UA123826C2 - Антитіла до pd1 та способи їх застосування - Google Patents
Антитіла до pd1 та способи їх застосування Download PDFInfo
- Publication number
- UA123826C2 UA123826C2 UAA201804633A UAA201804633A UA123826C2 UA 123826 C2 UA123826 C2 UA 123826C2 UA A201804633 A UAA201804633 A UA A201804633A UA A201804633 A UAA201804633 A UA A201804633A UA 123826 C2 UA123826 C2 UA 123826C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- antibody
- amino acid
- acid sequence
- sequence
- rgo
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 72
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 355
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 108
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 72
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 58
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 51
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 34
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 34
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 30
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 29
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 29
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 28
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 28
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 21
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims description 18
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 18
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 18
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 18
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims description 18
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 18
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 12
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 12
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 claims description 12
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 11
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 11
- 241000282553 Macaca Species 0.000 claims description 10
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 9
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 9
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 claims description 7
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 claims description 7
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 claims description 3
- CNKBIWLVNGWUAE-JQMRZUIASA-N propan-2-yl (2e,4e,12e)-11-hydroxy-13-iodo-3,7,11-trimethyltrideca-2,4,12-trienoate Chemical compound CC(C)OC(=O)\C=C(/C)\C=C\CC(C)CCCC(C)(O)\C=C\I CNKBIWLVNGWUAE-JQMRZUIASA-N 0.000 claims description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 2
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 claims 1
- 241001588265 Eucalyptus patens Species 0.000 claims 1
- 244000182067 Fraxinus ornus Species 0.000 claims 1
- 235000002917 Fraxinus ornus Nutrition 0.000 claims 1
- 241000087799 Koma Species 0.000 claims 1
- 101100049053 Mus musculus Vash1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000468053 Obodhiang virus Species 0.000 claims 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 claims 1
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 claims 1
- 235000021185 dessert Nutrition 0.000 claims 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims 1
- IFDVSPCLJCWIHL-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxyethyl)-n-methyldodecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CCO IFDVSPCLJCWIHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 46
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 45
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 45
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 38
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 30
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 30
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 30
- 101710058551 RO-1 Proteins 0.000 description 23
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 23
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 22
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 21
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 17
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 16
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 15
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 12
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 12
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 12
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- -1 poly(n-vinylpyrrolidone) Polymers 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 10
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 9
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 9
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 9
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108700023707 TUG1 Proteins 0.000 description 8
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 7
- 102100033772 Complement C4-A Human genes 0.000 description 7
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 7
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 101100460719 Mus musculus Noto gene Proteins 0.000 description 6
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 6
- 101100187345 Xenopus laevis noto gene Proteins 0.000 description 6
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 6
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 6
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 5
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 5
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 5
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 5
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 5
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 4
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 4
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 4
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000012552 review Methods 0.000 description 4
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 4
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 3
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 241000102542 Kara Species 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 3
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 3
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 3
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VPFUWHKTPYPNGT-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-(5-hydroxy-2,2-dimethylchromen-6-yl)propan-1-one Chemical compound OC1=C2C=CC(C)(C)OC2=CC=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VPFUWHKTPYPNGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100228149 Drosophila melanogaster Trl gene Proteins 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 2
- 241001123946 Gaga Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 101100018424 Mus musculus Ids gene Proteins 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 2
- 101001041541 Romalea microptera RO-1 Proteins 0.000 description 2
- 101150060303 SOK2 gene Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 241000897276 Termes Species 0.000 description 2
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 2
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 2
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 108010044540 auristatin Proteins 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 2
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 229960003082 galactose Drugs 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000005745 host immune response Effects 0.000 description 2
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N mmai Chemical compound C1=C(C)C(OC)=CC2=C1CC(N)C2 JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000004071 soot Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 229930013292 trichothecene Natural products 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 1
- WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxolane Chemical compound C1COCO1 WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=C(F)C=C1F VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 10043-66-0 Chemical compound [131I][131I] PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 0.000 description 1
- YBBNVCVOACOHIG-UHFFFAOYSA-N 2,2-diamino-1,4-bis(4-azidophenyl)-3-butylbutane-1,4-dione Chemical compound C=1C=C(N=[N+]=[N-])C=CC=1C(=O)C(N)(N)C(CCCC)C(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 YBBNVCVOACOHIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KGLPWQKSKUVKMJ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydrophthalazine-1,4-dione Chemical class C1=CC=C2C(=O)NNC(=O)C2=C1 KGLPWQKSKUVKMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBUTXZSKZCQABC-UHFFFAOYSA-N 2-amino-1-methyl-7h-purine-6-thione Chemical compound S=C1N(C)C(N)=NC2=C1NC=N2 FBUTXZSKZCQABC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MDEHFNXAMDVESV-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-5-(4-phenylphenyl)pentanoic acid Chemical compound C1=CC(CCC(C)CC(O)=O)=CC=C1C1=CC=CC=C1 MDEHFNXAMDVESV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 description 1
- 241001103870 Adia Species 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-OUBTZVSYSA-N Ammonia-15N Chemical compound [15NH3] QGZKDVFQNNGYKY-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 101100018859 Arabidopsis thaliana IMK3 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000669426 Aspergillus restrictus Ribonuclease mitogillin Proteins 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 108090000363 Bacterial Luciferases Proteins 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 102100022526 Bone morphogenetic protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100022361 CAAX prenyl protease 1 homolog Human genes 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 101100083745 Caenorhabditis elegans pmk-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100204453 Caenorhabditis elegans suro-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100153505 Caenorhabditis elegans tni-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N Carbon-13 Chemical compound [13C] OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N Carbon-14 Chemical compound [14C] OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 108700032819 Croton tiglium crotin II Proteins 0.000 description 1
- 102100031051 Cysteine and glycine-rich protein 1 Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 101800000585 Diphtheria toxin fragment A Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 231100000491 EC50 Toxicity 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000182691 Echinochloa frumentacea Species 0.000 description 1
- 235000008247 Echinochloa frumentacea Nutrition 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 101710082714 Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010015133 Galactose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108700004714 Gelonium multiflorum GEL Proteins 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 101000899388 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000824531 Homo sapiens CAAX prenyl protease 1 homolog Proteins 0.000 description 1
- 101001003584 Homo sapiens Prelamin-A/C Proteins 0.000 description 1
- 101000741885 Homo sapiens Protection of telomeres protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000939500 Homo sapiens UBX domain-containing protein 11 Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102100021317 Inducible T-cell costimulator Human genes 0.000 description 1
- 101710205775 Inducible T-cell costimulator Proteins 0.000 description 1
- 208000025814 Inflammatory myopathy with abundant macrophages Diseases 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N Iodine-123 Chemical compound [123I] ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 102100038609 Lactoperoxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010023244 Lactoperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010050551 Lupus-like syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000004907 Macro-emulsion Substances 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 229930191564 Monensin Natural products 0.000 description 1
- GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N Monensin A Natural products O1C(CC)(C2C(CC(O2)C2C(CC(C)C(O)(CO)O2)C)C)CCC1C(O1)(C)CCC21CC(O)C(C)C(C(C)C(OC)C(C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 101100109406 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) aga-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000238413 Octopus Species 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 101100491259 Oryza sativa subsp. japonica AP2-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000989950 Otolemur crassicaudatus Hemoglobin subunit alpha-A Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102100035727 Probable ATP-dependent RNA helicase DDX41 Human genes 0.000 description 1
- 102100038745 Protection of telomeres protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 229910019567 Re Re Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 229940122605 Short-acting muscarinic antagonist Drugs 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- 238000012338 Therapeutic targeting Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 102100029645 UBX domain-containing protein 11 Human genes 0.000 description 1
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 241000863480 Vinca Species 0.000 description 1
- 108010093894 Xanthine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100033220 Xanthine oxidase Human genes 0.000 description 1
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 229920000122 acrylonitrile butadiene styrene Polymers 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 108010001818 alpha-sarcin Proteins 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 201000004984 autoimmune cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 1
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N butyric aldehyde Natural products CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 1
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 1
- 125000001314 canonical amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002041 carbon nanotube Substances 0.000 description 1
- 229910021393 carbon nanotube Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000005354 coacervation Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000001295 dansyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=C2C([H])=C([H])C([H])=C(C2=C1[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- ZLFRJHOBQVVTOJ-UHFFFAOYSA-N dimethyl hexanediimidate Chemical compound COC(=N)CCCCC(=N)OC ZLFRJHOBQVVTOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N dolastatin Chemical compound CC(C)C(N(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)N(C)C(C(C)C)C(OC)CC(=O)N1CCCC1C(OC)C(C)C(=O)NC(C=1SC=CN=1)CC1=CC=CC=C1 AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930188854 dolastatin Natural products 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002222 fluorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 1
- 108010015750 fucose-binding lectin Proteins 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N indium-111 Chemical compound [111In] APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- 229940055742 indium-111 Drugs 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940057428 lactoperoxidase Drugs 0.000 description 1
- 229950005692 larotaxel Drugs 0.000 description 1
- SEFGUGYLLVNFIJ-QDRLFVHASA-N larotaxel dihydrate Chemical compound O.O.O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@@]23[C@H]1[C@@]1(CO[C@@H]1C[C@@H]2C3)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 SEFGUGYLLVNFIJ-QDRLFVHASA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 108010029942 microperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 229960005358 monensin Drugs 0.000 description 1
- GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N monensin A Chemical compound C([C@@](O1)(C)[C@H]2CC[C@@](O2)(CC)[C@H]2[C@H](C[C@@H](O2)[C@@H]2[C@H](C[C@@H](C)[C@](O)(CO)O2)C)C)C[C@@]21C[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](OC)[C@H](C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000007896 negative regulation of T cell activation Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- BWKDAMBGCPRVPI-ZQRPHVBESA-N ortataxel Chemical compound O([C@@H]1[C@]23OC(=O)O[C@H]2[C@@H](C(=C([C@@H](OC(C)=O)C(=O)[C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]4OC[C@]4([C@H]21)OC(C)=O)C3(C)C)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)CC(C)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 BWKDAMBGCPRVPI-ZQRPHVBESA-N 0.000 description 1
- 229950001094 ortataxel Drugs 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 239000002957 persistent organic pollutant Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 108010076042 phenomycin Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920000191 poly(N-vinyl pyrrolidone) Polymers 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 description 1
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 125000005030 pyridylthio group Chemical group N1=C(C=CC=C1)S* 0.000 description 1
- WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N pyrogallol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1O WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 229920005604 random copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 108010078070 scavenger receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000014452 scavenger receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N taxane Chemical class C([C@]1(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1C1)C[C@H]2[C@H](C)CC[C@@H]1C2(C)C DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- RUELTTOHQODFPA-UHFFFAOYSA-N toluene 2,6-diisocyanate Chemical compound CC1=C(N=C=O)C=CC=C1N=C=O RUELTTOHQODFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N trichothecene Chemical compound C12([C@@]3(CC[C@H]2OC2C=C(CCC23C)C)C)CO1 LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N 0.000 description 1
- 150000003327 trichothecene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 1
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-OUBTZVSYSA-N water-17o Chemical compound [17OH2] XLYOFNOQVPJJNP-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Даний винахід стосується антитіла до PD1 та його застосування.
Description
Даний винахід належить до антитіл до РО (білок запрограмованої смерті 1) та до способів їх застосування.
ПОПЕРЕДНІЙ РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
РО-1
Костимуляція або надання двох відмінних сигналів Т-клітинам є загальноприйнятою моделлю лімфоцитарної активації Т-лімфоцитів, що покояться, за допомогою антигенпрезентуючих клітин (АРС) (І апегіу еї аї., А!йв1. У. Ехр. Віої. Мед. 5сі. 53: 27-42 (1975)).
Згідно з даною моделлю додатково запропоноване розрізнення імунотолерантності відносно "свого" і "не свого" (Вгеїб5спег еї аї., Зсіепсе 169: 1042-1049 (1970); ВгєївсНег, Р.А., Р.М.А.5. ОБА 96: 185-190 (1999); УепКіп5 єї аї., У. Ехр. Мед. 165: 302-319 (1987)). Первинний сигнал, або антигенспецифічний сигнал, трансдукується через Т-клітинний рецептор (ТСК) після розпізнавання чужорідного антигенного пептиду, презентованого в контексті головного комплексу гістосумісності (МНС). Вторинний або костимулюючий сигнал доставляється до Т- клітин костимулюючими молекулами, що експерсуються на антигенпрезентуючих клітинах (АРС), і він індукує Т-клітини до стимуляції клонального розмноження, секреції цитокінів та ефекторної функції (Гепзспом/ еї аїЇ., Апп. Кем. ІттипоїЇ. 14:233 (1996)). У відсутності костимуляції Т-клітини можуть ставати несприйнятливими до стимуляції антигеном, не формують ефективної імунної відповіді, і додатково це може призводити до виснаження популяції або толерантності по відношенню до чужорідних антигенів.
Дана проста модель двох сигналів може являти собою надмірне спрощення, так як насправді сила сигналу ТОК має кількісний вплив на активацію і диференціацію Т-клітин (Міоїа еї аі., Зсівєпсе 273: 104-106 (1996); Біоап-І апсавієї, Маїшгте 363: 156-159 (1993)). Крім того, активація Т-клітин може відбуватися навіть за відсутності костимулюючих сигналів, якщо сила сигналу ТОК є високою. Більш важливо те, що Т-клітини одержують як позитивні, так і негативні вторинні костимулюючі сигнали. Регуляція таких позитивних і негативних сигналів є критично важливою для максимізації захисних імунних відповідей хазяїна при підтриманні імунологічної толерантності та попередженні аутоімунітету.
Негативні вторинні сигнали, очевидно, є необхідними для індукції толерантності Т-клітин, тоді як позитивні сигнали стимулюють активацію Т-клітин. У той час як проста модель двох сигналів все ще надає спроможне пояснення для наївних лімфоцитів, імунна відповідь хазяїна являє собою динамічний процес, і костимулюючі сигнали також можуть бути надані для Т- клітин, що піддаються впливу антигену.
Механізм костимулювання виявляє терапевтичний інтерес, так як було показано те, що маніпулювання костимулюючими сигналами надає засіб або для посилення, або для припинення імунної відповіді на клітинній основі. Нещодавно відкрили те, що дисфункція або анергія Т-клітин відбувається паралельно з індукованою і такою, що підтримується, експресією інгібуючого рецептора - поліпептиду запрограмованої смерті 1 (РО-1). У результаті, терапевтичний направлений вплив на РО-1 є сферою живого інтересу.
Білок запрограмованої смерті 1 (РО-1) являє собою інгібуючого члена сімейства рецепторів
СО28, яке також включає СО28, СТІ А-4 (антиген 4 цитотоксичних Т-лімфоцитів), ІСО5 (Т- клітинний костимулятор, що індукується) і ВТ А. РО-1 експресується на активованих В-клітинах,
Т-клітинах і мієлоїдних клітинах (Адаїа еї аї, вище; ОКа?акі еї а! (2002) Сигг. Оріп. Іттипої. 14: 391779-82; Веппеї вї аї. (2003) У Іттипої! 170:711-8). Вихідні члени сімейства - СО28 і ІСОЗ5 - були відкриті за функціональними ефектами на збільшення проліферації Т-клітин після додавання моноклональних антитіл (Ншийоїї єї а! (1999) Маїшге 397:263-266; Напзеп еї а! (1980)
Іттиподепісв 10:247-260). РО-1 був відкритий за допомогою скринінгу на диференційну експресію в апоптичних клітинах (Ізпіда еї а! (1992) ЕМВО У 11:3887-95). Інші члени сімейства -
СТІ А-4 і ВТГА - були відкриті за допомогою скринінгу на диференційну експресію в цитотоксичних Т-лімфоцитах і клітинах ТНІ1 (Т-хелпер 1-го типу) відповідно. Всі з СО28, ІСОЗ5 і
СТІ А-4 мають неспарений залишок цистеїну, що забезпечує гомодимеризацію. На відміну від цього, припускається те, що РО-1 існує у вигляді мономера, не маючи неспареного залишку цистеїну, характерного у інших членів сімейства СО28.
Ген РО-1 кодує 55 кДа трансмембранний білок типу Ї, який є частиною надсімейства генів Ід (Адаїа сеї аї. (1996) рії Іттипої 8:765-72). РО-1 містить мембранний проксимальний імунорецепторний тирозиновий інгібуючий мотив (ІТІМ) і мембранний дистальний оснований на тирозині перемикаючий мотив (ІТЗ5М) (ТПотавз, МХ. (1995) У Ехр А4еаму, : 1953-6; Мімієї, Е апа
Раєгоп, М (1997) Іттипої! Тодау 18:286-91). Не дивлячись на структурну схожість з СТІ А-4, у
РО-1 відсутній мотив МУРРРУ, який є критично важливим для зв'язування В7-1 та В7-2.
Ідентифікували два ліганди РО-1 - РО-І 1 ї РО-І2, для яких була показана знижуюча регуляція бо активації Т-клітин при зв'язуванні з РО-1 (Егеетап еї а! (2000) У Ехр Меса 192: 1027-34; | аєсптап еї а! (2001) Маї Іттипої 2:261-8; Сапег єї а! (2002) Єиг У Іттипої! 32:634-43). І РО-І 1, і РО-І2 є гомологами В?7, які зв'язуються з РО-1, але не зв'язуються з іншими членами сімейства СО28.
Одного ліганду РО-1 - РО-І 1 - багато при цілій низці людських ракових захворювань (опо еї аї (2002) Маї. Мей 8:787-9). Взаємодія між РО-1 та РО-ЇЇ призводить до зменшення кількості інфільтруючих пухлину лімфоцитів, зменшення проліферації, опосередкованої рецептором Т- клітин, і вислизанню ракових клітин від імунологічного нагляду (опа еї аї. (2003) У. Мої. Мед. 81:281-7; Віапк еї аї. (2005) Сапсег Іттипої. Іттипоїпег. 54:307-314; Копівні еї аї. (2004) Сііп.
Сапсег Вев. 10:5094-100). Імунодепресія може обертатися інгібуванням місцевої взаємодії РО-1 з РО-І1, і даний ефект є адитивним також при блокуванні взаємодії РО-1 з РО-12 (Імаї еї аї. (2002) Ргос. Маї 7. Асад. 5сі ОБА 99: 12293-7; Вгомп евї аї. (2003) 9. Іттипої. 170:1257-66).
РО! є інгібуючим членом сімейства СО28, що експресується на активованих В-клітинах, Т- клітинах і мієлоїдних клітинах (Адаїа еї аїЇ, вище; ОКа?лакі еї аї. (2002) Си Оріп Іттипої 14: 391779-82; Веппеїї евї аї. (2003) У Іттипо! ММ/ШІ 1-8). У РО-1-дефіцитних тварин розвиваються різні аутоїмунні фенотипи, що включають аутоімунну кардіоміопатію і вовчакоподібний синдром з артритом і нефритом (Міхпітига еї аї. (1999) Іттипкйу Н: 141-51; Мізпітитга еї а!. (2001) бсіепсе 291:319-22). Додатково виявили те, що РОТ відіграє роль в аутоїмунному енцефаломієліті, системному червоному вовчаку, захворюванні "трансплантат проти хазяїна" (ЗМНО), діабеті типу І ї ревматоїдному артриті (Заіата еї аї. (2003) У ЕЄхр Мей 198:71-78: РеоКипіпа апа Аїагсоп-
КідпчеІте (2004) Нит Мої! Сепеї 13 "К143; Мівїізеп еї аї. (2004) І ири5 11:510). В лінії мишиної В- клітинної пухлини було показане те, що ІТ5М РОТ є суттєвим для блокування опосередкованого
ВСЕ (В-клітинний рецептор) потоку Са? і фосфорилування тирозину наступних ефекторних молекул (ОКа?лакі еї аї. (2001) РМАЗ 98: 13866-71).
В різних патентних заявках розкриті продукція антитіл до РО-1 і/або способи посилення імунних відповідей з використанням агента (що включає антитіло до РО-1), який перешкоджає зв'язуванню з РО-Ї1 і/або сигналізації РО-1, включаючи наступні: 0Ш52003/0039653,
О52гО04/0213795, О52006/0110383, О052007/0065427, И52007/0122378, И52012/237522,
МО2004/072286, МуО2006/121168, УМуО2006/133396, М/О2007/005874, М О2008/083174,
МО2008/156712, МО2009/024531, М/О2009/014708, М/О2009/114335, МО2010/027828,
МО2010/027423, МО2010/036959, М/О2010/029435, М/О2010/029434, М О2010/063011,
Коо) МО2010/089411, МО2011/066342, МО2011/110604, ММО2011/110621 та УМО2012/145493.
КОРОТКИЙ ВИКЛАД СУТІ ВИНАХОДУ
Згідно з даним винаходом запропоновані антитіла до РО! та способи їх застосування.
Одним аспектом даного винаходу є таке антитіло до РО, де дане антитіло: ї) конкурує за зв'язування з РО-1 з антитілом до РОТ, яке містить МН і МІ РО1-0103, і/або її) зв'язується з РО-1 людини і яванського макака; і/або ії) посилює секрецію інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма) алогенними стимульованими Т- клітинами на 85 95 або більше при концентрації антитіла 10 мкг/мл; і/або ім) посилює секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) алогенними стимульованими Т-клітинами на 200 95 або більше при концентрації антитіла 10 мкг/мл.
Іншим аспектом винаходу є антитіло, яке зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло посилює секрецію інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма) алогенними стимульованими Т-клітинами на 8595 або більше при концентрації антитіла 10 мкг/мл в аналізі реакції змішаної культури лімфоцитів (МІК).
Іншим аспектом винаходу є антитіло, яке зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло посилює секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) алогенними стимульованими Т- клітинами на 200 95 або більше при концентрації антитіла 10 мкг/мл в аналізі реакції змішаної культури лімфоцитів (МІК).
Згідно з даним винаходом запропоноване виділене антитіло, яке зв'язується 3 людським
РОТ, де дане антитіло містить:
А) (а) НМЕ-НІ (гіперваріабельна ділянка 1 важкого ланцюга), яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:1; (б) НМЕА-На2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО 2; (в) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МОЗ; (г) НМЕ-1 1 (гіперваріабельна ділянка 1 легкого ланцюга), яка містить амінокислотну послідовність зБЕО ІЮ МО:4; (д) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО:5; і (е) НМК-І3, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:6; або
Б) (а) НМЕА-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:9; (б) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІЮ МО:10; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:11; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮО МО:12; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:13; ї (ее) НМА-ІЗ, яка містить 60 амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:14; або
В) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:17; (б) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:18; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:19; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:20; (д) НМЕК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:21; ї (є) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:22; або
Г) (а) НМА-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:25; (б) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:26; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:27; (г) НМА-11, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:28; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО:29; і (е) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:30; або
Д) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:33; (б) НМЕК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:34; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:35; (г) НМЕ-11, яка містить амінокислотну послідовність ФБЕО ІЮ МО:З6; (д) НМЕК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:37; і (є) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮ МО:38; або
Е) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:41; (б) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:42; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮО МО:43; (г) НМА-11, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:44; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:45; і (е) НМК-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:46; або
Ж) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:49; (б) НМЕК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІЮ МО:50; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮО МО:51; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮО МО:52; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:53; ії (е) НМЕА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:54.
Згідно з даним винаходом додатково запропоноване виділене антитіло, яке зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло містить
А) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ
МО-1, (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:2, ії (ії) НМЕ-НЗ, яка
Зо містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:3, і (б) домен Мі, який містить (Її)
НМУВ-І1, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:4, (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:5, і (ії) НМА-І З, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:6; або
Б) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ
МО:9, (ії) НМВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО':10, і (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:11, ї (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:12, (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:13, і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:14; або
В) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ
МО:17, (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО':18, і (ії) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5БЕО ІЮ МО:19, і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:20, (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:21, і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:22; або
Г) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:25, (ії) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:26, і (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:27, і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:28, (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:29, і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:30; або
Д) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:33, (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:З34, і (ії) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:35, і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМВ-І1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІЮ МО:З36, (ії) НМВ-1І2, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:37, і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:38; або
Е) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ
МО:41, (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:42, і (ії) НМЕ-НЗ, яка 60 містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:43, і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:44, (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО:45, і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:46; або
Ж) (а) домен МН, який містить (ії) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ
МО:49, (ії) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:50, і (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:51, і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:52, (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:53, і (її) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:54.
Згідно з даним винаходом додатково запропоноване виділене антитіло, яке зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло
А) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:7 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:8; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або Б) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:58; і) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮО МО:59; ії) містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:60; ім) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:61. або В) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:15 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:16; ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з і); або Г) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:23 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:24; ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї); або Д) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:31 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:32; ії) або гуманізований варіант УН і Мі. антитіла згідно з Її); або Е)
Ко) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:39 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:40; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або Ж) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:47 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:48; і) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї); або 3) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:55 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:56; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її);
В одному втіленні антитіло до РОЇ згідно з винаходом являє собою моноклональне антитіло.
В одному втіленні антитіло до РО1 згідно з винаходом являє собою людське, гуманізоване або химерне антитіло.
В одному втіленні антитіло до РО1 згідно з винаходом являє собою фрагмент антитіла, який зв'язується з РОТ.
В одному втіленні антитіло до РОЇ згідно з винаходом являє собою фрагмент Еар.
Згідно з винаходом запропонована виділена нуклеїнова кислота, кодуюча антитіло згідно з будь-яким з попередніх пунктів.
Згідно з винаходом запропонована клітина-хазяїн, яка містить таку нуклеїнову кислоту.
Згідно з винаходом запропонований спосіб продукування антитіла, що включає культивування клітини-хазяїна таким чином, що продукується антитіло.
Згідно з винаходом запропонований такий спосіб продукування антитіла, що додатково включає виділення антитіла з клітини-хазяїна.
Згідно з винаходом запропонований фармацевтичний препарат, який містить антитіло, описане в даному документі, і фармацевтично прийнятний носій.
Згідно з винаходом запропоноване антитіло, описане в даному документі, для застосування як лікарський засіб.
Згідно з винаходом запропоноване антитіло, описане в даному документі, для застосування в лікуванні раку.
Згідно з винаходом запропоноване застосування антитіла, описаного в даному документі, в приготуванні лікарського засобу. В одному втіленні даний лікарський засіб призначений для бо лікування раку.
Згідно з винаходом запропонований спосіб лікування індивіда, який має рак, що включає введення даному індивіду ефективної кількості антитіла, описаного в даному документі.
КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
Фіг. 1: блокада РО1 химерним РО1-0103 сильно збільшує секрецію ІЕМ-гамма алогенними стимульованими первинними людськими Т-клітинами.
Фіг. 2: блокада РОЇ химерним РО1-0103 сильно збільшує секрецію інтерферону-гамма (ІЕМ- у) алогенними стимульованими первинними людськими Т-клітинами.
Фіг. 3: блокада РОТ химерним РО1-0103 сильно збільшує секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТЕ) алогенними стимульованими первинними людськими Т-клітинами.
Фіг. 4: 4А) частота Т-клітин СО4, що продукують гранзим Б, і 4Б) кількість ІЕМ-у, виявлена за поглинанням (оптичною щільністю, О.Щ.), в супернатанті МІК у присутності зростаючих концентрацій різних антитіл до РО-1.
Фіг. 5: БА) вплив блокади РО1/РО-11 на реактивацію приглушеної сигналізації Т-клітинного рецептора у присутності різних антитіл до РО-1; 5Б) вплив блокади РО1/РО-11 на реактивацію приглушеної сигналізації Т-клітинного рецептора у присутності різних антитіл до РО-1.
Фіг. 6: структура РО1-ЕСО в комплексі з баб РО1-0103.
Фіг. 7: структура комплексу РО1Т-ЕСО з Раю РО1-0103: глікозилювання на АЗМ58 на РО1 бере участь у взаємодії.
Фіг. 8: структура комплексу РО1-ЕСО з Раб РО1-0103: вигляд на епітоп/паратоп.
Фіг. 9: контакти центрального бокового цукрового ланцюга на А5п58 РОЇ - важкого ланцюга
Раб РО1-0103: контакти, ідентифіковані за граничною відстанню 5А.
Фіг. 10: залишки РО1-ЕСО, які взаємодіють з антитілом - вигляд послідовності з детальними властивостями контактів - РО-1.
Фіг. 11: залишки антитіла, які взаємодіють з РО1-ЕСО - вигляд послідовності 3 детальними властивостями контактів - важкий ланцюг.
Фіг. 12: залишки антитіла, які взаємодіють з РО1-ЕСО - вигляд послідовності 3 детальними властивостями контактів - легкий ланцюг.
Фіг. 13А: зв'язування різних антитіл з РОТ, неглікозильованим на Авп58 (зліва), і з РО, глікозильованим на Азп58 (праворуч) (сенсограми Віасоге).
Фіг. 13Б: зв'язування різних антитіл з РО, неглікозильованим на Авп58, і з РО, глікозильованим на Азп58 - швидкість асоціації - дисоціації Маб, визначена Віасоге.
Фіг. 14А: інгібування росту пухлини іп мімо РО1-0103-0312 (аРО-1) у порівнянні з ніволумабом в комбінації з біспецифічним антитілом СЕА-СОЗ - при високих дозах.
Фіг. 14Б: інгібування росту пухлини іп мімо РО1-0103-0312 (аРО-1) у порівнянні з ніволумабом в комбінації з біспецифічним антитілом СЕА-СОЗ - при високих дозах.
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВТІЛЕНЬ ВИНАХОДУ
Термін "акцепторна людська каркасна ділянка" для цілей даного документа являє собою каркасну ділянку, яка містить амінокислотну послідовність каркасної ділянки варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) або каркасної ділянки варіабельного домену важкого ланцюга (МН), що походить з каркасної ділянки людського імуноглобуліну або людської консенсусної каркасної ділянки, як визначено нижче. Акцепторна людська каркасна ділянка, "що походить з" каркасної ділянки людського імуноглобуліну або людської консенсусної каркасної ділянки, може містити таку саму амінокислотну послідовність, як і вони, або вона може містити зміни амінокислотної послідовності. У деяких втіленнях кількість змін амінокислот становить 10 або менше, 9 або менше, 8 або менше, 7 або менше, 6 або менше, 5 або менше, 4 або менше, З або менше, або 2 або менше. У деяких втіленнях акцепторна людська каркасна ділянка МІ. є ідентичною за послідовністю каркасної ділянки МІ. людського імуноглобуліну або послідовністю людської консенсусної каркасної ділянки.
Термін "РО1", "людський РОТ", "РО-1" або "людський РО-1" при використанні в даному документі належить до людського білка РО1 (ЗЕБЕО І МО: 68) (білок без сигнальної послідовності) / (ЗЕО ІЮ МО: 70) (білок із сигнальною послідовністю). Фраза антитіло "яке зв'язується з людським РОТ", "яке специфічно зв'язується з людським РОТ", "яке зв'язується з людським РОТ" або "антитіло до РО1" в тому вигляді, в якому вона використовується в даному документі, належить до антитіла, яке специфічно зв'язується з людським антигеном РОЇ або його позаклітинним доменом (ЕСОБ) з афінністю зв'язування із значенням Ко 1,0х109 моль/л або менше, в одному втіленні - із значенням Ко 1,0х109 моль/л або менше, в одному втіленні - із значенням Ко від 1,0х109 моль/л до 1,0х10-3 моль/л. Афінність зв'язування визначається стандартним аналізом зв'язування, таким як методика поверхневого плазмонного резонансу (ВІАсогеФ), СЕ-НеайНсаге, Упсала, Швеція), наприклад, з використанням позаклітинного домену (510) РОТ.
Людський РО1 має сайти М-зв'язаного глікозилювання на залишках РО-1 49, 58, 74 5ЕО ІЮ
МО: 70 (див., наприклад, О.М. Гіп еї аії, РМАБ 105 (2008) 3011-3016)). Дерево центрального цукрового ланцюга (М-зв'язаного глікозилювання) в положенні Азп58 РО-1 має наступну структуру відносно моносахаридів. В одному втіленні центральний цукровий ланцюг на Азп58
РО1 належить до перших 5 цукрів (моносахаридів), які приєднуються до РО1 на Азп58.
А5п58-М-СІСМАсС(РОС) - СісМАс- - ВМА - МАМ (див. фіг. 9), де використовуються наступні скорочення.
ІСбісМАс| - МаА - М-ацетил-бета-О-галактозамін - 2-(ацетиламіно)-2-дезокси-бета-О- галактопіраноза
ІРОСІ - альфа-І -фукоза
ІВМАЇ - бета-О-манопіраноза
ІМАМ| - альфа-О-манопіраноза
Перший СІСМАс в цукровому ланцюзі є фукозильованим, що скорочується як сіСМАсС(РОС).
В одному втіленні центральний цукровий ланцюг на Азп58 РОТ належить до перших 5 цукрів (моносахаридів) СІСМАс, РОС, СІСМАс, ВМА, МАМ, які приєднуються до РО на Азп58.
Термін "антитіло" використовується в даному документі в найширшому значенні та охоплює різні структури антитіл, включаючи моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, мультиспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла) і фрагменти антитіл, але не обмежуючись ними, за умови, що вони демонструють бажану активність зв'язування антигену.
Термін "фрагмент антитіла" належить до молекули, відмінної від інтактного антитіла, яка містить частину інтактного антитіла, яка зв'язується з антигеном, з яким зв'язується інтактне антитіло. Приклади фрагментів антитіла включають Ем, Раб, Раб Рар'-5Н, К(аб)»; діатіла; лінійні антитіла; одноланцюжкові молекули антитіл (наприклад, 5сЕм) і мультиспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл, але не обмежуються ними.
Фраза "антитіло, яке зв'язується з тим самим епітопом", що і контрольне антитіло, належить до антитіла, яке блокує зв'язування контрольного антитіла з його антигеном в конкурентному аналізі на 50 95 або більше, або, навпаки, контрольне антитіло блокує зв'язування антитіла з його антигеном в конкурентному аналізі на 50 95 або більше. В даному документі виробляється типовий конкурентний аналіз.
Зо Термін "химерне" антитіло належить до антитіла, в якому частину важкого і/або легкого ланцюга походить з конкретного джерела або виду, тоді як решта важкого і/або легкого ланцюга походить з іншого джерела або виду. "Клас" антитіла належить до типу константного домену або константної ділянки, які має його важкий ланцюг. Існує п'ять головних класів антитіл: ІА, ДО, ІДЕ, дос і ДМ, ї декілька з них можуть додатково поділятися на підкласи (ізотипи), наприклад, Ідси, аг, ІДСіз, ІДС, ІДАч і ІдА».
Константні домени важкого ланцюга, які відповідають різним класам імуноглобулінів, називаються а, б, є, у і и відповідно.
Термін "цитотоксичний агент" в тому вигляді, в якому він використовується в даному документі, належить до речовини, яка інгібує або попереджає клітинній функції і/або викликає загибель або руйнування клітини. Цитотоксичні агенти включають радіоактивні ізотопи (наприклад, АБ", 1191, 0125, Мо ВНе86 Де88 тв, Ві, рзг, рр: і радіоактивні ізотопи Гц); хіміотерапевтичні агенти або лікарські засоби (наприклад, метотрексат, адріаміцин, алкалоїди барвінку (вінкристин, вінбластин, етопозид), доксорубіцин, мелфалан, мітоміцин С, хлорамбуцил, даунорубіцин або інші інтеркалюючі агенти); агенти, що інгібують ріст; ферменти та їх фрагменти, такі як нуклеолітичні ферменти; антибіотики; токсини, такі як низькомолекулярні токсини або ферментативно активні токсини бактеріального, грибного, рослинного або тваринного походження, включаючи їх фрагменти і/або варіанти; і різні протипухлинні або протиракові агенти, розкриті нижче, але не обмежуються ними. "Ефективна кількість" агента, наприклад, фармацевтичного препарату, належить до ефективної кількості в необхідних дозуваннях і протягом необхідних періодів часу для досягнення бажаного терапевтичного або профілактичного результату.
Термін "ділянка Ес" використовується в даному документі для визначення С-кінцевої ділянки важкого ланцюга імуноглобуліну, яка містить щонайменше частину константної ділянки. Даний термін включає ділянки Ес з природною послідовністю та варіанти ділянки Ес. В одному втіленні ділянка Бс важкого ланцюга людського дС простягається від Субз226 або від Рго230 до карбоксильного кінця важкого ланцюга. Однак С-кінцевий лізин (І уз447) ділянки Ес може бути присутнім або може бути відсутнім. Якщо в даному документі не визначено інше, нумерація амінокислотних залишків у ділянці Ес або в константній ділянці здійснюється згідно із системою нумерації БО, яка також називається індекс Є), як описано в КаБбаї, Е.А. єї аіІ., Зедоепсе5 ої 60 Ргоїєїпв ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, Бій ей. Рибіїс Неайй Бегмісе, Маїййопа! Іпзійшев ої Неайй,
Веїпезаа, МО (1991), МІН Рибіісайноп 91-3242. "Каркасна ділянка" або "РК" належить до залишків варіабельного домену, відмінних від залишків гіперваріабельної ділянки (НМК). ЕК варіабельного домену звичайно складається з чотирьох ЕК доменів: ЕКІ, ЕК2, ЕКЗ ї ЕК4. Відповідно, послідовності НМК і ЕК звичайно з'являються в МН (або МІ) в наступній послідовності: ЕК1-НІ1(І11)-ЕН2-НаІ(І2)-ЕАЗ-НЗ(І 3)-ЕНА.
Терміни "повнорозмірне антитіло", "Інтактне антитіло" і "повне антитіло" використовуються в даному документі взаємозамінно для назви антитіла, яке має по суті аналогічну структуру структурі природного антитіла, або яке має важкі ланцюги, які містять ділянку Ес, як визначено в даному документі.
Терміни "клітина-хазяїн", "лінія клітин-хазяїв" і "культура клітин-хазяїв" використовуються взаємозамінно і належить до клітин, в які була введена екзогенна нуклеїнова кислота, включаючи потомство таких клітин. Клітини-хазяї включають "трансформантів" і "трансформовані клітини", які включають первинні трансформовані клітини і потомство, одержане від них, незалежно від кількості пасажів. Потомство може не бути повністю ідентичним батьківській клітині за вмістом нуклеїнових кислот, але може містити мутації. Сюди включене мутантне потомство, яке має таку саму функцію або біологічну активність, на яку здійснюється скринінг або відбір у початково трансформованої клітини. "Людське антитіло" являє собою антитіло, яке має амінокислотну послідовність, яка відповідає амінокислотній послідовності антитіла, що продукується людиною або людською клітиною, або походить з джерела, що не є людським, в якому використовується людський репертуар антитіл або інших послідовностей, кодуючих людські антитіла. Дане визначення людського антитіла конкретно виключає гуманізоване антитіло, що містить антигензв'язуючі залишки, які не є людськими. "Людська консенсусна каркасна ділянка" являє собою каркасну ділянку, яка являє собою амінокислотні залишки, що частіше за все зустрічаються, в наборі послідовностей каркасних ділянок МІ. або МН людського імуноглобуліну. В загальному, набір послідовностей МІ або МН людського імуноглобуліну походить з підгрупи послідовностей варіабельного домену. Звичайно дана підгрупа послідовностей являє собою таку саму підгрупу, що і в Кабаї, Е.А. еї аї.,
Зедиєпсевз ої Ргоївїн5 ої Іттипоіодісаї Іпіегеві, Бій ей., Веїййезаа МО (1991), МІН Рибіїсайоп 91- 3242, Мов. 1-3. В одному втіленні для Мі. даною підгрупою є підгрупа каппа І, така сама, як і в
Кабаї єї аї., вище. В одному втіленні для МН даною підгрупою є підгрупа І, така сама, які в
Кабаї єї а!., вище.
Термін "гуманізоване" антитіло належить до химерного антитіла, що містить амінокислотні залишки з НМК, що не є людськими, і амінокислотні залишки з людських ЕК. У деяких втіленнях гуманізоване антитіло буде містити по суті всі з щонайменше одного і типово двох варіабельних доменів, в яких всі або по суті всі з НМЕ (наприклад, СОК (ділянка, яка визначає комплементарність)) відповідають НМК антитіла, що не є людським, і всі або по суті всі ЕВ відповідають ЕК людського антитіла. Гуманізоване антитіло можливо може містити щонайменше частину константної ділянки антитіла, що походить з людського антитіла. Термін "гуманізована форма" антитіла, наприклад, антитіла, що не є людським, належить до антитіла, яке піддавалося гуманізації.
Термін "гіперваріабельна ділянка" або "НМЕ" в тому вигляді, в якому він використовується в даному документі, належить до кожної з ділянок варіабельного домену антитіла, які є гіперваріабельними за послідовністю ("ділянки, що визначають комплементарність" або "СО") або утворюють структурно визначені петлі ("гіперваріабельні петлі"), і/або містять залишки, контактуючі з антигеном ("контакти з антигеном"). В загальному, антитіла містять шість НМЕ: три в МН (НІ, Н2, НЗ) і три в МІ (11, 12, 3). Типові НУК в даному документі включають: (а) гіперваріабельні петлі, що знаходяться в амінокислотних залишках 26-32 (11), 50-52 (І 2), 91-96 (І 3), 26-32 (НІ), 53-55 (Н2) і 96-101 (НЗ) (Споїйіа апа І ез5К, 9. Мої. Віої. 196:901-917 (1987)); (б) СОК, що знаходяться в амінокислотних залишках 24-34 (І 1), 50-56 (12), 89-97 (І 3), 31-
ЗБЬ (НІ), 50-65 (Н2) і 95-102 (НЗ) (КаБбаї еї а!., Зедиепсез ої Ргоївїпв ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві, Бій ей. Рибіїс Неайцй 5егмісе, Маїйопаї Іпвзійшез ої Неайй, Веїпезаа, МО (1991)); (в) контакти з антигеном, що знаходяться в амінокислотних залишках 27с-36 (І 1), 46-55 (І 2), 89-96 (13), 30-35Б6 (НІ), 47-58 (Н2) і 93-101 (НЗ) (МасСаїйшт єї аїЇ. 9). Мої. Віоії. 262: 732-745 (1996)); і (г) комбінації (а), (6) і/або (в), що включають амінокислотні залишки НУК 46-56 (12), 47-56 (12), 48-56 (І 2), 49-56 (12), 26-35 (НІ), 26-356 (НІ), 49-65 (Нг), 93-102 (НЗ) і 94-102 (НЗ).
Якщо не вказано інше, залишки НУ. та інші залишки у варіабельному домені (наприклад, залишки ЕК) нумеруються в даному документі згідно з Кабаї еї аЇ., вище. 60 "Імунокон'югат" являє собою антитіло, кон'юговане з одною або більше ніж одною гетерологічною молекулою, що включає цитотоксичний агент, але що не обмежується ним. "Індивід" або "суб'єкт" являє собою ссавця. Ссавці включають домашніх тварин (наприклад, корів, овець, кішок, собак і коней), приматів (наприклад, людину і приматів, що не є людиною, таких як мавпи), кроликів і гризунів (наприклад, мишей і щурів), але не обмежуються ними. У деяких втіленнях індивід або суб'єкт являє собою людину. "Виділене" антитіло являє собою антитіло, яке було відділене від компонента його природного оточення. У деяких втіленнях антитіло очищують до чистоти, більшої, ніж 95 95 або 99 95 при визначенні, наприклад, електрофоретичними (наприклад, 505-РАСЕ (електрофорез в поліакриламідному гелі з додецилсульфатом натрію), ізоелектрофокусування (ІЕЕ), капілярний електрофорез) або хроматографічними (наприклад, іонообмінна ВЕРХ (високоефективна рідинна хроматографія) або ВЕРХ з оберненою фазою) способами. Відносно огляду способів оцінки чистоти антитіл, див., наприклад, Ріайтап, 5. еї аї., )У. Сптотаїйодг. В 848 (2007) 79-87.
Термін "виділена" нуклеїнова кислота належить до молекули нуклеїнової кислоти, яка була відділена від компонента її природного оточення. Виділена нуклеїнова кислота включає молекулу нуклеїнової кислоти, яка міститься в клітинах, які звичайно містять дану молекулу нуклеїнової кислоти, але дана молекула нуклеїнової кислоти присутня позахромосомно або в ділянці хромосоми, яка відрізняється від її природної хромосомної ділянки.
Фраза "виділена нуклеїнова кислота, кодуюча антитіло до РОТ" належить до одної або більше ніж одної молекули нуклеїнової кислоти, кодуючої важкий і легкий ланцюг антитіла (або їх фрагменти), включаючи таку(кі) молекулу(ли) нуклеїнової кислоти в одному векторі або окремих векторах, і таку(кі) молекулу(ли) нуклеїнової кислоти, що присутні в одному або більше ніж одному положенні в клітині-хазяїні.
Термін "моноклональне антитіло" в тому вигляді, в якому він використовується в даному документі, належить до антитіла, одержаного з популяції по суті гомогенних антитіл, тобто індивідуальні антитіла, що становлять популяцію, є ідентичними і/або зв'язуються з тим самим епітопом, за виключенням можливих варіантів антитіл, наприклад, які містять мутації, що зустрічаються в природі або які виникають під час одержання препарату моноклонального антитіла, причому такі варіанти звичайно присутні в мінорних кількостях. На відміну від препаратів поліклональних антитіл, які типово включають різні антитіла, направлені проти
Зо різних детермінант (епітопів), кожне моноклональне антитіло препарату моноклональних антитіл направлене проти однієї детермінанти на антигені Таким чином, модифікатор "моноклональний" вказує на характер антитіла як одержаного з по суті гомогенної популяції антитіл, і його не потрібно тлумачити як такий, що вимагає продукції антитіла будь-яким конкретним способом. Наприклад, моноклональні антитіла, що підлягають застосуванню згідно з даним винаходом, можна одержувати цілою низкою методик, які включають спосіб гібридоми, способи генної інженерії, способи фагового дисплея і способи з використанням трансгенних тварин, які містять всі локуси людського імуноглобуліну або їх частину, але які не обмежуються ними, причому такі способи та інші типові способи для одержання моноклональних антитіл описуються в даному документі.
Термін "голе антитіло" належить до антитіла, яке не кон'юговане з гетерологічним групуванням (наприклад, цитотоксичним групуванням) або радіоактивною міткою. Голе антитіло може бути присутнім у фармацевтичному препараті.
Термін "природні антитіла" належить до молекул імуноглобулінів, що зустрічаються в природі, з варіюючими структурами. Наприклад, природні антитіла ІдсС являють собою гетеротетрамерні глікопротеїни з молекулярною масою приблизно 150000 Дальтон, які складаються з двох ідентичних легких ланцюгів і двох ідентичних важких ланцюгів, які зв'язані дисульфідними зв'язками. Від М- до С-кінця кожний важкий ланцюг має варіабельну ділянку (МН), яка також називається варіабельний важкий домен або варіабельний домен важкого ланцюга, з наступними трьома константними доменами (СНІ, СН2 їі СНЗ). Аналогічним чином, від М- до С-кінця кожний легкий ланцюг має варіабельну ділянку (МІ), яка також називається варіабельний легкий домен або варіабельний домен легкого ланцюга, з наступним константним легким доменом (СІ). Легкий ланцюг антитіла може бути приписаний до одного з двох типів, що називаються каппа (к) і лямбда (Х), на основі амінокислотної послідовності її константного домену.
Термін "аркуш-вкладка в упаковці" використовується для назви інструкцій, які традиційно включаються в наявні в продажу упаковки терапевтичних продуктів, які містять інформацію про показання, застосування, дозування, введення, комбіновану терапію, протипоказання і/або попередження, що стосуються застосування таких терапевтичних продуктів. "Відсоток (95) ідентичності амінокислотної послідовності" по відношенню до контрольної 60 послідовності поліпептиду визначається як відсоткова частка амінокислотних залишків у послідовності-кандидаті, які є ідентичними амінокислотним залишкам в контрольній послідовності поліпептиду, після вирівнювання даних послідовностей і, якщо необхідно, введення пропусків для досягнення максимального відсотка ідентичності послідовності, і не розглядаючи будь-які консервативні заміни як частину ідентичності послідовності. Вирівнювання для цілей визначення відсотка ідентичності амінокислотної послідовності може досягатися різними способами, які знаходяться в межах кваліфікації в даній галузі, наприклад, з використанням загальнодоступних комп'ютерних програм, таких як програми ВГАБ5Т, ВІ А5Т-2,
АСОМ або Медаїїдп (ОМАЗТАК). Фахівці в даній галузі можуть визначати придатні параметри для вирівнювання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання за всією довжиною порівнюваних послідовностей. Для цілей даного документа, однак, значення 95 ідентичності амінокислотної послідовності одержуються з використанням комп'ютерної програми порівняння послідовностей АГІОМ-2. Авторство комп'ютерної програми порівняння послідовностей АГ ІЇОМ-2 належить Сепепіесні, Іпс., і вихідний код з користувацькою документацією був поданий в Бюро реєстрації авторських прав США, умазпіпдіоп 0.С., 20559, де він зареєстрований під реєстраційним Мо авторського права США
ТХОИ510087. Програма АГІОМ-2 є загальнодоступною від Сепепіесп, Іпс., Південний Сан-
Франциско, Каліфорнія, або може бути складена з вихідного коду. Програму АГІСМ-2 потрібно складати для застосування в операційній системі ОМІХ, включаючи цифрову ОМІХ М4.00. Всі параметри порівняння послідовностей встановлюються програмою АГ ІОМ-2 і не варіюють.
У ситуаціях, коли АГІСМ-2 застосовується для порівнянь амінокислотних послідовностей, 90 ідентичності амінокислотної послідовності даної амінокислотної послідовності А з або відносно даної амінокислотної послідовності Б (що може бути альтернативно сформульовано як дана амінокислотна послідовність А, яка має або містить визначений 95 ідентичності амінокислотної послідовності з або відносно даної амінокислотної послідовності Б) розраховується наступним чином: 100 помножити на частку Х/У де Х являє собою кількість амінокислотних залишків, підрахованих як ідентичні співпадіння, за допомогою програми вирівнювання послідовностей АГІОМ-2 у вирівнюванні А і Б даною програмою, і де У являє собою загальну кількість амінокислотних залишків у Б. Буде зрозуміло те, що коли довжина амінокислотної послідовності А не дорівнює довжині амінокислотної послідовності Б, 95 ідентичності амінокислотної послідовності А з Б не буде дорівнювати 95 ідентичності амінокислотної послідовності Б з А. Якщо конкретно не стверджується інше, всі значення 95 ідентичності амінокислотної послідовності, що використовуються в даному документі, як описано в безпосередньо попередньому абзаці, одержані з використанням комп'ютерної програми АСІСМ-2.
Термін "фармацевтичний препарат" належить до препарату, який знаходиться в такій формі, щоб забезпечувати ефективну біологічну активність активного інгредієнта, що міститься в ньому, і який не містить додаткових компонентів, які Є неприйнятно токсичними для суб'єкта, якому вводився б препарат.
Термін "фармацевтично прийнятний носій" належить до інгредієнта в фармацевтичному препараті, відмінному від активного інгредієнта, який є онетоксичним для суб'єкта.
Фармацевтично прийнятний носій включає буфер, ексципієнт, стабілізатор або консервант, але не обмежується ними.
Термін "лікування" (і його граматичні варіації, такі як "лікувати" або "здійснення лікування") в тому вигляді, в якому він використовується в даному документі, належить до клінічного втручання у спробі змінити природний хід захворювання індивіда, якого лікують, і воно може здійснюватися або для профілактики, або протягом клінічної патології. Бажані ефекти лікування включають попередження появи або рецидиву захворювання, полегшення симптомів, зменшення будь-яких прямих або опосередкованих патологічних наслідків захворювання, попередження метастазів, зменшення швидкості прогресування захворювання, зменшення інтенсивності або тимчасове послаблення хворобливого стану і ремісію або покращений прогноз, але не обмежуються ними. У деяких втіленнях антитіла за винаходом використовуються для затримки розвитку захворювання або для уповільнення прогресування захворювання.
Термін "варіабельна ділянка" або "варіабельний домен" належить до домену важкого або легкого ланцюга антитіла, який бере участь у зв'язуванні антитіла з антигеном. Варіабельні домени важкого ланцюга і легкого ланцюга (МН ії МІ. відповідно) природного антитіла звичайно мають аналогічні структури, причому кожний домен містить чотири консервативні каркасні ділянки (ЕК) і три гіперваріабельні ділянки (НМ). (див., наприклад, Кіпаї, Т.9У., еї аІ. Киру 60 Іттипоіоду, бій ей., УМ.Н. Егеетап апа Со., М.М. (2007), сторінка 91). Один домен МН або МІ може бути достатнім для надання специфічності зв'язування з антигеном. Крім того, антитіла, які зв'язуються з конкретним антигеном, можуть бути виділені з використанням домену МН або
МІ. з антитіла, яке зв'язується з антигеном, для скринінгу бібліотеки комплементарних доменів
МІ або МН відповідно. Див., наприклад, Рогпіоіїапо, 5. еї аї., ). Іттипої. 150 (1993) 880-887; Сіасквоп, Т. єї аї!., Мате 352 (1991) 624-628).
Термін "вектор" в тому вигляді, в якому він використовується в даному документі, належить до молекули нуклеїнової кислоти, здатної розмножувати іншу нуклеїнову кислоту, з якою він зв'язаний. Даний термін включає вектор як структуру нуклеїнової кислоти, що самореплікується, а також вектор, включений в геном клітини-хазяїна, в яку він був введений. Визначені вектори здатні керувати експресією нуклеїнових кислот, з якими вони зв'язані функціональним чином.
Такі вектори називаються в даному документі "експресійними векторами".
І. КОМПОЗИЦІЇ ТА СПОСОБИ
В одному аспекті даний винахід частково оснований на даних про те, що вибрані антитіла до
РО1 за винаходом зв'язуються з визначеними епітопами РОЇ і мають здатність збільшувати активацію різних імунних клітин (наприклад, Т-клітин, В-клітин, клітин МК (натуральний кілер), дендритних клітин (ОС), моноцитів і макрофагів). Наприклад, вони збільшують вивільнення (секрецію) імуномодулюючих цитокінів (наприклад, інтерферону-гамма і гранзиму В). Іншими імуномодулюючими цитокінами, рівень яких збільшується або може бути збільшений, є, наприклад, секреція фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) і 1-12 (інтерлейкін-12).
Терміни секреція інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма), фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа),
І/-12 тощо. У тому вигляді, в якому вони використовуються в даному документі, належать до людських цитокінів.
У деяких втіленнях запропоновані антитіла, які зв'язуються з РО1. Антитіла за винаходом є корисними, наприклад, для діагностики або лікування раку.
А. Типові антитіла до РО1
В одному аспекті згідно з винаходом запропоновані виділені антитіла, які зв'язуються з людським РО.
У деяких втіленнях запропоноване антитіло до РОТ, де дане антитіло: ї) конкурує за зв'язування з РО-1 з антитілом до РОТ, яке містить МН і МІ РО1-0103, і ії) зв'язується з РО-1 людини і яванського макака; і ії) посилює секрецію інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма) алогенними стимульованими Т- клітинами на 85 95 або більше (в одному переважному втіленні на 90 95 або більше, в одному переважному втіленні на 95 95 або більше) при концентрації антитіла 10 мкг/мл (де секреція без антитіла прийнята за 0 95 (базальний рівень ІЄМ-гамма), і секреція з 20 ЄШ/мл рекомбінантного людського 1-2 прийнята за 100 95 (в аналізі реакції змішаної культури (алогенних) лімфоцитів (МІК) згідно з Прикладом 3); і/або ім) посилює секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) алогенними стимульованими Т-клітинами на 200 95 або більше (в одному переважному втіленні на 250 95 або більше) при концентрації антитіла 10 мкг/мл (де секреція без антитіла прийнята за 0 95 (базальний рівень ІЕМ-гамма), і секреція з 20 ЕЄШ/мл рекомбінантного людського 1-2 прийнята за 100 95 (в аналізі реакції змішаної культури (алогенних) лімфоцитів (МІ К) згідно з Прикладом
З).
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РО1, що містить (а) НМК-
НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕ 10 МО:1; (6) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІЮ МО:2; (в) НУВ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:3; (г) НМК-11, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:4; (д) НМЕ-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО:5; і (є) НМК-І3, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:6.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:1; (і) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:2; і (ії) НМАК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з
ЗЕО ІО МО:3; і (б) домен МІ, який містить (ї) НМЕ-І11, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО4; (ії) НМВ-12, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:5; і (ії) НМЕ-1І З, яка містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:6.
В одному втіленні таке антитіло до РО1 містить ї) послідовність МН 5ЕО ІО МО/;:7 і послідовність МІ. ЗЕО ІЮ МО:8; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її);
В одному втіленні таке антитіло до РО1 містить ї) послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:58; або 60 ії) послідовність МН 5ЕО І МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:59; або ії) послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:60; або ім) послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. ЗЕО ІЮ МО:61.
В одному втіленні таке антитіло до РОЇ містить послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:58.
В одному втіленні таке антитіло до РОЇ містить послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮО МО:59.
В одному втіленні таке антитіло до РОЇ містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:60.
В одному втіленні таке антитіло до РОЇ містить послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:61.
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОТ, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НМК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:9; (б) НМЕ-НХ, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:10; (в) НМА-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:11; (г) НМК-І1, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:12; (д) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:13; ії (е) НМК-І3, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:14.
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОТ, що містить (а) НМА-
НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕ 10 МО:9; (б) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:10; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:11; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:12; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:13; ї (ее) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:14.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НМА МН, вибрані з (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 52Е0 ІЮ МО:9; (ії) НМА-Н2, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО:10; і (ії) НМА-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІЮ МО:11; і (б) домен МІ, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НУВ
МІ, вибрані з (ї) НМЕ-1І1, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:12; (ії) НМЕ-12, яка
Зо містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:13; ії (ії) НМА-І3, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:14.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:9; (і) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:10; і (ії) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з
ЗЕО ІЮ МО:11; і (б) домен МІ, який містить (ї) НМК-1.1, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:12; (ії) НУВ-І2, яка містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:13; і (ії) НМЕ-1 3, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:14.
В одному втіленні таке антитіло до РО1 містить ї) послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:15 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:16; ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї).
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОТ, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НМК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО:17; (6) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:18; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:19; (г) НМК-11, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:20; (д) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність 5Е2 ІЮ МО:21; і (ев) НМАК-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:22.
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РО1, що містить (а) НМК-
НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:17; (6) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:18; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:19; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:20; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:21; і (є) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:22.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НМА МН, вибрані з (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:17; (ії) НМА-Н2, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:18; і (ії) НМА-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІО МО:19; і (б) домен МІ, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НУВ
МІ, вибрані з (ї) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:20; (ії) НМВ-12, яка 60 містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮ МО:21; і (ії) НМАК-І3, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:22.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:17; (і) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:18; і (ії) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з
ЗЕО ІЮ МО:19; і (б) домен МІ, який містить (ї) НМК-1.1, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО:20; (ії) НУВ-1І2, яка містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ МО:21; і (ії) НМЕА-1 3, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:22.
В одному втіленні таке антитіло до РО1 містить ї) послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:23 і послідовність МІ 5ЕО ІО МО:24; ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї).
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОТ, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НМК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО:25; (6) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:26; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:27; (г) НМК-І11, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:28; (д) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО:29; і (є) НМАК-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:30.
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РО1, що містить (а) НМК-
НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:25; (6) НМУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:26; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:27; (г) НМА-11, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:28; (д) НМЕК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:29; ї (е) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:30.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НМА МН, вибрані з (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:25; (ії) НМА-Н2, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО:26; і (ії) НМА-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІО МО:27; і (б) домен МІ, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НУК
МІ, вибрані з (ї) НМЕ-1І1, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:28; (ії) НМЕ-12, яка
Зо містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮ МО:29; і (ії) НМАК-І3, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:30.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:25; (ії) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:26; і (ії) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з
ЗЕО ІО МО:27; і (б) домен МІ, який містить (ї) НМК-1.1, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО:28; (ії) НУВ-1І2, яка містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:29; і (ії) НМЕА-1 3, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:30.
В одному втіленні таке антитіло до РО містить ї) послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:31 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:32; ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї).
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОТ, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ОО МО:33; (6) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:34; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:35; (г) НМК-І11, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:36; (д) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІЮ МО:37; і (е) НМК-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:38.
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РО1, що містить (а) НМА-
НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:33; (6) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:34; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:35; (г) НМА-11, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:36; (д) НМЕК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:37; і (є) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:38.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НМК УН, вибрані з (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:33; (ії) НМА-Н2, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО:34; і (ії) НМА-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІЮО МО:35; і (б) домен МІ, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НУВ
МІ, вибрані з (ї) НМЕ-1І1, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:36; (ії) НМЕ-12, яка бо містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:37; і (ії) НМК-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:38.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:33; (і) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:34; і (ії) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з
ЗЕО ІЮ МО:35; і (б) домен МІ, який містить (ї) НМК-1.1, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО:36; (ії) НУВ-1І2, яка містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ МО:37; і (ії) НУВ-І 3, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:38.
В одному втіленні таке антитіло до РО1 містить ї) послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:39 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:40; ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї).
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОТ, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НМК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ОО МО:41; (6) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:42; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:43; (г) НМК-11, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:44; (д) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮ МО:45; і (е) НМК-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО 10 МО 46.
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РО1, що містить (а) НМК-
НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:41; (6) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО ОО МО:42; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮО МО:43; (г) НМА-11, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:44; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:45; і (е) НМК-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:46.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МУН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НМА МН, вибрані з (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:41; (ії) НМА-Н2, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:42; і (ії) НМА-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІО МО:43; і (б) домен МІ, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НУВ
МІ, вибрані з (ї) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:44; (ії) НУВ-12, яка
Зо містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:45; і (ії) НМАК-І3, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:46.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮО МО:41; (її) НМЕК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО :42; і (ії) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з
ЗЕО ІЮ МО:43; і (б) домен МІ, який містить (ї) НМК-1.1, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:44; (ії) НУВ-1І2, яка містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО 45; і (ії) НМЕА-1 3, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:46.
В одному втіленні таке антитіло до РО1 містить ї) послідовність МН 5ЕО ІЮО МО :47 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:48; ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї).
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОТ, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НМК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО 10 МО:49; (6) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:50; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:51; (г) НМК-11, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:52; (д) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:53; і (є) НМАК-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:54.
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РО1, що містить (а) НМК-
НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:49; (6) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО І1О МО:50; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮО МО:51; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮО МО:52; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:53; ії (е) НМК-І З, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:54.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НМА МН, вибрані з (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:49; (ії) НУВ-НаІ, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:50; і (ії) НМА-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІО МО:51; і (б) домен МІ, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності НУВ
МІ, вибрані з (ї) НМЕ-1І1, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:52; (ії) НМЕ-12, яка 60 містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:53; і (ії) НМАК-І3, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:54.
В іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:49; (ії) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:50; і (ії) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з
ЗЕО ІЮ МО:51; і (б) домен МІ, який містить (ї) НМЕ-11, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:52; (ії) НУВ-1І2, яка містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:53; і (ії) НМЕА-1 3, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:54.
В одному втіленні таке антитіло до РО1 містить ї) послідовність МН 5ЕО ІЮО МО :47 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:48; ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї).
В одному переважному втіленні запропоноване антитіло, яке зв'язується 3 тим самим епітопом, що їі антитіло до РОТ, що містить послідовність МН ЗЕО ІО МО:7 і послідовність МІ.
ЗЕО І МО:8.
В одному переважному втіленні запропоноване антитіло, яке конкурує за зв'язування з людським РОЇ з антитілом до РОТ, яке містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:7 і послідовність МІ.
ЗЕО І МО:8 (при визначенні в конкурентному аналізі описаному в Прикладі 2 (ЕГІЗА (твердофазний імуноферментий аналіз) картування епітопів/конкурентний аналіз зв'язування)).
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РО1 (наприклад, антитіло, яке зв'язується з людським РОТ), що містить
А) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:1; (6) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:2; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:3; (г) НМК-І11, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО:4; (д) НМЕК-12, яка містить амінокислотну послідовність 56 ІЮ МО:5; ії (е) НМА-І3, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:6; або
В іншому аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОТ (наприклад, антитіло, яке зв'язується з людським РОТ), що містить (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:1; (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:2; ії (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО:3; і (б) домен МІ, який містить (Її)
Ко) НМУВ-І1, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:4; (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:5; і (ії) НМА-І З, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО:6.
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло, яке зв'язується 3 людським
РОТ, яке
А) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:7 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:8; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або Б) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮО МО:58. і) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮО МО:59. ії) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:60. ім) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:61. або В) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:15 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:16; ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї); або Г) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:23 і послідовність МІ. ЗЕО ІЮ МО:24; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або Д)
БО ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:31 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:32; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або Е) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:39 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:40; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або Ж) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:47 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:48; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або 3) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:55 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:56; бо ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї);
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло, яке зв'язується 3 людським
РОТ, яке ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО;:7 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:8; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її).
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло, яке зв'язується 3 людським
РОТ, яке містить послідовність МН ЗЕО ІЮО МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:58.
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло, яке зв'язується 3 людським
РОТ, яке містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:59.
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло, яке зв'язується 3 людським
РОТ, яке містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:60.
В одному аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло, яке зв'язується 3 людським
РОТ, яке містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:61.
В іншому аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОТ (наприклад, антитіло, яке зв'язується з людським РОТ), що містить
А) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:1; (6) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:2; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:3; (г) НМК-11, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО:4; (д) НМЕК-12, яка містить амінокислотну послідовність 56 ІЮ МО:5; ії (е) НМА-І3, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:6; або
Б) (а) НМЕА-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:9; (б) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІЮ МО:10; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:11; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:12; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:13; ї (ее) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:14; або
В) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:17; (б) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:18; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:19; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:20; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:21; і (є) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:22; або
Зо Г) (а) НМА-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:25; (б) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:26; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІО МО:27; (г) НУВ-11, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:28; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО:29; і (е) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:30; або
Д) (а) НМЕА-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:33; (б) НМК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:34; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:35; (г) НМА-11, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІО МО:36; (д) НМЕК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:37; і (е) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮ МО:38; або
Е) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:41; (б) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:42; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮО МО:43; (г) НМА-11, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:44; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:45; і (е) НМК-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:46; або
Ж) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:49; (б) НМЕК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІЮ МО:50; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮО МО:51; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮО МО:52; (д) НУВ-12, яка містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮ МО:53; і (е) НМА-І3З, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:54; де дане антитіло характеризується незалежно однією або більше ніж однією з наступних властивостей: антитіло до РО-1 ї) конкурує за зв'язування з РО-1 з антитілом до РО-1, яке містить МН і МІ РО1-0103, і/або її) зв'язується з РО-1 людини і яванського макака; і/або ії) посилює секрецію інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма) алогенними стимульованими Т- клітинами на 85 95 або більше (в одному переважному втіленні на 90 95 або більше, в одному переважному втіленні - на 95 95 або більше) при концентрації антитіла 10 мкг/мл (де секреція без антитіла прийнята за 095 (базальний рівень ІРМ-гамма), і секреція з 20 ЕМО/мл рекомбінантного людського ІЇ/-2 прийнята за 100 95 (в аналізі реакції (алогенної) змішаної культури лімфоцитів (МІК) згідно з Прикладом 3); і/або бо їм) посилює секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) алогенними стимульованими Т-клітинами на 200 95 або більше (в одному переважному втіленні на 250 95 або більше) при концентрації антитіла 10 мкг/мл (де секреція без антитіла прийнята за 0 95 (базальний рівень ІЄМ-гамма), і секреція з 20 ЄЮ/мл рекомбінантного людського 1-2 прийнята за 100 95 (в аналізі реакції (алогенної) змішаної культури лімфоцитів (МІК) згідно з Прикладом
З).
В іншому аспекті згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОТ (наприклад, антитіло, яке зв'язується з людським РОТ), що містить
А) (а) домен МН, який містить (ї) НМА-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО І
МО:1; (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:2; ії (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО:3; їі (б) домен МІ, який містить (Її)
НМВ-Ї1, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО ІО МО4; (ії) НМНВ-12, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:5; і (ії) НМА-І З, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:6; або
Б) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ
МО:9; (ії) НМВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:10; ії (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:11; і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:12; (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО:13; і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:14; або
В) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ
МО:17; (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:18; ії (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:19; і (6) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:20; (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:21; і (ії) НМУВА-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:22; або
Г) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:25; (ії) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:26; і (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:27; і (6) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:28; (ії) НМК-12, яка містить
Зо амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:29; і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:30; або
Д) (а) домен МН, який містить (їі) НМЕ-НТІ, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ
МО:33; (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:34; і (ії) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО':35; і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:36; (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:37; і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:38; або
Е) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ
МО:41; (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:42; і (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:43; і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:44; (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС ОО МО:45; і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:46; або
Ж) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ
МО:49; (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:50; і (ії) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:51; і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:52; (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:53; і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:54; де дане антитіло характеризується незалежно однією або більше ніж однією з наступних властивостей: антитіло до РО-1 ї) конкурує за зв'язування з РО-1 з антитілом до РО-1, яке містить МН і МІ РО1-0103, і/або її) зв'язується з РО-1 людини і яванського макака; і/або ії) посилює секрецію інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма) алогенними стимульованими Т- клітинами на 85 95 або більше (в одному переважному втіленні на 90 95 або більше, в одному переважному втіленні - на 95 95 або більше) при концентрації антитіла 10 мкг/мл (де секреція без антитіла прийнята за 095 (базальний рівень ІЕМ-гамма), і секреція з 20 ЕМО/мл рекомбінантного людського ІЇ/-2 прийнята за 100 95 (в аналізі реакції (алогенної) змішаної культури лімфоцитів (МІК) згідно з Прикладом 3); і/або бо їм) посилює секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) алогенними стимульованими Т-клітинами на 200 95 або більше (в одному переважному втіленні на 250 95 або більше) при концентрації антитіла 10 мкг/мл (де секреція без антитіла прийнята за 0 95 (базальний рівень ІЄМ-гамма), і секреція з 20 ЄЮ/мл рекомбінантного людського 1-2 прийнята за 100 95 (в аналізі реакції (алогенної) змішаної культури лімфоцитів (МІК) згідно з Прикладом
З).
В іншому аспекті винаходу антитіло до РО1 згідно з будь-яким з наведених вище втілень являє собою моноклональне антитіло, яке включає химерне, гуманізоване або людське антитіло. В одному втіленні антитіло до РОЇ являє собою фрагмент антитіла, наприклад, Ем,
Бар, Раб, 5сЕм, діатіло або фрагмент Е(аб)г». В іншому втіленні антитіло являє собою повнорозмірне антитіло, наприклад, інтактне антитіло ІдДсе1 або Ідс4, або інший клас або ізотип антитіла, як визначено в даному документі.
В іншому аспекті антитіло до РОЇ згідно з будь-яким з наведених вище втілень може включати будь-які з характеристик, поодиноко або в комбінації, як описано в Розділах 1-7 нижче: 1. Афінність антитіла
У деяких втіленнях антитіло, запропоноване в даному документі, має константу дисоціації
КО, меншу або рівну 1 мкМ, меншу або рівну 100 нМ, меншу або рівну 10 нМ, меншу або рівну 1
НМ, меншу або рівну 0,1 нМ, меншу або рівну 0,01 нМ або меншу або рівну 0,001 нм (наприклад, 109 М або менше, наприклад, від 109 М до 1073 М, наприклад, від 109 М до 1073
М).
В одному переважному втіленні КО вимірюється з використанням аналізів поверхневого плазмонного резонансу з використанням ВІАСОКЕ-? при 25 "С з чипами СМ5 з іммобілізованим антигеном при -10 одиницях відповіді (КШ). Стисло, біосенсорні чипи на основі карбоксиметильованого декстрана (СМ5, ВІАСОМКЕ, пс.) активуються /М-етил-М'-(3- диметиламінопропіл)-карбодіїміду гідрохлоридом (ЕС) і М-гідроксисукцинімідом (МН) згідно з інструкціями постачальника. Антиген розводиться 10 мМ ацетатом натрію, рН 4,8, до 5 мкг/мл (-0,2 мкМ) перед ін'єкцією при швидкості потоку 5 мкл/хвилину для досягнення приблизно 10 одиниць відповіді (КИ) зв'язаного білка. Після ін'єкції антигену ін'єктується 1 М етаноламін для блокування груп, що не прореагували. Для вимірювань кінетики ін'єктуються двократні серійні
Зо розведення Раб (от 0,78 нМ до 500 нМ) в РВЗ (фосфатно-сольовий буферний розчин) з 0,05 95 поверхнево-активної речовини полісорбат 20 (ТУМЕЕМ-20"М) (РВ5Т) при 25 С при швидкості потоку приблизно 25 мкл/хв. Швидкості асоціації (Коп або Ка) і швидкості дисоціації (Ког або Ка) розраховуються з використанням простої моделі зв'язування один до одного Лангмюра (ВІАСОНЕ 2 Емаїчайоп боїм'аге, версія 3.2) за допомогою одночасної апроксимації сенсограм асоціації та дисоціації. Рівноважна константа дисоціації КО розраховується як відношення ка/Ла (Кон/Коп). Див., наприклад, Спеп, У. еї аї., У. Мої. Віої. 293 (1999) 865-881. Якщо швидкість асоціації перевищує 106 Ми с" при вимірюванні за допомогою описаного вище аналізу поверхневого плазмонного резонансу, тоді швидкість асоціації можна визначати з використанням методики гасіння флуоресценції, в якій вимірюється збільшення або зменшення інтенсивності випускання флуоресценції (збудження - 295 нм; випускання - 340 нм, смуга пропускання - 16 нм) 20 нМ антитіла проти антигену (у вигляді Раб) при 25 "С в РВ5, рН 7,2, у присутності зростаючих концентрацій антигену при вимірюванні в спектрометрі, такому як спектрофотометр, оснащений зупиненим струменем (Амім Іпбігитепів), або спектрофотометр серії 8000 5І М-АМІМСО "М (Тнеппозресігопіс) з кюветою з перемішуванням. 2. Фрагменти антитіл
У деяких втіленнях антитіло, запропоноване в даному документі, являє собою фрагмент антитіла. Фрагменти антитіла включають фрагменти Раб, Раб", Баб'-ЗН, Е(ар")», Ем і зем, та інші фрагменти, описані нижче, але не обмежуються ними. Для огляду визначених фрагментів антитіла, див. Ниазоп, Р... еї аї., Маї. Меа. 9 (2003) 129-134. Для огляду фрагментів 5сЕм див., наприклад, Рісескіпип, А., п; Те Рпапптасоіоду ої Мопосіопа! Апіїбодіе5, Мої. 113, Козепригд апа Мооге (едв.), Зрііпде/-Мепад, Мем Мо (1994), рр. 269-315; див. також ММО 93/16185; і патенти США Мо 5571894 і 5587458. Для обговорення фрагментів Раб і Е(аб)», які містять залишки епітопа, що зв'язується рецептором утилізації, і мають підвищені періоди напівведення іп мімо, див. патент США Мо 5869046.
Діатіла являють собою фрагменти антитіл з двома антигензв'язуючими сайтами, які можуть бути двохвалентними або біспецифічними. Див., наприклад, ЕР 0 404 097; МО 1993/01161;
Нидзоп, Р.). еї аї., Маї. Меа. 9 (2003) 129-134 і Ноіїдег, Р. еї аї., Ргос. Май). Асай. Зсі. ОБА 90 (1993) 6444-6448. Триатіла і тетратіла також описуються в Ниазоп, Р... еї а!., Маї. Меа. 9 (20039 129-134). 60 Однодоменні антитіла являють собою фрагменти антитіл, які містять весь варіабельний домен важкого ланцюга антитіла або його частину, або весь варіабельний домен легкого ланцюга антитіла або його частину. У деяких втіленнях однодоменне антитіло являє собою людське однодоменне антитіло (Юотапіїй5, Іпс., УУакпат, МА; див., наприклад, патент США Мо 6248516 ВІ).
Фрагменти антитіла можуть бути одержані різними методиками, що включають протеолітичне розщеплення інтактного антитіла, а також продукцію рекомбінантними клітинами- хазяями (наприклад, Е. соїї або фагом), але не обмежуються ними, як описано в даному документі. 3. Химерні і гуманізовані антитіла
У деяких втіленнях антитіло, запропоноване в даному документі, являє собою химерне антитіло. Визначені химерні антитіла описуються, наприклад, в патенті США Мо 4816567; і
Могтізоп, 5.І... еї а!., Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 81 (1984) 6851-6855). В одному прикладі химерне антитіло містить варіабельну ділянку, що не є людською (наприклад, варіабельну ділянку, що походить від миші, щура, хом'яка, кролика або примата, що не є людиною, такого як мавпа), і людську константну ділянку. В іншому втіленні химерне антитіло являє собою антитіло "з перемиканням класу", у якого клас або підклас був змінений від класу або підкласу батьківського антитіла. Химерні антитіла включають їх антигензв'язуючі фрагменти.
У деяких втіленнях химерне антитіло являє собою гуманізоване антитіло. Типово антитіло, що не є людським, гуманізують для зменшення імуногенності у людини при збереженні специфічності та афінності батьківського антитіла, що не є людським. В загальному, гуманізоване антитіло містить один або більше ніж один варіабельний домен, в якому НМЕ, наприклад, СОР (або їх частини) походять з антитіла, що не є людським, і ЕЕ (або їх частини) походять з послідовностей людського антитіла. Гуманізоване антитіло можливо також буде містити щонайменше частину людської константної ділянки. У деяких втіленнях деякі залишки
ЕК в гуманізованому антитілі замінені відповідними залишками з антитіла, що не є людським (наприклад, антитіла, з якого походять залишки НМК), наприклад, для відновлення або покращення специфічності або афінності антитіла.
Огляд гуманізованих антитіл і способів їх одержання робиться, наприклад, в АЇІтадго, «4.С. апа Екапб5оп, 9., Егопі. Віобсі. 13 (2008) 1619-1633 і додатково описується, наприклад, в Аіесптапи, І. еї а)., Майте 332 (1988) 323-329; Оцееп, С. еї аї., Ргос. МаїЇ. Асад. осі. ОБА 86 (1989) 10029-10033; патентах США Мо 5821337, 7527791, 6982321 і 7087409; Казптігі, З.М. єї аї.,
МеїШшоаз 36 (2005) 25-34 (що описує пересадження 5ОК (а-СОК) (ділянка, що визначає специфічність)); Радіап, Е.А., Мої. Іттипої. 28 (1991) 489-498 (що описує "змінені поверхні (варіабельного домену)»); БаАсдца, МУР. еї аЇ.,, Меїйод5 36 (2005) 43-60 (що описує "перетасування ЕК"); ії Озроигп, ху). еї аЇ., Меїйоаз 36 (2005) 61-68 і Кіїтка, А. еї аї., Вг. У. Сапсег 83 (2000) 252-260 (що описує підхід "направленого відбору" для перетасування ЕК).
Людські каркасні ділянки, які можна використовувати для гуманізації, включають каркасні ділянки, відібрані з використанням способу "найкращої апроксимації" (див., наприклад, 5ітв5,
М.У. еї аї., У. Іттипої. 151 (1993) 2296-2308; каркасні ділянки, що походять з консенсусної послідовності варіабельних ділянок легкого або важкого ланцюга конкретної підгрупи людських антитіл (див., наприклад, Сагіег, Р. еї аї., Ргос. Маї!. Асад. Зсі. ОБА 89 (1992) 4285-4289; і Ргевчга,
Га. еї аї., У. Іттипої. 151 (1993) 2623-2632); людські зрілі (що соматично мутували) каркасні ділянки або людські каркасні ділянки зародкової лінії (див., наприклад, АїЇтадго, 9.С. апа
Екгапб5оп, 9., Егопі. Віобсі. 13 (2008) 1619-1633); ії каркасні ділянки, одержані в результаті скринінгу бібліотек ЕК (див., наприклад, Васа, М. еї аї., У. Віої. Снет. 272 (1997) 10678-10684 і
Возок, М... єї а!., 9. Віої. Спет. 271 (19969 22611-22618), але не обмежуються ними. 4. Людські антитіла
У деяких втіленнях антитіло, запропоноване в даному документі, являє собою людське антитіло. Людські антитіла можуть бути одержані з використанням різних методик, відомих в даній галузі. Людські антитіла у загальному описуються в мап ріЇкК, М.А. апа мап ае Уміпкеї, .(5.,
Сит. Оріп. Рпаптасої. 5 (2001) 368-374 і Її опрего, М., Ст. Оріп. Іттипої!. 20 (2008) 450-459.
Людські антитіла можуть бути одержані введенням імуногена трансгенним тваринам, які були модифіковані для продукції інтактних людських антитіл або інтактних антитіл з людськими варіабельними ділянками у відповідь на антигенну стимуляцію. Такі тварини типово містять всі локуси людського імуноглобуліну або їх частини, які заміняють локуси ендогенних імуноглобулінів, або які присутні позахромосомно або випадковим чином інтегрують в хромосоми тварини. У таких трансгенних мишей локуси ендогенних імуноглобулінів звичайно були інактивовані. Відносно огляду способів одержання людських антитіл з трансгенних тварин див. Гопрего, М., Маї. Віоїесп. 23 (2005) 1117-1125. Див. також, наприклад, патенти США Мо 60 6075181 і 6150584, що описують технологію ХЕМОМОИ5БЕ"М; патент США Ме 5770429, що описує технологію НиМарт; патент США Мо 7041870, що описує технологію К-М МООЗЕЄ, і публікацію заявки на патент США Ме 05 2007/0061900, що описує технологію Меіосімоизеф).
Людські варіабельні ділянки з інтактних антитіл, одержані за допомогою таких тварин, можуть бути додатково модифіковані, наприклад, за допомогою поєднання з іншою людською константною ділянкою.
Людські антитіла також можуть бути одержані способами на основі гібридоми. Були описані людські мієломні і мишино-людські гетеромієломні лінії клітин для продукції людських моноклональних антитіл. (див. наприклад, Ко2бог, О., У. Іттипої. 133 (1984) 3001-3005; Вгодеиг,
В.Н. єї аїІ., Мопосіопа! Апіїбоду Ргодисіоп Тесппідне5 апа Арріїсаїйоп5, Магсе! Оеккег", Іпс., Мем/ мок (1987), рр. 51-63 і Воегпег, Р. єї аї., У. Іттипої. 147 (1991) 86-95). Людські антитіла, одержані за допомогою технології людської В-клітинної гібридоми, також описуються в Її, 9. еї а!., Ргос. Маї). Асад. осі. ОБА 103 (2006) 3557-3562. Додаткові способи включають способи, описані, наприклад, в патенті США Мо 7189826 (що описує продукцію моноклональних людських антитіл ІДМ з гібридомних ліній клітин) і Мі, 9., Хіапдаї Міапуїхое 26 (2006) 265-268 (що описує людсько-людські гібридоми). Технологія людської гібридоми (технологія триоми) також описуються в Моїтег5, Н.Р. апа Вгапаїеїп, 5., Нізоіоду апа Нізіораїйоіоду 20 (2005) 927-937 і
Мої Ітегв, Н.Р. апа Вгапаїеїп, 5., МеїШйодз апа Ріпаіпов іп Ехрегітепіаї апа Сіїпіса! РнаптасоЇоду 27 (2005) 185-191.
Людські антитіла також можуть бути одержані за допомогою виділення послідовностей варіабельного домену клону Ем, відібраних з бібліотек фагового дисплея людського походження. Такі послідовності варіабельного домену можна потім поєднувати з бажаним людським константним доменом. Методики відбору людських антитіл з бібліотек антитіл описуються нижче. 5. Антитіла, одержані з бібліотеки
Антитіла за винаходом можуть бути виділені за допомогою скринінгу комбінаторних бібліотек антитіл з бажаною активністю або активностями. Наприклад, в даній галузі відома ціла низка способів для одержання бібліотек фагового дисплея і скринінгу таких бібліотек на антитіла, які мають бажані характеристики зв'язування. Огляд таких способів здійснюється, наприклад, в Ноодепроот, Н.А. еї аї., Меїйпод5 іп Моїесшаг Віооду 178 (2001) 1-37, і вони додатково описуються, наприклад, в МсСайепу, «). еї аІ., Майте 348 (1990) 552-554; СІасквоп, Т. еї а!., Маште 352 (1991) 624-628; Магк5б, 4.0. еї аї., у. Мої. Віої. 222 (1992) 581-597; МагїК5, 9.0. апа
Вгадригу, А., Меїнподвз іп МоїІесшіаг Віоіоду 248 (2003) 161-175; 5іапи, 5.5. еї аї., У. Мої. Віої. 338 (2004) 299-310; І ее, С.М. єї аї!., У. Мої. Віої. 340 (2004) 1073-1093; РеїІоизе, Е.А., Ргос. Маї!. Асад. зЗсі. ОБА 101 (2004) 12467-12472 і І ее, С.М. єї аї., у). Іттипої. Меїносдз 284 (2004) 119-132.
У деяких способах фагового дисплея репертуари генів МН і Мі роздільно клонуються полімеразною ланцюговою реакцією (ПЦР) і випадковим чином рекомбінують у фагові бібліотеки, які потім можна піддавати скринінгу на антигензв'язуючий фаг, як описано в М/іпіег, а. еї аіІ., Апп. Неу. Іттипої!. 12 (1994) 433-455. Фаг типово піддає дисплею фрагменти антитіл або у вигляді одноланцюжкових фрагментів Ем (5сЕм), або у вигляді фрагментів Рар. Бібліотеки з імунізованих джерел надають високоафінні антитіла до імуногену без необхідності конструювання гібридом. Як альтернатива, може бути клонований наївний репертуар (наприклад, від людини) з наданням одного джерела антитіл на широкий спектр чужорідних і також власних антигенів без будь-якої імунізації, як описано сгінйне, А.О. єї аіІ., ЕМВО 3. 12 (1993) 725-734. Нарешті, наївні бібліотеки також можуть бути одержані синтетично за допомогою клонування таких, що не піддавалися реаранжуванню сегментів М-генів із стовбурових клітин і застосування праймерів ПР, які містять випадкову послідовність, для кодування сильно варіабельних ділянок СОМКЗ і для здійснення реаранжування іп міїго, як описано Ноодепроот, Н.К. апа Уміпіег, ., ). Мої. Віої. 227 (1992) 381-388. Патентні публікації, що описують фагові бібліотеки людських антитіл, включають, наприклад: патент США Мо 5750373 і патентні публікації США Мо 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 і 2009/0002360.
Антитіла або фрагменти антитіл, виділені з бібліотек людських антитіл, вважаються в даному документі людськими антитілами або фрагментами людських антитіл. 6. Мультиспецифічні антитіла
У деяких втіленнях антитіло, запропоноване в даному документі, являє собою мультиспецифічне антитіло, наприклад, біспецифічне антитіло. Мультиспецифічні антитіла являють собою моноклональні антитіла, які мають специфічності зв'язування відносно щонайменше двох різних сайтів. У деяких втіленнях одна із специфічностей зв'язування направлена відносно РОТ, і інша - відносно будь-якого іншого антигену. У деяких втіленнях бо біспецифічні антитіла можуть зв'язуватися з двома різними епітопами РОТІ. Біспецифічні антитіла також можуть використовуватися для локалізації цитотоксичних агентів у клітинах, які експресують РОТ. Біспецифічні антитіла можна одержувати у вигляді повнорозмірних антитіл або фрагментів антитіл.
Методики одержання мультиспецифічних антитіл включають рекомбінантну співекспресію двох пар важкого ланцюга-легкого ланцюга імуноглобуліну, які мають різні специфічності (див.
Міївівїп, С. апа СиеПо, А.С., Маїиге 305 (1983) 537-540, УМО 93/08829 і Тгаипескег, А. єї аі., ЕМВО
У. 10 (1991) 3655-3659), і генетичну інженерію "виступ у западину" (див., наприклад, патент США
Мо 5731168). Мультиспецифічні антитіла також можна одержувати інженерією ефектів електростатичного наведення для одержання Ес-гетеродимерних молекул антитіла (М/о 2009/089004); поперечним зв'язуванням двох або більше ніж двох антитіл або фрагментів (див., наприклад, патент США Мо 4676980 і Вгеппап, М. еї аїЇ., Зсієпсе 229 (1985) 81-83); застосуванням лейцинових блискавок для одержання біспецифічних антитіл (див., наприклад,
Козівїпу, 5.А. еї аї., у. Іттипої. 148 (1992) 1547-1553; застосуванням технології "діатіла" для одержання біспецифічних фрагментів антитіл (див., наприклад, Ноїїдег, Р. єї аї., Ргос. Маї!).
Асад. бсі. ОБА 90 (1993) 6444-6448) і застосуванням димерів одноланцюжкових Ем (5Ем) (див., наприклад, сгибрег, М еї аї., У. Іттипої. 152 (1994) 5368-5374); і одержанням триспецифічних антитіл, як описано, наприклад, в Тий, А. еї аї., У. Іттипої. 147 (1991) 60-69).
У даний документ також включені генетично модифіковані антитіла з трьома або більше ніж трьома функціональними антигензв'язуючими сайтами, що включають "антитіла-восьминоги" (див., наприклад, ОЗ 2006/0025576).
Антитіло або фрагмент у даному документі також включає "Раб подвійної дії" або "ОАЕ", який містить антигензв'язуючий сайт, який зв'язується з РОЇ, а також з іншим, відмінним антигеном (див., наприклад, О5 2008/0069820).
Антитіло або фрагмент у даному документі також включає мультиспецифічні антитіла, описані в МУУО 2009/080251, УУО 2009/080252, УМО 2009/080253, МО 2009/080254, УМО 2010/112193, УМО 2010/115589, УУО 2010/136172, УМО 2010/145792 і УМО 2010/145793,
МО2011/117330, МО 2012/025525, МО2012/025530, М/О2013/026835, М О2013/026831,
УМО2013/164325 або МО 2013/174873. 7. Варіанти антитіл
Зо У деяких втіленнях розглядаються запропоновані в даному документі варіанти амінокислотної послідовності антитіл. Наприклад, може бути бажаним покращення афінності зв'язування і/або інших біологічних властивостей антитіла. Варіанти амінокислотної послідовності антитіла можуть бути одержані введенням придатних модифікацій в нуклеотидну послідовність, кодуючу антитіло, або за допомогою пептидного синтезу. Такі модифікації включають, наприклад, делеції з і/або вставки в, і/або заміни залишків у межах амінокислотних послідовностей антитіла. Можна зробити будь-яку комбінацію делеції, вставки і заміни для одержання кінцевої конструкції за умови, що дана кінцева конструкція має бажані характеристики, наприклад, зв'язування антигену. а) Варіанти із заміною, вставкою і делецією
У деяких втіленнях запропоновані варіанти антитіла, які мають одну або більше ніж одну амінокислотну заміну. Сайти для мутагенезу, що цікавлять, який призводить до замін, включають НМК і ЕК. В Таблиці 1 наводяться типові заміни під заголовком "типові заміни", ї, як описано далі нижче по відношенню до класів бокових ланцюгів амінокислот. Консервативні заміни показані в Таблиці 1 під заголовком "переважні заміни". В антитіло, що цікавить, можуть бути введені амінокислотні заміни, і продукти піддаються скринінгу відносно бажаної активності, наприклад, збереженого/покращеного зв'язування антигену, зниженої імуногенності або покращеної АОСС (антитілозалежна клітинна цитотоксичність) або СОС (комплементзалежна цитотоксичність).
Таблиця 1 залишок
Таблиця 1
Типові заміни Переважні заміни залишок е() 1 |сСешома;МекАгз; Рпеснорлейцин.//////777777777777 їв цец(Ю 0 Інорлейцин;ойе Ма; МерА-2в Рйє 7777777 ес
Амінокислоти можуть бути згруповані згідно із загальними властивостями бокового ланцюга: (1) гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, Маї, Гей, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: Су, 5ег, Тиг, Авп, Сп; (3) кислотні: Азр, Сім; (4) основні: Ні, Г ув, Ага; (5) залишки, які впливають на орієнтацію ланцюга: Су, Рго; (6) ароматичні: Тгр, Туг, Ріє.
Неконсервативні заміни будуть тягнути за собою заміну члена одного з даних класів на інший клас.
Один тип варіанта із замінами включає заміну одного або більше ніж одного залишку гіперваріабельної ділянки батьківського антитіла (наприклад, гуманізованого або людського антитіла). У загальному, одержаний(ні) в результаті варіант(ти), відібраний(ні) для подальшого дослідження, буде(дуть) мати модифікації (наприклад, покращення) деяких біологічних властивостей (наприклад, підвищену афінність, знижену імуногенність) відносно батьківського антитіла і/або буде(дуть) мати по суті визначені біологічні властивості батьківського антитіла, що зберігаються. Типовим варіантом із замінами є антитіло з дозрілою афінністю, яке може бути із зручністю одержане, наприклад, з використанням методик дозрівання афінності на основі фагового дисплея, таких як методики, описані в даному документі. Стисло, один або більше ніж один залишок НМК мутується, варіанти антитіла піддаються дисплею на фагу і піддаються скринінгу на визначену біологічну активність (наприклад, афінність зв'язування).
Зміни (наприклад, заміни) можуть бути зроблені в НМК, наприклад, для покращення афінності антитіла. Такі зміни можуть бути зроблені в "гарячих точках" НМК, тобто залишках, що кодуються кодонами, які з високою частотою піддаються мутації під час процесу соматичного дозрівання (див., наприклад, Спомжмапигу, Р.5., Меїноаз Мої. Вісі. 207 (2008) 179-196), лабо ЗОК (а-СОК), причому одержані в результаті варіанти МН або Мі тестуються на афінність зв'язування. Дозрівання афінності за допомогою конструювання і повторного відбору з вторинних бібліотек було описане, наприклад, в Ноодепроопт, Н.К. еї аЇ. в Меїйод» іп МоїІесшіаг
Віоюду 178 (2002) 1-37. У деяких втіленнях дозрівання афінності у вибрані для дозрівання
Зо варіабельні гени вводиться різноманітність за допомогою будь-якого з цілої низки способів (наприклад, ПЦР, схильна до помилок, перетасування ланцюга або мутагенез, що керується олігонуклеотидом). Потім створюється вторинна бібліотека. Дана бібліотека потім піддається скринінгу для ідентифікації будь-яких варіантів антитіла з бажаною афінністю. Інший спосіб введення різноманітності включає підходи, направлені на НУК, в яких рандомізуються декілька залишків НУК (наприклад, 4-6 залишків за раз). Залишки НУК, що беруть участь в зв'язуванні антигену, можуть бути специфічно ідентифіковані, наприклад, з використанням мутагенезу на основі аланінового сканування або моделювання. Зокрема, часто як мішень використовуються
СОов-нЗ і СОВ-І 3.
У деяких втіленнях заміни, вставки або делеції можуть відбуватися в межах одної або більше ніж одної НМК, за умови, що такі зміни по суті не зменшують здатність антитіла до зв'язування антигену. Наприклад, в НУЄ можуть бути зроблені консервативні зміни (наприклад, консервативні заміни, як запропоновано в даному документі), які по суті не зменшують афінність зв'язування. Такі зміни можуть знаходитися поза "гарячих точок" НМК або ЗОМ. У деяких втіленнях варіантів послідовностей МН і МІ, запропонованих вище, кожний НМК або є незмінною, або містить не більше, ніж одну, дві або три амінокислотні заміни.
Корисний спосіб ідентифікації залишків або ділянок антитіла, які можуть служити як мішень для мутагенезу, називається "мутагенезом на основі аланінового сканування", як описано
Сиппіпдпат, В.С. апа М/еїЇ5, У.А., Зсівєпсе 244 (1989) 1081-1085. У даному способі залишок або група залишків-мішеней (наприклад, заряджених залишків, таких як Аго, Ав5р, Нів, Губ і (Ім) ідентифікується і замінюється нейтральною або негативно зарядженою амінокислотою (наприклад, аланіном або поліаланіном) для визначення того, чи піддається впливу взаємодія антитіла з антигеном. Додаткові заміни можуть бути введені в положеннях амінокислот, демонструючих функціональну чутливість до вихідних замін. Як альтернатива або додатково, може бути визначена кристалічна структура комплексу антиген-антитіло для ідентифікації контактних точок між антитілом і антигеном. Такі контактні залишки і сусідні залишки можуть служити як мішень або усуватися як кандидати для заміни. Варіанти можуть бути піддані скринінгу для визначення того, чи мають вони бажані властивості.
Вставки в амінокислотну послідовність включають аміно- і/або карбоксикінцеві злиття, які варіюються за довжиною від одного залишку до поліпептидів, які містять сто або більше ніж сто залишків, а також вставки всередині послідовності одиночних або багатьох амінокислотних залишків. Приклади кінцевих вставок включають антитіло з М-кінцевим метіонільним залишком.
Інші вставні варіанти молекули антитіла включають злиття з М- або С-кінцем антитіла ферменту (наприклад, для АОЕРТ (антитілоопосередкована терапія з використанням ферментів і проліків)) або поліпептиду, який збільшує період напівведення антитіла у сироватці. б) Варіанти ділянки Ес
У деяких втіленнях в ділянку Ес антитіла, запропонованого в даному документі, можуть бути введені одна або більше ніж одна амінокислотна модифікація, генеруючи, за допомогою цього, варіант ділянки Ес. Даний варіант ділянки Ес може містити послідовність людської ділянки Ес (наприклад, ділянки Ес людського ІдС1, Ідс2, ІдСЗ або Ідс4), яка містить амінокислотну модифікацію (наприклад, заміну) в одному або більше ніж одному положенні амінокислоти.
Антитіла із зниженою ефекторною функцією включають антитіла із заміною одного або більше ніж одного залишку ділянки Ес 238, 265, 269, 270, 297, 327 і 329 (патент США Мо
Зо 6737056). Такі мутанти Ес включають мутантів Ес із замінами в двох або більше ніж двох положеннях амінокислот 265, 269, 270, 297 і 327, включаючи так званий мутант Ес "САМА" із заміною залишків 265 і 297 на аланін (патент США Мо 7332581).
Описані деякі варіанти антитіл з покращеним або зменшеним зв'язуванням з Есе. (див., наприклад, патент США Мо 6737056; УМО 2004/056312 і Зпівїд5, Б.І. еї аї., У. Віої. Снет. 276 (2001) 6591-6604).
В одному втіленні винаходу таке антитіло являє собою Ідс1 з мутаціями 1 234А і І 235А або з мутаціями 1 234А, І 235А і РЗ3296. В іншому втіленні запропонований Ідс4ї з мутаціями 5228Р і
Ї235Е або 5228Р, 1235Е і/або РЗ3295 (нумерація згідно з індексом Є), КаБбаї єї а!І., Зедоепсев ої
Ргоївіп5 ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, Бій Ей. Рибіїс Неайй Зегмісе, Маййопа! Іпвійшев ої Неайй,
Веїпезаа, МО, 1991).
Антитіла із збільшеними періодами напівведення і покращеним зв'язуванням з неонатальним рецептором Ес (ЕсКп), який відповідає за перенесення материнських до в плід (Сцуег, В.І. єї аї., У. Іттипої. 117 (1976) 587-593 і Кіт, У.К. еї аї., У. Іттипої. 24 (1994) 2429- 2434), описуються в 05 2005/0014934. Дані антитіла містять ділянку Ес з одною або більше ніж одною заміною в ній, яка покращує зв'язування ділянки Ес з ЕсКп. Такі варіанти Ес включають варіанти із замінами в одному або більше ніж одному залишку Ес: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434, наприклад, із заміною залишку 434 ділянки Ес (патент США Мо 7371826).
Див. також Юипсап, А.К. апа Уміпіег, ., Маїшге 322 (1988) 738-740; 005 5648260; 05 5624821 і
УМО 94/29351 відносно інших прикладів варіантів ділянки Ес. в) Варіанти антитіл, модифіковані за цистеїном
У деяких втіленнях може бути бажаним утворення антитіл, модифікованих за цистеїном, наприклад, "тіоМАб", в яких один або більше ніж один залишок антитіла замінений залишками цистеїну. У конкретних втіленнях замінені залишки зустрічаються в доступних сайтах антитіла.
За допомогою заміни даних залишків на цистеїн реакційноздатні тіольні групи розташовуються в доступних сайтах антитіла і можуть бути використані для кон'югування антитіла з іншими групуваннями, такими як групування лікарських засобів або групування лінкер-лікарський засіб, з утворенням імунокон'югата, як описано в даному документі далі. У деяких втіленнях будь-який один або більше ніж один з наступних залишків може бути замінений на цистеїн: М205 бо (нумерація за Кара) легкого ланцюга; А118 (нумерація Е)) важкого ланцюга і 5400 (нумерація
ЕУ) важкого ланцюга ділянки Ес. Антитіла, модифіковані за цистеїном, можуть бути одержані, як описано, наприклад, в патенті США Мо 7521541. г) Похідні антитіл
У деяких втіленнях запропоноване в даному документі антитіло може бути додатково модифіковане так, щоб воно містило додаткові небілкові групування, які відомі в даній галузі і є легко доступними. Групування, придатні для дериватизації антитіла, включають водорозчинні полімери, але не обмежуються ними. Необмежувальні приклади водорозчинних полімерів включають поліетиленгліколь (РЕС), співполімери етиленгліколю/пропіленгліколю, карбоксиметилцелюлозу, декстран, полівініловий спирт, полівінілпіролідон, полі-1, З-діоксолан, полі-1,3,6-триоксан, співполімер етилену/малеїнового ангідриду, поліамінокислоти (або гомополімери, або випадкові співполімери) і декстран або полі(н- вінілпіролідон)поліетиленгліколь, гомополімери пропіленгліколю, співполімери поліпропіленоксиду/етиленоксиду, поліоксиетильовані поліоли (наприклад, гліцерин), полівініловий спирт та їх суміші, але не обмежуються ними. Полієтиленглікольпропіональдегід може мати переваги у виробництві через його стабільність у воді. Полімер може мати будь-яку молекулярну масу і може бути розгалуженим або нерозгалуженим. Кількість полімерів, приєднаних до антитіла, може варіювати, і, при приєднанні більше ніж одного полімеру, вони можуть бути однаковими або різними молекулами. У загальному, число і/або тип полімерів, що використовуються для дериватизації, можуть визначатися на основі міркувань, які включають конкретні властивості або функції антитіла, що підлягають покращенню, але не обмежуються ними, незалежно від того, чи буде похідне антитіла використовуватися в терапії за визначених умов, тощо.
В іншому втіленні запропоновані кон'югати антитіла і небілкового групування, яке може бути селективно нагріте під впливом радіації. В одному втіленні небілюове групування являє собою вуглецеву нанотрубку (Кат, М.М/. еї а!І., Ргос. Май. Асад. осі. ОБА 102 (2005) 11600-11605).
Радіація може мати будь-яку довжину хвилі і включає довжини хвиль, які не завдають шкоди звичайним клітинам, але які нагрівають небілкове групування до температури, при якій умертвляються клітини, приближені до небілкового групування антитіла, але не обмежуються ними.
Зо Б. Способи та композиції генної інженерії
Антитіла можуть бути одержані з використанням способів та композицій генної інженерії, наприклад, як описано в патенті США Мо 4816567. В одному втіленні запропонована виділена нуклеїнова кислота, кодуюча антитіло до РОЇ, описане в даному документі. Така нуклеїнова кислота може кодувати амінокислотну послідовність, яка містить Мі, і/або амінокислотну послідовність, яка містить МН антитіла (наприклад, легкий і/або важкий ланцюг антитіла). В іншому втіленні запропонований один або більше ніж один вектор (наприклад, експресійний вектор), який містить таку нуклеїнову кислоту. В іншому втіленні запропонована клітина-хазяїн, яка містить таку нуклеїнову кислоту. В одному такому втіленні клітина-хазяїн містить (наприклад, була трансформована): (1) вектором, який містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка містить Мі. антитіла, і амінокислотну послідовність, яка містить
МН антитіла, або (2) перший вектор, який містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка містить МІ. антитіла, і другий вектор, який містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка містить МН антитіла. В одному втіленні клітина-хазяїн є еукаріотичною, наприклад, клітиною яєчника китайського хом'яка (СНО) або лімфоїдною клітиною (наприклад, клітиною МО, М5О, 5р20). В одному втіленні запропонований спосіб одержання антитіла до РОЇ, де даний спосіб включає культивування клітини-хазяїна, яка містить нуклеїнову кислоту, кодуючу антитіло, як запропоновано вище, за придатних умов для експресії антитіла и, можливо, виділення антитіла з клітини-хазяїна (або культурального середовища клітини-хазяїна).
Для рекомбінантної продукції антитіла до РОЇ нуклеїнову кислоту, кодуючу антитіло, наприклад, як описано вище, виділяють і вставляють в один або більше ніж один вектор для подальшого клонування і/або експресії в клітині-хазяїні. Таку нуклеїнову кислоту можна легко виділяти і секвенувати з використанням традиційних методик (наприклад, за допомогою застосування олігонуклеотидних зондів, які здатні до специфічного зв'язування з генами, кодуючими важкий і легкий ланцюг антитіла).
Придатні клітини-хазяї для клонування або експресії векторів, кодуючих антитіло, включають прокаріотичні або еукаріотичні клітини, описані в даному документі. Наприклад, антитіла можуть бути продуковані в бактеріях, зокрема, коли не потрібне глікозилювання та ефекторна функція Ес. Відносно експресії фрагментів антитіла і поліпептидів у бактеріях, див.,
Ге) наприклад, 5 5648237, 05 5789199 і 5 5840523. (див. також Спапоп, К.А., Іп: Меїноаз іп
Моїесшіаг Віоіоду, Мої. 248, Го, В.К.С. (ей.), Нитапа Ргев55, Тоїоула, М) (2003), рр. 245-254, що описує експресію фрагментів антитіла в Е. соїї.). Після експресії антитіло може бути виділене з пасти бактеріальних клітин в розчинній фракції і може бути додатково очищене.
Крім прокаріотів, придатними хазяями клонування або експресії для векторів, кодуючих антитіло, є еукаріотичні мікроби, такі як нитчасті грибки або дріжджі, що включають штами грибків і дріжджів, шляхи глікозилювання яких були "гуманізовані", призводячи до продукції антитіла з частково або повністю людською картиною глікозилювання. Див. сСегподго55, Т.О., Маї.
Віотесн. 22 (2004) 1409-1414 1 1, Н. ега!., Маї. Віоїтесі. 24 (2006) 210-215.
Придатні клітини-хазяї для експресії глікозильованого антитіла також походять з багатоклітинних організмів (безхребетних і хребетних). Приклади клітин безхребетних включають клітини рослин і комах. Були ідентифіковані багаточисленні бакуловірусні штами, які можна використовувати у поєднанні з клітинами комах, зокрема, для трансфекції клітин зЗродоріега Ігидірегаа.
Як хазяїв також можна використовувати культури клітин рослин. Див., наприклад, патенти
США Мо 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 і 6417429 (що описують технологію
РІ АМТІВООІЕ5"М для продукування антитіл в трансгенних рослинах).
Як хазяїв також можна використовувати клітини хребетних. Наприклад, можуть бути корисними лінії клітин ссавців, які адаптовані для росту в суспензії. Іншими прикладами корисних ліній клітин-хазяїв ссавців є лінія нирки мавпи СМ1, трансформована 540 (СО5-7); лінія ембріональної нирки людини (293 або клітини 293, як описано, наприклад, в Сгапат, Р... еї а!., У. Сеп Мігої. 36 (1977) 59-74); клітини ембріональної нирки хом'яка (ВНК); мишині клітини сертолі (клітини ТМ4, як описано, наприклад, в Маїйег, 9.Р., Віої. Кергоа. 23 (1980) 243-252); клітини нирки мавпи (СМ); клітини нирки африканської зеленої мартишки (МЕКО-76); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітини нирки собаки (МОСК); клітини печінки сірого щура (ВК. ЗА); клітини легені людини (М/138); клітини печінки людини (Нер 02); клітини пухлини молочної залози миші (ММТ 060562); клітини ТКІ, як описано, наприклад, в МаїНег, У.Р. еї аї.,
Аппаїв М.У. Асад. сі. 383 (1982) 44-68; клітини МЕС 5 і клітини Е54. Інші корисні лінії клітин- хазяїв ссавців включають клітини яєчника китайського хом'яка (СНО), що включають клітини
СНО ОНЕЕ: (негативні за дегідрофолатредуктазою) (ОпПаиб, б. єї аї., Ргос. Маї!. Асад. 5сі. ОБА 77 (1980) 4216-4220), і мієломні лінії клітин, такі як МО, М5О ї 5рг/0. Відносно огляду визначених ліній клітин-хазяїв ссавців, придатних для продукції антитіл, див., наприклад, Маакі, Р. апа УмМи,
А.М., Меїйоадз іп Моїесшіаг Віоіоду, Мої. 248, Го, В.К.С. (єд.), Нитапа Ргез5, Тоїомжа, МУ (2004), рр. 255-268.
В. Аналізи
Запропоновані в даному документі антитіла до РОЇ можуть бути ідентифіковані, піддані скринінгу або охарактеризовані на їх фізичні/хімічні властивості і/або біологічні активності за допомогою різних аналізів, відомих в даній галузі. 1. Аналізи зв'язування та інші аналізи
В одному аспекті антитіло за винаходом тестується на його активність зв'язування антигену, наприклад, відомими способами, такими як ЕГІЗА (твердофазний імуноферментний аналіз), вестерн-блотинг тощо.
В іншому аспекті можна використовувати конкурентні аналізи для ідентифікації антитіла, яке конкурує з РО1-0103 (яке містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:7 і послідовність МІ. ЗЕО ІЮ МО:8) за зв'язування з РОЇ (або, як альтернатива, з гуманізованими варіантами РО1-0103 - антитілами РО1-0103-0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314, РО1-0103-0315 з ідентичними 5-6
НМК). Одним втіленням винаходу є антитіло, яке конкурує за зв'язування з РОЇ людини з антитілом до РОТ, яке містить всі З НМЕ послідовності МН 5ЕО ІО МО:7 і всі 3 НУВ послідовності МІ ЗЕ ІЮ МО:8. Одним втіленням винаходу є антитіло, яке конкурує за зв'язування з РО1 людини з антитілом до РОТ, яке містить всі З НМЕК послідовності МН 5ЕО ІЮ
МО:57 і всі З НМК послідовності МІ 5ЕО ІО МО:58. У деяких втіленнях таке конкуруюче антитіло зв'язується з тим самим епітопом (наприклад, лінійним або конформаційним епітопом), з яким зв'язується антитіло до РОЇ РО1-0103. Докладні типові способи картування епітопа, з яким зв'язується антитіло, наводяться в Мо!ітіб5, .Е. (ей.), Ерйоре Марріпд Ргоїосої5, Іп: Меїпоад5 іп
Моїесшіаг Віоіоду, Мої. 66, Нитапа Ргез5, Тоїомжа, МУ (1996).
В типовому конкурентному аналізі іммобілізований РО1(-ЕСО) інкубується в розчині, який містить перше мічене антитіло, яке зв'язується з РО1 (наприклад, антитіло до РОТ РО1-0103 або гуманізоване антитіло РО1-0103-0312), і друге немічене антитіло, яке тестується на його здатність конкурувати з першим антитілом за зв'язування з РОТ. Друге антитіло може бути присутнім в супернатанті гібридоми. Як контроль іммобілізований РО1 інкубується в розчині, бо який містить перше мічене антитіло, але не друге немічене антитіло. Після інкубування за пермисивних умов для зв'язування першого антитіла з РОЇ видаляється надлишок антитіла, що не зв'язується, і вимірюється кількість мітки, асоційованої з іммобілізованим РОТ. Якщо кількість мітки, асоційованої з іммобілізованим РОТ, суттєво знижується в дослідному зразку відносно контрольного зразка, тоді це вказує на те, що друге антитіло є конкуруючим з першим антитілом за зв'язування з РО1. Див. Нагіом/у, Е. апа І апе, 0., Апіібодіев: А І абогаїогу Мапиаї, Спаргіег 14,
СоіЯй Зргіпд Нагрог ІГарогагу, Сої4 Зргіпд Нагрог, ММ (1988). Відносно другого типового конкурентного аналізу див. Приклад 2 (ЕГІЗА картування епітопів/конкурентний аналіз зв'язування). 2. Аналізи активності
В одному аспекті запропоновані аналізи для ідентифікації антитіл до РОТ, які мають біологічну активність. Біологічна активність може включати, наприклад, здатність до посилення активації і/або проліферації різних імунних клітин, особливо Т-клітин. Наприклад, вони посилюють секрецію імуномодулюючих цитокінів (наприклад, інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма) іМабо фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа)). Іншими імуномодулюючими цитокінами, рівень яких збільшується або може бути збільшений, є, наприклад, 1-12, гранзим В тощо.
Біологічна активність також може включати перехресну реактивність при зв'язуванні з антигенами яванського макака, а також зв'язування з другими типами клітин. Також надаються антитіла, які мають таку біологічну активність іп мімо і/або іп міїго.
У деяких втіленнях антитіло за винаходом тестується на таку біологічну активність, як описано, наприклад, нижче в Прикладах.
Г. Імунокон'югати (тільки рак або модифікація відносно мішені)
Згідно з винаходом також запропоновані імунокон'югати, які містять антитіло до РО, як описано в даному документі, кон'юЮговане з одним або більше ніж одним цитотоксичним агентом, таким як хіміотерапевтичні агенти або лікарські засоби, агенти, інгібуючі ріст, токсини (наприклад, білкові токсини, ферментативно активні токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження, або їх фрагменти) або радіоактивні ізотопи.
В одному втіленні імунокон'югат являє собою кон'югат антитіло-лікарський засіб (АОС), в якому антитіло кон'юговане з одним або більше ніж одним лікарським засобом, що включає майтансиноїд (див. 05 5208020, 05 5416064 і ЕР 0 425 235 В1); ауристатин, такий як
Зо монометильні лікарські групування ауристатину ОЕ і ОЄ (ММАЕ їі ММАБРЕ) (див. О5 5635483, 05 5780588 і 05 7498298); доластатин; каліхеаміцин або його похідне (див. ОЗ 5712374, 05 5714586, 05 5739116, 005 5767285, 05 5770701, 005 5770710, 005 5773001 ї 5 5877296; Ніптап,
Г.М. еї аї., Сапсег Вев. 53 (1993) 3336-3342 і І оде, Н.М. еї аІ.,, Сапсег Рез. 58 (1998) 2925-2928); антрациклін, такий як дауноміцин або доксорубіцин (див. Кгаї, Р. еї аіІ., Сцт. Мед. Снпет. 13 (2006) 477-523; дейНтеу, 5.0. єї а!., Віоогуд. Мед. Спет. І ей. 16 (2006) 358-362; Тогдом, М.У. еї аї.,
Віосопішд. Спет. 16 (2005) 717-721; Маду, А. еї аї., Ргос. Маї!. Асад. 5сі. ОБА 97 (2000) 829-834;
Бибромснік, С.М. еї аї., Віоогд. є Мед. Спет. І еЦегв 12 (2002) 1529-1532; Кіпо, Н.О. еї аї., У. Меа.
Сет. 45 (20029 4336-4343 і патент США Мо 6630579); метотрексат; віндезин; таксан, такий як доцетаксел, паклітаксел, ларотаксел, тезетаксел та ортатаксел; трихотецен і СС1065, але не обмежується ними.
В іншому втіленні імунокон'югат містить антитіло, як описано в даному документі, кон'юговане з ферментативно активним токсином або його фрагментом, що включає ланцюг А дифтерійного токсину, активні фрагменти дифтерійного токсину, що не зв'язуються, ланцюг А екзотоксину (з Рзейдотопах аегидіпоза), ланцюг А рицину, ланцюг А абрину, ланцюг А модексину, альфа-сарцин, білки АїЇІеигіев Тогаї, діантинові білки, білки Рпуїїаса атегісапа (РАРІ, РАРІЇ ї РАР-5), інгібітор Мотогаїса спагапііа, курцин, кротин, інгібітор Заропагіа ойісіпаїї5, гелонін, мітогелін, рестриктоцин, феноміцин, еномфіцин і трикотецени, але що обмежується ними.
В іншому втіленні імунокон'югат містить антитіло, як описано в даному документі, кон'юговане з радіоактивним атомом, з утворенням радіокон'югата. Для одержання радіокон'югатів доступна ціла низка радіоактивних ізотопів. Приклади включають Аг", 1191, | 125, 89 Ве"86 Де!88, Зпт/»з, Віг!2, рзг2, рр" і радіоактивні ізотопи І и. При використанні радіокон'югата для виявлення, він може містити радіоактивний атом для сцинтиграфічних досліджень, наприклад, ТС9т або 123, або спінову мітку для візуалізації за допомогою ядерного магнітного резонансу (ЯМР) (також відомого як магнітно-резонансна томографія), таку як знову-таки йод- 123, йод-131, індій-111, фтор-19, вуглець-13, азот-15, кисень-17, гадоліній, марганець або залізо.
Кон'югати антитіла і цитотоксичного агента можна одержувати з використанням цілої низки біфункціональних агентів зв'язування з білком, таких як /М-сукцинімідил-3-(2- бо піридилтіо)пропіоснат (ЗРОР), сукцинімідил-4-(М-малеїмідометил)-циклогексан-1-карбоксилат
(ЗМСС), імінотіолан (ІТ), біфункціональні похідні імідоефірів (такі як диметиладипімідат НС), активні складні ефіри (такі як дисукцинімідилсуберат), альдегіди (такі як глутаральдегід), біс- азидосполуки (такі як біс-(п-азидобензоїл)гександіамін), похідні біс-діазонію (такі як біс-(п- діазонійбензоїл)-етилендіамін), діїзоціанати (такі як толуол 2,6-діїзоціанат) і біс-активні сполуки фтору (такі як 1,5-дифтор-2,4-динітробензол). Наприклад, імунотоксин рицин може бути одержаний, як описано в Мена, Е.5. еї аІ., Зсієпсе 238 (1987) 1098-1104. Мічена вуглецем-14 1- ізотіоціанатобензил-З-метилдіетилентріамінпентаоцтова кислота (МХ-ОТРА) являє собою типовий хелатуючий агент для кон'югування радіонуклеїду з антитілом. Див. УМО 94/11026.
Лінкер може являти собою "розщеплювальний лінкер"-у що полегшує вивільнення цитотоксичного лікарського засобу в клітині Наприклад, можна використовувати кислотолабільний лінкер, чутливий до пептидази лінкер, фотолабільний лінкер, диметильний лінкер або дисульфідвмісний лінкер (СпПагі, К.М. еї аіІ., Сапсег Вез. 52 (1992) 127-131; патент
США Мо 5208020).
Серед імунокон'югатів або АБС в даному документі прямо розглядаються кон'югати, одержані з використанням реактивів, що поперечно зв'язуються, але не обмежуються ними, які включають ВМР5, ЕМОС5, СМВ5, НВУЗ, І С-5МОС, МВ5, МРВН, 5ВАР, 5ІА, БІАВ, 5МОС, ЗМРВ,
ЗМРН, сульфо-ЕМСОС5, сульфо-СМВ5, сульфо-КМИО5, сульфо-МВ5, сульфо-5ІАВ, сульфо-
ЗМОСС, сульфо-5МРВ і 5М5ЗВ (сукцинімідил-(4-вінілсульфон)бензоат), але не обмежуються ними, які наявні у продажу (наприклад, у Ріегсе Віобтесппо!іоду, Іпс., Коскога, ІС., США).
Д. Способи та композиції для діагностики і виявлення
У деяких втіленнях будь-яке із запропонованих в даному документі антитіл до РОЇ є корисним для виявлення присутності РОЇ в біологічному зразку. Термін "виявлення" в тому вигляді, в якому він використовується в даному документі, охоплює кількісне або якісне виявлення. У деяких втіленнях біологічний зразок містить клітину або тканину, таку як, імунна клітина або інфільтрати Т-клітин.
В одному втіленні запропоноване антитіло до РО1 для застосування у способі діагностики або виявлення. В іншому аспекті запропонований спосіб виявлення присутності РОЇ в біологічному зразку. У деяких втіленнях даний спосіб включає приведення біологічного зразка в контакт з антитілом до РОЇ, як описано в даному документі, за пермисивних умов для зв'язування антитіла до РО! з РО! і виявлення того, чи утворюється комплекс між антитілом до
РО! їі РОТ. Такий спосіб може являти собою спосіб іп міїго або іп мімо. В одному втіленні антитіло до РОТ використовується для відбору суб'єктів, придатних для терапії антитілом до РОЇ, наприклад, де РО1 являє собою біомаркер для відбору пацієнтів.
У деяких втіленнях запропоновані мічені антитіла до РОЇ. Мітки включають мітки або групування, які виявляються безпосередньо (такі як флуоресцентні, хромофорні, елекроннощільні, хемілюмінісцентні та радіоактивні мітки), а також групування, такі як ферменти або ліганди, які виявляються опосередковано, наприклад, через ферментативну реакцію або молекулярну взаємодію, але не обмежуються ними. Типові мітки включають радіоізотопи З2Р, 140, 7125), ЗН іі, флуорофори, такі як хелати рідкоземельних металів або флуоресцеїн та їх похідні, родамін та його похідні, дансил, умбеліферон, люциферази, наприклад, люциферазу світляка і бактеріальну люциферазу (патент США Мо 4737456), люциферин, 2,3- дигідрофталазиндіони, пероксидазу хріну (НКР), лужну фосфатазу, р-галактозидазу, глюкоамілазу, ліоцим, сахаридоксидази, наприклад, глюкозооксидазу, галактозооксидазу і глюкозо-6-фосфатдегідрогеназу, гетероциклічні оксидази, такі як уриказу і ксантиноксидазу, зв'язані з ферментом, який використовує пероксид водню для окиснення попередника барвника, таким як НЕР (пероксидаза хріну), лактопероксидаза або мікропероксидаза, біотин/авідин, спінові мітки, бактеріофагові мітки, стабільні вільні радикали і тому подобне, але не обмежуються ними.
Е. Фармацевтичні препарати
Фармацевтичні препарати антитіла до РОЇ, як описано в даному документі, одержують змішуванням такого антитіла, яке має бажаний ступінь чистоти, з одним або більше ніж одним можливим фармацевтично прийнятним носієм (Ветіпдіоп'5 Рнагтасеційсаї! бсіеєпсев, 161" еайіоп,
О5оОЇ, А. (еа.) (1980)), у формі ліофілізованих препаратів або водних розчинів. Фармацевтично прийнятні носії звичайно є нетоксичними для реципієнтів у застосовуваних дозуваннях і концентраціях і включають: буфери, такі як фосфатний, цитратний і на основі інших органічних кислот; антиоксиданти, що включають аскорбінову кислоту і метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламонію хлорид; гексаметонію хлорид; бензалконію хлорид; бензетонію хлорид; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкілларабени, такі як метил- або пропілпарабен; катехин; резорцин; циклогексанол; З-пентанол і м-крезол); низькомолекулярні 60 (менше, ніж приблизно 10 залишків) поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полі(вінілпіролідон); амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші вуглеводи, що включають глюкозу, манозу або декстрини; хелатори, такі як ЕОТА (етилендіамінтетраоцтова кислота); цукри, такі як цукроза, маніт, трегалоза або сорбіт; солеутворюючі протиїони, такі як натрій; комплекси металів (наприклад, комплекси 7п-білок); і/або неіонні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (РЕС), але не обмежуються ними. Типові фармацевтично прийнятні носії в даному документі додатково включають агенти для диспергування лікарського засобу в кишечнику, такі як розчинні нейтрально-активні гіалуронідазні глікопротеїни (5НАБЕОР), наприклад, людські розчинні гіалуронідазні глікопротеїни РН-20, такі як гпшРН2гО (НМ ЕМЕХ-, Вахіег ІпіегпайіопаїЇ, Іпс.). Деякі типові 5«НАБЕСР та способи застосування, включаючи гпиРН2О, описуються в публікаціях патентів
США Мо 2005/0260186 і 2006/0104968. В одному аспекті ЗНАБЕОР поєднується з одною або більше ніж одною додатковою глікозаміногліканазою, такою як хондроїтиназа.
Типові ліофілізовані препарати антитіл описуються в патенті США Мо 6267958. Водні препарати антитіл включають препарати, описані в патенті США Мо 6171586 і УМО 2006/044908, причому останні препарати включають гістидин-ацетатний буфер.
Описаний в даному документі препарат також може містити більше, ніж один активний інгредієнт, необхідний для конкретного показання, яке лікують, переважно інгредієнти із взаємодоповнюючими активностями, які не чинять шкідливого впливу один на одного. Такі активні інгредієнти, придатним чином, присутні в комбінації в кількостях, які є ефективними для наміченої цілі.
Активні інгредієнти можуть бути захоплені в мікрокапсули, одержані, наприклад, методиками коацервації або за допомогою полімеризації на межі розділу фаз, наприклад, в гідроксиметилцелюлозні або желатинові мікрокапсули і в полі-(метилметакрилатні) мікрокапсули відповідно, в колоїдні системи доставки лікарського засобу (наприклад, ліпосоми, альбумінові мікросфери, мікроемульсії, наночастинки і нанокапсули) або в макроемульсії. Такі методики розкриті в Ветіпдіоп'є Рнагтасеціїса! бсієпсев, 16!" веайоп, Оз5ої, А. (єа.) (1980).
Можуть бути одержані препарати з уповільненим вивільненням. Придатні приклади препаратів з уповільненим вивільненням включають напівпроникні матриці з твердих гідрофобних полімерів, які містять антитіло, які знаходяться у вигляді формованих предметів, наприклад, плівок або мікрокапсул.
Препарати, що підлягають застосуванню для введення іп мімо, звичайно є стерильними.
Стерильність може легко досягатися, наприклад, за допомогою фільтрування через мембрани для стерилізуючого фільтрування.
Ж. Терапевтичні способи та композиції
Будь-яке із запропонованих в даному документі антитіл до РО1 (або антигензв'язуючі білки) можна використовувати у терапевтичних способах.
В одному аспекті запропоноване антитіло до РО1 для застосування як лікарський засіб. В других аспектах запропоноване антитіло до РОЇ для застосування в лікуванні раку. У деяких втіленнях запропоноване антитіло до РОЇ для застосування у способі лікування. У деяких втіленнях згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОЇ для застосування у способі лікування індивіда, який має рак, що включає введення даному індивіду ефективної кількості антитіла до РОЇ.
В інших втіленнях згідно з винаходом запропоноване антитіло до РО1 для застосування як імуностимулюючого агента або стимулюючого секрецію інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма). У деяких втіленнях згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОЇ для застосування у способі імуностимулювання або стимулювання секреції інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма) у індивіда, що включає введення даному індивіду ефективної кількості антитіла до РОТ для імуностимулювання або стимулювання секреції інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма).
В інших втіленнях згідно з винаходом запропоноване антитіло до РО1 для застосування як імуностимулюючого агента або стимулюючого секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа). У деяких втіленнях згідно з винаходом запропоноване антитіло до РОТ для застосування у способі імуностимулювання або стимулювання секреції фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) у індивіда, що включає введення даному індивіду ефективної кількості антитіла до РОТ для імуностимулювання або стимулювання секреції фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа). "Індивід" згідно з будь-яким з наведених вище втілень переважно являє собою людину. В іншому аспекті згідно з винаходом запропоноване застосування антитіла до РОЇ в приготуванні або одержанні лікарського засобу. В одному втіленні даний лікарський засіб призначений для бо лікування раку. В іншому втіленні лікарський засіб призначений для застосування у способі лікування раку, що включає введення індивіду, що має рак, ефективного кількості лікарського засобу. В іншому втіленні лікарський засіб призначений для індукування клітинно- опосередкованого лізису ракових клітин. В іншому втіленні лікарський засіб призначений для застосування у способі індукування клітинно-опосередкованого лізису ракових клітин у індивіда, який страждає на рак, що включає введення даному індивіду ефективного кількості лікарського засобу для індукції апоптоза в раковій клітині або для інгібування проліферації ракових клітин. "Індивід" згідно з будь-яким з наведених вище втілень може являти собою людину.
В іншому аспекті згідно з винаходом запропонований спосіб лікування раку. В одному втіленні даний спосіб включає введення індивіда, що має рак, ефективної кількості антитіла до
РОТ. "Індивід" згідно з будь-яким з наведених вище втілень може являти собою людину.
В іншому аспекті згідно з винаходом запропонований спосіб індукування клітинно- опосередкованого лізису ракових клітин у індивіда, який страждає на рак. В одному втіленні даний спосіб включає введення індивіду ефективної кількості антитіла до РО1 для індукування клітинно-опосередкованого лізису ракових клітин у індивіда, який страждає на рак. В одному втіленні "індивід" являє собою людину.
В іншому аспекті згідно з винаходом запропоновані фармацевтичні препарати, які містять будь-яке із запропонованих в даному документі антитіл до РО1, наприклад, для застосування в будь-якому з наведених вище терапевтичних способів. В одному втіленні фармацевтичний препарат містить будь-яке з запропонованих в даному документі антитіл до РО1 і фармацевтично прийнятний носій.
Антитіло за винаходом (і будь-який додатковий терапевтичний агент) може вводиться будь- якими придатними способами, що включають парентеральне, внутрішньолегеневе та інтраназальне введення і, якщо це бажано для місцевого лікування, - введення в ділянку ураження. Парентеральні інфузії включають внутрішньом'язове, внутрішньовенне, внутрішньоартеріальне, внутрішньочеревне або підшкірне введення. Дозування може здійснюватися будь-яким придатним шляхом, наприклад, за допомогою ін'єкцій, таких як внутрішньовенні або підшкірні ін'єкції, частково залежно від того, чи є введення краткочасним або хронічним. У даному документі розглядаються різні схеми дозування, що включають однократні або багатократні введення протягом різних моментів часу, болюсне введення та
Зо імпульсну інфузію, що але не обмежуються ними.
Антитіла за винаходом були б приготовані, дозовані та введені способом, що узгоджується з належною медичною практикою. У даному контексті фактори для розгляду включають конкретний розлад, який лікують, конкретного ссавця, якого лікують, клінічний стан індивідуального пацієнта, причину розладу, місце доставки агента, спосіб введення, схему введення та інші фактори, відомі практикуючим лікарям. Антитіло не обов'язково повинне, але можливо приготоване з одним або більше ніж одним агентом, що використовується в цей час для попередження або лікування розладу, що розглядається. Ефективна кількість таких інших агентів залежить від кількості антитіла, присутнього в препараті, типу розладу або лікування та інших факторів, що обговорювалися вище. Вони звичайно використовуються в таких самих дозуваннях і з використанням таких самих шляхів введення, які описані в даному документі, або приблизно від 1 до 99 95 від дозувань, описаних в даному документі, або в будь-якому дозуванні і за допомогою будь-якого шляху, який емпірично/клінічно визначений як придатний.
Для попередження або лікування захворювання придатне дозування антитіла за винаходом (при застосуванні його одного або в комбінації з одним або більше ніж одним другим додатковим терапевтичним агентом) буде залежати від типа захворювання, що підлягає лікуванню, типу антитіла, тяжкості і протікання захворювання, того, чи вводиться антитіло для попереджувальних або терапевтичних цілей, попередньої терапії, клінічної історії і відповіді на антитіло пацієнта, і рішення лікуючого лікаря. Антитіло придатним чином вводиться пацієнту за один раз або протягом серії обробок. Залежно від типу і тяжкості захворювання, вихідним дозуванням-кандидатом для введення пацієнту може бути приблизно від 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, 0,5 мг/кг - 10 мг/кг) антитіла, незалежно від того, наприклад, чи здійснюється воно одним або більше ніж одним роздільним введенням або за допомогою безперервної інфузії.
Одне типове добове дозування може варіювати від приблизно 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше, залежно від факторів, зазначених вище. Для повторних введень протягом декількох діб або довше, залежно від стану, лікування звичайно підтримувалося б до бажаної появи приглушення симптомів захворювання. Одне типове дозування антитіла знаходилося б в інтервалі від приблизно 0,05 мг/кг до приблизно 10 мг/кг. Таким чином, пацієнту могла б вводиться одна або більше ніж одна доза приблизно 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг або 10 мг/кг (або будь-яка їх комбінація). Такі дози можуть вводитися періодично, наприклад, кожний тиждень або кожні три 60 тижні (наприклад, таким чином, що пацієнт одержує від приблизно двох до приблизно двадцяти,
або, наприклад, приблизно шість доз антитіла). Може вводитися вихідна більш висока завантажувальна доза, з наступними одною або більше ніж одною меншими дозами. Типова схема дозування включає введення вихідної завантажувальної дози приблизно 4 мг/кг, з наступною щотижневою підтримуючою дозою приблизно 2 мг/кг антитіла. Однак можуть бути корисними інші схеми дозування. Прогрес даної терапії легко відстежується традиційними методиками і аналізами.
Зрозуміло, що будь-які з наведених вище препаратів або терапевтичних способів можуть здійснюватися з використанням імунокон'югата за винаходом замість або крім антитіла до РОТ.
Зрозуміло, що будь-які з наведених вище препаратів або терапевтичних способів можуть здійснюватися з використанням імунокон'югата за винаходом замість або крім антитіла до РО.
ІІ. Вироби
В іншому аспекті винаходу запропонований виріб, що містить речовини, корисні для лікування, попередження і/або діагностики описаних вище розладів. Виріб містить контейнер та етикетку або аркуш-вкладку в упаковці на або асоційовані з контейнером. Придатні контейнери включають, наприклад, пляшки, флакони, шприці, мішки з в.в. (внутрішньовенний) розчином тощо. Контейнери можуть бути зроблені з цілої низки матеріалів, таких як скло або пластмаса.
Контейнер містить композицію, яка сама або в комбінації з іншою композицією є ефективною для лікування, попередження і/або діагностики стану, і може мати стерильний порт доступу (наприклад, контейнер може являти собою мішок для внутрішньовенного розчину або флакон, що має пробку, яка піддається проколюванню підшкірною ін'єкційною голкою). Щонайменше один активний агент в композиції являє собою антитіло за винаходом. На етикетці або аркуші- вкладці в упаковці вказано те, що композиція використовується для лікування вибраного стану.
Крім того, виріб може містити (а) перший контейнер з композицією, яка міститься в ньому, де дана композиція містить антитіло за винаходом; і (б) другий контейнер з композицією, яка міститься в ньому, де дана композиція містить додатковий цитотоксичний або інший терапевтичний агент. Виріб у даному втіленні винаходу може додатково містити аркуш-вкладку в упаковці, на якому вказано те, що композиції можуть бути використані для лікування конкретного стану. Альтернативно або додатково, виріб може додатково містити другий (або третій) контейнер, який містить фармацевтично прийнятний буфер, такий як бактеріостатична
Зо вода для ін'єкції (ВУМЕІ), фосфатно-сольовий буферний розчин, розчин Рінгера і розчин декстрози. Він може додатково включати інші матеріали, бажані з комерційної або користувацької точки зору, що включають інші буфери, розріджувачі, фільтри, голки та шприці.
Зрозуміло, що будь-який з наведених вище виробів може включати імунокон'югат за винаходом замість або крім антитіла до РО.
Опис амінокислотних послідовностей
ЗЕО ІО МО: 1 НУВ-НІ1 важкого ланцюга, РО1-0103
ЗЕО ІО МО: 2 НУВ-Н2 важкого ланцюга, РО1-0103
ЗЕО ІЮ МО: З НУВ-НЗ важкого ланцюга, РО1-0103
ЗЕО І МО: 4 НМУВ-11 легкого ланцюга, РО1-0103
ЗЕО І МО: 5 НУВ-12 легкого ланцюга, РО1-0103
ЗЕО І МО: 6 НУВ-ІЗ легкого ланцюга, РО1-0103
ЗЕО ІЮ МО: 7 варіабельний домен МН важкого ланцюга, РО1-0103
ЗЕО ІЮ МО: 8 варіабельний домен Мі. легкого ланцюга, РО1-0103
ЗЕО ІО МО: 9 НУВ-НІ1 важкого ланцюга, РО1-0098
ЗЕО ІО МО: 10 НУВ-Н2 важкого ланцюга, РО1-0098
ЗЕО ОО МО: 11 НУВ-НЗ важкого ланцюга, РО1-0098
ЗЕО ІО МО: 12 НМВ-11 легкого ланцюга, РО1-0098
ЗЕО ІО МО: 13 НУВ-12 легкого ланцюга, РО1-0098
ЗЕО ІО МО: 14 НМУВ-І3 легкого ланцюга, РО1-0098
БО ЗЕО ІЮ МО: 15 варіабельний домен УН важкого ланцюга, РО1-0098
ЗЕО ІЮ МО: 16 варіабельний домен М. легкого ланцюга, РО1-0098
ЗЕО ІО МО: 17 НУВ-НІ1 важкого ланцюга, РО1-0050
ЗЕО ІО МО: 18 НУВ-Н2 важкого ланцюга, РО1-0050
ЗЕО ІО МО: 19 НУВ-НЗ важкого ланцюга, РО1-0050
ЗЕО ІО МО: 20 НМВ-11 легкого ланцюга, РО1-0050
ЗЕО ІО МО: 21 НУВ-12 легкого ланцюга, РО1-0050
ЗЕО ІО МО: 22 НМУВ-І3 легкого ланцюга, РО1-0050
ЗЕО ІЮ МО: 23 варіабельний домен УН важкого ланцюга, РО1-0050
ЗЕО ІЮ МО: 24 варіабельний домен МІ. легкого ланцюга, РО1-0050 бо ЗЕО ІО МО: 25 НУВ-НІ1 важкого ланцюга, РО1-0069
ЗЕО ІО МО: 26 НУВ-Н2 важкого ланцюга, РО1-0069
ЗЕО ІО МО: 27 НУВ-НЗ важкого ланцюга, РО1-0069
ЗЕО ІЮО МО: 28 НМУВ-11 легкого ланцюга, РО1-0069
ЗЕО ІЮО МО: 29 НУВ-12 легкого ланцюга, РО1-0069
ЗЕО ІЮО МО: 30 НУВ-ІЇ3 легкого ланцюга, РО1-0069
ЗЕО ІЮ МО: 31 варіабельний домен УН важкого ланцюга, РО1-0069
ЗЕО ІЮ МО: 32 варіабельний домен МІ. легкого ланцюга, РО1-0069
ЗЕО ІО МО: 33 НУВ-НІ1 важкого ланцюга, РО1-0073
ЗЕО ІО МО: 34 НУВ-Н2 важкого ланцюга, РО1-0073
ЗЕО ІО МО: 35 НУВ-НЗ важкого ланцюга, РО1-0073
ЗЕО ІО МО: 36 НМУВ-11 легкого ланцюга, РО1-0073
ЗЕО ІЮО МО: 37 НУВ-12 легкого ланцюга, РО1-0073
ЗЕО ІЮО МО: 38 НУВ-І3 легкого ланцюга, РО1-0073
ЗЕО ІЮ МО: 39 варіабельний домен УН важкого ланцюга, РО1-0073
ЗЕО ІЮ МО: 40 варіабельний домен МІ. легкого ланцюга, РО1-0073
ЗЕО ІО МО: 41 НУВ-НІ1 важкого ланцюга, РО1-0078
ЗЕО ІО МО: 42 НУВ-Н2 важкого ланцюга, РО1-0078
ЗЕО ІЮО МО: 43 НУВ-НЗ важкого ланцюга, РО1-0078
ЗЕО ІО МО: 44 НУВ-11 легкого ланцюга, РО1-0078
ЗЕО І МО: 45 НУВ-1І2 легкого ланцюга, РО1-0078
ЗЕО ІЮО МО: 46 НУВ-І3 легкого ланцюга, РО1-0078
ЗЕО ІЮ МО: 47 варіабельний домен УН важкого ланцюга, РО1-0078
ЗЕО ІЮ МО: 48 варіабельний домен МІ. легкого ланцюга, РО1-0078
ЗЕО ІО МО: 49 НУВ-НІ1 важкого ланцюга, РО1-0102
ЗЕО ІО МО: 50 НУВ-Н2 важкого ланцюга, РО1-0102
ЗЕО ІО МО: 51 НУВ-НЗ важкого ланцюга, РО1-0102
ЗЕО ІО МО: 52 НМВ-11 легкого ланцюга, РО1-0102
ЗЕО ІО МО: 53 НУВ-12 легкого ланцюга, РО1-0102
ЗЕО ІО МО: 54 НУВ-І3 легкого ланцюга, РО1-0102
ЗЕО ІЮ МО: 55 варіабельний домен УН важкого ланцюга, РО1-0102
ЗЕО ІЮ МО: 56 варіабельний домен МІ. легкого ланцюга, РО1-0102
ЗЕО ІЮ МО: 57 гуманізований варіант - варіабельний домен МН важкого ланцюга РО1- 0103 01
ЗЕБЕО І МО: 58 гуманізований варіант - варіабельний домен МІ легкого ланцюга РО1- 0103 01
ЗЕБЕО ІЮО МО: 59 гуманізований варіант - варіабельний домен МІ легкого ланцюга РО1- 0103 02
ЗЕБЕО ІЮО МО: 60 гуманізований варіант - варіабельний домен МІ легкого ланцюга РО1- 0103 03
ЗЕБЕО ІЮО МО: 61 гуманізований варіант - варіабельний домен МІ легкого ланцюга РО1- 0103 04
ЗЕО ІЮО МО: 62 константна ділянка людського легкого ланцюга каппа
ЗЕО ІЮ МО: 63 константна ділянка людського легкого ланцюга лямбда
ЗЕО ІЮ МО: 64 константна ділянка людського важкого ланцюга, що походить з Їдо1
ЗБО І МО: 65 константна ділянка людського важкого ланцюга, що походить з ІдДС1 з мутаціями І 234А і І235А
ЗБЕО Ір МО: 66 константна ділянка людського важкого ланцюга, що походить з ІдДС1 з мутаціями 1 2344А, І 235А і РЗ29О
ЗЕО ІЮ МО: 67 константна ділянка людського важкого ланцюга, що походить з Їд4
ЗЕО ІЮ МО: 68 типова послідовність людського РОТ (без сигнальної послідовності)
ЗЕО ІЮ МО: 69 позаклітинний домен людського РОТ (ЕС)
ЗЕО ІЮ МО: 70 типова послідовність людського РО1 (що включає сигнальну послідовність)
ЗБОЮ МО: 71: мінімальна НМК1Т РО1-0103 і гуманізованого варіанта РО1-0103-РО1-0103- 0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 і РО1-0103-0315
ЗБОЮ МО: 72: мінімальна НМК2 РО1-0103 і гуманізованого варіанта РО1-0103-РО1-0103- 0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 і РО1-0103-0315
ЗБОЮ МО: 73: мінімальна НМАКЗ РО1-0103 і гуманізованого варіанта РО1-0103-РО1-0103- 0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 і РО1-0103-0315
ЗБЕО ІЮ МО: 74: мінімальна ГМК1 РО1-0103 і гуманізованого варіанта РО1-0103-РО1-0103- бо 0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 і РО1-0103-0315
ЗБЕО ІЮ МО: 75: мінімальна ГМК2 РО1-0103 і гуманізованого варіанта РО1-0103-РО1-0103- 0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 ії РО1-0103-0315
ЗБЕО ІЮ МО: 76: мінімальна ГУМКЗ РО1-0103 і гуманізованого варіанта РО1-0103-РО1-0103- 0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 ії РО1-0103-0315
ЗБО ІЮО МО: 77: фрагмент ЕК-НЗ, який містить амінокислотну послідовність КОМ в положеннях 71, 72, 73 згідно з нумерацією Кабаї
Далі перелічені наступні амінокислотні послідовності доменів МН і Мі, що включають відмічені НМК (НМК показані жирними підкресленими літерами), антитіл до РОТ РО1-0016 (і його гуманізованих версій РО1-0103-0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 ії РО1-0103-0315),
РО1-0098, РО1-0050, РО1-0069, РО1-0073, РО1-0078 ії РО1-0102:
Антитіло до РО1 РО1-0103:
МН РО1-0103:
ЕМІ МЕЗОСИЇ УКРОСБІ КІ БСААЗОЕЗЕЗЗУ ТМОМУУВОТРЕКВІ ОМ/МАТІЗаавВріУРОБМ
КавеЕтТІЗВОМАКМТІ МІ ЕМ55І МБЕОТАГ УС і ТавВУМЕАСОоБУСОСТОУТУБ
МІ РО1-0103:
КІМГТОЗРАБІ РИБІ СТВАТІЗСААЗЕЗМОТЗОМЗЕІНУМООВРООБРКІ ІМАЗЗТІ ЕБИаМРАВЕ зававАтТОг т ТтІОРУМЕАООМАТУУСООММОУРУТРаСсаИткі ЕІК
Версії гуманізованого антитіла до РОТ РО1-0103: РОТ1-0103-0312, РО1-0103-0313, РО1-0103- 0314 ії РО1-0103-0315:
МН РО1-0103-0312-МН РО1-0103-0313-МН РО1-0103-0314-МН РО1-0103-0315:
ЕМО ГЕЗСОСИІ МОРОСБІ ВІ БСААЗОЕЗЕЗЗУ ТМОМ/УВОАРОКаИЇ ЕМУМАТІЗСааВрІММРОБ
УКОаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМУМСМІ І ТаВУМЕАСОоБМУСОСТІ МТУ
МІ РО1-0103-0312:
РІММТО5РОБІ АУБІ ЧЕВАТІМСКАЗЕЗМОТ5ОМЗЕІНУ МООКРООЗРКІ ПУВЗЗТІ ЕЗОУРОВЕ зававзаторЕТІ ТЗІ оДАЕРЄМАУУУСООММОУРУТРаОСТКМЕїК
МІ РО1-0103-0313:
ОМУМТО5РІ 5І РМТІ аЧ а;яОРАБІЗСВАЗБЕЗМОТЗОМЗЕІНМУ ХОСАРООБРНАЇ ПІМАЗЗТІ ЕБОМРОВ
ЕзазавзатТоОЕТтІКкІЗАМЕАЕОМЕОУУУСООММОУРМТРаОСТКМЕК
МІ РО1-0103-0314:
Коо) ЕІМГТО5РАТІ 5І 5РЕЕВАТІ БСВАЗБЕЗМОТЗОМЗЕІНМУ МООКРООБРАЦІ ІМАЗЗТІ ЕЗИІРАВНЕ зававзаторЕТтІТІ55і ЕРЕОЕАМУУСООММОУРМТЕСОСТКМУБІК
МІ РО1-0103-0315:
ЕІММГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАЗЕЗМОТЗОМ5ЕІНУУООКРИОБРА ІМА5З5ТІ ЕБСИІРАВЕ зававзаторЕТтІТІ55і ЕРЕОЕАМУУСООММОУРМТЕСОСТКМУБІК
Антитіло до РОТ РО1-0098:
МН РО1-0098:
РМОГОЕБаРИОЇ МКРБОБІ БІ ТСТУТауУБІТ5ОМАММУМІВОЕРООКІ ЕМ СМІТ У5агєТМУМРБІК
ЗВІБІЗАОТЗКМОЕН ОЇ МЗМАТЕОТАТУУСАВМ НаОЗАРММЕО УМ СВИСТ ТУ
МІ РО1-0098:
ОМ МТОТРІ Б РИБІ арОАБІЗСАЗБОМІУНЗОВаТмтмІ ЕМ ОКРИОЗРМИІМКУМЗААЕБаМРО вЕЗаЗзИаБзИаТОЕТІКІЗАМЕАЕОІ УМ СРЕОаЗНЕРІ-ТЕСАСТКІ ЕІ К ун: 0050
РМОГОЕБаРИОЇ МКРБОБІ БІ ТСТУТауБІТ5ОМАМММІВОЕРОМКІ ЕУМСаМІТУТавтУМРБІ.
КОЗВІБІТАВОТЗКМО ЕР ОЇ М5М ТТЕОТАТУИУСАВЕМОУ УСТ ОУМУСОСТТІ ТУ
М: 0050
КІМ ТО5РАБІ АУМ5І ВОВАТІЗСВАЗЕЗМОВУОаМЗЕІНУМООКРООРРКМ ІМВАЗМІ ЕБСЕРАВЕ зававАтТОг ТІ ТІОРУЕАОРААТУУСООММЕОРУТРаЗИткі ЕК
УНН: 0069
ОМОГ ФОБаРЕЇМАРОУБУКІЗСКИЗаМТЕТОМАМНУ/УКОЗНАВТІ ЕМ МІЗТУВИаЮТтТМУМОКе
КОКАТМТМОК5ЗЗОТАМІ ЕІ АВМТЗЕОЗАІМУСАВІ СІТТОаЕАУМУС,ОСТІ МТУБА
У: 0069
РІМТОЗРАБІ АМ5І а ОВАТІЗСВАЗКаМУ5Т55УЗЕМНУ ХУООКРАВОРРКИ ІКМАЗМІ ЕБОМРАН
ЕЗзаБаБаТОЕтТІМІНРУЕЕЕВААТУМОННЗВЕЕРМ/ТРССИТтКІ БІК
УН: 0073
ЕУКІ МЕЗСОССОИЇ МКРОСБІ КІ БЗСААЗСЕТЕЗМУ СМЗУЛАВОТРЕКИаЇ ЕУ/МАТІЗГССЯВОТУМРОБМ кКавеЕтІЗВОМУКММІ М ОМ55І АЗЕОТАРУУСАЗУУ Ма УМУСОСТОУТУБо
МУ: 0073
ВІММТОРНКЕМ5ТЗУСОВУВІТСКАБЗБОВУТТАМАМ МООКРООЗРКІ ПУМАЗТАНТОаУРОВЕТОа
ЗазатЕНЕТІ ТІЗЗМОАЕОІ А УМСООНУЗІРМ ТРИ, СсИткі ЕК 60 ун: 0078
ОМОГ ООРОАЕЇ МКРОАЗУКМОЗСКАБЗаМУТЕТЗ ТУ МНУУКОА РОСТІ ЕМІСАІЮРЗОБУТТУМОК
ЕКОКАТІ ТМОТ5ЗТТАУМОЇ 551 Т5ЕОБАУУУСТАЗРЕО УМ СОСТТІ ТУ
МІ: 0078
РІММТОЗНКЕМЗТЗМарАМБІТСКАБОВУЗТАМАММООКРООБРКІ ПУЗАЗУВУТаМРОВЕТа
ЗабБатТОЕтТЕАІЗ5МОАЕОІЇ АУУУСООНУЗНРЕТЕРО5ИТКІ БІК ун: 0102
РМОГОЕБаРОЇУМКРЗОБІ Б ТОТУТтауУЗПТЗахуБУуНУМАвОгРОМКГЕММаИвРІНЗВЗаОЮТтТМУМРБІ.
КО5АІЗЕТАОТ5ОКМОЕН ОЇ 551 ТОЕОТАТУУСАТУВМММЕО УМ СОХСТТУТУ55
М: 0102
РІММТО5РБОБІ ТМТАСЕКУТМАСКОБІІМЗатОокмМмУІ ТУМООКРООРРКІ ПУМАЗТВЕБОМ
РМАВЕТавзаватТОвТІ ТІЗВМОАЕОІ 5МУМСОБОМТЕРІ. ТЕС СИТКІ ЕІ К
Далі перелічені конкретні втілення винаходу: 1. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РОЇ, де дане антитіло зв'язується з (центральним) цукровим ланцюгом на Азп58 глікозильованого людського РОТ 5ЕО ІЮО МО: 70, який є глікозильованим на Азп58. 2. Антитіло за п. 1, де дане антитіло додатково зв'язується з одною або більше ніж одною амінокислотою в положеннях 60-64, 68, 78-84, 126-134 людського РО1. 3. Антитіло за будь-яким з пп. 1 або 2, де дане антитіло зв'язується його важким ланцюгом з цукровим ланцюгом на Азп58. 4. Антитіло за будь-яким з пп. 2-3, де дане антитіло зв'язується з одною або більше ніж одною амінокислотою в положеннях 61, 62, 64, 83, 126, 128, 132, 134 людського РО1. 5. Антитіло за будь-яким з пп. 2-3, де дане антитіло зв'язується з амінокислотами положень 61, 62, 64, 83, 126, 128, 132, 134 людського РО1. 6. Антитіло за будь-яким з пп. 2-3, де дане антитіло зв'язується з амінокислотами положень 60, 61, 62, 63, 64, 68, 78, 82, 83, 84, 126, 127, 128, 130, 131, 132, 133, 134 людського РО. 7. Антитіло за будь-яким з пп. 1-6, де дане антитіло зв'язується з людським РОЇ, на якому антитіло зв'язується з першим і другим сСіМас, РОС, ВМА і МАМ в межах (центрального) цукрового ланцюга Авбтп58 глікозильованого людського РОЇ 5ЕО ІЮ МО: 70, який є глікозильованим на Азп58. 8. Антитіло за будь-яким з пп. 1-7, де дане антитіло демонструє знижене зв'язування з людським РОТ 5ЕО ІО МО: 70, який не є глікозильованим на Азп58, у порівнянні із зв'язуванням з людським РОТ, який є глікозильованим на Ахп58. 9. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло містить: (а) НУВ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:71; (6) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО І1О МО:72; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:73; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:74; (д) НМК-І2, яка містить амінокислотну послідовність 56 ІЮ МО:75; (є) НМК-І3, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:76, і (ж) ЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:77 (КОМ) в положеннях 71, 72 і 73 згідно з нумерацією Карбаї. 10. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РОЇ за п. 9, де дане антитіло
А) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:7 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:8; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або Б) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:58; і) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮО МО:59; ії) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:60; ім) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:61.
Далі перелічені конкретні втілення винаходу: 1. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло містить:
А) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:1; (6) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:2; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:3; (г) НМК-11, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО:4; (д) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:5; і (е) НМК-І З, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:6; або
Б) (а) НМЕА-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:9; (б) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІЮ МО:10; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮО МО:11; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮО МО:12; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:13; ї (ее) НМА-ІЗ, яка містить 60 амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:14; або
В) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:17; (б) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:18; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:19; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:20; (д) НМЕК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:21; ї (е) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:22; або
Г) (а) НМА-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:25; (б) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:26; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:27; (г) НМА-11, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:28; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО:29; і (е) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:30; або
Д) (а) НУВ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:33; (б) НМЕК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:34; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:35; (г) НМЕА-11, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:36; (д) НМЕК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:37; і (є) НМА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮ МО:38; або
Е) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:41; (б) НМЕ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:42; (в) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮО МО:43; (г) НМА-11, яка містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:44; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:45; і (е) НМК-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:46; або
Ж) (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:49; (б) НМЕК-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІЮ МО:50; (в) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮО МО:51; (г) НМА-1І1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО:52; (д) НМАК-12, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:53; ії (е) НМЕА-ІЗ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:54. 2. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РОЇ, де дане антитіло містить:
А) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ
МО-1, (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:2, ії (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮО МО:3, ї (б) домен МІ, який містить (Її)
Ко) НМУВ-І1, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:4, (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:5, і (ії) НМА-І З, яка містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:6; або
Б) (а) домен МН, який містить (ї) НУВ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ
МО:9, (ії) НМВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО':10, і (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:11, і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:12, (і) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:13, і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:14; або
В) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:17, (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО':18, і (ії) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:19, і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І1, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:20, (ії) НМВ-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:21, і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:22; або
Г) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:25, (ії) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:26, і (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:27, і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:28, (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:29, і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну
БО послідовність ФЕО ІЮ МО:30; або
Д) (а) домен МН, який містить (їі) НМЕ-НТІ, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ
МО:33, (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:34, і (ії) НМЕ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:35, і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:36, (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО:37, і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:38; або
Е) (а) домен МН, який містить (ї) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ
МО:41, (її) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:42, і (ії) НУВ-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:43, і (б) домен МІ, який містить (Її) 60 НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:44, (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:45, і (ії) НМК-ІЇЗ3, яка містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:46; або
Ж) (а) домен МН, який містить (ії) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ
МО:49, (ії) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:50, і (ії) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:51, і (б) домен МІ, який містить (Її)
НМУВ-І/1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:52, (ії) НМК-12, яка містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:53, і (ії) НМК-ІЇЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:54. 3. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло
А) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:7 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:8; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або Б) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ ЗЕО І МО:58; і) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮО МО:59; ії) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:60; ім) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:61; або В) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:15 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:16; ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї); або Г) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:23 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:24; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або Д) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:31 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:32; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або Е) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:39 і послідовність МІ 5ЕО ІО МО :40; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її);
Зо або Ж) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:47 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:48; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або 3) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:55 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:56; ї) або гуманізований варіант МН і Мі антитіла згідно з ї). 4. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РОЇ, де дане антитіло ї) містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:7 і послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:8; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її). 5. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РО1, де дане антитіло містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:58. б. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РОЇ, де дане антитіло містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:59. 7. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РО1, де дане антитіло містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:60. 8. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РО1, де дане антитіло містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:61. 9. Антитіло до РО1 за будь-яким з втілень 1-8, де дане антитіло характеризується незалежно однією або більше ніж однією з наступних властивостей: антитіло до РОЇ ї) конкурує за зв'язування з РО-1 з антитілом до РОТ, яке містить МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО:7 і МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО:8, і/або її) зв'язується з РО-1 людини і яванського макака; і/або ії) посилює секрецію інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма) алогенними стимульованими Т- клітинами на 85 95 або більше при концентрації антитіла 10 мкг/мл; і/або їм) посилює секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) алогенними стимульованими Т-клітинами на 200 95 або більше при концентрації антитіла 10 мкг/мл. 10. Виділене антитіло, яке зв'язується з РОТ, де дане антитіло посилює секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) алогенними стимульованими Т-клітинами на 200 95 або більше (в одному переважному втіленні на 250 95 або більше) при концентрації антитіла 10 бо мкг/мл в аналізі реакції змішаної культури лімфоцитів (МІК).
11. Виділене антитіло, яке зв'язується з РОЇ, де дане антитіло посилює секрецію інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма) алогенними стимульованими Т-клітинами на 85 95 або більше (в одному переважному втіленні на 90 95 або більше, в одному переважному втіленні на 95 95 або більше) при концентрації антитіла 10 мкг/мл в аналізі реакції змішаної культури лімфоцитів (МІ В). 12. Виділене антитіло, яке зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло: ї) конкурує за зв'язування з РО-1 з антитілом до РОТ, яке містить МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО:7 і МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО:8, і/або ії) зв'язується з РО-1 людини і яванського макака; і ії) посилює секрецію інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма) алогенними стимульованими Т- клітинами на 85 95 або більше при концентрації антитіла 10 мкг/мл; і/або ім) посилює секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) алогенними стимульованими Т-клітинами на 200 95 або більше при концентрації антитіла 10 мкг/мл. 13. Антитіло за будь-яким з втілень 1-12, яке являє собою моноклональне антитіло. 14. Антитіло за будь-яким з втілень 1-13, яке являє собою людське, гуманізоване або химерне антитіло. 15. Антитіло за будь-яким з втілень 1-14, яке являє собою фрагмент антитіла, який зв'язується з РОТ. 16. Антитіло за будь-яким з втілень 1-15, яке являє собою повнорозмірне антитіло Ідс1. 17. Антитіло за будь-яким з втілень 1-16, яке являє собою повнорозмірне антитіло ІДдС1 з мутаціями І 234А, І 235А і РЗ329О (нумерація згідно з індексом ЕЄЮО за Кабай. 18. Виділена нуклеїнова кислота, кодуюча антитіло за будь-яким з втілень 1-17. 19. Клітина-хазяїн, яка містить нуклеїнову кислоту за втіленням 18. 20. Спосіб одержання антитіла, який включає культивування клітини-хазяїна за втіленням 19 таким чином, що продукується антитіло. 21. Спосіб за втіленням 20, який додатково включає виділення антитіла з клітини-хазяїна. 22. Фармацевтичний препарат, який містить антитіло за будь-яким з втілень 1-17 і фармацевтично прийнятний носій. 23. Антитіло за будь-яким з втілень 1-17 для застосування як лікарський засіб.
Зо 24. Антитіло за будь-яким з втілень 1-17 для застосування в лікуванні раку. 25. Застосування антитіла за будь-яким з втілень 1-17 в приготуванні лікарського засобу. 26. Застосування за втіленням 25, де лікарський засіб призначений для лікування раку. 27. Спосіб лікування індивіда, який має рак, що включає введення даному індивіду ефективної кількості антитіла за втіленням 1.
І. ПРИКЛАДИ
Наступне являє собою приклади способів та композицій за винаходом. Зрозуміло, що можна практикувати різні інші втілення, беручи до уваги загальний опис, наведений вище.
Хоча вищевикладений винахід і був описаний в деяких подробицях за допомогою ілюстрації і прикладу для цілей точності розуміння, дані описи та приклади не потрібно тлумачити як такі, що обмежують обсяг винаходу. Розкриття всієї патентної та наукової літератури, процитованої в даному документі, прямо включені у всій їх повноті за допомогою посилання.
Приклад 1:
Одержання антитіл до РО-1
Імунізація мишей
Мишей ММК імунізували генетично з використанням плазмідного експресійного вектора, кодуючого повнорозмірний людський РО-1, за допомогою внутрішньошкірного введення 100 мкг
ДНК вектора (плазміда 15300 РПРО1-її), з наступною електропорацією (2 квадратних імпульси 1000 В/см, тривалість 0,1 мс, інтервал 0,125 с; з наступними 4 квадратними імпульсами 287,5
В/см, тривалість 10 мс, інтервал 0,125 с. Миші одержували 6 послідовних імунізацій на добу 0,
БО 14, 28, 42, 56, 70 і 84. Кров відбирали на добу 36, 78 і 92, і одержували сироватку, яку використовували для визначення титру за допомогою ЕГІЗА (див. нижче). Тварин з найвищими титрами відбирали для повторної імунізації на добу 96 за допомогою внутрішньовенної ін'єкції мкг рекомбінантної химери людського РОТ з людським Ес, і моноклональні антитіла виділяли методикою гібридоми за допомогою злиття спленоцитів з лінією мієломних клітин через З доби після повторної імунізації.
Визначення сироваткових титрів (ЕГІЗА)
Химеру людського рекомбінантного РОЇ з людським Ес іммобілізували на 96-ямковому планшеті МОМС Махізогр в концентрації 0,3 мкг/мл, 100 мкл/ямку в РВ5 (фосфатно-сольовий буферний розчин), з наступними: блокуванням планшета 2 95 кротеїном з в РВ5, 200 мкл/ямку; бо нанесенням серійних розведень антисироватки в подвійних повтореннях в 0,5 9о кротеїні з в
РВ5, 100 мкл/ямку; виявленням антитілом кози проти мишиного антитіла, кон'югованим з НКР (пероксидаза хріну) (Фаскзоп Ітптипогезеагсп/Оіапома 115-036-071; 1/16 000). Для всіх етапів планшети інкубували протягом 1 години при 37 "С. Між всіма етапами планшети З рази промивали 0,05 95 Тмееп 20 в РВ5. Сигнал проявляли додаванням розчинного субстрату РОЮ (пероксидаза) ВМ Вісше (Коспе), 100 мкл/ямку; і зупиняли розвиток реакції додаванням 1 М НСІ, 100 мкл/ямку. Поглинання зчитували при 450 нм у порівнянні з 690 нм як контроль. Титр визначали як розведення антисироватки, що призводить до напівмаксимального сигналу.
Приклад 2:
Характеризація антитіл до РО1
Зв'язування антитіл до РО1 с людським РО1
ЕГІЗА на пи РО1 (людський РОТ)
Планшети Мипс Махізогр, покриття стрептавідином (МісгоСоаї Ж11974998001) покривали 25 мкл/ямку біотинільованого РО1-ЕСО-АміНіхє та інкубували при 4 "С протягом ночі. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків антитіла до РОЇ або контрольних антитіл (людське антитіло до РО1; Коспе / мишине антитіло до РО; Віоіедепа; кат.: 329912) та інкубували 1 годину при КТ (кімнатна температура). Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВЗТ) додавали 25 мкл/ямку антитіла кози проти НяЇ (важкого і легкого ланцюга) антитіла людини, кон'югованого з РОЮ (ШК, 9У1К109-036-088) / антитіла вівці проти мишиного антитіла, кон'югованого з РОО (СЕ НеайПсаге; МА9310), в розведенні 1:2000/1:1000 та інкубували протягом 1 години при КТ на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером
РВЗТ) додавали 25 мкл/ямку субстрату ТМВ (тетраметилбензидин) (Коспе, каталожний Мо 11835033001) та інкубували до ОП 2-3. Вимірювання відбувалося при 370/492 нм.
Результати ЕГІЗА перелічуються у вигляді значень ЕС50О (напівмаксимальна ефективна концентрація) (нг/млі в узагальнюючих Таблицях 2 і 3, наведених нижче.
Клітинний ЕГІЗА на РО1
Прикріплену лінію клітин СНО-КІ, стабільно трансфіковану плазмідою 15311 ПРО1- ї рОС Мео, кодуючою повнорозмірний людський РО1, і піддану селекції з (3418 (маркер стійкості до неоміцину на плазміді), засівали в концентрації 0,01х10Еб клітин/ямку в 384-ямкові плоскодонні планшети і вирощували протягом ночі.
Зо На наступну добу додавали 25 мкл/ямку зразка РОТ або людського контрольного антитіла до РОТ (Коспе)/мишиного контрольного антитіла до РО1 (ВіоІедепа; кат.: 329912) та інкубували протягом 2 годин при 4"С (для того, щоб запобігти інтерналізації). Після ретельного промивання (їх90 мкл/ямку РВБЗТ) клітини фіксували додаванням 30 мкл/ямку 0,05 95 глутаральдегіду (Зідта, кат. Мо: (35882, 25 95), розведеного в Іхбуфері РВ5, та інкубували протягом 10 хв при КТ. Після промивання (3х90 мкл/'ямку РВЗТ) додавали 25 мкл/ямку вторинного антитіла для виявлення: антитіла кози проти Неї антитіла людини, кон'югованого з
РОБ (ДВ, У/ЛАІТ09-036-088) / антитіла вівці проти мишиного антитіла, кон'югованого з РОО (СЕ
МАЗУЗ310), з наступною 1 годинною інкубацією при КТ на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/'ямку РВЗТ) додавали 25 мкл/ямку розчину субстрату ТМВ (Коспе 11835033001) та інкубували до ОП 1,0-2,0. Планшети вимірювали при 370/492 нм.
Результати клітинного ЕГІЗБА перелічені у вигляді значень "ЕС5О СНО-РО1" Інг/млі в узагальнюючій Таблиці 3, наведеній нижче.
ЕСІЗА на РО1 яванського макака
Планшети Мипс Махізогр, покриття стрептавідином (МісгоСоаї Ж11974998001) покривали 25 мкл/ямку біотинільованого супоРО1-ЕСО-біотину та інкубували при 4 "С протягом ночі. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків антитіла до РО1 або контрольних антитіл (людське антитіло до РО1; Коспе) та інкубували 1 годину при КТ на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/ямку антитіла кози проти Неї. антитіла людини, кон'югованого з РОЮ (ЛЕ, У1К109-036-088), в розведенні 1:1000 та інкубували при КТ протягом 1 години на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером
РВ5Т) додавали 25 мкл/ямку субстрату ТМВ (Коспе, 11835033001) та інкубували до ОП 2-3.
Вимірювання відбувалося при 370/492 нм.
Результати ЕГІ5ЗА перелічуються у вигляді значень ЕС50О Інг/млі в узагальнюючих Таблицях 2 і 3, наведених нижче.
Аналіз заміни ліганду 1 РО
Планшети Мипс Махізогр, покриття стрептавідином (МісгоСоаї Ж11974998001) покривали 25 мкл/ямку біотинільованого РО1-ЕСО-АміНіхє та інкубували при 4 "С протягом ночі. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків антитіла до РО1 або контрольних антитіл (мишине антитіло до РО1; ВіоІедепа; кат.:329912) та інкубували 1 годину бо при КТ на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/ямку
РО-І1 (химера рекомбінантного людського В7-НІТ/РО-І 1 Ес; 156-887, КУ) та інкубували 1 годину при КТ на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/ямку антитіла кози проти Н-ї. антитіла людини, кон'югованого з РОЮ (ІК, 109-036-088), в розведенні 1:1000 та інкубували при КТ протягом 1 години на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/ямку субстрату ТМВ (Коспе, 11835033001) та інкубували до
ОП 2-3. Вимірювання відбувалося при 370/492 нм.
Результати ЕГІЗА перелічуються у вигляді значень ІС50 (напівмаксимальна інгібуюча концентрація) (нг/млі в узагальнюючій Таблиці 2, наведеній нижче.
Аналіз заміни ліганду 2 РО
Планшети Мипс Махізогр, покриття стрептавідином (МісгоСоаї 4Ж11974998001) покривали 25 мкл/ямку біотинільованого РО1-ЕСО-АміНіхє та інкубували при 4 "С протягом ночі. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків антитіла до РО1 або контрольного антитіла (мишине антитіло до пПИРО1; Коспе) та інкубували 1 годину при КТ на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/'ямку буфером РВ5ОТ) додавали 25 мкл/ямку РО-І2 (химера рекомбінантного людського В7-ЮОС/РО-І 2 Ес; 1224-РІ -100, КУ) та інкубували 1 годину при КТ на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/ямку антитіла кози проти Н-ї. антитіла людини, кон'югованого з РОЮ (ЛК, 109-036-088), в розведенні 1:2000 та інкубували при КТ протягом 1 години на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/ямку субстрату ТМВ (Коспе, 11835033001) та інкубували до
ОП 2-3. Вимірювання відбувалося при 370/492 нм.
Результати ЕГІ5ЗА перелічуються у вигляді значень ІС50 Інг/млі| в узагальнюючій Таблиці 2, наведеній нижче.
ЕГІЗА картування епітопів/аналіз конкурентного зв'язування
Планшети Мипс Махізогр (Мипс 2464718) покривали 25 мкл/ямку захоплюючого антитіла (антитіло кози проти мишиного Іде; ЛЕ; 115-006-071) та інкубували протягом 1 години при КТ на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) планшети блокували протягом 1 години буфером РВЕ, який містить 2 95 ВЗА (бичачий сироватковий альбумін) на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків мишиного антитіла до РОЇ та інкубували 1 годину при КТ на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т)
Зо захоплююче антитіло блокували 30 мкл/ямку мишиного Ідс (ЛЕ; 015-000-003) протягом 1 години при КТ на шейкері. В той самий час біотинільований РО1-ЕСО-Амініх передінкубували з другим зразком антитіла протягом 1 години при КТ на шейкері. Після промивання планшета для аналізу (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) суміш антитіла з РОЇ переносили на планшет для аналізу та інкубували при КТ протягом 1 години на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/ямку стрептавідин-РОЮ (Коспе, 211089153001) в розведенні 1:4000 та інкубували при КТ протягом 1 години на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/ямку буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/ямку субстрату ТМВ (Коспе, Ж11089153001) та інкубували до
ОП 1,5-2,5. Вимірювання відбувалося при 370/492 нм. Групи епітопів визначали ієрархічною кластеризацією відносно контрольних антитіл.
Таблиця 2
Зв'язування, інгібування РО-1 1 і групи ділянок епітопів типових антитіл (ЕГІ5А)
ЕП5А ЕП5А Група ділянки днтитіло | БМВА ЛИРОЇ ) ЕПВА сур! | інгібування РО- | інгібування РО- ее
ЕС5О |нг/млі| ЕС5О |нг/млі 1 І2 конкурентним
ІС5О І|нг/млі ІС5О І|нг/млі й аналізом оРОТО05О | 179 98 | 128 | 3 | 1 оРОТО069 | 457 777227. | 225. | 8 | 6 оРОТО078 | 26377 224 | -ХхХ | 86 6 Щ | 2
Таблиця З
Біохімічне зв'язування і зв'язування з клітинами гуманізованих антитіл до РО1, одержаних з батьківського мишиного антитіла РО1-0103 (ЕГІЗА) . . ЕИПЗА пиРО ЕНЗА суРО1 ЕПЗА СНО-РО1
Характеризація Віасоге гуманізованих антитіл до РО-1
Для визначення кінетичних параметрів зв'язування між декількома мишиними зв'язуючими агентами відносно РОЇ, а також наявними в продажу людськими контрольними зв'язуючими агентами відносно РО1 використовували аналіз на основі поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). У зв'язку з цим на поверхні сенсорного чипа СМ5 (Віасоге) іммобілізували антитіло до людського ЇД0 за допомогою амінного зв'язування. Потім захоплювали зразки, і з ними був зв'язаний РО1Т-ЕСО. Поверхню сенсорного чипа регенерували після кожного циклу аналізу.
Зрештою, одержали рівноважну константу і кінетичні константи швидкості за допомогою апроксимації даних до моделі взаємодії Лангмюра 1:1.
Приблизно 2000 одиниць відповіді (КО) 20 мкг/мл антитіла до (до людини (СЕ Неакрсаге
ЖВА-1008-39) зв'язували на проточних комірках 1 і 2 (як альтернатива: З і 4) сенсорного чипа
СМ5 в Віасоге 1200 при рН 5,0 з використанням набору для амінного зв'язування, поставленого аЕ Неайїнсагє.
Зразком і рухомим буфером були НВ5-ЕР-- (0,01 М НЕРЕЗ5, 0,15 М Масі, З мМ ЕОТА, 0,05 95 об./06. поверхнево-активної речовини Р20, рН 7,4). Була встановлена температура проточної комірки 25 "С і температура відсіку для зразка - 12 "С. Система була первинно оброблена рухомим буфером.
Зразки в концентрації 10 нМ ін'єктували протягом 20 секунд, і вони зв'язувались з другою проточною коміркою. Потім над кожним зразком протягом 120 с ін'єккгували повний набір концентрацій людського РО1-ЕСО (144 НМ, 48 нМ, 16 нМ, 5,33 нМ, 1,78 нМ, 0,59нМ,020нМіо
НМ), з наступним часом дисоціації 30/300 з і двома 20 с стадіями регенерації З М Маосі», з яких остання стадія містила "додаткове промивання після ін'єкції" рухомим буфером.
Зрештою, дані з подвійним контролем апроксимували до моделі взаємодії Лангмюра 171 з використанням програми Віасоге Т200 Емаїцайоп. Одержані в результаті значення Ко, Ка і Ка показані в Таблиці 4.
Таблиця 4
Кінетичні константи швидкості і рівноважна константа для химерного РО1-0103 і гуманізованих АБ до РОТ, визначені за допомогою Віасоге (див. наступну сторінку). о химернеРОї-0103 | 386Еч405 | 30704 | 08 гФ
Зо Як показано в Таблиці 4, всі гуманізовані версії химерного РО1-0103 (відносно одержання див. Приклад 6) демонструють кінетичні властивості, аналогічні батьківському антитілу (химерне
РО1-0103).
Кінетика
У систему Віасоге 4000 встановлювали сенсор СМ5 серії 5, і плями виявлення гідродинамічно адресували згідно з інструкціями виробника.
Поліклональне кроляче антитіло дО «ІДОЕСумМ»кК (Часкзоп ІттипокКезеагсі І арогаогіе5
Іпс.) іммобілізували при 10000 КО на плямах виявлення 1 та 5 в проточних комірках 1, 2, З та 4.
Зв'язування здійснювали за допомогою хімії ЕОС/МН5 згідно з інструкціями виробника. Решта плям в проточних комірках служили як контроль. Буфером для зразка був буфер системи, доповнений 1 мг/мл карбоксиметилдекстрана.
В одному втіленні аналіз проходив при 25 "С. В іншому втіленні аналіз проходив при 37 "С.
Кожне 50 нМ мишине моноклональне антитіло захоплювали на поверхні сенсора за допомогою 1 хв ін'єкції зі швидкістю 10 мкл/хв. Потім ін'єктували відповідні антигени у серії концентрацій 100 нМ, 2х 33 НМ, 11 нМ, 4 НМ, 1 нМ і 0 нМ в буфері системи зі швидкістю 30 мкл/хв протягом 4 хв часу фази асоціації. Дисоціацію відстежували протягом ще 4 хв. Систему захоплення регенерували з використанням З хв ін'єкції 10 мМ гліцину, рН 1,5, в концентрації 30 мкл/хв.
Релевантні кінетичні дані розраховували з використанням програми оцінки Віасоге згідно з інструкціями виробника.
Картування епітопів
У пристрій Віасоге 4000 встановлювали сенсор Віасоге САР, і готували його подібно до рекомендації виробника. Буфером пристрою був НВ5-ЕТ (10 мМ НЕРЕФЗ, рн 7,4, 150 мМ масі, з
ММ ЕОТА, 0,005 95 мас./об. Ту"ееп 20). Пристрій працював при 25 "С.
Всі зразки розводили в буфері системи. 35 кДа біотинільований антиген РО1-ЕСО-Амінів захоплювали при 200 КИ на поверхні сенсора САР за допомогою 1 хв ін'єкції зі швидкістю 30 мкл/хв в проточних комірках 1, 2, З і 4 в плямах 1 і 5. Плями 2, З і 4 служили як контроль. В іншому втіленні таким самим способом захоплювали 35 кДа біотинільований антиген РО1-ЕСО-
Амінів при 200 КІ на сенсорі САР.
Потім ін'єктували первинне антитіло в концентрації 100 нМ протягом З хв зі швидкістю 30 мкл/хв, з наступною ін'єкцією вторинного антитіла в концентрації 100 нМ протягом З хв зі швидкістю З0 мкл/хв. Первинне антитіло ін'єктгували до повного насичення антигену, присутнього на поверхні. В кінці фаз ін'єкції первинного і вторинного антитіла були встановлені звітні точки "пізнє зв'язування" (ВІ) для відстежування відповіді у вигляді зв'язування відповідних антитіл. Розраховували молярне відношення - частка між відповіддю у вигляді зв'язування вторинного антитіла "ВІ 2" і відповіддю первинного антитіла "ВІ 1". Дане молярне відношення використовували як індикатор доступності антигену для вторинного антитіла, коли даний антиген вже знаходився в комплексі з первинним антитілом.
Комплекси повністю видаляли з поверхні сенсора за допомогою ін'єкції регенеруючого
Зо буфера: 2 М гуанідин-НСІ, 250 мМ МаомМ протягом 2 хв зі швидкістю 30 мкл/хв, як рекомендовано виробником, з наступною 1 хв ін'єкцією буфера системи зі швидкістю 30 мкл/хв.
Приклад З
Вплив різних антитіл до РО1 на продукцію цитокінів у реакції змішаної культури лімфоцитів (МІВ)
ЗА) Реакція змішаної культури лімфоцитів (МІ К) являє собою аналіз імунних клітин, в якому вимірюється активація лімфоцитів від одного індивіда (донор Х) на лімфоцити від іншого індивіда (донор У). Реакцію змішаної культури лімфоцитів використовували для демонстрації ефекту блокування шляху РО1 на лімфоцитарні ефекторні клітини. Т-клітини в даному аналізі тестували на активацію та секрецію ними ІРЄМ-гамма у присутності або за відсутністю тАбр до
РО.
Для здійснення алогенної МІ-К одноядерні клітини периферичної крові (РВМС) щонайменше від чотирьох здорових донорів з невідомим типом НГА виділяли за допомогою центрифугування в градієнті щільності з використанням іІеиКозер (ОСгеіпег Віо Опе, 227 288). Стисло, гепаринізовані зразки крові розводили в три рази перевищуючим об'ємом РВЕ, і 25 мл аліквоти розведеної крові нашаровували в 50 мл пробірці Геикозер. Після центрифугування при 800 д протягом 15 хв при кімнатній температурі (без руйнування) фракції, які містять лімфоцити, відбирали, промивали в РВ5 та використовували безпосередньо в функціональних аналізах або ресуспендували в середовищі, що заморожується, (10 96 ЮОМ5О (диметилсульфоксид), 90 Фо
ЕС5 (фетальна теляча сироватка)) в концентрації 1,0Еж07 клітин/мл і зберігали в рідкому азоті.
Проводили індивідуальні 2- сторонні реакції МЕК за допомогою змішування РВМС від двох різних донорів у співвідношенні клітини стимулятори/респондери 1:21, і співкультури здійснювали щонайменше в двох повторюваностях у плоскодонних 96-ямкових планшетах протягом 6 діб при 37"С, 595 СО», у присутності або без інтервалу різних концентрацій очищених моноклональних антитіл до РОТ: РО1-0050, РО1-0069, РО1-0073, РО1-0078, РО1-0098, РО1- 0102, РО1-0103. Як контрольні антитіла до РО1 синтезували антитіла, які містять домени УНН або Мі або ніволумаба (також відомого як МОХ-5С4 або МОХ-1106), або пембролізумаба (також відомого як МК-3475 або Ого 1.09А), і клонували з використанням остовів людського ЇдДС1 (з мутаціями /234А, І235А і РЗ290с (індекс БО за Кара)). Як негативний контроль або не використовували антитіло, або використовували ізотипове контрольне антитіло, і як позитивний бо контроль використовували рекомбінантний людський ІЇ-2 (20 ЕШ/мл). Після доби 6 з кожної культури відбирали 100 мкл середовища для вимірювання цитокінів. Рівні ІЄМ-гамма вимірювали з використанням набору для ЕГІ5ЗА ОрІЕЇА (ВО Віозсіепсев).
Результати демонструються в Таблиці 5 (секреція/вивільнення ІЕМ-у). Моноклональні антитіла до РО1 стимулювали активацію Т-клітин і секрецію ІЕМ-гамма концентраційнозамінним чином. Значення 95 збільшення секреції ІЕМ-гамма розраховували відносно продукції ІЕМ-у МІ без додавання будь-яких блокуючих тА (базальна алогенна стимуляція індукувала значення
ІЕМ-у, що відповідає Е (експериментальний зразок) мінус с (контрольний зразок)) і МІК з додаванням 20 ЕШ/мл гес Ви 1-2 (позитивний контроль - 100 95 значення ІЄМ-у, що відповідає Е плюс с), і розраховували згідно з формулою: відн. стимуляція (95| - (Експериментальний - Е - с(Ежс-Е-с)"100.
Таблиця 5
Відсоткова частка секреції ІЕМ-гамма після алогенної стимуляції та обробки антитілом до РО- 1 у порівнянні з ефектом обробки рекомбінантним людським 1І--2 (20 Е/мл) (дорівнює 100 95-ому збільшенню) як позитивний контроль оте | ою (ко | втома (мкг/мл) о РОТО05О | 44 | 136 | 962 2ЮДщ1 33 | -- и о РОТО069 | -/(60 | 176. | 771155 | - "
І оРОТО078 | 64 | 99 | 72 | 2 | н-н
Декілька антитіл, блокуючих РОЇ: РО1-0050, РО1-0069, РО1Т-0073, РО1-0078, РО1-0098,
РО1-0102, РО1Т-0103, демонстрували сильну імуномодулюючу активність за допомогою збільшення секреції інтерферону-гамма (ІМЕ-у) (дані не показані для всіх антитіл).
ЗБ) У додатковому експерименті оцінювали химерне РО1-0103 (людський ізотип ДС1 з мутаціями 1 234А, І 235А і РЗ29О (індекс ЄЮ за Кабраї)). Блокада РО1 химерним РО-0103 сильно збільшує секрецію ІЕМ-гамма алогенними стимульованими первинними людськими Т-клітинами.
Химерне РО1-0103 є більш потужним, ніж контрольні антитіла до РО! (див. Фіг. 1).
Для порівняння використовували синтезовані контрольні антитіла до РО1 антитіла, які містять домени МН або Мі. або ніволумаба (також відомого як МОХ5С4 або МОХ-1106), або пембролізумаба (також відомого як МК-3475 або Ого 1.09А), і клоновані з остовами людського
ІЧО1 (з мутаціями І 234А, І 235А і РЗ329С (індекс ЕІ за Кабаб).
ЗВ) У додаткових експериментах в Мік оцінювали імуномодулюючу активність гуманізованих варіантів антитіла до РО-1 РО1-0103 (гуманізовані антитіла РО1-0103-0312, РО1- 0103-0314 на фіг. 2 і 3, див. також Приклад б нижче) на а) вивільнення (секрецію) ІЕМ-у, б) вивільнення (секрецію) ТМЕ-альфа, як описано вище. Ефект химерного антитіла РО1-0103 та його гуманізованих версій порівнювали з контрольними антитілами до РОТ, які містять домени
МН або У. або ніволумаба (також відомого як МОХ5С4 або МОХ-1106), або пембролізумаба
Зо (також відомого як МК-3475 або Огуд 1.09А) з остовами людського ІдС1 (з мутаціями І234А,
Ї235А і РЗ29С (індекс ЕІ за Кабрай)). Після 6 діб культури МІК відбирали 50 мкл супернатанту, і вимірювали багаточисленні цитокіни в одній культурі з використанням аналізу людських цитокінів ТА1/Тп2 Віо-Ріех Рго "м (Віо-Каай І арогайогіез Іпс.). (Дані для всіх цитокінів не показані).
Химерне антитіло РО1-0103 та його гуманізовані версії (РО1-0103 0312 ії РО1-0103 0314) були більш ефективними у порівнянні з контрольними антитілами до РОЇ в посиленні активації
Т-клітин і секреції ІЕМ-гамма (див. Фіг. г).
Крім того, химерне антитіло РО1-0103 та його гуманізовані варіанти збільшують секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) (див. Фіг. 3) і 1/-12 (дані не показані) антигенпрезентуючими клітинами і збільшують здатність моноцитів/макрофагів або антигенпрезентуючих клітин стимулювати Т-клітини.
Приклад 4:
Ефект блокади антитілом до РОТ на вивільнення цитотоксичного гранзиму В і секрецію ІЕМ-
М людськими Т-клітинами СО4, співкультивованими з алогенними зрілими дендритними клітинами
Для подальшого дослідження ефекту обробки антитілом до РО-1 в алогенній ситуації автори винаходу розробили аналіз, в якому свіжеочищені Т-клітини СО4 співкультивували протягом 5 діб у присутності таких, що походять від моноцитів алогенних зрілих дендритних клітин (то).
Моноцити виділяли зі свіжих РВМСОС за один тиждень до безперешкодного прикріплення до пластмаси, з наступним видаленням клітин, що не прикріпилися. Потім автори винаходу одержали незрілі ОС з моноцитів за допомогою їх культивування у середовищах, які містять а,М-С5Е (гранулоцитарно-макрофагальний колонієстимулюючий фактор) (50 нг/мл) і 1І-4 (100 нг/мл) протягом 5 діб. Для індукції дозрівання ОС (незрілі дендритні клітини) автори винаходу додавали у культуральні середовища ТМЕ-альфа, 1І-1 бета і ІІ -6 (по 50 нг/мл кожного) протягом 2 додаткових діб. Потім автори винаходу оцінювали дозрівання ОС за допомогою вимірювання експресії на їх поверхні головного комплексу гістосумісності класу ІІ (МНС), СО80, СО83 і СО86 за допомогою проточної цитометрії (І ЗКЕогіезза, ВО Віозсіепсев).
На добу мінімальної реакції змішаних лімфоцитів (п1Мі Кк) збагачували Т-клітини СО4 за допомогою набору мікрокульок (Мійепуії Віоїес) з 108 РВМС, одержаних від неспорідненого донора. До культивування Т-клітини СО4 мітили 5 мкМ складного сукцинімідилового ефіру карбоксифлуоресцеїну (СЕ5Е). Потім висаджували у 9б-ямковий планшет 105 Т-клітин СО4 разом із зрілими ало-ОС (5:1) у присутності або за відсутністю блокуючого антитіла до РО1 (або
РО1-0103, химерне РО1-0103, або гуманізовані антитіла РО1-0103-0312, РО1-0103-0313, РО1- 0103-0314, РО1-0103-0315, скорочені на Фіг. 4А і 4Б як 0312, 0313, 0314, 0315) в концентрації 10 мкг/мл, якщо на Фіг. не вказано інше.
Через п'ять діб автори винаходу відбирали супернатанти культури клітин, що використовуються пізніше для вимірювання рівнів ІЕМ-гамма за допомогою ЕГІ5БА (КО
Бузіетв5), і залишали клітини при 37 градусах С протягом ще 5 годин у присутності інгібітора апарату Гольджи (брефельдин А) і блокатора апарату Гольджи (моненсин). Клітини потім промивали, фарбували на поверхні антитілом до людського СО4 і фіксованим барвником на живі/мертві клітини Адиа (Іпмігодеп) перед фіксацією/пермеабілізацією буфером Ріїх/Регт (ВО
Віозсіепсе). Автори винаходу здійснювали внутрішньоклітинне фарбування на гранзим В (ВО
Віозсієпсе), ІРМ-гамма і ІІ -2 (обидва від еВіозсіепсе). Результати показані на Фіг. 4А та 4Б.
Автори винаходу також тестували різні концентрації гуманізованих варіантів РО1-0103 (гуманізовані антитіла РО1-0103-0312, РОІТ-0103-0313, РО1-0103-0314, РО1Т-0103-0315, скорочені на Фіг. як 0312, 0313, 0314, 0315, див. також Приклад 6 нижче) і виявили, що вони є однаково хорошими у збільшенні рівня гранзиму В і інтерферону-гамма. ОР47 являє собою людський ІдС, що не зв'язується, з мутацією ГАГА в частині Ес для того, щоб запобігти
Зо розпізнаванню Есгаммак (рецептор Есу), і його використовували як негативний контроль.
Приклад 5:
Похідні у вигляді химерних антитіл
Химерні антитіла до РОТ одержали ампліфікацією варіабельних ділянок важкого і легкого ланцюга мишиних антитіл до РОЇ РО1-0098, РО1-0103 за допомогою ПЦЕР та їх клонування в експресійні вектори для важкого ланцюга у вигляді злитих білків з людськими остовами Ідс1 / людської СНІ1-шарнірна ділянка-СН2-СНЗ з мутаціями І/234А, 1235А і РЗ29О (індекс БУ за
Каба)ї)) (лейцин 234 до аланіну, лейцин 235 до аланіну, пролін 329 до гліцину), що відміняють ефекторні функції, і в експресійні вектори для легкого ланцюга у вигляді злитих білків з людською С-каппа. Плазміди І С і НС потім співтрансфікували в НЕК293 та очищували через 7 діб із супернатантів стандартними способами очищення антитіл. Химерні антитіла до РО1 були перейменовані в химерне спіРО1-0098 (спіРО1-0098) і химерне РО1-0103 (спіРО1-0103). Для порівняння використовували синтезовані контрольні антитіла до РОТ, які містять домени УН або
МІ. або ніволумаба (також відомого як МОХ-5С4 або МОХ-1106), або пембролізумаба (також відомого як МК-3475 або Ого 1.09А), і клоновані з остовами людського Ідс1 (з мутаціями І 234А,
Ї235А і РЗ3290 (індекс ЄЮ за Кара).
Приклад 6:
Одержання, експресія та очищення гуманізованих варіантів антитіла до РО1Ї РО-0103 (пимаб РО-0103), і Характеризація
Гуманізація доменів МН і МІ. мишиного антитіла до РО1 0103
На основі амінокислотної послідовності мишиних доменів МН і МІ. мишиного антитіла до РО1 0103 (5ЗЕО ІЮ МО: 7 і 8) одержали гуманізовані варіанти антитіла до РОТ.
Гуманізований варіант МН базується на людській зародковій лінії ІМТ РМН З 23 в комбінації з людським .)-елементом зародкової лінії ІЗН.5-01 з декількома мутаціями (призводячи до 5ЕО ІЮ МО: 57).
Гуманізовані варіанти МІ базуються на людських зародкових лініях ІМОСТ НУК 4 1,
ІМОСТ пМК 2 30, ІМСТ ПМК З 11 і ІМТ йМК 1 39 в комбінації з людським .-елементом зародкової лінії ЗНУО1-01. Різні мутації призводили до гуманізованих варіантів хЕО ІЮО МО: 58-
ЗЕО ІЮО МО: 61.
Гуманізовані амінокислотні послідовності для варіабельних ділянок важкого і легкого бо ланцюга РО1-0103 зворотно транслювали в ДНК, синтезували одержані в результаті КкДНК
(СепАГгі) і потім клонували в експресійні вектори для важкого ланцюга у вигляді злитих білків з остовами людського ЇдДсе1 / людським СНІ1-шарнірна ділянка-СН2-СНЗ з мутаціями ГАГА і РО (лейцин 234 до аланіну, лейцин 235 до аланіну, пролін 329 до гліцину), що відміняють ефекторні функції, або в експресійні вектори для легкого ланцюга у вигляді злитих білків з людською С- каппа. Плазміди ЇС і НС потім співтрансфікували в НЕК293 і очищували через 7 діб із супернатантів стандартними способами очищення антитіл. Одержані в результаті гуманізовані антитіла до РО1 називали наступним чином:
Таблиця 6
Послідовності МН і МІ. гуманізованих варіантів антитіл РО1-0103
Гуманізовані . . : , . . . о антитіла РО1-0103 ГУманізований варіант МН/ЗЕО ІО МО Ігуманізований варіант М /ЗЕО ІЮ МО:
РО1-0103-0912 ЗЕО ІО МО: 57 ЗЕО ІЮ МО: 58
РО1-0103-0313 ЗЕО ІО МО: 57 ЗЕО ІЮ МО: 59
РО1-0103-0314 ЗЕО ІО МО: 57 ЗЕО ІЮ МО: 60
РО1-0103-0315 ЗЕО ІО МО: 57 ЗЕО І МО: 61
Таблиця 7
Послідовності НУК гуманізованих варіантів антитіл РО1-0103
Гуманізовані НМУВ-НІ, НУВ-На2 ї НУК-НЗ НМУВ-11, НУВ-1І2 ї НМК-І З антитіла РО1-0103 | гуманізованого варіанта/зЕО ІО МО: | гуманізованого варіанта /5ЕО ІЮО МО:
РО-0103-0312 ЗЕОІО МО: 1,213 ЗЕОІЮО МО: 4,516
РО-0103-0313 ЗЕОІО МО: 1,213 ЗЕОІЮО МО: 4,516
РО-0103-0314 ЗЕОІО МО: 1,213 ЗЕОІЮО МО: 4,516
РО-0103-0315 ЗЕОІО МО: 1,213 ЗЕОІЮО МО: 4,516
Гуманізовані варіанти антитіла РО1-0103 і батьківське химерне РО1-0103 були охарактеризовані, як описано вище. Результати показані в Таблиці 8.
Таблиця 8 стисле викладення результатів для варіантів гуманізованого антитіла РО1-0103 і батьківського химерного РО1-0103
РОІ-0109 | РО-0103-0312 | РО-0103-0313 РО-0103-0314 | РО-0103-0315
Афінність Ко з7сІнМ!"| 2,07 0,8 1,5 / 1,68 1,9 72,3 1,6/1,5 1,7/1,5
ЕС5О ЕМЗА (НМ) 02 | 01 | 007 | 007 | 006
ЕС5О СНО-РОЇ
Й їра (підлягає ово Рон, нм) пев | ен | о . й ни нижня нини я ня культури лімфоцитів перехресна реактивність з антигенами яванського ни 0,08 0,05 0,04 макака (ЕС5О (нМІ)
Приклад 7:
Нейтралізуюча ефективність антитіл до РО-1
Для тестування нейтралізуючої ефективності одержаних самими авторами винаходу антитіл до РО-1 в імітації відновлення приглушеної відповіді Т-клітин іп міго використовували наявний в продажу репортерний аналіз РО1/РО-І1 (Рготеда). Дана система складається з клітин
РОУМЕАТ Шигкаї і партнера РО-ІГ1 «СНО, який також дає активуючий сигнал. В принципі, дана репортерна система базується на трьох стадіях: (1) ТОВ-опосередкована активація МЕАТ, (2)
інгібування сигналу МЕАТ при активації осі РО-1/РО-І1 ї (3) відновлення сигналу МЕАТ за допомогою антитіл, блокуючих РО-1.
Матеріал і методи " Середовище РО-1 1: РАМ Віоїесп (2РО4-03609); ЕВ5 (10 90) і І-С1Іп (4 мМ) " Середовище для аналізу: ЕРМІ 1640 (231870; Іпмігодеп), 25 мМ НЕРЕФ5, 2 мМ І-СіІп, ЕВ5 (2 У) " Клітини, використані для даного аналізу (обидва типи клітин придбані Рготеда): клітини СНО РО-Ї 1. (Мо партії 2139147): 2-3х107 клітин/96 ямок клітини УигКкаї РО-1-МЕАТ (Ме партії 2133024: 3,5х1027 клітин/ямку
На добу 1 клітини РО-Ї1- відтавали, висівали у вказаній концентрації клітин у вищезазначене средовище і культивували протягом ночі при 37 "С і 5 95 СО». На наступну добу середовище видаляли, і клітини РО-ІЇ1- інкубували з одержаними антитілами у вказаних концентраціях (у середовищі для аналізу). Паралельно клітини Уигкаї РО-1-4МЕАТ відтавали, і вищезазначені кількості клітин переносили і співкультивували до клітин РО-1 1. Після інкубації протягом 6 годин при 37 "С і 5 95 СО» субстрат Віо-СіІо нагрівали до кімнатної температури (1-2 години до додавання). Планшет з культурою клітин видаляли з інкубатора і доводили до кімнатної температури (10 хв) перед додаванням 80 мкл розчину Віо-сСіІо на ямку, інкубували протягом 5-10 хв перед вимірюванням люмінісценції на рідері Тесап Іпбпйе згідно з рекомендацією виробника набору. Результати можна бачити на Фіг. БА і 5Б, де показане відновлення опосередкованого РО-1/РО-І1 приглушення сигналу МЕАТ різними антитілами до
РО-1 при стимуляції ТОК: Фіг. БА: химерне РОТ 0103 демонструвало відтворено більший ефект у порівнянні з контрольним антитілом. Як контроль синтезували антитіло до РО-1, що містить домени МН або Мі ніволумаба (також відомого як МОХ-5С4 або МОХ-1106) і клонували з остовами людського ІдДС1 (з мутаціями І 234А, 1235А і РЗ290 (індекс БЮ за Кара). Фіг. 55: чотири гуманізованих варіанти РОЇ 0103 демонстрували аналогічну ефективність іп міго з лідируючим антитілом і також були трохи краще контрольного антитіла.
Приклад 8:
Кристалізація Гар РО1-0103 з ектгодоменом РО-1:
Для утворення комплексу Рар РО1-0103 змішували в молярному надлишку 1,1 з ектодоменом РО-1. Після інкубації на льоду протягом 1 години комплекс деглікозилювали за допомогою стадії з РиСазою для видалення гліканів, які не беруть участі в утворенні комплексу.
Скринінг кристалізації на кристали комплексу фрагмента Бар РО1-0103 (з людським СНІ і СІ) з
ЕСО РО-1 проводили при концентрації 15 мг/мл. В експериментах з дифузією парів у сидячій краплі встановлювали температуру крапелек кристалізації 21 "С за допомогою змішування 0,1 мкл розчину білка з 0,1 мкл резервуарного розчину. Кристали з'являлися за різних умовах за наявності РЕС як осаджуючого агента. Кристали, що використовуються для визначення структури, з'являлися з 3095 РЕС1500 в межах 4 діб і виростали до кінцевого розміру 0,03х0,06х0,02 мкм в межах 7 діб.
Кристали переносили в резервуарний розчин, доповнений 20 95 гліцерину як кріопротектора, і потім швидко охолоджували в рідкому Ма. Картини дифракції одержали з використанням детектора Ріїайих ЄМ при температурі 100К з каналом пучка ХІО5БА Зм/із5 ПДМ Боцйгсе та обробляли з використанням пакета ХО5 ІКаресп, МУ. Ашотаїййс ргосезвіпу ої гоїайоп айкасіп даїа тот сгувіа!5 ої іпйайу спКпомуп зуттеїгу апа сеї! сопеіапів. 0). Аррі. Стуві. 26, 795-800 (1993))|. Дані від одного кристала об'єднували з одержанням набору даних з розрізненням 1,9 А в групі симетрії кристалічної решітки РІ з двома молекулами комплексу на кристалографічну асиметричну комірку (див. Таблицю 1).
Структуру визначали за допомогою молекулярного заміщення з використанням координат
Еар фрагмента з РОВ-ІЮО 30717 як пошукової моделі. Як пошукові координати для ЕСО РО-1 використовували РОВ-ІЮО ЗККО). Раб був розділений на константний і варіабельний домени, і з обома окремими пошуками в ССР4 використовували програму РНАЗЕК ССРА |ССРА (СоПабогаїме Сотриїайопаї! Рго|есі, М. Тне ССРА 5ийе: ргодгатв ог ргоїєїп сгузіаПодгарну. Асіа
Стувіайодг. 0, 760-763 (1994) для того, щоб пояснити можливі зміни кута плеча. Модель перебудовували в СООТ (Етсіеу, Р., ГопйКатр, В., Зсоц, М/С. 5 Соулап, К. Реайшге5 апа демеіортепі ої СООТ. Асіа Стгувіаоаг. О Віої. СтувіаІПоаг. 60, 486-501 (2010)) і уточнювали з використанням програми ССРА4 КЕРЕМАС. Етапи кінцевого уточнення здійснювали з використанням програми ВОЗТЕК (Вгісодпе с., Віапс Е., Вгапа! М., Ріеєпзбигу С., КеїйПег Р.,
Расіогек МУ.,Вомегзі Р, Знані А., Зтап О0.5., Мопіпеїп С., Мотаск Т.О. (2016). ВО5ТЕВ мегвіоп 2.11.6. Сатргідде, Опієа Кіпддот: Спіоба! Рнавзіпд (а.).
Таблиця 9
Збір даних і статистика уточнення структури для кристала
Еаб РО1Т-0103-ЕСО РО-1 00000000 Збідданих//////////Ї77777111111111111111111111СсСсС
Довжина хвилі (А) бУточченняд/ 77777111
РМ5 (середньоквадратичне значення) зв'язків (А)
Рамачандрана (95 1 Значення в дужках належать до наборів з найвищим розрізненням. 2 Воб'єднаний 25 | І-«І» |/ХІ, де І являє собою інтенсивність.
З Вробота 25 | о-«Ес» |/ХЕо, де Ес являє собою таку, що спостерігається, і Ес являє собою розрахункову амплітуду структурного множника. 45 Ввільний був розрахований на основі 5 95 від всіх даних, опущених під час уточнення
Визначення структури баб РО1-0103 в комплексі з ектодоменом РО-1
Для того щоб детально охарактеризувати епітоп і паратоп, автори винаходу визначили кристалічну структуру ектодомену РО-1 в комплексі з Гар РО1-0103 до розрізнення 1,9 А. Дана структура виявляє те, що Бар РО1-0103 розпізнає епітоп, утворений ділянками петель ВС і ЕС і залишками Д-тяжів ССС передньої рД-складчастої структури домену Ід М-типу РО-1. Крім того, даний епітоп включає дерево М-зв'язаного глікозилювання в положенні А5п58, яке є частиною петлі ВС РО-1. Всі СОК, за виключенням СОКАІ легкого ланцюга баб РО1-0103, вносять внесок у паратоп.
Площа поверхні 1063 А? РО-1 покривається Раб РО1-0103, причому внесок важкого ланцюга становить 743 А?, а легкого ланцюга - 320 А? Аналіз поверхні контакту зв'язування з використанням програми РІБА виявляє картину взаємодії ар РО1-0103 з ЕСО РО-1 з 6 водневими зв'язками і вандерваальсовими силами. Водневі зв'язки бокових ланцюгів утворюються між залишками СОКІ важкого ланцюга (Тпг33) і СОК2 (5ег52, Агуд5б6, Азр57) з
СіІШб1 і Зегб2 петлі ВС РО-1. Вандерваальсови контакти, головним чином, керуються СОКЗ легкого і важкого ланцюга, зокрема, Рпе105 НСОКЗ і Туг32 НОСОК, які знаходяться на близькій відстані від залишків МаІб4 петлі ВС, Рго83, Пе126 і Іеи128 петлі БО. Додаткові вандерваальсови контакти спостерігаються між залишками петлі б Рго130, АІа132, Пе134 з
СОК2 важкого ланцюга і СОКЗ легкого ланцюга Гарб РО1-0103. Легкий ланцюг бар РО1-0О103 контактує виключно з петлею ЕС РО-1. СОК2 легкого ланцюга не надає контактів для утворення комплексу.
Дерево М-зв'язаного глікозилювання в положенні А5хп58 РО-1 є частиною епітопа і взаємодіє тільки із залишками важкого ланцюга баб РО1-0103.
Дерево центрального цукрового ланцюга (М-зв'язаного глікозилювання) в положенні А5п58
РО-1 має наступну структуру відносно моносахаридів:
А5п58-М-СІСМАсС(РОС) - СісМАс- - ВМА - МАМ (див. фіг. 9), де використовуються наступні скорочення:
ІбісМАс| - Мад-М-ацетил-бета-О-галактозамін - 2-(ацетиламіно)-2-дезокси-бета-О- галактопіраноза,
ІРОСІ - альфа-їЇ -фукоза,
ІВМА) - бета-О-манопіраноза,
ІМАМІ - альфа-О-манопіраноза.
Перший сСіІсСМАс у цукровому ланцюзі фукозилюється, що скорочується як сІСМАС(РИС).
В структурі центральні глікани добре визначаються в електронній щільності, за виключенням однієї манозної ланки. Фукозне групування направлене в гідрофільний карман, утворений РО-1 з СОКІ1 ї СОК2. Зв'язування фукози координується мережею водневих зв'язків з Зег3о і Зег31
СОКІ разом з СіІйб1 і бІп99 РО-1. Додаткові контакти надаються зв'язуванням водневими зв'язками першого СіІСМАс з Агу56 і залишками каркаса Агд72, Азр73, Азп74 з Мап.
Таблиця 10
Перелік контактів РО1 - важкий ланцюг баб РО1-0103
Контакти, ідентифіковані за пороговою відстаню 5 А
Таблиця 11
Перелік контактів РО1 - легкий ланцюг Раб РО1-0103
Контакти, ідентифіковані за пороговою відстаню 5 А
Таблиця 11
Перелік контактів РО1 - легкий ланцюг Раб РО1-0103
Контакти, ідентифіковані за пороговою відстаню 5 А
Таблиця 12
Перелік контактів центральний цукровий ланцюг на Азп58 РО - важкий ланцюг бар РО1-0103
Контакти, ідентифіковані за пороговою відстаню 5 А
РО - М- глікозилювання на
Азп58 (центральний НО РО-103 цукровий ланцюг)
Узагальнення " Епітоп на РОЇ має схожість з плоскою поверхнею, яка зв'язується, головним чином, передньою р-складчастою структурою і СОКЗ РО1 "- Взаємодії включають полярні і вандерваальсови контакти " Велика площа поверхні взаємодії РО1 з важким ланцюгом Еар " Глікозилювання в положенні Азп 58 бере участь в зв'язуванні РО1 з фрагментом Бар " Фукозна ланка займає карман, утворений РО1 і важким ланцюгом Бар РО1-0103.
Приклад 9:
Знижене зв'язування антитіла з людським РОЇ, який не є глікозильованим на Азтп58 у порівнянні із зв'язуванням з людським РОТ, який є глікозильованим на Азп58 (Характеризація
Віасоге антитіл проти РО-1 до глікозильованих і неглікозильованих рекомбінантних РО1)
Аналіз на основі поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК) використовували для визначення кінетичних параметрів зв'язування між глікозильованим РОЇ і неглікозильованим рекомбінантним людським РО1. В зв'язку з цим антитіло до людського до іммобілізували за допомогою амінного зв'язування з поверхнею сенсорного чипа СМ5 (Віасоге). Потім захоплювали зразки, і з ними зв'язувався пи РО1-ЕСО. Поверхню сенсорного чипа регенерували після кожного циклу аналізу. Зрештою, одержали рівноважну константу і кінетичні константи швидкості за допомогою апроксимації даних до моделі взаємодії Лангмюра 1.1.
Приблизно 2000 одиниць відповіді (КО) 20 мкг/мл антитіла до людського до (СЕ Неайнсаге
ЖВА-1008-39) зв'язували з проточними комірками 1 і2 (як альтернатива: З і 4) сенсорного чипа
СМ5 в Віасоге 1200 при рН 5,0 за допомогою застосування набору амінного зв'язування, який постачають СЕ Неайнсагеє.
Буфером для зразка і рухомим буфером був НВ5-ЕР-- (0,01 М НЕРЕЗ, 0,15 М Масі, 3 мм
ЕОТА, 0,05595 о0о6б./06. поверхнево-активна речовина Р2О, рН 7,4). Була встановлена температура проточної комірки 25 "С і температура відсіку для зразка 12 "С. Система була первинно оброблена рухомим буфером.
Зразки з концентрацією 10 нМ ін'єктували протягом 20 секунд, і вони зв'язувались з другою
Зо проточною коміркою. Потім над кожним зразком протягом 200 с ін'єктували повний набір концентрацій людського РО1-ЕСО (глікозильованого і неглікозильованого) (200 нМ, 66,6 нм, 22,2 НМ, 7,4 нМ, 2,46 нМ їі 0 нМ), з наступним часом дисоціації 0/2000 с (66,6 нМ і 22,2 нМ) і двома 20 с стадіями регенерації З М МосСіг, з яких щонайменше одна містила "додаткове промивання після ін'єкції" рухомим буфером.
Зрештою, дані з подвійним контролем апроксимували до моделі взаємодії Лангмюра 171 з використанням програми Віасоге Т200 Емаїцайоп. Одержані в результаті значення Ко, Ка і Ка показані в Таблиці 13.
Таблиця 13
Кінетичні константи швидкості та рівноважна константа, визначені Віасоге ка (1/Мо) ка (1/с)
РО1-0103-0312 | РОТ, неглікозильований на Азп58| 3,36Е-05 2,70Б-02 8,02Е-08
РО1-0103-0312 |РОТ, глікозильований на Азп58 7,7171Е-05 7 ,46Е-05 9,61 Б-11 пембролізумаб |/|РОТ1, неглікозильований на А5п58| /1,51Е-06 2,А6Е-0З3 1,63Е-09 пембролізумаб |/|РО1, глікозильований на Азп58 1,87Е--06 4,50Е-0З3 2,А1Е-09
РО, неглікозильований на А5п58| 5,49Е-05 3,66Е-03 6,66Е-09
РОЇ, глікозильований на Азп58 4,4АЕ 05 1,63Е-03 3,68Е-09
Мається явна різниця між зв'язуванням РО-103-0312 з неглікозильованим і глікозильованим
РО-1, на відміну від пембролізумаба і ніволумаба (див. також Фіг. 13А і 13Б).
Приклад 10:
Протипухлинна ефективність антитіл до РО іп омімо в комбінації з Т-клітинним біспецифічним антитілом проти СЕА
Гуманізовану тварину одержали за допомогою адаптації мишей МОСС з наступним адоптивним перенесенням людських гематопоетичних стовбурових клітин. Одержані в результаті миші демонструють химерне відношення між людськими і мишиними лейкоцитами, що варіюється від 20 до 8595 клітин людського походження. В такій моделі Т-клітини є функціональними і можуть бути активовані для умертвіння пухлинних клітин за допомогою біспецифічного антитіла, яке зв'язується з СЕА (раковий ембріональний антиген) і СОЗ (яке описується в УМО2014/131712). Таким гуманізованим тваринам потім ін'єктували один мільйон
СЕА-позитивних пухлинних клітин - карциноми шлунка МКМА45 - підшкірно в латеральну ділянку.
Ріст пухлини міг оцінюватися вимірюванням З-мірної осі пухлини за допомогою циркуля, що керується оператором, З рази на тиждень (Фіг. 14А і Б). На добу 9 після ін'єкції пухлини мишей рандомізували на основі розміру пухлини для того, щоб мати гомогенні групи тварин, і починалося терапевтичне лікування. За виключенням груп носія (Фіг. 14А і 14Б, круги), всім групам мишей внутрішньовенно вводили СЕАСОЗТСВ в дозі 2,5 мг/кг двічі на тиждень. Крім того, кожну групу мишей також обробляли одним партнером за комбінацією: антитілом до РОЇ (РОТ1-0103-0212) або в дозуванні 0,15 мг/кг щотижнево (фіг. 14А, квадрати), або 1,5 мг/кг (Фіг. 14Б, квадрати) щотижнево внутрішньобрюшинно; ніволумабом або в дозуванні 0,15 мг/кг щотижнево (Фіг. 14А, ромби), або 1,5 мг/кг (Фіг. 14Б, ромби) щотижнево внутрішньобрюшинно.
Середній розмір пухлини в межах однієї групи обробки демонструється протягом часу. Кожний група складалася з 9-10 мишей, і вимірювання продовжували доти, доки було щонайменше З миші на групу. Розраховували стандартизовану площу під кривою (5АШС), і однофакторний
АМОМА (дисперсійний аналіз) використовували для розрахунку статистичної значущості.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
Зо «1105 Б. НоТТтапп-іа коспе дес «1205 АНТИТІЛА ДО РОТ І СПОСОБИ ЇХ ЗАСТОСУВАННЯ «1305 РЗЗ3103-мМО «1505 ЕРІ5188061.4 «1515 2015-10-02 «1605 77 «1705 РакепсІп мег5іоп 3.5 «2105 1 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Ми Ми5сици5 «4005 1 с1Уу Ре 5ег Ре 5ег 5ег туг 1 5
«2105» 2 «2115 З «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «4005» 2 су с1Уу Агд 1 «210» З «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005» З
Тк о1у Агд ма! Туг Ре АїТа гГеи А5р 1 5 «210» 4 2115 11 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «400» 4 5ег сі 5ег маї А5р Тиг 5ег др Ап 5ег РІНе зо 1 5 10 «2105. 5 «2115 З «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005» 5
Ага бег 5ег 1 «2105» 6 «2115 6 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005» 6
Азп туг Азр ма!ї Рго Тер 1 5 «2105 7 «2115 120 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005 7 60 сіи ма! І1е гей ма! сіи б5ег сіу сїу с1у Геи ма! гу5 Рго ОсТу Сс1у 1 5 10 15 5ег їеи Гуз Гей 5ег Су5з АЇа АЇа 5ег сІіу Ре 5ег Ре 5ег 5ег тТуг 20 25 30 65
Тк Мет б5ег о Тегр ма! Агуд сп тйг Рго сій Гуз Агд Гей Ар Тгр ма! 35 40 45
АТїа тйг Іїе 5ег сіу сіу сіу Аг А5р ІЇе Ттуг туг Рго А5р 5ег ма! 70 50 55 60
Гуз с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег Агуд А5р Азп АЇа Гуз А5зп тТиг о Геи туг 65 70 75 80 ем сіи Меє бег б5ег Ге Мет бек сі А5р Тйг АЇїа геи туг туг суз 85 90 95
Уа! Гей гей тийг с1у Агуд ма! туг Ре АїЇа гей А5р 5ег Тгр су сіп 100 105 110 с1іу тйг о б5ег ма! тиг маї 5ег 5ег 115 120 «210» 8 «2115 111 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «А00» 8
Гуз ІІе маї Ге Ттиг о сіп 5ег Рго АЇа 5ег Ге Рго ма! 5ег Геи СсС1У 1 5 10 15 сп Аг Аїа Тс о ІЇе б5ег сСуз Агуд Аїа 5ег сіи бег ма! А5зр тНг 5ег 20 25 30
А5Зр А5п о б5ег Ре ІЇе Ні Тгр туг сіп сіп Агуд Рго сІЇу сіп 5ег РгОо 35 40 45
Гуз Гей гей ІІе туг Агд 5ег бег Тиг Ге сіи б5ег сіу ма! Рго АїЇа 50 55 60
Аг Рпе б5ег сІу б5ег сіу бек Аг ТИг Ар Ре тТиг Ге Тийг ІЇе А5р 65 70 75 80
Рго ма! сій Аїа А5р Азр ма! АїЇа тйг о туг туг Суб сіп сп доп отуг 85 90 95
Азр ма! Рго Тгр Ттйг Ре сіу СсСІу сіу тиг Гуз Гей сіи ІЇе Гуз 100 105 110 «210» 9 «2115 8 «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «А00» 9 сіу туг 5ег ІІе ТНг 5ег др туг 1 5 «2105» 10 «2115 З «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «400» 10 туг 5зег с1у (516) 1 «2105 11 «2115 9 «2125 ПРТ 65 «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005 11
НІі5 сіу б5ег АЇа Рго Тер Ттуг Ріе А5р 70 1 5
«2105» 12 «2115 12 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «4005 12 5ег сіп Аб5п о ІЇе ма! Ні 5ег д5р с1у Азп о тиг туг 1 5 10 «2105» 13 «2115 З «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «4005» 13
Гуз ма! 5ег 1 «2105» 14 «2115 6 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «400» 14 с1іу 5ег НІі5 Ре РгОо Гей з30 1 5 «2105» 15 «2115 120 «2125 ПРТ 0«2135 Ми5 Мизсйи1и5 «4005» 15
Азр ма! сіп гей сіп сій 5ег сІіу Рго сІу Гей ма! Гу5 Рго 5ег СсіІп 434 1 5 10 15 5зег Гей 5ег гей Тиг о Суз Тиг Ома! тиг о сІіу туг 5ег ІЇе тиг 5ег др 20 25 30 Туг АїЇа Тер А5п Тер ІЇе Агуд сіп Рпе Рго СсІіу А5зр Гуз Геи сіи тер 35 40 45
Гей сіу туг ІІе Тийг туг б5ег сіу Ре ТИПг А5Зп тТуг АЗзп РгО 5ег Гей 60 50
Гуз 5ег Агуд ІІе 5ег ІЇе 5ег Агуд Ар ТИг 5ег Гуз Азп сп Ре РЕНе 65 70 75 80
Гей сіп Гей А5п б5ег о маїЇ АТа тк сі Азр Тйг АТа тиг туго туг су 55 85 90 95
АТїа Агд тгр Ні сіу бек АЇа Рго Тгр Туг Ре Азр Туг Тгр с1У Агд 100 105 110 60 с1у тиг тс гей твг маї 5ег 5ег 115 120 «210» 16 65 «2115 112 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «400» 16 70
Азр ма! Геи Меє тийг осіп Тйг РгОоО Ге 5ег Ге Рго Маї 5ег Гей сІу 1 5 10 15
Азр сіп АТа б5ег ІЇе бек Су5 Агуд 5ег 5ег сіп А5п ІЇе ма! Ні 5ег 20 25 30
Азр с1у А5зп Тйг тТуг Гей сіи Тер туг Гей сіп гГу5 Рго сіу сіп 5ег 35 40 45
РгОо А5п Гей Гей ІЇІе туг Гуз ма! 5ег Агуд Агуд Ре б5ег су ма! Рго 50 55 60
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бег сіу 5ег сіу Тйг А5зр Ре тНг Геи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сій А5р Ге сіу ма! Ттуг туг Суз Ре сп с1у 85 90 95 5зег Ні5 Ре Рго Ге Тиг Ре СІу Аїа сСІу ТНг 1у5 Гей си Геи Гуз 100 105 110 «2105 17 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «4005 17 сіу туг 5ег ІІе ТНг 5ег др туг з30 1 5 «2105» 18 «2115 З «2125 ПРТ 0«2135 Ми5 Мизсйи1и5 «400» 18 туг тк с1у 1 «210» 19 «2115 9 «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «400» 19
Ммек А5р Туг Туг с1у 5ег тТиг Геи др 1 5 «2105» 20 «2115 11 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «4005» 20 5зег сій б5ег ма! дор Агуд Туг о1у А5зп 5ег РІе во 1 5 10 «2105» 21 «2115 З «2125 ПРТ 65 «2135 Ми5 Ми5си1и5 «400» 21
Агд АїЇа 5ег 70 1
«2105» 22 «2115 6 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «4005» 22
Азп АЗп сій Ар Рго туг 1 5 «2105» 23 «2115 120 «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «4005» 23
Азр ма! сіп гей сіп сій 5ег сІу Рго сСІу Гей ма! Гу5 Рго 5ег сіп го 1 5 10 15 5зег Гей 5ег гей Тиг о Суз Тиг Ома! тиг о сІіу туг 5ег ІЇе тиг 5ег др 25 Туг АїЇа Тер А5Зп Тер ІЇе Агуд сіп Рпе Рго ОТ1У А5п Гуз Гей си Тер мес сіу туг ІІе тийг туг тийг сіу Аг тиг об5ег туг Азп РгОо 5ег Геи 60
Зо
Гуз 5ег Агуд ІІе 5ег ІЇе Тйг Агуд Азр тТиг 5ег уз Ап сЇп РБе РПе 65 70 75 80
Гей сіп Гей А5п о б5ег ма! Тийг отийг сій Азр Тс АТа твг туго туг су 35 85 90 95
АТїа Агд сіи Мет дор Туг Туг оЇу 5ег Ттиг Гей А5Зр туг Тгр сТу сіп 100 105 110 40 сІіу тис тигогГеу тТйг ма! 5ег 5ег 115 120 «2105» 24 «2115 111 45 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005» 24 50 Гуз ІІе ма! Ге Тийг сіп 5ег Рго діа 5ег Ге Аїа ма! 5ег Геи Ага 1 5 10 15 сп Аг Аїа Тс о ІЇе 5ег сСуз5з Агуд Аїа 5ег сіи б5ег ма! А5р Ага туг 20 25 30 55 с1у А5п о б5ег Ре ІІе Ні Тер Ттуг сіп сіп Гуз Рго сіу сіп Рго РгО 35 40 45
Гуз ма! Гей ІїІе туг Агд АЇа б5ег Азп Ге сіи бег сіу Ре Рго АїЇа бо 50 55 60
Аг Рпе б5ег сІу б5ег сіу бек Аг ТИг Ар Ре тТиг Ге Тийг ІЇе дор 65 70 75 80 65 Рго ма! сій Аїа А5р д5р діа АїЇа тийг туг туг Су сп сп Абп А5п 85 90 95 сі А5р Рго Туг Тиг Ре СсСІу б5ег сіу Тиг Гуз Гей сіи те Гуз 100 105 110 70
«2105» 25 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизсии5 «400» 25 с1іу туг Тиг Ре тТиг А5р о туг 1 5 «210» 26 «2115 З «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Мизсии5 «400» 26 туг 5зег с1у 1 «210» 27 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизсии5 «4005» 27 с1у т1Іе тийг о тйг с1у Ре Аїа
Зо 1 5 «210» 28 «2115 11 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизсии5 «400» 28 5ег Гуз сіу ма! 5ег Тиг 5ег б5ег о Туг 5ег РНе 1 5 10 «210» 29 «2115 З «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Мизсии5 «400» 29 туг Аїа 5ег 1 «210» 30 «2115 6 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизсии5 «4005» 30 зег Агд сі Ре Рго Тгр 60 1 5 «210» 31 «2115 118 «2125 ПРТ 65 «2135 Ми5 Мизси и5 «400» 31 соІп ма! сіп гей сЇп сіп б5ег сіу Рго сЇи Ге маї Агуд Рго су маї 70 1 5 10 15
5ег ма! Гуз ІІе 5ег Су5 Гуз сіу бек сІіу туг Тйг Ре Тйг А5р туг 20 25 30 АЇа меє Ні тгр ма! Гуз сіп 5ег Ні АЇа Агуд тТНг Геи сіи Тер Іе 35 40 45 сіу ма! ІІе 5ег Тиг о туг б5ег сіу А5р Тйг А5Зп о тТуг АбЗп о сіп Гуз РНе 50 55 60
Гуз Азр Гуз АЇа ТийгоМеє тиг омаї А5р Гуз 5ег б5ег 5ег Тг АїЇа туг 65 70 75 80
Гей сі Гей Аїа Агуд Мет Тийг бек сі А5р 5ег АЇа ІЇе туг туг суз 85 90 95
Аїа Агд Гей с1у ІЇе тк тик с1у Ре АЇїа туг тер су сіп су тпг 100 105 110
Ге ма! Тиг ма! 5ег Аїа 115 «2105» 32 «2115 111 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005 32
А5р ІчІЇе ма!їЇ Геи Тк сіп 5ег Рго АїЇа 5ег Гей АЇїа ма! 5екг гей с1у 1 5 10 15 сп Аг Аїа Тс о ІЇе б5ег сСуз Агуд Аїа 5ег Гуз сіу ма! 5ег тНг 5ег 20 25 30 5зег Туг бег Ре Мет Ні Тгр туг сіп сіп Гу5 Рго Агд сіп Рго РгО 35 40 45
Гуз Ге Гей чІЇе Гуз Ттуг АЇїа 5ег Туг Гей сіи 5ег сіу ма! Рго АїЇа 50 55 60
Аг Рпе б5ег сІу 5ег сіу бек сІ1у Тйг А5р Ре тНг Ге А5п ІЇе Ні 65 70 75 80
Рго ма! сіи сій сій А5р АЇїа Аїа тийготуг туго Суз Ні Ні 5ег Ага 85 90 95 сі Ре Рго Тгр Тиг Ре СсСІу сіу сіу Ттиг уз Гей сіи Іе Гуз 100 105 110 «2105» 33 «2115 7 «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005 33 с1у Ре Тиг РМПе 5ег А5п туг 1 5 (516) «2105» 34 «2115 З «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 65 «4005» 34 су с1Уу Агд 1 70
БА
«2105» 35 «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005 35 туг туг с1у Пе А5р 1 5 «2105» 36 «2115 7 «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «4005 36 5зег сп А5р ма! тиг тиг Аїа 1 5 «2105» 37 «2115 З «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «4005 37
Тер АїТа 5ег
Зо 1 «2105» 38 «2115 6 «2125 ПРТ 0«2135 Ми5 Мизсйи1и5 «4005 38
Ні Ттуг 5ег ІЇе Рго Тер 1 5 «2105» 39 «2115 116 «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «4005 39 сіи ма! Гуз Ге ма! сій 5ег сіу сіу сіу Ге ма!Ї Гуз Рго сІу с1У 1 5 10 15 5ег їеи Гуз Гей 5ег Су5з АЇа АЇа 5екг сІіу Ре Тйг Ре 5ег Азп ТУуг 20 25 30 сіу мес 5ег Тгр ІЇе Агуд сіп тйг Рго сіи Гуз сІу Геи сіи тТгр ма! 35 40 45
АТїа тйг ІТе 5ег сіу сіу сіу Агд А5р Тйг туго туг Рго А5р 5ег маї 50 55 60 (516)
Гуз с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег Агуд Азр Азп ма! губ Азп А5п Геи тТуг 65 70 75 80 ей сіп Меє бег 5ег Ге Агд бег сі АЗр Тйг АЇїа Ре туг туг суз 65 85 90 95
АТїа б5ег Ттуг Ттуг Туг сСЇу ІЇе А5р Туг Тгр сіу сіп сіу тЕг 5ег ма! 100 105 110 70 те ма! 5ег 5ег
«2105» 40 «2115 107 «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «400» 40
А5зр ІчІЇе ма! Мес тс сій Рго Ні Гуз Рпе Мет 5ег Тиг б5ег ма! с1у 1 5 10 15
А5Зр Агуд ма! Агу ч1Іе тйг о сСуз Гуз АТа 5ег о сіп Азр ма! тйг тйг Аїа 20 25 30 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сіу сіп 5ег Рго Гуз Ге Гей ІїЇе 35 40 45 тукг тер АТа 5ег Тиск Агуд Ні Тс о сіу ма! Рго дор Аг Ре тиг с1Уу 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу Ттйг сій Ре тТиг огГеи Тиг о ІЇе 5ег 5ег ма! сіп Аїа 65 70 75 80 си Азр Ге АЇїа гей Туг Ттуг Суз сіп сіп Ні5 Туг 5ег ІЇе Рго Тгр 85 90 95
Тиг Ре сіу су сіу тйг Гуз Ге сіи ІІе Гуз 100 105
Зо «210» 41 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «400» 41 с1іу туг Тиг Ре тТиг 5ег0 тиг 1 5 «2105» 42 «2115 З «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005» 42 зег А5р 5ег 1 «2105» 43 «2115 З «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005» 43
Рго Ре дор 1 (516) «2105» 44 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 65 «4005» 44 5ег сп А5р мМмаї 5ег Ттиг Аїа 1 5 70
«2105» 45 «2115 З «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005» 45 зег АЇа 5ег 1 «210» 46 «2115 6 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «400» 46
Ні Ттуг 5ег Ні Рго Ре 1 5 «2105» 47 «2115 114 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Мизси1и5 «4005» 47 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу АЇа сій ге ма! Гуз Рго сІу АїЇа з30 1 5 10 15 5зег ма! Гуз Мет 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг Ре тТиг 5ег тег 20 25 30
Тер мес ніх Тер маї Гуз сіп Агд Рго сіу сЇп су гГеи сіи Тер Пе 35 40 45 с1Уу АЇїа ІЇе А5р Рго 5ег А5р б5ег Туг ТИг о тТиг о туг А5Зп о сіп Гуз РНе 50 55 60
Гуз сіу Гуз АЇїа Тийг оГеи тТийг омаї А5р о тТийг о 5ег о б5ег Тиг тиг Аїа туг 65 70 75 80 мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95
ТК о Агд бег Рго Ре Азр Туг Тгр сіу сіп сІ1у тйг тис огеи тег ма! 100 105 110 5зег 5ег «2105» 48 «2115 107 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «400» 48 60 Ар ІчІІе ма! Меє тийг о сіп б5ег Ні Гуз Ріпе Мет б5ег Тиг 5ег маї с1у 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! 5ег ІЇе тйг Суз Гуз АТа 5ег сіп Азр ма! 5ег Ттиг Аїа 20 25 30 65 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сіу сіп 5ег Рго Гуз Ге Гей ІїЇе 35 40 45 туг 5ег Аїа б5ег Туг Агуд Туг Тйг сіу ма! Рго дор Агуд Ре тиг с1Уу 70 50 55 60
5ег сіу 5ег сіу Тйг А5р Ре Тиг РПе Аа ІЇе 5ег 5ег ма! сіп АїЇа 65 70 75 80 см А5р Гей АТа ма! Тукг тук Суз сіп сіп Ні5 туг 5ег Ні Рго РПе 85 90 95
ТИг Ре сіу 5ег сіу тиг Гуз Ге сіи ІІе Гуз 100 105 «2105» 49 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Ми Ми5сици5 «4005» 49 сіу туг 5ег ІІ1е Ттиг 5екг су туг 1 5 «2105 50 «2115 З «2125 ПРТ «2135 Ми Ми5сици5 «4005 м150 5зег 5ег с1у 1 «210» 51 «2115 6 «2125 ПРТ «2135 Ми Ми5сици5 «400» 51
Аг А5п Тер отуг РВе дор 1 5 «2105 52 «2115 13 «2125 ПРТ «2135 Ми Ми5сици5 «4005 52 5ег сп 5ег Ге ге АЗп 5ег сіу Тийг сіп Гуз А5Зп отуг 1 5 10 «2105 53 «2115 З «2125 ПРТ «2135 Ми Ми5сици5 «4005 53
Тер АїТа 5ег 1 60 «2105» 54 «2115 6 «2125 ПРТ «2135 Ми Ми5сици5 65 «4005» 54
Азр Туг Тйг Ре Рго Геий 1 5 70
«2105 1055 «2115 117 «2125 ПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005 155
Азр ма! сіп гей сіп сій 5ег СсІу Рго А5р и Ге ма! Гу5 Рго 5ег СсіІп 1 5 10 15 5зег Гей 5ег гей Тиг о Суз Тиг Ома! тиг сІіу туг 5ег ІЇе тиг 5ег с1у 20 25 30 тукг 5ег Тер ніх Тгр Іїе Агуд сіп Ре Рго СсІУу Ап Гуз Геи си тер 35 40 45 мес сіу Ре ІЇе Ні5 5ег б5ег сіу А5р Тйг А5Зп тТуг АЗзп РгО 5ег Гей 50 55 60
Гуз 5ег Агуд ІІе 5ег Ре ТИйг Агуд Ар Тиг об5ег Гуз А5зп сп РБе РПе 65 70 75 80 ей сіп Гей 5ег б5ег гей Тиг о А5зр сі Азр ТТГ АТа тйг туго туг су 85 90 95
АТа тиск о туг Агуд АЗп Тер Туг РБе Ар ма! Тер сіу АТа сІу тйг тпг 100 105 110 ма! Тк ма! 5ег 5ег 115 «2105» 56 «2115 113 «2125 ПпПРТ «2135 Ми5 Ми5си1и5 «4005 156
А5зр ІчІЇе ма! Мет тТпйг сіп 5ег Рго 5ег 5ег Гей Тиг ма! тйг Аїа сі1у 1 5 10 15 сі Гуз ма! Тис Мет Адгд Суз Гуз 5ег 5ег сіп б5ег їеи Ге А5Зп 5ег 20 25 30 сіу тйг сп Гуз АЗп о Туг Гей Тпг Тер туг сп сіп Гуз Рго сІу сп 35 40 45
Рго Рго Гуз Гей Гей ІІе Туг Тгр АТа 5ег Тийг Агд сіи 5ег су маї 50 55 60
Рго А5п о Агу Рпе Тийг о сіу б5ег сіу бек сІу Тиг дор Ре тиг Ге тАг 65 70 75 80
ІІе 5ег 5ег ма! сіп АТа сі А5р ей бег Ма! Туг туг Ссу5 сіп 5ег 85 90 95
Азр Туг Тйг Ре Рго Гей Тйг Ре сіу сІу сіу тТНг Гуз гей си Гей 100 105 110 (516)
Гуз «2105 57 65 «2115 120 «2125 ПРТ «2135 Штучна «220»
«223» гуманізований варіант - вартабельний домен МН важкого ланцюга РОІ1- 0103 01 «4005 57 сіи ма! сіп ге гей сій 5ег сіу сіу сіу Ге маї сіп Рго сІу с1У 1 5 10 15 зег їеи Агуд Гей 5ег Суз АЇа Аїа б5ег сіу Ре 5ег РіПе 5ег 5ег туг 20 25 30
Тк Мет 5ег Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу Гуз су Геи сіи тТгр ма! 35 40 45 Аїа тйг ІІе 5ег сіу сіу с1у Агд А5р ІЇе туг Туг Рго А5р 5ег маї 50 55 60
Гуз с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег Агуд А5р Азп 5ег Гуз АЗзп Тиг о Геи туг 65 70 75 80
Ге сіп Меє Азп 5ег Ге Аг АїЇа сі Азр Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
Уа! Гей гей тийг с1у Агуд ма! туг Ре АїЇа гей А5р 5ег Тгр су сіп 100 105 110 сіу тйг Ге ма! тиг маї 5ег 5ег 115 120
Коо) «2105. 58 «2115 111 «2125 ПпПРТ «2135 Штучна «220» «223» гуманізований варіант - вартабельний домен мі легкого ланцюга РОІ1- 0103 01 «4005 58
Азр ІІе ма! Ммеє тйг сіп 5ег Рго Азр 5ег Гецй АЇа маї 5ег Гей сІу 1 5 10 15 сій Аг Аїа Тис о ІЇе Ад5п Суз уз АЇїа 5ег сіи бег ма! А5р тНг 5ег 20 25 30
Азр Азп о 5ег Рпе ІЇе Ні5 Тгр Туг сіп сіп Гу5 Рго сіу сіп 5ег Рго 35 40 45
Гуз Гей гей ІІе туг Агд 5ег бек ТИг Ге сіи бег сіу ма! Рго дор 50 55 60
Аг Рпе б5ег сІу б5ег сіу бек сІу Тйг Ар Ре тиг Ге Тиг ІЇе 5ег 65 70 75 80 5ег Гей сіп Аїа сі А5зр ма! Аїа ма! туг туг Су5 сіп сіп Азп туг 85 90 95
Азр ма! Рго Тгр Ттйг Ре СсІу сіп сіу тиг Гуз ма! сіи че Гуз бо 100 105 110 «2105» 59 «2115 111 «2125 ПРТ 65 «2135 Штучна «220» «223» гуманізований варіант - вартабельний домен мі легкого ланцюга РОІ1- 0103 02 70 бо
«4005 159
Азр ма! ма! мес тйг о сіп 5ег Рго Гей 5ег Гей Рго Мма!Ї тиг Гей сІу 1 5 10 15 сій Рго АїЇа бек ІЇе 5ег сСуз5з Агуд АЇїа 5ег сіи бег ма! Азр тНг 5ег 20 25 30
А5Зр А5п о б5ег Ре ІЇе Ні Тгр туг сіп сіп Агуд Рго сІЇу сіп 5ег РгОо 35 40 45
Аг Гей Ге Іїе Ттуг Агуд бег 5ег ТИг Ге сіи 5ег су ма! Рго А5р 50 55 60 Агдуд Ре 5ег сіу 5ег сіу б5ег сіу ТПг А5р Ре ТиИг Геи уз ІЇе 5ег 65 70 75 80
Агд ма! си АТа сі Азр ма! сІу ма! туг туг Ссу5 сЇп сіп А5п туг 85 90 95
Азр ма! Рго Тгр Ттйг Ре СсІу сіп сіу тиг Гуз ма! сіи че Гуз 100 105 110 «2105» 60 «2115» 111 «2125 ПпПРТ «2135 Штучна «220» 00«223» гуманізований варіант - варіабельний домен МІ легкого ланцюга РО1- 0103 03 «4005 60 сій ІчІЇе ма!ї Геи тк сіп 5ег Рго Аїа ТПг Гей 5ег Ге 5ег Рго Ос1Уу 1 5 10 15 сій Аг Аїа Тис огГеи б5ег о сСуз Агуд АЇїа 5ег сіи бег ма! А5р тНг 5ег 20 25 30
Азр Азп о 5ег Рпе ІЇе Ні5 Тгр Туг сіп сіп Гу5 Рго сіу сіп 5ег Рго 35 40 45
Агд Гей Гей Іїе туг Агуд бег 5ег ТиИг Геи сіи 5ег су ІЇІе Рго АїЇа 60
Аг Рпе б5ег сІу б5ег сіу бек сІу Тйг Ар Ре тиг Ге Тиг ІЇе 5ег 65 70 75 80 50 5зег Гей сої Рго сій Азр Ре Аїа ма! Туг туг Ссу5 сЇп сіп А5п туг 85 90 95
Азр ма! Рго Тгр Ттйг Ре СсІу сіп сіу тиг Гуз ма! сіи че Гуз 100 105 110 55 «210» 61 «2115 111 «2125 ПРТ «2135 Штучна (516) «220» «223» гуманізований варіант - вартабельний домен мі легкого ланцюга РОІ1- 0103 04 65 «400» 61 сій 1Іе ма!ї ге тТиг о сіп 5ег Рго АЇа ТПг Ге б5ег Ге 5ег Рго сі1у 1 5 10 15 70 си Аг Аїа Тс гей бек сСуз Агуд Аїа 5ег сіи бек ма! А5р тиг 5ег
20 25 30
Азр Азп о 5ег Рпе ІЇе Ні5 Тгр Туг сіп сіп Гуз Рго сіу сіп 5ег Рго 35 40 45
Агд Гей Гей Іїе туг Агуд бег 5ег ТиИг Геи сіи 5ег су ІЇІе Рго АїЇа 50 55 60
Аг Рпе б5ег сІу б5ег сіу бек сІ1у Тйг дор Ре тТийг Ге тНг Іе 5ег 1065 70 75 80 5зег Гей сі Рго сі Ар Ре АЇа ма! Туг туг Су5 сіп сіп Азп туг 85 90 95 А5зр ма! Рго Тер Тс Ре су сіп сіу тТпйг Гуз ма! сіи Іе Гуз 100 105 110 «2105» 62 «2115 107 «2125 ПпПРТ «2135 Ното 5аріеп5 «4005» 62 Агд Тк ма! Аїа Аїа Рго 5ег ма! Ріпе ІїЇе РПе Рго Рго 5ег А5р Си 1 5 10 15 сіп ге Гуз 5ег сіу Тйг АТа 5ег ма! маї Суз Гей Ге А5Зп А5п Ре 20 25 30
Зо туг Рго Агуд сім АЇїа Гуз ма! сіп Тер Гуз маї д5р доп АїЇа гей сп 5ег с1у А5п 5ег сіп сій 5ег ма! тпг си сіп дор 5ег уз Азр 5ег 35 50 55 60
Тиг о туг б5ег Ге б5ег б5ег ТИг о їГеи Тиг Ге 5ег Гуз АЇа Азр Туг си 65 70 75 80 40 Гуз Ні Гуз ма! туг Аїа Суз сіи ма! тиг ніх сіп сіу Ге 5ег 5ег 85 90 95
Рго ма! Тиск Гуз 5ег Ре А5п Агуд су си сСуз 100 105 45 «2105» 63 «2115 105 «2125 ПРТ «2135 Ното 5аріеп5 «4005 63 сій Рго Гуз АЇїа АЇїа Рго 5ег ма! Тийг Гей Ре Рго Рго 5ег 5ег Си 1 5 10 15 сій Ге сіп АЇїа А5п о Гу5 АЇїа тТийг оїеи маї Суз Гей ІІе 5ег А5Зр РНе 20 25 30 туг Рго сіу АТа ма! тйг маїЇ АїЇа Тер Гуз АЇа Ар 5ег 5ег Рго Маї бо 35 40 45
Гуз АЇа сіу ма! сіи тТйг о тиг Тс Рго 5ег уз сіп 5ег Авзп А5П Гуз 50 55 60 65 тТуг Аїа Аїа 5ег 5ег Туг Ге 5ег Гей Тиг Рго сіи сіп тер Гуз 5ег 65 70 75 80
Ні Агд бег туг б5ег Суз сіп ма! тйг ніх сіи сіу 5ег тНг ма! си 85 90 95 70
Гуз Тийгомаї Аїа Рго Тийг сіи сСу5 5ег 100 105 «2105» 64 «2115 330 «2125 ПРТ «2135 Ното 5аріеп5 «400» 64
АТїа бек ТтиИг Гуз сіу Рго 5ег ма! Ре Рго Ге АЇа Рго 5ег 5ег уз 1 5 10 15 5ег Тиг 5ег сіу сіу ТНг АїЇа Аїа гей сІу Су5 Гей маїЇ Гуз Азр туг
Ре Рго сій Рго ма! тйг ма! бек Тер Азп 5ег с1у АЇа Ге тЕг 5ег 20 сІу ма! ніх Тиг РПе Рго АЇа ма!Ї Гей сіп 5ег 5ег сІу Геи Туг 5ег 60
Гей 5ег б5ег ма! ма! тиг ома!ї Рго 5ег 5ег 5ег їеи сіу Ттиг сіп тНг 65 70 75 80 25 тукг шІІе Суб Азп мМмаЇ А5зп Ні Гуз Рго 5ег АЗзп ТИг Гуз маї А5р Гуз 85 90 95
Гуз ма! си Рго Гуз 5ег Су5з Азр Гуз ТИг Ні Тиг осСуз Рго Рго су 30 100 105 110
Рго АЇа Рго сіи Гей Гей сіу сіу Рго 5ег ма! Ре Геи Ре Рго РгО 115 120 125 35 Гуз Рго Гуз Азр ТИг о Геи Мет ІчІЇе 5ег Аг Тйг о Рго сіи Ма! тНг су 130 135 140 ма! ма! ма! Азр ма! 5екг Ні сій Ар Рго сіи ма! Гуз Ре Азп Тгр 145 150 155 160 40 тукг ма! А5зр сіу ма! си ма! ніх А5п АЇа Гуз Тийг Гуз Рго Аг си 165 170 175 сі сіп тТуг АбЗп о б5ег Тйг о тТуг Агуд ма! Ма! 5ег ма! гей тиг маї геи 45 180 185 190
Ні5 сіп Ар тер ге АбЗп сіу Гуз сій Туг Гуз Суз Гуз ма! 5ег дп 195 200 205 50 Гуз АЇїа Гей Рго АЇїЇа Рго ІЇе сіи Гуз Тиг ІЇе 5ег уз АїЇа Гуз Сс1у 210 215 220 сій Рго Агуд сій Рго сіп Ма! Тук тТигогГеиу Рго Рго 5ег Аг А5р си 225 230 235 240 55
Семи Тйг оГуз АЗзп о сіп мМмаї 5ег гей Тйг о Су5з Ге ма!їЇ Гуз сіу Ре туг 245 250 255
Рго 5ег А5Зр ІЇе АЇа ма!їЇ сіи тер сіи 5ег А5Зп СІу сіп Рго Си А5ПпП бо 260 265 270
Азпотуг Гуз Тс Тс о Рго Рго ма! Гей А5р б5ег Ар сіу 5ег РПе РІе 275 280 285 65 Гей туг бек Гуз Ге Тийг ма! Азр Гуз 5ег Агд Тер сіп сп с1У А5П 290 295 з00 ма! Ре 5ег Су5 5ег ма! мет нНі5 сій АТа гей Ні Азп Ніз Туг тег 70 305 310 315 320 сіп Гуз 5ег їеу б5ег гей б5ег Рго СсІу Гуз 325 330 «2105» 65 «2115 330 «2125 ПРТ «2135 ото 5аріеп5 «4005 65
АТїа бек ТтиИг Гуз сіу Рго 5ег ма! Ре Рго Гей АЇа Рго 5ег 5ег Гуз 1 5 10 15 5ег Тиг о б5ег сТу сіу Ттйг Аїа АТа ге сіу Су5з Гей ма! Гуз А5р туг
Ре Рго сій Рго ма! тик ма! бек Тер Азп 5ег С1Уу АЇа Гей тЕг 5ег 20 сіу ма! ні Тийг РМПе Рго АЇїа маЇ Ге сіп 5ег б5ег сіу Геи Туг 5ег 60
Ге 5ег б5ег ма! ма! тик о маїЇ Рго 5ег 5ег 5ег їеи сіу Ттиг сіп тиг 25 5655 70 75 80 тукг шІІе Суб Азп мМаЇ А5зп Ні Гуз Рго 5ег АЗзп ТИг Гуз маї А5р Гуз 85 90 95 30 Гуз ма! сій Рго Гуз 5ег Суз Азр Гуз ТИг Ні Тиг о сСу5 Рго Рго су» 100 105 110
Рго АЇа Рго сі АЇїа Аїа сіу сіу Рго 5ег ма! Ре Ге Ре Рго РгО 115 120 125 35
Гуз Рго Гуз Азр ТИг о Геи Мет ІЇе 5ег Аг Тйг о Рго сіи ма! тиг су» 130 135 140 ма! ма! ма! Азр ма! 5ег Ні сій Ар Рго сіи ма! Гуз Ре Азп Тгр 40 145 150 155 160 тукг ма! А5зр сіу ма! си ма! ніх А5п АЇа Гуз тТНг Гуз Рго Аг си 165 170 175 45 сій сіп туг Аб5п о б5ег Тиг о туг Агуд ма! ма! 5ег ма! Ге тиск маї Ге 180 185 190
Ні5 сіп А5р тер ге АбЗп сіу Гуз сіи Туг Гуз Суз Гуз ма! 5ег дп 195 200 205 50
Гуз АЇа Гей Рго АЇа Рго ІЇІе сій Гуз Тийг ІЇе 5ег уз АїЇа Гуз СсС1У 210 215 220 сій Рго Агуд сій Рго сіп Ма! Тукг Тйг о Ге Рго Рго 5ег Аг А5р си 55 (225 230 235 240
Семи Тйг оГуз АЗзп о сіп Ммаї 5ег гей Тйг о Су5з Ге маїЇ Гуз сІ1у Ре туг 245 250 255 60 Рго 5ег Азр ІЇе АТа ма! сіи Тер сіи 5ег А5зп сІу сіп Рго си А5П 260 265 270
Азпотуг Гуз Тс Тс о Рго Рго ма Гей А5р б5ег Ар сіу 5ег РПе РІе 275 280 285 65
Гей туг бек Гуз Ге Ттиг ма! Азр Гуз 5ег Аг Тер сіп сп с1У А5П 290 295 з00 ма! Ре 5ег Су5 5ег ма! мет нНі5 сій АТа гей Ні Азп Ніз Туг тег 70 305 310 315 320 сіп Гуз 5ег їеу б5ег Ге б5ег Рго СсІу Гуз 325 330 «2105» 566 «2115 330 «2125 ПРТ «2135 ото 5аріеп5 «4005» 66
АТїа бек ТтиИг Гуз сіу Рго 5ег ма! Ре Рго Гей АЇа Рго 5ег 5ег Гуз 1 5 10 15 5ег Тиг о б5ег сТу сіу Ттйг Аїа АТа ге сіу Су5з Гей ма! Гуз А5р туг
Ре Рго сій Рго ма! тик ма! бек Тер Азп 5ег С1Уу АЇа Гей тЕг 5ег 20 сіу ма! ні Тийг РМПе Рго АЇїа маЇ Ге сіп 5ег б5ег сіу Геи Туг 5ег 60
Гей 5ег б5ег ма! ма! тис о ма!їЇ Рго 5ег 5ег 5ег Ге сіу Ттиг сіп тНг 25 5655 70 75 80 тукг шІІе Суб Азп мМаЇ А5зп Ні Гуз Рго 5ег АЗзп ТИг Гуз маї А5р Гуз 85 90 95 30 Гуз ма! сій Рго Гуз 5ег Суз Азр Гуз ТИг Ні Тийг о сСу5 Рго Рго сСуз 100 105 110
Рго АЇа Рго сі АЇїа Аїа сіу сіу Рго 5ег ма! Ре Ге Ре Рго РгО 115 120 125 35
Гуз Рго Гуз Азр ТИг о Геи Мет ІЇе 5ег Аг Тйг о Рго сіи Ма! тНг су 130 135 140 ма! ма! ма! Азр ма! 5ег Ні сій Ар Рго сіи ма! Гуз Ре Азп Тгр 40 145 150 155 160 тукг ма! А5зр сіу ма! си ма! ніх А5п АЇа Гуз Тийг Гуз Рго Аг си 165 170 175 45 сій сіп туг Аб5п о б5ег Тиг о туг Агуд ма! ма! 5ег ма! Ге тиск маї Ге 180 185 190
Ні5 сіп А5р тер ге АбЗп сіу Гуз сій Туг Гуз Суз Гуз ма! 5ег дп 195 200 205 50
Гуз АЇа Гей СсСІу АЇїЇа Рго ІЇІе сій Гуз Типг ІЇе 5ег уз АїЇа Гуз СсС1У 210 215 220 сій Рго Агуд сій Рго сіп Ма! Тук тТигогГеиу Рго Рго 5ег Аг А5р си 55 (225 230 235 240
Семи Тйг оГуз АЗзп о сіп Ммаї 5ег гей Тйг о Су5з Ге маїЇ Гуз сІ1у Ре туг 245 250 255 60 Рго 5ег Азр ІЇе АТа ма! сіи Тер сЇи 5ег А5п сіу сіп Рго си А5П 260 265 270
Азпотуг Гуз Тс Тс о Рго Рго ма Гей А5р б5ег Ар сіу 5ег РПе РІе 275 280 285 65
Гей туг бек Гуз Ге Тийг ма! Азр Гуз 5ег Агд Тер сіп сп с1У А5П 290 295 з00 ма! Ре 5ег Су5 5ег ма! мет нНі5 сій АТа гей Ні Азп Ніз Туг тег 70 305 310 315 320 сіп Гуз 5ег їеу б5ег гей б5ег Рго СсІу Гуз 325 330 «2105» 67 «2115 327 «2125 ПРТ «2135 Ното 5аріеп5 «4005» 67
Аїа бек тТиг Гуз сІіу Рго бек Ма! Ре Рго Гей АЇїа Рго Су5 5ег Агд 1 5 10 15 5зег ТИг о 5ег соЇи 5ег Тк Аїа АТа ге сіу сСу5з Гей Ма! Гуз А5р туг
Ре Рго сій Рго ма! тик ма! бек Тер Азп 5ег С1Уу АЇа Гей тЕг 5ег 20 сіу ма! нНі5 Тийг РМПе Рго АЇа маЇ Гей сіп 5ег 5ег сіу Гей Туг 5ег 60
Ге 5ег б5ег ма! ма! тис ома!їЇ Рго 5ег 5ег 5ег їеи сіу Ттиг Гуз тиг 25 5655 70 75 80
Туг ТНг о Субз АЗзп о маЇ А5Зр о Ні Гуз Рго 5ег Ап ТИг оГу5 ма! А5р Гуз 85 90 95 30 Агд ма! сіи б5ег о їу5 Туг с1у Рго Рго Су5 Рго 5ег Су5 Рго АїЇа РГгОо 100 105 110 сі Ре Гей сіу сіу Рго 5ег ма! Ре Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз 115 120 125 35
Азр Тс Ге Мет ІЇе бек Агуд Тиг о Рго сіи ма! тиг суз ма! маї ма! 130 135 140
Азр ма! 5ег сіп сіи Азр Рго сій ма! сіп Ре А5п Тгр Ттуг маї дор 40 145 150 155 160 сІ1у ма! сіи маї Ні5 А5п АЇа Гуз Тиг Гуз Рго Агд сіи сЇи сіп Ре 165 170 175 45 А5зп бег Тиг о туг Агуд ма! ма! 5ег ма! Гей тиг маї гГеи ніх сіп др 180 185 190
Тер Гей Ап сіу Гуз сіи Туг Гуз Су5з Гуз ма! 5ег А5Зп Гуз СТУ Гей 195 200 205 50
Рго 5ег б5ег ІЇе сЇи Гуз Тийг ІЇе 5ег Гуз АЇа Гуз сіу сп Рго Ага 210 215 220 сі Рго сіп ма! Туг тис Гей Рго Рго 5ег сіп сіи сіи Ме тЕг Гуз 55 (225 230 235 240
Азп сіп ма! бек їеи Тиг Суз Гей мМмаїЇ Гуз сіу Ре Туг Рго 5ег др 245 250 255 60 че АТа ма! сіи Тер сЇи 5ег д5п сіу сіп Рго сі А5п АбЗп туго Гуз 260 265 270
ТВг о ТИг о РгО Рго мМаЇ Ге Азр 5ег А5Зр сіу б5ег Ре Ре Гей Туг 5ег 275 280 285 65
Аг Гей тиг о маї дор Гуз б5ег Аг Тгр сіп сій с1у А5зп Ма! РПе 5ег 290 295 з00
Суз 5ег ма! мет ні5 сій АТа Гей Ні Азп Ні Туг Тйг сіп Гуз 5ег 70 305 310 315 320
Ге б5ег їеи бег Геи сІу Гуз «2105» 68 «2115 268 «2125 ПРТ «2135 Ното 5аріеп5 «4005 68
Рго сіу Тер РПе Гей д5р 5ег Рго А5р Ага Рго Тер А5п о РГгГО РгГО ТАг 1 5 10 15
Ре 5ег Рго Аїа Гей Геи ма! ма! тийг си сІіу А5зр А5зп АТа тиг РПе
Тис осСуз бег Ре 5ег А5Зп ТИг о 5ег сі 5ег Ре маїЇ Гей Азп Тер туг 20
Агд Меє б5ег Рго 5ег А5п сіп Тиг А5р Гуз Гей Аа Аїа Ре Рго си 60
А5Зр Агуд б5ег сп Рго сіу сіп Азр Суз Агуд Ре Агуд ма! тйг сіп гей 25 5655 70 75 80
Рго А5п о сіу Агуд АЗр Ре Ні Мет 5ег ма! ма! Агд АїЇа Аго Ага А5Пп 85 90 95 30 А5р б5ег сіу тТиг туг Гей сСу5 о1у Аїа ІЇе 5ег Геи АїЇа Рго Гу5 АїЇа 100 105 110 сп І1ІЇе Гуз сіи 5ег Ге Аг Аїа сі Ге Агд ма! тис си Ага Ага 115 120 125 35
АТїа сіи маї Рго Ттйг АїЇа Ні Рго 5ег Рго 5ег РгОо Агд Рго АїЇа су 130 135 140 сіп Ре сіп тйгогГеи маї ма! сіу ма! ма! сіу с1Уу ге Гей сІу 5ег 40 145 150 155 160
Ге мМма!ї Гей Гей ма! Тер ма! гей АТа ма! Іїе су5 5ег Аг9 АїЇа Аїа 165 170 175 45 Агдуд с1у Ттиг ї1Іе с1у Аїа Агуд Агд Тпг сіу сп Рго Гей Гу5 си А5р 180 185 190
Рго 5ег АЇїа ма! Рго ма! Ре 5ег ма! Азр Ттуг СІу сіи Гей А5р Ре 195 200 205 50 сп Тер Агуд сій Гуз Тс о Рго сій Рго Рго Ма! Рго Су5 ма! Рго си 210 215 220 сіп тс осі тТуг АТа тс оче маїЇ Ре Рго 5ег сіу Мет сІу тЕиг 5ег 55 (225 230 235 240 5ег Рго АЇїа Агуд Агд сіу б5ег АЇїа А5р сІу Рго Агу 5ег АЇа сіп РгОо 245 250 255 60 Гей Агд Рго сій Азр сіу ніх Су5з 5ег Тгр Рго Гец 260 265 «2105» 69 «2115 150 65 «2125 ПпПРТ «2135 Ното 5аріеп5 «4005 69 70 Рго сіу Тер РпПе Гей д5р 5ег Рго Ар Аг Рго Тер А5зп о РгГОо РгО Тег
1 5 10 15
Ре 5ег Рго АЇа Гей Гей ма! ма! тйг сіи сіу А5р А5Зп АЇа тТиг РНе 20 25 30
Тис осСуз бег Ре 5ег А5Зп ТИг о 5ег сі 5ег Ре ма!Ї Гей Азп Тер туг 35 40 45
Агд Меє б5ег Рго 5ег А5п сіп Тиг А5р Гуз Гей Аа Аїа Ре Рго си 50 55 60
А5Зр Агуд б5ег сп Рго сіу сіп Азр Суз Агуд Ре Агуд ма! тНг сп гей 65 70 75 80
Рго Азп сіу Аг Азр Ре Ні Меї 5ег ма! ма! Аго9 Аїа Аго Агд Абп 85 90 95
Азр б5ег сіу тийг туг Гей Суз С1у АїЇа те 5ег їеи АїЇа Рго Гуз АїЇа 100 105 110 сп І1ІЇе Гуз сіи 5ег Ге Аг Аїа сі Ге Агд ма! тис си Ага Ага 115 120 125
АТїа сіи маї Рго Ттйг АїЇа Ні Рго 5ег Рго 5ег РгОо Агд Рго АїЇа су 130 135 140 сіп Ре сіп тиг Геи маї 145 150 «2105 70 «2115» 288 «2125 ПРТ «2135 ото 5аріеп5 «4005 70 мес сіп ІІе Рго сіп АЇа Рго Тгр Рго ма! ма! тер АїЇа маї гГеи сп 1 5 10 15
Гей сіу Тер Агуд Рго сіу Тер Ре Гей А5зр 5ег Рго А5р Ага Рго Тгр 20 25 30
Азп оРгГО Рго ТИйг Ре 5ег Рго АЇа Ге Гей маїЇ ма! тийг сіми с1іу др 35 40 45
Азп АЇа Тйг Ре тТийг Су 5ег Ріпе 5ег А5Зп ТИг 5ег сі 5ег РНе маї 60
Гей А5п Тер о тТуг Агуд Мет б5ег Рго 5ег Азп сіп Тиг Ар Гуз Геи АїЇа 50 65 70 75 80
Аїа РПпе Рго си А5р Агуд бег сп Рго сіу сіп А5р сСуз Агу Ре Агд 85 90 95 55 Ма! Тк сіп Ге Рго Азп сіу Агуд Азр Ре Ні5 Мет б5ег ма! ма! Ага 100 105 110
Аїа Агд Агуд Азп дор бег сіу тиг туг Геи Су5 Оу АїТа ІЇе 5ег геи 115 120 125 (516)
АЇїа Рго Гуз АТа сіп ІЇе їу5 сЇи 5ег Геи Агу Аїа си Геи Ага ма! 130 135 140
Тк ої Агуд Аг Аїа сіи мМмаї Рго Тйг АЇїа Ні5 Рго 5ег Рго 5ег РГгО 65 145 150 155 160
Аг Рго Аїа с1у сіп Ре сіп тийг о Геи ма! ма! с1у ма! ма! с1у с1у 165 170 175 70 Гей Геи сіу бек Ге Ма! Гей їеи Ма! тер ма! ге Аїа маї Пе су
180 185 190 5ег Агуд Аїа АТа Агд сіу тик Іїе сІ1у АЇїа Агуд Агу тиг сіу сіп Рго 195 200 205
Гей Гуз сій А5р Рго 5ег АЇа ма!Ї Рго ма! Ре 5ег ма! А5зр туг ОС1У 210 215 220 си Гей А5р Рпе сіп Тер Агд сій Гуз ТигоРго сій Рго Рго Маї Рго 10225 230 235 240
Суз ма! Рго сіи сіп тТйг сі туг Аїа тТйг о І1Іе ма! Рпе Рго 5ег СсС1У 245 250 255
Мет сіу тНг 5ег 5ег Рго АЇа Агд Агдуд сіу 5ег АЇа А5р сіу Рго Ага 260 265 270 5зег АЇа сіп Рго Геи Агуд Рго сі А5р сіу Ні Суб 5ег Тер Рго Гей 275 280 285 «2105 71 «2115 4 «2125 ПпПРТ «2135 Штучна «220» «223» Мінімальна НМК1 РОІ1-0103 1 гуманізованого варіанта РО1-0103:
РО1-0103-0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 1 РО1-0103-0315 «4005 71 5зег бег Туг тиг 1 «2105 72 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна «220» «223» Мінімальна НМК2 РО1-0103 1 гуманізованого варіанта РО1-0103:
РО1-0103-0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 1 РО1-0103-0315 «4005 72 5ег сіу сТ1у о1у Агд Аз5р ІЇе туг 1 5 «2105 73 «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Штучна «220» «223» Мінімальна НМК3 РО1-0103 ії гуманізованого варіанта РО1-0103:
РО1-0103-0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 1 РО1-0103-0315 «4005 73 60 с1у Ага ма! Туг РНе 1 5 «2105 174 «2115 6 65 «2125 ПпПРТ «2135 Штучна «220» «223» Мінімальна ІМК1 РОІ1-0103 1 гуманізованого варіанта РО1-0103: 70 РО1-0103-0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 1 РО1-0103-0315
«4005 е«Л74
Тиг об5ег А5р АЗп 5ег. Ре 1 5 «2105 75 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна «220» «223» Мінімальна ІМКк2 РО1-0103 1 гуманізованого варіанта РО1-0103:
РО1-0103-0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 1 РО1-0103-0315 «4005 75
Аг бег 5ег Тиг Геи си 5ег 1 5 «2105 76 «2115 6 «2125 ПРТ «2135 Штучна «220» «223» Мінімальна ІМК3 РО1-0103 1 гуманізованого варіанта РО1-0103:
РО1-0103-0312, РО1-0103-0313, РО1-0103-0314 1 РО1-0103-0315 «4005» 76
Азп тТуг Азр ма!ї Рго Тер 1 5 «2105 77 «2115 З «2125 ПРТ «2135 Штучна «220» «223» фрагмент гк-НЗ3, що містить амінокислотну послідовність КОМ в положеннях 71, 72, 73 згідно з нумерацією Кабах «4005 77
Аг А5Зр А5п
Claims (16)
1. Виділене антитіло, яке специфічно зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло містить: (а) НУВ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:71; (б) НМЕА-На, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:72; (в) НМА-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:73; (г) НМА-1.1, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:74; (д) НМЕА-12, яка містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:75; (є) НМЕА-І-3, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:76, і (ж) ЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО:77 (КОМ) в положеннях 71, 72 і 73, згідно з нумерацією Кабаї. 60 2. Антитіло за п. 1, де дане антитіло А) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:7 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:8; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її); або 65 Б) ї) містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:58;
і) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮО МО:59; ії) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:60; ім) містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО:61.
3. Виділене антитіло, яке специфічно зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло ї) містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:7 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:8; ії) або гуманізований варіант МН і Мі. антитіла згідно з Її).
4. Виділене антитіло, яке специфічно зв'язується з людським РО, де дане антитіло містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:58.
5. Виділене антитіло, яке специфічно зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:59.
6. Виділене антитіло, яке специфічно зв'язується з людським РО, де дане антитіло містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:60.
7. Виділене антитіло, яке специфічно зв'язується з людським РОТ, де дане антитіло містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:57 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:61.
8. Антитіло до РО! за будь-яким з пп. 1-7, де дане антитіло характеризується незалежно одною або більше ніж одною з наступних властивостей: антитіло до РО1 ї) конкурує за зв'язування з РО-1 з антитілом до РОТ, яке містить МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО:7 і МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО:8, і/або ії) зв'язується з РО-1 людини і яванського макака; і/або ії) посилює секрецію інтерферону-гамма (ІЕМ-гамма) алогенними стимульованими Т-клітинами на 85 95 або більше при концентрації антитіла 10 мкг/мл; і/або їм) посилює секрецію фактора некрозу пухлин альфа (ТМЕ альфа) алогенними стимульованими Т-клітинами на 200 95 або більше при концентрації антитіла 10 мкг/мл.
9. Антитіло за будь-яким з пп. 1-8, яке являє собою повнорозмірне антитіло ЇДО1 з мутаціями І 234А, І 235А і РЗ3290 (нумерація згідно з індексом ЄШО за Кабра).
10. Виділена нуклеїнова кислота, кодуюча антитіло, що специфічно зв'язується 3 людським РОТ, за будь-яким з пп. 1-9.
11. Клітина-хазяїн для експресії антитіла за будь-яким з пп. 1-9, яка містить нуклеїнову кислоту за п. 10. Зо
12. Спосіб одержання антитіла за будь-яким з пп. 1-9, що включає культивування клітини- хазяїна за п. 11 таким чином, що продукується антитіло.
13. Спосіб за п. 12, який додатково включає виділення антитіла з клітини-хазяїна.
14. Фармацевтичний препарат для специфічного зв'язування з людським РОТ, який містить антитіло за будь-яким з пп. 1-8 і фармацевтично прийнятний носій.
15. Застосування антитіла за будь-яким з пп. 1-8 для лікування раку, експресуючого РО1.
16. Застосування антитіла за будь-яким з пп. 1-8 в приготуванні лікарського засобу для лікування раку, експресуючого РО1.
Збільшення секрепії ІЕМ-у злогенними активовапими Т-клікяшками ; АБ ЯРрІ» в МІК 40 мкг/мл ої ЩІ ОМ мкг/мл пн хв ке | - т сій : ї кееха ! т : Ех : те ДДронкеннннеенння пн З знанні шк І я | ЩЕ ПОВЕ : ще Я шк 3 ЯН ЯМ де ї ї но: ПКУ ПОН ря ДР ря манна НІ шани В Еш і о : | НК ОН Х : ; | ЩО шва Ех ПОКИ В : АК НН ОКХ ПЕК : ше НЕО НАХ ; АК ИН і го : | ЩІ іВ . п . о п : : ЕК І ж еНя ОКО: : ФК Хо зно ММ 5 ян СН ІК Не ПН, У мм. І й ІЗ МІВ -2 20 Шмл МІхесСА МК-3475 химерне РІЗ1-0103 ; Е я й Секреція ПЕМ-у Ви Рісх Ро о й ОО ЩЩВ доянннодроя І хв: МНН дохо ! що 5 г З ї шщ-- З Не ща ща : щх с Со , То ЕОВ5У ЕВ НЕ В Концентрації аку ій, що Коряжеї ЕС І: КВУ КО Н ПОККІ хх ТОВ Я Й пол Й Й ши НН НН ХВ В В ЛННОГО отовичика До правако ми В я 0 В я В стовичики, РОЖК донні І З ВО 0 б мкм й 20 мкм 704 мами : : І Ве: 5 в 3 0 ВО 35 б чкиманОО мкатної Ї З Шипи Кн НН В си ВВ КК у ВИК ДИВ. : Ще , МУКА ооо дю ли й Со оз нава ЯЬ-3 М 00 химерно ООН Я зак з5 рі оїра ри екНіЗ і У ї і. Ще Мт Я : Пам воі-анма доза па !
Фіг. 2 Ї І - В. ія МК ПОН Н ННЯ : ща -- ІВ ЄСекредія І чЕ-х Вів-Ріех Рго Ва не ше ї ї щей ща щ Концентрації антитітка, що ОЙ сення ня т Ше сне ЗцИЖжуються де ПИ ПМ й . Е с нннняняаяаяаяая-.йяяяни ше НН ЗНИК (відзнвого стовичика до правого с мини ША я СОВИ р стовпчика) А МИ ОМ р и ШИК! ' вк З й ВХ. СВІ Я ВАК ях. 10 мкг/мл. г) мкгімлог Я мегуми е Бех ре Ва НІ ОМ мктумл-йО! мктмл що ' ' С ОБ шини нн В : с Ще ОН Со дві вемає АЬ «230 химорнс ЛЮХКЯ МКЕЗЯ75 РОЇ 0103 РІ, ОЗ ї іл МИ з є і Е ях пОу зла
Фіг. 5
Об'єднаний гранзим В коло. ха, -« 000 в Е ще ще а г НЕ ге щЕ Й Ж б « 577" «у і о ! т : б вв ЗЕ НЕ ВЕ ЕМ Ко п 4 (середнє значення)
Фіг. 4А Об'єднаний ПЕЧ-У 44 з : г в з | З в в в б мкг/ми шк яв а. т по Щї вок я ж ях м; й я п
Ге. Е Е Ї. Я , ; У в а мк що яки б я ою о и ши м КО тії пк 3 (середнє значення)
Фіг. 46
(1) Вилив блокади ЕВІРО-ТЇ на повторну активанно норигніченої сигналізані СК - й50ю065 - шк ЗО мкг/мл - ЖНЮОВ зу 5 мкг/мл х КЕ ! І зк жк щи гі ше що: ш Япаовпая шк. ШЕ ш : ОО 5 ШЕ - -ш Ф Й щи Йони пееетттеттттеттсеофресотееестстесо В подеестссестестестст плини пн й - Кк 0. - с ИН ЕНН щи Ко о. ефекторні клітини Коя пере о (З Вилив блокади РІІУРО-11 на повторну зктиванію пригніченої снгналізанії СК п КН - Шо замком ш Ще. ій мк мл з Ж ж 1500005 ; й в З її аа БМК Ма | ї З г і ї жо озвоюю ОТ ші Еш ше ше що Е | ВО | . ж ; а ОО В Б Е - | ще ша г с ї: - ВОЮ ще ше що го ! й Е й г х ; ІЕЕ ї і ї Е ж іш щ ше шо кій в4 шт ! ші ши . . Коли ЕЕ 5 ФУ о жбвконтрольїо 530 ефекторні клітини що па Й | ЇЇ: я у я 81 я
Фіг. 5А і 5 у Я ох к ок й ах З «ау щ-. й х КИ х | ся а, чай Ко в Ме ій «й й ша о: б. КО шо я. «5 як о а " дюенх, й ва ч Є: ей З Кз ЛОВ В 5 а як жо, ее З ЕШИКЗ 3 Ж Я З ЩЕ Ж не З СХ сич, я ОХ х я с 5 сао ай чи їх Па чу ї КК З т з В ЗД й я Фр х а ОХ ек ХА і з ом М Ох ех З ЗМО КЕ ДО ск В М сови М зе в ях М ОИ В ря З б зи М Бк а с пости дику В Кк. Є х ек І КЕ с сн Й 8 а в Мкозй зов що а ще Ко К ще в а й 4 Те Б Х пок ЗБ Я кеВ, ще БО ще Ж дк 5 ес ши: Ваш. Ше ї Ше ча т Ть 5 їе, У ї 5 а Кестосяу та 5 кВ он ЕУ я УК Кй ОКУ, у ден Кс : ше ев СИ ЩЕ М що КУ М т За ВОАС Раб РП1-0103 Важкий ланшог В їй Легкий ланцюг
Фіг. 6 НезвВо на / Е | нерв зе ЯКУ т- КОХ ОК ЕК «ее Хлху АК, МКК Ха ОК ОК о КК ОВ В ня п ОО С В ОО Б СВ позовна о. о. о. с о. за ОК В В ОО М В що НК Ж у, о г МКК ХК ПЕ ОО Я с 0. . . о. Ха СХ А Ж о о: : п. ОО ОО ОО ОК В В В о ВВ ЗО СО п М У шо. З ОО и Ж й г с шо | Й Глікознаєвиня бере учаєть у вжаемодії 5 ОБОВ . вк з про ВЕ ек ОКя між РОТІ Бав РОН що ще й жк К 7 х Важкий ланнювє х Леєкий ланшес
Фіг. 7
Урі сук я о чтожиткх Й Легкий ланнює Важкий ланцюг -е : зе МБО 5 ; ; а сом РК с ЗХ ОД ХО 5 ММ сс ЖК, ЗКУ о. ХО НЯ дому Я ох КО Оаких ОБ УОЗ о, Кз в Ех ще 0 се а х в. о е фо» МО КК В В У х ХМК хо ВМ шо ах м МЕ ОН Ж ОХ ХК ОО шо І В В С в НН,
о. 7» ее Ф і в. ТО п, МН З ОН а ши о І в с ВО ОВ ХО ОКХ С Я за Ох п А р В су г сш Ох їі ж що МОХ НН КК -. КК нн ях ЗХ ЗУ ОВ де ВУ й 1 и З ОК 55 ЕМ о о ВВ Ко ВВ в 55 І 000 ЦК
Б. о ВО ОХ 0: - В ПІН ВК ж Я Ши Б Ме І І М МВ . о. У М МО Фрагмент Бар РОЗ Діанака конгакти з РЕ Діпяека ковтакту з РЕЯ - сайк Глікосзжлювання Аня Бвітоп ав'язувашня, пе власмодіє з важким і легким запиюгоМ п їй ЗУ зо тя и Бігой зв'язухання. що взаємодіє з тільки з важену лавцютом Диянка коніктх а РОЇ на легкому дахи й
Фіг. 8 Ся Зк до КОН і ВЕН- Глікозалювання ва Ази М ЗУ ЗЕ кб я ї (ценжральний пукревий ланці) вста М З Н в ЗК й в в лем Агобв. А М боту де а Ї Перший СпеМАс (Агов, Лера з ож ща із й Мета ім САТ Що : шо - Ка Мезе Комо рос о Бегзо, Зегаї, Туг3?, Вуз, ч йо аа 5 оз | сіува. х Б Я щ і; хв МА кс В Я й С ! о ВШ ; зі З га ц ай зар зу я Другий СМАЄ суза, Спува, Агов сх ра В ще: У Н Зх лвмав ВАК ВОСНсВЯУ Є З Кк ПК А ИН А НН ОКА НН нн Ся они У вк Н ї КУ Тк е оч КУ ій ії ВМА о біуза, АБп/й хз ви ос ВИ Я ! ! ЕК ВІК о Мем ВТ і де іс Я ОО МАМ і : ся (Вс - ої КО " І МАМ біуша, Сбуза, Сімов, Агнія,
р. ще і Авр7З, Авп/а У «7 ВА Ку уоляннннажнннкнлажллинчнанлчинлнжлничкяхачилнила стан чанизианя я аа начд нання ині лахжаажааиалачжии Ф що ОС МАс|-е МОА є М-анеплеебста- г адактозамтн ох 24 зпетиламіном с озокотчєта-юталактопіраноа ТРОС» ажвфа-і ефуноза ІВМА бета 1) мацопіраюза МАМ): альфа-Ї)-мавопіравоза
Фіг. 9
«Контакти. розраховані РІБА «Ярий: залишки РЕМ в контакні з антикізом м оРИ . 30 . ав й БО . БО . 70 пір тут тах: на "ж хмеух укр жк поту з РОМЕБОБЕОВРИМРРТЕБРАССЬУУТЕСОМАТЕТСВЕ БМ Ще М ча а . 50 . 0 - 155 - 110 - 120 БМ ами воотзЗОоСеевУТОСОЕМОСВОВНИВУУНАНВНМПЛОСТ
А . 130 . 140 - 150 . 159 . 179 крали 5- МО КВ ен п ВАВ ЕвеАКУВТУЕ среди ЖЕК ОЦК ЕЗОКАКЬКУТЕККАЕУКТАНРОВОРЕРАСОКОТЬУ й а і й а серажодія З Локони паном я сх нздевнадія З гОоловииМ МаенНЕнМ
Фіг. 10 «Жовті: СЮК. « Червоний: залив аваеіня я кома з пр ехгеом «Жонтах вх, розрахевази РІБА. яРО-от03 Не . 10 « о . 30 , 0 , 50 кУупуввадо р укросвькКовсААяо ВЗ Но ХУВОТРЕКВООКУАТ ай , БО . 79 . во . 20 - 100 ОО кт ув еп їх Ку чЕ сет пт ех у У «ІІ т ПптохровУКЮСВЕТІв ЦЕ тТОУБЕМОВОМОКОТАБУЖСТЬСІ в ж жа й ж жж жжжж - Мо - 180 Вес осксоствуттува ши не Жот взаємній з лк люгванням ко: узаємсвця З боковим панижчм ж ге пу мочів З гоновниМм панич
Фіг. 11
-Жеонтва СК - Мері: звленно) ЗжеМНа ла В хевегакті я ануса «ЖКонтиктв, розраховані РІБА, У врі-0103 1С ЕТУБТОВРАВЕРУВЬООВАТІЗСВАЄВОУВ ЦО НИ РООВРК, і ва . то . Во . зо Зо ІЛУНЕЯТСВОСУРАНЕВОВОВИТОКТ ТІ ВРУВАОВОУАТУ СО ВМСО я й й ром йо еіиМм се оекКОоВим Ла МЕ шо см вемМОя тоаЖУВиНМ ИЙ ИЮОМ
Фіг. 12 Нетглікозтютвованнй РЕЯ ! Глкозальований РЕ т 145 в. 455. ї я Е: я І зжа Ще з и НЕК: уунтірниня Е З Е ій смс й 15 ї Й - 21 А я | із ; РО1-103-0312 КЗ З но а Ето ій 1 8 Її Е Е / з т Еш і Й Е Й Ж Е ШЕУ КД З ЕЕ я -БЕ БУ 5 ние Б з555 Хобі -535 г БУ І Ух ВМР - а 84 -и ЕС до» Н КУ ! | і і ! і Ех Ї у їх і Х 184 у Г і Н 31554 я ж, ж 34 Х » 1 ! пеморолзумає Н у М НН ші й й 54 наніс 8 : сексу Н ЕН Шо Шк «1 фожлжижлауюючжжужьжжорктяжувььжвруюкилжюжьжеркььвьхжежвтарсжижажььььку Е «Ед фон ночнлжижаржижажювлжерлживтажажуютжжижжецажевлдиллжеуажжязижижну «ВМ 5 Ми щих ЗБ май ЗК --а З а не ЗМ лезо 0 б5ао яку Е Же зі : їжі гри Вк 4 3 І ши ша 85 12 ТУ -і ї А ї з84 лем ві ОО 54 к стук 1 84 Я дкюн о кттттностх нволумає В : : ши ! - " ч НК З Ен ї К І: -- т-во 1 -їх фрнннннжреюннннннютнння урн руююнннснь Я 215. десерту кинуто укр «В КУ вс тва зе дм олЕоеі 805 КУ 5-8 збе ам жо 25
Фіг. ІЗА с; | а 20408. ж ; а Е Фе
Е й.й : їз Айннчть зіднівяаєнжх приді зазори перя дк 000 оо они и п ка (ув) ії» Вр ї Неглікозильований РОЇ
Фіг. 138
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP15188061 | 2015-10-02 | ||
| PCT/EP2016/073248 WO2017055443A1 (en) | 2015-10-02 | 2016-09-29 | Anti-pd1 antibodies and methods of use |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA123826C2 true UA123826C2 (uk) | 2021-06-09 |
Family
ID=54252164
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201804633A UA123826C2 (uk) | 2015-10-02 | 2016-09-29 | Антитіла до pd1 та способи їх застосування |
Country Status (32)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US20170247454A1 (uk) |
| EP (1) | EP3356404B1 (uk) |
| JP (1) | JP6654694B2 (uk) |
| KR (1) | KR102072317B1 (uk) |
| CN (1) | CN108368173B (uk) |
| AR (1) | AR106232A1 (uk) |
| AU (1) | AU2016329251B2 (uk) |
| BR (1) | BR112018005164A2 (uk) |
| CA (1) | CA2997799A1 (uk) |
| CL (1) | CL2018000595A1 (uk) |
| CO (1) | CO2018003477A2 (uk) |
| CR (1) | CR20180151A (uk) |
| DK (1) | DK3356404T3 (uk) |
| ES (1) | ES2895034T3 (uk) |
| HK (1) | HK1259019A1 (uk) |
| HR (1) | HRP20211594T1 (uk) |
| HU (1) | HUE056033T2 (uk) |
| IL (1) | IL257858B (uk) |
| LT (1) | LT3356404T (uk) |
| MA (1) | MA43018B1 (uk) |
| MX (1) | MX2018003629A (uk) |
| MY (1) | MY190297A (uk) |
| PE (1) | PE20181092A1 (uk) |
| PH (1) | PH12018500711A1 (uk) |
| PL (1) | PL3356404T3 (uk) |
| PT (1) | PT3356404T (uk) |
| RS (1) | RS62450B1 (uk) |
| RU (1) | RU2746409C1 (uk) |
| SI (1) | SI3356404T1 (uk) |
| TW (1) | TWI625336B (uk) |
| UA (1) | UA123826C2 (uk) |
| WO (1) | WO2017055443A1 (uk) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3277320A4 (en) | 2015-03-30 | 2018-08-01 | Stcube, Inc. | Antibodies specific to glycosylated pd-l1 and methods of use thereof |
| US11933786B2 (en) | 2015-03-30 | 2024-03-19 | Stcube, Inc. | Antibodies specific to glycosylated PD-L1 and methods of use thereof |
| CN108368170B (zh) | 2015-07-13 | 2022-04-15 | 西托姆克斯治疗公司 | 抗pd-1抗体、可活化抗pd-1抗体及其使用方法 |
| PE20181322A1 (es) | 2015-09-01 | 2018-08-14 | Agenus Inc | Anticuerpo anti-pd1 y sus metodos de uso |
| EA201890790A1 (ru) | 2015-09-29 | 2018-10-31 | Селджин Корпорейшн | Связывающие pd-1 белки и способы их применения |
| US10287352B2 (en) | 2015-10-02 | 2019-05-14 | Hoffman-La Roche Inc. | Bispecific antibodies specific for PD1 and TIM3 |
| EP3370768B9 (en) | 2015-11-03 | 2022-03-16 | Janssen Biotech, Inc. | Antibodies specifically binding pd-1 and their uses |
| CA3132021C (en) | 2015-11-18 | 2024-03-12 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Pd1 and/or lag3 binders |
| JP7003036B2 (ja) * | 2015-12-02 | 2022-02-04 | エスティーキューブ，インコーポレイテッド | グリコシル化ｐｄ－１に対して特異的な抗体およびその使用方法 |
| KR20180097615A (ko) | 2016-01-08 | 2018-08-31 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | Pd-1 축 결합 길항물질 및 항-cea/항-cd3 이중특이성 항체를 사용하는 cea-양성 암의 치료 방법 |
| EP3943508B1 (en) | 2016-03-29 | 2024-01-10 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Dual function antibodies specific to glycosylated pd-l1 and methods of use thereof |
| EP3476865B1 (en) | 2016-06-28 | 2023-09-13 | Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. | Method for constructing pd-1 gene-modified humanized animal model and use thereof |
| EP3487883B1 (en) | 2016-07-20 | 2023-01-04 | Stcube, Inc. | Methods of cancer treatment and therapy using a combination of antibodies that bind glycosylated pd-l1 |
| EP4339615A3 (en) | 2016-09-16 | 2024-05-22 | Shanghai Henlius Biotech, Inc. | Anti-pd-1 antibodies |
| MX2019002867A (es) | 2016-09-19 | 2019-11-12 | Celgene Corp | Metodos de tratamiento de trastornos inmunologicos usando proteinas de union a pd-1. |
| WO2018053401A1 (en) | 2016-09-19 | 2018-03-22 | Celgene Corporation | Methods of treating vitiligo using pd-1 binding proteins |
| JP7106538B2 (ja) | 2016-12-07 | 2022-07-26 | アジェナス インコーポレイテッド | 抗体およびその使用方法 |
| CN110392692B (zh) | 2017-04-03 | 2023-07-21 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抗pd-1抗体与突变体il-2或与il-15的免疫缀合物 |
| AU2018247794A1 (en) | 2017-04-05 | 2019-08-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific antibodies specifically binding to PD1 and LAG3 |
| WO2018231339A2 (en) * | 2017-04-20 | 2018-12-20 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Anti-phosphotyrosinylated pd-1 antibodies and uses thereof |
| PL3661954T3 (pl) | 2017-08-03 | 2022-05-16 | Amgen Inc. | Muteiny interleukiny 21 i sposoby leczenia |
| WO2019072241A1 (en) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | Beijing Biocytogen Co., Ltd | NON-HUMAN ANIMAL GENETICALLY MODIFIED WITH PD-1 HUMAN OR CHIMERIC |
| WO2019094265A1 (en) * | 2017-11-10 | 2019-05-16 | Armo Biosciences, Inc. | Pd1 polypeptide binding molecules |
| TW201930344A (zh) | 2018-01-12 | 2019-08-01 | 美商安進公司 | 抗ｐｄ-１抗體及治療方法 |
| CN111655730A (zh) | 2018-01-31 | 2020-09-11 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 包含与lag3结合的抗原结合位点的双特异性抗体 |
| IL276675B2 (en) | 2018-02-23 | 2023-10-01 | Eucure Beijing Biopharma Co Ltd | Anti-PD-1 antibodies and uses thereof |
| TWI708787B (zh) | 2018-03-02 | 2020-11-01 | 美商美國禮來大藥廠 | Pd-1促效劑抗體及其用途 |
| WO2020021061A1 (en) * | 2018-07-26 | 2020-01-30 | Pieris Pharmaceuticals Gmbh | Humanized anti-pd-1 antibodies and uses thereof |
| SG11202105153RA (en) | 2018-11-19 | 2021-06-29 | Biocytogen Pharmaceuticals Beijing Co Ltd | Anti-pd-1 antibodies and uses thereof |
| AU2020295012A1 (en) | 2019-06-18 | 2022-02-17 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Combination of hepatitis B virus (HBV) vaccines and anti-PD-1 or anti-PD-L1 antibody |
| AU2020296372A1 (en) | 2019-06-18 | 2022-02-17 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Combination of hepatitis B virus (HBV) vaccines and anti-PD-1 antibody |
| JP6881658B2 (ja) | 2019-07-05 | 2021-06-02 | 小野薬品工業株式会社 | Ｐｄ−１／ｃｄ３二重特異性タンパク質による血液がん治療 |
| TW202120550A (zh) | 2019-08-08 | 2021-06-01 | 日商小野藥品工業股份有限公司 | 雙特異性蛋白質 |
| EP4135848A2 (en) | 2020-04-15 | 2023-02-22 | F. Hoffmann-La Roche AG | Immunoconjugates |
| WO2021224215A1 (en) | 2020-05-05 | 2021-11-11 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Predicting response to pd-1 axis inhibitors |
| EP4304723A1 (en) | 2021-03-09 | 2024-01-17 | F. Hoffmann-La Roche AG | Combination therapy of pd-1-targeted il-2 variant immunoconjugates and fap/4-1bb binding molecules |
| CN117015555A (zh) | 2021-03-09 | 2023-11-07 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | Pd-1靶向il-2变体免疫缀合物和抗tyrp1/抗cd3双特异性抗体的组合疗法 |
| WO2023012147A1 (en) | 2021-08-03 | 2023-02-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific antibodies and methods of use |
| WO2023062048A1 (en) | 2021-10-14 | 2023-04-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Alternative pd1-il7v immunoconjugates for the treatment of cancer |
| CA3234731A1 (en) | 2021-10-14 | 2023-04-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | New interleukin-7 immunoconjugates |
Family Cites Families (111)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US4737456A (en) | 1985-05-09 | 1988-04-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Reducing interference in ligand-receptor binding assays |
| US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
| US6548640B1 (en) | 1986-03-27 | 2003-04-15 | Btg International Limited | Altered antibodies |
| JP3101690B2 (ja) | 1987-03-18 | 2000-10-23 | エス・ビィ・２・インコーポレイテッド | 変性抗体の、または変性抗体に関する改良 |
| US5606040A (en) | 1987-10-30 | 1997-02-25 | American Cyanamid Company | Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group |
| US5770701A (en) | 1987-10-30 | 1998-06-23 | American Cyanamid Company | Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
| US5750373A (en) | 1990-12-03 | 1998-05-12 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants |
| AU634186B2 (en) | 1988-11-11 | 1993-02-18 | Medical Research Council | Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors |
| DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
| CA2026147C (en) | 1989-10-25 | 2006-02-07 | Ravi J. Chari | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
| US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
| US5959177A (en) | 1989-10-27 | 1999-09-28 | The Scripps Research Institute | Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies |
| US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
| ATE255131T1 (de) | 1991-06-14 | 2003-12-15 | Genentech Inc | Humanisierter heregulin antikörper |
| GB9114948D0 (en) | 1991-07-11 | 1991-08-28 | Pfizer Ltd | Process for preparing sertraline intermediates |
| CA2116774C (en) | 1991-09-19 | 2003-11-11 | Paul J. Carter | Expression in e. coli antibody fragments having at least a cysteine present as a free thiol. use for the production of bifunctional f(ab') 2 antibodies |
| US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
| WO1993008829A1 (en) | 1991-11-04 | 1993-05-13 | The Regents Of The University Of California | Compositions that mediate killing of hiv-infected cells |
| DE69333807T2 (de) | 1992-02-06 | 2006-02-02 | Chiron Corp., Emeryville | Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür |
| CA2149329C (en) | 1992-11-13 | 2008-07-15 | Darrell R. Anderson | Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma |
| US5635483A (en) | 1992-12-03 | 1997-06-03 | Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University | Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides |
| US5780588A (en) | 1993-01-26 | 1998-07-14 | Arizona Board Of Regents | Elucidation and synthesis of selected pentapeptides |
| WO1994029351A2 (en) | 1993-06-16 | 1994-12-22 | Celltech Limited | Antibodies |
| US5773001A (en) | 1994-06-03 | 1998-06-30 | American Cyanamid Company | Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis |
| US5789199A (en) | 1994-11-03 | 1998-08-04 | Genentech, Inc. | Process for bacterial production of polypeptides |
| US5840523A (en) | 1995-03-01 | 1998-11-24 | Genetech, Inc. | Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides |
| US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
| US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
| US5712374A (en) | 1995-06-07 | 1998-01-27 | American Cyanamid Company | Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
| US5714586A (en) | 1995-06-07 | 1998-02-03 | American Cyanamid Company | Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
| US6267958B1 (en) | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
| US6171586B1 (en) | 1997-06-13 | 2001-01-09 | Genentech, Inc. | Antibody formulation |
| US6040498A (en) | 1998-08-11 | 2000-03-21 | North Caroline State University | Genetically engineered duckweed |
| US6610833B1 (en) | 1997-11-24 | 2003-08-26 | The Institute For Human Genetics And Biochemistry | Monoclonal human natural antibodies |
| ES2375931T3 (es) | 1997-12-05 | 2012-03-07 | The Scripps Research Institute | Humanización de anticuerpo murino. |
| PL220113B1 (pl) | 1999-01-15 | 2015-08-31 | Genentech Inc | Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc |
| US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| CA2385347C (en) | 1999-10-04 | 2009-12-15 | Medicago Inc. | Method for regulating transcription of foreign genes |
| US7125978B1 (en) | 1999-10-04 | 2006-10-24 | Medicago Inc. | Promoter for regulating expression of foreign genes |
| CA2393869A1 (en) | 1999-12-15 | 2001-06-21 | Genetech,Inc. | Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes |
| AU767394C (en) | 1999-12-29 | 2005-04-21 | Immunogen, Inc. | Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use |
| CN100390288C (zh) | 2000-04-11 | 2008-05-28 | 杰南技术公司 | 多价抗体及其应用 |
| US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
| US7041870B2 (en) | 2000-11-30 | 2006-05-09 | Medarex, Inc. | Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies |
| WO2002086083A2 (en) | 2001-04-20 | 2002-10-31 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods of enhancing cell responsiveness |
| JP4488740B2 (ja) | 2001-11-13 | 2010-06-23 | ダナ−ファーバー キャンサー インスティテュート，インコーポレイテッド | 免疫細胞活性化を調節する作用剤およびその使用方法 |
| WO2003102157A2 (en) | 2002-06-03 | 2003-12-11 | Genentech, Inc. | Synthetic antibody phage libraries |
| ES2654064T3 (es) | 2002-07-03 | 2024-03-13 | Ono Pharmaceutical Co | Composiciones inmunopotenciadoras que comprenden anticuerpos anti-PD-L1 |
| US7361740B2 (en) | 2002-10-15 | 2008-04-22 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
| BRPI0316779B8 (pt) | 2002-12-16 | 2023-02-28 | Genentech Inc | Anticorpo anti-cd20 humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, seus usos, composição, artigo manufaturado e formulação líquida |
| EP1576014B1 (en) | 2002-12-23 | 2011-06-29 | Wyeth LLC | Antibodies against pd-1 and uses thereof |
| WO2004065416A2 (en) | 2003-01-16 | 2004-08-05 | Genentech, Inc. | Synthetic antibody phage libraries |
| EP1591527B1 (en) | 2003-01-23 | 2015-08-26 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Substance specific to human pd-1 |
| US7871607B2 (en) | 2003-03-05 | 2011-01-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases |
| US20060104968A1 (en) | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
| NZ583292A (en) | 2003-11-06 | 2012-03-30 | Seattle Genetics Inc | Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands |
| MXPA06011199A (es) | 2004-03-31 | 2007-04-16 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-tgf-beta humanizados. |
| US7785903B2 (en) | 2004-04-09 | 2010-08-31 | Genentech, Inc. | Variable domain library and uses |
| BRPI0516284A (pt) | 2004-09-23 | 2008-09-02 | Genentech Inc | anticorpo construìdo com cisteìna, método de selecionar anticorpos, compostos conjugados de droga-anticorpo, composição farmacêutica, método para matar ou inibir a proliferação de células de tumor, métodos de inibir a proliferação celular e o crescimento de células de tumor, artigo manufaturado e método para produzir um composto |
| JO3000B1 (ar) | 2004-10-20 | 2016-09-05 | Genentech Inc | مركبات أجسام مضادة . |
| KR101339628B1 (ko) * | 2005-05-09 | 2013-12-09 | 메다렉스, 인코포레이티드 | 예정 사멸 인자 1(ｐｄ-1)에 대한 인간 모노클로날 항체, 및 항-ｐｄ-1 항체를 단독 사용하거나 기타 면역 요법제와 병용한 암 치료 방법 |
| AU2006254902B8 (en) | 2005-06-08 | 2012-08-16 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods and compositions for the treatment of persistent infections and cancer by inhibiting the programmed cell death 1 (PD-1) pathway |
| KR101888321B1 (ko) | 2005-07-01 | 2018-08-13 | 이. 알. 스퀴부 앤드 선즈, 엘.엘.씨. | 예정 사멸 리간드 1 (피디-엘1)에 대한 인간 모노클로날 항체 |
| ES2577292T3 (es) | 2005-11-07 | 2016-07-14 | Genentech, Inc. | Polipéptidos de unión con secuencias hipervariables de VH/VL diversificadas y consenso |
| WO2007064919A2 (en) | 2005-12-02 | 2007-06-07 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides with restricted diversity sequences |
| AU2007249408A1 (en) | 2006-05-09 | 2007-11-22 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides with optimized scaffolds |
| PL2059533T3 (pl) | 2006-08-30 | 2013-04-30 | Genentech Inc | Przeciwciała wieloswoiste |
| MX351975B (es) | 2006-12-27 | 2017-11-06 | Emory Univ Star | Composiciones y metodos para el tratamiento de infecciones y tumores. |
| CN100592373C (zh) | 2007-05-25 | 2010-02-24 | 群康科技(深圳)有限公司 | 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法 |
| PL2170959T3 (pl) | 2007-06-18 | 2014-03-31 | Merck Sharp & Dohme | Przeciwciała przeciwko ludzkiemu receptorowi programowanej śmierci PD-1 |
| US20090028857A1 (en) | 2007-07-23 | 2009-01-29 | Cell Genesys, Inc. | Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof |
| EP2195347A1 (en) | 2007-08-17 | 2010-06-16 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Method for treating and diagnosing hematologic malignancies |
| US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
| US8242247B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-08-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| US8227577B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-07-24 | Hoffman-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| EP3663318A1 (en) | 2008-01-07 | 2020-06-10 | Amgen Inc. | Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects |
| EP2262837A4 (en) | 2008-03-12 | 2011-04-06 | Merck Sharp & Dohme | PD-1 BINDING PROTEINS |
| CA2735006A1 (en) | 2008-08-25 | 2010-03-11 | Amplimmune, Inc. | Pd-1 antagonists and methods of use thereof |
| PL2350129T3 (pl) | 2008-08-25 | 2015-12-31 | Amplimmune Inc | Kompozycje antagonistów PD-1 i sposoby stosowania |
| CA2736829C (en) | 2008-09-12 | 2018-02-27 | Isis Innovation Limited | Pd-1 specific antibodies and uses thereof |
| AU2009290543B2 (en) | 2008-09-12 | 2015-09-03 | Oxford University Innovation Limited | PD-1 specific antibodies and uses thereof |
| WO2010036959A2 (en) * | 2008-09-26 | 2010-04-01 | Dana-Farber Cancer Institute | Human anti-pd-1, pd-l1, and pd-l2 antibodies and uses therefor |
| KR101050829B1 (ko) | 2008-10-02 | 2011-07-20 | 서울대학교산학협력단 | 항 ｐｄ-1 항체 또는 항 ｐｄ-ｌ1 항체를 포함하는 항암제 |
| CA2744449C (en) | 2008-11-28 | 2019-01-29 | Emory University | Methods for the treatment of infections and tumors |
| WO2010089411A2 (en) | 2009-02-09 | 2010-08-12 | Universite De La Mediterranee | Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof |
| JP5501439B2 (ja) | 2009-04-02 | 2014-05-21 | ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト | 完全長抗体と単鎖Ｆａｂフラグメントとを含む多重特異的抗体 |
| BRPI1010297A2 (pt) | 2009-04-07 | 2017-06-06 | Roche Glycart Ag | anticorpos biespecíficos trivalentes. |
| CN102448985B (zh) | 2009-05-27 | 2015-08-05 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 三或四特异性抗体 |
| US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
| US8703132B2 (en) | 2009-06-18 | 2014-04-22 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific, tetravalent antigen binding proteins |
| US20130017199A1 (en) | 2009-11-24 | 2013-01-17 | AMPLIMMUNE ,Inc. a corporation | Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2 |
| TW201134488A (en) * | 2010-03-11 | 2011-10-16 | Ucb Pharma Sa | PD-1 antibodies |
| US8993731B2 (en) * | 2010-03-11 | 2015-03-31 | Ucb Biopharma Sprl | PD-1 antibody |
| TW201138821A (en) | 2010-03-26 | 2011-11-16 | Roche Glycart Ag | Bispecific antibodies |
| CA2807278A1 (en) | 2010-08-24 | 2012-03-01 | F. Hoffmann - La Roche Ag | Bispecific antibodies comprising a disulfide stabilized - fv fragment |
| RU2013110876A (ru) | 2010-08-24 | 2014-09-27 | Рош Гликарт Аг | Активируемые биспецифические антитела |
| CN103476795B (zh) * | 2011-03-29 | 2016-07-06 | 罗切格利卡特公司 | 抗体Fc变体 |
| WO2012145493A1 (en) * | 2011-04-20 | 2012-10-26 | Amplimmune, Inc. | Antibodies and other molecules that bind b7-h1 and pd-1 |
| KR101721301B1 (ko) | 2011-08-23 | 2017-03-29 | 로슈 글리카트 아게 | 이중특이적 항원 결합 분자 |
| WO2013026835A1 (en) | 2011-08-23 | 2013-02-28 | Roche Glycart Ag | Fc-free antibodies comprising two fab fragments and methods of use |
| WO2013164325A1 (en) | 2012-05-02 | 2013-11-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Multispecific antigen binding proteins |
| MX2014014162A (es) | 2012-05-24 | 2015-02-04 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos multiespecificos. |
| EA032192B1 (ru) * | 2012-07-13 | 2019-04-30 | Роше Гликарт Аг | Биспецифическое антитело к vegf/ang-2, нуклеиновая кислота, кодирующая это антитело, вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, клетка-хозяин, способ получения биспецифического антитела и содержащая его фармацевтическая композиция |
| NZ708182A (en) | 2013-02-26 | 2019-08-30 | Roche Glycart Ag | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
| TWI595006B (zh) * | 2014-12-09 | 2017-08-11 | 禮納特神經系統科學公司 | 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法 |
| CA2971734A1 (en) * | 2014-12-22 | 2016-06-30 | Enumeral Biomedical Holdings, Inc. | Anti-pd-1 antibodies |
-
2016
- 2016-09-29 RU RU2018115986A patent/RU2746409C1/ru active
- 2016-09-29 US US15/280,810 patent/US20170247454A1/en not_active Abandoned
- 2016-09-29 CN CN201680055439.1A patent/CN108368173B/zh active Active
- 2016-09-29 MY MYPI2018701270A patent/MY190297A/en unknown
- 2016-09-29 AU AU2016329251A patent/AU2016329251B2/en active Active
- 2016-09-29 EP EP16774499.4A patent/EP3356404B1/en active Active
- 2016-09-29 LT LTEPPCT/EP2016/073248T patent/LT3356404T/lt unknown
- 2016-09-29 BR BR112018005164A patent/BR112018005164A2/pt active Search and Examination
- 2016-09-29 WO PCT/EP2016/073248 patent/WO2017055443A1/en active Application Filing
- 2016-09-29 ES ES16774499T patent/ES2895034T3/es active Active
- 2016-09-29 PE PE2018000405A patent/PE20181092A1/es unknown
- 2016-09-29 RS RS20211227A patent/RS62450B1/sr unknown
- 2016-09-29 HR HRP20211594TT patent/HRP20211594T1/hr unknown
- 2016-09-29 DK DK16774499.4T patent/DK3356404T3/da active
- 2016-09-29 PL PL16774499T patent/PL3356404T3/pl unknown
- 2016-09-29 IL IL257858A patent/IL257858B/en unknown
- 2016-09-29 KR KR1020187012254A patent/KR102072317B1/ko active IP Right Grant
- 2016-09-29 JP JP2018516670A patent/JP6654694B2/ja active Active
- 2016-09-29 CA CA2997799A patent/CA2997799A1/en active Pending
- 2016-09-29 PT PT167744994T patent/PT3356404T/pt unknown
- 2016-09-29 HU HUE16774499A patent/HUE056033T2/hu unknown
- 2016-09-29 SI SI201631371T patent/SI3356404T1/sl unknown
- 2016-09-29 UA UAA201804633A patent/UA123826C2/uk unknown
- 2016-09-29 MA MA43018A patent/MA43018B1/fr unknown
- 2016-09-29 CR CR20180151A patent/CR20180151A/es unknown
- 2016-09-29 MX MX2018003629A patent/MX2018003629A/es unknown
- 2016-09-30 TW TW105131771A patent/TWI625336B/zh active
- 2016-09-30 AR ARP160103011A patent/AR106232A1/es unknown
-
2018
- 2018-03-07 CL CL2018000595A patent/CL2018000595A1/es unknown
- 2018-03-28 PH PH12018500711A patent/PH12018500711A1/en unknown
- 2018-03-28 CO CONC2018/0003477A patent/CO2018003477A2/es unknown
- 2018-12-18 US US16/224,553 patent/US20190382489A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-01-29 HK HK19101507.3A patent/HK1259019A1/zh unknown
-
2022
- 2022-06-30 US US17/810,242 patent/US20230143310A1/en not_active Abandoned
-
2023
- 2023-03-03 US US18/178,278 patent/US20230183349A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA123826C2 (uk) | Антитіла до pd1 та способи їх застосування | |
| TWI731861B (zh) | FcRH5之人源化及親和力成熟抗體及使用方法 | |
| KR101945002B1 (ko) | 항-cd38 항체 | |
| RU2710717C2 (ru) | Молекулы, связывающиеся с 4-1ВВ | |
| TWI522366B (zh) | 與ｃｘｃｒ４結合之人抗體及彼之用途 | |
| CN108136002A (zh) | 治疗性抗体和它们的用途 | |
| CN107074956A (zh) | Cd123结合剂及其用途 | |
| KR20140006096A (ko) | Masp-2 의존적 보체 활성화를 억제하는 조성물 | |
| TW200817437A (en) | Monoclonal antibodies against stromal cell derived factor-1 (SDF-1) | |
| KR20200115596A (ko) | Cd70에 특이적인 항체 및 이의 용도 | |
| CN114599681B (zh) | 新型抗cd47抗体及其用途 | |
| KR20210104064A (ko) | 항-il-27 항체 및 그의 용도 | |
| JP2015514708A (ja) | 抗ｅｍｐ２療法による癌幹細胞の低減 | |
| KR20150060761A (ko) | in vivo 에서 항종양 활성을 갖는 항인간 Dlk-1 항체 | |
| JP2014534965A (ja) | コンパニオン診断を用いた乳癌の治療 | |
| RU2723940C2 (ru) | Биспецифические антигенсвязывающие полипептиды | |
| CN113348182B (zh) | Lag-3抗体及其医药用途 | |
| KR20240021153A (ko) | Nkp46 및 cd38를 표적으로 하는 이중 특이적 항체 및 이의 사용 방법 | |
| AU2014227437B9 (en) | 4-1BB binding molecules | |
| AU2013201617B2 (en) | 4-1BB binding molecules |