KR20210027295A

KR20210027295A - 세포 부착 분자3에 결합하는 항체

Info

Publication number: KR20210027295A
Application number: KR1020207037936A
Authority: KR
Inventors: 노부아키 다카하시; 료스케 나카노; 사야카 마에다; 다케나오 야마다; 유지 이토
Original assignee: 쿄와 기린 가부시키가이샤; 가고시마 유니버시티
Priority date: 2018-06-26
Filing date: 2019-06-26
Publication date: 2021-03-10
Also published as: EP3816290A1; CN112424358A; TW202020158A; JPWO2020004492A1; EP3816290A4; JP7397445B2; US20210147541A1; WO2020004492A1; AU2019295279A1; CA3105000A1; US11873337B2

Abstract

본 발명은 세포 부착 분자3(CADM3)에 결합하는 항체 또는 해당 항체 단편, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 산생하는 하이브리도마, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 핵산, 당해 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 형질 전환 세포, 해당 항체 또는 해당 항체 단편의 제조 방법, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 포함하는 조성물, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 사용한 뇌에 존재하는 항원을 검출 또는 측정하는 방법, 뇌질환을 진단 또는 치료하는 방법, 항체의 뇌 체류성을 향상시키는 방법, 뇌 내의 항체량을 증가시키는 방법 등에 관한 것이다.

Description

세포 부착 분자3에 결합하는 항체

본 발명은 예를 들어 세포 부착 분자3(Cell Adhesion Molecule3; CADM3)에 결합하는 항체 또는 해당 항체 단편, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 산생하는 하이브리도마, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 핵산, 해당 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 형질 전환 세포, 해당 항체 또는 해당 항체 단편의 제조 방법, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 포함하는 조성물, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 사용한 뇌에 존재하는 항원을 검출 또는 측정하는 방법, 뇌질환을 진단 또는 치료하는 방법, 항체의 뇌 체류성을 향상시키는 방법, 뇌 내의 항체량을 증가시키는 방법 등에 관한 것이다.

1986년에 마우스 항CD3 항체, 무로모납(muromonab)-CD3(OKT3)이 최초의 항체 의약품으로서 FDA로부터 승인을 받은 이래, 수많은 항체 의약품이 개발되고 있다. 1994년에는 마우스 항체가 갖는 항원성을 저감하기 위해서, 마우스 항체의 가변 영역과 인간 항체의 정상 영역을 연결한 키메라 항체 압식시맙(abciximab)이 승인을 받았다.

또한 항원성을 저감하기 위해서, 마우스 항체의 가변 영역의 항원 결합에 중요한 작용을 갖는 상보성 결정 영역(complementarity determining region; CDR)을 인간 항체의 프레임 워크 영역(frame work region; FR)에 이식하는 인간화 항체 기술이 개발되어, 1997년에 인간화 항CD20 항체 다시주맙(dacizumab)이 승인을 받았다.

또한, 인간의 항체 서열 라이브러리를 사용한 파지 디스플레이 기술이 사용되게 되어, 파지 디스플레이 기술로 취득한 최초의 항체로서 완전 인간 항TNFα 항체 아달리무맙(adalimumab)이 2002년에 승인되었다. CD20, CD52, TNFα, HER2, EGFR 등을 표적 항원으로 한 항체 의약품이 이미 60품째 이상 승인되었다(비특허문헌 1).

이와 같이, 항체는 폭넓게 인지된 의약품 포맷으로 되어 있다. 지금까지 승인된 항체 의약품 중 대부분은 암이나 면역 질환을 대상으로 하는 것이며, 전체의 약 75% 이상을 차지하고 있다.

중추 신경 질환의 치료에 있어서도 항체 등의 바이올로직스의 중요성이 높아지고 있고, 아밀로이드 β에 대한 모노클로날 항체가 알츠하이머병에 있어서 연구되고 있는 것이나, 신경 보호 작용을 갖는 각종 신경 영양 인자(뇌-유래 신경 영양 인자(brain-derived neurotorophic factor); BDNF, 신경교 세포-유래 신경 영양 인자(glial-derived neurotorophic factor); GDNF)가 중추 신경 질환에 있어서 신경 보호 작용을 나타내는 것이 동물 모델에서 보고되어 있다(비특허문헌 2).

그러나, 중추 신경계에서는 항체를 말초에 투여한 경우에 다른 장기와 비교하여 송달량이 낮고, 항체 이행율[뇌척수액(cerebrospinal fluid; CSF) 중 농도와 혈청 농도의 비]은 0.1-0.3%로 보고되어 있다(비특허문헌 3-5).

뇌 및 척수를 포함하는 중추 신경계에 있어서 약제 송달량이 저하되는 이유로서, 혈액 뇌관문(Blood Brain Barrier; BBB)이라 불리는 혈액과 뇌의 조직액간에서의 물질 수송을 제한하는 기구를 들 수 있다. 혈액 뇌관문은 혈관 내피 세포의 세포간 접합에 의한 물리적·비특이적인 제어 기구 및 배출 트랜스포터에 의한 기질 특이적인 배출 기구를 갖고 있으며, 이물 또는 약물로부터 중추 신경계를 보호하여 항상성의 유지에 중요한 역할을 하고 있다.

그러나, 혈액 뇌관문의 존재에 의해, 중추 신경계에서는 약제 투여 시의 유효 농도가 얻어지기 어려워 약제 개발이 곤란해지고 있다. 예를 들어, 헐러 증후군(무코 다당증 I형)에 대한 α-L-이두로니다제나, 헌터 증후군(무코 다당증 II형)에 대한 이두론산2-술파타제의 정맥 내 투여에 의한 효소 보충 요법이 행해지고 있지만, 효소의 분자량이 커서 혈액 뇌관문을 통과하지 못하기 때문에, 중추 신경 증상에 대한 유효성은 인정받지 못하였다(비특허문헌 6-9). 또한, 일정량의 재조합 효소를 정기적으로 계속 투여하기 때문에, 중화 항체의 산생 등의 부작용이 나타나는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 10).

또한, 뇌 내 농도를 높이기 위해서 바이올로직스를 수강 내 또는 뇌 내에 직접 투여하는 시도도 행해지고 있다. 예를 들어 헌터 증후군(무코 다당증 II형)의 환자의 뇌 장애의 진행을 방지하기 위해서, 이두론산2-술파타제를 환자의 뇌 내에 투여하는 방법이 보고되어 있다(특허문헌 1). 그러나, 수강 내 또는 뇌 내로의 직접 투여는 침습성이 높다(비특허문헌 11).

그 때문에, 바이올로직스와 같은 고분자 물질의 뇌 내 농도를 높이기 위해서 다양한 송달 기술이 연구되고 있다. 예를 들어, 뇌혈관 내피 세포에 발현하고 있는 막단백질에 결합하고, 고분자 물질 및 막단백질의 복합체를 형성시켜서 엔도사이토시스에 의해 혈액 뇌관문을 통과시키는 방법이 복수 보고되어 있다.

보고되어 있는 기술의 대부분은 수용체 개재성 트랜스사이토시스(receptor-mediated transcytosis; RMT)를 이용한 것이며, 표적이 되는 뇌혈관 내피 발현 수용체로서는 예를 들어 트랜스페린 수용체, 인슐린 수용체, 인슐린 유사 성장 인자 수용체, 저비중 리포 단백질 수용체 패밀리(LDLRf) 등이 있다.

항트랜스페린 수용체 항체 및 신경 성장 인자의 융합 단백질을 제작함으로써, 트랜스페린 수용체를 통한 혈액 뇌관문 통과 기술이 보고되어 있다. 항트랜스페린 수용체 항체를 사용한 기술로서는, 항트랜스페린 수용체 항체 및 항베타세크레타제(BACE1) 항체의 이중특이적 항체(특허문헌 2 및 3, 그리고 비특허문헌 12 및 13) 및 항아밀로이드 β 항체의 카르복실 말단측에 항트랜스페린 수용체의 1가 항체를 융합시킨 융합 항체(특허문헌 4 및 비특허문헌 14)가 보고되어 있다.

항트랜스페린 수용체 항체 및 항BACE1 항체의 이중특이적 항체에 의한 뇌 송달은, 마우스에 있어서 20㎎/㎏체중으로 항체를 투여했을 때에 뇌에서의 항체 도입량이 컨트롤의 약 4배로 증가하는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 13).

또한, 항트랜스페린 수용체 항체를 표면에 갖는 리포솜에 약제를 내포시킴으로써, 약제를 혈액 뇌관문에 있어서 통과시키는 기술이 보고되어 있다. 항래트 트랜스페린 수용체 항체와 이뮤노미셀 융합체에 의해, 래트에 있어서의 뇌에서의 도입량이 약 2 내지 5배로 증가하는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 15).

또한, 항인슐린 수용체 항체의 카르복실 말단측에 신경 영양 인자, 효소 또는 항아밀로이드 항체를 융합한 융합 단백질을 제작함으로써, 인슐린 수용체를 통한 혈액 뇌관문 통과 기술이 보고되어 있다(비특허문헌 16-19).

히말라야 원숭이에 있어서, 표지 항인간 인슐린 수용체 항체 및 GDNF의 융합 항체를 투여한 2시간 후의 뇌에서의 도입량이 GDNF와 비교하여 약 15배가 되는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 17).

그러나, 트랜스페린 수용체 및 인슐린 수용체는 뇌혈관 내피 세포뿐만 아니라 간장 등 전신에서 발현하고 있기 때문에, 이들 기술에서는 중추 신경계로의 약제 송달량의 증대와 함께 간장 등에도 약제 송달이 일어난다(비특허문헌 20). 또한, 전신에서 항원이 발현하고 있기 때문에 항체의 혈중 반감기가 짧다(비특허문헌 12).

또한, 뇌혈관 내 피막 발현 항원인 TMEM30A에 대한 항체(Fc5)가 RMT 유사 활성을 나타내는 것이 보고되어 있다(특허문헌 5, 그리고 비특허문헌 21 및 22). Fc5는 라마 유래의 싱글 도메인의 중쇄 항체의 중쇄 가변 영역(Variable domain of Heavy chain of Heavy chain antibody; VHH) 항체이며, Fc5 및 인간 Fc의 융합체가 컨트롤 IgG와 비교하여 뇌 송달이 증가하는 것이 시험관 내(in vitro) BBB 모델 및 래트 생체 내(in vivo) 모델에 있어서 나타나 있다.

Fc5 유래의 단쇄 항체(single chain antibody; scFv) 및 대사형 글루타민산 수용체 1형(metabotropic glutamate receptor type I; mGluRI) 항체의 융합체가 컨트롤 단쇄 항체 및 mGluRI 항체의 융합체와 비교하여 래트 모델에서의 CSF 폭로가 높아지는 것이 보고되어 있는데, 증가량으로서는 5배 정도이다(비특허문헌 23).

또한, IgG 항체는 태아성 Fc 수용체(neonatal Fc receptor; FcRn)에 의해 뇌 내로부터 순환 혈액 방향으로 빠르게 배출되는 것이 보고되어 있고(비특허문헌 24 및 25), 예를 들어 래트에 있어서의 IgG의 뇌 내 투여 후의 뇌 내 반감기는 48분간으로 짧다(비특허문헌 24).

CADM3은 칼슘 이온 비의존성 면역 글로불린 유사 세포 접착 분자이다(비특허문헌 26-31). CADM3은 세포 외 영역에 3개의 면역 글로불린 유사 도메인, 1개의 막 관통 도메인 및 1개의 세포질 도메인과 같은 구조로 나뉜다(비특허문헌 29).

RNA 블롯과 계내 혼성화(in situ hybridization)의 해석으로부터, CADM3은 소뇌, 대뇌피질, 해마, 편도체, 후구 및 연수를 포함하는 여러가지 중추 신경과 말초 신경의 양쪽의 신경 조직 특이적으로 발현하고 있다(비특허문헌 26, 27 및 32). CADM3은 2개의 축색 말단간, 축색 말단 및 축색 샤프트 사이, 그리고 축색 말단 및 축색 말단의 신경교 세포 프로세스 사이의 접촉 부위에 국재화된다(비특허문헌 26).

CADM3은 칼슘 이온 비의존성의 호모필릭 결합에서의 세포간의 접착 활성을 나타낸다. 또한, CADM3은 Necl-2, 넥틴-1 및 넥틴-3과 칼슘 이온 비의존성의 헤테로필릭 결합에서의 세포간의 접착 활성을 나타내지만, Necl-5 및 넥틴-2는 접착 활성을 나타내지 않는다. 넥틴-1 및 넥틴-3과 상호 작용하는 CADM3은 소뇌 형태 형성 시와 마찬가지로 신경 활동 의존성의 시냅스의 재구축 프로세스에 관여한다(비특허문헌 32 및 33). 시험관 내 결합 해석으로부터, 액틴 세포 골격의 재편성에 관여하는 단백질 4.1N과 CADM3이 결합하는 것이 나타나 있다(비특허문헌 27).

CADM3을 결손시킨 마우스에서는 생후 조기에 시신경 및 척수에 있어서의 유수 축색수가 감소한다. 그러나, 성숙 후에 정상 개체와 변이체 사이에서, 유수 축색수나 미엘린초의 두께에 차는 없다(비특허문헌 30). 또한, CADM3에 결합하는 폴리클로날 항체가 보고되어 있다(비특허문헌 27).

국제공개 제2012/023623호 국제공개 제2016/081640호 국제공개 제2016/081643호 국제공개 제2014/033074호 캐나다특허 제2623841호 명세서

Kyla RR. and Richard CC., Biotechnol Adv, pii: S0734-9750(16), 30091-X, 2016 Pardridge WM., Bioconjugate Chem., 19, 1327-1338, 2008 Wang W., et al., Clin. pharmacol. Ther., 84, 548-558, 2008 Garg A., et al., AAPSJ., 11, 553-557, 2009 Kaj B., et al., Arch. Neurol., 69(8), 1002-1010, 2012 Wraith JE. et al., J. Pediatr. 144(5), 581-588, 2004 Muenzer J. et al., Genet Med. 8(8), 465-473, 2006 알두라자임(등록상표) 점적 정맥 주사액 2.9㎎ 첨부 문서(2016년 7월 제8판) 엘라프라제(등록상표) 점적 정맥 주사액 6㎎ 첨부 문서(2016년 7월 제6판) Brooks, D.A .et al., Trends Mol. Med. 9, 450-453, 2003 Sorrentino NC.et al., Pediatr Endocrinol Rev. 1, 630-638, 2016 Couch JA., et al., Science Translational Medicine, 5, 183ra57, 2013 Yu YJ., et al., Science Translational Medicine, 6, 261ra154, 2014 Niewoehner J., et al., Neuron. 81, 49-60, 2014 Jun Y., et al., Macromol. Biosci. 12, 1209-1219, 2012 Pardridge WM. and Boado RJ., Methods in Enzymology, 503, 269-292, 2012 Boado RJ., et al., Drug Metab. Dispos., 37(12), 2299-2304, 2009 Boado RJ., et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 333(3), 961-969, 2010 Boado RJ., et al., Bioconjugate Chem., 1, 97-104, 2012 Yun Zhang.et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 313(3), 1075-1081, 2005 Abulrob A., et al., J. Neuyrochem., 95(4), 1201-1214, 2005 Farrington GK., et al., FASEB J., 28, 4764-4778, 2014 Webster CI., et al., FASEB J., 30, 1927-1940, 2016 Zhang Y., et al., J. Neuroimmunol., 114(1-2), 168-172, 2001 Philip RC., et al., Brain Research, 1534, 13-21, 2013 Kakunaga S., et al., J. Cell Science, 118, 1267-1277, 2005 Zhou Y., et al., Biochim. Biophys. Acta, 1669, 142-154, 2005 Gao J., et al., Biochim. Biophys. Acta, 1778, 1429-1435, 2008 Dong X., et al., J. Biol. Chem., 281, 10610-10617, 2006 Park J., et al., J. Neurosci., 28, 12815-12819, 2008 Gruber-Olipitz M., et al., Amino Acids, 30, 409-415, 2006 Takai Y., et al., Cancer Sci., 94, 655-667, 2003 Sakisaka T., et al., Curr. Opin. Cell. Biol., 16, 513-521, 2004

본 발명은 예를 들어 CADM3에 결합하는 CADM3 결합 분자 및 해당 분자를 사용한 방법 등에 관한 것이다. 구체적으로는, CADM3에 결합하는 항체 또는 해당 항체 단편, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 산생하는 하이브리도마, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 핵산, 해당 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 형질 전환 세포, 해당 항체 또는 해당 항체 단편의 제조 방법, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 포함하는 조성물, 해당 항체 또는 해당 항체 단편을 사용한 뇌에 존재하는 항원을 검출 또는 측정하는 방법, 뇌질환을 진단 또는 치료하는 방법, 항체의 뇌 체류성을 향상시키는 방법, 뇌 내의 항체량을 증가시키는 방법 등을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 과제를 해결하기 위한 수단으로서, 본 발명은 CADM3에 결합하는 CADM3 결합 분자 및 해당 분자를 사용한 방법, 구체적으로는 CADM3에 결합하는 항체 또는 해당 항체 단편을 제공한다.

즉, 본 발명은 이하의 <1> 내지 <22>에 관한 것이다.

<1> 세포 부착 분자3(CADM3)에 결합하는 항체 또는 해당 항체 단편.

<2> 항체가 뇌 체류성을 갖는 <1>에 기재된 항체 또는 해당 항체 단편.

<3> 항체가 신경 세포 및/또는 신경 조직 결합성을 갖는 <1> 또는 <2>에 기재된 항체 또는 해당 항체 단편.

<4> 항체 또는 해당 항체 단편이 하기 (a) 내지 (x)로 이루어지는 군에서 선택되는 하나인, <1> 내지 <3> 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 해당 항체 단편;

(a) 중쇄 가변 영역(VH)의 상보성 결정 영역(CDR) 1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 23, 24 및 25에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 28, 29 및 30에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(b) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 34, 35 및 36에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 38, 39 및 40에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(c) 중쇄 항체의 중쇄 가변 영역(VHH)의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 3, 4 및 5에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(d) VHH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 8, 9 및 10에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(e) VHH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 13, 14 및 15에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(f) VHH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 18, 19 및 20에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(g) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 89, 90 및 91에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 94, 95 및 96에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(h) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 99, 100 및 101에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(i) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 104, 105 및 106에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(j) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 109, 110 및 111에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(k) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 114, 115 및 116에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(l) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 119, 120 및 121에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(m) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 124, 125 및 126에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(n) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 129, 130 및 131에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(o) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 139, 140 및 141에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 164, 165 및 166에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(p) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 144, 145 및 146에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 164, 165 및 166에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(q) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 149, 150 및 151에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 164, 165 및 166에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(r) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 154, 155 및 156에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 164, 165 및 166에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(s) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 159, 160 및 161에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 164, 165 및 166에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(t) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 169, 170 및 171에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 174, 175 및 176에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(u) 상기 (a) 내지 (t)에 기재된 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편과, CADM3으로의 결합에 대해서 경합하는 항체,

(v) 상기 (a) 내지 (t)에 기재된 어느 하나의 항체 또는 항체 단편이 결합하는 에피토프를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체,

(w) 상기 (a) 내지 (t)에 기재된 어느 하나의 항체 또는 항체 단편이 결합하는 에피토프와 동일한 에피토프에 결합하는 항체,

(x) 상기 (a) 내지 (t)에 기재된 어느 하나의 항체 또는 항체 단편의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체.

<5> 항체 또는 해당 항체 단편이 하기 (1) 내지 (31)로 이루어지는 군에서 선택되는 하나인, <1> 내지 <4> 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 해당 항체 단편;

(1) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 22에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 27에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(2) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 32에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 37에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(3) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 2에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(4) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 7에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(5) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 12에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(6) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 17에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(7) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 68에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(8) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 70에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(9) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 72에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(10) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 74에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(11) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 76에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(12) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 78에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(13) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 80에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(14) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 82에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(15) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 84에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(16) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 86에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

(17) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 88에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 93에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(18) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 98에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(19) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 103에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(20) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 108에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(21) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 113에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(22) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 118에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(23) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 123에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(24) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 128에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(25) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 138에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 163에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(26) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 143에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 163에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(27) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 148에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 163에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(28) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 153에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 163에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(29) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 158에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 163에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(30) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 168에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 173에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(31) 상기 (1) 내지 (30)에 기재된 어느 하나의 항체 또는 항체 단편의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체.

<6> 항체 또는 해당 항체 단편이 이중특이적 항체인, <1> 내지 <5> 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 해당 항체 단편.

<7> 이중특이적 항체가 CADM3 및 뇌에 존재하는 항원에 결합하는, <6>에 기재된 이중특이적 항체.

<8> 이중특이적 항체가 CADM3에 결합하는 항원 결합 부위 및 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는, <6> 또는 <7>에 기재된 이중특이적 항체.

<9> 항체 단편이 Fab, Fab', F(ab')₂, 단일쇄 항체(scFv), 이량체화 V 영역(디아바디(diabody)), 디술피드 안정화 V 영역(dsFv), VHH 및 CDR을 포함하는 펩티드로 이루어지는 군에서 선택되는 하나인, <1> 내지 <8> 중 어느 하나에 기재된 항체 단편.

<10> 항체가 유전자 재조합 항체인, <1> 내지 <9> 중 어느 하나에 기재된 항체 및 해당 항체 단편.

<11> 항체가 마우스 항체, 래트 항체, 래빗 항체, 알파카 항체, 낙타 항체, 라마 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 및 인간 항체로 이루어지는 군에서 선택되는 하나인, <1> 내지 <10> 중 어느 하나에 기재된 항체 및 해당 항체 단편.

<12> <1> 내지 <11> 중 어느 하나에 기재된 CADM3에 결합하는 항체 또는 해당 항체 단편에, 하기 (i) 내지 (iii)으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나를 결합시킨 융합 항체 또는 해당 융합 항체 단편;

(i) 친수성 고분자,

(ii) 양친매성 고분자, 및

(iii) 기능성 분자.

<13> <1> 내지 <12> 중 어느 하나에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편을 산생하는 하이브리도마.

<14> <1> 내지 <12> 중 어느 하나에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 핵산.

<15> <14>에 기재된 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 형질 전환 세포.

<16> <13>에 기재된 하이브리도마 또는 <15>에 기재된 형질 전환 세포를 배양하고, 배양액으로부터 <1> 내지 <12> 중 어느 하나에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편을 채취하는 것을 포함하는, <1> 내지 <12> 중 어느 하나에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편의 제조 방법.

<17> <1> 내지 <12> 중 어느 하나에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편을 포함하는, 조성물.

<18> 뇌에 존재하는 항원의 검출 또는 측정용의 조성물인, <17>에 기재된 조성물.

<19> 뇌질환의 진단 또는 치료를 하기 위한 조성물인, <17>에 기재된 조성물.

<20> <1> 내지 <12> 중 어느 하나에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편, 또는 <17>에 기재된 조성물을 사용하여, 뇌에 존재하는 항원을 검출 또는 측정하는 방법.

<21> <1> 내지 <12> 중 어느 하나에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편, 또는 <17>에 기재된 조성물을 사용하여, 뇌질환을 진단 또는 치료하는 방법.

<22> <1> 내지 <12> 중 어느 하나에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편, 또는 <17>에 기재된 조성물을 사용하여, 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편의 뇌 체류성을 향상시키는 방법.

<23> <1> 내지 <12> 중 어느 하나에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편, 또는 <17>에 기재된 조성물을 사용하여, 뇌 내의 항체량, 해당 항체 단편량, 융합 항체량 혹은 해당 융합 항체 단편량을 증가시키는 방법.

본 발명의 CADM3 결합 분자는 CADM3에 특이적으로 결합함으로써 결합 분자 자체의 뇌 체류성을 증가시킬뿐만 아니라, 기타 목적 분자를 CADM3 결합 분자에 수식함으로써, 목적 분자를 뇌 내로 수송, 체류시킴으로써 뇌질환의 치료에 응용할 수 있다. 본 발명의 구체적인 CADM3 결합 분자로서는 항체 또는 해당 항체 단편을 들 수 있다. 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편은 뇌 내의 CADM3에 결합함으로써, 뇌 체류성을 갖는 항체 또는 해당 항체 단편이다. 그 때문에, 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편은 뇌에 존재하는 항원(CADM3 또는 CADM3 및 뇌에 존재하는 기타 항원)의 검출 또는 측정용의 조성물, 뇌질환의 진단용의 조성물 및 뇌질환을 치료하기 위한 의약 조성물로서 사용할 수 있다.

도 1의 (A) 및 (B)는, 조직 중에 있어서의 각 항체의 농도를 측정한 결과이다. 도 1의 (A)는 항체 투여 3일 후의 혈청 중의 항체 농도를 나타낸다. 종축은 항체 농도(ng/mL), 횡축은 투여한 항체를 나타낸다. 도 1의 (B)는 항체 투여 3일 후의 뇌 조직 중의 항체 농도를 나타낸다. 종축은 항체 농도(ng/g뇌), 횡축은 투여한 항체를 나타낸다.
도 2의 (A) 및 (B)는, 조직 중에 있어서의 각 항체의 농도를 측정한 결과이다. 도 2의 (A)는 항체 투여 7일 후의 혈청 중의 항체 농도를 나타낸다. 종축은 항체 농도(ng/mL), 횡축은 투여한 항체를 나타낸다. 도 2의 (B)는 항체 투여 7일 후의 뇌 조직 중의 항체 농도를 나타낸다. 종축은 항체 용출량(ng/g뇌), 횡축은 투여한 항체를 나타낸다.
도 3의 (A) 및 (B)는, 조직 중에 있어서의 각 항체의 농도를 측정한 결과이다. 도 3의 (A)는, 항체 투여 7일 후의 혈청 중의 항체 농도를 나타낸다. 종축은 항체 농도(ng/mL), 횡축은 투여한 항체를 나타낸다. 도 3의 (B)는 투여 7일 후의 뇌 조직 중의 항체 농도를 나타낸다. 종축은 항체 용출량(ng/g뇌), 횡축은 투여한 항체를 나타낸다. 항체 농도는 몰 농도로부터, 모노클로날 항체의 분자량(150kDa)으로 환산한 값으로 나타낸다.
도 4의 (A) 및 (B)는, 각 항체의 마우스 뇌 이행성 이미징 평가의 결과이다. 도 4의 (A)는 항체 투여 9일 후의 뇌의 이미징상을 나타낸다. 도 4의 (B)는 뇌중 형광량을 투여 항체의 형광 강도로 보정한 값의 대(對)항AVM 항체비를 나타낸다. 종축은 대항AVM 항체비, 횡축은 투여한 항체를 나타낸다.
도 5는 각 항체의 마우스 뇌 이행성 이미징 평가의 결과이며, 항체 투여 7일 후의 뇌의 이미징상을 나타낸다.
도 6은 각 항체의 마우스 뇌 이행성 이미징 평가의 결과이며, 뇌중 형광량을 투여 항체의 형광 강도로 보정한 값의 대항AVM 항체비를 나타낸다. 종축은 대항AVM 항체비, 횡축은 투여한 항체를 나타낸다.
도 7의 (A) 및 (B)는, 조직 중에 있어서의 각 항체의 농도를 측정한 결과이다. 도 7의 (A)는, 항체 투여 7일 후의 혈청 중의 항체 농도를 나타낸다. 종축은 항체 농도(ng/mL), 횡축은 투여한 항체를 나타낸다. 도 7의 (B)는 투여 7일 후의 뇌 조직 중의 항체 농도를 나타낸다. 종축은 항체 용출량(ng/g뇌), 횡축은 투여한 항체를 나타낸다.
도 8의 (A) 및 (B)는, 각 항체의 마우스 뇌 이행성 이미징 평가의 결과이다. 도 8의 (A)는 항체 투여 7일 후의 뇌의 이미징상을 나타낸다. 도 8의 (B)는 뇌중 형광량을 투여 항체의 형광 강도로 보정한 값의 대항AVM 항체비를 나타낸다. 종축은 대항AVM 항체비, 횡축은 투여한 항체를 나타낸다.

본 발명은 CADM3에 결합하는 항원 결합 분자에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 CADM3에 결합하는 항체 또는 해당 항체 단편에 관한 것이다.

본 발명의 CADM3 결합 분자로서는 CADM3에 특이적으로 결합하여 당해 분자가 뇌 내에 체류하는 분자이면 어느 분자 형태여도 되고, 단백질, 핵산, 유기 합성된 저분자 화합물/고분자 화합물 등 어느 분자여도 된다. 구체적으로는 재조합 단백질, 항체, 앱타머, 저분자 스크리닝에서 얻어지는 저분자 화합물 등 어느 것이어도 되지만, 바람직하게는 항체 및 해당 항체 단편을 들 수 있다. CADM3 결합 분자는 CADM3의 세포 외 영역에 결합하는 분자인 것이 바람직하다.

CADM3은 칼슘 이온 비의존성 면역 글로불린 유사 세포 접착 분자이며, 칼슘 비의존성의 호모필릭 결합에서의 세포간의 접착 활성을 나타낸다. 예를 들어, 시그널 서열을 포함하는 인간 CADM3의 전체 길이는 398아미노산을 포함하고, 중추 신경계 및 말초 신경계에 있어서 2개의 축색 말단간, 축색 말단 및 축색 샤프트 사이, 그리고 축색 말단 및 축색 말단의 신경교 세포 프로세스 사이의 접촉 부위에서 발현하고 있고, 세포 접착 작용에 있어서 역할을 하고 있다.

본 발명의 CADM3 결합 분자가 결합하는 CADM3의 동물종은 마우스, 래트, 게잡이 원숭이 및/또는 인간 등을 들 수 있지만, 특히 이들 종에 한정되는 것은 아니고, 항체의 용도에 따라 적절한 동물종을 선택할 수 있다. 예를 들어 본 발명의 항체를 인간의 의약 용도에서 사용하는 경우, 해당 항체는 적어도 인간의 CADM3에 결합하는 항체인 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서 인간 CADM3로서는, 서열 번호 52에 기재된 아미노산 서열 혹은 NCBI 액세션 번호 AAH33819의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 서열 번호 52에 기재된 아미노산 서열 혹은 NCBI 액세션 번호 AAH33819의 아미노산 서열에 있어서 1개 이상의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하고, 또한 인간 CADM3의 기능을 갖는 폴리펩티드, 혹은 서열 번호 52에 기재된 아미노산 서열 혹은 NCBI 액세션 번호 AAH33819의 아미노산 서열과 60% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 인간 CADM3의 기능을 갖는 폴리펩티드 등을 들 수 있다.

서열 번호 52에 기재된 아미노산 서열 또는 NCBI 액세션 번호 AAH33819로 나타나는 아미노산 서열에 있어서 1개 이상의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 부위 특이적 변이 도입법[Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons(1987-1997), Nucleic acids Research, 10, 6487(1982), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 6409(1982), Gene, 34, 315(1985), Nucleic Acids Research, 13, 4431(1985), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 488(1985)] 등을 사용하여, 예를 들어 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 DNA에 부위 특이적 변이를 도입함으로써 얻을 수 있다.

결실, 치환 또는 부가되는 아미노산의 수는 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 1개 내지 수십개, 예를 들어 1 내지 20개, 보다 바람직하게는 1개 내지 수개, 예를 들어 1 내지 5개의 아미노산이다.

마우스 CADM3의 아미노산 서열[서열 번호 54 또는 NCBI 액세션 번호 NP_444429.1], 래트 CADM3의 아미노산 서열[NCBI 액세션 번호 AAI61811.1] 및 게잡이 원숭이 CADM3의 아미노산 서열[서열 번호 56 또는 NCBI 액세션 번호 NP_001270618.1]에 대해서도 마찬가지라고 할 수 있다.

본 발명에 있어서 인간 CADM3을 코딩하는 유전자로서는, 서열 번호 51에 기재된 염기 서열 또는 NCBI 액세션 번호 BC033819.1의 염기 서열을 들 수 있다. 서열 번호 51에 기재된 염기 서열 혹은 NCBI 액세션 번호 BC033819.1의 염기 서열에 있어서, 1 이상의 염기가 결실, 치환 또는 부가된 염기 서열을 포함하고, 또한 CADM3의 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 포함하는 유전자, 서열 번호 51에 기재된 염기 서열 혹은 NCBI 액세션 번호 BC033819.1의 염기 서열과 적어도 60% 이상의 상동성을 갖는 염기 서열, 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 갖는 염기 서열, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 상동성을 갖는 염기 서열을 포함하고, 또한 CADM3의 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 포함하는 유전자, 또는 서열 번호 51에 기재된 염기 서열 혹은 NCBI 액세션 번호 BC033819.1의 염기 서열을 포함하는 DNA와 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이징하는 DNA를 포함하고, 또한 CADM3의 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자 등도 본 발명에 있어서 CADM3을 코딩하는 유전자에 포함된다.

스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이징하는 DNA로서는, 서열 번호 51에 기재된 염기 서열 혹은 NCBI 액세션 번호 BC033819.1의 염기 서열을 포함하는 DNA를 프로브에 사용한, 콜로니·하이브리다이제이션법, 플라크·하이브리다이제이션법, 서던 블롯·하이브리다이제이션법 또는 DNA 마이크로어레이법 등에 의해 얻어지는 하이브리다이징 가능한 DNA를 말한다.

구체적으로는, 하이브리다이징한 콜로니 혹은 플라크 유래의 DNA, 또는 해당 서열을 갖는 PCR 산물 혹은 올리고 DNA를 고정화한 필터 혹은 슬라이드 글래스를 사용하여, 0.7 내지 1.0mol/L의 염화나트륨 존재 하, 65℃에서 하이브리다이제이션법[Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons(1987-1997), DNA Cloning 1: Core Techniques, A Practical Approach, Second Edition, Oxford University,(1995)]을 행한 후, 0.1 내지 2배 농도의 염수 시트르산나트륨(Saline Sodium Citrate)(SSC) 용액(1배 농도의 SSC 용액의 조성은 150mmol/L의 염화나트륨 및 15mmol/L의 시트르산나트륨을 포함한다)을 사용하여, 65℃ 조건 하에서 필터 또는 슬라이드 글래스를 세정함으로써 동정할 수 있는 DNA를 들 수 있다.

하이브리다이징 가능한 DNA로서는 서열 번호 51에 기재된 염기 서열 또는 NCBI 액세션 번호 BC033819.1의 염기 서열과 적어도 60% 이상의 상동성을 갖는 DNA, 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 갖는 DNA, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 상동성을 갖는 DNA를 들 수 있다.

마우스 CADM3의 염기산 서열[서열 번호 53 또는 NCBI 액세션 번호 NM_053199.3], 래트 CADM3의 염기산 서열[NCBI 액세션 번호 NM_001047103.1] 및 게잡이 원숭이 CADM3의 염기 서열[서열 번호 55 또는 NCBI 액세션 번호 NM_001283689.1]에 대해서도 마찬가지라고 할 수 있다.

CADM3의 기능으로서는, 상기한 바와 같이 중추 신경계 및 말초 신경계에 있어서의 축색 말단간 등에 있어서의 세포 접착 등에 대한 관여를 들 수 있다.

진핵 생물의 단백질을 코딩하는 유전자의 염기 서열에는 종종 유전자의 다형이 확인된다. 본 발명에 있어서 사용되는 유전자에 이러한 다형에 의해 염기 서열에 소규모의 변이를 발생시킨 유전자도 본 발명에 있어서의 CADM3을 코딩하는 유전자에 포함된다.

본 발명에 있어서의 상동성의 수치는 특별히 명시한 경우를 제외하고, 당업자에게 공지된 상동성 검색 프로그램을 사용하여 산출되는 수치이면 되지만, 염기 서열에 대해서는 BLAST[J. Mol. Biol., 215, 403(1990)]에 있어서 디폴트의 파라미터를 사용하여 산출되는 수치 등, 아미노산 서열에 대해서는 BLAST2[Nucleic Acids Res., 25, 3389(1997), Genome Res., 7, 649(1997), http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Education/BLASTinfo/information3.htmL]에 있어서 디폴트의 파라미터를 사용하여 산출되는 수치 등을 들 수 있다.

디폴트의 파라미터로서는, G(Cost to open gap)가 염기 서열인 경우에는 5, 아미노산 서열인 경우에는 11, -E(Cost to extend gap)가 염기 서열인 경우에는 2, 아미노산 서열인 경우에는 1, -q(Penalty for nucleotide mismatch)는 -3, -r (reward for nucleotide match)은 1, -e(expect value)는 10, -W(wordsize)가 염기 서열인 경우에는 11, 아미노산 서열인 경우에는 3, -y[Dropoff(X) for blast extensions in bits]가 blastn인 경우에는 20, blastn 이외의 프로그램인 경우에는 7, -X(X dropoff value for gapped alig㎚ent in bits)는 15 및 -Z(final X dropoff value for gapped alig㎚ent in bits)가 blastn인 경우에는 50, blastn 이외의 프로그램인 경우에는 25이다(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/htmL/blastcgihelp.htmL).

상기 각종 CADM3의 아미노산 서열의 부분 서열을 포함하는 폴리펩티드는 당업자에게 공지된 방법에 의해 제작할 수 있다. 구체적으로는, 상기 각종 CADM3의 아미노산 서열을 코딩하는 DNA의 일부를 결실시키고, 이것을 포함하는 발현 벡터를 도입한 형질 전환체를 배양함으로써 제작할 수 있다. 또한 상기와 마찬가지 방법에 의해, 각종 CADM3의 아미노산 서열에 있어서 1 이상의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 얻을 수 있다.

또한, 각종 CADM3의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 또는 각종 CADM3의 아미노산 서열에 있어서 1 이상의 아미노산이 결실, 치환 혹은 부가된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 플루오레닐메틸옥시카르보닐(Fmoc)법, t-부틸옥시카르보닐(tBoc)법 등의 화학 합성법에 의해 제조할 수도 있다.

본 발명에 있어서 인간 CADM3의 세포 외 영역은 서열 번호 52 또는 NCBI 액세션 번호 AAH33819에 기재된 아미노산 서열에 있어서, 25번째부터 330번째의 아미노산 서열을 말한다.

마우스 CADM3의 세포 외 영역은 서열 번호 54 또는 NCBI 액세션 번호 NP_444429.1에 기재된 아미노산 서열에 있어서, 23번째부터 328번째의 아미노산 서열을 말한다. 래트 CADM3의 세포 외 영역은 NCBI 액세션 번호 AAI61811.1에 기재된 아미노산 서열에 있어서, 23번째부터 328번째의 아미노산 서열을 말한다.

게잡이 원숭이 CADM3의 세포 외 영역은 서열 번호 56 또는 NCBI 액세션 번호 NP_001270618.1에 기재된 아미노산 서열에 있어서, 23번째부터 328번째의 아미노산 서열을 말한다.

본 발명의 CADM3 결합 분자가 CADM3의 세포 외 영역에 결합하는 것은, CADM3 발현 세포 또는 재조합 CADM3 단백질에 대한 본 발명의 CADM3 결합 분자의 결합성을 효소 결합 면역흡착 검정(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)(ELISA), 플로우 사이토메트리 또는 표면 프라즈몬 공명법 등을 사용하여 측정함으로써 확인할 수 있다. 또한, 공지된 면역학적 검출법[Monoclonal Antibodies-Principles and practice, Third edition, Academic Press(1996), Antibodies-A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory(1988), 단일 클론 항체 실험 매뉴얼, 고단샤 사이언티픽(1987)] 등을 조합해서 확인할 수도 있다.

본 발명의 CADM3 결합 분자는 뇌 내의 CADM3에 특이적으로 결합함으로써 뇌 체류성을 갖는 분자이며, 예를 들어 본 발명의 항체는 뇌 내의 CADM3에 결합함으로써 뇌 체류성을 갖는 항체이다. 또한, 본 발명의 항체는 동물의 말초에 투여했을 때에, 말초로부터 뇌의 혈액 뇌관문을 투과해서 뇌 내로 이행하고, 뇌 내의 CADM3에 결합함으로써 뇌 체류성을 갖는 항체이다. 본 발명의 항체는 뇌 체류성이 우수한 항체, 또는 뇌 체류성이 향상된 항체인 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서 뇌 체류성이란, 피검 동물에 대상물을 투여했을 때에 해당 대상물이 뇌 내에 머무르는 성질을 말한다. 즉, 뇌 내로의 이행의 증가, 뇌 내로의 축적의 증가, 뇌 내로부터 뇌 외로의 이행의 저하, 뇌 내로부터 뇌 외로의 배출의 저하, 및 뇌 내 분해의 저하로부터 선택되는 적어도 어느 하나에 의해 해당 대상물의 뇌 내 농도(또는 뇌 내량)가 증가하는 것, 또는 검출 가능한 정도로 일정 농도 존재하는 것을 의미한다.

본 발명에 있어서 뇌 체류성이 우수하다는 것, 뇌 체류성이 높다는 것, 또는 뇌 체류성이 향상되어 있다는 것은, 대상물을 피검 동물에 투여했을 때 컨트롤과 비교하여, 투여로부터 동일 일자 경과 후의 해당 대상물의 뇌 내 농도(또는 뇌 내량)가 증가하는 것, 또는 당해 대상물이 뇌 내에서 장기간 검출 가능한 정도로 일정 농도(량) 존재하는 것을 의미한다.

이들 현상은 컨트롤과 비교하여 해당 대상물의 뇌 내로의 이행의 증가, 뇌 내로의 축적의 증가, 뇌 내로부터 뇌 외로의 이행의 저하, 뇌 내로부터 뇌 외로의 배출의 저하, 및 뇌 내 분해의 저하 중 적어도 어느 하나에 의해 발생한다.

본 발명에 있어서 뇌 체류성이 우수하다는 것, 뇌 체류성이 높다는 것, 또는 뇌 체류성이 향상되어 있다는 것은, 예를 들어 피검 동물에 해당 대상물을 투여했을 때에 컨트롤과 비교해서 투여 후 1 내지 10일, 바람직하게는 투여 후 2 내지 10일, 3 내지 10일, 보다 바람직하게는 4 내지 10일의 해당 대상물의 뇌 내 농도 (량)가 높은 것, 또는 당해 대상물의 뇌 내 농도(또는 뇌 내량)의 피크가 투여 후 4일째 이후, 바람직하게는 투여 후 5일째 이후, 6일째 이후, 7일째 이후, 8일째 이후, 9일째 이후, 보다 바람직하게는 10일째 이후인 것 등을 들 수 있다.

뇌 체류성이 우수한 항체, 뇌 체류성이 높은 항체, 또는 뇌 체류성이 향상된 항체는 컨트롤 항체와 비교하여 뇌 내에서의 항체 농도(항체량)가 높은 항체, 또는 뇌 내에 장기간 존재할 수 있는 특징을 구비한 항체이면 어느 항체여도 된다.

예를 들어 컨트롤 항체와 비교하여 뇌 내로의 이행성 및/또는 뇌 내 축적성이 높은 특징, 뇌 내로부터 뇌 외로의 이행성, 배출성 및/또는 뇌 내 분해성이 낮은 특징, 그리고 뇌 내로부터 뇌 외로의 이행성, 배출성 및/또는 뇌 내 분해성에 비하여, 뇌 내로의 이행성 및/또는 뇌 내 축적성이 높은 특징 등을 구비한 항체를 들 수 있다.

따라서 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편으로서는, 항체 또는 해당 항체 단편을 동물에 투여한 경우, 컨트롤 항체와 비교하여 투여로부터 동일 일자 경과 후의 뇌 내 항체 농도(또는 항체량)가 높은 항체 혹은 해당 항체 단편, 또는 뇌 내에 장기간 존재할 수 있는 항체 혹은 해당 항체 단편 등을 들 수 있다.

뇌 내에서의 항체 농도(또는 항체량)의 변화는 어떠한 것이든 무방하며, 예를 들어 측정 기간 중에 뇌 내의 항체 농도가 한번 피크에 달한 후, 서서히 항체 농도가 저하되는 경우, 뇌 내의 항체 농도가 피크에 달한 후, 그 항체 농도를 계속해서 유지하고 있는 경우, 또는 항체 투여 후에 뇌 내에서의 항체 농도가 계속해서 증가하고 있는 경우 등을 들 수 있다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편으로서는, 예를 들어 래트에 대한 투여 후 4일째 혹은 10일째에 컨트롤 항체보다 뇌 내의 항체 농도 또는 항체량이 높은 항체, 래트에 대한 투여 후 4일째부터 10일째 사이에 뇌 내의 항체 농도 혹은 항체량이 유지되고 있거나 혹은 증가하는 항체, 또는 래트에 대한 투여 후 10일째 이후에도 뇌 내에서의 존재를 명확하게 확인할 수 있는 항체 등을 말하지만, 이들에 한정되지 않는다.

컨트롤 항체로서는 피검 항체와 동일한 종 또는 서브클래스의 항체이면 어느 항체든 무방하지만, 예를 들어 항아버멕틴(AVM) 항체 등을 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서 뇌 내로서는, 예를 들어 뇌 실질, 뇌실 내, 뇌척수액 내 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.

면역 전자 현미경법에 의해, CADM3의 염색은 예를 들어 과립 세포의 평행 섬유 말단, 평행 섬유 말단 및 평행 섬유 축색의 접촉 부위, 그리고 평행 섬유 말단 및 신경교 세포 프로세스의 접촉 부위에 확인된다(비특허문헌 26). 따라서 본 발명의 CADM3 결합 분자의 일 양태로서, 신경 세포 및/또는 신경 조직 내의 CADM3에 특이적으로 결합함으로써 신경 세포 결합성을 갖고, 이에 의해 뇌 체류성을 갖는 분자를 들 수 있다. 본 발명의 항체의 일 양태로서, 예를 들어 신경 세포 및/또는 신경 조직 내의 CADM3에 결합함으로써 신경 세포 결합성을 갖고, 이에 의해 뇌 체류성을 갖는 항체를 들 수 있다.

본 발명에 있어서 동물에 항체를 투여하는 방법으로서는, 예를 들어 정맥 투여, 뇌실 내 투여, 복강 내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경비 투여, 척수강 내 투여 등을 들 수 있지만, 이들 방법에 한정되지 않는다.

본 발명에 있어서 항체의 뇌 체류성을 측정하는 방법으로서는, 예를 들어 동물에 항체를 투여해서 수일 경과 후에 뇌 조직을 회수하고, 균질화해서 원심 분리 후의 상청 중의 항체 농도를 측정하고, 단위 뇌 중량당의 항체량을 산출하는 방법, 회수한 뇌 조직을 사용하여 공지된 면역학적 방법을 사용하여 항체의 존재를 검출하는 방법, 표지를 실시한 항체를 동물에 투여하고, 생체 내 이미징 시스템으로 경시적으로 당해 항체의 존재를 검출하는 방법 등을 들 수 있다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편으로서는, 하기 (a) 내지 (x)로 이루어지는 군에서 선택되는 하나의 항체 또는 항체 단편을 들 수 있다. 이들 중에서도 항체의 뇌 체류성 및 뇌 내 항체량의 점에서, (d), (j), (o) 또는 (t)가 바람직하다.

(a) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 23, 24 및 25에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 28, 29 및 30에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,

(c) VHH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 3, 4 및 5에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,

본 발명의 항체로서는, 상기 (a) 내지 (t)에 기재되는 어느 하나의 항체 또는 항체 단편의 VH의 CDR1 내지 3 및 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열과, 각각 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내는 항체의 VH의 CDR1 내지 3 및 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함한다. 90% 이상의 상동성으로서 보다 바람직하게는, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 및 99%의 상동성 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서 상기 (a) 내지 (t)에 기재되는 항체 또는 항체 단편의 일 양태로서는, 각각 인간 항CADM3 모노클로날 항체로서 CADM301 항체, CADM3102 항체, CADM3219 항체, CADM3301 항체, CADM3309 항체, CADM3312 항체, CADM3314 항체, CADM3316 항체, CADM3349 항체, CADM3351 항체, CADM3402 항체, CADM3404 항체, CADM3432 항체, CADM3448 항체, CADM3458 항체 및 CADM3501 항체, 그리고 알파카 항CADM3 모노클로날 VHH 항체로서 iCADM3-3R1-L5 항체, iCADM3-3R1-L8 항체, iCADM3-3R1-L10 항체 및 iCADM3-3R1-L11 항체를 들 수 있다. 이들 중에서도 항체의 뇌 체류성 및 뇌 내 항체량의 점에서, CADM3312 항체, CADM3402 항체, CADM3502 항체 또는 iCADM3-3R1-L8 항체가 바람직하다.

그 외에는, 상술한 모노클로날 항체로부터 유전자 재조합 기술에 의해 제작된 인간형 키메라 항체, 인간화 항체 등을 들 수 있다. 구체적으로는, iCADM3-3R1-L8_01 인간화 항체, iCADM3-3R1-L8_02 인간화 항체, iCADM3-3R1-L8_03 인간화 항체, iCADM3-3R1-L8_04 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_01 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_02 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_03 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_04 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_05 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_06 인간화 항체 등도 들 수 있다.

본 발명에 있어서 상기 (u)의 항체란, 상기 (a) 내지 (t)에 기재된 어느 하나의 항체 또는 항체 단편을 제1 항체로 했을 때, 해당 제1 항체와 CADM3의 결합을 저해하는 제2 항체를 말한다.

본 발명에 있어서 상기 (w)의 항체란, 상기 (a) 내지 (t)에 기재된 어느 하나의 항체 또는 항체 단편을 제1 항체, 및 제1 항체가 결합하는 에피토프를 제1 에피토프로 한 경우, 당해 제1 에피토프를 포함하는, 제2 에피토프에 결합하는 제2 항체를 말한다.

또한, 본 발명의 상기 (x)의 항체란, 상기 (a) 내지 (t)에 기재된 어느 하나의 항체 또는 항체 단편을 제1 항체, 및 제1 항체가 결합하는 에피토프를 제1 에피토프로 한 경우에, 당해 제1 에피토프에 결합하는 제2 항체를 말한다.

또한, 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편으로서 구체적으로는, 하기 (1) 내지 (31)로 이루어지는 군에서 선택되는 하나의 항체 또는 항체 단편도 들 수 있다. 이들 중에서도 항체의 뇌 체류성 및 뇌 내 항체량의 점에서, (4), (20), (25) 또는 (30)이 바람직하다.

본 발명의 항체로서는, 상기 (1) 내지 (30)에 기재되는 어느 하나의 항체 또는 항체 단편의 VH 및 VL의 아미노산 서열과, 각각 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내는 항체의 VH 및 VL의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함한다. 90% 이상의 상동성으로서 보다 바람직하게는, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 및 99%의 상동성 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서 상기 (1) 내지 (31)에 기재되는 항체 또는 항체 단편의 일 양태로서는, 각각 인간 항CADM3 모노클로날 항체로서 CADM301 항체, CADM3102 항체, CADM3219 항체, CADM3301 항체, CADM3309 항체, CADM3312 항체, CADM3314 항체, CADM3316 항체, CADM3349 항체, CADM3351 항체, CADM3402 항체, CADM3404 항체, CADM3432 항체, CADM3448 항체, CADM3458 항체 및 CADM3501 항체, 그리고 알파카 항CADM3 모노클로날 VHH 항체로서 iCADM3-3R1-L5 항체, iCADM3-3R1-L8 항체, iCADM3-3R1-L10 항체 및 iCADM3-3R1-L11 항체를 들 수 있다. 이들 중에서도 항체의 뇌 체류성 및 뇌 내 항체량의 점에서, CADM3312 항체, CADM3402 항체, CADM3502 항체 또는 iCADM3-3R1-L8 항체가 바람직하다.

그 외에는, 상술한 모노클로날 항체로부터 유전자 재조합 기술에 의해 제작된 인간형 키메라 항체, 인간화 항체 등을 들 수 있다. 구체적으로는, 서열 번호 177의 아미노산 서열의 6번째, 27번째, 37번째, 44번째, 45번째, 47번째, 49번째, 79번째 및 98번째에서 선택되는 적어도 하나의 아미노산 잔기가 치환된 인간화 항체, 서열 번호 178번째의 아미노산 서열의 1번째, 12번째, 14번째, 27번째, 28번째, 29번째, 37번째, 44번째, 45번째, 46번째, 47번째, 49번째, 78번째, 96번째 및 97번째에서 선택되는 적어도 하나의 아미노산 잔기가 치환된 인간화 항체, 서열 번호 177의 아미노산 서열의 6번째의 아미노산 잔기를 Glu로, 27번째의 아미노산 잔기를 Arg로, 37번째의 아미노산 잔기를 Phe로, 44번째의 아미노산 잔기를 Glu로, 45번째의 아미노산 잔기를 Arg로, 47번째의 아미노산 잔기를 Phe로, 49번째의 아미노산 잔기를 Ala로, 79번째의 아미노산 잔기를 Val로, 및 98번째의 아미노산 잔기를 Ala로 치환하는 아미노산 잔기 치환 중 적어도 1개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 인간화 항체, 서열 번호 178번째의 아미노산 서열의 1번째의 아미노산 잔기를 Gln으로, 12번째의 아미노산 잔기를 Val로, 14번째의 아미노산 잔기를 Ala로, 27번째의 아미노산 잔기를 Ser로, 28번째의 아미노산 잔기를 Ile로, 29번째의 아미노산 잔기를 Phe로, 37번째의 아미노산 잔기를 Tyr로, 44번째의 아미노산 잔기를 Gln으로, 45번째의 아미노산 잔기를 Arg로, 46번째의 아미노산 잔기를 Gly로, 47번째의 아미노산 잔기를 Leu로, 49번째의 아미노산 잔기를 Ala로, 78번째의 아미노산 잔기를 Val로, 96번째의 아미노산 잔기를 Asn, 및 97번째의 아미노산 잔기를 Ala로 치환하는 아미노산 잔기 치환 중 적어도 1개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 인간화 항체, iCADM3-3R1-L8_01 인간화 항체, iCADM3-3R1-L8_02 인간화 항체, iCADM3-3R1-L8_03 인간화 항체, iCADM3-3R1-L8_04 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_01 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_02 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_03 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_04 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_05 인간화 항체, iCADM3-3R1-L11_06 인간화 항체 등도 들 수 있다.

본 발명에 있어서 EU 인덱스란, 시퀀스·오브·프로테인즈·오브·이뮤노로지칼·인터레스트 제5판(1991)에 나타나는 아미노산 잔기의 위치를 말한다. 이하에 나타내는 아미노산 잔기의 위치는 특별히 기재하지 않은 경우에는 모두 EU 인덱스에 기재되는 아미노산 잔기의 위치를 나타낸다.

항체 분자는 이뮤노글로불린(Ig)이라고도 칭해지고, 그의 기본적인 구조는 중쇄(Heavy chain; H쇄) 및 경쇄(Light chain; L쇄)라 불리는 폴리펩티드를 각각 2개씩 갖는 4량체이다.

또한, H쇄는 N말단측으로부터 H쇄 가변 영역(VH라고도 표기된다), H쇄 정상 영역(CH라고도 표기된다), L쇄는 N말단측으로부터 L쇄 가변 영역(VL이라고도 표기된다), L쇄 정상 영역(CL이라고도 표기된다)의 각 영역에 의해 각각 구성된다.

CH는 각 서브클래스마다 α, δ, ε, γ 및 μ쇄가 각각 알려져 있다. CH는 또한 N말단측으로부터 CH1 도메인, 힌지 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인의 각 도메인에 의해 구성된다.

도메인이란, 항체 분자의 각 폴리펩티드를 구성하는 기능적인 구조 단위를 말한다. 또한, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 합해서 Fc(Fragment, crystallizable)영역 또는 단순히 Fc라고 한다. CL은 C_λ쇄 및 C_κ쇄가 알려져 있다.

CH가 α, δ, ε, γ 및 μ쇄인 항체의 서브클래스는 각각 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이라고 한다. 각 항체의 서브클래스에는 동물에 따라 아이소타입이 존재하는 것이 있고, 인간에서는 IgA에는 IgA1 및 IgA2, IgG에는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 아이소타입이 존재한다.

본 발명에 있어서의 CH1 도메인, 힌지 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인 및 Fc 영역은 EU 인덱스에 의해, N말단으로부터의 아미노산 잔기의 번호로 특정할 수 있다.

구체적으로, CH1은 EU 인덱스 118 내지 215번의 아미노산 서열, 힌지는 EU 인덱스 216 내지 230번의 아미노산 서열, CH2는 EU 인덱스 231 내지 340번의 아미노산 서열, CH3은 EU 인덱스 341 내지 447번의 아미노산 서열, 및 Fc 영역은 EU 인덱스 231 내지 447번의 아미노산 서열로 각각 특정된다.

본 발명의 항체로서는 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체 및 올리고클로날 항체 중 어느 항체도 포함한다. 폴리클로날 항체란, 다른 클론의 항체 산생 세포가 분비되는 항체 분자의 집단을 말한다. 모노클로날 항체란, 단일 클론의 항체 산생 세포가 분비되는 항체이며, 단 하나의 에피토프(항원 결정기라고도 한다)를 인식하고, 모노클로날 항체를 구성하는 아미노산 서열(1차 서열)이 균일한 항체를 말한다. 올리고클로날 항체란, 복수의 다른 모노클로날 항체를 혼합한 항체 분자의 집단을 말한다.

본 발명에 있어서의 모노클로날 항체로서는 하이브리도마에 의해 산생되는 항체, 또는 항체 유전자를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환한 형질 전환체에 의해 산생되는 유전자 재조합 항체를 들 수 있다.

에피토프란, 모노클로날 항체가 인식하고 결합하는 단일의 아미노산 서열, 아미노산 서열을 포함하는 입체 구조, 번역 후 수식된 아미노산 서열 및 번역 후 수식된 아미노산 서열을 포함하는 입체 구조 등을 들 수 있다.

번역 후 수식된 아미노산 서열로서는, 당쇄가 OH 치환기를 갖는 Tyr 및 Ser에 결합한 O 결합형 당쇄, 당쇄가 NH₂ 치환기를 갖는 Gln 및 Asn에 결합한 N 결합형 당쇄, 그리고 황산 분자가 OH 치환기를 갖는 Tyr에 결합하고, 티로신황산화된 아미노산 서열을 들 수 있다.

본 발명의 항체가 결합하는 CADM3의 에피토프는 CADM3의 일부 도메인을 결실시킨 결손체, CADM3의 일부 도메인을 다른 단백질 유래의 도메인으로 치환시킨 변이체, CADM3의 부분 펩티드 단편 등을 사용하여 항체의 결합 실험을 행함으로써 결정할 수 있다. 또한, 상기 결손체 또는 변이체의 발현 세포를 사용하여 항체의 결합 실험을 행할 수도 있다.

또는, 본 발명의 항체가 결합하는 CADM3의 에피토프는 단백질 분해 효소로 소화된 CADM3의 펩티드 단편에 본 발명의 항체를 첨가하고, 기지의 질량 분석법을 사용하여 에피토프 매핑을 행함으로써도 결정할 수 있다.

본 발명의 항체로서는, 유전자 재조합 기술에 의해 제작되는 마우스 항체, 래트 항체, 햄스터 항체, 래빗 항체, 라마 항체, 낙타 항체, 알파카 항체, 키메라 항체, 인간화 항체(「CDR 이식 항체」라고도 한다), 인간 항체 등의 유전자 재조합 항체도 포함된다.

본 발명에 있어서 키메라 항체란, VH 및 VL과, CH 및 CL이 다른 동물종에서 유래하는 항체를 말한다. 인간 이외의 동물(비인간 동물)의 항체의 VH 및 VL과, 인간 항체의 CH 및 CL을 포함하는 항체는 인간형 키메라 항체, 마우스 이외의 동물의 항체의 VH 및 VL과, 마우스 항체의 CH 및 CL을 포함하는 항체는 마우스형 키메라 항체라 하고, 기타 키메라 항체도 마찬가지 방법으로 명명된다.

비인간 동물로서는, 마우스, 래트, 햄스터, 래빗, 라마, 낙타, 알파카 등, 하이브리도마를 제작하거나, 또는 항체 파지 라이브러리를 제작하는 것이 가능한 동물이면 어떠한 것도 사용할 수 있다.

하이브리도마란, 비인간 동물에 항원을 면역해서 취득된 B 세포와, 마우스 등에서 유래하는 미엘로마 세포를 세포 융합시켜서 얻어지는, 원하는 항원 특이성을 가진 모노클로날 항체를 산생하는 세포를 말한다.

항체 파지 라이브러리는 면역 글로불린 가변 영역의 유전자를 파지에 클로닝하고, 그 표면에 항원 결합 분자를 발현시켜서 제작한 라이브러리를 말한다. 사용되는 파지는 M13 파지 등을 들 수 있지만, 특별히 한정되는 것이 아니다.

파지에 제시되는 항원 결합 분자는 어떠한 형태라도 무방하지만, scFv, Fab, VHH 등의 항체 단편인 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서, 항체 파지 라이브러리는 면역 라이브러리, 나이브 라이브러리 및 합성 라이브러리 중 어느 라이브러리여도 된다.

면역 라이브러리는 항원으로 면역된 동물 또는 환자의 림프구 유래의 항체 유전자를 바탕으로 구축된 항체 파지 라이브러리를 말한다. 나이브 라이브러리는 정상적인 동물 또는 건강인의 림프구 유래의 항체 유전자를 바탕으로 구축된 항체 파지 라이브러리를 말한다. 합성 라이브러리는 게놈 DNA에 있어서의 V 유전자 또는 재구축된 기능적인 V 유전자의 CDR을, 적당한 길이의 랜덤한 아미노산 서열을 코딩하는 올리고 뉴클레오티드로 치환한 라이브러리를 말한다.

키메라 항체의 제작 방법으로서, 이하에 인간형 키메라 항체의 제작 방법을 기재한다. 기타 키메라 항체에 대해서도 마찬가지 방법으로 제작할 수 있다.

인간형 키메라 항체는 모노클로날 항체를 생산하는 비인간 동물 세포 유래의 하이브리도마로부터 VH 및 VL을 코딩하는 cDNA를 취득하고, 인간 항체의 CH 및 CL을 코딩하는 DNA를 갖는 동물 세포용 발현 벡터에 각각 삽입해서 인간형 키메라 항체 발현 벡터를 구축하고, 동물 세포에 도입함으로써 발현시켜서 제조할 수 있다.

또한, 비인간 동물 유래의 항체 파지 라이브러리로부터 VH 및 VL을 코딩하는 유전자를 클로닝하여, 인간 항체의 CH 및 CL을 코딩하는 DNA를 갖는 동물 세포용 발현 벡터에 각각 삽입해서 인간형 키메라 항체 발현 벡터를 구축하고, 동물 세포에 도입함으로써 발현시켜서 제조할 수도 있다.

인간화 항체란, 비인간 동물 항체의 VH 및 VL의 CDR의 아미노산 서열을 인간 항체의 VH 및 VL의 대응하는 CDR에 이식한 항체를 말한다. VH 및 VL의 CDR 이외의 영역은 FR이라 칭해진다.

인간화 항체는 비인간 동물 항체의 VH의 CDR의 아미노산 서열 및 임의의 인간 항체의 VH의 FR의 아미노산 서열을 포함하는 VH의 아미노산 서열을 코딩하는 cDNA 그리고 비인간 동물 항체의 VL의 CDR의 아미노산 서열 및 임의의 인간 항체의 VL의 FR의 아미노산 서열을 포함하는 VL의 아미노산 서열을 코딩하는 cDNA를 구축하고, 인간 항체의 CH 및 CL을 코딩하는 DNA를 갖는 동물 세포용 발현 벡터에 각각 삽입해서 인간화 항체 발현 벡터를 구축하고, 동물 세포에 도입함으로써 발현시켜서 제조할 수 있다.

인간 항체는 원래 인간 체내에 천연으로 존재하는 항체를 말하지만, 인간 항체 파지 라이브러리 또는 인간 항체 산생 트랜스제닉 동물에서 얻어지는 항체 등도 포함된다.

인간 항체는 인간 이뮤노글로불린 유전자를 유지하는 마우스(Tomizuka K. et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 722-7, 2000.)에 원하는 항원을 면역함으로써 취득할 수 있다. 또한, 인간 유래의 B 세포로부터 항체 유전자를 증폭한 파지 디스플레이 라이브러리를 사용하여 원하는 결합 활성을 갖는 인간 항체를 선택함으로써, 면역을 행하지 않고 인간 항체를 취득할 수 있다(Winter G. et al., Annu Rev Immunol.12:433-55. 1994).

또한, EB 바이러스를 사용하여 인간 B 세포를 불사화함으로써, 원하는 결합 활성을 갖는 인간 항체를 생산하는 세포를 제작하고 인간 항체를 취득할 수 있다(Rosen A. et al., Nature 267, 52-54.1977).

인간 항체 파지 라이브러리는 인간(건강인 또는 환자)의 림프구로부터 제조한 항체 유전자를 파지 유전자에 삽입함으로써 Fab, scFv 및 VHH 등의 항체 단편을 표면에 발현시킨 파지의 라이브러리이다. 해당 라이브러리로부터, 항원을 고정화한 기질에 대한 결합 활성을 지표로 해서 원하는 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편을 발현하고 있는 파지를 회수할 수 있다. 해당 항체 단편은 또한 유전자 공학적 방법이 의해, 2개의 완전한 H쇄 및 2개의 완전한 L쇄를 포함하는 인간 항체 분자로도 변환할 수 있다.

인간 항체 산생 트랜스제닉 동물은 인간 항체 유전자가 숙주 동물의 염색체내에 혼입된 동물을 말한다. 구체적으로는 마우스 ES 세포에 인간 항체 유전자를 도입하고, 해당 ES 세포를 다른 마우스의 초기배에 이식 후, 발생시킴으로써 인간 항체 산생 트랜스제닉 동물을 제작할 수 있다.

인간 항체 산생 트랜스제닉 동물로부터의 인간 항체의 제작은 통상의 인간 이외의 포유 동물에서 행해지고 있는 하이브리도마 제작 방법에 의해 얻은 인간 항체 산생 하이브리도마를 배양해서 배양물 중에 인간 항체를 산생 축적시키고, 해당배양물로부터 항체를 정제함으로써 행할 수 있다.

본 발명의 항체는 중쇄만으로 구성되는 중쇄 항체를 포함한다. 중쇄 항체는 라마, 낙타, 알파카 등의 낙타과의 동물로부터 취득되는 항체, 또는 해당 항체를 바탕으로 제작한 유전자 재조합 항체를 말한다.

본 발명에 있어서 항체 단편은 항체의 단편이며, 또한 항원 결합 활성을 갖는 것을 말한다. 예를 들어 Fab, Fab', F(ab')₂, scFv, 디아바디, dsFv, 복수의 CDR을 포함하는 펩티드 및 VHH 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 항체 단편에는 해당 항체 단편에 항체의 정상 영역 또는 Fc의 전체 길이 혹은 일부를 융합시킨 항체 단편, 정상 영역 또는 Fc를 포함하는 항체 단편 등, 항체의 부분 단편을 포함하고 또한 CADM3 결합 활성을 갖는 것이면 어느 항체 단편도 포함된다.

Fab는 IgG 항체를 단백질 분해 효소 파파인으로 처리해서 얻어지는 단편 중(H쇄의 224번째의 아미노산 잔기에서 절단된다), H쇄의 N말단측 약 절반과 L쇄 전체가 디술피드 결합(S-S 결합)으로 결합한, 분자량 약 5만의 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다.

F(ab')₂는 IgG를 단백질 분해 효소 펩신으로 처리해서 얻어지는 단편 중(H쇄의 234번째의 아미노산 잔기에서 절단된다), Fab가 힌지 영역의 S-S 결합을 통해서 결합된 것보다 약간 큰, 분자량 약 10만의 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다.

Fab'는 상기 F(ab')₂의 힌지 영역의 S-S 결합을 절단한 분자량 약 5만의 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다.

scFv는 1개의 VH와 1개의 VL을 4개의 Gly 및 1개의 Ser 잔기를 포함하는 링커(G4S)를 임의의 개수 연결시킨 링커 펩티드 등의 적당한 펩티드 링커(P)를 사용하여 연결한, VH-P-VL 또는 VL-P-VH 폴리펩티드이며, 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다.

디아바디는 항원 결합 특이성이 동일하거나 또는 다른 scFv가 2량체를 형성한 항체 단편이며, 동일한 항원에 대한 2가의 항원 결합 활성 또는 다른 항원에 대한 특이적인 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다.

dsFv는 VH 및 VL 중 각각 1아미노산 잔기를 시스테인 잔기로 치환한 폴리펩티드를 해당 시스테인 잔기간의 S-S 결합을 통해서 결합시킨 것이며, 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다.

CDR을 포함하는 펩티드는 VH 또는 VL의 CDR의 적어도 1 영역 이상을 포함하여 구성되는 것이며, 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다. 복수의 CDR을 포함하는 펩티드는 CDR끼리를 직접 또는 적당한 펩티드 링커를 통해서 결합시킬 수 있다. 본 발명의 CDR을 포함하는 펩티드로서는, 본 발명의 항체 유래의 6개의 CDR을 포함하는 펩티드를 들 수 있다.

해당 CDR을 포함하는 펩티드는 본 발명의 항체의 VH 및 VL의 CDR을 코딩하는 DNA를 구축하고, 해당 DNA를 원핵 생물용 발현 벡터 또는 진핵 생물용 발현 벡터에 삽입하고, 해당 발현 벡터를 원핵 생물 또는 진핵 생물에 도입함으로써 발현시켜서 제조할 수 있다. 또한, 해당 CDR을 포함하는 펩티드는 Fmoc법 또는 tBoc법 등의 화학 합성법에 의해 제조할 수도 있다.

VHH는 중쇄 항체의 가변 영역이며, 나노바디(nanobody)라고도 한다. 본 발명의 항체 단편은 상술한 어느 항체 단편 또는 해당 부분 단편을 포함하고 또한 CADM3 결합 활성을 갖는 항체 단편이면 어느 것도 포함한다.

본 발명에 있어서, 하나의 항원 결합 부위를 갖는 항체 또는 해당 항체 단편을 1가 항체라고 한다. 1가 항체의 포맷으로서는 국제공개 제2014/054804호, 국제공개 제2011/090754호, 국제공개 제2007/048037호 및 국제공개 제2012/116927호 등에 기재되는, 항원 결합 부위를 하나 갖는 항체 또는 해당 항체 단편의 포맷 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서, 3개 이상의 다른 항원 또는 에피토프에 결합하는 1분자의 항체 또는 해당 항체 단편을 다중특이적 항체라고 한다. 또한, 본 발명에 있어서, 2개의 다른 항원 또는 에피토프에 결합하는 1분자의 항체 또는 해당 항체 단편을 이중특이적 항체라고 한다.

다중특이적 항체 또는 이중특이적 항체의 포맷으로서는, 국제공개 제2009/131239호, 국제공개 제2014/054804호, 국제공개 제01/077342호, 미국특허출원 공개 2007/0071675호 명세서, 국제공개 2007/024715호, Wu et al., [Nature Biotechnology, 2007, 25(11), p.1290-1297], Labrijn et al., [PNAS 2013, vol.110, no.13, p5145-5150], Jong et al., [http://dx.doi.org/10.1371/journal.pbio.1002344], Kontermann et al., [mAbs 2012, vol.4, issue2, p182-197], Spiess et al., [Molecular Immunology 67(2015) 95-106], Ridgway et al., [Protein engineering, 1996 vol.9 no.7 pp617-621], 국제공개 제2009/080251호, 국제공개 제2010/151792호 및 국제공개 제2014/033074호 등에 기재되는 포맷 등을 들 수 있다.

이중특이적 항체로서 구체적으로는, 이하에 기재하는 이중특이적 항체 등을 들 수 있다.

(1) 항체의 2개의 중쇄 중, 한쪽 중쇄(중쇄 A)의 CH3에 S354C/T366W, 다른 한쪽 중쇄(중쇄 B)의 CH3에 Y349C/T366S/L368A/Y407V의 아미노산 개변을 가한 이중특이적 항체.

(2) 항체의 C말단에 항체 단편을 융합시킨 이중특이적 항체.

(3) 항체의 N말단에 항체 단편을 융합시킨 이중특이적 항체.

상기 (1)에 기재하는 이중특이적 항체는 중쇄 A의 VH를 포함하는 항원 결합 부위가 CADM3에 결합하고, 중쇄 B의 VH를 포함하는 항원 결합 부위가 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 이중특이적 항체여도 되고, 그 반대여도 된다.

상기 (2)에 기재하는 이중특이적 항체로서는, 예를 들어 항체를 구성하는 2개의 중쇄의 한쪽 C말단에 항체 단편이 결합하고 있는 이중특이적 항체, 항체를 구성하는 2개의 중쇄의 양쪽 C말단에 항체 단편이 결합하고 있는 이중특이적 항체, 항체를 구성하는 2개의 경쇄의 한쪽 C말단에 항체 단편이 결합하고 있는 이중특이적 항체, 항체를 구성하는 2개의 경쇄의 양쪽 C말단에 항체 단편이 결합하고 있는 이중특이적 항체, 항체를 구성하는 2개의 경쇄의 C말단 및 2개의 중쇄의 C말단의 어느 것에도 항체 단편이 결합하고 있는 이중특이적 항체 등을 들 수 있다. 또한, 항체의 C말단 및 항체 단편 사이에는 적당한 링커가 존재하고 있어도 된다.

상기 (2)에 기재하는 이중특이적 항체가 갖는 항체 단편은 scFv, Fab 및 VHH 등이 바람직하지만, 특별히 이들에 한정되지 않는다.

상기 (2)에 기재하는 이중특이적 항체는 N말단의 항원 결합 부위가 CADM3에 결합하고, C말단의 항원 결합 부위가 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 이중특이적 항체여도 되고, 그 반대여도 된다.

상기 (3)에 기재하는 이중특이적 항체는, 항체를 구성하는 2개의 중쇄 또는 경쇄의 적어도 어느 1개의 N말단에 항체 단편이 결합하고 있는 이중특이적 항체를 말한다. 또한, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 N말단과 항체 단편 사이에 적당한 링커가 존재하고 있어도 된다. 상기 (3)에 기재하는 이중특이적 항체가 갖는 항체 단편은 scFv, Fab 및 VHH 등이 바람직하지만, 특별히 이들에 한정되지 않는다.

또한, 상기 (3)에 기재하는 이중특이적 항체로서는, 중쇄의 N말단으로부터 VH₁-CH1-VH₂-CH1-힌지-CH2-CH3이라고 하는 구조를 갖는 이중특이적 항체, 및 상기 중쇄 구조를 갖고, 또한 VH₁과 VH₂가 각각 VL과 항원 결합 부위를 형성하고 있는 이중특이적 항체 등을 들 수 있다. VH₁ 및 VH₂가 항원 결합 부위를 형성하는 VL은 동일한 아미노산 서열이어도 되고, 다른 아미노산 서열이어도 된다.

본 발명에 있어서, 다중특이적 항체 또는 이중특이적 항체는 CADM3에 결합하는 다중특이적 항체 및 이중특이적 항체이면 어떠한 항체든 무방하다. 그 중에서도, CADM3 및 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 다중특이적 항체 또는 이중특이적 항체가 바람직하고, CADM3에 결합하는 항원 결합 부위 및 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체 또는 이중특이적 항체가 보다 바람직하다.

본 발명에 있어서 뇌에 존재하는 항원이란, 단백질, 당쇄 및 지질 등을 들 수 있고, 그 중에서도 단백질인 것이 바람직하다.

뇌에 존재하는 단백질로서는, 예를 들어 프리온, 5T4, AFP, ADAM10, ADAM12, ADAM17, AFP, AXL, BCAM, BSG, C5, C5R, CA9, CA72-4, CADM3, CCL11, CCL2, CCR1, CCR4, CCR5, CCR6, CD2, CD3E, CD4, CD5, CD6, CD8, CD11, CD18, CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD29, CD30, CD32B, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40LG, CD44, CD47, CD52, CD55SC1, CD56, CD66E, CD71, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD80, CD86, CD95, CD98, CD137, CD147, CD138, CD168, CD200, CD248, CD254, CD257, CDH2, CDH3, CEA, CEACAM1, CEACAM5, CEACAM6, CEACAM8, 클라우딘3, 클라우딘4, CSF-1, CSF2RA, CSPG-4, CSPG5, CTLA4, CRF-1, 크립토, CXCR4, CXCR5, DJ-1, DLL4, DR4, DR5, ED-B, EFNA2, EGFR, EGFRvIII, ETBR, ENPP3, EPCAM, EphA2, EphA4, EPOR, ERBB2, ERBB3, ERBB4, FAPα, FAS, FcγRI, FCER2, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FLT1, FOLH1, FOLR1, GDF2, GFR, GLP1R, 글리피칸-3, GPNMB, GRP78, HAPLN4, HB-EGF, HGF, HLA-DRβ, HMGB1, ICAM1, ICAM5, IFNA1, IFNB, IgE, IgE-Fc, IGF1R, IL10, IL12B, IL13, IL15, IL17A, IL1A, IL1B, IL2RA, IL4, IL5, IL5RA, IL6, IL6R, IL9, IL2Rα, IL2Rβ, IL2Rγ, INSR, ITGA2, ITGA2B2, ITGB3, ITGA4, ITGB7, ITGA5, ITGAL, ITGAV, ITGB3, ITGB2, KDR, L1CAM, LAG3, LRP3, 메소텔린, MAG, MMP14, MMP15, MOG, MST1R, MSTN, MUC1, MUC4, MUC16, MUC5AC, 미오스타틴, NECTIN4, NCAN, NGF, NMDAR, NOTCH, NRG1, NRP, OX40, OX40L, P2Y6, PAR1, PDGFA, PDGFB, PDGFRA, PDGFRB, PD1, PDL1, PLP1, PSCA, PTPRZ, RET, RGMA, SLAM7, SLC44A4, TAG-72, TCR, TGFB1, TGFB2, TGFBR, TIMP2, TLR9, TNF, TNFR, TNFRSF10A, TNFRSF10B, TNFRSF12A, TNFSF13, TNFSF14, TNFSF2, TNFSF7, TREM2, TRAILR2, TRKA, TRKB, TRKC, 트랜스페린, VEGF, VEGFR, VLA-4, CGRP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, 타우, FUS, 아밀로이드-베타(Aβ), APP, BACE1, 프레세닐린, LINGO-1, 노고, 트로이, 폴리Q, 안드로겐 수용체, 헌팅틴, 아탁신 1, 아탁신 2, 포스포-타우 또는 포스포-알파-시뉴클레인 등을 들 수 있지만, 이들 단백질에 한정되는 것은 아니다.

뇌에 존재하는 당쇄로서는, 예를 들어 루이스-x, 루이스-y 또는 CD15 등을 들 수 있지만, 이들 당쇄에 한정되는 것은 아니다.

뇌에 존재하는 지질로서는, 예를 들어 GD1a, GD2, GD3, GM1, GM2, GM3 또는 포스파티딜세린 등을 들 수 있지만, 이들 지질에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편은 번역 후 수식된 어떠한 아미노산을 포함하는 항체도 포함한다. 번역 후 수식으로서는, 예를 들어 H쇄의 C말단에 있어서의 리신 잔기의 결실[리신·클리핑(lysine clipping)] 및 폴리펩티드의 N말단에 있어서의 글루타민 잔기의 피로글루타민(pyroGlu)으로의 변환 등을 들 수 있다[Beck et al, Analytical Chemistry, 85, 715-736(2013)].

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편은 Fc 영역의 아미노산 개변을 행하고 있어도 된다. Fc 영역의 아미노산 개변으로서는, 예를 들어 항체를 안정화시키기 위한 또는 혈중 반감기를 제어하기 위한 아미노산 개변 등을 들 수 있다. Fc 영역의 아미노산 개변으로서는, 구체적으로는 예를 들어 국제공개 제2006/033386호, 국제공개 제2006/075668호, 국제공개 제2011/122011호 및 국제공개 제2009/125825호 등을 들 수 있다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편은 항체 또는 해당 항체 단편에 원하는 분자를 결합시킴으로써 수식된 융합 항체 또는 해당 융합 항체 단편도 포함한다. 항체를 수식하는 방법은 특별히 한정되지 않고, 원하는 아미노산 잔기 및 당쇄를 수식할 수 있는 것이면 어느 방법도 사용할 수 있다.

예를 들어, 화학 반응을 이용한 화학 수식[항체 공학 입문, 치진쇼칸(1994); Kolb et al., Angew Chem Int Ed Engl. 40. 2004-21, 2001]이나, 유전자 재조합 기술을 이용하여, 재조합 단백질 발현 벡터를 적당한 숙주 세포에 도입해서 발현시키는 유전자 공학적 방법에서의 수식 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서 항체 또는 해당 항체 단편을 수식하는 분자로서는, 예를 들어 친수성 고분자, 양친매성 고분자 및 기능성 분자 등을 들 수 있다. 상기 친수성 고분자, 양친매성 고분자로서는, 예를 들어 폴리옥시알킬렌, 폴리올 또는 다당을 포함하는 분자 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서 항체 또는 해당 항체 단편에 화학 수식에 의해 다른 분자를 수식하는 경우, 그 수식 부위로서는 항체 또는 항체 단편의 정상 영역을 들 수 있고, 특히 C말단 또는 S-S 결합 부위의 Cys 잔기가 바람직하다. 유전자 공학적 방법에 의해, 뒤에서부터 화학 수식 가능한 잔기를 미리 항체 또는 항체 단편의 임의의 위치에 도입하는 것도 가능하다.

또한 유전자 공학적 방법에 의해 직접 다른 분자를 수식하는 경우, 그 수식 부위로서는 항체 또는 항체 단편의 경쇄 또는 중쇄의 N말단 또는 C말단을 들 수 있다.

폴리옥시알킬렌으로서는, 예를 들어 직쇄 또는 분지쇄를 포함하는 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol; PEG), 폴리프로필렌글리콜, 폴리프로필렌에틸렌글리콜 등을 들 수 있다.

폴리올 또는 다당을 포함하는 분자로서는, 예를 들어 아밀로스, 덱스트란, 풀루란, 글리코겐 등의 글루코오스가 중합된 직쇄 또는 분지상의 다당 등을 들 수 있다. 또한, 호모 다당류에 한하지 않고, 헤테로 다당류여도 된다.

친수성 고분자 또는 양친매성 고분자를 포함하는 분자의 분자량은 특별히 한정되지 않지만, 100Da 이상인 것이 바람직하고, 예를 들어 100Da 내지 100kDa인 것이 바람직하다.

기능성 분자로서는, 예를 들어 항원 결합 분자, 항체 결합 분자의 단편, 약물, 생리 활성 펩티드, 생리 활성 단백질, 핵산, 방사성 표지 화합물, 당쇄, 지질, 형광 화합물 등을 들 수 있다. 항원 결합 분자 등의 기능성 분자로 수식된 결과, 이중특이성을 갖는 분자는 이중특이적 항체이다.

항원 결합 분자로서는, 예를 들어 항체, 수용체, 리간드 등을 들 수 있다.

항원 결합 분자의 단편으로서는, 상기 항원 결합 분자의 단편이며 항원 결합 활성을 갖는 것이면, 어떠한 것이든 무방하다.

약물로서는, 예를 들어 알킬화제, 니트로소우레아제, 대사 길항제, 항바이러스제, 항생 물질, 식물 알칼로이드, 토포이소머라아제 저해제, 튜불린 중합 저해제, 호르몬 요법제, 호르몬 길항제, 아로마타제 저해제, P당 단백 저해제, 백금 착체 유도체, M기 저해제 혹은 키나아제 저해제 등의 항암제[임상 종양학, 암과 화학 요법사(1996)], 스테로이드제, 비스테로이드제, 면역 조절제, 면역 제어제 또는 항히스타민제 등의 항염증제[염증과 항염증 요법, 이시야쿠 슛판 가부시키가이샤(1982)] 등을 들 수 있다.

보다 구체적으로는, 예를 들어 메르탄신, 엠탄신, 아미포스틴(에티올), 시스플라틴, 다카르바진(DTIC), 닥티노마이신, 메클로레타민(질소 머스타드), 스트렙토조신, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 카르무스틴(BCNU), 로무스틴(CCNU), 독소루비신(아드리아마이신), 에피루비신, 겜시타빈(겜자르), 다우노루비신, 프로카르바진, 마이토마이신, 시타라빈, 에토포시드, 5-플루오로우라실, 플루오로우라실, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 블레오마이신, 다우노마이신, 페플로마이신, 에스트라무스틴, 파클리탁셀(탁솔), 도세탁셀(탁소텔), 알데스류킨, 아스파라기나아제, 부술판, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 네다플라틴, 클라드리빈, 캄토테신, 10-히드록시-7-에틸-캄토테신(SN38), 플록스우리딘, 플루다라빈, 히드록시우레아, 이다루비신, 메스나, 이리노테칸(CPT-11), 노기테칸, 미톡산트론, 토포테칸, 류프롤리드, 메게스트롤, 멜팔란, 머캅토퓨린, 히드록시카르바미드, 플리카마이신, 미토탄, 페가스파르가제, 펜토스타틴, 피포브로만, 스트렙토조신, 타목시펜, 고세렐린, 류프로렐닌, 플루타미드, 테니포시드, 테스토락톤, 티오구아닌, 티오테파, 우라실머스타드, 비노렐빈, 클로람부실, 하이드로코르티손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 빈데신, 니무스틴, 세무스틴, 카페시타빈, 토뮤덱스, 아자시티딘, UFT, 옥살로플라틴, 게피티닙(이렛사), 이마티닙(STI571), 에를로티닙, FMS-유사 티로신 키나아제 3(FMS-like tyrosine kinase 3)(Flt3) 저해제, 혈관 내피 성장 인자 수용체(vascular endothelial growth factor receptor)(VEGFR) 저해제, 섬유모세포 성장 인자 수용체(fibroblast growth factor receptor)(FGFR) 저해제, 타세바 등의 표피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor)(EGFR) 저해제, 라디시콜, 17-알릴 아미노-17-데메톡시겔다나마이신, 라파마이신, 암사크린, 올-트랜스 레티노산, 탈리도마이드, 레날리도마이드, 아나스트로졸, 파드로졸, 레트로졸, 엑세메스탄, 부실라민, 아자티오프린, 미조리빈, 시클로스포린, 라파마이신, 히드로코르티손, 벡사로텐(타그레틴), 타목시펜, 덱사메타손, 프로게스틴류, 에스트로겐류, 아나스트로졸(아리미덱스), 류프린, 아스피린, 인도메타신, 셀레콕시브, 아자티오프린, 페니실라민, 금 티오말레이트, 말레산클로르페니라민, 클로르페니라민, 클레마스틴, 트레티노인, 비소, 보르테조밉, 알로푸리놀, 칼리케아마이신, 이브리투모맙티욱세탄, 타르그레틴, 오조가민, 클라리트로마이신, 류코보린, 케토코나졸, 아미노글루테티미드, 수라민, 메토트렉세이트, 메이탄시노이드 등을 들 수 있고, 이들의 유도체여도 된다.

약물 및 항체 또는 해당 항체 단편을 결합시키는 방법으로서는, 상술한 방법 외에 글루타르알데히드를 통해서 약물 및 항체의 아미노기를 결합시키는 방법, 또는 수용성 카르보디이미드를 통해서 약물의 아미노기 및 항체의 카르복실기를 결합시키는 방법 등을 들 수 있다.

생리 활성 펩티드 또는 생리 활성 단백질로서는, 예를 들어 인터페론(IFN)-α, IFN-β, IFN-γ, 인터류킨(IL)-2, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IL-23, 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 과립구/마크로파지 콜로니 자극 인자(GM-CSF) 또는 마크로파지 콜로니 자극 인자(M-CSF) 등, NK 세포, 마크로파지 또는 호중구 등의 면역 담당 세포를 활성화하는 사이토카인 혹은 증식 인자, 히드라제, 리아제 및 이소메라제 등의 단백질 분해 효소, 산성 스핀고미에리나제, 글루코세레브로시다제 등의 효소, 리신, 디프테리아톡신, 또는 ONTAK 등의 세균 독소 및 식물 독소 등의 독소, 세포막 상해 활성을 갖는 항균 펩티드, 세포막 결합성 또는 세포막 투과성을 갖는 펩티드 및 그들의 유도체 등을 들 수 있다.

핵산으로서는, 뉴클레오티드 또는 해당 뉴클레오티드와 동등한 기능을 갖는 분자가 중합한 분자이면 어떠한 분자여도 되고, 예를 들어 siRNA, 마이크로RNA, 안티센스 RNA/DNA, DNA 앱타머 등을 들 수 있다.

방사성 표지 화합물로서는, 진단용 또는 치료용 용도로 사용되는 핵종이면 되고, 예를 들어 ³H, ¹⁴C, ³²P, ³³P, ³⁵S, ⁵¹Cr, ⁵⁷CO, ¹⁸F, ¹⁵³Gd, ¹⁵⁹Gd, ⁶⁴Cu, ⁶⁸Ge, ¹⁶⁶Ho, ¹¹⁵In, ¹¹³In, ¹¹²In, ¹¹¹In, ¹³¹I, ¹²⁵I, ¹²³I, ¹²¹I, ¹⁴⁰La, ¹⁷⁷Lu, ⁵⁴Mn, ⁹⁹Mo, ¹⁰³Pd, ¹⁴²Pr, ¹⁴⁹Pm, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ²¹¹At, ¹⁰⁵Rh, ⁹⁷Ru, ¹⁵³Sm, ⁴⁷Sc, ⁷⁵Se, ⁸⁵Sr, ⁹⁹Tc, ²⁰¹Ti, ¹¹³Sn, ¹¹⁷Sn, ¹³³Xe, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ⁹⁰Y 및 ⁶⁵Zn 등 또는 상술한 핵종을 포함하는 화합물을 들 수 있다.

방사성 표지 화합물은 클로라민 T법 등에 의해 항체에 직접 결합시킬 수 있다. 또한, 방사성 표지 화합물을 킬레이트하는 물질을 항체에 결합시켜도 된다. 킬레이트제로서는, 예를 들어 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸4아세트산(DOTA), 1-[2-(4-아미노페닐)에틸]-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸4아세트산(PA-DOTA), 1,4,7,10-테트라아자시클로트리데칸4아세트산(TRITA) 및 디에틸렌트리아민5아세트산(DTPA) 등을 들 수 있고, 킬레이트제에 의해 수식된 항체 및 킬레이트제를 통해서 방사성 표지 화합물이 표지된 수식화 항체도 본 발명의 항체에 포함된다.

당쇄로서는, 예를 들어 단당, 이당류 또는 올리고당 등을 들 수 있고, 보다 구체적으로는 예를 들어 푸코오스, 만노오스, 글루코오스, 알로오스, 알도오스, 굴로오스, 이도오스, 갈락토오스, 탈로오스, 리보오스, 아라비노오스, 크실로오스, 릭소오스, 에리토오스, 에리트로오스, 트레오스, 셀로비오스, 말토오스, 이소말토오스, 락토오스, 리포아라비노만난, 루이스 X형 3당, 시알릴 루이스 X형 4당 등을 들 수 있다. 또한, 이뮤노아쥬반트로서 알려지는 당쇄를 포함하는 천연물이어도 되고, β(1→3)글루칸(렌티난, 시조피란) 또는α갈락토실세라마이드(KRN7000) 등을 들 수 있다.

지질로서는, 예를 들어 지방산과 각종 알코올의 에스테르 및 그의 유사체인 단순 지질(중성 지질)을 들 수 있다. 예를 들어, 유지(예를 들어, 트리아실글리세롤), 왁스(예를 들어, 고급 알코올의 지방산에스테르), 스테롤에스테르, 콜레스테롤에스테르, 비타민의 지방산에스테르 등, 지방산과 알코올 이외에 인산, 당, 황산, 아민 등 극성기를 갖는 복합 지질, 예를 들어 인지질(예를 들어, 글리세로인지질 및 스핀고인지질 등) 및 당지질(예를 들어, 글리세로당지질 및 스핀고당지질 등), 단순 지질 및 복합 지질의 가수 분해에 의해 생성되는 화합물 중 지용성의 것을 가리키는 유도 지질, 예를 들어 지방산, 고급 알코올, 지용성 비타민, 스테로이드, 탄화수소 등을 들 수 있다.

형광 화합물로서는, 예를 들어 플루오레세인이소티오시아네이트(FITC) 등의 플루오레세인 계열, 로다민이소티오시아네이트(RITC) 등의 로다민 계열, Cy3, Cy5, 에오신 계열, 알렉사플루오로 계열 및 NBD 계열 등의 형광 색소, 아크리디늄에스테르 또는 로핀 등의 발광 물질 그리고 녹색 형광 단백질(GFP) 등의 형광성 단백질 등을 들 수 있다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편은 상술한 친수성 고분자, 양친매성 고분자 또는 기능성 분자를 직접 또는 적당한 링커를 통해서 결합시킬 수 있다. 링커로서는, 예를 들어 에스테르, 디술피드, 히드라존 및 디펩티드 등을 들 수 있다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 유전자 공학적인 방법에 의해 수식하여 융합 항체 또는 융합 항체 단편을 제작하는 경우에는, 항체를 코딩하는 cDNA에 단백질을 코딩하는 cDNA를 연결시켜서 융합 항체 또는 융합 항체 단편을 코딩하는 DNA를 구축하고, 해당 DNA를 원핵 생물 또는 진핵 생물용 발현 벡터에 삽입하고, 해당 발현 벡터를 원핵 생물 또는 진핵 생물에 도입해서 융합 항체 또는 융합 항체 단편을 발현시킴으로써 융합 항체 또는 융합 항체 단편을 제작할 수 있다.

본 발명의 조성물은 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 함유하는 조성물이면 어떠한 것이든 무방하다. 이러한 조성물은 항체 또는 해당 항체 단편 이외에, 적당한 캐리어, 안정화제 등의 첨가제를 포함하고 있어도 된다.

본 발명의 조성물로서는, 예를 들어 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 포함하는 검출용 또는 측정용의 조성물 등을 들 수 있다. 본 발명의 조성물로서는, 예를 들어 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 유효 성분으로서 함유하는 의약 조성물(치료제) 등을 들 수 있고, 약리학적으로 허용할 수 있는 담체와 함께 원하는 제형으로 제제화된다.

본 발명에 있어서 검출용 또는 측정용의 조성물이란, 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 포함하고 있고, 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편이 특이적으로 결합하는 항원을 검출 또는 측정할 수 있는 것이면 어떠한 조성물이어도 된다. 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편이 특이적으로 결합하는 항원으로서는, CADM3, 또는 CADM3 및 뇌에 존재하는 항원 등을 들 수 있다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편은 동물에 투여하면 뇌 내의 CADM3에 결합하고, 뇌에 체류하는 성질을 갖는다. 따라서, 당해 항체 또는 해당 항체 단편을 포함하는 검출용 또는 측정용의 조성물을 사용함으로써, 당해 항체의 뇌 내에 있어서의 유지 또는 뇌 내에 있어서의 항체 농도의 향상이 가능해지고, 장기간에 걸쳐 CADM3, 또는 CADM3 및 뇌에 존재하는 항원을 검출 또는 측정하는 것 및/또는 CADM3, 또는 CADM3 및 뇌에 존재하는 항원을 고감도로 검출 또는 측정할 수도 있다.

예를 들어, 검출용 또는 측정용의 조성물이 CADM3과 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 이중특이적 항체를 포함하는 조성물일 때에는, 당해 이중특이적 항체가 결합하는 CADM3 및 뇌에 존재하는 항원을 장기간 검출 또는 측정하는 것, 및/또는 CADM3 및 뇌에 존재하는 항원을 고감도로 검출 또는 측정하는 것이 가능하다.

또한, 예를 들어 검출용 또는 측정용의 조성물이 방사성 표지 화합물 또는 형광 색소로 표지된 CADM3에 결합하는 융합 항체 또는 해당 융합 항체 단편을 포함하는 조성물일 때에는, CADM3을 장기간 검출 또는 측정하는 것 및/또는 CADM3을 고감도로 검출 또는 측정하는 것이 가능하다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 함유하는 의약 조성물(치료제)은 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편이 특이적으로 결합하는 항원이 발현하고 있는 질환이면 어느 질환의 치료제여도 되지만, 뇌질환의 치료제가 바람직하다.

뇌질환으로서는, 예를 들어 알츠하이머병, 전구기 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, 뇌종양, 다발성 경화증, 근디스트로피, 근위축성 측색 경화증, 다계통 위축증, 진행성 핵상성 마비, 선조체 흑질 변성증, 올리브교소뇌 위축증, 구척수성 근위축증, 척수 소뇌 변성증, 뇌혈관 장애, 간질, 편두통, 다동성 장애, 크로이츠펠트 야코프병, 대뇌피질 기저핵 변성증, 라이소솜병, 우울증 및 디스토니아 등을 들 수 있다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편은 동물에 투여하면 뇌 내의 CADM3에 결합하고, 뇌에 체류하는 성질을 갖는다. 따라서, 당해 항체 또는 해당 항체 단편을 함유하는 치료제를 사용함으로써 뇌 내에 있어서의 해당 항체 또는 해당 항체 단편의 장기간에 걸친 유지, 뇌 내에 있어서의 항체 농도의 향상이 가능해지고, 상기의 질환에 대하여 치료 효과를 나타낼 수 있다.

예를 들어, 치료제가 본 발명의 항CADM3 항체의 융합 항체를 포함하는 치료제일 때에는, 융합시킨 분자를 뇌 내에 송달시킴으로써 당해 분자에 의한 치료 효과를 발휘할 수 있다. 구체적으로 약물이나 효소 등을 항CADM3 항체에 융합시킨 융합 항체를 포함하는 치료제일 때는, 약물이나 효소에 의해 치료 효과를 나타낼 수 있고, CADM3과 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 이중특이적 항체를 포함하는 치료제일 때에는, 당해 이중특이적 항체가 결합하는 뇌에 존재하는 항원에 관련된 뇌질환에 대하여 치료 효과를 나타낼 수 있다.

또한, 예를 들어 치료제가 저분자 약제로 수식된 CADM3에 결합하는 융합 항체 또는 융합 항체 단편일 때에는, 당해 저분자 약제가 표적으로 하는 뇌질환에 대하여 치료 효과를 나타낼 수 있다. 이때, 해당 저분자 약제를 단체로 사용할 때보다 본 발명의 치료제를 사용했을 때의 쪽이 치료 효과가 높은 것이 바람직하다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 함유하는 치료제는 유효 성분으로서의 해당 항체 또는 해당 항체 단편만을 포함하는 것이어도 되지만, 통상은 약리학적으로 허용되는 1 이상의 담체와 함께 혼합하고, 제제학의 기술 분야에 있어서 공지된 임의의 방법에 의해 제조한 의약 제제로서 제공하는 것이 바람직하다.

투여 경로는 치료 시에 가장 효과적인 것을 사용하는 것이 바람직하고, 예를 들어 경구 투여, 또는 구강 내, 기도 내, 직장 내, 피하, 피내, 근육 내, 뇌실 내, 척수강 내, 비강 내, 복강 내 혹은 정맥 내 등의 비경구 투여를 들 수 있고, 특히 바람직하게는 정맥 내 또는 뇌실 내 투여 등을 들 수 있다. 투여 형태로서는, 예를 들어 분무제, 캡슐제, 정제, 산제, 과립제, 시럽제, 유제, 좌제, 주사제, 연고 또는 테이프제 등을 들 수 있다.

투여량 또는 투여 횟수는 목적으로 하는 치료 효과, 투여 방법, 치료 기간, 연령 및 체중 등에 따라 다르지만, 통상 성인 1일당 10㎍/㎏ 내지 20㎎/㎏이다.

또한, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 사용하여 항체를 뇌 내에 체류시키는 방법, 항체의 뇌 체류성을 향상시키는 방법 및 뇌 내의 항체 농도(또는 항체량)를 높이는 방법도 포함한다.

또한, 본 발명은 CADM3에 결합하는 펩티드, 해당 펩티드를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 핵산, 해당 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 형질 전환 세포, 해당 형질 전환 세포를 배양하고, 배양액으로부터 상기 펩티드를 채취하는 것을 포함하는 상기 펩티드의 제조 방법, 상기 펩티드를 포함하는 조성물, 또는 상기 펩티드 또는 상기 조성물을 사용하여 뇌에 존재하는 항원을 검출 또는 측정하는 방법, 뇌질환을 진단 혹은 치료하는 방법, 펩티드의 뇌 체류성을 향상시키는 방법, 또는 뇌 내의 펩티드양을 증가시키는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 펩티드는 펩티드가 수식된 융합 펩티드를 포함한다.

CADM3에 결합하는 펩티드에 관한 각종 용어의 정의 등은 특별히 기재가 없는 한, 상술한 CADM3에 결합하는 항체에 대해서 기재한 용어의 정의 등과 동일한 것을 사용한다.

이하에, 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편의 제조 방법, 질환의 치료 방법 및 질환의 진단 방법 등에 대해서 구체적으로 설명한다.

1. 항체의 제조 방법

(1) 항원의 제조

항원이 되는 CADM3 또는 CADM3 발현 세포는 CADM3 전체 길이 또는 그의 부분 길이를 코딩하는 cDNA를 포함하는 발현 벡터를, 대장균, 효모, 곤충 세포 또는 동물 세포 등에 도입함으로써 얻을 수 있다. 또한, CADM3은 CADM3을 다량으로 발현하고 있는 각종 동물 세포주, 동물 세포 및 동물 조직 등으로부터 CADM3을 정제함으로써도 얻을 수 있다.

또한, 이들 동물 세포주, 동물 세포 및 동물 조직 등을 그대로 항원으로서 사용할 수도 있다. 또한, Fmoc법 또는 tBoc법 등의 화학 합성법에 의해 CADM3의 부분 서열을 갖는 합성 펩티드를 제조하여 항원에 사용할 수도 있다.

CADM3 또는 CADM3의 부분 서열을 갖는 합성 펩티드에는, C말단 또는 N말단에 FLAG 또는 His 등의 공지된 태그가 부가되어 있어도 된다.

본 발명에서 사용되는 CADM3은 [Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)]나 [Current Protocols In Molecular Biology, John Wiley & Sons(1987-1997)] 등에 기재된 방법 등을 사용하여, 예를 들어 이하의 방법에 의해 CADM3을 코딩하는 DNA를 숙주 세포 중에서 발현시켜서 제조할 수 있다.

먼저, CADM3을 코딩하는 부분을 포함하는 완전 길이 cDNA를 적당한 발현 벡터의 프로모터의 하류에 삽입함으로써 재조합 벡터를 제작한다. 상기 완전 길이 cDNA 대신에, 완전 길이 cDNA를 바탕으로 제조된 폴리펩티드를 코딩하는 부분을 포함하는 적당한 길이의 DNA 단편을 사용해도 된다. 이어서, 얻어진 해당 재조합 벡터를 해당 발현 벡터에 적합한 숙주 세포에 도입함으로써, 폴리펩티드를 생산하는 형질 전환체를 얻을 수 있다.

발현 벡터로서는, 사용하는 숙주 세포에 있어서의 자율 복제 또는 염색체 중으로의 혼입이 가능하고, 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 전사할 수 있는 위치에 적당한 프로모터를 함유하고 있는 것이면 모두 사용할 수 있다. 숙주 세포로서는, 대장균 등의 에스케리키아속 등에 속하는 미생물, 효모, 곤충 세포 또는 동물 세포 등, 목적으로 하는 유전자를 발현할 수 있는 것이면 모두 사용할 수 있다.

대장균 등의 원핵 생물을 숙주 세포로서 사용하는 경우, 발현 벡터는 원핵 생물 중에서 자율 복제가 가능함과 동시에, 프로모터, 리보솜 결합 서열, 인간 CADM3을 코딩하는 부분을 포함하는 DNA, 및 전사 종결 서열을 포함하는 벡터인 것이 바람직하다. 또한, 해당 발현 벡터에는 전사 종결 서열은 반드시 필요하지 않지만, 구조 유전자의 바로 아래에 전사 종결 서열을 배치하는 것이 바람직하다. 또한, 해당 재조합 벡터에는 프로모터를 제어하는 유전자를 포함하고 있어도 된다.

해당 발현 벡터로서는, 리보솜 결합 서열인 샤인ㆍ달가노 서열(SD 서열이라고도 한다) 및 개시 코돈 사이를 적당한 거리(예를 들어 6 내지 18 염기)로 조절한 플라스미드를 사용하는 것이 바람직하다.

또한, CADM3을 코딩하는 DNA의 염기 서열로서는, 숙주 내에서의 발현에 최적인 코돈이 되도록 염기를 치환할 수 있고, 이것에 의해 목적으로 하는 CADM3의 생산율을 향상시킬 수 있다.

발현 벡터로서는, 사용하는 숙주 세포 중에서 기능을 발휘할 수 있는 것이면 모두 사용할 수 있지만, 예를 들어 pBTrp2, pBTac1, pBTac2(이상, 로슈·다이아그노스틱스사제), pKK233-2(파마시아사제), pSE280(인비트로젠사제), pGEMEX-1(프로메가사제), pQE-8(퀴아젠사제), pKYP10(일본특허공개 소58-110600호 공보), pKYP200[Agricultural Biological Chemistry, 48, 669(1984)], pLSA1[Agric. Biol. Chem., 53, 277(1989)], pGEL1[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 4306(1985)], pBluescript II SK(-)(스트라타진사제), pTrs30[대장균 JM109/pTrS30(FERM BP-5407)으로 제조], pTrs32[대장균 JM109/pTrS32(FERM BP-5408)로 제조], pGHA2[대장균 IGHA2(FERM BP-400)로 제조, 일본특허공개 소60-221091호 공보], pGKA2[대장균 IGKA2(FERM BP-6798)로 제조, 일본특허공개 소60-221091호 공보], pTerm2(미국특허 제4,686,191호 명세서, 미국특허 제4,939,094호 명세서, 미국특허 제160,735호 명세서), pSupex, pUB110, pTP5, pC194, pEG400[J. Bacteriol., 172, 2392(1990)], pGEX(파마시아사제), pET시스템(노바젠사제) 또는 pME18SFL3 등을 들 수 있다.

프로모터로서는, 사용하는 숙주 세포 중에서 기능을 발휘할 수 있는 것이면 어떠한 것이든 무방하다. 예를 들어 trp 프로모터(Ptrp), lac 프로모터, PL 프로모터, PR 프로모터 또는 T7 프로모터 등의 대장균 또는 파지 등에서 유래하는 프로모터를 들 수 있다. 또한, 예를 들어 Ptrp를 2개 직렬시킨 탠덤 프로모터, tac 프로모터, lacT7 프로모터 또는 let I 프로모터 등의 인위적으로 설계 개변된 프로모터 등을 들 수 있다.

숙주 세포로서는, 예를 들어 대장균 XL1-Blue, 대장균 XL2-Blue, 대장균 DH1, 대장균 MC1000, 대장균 KY3276, 대장균 W1485, 대장균 JM109, 대장균 HB101, 대장균 No.49, 대장균 W3110, 대장균 NY49 또는 대장균 DH5α 등을 들 수 있다.

숙주 세포로의 재조합 벡터의 도입 방법으로서는, 사용하는 숙주 세포에 DNA를 도입하는 방법이면 모두 사용할 수 있으며, 예를 들어 칼슘 이온을 사용하는 방법[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 2110(1972), Gene, 17, 107(1982), Molecular & General Genetics, 168, 111(1979)]을 들 수 있다.

동물 세포를 숙주로서 사용하는 경우, 발현 벡터로서는 동물 세포 중에서 기능을 발휘할 수 있는 것이면 모두 사용할 수 있으며, 예를 들어 pcDNAI, pCDM8(프나코시사제), pAGE107[일본특허공개 평3-22979호 공보; Cytotechnology, 3, 133(1990)], pAS3-3(일본특허공개 평2-227075호 공보), pCDM8[Nature, 329, 840(1987)], pcDNAI/Amp(인비트로젠사제), pcDNA3.1(인비트로젠사제), pREP4(인비트로젠사제), pAGE103[J. Biochemistry, 101, 1307(1987)], pAGE210, pME18SFL3, pKANTEX93(국제공개 제97/10354호), N5KG1val(미국특허 제6,001,358호 명세서), INPEP4(Biogen-IDEC사제), pCI(Promega사제) 및 트랜스포존 벡터(국제공개 제2010/143698호) 등을 들 수 있다.

프로모터로서는 동물 세포 중에서 기능을 발휘할 수 있는 것이면 모두 사용할 수 있으며, 예를 들어 사이토메갈로 바이러스(CMV)의 극초기(immediate early)(IE) 유전자의 프로모터, SV40의 초기 프로모터, 레트로바이러스의 프로모터, 메탈로티오네인 프로모터, 히트쇼크 프로모터, SRα 프로모터 또는 몰로니 마우스 백혈병 바이러스의 프로모터 혹은 인핸서를 들 수 있다. 또한, 인간 CMV의 IE 유전자의 인핸서를 프로모터와 함께 사용해도 된다.

숙주 세포로서는, 예를 들어 인간 백혈병 세포 나말바(Namalwa) 세포, 원숭이 세포 COS 세포, 차이니즈·햄스터 난소 세포 CHO 세포[Journal of Experimental Medicine, 108, 945(1958); Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 60, 1275(1968); Genetics, 55, 513(1968); Chromosoma, 41, 129(1973); Methods in Cell Science, 18, 115(1996); Radiation Research, 148, 260(1997); Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 4216(1980); Proc. Natl. Acad. Sci., 60, 1275(1968); Cell, 6, 121(1975); Molecular Cell Genetics, Appendix I, II (pp. 883-900)]; 디히드로엽산 환원 효소 유전자(dhfr)가 결손된 CHO 세포(CHO/DG44 세포)[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 4216(1980)], CHO-K1(ATCC CCL-61), DUkXB11(ATCC CCL-9096), Pro-5(ATCC CCL-1781), CHO-S(Life Technologies, Cat#11619), Pro-3, 래트 미엘로마 세포 YB2/3HL.P2.G11.16Ag.20(또는 YB2/0이라고도 한다), 마우스 미엘로마 세포 NS0, 마우스 미엘로마 세포 SP2/0-Ag14, 시리안 햄스터 세포 BHK 또는 HBT5637(일본특허공개 소63-000299호 공보) 등을 들 수 있다.

숙주 세포로의 발현 벡터의 도입 방법으로서는 동물 세포에 DNA를 도입하는 방법이면 모두 사용할 수 있으며, 예를 들어 일렉트로포레이션법[Cytotechnology, 3, 133(1990)], 인산칼슘법(일본특허공개 평2-227075호 공보) 또는 리포펙션법[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413(1987)] 등을 들 수 있다.

이상과 같이 해서 얻어지는 CADM3을 코딩하는 DNA를 혼입한 발현 벡터를 보유하는 미생물 또는 동물 세포 등의 유래의 형질 전환체를 배지 중에서 배양하고, 배양액 중에 해당 CADM3을 생성 축적시키고, 해당 배양액으로부터 채취함으로써 CADM3을 제조할 수 있다. 해당 형질 전환체를 배지 중에서 배양하는 방법은 숙주의 배양에 사용되는 통상의 방법에 따라서 행할 수 있다.

진핵 생물 유래의 세포에서 발현시킨 경우에는 당 또는 당쇄가 부가된 CADM3을 얻을 수 있다.

유도성 프로모터를 사용한 발현 벡터로 형질 전환한 미생물을 배양할 때에는, 필요에 따라 인듀서를 배지에 첨가해도 된다. 예를 들어 lac 프로모터를 사용한 발현 벡터로 형질 전환한 미생물을 배양하는 경우에는 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노시드 등을, trp 프로모터를 사용한 발현 벡터로 형질 전환한 미생물을 배양하는 경우에는 인돌아크릴산 등을 배지에 첨가해도 된다.

동물 세포를 숙주로 하여 얻어진 형질 전환체를 배양하는 배지로서는, 예를 들어 일반적으로 사용되고 있는 RPMI1640 배지[The Journal of the American Medical Association, 199, 519(1967)], 이글(Eagle)의 MEM 배지[Science, 122, 501(1952)], 둘베코 개변 MEM 배지[Virology, 8, 396(1959)], 199 배지[Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 73, 1(1950)] 혹은 이스코브 변형 둘베코 배지(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)(IMDM) 배지 또는 이들 배지에 소태아 혈청(FBS) 등을 첨가한 배지 등을 들 수 있다. 배양은 통상 pH6 내지 8, 30 내지 40℃, 5% CO₂ 존재 하 등의 조건 하에서 1 내지 7일간 행한다. 또한, 배양 중에 필요에 따라 카나마이신 또는 페니실린 등의 항생 물질을 배지에 첨가해도 된다.

CADM3을 코딩하는 유전자의 발현 방법으로서는, 예를 들어 직접 발현 이외에 분비 생산 또는 융합 단백질 발현 등의 방법[Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)]을 들 수 있다.

CADM3의 생산 방법으로서는, 예를 들어 숙주 세포 내에 생산시키는 방법, 숙주 세포 밖으로 분비시키는 방법, 또는 숙주 세포 외막 상에 생산시키는 방법을 들 수 있고, 사용하는 숙주 세포 또는 생산시키는 CADM3의 구조를 바꿈으로써 적절한 방법을 선택할 수 있다.

CADM3이 숙주 세포 내 또는 숙주 세포 외막 상에 생산되는 경우, 폴슨 등의 방법[J. Biol. Chem., 264, 17619(1989)], 로우 등의 방법[Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 86, 8227(1989), Genes Develop., 4, 1288(1990)], 일본특허공개 평05-336963호 공보 또는 국제공개 제94/23021호 등에 기재된 방법을 사용함으로써, CADM3을 숙주 세포 밖으로 적극적으로 분비시킬 수 있다. 또한, 디히드로엽산 환원 효소 유전자 등을 사용한 유전자 증폭계(일본특허공개 평2-227075호 공보)를 이용해서 CADM3의 생산량을 상승시킬 수도 있다.

얻어진 CADM3은 예를 들어 이하와 같이 해서 단리, 정제할 수 있다. CADM3이 세포 내에 용해 상태로 발현된 경우에는, 배양 종료 후에 세포를 원심 분리에 의해 회수하고, 수계 완충액에 현탁 후, 초음파 파쇄기, 프렌치 프레스, 만톤 가울린 균질기 또는 다이노 밀 등을 사용하여 세포를 파쇄하고, 무세포 추출액을 얻는다. 해당 무세포 추출액을 원심 분리함으로써 얻어지는 상청으로부터, 통상의 단백질의 단리 정제법, 즉 용매 추출법, 유안 등에 의한 염석법, 탈염법, 유기 용매에 의한 침전법, 디에틸아미노에틸(DEAE)-세파로스, DIAION HPA-75(미쯔비시 가가꾸사제) 등의 레진을 사용한 음이온 교환 크로마토그래피법, S-세파로스 FF(파마시아사제) 등의 레진을 사용한 양이온 교환 크로마토그래피법, 부틸세파로스, 페닐세파로스 등의 레진을 사용한 소수성 크로마토그래피법, 분자체를 사용한 겔 여과법, 친화성 크로마토그래피법, 크로마토그래피 포커싱법 또는 등전점 전기 영동 등의 전기 영동법 등의 방법을 단독으로 또는 조합해서 사용하여 정제 표품을 얻을 수 있다.

CADM3이 세포 내에 불용체를 형성해서 발현된 경우에는, 상기와 마찬가지로 세포를 회수 후 파쇄하고, 원심 분리를 행함으로써, 침전 분획으로서 해당 CADM3의 불용체를 회수한다. 회수한 해당 CADM3의 불용체를 단백질 변성제로 가용화한다. 해당 가용화액을 희석 또는 투석함으로써 해당 CADM3을 정상적인 입체 구조로 되돌린 후, 상기와 마찬가지 단리 정제법에 의해 폴리펩티드의 정제 표품을 얻을 수 있다.

CADM3 또는 그의 당 수식체 등의 유도체가 세포 밖으로 분비된 경우에는, 배양 상청에 있어서 해당 CADM3 또는 그의 당 수식체 등의 유도체를 회수할 수 있다. 해당 배양물을 상기와 마찬가지로 원심 분리 등의 방법에 의해 처리함으로써 가용성 분획을 취득하고, 해당 가용성 분획으로부터 상기와 마찬가지의 단리 정제법을 사용함으로써 정제 표품을 얻을 수 있다.

또한, 본 발명에 있어서 사용되는 CADM3은 Fmoc법 또는 tBoc법 등의 화학 합성법에 의해서도 제조할 수 있다. 또한, 어드밴스드 켐텍사 제조, 퍼킨 엘머사 제조, 파마시아사 제조, 프로테인 테크놀러지 인스트루먼트사 제조, 신세세루-베가사 제조, 퍼셉티브사제 또는 시마즈 세이사쿠쇼사제 등의 펩티드 합성기를 이용해서 화학 합성할 수도 있다.

(2) 동물의 면역과 융합용 항체 산생 세포의 제조

3 내지 20주령의 마우스, 래트, 래빗 또는 햄스터 등의 동물에, (1)에서 얻어지는 항원을 면역하여 그 동물의 비장, 림프절, 말초혈 중의 항체 산생 세포를 채취한다. 또한 피면역 동물로서 라마, 알파카, 낙타 등의 동물을 사용할 수도 있다.

면역은 동물의 피하, 정맥 내 또는 복강 내에, 예를 들어 프로인드의 완전 아쥬반트 또는 수산화알루미늄 겔과 백일해균 백신 등의 적당한 아쥬반트와 함께 항원을 투여함으로써 행한다. 항원이 부분 펩티드인 경우에는, 소혈청 알부민(BSA) 또는 키홀 림펫 헤모시아닌(Keyhole Limpet hemocyanin)(KLH) 등의 캐리어 단백질과 콘쥬게이트를 제작하고, 이것을 면역원으로서 사용한다.

마우스나 래트에 면역할 때, 항원의 투여는 1회째의 투여 후, 1 내지 2주일 간격으로 5 내지 10회 행한다. 각 투여 후 3 내지 7일째에 안저 정맥총으로부터 채혈하고, 그 혈청의 항체값을 효소 면역 측정법[Antibodies-A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory(1988)] 등을 사용하여 측정한다. 면역에 사용한 항원에 대하여, 그 혈청이 충분한 항체값을 나타낸 동물을 융합용 항체 산생 세포의 공급원으로 한다.

항원의 최종 투여 후 3 내지 7일째에, 면역한 동물로부터 비장 등의 항체 산생 세포를 포함하는 조직을 적출하고, 항체 산생 세포를 채취한다. 비장 세포를 사용하는 경우에는 비장을 세단하여 푼 후, 원심 분리하고, 또한 적혈구를 제거해서 융합용 항체 산생 세포를 취득한다.

그 외 피면역 동물에 대해서도 마찬가지 방법으로 면역을 행하고, 항체 산생 세포를 취득할 수 있다. 면역 간격이나 최후의 면역으로부터 조직의 적출까지의 기간은 피면역 동물의 동물종에 맞춰서 적절한 조건을 선택할 수 있다.

(3) 골수종 세포의 제조

골수종 세포로서는, 마우스로부터 얻어진 주화 세포를 사용하여 예를 들어 8-아자구아닌 내성 마우스(BALB/c 유래) 골수종 세포주 P3-X63Ag8-U1(P3-U1)[Current Topics in Microbiology and Immunology, 18, 1(1978)], P3-NS1/1-Ag41(NS-1)[European J. Immunology, 6, 511(1976)], SP2/0-Ag14(SP-2)[Nature, 276, 269(1978)], P3-X63-Ag8653(653)[J. Immunology, 123, 1548(1979)] 또는 P3-X63-Ag8(X63)[Nature, 256, 495(1975)] 등이 사용된다.

해당 골수종 세포는 정상 배지[글루타민, 2-머캅토에탄올, 겐타마이신, FBS 및 8-아자구아닌을 첨가한 RPMI1640 배지]에서 계대하고, 세포 융합의 3 내지 4일전에 정상 배지에서 계대하고, 융합 당일 2×10⁷개 이상의 세포수를 확보한다.

(4) 세포 융합과 모노클로날 항체 산생 하이브리도마의 제조

(2)에서 얻어지는 융합용 항체 산생 세포와 (3)에서 얻어지는 골수종 세포를 최소 필수 배지(Minimum Essential Medium)(MEM) 배지 또는 인산 완충 생리 식염수(PBS; 인산2나트륨 1.83g, 인산1칼륨 0.21g, 식염 7.65g, 증류수 1리터, pH7.2)로 잘 세정하고, 세포수가 융합용 항체 산생 세포:골수종 세포=5 내지 10:1이 되도록 혼합하고, 원심 분리한 후, 상청을 제거한다.

침전된 세포군을 잘 푼 후, 폴리에틸렌글리콜-1000(PEG-1000), MEM 배지 및 디메틸술폭시드의 혼합액을 37℃에서 교반하면서 첨가한다. 또한 1 내지 2분간마다 MEM 배지 1 내지 2mL를 수회 첨가한 후, MEM 배지를 첨가하여 전량이 50mL가 되도록 한다.

원심 분리 후, 상청을 제거한다. 침전된 세포군을 서서히 푼 후, HAT 배지[히포크산틴, 티미딘 및 아미노프테린을 첨가한 정상 배지] 중에 서서히 세포를 현탁한다. 이 현탁액을 5% CO₂ 인큐베이터 중, 37℃에서 7 내지 14일간 배양한다.

배양 후, 배양 상청의 일부를 발취하고, 후술하는 바인딩 분석 등의 하이브리도마의 선택 방법에 의해, CADM3에 반응하고, CADM3이 아닌 항원에 반응하지 않는 세포군을 선택한다. 이어서, 한계 희석법에 의해 클로닝을 행하고, 안정되고 강한 항체값이 확인된 것을 모노클로날 항체 산생 하이브리도마로서 선택한다.

(5) 정제 모노클로날 항체의 제조

프리스탄 처리[2,6,10,14-테트라메틸펜타데칸(Pristane) 0.5mL를 복강 내 투여하고, 2주일 사육한다]한 8 내지 10주령의 마우스 또는 누드마우스에, (4)에서 얻어지는 모노클로날 항체 산생 하이브리도마를 복강 내에 주사한다. 10 내지 21일에 하이브리도마는 복수암화된다.

이 마우스로부터 복수를 채취하고, 원심 분리하여 고형분을 제거 후, 40 내지 50% 황산암모늄으로 염석하고, 카프릴산 침전법, DEAE-세파로스 칼럼, 단백질 A-칼럼 또는 겔 여과 칼럼에 의한 정제를 행하여, IgG 또는 IgM 분획을 모아 정제 모노클로날 항체로 한다.

또한, (4)에서 얻어지는 모노클로날 항체 산생 하이브리도마를 10% FBS를 첨가한 RPMI1640 배지 등에서 배양한 후, 원심 분리에 의해 상청을 제거하고, 하이브리도마 SFM 배지에 현탁하여 3 내지 7일간 배양한다.

얻어진 세포 현탁액을 원심 분리하고, 얻어진 상청으로부터 단백질 A-칼럼 또는 단백질 G-칼럼에 의한 정제를 행하고, IgG 분획을 모아 정제 모노클로날 항체를 얻을 수도 있다. 또한, 하이브리도마 SFM 배지에는 5% 다이고 GF21을 첨가할 수도 있다.

항체의 서브클래스의 결정은 서브클래스 타이핑 키트를 사용하여 효소 면역 측정법에 의해 행한다. 단백질량의 정량은 로리법 또는 280㎚에서의 흡광도로부터 산출한다.

(6) 항체의 선택

항체의 선택은 이하에 기재한 바와 같이, 플로우 사이토메트리를 사용하여 CADM3 발현 세포에 대한 항체의 결합성을 측정하는 것 등에 의해 행한다. CADM3 발현 세포는 세포 표면 상에 CADM3이 발현하고 있으면 어느 세포여도 되고, 예를 들어 동물 세포, 동물 세포주 및 (1)에서 얻어지는 CADM3 강제 발현 세포주 등을 들 수 있다.

CADM3 발현 세포를 96웰 플레이트 등의 플레이트에 분주한 후, 제1 항체로서 혈청, 하이브리도마의 배양 상청 또는 정제 항체 등의 피검 물질을 분주하고, 반응시킨다. 반응 후의 세포를 1 내지 10% BSA를 포함하는 PBS(이하, BSA-PBS라 기재한다) 등으로 잘 세정한 후, 제2 항체로서 형광 시약 등으로 표지한 항이뮤노글로불린 항체를 분주해서 반응시킨다. BSA-PBS 등으로 잘 세정한 후, 플로우 사이토미터를 사용하여 표지화 항체의 형광량을 측정함으로써, CADM3 발현 세포에 대하여 특이적으로 반응하는 항체를 선택한다.

또한, 항체의 선택은 이하에 기재하는 ELISA 또는 표면 프라즈몬 공명을 사용하여, 모노클로날 항체의 CADM3 발현 세포 또는 CADM3 단백질 등에 대한 결합성을 측정함으로써 행할 수도 있다. CADM3 단백질은 CADM3의 일부 도메인을 포함하는 단백질이어도 되고, GST 등의 태그가 부가되어 있는 단백질이어도 된다.

ELISA는 CADM3 발현 세포 또는 CADM3 단백질을 96웰 플레이트 등의 플레이트에 분주한 후, BSA-PBS로 블로킹하고, 제1 항체로서 혈청, 하이브리도마의 배양 상청 또는 정제 항체 등의 피검 물질을 분주하고, 반응시킨다. 이어서, PBS 등으로 잘 세정한 후, 제2 항체로서 형광 시약 등으로 표지한 항이뮤노글로불린 항체를 분주해서 반응시킨다.

그 후 PBS 등으로 잘 세정한 후, 발색 시약을 첨가한다. 마지막으로 반응 정지액으로 발색 반응을 멈추고, 마이크로플레이트 리더로 각 웰에 있어서의 흡광도를 측정함으로써, CADM3 발현 세포 또는 CADM3 단백질에 대하여 특이적으로 반응하는 항체를 선택한다.

표면 프라즈몬 공명은 공지된 프로토콜을 사용하여, 적절한 센서 칩에 항체를 고상화하고, CADM3 단백질을 애널라이트로 함으로써 CADM3에 결합하는 항체의 어피니티를 측정할 수 있다.

얻어진 항체의 어피니티로부터, CADM3 단백질에 대하여 원하는 어피니티를 갖는 항체를 선택할 수 있다. 또한, 센서 칩에 CADM3 단백질을 고상화하고, 항체를 애널라이트로 하여, CADM3에 결합하는 항체의 어피니티를 측정할 수도 있다.

또한, 본 발명의 항체와 경합해서 CADM3에 결합하는 항체는 상술한 플로우 사이토메트리나 ELISA를 사용한 측정계에 피검 항체를 첨가해서 반응시킴으로써 취득할 수 있다. 즉, 피검 항체를 첨가했을 때에 본 발명의 항체 및 CADM3의 결합이 저해되는 항체를 스크리닝함으로써, CADM3의 아미노산 서열 또는 그의 입체 구조에 대한 결합에 대해서, 본 발명의 항체와 경합하는 항체를 취득할 수 있다.

또한, 본 발명의 항체가 결합하는 에피토프를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체는 상술한 스크리닝 방법으로 취득된 항체의 에피토프를 공지된 방법으로 동정하고, 동정한 에피토프를 포함하는 합성 펩티드 또는 에피토프의 입체 구조로 의태시킨 합성 펩티드 등을 제작하고, 면역함으로써 취득할 수 있다.

또한, 본 발명의 항체가 결합하는 에피토프와 동일한 에피토프에 결합하는 항체는 상술한 스크리닝 방법으로 취득된 항체의 에피토프를 동정하고, 동정한 에피토프의 부분적인 합성 펩티드 또는 에피토프의 입체 구조로 의태시킨 합성 펩티드 등을 제작하고, 면역함으로써 취득할 수 있다.

(7) 파지 디스플레이법에 의한 항체의 취득

(7-1) 항체 파지 라이브러리의 제작 방법

본 발명에 있어서, 항체 파지 라이브러리는 면역 라이브러리, 나이브 라이브러리 및 합성 라이브러리를 사용할 수 있다. 각 라이브러리의 제작 방법을 이하에 기재한다.

면역 라이브러리는 상기 (1)과 마찬가지의 방법으로 면역한 동물 또는 환자 유래의 림프구를, 나이브 라이브러리는 정상적인 동물 또는 건강인 유래의 림프구를 채취하고, RNA를 추출해서 역전사 반응에 의해 cDNA를 합성한다.

이 cDNA를 주형으로 해서 PCR로 증폭한 항체 유전자 단편을 파지미드 벡터에 삽입하고, 해당 파지미드 벡터로 대장균을 형질 전환한다. 얻어진 형질 전환체에 헬퍼 파지를 감염시키면, 항체 유전자가 라이브러리화된 항체 파지 라이브러리를 얻을 수 있다.

또한, 합성 라이브러리는 게놈 DNA에 있어서의 V 유전자나 재구축된 기능적인 V 유전자의 CDR을, 적당한 길이의 랜덤한 아미노산 서열을 코딩하는 올리고 뉴클레오티드로 치환하고, 당해 V 유전자를 삽입한 파지미드 벡터로 대장균을 형질 전환한다. 얻어진 형질 전환체에 헬퍼 파지를 감염시키면, 항체 파지 라이브러리를 얻을 수 있다.

림프구 유래의 cDNA, 항체 파지 라이브러리는 시판하는 것을 사용할 수도 있다.

파지미드 벡터는 pCANTAB 5E(Amersham Pharmacia사), pUC118/pUC119 벡터(TaKaRa사), pBlueScript II Phagemid Vector(Agilent Technologies사) 및 pKSTV- 02[Miyazaki N., et al., J. Biochem., 158(3), 205-215, 2015] 등을 사용할 수 있다.

헬퍼 파지는 M13KO7 헬퍼 파지(Invitrogen사), VCSM13 Interference Resistant Helper Phage(Agilent Technologies사), R408 Interference Resistant Helper Phage(Agilent Technologies사) 등을 사용할 수 있다.

파지 디스플레이에는 파지 벡터도 사용할 수 있다. 섬유상 파지의 g3p를 제시 분자로 하는 펩티드 파지 라이브러리(New England Biolabs사제 등) 및 g7p, g8p, g9p를 제시 분자로 하는 방법 등이 있다.

또한, T7 파지를 사용한 파지 디스플레이를 사용할 수도 있다. T7 파지에 대한 디스플레이 시스템에는 T7Select 벡터(Novagen사) 등이 있다.

(7-2) 항체 파지 클론의 선택

(7-1)에서 제작한 항체 파지 라이브러리로부터의 항체 파지 클론의 선택은 이하에 나타내는 ELISA법을 사용하여 행할 수 있다.

이뮤노 튜브에 CADM3을 고상화하고, 블로킹 버퍼로 튜브를 블로킹한다. 튜브의 각 웰에 상기 (7-1)에서 제작한 항체 파지 라이브러리를 첨가해서 반응시킨다. 이어서 웰을 세정하고, 형광 표지된 항파지 항체를 첨가해서 반응시킨 후, 다시 웰을 세정해서 발색액을 첨가한다. 그 후 반응 정지액으로 발색 반응을 멈추고, 마이크로플레이트 리더로 각 웰에 있어서의 흡광도를 측정한다. 이에 의해, CADM3에 결합하는 항체 파지 클론을 선택한다.

2. 유전자 재조합 항체의 제작

유전자 재조합 항체의 제작예로서, 이하에 인간형 키메라 항체 및 인간화 항체의 제작 방법을 나타낸다. 유전자 재조합의 마우스 항체, 래트 항체, 래빗 항체, 햄스터 항체, 낙타 항체, 라마 항체, 알파카 항체,및 인간 항체, 각종 키메라 항체, 그리고 중쇄 항체 등도 마찬가지 방법으로 제작할 수 있다.

(1) 유전자 재조합 항체 발현용 벡터의 구축

유전자 재조합 항체 발현용 벡터는 인간 항체의 CH 및 CL을 코딩하는 DNA가 혼입된 동물 세포용 발현 벡터이며, 동물 세포용 발현 벡터에 인간 항체의 CH 및 CL을 코딩하는 DNA를 각각 클로닝함으로써 구축할 수 있다.

인간 항체의 정상 영역(C 영역)은 임의의 인간 항체의 CH 및 CL을 사용할 수 있다. 예를 들어, 인간 항체의 γ1 서브클래스의 CH 및 κ 클래스의 CL 등을 사용한다. 인간 항체의 CH 및 CL을 코딩하는 DNA에는 cDNA를 사용하지만, 엑손과 인트론을 포함하는 염색체 DNA를 사용할 수도 있다.

동물 세포용 발현 벡터에는 인간 항체의 C 영역을 코딩하는 유전자를 혼입해 발현할 수 있는 것이면 어떠한 것이라도 사용할 수 있다. 예를 들어, pAGE107[Cytotechnol., 3, 133(1990)], pAGE103[J. Biochem., 101, 1307(1987)], pHSG274[Gene, 27, 223(1984)], pKCR[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78, 1527(1981)], pSG1bd2-4[Cytotechnol., 4, 173(1990)] 또는 pSE1UK1Sed1-3[Cytotechnol., 13, 79(1993)] 등을 사용한다.

동물 세포용 발현 벡터 중, 프로모터 및 인핸서에는 SV40의 초기 프로모터[J. Biochem., 101, 1307(1987)], 몰로니 마우스 백혈병 바이러스 LTR[Biochem. Biophys. Res. Commun., 149, 960(1987)] 또는 면역 글로불린 H쇄의 프로모터[Cell, 41, 479(1985)] 및 인핸서[Cell, 33, 717(1983)] 등을 들 수 있다.

유전자 재조합 항체 발현용 벡터에는 유전자 재조합 항체 발현 벡터의 구축의 용이함, 동물 세포로의 도입의 용이함, 동물 세포 내에서의 항체 H쇄 및 L쇄의 발현량의 밸런스가 균형을 이루는 등의 점에서, 항체 H쇄 및 L쇄가 동일한 벡터 상에 존재하는 타입(탠덤형)의 유전자 재조합 항체 발현용 벡터[J. Immunol. Methods, 167, 271(1994)]를 사용하지만, 항체 H쇄 및 L쇄가 개개의 벡터 상에 존재하는 타입을 사용할 수도 있다. 탠덤형의 유전자 재조합 항체 발현용 벡터에는, pKANTEX93(국제공개 제97/10354호), pEE18[Hybridoma, 17, 559(1998)] 등을 사용한다.

(2) 인간 이외의 동물 유래의 항체의 가변 영역(V 영역)을 코딩하는 cDNA의 취득 및 아미노산 서열의 해석

비인간 항체의 VH 및 VL을 코딩하는 cDNA의 취득 및 아미노산 서열의 해석은 이하와 같이 해서 행할 수 있다.

(2-1) 하이브리도마법으로 항체를 취득한 경우

비인간 항체를 산생하는 하이브리도마 세포로부터 mRNA를 추출하고, cDNA를 합성한다. 합성한 cDNA를 파지 또는 플라스미드 등의 벡터에 클로닝해서 cDNA 라이브러리를 제작한다.

상기 라이브러리로부터, 비인간 항체의 C 영역 부분 또는 V 영역 부분을 코딩하는 DNA를 프로브로서 사용하고, VH 혹은 VL을 코딩하는 cDNA를 갖는 재조합 파지 또는 재조합 플라스미드를 각각 단리한다. 재조합 파지 또는 재조합 플라스미드 상의 목적으로 하는 비인간 항체의 VH 또는 VL의 전체 염기 서열을 각각 결정하고, 염기 서열로부터 VH 또는 VL의 전체 아미노산 서열을 각각 추정한다.

비인간 항체를 산생하는 하이브리도마 세포를 제작하는 인간 이외의 동물에는, 마우스, 래트, 햄스터, 래빗, 라마, 낙타 또는 알파카 등을 사용하지만, 하이브리도마 세포를 제작하는 것이 가능하면 어떠한 동물도 사용할 수 있다.

하이브리도마 세포로부터의 전체 RNA의 제조에는, 티오시안산구아니딘-트리플루오로아세트산세슘법[Methods in Enzymol., 154, 3(1987)] 또는 RNA 이지 키트(RNA easy kit)(퀴아젠사제) 등의 키트 등을 사용한다.

전체 RNA로부터의 mRNA의 제조에는 올리고(dT) 고정화 셀룰로오스 칼럼법[Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)] 또는 올리고-dT30＜슈퍼＞mRNA　정제(Oligo-dT30＜Super＞mRNA　Purification)(등록상표) 키트(다카라 바이오사제) 등의 키트 등을 사용한다. 또한, 패스트 트랙 mRNA 단리(Fast Track mRNA Isolation)(등록상표) 키트(인비트로젠사제) 또는 퀵프렙 mRNA 정제(QuickPrep mRNA Purification)(등록상표) 키트(파마시아사제) 등의 키트를 사용하여 하이브리도마 세포로부터 mRNA를 제조할 수도 있다.

cDNA의 합성 및 cDNA 라이브러리의 제작에는 공지된 방법[Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989), Current Protocols in Molecular Biology, Supplement 1, John Wiley & Sons(1987-1997)] 또는 cDNA 합성 및 플라스미드 클로닝을 위한 슈퍼스크립트 플라스미드 시스템(SuperScript Plasmid System for cDNA Synthesis and Plasmid Cloning)(인비트로젠사제) 혹은 ZAP-cDNA 합성(Synthesis)(등록상표) 키트(스트라타진사제) 등의 키트 등을 사용한다.

cDNA 라이브러리의 제작 시, 하이브리도마 세포로부터 추출한 mRNA를 주형으로서 합성한 cDNA를 혼입하는 벡터에는, 해당 cDNA를 혼입하는 벡터이면 어떠한 것이라도 사용할 수 있다. 예를 들어, ZAP Express[Strategies, 5, 58(1992)], pBluescript II SK(+)[Nucleic Acids Research, 17, 9494(1989)], λZAPII(Stratagene사제), λgt10, λgt11[DNA Cloning: A Practical Approach, I, 49(1985)], Lambda BlueMid(클론테크사제), λExCell, pT7T3-18U(파마시아사제), pCD2[Mol. Cell. Biol., 3, 280(1983)] 또는 pUC18[Gene, 33, 103(1985)] 등을 사용한다.

파지 또는 플라스미드 벡터에 의해 구축되는 cDNA 라이브러리를 도입하는 대장균에는, 해당 cDNA 라이브러리를 도입, 발현 및 유지할 수 있는 것이면 어떠한 것이라도 사용할 수 있다. 예를 들어, XL1-Blue MRF'[Strategies, 5, 81(1992)], C600[Genetics, 39, 440(1954)], Y1088, Y1090[Science, 222, 778(1983)], NM522[J. Mol. Biol., 166, 1(1983)], K802[J. Mol. Biol., 16, 118(1966)] 또는 JM105[Gene, 38, 275(1985)] 등을 사용한다.

cDNA 라이브러리로부터의 비인간 항체의 VH 또는 VL을 코딩하는 cDNA 클론의 선택에는, 동위 원소 혹은 형광 표지한 프로브를 사용한 콜로니·하이브리다이제이션법 또는 플라크·하이브리다이제이션법[Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)] 등을 사용한다.

또한, 프라이머를 제조하고, mRNA로부터 합성한 cDNA 또는 cDNA 라이브러리를 주형으로 하여, 폴리머라제 연쇄 반응(Polymerase Chain Reaction)(PCR)법[Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989), Current Protocols in Molecular Biology, Supplement 1, John Wiley & Sons(1987-1997)]을 행함으로써 VH 또는 VL을 코딩하는 cDNA를 제조할 수도 있다.

선택된 cDNA를 적당한 제한 효소 등으로 절단 후, pBluescript SK(-)(스트라타진사제) 등의 플라스미드에 클로닝하여, 통상 사용되는 염기 서열 해석 방법 등에 의해 해당 cDNA의 염기 서열을 결정한다. 염기 서열 해석 방법에는, 예를 들어 디데옥시법[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74, 5463(1977)] 등의 반응을 행한 후, ABI PRISM3700(PE 바이오 시스템즈사제) 또는 A.L.F.DNA 시퀀서(파마시아사제) 등의 염기 서열 자동 분석 장치 등을 사용한다.

(2-2) 파지 디스플레이법에 의해 항체를 취득한 경우

선택한 파지 클론의 플라스미드 벡터로부터, 벡터 부분 또는 V 영역 부분을 코딩하는 DNA를 프로브로서 사용하고, VH 또는 VL의 전체 염기 서열을 각각 결정하고, 염기 서열로부터 VH 또는 VL의 전체 아미노산 서열을 각각 추정할 수 있다.

하이브리도마법 또는 파지 디스플레이법의 어느 방법에 있어서도, 결정한 염기 서열로부터 VH 및 VL의 전체 아미노산 서열을 각각 추정하고, 기지의 항체의 VH 및 VL의 전체 아미노산 서열[Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services(1991)]과 비교함으로써, 취득한 cDNA가 분비 시그널 서열을 포함하는 항체의 VH 및 VL의 완전한 아미노산 서열을 코딩하고 있는지를 각각 확인한다.

분비 시그널 서열을 포함하는 항체의 VH 및 VL의 완전한 아미노산 서열에 관해서는, 기지의 항체의 VH 및 VL의 전체 아미노산 서열[Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services(1991)]과 비교함으로써, 분비 시그널 서열의 길이 및 N말단 아미노산 서열을 추정할 수 있고, 나아가 그들이 속하는 서브그룹을 알 수 있다.

또한, VH 및 VL의 각 CDR의 아미노산 서열에 대해서도, 기지의 항체의 VH 및 VL의 아미노산 서열[Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services(1991)]과 비교함으로써 발견할 수 있다.

또한, 얻어진 VH 및 VL의 완전한 아미노산 서열을 사용하여, 예를 들어SWISS-PROT 또는 PIR-Protein 등의 임의의 데이터베이스에 대하여 BLAST법[J. Mol. Biol., 215, 403(1990)] 등의 상동성 검색을 행하여, VH 및 VL의 완전한 아미노산 서열이 신규인지를 확인할 수 있다.

(3) 인간형 키메라 항체 발현 벡터의 구축

(1)에서 얻어지는 유전자 재조합 항체 발현용 벡터의 인간 항체의 CH 또는 CL을 코딩하는 각각의 유전자의 상류에, 각각 비인간 항체의 VH 또는 VL을 코딩하는 cDNA를 각각 클로닝함으로써, 인간형 키메라 항체 발현 벡터를 구축할 수 있다.

비인간 항체의 VH 또는 VL을 코딩하는 cDNA의 3' 말단측과, 인간 항체의 CH 또는 CL의 5' 말단측을 연결하기 위해서, 연결 부분의 염기 서열이 적절한 아미노산을 코딩하며, 또한 적당한 제한 효소 인식 서열이 되도록 설계한 VH 및 VL의 cDNA를 제작한다.

제작된 VH 및 VL의 cDNA를, (1)에서 얻어지는 유전자 재조합 항체 발현용 벡터의 인간 항체의 CH 또는 CL을 코딩하는 각각의 유전자의 상류에 그들이 적절한 형태로 발현하도록 각각 클로닝하고, 인간형 키메라 항체 발현 벡터를 구축한다.

또한, 비인간 항체 VH 또는 VL을 코딩하는 cDNA를, 적당한 제한 효소의 인식 서열을 양 끝에 갖는 합성 DNA를 사용하여 PCR법에 의해 각각 증폭하고, (1)에서 얻어지는 유전자 재조합 항체 발현용 벡터에 클로닝할 수도 있다.

(4) 인간화 항체의 V 영역을 코딩하는 cDNA의 구축

인간화 항체의 VH 또는 VL을 코딩하는 cDNA는 이하와 같이 해서 구축할 수 있다.

비인간 항체의 VH 또는 VL의 CDR의 아미노산 서열을 이식하기 위한, 인간 항체의 VH 또는 VL의 FR의 아미노산 서열을 각각 선택한다. 선택하는 FR의 아미노산 서열에는, 인간 항체 유래의 것이라면 어느 것이라도 사용할 수 있다.

예를 들어, 프로테인 데이터 뱅크(Protein Data Bank) 등의 데이터베이스에 등록되어 있는 인간 항체의 FR의 아미노산 서열 또는 인간 항체의 FR의 각 서브그룹의 공통 아미노산 서열[Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services(1991)] 등을 사용한다. 항체의 결합 활성의 저하를 억제하기 위해서, 원래의 항체의 VH 또는 VL의 FR의 아미노산 서열과 가능한 한 높은 상동성(적어도 60% 이상)의 FR의 아미노산 서열을 선택한다.

이어서, 선택한 인간 항체의 VH 또는 VL의 FR의 아미노산 서열에, 원래의 항체 CDR의 아미노산 서열을 각각 이식하고, 인간화 항체의 VH 또는 VL의 아미노산 서열을 각각 설계한다. 설계한 아미노산 서열을 항체의 유전자의 염기 서열에 보이는 코돈의 사용 빈도[Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services(1991)]를 고려해서 DNA 서열로 변환하고, 인간화 항체의 VH 또는 VL의 아미노산 서열을 코딩하는 DNA 서열을 각각 설계한다.

설계한 DNA 서열에 기초하여, 100염기 전후의 길이로 이루어지는 수개의 합성 DNA를 합성하고, 그들을 사용하여 PCR 반응을 행한다. 이 경우, PCR 반응에서의 반응 효율 및 합성 가능한 DNA의 길이로부터, 바람직하게는 VH, VL 각각에 대해서 각 6개의 합성 DNA를 설계한다.

또한, 양 끝에 위치하는 합성 DNA의 5' 또는 3' 말단에 적당한 제한 효소의 인식 서열을 도입함으로써, 인간화 항체의 VH 또는 VL을 코딩하는 cDNA를, (1)에서 얻어지는 유전자 재조합 항체 발현용 벡터에 용이하게 클로닝할 수 있다.

PCR 반응 후, 증폭산물을 pBluescript SK(-)(스트라타진사제) 등의 플라스미드에 각각 클로닝하고, (2)에 기재된 방법과 마찬가지 방법에 의해 염기 서열을 결정하고, 원하는 인간화 항체의 VH 또는 VL의 아미노산 서열을 코딩하는 DNA 서열을 갖는 플라스미드를 취득한다.

또는, 설계한 DNA 서열에 기초하여, VH 전체 길이 및 VL 전체 길이를 각각 1개의 장쇄 DNA로서 합성한 것을 상기 PCR 증폭산물 대신에 사용할 수도 있다. 또한, 합성 장쇄 DNA의 양 끝에 적당한 제한 효소의 인식 서열을 도입함으로써, 인간화 항체의 VH 또는 VL을 코딩하는 cDNA를, (1)에서 얻어지는 유전자 재조합 항체 발현용 벡터에 용이하게 클로닝할 수 있다.

(5) 인간화 항체의 V 영역의 아미노산 서열의 개변

인간화 항체는 비인간 항체의 VH 및 VL의 CDR만을 인간 항체의 VH 및 VL의 FR에 이식한 것 만으로는, 그의 항원 결합 활성은 원래의 비인간 항체에 비교해서 저하된다[BIO/TECHNOLOGY, 9, 266(1991)].

인간화 항체에서는, 인간 항체의 VH 및 VL의 FR의 아미노산 서열 중에서, 직접 항원과의 결합에 관여하고 있는 아미노산 잔기, CDR의 아미노산 잔기와 상호 작용하는 아미노산 잔기 및 항체의 입체 구조를 유지하고, 간접적으로 항원과의 결합에 관여하고 있는 아미노산 잔기를 동정하고, 그들 아미노산 잔기를 원래의 비인간 항체의 아미노산 잔기로 치환함으로써, 저하된 항원 결합 활성을 상승시킬 수 있다.

항원 결합 활성에 관련된 FR의 아미노산 잔기를 동정하기 위해서, X선 결정 해석[J. Mol. Biol., 112, 535(1977)] 또는 컴퓨터 모델링[Protein Engineering, 7, 1501(1994)] 등을 사용함으로써, 항체의 입체 구조의 구축 및 해석을 행할 수 있다. 또한, 각각의 항체에 대해서 수종의 개변체를 제작하고, 각각의 항원 결합 활성과의 상관을 검토하는 것을 반복하고, 시행 착오함으로써 필요한 항원 결합 활성을 갖는 인간화 항체를 취득할 수 있다.

인간 항체의 VH 및 VL의 FR의 아미노산 잔기는 개변용 합성 DNA를 사용하여 (4)에 기재된 PCR 반응을 행함으로써 개변시킬 수 있다. PCR 반응 후의 증폭산물에 대해서 (2)에 기재된 방법에 의해 염기 서열을 결정하고, 목적으로 하는 개변이 실시된 것을 확인한다.

(6) 인간화 항체 발현 벡터의 구축

(1)에서 얻어지는 유전자 재조합 항체 발현용 벡터의 인간 항체의 CH 또는 CL을 코딩하는 각각의 유전자의 상류에, 구축한 유전자 재조합 항체의 VH 또는 VL을 코딩하는 cDNA를 각각 클로닝하여 인간화 항체 발현 벡터를 구축할 수 있다.

예를 들어 (4) 및 (5)에서 얻어지는 인간화 항체의 VH 또는 VL을 구축할 때에 사용하는 합성 DNA 중, 양 끝에 위치하는 합성 DNA의 5' 또는 3' 말단에 적당한 제한 효소의 인식 서열을 도입함으로써, (1)에서 얻어지는 유전자 재조합 항체 발현용 벡터의 인간 항체의 CH 또는 CL을 코딩하는 각각의 유전자의 상류에 그들이 적절한 형태로 발현하도록 각각 클로닝한다.

(7) 유전자 재조합 항체의 일과성 발현

(3) 및 (6)에서 얻어지는 유전자 재조합 항체 발현 벡터, 또는 그들을 개변한 발현 벡터를 사용하여 유전자 재조합 항체의 일과성 발현을 행하고, 제작한 다종류의 인간형 키메라 항체, 인간화 항체의 항원 결합 활성을 효율적으로 평가할 수 있다.

발현 벡터를 도입하는 숙주 세포에는, 유전자 재조합 항체를 발현할 수 있는 숙주 세포이면 어떠한 세포라도 사용할 수 있지만, 예를 들어 COS-7 세포[American Type Culture Collection(ATCC) 번호: CRL1651]를 사용한다[Methods in Nucleic Acids Res., CRC press, 283(1991)].

COS-7 세포로의 발현 벡터의 도입에는, DEAE-덱스트란법[Methods in Nucleic Acids Res., CRC press(1991)] 또는 리포펙션법[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413(1987)] 등을 사용한다.

발현 벡터의 도입 후, 배양 상청 중의 유전자 재조합 항체의 발현량 및 항원 결합 활성은 효소 면역 항체법[Monoclonal Antibodies-Principles and practice, Third edition, Academic Press(1996), Antibodies - A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory(1988), 단일 클론 항체 실험 매뉴얼, 고단샤 사이언티픽(1987)] 등을 사용하여 측정한다.

(8) 유전자 재조합 항체를 안정적으로 발현하는 형질 전환주의 취득과 유전자 재조합 항체의 제조

(3) 및 (6)에서 얻어진 유전자 재조합 항체 발현 벡터를 적당한 숙주 세포에 도입함으로써 유전자 재조합 항체를 안정적으로 발현하는 형질 전환주를 얻을 수 있다.

숙주 세포로의 발현 벡터의 도입에는 일렉트로포레이션법[일본특허공개 평2-257891호 공보, Cytotechnology, 3, 133(1990)] 등을 사용한다.

유전자 재조합 항체 발현 벡터를 도입하는 숙주 세포에는, 유전자 재조합 항체를 발현시킬 수 있는 숙주 세포이면 어떠한 세포라도 사용할 수 있다. 예를 들어, CHO-K1(ATCC CCL-61), DUKXB11(ATCC CCL-9096), Pro-5(ATCC CCL-1781), CHO-S(Life Technologies, Cat#11619), 래트 미엘로마 세포 YB2/3HL.P2.G11.16Ag.20(ATCC 번호: CRL1662 또는 YB2/0이라고도 한다), 마우스 미엘로마 세포 NS0, 마우스 미엘로마 세포 SP2/0-Ag14(ATCC 번호: CRL1581), 마우스 P3X63-Ag8.653 세포(ATCC 번호: CRL1580), dhfr이 결손된 CHO 세포(CHO/DG44 세포)[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 4216(1980)] 등을 사용한다.

또한, 세포 내 당뉴클레오티드 GDP-푸코오스의 합성에 관여하는 효소 등의 단백질, N-글리코시드 결합 복합형 당쇄의 환원 말단의 N-아세틸글루코사민의 6위치에 푸코오스의 1위치가 α 결합하는 당쇄 수식에 관여하는 효소 등의 단백질 혹은 세포 내 당뉴클레오티드 GDP-푸코오스의 골지체로의 수송에 관여하는 단백질 등의 활성이 저하 또는 결실된 숙주 세포, 예를 들어 α1,6-푸코오스 전이 효소 유전자가 결손된 CHO 세포(국제공개 제2005/035586호, 국제공개 제02/31140호), 렉틴 내성을 획득한 Lec13[Somatic Cell and Molecular genetics, 12, 55(1986)] 등을 사용할 수도 있다.

발현 벡터의 도입 후, 유전자 재조합 항체를 안정적으로 발현하는 형질 전환주는 G418 황산염(이하, G418이라 표기한다) 등의 약제를 포함하는 동물 세포 배양용 배지에서 배양함으로써 선택한다(일본특허공개 평2-257891호 공보).

동물 세포 배양용 배지에는 RPMI1640 배지(인비트로젠사제), GIT 배지(니혼 세이야쿠사제), EX-CELL301 배지(JRH사제), IMDM 배지(인비트로젠사제) 혹은 하이브리도마-SFM(인비트로젠사제), 또는 이들 배지에 FBS 등의 각종 첨가물을 첨가한 배지 등을 사용한다.

얻어진 형질 전환주를 배지 중에서 배양함으로써 배양 상청 중에 유전자 재조합 항체를 발현 축적시킨다. 배양 상청 중의 유전자 재조합 항체의 발현량 및 항원 결합 활성은 ELISA법 등에 의해 측정할 수 있다. 또한, dhfr 유전자 증폭계(일본특허공개 평2-257891호 공보) 등을 이용하여, 형질 전환주가 산생하는 유전자 재조합 항체의 발현량을 향상시킬 수 있다.

유전자 재조합 항체는 형질 전환주의 배양 상청으로부터 단백질 A-칼럼을 사용하여 정제한다[Monoclonal Antibodies - Principles and practice, Third edition, Academic Press(1996), Antibodies - A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory(1988)]. 또한, 겔 여과, 이온 교환 크로마토그래피 및 한외 여과 등의 단백질의 정제에서 사용되는 방법을 조합할 수도 있다.

정제한 유전자 재조합 항체의 H쇄, L쇄 혹은 항체 분자 전체의 분자량은 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동법[Nature, 227, 680(1970)] 또는 웨스턴 블로팅법[Monoclonal Antibodies - Principles and practice, Third edition, Academic Press(1996), Antibodies - A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory(1988)] 등을 사용하여 측정할 수 있다.

(9) 항체 단편의 제작 방법

본 발명의 항체 단편은 공지된 방법에 따라 제작할 수 있다. 본 발명의 항체 단편은 상기 (1) 내지 (8)에서 기재한 방법에 따라 제작한 항체를 효소 등으로 절단함으로써 제작해도 되고, 원하는 항체 단편을 코딩하는 염기 서열을 제조하고, 유전자 공학적인 수법으로 제작해도 된다.

(10) 1가 항체의 제작 방법

본 발명에 있어서, 1가 항체는 국제공개 제2014/054804호, 국제공개 제2011/090754호, 국제공개 제2007/048037호 및 국제공개 제2012/116927호 등에 기재하는 방법 등으로 제작할 수 있다.

(11) 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체의 제조 방법

본 발명의 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체는 상술한 항체의 제조 방법에 준하여 제작할 수 있다. 예를 들어 국제공개 제2009/131239호, 국제공개 제2014/054804호, 국제공개 제01/077342호, 미국특허출원 공개 제2007/0071675호 명세서, 국제공개 제2007/024715, Wu et al., [Nature Biotechnology, 2007, 25(11), p.1290-1297], Labrijn et al., [PNAS 2013, vol.110, no.13, p5145-5150], Jong et al., [http://dx.doi.org/10.1371/journal.pbio.1002344], Kontermann et al., [mAbs 2012, vol.4, issue2, p182-197], Spiess et al., [Molecular Immunology 67(2015) 95-106], Ridgway et al., [Protein engineering, 1996 vol.9 no.7 pp617-621], 국제공개 제2009/080251, 국제공개 제2010/151792 및 국제공개 제2014/033074 등에 기재되는 방법을 사용하여 제작할 수 있다.

예를 들어 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 IgG 항체의 C말단에, CADM3에 결합하는 scFv를 융합시킨 이중특이적 항체의 발현 벡터는 이하에 기재하는 방법으로 제작할 수 있고, 상술한 항체의 발현 방법 및 항체의 정제 방법에 준하여 당해 이중특이적 항체를 제작할 수 있다. 또한, 그 밖에는, 항체의 C말단에 항체 단편을 융합시킨 이중특이적 항체도 마찬가지 방법으로 제작할 수 있다.

뇌에 존재하는 항원에 결합하는 IgG 항체의 중쇄 정상 영역의 합성 유전자를 주형으로 하여, PCR법에 의해 CH1-힌지-CH2-CH3-링커 영역의 유전자 단편을 증폭한다. 이어서, CADM3에 결합하는 항체의 염기 서열을 주형으로 하여, 당해 항체의 VH 및 VL을 적절한 링커로 결합시킨 scFv 영역의 염기 서열을 PCR법 등을 사용하여 제조한다. 상기 2개의 영역을 PCR법 등으로 결합시켜서 얻어진 유전자 단편을 pCI 벡터 등이 적절한 벡터에 삽입한다.

또한, 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 IgG 항체의 경쇄 영역(VL 및 CL)의 유전자 단편 및 당해 항체의 VH의 유전자 단편을, 각각 적절한 주형을 사용한 PCR법에 의해 증폭하고, 상기 벡터가 적절한 위치에 삽입된다.

또한, 본 발명의 이중특이적 항체는 화학적 방법에 의해, IgG 항체에 항체 단편을 포함하는 항원 결합 부위를 결합시켜서 제작할 수도 있다.

3. 항체 또는 해당 항체 단편의 활성 평가

본 발명에 있어서, 항체 또는 해당 항체 단편의 활성 평가는 이하와 같이 행할 수 있다.

(1) CADM3에 대한 결합 활성

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편의 CADM3에 대한 결합 활성은 전술한 1-(6)에 기재된 플로우 사이토메트리, ELISA 및 표면 프라즈몬 공명 검출 등을 사용하여 측정한다. 또한, 형광 항체법[Cancer Immunol. Immunother., 36, 373(1993)]을 사용하여 측정할 수도 있다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편이 CADM3에 결합하는 1가 항체인 경우에도, 마찬가지 방법으로 당해 1가 항체의 CADM3으로의 결합 활성을 측정할 수 있다. 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편이 CADM3 및 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체인 경우에도, 마찬가지 방법으로 당해 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체의 CADM3 또는 뇌에 존재하는 항원에 대한 결합 활성을 측정할 수 있다.

(2) 뇌 체류성의 측정 방법

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편의 뇌 체류성은 이하에 기재하는 방법으로 측정할 수 있다.

동물에 항체 또는 해당 항체 단편을 투여해서 수일 경과 후에 뇌 조직을 회수하고, 균질화해서 원심 분리 후의 상청 중의 항체 또는 해당 항체 단편의 농도를 측정하고, 단위 뇌 중량당의 항체 또는 해당 항체 단편의 양을 산출하는 방법, 또는 회수한 뇌 조직을 사용하여 공지된 면역학적 방법에 의해 항체 또는 해당 항체 단편의 존재를 검출하는 방법 등을 들 수 있다. 또한, 약리학적으로 허용되는 표지를 실시한 항체 또는 해당 항체 단편을 동물에 투여하고, 생체 내 이미징 시스템으로 경시적으로 당해 항체 또는 해당 항체 단편의 존재를 검출하는 방법 등을 들 수 있다.

뇌 체류성의 평가에 사용하는 동물은, 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편의 용도에 따른 적절한 동물을 선택할 수 있다.

(3) 항체 의존성 세포 상해 활성(ADCC), 보체 의존성 세포 상해 활성(CDC)의 측정 방법

인간 CADM3 발현 세포 또는 CADM3 및 뇌에 존재하는 항원이 발현하고 있는 세포에 대한 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편의 CDC 또는 ADCC는 공지된 측정 방법[Cancer Immunol. Immunother., 36, 373(1993); Current protocols in Immunology, Chapter7. Immunologic studies in humans, Editor, John E, Coligan et al., John Wiley & Sons, Inc.,(1993)]에 의해 측정할 수 있다.

4. 항체 또는 항체 단편의 이펙터 활성을 제어하는 방법

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편의 이펙터 활성을 제어하는 방법으로서는, 항체 또는 Fc를 포함하는 해당 항체 단편의 Fc 영역에 297번째의 아스파라긴(Asn)에 결합하는 N 결합 복합형 당쇄의 환원 말단에 존재하는 N-아세틸글루코사민(GlcNAc)에 α1,6 결합하는 푸코오스(코어 푸코오스라고도 한다)의 양을 제어하는 방법(국제공개 제2005/035586호, 국제공개 제2002/31140호, 국제공개 제00/61739호), 또는 항체 혹은 해당 항체 단편의 Fc 영역의 아미노산 잔기를 개변함으로써 제어하는 방법 등이 알려져 있다. 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편에는 어느 방법을 사용해도 이펙터 활성을 제어할 수 있다.

이펙터 활성이란, 항체 또는 해당 항체 단편의 Fc 영역을 통해서 야기되는 항체 의존성의 활성을 말하고, ADCC, CDC 또는 마크로파지 혹은 수상 세포 등의 식세포에 의한 항체 의존성 파고사이토시스(Antibody-dependent phagocytosis; ADP) 등이 알려져 있다.

이펙터 활성의 측정법으로서, 예를 들어 표적 세포, 이펙터로서 인간 말초혈단핵구(PBMC), 그리고 표적 세포 특이적인 항체 또는 해당 항체 단편을 혼합하고, 4시간 정도 인큐베이션한 후, 세포 상해의 지표로서 유리된 락트산 탈수소 효소(LDH)를 측정할 수 있다. 이 외에는, 유리 ⁵¹Cr법 또는 플로우 사이토메트리법 등에 의해 이펙터 활성을 측정할 수도 있다.

항체의 Fc의 N 결합 복합형 당쇄의 코어 푸코오스의 함량을 제어함으로써, 항체 또는 Fc를 포함하는 항체 단편의 이펙터 활성을 증가 또는 저하시킬 수 있다. 항체 또는 해당 항체 단편의 Fc에 결합하고 있는 N 결합 복합형 당쇄에 결합하는 푸코오스의 함량을 저하시키는 방법으로서는, α1,6-푸코오스 전이 효소 유전자가 결손된 CHO 세포를 사용하여 항체 또는 해당 항체 단편을 발현함으로써, 푸코오스가 결합하고 있지 않은 항체 또는 해당 항체 단편을 취득할 수 있다. 푸코오스가 결합하고 있지 않은 항체 또는 해당 항체 단편은 높은 ADCC를 갖는다.

한편, 항체 또는 해당 항체 단편의 Fc에 결합하고 있는 N 결합 복합형 당쇄에 결합하는 푸코오스의 함량을 증가시키는 방법으로서는, α1,6-푸코오스 전이 효소 유전자를 도입한 숙주 세포를 사용하여 항체 또는 해당 항체 단편을 발현시킴으로써, 푸코오스가 결합하고 있는 항체 또는 해당 항체 단편을 취득할 수 있다. 푸코오스가 결합하고 있는 항체 또는 해당 항체 단편은 푸코오스가 결합하고 있지 않은 항체 또는 해당 항체 단편보다 낮은 ADCC를 갖는다.

또한, 항체 또는 해당 항체 단편의 Fc 영역의 아미노산 잔기를 개변함으로써 ADCC 또는 CDC를 증가 또는 저하시킬 수 있다. 예를 들어, 미국특허출원공개 제2007/0148165호 명세서에 기재된 Fc 영역의 아미노산 서열을 사용함으로써, 항체 또는 해당 항체 단편의 CDC를 증가시킬 수 있다.

또한, 미국특허 제6,737,056호 명세서, 미국특허 제7,297,775호 명세서 또는 미국특허 제7,317,091호 명세서에 기재된 아미노산 개변을 행함으로써, ADCC 또는 CDC를 증가시킬 수도 저하시킬 수도 있다.

또한 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편에는, 상술한 항체 또는 해당 항체 단편이 포함하는 정상 영역에 있어서의 아미노산 개변 또는 당쇄 개변과 아울러, 예를 들어 일본특허공개 제2013-165716호 공보 또는 일본특허공개 제2012-021004호 공보 등에 기재된 아미노산 개변을 행함으로써, Fc 수용체에 대한 반응성을 제어함으로써 혈중 반감기를 제어한 항체 또는 해당 항체 단편도 포함된다.

또한, 상술한 방법을 조합하여 하나의 항체 또는 해당 항체 단편에 사용함으로써, 이펙터 활성이나 혈중 반감기가 제어된 항체 또는 해당 항체 단편을 취득할 수 있다.

5. 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 사용한 질환의 치료 방법

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편은 뇌 내에 CADM3이 발현하고 있는 동물의 뇌질환 치료에 사용할 수 있다.

뇌질환으로서는, 예를 들어 알츠하이머병, 전구기 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, 뇌종양, 다발성 경화증, 근디스트로피, 근위축성 측색 경화증, 다계통 위축증, 진행성 핵상성 마비, 선조체 흑질 변성증, 올리브교소뇌 위축증, 구척수성 근위축증, 척수 소뇌 변성증, 뇌혈관 장애, 간질, 편두통, 다동성 장애, 크로이츠펠트 야코프병, 대뇌피질 기저핵 변성증, 라이소솜병, 우울증, 디스토니아 등을 들 수 있다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 치료할 수 있는 뇌질환은 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편이 결합하는 항원, 및 본 발명의 융합 항체 또는 융합 항체 단편에 있어서 항체 또는 해당 항체 단편을 수식하는 분자의 종류 등에 따라 다르다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 함유하는 치료제는 유효 성분으로서의 해당 항체 또는 해당 항체 단편만을 포함하는 것이어도 되지만, 통상은 약리학적으로 허용되는 1 이상의 담체와 함께 혼합하고, 제제학의 기술 분야에 있어서 공지된 방법에 의해 제조한 의약 제제로서 제공된다.

투여 경로로서는 예를 들어 경구 투여, 또는 구강 내, 기도 내, 직장 내, 피하, 근육 내, 뇌실 내, 복강 내 투여, 피내 투여, 경비 투여, 척수강 내 투여 혹은 정맥 내 등의 비경구 투여를 들 수 있다. 투여 형태로서는, 예를 들어 분무제, 캡슐제, 정제, 산제, 과립제, 시럽제, 유제, 좌제, 주사제, 연고 또는 테이프제 등을 들 수 있다.

경구 투여에 적당한 제제로서는, 유제, 시럽제, 캡슐제, 정제, 산제 또는 과립제 등을 들 수 있다.

유제 또는 시럽제와 같은 액체 제조물은 물, 자당, 소르비톨 혹은 과당 등의 당류, 폴리에틸렌글리콜 혹은 프로필렌글리콜 등의 글리콜류, 호마유, 올리브유 혹은 대두유 등의 유류, p-히드록시벤조산에스테르류 등의 방부제, 또는 스트로베리 플레이버 혹은 페퍼민트 등의 플레이버류 등을 첨가제로서 사용해서 제조한다.

캡슐제, 정제, 산제 또는 과립제 등은 유당, 포도당, 자당 혹은 만니톨 등의 부형제, 전분 혹은 알긴산나트륨 등의 붕괴제, 스테아르산마그네슘 혹은 탈크 등의 활택제, 폴리비닐알코올, 히드록시프로필셀룰로오스 혹은 젤라틴 등의 결합제, 지방산에스테르 등의 계면 활성제 또는 글리세린 등의 가소제 등을 첨가제로서 사용해서 제조한다.

비경구 투여에 적당한 제제로서는, 주사제, 좌제 또는 분무제 등이다. 주사제는 염 용액 혹은 포도당 용액, 또는 그 양자의 혼합물을 포함하는 담체 등을 사용하여 제조한다. 좌제는 카카오 버터, 수소화 지방 또는 카르복실산 등의 담체를 사용하여 제조한다.

분무제는 수용자의 구강 및 기도 점막을 자극하지 않고, 또한 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 미세한 입자로서 분산시켜서 흡수를 쉽게 만드는 담체 등을 사용하여 제조한다. 담체로서는, 예를 들어 유당 또는 글리세린 등을 사용한다. 또한, 에어로졸 또는 드라이 파우더로서 제조할 수도 있다. 또한, 상기 비경구제에 있어서도 경구 투여에 적당한 제제로 첨가제로서 예시한 성분을 첨가할 수도 있다.

6. 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 사용한 뇌에 존재하는 항원의 검출 혹은 측정 방법, 또는 질환의 진단 방법

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 사용하여 CADM3, 또는 CADM3과 뇌에 존재하는 항원을 검출 또는 측정할 수 있다. 또한, CADM3, 또는 CADM3과 뇌에 존재하는 항원을 검출 또는 측정함으로써, 뇌 내에 CADM3이 발현하고 있는 동물의 뇌질환을 진단할 수 있다.

뇌질환으로서는, 예를 들어 알츠하이머병, 전구기 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, 뇌종양, 다발성 경화증, 근디스트로피, 근위축성 측색 경화증, 다계통 위축증, 진행성 핵상성 마비, 선조체 흑질 변성증, 올리브교소뇌 위축증, 구척수성 근위축증, 척수 소뇌 변성증, 뇌혈관 장애, 간질, 편두통, 다동성 장애, 크로이츠펠트 야코프병, 대뇌피질 기저핵 변성증, 라이소솜병, 우울증, 디스토니아 등을 들 수 있지만, 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 진단할 수 있는 뇌질환은 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편이 결합하는 항원, 및 본 발명의 융합 항체 또는 융합 항체 단편에 있어서 항체 또는 해당 항체 단편을 수식하는 분자의 종류 등에 따라 다르다.

뇌 내에 CADM3이 발현하고 있는 동물의 뇌질환 진단은, 예를 들어 환자 또는 이환 동물의 뇌 내에 존재하는 CADM3을 면역학적 방법에 의해 검출 또는 측정해서 행할 수 있다. 또한, 환자 또는 이환 동물의 뇌 내의 세포에 발현 또는 존재하고 있는 CADM3을 플로우 사이토메트리 등의 면역학적 방법을 사용하여 검출함으로써 진단을 행할 수 있다.

본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편으로서 CADM3에 결합하는 1가 항체를 사용할 때에는, 상기와 마찬가지의 방법으로 뇌 내의 CADM3을 측정할 수 있다. 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편으로서 CADM3 및 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체를 사용할 때에는, 상기와 마찬가지의 방법으로 뇌 내의 CADM3 또는 뇌에 존재하는 항원을 검출 또는 측정할 수 있다.

면역학적 방법이란, 표지를 실시한 항원 또는 항체 등을 사용하여 항체량 또는 항원량을 검출 또는 측정하는 방법이다. 예를 들어 방사성 물질 표지 면역 항체법, 효소 면역 측정법, 형광 면역 측정법, 발광 면역 측정법, 웨스턴 블로팅법 또는 물리 화학적 방법 등을 사용한다.

방사성 물질 표지 면역 항체법은, 예를 들어 항원 또는 항원을 발현한 세포 등에 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 반응시키고, 또한 방사선 표지를 실시한 항이뮤노글로불린 항체 또는 해당 항체 단편을 반응시킨 후, 신틸레이션 카운터 등으로 측정한다.

효소 면역 측정법은, 예를 들어 항원 또는 항원을 발현한 세포 등에 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 반응시키고, 또한 효소 등으로 표지를 실시한 항이뮤노글로불린 항체 또는 해당 항체 단편을 반응시킨 후, 기질을 첨가해서 반응액의 흡광도를 흡광 광도계로 측정한다. 예를 들어, 샌드위치 ELISA법 등을 사용한다. 효소 면역 측정법에서 사용하는 표지체로서는 공지[효소 면역 측정법, 이가쿠쇼인(1987)]된 효소 표지를 사용할 수 있다.

예를 들어 알칼리포스파타제 표지, 퍼옥시다제 표지, 루시페라아제 표지 또는 비오틴 표지 등을 사용한다. 샌드위치 ELISA법은 고상에 항체를 결합시킨 후, 검출 또는 측정 대상인 항원을 포획시키고, 포획된 항원에 제2 항체를 반응시키는 방법이다.

상기 ELISA법에서는 검출 또는 측정하고자 하는 항원을 인식하는 항체이며, 항원 인식 부위가 다른 2종류의 항체를 준비하고, 그 중 제1 항체를 미리 플레이트(예를 들어, 96웰 플레이트)에 흡착시키고, 다음으로 제2 항체를 FITC 등의 형광 물질, 퍼옥시다제 등의 효소 또는 비오틴 등으로 표지해둔다.

상기 제1 항체가 흡착된 플레이트에, 생체 내로부터 분리된 세포 또는 그의 파쇄액, 조직 또는 그의 파쇄액, 세포 배양 상청, 혈청, 흉수, 복수 또는 안액 등을 반응시킨 후, 제2 항체를 반응시켜서 표지 물질에 따른 검출 반응을 행한다. 농도 기지의 항원을 단계적으로 희석해서 제작한 검량선으로부터, 피검 샘플 중의 항원 농도를 산출한다.

샌드위치 ELISA법에 사용하는 항체로서는, 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체 중 어느 것을 사용해도 된다. 또한, 항체 대신에 Fab, Fab' 또는 F(ab)₂ 등의 항체 단편을 사용해도 된다. 샌드위치 ELISA법에서 사용하는 2종류의 항체의 조합으로서는, 다른 에피토프를 인식하는 모노클로날 항체 또는 해당 항체 단편의 조합이어도 되고, 폴리클로날 항체와 모노클로날 항체 또는 그들의 항체 단편과의 조합이어도 된다.

형광 면역 측정법은 문헌[Monoclonal Antibodies-Principles and practice, Third edition, Academic Press(1996), 단일 클론 항체 실험 매뉴얼, 고단샤 사이언티픽(1987)] 등에 기재된 방법으로 측정한다. 형광 면역 측정법에서 사용하는 표지체로서는 공지[형광 항체법, 소프트 사이언스사(1983)]의 형광 표지를 사용할 수 있다. 예를 들어, FITC 또는 RITC 등을 사용한다.

발광 면역 측정법은 문헌[생물 발광과 화학 발광 임상 검사 42, 히로카와 쇼텐(1998)] 등에 기재된 방법으로 측정한다. 발광 면역 측정법에서 사용하는 표지체로서는 공지된 발광체 표지를 들 수 있고, 아크리디늄에스테르 또는 로핀 등을 사용한다.

웨스턴 블로팅법은 항원 또는 항원을 발현한 세포 등을 SDS(도데실황산나트륨)-PAGE(폴리아크릴아미드 겔)[Antibodies - A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory(1988)]로 분획한 후, 해당 겔을 폴리불화비닐리덴(PVDF)막 또는 니트로셀룰로오스막에 블로팅하고, 해당 막에 항원을 인식하는 항체 또는 해당 항체 단편을 반응시키고, 또한 FITC 등의 형광 물질, 퍼옥시다제 등의 효소 표지 또는 비오틴 표지 등을 실시한 항마우스 IgG 항체 또는 결합 단편을 반응시킨 후, 해당 표지를 가시화함으로써 측정한다. 일례를 이하에 나타낸다.

CADM3의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 발현하고 있는 세포나 조직을 용해하고, 환원 조건 하에서 레인당의 단백량으로서 0.1 내지 30㎍을 SDS-PAGE법에 의해 영동한다. 영동된 단백질을 PVDF막에 트랜스퍼하고, BSA-PBS에 실온에서 30분간 반응시켜 블로킹 조작을 행한다.

여기서 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 반응시키고, 0.05 내지 0.1%의 폴리옥시에틸렌소르비탄모노라우레이트(Tween-20)를 포함하는 PBS(이하, Tween-PBS라 표기한다)로 세정하고, 퍼옥시다제 표지한 염소 항마우스 IgG를 실온에서 2시간 반응시킨다.

Tween-PBS로 세정하고, ECL 웨스턴 블로팅 검출 시약(Western Blotting Detection Reagents)(아머샴사제) 등을 사용하여 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편이 결합된 밴드를 검출함으로써, CADM3의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 검출한다.

웨스턴 블로팅에서의 검출에 사용되는 항체 또는 해당 항체 단편으로서는, 천연형 입체 구조를 유지하고 있지 않은 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항체 또는 해당 항체 단편이 사용된다.

물리 화학적 방법은 예를 들어 항원인 CADM3과 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 결합시킴으로써 응집체를 형성시키고, 이 응집체를 검출함으로써 행한다. 이 밖에 물리 화학적 방법으로서, 모세관법, 일차원 면역 확산법, 면역 비탁법 또는 라텍스 면역 비탁법[임상 검사법 제요, 가네하라 슛판(1998)] 등을 사용할 수도 있다.

라텍스 면역 비탁법은 항체 또는 항원을 감작시킨 입경 0.1 내지 1㎛ 정도의 폴리스티렌 라텍스 등의 담체를 사용하여 대응하는 항원 또는 항체에 의해 항원 항체 반응을 일으키면, 반응액 내의 산란광은 증가하고 투과광은 감소한다. 이 변화를 흡광도 또는 적분구 탁도로서 검출함으로써 피검 샘플 중의 항원 농도 등을 측정한다.

CADM3이 발현하고 있는 세포의 검출 또는 측정은 공지된 면역학적 검출법을 사용할 수 있지만, 그 중에서도 면역 침강법, 면역 세포 염색법, 면역 조직 염색법 또는 형광 항체 염색법 등을 사용하는 것이 바람직하다.

면역 침강법은 CADM3을 발현한 세포 등을 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편과 반응시킨 후, 단백질 G-세파로스 등의 이뮤노글로불린에 특이적인 결합능을 갖는 담체를 첨가해서 항원 항체 복합체를 침강시킨다. 또는 이하와 같은 방법에 의해서도 행할 수 있다.

ELISA용 96웰 플레이트에 상술한 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편을 고상화한 후, BSA-PBS에 의해 블로킹한다. 항체가 예를 들어 하이브리도마 배양 상청 등의 정제되어 있지 않은 상태인 경우에는, 항마우스 이뮤노글로불린, 항래트 이뮤노글로불린, 단백질-A 또는 단백질-G 등을 미리 ELISA용 96웰 플레이트에 고상화하고, BSA-PBS로 블로킹한 후, 하이브리도마 배양 상청을 분주해서 결합시킨다.

이어서, BSA-PBS를 버리고 PBS로 잘 세정한 후, 인간 CADM3을 발현하고 있는 세포나 조직의 용해액을 반응시킨다. 잘 세정한 후의 플레이트로부터 면역 침강물을 SDS-PAGE용 샘플 버퍼로 추출하고, 상기 웨스턴 블로팅에 의해 검출한다.

면역 세포 염색법 또는 면역 조직 염색법은 항원을 발현한 세포 또는 조직 등을 경우에 따라서는 항체의 통과성을 좋게 하기 위해서 계면 활성제나 메탄올 등으로 처리한 후, 본 발명의 항체와 반응시키고, 또한 FITC 등의 형광 표지, 퍼옥시다제 등의 효소 표지 또는 비오틴 표지 등을 실시한 항이뮤노글로불린 항체 또는 그의 결합 단편과 반응시킨 후, 해당 표지를 가시화하고, 현미경으로 관찰하는 방법이다.

또한, 형광 표지의 항체와 세포를 반응시켜서 플로우 사이토미터로 해석하는 형광 항체 염색법[Monoclonal Antibodies-Principles and practice, Third edition, Academic Press(1996), 단일 클론 항체 실험 매뉴얼, 고단샤 사이언티픽(1987)]에 의해 검출을 행할 수 있다. 특히, 본 발명의 항체 또는 해당 항체 단편은 형광 항체 염색법에 의해 천연형 입체 구조를 유지해서 발현하고 있는 세포를 검출할 수 있다.

또한, 형광 항체 염색법 중 FMAT8100HTS 시스템(어플라이드 바이오시스템사제) 등을 사용한 경우에는, 형성된 항체-항원 복합체와, 항체-항원 복합체의 형성에 관여하고 있지 않은 유리된 항체 또는 항원을 분리하지 않고, 항원량 또는 항체량을 측정할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예

[실시예 1] 항CADM3 항체의 취득

(1) 알파카 항체 라이브러리에서의 항체의 취득

후술하는 실시예 4에서 제작한 hCADM3-FLAG_Fc 및 mCADM3-FLAG_Fc를 면역원으로 하여, 첫회는 TiterMax(TiterMax사제), 2 내지 5회째는 불완전 컴플리트 아쥬반트(BD사제)와의 에멀션을 제작하고, 알파카에 면역했다.

면역된 알파카의 혈액(50mL)으로부터 림프구(2×10⁷ 세포)를 채취하고, 얻어진 세포로부터 RNA IsoPlus(TAKARA사제)를 사용하여 RNA를 추출했다. 또한, SuperScript(등록상표) III First-Strand Synthesis System for RT-PC(Invitrogen사제)를 사용한 역전사 반응에 의해 cDNA를 합성 후, 알파카 IgG2(짧은 힌지-중쇄 항체; Short hinge-heavy chain antibody), IgG3(긴 힌지-중쇄 항체; Long hinge-heavy chain antibody)에 특이적인 프라이머를 사용하여 VHH 유전자의 증폭을 행하였다. VHH 유전자 단편을 파지미드 벡터 pKSTV-02(Miyazaki N., et al., J. Biochem., 158(3), 205-215, 2015)에 삽입하고, MicroPulser 일렉트로포레이터(BioRad사제)를 사용한 일렉트로포레이션에 의해 대장균 TG1을 형질 전환했다.

얻어진 형질 전환체에 M13KO7 헬퍼 파지(Invitrogen사제)를 감염시킴으로써, VHH 유전자가 라이브러리화된 알파카 항체 M13 파지 라이브러리를 얻었다.

이 알파카 항체 M13 파지 라이브러리를 사용하여, 하기 바이오패닝의 방법을 사용하여 항CADM3 항체를 취득했다. 이뮤노 튜브에 후술하는 실시예 4의 hCADM3-GST를 고상화하고, 0.5% BSA를 사용하여 블로킹했다. 해당 튜브에 알파카 항체 M13 파지 라이브러리를 실온 하에서 1시간 반응시키고, PBS-T로 세정 후에 0.1mol/L의 글리신-염산 완충액(Gly-HCl)(pH2.7)으로 파지를 용출했다. 용출액은 트리스히드록시메틸아미노메탄-염산 완충액(트리스-HCl)(pH9.1)을 첨가해서 중화했다. 용출된 파지는 대장균 TG1에 감염 후, 파지를 증폭했다.

그 후, 이뮤노 튜브에 고상화한 mCADM3-GST와 반응시키고, 세정 및 용출을 실시했다. 또한, 이뮤노 튜브에 고상화한 hCADM3-GST와 반응시키고, 세정 및 용출을 실시하고, hCADM3-GST 및 mCADM3-GST에 특이적으로 결합하는 VHH를 제시한 파지를 농축했다. 농축된 파지를 단클론화하고, ELISA로 hCADM3-GST 및 mCADM3-GST에 대한 결합성을 갖는 클론을 선택했다.

ELISA에서는 MAXISORP(NUNC사제)에 hCADM3-GST 및 mCADM3-GST를 고상화(50ng/50μL)하고, 0.5% BSA를 사용하여 블로킹했다. 각 웰에 각각의 파지 클론을 첨가하고, 실온 하에서 1시간 반응시킨 후, 각 웰을 PBS-T로 5회 세정했다. 이어서, 비오틴화 항M13 파지 항체(Abcam사제)와 서양 고추냉이 퍼옥시다제로 표지된 스트렙트아비딘(Vector사제)을 각 웰에 50μL 첨가하고, 실온 하 1시간 인큐베이트했다.

마이크로플레이트를 PBS-T로 세정 후, 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB) 발색 기질액(CALBIOCHEM사제)을 각 웰에 더하여, 실온 하에서 인큐베이트했다. 각 웰에 1mol/L의 염산을 첨가해서 발색 반응을 멈추고, 파장 450㎚(참조 파장 570㎚)에서의 흡광도를 마이크로플레이트 리더로 측정했다.

hCADM3-GST 및 mCADM3-GST에 결합한 클론에 대해서 서열 해석을 행하여, 항CADM3 VHH 항체 iCADM3_3R1-L5, iCADM3_3R1-L8, iCADM3_3R1-L10 및 iCADM3_3R1-L11을 취득했다. 각종 항CADM3 항체의 VHH를 코딩하는 염기 서열 및 해당 염기 서열로부터 추정되는 아미노산 서열을 표 1에 나타낸다.

[표 1]

(2) 인간 항체 파지 라이브러리에서의 항체의 취득

인간 PBMC 유래의 cDNA로부터, PCR로 VH 유전자 단편 및 VL 유전자 단편을 증폭시켰다. VH 유전자 단편 및 VL 유전자 단편을 파지미드 벡터 pCANTAB 5E(Amersham Pharmacia사제)에 각각 삽입하고, 대장균 TG1(Lucigen사제)을 형질 전환해서 플라스미드를 얻었다. 얻어진 플라스미드를 M13KO7 헬퍼 파지(Invitrogen사제)에 감염시킴으로써, VH 유전자 및 VL 유전자가 라이브러리화된 인간 항체 M13 파지 라이브러리를 얻었다.

이 인간 항체 M13 파지 라이브러리를 사용하여, 하기 파지 디스플레이법을 사용하여 항CADM3 모노클로날 항체를 취득했다. MAXISORP STARTUBE(NUNC사제)에 후술하는 실시예 4의 hCADM3-FLAG_Fc, rCADM3-FLAG_Fc 또는 mCADM3-FLAG_Fc를 고상화하고, 슈퍼블록 블로킹 버퍼(SuperBlock Blocking Buffer)(Thermo사제)를 사용하여 블로킹했다.

해당 튜브에 인간 항체 M13 파지 라이브러리를 실온 하에서 1시간 반응시키고, PBS 또는 PBS-T로 세정 후에 0.1mol/L의 Gly-HCl(pH2.2)로 파지를 용출했다. 용출액은 트리스-HCl(pH8.5)을 첨가해서 중화했다. 용출된 파지는 TG1적격 세포에 감염시켜서 파지를 증폭했다.

그 후, 다시 MAXISORP STARTUBE에 고상화한 hCADM3-FLAG_Fc, rCADM3-FLAG_Fc 또는 mCADM3-FLAG_Fc와 반응시키고, 세정 및 용출을 실시했다. 이 조작을 반복하여, hCADM3-FLAG_Fc, rCADM3-FLAG_Fc 및 mCADM3-FLAG_Fc에 특이적으로 결합하는 scFv를 제시한 파지를 농축했다. 농축된 파지를 단클론화하고, ELISA로 CADM3에 대한 결합성을 갖는 클론을 선택했다.

ELISA는 hCADM3-FLAG_Fc, rCADM3-FLAG_Fc 및 mCADM3-FLAG_Fc를 MAXISORP(NUNC사제)에 각각 고상화하고, 슈퍼블록 블로킹 버퍼(Thermo사제)를 사용하여 블로킹했다. 네거티브 컨트롤로서, Fc를 고상화한 플레이트도 준비했다.

각 웰에 각각의 파지 클론을 첨가하고, 실온 하에서 30분간 반응시킨 후, 각 웰을 PBS-T로 세정했다. 이어서, 서양 고추냉이 퍼옥시다제로 표지된 항M13 항체(GE 헬스케어사제)를 10% 블록에이스(다이닛본 세이야꾸 가부시키가이샤제) 함유 PBS-T로 희석한 용액을 각 웰에 더하고, 실온 하 30분간 인큐베이트했다.

마이크로플레이트를, PBS-T로 3회 세정 후, TMB 발색 기질액(DAKO사제)을 첨가하고, 실온 하에서 인큐베이트했다. 각 웰에 0.5mol/L의 황산을 첨가해서 발색 반응을 멈추고, 파장 450㎚(참조 파장 570㎚)에서의 흡광도를 마이크로플레이트 리더로 측정했다.

CADM3-FLAG_Fc를 사용한 패닝으로부터 얻어진 클론에 대해서 서열 해석을 행하여, CADM301, CADM3102, CADM3219, CADM3301, CADM3309, CADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349, CADM3351, CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448, CADM3458 또는 CADM3501을 코딩하는 파지미드 벡터를 각각 취득했다.

각종 항CADM3 항체의 VH 또는 VL을 코딩하는 염기 서열 및 해당 염기 서열로부터 추정되는 아미노산 서열을 표 2A 및 표 2B에 나타낸다.

[표 2A]

[표 2B]

[실시예 2] 항체 제작

(1) CADM3 VHH-hG4PE(R409K) 발현 벡터의 구축

EU 넘버링 S228P, L235E 및 R409K의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 인간 IgG4 항체(이하, IgG4 개변체라 약기하는 경우도 있다)의 Fc 영역에, 각 항CADM3 VHH 항체를 결합시킨 VHH-Fc 항체를 제작하기 위해서 발현 벡터를 구축했다.

iCADM3_3R1-L5, iCADM3_3R1-L8, iCADM3_3R1-L10 및 iCADM3_3R1-L11의 VHH의 합성 유전자를 주형으로 하여, PCR에 의해 VHH 영역의 유전자 단편을 증폭했다. 중쇄 정상 영역의 합성 유전자를 주형으로 하여, PCR에 의해 힌지-CH2-CH3 영역의 유전자 단편을 증폭했다. 얻어진 유전자 단편을 pCI 벡터(Promega사제)에 삽입하고, pCI_iCADM3_3R1-L5 VHH-hG4PE(R409K) 벡터를 제작했다.

마찬가지 방법으로, 표 1에 기재한 각종 항CADM3 항체의 VHH 영역의 유전자 단편을 삽입한 항체 발현 벡터를 제작하고, 각각 pCI_iCADM3_3R1-L8 VHH-hG4PE(R409K) 벡터, pCI_iCADM3_3R1-L10 VHH-hG4PE(R409K) 벡터 및 pCI_iCADM3_3R1-L11 VHH-hG4PE(R409K) 벡터라고 명명했다.

(2) CADM3 scFv-hG4PE(R409K) 발현 벡터의 구축

항CADM3 항체의 항체 가변 영역을 인간 IgG4 개변체의 Fc 영역에 결합시킨 scFv-Fc 항체를 제작하기 위해서 발현 벡터를 구축했다. 실시예 1의 (2)에서 얻어진 CADM301을 코딩하는 파지미드 벡터를 주형으로 하여, PCR에 의해 scFv 영역의 유전자 단편을 증폭했다. 중쇄 정상 영역의 합성 유전자를 주형으로 하여, PCR에 의해 힌지-CH2-CH3 영역의 유전자 단편을 증폭했다.

얻어진 유전자 단편을 N5 벡터(IDEC사제)에 삽입하고, N5_CADM301 scFv-hG4PE 벡터를 제작했다. 마찬가지 방법으로, 실시예 1의 (2)에서 얻어진 CADM3102를 코딩하는 파지미드 벡터를 주형으로 하여, N5_CADM3102 scFv-hG4PE 벡터를 제작했다.

(3) CADM3 hG4PE(R409K) 발현 벡터의 구축

실시예 1의 (2)에서 얻어진 CADM3219, CADM3301, CADM3309, CADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349, CADM3351, CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448, CADM3458 또는 CADM3501을 코딩하는 파지미드 벡터를 각각 주형으로 하여, PCR에 의해 가변 영역의 각 유전자 단편을 증폭했다. 얻어진 각 유전자 단편을 pCI 벡터(Promega사제)에 삽입하고, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3219, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3301, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3309, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3312, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3314, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3316, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3349, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3351, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3402, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3404, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3432, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3448, pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3458 및 pCI-hKG4PE(R409K)_CADM3501을 각각 제작했다.

(4) pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-CADM3 VHH 벡터의 구축

항AVM-IgG4 항체의 C말단측에 2개의 항CADM3 VHH 항체를 결합시킨 항AVM-IgG4-CADM3 VHH 이중특이적 항체를 제작하기 위해서 발현 벡터를 구축했다. 항AVM 항체의 가변 영역을 주형으로 하여 VL 및 VH 영역의 유전자 단편을, 합성 유전자를 주형으로 하여 CL 및 CH1-힌지-CH2-CH3-링커 영역의 유전자 단편을 PCR에 의해 증폭했다. 또한, iCADM3_3R1-L5, iCADM3_3R1-L8, iCADM3_3R1-L10 및 iCADM3_3R1-L11의 VHH의 합성 유전자를 주형으로 하여, PCR에 의해 VHH 영역의 유전자 단편을 증폭했다.

얻어진 유전자 단편을 pCI 벡터(Promega사제)에 삽입하고, pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L5 VHH 벡터, pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L8 VHH 벡터, pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L10 VHH 벡터 및 pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L11 VHH 벡터를 제작했다.

항체 발현 벡터의 명칭과 항체의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 염기 서열 및 해당 염기 서열로부터 추정되는 아미노산 서열을 표 3에 나타낸다.

[표 3]

(5) 항아베르멕틴(Avermectin) 항체의 발현 벡터 및 pCI-AVM-hLG4PE(R409K)_AVMscFv5 벡터의 구축

네거티브 컨트롤 항체로서 키메라 항아베르멕틴(AVM) 항체를 제작했다. SD래트에 AVM을 면역하고, 통상의 방법으로 항AVM 항체 산생 하이브리도마를 수립했다. 해당 하이브리도마 유래의 가변 영역을 주형으로 하여, PCR에 의해 VL 및 VH의 유전자 단편을 증폭했다. 합성한 인간 IgG의 람다쇄 정상 영역을 코딩하는 염기 서열 및 증폭한 가변 영역을 N5KG4PE 벡터(국제공개 제2002/088186호에 기재)에 삽입하고, 발현 벡터 N5LG4PE_AVM을 제작했다.

합성 유전자를 주형으로 하여, CL 및 CH1-힌지-CH2-CH3-링커 영역의 유전자 단편을 PCR에 의해 증폭했다. 또한, N5LG4PE_AVM을 주형으로 하여, PCR에 의해 AVM의 VH, VL의 유전자 단편을 증폭했다. 얻어진 유전자 단편을 pCI 벡터(Promega사제)에 삽입하고, pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-AVMscFv5 벡터를 제작했다.

(6) 항체의 제조

항체 발현 플라스미드 벡터를 Expi293(상표) Expression System(Thermo Fisher Scientific사제)을 사용하여 Expi293F 세포(Thermo Fisher Scientific사제)에 도입해서 배양하고, 일과성 발현계로 항체를 발현시켰다. 벡터 도입 3 내지 4일 후에 배양 상청을 회수하고, 구멍 직경 0.22㎛의 멤브레인 필터(머크 밀리포아사제)로 여과했다. 이 배양 상청 중의 항체 단백질을 단백질 A 수지(MabSelect SuRe, GE 헬스케어 바이오사이언스사제)를 사용하여 어피니티 정제했다.

세정액으로서 인산 완충액을 사용했다. 단백질 A에 흡착시킨 단백질을 20mmol/L의 시트르산나트륨 및 50mmol/L의 NaCl 완충액(pH3.4)에 의해 용출하고, 1mol/L의 트리스-HCl(pH8.0)을 포함하는 튜브로 회수했다. 이어서, 아미콘 울트라(머크 밀리포아사제)를 사용한 한외 여과와 NAP 칼럼(GE 헬스케어 바이오사이언스사제)에 의해 용출액의 용매를 PBS로 치환 후, 구멍 직경 0.22㎛의 멤브레인 필터(머크 밀리포아사제)로 여과 멸균을 행하였다. 항체 용액의 280㎚의 흡광도를 측정하고, 정제 항체의 농도를 산출했다.

실시예 2 (1)에서 제작한 벡터를 발현시켜서 얻은 항CADM3 VHH-Fc 항체를, 각각 iCADM3_3R1-L5 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L8 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L10 VHH-hG4PE(R409K) 및 iCADM3_3R1-L11 VHH-hG4PE(R409K)라 명명했다.

실시예 2 (2)에서 제작한 벡터를 발현시켜서 얻은 항CADM3 scFv-Fc 항체를, 각각 CADM301 scFv-hG4PE 및 CADM3102 scFv-hG4PE라 명명했다.

실시예 2 (3)에서 제작한 벡터를 발현시켜서 얻은 항CADM3 항체를 CADM3219-hG4PE, CADM3301-hG4PE, CADM3309-hG4PE, CADM3312-hG4PE, CADM3314-hG4PE, CADM3316-hG4PE, CADM3349-hG4PE, CADM3351-hG4PE, CADM3402-hG4PE, CADM3404-hG4PE, CADM3432-hG4PE, CADM3448-hG4PE, CADM3458-hG4PE 및 CADM3501-hG4PE라 각각 명명했다.

실시예 2 (4)에서 제작한 pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L5 VHH 벡터, pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L8 VHH 벡터, pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L10 VHH 벡터 및 pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L11 VHH 벡터를 발현시켜서 얻은 항AVM-IgG4-CADM3 VHH 이중특이적 항체를, 각각 AVM IgG4PE(R409K)_iCADM3_3R1-L5 dVHH, AVM IgG4PE(R409K)_iCADM3_3R1-L8 dVHH, AVM IgG4PE(R409K)_iCADM3_3R1-L10 dVHH 및 AVM IgG4PE(R409K)_iCADM3_3R1-L11 dVHH라 명명했다.

또한, 실시예 2 (5)에서 제작한 N5LG4PE_AVM을 발현시켜서 얻은 항AVM-IgG4 항체와 실시예 2 (4)에서 제작한 pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-AVMscFv5 벡터를 발현시켜서 얻은 항AVM-IgG4-AVM dscFv 이중특이적 항체를, 각각 항AVM 항체, AVM IgG4PE(R409K)_AVM dscFv5라 명명했다.

[실시예 3] CADM3 발현 세포에 대한 반응성 해석

인간 CADM3을 코딩하는 염기 서열을 서열 번호 51에, 해당 염기 서열로부터 추정되는 아미노산 서열을 서열 번호 52에, 마우스 CADM3을 코딩하는 염기 서열을 서열 번호 53에, 해당 염기 서열로부터 추정되는 아미노산 서열을 서열 번호 54에, 원숭이 CADM3을 코딩하는 염기 서열을 서열 번호 55에, 해당 염기 서열로부터 추정되는 아미노산 서열을 서열 번호 56에 나타낸다.

인간 CADM3, 마우스 CADM3 및 원숭이 CADM3의 전체 길이 유전자 서열을 합성하고, 각각의 유전자 서열을 pEF6/V5-His(Thermo Fisher Scientific사제) 벡터의 BamHI-NotI 사이트에 삽입함으로써, 각종 CADM3의 막 발현용 플라스미드 벡터 pEF6_human CADM3, pEF6_mouse CADM3 및 pEF6_cynomolgus CADM3을 제작했다.

각종 막형 CADM3 항원 발현 벡터를 FreeStyle(상표) 293 Expression System(Thermo Fisher Scientific사제)을 사용하여 Expi293F 세포에 도입해서 배양하고, 일과성 발현계로 막형 항원을 발현시켰다. 상기의 세포를 사용하여, 이하의 수순에 따라 형광 활성화 세포 분류(fluoresence activated cell sorting)(FACS)법에 의해, 실시예 2로 제작한 항체의 CADM3 발현 세포에 대한 반응성을 해석했다.

Expi293F 세포, 인간 CADM3/Expi293F 세포, 마우스 CADM3/Expi293F 세포 및 원숭이 CADM3/Expi293F 세포를 각각 0.1% NaN₃, 1% FBS 함유 PBS의 염색 완충제(Staining Buffer)(SB)에 현탁하고, 96구멍 둥근 바닥 플레이트(벡톤 디킨슨사제)에 분주했다.

원심 분리(2000rpm, 4℃, 2분간) 후, 상청을 제거하고, 펠릿에 실시예 2에서 얻은 10㎍/mL의 각 항체를 첨가해서 현탁한 후, 빙온 하에서 30분간 정치했다. 또한 원심 분리(2000rpm, 4℃, 2분간)해서 상청을 제거하고, 펠릿을 SB로 세정 후에, 1㎍/mL의 RPE 형광 표지 염소 항인간 항체(Southern Biotech사제)를 첨가하고, 빙온 하 30분간 인큐베이트했다.

SB로 세정 후, SB에 현탁하고, 플로우 사이토미터 FACS CANTO II(벡톤 디킨슨사제)로 각 세포의 형광 강도를 측정했다. 또한, 네거티브 컨트롤로서 10㎍/mL의 항AVM 항체를 사용했다.

검출 결과를 해석하고, 기하 평균(geometric mean)을 이용해서 평균 형광 강도(mean fluorescence intensity; MFI)를 산출했다. 또한, 각 항체 10㎍/mL의 농도일 때의 MFI에 대해서, 인간 CADM3/Expi293F 세포와 Expi293F 세포(친주)의 비율(평균 형광 강도비)을 산출했다.

마찬가지 수순으로 원숭이 CADM3/Expi293F 세포 및 마우스 CADM3/Expi293F 세포에 대해서도 Expi293F 세포(친주)에 대한 평균 형광 강도비를 산출하고, 결과를 표 4에 나타낸다.

[표 4]

표 4에 나타낸 바와 같이, 모든 항CADM3 항체에서 평균 형광 강도비는 네거티브 컨트롤인 항AVM 항체에 대하여 증가하고 있고, 인간 CADM3/Expi293F 세포, 마우스 CADM3/Expi293F 세포 및 원숭이 CADM3/Expi293F 세포에 반응성을 나타냈다(단, 일부의 항CADM3 항체에 대해서는 원숭이 CADM3/Expi293F 세포에 대한 반응성은 미평가). 따라서, 항CADM3 항체는 인간 CADM3, 마우스 CADM3 또는 원숭이 CADM3을 인식하고, 결합하는 것이 밝혀졌다.

또한, AVM IgG4PE(R409K)_iCADM3_3R1-L5 dVHH, AVM IgG4PE(R409K)_iCADM3_3R1-L8 dVHH, AVM IgG4PE(R409K)_iCADM3_3R1-L10 dVHH 및 AVM IgG4PE(R409K)_iCADM3_3R1-L11 dVHH에 대해서도, 마찬가지 수순으로 Expi293F 세포, 인간 CADM3/Expi293F 세포 및 마우스 CADM3/Expi293F 세포에 대하여 반응성을 해석한 결과를 표 5에 나타낸다.

[표 5]

표 5에 나타낸 바와 같이, 모든 항체에서 평균 형광 강도비는 네거티브 컨트롤인 항AVM 항체에 대하여 증가하고 있어, 인간 CADM3/Expi293F 세포 및 마우스 CADM3/Expi293F 세포에 반응하는 것이 명확해졌다.

[실시예 4] 가용형 CADM3 항원의 제작

(1) FLAG_Fc가 결합한 CADM3의 세포 외 도메인 단백질의 제작

인간 CADM3, 마우스 CADM3 및 래트 CADM3의 가용성 항원으로서, C말단에 FLAG_Fc가 부가된 CADM3의 세포 외 도메인 단백질을 이하에 기재하는 방법으로 제작했다.

인간 CADM3의 세포 외 도메인의 합성 유전자 및 FLAG_Fc의 합성 유전자를 INPEP4(IDEC사제) 벡터에 삽입함으로써, C말단측에 FLAG_Fc가 부가된 인간 CADM3의 세포 외 도메인을 발현하는 플라스미드 벡터 INPEP4-hCADM3-FLAG_Fc를 제작했다. hCADM3-FLAG_Fc를 코딩하는 염기 서열을 서열 번호 57에, 해당 염기 서열로부터 추정되는 아미노산 서열을 서열 번호 58에 나타낸다.

마우스 CADM3 및 래트 CADM3에 대해서도, 마찬가지 방법으로 플라스미드 벡터 INPEP4-mCADM3-FLAG_Fc 및 INPEP4-rCADM3-FLAG_Fc를 제작했다. mCADM3-FLAG_Fc를 코딩하는 염기 서열을 서열 번호 59에, 해당 염기 서열로부터 추정되는 아미노산 서열을 서열 번호 60에, rCADM3-FLAG_Fc를 코딩하는 염기 서열을 서열 번호 61에, 해당 염기 서열로부터 추정되는 아미노산 서열을 서열 번호 62에 나타낸다.

INPEP4-hCADM3-FLAG_Fc, INPEP4-mCADM3-FLAG_Fc 및 INPEP4-rCADM3-FLAG_Fc를 Expi293(상표) Expression System(Thermo Fisher Scientific사제)을 사용하여 Expi293F 세포에 도입해서 배양하고, 일과성 발현계로 단백질을 발현시키고, 실시예 2와 마찬가지 방법으로 정제했다. 용액 중의 정제된 인간, 마우스 및 래트 CADM3-FLAG_Fc 단백질의 농도는 280㎚의 흡광도에 의해 측정했다.

(2) GST가 결합한 CADM3의 세포 외 도메인 단백질의 제작

인간 CADM3 및 마우스 CADM3의 가용성 항원으로서, C말단에 GST가 부가된 CADM3의 세포 외 도메인 단백질을 이하에 기재하는 방법으로 제작했다.

인간 및 마우스 CADM3의 세포 외 도메인의 합성 유전자 및 GST의 합성 유전자를 N5 벡터(IDEC사제)에 삽입함으로써, C말단측에 GST가 부가된 인간 및 마우스 CADM3의 세포 외 도메인을 발현하는 플라스미드 벡터 N5-hCADM3-GST 및 N5-mCADM3-GST를 제작했다.

hCADM3-GST를 코딩하는 염기 서열을 서열 번호 63에, 해당 염기 서열로부터 추정되는 아미노산 서열을 서열 번호 64에 나타내고, mCADM3-GST를 코딩하는 염기 서열을 서열 번호 65에, 해당 염기 서열로부터 추정되는 아미노산 서열을 서열 번호 66에 나타낸다.

N5-hCADM3-GST 및 N5-mCADM3-GST를 Expi293(상표) Expression System(Thermo Fisher Scientific사제)을 사용하여 Expi293F 세포에 도입해서 배양하고, 일과성 발현계로 단백질을 발현시켰다. 벡터 도입 3 내지 4일 후에 배양 상청을 회수하고, 구멍 직경 0.22㎛의 멤브레인 필터(머크 밀리포아사제)로 여과했다.

이 배양 상청 중의 단백질을 글루타티온 세파로스(Glutathione Sepharose) 4B(GE 헬스케어 바이오사이언스사제)를 사용하여 어피니티 정제했다. 세정액으로서 인산 완충액을 사용했다. 글루타티온 세파로스 4B에 흡착시킨 단백질을, 50mmol/L의 트리스-HCl 및 10mmol/L의 감소된 글루타티온(reduced glutatione)(pH8.0)에 의해 용출했다.

이어서, 아미콘 울트라(머크 밀리포아사제)를 사용한 한외 여과와 NAP칼럼(GE 헬스케어 바이오사이언스사제)에 의해, 용액 중의 용매를 PBS로 치환했다. 얻어진 용액을 구멍 직경 0.22㎛의 멤브레인 필터(머크 밀리포아사제)로 여과 멸균했다. 용액 중의 정제된 인간 및 마우스 CADM3-GST 단백질의 농도는 280㎚의 흡광도에 의해 측정했다.

[실시예 5] 표면 프라즈몬 공명 검출에 의한 CADM3에 대한 결합성의 평가

실시예 2에서 제작한 항CADM3 항체의 인간 CADM3 및 마우스 CADM3에 대한 어피니티를 Biacore T-100(GE Healthcare)을 사용하여 측정했다. CM5 센서 칩 상에 인간 항체 포획(Human antibody Capture) 키트를 사용하여 각 항체를 고정화하고, 실시예 4에서 제작한 hCADM3-GST 및 mCADM3-GST를 애널라이트로 하여 결합능을 평가했다.

얻어진 센서 그램에 대해서 BIA 평가 소프트웨어(evaluation software)에 의해 해석을 행함으로써 해리 상수(KD값)를 산출했다. 그 결과, 실시예 2에서 제작한 모든 항CADM3 항체가 인간 CADM3 및 마우스 CADM3에 친화성을 나타냈다.

[실시예 6] 마우스 뇌 이행성 평가

(1) 항체량 측정

마우스에 각 항체를 9㎎/㎏체중으로 꼬리 정맥(i.v.) 투여하고, 3일 후에 채혈을 행하였다. 채혈과 같은 날에 마취 하에서 전신 관류 후, 뇌 조직을 회수해서 그 무게를 측정했다. 또한, 회수한 뇌 조직에 버퍼 용액을 첨가하여 균질화하고, 원심 분리 후, 상청에 용출된 항체 용액을 회수했다. 그 용량을 측정함과 함께 항체 농도를 AlphaLISA(PerkinElmer사제)에 의해 측정하고, 단위 뇌 중량당의 항체량을 산출했다. 또한, 표준 곡선은 키트 부속의 항체를 사용하여 제작했다.

항체 투여 3일 후의 혈청 중 항체 농도를 도 1의 (A), 단위 뇌 중량당의 뇌 조직 중의 항체량을 도 1의 (B)에 나타낸다. 도 1의 (A)에 나타내는 바와 같이, 항CADM3 VHH-Fc 항체는 네거티브 컨트롤(항AVM 항체)과 비교하여, 항체 투여 3일 후의 혈청 중 농도에 차는 없었다. 반면에, 도 1의 (B)과 같이 항CADM3 VHH-Fc 항체; iCADM3_3R1-L5 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L8 VHH-hG4PE(R409K) 및 iCADM3_3R1-L10 VHH-hG4PE(R409K)에서는 뇌 내의 항체량이 네거티브 컨트롤과 비교하여 약 10배로 향상되는 것이 나타났다.

또한, 상기와는 다른 조건에서 실시한 시험의 방법과 그 결과를 나타낸다.

네거티브 컨트롤 항체(항AVM 항체), 항CADM3 VHH-Fc 항체; iCADM3_3R1-L8, 항CADM3 항체; CADM3312 hG4PE(R409K), CADM3402 hG4PE(R409K), CADM3501 hG4PE(R409K)에 대해서, 5㎎/㎏으로 꼬리 정맥(i.v.) 투여하고, 7일 후에 채혈을 행하였다. 채혈 후에 마취 하에서 전신 관류 후, 뇌 조직을 회수해서 그 무게를 측정했다. 회수한 뇌 조직에 버퍼 용액을 첨가하여 균질화하고, 원심 분리 후, 상청에 용출된 항체 용액을 회수했다. 그 용량을 측정함과 함께 항체 농도를 AlphaLISA(PerkinElmer사제)에 의해 측정하고, 단위 뇌 중량당의 항체량을 산출했다. 또한, 표준 곡선은 각 항체를 사용하여 제작했다.

항체 투여 7일 후의 혈청 중 항체 농도를 도 2의 (A), 단위 뇌 중량당의 뇌 조직 중의 항체량을 도 2의 (B)에 나타낸다. 도 2의 (A)에 나타내는 바와 같이, CADM3 VHH-Fc 항체; iCADM3_3R1-L8, 항CADM3 항체; CADM3312 hG4PE(R409K), CADM3402 hG4PE(R409K) 및 CADM3501 hG4PE(R409K) 항체는 네거티브 컨트롤(항AVM 항체)과 비교하여, 항체 투여 7일 후의 혈청 중 농도에 현저한 차는 없었다. 반면에, 도 2의 (B)에 나타내는 바와 같이 항CADM3 VHH-Fc 항체; iCADM3_3R1-L8, 그리고 항CADM3 항체; CADM3312 hG4PE(R409K), CADM3402 hG4PE(R409K) 및 CADM3501 hG4PE(R409K)에서는 항AVM 항체에 비하여 뇌 내 항체량이 증가했다. 따라서 뇌 내 항체량을 높이는 효과가 확인되었다.

이어서, 상기와는 다른 조건에서 실시한 시험의 방법과 그 결과를 나타낸다.

마우스에 각 항체를 35㎚ol/㎏체중으로 꼬리 정맥(i.v.) 투여하고, 7일 후에 채혈을 행하였다. 채혈과 같은 날에 마취 하에서 전신 관류 후, 뇌 조직을 회수해서 그 무게를 측정했다. 또한, 회수한 뇌 조직에 버퍼 용액을 첨가하여 균질화하고, 원심 분리 후, 상청에 용출된 항체 용액을 회수했다. 그 용량을 측정함과 함께 항체 농도를 AlphaLISA(PerkinElmer사제)에 의해 측정하고, 단위 뇌 중량당의 항체량을 산출했다. 항체 농도는 몰 농도로부터, 모노클로날 항체의 분자량(150kDa)으로 환산한 값으로 나타냈다. 또한, 표준 곡선은 각 항체를 사용하여 제작했다.

AVM IgG4PE(R409K)_AVM dscFv5와 AVM IgG4PE(R409K)_iCADM3_3R1-L8 dVHH의 혈청 중 항체 농도를 도 3의 (A), 뇌 조직 중의 단위 뇌 중량당의 항체량을 도 3의 (B)에 나타낸다.

도 3의 (B)에 나타내는 바와 같이, 이중특이적 항체의 네거티브 컨트롤인 항AVM-IgG4-AVM dscFv 이중특이적 항체; AVM IgG4PE(R409K)_AVM dscFv5와 비교하여, 항AVM-IgG4-CADM3 VHH 이중특이적 항체; AVM IgG4PE(R409K)_iCADM3_3R1-L8 dVHH에서는 뇌 내의 항체량이 증가하는 것이 나타났다. 이상으로, CADM3에 결합하는 이중특이적 항체는 CADM3에 결합하지 않는 이중특이적 항체보다, 뇌 내의 항체량을 높일 수 있는 것이 나타났다.

(2) 이미징 해석

항CADM3 VHH-Fc 항체 및 네거티브 컨트롤(항AVM 항체)에 대해서, 알렉사 플루오르R 488 프로테인 라벨링 키트(Molecular Probes사제)로 표지를 행하였다. 표지 후의 각 항체를 9㎎/㎏체중으로 마우스에 꼬리 정맥(i.v.) 투여하고, 9일 후에 채혈을 행하였다. 채혈 후에 마취 하에서 전신 관류 후, 뇌 조직을 회수하고, IVIS Spectrum(퍼킨엘머사제)으로 형광 강도를 측정했다.

항체 투여 9일 후의 뇌 이미징상을 도 4의 (A)에 나타낸다. 뇌중 형광량을 투여 항체의 형광 강도로 보정한 값의 대네거티브 컨트롤비를 도 4의 (B)에 나타낸다. 도 4의 (A) 및 (B)에 나타내는 바와 같이, 항CADM3 VHH-Fc 항체; iCADM3_3R1-L5 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L8 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L10 VHH-hG4PE(R409K) 및 iCADM3_3R1-L11 VHH-hG4PE(R409K)에서는 네거티브 컨트롤과 비교하여 뇌 내 항체량은 수배로 향상되어 있고, 항체의 분포는 뇌 내 전역에 걸쳐 있는 것이 나타났다.

네거티브 컨트롤 항체(항AVM 항체), 항CADM3 VHH-Fc 항체; iCADM3_3R1-L8, 그리고 항CADM3 항체; CADM3312 hG4PE(R409K), CADM3402 hG4PE(R409K), CADM3501 hG4PE(R409K)에 대해서, SAIVI 알렉사 플루오르 647 항체/단백질 1㎎-라벨링 키트(Labeling Kit)를 사용하여 형광 표지한 항체를 5㎎/㎏으로 꼬리 정맥(i.v.) 투여하고, 7일 후에 채혈을 행하였다. 채혈 후에 마취 하에서 전신 관류 후, 뇌 조직을 회수하고, IVIS Spectrum(퍼킨엘머사제)으로 형광 강도를 측정했다.

항체 투여 7일 후의 뇌 이미징상을 도 5에 도시한다. 네거티브 컨트롤의 투여 항체가 뇌의 중심부에 매우 조금 확인된(뇌의 중심부만 발색하고 있는) 것에 대해서, 어느 CADM3 항체에 있어서도 그 분포는 뇌 내 전역에 걸쳐 있는(뇌 내 전체가 발색하고 있는) 것이 나타났다. 또한, 흑백 화상에서는 항CADM3 VHH-Fc 항체; iCADM3_3R1-L8은 발색이 지나치게 강해서 전체적으로 희게 보이고 있지만, 이것은 네거티브 컨트롤의 도면의 발색하지 않고 희게 보이고 있는 것과는 다르다.

이어서, 항체 투여 7일 후의 뇌중 형광량을 투여 항체의 형광 강도로 보정한 값의 대네거티브 컨트롤비를 도 6에 나타낸다. 네거티브 컨트롤과 비교하여, 항CADM3 VHH-Fc 항체; iCADM3_3R1-L8, 그리고 항CADM3 항체; CADM3312 hG4PE(R409K), CADM3402 hG4PE(R409K) 및 CADM3501 hG4PE(R409K)에서 모두 뇌 내 항체량은 수배로 향상되었다.

[실시예 7] 인간화 항CADM3 항체의 제작

(1) iCADM3_3R1-L8 인간화 항체의 각종 VHH의 아미노산 서열의 설계

이하에 기재하는 방법으로, iCADM3_3R1-L8 인간화 항체의 각종 VHH의 아미노산 서열을 설계했다. VHH에 대해서, iCADM3_3R1-L8 항체의 FR의 아미노산 서열과, Kabat 외 [Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services(1991)]에 보고되어 있는 인간 FR 콘센서스 서열과의 상동성을 비교했다. 그 결과, GenBank 액세션 넘버 ACR16109.1이 iCADM3_3R1-L8 항체의 VHH의 FR의 아미노산 서열과 가장 상동성이 높았다. 따라서, ACR16109.1의 FR의 아미노산 서열의 적절한 위치에, 각각 서열 번호 8, 9 및 10으로 표현되는 iCADM3_3R1-L8 항체의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열을 이식한 아미노산 서열을 포함하는 iCADM3_3R1-L8_00 항체를 설계했다(서열 번호 177). iCADM3_3R1-L8_00 항체는, 선택한 인간 항체의 FR의 아미노산 서열에 알파카 항체 iCADM3_3R1-L8 항체 유래의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열만을 이식한 아미노산 서열을 포함하는 인간화 항체이다.

그러나, 일반적으로 인간화 항체를 제작하는 경우에는, 단순히 설치류, 토끼나 알파카 등의 동물 유래 항체의 CDR의 아미노산 서열을 인간 항체의 FR의 아미노산 서열에 이식하는 것 만으로는, 인간화 항체의 생물 활성이 저하되어버리는 경우가 많다. 이러한 결합 활성의 저하를 회피하기 위해서, CDR의 아미노산 서열의 이식과 함께, 인간 항체와 알파카 항체에서 다른 FR의 아미노산 잔기 중, 항체의 결합 활성에 영향을 준다고 생각되는 아미노산 잔기를 개변하는 것이 행해지고 있다.

그래서 본 실시예에 있어서도, 항체의 결합 활성에 영향을 준다고 생각되는 FR의 아미노산 잔기를 이하와 같이 해서 동정하고, 개변했다. iCADM3_3R1-L8_00 항체의 가변 영역의 삼차원 구조를 컴퓨터 모델링의 방법을 사용하여 구축했다.

삼차원 구조 좌표 제작 및 삼차원 구조의 표시에는, Discovery Studio(BIOVIA사)를 사용했다. 또한, iCADM3_3R1-L8 항체의 가변 영역의 삼차원 구조의 컴퓨터 모델도 마찬가지로 하여 구축했다. 또한, iCADM3_3R1-L8_00 항체의 VHH의 FR의 아미노산 서열 중에서 iCADM3_3R1-L8 항체와 다른 아미노산 잔기를, iCADM3_3R1-L8 항체의 동일한 부위에 존재하는 아미노산 잔기로 치환한 아미노산 서열을 제작하고, 마찬가지로 삼차원 구조 모델을 구축했다.

이들 제작한 iCADM3_3R1-L8 항체, iCADM3_3R1-L8_00 항체 및 개변체의 가변 영역의 삼차원 구조를 비교하여, 항체의 결합 활성에 영향을 준다고 예측되는 아미노산 잔기를 동정했다.

동정한 iCADM3_3R1-L8_00 항체의 아미노산 잔기 중 적어도 1개 이상의 아미노산 잔기를, iCADM3_3R1-L8 항체의 동일한 부위에 존재하는 아미노산 잔기로 치환하고, 여러가지 개변을 갖는 인간화 항체의 VHH를 설계했다.

구체적으로는 동정한 아미노산 잔기 중, 서열 번호 177로 표현되는 아미노산 서열의 6번째의 Gln으로부터 Glu, 27번째의 Phe로부터 Arg, 37번째의 Val로부터 Phe, 44번째의 Gly로부터 Glu, 45번째의 Leu로부터 Arg, 47번째의 Trp로부터 Phe, 49번째의 Ser으로부터 Ala, 79번째의 Leu로부터 Val 및 98번째의 Lys로부터 Ala로의 아미노산 잔기 치환에서 선택되는 적어도 하나의 아미노 잔기 치환을 포함하는 인간화 항체의 아미노산 서열을 제작하고, 여러가지 개변을 갖는 인간화 항체의 VHH를 설계했다.

구체적으로는, iCADM3_3R1-L8 인간화 항체의 VHH로서, iCADM3_3R1-L8_01(서열 번호 68), iCADM3_3R1-L8_02(서열 번호 70), iCADM3_3R1-L8_03(서열 번호 72), iCADM3_3R1-L8_04(서열 번호 74)를 설계했다. 각종 iCADM3_3R1-L8 인간화 항체의 VHH를 코딩하는 아미노산 서열을 표 6에 나타낸다.

(2) iCADM3_3R1-L11 인간화 항체의 각종 VHH의 아미노산 서열의 설계

iCADM3_3R1-L11 인간화 항체의 VHH의 아미노산 서열에 대해서도, 실시예 7 (1)과 마찬가지 방법으로 설계했다. 아미노산 서열의 상동성이 가장 높은 인간 FR은 GenBank 액세션 넘버 AAQ05734.1이었지만, 항원성이 높은 것이 예상되었다. 따라서 배선(Germline) 서열 VH3-53을 사용하기로 했다.

VH3-53의 FR의 아미노산 서열의 적절한 위치에, iCADM3_3R1-L11 항체의 VHH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열(각각 서열 번호 18, 19 및 20)을 이식한 아미노산 서열을 포함하는 iCADM3_3R1-L11_00 항체를 설계했다(서열 번호 178). iCADM3_3R1-L11_00 항체의 결합 활성에 영향을 준다고 생각되는 FR의 아미노산 잔기에 대해서도 실시예 7 (1)과 마찬가지의 방법으로 선택했다.

선택한 아미노산 잔기 중, 서열 번호 178로 표현되는 아미노산 서열의 1번째의 Glu로부터 Gln, 12번째의 Ile로부터 Val, 14번째의 Pro로부터 Ala, 27번째의 Phe로부터 Ser, 28번째의 The로부터 Ile, 29번째의 Val로부터 Phe, 37번째의 Val로부터 Tyr, 44번째의 Gly로부터 Gln, 45번째의 Lys로부터 Arg, 46번째의 Glu로부터 Gly, 47번째의 Trp로부터 Leu, 49번째의 Ser으로부터 Ala, 78번째의 Leu로부터 Val 및 96번째의 Ala로부터 Asn, 97번째의 Arg로부터 Ala의 아미노산 잔기 치환에서 선택되는 적어도 하나의 아미노 잔기 치환을 포함하는 인간화 항체의 아미노산 서열을 제작하고, 여러가지 개변을 갖는 인간화 항체의 VHH를 설계했다.

구체적으로는 iCADM3_3R1-L11 인간화 항체의 VHH로서, iCADM3_3R1-L11_01(서열 번호 76), iCADM3_3R1-L11_02(서열 번호 78), iCADM3_3R1-L11_03(서열 번호 80), iCADM3_3R1-L11_04(서열 번호 82), iCADM3_3R1-L11_05(서열 번호 84), iCADM3_3R1-L11_06(서열 번호 86)을 설계했다. 각종 iCADM3_3R1-L11 인간화 항체의 VHH를 코딩하는 아미노산 서열을 표 6에 나타낸다.

표 6에 나타내는 인간화 항체의 가변 영역의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열을, 동물 세포에서 고빈도로 사용되는 코돈을 사용하여 설계하고 표 6에 나타낸다.

[표 6]

(3) CADM3 인간화 항체의 제조

실시예 2 (1)과 마찬가지 방법으로, 표 6에 기재한 각종 인간화 항CADM3 항체의 VHH 영역의 유전자 단편을 삽입한 항체 발현 벡터를 제작했다. 실시예 2 (5)와 마찬가지 방법으로 제작한 벡터를 발현시켜서 항체를 얻었다.

제작한 인간화 항CADM3 VHH-Fc 항체를, 각각 iCADM3_3R1-L8_01 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L8_02 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L8_03 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L8_04 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L11_01 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L11_02 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L11_03 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L11_04 VHH-hG4PE(R409K), iCADM3_3R1-L11_05 VHH-hG4PE(R409K) 및 iCADM3_3R1-L11_06 VHH-hG4PE(R409K)라 명명했다.

(4) CADM3 인간화 항체의 CADM3 발현 세포에 대한 반응성 해석

제작한 인간화 항CADM3 VHH-Fc 항체에 대해서, 실시예 3과 마찬가지 수순으로 Expi293F 세포, 인간 CADM3/Expi293F 세포 및 마우스 CADM3/Expi293F 세포에 대하여 반응성을 해석했다. 결과를 표 7 및 표 8에 나타낸다.

[표 7]

[표 8]

표 7 및 표 8에 나타내는 바와 같이, 모든 항체에서 평균 형광 강도비는 컨트롤인 항AVM 항체에 대하여 증가하고 있어, 인간화 항CADM3 항체는 인간 CADM3/Expi293F 세포 및 마우스 CADM3/Expi293F 세포에 반응하는 것이 명확해졌다.

제작한 인간화 항CADM3 항체에 대해서, 실시예 6과 마찬가지 수순으로 표면 프라즈몬 공명 검출에 의한 CADM3에 대한 결합성을 평가했다. 그 결과, 표 9 및 표 10에 나타내는 대로 모든 항체가 인간 CADM3 및 마우스 CADM3에 친화성을 나타냈다.

[표 9]

[표 10]

[실시예 8] 인간화 항CADM3 항체의 마우스 뇌 이행성 평가

네거티브 컨트롤 항체(항AVM 항체), 항CADM3 VHH-Fc 항체(iCADM3_3R1-L8 VHH-hG4PE(R409K)), 인간화 항CADM3 VHH-Fc 항체(iCADM3_3R1-L8_04 VHH-hG4PE(R409K))에 대해서, SAIVI 알렉사 플루오르 647 항체/단백질 1㎎-라벨링 키트로 표지를 행하였다. 표지 후의 각 항체를 5㎎/㎏체중으로 꼬리 정맥(i.v.) 투여하고, 7일 후에 채혈을 행하였다.

채혈 후에 마취 하에서 전신 관류 후, 뇌 조직을 회수해서 그 무게를 측정했다. 회수한 뇌 조직에 버퍼 용액을 첨가하여 균질화하고, 원심 분리 후, 상청에 용출된 항체 용액을 회수했다. 그 용량을 측정함과 함께 항체 농도를 AlphaLISA(PerkinElmer사제)에 의해 측정하고, 단위 뇌 중량당의 항체량을 산출했다. 또한, 표준 곡선은 각 항체를 사용하여 제작했다. 또한, 동일한 조건에서 회수한 뇌 조직에 대해서, IVIS Spectrum(퍼킨엘머사제)으로 형광 강도를 측정했다.

항체 투여 7일 후의 혈청 중 항체 농도를 도 7의 (A), 뇌 조직 중의 단위 뇌 중량당의 항체량을 도 7의 (B)에 나타낸다. 도 7의 (A) 및 (B)에 나타내는 바와 같이, iCADM3_3R1-L8 VHH-hG4PE(R409K) 및 iCADM3_3R1-L8_04 VHH-hG4PE(R409K)에서는 혈청 중의 항체 농도 및 뇌 조직 중의 단위 뇌 중량당의 항체량 모두 차는 없고, 인간화 후에도 뇌 내 항체량을 높이는 효과가 유지되어 있는 것이 나타났다.

항체 투여 7일 후의 뇌 이미징상을 도 8의 (A)에 나타낸다. 뇌중 형광량을 투여 항체의 형광 강도로 보정한 값의 대네거티브 컨트롤비를 도 8의 (B)에 나타낸다. 도 8의 (A) 및 (B)에 나타내는 바와 같이, 네거티브 컨트롤과 비교하여 항CADM3 VHH-Fc 항체 및 인간화 항CADM3 VHH-Fc 항체는 모두 뇌 내 항체량이 수배로 향상되어 있고, 항체의 분포가 뇌 내 전역에 걸쳐 있는 것이 나타났다. 이상의 결과로부터, 항CADM3 VHH 항체와 동등한 활성을 유지한 인간화 VHH가 제작되었다.

본 발명을 특정한 양태를 사용하여 상세히 설명했지만, 본 발명의 의도와 범위를 벗어나는 일 없이 다양한 변경 및 변형이 가능한 것은 당업자에게 있어서 명확하다. 또한, 본 출원은 2018년 6월 26일자로 출원된 일본특허출원(일본특허출원 제2018-120477)에 기초하고 있고, 그 전체가 인용에 의해 원용된다.

서열표 프리 텍스트

서열 번호 1-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L5의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 2-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L5의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 3-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L5의 CDR1의 아미노산 서열

서열 번호 4-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L5의 CDR2의 아미노산 서열

서열 번호 5-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L5의 CDR3의 아미노산 서열

서열 번호 6-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 7-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 8-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8의 CDR1의 아미노산 서열

서열 번호 9-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8의 CDR2의 아미노산 서열

서열 번호 10-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8의 CDR3의 아미노산 서열

서열 번호 11-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L10의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 12-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L10의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 13-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L10의 CDR1의 아미노산 서열

서열 번호 14-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L10의 CDR2의 아미노산 서열

서열 번호 15-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L10의 CDR3의 아미노산 서열

서열 번호 16-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 17-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 18-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11의 CDR1의 아미노산 서열

서열 번호 19-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11의 CDR2의 아미노산 서열

서열 번호 20-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11의 CDR3의 아미노산 서열

서열 번호 21-인공 서열의 설명: CADM301의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 22-인공 서열의 설명: CADM301의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 23-인공 서열의 설명: CADM301의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 24-인공 서열의 설명: CADM301의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 25-인공 서열의 설명: CADM301의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 26-인공 서열의 설명: CADM301의 VL(시그널 서열을 제외한다)을 코딩하는 염기 서열

서열 번호 27-인공 서열의 설명: CADM301의 VL(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 28-인공 서열의 설명: CADM301의 LCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 29-인공 서열의 설명: CADM301의 LCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 30-인공 서열의 설명: CADM301의 LCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 31-인공 서열의 설명: CADM3102의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 32-인공 서열의 설명: CADM3102의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 33-인공 서열의 설명: CADM3102의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 34-인공 서열의 설명: CADM3102의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 35-인공 서열의 설명: CADM3102의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 36-인공 서열의 설명: CADM3102의 VL(시그널 서열을 제외한다)을 코딩하는 염기 서열

서열 번호 37-인공 서열의 설명: CADM3102의 VL(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 38-인공 서열의 설명: CADM3102의 LCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 39-인공 서열의 설명: CADM3102의 LCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 40-인공 서열의 설명: CADM3102의 LCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 41-인공 서열의 설명: 항AVM 항체의 경쇄(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 42-인공 서열의 설명: 항AVM 항체의 경쇄(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 43-인공 서열의 설명: pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L5 VHH의 중쇄(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 44-인공 서열의 설명: pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L5 VHH의 중쇄(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 45-인공 서열의 설명: pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L8 VHH의 중쇄(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 46-인공 서열의 설명: pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L8 VHH의 중쇄(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 47-인공 서열의 설명: pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L10 VHH의 중쇄(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 48-인공 서열의 설명: pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L10 VHH의 중쇄(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 49-인공 서열의 설명: pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L11 VHH의 중쇄(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 50-인공 서열의 설명: pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L11 VHH의 중쇄(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 51-인공 서열의 설명: 시그널 서열을 포함하는 인간 CADM3(시그널 서열을 포함한다)을 코딩하는 염기 서열

서열 번호 52-인공 서열의 설명: 시그널 서열을 포함하는 인간 CADM3(시그널 서열을 포함한다)의 아미노산 서열

서열 번호 53-인공 서열의 설명: 시그널 서열을 포함하는 마우스 CADM3(시그널 서열을 포함한다)을 코딩하는 염기 서열

서열 번호 54-인공 서열의 설명: 시그널 서열을 포함하는 마우스 CADM3(시그널 서열을 포함한다)의 아미노산 서열

서열 번호 55-인공 서열의 설명: 시그널 서열을 포함하는 원숭이 CADM3(시그널 서열을 포함한다)을 코딩하는 염기 서열

서열 번호 56-인공 서열의 설명: 시그널 서열을 포함하는 원숭이 CADM3(시그널 서열을 포함한다)의 아미노산 서열

서열 번호 57-인공 서열의 설명: hCADM3-FLAG_Fc(시그널 서열을 포함한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 58-인공 서열의 설명: hCADM3-FLAG_Fc(시그널 서열을 포함한다)의 아미노산 서열

서열 번호 59-인공 서열의 설명: mCADM3-FLAG_Fc(시그널 서열을 포함한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 60-인공 서열의 설명: mCADM3-FLAG_Fc(시그널 서열을 포함한다)의 아미노산 서열

서열 번호 61-인공 서열의 설명: rCADM3-FLAG_Fc(시그널 서열을 포함한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 62-인공 서열의 설명: rCADM3-FLAG_Fc(시그널 서열을 포함한다)의 아미노산 서열

서열 번호 63-인공 서열의 설명: hCADM3-GST(시그널 서열을 포함한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 64-인공 서열의 설명: hCADM3-GST(시그널 서열을 포함한다)의 아미노산 서열

서열 번호 65-인공 서열의 설명: mCADM3-GST(시그널 서열을 포함한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 66-인공 서열의 설명: mCADM3-GST(시그널 서열을 포함한다)의 아미노산 서열

서열 번호 67-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8_01의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 68-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8_01의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 69-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8_02의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 70-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8_02의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 71-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8_03의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 72-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8_03의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 73-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8_04의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 74-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8_04의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 75-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_01의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 76-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_01의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 77-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_02의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 78-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_02의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 79-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_03의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 80-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_03의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 81-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_04의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 82-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_04의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 83-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_05의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 84-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_05의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 85-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_06의 VHH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 86-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_06의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 87-인공 서열의 설명: CADM3219의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 88-인공 서열의 설명: CADM3219의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 89-인공 서열의 설명: CADM3219의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 90-인공 서열의 설명: CADM3219의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 91-인공 서열의 설명: CADM3219의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 92-인공 서열의 설명: CADM3219의 VL(시그널 서열을 제외한다)을 코딩하는 염기 서열

서열 번호 93-인공 서열의 설명: CADM3219의 VL(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 94-인공 서열의 설명: CADM3219의 LCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 95-인공 서열의 설명: CADM3219의 LCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 96-인공 서열의 설명: CADM3219의 LCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 97-인공 서열의 설명: CADM3301의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 98-인공 서열의 설명: CADM3301의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 99-인공 서열의 설명: CADM3301의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 100-인공 서열의 설명: CADM3301의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 101-인공 서열의 설명: CADM3301의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 102-인공 서열의 설명: CADM3309의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 103-인공 서열의 설명: CADM3309의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 104-인공 서열의 설명: CADM3309의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 105-인공 서열의 설명: CADM3309의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 106-인공 서열의 설명: CADM3309의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 107-인공 서열의 설명: CADM3312의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 108-인공 서열의 설명: CADM3312의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 109-인공 서열의 설명: CADM3312의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 110-인공 서열의 설명: CADM3312의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 111-인공 서열의 설명: CADM3312의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 112-인공 서열의 설명: CADM3314의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 113-인공 서열의 설명: CADM3314의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 114-인공 서열의 설명: CADM3314의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 115-인공 서열의 설명: CADM3314의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 116-인공 서열의 설명: CADM3314의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 117-인공 서열의 설명: CADM3316의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 118-인공 서열의 설명: CADM3316의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 119-인공 서열의 설명: CADM3316의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 120-인공 서열의 설명: CADM3316의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 121-인공 서열의 설명: CADM3316의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 122-인공 서열의 설명: CADM3349의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 123-인공 서열의 설명: CADM3349의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 124-인공 서열의 설명: CADM3349의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 125-인공 서열의 설명: CADM3349의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 126-인공 서열의 설명: CADM3349의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 127-인공 서열의 설명: CADM3351의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 128-인공 서열의 설명: CADM3351의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 129-인공 서열의 설명: CADM3351의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 130-인공 서열의 설명: CADM3351의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 131-인공 서열의 설명: CADM3351의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 132-인공 서열의 설명: CADM3301, CADM3309, CADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349 및 CADM3351의 VL(시그널 서열을 제외한다)을 코딩하는 염기 서열

서열 번호 133-인공 서열의 설명: CADM3301, CADM3309, CADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349 및 CADM3351의 VL(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 134-인공 서열의 설명: CADM3301, CADM3309, CADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349 및 CADM3351의 LCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 135-인공 서열의 설명: CADM3301, CADM3309, CADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349 및 CADM3351의 LCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 136-인공 서열의 설명: CADM3301, CADM3309, CADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349 및 CADM3351의 LCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 137-인공 서열의 설명: CADM3402의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 138-인공 서열의 설명: CADM3402의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 139-인공 서열의 설명: CADM3402의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 140-인공 서열의 설명: CADM3402의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 141-인공 서열의 설명: CADM3402의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 142-인공 서열의 설명: CADM3404의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 143-인공 서열의 설명: CADM3404의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 144-인공 서열의 설명: CADM3404의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 145-인공 서열의 설명: CADM3404의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 146-인공 서열의 설명: CADM3404의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 147-인공 서열의 설명: CADM3432의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 148-인공 서열의 설명: CADM3432의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 149-인공 서열의 설명: CADM3432의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 150-인공 서열의 설명: CADM3432의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 151-인공 서열의 설명: CADM3432의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 152-인공 서열의 설명: CADM3448의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 153-인공 서열의 설명: CADM3448의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 154-인공 서열의 설명: CADM3448의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 155-인공 서열의 설명: CADM3448의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 156-인공 서열의 설명: CADM3448의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 157-인공 서열의 설명: CADM3458의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 158-인공 서열의 설명: CADM3458의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 159-인공 서열의 설명: CADM3458의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 160-인공 서열의 설명: CADM3458의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 161-인공 서열의 설명: CADM3458의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 162-인공 서열의 설명: CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448 및 CADM3458의 VL(시그널 서열을 제외한다)을 코딩하는 염기 서열

서열 번호 163-인공 서열의 설명: CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448 및 CADM3458의 VL(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 164-인공 서열의 설명: CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448 및 CADM3458의 LCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 165-인공 서열의 설명: CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448 및 CADM3458의 LCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 166-인공 서열의 설명: CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448 및 CADM3458의 LCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 167-인공 서열의 설명: CADM3501의 VH(시그널 서열을 제외한다)를 코딩하는 염기 서열

서열 번호 168-인공 서열의 설명: CADM3501의 VH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 169-인공 서열의 설명: CADM3501의 HCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 170-인공 서열의 설명: CADM3501의 HCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 171-인공 서열의 설명: CADM3501의 HCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 172-인공 서열의 설명: CADM3501의 VL(시그널 서열을 제외한다)을 코딩하는 염기 서열

서열 번호 173-인공 서열의 설명: CADM3501의 VL(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 174-인공 서열의 설명: CADM3501의 LCDR1의 아미노산 서열

서열 번호 175-인공 서열의 설명: CADM3501의 LCDR2의 아미노산 서열

서열 번호 176-인공 서열의 설명: CADM3501의 LCDR3의 아미노산 서열

서열 번호 177-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L8_00의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

서열 번호 178-인공 서열의 설명: iCADM3_3R1-L11_00의 VHH(시그널 서열을 제외한다)의 아미노산 서열

SEQUENCE LISTING <110> Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Kagoshima University <120> Antibody binding to Cell Adhesion Molecule 3 <130> W527352 <150> JP2018-120477 <151> 2018-06-26 <160> 178 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L5 excluding signal sequence <400> 1 caggtgcagc tcgtggagtc tgggggaggc ttggtgcagg ctggggggtc tctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggaag catcgtcagt gtcaatgcca tgggctggta ccgccaggct 120 ccagggaagc agcgcgagtt ggtcgcaact attactagtg ggggtagcac aaactatgca 180 gactccgcga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaacac gatgtatctg 240 caaatgaaca gcctgaaacc tgaggacaca gccgtctatt actgtaacgg ggaattctgg 300 tcgcgccggg acacacgccc cccaggggtc gtaaactact ggggccaggg gacccaggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 2 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L5 excluding signal sequence <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Val Ser Val Asn 20 25 30 Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val 35 40 45 Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Met Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn 85 90 95 Gly Glu Phe Trp Ser Arg Arg Asp Thr Arg Pro Pro Gly Val Val Asn 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR1 of iCADM3_3R1-L5 <400> 3 Val Asn Ala Met Gly 1 5 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR2 of iCADM3_3R1-L5 <400> 4 Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR3 of iCADM3_3R1-L5 <400> 5 Glu Phe Trp Ser Arg Arg Asp Thr Arg Pro Pro Gly Val Val Asn Tyr 1 5 10 15 <210> 6 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L8 excluding signal sequence <400> 6 caggtgcagc tcgtggagtc tgggggaggc ttggtgcagc ctggggggtc tctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggacg caccttcagt aattatgccc ggggctggtt ccgccaggct 120 ccagggaagg agcgtgagtt tgtagcagct attgactaca gtggtggtag cacaaactat 180 gcagactccg cgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacggtgtat 240 ctgcaaatga acagcctgaa acccggggac acggccgttt attactgtgc agcgcccgca 300 agccggcgtc ctagttggga tgctgatggg tatgactact ggggccaggg gacccaggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 7 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L8 excluding signal sequence <400> 7 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Arg Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45 Ala Ala Ile Asp Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Pro Ala Ser Arg Arg Pro Ser Trp Asp Ala Asp Gly Tyr Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR1 of iCADM3_3R1-L8 <400> 8 Asn Tyr Ala Arg Gly 1 5 <210> 9 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR2 of iCADM3_3R1-L8 <400> 9 Ala Ile Asp Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala Lys 1 5 10 15 Gly <210> 10 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR3 of iCADM3_3R1-L8 <400> 10 Pro Ala Ser Arg Arg Pro Ser Trp Asp Ala Asp Gly Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 11 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L10 excluding signal sequence <400> 11 caggtgcagc tcgtggagtc tgggggaggc ttggtgcagg ctggggggtc tctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggaag catcttcagt atacatgcca tgggctggta ccgtcaggct 120 ccagggaagc agcgcgagtt ggtcgcaact gttactagtg gtggtagcac aaactatgca 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaacac ggtgtatctg 240 caaatgaaca gcctgaaacc tgaggacaca gccgtctatt actgtaatgc agaaaccccc 300 tactatagta gtacttacta cacgaactac tggggccagg ggacccaggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 12 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L10 excluding signal sequence <400> 12 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile His 20 25 30 Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val 35 40 45 Ala Thr Val Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn 85 90 95 Ala Glu Thr Pro Tyr Tyr Ser Ser Thr Tyr Tyr Thr Asn Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR1 of iCADM3_3R1-L10 <400> 13 Ile His Ala Met Gly 1 5 <210> 14 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR2 of iCADM3_3R1-L10 <400> 14 Thr Val Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR3 of iCADM3_3R1-L10 <400> 15 Glu Thr Pro Tyr Tyr Ser Ser Thr Tyr Tyr Thr Asn Tyr 1 5 10 <210> 16 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11 excluding signal sequence <400> 16 caggtgcagc tcgtggagtc tgggggaggc ttggtgcagg ctggggggtc tctgagactt 60 tcctgtgcag cctctggaag catcttcagc ttcaatgcca tgggctggta ccgccaggct 120 ccagggaagc agcgcgggtt ggtcgcagtt attactagtg gtggttacac aaactatgcg 180 gactccgtga agggccgatt caccatcacc agagacaacg ccaagaacac ggtgtatctg 240 caaatgaaca gcctgaaacc tgaggacaca gccgtctatt actgtaatgc agaaggagtc 300 tacagcgact atgtgatcat gaactactgg ggccagggga cccaggtcac cgtctcctca 360 <210> 17 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11 excluding signal sequence <400> 17 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Phe Asn 20 25 30 Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Gly Leu Val 35 40 45 Ala Val Ile Thr Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn 85 90 95 Ala Glu Gly Val Tyr Ser Asp Tyr Val Ile Met Asn Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 18 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR1 of iCADM3_3R1-L11 <400> 18 Phe Asn Ala Met Gly 1 5 <210> 19 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR2 of iCADM3_3R1-L11 <400> 19 Val Ile Thr Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 20 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of CDR3 of iCADM3_3R1-L11 <400> 20 Glu Gly Val Tyr Ser Asp Tyr Val Ile Met Asn Tyr 1 5 10 <210> 21 <211> 369 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM301 excluding signal sequence <400> 21 caggtgcagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaggaggc ctgggacctc agtgaaagtc 60 tcctgcaagg cttctggata cagcttcacc agttatgata ttaactgggt gcgcctggcc 120 actggacaag ggcttgagtg gatggggtgg atgaacccta acactggtga tacaggctct 180 ccacagaagt tccaggacag agtcaccatg accagggaca tctccacagg cacagcctac 240 ttagaactga gaggcctgaa gtctgaggac acggccattt attattgtgc gagaggcttc 300 ctggtgacag catataccgc tgagttcttc ccgcactggg gccagggcac cctggtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 22 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM301 excluding signal sequence <400> 22 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Arg Leu Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Met Asn Pro Asn Thr Gly Asp Thr Gly Ser Pro Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Ile Ser Thr Gly Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Arg Gly Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Phe Leu Val Thr Ala Tyr Thr Ala Glu Phe Phe Pro His 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM301 <400> 23 Ser Tyr Asp Ile Asn 1 5 <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM301 <400> 24 Trp Met Asn Pro Asn Thr Gly Asp Thr Gly Ser Pro Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Asp <210> 25 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM301 <400> 25 Gly Phe Leu Val Thr Ala Tyr Thr Ala Glu Phe Phe Pro His 1 5 10 <210> 26 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VL of CADM301 excluding signal sequence <400> 26 tcctatgtgc tgactcagcc accctcagtg tcagtggccc caggaaagac ggccaggctc 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa agtgttcact ggtaccagca gaggccaggc 120 caggcccctg tgctggtcat aaattatgat agtgaccggc cctctgggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctga gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtggta gtgatcatgt ggtattcggc 300 ggaggaaccc agctgatcat ttta 324 <210> 27 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VL of CADM301 excluding signal sequence <400> 27 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys 1 5 10 15 Thr Ala Arg Leu Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Asn 35 40 45 Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Glu Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Gly Ser Asp His 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Ile Ile Leu 100 105 <210> 28 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR1 of CADM301 <400> 28 Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His 1 5 10 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR2 of CADM301 <400> 29 Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser 1 5 <210> 30 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR3 of CADM301 <400> 30 Gln Val Trp Asp Ser Gly Ser Asp His Val Val 1 5 10 <210> 31 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3102 excluding signal sequence <400> 31 cagatgcagc tagtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tgtctggcac agcaaactac 180 gcacagaaat tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtct actactgtgc gagagttgag 300 gaaagtggct ggtacgacca ctaccacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 32 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3102 excluding signal sequence <400> 32 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Met Ser Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Glu Glu Ser Gly Trp Tyr Asp His Tyr His Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 33 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3102 <400> 33 Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 34 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3102 <400> 34 Gly Ile Ile Pro Met Ser Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 35 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3102 <400> 35 Val Glu Glu Ser Gly Trp Tyr Asp His Tyr His Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 36 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VL of CADM3102 excluding signal sequence <400> 36 gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca cgtctagtca gagcctcctg tatagtaatg gattcaacta tttggattgg 120 tacctgcaga aaccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agtagagtgg aggctgagga tgttggggtg tattactgca tgcaagctct aacaactcat 300 cccacttttg gcggagggac caaagtggat atcaaa 336 <210> 37 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VL of CADM3102 excluding signal sequence <400> 37 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Thr Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Phe Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Thr Thr His Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 110 <210> 38 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR1 of CADM3102 <400> 38 Thr Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Phe Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR2 of CADM3102 <400> 39 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR3 of CADM3102 <400> 40 Met Gln Ala Leu Thr Thr His Pro Thr 1 5 <210> 41 <211> 648 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> base sequence of light chain antibody excluding signal sequence of pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L5 VHH, pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L8 VHH, pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L10 VHH, <400> 41 cagtttgtgc tttctcagcc aaactctgtg tctacgaatc tcggaagcac agtcaaactg 60 tcttgcaagc gcagcactgg taacattgga agcaattatg tgagctggta ccagcagcat 120 gagggaagat ctcccaccac tatgatttat agggatgata agagaccaga tggagttcct 180 gacaggttct ctggctccat tgacagatct tccgactcag ccctcctgac aatcaataat 240 gtgcagactg aagatgaagc tgactacttc tgtcagtctt acagtagtgg tattaatatt 300 ttcggcggtg gaaccaagct cactgtccta ggtcagccca aggccgcccc ctcggtcact 360 ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata 420 agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag 480 gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc 540 tacctgagcc tgacgcctga gcagtggaag tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg 600 catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg gcccctacag aatgttca 648 <210> 42 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of light chain antibody excluding signal sequence of pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L5 VHH, pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L8 VHH, pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L10 VHH, <400> 42 Gln Phe Val Leu Ser Gln Pro Asn Ser Val Ser Thr Asn Leu Gly Ser 1 5 10 15 Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Arg Ser Thr Gly Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Glu Gly Arg Ser Pro Thr Thr Met 35 40 45 Ile Tyr Arg Asp Asp Lys Arg Pro Asp Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asp Ser Ala Leu Leu Thr Ile Asn Asn 65 70 75 80 Val Gln Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Ser Tyr Ser Ser 85 90 95 Gly Ile Asn Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 43 <211> 1764 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of heavy chain antibody sequence of pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L5 VHH excluding signal sequence <400> 43 gaggtgcagc tggtggaatc tgggggaggc ttagtgcagc ctggaagatc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt aactatgcca tggcttgggt ccgccgggct 120 ccaacgaagg gtctggagtg ggtcgcatcc attagtaatg gtggtggtaa cacttactat 180 cgcgactccg tgaagggccg attcactatc tccagagatg atgcaaaaaa caccctatac 240 ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtgc aagacacggg 300 aattatatat attatgggtc cttctttgat tactggggcc aaggagtcat ggtcacagtc 360 tcctcagcta gcaccaaggg gccatccgtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc 420 tccgagagca cagccgccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacg 600 aagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660 gagtccaaat atggtccccc atgcccacca tgcccagcac ctgagttcga ggggggacca 720 tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag gacactctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840 gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc 900 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa 1020 gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg 1080 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctaaccg tggacaagag caggtggcag 1260 gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag 1320 aagagcctct ccctgtctct gggtggagga ggagggtccg gaggaggagg gtccggtgga 1380 ggtgggtccc aggtgcagct cgtggagtct gggggaggct tggtgcaggc tggggggtct 1440 ctgagactct cctgtgcagc ctctggaagc atcgtcagtg tcaatgccat gggctggtac 1500 cgccaggctc cagggaagca gcgcgagttg gtcgcaacta ttactagtgg gggtagcaca 1560 aactatgcag actccgcgaa gggccgattc accatctcca gagacaacgc caagaacacg 1620 atgtatctgc aaatgaacag cctgaaacct gaggacacag ccgtctatta ctgtaacggg 1680 gaattctggt cgcgccggga cacacgcccc ccaggggtcg taaactactg gggccagggg 1740 acccaggtca ccgtctcctc atga 1764 <210> 44 <211> 587 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of heavy chain antibody sequence of pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L5 VHH excluding signal sequence <400> 44 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ala Trp Val Arg Arg Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Asn Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Asn Tyr Ile Tyr Tyr Gly Ser Phe Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr 210 215 220 Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln 450 455 460 Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser 465 470 475 480 Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Val Ser Val Asn Ala 485 490 495 Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala 500 505 510 Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala Lys Gly 515 520 525 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Met Tyr Leu Gln 530 535 540 Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Gly 545 550 555 560 Glu Phe Trp Ser Arg Arg Asp Thr Arg Pro Pro Gly Val Val Asn Tyr 565 570 575 Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 580 585 <210> 45 <211> 1764 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of heavy chain antibody sequence of pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L8 VHH excluding signal sequence <400> 45 gaggtgcagc tggtggaatc tgggggaggc ttagtgcagc ctggaagatc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt aactatgcca tggcttgggt ccgccgggct 120 ccaacgaagg gtctggagtg ggtcgcatcc attagtaatg gtggtggtaa cacttactat 180 cgcgactccg tgaagggccg attcactatc tccagagatg atgcaaaaaa caccctatac 240 ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtgc aagacacggg 300 aattatatat attatgggtc cttctttgat tactggggcc aaggagtcat ggtcacagtc 360 tcctcagcta gcaccaaggg gccatccgtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc 420 tccgagagca cagccgccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacg 600 aagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660 gagtccaaat atggtccccc atgcccacca tgcccagcac ctgagttcga ggggggacca 720 tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag gacactctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840 gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc 900 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa 1020 gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg 1080 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctaaccg tggacaagag caggtggcag 1260 gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag 1320 aagagcctct ccctgtctct gggtggagga ggagggtccg gaggaggagg gtccggtgga 1380 ggtgggtccc aggtgcagct cgtggagtct gggggaggct tggtgcagcc tggggggtct 1440 ctgagactct cctgtgcagc ctctggacgc accttcagta attatgcccg gggctggttc 1500 cgccaggctc cagggaagga gcgtgagttt gtagcagcta ttgactacag tggtggtagc 1560 acaaactatg cagactccgc gaagggccga ttcaccatct ccagagacaa cgccaagaac 1620 acggtgtatc tgcaaatgaa cagcctgaaa cccggggaca cggccgttta ttactgtgca 1680 gcgcccgcaa gccggcgtcc tagttgggat gctgatgggt atgactactg gggccagggg 1740 acccaggtca ccgtctcctc atga 1764 <210> 46 <211> 587 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of heavy chain antibody sequence of pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L8 VHH excluding signal sequence <400> 46 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ala Trp Val Arg Arg Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Asn Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Asn Tyr Ile Tyr Tyr Gly Ser Phe Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr 210 215 220 Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln 450 455 460 Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser 465 470 475 480 Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Asn Tyr Ala 485 490 495 Arg Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala 500 505 510 Ala Ile Asp Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala Lys 515 520 525 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu 530 535 540 Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 545 550 555 560 Ala Pro Ala Ser Arg Arg Pro Ser Trp Asp Ala Asp Gly Tyr Asp Tyr 565 570 575 Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 580 585 <210> 47 <211> 1755 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of heavy chain antibody sequence of pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L10 VHH excluding signal sequence <400> 47 gaggtgcagc tggtggaatc tgggggaggc ttagtgcagc ctggaagatc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt aactatgcca tggcttgggt ccgccgggct 120 ccaacgaagg gtctggagtg ggtcgcatcc attagtaatg gtggtggtaa cacttactat 180 cgcgactccg tgaagggccg attcactatc tccagagatg atgcaaaaaa caccctatac 240 ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtgc aagacacggg 300 aattatatat attatgggtc cttctttgat tactggggcc aaggagtcat ggtcacagtc 360 tcctcagcta gcaccaaggg gccatccgtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc 420 tccgagagca cagccgccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacg 600 aagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660 gagtccaaat atggtccccc atgcccacca tgcccagcac ctgagttcga ggggggacca 720 tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag gacactctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840 gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc 900 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa 1020 gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg 1080 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctaaccg tggacaagag caggtggcag 1260 gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag 1320 aagagcctct ccctgtctct gggtggagga ggagggtccg gaggaggagg gtccggtgga 1380 ggtgggtccc aggtgcagct cgtggagtct gggggaggct tggtgcaggc tggggggtct 1440 ctgagactct cctgtgcagc ctctggaagc atcttcagta tacatgccat gggctggtac 1500 cgtcaggctc cagggaagca gcgcgagttg gtcgcaactg ttactagtgg tggtagcaca 1560 aactatgcag actccgtgaa gggccgattc accatctcca gagacaacgc caagaacacg 1620 gtgtatctgc aaatgaacag cctgaaacct gaggacacag ccgtctatta ctgtaatgca 1680 gaaaccccct actatagtag tacttactac acgaactact ggggccaggg gacccaggtc 1740 accgtctcct catga 1755 <210> 48 <211> 584 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of heavy chain antibody sequence of pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L10 VHH excluding signal sequence <400> 48 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ala Trp Val Arg Arg Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Asn Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Asn Tyr Ile Tyr Tyr Gly Ser Phe Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr 210 215 220 Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln 450 455 460 Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser 465 470 475 480 Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile His Ala 485 490 495 Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala 500 505 510 Thr Val Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 515 520 525 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln 530 535 540 Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala 545 550 555 560 Glu Thr Pro Tyr Tyr Ser Ser Thr Tyr Tyr Thr Asn Tyr Trp Gly Gln 565 570 575 Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 580 <210> 49 <211> 1752 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of heavy chain antibody sequence of pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L11 VHH excluding signal sequence <400> 49 gaggtgcagc tggtggaatc tgggggaggc ttagtgcagc ctggaagatc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt aactatgcca tggcttgggt ccgccgggct 120 ccaacgaagg gtctggagtg ggtcgcatcc attagtaatg gtggtggtaa cacttactat 180 cgcgactccg tgaagggccg attcactatc tccagagatg atgcaaaaaa caccctatac 240 ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtgc aagacacggg 300 aattatatat attatgggtc cttctttgat tactggggcc aaggagtcat ggtcacagtc 360 tcctcagcta gcaccaaggg gccatccgtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc 420 tccgagagca cagccgccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacg 600 aagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660 gagtccaaat atggtccccc atgcccacca tgcccagcac ctgagttcga ggggggacca 720 tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag gacactctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840 gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc 900 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa 1020 gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg 1080 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctaaccg tggacaagag caggtggcag 1260 gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag 1320 aagagcctct ccctgtctct gggtggagga ggagggtccg gaggaggagg gtccggtgga 1380 ggtgggtccc aggtgcagct cgtggagtct gggggaggct tggtgcaggc tggggggtct 1440 ctgagacttt cctgtgcagc ctctggaagc atcttcagct tcaatgccat gggctggtac 1500 cgccaggctc cagggaagca gcgcgggttg gtcgcagtta ttactagtgg tggttacaca 1560 aactatgcgg actccgtgaa gggccgattc accatcacca gagacaacgc caagaacacg 1620 gtgtatctgc aaatgaacag cctgaaacct gaggacacag ccgtctatta ctgtaatgca 1680 gaaggagtct acagcgacta tgtgatcatg aactactggg gccaggggac ccaggtcacc 1740 gtctcctcat ga 1752 <210> 50 <211> 583 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of heavy chain antibody sequence of pCI_AVM-hLG4PE(R409K)-iCADM3_3R1-L11 VHH excluding signal sequence <400> 50 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ala Trp Val Arg Arg Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Asn Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Asn Tyr Ile Tyr Tyr Gly Ser Phe Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr 210 215 220 Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln 450 455 460 Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser 465 470 475 480 Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Phe Asn Ala 485 490 495 Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Gly Leu Val Ala 500 505 510 Val Ile Thr Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 515 520 525 Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln 530 535 540 Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala 545 550 555 560 Glu Gly Val Tyr Ser Asp Tyr Val Ile Met Asn Tyr Trp Gly Gln Gly 565 570 575 Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 580 <210> 51 <211> 1197 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of human CADM3 including signal sequence <400> 51 atgggggccc cagccgcctc gctcctgctc ctgctcctgc tgttcgcctg ctgctgggcg 60 cccggcgggg ccaacctctc ccaggacgac agccagccct ggacatctga tgaaacagtg 120 gtggctggtg gcaccgtggt gctcaagtgc caagtgaaag atcacgagga ctcatccctg 180 caatggtcta accctgctca gcagactctc tactttgggg agaagagagc ccttcgagat 240 aatcgaattc agctggttac ctctacgccc cacgagctca gcatcagcat cagcaatgtg 300 gccctggcag acgagggcga gtacacctgc tcaatcttca ctatgcctgt gcgaactgcc 360 aagtccctcg tcactgtgct aggaattcca cagaagccca tcatcactgg ttataaatct 420 tcattacggg aaaaagacac agccacccta aactgtcagt cttctgggag caagcctgca 480 gcccggctca cctggagaaa gggtgaccaa gaactccacg gagaaccaac ccgcatacag 540 gaagatccca atggtaaaac cttcactgtc agcagctcgg tgacattcca ggttacccgg 600 gaggatgatg gggcgagcat cgtgtgctct gtgaaccatg aatctctaaa gggagctgac 660 agatccacct ctcaacgcat tgaagtttta tacacaccaa ctgcgatgat taggccagac 720 cctccccatc ctcgtgaggg ccagaagctg ttgctacact gtgagggtcg cggcaatcca 780 gtcccccagc agtacctatg ggagaaggag ggcagtgtgc cacccctgaa gatgacccag 840 gagagtgccc tgatcttccc tttcctcaac aagagtgaca gtggcaccta cggctgcaca 900 gccaccagca acatgggcag ctacaaggcc tactacaccc tcaatgttaa tgaccccagt 960 ccggtgccct cctcctccag cacctaccac gccatcatcg gtgggatcgt ggctttcatt 1020 gtcttcctgc tgctcatcat gctcatcttc cttggccact acttgatccg gcacaaagga 1080 acctacctga cacatgaggc aaaaggctcc gacgatgctc cagacgcgga cacggccatc 1140 atcaatgcag aaggcgggca gtcaggaggg gacgacaaga aggaatattt catctag 1197 <210> 52 <211> 398 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of human CADM3 including signal sequence <400> 52 Met Gly Ala Pro Ala Ala Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Phe Ala 1 5 10 15 Cys Cys Trp Ala Pro Gly Gly Ala Asn Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gln 20 25 30 Pro Trp Thr Ser Asp Glu Thr Val Val Ala Gly Gly Thr Val Val Leu 35 40 45 Lys Cys Gln Val Lys Asp His Glu Asp Ser Ser Leu Gln Trp Ser Asn 50 55 60 Pro Ala Gln Gln Thr Leu Tyr Phe Gly Glu Lys Arg Ala Leu Arg Asp 65 70 75 80 Asn Arg Ile Gln Leu Val Thr Ser Thr Pro His Glu Leu Ser Ile Ser 85 90 95 Ile Ser Asn Val Ala Leu Ala Asp Glu Gly Glu Tyr Thr Cys Ser Ile 100 105 110 Phe Thr Met Pro Val Arg Thr Ala Lys Ser Leu Val Thr Val Leu Gly 115 120 125 Ile Pro Gln Lys Pro Ile Ile Thr Gly Tyr Lys Ser Ser Leu Arg Glu 130 135 140 Lys Asp Thr Ala Thr Leu Asn Cys Gln Ser Ser Gly Ser Lys Pro Ala 145 150 155 160 Ala Arg Leu Thr Trp Arg Lys Gly Asp Gln Glu Leu His Gly Glu Pro 165 170 175 Thr Arg Ile Gln Glu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Phe Thr Val Ser Ser 180 185 190 Ser Val Thr Phe Gln Val Thr Arg Glu Asp Asp Gly Ala Ser Ile Val 195 200 205 Cys Ser Val Asn His Glu Ser Leu Lys Gly Ala Asp Arg Ser Thr Ser 210 215 220 Gln Arg Ile Glu Val Leu Tyr Thr Pro Thr Ala Met Ile Arg Pro Asp 225 230 235 240 Pro Pro His Pro Arg Glu Gly Gln Lys Leu Leu Leu His Cys Glu Gly 245 250 255 Arg Gly Asn Pro Val Pro Gln Gln Tyr Leu Trp Glu Lys Glu Gly Ser 260 265 270 Val Pro Pro Leu Lys Met Thr Gln Glu Ser Ala Leu Ile Phe Pro Phe 275 280 285 Leu Asn Lys Ser Asp Ser Gly Thr Tyr Gly Cys Thr Ala Thr Ser Asn 290 295 300 Met Gly Ser Tyr Lys Ala Tyr Tyr Thr Leu Asn Val Asn Asp Pro Ser 305 310 315 320 Pro Val Pro Ser Ser Ser Ser Thr Tyr His Ala Ile Ile Gly Gly Ile 325 330 335 Val Ala Phe Ile Val Phe Leu Leu Leu Ile Met Leu Ile Phe Leu Gly 340 345 350 His Tyr Leu Ile Arg His Lys Gly Thr Tyr Leu Thr His Glu Ala Lys 355 360 365 Gly Ser Asp Asp Ala Pro Asp Ala Asp Thr Ala Ile Ile Asn Ala Glu 370 375 380 Gly Gly Gln Ser Gly Gly Asp Asp Lys Lys Glu Tyr Phe Ile 385 390 395 <210> 53 <211> 1191 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of mouse CADM3 including signal sequence <400> 53 atgggggccc cttccgccct gcccctgctc ctgctcctcg cctgctcctg ggcgcccggc 60 ggggccaatc tttcccagga cgatagccag ccctggacat ctgatgaaac agttgtggct 120 ggtggcacag tggttctcaa gtgtcaagta aaagaccatg aagactcatc tctgcagtgg 180 tctaaccctg ctcagcagac cctatacttc ggggagaaga gagcccttcg agataatcgg 240 attcagctgg ttagctctac tccccatgag ctcagcatca gcatcagcaa tgtggcgctg 300 gccgatgagg gggagtacac gtgctccatc ttcactatgc ctgtgcgaac cgccaagtcc 360 cttgtcactg tgctcggaat cccacagaaa cccataatca ctggttataa gtcatcattg 420 cgggaaaagg agacagccac tctaaattgt cagtcttctg ggagcaaacc tgcagcccag 480 ctcacctgga ggaaaggtga ccaagaactc cacggggacc aaacacgaat ccaggaagat 540 cccaacggga aaaccttcac tgtgagcagc tcagtgtcat tccaggttac ccgggaggat 600 gatggagcaa acatcgtgtg ctctgtgaac catgaatctc tgaagggagc cgacagatcc 660 acttctcagc gcattgaagt gttatacaca ccaacagcca tgattaggcc agaacctgct 720 catcctcgag aaggccagaa gctgttgtta cattgtgagg ggcgtggcaa tccagtcccc 780 cagcagtacg tgtgggtaaa ggaaggcagt gagccacccc tcaagatgac ccaagagagt 840 gctctcatct tccccttttt gaataagagt gacagtggca cttatggctg tacagccaca 900 agcaacatgg gcagctatac agcctacttc accctcaatg tcaacgaccc cagtccagtg 960 ccctcgtcct ccagtaccta ccacgccatc attggaggga ttgtggcttt cattgtcttc 1020 ctgctgctca ttctgctcat tttccttgga cactatttga tccggcacaa aggaacctac 1080 ctgacacacg aagcgaaggg ttccgacgat gctccagatg cggatacggc catcatcaac 1140 gcagaaggcg ggcagtcagg cggggatgac aagaaggaat atttcatcta g 1191 <210> 54 <211> 396 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of mouse CADM3 including signal sequence <400> 54 Met Gly Ala Pro Ser Ala Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu Ala Cys Ser 1 5 10 15 Trp Ala Pro Gly Gly Ala Asn Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gln Pro Trp 20 25 30 Thr Ser Asp Glu Thr Val Val Ala Gly Gly Thr Val Val Leu Lys Cys 35 40 45 Gln Val Lys Asp His Glu Asp Ser Ser Leu Gln Trp Ser Asn Pro Ala 50 55 60 Gln Gln Thr Leu Tyr Phe Gly Glu Lys Arg Ala Leu Arg Asp Asn Arg 65 70 75 80 Ile Gln Leu Val Ser Ser Thr Pro His Glu Leu Ser Ile Ser Ile Ser 85 90 95 Asn Val Ala Leu Ala Asp Glu Gly Glu Tyr Thr Cys Ser Ile Phe Thr 100 105 110 Met Pro Val Arg Thr Ala Lys Ser Leu Val Thr Val Leu Gly Ile Pro 115 120 125 Gln Lys Pro Ile Ile Thr Gly Tyr Lys Ser Ser Leu Arg Glu Lys Glu 130 135 140 Thr Ala Thr Leu Asn Cys Gln Ser Ser Gly Ser Lys Pro Ala Ala Gln 145 150 155 160 Leu Thr Trp Arg Lys Gly Asp Gln Glu Leu His Gly Asp Gln Thr Arg 165 170 175 Ile Gln Glu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Phe Thr Val Ser Ser Ser Val 180 185 190 Ser Phe Gln Val Thr Arg Glu Asp Asp Gly Ala Asn Ile Val Cys Ser 195 200 205 Val Asn His Glu Ser Leu Lys Gly Ala Asp Arg Ser Thr Ser Gln Arg 210 215 220 Ile Glu Val Leu Tyr Thr Pro Thr Ala Met Ile Arg Pro Glu Pro Ala 225 230 235 240 His Pro Arg Glu Gly Gln Lys Leu Leu Leu His Cys Glu Gly Arg Gly 245 250 255 Asn Pro Val Pro Gln Gln Tyr Val Trp Val Lys Glu Gly Ser Glu Pro 260 265 270 Pro Leu Lys Met Thr Gln Glu Ser Ala Leu Ile Phe Pro Phe Leu Asn 275 280 285 Lys Ser Asp Ser Gly Thr Tyr Gly Cys Thr Ala Thr Ser Asn Met Gly 290 295 300 Ser Tyr Thr Ala Tyr Phe Thr Leu Asn Val Asn Asp Pro Ser Pro Val 305 310 315 320 Pro Ser Ser Ser Ser Thr Tyr His Ala Ile Ile Gly Gly Ile Val Ala 325 330 335 Phe Ile Val Phe Leu Leu Leu Ile Leu Leu Ile Phe Leu Gly His Tyr 340 345 350 Leu Ile Arg His Lys Gly Thr Tyr Leu Thr His Glu Ala Lys Gly Ser 355 360 365 Asp Asp Ala Pro Asp Ala Asp Thr Ala Ile Ile Asn Ala Glu Gly Gly 370 375 380 Gln Ser Gly Gly Asp Asp Lys Lys Glu Tyr Phe Ile 385 390 395 <210> 55 <211> 1191 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of cynomolgus monkey CADM3 including signal sequence <400> 55 atgggggccc cagtcgcctt gctcctgctc ctgctgttcg cctgctgctg ggcgcccagt 60 ggggccaacc tctcccagga cgacagccag ccctggacat ctgatgaaac agtggtggct 120 ggtggcaccg tggtgctcaa gtgccaagtg aaagatcacg aggactcatc cctgcaatgg 180 tctaaccctg ctcagcagac tctctacttt ggggagaaga gagcccttcg agataatcga 240 attcagctgg ttacctctac tccccacgag ctcagcatca gcatcagcaa tgtggccctg 300 gcagacgagg gcgagtacac ctgctcaatc ttcactatgc ctgtacgaac tgccaagtcc 360 ctcgtcactg tgctaggaat tccacagaag cccatcatca ctggttataa atcttcatta 420 cgggaaaagg acacagccac cctaaactgt cagtcttctg ggagcaagcc tgcagcccgg 480 ctcacctgga gaaagggtga ccaagaactc cacggagaac caactcgcat acaggaagat 540 cccaatggta aaaccttcac tgtcagcagc tcggtgacat tccaggttac ccgggaggat 600 gatggggcga acatcgtgtg ctctgtgaac catgaatctc taaagggagc tgacagatcc 660 acctctcaac gcattgaagt tttatacaca ccgactgcga tgattaggcc agaccctccc 720 catcctcgtg agggccagaa gctgttgcta cactgtgagg gtcgtggcaa tccagtcccc 780 cagcagtacc tatgggagaa ggagggcagt gtgccacccc tgaagatgac ccaagagagt 840 gccctgatct tccccttcct caacaagagt gacagcggca cctacggctg cacggccacc 900 agcaacatgg gcagctacaa ggcctactac actctcaacg ttaatgaccc cagtccggtg 960 ccctcctcct ccagcaccta ccacgccatc atcggcggga tcgtggcttt cattgtcttc 1020 ctgctgctca tcatgctcat cttccttgga cattacttga tccggcacaa aggaacctac 1080 ctgacacatg aggcgaaagg ctccgacgat gccccagatg cggacacggc catcatcaat 1140 gcagaaggcg ggcagtcggg aggggacgac aagaaggaat atttcatcta g 1191 <210> 56 <211> 396 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of cynomolgus monkey CADM3 including signal sequence <400> 56 Met Gly Ala Pro Val Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu Phe Ala Cys Cys 1 5 10 15 Trp Ala Pro Ser Gly Ala Asn Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gln Pro Trp 20 25 30 Thr Ser Asp Glu Thr Val Val Ala Gly Gly Thr Val Val Leu Lys Cys 35 40 45 Gln Val Lys Asp His Glu Asp Ser Ser Leu Gln Trp Ser Asn Pro Ala 50 55 60 Gln Gln Thr Leu Tyr Phe Gly Glu Lys Arg Ala Leu Arg Asp Asn Arg 65 70 75 80 Ile Gln Leu Val Thr Ser Thr Pro His Glu Leu Ser Ile Ser Ile Ser 85 90 95 Asn Val Ala Leu Ala Asp Glu Gly Glu Tyr Thr Cys Ser Ile Phe Thr 100 105 110 Met Pro Val Arg Thr Ala Lys Ser Leu Val Thr Val Leu Gly Ile Pro 115 120 125 Gln Lys Pro Ile Ile Thr Gly Tyr Lys Ser Ser Leu Arg Glu Lys Asp 130 135 140 Thr Ala Thr Leu Asn Cys Gln Ser Ser Gly Ser Lys Pro Ala Ala Arg 145 150 155 160 Leu Thr Trp Arg Lys Gly Asp Gln Glu Leu His Gly Glu Pro Thr Arg 165 170 175 Ile Gln Glu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Phe Thr Val Ser Ser Ser Val 180 185 190 Thr Phe Gln Val Thr Arg Glu Asp Asp Gly Ala Asn Ile Val Cys Ser 195 200 205 Val Asn His Glu Ser Leu Lys Gly Ala Asp Arg Ser Thr Ser Gln Arg 210 215 220 Ile Glu Val Leu Tyr Thr Pro Thr Ala Met Ile Arg Pro Asp Pro Pro 225 230 235 240 His Pro Arg Glu Gly Gln Lys Leu Leu Leu His Cys Glu Gly Arg Gly 245 250 255 Asn Pro Val Pro Gln Gln Tyr Leu Trp Glu Lys Glu Gly Ser Val Pro 260 265 270 Pro Leu Lys Met Thr Gln Glu Ser Ala Leu Ile Phe Pro Phe Leu Asn 275 280 285 Lys Ser Asp Ser Gly Thr Tyr Gly Cys Thr Ala Thr Ser Asn Met Gly 290 295 300 Ser Tyr Lys Ala Tyr Tyr Thr Leu Asn Val Asn Asp Pro Ser Pro Val 305 310 315 320 Pro Ser Ser Ser Ser Thr Tyr His Ala Ile Ile Gly Gly Ile Val Ala 325 330 335 Phe Ile Val Phe Leu Leu Leu Ile Met Leu Ile Phe Leu Gly His Tyr 340 345 350 Leu Ile Arg His Lys Gly Thr Tyr Leu Thr His Glu Ala Lys Gly Ser 355 360 365 Asp Asp Ala Pro Asp Ala Asp Thr Ala Ile Ile Asn Ala Glu Gly Gly 370 375 380 Gln Ser Gly Gly Asp Asp Lys Lys Glu Tyr Phe Ile 385 390 395 <210> 57 <211> 1713 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of hCADM3-FLAG_Fc including signal sequence <400> 57 atgggggccc cagccgcctc gctcctgctc ctgctcctgc tgttcgcctg ctgctgggcg 60 cccggcgggg ccaacctctc ccaggacgac agccagccct ggacatctga tgaaacagtg 120 gtggctggtg gcaccgtggt gctcaagtgc caagtgaaag atcacgagga ctcatccctg 180 caatggtcta accctgctca gcagactctc tactttgggg agaagagagc ccttcgagat 240 aatcgaattc agctggttac ctctacgccc cacgagctca gcatcagcat cagcaatgtg 300 gccctggcag acgagggcga gtacacctgc tcaatcttca ctatgcctgt gcgaactgcc 360 aagtccctcg tcactgtgct aggaattcca cagaagccca tcatcactgg ttataaatct 420 tcattacggg aaaaagacac agccacccta aactgtcagt cttctgggag caagcctgca 480 gcccggctca cctggagaaa gggtgaccaa gaactccacg gagaaccaac ccgcatacag 540 gaagatccca atggtaaaac cttcactgtc agcagctcgg tgacattcca ggttacccgg 600 gaggatgatg gggcgagcat cgtgtgctct gtgaaccatg aatctctaaa gggagctgac 660 agatccacct ctcaacgcat tgaagtttta tacacaccaa ctgcgatgat taggccagac 720 cctccccatc ctcgtgaggg ccagaagctg ttgctacact gtgagggtcg cggcaatcca 780 gtcccccagc agtacctatg ggagaaggag ggcagtgtgc cacccctgaa gatgacccag 840 gagagtgccc tgatcttccc tttcctcaac aagagtgaca gtggcaccta cggctgcaca 900 gccaccagca acatgggcag ctacaaggcc tactacaccc tcaatgttaa tgaccccagt 960 ccggtgccct cctcctccag cacctaccac tctagagcag actacaagga cgacgatgac 1020 aagactagtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 1080 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 1140 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 1200 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 1260 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1320 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1380 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1440 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1500 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1560 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1620 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1680 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tga 1713 <210> 58 <211> 570 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of hCADM3-FLAG_Fc including signal sequence <400> 58 Met Gly Ala Pro Ala Ala Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Phe Ala 1 5 10 15 Cys Cys Trp Ala Pro Gly Gly Ala Asn Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gln 20 25 30 Pro Trp Thr Ser Asp Glu Thr Val Val Ala Gly Gly Thr Val Val Leu 35 40 45 Lys Cys Gln Val Lys Asp His Glu Asp Ser Ser Leu Gln Trp Ser Asn 50 55 60 Pro Ala Gln Gln Thr Leu Tyr Phe Gly Glu Lys Arg Ala Leu Arg Asp 65 70 75 80 Asn Arg Ile Gln Leu Val Thr Ser Thr Pro His Glu Leu Ser Ile Ser 85 90 95 Ile Ser Asn Val Ala Leu Ala Asp Glu Gly Glu Tyr Thr Cys Ser Ile 100 105 110 Phe Thr Met Pro Val Arg Thr Ala Lys Ser Leu Val Thr Val Leu Gly 115 120 125 Ile Pro Gln Lys Pro Ile Ile Thr Gly Tyr Lys Ser Ser Leu Arg Glu 130 135 140 Lys Asp Thr Ala Thr Leu Asn Cys Gln Ser Ser Gly Ser Lys Pro Ala 145 150 155 160 Ala Arg Leu Thr Trp Arg Lys Gly Asp Gln Glu Leu His Gly Glu Pro 165 170 175 Thr Arg Ile Gln Glu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Phe Thr Val Ser Ser 180 185 190 Ser Val Thr Phe Gln Val Thr Arg Glu Asp Asp Gly Ala Ser Ile Val 195 200 205 Cys Ser Val Asn His Glu Ser Leu Lys Gly Ala Asp Arg Ser Thr Ser 210 215 220 Gln Arg Ile Glu Val Leu Tyr Thr Pro Thr Ala Met Ile Arg Pro Asp 225 230 235 240 Pro Pro His Pro Arg Glu Gly Gln Lys Leu Leu Leu His Cys Glu Gly 245 250 255 Arg Gly Asn Pro Val Pro Gln Gln Tyr Leu Trp Glu Lys Glu Gly Ser 260 265 270 Val Pro Pro Leu Lys Met Thr Gln Glu Ser Ala Leu Ile Phe Pro Phe 275 280 285 Leu Asn Lys Ser Asp Ser Gly Thr Tyr Gly Cys Thr Ala Thr Ser Asn 290 295 300 Met Gly Ser Tyr Lys Ala Tyr Tyr Thr Leu Asn Val Asn Asp Pro Ser 305 310 315 320 Pro Val Pro Ser Ser Ser Ser Thr Tyr His Ser Arg Ala Asp Tyr Lys 325 330 335 Asp Asp Asp Asp Lys Thr Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 340 345 350 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 355 360 365 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 370 375 380 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 385 390 395 400 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 405 410 415 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 420 425 430 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 435 440 445 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 450 455 460 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 465 470 475 480 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 485 490 495 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 500 505 510 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 515 520 525 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 530 535 540 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 545 550 555 560 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 565 570 <210> 59 <211> 1707 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of mCADM3-FLAG_Fc including signal sequence <400> 59 atgggggccc cttccgccct gcccctgctc ctgctcctcg cctgctcctg ggcgcccggc 60 ggggccaatc tttcccagga cgatagccag ccctggacat ctgatgaaac agttgtggct 120 ggtggcacag tggttctcaa gtgtcaagta aaagaccatg aagactcatc tctgcagtgg 180 tctaaccctg ctcagcagac cctatacttc ggggagaaga gagcccttcg agataatcgg 240 attcagctgg ttagctctac tccccatgag ctcagcatca gcatcagcaa tgtggcgctg 300 gccgatgagg gggagtacac gtgctccatc ttcactatgc ctgtgcgaac cgccaagtcc 360 cttgtcactg tgctcggaat cccacagaaa cccataatca ctggttataa gtcatcattg 420 cgggaaaagg agacagccac tctaaattgt cagtcttctg ggagcaaacc tgcagcccag 480 ctcacctgga ggaaaggtga ccaagaactc cacggggacc aaacacgaat ccaggaagat 540 cccaacggga aaaccttcac tgtgagcagc tcagtgtcat tccaggttac ccgggaggat 600 gatggagcaa acatcgtgtg ctctgtgaac catgaatctc tgaagggagc cgacagatcc 660 acttctcagc gcattgaagt gttatacaca ccaacagcca tgattaggcc agaacctgct 720 catcctcgag aaggccagaa gctgttgtta cattgtgagg ggcgtggcaa tccagtcccc 780 cagcagtacg tgtgggtaaa ggaaggcagt gagccacccc tcaagatgac ccaagagagt 840 gctctcatct tccccttttt gaataagagt gacagtggca cttatggctg tacagccaca 900 agcaacatgg gcagctatac agcctacttc accctcaatg tcaacgaccc cagtccagtg 960 ccctcgtcct ccagtaccta ccactctaga gcagactaca aggacgacga tgacaagact 1020 agtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 1080 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 1140 acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 1200 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 1260 taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1320 aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1380 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1440 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1500 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1560 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1620 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1680 agcctctccc tgtctccggg taaatga 1707 <210> 60 <211> 568 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of mCADM3-FLAG_Fc including signal sequence <400> 60 Met Gly Ala Pro Ser Ala Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu Ala Cys Ser 1 5 10 15 Trp Ala Pro Gly Gly Ala Asn Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gln Pro Trp 20 25 30 Thr Ser Asp Glu Thr Val Val Ala Gly Gly Thr Val Val Leu Lys Cys 35 40 45 Gln Val Lys Asp His Glu Asp Ser Ser Leu Gln Trp Ser Asn Pro Ala 50 55 60 Gln Gln Thr Leu Tyr Phe Gly Glu Lys Arg Ala Leu Arg Asp Asn Arg 65 70 75 80 Ile Gln Leu Val Ser Ser Thr Pro His Glu Leu Ser Ile Ser Ile Ser 85 90 95 Asn Val Ala Leu Ala Asp Glu Gly Glu Tyr Thr Cys Ser Ile Phe Thr 100 105 110 Met Pro Val Arg Thr Ala Lys Ser Leu Val Thr Val Leu Gly Ile Pro 115 120 125 Gln Lys Pro Ile Ile Thr Gly Tyr Lys Ser Ser Leu Arg Glu Lys Glu 130 135 140 Thr Ala Thr Leu Asn Cys Gln Ser Ser Gly Ser Lys Pro Ala Ala Gln 145 150 155 160 Leu Thr Trp Arg Lys Gly Asp Gln Glu Leu His Gly Asp Gln Thr Arg 165 170 175 Ile Gln Glu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Phe Thr Val Ser Ser Ser Val 180 185 190 Ser Phe Gln Val Thr Arg Glu Asp Asp Gly Ala Asn Ile Val Cys Ser 195 200 205 Val Asn His Glu Ser Leu Lys Gly Ala Asp Arg Ser Thr Ser Gln Arg 210 215 220 Ile Glu Val Leu Tyr Thr Pro Thr Ala Met Ile Arg Pro Glu Pro Ala 225 230 235 240 His Pro Arg Glu Gly Gln Lys Leu Leu Leu His Cys Glu Gly Arg Gly 245 250 255 Asn Pro Val Pro Gln Gln Tyr Val Trp Val Lys Glu Gly Ser Glu Pro 260 265 270 Pro Leu Lys Met Thr Gln Glu Ser Ala Leu Ile Phe Pro Phe Leu Asn 275 280 285 Lys Ser Asp Ser Gly Thr Tyr Gly Cys Thr Ala Thr Ser Asn Met Gly 290 295 300 Ser Tyr Thr Ala Tyr Phe Thr Leu Asn Val Asn Asp Pro Ser Pro Val 305 310 315 320 Pro Ser Ser Ser Ser Thr Tyr His Ser Arg Ala Asp Tyr Lys Asp Asp 325 330 335 Asp Asp Lys Thr Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 340 345 350 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 355 360 365 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 370 375 380 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 385 390 395 400 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 405 410 415 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 420 425 430 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 435 440 445 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 450 455 460 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 465 470 475 480 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 485 490 495 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 500 505 510 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 515 520 525 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 530 535 540 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 545 550 555 560 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 565 <210> 61 <211> 1707 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of rCADM3-FLAG_Fc including signal sequence <400> 61 atgggggccc cttccgccct gcccctgctc ctgctcctcg cctgctcctg ggcgcccggc 60 ggggccaatc tttcccagga cgatagccag ccctggacgt ctgatgaaac agtggtggct 120 ggtggcacag tagtgctcaa gtgccaagtg aaagaccatg aagactcatc tctgcagtgg 180 tctaaccctg cccagcagac tctatacttt ggggagaaaa gagcccttcg agataatcgg 240 attcagctgg ttagctccac cccgcatgag ctcagcatca gcatcagcaa cgtggcactg 300 gccgacgagg gcgagtacac atgctccatc ttcactatgc ctgtgcggac cgccaagtcc 360 ctcgtcactg tgctcggaat cccacagaaa cccataatca ctggttataa gtcatcgttg 420 cgggaaaagg agacagccac tctaaattgt cagtcttctg ggagcaaacc tgcagcccag 480 ctcgcctgga gaaaaggtga ccaagaactc cacggggacc agacgcgaat ccaggaagat 540 cccaatggga aaaccttcac tgtgagcagc tcggtgtcat tccaggttac ccgggatgat 600 gatggagcaa acgtcgtgtg ctctgtgaac catgaatctc tgaagggagc tgacagatcc 660 acctctcagc gcattgaagt gttatacaca ccaacagcca tgattaggcc agaacctgct 720 catcctcgtg aaggccagaa gctgttgtta cattgtgagg ggcgtggcaa tccagtccct 780 cagcagtacg tgtgggtaaa agaaggcagc gagccacccc tcaagatgac ccaagagagt 840 gcactcatct tcccattttt gaacaaaagt gacagtggca cctatggctg tacagccacg 900 agcaacatgg gcagctatac agcctacttc actctcaatg tcaacgaccc tagtccagtg 960 ccctcatcct ccagtactta ccactctaga gcagactaca aggacgacga tgacaagact 1020 agtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 1080 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 1140 acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 1200 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 1260 taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1320 aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1380 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1440 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1500 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1560 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1620 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1680 agcctctccc tgtctccggg taaatga 1707 <210> 62 <211> 568 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of rCADM3-FLAG_Fc including signal sequence <400> 62 Met Gly Ala Pro Ser Ala Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu Ala Cys Ser 1 5 10 15 Trp Ala Pro Gly Gly Ala Asn Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gln Pro Trp 20 25 30 Thr Ser Asp Glu Thr Val Val Ala Gly Gly Thr Val Val Leu Lys Cys 35 40 45 Gln Val Lys Asp His Glu Asp Ser Ser Leu Gln Trp Ser Asn Pro Ala 50 55 60 Gln Gln Thr Leu Tyr Phe Gly Glu Lys Arg Ala Leu Arg Asp Asn Arg 65 70 75 80 Ile Gln Leu Val Ser Ser Thr Pro His Glu Leu Ser Ile Ser Ile Ser 85 90 95 Asn Val Ala Leu Ala Asp Glu Gly Glu Tyr Thr Cys Ser Ile Phe Thr 100 105 110 Met Pro Val Arg Thr Ala Lys Ser Leu Val Thr Val Leu Gly Ile Pro 115 120 125 Gln Lys Pro Ile Ile Thr Gly Tyr Lys Ser Ser Leu Arg Glu Lys Glu 130 135 140 Thr Ala Thr Leu Asn Cys Gln Ser Ser Gly Ser Lys Pro Ala Ala Gln 145 150 155 160 Leu Ala Trp Arg Lys Gly Asp Gln Glu Leu His Gly Asp Gln Thr Arg 165 170 175 Ile Gln Glu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Phe Thr Val Ser Ser Ser Val 180 185 190 Ser Phe Gln Val Thr Arg Asp Asp Asp Gly Ala Asn Val Val Cys Ser 195 200 205 Val Asn His Glu Ser Leu Lys Gly Ala Asp Arg Ser Thr Ser Gln Arg 210 215 220 Ile Glu Val Leu Tyr Thr Pro Thr Ala Met Ile Arg Pro Glu Pro Ala 225 230 235 240 His Pro Arg Glu Gly Gln Lys Leu Leu Leu His Cys Glu Gly Arg Gly 245 250 255 Asn Pro Val Pro Gln Gln Tyr Val Trp Val Lys Glu Gly Ser Glu Pro 260 265 270 Pro Leu Lys Met Thr Gln Glu Ser Ala Leu Ile Phe Pro Phe Leu Asn 275 280 285 Lys Ser Asp Ser Gly Thr Tyr Gly Cys Thr Ala Thr Ser Asn Met Gly 290 295 300 Ser Tyr Thr Ala Tyr Phe Thr Leu Asn Val Asn Asp Pro Ser Pro Val 305 310 315 320 Pro Ser Ser Ser Ser Thr Tyr His Ser Arg Ala Asp Tyr Lys Asp Asp 325 330 335 Asp Asp Lys Thr Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 340 345 350 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 355 360 365 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 370 375 380 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 385 390 395 400 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 405 410 415 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 420 425 430 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 435 440 445 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 450 455 460 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 465 470 475 480 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 485 490 495 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 500 505 510 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 515 520 525 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 530 535 540 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 545 550 555 560 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 565 <210> 63 <211> 1683 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of hCADM3-GST including signal sequence <400> 63 atgggggccc cagccgcctc gctcctgctc ctgctcctgc tgttcgcctg ctgctgggcg 60 cccggcgggg ccaacctctc ccaggacgac agccagccct ggacatctga tgaaacagtg 120 gtggctggtg gcaccgtggt gctcaagtgc caagtgaaag atcacgagga ctcatccctg 180 caatggtcta accctgctca gcagactctc tactttgggg agaagagagc ccttcgagat 240 aatcgaattc agctggttac ctctacgccc cacgagctca gcatcagcat cagcaatgtg 300 gccctggcag acgagggcga gtacacctgc tcaatcttca ctatgcctgt gcgaactgcc 360 aagtccctcg tcactgtgct aggaattcca cagaagccca tcatcactgg ttataaatct 420 tcattacggg aaaaagacac agccacccta aactgtcagt cttctgggag caagcctgca 480 gcccggctca cctggagaaa gggtgaccaa gaactccacg gagaaccaac ccgcatacag 540 gaagatccca atggtaaaac cttcactgtc agcagctcgg tgacattcca ggttacccgg 600 gaggatgatg gggcgagcat cgtgtgctct gtgaaccatg aatctctaaa gggagctgac 660 agatccacct ctcaacgcat tgaagtttta tacacaccaa ctgcgatgat taggccagac 720 cctccccatc ctcgtgaggg ccagaagctg ttgctacact gtgagggtcg cggcaatcca 780 gtcccccagc agtacctatg ggagaaggag ggcagtgtgc cacccctgaa gatgacccag 840 gagagtgccc tgatcttccc tttcctcaac aagagtgaca gtggcaccta cggctgcaca 900 gccaccagca acatgggcag ctacaaggcc tactacaccc tcaatgttaa tgaccccagt 960 ccggtgccct cctcctccag cacctaccac ggtaccctgg aagttctgtt ccaggggccc 1020 atgtccccta tactaggtta ttggaaaatt aagggccttg tgcaacccac tcgacttctt 1080 ttggaatatc ttgaagaaaa atatgaagag catttgtatg agcgcgatga aggtgataaa 1140 tggcgaaaca aaaagtttga attgggtttg gagtttccca atcttcctta ttatattgat 1200 ggtgatgtta aattaacaca gtctatggcc atcatacgtt atatagctga caagcacaac 1260 atgttgggtg gttgtccaaa agagcgtgca gagatttcaa tgcttgaagg agcggttttg 1320 gatattagat acggtgtttc gagaattgca tatagtaaag actttgaaac tctcaaagtt 1380 gattttctta gcaagctacc tgaaatgctg aaaatgttcg aagatcgttt atgtcataaa 1440 acatatttaa atggtgatca tgtaacccat cctgacttca tgttgtatga cgctcttgat 1500 gttgttttat acatggaccc aatgtgcctg gatgcgttcc caaaattagt ttgttttaaa 1560 aaacgtattg aagctatccc acaaattgat aagtacttga aatccagcaa gtatatagca 1620 tggcctttgc agggctggca agccacgttt ggtggtggcg accatcctcc aaaatcggat 1680 tga 1683 <210> 64 <211> 560 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of hCADM3-GST including signal sequence <400> 64 Met Gly Ala Pro Ala Ala Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Phe Ala 1 5 10 15 Cys Cys Trp Ala Pro Gly Gly Ala Asn Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gln 20 25 30 Pro Trp Thr Ser Asp Glu Thr Val Val Ala Gly Gly Thr Val Val Leu 35 40 45 Lys Cys Gln Val Lys Asp His Glu Asp Ser Ser Leu Gln Trp Ser Asn 50 55 60 Pro Ala Gln Gln Thr Leu Tyr Phe Gly Glu Lys Arg Ala Leu Arg Asp 65 70 75 80 Asn Arg Ile Gln Leu Val Thr Ser Thr Pro His Glu Leu Ser Ile Ser 85 90 95 Ile Ser Asn Val Ala Leu Ala Asp Glu Gly Glu Tyr Thr Cys Ser Ile 100 105 110 Phe Thr Met Pro Val Arg Thr Ala Lys Ser Leu Val Thr Val Leu Gly 115 120 125 Ile Pro Gln Lys Pro Ile Ile Thr Gly Tyr Lys Ser Ser Leu Arg Glu 130 135 140 Lys Asp Thr Ala Thr Leu Asn Cys Gln Ser Ser Gly Ser Lys Pro Ala 145 150 155 160 Ala Arg Leu Thr Trp Arg Lys Gly Asp Gln Glu Leu His Gly Glu Pro 165 170 175 Thr Arg Ile Gln Glu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Phe Thr Val Ser Ser 180 185 190 Ser Val Thr Phe Gln Val Thr Arg Glu Asp Asp Gly Ala Ser Ile Val 195 200 205 Cys Ser Val Asn His Glu Ser Leu Lys Gly Ala Asp Arg Ser Thr Ser 210 215 220 Gln Arg Ile Glu Val Leu Tyr Thr Pro Thr Ala Met Ile Arg Pro Asp 225 230 235 240 Pro Pro His Pro Arg Glu Gly Gln Lys Leu Leu Leu His Cys Glu Gly 245 250 255 Arg Gly Asn Pro Val Pro Gln Gln Tyr Leu Trp Glu Lys Glu Gly Ser 260 265 270 Val Pro Pro Leu Lys Met Thr Gln Glu Ser Ala Leu Ile Phe Pro Phe 275 280 285 Leu Asn Lys Ser Asp Ser Gly Thr Tyr Gly Cys Thr Ala Thr Ser Asn 290 295 300 Met Gly Ser Tyr Lys Ala Tyr Tyr Thr Leu Asn Val Asn Asp Pro Ser 305 310 315 320 Pro Val Pro Ser Ser Ser Ser Thr Tyr His Gly Thr Leu Glu Val Leu 325 330 335 Phe Gln Gly Pro Met Ser Pro Ile Leu Gly Tyr Trp Lys Ile Lys Gly 340 345 350 Leu Val Gln Pro Thr Arg Leu Leu Leu Glu Tyr Leu Glu Glu Lys Tyr 355 360 365 Glu Glu His Leu Tyr Glu Arg Asp Glu Gly Asp Lys Trp Arg Asn Lys 370 375 380 Lys Phe Glu Leu Gly Leu Glu Phe Pro Asn Leu Pro Tyr Tyr Ile Asp 385 390 395 400 Gly Asp Val Lys Leu Thr Gln Ser Met Ala Ile Ile Arg Tyr Ile Ala 405 410 415 Asp Lys His Asn Met Leu Gly Gly Cys Pro Lys Glu Arg Ala Glu Ile 420 425 430 Ser Met Leu Glu Gly Ala Val Leu Asp Ile Arg Tyr Gly Val Ser Arg 435 440 445 Ile Ala Tyr Ser Lys Asp Phe Glu Thr Leu Lys Val Asp Phe Leu Ser 450 455 460 Lys Leu Pro Glu Met Leu Lys Met Phe Glu Asp Arg Leu Cys His Lys 465 470 475 480 Thr Tyr Leu Asn Gly Asp His Val Thr His Pro Asp Phe Met Leu Tyr 485 490 495 Asp Ala Leu Asp Val Val Leu Tyr Met Asp Pro Met Cys Leu Asp Ala 500 505 510 Phe Pro Lys Leu Val Cys Phe Lys Lys Arg Ile Glu Ala Ile Pro Gln 515 520 525 Ile Asp Lys Tyr Leu Lys Ser Ser Lys Tyr Ile Ala Trp Pro Leu Gln 530 535 540 Gly Trp Gln Ala Thr Phe Gly Gly Gly Asp His Pro Pro Lys Ser Asp 545 550 555 560 <210> 65 <211> 1677 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of mCADM3-GST including signal sequence <400> 65 atgggggccc cttccgccct gcccctgctc ctgctcctcg cctgctcctg ggcgcccggc 60 ggggccaatc tttcccagga cgatagccag ccctggacat ctgatgaaac agttgtggct 120 ggtggcacag tggttctcaa gtgtcaagta aaagaccatg aagactcatc tctgcagtgg 180 tctaaccctg ctcagcagac cctatacttc ggggagaaga gagcccttcg agataatcgg 240 attcagctgg ttagctctac tccccatgag ctcagcatca gcatcagcaa tgtggcgctg 300 gccgatgagg gggagtacac gtgctccatc ttcactatgc ctgtgcgaac cgccaagtcc 360 cttgtcactg tgctcggaat cccacagaaa cccataatca ctggttataa gtcatcattg 420 cgggaaaagg agacagccac tctaaattgt cagtcttctg ggagcaaacc tgcagcccag 480 ctcacctgga ggaaaggtga ccaagaactc cacggggacc aaacacgaat ccaggaagat 540 cccaacggga aaaccttcac tgtgagcagc tcagtgtcat tccaggttac ccgggaggat 600 gatggagcaa acatcgtgtg ctctgtgaac catgaatctc tgaagggagc cgacagatcc 660 acttctcagc gcattgaagt gttatacaca ccaacagcca tgattaggcc agaacctgct 720 catcctcgag aaggccagaa gctgttgtta cattgtgagg ggcgtggcaa tccagtcccc 780 cagcagtacg tgtgggtaaa ggaaggcagt gagccacccc tcaagatgac ccaagagagt 840 gctctcatct tccccttttt gaataagagt gacagtggca cttatggctg tacagccaca 900 agcaacatgg gcagctatac agcctacttc accctcaatg tcaacgaccc cagtccagtg 960 ccctcgtcct ccagtaccta ccacggtacc ctggaagttc tgttccaggg gcccatgtcc 1020 cctatactag gttattggaa aattaagggc cttgtgcaac ccactcgact tcttttggaa 1080 tatcttgaag aaaaatatga agagcatttg tatgagcgcg atgaaggtga taaatggcga 1140 aacaaaaagt ttgaattggg tttggagttt cccaatcttc cttattatat tgatggtgat 1200 gttaaattaa cacagtctat ggccatcata cgttatatag ctgacaagca caacatgttg 1260 ggtggttgtc caaaagagcg tgcagagatt tcaatgcttg aaggagcggt tttggatatt 1320 agatacggtg tttcgagaat tgcatatagt aaagactttg aaactctcaa agttgatttt 1380 cttagcaagc tacctgaaat gctgaaaatg ttcgaagatc gtttatgtca taaaacatat 1440 ttaaatggtg atcatgtaac ccatcctgac ttcatgttgt atgacgctct tgatgttgtt 1500 ttatacatgg acccaatgtg cctggatgcg ttcccaaaat tagtttgttt taaaaaacgt 1560 attgaagcta tcccacaaat tgataagtac ttgaaatcca gcaagtatat agcatggcct 1620 ttgcagggct ggcaagccac gtttggtggt ggcgaccatc ctccaaaatc ggattga 1677 <210> 66 <211> 558 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of mCADM3-GST including signal sequence <400> 66 Met Gly Ala Pro Ser Ala Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu Ala Cys Ser 1 5 10 15 Trp Ala Pro Gly Gly Ala Asn Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gln Pro Trp 20 25 30 Thr Ser Asp Glu Thr Val Val Ala Gly Gly Thr Val Val Leu Lys Cys 35 40 45 Gln Val Lys Asp His Glu Asp Ser Ser Leu Gln Trp Ser Asn Pro Ala 50 55 60 Gln Gln Thr Leu Tyr Phe Gly Glu Lys Arg Ala Leu Arg Asp Asn Arg 65 70 75 80 Ile Gln Leu Val Ser Ser Thr Pro His Glu Leu Ser Ile Ser Ile Ser 85 90 95 Asn Val Ala Leu Ala Asp Glu Gly Glu Tyr Thr Cys Ser Ile Phe Thr 100 105 110 Met Pro Val Arg Thr Ala Lys Ser Leu Val Thr Val Leu Gly Ile Pro 115 120 125 Gln Lys Pro Ile Ile Thr Gly Tyr Lys Ser Ser Leu Arg Glu Lys Glu 130 135 140 Thr Ala Thr Leu Asn Cys Gln Ser Ser Gly Ser Lys Pro Ala Ala Gln 145 150 155 160 Leu Thr Trp Arg Lys Gly Asp Gln Glu Leu His Gly Asp Gln Thr Arg 165 170 175 Ile Gln Glu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Phe Thr Val Ser Ser Ser Val 180 185 190 Ser Phe Gln Val Thr Arg Glu Asp Asp Gly Ala Asn Ile Val Cys Ser 195 200 205 Val Asn His Glu Ser Leu Lys Gly Ala Asp Arg Ser Thr Ser Gln Arg 210 215 220 Ile Glu Val Leu Tyr Thr Pro Thr Ala Met Ile Arg Pro Glu Pro Ala 225 230 235 240 His Pro Arg Glu Gly Gln Lys Leu Leu Leu His Cys Glu Gly Arg Gly 245 250 255 Asn Pro Val Pro Gln Gln Tyr Val Trp Val Lys Glu Gly Ser Glu Pro 260 265 270 Pro Leu Lys Met Thr Gln Glu Ser Ala Leu Ile Phe Pro Phe Leu Asn 275 280 285 Lys Ser Asp Ser Gly Thr Tyr Gly Cys Thr Ala Thr Ser Asn Met Gly 290 295 300 Ser Tyr Thr Ala Tyr Phe Thr Leu Asn Val Asn Asp Pro Ser Pro Val 305 310 315 320 Pro Ser Ser Ser Ser Thr Tyr His Gly Thr Leu Glu Val Leu Phe Gln 325 330 335 Gly Pro Met Ser Pro Ile Leu Gly Tyr Trp Lys Ile Lys Gly Leu Val 340 345 350 Gln Pro Thr Arg Leu Leu Leu Glu Tyr Leu Glu Glu Lys Tyr Glu Glu 355 360 365 His Leu Tyr Glu Arg Asp Glu Gly Asp Lys Trp Arg Asn Lys Lys Phe 370 375 380 Glu Leu Gly Leu Glu Phe Pro Asn Leu Pro Tyr Tyr Ile Asp Gly Asp 385 390 395 400 Val Lys Leu Thr Gln Ser Met Ala Ile Ile Arg Tyr Ile Ala Asp Lys 405 410 415 His Asn Met Leu Gly Gly Cys Pro Lys Glu Arg Ala Glu Ile Ser Met 420 425 430 Leu Glu Gly Ala Val Leu Asp Ile Arg Tyr Gly Val Ser Arg Ile Ala 435 440 445 Tyr Ser Lys Asp Phe Glu Thr Leu Lys Val Asp Phe Leu Ser Lys Leu 450 455 460 Pro Glu Met Leu Lys Met Phe Glu Asp Arg Leu Cys His Lys Thr Tyr 465 470 475 480 Leu Asn Gly Asp His Val Thr His Pro Asp Phe Met Leu Tyr Asp Ala 485 490 495 Leu Asp Val Val Leu Tyr Met Asp Pro Met Cys Leu Asp Ala Phe Pro 500 505 510 Lys Leu Val Cys Phe Lys Lys Arg Ile Glu Ala Ile Pro Gln Ile Asp 515 520 525 Lys Tyr Leu Lys Ser Ser Lys Tyr Ile Ala Trp Pro Leu Gln Gly Trp 530 535 540 Gln Ala Thr Phe Gly Gly Gly Asp His Pro Pro Lys Ser Asp 545 550 555 <210> 67 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L8_01 excluding signal sequence <400> 67 caggtgcaac ttgttcagag cggaggtggt ctcgtccaac ctggcggcag cctcagactc 60 tcttgtgctg cttcaggacg aactttcagt aattacgcac gaggatggtt cagacaggca 120 cccgggaagg ggcgcgagtt tgtggcagca atagattatt ctggtggaag caccaactac 180 gctgattctg ccaagggcag gtttaccata agtagagaca actccaagaa tactctttat 240 ttgcaaatga actcactgag agcagaggat acagccgtgt attactgcgc tgcccctgct 300 tcacgtcgtc catcttggga tgctgatgga tatgattact ggggtcaagg tactctggta 360 actgttagtt cc 372 <210> 68 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L8_01 excluding signal sequence <400> 68 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Arg Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Arg Glu Phe Val 35 40 45 Ala Ala Ile Asp Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Pro Ala Ser Arg Arg Pro Ser Trp Asp Ala Asp Gly Tyr Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 69 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L8_02 excluding signal sequence <400> 69 caagtccaac ttgtccaaag tggcggtggg ttggtccagc ccggcggttc tttgaggttg 60 tcatgcgccg cctccggcag gaccttctca aattacgccc gtggttggtt ccgtcaggca 120 cctgggaaag aacgggagtt cgtagctgca atagattaca gcggtgggtc aactaattac 180 gctgattctg ccaaaggaag attcaccatc tcaagagaca attctaagaa cacactttac 240 cttcagatga actctctgag agctgaagac accgctgtgt attactgtgc tgcacccgca 300 tcacggcgac cctcatggga tgctgatggg tacgactatt gggggcaagg tacacttgtt 360 actgtatcta gt 372 <210> 70 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L8_02 excluding signal sequence <400> 70 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Arg Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45 Ala Ala Ile Asp Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Pro Ala Ser Arg Arg Pro Ser Trp Asp Ala Asp Gly Tyr Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 71 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L8_03 excluding signal sequence <400> 71 caagttcaac ttgtagagtc tggaggcggt ctggttcaac ctggtgggtc cctccgcctt 60 tcctgcgctg ctagcgggag aacctttagt aattatgcac gtggctggtt taggcaggca 120 ccagggaaag ggcgtgagtt cgtcgcagca atagattata gcggcggatc taccaactac 180 gccgattcag ctaagggacg atttacaatt tcacgagaca attccaagaa taccgtttac 240 ctgcaaatga atagtctccg ggccgaagat accgctgtgt attattgtgc agcccctgct 300 tcccgccgtc ccagttggga cgcagacggg tatgactatt ggggccaggg aactttggta 360 accgtttcat ca 372 <210> 72 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L8_03 excluding signal sequence <400> 72 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Arg Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Arg Glu Phe Val 35 40 45 Ala Ala Ile Asp Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Pro Ala Ser Arg Arg Pro Ser Trp Asp Ala Asp Gly Tyr Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 73 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L8_04 excluding signal sequence <400> 73 caggttcagt tggttgagag cggtggtggt ctggtacagc ccggcggtag cttgcgactt 60 tcctgtgcag ccagtggtcg gacattttct aactatgccc gaggctggtt tcgccaggcc 120 cccggaaagg aacgtgagtt cgttgcagct atagattact ccggaggatc aaccaattat 180 gccgattctg caaaaggacg ctttaccatc tcccgtgaca atagtaaaaa taccgtgtac 240 ttgcaaatga acagcttgag ggcagaggat accgctgttt attactgcgc cgctcccgct 300 agtcgcaggc catcctggga cgcagatggg tatgattact ggggccaagg caccctcgta 360 actgtttcct cc 372 <210> 74 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L8_04 excluding signal sequence <400> 74 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Arg Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45 Ala Ala Ile Asp Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Pro Ala Ser Arg Arg Pro Ser Trp Asp Ala Asp Gly Tyr Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 75 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_01 excluding signal sequence <400> 75 gaggtccaac ttgtagagtc tggaggggga ttgattcaac ccggcgggag tcttagactt 60 agctgtgccg catcagggag cacagtgtca ttcaatgcta tggggtggta tagacaagca 120 cctgggaaag gtcttggtct ggtagccgtc atcacttctg gtgggtacac caattatgcc 180 gacagcgtca aaggccgttt taccattagt cgtgacaaca gcaagaatac cctctttctg 240 caaatgaaca gccttagagc tgaagacaca gccgtatact attgtaatgc cgagggggta 300 tattcagact atgttattat gaattattgg ggtcaaggca ctctcgttac cgtaagttca 360 <210> 76 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_01 excluding signal sequence <400> 76 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Val Ser Phe Asn 20 25 30 Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gly Leu Val 35 40 45 Ala Val Ile Thr Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn 85 90 95 Ala Glu Gly Val Tyr Ser Asp Tyr Val Ile Met Asn Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 77 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_02 excluding signal sequence <400> 77 gaggtacagt tggtggagag tggtggcgga ttgatccaac caggggggag cctgcgactc 60 tcctgtgctg ccagcggatc tacagtctct tttaatgcca tgggttggta tcgacaggct 120 ccaggtaaag gacgggtttt ggtcgcagta attactagcg gaggatacac aaactacgca 180 gactctgtca aggggcggtt tacaatatct cgggataact ccaagaacac cgtctatctt 240 caaatgaata gtttgcgggc cgaagatact gctgtctatt actgcaatgc tgaaggtgtg 300 tattccgatt atgttataat gaactattgg ggccagggca ccctggtcac agttagcagc 360 <210> 78 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_02 excluding signal sequence <400> 78 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Val Ser Phe Asn 20 25 30 Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Arg Val Leu Val 35 40 45 Ala Val Ile Thr Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn 85 90 95 Ala Glu Gly Val Tyr Ser Asp Tyr Val Ile Met Asn Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 79 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_03 excluding signal sequence <400> 79 gaagttcagt tggtagaatc cgggggaggt ttgattcaac ccggtgggag ccttagattg 60 agctgtgcag ccagcggctc aaccgtatct tttaacgcta tgggttggta tcggcaagcc 120 ccaggcaaac aaaggggttt ggtcagcgtc attaccagtg gtggttacac aaactacgca 180 gattcagtta agggccgctt cacaatctcc cgcgacaatt ccaaaaacac tgtgtatttg 240 caaatgaata gcttgagggc tgaagacaca gcagtatatt actgcaatgc tgagggtgta 300 tattctgact acgtaatcat gaactactgg ggacaaggca ctctggtgac cgtgagtagt 360 <210> 80 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_03 excluding signal sequence <400> 80 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Val Ser Phe Asn 20 25 30 Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Gly Leu Val 35 40 45 Ser Val Ile Thr Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn 85 90 95 Ala Glu Gly Val Tyr Ser Asp Tyr Val Ile Met Asn Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 81 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_04 excluding signal sequence <400> 81 gaagtccaac tggtagagag cggtgggggc cttattcagg caggaggctc tcttcgtctt 60 tcttgcgccg ccagcggcag tatcgttagc tttaatgcca tgggttggta tcgacaggcc 120 cctgggaaac aaagggggtt ggtcgcagta ataaccagtg gagggtacac caattatgca 180 gattctgtca agggaagatt caccatatca agggacaaca gtaagaacac attgtttctt 240 caaatgaata gtttgcgtgc agaagacaca gcagtgtact attgtaacgc tgagggcgtg 300 tactccgact atgttattat gaattactgg ggtcaaggta cactggtcac agttagcagc 360 <210> 82 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_04 excluding signal sequence <400> 82 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Val Ser Phe Asn 20 25 30 Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Gly Leu Val 35 40 45 Ala Val Ile Thr Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn 85 90 95 Ala Glu Gly Val Tyr Ser Asp Tyr Val Ile Met Asn Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 83 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_05 excluding signal sequence <400> 83 gaggttcagc tcgtagaaag tggggggggc ctgatacagc caggcgggag ccttagattg 60 agttgtgccg catccgggtc catattttca tttaacgcca tgggttggta cagacaagca 120 ccaggcaaag ggcgcgtatt ggtagctgtt atcaccagtg gtgggtacac aaactacgcc 180 gatagtgtta aagggcgatt tacaatatcc agagacaatt ccaaaaatac cgtttacctc 240 caaatgaata gccttagagc tgaggacact gctgtatact attgcaacgc tgagggcgta 300 tactccgatt acgtgataat gaactactgg ggccaaggca ctctggtcac cgtgtcatcc 360 <210> 84 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_05 excluding signal sequence <400> 84 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Phe Asn 20 25 30 Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Arg Val Leu Val 35 40 45 Ala Val Ile Thr Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn 85 90 95 Ala Glu Gly Val Tyr Ser Asp Tyr Val Ile Met Asn Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 85 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_06 excluding signal sequence <400> 85 caggttcaac tcgttgaatc tggtggaggg ttggtccagg cagggggcag tttgagactg 60 agctgcgccg catccggctc tattttctca tttaacgcca tggggtggta tcgacaggca 120 ccaggtaagc aacgcggtct cgttgcagtg ataaccagtg ggggctatac aaactatgct 180 gatagtgtta aaggcaggtt caccatcagt cgggacaaca gcaagaacac cgtcttcttg 240 caaatgaatt ctcttagagc tgaagatact gctgtatatt attgcaacgc cgagggtgtg 300 tattccgatt acgtgataat gaactactgg gggcagggga cacttgtgac cgttagttca 360 <210> 86 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_06 excluding signal sequence <400> 86 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Phe Asn 20 25 30 Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Gly Leu Val 35 40 45 Ala Val Ile Thr Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Phe Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn 85 90 95 Ala Glu Gly Val Tyr Ser Asp Tyr Val Ile Met Asn Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 87 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM 3219 excluding signal sequence <400> 87 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cctctggata cagcttcacc ggctactata tacactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gacttgagtg gatgggacgg atcaacccta acagtggtgg cacaacttat 180 gcaccgaagt ttcagggcag gttcaccatg accagagaca cgtccacgac cacagtgtac 240 ttggaactga gcggcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagttctg 300 gaacgacagg gcaggccctt cgaggctgat gcttttgata tctggggcca agggacaatg 360 gtcaccgtct cttca 375 <210> 88 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM 3219 excluding signal sequence <400> 88 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Ala Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Thr Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Leu Glu Arg Gln Gly Arg Pro Phe Glu Ala Asp Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 89 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3219 <400> 89 Gly Tyr Tyr Ile His 1 5 <210> 90 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3219 <400> 90 Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Ala Pro Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 91 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3219 <400> 91 Val Leu Glu Arg Gln Gly Arg Pro Phe Glu Ala Asp Ala Phe Asp Ile 1 5 10 15 <210> 92 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VL of CADM3219 excluding signal sequence <400> 92 gaaatagtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctcc gtggacgttc 300 ggccaaggga ccaaggtgga aataaaa 327 <210> 93 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VL of CADM3219 excluding signal sequence <400> 93 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 94 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR1 of CADM3219 <400> 94 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 95 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR2 of CADM3219 <400> 95 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 96 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR3 of CADM3219 <400> 96 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Trp Thr 1 5 10 <210> 97 <211> 378 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3301 excluding signal sequence <400> 97 cagatgcagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcaac aactatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg aatattcctc tttctggaac accaaagtac 180 gcacagaagt ttcagggcag aatcacgatg accgcggaca aatccacgag cacagagtac 240 atggaactga gcagcctgac atctgaggac acggccgtat actactgtgc gagagatacc 300 ccgagtggct acaattcccc ctactactat aaaggaatgg acgtctgggg ccaagggacc 360 atggtcaccg tctcttca 378 <210> 98 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3301 excluding signal sequence <400> 98 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Asn Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Asn Ile Pro Leu Ser Gly Thr Pro Lys Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Ile Thr Met Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Glu Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Thr Pro Ser Gly Tyr Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Lys Gly 100 105 110 Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 99 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3301 <400> 99 Asn Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 100 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3301 <400> 100 Gly Asn Ile Pro Leu Ser Gly Thr Pro Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 101 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3301 <400> 101 Asp Thr Pro Ser Gly Tyr Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Lys Gly Met Asp 1 5 10 15 Val <210> 102 <211> 378 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3309 excluding signal sequence <400> 102 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag atgaagaagc ctgggtcctc ggtgaagctc 60 tcctgcaaat tttctggagg cgacttcagg agttatccta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggcggc atcatcccga tttttagtcg agtaaactat 180 gcacagagat tcctgggcag aatcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggaattga gaagcctgac gtctgacgac acggccgtct attactgtgc gacagatacc 300 ccgagtggct acaactcccc ctactactat aaaggaatgg acgtctgggg ccaggggacc 360 ctggtcaccg tctcctca 378 <210> 103 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3309 excluding signal sequence <400> 103 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Phe Ser Gly Gly Asp Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Pro Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Ser Arg Val Asn Tyr Ala Gln Arg Phe 50 55 60 Leu Gly Arg Ile Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asp Thr Pro Ser Gly Tyr Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Lys Gly 100 105 110 Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 104 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3309 <400> 104 Ser Tyr Pro Ile Ser 1 5 <210> 105 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3309 <400> 105 Gly Ile Ile Pro Ile Phe Ser Arg Val Asn Tyr Ala Gln Arg Phe Leu 1 5 10 15 Gly <210> 106 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3309 <400> 106 Asp Thr Pro Ser Gly Tyr Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Lys Gly Met Asp 1 5 10 15 Val <210> 107 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3312 excluding signal sequence <400> 107 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcagtg tctctggtgg ctccatcaga ggacactatt ggagttggat ccggcagccc 120 ccagggaagg gactggagtg gatgggttac atcaaccaca ttgggagcgc cgcctacaac 180 ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc cgcagacacg gccgtgtatt actgtgcgag aatggggcca 300 tggtgggagc ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351 <210> 108 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3312 excluding signal sequence <400> 108 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Gly His 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn His Ile Gly Ser Ala Ala Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Gly Pro Trp Trp Glu Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 109 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3312 <400> 109 Gly His Tyr Trp Ser 1 5 <210> 110 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3312 <400> 110 Tyr Ile Asn His Ile Gly Ser Ala Ala Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 111 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3312 <400> 111 Met Gly Pro Trp Trp Glu Leu Asp Tyr 1 5 <210> 112 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3314 excluding signal sequence excluding signal sequence <400> 112 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctggggggtc cctgagactt 60 tcctgtgcag cgtctggatt cagtttcaat aatcatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtgacattt atccggtttg atggaagtag taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa caccgtgtat 240 ctggaaatga acagcctgag agcagaggac acgggtgtgt attactgtgt gaatacgcca 300 aggggttggt ccttcgatat ctggggccgt ggcaccctgg tcactgtctc ctca 354 <210> 113 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3314 excluding signal sequence excluding signal sequence <400> 113 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Asn His 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Thr Phe Ile Arg Phe Asp Gly Ser Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Asn Thr Pro Arg Gly Trp Ser Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 114 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3314 <400> 114 Asn His Gly Met His 1 5 <210> 115 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3314 <400> 115 Phe Ile Arg Phe Asp Gly Ser Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 116 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3314 <400> 116 Thr Pro Arg Gly Trp Ser Phe Asp Ile 1 5 <210> 117 <211> 384 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3316 excluding signal sequence <400> 117 gaggtgcagc tggtggagac tgggggagcc ttggtacagc ctggggggtc cctaagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctattcca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg gctctcaggt attagtggtg gtgcttttag cacacactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagtaggt 300 cggttgagtg ggagctacaa cagatactac tactactacg gtatggacgt ctggggccaa 360 gggaccctgg tcaccgtctc ctca 384 <210> 118 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3316 excluding signal sequence <400> 118 Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Gly Gly Ala Phe Ser Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Gly Arg Leu Ser Gly Ser Tyr Asn Arg Tyr Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 119 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3316 <400> 119 Ser Tyr Ser Met Asn 1 5 <210> 120 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3316 <400> 120 Gly Ile Ser Gly Gly Ala Phe Ser Thr His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 121 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3316 <400> 121 Val Gly Arg Leu Ser Gly Ser Tyr Asn Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 122 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3349 excluding signal sequence <400> 122 caggtgcagc tacagcagtg gggcggaggt ctgttgacgc cttcggagac cctgtccctc 60 agctgcgatg tctctggtgg ggccttcact aattaccact ggacctggat ccgccagccc 120 ccaggaaagg gactggaatg gattggagaa atctttcata ctgggaccac caactacaac 180 ccgtccctcc agggtcgagt cgccatgtct attgacacca ccaagcggca gttcttcctg 240 aggctgacgt ctctgaccgc cgcggacacg gctgtatatt actgtgcgag agttggtaaa 300 tatggctggt acgtaggtga cttttggggc cagggaacca cggtcaccgt ctcctca 357 <210> 123 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3349 excluding signal sequence <400> 123 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Gly Gly Leu Leu Thr Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Ser Cys Asp Val Ser Gly Gly Ala Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 His Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Phe His Thr Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Gln 50 55 60 Gly Arg Val Ala Met Ser Ile Asp Thr Thr Lys Arg Gln Phe Phe Leu 65 70 75 80 Arg Leu Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Gly Lys Tyr Gly Trp Tyr Val Gly Asp Phe Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 124 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3349 <400> 124 Asn Tyr His Trp Thr 1 5 <210> 125 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3349 <400> 125 Glu Ile Phe His Thr Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Gln Gly 1 5 10 15 <210> 126 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3349 <400> 126 Val Gly Lys Tyr Gly Trp Tyr Val Gly Asp Phe 1 5 10 <210> 127 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3351 excluding signal sequence <400> 127 gaagtgcagc tgttgcagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctccggact catcttcagt gaccactaca tggactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggagtg ggtcggctct attagaaata aacgtaacgg tggctccaca 180 gaatacgccg cctctgtgaa aggcagattc agcatctcaa gagatgattc aaagaattca 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccatgtattt ctgtgccaca 300 acgcgtactg gttatcaagg cttctacggc atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 128 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3351 excluding signal sequence <400> 128 Glu Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Ser Asp His 20 25 30 Tyr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Ser Ile Arg Asn Lys Arg Asn Gly Gly Ser Thr Glu Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr 85 90 95 Phe Cys Ala Thr Thr Arg Thr Gly Tyr Gln Gly Phe Tyr Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 129 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3351 <400> 129 Asp His Tyr Met Asp 1 5 <210> 130 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3351 <400> 130 Ser Ile Arg Asn Lys Arg Asn Gly Gly Ser Thr Glu Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 131 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3351 <400> 131 Thr Arg Thr Gly Tyr Gln Gly Phe Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 132 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VL of CADM3301, CADM3309, CADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349 and CADM3351 excluding signal sequence <400> 132 gaaatagtgt tgacgcagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctccgac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 133 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VL of CADM3301, CADM3309, CADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349 and CADM3351 excluding signal sequence <400> 133 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 134 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR1 of CADM3301, CADM3309?ACADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349 and CADM3351 <400> 134 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 135 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR2 of CADM3301, CADM3309?ACADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349 and CADM3351 <400> 135 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 136 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR3 of CADM3301, CADM3309?ACADM3312, CADM3314, CADM3316, CADM3349 and CADM3351 <400> 136 Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Thr 1 5 <210> 137 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3402 excluding signal sequence <400> 137 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc cgggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa cctctggatt caggttcagt atgtatggca tgcactgggt ccgccagtct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggaaacac agactacgca 180 gactccgtga agggccgatt cacaatctcc agagacaatt ccaagaacac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag tcgtcgagta 300 gttccaggtg ttatagacta ctttgactcc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 138 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3402 excluding signal sequence <400> 138 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Arg Phe Ser Met Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Ser Arg Arg Val Val Pro Gly Val Ile Asp Tyr Phe Asp Ser Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 139 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3402 <400> 139 Met Tyr Gly Met His 1 5 <210> 140 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3402 <400> 140 Val Ile Tyr Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 141 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3402 <400> 141 Arg Arg Val Val Pro Gly Val Ile Asp Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 <210> 142 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3404 excluding signal sequence <400> 142 gaggtgcagc tggtggagac cggggggggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cgccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggaaacac agactacgca 180 gactccgtga agggccgatt cacaatctcc agagacaatt ccaagaacac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag tcgtcgagta 300 gttccaggtg ttatagacta ctttgactcc tggggccagg gaaccctggt cactgtctcc 360 tca 363 <210> 143 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3404 excluding signal sequence <400> 143 Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Ser Arg Arg Val Val Pro Gly Val Ile Asp Tyr Phe Asp Ser Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 144 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3404 <400> 144 Asn Tyr Gly Met His 1 5 <210> 145 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3404 <400> 145 Val Ile Tyr Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 146 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3404 <400> 146 Arg Arg Val Val Pro Gly Val Ile Asp Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 <210> 147 <211> 390 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3432 excluding signal sequence <400> 147 caggtacagc tgcagcagtc aggtccagga ctggtgaagg cctcgcagac cctctcactc 60 acctgtgcca tctccgggga cagtgtctct agcaggagtg ctgcttggga ctggataagg 120 cagtccccat cgagaggcct tgagtggctg ggaaggacat actacaggtc cacgtggtat 180 aatgactatg catcatctgt gagaagtcga ataagcatca accccgacac atccaagaac 240 cagttctccc tgcagctgaa ctctgtgact cccgaggaca cggctgtata ttattgtgtg 300 agagcaaata ggaagcttcc agcacctgga cagcactttt attatggtat ggacgtctgg 360 ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 390 <210> 148 <211> 130 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3432 excluding signal sequence <400> 148 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Ala Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Arg 20 25 30 Ser Ala Ala Trp Asp Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Thr Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala 50 55 60 Ser Ser Val Arg Ser Arg Ile Ser Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn 65 70 75 80 Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val 85 90 95 Tyr Tyr Cys Val Arg Ala Asn Arg Lys Leu Pro Ala Pro Gly Gln His 100 105 110 Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val 115 120 125 Ser Ser 130 <210> 149 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3432 <400> 149 Ser Arg Ser Ala Ala Trp Asp 1 5 <210> 150 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3432 <400> 150 Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Thr Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala Ser Ser Val 1 5 10 15 Arg Ser <210> 151 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3432 <400> 151 Ala Asn Arg Lys Leu Pro Ala Pro Gly Gln His Phe Tyr Tyr Gly Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 152 <211> 390 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3448 excluding signal sequence <400> 152 caggtacagc tgcagcagtc aggtccagga ctggtgaagc ccgcgcagac cctctcactc 60 acctgtgcca tctccggaga cagtgtctcc agcaacagtg ttgcttggaa ctgggtcagg 120 cagtccccat cgagaggcct tgagtggctg ggaaggacat attacaggtc ccagtggtat 180 aacgattatg caggatctgt gagaagtcga ataaccatca gcgcagacac atctaagaac 240 cagttctccc tgcaactgaa ctctgtgact cccgaggaca cggctcttta ttattgtgtg 300 agagcaaata ggaagcttcc agcacctgga cagcactttt attatggtat ggacgtctgg 360 ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 390 <210> 153 <211> 130 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3448 excluding signal sequence <400> 153 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ala Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Ser Val Ala Trp Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Gln Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala 50 55 60 Gly Ser Val Arg Ser Arg Ile Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn 65 70 75 80 Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Leu 85 90 95 Tyr Tyr Cys Val Arg Ala Asn Arg Lys Leu Pro Ala Pro Gly Gln His 100 105 110 Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val 115 120 125 Ser Ser 130 <210> 154 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3448 <400> 154 Ser Asn Ser Val Ala Trp Asn 1 5 <210> 155 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3448 <400> 155 Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Gln Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala Gly Ser Val 1 5 10 15 Arg Ser <210> 156 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3448 <400> 156 Ala Asn Arg Lys Leu Pro Ala Pro Gly Gln His Phe Tyr Tyr Gly Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 157 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3458 excluding signal sequence <400> 157 gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agatatggca tacactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atttatagcg gtggaaacac agactacgca 180 gactccgtga agggccgatt cacaatctcc agagacaatt ccaagaacac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag tcgtcgagta 300 gttccaggtg ttatagacta ctttgactcc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 158 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3458 excluding signal sequence <400> 158 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Tyr Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Ser Arg Arg Val Val Pro Gly Val Ile Asp Tyr Phe Asp Ser Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 159 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3458 <400> 159 Arg Tyr Gly Ile His 1 5 <210> 160 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3458 <400> 160 Val Ile Tyr Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 161 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3458 <400> 161 Arg Arg Val Val Pro Gly Val Ile Asp Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 <210> 162 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VL of CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448 and CADM3458 excluding signal sequence <400> 162 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctcgaac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 163 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VL of CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448 and CADM3458 excluding signal sequence <400> 163 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 164 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR1 of CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448 and CADM3458 <400> 164 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 165 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR2 of CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448 and CADM3458 <400> 165 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 166 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR3 of CADM3402, CADM3404, CADM3432, CADM3448 and CADM3458 <400> 166 Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Arg Thr 1 5 <210> 167 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VH of CADM3501 excluding signal sequence <400> 167 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagttcagc ctgggggggc cctgagactc 60 tcctgttcag cctccggatt caccttcagt gggtactgga tgcactgggt ccgccaagct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtgtcacaa attagtagta gtggtactat catagactcc 180 gcagactttg tgaagggccg attcgccgtc tccagggaca acgccaagga cttattgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgatgac acggccgtct attactgtgc gagggggcca 300 ctggcgaaga atggttttga catttggggc caagggacaa tggtcaccgt ctcttca 357 <210> 168 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VH of CADM3501 excluding signal sequence <400> 168 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ala Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gln Ile Ser Ser Ser Gly Thr Ile Ile Asp Ser Ala Asp Phe Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp Leu Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Leu Ala Lys Asn Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 169 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR1 of CADM3501 <400> 169 Gly Tyr Trp Met His 1 5 <210> 170 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR2 of CADM3501 <400> 170 Gln Ile Ser Ser Ser Gly Thr Ile Ile Asp Ser Ala Asp Phe Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 171 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of HCDR3 of CADM3501 <400> 171 Gly Pro Leu Ala Lys Asn Gly Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 172 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: base sequence of VL of CADM3501 excluding signal sequence <400> 172 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300 ccgtacactt ttggccaggg gaccaagctg gagatcaaa 339 <210> 173 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VL of CADM3501 excluding signal sequence <400> 173 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 174 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR1 of CADM3501 <400> 174 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 175 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR2 of CADM3501 <400> 175 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 176 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of LCDR3 of CADM3501 <400> 176 Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 177 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L8_00 excluding signal sequence <400> 177 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Arg Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Pro Ala Ser Arg Arg Pro Ser Trp Asp Ala Asp Gly Tyr Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 178 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of the artificial sequence: amino acid sequence of VHH of iCADM3_3R1-L11_00 excluding signal sequence <400> 178 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Phe Asn 20 25 30 Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Thr Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Val Tyr Ser Asp Tyr Val Ile Met Asn Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120

Claims

세포 부착 분자3(Cell Adhesion Molecule3; CADM3)에 결합하는, 항체 또는 해당 항체 단편.
제1항에 있어서, 항체가 뇌 체류성을 갖는, 항체 또는 해당 항체 단편.
제1항 또는 제2항에 있어서, 항체가 신경 세포 및/또는 신경 조직 결합성을 갖는, 항체 또는 해당 항체 단편.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 해당 항체 단편이 하기 (a) 내지 (x)로 이루어지는 군에서 선택되는 하나인, 항체 또는 해당 항체 단편;
(a) 중쇄 가변 영역(VH)의 상보성 결정 영역(CDR) 1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 23, 24 및 25에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 경쇄 가변 영역(VL)의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 28, 29 및 30에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(b) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 34, 35 및 36에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 38, 39 및 40에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(c) 중쇄 항체의 중쇄 가변 영역(VHH)의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 3, 4 및 5에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(d) VHH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 8, 9 및 10에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(e) VHH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 13, 14 및 15에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(f) VHH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 18, 19 및 20에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(g) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 89, 90 및 91에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 94, 95 및 96에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(h) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 99, 100 및 101에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(i) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 104, 105 및 106에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(j) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 109, 110 및 111에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(k) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 114, 115 및 116에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(l) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 119, 120 및 121에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(m) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 124, 125 및 126에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(n) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 129, 130 및 131에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 134, 135 및 136에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(o) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 139, 140 및 141에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 164, 165 및 166에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(p) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 144, 145 및 146에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 164, 165 및 166에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(q) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 149, 150 및 151에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 164, 165 및 166에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(r) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 154, 155 및 156에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 164, 165 및 166에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(s) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 159, 160 및 161에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 164, 165 및 166에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(t) VH의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 169, 170 및 171에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 CDR1 내지 3의 아미노산 서열이 각각 서열 번호 174, 175 및 176에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(u) 상기 (a) 내지 (t)에 기재된 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편과, CADM3으로의 결합에 대해서 경합하는 항체,
(v) 상기 (a) 내지 (t)에 기재된 어느 하나의 항체 또는 항체 단편이 결합하는 에피토프를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체,
(w) 상기 (a) 내지 (t)에 기재된 어느 하나의 항체 또는 항체 단편이 결합하는 에피토프와 동일한 에피토프에 결합하는 항체,
(x) 상기 (a) 내지 (t)에 기재된 어느 하나의 항체 또는 항체 단편의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 해당 항체 단편이 하기 (1) 내지 (31)로 이루어지는 군에서 선택되는 하나인, 항체 또는 해당 항체 단편;
(1) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 22에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 27에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(2) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 32에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 37에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(3) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 2에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(4) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 7에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(5) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 12에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(6) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 17에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(7) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 68에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(8) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 70에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(9) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 72에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(10) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 74에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(11) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 76에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(12) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 78에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(13) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 80에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(14) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 82에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(15) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 84에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(16) VHH의 아미노산 서열이 서열 번호 86에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 단편,
(17) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 88에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 93에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(18) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 98에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(19) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 103에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(20) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 108에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(21) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 113에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(22) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 118에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(23) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 123에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(24) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 128에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 133에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(25) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 138에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 163에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(26) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 143에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 163에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(27) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 148에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 163에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(28) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 153에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 163에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(29) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 158에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 163에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(30) VH의 아미노산 서열이 서열 번호 168에 기재되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 VL의 아미노산 서열이 서열 번호 173에 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 항체,
(31) 상기 (1) 내지 (30)에 기재된 어느 하나의 항체 또는 항체 단편의 아미노산 서열과 85% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 해당 항체 단편이 이중특이적 항체인, 항체 또는 해당 항체 단편.
제6항에 있어서, 이중특이적 항체가 CADM3 및 뇌에 존재하는 항원에 결합하는, 이중특이적 항체.
제6항 또는 제7항에 있어서, 이중특이적 항체가 CADM3에 결합하는 항원 결합 부위 및 뇌에 존재하는 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는, 이중특이적 항체.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 단편이 Fab, Fab', F(ab')₂, 단일쇄 항체(scFv), 이량체화 V 영역(디아바디(diabody)), 디술피드 안정화 V 영역(dsFv), VHH 및 CDR을 포함하는 펩티드로 이루어지는 군에서 선택되는 하나인, 항체 단편.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 유전자 재조합 항체인, 항체 및 해당 항체 단편.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 마우스 항체, 래트 항체, 래빗 항체, 알파카 항체, 낙타 항체, 라마 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 및 인간 항체로 이루어지는 군에서 선택되는 하나인, 항체 및 해당 항체 단편.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 기재된 CADM3에 결합하는 항체 또는 해당 항체 단편에, 하기 (i) 내지 (iii)으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나를 결합시킨, 융합 항체 또는 해당 융합 항체 단편;
(i) 친수성 고분자,
(ii) 양친매성 고분자, 및
(iii) 기능성 분자.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편을 산생하는, 하이브리도마.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편을 코딩하는 염기 서열을 포함하는, 핵산.
제14항에 기재된 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는, 형질 전환 세포.
제13항에 기재된 하이브리도마 또는 제15항에 기재된 형질 전환 세포를 배양하고, 배양액으로부터 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편을 채취하는 것을 포함하는, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편의 제조 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편을 포함하는, 조성물.
제17항에 있어서, 뇌에 존재하는 항원의 검출 또는 측정용의 조성물인, 조성물.
제17항에 있어서, 뇌질환의 진단 또는 치료를 하기 위한 조성물인, 조성물.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편, 또는 제17항에 기재된 조성물을 사용하여, 뇌에 존재하는 항원을 검출 또는 측정하는 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편, 또는 제17항에 기재된 조성물을 사용하여, 뇌질환을 진단 또는 치료하는 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편, 또는 제17항에 기재된 조성물을 사용하여, 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편의 뇌 체류성을 향상시키는 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 항체, 해당 항체 단편, 융합 항체 혹은 해당 융합 항체 단편, 또는 제17항에 기재된 조성물을 사용하여, 뇌 내의 항체량, 해당 항체 단편량, 융합 항체량 혹은 해당 융합 항체 단편량을 증가시키는 방법.