП Іїе сіп Геї АБп Уа! Тбг Тук Уаі Рго сбіп АБп Рго Тс Тс 225 230 235 240 біу І1їе Рпе Рго сіу Ар сіу бек біу Гуз біп біц ТБПг Агуд Аза с1Уу 245 250 255

Уаї Уаї Нів сіу Аїа І1їе сіу сі1у Аїа сі1іу Ма1ї Тірг Аїа Іеч Іеєч А1а 260 265 270

Теч Суб Пец Сув Гечш Іїе Робе Роре І1їе Уа! їу5 ТргЕ Ніб Агу Аг Гув 275 280 285

Аза Аза Аку Тс Аза Уаі! сбіу Аку АБп Авр Тс Ні Рго Тс Те б1Уу 290 295 300 зек Аїа Бек Рго Куб Нів біп Ппу5з пуб бек ПпувБ Геч Нів сі1у Рго ТЕГ 305 310 315 320 біч ТБг бек бек Суб Бек сбіу Аїа Азїа Рго Тйг Уаі бі Меє А5р сій 325 330 335 сій Те Нів Туг Аїа бек їеч Авп Ріе Нів сіу Меє Авп Рго бег Гуз 340 345 350

АБр ТПг Бек ТПг біз Тук бек біц Уаі Агу ТПг сіп 355 360 «2105 198 «2115 277 «2125 РЕТ «213» Ното 5арієпь «4005 198

Меє Суз Уаї біу Аїа Агуд Агуд Ге сіу Акуд біу Рго Су5з5 Аза Аїа Гец 1 5 10 15

Теч Геч Пец сіу Гечш сіу Ге бек ТПг Уа! Тс сіу Геч Ні Сув Уаї 20 25 Зо біу АБр ТЕ Тук Рго Бек АБп АБр Агу Сув Суб Нів бій Суб Агуд Рего 35 40 45 сі1у Авп Сіу Меє Уаі1ї бек Агуд Сув бек Агуд бек біп Ап ТПг Уаї Сув 5о0 ів) бо

Агуд Рго Суб біу Ркго біу Робе Туг АБбБп Авр Уа! Уаі1ї! Бек Бек Пув Рго 65 70 75 80

Сув пуб Ркго Суб ТПг Тер Суб АБп о Течп Агу бег біу бек бі Аг ГПув (516) 85 90 95 біп Геч Суб ТПг Аза Тбг сіп АБр ТБ Уаї Субз Акуд Суб Агуд Аза с1УуУ 100 105 110

ТПг біп Рко Теч АвБр бек Тук Пув Рго сіу Маі АБр Сув Аза Ркго Сув 115 120 125 65 Рго Рго біу Нів Ріпе бег Рго біу Авр АвБп біп Аїа Суз Пув Рго Тгр 130 135 140

ТПгЕ АБп Суб ТБ Теч Аза сіу пуб Ніє ТПг Геї біп Ргро Аза бек Авп 145 150 155 160

Бек Бек АБр Аїа І1їе Су5 біц Авр Агуд Ар Рго Рго Аїа ТПг біп Рго 165 170 175 біп біц ТБ біп сіу Рго Рго Аїа Агу Рго І1їе ТБг Уаї сбіп Рго ТПг 180 185 190 бі Аїа Тер Рго Агу Тс бБег біп біу Рго бек ТПг Агуд Рго Уа1і бій 195 200 205

Уаї Ркго біу біу Акуд Аїа Уаі Аза Аїа Іїе Іечп сСіу Іеч сіу Геч Уаї! 210 215 220

Теч біу Пец Ге сіу Рго Геї Аїа Іїе Іечп Іеч Аза Гей Тук Геч Гей 225 230 235 240

Агу Агуд АвБр обіп Агу Тез Ргсо Рго Авр Аза Ні Пуб5 Рго Рго біу б1Уу 245 250 255 біу бек Рпе Агуд ТПг Рго Іїе сіп біп бі біп Аза Авр Аза Ні бБег 260 265 270

Таг Іеч Аїа Гуз І1е 275 «2105 199 «2115 255 «2125 РЕТ «213» Ното варієпв «4005 199

Меє б1у АБп бек Суб Туг АвБп Іїе Уаі Аїа ТП Іечп Іеч Іеч Уаї Гец 1 5 10 15

Авп о Рпе сії Агу Тс Агу беє Теч біп Авр Рго СувБ Бек АБп Суб Рго 20 25 Зо

Аа сіу ТПЕ Рре Суб АБр АБп АБп Агуд АвБп о біп Іїе Сув бек Рго Сув 35 40 45

Ркго Рго АБп бек Ріе бег бек Аїа сіу сіу сбіп Акуд Тс Суз АБр Те 5о0 ів) бо

Сув Аку біп Сув Ппуз сіу Маі Рре Агку Тпйг Акуд їув бій Сув бек бег 65 70 75 80

ТПг Бек АБп Аїа біч Суб Авр Суб Тбг Рго сбіу Роре Ніз Суб5 Геч с01Уу 85 90 95

Аа сіу Суб Бек Меє Сув біч біп Авр Суб пуб сіп сіу сбіп січ Іеч 100 105 110

ТЕ Ппув Кпув біу Сув Гпубв Авр о Суб Суб Рбпе сіу ТП Роре АБп Ар бсіп 115 120 125

Туз Акуд біу Іїе Суб Акуд Рго Тегр ТБг АБп Суб бек Гец Авр сіу ГПув 130 135 140 бЗек Ма1і теп Маі1і Авп с1іу ТБ пув бій Агку Ар Ма1і Уаї Сув С1у Рего 145 150 155 160

Бек Рго Аїа АБр Іечп бек Рго біу Аїа Бек Бек Уаі! ТПг Рго Рго Аїа 165 170 175

Рго Аїа Акуд сії Рго біу Нів бек Рго біп Іїе Іїе Бек Роре Роіе Іеч 180 185 190

А1їа Пе Тбг бег Тйг Аза Іїей Іеп Рре ГПецп Ппейп Рбе Робе Гей ТПг Іецй 195 200 205

Агуд Рпе Бек Уаі Маї Гуз Аку біу Аку пуб пуб Геч Геч Туг І1е Ріе 210 215 220

Пув біп Рго Рре Меє Агу Рго Маї Сіп Тс Тпг сСіп Січ Січ Авр С1Уу 225 230 235 240

Сув бек Сув Акуд Рпе Рго січ бі бі біч біу сіу Сув січ Гей 245 250 255 «2105 100 «2115 260 «2125 РЕТ «213» Ното 5арієпь «4005 100

Меє Аза Агу Рго Ніб Рго Тер Тер Геї Суб Маії Іеч біу Тс Гец Уаї! (516) 1 5 10 15 біу Геч бек Аза ТПг Рго Аїа Ркго Пу5 бек Сув Рго біц Агуд Нів Туг 20 25 Зо

Тер Аїа біп біу Гувз Теч Суб Сув біп Меє Сув бій Рго біу Тбг Ре 35 40 45 65 Печ УМаї Ппуз Авр Сув АБр біп Ніз Агу Гуз Аза Аза біп Сув Авр Рго 5о0 ів) бо

Сув Іїе Ркго сіу Уа1ї Бек Роре бек Рго АБр Нібв5 Ніб5 ТПг Агу Рго Нів 65 70 75 80

Сув біц бек Сув Акуд Нібв Суб АБп бек біу Теч Гей Уаі Агу Авп Сув 85 90 95

ТЕ І1їе Тс Аза АБп Аза бій Суб Аза Суб Агу АБп о біу Тгр біп Сув 100 105 110

Агкуд АБр о Ппув бій Сув Тпг бій Сув Авр Рго Пе Рго АБп Рго бБег Іецй 115 120 125

ТЕ Азїа Аку бек бек біп Аза Гей бек Рго Ні Рго біп Рго Тірг Ні 130 135 140

Теч Рго Тук Уаі! бек сі Меє Гезп біп Аза Аку ТПг Аза сіу Ні Меє 145 150 155 160 біп Тс Гец Аза Азр Рбе Агку біп Теп Рго Аїа Аку Тс Гей бБегє ТПг 165 170 175

Нів Тер Рго Рго біп Агкуд бек Гецп СубвБ бБег Бек АБр РоПе І1їе Агдуд Те 180 185 190

Теч УМаї1ї І1їе Рпе бек Сіу Меє Рре Ієш Уаї Рре Тпг Іеч Азїа СсС1у А1а 195 200 205

Теч Рпе Гей Нів сіп Акуд Акуд пуб Туг Агуд бБег АбБп пуб біу січ бБег 210 215 220

Рго Уаі сії Рго Аїа біцп Рко Суб Нів Туг бек Суб Рго Аку біч січ 225 230 235 240 біч біу бек ТПг Іїе Рго Іїе сіп сії Авр Туг Агу пуб Рго біц Рего 245 250 255

Аза Сув Бек Рго 260 «2105 101 «2115 283 «2125 РЕТ «213» Ното 5арієпь «4005 101

Меє бій Рго Рго біу Авр Тер сіу Рго Рго Рго Тер Агуд бег ТіПг Рго 1 5 10 15

Туз ТВ Авр о Уаі! Гей Акуд Геч УМаї Іеч Тук Іїеч Тбг Рре Гец сіу Аза 20 25 Зо

Рго Суб Тугк Аїа Рго Аїа Тец Рго бек Суб пуб бії АБр бі Туг Рго 35 40 45

Уаї бі1у бек бічЧ Сув Сув Рго Пубв Суб Бек Рго біу Туг Агку Уаї Пув 5о0 ів) бо біч Аїа Сув сіу бі Гечп Тбг сі1іу Тс УМаї Сув біц Ркго Суб Рго Рго 65 70 75 80 сіу Тис Туг І1їе Аїа Нів їеч Авп Сіу Іїеч бег Пув Сув Іеч Сіп Сув 85 90 95 біп Меє Суб Авр Рго Аїа Меє сіу Іеп Агку Аїа бег Агуд Авп Сув бБег 100 105 110

Агуд ТП бій Абп Азїа Уаї Суз біу Суб бек Рго сіу Нів Рре Су5 І1е 115 120 125

Уаї біп АвБр біу АвБр Ніб5 Суб5 Аїа Аза Суб Агкгу Аїа Туг Аза Трг 5бег 130 135 140

Бек Ркго сбіу біп Аку Уаії біп пуз сіу сіу ТП бій Бек біп АБр ТЕбг 145 150 155 160

Печ Сув біп Авп о Сув Рго Рго біу ТПг Робе бег Рго Авзп біу ТпПг Гей 165 170 175 біч бічЧ Сув біп Нів сіп Тбг Ппув Суб бек Тгр ІТеч Уаі ТПг Ппу5 Аза 180 185 190 біу Аїа сіу ТПг бек бБег бек Нібє Тгр Уа! Тгр Тер Рпе Гей Бек с1УуУ 195 200 205

Ззек Геч Маії Іїе УМаії Іїе Уаі! Су5 бек ТПг Уаі сіу Геї І1їе І1е Сув 210 215 220

Уаї ув Агуд Агуд пуб Рго Агуд сіу Ар Уаї МУМаї Гуз Уаї І1їе Уа1ї 5ег 225 230 235 240 60 Уаї біп Агд пу Акуд Сіп бі Аза Січ сСі1у бі Аїа ТБ Уаї І1е Січ 245 250 255

Аза Гечш сіп Аза Рго Рго АБр Уа! Трг ТрПг Уаі Аза Уа1і січ бій ТБг 260 265 270

І1їе Рго Бек Роре ТБг біу Агку бек Рго АБп Нів 65 275 280 «2105 102 «2115 595 «2125 РЕТ

«213» Ното 5арієпь «4005 102

Меє Аку Уаії Іеч Ге Аза Аза Гечш сіу Гечш Геї Ріре Іеч Сіу Аїа Гец 1 5 10 15

Агкуд Аза Робе Рго біп Авр Акуд Рго Рпе бій Авр ТПг Сувз Нівз с1у Авп 20 25 Зо

Рго Бек Нів Тугк Тук Авр Гуз Аїа Уаі Агу Акуд Суб Сув Туг Агуд Сув 35 40 45

Ркго Меє сіу Геї Роре Рго ТПг біп біп Суб Рго біп Аку Рго ТБбг Авр 50 55 бо

Сув Акуд пуб біп Сув бій Рго АБр Тук Тук ІТеч АвБр біц Аза А5вр Агд 65 70 75 80

Сув ТпгЕ АТїа Суб Уа1і ТПг Суб бек Агу Авр АБр Геч Уаї сій Ппуб5 Тс 85 90 95

Рго Сув Аїа Тер Авп бег бек Агу Уаі Сув бі Суз Агу Рго біу Меє 100 105 110

Рпе Суб бБег ТПг бек Аза Уаі! А5п бек Суб Аїа Акуд Суб Роре Ріе Ніз 115 120 125

Зек Уаії Сув Ркго Аїа біу Месє Іїе Уаії Ппув5 Рпе Рго сіу ТПг Аза сіп 130 135 140

Туз АБп Тс Уа1! Суб сій Рго Аїа бек Рго біу Уаі бек Рго Аїа Сув 145 150 155 160

Аза Бек Рго сії АБп о Сув Гув бі Рго бек бек сіу ТПг І1е Рго біп 165 170 175

А1зїа Ппув Рго Типг Рго Ма1і бек Рго Аза Трг бЗег бек Аза бег Тс Меб 180 185 190

Рго Уаі Аку сіу бі1у Тс Агуд Те Аїа сіп сіц Аза Аїа бек ГУув5 Іеч 195 200 205

ТПг Аку Аза Рго АБр бек Рго бек бек Уа1і сіу Аку Рго бек 5ег Авр 210 215 220

Рго сіу Геч бек Рго ТПг біп Рго Суб Рго біц сіу Бек б1і1у АБвр Сув 225 230 235 240

Агуд пуб біп Сув бій Ргро Авр Туг Тук Гей Авр сії Аїа с1у Аг Сув 245 250 255

ТВ Аїа Сув Уа1і бек Сув бек Агу Авр Авр Ге Маії сій Ппув Табг Ркго 260 265 270

Сув Аїа Тер Авп бек Бек Агуд Тс Суб бі Сув Агуд Рго біу Меє Ше 275 280 285

Сув Аїа Трг бек Аїа ТПг АвБп бек Суб Аза Агку Суб Уаії Рго Тук Рго 290 295 300

Іїе СувБ Аза Аїа біїп ТБг Уа! ТБг пуб Рго сбіп Абвр Меє Аза бі Гуз 305 310 315 320

АБр ТПпг Тбг Рбе сбіп Аза Рго Рго Ге сіу ТпПг сбіп Рго АБр Суб5 АБп 325 330 335

Рго Тпг Рго Січ Авп сС1іу біз Аза Рго А1їа бек ТіПг бег Рго ТіПг сіп 340 345 350

Ззек Геч Геч Маі АБр бек біп Аза бек пуб ТПг Гечп Рго І1е Рго ТЕГ 355 360 365 ек Азїа Рго Маі Аїа Тез бек бек ТПг сіу Ппув Рго МУМаії Іеч АБр Аза 370 375 З8о біу Рко Уаі Гей Рпе Тер УМаії Іїе Іечп Уаі! Іеч Уаії Уаі1і! Уа1і Уа1 с1Уу 385 390 395 400

Бек Бек Аїа Роре Іеч Іеч Суб Ні Агуд Агуд Аїа Субв Агу Туз Агущ Те 405 410 415

Акуд біп Ппув Гей Нів Іеч Суб Туг Рго Уаї біп ТПг бек біп Рго Гуз 420 425 430

Теч біЧ Пец Уаі Авр Бек Агуд Рго Агу Агу бег бек ТПг біп Геч Агд 435 440 445

Бек сбіу Аїа бек Ма! Тйг біц Ркго Уаі Аїа сії сії Аку біу Теч Меє 60 450 455 460

Бек біп Рго Геч Меє біп Тбг Суб Нібв бек Уаі сіу Аза Аза Тукг Іеч 465 470 475 480 біч бек Гей Рго Гей сбіп АБр Аїа бек Рго Аїа біу біу Рго Бек бБег 485 490 495 65 Рго Агу АБр Гей Рго бій Рго Акуд Уаі! бек ТПг біп Ні Тбг АБп АвБп 500 505 510

Туз Іїе біц Ппув Іїе Туг І1їе Меє Гуз Аза А5р ТрПг Уаі Іїе Уа1 СсС1Уу 515 520 525

ТЕ Маї ув Аїа бічЧ Тецп Рго біц сіу Акуд сіу Геї Азїа сС1у Рго Аза 530 535 540 бічЧ Ркго біц Ге бі бій бі Ге біп Аза АБр Ніб5 Трг Рго Нів Туг 545 550 555 560

Рго бій біп бій Тпг бій Рго Рго Ппеп біу бек Сув Бег Авр Уаії Меє 565 570 575

Теч бек Уаі сі сі сіш сіу Ппув бій АБр Рго Іїец Рго ТПг Аза Аза 580 585 590

Бек с1у Пув 595 «2105 103 «2115 241 «2125 РЕТ «213» Ното 5арієпь «4005 103

Меє Аза біп Ніз сіу Аїа Меє сіу Аза Рре Аку Аїа Іеч Суб5з сбіу Гец 1 5 10 15

Аа Геч Геч Суб Аїа Іечп бек ІТеч біу біп Агуд Рго ТПг сіу с1у Рго

Зо 20 сіу Сув С1у Рго сСі1іу Агу Іїеч Іїеч Іеп Сіу Тпг сС1у Тс Авр А1їа Агд 35 40 45

Сув Сув Акуд Уа1і Ніб Тс Тс Агуд Суб Суб Агуд Авр Тугє Рго сіу сій 5о0 ів) бо біч Сув Сув бек бій Тер АБр Суб Меє Суз Уа! біп Рго січ Роре Ні 25 65 7о 75 80

Сув біу Авр Рго СувБ Суб ТПг Тс Суб Агу Нібв Нібв Рго Суб Рго Рго 85 90 95 біу біп біу Уа1і сіп Бек біп сб1іу Гуз Робе бек Рпе сіу Рпе сіп Сув 100 105 110

І1е Авр Сув Аїа Бек Ссіу Тпг Рпе бБег Ссіу СсСіу Нів сій сС1у Нів Сув 115 120 125

Тув Рго Тер ТПг Авр Суб Тбг біп Рбе біу Рбе Те Трг Уаї Рре Рго 130 135 140 біу АБп Пу5 Тбг Ніб А5п Аза Уа1ї Суб Маії Рго біу бек Рго Рго Аза 145 150 155 160 біч Рко Пец сіу Тер Геї ТПг Уаії Уаії Іеч їІец Аїа Уаі Аза Аза Сув 165 170 175

Уаї Іеч Іеч Іїеч Трг бек Аза сіп Гечп сіу Геї Ніб5 Іїе Тгр біп Гец 180 185 190

Агуд Бек Сбіп Сув Меє Тер Рго Агу біц ТПг Сбіп їеч Іїеч ІЧ Січ Уаї 195 200 205

Рго Рго Бек ТПг біп АБр Аза Агку бек Суб біп Рпбе Рго січ січ січ 210 215 220

Агуд сбіу бій Агуд бБесє Аїа бі біч Гуз біу Агуд Геч сіу АБр Іеч Тгр 225 230 235 240

Уаї «2105 104 «2115 272 «2125 РВТ «2135 Ми5 тизсчій5 «4005 104

Меє Тук УМаї Ткср Уаі сбіп сіп Рго ТПг Аїа Іечї Іечп Іеч Іеч Аїа Гец 1 5 10 15

Таг тїеч сіу Уаі1і Тайг Аза Аку Агу Тез Авп Сув УМа1ї Ппув Нів Тис Туг 20 25 Зо

Рго Бек сіу Ні Гуз Сув Суб Акуд бі Сув біп Рго біу Ніз біу Меє 35 40 45

Уаї бек Аку Суб Авр Ніб ТПг Агуд Абр ТБ Геч Суб Нів Рго Сув бІі1ц (516) 50 55 бо

ТЕ б1у Рре Тук АБп біц Аза Уа1і Авп Туг АБр Тк Сув Тув біп Сув 65 70 75 80

ТЕ біп Суб АвБп Нібз Агуд бек біу Бек січ Геч Гуз біп АБп Суб5 Тр 85 90 95 65 Рго Тпг Сіп Авр Тс оУаї Сув Агуд Сув Агуд Рго біу Тпг біп Рго Агд 100 105 110 біп Авр бек біу Тук пуб Геч сіу Маі АвБр Сув Уаі Рго Суб Рго Рго 115 120 125 біу Ніб Рре бек Рго сіу АБп АБп о біп Аїа Суб пуб Рго Тер ТпПг АБп 130 135 140

Сув ТП Гей бек сіу пуб біп Тс Агу Нібз Рго Аза бег Авр бек Гей 145 150 155 160

АБвр Аїа Уаії Сув бій Авр Акуд бек Їїечп їеп Аїа ТПг Геп Ге Тгр сі 165 170 175

ТЕ біп Аку Рго ТБ Рбе Агу Рго ТПг Тбг Уа1ї бСіп бек Тс ТБг Уаї 180 185 190

Тер Рго Аку ТБг бек біц Пец Рго бек Рго Рго ТПг Іеч Уа! Тбг Рго 195 200 205 біч бі1у Рго Аїа Рпе Аїа Уаії Іеч Іеч Сбіу ІТеч сбіу Пец сіу Геч Гей 210 215 220

Аза Рго Геї ТПг Уаї Іечп Іеп Аза Те Тук Гецп Ге Акуд Пув Аза Тгр 225 230 235 240

Акуд Гей Рго АБп о Тс Рго Пув Рго Суб Тер біу Авп бек Роре Агу ТЕГ 245 250 255

Рго Іїе сіп біп біцш Ні ТБг Авр Аза Ні Рре ТПг Іечп Аза Туз Іе 260 265 270 «2105 105 «2115 256 «2125 РЕТ «2135 Ми5 тизсчій5 «4005 105

Меє б1у АБп АБп Суб Туг Абп Уа1і Уа1ї Уаї Іїе Уаї Іеч Гецч Гец Уаї! 1 5 10 15 біу Сув біц пуб Уа1і сіу Аїа Уаі біп АБп бек Суб Авр Авп Суб сіп 20 25 Зо

Рго біу ТЕ Роре Суз Агу Пу5 Тук Авп Рго Уаі1і Сув Пув бек Сув Рго 35 40 45

Рго бБег ТПг Ре бБег бег І1е Сі1іу сіу Сіп Рго Авп Сув Авп І1е Сув 5о0 ів) бо

Агуд Уа1і Сув Аїа сіу Тук Робе Аку Рпе пуб пуб Рпе Сув бек бек ТЕГ 65 70 75 80

Нів АБп Аїа біч Суз біч Су5 Іїе сіц сіу Рре Ні Су5 Іеч б1іу Рго 85 90 95 біп Сув ТпЕ Агуд Сув бій Ппув АБр Суб Агу Рго біу біп бій Геч ТПг 100 105 110

Туз біп біу Сув пуб Тбг Сув бек Геч біу ТБ Рре Авп Авр біп АБп 115 120 125 сбіу Тпг біу УМаї Сув Агу Рго Тгр ТБг Авп Сув бег ТІеч Авр б1у Агд 130 135 140

Зек УМаії Геч Ппуб5 ТП біу ТБ ТпЕг бі пуб Авр оУаї Уаї Су5з б1у Ркго 145 150 155 160

Рго Маії МУаії бек Ріпе бег Рго бБег ТПг ТПг Іїе бек Уаі Тс Рго сій 165 170 175 біу біу Ркго сіу сіу Нів Бек Геч біп Маії Іїеч ТБг Гей Рре Ге Аза 180 185 190

Пес ТПг бек Аза Гей Ге Ге Аїа Гей Іїе Робе Іїе ТрПг Іеч Геч Ріре 195 200 205 бек Ма1ії їечш ПЦув Тгр І1е Аку Пув Пув Рре Рго Нів І1е Ре Кпу5 сіп 210 215 220

Рго Рпе Ппув Пуб5 ТПг ТПг біу Аїа Аза сіп сій бій АБр Аїа Суб 5ег 225 230 235 240

Сув Акуд Суб Рго біп бій бі біз б1у біу біу біу сбіу Тук січ Гей 245 250 255 «2105 106 «2115 254 «2125 РЕТ «213» Ціномолгус (516) «4005 106

Меє б1у АБп бек Суб Туг АвБп Іїе Уаі Аїа ТП Іечп Іеч Іеч Уаї Гец 1 5 10 15

Авп о Рпе сії Агу Тс Агу беє Теч біп Авр Геч СувБ Бек АБп Суб Рго 20 25 Зо 65 Аза с1у ТБЕ Рбе Суб Авр Авп Авзп Агу бегс біп І1їе Суз Бек Рго Сув 35 40 45

Ркго Рго АБп бек Ріе бег бек Аїа сіу сіу сбіп Акуд Тс Суз АБр Те 5о0 ів) бо

Сув Акуд біп Сув пуб сіу Ма1і Роре Гуз ТБг Агу пу5 бій Суб бек бБег 65 70 75 80

ТПг Бек АБп Аїа біч Суб Авр Суб Іїе Бек сіу Тук Нівз Сув Геч с01Уу 85 90 95

Аза сі Сув бек Меє Сув бій біп Авр Суз Ппу5 біп сбіу біп січ Гей 100 105 110

ТЕ Ппув Кпув біу Сув Гпубв Авр о Суб Суб Рбпе сіу ТП Роре АБп Ар бсіп 115 120 125

Туз Акуд біу Іїе Суб Акуд Рго Тегр ТБг АБп Суб бек Гец Авр сіу ГПув 130 135 140

Ззек Уаії Геч Маі АБп о біу ТБ пуб бі Агуд Абр Уаї Уаї Су5з б1у Ркго 145 150 155 160

Бек Рго Аїа АБр Іечп бек Рго біу Аїа бек Бек Аїа ТПг Рго Рго Аїа 165 170 175

Рго Аїа Аку Січ Рго Сіу Нів бБег Рго Сіп І1е І1їе Рре Ріє Ієч А1а 180 185 190

Теч ТіПг бек ТпПг Уаї Уаї Геї Роре Іечп Іечп Рбе Рбе Гей Уа1і! Геч Агд 195 200 205

Рпе Бек Уа1і Ма1і Гуз Агку бек Акуд пуб пуб Геч Геч Туг І1е Рое Гуз 210 215 220 біп Ркго Рпре Меє Аку Рго Уаі біп Тс Тбг біп бі бій Авр с1іу Сув 225 230 235 240 зек Сув Акуд Рпе Рго біч бі біц сіц сіу сіу Сув біч Іеч 245 250 «2105 107 «2115 5 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205

Зо «223» Пептидний лінкер «4005 107

Сіу біу сіу сіу бБег 1 5 «2105 108

З5 «2115 10 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Пептидний лінкер «4005 108

Сіу біу біу сіу бек сіу сіу сіу біу б5ег 1 5 10 «2105 109 «2115 10 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Пептидний лінкер «4005 109 бЗек сіу сС1у С1у сС1у бег сСі1у С1у С1у С1Уу 1 5 10 «2105 110 «2115 14 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Пептидний лінкер «4005 110

Сіу біу сбіу сіу бек сіу сіу сіу біу бек біу бі1у с1у ШУ 60 1 5 10 «2105 111 «2115 10 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність 65 «220» «223» Пептидний лінкер «4005 111 біу бек Рго біу бек бБег бБег бек біу б5ег

1 5 10 «2105 112 «2115 15 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «4005 112

Сіу біу сбіу сіу Бек сіу сіу біу біу бек біу сбіу сіу сіу бБег 1 5 10 15 «2105 113 «2115 20 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «4005 113

Сіу бі1у сіу сіу бек сіу сіу біу біу бек біу сбіу сіу сіу Бек сб1Уу 1 5 10 15 сі1іу б1у сС1у бег 20 «2105 114 «2115 8 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «4005 114

Сіу бек сбіу бек сіу Бек біу б5ег 1 5 «2105 115 «2115 8 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Пептидний лінкер «4005 115

Сбіу бек біу бек сіу АБп біу б5ег 1 5 «2105 116 «2115 8 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «4005 116

Сіу біу бек біу бек сіу Бек б1Уу 1 5 «2105 117 «2115 656 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «4005 117

Сіу біу бек сіу Бек Сб1УуУ 1 5 «2105 118 «2115. 4 (516) «212» РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «4005 118 65 сіу б1у бек С1Уу 1 «2105 119 «2115 8

«2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Пептидний лінкер «4005 119

Сбіу біу бек біу АвБп сіу Бек б1Уу 1 5 «2105 120 «2115 8 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Пептидний лінкер «4005 120 сі1у б1іу Авп сіу бег Сіу бек ШУ 1 5 «2105 121 «2115 6 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Пептидний лінкер «4005 121

Сбіу б1у Ап сіу Бек сб1УуУ 1 5 «2105 122 «2115 186 «2125 РЕТ «213» Ціномолгус

Зо «4005 122

Теч Ніз Сув Уа1! сіу Авр ТіПг Ту Рго бек АБп Авр Агуд Суб Суб сіп 1 5 10 15 біч Сув Акуд Рго сбіу Авп сіу Меє Уаі! 5ек Агу Суб АвБп Агуд бек сіп 20 25 Зо

Авп о Тпг оУаї Сув Агуд Рго Сув Сіу Рго Сс1іу Рре Туг Авп Авр Уа1ї Уаї 35 40 45 зек Аїа Пув Ркго Субв Гуз Аза Суб ТПг Тер Суб АвБп Геї Агу бек б1у 5о0 ів) бо

Зек бі Акуд пу5 біп Ргро Сув ТПг Аза ТПг біп Абр Тс Уаї Су5з Агд 65 70 75 80

Сув Акуд Аїа сіу ТпПг о біп Рго Геї АБр бек Тук Гув Рго біу Уаі1і Авр 85 90 95

Сув Аза Ркго Суб Рго Рго сіу Ні Роре бек Рго біу АвБр АвБп сбіп Аза 100 105 110

Сув ПЦув Рго Тер Тіпг Авп Суб Трпг Тез Азїа сіу Ппув Нів ТіПг Іеч Сіп 115 120 125

Рго Аза Бек АБп бек бек АБр Аза Іїе Суб сії АБр Агу АБр Рго Рго 130 135 140

Рго ТПг біп Рго біп бі ТБ біп біу Рго Рго Аіїа Агкуд Рго Тс Тс 145 150 155 160

Уаї біп Рго ТЕ біц Аза Тер Рго Агкуд ТБ беє біп Агу Рго бекг ТіПг 165 170 175

Агуд Рго Уаі сій Маї Рго Агу біу Рго Аза 180 185 «2105 123 «2115 192 «2125 РЕТ «2135 Ми5 тизсчій5 «4005 123 60 Уаї Таг Аза Акуд Асу їеч Авп Сув УМа1ії Ппув Нів Тис Туг Рго бек С1У 1 5 10 15

Нів Ппув Сув Сув Агкуд біч Суб біп Рго сіу Нів біу Меє Уаї б5ег Агд 20 25 Зо

Сув АБр Нібв ТПг Агуд Ар ТБ Геч Суб Нів Рго Суб бій ТПг сіу Робе 65 35 40 45

Тук АБп бі Аза Уаії Авп Туг Авр ТПг Суб Ппуб5 біп Сув ТПг біп Сув 5о0 ів) бо

АвБп о Нів Агуд Бек біу бек біч Теч Пуз біп Авп Суб ТПг Рго Тс біп

65 7о 75 8о0

Авр ТпПг Уа1і Сув Аку Суб Агу Рго біу ТПг біп Рго Агкуд біп АБр б5ег 85 90 935 біу Тук Мпув Ге сіу Уа1і АвБр Сув Маії Рго Суб Рго Рго біу Нів Ріе 100 105 110

Бек Ркго біу АБп АБп о біп Аїа Суб пуб Рго Тер ТПг АБп Суб Тк Іеч 115 120 125

Бек сбіу Ппув біп Тс Агу Ніб Рго Аза бек Авр Бек Геї АБр Аїа Уаї 130 135 140

Сув бій Авр Агу бек Ге Гей Аїа ТПг Іей Іеч Тер бій ТПпг біп Агд 145 150 155 160

Рго ТПЕ Рре Аку Рго ТПг ТБг Уаі! біп бек ТПг Тбг Уа1і Тгр Рго Агд 165 170 175

ТПг Бек біш ТІГечп Рго бек Рго Рго ТПг Геч Уаі! Тс Рго бі б1у Ркго 180 185 190 «2105 124 «2115 65681 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Нуклеотидна послідовність ланцюга із западиною Ес «4005 124 часаааасєс асасаєдссс ассуєдссса дсассєдаас ЕССсСсддадоад ассдессадесс бо

ЕсСссесеЕсСсс ссссаааасс сааддчасасс сеЕсаєдаєсеє сссудассссо Єдаддессаса 120

Єдсдсддасєда Єддасдедад ссасудаадас ссЕдаддеЕса адсєсаассд дсасудсддас 180 часЧдєдчачду Сдсасааєдс саадасааа ссусудчдадд адсадсасаа садсасувєас 240 сдєдсддЕса дсдеЕссеЕсас сдеЕссєдсас саддасєддс Єдааєсєддсаа ддадсасаад 300

Едсааддссс ссаасааадс ссеЕсссадсс сссасєсудада ааассаєсесс сааадссааа 360 чадсадсссс дадаассаса ддєдЕдсасс сеЕдсссссає сссудчаєда дссдассаад 420 аассаддсса дссЕсссуєд сдсадеЕсааа ддсеЕссвтасс ссадсдасає сдссдєсддад 480

ЕЧдаодачадса аєдддсадсс дчдадаасаас Сасаадасса судссЕСссуєЄ дссддасесс 540 часудсЕссс СссєсСсСссуЄ дадсаадсес ассуєддаса ададсаддєд дсадсад9чЧчУ 60 аасуєсєЕссс сасудсеЕссудєЄє дчаєдсаєда дссссдсаса ассассасас дсадаададс ббо сЕСсСЕСсСссвдЕ сЕССДддЕаа а 681 «2105 125 «2115» 1335 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність ланцюга антигену людського 0ОХ40 з виступом Ес «4005 125 сеЕдсассдсд Едддсдасас срассссадс аасудассудде дсеєдссасуда деЕдсадассс бо часаасуддса СддЕдЕсСссу дсдсадссуд Єсссадааса ссуєдесдсад ассЕсдсддас 120 ссеЕддссЕсСЕ асаасддасудс ддсдеЕссадс аадсссеєдса адссеЕєдвас сеЕддедсаас 180 сЕдсддадсуд дсадсдадсу даадсадсєд Єдсассудсса сссаддасас сдєдесдсс9д 240

Едесададссу дсасссадсс ссеєддасадс Сасааасссу дсєдчасьд сдсесссеЕвдс 300 ссеЕссЕддсс асеЕссадссс бддсдасаас саддссєдса адссесбддас саасеєдсасс 360 сЕддссуддса адсасасссс дсадсссдсес адсаасадса дсдасдссає седсдаддас 420 сдддаєсссс ссдссассса дссеєсаддаа асссадддсес сеЕсссдссад асссаєсасс 480

ЧдЕдсадссса сададдсссд дсссадаасс адссаддддсе ссадсассад асссуєсддаа 540 чЧчеЕдсссдудсу дсачадссуєЄє сдасччааса Ссасаєсєсс адддсддеєс асссаааєссе 60 чсачасаааа сеєсасасасу сссассуєбудс ссадсасссуд аасссссдуад доадассдєса ббо дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 720 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 780 часуддсдсдда аддеєдсаєаа Єдссаадаса аадссдсддад аддадсадса саасадсасду 840

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 900 аадсдсаадуд Сссссаасаа адссссссса дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 960 ааадддсадс сссдадаасс асаддсдсас ассссдсссс саєдссуддда Єдадсеєдасс 1020 аадаассаду Ссадсссдеєд дЕдссЕддЕс аааддсеЕссс аєсссадсда саєсдссдаєд 1080 60 чадсдддада дсаасддудса дссудадаас аасграсаада ссасудссєсс судЕдссддас 1140 бссудасуддасеє сссесеЕсссе ссрасадсаад сеєсассуєду асаададсад деЕддсадсад 1200 чачдаасуєсє ссссаєдсеєс сдедаєдсає даддсєссдс асаассасса сасдсадаад 1260 адссеєссссс сдсссссудуад баааєссудда ддссєдаасу асаєсєсссда ддсссадаад 1320 аєсдаасддс асчад 1335 65 «2105 126 «2115» 1335 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

«2235» Нуклеотидна послідовність ланцюга антигену мавпи ціномолгус ОХ40 з виступом

Ес «4005 126 сЕссассдЕд Есддддасас сбассссадс аасдассуддЕ дсЕєдЕСсадда дЕдсаддсса бо часаасччдча Сдудєдадссу ссдсаассус Єсссадааса суддсдсдссу Єссодєсдсоа9ЧУ 120 сссддссЕсСЕ асаасудасудс ддесЕсадсдсес аадсссєдса аддссєдсас абддедсаас 180 сЕсадаадсд ддадеЕдадсуд дааасадссд Єдсасуддсса сасаддасас адегсєдссдас 240

Едссуддудсуду дсасссадсс ссеєддасадс Сасаадсссуд чадсєдасе Єдссссседс 300 ссЕссадддс ассссеЕсссс дддсдасаас саддсссдса адсссєддас саасеєдсасс 360

Есдудссудчда адсасасссє дсадссадсс адсааєадсеє судасуссає сеєдедадддас 420 адддассссс сасссасаса дссссаддад асссадддсес ссссудудсесад дсссассасе 480

ЧдеЕссадссса сЕєдаадсссд дсссадаасс Ссасададас ссеЕссасссу дсссуєддад 540

ЧеЕссссадчду дссссдсудЕ сдасчааса Єсасаєсєсс адддсддеєс асссаааєссе 60 дсадасаааа сссасасасд сссассудбдс ссадсасссд аасєсссдудад додадассдЕса ббо дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 720 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 780 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 840

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 900 аадсдсаадд СсЕссаасаа адсссеЕссса дсссссаєсу адаааассає ссссааадсс 960 ааадддсадс сссдадаасс асаддсдсас ассссдсссс саєдссуддда Єдадсеєдасс 1020 аадаассаду Ссадсссдеєд дЕдссЕддЕс аааддсеЕссс аєсссадсда саєсдссдаєд 1080 чачсдчдуачЧача дсаасудудса дссудачаас аасбасаада ссасудссєсс сдєдсеєддас 1140 бссудасуддасеє сссесеЕсссе ссрасадсаад сеєсассуєду асаададсад деЕддсадсад 1200 чадаасуєсє ссссаєдсєс судєдаєдсає даддссссдс асаассасса сасдсадаад 1260 адссеєссссс сдсссссудуад баааєссудда ддссєдаасу асаєсєсссда ддсссадаад 1320 аєсдаасддс асчад 1335 «2105 127 «2115 1353

Зо «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність ланцюга мишачого антигену ОХ40 з виступом Ес «4005 127

ЧЕдассдсса дасуддсєдаа ссдсуєЄдаад сасассрасс ссадсддсса саадсдседс бо ачачадеєдсс адсссудсса судсасудудєд Єссадасудсуд ассасасасу ддасасссвєд 120

ЕдссасссеЕс дсуадасаддд ссєсСвасаас даддссуєда асврасасас сеЕдсаадсад 180 бдсасссаде дсаассасад аадсуддсадс дадсєдаадс адаассдсас ссссасссад 240 чаєассусєудс дсачаєдсад асссудсасс садсссадас аддасадсудд сеєасаадсесд 300 часаєддасеЕ дсдєЕдссссд сссеЕссеЕддс сасеЕссадсс ссудудсаасаа ссаддеседс 360 аадссссудда ссаасєдсас ссеЕдадсдудс аадсадасса дасассссдудс садсдасадс 420 сЕддаєдссд ЕдЕдсдадда садаадсссд седдссассс бдсЕдесддада дасасадс9ад 480 сссассссса дасссассас сдедсададс ассассдсдЕ ддсссадаас садсдадсед 540 сссадеЕсссс ссасссеєсудс дасасссдад ддссссдсесуд асдаасадеЕє асасвєесссад 60 ддсддсЕсас ссааассеєдс адасаааасе сасасаєдсс сассусдссс адсасседаа ббо сЕССсдддада дассдесадес сЕсссеЕсСеЕсс сссссаааас ссааддасас ссеєсаєдаєс 720

Есссудассс сєдаддссас асудсудєдчєд деЕдчасуєда дссасаадча сссеЕдадаєс 780 аадсєсаасс доасасуєдчда суддсусЄдчад деЕдсаєаасу ссаадасааа дссдсодддад 840 чачсадсєаса асадсасуса ссусусудудЕСсС адсудсєссеєса ссудєсєссвєдса ссадчасеєду 900 сЕдааєддса аддадсасаа деЕдсааддес Ессаасааад сссссссадс ссссаєсдад 960 аааассассо ссааадссаа адддсадссс сдадаассас аддсдсасас ссесдссссса 1020 бдссуддадаєд адсєдассаа даассаддес адссеЕдеЕддае дссєддеЕсаа аддсеестає 1080 сссадсдаса Есдссудбдда деЕдддададс аасдддсадс сддадаасаа сгбасаадасс 1140 асдссєсссу Єдседдасес сдасуддсеєсс ЕЕСЕЕсСсЕссСс асадсаадсс сассудєддас 1200 аададсадудє ддсадсадудд даасудєсеЕєс Есаєдсессу Єчаєдсаєда ддсЕСєдсас 1260 аассасвєаса судудсадаацад ссЕСЕССсСвД Єссссудудса ааєссудад сссдаасдас 1320 аєсеЕссдадд сссадаадає Єдааєддсас дад 1353 «2105 128 «2115 227 бо «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Ланцюга із западиною Ес «4005 128 65 АБвр Ппув ТБг Нів ТВг о Сув Рго Рго Сув Рго Азїа Рго бій Геч Ге Сс1У 1 5 10 15 біу Ркго бек Уаі Рпе Геч Робе Рго Рго Гу5з Рго Губ Авр ТПг Геч Меє 20 25 Зо

І1їе Бек Аку ТП Рко біч Уа! ТБг Суб Уа1і! Уа1і Уа1і АБр Уаї бек Нів 35 40 45 біч Авр Ркго біц Уа1і Ппубв Роре АБп Тр Туг Уаі Авр сіу Уа1і січ МУаї 5о0 ів) бо

Нів АБп Аїа їув ТрПг Ппув Рго Агу бі бій біп Туг АвБп бег Тпг Туг 65 70 75 80

Агуд Уа1ї Уа1ї Бек Маії Іеч ТБг Уаії Гей Ніб сіп Абвр Тер Геї АБп б1Уу 85 90 95

Туз бічЧ Тук Ппув Сув пуб Уа1і Бек АБп Гуз Аза Те Рго Аїа Рго Те 100 105 110 біч пувз Тбг Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бій Рго сіп Уаї 115 120 125

Сув ТП Гей Рго Рго Бек Агуд АБр бій Теч Тбг Гпу5 Авп о біп Уаі1ї бБег 130 135 140

Теч бЗек Сув АТїа Уаї Пув Ссіу Рре Туг Рго бБег Авр Іїе Аїа Уаї січ 145 150 155 160

Тер бі бек АБп біу біп Рго бій Абп Аб5п Туг Пуб5 Тс Тс Рго Рго 165 170 175

Уаї Іеч Авр бек Авр бсіу бек Рпе Ррбе Геч Уаі! бек їув Геч ТПг Уаї 180 185 190

Авр ПувБ Бек Агуд Тер біп біп біу АбБп Уаі Рре бек Суб Бек МУаі1! Меє 195 200 205

Нів сі Аза Іеч Нів АвБп Ніб Тук ТПг сіп Ппув бек ІГеч бег Іеч бег 210 215 220

Рго с1у Гув 225 «2105 129 «2115 445 «2125 РЕТ

Зо «213» Штучна послідовність «2205 «223» Ланцюг антигену людського ОХ40 з виступом Ес «4005 129

Теч Ніз Суб Уа1 сіу Авр ТП Тугк Рго бек АБп Авр Агуд Суб Суб Нів 1 5 10 15 біч Сув Акуд Рго сбіу Авп сіу Меє Уаі! бек Агу Суб бБег Агуд бек сіп 20 25 Зо

АвБп оТпг Уа1і Сув Аку Рго Сув біу Ркго біу Робе Туг АБп АБр Уаї Уаї 35 40 45 зек Бек Ппув Рго Сув Пув Рго Сув ТПг Тер Су5 АвБп Гей Агуд бег б1УуУ 5о0 ів) бо

Зек бі Акуд пу5 біп Теч Сув ТПг Аза ТПг сбіп Абр Тс Уаї Су5з Агд 65 70 75 80

Сув Акуд Аїа сіу ТпПг о біп Рго Геї АБр бек Тук Гув Рго біу Уаі1і Авр 85 90 95

Сув Аза Ркго Суб Рго Рго сіу Ні Роре бек Рго біу АвБр АвБп сбіп Аза 100 105 110

Сув пуб Рго Тер ТПг Аб5п Суб Тс Іеп Аза біу Пу5 Нібв ТпПг Геч сіп 115 120 125

Рго Аїа 5ег АБп бег бег Авр Аіїа Іїе Су5 бій АБр Агу АБр Рго Рго 130 135 140

Аза ТПпг сбіп Рго сбіп біп ТБ біп біу Рго Рго Аіїа Агу Рго І1е ТЕГ 145 150 155 160

Уаї біп Рго ТЕ біц Аза Тер Рго Акуд ТБ беє біп біу Рго бек ТіПг 165 170 175

Агуд Рго Уаі сії Маї Рко біу біу Акуд Аїа Уаі А5р січ сіп Іеч Туг 180 185 190

Рпе сіп сіу біу бек Рго пуб бек Аза Авр Пуб5 ТПг Нів ТіПг Сув Рго 195 200 205 60 Рго Сув Рго Аїа Рго Сіїп Іїеч Іїеч Сіу Сіу Рго бБег УМаі1ї Ріре Іеч Ріе 210 215 220

Ркго Ркго Пув Рго Гуз АБр ТПг Гей Меє Іїе Бек Агу ТПг Рго біч Уаї 225 230 235 240

ТПг Сув Маїії МУМаї Уаї АвБр Уаї бек НівБ сії АБр Ркго біп МУаї їУув5 Ре 65 245 250 255

АвБп Тер Тук Уаі АБр біу Маії біч Уаі Ніб5 АвБп Аза Пуб5 ТПг пув Рего 260 265 270

Агуд бій бій біп Тук АБп о бек Тбг Туг Агуд Уа1! Уа1ї Бек Уаї Іеч ТЕбг

275 280 285

Уаї Іеч Нібз біп Авр Тер Гечп Аб5п сіу Ппув бі Тук Гув Суб Пув Уаї 290 295 300

Бек АвБп пув Аїа Іеїп Рго Аза Рго Іїе сії Ппу5 ТПг І1е бек Туз Аїа 305 310 315 320

Туз біу біп Рго Акуд бій Рго біп Маі! Тук ТБг Ге Рго Рго Суб Аг4д 325 330 335

Авр січ Геч Тс губ АБп обіп Уаі! бек Гечп Тер Суб Геч Уаї Гуз б1У 340 345 350

Рпе Туг Рго бек Авр І1е Аїа Уаї сій Тгр Сіц бБег Авп Сіу Сіп Рего 355 360 365 біч АвБп о Авп о Тук пуб Тбг ТБ Рго Рго Уаії Іеч Авр бег Авр сіу бБег 370 375 З8о

Рпе Рпе Геч Тугк бек Гувз ТГеч ТБПг Уаі Авр ПувБ бБег Агуд Тгр біп сбіп 385 390 395 400 біу АБп Уаії Рпе бек Суб Бек УМаі Меє Ні5 біц Аза Гей Нібв Ап Нів 405 410 415

Тук Тс біп Гуз бек ТГец бек Гецп бек Рго сіу Пув5 бек біу біу Гец 420 425 430

АБп Авр о І1е Рпе Січ Аїа Сіп Цув І1їе сії Тгр Нів січ 435 440 445 «2105 130 «2115 445 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Антиген ОХ40 ціномолгус

Ес ланцюга з виступом «4005 130

Печ Нів Сув Уаї сб1у АБвр ТПг Туг Рго бБег Авп Авр Аг Сув Сув біп 1 5 10 15 біч Сув Акуд Рго сбіу Авп сіу Меє Уаі! 5ек Агу Суб АвБп Агуд бек сіп 20 25 Зо

АвБп оТпг Уа1і Сув Аку Рго Сув біу Ркго біу Робе Туг АБп АБр Уаї Уаї 35 40 45 зек Аїа Пув Ркго Субв Гуз Аза Суб ТПг Тер Суб АвБп Геї Агу бек б1у 5о0 ів) бо

Зек бі Акуд пу5 біп Ргро Сув ТПг Аза ТПг біп Абр Тс Уаї Су5з Агд 65 70 75 80

Сув Аку Аїа сіу ТП біп Рго Гей Авр бБег Туг Пув Рго біу Уаі1і Авр 85 90 95

Сув Аза Ркго Суб Рго Рго сіу Ні Роре бек Рго біу АвБр АвБп сбіп Аза 100 105 110

Сув пуб Рго Тер ТПг Аб5п Суб Тс Іеп Аза біу Пу5 Нібв ТпПг Геч сіп 115 120 125

Рго Аза Бек АБп бек бек АБр Аза Іїе Суб сії АБр Агу АБр Рго Рго 130 135 140

Рго ТПг біп Рго біп бі ТБ біп біу Рго Рго Аіїа Агкуд Рго Тс Тс 145 150 155 160

Уаї біп Рго Трг біз Аза Тгр Рго Агу ТПг бег Сіп Агу Рго бег Тс 165 170 175

Агуд Рго Уаі сії Маї Рго Аку біу Рго Аїа Уаі А5р сії сіп Іеч Туг 180 185 190

Рпе сіп сіу біу бек Рго пуб бек Аза Авр Пуб5 ТПг Нів ТіПг Сув Рго 195 200 205

Рго Суб Рго Аїа Рго біч їецш Пец сіу сіу Рго Бек Маі! Рібе Іеч Ре 210 215 220

Ркго Ркго Пув Рго Гуз АБр ТПг Гей Меє Іїе Бек Агу ТПг Рго біч Уаї 225 230 235 240 60 Тис Сув Ма1 Уа1ї Уаї1ї Авр Уаї бек Нів бій Авр Рго біц Уаї Пув Рре 245 250 255

АвБп Тер Тук Уаі АБр біу Маії біч Уаі Ніб5 АвБп Аза Пуб5 ТПг пув Рего 260 265 270

Агуд бій бій біп Тук АБп о бек Тбг Туг Агуд Уа1! Уа1ї Бек Уаї Іеч ТЕбг 65 275 280 285

Уаї Іеч Нібз біп Авр Тер Гечп Аб5п сіу Ппув бі Тук Гув Суб Пув Уаї 290 295 300

Бек АвБп пув Аїа Іеїп Рго Аза Рго Іїе сії Ппу5 ТПг І1е бек Туз Аїа

305 310 315 320

Туз біу біп Рго Акуд бій Рго біп Маі! Тук ТБг Ге Рго Рго Суб Аг4д 325 330 335

Авр січ Геч Тс губ АБп обіп Уаі! бек Гечп Тер Суб Геч Уаї Гуз б1У 340 345 350

Рпе Туг Рго бек АБр Іїе Аїа Уаі сій Тер бій Бек АБп біу біп Рго 355 360 365 біч АвБп о Авп о Тук пуб Тбг ТБ Рго Рго Уаії Іеч Авр бег Авр сіу бБег 370 375 З8о

Рпе Ріе Гей Туг бек Пув Теч ТПг Уаі Авр Пуз бек Агу Тгр сіп сіп 385 390 395 400 біу АБп Уаії Рпе бек Суб Бек УМаі Меє Ні5 біц Аза Гей Нібв Ап Нів 405 410 415

Тук Тс біп Гуз бек ТГец бек Гецп бек Рго сіу Пув5 бек біу біу Гец 420 425 430

АБп Авр Іїе Рпе сії Аза біп Туз Ії1е бій Тер Ні сій 435 440 445 «2105 131 «2115 451 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Ланцюг мишачого антигену 0ОХ40 з виступом Ес «4005 131

Уаї Таг Аза Акуд Асу їеч Авп Сув УМа1ії Ппув Нів Тис Туг Рго бек С1У 1 5 10 15

Нів Ппув Сув Сув Агкуд біч Суб біп Рго сіу Нів біу Меє Уаї б5ег Агд 20 25 Зо

Сув АБр Нібв ТПг Агуд Ар ТБ Геч Суб Нів Рго Суб бій ТПг сіу Робе

Зо 35 40 45

Тук АБп бі Аза Уаії Авп Туг Авр ТПг Суб Ппуб5 біп Сув ТПг біп Сув 5о0 ів) бо

АвБп о Нів Агуд Бек біу бек біч Теч Пуз біп Авп Суб ТПг Рго Тс біп 65 70 75 80

АБвр ТП Уаії Сув Акуд Сув Агкуд Рго біу ТПг біп Рго Агу біп Авр 5бег 85 90 95 біу Тук Мпув Ге сіу Уа1і АвБр Сув Маії Рго Суб Рго Рго біу Нів Ріе 100 105 110

Бек Ркго біу АБп АБп о біп Аїа Суб пуб Рго Тер ТПг АБп Суб Тк Іеч 115 120 125

Бек сбіу Ппув біп Тс Агу Ніб Рго Аза бек Авр Бек Геї АБр Аїа Уаї 130 135 140

Сув біц Авр Агуд бек Гечш Геї Аїа ТПг Іеч Іеч Тер бі ТПпг сбіп Агд 145 150 155 160

Рго Трпг Рре Агу Рго ТБбг ТБ Уаї біп бЗеє Тпг Тс о Уаї Тгср Рго Агд 165 170 175

ТПг Бек біш ТІГечп Рго бек Рго Рго ТПг Геч Уаі! Тс Рго бі б1у Ркго 180 185 190

Уаї АБр бічЧ біп Гей Тук Рпе сіп сіу біу бек Рго Пувз бег Аїа Авр 195 200 205

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Гец Ге сіу с1у 210 215 220

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 225 230 235 240 бек Агуд Тпг Рго біц Маї Тип Сув Ма1ї Уа1ї Уаї1ї Авр Уаї бек Нів січ 245 250 255

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 260 265 270

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд (516) 275 280 285

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 290 295 300 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Тез Рго Аїа Рго Іїе сій 305 310 315 320 65 Пув Тис І1їе бБег Ппув Аїа ПГув сіу біп Рго Агд Сі Рго Сбіп Уаї Туг 325 330 335

ТПЕ Геч Ркго Рго Сув Агуд Авр бі Геч Тс Гпуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 340 345 350

Тер Суб Геч Маї Гуз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уаї біч Тгр 355 360 365 біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 370 375 380

Пес Авр бек Авр біу Бек Рібе Рібе Гей Туг бек Гув Теч ТПг Уаі1ї! Авр 385 390 395 400

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 405 410 415 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 420 425 430 біу пув бек біу сіу Геї АБп АБр І1е Рбе Січ Аза сбіп пу ІШе сій 435 440 445

Тер Нів січ 450 «2105 132 «2115» 1613 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність бібліотеки ОР8В8-4 «4005 132

Едааасассо аєсудсссасу дсадссустуд дасєдесасс асссудсуддес садссудесса бо

Еддссдасає ссадчаєдасс садсссссеЕс ссассссдсс єдсаєсєдна дададассуєд 120

Есассаєсас СеєдссуєЄдсес адсесадчадса Ссадсадссу чЕсдасссда бассадсада 180 аассадддаа адсссстаад сЕссЄдасєсєЕ асдчасдсссс садЕсєсддаа адеддддеЕсс 240 саєсасдЕєсеЕ садсддсадс ддаєссуддада садааєєсас ссессассаєс адсадсесдс 300 адссєдЧаєчЧа СЕСсСєЧдсаасе баєсасеєдсс аасадсаєаа бЄадсвтаєссс асуєсвєддес 360 адддсассаа адссуачасєс аадсусбасуд Єддссєдсасс асссдессеєс аєсеЕссссс 420 саєссдаєда дсадеЕсдааа Сссддаассд ссЕСЕдЕсСдДЕ дЕДДЦСсССЕДСсСсд аасаасеЕссес 480 аєсссадада ддссааадса садєддаадд Сддасаасудс сссссааєсд ддеаасеЕссс 540 аччачадсусЄ сасачадсад дчасадсаачдуд асадсассса садссссадс адсасссєда 60 сдсЕдадсаа адсадассас дадааасаса аадсссасдс седсдаадес асссаєсаду ббо чсессдадсеєс дсссуєЄєсаса аачадсеєсса асаччдаччдача чсЧдсддадсс дсадаасааа 720 аасссаєсєс адаачадчає ссудаасуда ссусадасса сааддасас дасддасаад 780

ЧдЕдссдсаса асааддсудсд ссааєєссає сСссааддада садеєсабаєд ааасассвдс 840

Едссдассус ЄудсеЕдссуудЕ ссдсеЕдсссс ссуссдссса дссудсчдаєд дсссадаєдас 900 ааєсуддєдса дчЕСєЄЧдЧаЧдЧасЕ дЧчаччаєдаача адсссддучєс сЕсдаЕдаад дЕсСЕсСссдса 960 аддсссссуда аддсасаєсс адсадсвасу сбаєаадссуд ддєдсчдасад дсссседдас 1020 аадддсєсда чедчдаєддада дддчдаєсаєсс свраєсьєєсду басадсааас Сасдсасада 1080 адеЕсссаддд садддссасс ассасєдсад асааасссас дадсасадсс Сасасддададс 1140 бдадсадссє дадаєссдад дасассудссу Едваєсасьд сбдсдадасста Сссссаддсд 1200 чЧЕсасваєдеі сасддаєдсс єддддссаад ддассассує дассудеєсеєсс ссадстсадса 1260 ссаааддссс ассуддсссеєс ссссрддсас ссесссссаа дадсассеєсе дддддсасад 1320 сддасссвЕддд сЕдссЕдуєс ааддассасс сссссдаасс ддєдасуддеєд Есдсддаасе 1380 саддсдсссеЕ дассадсудс деЕдсасассє СсссудседЕ ссврасадесс єсаддасессе 1440 асєсссссад садсуєддаєд ассдеЕдсссе ссадсадсес дддсассса ассрасаєсь 1500 чсаасуєдаа Ссасаадссс адсаасасса аадсудчасаа чааадссєдад сссааассеєє 1550 чЧЕдасудсуддс сдсаадсасе адебдсссаєс ассаєсасса ссасдссудсуд дса 1613 «2105 133 «2115 723 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність Кар-фрагмента легкого ланцюга УкКІ 5 «4005 133 часаєссадча Сдасссадсс ЄсссСЕСсСсасс сЕДдЕСЕДДсає ссдсаддада ссуєдеЕсасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 60 чаєчавЕвєссдд саасссаєса ссбдссаасад СагаасадСссє асссвасуєе сЄддадассадддс 300 ассааадссу ачаєсаадсу Єасуддсддсс дсассасссу ЄсеЕссассвєс сссдссаєсе 360 чаєчадсадс СЄдчаааєсєду аассудссссс чдчЕсСЧсдсдсес єдссдаасаа сЕЄССсСаєссс 420 ачачадудсса аадсєасадсу чаадчдсдудчасє аасудсссеєсс ааєсудддсбаа сеЕСссаддад 480 адедеЕсаса адсадчдаса сааддасадс ассбасадсс Есадсадсас ссєдасусєд 540 65 адсааадсад ассасдадаа асасааадсс Сасдссєдсуд аадеєсассса Єсадддссеєд 60 адсссудсссу Ссасааацад ссєсаасачду дчачадсудсєд дадссусада асааавпдасесс ббо ассссадаа ачдччаєссудаа Єдчдадссуса дасвєасааууд асчасасда саадддесдсс 720 чса 723

«2105 134 «2115 241 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» РабБб-фрагмент легкого ланцюга МУМКІ1 5 «4005 134 й

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

Авр Агуд УМаї Таг І1е Трг Сув Агу Аза бег Сіп бек І1їе бег бекг Тгр 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 50 55 бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 7о 75 8о0

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Сув біп біп Тук Авп бБег Туг бек ТЕГ 85 90 935

Рпе сіу Сіп С1у Тпг Ппув Маі1ї бі І1е пув Агуд Тпг Уаї Аза Аза Рго 100 105 110

Зек Уа1і Рре І1їе Роре Рго Рго бег Авр бій біп Геч Ппув бек б1іу ТЕбг 115 120 125

Аа Бек Уа1і МУаї Суб ІГеч Теч АБбБп Абп Рпе Туг Рго Агу біп Аїа Гуз 130 135 140

Уаї біп Тер Гуз Уаі Авр АвБп Аза Геї сСіп бек біу АБп бек біп сіц 145 150 155 160

Зек Уаі1і Тпг сії біп Авр бек губ Авр бек ТПг Туг бБег Геч бек б5ег 165 170 175

Та їеч Трг Тез бек Гуз АТїа Авр Туг бій пуб Нів Був Уаї Туг А1а 180 185 190

Сув біч Уаії Тпг Нів сіп сіу Ге бек бек Ргко Уа! ТК пуб бек Ріе 195 200 205

АБп Агуд сіу бій Суб біу Аїа Аїа біц сбіп пуб Геч Іїе бек біч січ 210 215 220

Авр Геч АвБп сіу Аїа Аза АБр Тук пуб Авр АвБр Авр Авр Пув5 с1у Аїа 225 230 235 240

А1тча «2105 135 «2115 720 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність Кар-фрагмента важкого ланцюга УНІ 69 «4005 135 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 дсасадааде Сссадддсад ддЕсассасє аседсадаса аасссасудад сасадсстас 240 асдчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдЕ асвсассдсдс дадчасваєсс 300 ссаддсуддсєеЕ асвтаєдеЕсає ддаєдссьдда ддссааддда ссассдбдас сдеЕСЕСССсСа 360 чЧсЕадсасса ааддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 часасадсуд сссЕдЧдучссдд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдаассуде дасудЧЕеЕдесУ 480 бддаасєсад дсдсссЕєдас садсуддсуєЄд сасассеЕєсс суддсеЕдеЕссе асадесссьса 540 ччасеЕсвтасс сссеЕСсадсад суєдудєдасс дЕдсссссса дсадссєдаду сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдааєса саадсссадс аасассааад Єддасаадаа адсєдадсесс ббо авдвасссєдед асдсддсесудс аадсасвсадс дсссаєсасс ассассаєса судссдсддса 720 «2105 136 (516) «2115 240 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» БРар-фрагмент важкого ланцюга УНІ 69 65 «4005 136 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг

20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Агд тей бек Рго сіу Сіу Туг Туг Уаі Меє Ар Аїа Тгр СсС1у сіп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Пес біп бек бек біу Пе Туг бек Гей бег бег Уаі! Уа1ї! Трг Уаї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220

Аза Аїа Аза бек ТПг бек Аза Ні Нів Нів Нів Ні Ні Аза Аїа Аїа 225 230 235 240 «2105 137 «2115 26

Зо «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Праймер ІМВЗ3 «4005 137 саддааасад сбаєдассає даєвас 26 «2105 138 «2115 71 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Праймер УКІ 5 ІЗЕ 5 «4005 138 сЕсудасеЕсєвєд деЕдссседдс сааасуєвра асасудааєса гаседеЕєдччс адеаасааді бо бдсааааєса Є 71 «2105 139 «2115 74 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Праймер УК1 5 ГЗг 5У «4005 139 сЕсудасеЕсєвєд деЕдссседдс сааасуєтьс 5здгасасдаа Єсасаседеє ддсадсааєса бо адсєдсаааа ссає 74 «2105 140 «2115 77 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» УК1 5 Зк 5РУ (516) «4005 140 сЕсудасесєвєд деЕдссседдс сааасуєтьв тозв5дгаєас дааєсаєасе десєдачсадва бо аєаадесдса аааєсає 77 «2105 141 «2115 27 65 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Праймер ВОНЗ1

«4005 141 асдЕсєдчдчсс адддсассаа адессчад 27 «2105 142 «2115 28 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Праймер ВОНЗ2 «4005 142

Есесудсасад Єаасасасдуд суддеЕдесс 28 «2105 143 «2115 654 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ОРВ8В-му4-4 «4005 143 ччдасассудсс дЕдсаєсасе дсудсччачача ссассуддддс саадддасса ссудєдассє бо сЕсс 64 «2105 144 «2115 654 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» БРВ8В-у4-6 «4005 144 ччдасассудсс дЕдсаєсасе дсудсччачача ссассуддддс саадддасса ссудєдассє бо сЕсс 64 «2105 145

Зо «2115 64 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ОРВ8В-у4-8 «4005 145 ччдасассудсс дЕдсаєсасе дсудсччачача ссассуддддс саадддасса ссудєдассє бо сЕсс 64 «2105 146 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Праймер Кдзедіопд «4005 146 часуєвтадна аасдаавсьс седсаєдачу зо «2105 147 «2115 1596 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Матриця (УКЗ 20/УНЗ 23) «4005 147 асчдааасасс Сасєдссвас ддсадссусс дчаєсдсває єасссусуддс ссадссудес бо асддссдааа СсуєдЕсСаас дсадеЕсєсса дадсасссєдеЕ сЕссудсєсссс аддаддааада 120 дссасссссЕ сеЕєдсадддс садесададеі дссадсадса дссасесадс ссддсассад 180 садааасссд дссаддсссс саддсеєсссс асссасддад саєссадсад ддссасєддс 240 ассссадаса дЧасєсадесду садчсудчдаєсс доадасадасе Єсасеєсссас сассадсада 300 сЕддадсссд аадаєсеЕсдс адсдсасвтас єдеЕсСадсаде аєддсадсес ассдсєдасу 360

Ессуддссаду дчдассаааде дчдааассааа судсасуддеЕдд ссдсассаєс Єдессесесаєс 420 60 БЕССсСсдссає сєдаєдадса деЕсдааасєсеє ддаассдссс ссдеЕєдесЧдєд ссеЕдссдаає 480 аассєсвтаєс ссадчачадудс сааачсаса Сддаачудєдуч асаасудсссс ссааєссоддає 540 аасссссадч ачадсудссас ададсаддас адсааддаса дсасссасад ссссадсадс 60 асссєдасус Сдадсааадс адасвсасуа ааасасааад Єсбасуссвєд сдаадесасс ббо сассадддсес Едадсссудсес сдесесасааад адссєсааса ддададдададсд Еддадссдса 720 65 саєсассаєс ассаєсасуду адссдсадас басааддасу асудасудасаа дддеЕдссдса 780

Баасааддсу суудссаасеєсє асєссааудчда дасадеєсаса Єдааасассє дссдссддасс 840

ЧсЕЧ9ДСсСсСЧсСЕуЧ ЧдЕСЕДДССУЧсСЕ ссЕСУдсСЕДсСсС садссудсуа Єддссчадає дсаасєдсесес 900 чачсссдчачу чадчдсЕсЧдає асадссєдчу чдоадЕСССсСєЧда дчасссессстд Єдсадссесс 960 ччаєссассеє ссадсадеса єдссаєдадс ЕЄдддЕссудсс аддсессадач дааддадсед 1020 чадедчддЕсЕ садссаєсад єддсадесдчЕ ддєадсасає ассасусада сеЕссдєдаад 1080 чассуддєєса ссаєсессад адасааєссс аадаасасус бЄдсаєссдса даєсдаасадс 1140 сєдададссуд аддасасудс судбасаєсас єдседсдааас суЕсЕсСсдба ЕєЕеЕєдасвасі 1200 сбддаддссаад даассссдудб сассуєсєсу адсєдссадса ссаааддссс аєсдддесесс 1260 ссссбддсас ссеЕсссссаа дадсассеєсе дддддадсасад сддсссєддуа сЕдссЕддЕс 1320 аадчасвтасс Сссссдаасс ддаєдасуддеЕд сЄсуєддаасе саддсудсссє дассадсуддес 1380 чЧдЕдсасассє ссссуддсбдеЕ ссврасадесс Есаддасссс асссссесад садсудєддачед 1440 ассуєдсссо ссадсадссє дуддсассса ассбрасаєсє дсаасуєдаа Ссасаадссс 1500 адсаасасса аадєддасаа дааадеєдад сссаааєссс дсдасдсуддс сдсадаасаа 1550 ааасссаєсє садаададда єсеєдааєдсс дсддса 1596 «2105 148 «2115 714 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Бар-фрагмент легкого ланцюга УКЗ 20 «4005 148 чаааєсуєддс сСаасудсадсс єссаддсасс сЕдЕСЕСсвєдЕ ссссадддадда аададссасс бо сЕСЕСЄсдса дддссадсса дадедеЕсадс адсадссасе бСадссєддбеа ссадсадааа 120 сседдссадда сесссаддсеє ссесаєстає ддадсаєсса дсадддссас ЕддсаєЄссса 180 часаддеєсса дчеЕдчдсадедч асссудчдаса дасеєссассс єсассаєса садчасєддад 240 ссєдаадасє єсдсадедса свсассдессад садсаєддбеа дсесассдсе дасдеЕссддадес 300 саддддасса аадсддааасє сааасдсбасуд деЕддсЕдсас сассеєдеЕсье саєсьєєссссд 360 ссаєсєдаєд адсадеЕсдаа аєссддаасє дссссЕдсьа ЄдЕДсССЕДсСЕ дааєсаассес 420

Баєсссада аддссааадеє асадєедчаа чдчедчаєаасу ссссссааєс доададеаасесс 480 саддададсд Есасададса ддасадсаад дасадсассс асадссссад садсассстд 540 асудсєдадса аадсадасса судадааасас ааадсссасу ссЕдсдаадс сасссаєсад 60 чассЕдадсс судсссуєсас ааададссеєс аасадчауЧчачЧч адедедчадс сдсасаєсас ббо саєсассаєс асудадссудс адассасаау дасдасдасу асаадддбдс сдса 714 «2105 149 «2115 238 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Бар-фрагмент легкого ланцюга УКЗ 20 «4005 149 біч Іїе Уаії Гей ТПг сіп Бек Рго біу Тбг Те бек Гец бек Рго с1у 1 5 10 15 бі Агу Аза ТБ Гей бек Суз Агу Аза бБег біп бек Уа1! бег бек бег 20 25 Зо

Тук Геї Аїа Ткр Тук біп біп пуб Рго сіу біп Аза Рго Агу Іеч Гец 35 40 45

Іїе Тук сі1іу А1їа бек бек Агу Аїа ТПг сіу Іїе Рго АБр Аку Рое б5ег бо біу бек біу бек сіу ТПг АБр Роре ТПг ІТечп ТБПг І1їе бег Агкд Геч сій 65 7о 75 8о0

Рго бій АБр Рпре Аїа Уа1! Туг Тук СувБ біп сбіп Туєк біу бек бег Рго 85 90 935 50 Теч Ти Рпе сіу сСіп Сі1іу Тпг Ппув Уаі1і Сі І1їе Пув Агу Тпг Уаї Аза 100 105 110

Аза Рго Бек УМаі Роре І1їе Робе Рго Рго бек Авр січ біп Геч Пув б5ег 115 120 125 біу Тс Аза бек Уа1і Уаї Суб Геї ІГеп АБп АБп Рре Туг Рго Агкд сій 55 130 135 140

Аа Ппув Уа1і сіп Тер Гуз Маії АБр АбБп Аза Гей сіп Бек сб1у АБп 5ег 145 150 155 160 біп біц бек Уаі ТП сій біп АвБр бек Гу5з АБр бек ТПг Тугк бек Гей 165 170 175 60 Зек Бек ТПг Ген ТПг ІТечй бек Ппув Аїа Авр Тук бі Ппуз Нів Пувз Уаї 180 185 190

Тук Аїа Сув біч Уа! Трг Ніб сіп сіу Геї бек бек Рго Уаі! ТрПкгЕ Гуз 195 200 205 ек Рпе АБп Аку біу бі Сув біу Аїа Аза Ні Нів Нів Ні Нів Нів 65 210 215 220 біу Аїа Аза Авр Тук Пубв АБр АБр АБр АБр їу5 с1у Аза Аза 225 230 235 «2105 150

«2115 711 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» БРар-фрагмент важкого ланцюга УНЗ 23 «4005 150 чаччаєдсаасє Судсєдчадсс єдадоадЧдаддс Єєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 дсадасєссд Єдаадддссуд дессассасєс сСссададаса ассссаадаа сасдсєднтає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасеєдбдс дааассдееес 300 ссдраєсьєсд асрассддадуд ссааддаасс ссддЕсассу Єсссдадедс бадсассааа 360 часссаєсуд СссЕєсссссЕ ддсасссссс сссаададса ссЕСєддудоду сасадсуддес 420 сЕдддссдсс Еддссаадда стассєсссс даассуддаєда сддеЕдеЕсдЯєд даасесаддс 480 дссссдасса дсддсдЕдса сассссєсссу дсЕдсСсстас адсссссадду асеЕССасьсс 540 сЕсадсадсд Еддсдассдс дссссссадс адсссбдддса сссадассста саєсєдсаас 60 чсЧдаассаса адсссадсаа сассааауєд дасаачааад Єсдадсссаа аєсЕсдсдас ббо чЧсддссудсад аасааааасе саєсєсадаа чЧчадчаєсєда асдссудсддс а 711 «2105 151 «2115 237 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» РабБ-фрагмент важкого ланцюга УнЗ 23 (рР47) «4005 151 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

А1їа Меє бег Тер Уаі Акуд Сіп Азїа Рго с1іу Пув С1у їеч Січ Тгр Уаї зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 35 65 7о 75 8о0

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 935

Аа Ппув Рго Робе Рго Тук Рпе Авр Туг Тер сіу сбіп сіу ТіПг Іеч Уаї 100 105 110 40 Таг Уаї бБег бек Аза бБег ТрПг Пув біу Рго бек Уа1ї Рре Рго Іеч А1а 115 120 125

Рго Бек Бек пуб бек ТПг бек біу біу ТПг Аза Аза Геч сіу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї ув Авр Тукє Рпе Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр АБп бег Ш1Уу 45 145 150 155 160

Аа Геч ТПг бек біу Маії Нів ТБбг Рре Рго Аїа Уаії Геї сіп бек 5ег 165 170 175 біу Геч Тук бек Гецп бБег Бек УМаі УМаі! ТБг Уаі! Рго бек бек бек Гей 180 185 190 50 сіу Так біп Тс Тує І1е Суб Авп Уаі Авп Нів Ппув Рго бБег Авп Тис 195 200 205

Туз Маії Авр пуб пуб Уа1ї сій Рко Гуз бек Суб АБр Аїа Аза Аза сій 210 215 220 біп Гуз Пец Іїе бек бі бій АБр Геї АБп Азїа Аза Аза 55 225 230 235 «2105 152 «2115 25 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність бо «220» «223» Праймер М564 «4005 152 асдЕссддасс аддддассаа адед 25 «2105 153 65 «2115 25 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205

«223» Праймер РР4А47СОВЗ ра «4005 153 сдсасадсаа басасуддссу ЄдЕсс 25 «2105 154 «2115 64 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» рРА1і7-у4-4 «4005 154 сдаддасасуд дссудбеаваєс ассдсдсдда ссасєддддс сааддаассс Еддссассдаес бо сесСд 64 «2105 155 «2115 654 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» рР4А17-у4-6 «4005 155 сдаддасасуд дссдбеасаєє асєдеЕдсдда сграсєддддс сааддаассс ЕддЕссассде бо сесСд 64 «2105 156 «2115 654 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» рР1і7-у4-8 «4005 156 сдаддасасуд дссудбеаваєс ассдсдсдда ссасєддддс сааддаассс Еддссассдаес бо сеєсд 64 «2105 157 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Ідведіопд «4005 157 часуєсаса аасдаасьсе седсаєдадд 30 «2105 158 «2115» 1605 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Матриця бібліотеки У13 19/УНЗ 23 «4005 158 асчдааасасс Сасєдссвас ддсадссусс дчаєсдсває єасссусуддс ссадссудес бо асддссЕсудєЄ сЕЧдадссдас єсадчасссс дссудсдсссд єдадсссЕєдадд асадасадесс 120 адчаєсасасє дссаадчачда садссссада адсвсаєсаєд саадссддєа ссадсадаад 180 ссаддасадд ссссеЕдсасс бдесесаєстає ддеаааааса ассддсесссс адддаєссса 240 чЧассдаєссеЕ себддссссад сссаддааас асадссеєссс Єдассаєсас ЄддддсЕсад 300 чсочдчдаачаєд адудссєдЧасса Єсасеєдеєаас Єсссуєдаса дсадсуддсаа Єсаєдедчачєба 360

Ессуддсудадд дчдассаадсеЕ дассуєссва ддасаассса аддсєдсссс садсуєдасс 420 сЕДдЕссСсссс ссадсадсда ддаасєдсад дссаасаадд ссасссєддеЕ сеЕдсседаєс 480 адсчасеЕссс асссаддсудс суєдассуєд дссєдчдааду ссдасадсад ссссуєдаад 540 дссуддсудєдуда адассассас ссссадсаад сададсааса асаадсасдудс сдссадсадс 60

Бассєдадсс Сдасссссууа дсадєедчаа адссасаддє ссвєасадсвєд ссаддеєдасс ббо сасудадддса дсассуєдда даааассуєд дсссссассуд адедсадсуд адссдсадаа 720 сааавагасєса єсЕсадаада ддаєсєдаає ддадссдсад ассасаадда сдасдасдас 780 ааддчдсєдссу сасааєаадд судсдссааєс свраєсєсаа дчадчасадсса сасдаааєвас 840 60 сЕдсЕдссда ссусЕдссдс СЄдудєсєдсвудосЕССЕСДСсСвД сссадссуддс даєддссддад 900

Ччедсааєсус СЄдчаадЕСєЧду чоачадудссвєд деасадсссд дддудеЕсссє дадчасеЕсьсс 960 бдсдсадссє ссудаєссас сеЕєсадсаде баєдссаєда дссдддессу ссаддсесса 1020 чачаачдчдвдс сЄдчдадеддудЕ сеЕсадсваєє адеддєаЧчед деЕдчсадсас асассасдса 1080 часеєссудєда адддссуддеє сассаєсеєсс ададасааєс ссаадаасас дсеєдсаєсьд 1140 65 садаєдааса дссєдададс счдаддасасу дссдсбасасе асеЕдедсдаа ассуєєєссу 1200 басеєсєдасе ассддддсса аддаасссвєд дЕсассуєсс сдадсдссад сассаааддс 1260 ссаєсуддеЕсе Есссссеуддс асссеоссесс аададсассе седддддсас адсддсссед 1320 часЕдссвєду Єсааддасса сеЕссссдаа ссддєдасуд сдеЕсдбсддаа сеЕсаддсдес 1380 сєбдассадсуд дсдеЕдсасас сеЕссссуддсеЕ деЕсссасаде ссеЕсаддасе свасесссяс 1440 адсадсудєд Єдассудбдсс сеЕссадсадс ЕєЄдддсассс адасссасає седсаасаєд 1500 ааєсасаадс ссадсаасас сааадсудас аачааадеєсуд адсссаааєс ЄєдеЕДдасос 1550 дссудсаадса ссадсдссса сассаєсас саєсасдссу судса 1605 «2105 159 «2115 726 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Еар-фрагмент легкого ланцюга М13 19 «4005 159

Есудєссдадс Єдасссадда ссссдсЕЧдеЕУд сєссдсддссЕ єдддасадчас адссадчаєс бо асасудссаа дчачасадссє садчаадеєсасє сСасусаадсе ддсассадса даадссадда 120 саддсссссд бассєдеЕсає стаєддсааа аасаассуддсес ссссадуддає сссадассда 180 вбЕСССсСЕдДсСЕ ссадсссадд ааасасадсе СссЕсСдасса Єсасєддддс Єсаддсддаа 240 чаєчадчдсєд ассасвтассу єаасеЕсссуєЄ дасадеадсу дсааєсаєдс доаоасасеєсоддес 300 ччаччачдасса адсєдассуєЄє ссвєаддасаа сссаадудссд сссссадсує дасссЕдссс 360 ссссссадса дсдаддааєс дсаддссаас ааддссассс ЄддЕСєдссе даєсадсдас 420

Есссасссад дсудссуєЄдас суєдудсссду ааддссуаса дсадссссуєЄє дааддссуддес 480 деддадасса ссасссссад саадсададс аасаасааде асдссудссад садсбассед 540 адссєдассс ссдадсадсу даададссас аддЕсссаса дсеєдссаддс дасссасдад 60 ддсадсассуд Єддадаааас сдеддссссс ассудадедса дсддадссудс адаасааааа бо сеЕсаєсссад аададдасєсс дааєддадсс дсадассраса аддасдасда сдасааддде 720 дссдса 726 «2105 160 «2115 242 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Бар-фрагмент легкого ланцюга М13 19 «4005 160

Зек Бек біш Геї Тс біп АбБр Рго Аїа Уа! бек Уаі Аїа Іечзч с1у сіп 1 5 10 15

ТЕ Маії Аку І1ї1е ТБг Сув біп біу Авр Бек Геї Агу бек Туг Туг Аза 20 25 Зо ек Тер Тук біп біп Гуз Рго біу біп Аїа Рго Уаі Геч МУаї І1е Туг 35 40 45 біу ув Авп Авп Агуд Рго бек біу І1е Рго АБр Агку Рре бек сіу бБег 50 55 бо бек бек Сіу АБп ТПг Аїа бек їеч Трг І1е Тпг сС1у Аза Сіп Аз1а січ 65 7о 75 8о0

Авр січ Аза АБр Тук Тук Суб АБп о бег Агуд Авр бБег бек б1іу АБп Нів 85 90 935

Уаї Маї Рре біу біу сіу ТПпг пуб Геї ТПг УМаї Іеч біу біп Ркго Пув 100 105 110

Аза Аїа Рго бек Уаі Тпг Тей Рре Рго Рго бек бек біп бі Геч сіп 115 120 125

Аза Авп пуб Аїа ТП о Іеч Уаї Суб Гей І1їе бек Авр Роре Тугє Рго б1Уу 130 135 140

Аза Ма1 Трг Уаі1 Аза Тер їув Аза Авр бег бек Рго Маї їув Аїа СЩ1У 145 150 155 160

Уаї бії ТБг ТБЕ ТЕ Рго Бек Ппув біп бек АБп АБп Гуз Туг Аза Аза 165 170 175 бЗек Бек Тугк Геч бек Те ТПг Рго біц біп Тер пуб Бек Ні Агу 5ег 180 185 190

Тук Бек Суб біп Уа! Тпг Ніз бі сіу Бек ТПг УМаї січ Гуз ТБг Уаї 195 200 205

Аза Рго ТПг сії Су5 бек біу Аїа Аїа сій сіп Пу5 Геї І1е бек січ 210 215 220 60 біш Авр Геш Ап сбіу Аїа Аза Авр Туг Пув Авр Ар Авр Авр Ппуз 01У 225 230 235 240

Аза А1а «2105 161 65 «2115» 26 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205

«223» Бібліотека ІМВ3 лямбда-РР47 «4005 161 саддааасад сбаєдассає даєсвсас 26 «2105 162 «2115 85 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Бібліотека МУ1 З 19 ІЗе У лямбда-рРІ4і7 «4005 162 ччасуддеєса сЕсддеЕсссЕ ссудссдааса супуаєвсасс дссассаєса сдуддадевас бо адсаасадес адссссаєсе єссддс 85 «2105 163 «2115 88 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «2235» М1 3 19 ІЗке НУ лямбда-рРІ4і7 «4005 163 чЧдасддЕсад сеєддЕсссс ссдссдааса ссттпаєдасс ассудссасса Єсасдддаде бо басадсааса десадссеса ЕсЕЕссдас 88 «2105 164 «2115 91 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «2235» У1 3 19 ІЗе НІМ лямбда-рР47 «4005 164 ччасуддеєса сЕсддеЕсссЕ ссудссдааса сгітучудаєд аєсассудсвта сгаєссасо9доу бо адсбасадна абадесадсс бсаєсвсссуа с 91 «2105 165 «2115 28 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

З5 «220» «223» ВІОІНВО лямбда-РР47 «4005 165 бЕсуддсудда ддассаадсе дассуєсс 28 «2105 166 «2115 318 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (8НУО) МІ, «4005 166

Есудєссдадс Єдасссадда ссссдсЕЧдеЕУд сєссдсддссЕ єдддасадчас адссадчаєс бо асасудссаа дчачасадссє садчаадеєсасє сСасусаадсе ддсассадса даадссадда 120 саддсссссд бассєдеЕсає стаєддсааа аасаассуддсес ссссадуддає сссадассда 180

Есссссудудсес ссадсеєсаду ааасасадсс Єссеєсудасса Єсассддддс Єсаддсуддаа 240 чаєдаддсесєсд ассассассуд Єаасєсссує дсвасдсессс асааєсдсує асєсуддсдада 300 чадассаадс ЄдассдеЕс 318 «2105 167 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (8Н9У) УН «4005 167 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо 60 ЕсссдеЕдсад ссЕСсСсуддасс сассеєстадс адеЕсаєсдсса ЄдадссдудудЕ ссдссаддсе 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 чсачасєссу СЄдаадддссу дсЕссассаєс Сссададаса ассссаадаа сасдсєдесає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає ассасеЕдеСедс дсуєдеЕеес 300 бассусуЧеЕд чдЕДдЧЕСЕСває дчдассассуду дадссаадчаа ссссддесас судєсссддаде 360 65 «2105 168 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

«223» ДНК (4984) МІ, «4005 168 часаєссадча Сдасссадсс ЄсссСЕСсСсасс сЕДдЕСЕДДсає ссдсаддада ссуєдеЕсасс бо ассасеЕєдсс деЕдссадеєса дадеаєстадеЕ адсЕддеЕєдд сссддсбаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчасєсвєу саассваєса ссдссааса СасадеЕссус адссудсбасас дЯдЕсСєддссад 300 дадасассааа сСсудадаєсаа Фд 321 «2105 169 «2115 354 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (4984) УН «4005 169 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 дсасадааде Сссадддсад ддЕсассасє аседсадаса аасссасудад сасадсстас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

Бассуєддеєс субасчасса ссддддссаа доадассассу Єдассуєстєс ссса 354 «2105 170 «2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (164) М, «4005 170 чЧасаєсєссада Сдасссадсс ЄссЕсссасс ссдЕСЄдсає ссдесаддада ссдеЕдссасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчаєєсьсу саассстаєса седссаасад баваєсеєсує аєсссаєуєс дасдеєєсддас 300 садддсасса аадесдадає саад 324 «2105 171 «2115 348 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (164) УН «4005 171 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

ЧачаЕсссасуд ассасєдудудуд ссаадддасс ассуєдассу ЕЄсЕссєса 348 «2105 172 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (2087) МІ, «4005 172 часаєссадча Сдасссадсс ЄсссСЕСсСсасс сЕДдЕСЕДДсає ссдсаддада ссуєдеЕсасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 60 чаєчавЕвєссдд саасссаєса ссбдссаасад Саєсаддасес єсессусеЕсас дсеЕєддссад 300 дадасассааа сСсудадаєсаа Фд 321 «2105 173 «2115 366 «2125 ДНК 65 «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (2087) УН «4005 173 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асддадссда дсадссєдад ассєдаддас ассдссуєдеЕ ассаседсдс дададсваас 300

Басссуєасс сЕсСасєдудуд ЄчасеЕссудас сСасєддддсс аадддассас сдєдассуєс 360 ссеса 366 «2105 174 «2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (СІС-563) МУ «4005 174 чадасєсдсдс Єдасссадад ссссудсаса сссЕСсСсстрдс сессбдддда аадддссасс бо сЕсЕсСасдса дадссадсса дЕСсСдЕСЕСсСЕ адгсадсвасс бддсаєддбса єсадсадаад 120 ссаддасаад ссссссудсесес сседаєсвтас ддсдссЕсСсс сЕСдддсаас Еддсаєсссся 180 часаддЕссс садудчдадсудд аадсудааса часеєстассеє Єдасваєсєс садасеєддад 240 ссададдасеЕ ЕсдссдЕдса свсассдссад, садсасддбра десадсссссе сассЕсєвсддс 300 саддддасаа аадесдааає саад 324 «2105 175 «2115 348 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (СІС-563) УН «4005 175 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссаддчдаадуд доассддадеЕд ддЕСсСЕСсадсеЕ аєсадеддна дЕддсддсад сасасбассас 180 чсачасєссу СЄдаадддссу дсЕссассаєс Сссададаса ассссаадаа сасдсєдесає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасеЕдедс дсеЕЄДдасдеєе 300

ЧаесдсЕсссу ассассдддд ссааддадсс сєддЕсассу ЕсЕСдаде 348 «2105 176 «2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (СІС-564) МУ «4005 176 чачаєсуєдс СЄдасссадад ссссудсаса сЕСЕССсСсСЕдЕ сессєддуда аадддссасс бо сЕсЕсСасдса дадссадсса дЕСсСдЕСЕСсСЕ адгсадсвасс бддсаєддбса єсадсадаад 120 ссаддасаад ссссссудсесес сседаєсвтас ддсдссЕсСсс сЕСдддсаас Еддсаєсссся 180 часаддЕссс садудчдадсудд аадсудааса часеєстассеє Єдасваєсєс садасеєддад 240 ссададдасс ЕсдссудбЄдва Сбассдеєсад садсасудба деадсссссе сассеЕєсдас 300 саддддасаа аадеєсдааає саад 324 «2105 177 «2115 348 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (СІС-564) УН «4005 177 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

ЕсссдеЕдсад ссЕСсСсуддасс сассеєстадс адеЕсаєсдсса ЄдадссдудудЕ ссдссаддсе 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 чсачасєссу СЄдаадддссу дсЕссассаєс Сссададаса ассссаадаа сасдсєдесає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасеЕдедс деЕєсдасеЕє 300

ЧчЧеєЕсСсУуєссуУ ассасєддудуд ссааддаасс сеЕддссассу ЕсЕСЯЧадес 348 (516) «2105 178 «2115 318 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 65 «223» ДНК (17А9) У, «4005 178

Есудєссдадс Єдасссадда ссссдсЕЧдеЕУд сєссдсддссЕ єдддасадчас адссадчаєс бо асасудссаа дчачасадссє садчаадеєсасє сСасусаадсе ддсассадса даадссадда 120

Зоо саддсссссд бассєдеЕсає стаєддсааа аасаассуддсес ссссадуддає сссадассда 180

Есссссудудсес ссадсеєсаду ааасасадсс Єссеєсудасса Єсассддддс Єсаддсуддаа 240 чаєчадчсєд ассассассу Єаасеєсссує деЕсасусссс асааєсєсусує асссоуддсода 300 чадассаадс ЄдассдеЕс 318 «2105 179 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (17А9) УН «4005 179 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 дсадасєссд Єдаадддссуд дессассасєс сСссададаса ассссаадаа сасдсєднтає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає ассасеЕдеСедс дсуєдеЕеес 300 бассусуЧеЕд чдЕДдЧЕСЕСває дчдассассуду дадссаадчаа ссссддесас судєсссддаде 360 «2105 180 «2115 645 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 8НО РЗ29СІАТА Ідсі легкий ланцюг «4005 180 чЧасаєсєссада Сдасссадсс ЄссЕсссасс ссдЕСЄдсає ссдесаддада ссдеЕдссасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчаєсьсу саассстаєса седссаасад баєсєєдасує аєссддсудєє сбасдеєєсддас 300 садддсасса аадссдадає саадсуєасу дЕддсЕдсас саєссдеЕссе саєсеєссс 360 ссаєсєдаєд адсадсєдаа асєсєддаасє дсссЕсЕдеЕвуд єдЕДдссеЕдсеЕ дааєсаасьсс 420

Баєсссада аддссааадеє асадєедчаа чдчедчаєаасу ссссссааєс доададеаасесс 480 саддададсд Есасададса ддасадсаад дасадсассс асадссссад садсассстд 540 асудсєдадса аадсадасса судадааасас ааадсссасу ссЕдсдаадс сасссаєсад 60 чЧадасссдадсеЕ сдсссдеЕсас ааададсеєсс аасадддададчад адеєде 645 «2105 181 «2115 1338 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК 8НО РЗ29СІАТА Ідсі важкий ланцюг «4005 181 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

ЧччаеЕсоЧчасуча ассасєддудуд ссаадддасс ассуєдассу ЕЄсЕССсСЄСсадс Садсассаад 360 часссаєсуд СссЕєсссссЕ ддсасссссс сссаададса ссЕСєддудоду сасадсуддес 420 сЕдддссдсс Еддссаадда срасеєсссс даассуддбда сддаєдЕсдбд даасеєсаддс 480 чдсессєдасса дсуддсудсєдса сассеЕссссу дссдсссвас адЕссссадд ассссасесс 540 сЕсадсадсд Еддсдассдс дссссссадс адсссбдддса сссадассста саєсєдсаас 60 чсЧдаассаса адсссадсаа сассаадуєд дасаачааад Єсдадсссаа аєсЕсдсдас ббо аааасссаса сасудсссасс дсдсссадса сссдаадссд садддудадЧчасс деЕсадеЕСЕсс 720 сЕсСЕЕсСсссс саааасссаа ддасасссеєс аєдаєссссс ддассссода ддеЕсасаєсдс 780 чЧчеЧЧаєдЧасЧдУа асуєдадсса саацчасссо даддссаадеЕ Єсаассдудєа сдсддасуадес 840 чсЧдчвадчдсдс аєаасуссаа дчасааачссу сддчадчдадс адсасаасад сассбассає 900 чЧчедЧдєсадсу СЄссеєсассуєЄє ссеЕдсассад дЧасєддсєЧда асддсаадчда деасаадедес 960 ааддеЕсЕєсса асааадсссє суддсудссссс аєсдадаааа ссасєссссаа адссааадчу 1020 60 садссссдад аассасаддеЕ деасасссвд сссссасссс доддаєдадсе дассаадаас 1080 саддеЕсадсс ЄдассєдссЕ ддссаааддс Єсссаєссса дсдасаєсдс сдєдчадеЧчу 1140 чачачсааєуд дадсадссуда даасаассас аадассасус сЕсссуєдсе ддассссдас 1200

ЧасЕСсСсСЕЕсЕ сссесрасад саадсесасс дЕддасаада дсаддсддса дсаддддаас 1260

ЧдЕСЕсЄСсСЕсСає дссссуєдає дсаєдаддсе сЕдсасаасс ассасасуса даададссес 1320 65 ЕсссвєдесесС сдддєааа 1338 «2105 182 «2115 215 «2125 РЕТ

«213» Штучна послідовність «223» ВНЗ РЗ29СІАТА Ідсі легкий ланцюг «4005 182

АБр І1е біп Меє Тпг біп бек Рго бБег ТПг Гей бек Аїа бек Уаі с1У 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 5о0 ів) бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 70 75 80

АБвр АБр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп Тук Пеп ТПг Тук 5ег Агд 85 90 95

Рпе Тпг Рре сіу біп біу ТБ пу Уаі сіш Іїе Гпуб5 Аку ТБг Уаї Аза 100 105 110

Аза Рго Бек УМаі Роре І1їе Робе Рго Рго бек Авр січ біп Геч Пув б5ег 115 120 125 біу Тс Аза бек Уа1і Уаї Суб Геї ІГеп АБп АБп Рре Туг Рго Агкд сій 130 135 140

Аа Ппув Уа1і сіп Тер Гуз Маії АБр АбБп Аза Гей сіп Бек сб1у АБп 5ег 145 150 155 160 сСіп бі бек Ма1! Трг Січ біп Авр бек ПЦув Авр бег ТіПг Туг бек Іеєч 165 170 175

Бек Бек ТПг Геї ТПг Теч бек Ппуз Аза Авр Тук січ пуб Нів Гуз Уаї 180 185 190

Тук Аїа Сув біч Уа! Трг Ніб сіп сіу Геї бек бек Рго Уаі! ТрПкгЕ Гуз

Зо 195 200 205

Бек Рпе АБп Акуд біу біч Сув 210 215 «2105 183 «2115 446 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» ВНЗ РЗ29СІАТА Ідсі важкий ланцюг «4005 183 сіп Уаі1ї Сіп теп Уаї Сіп бек сі1у Аїа Січ Ма1 Ппув Пув Рго сС1іу бЗег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє бій Іей бег бек ГПеп Агу бек біш АвБр ТБг Аза Уаї Тугк Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд бі Тугк біу Тер Мес Ар Туг Тер сіу сбіп сі1іу Тбг Тс Уаї 100 105 110

ТПг Маї бек бек Аза бек ТПг пуб сіу Рго Бек Маі Рое Рго Іеч Аїа 115 120 125

Рго Бек Бек пуб бек ТПг бек біу біу ТПг Аза Аза Геч сіу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї ув Авр Тукє Рпе Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр АБп бег Ш1Уу 145 150 155 160 60 А1ї1а тес Трг бек біу Маї Нів ТПг Рре Рго Аїа МУа1ї Іеч Сіп бег бег 165 170 175 біу Геч Тук бек Гецп бБег Бек УМаі УМаі! ТБг Уаі! Рго бек бек бек Гей 180 185 190 біу ТЕ біп Тбпг Ту Іїе Суб АБп о Уаі АБп Нібв пуб5 Рго бек АБп о ТПг 65 195 200 205

Туз Маії Авр пуб пуб Уа1ї сій Рко Пув5 бек Сув АвБр Пуб5 ТПг Ні Тс 210 215 220

Сув Рго Рго Суб Рго Аза Рго сії Аза Аза Сбіу біу Ркго бек Уа1і Роіе зЗо02

225 230 235 240

Теч Ріпе Рго Рго ПувБ Рго Пув АБр ТПг ІТечп Месє І1е бег Агу ТпПг Рго 245 250 255 біч Уаії ТрпЕ Суб Уа1і Уаї Маїії АБр Уаї бек Ніб біц Авр Рго січ Уаї 260 265 270

Туз Рпе Авп Тер Тук Уаі АБр сіу Маі біч Уаії Ні5 АвБп Аза Пуб5 ТПг 275 280 285

Туз Рго Акд бій бій біп Тук АБп бек Тйг Туг Акуд Уа1і Уаі1і Бек Уаї 290 295 108)

Пес Тпг о Уаї Ге Ніз сіп Авр Тср Гей АвБп біу Пув бій Тугк Ппув Сув 305 310 315 320

Туз Уаії бек Авп пуб Аза Геї сіу Азїа Рго Іїе біц пуб ТПг Іе бБег 325 330 335

Туз Аїа Ппуз сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уа! Тугє Трг Гей Рго Рго 340 345 350 век Акуд АБр бічш Теч ТБг губ Авп обіп Уа! Бек Геї ТПг Су5 Іеч Уаї 355 360 365

Туз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уа! бі Тер бій бек Ап с1Уу 370 375 380 біп Рго бій Авп Авп Тук Ппуз ТБг ТБг Ргсо Рго Уа! Іечй Авзр 5ег Авр 385 390 395 400 біу бек Рпе Рпе Гей Тугк Бек Пув Геї ТПг Уаі! Авр Пубз бег Агуд Тгр 405 410 415 біп біп біу Авп Уа1і Роре бек Суб5 бек Уа! Меєсє Ніб5 сій Аза Геч Нів 420 425 430

АвБп оНів Тугк Тс біп Гуз бек ТГеч бек Гей бек Рго сіу ГПув 435 440 445 «2105 184 «2115 642

Зо «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 4984 РЗ29СІАТА ч1І9дб1і легкий ланцюг «4005 184 чЧасаєсєссада Сдасссадсс ЄссЕсссасс ссдЕСЄдсає ссдесаддада ссдеЕдссасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчасєсвєу саассваєса ссдссааса СасадеЕссус адссудсбасас дЯдЕсСєддссад 300 ддсассааад Ссдадаєсаа дсдеєасдудєд дсЕдсассає ссдеЕССссСає сеЕссссдсса 360

ЕсєЧасчадс адсєдааасєс єдчдааседсес ЄссусєдесдеЕ дсессдсесєдаа Саасеєсстає 420 сссадададд ссааадсаса деддааддсд даєсаасдсесс сссааєсддадауд баасеєсссад 480 чачадсудсса сачдадсадда садсааддас адсасссаса дссссадсадд сасссеєдасу 540 сЕдадсааад садассасда дааасасааа десЕссасдссс дсдаадссас ссаєсадддс 60 сеЕдадсеЕсдс ссдеєсасааа дадссєсаас аддодоадададЕ де 642 «2105 185 «2115 1344 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК 4984 РЗ29СІАТА ч19дб1і важкий ланцюг «4005 185 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

Бассуєддєс субасдасса ссудудуддссаа додадассассу ЄдассуєсєЕс сЕСадссадс 360 ассааддудсс сассудссссє ссссссдудса сссеєссссса ададсассєс Сдодадддсаса 420 60 дсддссссда дсЕдссЕддЕ сааддассас сСсссссдаас сддєдасуддЕ дссдсдааас 480

Есаддсудссс Єдассадсуд судєдсасасс СЕСССУОСсСС ЕсссасадеЕс сЕСаддасесс 540

Бассссссса дсадсуєдудє дассусєдссс сссадсадсе Єдддсассса дасссасаєс 60

ЕдсаасуєЄда аєсасаадсс садсаасасс аадчдсдуддаса адааадссда дсссаааєссе ббо

Едеєдасаааа сеєсасасасу сссассуєбудс ссадсасссуд аадсєдсаду дадассдєса 720 65 ЧдЕСЕСсСсССсСЕ Сссссссааа асссааддас асссссаєда Єсессссуддас сссеЕдаддес 780 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 840 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 900

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 960

ЗОЗ аадсдсаадуд Сссссаасаа адсссссудс дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддсдсас ассссдсссс саєсссудда Єдадсеєдасс 1080 аадаассаду Ссадссєдас седссЕддЕс аааддсеЕссс аєсссадсда саєсдссдаєд 1140 чачсдчдуачЧача дсаасудудса дссудачаас аасбасаада ссасудссєсс сдєдсеєддас 1200 сссуасуддесе сссссеЕсСссеЕ ссасадсаад сєсассуєдду асаададсад дЕддсадсад 1260 чачдаасуєсє ссссаєдсеєс сдедаєдсає даддсєссдс асаассасса сасдсадаад 1320 адссеєсессс сдеЕсесссудда бааа 1344 «2105 186 «2115 214 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 4984 РЗ29СІАТА ч1І9дб1і легкий ланцюг «4005 186

АБр І1е Сіп Меє ТПг о біп бек Рго бБег ТіПг їеч бБег Аїа бек Уа1 СЩ1У 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр

Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше 20 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 50 55 бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 7о 75 8о0 25 АБвр АБр Рпе Аїа ТПг Туг Тугк Сув біп біп Туг бек бек біп Рго Туг 85 90 935

ТПЕ Ррпе бі1у біп біу ТБ пу Уаі сіш Іїе Гу5 Агку Тс Уаі Аза Аза 100 105 110

Рго Бек Маі Роре Іїе Робе Рго Рго бек Авр сії сбіп Геч Гу5 бек б1у

Зо 115 120 125

ТПг Аїа бек Уаії Уаї Суб Пец Гей Абзп Ап Рре Туг Рго Агу біч Аїа 130 135 140

Туз Уаі біп Тер пуб Уа1і АБр АБп Аза Тез біп бек біу Ап бек сіп 145 150 155 160 бій бек Уаї Тпг бі сбіп Авр бБег Пув Авр бег ТПг Туг бБег Геч бег 165 170 175 ек ТПЕ Геї ТіПг Ге бек Гуз Аза Авр Тук січ пуб Нів пуб МУМаї Туг 180 185 190

Аа Сув сії Ма1ї ТП Ні біп біу Пец бек бек Рго Уа1і ТПг Пув5 б5ег 195 200 205

Рпе Абп Агуд сіу біч Сув 210 «2105 187 «2115 448 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Важкий ланцюг 4984 «4005 187 сіп Уаі1ї Сіп теп Уаї Сіп бек сі1у Аїа Січ Ма1 Ппув Пув Рго сС1іу бЗег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0 60 Меє бій Іей бег бек ГПеп Агу бек біш АвБр ТБг Аза Уаї Тугк Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд бій Туг Тугк Аку біу Рго Туг Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

ТПг Маї ТП Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сіу Рго бек Уаі! Рое Рго 65 115 120 125

Теч Аза Рго бек бек Пув Бек ТПг бек біу біу ТбПг Аза Аза Геч Сс1Уу 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп

145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190

Ззек Геч сіу ТПг біп ТБ Тук Іїе Суб Авп Уаі АвБп Нів пуб Рго 5ег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів Тпг оСув Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аза Аїа Сіу сС1іу Рго бег 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 біч Уаії пуб Рпе Абзп Тер Туг Маі АБр біу Уаі! біч Уаї Ніб5 Ап Аза 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 108) бек Маі1і Те Тіг Маї Ге Нів біп Авр Тер їеч Ап сС1у Кув Січ Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сіп Уа1ї Тугє ТіПг Іеч 340 345 350

Рго Рго Бек Агу АБр біч Теч ТБПг пуб Авп о біп Уа1і! Бек Геч ТіПг Сув 355 360 365

Теч Уаі Ппув сіу Рпе Туг Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаі біц Тер січ бБег 370 375 380

АБп о сбіу біп Рго бій Авп Авп Туг Пув ТПг ТБ Рго Рго Уаї Гей Авр 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Робе Теч Тук бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Теч Ніб Ап Нів Тук ТПг біп пуб бек ТГеч бек Гей бек Рго сіу ГПув 435 440 445 «2105 188 «2115 645 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 154 РЗ29СІАТА Ідсі легкий ланцюг «4005 188 чЧасаєсєссада Сдасссадсс ЄссЕсссасс ссдЕСЄдсає ссдесаддада ссдеЕдссасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчаєєсьсу саассстаєса седссаасад баваєсеєсує аєсссаєуєс дасдеєєсддас 300 садддсасса аадссдадає саадсуєасу дЕддсЕдсас саєссдеЕссе саєсеєссс 360 ссаєсєдаєд адсадсєдаа асєсєддаасє дсссЕсЕдеЕвуд єдЕДдссеЕдсеЕ дааєсаасьсс 420

Баєсссада аддссааадеє асадєедчаа чдчедчаєаасу ссссссааєс доададеаасесс 480 саддададсд Есасададса ддасадсаад дасадсассс асадссссад садсассстд 540 асудсєдадса аадсадасса судадааасас ааадсссасу ссЕдсдаадс сасссаєсад 60 чЧадасссдадсеЕ сдсссдеЕсас ааададсеєсс аасадддададчад адеєде 645 «2105 189 «2115 1338 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність бо «220» «223» ДНК 154 РЗ29СІАТА Ідсі важкий ланцюг «4005 189 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 65 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

ЧачаЕсссасуд ассасєдудудуд ссаадддасс ассуєдассу ЕЄсЕССсСЄСсадс Садсассаад 360 часссаєсуд СссЕєсссссЕ ддсасссссс сссаададса ссЕСєддудоду сасадсуддес 420 сЕдддссдсс Еддссаадда стассєсссс даассуддаєда сддеЕдеЕсдЯєд даасесаддс 480 чдсессєдасса дсуддсудсєдса сассеЕссссу дссдсссвас адЕссссадд ассссасесс 540 сЕсадсадсд Еддсдассдс дссссссадс адсссбдддса сссадассста саєсєдсаас 60

ЧЕдааєсаса адсссадсаа сассаадуєд дасаадааад Єсдадсссаа ассеЕсдеєдас ббо аааасссаса сасудсссасс дсдсссадса сссдаадссд садддудадЧчасс деЕсадеЕСЕсс 720 сЕСЕсСсСсссс саааасссаа ддасасссос асдаєсеєссс ддчдассссєда ддеЕсасаєдс 780 чЧчеЧЧаєдЧасЧдУа асуєдадсса саацчасссо даддссаадеЕ Єсаассдудєа сдсддасуадес 840 чсЧдчвадчдсдс аєаасуссаа дчасааачссу сддчадчдадс адсасаасад сассбассає 900

ЧЕддссадсуд ЄссеЕсассудсЄ сседсассад дасєддсєда асддсаадда дсасаадедс 960 ааддеЕсЕєсса асааадсссє суддсудссссс аєсдадаааа ссасєссссаа адссааадчу 1020 садссссдад аассасаддс деасасссод сссссаєссс доадаєдадсе дассаадаас 1080 саддеЕсадсс ЄдассєдссЕ ддссаааддс Єсссаєссса дсдасаєсдс сдєдчадеЧчу 1140 чачачсааєуд дадсадссуда даасаассас аадассасус сЕсссуєдсе ддассссдас 1200 дасЕсСсСЕЄсЕ сссеєсСвасад саадсєсасс деЕддасаада дсаддсддса дсадддадаас 1260

ЧдЕСЕсЄСсСЕсСає дссссуєдає дсаєдаддсе сЕдсасаасс ассасасуса даададссес 1320

Єссседесес сддадсааа 1338 «2105 190 «2115 215 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 164 РЗ29СІАТА Ідсі легкий ланцюг «4005 190

АБр І1е Сіп Меє ТПг о біп бек Рго бБег ТіПг їеч бБег Аїа бек Уа1 СЩ1У 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше

Зо 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 50 55 бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 7о 75 8о0

Авр Авр Рре Аїа ТіПг Туг Туг Сув біп Ссіп Тує І1е бБег Туг бек Меб 85 90 935

Теч ТП Рпе сіу сіп сіу Тбг Ппув Маї біч Іїе Гуз Аку ТПг Уа1і Аза 100 105 110

Аза Рго Бек УМаі Роре І1їе Робе Рго Рго бек Авр січ біп Геч Пув б5ег 115 120 125 біу Тс Аза бек Уа1і Уаї Суб Геї ІГеп АБп АБп Рре Туг Рго Агкд сій 130 135 140

Аа Ппув Уа1і сіп Тер Гуз Маії АБр АбБп Аза Гей сіп Бек сб1у АБп 5ег 145 150 155 160 сСіп бі бек Ма1! Трг Січ біп Авр бек ПЦув Авр бег ТіПг Туг бек Іеєч 165 170 175

Бек Бек ТПг Геї ТПг Теч бек Ппуз Аза Авр Тук січ пуб Нів Гуз Уаї 180 185 190

Тук Аїа Сув біч Уа! Трг Ніб сіп сіу Геї бек бек Рго Уаі! ТрПкгЕ Гуз 195 200 205

Бек Рпе АБп Акуд біу біч Сув 210 215 «2105 191 «2115» 446 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 164 РЗ29СІАТА Ідсі важкий ланцюг «4005 191 60 сіп Уаі1ї Сіп теп Уаї Сіп бек сі1у Аїа Січ Ма1 Ппув Пув Рго сС1іу бЗег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 65 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг

65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд бій Туг біу бек Мес А5р Туг Тер сіу сбіп сі1іу ТПг ТБг Уаї 100 105 110

ТПг Маї бек бек Аза бек ТПг пуб сіу Рго Бек Маі Рое Рго Іеч Аїа 115 120 125

Рго Бек Бек пуб бек ТПг бек біу біу ТПг Аза Аза Геч сіу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї цЦув Авр Туг Рре Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр Авп бек С1У 145 150 155 160

Аа Геч ТПг бек біу Маії Нів ТБбг Рре Рго Аїа Уаії Геї сіп бек 5ег 165 170 175 біу Геч Тук бек Гецп бБег Бек УМаі УМаі! ТБг Уаі! Рго бек бек бек Гей 180 185 190 біу ТЕ біп Тбпг Ту Іїе Суб АБп о Уаі АБп Нібв пуб5 Рго бек АБп о ТПг 195 200 205

Туз Маії Авр пуб пуб Уа1ї сій Рко Пув5 бек Сув АвБр Пуб5 ТПг Ні Тс 210 215 220

Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сіц Аїа Азїа сіу СсС1іу Рго Бек Уаї Ре 225 230 235 240

Теч Ріпе Рго Рго ПувБ Рго Пув АБр ТПг ІТечп Месє І1е бег Агу ТпПг Рго 245 250 255 біч Уаії ТрпЕ Суб Уа1і Уаї Маїії АБр Уаї бек Ніб біц Авр Рго січ Уаї 260 265 270

Туз Рпе Авп Тер Тук Уаі АБр сіу Маі біч Уаії Ні5 АвБп Аза Пуб5 ТПг 275 280 285

Туз Рго Акд бій бій біп Тук АБп бек Тйг Туг Акуд Уа1і Уаі1і Бек Уаї 290 295 108)

Пес Тпг о Уаї Ге Ніз сіп Авр Тср Гей АвБп біу Пув бій Тугк Ппув Сув 305 310 315 320

Туз Уаії бек Авп пуб Аза Геї сіу Азїа Рго Іїе біц пуб ТПг Іе бБег 325 330 335

Туз Аїа Ппуз сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уа! Тугє Трг Гей Рго Рго 340 345 350 век Акуд АБр бічш Теч ТБг губ Авп обіп Уа! Бек Геї ТПг Су5 Іеч Уаї 355 360 365

Туз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уа! бі Тер бій бек Ап с1Уу 370 375 380 біп Рго бій Авп Авп Тук Ппуз ТБг ТБг Ргсо Рго Уа! Іечй Авзр 5ег Авр 385 390 395 400 біу бек Рпе Рпе Гей Тугк Бек Пув Геї ТПг Уаі! Авр Пубз бег Агуд Тгр 405 410 415 біп біп біу Авп Уа1і Роре бек Суб5 бек Уа! Меєсє Ніб5 сій Аза Геч Нів 420 425 430

АвБп оНів Тугк Тс біп Гуз бек ТГеч бек Гей бек Рго сіу ГПув 435 440 445 «2105 192 «2115 642 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 2087 РЗ29СІАТА ч1Ідб1і легкий ланцюг «4005 192 чЧасаєсєссада Сдасссадсс ЄссЕсссасс ссдЕСЄдсає ссдесаддада ссдеЕдссасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчасєсвєу саассваєса ссдссааса СассадуссеЕ єсЕСЯЯСЕСсСас ДЕСсСєдссад 300 60 ддсассааад Ссдадаєсаа дсдеєасдудєд дсЕдсассає ссдеЕССссСає сеЕссссдсса 360

ЕсєЧасчадс адсєдааасєс єдчдааседсес ЄссусєдесдеЕ дсессдсесєдаа Саасеєсстає 420 сссадададд ссааадсаса деддааддсд даєсаасдсесс сссааєсддадауд баасеєсссад 480 чачадсудсса сачдадсадда садсааддас адсасссаса дссссадсадд сасссеєдасу 540 сЕдадсааад садассасда дааасасааа десЕссасдссс дсдаадссас ссаєсадддс 60 65 сеЕдадсеЕсдс ссдеєсасааа дадссєсаас аддодоадададЕ де 642 «2105 193 «2115» 1356 «2125 ДНК

«213» Штучна послідовність «223» ДНК 2087 РЗ29СІАТА ч19дб1і важкий ланцюг «4005 193 саддЕдсаає єддсдсадеЕс Єддддсєдад дЕдаадаадс сЕдддЕсСсЕс ддєдаадаеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асдчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдЕ асвсассдсдс дачадеЕсаас 300 басссдбасеЕ севгассдддда Єдассєсудас Сасєддддсес аадддассас судЕдассдєс 360

Ессссадсва дсассааддд сссаєсудЕСсС СЕССССсССсСвєУЯ сасссєссес саададсасс 420

Есєдддддса садсуддсссЕ дддсєЕдссвд дЕсСааддасе асЕсссссда ассоддеєдас 480

ЧчЕдссуєдчча асссаддсудс ссеєдассадс ддсдсдсаса ссЕсСсссуддс Єдесссвасад 540

Ессссаддас Сссасеєсссе садсадсуєд деЕдассуєдс ссЕССадсад сЕсдддсасс 60 садасссаса ЕссСдсаасуєЄє дааєсасаад сссадсааса ссаадудєдда саадааадесє ббо чадсссааасє сеєсусЄудасаа аасссасаса СдсссассуєЄє дсссадсасс Єдаадссдса 720 чачачЧчассуєЄ садеЕсСЕсссяЕ ссЕєсссссса ааасссаауд асасссеєсає дЧаєсєссссс9ад 780 асссссдадуд Ссасаєдсує чддєдасдчдас деЕдадссасу аачасссєда ддссаадесс 840 аассддбєасу Сдчдасуддсудє дчаддсдсасє аасудссаада сааадссусу дчаддадсад 900 басаасадса сдбассдєдс ддеЕсадсуєс сссассдеЕсс Єдсассадда сєддссдаає 960 часаадчадс асаадєдсаа ддЕсСЕССсаас ааадсссеєсу дсдсссссає сдадаааасс 1020 асссссааа ссааадуддса дссссудадаа ссасаддєдЕ асасссеєдсс сссаєссс9д 1080 чаєдадсєда ссаадаасса ддеЕсадссвєд ассєдсссдач ссаааддсес свраєсссадс 1140 часаєсудссу СдчдадчдеЕдуада чачсааєдучуд садссудада асаассасаа дассасдссєе 1200 сссуєдседуд асеЕссуасуд сеЕссссєсесс сессасадса адсссассує ддасаададс 1260 аддеЕддсадс аддддаасує сеЕєсЕСаєдс Ессуєдаєдс аєдаддсссо дсасаассас 1320 басасусада ададсссєссс ссеЕдеЕсеЕссу даєааа 1355 «2105 194 «2115 214

Зо «2125 РВТ «213» Штучна «2205 «223» 2087 РЗ29СІАТА чІ9дб1і легкий ланцюг «4005 194

АБр І1е Сіп Меє ТПг о біп бек Рго бБег ТіПг їеч бБег Аїа бек Уа1 СЩ1У 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 50 55 бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 7о 75 8о0

Авр Авр Рпе Аїа ТіПг Туг Тує Сув біп Сіп Ту біп А1їа Ре бег Іеч 85 90 935

ТПЕ Ррпе бі1у біп біу ТБ пу Уаі сіш Іїе Гу5 Агку Тс Уаі Аза Аза 100 105 110

Рго Бек Маі Роре Іїе Робе Рго Рго бек Авр сії сбіп Геч Гу5 бек б1у 115 120 125

ТПг Аїа бек Уаії Уаї Суб Пец Гей Абзп Ап Рре Туг Рго Агу біч Аїа 130 135 140

Туз Уаі біп Тер пуб Уа1і АБр АБп Аза Тез біп бек біу Ап бек сіп 145 150 155 160 бій бек Уаї Тпг бі сбіп Авр бБег Пув Авр бег ТПг Туг бБег Геч бег 165 170 175 ек ТПЕ Геї ТіПг Ге бек Гуз Аза Авр Тук січ пуб Нів пуб МУМаї Туг 180 185 190

Аа Сув сії Ма1ї ТП Ні біп біу Пец бек бек Рго Уа1і ТПг Пув5 б5ег (516) 195 200 205

Рпе Абп Агуд сіу біч Сув 210 «2105 195 «2115 452 65 «2125 РВТ «213» Штучна «2205 «223» 2087 РЗ29СІАТА ч1І9дб1 важкий ланцюг зов

«4005 195 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо сіп б1іу Агуд Ма1 Трг І1їе ТПг АТїа Авр Пув бБег ТіПг бек ТіПг Аїа Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд Уа1і АБвБп о Тугє Рго Тук бек Туг Тер біу Авр Роре АБр Тугє Тгр 100 105 110 біу біп біу ТПг Тпг о Уа1ї Тбг Уаї бек бек Аза бег ТПг Ппу5 с1у Рго 115 120 125

Зек Уа1і Рре Рго Іечп Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу б1у ТЕбг 130 135 140

Аза Аїа Теч сСіу Суб Геч Ма1і ПЦув Авр Ту Рбе Рго сій Рго Уа1 Тіг 145 150 155 160

Уаї бек Тгрр АБп бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаії Ні5 Трг Рре Рго 165 170 175

Аа Уаі Геї сіп бек бек біу Те Тукг бек Гей бБег Бек Уа1і Уа1і ТБг 180 185 190

Уаї Ркго бек бек бек Ге сіу ТпПг сіп ТПг Тук І1е Субв АБп Уаії Авп 195 200 205

Нів пуб Рго бек АБп ТПг пуб Уа1і Авр о Ппуб5 Ппув Ма1ії бій Рго Ппув бег 210 215 220

Сув Авр Пув Тпг Нів ТБ о Сув Реро Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа А1а 225 230 235 240 біу біу Ркго бек Уа1і Рбе Геї Робе Рго Рго Гу5 Рго Пуб Авр ТпПг Гей 245 250 255

Меє І1їе бек Агу ТБПг Ркго біц Уа1і Тбг Суб Маї Уаїії Уаї АБр Уаі1ї 5ег 260 265 270

Нів бі АБр Рко біч Уаі пуб Рпе Абзп Тер Туг УМаі АБр сбіу Уаї сіц 275 280 285

Уаї Нібв АБп Аза пу5 ТПг пуб Рго Акуд бій біз біп Тук АБп бек Тр 290 295 300

Тук Агуд Ма1 Уаі1ії бек Ма1ї Гечш Тип Уаї Гечп Нів Сіп Авр Тер Іеч Ап 305 310 315 320 сбіу пув біЧ Тук Ппув Сув Ппув Маії бек АБп Гуз Аза Те сСіу Аза Рго 325 330 335

Іїе сії Ппув ТПг І1їе бек Гуз Аїа Ппу5 сіу біп Рго Агкуд бій Рго біп 340 345 350

Уаї Тук ТБг Гецп Рго Рго бек Агуд АБр біч Теч ТБг Гу5 Ап біп Уаї! 355 360 365

Ззек Геч ТПг Суб ІГеч Уаї пувз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1їе Аїа Уаї 370 375 З8о сій Теср біц бБег Авп Сіу біп Рго біц Авп Авп Ту Пув ТПг Тс Рего 385 390 395 400

Рго Уаі Геї АБр бек Авр біу бек Рпе Рпе Гей Туг Бек Пув Іеч Тс 405 410 415

Уаї АБр Гуз бек Агу Тер біп сбіп сбі1іу АБп Уаі! Рібе бек Субв бек Уаї1! 420 425 430

Меє Нібв біч Аза Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп губ бек ІТеч бек Гец 435 440 445

Зек Рго сіу Гув 450 (516) «2105 196 «2115 645 «2125 ДНК «213» Штучна «2205 65 «223» ДНК СІС-563 РЗ29СІАТА Ідс1і легкий ланцюг «4005 196 чачаєсуєдс СЄдасссадад ссссудсаса сЕСЕССсСсСЕдЕ сессєддуда аадддссасс бо сЕсЕсСасдса дадссадсса дЕСсСдЕСЕСсСЕ адгсадсвасс бддсаєддбса єсадсадаад 120 зо9 ссаддасаад ссссссудсесес сседаєсвтас ддсдссЕсСсс сЕСдддсаас Еддсаєсссся 180 часаддЕссс садудчдадсудд аадсудааса часеєстассеє Єдасваєсєс садасеєддад 240 ссададдасеЕ ЕсдссдЕдса свсассдссад, садсасддбра десадсссссе сассЕсєвсддс 300 саддддасаа аадссдааасє саадсдбасуд деЕддсЕдсас сассеєдеЕсье саєсьєєссссд 360 ссаєсєдаєд адсадеЕсдаа аєссддаасє дссссЕдсьа ЄдЕДсССЕДсСЕ дааєсаассес 420

Баєсссада аддссааадеє асадєедчаа чдчедчаєаасу ссссссааєс доададеаасесс 480 саддададсд Есасададса ддасадсаад дасадсассс асадссссад садсассстд 540 асудсєдадса аадсадасса судадааасас ааадсссасу ссЕдсдаадс сасссаєсад 60 чассЕєдадсс судсссуєЄсас ааададсссєс аасадчадачач адесде 645 «2105 197 «2115 1338 «2125 ДНК «213» Штучна «2205 «223» ДНК СІС-563 РЗ2О9СІАТА Ідс1 важкий ланцюг «4005 197 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 дсадасєссд Єдаадддссуд дессассасєс сСссададаса ассссаадаа сасдсєднтає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасеЕдедс дсеЕЄДдасдеєе 300 чЧЧєдссЕссу ассасєддудуд ссааддадсс сЕддссассу ЕсЕСЧадсдс Садсассаад 360 часссаєсуд СссЕєсссссЕ ддсасссссс сссаададса ссЕСєддудоду сасадсуддес 420 сЕдддссдсс Еддссаадда стассєсссс даассуддаєда сддеЕдеЕсдЯєд даасесаддс 480 дссссдасса дсддсдЕдса сассссєсссу дсЕдсСсстас адсссссадду асеЕССасьсс 540 сЕсадсадсд Еддсдассдс дссссссадс адсссбдддса сссадассста саєсєдсаас 60 чсЧдаассаса адсссадсаа сассаадуєд дасаачааад Єсдадсссаа аєсЕсдсдас ббо аааасссаса сасудсссасс дсдсссадса сссдаадссд садддудадЧчасс деЕсадеЕСЕсс 720 сЕСЕсСсСсссс саааасссаа ддасасссос асдаєсеєссс ддчдассссєда ддеЕсасаєдс 780 чЧчЕдЧдсдасда асдєдадсса сдаадасссє даддссаадс Єсаассддсба сдєбддасддас 840 чсЧдчвадчдсдс аєаасуссаа дчасааачссу сддчадчдадс адсасаасад сассбассає 900 чЧчедЧдєсадсу СЄссеєсассуєЄє ссеЕдсассад дЧасєддсєЧда асддсаадчда деасаадедес 960 ааддеЕсЕєсса асааадсссє суддсудссссс аєсдадаааа ссасєссссаа адссааадчу 1020 садссссдад аассасаддс деасасссод сссссаєссс доадаєдадсе дассаадаас 1080 саддеЕсадсс ЕдассєдссеЕ ддєссаааддс Єсссаєсссса дсдасаєсудс, саєдвавадса 1140 чачачсааєуд дадсадссуда даасаассас аадассасус сЕсссуєдсе ддассссдас 1200

ЧасЕСсСсСЕЕсЕ сссесрасад саадсесасс дЕддасаада дсаддсддса дсаддддаас 1260

ЧдЕСЕсЄСсСЕсСає дссссуєдає дсаєдаддсе сЕдсасаасс ассасасуса даададссес 1320

Єссседесес сддадсааа 1338 «2105 198 «2115 215 «2125 РЕТ «213» Штучна «2205 «223» СІС-563 РЗ29СІАТА Ідс1і легкий ланцюг «4005 198 біч Іїе Уаії Гей ТПг сіп Бек Рго біу Тбг Те бек Гец бек Рго с1у 1 5 10 15 біч Акуд Аза Тбг Гей бек Сув Агу Азїа бек біп бек Уаії бек Бек бБег 20 25 Зо

Тук Геї Аїа Ткр Тук біп біп пуб Рго сіу біп Аза Рго Агу Іеч Гец 35 40 45

Іїе Тук сі1іу А1їа бек бек Агу Аїа ТПг сіу Іїе Рго АБр Аку Рое б5ег 50 55 бо сіу бЗек Сі1іу Бек сС1іу ТБг Авр Рре Тс їец ТПг І1е бек Агд Іеч Січ 65 7о 75 8о0

Рго бій АБр Рпре Аїа Уа1! Туг Тук СувБ біп сбіп Туєк біу бек бег Рго 85 90 935

Теч ТП Рпе сіу сіп сіу Тбг Ппув Маї біч Іїе Гуз Аку ТПг Уа1і Аза (516) 100 105 110

Аза Рго Бек УМаі Роре І1їе Робе Рго Рго бек Авр січ біп Геч Пув б5ег 115 120 125 біу Тс Аза бек Уа1і Уаї Суб Геї ІГеп АБп АБп Рре Туг Рго Агкд сій 130 135 140 65 Аза пув Маї Сіп Тер пув УМаі1і Авр Авп А1їа їеч Сбіп бег Сіу Авп бег 145 150 155 160 біп біц бек Уаі ТП сій біп АвБр бек Гу5з АБр бек ТПг Тугк бек Гей 165 170 175

Бек Бек ТПг Геї ТПг Теч бек Ппуз Аза Авр Тук січ пуб Нів Гуз Уаї 180 185 190

Тук Аїа Сув біч Уа! Трг Ніб сіп сіу Геї бек бек Рго Уаі! ТрПкгЕ Гуз 195 200 205 бек Рре Авп Агуд Сбіу Січ Сув 210 215 «2105 199 «2115 446 «2125 РЕТ «2135 Штучна «2205 «223» СІС-563 РЗ29СІАТА Ідсі важкий ланцюг «4005 199 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг

Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 20 бек Аїа І1е бек біу бек Сіу біу бек ТЬг Туг Туг А1їа АБр Бег Уаї 5о0 ів) бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 25 85 90 95

Аза Ггеч Авр Уаії сбіу Азїа Рбе А5р Туг Тер сіу сіп сіу Аза Іеч Уаї 100 105 110

ТПг Маї бек бек Аза бек ТПг пуб сіу Рго Бек Маі Рое Рго Іеч Аїа 115 120 125

Рго бБег бек Пув Бег ТіПг бек біу сіу ТЬіг Аза АТа Іеч С1іу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї ув Авр Тукє Рпе Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр АБп бег Ш1Уу 145 150 155 160

Аа Геч ТПг бек біу Маії Нів ТБбг Рре Рго Аїа Уаії Геї сіп бек 5ег 165 170 175 біу Геч Тук бек Гецп бБег Бек УМаі УМаі! ТБг Уаі! Рго бек бек бек Гей 180 185 190 біу ТЕ біп Тбпг Ту Іїе Суб АБп о Уаі АБп Нібв пуб5 Рго бек АБп о ТПг 195 200 205 цув Маї Авр Ппуз Ппуз Маї бій Рго Пув бек Сув Авр Гув ТПг Нів ТПг 210 215 220

Сув Рго Рго Суб Рго Аза Рго сії Аза Аза Сбіу біу Ркго бек Уа1і Роіе 225 230 235 240

Теч Ріпе Рго Рго ПувБ Рго Пув АБр ТПг ІТечп Месє І1е бег Агу ТпПг Рго 245 250 255 біч Уаії ТрпЕ Суб Уа1і Уаї Маїії АБр Уаї бек Ніб біц Авр Рго січ Уаї 260 265 270

Туз Рпе Авп Тер Тук Уаі АБр сіу Маі біч Уаії Ні5 АвБп Аза Пуб5 ТПг 275 280 285

Пув Рго Агд бі сії Сбіп Туг Авп бЗегє ТПг Туг Аку Уа1ї Ма1ї бег Уаї 290 295 300

Теч Тпг Уаії Гей Нів сіп АБр Тгр Іеч АБп біу Ппув бі Тук Пув Сув 305 310 315 320

Туз Уаії бек Авп пуб Аза Геї сіу Азїа Рго Іїе біц пуб ТПг Іе бБег 325 330 335

Туз Аїа Ппуз сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уа! Тугє Трг Гей Рго Рго 340 345 350 век Акуд АБр бічш Теч ТБг губ Авп обіп Уа! Бек Геї ТПг Су5 Іеч Уаї 355 360 365 60 пув біу Рпе Туг Рго бек Авр І1ї1е Аїа Уаї бі Тер Січ бег Авп С1Уу 370 375 З8о біп Рго біц Авп Ап Туг Пув Тс ТБ Ргро Рго Уаі Гей Авр бек Авр 385 390 395 400 біу бек Рпе Рпе Гей Тугк Бек Пув Геї ТПг Уаі! Авр Пубз бег Агуд Тгр 65 405 410 415 біп біп біу Авп Уа1і Роре бек Суб5 бек Уа! Меєсє Ніб5 сій Аза Геч Нів 420 425 430

АвБп оНів Тугк Тс біп Гуз бек ТГеч бек Гей бек Рго сіу ГПув

435 440 445 «2105 200 «2115 645 «2125 ДНК «213» Штучна «2205 «223» ДНК СІС-564 РЗ29СІАТА Ідсі легкий ланцюг «4005 200 чачаєсуєдс СЄдасссадад ссссудсаса сЕСЕССсСсСЕдЕ сессєддуда аадддссасс бо сЕсЕсасдса дадссадсса дЕССдДЕСЕСЕЄ адсадссасс Сддсаєддба Єсадсадаад 120 ссаддасаад ссссссудсесес сседаєсвтас ддсдссЕсСсс сЕСдддсаас Еддсаєсссся 180 часаддЕссс садудчдадсудд аадсудааса часеєстассеє Єдасваєсєс садасеєддад 240 ссададдасеЕ ЕсдссдЕдса свсассдссад, садсасддбра десадсссссе сассЕсєвсддс 300 саддддасаа аадссдааасє саадсдбасуд деЕддсЕдсас сассеєдеЕсье саєсьєєссссд 360 ссаєсєдаєд адсадеЕсдаа аєссддаасє дссссЕдсьа ЄдЕДсССЕДсСЕ дааєсаассес 420

Баєсссада аддссааадеє асадєедчаа чдчедчаєаасу ссссссааєс доададеаасесс 480 саддададсд Есасададса ддасадсаад дасадсассс асадссссад садсассстд 540 асудсєдадса аадсадасса судадааасас ааадсссасу ссЕдсдаадс сасссаєсад 60 чассЕєдадсс судсссуєЄсас ааададсссєс аасадчадачач адесде 645 «2105 201 «2115 1338 «2125 ДНК «213» Штучна «2205 «223» ДНК СІС-564 РЗ29СІАТА Ідс1 важкий ланцюг «4005 201 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 дсадасєссд Єдаадддссуд дессассасєс сСссададаса ассссаадаа сасдсєднтає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасеЕдедс деЕєсдасеЕє 300

ЧЧеєЕсСсУуєссуУ ассасєддудуд ссааддаасс сЕддссассу ЕсЕСЧадсдс Садсассаад 360 часссаєсуд СссЕєсссссЕ ддсасссссс сссаададса ссЕСєддудоду сасадсуддес 420 сЕдддссдсс Еддссаадда стассєсссс даассуддаєда сддеЕдеЕсдЯєд даасесаддс 480 дссссдасса дсддсдЕдса сассссєсссу дсЕдсСсстас адсссссадду асеЕССасьсс 540 сЕсадсадсд Еддсдассдс дссссссадс адсссбдддса сссадассста саєсєдсаас 60 чсЧдаассаса адсссадсаа сассаадуєд дасаачааад Єсдадсссаа аєсЕсдсдас ббо аааасссаса сасудсссасс дсдсссадса сссдаадссд садддудадЧчасс деЕсадеЕСЕсс 720 сЕСЕсСсСсссс саааасссаа ддасасссос асдаєсеєссс ддчдассссєда ддеЕсасаєдс 780 чЧчЕдЧдсдасда асдєдадсса сдаадасссє даддссаадс Єсаассддсба сдєбддасддас 840 чсЧдчвадчдсдс аєаасуссаа дчасааачссу сддчадчдадс адсасаасад сассбассає 900 чЧчедЧдєсадсу СЄссеєсассуєЄє ссеЕдсассад дЧасєддсєЧда асддсаадчда деасаадедес 960 ааддеЕсЕєсса асааадсссє суддсудссссс аєсдадаааа ссасєссссаа адссааадчу 1020 садссссдад аассасаддс деасасссод сссссаєссс доадаєдадсе дассаадаас 1080 саддеЕсадсс ЕдассєдссеЕ ддєссаааддс Єсссаєсссса дсдасаєсудс, саєдвавадса 1140 чачачсааєуд дадсадссуда даасаассас аадассасус сЕсссуєдсе ддассссдас 1200

ЧасЕСсСсСЕЕсЕ сссесрасад саадсесасс дЕддасаада дсаддсддса дсаддддаас 1260

ЧдЕСЕсЄСсСЕсСає дссссуєдає дсаєдаддсе сЕдсасаасс ассасасуса даададссес 1320

Єссседесес сддадсааа 1338 «2105 202 «2115 215 «2125 РЕТ «213» Штучна «2205 «223» сСІС-564 РЗ29СІАТА Ідсі легкий ланцюг «4005 Щ 202 біч Іїе Уаії Гей ТПг сіп Бек Рго біу Тбг Те бек Гец бек Рго с1у 1 5 10 15 біч Акуд Аза Тбг Гей бек Сув Агу Азїа бек біп бек Уаії бек Бек бБег (516) 20 25 Зо

Тук Геї Аїа Ткр Тук біп біп пуб Рго сіу біп Аза Рго Агу Іеч Гец 35 40 45

Іїе Тук сі1іу А1їа бек бек Агу Аїа ТПг сіу Іїе Рго АБр Аку Рое б5ег 50 55 бо 65 сіу бЗек Сі1іу Бек сС1іу ТБг Авр Рре Тс їец ТПг І1е бек Агд Іеч Січ 65 7о 75 8о0

Рго бій АБр Рпре Аїа Уа1! Туг Тук СувБ біп сбіп Туєк біу бек бег Рго 85 90 935

Теч ТП Рпе сіу сіп сіу Тбг Ппув Маї біч Іїе Гуз Аку ТПг Уа1і Аза 100 105 110

Аза Рго Бек УМаі Роре І1їе Робе Рго Рго бек Авр січ біп Геч Пув б5ег 115 120 125 сбіу Тпг Аза бек УМаї УМаї Сув Гей Гей АбБп Азп Рре Туг Рго Агу бій 130 135 140

Аа Ппув Уа1і сіп Тер Гуз Маії АБр АбБп Аза Гей сіп Бек сб1у АБп 5ег 145 150 155 160 біп біц бек Уаі ТП сій біп АвБр бек Гу5з АБр бек ТПг Тугк бек Гей 165 170 175

Бек Бек ТПг Геї ТПг Теч бек Ппуз Аза Авр Тук січ пуб Нів Гуз Уаї 180 185 190

Тук Аїа Сув біч Уа! Трг Ніб сіп сіу Геї бек бек Рго Уаі! ТрПкгЕ Гуз 195 200 205 бек Рре Авп Агуд Сбіу Січ Сув 210 215 «2105 203 «2115 446 «2125 РЕТ «2135 Штучна «2205 «223» СІС-564 РЗ29СІАТА Ідсі важкий ланцюг «4005 203 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 бек Аїа І1е бек біу бек Сіу біу бек ТЬг Туг Туг А1їа АБр Бег Уаї 5о0 ів) бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Рпе Авр Уа1ії біу Ргро Рбе Авр Туг Тер сіу сбіп сіу ТіПг Іеч Уаї 100 105 110

ТПг Маї бек бек Аза бек ТПг пуб сіу Рго Бек Маі Рое Рго Іеч Аїа 115 120 125

Рго бБег бек Пув Бег ТіПг бек біу сіу ТЬіг Аза АТа Іеч С1іу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї ув Авр Тукє Рпе Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр АБп бег Ш1Уу 145 150 155 160

Аа Геч ТПг бек біу Маії Нів ТБбг Рре Рго Аїа Уаії Геї сіп бек 5ег 165 170 175 біу Геч Тук бек Гецп бБег Бек УМаі УМаі! ТБг Уаі! Рго бек бек бек Гей 180 185 190 біу ТЕ біп Тбпг Ту Іїе Суб АБп о Уаі АБп Нібв пуб5 Рго бек АБп о ТПг 195 200 205 цув Маї Авр Ппуз Ппуз Маї бій Рго Пув бек Сув Авр Гув ТПг Нів ТПг 210 215 220

Сув Рго Рго Суб Рго Аза Рго сії Аза Аза Сбіу біу Ркго бек Уа1і Роіе 225 230 235 240

Теч Ріпе Рго Рго ПувБ Рго Пув АБр ТПг ІТечп Месє І1е бег Агу ТпПг Рго 245 250 255 біч Уаії ТрпЕ Суб Уа1і Уаї Маїії АБр Уаї бек Ніб біц Авр Рго січ Уаї 260 265 270

Туз Рпе Авп Тер Тук Уаі АБр сіу Маі біч Уаії Ні5 АвБп Аза Пуб5 ТПг 275 280 285 60 Пув Рго Агд бі сії Сбіп Туг Авп бЗегє ТПг Туг Аку Уа1ї Ма1ї бег Уаї 290 295 300

Теч Тпг Уаії Гей Нів сіп АБр Тгр Іеч АБп біу Ппув бі Тук Пув Сув 305 310 315 320

Туз Уаії бек Авп пуб Аза Геї сіу Азїа Рго Іїе біц пуб ТПг Іе бБег 65 325 330 335

Туз Аїа Ппуз сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уа! Тугє Трг Гей Рго Рго 340 345 350 век Акуд АБр бічш Теч ТБг губ Авп обіп Уа! Бек Геї ТПг Су5 Іеч Уаї

355 360 365

Туз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уа! бі Тер бій бек Ап с1Уу 370 375 380 біп Рго біц Авп Ап Туг Пув Тс ТБ Ргро Рго Уаі Гей Авр бек Авр 385 390 395 400 біу бек Рпе Рпе Гей Тугк Бек Пув Геї ТПг Уаі! Авр Пубз бег Агуд Тгр 405 410 415 біп біп біу Авп Уа1і Роре бек Суб5 бек Уа! Меєсє Ніб5 сій Аза Геч Нів 420 425 430

АБп о Нів Туг Тип біп Пув бек Тїеч бБег Геч бек Рго С1у ув 435 440 445 «2105 204 «2115 639 «2125 ДНК «2135 Штучна «2205 «223» ДНК 17А9 РЗ29СІАТА ч1Ідб1і легкий ланцюг «4005 204

Есудєссдадс Єдасссадда ссссдсЕЧдеЕУд сєссдсддссЕ єдддасадчас адссадчаєс бо асаєдссаад дадасадссс садаадесає сСаєдсаадссї ддсассадса даадссадда 120 саддсссссд бассєдеЕсає стаєддсааа аасаассуддсес ссссадуддає сссадассда 180

Есссссудудсес ссадсеєсаду ааасасадсс Єссеєсудасса Єсассддддс Єсаддсуддаа 240 чаєчадчсєд ассассассу Єаасеєсссує деЕсасусссс асааєсєсусує асссоуддсода 300 чачассаадс ЄдчассуєЄєссЕ аддссаассс ааддсєдссс ссадсуєдас ссЕдсессесс 360 сссадсадсуд аддаассдса ддссаасаа дссассссдд ЄсЕдссеєдає садсдассес 420

Басссаддсу ссуєдассує ддссєдчдчаа дссдасадса дссссуєдаа ддссддасЧесд 480 чадассасса сссссадсаа дсададсаас аасаадсасуд ссдссадсад сеЕассеЕдадс 540 сеЕдасссссд адсадсддаа дадссасадд Єсссбасадсс дссаддедас ссасдадддс 60 адсассудєду адаааассудє ддсссссасс дадсдсадс 639

Зо «2105 205 «2115» 1350 «2125 ДНК «213» Штучна «2205 «223» ДНК 17А9 РЗ29СІАГЦА ІдСі важкий ланцюг «4005 205 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 дсадасєссд Єдаадддссуд дессассасєс сСссададаса ассссаадаа сасдсєднтає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає ассасеЕдеСедс дсуєдеЕеес 300 бассусуЧеЕд чдЕДдЧЕСЕСває дчдассассуду дадссаадчаа ссссддесас судєсссддаде 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 часасадсуд сссЕдЧдучссдд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдаассуде дасудЧЕеЕдесУ 480 бддаасєсад дсдсссЕєдас садсуддсуєЄд сасассеЕєсс суддсеЕдеЕссе асадесссьса 540 ччасеЕсвтасс сссеЕСсадсад суєдудєдасс дЕдсссссса дсадссєдаду сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдааєса саадсссадс аасассааууд Єддасаадаа адсєдадсесс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссдЕсадеЕсе ЕсссссЕссс сссаааассс ааддасассс Єсаєдаєсєссс ссддассссе 780 чаддсєсасає дсдЕддЕддЕ ддасуєдадс сасдаадасс ссдаддесаа дсеЕсаасвє9ду 840

Басєдчдасу дсудєдчвадає дсасааєдсс аадасааадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасуєасс дчЕДдЕдЧдссадд судєсСсссасс дЕСССдсасс адчасєсдудсс дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса деЕдєасассс єЄдсссссаєс ссудчаєдад 1080 седассаада ассадудєса сссдассєдс седдссааад дсЕссСсаєсс садсдасаєс 1140 чссаєдчадс доадачадсаа Єдддсадссу дачаасаасеє асаадассас дссЕССсСсєд 1200 седдасессуд асддсЕєссьє сеЕсссеЕсвас адсаадсесса ссудбддасаа дадсаддачєдЧу 1260 садсаддудда асдеЕсЕеєсеЕс аєдссссуєд абдсаєдадуд сесбдсасаа ссасграсасу 1320 садаададсс ЕсЕСССЕДдДЕСсС єссдудудбааа 1350 (516) «2105 206 «2115 213 «2125 РЕТ «213» Штучна «2205 65 «223» 17А9 РЗ29СІАТА Ідс1і легкий ланцюг «4005 206

Зек Бек біш Геї Тс біп АбБр Рго Аїа Уа! бек Уаі Аїа Іечзч с1у сіп 1 5 10 15

ТЕ Маії Аку І1ї1е ТБг Сув біп біу Авр Бек Геї Агу бек Туг Туг Аза 20 25 Зо ек Тер Тук біп біп Гуз Рго біу біп Аїа Рго Уаі Геч МУаї І1е Туг 35 40 45 біу Ппув Авп Авп Агу Рго бек біу І1е Рго Авр Акуд Рре бег біу бег 5о0 ів) бо

Бек Бек біу АБп ТПг Аза бек їецп ТПг Іїе ТПг сіу Аїа сіп Аза січ 65 70 75 80

Авр січ Аза АБр Тук Тук Суб АБп бег Акуд Уа1і Меє Рго Ні АБп Агд 85 90 95

Уаї Рре біу біу біу ТПг Ппув Геч Тбг УМаї Іеч Сіу біп Рго Пув5 Аза 100 105 110

А1Та Рго бек Уаі Тйг Гей Ропе Рго Рго бег бек бій біп Ге сіп Аїа 115 120 125

АБп опув Аїа Тип Тез Ма1! Сув їеч І1їе бег Авр Рпе Туг Рго С1у А1а 130 135 140

Уаї ТЕ Уаії Аза Тер пуб Аза Абвр бБег бек Рго Уа! Туз Аза сіу Уаї1! 145 150 155 160 біч ТБЕ ТЕ Тбг Рго Бек Ппув біп бек АБп АБп Гуз Туг Аїа Аза бБег 165 170 175

Зек Тук Геч бек Геї ТіПг Рго біц біп Тер ПувБ Бек Нібв Агу бек Туг 180 185 190 зек Сув біп Маії ТБг Ні біц сіу бек ТпПг Уаі1і січ Ггу5 ТБг Уаї Аїа 195 200 205

Рго Тпг Січ Сув бег 210 «2105 207 «2115 450 «2125 РЕТ 0) «213» Штучна «2205 «223» 17А9 РЗ29СІАТА ч1І9дб1 важкий ланцюг «4005 207 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 бек Аїа І1е бек біу бек Сіу біу бек ТЬг Туг Туг А1їа АБр Бег Уаї 5о0 ів) бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд Уа1і Рре Туг Аку біу біу Уаії бек Меє А5вр Тугє Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Пец Уа! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Те Аїа Рго бег бек Пув бег ТіПг бек біу сС1у Тйг Аза А1а 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205 60 Рго Бек АвБп ТПйг пув Уаі Авр о Ппув Ппув УМаї бі Рго Ппувз бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 65 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів

275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 108)

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув сбіу біп Рго Акуд бід Рго біп Уа1ї Туг 340 345 350

ТВгЕ Ген Рго Рго бек Агуд Авр біп Ге ТП Ппуз АБп о біп Уаї бег Іеч 355 360 365

ТПЕ Сув Геч Маї Гуз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уаї біч Тгр 370 375 380 біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Тук бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 бі Аїа Пешп Ні АвБп Ніз Туг ТБПг біп Гпубв бБег ТІечй бег ТІеч бег Рго 435 440 445 сіу Гуз 450 «2105 208 «2115 6563 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність людського ОХ40 Нів

Зо «4005 208 сеЕдсассдсд Едддсдасас срассссадс аасудассудде дсеєдссасуда деЕдсадассс бо часаасуддса СддЕдЕсСссу дсдсадссуд Єсссадааса ссуєдесдсад ассЕсдсддас 120 ссеЕддссЕсСЕ асаасддасудс ддсдеЕссадс аадсссеєдса адссеЕєдвас сеЕддедсаас 180 сЕдсддадсд дсадсдадсуд даадсадссд єЄдбассдсеса сссаддаєас сдедесдсс9адд 240 бдеададссуд дсасссадсс сседдчасадс Сасааасссуд дсдЕддассд сдесссЕвєдас 300 ссеЕссЕддсс асеЕссадссс бддсдасаас саддссєдса адссесбддас саасеєдсасс 360 сЕддссуддса адсасасссс дсадсссдсес адсаасадса дсдасдссає седсдаддас 420 сдддаєсссс ссдссассса дссеєсаддаа асссадддсес сеЕсссдссад асссаєсасс 480 чЧчсдсадссва сададудсссд дсссадаасс адссаддддс ссадсассад асссудаєддаа 540

ЧдЧЕдссЕддсуд дсададссудє сдасудаасад Ссавасєєсс адддсддсєсс аддсссдаас 60 часаєсєссу аддсссадчаа чаєсчачдсууд сасчаддссс дадсєсасса ссаєсассає ббо сас 663 «2105 209 «2115 221 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Людський ОХ40 Ні «4005 209

Печ Нів Сув УМаї с1у АБр ТБПг Туг Рго бек Авп Авр Агу Сув Сув Нів 1 5 10 15 біч Сув Акуд Рго сбіу Авп сіу Меє Уаі! бек Агу Суб бБег Агуд бек сіп 20 25 Зо

АвБп оТпг Уа1і Сув Аку Рго Сув біу Ркго біу Робе Туг АБп АБр Уаї Уаї 35 40 45

Зек Бек Пув Рго Сув Гув Рго Суб ТПг Тер Суб АвБп Геї Агу бек б1у 50 55 бо

Зек бі Акуд пу5 біп Теч Сув ТПг Аза ТПг сбіп Абр Тс Уаї Су5з Агд 65 7о 75 8о0 60 Сув Аку Аїа сіу ТП біп Рго Гей Авр бБег Туг Пув Рго біу Уаі1і Авр 85 90 935

Сув Аза Ркго Суб Рго Рго сіу Ні Роре бек Рго біу АвБр АвБп сбіп Аза 100 105 110

Сув пуб Рго Тер ТПг Аб5п Суб Тс Іеп Аза біу Пу5 Нібв ТпПг Геч сіп 65 115 120 125

Рго Аза Бек АБп бек бек АБр Аза Іїе Суб сії АБр Агу АБр Рго Рго 130 135 140

Аза ТПпг сбіп Рго сбіп біп ТБ біп біу Рго Рго Аіїа Агу Рго І1е ТЕГ

145 150 155 160

Уаї біп Рго ТЕ біц Аза Тер Рго Акуд ТБ беє біп біу Рго бек ТіПг 165 170 175

Агуд Рго Уаі сії Маї Рко біу біу Акуд Аїа Уаі А5р січ сіп Іеч Туг 180 185 190

Рпе сіп сіу біу бек біу Гец Авп Авр Іїе Рбе сії Аза біп Туз І1е 195 200 205 біч Тер Ні5 біц Аза Агу Аза Ні Нів5 Нів Нів Нів Нів 210 215 220 «2105 210 «2115 65681 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК мишачий ОХ40 Нів «4005 210 чсдассусса дасуддсєдаа ссдсуєЄдаа сасасссасс ссадсудсса саадсдседс бо ачачадеєдсс адсссудсса судсасудудєд Єссадасудсуд ассасасасу ддасасссвєд 120

ЕдссасссеЕс дсуадасаддд ссєсСвасаас даддссуєда асврасасас сеЕдсаадсад 180 бдсасссадс дсаассасад аадсудсадс дадсєдаадс адаассдсас ссссасссад 240 чаєассусєудс дсачаєдсад асссудсасс садсссадас аддасадсудд сеєасаадсесд 300 часЧдєдчасс дсуєдссссд ссссссеЕддс сасеЕссадсс ссудудсаасаа ссаддсседс 360 аадсссєдда ссааседсас ссЕдадсудс аадсадасса дасассссудс садсдасадс 420 сЕддаєдссд ЕдЕдсдадда садаадсссд седдссассс бдсЕдесддада дасасадс9ад 480 сссассссса дасссассас сдєдсададс ассассусдЕ ддсссадаас садсдадсед 540 сссадеЕсссс ссасссеєсудс дасасссдад ддссссдсесуд асдаасадеЕє асасвєесссад 60 часдадсЕсад дссєдаасда саєсєссудад дсссадаада Єсччадсуддса счаддсссда ббо дсесассасс ассассаєса с 681 «2105 211

Зо «2115 226 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Мишачий ОХ40 Нів «4005 211

ТЬПг Азїа Аку Агу Теч Абп Суб Уа1ї Ппуб5 Ні Тс Тугє Рго бек б1у Нів 1 5 10 15

Туз Сув Сув Акуд бій Сув біп Рго біу Ніз біу Меє Уа1і бек Ак Сув 20 25 Зо

Авр Нів Трг Агу Авр о Тбг Тез Сув Нів Рго Сув біц Трг Сіу Рпре Туг 35 40 45

АвБп обі Аза УМаії АБп о Тук АБвр Тс Суб пуб біп Суб Тс біп Суб АБп 50 55 бо

Нів Аку бек біу бек біч Ге пуб біп Абп Сув ТПг Рго ТБг біп Авр 65 7о 75 8о0

ТЕ Маї Суб Аку Суб Агуд Рго біу Тбг біп Рго Агу біп Авр бесє б1УуУ 85 90 935

Тук Ппув Геч біу Маії Авр Суб Уа1і Рго Суб Рго Рго біу Нів Рре 5бег 100 105 110

Рго бі1у АБп АБп біп Аїа Сув Пув Рго Тер ТПг Авп Сувз Тс Геч 5ег 115 120 125 біу пуб біп ТПг Агуд Нів Рго Аза бек АБр бег Гей Авр Аїа Уа1ї Сув 130 135 140 біч Авр Агуд бесє Геп Гечш Аїа ТПг Іеч Іечп Тгр бі Трг сбіп Агуд Рего 145 150 155 160

ТПЕ Рре Агу Рго ТПг ТБ Уаї біп бек ТПг Тс Уаї Теср Рго Агуду То 165 170 175

Бек біш Гей Ркго бек Рго Рго ТПг Гец Уа! ТПг Рго січ б1іу Рго Уаї 180 185 190 60 АБр біч сСіп їеч Туг Рре Сіп Сіу Ссіу бек біу їеч Авп Авр І1е Рре 195 200 205 біч Аза сбіп пуб Іїе сії Тер Ні5 біц Аза Агку Аза Ні Ні Ні Ні 210 215 220

Нів Нів 65 225 «2105 212 «2115 1317 «2125 ДНК

«213» Штучна послідовність «223» Нуклеотидна послідовність димерного людського ОХ40 антигена Ес «4005 212 сЕдсассдсуд Едддсдасас сбрассссадс аасдассуддеЕ дсеєдссасда деЕдсадассс бо часаасуддса СддЕдЕсСссу дсдсадссуд Єсссадааса ссуєдесдсад ассЕсдсддас 120 ссеЕддссЕсСЕ асаасддасудс ддсдеЕссадс аадсссеєдса адссеЕєдвас сеЕддедсаас 180 сЕдсддадсд дсадсдадсуд даадсадссд єЄдбассдсеса сссаддаєас сдедесдсс9адд 240

Едесададссу дсасссадсс ссеєддасадс Сасааасссу дсєдчасьд сдсесссеЕвдс 300 ссЕССсСєддсс ассссадссс бдудсдасаас саддсссдса адсссєддас саасеєдсасс 360 сЕддссуддса адсасасссс дсадсссдсес адсаасадса дсдасдссає седсдаддас 420 сдддаєсссс ссдссассса дссеєсаддаа асссадддсес сеЕсссдссад асссаєсасс 480 чЧчсдсадссва сададудсссд дсссадаасс адссаддддс ссадсассад асссудаєддаа 540 чЧчеЕдсссдудсу дсачадссуєЄє сдасччааса Ссасаєсєсс адддсддеєс асссаааєссе 60 дсадасаааа сссасасасд сссассудбдс ссадсасссд аасєсссдудад додадассдЕса ббо дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 720 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 780 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 840

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 900 аадсдсаадд СсЕссаасаа адсссЕсудс дсссссаєсу адаааассає ссссааадсс 960 ааадддсадс сссдадаасс асаддсдсас ассссдсссс саєсссудда Єдадсеєдасс 1020 аадаассаду Ссадссєдас седссЕддЕс аааддсеЕссс аєсссадсда саєсдссдаєд 1080 чачсдчдуачЧача дсаасудудса дссудачаас аасбасаада ссасудссєсс сдєдсеєддас 1140 бссудасуддасеє сссесеЕсссе ссрасадсаад сеєсассуєду асаададсад деЕддсадсад 1200 чадаасуєсє ссссаєдсєс судєдаєдсає даддссссдс асаассасса сасдсадаад 1260 адссеєссссс сдсссссудуад баааєссуддс басссаєасу аєдеЕсссада сСсасасе 1317 «2105 213 «2115 439 «2125 РЕТ

Зо «213» Штучна послідовність «2205 «223» Димерний людський ОХ40 антигена Ес «4005 213

Теч Ніз Суб Уа1 сіу Авр ТП Тугк Рго бек АБп Авр Агуд Суб Суб Нів 1 5 10 15 біч Сув Акуд Рго сбіу Авп сіу Меє Уаі! бек Агу Суб бБег Агуд бек сіп 20 25 Зо

АвБп оТпг Уа1і Сув Аку Рго Сув біу Ркго біу Робе Туг АБп АБр Уаї Уаї 35 40 45 зек Бек Ппув Рго Сув Пув Рго Сув ТПг Тер Су5 АвБп Гей Агуд бег б1УуУ 50 55 бо

Зек бі Акуд пу5 біп Теч Сув ТПг Аза ТПг сбіп Абр Тс Уаї Су5з Агд 65 7о 75 8о0

Сув Акуд Аїа сіу ТпПг о біп Рго Геї АБр бек Тук Гув Рго біу Уаі1і Авр 85 90 935

Сув Аза Ркго Суб Рго Рго сіу Ні Роре бек Рго біу АвБр АвБп сбіп Аза 100 105 110

Сув пуб Рго Тер ТПг Аб5п Суб Тс Іеп Аза біу Пу5 Нібв ТпПг Геч сіп 115 120 125

Рго Аїа 5ег АБп бег бег Авр Аіїа Іїе Су5 бій АБр Агу АБр Рго Рго 130 135 140

Аза ТПпг сбіп Рго сбіп біп ТБ біп біу Рго Рго Аіїа Агу Рго І1е ТЕГ 145 150 155 160

Уаї біп Рго ТЕ біц Аза Тер Рго Акуд ТБ беє біп біу Рго бек ТіПг 165 170 175

Агуд Рго Уаі сії Маї Рко біу біу Акуд Аїа Уаі А5р січ сіп Іеч Туг 180 185 190

Рпе сіп сіу біу бек Рго пуб бек Аза Авр Пуб5 ТПг Нів ТіПг Сув Рго 195 200 205 60 Рго Сув Рго Аїа Рго Сіїп Іїеч Іїеч Сіу Сіу Рго бБег УМаі1ї Ріре Іеч Ріе 210 215 220

Ркго Ркго Пув Рго Гуз АБр ТПг Гей Меє Іїе Бек Агу ТПг Рго біч Уаї 225 230 235 240

ТПг Сув Маїії МУМаї Уаї АвБр Уаї бек НівБ сії АБр Ркго біп МУаї їУув5 Ре 65 245 250 255

АвБп Тер Тук Уаі АБр біу Маії біч Уаі Ніб5 АвБп Аза Пуб5 ТПг пув Рего 260 265 270

Агуд бій бій біп Тук АБп о бек Тбг Туг Агуд Уа1! Уа1ї Бек Уаї Іеч ТЕбг

275 280 285

Уаї Іеч Нібз біп Авр Тер Гечп Аб5п сіу Ппув бі Тук Гув Суб Пув Уаї 290 295 108)

Бек АвБп пув Аїа Іечп Сіу Аїа Рго Іїе сії Ппу5 ТПг І1е бек Туз Аза 305 310 315 320

Туз біу біп Рго Акуд бій Рго біп Маі! Тук ТБг Ге Рго Рго бБег Аг4д 325 330 335

Авр січ Геч Тс губ АБп обіп Уаі! бек Гечп ТпПг Суб Геч Уаї Гуз б1У 340 345 350

Рпе Туг Рго бек Авр І1е Аїа Уаї сій Тгр Сіц бБег Авп Сіу Сіп Рего 355 360 365 біч АвБп о Авп о Тук пуб Тбг ТБ Рго Рго Уаії Іеч Авр бег Авр сіу бБег 370 375 380

Рпе Рпе Геч Тугк бек Гувз ТГеч ТБПг Уаі Авр ПувБ бБег Агуд Тгр біп сбіп 385 390 395 400 біу АБп Уаії Рпе бек Суб Бек УМаі Меє Ні5 біц Аза Гей Нібв Ап Нів 405 410 415

Тук Тс біп Гуз бек Тец бек Гец бек Рго сіу Ппув бек біу Туг Рго 420 425 430

Тук Авр Ма1 Рго Ар Туг А1а 435 «2105 214 «2115 2064 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (89) УНСН1і-важкий ланцюг-(28НІ1) УНСІ, «4005 214 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд ссеЕссуддадд сасаєєсадс адсбрасудсса ЄаадссдддЕ дсдасаддесес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

ЧччаеЕсоЧчасуча ассасєддудуд ссаадддасс ассуєдассу ЕЄсЕССсСЄСсадс Садсассаад 360 ддсссаєссу СЄдЕЄсСсСсСЕсСс ддссссЕссс адсаадеЕсса ссссвєддсудд сасадссдсєе 420 сЕдддсєдсс Есдсдаадда стассєсссс дадссєдбда садедесссд даасеЕссддс 480 чдсессеєдасасє ссудсуєЄдса сассЕсеєсса уссдсдсеєдс адЕсссссудд сседсасесс 540 сЕДЕССССсСсЯ Есдсдасадс дсссесссадс єсЕСсСсдддса сссадассста саєсєдсаас 60 чЧсдаассаса адсссЕєссаа сассаадуєд дасаачааууд єЄддаасссаа дЕССЄдсдас ббо аадасссаса ссЕдсСссссс ЕЄсдЕССЕДсс ссЕДаадссдд ссддсддесс СадсудсдеЕєс 720 сЕДЕссСсссс сааадсссаа ддасасссод абдаєсеєссс ддасссссда адедассідс 780 чЧчЕЧЧаєЧдЧЧасЧдч аєдеЕдєссса садчдасссс даадсдаадеЕ Єсааєсдуєа сдєсдддасадес 840 чсдчдаадсудс асаасуссаа дассаадссо адачаддаас адбєасаасеєс сасссасс9д 900

ЧЕЧЧєдЕсСсСу СдсеєЧдассує дсЕдсасса часєддсеєда асуддсааачца деасаадедс 960 ааддсдЕсса асааддсссс дддадссссс ассдаааада ссаєссссаа ддссаадддс 1020 садссеєсдсд адссеєсадде деасасссод сссссбадса дадаєдадсе дассаадаас 1080 саддеЕдеЕссс ЕдассеєдЕсСЕ судєдаааддс Єсссассссе ссдаєаєсудс сдєддадааєчуу 1140 чачадсаасу дссадсссуда даасаассас аадассассс ссссЕдвєдсс дадассссддасєс 1200 часЕСсСасеєсе ссседсассс баадсєдаса деЕдчдасаадс сссудсддса дсадддсаас 1260 дЕДЕССЕсСсЕ дссссуєдає дсасдаддсес сеєдсасаасс ассасассса даадсссссд 1320 бсссбдссес ссудудддада судвдаддадаєсє додсудаддсу даєссудеда Єдадасудчаєсь 1380 чаЧдадсудчаєд даєссдаддє дсадсєдсвєд дааєссдучду даддасєддс дсадссаддс 1440 ччаєсєсєда ддасеЕдЕсссд судсєдсеЕЕєсс дудсЕеєвассо сссссадсса сдссаєдаді 1500

ЕдЧддЕдсудсс аддсасссуу ааааччасєд чааєдуддєдЕ садссаєсвєд ддссєсссддс 1550 чадсадсасеє асудссдаєад сдедааддудс суддеЕєсасса Ссессссудудчаа Саасадсаад 1620 аасасеєсєдЕ ассебдсадає даасесссвд судсудсєдаад абєассусєсдс десаєсасвдс 1680 дссаадддсєЕ ддсЕдддсаа сеЕєсЧдаєсас єддадддссадуа даасссеєсудєс даседесьсд 1740 адсусЕєсєсву сддссудсесс сеЕССУЧЄДДЕЄсС аєсвесссас сЕсссуасуда дсадсеєдаад 1800

Ессудсассу ссессдесує деЕдсседсвд аасаасессс асссесуддда адссааддед 1860 60 садеддааад Єддаєбаасудс ссЕдсадсесс ддсаассссс аддааєссдє дассдадсад 1920 чассссаадуд асадсассса ссссссдадс адсасссєда ссссдсссаа ддссдасвас 1980 чачаадсаса аддєЕдєасудс ссдсдаауєд асссассадд дсссєдесссад ссссуєдасс 2040 аадесссєса ассддддсда дедс 2064 «2105 215 65 «2115 642 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205

«223» ДНК МІСН1і-легкий ланцюг 2 (28НІ1) «4005 215 чачаєсуєдс СЄдасссадсс ЕєсСссудсасс сеєдадссєда дсссєддсда дЧадчадссасс бо сЕдадссдса дадссадсса дадсудєдадс суддадсвтасс бЄддссєддса єсадсадаад 120 сссддссадудд сссссадасеє дсеєдаєсаєс ддсдссадса сссудддссас сддсаєсссс 180 чаєачаєсса дсуддсадсудд ссссудсасс дасеєссассс Єдассаєсад ссуддсєдддаа 240 сссдаддасеЕ ЕсдссдеЕдва срассдссад садддссадд Єдаєсссссс сассеЕссдадс 300 садддсасса аддсддааасє саададсеєсс дсгадсасса адддасессссс сдуаудЕсессе 360 сеЕддссссса дсадсаадад сасссссддс ддаасадссуд ссседддссд ссеЕддесдааа 420 чЧассасеЕссс ссдадсссудє дассуєдессс Сддаасессуд дсдсссєдас садсддас9аєдд 480 сасасссеєсс садссудєдсс дсададсадс ддссеЕдвасс сссеєдадсад сдеЕддєЄдаса 540

ЧеЕдсссЕсса дсадсссудуду сасссадасс басаєссудса асуєдаасса саадсссадс 60 аасассааа Єддасаадаа ддеЕддаассс аададсєдсуд ас 642 «2105 216 «2115 688 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (89) УНСН1і-важкий ланцюг-(28НІ1) УНСІ, «4005 216 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе бег Тгр Уаі Агуд Сіп Аїа Рго сіу Сіп С1у їеч Січ Тгр Меб 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд бі Тугк біу Тер Мес Ар Туг Тер сіу сбіп сі1іу Тбг Тс Уаї 100 105 110

Таг Уаї бБег бек Аза бБег ТрПг Пув біу Рго бек Уа1ї Рре Рго Іеч А1а 115 120 125

Рго Бек Бек пуб бек ТПг бек біу біу ТПг Аза Аза Геч сіу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї ув Авр Тукє Рпе Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр АБп бег Ш1Уу 145 150 155 160

Аа Геч ТПг бек біу Маії Нів ТБбг Рре Рго Аїа Уаії Геї сіп бек 5ег 165 170 175 біу Геч Тук бек Гецп бБег Бек УМаі УМаі! ТБг Уаі! Рго бек бек бек Гей 180 185 190 сіу Так біп Тс Тує І1е Суб Авп Уаі Авп Нів Ппув Рго бБег Авп Тис 195 200 205

Туз Маії Авр пуб пуб Уа1ї сій Рко Пув5 бек Сув АвБр Пуб5 ТПг Ні Тс 210 215 220

Сув Рго Рго Суб Рго Аза Рго сії Аза Аза Сбіу біу Ркго бек Уа1і Роіе 225 230 235 240

Теч Ріпе Рго Рго ПувБ Рго Пув АБр ТПг ІТечп Месє І1е бег Агу ТпПг Рго 245 250 255 біч Уаії ТрпЕ Суб Уа1і Уаї Маїії АБр Уаї бек Ніб біц Авр Рго січ Уаї 260 265 270

Пув Рпе Авп Тгр Туг УМаі1і Авр сіу Уаі Сіц Ма1ї Нів АБп Аїа ГПув Тис 275 280 285

Туз Рго Акд бій бій біп Тук АБп бек Тйг Туг Акуд Уа1і Уаі1і Бек Уаї 290 295 108)

Теч Тпг Уаії Гей Нів сіп АБр Тгр Іеч АБп біу Ппув бі Тук Пув Сув 60 305 310 315 320

Туз Уаії бек Авп пуб Аза Геї сіу Азїа Рго Іїе біц пуб ТПг Іе бБег 325 330 335

Туз Аїа Ппуз сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уа! Тугє Трг Гей Рго Рго 340 345 350 65 век Агу АБр бій Теч ТПг Гпув Авп біп Уаї бек Ге ТПг Сувз Геч Уаї 355 360 365

Туз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уа! бі Тер бій бек Ап с1Уу 370 375 380 біп Рго біц Авп Ап Туг Пув Тс ТБ Ргро Рго Уаі Гей Авр бек Авр 385 390 395 400 біу бек Рпе Рпе Гей Тугк Бек Пув Геї ТПг Уаі! Авр Пубз бег Агуд Тгр 405 410 415 біп біп біу Авп Уаії Ріре бБег Сув бек Уа! Меє Ні5 бій Аза Гей Ні 420 425 430

АвБп оНів Тугк Тс біп Гуз бек Тец бек Гец бек Рго сіу сіу біу б1Уу 435 440 445

Сіу бек біу сіу сіу сіу Бек біу біу біу біу бек сіу сіу сіу с1Уу 450 455 460

Зек біп УМаї сіп Іечп Іеч біц бек сбіу сіу сіу Геї УМаі сбіп Рго б1Уу 465 470 475 480 біу бек Гей Акуд Геп бек Сув Аїа Аза бек біу Ропе ТПг Рре бБег бБег 485 490 495

Нів А1їа Меє бек Тгр Ма1і Акуд Сіп Аза Рго сС1у ПЦув С1у їеч Січ Тгр 500 505 510

Уаї бек Аїа Іїе Тер Аїа бек сіу сії сбіп Тук Тук Аза Авр бек Уаї1 515 520 525

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 530 535 540

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 545 550 555 560

Аа Ппув сіу Тер Геч біу АБп Рбе Ар Туг Тер сіу сбіп сі1іу ТіПг Іеч 565 570 575

Уаї Тис Уаї бег бек Аза бБег Уаії Аїа Аза Рго бек Уа1і Рпбе І1е Ріє 580 585 590

Рго Рго Бек АБр біп біп Теч Ппуз бек сіу ТПг Аза Бек Уаі1ї Уаї Сув 595 6о0 605

Теч Ггец Авп Авп Ррпе Туг Рго Аку бі Аза Ппуз Уаії сбіп Тер Пув Уаї 610 615 620

АвБр Авп Аза Геї біп бек біу АБп бек біп бій Бек Уаі Тс січ біп 625 630 635 640

Авр Бек Пув АБр бек ТПг Тук бек Гец бек бек ТПг Геї ТПг Іеч 5ег 645 650 655 пув Аїа Авр Туг січ ПЦув Нів Ппув Маі1ї Туг Аїа Сув Січ Ма1 Трг Нів 66о 665 670 біп біу Пец бек бек Рго УМаі ТП Гуз бек Ропе Абхп Агуд сіу січ Сув 675 680 685 «2105 217 «2115 214 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» МІ1сСН1і-легкий ланцюг 2 (28НІ1) «4005 217 біч Іїе Уаії Гей ТПг сіп Бек Рго біу Тбг Те бек Гец бек Рго с1у 1 5 10 15 біч Акуд Аза Тбг Гей бек Сув Агу Азїа бек біп бек Уаі бек Агд бБег 20 25 Зо

Тукг Ген Аїа Тер Туг біп біп Пу5 Рго сбіу біп Аїа Рго Аг Іеч Іеч 35 40 45

Іїе Іїе сі1іу Азїа бек ТБПг Агу Аїа ТрПг сіу Іїе Рго АБр Аку Рое б5ег 5о0 ів) бо біу бек біу бек сіу ТПг АБр Роре ТПг ІТечп ТБПг І1їе бег Агкд Геч сій 65 7о 75 80

Рго бій АБр Рпре Аїа Уа1! Туг Тук СувБ біп сбіп сі1іу біп Уаі Іїе Рго 85 90 95

Рго ТпПЕ Ррпе сіу біп біу ТБ пу Уаі сіц Іїе Ппубв5 бБег бек Аїа 5ег 100 105 110 60 ТВЕ Ппув біу Рго бек Уаі! Рре Рго Гей Аїа Рго бБег бек Пув бег ТПг 115 120 125

Бек сбіу сбіу Тс Аза Аза їеч сіу Суб Геч Уа1і Пуб5 АБр Тукє Рое Рго 130 135 140 біч Рко Уаі ТпПг Уа1ї Бек Тгр АБп бек біу Аїа Гей ТПг Бек сіу Уаї 65 145 150 155 160

Нів ТПг Роре Рго Аїа Уаі Гей сіп бек Бек сіу Геч Тук бек Іеч 5бег 165 170 175

Зек Уа1і МУМа1ї ТПг Уаї Рго бек бек бек Гечп сіу Тс біп Тс Тує Те

180 185 190

Сув АвБп о Уаії Авп Нів пуб Рго бек АБп Тс пуз Уаї Авр о Пув Пув Уаї 195 200 205 біч Ркго Пув бек Сув Авр 210 «2105 218 «2115 2070 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (4984) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 218 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

Бассуєддєс субасдасса ссудудуддссаа додадассассу ЄдассуєсєЕс сЕСадссадс 360 ассааддудсс сасссусуєе ссссссудсес ссссссадса адессассєс сдадасуддсаса 420 дссудсЕССдУд дсЕдссЕсудЄ дааддассас сСсссссдадс ссдЕєдасаде дсЕсссддааас 480

Есєддсудссс Єдасаєссуд судєдсасасс СЕсСссадссу єЄдссдсадеЕс сЕССУДСсССЄдД 540

Бассссссудс сссссуєсуєЄє дасадсудссс Єссадссссс єддадсассса дасссасаєс 60

ЕдсаасуєЄда ассасаадсс ссссаасасс ааддсдчдаса адааддєдда асссаадесс ббо

Едсдасаада сссасасссу ЄсссссЕсСуЧЄ сссдсссссд аадсєдссдуа сддессссадс 720

ЧЕДЕСсСссдЕ Сссссссааа дсссааддас ассссдаєда Єсессссддас ссссдаадесд 780 асссдсуєдуа СЄдуаєдчаєдеЕ дсесссасдад дасссєдаач Єдаадсєсаа СЕДдДсасуєд 840 часддсуєЄдуа аадедсасаа Єдссаацдцасс аадссвєадад аддаасадвєа саассссасс 900

Бассчддуаєду СудсссусудсЕ дассуєдсвед сассадчдасє дудссдаасуд сааачадвас 960 аадсдсаачду Сдсссаасаа ддссссдудуда дсссссаєсу аааадцассає сеЕссааддес 1020 аадддссадс сссдсдадсс ЕЄсаддЕдсас ассссдсссс ссадсадада Єдадссдасс 1080 аадаассаду Єдесссєдас сеЕдеЕсЕсдбєд аааддсеЕссс ассссєссда Сассудссоаєд 1140 чаасудудчача дсаасудсса дсссдадаас аасбасаада ссассссссс Єдсдсеєдвдас 1200

Єссдасуддсе сасеєсесссе дсасессаад сєдасадсдч асаадссссуд деЕддсадсад 1260 часаасудєдЕ сЄссссеЕдсесС сдбдаєдсас даддссссдс асаассасса сасссадаад 1320

Єссседсссс сдссссссуда доддаддсодда дчдаєссддсдд даддсудаєс соддеЕддесддас 1380 ччаєсєдчада дсуддєддаєс єдаддедсад сєдсєдчаає сєдаддададаа ассддеЕдсад 1440 ссаддсуддає сеЕСЕєдадсєЕ дЕССЕСДСсСУЧСсСЕ дссЕссудсеЕ Есассееєсес садссасдсс 1500 аєчадесдудд бдсдссаддс асссудаааа дчасєдчаає дадеЕдссадс саєссдуадес 1550 бссудсудадс адсасрасус сдаєадсдєд аадддссуде ссассаєсеєс ссуддадаєаас 1620 адсаадааса сеседстассеЕ дсадаєдаас ЕсссЕдсудсу сєдаадасас сдсєЕдеЕднає 1680 басєдсудсса адддсЕддсЕ дддсаасеєс даєсаседаду дссадддаас ссесудедасе 1740

ЧдЕСсСЕСЧДадсу СЕСссСсдсддс судсЕсссеЕсСс дЕДЕЕСаєсює ссссассссс сдасдадсад 1800 сєдаадессуд дсасеєдссеЕс сєдсесудєдЕдс седссдааса асеЕсссассс Есдддаадсс 1860 ааддєдсадс дчааадсуда бЄаасусссвєд садеЕссудса асеЕсссадда аєссуєдасс 1920 чЧадсаддасеЕ ссааддасад сасссасссс ссдадсадса сссєдасссе дсссааддес 1980 чассасчача адсасаадудє дсасусссдс даадсдассс ассадддссе дЕссадссесс 2040 чЧдЕдассаадс сссссаассу дддсчдадедс 2070 «2105 219 «2115 690 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (4984) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 219 сіп Уаі1ї Сіп теп Уаї Сіп бек сі1у Аїа Січ Ма1 Ппув Пув Рго сС1іу бЗег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє (516) 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0 65 Меє бій Іей бег бек ГПеп Агу бек біш АвБр ТБг Аза Уаї Тугк Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд бій Туг Тугк Аку біу Рго Туг Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

ТПг Маї ТП Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сіу Рго бек Уаі! Рое Рго 115 120 125

Теч Аза Рго бек бек Пув Бек ТПг бек біу біу ТбПг Аза Аза Геч Сс1Уу 130 135 140

Сув Ппеч Уаї Ппуз Авр Тук Робе Рго бій Рго Уаі! ТрПг Уаї бег Тер Авп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190

Ззек Геч сіу ТПг біп ТБ Тук Іїе Суб Авп Уаі АвБп Нів пуб Рго 5ег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів Тпг оСув Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аза Аїа Сіу сС1іу Рго бег 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 біч Уаії пуб Рпе Абзп Тер Туг Маі АБр біу Уаі! біч Уаї Ніб5 Ап Аза 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 300 бек Маі1і Те Тіг Маї Ге Нів біп Авр Тер їеч Ап сС1у Кув Січ Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сіп Уа1ї Тугє ТіПг Іеч

Зо 340 345 350

Рго Рго Бек Агу АБр біч Теч ТБПг пуб Авп о біп Уа1і! Бек Геч ТіПг Сув 355 360 365

Теч Уаі Ппув сіу Рпе Туг Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаі біц Тер січ бБег 370 375 З8о

АБп о сбіу біп Рго бій Авп Авп Туг Пув ТПг ТБ Рго Рго Уаї Гей Авр 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Робе Теч Тук бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Теч Ніб Авп Нів Тугк ТПг бсіп пуб бек ТГеч бек Гей бег Рго сіу с1у 435 440 445

Сіу бі1у сіу бек сіу сіу сіу біу бек біу біу сбіу сіу бек сіу с1Уу 450 455 460 сіу б1іу бек біц Уаї Сіп Іїеч їечп Сі бек сіу с1у С1у Іеч МУаї сіп 465 470 475 480

Рго сіу сіу бек Іечп Агу Ге бег СувБ Аїа Аза бек біу Рое ТПг Ре 485 490 495 бЗек Бек Нів Аїа Меє бек Ткр Уаі Аку сіп Аза Рго сіу Ппув б1Уу Іеч 500 505 510 біч Тер Уаі бек Аїа Іїе Тер Аїа бек біу бічЧ біп Туг Туг Аїа Авр 515 520 525

Зек Уаі1ї Ппув сбіу Аку Робе ТБбг І1їе бек Агуд Ар А5п о бБег Пуб5 АБп Тс 530 535 540

Теч Тує Пец біп Меє Авп бег Іїечп Акуд Аїа бі Авр Тпг Азїа Уаї Туг 545 550 555 560

Тук Сув Аїа Гуз біу Тер Пец сіу АбБп Ррбе АБр Туг Тгсгр б1іу біп 01УуУ 565 570 575

ТВгЕ Ген Уаії! Трг Уаії бег бек Азїа бек Уаі Аїа Аза Рго бек Уаї Ріре (516) 580 585 590

І1їе Рпе Рго Рго бек АБр біц біп Гецп пуб Бек сіу ТПг Аза бек Уаї 595 6о0 605

Уаї Сув ТГеч Гец Абп Авп Рпе Туг Рго Аку бі Аза Гуз Уаї сбіп Тгр 610 615 620 65 пув Маі1і Авр Авп Аїа Тїеч Сіп бег біу Авп бБег Сіп Січ бБег Уаї Тис 625 630 635 640 біч біп Авр бек пуб Авр о бБег ТПг Тук бек ТГеч бек бек ТПпг Геч Тс 645 650 655

Теч бек Ппув Аза Авр Тук січ Ппуб5 Нів Гуз Уаії Тук Аїа Суб січ МУаї 6ббо 665 670

ТПЕ Нів біп біу Тецп бек бек Рго Уа1і ТПг Ппуб5 бек Ропе АБп Агдудщ с1у 675 680 685 біч Сув 690 «2105 220 «2115 2064 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (154) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 220 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд ссеЕссуддадд сасаєєсадс адсбрасудсса ЄаадссдддЕ дсдасаддесес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

ЧачаЕсссасуд ассасєдудудуд ссаадддасс ассуєдассу ЕЄсЕССсСЄСсадс Садсассаад 360 ддсссаєссу СЄдЕЄсСсСсСЕсСс ддссссЕссс адсаадеЕсса ссссвєддсудд сасадссдсєе 420 сЕдддсєдсс Есдсдаадда стассєсссс дадссєдбда садедесссд даасеЕссддс 480 чдсессеєдасасє ссудсуєЄдса сассЕсеєсса уссдсдсеєдс адЕсссссудд сседсасесс 540 сЕДЕССССсСсЯ Есдсдасадс дсссесссадс єсЕСсСсдддса сссадассста саєсєдсаас 60 чЧсдаассаса адсссЕєссаа сассаадуєд дасаачааууд єЄддаасссаа дЕССЄдсдас ббо аадасссаса ссЕдсСссссс ЕЄсдЕССЕДсс ссЕДаадссдд ссддсддесс СадсудсдеЕєс 720 сЕДЕссСсссс сааадсссаа ддасасссод абдаєсеєссс ддасссссда адедассідс 780 чЧчЕЧЧаєЧдЧЧасЧдч аєдеЕдєссса садчдасссс даадсдаадеЕ Єсааєсдуєа сдєсдддасадес 840 чсдчдаадсудс асаасуссаа дассаадссо адачаддаас адбєасаасеєс сасссасс9д 900

ЧЕЧЧєдЕсСсСу СдсеєЧдассує дсЕдсасса часєддсеєда асуддсааачца деасаадедс 960 ааддсдЕсса асааддсссс дддадссссс ассдаааада ссаєссссаа ддссаадддс 1020 садссеєсдсд адссеєсадде деасасссод сссссбадса дадаєдадсе дассаадаас 1080 саддеЕдеЕссс ЕдассеєдЕсСЕ судєдаааддс Єсссассссе ссдаєаєсудс сдєддадааєчуу 1140 чачадсаасу дссадсссуда даасаассас аадассассс ссссЕдвєдсс дадассссддасєс 1200 часЕСсСасеєсе ссседсассс баадсєдаса деЕдчдасаадс сссудсддса дсадддсаас 1260 дЕДЕССЕсСсЕ дссссуєдає дсасдаддсес сеєдсасаасс ассасассса даадсссссд 1320 бсссбдссес ссудудддада судвдаддадаєсє додсудаддсу даєссудеда Єдадасудчаєсь 1380 чаЧдадсудчаєд даєссдаддє дсадсєдсвєд дааєссдучду даддасєддс дсадссаддс 1440 ччаєсєсєда ддасеЕдЕсссд судсєдсеЕЕєсс дудсЕеєвассо сссссадсса сдссаєдаді 1500

ЕдЧддЕдсудсс аддсасссуу ааааччасєд чааєдуддєдЕ садссаєсвєд ддссєсссддс 1550 чадсадсасеє асудссдаєад сдедааддудс суддеЕєсасса Ссессссудудчаа Саасадсаад 1620 аасасеєсєдЕ ассебдсадає даасесссвд судсудсєдаад абєассусєсдс десаєсасвдс 1680 дссаадддсєЕ ддсЕдддсаа сеЕєсЧдаєсас єддадддссадуа даасссеєсудєс даседесьсд 1740 адсусЕєсєсву сддссудсесс сеЕССУЧЄДДЕЄсС аєсвесссас сЕсссуасуда дсадсеєдаад 1800

Ессудсассу ссессдесує деЕдсседсвд аасаасессс асссесуддда адссааддед 1860 садеддааад Єддаєбаасудс ссЕдсадсесс ддсаассссс аддааєссдє дассдадсад 1920 чассссаадуд асадсассса ссссссдадс адсасссєда ссссдсссаа ддссдасвас 1980 чачаадсаса аддєЕдєасудс ссдсдаауєд асссассадд дсссєдесссад ссссуєдасс 2040 аадесссєса ассддддсда дедс 2064 «2105 221 «2115 688 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (1064) УНСН1і-важкий ланцюг-(28НІ1) УНСІ, «4005 221 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо 60 Аза І1їе бег Тгр Уаі Агуд Сіп Аїа Рго сіу Сіп С1у їеч Січ Тгр Меб 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд бій Туг біу бек Мес А5р Туг Тер сіу сбіп сі1іу ТПг ТБг Уаї

100 105 110

ТПг Маї бек бек Аза бек ТПг пуб сіу Рго Бек Маі Рое Рго Іеч Аїа 115 120 125

Рго Бек Бек пуб бек ТПг бек біу біу ТПг Аза Аза Геч сіу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї ув Авр Тукє Рпе Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр АБп бег Ш1Уу 145 150 155 160

Аа Геч ТПг бек біу Маії Нів ТБбг Рре Рго Аїа Уаії Геї сіп бек 5ег 165 170 175 б1у Ппеч Тук бек Гей бек бБег Уаі Уаі Тпг Уа1! Рго бег бБег бек Гей 180 185 190 біу ТЕ біп Тбпг Ту Іїе Суб АБп о Уаі АБп Нібв пуб5 Рго бек АБп о ТПг 195 200 205

Туз Маії Авр пуб пуб Уа1ї сій Рко Пув5 бек Сув АвБр Пуб5 ТПг Ні Тс 210 215 220

Сув Рго Рго Суб Рго Аза Рго сії Аза Аза Сбіу біу Ркго бек Уа1і Роіе 225 230 235 240

Теч Ріпе Рго Рго ПувБ Рго Пув АБр ТПг ІТечп Месє І1е бег Агу ТпПг Рго 245 250 255 сій Уаї1ї Тпс Сув УМа1ї Уаї Ма1 Авр Уаї бек Нів Сі Авр Рго січ Уаї 260 265 270

Туз Рпе Авп Тер Тук Уаі АБр сіу Маі біч Уаії Ні5 АвБп Аза Пуб5 ТПг 275 280 285

Туз Рго Акд бій бій біп Тук АБп бек Тйг Туг Акуд Уа1і Уаі1і Бек Уаї 290 295 300

Теч Тпг Уаії Гей Нів сіп АБр Тгр Іеч АБп біу Ппув бі Тук Пув Сув 305 310 315 320

Туз Уаії бек Авп пуб Аза Геї сіу Азїа Рго Іїе біц пуб ТПг Іе бБег 325 330 335 пув Аїа Пув біу Сіп Рго Агд бій Рго Сіп Ма1! Тує Тбг Іеч Рго Ркго 340 345 350 век Акуд АБр бічш Теч ТБг губ Авп обіп Уа! Бек Геї ТПг Су5 Іеч Уаї 355 360 365

Туз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уа! бі Тер бій бек Ап с1Уу 370 375 З8о біп Рго біц Авп Ап Туг Пув Тс ТБ Ргро Рго Уаі Гей Авр бек Авр 385 390 395 400 біу бек Рпе Рпе Гей Тугк Бек Пув Геї ТПг Уаі! Авр Пубз бег Агуд Тгр 405 410 415 сіп біп б1у Авп Уаі1і Рібе бБег Сув бек Уа1ї Меє Нів Січ Аїа Ієч Нів 420 425 430

АвБп оНів Тугк Тс біп Гуз бек Тец бек Гец бек Рго сіу сіу біу б1Уу 435 440 445

Сіу бек біу сіу сіу сіу Бек біу біу біу біу бек сіу сіу сіу с1Уу 450 455 460

Зек біп УМаї сіп Іечп Іеч біц бек сбіу сіу сіу Геї УМаі сбіп Рго б1Уу 465 470 475 480 біу бек Гей Акуд Геп бек Сув Аїа Аза бек біу Ропе ТПг Рре бБег бБег 485 490 495

Нів А1їа Меє бек Тгр Ма1і Акуд Сіп Аза Рго сС1у ПЦув С1у їеч Січ Тгр 500 505 510

Уаї бек Аїа Іїе Тер Аїа бек сіу сії сбіп Тук Тук Аза Авр бек Уаї1 515 520 525

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 530 535 540

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 545 550 555 560

Аа Ппув сіу Тер Геч біу АБп Рбе Ар Туг Тер сіу сбіп сі1іу ТіПг Іеч 565 570 575 60 Уаї Тис Уаї бег бек Аза бБег Уаії Аїа Аза Рго бек Уа1і Рпбе І1е Ріє 580 585 590

Рго Рго Бек АБр біп біп Теч Ппуз бек сіу ТПг Аза Бек Уаі1ї Уаї Сув 595 6о0 605

Теч Ггец Авп Авп Ррпе Туг Рго Аку бі Аза Ппуз Уаії сбіп Тер Пув Уаї 65 610 615 620

АвБр Авп Аза Геї біп бек біу АБп бек біп бій Бек Уаі Тс січ біп 625 630 635 640

Авр Бек Пув АБр бек ТПг Тук бек Гец бек бек ТПг Геї ТПг Іеч 5ег

645 650 655

Туз Аза Авр Тук січ Ппув Нів Ппуб5 Ма! Туг Аїа Суб5 бій Уа1і ТіПкг Нів 6ббо 665 670 біп біу Пец бек бек Рго УМаі ТП Гуз бек Ропе Абхп Агуд сіу січ Сув 675 680 685 «2105 222 «2115 2082 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (2087) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 222 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асдчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдЕ асвсассдсдс дачадеЕсаас 300

Басссуєасс сЕсСасєдудуд ЄчасеЕссудас сСасєддддсс аадддассас сдєдассуєс 360

Ессссадсва дсассааддд сссаєссуєд СЕсСсСсСЕСЕДУУ ссссеЕссса саадесссасс 420

ЕсЕддсддса садссудсЕсс дддсєдсссс дсдааддассі ассєссссда дссЕдсдаса 480

ЧЕЧдсссеЕдча ассссуддсудс ссеєдасассс ддсудсдсаса ссЕСЕєССсСадс Єдсдсеєдсад 540

Есссссудсесс Єдсасесссе дсссЕСсСудєС дЕЧдасадеЕдс ссЕССадсЕС Єссдудудсасс 60 садасссаса єседсаасудс даассасаад ссссссааса ссааддедда саадааддед ббо чаасссаадс сссдсдасаа дасссасасс Єдсссссссє деЕссвєдсссс Єдаадссусс 720 дадасддсссса дсЧдєдесєссе дессссссса аадсссаадд асасссеєдає даєссссс9дд 780 асссссдаа СчассєдсдчєЕ чЧдєдасодчас деЕдеєсссасу адчасссєда адсдаадесс 840 ааєсддбєасу Сдчдасуддсудє дчдаадсудсас аасудссаада ссаадсссад ададдаасад 900

Басаасеєсса сссассудує чдЕдЕССсСУЧєЄД сЕдассуєдс єЄдсассадча Єєддасеєдаас 960 часааачадс асаадєдсаа ддєдЕССсСаас ааддсссвєдд дадсссссає сдаааадасс 1020 аєссссаадд ссаадддсса дссЕсдсудад ссЕСаддедс асассссбдсс ссстгадсада 1080 чаєдадсєда ссаадаасса ддеЕдеЕсссвд ассеєдесссу Єдаааддсес срассссесс 1140 чаєаєсудссу Сдчдааєдудда чадсаасудс садсссууада асаассасаа дассассссс 1200 ссЕдеЕдседуд асессудасуу сеЕсасеєсесс седсасссса адсєдасадеі ддасаадесс 1260 сддаєЕддсадс адддсаасує дЧчЕсСсСсссвЕдс єссудбсєдаєдс асдаддсссе дсасаассас 1320 басасссада адесссЕдсс ссеЕдЕсСЕССсСсС доадоададдсу дчадчдаєсєдоа соуддаддсдада 1380

Ессудедуаєд дсудаєсьдуа дддсоддЕдчда Еседаддєдс адсєдссдда аєседдаддоада 1440 ччассддєдс адссаддсуд аєсєсеєдадач сЕдЕссьдсу сеЕдсесссдч сеЕсврассьсес 1500

Ессадссасу ссаєдадесу дудєдсдссад дсасссудаа ааччассдча асдадеєдеса 1550 чдссаєссдудауд сссссуддсуда дсадбсассас дссдаєсадсуд Єдаадддссу деЕссассаєс 1620 ссссудудаєба асадсаадаа басссєдстас сеєдсадаєда ассссссдсуд сдсєЕдаадає 1680 ассудсєдЕдЕ аєсаседсудс саадддсєдуу сєЕдддсаасс ссудаєсассуд дддссаддда 1740 асссєсудбєда сеЕдеЕсЕсдад судсеєеЕсвдед дссусеЕсссє ссуєдессає сеЕссссассяе 1800 бссудасудадс адсеєдаадес сддсасєдсс ЕСЕдДЕСУ9ОсУДЄ дссєдседаа саасеестас 1860 ссесдддаад ссааддедса деЕддааадсд даєсаасдсесс бЄдсадесссдрда саасеєсссад 1920 чааєссудсда ссдадсадда сессааддас адсасстасс сссєдадсад сассссдасс 1980 сеЕдеЕссаадд ссдассасда даадсасаад деЕдсасдссс дедаадсдас ссассадддс 2040 седеЕссадсс ссдєбдассаа дЕсссєсаас сддаддсудаде де 2082 «2105 223 «2115 694 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (2087) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 223 сіп Уаі1ї Сіп теп Уаї Сіп бек сі1у Аїа Січ Ма1 Ппув Пув Рго сС1іу бЗег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє (516) 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0 65 Меє бій Іей бег бек ГПеп Агу бек біш АвБр ТБг Аза Уаї Тугк Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд Уа1і АБвБп о Тугє Рго Тук бек Туг Тер біу Авр Роре АБр Тугє Тгр 100 105 110 біу біп біу ТПг Тпг о Уа1ї Тбг Уаї бек бек Аза бег ТПг Ппу5 с1у Рго 115 120 125

Зек Уа1і Рре Рго Іечп Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу б1у ТЕбг 130 135 140

Аза Аїа Ге сіу Суб ІГеч Уаії Пув Авр Туг Рпе Рго бій Рго Уаї ТЕГ 145 150 155 160

Уаї бек Тгрр АБп бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаії Ні5 Трг Рре Рго 165 170 175

Аа Уаі Геї сіп бек бек біу Те Тукг бек Гей бБег Бек Уа1і Уа1і ТБг 180 185 190

Уаї Ркго бек бек бек Ге сіу ТпПг сіп ТПг Тук І1е Субв АБп Уаії Авп 195 200 205

Нів пуб Рго бек АБп ТПг пуб Уа1і Авр о Ппуб5 Ппув Ма1ії бій Рго Ппув бег 210 215 220

Сув Авр Пув Тпг Нів ТБ о Сув Реро Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа А1а 225 230 235 240 біу біу Ркго бек Уа1і Рбе Геї Робе Рго Рго Гу5 Рго Пуб Авр ТпПг Гей 245 250 255

Меє І1їе бек Агу ТБПг Ркго біц Уа1і Тбг Суб Маї Уаїії Уаї АБр Уаі1ї 5ег 260 265 270

Нів бі АБр Рко біч Уаі пуб Рпе Абзп Тер Туг УМаі АБр сбіу Уаї сіц 275 280 285

Уаї Нібв АБп Аза пу5 ТПг пуб Рго Акуд бій біз біп Тук АБп бек Тр 290 295 300

Тук Агуд Ма1 Уаі1ії бек Ма1ї Гечш Тип Уаї Гечп Нів Сіп Авр Тер Іеч Ап 305 310 315 320 сбіу пув біЧ Тук Ппув Сув Ппув Маії бек АБп Гуз Аза Те сСіу Аза Рго 325 330 335

Іїе сії Ппув ТПг І1їе бек Гуз Аїа Ппу5 сіу біп Рго Агкуд бій Рго біп

Зо 340 345 350

Уаї Тук ТБг Гецп Рго Рго бек Агуд АБр біч Теч ТБг Гу5 Ап біп Уаї! 355 360 365

Ззек Геч ТПг Суб ІГеч Уаї пувз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1їе Аїа Уаї 370 375 З8о сій Теср біц бБег Авп Сіу біп Рго біц Авп Авп Ту Пув ТПг Тс Рего 385 390 395 400

Рго Уаі Геї АБр бек Авр біу бек Рпе Рпе Гей Туг Бек Пув Іеч Тс 405 410 415

Уаї АБр Гуз бек Агу Тер біп сбіп сбі1іу АБп Уаі! Рібе бек Субв бек Уаї1! 420 425 430

Меє Нібв біч Аза Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп губ бек ІТеч бек Гец 435 440 445 ек Рго сіу сіу біу біу біу бек сбіу сіу сіу сіу Бек біу бі1іу б1Уу 450 455 460 сі1у Зек сі1у сіу сіу Сіу Бек біш Уа1ї Сіп їечп еп Січ бег сС1у С1Уу 465 470 475 480 біу Геч Уаі сіп Рго сіу сіу бек ІГеп Агу ІТеч бек Суб Аїа Аза бБег 485 490 495 біу Рпе Трг Рре бек Бек Нів Аїа Меє бек Тгр Уаі Агу сіп Аза Рго 500 505 510 біу пу біу Ге бій Тер Уаі бек Аза І1ї1е Тгр Аїа бек сіу січ сіп 515 520 525

Тук Тук Аїа АБвБр бек Уаі пуб сіу Акуд Ррбе ТПг І1е 5ег Агу АБр Авп 530 535 540 век Ппув АБп ТПг Тїеч Туг Гечп біп Меє Авп бек Гей Агу Аїа бій АБр 545 550 555 560

ТЕ Азїа Уа1ї Тук Тук Суб Аза пуб сіу Тер Геч б1і1у АБп Робе Ар Туг 565 570 575

Тер б1у біп біу ТБ Тец Уа! ТПг Уа1ї Бек Бек Аїа бек Уаі Аза Аза (516) 580 585 590

Рго Бек Маі Роре Іїе Робе Рго Рго бек Авр сії сбіп Геч Гу5 бек б1у 595 6о0 605

ТПг Аїа бек Уаії Уаї Суб Пец Гей Абзп Ап Рре Туг Рго Агу біч Аїа 610 615 620 65 пув Маі1і Сбіп Тер Пув УМа1і Авр Авп Аїа їеч Сіп бег Сіу Авп бег біп 625 630 635 640 біч бек Уаі ТП сій сбіп Авр бек Куб Авр бег ТПг Тукг бек Геч бБег 645 650 655 ек ТПЕ Геї ТіПг Ге бек Гуз Аза Авр Тук січ пуб Нів пуб МУМаї Туг 6ббо 665 670

Аа Сув сії Ма1ї ТП Ні біп біу Пец бек бек Рго Уа1і ТПг Пув5 б5ег 675 680 685

Рпе Авп Акуд С1у біч Сув 690 «2105 224 «2115 2064 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (СсСІС-563) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 224 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

ЕсссдеЕдсад ссЕСсСсуддасс сассеєстадс адеЕсаєсдсса ЄдадссдудудЕ ссдссаддсе 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 чсачасєссу СЄдаадддссу дсЕссассаєс Сссададаса ассссаадаа сасдсєдесає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасеЕдедс дсеЕЄДдасдеєе 300 чЧЧєдссЕссу ассасєддудуд ссааддадсс сЕддссассу ЕсЕСЧадсдс Садсассаад 360 ддсссаєссу СЄдЕЄсСсСсСЕсСс ддссссЕссс адсаадеЕсса ссссвєддсудд сасадссдсєе 420 сЕдддсєдсс Есдсдаадда стассєсссс дадссєдбда садедесссд даасеЕссддс 480 чдсессеєдасасє ссудсуєЄдса сассЕсеєсса уссдсдсеєдс адЕсссссудд сседсасесс 540 сЕДЕССССсСсЯ Есдсдасадс дсссесссадс єсЕСсСсдддса сссадассста саєсєдсаас 60 чЧсдаассаса адсссЕєссаа сассаадуєд дасаачааууд єЄддаасссаа дЕССЄдсдас ббо аадасссаса ссЕдсСссссс ЕЄсдЕССЕДсс ссЕДаадссдд ссддсддесс СадсудсдеЕєс 720 сЕДЕссСсссс сааадсссаа ддасасссод абдаєсеєссс ддасссссда адедассідс 780 чЧчЕЧЧаєЧдЧЧасЧдч аєдеЕдєссса садчдасссс даадсдаадеЕ Єсааєсдуєа сдєсдддасадес 840 чсдчдаадсудс асаасуссаа дассаадссо адачаддаас адбєасаасеєс сасссасс9д 900

ЧЕЧЧєдЕсСсСу СдсеєЧдассує дсЕдсасса часєддсеєда асуддсааачца деасаадедс 960 ааддсдЕсса асааддсссс дддадссссс ассдаааада ссаєссссаа ддссаадддс 1020 садссеєсдсд адссеєсадде деасасссод сссссбадса дадаєдадсе дассаадаас 1080 саддеЕдеЕссс ЕдассеєдЕсСЕ судєдаааддс Єсссассссе ссдаєаєсудс сдєддадааєчуу 1140 чачадсаасу дссадсссуда даасаассас аадассассс ссссЕдвєдсс дадассссддасєс 1200 часЕСсСасеєсе ссседсассс баадсєдаса деЕдчдасаадс сссудсддса дсадддсаас 1260 дЕДЕССЕсСсЕ дссссуєдає дсасдаддсес сеєдсасаасс ассасассса даадсссссд 1320 бсссбдссес ссудудддада судвдаддадаєсє додсудаддсу даєссудеда Єдадасудчаєсь 1380 чаЧдадсудчаєд даєссдаддє дсадсєдсвєд дааєссдучду даддасєддс дсадссаддс 1440 ччаєсєсєда ддасеЕдЕсссд судсєдсеЕЕєсс дудсЕеєвассо сссссадсса сдссаєдаді 1500

ЕдЧддЕдсудсс аддсасссуу ааааччасєд чааєдуддєдЕ садссаєсвєд ддссєсссддс 1550 чадсадсасеє асудссдаєад сдедааддудс суддеЕєсасса Ссессссудудчаа Саасадсаад 1620 аасасеєсєдЕ ассебдсадає даасесссвд судсудсєдаад абєассусєсдс десаєсасвдс 1680 дссаадддсєЕ ддсЕдддсаа сеЕєсЧдаєсас єддадддссадуа даасссеєсудєс даседесьсд 1740 адсусЕєсєсву сддссудсесс сеЕССУЧЄДДЕЄсС аєсвесссас сЕсссуасуда дсадсеєдаад 1800

Ессудсассу ссессдесує деЕдсседсвд аасаасессс асссесуддда адссааддед 1860 садеддааад Єддаєбаасудс ссЕдсадсесс ддсаассссс аддааєссдє дассдадсад 1920 чассссаадуд асадсассса ссссссдадс адсасссєда ссссдсссаа ддссдасвас 1980 чачаадсаса аддєЕдєасудс ссдсдаауєд асссассадд дсссєдесссад ссссуєдасс 2040 аадесссєса ассддддсда дедс 2064 «2105 225 «2115 688 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (сІ1с-563) УНСН1і-важкий ланцюг-(28НІ1) УНСІ, «4005 225 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо 60 А1їа Меє бег Тер Уаі Акуд Сіп Азїа Рго с1іу Пув С1у їеч Січ Тгр Уаї 35 40 45 зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї 50 55 бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 65 7о 75 8о0

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Ггеч Авр Уаії сбіу Азїа Рбе А5р Туг Тер сіу сіп сіу Аза Іеч Уаї

100 105 110

ТПг Маї бек бек Аза бек ТПг пуб сіу Рго Бек Маі Рое Рго Іеч Аїа 115 120 125

Рго Бек Бек пуб бек ТПг бек біу біу ТПг Аза Аза Геч сіу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї ув Авр Тукє Рпе Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр АБп бег Ш1Уу 145 150 155 160

Аа Геч ТПг бек біу Маії Нів ТБбг Рре Рго Аїа Уаії Геї сіп бек 5ег 165 170 175 б1у Ппеч Тук бек Гей бек бБег Уаі Уаі Тпг Уа1! Рго бег бБег бек Гей 180 185 190 біу ТЕ біп Тбпг Ту Іїе Суб АБп о Уаі АБп Нібв пуб5 Рго бек АБп о ТПг 195 200 205

Туз Маії Авр пуб пуб Уа1ї сій Рко Пув5 бек Сув АвБр Пуб5 ТПг Ні Тс 210 215 220

Сув Рго Рго Суб Рго Аза Рго сії Аза Аза Сбіу біу Ркго бек Уа1і Роіе 225 230 235 240

Теч Ріпе Рго Рго ПувБ Рго Пув АБр ТПг ІТечп Месє І1е бег Агу ТпПг Рго 245 250 255 сій Уаї1ї Тпс Сув УМа1ї Уаї Ма1 Авр Уаї бек Нів Сі Авр Рго січ Уаї 260 265 270

Туз Рпе Авп Тер Тук Уаі АБр сіу Маі біч Уаії Ні5 АвБп Аза Пуб5 ТПг 275 280 285

Туз Рго Акд бій бій біп Тук АБп бек Тйг Туг Акуд Уа1і Уаі1і Бек Уаї 290 295 300

Теч Тпг Уаії Гей Нів сіп АБр Тгр Іеч АБп біу Ппув бі Тук Пув Сув 305 310 315 320

Туз Уаії бек Авп пуб Аза Геї сіу Азїа Рго Іїе біц пуб ТПг Іе бБег 325 330 335 пув Аїа Пув біу Сіп Рго Агд бій Рго Сіп Ма1! Тує Тбг Іеч Рго Ркго 340 345 350 век Акуд АБр бічш Теч ТБг губ Авп обіп Уа! Бек Геї ТПг Су5 Іеч Уаї 355 360 365

Туз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уа! бі Тер бій бек Ап с1Уу 370 375 З8о біп Рго біц Авп Ап Туг Пув Тс ТБ Ргро Рго Уаі Гей Авр бек Авр 385 390 395 400 біу бек Рпе Рпе Гей Тугк Бек Пув Геї ТПг Уаі! Авр Пубз бег Агуд Тгр 405 410 415 сіп біп б1у Авп Уаі1і Рібе бБег Сув бек Уа1ї Меє Нів Січ Аїа Ієч Нів 420 425 430

АвБп оНів Тугк Тс біп Гуз бек Тец бек Гец бек Рго сіу сіу біу б1Уу 435 440 445

Сіу бек біу сіу сіу сіу Бек біу біу біу біу бек сіу сіу сіу с1Уу 450 455 460

Зек біп УМаї сіп Іечп Іеч біц бек сбіу сіу сіу Геї УМаі сбіп Рго б1Уу 465 470 475 480 біу бек Гей Акуд Геп бек Сув Аїа Аза бек біу Ропе ТПг Рре бБег бБег 485 490 495

Нів А1їа Меє бек Тгр Ма1і Акуд Сіп Аза Рго сС1у ПЦув С1у їеч Січ Тгр 500 505 510

Уаї бек Аїа Іїе Тер Аїа бек сіу сії сбіп Тук Тук Аза Авр бек Уаї1 515 520 525

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 530 535 540

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 545 550 555 560

Аа Ппув сіу Тер Геч біу АБп Рбе Ар Туг Тер сіу сбіп сі1іу ТіПг Іеч 565 570 575 60 Уаї Тис Уаї бег бек Аза бБег Уаії Аїа Аза Рго бек Уа1і Рпбе І1е Ріє 580 585 590

Рго Рго Бек АБр біп біп Теч Ппуз бек сіу ТПг Аза Бек Уаі1ї Уаї Сув 595 6о0 605

Теч Ггец Авп Авп Ррпе Туг Рго Аку бі Аза Ппуз Уаії сбіп Тер Пув Уаї 65 610 615 620

АвБр Авп Аза Геї біп бек біу АБп бек біп бій Бек Уаі Тс січ біп 625 630 635 640

Авр Бек Пув АБр бек ТПг Тук бек Гец бек бек ТПг Геї ТПг Іеч 5ег

645 650 655

Туз Аза Авр Тук січ Ппув Нів Ппуб5 Ма! Туг Аїа Суб5 бій Уа1і ТіПкг Нів 6ббо 665 670 біп біу Пец бек бек Рго УМаі ТП Гуз бек Ропе Абхп Агуд сіу січ Сув 675 680 685 «2105 226 «2115 2064 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (СсСІС-564) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 226 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссаддчдаадуд доассддадеЕд ддЕСсСЕСсадсеЕ аєсадеддна дЕддсддсад сасасбассас 180 чсачасєссу СЄдаадддссу дсЕссассаєс Сссададаса ассссаадаа сасдсєдесає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасеЕдедс деЕєсдасеЕє 300

ЧЧеєЕсСсУуєссуУ ассасєддудуд ссааддаасс сЕддссассу ЕсЕСЧадсдс Садсассаад 360 часссаєссу СусСЕсСссЕсСЕ ддссссЕєссс адсаадссса ссеЕссддсуад сасадсссе 420 сЕдддссдсс Есудсдаадда сбасеєсссс дадсседсда садседеЕсссу даасеЕссддс 480 чдсессеєдасасє ссудсуєЄдса сассЕсеєсса уссдсдсеєдс адЕсссссудд сседсасесс 540 сЕДЕССССсСсЯ Есдсдасадс дсссесссадс єсЕСсСсдддса сссадассста саєсєдсаас 60 чЧсдаассаса адсссЕєссаа сассаадуєд дасаачааууд єЄддаасссаа дЕССЄдсдас ббо аацдасссаса сссдсссссс ЕсСдсссвЕдсс сссдаадссу ссддсудесс СадсєдеЕсс 720 сЕДдЕЕсСсссс сааадсссаа ддасассстд аєддаєссссс ддасссссда адеєдассесдс 780 чЧчЕЧЧаєЧдЧЧасЧдч аєдеЕдєссса садчдасссс даадсдаадеЕ Єсааєсдуєа сдєсдддасадес 840 чсдчдаадсудс асаасуссаа дассаадссо адачаддаас адбєасаасеєс сасссасс9д 900

ЧЕЧЧєдЕсСсСу СдсеєЧдассує дсЕдсасса часєддсеєда асуддсааачца деасаадедс 960 ааддєдЕсса асааддсссЕ дудададссссс аєсдаааада ссаєсєсєсссаа ддссааддас 1020 садссєсдсуд адссеєсаддє деасасссвд сссссрадса дадчаєдадсеє дассаадаас 1080 саддеЕдеЕссс ЕдассеєдЕсСЕ судєдаааддс Єсссассссе ссдаєаєсудс сдєддадааєчуу 1140 чачадсаасу дссадсссуда даасаассас аадассассс ссссЕдвєдсс дадассссддасєс 1200 часЕСсСасеєсе ссседсассс баадсєдаса деЕдчдасаадс сссудсддса дсадддсаас 1260

ЧЕДЕсЄСсСЕсСсЕ дссссуєдає дсасдаддсс сЕдсасаасс ассасассса даадесссед 1320

Єссседссесс ссуддддадада сддаддаєсєЕ дудсудаддсу даєссувдеєда Єддсуддаєсе 1380 чаЧдадсудчаєд даєссдаддє дсадсєдсвєд дааєссдучду даддасєддс дсадссаддс 1440 ччаєсєсєда ддасеЕдЕсссд судсєдсеЕЕєсс дудсЕеєвассо сссссадсса сдссаєдаді 1500

ЕдЧддЕдсудсс аддсасссуу ааааччасєд чааєдуддєдЕ садссаєсвєд ддссєсссддс 1550 чадсадсасеє асудссдаєад сдедаадддс суддЕєсасса ссеЕсессуддда Саасадсаад 1620 аасасєссудеЕ ассєдсадає даасеєсссвд судсудсєдаад асассудссдс дегаєсасьдс 1680 дссаадддсєЕ ддсЕдддсаа сеЕєсЧдаєсас єддадддссадуа даасссеєсудєс даседесьсд 1740 адсусЕєсєсву сддссудсесс сеЕССУЧЄДДЕЄсС аєсвесссас сЕсссуасуда дсадсеєдаад 1800

Ессудсассу ссессдесує деЕдсседсвд аасаасессс асссесуддда адссааддед 1860 садеддааад Єддаєаасдс ссбдсадесс ддсаасессс аддааєссудє дассдадсад 1920 чЧасєссаадд асадсассса сесссЕдадс адсасссеєда сссЕєдсссаа ддссдастас 1980 чачаадсаса аддєЕдєасудс ссдсдаауєд асссассадд дсссєдесссад ссссуєдасс 2040 аадесссєса ассддддсда дедс 2064 «2105 227 «2115 688 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (сСІ1с-564) УНСН1і-важкий ланцюг-(28НІ1) УНСІ, «4005 Щ 227 сі Уаї Сіп їечп Те Січ бег сіу Сі1у С1у їеч Уаї Сіп Рго сС1у С1Уу 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї (516) 35 40 45 зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї 50 55 бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 7о 75 8о0 65 Теч біп Меє Авп бег їеч Агуд Аїа Січ Авр Трг Атїа Уа1ї Туг Туг Сув 85 90 935

Аза Рпе Авр Уа1ії біу Ргро Рбе Авр Туг Тер сіу сбіп сіу ТіПг Іеч Уаї 100 105 110

ТПг Маї бек бек Аза бек ТПг пуб сіу Рго Бек Маі Рое Рго Іеч Аїа 115 120 125

Рго Бек Бек пуб бек ТПг бек біу біу ТПг Аза Аза Геч сіу Сув5 Іеч 130 135 140

Уа1ї Ппув Авр Туг Рпе Рго біп Рго Уаії ТбПг Уаії бег Тер АБп бек 1У 145 150 155 160

Аа Геч ТПг бек біу Маії Нів ТБбг Рре Рго Аїа Уаії Геї сіп бек 5ег 165 170 175 біу Геч Тук бек Гецп бБег Бек УМаі УМаі! ТБг Уаі! Рго бек бек бек Гей 180 185 190 біу ТЕ біп Тбпг Ту Іїе Суб АБп о Уаі АБп Нібв пуб5 Рго бек АБп о ТПг 195 200 205

Туз Маії Авр пуб пуб Уа1ї сій Рко Пув5 бек Сув АвБр Пуб5 ТПг Ні Тс 210 215 220

Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго сіц Аїа Азїа сіу СсС1іу Рго Бек Уаї Ре 225 230 235 240

Теч Ріпе Рго Рго ПувБ Рго Пув АБр ТПг ІТечп Месє І1е бег Агу ТпПг Рго 245 250 255 біч Уаії ТрпЕ Суб Уа1і Уаї Маїії АБр Уаї бек Ніб біц Авр Рго січ Уаї 260 265 270

Туз Рпе Авп Тер Тук Уаі АБр сіу Маі біч Уаії Ні5 АвБп Аза Пуб5 ТПг 275 280 285

Туз Рго Акд бій бій біп Тук АБп бек Тйг Туг Акуд Уа1і Уаі1і Бек Уаї 290 295 300

Пес Тпг о Уаї Ге Ніз сіп Авр Тср Гей АвБп біу Пув бій Тугк Ппув Сув 305 310 315 320

Туз Уаії бек Авп пуб Аза Геї сіу Азїа Рго Іїе біц пуб ТПг Іе бБег 325 330 335

Туз Аїа Ппуз сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уа! Тугє Трг Гей Рго Рго

Зо 340 345 350 век Акуд АБр бічш Теч ТБг губ Авп обіп Уа! Бек Геї ТПг Су5 Іеч Уаї 355 360 365

Туз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уа! бі Тер бій бек Ап с1Уу 370 375 З8о біп Рго бій Авп Авп Тук Ппуз ТБг ТБг Ргсо Рго Уа! Іечй Авзр 5ег Авр 385 390 395 400 біу бек Рпе Рпе Гей Тугк Бек Пув Геї ТПг Уаі! Авр Пубз бег Агуд Тгр 405 410 415 біп біп біу Авп Уа1і Роре бек Суб5 бек Уа! Меєсє Ніб5 сій Аза Геч Нів 420 425 430

АвБп оНів Тугк Тс біп Гуз бек Тец бек Гец бек Рго сіу сіу біу б1Уу 435 440 445

Сіу бек біу сіу сіу сіу Бек біу біу біу біу бек сіу сіу сіу с1Уу 450 455 460 бек бі Уаї Сіп їеч Ге Сі бек сіу сС1іу С1у їеч Маї Сіп Рго СШ1У 465 470 475 480 біу бек Гей Акуд Геп бек Сув Аїа Аза бек біу Ропе ТПг Рре бБег бБег 485 490 495

Нів Аїа Меє бек Тгср Уаі Аку сіп Аза Рго сіу Ппув5 біу Іеч біч Тгр 500 505 510

Уаї бек Аїа Іїе Тер Аїа бек сіу сії сбіп Тук Тук Аза Авр бек Уаї1 515 520 525

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 530 535 540

Теч біп Меє Авп бег їеч Агуд Аїа Січ Авр Трг Атїа Уа1ї Туг Туг Сув 545 550 555 560

Аа Ппув сіу Тер Геч біу АБп Рбе Ар Туг Тер сіу сбіп сі1іу ТіПг Іеч 565 570 575

Уа1ї Трг Уаї бек бек Азїа бек УМаі Аїа Аза Рго бек Уаі Рпбе Іїе Рбре (516) 580 585 590

Рго Рго Бек АБр біп біп Теч Ппуз бек сіу ТПг Аза Бек Уаі1ї Уаї Сув 595 6о0 605

Теч Ггец Авп Авп Ррпе Туг Рго Аку бі Аза Ппуз Уаії сбіп Тер Пув Уаї 610 615 620 65 Авр Авп Аїа їеч Сіп бег Сіу Авп бег Сіп Сіц бБег Уаї Тс Січ сіп 625 630 635 640

Авр Бек Пув АБр бек ТПг Тук бек Гец бек бек ТПг Геї ТПг Іеч 5ег 645 650 655

Туз Аза Авр Тук січ Ппув Нів Ппуб5 Ма! Туг Аїа Суб5 бій Уа1і ТіПкг Нів 6ббо 665 670 біп біу Пец бек бек Рго УМаі ТП Гуз бек Ропе Абхп Агуд сіу січ Сув 675 680 685 «2105 228 «2115» 1350 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (28Н1) УНСІ-важкий ланцюг із западиною «4005 228 чаадеєдсадс Сдсєдчаасс суддсудаддс сЕддсдсадс ссддсуЧаєс Єссдадассд бо

Есссудсуссу сссссудессе сассеєссссс ссссасудсса ЄдЕСССЧддЧЄ ссддасадасєсєс 120 сседдсааад дсссддааєд ддедеЕссдсс асссдддссо ссуддасдадса дсасврасдсс 180 часєсЕдсда адддссуддеє сассаєсссс суддаддасаассі ссаадаасас ссеЕдСсассод 240 садаєдаасеЕ ссссдсдддс сдаддасасс дссудеЕдсасе аседесдссаа дддсеЕддасед 300 часаасеєссу ассасєдудудч асадддсасс сеЕддссассу ЄдЕССадсудс Садсуєддсс 360

ЧдсЕССсСсадсу СЄдсєсасссє сссасссадс дасдадсадс Єдаадсссуда сасадссадс 420 чЧчЕЧдЧєдЕдсс Сдсєдаасаа ссЕєСсСвасссс судсдаддсса аддсдсадед чаадчдєдчвас 480 аасусссєдс ададсддсаа садссаддаа Ессуєдассу адсаддасад сааддасесс 540 асссасадсс Сдадсадсас ссеєдасссвєд адсааддссуд асбасадаа дсасаадучєд 60

Басдссєдсу аадедассса ссадддссеєд сЄссадссссу Єдассаадад сЕссаасс9 ббо часчадеЕдсу асаадассса сассЕєдессс сссвєдссссд ссссеєдаадс ЄдсеЕдадсдас 720 ссСЕССЯДЕдДЕ ЕССЕДЕЕєСсСсс сссааадссс ааддасассс бЄдаєдаєсад ссддассссс 780 чаадсдассеЕ дсдєддЕддЕ сдаєдеЕдссс сасдаддасс ссдаадеєдаа дсеєсааєвє9а 840

Басєдчдасу дсудєдчдаадеЕ дсасааєдсс аадассаадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасуєасс дчЕДдЕдЧдссадд судєсСсссасс дЕСССдсасс адчасєсдудсс дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса дчЕдеЕдсассс єдсссссаєс ссудчаєдад 1080 седассаада ассадудєсау ссссссудєдс дсадссааад дсЕсСссаєсс садсдасаєс 1140 чссаєдчадс доадачадсаа Єдддсадссу дачаасаасеє асаадассас дссЕССсСсєд 1200 седдасессуд асддсЕєссьє сеЕсссесуєду адсаадсеєса ссудбддасаа дадсаддаєдЧу 1260 садсаддудда асдеЕсЕеєсеЕс аєдссссуєд абдсаєдадуд сесбдсасаа ссасграсасу 1320 садаададсс ЕсЕСССЕДдДЕСсС єссдудудбааа 1350 «2105 229 «2115 450 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» (28Н1) УНСІ-важкий ланцюг із западиною «4005 229 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15 зек Геч Акуд Геч бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Роре бег бек Нів 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 зек Аїа І1ї1е Тгр Аїа бек біу бі біп Ту Тук Аза АБр бек Уаї Гуз бо 50 б1іу Аку Рпе ТПг І1їе 5Бег Агу АБр АБп о бБег Гув Авп ТПг Геч Туг Гей 65 7о 75 8о0 біп Месб Абзп бек Гей Агуд Аза сії АБр ТБг Аза Уаі! Туг Туг СувБ Аза 85 90 935

Туз біу Тер Ге сіу АБп Робе АБр Туг Тгр біу біп сіу ТПг Геч Уаї 55 100 105 110

ТВг УМаї бек бек Аїа бек Уаі Аїа Аза Рго Бек Маі Роре І1е Робе Рго 115 120 125

Рго Бек АБр сії біп Теч Гуз бек біу ТПг Аза Бек Уа1і Уаї Сув5 Іеч 130 135 140 60 Пес Авп Авп Робе Тук Рго Агу бій Аїа Ппуз Уаі! біп Тер Пув Уаі1ї! Авр 145 150 155 160

АБп Аза Геї сіп бек біу АБп бек біп біц бек Уаі ТПг січ сбіп АБр 165 170 175 зек Ппув АБр бек ТПг Тук бек Гец бек бек ТПг Геї ТіПг Геч бек Гуз 65 180 185 190

Аза Авр Тук січ пуб Ні Гуз Уа! Тук Аза СубБ сії Уа1і Тс Нів сіп 195 200 205 біу Геч бек бек Рго Уа1і ТПг Ппув бек Роре АБп Агу біу бій Сув Авр

210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аїа Ппуз ТВг Ппув Рго Акуд бій бій біп Тук Авп бек ТПг Туг Агд 290 295 108)

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув біу біп Рго Акуд бі Рго біп Уа1ї! Сув 340 345 350

ТПЕ Геї Ркго Рго бек Агуд Авр бі Геч Тс Ппуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365 бЗек Сув Аїа Ма1ї Ппув СсСіу Рпе Туг Рго бек АБр Іїе Аїа Уа1ї Січ Тер 370 375 380 біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Ма! бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 435 440 445 с1у Гуз 450 «2105 230 «2115» 1343 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (4984) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 230 адчсдсааєс дасдсадеЕсє дчоддчоассЧачуа Єчаадаадсс Єдддєсссса деЕдаадаєсе бо ссЕдсааддс сЕССддаддс асасссадса дссасдссає аадссдддбд сдасаддсеесс 120 сЕддасаадд дсЕСсдадесдуда аєдддаддда Єсаєсссстає сЕсєсддсаса дсааассасу 180 сасадаадсє ссадддсадуд деЕсассаєса ссдсадасаа аєссасдадс асадсстаса 240

ЕдчаЧчсєдад садссєдача Єсєдадчаса ссудссуєЄдса Єсасєдсдса ачадаасасе 300 ассудєддсєсс деасчасвсас єЄдддадссаад дчдассассує дчассуєсссс Ссадссадса 360 ссаадддссс БбадсудЕдсєс ссЕСсддссс сгадсадсаа дадсасааде ддаддаасад 420 ссдсссбдуда седсссддЕсС ааддассасеЕ Ессссдадсс сдєдассдєд Есссддаацсєс 480 сЕддсдсссЕ дасаадсуддс деЕдсасасає єсСссадссдс дссдсададс адсддсссде 540 асЕсєсєЧдад садсуєсуєд ассуєдсесссс ссадсеєсессеє дддсасссад асссасаєсе 60 дсаасуєдаа ссасаадссс адсаасасса аадсддасаа дааддседдаа сссаададсе бо дсдасаадас ссасасстЕдс сссссЕБдсс ссдсссседа адсєдсєддаЕ ддссссвЕсс 720

ЄдЕССсСсСвДдДЕС ссссссааач сссаадчдаса сссєдаєдає садссудасс сссддаадесда 780 сседсдсдЧдЕ ддЕСЧдаєдед ссссасдадда асссєдааде даадесєсаає єддсасдаєд 840 асчддсуєдча адсудсасаає дссаадасса адссудсудудда ддадсадсас аасадсасає 900 ассуєдеЕдчс садсуєсссс ассуєсссдс ассадчассу дсєдааєсєдудс аадчадсаса 960 адеЕдсааддеЕ ссссаасааа дсссЕсддасд сссссаєсда даааассаєс Єссааадсса 1020 аадддсадсс ссдадаасса саддєдбсаса сссеєдссссс асдссуддає дадссдасса 1080 адаассадудс садсседеЕд єЄдссЕддеЕса ааддссєсва ссссадсудас аєсдссаєд 1140 адеЕдачдачад сааєдуддсад ссудадааса ассасаацчцас сасудссєссс деЕдссоддасе 1200 ссдасуддсес сЕЕсЕЕєссеЕсС сбасадсаадс Єсассудсбдда саададсадд ЕЄддсадсачду 1260 60 чдчаасуєсьс сесасдсеЕсс деЕдаєдсаєд аддсесеєдса саассассас асдсадаада 1320 дссЕСЕсСссЕ дЕСЕСсССсСДдЄ ааа 1343 «2105 231 «2115 448 «2125 РЕТ 65 «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (4984) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 231 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1е 5ег Тгр Уаі Акуд біп Аїа Рго біу біп біу Геп бі Тер Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд бій Туг Тугк Аку біу Рго Туг Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

Тис Уаї Трг Уаі1ї бек бБег Аїа бек ТПг Ппув Сіу Рго бБег Уаії Рре Рго 115 120 125

Теч Аза Рго бек бек Пув Бек ТПг бек біу біу ТбПг Аза Аза Геч Сс1Уу 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190 бек Геч сСіу Тпг біп Трг Тує І1е Сув Авп Уа1і Авп Нів Кув Рго бег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 сій УМаї Пцув Рпе Авп Тгр Туг Маї Авр Сіу Ма1 Сі Уаї Нів Авп Аї1а 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 108)

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сіп Уа1ї Тугє ТіПг Іеч 340 345 350

Рго Рго Сув Агуд Авр бій Теч ТПг о Ппуз Авп о біп Уаї бек Геч Тгр Сув 355 360 365

Теч Уаі Ппув сіу Рпе Туг Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаі біц Тер січ бБег 370 375 380

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Робе Теч Тук бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Печ Нів Авп Нівз Тук ТПг біп Ппувз бБег ІГеч бег Течп бег Рго біУу Пув 435 440 445 «2105 232 «2115 1338 «2125 ДНК 10) «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (154) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 232 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо 65 Есссдсаадд ссеЕссуддадд сасаєєсадс адсбрасудсса ЄаадссдддЕ дсдасаддесес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

ЧачаЕсссасуд ассасєдудудуд ссаадддасс ассуєдассу ЕЄсЕССсСЄСсадс Садсассаад 360 чассссадсу СдсЕєсссЕсСЕ ддссссвадс адсаачадса сааєсдчдадч аасадссдсс 420 сЕдддсєдсс Еддссаадда стассєсссс дадсссудєда ссудеЕдеЕсстд даасєсвддс 480 чсессєдасаа дсддсудєдса сасаєсєсса дссуєЄдсєдс ададсадсуд ссдсасесе 540 сЕдадсадсуд ЕсдЄдассує дсссеЕсвбадс ЕсссЕдддса сссадассса саєсєдсаас 60 дедаассаса адсссадсаа сассааадсуд дасаадаадд Сддадаасссаа дадсєдсдас бо аацдасссаса сссдсссссс ЕСудсссвЕдсс сссдаассу ссуддєдассс СЕССУЧЕДЧЕЄС 720 сЕДдЕссСсссс сааадсссаа ддасасссод асбдаєсадсс ддасссссда адедассеідс 780

ЧчЕЧЧєдЧассу аєдеЕдеєссса саддасссс даадсдаадеЕ Єсааєсдуєа сдєсдддасадес 840

ЧЕддаадсдс асаасдссаа дассаадссуд сдддаддадс адсасаасад сасдсассє 900 чЧчедЧдєсадсу СЄссеєсассуєЄє ссеЕдсассад дЧасєддсєЧда асддсаадчда деасаадедес 960 ааддеЕсЕєсса асааадсссє суддсудссссс аєсдадаааа ссасєссссаа адссааадчу 1020 садссссдад аассасаддс деасасссод сссссаєдсс доадаєдадсе дассаадаас 1080 саддеЕсадсс ЕдЕддЕдссЕ дадєсєсаааддс Єсссаєссса дсдасаєсдс сдєдчадеЧчу 1140 чЧададсаасд ддсадссуда даасаассас аадассасудс сссссдЕдсЕ ддассссдас 1200

ЧасЕСсСсСЕЕсЕ сссесрасад саадсесасс дЕддасаада дсаддсддса дсаддддаас 1260

ЧдЕСЕсЄСсСЕсСає дссссуєдає дсаєдаддсе сЕдсасаасс ассасасуса даададссес 1320

Єссседесес сддадсааа 1338 «2105 233 «2115» 446 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (154) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 233 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе бег Тгр Уаі Агуд Сіп Аїа Рго сіу Сіп С1у їеч Січ Тгр Меб

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 35 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд бій Туг біу бек Мес А5р Туг Тер сіу сбіп сі1іу ТПг ТБг Уаї 100 105 110 40 Таг Уаї бБег бек Аза бБег ТрПг Пув біу Рго бек Уа1ї Рре Рго Іеч А1а 115 120 125

Рго Бек Бек пуб бек ТПг бек біу біу ТПг Аза Аза Геч сіу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї ув Авр Тукє Рпе Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр АБп бег Ш1Уу 45 145 150 155 160

Аа Геч ТПг бек біу Маії Нів ТБбг Рре Рго Аїа Уаії Геї сіп бек 5ег 165 170 175 біу Геч Тук бек Гецп бБег Бек УМаі УМаі! ТБг Уаі! Рго бек бек бек Гей 180 185 190 50 сіу Так біп Тс Тує І1е Суб Авп Уаі Авп Нів Ппув Рго бБег Авп Тис 195 200 205

Туз Маії Авр пуб пуб Уа1ї сій Рко Пув5 бек Сув АвБр Пуб5 ТПг Ні Тс 210 215 220

Сув Рго Рго Суб Рго Аза Рго сії Аза Аза Сбіу біу Ркго бек Уа1і Роіе 55 225 230 235 240

Теч Ріпе Рго Рго ПувБ Рго Пув АБр ТПг ІТечп Месє І1е бег Агу ТпПг Рго 245 250 255 біч Уаії ТрпЕ Суб Уа1і Уаї Маїії АБр Уаї бек Ніб біц Авр Рго січ Уаї 260 265 270 60 Пув Рпе Авп Тгр Туг УМаі1і Авр сіу Уаі Сіц Ма1ї Нів АБп Аїа ГПув Тис 275 280 285

Туз Рго Акд бій бій біп Тук АБп бек Тйг Туг Акуд Уа1і Уаі1і Бек Уаї 290 295 108)

Теч Тпг Уаії Гей Нів сіп АБр Тгр Іеч АБп біу Ппув бі Тук Пув Сув 65 305 310 315 320

Туз Уаії бек Авп пуб Аза Геї сіу Азїа Рго Іїе біц пуб ТПг Іе бБег 325 330 335

Туз Аїа Ппуз сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уа! Тугє Трг Гей Рго Рго

340 345 350

Сув Акуд Авр бій Геч Тс Ппув АБп обіп Уа! бек Гецп Тер Сув Геч Уаї 355 360 365

Туз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уа! бі Тер бій бек Ап с1Уу 370 375 380 біп Рго біц Авп Ап Туг Пув Тс ТБ Ргро Рго Уаі Гей Авр бек Авр 385 390 395 400 біу бек Рпе Рпе Гей Тугк Бек Пув Геї ТПг Уаі! Авр Пубз бег Агуд Тгр 405 410 415 сіп біп б1у Авп Уаі1і Рібе бБег Сув бек Уа1ї Меє Нів Січ Аїа Ієч Нів 420 425 430

АвБп оНів Тугк Тс біп Гуз бек ТГеч бек Гей бек Рго сіу ГПув 435 440 445 «2105 234 «2115» 1356 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (2087) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 234 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асддадссда дсадссєдад ассєдаддас ассдссуєдеЕ ассаседсдс дададсваас 300

Басссуєасс сЕсСасєдудуд ЄчасеЕссудас сСасєддддсс аадддассас сдєдассуєс 360

Ессссадсва дсассааддд ссссадсуєд ЄссссеЕссдуу ссссвбадса саададсаса 420 адеЕдчачдчдаа садссудсссЕ дддсЕдссвЕд дЕСааддасе асЕсссссда дсссуєдасс 480

ЧЕЧдсссеЕдча аєсссуддсудс ссеєдасаадс додсдсдсаса саєсєссадс сдєдсеєдсад 540 адсадсддсес Єдбасссеєсс дадсадсуєс дсдассудєдс ссеЕсвтадссс ссеЕдддсасс 60 садасссаса єссдсаасудс даассасаад сссадсааса ссааадсдда саадааддед ббо чаасссаача дссдсдасаа дасссасасс Єдсссссссс дсессєдсссс Єдаадссусєс 720

ЧчЧеєдЧсссСЕС ссуєдЕСсСсСЕ дсєсссссса аадсссаад асасссєдає даєссадсс9д 780 асссссдаа Счассєдсдє дудєдасєсчаєс деЕдеєсссасу адчасссєда адсдаадесс 840 ааєсддаєасд ЄддасддсдЕ ддаадсдсас ааєдссаада ссаадссудсд дчдаддадсад 900 басаасадса сусассуєдЕ ддєсадсудеєс сесассуєсс Єдсассадча сєддсєдаає 960 часаадчадс асаадєдсаа ддЕсСЕССсаас ааадсссеєсу дсдсссссає сдадаааасс 1020 асссссааа ссааадуддса дссссудадаа ссасаддеєдЕ асасссеєдсс сссаєсдсс9д 1080 чаєсдадсєда ссаадаасса ддеЕсадссвєд ЕддЕдсссду ссаааддсес свраєсссадс 1140 чЧасаєсдссд СЄддадсддда дадсааєдудд садссуддада асаассасаа дассасдсесєс 1200 сссуєдсєдуд асессудасуув сеЕсссеєсесс сеЕссасадса адсссассує ддасаададс 1260 аддеЕддсадс аддддаасує сеЕєсЕСаєдс Ессуєдаєдс аєдаддсссо дсасаассас 1320 басасусада ададсссєссс ссеЕдеЕсеЕссу даєааа 1355 «2105 235 «2115 452 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (2087) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 235 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе бег Тгр Уаі Агуд Сіп Аїа Рго сіу Сіп С1у їеч Січ Тгр Меб 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 60 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд Уа1і АБвБп о Тугє Рго Тук бек Туг Тер біу Авр Роре АБр Тугє Тгр 100 105 110 65 сі1у біп с1у Трг Тбг Уаї ТПг о Уаї бек бег Аїа бег Тіг Пув С1у Рго 115 120 125

Зек Уа1і Рре Рго Іечп Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу б1у ТЕбг 130 135 140

Аза Аза Геч сіу Суб ІГеч Маї Гув Авр Тук Рпе Рго сії Рго Уаі1і ТЕбг 145 150 155 160

Уаї бек Тгрр АБп бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаії Ні5 Трг Рре Рго 165 170 175

Аза Уаі Гей біп бБег бек біу Течп Туг бек Пец бек бек Уаії Уаї ТЕг 180 185 190

Уаї Ркго бек бек бек Ге сіу ТпПг сіп ТПг Тук І1е Субв АБп Уаії Авп 195 200 205

Нів пуб Рго бек АБп ТПг пуб Уа1і Авр о Ппуб5 Ппув Ма1ії бій Рго Ппув бег 210 215 220

Сув АБр Пу5 Тс Нів ТК Сув Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго біц Аза Аза 225 230 235 240 біу біу Ркго бек Уа1і Рбе Геї Робе Рго Рго Гу5 Рго Пуб Авр ТпПг Гей 245 250 255

Меє І1їе бБег Акуд Тпг Рго біц УМаї Тип Суб Ма1 Уа1ї Уаї1ї Авр Уаї 5ег 260 265 270

Нів бі АБр Рко біч Уаі пуб Рпе Абзп Тер Туг УМаі АБр сбіу Уаї сіц 275 280 285

Уаї Нібв АБп Аза пу5 ТПг пуб Рго Акуд бій біз біп Тук АБп бек Тр 290 295 108)

Тук Аку Маі Уаї бек Уаі Гей ТпПг Уаї Гечп Ніб біп АБр Тгр Іеч Авп 305 310 315 320 сбіу пув біЧ Тук Ппув Сув Ппув Маії бек АБп Гуз Аза Те сСіу Аза Рго 325 330 335

Ії1е бі Ппув Тбг Іїе бег їув Аза Ппув С1іу Сіп Рго Акд Січ Рго сіп 340 345 350

Уаї Тук ТБЕ Ге Рго Рго СубБ Агкуд АБр біч Теч ТБг Гу5 Ап біп Уаї! 355 360 365 зек Геч Тер Суб ІГеч УМаї пув біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1їе Аїа Уаї 370 375 380 біч Тер біц бек Авп сіу біп Рго бій АБп АБп Туг Муз ТПг Тпг Рего 385 390 395 400

Рго Уаі Геї АБр бек Авр біу бек Рпе Рпе Гей Туг Бек Пув Іеч Тс 405 410 415

Уаї Авр Пув бег Аку Тгр біп Сіп Сіу Авп Маі1ї Ре бек Сув бек Уаї 420 425 430

Меє Нібв біч Аза Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп губ бек ІТеч бек Гец 435 440 445

Зек Рго сіу Гув 450 «2105 236 «2115 1338 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (СІС-563) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 236 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссаддчдаадуд доассддадеЕд ддЕСсСЕСсадсеЕ аєсадеддна дЕддсддсад сасасбассас 180 чсачасєссу СЄдаадддссу дсЕссассаєс Сссададаса ассссаадаа сасдсєдесає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасеЕдедс дсеЕЄДдасдеєе 300 чЧЧєдссЕссу ассасєддудуд ссааддадсс сЕддссассу ЕсЕСЧадсдс Садсассаад 360 чассссадсу СдсЕєсссЕсСЕ ддссссвадс адсаачадса сааєсдчдадч аасадссдсс 420 сЕдддссдсс Еддссаадда сбасеєсссс дадсссуєда ссуєдЕССС9д дааєсєссдас 480 чсессєдасаа дсддсудєдса сасаєсєсса дссуєЄдсєдс ададсадсуд ссдсасесе 540 сЕдадсадсд Есдбдассудс дсссессадс єсЕсСсдддса сссадассста саєсєдсаас 60 дЕдаассаса адсссадсаа сассааадєд дасаадаадд Сдуддаасссаа дадссдсдас бо аацдасссаса сссдсссссс ЕСудсссвЕдсс сссдаассу ссуддєдассс СЕССУЧЕДЧЕЄС 720 60 сЕДдЕЕсСсссс сааадсссаа ддасассстд аєдаєсадсс ддасссссда адеєдассесдс 780

ЧчЕЧЧєдЧассу аєдеЕдеєссса саддасссс даадсдаадеЕ Єсааєсдуєа сдєсдддасадес 840 чсдчдаадсус асаасуссаа дассаадссу соддчадчдадс адсасаасад сассбассає 900 чЧчедЧдєсадсу СЄссеєсассуєЄє ссеЕдсассад дЧасєддсєЧда асддсаадчда деасаадедес 960 ааддеЕсЕєсса асааадсссє суддсудссссс аєсдадаааа ссасєссссаа адссааадчу 1020 65 садссссдад аассасаддеЕ деасасссвд сссссасдсес доддаєдадсеє дассаадаас 1080 саддеЕсадсс ЕдЕддЕдссЕ дадєсєсаааддс Єсссаєссса дсдасаєсдс сдєдчадеЧчу 1140 чачачсааєуд дадсадссуда даасаассас аадассасус сЕсссуєдсе ддассссдас 1200

ЧасЕСсСсСЕЕсЕ сссесрасад саадсесасс дЕддасаада дсаддсддса дсаддддаас 1260

ЧдЕСЕсЄСсСЕсСає дссссуєдає дсаєдаддсе сЕдсасаасс ассасасуса даададссес 1320

Єссседесес сддадсааа 1338 «2105 237 «2115 446 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (сСІСс-563) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 237 сі Уаї Сіп їечп Те Січ бег сіу Сі1у С1у їеч Уаї Сіп Рго сС1у С1Уу 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї 5о0 ів) бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Авп бег їеч Агуд Аїа Січ Авр Трг Атїа Уа1ї Туг Туг Сув 85 90 95

Аза Ггеч Авр Уаії сбіу Азїа Рбе А5р Туг Тер сіу сіп сіу Аза Іеч Уаї 100 105 110

ТПг Маї бек бек Аза бек ТПг пуб сіу Рго Бек Маі Рое Рго Іеч Аїа 115 120 125

Рго Бек Бек пуб бек ТПг бек біу біу ТПг Аза Аза Геч сіу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї ув Авр Тукє Рпе Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр АБп бег Ш1Уу 145 150 155 160

А1ї1а тес Трг бек біу Маї Нів ТПг Рре Рго Аїа МУа1ї Іеч Сіп бег бег 165 170 175 біу Геч Тук бек Гецп бБег Бек УМаі УМаі! ТБг Уаі! Рго бек бек бек Гей 180 185 190 біу ТЕ біп Тбпг Ту Іїе Суб АБп о Уаі АБп Нібв пуб5 Рго бек АБп о ТПг 195 200 205

Туз Маії Авр пуб пуб Уа1ї сій Рко Пув5 бек Сув АвБр Пуб5 ТПг Ні Тс 210 215 220

Сув Рго Рго Суб Рго Аза Рго сії Аза Аза Сбіу біу Ркго бек Уа1і Роіе 225 230 235 240

Пес Рпе Рго Рго Пувз Рго Ппувз АБр ТПг Гей Меє І1їе б5ег Агуд ТіПг Рго 245 250 255 біч Уаії ТрпЕ Суб Уа1і Уаї Маїії АБр Уаї бек Ніб біц Авр Рго січ Уаї 260 265 270

Туз Рпе Авп Тер Тук Уаі АБр сіу Маі біч Уаії Ні5 АвБп Аза Пуб5 ТПг 275 280 285

Туз Рго Акд бій бій біп Тук АБп бек Тйг Туг Акуд Уа1і Уаі1і Бек Уаї 290 295 300

Теч Тпг Уаії Гей Нів сіп АБр Тгр Іеч АБп біу Ппув бі Тук Пув Сув 305 310 315 320

Пув Ма1і бек Авп Пув Аїа Іеч сСіу Аза Рго Іїе Сі Пув ТПг І1е 5ег 325 330 335

Туз Аїа Ппуз сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уа! Тугє Трг Гей Рго Рго 340 345 350

Сув Акуд Авр бій Геч Тс Ппув АБп обіп Уа! бек Гецп Тер Сув Геч Уаї 355 360 365

Туз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уа! бі Тер бій бек Ап с1Уу 370 375 З8о біп Рго біц Авп Ап Туг Пув Тс ТБ Ргро Рго Уаі Гей Авр бек Авр 385 390 395 400 60 біу бек Рпе Робе Гей Тук бек Ппув Гей ТПг Уаі Авр Пув бег Агу Тгр 405 410 415 біп біп біу Авп Уа1і Роре бек Суб5 бек Уа! Меєсє Ніб5 сій Аза Геч Нів 420 425 430

АвБп оНів Тугк Тс біп Гуз бек ТГеч бек Гей бек Рго сіу ГПув 65 435 440 445 «2105 238 «2115 1338 «2125 ДНК

«213» Штучна послідовність «223» ДНК (СІС-564) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 238 чаддаєдсаає ЄдЕєддадес Єдддддаддс Ссддсасадс ссддддоддеЕс ссеЕдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 чсачасєссу СЄдаадддссу дсЕссассаєс Сссададаса ассссаадаа сасдсєдесає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасеЕдедс деЕєсдасеЕє 300

ЧддЕссдЕссУд асрассдуддда ссааддаасс ссддссассу Єсссдадебдс Садсассаад 360 чассссадсу СдсЕєсссЕсСЕ ддссссвадс адсаачадса сааєсдчдадч аасадссдсс 420 сЕдддсєдсс Еддссаадда стассєсссс дадсссудєда ссудеЕдеЕсстд даасєсвддс 480 чсессєдасаа дсддсудєдса сасаєсєсса дссуєЄдсєдс ададсадсуд ссдсасесе 540 сЕдадсадсд Есдбдассудс дсссессадс єсЕсСсдддса сссадассста саєсєдсаас 60 дЕдаассаса адсссадсаа сассааадєд дасаадаадд Сдуддаасссаа дадссдсдас бо аацдасссаса сссдсссссс ЕСудсссвЕдсс сссдаассу ссуддєдассс СЕССУЧЕДЧЕЄС 720 сЕДдЕссСсссс сааадсссаа ддасасссод асбдаєсадсс ддасссссда адедассеідс 780

ЧчЕЧЧєдЧассу аєдеЕдеєссса саддасссс даадсдаадеЕ Єсааєсдуєа сдєсдддасадес 840 чсдчдаадсус асаасуссаа дассаадссу соддчадчдадс адсасаасад сассбассає 900

ЧЕддссадсуд ЄссеЕсассудсЄ сседсассад дасєддсєда асддсаадда дсасаадедс 960 ааддеЕсЕєсса асааадсссє суддсудссссс аєсдадаааа ссасєссссаа адссааадчу 1020 садссссдад аассасаддс деасасссод сссссаєдсс доадаєдадсе дассаадаас 1080 саддеЕсадсс ЕдЕддЕдссЕ дадєсєсаааддс Єсссаєссса дсдасаєсдс сдєдчадеЧчу 1140 чачачсааєуд дадсадссуда даасаассас аадассасус сЕсссуєдсе ддассссдас 1200 дасЕсСсСЕЄсЕ сссеєсСвасад саадсєсасс деЕддасаада дсаддсддса дсадддадаас 1260

ЧдЕСЕсЄСсСЕсСає дссссуєдає дсаєдаддсе сЕдсасаасс ассасасуса даададссес 1320

Єссседесес сддадсааа 1338 «2105 239 «2115» 446

Зо «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (сСІс-564) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 239 сі Уаї Сіп їечп Те Січ бег сіу Сі1у С1у їеч Уаї Сіп Рго сС1у С1Уу 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї 50 55 бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 7о 75 8о0

Теч біп Меє Авп бег їеч Агуд Аїа Січ Авр Трг Атїа Уа1ї Туг Туг Сув 85 90 935

Аза Рпе Авр Уа1ії біу Ргро Рбе Авр Туг Тер сіу сбіп сіу ТіПг Іеч Уаї 100 105 110

ТПг Маї бек бек Аза бек ТПг пуб сіу Рго Бек Маі Рое Рго Іеч Аїа 115 120 125

Рго Бек Бек пуб бек ТПг бек біу біу ТПг Аза Аза Геч сіу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї ув Авр Тукє Рпе Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр АБп бег Ш1Уу 145 150 155 160

А1ї1а тес Трг бек біу Маї Нів ТПг Рре Рго Аїа МУа1ї Іеч Сіп бег бег 165 170 175 біу Геч Тук бек Гецп бБег Бек УМаі УМаі! ТБг Уаі! Рго бек бек бек Гей 180 185 190 біу ТЕ біп Тбпг Ту Іїе Суб АБп о Уаі АБп Нібв пуб5 Рго бек АБп о ТПг (516) 195 200 205

Туз Маії Авр пуб пуб Уа1ї сій Рко Пув5 бек Сув АвБр Пуб5 ТПг Ні Тс 210 215 220

Сув Рго Рго Суб Рго Аза Рго сії Аза Аза Сбіу біу Ркго бек Уа1і Роіе 225 230 235 240 65 Пес Рпе Рго Рго Пувз Рго Ппувз АБр ТПг Гей Меє І1їе б5ег Агуд ТіПг Рго 245 250 255 біч Уаії ТрпЕ Суб Уа1і Уаї Маїії АБр Уаї бек Ніб біц Авр Рго січ Уаї 260 265 270

Туз Рпе Авп Тер Тук Уаі АБр сіу Маі біч Уаії Ні5 АвБп Аза Пуб5 ТПг 275 280 285

Туз Рго Акд бій бій біп Тук АБп бек Тйг Туг Акуд Уа1і Уаі1і Бек Уаї 290 295 300

Пес Тпг о Уаї Ге Ніз сіп Авр Тср Гей АвБп біу Пув бій Тугк Ппув Сув 305 310 315 320

Туз Уаії бек Авп пуб Аза Геї сіу Азїа Рго Іїе біц пуб ТПг Іе бБег 325 330 335

Туз Аїа Ппуз сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уа! Тугє Трг Гей Рго Рго 340 345 350

Сув Акуд Авр бій Геч Тс Ппув АБп обіп Уа! бек Гецп Тер Сув Геч Уаї 355 360 365

Туз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уа! бі Тер бій бек Ап с1Уу 370 375 З8о біп Рго бій Авп Авп Тук Ппуз ТБг ТБг Ргсо Рго Уа! Іечй Авзр 5ег Авр 385 390 395 400 біу бек Рпе Рпе Гей Тугк Бек Пув Геї ТПг Уаі! Авр Пубз бег Агуд Тгр 405 410 415 біп біп біу Авп Уа1і Роре бек Суб5 бек Уа! Меєсє Ніб5 сій Аза Геч Нів 420 425 430

АвБп оНів Тугк Тс біп Гуз бек ТГеч бек Гей бек Рго сіу ГПув 435 440 445 «2105 240 «2115 163 «2125 РВТ «213» Ціномолгус «4005 240

Теч біп Авр Геч СувБ Бек АБп Суб Рго Аїа біу ТБПг Рре Суб Авр АБп 1 5 10 15

АБп Агуд бБег біп І1е Сув бек Рго Сув Рго Рго Авп бек Ріе бБег 5бег 20 25 Зо

Аза сіу сіу біп Аку ТБ Суб Авр Іїе Суб5 Акуд біп Суб КГув5 біу Уаї

Рпе Ппув ТПг Агу Гуз біч Суб бек бек ТПг Бек АБп Аїа бі Сув Авр 35 50 55 бо

Сув І1е бек сіу Тук Нів Суб Гезч біу Аїа біч Суб бек Меє СувБ сій 65 70 75 80 біп АвБр о Сув пуб біп сіу біп сії Тез ТБкг Гуз пувз б1іу Сув Пув Авр 85 90 95 40 Сув Сув Рпе біу Тпг Рре Авп Авр о Сбіп ув Агуд С1у І1е Субв Агд Рего 100 105 110

Тер Тс АБп о Сув бек Ге Авр сіу пуб Бек УМаі Іеч УМаії АБп б1іу Тр 115 120 125

Туз бічЧ Агуд Авр о Уа1ї Уаї Суб сіу Рго бек Рго Аза Авр Гей бек Рго 45 130 135 140 біу Аїа бек бек Аза ТПг Рго Рго Аїа Рго Аїа Агку бій Рго сіу Нів 145 150 155 160 век Рго сіп «2105 241 «2115 164 «2125 РЕТ «2135 Ми5 тизсчій5 «4005 241

Уа1ї біп Авп бек Суб Авр Авп Суз біп Рго біу Тс Рбе Сув Аг Гув 1 5 10 15

Тук АБп о Рко УМаії Сув пув бек Сув Рго Рго бБег ТПг Ріре бек бек Іе 20 25 Зо біу біу біп Рго Авп Суб АБп о І1е Суб Агку Уа! Сув Аза сіу Тук Роіе (516) 35 40 45

Акуд Рпе Ппу5 Пув Роре Суб бек бек ТПг Ніб А5п Аза січ Суб5 біч Сув 5о0 ів) бо

Іїе сбіш сіу Рре Ні Сувз Теч біу Рго біп Суб ТПг Акуд Сув біч Гуз 65 70 75 80 65 Авр о Сув Агуд Рго бі1іу біп Сі їеч ТбПг о Ппув біп сС1у Сув Пув Тис Сув 85 90 95

Зек Геч біу ТП Рре АБп Авр біп Авп сіу Тбг сіу Маї Су5з Агу Рго 100 105 110

Тер Тс АБп о Сув бек Ге Авр сіу Акуд Бек МУМаії Іеч Гуз ТПг с1у Торг 115 120 125

ТПг січ Гуз Авр о Уаї! Уаї Суб сіу Рго Рго Уа1і МУМаі1ї бек Рое бег Рго 130 135 140

Бек ТПг ТПг Іїе бек Уа! Трг Рго бі сбіу біу Рго сбіу сіу Нівз 5бег 145 150 155 160 їПеч біп Уаї Гей «2105 242 «2115» 1266 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК людського 4-1В8В антигена Ес ланцюга з виступом «4005 242 сЕдсаддасс сседсадсаа седссссдсс ддсассеЕссс дсдасаасаа ссддаассад бо асссдсадсс сссдсссссс саасадссеєс адсеЕСєдссу дсуддасадсу дасссдсдас 120 асссдсачас адсдсаачдуддч сдЕдЕссада асссудааа адєдсадса сассадсаас 180 чссчдадеЕдсу ассдсасссс судсеЕсссає сдсссдудчдад ссуддсєдсад саєдсдсдад 240 саддассдса адсадддсса ддаасєдасс аадаадддсеЕ дсааддассуд сеЕдсеЕЕсдс 300 асссєсаасу ассадаадсу ддадсасссудс суддссссдда ссаассдса сссддасуддес 360 аачачдсуєЄдс СдудЕсаасуд сассааадаа счддчасудеЕсу ЄдеЕдсддсесс садсссєдсе 420 чаєсєЕдЕСЕсС сЕддддссад садсуєдасс сссссеЕдссс ссдссадада дссеєддссас 480

ЕсеЕсСсссада Ссудасуааса чссасаєсєс садддсуддеє сасссаааєс Сдсадасааа 540 асеЕсасасає дсссассуєбд сссадсассеє даассссвдуа ддадчассуєс адеЕссссссс 60

Есссссссаа аасссааудда сасссссаєд аєсЕсссуда ссссеєдадудс сасасдсуєд ббо чЧчеЧдЧдєдчасу СЄдадссасуа адасссєда дЕСаадсеєса асеєддсасуає дадасддсуєд 720 чаччдєдсаєа аєдссаадас ааадссусуд дЧадчадсадеЕ асаасадсас деассєдесд 780

ЧеЕсадсуєсс СсассуєЄєссеє дсассаддас Єддссєдаасу дсаадчадеа саадсдсаад 840

ЧдЕсЕЄссааса аадсссеєссс адсссссасс дадаааасса ЄссСссааадс сааадддсад 900 ссссдадаас сасаддедбта сасссєдссс ссаєсдссдад аєдадсєдас саадаассад 960 чЧЕсадссєдЕ ддсдсссдудє саааддсеєс баєсссадсу асаєсуссудє даадеддадад 1020 адсаасуддудс адссудачаа саасвєасаа ассасусссс ссуєдсєдчда сЕссдасудес 1080

ЄссЕссееєсс сссасадсаа дсесассудєд дасаададса ддасддсадса ддаддаасдес 1140

СЕСсСЕСаєсдсеЕ ссуєдаєдса єЄдаддсеєсьд сасаассасо асасдсадаа дадссЕсьсс 1200 сЕдеЕсеЕссудд деаааєссуу аддссєдаас дасаєссссуд аддсссадаа даєєдааєчуу 1260 сасдад 1266 «2105 243 «2115» 1266 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК ціномолгус 4-18В антигена Ес ланцюга з виступом «4005 243

Єєдсаддасєс ЄдеЕдсадеаа ссбдсссадсеЕ ддеасаєєсс дсдаєаасаа саддадесад бо асєсудсадеЕс сссдсссЕсСс ааасадеЕсеєс сссадсудсад дсдчдасааа чЧассєдесдас 120 асасудсадчдс адсдсааадчч ЄДЕСеЕсСсаа ассадчаадч адеЕдеЕсссеєс сассадсаає 180 чсачадеЕдеЕд ассдсасєсс адддєаєсас СЄдсссддадач сачадчсдсад сасєдсудєдаа 240 саддаєсдса аасааддсса адаасєдаса аааавааддес дсааадассд єсдсеЕєсвдоад 300 асасєстаасд ассадааасуд ЄддсаєсєдЕ сдссссЕдда сааассдеЕєс Єседчаєддаа 360 аадсссдсдс сСЕЧдЕЧчааєда дчасчааччад адчдчасуєду ЕсЕєдсудасс аєсеЕссадесс 420 чассЕсЕсЕеЕсС саддчадсасєс ссссудсдасс ссуссвєдссс ссдсдадада дссаддасас 480

ЕсЕссудсад Ссудасуааса чдссасаєсєс садддсуддеє сасссаааєс Сдсадасааа 540 асєЕсасасасє дсссассуєЄєд сссадсассс даассссвєдуа ддадчдассуєс адсссессесс 60

БЕсСсссссаа аасссаадда сасссеєсаєд ассеЕсссуда ссссєдаддЕ сасасдс9аєд ббо чЧчеЧдЧдєдчасу СЄдадссасуа адасссєда дЕСаадсеєса асеєддсасуає дадасддсуєд 720 чаччдєдсаєа аєдссаадас ааадссусуд дЧадчадсадеЕ асаасадсас деассєдесд 780

ЧеЕсадсуєсс СсассуєЄєссеє дсассаддас Єддссєдаасу дсаадчадеа саадсдсаад 840

ЧдЕссссааса аадссссссс адсссссаєс дачдаааасса єсЕССсСааадс сааадддсад 900 60 ссссдадаас сасаддсдба сасссєдссс ссасдссуддауд аєдадсєдас саадаассад 960 чЧЕсадссєдЕ ддсдсссдудє саааддсеєс баєсссадсу асаєсуссудє даадеддадад 1020 адсаасуддудс адссудачаа саасвєасаа ассасусссс ссуєдсєдчда сЕссдасудес 1080

ЄссЕссееєсс сссасадсаа дсесассудєд дасаададса ддасддсадса ддаддаасдес 1140 рЕСсСЕСаєдсє ссуєдаєдса Єдаддсеєсвд сасаассассо асасудсадаа дадссесьсс 1200 65 сеЕдесСссс9дуд деаааєссоу аддссєдаас дасасєссссу аддсссадаа чдаєєдааєау 1260 сасдад 1266 «2105 244 «2115» 1269

«2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК мишачий 4-1В8В антигена Ес ланцюга з виступом «4005 244 чЧчсдсадааса дссдсдасаа ссдссадссс ддсасссєсеЕ дссудаадста саассссуєд бо

Едсаададсс дсссссссад сассеЕссадс адсасєсудсуд дссадсссаа сеєдсаасаєс 120

ЕдсачадсуєЄ дсудссудсса ссеєсСсудсєс аадаадсеєсе дсадсадсас ссасаасудсс 180 чачсдсчадс дсаєсчадуду ссєссассдс сЕдддссссс адедсассад аєдсдадаад 240 часєдсадас ссддссадда асєдассаад садддсєдса адассєдсад ссЕдддсасс 300

ЕсСсаасдасс адаасудчас суддсуєЄдсдс суддссЕсдчда ссааєсдса сссдддасоа9чу 360 ачаадсуєЄдс Сдаааассуд сассассда аадчасуєсч ЄдЕдчсуддсессс Єсссуєдуєд 420

Есссссадсс сеадсассас саєсадсуєд ассссєдаад дсоддссссдуи суадасасесе 480 сЕдсаддеЕсс Еддссдасда асадссаває єсссадддсуд дсесасссаа асссдсадас 540 аааасєсаса саєдсссасс дедсссадса ссЕдаасеєсс єЄдддаддадасс десадесьсс 60 сЕСЕсСсСсссс саааасссаа ддасасссос асдаєсеєссс ддчдассссєда ддеЕсасаєдс ббо чЧчеЧЧаєдЧасЧдУа асуєдадсса саацчасссо даддссаадеЕ Єсаассдудєа сдсддасуадес 720 чсЧдчвадчдсдс аєаасуссаа дчасааачссу сддчадчдадс адсасаасад сассбассає 780 чЧчедЧдєсадсу СЄссеєсассуєЄє ссеЕдсассад дЧасєддсєЧда асддсаадчда деасаадедес 840 ааддссЕсса асааадсссс сссадссссс ассдадаааа ссаєссссаа адссааадду 900 садссссдад аассасаддс деасасссод сссссаєдсс доадаєдадсе дассаадаас 960 саддеЕсадсс ЕдЕддЕдссЕ дадєсєсаааддс Єсссаєссса дсдасаєсдс сдєдчадеЧчу 1020 чачачсааєуд дадсадссуда даасаассас аадассасус сЕсссуєдсе ддассссдас 1080

ЧасЕСсСсСЕЕсЕ сссесрасад саадсесасс дЕддасаада дсаддсддса дсаддддаас 1140 дЕСЕССсСсСсСає дссссуєЄдає дсаєдаддсеЕ сеєдсасаасс ассасасуса даададссес 1200

Єссседесес сддадсбаааєс суддаддссвд аасдасаєсс ссдаддссса даадаєєсдаа 1260

Єбдадсасдад 1269 «2105 245 «2115 422

Зо «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Людський 4-1В8В антигена Ес ланцюга з виступом «4005 245

Печ біп Авр Рго Сувз Бек АБп Сув Рго Аїа біу ТПг Рре Су5з Авр Авп 1 5 10 15

АБп Агуд Абп обіп І1е Сув бек Рго Суб Рго Рго Авп бБег Роре бег 5ег 20 25 Зо

Аза сіу сіу біп Аку ТБ Суб Авр Іїе Суб5 Акуд біп Суб КГув5 біу Уаї 35 40 45

Рпе Аку Тс Агу Гуз біч Суб бек бек ТПг Бек АБп Аїа бі Сув Авр 50 55 бо

Сув ТПЕ Ркго сіу Рпе Нібв Сув Геч біу Аїа біу Суб бек Меє СувБ сій 65 7о 75 8о0 сіп Авр Сув Пув Сіп С1у біп сій Те Тпг о Бпуз Ппув С1у Сув Пув Авр 85 90 935

Сув Сув Рпе сіу ТпПг Рре АБп АБр о біп Гуз Агу біу Іїе Суб Агд Рего 100 105 110

Тер Тс АБп о Сув бек Ге Авр сіу пуб Бек УМаі Іеч УМаії АБп б1іу Тр 115 120 125

Туз бічЧ Агуд Авр о Уа1ї Уаї Суб сіу Рго бек Рго Аза Авр Гей бек Рго 130 135 140 біу Аїа бек бек Уаі Тбг Рго Рго Аїа Рго Аїа Агку бій Рго сіу Нів 145 150 155 160 бек Рго Сіп Маі1і Авр сій Сіп їеч Туг Рре Сіп сСі1іу сіу бек Рго Був 165 170 175 зек Аза АБр Гу ТПг Нів Тпг Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго січ Іеч 180 185 190

Теч біу біу Рго Бек Уа1і Роре Геї Робе Рго Рго Пу5 Рго пуб АвБр Тс (516) 195 200 205

Теч Меєсє І1їе бек Аку ТПг Ркго біп Уа! ТБг Сувз Уаї Уа1 Уа1і АБвБр Уаї 210 215 220

Бек Нів бі АБр Рко біч Уаі Ппув Рпре Абзп Тер Туг Маі АБр сіу Уаї 225 230 235 240 65 сі Уа1 Нів Авп Аїа Пув ТПг о Гуз Рго Агд бі Сі біп Туг Авп бег 245 250 255

ТПг Тук Аку Уаї Уаї бек Уаі ГПеп ТпПг Уаї Геч Ні біп АБр Тгр Гец 260 265 270

АвБп о сіу пуб бі Тук Гуз Сув Гув Уаії бек АвБп пуб Аза Геч Рго Аа 275 280 285

Рго Іїе сії Ппуб5 ТПг Іїе бек Ппуб5 Аїа пуб сіу біп Рго Агку біч Рго 290 295 300 біп Маї Тук ТП Гей Рго Рго Сув Агуд Авр бій Теч ТПг Пу5 Авп о біп 305 310 315 320

Уаї бек ТГеч Ткр Суб Геч Уа1ї Ппув сіу Роре Туг Рго бег АвБр Іїе Аза 325 330 335

Уаї біч Терр бічЧ бек АвБп біу сбіп Рго бі АБп АБп Тук Ту5 Тс То 340 345 350

Рго Ркго Уаі Геї АБр бек АБр біу бек Рпе Рпе Геч Туг бек ГУув5 Іеч 355 360 365

ТЕ Маї1ї АБр Гуз бек Агу Тер біп сбіп сбіу АБп Уаі! Рібе бек Сув бег 370 375 З8о

Уаї Меє Нів сі Аїа їеч Нів Авп Нів Туг ТрПг Сіп Пув бБег Іеч бег 385 390 395 400

Теч бек Рго біу ПувБ Бек сіу біу ІГеп АБп АБр Іїе Рпе сій Аза сіп 405 410 415

Туз І1їе бій Тер Ні сій 420 «2105 246 «2115 422 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Ціномолгус 4-1В8В антиген

Ес ланцюга з виступом «4005 246

Теч біп Авр Геч СувБ Бек АБп Суб Рго Аїа біу ТБПг Рре Суб Авр АБп

Зо 1 5 10 15

АБп Агуд Бек біп І1е Сув бек Рго Суб Рго Рго Авп бБег Роре бег 5ег 20 25 Зо

Аза сіу сіу біп Аку ТБ Суб Авр Іїе Суб5 Акуд біп Суб КГув5 біу Уаї 35 Рпе Ппуз ТПг Агуд Пув бій Сув бБег бек ТПг бек АБп Аїа бій Сув Авр 5о0 ів) бо

Сув І1е бек сіу Тук Нів Суб Гезч біу Аїа біч Суб бек Меє СувБ сій 65 70 75 80 біп АвБр о Сув пуб біп сіу біп сії Тез ТБкг Гуз пувз б1іу Сув Пув Авр 40 85 90 95

Сув Сув Рпе сіу ТпПг Рре АБп АБр о біп Гуз Агу біу Іїе Суб Агд Рего 100 105 110

Тер Тс АБп о Сув бек Ге Авр сіу пуб Бек УМаі Іеч УМаії АБп б1іу Тр 115 120 125 45 цув бій Агу Авр о Уаї Уаї Суз сіу Рго бек Рго Аїа Авр Іеч 5бег Рго 130 135 140 біу Аїа бек бек Аза ТПг Рго Рго Аїа Рго Аїа Агку бій Рго сіу Нів 145 150 155 160

Бек Ркго біп Маі АБр біч біп Ге Тук Рпе сіп сіу сіу бек Рго Гуз 165 170 175 зек Аза АБр Гу ТПг Нів Тпг Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго січ Іеч 180 185 190

Теч біу біу Рго Бек Уа1і Роре Геї Робе Рго Рго Пу5 Рго пуб АвБр Тс 195 200 205

Теч Меє І1їе бБег Агку Тіг Рго сі Уа1ї ТПг Сув Уаі1і Уаї Ма1 Авр Уаї 210 215 220

Бек Нів бі АБр Рко біч Уаі Ппув Рпре Абзп Тер Туг Маі АБр сіу Уаї 225 230 235 240 біч Уаії Ні Авп Аза Пуб5 ТПг пуб Рго Агу бі бід біп Туг Авп бБег (516) 245 250 255

ТПг Тук Аку Уаї Уаї бек Уаі ГПеп ТпПг Уаї Геч Ні біп АБр Тгр Гец 260 265 270

АвБп о сіу пуб бі Тук Гуз Сув Гув Уаії бек АвБп пуб Аза Геч Рго Аа 275 280 285 65 Рго І1їе сії ПЦув ТПг І1е бек ув Аїа пув С1у біп Рго Агу Січ Рего 290 295 300 біп Уаі Тук Тпг Гей Рго Рго Суб Агу Авр біч Ге ТПг Пуб5 Авп о сіп 305 310 315 320

Уаї бек ТГеч Ткр Суб Геч Уа1ї Ппув сіу Роре Туг Рго бег АвБр Іїе Аза 325 330 335

Уаї біч Терр бічЧ бек АвБп біу сбіп Рго бі АБп АБп Тук Ту5 Тс То 340 345 350

Рго Рго Уаі Гей Авр бег Авр біу бек Рпе Рпе Гей Тук бек Пувз Іецй 355 360 365

ТЕ Маї1ї АБр Гуз бек Агу Тер біп сбіп сбіу АБп Уаі! Рібе бек Сув бег 370 375 З8о

Уаї Меє Нібз біч Аза Пец Нібв Авп Ні Туг ТПг біп Гуз бек Іеч бег 385 390 395 400

Теч бек Рго біу ПувБ Бек сіу біу ІГеп АБп АБр Іїе Рпе сій Аза сіп 405 410 415

Туз І1їе бій Тер Ні сій 420 «2105 247 «2115 423 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Мишачий 4-18В антигена Ес ланцюга з виступом «4005 247

Уаї біп Авп бек Суб Авр Авп Суб біп Рго біу ТБ Рбе Суб Агкуду ГПув 1 5 10 15

Тук АБп о Рко УМаії Сув пув бек Сув Рго Рго бБег ТПг Ріре бек бек Іе 20 25 Зо біу біу біп Рго Авп Суб АБп о І1е Суб Агку Уа! Сув Аза сіу Тук Роіе 35 40 45

Акуд Рпе Ппу5 Пув Роре Суб бек бек ТПг Ніб А5п Аза січ Суб5 біч Сув 5о0 ів) бо

Ії1е січ с1у Рре Нів Сув Тез Сі1іу Рго Сіп Сув ТПг Агуд Сув Січ Був 65 70 75 80

Авр о Сув Агкуд Рго біу біп бічЧ Те ТБг пуб сбіп сіу Сув Пуб5 Тік Сув 85 90 95

Зек Геч біу ТП Рре АБп Авр біп Авп сіу Тбг сіу Маї Су5з Агу Рго 100 105 110

Тер Тс АБп о Сув бек Ге Авр сіу Акуд Бек МУМаії Іеч Гуз ТПг с1у Торг 115 120 125

ТПг січ Гуз Авр о Уаї! Уаї Суб сіу Рго Рго Уа1і МУМаі1ї бек Рое бег Рго 130 135 140 бек ТрПг ТЕ І1їе Бек УМаї Тип Рго бій сСіу С1у Рго сСі1у Сіу Нів бег 145 150 155 160

Теч біп Уаі Ге Уаі Авр сії сіп ІГеч Тук Рбе біп сіу сіу бек Рго 165 170 175

Туз бек Аза Авр ПуБ ТПг Ні ТБ Суб Ргро Рго Субв Рго Аїа Рго сій 180 185 190

Теч Геч сіу сіу Рго Бек Уа1і Робе Геї Робе Рго Рго Пуб5 Рго Пув Авр 195 200 205

ТПЕ Геч Меє І1їе бек Агку ТПг Рго бі Уа1і ТПг Суб Уаї Уаї Уаї Авр 210 215 220

Уаї бек Нів сі Авр Рго біц Уа1і ПЦув Рбе Авп Тгр Туг Маї Авр С1У 225 230 235 240

Уаї біч УМаї Ні АвБп Аза Пу5 ТпПг пуб Рго Аку біз біч біп Тук Авп 245 250 255

Бек ТПг Тугк Аку Уаії Уаї бек Уаі ГПеп ТпПг Уаї Геч Ні біп АБр Тгр 260 265 270

Теч АБп о біу пуб бі Тук Ппув Сув Кпубв Маії бек АБп Гуз Аїа Геч Рго 275 280 285

Аза Рго Іїе сії Ппуб5 ТП Іїе бек Пуз Аза пуб сіу біп Рго Агку січ 290 295 300 60 Рго біп УМаї Туг Тйг ТГечй Рго Рго Сув Агу Авр біп Гей Тк Ппувз АвБп 305 310 315 320 біп Уаії бек Гей Тер Суб Геч Маї Гуз біу Ропе Туг Рго бег АБр Ше 325 330 335

Аза Уа1і сій Тер бій бек АБп біу біп Рго бій Абп АБп Тугє Гу5 ТЕГ 65 340 345 350

ТПЕ Рго Ркго Маії Іецч Авр бег Авр сіу Бек Роре Робе ІТеч Тукг бек ГПув 355 360 365

Теч Тпг Уаї Авр пуб Бек Агуд Тер біп біп біу Авп Уа! Рре Бек Сув

370 375 380

Зек Уа1ї Меє Ніб5 біцп Аза Теч Нібв Ап Нібв Тук ТПг сіп пуб бек Іеч 385 390 395 400 ек Геч Бек Рго біу Гуз бек біу сіу Гечш АБп АБр І1е Робе січ Аїа 405 410 415 біп гуз Іїе бій Тер Ні сій 420 «2105 248 «2115 28 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Праймер М563 «4005 248 вЕссудсасад Єаасасасудд ссдєдесс 28 «2105 249 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК 4-188(1283) УМ, «4005 249 часаєссадча Сдасссадсс ЄсссСЕСсСсасс сЕДдЕСЕДДсає ссдсаддада ссуєдеЕсасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чЧададааадссс ссаадсеєссс даєссаєдає дссЕСсСсадсс єддааадеєдд ддЕсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчасєсвєу саассваєса ссдссааса Сассаєссує асссдсадас яєЕсеЕддссад 300 дадасассааа сСсудадаєсаа Фд 321 «2105 250

Зо «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 4-188(1283) УН «4005 250 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асддадссда дсадссєдад ассєдаддас ассдссуєдсЕ ассассдеєдс дадаєсєдаа 300 гЕсСссусЕссс асуссудассє сдасвсассуу додссаадудда ссассудєдас суаєЄсєссеса 360 «2105 251 «2115 318 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 4-188(25057) УМ, «4005 251

Есудєссдадс Єдасссадда ссссдсЕЧдеЕУд сєссдсддссЕ єдддасадчас адссадчаєс бо асаєдссаад дадасадссс садаадесає сСаєдсаадссї ддсассадса даадссадда 120 саддсссссд бассєдеЕсає стаєддсааа аасаассуддсес ссссадуддає сссадассда 180

Есссссудудсес ссадсеєсаду ааасасадсс Єссеєсудасса Єсассддддс Єсаддсуддаа 240 чаєчадчсєд ассассассу ЄаасеєсссеЕс дасададсусу чсасчдсдаче аєсссоуддсода 300 чадассаадс ЄдассдеЕс 318 «2105 252 «2115 354 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 бо «223» ДНК 4-188(25607) УН «4005 252 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 65 дсадасєссд Єдаадддссуд дессассасєс сСссададаса ассссаадаа сасдсєднтає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасєдедс дсдеєдасдас 300 ссдЕддссдс сдЕссдасса седдддссаа ддаасссода Єсассдессс даде 354 «2105 253

«2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 4-188(1105) У, «4005 253 часаєссадча Сдасссадсс ЄсссСЕСсСсасс сЕДдЕСЕДДсає ссдсаддада ссуєдеЕсасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдЕсєЕсадсу дсадеддаєс судддасадаа ЕЄЄсасеєссса ссаєсадсад сЕсдсадссяе 240 чаєчасєсвєу саассваєса ссдссааса сЕсааєссує асссеєсадас дЕсСєд4дссад 300 дадасассааа сСсудадаєсаа Фд 321 «2105 254 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 4-188(1105) УН «4005 254 саддЕдсаає єддсдсадеЕс Єддддсєдад дЕдаадаадс сЕдддЕсСсЕс ддєдаадаеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадссєдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассудєдс дадчаєссасе 300 сЕдаєссасу дЕСасеєссуда сбаседдддс саадддасса ссуєдассдеє сеЕссеса 357 «2105 255 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» ДНК 4-188(9811) УМ, «4005 255 часаєссадча Сдасссадсс ЄсссСЕСсСсасс сЕДдЕСЕДДсає ссдсаддада ссуєдеЕсасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чЧададааадссс ссаадсеєссс даєссаєдає дссЕСсСсадсс єддааадеєдд ддЕсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчасєсвєу саассваєса ссдссааса дчЕсСааєсссяє асссудсадас дЯяЕсСєддссад 300 дадасассааа сСсудадаєсаа Фд 321 «2105 256 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 4-188(9811) Щ УН «4005 256 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асддадссда дсадссєдад ассєдаддас ассдссуєдаєс ассассдеЕдс дадассеЕєсе 300 чЧчаеєдссвасс суддудєвсассє сдассассуду додссаадудда ссассудєдас суаєсєссеса 360 «2105 257 «2115 318 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 4-188(2002) УМ, «4005 257 часаєссада Сдасссадсс єссаєссасс сЕДдЕСЕєдсає ссдсаддада ссуєдеЕсасс бо 60 ассасеЕєдсс деЕдссадеєса дадеаєстадеЕ адсЕддеЕєдд сссддсбаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчасєсвєу саассваєса ссдссааса садсасссує асвсаєасуєс сдудссадддс 300 ассааадссу адаєсаад 318 65 «2105 258 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

«223» ДНК 4-188(2002) УН «4005 258 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд ссеЕссуддадд сасаєєсадс адсбрасудсса ЄаадссдддЕ дсдасаддесес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асдчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдЕ асвсассдсдс дачаєссеєвас 300

Бассдудадаас сЕсСасссусє сдасвассуу додссаадудда ссассуєдас судсссссадс 360 «2105 259 «2115 642 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 1283 РЗ29СІАГА Ідсі легкий ланцюг «4005 259 часаєссадча Сдасссадсс ЄсссСЕСсСсасс сЕДдЕСЕДДсає ссдсаддада ссуєдеЕсасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдЕсєЕсадсу дсадеддаєс судддасадаа ЕЄЄсасеєссса ссаєсадсад сЕсдсадссяе 240 чаєчасєсвєу саассваєса ссдссааса Сассаєссує асссдсадас яєЕсеЕддссад 300 часассааа Ссдачаєсаа дсусасудеЕд дссдсассає ссдссессає сессссддсса 360

ЕсєЧасчадс адсєдааасєс єдчдааседсес ЄссусєдесдеЕ дсессдсесєдаа Саасеєсстає 420 сссадададд ссааадсаса деддааддсд даєсаасдсесс сссааєсддадауд баасеєсссад 480 чададеЕдсса сададсадда садсааддас адсассбраса дссЕєсадсад сассссдасд 540 сЕдадсааад садассасда дааасасааа десЕссасдссс дсдаадссас ссаєсадддс 60 сеЕдадсеЕсдс ссдЕсасааа дадссєсаас адддчадчдаде дЕ 642 «2105 260 «2115» 1350

Зо «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 1283 РЗ29СІАТА ч19дб1і важкий ланцюг «4005 260 саддЕдсаає єддсдсадеЕс Єддддсєдад дЕдаадаадс сЕдддЕсСсЕс ддєдаадаеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассусєудс дачаєссдаа 300

СЕССУЧЕЕСсССсСЕ асдсєдассс сдассассуддда ддссааддда ссассудєдас судєсєссеса 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 часасадсуд сссЕдЧдучссдд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдаассуде дасудЧЕеЕдесУ 480

Едчдаасеєсад дсдссссдас садсуддсуєд сасасссссс суддсеєдеЕссо асадесссьса 540 ччасеЕсвтасс сссеЕСсадсад суєдудєдасс дЕдсссссса дсадссєдаду сасссадасс 60 басасєсєдса асдєедааєса саадсссадс аасассаадд Єддасаадаа адеєдадссс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссдЕсадеЕсе ЕсссссЕссс сссаааассс ааддасассс Єсаєдаєсєссс ссддассссе 780 чаччдаєсасаєсє дсдєдУЧасЧдУчЕ дчасуєдадс сасдаадасс ссдаддеєсаа дЕсСаасеєда 840

Басєдчдасу дсудєдчвадає дсасааєдсс аадасааадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасдбєасс деЕдЕддЕсад сдеЕссЕСасс деЕсссдсасс аддасєддсЕ дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса деЕдєасассс єЄдсссссаєс ссудчаєдад 1080 сєдассаада ассаддеса сссдассєдс седдссааад дсеЕсссаєсс садсдасаєс 1140 чссаєдчадс доадачадсаа Єдддсадссу дачаасаасеє асаадассас дссЕССсСсєд 1200 седдасеєссу асуддасеєссеЕє сеЕсСссеєсвас адсаадсєса ссдєсддасаа дадсадаєа 1260 садсаддудда асдеЕсЕеєсеЕс аєдссссуєд абдсаєдадуд сесбдсасаа ссасграсасу 1320 садаададсс ЕсЕСССЕДдДЕСсС єссдудудбааа 1350 «2105 261 «2115 214 бо «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 1283 РЗ29СІАТА чІ9дб1і легкий ланцюг «4005 261 65 АБр І1е Сіп Меє ТПг о біп бек Рго бБег ТіПг їеч бБег Аїа бек Уа1 СЩ1У 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 5о0 ів) бо зек біу бек біу Тпг бій Рре ТПг Гпейп ТПг І1е Бек 5Бег Гей біп Рго 65 70 75 80

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Суб біп біп Тук Нів бБег Тугк Рго біп 85 90 95

ТПЕ Ррпе бі1у біп біу ТБ пу Уаі сіш Іїе Гу5 Агку Тс Уаі Аза Аза 100 105 110

Рго Бек Маі Роре Іїе Робе Рго Рго бек Авр сії сбіп Геч Гу5 бек б1у 115 120 125

ТПг Аїа бек Уаії Уаї Суб Пец Гей Абзп Ап Рре Туг Рго Агу біч Аїа 130 135 140 пув Маі1і Сбіп Тер Пув УМа1і Авр Авп Аїа їеч Сіп бег Сіу Авп бег біп 145 150 155 160 біч бек Уаі ТП сій сбіп Авр бек Куб Авр бег ТПг Тукг бек Геч бБег 165 170 175 ек ТПЕ Геї ТіПг Ге бек Гуз Аза Авр Тук січ пуб Нів пуб МУМаї Туг 180 185 190

Аа Сув сії Ма1ї ТП Ні біп біу Пец бек бек Рго Уа1і ТПг Пув5 б5ег 195 200 205

Рпе Абп Агуд сіу біч Сув 210 «2105 262 «2115 450 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 1283 РЗ29СІАТА Ідс1і важкий ланцюг «4005 262 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо сіп б1іу Агуд Ма1 Трг І1їе ТПг АТїа Авр Пув бБег ТіПг бек ТіПг Аїа Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд Бек бій Робе Аку Рбе Туг Аза Авр Рпе А5зр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140

Теч біу Сув їеч Ма1ї Пув Авр Туг Рре Рго бі Рго Уа1і ТПг Уаї 5Зег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220 60 Пув ТЕ Нів Тпг о Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго СсСіш Аїа Аза с1у С1Уу 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 65 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд

290 295 108)

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув сбіу біп Рго Акуд бід Рго біп Уа1ї Туг 340 345 350

ТПЕ Геї Ркго Рго бек Агуд Авр бі Геч Тс Ппуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365

Та Сув Геч Уаі1і ПЦув біу Рре Туг Рго бБег Авр І1е Аїа Уаї Січ Тгр 370 375 380 біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Тук бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 435 440 445 с1і1у Гуз 450 «2105 263 «2115 639 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 25657 РЗ29СІАТА ч1Ідб1і легкий ланцюг «4005 263

Есудєссдадс Єдасссадда ссссдсЕЧдеЕУд сєссдсддссЕ єдддасадчас адссадчаєс бо асаєдссаад дадасадссс садаадесає сСаєдсаадссї ддсассадса даадссадда 120 саддсссссд бассєдеЕсає стаєддсааа аасаассуддсес ссссадуддає сссадассда 180

Есссссудудсес ссадсеєсаду ааасасадсс Єссеєсудасса Єсассддддс Єсаддсуддаа 240 чаєчадчсєд ассассассу ЄаасеєсссеЕс дасададсусу чсасчдсдаче аєсссоуддсода 300 чачассаадс ЄдчассуєЄєссЕ аддссаассс ааддсєдссс ссадсуєдас ссЕдсессесс 360 сссадсадсуд аддаассдса ддссаасаа дссассссдд ЄсЕдссеєдає садсдассес 420

Басссаддсу ссуєдассує ддссєдчдчаа дссдасадса дссссуєдаа ддссддасЧесд 480 чадассасса сссссадсаа дсададсаас аасаадсасуд ссдссадсад сеЕассеЕдадс 540 сеЕдасссссд адсадсддаа дадссасадд Єсссбасадсс дссаддедас ссасдадддс 60 адсассудєду адаааассудє ддсссссасс дадсдсадс 639 «2105 264 «2115 1344 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 25607 РЗ29СІАГА Ідс1і важкий ланцюг «4005 264 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 дсадасєссд Єдаадддссуд дессассасєс сСссададаса ассссаадаа сасдсєднтає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасєдедс дсдеєдасдас 300 ссдЕддссдс сдЕссдасвса седдддссаа ддаасссодда ЄсассдеЕсесс дадеЕдссадс 360 ассааддудсс сассудссссє ссссссдудса сссеєссссса ададсассєс Сдодадддсаса 420 чсоддссссду дссдсссддє саадчассас сСЕсСсссдаас суддєдасуде дЕСдЄсддаас 480

Есаддсдссс Єдассадсудд сдедсасасс Сссссуддсеєд Єссвбасадес сссаддасесс 540

Бассссссса дсадсуєдудє дассусєдссс сссадсадсе Єдддсассса дасссасаєс 60

ЕдсаасуєЄда аєсасаадсс садсаасасс аадчдсдуддаса адааадссда дсссаааєссе ббо

Едеєдасаааа сеєсасасасу сссассуєбудс ссадсасссуд аадсєдсаду дадассдєса 720 дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 780 60 асаєдсдєдда ЄддЕддасді дадссасудаа дассссдадд Єсаадеєсаа ссддсас9аєд 840 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 900

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 960 аадсдсаадуд Сссссаасаа адсссссудс дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддсдсас ассссдсссс саєсссудда Єдадсеєдасс 1080 65 аадаассадуд Єсадсссдас седссЕддеЕс аааддсеЕссс аєсссадсда сассдсесоаєд 1140 чачсдчдуачЧача дсаасудудса дссудачаас аасбасаада ссасудссєсс сдєдсеєддас 1200 бссудасуддасеє сссесеЕсссе ссрасадсаад сеєсассуєду асаададсад деЕддсадсад 1260 чачдаасуєсє ссссаєдсеєс сдедаєдсає даддсєссдс асаассасса сасдсадаад 1320 адссеєсессс сдеЕсесссудда бааа 1344 «2105 265 «2115 213 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 2557 РЗ29СІАТА чІдб1і легкий ланцюг «4005 265

Зек Бек біш Геї Тс біп АбБр Рго Аїа Уа! бек Уаі Аїа Іечзч с1у сіп 1 5 10 15

ТЕ Маії Аку І1ї1е ТБг Сув біп біу Авр Бек Геї Агу бек Туг Туг Аза 20 25 Зо ек Тер Тук біп біп Гуз Рго біу біп Аїа Рго Уаі Геч МУаї І1е Туг 35 40 45 біу Ппув Авп Авп Агу Рго бек біу І1е Рго Авр Акуд Рре бег біу бег 5о0 ів) бо

Бек Бек біу АБп ТПг Аза бек їецп ТПг Іїе ТПг сіу Аїа сіп Аза січ 65 70 75 80

АвБр січ Аза АБр Тугк Тук Суб АБп бег Гей Авр Агуд Акуд сбіу Меє Тгр 85 90 95

Уаї Рре біу біу біу ТПг Ппув Геч Тбг УМаї Іеч Сіу біп Рго Пув5 Аза 100 105 110

А1Та Рго бек Уаі Тйг Гей Ропе Рго Рго бег бек бій біп Ге сіп Аїа 115 120 125

АБп опув Аїа Тип Тез Ма1! Сув їеч І1їе бег Авр Рпе Туг Рго С1у А1а 130 135 140

Уаї ТЕ Уаії Аза Тер пуб Аза Абвр бБег бек Рго Уа! Туз Аза сіу Уаї1! 145 150 155 160 біч ТБЕ ТЕ Тбг Рго Бек Ппув біп бек АБп АБп Гуз Туг Аїа Аза бБег

Зо 165 170 175

Зек Тук Геч бек Геї ТіПг Рго біц біп Тер ПувБ Бек Нібв Агу бек Туг 180 185 190 зек Сув біп Маії ТБг Ні біц сіу бек ТпПг Уаі1і січ Ггу5 ТБг Уаї Аїа 195 200 205

Рго Тпг Січ Сув бег 210 «2105 266 «2115 448 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 2557 РЗ29СІАТА ч1І9дб1 важкий ланцюг «4005 266 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 бек Аїа І1е бек біу бек Сіу біу бек ТЬг Туг Туг А1їа АБр Бег Уаї 5о0 ів) бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Агуд АвБр АБр о Рго Тер Рго Рго Роре Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

Теч Уаі ТЕ Уа1! бек Бек Аїа бек ТП Гуз біу Рго бек Уаі Рпре Рго 115 120 125 60 Теч Атїа Рго бБег бег Кув бБег ТрПг бек Сіу сСіу Трг Аза Аза еп С1У 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 65 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190

Ззек Геч сіу ТПг біп ТБ Тук Іїе Суб Авп Уаі АвБп Нів пуб Рго 5ег

195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 сій УМаї Пцув Рпе Авп Тгр Туг Маї Авр Сіу Ма1 Сі Уаї Нів Авп Аї1а 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 108)

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сіп Уа1ї Тугє ТіПг Іеч 340 345 350

Рго Рго бек Агуд Авр бій Теч ТПг Ппуз Авп о біп Уаї бек Геч ТБПг Сув 355 360 365

Теч Уаі Ппув сіу Рпе Туг Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаі біц Тер січ бБег 370 375 380

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Робе Теч Тук бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Печ Нів Авп Нівз Тук ТПг біп Ппувз бБег ІГеч бег Течп бег Рго біУу Пув 435 440 445 «2105 267 «2115 642 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 1105 РЗ29СІАТА ч1І9дб1і легкий ланцюг «4005 267 часаєссадча Сдасссадсс ЄсссСЕСсСсасс сЕДдЕСЕДДсає ссдсаддада ссуєдеЕсасс бо ассасеЕєдсс деЕдссадеєса дадеаєстадеЕ адсЕддеЕєдд сссддсбаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчасєсвєу саассваєса ссдссааса сЕсааєссує асссеєсадас дЕсСєд4дссад 300 часассааа Ссдачаєсаа дсусасудеЕд дссдсассає ссдссессає сессссддсса 360

ЄЕсЕЧдаєдадс адеЕєдаааєс Єддааседсс ССЕДССЧЕДЕ десеєдсеєдаа Єаасесстає 420 сссадададд ссааадсаса деддааддсд даєсаасдсесс сссааєсддадауд баасеєсссад 480 чачадсудсса сачдадсадда садсааддас адсасссаса дссссадсадд сасссеєдасу 540 сЕдадсааад садассасда дааасасааа десЕссасдссс дсдаадссас ссаєсадддс 60 сеЕдадсеЕсдс ссдЕсасааа дадссєсаас адддчадчдаде дЕ 642 «2105 268 «2115 1347 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 1105 РЗ29СІАГЦА ІдСі важкий ланцюг «4005 268 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 60 дсасадааде Сссадддсад ддЕсассасє аседсадаса аасссасудад сасадсстас 240 асудчадссда дсадссєдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассудєдс дадчаєссасе 300 сЕдаєссасуд деЕбасссєсда срассддддс саадддасса ссудеЕдассує сессеєсадсе 360 адсассаадуд дсссаєсудЕ ссєсСссссвд дсассссссеє ссаададсас сЕСЕєдоддоадес 420 асадсуддссс СЄдддсЕдссЕ ддєсааддас СасеЕсссссу аассудеЕЧвчас доасдссЧчедаУ 480 65 аасссаддсд сссЕдассад сддсудєдсас ассЕссссудд сбдЕсСсСсаса деЕссссадда 540 сЕСвассссс єсадсадсуде ддаєдассдбд сссессадса дсеЕєсдддсас ссадасстас 60 асссдсаасу СЄдаассасаа дсссадсаас ассаадудєдуч асаачааадс Сдадсссааа ббо

ЕєЕсЕсдсдаса ааасссасас асудсссассу Єдсссадсас ссдаадссдс адддддЧдасс 720

ЕсадеЕсеЕссс Сссєсссссс аааасссаа дасасссєса Єдчасєсєсссу дассссєдад 780

ЧчсЕсасаєдсу СЧдУЧаєдУасдчда суєдадссас даачассссд аддссаадеЕс саассдудавєас 840 чсдчдасчддсу СЄдчаддсдса бЄаасуссаа асааадссус дуададчадса деасаасадс 900 асусбассуєд СдудЕсадсує ссЕСассуєс сеЕдсассаду асєддсєЧдаа СЄддсаадчад 960 басаадедса аддессссаа сааадссссс ддсдссссса ЕЄсдадаааас саєссссааа 1020 чдссаааддудс адссссуада ассасадєд Сасасссвєдс ссссаєсссу дчаєдадсід 1080 ассаадаасс аддесадссеЕ дасседссвд дЕсаааддсс сссаєсссад сдасаєсдсес 1140 чседчвадеЕдчу ачачсааєду дсадссуда аасаассаса адассасусс Єсссуєдсес 1200 часеєЕссудасу дчссссЕссеЕ ссеЕСвасадс аадсеєсассу Сддасаадад саддеддсад 1260 садддадаасу ЕСЕЄСЄСаєУ сЕССдЄдає саєсєдаддссс єдсасаасса сбасасдсад 1320 аададссеєсс сссеЕдеЕсСЕсСс дддеааа 1347 «2105 269 «2115 214 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 1105 РЗ29СІАГА чІ9дсб1 легкий ланцюг «4005 269

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше 35 40 45

ТУуг АБр Аза бег бег ГПеч бій бек біу Маії Рго 5ег Агкуд Ропе бек б1У 50 55 бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 7о 75 8о0

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Суб біп біп Гей Абзп бБег Туг Рго біп

Зо 85 90 95

ТПЕ Ррпе бі1у біп біу ТБ пу Уаі сіш Іїе Гу5 Агку Тс Уаі Аза Аза 100 105 110

Рго Бек Маі Роре Іїе Робе Рго Рго бек Авр сії сбіп Геч Гу5 бек б1у 115 120 125

Тис Азта бег Уаі1і Уаї Суб Гечш Тїеч Авп Авп Ріре Туг Рго Акуд Січ А1а 130 135 140

Туз Уаі біп Тер пуб Уа1і АБр АБп Аза Тез біп бек біу Ап бек сіп 145 150 155 160 біч бек Уаі ТП сій сбіп Авр бек Куб Авр бег ТПг Тукг бек Геч бБег 165 170 175 ек ТПЕ Геї ТіПг Ге бек Гуз Аза Авр Тук січ пуб Нів пуб МУМаї Туг 180 185 190

Аа Сув сії Ма1ї ТП Ні біп біу Пец бек бек Рго Уа1і ТПг Пув5 б5ег 195 200 205

Рпе Авп Акуд С1у біч Сув 210 «2105 270 «2115 449 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 1105 РЗ29СІАГА ч1І9дСсб1 важкий ланцюг «4005 270 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45 60 сіу б1у І1е І1їе Рго Іїе Рбе сіу ТБ Аза Ап Туг Аїа біп пув Ре 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 65 85 90 95

Аза Акуд Бек ТПг Тез І1ї1е Тук біу Тук Рре Авр Туг Тгр сб1у біп б1Уу 100 105 110

ТПг Тс Маї ТБг Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сбіу Ркго бек Уаї Ре

115 120 125

Рго Геч Аїа Ркго бек бек Гув бек ТПг бек сіу сіу ТПг Аза Аї1а Іеч 130 135 140 біу Сув Печ Уаі! Ппув Авр Тугк Роре Рго біцп Рго Уа! Трг Уа1ї бек Тгр 145 150 155 160

АБп бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Ніб ТпПг Рре Рго Аїа Уаї1ї Іеч 165 170 175 біп бек бек біу Пес Туг Бек Геч бек бек Уа! Уаі Трг Уаі1ї Рго 5Бег 180 185 190 бек бек Те Сіу Тпг сСіп ТБ Туг І1е Сув Авп Ма1і Авп Нівз Кув Рего 195 200 205 век Авп ТПг Ппуб5 Маі Авр о Гув Ппув Уаї сій Рго Ппув Бек Суб АБвр Туз 210 215 220

ТПЕ Нів ТПг Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сії Аїа Аза с1у б1у Рго 225 230 235 240

Зек Уа1ї Рре Геї Робе Рго Рго Пу5 Рго Пув Авр ТПг Геч Меє І1е 5ег 245 250 255

Агуд Тпкг Рго бій Маї Тс Сувз Уаії Уаії Уаї Авр Уаії Бек Нібв січ Ар 260 265 270

Рго біц Уа1і цЦув Рбе Авп Тгр Туг Ма1і Авр Сіу Ма1 січ Уа1ї Нів Авп 275 280 285

Аа пуб ТПг Ппув Рго Аку бі бі біп Туг Абзп бБег ТПг Туг Агуду Уаї 290 295 108)

Уаї бек УМаї Іїеч ТБг Уаї Ге Нів сіп АБр Тгр ІГеч АБп біу Ппу5з сіц 305 310 315 320

Тук Ппув Сув Гуз Уаії бек АвБп пуб Аза Геч сіу Аїа Рго Іїе біц Був 325 330 335

ТПг І1ї1е бек Гуз Аза пу5 сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уаї Тує Тр 340 345 350

Пес Рго Рго бек Агу АБр бій Гей ТПг Гуз Авп біп Уаі! бег Геч ТПг 355 360 365

Сув Теч Уаі Ппув сіу Рбе Туг Рго бек АБр Іїе Аїа Уаі сій Тер сій 370 375 380 век Авп біу біп Рго біц АБп АбБп Тук пуб ТПг Тс Рго Рго Уаї Іеч 385 390 395 400

Авр Бек Авр сіу бек Рре Робе Те Тук бек ПпувБ Геч ТПг УМаї АБр Гуз 405 410 415 ек Акуд Тер біп біп біу АБп Уаі Рре бек СубвБ Бек Уа1і Меє Нів січ 420 425 430

А1їа Геч Нів АБп Нів Туг ТПг біп Ппув бек Пец бек Гей бБег Рго сб1УуУ 435 440 445

Тув «2105 271 «2115 642 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 9811 РЗ29СІАТА чІ9дб1і легкий ланцюг «4005 271 часаєссадча Сдасссадсс ЄсссСЕСсСсасс сЕДдЕСЕДДсає ссдсаддада ссуєдеЕсасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 чачааадссс сеЕаадссссє даєсстаєдає дссеєссадсє єдчаааадсуда ддсєсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчавЕвєссдд саасссаєса ссбдссаасад десаасеЕссс асссудсадас дДдЕЕєддссад 300 часассааа Ссдачаєсаа дсусасудеЕд дссдсассає ссдссессає сессссддсса 360

ЕсєЧасчадс адсєдааасєс єдчдааседсес ЄссусєдесдеЕ дсессдсесєдаа Саасеєсстає 420 сссадададд ссааадсаса деддааддсд даєсаасдсесс сссааєсддадауд баасеєсссад 480 чачадсудсса сачдадсадда садсааддас адсасссаса дссссадсадд сасссеєдасу 540 60 сЕдадсааад садассасуда дааасасааа дЕСсССасудссеЕ дсдаадеєсас ссаєсаддддс 60 сеЕдадсеЕсдс ссдЕсасааа дадссєсаас адддчадчдаде дЕ 642 «2105 272 «2115» 1350 «2125 ДНК 65 «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК 9811 РЗ29СІАТА ч19дб1 важкий ланцюг «4005 272 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асддадссда дсадссєдад ассєдаддас ассдссуєдаєс ассассдеЕдс дадассеЕєсе 300 чЧчаеєдссвасс суддудєвсассє сдассассуду додссаадудда ссассудєдас суаєсєссеса 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 часасадсуд сссЕдЧдучссдд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдаассуде дасудЧЕеЕдесУ 480

Едчдаасеєсад дсдссссдас садсуддсуєд сасасссссс суддсеєдеЕссо асадесссьса 540 чддассстасеЕ сссеЕсадсад сдеЕддедасс дедсссЕсСса дсадссбдучд сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдааєса саадсссадс аасассааууд Єддасаадаа адсєдадсесс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссдЕсадеЕсе ЕсссссЕссс сссаааассс ааддасассс Єсаєдаєсєссс ссддассссе 780 чаччдаєсасаєсє дсдєдУЧасЧдУчЕ дчасуєдадс сасдаадасс ссдаддеєсаа дЕсСаасеєда 840 басуєддасуд дсдєЕддадді дсаєааєдсс аадасааадс сдсудддадда дсадсасаас 900 адсасуєасс дчЕДдЕдЧдссадд судєсСсссасс дЕСССдсасс адчасєсдудсс дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса деЕдєасассс єЄдсссссаєс ссудчаєдад 1080 сєдассаада ассаддеса сссдассєдс седдссааад дсеЕсссаєсс садсдасаєс 1140 дссдасєддадЕ дддададсаа Єдддсадссуд дадаасаасс асаадассас дсессеЕсссдаєдд 1200 седдасессуд асддсЕєссьє сеЕсссеЕсвас адсаадсесса ссудбддасаа дадсаддачєдЧу 1260 садсаддудда асдеЕсЕеєсеЕс аєдссссуєд абдсаєдадуд сесбдсасаа ссасграсасу 1320 садаададсс ЕсЕСССЕДдДЕСсС єссдудудбааа 1350 «2105 273 «2115 214 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 9811 РЗ29СІАТА чІ9дСб1 легкий ланцюг

Зо «4005 273

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

АБр Акуд Уа1і Тс І1е Тс Суз Агу Аза бек біп бек Іїе бБег бег Тгр 20 25 Зо їПеч Аїа Тер Тук біп сбіп Ппуз Рго біу Пув Аїа Ркго Пув Іеч їеч І1е 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 50 55 бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 7о 75 8о0

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Суб біп біп Уаі А5зп бБег Тугк Рго біп 85 90 935

ТПЕ Ррпе бі1у біп біу ТБ пу Уаі сіш Іїе Гу5 Агку Тс Уаі Аза Аза 100 105 110

Рго бек Маі1і Рбе Іїе Рре Рго Рго бБег Авр Січ біп Теч їув бек СШ1У 115 120 125

ТПг Аїа бек Уаії Уаї Суб Пец Гей Абзп Ап Рре Туг Рго Агу біч Аїа 130 135 140

Туз Уаі біп Тер пуб Уа1і АБр АБп Аза Тез біп бек біу Ап бек сіп 145 150 155 160 біч бек Уаі ТП сій сбіп Авр бек Куб Авр бег ТПг Тукг бек Геч бБег 165 170 175 ек ТПЕ Геї ТіПг Ге бек Гуз Аза Авр Тук січ пуб Нів пуб МУМаї Туг 180 185 190

Аза Сув сі Уаї ТПг Нів Сіп С1у Гей бек бек Рго Уа1ї Тис Пув бег 195 200 205

Рпе Абп Агуд сіу біч Сув 210 «2105 274 (516) «2115 450 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 9811 РЗ29СІАТА чІ9дСсб1 важкий ланцюг 65 «4005 Щ 274 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг

20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Агуд бег бек б1у Аїа Тукє Рго біу Тує Рбе Авр Туг Тгр С1у сіп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Пес біп бек бек біу Пе Туг бек Гей бег бег Уаі! Уа1ї! Трг Уаї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255 бек Агуд Тпг Рго біц Маї Тип Сув Ма1ї Уа1ї Уаї1ї Авр Уаї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 108)

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335

Пув Тис І1їе бБег Ппув Аїа ПГув сіу біп Рго Агд Сі Рго Сбіп Уаї Туг 340 345 350

ТПЕ Геї Ркго Рго бек Агуд Авр бі Геч Тс Ппуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365

ТПЕ Сув Геч Маї Гуз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уаї біч Тгр 370 375 380 біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Тук бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Пув бек Агуд Тер Сіп Сбіп СбС1іу Авп Уаі1ї Рре бег Сув бек Ма1 Меє Нів 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 435 440 445 сіу Гуз 450 «2105 275 «2115 639 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність бо «220» «223» ДНК 2062 РЗ29СІАТА ч1Ідб1і легкий ланцюг «4005 Щ 275 часаєссада Сдасссадсс єссаєссасс сЕДдЕСЕєдсає ссдсаддада ссуєдеЕсасс бо ассассєдсс дЕдссадеєса чадчсасвсадс адсеєдаеЕсдау ссєддсаєса дсадааасса 120 65 чЧададааадссс ссаадсеєссс даєссаєдає дссЕСсСсадсс єддааадеєдд ддЕсссаєса 180 сдсЕссадсуд дсадеддаєс сдддасадаа ЕсСсассссса ссаєсадсад сеЕєдсадссєе 240 чаєчасєсвєу саассваєса ссдссааса садсасссує асвсаєасуєс сдудссадддс 300 ассааадссу ачаєсаадсу Єасуддсддсс дсассасссу ЄсеЕссассвєс сссдссаєсе 360 чаєчадсадс СЄдчаааєсєду аассудссссс чдчЕсСЧсдсдсес єдссдаасаа сЕЄССсСаєссс 420 ачачадудсса аадсєасадсу чаадчдсдудчасє аасудсссеєсс ааєсудддсбаа сеЕСссаддад 480 адедеЕсаса адсадчдаса сааддасадс ассбасадсс Есадсадсас ссєдасусєд 540 адсааадсад ассасуачаа асасааадеєс Сасудсссдсуд аадссассса Єсадддсесєд 60 адсєЕсдсссу Ссасааадад сеЕєЄсаасада ддададеЕде 639 «2105 276 «2115» 1350 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК 2062 РЗ29СІАТА ч19дб1і важкий ланцюг «4005 276 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асдчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдЕ асвсассдсдс дачаєссеєвас 300

Бассдудадаас сЕсСасссусє сдасвассуу додссаадудда ссассуєдас судсссссадс 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 ддсасадсуддд сссеЕдддссд ссеЕддЕсаад дастасеЕєсс ссдаассудЕ дасоддеєдеЕс 480

Едчдаасеєсад дсдссссдас садсуддсуєд сасасссссс суддсеєдеЕссо асадесссьса 540 ччасеЕсвтасс сссеЕСсадсад суєдудєдасс дЕдсссссса дсадссєдаду сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдааєса саадсссадс аасассааууд Єддасаадаа адсєдадсесс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссуєЄсадеЕсс ЕссссеЕсссс сссаааассс ааддасассс СсаєдаєсеЕс ссуддассссяе 780 чаччдаєсасаєсє дсдєдУЧасЧдУчЕ дчасуєдадс сасдаадасс ссдаддеєсаа дЕсСаасеєда 840

Басєдчдасу дсудєдчвадає дсасааєдсс аадасааадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасуєасс дчЕДдЕдЧдссадд судєсСсссасс дЕСССдсасс адчасєсдудсс дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааад ддсадссссуд адаассасад дсдЕасассс Єдсссссаєс ссдддаєдад 1080 сєдассаада ассаддеса сссдассєдс седдссааад дсеЕсссаєсс садсдасаєс 1140 чссаєдчадс доадачадсаа Єдддсадссу дачаасаасеє асаадассас дссЕССсСсєд 1200 седдасессуд асддсЕєссьє сеЕсссеЕсвас адсаадсесса ссудбддасаа дадсаддачєдЧу 1260 садсаддудда асдеЕсЕеєсеЕс аєдссссуєд абдсаєдадуд сесбдсасаа ссасграсасу 1320 садаададсс ЕЄсЕсссєдЕс сссдуддбааа 1350 «2105 277 «2115 213 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «223» 2062 РЗ29СІАТА ч1І9дб1і легкий ланцюг «4005 Щ 277

АБр Іїе сбіп Меє ТП о біп бек Рго бек ТПг Гей бБег Аїа бек Уаі б1Уу 1 5 10 15

Авр Агуд УМаї Таг І1е Трг Сув Агу Аза бег Сіп бек І1їе бег бекг Тгр 20 25 Зо

Теч Аїа Тер Тук біп сіп Пув Рго біу Гуз Аза Рго Пу5з Геч Геч Ше 35 40 45

Тук АБр Аза бек бек Ге бій бек сіу Уа1і Ркго бек Агу Ропе бесг с01УуУ 50 55 бо

Бек сіу Бек біу ТПг біч Рре Трг Гец ТПг Іїе бБег бек Іеч біп Рго 65 7о 75 8о0

АвБр Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Суб біп біп сбіп Нібв бБег Тугє Тук Тс 85 90 935

Рпе сіу Сіп С1у Тпг Ппув Маі1ї бі І1е пув Агуд Тпг Уаї Аза Аза Рго 100 105 110

Зек Уа1і Рре І1їе Роре Рго Рго бег Авр бій біп Геч Ппув бек б1іу ТЕбг 115 120 125

Аа Бек Уа1і МУаї Суб ІГеч Теч АБбБп Абп Рпе Туг Рго Агу біп Аїа Гуз 60 130 135 140

Уаї біп Тер Гуз Уаі Авр АвБп Аза Геї сСіп бек біу АБп бек біп сіц 145 150 155 160

Зек Уаі1і Тпг сії біп Авр бек губ Авр бек ТПг Туг бБег Геч бек б5ег 165 170 175 65 Та їеч Трг Тез бек Гуз АТїа Авр Туг бій пуб Нів Був Уаї Туг А1а 180 185 190

Сув біч Уаії Тпг Нів сіп сіу Ге бек бек Ргко Уа! ТК пуб бек Ріе 195 200 205

АБп Агуд сіу січ Сув «2105 278 «2115 450 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» 2062 РЗ29СІАТА ч1І9дб1 важкий ланцюг «4005 278 сіп Уаі1ї Сіп теп Уаї Сіп бек сі1у Аїа Січ Ма1 Ппув Пув Рго сС1іу бЗег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє бій Іей бег бек ГПеп Агу бек біш АвБр ТБг Аза Уаї Тугк Тук Сув 85 90 95

Аза Агуд бБег Туг Тук Тер біч бек Тук Рго Рпе Авр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер Авп бег Сіу Аїа тес ТрПг бек біу Маї Нів ТіПс Рре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Маі Рпе Гей Рре Рго Рго Пувз Рго Пуз АБр ТПг Гей Меє Ії1е 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 300

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 сій Тук цЦув Сув Ппув Маі1ії бБег Авп Туз Аза Іеч Сіу Аїа Рго І1е Січ 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув сбіу біп Рго Акуд бід Рго біп Уа1ї Туг 340 345 350

ТПЕ Геї Ркго Рго бек Агуд Авр бі Геч Тс Ппуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365

ТПЕ Сув Геч Маї Гуз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уаї біч Тгр 370 375 З8о біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400 60 Пес Авр бек Авр біу Бек Рібе Рібе Гей Туг бек Гув Теч ТПг Уаі1ї! Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 65 435 440 445 сіу Гуз 450 «2105 279

«2115 421 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» тпма4-188 01 / пиа4-188 02 Ес з виступом «4005 279

Уаї біп Авп бек Суб Авр Авп Суб біп Рго біу ТБ Рбе Суб Агкуду ГПув 1 5 10 15

Тук АБп о Рко УМаії Сув пув бек Сув Рго Рго бБег ТПг Ріре бек бек Іе 20 25 Зо біу біу біп Рго Авп Суб АБп о І1е Суб Агку Уа! Сув Аза сіу Тук Роіе 35 40 45

Акуд Рпе Ппу5 Пув Роре Суб бек бек ТПг Ніб А5п Аза січ Суб5 біч Сув 5о0 ів) бо

Ії1е січ с1у Рре Нів Сув Тез Сі1іу Рго Сіп Сув ТПг Агуд Сув Січ Був 65 70 75 80

Авр о Сув Агкуд Рго біу біп бічЧ Те ТБг пуб сбіп сіу Сув Пув АБвр Сув 85 90 95

Сув Рпе біу ТПг Рпе Абзп Ар о сіп Гуз Агу біу І1е Суб Агуд Рго Тер 100 105 110

ТПЕ АБп Суб бек Теч Авр сіу ПувБ Бек Уаі Геч УМаі АБп біу ТрПкгЕ Був 115 120 125 біч Агуд Авр о Уа1! Уа1ї Суб сіу Рго бек Рго Аза Ар Гей бек Рго с1у 130 135 140

А1їа Бек бек Уаі1ї ТіПг Рго Рго Аїа Рго Аїа Агу бі Рго Сіу Нів бег 145 150 155 160

Рго біп Уаі АБр біп біп Теч Тук Рпе сіп сіу сіу Бек Рго Пув 5ег 165 170 175

Аза Авр Пубє ТП Ніб ТБ Сув Рго Рго Суб Рго Аза Рго січ Іеч Іеч

Зо 180 185 190 біу біу Ркго бек Уа1і Рбе Геї Робе Рго Рго Гу5 Рго Пуб Авр ТпПг Гей 195 200 205

Меє І1їе бек Агу ТБПг Ркго біц Уа1і Тбг Суб Маї Уаїії Уаї АБр Уаі1ї 5ег 210 215 220

Нів біц Авр Рго Січ Ма1 Ппув Рре Авп Тер Тує УМаі1і Авр сі1у Уа1 Ссіц 225 230 235 240

Уаї Нібв АБп Аза пу5 ТПг пуб Рго Акуд бій біз біп Тук АБп бек Тр 245 250 255

Тук Аку Маі Уаї бек Уаі Гей ТпПг Уаї Гечп Ніб біп АБр Тгр Іеч Авп 260 265 270 сбіу пув біЧ Тук Ппув Сув Ппув Ма1ії бек АБп Гуз Аза Гей Рго Азїа Рго 275 280 285

Іїе сії Ппув ТПг І1їе бек Гуз Аїа Ппу5 сіу біп Рго Агкуд бій Рго біп 290 295 300

Уа1ї Тук Трг Ппеп Рго Рго Сувз Агу АБр бій Гей ТПг Гув Авп біп Уаї 305 310 315 320 зек Геч Тер Суб ІГеч УМаї пув біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1їе Аїа Уаї 325 330 335 біч Тер біц бек Авп сіу біп Рго бій АБп АБп Туг Муз ТПг Тпг Рего 340 345 350

Рго Уаі Геї АБр бек Авр біу бек Рпе Рпе Гей Туг Бек Пув Іеч Тс 355 360 365

Уаї АБр Гуз бек Агу Тер біп сбіп сбі1іу АБп Уаі! Рібе бек Субв бек Уаї1! 370 375 З8о

Меє Нів бі Аїа Тез Нів Авп Нів Тугє ТПг біп Пув бек Іеч бег Іеєч 385 390 395 400

Бек Ркго сіу Ппув бек біу біу Гец Авп Авр Іїе Рбе сії Аза біп Гуз 405 410 415

Іїе сії Тгр Нів с1Ч (516) 420 «2105 280 «2115 424 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність 65 «220» «223» пча4-188 01 / тиа4-188 02 Ес з виступом «4005 280

Теч біп Авр Рго СувБ Бек АБп Суб Рго Аїа біу ТБПг Рре Суб Авр АБп

1 5 10 15

АБп Агуд Абп обіп І1е Сув бек Рго Суб Рго Рго Авп бБег Роре бег 5ег 20 25 Зо

Аза сіу сіу біп Аку ТБ Суб Авр Іїе Суб5 Акуд біп Суб КГув5 біу Уаї 35 40 45

Рпе Аку Тс Агу Гуз біч Суб бек бек ТПг Бек АБп Аїа бі Сув Авр 5о0 ів) бо

Сув ТПЕ Ркго сіу Рпе Нібв Сув Геч біу Аїа біу Суб бек Меє СувБ сій 65 70 75 80 сбіп Авр Сув Пув Сіп Сі1у біп сій Те ТПс Був Ппув С1іу Сув Пув Тис 85 90 95

Сув бек Гей сіу ТпПг Ррбе АБп АБр о біп АвБп о біу Тпг сіу Уа1і Суб Аг4дФ 100 105 110

Рго Тер ТПг АБп о Сув бек Те Авр біу Агуд бек Уа1і ІГеч Гу5 Тс б1Уу 115 120 125

ТПг Тс о біч Гуз Авр оУаї Уаї Суб сіу Рго Ркго Уаі Уаї бек Рре 5бег 130 135 140

Рго Бег ТПг ТПг І1е бек Уа! Трг Рго сбіц сіу сіу Рго сбіу біу Нів 145 150 155 160 бек Геч Сіп Уаі їеч Маії Авр Сі сСіп теп Тує Рре Сіп Сіу Ссі1у бег 165 170 175

Рго Пув Бек Аїа АБр Гу5 ТПг Ніб Тпг Суб Рго Рго Суб5 Рго Аза Рго 180 185 190 біч Геч Ге сіу сіу Рго Бек Маі Рбе Теч Робпе Рго Рго ПуБ Рго Пув 195 200 205

АБвБр ТПпг Геч Меє І1їе бек Агу ТПг Рго бі Уа1і ТПг Суб Уаї Уаї Уаї 210 215 220

Авр Уа1і Бек Нів сбіш АБр Рко біч Уаі пуб Рпре Абзп Тер Туг Уа1ї АБр 225 230 235 240 сіу Маі1 Сбіц Ма1 Нів АБп Аза Пув Тпг ПЦув Рго Акуд Січ Січ Сіп Туг 245 250 255

АБпобБек ТПг Туг Аку Уаії Уаї бек Уаі Гей ТпПг Уаії Гечш Нібв сіп Ар 260 265 270

Тер Геч АБп о біу Гуз біч Тук пуб Суб пуб Маії бек АБп Тїу5з Аїа Гец 275 280 285

Рго Аїа Рго Іїе бічп Гуз Тйг Іїе бек пуб Аїа Пу5 сіу біп Рго Агд 290 295 300 біч Рко біп Уа! Тук Тбг Геї Рго Рго Суз Агуд Авр бій Геч ТПг Гуз 305 310 315 320

АБп о біп Уаії бек Гей Тер Сув Іїеч Уаії Ппув біу Рпе Тук Рго 5ег АБр 325 330 335

Іїе Аїа Уаі1і сії Тер біч бек АвБп біу біп Рго бі АБп АБп Тук Гуз 340 345 350

ТПг ТБ Ркго Рго Уа! ІГец Авр бек Авр сіу Бек Роре Рібе Іеч Туг 5бег 355 360 365

Тув ТГеч ТП Уаі Авр Пув Бек Агу Тер біп біп біу Авзп Уа1і Роре 5бег 370 375 З8о

Сув бек Уаії Меє Нів сії Аїа Геч Ніб АвБп Нів Туг ТПг біп пуб бБег 385 390 395 400

Пес бек Ппейп бек Рго сіу Ппуз бек біу біу Те АвБп Азр Іїе Рпе бій 405 410 415

Аза сбіп пуб Іїе сії Тгр Нів січ 420 «2105 281 «2115 354 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» ПЧ 4-188 01 Ес з виступом (516) «4005 281

Теч біп Авр Рго СувБ Бек АБп Суб Рго Аїа біу ТБПг Рре Суб Авр АБп 1 5 10 15

АБп Агуд Абп обіп І1е Сув бек Рго Суб Рго Рго Авп бБег Роре бег 5ег 20 25 Зо 65 Аза сіу с1у Сіп Агуд Тс Сув Авр о тІ1е Сув Акуд біп Суб Ппув С1іу МУаї 35 40 45

Рпе Аку Тс Агу Гуз біч Суб бек бек ТПг Бек АБп Аїа бі Сув Авр 5о0 ів) бо

Сув ТПЕ Ркго сіу Рпе Нібв Сув Геч біу Аїа біу Суб бек Меє СувБ сій 65 70 75 80 біп Авр Суб пуб біп сіу біп біч Теч ТБ Ппуз пуб с1іу Сув Пув Уаї 85 90 95

АБр бій біп Гей Туг Рпе біп біу біу бек Рго Пуз Бек Аїа АБвр Гуз 100 105 110

ТПЕ Ні ТПг Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго сії ІГеч Іечп Сіу б1іу Ркго 115 120 125

Зек Уа1ї Рре Геї Робе Рго Рго Пу5 Рго Пув Авр ТПг Геч Меє І1е 5ег 130 135 140

Агуд Тпкг Рго бій Маї Тс Сувз Уаії Уаії Уаї Авр Уаії Бек Нібв січ Ар 145 150 155 160

Рго біц Маї Ппув Роре АБп Тгр Туг Уаі Авр сіу Уаі1і сії Маї Ніб5 АБп 165 170 175

Аза Ппув Трпг Пув Рго Агд Сі Січ біп Туг Авп бег Тпг Туг Агу Уаї 180 185 190

Уаї бек УМаї Іїеч ТБг Уаї Ге Нів сіп АБр Тгр ІГеч АБп біу Ппу5з сіц 195 200 205

Тук Ппув Сув Гуз Уаії бек АвБп пуб Аза Геї Рго Аїа Рго Іїе біц Був 210 215 220

ТПг І1ї1е бек Гуз Аза пу5 сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уаї Тує Тр 225 230 235 240

Теч Рго Рго Суб Агуд Авр січ Геї ТП Гуз АБп о біп Уаії бек Геч Тгр 245 250 255

Сув їеч УМаї Ппув Ссіу Рпе Туг Рго бек Авр Іїе Аїа Уа1ї Січ Тер Січ 260 265 270 век Авп біу біп Рго біц АБп АбБп Тук пуб ТПг Тс Рго Рго Уаї Іеч 275 280 285

Авр Бек Авр сіу бек Рре Робе Те Тук бек ПпувБ Геч ТПг УМаї АБр Гуз 290 295 300 ек Акуд Тер біп біп біу АБп Уаі Рре бек СубвБ Бек Уа1і Меє Нів січ 305 310 315 320

Аза Ггеч Ні АБп о Нів Тук Тйг біп пуб бек Геч бБег Геч бек Рго б1Уу 325 330 335

Пув бек бі1у сіу їеш АБп Ар І1е Рбе Сі Аїа Сіп Пуз Іїе січ Тгр 340 345 350

Нів віч «2105 282 «2115 94 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Мишачий 4-18В домен Р1 (М-кінець) «4005 282

Уаї біп Авп бек Суб Авр Авп Суб біп Рго біу ТБ Рбе Суб Агкуду ГПув 1 5 10 15

Тук АБп о Рко УМаії Сув пув бек Сув Рго Рго бБег ТПг Ріре бек бек Іе 20 25 Зо сіу біу біп Рго Авп Сув Авп І1е Сув Агуд Ма1і Сув Аїа сіу Туг Ре 35 40 45

Акуд Рпе Ппу5 Пув Роре Суб бек бек ТПг Ніб А5п Аза січ Суб5 біч Сув 5о0 ів) бо

Іїе сбіш сіу Рре Ні Сувз Теч біу Рго біп Суб ТПг Акуд Сув біч Гуз 65 7о 75 80

Авр о Сув Акуд Рго сбіу біп біч Теч ТБ пу біп с1іу Сув Гуз 85 90 «2105 283 «2115 68 бо «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Людський 4-1В8В домен 02 (С-кінець) «4005 283 65 Авр о Сув Сув Рпе бі1іу Трпг Рре Авп Авр Сіп ув Агуд сС1у І1е Сув Агд 1 5 10 15

Рго Тер Тс АБп о Сув бек Те Авр біу пуб Бек Уаі ІГезч Уаі АБп сб1Уу 20 25 Зо збо

ТЕ пув біз Агуд АБр оУаї Уаї Суб сіу Рго Бек Рго Аїа АБр Іецч 5бег 35 40 45

Рго сіу Аїа бек бек Уа! Тібг Рго Рго Аіїа Рго Аіїа Аку бій Рго б1Уу 50 55 бо

Нів Бек Рго сіп 65 «2105 284 «2115 95 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Людський 4-1В8В домен 01 (М-кінець) «4005 284

Теч біп Авр Рго СувБ Бек АБп Суб Рго Аїа біу ТБПг Рре Суб Авр АБп 1 5 10 15

АБп Агуд Абп обіп І1е Сув бек Рго Суб Рго Рго Авп бБег Роре бег 5ег

Зо

Аза сіу сіу біп Аку ТБ Суб Авр Іїе Суб5 Акуд біп Суб КГув5 біу Уаї 20 Рпе Агу ТВПг Агуд Гув бій Сув бБег бек ТПг бек АБп Аїа бій Сув Авр бо

Сув ТПЕ Ркго сіу Рпе Нібв Сув Геч біу Аїа біу Суб бек Меє СувБ сій 65 7о 75 8о0 біп Авр Суб пуб біп сіу біп біч Теч ТБ Ппуз пуб с1у Сув Гуз 25 85 90 935 «2105 285 «2115 70 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Мишачий 4-18В домен 02 (СсС-кінець) «4005 285

ТПг Сув бек ТІГеч біу ТП Рре Абп Авр біп АБп о біу ТБг біу Уаї Сув 1 5 10 15 35 Акуд Рго Тер ТВг АБп о Сув бек Течп Авр біу Агу бек УМаії Геч Ппуз ТЕГ 20 25 Зо біу ТЕ ТЕ бі пуб Авр оУаії Уаї Сув біу Рго Рго Уаі Уаії бек Роіе 35 40 45

Бек Ркго Бек ТПг ТПг І1їе бек Уаі Трг Рго сіц сіу сі1іу Рго біу б1Уу 40 50 55 бо

Нів бек Іеч біп Уаї Гей 65 7о «2105 286 «2115 2076 45 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (1283) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 286 50 саддЕдсаає єддсдсадеЕс Єддддсєдад дЕдаадаадс сЕдддЕсСсЕс ддєдаадаеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассусєудс дачаєссдаа 300 55 СЕССУЧЕЕСсССсСЕ асдсєдассс сдассассуддда ддссааддда ссассудєдас судєсєссеса 360 чЧсЕадсасса адддсссасс суєдЕСсСссс сЕддсссссЕє ссадсаадеЕс Сасссссуддас 420 часасадссу сЕСЕдДУ9дУдЧСсССсСЯЯ ссЕСУдЄЧдаад дЧасвтассєсс ссдадссєдс дасадеЕдесс 480

ЕдчаасеЕсвд дсудссссдас асссудсуєд сасасссеєсс садсеЕдеєдсс дсадсссяесс 540

ЧчассЕдвасс сссЕдЕССССсС судєСсСудЄдаса дчЕдсссссса дсЕСЕСєДду сасссадасс 60 60 басасєсєдса асдєедаасса саадсссссс аасассаадд Єддасаадаа ддеЕддаассс ббо аадсссвєдсу асаадассса сассеЕдессс сссЕдЕСССд ссссеЕдаадс ЄдсеЕддсодес 720 ссрадсудєдЕ ЕСсСсСЕДдДЕЕсСсс сссааадссс ааддасассс Єдаєдаєсес ссддассссс 780 чаадеєдассс дсуєдУасЧУЧє дчасдсдссс сасчаддасс ссдаадеєдаа дчЕсСВасвєда 840

Басєдчдасу дсудєдчдаадеЕ дсасааєдсс аадассаадс ссадачаддда асадсасаас 900 65 Ессасстасс дддЕддеЕдеЕс сдЕдсєдасс дсдссдсасс аддаєсдудсє даасуддсааа 960 чачсасааЧдс дсааддсдсс саасааддсс сЕдддадссс ссаєсудаааа дассаєсесс 1020 ааддссаадуд дссадссеєсу сдадссєсад дЕдвєасассс єдсссссса сачачаєдад 1080 сєдассаада ассаддедеЕс ссєдассвєдЕ сеЕсдсдааад дсеЕсссассс сЕССЯдаваєс 1140 чссєдчаас доадачадсаа суддссадссс дачдаасаасеє асаадассас ссссссеєдсд 1200 седдасессуд асддсєсавє сеЕсссвЕдвас єссаадсєда садсддасаа дЕСссуддЕдЧУ 1260 садсадддса асдЕдеЕеєсеЕс сеЕдссссуєд абдсасудадд сссбдсасаа ссасрасасс 1320 садаадессс єдЕСССсСЕДдЕСсС ссссуудддда ддсоддадчає седдсдчдада суддаєссаце 1380 чЧчасддсудчає седдддадсуд єддчаєсєдад деЕдсадссдс Єддааєссодда дададчасед 1440 чЧЕдсадссад дсудаєсеєсе даддседЕсс Едсудсєдсес ссуддсеєеєсас сеЕссессадес 1500 сасдссаєда деЕєдддЕдсу ссаддсассс ддааааддас ЄддааєдддеЕ дЕсадссаєс 1550 бддадассесссу дсдадсадса сбасудссдає адсуєдаадд дссуддеєсас саєсєссс9д 1620 часаасадса адаасасесе дсассєдсад аєдаасессс бдсудсудсєда адасассдсе 1680

ЧдЕдвєаєсасе дсдссаадудд седдсЕддус аасеєєсчаєс ассддддсесса ддадаасссєс 1740 чЧчЕдчасєдеЕсе сдадсудсесєс єдЕддссудсЕ сссеЕсССсСусуДЄ сСсаєсьссссс ассеЕсссдасєс 1800 чадсадсєда адсссддсас ЕдссЕСЕдЕС дЕДЕДдДсссдсС Єдаасаасьс срасссеісд 1860 чаадссаачу Сдсадедчаа адєдчаєаас дссссдсадеЕ ссуддсаасес ссаддааєсс 1920 чсЧдассдадс адчдасєссаа ддасадсасс СбасеЕсссєЧда дсадсасссє дасссеЕдесс 1980 ааддссдасеЕ асдадаадса сааддєедсас дссЕдсдаад Єдасссасса дддсссдЕсс 2040 адссссуєда ссаадессеє саассудддудс дадедс 2076 «2105 287 «2115 692 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (1283) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 287 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45 сіу б1у І1е І1їе Рго Іїе Рбе сіу ТБ Аза Ап Туг Аїа біп пув Ре 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд Бек бій Робе Аку Рбе Туг Аза Авр Рпе А5зр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Те Аїа Рго бег бек Пув бег ТіПг бек біу сС1у Тйг Аза А1а 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АвБп ТПйг пув Уаі Авр о Ппув Ппув УМаї бі Рго Ппувз бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285 60 АБп Аїа Ппуз ТВг Ппув Рго Акуд бій бій біп Тук Авп бек ТПг Туг Агд 290 295 108)

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 65 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув сбіу біп Рго Акуд бід Рго біп Уа1ї Туг 340 345 350

ТПЕ Геї Ркго Рго бек Агуд Авр бі Геч Тс Ппуб5 АБп обіп Уа! бек Гец

355 360 365

ТПЕ Сув Геч Маї Гуз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уаї біч Тгр 370 375 380 біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Тук бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 бі Аїа Пешп Ні АвБп Ніз Туг ТБПг біп Гпубв бБег ТІечй бег ТІеч бег Рго 435 440 445

Сіу бі1у сбіу сіу сіу Бек сіу сіу біу біу бек біу сіу сіу сіу бБег 450 455 460

Сіу біу сбіу сіу Бек біцп УМаї сіп Іечп Іеч Січ бек сіу сіу сіу Гей 465 470 475 480

Уаї біп Рго біу біу бек Гечп Агкуд Геї бек Су5 Аїа Аза бек сіу Ріе 485 490 495

ТПЕ Ріре бек бек Ні Аза Меє бек Тер Уаі Аку біп Аза Рго біу Пув 500 505 510 с1у Те біц Тер Уаї бек Аза І1е Тгр А1їа бБег СсС1у Січ Сіп Туг Туг 515 520 525

Аза Авр Бек Уа1і Губ5 біу Аку Ропе Трг Іїе бек Агуд АБр АБп бек КТув 530 535 540

АвБп оТпг Геч Туг Геч біп Месє АБбБп бег Гей Агуд Аіїа сій АБр ТПгс Аза 545 550 555 560

Уаї Тук Тук Сув Аїа пуб сіу Тер Геї сі1у АБп Роре Авр Туг Тер 0Ш1У 565 570 575 біп біу Тр Гей Уа! Тбг Уаї бек бек Аїа бег Уаі Аза Аза Рго 5Бег 580 585 590

Уаї Рпе І1їе Рре Рго Рго бБег Авр Січ Сіп їечп Пув бек біу Тіг А1а 595 6о0 605

Ззек Уа1ї УМаї Суб5 ІГеч Теч АБп Абп Рпе Туг Рго Аку сії Аза Гуз Уаї 610 615 620 біп Тер пуб Уаі Авр Аб5п Аїа Геч біп бек біу АвБп бек біп січ бБег 625 630 635 640

Уаї ТЕ біч біп Абвр о бек пуб Авр о бБег ТПг Туг бек ІТеч бег бек ТІПг 645 650 655

Теч ТПг Гей бек пуб Аза АБр Тук біч Гу5з Нів Ппувз Уа1! Тук Аза Сув 6ббо 665 670 сій Уаї1ї Тис Нів СсСіп С1іу їеч бег бек Рго Ма1 Тпг Пув бБег Рре Авп 675 680 685

Агуд сб1іу січ Сув 690 «2105 288 «2115 2070 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (2567) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 288 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 чсачасєссу СЄдаадддссу дсЕссассаєс Сссададаса ассссаадаа сасдсєдесає 240 сЕдсадаєда асадсссдад адссдаддас асуддссудсбає аєсасєдсдс дсуєдасддас 300 ссдЕддссдс сдЕссдасвса седдддссаа ддаасссодда ЄсассдеЕсесс дадеЕдссадс 360 ассааддудсс сасссусуєе ссссссудсес ссссссадса адессассєс сдадасуддсаса 420 чЧчсессуссссудуд дссдссссуєЄє даадчассас сЕСсссдадс ссдсдасадес дЕССсддаас 480

Есєддсудссс Єдасаєссуд судєдсасасс СЕсСссадссу єЄдссдсадеЕс сЕССУДСсССЄдД 540 60 бассссссдеЕ ссЕСсСдЕСсСдЄ дасадедссс Сссадсессс єЄдддсассса дасссасаєс 60

ЕдсаасуєЄда ассасаадсс ссссаасасс ааддсдчдаса адааддєдда асссаадесс ббо

Едсдасаада сссасасссу ЄсссссЕсСуЧЄ сссдсссссд аадсєдссдуа сддессссадс 720

ЧЕдсЕсСссудс сСссссссааа дсссааддас асссєдаєда ЕєсЕССсССсСуддас ссссаадесд 780 асссдсуєдуа СЄдуаєдчаєдеЕ дсесссасдад дасссєдаач Єдаадсєсаа СЕДдДсасуєд 840 65 часуддсдсдда аадеєдсасаа Єдссаадасс аадсссадад аддаасадса саассссасс 900

Бассчддуаєду СудсссусудсЕ дассуєдсвед сассадчдасє дудссдаасуд сааачадвас 960 аадсдсаачду Сдсссаасаа ддссссдудуда дсссссаєсу аааадцассає сеЕссааддес 1020 аадддссадс сЕСЧдсдадсс Есаддсдсас ассссдсссс ссадсадчача Єдадсеєдасс 1080 аадаассаду Єдесссєдас сеЕдеЕсЕсдбєд аааддсеЕссс ассссєссда Сассудссоаєд 1140 чаасудудчача дсаасудсса дсссдадаас аасбасаада ссассссссс Єдсдсеєдвдас 1200

Єссдасуддсе сасеєсесссе дсасессаад сєдасадсдч асаадссссуд деЕддсадсад 1260 часаасудєдЕ сЄссссеЕдсесС сдбдаєдсас даддссссдс асаассасса сасссадаад 1320

Єссседсссс сдссссссуда доддаддсодда дчдаєссддсдд даддсудаєс соддеЕддесддас 1380 ччаєсєдчада дсуддєддаєс єдаддедсад сєдсєдчаає сєдаддададаа ассддеЕдсад 1440 ссаддсуддає сеЕСЕєдадсєЕ дЕССЕСДСсСУЧСсСЕ дссЕссудсеЕ Есассееєсес садссасдсс 1500 аєчадесдудд бдсдссаддс асссудаааа дчасєдчаає дадеЕдссадс саєссдуадес 1550 бссудсудадс адсасрасус сдаєадсдєд аадддссуде ссассаєсеєс ссуддадаєаас 1620 адсаадааса сеседстассеЕ дсадаєдаас ЕсссЕдсудсу сєдаадасас сдсєЕдеЕднає 1680 басєдсудсса адддсЕддсЕ дддсаасеєс даєсаседаду дссадддаас ссесудедасе 1740

ЧдЕСсСЕСЧДадсу СЕСссСсдсддс судсЕсссеЕсСс дЕДЕЕСаєсює ссссассссс сдасдадсад 1800 сєдаадессуд дсасеєдссеЕс сєдсесудєдЕдс седссдааса асеЕсссассс Есдддаадсс 1860 ааддєдсадс дчааадсуда бЄаасусссвєд садеЕссудса асеЕсссадда аєссуєдасс 1920 чЧадсаддасеЕ ссааддасад сасссасссс ссдадсадса сссєдасссе дсссааддес 1980 чассасчача адсасаадудє дсасусссдс даадсдассс ассадддссе дЕссадссесс 2040 чЧдЕдассаадс сссссаассу дддсчдадедс 2070 «2105 289 «2115 690 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (256567) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 289 сі Уаї Сіп їечп Те Січ бег сіу Сі1у С1у їеч Уаї Сіп Рго сС1у С1Уу 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї

Зо 35 40 45 зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї 50 55 бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 7о 75 8о0

Теч біп Меє Авп бег їеч Агуд Аїа Січ Авр Трг Атїа Уа1ї Туг Туг Сув 85 90 935

Аза Агуд АвБр АБр о Рго Тер Рго Рго Роре Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

Теч Уаі ТЕ Уа1! бек Бек Аїа бек ТП Гуз біу Рго бек Уаі Рпре Рго 115 120 125

Теч Аза Рго бек бек Пув Бек ТПг бек біу біу ТбПг Аза Аза Геч Сс1Уу 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160 бек біу Аїа їеч ТіПг бег Сіу Маі Нів Трг Ррпе Рго Аїа Уаї Ієч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190

Ззек Геч сіу ТПг біп ТБ Тук Іїе Суб Авп Уаі АвБп Нів пуб Рго 5ег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уа1 Рре Гей Рпе Рго Рго Пуз Рго Пуз АБр ТПг Гей Меє І1їе б5ег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 біч Уаії пуб Рпе Абзп Тер Туг Маі АБр біу Уаі! біч Уаї Ніб5 Ап Аза (516) 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 108)

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320 65 пув Сув ПЦув Ма1 бек Авп Гув Аїа Іез С1у Аїа Рго Іїе Січ Пув Тис 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сіп Уа1ї Тугє ТіПг Іеч 340 345 350

Рго Рго Бек Агу АБр біч Теч ТБПг пуб Авп о біп Уа1і! Бек Геч ТіПг Сув 355 360 365

Теч Уаі Ппув сіу Рпе Туг Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаі біц Тер січ бБег 370 375 380

АБп о сбіу біп Рго бій Авп Авп Туг Пув ТПг ТБ Рго Рго Уаї Гей Авр 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Робе Теч Тук бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Теч Ніб Авп Нів Тугк ТПг бсіп пуб бек ТГеч бек Гей бег Рго сіу с1у 435 440 445

Сіу бі1у сіу бек сіу сіу сіу біу бек біу біу сбіу сіу бек сіу с1Уу 450 455 460 сіу б1іу бек біц Уаї Сіп Іїеч їечп Сі бек сіу с1у С1у Іеч МУаї сіп 465 470 475 480

Рго сіу сіу бек Іечп Агу Ге бег СувБ Аїа Аза бек біу Рое ТПг Ре 485 490 495 бЗек Бек Нів Аїа Меє бек Ткр Уаі Аку сіп Аза Рго сіу Ппув б1Уу Іеч 500 505 510 біч Тер Уаі бек Аїа Іїе Тер Аїа бек біу бічЧ біп Туг Туг Аїа Авр 515 520 525

Зек Уаі1ї Ппув сбіу Аку Робе ТБбг І1їе бек Агуд Ар А5п о бБег Пуб5 АБп Тс 530 535 540

Теч Тує Пец біп Меє Авп бег Іїечп Акуд Аїа бі Авр Тпг Азїа Уаї Туг 545 550 555 560

Тук Сув Аїа Гуз біу Тер Пец сіу АбБп Ррбе АБр Туг Тгсгр б1іу біп 01УуУ 565 570 575

ТВгЕ Ген Уаії! Трг Уаії бег бек Азїа бек Уаі Аїа Аза Рго бек Уаї Ріре

Зо 580 585 590

І1їе Рпе Рго Рго бек АБр біц біп Гецп пуб Бек сіу ТПг Аза бек Уаї 595 6о0 605

Уаї Сув ТГеч Гец Абп Авп Рпе Туг Рго Аку бі Аза Гуз Уаї сбіп Тгр 610 615 620 пув Маі1і Авр Авп Аїа Тїеч Сіп бег біу Авп бБег Сіп Січ бБег Уаї Тис 625 630 635 640 біч біп Авр бек пуб Авр о бБег ТПг Тук бек ТГеч бек бек ТПпг Геч Тс 645 650 655

Теч бек Ппув Аза Авр Тук січ Ппуб5 Нів Гуз Уаії Тук Аїа Суб січ МУаї 6ббо 665 670

ТПЕ Нів біп біу Тецп бек бек Рго Уа1і ТПг Ппуб5 бек Ропе АБп Агдудщ с1у 675 680 685 січ Сув 690 «2105 290 «2115 2073 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (1105) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 290 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 дсасадааде Сссадддсад ддЕсассасє аседсадаса аасссасудад сасадсстас 240 асудчадссда дсадссєдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассудєдс дадчаєссасе 300 сЕдаєссасуд деЕбасссєсда срассддддс саадддасса ссудеЕдассує сессеєсадсе 360 адсассаадд дсссаєссує дчсЕсссЕСЕУ дссссЕссса дсаадсессас сЕСЕєдсЯдеС 420 асадссусЕСсС СЄдддсЕдссЕ сдєЧдааддас СасеЕсссссу адссЕдеєдас адсудсєссвда 480 60 аасєсЕддсд сссЕдасаєс сддсудєдсас ассЕссссад ссдЕдседса дсЕсссссдадае 540 сЕдвассссс ЕдЕССЄСсСсСЯдс сдєдасадесд сссессадсс сеЕссдддсас ссадасстас 60 асссдсаасу Сдаассасаа дсссЕССсСаас ассаадудєдуа асаачаадудс ддаасссаад ббо

Есссудсудаса адасссасас ссдссссссс Єудсссвєдссс седаадссдс Єддасддессєе 720 адсуєдЕСсс сСдсєсссссос ааадсссаа дасасссєда Єдаєсссссу дасссссддаа 780 65 ЧЕдассєдсд ЄддЕддЕдда ЄдЕдссссас даддассссд аадєдаадесеє сааєсддадєас 840 чсдчдасчддсу Сдчдаадсудса саасудссаа ассаадссса дачадчдааса дсасаасесс 900 асссассуду СдудєдЕСсСУУЄ дсеЕдассуєд сеЕдсассаду асєддсєдаа сддсааадЧдад 960

Басаадєедса аддеЕдеЕссаа сааддсссвєд ддадссссса ЕЄсдаааадас саєсссссаад 1020 чссаадддсс адссссусуда дссссадаєд басасссвєдс ссссвадсад ачаєдадсод 1080 ассаадаасс аддеЕдеЕсссе дассеЕдеЕсеЕс дЕдаааддсс Сссассссеєс сдаєаєсдес 1140 чсдчдааєдучау адчадсаасуд ссадсссудад аасаассаса адассасссс сссЕДдчеЕдсс 1200 часеЕссудасу дсєсаєссьє сседвасесе аадсєдаса сСддасаадес ссуддеддсад 1260 садддсаасу ЕДЕЄСЕССЕ сЕССдЄдаєсу сасдаддсесс єдсасаасса свбасасссад 1320 аадесссвдЕ ссседЕсЕСсСсС судадоададдс дчадчаєсьуд дсудчваддсду аєссуддаєдає 1380 часчдаєссд доадоадсоддеєдча аєсєдадаєд садсєдссдуа аассєддччду аддасеєдачед 1440 садссаддсуд даєсеЕСсєда дссдесессвєдс дссдсесссу дсеЕсвассьс сеЕссадссас 1500 чдссаєдадеє дддеЕдсудсса ддсасссудда аааддассдуч аасддчєдеЕс адссаєсвєд 1550 дссЕссудудсу адсадеасса судссдаєадс деЕдаадддсес ддєєсассає сеЕСЕСдддває 1620 аасадсаада асассссдсра ссеєдсадаєд аасеєссссдс дсудсєдаада Сассудсєдед 1680 басвассдсу ссаадддсбєд дсеЕдддсаас ЕєСсСЧдаєвсасоі даддссадду аасссесддед 1740 ассдесссда дсудссеЕсвЕдЕ ддссдсЕссс ЕссудЯЕДЕсса СсеЕссссасс сеЕССДасдад 1800 садсєдааде ссддсасєдс сЕСЕдЕСУЄУУТ Сдссєдсеєда асаасеєсва сссссудуадаа 1860 дссааддсдс адєддааадс ддаєаасудсес ссдсадессу дсаассссса ддаасссоаєд 1920 ассдадсадуд ассссаадда садсасссас сссссдадса дсасссеєдас ссєдсссаад 1980 чссдасвасу адаадсасаа дчудєдЕасудсес сЄдсдаадеєда сссассадд ссєдсссадс 2040 сссудебдасса адессЕссаа ссуддуддсчдад бас 2073 «2105 291 «2115 691 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (1105) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 291 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе бег Тгр Уаі Агуд Сіп Аїа Рго сіу Сіп С1у їеч Січ Тгр Меб

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 35 65 7о 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд Бек ТПг Тез І1ї1е Тук біу Тук Рре Авр Туг Тгр сб1у біп б1Уу 100 105 110 40 Та Тпг оМа1 Тс Уаї бБег бег Аза бек ТрПг Пув С1іу Рго бег Уа1 Рре 115 120 125

Рго Геч Аїа Ркго бек бек Гув бек ТПг бек сіу сіу ТПг Аза Аї1а Іеч 130 135 140 біу Сув Печ Уаі! Ппув Авр Тугк Роре Рго біцп Рго Уа! Трг Уа1ї бек Тгр 45 145 150 155 160

АБп бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Ніб ТпПг Рре Рго Аїа Уаї1ї Іеч 165 170 175 біп бек бек біу Пес Туг Бек Геч бек бек Уа! Уаі Трг Уаі1ї Рго 5Бег 180 185 190 50 бек бек Те Сіу Тпг сСіп ТБ Туг І1е Сув Авп Ма1і Авп Нівз Кув Рего 195 200 205 век Авп ТПг Ппуб5 Маі Авр о Гув Ппув Уаї сій Рго Ппув Бек Суб АБвр Туз 210 215 220

ТПЕ Нів ТПг Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сії Аїа Аза с1у б1у Рго 55 225 230 235 240

Зек Уа1ї Рре Геї Робе Рго Рго Пу5 Рго Пув Авр ТПг Геч Меє І1е 5ег 245 250 255

Агуд Тпкг Рго бій Маї Тс Сувз Уаії Уаії Уаї Авр Уаії Бек Нібв січ Ар 260 265 270 60 Рго біц Уа1і цЦув Рбе Авп Тгр Туг Ма1і Авр Сіу Ма1 січ Уа1ї Нів Авп 275 280 285

Аа пуб ТПг Ппув Рго Аку бі бі біп Туг Абзп бБег ТПг Туг Агуду Уаї 290 295 108)

Уаї бек УМаї Іїеч ТБг Уаї Ге Нів сіп АБр Тгр ІГеч АБп біу Ппу5з сіц 65 305 310 315 320

Тук Ппув Сув Гуз Уаії бек АвБп пуб Аза Геч сіу Аїа Рго Іїе біц Був 325 330 335

ТПг І1ї1е бек Гуз Аза пу5 сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уаї Тує Тр

340 345 350

Теч Рго Рго бек Агуд АвБр сії Геї ТП Гуз АБп о біп Уаї бек Геч ТПг 355 360 365

Сув Теч Уаі Ппув сіу Рбе Туг Рго бек АБр Іїе Аїа Уаі сій Тер сій 370 375 380 век Авп біу біп Рго біц АБп АбБп Тук пуб ТПг Тс Рго Рго Уаї Іеч 385 390 395 400

Авр Бек Авр сіу бек Рре Робе Те Тук бек ПпувБ Геч ТПг УМаї АБр Гуз 405 410 415 бек Агд Тер Сіп біп с1іу Авп Уа1! Рре бЗег Сув Бег Уаї Меє Нів січ 420 425 430

Аза Ггеч Ні АБп о Нів Тук Тйг біп пуб бек Геч бБег Геч бек Рго б1Уу 435 440 445

Сіу бі1у сіу сіу бек сіу сіу біу біу бек біу сбіу сіу сіу Бек сб1Уу 450 455 460

Сбіу біу сіу бек бі Уаї сіп ІГечш Іечп біч бек сіу сіу сіу Геч Уаї 465 470 475 480 біп Ркго біу сіу Бек Геї Агкуд Тез бек Су5з Аїа Аза бек сіу Рпе ТПг 485 490 495

Рпе бег бек Нів Азїа Мес бЗег Тгр Маі Акуд Сіп Аза Рго СсС1у Пув СЩ1У 500 505 510

Теч біч Тер Уаі! бек Аза Іїе Тгр Аїа бек біу біч біп Туг Тук Аза 515 520 525

Авр Бек Уа1і Ппув бі1у Аку Робе ТБПг І1їе бег Агуд Авр АБп бек ГУу5 АБПпП 530 535 540

ТПЕ Геч Тук Іеч біп Месб Абзп бег Гей Агуд Аза сії АБр Тс Аїа Уаї 545 550 555 560

Тук Тук СувБ Аїа їувз біу Тер Ге сіу АбБп Роре АБр Туг Тгр б1у сіп 565 570 575 сіу ТБ Пец Ма! Трг Уаї бБег бег Аза бек Ма1і Аїа Аза Рго бег Уаї 580 585 590

Рпе Іїе Рре Рго Рго бек АБр біц біп Гей ПпувБ Бек сіу ТПг Аза 5ег 595 6о0 605

Уаї Маї Сув Геч Гец Абп Авп Рпе Туг Рго Аку біп Аза Гуз Уаії сіп 610 615 620

Тер пуб Маі АБр АБп Аза Гец біп бек сіу АвБп Бек біп бі бек Уаї 625 630 635 640

ТПг біз біп Авр обек губ Авр о бек ТПг Туг бек Геч бек бек ТПг Гец 645 650 655

Та тез бег пув Аза Авр Туг Січ Пув Нів Ппув Ма1ї Туг Аїа Сув Сс1іц 6ббо 665 670

Уаї ТрЕ Ні біп біу Пец бек бек Рго УМа1і ТП Гу5з бек Ропе Ап Агд 675 680 685 сіу біч Сув 690 «2105 292 «2115 2076 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (9811) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 Щ292 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадссєдач асссудадччдас ассуссуєдеЕ ассассуєдс дачасєсеєєссе 300 чЧчаеєдссвасс суддудєвсассє сдассассуду додссаадудда ссассудєдас суаєсєссеса 360 чЧсЕадсасса адддсссасс суєдЕСсСссс сЕддсссссЕє ссадсаадеЕс Сасссссуддас 420 60 ддсасадссуд сесЕдддсєд ссеЕСУдЕдаад дасвтасеЕєсс ссдадссєдЕ дасадесдеЕсс 480

ЕдчаасеЕсвд дсудссссдас асссудсуєд сасасссеєсс садсеЕдеєдсс дсадсссяесс 540

ЧчассЕдвасс сссЕдЕССССсС судєСсСудЄдаса дчЕдсссссса дсЕСЕСєДду сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдаасса саадсссссс аасассаад Єддасаачаа дадасдчдаассс ббо аадсссвєдсу асаадассса сассеЕдессс сссЕдЕСССд ссссеЕдаадс ЄдсеЕддсодес 720 65 сстадсуєдеЕ ЕсссдЕСссс сссааадссс ааддасассс Сдаєдаєссс ссуддассссс 780 чаадеєдассс дсуєдУасЧУЧє дчасдсдссс сасчаддасс ссдаадеєдаа дчЕсСВасвєда 840

Басєдчдасу дсудєдчдаадеЕ дсасааєдсс аадассаадс ссадачаддда асадсасаас 900

Ессассвасс доадЕЧЧЄЧссС суєдссдасс деЕдссдсасс адчаєсуддссє даасуддсааа 960 чачсасааЧдс дсааддсдсс саасааддсс сЕдддадссс ссаєсудаааа дассаєсесс 1020 ааддссаадуд дссадссеєсу сдадссєсад дЕдвєасассс єдсссссса сачачаєдад 1080 сєдассаада ассаддедеЕс ссєдассвєдЕ сеЕсдсдааад дсеЕсссассс сЕССЯдаваєс 1140 чссєдчаас доадачадсаа суддссадссс дачдаасаасеє асаадассас ссссссеєдсд 1200 седдасеєссу асддсєсаєс сеЕсСссвєдвас єссаадсєда садсддасаа дЕСсСсуддеєад 1260 садсадддса асдЕдеЕеєсеЕс сеЕдссссуєд абдсасудадд сссбдсасаа ссасрасасс 1320 садаадессс єдЕСССсСЕДдЕСсС ссссуудддда ддсоддадчає седдсдчдада суддаєссаце 1380 часдадсудчає седдддадсуа Єдчдаєсєдад дЕдсадссдс сЄддааєссддча доададчасед 1440 чЧЕдсадссад дсудаєсеєсе даддседЕсс Едсудсєдсес ссуддсеєеєсас сеЕссессадес 1500 сасдссаєда дЕсдддсдсу ссаддсассс ддааааддас СЄддааєдддЕ дЕсадссаєс 1550 бддадассесссу дсдадсадса сбасудссдає адсуєдаадд дссуддеєсас саєсєссс9д 1620 часаасадса адаасасесе дсассєдсад аєдаасессс бдсудсудсєда адасассдсе 1680 чЧчЕдвєаєсасе дсудссаадудд сеЕддсЕддудс аасеєєсдаєс ассддадсса ддадаасссес 1740 чЧчЕдчасєдеЕсе сдадсудсесєс єдЕддссудсЕ сссеЕсССсСусуДЄ сСсаєсьссссс ассеЕсссдасєс 1800 чадсадсєда адсссддсас єдссЕСЕДдДЕС дЕДдЕДдДсссдс Єдаасаасес свгасссосоод 1860 чаадссаачу Сдсадедчаа адєдчаєаас дссссдсадеЕ ссуддсаасес ссаддааєсс 1920 чсЧдассдадс адчдасєссаа ддасадсасс СбасеЕсссєЧда дсадсасссє дасссеЕдесс 1980 ааддссдасс асадаадса сааддсдсас дссЕдеЕдаад Єдасссасса доддссЕдесс 2040 адссссуєда ссаадессеє саассудддудс дадедс 2076 «2105 293 «2115 692 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» (9811) УНСН1і-важкий ланцюг-(28Н1) УНСІ, «4005 293 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг

Зо 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе бо 35 сіп б1іу Агуд Ма1 Трг І1їе ТПг АТїа Авр Пув бБег ТіПг бек ТіПг Аїа Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Агуд Бек бек біу Аїа Тук Рго біу Тук Рпе Авр Туг Тгр б1у біп 40 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140 45 Теч біу Сув їеч Ма1ї Пув Авр Туг Рре Рго бі Рго Уа1і ТПг Уаї 5Зег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 50 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220 55 Пув ТЕ Нів Тпг о Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго СсСіш Аїа Аза с1у С1Уу 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ (516) 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 108) 65 Уаї Уаї Бек Маї Іїечш Тпг Ма1ї Ге Нів біп Авр Тгр їеч Ап сС1у Гуз 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув сбіу біп Рго Акуд бід Рго біп Уа1ї Туг 340 345 350

ТПЕ Геї Ркго Рго бек Агуд Авр бі Геч Тс Ппуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365

ТВ Сув ІГеч Уаії Ппув біу Рпе Тугк Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаї січ Тгр 370 375 380 біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Тук бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 435 440 445 сі1іу сі1у сС1у сіу сі1іу бек сі1іу сіу Сі1іу С1у бБег сС1у Сі1у сСі1у с1у бЗег 450 455 460

Сіу біу сбіу сіу Бек біцп УМаї сіп Іечп Іеч Січ бек сіу сіу сіу Гей 465 470 475 480

Уаї біп Рго біу біу бек Гечп Агкуд Геї бек Су5 Аїа Аза бек сіу Ріе 485 490 495

ТПЕ Ріре бек бек Ні Аза Меє бек Тер Уаі Аку біп Аза Рго біу Пув 500 505 510 біу Теч бій Тер Уаі Бек Аїа І1ї1е Тер Аїа бек біу біц біп Тугє Туг 515 520 525

А1Та АБр бек Уаії Ппув біу Акуд Рре ТПг Іїе бек Агу АБр АБп бБег Гуз 530 535 540

АвБп оТпг Геч Туг Геч біп Месє АБбБп бег Гей Агуд Аіїа сій АБр ТПгс Аза 545 550 555 560

Уаї Тук Тук Сув Аїа пуб сіу Тер Геї сі1у АБп Роре Авр Туг Тер 0Ш1У

Зо 565 570 575 біп біу Тр Гей Уа! Тбг Уаї бек бек Аїа бег Уаі Аза Аза Рго 5Бег 580 585 590

Уаї Ре Іїе Рбе Рго Рго бек Ар сії біп Теч Гуз бек сбіу ТПг Аза 595 6о0 605 зек Маії УМаї Сув Ген ІГечй Авзп Авзп Рпе Тугк Рго Агу бі Аїа Пуз Уаї 610 615 620 біп Тер пуб Уаі Авр Аб5п Аїа Геч біп бек біу АвБп бек біп січ бБег 625 630 635 640

Уаї ТЕ біч біп Абвр о бек пуб Авр о бБег ТПг Туг бек ІТеч бег бек ТІПг 645 650 655

Теч ТПг Гей бек пуб Аза АБр Тук біч Гу5з Нів Ппувз Уа1! Тук Аза Сув 6ббо 665 670 біч Уаії ТрЕ Нів сіп сіу Гечп бек бек Рго Уа! Тс пуб бек Роре АБп 675 680 685

Агуд с1у січ Сув 690 «2105 294 «2115» 1350 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (1283) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 294 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд ссеЕссуддадд сасаєєсадс адсбрасудсса ЄаадссдддЕ дсдасаддесес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассусєудс дачаєссдаа 300 гЕсСссусЕссс асуссудассє сдасвсассуу додссаадудда ссассудєдас суаєЄсєссеса 360 60 дсЕадсасса адддсесстад сдЕдсссссЕ ссддссссса дсадсаадад сасаадедда 420 ччдаасадссу сссЕддучссд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдадсссує дассуєдеЕсс 480

Едчаасеєсвд дсдссссдас аадсуддсуєд сасасасеєсс садссуєдсе дсададсадс 540

ЧчассЕдвасс сЕСєЧдадсад судєсуєЄдасс дЕдсссссса дсЕСЕСєДду сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдаасса саадсссадс аасассааад Єддасаачаа дадасдчдаассс ббо 65 аададсєдсд асаадассса сассєдеЕссс ссЕБдссссд ссссеєдаадс ЄдсЕддЕдас 720 ссСЕССЯДЕдДЕ ЕССЕДЕЕєСсСсс сссааадссс ааддасассс бЄдаєдаєсад ссддассссс 780 чаадеєдассс дсуєдасєдУає счасдсдссс сасчаддасс ссдаадеєдаа дчЕсСВасвда 840

Басєдчдасу дсудєдчдаадеЕ дсасааєдсс аадассаадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасуєасс дчЕДдЕдЧдссадд судєсСсссасс дЕСССдсасс адчасєсдудсс дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса дЕдєасассс єдсссссаєд ссдчаєдад 1080 сєдассаада ассаддеса сссдсддеЕдс сеЕддссааад дсеЕссбраєсс садсдасаєс 1140 дссдасєддадЕ дддададсаа Єдддсадссуд дадаасаасс асаадассас дсессеЕсссдаєдд 1200 седдасессуд асддсЕєссьє сеЕсссеЕсвас адсаадсесса ссудбддасаа дадсаддачєдЧу 1260 садсаддудда асдеЕсЕеєсеЕс аєдссссуєд абдсаєдадуд сесбдсасаа ссасграсасу 1320 садаададсс ЕсЕСССЕДдДЕСсС єссдудудбааа 1350 «2105 295 «2115 450 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (1283) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 295 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг

Зо 20 Аза І1їе бег Тгр Уаі Агуд Сіп Аїа Рго сіу Сіп С1у їеч Січ Тгр Меб 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 25 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд Бек бій Робе Аку Рбе Туг Аза Авр Рпе А5зр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 сіу Тис Тпс Ма1 Тс Уаї бБег бег Аза бек ТрПг Ппув Сіу Рго бег Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 180 185 190 бек бБег бек їеч біу Тпг біп Тпг Туг І1е Сув Авп Ма1ї Авп Нів ув 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго січш Уаї1ї пуб Рре Авп о Тгр Туг Маії Авр Сі1іу Ма1! Січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 108)

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув сбіу біп Рго Акуд бід Рго біп Уа1ї Туг 340 345 350 60 ТВЕ Ген Ркго Ркго Сув Агуд Авр бій Ге ТП Ппуз АБп о біп Уаї бег Іеч 355 360 365

Тер Суб Геч Маї Гуз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уаї біч Тгр 370 375 380 біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 65 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Тук бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні

420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 435 440 445 сіу Гуз 450 «2105 296 «2115 1344 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (2567) УМНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 296 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссаддчдаадуд доассддадеЕд ддЕСсСЕСсадсеЕ аєсадеддна дЕддсддсад сасасбассас 180 чсачасєссу СЄдаадддссу дсЕссассаєс Сссададаса ассссаадаа сасдсєдесає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасєдедс дсдеєдасдас 300 ссдЕддссдс сдЕссдасвса седдддссаа ддаасссодда ЄсассдеЕсесс дадеЕдссадс 360 ассаадддсес сеЕадсуєуєе ссссссудудсес сссадсадса ададсасаад Сддаддааса 420 дссдссссдоа дсЕдссЕддЕ сааддассас сСсссссдадс ссдЕдассує дЕССЄддаає 480

Есєддсудссс Єдасаадсудд судєдсасаса СЕсСссадссу єЄдссдсадча садсудссесд 540

Бассссссуда дсадсуєсуєЄє дассусєдсесс Єссадссссс єдададсассса дасссасаєс 60 бдсаасуєда ассасаадсс садсаасасс ааауєсуддаса адааддсдда асссаададс бо

Едсдасаада сссасасссу ЄсссссЕсСудс сссдсссссд аадсеЕдссу Єддсссесвсс 720

ЧЕДЕСсСссдЕ Сссссссааа дсссааддас ассссдаєда Єсадссддас ссссдаадесд 780 асссдсуєдуа СдудєЕСсСЧчаєдеЕ дсесссасдад дасссєдаач Єдаадсєсаа СЕДдДсасуєд 840 часуддсудєддаЩ аадедсасаа Єдссаадасс аадссудсуддд аддадсадста саасадсасд 900

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 960 аадсдсаадуд Сссссаасаа адсссссудс дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддеЕдсбас ассссдсссс сасбдссдудуда Єдадссдасс 1080 аадаассаду Ссадсссдеєд дЕдссЕддЕс аааддсеЕссс аєсссадсда саєсдссдаєд 1140 чачсдчдуачЧача дсаасудудса дссудачаас аасбасаада ссасудссєсс сдєдсеєддас 1200 бссудасуддасеє сссесеЕсссе ссрасадсаад сеєсассуєду асаададсад деЕддсадсад 1260 чачдаасуєсє ссссаєдсеєс сдедаєдсає даддсєссдс асаассасса сасдсадаад 1320 адссєсЕссс єдЕсЕссуду бааа 1344 «2105 297 «2115 448 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «2235» (25657) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 297 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15 век Геч Агуд Гей бег Сув Аза Аїа бек біу Рпе ТП Роре бек бБег Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї 50 55 бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 7о 75 8о0

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Агуд АБр о АБр о Рго Тер Рго Рго Рре Авзр Туг Тер біу біп с1у ТЕГ 100 105 110

Теч Уаі ТЕ Уа1! бек Бек Аїа бек ТП Гуз біу Рго бек Уаі Рпре Рго 115 120 125

Теч Аза Рго бек бек Пув Бек ТПг бек біу біу ТбПг Аза Аза Геч Сс1Уу 60 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 165 170 175 65 зек Бек біу Ген Туг бек ТІеч бег бек Уа1і Уаї ТПг Уаї Рго Бег 5ег 180 185 190

Ззек Геч сіу ТПг біп ТБ Тук Іїе Суб Авп Уаі АвБп Нів пуб Рго 5ег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уа1 Рре Гей Рпе Рго Рго Пуз Рго Пуз АБр ТПг Гей Меє І1їе б5ег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 біч Уаії пуб Рпе Абзп Тер Туг Маі АБр біу Уаі! біч Уаї Ніб5 Ап Аза 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 108)

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320 пув Сув ПЦув Ма1 бек Авп Гув Аїа Іез С1у Аїа Рго Іїе Січ Пув Тис 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сіп Уа1ї Тугє ТіПг Іеч 340 345 350

Рго Рго Сув Агу АБр біч Теч ТБПг пуб Авп о біп Уа1і! Бек Геч Тгр Сув 355 360 365

Теч Уаі Ппув сіу Рпе Туг Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаі біц Тер січ бБег 370 375 380

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 век Авр біу Бек Рпе Рпе Теч Туг бек Пув Ппечп ТПг Уаї АБр Пуз 5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Теч Ніб Ап Нів Тук ТПг біп пуб бек ТГеч бек Гей бек Рго сіу ГПув

Зо 435 440 445 «2105 298 «2115 1347 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (1105) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 298 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадссєдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассудєдс дадчаєссасе 300 сЕдаєссасуд деЕбасссєсда срассддддс саадддасса ссудеЕдассує сессеєсадсе 360 адсассаадуд дссссадсує дчсссссЕсвд дсссссадса дсаачадсас аадсуддчдадча 420 асадссдссс ЄдддсєдссЄ ддадєсааддас СасеЕсссссуд адсссудєдас судєдсссв9ду 480 ааєсссуддасуд сссєдасаа суддсудсЄдсас асаєсєссад ссудєдсєдса дадсадсуддес 540 сЕдЕассссс єдадсадсудс сдвєдассудбд сссессадсс сеЕсєбдддсас ссадасстас 60 асссдсаасу Сдаассасаа дсссадсаас ассааадєдд асаачаадудс ддаасссаад ббо адссдсдаса адасссасас ссдссссссс Єдсссвєдссс сЕдаадссудс, Єддаєдасссєе 720

ЕссусдЕсСсс сдЕєсссссс ааадсссаад дасасссрда Єдаєсадссуд дасссссдаа 780

ЧчеЕЧассєдсу СдуЧаєдУаєсча ЄдЕДдЕССсССсСас дадчдассссд аадсдаадеЕс сааєсдудавасєс 840 чсдчдасддсу Сдчдаадсуса саасуссаа ассаадссус дуададчадса деасаасадс 900 асусбассуєд СдудЕсадсує ссЕСассуєс сеЕдсассаду асєддсєЧдаа СЄддсаадчад 960

Басаадєсдса аддеЕсЕєссаа сааадсссєс ддсудссссса Єсдадаааас саєссссааа 1020 дссааадддс адссссдада ассасадуєд Сасасссвдс ссссаєдссуа дчаєдадсесд 1080 ассаадаасс аддесадссеЕ деЕддЕдссвд дЕсаааддсс сссаєсссад сдасаєсдес 1140 чседчвадеЕдчу ачачсааєду дсадссуда аасаассаса адассасусс Єсссуєдсес 1200 часеєЕссудасу дчссссЕссеЕ ссеЕСвасадс аадсеєсассу Сддасаадад саддеддсад 1260 саддддаасу ЕсЕЕєСсСЕСсСаєду сЕссудеЕдає саєдаддссс бдсасаасса сбасасдсад 1320 60 аададссьсе сссеЕдеЕсЕєсс ддоддесааа 1347 «2105 299 «2115 449 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність 65 «220» «2235» (1105) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 299 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег

1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0

Меє бій Іей бег бек ГПеп Агу бек біш АвБр ТБг Аза Уаї Тугк Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд Бек ТПг Тез І1ї1е Тук біу Тук Рре Авр Туг Тгр сб1у біп б1Уу 100 105 110

ТПг Тс Маї ТБг Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сбіу Ркго бек Уаї Ре 115 120 125

Рго Геч Аїа Ркго бек бек Гув бек ТПг бек сіу сіу ТПг Аза Аї1а Іеч 130 135 140 біу Сув Печ Уаі! Ппув Авр Тугк Роре Рго біцп Рго Уа! Трг Уа1ї бек Тгр 145 150 155 160

АБп о бБег сіу Аїа Іїеч ТрПг бЗек Сіу Ма1 Нів Тіг Рре Рго Аїа Уаї Іеч 165 170 175 біп бек бек біу Пес Туг Бек Геч бек бек Уа! Уаі Трг Уаі1ї Рго 5Бег 180 185 190

Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБ Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп о Нібв КТу5 Рго 195 200 205 век Авп ТПг Ппуб5 Маі Авр о Гув Ппув Уаї сій Рго Ппув Бек Суб АБвр Туз 210 215 220

ТПЕ Нів ТПг Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сії Аїа Аза с1у б1у Рго 225 230 235 240 зек Маії Ріпе Гей Робе Ркго Ркго Пув Рго Пув Авр ТПг Гей Меє І1е 5ег 245 250 255

Агуд Тпкг Рго бій Маї Тс Сувз Уаії Уаії Уаї Авр Уаії Бек Нібв січ Ар 260 265 270

Рго біц Маї Ппув Роре АБп Тгр Туг Уаі Авр сіу Уаі1і сії Маї Ніб5 АБп 275 280 285

Аа пуб ТПг Ппув Рго Аку бі бі біп Туг Абзп бБег ТПг Туг Агуду Уаї 290 295 108)

Уаї бек УМаї Іїеч ТБг Уаї Ге Нів сіп АБр Тгр ІГеч АБп біу Ппу5з сіц 305 310 315 320

Тук Ппув Сув Пув Уа1і! бек Авп Пуз Аїа Ге сі1у Азїа Рго Іїе біч Гув 325 330 335

ТПг І1ї1е бек Гуз Аза пу5 сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уаї Тує Тр 340 345 350

Теч Рго Рго Суб Агуд Авр січ Геї ТП Гуз АБп о біп Уаії бек Геч Тгр 355 360 365

Сув Теч Уаі Ппув сіу Рбе Туг Рго бек АБр Іїе Аїа Уаі сій Тер сій 370 375 380 век Авп біу біп Рго біц АБп АбБп Тук пуб ТПг Тс Рго Рго Уаї Іеч 385 390 395 400

АБвр Бег Авр біу бек Рпе Ріпе Іеч Туг бек Пув Пе ТПг УМаї АБвр Гуз 405 410 415 ек Акуд Тер біп біп біу АБп Уаі Рре бек СубвБ Бек Уа1і Меє Нів січ 420 425 430

Аза Ггеч Ні АБп о Нів Тук Тйг біп пуб бек Геч бБег Геч бек Рго б1Уу 435 440 445

Тув «2105 300 «2115 1350 бо «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (9811) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 300 65 саддЕдсаає єддсдсадеЕс Єддддсєдад дЕдаадаадс сЕдддЕсСсЕс ддєдаадаеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадссєдач асссудадччдас ассуссуєдеЕ ассассуєдс дачасєсеєєссе 300 чЧчаеєдссвасс суддудєвсассє сдассассуду додссаадудда ссассудєдас суаєсєссеса 360 чЧчсЕадсасса адддссстад судєдЕсСсссоі седудссссса дсадсаада сасаадсода 420 ччдаасадссу сссЕддучссд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдадсссує дассуєдеЕсс 480

Єддааєєссд дсдсссєдас аадсуддсуєЄд сасасаєеєсс садссдЕбдсЕ дсададсадс 540

ЧчассЕдвасс сЕСєЧдадсад судєсуєЄдасс дЕдсссссса дсЕСЕСєДду сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдаасса саадсссадс аасассааад Єддасаачаа дадасдчдаассс ббо аачадсєдсу асаадассса сассЕєдессс сссвєдссссд ссссеЕдаадс ЄдсеЕдадсдас 720 ссСЕССЯДЕдДЕ ЕССЕДЕЕєСсСсс сссааадссс ааддасассс бЄдаєдаєсад ссддассссс 780 чаадсдассеЕ дсдєддЕддЕ сдаєдеЕдссс сасдаддасс ссдаадеєдаа дсеєсааєвє9а 840

Басєдчдасу дсудєдчдаадеЕ дсасааєдсс аадассаадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасуєасс дчЕДдЕдЧдссадд судєсСсссасс дЕСССдсасс адчасєсдудсс дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса дЕдєасассс єдсссссаєд ссдчаєдад 1080 седассаада ассадудєса сссдсуддеЕдс седдссааад дсЕсссаєсс садсдасаєс 1140 чссаєдчадс доадачадсаа Єдддсадссу дачаасаасеє асаадассас дссЕССсСсєд 1200 седдасессуд асддсЕєссьє сеЕсссеЕсвас адсаадсесса ссудбддасаа дадсаддачєдЧу 1260 садсаддудда асдеЕсЕеєсеЕс аєдссссуєд абдсаєдадуд сесбдсасаа ссасграсасу 1320 садаададсс ЕсЕСССЕДдДЕСсС єссдудудбааа 1350 «2105 301 «2115 450 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» (9811) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 301 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг

Зо 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе бо 35 сіп б1іу Агуд Ма1 Трг І1їе ТПг АТїа Авр Пув бБег ТіПг бек ТіПг Аїа Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Агуд Бек бек біу Аїа Тук Рго біу Тук Рпе Авр Туг Тгр б1у біп 40 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140 45 Теч біу Сув їеч Ма1ї Пув Авр Туг Рре Рго бі Рго Уа1і ТПг Уаї 5Зег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 50 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220 55 Пув ТЕ Нів Тпг о Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго СсСіш Аїа Аза с1у С1Уу 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ (516) 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 108) 65 Уаї Уаї Бек Маї Іїечш Тпг Ма1ї Ге Нів біп Авр Тгр їеч Ап сС1у Гуз 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув сбіу біп Рго Акуд бід Рго біп Уа1ї Туг 340 345 350

ТПЕ Геч Ркго Рго Сув Агуд Авр бі Геч Тс Гпуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365

Тер Сув ІГеч Уаі пув біу Рпе Тугк Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаї січ Тгр 370 375 380 біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Тук бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 435 440 445 с1і1у Гуз 450 «2105 302 «2115 1338 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (8НО) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 302 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд ссеЕссуддадд сасаєєсадс адсбрасудсса ЄаадссдддЕ дсдасаддесес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

ЧччаеЕсоЧчасуча ассасєддудуд ссаадддасс ассуєдассу ЕЄсЕССсСЄСсадс Садсассаад 360 ддсссрадсуд ЄДдДЕЄсСссЕсСе ддсссстрадс адсаададса саадсддадд аасадссдсс 420 сЕдддсєдсс Еддссаадда стассєсссс дадсссудєда ссудеЕдеЕсстд даасєсвддс 480 чсессєдасаа дсддсудєдса сасаєсєсса дссуєЄдсєдс ададсадсуд ссдсасесе 540 сЕдадсадсд Есдбдассудс дсссессадс єсЕсСсдддса сссадассста саєсєдсаас 60 дЕдаассаса адсссадсаа сассааадєд дасаадаадд Сдуддаасссаа дадссдсдас бо аадасссаса ссЕдсСссссс ЄсдсссеЕдсес ссЕдаадссу седдеЕддсесс ЄсссуєдЕсс 720 сЕДдЕссСсссс сааадсссаа ддасасссод асбдаєсадсс ддасссссда адедассеідс 780

ЧчЕЧЧєдЧассу аєдеЕдеєссса саддасссс даадсдаадеЕ Єсааєсдуєа сдєсдддасадес 840 чсдчдаадсус асаасуссаа дассаадссу соддчадчдадс адсасаасад сассбассає 900 чЧчедЧдєсадсу СЄссеєсассуєЄє ссеЕдсассад дЧасєддсєЧда асддсаадчда деасаадедес 960 ааддссЕсса асааадссссї сддсудссссс ассдадаааа ссаєссссаа адссааадду 1020 садссссдад аассасаддс деасасссод сссссаєдсс доадаєдадсе дассаадаас 1080 саддеЕсадсс ЕдЕддЕдссЕ дадєсєсаааддс Єсссаєссса дсдасаєсдс сдєдчадеЧчу 1140 чачачсааєуд дадсадссуда даасаассас аадассасус сЕсссуєдсе ддассссдас 1200

ЧасЕСсСсСЕЕсЕ сссесрасад саадсесасс дЕддасаада дсаддсддса дсаддддаас 1260 дЕСЕССсСсСсСає дссссуєЄдає дсаєдаддсеЕ сеєдсасаасс ассасасуса даададссес 1320

Єссседесес сддадсааа 1338 «2105 303 «2115» 446 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (вно) УНСН1і-важкий ланцюг з виступом «4005 303 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45 60 сіу б1у І1е І1їе Рго Іїе Рбе сіу ТБ Аза Ап Туг Аїа біп пув Ре 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 65 85 90 935

Аза Акуд бі Тугк біу Тер Мес Ар Туг Тер сіу сбіп сі1іу Тбг Тс Уаї 100 105 110

ТПг Маї бек бек Аза бек ТПг пуб сіу Рго Бек Маі Рое Рго Іеч Аїа

115 120 125

Рго Бек Бек пуб бек ТПг бек біу біу ТПг Аза Аза Геч сіу Сув5 Іеч 130 135 140

Уаї ув Авр Тукє Рпе Рго бій Рго Уа1і ТіПг Уаї бек Тгр АБп бег Ш1Уу 145 150 155 160

Аа Геч ТПг бек біу Маії Нів ТБбг Рре Рго Аїа Уаії Геї сіп бек 5ег 165 170 175 біу Геч Тук бек Гецп бБег Бек УМаі УМаі! ТБг Уаі! Рго бек бек бек Гей 180 185 190 сіу Так біп Тс Тує І1е Суб Авп Уаі Авп Нів Ппув Рго бБег Авп Тис 195 200 205

Туз Маії Авр пуб пуб Уа1ї сій Рко Пув5 бек Сув АвБр Пуб5 ТПг Ні Тс 210 215 220

Сув Рго Рго Суб Рго Аза Рго сії Аза Аза Сбіу біу Ркго бек Уа1і Роіе 225 230 235 240

Теч Ріпе Рго Рго ПувБ Рго Пув АБр ТПг ІТечп Месє І1е бег Агу ТпПг Рго 245 250 255 біч Уаії ТрпЕ Суб Уа1і Уаї Маїії АБр Уаї бек Ніб біц Авр Рго січ Уаї 260 265 270

Пув Рпе Авп Тгр Туг УМаі1і Авр сіу Уаі Сіц Ма1ї Нів АБп Аїа ГПув Тис 275 280 285

Туз Рго Акд бій бій біп Тук АБп бек Тйг Туг Акуд Уа1і Уаі1і Бек Уаї 290 295 108)

Теч Тпг Уаії Гей Нів сіп АБр Тгр Іеч АБп біу Ппув бі Тук Пув Сув 305 310 315 320

Туз Уаії бек Авп пуб Аза Геї сіу Азїа Рго Іїе біц пуб ТПг Іе бБег 325 330 335

Туз Аїа Ппуз сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уа! Тугє Трг Гей Рго Рго 340 345 350

Сув Агу Авр бій Ге Тс Ппуз АБп обіп Уа! бек Геч Тер Су5 Геч Уаї 355 360 365

Туз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уа! бі Тер бій бек Ап с1Уу 370 375 380 біп Рго біц Авп Ап Туг Пув Тс ТБ Ргро Рго Уаі Гей Авр бек Авр 385 390 395 400 біу бек Рпе Рпе Гей Тугк Бек Пув Геї ТПг Уаі! Авр Пубз бег Агуд Тгр 405 410 415 біп біп біу Авп Уа1і Роре бек Суб5 бек Уа! Меєсє Ніб5 сій Аза Геч Нів 420 425 430

АБп о Нів Туг Тип біп Пув бек Тїеч бБег Геч бек Рго С1у ув 435 440 445 «2105 304 «2115 1752 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність (4984) УНСНІ1І Ес з виступом УН (489) «4005 304 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд ссеЕссуддадд сасаєєсадс адсбрасудсса ЄаадссдддЕ дсдасаддесес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

Бассуєддєс субасдасса ссудудуддссаа додадассассу ЄдассуєсєЕс сЕСадссадс 360 ассаадддсс саєсуддеЕссс ссссседдса сссеЕссЕсСса ададсассєс Єдддддсаса 420 чсоддссссду дссдсссддє саадчассас сСЕсСсссдаас суддєдасуде дЕСдЄсддаас 480

Есаддсудссс Єдассадсуд судєдсасасс СЕСССУОСсСС ЕсссасадеЕс сЕСаддасесс 540

Бассссссса дсадсуєдудє дассусєдссс сссадсадсе Єдддсассса дасссасаєс 60

ЕдсаасуєЄда аєсасаадсс садсаасасс аадчдсдуддаса адааадссда дсссаааєссе ббо 60 бдЕдасаааа сссасасасд сссассдбдс ссадсасссд аадсєдсадда додадассдЕса 720 дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 780 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 840 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 900

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 960 65 аадсдсаадд СсЕссаасаа адсссЕсудс дсссссаєсу адаааассає ссссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддсдсас ассссдсссс ссеЕдсадача Єдадсеєдасс 1080 аадаассад Єдессссдед дЕдЕСЕддЕсС аадддсеЕссоі ассссадсда Сассудссдаєд 1140 чачсчдуаЧача дсаасудсса дсссдадаас аасбасаада ссассссссс Єдсдсеєдвдас 1200 адсчасуддса дчссЕсЕсссеЕ дсасессааа сєдассуєду асаададссуд деЕддсадсад 1260 часаасуєдс Ссадсєдсад суєдасдсас даддсссвєдс асаассасва сасссадаад 1320

Есссєдадсс Сдадссссуд судЧчаддсуддс дчаадсучЧач чаччадчаєс Єдоаддоадсода 1380

ЧччЕсссудад дсоуачЧачдчаєс счаддсдсад сєдсссудааа дсоддсуадЧдадча ассддеєдсад 1440 ссЕддсддса дссєдадасє дЕСЕсСдсудсс дссадсуддсє Есассеєєсад садсвасддсес 1500 аєдадссдуддау сссдссаддс ссседдсаад дчдасєдчаає дадЕдеЕссудс саєсаєсддс 1550

Есєддсудсса дсассврасса суссдасадс дЕЧдаадддсес ддЕссассає садссдддадасєс 1620 аасадсаача асассссдса ссеєдсачаєд аасадссєдс дддссдадда сассудссуєд 1680 басвассдсу ссаадддаєд деЕЕсддсдудс бЕсаасврасоі даддасаддд сассседдеЕс 1740 ассдєдЕсса дес 1752 «2105 305 «2115 1725 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Нуклеотидна послідовність (4984) УНСНІ1І Ес із западиною МІ, (489) «4005 305 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

Бассуєддєс субасдасса ссудудуддссаа додадассассу ЄдассуєсєЕс сЕСадссадс 360 ассааддудсс сассудссссє ссссссдудса сссеєссссса ададсассєс Сдодадддсаса 420 дсддссссда дсЕдссЕддЕ сааддассас сСсссссдаас сддєдасуддЕ дссдсдааас 480

Есаддсудссс Єдассадсуд судєдсасасс СЕСССУОСсСС ЕсссасадеЕс сЕСаддасесс 540

Бассссссса дсадсуєдудє дассусєдссс сссадсадсе Єдддсассса дасссасаєс 60

ЕдсаасуєЄда аєсасаадсс садсаасасс аадчдсдуддаса адааадссда дсссаааєссе ббо

Едеєдасаааа сеєсасасасу сссассуєбудс ссадсасссуд аадсєдсаду дадассдєса 720

ЧдЕСЕСсСсССсСЕ Сссссссааа асссааддас асссссаєда Єсессссуддас сссеЕдаддес 780 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 840 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 900

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 960 аадсдсаадуд Сссссаасаа адсссссудс дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддЕдсдс ассссдсссс саєсєсссдудуда Єдадссдасс 1080 аадаассаду Ссадссєссс деЕдсудсадес аааддсеЕссс аєсссадсда саєсдссдаєд 1140 чачсдчдуачЧача дсаасудудса дссудачаас аасбасаада ссасудссєсс сдєдсеєддас 1200 бссдасуддасє сссесеЕсссе сдбдадсаад сеєсассуєду асаададсад деЕддсадсад 1260 чачдаасуєсє ссссаєдсеєс сдедаєдсає даддсєссдс асаассасса сасдсадаад 1320 адссссеЕСсСсс сдЕСССсСсоЯдоа Єддаддсуддс ддаадсддад дчадчдчаддаєс сддасддсдада 1380 часЕссудчдад дсуддеєддаєс єЄдадаєсдед сєдасссадс сЕсссудсас сседесесвд 1440 адсссєддчсу адададссас ссеЕдеЕссЕдс ададссессс адсссуєдас сеЕССЕсСстас 1500 сеЕсдссЕдудЕ аєсадсадаа дсссуддссад дссссеЕсуддс Єдсєдаєсаа сдєддаддсадве 1550 судададсса ссддсаєссс ЄдассудеЕсєс єссуддсеєссд дсеЕссуддсас сдасьєсасс 1620 седассаєсє сссудсєуда асссудаддас ЄссдссуєдЕ асвеассдсса дсадддсаєс 1680 аєдсбдсссс ссассессуду ссадддсасс ааддєдадааа сСсаад 1725 «2105 306 «2115 584 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (4984) УНСНІ Ес з виступом УН (489) «4005 306 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45 60 сіу б1у І1е І1їе Рго Іїе Рбе сіу ТБ Аза Ап Туг Аїа біп пув Ре 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 65 85 90 935

Аза Акуд бій Туг Тугк Аку біу Рго Туг Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

ТПг Маї ТП Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сіу Рго бек Уаі! Рое Рго

115 120 125

Теч Аза Рго бек бек Пув Бек ТПг бек біу біу ТбПг Аза Аза Геч Сс1Уу 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190 бек Геч сСіу Тпг біп Трг Тує І1е Сув Авп Уа1і Авп Нів Кув Рго бег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 сій УМаї Пцув Рпе Авп Тгр Туг Маї Авр Сіу Ма1 Сі Уаї Нів Авп Аї1а 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 300

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сіп Уа1ї Тугє ТіПг Іеч 340 345 350

Рго Рго Сув Агуд Авр бій Теч ТПг о Ппуз Авп о біп Уаї бек Геч Тгр Сув 355 360 365

Теч Уаі Ппув сіу Рпе Туг Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаі біц Тер січ бБег 370 375 З8о

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Робе Теч Тук бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Пес Нів Авп Нівз Тук ТПг біп Ппуз бБег Іеч бег Іеч бег Рго біу б1У 435 440 445

Сіу бі1у сіу бек сіу сіу сіу біу бек біу біу сбіу сіу бек сіу с1Уу 450 455 460 біу біу бек біц Уаі! сіп Геч Геч біп бек біу біу сіу Геч Уаі1ї сіп 465 470 475 480

Рго сіу сіу бек Іечп Агу Ге бег СувБ Аїа Аза бек біу Рое ТПг Ре 485 490 495 бЗек Бек Туг Аїа Меє бек Ткр Уаі Аку сіп Аза Рго сіу Ппув б1Уу Іеч 500 505 510 сій Тер Уаї бБег Аїа Іїе Іїе сіу бек С1у Аїа бег Тіг Туг Туг Аза 515 520 525

Авр Бек Уа1і Ппув бі1у Аку Робе ТБПг І1їе бег Агуд Авр АБп бек ГУу5 АБПпП 530 535 540

ТПЕ Геч Тук Іеч біп Месб Абзп бег Гей Агуд Аза сії АБр Тс Аїа Уаї 545 550 555 560

Тук Тук СувБ Аїа їувз біу Тер Рпе сіу сіу Рре АБп Тугє Тгр б1у сіп 565 570 575 біу ТЕ Гей Уа! ТПг Уаї бек 5ег 580 (516) «2105 307 «2115 575 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 65 «223» (4984) УНСН1 Ес із западиною МІ, (489) «4005 307 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45 сіу б1у Іїе Іїе Рго Іїе Робе сіу ТБйг Аза АБп Туг Аза біп Пувз Рре 5о0 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд бій Туг Тугк Аку біу Рго Туг Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

ТПг Маї ТП Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сіу Рго бек Уаі! Рое Рго 115 120 125

Теч Атїа Рго бБег бег Кув бБег ТрПг бек Сіу сСіу Трг Аза Аза еп С1У 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190

Ззек Геч сіу ТПг біп ТБ Тук Іїе Суб Авп Уаі АвБп Нів пуб Рго 5ег 195 200 205

АБп ОТ Ппувз Уаї Авр оПув пув Уа1і бій Рго Ппув бек Сув Авр Пу5з ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд

Зо 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 біч Уаії пуб Рпе Абзп Тер Туг Маі АБр біу Уаі! біч Уаї Ніб5 Ап Аза 275 280 285

Пув Тип Пув Рго Акуд Січ бі Сбіп Туг Авп бег Тпг Туг Агуд Уаї Уаї 290 295 300

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сбіп Уа1ї Суб ТіПгЕ Іеч 340 345 350

Рго Рго Бек Агу АБр біч Теч ТБПг пуб Ап о біп Уа1ї! Бек Геч бек Сув 355 360 365

Аза Ма1ї Ппув Сіу Рпе Туг Рго бЗег Авр І1е Аїа Ма1і сії Тгр Січ бег 370 375 З8о

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Рібе Теч Уа! бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Теч Ніб Авп Нів Тугк ТПг бсіп пуб бек ТГеч бек Гей бег Рго сіу с1у 435 440 445 сіу бі1іу С1у бБег сі1іу Сіу сі1у сі1у бек Сі1у сіу сС1у Сі1у бек С1у С1У 450 455 460 біу біу бек біц Іїе Уаї Геї ТП біп бек Рго біу ТрПг Гей бек Гей 465 470 475 480

Бек Рго сбіу бі Аку Аїа ТБбг Гей бек Субв Агуд Аза бек біп бек Уаї (516) 485 490 495

ТПг Бек бек Тук Теч Аза Тер Тук біп сбіп Пув Рго біу біп Аза Рго 500 505 510

Агуд Геч Геч І1їе АБп Уаі! Сіу б5ег Агуд Акгуд Аїа ТПг сіу І1е Рго АБр 515 520 525 65 Агуд Рпе бек Сіу Бек біу бек бі1іу Тпг Авр Рбе ТіПг теп Тс І1е бег 530 535 540

Агуд Геї бій Рго бі Ар Рбе Аза Уаі! Туг Тугк СувБ біп сбіп с1у І1е 545 550 555 560

Меє теп Рго Рго ТіПг Рпе сіу сіп сіу Тс Гуз Уаї біч Іїе Був 565 570 575 «2105 308 «2115 1749 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність (4984) УМНСНІ1І Ес з виступом МН (28НІ) «4005 308 саддЕдсаає єддсдсадеЕс Єддддсєдад дЕдаадаадс сЕдддЕсСсЕс ддєдаадаеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300 бассудєддсс сдбасдасса ссддддассаа ддчдассассу ЄдассдЕссс сссадсвадс 360 ассааддудсс сассудссссє ссссссдудса сссеєссссса ададсассєс Сдодадддсаса 420 чсоддссссду дссдсссддє саадчассас сСЕсСсссдаас суддєдасуде дЕСдЄсддаас 480

Есаддсудссс Єдассадсуд судєдсасасс СЕСССУОСсСС ЕсссасадеЕс сЕСаддасесс 540

Бассссссса дсадсуєдудє дассусєдссс сссадсадсе Єдддсассса дасссасаєс 60 бдсаасдсда ассасаадсс садсаасасс ааддсддаса адааадсєда дсссаааєсе ббо

Едеєдасаааа сеєсасасасу сссассуєбудс ссадсасссуд аадсєдсаду дадассдєса 720 дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 780 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 840 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 900 бассуєдсдд Єсадсдессо сассуєсссд сассаддасс ддсєдааєдд сааддадеас 960 аадсдсаадуд Сссссаасаа адсссссудс дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддсдсас ассссдсссс ссеЕдсадача Єдадсеєдасс 1080 аадаассад Єдессссдед дЕдЕСЕддЕсС аадддсеЕссоі ассссадсда Сассудссдаєд 1140 чачсчдуаЧача дсаасудсса дсссдадаас аасбасаада ссассссссс Єдсдсеєдвдас 1200 адсасуддса дчссЕсСЕСссЕ дсасеєссааа сєдассуєддуд асаададссу дЕддсадсад 1260 часаасуєдс Ссадсєдсад суєдасдсас даддсссвєдс асаассасва сасссадаад 1320 бссссдадсс сдадссссуда сддаддсдудс ддаадсудад даддаддаєс сододаддададчдад 1380 ччаачсдудсу дсуЧаччаєсєс єЄдаддсдсад сеєдссдчдаає ссуддсудаддч сссддеєдсад 1440 ссЕддсуддає сеЕСєДдадасе дЕССсдсусс дссеЕссудесе Есассеєеєсес сеЕсссасддесс 1500 аєдеЕСсссддд сссдасаддс Есссддсааа дудссєдчааає дддеЕдесссдсе саєссдддасес 1550 бссудсудадс адсасрасус сдасеєсєдед аадддссудє бсассаєсеєс ссудддасаас 1620

Ессаадааса сссеЕдєассеє дсачасєдаас Сссссдсудчу ссдадчдасас судссуєдеас 1680 басєдедсса адддсЕддсЕ дддсаасеєс дассасєуддуд дссадддсас сседдеЕсасс 1740 чЧЕдЕссадс 1749 «2105 309 «2115 1725 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність (4984) УНСНІ Ес із западиною МІ (28НІ) «4005 309 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 дсасадааде Сссадддсад ддЕсассасє аседсадаса аасссасудад сасадсстас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

Бассуєддєс субасдасса ссудудуддссаа додадассассу ЄдассуєсєЕс сЕСадссадс 360 ассааддудсс сассудссссє ссссссдудса сссеєссссса ададсассєс Сдодадддсаса 420 чсоддссссду дссдсссддє саадчассас сСЕсСсссдаас суддєдасуде дЕСдЄсддаас 480

Есаддсдссс Єдассадсудд сдедсасасс Сссссуддсеєд Єссвбасадес сссаддасесс 540

Бассссссса дсадсуєдудє дассусєдссс сссадсадсе Єдддсассса дасссасаєс 60

ЕдсаасуєЄда аєсасаадсс садсаасасс аадчдсдуддаса адааадссда дсссаааєссе ббо

Едеєдасаааа сеєсасасасу сссассуєбудс ссадсасссуд аадсєдсаду дадассдєса 720 дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 780 60 асаєдсдєдда ЄддЕддасді дадссасудаа дассссдадд Єсаадеєсаа ссддсас9аєд 840 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 900

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 960 аадсдсаадуд Сссссаасаа адсссссудс дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддсудсдс ассссдсссс саєсссудда Єдадсеєдасс 1080 65 аадаассадуд Єсадсссссс дедсдсадес аааддсеЕссс аєсссадсда сассдсесоаєд 1140 чачсдчдуачЧача дсаасудудса дссудачаас аасбасаада ссасудссєсс сдєдсеєддас 1200 бссдасуддасє сссесеЕсссе сдбдадсаад сеєсассуєду асаададсад деЕддсадсад 1260 чачдаасуєсє ссссаєдсеєс сдедаєдсає даддсєссдс асаассасса сасдсадаад 1320 адссЕСсСЕСсСсс сдсссссудоа єдчдаддсудудс ддаадсудЧач чаччачдчаєс сододЕдаєсдас 1380 ччаєсєдчад дсуддєддаєс єдадаєсдед сєдасссадс сЕсссудсас ссеєдадессед 1440 адссссддсу ачачадссас ссЕдадссдс ададссадсс ададсуєдад ссудадсвас 1500 сЕддсссддЕ ассадсадаа дсссддсесад дсссссадас бЄдсєдаєсає сддсдссадс 1550 асссудддсса ссддсаєссс сдаєадасєсс адсддсадсуд дсеЕссддсас сдассссасс 1620 сеЕдассаєса дссуддсєдда асссдаддас єссдссдеєдЕ ассасєдсса дсадддссад 1680 чЧеЕдаєссссс ссассессуд ссадддсасс ааддєддадааа сСсаад 1725 «2105 310 «2115 583 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (4984) УНСНІ Ес з виступом УН (28НІ) «4005 310 сіп Уаі1ї Сіп теп Уаї Сіп бек сі1у Аїа Січ Ма1 Ппув Пув Рго сС1іу бЗег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг

Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 20 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0 25 Меє бій Іей бег бек ГПеп Агу бек біш АвБр ТБг Аза Уаї Тугк Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд бій Туг Тугк Аку біу Рго Туг Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

ТПг Маї ТП Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сіу Рго бек Уаі! Рое Рго

Зо 115 120 125

Теч Аза Рго бек бек Пув Бек ТПг бек біу біу ТбПг Аза Аза Геч Сс1Уу 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160 бек біу Аїа їеч ТіПг бег Сіу Маі Нів Трг Ррпе Рго Аїа Уаї Ієч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190

Ззек Геч сіу ТПг біп ТБ Тук Іїе Суб Авп Уаі АвБп Нів пуб Рго 5ег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уа1 Рре Гей Рпе Рго Рго Пуз Рго Пуз АБр ТПг Гей Меє І1їе б5ег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 біч Уаії пуб Рпе Абзп Тер Туг Маі АБр біу Уаі! біч Уаї Ніб5 Ап Аза 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 108)

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320 пув Сув ПЦув Ма1 бек Авп Гув Аїа Іез С1у Аїа Рго Іїе Січ Пув Тис 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сіп Уа1ї Тугє ТіПг Іеч 340 345 350

Рго Рго Сув Агу АБр біч Теч ТБПг пуб Авп о біп Уа1і! Бек Геч Тгр Сув (516) 355 360 365

Теч Уаі Ппув сіу Рпе Туг Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаі біц Тер січ бБег 370 375 380

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 65 век Авр біу Бек Рпе Рпе Теч Туг бек Пув Ппечп ТПг Уаї АБр Пуз 5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Теч Ніб Авп Нів Тугк ТПг бсіп пуб бек ТГеч бек Гей бег Рго сіу с1у 435 440 445

Сіу бі1у сіу бек сіу сіу сіу біу бек біу біу сбіу сіу бек сіу с1Уу 450 455 460 сіу біу бек бі УМаї сіп Гешп Гей бій бек біу біу бі1у Печ Уаї сіп 465 470 475 480

Рго сіу сіу бек Іечп Агу Ге бег СувБ Аїа Аза бек біу Рое ТПг Ре 485 490 495 бЗек Бек Нів Аїа Меє бек Ткр Уаі Аку сіп Аза Рго сіу Ппув б1Уу Іеч 500 505 510 біч Тер Уаі бек Аїа Іїе Тер Аїа бек біу бічЧ біп Туг Туг Аїа Авр 515 520 525

Зек Уаі1ї Ппув сбіу Аку Робе ТБбг І1їе бек Агуд Ар А5п о бБег Пуб5 АБп Тс 530 535 540

Теч Тує Пец біп Меє Авп бег Іїечп Акуд Аїа бі Авр Тпг Азїа Уаї Туг 545 550 555 560

Тук Сув Аїа Гуз біу Тер Пец сіу АбБп Ррбе АБр Туг Тгсгр б1іу біп 01УуУ 565 570 575

ТВгЕ Ген Уаї! Трг Уаї бег 5ег 580 «2105 311 «2115 575 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «2235» (4984) УНСН1І Ес із западиною МІ, (28НІ1) «4005 311 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15 бек Ма1 Ппув Ма1ї БбБег Сув їув А1їа бег Сіу С1у ТіПг Рре бег бег Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 35 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95 40 Аза Агд сії Тує Туг Акуд біу Рго Туг Авр Туг Тгр СсС1у Сіп С1у Тіг 100 105 110

ТПг Маї ТП Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сіу Рго бек Уаі! Рое Рго 115 120 125

Теч Аза Рго бек бек Пув Бек ТПг бек біу біу ТбПг Аза Аза Геч Сс1Уу 45 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 165 170 175 зек Бек біу Ген Туг бек ТІеч бег бек Уа1і Уаї ТПг Уаї Рго Бег 5ег 180 185 190

Ззек Геч сіу ТПг біп ТБ Тук Іїе Суб Авп Уаі АвБп Нів пуб Рго 5ег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд 245 250 255 60 Так Рго бі Уа1і Тійг Суб Уаї Уаї1ї Уа1ї Авр Уаі1і бек Нів сії Авр Рго 260 265 270 біч Уаії пуб Рпе Абзп Тер Туг Маі АБр біу Уаі! біч Уаї Ніб5 Ап Аза 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 65 290 295 300

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг зЗ82

325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сбіп Уа1ї Суб ТіПгЕ Іеч 340 345 350

Рго Рго Бек Агу АБр біч Теч ТБПг пуб Ап о біп Уа1ї! Бек Геч бек Сув 355 360 365

Аа Уа1 Ппув сіу Роре Тук Рго бек АвБр Іїе Аїа Уаі сії Тгр бі 5ег 370 375 380

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 век Авр біу бек Рпе Рпе Іїеч Уаі! бек Ппув Ппечп ТПг Уаї АБр Пуз 5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Теч Ніб Авп Нів Тугк ТПг бсіп пуб бек ТГеч бек Гей бег Рго сіу с1у 435 440 445

Сіу бі1у сіу бек сіу сіу сіу біу бек біу біу сбіу сіу бек сіу с1Уу 450 455 460 біу біу бек біц Іїе Уаї Геї ТП біп бек Рго біу ТрПг Гей бек Гей 465 470 475 480 бек Рго С1у бі Агуд Аїа Тйг Іеч бег Сув Агуд Аїа бег Сіп бБег Уаї 485 490 495

Бек Акуд Бек Тук Іеч Аза Тгр Тук біп сбіп Пу5 Рго біу біп Аза Рго 500 505 510

Агуд Геч Геч Іїе І1ї1е б1іу Азїа бег ТПг Агуд Аїа ТпПг сіу І1е Рго АБр 515 520 525

Агуд Рпе Бек сіу бек біу бек біу ТБПг Авр Рпе ТПг Геї ТПг І1е 5ег 530 535 540

Агуд Геч бій Рго бі Ар Рбе Аза Уаі Туг Тук СувБ біп сіп с1у біп 545 550 555 560

Уаї І1їе Рго Рего Тік Рпе сіу СсСіп Сіу Тпг Ппув УМа1і Січ Іїе Гув 565 570 575 «2105 312 «2115 1746 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність (4984) УМНСНІ1І Ес з виступом МН (РР4І7) «4005 312 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд ссеЕссуддадд сасаєєсадс адсбрасудсса ЄаадссдддЕ дсдасаддесес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

Бассуєддєс субасдасса ссудудуддссаа додадассассу ЄдассуєсєЕс сЕСадссадс 360 ассаадддсс саєсуддеЕссс ссссседдса сссеЕссЕсСса ададсассєс Єдддддсаса 420 чсоддссссду дссдсссддє саадчассас сСЕсСсссдаас суддєдасуде дЕСдЄсддаас 480

Есаддсудссс Єдассадсуд судєдсасасс СЕСССУОСсСС ЕсссасадеЕс сЕСаддасесс 540

Бассссссса дсадсуєдудє дассусєдссс сссадсадсе Єдддсассса дасссасаєс 60

ЕдсаасуєЄда аєсасаадсс садсаасасс аадчдсдуддаса адааадссда дсссаааєссе ббо бдЕдасаааа сссасасасд сссассдбдс ссадсасссд аадсєдсадда додадассдЕса 720 дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 780 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 840 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 900

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 960 аадсдсаадд СсЕссаасаа адсссЕсудс дсссссаєсу адаааассає ссссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддсдсас ассссдсссс ссеЕдсадача Єдадсеєдасс 1080 аадаассад Єдессссдед дЕдЕСЕддЕсС аадддсеЕссоі ассссадсда Сассудссдаєд 1140 чачсчдуаЧача дсаасудсса дсссдадаас аасбасаада ссассссссс Єдсдсеєдвдас 1200 адсчасуддса дчссЕсЕсссеЕ дсасессааа сєдассуєду асаададссуд деЕддсадсад 1260 60 чЧадсаасдсєдЕ Ссадссдсад сдедаєдсас даддсссеЕдс асаассасса сасссадаад 1320 бссссдадсс сдадссссуда сддаддсдудс ддаадсудад даддаддаєс сододаддададчдад 1380 ччаадеєдчдчсу дсудаддаєс єЄдаддедсаа ЕєДдЕєЧддЧадеі сєЕдчадчададае сЕєсддЕасад 1440 ссЕдддддЧЕ сссеєдадасеє сЕСсСссдбсдса дссадсудає сассеєєсад садесаєдесс 1500 аєдадссдудау сссдссаддс Ессадддаад доддсеЕдчаде доадЕСсСЕєСсадс сассадесдче 1550 65 адсддєддса дсасаєасса сдсадасесс дЕдаадддсес ддєєЄсассає сеЕССададас 1620 ааєсссаадча асасуссдса єсєдсачаєд аасадссєда дчадссудадча сасуддссоаба 1680 басвсассуєд сдаааддсад суддаєєєдас гасєддддсс ааддаасссє ддесассдес 1740 ссдадс 1746

«2105 313 «2115 1725 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Нуклеотидна послідовність (4984) УНСНІ Ес із западиною МІ (ОР417) «4005 313 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдач асссудаддас ассуссуєдеЕ асвтассдсдс дачадаавас 300

Бассуєддєс субасдасса ссудудуддссаа додадассассу ЄдассуєсєЕс сЕСадссадс 360 ассааддудсс сассудссссє ссссссдудса сссеєссссса ададсассєс Сдодадддсаса 420 дсддссссда дсЕдссЕддЕ сааддассас сСсссссдаас сддєдасуддЕ дссдсдааас 480

Есаддсудссс Єдассадсуд судєдсасасс СЕСССУОСсСС ЕсссасадеЕс сЕСаддасесс 540

Бассссссса дсадсуєдудє дассусєдссс сссадсадсе Єдддсассса дасссасаєс 60

ЕдсаасуєЄда аєсасаадсс садсаасасс аадчдсдуддаса адааадссда дсссаааєссе ббо

Едеєдасаааа сеєсасасасу сссассуєбудс ссадсасссуд аадсєдсаду дадассдєса 720

ЧдЕСЕСсСсССсСЕ Сссссссааа асссааддас асссссаєда Єсессссуддас сссеЕдаддес 780 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 840 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 900

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 960 аадсдсаадуд Сссссаасаа адсссссудс дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддЕдсдс ассссдсссс саєсєсссдудуда Єдадссдасс 1080 аадаассаду Ссадссєссс деЕдсудсадес аааддсеЕссс аєсссадсда саєсдссдаєд 1140 чачсдчдуачЧача дсаасудудса дссудачаас аасбасаада ссасудссєсс сдєдсеєддас 1200 бссдасуддасє сссесеЕсссе сдбдадсаад сеєсассуєду асаададсад деЕддсадсад 1260 чачдаасуєсє ссссаєдсеєс сдедаєдсає даддсєссдс асаассасса сасдсадаад 1320 адссссЕСсСсс сдЕСССсСсодоа Єддаддсуддс ддаадсуддад чадчаддаєс сддаддсддес 1380 ччаачсудЧдачд дчадчаддссс Єдааасєдєд сеєдасссада дссссудсас ссєдссассд 1440

ЕсЕсСсаддсу ааацдадссас ссеЕдадссудс ададссадсс ададсуєдеЕС садсесссвас 1500 сеЕддссЕдудЕ аєсадсадаа дсссуддаса дсссссадас єдсеєдаєсвса суддсуссесе 1550

Есбададсса ссудсасєссс суасадасеєс адсуддсадсу дсЕссудсас сдасесеєсасс 1620 седасаасса дсадасєуда асссудаддас ЄссдссуєдЕ асвгассдсса дсадеасадес 1680 адсадссссс бЄдассессуду ссададдсасс ааддєддадааа сСсааа 1725 «2105 314 «2115 582 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (4984) УНСНІ Ес з виступом МН (РР47) «4005 314 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45 сіу б1у І1е І1їе Рго Іїе Рбе сіу ТБ Аза Ап Туг Аїа біп пув Ре 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд бій Туг Тугк Аку біу Рго Туг Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

ТПг Маї ТП Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сіу Рго бек Уаі! Рое Рго 115 120 125 60 Теч Атїа Рго бБег бег Кув бБег ТрПг бек Сіу сСіу Трг Аза Аза еп С1У 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 65 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190

Ззек Геч сіу ТПг біп ТБ Тук Іїе Суб Авп Уаі АвБп Нів пуб Рго 5ег

195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 сій УМаї Пцув Рпе Авп Тгр Туг Маї Авр Сіу Ма1 Сі Уаї Нів Авп Аї1а 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 300

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сіп Уа1ї Тугє ТіПг Іеч 340 345 350

Рго Рго Сув Агуд Авр бій Теч ТПг о Ппуз Авп о біп Уаї бек Геч Тгр Сув 355 360 365

Теч Уаі Ппув сіу Рпе Туг Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаі біц Тер січ бБег 370 375 З8о

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Робе Теч Тук бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Пес Нів Авп Нівз Тук ТПг біп Ппуз бБег Іеч бег Іеч бег Рго біу б1У 435 440 445

Сіу бі1у сіу бек сіу сіу сіу біу бек біу біу сбіу сіу бек сіу с1Уу 450 455 460 біу біу бек біц Уаі! сіп Геч Геч біп бек біу біу сіу Геч Уаі1ї сіп 465 470 475 480

Рго сіу сіу бек Іечп Агу Ге бег СувБ Аїа Аза бек біу Рое ТПг Ре 485 490 495 бЗек Бек Туг Аїа Меє бек Ткр Уаі Аку сіп Аза Рго сіу Ппув б1Уу Іеч 500 505 510 сій Тер Уаї бБег Аїа І1їеє бБег сіу бек Сіу сіу бек Тіг Туг Туг Аза 515 520 525

Авр Бек Уа1і Ппув бі1у Аку Робе ТБПг І1їе бег Агуд Авр АБп бек ГУу5 АБПпП 530 535 540

ТПЕ Геч Тук Іеч біп Месб Абзп бег Гей Агуд Аза сії АБр Тс Аїа Уаї 545 550 555 560

Тук Тук СувБ Аїа їувз біу бек біу Рпе Авр Туг Тгр біу біп сб1іу Тр 565 570 575

Печ Уаї ТП Уаї Бек 5ег 580 «2105 315 «2115 575 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» (4984) УНСН1і Ес із западиною МІ (РРА7) «4005 315 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг (516) 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо 65 сіп б1іу Агуд Ма1 Трг І1їе ТПг АТїа Авр Пув бБег ТіПг бек ТіПг Аїа Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд бій Туг Тугк Аку біу Рго Туг Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

ТПг Маї ТП Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сіу Рго бек Уаі! Рое Рго 115 120 125

Печ Аза Рго бек бек Ппувз бБег ТПг бег біу б1іу Трпг Аза Аза Геп с1УуУ 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190

Ззек Геч сіу ТПг біп ТБ Тук Іїе Суб Авп Уаі АвБп Нів пуб Рго 5ег 195 200 205

АБп ОТ Ппувз Уаї Авр оПув пув Уа1і бій Рго Ппув бек Сув Авр Пу5з ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 біч Уаії пуб Рпе Абзп Тер Туг Маі АБр біу Уаі! біч Уаї Ніб5 Ап Аза 275 280 285

Пув Тип Пув Рго Акуд Січ бі Сбіп Туг Авп бег Тпг Туг Агуд Уаї Уаї 290 295 300

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг

Зо 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сбіп Уа1ї Суб ТіПгЕ Іеч 340 345 350

Рго Рго Бек Агу АБр біч Теч ТБПг пуб Ап о біп Уа1ї! Бек Геч бек Сув 355 360 365

Аза Ма1ї Ппув Сіу Рпе Туг Рго бЗег Авр І1е Аїа Ма1і сії Тгр Січ бег 370 375 З8о

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Рібе Теч Уа! бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Теч Ніб Авп Нів Тугк ТПг бсіп пуб бек ТГеч бек Гей бег Рго сіу с1у 435 440 445 сіу бі1іу С1у бБег сі1іу Сіу сі1у сі1у бек Сі1у сіу сС1у Сі1у бек С1у С1У 450 455 460 біу біу бек біц Іїе Уаї Геї ТП біп бек Рго біу ТрПг Гей бек Гей 465 470 475 480

Бек Рго сбіу бі Аку Аїа ТБбг Гей бек Субв Агуд Аза бек біп бек Уаї 485 490 495

Бек Бек Бек Тук Іеч Аза Тгр Тук біп сбіп Пу5 Рго біу біп Аза Рго 500 505 510

Агуд Геч Геч Іїе Тугк біу Аза бек бег Акгуд Аїа ТПг сіу І1е Рго АБр 515 520 525

Агуд Рпе бек Сіу Бек біу бек бі1іу Тпг Авр Рбе ТіПг теп Тс І1е бег 530 535 540

Агуд Геч бій Рго бі АБр Рбе Аза Уаї Туг Тук Сув біп сбіп Туєк б1Уу 545 550 555 560

Бек Бек Рго Геї ТП Робе біу біп сіу ТпПг Ппув УМаї січ І1е Гуз (516) 565 570 575 «2105 316 «2115 1758 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 65 «220» «223» ДНК (1283) УМНСНІ1І Ес з виступом МН (489) (НС1) «4005 316 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддссддадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассусєудс дачаєссдаа 300

СЕССУЧЕЕСсССсСЕ асдсєдассс сдассассуддда ддссааддда ссассудбдас судєсСссддаде 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 часасадсуд сссЕдЧдучссдд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдаассуде дасудЧЕеЕдесУ 480

Едчдаасеєсад дсдссссдас садсуддсуєд сасасссссс суддсеєдеЕссо асадесссьса 540 ччасеЕсвтасс сссеЕСсадсад суєдудєдасс дЕдсссссса дсадссєдаду сасссадасс 60 басасєсєдса асдєедааєса саадсссадс аасассаадд Єддасаадаа адеєдадссс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссдЕсадеЕсе ЕсссссЕссс сссаааассс ааддасассс Єсаєдаєсєссс ссддассссе 780 чаччдаєсасаєсє дсдєдУЧасЧдУчЕ дчасуєдадс сасдаадасс ссдаддеєсаа дЕсСаасеєда 840

Басєдчдасу дсудєдчвадає дсасааєдсс аадасааадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасдбєасс деЕдЕддЕсад сдеЕссЕСасс деЕсссдсасс аддасєддсЕ дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса дчеЕдвєасассс Єдссссссвд сачачаєдад 1080 сєдассаада ассаддеЕдеЕс сссдсддеЕдЕ седдссаадуд дсЕссбассс садсдаєаєс 1140 чссаєдчадс доадачадсаа суддссадссс дадаасаасє асаадассас ссссссеєдсд 1200 седдасадсуд асддсадсеЕє сеЕсСссвєдвас сссааасєда ссдєсддасаа дадссучеєа 1260 садсадддса асдсдсєсад седсадсдбд асбдсасдадд сссеєдсасаа ссастрасасс 1320 садаадсссс Єдадссєдад ссссуддсдда ддсддсддаа дсддаддада аддаєсєд9ад 1380 час9ччадчЕс ссуЧадудсуд Єдчаєсєдад деЕдсадсеєдс Есдааадсуду содоЧадчасесд 1440 чЧЕдсадссбд дсуддсадссеє дадаседесеЕ Едсудссудсса дсуддсєсЄсас сеЕссадсадс 1500 басуссаєда дссдддсєссуд ссаддсессссе дудсаадддас Єддаасдаає дЕССсСДссаєс 1550 ассуддсЕсвд дсудссадсас ссасвєасусс дасадсуєда адддссуддеЕс сассаєсадс 1620 сдддасааса дсаадаасас ссбдсасссд садаєдааса дсседсудддс сдаддасасс 1680 чдссуєдсасе ассдсдссаа ддчдаєддеєєс ддсддсеЕсса ассассдчдд асадддсасс 1740 сеЕддЕсассуд ЕдЕссадс 1758

Зо «2105 317 «2115 1731 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (1283) УНСНІ Ес із западиною Уї. (489) «4005 317 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддссддадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 дсасадааде Сссадддсад ддЕсассасє аседсадаса аасссасудад сасадсстас 240 асудчадссда дсадсссдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассусєудс дачаєссдаа 300 гЕсСссусЕссс асуссдассє сдасвсассуу додссаадудда ссассудєдас судєсссдаде 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 часасадсуд сссЕдЧдучссдд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдаассуде дасудЧЕеЕдесУ 480 бддаасєсад дсдсссЕєдас садсуддсуєЄд сасассеЕєсс суддсеЕдеЕссе асадесссьса 540 ччасеЕсвтасс сссеЕСсадсад суєдудєдасс дЕдсссссса дсадссєдаду сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдааєса саадсссадс аасассааууд Єддасаадаа адсєдадсесс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссдЕсадеЕсе ЕсссссЕссс сссаааассс ааддасассс Єсаєдаєсєссс ссддассссе 780 чаддсєсасає дсдЕддЕддЕ ддасуєдадс сасдаадасс ссдаддесаа дсеЕсаасвє9ду 840

Басєдчдасу дсудєдчвадає дсасааєдсс аадасааадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасуєасс дчЕДдЕдЧдссадд судєсСсссасс дЕСССдсасс адчасєсдудсс дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса дчЕдеЕдсассс єдсссссаєс ссудчаєдад 1080 седассаада ассадудєсау ссссссудєдс дсадссааад дсЕсСссаєсс садсдасаєс 1140 чссаєдчадс доадачадсаа Єдддсадссу дачаасаасеє асаадассас дссЕССсСсєд 1200 седдасессуд асддсЕєссьє сеЕсссесуєду адсаадсеєса ссудбддасаа дадсаддаєдЧу 1260 садсаддудда асдеЕсЕеєсеЕс аєдссссуєд абдсаєдадуд сесбдсасаа ссасграсасу 1320 садаададсс ЕсЕСССЕДдДЕС ЕСссодддЕдда ддсддасддаа дсудаадаадда аддаєссддас 1380 60 час9ададдсЕ ссддаддсдда аддаєссудад ассудсєдсєда сссадесєсс сддсасссоід 1440

Єсессдадсс себддсдадад адссасссвд Ессєдсадад ссесссадес сдєдассесс 1500 бссвассеєсу сссддбаєса дсадаадссс ддссаддссс сЕСсуддсбдсе даєсаасоаєд 1550 часадссуда дадссассууд саєсссєдас суддЕСсССсссу дсЕСЕддсЕсС сддсассддасєс 1620 беЕсасссвєда ссаєсеєсссуд дсЕддаассс даддасессу ссудбдсасса седссадсад 1680 65 чдасаєсаєдс Сдссссссас сЕєєддссад ддсассаадд Єддаааєсаа 9 1731 «2105 318 «2115 586 «2125 РЕТ

«213» Штучна послідовність «2235» (1283) УНСНІ Ес з виступом УН (489) «4005 318 біп Уаії біп Пеп Уаї сіп бек сбіу Аїа біц Уаї Ппув Ппув Рго біу бег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє бій Іей бег бек ГПеп Агу бек біш АвБр ТБг Аза Уаї Тугк Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд Бек бій Робе Аку Рбе Туг Аза Авр Рпе А5зр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер Авп бег Сіу Аїа тес ТрПг бек біу Маї Нів ТіПс Рре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз

Зо 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Маі Рпе Гей Рре Рго Рго Пувз Рго Пуз АБр ТПг Гей Меє Ії1е 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 300

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 сій Тук цЦув Сув Ппув Маі1ії бБег Авп Туз Аза Іеч Сіу Аїа Рго І1е Січ 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув сбіу біп Рго Акуд бід Рго біп Уа1ї Туг 340 345 350

ТПЕ Геч Ркго Рго Сув Агуд Авр бі Геч Тс Гпуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365

Тер Суб Геч Маї Гуз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уаї біч Тгр 370 375 З8о біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Пес Авр бек Авр біу Бек Рібе Рібе Гей Туг бек Гув Теч ТПг Уаі1ї! Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго (516) 435 440 445

Сіу бі1у сбіу сіу сіу Бек сіу сіу біу біу бек біу сіу сіу сіу бБег 450 455 460

Сіу біу сбіу сіу Бек біцп УМаї сіп Іечп Іеч Січ бек сіу сіу сіу Гей 465 470 475 480 65 Уаї біп Рго сіу Сіу бек їеч Агуд їеч бег Сув Аїа Аза Бек Сс1у Ріє 485 490 495

ТПЕ Ріре бек бек Туг Аза Меє бек Тер Уаі Аку біп Аза Рго біу Пув 500 505 510 зЗ88 біу Теч біц Тер Уаі Бек Аїа І1ї1е І1ї1е сСіу бек біу Аза бек ТПг Туг 515 520 525

Тук А1їа АБр бек Уа! пуз сіу Акуд Рпе ТПг І11е 5егк Агу АБр Ап бег 530 535 540

Пцув Авп Тс опе Тук Ге біп Месб А5п б5ег Те Агуд Аїа бій Авр ТПг 545 550 555 560

Аа Уа1 Тук Тук СувБ Аїа Гуз біу Ткр Рпе сіу сіу Рре АБп Туг Тгр 565 570 575 біу біп біу ТПг Гей Уа1! ТПг Уаї бек б5ег 580 585 «2105 319 «2115 577 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «2235» (1283) УНСН1І Ес із западиною МІ, (489) «4005 319 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15 бек Ма1 Ппув Ма1ї БбБег Сув їув А1їа бег Сіу С1у ТіПг Рре бег бег Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Агуд бек Січ Рпре Акуд Рбе Туг Аїа Авр Ріе Авр Туг Тгр С1у сіп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Пес біп бек бек біу Пе Туг бек Гей бег бег Уаі! Уа1ї! Трг Уаї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255 бек Агуд Тпг Рго біц Маї Тип Сув Ма1ї Уа1ї Уаї1ї Авр Уаї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 300

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335 60 Пув Тс І1їе бБег Ппув Аїа Пув СсСіу Сбіп Рго Акуд бій Рго біп Уаї Сув 340 345 350

ТПЕ Геї Ркго Рго бек Агуд Авр бі Геч Тс Ппуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365 зек Сув Аїа Ма1ії Гуз біу Рпе Тукг Рго Бек Ар Іїе Аїа Уаї січ Тгр 65 370 375 З8о біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Ма! бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр з85

405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 435 440 445

Сіу бі1у сбіу сіу сіу Бек сіу сіу біу біу бек біу сіу сіу сіу бБег 450 455 460

Сіу біу сбіу сіу Бек сії Іїе Маії Іечп ТБг біп бек Рго біу ТпПг Гей 465 470 475 480 век Ппеч бек Рго біу бій Акуд Аїа ТПг Гпецп бек Су5в Агу Аїа Бек сіп 485 490 495

Зек Уа1і ТіПг бек бек Тук Теч Аза Тер Тук біп сіп Пув Рго біу біп 500 505 510

Аза Рго Акд Геї Геї І1їе АБп Уа! Сіу бег Агуд Агуд Аїа ТПг с1у І1е 515 520 525

Рго АБр Агу Роре бек біу бек біу бек біу ТПг Авр Рре ТПг Іеч Тс 530 535 540

І1їе Бек Акд Геч біцп Ргро бічЧ Абр Рпре Аїа Уа1і Туг Тугк Сув біп сбіп 545 550 555 560 с1у І1їе Мебє Гецп Рго Рго ТПг Рре Сіу Сіп сіу Тпг Пув Ма1! січ І1е 565 570 575

Тув «2105 320 «2115 1752 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (25607) МНСНІ1І Ес з виступом УН (489)

Зо «4005 320 чаччаєдсадс Сдсєдчаасс єЄддсоддсучЧа сеЕддсдсадс ссддсуЧаєс Єссдадассд бо адссдсдссу ссадсудесеє сассеЕссадс адсвєасусса Єдадссдудудс дсудссаддес 120 ссбддаааад дсссддааєд ддедеЕссдсс асссссддса дсддсддсад сасстастас 180 чссчасєсвд сСдаадддссу дсєсассаєс адссуддаса асадсаадаа сасссеєдвас 240 сЕдсадаєда асадсссдсуд ддссдаддас ассудссуєдЕ асрасєдсдс садддасддас 300 сссеЕддсссс ссЕсСєдаєса ссддадддадасад ддсасссосуд ЄдассдеєдеЕс садсдсвсадс 360 ассааддудсс сассудссссє ссссссдудса сссеєссссса ададсассєс Сдодадддсаса 420 чсоддссссду дссдсссддє саадчассас сСЕсСсссдаас суддєдасуде дЕСдЄсддаас 480

Есаддсудссс Єдассадсуд судєдсасасс СЕСССУОСсСС ЕсссасадеЕс сЕСаддасесс 540 бассссссса дсадсдєддс дассуєдссс Сссадсадсо Єдддсассса дасссасаєс 60

ЕдсаасуєЄда аєсасаадсс садсаасасс аадчдсдуддаса адааадссда дсссаааєссе ббо

Едеєдасаааа сеєсасасасу сссассуєбудс ссадсасссуд аадсєдсаду дадассдєса 720 дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 780 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 840 часуддсдсдда аддеєдсаєаа Єдссаадаса аадссдсддад аддадсадса саасадсасду 900

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 960 аадсдсаадуд Сссссаасаа адсссссудс дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддсдсас ассссдсссс ссеЕдсадача Єдадсеєдасс 1080 аадаассад Єдессссдед дЕдЕСЕддЕсС аадддсеЕссоі ассссадсда Сассудссдаєд 1140 чадсдддада дсаасддсса дссєдадаас аасграсаада ссассссссс ЄдЕДСсСсддас 1200 адсчасуддса дчссЕсЕсссеЕ дсасессааа сєдассуєду асаададссуд деЕддсадсад 1260 часаасуєдс Ссадсєдсад суєдасдсас даддсссвєдс асаассасва сасссадаад 1320

Есссєдадсс Сдадссссуд судЧчаддсуддс дчаадсучЧач чаччадчаєс Єдоаддоадсода 1380 часЕссудчдад дсуддєддаєс єдаддедсад сєдсеЕсЧдааа дсуддсудаддч асєддедсад 1440 ссЕддсддса дссєдадасє дЕСЕсСдсудсс дссадсуддсє Есассеєєсад садсвасддсес 1500 аєдадссдуддау сссдссаддс ссседдсаад дчдасєдчаає дадЕдеЕссудс саєсаєсддс 1550

Есєддсудсса дсассврасса суссдасадс дЕЧдаадддсес ддЕссассає садссдддадасєс 1620 аасадсаача асассссдса ссеєдсачаєд аасадссєдс дддссдадда сассудссуєд 1680 басвассдсу ссаадддаєд деЕЕсддсдудс бЕсаасврасоі даддасаддд сассседдеЕс 1740 60 ассдєдЕсса дес 1752 «2105 321 «2115 1725 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 65 «220» «223» ДНК (25607) УМНСНІ1І Ес із западиною МІ, (489) «4005 321 чаччаєдсадс Сдсєдчаасс єЄддсоддсучЧа сеЕддсдсадс ссддсуЧаєс Єссдадассд бо адссдсдссу ссадсудесеє сассеЕссадс адсвєасусса Єдадссдудудс дсудссаддес 120 ссбддаааад дсссддааєд ддедеЕссдсс асссссддса дсддсддсад сасстастас 180 чссчасєсвд сСдаадддссу дсєсассаєс адссуддаса асадсаадаа сасссеєдвас 240 сеЕдсадаєда асадссєдсуд ддссдаддас ассдссдбєдеЕ ассасєєсдсдс садддасдас 300 сссеЕддсссс ссссеєдаста Сєддадчдасадд ддсасссссуд ЄдассудєдеЕс садсдссадс 360 ассааддудсс сассудссссє ссссссдудса сссеєссссса ададсассєс Сдодадддсаса 420 чсоддссссду дссдсссддє саадчассас сСЕсСсссдаас суддєдасуде дЕСдЄсддаас 480

Есаддсудссс Єдассадсуд судєдсасасс СЕСССУОСсСС ЕсссасадеЕс сЕСаддасесс 540

Бассссссса дсадсуєдудє дассусєдссс сссадсадсе Єдддсассса дасссасаєс 60 бдсаасдсда ассасаадсс садсаасасс ааддсддаса адааадсєда дсссаааєсе ббо

Едеєдасаааа сеєсасасасу сссассуєбудс ссадсасссуд аадсєдсаду дадассдєса 720 дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 780 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 840 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 900 бассуєдсдд Єсадсдессо сассуєсссд сассаддасс ддсєдааєдд сааддадеас 960 аадсдсаадуд Сссссаасаа адсссссудс дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддсудсдс ассссдсссс саєсссудда Єдадсеєдасс 1080 аадаассаду Ссадссєссс деЕдсудсадес аааддсеЕссс аєсссадсда саєсдссдаєд 1140 чачсдчдуачЧача дсаасудудса дссудачаас аасбасаада ссасудссєсс сдєдсеєддас 1200 сссуасуддесе сссссеЕсСссЕ судедадсаад сєсассуєддуд асаададсад дЕддсадсад 1260 чачдаасуєсє ссссаєдсеєс сдедаєдсає даддсєссдс асаассасса сасдсадаад 1320 адссЕсЕсСсс сдсссссудуч Єдчаддсудудс дчаадсучЧач чаччадчаєс соуддсуддсоада 1380 часЕссудчда дсудаддаєс сдадаєсдбед сєдасссадс сЕсссудсас сседесесвд 1440 адсссєддчсу адададссас ссеЕдеЕссЕдс ададссессс адсссуєдас сеЕССЕсСстас 1500 сеЕсдссЕдудЕ аєсадсадаа дсссудудссад дссссеЕСддс єдсеЕдаєсаа сдбєдддсаде 1550 судададсса ссддсаєссс ЄдассудеЕсєс єссуддсеєссд дсеЕссуддсас сдасьєсасс 1620 сєдассаєсеє сссуддсєдда асссудаддас ЄссдссуєдЕ асрасеєдсса дсадддсаєс 1680 аєдсбдсссс ссассессуду ссадддсасс ааддєдадааа сСсаад 1725 «2105 322

Зо «2115 584 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (2567) УНСНІ1І Ес з виступом УН «4005 322 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

А1їа Меє бег Тер Уаі Акуд Сіп Азїа Рго с1іу Пув С1у їеч Січ Тгр Уаї 35 40 45 зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї 50 55 бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 7о 75 8о0

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Агуд АвБр АБр о Рго Тер Рго Рго Роре Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

Теч Уа1 Тпг УМа1 бек бек Азїа бег Тпг Пув біу Рго бек УМа1 Рре Рго 115 120 125

Теч Аза Рго бек бек Пув Бек ТПг бек біу біу ТбПг Аза Аза Геч Сс1Уу 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190 60 бек Геч сСіу Тпг біп Трг Тує І1е Сув Авп Уа1і Авп Нів Кув Рго бег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 65 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго

260 265 270 біч Уаії пуб Рпе Абзп Тер Туг Маі АБр біу Уаі! біч Уаї Ніб5 Ап Аза 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 300

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг 325 330 335

І1е бек пув Аїа Пув сС1іу Сбіп Рго Акуд Сі Рго біп Уаї Тує ТіПг Іеч 340 345 350

Рго Рго Сув Агу АБр біч Теч ТБПг пуб Авп о біп Уа1і! Бек Геч Тгр Сув 355 360 365

Теч Уаі Ппув сіу Рпе Туг Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаі біц Тер січ бБег 370 375 З8о

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Робе Теч Тук бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер Сбіп біп б1у Авп Уаі1і Ріре бБег Сув бек Уаї Меє Нів Січ А1а 420 425 430

Теч Ніб Авп Нів Тугк ТПг бсіп пуб бек ТГеч бек Гей бег Рго сіу с1у 435 440 445

Сіу бі1у сіу бек сіу сіу сіу біу бек біу біу сбіу сіу бек сіу с1Уу 450 455 460 біу біу бек біц Уаі! сіп Геч Геч біп бек біу біу сіу Геч Уаі1ї сіп 465 470 475 480

Рго сіу сіу бек Іечп Агу Ге бег СувБ Аїа Аза бек біу Рое ТПг Ре 485 490 495 бек бБег Тук Аїа Мебє бег Тгр Уаі Акудщ Сіп Азїа Рго Сс1у Кув С1у Іеч 500 505 510 біч Тер Уаі бек Аїа Іїе Іїе сіу бек біу Аза бег Трг Туг Тугк Аза 515 520 525

Авр Бек Уа1і Ппув бі1у Аку Робе ТБПг І1їе бег Агуд Авр АБп бек ГУу5 АБПпП 530 535 540

ТПЕ Геч Тук Іеч біп Месб Абзп бег Гей Агуд Аза сії АБр Тс Аїа Уаї 545 550 555 560

Тук Тук СувБ Аїа їувз біу Тер Рпе сіу сіу Рре АБп Тугє Тгр б1у сіп 565 570 575 с1у ТК Пец Ма1! Трг Уаї бБег бег 580 «2105 323 «2115 575 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (25607) УНСН1І Ес із западиною МІ, (489) «4005 323 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 бек Аїа І1е бек біу бек Сіу біу бек ТЬг Туг Туг А1їа АБр Бег Уаї 5о0 ів) бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув (516) 85 90 95

Аза Агуд АвБр АБр о Рго Тер Рго Рго Роре Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

Теч Уаі ТЕ Уа1! бек Бек Аїа бек ТП Гуз біу Рго бек Уаі Рпре Рго 115 120 125 65 Теч Атїа Рго бБег бег Кув бБег ТрПг бек Сіу сСіу Трг Аза Аза еп С1У 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190 век печ біу Тбйг біп Тпг Тук Іїе Сув Авп Уаії Авп о Нівз Ппувз Рго 5бег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 сій УМаї Пцув Рпе Авп Тгр Туг Маї Авр Сіу Ма1 Сі Уаї Нів Авп Аї1а 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 108)

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сбіп Уа1ї Суб ТіПгЕ Іеч 340 345 350

Рго Рго бек Агуд Авр бій Теч ТПг Ппуз Авп о біп Уаї бек Геч бег Сув 355 360 365

Аа Уа1 Ппув сіу Роре Тук Рго бек АвБр Іїе Аїа Уаі сії Тгр бі 5ег 370 375 380

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Рібе Теч Уа! бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Пес Нів Авп Нівз Тук ТПг біп Ппуз бБег Іеч бег Іеч бег Рго біу б1У 435 440 445

Сіу бі1у сіу бек сіу сіу сіу біу бек біу біу сбіу сіу бек сіу с1Уу 450 455 460 біу біу бек біц Іїе Уаї Геї ТП біп бек Рго біу ТрПг Гей бек Гей 465 470 475 480

Бек Рго сбіу бі Аку Аїа ТБбг Гей бек Субв Агуд Аза бек біп бек Уаї 485 490 495

ТПг Бек бек Тук Теч Аза Тер Тук біп сбіп Пув Рго біу біп Аза Рго 500 505 510

Агуд Теч Геч Іїе Ап Ма1 СсСіу бек Агуд Акуд Аїа ТПг Ссіу І1е Рго Авр 515 520 525

Агуд Рпе Бек сіу бек біу бек біу ТБПг Авр Рпе ТПг Геї ТПг І1е 5ег 530 535 540

Агуд Геї бій Рго бі Ар Рбе Аза Уаі! Туг Тугк СувБ біп сбіп с1у І1е 545 550 555 560

Меє теп Рго Рго ТіПг Рпе сіу сіп сіу Тс Гуз Уаї біч Іїе Був 565 570 575 «2105 324 «2115 1755 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (1105) УМНСНІ1І Ес з виступом УН (489) «4005 324 60 саддєЕдсадс Еддсдсадес Єддсдссдаа дЕдаадааас ссддсадсад сдєдаадчєд бо

Есссдсаачдд сЕсСссудсудд сассеЕссадс адсвасусса єЕСсСЕСЕсЧдддЄЕ дсудссадудсс 120 ссбддасадда дсссддааєд дасдддсддс ассаєсссса ссЕссддсас сдссаастас 180 чдсссадааасє Сссадддсад адєдассаєс ассудссудаса ададсассад сассудссвас 240 асудчаассуда дсадсссдсу дадсчадчдас ассуссуєдеЕ асвассдсдс садаадсасс 300 65 сЕдаєссасу дссасеєссуда сбасєддддс садддсасса ссуєдассудє дЕССадсдсе 360 адсассаадуд дсссаєсудЕ ссєсСссссвд дсассссссеє ссаададсас сЕСЕєдоддоадес 420 асадсуддссс СЄдддсЕдссЕ ддєсааддас СасеЕсссссу аассудеЕЧвчас доасдссЧчедаУ 480 аасссаддсуд сссєдассад сддсудєЄдсас ассЕссссудд седсссвсаса деЕссссадда 540 сЕСвассссс єсадсадсуде ддаєдассдбд сссессадса дсеЕєсдддсас ссадасстас 60 асссдсаасу СЄдаассасаа дсссадсаас ассаадудєдуч асаачааадс Сдадсссааа ббо

ЕєЕсЕсдсдаса ааасссасас асудсссассу Єдсссадсас ссдаадссдс адддддЧдасс 720

ЕсадеЕсеЕссс Сссєсссссс аааасссаа дасасссєса Єдчасєсєсссу дассссєдад 780

ЧЕсасаєдсд ЄддЕддЕдда сдедадссас даадасссод аддеєсаадесє саассддеас 840 чсдчдасчддсу СЄдчаддсдса бЄаасуссаа асааадссус дуададчадса деасаасадс 900 асусбассуєд СдудЕсадсує ссЕСассуєс сеЕдсассаду асєддсєЧдаа СЄддсаадчад 960

Басаадєсдса аддеЕсЕєссаа сааадсссєс ддсудссссса Єсдадаааас саєссссааа 1020 чдссаааддудс адссссуада ассасадєд Сасасссвєдс сссссєдсад ачаєдчадсед 1080 ассаадаасс аддЕдеЕсссЕ дЕддЕдЕСвд дЕСсаадддсс Сссассссад сдаваєсдес 1140 чседчвадеЕдчу ачадсаасуд ссадссєда аасаассаса адассасссс сссЕДдчеЕдсс 1200 часадсудасу дсадсеЕссеьеє сседбвасесс ааасєдассу Сддасаадад ссуддеЕддсад 1260 садддсаасуд ЕДдЕсСадсвуд садсудбєдаєд сасдаддсесс бЄдсасаасса сгбасасссад 1320 аадсссссда дссЕєдадссс суддсудаддс доасодЧдаадсу дчадччаччадч аєсєддаддоадес 1380 чдчаадчдЕсссу даддсддеЕдд асєсєдаддаєд садсєдсссу ааадсуддсдуд аддасеЕдаєд 1440 садссєддсуд дсадссєда ассдессбєдс дссдссадсуд дсеЕсЄсассес садсадсвас 1500 чдссаєдадсеЕ дддЕссудсса ддссссєдудс аадудчассдуа аасдддаєдеЕс сдссаєсаєс 1550 чассссддсу ссадсассса ссасуссуудас адсуєдааду дссуддеєсас саєссадсс9у 1620 часаасадса адаасасссє дсасссдса аєдаасадсс єЄдсуддссда ддасассдсс 1680 дЧдЕдвєассасе дсдссаадудд асддеЕєсдудс дудсЕєсаасоі ассуддддаса ддадсассстд 1740 чЧдЕсассдєдЕ ссадс 1755 «2105 325 «2115 1728 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (1105) УНСНІ1І Ес із западиною МІ, (489) «4005 325 саддесдсадс єддсдсадес сЄддсдссдаа дсЕдаадааас ссддсадсад сдєЕдааддеЕд бо

Єсссдсаадд ссєссддсудд сасссєєсадс адсграсдсса ЄСЕСЕсдудЄ дсдссаддес 120 ссбддасадда дсссддааєд дасдддсддс ассаєсссса ссЕссддсас сдссаастас 180 чдсссадааасє Сссадддсад адєдассаєс ассудссудаса ададсассад сассудссвас 240 асудчаассуда дсадсссдсу дадсчадчдас ассуссуєдеЕ асвассдсдс садаадсасс 300 сЕдаєссасуд дсвассєсда срассддддс садддсасса ссудеЕдассудє деЕссадсдсе 360 адсассаадд дсссассудеЕ сеЕбссссссд дсасссеєссо ссаададсас сссЕддддадес 420 асадсуддссс СЄдддсЕдссЕ ддєсааддас СасеЕсссссу аассудеЕЧвчас доасдссЧчедаУ 480 аасссаддсуд сссєдассад сддсудєЄдсас ассЕссссудд седсссвсаса деЕссссадда 540 сЕСвассссс єсадсадсуде ддаєдассдбд сссессадса дсеЕєсдддсас ссадасстас 60 асссдсаасу СЄдаассасаа дсссадсаас ассаадудєдуч асаачааадс Сдадсссааа ббо

ЄсЕсдЕДдаса ааасссасас асбдсссассу Сдсссадсас ссдаадсєдс адддддассд 720

ЕсадеЕсеЕссс Сссєсссссс аааасссаа дасасссєса Єдчасєсєсссу дассссєдад 780

ЧчсЕсасаєдсу СЧдУЧаєдУасдчда суєдадссас даачассссд аддссаадеЕс саассдудавєас 840 чсдчдасчддсу СЄдчаддсдса бЄаасуссаа асааадссус дуададчадса деасаасадс 900 асусбассуєд СдудЕсадсує ссЕСассуєс сеЕдсассаду асєддсєЧдаа СЄддсаадчад 960 басаадедса аддессссаа сааадссссс ддсдссссса ЕЄсдадаааас саєссссааа 1020 чдссаааддудс адссссуада ассасадуєд Єдсасссвєдс ссссаєсссу дчаєдадсід 1080 ассаадаасс аддесадссеЕ сеЕсдбдсдса дЕсаааддсс сссаєсссад сдасаєсдсес 1140 чседчвадеЕдчу ачачсааєду дсадссуда аасаассаса адассасусс Єсссуєдсес 1200 часеєЕссудасу дчссссЕссЕЕ ссеЕСсСудЄдадс аадсеєсассу Сддасаадад саддеддсад 1260 садддадаасу ЕСЕЄСЄСаєУ сЕССдЄдає саєсєдаддссс єдсасаасса сбасасдсад 1320 аачадссссс сссЕдеЕСЕСС ддЧсЧдЧдаддс дасоЧдаадсу дчадччачдчадч аєссуддсудес 1380 ччаддЕсссу даддсддадд аєссдадаєс деЕдсеєдассс адссссссудур сассседеся 1440 сєдадсссвєд дсдадададс сасссеєдЕсс Єдсададссе сссадессуєЄ дассеЕссьсс 1500 бассссудссє ддсассадса даадсссдудс саддссссеЕс ддсєдсеєдає саасудєдддас 1550 адссуддчадад ссассддсає сссеєдассуд ЕЄсСЕссудес седдссссда сассуасьєсс 1620 асссбдасса ссссссудсЕ ддаасссдад дасєєсдссу Єдсассассд ссадсадддс 1680 аєсаєсдсєдс сссссасссє гддссадддс ассааддєдч аааєсаау 1728 «2105 326 «2115 585 бо «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (1105) УНСНІ Ес з виступом УН (489) «4005 326 65 сіп Уаі1ї Сіп теп Уаї Сіп бек сі1у Аїа Січ Ма1 Ппув Пув Рго сС1іу бЗег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо біп б1іу Аку УМаї ТП І1їе ТБг Аза А5р Губ5 бег ТПг бег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд Бек ТПг Тез І1ї1е Тук біу Тук Рре Авр Туг Тгр сб1у біп б1Уу 100 105 110

ТПг Тс Маї ТБг Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сбіу Ркго бек Уаї Ре 115 120 125

Рго Геч Аїа Ркго бек бек Гув бек ТПг бек сіу сіу ТПг Аза Аї1а Іеч 130 135 140 сі1у Сув Печ Ма1 Ппув Авр Туг Рре Рго біц Рго Уаі1і Тіг Уаі1ї бег Тгр 145 150 155 160

АБп бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Ніб ТпПг Рре Рго Аїа Уаї1ї Іеч 165 170 175 біп бек бек біу Пес Туг Бек Геч бек бек Уа! Уаі Трг Уаі1ї Рго 5Бег 180 185 190

Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБ Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп о Нібв КТу5 Рго 195 200 205 век Авп ТПг Ппуб5 Маі Авр о Гув Ппув Уаї сій Рго Ппув Бек Суб АБвр Туз 210 215 220

Так Нів Трг о Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Сі Азїа Аза сСі1у С1і1у Рго 225 230 235 240

Зек Уа1ї Рре Геї Робе Рго Рго Пу5 Рго Пув Авр ТПг Геч Меє І1е 5ег 245 250 255

Агуд Тпкг Рго бій Маї Тс Сувз Уаії Уаії Уаї Авр Уаії Бек Нібв січ Ар

Зо 260 265 270

Рго біц Маї Ппув Роре АБп Тгр Туг Уаі Авр сіу Уаі1і сії Маї Ніб5 АБп 275 280 285

Аа пуб ТПг Ппув Рго Аку бі бі біп Туг Абзп бБег ТПг Туг Агуду Уаї 290 295 300

Уаї бек Уаї ес Тр Уаї тез Нів Сіп Авр Тер Те АБп с1у Пув С1Ч 305 310 315 320

Тук Ппув Сув Гуз Уаії бек АвБп пуб Аза Геч сіу Аїа Рго Іїе біц Був 325 330 335

ТПг І1ї1е бек Гуз Аза пу5 сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уаї Тує Тр 340 345 350

Теч Рго Рго Суб Агуд Авр січ Геї ТП Гуз АБп о біп Уаії бек Геч Тгр 355 360 365

Сув Теч Уаі Ппув сіу Рбе Туг Рго бек АБр Іїе Аїа Уаі сій Тер сій 370 375 З8о век АБп біу біп Рго бій Авп Авзп Туг Пув ТПг ТБ Рго Рго Уаї Іецй 385 390 395 400

Авр Бек Авр сіу бек Рре Робе Те Тук бек ПпувБ Геч ТПг УМаї АБр Гуз 405 410 415 ек Акуд Тер біп біп біу АБп Уаі Рре бек СубвБ Бек Уа1і Меє Нів січ 420 425 430

Аза Ггеч Ні АБп о Нів Тук Тйг біп пуб бек Геч бБег Геч бек Рго б1Уу 435 440 445

Сіу бі1у сіу сіу бек сіу сіу біу біу бек біу сбіу сіу сіу Бек сб1Уу 450 455 460 сіу біу с1у бек Сіп Уаї1ї Сіп теп Іїееч Сіц бег СсС1іу С1у Сс1у Іеч Уаї 465 470 475 480 біп Ркго біу сіу Бек Геї Агкуд Тез бек Су5з Аїа Аза бек сіу Рпе ТПг 485 490 495

Рпе бБег бБег Туг Аїа Мес бег Тер Уаі Агу сіп Аза Рго с1іу Гуз б1Уу (516) 500 505 510

Теч біц Тер Уаі! бек Аза Ії1е І1е сб1іу бек біу Аїа бек ТПг Тукг Туг 515 520 525

Аза Авр Бек Уа1і Губ5 біу Аку Ропе Трг Іїе бек Агуд АБр АБп бек КТув 530 535 540 65 АБп о Тпг о Геч Тує їеч біп Мес Абп бег Іїечп Агкуд Аїа Січ Авр Тіг А1та 545 550 555 560

Уаї Тук Тук Сув Аїа пуб сіу Тер Рпбе сіу біу Роре АБп Туг Тер 0Ш1У 565 570 575 біп біу ТПг Ге Уа1і ТПг Уаї бек б5ег 580 585 «2105 327 «2115 576 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (1105) УНСН1І Ес із западиною МІ, (489) «4005 327 сіп Уаі1ї Сіп теп Уаї Сіп бек сі1у Аїа Січ Ма1 Ппув Пув Рго сС1іу бЗег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє бій Іей бег бек ГПеп Агу бек біш АвБр ТБг Аза Уаї Тугк Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд Бек ТПг Тез І1ї1е Тук біу Тук Рре Авр Туг Тгр сб1у біп б1Уу 100 105 110

ТПг Тс Маї ТБг Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сбіу Ркго бек Уаї Ре 115 120 125

Рго Геч Аїа Ркго бек бек Гув бек ТПг бек сіу сіу ТПг Аза Аї1а Іеч 130 135 140 біу Сув Печ Уаі! Ппув Авр Тугк Роре Рго біцп Рго Уа! Трг Уа1ї бек Тгр 145 150 155 160

АБп о бБег сіу Аїа Іїеч ТрПг бЗек Сіу Ма1 Нів Тіг Рре Рго Аїа Уаї Іеч 165 170 175 біп бек бек біу Пес Туг Бек Геч бек бек Уа! Уаі Трг Уаі1ї Рго 5Бег 180 185 190

Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБ Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп о Нібв КТу5 Рго 195 200 205 век Авп ТПг Ппуб5 Маі Авр о Гув Ппув Уаї сій Рго Ппув Бек Суб АБвр Туз 210 215 220

ТПЕ Нів ТПг Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сії Аїа Аза с1у б1у Рго 225 230 235 240 зек Маії Ріпе Гей Робе Ркго Ркго Пув Рго Пув Авр ТПг Гей Меє І1е 5ег 245 250 255

Агуд Тпкг Рго бій Маї Тс Сувз Уаії Уаії Уаї Авр Уаії Бек Нібв січ Ар 260 265 270

Рго біц Маї Ппув Роре АБп Тгр Туг Уаі Авр сіу Уаі1і сії Маї Ніб5 АБп 275 280 285

Аа пуб ТПг Ппув Рго Аку бі бі біп Туг Абзп бБег ТПг Туг Агуду Уаї 290 295 300

Уаї бек УМаї Іїеч ТБг Уаї Ге Нів сіп АБр Тгр ІГеч АБп біу Ппу5з сіц 305 310 315 320

Тук Ппув Сув Пув Уа1і! бек Авп Пуз Аїа Ге сі1у Азїа Рго Іїе біч Гув 325 330 335

ТПг І1ї1е бек Гуз Аза пу5 сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уаї Су5 Тр 340 345 350

Теч Рго Рго бек Агуд АвБр сії Геї ТП Гуз АБп о біп Уаї бек Геч бБег 355 360 365

Сув Аїа Уаії Ппув сіу Рбе Туг Рго бек АБр Іїе Аїа Уаі сій Тер сій 370 375 З8о век Авп біу біп Рго біц АБп АбБп Тук пуб ТПг Тс Рго Рго Уаї Іеч 385 390 395 400 60 АБвр Бег Авр біу бек Рпе Ріпе Тїеч Уаі! бек Ппув Пе ТП УМаї АБвр Гуз 405 410 415 ек Акуд Тер біп біп біу АБп Уаі Рре бек СубвБ Бек Уа1і Меє Нів січ 420 425 430

Аза Ггеч Ні АБп о Нів Тук Тйг біп пуб бек Геч бБег Геч бек Рго б1Уу 65 435 440 445

Сіу бі1у сіу сіу бек сіу сіу біу біу бек біу сбіу сіу сіу Бек сб1Уу 450 455 460

Сіу біу біу бек бі Іїе Уаії Геї ТПг біп бек Рго біу ТпПг Геч бБег

465 470 475 480

Теч бек Рго біу біц Акуд Аза ТП Іечп бек Суб Агуд Аїа бек сіп бБег 485 490 495

Уаї ТЬг бек бек Тук Ге Аза Тер Тук біп біп Гуз Рго сіу сбіп Азїа 500 505 510

Рго Акд Геї Геї І1їе АБп Уа! сіу бек Агуд Агуд Аїа ТПг сб1у Іїе Рго 515 520 525

АБр Акуд Рбе бек сіу бек біу бек біу ТБПг Авр Рпе ТПг Геї ТПг І1е 530 535 540 бек Агд Течш Січ Рго сСіп Авр Рпе Аїа Уаі1і Тугє Туг Сув біп с1іп С1У 545 550 555 560

Іїе Меє Геї Рго Рго Тйг Рбе біу біп сіу ТпПг Ппув УМаї січ І1е Гуз 565 570 575 «2105 328 «2115 1758 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (9811) УНСНІ1І Ес з виступом УН (489) «4005 328 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асддадссда дсадссєдад ассєдаддас ассдссуєдаєс ассассдеЕдс дадассеЕєсе 300 чЧчаеєдссвасс суддудєвсассє сдассассуду додссаадудда ссассудєдас суаєсєссеса 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 часасадсуд сссЕдЧдучссдд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдаассуде дасудЧЕеЕдесУ 480

Едчдаасеєсад дсдссссдас садсуддсуєд сасасссссс суддсеєдеЕссо асадесссьса 540 чддассстасеЕ сссеЕсадсад сдеЕддедасс дедсссЕсСса дсадссбдучд сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдааєса саадсссадс аасассааууд Єддасаадаа адсєдадсесс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссдЕсадеЕсе ЕсссссЕссс сссаааассс ааддасассс Єсаєдаєсєссс ссддассссе 780 чаччдаєсасаєсє дсдєдУЧасЧдУчЕ дчасуєдадс сасдаадасс ссдаддеєсаа дЕсСаасеєда 840 басуєддасуд дсдєЕддадді дсаєааєдсс аадасааадс сдсудддадда дсадсасаас 900 адсасуєасс дчЕДдЕдЧдссадд судєсСсссасс дЕСССдсасс адчасєсдудсс дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса дчеЕдвєасассс Єдссссссвд сачачаєдад 1080 сєдассаада ассаддеЕдеЕс сссдсддеЕдЕ седдссаадуд дсЕссбассс садсдаєаєс 1140 дссдасєддадЕ дддададсаа сддссадссЕ дадаасаасс асаадассас ссссссвЕдсд 1200 сєбддасадсуд асддсадсеє сеЕссседвас єЄссаааседа ссудбддасаа дадссуддеЕду 1260 садсадддса асдсдсєсад седсадсдбд асбдсасдадд сссеєдсасаа ссастрасасс 1320 садаадсссс Єдадссєдад ссссуддсдда ддсддсддаа дсддаддада аддаєсєд9ад 1380 час9ччадчЕс ссуЧадудсуд Єдчаєсєдад деЕдсадсеєдс Есдааадсуду содоЧадчасесд 1440 дЕдсадсссд дсуддсадсесе дадасеЕдеЕсеЕ Едсудссусса дсуддсєссас сЕссадсадс 1500 басуссаєда дссдддессуд ссаддссссе дудсааддчдас сддааєдадє дЕСсдссаєс 1550 ассуддсЕсвд дсудссадсас ссасвєасусс дасадсуєда адддссуддеЕс сассаєсадс 1620 сдддасааса дсаадаасас ссбдсасссд садаєдааса дсседсудддс сдаддасасс 1680 чдссуєдсасе ассдсдссаа ддчдаєддеєєс ддсддсеЕсса ассассдчдд асадддсасс 1740 сеЕддЕсассу бдеЕссадс 1758 «2105 329 «2115 1731 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» ДНК (9811) УНСНІ1І Ес із западиною МІ, (489) «4005 329 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 60 ссЕддасаад ддсссдадед даєддачаддуч аєсаєссста СсЕСсСддсас адсааассас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадссєдач асссудадччдас ассуссуєдеЕ ассассуєдс дачасєсеєєссе 300 чЧчаеєдссвасс суддудєвсассє сдассассуду додссаадудда ссассудєдас суаєсєссеса 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 65 ддсасадсуддд сссеЕдддссд ссеЕддЕсаад дастасеЕєсс ссдаассудЕ дасоддеєдеЕс 480

Едчдаасеєсад дсдссссдас садсуддсуєд сасасссссс суддсеєдеЕссо асадесссьса 540 ччасеЕсвтасс сссеЕСсадсад суєдудєдасс дЕдсссссса дсадссєдаду сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдааєса саадсссадс аасассааууд Єддасаадаа адсєдадсесс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссдЕсадеЕсе ЕсссссЕссс сссаааассс ааддасассс Єсаєдаєсєссс ссддассссе 780 чаччдаєсасаєсє дсдєдУЧасЧдУчЕ дчасуєдадс сасдаадасс ссдаддеєсаа дЕсСаасеєда 840

Басєдчдасу дсудєдчвадає дсасааєдсс аадасааадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасдбєасс деЕдЕддЕсад сдеЕссЕСасс деЕсссдсасс аддасєддсЕ дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса дчЕдеЕдсассс єдсссссаєс ссудчаєдад 1080 сєдассаада ассаддеса ссссссуєдс дсадссааад дсеЕсссаєсс садсдасаєс 1140 чссаєдчадс доадачадсаа Єдддсадссу дачаасаасеє асаадассас дссЕССсСсєд 1200 седдасеєссу асуддасеєссеЕє сеЕсСссеєсуєд адсаадсєса ссдсддасаа дадсадаєа 1260 садсаддудда асдеЕсЕеєсеЕс аєдссссуєд абдсаєдадуд сесбдсасаа ссасграсасу 1320 садаададсс ЕсЕСССЕДдДЕС ЕСссодддЕдда ддсддасддаа дсудаадаадда аддаєссддас 1380 час9ччадчЕс ссудадудсууд адчаєссуа аєсдсбдсєда сссадсесссс сддсасссвд 1440

Єсессдадсс себддсдадад адссасссвд Ессєдсадад ссесссадес сдєдассесс 1500

Єссвассєсу сссддбаєса дсадаадссс дудссаддсесс сЕСсСуддсєдесе даєсаасоаєд 1550 часадссуда дадссассууд саєсссєдас суддЕСсССсссу дсЕСЕддсЕсС сддсассддасєс 1620 беЕсасссвєда ссаєсеєсссуд дсЕддаассс даддасессу ссудбдсасса седссадсад 1680 чдасаєсаєдс бдссссссас сеЕєсддссад ддсассаач Єддаааєсаа д 1731 «2105 330 «2115 586 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (9811) УНСНІ Ес з виступом УН (489) «4005 330 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе бег Тгр Уаі Агуд Сіп Аїа Рго сіу Сіп С1у їеч Січ Тгр Меб

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 35 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Агуд Бек бек біу Аїа Тук Рго біу Тук Рпе Авр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 40 сіу Тис Тпс Ма1 Тс Уаї бБег бег Аза бек ТрПг Ппув Сіу Рго бег Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 45 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 180 185 190 50 бек бБег бек їеч біу Тпг біп Тпг Туг І1е Сув Авп Ма1ї Авп Нів ув 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 55 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 260 265 270 60 Авр Рго січш Уаї1ї пуб Рре Авп о Тгр Туг Маії Авр Сі1іу Ма1! Січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 108)

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 65 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув сбіу біп Рго Акуд бід Рго біп Уа1ї Туг

340 345 350

ТПЕ Геч Ркго Рго Сув Агуд Авр бі Геч Тс Гпуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365

Тер Суб Геч Маї Гуз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уаї біч Тгр 370 375 З8о біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Тук бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Пув бек Агуд Тер Сіп Сбіп СбС1іу Авп Уаі1ї Рре бег Сув бек Ма1 Меє Нів 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 435 440 445

Сіу бі1у сбіу сіу сіу Бек сіу сіу біу біу бек біу сіу сіу сіу бБег 450 455 460

Сіу біу сбіу сіу Бек біцп УМаї сіп Іечп Іеч Січ бек сіу сіу сіу Гей 465 470 475 480

Уаї біп Рго біу біу бек Гечп Агкуд Геї бек Су5 Аїа Аза бек сіу Ріе 485 490 495

Так Рпе бег бек Туг Аїа Меє бек Тгр Маії Акуд Сіп Аза Рго С1Уу Гув 500 505 510 біу Теч біц Тер Уаі Бек Аїа І1ї1е І1ї1е сСіу бек біу Аза бек ТПг Туг 515 520 525

Тук А1їа АБр бек Уа! пуз сіу Акуд Рпе ТПг І11е 5егк Агу АБр Ап бег 530 535 540

Туз АБп Тс Гей Тук Геї біп Меє АБп бек Те Агуд Аїа бій АвБр Тс 545 550 555 560

Аа Уа1 Тук Тук СувБ Аїа Гуз біу Ткр Рпе сіу сіу Рре АБп Туг Тгр 565 570 575 сі1у біп с1у Тпг Те Уа1ї ТПг Уаї бекг бег 580 585 «2105 331 «2115 577 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (9811) УНСН1І Ес із западиною МІ, (489) «4005 331 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45 сіу б1у І1е І1їе Рго Іїе Рбе сіу ТБ Аза Ап Туг Аїа біп пув Ре 5о0 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Агуд Бек бек біу Аїа Тук Рго біу Тук Рпе Авр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Те Аїа Рго бег бек Пув бег ТіПг бек біу сС1у Тйг Аза А1а 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї (516) 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205 65 Рго Бек АвБп ТПйг пув Уаі Авр о Ппув Ппув УМаї бі Рго Ппувз бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 260 265 270

АБвр Рго бій Маї Ппув Рпе Азп Тер Тугк Уаі Авр сіу Уаї сі МУаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 108)

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув біу біп Рго Акуд бі Рго біп Уа1ї! Сув 340 345 350

ТВгЕ Ген Рго Рго бек Агуд Авр біп Ге ТП Ппуз АБп о біп Уаї бег Іеч 355 360 365 зек Сув Аїа Ма1ії Гуз біу Рпе Тукг Рго Бек Ар Іїе Аїа Уаї січ Тгр 370 375 380 біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Ма! бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 бі Аїа Пешп Ні АвБп Ніз Туг ТБПг біп Гпубв бБег ТІечй бег ТІеч бег Рго 435 440 445

Сіу бі1у сбіу сіу сіу Бек сіу сіу біу біу бек біу сіу сіу сіу бБег 450 455 460

Сіу біу сбіу сіу Бек сії Іїе Маії Іечп ТБг біп бек Рго біу ТпПг Гей 465 470 475 480

Зек Геч Бек Рго біу бі Аку Аїа ТрПг Гей бек Суб Агуд Азїа бек біп 485 490 495

Зек Уа1і ТіПг бек бек Тук Теч Аза Тер Тук біп сіп Пув Рго біу біп 500 505 510

Аза Рго Акд їеч їеч І1їе Авп Уаі1і Сіу бег Агку Агд Аїа ТПг СсС1у І1е 515 520 525

Рго АБр Агу Роре бек біу бек біу бек біу ТПг Авр Рре ТПг Іеч Тс 530 535 540

І1їе Бек Акд Геч біцп Ргро бічЧ Абр Рпре Аїа Уа1і Туг Тугк Сув біп сбіп 545 550 555 560 біу І1їе Меє Гей Рго Рго ТПг Рре біу біп біу Тс Ппуз Уаі бі Ше 565 570 575

Тув «2105 332 «2115 1731 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (1283) УНСНІ Ес з виступом МІ, (489) «4005 332 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддссддадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 дсасадааде Сссадддсад ддЕсассасє аседсадаса аасссасудад сасадсстас 240 асудчадссда дсадсссдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассусєудс дачаєссдаа 300 гЕсСссусЕссс асуссдассє сдасвсассуу додссаадудда ссассудєдас судєсссдаде 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 часасадсуд сссЕдЧдучссдд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдаассуде дасудЧЕеЕдесУ 480 60 бддаасєсад дсдсссЕєдас садсуддсуєЄд сасассеЕєсс суддсеЕдеЕссе асадесссьса 540 ччасеЕсвтасс сссеЕСсадсад суєдудєдасс дЕдсссссса дсадссєдаду сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдааєса саадсссадс аасассааууд Єддасаадаа адсєдадсесс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссдЕсадеЕсе ЕсссссЕссс сссаааассс ааддасассс Єсаєдаєсєссс ссддассссе 780 65 чаддсєсасає дсдЕддЕддЕ ддасуєдадс сасдаадасс ссдаддесаа дсеЕсаасвє9ду 840

Басєдчдасу дсудєдчвадає дсасааєдсс аадасааадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасуєасс дчЕДдЕдЧдссадд судєсСсссасс дЕСССдсасс адчасєсдудсс дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса дчеЕдвєасассс Єдссссссвд сачачаєдад 1080 сєдассаада ассаддеЕдеЕс сссдсддеЕдЕ седдссаадуд дсЕссбассс садсдаєаєс 1140 чссаєдчадс доадачадсаа суддссадссс дадаасаасє асаадассас ссссссеєдсд 1200 сєбддасадсуд асддсадсеє сеЕссседвас єЄссаааседа ссудбддасаа дадссуддеЕду 1260 садсадддса асдсдеЕссад сєдсадсудєд аєдсасудадд ссссдсасаа ссассасасс 1320 садаадсссс Єдадссєдад ссссуддсдда ддсддсддаа дсддаддада аддаєсєд9ад 1380 часчвдадчЕє ссуддаддсудд Єддаєсєдад аєсуєдссда сссадесссс сддсасссвд 1440

Єсессдадсс себддсдадад адссасссвд Ессєдсадад ссесссадес сдєдассесс 1500 бссвассеєсу сссддбаєса дсадаадссс ддссаддссс сЕСсуддсбдсе даєсаасоаєд 1550 чЧадсадеЕсудда дадссассудда саєсссеєдас суддеЕссеЕссу дсеЕсеєддссс суддсассдас 1620 беЕсасссвєда ссаєсеєсссуд дсЕддаассс даддасессу ссудбдсасса седссадсад 1680 чдасаєсаєдс бдссссссас сеЕєсддссад ддсассаач Єддаааєсаа д 1731 «2105 333 «2115 1758 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (1283) УМНСНІ1І Ес із западиною УН (489) «4005 333 саддЕдсаає єддсдсадеЕс Єддддсєдад дЕдаадаадс сЕдддЕсСсЕс ддєдаадаеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддссддадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадсссдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассусєудс дачаєссдаа 300

СЕССУЧЕЕСсССсСЕ асдсєдассс сдассассуддда ддссааддда ссассудбдас судєсСссддаде 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 часасадсуд сссЕдЧдучссдд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдаассуде дасудЧЕеЕдесУ 480

Едчдаасеєсад дсдссссдас садсуддсуєд сасасссссс суддсеєдеЕссо асадесссьса 540 ччасеЕсвтасс сссеЕСсадсад суєдудєдасс дЕдсссссса дсадссєдаду сасссадасс 60 басасєсєдса асдєедааєса саадсссадс аасассаадд Єддасаадаа адеєдадссс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссдЕсадеЕсе ЕсссссЕссс сссаааассс ааддасассс Єсаєдаєсєссс ссддассссе 780 чаччдаєсасаєсє дсдєдУЧасЧдУчЕ дчасуєдадс сасдаадасс ссдаддеєсаа дЕсСаасеєда 840

Басєдчдасу дсудєдчвадає дсасааєдсс аадасааадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасдбєасс деЕдЕддЕсад сдеЕссЕСасс деЕсссдсасс аддасєддсЕ дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса дчЕдеЕдсассс єдсссссаєс ссудчаєдад 1080 сєдассаада ассаддеса ссссссуєдс дсадссааад дсеЕсссаєсс садсдасаєс 1140 чссаєдчадс доадачадсаа Єдддсадссу дачаасаасеє асаадассас дссЕССсСсєд 1200 седдасеєссу асуддасеєссеЕє сеЕсСссеєсуєд адсаадсєса ссдсддасаа дадсадаєа 1260 садсаддудда асдеЕсЕеєсеЕс аєдссссуєд абдсаєдадуд сесбдсасаа ссасграсасу 1320 садаададсс ЕсЕСССЕДдДЕС ЕСссодддЕдда ддсддасддаа дсудаадаадда аддаєссддас 1380 час9ччадчЕс ссудадудсуд адчаєссудадд деЕдсадсєдс Єсдааадсуду содоЧадчасесд 1440 чЧЕдсадссбд дсуддсадссеє дадаседесеЕ Едсудссудсса дсуддсєсЄсас сеЕссадсадс 1500 басуссаєда дссдддсєссуд ссаддсессссе дудсаадддас Єддаасдаає дЕССсСДссаєс 1550 ассуддсЕсвд дсудссадсас ссасвєасусс дасадсуєда адддссуддеЕс сассаєсадс 1620 сдддасааса дсаадаасас ссбдсасссд садаєдааса дсседсудддс сдаддасасс 1680 чдссуєдсасе ассдсдссаа ддчдаєддеєєс ддсддсеЕсса ассассдчдд асадддсасс 1740 сеЕддЕсассуд ЕдЕссадс 1758 «2105 334 «2115 577 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» (1283) УНСН1 Ес з виступом МІ, (489) «4005 334 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг (516) 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 50 55 бо 65 сіп б1іу Агуд Ма1 Трг І1їе ТПг АТїа Авр Пув бБег ТіПг бек ТіПг Аїа Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Акуд Бек бій Робе Аку Рбе Туг Аза Авр Рпе А5зр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Гей Аїа Рго бег бег Пув бек ТПг бек сіу сі1у ТБг Аїа Аї1а 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АвБп ТПйг пув Уаі Авр о Ппув Ппув УМаї бі Рго Ппувз бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аїа Ппуз ТВг Ппув Рго Акуд бій бій біп Тук Авп бек ТПг Туг Агд 290 295 300

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій

Зо 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув сбіу біп Рго Акуд бід Рго біп Уа1ї Туг 340 345 350

ТПЕ Геч Ркго Рго Сув Агуд Авр бі Геч Тс Гпуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365

Тер Сув Геч Уа1і ПЦув біу Рре Туг Рго бБег Авр І1е Аїа Уаї Січ Тгр 370 375 З8о біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Тук бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 435 440 445 сі1іу сі1у сС1у сіу сі1іу бек сі1іу сіу Сі1іу С1у бБег сС1у Сі1у сСі1у с1у бЗег 450 455 460

Сіу біу сбіу сіу Бек сії Іїе Маії Іечп ТБг біп бек Рго біу ТпПг Гей 465 470 475 480

Зек Геч Бек Рго біу бі Аку Аїа ТрПг Гей бек Суб Агуд Азїа бек біп 485 490 495

Зек Уа1і ТіПг бек бек Тук Теч Аза Тер Тук біп сіп Пув Рго біу біп 500 505 510

Аза Рго Акд Геї Геї І1їе АБп Уа! Сіу бег Агуд Агуд Аїа ТПг с1у І1е 515 520 525

Рго Авр Агу Рпе бБег Сіу бек біу бек С1іу ТіПг Авр Рре Тс Ієч ТЕГ 530 535 540

І1їе Бек Акд Геч біцп Ргро бічЧ Абр Рпре Аїа Уа1і Туг Тугк Сув біп сбіп 545 550 555 560 біу І1їе Меє Гей Рго Рго ТПг Рре біу біп біу Тс Ппуз Уаі бі Ше (516) 565 570 575

Тув «2105 335 «2115 586 65 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (1283) УНСН1І Ес із западиною УНН (489)

«4005 335 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо сіп б1іу Агуд Ма1 Трг І1їе ТПг АТїа Авр Пув бБег ТіПг бек ТіПг Аїа Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд Бек бій Робе Аку Рбе Туг Аза Авр Рпе А5зр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140

Теч біу Сув їеч Ма1ї Пув Авр Туг Рре Рго бі Рго Уа1і ТПг Уаї 5Зег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220

Пув ТЕ Нів Тпг о Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго СсСіш Аїа Аза с1у С1Уу 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 300

Уаї Уаї Бек Маї Іїечш Тпг Ма1ї Ге Нів біп Авр Тгр їеч Ап сС1у Гуз 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув біу біп Рго Акуд бі Рго біп Уа1ї! Сув 340 345 350

ТПЕ Геї Ркго Рго бек Агуд Авр бі Геч Тс Ппуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365 зек Сув Аїа Ма1ії Гуз біу Рпе Тукг Рго Бек Ар Іїе Аїа Уаї січ Тгр 370 375 З8о сій бек Авп біу Сіп Рго біц Авп Авп о Туг ГПув Тс ТБ Рго Ркго Уаї 385 390 395 400

Теч АБр бек Авр сіу Бек Рібе Робе ІГеч Ма! бек Гув Гец ТПг Уаі1і Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 435 440 445

Сіу бі1у сбіу сіу сіу Бек сіу сіу біу біу бек біу сіу сіу сіу бБег 450 455 460 60 сіу бі1у сС1у сіу бек Січ Маї СсСіп Те їеч бі бЗег Сіу сСі1у сС1у Іеєч 465 470 475 480

Уаї біп Рго біу біу бек Гечп Агкуд Геї бек Су5 Аїа Аза бек сіу Ріе 485 490 495

ТПЕ Ріре бек бек Туг Аза Меє бек Тер Уаі Аку біп Аза Рго біу Пув 65 500 505 510 біу Теч біц Тер Уаі Бек Аїа І1ї1е І1ї1е сСіу бек біу Аза бек ТПг Туг 515 520 525

Тук А1їа АБр бек Уа! пуз сіу Акуд Рпе ТПг І11е 5егк Агу АБр Ап бег

530 535 540

Туз АБп Тс Гей Тук Геї біп Меє АБп бек Те Агуд Аїа бій АвБр Тс 545 550 555 560

Аа Уа1 Тук Тук СувБ Аїа Гуз біу Ткр Рпе сіу сіу Рре АБп Туг Тгр 565 570 575 біу біп біу ТПг Гей Уа1! ТПг Уаї бек б5ег 580 585 «2105 336 «2115 1725 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (25607) МНСНІ1І Ес з виступом МІ, (489) «4005 336 чаддаєдсаає ЄдЕєддадес Єдддддаддс Ссддсасадс ссддддоддеЕс ссеЕдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 чсачасєссу СЄдаадддссу дсЕссассаєс Сссададаса ассссаадаа сасдсєдесає 240 сеЕдсадаєда асадссєдад адссдаддас асддссдбає аєсасєдедс дсдеєдасдас 300 ссудєддссдс сдсєссдасва сєддддссаа ддаассссдда Ссассуєсєс дадедссадс 360 ассааддудсс сассудссссє ссссссдудса сссеєссссса ададсассєс Сдодадддсаса 420 чсоддссссду дссдсссддє саадчассас сСЕсСсссдаас суддєдасуде дЕСдЄсддаас 480

Есаддсудссс Єдассадсуд судєдсасасс СЕСССУОСсСС ЕсссасадеЕс сЕСаддасесс 540

Бассссссса дсадсуєдудє дассусєдссс сссадсадсе Єдддсассса дасссасаєс 60 бдсаасдсда ассасаадсс садсаасасс ааддсддаса адааадсєда дсссаааєсе ббо

Едеєдасаааа сеєсасасасу сссассуєбудс ссадсасссуд аадсєдсаду дадассдєса 720 дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 780 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 840 часчддсуєЄдуа аддєдсаєаа Єдссаацаса аадссудсудчд адчадсадеа саасадсасд 900 бассуєдсдд Єсадсдессо сассуєсссд сассаддасс ддсєдааєдд сааддадеас 960 аадсдсаадуд Сссссаасаа адсссссудс дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддсдсас ассссдсссс ссеЕдсадача Єдадсеєдасс 1080 аадаассад Єдессссдед дЕдЕСЕддЕсС аадддсеЕссоі ассссадсда Сассудссдаєд 1140 чачсчдуаЧача дсаасудсса дсссдадаас аасбасаада ссассссссс Єдсдсеєдвдас 1200 адсасуддса дчссЕсСЕСссЕ дсасеєссааа сєдассуєддуд асаададссу дЕддсадсад 1260 часаасуєдс Ссадсєдсад суєдасдсас даддсссвєдс асаассасва сасссадаад 1320

Есссєдадсс Сдадссссуд судЧчаддсуддс дчаадсучЧач чаччадчаєс Єдоаддоадсода 1380 часЕссудчдад дсуддеєддаєс єЄдадаєсдед сєдасссадс сЕсссудсас сседесесвд 1440 адсссєддчсу адададссас ссеЕдеЕссЕдс ададссессс адсссуєдас сеЕССЕсСстас 1500 сеЕсдссЕдудЕ аєсадсадаа дсссудудссад дссссеЕСддс єдсеЕдаєсаа сдбєдддсаде 1550 судададсса ссддсаєссс ЄдассудеЕсєс єссуддсеєссд дсеЕссуддсас сдасьєсасс 1620 сєдассаєсеє сссуддсєдда асссудаддас ЄссдссуєдЕ асрасеєдсса дсадддсаєс 1680 аєдсбдсссс ссассессуду ссадддсасс ааддєдадааа сСсаад 1725 «2105 337 «2115 1752 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (25607) УМНСНІ1І Ес із западиною УН (489) «4005 337 чачачаєдсаасє СуУосєдчадсс єдоадоадЧдаддс сЄєдадсасадс ссддадоадЕС ссєдадасесс бо

Есссудсдса сссссудасє сассеЕсвсадс адссаєдсса Єдадссддудє ссдссадаесє 120 ссадддаадд ддссддадеЕд ддеЕсссадсеЕ ассадсддеа деЕддеЕддсад сасавбастсас 180 чсачасєссу СЄдаадддссу дсЕссассаєс Сссададаса ассссаадаа сасдсєдесає 240 сЕдсадаєда асадсссдад адссдаддас асуддссудсбає аєсасєдсдс дсуєдасддас 300 ссдЕддссдс сдЕссдасвса седдддссаа ддаасссодда ЄсассдеЕсесс дадеЕдссадс 360 ассааддудсс сассудссссє ссссссдудса сссеєссссса ададсассєс Сдодадддсаса 420 чсоддссссду дссдсссддє саадчассас сСЕсСсссдаас суддєдасуде дЕСдЄсддаас 480

Есаддсудссс Єдассадсуд судєдсасасс СЕСССУОСсСС ЕсссасадеЕс сЕСаддасесс 540 60 бассссссса дсадсдєддс дассуєдссс Сссадсадсо Єдддсассса дасссасаєс 60

ЕдсаасуєЄда аєсасаадсс садсаасасс аадчдсдуддаса адааадссда дсссаааєссе ббо

Едеєдасаааа сеєсасасасу сссассуєбудс ссадсасссуд аадсєдсаду дадассдєса 720 дЕсСсСЕссссс сСссссссааа асссаауддас асссссаєда ЕЄсЕСССддас сссеЕдадуаєс 780 асасдсуєдуа Сдудаєдчасує дадссасуаа дасссєдадд єсаадсєсаа сЕддсасуаєд 840 65 часуддсдсдда аддеєдсаєаа Єдссаадаса аадссдсддад аддадсадса саасадсасду 900

Бассуєдсуду Ссадсуєссє сассуєссвєд сассаддасеє дудссдаасдЩ саадчадвас 960 аадсдсаадуд Сссссаасаа адсссссудс дсссссаєсу адаааассає сеЕссааадсс 1020 ааадддсадс сссдадаасс асаддсудсдс ассссдсссс саєсссудда Єдадсеєдасс 1080 аадаассаду Ссадссєссс деЕдсудсадес аааддсеЕссс аєсссадсда саєсдссдаєд 1140 чачсдчдуачЧача дсаасудудса дссудачаас аасбасаада ссасудссєсс сдєдсеєддас 1200 бссдасуддасє сссесеЕсссе сдбдадсаад сеєсассуєду асаададсад деЕддсадсад 1260 чачдаасуєсє ссссаєдсеєс сдедаєдсає даддсєссдс асаассасса сасдсадаад 1320 адссссеЕСсСсс сдЕСССсСсоЯдоа Єддаддсуддс ддаадсддад дчадчдчаддаєс сддасддсдада 1380

ЧччЕсссудад дсоуачЧачдчаєс счаддсдсад сєдсссудааа дсоддсуадЧдадча ассддеєдсад 1440 ссЕддсддса дссєдадасє дЕСЕсдсудсс дссадсуддсе Есассеєсад садсврасдсс 1500 аєдадссдуддау сссдссаддс ссседдсаад дчдасєдчаає дадЕдеЕссудс саєсаєсддс 1550

Есєддсудсса дсассврасса суссдасадс дЕЧдаадддсес ддЕссассає садссдддадасєс 1620 аасадсаада асасссєдсба ссеЕдсадасд аасадссєдс дддссдадда сассдсс9аєд 1680 басвассдсу ссаадддаєд деЕЕсддсдудс бЕсаасврасоі даддасаддд сассседдеЕс 1740 ассуєдеЕсса дес 1752 «2105 338 «2115 575 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (2567) УМНСНІ Ес з виступом МІ (489) «4005 338 сі Уаї Сіп їечп Те Січ бег сіу Сі1у С1у їеч Уаї Сіп Рго сС1у С1Уу 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

Аа Меє Бек Тгр Маі Аку біп Аза Рго сіу пуб сіу Гезч біч Тгрр Уаї 35 40 45 зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї 50 55 бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 7о 75 8о0

Теч біп Меє Авп бег їеч Агуд Аїа Січ Авр Трг Атїа Уа1ї Туг Туг Сув 85 90 935

Аза Агуд АвБр АБр о Рго Тер Рго Рго Роре Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

Теч Уаі ТЕ Уа1! бек Бек Аїа бек ТП Гуз біу Рго бек Уаі Рпре Рго 115 120 125

Теч Аза Рго бек бек Пув Бек ТПг бек біу біу ТбПг Аза Аза Геч Сс1Уу 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160 бек біу Аїа їеч ТіПг бег Сіу Маі Нів Трг Ррпе Рго Аїа Уаї Ієч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190

Ззек Геч сіу ТПг біп ТБ Тук Іїе Суб Авп Уаі АвБп Нів пуб Рго 5ег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 225 230 235 240

Уа1 Рре Гей Рпе Рго Рго Пуз Рго Пуз АБр ТПг Гей Меє І1їе б5ег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 біч Уаії пуб Рпе Абзп Тер Туг Маі АБр біу Уаі! біч Уаї Ніб5 Ап Аза 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 108)

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320 60 пув Сув ПЦув Ма1 бек Авп Гув Аїа Іез С1у Аїа Рго Іїе Січ Пув Тис 325 330 335

Іїе Бек Ппув Аїа Гуз біу біп Рго Акуд бі Рго сіп Уа1ї Тугє ТіПг Іеч 340 345 350

Рго Рго Сув Агу АБр біч Теч ТБПг пуб Авп о біп Уа1і! Бек Геч Тгр Сув 65 355 360 365

Теч Уаі Ппув сіу Рпе Туг Рго бек АБр І1ї1е Аїа Уаі біц Тер січ бБег 370 375 380

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар

385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Робе Теч Тук бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер біп біп сб1у АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уаі1і Меє Ніб5 січ Аїа 420 425 430

Теч Ніб Авп Нів Тугк ТПг бсіп пуб бек ТГеч бек Гей бег Рго сіу с1у 435 440 445

Сіу бі1у сіу бек сіу сіу сіу біу бек біу біу сбіу сіу бек сіу с1Уу 450 455 460 сіу б1іу бек бі І1е Уаї Іїеч Трг Сіп бек Рго СсС1іу ТіПг Іеч бег Іеєч 465 470 475 480

Бек Рго сбіу бі Аку Аїа ТБбг Гей бек Субв Агуд Аза бек біп бек Уаї 485 490 495

ТПг Бек бек Тук Теч Аза Тер Тук біп сбіп Пув Рго біу біп Аза Рго 500 505 510

Агуд Геч Геч І1їе АБп Уаі! Сіу б5ег Агуд Акгуд Аїа ТПг сіу І1е Рго АБр 515 520 525

Агуд Рпе Бек сіу бек біу бек біу ТБПг Авр Рпе ТПг Геї ТПг І1е 5ег 530 535 540

Агд Теч Сі Рго біц Авр Рре Аза Ма1і Туг Тує Сув біп сСіп СсС1у І1е 545 550 555 560

Меє теп Рго Рго ТіПг Рпе сіу сіп сіу Тс Гуз Уаї біч Іїе Був 565 570 575 «2105 339 «2115 584 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (25607) УНСН1І Ес із западиною УНН (489)

Зо «4005 339 біч Уаії сбіп Пец Ге сі бек біу біу біу ІТеч Уаі сіп Рго сіу с1у 1 5 10 15

Ззек Геч Акуд Тез бек Сув Аза Аза бек сіу Рпе ТПг Ріре бег бек Туг 20 25 Зо

А1їа Меє бег Тер Уаі Акуд Сіп Азїа Рго с1іу Пув С1у їеч Січ Тгр Уаї 35 40 45 зек Аїа І1ї1е бек біу бек біу біу бек ТПг Туг Туг Аїа АБр бек Уаї 5о0 ів) бо

Туз біу Акуд Рпе ТПг Іїе Бек Агу АБр АБп о бег Гу5 Ап ТпПг Геч Туг 65 70 75 80

Теч біп Меє Ап бек Геї Агу Аза бі АвБр ТБ Аза Уа1і Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Агуд АвБр АБр о Рго Тер Рго Рго Роре Авр Туг Тер сіу сіп б1у ТЕбг 100 105 110

Теч Уа1 Тпг УМа1 бек бек Азїа бег Тпг Пув біу Рго бек УМа1 Рре Рго 115 120 125

Теч Аза Рго бек бек Пув Бек ТПг бек біу біу ТбПг Аза Аза Геч Сс1Уу 130 135 140

Сув ТГеч Уаії пуб Авр Тук Рре Рго бій Рго Уа! Трг Уаї бек Тер АБп 145 150 155 160

Бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Нібв ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іеч сіп 165 170 175

Зек Бек сіу Геч Тук бек ТГеч бек бек Уа1і Уа1і ТПг Уа1ї Рго бек 5ег 180 185 190 бек Геч сСіу Тпг біп Трг Тує І1е Сув Авп Уа1і Авп Нів Кув Рго бег 195 200 205

Авп оТпк пуб Ма1ії АБр оГув5 Гуз Уаії біц Рго Пув Бек Сув АБр Гу5 ТЕГ 210 215 220

Нів ТП Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сі Аза Аза сбіу біу Ркго 5бег 60 225 230 235 240

Уаї Рре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пуб АБр ТПг Іечп Меєсє І1їе бег Агд 245 250 255

ТПЕ Ркго біп УМаії ТБг Сув Уаії Уа1 Уа1ї Авр Уа1ї бек Ніб5 біц АБр Рго 260 265 270 65 сій УМаї Пцув Рпе Авп Тгр Туг Маї Авр Сіу Ма1 Сі Уаї Нів Авп Аї1а 275 280 285

Туз ТВ Мпув Рго Акд бій біз біп Тук АБвБп о бег ТПг Туг Акуд Уа1ї Уаї 290 295 300

Зек Уаії Гечш ТПг Уаї Іеч Ні біп Авр Тер Геч Ап сіу Ппув бі Туг 305 310 315 320

Туз Сув пуб Уа1! Бек АбБп Пув Аза Іеп сбіу Аїа Рго Іїе сій Ппуб5 ТПг 325 330 335

І1е Бек Ппув Аїа Ппув біу біп Рго Аку бій Рго біп Уаї Суз ТБПг Іецй 340 345 350

Рго Рго Бек Агу АБр біч Теч ТБПг пуб Ап о біп Уа1ї! Бек Геч бек Сув 355 360 365

Аа Уа1 Ппув сіу Роре Тук Рго бек АвБр Іїе Аїа Уаі сії Тгр бі 5ег 370 375 380

АБп осіу біп Рго бі АБп АБп Тук Гпу5 Тс Тбг Рго Рго Уаі1ї Іеч Ар 385 390 395 400 век Авр сіу бек Рібе Рібе Теч Уа! бек пуб Геч ТПг Уа1і АБр Гув5 б5ег 405 410 415

Агуд Тер Сбіп біп б1у Авп Уаі1і Ріре бБег Сув бек Уаї Меє Нів Січ А1а 420 425 430

Теч Ніб Авп Нів Тугк ТПг бсіп пуб бек ТГеч бек Гей бег Рго сіу с1у 435 440 445

Сіу бі1у сіу бек сіу сіу сіу біу бек біу біу сбіу сіу бек сіу с1Уу 450 455 460 біу біу бек біц Уаі! сіп Геч Геч біп бек біу біу сіу Геч Уаі1ї сіп 465 470 475 480

Рго сіу сіу бек Іечп Агу Ге бег СувБ Аїа Аза бек біу Рое ТПг Ре 485 490 495 бек бБег Тук Аїа Мебє бег Тгр Уаі Акудщ Сіп Азїа Рго Сс1у Кув С1у Іеч 500 505 510 біч Тер Уаі бек Аїа Іїе Іїе сіу бек біу Аза бег Трг Туг Тугк Аза 515 520 525

Авр Бек Уа1і Ппув бі1у Аку Робе ТБПг І1їе бег Агуд Авр АБп бек ГУу5 АБПпП 530 535 540

ТПЕ Геч Тук Іеч біп Месб Абзп бег Гей Агуд Аза сії АБр Тс Аїа Уаї 545 550 555 560

Тук Тук СувБ Аїа їувз біу Тер Рпе сіу сіу Рре АБп Тугє Тгр б1у сіп 565 570 575 с1у ТК Пец Ма1! Трг Уаї бБег бег 580 «2105 340 «2115 1728 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (1105) УНСНІ1І Ес з виступом МІ, (489) «4005 340 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд ссеЕссуддадд сасаєєсадс адсбрасудсса ЄаадссдддЕ дсдасаддесес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадссєдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассудєдс дадчаєссасе 300 сЕдаєссасуд деЕбасссєсда срассддддс саадддасса ссудеЕдассує сессеєсадсе 360 адсассаадд дсссассудеЕ сеЕбссссссд дсасссеєссо ссаададсас сссЕддддадес 420 асадсуддссс СЄдддсЕдссЕ ддєсааддас СасеЕсссссу аассудеЕЧвчас доасдссЧчедаУ 480 аасссаддсуд сссєдассад сддсудєЄдсас ассЕссссудд седсссвсаса деЕссссадда 540 сЕСвассссс єсадсадсуде ддаєдассдбд сссессадса дсеЕєсдддсас ссадасстас 60 асссдсаасу СЄдаассасаа дсссадсаас ассаадудєдуч асаачааадс Сдадсссааа ббо

ЄсЕсдЕДдаса ааасссасас асбдсссассу Сдсссадсас ссдаадсєдс адддддассд 720

ЕсадеЕсеЕссс Сссєсссссс аааасссаа дасасссєса Єдчасєсєсссу дассссєдад 780

ЧчсЕсасаєдсу СЧдУЧаєдУасдчда суєдадссас даачассссд аддссаадеЕс саассдудавєас 840 чсдчдасчддсу СЄдчаддсдса бЄаасуссаа асааадссус дуададчадса деасаасадс 900 асусбассуєд СдудЕсадсує ссЕСассуєс сеЕдсассаду асєддсєЧдаа СЄддсаадчад 960 60 басаадедса аддессссаа сааадссссс ддсдссссса ЕЄсдадаааас саєссссааа 1020 чдссаааддудс адссссуада ассасадєд Сасасссвєдс сссссєдсад ачаєдчадсед 1080 ассаадаасс аддеЕдЕсссЕ дЕддЕдЕсСвд дЕСсСаадддсс Сссбассссад сдаєаєсдес 1140 чседчвадеЕдчу ачадсаасуд ссадссєда аасаассаса адассасссс сссЕДдчеЕдсс 1200 часадсудасу дсадсеЕссеьеє сседбвасесс ааасєдассу Сддасаадад ссуддеЕддсад 1260 65 садддсаасу Едсссадсвєд садсдєдаєд сасдаддсесс Сдсасаасса сгасасссад 1320 аадсссссда дссЕєдадссс суддсудаддс доасодЧдаадсу дчадччаччадч аєсєддаддоадес 1380 ччаддЕсссу даддсддбеддв аєсєдадаєс деЕдседассс адссссссудур сассседеся 1440 сєдадсссвєд дсдадададс сасссеєдЕсс Єдсададссе сссадессуєЄ дассеЕссьсс 1500 бассссудссє ддсассадса даадсссдудс саддссссеЕс ддсєдсеєдає саасудєдддас 1550 адссуддада ссассуддсає сссеєдассуд ЕЄЕсСЕсСсудсе сеЕддсесссудд сассудасьєсс 1620 асссбдасса ссссссудсЕ ддаасссдад дасєєсдссу Єдсассассд ссадсадддс 1680 аєсаєсдсєдс сссссасссє гддссадддс ассааддєдч аааєсаау 1728 «2105 341 «2115 1755 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (1105) УНСН1 Ес із западиною УН (489) «4005 341 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 дсасадааде Сссадддсад ддЕсассасє аседсадаса аасссасудад сасадсстас 240 асудчадссда дсадссєдЧачЧ асссудаччдас ассуссуєдеЕ ассассудєдс дадчаєссасе 300 сЕдаєссасуд деЕбасссєсда срассддддс саадддасса ссудеЕдассує сессеєсадсе 360 адсассаадуд дсссаєсудЕ ссєсСссссвд дсассссссеє ссаададсас сЕСЕєдоддоадес 420 асадсуддссс СЄдддсЕдссЕ ддєсааддас СасеЕсссссу аассудеЕЧвчас доасдссЧчедаУ 480 аасссаддсд сссЕдассад сддсудєдсас ассЕссссудд сбдЕсСсСсаса деЕссссадда 540 сЕСвассссс єсадсадсуде ддаєдассдбд сссессадса дсеЕєсдддсас ссадасстас 60 асссдсаасу СЄдаассасаа дсссадсаас ассаадудєдуч асаачааадс Сдадсссааа ббо

ЕєЕсЕсдсдаса ааасссасас асудсссассу Єдсссадсас ссдаадссдс адддддЧдасс 720

ЕсадеЕсеЕссс Сссєсссссс аааасссаа дасасссєса Єдчасєсєсссу дассссєдад 780

ЧЕсасаєдсд ЄддЕддЕдда сдедадссас даадасссод аддеєсаадесє саассддеас 840 чсдчдасчддсу СЄдчаддсдса бЄаасуссаа асааадссус дуададчадса деасаасадс 900 асусбассуєд СдудЕсадсує ссЕСассуєс сеЕдсассаду асєддсєЧдаа СЄддсаадчад 960

Басаадєсдса аддеЕсЕєссаа сааадсссєс ддсудссссса Єсдадаааас саєссссааа 1020 чдссаааддудс адссссуада ассасадуєд Єдсасссвєдс ссссаєсссу дчаєдадсід 1080 ассаадаасс аддеЕсадссеЕ сесдедсдса дЕсаааддсес Сссаєссссад сдасаєсдсес 1140 чседчвадеЕдчу ачачсааєду дсадссуда аасаассаса адассасусс Єсссуєдсес 1200 часеєЕссудасу дчссссЕссЕЕ ссеЕСсСудЄдадс аадсеєсассу Сддасаадад саддеддсад 1260 саддддаасу ЕсЕЕєСсСЕСсСаєду сЕссудеЕдає саєдаддссс бдсасаасса сбасасдсад 1320 аачадссссс сссЕдеЕСЕСС ддЧсЧдЧдаддс дасоЧдаадсу дчадччачдчадч аєссуддсудес 1380 ччваддЕєсса даддсдчададда асссддадддєд садсєдсесу ааадсддсудд аддассдоаєд 1440 садссєддсуд дсадссєда ассдессбєдс дссдссадсуд дсеЕсЄсассес садсадсвас 1500 чдссаєдадсеЕ дддЕссудсса ддссссєдудс аадудчассдуа аасдддаєдеЕс сдссаєсаєс 1550 чассссддсу ссадсассса ссасуссуудас адсуєдааду дссуддеєсас саєссадсс9у 1620 часаасадса адаасасссє дсасссдса аєдаасадсс єЄдсуддссда ддасассдсс 1680 дЧдЕдвєассасе дсдссаадудд асддеЕєсдудс дудсЕєсаасоі ассуддддаса ддадсассстд 1740 чЧдЕсассдєдЕ ссадс 1755 «2105 342 «2115 576 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (1105) УНСНІ Ес з виступом МІ (489) «4005 342 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45 сіу б1у І1е І1їе Рго Іїе Рбе сіу ТБ Аза Ап Туг Аїа біп пув Ре 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 7о 75 8о0

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув (516) 85 90 935

Аза Акуд Бек ТПг Тез І1ї1е Тук біу Тук Рре Авр Туг Тгр сб1у біп б1Уу 100 105 110

ТПг Тс Маї ТБг Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сбіу Ркго бек Уаї Ре 115 120 125 65 Рго Геч А1їа Рго Бег бег Куб бег Трг бек Сіу Сіу Трг Аїа А1а Іеч 130 135 140 біу Сув Печ Уаі! Ппув Авр Тугк Роре Рго біцп Рго Уа! Трг Уа1ї бек Тгр 145 150 155 160

АБп бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Ніб ТпПг Рре Рго Аїа Уаї1ї Іеч 165 170 175 біп бек бек біу Пес Туг Бек Геч бек бек Уа! Уаі Трг Уаі1ї Рго 5Бег 180 185 190 зек Бек Геч біу Тпг біп Тпг Тук Іїе Су5в АвБп Уаії АБп Нів Пув Ркго 195 200 205 век Авп ТПг Ппуб5 Маі Авр о Гув Ппув Уаї сій Рго Ппув Бек Суб АБвр Туз 210 215 220

ТПЕ Нів ТПг Суб Рго Рго Субв Рго Аїа Рго сії Аїа Аза с1у б1у Рго 225 230 235 240

Зек Уа1ї Рре Геї Робе Рго Рго Пу5 Рго Пув Авр ТПг Геч Меє І1е 5ег 245 250 255

Агуд Тпкг Рго бій Маї Тс Сувз Уаії Уаії Уаї Авр Уаії Бек Нібв січ Ар 260 265 270

Рго біц Уа1і цЦув Рбе Авп Тгр Туг Ма1і Авр Сіу Ма1 січ Уа1ї Нів Авп 275 280 285

Аа пуб ТПг Ппув Рго Аку бі бі біп Туг Абзп бБег ТПг Туг Агуду Уаї 290 295 300

Уаї бек УМаї Іїеч ТБг Уаї Ге Нів сіп АБр Тгр ІГеч АБп біу Ппу5з сіц 305 310 315 320

Тук Ппув Сув Гуз Уаії бек АвБп пуб Аза Геч сіу Аїа Рго Іїе біц Був 325 330 335

ТПг І1ї1е бек Гуз Аза пу5 сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уаї Тує Тр 340 345 350

Пес Рго Рго Сув Агу АБр бій Гей ТБг Гуз АвБп біп Уа! бег ТГеч Тгр 355 360 365

Сув Теч Уаі Ппув сіу Рбе Туг Рго бек АБр Іїе Аїа Уаі сій Тер сій 370 375 З8о век Авп біу біп Рго біц АБп АбБп Тук пуб ТПг Тс Рго Рго Уаї Іеч 385 390 395 400

Авр Бек Авр сіу бек Рре Робе Те Тук бек ПпувБ Геч ТПг УМаї АБр Гуз 405 410 415 ек Акуд Тер біп біп біу АБп Уаі Рре бек СубвБ Бек Уа1і Меє Нів січ 420 425 430

А1їа Геч Нів АБп Нів Туг ТПг біп Ппув бек Пец бек Гей бБег Рго сб1УуУ 435 440 445

Сіу бі1у сіу сіу бек сіу сіу біу біу бек біу сбіу сіу сіу Бек сб1Уу 450 455 460

Сіу біу біу бек бі Іїе Уаії Геї ТПг біп бек Рго біу ТпПг Геч бБег 465 470 475 480

Теч бек Рго біу біц Акуд Аза ТП Іечп бек Суб Агуд Аїа бек сіп бБег 485 490 495

Уаї ТЬг бек бек Тук Ге Аза Тер Тук біп біп Гуз Рго сіу сбіп Азїа 500 505 510

Рго Агд теп їеч Іїе Авп Уаі1і Сіу бег Агуд Агуд Аїа Тпг С1у І1е Рего 515 520 525

АБр Акуд Рбе бек сіу бек біу бек біу ТБПг Авр Рпе ТПг Геї ТПг І1е 530 535 540 зек Акд Геї біп Рго біц АвБр Рре Аза Уа1! Туг Тугк Сув біп біп с1Уу 545 550 555 560

Іїе Меє Геї Рго Рго Тйг Рбе біу біп сіу ТпПг Ппув УМаї січ І1е Гуз 565 570 575 «2105 343 «2115 585 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (1105) УНСН1І Ес із западиною УНН (489) «4005 343 60 сіп Уаі1ї Сіп теп Уаї Сіп бек сі1у Аїа Січ Ма1 Ппув Пув Рго сС1іу бЗег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 65 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг

65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95

Аза Акуд Бек ТПг Тез І1ї1е Тук біу Тук Рре Авр Туг Тгр сб1у біп б1Уу 100 105 110

ТПг Тс Маї ТБг Уаї бек бек Аза бек ТПг Ппув сбіу Ркго бек Уаї Ре 115 120 125

Рго Геч Аїа Ркго бек бек Гув бек ТПг бек сіу сіу ТПг Аза Аї1а Іеч 130 135 140 сі1у Сув Печ Ма1 Ппув Авр Туг Рре Рго біц Рго Уаі1і Тіг Уаі1ї бег Тгр 145 150 155 160

АБп бек сіу Аїа Геї ТіПг бек біу Уаі Ніб ТпПг Рре Рго Аїа Уаї1ї Іеч 165 170 175 біп бек бек біу Пес Туг Бек Геч бек бек Уа! Уаі Трг Уаі1ї Рго 5Бег 180 185 190

Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБ Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп о Нібв КТу5 Рго 195 200 205 век Авп ТПг Ппуб5 Маі Авр о Гув Ппув Уаї сій Рго Ппув Бек Суб АБвр Туз 210 215 220

Так Нів Трг о Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Сі Азїа Аза сСі1у С1і1у Рго 225 230 235 240

Зек Уа1ї Рре Геї Робе Рго Рго Пу5 Рго Пув Авр ТПг Геч Меє І1е 5ег 245 250 255

Агуд Тпкг Рго бій Маї Тс Сувз Уаії Уаії Уаї Авр Уаії Бек Нібв січ Ар 260 265 270

Рго біц Маї Ппув Роре АБп Тгр Туг Уаі Авр сіу Уаі1і сії Маї Ніб5 АБп 275 280 285

Аа пуб ТПг Ппув Рго Аку бі бі біп Туг Абзп бБег ТПг Туг Агуду Уаї 290 295 300

Уаї бек Уаї ес Тр Уаї тез Нів Сіп Авр Тер Те АБп с1у Пув С1Ч 305 310 315 320

Тук Ппув Сув Гуз Уаії бек АвБп пуб Аза Геч сіу Аїа Рго Іїе біц Був 325 330 335

ТПг І1ї1е бек Гуз Аза пу5 сіу біп Рго Акуд бій Рго біп Уаї Су5 Тр 340 345 350

Теч Рго Рго бек Агуд АвБр сії Геї ТП Гуз АБп о біп Уаї бек Геч бБег 355 360 365

Сув Аїа Уаії Ппув сіу Рбе Туг Рго бек АБр Іїе Аїа Уаі сій Тер сій 370 375 З8о век АБп біу біп Рго бій Авп Авзп Туг Пув ТПг ТБ Рго Рго Уаї Іецй 385 390 395 400

Авр Бек Авр сіу бек Ріре Рібе Те Уаії бек Ппув Геї ТПг УМаї АБр Гуз 405 410 415 ек Акуд Тер біп біп біу АБп Уаі Рре бек СубвБ Бек Уа1і Меє Нів січ 420 425 430

Аза Ггеч Ні АБп о Нів Тук Тйг біп пуб бек Геч бБег Геч бек Рго б1Уу 435 440 445

Сіу бі1у сіу сіу бек сіу сіу біу біу бек біу сбіу сіу сіу Бек сб1Уу 450 455 460 сіу біу с1у бек Сіп Уаї1ї Сіп теп Іїееч Сіц бег СсС1іу С1у Сс1у Іеч Уаї 465 470 475 480 біп Ркго біу сіу Бек Геї Агкуд Тез бек Су5з Аїа Аза бек сіу Рпе ТПг 485 490 495

Рпе бБег бБег Туг Аїа Мес бег Тер Уаі Агу сіп Аза Рго с1іу Гуз б1Уу 500 505 510

Теч біц Тер Уаі! бек Аза Ії1е І1е сб1іу бек біу Аїа бек ТПг Тукг Туг 515 520 525

Аза Авр Бек Уа1і Губ5 біу Аку Ропе Трг Іїе бек Агуд АБр АБп бек КТув 530 535 540 60 АБп о Тпг о Геч Тує їеч біп Мес Абп бег Іїечп Агкуд Аїа Січ Авр Тіг А1та 545 550 555 560

Уаї Тук Тук Сув Аїа пуб сіу Тер Рпбе сіу біу Роре АБп Туг Тер 0Ш1У 565 570 575 біп біу ТПг Ге Уа1і ТПг Уаї бек б5ег 65 580 585 «2105 344 «2115 1731 «2125 ДНК

«213» Штучна послідовність «223» ДНК (9811) УНСНІ1І Ес з виступом МІ, (489) «4005 344 саддЕдсаає єддсдсадеЕс Єддддсєдад дЕдаадаадс сЕдддЕсСсЕс ддєдаадаеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асудчадссда дсадссєдач асссудадччдас ассуссуєдеЕ ассассуєдс дачасєсеєєссе 300

ЧдадаЕдсЕБасс сддадеЕсбассс сдассассудда ддссааддда ссассудєдас судєсєссеса 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 часасадсуд сссЕдЧдучссдд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдаассуде дасудЧЕеЕдесУ 480

Едчдаасеєсад дсдссссдас садсуддсуєд сасасссссс суддсеєдеЕссо асадесссьса 540 ччасеЕсвтасс сссеЕСсадсад суєдудєдасс дЕдсссссса дсадссєдаду сасссадасс 60 басасєсєдса асдєедааєса саадсссадс аасассаадд Єддасаадаа адеєдадссс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссдЕсадеЕсе ЕсссссЕссс сссаааассс ааддасассс Єсаєдаєсєссс ссддассссе 780 чаччдаєсасаєсє дсдєдУЧасЧдУчЕ дчасуєдадс сасдаадасс ссдаддеєсаа дЕсСаасеєда 840

Басєдчдасу дсудєдчвадає дсасааєдсс аадасааадс сусудчадчда дсадсасаас 900 адсасдбєасс деЕдЕддЕсад сдеЕссЕСасс деЕсссдсасс аддасєддсЕ дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса дчеЕдвєасассс Єдссссссвд сачачаєдад 1080 сєдассаада ассаддеЕдеЕс сссдсддеЕдЕ седдссаадуд дсЕссбассс садсдаєаєс 1140 чссаєдчадс доадачадсаа суддссадссс дадаасаасє асаадассас ссссссеєдсд 1200 седдасадсуд асддсадсеЕє сеЕсСссвєдвас сссааасєда ссдєсддасаа дадссучеєа 1260 садсадддса асдсдсєсад седсадсдбд асбдсасдадд сссеєдсасаа ссастрасасс 1320 садаадсссс Єдадссєдад ссссуддсдда ддсддсддаа дсддаддада аддаєсєд9ад 1380 часчвдадчЕє ссуддаддсудд Єддаєсєдад аєсуєдссда сссадесссс сддсасссвд 1440

Єсессдадсс себддсдадад адссасссвд Ессєдсадад ссесссадес сдєдассесс 1500

Єссвассєсу сссддбаєса дсадаадссс дудссаддсесс сЕСсСуддсєдесе даєсаасоаєд 1550 часадссуда дадссассууд саєсссєдас суддЕСсССсссу дсЕСЕддсЕсС сддсассддасєс 1620 беЕсасссвєда ссаєсеєсссуд дсЕддаассс даддасессу ссудбдсасса седссадсад 1680 чдасаєсаєдс бдссссссас сеЕєсддссад ддсассаач Єддаааєсаа д 1731 «2105 345 «2115 1758 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ДНК (9811) УНСНІ1І Ес із западиною УН (489) «4005 345 саддесдсаає Єддсдсадес Єддддссдад дЕдаадаадс сеЕдддеЕссЕсС ддєдаадддеЕс бо

Есссдсаадд сссссудад сасаєссадс адсвєасусса єЄаадссдуддс дсдасаддес 120 ссбддасаад ддсссдадед дасддададдад ассаєссста сЄсСЕєсддбас адсааастас 180 чсасачаадс Сссадддсад ддЕсассаєс ассдсадаса ааєссасуда сасадссвас 240 асддадссда дсадссєдад ассєдаддас ассдссуєдаєс ассассдеЕдс дадассеЕєсе 300 чЧчаеєдссвасс суддудєвсассє сдассассуду додссаадудда ссассудєдас суаєсєссеса 360 чЧсЕадсасса адддсссасс дуєсСЕсСсссс сеЕддсасссяє ссЕССаада сассєссод9ад 420 часасадсуд сссЕдЧдучссдд ссеЕддссаа дасвтассєсс ссдаассуде дасудЧЕеЕдесУ 480

Едчдаасеєсад дсдссссдас садсуддсуєд сасасссссс суддсеєдеЕссо асадесссьса 540 чддассстасеЕ сссеЕсадсад сдеЕддедасс дедсссЕсСса дсадссбдучд сасссадасс 60

Басаєсєдса асуєдааєса саадсссадс аасассааууд Єддасаадаа адсєдадсесс ббо авдваасссєддеєд асаааассса сасаєдссса ссудєдсссад сассєдаадс Єдсадоадоада 720 ссдЕсадеЕсе ЕсссссЕссс сссаааассс ааддасассс Єсаєдаєсєссс ссддассссе 780 чаччдаєсасаєсє дсдєдУЧасЧдУчЕ дчасуєдадс сасдаадасс ссдаддеєсаа дЕсСаасеєда 840 басуєддасуд дсдєЕддадді дсаєааєдсс аадасааадс сдсудддадда дсадсасаас 900 адсасуєасс дчЕДдЕдЧдссадд судєсСсссасс дЕСССдсасс адчасєсдудсс дааєддсаад 960 чачсасаадс дсааддсссс саасааадсс сЕСддсудссс ссаєсєсудадаа аассаєсесс 1020 ааадссааа ддсадссссу адаассаса дчЕдеЕдсассс єдсссссаєс ссудчаєдад 1080 сєдассаада ассаддеса ссссссуєдс дсадссааад дсеЕсссаєсс садсдасаєс 1140 60 дссдасєддадЕ дддададсаа Єдддсадссуд дадаасаасс асаадассас дсессеЕсссдаєдд 1200 седдасессуд асддсЕєссьє сеЕсссесуєду адсаадсеєса ссудбддасаа дадсаддаєдЧу 1260 садсаддудда асдеЕсЕеєсеЕс аєдссссуєд абдсаєдадуд сесбдсасаа ссасграсасу 1320 садаададсс ЕсЕСССЕДдДЕС ЕСссодддЕдда ддсддасддаа дсудаадаадда аддаєссддас 1380 час9ччадчЕс ссудадудсуд адчаєссудадд деЕдсадсєдс Єсдааадсуду содоЧадчасесд 1440 65 дЕдсадсссд дсуддсадсесе дадасеЕдеЕсеЕ Едсудссусса дсуддсєссас сЕссадсадс 1500 басуссаєда дссдддессуд ссаддссссе дудсааддчдас сддааєдадє дЕСсдссаєс 1550 ассуддсЕсвд дсудссадсас ссасвєасусс дасадсуєда адддссуддеЕс сассаєсадс 1620 сдддасааса дсаадаасас ссбдсасссд садаєдааса дсседсудддс сдаддасасс 1680 а чдссуєдсасе ассдсдссаа ддчдаєддеєєс ддсддсеЕсса ассассдчдд асадддсасс 1740 сеЕддЕсассуд ЕдЕссадс 1758 «2105 346 «2115 577 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» (9811) УНСНІ Ес з виступом МІ (489) «4005 346 сіп Уаі1ї Сіп теп Уаї Сіп бек сі1у Аїа Січ Ма1 Ппув Пув Рго сС1іу бЗег 1 5 10 15

Зек Уа1ї Ппув Ма1ії бек Сув Туз Аза бек сіу сіу ТПг Рре бег бек Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє 35 40 45

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе 5о0 ів) бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє бій Іей бег бек ГПеп Агу бек біш АвБр ТБг Аза Уаї Тугк Тук Сув 85 90 95

Аза Агуд Бек бек біу Аїа Тук Рго біу Тук Рпе Авр Туг Тгр б1у біп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер Авп бег Сіу Аїа тес ТрПг бек біу Маї Нів ТіПс Рре Рго Аїа Уаї 165 170 175

Теч біп бек бек сіу Геч Туг Бек Геч бек бек Уаі Уаі ТрПг Уа1ї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Маі Рпе Гей Рре Рго Рго Пувз Рго Пуз АБр ТПг Гей Меє Ії1е 245 250 255

Бек Акуд ТПг Ркго біп Ма! ТБг Сув Уаії Уа1і Уа1і Авр Уаі1ї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 290 295 300

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 сій Тук цЦув Сув Ппув Маі1ії бБег Авп Туз Аза Іеч Сіу Аїа Рго І1е Січ 325 330 335

Туз ТП Іїе бек ПувБ Аза Ппув сбіу біп Рго Акуд бід Рго біп Уа1ї Туг 340 345 350

ТПЕ Геч Ркго Рго Сув Агуд Авр бі Геч Тс Гпуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365

Тер Суб Геч Маї Гуз біу Рпе Тук Рго Бек АБр І1ї1е Аїа Уаї біч Тгр 370 375 З8о біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400 60 Пес Авр бек Авр біу Бек Рібе Рібе Гей Туг бек Гув Теч ТПг Уаі1ї! Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 65 435 440 445

Сіу бі1у сбіу сіу сіу Бек сіу сіу біу біу бек біу сіу сіу сіу бБег 450 455 460

Сіу біу сбіу сіу Бек сії Іїе Маії Іечп ТБг біп бек Рго біу ТпПг Гей

465 470 475 480

Зек Геч Бек Рго біу бі Аку Аїа ТрПг Гей бек Суб Агуд Азїа бек біп 485 490 495

Зек Уа1і ТіПг бек бек Тук Теч Аза Тер Тук біп сіп Пув Рго біу біп 500 505 510

Аза Рго Акд Геї Геї І1їе АБп Уа! Сіу бег Агуд Агуд Аїа ТПг с1у І1е 515 520 525

Рго АБр Агу Роре бек біу бек біу бек біу ТПг Авр Рре ТПг Іеч Тс 530 535 540

І1е бБег Акуд їеч біц Рго Січ Авр Рре Аїа Уа1ї Туг Туг Сув біп сіп 545 550 555 560 біу І1їе Меє Гей Рго Рго ТПг Рре біу біп біу Тс Ппуз Уаі бі Ше 565 570 575

Тув «2105 347 «2115 586 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «2235» (9811) УНСН1І Ес із западиною УНН (489) «4005 347 біп Уаі біп Ге Уаі! сіп Бек сбі1іу Аїа біч Уаії Ппу5з пуб Рго сіу бБег 1 5 10 15 бек Ма1 Ппув Ма1ї БбБег Сув їув А1їа бег Сіу С1у ТіПг Рре бег бег Туг 20 25 Зо

Аза І1їе Бек Тер Маі Аку біп Азїа Рго сбіу сбіп сіу Геч сії Ткр Меє

Сіу бі1у Іїе Іїе Рго Іїе Рбе сіу Тс Аза АБп Туг Аїа біп Пув Роіе

Зо 50 55 бо біп бі1у Акуд Уа! Тпг Іїе ТПг Аза АБр Гуз бег ТіПг бег ТПг Аза Туг 65 70 75 80

Меє біп Іеч бек бек Гей Агуд бек бі АБр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95 35 Аза Агуд бег бек б1у Аїа Тукє Рго біу Тує Рбе Авр Туг Тгр С1у сіп 100 105 110 біу ТЕ Тпг Уа1! ТпПг Уаї бек бек Аза бек Тс пуб сіу Рго Бек Уаї 115 120 125

Рпе Рго Геї Аза Рго бек бек пуб бек ТПг Бек сіу бі1у ТБг Аза Аза 40 130 135 140

Теч біу Сув ГПеч Уа1ї Ппув АвБр Тук Роре Рго біц Ркго Уаі ТпПг Уа1ї 5Бег 145 150 155 160

Тер АБп бек біу Аза Те Трг бек сіу Уа1і Ніб ТПг Роре Рго Аїа Уаї 165 170 175 45 Пес біп бек бек біу Пе Туг бек Гей бег бег Уаі! Уа1ї! Трг Уаї Рго 180 185 190 бЗек Бек Бек Геч біу ТБ біп ТБг Тук Іїе Суб АвБп Уаі АБп Нів Гуз 195 200 205

Рго Бек АБп ТП Гуз Уаї Авр о пуб пуб Уа1ї сій Рго Пув5 бек Сув Авр 210 215 220

Тув ТБпЕ Нібв Тс Суб Рго Рго Суб Рго Аїа Рго біц Аїа Аза сіу с1у 225 230 235 240

Рго Бек Ма1і Роре Те Робе Рго Рго пуб Рго Пубв АБр ТПг Іечп Меє Те 245 250 255 бек Агуд Тпг Рго біц Маї Тип Сув Ма1ї Уа1ї Уаї1ї Авр Уаї бек Нів січ 260 265 270

Авр Рго бі Маї Ппуб5 Роре АБп о Тгр Тук Уаі Авр сіу Уа1і січ Уаї Нів 275 280 285

АБп Аза Ппуб5 ТПг Гпуб5 Ргро Агу бі бід біп Тук Абзп бБег ТПг Туг Агд 60 290 295 300

Уаї УМаї бек Уаі Ге ТБПг Уаї Гечш Нів сіп АБр Тгр Теч АБп б1іу Пув 305 310 315 320 біч Тук Ппув Сув пуб Уа1ї Бек АБп Гуз Аза Іеч сіу Аза Рго Іїе сій 325 330 335 65 Пув Тс І1їе бБег Ппув Аїа Пув СсСіу Сбіп Рго Акуд бій Рго біп Уаї Сув 340 345 350

ТПЕ Геї Ркго Рго бек Агуд Авр бі Геч Тс Ппуб5 АБп обіп Уа! бек Гец 355 360 365

А13 зек Сув Аїа Ма1ії Гуз біу Рпе Тукг Рго Бек Ар Іїе Аїа Уаї січ Тгр 370 375 зво біч бек АвБп сбіу сбіп Рго бі АБп АвБп Туг ГПу5 Тс Тпг Рго Рго Уаї 385 390 395 400

Пес Авр бек Авр біу Бек Рібе Рібе Гей Уаії бек Пув Теч ТПг Уаі1ї! Авр 405 410 415

Туз бек Агуд Тер біп біп сбіу АБп Уа! Рібе бек Суб бек Уа1і Меє Ні 420 425 430 біч Азїа Гецп Ніб Авп Нібв Туг ТПг біп ув бек Тец бек Гей бек Рго 435 440 445

Сіу бі1у сбіу сіу сіу Бек сіу сіу біу біу бек біу сіу сіу сіу бБег 450 455 460

Сіу біу сбіу сіу Бек біцп УМаї сіп Іечп Іеч Січ бек сіу сіу сіу Гей 465 470 475 480

Уаї біп Рго сіу Сіу бек їеч Агуд їеч бег Сув Аїа Аза Бек Сс1у Ріє 485 490 495

ТПЕ Ріре бек бек Туг Аза Меє бек Тер Уаі Аку біп Аза Рго біу Пув 500 505 510 біу Теч біц Тер Уаі Бек Аїа І1ї1е І1ї1е сСіу бек біу Аза бек ТПг Туг 515 520 525

Тук А1їа АБр бек Уа! пуз сіу Акуд Рпе ТПг І11е 5егк Агу АБр Ап бег 530 535 540

Туз АБп Тс Гей Тук Геї біп Меє АБп бек Те Агуд Аїа бій АвБр Тс 545 550 555 560

Аза Ма1 Туг Тук Сув Аїа Пув Сіу Тер Рре Сіу С1у Рпе Авп Туг Тгр 565 570 575 біу біп біу ТПг Гей Уа1! ТПг Уаї бек б5ег 580 585

Зо

Claims (12)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула, яка містить: (а) два фрагменти Раб, які мають здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, що містять (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 25, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 26, (ІІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІЮ МО: 27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 28, (І) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮ МО: 29, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 30, (ІМ) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 31, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 32, (М) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 34, (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 36, або (МІ) варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 37, і варіабельну ділянку легкого ланцюга МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 38; (б) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з фібробласт-активуючим білком (БАР), що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга Мі, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 83, і (в) Ес-домен, який складається з першої та другої субодиниць, що мають здатність до 60 стабільної асоціації, де Ес-домен являє собою Ес-домен Ідс, зокрема Ес-домен Ідс1 або Ес- домен Ідс4, і де Ро-домен містить одну або декілька амінокислотних замін, які знижують афінність зв'язування антитіла з Ес-рецептором і/або ефекторну функцію.

2. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за п. 1, в якій:

(І) два фрагменти Раб, які мають здатність специфічно зв'язуватись з ОХ40, містять варіабельну ділянку важкого ланцюга МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІО МО: 28, і (ІІ) фрагмент, який має здатність специфічно зв'язуватись з ЕАР, містить варіабельну ділянку важкого ланцюга УН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 83.

3. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за п. 1 або 2, в якій Ес-домен являє собою Ео-домен людського Ідо1-підкласу з амінокислотними мутаціями І 234А, І 235А і РЗ3290О (нумерація згідно з БЄЮ-індексом Кебата).

4. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-3, в якій Ес-домен містить модифікацію, що підсилює асоціацію першої і другої субодиниць Ес-домену.

5. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-4, в якій перша субодиниця Ес- домену містить "виступи", а друга субодиниця Ес-домену містить "западини" згідно з технологією "Кпор-іпіо-поїе".

6. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-5, в якій перша субодиниця Ес- домену містить амінокислотні заміни 5354С і Т366МУ (нумерація згідно з ЄО-індексом Кебата), а друга субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни У349С, 713665 і у407М (нумерація згідно з ЕЮО-індексом Кебата).

7. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за п. 1, де біспецифічна антигензв'язуюча молекула є двовалентною відносно ОХ40 і одновалентною відносно ЕАР.

8. Полінуклеотид, який кодує біспецифічну антигензв'язуючу молекулу за будь-яким із пп. 1-7.

9. Фармацевтична композиція, що містить біспецифічну антигензв'язуючу молекулу за будь- яким із пп. 1-7 і принаймні один фармацевтично прийнятний ексципієнт.

10. Біспецифічна антигензв'язуюча молекула за будь-яким із пп. 1-7 або фармацевтична композиція за п. 9, призначені для застосування як лікарського засобу.

11. Застосування біспецифічної антигензв'язуючої молекули за будь-яким із пп.1-7 або фармацевтичної композиції за п. 9 для виготовлення лікарського засобу для застосування для лікування раку.

12. Застосування біспецифічної антигензв'язуючої молекули за будь-яким із пп.1-7 або Зо фармацевтичної композиції за п. 11 для виготовлення лікарського засобу для застосування для лікування раку, де біспецифічну антигензв'язуючу молекулу вводять в комбінації з хіміотерапевтичним засобом, випромінюванням і/або іншими агентами, призначеними для застосування в протираковій імунотерапії.

Фіг. 1 Фів ТА Фі ТМЕ СО ТМЕ СО Нової А Ниївсї а ши нчвсї (западина) У (виступ) ше ОХ о ЖИ ХХ ХУ Фіе їв ї В ДК Ой «д ОО Б Фіг 2А Фіг 2Б и . ІД. окпітине я стані р: ру дктивовані Соки. клітини Е де спокою Ж ом й хе г й СК 59 ї Е ; засо. . шт п ж ГКУ г вом ОБО я о иа нин В б. р. хо тує НЕ ва ОБО вни виш о муж й ІЩЕ кн З шк -в сля 2 с Шк иа нн шк хо з в Сян ЩО фанеюктти тт овреееевтттевщетессв рез в вн пиоо манннн ва із з ях Н леооябою ява с ви з мств агов т к«анцентрація (ХМ конгрентряця Мі

Фе. 2В Фіг ї ТИВ т. тини я дтаНі СПОХОЮУ КЕ щ дктивовані СТИ клітини т см ОХ ді гоовт хе ЕЕ ЕВ 55 з Бодя винна нини БО мае в «БА р пн р а и з м и я кохцентрація "нм канцентрація нм я булу во я нео суВуУ ек негативним комтроле - СО ВЯХ ви ся жона

. з.оящри фіг. ЗА Фіг. ЗБ ; У . ТИла-т-хлтинМ а стан опо ех детивовані СД Т-клітини х хе До оввев 3 00сооо - оп МІ го Хо ЕЕ Е 5 Е ВУ Е уко н З бощоиння ОВО аж БОЖ 5 Ба ЩОБ в тв шОЩОдоече Ж ОБОЄ соб й В Кн Бкя Е Тегі Ох ї ее що щолу ри ВЧИНИВ Я -8 Б вва она вал мання їнОЛЕ Іза ванни палімаь наван рада т з ах - 15 зво дос а ви 1 12 то ща п концентрація сим) Бе канцентрація (км Й Фіз ще Фіг ЗГ ох ОСОБ штики В тан сповю ЕЕ Активовані СИВОТлітТини в "п. Із Е ї ; ЩО ояееоя, р і що ККУ Щі ії. ЕК у ект нин е 5 йроя ВЕ є КІ хр сб ж ЕК С риття ВЕ лхеюі Й

5. КЗ Га ко ж в 4. надр фс ї т кА-- з фо. пол ре фунт тт щі она вн о пи нові Би не п и в У «а зжоояйеочава кагцентоація (НМ! концентрація (ему й тран; -«- Негвтувний -к-овісаву й о ож хзві онтеонь конт яке підсЕОК е Ва же За

Фів. А Фіг я Активовані СОТ клітини ж дктизовані СІМ Т капиеи ЩОйрооЗмеж ния иния ФВ овеюетютпутннннннтняя с хх Б Ж кв Бо Воду за нн . . я . Е х т ян Б од ой - ся ш пох а ходою Б БЖ: хога Е й 5 ах р е Щофроо мают тт ит хх ака ення й осв ков о ен ; ва га а - то... я й тики хх пої со - 2 НН т Си сани нах ке зеюфофіяя ЖЕ зак У. Е ь опер вететттнсв во Іво нина шині пошана а б 1 10 івя 19825 і 54 М 3 тою ав годях какцентовців (нм концентрація (ЯМ; анцентвців (ні яжонегативний шомтраль же ПІ о-пеЗ -- АВКА но обат - бі ЕВЯ о-ве 134000 св ца

Ф/г.БА Фів. Б аз 8 еВ утазме -- 5 ММ 266-4 рег УНН що п и а и и а я що Об тт тя, ниття р я 2509: - - -

е. її Вжиття МОФОО 4500 кет та ва Фо вот ГІ шодо ЕК Енн що. АБО лляне терня 55 со 52 ' В Ех хо 5 (23) ВОФО опт тт ШОВО доп ттестттятттю тити БЕ ож ш г пов лфотініесйнани : пов пидиефкнфстірннй фах Е г: я за й -- ее бер яв т. Ї ас нання ниви нання пра ший Ї пиінінн Зпвньння Піни ско, Пнвннь нн ї По 1 тв. ло що о а х 10 чо. 400 концентрація (нм концентрація (НМ) а СІСББУ -- ОВД око 2087 жо нвгативнийконтволя як СД СНОВЯ ек 1054 « ВН ще : ; .

фіг. бА фіг.бБ Фіг. 68 ко ко сток. що - сте Уа. Ж я: ВН Ж хи ОВУ Е їсха Шозю: ЯК охо ою с: ода Проза Я З за 2 о У Зк зи з Й я Зо: шах хом пода шия оо: : дО а : ОТ. ї о пишні що Е ї яке з: н В ха Й ою. ГУ НИЩИщи пот Ще ЖЕО бо о) 90 20 У ЯбО 380 55 55 йо бе ме обо тб зо зов жо Сб бо) М см оми їх Мо хо й часівихіний рівенв Є Гі Ммасівяйдний с хавнн о б Ки час(вмадний ріаєньК Є фіг фіг: ОД фіг. бЕ я ки «о

Зо. ії. я м: 5 Й 4чзва с оссевоа и": ССО яром Фо: я: ЕЗ т. В що кох ще ваш що: м Ж. що ще хх ХХ де я х ж пе осн ню - З шк а Ж ше : ее - МККя : «е 5 тож ож ХОМ ук тк з М я ї дк задо: ік В по. : й - ЕІ жі Е хи : є во. ї ю- Кк кн В ат і вл М НАННЯ о шия ЕНН . еко . Яке Фо Ж мю соб 2мюс Ре ЗМ ОУХИ «обо б зб ам хх мю с З2о Фч мг Око жа бе «Би оМхб ха мер оуж ств р поля Й чарізихідний явну часівихднни вен о чао(сУмідний хан с нн а фіг.7А Фіг. Б в присутності втдшинного дити. б Би Беоу-опецифічного антитіла без аторихного ахтитійв вище Бот-специфічного антиті; Ж з ше бо ект З «шк з 5, а 55 зас Б Ж хсж ї хх ОБЖ ко й ШЕ Же тттниннннннннннннн: уу ОВ ово Ж . ТОЖ сі що тож од й - Ват НИМ ЕН Во ст звійотни кої шк й жк З дов ПоогевоЯ я - - ся ШО озерюя ння ; пи каже. ей, МО СХ вч др нфомібйаМтвУттутт --- лев нив ванни нив лава нивнааяньк і нини нина ин нини ль ни ль! о кі Е! їх зно п бл 1 162. хонцентрація (ЯМІ й стих пеатрація (НО хокцентрація (НМ) --нагдтнений ев бів -е Щ9вА «ше 20 контроль. ее півня яке ва -к- ВЗ - Н ГУ ги І. Фіг ВА 5 Фіг.вБ 4 фіг. 88 -ош ТО їх клини з вікдхим рівнам 5 под ЕЕ но мон й теє; . ЖЖ в пропкрерації 595) Ед ФО сфея сто а Я пі Е ФЕН шо | - пи ож п Н ї ЕЕ сожікет чи: Ех жо ' т ду шо - Пп ие с ОК зар Фо олово п. з СХ м ВИ ЙО. -Е оди діоуий ВЕ отрут Ех" : їй ДЕННИЙ ПИ не Я ЖЖ Н жі М ди ще : ; мен шк Гі вкнне ВСЕ безос пиж / ЕЕ ах 84 ноя З й Ирть, Що Бо, ДМ й дари у во нич І ШИ БО сій ван рт КОМ Я ГДР ШК КК сно осо сссчн нен ісьовснви кро р Й еф МЕ ом зегоееттютттетттиутюкттня В зе я пиво Зі кт о й 7 т ї У рових 7 Фо» 0 ІЗ и не 4 ал Що : г і : 7 «овцентраєния 7. - свнушнтєвція (НМ, кокцентеанія яму концентрація 15) й концентрація (НМУ

Ов. - та н -Е Н св фіг. ві в Фіг. ЗД я Фіг. ЗЕ що Ж КЗ жа г дя

В. позг ве по тів та ехаг ме)

о. сх ож ох хх Х 5 ї, не водЙКт, БЕ ши А ша" 5 5» не Я ДОБ КО я о Ко вх ни Я р ща А Я я ; й в. вк засеМКі ох щ п й кОм ЕК г ФфОДОо мі ва уд кн нн нс не я нин и фунт. ах КИ - ра Ю : їх ї жо - с БУ и ї ІЩЕ й піски гі. Я фін Вер ни осн ОЕМ ни но МН Ку о? т я - Іво . вав х зба рі х м кож І мо ле шк я змови . зп о а концентрація (Мі ш концентрація нм Е концентрацій (НМУ ле 3 ме НЕПЕІИВКИЙ КОНУДЮДНО ж сі с 583 «ее 45Б4 -- ОБ - са - іа яке вне

ЕСла (НМ) шт- середне зна 4 ї я а СОра5ВА - сяшх я . я СЕЗЕЇМЕН - с й .

т. Ех т о СОБІ МЕ х " ше й ех НО І .

й. на 2 Ї ! чо Тіз МЕ -- що мо Її 0 поді он вд З ши у ФІ м ги - Ж вини и ем - - р о

Фіг.10А ВЕ фіг. 10Б а фіг. 108 я зе Кліпяни з високим шівнем Б З щита; гу й пол г а вмовАки Б. прагпіфрерації (4 Б чере п о и ПІН нн и вх хх ща дохо ш- зання ва нин не і Й Па СНИ шо а в ЕЙ вк 7 й НЕ г А ор сти марі вок рн се нн В се Н поши те хануентовя (М) ої кандентрація тим Не 8. концентрація (ому 2 Фіглог Фіг10д ЩІ ФіглОД Баея спегююік до яко рву дж ж В й ЖЖ. дати. КВ бло рі 5 25 виро Й 5 це пи вининя їх 55 ва па кіз Вб В зей ня зт ки ме ни ИН па в Я рин нини шо ІДИ МД Я на ДО 5 Х ; ЕЛЬ Ре вика ше дня інст Ессе естртесісалсннот ХК. ДК ЕТ, що ри твоя В бом зе Моя повна й концентрація ДИМ) концентрація (ям концентрація (НМ) ж: негативний контроль се Фр, же аа ко 2987 - сьс-554 - са ек вм

Фіг. 11 ій ян що об . Ж ГУ гову Ж шу ою и ж г: гу осьова Ж яв я г сусввя,: лю ж ов й г й т. г щ Е х 29 . Е й ч тла іза дев зі а Ну 53 й 70 4 8й за ї26 стандартизована біозхтменість (96)

Фів. 12А Фіг.126 КО ще о Й ща вок Є й У хи. КО У і, анти-Сх4й Са вНтТИ-РАР: я чо соки г. СЕ ЖК анти-ЕАР. а

Фіе.т2В в -о а НИБАР м в ІЗ (ана я хх о ку МОЖАЖ БК я : го діспецифічна ше винне щ конструкція ганаліт сем свіже БІ і В Ж Бай Е и баня Х зкихай х те ще із в цена чь І КУ ся

. -- зд же

Фіг. 12 Фіг 12Д шт Кн «шк. сх К-я с. Помомнюмо дптр нціх я У ве в АНЯ ЖИ, НА ВеМ, СЕ о иа антохаю ЗЕ ших м нини я пове ув Б Яд Укл цАК А Мк. ШЕ У ЖК з о смненк й ЖЕНИХ МКМ ОУ ще й в 5 шк ЕВ з и М Ве ше. ШИ кокон кн

Б... З ОККО ПЕК автвАР ЖЕ ун м

Фіг.19Е хх В У Вика В щі 5 ізхолі: В КУ Ж пн свя диском смомрукцех те | тамох ек М Кок СЯ сан в: 5

Фе. 13А Фів, 13 дк ВНУЖАР іформат ак як З9ВАБАР (формах 352) Бон ОО хх. ах! КЗ чо Ж сю шо. фо Ома г Ж хе: : - Моодж с й ше Мо ч 4 З осях йОоЗова: зойк: - шо : дю що Бо: КІ м : КЗ - те І єш т ту : 7 ле Сем ре бі ик т Ми їх хо «23 до хї «50. -е Кк Ух сх вихідний о У г чай х яихідмий ріяеньх 5 «ас вихідний півні оо аж - Філе. 13С Фів. 130 - ТОДРАРіформат ау яй 2ОБУЖАР (формат 2-2)

з. я Хх : жов: 2. Що : ! У шк 5 - що : в: З пожотра й Ї шЕО: тх УСУНЕ І ще Ж: се ЗИШН СУ НИ жо. В : Я вії я шля Ех : Я їх Н а ас я! Й . . дай . . . ; хе ю З ЗИ ИН ож: пеойю мим час вихідний рівень о чек 05 - вихідним рівено б фіг. 1 ЗД Фігї1ЗЕ ву ЗНЯЖАР (формат 11) тв ВВА? (формат 197) же що - : - ре не Ж ші : З : : ЗВ : ЕІ : я : ГКУ : Об чт - 5 й Я щ 8 : о т. Ти що НИ ж : Ж Кк ху : що Н а и : Я БУ по й жМмо зх 7 х це Б т й часі вихідмий ріашно) с зва є видний пен о Фів/1З3Ж Фіг.133 Кк ще зе. ТО4ЕАР (формат 11) ле. ЖОВТЕ АР (формат їж) х Н ЗХ. : й -

що . Об: м о: С : ЦБ ШЕ : пи од отнх В й І Бо! я: : ще шу ЕМ да: - : во 5 НИ гу НИ г ке І : ШЕ НН Ф : - : т ша г Н б : -кЕ з ско до леояое яко пбо юю мб оозва чне ох вмхдихи машинні 5 маш вихний ріБено Фіг 1 ЗК Фіз 138 щи з35УЗВа я й до я ззвааніані х ор Би І Конт "з я а й Ех : й ЕЗ т . - ше п о; ;

І ». Н як Мк їх ЗД ра п ав дві пе, и 5 : - моя 17 дю: ЯМ шою алі кН ді Во ооаде бод а аж Н З Но ій щоОові о й х- можу дю ще пос. ЗБ я їх ли зе жо же а шо шо лю» ме ун вурідний рівень с чат«О вихідний панк Є Фів 13 ви чаваюва? й як. Моомату Е Воді: пу о Н Вовк к т ОО: ов Зо 8) т вихідний рівенві с

Фіг. ТЗН Днапіз зв'язування з ох. в умовах, конкуренції ев Ф500О Урени й - -- дЗвВАЛяНІ ок х 000 Б я ях ЗОВАДОРАТ ЗК - : с щ й ее азам 21 щх щ 19000 г як. 4984 дО о ах о К Е 40000 й. т БООВ ; Кк Я - Е в 0 г : - в) 7 4 логарифм концентрації сему ФелЯад Фіаї4Б Сов-Т-клітини 8 стані В Активовані 508 -Т-клітИНИ Ж щ «зав сткою ч КУ вом ак вх хе ! р ож ЕН това й г пух БЕ І ВЕ Еш! ВЕ ХО Іво дплллвся ков: са шо ж сн фонній ш- я ви ч 16 лк ве та «а В; 15 103 Щі хокоентрація (ЯМ концентрація (НМ

Фіа.1483 Фіг. 14Г БО -Т-хлітиани а стані Активавані 04 Т.клпини я хооу спокою -яєоз НУ е Ж В с БоФодуово соту сдоха Фо ЕЕЯ ЕЕ ВЕ орто 2355 кр ОО ве Е «Зак Я ; хе МН Я -5 я Ех - г пів т те 120 6 слі я 1 за ме в концемтрація пеМІ ш Бо зонцестрація мі -- прМВ ово РУгВО АТАСОНІДОЛЬіІМКИУХ 0-й охо (мк БАРІЗВМІ ОХ ЖюОсоха5 заз кищеї иЗгвїаА зах СпХаВ іазух ТАРІ ІІ й зд.

Фа. 14Д Фіг Я Н вктивлвах: СІОМИ-Т клітини. . дктивован СО клітини « ш Ех вом «В 825 « во " до о ОЗ й аю б дл ялоо ЕВ з яв ТОБОЮ зх ШИ ОЗ ле гоза ВЕж Суве -к ЗЕ Я В Я жо ол «Ж ВХ ою ЕЕ й а КБ щі БЩОХовоо т А" дол шова я ах ик ах шх су вшож Ко о щі а ш БЕ а ш их ве що і Ї ак вадами піканя пааднння мання жи По Ї я півня Памаіснаня При Панін вв ШЕ м2я ол 4 9 18 -ш 2 в х іх 190 канцечетрація (НМ канцентовція ТИМ е СЯ кптими в'стямі р СУТ килим в стані спохою. ба ово опоюою о Ж оояор Жодоет ЯН Е т аго що 5 щлете ж ЕКО є о аю 2 е блсос Б Ех зах ЕМ З Ж голо - ВоОЖ ДИ ХЯ з а гефену ше ж іо 8 Жов ее ще щолошее» Б тв п СД (іо лівій Нік ін нь КЕ СІ лини нини ник в Я фетттттттнт во в В ай ов

Сх. о б ги в 19 я я? чх щі тя хи концеєтрація «нм концентрація Гм йно УРЯВ ЧІВ ВІ 32 БАХА «кантроль отипу) ак ОХаВ(ВнНВуХ БАРІВНІІЯ З о схао(вноз поет За іі ко схедіяної» кАваЙВнЛЯі іг.14К

Фіе.14 Фіг. 14 СОТ клітими в стані спрбою. печах е ! слово о дитивсавні ССИи-т клітини. тощо зва ж «о «о 2 пробах водно У дет водо х Ей пі о В Еш дова нин се чне ння ЗА вх шо Зоо 8. їх БОЖ до яоо ЕК ЯК сь сон. - Кз ве и да МУ с ві ж « ноохойо ос ря я бога запо чер кокцентраців М) концемтрація (ЯМ) Фа лЯМ Фіг. 194 е СОВИ -Т-клітяни з остані опОКок -- Ахтивовамі СЛОН" клітяни а Ж оолюю м ер -ї: мені пива З й ас ОБ х А ОК ек ЩОЖ фодЯнсннннннннннння ах тя пан по пот пЕ ЖК вщоі. . . Ядро вій - Е Зох вч Е КУ фев п. реа що ЖЖ до баня тити тити нині ве я он вм : ов що ноя и ше ГО: неон вва ее ЗНОШИ во ТВ. и ак ще с й во пхтофит В 5 ри п я СКК НА БВ пи ово а и хо есте тот утрені тттечя в'є терте етеру ето вові торлев тва - е С: Ше ЕК яз сояо коицентровція (НМУ сггокдї оц, ня о кандантрація (хм) -внопхепіЗоВкух ПРЯТ кі а ОХ Х АРІЯ НІКІ АЙ - ха (Зах бАВІШЯНІ ІТ тт ОХхі1о(АаВ4іх АРОК яко оз? кону тва іА1 а чКОМтрОлЬ ТУТ

; НА

Фіг. 140 Фета н Актававяні Д-т -кпітини сраставнітини в стані спокою , 7 ваш и Е тоб « -е зу Й й з пох І ни ПО зву вв Ж ОБ зо Ех ш Ж

5. Б о й ох шОщ ОО чео Кай н ЖОЖ Ж ввдЯ сг - А ща ОК ВЕ рай в- ах ях енни ке нини нн нн ан З ВЕЖ м у м о ок шодо щі ааттолиптесває есе ота яса ше Ї дна пив нн свв: пи ливнвнь ня З а ваги - тво сл, «осо й ій 2 Чк В хе. 590 чої д канцдеотрація (нм т хочнентрація чим) опе, на сто вВкткасадаї СМТ «кпк . Сробталивни в стані спогою в лктиволан КИТ АЛЮТИНИ ра: у Ж що боже - - КО 0 амур ВЕ шо хі МО їх шої т Фу м - 1. - - х ЕК Ж о хо4. й що х х ї БО еЕ 5 Ея оо хм ВА з х В Вони нини ЗБ вн тн па зах Е 55 ЕІ БЕ що В й Тр виє : - В Ж зо. : п, ше о. вої зон Ж Ех фон в" ес ве о п и о в М ЗХ ХНИ пе 4 пос лег ВІДМ У - В нія ниви шани надан тва наван Б р п НИ 2 ре 4 15. зба (04 Що е ді шал таоозсоололо концевтрація (НМ канцемтрація (М) чо лхайлатуазх Р (ЗАВУВя! як орпєтоюубі лихо гла ККОНТООЛЬ ШОТИПУ) «ан ОХа УВІ ЕАР ВМ - одаптєуююхова г

Фіг. ТоА Фіг. 156 х І клон 38 НИК ат3: у мав» ва МІН/ІТ З ВИКА Р лваро мм «хх ах 2 5 Зо «у М 8о08 йо ох ГІ хо хх з во уапря прдійою пох то: Ен й ВЕ --к в її Ба ДЕ 5 бан Ж ОК тов є БЕВЕ й Кк вОщНЕ й шо Ме цолрканів м Гея - -- - в . м НИНІ ря сні й не савакн нава вас т 5 валовий й Фа вл 4 т зов т паї ві 1 че Фа концентуекія (М) кочцентрація ЯМ) коло мері утома КОБТЕОпЬ ОТ лЕХ яоптєд вих тою і хін іКочтроль іотипу) софт еккі лів А яко УЛ ВМ ВІ Ким ІМ ан ОХ НИ ЕЕ ТННЕМИ опухла в ДУМІ асо лАЛІТТВІН ВВ УТ ей пдв АЙ ДУМІ

Фе тов Фіг ТОГ це пе. Я дме -Я ж АБ4АВЗ Моск лй ві ЖЕ непо Е В слопоннннннннннениНи кН 25 ох ке з Ж ведення В ФроовеешЮє ння Е З 5 в'я й РЕ БОБ бяввва ин ее мин - ВЕ Жасопо ЖЕ У ом 8 гово С се їх йо болю я Ж Ж Гирасу ї о Б м ря 9 ванни нн п анна 8 Пес і не в шк вики пн вання НИВИ х фногру чено носа ответ кутя | ін ван ванн, меани вано засно 9 Вк ол 1 10 бо любо а п ов х 10000839 хонуентраця їм) "знувнурація (НМУ -- вка чів Іо віх іконтральсзотилуї ж пХабідавахх АВ ЗЯНІТІ -- спхавіовл;хавях ні -- ОХІ Яупліх ав ІН Уо я о шхАЦАОВаАЄХ АРІЯ

Фіг. 15Д Фіг. 15Е ре м м255-4 х АЗав носінні й пох ОТ ЖЕ зояой «осо водо - пі Й дов х г. КОЖ 5абав п-Ж БОБ вейеатй сніп 5 ох я БАННІ е жо х сожов -щ ж Н шо. лу У 5 З іваво пн В 5 шваваочо н Е шощо- ї оо лю хв м дОж ре . шо Е х гоп птн пиття - В КЕ 20908 щої 8 а во" шо Є 7 пт -Е ша БЕ й Не Дон и мч я « пофсо вес совраео Трлтвфссннф ня офр я Б оз г 5 ні в дііьс в діви а гаї Кл Я ТЯ ок 1авк о 0.81 а ї та 1 опо концентрація «М кокнцентрація іні --- схе ідвВваїк БУХ ЗК -- ват внівах РІЗЯВ АТ А (ХОНТООЛЬ ПОТИПУ) Як кА (хОв4їх АРІ 2 че Ох (ев ВА ап

: дав

Фіг. Т1бА Фа. 16Б Безантичла ооозво з присутності аториеного: хв м да пи х - антисоекі Боу с Жов с ; ; я Ж Ба же спенифісном» зніутіле Ж оч-оо й до дзасе ше шою ярмо. м хх Е ЗК К ДК КУ яз ЩО о Ж КУ УНьКІЯ ве С ЗВ тах - ; що ще пу - ж Ж бо с Ж вуз а ИН ши й МТА З є й. знак нн БК З Ж оф, і - ж М В ! нен ЗЕ лашнія аій зйля й 5.04. ря х 42 фелетевре ето ау екуття ханцентуація (М) а 9.51 в Н 73 кочцектрація им) щ Мін/атз-йчЕде клон 33 ж -чяв-У Во ого З ож г Б х Фоознео хх ко ШЕ і и я" еш я. я трсріе що Кк їрх ж Ж х водкатео Й тя Фоопе є З , пев пл мо сов» С В Ж як тов що дише ох я - шо а Вени то На х с. сажа Ж х з Я - т «т ж -х х пошана я В в В 5 ха "з х 10 х я ті ' ха концентрація (ВМ) хонцентрація (НМ -- овяз вусі 385 АзАКОНТЮЮТЬ ЩОТКПУХ ак Ух40(4883)х ЕАБ2аняу ших «їн пв4о(1о)бюдсІ ав Аіх "й клю (яВюзу гак гака ути в присутноют вторинного акти Бехантяійк Вон Есу-спецуюдтько - з антитіла Бо 1520 ЕЗ "Б тео ЩЕ зе к У й 5Е - Ж 4860 ща Мі Е я й пблоя ' 7 Вт 2820 Є ДЯ дет Шо с - ОО. забя «7 й що ся Я Ід - ій е з фен ал ї а ик

З. р те рей с ч з (хі зби: тт г. за Фа 1 їй концентрація «МІ во М и 18 КУТ хончентрація ім) -е- по вищі зго івкА (ОНТООВлеІМТИпуХ МінізтЗ-никде клон З ко вита ввА ЦОНТЕ жатипу) - ЗХ епі у охаб вно млі РОЗВ Ах ве п Ж М: : ко Я ОХАЦІВНОхи тАРІЗЯК ТТ Мол діа І НЯ 2 НІ ї б. -ке ОХІБІВНОІ АВ аві рі рожа я- й Б 2006 о ди, пох х -к Ба шк В Е Маре З Я 54 ЩЕ -- Мав Пн НИ СІ вл за Н т «анцентрецін ни

Фіг. 163 Фіг. 16К безамтитьа д ті г т й в присутності вторинного анти. З мову й - - тал Бех специфічного се ентитіна Ех Щ «гоп ентитіна Ши Й ек я мини петлі ЕДЕЧЕУ о щЕ Ше си поз бо пиши но с: цих док ол х дово КУ й К. ма ж є зов . ни Н . а ш у 5 ко шовк «ок ЖІ м ах я в сад а Зо 1о6а г я Ой Кави фнттнт ИВ - пк р-р я з. Я й кт -- ов. я о фа лини вия Ганни пививднни нини нини! реичнумкрчу чотки ов. клі Гм х о себя вл " те канцентовція (НМ) концентрація зи МІ

Фіг. 16П Мінозтазни-вАР кпон В БеЯ - Жора тов: внУбі Рі3Жев а лА іКоНТроль оРипуХ В Е щен жк ода аву БАВІЖВНІІ Її ол зва и й Ез щи с пкт шк ОВ 7 шт и блававихихОовВіІу г ЗД Е Ф ше п ОВ зорю шо

8. ГУ зе джкхосахозух как остан уж; -ОВ Кк -Е х х г дона -8- 5 "й : - «ж: окавлкзварх вах ому 5 о ф дийсх ати - і пвания аа о иивавня янь ж її а.ї ї в. кенцентрація сн! Фіг 15М ФіглбН Баа антитіла в присутності вторинного т ач Ко мое Й специфічне актипла х із Й - ще «255 ? Я : х х заби Кк Ж У тд ве Шах и Я о о Ша. й - Тож й х ЕЕ а ПО. гас йно. Ан -к ха05 : Зх Мк ЩЕ и: ВИ Ви : й І хх МЕ ма, сна. зкфеет зага бо зі 1 тн жах рин в з хо хекцентрація (НМ концентрація (НМУ се» я

Фіг. 160 МмінізтЗ-по-кАР Кпов 48. Я щі -ено раї вч: ваза ьАЦА МОНУДОЛЬ ТИЛУ) ч е З Ка т ся п пк зу й якьч З Х зві: п, КОН кохав авяіх увах ді Щоб ит Жот ех ож Ж я Ох с«васх кВ (ВНТУ ЗУ Ж хо 7092 : и Б що (й па д. «В здо ов) хЕкРІЯВОГо кі - ЩОБ тя: - нен : У ШОВ г Шо я Е У й ; ій фун чено ее ого июеє Фо г і їх концентрацій нм)

Фе. 17А Фів.175 там ДЕ уМея ломт им "т: Зо ткани оз ВС СИ ТТ юттимй Жов зсойо ТУ х І: . ї 150. ЖЕ 2 х я ре ох дяктфляттьи ВЕ х ї ох «7 Ж 5 вові і й 7 ко що Ей 7 я де; кв чи з ся. ДИ "се бе ла в че тА ГЕДЕУ е т) од й о я тов ри ож ж От» М І "7 -Е о й ; Е Еш: же. ій вх ж ЯНВ МО Ми ИН си ПД ИН А Я Б ше х -о мо 0.01 ча : зи заб й т 25 за 4 то зпо хонценірація (МІ концем:раціа Там я НеБ ія: взяв АТА (МОНТроль ІЗОТИТу я ОХІ)(ВНЯ:Х КАРІЯХТ 2. ЖкоохіІа яму ЗІ іахА як: УЯВНОЇ КАВІТАНА РІК: и ;

Фіа. 18А Фіг. 185 тиха ад Ес : с кпнини т Ж Тіз чореротохпіткни 5) іч Ж пропферувих СО Т-климни (5) х ч ня ХО0озу ха Е о зя Ду БУ га - шен ті ннЕЕ вв я ее У Мо вород бо Ї -х є дов і її й пт че НЕ те «йон ся го Н ша ша Й ожив У ДИ РИ в З Боогв ж я ; : Кен чі Ге , БЕ - є КЕ » В. у : т В й - ох й пи и у ява ї то 55 з яса ї М концентрація М) от І : чентрація (НМ) кокцентоація (НМ ЖЕ т САКЕ СТ КПТ КИЯ (09) в їх Фів Й тв . хх - ж ї Фа на ст -Г-кдітинах ж 22 хх зах ЕХ Бе: ака гово КМ ях оп. - Фо в ках ; ц В «о єсх Кз гЗ с ; й ЕЕ З оз ; Її сх нь 7 7 тя хо т. -- - п зЗ й дот й мо їші ОО хх ї - . - - 2 аж та 1 уз Га! г. г ай ї 10 концентрація (ММ) концектрація Гн) -- певя кота РІЗ ГАГА КОНІОМЬ ОТИТУ) яко олавіїоєі вАКІВНІГрІЮ «ПВ хжкаоЗ«к1йпоіЗа РЗФВЗ АТА зе оХхат і ЗАРХРАВ ОВНІХ я

Фіг. 19 ЕСьо (НМ) а пропіферація -в 7 ня 2. г. По бср127 ж Ж -я

З . «а Фо тіт.-З щі ж І Ж ббх4о о 1 242 ще . Фіг. 20А Фіг. 205 Ж и СИ Тк пітяни З НиЗьАММ Мане Мщк че . Ж х ІЗ пітяни а Низ свя ДУ щем Й Крокіств СЗТ аептиН т- ХЕ промферації т ж В ою Мож о гоозє - - и й ха БЕ о МУ є - зе БАНЬ: сафянь ще. х Х Міввог шиття Ла ЕВ ше З Я їй ЕІ сх нн За нн нь чн З ц а 5 ГУ ж Я Я ж 7 жа ще п Ва, же 58 є ОМ. ожеов і знов пивні а З п « НЯ о. паї Н звк кандентрація (ем концентрація /5М) Ве Фіг. 208 Фіг. 20Г БЕ Сов калини З Бисоким рівнем ЕЕ Кльнсть ООВУЛ.кЛітИМ ож ост проліферації в ж Е їв ня - щЕ чи -- я пня св т ви Що Й ч ж тод: « Шож ліз Га ее» вени Як а "ВШ шо жо її. со; Як СЕ Ж ї ї ЕЕ ї х КУ я т ЕЕ шк «Ж. се бод ще і; Ж те я ще КЗ еще Хот, що Ме ема І пенні мини ТЕ ов и КА Я см т їм й М ки щи тва хонуентрація ем конуентоація М) яке пра нвіжшат РКО ГАТА фОВТДОПО ГКТЯПУ! -- ОХхадіаняух БАР ІВНІЗ Із же охапзяна, квасі ВЗ ТАКА ей ХПІ) КАВІЗОМ Кр

Фіг. ОД Фіг. 20Е Ез СТВ ТАКА клітини ТЕЖ СТИ. клітини З (МЕ (МЕ Хосе е Яе й хх - ! пох 5 З бохо ХХ Ж рин Мина с Ва ВИМИ пий юо о уже пеифріннянифи пф Т-ХОЖ ; БЕ сл не ді бю» Н х я - - ік сь дя ЧУ с Вшчко і: зай М ї со З З бю дич їй ж до 7 З Ошц - є з їх я СО шов пін В, - Воосзіжх яесйтей- дояте гй ї А Е х Що аб» і овнвавасі певна повинна тес інт тет « яю ЩЕ г05 я й Ще зей концентрація (МО концеЕнтовЦія (НМ)

Фіа. 2О0Ж Фіг.203 гЯ ява ор тУєаиини. Се. Ток иня тло Ме зх іМЕв 5 - є Ге ЖЕЯ - ок У шо Ж Об івео - що - под Де ПН ав ке а Й Я хів ї 1 ох Є С дрова Й КОКО м з шо КИ ЕН б дов й ї ря що х ж ж жений д КУ зевеі-- й Ж ше зкке сл пильна нив палі и пильвьаня «узи і мвакке пивна» ниви жан з ях , го х га Ще зас пакцентрація (нм канцентаціх (НМ) ее ПРАХ кір! РУ АТАКОЧТООПЬ ЗОТИпуХ над Охасянвіх гАКІ2ВНЯ Я -- аХеБІВНО р РІО АНА ей УХА ВНЯК ВАРКІЯКІіЯ

Фіг. ТА Фі гі САМУ Н-Т-клітини 55) коуч ан окпітиня ГюХ учи Ж оодва ЙОож х т й ЕЕ їх та шо жа Ге що Сожшрюоя . ТЕ ЖЕ не Ач СЯ і Я ЛОСЬ сш -ї й Де Ж І ЗБ з в ї ох -7 ух . ра с й -- роя А ре Не і ви и и А та, м Я т я Ще ЗШ. я б 24 Же а не и С в З а Я Ь ідксс хгвзес рова -5 -82 з пл у р в.о вах Ки х 1 їх плов б.оч 0.1 з т зокциктрація М) хонуентрація (нм

Фіг. 218 Бхактивністх САТАТІ -е тав нов: ЗАВ АКА (КОКТропе ЇЗатиту! ЖЕ Охаохібяівиові ЗХ і АА бо - Во єуоЯ оф КЕ. Я ОхЯріваук вАРІВНІІКІ та як щу й: кла) вАВітанлутяї дО зло» й пен Ї пе ц ш Ж с зво. НЕ А НИ Е п ВО . я ши СОСКИ ОО ж щ- ща що ка о х я а кидьхісте СІЛ Т-кптиМ ЕВ СПК ТаспітиМи з СК І Т-клітяНни ЖЖ озеро тнтнттннтнинтнннт МО вюгедяяо нин ни Ж доб Й ЩОВ, н А ЕН й вх пої - Ж ФО факси ЕОМ таку пе тив Бош жде і М. ек вн МОХ зима у Ва: ; ем ре теє Ух К. Кк Щой юю г руш ДЖ юр нтнедк -- з Бобю» во ух ох с о ШЕ. С оз в, и ПОТ 5 р КД Ге Аж, ау х Я ва б тйниювсо и ОПО? ев Плджюерсовесию ЖЕ ОО Я етно ов -Е Щи іє ДЕ не: НКИ нене одн те. і. ХЕ

КЕ. хм см чи і 15 бом ва: за 1 з шехсі вл 4 х В кокцентраціє ам) канцентрація НМУ що каецентраця (хм БО ОДА «клітини. Е. БЕК СДВАТ-кЛПМНИ со Ж Н еоодлй ОВ! - п Е іа то Ше ЖЄЛ Ж аю вх Вовка о Ех за НН жо ЕЕ же пи ОПОВ фони ЕЕ Н НИ У З Я ВОК ши. ЗО того. - я - В Ж ; ПЕ Н а ей вне дрів ПО лоовютьн Берете З вто дочок авоєну ков зе ва т 16. кові в дл ї як кокцентрація сн концентрація (нм -- пра вищетизтаєз умі ікантрапь івоатиоу) й СХ40 4884)х ЕАРІЯНОГікі Ям сло каваух Вахиіні Як о охаосаавате ЕАВІОНІ; КІ як Охзаховваук АРЕНІ

Фіг. 21ТК Фіг 21Л й ФеагімМ п - - М з ВЕС ГМ-токлимя гу спало ткати Ух кілекість СОМ катин З Кв са т клітини Ж у расою т. клітини Ж Ж янь ШО ТУММ р стттттттт тити щотом Й їх ЕХ 55 Е: тов соди що я б Ки Сроврирчнаи ння журбу Фоми фрі тт тт тт Б. МО ам сти тттттттттт вви ЖЕ КУ тюь А ЕН не ж р п в п В и з а ПИ са от -И а ж ши ОБОРОТ Е Е жо Шашок ося З З сосен (ОО сійеюйну М сетер Ух Щі де: пе З че й КЕ сани З Я й мі ; ши ст х В.о тенти хаех. Гпасван двова: педа нава Го зм Ї наван вано лиранолвранні У 7 вецентеація (ну ОД: нет пролом пив с хомментрація (КМ; комцентрація (НМ) концентрація (НМ Фів гін Фіа 210 в БІК КДОВ. 1-кпітини Фа СУМУ ХЖ Ж клітини її От Ж сх пд пох ЙОД зму Щодр даю сту ен В р Ж іме ще з Кз ІОХ: Кз ес пив пок Ве я ах заду нт о КИ шо Тож що Зла я пото ря ки онйя ту х вх пит тат тю тн ен ща те тота ь Цоооямх па З мк. на межі кл г ' їх мет ткюв ' та удкцентрація (Мі копцентрація (М) --е хай сава|іх ДЕК ЖІ та о вЯХ кайбі ВУЗ КАТА ПЧНТрОМЬ ІОТИЛУ) --е Ох зовазз вАвІЗВМЯ ля во охасізевау« КАРІ) 1

ТУ я . м у с еВ Со служ жк Тк б пт 8 и вл ср ОО ЕЕ ЗВ й . в то сток х Кк ОО ТВ ей яв Й що зв Б. яр 5 о - я ЕВ Б Е 2 Я ме У ЕСЕ і: г а печії Же З як х В. ох : лю х К щ-. 5» Я з) я КЗ КЗ ха Х З я ЕЕ Щ) У не М » я хх б « хе Вя х ту 7 т Фів 22А Фіг. 22Б Емвітьчення МН Прежочна зиятовето 52 Фу МУ 180 ях - З ї- я хе 2 б З ЕЕ ти о Ка ч ї --о х у, й Х ук щи ї щі і Ч ж БИ В ав Си т, я ; що й о є а пр -4 -7 : В у 2 й-о сізйьх Ва с ша 2 АВ УВ я х ев рення Їадонні пввн інь ЗВ вдова «т в пови оч Й тво а попвя тої ї то концентрацію яититіла на) хоицентрація антутив (НМ -ео0 невімМВнИЙ сонтооЛь Як охо дпдзльщо РІЗ зак бхайсеняі кою -е позитивний комроль Я ОодХАВТІВирпетвві -веосхаті дахів хх СЯЄ ст лини в'єтан спокою. Акивован СОТ залтини Моз : сій УПСКО, 5 зда п по Ка її овлЕ і: ж в аж. пн вжи Ко пиття Ко БУ кою ї Додає - в є ка ЯН ех ш в я Го шаг ярі ня я їй є з . ши. ООССЖОВОВ юною К- Б Й Й з ря ой ; М 4.000020. ос ЛИ т ж ж НН ни с жов нн НІМ я 7 - г з С й в данцентраців см з кондектраців ем ге ся. Фів 23 . Фі 23Г х «авич СКИТ Критики Встав Слокою ей ов дктивовані СОЮ клітки тс ООЖЕ яв ї- Я ох ж Ж У пи ЕВ з, й , ко доп Е жов СЕ аж й шх х аз с . с щоеовя КЕ ПК ко . В Б Е гі я: - . Не ЩОБ дове о й

Е х. ї- є реченню сни ечеюнн як «Ф що х З У г. (З х к к дя 2 с Ко « «З КУ А -е Ще ри хокцентрацініМ У спих концентрація НМ). -- улвв(гой ної: вза й 33 БОЛІ вої РІО ЕМКА за 3. ІВВ ва) коіві РІВ 1АА яжеотоо-іВВ(ІпОогрконо вУсБУ вАТА «ке вв оплаБУвокнхІ ВУ КА «о птет? нога вЗваа тА (КОМТроль Ватиму)

Фіг. 24А Фіг 24Б ж Мицач і-ї -кпітиня Аутивогмані мишам соми. ї п ств опоКою пітмни Хо оо встане опоКої 5 мо кпітин ТЯсЯ пов ха пох ш КЗ Я. о птн ння . Е З Косач - . Кола Ф.ОйОТХ ЖІ Я С, Уни нн ння роко се в ща в: . ЖК Доба ее - 8 зо дк лову - - - 3

Я г. 54 оппефевофеносфонаєфюворано фі ї. я чо Ко - к око Ку зе х С нс концектраціе (м коццеЕнтрація (КМ й Мини С -Т-клаМмни В Активовак: минлачі СВТ. Бк ставі спокою а хпітинк Ж йо т й - вихо Н я Н сс ень аг КОС сов бен . вт. жо ван - що я ож ва ру Ку г Е З вай пня 5 - З В ЕУ золо МАУ ЖК -к БЕ З ямо - Ж БОЖОК, даоя сен М Б 5 шк І ШО Я зфакфо нин яд й шЕ г а зна г КоЯ в с шк мн не я " сл МУ концентрація НМ) й концектрація (НМУ певтрація ги ля зв (яті зов ЗЛО АКА -к- ДТ1Ва ВВ ІУ нні ватявіАТА я вазі МевиЗі РУлаУ КАТА я тво ів вв аловівА фе ав ввЗі віз АА де опори кю вага АА ікОНнТроль ізотмт

МмМикшаечи скит. «т Активоваєі миша опт Ж чо клітини встахі опосею е Х я хлІТиНе, за ЖЕ Я взнЯ нн пін НААН їх ож Обов Мо п оЗлЕ Зо об ож З Бо ШО Х бою пін ваті З 28 й ой) що вишаЯ сення ня х- -п- СІ Бсвнтаня, зно пн зн, конк ив Мас вак х з к к » ве і Ах « о К-й «а еї той я хомцемтрація (ЛЮ) концентраче: ВМ

Фіг. со Фів. 29 Мира ОВ т квітиня ж Активевані мищачі СЕ. в'стаці спокою з ктини іо ОБО евов дек х 5 Коб Що вн В Не ай Ео СНИ Мошов боб -- то Б Б ОЖОЖ зву ЗВ доо Що шк допо нин ання ж Е - е я БЕ - Е пк БЕ . - МОТО его Дім мах, ладі Вл іш з ооБа В ЗУ я « х Щ ж Се не концентрація (М й поту канцектрація (МІ З лоба кшвех кове рве ДО Ки ж Б понтроць коипу пюКОЯ хом ів. Фів 26Б

Фа. ебА іа. Активовані СТУ клини мови Акцявсвані СО. Т-клітин не мОопУє мевпінамелує у Ь ев цінамелгу Жовч : о вади нтміни 2 х з | хі. |! Г Я Е Ки НН ни п за мне ен о сел що Ядра июня У ж Ж яко й Дод Кф тт я - сей он нн стих М А п в й Вк ЖЕ оси ВК нти в зорі аж Шен ще ; і 2 не «5 . я и КИ -- в . ; Ух или і мевслематмт вк ; : ох х Ії хі х Бе Ме а -х ке концентрація нм всю дентраця ко кониентрація нм -к- А-ТЯВ дві из ТАКА яке ф-т ТУВЗІве Зі КОХ АГА й З-ТВБІ1РВВуантво і ВвауВо ТАТА сже с-ТВВівВ 1: мив Уго ВА СО ДВяТ вирі Уха АКА (контропос:аотипу)

. . г тр. Фіг 27А Фесть ж С я 2 Си Щ зво в Що онов БО ск. хо; сл ше Кия ні ша: ДУ мо асбалюї а Не ; ня їй ро Б шо у хом й ке тя ча ІЗ Е що ее ле Зах тях У хо Ше возом 5 оо мех т ФО МО МК ОМ Мо сяк мо, Км ху, де масійевихідний рівенкі є маю (певихіднкй півень с В га Кт і. 7

Фіг.278 Фіг. ог Фів. 27Д я ща - «і - ВВ ві 32853 до. хЕ зо2 я сей, во -к пох - КЕ ще з а на сь профе, Км кої ще ко Ме у ду Не ре БОШ Бк ше З ОО хо Об хи ш Ж М т ща Ш-- поволі шк шок хх В які Меки Є дже ше доки що Е рН 7 Ес жі ВЕ Ма ОБ МУ слот топки я І НУ. дриля Те Коельо м мух мо Музю Мо КО Му хх мо Мет лет ши оме мих Мих УМ. ке ду КИ т й Й п ти6 о ме ой см оо М часіхвихдний рин с ча певихіпний ровень с пасіювихівнУй рівень) Є пів еВА пе. 296 що во в ге: ВИН що КН жо во 1105 Бак , ко ИН в я Зі вай ою Комі Тож Ге Ву Й й ШЕ сю ряст «ЖК. сгіненітрннтнтнтнінттнт тт щ ото жо ев Ж ах не МИ ПИ о Во ШОЕ «де ек ахірний пою сх мо (пло мхідеим рікнсх сс

Фіг. 288 во ші Н ре ш 2557

Б. ря То. вах ді 1 п чапуіознийаний різжньу с

Фів. ВІ Фів гид п чо хо, пт; Ко 1283 дикі зв13 оку хо Фо ну фік кн тож, оба щі й Б е з. ші осо фо ВО ГІ ОО м Же мМ М и се г. черіеаихний рівень с вс (йевихідних рівенн) с Фіг 28 х з5а7 Б 1 м ком миття яко щі и ЕН й й вві є ВО я т ВЕ ше ОВК Ше БУ 8 зі Ся ве хо в -ш ях БА «ве (пеБихідНиЙ півенм) с й Фіг: г9А - Фіг.295 ву хо ЕЗ -к ЗЯВЯ 0. таймі готов я й БЖ лю: в В НО ВИ ти ІНВ І ни івВНХ Е зі нан - : попід ей в я з. 2 Н ке Щ оо ї- ся Вид ши СУ мі ма т Б нн КОН домі ; В. реч І ОО : тет, я я жі я : ХУ А По ПА у - т БУ ме а Я пе см Я т т зе зи их й Ух має (пнвихдмий різень с часійтанкідний півеню с сне. 29 Фе. п «с зе, пд гій мит Х І ОЖН осизаБоми с ммс : яц2 Во шення Жов вІвжіБАдІ и вия АВ щі Си х Н дитину Мох Мк Й Хо. : ТИ п НН в ІЙ ЕЕ ж ЕК У к овоча! ря х Н Є ЕЕ і їх о и и с я шк ЖК З хх Мк ме хо ро Кк в г. п Не пе ме ще КУ пах вихідними рівень Ф. часі квихідниМй рагинх с

Фів. З0А Фіг. 305 де Ре «Мр ОБ х -: ВБД7 Е Ма пити З кі

З 1. и є : й пі т кож ож: а ж них МО Ки шк. о я г ї що Є г Н й Н х Волю В ЗБенеяи ч Н СЯ : а Н я : я ГУ Ж оч о БО ж г п тих ек жк як хо «ассйевихідний рівних Є папійхвикдниЙ піяенкІ о

Фіг. ЗОВ Фіг. ЗОГ я кі шо От е ом пн ник «оф: жит пише в і К вв ле Б 7 Е Н а Н ї Ж жі Ех ШЕ М М З У ЕУ в М ЕЕ З зак (оевикідНий хяеНннІ с част твихідний щізенех ло й Фів.З1Б с. Фіг. ЗТА що - із коми ох х Я Ен бачився БО . Е М я Бл ях ї ме тарі я ще ут. в х пз Геш ФО ху яв их яю де жо ше в поз ш п . жо а те тв тва вола 5 лах яю кокиентрація дтп хонцентрація АтіпМу - хі (зай

Фіг. ЗІВ фіат х інж СМ доя Онумх ср Е ж плекс Е ш Й їла ож «дксрженнях к г З х т 2 Ей Кз я ге. 3 З е ШЕУ ме д Гоа 5 ями ЕХ ху КМ З хи шо « щ З Ж ах йо МЕ З свкюхи я "дов ух руплвюдууювсу у, ЗМ я. пня і в ЗВ зо ол чис 1002. юю віценцхацій ті хляцентрація АТМ я пк ші же УМІВ я УМО тили КІВю АВ я ВІК ер Ми жи о жщеифольхлУцу ПИККЗІ БІ А А. яфнто жа торфом ВІЗКОМ я

(о Іб мипачі спленацити я б кг І митзчі сппеноцити ск О.Б мкг - антитіло до мижачого ОЗ щ- антитіла до мишачого МО п я ово як ков ди БО ж с ка ТУ ні м : Год я п ї им х хх са АН Ка у я т Но ж еф вок Оу, п ові а я Шк Ж Кн ин во ние м шк йй ми Ш Е ЕЕ г ггі ; С я я Аллан ливо льлим вна б й плавне ді г вх х Зах х - й ГУ ее й Є ще а ч 2 ще концентрація (мм) ханцентрація нм а оте ВВ тео фо оз-1 ВІЛ жі ВАРИ му хентепь зитину ФООрЯХутовоОю 0 б контральзотипту ПРЯг ро Од дено дек дже» меню ткох х така ОК т дме здано од У 5 Х Тофиюстйжккк юка М.О зі САМО ДВАКЛХУ 800 КЗ ДОНУ 00 зкрх Х дих мого хм жк 1 йозжихї ї тегомії ! см ЩІ І т і їйодм ! ї паю р зх ї | ! І ККХІА мак ОМ ЗЕ І ! змисххенюсохкімюка Ж | і І Во ! ! 3 7 оігтем вп В ання Ай. вв що і ! ЗЕ Н т ! СЯ ви НИ : : ! іш Н ! Ще ї жо Н ї ЗІБ 1 Н ! ЗК я ! І ІЩЕ Н ! Ж х В КА Шо й шшкеня « щоЗї й щі і Її ї і Н г ' хо хі Н ! ж і Н ї в зе Кч Н ! Ж І і ! ЕН сх і ! я ЇЇ ! й ОХ 5 Й ХЕ Ка ' Н Б лем : Н ви ЖЕ ' Н ШК і Н ЗЕ Н Н ших Ї Н Н лк Н - ! еБе ! і ! щу ді Н ! КОЖ Еч Я ВЕ у і МЕМ І ! ! БИ Н ! дрантя нан шо ж ЕХ зе

Фіг. 34

Фів. ЗА Фе ЗБ т дити-й г зр" ще якти а-ТБВ. , З дове» ща Я далюцифіннх з з о конструкція оз Фе хх ізнапі ду ЖЖ Ко " «0 ацп-едр. КУ З База ЗУ х тк цк В ЗВ і. ось КВ. с анти-4-188. Й аНАРАР С Б З

Фіг. 35 Фіг З5А Фіг. ОБ ТАНУЕАИ а ще ВВА 2» ик рен овеї рн не й ву Фі ма Ку дя оте вовк аналий Я і ї пк рі Жот В кралют я В хх Ко оф ва вв вв в ЕЛЕ ГУ Да а а ав соб соб єМож Мом Зоб. мн що МУ чесійевихідний різенех о. оже йевилдний рівене є фіг. 358 Фе З во 52 по МиБтдР зе жо же ще Фома НІ Ж і В ЕХ дожмл : В'неюі се Н Вик дюн 5 ї ! плн х 5 дк Ка її ск : : ущаї ї ВО Ж оо У жадИК доро МЕ ДН яд я япю-чхх АК як; хх ЗБ Же хо моя боймотю лю М Мю. Ж, жк хх «кеіпевихідний бівеньїосс час девихідиий рівниех с

Фіг. 36

Фів. ЗА Фів. 3556 МН МА ч спі СОУ антизніВВ Щйх СН: СВ анти-нівВ ШИ Во УВК вон БИ о а НАШИ Б о А ша ща У «виступ» зи: «западина» «виступ» за: «западина» що анти-РАР КУ анпевАе хн п ви щі й Фіг.3З/Б зе. й ДОС УКАР (УН з «западиною» оям: Би й

Фіг.37А Вишня Вове: с п, фек: 2 я ; г ко ВЗ вид тацені ОО ШО ОМО КУ пиКАКіВвВНац З щої ес КИ ОО а 7 - рик й КЕ ВАоя Б - ра з та Ук ж і: Бе пає ви ний пвеної й св Біспецифічна. чазісквмхіщний різень 2 хх й с Я конетрукиия. є санотрукці; ; найк бу, 87В КААААААААХААААААААААААЙ хх ях. 5 пед х пи ВЕ 5 й мих, 24 ПОМЕАР Сліа хи кий Ж щ 1 «звпадиною» й у аж що в ОООБЕ: ВО У : :

су. : до я са те ее Ше: ЗНУ часіевихідний вень ; ал

Фіг. ЗВА Фіг. ЗВ Пюдевм СОТ клітину " учи ж вс яти Вюдови сс тт ктини В х тан опохоюа «з : хо бар як З сувво стані спокою . ха м ин ФЖАОЖ ожвфоунмнсичнинямтннин ЖЖ о і в с бот ДОБ ОМОЮ вЯ т нх ми ОпеОб; по как: В жах ЖЕ Я ху Ба и вх шия пе еЖУ т й с ФА ооолоо БЖ ооюф- о й : Ех 5 ШЕ ЖК вх

8. х х МЕ шоком Я КЯ те п ке Що, центра ція (М Й й хопцентрація (НМ) концентрація Ум тю еу пи Фіг; 398 Фів. ЗВГ ехо . Зедемо слодД'-т-клтизи в'тан У Дюдік СОМ То ялпітяни вста С лювдськкя шк й Ав отан - х плюк гі ЗВакою во Ж зюденитям зе айву ТМ ія ВЕ Я М ча - не ши БОБ вх ядро Де й щк 0. ЕКЗ аж памяти нта дО ох хо МС ЗБ, . яя о Межа ож до Ей ЩОБ афо: бен шиті хо ШЕ шо М ЖЕ мк шо соте ин нин тенти з. яв 7 ж, як кісок фоіреофовстй М Код ос сою 5 Пеотттртеентр что етан, Каже ки ше х : концентрація М кавцентовзціа (нм ж концерн М . яйК осел коти КЛІЗМИ МОМИНТ Оле ІВУТИИУЬ зе: плат ут мами мох крнуроглих сотуціуї яко пам похгімемкІ КаУчо М «же Зк вху Ву РІВ ЗК гА ек пміВК ЛІНА УЖНи ЇЗУ я пок утік МАК ВН: у В. УЖ СИ ВЕ УМ Ми их

Фіг. ЗД ря «Людеьк сі токлітвни в стамі х Жов: спожно рр п ЕТ ва - 5 що З «оч. н й Фо ЕЕ шо сем ГА У г Фа шини й ак г я жо ож КК Он од ШК конузатраці нм,

фі. ЗВЕ КЗ веде сде т клітини п сотні що. що; спохою: жор З по54- А | Ц ря вк прати ширх ом з КОМ УрюОЙ В ЗОТАКу) до хі ло. - - ВЕ - 2 Ж ОВО з ста ЖгУ хм КУКА Ми пікантні як іа т чи Мах щш млі Кі гальки Ме акя ейгоз т лосі лю м М айефон тя иєитннкя ке « я о зевш щиті ках т ж х ям и и ОВ ;. Щ - ни Не ВИКани 5 пі Мои Ід й ї Як ЕВ ОВУ иІХ - 5 х є У з х еЖ ап ВЕІМЮТЖуУЙ МАХ Уж ее ож ож ж ЯВКУ хозиентрацій НМ Я яко турі

Фіг. З9А Фіг. 395 гетдк Активовакі людовкі са т- ж АктиВовані Люденм СТ. диляни т ЗШ ХлЙнНх Хоб Ва КИ ЕТО я . ва : В ово Й Й Й Ме и ня пи соя бчнх п Ех Лвіов зовг сою сь я В ОКО зве» ен б ЕЕ й я : ЗНМ ВУ що то ор п- КУ Що В Й ля ки - СЯ - Кк Ж Ки -У Во Кс о» кож канцентраціа м концевурація Тим Фів, З9В Фів. З9Г Дктивовані люде САХВ-Т- Активовині підивкі СХ т вунтани хх. спін З жеху клітини газ Уже В скоші Т00о й ля зов не . х ВЕ я ї ОО Ж фІо: ши ооо . -- . дж 5 щі ЩІ т ев ж Же Е ШОК олезернтмттмтттнитд их тя нтня тва Й й ря Оле щ тож о Вр х Ж од хх . сх ве вра се и ней в ж: а с ЕК с ЗК КВ «Те Сея ле шк зн на у А ни СН КУ ще" їй гонцентоамі ВМ е Шк концентрація вм кснцватовція (НМ «Ума КІ 02 МОКтроль йютулуї Й Й Н М я евтроль отиту) звопеу умі кози ск «комі роль ізатинчу! Зоя вна І КНА со алко Кф А М вв яке сАВ МИХ нн ха чем яжх тиви сідожуєкек вить

Фіг. З9Д Актипсваці пюдеТькру лет. клтимя жов; т Ко м - мн хаою Дике но пк зяеоф о. пня щ зіва екотвсвн сф ще ою яв х концентрація нм гд Же

Фіг. З9Е гжктивовані пюдсех СОВА Т-кпітини лова му осЕех мих їі (КоМмтроль пютилу! вх но нин птння - вк с пнВІЮКЬСІ ВИШУ МоАХ МО Мі но АН «М яепЕИ єлує тує Ми А, «оса. не п Сея жо я ЗЕЖІВЮУТЬН КАКОоЛІВЛІ Їх зіжевя зак: Бе о злевійвихвкі мо т ож кож - кохоентрація НМ

Фіг. 40 ще й Фе ка ' ія спе З 4-5В8 (ОБУ . з З ШУ «зве ство 23655 . ро слот і - КЗ ДЯ В "ІІ 4-5В8 сту ПРИ? мкмілвМ. тю орі Кот? ера тт «в зує вся Би Бо ММА І: х х х Б Ж Ж Ж я У Брях о озвні МОХ в врря; зані

Фа атА Фе ТВ Х чом -285-4 як -285-4 ЩО важать ня б Я яви реве ВНС «Же лу. ря шт А А РУ нн А ве БЕ шана вітання ан митті КІЗ нн нн НК Ех поси Фа нд ге я хіЯщ ОТО Аа - ка і з са У Бя зе кж х и НИК ак х хх ою ша рез а їй ше « - з ши Федів Фіг х мін та вавА р клонів МІН ТЗ веде клонів ву яр мн тя фея я нини тих «Еоо я г «ува зва ж 8. ши с ни Ку Жорж «Зв - хв свій Кк я В, Зк ж х « КЗ 2 СЯ не ще « м СІ х СЯ йо - ку я х «В а ще о Б Ко Я хоацвнтрація МІ концентрація їм вести паум ктех (ХОвУроль Шотису. таоошназхєи Уго ськ укоКгромь тин яті пами МоЦВІ УМ ох яжк ЗИОВВВЛУХМІВ КІВ сх

Ж. хКк є сувУх вп сукиі ля ее шогВХ ОКУ СМК дж ої хх єоМіВХ єм иуМе хи Ми Фі 4їД. У тав «ваз листи листи митник ЗВФУЯ. ин завад тн ей ее. ж щи се пок ща к к. сх З ду «Е щу «У У « Коя Фі ЯТЕ Мінізтзних АР клон В Дауна и мат ня яосеоїт хвої ік ПКОНТІХТЬ ІВУТИПУ) - ект хчми із (щі я нак ек хеВ І -всА ЕЙ ти мм по тя ек вна ЯН зв К Ще ЕВ ЖК усе ктАЖІМИ ТМ 4 4 СЕ ооо Ах В « я - їх м ех алл ті юка я є «У го ХХ «Е концентрація МІ ааеч я зе нування з клон 19 МІНУТ ЛОГАР фИф іти тити пи Є ркчу ад т нн ян пеки ідикду. ж фуд елиннитянинииннитимтинук МН пог ВИН Ор ясел, а ПИЙ я и но, еВ) ж зага й . де І фо сини ин й п і. М. ШЕ тв пли, пад Якем дддти ннттннннмох Ін | ЕЙ 8 косрокх А г а Жей хотзввсуваті ПеЯ; наційсн Б Х х Кк З Бех ЖЕН ОВ ЩЕ БРА? 281 дова ;

Фіз. ЗА Фіг. 43Б х дез БАКУ лухипинних КПТИМ Му свавгя ша Шаю аввпб тр: СТЛІВВІДНОЮеНнНЯ Т.О . ше ЕЕ тод я ї т а ооо Я т шЕ щоб905 ї тобою . мл ка ЕВ РЕК сЬ ШИ Я з «В гвшоо НЕ х-о ж х щОШОХ ого 8 - . В -Е БУ г Ж чсову бий . щ х БА дих зафже нннтннНннння г ре нпгее нні досфнню м ж «Ж х х г. т - пн я чі З Ук Ж ох «в

Фіг. 43 Крона мін аов А горя спіаввіинемення 125. ач шк бл пава с й г а Ж Р піс ни опр Ят семи юкити кл» фонтроль Ізотит й аж г ДЖ змо й ше Й УМ озчашси отим КІ М ЕЕ е зи тові дк ох тео імавок пи ії 7 га у ЯМ о ліхвсінаніи векохаитхі рем планки Ку чую Й що З зак внйнсся Діани МВ льно ПИ ьм а Віки Зк Ся - М я «ї г к «а конуентучуе: пе)

Фіг. 43 й фіг. 43 Че Яд ума БезЕдЕ-пукликних клин співвіднотіення МА запою й ше ачоза й атод ва хсозб; - я - - - запас, бе вени ат РУ пи пи р НН и тов - - 1звабя- - п я п ние п и ри у и х пр оновив й рентою лего тост юю с т. т т Ї пивні жан дивно МК лька жан з й х ке х з зх х В х х - х (З КУ з З У З х х є ки и НИ ох й

Фів. 43Е Кпок 5 МІНКЄСМВуКАР сСтеніднешщення 15 арен олавіднещення т йод сь зн ви во орех тим Уч его КОКТраєнк Ізотипу) ДОК нин - он яйколобВЕ КІ че то Во КУ дили, еп ха тих ідея ши, ее м и Не и ЗИМУ м в, Же ШИ ВІЗІВАРЄ КАК СЕЙМТІ Їх «др рою оф еф А В х фей І пада мн пада мини вав зе З «Е У кот з ; . «анцентраце ня; Фіг 43Ж Фіг. 433 ЗМО ТВсьЯ Єсо КАДпОУЮПИННУХ КИЙ ні тивно -5 адооот СВ Дрепухинних хлтин. «оз спввідновкеиня 175 . под |! под зако. - я що т ші як пе яадад т ит нини Я т тити ще шашки чооня . ктня нн М 5009 пепсеіфісасфосеніф сф асірасейраі фіни к пи я 1 Її нвиасво нини надан ьнивв наван хе й Кк Ши « Ки х .« ї- ОН НК 2 Ш їй Кк ся ЗА - шк -е У х кож -

Фів. ЯЗИ Коля ТЕМ ТЗ АР побу с кому мін о тлі (Контроль зеткоуі «пізвіднещшення 1 сражежт пе оноуса туя вино бод фЗадпютетт тити мити и ро УУВтлатх РАРІММУ І здо «НО акти я а - - тавозлетьжкав міх звтсг и отче жав й г. Ук о- он ляти) как Я я зуе З їн ванн ШЕ даси Янв птн о у-хОВ. зуба ту ен тні х к . х ко о «є «ех Ф х концентрація єн

Фіг. 44А ЕК активація в присутності кпону ТУ МІН ТЖНКАР оеакт контроль ізатипу! Оу п и и й ілввохей го ал ичих в же! в я М іх о х пяна і хв

Фіз. 44Б МЕ «В-зктивація в присутності клому Т9 ЧІН/ЗТЗ-пИгА Р довбання денних ВЕН пи шини Сова контроль Ізотит о й ША ЗБ, З КЕ нання птинятня І | ФіВВ Зоб З ЕЕ ху ї Че З звні і. «ва Ух З