JP2023516080A - 抗グリコｃｄ４４抗体およびその使用 - Google Patents

抗グリコｃｄ４４抗体およびその使用 Download PDF

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Abstract

本発明の開示は、ＣＤ４４のがん特異的なグリコシル化バリアントに特異的に結合する抗グリコＣＤ４４抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに関連する融合タンパク質および抗体－薬物コンジュゲート、加えて、このような生体分子をコードする核酸に関する。本発明の開示はさらに、がん療法のための、抗体、抗原結合フラグメント、融合タンパク質、抗体－薬物コンジュゲートおよび核酸の使用に関する。

Description

１．関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年３月６日に出願された米国仮出願第６２／９８６，０８３号の優先権の利益を主張し、その内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に取り込まれる。
２．配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、これによりその全体が参照により組み入れられる。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１年３月５日に作成され、ＧＯＴ－００３－ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、２０２，６５１バイトのサイズである。
３．背景
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を使用してＴ細胞応答をリダイレクトする療法は、がん免疫療法における有力なツールとして出現し、血液がんにおいて極めて有効であることが証明されたものであり、これは、Ｂ細胞悪性腫瘍におけるＣＤ１９などの、必須ではない組織と共有される抗原を標的化する（Brentjens et al., 2013, Sci Transl Med. 5(177):177ra38-177ra38；Grupp et al., 2013, N Engl J Med. 368(16):1509-1518；Kalos et al., 2011, Sci Transl Med. 3(95):95ra73- 95ra73；Kochenderfer et al., 2010, Blood. 116(20):4099-4102；Porter et al., 2011, N Engl J Med. 365(8):725-733）。しかしながら、ＣＡＲ標的の大部分は固形がんで過剰発現される正常な自己抗原であるため、ＣＡＲ療法を固形腫瘍に採用することは問題があった。したがって、ＣＡＲ Ｔ細胞で固形腫瘍を標的化する研究において、必須の健康な組織との交差反応に起因する有害作用がしばしば報告されている（Bin Hou et al., 2019, Dis Markers, Article ID 3425291）。ＣＡＲ療法を固形腫瘍に採用する問題を克服するために、選択的な標的化を可能にする新しいがん特異的な抗原が必要である。
多くのがんが、健康な組織とは異なる異常にグリコシル化されたタンパク質を発現する。このような異常にグリコシル化されたタンパク質は、固形腫瘍の免疫療法に適する可能性がある糖ペプチドエピトープを含有するが、このような糖ペプチドエピトープはほとんど同定されていない。ＣＤ４４は、細胞間相互作用、細胞の接着および移動に関与する重鎖がグリコシル化された膜貫通タンパク質であり、加えてがん幹細胞のマーカーであることが示唆されている。ヒトにおいて、標準的なバリアントを含む１０種のＣＤ４４バリアントがある。１０種のバリアントは、様々な腫瘍で示差的に発現される（Chen, et al., 2018, J Hematol Oncol. 11(1):64を参照）。ＣＤ４４バリアント領域内に、５４のセリンおよび６３スレオニンを含む１１７種の可能性のあるＯ結合型グリコシル化部位がある。
ＣＤ４４を標的化する抗体、例えば、がん関連アイソフォームＣＤ４４ｖ６を認識するビバツズマブ（Bivatuzumab）が、当業界において公知である。しかしビバツズマブは、健康な皮膚におけるＣＤ４４ｖ６の低い発現に起因する重度の皮膚毒性を誘発する。Borjesson et al., 2003. Clin Cancer Res. 9(10 Pt 2):3961S-72S； Brentjens et al., 2013. Sci Transl Med. 5(177):177ra38- 177ra38； Goodison et al., 1999, Mol Pathol. 52(4):189-196； Grupp, et al. 2013, N Engl J Med. 368(16):1509-1518； Hou et al., 2019, Dis Markers. 2019:1-11；Julien et al., 2012, Biomolecules. 2(4):435-466； Kalos et al., 2011, Sci Transl Med. 3(95):95ra73-95ra73； King et al., 2017, Blood Adv. 1(7):429-442； Kochenderfer et al., 2010, Blood. 116(20):4099-4102； Porter et al., 2011, N Engl J Med. 365(8):725-733； Posey et al., 2016, Immunity. 44(6):1444- 1454； Prochazka et al., 2014, Cell Signal. 26(10):2234-2239； Radhakrishnan et al., 2014, Proc Natl Acad Sci. 111(39):E4066-E4075； Sneath et al., 1998, Mol Pathol. 51(4):191-200； Sorensen et al., 2006, Glycobiology. 16(2):96-107； Stanley, 2011, Cold Spring Harb Perspect Biol. 3(4)； Steentoft et al., 2013, EMBO J. 32(10):1478-1488； Steentoft et al., 2011, Nat Methods. 8(11):977-982； Stroomer et al., 2000, Clin Cancer Res. 6(8):3046-3055； Thapa et al., 2016, Stem Cells Int. 2016:1-15； Tijink et al., 2006, Clin Cancer Res. 12(20):6064-6072； Wandall et al., 2010, Cancer Res. 70(4):1306-1313を参照されたい。
したがって、がん細胞で過剰発現されるグリコＣＤ４４エピトープの同定、およびこのようなグリコＣＤ４４エピトープを利用する新しい治療様式、例えば抗体およびＣＡＲの必要性がある。
４．要約
本開示は、グリコＣＤ４４のがん特異的なエピトープに選択的な抗体および抗原結合フラグメントに基づく治療剤および診断剤を提供することによって、グリコペプチドバリアントの腫瘍特異性を獲得するものである。
本発明の開示は、ＣＤ４４のがん特異的なグリコシル化バリアントに結合する抗グリコＣＤ４４抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。本発明の開示はさらに、抗グリコＣＤ４４抗体および抗原結合フラグメントを含む融合タンパク質および抗体－薬物コンジュゲート、ならびに抗グリコＣＤ４４抗体、抗原結合フラグメントおよび融合タンパク質をコードする核酸を提供する。
本発明の開示はさらに、がん療法のための、抗グリコＣＤ４４抗体、抗原結合フラグメント、融合タンパク質、抗体－薬物コンジュゲートおよび核酸の使用方法を提供する。
特定の態様において、本開示は、ＣＤ４４のがん特異的なグリコシル化バリアントと、第２のエピトープとに結合する、二重特異性および他の多重特異性を有する抗グリコＣＤ４４抗体および抗原結合フラグメントを提供する。第２のエピトープは、ＣＤ４４それ自体、がん細胞上でＣＤ４４と共発現される別のタンパク質、または活性化Ｔ細胞などの異なる細胞上に存在する別のタンパク質のいずれの上にあるものでもよい。さらに、コドン最適化されたコード領域を含む核酸、および特定の宿主細胞における発現にコドン最適化されていないコード領域を含む核酸などの抗体をコードする核酸も開示される。
抗グリコＣＤ４４抗体および結合フラグメントは、融合パートナーを含有する融合タンパク質の形態であり得る。融合パートナーは、第２の機能、例えば、Ｔ細胞シグナル伝達タンパク質のシグナル伝達ドメインのシグナル伝達機能、Ｔ細胞活性化のペプチドモジュレーター、または標識システムの酵素的な要素を提供するのに有用であり得る。例示的なＴ細胞シグナル伝達タンパク質としては、４－１ＢＢ、ＣＯ３Ｃ、ならびに融合ペプチド、例えば、ＣＤ２８－ＣＤ３－ゼータおよび４－１ＢＢ－ＣＤ３－ゼータが挙げられる。４－１ＢＢ、またはＣＤ１３７は、Ｔ細胞の共刺激受容体であり、ＣＤ３－ゼータは、Ｔ細胞抗原受容体のシグナル伝達要素である。第２の機能を提供する部分は、Ｔ細胞活性化のモジュレーター、例えばＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒａ、またはＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ融合体であってもよく、ＭｉｃＡｂｏｄｙの作製に有用なＭＨＣクラスＩ鎖関連（ＭＩＣ）タンパク質ドメインであってもよいし、またはインビボまたはインビトロでの結合の程度および／または場所をモニターするのに有用な標識システムの標識または酵素的な要素をコードしていてもよい。Ｔ細胞、例えば自己Ｔ細胞の状況下に置かれた、これらの予防および治療活性を有する生体分子をコードするコンストラクトは、本開示の一部の実施形態において、様々ながんを防止または処置するための、養子導入されたＴ細胞を補充するための強力なプラットフォームを提供する。
特定の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、表１Ａ～１Ｅに記載の重鎖および／または軽鎖可変配列を含む（またはヌクレオチド配列によってコードされる）。明確にするために、この文書中で用語「抗グリコＣＤ４４抗体」が使用される場合、それは、文脈上別段の指示がない限り、単一特異性および多重特異性（二重特異性を含む）抗グリコＣＤ４４抗体、単一特異性および多重特異性抗体の抗原結合フラグメント、ならびに抗体およびその抗原結合フラグメントを含有する融合タンパク質およびコンジュゲートを含むことが意図される。同様に、用語「抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント」が使用される場合、それはまた、文脈上別段の指示がない限り、単一特異性および多重特異性（二重特異性を含む）抗グリコＣＤ４４抗体およびその抗原結合フラグメントに加えて、このような抗体および抗原結合フラグメントを含有する融合タンパク質およびコンジュゲートも含むことが意図される。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、表１～３に記載の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ配列を含む（またはヌクレオチド配列によってコードされる）。表１Ａ～１Ｅに記載のＣＤＲ配列は、ＣＤＲの境界を定義するための、ＩＭＧＴ（Lefranc et al., 2003, Dev Comparat Immunol 27:55-77）, Kabat （Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.）、およびChothia（Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biol 273:927-948）のスキームに従って定義されるＣＤＲ配列を含む。表１Ｆ、１Ｇ、および１Ｈに記載のＣＤＲ配列は、それぞれＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、およびＣｈｏｔｈｉａの定義に従って表１Ａ～１Ｄに記載されるＣＤＲ配列由来のコンセンサス配列である。表１Ｉ、１Ｊ、および１Ｋに記載のＣＤＲ配列は、それぞれＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、およびＣｈｏｔｈｉａの定義に従って表１Ａ～１Ｅに記載されるＣＤＲ配列由来のコンセンサス配列である。表２Ａ～２Ｅに記載のＣＤＲ配列は、それぞれ表１Ａ～１Ｅに記載のＣＤＲ配列の組み合わされたオーバーラップ領域であり、ＩＭＧＴ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ配列は、下線の太字で示される。表２Ｆに記載のＣＤＲ配列は、表１Ｆ～１Ｈに記載のコンセンサスＣＤＲ配列の組み合わされたオーバーラップ領域である。表２Ｇに記載のＣＤＲ配列は、表１Ｉ～１Ｋに記載のコンセンサスＣＤＲ配列の組み合わされたオーバーラップ領域である。表３Ａ～３Ｅに記載のＣＤＲ配列は、それぞれ表１Ａ～１Ｅに示されるＣＤＲ配列の共通のオーバーラップ領域である。表３Ｆに記載のＣＤＲ配列は、表１Ｆ～１Ｈに記載のＣＤＲ配列の共通のオーバーラップ領域である。表３Ｇに記載のＣＤＲ配列は、表１Ｉ～１Ｋに記載のＣＤＲ配列の共通のオーバーラップ領域である。このような抗グリコＣＤ４４抗体および抗原結合フラグメントのフレームワーク配列は、表１Ａ～１Ｄに記載のＶＨおよびＶＬ配列の天然マウスフレームワーク配列であってもよいし、表１Ｅに記載のＶＨおよびＶＬ配列の天然ウサギフレームワーク配列であってもよいし、または非天然（例えば、ヒト化またはヒト）フレームワーク配列であってもよい。
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特定の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、表１～３に記載のＣＤＲ配列から選択されるＣＤＲの組合せを含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号３、９、１５、２５、３１、３７、４７、５３、５９、６９、７５、８１、８９、９３、９７、１０１、１０７、１１３、１１９、１２５、１２９、１３５、１４１、１４７、１５３、２０８、２１４、２２０、２２８、２３２、２３６、２４０、２４６、２５０、または２５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号４、１０、１６、２６、３２、３８、４８、５４、６０、７０、７６、８２、９０、９４、９８、１０２、１０８、１１４、１２０、１２６、１３０、１３６、１４２、１４８、１５４、２０９、２１５、２２１、２２９、２３３、２３７、２４１、２４７、２５１、または２５７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号５、１１、１７、２７、３３、３９、４９、５５、６１、７１、７７、８３、１０３、１０９、１１５、１２１、１３１、１３７、１４３、１４９、２１０、２１６、２２２、２４２、２５２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号６、１２、１８、２８、３４、４０、５０、５６、６２、７２、７８、８４、１０４、１１０、１１６、１２２、１３２、１３８、１４４、１５０、２１１、２１７、２２３、２４３、２５３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号７、１３、１９、２９、３５、４１、５１、５７、６３、７３、７９、８５、９１、９５、９９、１０５、１１１、１１７、１２３、１２７、１３３、１３９、１４５、１５１、１５５、２１２、２１８、２２４、２３０、２３４、２３８、２４４、２４８、２５４、２５８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号８、１４、２０、３０、３６、４２、５２、５８、６４、７４、８０、８６、９２、９６、１００、１０６、１１２、１１８、１２４、１２８、１３４、１４０、１４６、１５２、１５６、２１３、２１９、２２５、２３１、２３５、２３９、２４５、２４９、２５５、２５９のアミノ酸配列を含む。
特定の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、番号付けされた実施形態１３～２７５に記載のＣＤＲ組合せのいずれかのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む。したがって、特定の実施形態において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１２５、配列番号１５３、配列番号２２８、配列番号２３２、配列番号２３６、配列番号２４６、または配列番号２５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；配列番号９０、配列番号９４、配列番号９８、配列番号２２９、配列番号２３３、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；配列番号１０３、配列番号１０９、配列番号１１５、配列番号１２１、配列番号１３１、配列番号１３７、配列番号１４３、配列番号１４９、配列番号２４２、または配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；配列番号１０４、配列番号１１０、配列番号１１６、配列番号１２２、配列番号１３２、配列番号１３８、配列番号１４４、配列番号１５０、配列番号２３４、または配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；配列番号９１、配列番号９５、配列番号２３０、または配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および配列番号９２または配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３～５の重鎖ＣＤＲおよび配列番号６～８の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号９～１１の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１２～１４の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１５～１７の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１８～２０の軽鎖ＣＤＲを含む。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２５～２７の重鎖ＣＤＲおよび配列番号２８～３０の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３１～３３の重鎖ＣＤＲおよび配列番号３４～３６の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３７～３９の重鎖ＣＤＲおよび配列番号４０～４２の軽鎖ＣＤＲを含む。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号４７～４９の重鎖ＣＤＲおよび配列番号５０～５２の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号５３～５５の重鎖ＣＤＲおよび配列番号５６～５８の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号５９～６１の重鎖ＣＤＲおよび配列番号６２～６４の軽鎖ＣＤＲを含む。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号６９～７１の重鎖ＣＤＲおよび配列番号７２～７４の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号７５～７７の重鎖ＣＤＲおよび配列番号７８～８０の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号８１～８３の重鎖ＣＤＲおよび配列番号８４～８６の軽鎖ＣＤＲを含む。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２０８～２１０の重鎖ＣＤＲおよび配列番号２１１～２１３の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２１４～２１６の重鎖ＣＤＲおよび配列番号２１７～２１９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２２０～２２２の重鎖ＣＤＲおよび配列番号２２３～２２５の軽鎖ＣＤＲを含む。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１０１～１０３の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１０４～１０６の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１０７～１０９の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１１０～１１２の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１１３～１１５の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１１６～１１８の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１１９～１２１の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１２２～１２４の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２４０～２４２の重鎖ＣＤＲおよび配列番号２４３～２４５の軽鎖ＣＤＲを含む。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１２９～１３１の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１３２～１３４の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１３５～１３７の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１３８～１４０の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１４１～１４３の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１４４～１４６の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１４７～１４９の重鎖ＣＤＲおよび配列番号１５０～１５２の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２５０～２５２の重鎖ＣＤＲおよび配列番号２５３～２５５の軽鎖ＣＤＲを含む。
本開示の抗体および抗原結合フラグメントは、マウス、ウサギ、キメラ、ヒト化またはヒトであってもよい。
さらなる態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号１および２の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する。さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号１および２の少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
さらに他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号２３および２４の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する。さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号２３および２４と、少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
さらに他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号４５および４６の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する。さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号４５および４６と、少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
さらに他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号６７および６８の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する。さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号６７および６８と、少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
さらに他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号２０６および２０７の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する。さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号２０６および２０７と、少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
さらに他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。例示的なｓｃＦｖは、軽鎖可変フラグメントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む。一部の実施形態において、ｓｃＦｖの重鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントは、４～１５アミノ酸のリンカー配列に共有結合している。ｓｃＦｖは、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの形態であってもよいし、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）内であってもよい。
抗グリコＣＤ４４抗体および抗原結合フラグメントは、単鎖可変フラグメントの多量体、二重特異性単鎖可変フラグメント、および二重特異性単鎖可変フラグメントの多量体の形態であってもよい。一部の実施形態において、単鎖可変フラグメントの多量体は、２価単鎖可変フラグメント、トリボディ（tribody）またはテトラボディ（tetrabody）から選択される。これらの実施形態の一部において、二重特異性単鎖可変フラグメントの多量体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーである。
本開示の他の態様は、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体および抗体結合フラグメントをコードする核酸に関心を寄せている。一部の実施形態において、抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントをコードする核酸の部分は、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている。特定の態様において、本開示は、配列番号１、配列番号２３、配列番号４５、配列番号６７、または配列番号２０６と少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖ヌクレオチド配列、および配列番号２、配列番号２４、配列番号４６、配列番号６８、または配列番号２０７と少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する軽鎖ヌクレオチド配列によってコードされた重鎖および軽鎖可変領域を有する抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを提供する。核酸を含むベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）および宿主細胞も本開示の範囲内である。重鎖および軽鎖をコードする配列は、単一のベクターに存在していてもよいし、または別個のベクターに存在していてもよい。
本開示のさらに別の態様は、抗グリコＣＤ４４抗体、抗原結合フラグメント、核酸（または核酸の対）、ベクター（または対のベクター）または本開示による宿主細胞、および生理学的に好適な緩衝液、アジュバント、または希釈剤を含む医薬組成物である。
本開示のさらに別の態様は、キメラ抗原受容体を作製する方法であって、コード領域の発現に好適な条件下で、本開示による核酸またはベクターを含む細胞をインキュベートすること、およびキメラ抗原受容体を収集することを含む方法である。
本開示の別の態様は、がんを検出する方法であって、細胞または組織サンプルを、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および抗体が細胞または組織サンプルに結合しているかどうかを検出することを含む方法である。
本開示のさらに別の態様は、がんを検出することで使用するための本開示による抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントである。
本開示のさらに別の態様は、がんを処置する方法であって、予防的または治療的有効量の本開示による抗グリコＣＤ４４抗体、抗原結合フラグメント、核酸、ベクター、宿主細胞または医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法である。
本開示のさらに別の態様は、がんの処置で使用するための、本開示による抗グリコＣＤ４４抗体、抗原結合フラグメント、核酸、ベクター、宿主細胞または医薬組成物である。
本開示のさらに別の態様は、がんの処置のための医薬を製造するための、本開示による抗グリコＣＤ４４抗体、抗原結合フラグメント、核酸、ベクター、宿主細胞または医薬組成物の使用である。
ＣＤ４４ｖ６ペプチドも本明細書で提供される。ペプチドは、長さが１２～３０アミノ酸であってもよく、配列番号１６５のアミノ酸４～１３を含む。ＣＤ４４ｖ６ペプチドは、セクション６．８および番号付けされた実施形態５３４～５３９に記載される。ペプチドは、セクション６．８．１および番号付けされた実施形態５４０～５４１に記載されたように組成物中に含まれていてもよい。ＣＤ４４ｖ６ペプチドは、動物において抗体を生産するための方法および／または動物において免疫応答を惹起するための方法において使用することができる。ＣＤ４４ｖ６ペプチドを使用するための方法は、セクション６．８．２および番号付けされた実施形態５４２～５４５に記載される。
抗体４Ｃ８がＴｎグリコシル化ＣＤ４４と特異的に結合することを示す図である。図１Ａ：様々な濃度の非グリコシル化およびＴｎグリコシル化ＣＤ４４およびＭＵＣ１に対する１μｇ／ｍＬの４Ｃ８ｍＡｂを用いて実行されたＥＬＩＳＡ。図１Ｂ：ＢｉａｃｏｒｅおよびＯｃｔｅｔ技術を使用して決定されたＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに対する４Ｃ８ｍＡｂの親和性。 抗体４Ｃ８がＴｎグリコシル化ＣＤ４４と特異的に結合することを示す図である。図１Ｃ：α－ゴルジ、４Ｃ８ｍＡｂ上清、α－ＣＤ４４ｖ６、およびマウスＩｇＧアイソタイプ対照の様々な希釈物を使用した、ＨａＣａＴ ＷＴおよびＣＯＳＭＣ ＫＯ細胞染色。 抗体４Ｃ８がＴｎグリコシル化ＣＤ４４と特異的に結合することを示す図である。図１Ｄ：４Ｃ８ｍＡｂ、α－ＣＤ４４ｖ６、およびα－Ｔｎを使用したＨａＣａＴ ＷＴおよびＣＯＳＭＣ ＫＯ細胞免疫蛍光染色。図１Ｅ：ヒト線維芽細胞を含有するコラーゲンゲル上で器官型皮膚モデルに増殖させ、固定し、パラフィン包埋し、４Ｃ８ｍＡｂおよびα－ＣＤ４４ｖ６を使用して免疫蛍光法のために染色した、ＨａＣａＴ ＷＴおよびＣＯＳＭＣ ＫＯ細胞。図１Ｆ：４Ｃ８ｍＡｂおよびα－ＣＤ４４ｖ６を使用して免疫蛍光法のために染色された健康なヒト皮膚からの生検。 抗体４Ｃ８が数種の原発性がん組織を選択的に染色することを示す図である。図２Ａ－１：４Ｃ８ｍＡｂ、α－ＣＤ４４、およびマウスＩｇＧアイソタイプ対照を使用して免疫組織化学のために染色された数種の癌腫および隣接する健康な組織の組織マイクロアレイ。 抗体４Ｃ８が数種の原発性がん組織を選択的に染色することを示す図である。図２Ａ－２：４Ｃ８ｍＡｂ、α－ＣＤ４４、およびマウスＩｇＧアイソタイプ対照を使用して免疫組織化学のために染色された数種の癌腫および隣接する健康な組織の組織マイクロアレイ。 抗体４Ｃ８が数種の原発性がん組織を選択的に染色することを示す図である。図２Ａ－３：４Ｃ８ｍＡｂ、α－ＣＤ４４、およびマウスＩｇＧアイソタイプ対照を使用して免疫組織化学のために染色された数種の癌腫および隣接する健康な組織の組織マイクロアレイ。 図２Ｂ：各がんタイプにつきグレード１、グレード２、およびグレード３の癌腫に分けた、図２Ａで描写された免疫組織化学で観察された、強く染色された、弱く染色された、および陰性染色された組織切片の分布を示す表である。 ４Ｃ８ ＣＡＲ Ｔ細胞がＴｎ陽性がん細胞を選択的に致死させることを示す図である。図３Ａ：ＨａＣａＴ ＷＴおよびＣＯＳＭＣ ＫＯ細胞と共培養された４Ｃ８ ＣＡＲ Ｔ細胞（コンストラクト１）を用いて実行された細胞傷害性アッセイの結果。図３Ｂ：ＥＬＩＳＡによって分析された共培養上清中のＩＦＮ－γの濃度。図３Ｃ：フローサイトメトリーを使用して評価された（ａｓｓｓｅｄｄｅｄ）Ｔ細胞活性化マーカーの発現。 ＨａＣａＴ ＷＴおよびＣＯＳＭＣ ＫＯ細胞と共に３対１の比率で共培養した４Ｃ８ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて実行された細胞傷害性アッセイの結果を示す図である。ＮＶ（ベクターなし）は、４Ｃ８ ＣＡＲが発現されないＴ細胞単独である。Ｎ末端における軽鎖（Ｌ）（コンストラクト１）の方向は、Ｎ末端における重鎖（コンストラクト４）より有効であることが見出された。 代表的な４Ｃ８ ＣＡＲコンストラクト１～８の概略図である。図５Ａ：コンストラクト１（ＬＨ－４Ｃ８－ＣＤ８ａ－ＣＡＲＴ）；図５Ｂ：コンストラクト２（ＬＨ－４Ｃ８－ＩｇＧ４－ＣＡＲＴ）。図５Ａ～５Ｈは、配列番号１８４として「（ＧＧＧＧＳ）３」および配列番号１８３として「（ＧＧＧＧＳ）１」を開示する。 代表的な４Ｃ８ ＣＡＲコンストラクト１～８の概略図である。図５Ｃ：コンストラクト３（ＬＨ－４Ｃ８－ＩｇＧ４－長鎖－ＣＡＲＴ）；図５Ｄ：コンストラクト４（ＨＬ－４Ｃ８－ＣＤ８ａ－ＣＡＲＴ）。図５Ａ～５Ｈは、配列番号１８４として「（ＧＧＧＧＳ）３」および配列番号１８３として「（ＧＧＧＧＳ）１」を開示する。 代表的な４Ｃ８ ＣＡＲコンストラクト１～８の概略図である。図５Ｅ：コンストラクト５（ＨＬ－４Ｃ８－ＩｇＧ４－ＣＡＲＴ）；図５Ｆ：コンストラクト６（ＨＬ－４Ｃ８－ＩｇＧ４－長鎖－ＣＡＲＴ）。図５Ａ～５Ｈは、配列番号１８４として「（ＧＧＧＧＳ）３」および配列番号１８３として「（ＧＧＧＧＳ）１」を開示する。 代表的な４Ｃ８ ＣＡＲコンストラクト１～８の概略図である。図５Ｇ：コンストラクト７（ＬＨｘ２－４Ｃ８－ＣＤ８－ＣＡＲＴ）；図５Ｈ：コンストラクト８（ＨＬｘ２－４Ｃ８－ＣＤ８－ＣＡＲＴ）。図５Ａ～５Ｈは、配列番号１８４として「（ＧＧＧＧＳ）３」および配列番号１８３として「（ＧＧＧＧＳ）１」を開示する。 代表的な１０Ｈ４ ＣＡＲコンストラクトの概略図である。
６．詳細な説明
６．１ 抗体
ＣＤ４４バリアント領域内の可能性がある１１７種のＯ結合型グリコシル化部位のそれぞれは、治療抗体のための標的である可能性を有する。どのグリコシル化部位が効果的に標的化され得るかは不明である。ＣＤ４４ｖ６ドメイン単独は、４つのセリンおよび９つのスレオニンを含む１３種の可能性があるＯ結合型グリコシル化部位を含む。これらの部位のそれぞれが、潜在的に抗体標的として使用される可能性がある。本開示は、腫瘍細胞上に存在するＣＤ４４ｖ６の特異的なグリコフォームに向けられた新規の抗体を提供する。これらは、抗体４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４によって例示される。腫瘍細胞上に存在するＣＤ４４ｖ６のグリコシル化パターンを模擬するように、太字と下線で示したセリンおよびスレオニン残基上でＧａｌＮＡｃでグリコシル化されたＣＤ４４ｖ６の特定のグリコフォーム、ＧＹＲＱＴＰＫＥＤＳＨＳＴＴＧＴＡＡＡ（配列番号１６５）中に存在するグリコシル化ペプチド（「ＣＤ４４ｖ６糖ペプチド」）に結合するマウス抗体に関するスクリーニングで、４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、および１Ｄ１２を同定した。同じＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合するウサギ抗体に関するスクリーニングで、１０Ｈ４を同定した。
本開示の抗グリコＣＤ４４抗体は、抗体４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４によって例示され、がんの診断および療法におけるツールとして有用である。
したがって、特定の態様において、本開示は、腫瘍細胞上に提示されるＣＤ４４のグリコフォーム（本明細書では「グリコＣＤ４４」と称される）に、好ましくは、ＣＤ４４ｖ６グリコペプチドに結合する抗体および抗原結合フラグメントを提供する。
本開示の抗グリコＣＤ４４抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、遺伝子操作された、および／またはそれ以外の方法で性質が改変されたものであってもよく、例えば、これらに限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、霊長類化抗体、単鎖抗体、二重特異性抗体、二重可変ドメイン抗体などが挙げられる。様々な実施形態において、抗体は、抗体の定常領域の全部または一部を含む。一部の実施形態において、定常領域は、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）、およびＩｇＭから選択されるアイソタイプである。具体的な実施形態において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体は、ＩｇＧ１の定常領域のアイソタイプを含む。
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、ハイブリドーマ技術を介して産生された抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、あらゆる真核、原核、またはファージクローンを含み、これらは、当業界において利用可能な、または公知のあらゆる手段によって単一のクローンから誘導される。本発明の開示において有用なモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組合せの使用を含む当業界において公知の様々な技術を使用して調製することができる。ヒトにおける抗グリコＣＤ４４抗体のインビボでの使用を含む本発明の開示の多くの使用において、キメラ、霊長類化、ヒト化、またはヒト抗体を、好適に使用することができる。
用語「キメラ」抗体は、本明細書で使用される場合、非ヒト免疫グロブリン、例えばラットまたはマウス抗体由来の可変配列と、典型的にはヒト免疫グロブリンテンプレートから選ばれるヒト免疫グロブリン定常領域とを有する抗体を指す。キメラ抗体を産生するための方法は、当業界において公知である。例えば、この参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7；Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221；Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202；米国特許第５，８０７，７１５号明細書；第４，８１６，５６７号明細書；および第４，８１６３９７号明細書を参照されたい。
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化された」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有するキメラ免疫グロブリンである。一般的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に相当し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むと予想される。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体ヒト化の方法は、当業界において公知である。例えば、全てが参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-7；Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５，５３０，１０１号明細書；第５，５８５，０８９号明細書；第５，６９３，７６１号明細書；第５，６９３，７６２号明細書；および第６，１８０，３７０号明細書；欧州特許第２３９４００号明細書；ＰＣＴ国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；米国特許第５，２２５，５３９号明細書；欧州特許第５９２１０６号明細書；欧州特許第５１９５９６号明細書；Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498；Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-814；Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973；ならびに米国特許第５，５６５，３３２号明細書を参照されたい。
「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、さらに、ヒト免疫グロブリンライブラリーから単離された抗体、または１つまたは複数のヒト免疫グロブリンに関してトランスジェニックであり、内因性免疫グロブリンを発現しない動物から単離された抗体を含む。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリーを使用するファージディスプレイ方法などの当業界において公知の様々な方法によって作製することができる。これらのそれぞれが参照によりその全体が本明細書に組み入れられる、米国特許第４，４４４，８８７号明細書および第４，７１６，１１１号明細書；ならびにＰＣＴ国際公開第９８／４６６４５号パンフレット；国際公開第９８／５０４３３号パンフレット；国際公開第９８／２４８９３号パンフレット；国際公開第９８／１６６５４号パンフレット；国際公開第９６／３４０９６号パンフレット；国際公開第９６／３３７３５号パンフレット；および国際公開第９１／１０７４１号パンフレットを参照されたい。ヒト抗体はまた、機能的な内因性免疫グロブリンを発現できないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを使用することにより産生することもできる。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第９８／２４８９３号パンフレット；国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；国際公開第９６／３４０９６号パンフレット；国際公開第９６／３３７３５号パンフレット；米国特許第５，４１３，９２３号明細書；第５，６２５，１２６号明細書；第５，６３３，４２５号明細書；第５，５６９，８２５号明細書；第５，６６１，０１６号明細書；第５，５４５，８０６号明細書；第５，８１４，３１８号明細書；第５，８８５，７９３号明細書；第５，９１６，７７１号明細書；および第５，９３９，５９８号明細書を参照されたい。選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「ガイドされる選択」と称される技術を使用して生成することができる。このアプローチにおいて、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えばマウス抗体は、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択をガイドするのに使用される（Jespers et al., 1988, Biotechnology 12:899-903を参照）。
「霊長類化抗体」は、サル可変領域およびヒト定常領域を含む。霊長類化抗体を産生するための方法は、当業界において公知である。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、米国特許第５，６５８，５７０号明細書；第５，６８１，７２２号明細書；および第５，６９３，７８０号明細書を参照されたい。
本開示の抗グリコＣＤ４４抗体は、全長（無傷）抗体分子と、グリコＣＤ４４と結合することが可能な抗原結合フラグメントの両方を含む。抗原結合フラグメントの例としては、一例として、これらに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、単鎖Ｆｖフラグメントおよび単一ドメインフラグメントが挙げられる。
Ｆａｂフラグメントは、軽鎖（ＣＬ）の定常ドメイン、および重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体のヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端における数個の残基の付加によってＦａｂフラグメントと異なる。Ｆ（ａｂ’）フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２ペプシン消化生成物のヒンジシステインにおけるジスルフィド結合の切断によって産生される。抗体フラグメントの追加の化学的カップリングは、当業者公知である。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）１フラグメントは無傷抗体のＦｃフラグメントを欠き、無傷抗体より迅速に動物の循環から排除され、無傷抗体より少ない非特異的な組織結合を有する可能性がある（例えば、Wahl et al., 1983, J. Nucl. Med. 24:316を参照）。
「Ｆｖ」フラグメントは、完全な標的認識および結合部位を含有する抗体の最小フラグメントである。この領域は、しっかりとした非共有結合による会合での１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインの二量体（ＶＨ－ＶＬ二量体）からなる。この立体配置で、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上の標的結合部位が規定される。しばしば６つのＣＤＲは、抗体に標的結合特異性を付与する。しかしながら、一部の場合において、単一の可変ドメイン（または標的に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体より低い親和性ではあるが標的を認識してそれに結合する能力を有する場合がある。
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗原結合フラグメントは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、この場合、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般的に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓｃＦｖが標的結合にとって望ましい構造を形成することを可能にする。
「単一ドメイン抗体」は、グリコＣＤ４４に十分な親和性を示す単一のＶＨまたはＶＬドメインで構成される。具体的な実施形態において、単一ドメイン抗体は、ラクダ化抗体である（例えば、Riechmann, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25-38を参照）。
また本開示の抗グリコＣＤ４４抗体は、二重特異性および他の多重特異性抗体であってもよい。二重特異性抗体は、同一または異なる抗原上の２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有するモノクローナル抗体、多くの場合、ヒト抗体またはヒト化抗体である。本発明の開示において、結合特異性の一方は、グリコＣＤ４４に向けられていてもよく、他方は、他のあらゆる抗原、例えば、細胞表面タンパク質、受容体、受容体サブユニット、組織特異的抗原、ウイルス由来のタンパク質、ウイルスによってコードされたエンベロープタンパク質、細菌由来のタンパク質、または細菌表面タンパク質などに向けられていてもよい。特定の実施形態において、二重特異性および他の多重特異性を有する抗グリコＣＤ４４抗体および抗原結合フラグメントは、第２のＣＤ４４エピトープ、がん細胞上でＣＤ４４と共発現される別のタンパク質上のエピトープ、または活性化Ｔ細胞などの異なる細胞上に存在する別のタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。本開示の二重特異性抗体は、ＩｇＧ様式の二重特異性抗体および単鎖ベースの二重特異性抗体を含む。
ＩｇＧ様式の本開示の二重特異性抗体は、当業界において公知の様々な種類のＩｇＧ様式の二重特異性抗体のいずれか、例えば、クアドローマ二重特異性抗体、「ノブ－イン－ホール（knobs-in-hole）」二重特異性抗体、ＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体、電荷対を有する二重特異性抗体、一般的な軽鎖二重特異性抗体、１アームの単鎖Ｆａｂ－免疫グロブリンガンマ二重特異性抗体、ジスルフィドで安定化されたＦｖ二重特異性抗体、ＤｕｅｔＭａｂ、制御されたＦａｂアーム交換二重特異性抗体、鎖交換操作されたドメインボディの二重特異性抗体、２アームのロイシンジッパーヘテロ二量体モノクローナル二重特異性抗体、κλボディの二重特異性抗体、二重可変ドメイン二重特異性抗体、および交差二重可変ドメイン二重特異性抗体であってもよい。例えば、この参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495-497；Milstein and Cuello, 1983, Nature 305:537-40；Ridgway et al., 1996, Protein Eng. 9:617-621；Schaefer et al., 2011, Proc Natl Acad Sci USA 108:11187-92；Gunasekaran et al., 2010, J Biol Chem 285:19637-46；Fischer et al., 2015 Nature Commun 6:6113；Schanzer et al., 2014, J Biol Chem 289:18693-706；Metz et al., 2012 Protein Eng Des Sel 25:571-80；Mazor et al., 2015 MAbs 7:377-89；Labrijn et al., 2013 Proc Natl Acad Sci USA 110:5145-50；Davis et al., 2010 Protein Eng Des Sel 23:195-202；Wranik et al., 2012, J Biol Chem 287:43331-9；Gu et al., 2015, PLoS One 10(5):e0124135；Steinmetz et al., 2016, MAbs 8(5):867-78；Klein et al., 2016, mAbs, 8(6):1010-1020；Liu et al., 2017, Front. Immunol. 8:38；およびYang et al., 2017, Int. J. Mol. Sci. 18:48を参照されたい。
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣｒｏｓｓＭａｂである。ＣｒｏｓｓＭａｂ技術は、この参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、国際公開第２００９／０８０２５１号パンフレット、国際公開第２００９／０８０２５２号パンフレット、国際公開第２００９／０８０２５３号パンフレット、国際公開第２００９／０８０２５４号パンフレット、国際公開第２０１３／０２６８３３号パンフレット、国際公開第２０１６／０２０３０９号パンフレット、およびSchaefer et al., 2011, Proc Natl Acad Sci USA 108:11187-92で詳細に記載されている。簡単に言えば、ＣｒｏｓｓＭａｂ技術は、正しい鎖会合を促進する二重特異性ＩｇＧの１つのＦａｂアーム内の重鎖と軽鎖との間のドメインの交差に基づく。本開示のＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および軽鎖が交換されている「ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢ」抗体であってもよい。他の実施形態において、本開示のＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および軽鎖の可変ドメインのみが交換されている「ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬ」抗体であってもよい。さらに他の実施形態において、本開示のＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および軽鎖の定常ドメインのみが交換されている「ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１－ＣＬ」抗体であってもよい。ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１－ＣＬ抗体は、ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢおよびＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬとは対照的に、予測された副産物を有さず、それゆえに、一部の実施形態において、ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１－ＣＬ二重特異性抗体が好ましい。Klein et al., 2016, mAbs, 8(6):1010-1020を参照されたい。
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、制御されたＦａｂアーム交換二重特異性抗体である。Ｆａｂアーム交換二重特異性抗体を作製するための方法は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第２０１１／１３１７４６号パンフレットおよびLabrijn et al., 2014 Nat Protoc. 9(10):2450-63に記載されている。簡単に言えば、制御されたＦａｂアーム交換二重特異性抗体は、ＣＨ３ドメイン中に単一の一致する点突然変異を含有する２つの親ＩｇＧ１を別々に発現させること、インビトロで、酸化還元条件下で親ＩｇＧ１を混合して、半分の分子の組換えを可能にすること、および還元体を除去して鎖間のジスルフィド結合を再酸化し、それにより二重特異性抗体を形成することによって作製することができる。
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、「ボトルオープナー」、「ｍＡｂ－Ｆｖ」、「ｍＡｂ－ｓｃＦｖ」、「セントラルｓｃＦｖ」、「セントラルＦｖ」、「１アームのセントラルｓｃＦｖ（one-armed central-scFv）」または「二重ｓｃＦｖ」様式の二重特異性抗体である。これらの様式の二重特異性抗体は、その内容が参照により本明細書にその全体で組み入れられるＰＣＴ公報国際公開第２０１６／１８２７５１号パンフレットに記載されている。これらの様式はいずれも、２つのＦｃサブユニットを含有する「単量体」がＦｃドメインを含有する「二量体」に集合する抗体重鎖のＦｃドメインの自己集合性質に頼っている。
ボトルオープナー様式において、第１の単量体は、任意選択でリンカーを介してＦｃサブユニットのＮ末端に共有結合で連結されたｓｃＦｖを含み、第２の単量体は、重鎖（ＶＨ、ＣＨ１、および第２のＦｃサブユニットを含む）を含む。ボトルオープナー様式の二重特異性抗体は、第２の単量体と対を形成してＦａｂを形成することが可能な軽鎖をさらに含む。
ｍＡｂ－Ｆｖ二重特異性抗体様式は、一方の重鎖単量体のＣ末端に付着した「余分な」ＶＨドメインと、他方の重鎖単量体に付着した「余分な」ＶＬドメインとが第３の抗原結合ドメインを形成することに頼っている。一部の実施形態において、ｍＡｂ－Ｆｖ二重特異性抗体は、第１のＶＨドメイン、ＣＨ１ドメインおよび第１のＦｃサブユニットを含む第１の単量体を含み、ＶＬドメインはＣ末端に共有結合で付着している。第２の単量体は、ＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン第２のＦｃサブユニット、および第２の単量体のＣ末端に共有結合で付着したＶＨを含む。２つのＣ末端に付着した可変ドメインが、Ｆｖを構成する。ｍＡｂ－Ｆｖは２つの軽鎖をさらに含み、これらが第１および第２の単量体と会合すると、Ｆａｂを形成する。
ｍＡｂ－ｓｃＦｖ二重特異性様式は、ｓｃＦｖのＣ末端のｍＡｂの単量体の１つに付着すること、したがって、第３の抗原結合ドメインを形成することの使用に頼っている。したがって、第１の単量体は、第１の重鎖（ＶＨ、ＣＨ１および第１のＦｃサブユニットを含む）を、Ｃ末端に共有結合で付着したｓｃＦｖと共に含む。ｍＡｂ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体は、第２の単量体（ＶＨ、ＣＨ１、および第１のＦｃサブユニットを含む）、ならびに第１および第２の単量体と会合するとＦａｂを形成する２つの軽鎖をさらに含む。
セントラルｓｃＦｖ二重特異性様式は、ｍＡｂに挿入されたｓｃＦｖドメインの使用、したがって第３の抗原結合ドメインの形成に頼っている。ｓｃＦｖドメインは、単量体の一方のＦｃサブユニットとＣＨ１ドメインとの間に挿入され、したがって第３の抗原結合ドメインが提供される。したがって、第１の単量体は、ＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン（および任意選択のヒンジ）および第１のＦｃサブユニットを含んでいてもよく、ｓｃＦｖは、任意選択のドメインリンカーを使用して、ＣＨ１ドメインのＣ末端と第１のＦｃサブユニットのＮ末端との間に共有結合で付着されている。他方の単量体は、標準的なＦａｂ側の単量体であってもよい。セントラルｓｃＦｖ二重特異性抗体は、２つの軽鎖をさらに含み、これらは、第１および第２の単量体と会合するとＦａｂを形成する。
セントラルＦｖ二重特異性様式は、挿入されたＦｖドメインの使用、したがって第３の抗原結合ドメインの形成に頼っている。各単量体は、Ｆｖの成分を含有していてもよい（例えば一方の単量体は可変重鎖ドメインを含み、他方は可変軽鎖ドメインを含む）。したがって、１つの単量体は、ＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、第１のＦｃサブユニット、および任意選択でドメインリンカーを使用してＣＨ１ドメインのＣ末端と第１のＦｃサブユニットのＮ末端との間に共有結合で付着したＶＬドメインを含んでいてもよい。他の単量体は、ＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、第２のＦｃサブユニット、および任意選択でドメインリンカーを使用してＣＨ１ドメインのＣ末端と第２のＦｃドメインのＮ末端との間に共有結合で付着した追加のＶＨドメインを含んでいてもよい。セントラルＦｖ二重特異性抗体は、第１および第２の単量体と会合するとＦａｂを形成する２つの軽鎖をさらに含む。
１アームのセントラルｓｃＦｖ二重特異性様式は、Ｆｃサブユニットだけを含む１つの単量体を含み、一方で他方の単量体は、挿入されたｓｃＦｖドメインを含み、したがって第２の抗原結合ドメインを形成する。したがって、１つの単量体は、ＶＨドメイン、ＣＨ１ドメインおよび第１のＦｃサブユニットを含んでいてもよく、ｓｃＦｖは、任意選択でドメインリンカーを使用してＣＨ１ドメインのＣ末端と第１のＦｃサブユニットのＮ末端との間に共有結合で付着されている。第２の単量体は、Ｆｃドメインを含んでいてもよい。この実施形態はさらに、第１の単量体と会合してＦａｂを形成する、可変軽鎖ドメインおよび定常軽鎖ドメインを含む軽鎖を利用する。
デュアルｓｃＦｖ二重特異性様式は、任意選択でリンカーを介して第１のＦｃサブユニットのＮ末端に共有結合で付着したｓｃＦｖを含む第１の単量体、および任意選択でリンカーを介して第２のＦｃサブユニットのＮ末端に共有結合で付着したｓｃＦｖを含む第２の単量体を含む。
本開示の二重特異性抗体は、第１および第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインを含んでいてもよい。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメインである。特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。別の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。より具体的な実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８位におけるアミノ酸置換、特にアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスの番号付け）を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。本明細書において別段の規定がない限り、Ｆｃドメインまたは定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MDに記載されたような、ＥＵインデックスとも称されるＥＵ番号付けシステムに従う。このアミノ酸置換は、インビボにおいてＩｇＧ４抗体のＦａｂアーム交換を低減させる（Stubenrauch et al., 2010, Drug Metabolism and Disposition 38:84-91を参照）。さらなる特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインである。よりさらに特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の例示的な配列は、配列番号１６６に示される。
特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進する改変を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインの２つのサブユニット間の最も大規模なタンパク質－タンパク質相互作用の部位は、ＣＨ３ドメイン中にある。したがって、一実施形態において、前記改変は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメイン中にある。
具体的な実施形態において、前記Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進する改変は、いわゆる「ノブ－イントゥー－ホール（knob-into-hole）」改変であり、これは、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一方に「ノブ」の改変、およびＦｃドメインの２つのサブユニットの他方に「ホール」の改変を含む。ノブ－イントゥー－ホール技術は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号明細書；米国特許第７，６９５，９３６号明細書；Ridgway et al., 1996, Prot Eng 9:617-621、およびCarter, J, 2001, Immunol Meth 248:7-15に記載されている。一般的に、本方法は、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨害するように、突起部が空洞に入ることができるように、第１のポリペプチドの境界に突起部（「ノブ」）、および第２のポリペプチドの境界に対応する空洞（「ホール」）を導入することを含む。突起部は、第１のポリペプチドの境界からの小さいアミノ酸側鎖をより大きい側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えることによって構築される。大きいアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、第２のポリペプチドの境界に、突起部と同一または類似のサイズを有するそれに見合った空洞が作り出される。
したがって、一部の実施形態において、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン中のアミノ酸残基を、より大きい側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き換えることによって、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の空洞に入ることができる突起部が生じ、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン中のアミノ酸残基を、より小さい側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き換えることによって、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の突起部を入れることができる空洞が生じる。好ましくは、より大きい側鎖の体積を有する前記アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。好ましくは、より小さい側鎖の体積を有する前記アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、およびバリン（Ｖ）からなる群から選択される。突起部および空洞は、例えば部位特異的突然変異誘発によってポリペプチドをコードする核酸を変更することにより、またはペプチド合成により作製することができる。
特定のこのような実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、３６６位におけるスレオニン残基は、トリプトファン残基で置き換えられ（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、４０７位におけるチロシン残基は、バリン残基で置き換えられ（Ｙ４０７Ｖ）、任意選択で３６６位におけるスレオニン残基は、セリン残基で置き換えられ（Ｔ３６６Ｓ）、３６８位におけるロイシン残基は、アラニン残基で置き換えられている（Ｌ３６８Ａ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。さらなる実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、加えて、３５４位におけるセリン残基は、システイン残基で置き換えられ（Ｓ３５４Ｃ）、または３５６位におけるグルタミン酸残基は、システイン残基で置き換えられ（Ｅ３５６Ｃ）（特に３５４位におけるセリン残基は、システイン残基で置き換えられている）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、加えて、３４９位におけるチロシン残基は、システイン残基によって置き換えられている（Ｙ３４９Ｃ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。特定の実施形態において、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
一部の実施形態において、固定のステアリング（例えば、Gunasekaran et al., 2010, J Biol Chem 285(25):19637-46に記載される通り）を使用して、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進することができる。
一部の実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体および／またはエフェクター機能への結合を低減する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。
特定の実施形態において、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。一実施形態において、Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。一実施形態において、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な実施形態において、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体であり、より具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩａであり、最も具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａである。一実施形態において、エフェクター機能は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、およびサイトカイン分泌の群から選択される１つまたは複数である。特定の実施形態において、エフェクター機能は、ＡＤＣＣである。
典型的には、同じ１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのそれぞれに存在する。一実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸置換は、ＦｃドメインのＦｃ受容体への結合親和性を低減する。一実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸置換は、ＦｃドメインのＦｃ受容体への結合親和性を、少なくとも２分の１、少なくとも５分の１、または少なくとも１０分の１にする。
一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、Ｐ３３１およびＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｌ２３４、Ｌ２３５およびＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。一部の実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。このような実施形態の一つにおいて、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態において、アミノ酸置換は、Ｐ３２９ＡまたはＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇである（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含み、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７およびＰ３３１から選択される位置にさらなるアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な実施形態において、さらなるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＰ３３１Ｓである。特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９、Ｌ２３４およびＬ２３５の位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇを含む（「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」、「ＰＧＬＡＬＡ」または「ＬＡＬＡＰＧ」）。具体的には、特定の実施形態において、Ｆｃドメインの各サブユニットは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスの番号付け）、すなわち、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットのそれぞれにおいて、２３４位におけるロイシン残基は、アラニン残基で置き換えられ（Ｌ２３４Ａ）、２３５位におけるロイシン残基は、アラニン残基で置き換えられ（Ｌ２３５Ａ）、３２９位におけるプロリン残基は、グリシン残基によって置き換えられている（Ｐ３２９Ｇ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。このような実施形態の一つにおいて、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
本開示の単鎖ベースの二重特異性抗体は、当業界において公知の様々な種類の単鎖ベースの二重特異性抗体、例えば二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、ダイアボディ、タンデムダイアボディ（ｔａｎｄａｂ）、二重親和性リターゲティング分子（ＤＡＲＴ：dual-affinity retargeting molecule）、および二重特異性キラー細胞エンゲージャーのいずれかであり得る。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Loffler et al., 2000, Blood 95:2098-103；Holliger et al., 1993, Proc Natl Acad Sci USA, 90:6444-8；Kipriyanov et al., 1999, Mol Biol 293:41-56；Johnson et al., 2010, Mol Biol 399:436-49；Wiernik et al., 2013, Clin Cancer Res 19:3844-55；Liu et al., 2017, Front. Immunol. 8:38；およびYang et al., 2017, Int. J. Mol. Sci. 18:48を参照されたい。
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である。ＢｉＴＥは、２つの抗原結合ドメインを有する単一のポリペプチド鎖分子であり、抗原結合ドメインの一方がＴ細胞抗原に結合し、第２の抗原結合ドメインが標的の表面上に提示される抗原に結合する（参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第０５／０６１５４７号パンフレット；Baeuerle et al., 2008, Drugs of the Future 33: 137-147；Bargou, et al., 2008, Science 321:974-977を参照）。したがって、本開示のＢｉＴＥは、Ｔ細胞抗原に結合する抗原結合ドメイン、およびグリコＣＤ４４に向けられた第２の抗原結合ドメインを有する。
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、二重親和性リターゲティング分子（ＤＡＲＴ）である。ＤＡＲＴは、会合して（特に共有結合による相互作用を介して）少なくとも２つのエピトープ結合部位を形成する少なくとも２つのポリペプチド鎖を含み、これらのエピトープ結合部位は、同一のエピトープを認識してもよいし、または異なるエピトープを認識してもよい。ＤＡＲＴのポリペプチド鎖のそれぞれは、免疫グロブリン軽鎖可変領域および免疫グロブリン重鎖可変領域を含むが、これらの領域は、相互作用してエピトープ結合部位を形成しない。そうではなく、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の一方の（例えば、第１の）免疫グロブリン重鎖可変領域は、異なる（例えば、第２の）ＤＡＲＴ（商標）ポリペプチド鎖の免疫グロブリン軽鎖可変領域と相互作用して、エピトープ結合部位を形成する。同様に、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の一方の（例えば、第１の）の免疫グロブリン軽鎖可変領域は、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の異なる（例えば、第２の）免疫グロブリン重鎖可変領域と相互作用して、エピトープ結合部位を形成する。ＤＡＲＴは、単一特異性、二重特異性、三重特異性などであってもよく、したがって、１、２、３またはそれより多くの異なるエピトープ（これらは、同じまたは異なる抗原のものであってもよい）と同時に結合することができる。ＤＡＲＴは、加えて、１価、２価、３価、４価、５価、６価などであってもよく、したがって、１、２、３、４、５、６つまたはそれより多くの分子と同時に結合することができる。ＤＡＲＴのこれら２つの特性（すなわち、特異性の程度および原子価を組み合わせて、例えば、４価の（すなわち、エピトープの４つのセットと結合することが可能な）二重特異性抗体（すなわち、２つのエピトープと結合することが可能な）などを産生することができる。ＤＡＲＴ分子は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第２００６／１１３６６５号パンフレット、国際公開第２００８／１５７３７９号パンフレット、および国際公開第２０１０／０８０５３８号パンフレットに開示されている。
本開示の二重特異性抗体の一部の実施形態において、結合特異性の１つは、グリコＣＤ４４に向けられ、他方は、免疫エフェクター細胞上で発現される抗原に向けられる。用語「免疫エフェクター細胞」または「エフェクター細胞」は、本明細書で使用される場合、活性化されて標的細胞の生存能に影響を与えることができる、哺乳類免疫系中の細胞の天然レパートリー内の細胞を指す。免疫エフェクター細胞としては、リンパ球系細胞、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔ細胞を含むＴ細胞、またはＢ細胞が挙げられることに加えて、単球またはマクロファージ、樹状細胞および好中性顆粒球などの骨髄系細胞も、免疫エフェクター細胞とみなすことができる。したがって、前記エフェクター細胞は、好ましくは、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞または好中性顆粒球である。異常な細胞へのエフェクター細胞の補充は、エフェクター細胞が、それらが補充される異常な細胞を直接致死させるか、またはその致死を間接的に開始させることができるように、免疫エフェクター細胞が、異常な標的細胞に近接して取り込まれることを意味する。非特異的な相互作用を回避するために、本開示の二重特異性抗体は、体内の他の細胞と比較して、これらの免疫エフェクター細胞によって少なくとも過剰発現される免疫エフェクター細胞上の抗原を特異的に認識することが好ましい。免疫エフェクター細胞上に提示される標的抗原としては、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ６４、ＣＤ８９、ＮＫＧ２ＤおよびＮＫｐ４６を挙げることができる。好ましくは、免疫エフェクター細胞上の抗原は、Ｔ細胞上で発現されるＣＤ３である。
「ＣＤ３」は、本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、霊長類（例えばヒト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）およびげっ歯類（例えばマウスおよびラット）などの哺乳動物を含むあらゆる脊椎動物源由来のあらゆる天然ＣＤ３を指す。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＣＤ３に加えて、細胞中でのプロセシングに起因するＣＤ３のあらゆる形態を包含する。この用語はまた、ＣＤ３の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントも包含する。免疫エフェクター細胞上の最も好ましい抗原は、ＣＤ３イプシロン鎖である。この抗原は、異常な細胞へのＴ細胞の補充において非常に有効であることが示されている。したがって、本開示の二重特異性抗体は、好ましくは、ＣＤ３イプシロンを特異的に認識する。ヒトＣＤ３イプシロンのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（www.uniprot.org）受託番号Ｐ０７７６６（バージョン１４４）、またはＮＣＢＩ（www.ncbi.nlm.nih.gov/）ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿０００７２４．１で示される。カニクイザル［カニクイザル（Macaca fascicularis）］ＣＤ３イプシロンのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ番号ＢＡＢ７１８４９．１で示される。ヒトの治療的使用の場合、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３イプシロン鎖）に特異的に結合する二重特異性抗体が使用される。非ヒト動物や細胞株における前臨床試験の場合、前臨床試験に利用される種（例えば、霊長類の試験の場合、カニクイザルＣＤ３）においてＣＤ３結合ドメインがＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体を使用することができる。
本明細書で使用される場合、特定の種由来の標的抗原に「特異的に結合する」またはそれを「特異的に認識する」結合ドメインは、他の種由来の抗原への結合またはその認識を除外せず、したがって、結合ドメインの１つまたは複数が種間の交差反応性を有する抗体を包含する。例えば、ヒトＣＤ３に「特異的に結合する」またはそれを「特異的に認識する」ＣＤ３結合ドメインはまた、カニクイザル（cyomolgus）ＣＤ３に結合する、またはそれを認識することもでき、逆もまた同様である。
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体Ｈ２Ｃ（ＰＣＴ国際公開第２００８／１１９５６７号パンフレットに記載される）と競合することができる。他の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体Ｖ９（Rodrigues et al., 1992, Int J Cancer Suppl 7:45-50および米国特許第６，０５４，２９７号明細書に記載される）と競合することができる。さらに他の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体ＦＮ１８（Nooij et al., 1986, Eur J Immunol 19:981-984に記載される）と競合することができる。さらに他の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体ＳＰ３４（Pessano et al., 1985, EMBO J 4:337-340に記載される）と競合することができる。
本開示の抗グリコＣＤ４４抗体は、誘導体化された抗体を含む。例えば、ただし限定されないが、誘導体化された抗体は、典型的には、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解による切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結によって改変される。様々な化学修飾のいずれも、これらに限定されないが、特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などの公知の技術によって行うことができる。加えて、誘導体は、例えばａｍｂｒｘの技術を使用して、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含有していてもよい（例えば、Wolfson, 2006, Chem. Biol. 13(10):1011-2を参照）。
抗グリコＣＤ４４抗体または結合フラグメントは、少なくとも１つの定常領域が媒介する生物学的なエフェクター機能を変更するようにその配列が改変されている抗体またはフラグメントであり得る。例えば、一部の実施形態において、抗グリコＣＤ４４抗体は、改変されていない抗体と比べて、少なくとも１つの定常領域が媒介する生物学的なエフェクター機能を低減するように改変されてもよく、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）への結合を低減するように改変される。ＦｃγＲへの結合は、ＦｃγＲ相互作用に必要な特定の領域で抗体の免疫グロブリン定常領域セグメントを突然変異させることによって低減させることができる（例えば、Canfield and Morrison, 1991, J. Exp. Med. 173:1483-1491；およびLund et al., 1991, J. Immunol. 147:2657-2662を参照）。抗体のＦｃγＲ結合能の低減はまた、ＦｃγＲ相互作用を頼る他のエフェクター機能、例えばオプソニン化、貪食および抗原依存性細胞傷害（「ＡＤＣＣ」）も低減することができる。
本明細書に記載される抗グリコＣＤ４４抗体または結合フラグメントは、少なくとも１つの定常領域が媒介する生物学的なエフェクター機能を獲得するか、または改変されていない抗体に比べて改善する、例えば、ＦｃγＲ相互作用を強化するように改変された抗体および／または結合フラグメントを含む（例えば、米国特許出願公開第２００６／０１３４７０９号明細書を参照）。例えば、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体は、対応する野生型定常領域より大きい親和性でＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＦｃγＲＩＩＩＡと結合する定常領域を有していてもよい。
したがって、本開示の抗体は、オプソニン化、貪食、またはＡＤＣＣの増加または減少を引き起こす生物学的活性における変更を有していてもよい。このような変更は、当業界において公知である。例えば、ＡＤＣＣ活性を低減する抗体における改変は、米国特許第５，８３４，５９７号明細書に記載されている。例示的なＡＤＣＣを低下させるバリアントは、残基２３６が欠失し、残基２３４、２３５および２３７（ＥＵの番号付けを使用）がアラニンで置換された「突然変異体３」に相当する（米国特許第５，８３４，５９７号明細書の図４に示される）。別の例示的なＡＤＣＣを低減するバリアントは、アミノ酸突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」）を含む。アミノ酸置換の「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」の組合せは、参照によりその全体が本明細書に組み入れられるＰＣＴ公報ＷＯ２０１２／１３０８３１号に記載されたように、ヒトＩｇＧ１ ＦｃドメインのＦｃγ受容体結合（同様に補体結合も）をほぼ完全に破壊する。ＷＯ２０１２／１３０８３１はまた、このような突然変異体Ｆｃドメインの調製方法、およびその特性、例えばＦｃ受容体結合またはエフェクター機能を決定するための方法も記載している。
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体は、低いレベルのフコースを有するか、またはフコースを欠く。フコースを欠く抗体は、特に低用量の抗体で、ＡＤＣＣ活性の強化との相関が示されている。Shields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-26740；Shinkawa et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:3466-73を参照されたい。フコースが少ない抗体を調製する方法としては、ラット骨髄腫ＹＢ２／０細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６６２）での増殖が挙げられる。ＹＢ２／０細胞は、ポリペプチドのフコシル化に必要な酵素であるα－１，６－フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８ ｍＲＮＡを低いレベルで発現する。
一部の実施形態において、抗グリコＣＤ４４抗体または結合フラグメントは、バイセクト型オリゴ糖を含み、例えば、Ｆｃドメインに結合した２分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されているものを含む。このようなバリアントは、上述したように、低減されたフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。このような抗体バリアントの例は、例えば、Umana et al., 1999, Nat Biotechnol 17:176-180；Ferrara et al., 2006, Biotechn Bioeng 93: 851-861；ＷＯ９９／５４３４２；ＷＯ２００４／０６５５４０；およびＷＯ２００３／０１１８７８に記載されている。
さらに別の態様において、抗グリコＣＤ４４抗体または結合フラグメントは、例えば、ＦｃＲｎ相互作用に関与する特定の領域で免疫グロブリン定常領域セグメントを突然変異させることによって、胎児Ｆｃ受容体、ＦｃＲｎへのその結合親和性を増加または減少させる改変を含む（例えば、国際公開第２００５／１２３７８０号パンフレットを参照）。特定の実施形態において、ＩｇＧクラスの抗グリコＣＤ４４抗体は、重鎖定常領域のアミノ酸残基２５０、３１４、および４２８の少なくとも１つが、例えば２５０および４２８位、または２５０および３１４位、または３１４および４２８位、または２５０、３１４、および４２８位で、単独で、またはそれらのいずれかの組合せで置換されるように突然変異しており、具体的な組合せは２５０および４２８位である。２５０位の場合、置換されるアミノ酸残基は、スレオニン以外のいずれのアミノ酸残基であってもよく、例えば、これらに限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、バリン、トリプトファン、またはチロシンなどであってもよい。３１４位の場合、置換されるアミノ酸残基は、ロイシン以外のいずれのアミノ酸残基であってもよく、例えば、これらに限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、バリン、トリプトファン、またはチロシンなどであってもよい。４２８位の場合、置換されるアミノ酸残基は、メチオニン以外のいずれのアミノ酸残基であってもよく、例えば、これらに限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、バリン、トリプトファン、またはチロシンなどであってもよい。好適なアミノ酸置換の具体的な組合せは、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第７，２１７，７９７号明細書の表１で特定されている。このような突然変異は、ＦｃＲｎへの結合を増加させ、それにより抗体を分解から保護し、その半減期を増加させる。
さらに他の態様において、本開示の抗原結合フラグメントの抗グリコＣＤ４４抗体は、例えばJung and Pluckthun, 1997, Protein Engineering 10:9, 959-966；Yazaki et al., 2004, Protein Eng. Des Sel. 17(5):481-9. Epub 2004 Aug. 17；および米国特許出願第２００７／０２８０９３１号明細書に記載されるように、その高度可変領域の１つまたは複数に挿入された１つまたは複数のアミノ酸を有する。
診断適用に特に有用なさらに他の態様において、本開示の抗原結合フラグメントの抗グリコＣＤ４４抗体は、検出可能な部分に取り付けられている。検出可能な部分としては、放射性部分、比色分子、蛍光部分、化学発光部分、抗原、酵素、検出可能なビーズ（例えば磁気または高電子密度（例えば、金）ビーズ）、または別の分子に結合する分子（例えば、ビオチンまたはストレプトアビジン））が挙げられる。
放射性同位体または放射性核種は、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉを挙げることができる。
蛍光標識としては、ローダミン、ランタニド蛍光、フルオレセインおよびその誘導体、蛍光色素、ＧＦＰ（ＧＦＰは「Ｇｒｅｅｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ（緑色蛍光タンパク質）」を表す）、ダンシル、ウンベリフェロン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド（phthaldehyde）、およびフルオレサミンを挙げることができる。
酵素標識としては、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ（「Ｇ６ＰＤＨ」）、アルファ－Ｄ－ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコースアミラーゼ、炭酸脱水酵素、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸デヒドロゲナーゼおよびペルオキシダーゼを挙げることができる。
化学発光標識または化学発光物質（chemiluminescer）、例えばイソルミノール、ルミノールおよびジオキセタン。
他の検出可能な部分としては、ビオチン、ジゴキシゲニンまたは５－ブロモデオキシウリジンなどの分子が挙げられる。
特定の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、４Ｃ８または４Ｃ８の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体もしくは抗原結合フラグメント（それぞれ配列番号１～２）と競合する。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、２Ｂ２または２Ｂ２の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体もしくは抗原結合フラグメント（それぞれ配列番号２３～２４）と競合する。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、１８Ｇ９または１８Ｇ９の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラグメント（それぞれ配列番号４５～４６）と競合する。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、１Ｄ１２または１Ｄ１２の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラグメント（それぞれ配列番号６７～６８）と競合する。
他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、１０Ｈ４または１０Ｈ４の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラグメント（それぞれ配列番号２０６～２０７）と競合する。
競合は、４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、または１０Ｈ４と結合するグリコＣＤ４４エピトープまたは４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、または１０Ｈ４と結合するエピトープを含有するグリコシル化ＣＤ４４ペプチド、例えば、ＣＤ４４ｖ６グリコペプチドを発現する細胞でアッセイすることができる。対照として、エピトープまたはグリコシル化されていないペプチドを発現しない細胞を使用することができる。
競合アッセイを行うことができる細胞としては、これらに限定されないが、グリコＣＤ４４エピトープを発現するように改変された（engineered）、ＣＯＳＭＣノックアウトＨａＣａＴ細胞および組換え細胞（例えば、ＣＯＳＭＣノックアウトＨＥＫ２９３細胞）が挙げられる。１つの非限定的な例において、ＨＥＫ２９３細胞は、本来的にＴｎ陰性であるが、ＣＯＳＭＣシャペロンのノックアウトによってＴｎ抗原を発現するように誘導されてもよく、ＣＤ４４を発現するように改変され、４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４が結合するＣＤ４４のＴｎグリコフォームを発現する細胞が得られている。ＣＤ４４のグリコシル化されていない形態を発現する細胞は、陰性対照として使用することができる。Ｔｎ抗原を発現する細胞はまた、例えば、ＣＤ４４を発現する細胞を、グリコシル化阻害剤、コア１合成酵素もしくはＺＩＰ９のノックアウトで処理するか、または既存のグリカンの切断によって処理することによっても生成することができる。
競合に関するアッセイとしては、これらに限定されないが、放射活性物質標識イムノアッセイ（radioactive material labeled immunoassay；ＲＩＡ）、 酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチＥＬＩＳＡ、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）アッセイ、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）アッセイ、およびバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイが挙げられる。一部の実施形態において、抗体競合アッセイは、ＢＬＩを使用して（例えば、Ｏｃｔｅｔ－ＨＴＸシステム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して）行ってもよい。モノクローナル抗体の抗体競合またはエピトープビニングは、ＢＬＩを使用して、その特異的な抗原に対してタンデムで評価してもよい。ＢＬＩアッセイにおいて、抗原は、連続する工程で、バイオセンサー上に固定され、２つの競合する抗体に提示されていてもよい。オーバーラップしないエピトープへの結合は、第１の抗体での飽和が第２の抗体の結合をブロックしない場合に起こる。一部の実施形態において、抗体競合アッセイは、表面プラズモン共鳴を使用して（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅシステム（Ｃｙｔｉｖａ）を使用して）行ってもよい。表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、１種または複数の抗体は、バイオセンサー上に固定され、分析物（例えば、配列番号１６５のグリコＣＤ４４ｖ６ペプチド、または陰性対照分析物、例えば配列番号２０５もしくは配列番号２６０のグリコＭＵＣ１ペプチドまたは配列番号１６５のグリコシル化されていないＣＤ４４ｖ６ペプチド）と共に提示されてもよい。一部の実施形態において、抗体は、飽和濃度、例えば少なくとも約０．５μＭの濃度の分析物と接触する。一部の実施形態において、飽和濃度は、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭである。２種の抗体の結合親和性を比較する場合、両方の抗体の親和性は、好ましくは同じ濃度の両方の抗体を使用して測定され、例えば、１μＭの濃度の各抗体を使用して測定される。
参照抗体と試験抗体との間の抗体競合アッセイ（種またはアイソタイプに関わりなく）を実行することにおいて、最初に、後続の同定が可能になるように、検出可能な標識、例えばフルオロフォア、ビオチンまたは酵素標識（または放射性標識でも）で参照を標識してもよい。この場合、グリコＣＤ４４を発現する細胞は、標識されていない試験抗体とインキュベートされ、標識された参照抗体が添加され、結合した標識の強度が測定される。試験抗体が、オーバーラップするエピトープに結合することによって標識された参照抗体と競合する場合、強度は、試験抗体なしで行われた対照反応と比較して減少すると予想される。
このアッセイの具体的な実施形態において、アッセイ条件（例えば、特定された細胞密度）下における最大の結合の８０％をもたらす標識された参照抗体の濃度（「ｃｏｎｃ８０％」）がまず決定され、競合アッセイは、標識されていない試験抗体の１０×ｃｏｎｃ８０％および標識された参照抗体のｃｏｎｃ８０％行われる。
阻害は、阻害定数、またはＫｉとして表すことができ、これは、以下の式：
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［参照Ａｂ濃度］／ＫＤ）
に従って計算され、
式中、ＩＣ５０は、参照抗体の結合の５０％低減をもたらす試験抗体の濃度であり、Ｋｄは、参照抗体の解離定数であり、これは、グリコＣＤ４４に対するその親和性の尺度である。本明細書で開示される抗グリコＣＤ４４抗体と競合する抗体は、本明細書に記載されるアッセイ条件下で、１０ｐＭから１０ｎＭのＫｉを有し得る。
様々な実施形態において、使用される特定のアッセイ条件下で最大の結合の８０％である参照抗体濃度、および参照抗体濃度の１０倍高い試験抗体濃度で、少なくとも約２０％またはそれより多く、例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％もしくはそれよりさらに多く、または前述の値のいずれかの間の範囲のパーセンテージで、試験抗体が参照抗体の結合を減少させる場合、試験抗体は参照抗体と競合するとみなされる。
競合アッセイの一例では、ＣＤ４４ｖ６グリコペプチドを、プレートをペプチドの溶液と接触させることによって（例えば、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬの濃度で４℃で一晩）、固体表面、例えばマイクロウェルプレート上に接着させる。プレートを洗浄し（例えば、ＰＢＳ中の０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０）、ブロックする（例えば、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬで）。ＥＬＩＳＡ緩衝液（例えば、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０）中の飽和未満の量のビオチン化４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４（例えば、８０ｎｇ／ｍＬの濃度での）および連続希釈した（例えば、２．８μｇ／ｍＬ、８．３μｇ／ｍＬ、または２５μｇ／ｍＬの濃度での）標識されていない抗体（「参照」抗体）または競合する抗グリコＣＤ４４抗体（「試験」抗体）抗体の混合物をウェルに添加し、プレートを穏やかに振盪しながら１時間インキュベートする。プレートを洗浄し、各ウェルにＥＬＩＳＡ緩衝液で希釈した１μｇ／ｍＬのＨＲＰがコンジュゲートしたストレプトアビジンを添加し、プレートを１時間インキュベートする。プレートを洗浄し、基質（例えば、ＴＭＢ、Ｂｉｏｆｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）の添加によって結合した抗体を検出する。停止緩衝液（例えば、Ｂｉｏ ＦＸ Ｓｔｏｐ試薬、Ｂｉｏｆｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）の添加によって反応を止め、マイクロプレートリーダー（例えば、ＶＥＲＳＡｍａｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を使用して、吸光度を６５０ｎｍで測定する。
４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、１０Ｈ４と別の抗グリコＣＤ４４抗体との競合を試験するのに、この競合アッセイにおけるバリエーションも使用することができる。例えば、特定の態様において、抗グリコＣＤ４４抗体は参照抗体として使用され、４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４は試験抗体として使用される。加えて、配列番号１６５のグリコシル化ＣＤ４４ペプチドの代わりに、培養中に細胞表面上で（例えば上述の細胞型の１つの表面上で）発現される膜結合型グリコＣＤ４４を使用してもよい。一般的に、約１０４から１０６個の形質転換体、例えば、約１０５個の形質転換体が使用される。競合アッセイの他の様式は当業界において公知であり、採用することができる。
様々な実施形態において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体は、抗グリコＣＤ４４抗体が、０．０８μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬの濃度で、または前述の値のいずれかの間の範囲の濃度で（例えば、２μｇ／ｍＬから１０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で）使用される場合、標識された４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４の結合を、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または前述の値のいずれかの間の範囲のパーセンテージで低減させる（例えば、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体は、標識された４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４の結合を、５０％から７０％低減させる）。
他の実施形態において、４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４が、０．４μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬの濃度で、または前述の値のいずれかの間の範囲の濃度で（例えば、２μｇ／ｍＬから１０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で）使用される場合、４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４は、本開示の標識された抗グリコＣＤ４４抗体の結合を、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または前述の値のいずれかの間の範囲のパーセンテージで低減させる（例えば、４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４は、本開示の標識された抗グリコＣＤ４４抗体の結合を、５０％から７０％低減させる）。
前述のアッセイにおいて、４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４抗体は、４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４のＣＤＲまたは重鎖および軽鎖可変領域を含むあらゆる抗体または抗原結合フラグメント、例えば４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４のヒト化またはキメラカウンターパートで置き換えることができる。
特定の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、または１０Ｈ４のエピトープと同じかまたは類似したエピトープを有する。本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントのエピトープは、アラニンスキャニングを実行することによって特徴付けることができる。糖ペプチドのライブラリーはそれぞれ、配列番号１６５の１つの位置におけるアラニン点突然変異によって、ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドから変化している（またはＣＤ４４ペプチドが、グリシンの点突然変異によってアラニンを有する）。ペプチドのそれぞれへの抗体または抗原結合フラグメントの結合をＥＬＩＳＡで測定することによって、抗体または抗原結合フラグメントのエピトープをマッピングすることができる。
特定の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、表１Ａ～１Ｅに記載の重鎖および／または軽鎖可変配列（またはヌクレオチド配列によってコードされたもの）を含む。他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、表１～３に記載の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ配列（またはヌクレオチド配列によってコードされたもの）を含む。このような抗グリコＣＤ４４抗体および抗原結合フラグメントのフレームワーク配列は、表１Ａ～１Ｄに記載のＶＨおよびＶＬ配列の天然のマウスフレームワーク配列、表１Ｅに記載のＶＨおよびＶＬ配列の天然のウサギフレームワーク配列であってもよいし、または非天然の（例えば、ヒト化またはヒト）フレームワーク配列であってもよい。
さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号１～２と少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号２３～２４の少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号４５～４６と、少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号６７～６８と、少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号２０６～２０７と、少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
さらに他の態様において、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。例示的なｓｃＦｖは、重鎖可変フラグメントのＮ末端から軽鎖可変フラグメントまでを含む。別の例示的なｓｃＦｖは、重鎖可変フラグメントのＮ末端側に軽鎖可変フラグメントを含む。一部の実施形態において、ｓｃＦｖ重鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントは、４～１５アミノ酸のリンカー配列に共有結合している。ｓｃＦｖは、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの形態であってもよいし、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）内であってもよい。
６．２ 抗体－薬物コンジュゲート
本開示の別の態様は、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体および抗原結合フラグメントを含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）に関する。ＡＤＣは、一般的に、１つまたは複数のリンカーを介して１つまたは複数の細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質がそれに連結された、本明細書に記載される抗グリコＣＤ４４抗体および／または結合フラグメントを含む。具体的な実施形態において、ＡＤＣは、構造式（Ｉ）：
［Ｄ－Ｌ－ＸＹ］ｎ－Ａｂ
による化合物またはその塩であり、式中、各「Ｄ」は、それぞれ独立して、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質（「薬物」）を表し；各「Ｌ」は、それぞれ独立して、リンカーを表し；「Ａｂ」は、抗グリコＣＤ４４抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載される抗グリコＣＤ４４抗体または結合フラグメントを表し；各「ＸＹ」は、リンカー上の官能基Ｒｘと抗体上の「相補的」官能基Ｒｙとの間で形成された連結を表し、ｎは、ＡＤＣに連結された薬物の数、またはＡＤＣの薬物対抗体の比率（ＤＡＲ）を表す。
ＡＤＣを含み得る様々な抗体（Ａｂ）の具体的な実施形態は、上述した抗グリコＣＤ４４抗体および／または結合フラグメントの様々な実施形態を含む。
構造式（Ｉ）のＡＤＣおよび／または塩の一部の具体的な実施形態において、各Ｄが同じであり、および／または各Ｌが同じである。
本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣを構成し得る細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質（Ｄ）およびリンカー（Ｌ）に加えて、ＡＤＣに連結された多数の細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質の具体的な実施形態を、以下でより詳細に説明
する。
６．２．１．細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質
細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、細胞、特にがんおよび／または腫瘍細胞の増殖および／または複製を阻害する、および／またはそのような細胞を致死させることがわかっているあらゆる薬剤であり得る。細胞傷害性および／または細胞増殖抑制特性を有する多数の薬剤が文献公知である。細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質のクラスの非限定的な例としては、一例として、これらに限定されないが、放射性核種、アルキル化剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ＤＮＡ挿入剤（例えば、副溝結合剤、例えば副溝バインダー）、ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗物質、細胞周期モジュレーター、キナーゼ阻害剤、タンパク質合成阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ミトコンドリア阻害剤、および抗有糸分裂剤が挙げられる。
これらの様々なクラスのうち特定のものの範囲内の薬剤の具体的な非限定的な例を以下に示す。
アルキル化剤：アサレー（asaley）（（Ｌ－ロイシン、Ｎ－［Ｎ－アセチル－４－［ビス－（２－クロロエチル）アミノ］－ＤＬ－フェニルアラニル］－、エチルエステル；ＮＳＣ１６７７８０；ＣＡＳ登録番号３５７７８９７））；ＡＺＱ（（１，４－シクロヘキサジエン－１，４－ジカルバミン酸、２，５－ビス（１－アジリジニル）－３，６－ジオキソ－、ジエチルエステル；ＮＳＣ１８２９８６；ＣＡＳ登録番号５７９９８６８２））；ＢＣＮＵ（（Ｎ，Ｎ’－ビス（２－クロロエチル）－Ｎ－ニトロソウレア；ＮＳＣ４０９９６２；ＣＡＳ登録番号１５４９３８））；ブスルファン（１，４－ブタンジオールジメタンスルホネート；ＮＳＣ７５０；ＣＡＳ登録番号５５９８１）；（カルボキシフタラト）白金（ＮＳＣ２７１６４；ＣＡＳ登録番号６５２９６８１３）；ＣＢＤＣＡ（（ｃｉｓ－（１，１－シクロブタンジカルボキシラト）ジアンミン白金（ＩＩ））；ＮＳＣ２４１２４０；ＣＡＳ登録番号４１５７５９４４））；ＣＣＮＵ（（Ｎ－（２－クロロエチル）－Ｎ’－シクロヘキシル－Ｎ－ニトロソウレア；ＮＳＣ７９０３７；ＣＡＳ登録番号１３０１０４７４））；ＣＨＩＰ（イプロプラチン；ＮＳＣ２５６９２７）；クロラムブシル（ＮＳＣ３０８８；ＣＡＳ登録番号３０５０３３）；クロロゾトシン（（２－［［［（２－クロロエチル）ニトロソアミノ］カルボニル］アミノ］－２－デオキシ－Ｄ－グルコピラノース；ＮＳＣ１７８２４８；ＣＡＳ登録番号５４７４９９０５））；シスプラチン（シスプラチン；ＮＳＣ１１９８７５；ＣＡＳ登録番号１５６６３２７１）；クロメソン（clomesone）（ＮＳＣ３３８９４７；ＣＡＳ登録番号８８３４３７２０）；シアノモルホリノドキソルビシン（ＮＣＳ３５７７０４；ＣＡＳ登録番号８８２５４０７３）；シクロジソン（cyclodisone）（ＮＳＣ３４８９４８；ＣＡＳ登録番号９９５９１７３８）；ジアンヒドロガラクチトール（５，６－ジエポキシズルシトール；ＮＳＣ１３２３１３；ＣＡＳ登録番号２３２６１２０３）；フルオロドパン（fluorodopan）（（５－［（２－クロロエチル）－（２－フルオロエチル）アミノ］－６－メチル－ウラシル；ＮＳＣ７３７５４；ＣＡＳ登録番号８３４９１３）；ヘプスルファム（ＮＳＣ３２９６８０；ＣＡＳ登録番号９６８９２５７８）；ヒカントン（ＮＳＣ１４２９８２；ＣＡＳ登録番号２３２５５９３８）；メルファラン（ＮＳＣ８８０６；ＣＡＳ登録番号３２２３０７２）；メチルＣＣＮＵ（（１－（２－クロロエチル）－３－（ｔｒａｎｓ－４－メチルシクロヘキサン）－１－ニトロソウレア；ＮＳＣ９５４４１；１３９０９０９６）；マイトマイシンＣ（ＮＳＣ２６９８０；ＣＡＳ登録番号５００７７）；ミトゾロミド（mitozolamide）（ＮＳＣ３５３４５１；ＣＡＳ登録番号８５６２２９５３）；ナイトロジェンマスタード（（ビス（２－クロロエチル）メチルアミンヒドロクロリド；ＮＳＣ７６２；ＣＡＳ登録番号５５８６７）；ＰＣＮＵ（（１－（２－クロロエチル）－３－（２，６－ジオキソ－３－ピペリジル）－１－ニトロソウレア；ＮＳＣ９５４６６；ＣＡＳ登録番号１３９０９０２９））；ピペラジンアルキル化薬（（１－（２－クロロエチル）－４－（３－クロロプロピル）－ピペラジンジヒドロクロリド；ＮＳＣ３４４００７））；ピペラジンジオン（ＮＳＣ１３５７５８；ＣＡＳ登録番号４１１０９８０２）；ピポブロマン（（Ｎ，Ｎ－ビス（３－ブロモプロピオニル）ピペラジン；ＮＳＣ２５１５４；ＣＡＳ登録番号５４９１１））；ポルフィロマイシン（Ｎ－メチルマイトマイシンＣ；ＮＳＣ５６４１０；ＣＡＳ登録番号８０１５２５）；スピロヒダントインマスタード（ＮＳＣ１７２１１２；ＣＡＳ登録番号５６６０５１６４）；テロキシロン（teroxirone）（トリグリシジルイソシアヌレート；ＮＳＣ２９６９３４；ＣＡＳ登録番号２４５１６２９）；テトラプラチン（ＮＳＣ３６３８１２；ＣＡＳ登録番号６２８１６９８２）；チオテパ（Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリ－１，２－エタンジイルチオホスホルアミド；ＮＳＣ６３９６；ＣＡＳ登録番号５２２４４）；トリエチレンメラミン（ＮＳＣ９７０６；ＣＡＳ登録番号５１１８３）；ウラシルナイトロジェンマスタード（デスメチルドパン（desmethyldopan）；ＮＳＣ３４４６２；ＣＡＳ登録番号６６７５１）；Ｙｏｓｈｉ－８６４（（ビス（３－メシルオキシプロピル）アミンヒドロクロリド；ＮＳＣ１０２６２７；ＣＡＳ登録番号３４５８２２８）。
トポイソメラーゼＩ阻害剤：カンプトテシン（ＮＳＣ９４６００；ＣＡＳ登録番号７６８９－０３－４）；様々なカンプトテシン誘導体および類似体（例えば、ＮＳＣ１００８８０、ＮＳＣ６０３０７１、ＮＳＣ１０７１２４、ＮＳＣ６４３８３３、ＮＳＣ６２９９７１、ＮＳＣ２９５５００、ＮＳＣ２４９９１０、ＮＳＣ６０６９８５、ＮＳＣ７４０２８、ＮＳＣ１７６３２３、ＮＳＣ２９５５０１、ＮＳＣ６０６１７２、ＮＳＣ６０６１７３、ＮＳＣ６１０４５８、ＮＳＣ６１８９３９、ＮＳＣ６１０４５７、ＮＳＣ６１０４５９、ＮＳＣ６０６４９９、ＮＳＣ６１０４５６、ＮＳＣ３６４８３０、およびＮＳＣ６０６４９７）；モルホリンイソキソルビシン（morpholinisoxorubicin）（ＮＳＣ３５４６４６；ＣＡＳ登録番号８９１９６０４３）；ＳＮ－３８（ＮＳＣ６７３５９６；ＣＡＳ登録番号８６６３９－５２－３）。
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤：ドキソルビシン（ＮＳＣ１２３１２７；ＣＡＳ登録番号２５３１６４０９）；アモナフィド（ベンゾイソキノリンジオン；ＮＳＣ３０８８４７；ＣＡＳ登録番号６９４０８８１７）；ｍ－ＡＭＳＡ（（４’－（９－アクリジニルアミノ）－３’－メトキシメタンスルホンアニリド；ＮＳＣ２４９９９２；ＣＡＳ登録番号５１２６４１４３））；アントラピラゾール誘導体（（ＮＳＣ３５５６４４）；エトポシド（ＶＰ－１６；ＮＳＣ１４１５４０；ＣＡＳ登録番号３３４１９４２０）；ピラゾロアクリジン（（ピラゾロ［３，４，５－ｋｌ］アクリジン－２（６Ｈ）－プロパンアミン、９－メトキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－５－ニトロ－、モノメタンスルホネート；ＮＳＣ３６６１４０；ＣＡＳ登録番号９９００９２１９）；ビサントレンヒドロクロリド（ＮＳＣ３３７７６６；ＣＡＳ登録番号７１４３９６８４）；ダウノルビシン（ＮＳＣ８２１１５１；ＣＡＳ登録番号２３５４１５０６）；デオキシドキソルビシン（ＮＳＣ２６７４６９；ＣＡＳ登録番号６３９５００６１）；ミトキサントロン（ＮＳＣ３０１７３９；ＣＡＳ登録番号７０４７６８２３）；メノガリル（ＮＳＣ２６９１４８；ＣＡＳ登録番号７１６２８９６１）；Ｎ，Ｎ－ジベンジルダウノマイシン（ＮＳＣ２６８２４２；ＣＡＳ登録番号７０８７８５１２）；オキサントラゾール（oxanthrazole）（ＮＳＣ３４９１７４；ＣＡＳ登録番号１０５１１８１２５）；ルビダゾン（rubidazone）（ＮＳＣ１６４０１１；ＣＡＳ登録番号３６５０８７１１）；テニポシド（ＶＭ－２６；ＮＳＣ１２２８１９；ＣＡＳ登録番号２９７６７２０２）。
ＤＮＡ挿入剤：アントラマイシン（ＣＡＳ登録番号４８０３２７４）；チカマイシンＡ（ＣＡＳ登録番号８９６７５３７６）；トマイマイシン（ＣＡＳ登録番号３５０５０５５６）；ＤＣ－８１（ＣＡＳ登録番号８１３０７２４６）；シビロマイシン（ＣＡＳ登録番号１２６８４３３２）；ピロロベンゾジアゼピン誘導体（ＣＡＳ登録番号９４５４９００９５）；ＳＧＤ－１８８２（（Ｓ）－２－（４－アミノフェニル）－７－メトキシ－８－（３－４（Ｓ）－７－メトキシ－２－（４－メトキシフェニル）－５－オキソ－５，１１ａ－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－８－イル）オキシ）プロポキシ）－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－５（１１ａＨ）－オン）；ＳＧ２０００（ＳＪＧ－１３６；（１１ａＳ，１１ａ’Ｓ）－８，８’－（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））ビス（７－メトキシ－２－メチレン－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－５（１１ａＨ）－オン）；ＮＳＣ６９４５０１；ＣＡＳ登録番号２３２９３１５７６）。
ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗物質：Ｌ－アラノシン（ＮＳＣ１５３３５３；ＣＡＳ登録番号５９１６３４１６）；５－アザシチジン（ＮＳＣ１０２８１６；ＣＡＳ登録番号３２０６７２）；５－フルオロウラシル（ＮＳＣ１９８９３；ＣＡＳ登録番号５１２１８）；アシビシン（ＮＳＣ１６３５０１；ＣＡＳ登録番号４２２２８９２２）；アミノプテリン誘導体Ｎ－［２－クロロ－５－［［（２，４－ジアミノ－５－メチル－６－キナゾリニル）メチル］アミノ］ベンゾイル－］Ｌ－アスパラギン酸（ＮＳＣ１３２４８３）；アミノプテリン誘導体Ｎ－［４－［［（２，４－ジアミノ－５－エチル－６－キナゾリニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］Ｌ－アスパラギン酸（ＮＳＣ１８４６９２）；アミノプテリン誘導体Ｎ－［２－クロロ－４－［［（２，４－ジアミノ－６－プテリジニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］Ｌ－アスパラギン酸一水和物（ＮＳＣ１３４０３３）；葉酸代謝拮抗薬（antifo）（（Ｎα－（４－アミノ－４－デオキシプテロイル）－Ｎ７－ヘミフタロイル－Ｌ－オルニチン；ＮＳＣ６２３０１７））；ベーカー（Baker）の可溶性葉酸代謝拮抗薬（antifol）（ＮＳＣ１３９１０５；ＣＡＳ登録番号４１１９１０４２）；ジクロロアリルローソン（lawsone）（（２－（３，３－ジクロロアリル）－３－ヒドロキシ－１，４－ナフトキノン；ＮＳＣ１２６７７１；ＣＡＳ登録番号３６４１７１６０）；ブレキナル（ＮＳＣ３６８３９０；ＣＡＳ登録番号９６２０１８８６）；フトラフル（（プロドラッグ；５－フルオロ－１－（テトラヒドロ－２－フリル）－ウラシル；ＮＳＣ１４８９５８；ＣＡＳ登録番号３７０７６６８９）；５，６－ジヒドロ－５－アザシチジン（ＮＳＣ２６４８８０；ＣＡＳ登録番号６２４０２３１７）；メトトレキセート（ＮＳＣ７４０；ＣＡＳ登録番号５９０５２）；メトトレキセート誘導体（Ｎ－［［４－［［（２，４－ジアミノ－６－プテリジニル）メチル］メチルアミノ］－１－ナフタレニル］カルボニル］Ｌ－グルタミン酸；ＮＳＣ１７４１２１）；ＰＡＬＡ（（Ｎ－（ホスホノアセチル）－Ｌ－アスパルテート；ＮＳＣ２２４１３１；ＣＡＳ登録番号６０３４２５５６５）；ピラゾフリン（ＮＳＣ１４３０９５；ＣＡＳ登録番号３０８６８３０５）；トリメトレキセート（ＮＳＣ３５２１２２；ＣＡＳ登録番号８２９５２６４５）。
ＤＮＡ代謝拮抗物質：３－ＨＰ（ＮＳＣ９５６７８；ＣＡＳ登録番号３８１４７９７）；２’－デオキシ－５－フルオロウリジン（ＮＳＣ２７６４０；ＣＡＳ登録番号５０９１９）；５－ＨＰ（ＮＳＣ１０７３９２；ＣＡＳ登録番号１９４９４８９４）；α－ＴＧＤＲ（α－２’－デオキシ－６－チオグアノシン；ＮＳＣ７１８５１ ＣＡＳ登録番号２１３３８１５）；アフィジコリングリシネート（ＮＳＣ３０３８１２；ＣＡＳ登録番号９２８０２８２２）；ａｒａ Ｃ（シトシンアラビノシド；ＮＳＣ６３８７８；ＣＡＳ登録番号６９７４９）；５－アザ－２’－デオキシシチジン（ＮＳＣ１２７７１６；ＣＡＳ登録番号２３５３３３５）；β－ＴＧＤＲ（β－２’－デオキシ－６－チオグアノシン；ＮＳＣ７１２６１；ＣＡＳ登録番号７８９６１７）；シクロシチジン（ＮＳＣ１４５６６８；ＣＡＳ登録番号１０２１２２５６）；グアナゾール（ＮＳＣ１８９５；ＣＡＳ登録番号１４５５７７２）；ヒドロキシ尿素（ＮＳＣ３２０６５；ＣＡＳ登録番号１２７０７１）；イノシングリコジアルデヒド（ＮＳＣ１１８９９４；ＣＡＳ登録番号２３５９０９９０）；マクベシンＩＩ（ＮＳＣ３３０５００；ＣＡＳ登録番号７３３４１７３８）；ピラゾロイミダゾール（ＮＳＣ５１１４３；ＣＡＳ登録番号６７１４２９０）；チオグアニン（ＮＳＣ７５２；ＣＡＳ登録番号１５４４２７）；チオプリン（ＮＳＣ７５５；ＣＡＳ登録番号５０４４２）。
細胞周期モジュレーター：シリビニン（ＣＡＳ登録番号２２８８８－７０－６）；没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ；ＣＡＳ登録番号９８９５１５）；プロシアニジン誘導体（例えば、プロシアニジンＡ１［ＣＡＳ登録番号１０３８８３０３０］、プロシアニジンＢ１［ＣＡＳ登録番号２０３１５２５７］、プロシアニジンＢ４［ＣＡＳ登録番号２９１０６５１２］、アレカタニン（arecatannin）Ｂ１［ＣＡＳ登録番号７９７６３２８３］）；イソフラボン（例えば、ゲニステイン［４％５，７－トリヒドロキシイソフラボン；ＣＡＳ登録番号４４６７２０］、ダイゼイン［４’，７－ジヒドロキシイソフラボン、ＣＡＳ登録番号４８６６６８］；インドール－３－カルビノール（ＣＡＳ登録番号７０００６１）；ケルセチン（ＮＳＣ９２１９；ＣＡＳ登録番号１１７３９５）；エストラムスチン（ＮＳＣ８９２０１；ＣＡＳ登録番号２９９８５７４）；ノコダゾール（ＣＡＳ登録番号３１４３０１８９）；ポドフィロトキシン（ＣＡＳ登録番号５１８２８５）；酒石酸ビノレルビン（ＮＳＣ６０８２１０；ＣＡＳ登録番号１２５３１７３９７）；クリプトフィシン（ＮＳＣ６６７６４２；ＣＡＳ登録番号１２４６８９６５２）。
キナーゼ阻害剤：アファチニブ（ＣＡＳ登録番号８５０１４０７２６）；アキシチニブ（ＣＡＳ登録番号３１９４６０８５０）；ＡＲＲＹ－４３８１６２（ビニメチニブ）（ＣＡＳ登録番号６０６１４３８９９）；ボスチニブ（ＣＡＳ登録番号３８０８４３７５４）；カボザンチニブ（ＣＡＳ登録番号１１４０９０９４８３）；セリチニブ（ＣＡＳ登録番号１０３２９００２５６）；クリゾチニブ（ＣＡＳ登録番号８７７３９９５２５）；ダブラフェニブ（ＣＡＳ登録番号１１９５７６５４５７）；ダサチニブ（ＮＳＣ７３２５１７；ＣＡＳ登録番号３０２９６２４９８）；エルロチニブ（ＮＳＣ７１８７８１；ＣＡＳ登録番号１８３３１９６９９）；エベロリムス（ＮＳＣ７３３５０４；ＣＡＳ登録番号１５９３５１６９６）；フォスタマチニブ（ＮＳＣ７４５９４２；ＣＡＳ登録番号９０１１１９３５５）；ゲフィチニブ（ＮＳＣ７１５０５５；ＣＡＳ登録番号１８４４７５３５２）；イブルチニブ（ＣＡＳ登録番号９３６５６３９６１）；イマチニブ（ＮＳＣ７１６０５１；ＣＡＳ登録番号２２０１２７５７１）；ラパチニブ（ＣＡＳ登録番号３８８０８２７８８）；レンバチニブ（ＣＡＳ登録番号８５７８９０３９２）；ムブリチニブ（ＣＡＳ３６６０１７０９６）；ニロチニブ（ＣＡＳ登録番号９２３２８８９５３）；ニンテダニブ（ＣＡＳ登録番号６５６２４７１７５）；パルボシクリブ（ＣＡＳ登録番号５７１１９０３０２）；パゾパニブ（ＮＳＣ７３７７５４；ＣＡＳ登録番号６３５７０２６４６）；ペガプタニブ（ＣＡＳ登録番号２２２７１６８６１）；ポナチニブ（ＣＡＳ登録番号１１１４５４４３１８）；ラパマイシン（ＮＳＣ２２６０８０；ＣＡＳ登録番号５３１２３８８９）；レゴラフェニブ（ＣＡＳ登録番号７５５０３７０３７）；ＡＰ２３５７３（リダフォロリムス）（ＣＡＳ登録番号５７２９２４５４０）；ＩＮＣＢ０１８４２４（ルキソリチニブ）（ＣＡＳ登録番号１０９２９３９１７７）；ＡＲＲＹ－１４２８８６（セルメチニブ）（ＮＳＣ７４１０７８；ＣＡＳ登録番号６０６１４３－５２－６）；シロリムス（ＮＳＣ２２６０８０；ＣＡＳ登録番号５３１２３８８９）；ソラフェニブ（ＮＳＣ７２４７７２；ＣＡＳ登録番号４７５２０７５９１）；スニチニブ（ＮＳＣ７３６５１１；ＣＡＳ登録番号３４１０３１５４７）；トファシチニブ（ＣＡＳ登録番号４７７６００７５２）；テムシロリムス（ＮＳＣ６８３８６４；ＣＡＳ登録番号１６３６３５０４３）；トラメチニブ（ＣＡＳ登録番号８７１７００１７３）；バンデタニブ（ＣＡＳ登録番号４４３９１３７３３）；ベムラフェニブ（ＣＡＳ登録番号９１８５０４６５１）；ＳＵ６６５６（ＣＡＳ登録番号３３０１６１８７０）；ＣＥＰ－７０１（レスタウルチニブ（lesaurtinib））（ＣＡＳ登録番号１１１３５８８８４）；ＸＬ０１９（ＣＡＳ登録番号９４５７５５５６６）；ＰＤ－３２５９０１（ＣＡＳ登録番号３９１２１０１０９）；ＰＤ－９８０５９（ＣＡＳ登録番号１６７８６９２１８）；ＡＴＰ競合ＴＯＲＣ１／ＴＯＲＣ２阻害剤、例えばＰＩ－１０３（ＣＡＳ登録番号３７１９３５７４９）、ＰＰ２４２（ＣＡＳ登録番号１０９２３５１６７１）、ＰＰ３０（ＣＡＳ登録番号１０９２７８８０９４）、Ｔｏｒｉｎ １（ＣＡＳ登録番号１２２２９９８３６８）、ＬＹ２９４００２（ＣＡＳ登録番号１５４４４７３６６）、ＸＬ－１４７（ＣＡＳ登録番号９３４５２６８９３）、ＣＡＬ－１２０（ＣＡＳ登録番号８７０２８１３４８）、ＥＴＰ－４５６５８（ＣＡＳ登録番号１１９８３５７７９７）、ＰＸ８６６（ＣＡＳ登録番号５０２６３２６６８）、ＧＤＣ－０９４１（ＣＡＳ登録番号９５７０５４３０７）、ＢＧＴ２２６（ＣＡＳ登録番号１２４５５３７６８１）、ＢＥＺ２３５（ＣＡＳ登録番号９１５０１９６５７）、ＸＬ－７６５（ＣＡＳ登録番号９３４４９３７６２）など。
タンパク質合成阻害剤：アクリフラビン（ＣＡＳ登録番号６５５８９７００）；アミカシン（ＮＳＣ１７７００１；ＣＡＳ登録番号３９８３１５５５）；アルベカシン（ＣＡＳ登録番号５１０２５８５５）；アストロマイシン（ＣＡＳ登録番号５５７７９０６１）；アジスロマイシン（ＮＳＣ６４３７３２；ＣＡＳ登録番号８３９０５０１５）；ベカナマイシン（ＣＡＳ登録番号４６９６７６８）；クロルテトラサイクリン（ＮＳＣ１３２５２；ＣＡＳ登録番号６４７２２）；クラリスロマイシン（ＮＳＣ６４３７３３；ＣＡＳ登録番号８１１０３１１９）；クリンダマイシン（ＣＡＳ登録番号１８３２３４４９）；クロモサイクリン（ＣＡＳ登録番号１１８１５４０）；シクロヘキシミド（ＣＡＳ登録番号６６８１９）；ダクチノマイシン（ＮＳＣ３０５３；ＣＡＳ登録番号５０７６０）；ダルホプリスチン（ＣＡＳ登録番号１１２３６２５０２）；デメクロサイクリン（ＣＡＳ登録番号１２７３３３）；ジベカシン（ＣＡＳ登録番号３４４９３９８６）；ジヒドロストレプトマイシン（ＣＡＳ登録番号１２８４６１）；ジリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号６２０１３０４１）；ドキシサイクリン（ＣＡＳ登録番号１７０８６２８１）；エメチン（ＮＳＣ３３６６９；ＣＡＳ登録番号４８３１８１）；エリスロマイシン（ＮＳＣ５５９２９；ＣＡＳ登録番号１１４０７８）；フルリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号８３６６４２０８）；フラマイセチン（ネオマイシンＢ；ＣＡＳ登録番号１１９０４０）；ゲンタマイシン（ＮＳＣ８２２６１；ＣＡＳ登録番号１４０３６６３）；グリシルシクリン、例えばチゲサイクリン（ＣＡＳ登録番号２２０６２００９７）；ハイグロマイシンＢ（ＣＡＳ登録番号３１２８２０４９）；イセパマイシン（ＣＡＳ登録番号６７８１４７６０）；ジョサマイシン（ＮＳＣ１２２２２３；ＣＡＳ登録番号１６８４６２４５）；カナマイシン（ＣＡＳ登録番号８０６３０７８）；ケトライド、例えばテリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号１９１１１４４８４）、セスロマイシン（ＣＡＳ登録番号２０５１１０４８１）、およびソリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号７６０９８１８３７）；リンコマイシン（ＣＡＳ登録番号１５４２１２）；ライムサイクリン（ＣＡＳ登録番号９９２２１２）；メクロサイクリン（ＮＳＣ７８５０２；ＣＡＳ登録番号２０１３５８３）；メタサイクリン（ロンドマイシン（rondomycin）；ＮＳＣ３５６４６３；ＣＡＳ登録番号９１４００１）；ミデカマイシン（ＣＡＳ登録番号３５４５７８０８）；ミノサイクリン（ＮＳＣ１４１９９３；ＣＡＳ登録番号１０１１８９０８）；ミオカマイシン（ＣＡＳ登録番号５５８８１０７７）；ネオマイシン（ＣＡＳ登録番号１１９０４０）；ネチルマイシン（ＣＡＳ登録番号５６３９１５６１）；オレアンドマイシン（ＣＡＳ登録番号３９２２９０５）；オキサゾリジノン、例えばエペレゾリド（ＣＡＳ登録番号１６５８０００４４）、リネゾリド（ＣＡＳ登録番号１６５８０００３３）、ポジゾリド（posizolid）（ＣＡＳ登録番号２５２２６００２９）、ラデゾリド（ＣＡＳ登録番号８６９８８４７８６）、ランベゾリド（ranbezolid）（ＣＡＳ登録番号３９２６５９３８０）、ステゾリド（ＣＡＳ登録番号１６８８２８５８８）、テジゾリド（ＣＡＳ登録番号８５６８６７５５５）；オキシテトラサイクリン（ＮＳＣ９１６９；ＣＡＳ登録番号２０５８４６０）；パロモマイシン（ＣＡＳ登録番号７５４２３７２）；ペニメピサイクリン（ＣＡＳ登録番号４５９９６０４）；ペプチジルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、クロラムフェニコール（ＮＳＣ３０６９；ＣＡＳ登録番号５６７５７）ならびにアジダムフェニコール（ＣＡＳ登録番号１３８３８０８９）、フロルフェニコール（ＣＡＳ登録番号７３２３１３４２）、およびチアンフェニコール（ＣＡＳ登録番号１５３１８４５３）、およびプロイロムチリン、例えばレタパムリン（ＣＡＳ登録番号２２４４５２６６８）、チアムリン（ＣＡＳ登録番号５５２９７９５５）、バルネムリン（ＣＡＳ登録番号１０１３１２９２９）などの誘導体；ピルリマイシン（ＣＡＳ登録番号７９５４８７３５）；ピューロマイシン（ＮＳＣ３０５５；ＣＡＳ登録番号５３７９２）；キヌプリスチン（ＣＡＳ登録番号１２０１３８５０３）；リボスタマイシン（ＣＡＳ登録番号５３７９７３５６）；ロキタマイシン（ＣＡＳ登録番号７４０１４５１０）；ロリテトラサイクリン（ＣＡＳ登録番号７５１９７３）；ロキシスロマイシン（ＣＡＳ登録番号８０２１４８３１）；シソマイシン（ＣＡＳ登録番号３２３８５１１８）；スペクチノマイシン（ＣＡＳ登録番号１６９５７７８）；スピラマイシン（ＣＡＳ登録番号８０２５８１８）；ストレプトグラミン、例えばプリスチナマイシン（ＣＡＳ登録番号２７００７６６０３）、キヌプリスチン／ダルホプリスチン（ＣＡＳ登録番号１２６６０２８９９）、およびバージニアマイシン（ＣＡＳ登録番号１１００６７６１）；ストレプトマイシン（ＣＡＳ登録番号５７９２１）；テトラサイクリン（ＮＳＣ１０８５７９；ＣＡＳ登録番号６０５４８）；トブラマイシン（ＣＡＳ登録番号３２９８６５６４）；トロレアンドマイシン（ＣＡＳ登録番号２７５１０９９）；タイロシン（ＣＡＳ登録番号１４０１６９０）；ベルダマイシン（verdamicin）（ＣＡＳ登録番号４９８６３４８１）。
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤：アベキシノスタット（ＣＡＳ登録番号７８３３５５６０２）；ベリノスタット（ＮＳＣ７２６６３０；ＣＡＳ登録番号４１４８６４００９）；チダミド（chidamide）（ＣＡＳ登録番号７４３４２００２２）；エンチノスタット（ＣＡＳ登録番号２０９７８３８０２）；ギビノスタット（givinostat）（ＣＡＳ登録番号７３２３０２９９７）；モセチノスタット（ＣＡＳ登録番号７２６１６９７３９）；パノビノスタット（ＣＡＳ登録番号４０４９５０８０７）；キシノスタット（ＣＡＳ登録番号８７５３２０２９９）；レスミノスタット（ＣＡＳ登録番号８６４８１４８８０）；ロミデプシン（ＣＡＳ登録番号１２８５１７０７７）；スルホラファン（ＣＡＳ登録番号４４７８９３７）；チオウレイドブチロニトリル（Ｋｅｖｅｔｒｉｎ（商標）；ＣＡＳ登録番号６６５９８９０）；バルプロ酸（ＮＳＣ９３８１９；ＣＡＳ登録番号９９６６１）；ボリノスタット（ＮＳＣ７０１８５２；ＣＡＳ登録番号１４９６４７７８９）；ＡＣＹ－１２１５（ロシリノスタット（rocilinostat）；ＣＡＳ登録番号１３１６２１４５２４）；ＣＵＤＣ－１０１（ＣＡＳ登録番号１０１２０５４５９９）；ＣＨＲ－２８４５（テフィノスタット（tefinostat）；ＣＡＳ登録番号９１４３８２６０８）；ＣＨＲ－３９９６（ＣＡＳ登録番号１２３５８５９１３８）；４ＳＣ－２０２（ＣＡＳ登録番号９１０４６２４３０）；ＣＧ２００７４５（ＣＡＳ登録番号９３６２２１３３９）；ＳＢ９３９（プラシノスタット；ＣＡＳ登録番号９２９０１６９６６）。
ミトコンドリア阻害剤：パンクラチスタチン（ＮＳＣ３４９１５６；ＣＡＳ登録番号９６２８１３１１）；ローダミン－１２３（ＣＡＳ登録番号６３６６９７０９）；エデルフォシン（edelfosine）（ＮＳＣ３２４３６８；ＣＡＳ登録番号７０６４１５１９）；ｄ－アルファ－コハク酸トコフェロール（ＮＳＣ１７３８４９；ＣＡＳ登録番号４３４５０３３）；化合物１１β（ＣＡＳ登録番号８６５０７０３７７）；アスピリン（ＮＳＣ４０６１８６；ＣＡＳ登録番号５０７８２）；エリプチシン（ＣＡＳ登録番号５１９２３３）；ベルベリン（ＣＡＳ登録番号６３３６５８）；セルレニン（ＣＡＳ登録番号１７３９７８９６）；ＧＸ０１５－０７０（Ｏｂａｔｏｃｌａｘ（登録商標）；１Ｈ－インドール、２－（２－（（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピロール－２－イル）メチレン）－３－メトキシ－２Ｈ－ピロール－５－イル）－；ＮＳＣ７２９２８０；ＣＡＳ登録番号８０３７１２６７６）；セラストロール（トリプテリン；ＣＡＳ登録番号３４１５７８３０）；メトホルミン（ＮＳＣ９１４８５；ＣＡＳ登録番号１１１５７０４）；ブリリアントグリーン（ＮＳＣ５０１１；ＣＡＳ登録番号６３３０３４）；ＭＥ－３４４（ＣＡＳ登録番号１３７４５２４５５６）。
抗有糸分裂剤：アロコルヒチン（allocolchicine）（ＮＳＣ４０６０４２）；オーリスタチン、例えばＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ；ＣＡＳ登録番号４７４６４５－２７－７）およびＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ；ＣＡＳ登録番号７４５０１７－９４－１；ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ６０９３９５）；コルヒチン（ＮＳＣ７５７；ＣＡＳ登録番号６４８６８）；コルヒチン（cholchicine）誘導体（Ｎ－ベンゾイル－デアセチルベンズアミド；ＮＳＣ３３４１０；ＣＡＳ登録番号６３９８９７５３）；ドラスタチン１０（ＮＳＣ３７６１２８；ＣＡＳ登録番号１１０４１７－８８－４）；メイタンシン（ＮＳＣ１５３８５８；ＣＡＳ登録番号３５８４６－５３－８）；リゾキシン（rhozoxin）（ＮＳＣ３３２５９８；ＣＡＳ登録番号９０９９６５４６）；タキソール（ＮＳＣ１２５９７３；ＣＡＳ登録番号３３０６９６２４）；タキソール誘導体（（２’－Ｎ－［３－（ジメチルアミノ）プロピル］グルタメート（glutaramate）タキソール；ＮＳＣ６０８８３２）；チオコルヒチン（３－デメチルチオコルヒチン；ＮＳＣ３６１７９２）；トリチルシステイン（ＮＳＣ４９８４２；ＣＡＳ登録番号２７９９０７７）；硫酸ビンブラスチン（ＮＳＣ４９８４２；ＣＡＳ登録番号１４３６７９）；硫酸ビンクリスチン（ＮＳＣ６７５７４；ＣＡＳ登録番号２０６８７８２）。
これらの薬剤のうち、抗体への取り付け部位を含むか、または抗体への取り付け部位を含むように改変できるものはいずれも、本明細書で開示されるＡＤＣに含めることができる。
具体的な実施形態において、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、抗有糸分裂剤である。
別の具体的な実施形態において、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、オーリスタチン、例えば、モノメチルオーリスタチンＥ（「ＭＭＡＥ」）またはモノメチルオーリスタチンＦ（「ＭＭＡＦ」）である。
６．２．２．リンカー
本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣにおいて、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、リンカーによって抗体に連結されている。ＡＤＣの抗体に細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を連結するリンカーは、短い、長い、疎水性、親水性、フレキシブルな、または硬いリンカーであってもよく、またはリンカーが異なる特性を有するセグメントを含み得るように、それぞれ独立して上述の特性の１つまたは複数を有するセグメントで構成されていてもよい。リンカーは、それらが１つより多くの薬剤を抗体上の単一の部位に共有結合で連結するように多価であってもよいし、またはそれらが単一の薬剤を抗体上の単一の部位に共有結合で連結するように１価であってもよい。
当業者は理解していると予想されるように、リンカーは、一方の位置で細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質への共有結合による連結を形成し、他方の位置で抗体への共有結合による連結を形成することによって、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を抗体に連結する。共有結合による連結は、リンカー上の官能基と薬剤および抗体上の官能基との反応によって形成される。本明細書で使用される場合、「リンカー」という表現は、（ｉ）リンカーを細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質に共有結合で連結することが可能な官能基と、リンカーを抗体に共有結合で連結することが可能な官能基とを含む、リンカーのコンジュゲートしていない形態；（ｉｉ）リンカーを抗体に共有結合で連結することが可能であり、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質に共有結合で連結されている官能基を含むか、またはその逆である、リンカーの部分的にコンジュゲートした形態；および（ｉｉｉ）細胞傷害性物質ならびに／または細胞増殖抑制性物質および抗体の両方に共有結合で連結されている、リンカーの完全にコンジュゲートした形態を含むことが意図される。本開示のリンカーおよび抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣに加えて、リンカー－薬剤を抗体にコンジュゲートするのに使用されるシントンの一部の具体的な実施形態において、リンカー上の官能基およびリンカーと抗体との間で形成された共有結合による連結を含む部分は、それぞれＲｘおよびＸＹとして具体的に例示される。
リンカーは、好ましくは、ただし必ずしもそうでなくてもよいが、細胞の外側の条件に対して化学的に安定であり、細胞の内部で切断される、破壊される、および／またはそれ以外の方法で特異的に分解するように設計されていてもよい。代替として、細胞の内部で特異的に切断または分解されるように設計されていないリンカーを使用してもよい。安定なリンカーと不安定なリンカーとの選択は、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質の毒性によって決まる場合がある。正常細胞に対して毒性の薬剤の場合、安定なリンカーが好ましい。正常細胞に対して選択的であるかまたはそれを標的化して毒性を低める薬剤を利用してもよく、細胞外環境に対するリンカーの化学的安定性は、それほど重要ではない。ＡＤＣの状態で薬物を抗体に連結するのに有用な様々なリンカーは、当業界において公知である。これらのリンカーのいずれか、および他のリンカーは、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を、本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣの抗体に連結するのに使用することができる。
多くの細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を単一抗体分子に連結するのに使用できる例示的な多価リンカーは、例えば、その内容が参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、国際公開第２００９／０７３４４５号パンフレット；国際公開第２０１０／０６８７９５号パンフレット；国際公開第２０１０／１３８７１９号パンフレット；国際公開第２０１１／１２００５３号パンフレット；国際公開第２０１１／１７１０２０号パンフレット；国際公開第２０１３／０９６９０１号パンフレット；国際公開第２０１４／００８３７５号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３７９号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３９４号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３６４０号パンフレットに記載されている。例えば、Ｍｅｒｓａｎａらにより開発されたＦｌｅｘｉｍｅｒリンカー技術は、優れた物理化学的な特性を有する高ＤＡＲのＡＤＣを可能にする能力を有する。以下に示すように、Ｍｅｒｓａｎａ技術は、エステル結合の配列を介して可溶性のポリアセタールバックボーンに薬物分子を取り込むことに基づく。この手法は、優れた物理化学的な特性を維持しながら高度にローディングされたＡＤＣ（最大２０のＤＡＲ）をもたらす。
樹枝型のリンカーのさらなる例は、それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、米国特許出願公開第２００６／１１６４２２号明細書；米国特許出願公開第２００５／２７１６１５号明細書；de Groot et al. (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4490-4494；Amir et al. (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4494-4499；Shamis et al. (2004) J. Am. Chem. Soc. 126:1726-1731；Sun et al. (2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215；Sun et al. (2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768；King et al. (2002) Tetrahedron Letters 43:1987-1990に見出すことができる。
使用できる例示的な１価リンカーは、例えば、それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Nolting, 2013, Antibody-Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology 1045:71-100；Kitson et al., 2013, CROs/CMOs--Chemica Oggi--Chemistry Today 31(4):30-38；Ducry et al., 2010, Bioconjugate Chem. 21:5-13；Zhao et al., 2011, J. Med. Chem. 54:3606-3623；米国特許第７，２２３，８３７号明細書；米国特許第８，５６８，７２８号明細書；米国特許第８，５３５，６７８号明細書；および国際公開第２００４０１０９５７号パンフレットに記載されている。
一例として、これらに限定されないが、本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣ中に含まれ得る一部の切断可能および切断不可能なリンカーは、後述される。
６．２．３．切断可能なリンカー
特定の実施形態において、選択されたリンカーは、インビボで切断可能である。切断可能なリンカーは、化学的または酵素的に不安定な、または分解可能な連結を含んでいてもよい。切断可能なリンカーは、一般的に、薬物を開放する細胞の内部のプロセス、例えば細胞質内での還元、リソソーム中での酸性条件への曝露、または細胞内の特異的なプロテアーゼまたは他の酵素による切断を頼る。切断可能なリンカーは、一般的に、化学的または酵素的のいずれかで切断可能な１つまたは複数の化学結合を取り込んでおり、それと同時に、リンカーの残部は、切断不可能である。特定の実施形態において、リンカーは、化学的に不安定性の基、例えばヒドラゾンおよび／またはジスルフィド基を含む。化学的に不安定性の基を含むリンカーは、血漿と一部の細胞質内区画との間で特性が異なることを利用する。ヒドラゾンを含有するリンカーの場合の薬物放出を容易にする細胞内条件は、エンドソームおよびリソソームの酸性環境であり、一方、ジスルフィドを含有するリンカーは、高いチオール濃度、例えばグルタチオンを含有するサイトゾル中で還元される。特定の実施形態において、化学的に不安定性の基を含むリンカーの血漿安定性は、化学的に不安定性の基付近の置換基を使用して立体障害を導入することによって増加させることができる。
酸不安定性の基、例えばヒドラゾンは、血液の中性ｐＨ環境（ｐＨ７．３～７．５）での体循環の間は無傷のままであるが、ＡＤＣが細胞の弱酸性のエンドソーム（ｐＨ５．０～６．５）およびリソソーム（ｐＨ４．５～５．０）の区画に内在化されると加水分解を受けて薬物を放出する。このｐＨ依存性の放出メカニズムは、薬物の非特異的な放出と関連付けられている。リンカーのヒドラゾン基の安定性を増加させるために、リンカーは、循環中での損失を最小化しながらもリソソーム中でのより効率的な放出を達成するように調整できる化学修飾、例えば置換によって変更してもよい。
ヒドラゾンを含有するリンカーは、追加の切断部位、例えば追加の酸不安定性の切断部位および／または酵素不安定性の切断部位を含有していてもよい。例示的なヒドラゾンを含有するリンカーを含むＡＤＣは、以下の構造を含む。
Figure 2023516080000032
 式中、ＤおよびＡｂは、それぞれ細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質（薬物）およびＡｂを表し、ｎは、抗体に連結された薬物－リンカーの数を表す。特定のリンカー、例えばリンカー（Ｉｇ）において、リンカーは、２つの切断可能な基、すなわちジスルフィド部分およびヒドラゾン部分を含む。このようなリンカーの場合、改変されていない遊離の薬物の有効な放出は、酸性ｐＨまたはジスルフィド還元および酸性ｐＨを必要とする。（Ｉｈ）および（Ｉｉ）などのリンカーは、単一のヒドラゾン切断部位に有効であることが示されている。
体循環の間は無傷のままであるがＡＤＣが酸性細胞区画の内部に内在化されると加水分解を受けて薬物を放出する追加のリンカーとしては、カーボネートが挙げられる。このようなリンカーは、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質が、酸素を介して共有結合で取り付けることができる場合、有用な可能性がある。
リンカー中に含まれ得る他の酸不安定性の基としては、ｃｉｓ－アコニチルを含有するリンカーが挙げられる。ｃｉｓ－アコニチル化学は、酸性条件下でのアミド加水分解を促進するために、アミド結合に並置されたカルボン酸を使用する。
切断可能なリンカーはまた、ジスルフィド基も含み得る。ジスルフィドは、生理学的なｐＨで熱力学的に安定であり、細胞の内部に内在化されると薬物を放出するように設計され、この場合サイトゾルは、細胞外の環境と比較してより有意に高い還元性の環境を提供する。ジスルフィド結合の分離は、一般的に、ジスルフィドを含有するリンカーが循環中で適度に安定であり、サイトゾル中で薬物を選択的に放出するように、細胞質内のチオール補因子、例えば（還元された）グルタチオン（ＧＳＨ）の存在を必要とする。また、細胞内酵素タンパク質であるジスルフィドイソメラーゼ、またはジスルフィド結合の切断が可能な類似の酵素も、細胞の内部におけるジスルフィド結合の優先的な切断に寄与する可能性がある。およそ５つの腫瘍細胞において、循環中でＧＳＨまたはシステイン（これは最も豊富な低分子量チオールである）がより有意に低い濃度であることと比較して、ＧＳＨは、０．５～１０ｍＭの濃度範囲で細胞中に存在することが報告されており、この場合、不規則な血流が低酸素状態を引き起こし、還元性酵素の活性が強化され、それゆえにグルタチオン濃度がより一層高くなる。特定の実施形態において、ジスルフィドを含有するリンカーのインビボでの安定性は、リンカーの化学修飾によって、例えば、ジスルフィド結合に隣接する立体障害の使用によって強化することができる。
例示的なジスルフィドを含有するリンカーを含むＡＤＣは、以下の構造を含む。
Figure 2023516080000033
 式中、ＤおよびＡｂは、それぞれ薬物および抗体を表し、ｎは、抗体に連結された薬物－リンカーの数を表し、Ｒは、各出現につき、例えば水素またはアルキルから独立して選択される。特定の実施形態において、ジスルフィド結合に隣接する立体障害を増加させることは、リンカーの安定性を増加させる。（Ｉｊ）および（Ｉｌ）などの構造は、１つまたは複数のＲ基が低級アルキルから選択され、例えばメチルである場合、インビボにおける増加した安定性を示す。
使用することができる別のタイプの切断可能なリンカーは、酵素によって特異的に切断されるリンカーである。このようなリンカーは、典型的にはペプチドベースであるか、または酵素の基質として作用するペプチド領域を含む。ペプチドベースのリンカーは、血漿および細胞外環境中で、化学的に不安定性のリンカーより安定である傾向がある。リソソームのタンパク質分解酵素は、内因性阻害剤およびリソソームと比較して都合悪く高いｐＨ値の血液のために、血液中で非常に低い活性を有するため、一般的に、ペプチド結合は血清中で優れた安定性を有する。抗体からの薬物の放出は、具体的にはリソソームのプロテアーゼ、例えばカテプシンおよびプラスミンの作用に起因して起こる。これらのプロテアーゼは、特定の腫瘍細胞中において高いレベルで存在する場合がある。
例示的な実施形態において、切断可能なペプチドは、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号１８１）、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号１８２）などのテトラペプチド、またはＶａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｖａｌ－（Ｄ）Ａｓｐ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｉｌｅ－Ｖａｌ、Ａｓｐ－Ｖａｌ、Ｈｉｓ－Ｖａｌ、ＮｏｒＶａｌ－（Ｄ）Ａｓｐ、Ａｌａ－（Ｄ）Ａｓｐ５、Ｍｅｔ－Ｌｙｓ、Ａｓｎ－Ｌｙｓ、Ｉｌｅ－Ｐｒｏ、Ｍｅ３Ｌｙｓ－Ｐｒｏ、フェニルＧｌｙ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｐｒｏ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、ＡＭ Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、ＡＷ Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、およびＡｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓなどのジペプチドから選択される。特定の実施形態において、より長いペプチドは疎水性であるため、ジペプチドが、より長いポリペプチドより好ましい。
ドキソルビシン、マイトマイシン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、タリソマイシン（tallysomycin）およびオーリスタチン／オーリスタチンファミリーメンバーなどの薬物を抗体に連結するのに有用な様々なジペプチドベースの切断可能なリンカーが記載されている（それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Dubowchik et al., 1998, J. Org. Chem. 67:1866-1872；Dubowchik et al., 1998, Bioorg. Med. Chem. Lett. 8(21):3341-3346；Walker et al., 2002, Bioorg. Med. Chem. Lett. 12:217-219；Walker et al., 2004, Bioorg. Med. Chem. Lett. 14:4323-4327；Sutherland et al., 2013, Blood 122: 1455-1463；およびFrancisco et al., 2003, Blood 102:1458-1465を参照）。これらのジペプチドリンカー、またはこれらのジペプチドリンカーの改変されたバージョンの全ては、本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣで使用することができる。使用できる他のジペプチドリンカーとしては、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓのブレンツキシマブベドチン（Vendotin）ＳＧＮ－３５（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（商標））、Ｓｅａｔｔｌｅ ＧｅｎｅｔｉｃｓのＳＧＮ－７５（抗ＣＤ－７０、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、Ｓｅａｔｔｌｅ ＧｅｎｅｔｉｃｓのＳＧＮ－ＣＤ３３Ａ（抗ＣＤ－３３、Ｖａｌ－Ａｌａ－（ＳＧＤ－１８８２））、Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのグレンバツムマブ（ＣＤＸ－０１１）（抗ＮＭＢ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、およびサイトジェン（Cytogen）ＰＳＭＡ－ＡＤＣ（ＰＳＭＡ－ＡＤＣ－１３０１）（抗ＰＳＭＡ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ）などのＡＤＣに見出されるものが挙げられる。
酵素的に切断可能なリンカーとしては、酵素的切断部位から薬物を空間的に分離するための自壊性スペーサーを挙げることができる。ペプチドリンカーへの薬物の直接の取り付けは、タンパク質分解による薬物のアミノ酸付加物の放出を引き起こすことができ、それによってその活性が損なわれる。自壊性スペーサーの使用は、アミド結合の加水分解の後に、十分活性な化学的に改変されていない薬物の脱離を可能にする。
１つの自壊性スペーサーは、二機能性のパラアミノベンジルアルコール基であり、これは、アミノ基を介してペプチドに連結されてアミド結合を形成するが、アミンを含有する薬物は、リンカー（ＰＡＢＣ）のベンジルのヒドロキシル基にカルバミン酸官能性を介して取り付けられていてもよい。得られたプロドラッグは、プロテアーゼ媒介の切断で活性化され、１，６脱離反応を引き起こし、改変されていない薬物、二酸化炭素、およびリンカー基の残部を放出する。以下のスキームは、ｐ－アミドベンジルエーテルのフラグメント化および薬物の放出を描写する。
Figure 2023516080000034
 式中、Ｘ－Ｄは、改変されていない薬物を表す。
この自壊性基の複素環式バリアントも記載されている。例えば参照により本明細書に組み入れられる米国特許第７，９８９，４３４号明細書を参照されたい。
一部の実施形態において、酵素的に切断可能なリンカーは、β－グルクロン酸ベースのリンカーである。薬物の容易な放出は、リソソーム酵素であるβ－グルクロニダーゼによるβ－グルクロニドグリコシド結合の切断を介して実現することができる。この酵素は、リソソーム内に豊富に存在し、一部の腫瘍タイプにおいて過剰発現されるが、細胞の外側での酵素活性は低い。β－グルクロン酸ベースのリンカーは、β－グルクロニドの親水性の性質のために凝集を受けるＡＤＣの傾向を回避するのに使用することができる。一部の実施形態において、β－グルクロン酸ベースのリンカーは、疎水性薬物に連結されたＡＤＣのためのリンカーとして好ましい。以下のスキームは、β－グルクロン酸ベースのリンカーを含有するＡＤＣからの薬物の放出を描写する。
Figure 2023516080000035
オーリスタチン、カンプトテシンおよびドキソルビシン類似体、ＣＢＩ副溝バインダー、およびプシムベリン（psymberin）などの薬物を抗体に連結するのに有用な、様々な切断可能なβ－グルクロン酸ベースのリンカーが記載されている（それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Nolting, Chapter 5 “Linker Technology in Antibody-Drug Conjugates,” In: Antibody-Drug Conjugates: Methods in Molecular Biology, vol. 1045, pp. 71-100, Laurent Ducry (Ed.), Springer Science & Business Medica, LLC, 2013；Jeffrey et al., 2006, Bioconjug. Chem. 17:831-840；Jeffrey et al., 2007, Bioorg. Med. Chem. Lett. 17:2278-2280；およびJiang et al., 2005, J. Am. Chem. Soc. 127:11254-11255を参照）。これらのβ－グルクロン酸ベースのリンカーは全て、本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣで使用することができる。
加えて、フェノール基を含有する細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、フェノールの酸素を介してリンカーに共有結合で結合させることができる。１つのこのようなリンカーは、国際公開第２００７／０８９１４９号パンフレットに記載されており、ジアミノ－エタン「ＳｐａｃｅＬｉｎｋ」を、フェノールを送達するために従来の「ＰＡＢＯ」ベースの自壊性基と共に使用する手法を頼る。リンカーの切断は、以下に模式的に描写され、式中、Ｄは、フェノールのヒドロキシル基を有する細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を表す。
Figure 2023516080000036
切断可能なリンカーは、切断不可能な部分またはセグメントを含んでいてもよいし、および／または切断可能なセグメントまたは部分は、それを切断可能にするために、それ以外の切断不可能なリンカー中に含まれていてもよい。単なる例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および関連するポリマーは、ポリマーバックボーン中に切断可能な基を含んでいてもよい。例えば、ポリエチレングリコールまたはポリマーリンカーは、１つまたは複数の切断可能な基、例えばジスルフィド、ヒドラゾンまたはジペプチドを含んでいてもよい。
リンカー中に含まれ得る他の分解可能な連結としては、ＰＥＧのカルボン酸または活性化されたＰＥＧのカルボン酸と生物活性薬剤上のアルコール基との反応によって形成されたエステル連結が挙げられ、この場合、このようなエステル基は一般的に生理学的条件下で加水分解して生物活性薬剤を放出する。加水分解で分解可能な連結としては、これらに限定されないが、炭酸連結；アミンとアルデヒドの反応の結果生じるイミン連結；アルコールをリン酸基と反応させることによって形成されたリン酸エステル連結；アルデヒドとアルコールの反応生成物であるアセタール連結；ギ酸塩とアルコールの反応生成物であるオルトエステル連結；ならびにこれに限定されないが、ポリマーの末端のホスホアミダイト基、およびオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基によって形成されたオリゴヌクレオチド連結が挙げられる。
特定の実施形態において、リンカーは、酵素的に切断可能なペプチド部分を含み、例えば、リンカーは、構造式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）：
Figure 2023516080000037
 またはその塩を含み、式中、ペプチドは、リソソーム酵素によって切断可能なペプチド（ＣからＮに図解されており、カルボキシおよびアミノ「末端」は示されない）を表し；Ｔは、１つまたは複数のエチレングリコール単位もしくはアルキレン鎖、またはそれらの組合せを含むポリマーを表し；Ｒａは、水素、アルキル、スルホン酸イオンおよびメチルスルホン酸イオンから選択され；ｐは、０～５の範囲の整数であり；ｑは、０または１であり；ｘは、０または１であり；ｙは、０または１であり；
Figure 2023516080000038
 は、リンカーの細胞傷害性および／または細胞増殖抑制性剤への付着点を表し；＊は、リンカーの残部への付着点を表す。
特定の実施形態において、ペプチドは、トリペプチドまたはジペプチドから選択される。特定の実施形態において、ジペプチドは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｖａｌ；Ａｌａ－Ａｌａ；Ａｌａ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｌａ；Ａｓｎ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｓｎ；Ｃｉｔ－Ｃｉｔ；Ｖａｌ－Ｇｌｕ；Ｇｌｕ－Ｖａｌ；Ｓｅｒ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｓｅｒ；Ｌｙｓ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｌｙｓ；Ａｓｐ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｓｐ；Ａｌａ－Ｖａｌ；Ｖａｌ－Ａｌａ；Ｐｈｅ－Ｌｙｓ；Ｖａｌ－Ｌｙｓ；Ａｌａ－Ｌｙｓ；Ｐｈｅ－Ｃｉｔ；Ｌｅｕ－Ｃｉｔ；Ｉｌｅ－Ｃｉｔ；Ｐｈｅ－Ａｒｇ；およびＴｒｐ－Ｃｉｔから選択される。特定の実施形態において、ジペプチドは、Ｃｉｔ－Ｖａｌ；およびＡｌａ－Ｖａｌから選択される。
本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＩＶａ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
Figure 2023516080000039
Figure 2023516080000040
本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＩＶｂ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
Figure 2023516080000041
Figure 2023516080000042
Figure 2023516080000043
Figure 2023516080000044
Figure 2023516080000045
特定の実施形態において、リンカーは、酵素的に切断可能なペプチド部分を含み、例えば、リンカーは、構造式（ＩＶｃ）または（ＩＶｄ）：
Figure 2023516080000046
 またはその塩を含み、式中、ペプチドは、リソソーム酵素によって切断可能なペプチド（ＣからＮに図解されており、カルボキシおよびアミノ「末端」は示されない）を表し；Ｔは、１つまたは複数のエチレングリコール単位もしくはアルキレン鎖、またはそれらの組合せを含むポリマーを表し；Ｒａは、水素、アルキル、スルホン酸イオンおよびメチルスルホン酸イオンから選択され；ｐは、０～５の範囲の整数であり；ｑは、０または１であり；ｘは、０または１であり；ｙは、０または１であり；ｘ
Figure 2023516080000047
 は、リンカーの細胞傷害性および／または細胞増殖抑制性剤への付着点を表し；＊は、リンカーの残部への付着点を表す。
本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＩＶｃ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
Figure 2023516080000048
本開示の抗グリコＣＤ４４ＡＤＣに含まれ得る構造式（ＩＶｄ）によるリンカーの具体的な例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示される通り、リンカーとしては、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基が挙げられる）：
Figure 2023516080000049
Figure 2023516080000050
特定の実施形態において、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）、または（ＩＶｄ）を含むリンカーは、酸性媒体への曝露によって切断可能なカーボネート部分をさらに含む。特定の実施形態において、リンカーは、酸素を介して細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質に取り付けられる。
６．２．４．切断不可能なリンカー
切断可能なリンカーは一定の利点を提供し得るが、本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣを含むリンカーは、必ずしも切断可能でなくてもよい。切断不可能なリンカーの場合、薬物の放出は、血漿と一部の細胞質内区画との間で特性が異なることに依存しない。薬物の放出は、抗原媒介エンドサイトーシスを介したＡＤＣの内在化とリソソーム区画への送達の後に起こり、そこで抗体は、細胞内タンパク質分解を介してアミノ酸レベルに分解されると仮定されている。このプロセスは、薬物、リンカー、およびリンカーが共有結合で取り付けられたアミノ酸残基によって形成される薬物誘導体を放出する。切断不可能なリンカーとのコンジュゲートからのアミノ酸薬物代謝産物は、切断可能なリンカーとのコンジュゲートと比較して、より親水性であり、一般的にはより低い膜透過性であり、それにより、より少ないバイスタンダー作用およびより少ない非特異的な毒性が生じる。一般的に、切断不可能なリンカーとのＡＤＣは、循環中で切断可能なリンカーとのＡＤＣより大きい安定性を有する。切断不可能なリンカーは、アルキレン鎖であってもよく、または天然の重合体、例えば、ポリアルキレングリコールポリマー、アミドポリマーベースのものであってもよいし、またはアルキレン鎖、ポリアルキレングリコール（glocol）および／またはアミドポリマーのセグメントを含んでいてもよい。
薬物を抗体に連結するのに使用される様々な切断不可能なリンカーが記載されている。それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Jeffrey et al., 2006, Bioconjug. Chem. 17；831-840；Jeffrey et al., 2007, Bioorg. Med. Chem. Lett. 17:2278-2280；and Jiang et al., 2005, J. Am. Chem. Soc. 127:11254-11255を参照されたい。これらのリンカーはいずれも、本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣ中に含まれていてもよい。
特定の実施形態において、リンカーは、インビボで切断不可能であり、例えば、構造式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）、（ＶＩｃ）または（ＶＩｄ）によるリンカーであり（例示された通り）、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基：
Figure 2023516080000051
 またはその塩を含み、式中、Ｒａは、水素、アルキル、スルホネートおよびメチルスルホネートから選択され；Ｒｘは、リンカーを抗体に共有結合で連結することが可能な官能基を含む部分であり；
Figure 2023516080000052
 は、リンカーの細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質への取り付け点を表す。
本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＶＩａ）～（ＶＩｄ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含み、
Figure 2023516080000053
 は、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質）への取り付け点を表す。
Figure 2023516080000054
６．２．５．リンカーを抗体に取り付けるのに使用される基
リンカー－薬物シントンを抗体に取り付けてＡＤＣを得るために、様々な基を使用することができる。取り付け基は、本質的に求電子性であってもよく、その例としては、マレイミド基、活性化ジスルフィド、活性エステル、例えばＮＨＳエステルおよびＨＯＢｔエステル、ギ酸ハロゲン化物、酸ハロゲン化物、ハロゲン化アルキルおよびベンジル、例えばハロアセトアミドが挙げられる。以下で論じられるように、本開示に従って使用することができる「自己安定化」マレイミドおよび「架橋形成ジスルフィド」に関する新興の技術もある。使用される具体的な基は、抗体への取り付け部位に一部依存すると予想される。
抗体コンジュゲーション条件下で自発的に加水分解して安定性が改善されたＡＤＣ種を生じる「自己安定化」マレイミド基の一例を以下の略図に描写する。米国特許出願公開第２０１３０３０９２５６号明細書；さらに、Lyon et al., Nature Biotech published online, doi:10.1038/nbt.2968も参照されたい。
通常の系:
Figure 2023516080000055
ＳＧＮ ＭａｌＤＰＲ（マレイミドジプロピルアミノ）系：
Figure 2023516080000056
Ｐｏｌｙｔｈｅｒｉｃｓは、天然ヒンジジスルフィド結合の還元から誘導されたスルフヒドリル基の対を架橋する方法を開示している。Badescu et al., 2014, Bioconjugate Chem. 25:1124-1136を参照されたい。この反応を以下の略図に描写する。この手法の利点は、ＩｇＧの完全な還元（スルフヒドリルの４つの対を生じる）とそれに続く４当量のアルキル化剤との反応によって富化したＤＡＲ４ ＡＤＣを合成する能力である。「架橋されたジスルフィド」を含有するＡＤＣも、安定性が増加したと述べられている。
Figure 2023516080000057
同様に、以下で描写されるように、スルフヒドリル基の対を架橋することが可能なマレイミド誘導体（１、以下）が開発されている。国際公開第２０１３／０８５９２５号パンフレットを参照されたい。
Figure 2023516080000058
６．２．６．リンカー選択の考察
当業者公知のように、特定のＡＤＣのための選択されたリンカーは、これらに限定されないが、抗体への取り付けの部位（例えば、ｌｙｓ、ｃｙｓまたは他のアミノ酸残基）、薬物の薬理作用団の構造的な拘束、および薬物の親油性などの様々な要因によって影響を受ける可能性がある。具体的なＡＤＣのための選択されたリンカーは、具体的な抗体／複合薬に対してこれらの様々な要因のバランスをとることが求められることになる。ＡＤＣにおけるリンカーの選択によって影響を受ける要因の総論に関して、Nolting, Chapter 5 “Linker Technology in Antibody-Drug Conjugates,” In: Antibody-Drug Conjugates: Methods in Molecular Biology, vol. 1045, pp. 71-100, Laurent Ducry (Ed.), Springer Science & Business Medica, LLC, 2013を参照されたい。
例えば、ＡＤＣは、抗原陽性腫瘍細胞の近くに存在するバイスタンダー抗原陰性細胞を致死させることが観察されている。ＡＤＣによるバイスタンダー細胞致死のメカニズムは、ＡＤＣの細胞内プロセシング中に形成された代謝産物が役割を果たし得ることを示した。抗原陽性細胞中でのＡＤＣの代謝によって生成した中性の細胞傷害性の代謝産物は、バイスタンダー細胞致死において役割を果たすようであるが、電荷を有する代謝産物は、膜を介した媒体への拡散が阻止される可能性があり、それゆえにバイスタンダー致死に影響を与えることができない。特定の実施形態において、リンカーは、ＡＤＣの細胞代謝産物によって引き起こされるバイスタンダー致死作用を弱めるように選択される。特定の実施形態において、リンカーは、バイスタンダー致死作用を増加させるように選択される。
またリンカーの特性も、使用および／または貯蔵条件下でＡＤＣの凝集に影響を与える可能性がある。典型的には、文献で報告されたＡＤＣは、抗体分子１個当たり３～４個以下の薬物分子を含有する（例えば、Chari, 2008, Acc Chem Res 41:98-107を参照）。より高い薬物対抗体の比率（「ＤＡＲ」）を得ようとする試みは、特に薬物とリンカーの両方が疎水性の場合、ＡＤＣが凝集するため失敗することが多い（King et al., 2002, J Med Chem 45:4336-4343；Hollander et al., 2008, Bioconjugate Chem 19:358-361；Burke et al., 2009 Bioconjugate Chem 20:1242-1250）。多くの例において、３～４より高いＤＡＲが、効力増加の手段として有益であり得る。細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質が本質的に疎水性である例において、特に３～４より大きいＤＡＲが望ましい例において、ＡＤＣ凝集を低減させる手段として、相対的に親水性のリンカーを選択することが望ましい場合がある。したがって、特定の実施形態において、リンカーは、貯蔵および／または使用中にＡＤＣの凝集を低減する化学成分を取り込んでいる。リンカーは、ＡＤＣの凝集を低減するために、極性または親水性基、例えば電荷を有する基または生理学的なｐＨで電荷を有するようになる基を取り込んでいてもよい。例えば、リンカーは、生理学的なｐＨで、例えばカルボン酸を脱プロトン化する、または例えばアミンをプロトン化する、電荷を有する基、例えば塩または基を取り込んでいてもよい。
２０もの高いＤＡＲをもたらすと報告されている、多数の細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を抗体に連結するのに使用できる例示的な多価リンカーは、その内容が参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、国際公開第２００９／０７３４４５号パンフレット；国際公開第２０１０／０６８７９５号パンフレット；国際公開第２０１０／１３８７１９号パンフレット；国際公開第２０１１／１２００５３号パンフレット；国際公開第２０１１／１７１０２０号パンフレット；国際公開第２０１３／０９６９０１号パンフレット；国際公開第２０１４／００８３７５号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３７９号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３９４号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３６４０号パンフレットに記載されている。
特定の実施形態において、貯蔵または使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定した場合、約１０％未満である。特定の実施形態において、貯蔵または使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定した場合、１０％未満、例えば、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、約０．５％未満、約０．１％未満であるか、またはそれよりさらに低い。
６．２．７．抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣを作製する方法
本開示の抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣは、周知の化学的方法を使用して合成することができる。選択された化学的方法は、数ある中でも、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質、リンカーを抗体に取り付けるのに使用されるリンカーおよび基の性質に依存すると予想される。一般的に、式（Ｉ）によるＡＤＣは、以下のスキームに従って調製することができる：
Ｄ－Ｌ－Ｒｘ＋Ａｂ－Ｒｙ→［Ｄ－Ｌ－ＸＹ］ｎ－Ａｂ （Ｉ）
式中、Ｄ、Ｌ、Ａｂ、ＸＹおよびｎはこれまでに定義した通りであり、ＲｘおよびＲｙは、上記で論じられたように、互いに共有結合による連結を形成することが可能な補完的な基を表す。
ＲｘおよびＲｙ基の性質は、シントンＤ－Ｌ－Ｒｘを抗体に連結するのに使用される化学的方法に依存すると予想される。一般的に、使用される化学的方法は、抗体の完全性、例えばその標的に結合するその能力を変更しないものであるべきである。好ましくは、コンジュゲートした抗体の結合特性は、コンジュゲートしていない抗体の結合特性に極めて類似していると予想される。分子を抗体などの生体分子にコンジュゲートするための様々な化学的方法および技術が当業界において公知であり、特に抗体にコンジュゲートするためのものが周知である。例えば、Amon et al., “Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy,” in: Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. Eds., Alan R. Liss, Inc., 1985；Hellstrom et al., “Antibodies For Drug Delivery,” in: Controlled Drug Delivery, Robinson et al. Eds., Marcel Dekker, Inc., 2nd Ed. 1987；Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review,” in: Monoclonal Antibodies ‘84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al., Eds., 1985；“Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy,” in: Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al., Eds., Academic Press, 1985；Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58；ＰＣＴ国際公開第８９／１２６２４号パンフレットを参照されたい。これらの化学的方法のいずれも、シントンを抗体に連結するのに使用することができる。
接近可能なリシン残基にシントンを連結するのに有用な官能基Ｒｘの数および化学的方法は公知であり、一例としては、これらに限定されないが、ＮＨＳ－エステルおよびイソチオシアネートが挙げられる。
システイン残基の接近可能な遊離のスルフヒドリル基にシントンを連結するのに有用な官能基Ｒｘの数および化学的方法は公知であり、一例としては、これらに限定されないが、ハロアセチルおよびマレイミドが挙げられる。
しかしながら、コンジュゲーションの化学的性質は、利用可能な側鎖基に限定されない。アミンなどの側鎖は、適切な小分子をアミンに連結することによって、他の有用な基、例えばヒドロキシルに変換することができる。この戦略は、抗体の接近可能なアミノ酸残基の側鎖に多官能性の小分子をコンジュゲートすることによって抗体上の利用可能な連結部位の数を増加させるために使用することができる。次いで、これらの「変換された」官能基にシントンを共有結合で連結するのに好適な官能基Ｒｘが、シントンに含まれる。
抗体はまた、コンジュゲーションのためのアミノ酸残基を含むように改変することができる。ＡＤＣの状態で薬物をコンジュゲートするのに有用な非遺伝子コード化アミノ酸残基を含むように抗体を改変するためのアプローチは、非コード化アミノ酸にシントンを連結するのに有用な化学的方法および官能基と共に、Axup et al., 2012, Proc Natl Acad Sci USA. 109(40):16101-16106によって記載されている。
典型的には、シントンは、抗体のアミノ酸残基の側鎖に、例えば、接近可能なリシン残基の一級アミノ基または接近可能なシステイン残基のスルフヒドリル基などに連結されている。遊離のスルフヒドリル基は、鎖間のジスルフィド結合を還元することにより得ることができる。
Ｒｙがスルフヒドリル基である場合（例えば、Ｒｘがマレイミドである場合）の連結では、一般的に、抗体はまず完全または部分的に還元して、システイン残基間の鎖間のジスルフィド架橋を崩壊させる。
１つまたは複数のコドンの突然変異によって、ジスルフィド架橋に参加しないシステイン残基が抗体に入るように改変することができる。これらの対応のないシステインの還元により、コンジュゲーションに好適なスルフヒドリル基が生じる。改変されたシステインを取り込むのに好ましい位置としては、一例として、これらに限定されないが、ヒトＩｇＧ１重鎖上の、Ｓ１１２Ｃ位、Ｓ１１３Ｃ位、Ａ１１４Ｃ位、Ｓ１１５Ｃ位、Ａ１７６Ｃ位、５１８０Ｃ位、Ｓ２５２Ｃ位、Ｖ２８６Ｃ位、Ｖ２９２Ｃ位、Ｓ３５７Ｃ位、Ａ３５９Ｃ位、Ｓ３９８Ｃ位、Ｓ４２８Ｃ位（Ｋａｂａｔの番号付け）、およびヒトＩｇカッパ軽鎖上の、Ｖ１１０Ｃ位、Ｓ１１４Ｃ位、Ｓ１２１Ｃ位、Ｓ１２７Ｃ位、Ｓ１６８Ｃ位、Ｖ２０５Ｃ位（Ｋａｂａｔの番号付け）が挙げられる（例えば、米国特許第７，５２１，５４１号明細書、米国特許第７，８５５，２７５号明細書および米国特許第８，４５５，６２２号明細書を参照）。
当業者により理解されていると予想されるように、抗体分子に連結された多数の細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、一部の抗体は１つの連結された薬剤を含有する、一部の抗体は２つの連結された薬剤を含有する、一部の抗体は３つの連結された薬剤を含有するなど（一部の抗体は連結された薬剤を含有しない）、ＡＤＣの集合体が本質的に不均質であり得るように変更することが可能である。不均質性の程度は、数ある中でも、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を連結するのに使用される化学的方法に依存すると予想される。例えば、抗体が還元されて取り付けのためのスルフヒドリル基が生じる場合、分子１個当たり０、２、４、６または８個の連結された薬剤を有する抗体の不均質な混合物が産生されることが多い。さらに、取り付け化合物のモル比を制限することによって、分子１個当たり０、１、２、３、４、５、６、７または８個の連結された薬剤を有する抗体が産生されることが多い。したがって、文脈に応じて、述べられるＤＡＲは、抗体の集合体の平均であり得ることが理解されると予想される。例えば、「ＤＡＲ４」は、特定のＤＡＲピークを単離するために精製に供されておらず、抗体１個当たりの取り付けられた細胞増殖抑制性物質および／または細胞傷害性物質の数が異なる（例えば、抗体１個当たり０、２、４、６、８個の薬剤）ＡＤＣ分子の不均質な混合物を含み得るが、平均の薬物対抗体の比率が４であるＡＤＣ調製物を指すことができる。同様に、一部の実施形態において、「ＤＡＲ２」は、平均の薬物対抗体の比率が２である不均質なＡＤＣ調製物を指す。
富化した調製物が望ましい場合、既定の数の連結された細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を有する抗体は、不均質な混合物の精製を介して、例えば、カラムクロマトグラフィー、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーを介して得ることができる。
純度は、当業界において公知のように、様々な方法によって評価することができる。具体的な例として、ＡＤＣ調製物は、ＨＰＬＣまたは他のクロマトグラフィーを介して分析してもよく、純度は、得られたピークの曲線下面積を分析することによって評価してもよい。
６．３ キメラ抗原受容体
本発明の開示は、本明細書に記載される抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。一部の実施形態において、ＣＡＲは、本明細書に記載される１つまたは複数のｓｃＦｖ（例えば、１または２つ）を含む。例えば、ＣＡＲは、リンカー配列（例えば、４～１５アミノ酸の）によって共有結合で接続された２つのｓｃＦｖを含んでいてもよい。例示的なリンカーとしては、ＧＧＧＧＳ（配列番号１８３）および（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号１８４）が挙げられる。
本開示のＣＡＲは、典型的には、膜貫通ドメインに作動可能に連結した細胞外ドメインを含み、これが順にシグナル伝達のための細胞内ドメインに作動可能に連結している。ＣＡＲは、細胞外ドメインのＮ末端にシグナルペプチドをさらに含んでいてもよい（例えば、ヒトＣＤ８シグナルペプチド）。一部の実施形態において、本開示のＣＡＲは、アミノ酸配列ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号１７５）を含むヒトＣＤ８シグナルペプチドを含む。
本開示のＣＡＲの細胞外ドメインは、抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの配列（例えば、セクション６．１または番号付けされた実施形態１から３５９に記載される通り）を含む。
例示的な膜貫通ドメイン配列および細胞内ドメイン配列は、それぞれセクション６．３．１および６．３．２に記載されている。
本明細書に記載される数々の融合タンパク質（例えば、番号付けされた実施形態３９５から４２９）は、ＣＡＲであり、ＣＡＲに関連する開示は、このような融合タンパク質に適用される。
６．３．１．膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに作動可能に連結された（例えば、融合した）膜貫通ドメインを含むように設計することができる。
膜貫通ドメインは、天然源または合成源のいずれに由来するものでもよい。源が天然である場合、ドメインは、あらゆる膜結合または膜貫通タンパク質由来であり得る。この開示における特定の用途の膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４のアルファ、ベータまたはゼータ鎖由来であってもよい（すなわち、その少なくとも膜貫通領域を含んでいてもよい）。一部の場合において、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジなどの様々なヒトヒンジも同様に採用することができる。
一実施形態において、膜貫通ドメインは、合成である（すなわち、天然に存在しない）。合成膜貫通ドメインの例は、ロイシンおよびバリンなどの主として疎水性の残基を含むペプチドである。好ましくは、合成膜貫通ドメインの各末端に、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンの三つ組が見出されると予想される。任意選択で、短いオリゴまたはポリペプチドリンカー、好ましくは２から１０アミノ酸の長さのものが、膜貫通ドメインとＣＡＲの細胞質内シグナル伝達ドメインとの間に連結を形成することができる。グリシン－セリンの二つ組は、特に好適なリンカーを提供する。
一実施形態において、本開示のＣＡＲにおける膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインである。一実施形態において、ＣＤ８膜貫通ドメインは、アミノ酸配列ＹＬＨＬＧＡＬＧＲＤＬＷＧＰＳＰＶＴＧＹＨＰＬＬ（配列番号１８５）を含む。
一実施形態において、本開示のＣＡＲにおける膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。一実施形態において、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、アミノ酸配列ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１８６）を含む。
一部の場合において、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａヒンジドメインによって細胞外ドメインに連結されている。一実施形態において、ＣＤ８ａヒンジドメインは、アミノ酸配列ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣ（配列番号１８７）を含む。別の実施形態において、ＣＤ８ａヒンジドメインは、アミノ酸配列ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号１７６）を含む。
一部の場合において、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ヒトＩｇＧ４－短鎖ヒンジによって細胞外ドメインに連結されている。一実施形態において、ヒトＩｇＧ４－短鎖ヒンジは、アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号１７７）を含む。
一部の場合において、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ヒトＩｇＧ４－長鎖ヒンジによって細胞外ドメインに連結されている。一実施形態において、ヒトＩｇＧ４－長鎖ヒンジは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000059
 を含む。
６．３．２．細胞内ドメイン
本開示のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが発現される免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。用語「エフェクター機能」は、細胞の特殊化した機能を指す。例えばＴ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。したがって、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを変換し、細胞が特殊化した機能を実行するように方向付けるタンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体が採用できるが、多くの場合において、鎖全体を使用することは必ずしも必要ではない。細胞内シグナル伝達ドメインの短縮化された部分が使用される限りにおいて、このような短縮化された部分は、それがエフェクター機能シグナルを変換しさえすれば、無傷の鎖の代わりに使用することができる。したがって細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを変換するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインのあらゆる短縮化された部分を含むことを意味する。
本開示のＣＡＲで使用するための細胞内シグナル伝達ドメインの好ましい例としては、抗原受容体と結合した後に協同的に作用してシグナル伝達を開始させるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）および補助受容体の細胞質内配列、加えて、これらの配列のあらゆる誘導体またはバリアント、および同じ機能的な能力を有するあらゆる合成配列が挙げられる。
ＴＣＲ単独により生成したシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分な場合があり、二次または共刺激シグナルも必要である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの別個のクラスの細胞質内シグナル伝達配列、すなわちＴＣＲを介して抗原依存性の一次活性化を開始させる配列（一次細胞質内シグナル伝達配列）および二次的な、または共刺激シグナルを提供するように抗原非依存性の方式で作用する配列（二次細胞質内シグナル伝達配列）によって媒介されると言うことができる。
一次細胞質内シグナル伝達配列は、刺激によるか、または阻害によるかのいずれかでＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激による方式で作用する一次細胞質内シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして公知のシグナル伝達モチーフを含有していてもよい。
本開示のＣＡＲにおいて特定の用途を有するＩＴＡＭを含有する一次細胞質内シグナル伝達配列の例としては、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄ由来のものが挙げられる。本開示のＣＡＲにおける細胞質内シグナル伝達分子は、ＣＤ３－ゼータ由来の細胞質内シグナル伝達配列を含むことが特に好ましい。
好ましい実施形態において、ＣＡＲの細胞質内ドメインは、ＩＴＡＭを含有する一次細胞質内シグナル伝達配列ドメイン（例えば、ＣＤ３－ゼータのもの）そのものを含む、または本開示のＣＡＲの状況で有用な他のあらゆる望ましい細胞質内ドメインと組み合わせて含むように設計される。例えば、ＣＡＲの細胞質内ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖部分および共刺激シグナル伝達領域を含んでいてもよい。
共刺激シグナル伝達領域は、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。共刺激分子は、リンパ球の抗原への効率的な応答に必要な、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。このような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＤＡＰ１０、ＧＩＴＲなどが挙げられる。
本開示のＣＡＲの細胞質内シグナル伝達部分内の細胞質内シグナル伝達配列は、ランダムな、または特定された順番で互いに連結されていてもよい。任意選択で、短いオリゴまたはポリペプチドリンカー、好ましくは２から１０アミノ酸の長さのものが、連結を形成することができる。グリシン－セリンの二つ組は、特に好適なリンカーを提供する。
一実施形態において、細胞質内ドメインは、ＣＤ３－ゼータのシグナル伝達ドメインおよびＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３－ゼータのシグナル伝達ドメインは、アミノ酸配列ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１８０）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、アミノ酸配列ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号１７９）を含む。
別の実施形態において、細胞質内ドメインは、ＣＤ３－ゼータのシグナル伝達ドメインおよび４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含む。
６．４ ＭｉｃＡｂｏｄｙ
本発明の開示は、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体および抗原結合フラグメントを含むＭｉｃＡｂｏｄｙを提供する。ＭｉｃＡｂｏｄｙは、抗体または抗原結合フラグメントおよび改変されたＭＨＣ－クラスＩ鎖関連（ＭＩＣ）タンパク質ドメインを含む融合タンパク質である。ＭＩＣタンパク質は、ＮＫ細胞の表面上で発現されるヒトＮＫＧ２Ｄ受容体の天然リガンドであり、ＭＩＣタンパク質のα１－α２ドメインは、ＮＫＧ２Ｄ受容体のための結合部位を提供する。改変されたＭＩＣタンパク質ドメイン（例えば改変されたα１－α２ドメイン）を、がんを標的化する抗体または抗原結合フラグメントに融合させることによって、改変されたＭＩＣタンパク質ドメインと結合することが可能な改変されたＮＫＧ２Ｄ受容体を発現するＴ細胞をがん細胞へと標的化させることができる。本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙ中に含まれていてもよい改変されたＭＩＣタンパク質ドメイン、ならびに改変されたＭＩＣタンパク質ドメインと結合することが可能なＮＫＧ２Ｄ受容体、ＮＫＧ２Ｄ受容体を含むＣＡＲおよびＣＡＲ Ｔ細胞は、その内容が参照により本明細書にその全体で組み入れられる、米国特許出願公開第２０１１／０１８３８９３号明細書、第２０１１／０３１１５６１号明細書、第２０１５／０１６５０６５号明細書、および第２０１６／０３０４５７８号明細書、ならびにＰＣＴ公報国際公開第２０１６／０９０２７８号パンフレット、国際公開第２０１７／０２４１３１号パンフレット、国際公開第２０１７／２２２５５６号パンフレット、および国際公開第２０１９／１９１２４３号パンフレットに記載されている。
一部の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、ＮＫＧ２Ｄリガンド（例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、ＵＬＢＰ６、またはＯＭＣＰ）のα１－α２ドメインと少なくとも８０％同一であるかまたはそれに相同なα１－α２ドメインを含む。ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、ＵＬＢＰ６、およびＯＭＣＰの例示的なアミノ酸配列は、それぞれ国際公開第２０１９／１９１２４３号パンフレットの配列番号１～９に記載された通りであり、それらの配列は、参照により本明細書に組み入れられる。他の実施形態において、α１－α２ドメインは、ＮＫＧ２Ｄリガンドのネイティブまたは天然のα１－α２ドメインと８５％同一である。さらに他の実施形態において、α１－α２ドメインは、天然ＮＫＧ２Ｄリガンドタンパク質のネイティブまたは天然のα１－α２ドメインと９０％同一であり、非天然のＮＫＧ２Ｄと結合する。
一部の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、ヒトＭＩＣＡまたはＭＩＣＢタンパク質のネイティブまたは天然のα１－α２ドメインと少なくとも８０％同一であるかまたはそれに相同であり、ＮＫＧ２Ｄと結合するα１－α２ドメインを含む。一部の実施形態において、α１－α２ドメインは、ヒトＭＩＣＡまたはＭＩＣＢタンパク質のネイティブまたは天然のα１－α２ドメインと８５％同一であり、ＮＫＧ２Ｄと結合する。他の実施形態において、α１－α２ドメインは、ヒトＭＩＣＡまたはＭＩＣＢタンパク質のネイティブまたは天然のα１－α２プラットフォームドメインと９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり、ＮＫＧ２Ｄと結合する。
一部の実施形態において、ＮＫＧ２Ｄリガンドのα１－α２ドメインにおける特定の突然変異を作製して、天然ＮＫＧ２Ｄリガンドに対して低減された親和性を有するようにそれ自体改変された非天然のＮＫＧ２Ｄ受容体と結合する非天然のα１－α２ドメインを作り出すことができる。これは、例えば遺伝子工学を介してなされてもよい。このようにして改変された非天然のＮＫＧ２Ｄ受容体を使用して、免疫系のＮＫまたはＴ細胞の表面上に、非天然のα１－α２ドメインで構成される分子に優先的に結合して、それにより活性化され得るＮＫＧ２ＤベースのＣＡＲを作り出すことができる。このような非天然のＮＫＧ２Ｄ受容体およびそのコグネートな非天然のＮＫＧ２Ｄリガンドの対は、従来のＣＡＲ－Ｔ細胞およびＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較して、がんおよびウイルス感染の処置に関する重要な安全性、効能、および製造上の利点を提供することができる。ＮＫＧ２ＤベースのＣＡＲを有するＣＡＲ－Ｔ細胞およびＣＡＲ－ＮＫ細胞の活性化は、ＭｉｃＡｂｏｄｙの投与によって制御することができる。有害事象が生じる事象において、ＭｉｃＡｂｏｄｙの用量レジメンは、誘導された自殺メカニズムを利用するというより、注入されたＣＡＲ細胞を破壊することになるように改変してもよい。
ＭｉｃＡｂｏｄｙは、抗体または抗原結合フラグメントを、リンカーを介して、例えば、ＡＰＴＳＳＳＧＧＧＧＳ（配列番号１８８）またはＧＧＧＳ（配列番号１８９）を介して改変されたα１－α２ドメインに付着させることによって生成することができる。例えば、α１－α２ドメインは、例えば、国際公開第２０１９／１９１２４３号パンフレットに記載されたように、ＩｇＧ重鎖または軽鎖のＣ末端に融合されていてもよい。
一部の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000060
 を含む改変されたα１－α２ドメインを含む。
他の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000061
 を含む改変されたα１－α２ドメインを含む。
他の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000062
 を含む改変されたα１－α２ドメインを含む。
他の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000063
 を含む改変されたα１－α２ドメインを含む。
他の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000064
 を含む改変されたα１－α２ドメインを含む。
他の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000065
 を含む改変されたα１－α２ドメインを含む。
他の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000066
 を含む改変されたα１－α２ドメインを含む。
他の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000067
 を含む改変されたα１－α２ドメインを含む。
他の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000068
 を含む改変されたα１－α２ドメインを含む。
他の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000069
 を含む改変されたα１－α２ドメインを含む。
他の実施形態において、本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙは、アミノ酸配列
Figure 2023516080000070
 を含む改変されたα１－α２ドメインを含む。
例示的な改変されたＮＫＧ２Ｄ受容体は、アミノ酸配列
Figure 2023516080000071
 を含み、７３位におけるチロシンは、別のアミノ酸、例えばアラニンで置き換えられている。
別の例示的な改変されたＮＫＧ２Ｄ受容体は、アミノ酸配列
Figure 2023516080000072
 を含み、これにおいて、７５および１２２位におけるチロシンが別のアミノ酸で置き換えられており、例えば７５位でアラニン、１２２位でフェニルアラニンで置き換えられている。
６．５ 核酸、組換えベクターおよび宿主細胞
本発明の開示は、抗グリコＣＤ４４抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖遺伝子をコードする核酸分子、このような核酸を含むベクター、および本開示の抗グリコＣＤ４４抗体を産生することが可能な宿主細胞を包含する。特定の態様において、核酸分子は、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体および抗体結合フラグメント（例えば、セクション６．１および番号付けされた実施形態１～３８４に記載される通り）、加えて、それらを含有する融合タンパク質（例えば、番号付けされた実施形態３８５～３９４に記載される通り）およびキメラ抗原受容体（例えば、セクション６．３および番号付けされた実施形態３９５～４２９に記載される通り）をコードし、宿主細胞は、それらを発現することが可能である。本開示の例示的なベクターは、番号付けされた実施形態４４２～４４４に記載されており、例示的な宿主細胞は、番号付けされた実施形態４４５～４４８に記載されている。
本開示の抗グリコＣＤ４４抗体は、宿主細胞中での免疫グロブリン軽鎖および重鎖遺伝子の組換え発現によって調製することができる。抗体を組換え発現するために、宿主細胞は、抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡフラグメントを有する１つまたは複数の組換え発現ベクターをトランスフェクトされ、それにより、軽鎖および重鎖が宿主細胞中で発現され、任意選択でそれらは宿主細胞が培養される培地に分泌され、その培地から抗体を回収することができる。標準的な組換えＤＮＡ手法は、抗体重鎖および軽鎖遺伝子を得て、これらの遺伝子を組換え発現ベクターに組み込み、ベクターを、宿主細胞に、例えば、Molecular Cloning；A Laboratory Manual, Second Edition (Sambrook, Fritsch and Maniatis (eds), Cold Spring Harbor, N. Y., 1989), Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, F. M. et al., eds., Greene Publishing Associates, 1989)および米国特許第４，８１６，３９７号明細書に記載されるものに導入するのに使用される。
このような抗グリコＣＤ４４抗体をコードする核酸を生成するために、まず、軽鎖および重鎖可変領域をコードするＤＮＡフラグメントを得る。これらのＤＮＡは、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、軽鎖および重鎖可変配列をコードする生殖細胞系ＤＮＡまたはｃＤＮＡを増幅および改変することにより得ることができる。ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、当業界において公知である（例えば、「ＶＢＡＳＥ」ヒト生殖細胞系配列データベースを参照されたい；Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242；Tomlinson et al., 1992, J. Mol. Biol. 22T:116-198；and Cox et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:827-836も参照されたい；これらそれぞれの内容は参照により本明細書に組み入れられる）。
抗グリコＣＤ４４抗体関連のＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡフラグメントが得られたら、これらのＤＮＡフラグメントはさらに、標準的な組換えＤＮＡ技術によって改変して、例えば、可変領域遺伝子を、全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂフラグメント遺伝子またはｓｃＦｖ遺伝子に変換することができる。これらの改変において、ＶＨまたはＶＬをコードするＤＮＡフラグメントは、別のタンパク質、例えば抗体定常領域またはフレキシブルなリンカーをコードする別のＤＮＡフラグメントに作動可能に連結されている。用語「作動可能に連結される」は、この状況で使用される場合、２つのＤＮＡフラグメントによってコードされたアミノ酸配列がフレーム内に残るように２つのＤＮＡフラグメントが合体することを意味することが意図される。
ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および任意選択でＣＨ４）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当業界において公知であり（例えば、Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S.Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤの定常領域であってもよいが、特定の実施形態において、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４の定常領域である。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子の場合、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結されていてもよい。
ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域、ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、全長軽鎖遺伝子（加えてＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当業界において公知であり（例えば、Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S.Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であってもよいが、特定の実施形態において、カッパ定常領域である。
ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡフラグメントは、ＶＨおよびＶＬ配列が、ＶＨおよびＶＬ領域がフレキシブルなリンカーによって合体した連続する単鎖タンパク質として発現できるように、フレキシブルなリンカーをコードする別のフラグメント、例えばアミノ酸配列（Ｇｌｙ４～Ｓｅｒ）３（配列番号１８４）をコードする別のフラグメントに作動可能に連結されていてもよい（例えば、Bird et al., 1988, Science 242:423-426；Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554を参照）。
本開示の抗グリコＣＤ４４抗体を発現させるために、上述したようにして得られた部分的なまたは全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡは、遺伝子が転写および翻訳制御配列に作動可能に連結されるように発現ベクターに挿入される。この文脈において、用語「作動可能に連結した」は、ベクター内の転写および翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写および翻訳を調節するそれらの意図した機能を発揮するように、抗体遺伝子がベクターにライゲートされることを意味することが意図される。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞に適合するように選ばれる。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は、別個のベクターに挿入されていてもよいし、またはより典型的には、両方の遺伝子が同じ発現ベクターに挿入される。
抗体遺伝子は、標準的な方法（例えば、抗体遺伝子フラグメントおよびベクター上の相補的制限部位ライゲーション、または制限部位が存在しない場合、平滑末端のライゲーション）によって発現ベクターに挿入される。抗グリコＣＤ４４抗体関連の軽鎖または重鎖配列の挿入の前に、発現ベクターは、すでに抗体定常領域配列を有していてもよい。例えば、抗グリコＣＤ４４モノクローナル抗体関連のＶＨおよびＶＬ配列を全長抗体遺伝子に変換するための１つのアプローチは、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセグメントに作動可能に連結され、ＶＬセグメントがベクター内のＣＬセグメントに作動可能に連結されるように、重鎖定常および軽鎖定常領域をそれぞれ予めコードする発現ベクターにそれらを挿入することである。加えて、または代替として、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードしていてもよい。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドがフレーム内で抗体鎖遺伝子のアミノ末端に連結されるように、ベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンのシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であってもよい。
抗体鎖遺伝子に加えて、本開示の組換え発現ベクターは、宿主細胞中で抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を有する。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサー、および抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御する他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。このような調節配列は、例えば、Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif., 1990に記載されている。当業者であれば、調節配列の選択を含む発現ベクターの設計は、形質転換しようとする宿主細胞の選択、望ましいタンパク質の発現のレベルなどのような要因によって決まる可能性があることを理解していると予想される。哺乳類宿主細胞発現に好適な調節配列としては、哺乳類細胞における高レベルのタンパク質発現を指示するウイルスエレメント、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー（例えばＣＭＶプロモーター／エンハンサー）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー（例えばＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、ならびにポリオーマ由来のプロモーターおよび／またはエンハンサーが挙げられる。ウイルス調節エレメントおよびその配列のさらなる説明に関して、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，１６８，０６２号明細書、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，２４５号明細書、およびＳｃｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号明細書を参照されたい。
抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、本開示の組換え発現ベクターは、宿主細胞中でのベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択可能マーカー遺伝子などの追加の配列を有していてもよい。選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、全てＡｘｅｌらによる、米国特許第４，３９９，２１６号明細書、第４，６３４，６６５号明細書および第５，１７９，０１７号明細書を参照）。例えば、典型的には、選択可能マーカー遺伝子は、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキセートなどの薬物に対する耐性を、ベクターが導入された宿主細胞に付与する。好適な選択可能マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（ＤＨＦＲ－宿主細胞でメトトレキセート選択／増幅と共に使用するため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が挙げられる。軽鎖および重鎖の発現のために、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術によって宿主細胞にトランスフェクトされる。用語「トランスフェクション」の様々な形態は、例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなどの、原核または真核宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入のために一般的に使用される様々な技術を包含することが意図される。
原核または真核宿主細胞のいずれかで本開示の抗体を発現することが考えられる。特定の実施形態において、抗体の発現、または適切にフォールディングされ免疫学的に活性な抗体の最適な分泌は、真核細胞、例えば、哺乳類宿主細胞で実行される。本開示の組換え抗体を発現するための例示的な哺乳類宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220に記載されるＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞などであり、これは、例えば、Kaufman and Sharp, 1982, Mol. Biol. 159:601-621に記載されるようなＤＨＦＲ選択可能マーカーと共に使用される）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳類宿主細胞に導入される場合、抗体は、宿主細胞中での抗体の発現または宿主細胞が増殖する培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間にわたり、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる。宿主細胞も、無傷抗体の一部、例えばＦａｂフラグメントまたはｓｃＦｖ分子を産生するために使用することができる。上記の手順のバリエーションは本発明の開示の範囲内であることが理解される。例えば、本開示の抗グリコＣＤ４４抗体の軽鎖または重鎖のいずれか（ただし両方ではない）をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましい場合がある。
本開示のＣＡＲの発現に関して、例えばセクション６．３として、さらに番号付けされた実施形態３９５から４２９に記載される通り、好ましくは、宿主細胞はＴ細胞であり、好ましくはヒトＴ細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞は、細胞が腫瘍細胞上のＣＤ４４と架橋されると、抗腫瘍免疫を示す。本開示のＴ細胞を産生するための詳細な方法は、セクション６．５．１に記載されている。
組換えＤＮＡ技術はまた、グリコＣＤ４４への結合に必ずしも必要ではない軽鎖および重鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡの一部または全部を除去するのに使用することもできる。このような短縮化されたＤＮＡ分子から発現される分子も、本開示の抗体に包含される。
本開示の抗グリコＣＤ４４抗体の組換え発現のために、宿主細胞は、２つの本開示の発現ベクター、すなわち、重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクターおよび軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベクターをコトランスフェクトされてもよい。２つのベクターは、同一な選択可能マーカーを含有していてもよく、またはそれらは、それぞれ別の選択可能マーカーを含有していてもよい。代替として、両方の重鎖および軽鎖ポリペプチドをコードする単一のベクターを使用してもよい。
核酸が抗グリコＣＤ４４抗体の１つまたは複数の部分をコードするようになれば、例えば、異なるＣＤＲ配列を有する抗体、Ｆｃ受容体への親和性が低減した抗体、または異なるサブクラスの抗体をコードする核酸を生成するように、さらなる変更または突然変異をコード配列に導入することができる。
本開示の抗グリコＣＤ４４抗体はまた、化学合成によって（例えば、Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., 1984 The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.に記載される方法によって）産生することもできる。バリアント抗体も、無細胞プラットフォームを使用して生成することができる（例えば、Chu et al., Biochemia No.2, 2001 (Roche Molecular Biologicals)およびMurray et al., 2013, Current Opinion in Chemical Biology, 17:420-426を参照）。
組換え発現によって本開示の抗グリコＣＤ４４抗体が産生されたら、免疫グロブリン分子の精製に関する当業界において公知のあらゆる方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、およびサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、分別溶解によって、または他のあらゆる標準的なタンパク質精製技術によってこれを精製することができる。さらに、本発明の開示の抗グリコＣＤ４４抗体および／または結合フラグメントは、精製を容易にするために、本明細書に記載される、またはそれ以外の当業界において公知の異種ポリペプチド配列に融合させることができる。
抗グリコＣＤ４４抗体は、単離されたら、必要に応じて、例えば高速液体クロマトグラフィーによって（Fisher, Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecular Biology, Work and Burdon, eds., Elsevier, 1980を参照）、またはＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）７５カラム（Pharmacia Biotech AB、Uppsala、Sweden）でのゲルろ過クロマトグラフィーによってさらに精製してもよい。
６．５．１．Ｔ細胞におけるＣＡＲの組換え産生
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＣＤ４４ ＣＡＲをコードする核酸は、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターを使用して細胞に送達される。ＣＡＲを発現するレトロウイルスおよびレンチウイルスベクターは、担体として形質導入された細胞を使用して、またはカプセル化された、結合した、または裸のベクターの無細胞の局所または全身送達を使用して、異なるタイプの真核細胞に、さらには組織および生物全体にも送達することができる。使用される方法は、安定な発現が必要であるかまたは十分なあらゆる目的のための方法であり得る。
他の実施形態において、ＣＡＲ配列は、インビトロで転写されたｍＲＮＡを使用して細胞に送達される。インビトロで転写されたｍＲＮＡ ＣＡＲは、担体としてトランスフェクトされた細胞を使用して、またはカプセル化された、結合した、または裸のｍＲＮＡの無細胞の局所または全身送達を使用して、異なるタイプの真核細胞に、さらには組織および生物全体にも送達することができる。使用される方法は、一過性発現が必要であるかまたは十分なあらゆる目的のための方法であり得る。
別の実施形態において、望ましいＣＡＲは、トランスポゾンによって細胞中で発現させることができる。
本開示のＲＮＡトランスフェクション方法の１つの利点は、ＲＮＡトランスフェクションは、本質的に一過性であり、ベクターを含まないことであり、すなわちＲＮＡ導入遺伝子は、リンパ球に送達され、短時間のインビトロにおける細胞活性化の後、いかなる追加のウイルス配列も必要とせずに、最小限の発現カセットとしてそこで発現される。これらの条件下で、宿主細胞ゲノムへの導入遺伝子の組込みが起こる可能性は低い。細胞のクローニングは、必ずしもＲＮＡのトランスフェクション効率やリンパ球集団全体を均一に改変するその能力によるわけではない。
インビトロで転写されたＲＮＡ（ＩＶＴ－ＲＮＡ）でのＴ細胞の遺伝学的改変は、両方とも様々な動物モデルで継続的に試験されている２つの異なる戦略を利用する。細胞に、リポフェクションまたはエレクトロポレーションによって、インビトロで転写されたＲＮＡをトランスフェクトする。好ましくは、移入されたＩＶＴ－ＲＮＡの持続的な発現を達成するために、様々な改変を使用してＩＶＴ－ＲＮＡを安定化させることが望ましい。
一部のＩＶＴベクターが、インビトロでの転写のためのテンプレートとして標準化された方式で利用されており、安定化されたＲＮＡ転写物が産生されるように遺伝子改変されていることが文献公知である。現在のところ、当業界で使用されるプロトコールは、以下の構造：ＲＮＡ転写を可能にする５’ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、それに続き３’および／または５’のいずれかで非翻訳領域（ＵＴＲ）に隣接する目的の遺伝子、および５０～７０個のＡヌクレオチドを含有する３’ポリアデニルカセット（配列番号２０４）を有するプラスミドベクターに基づく。インビトロでの転写の前に、環状プラスミドを、ポリアデニルカセットの下流でＩＩ型制限酵素（認識配列は切断部位に対応する）によって線形化する。したがってポリアデニルカセットは、転写物中の後期ポリ（Ａ）配列に対応する。この手順の結果として、一部のヌクレオチドは、線形化後に酵素切断部位の一部として残り、３’末端におけるポリ（Ａ）配列を伸長させるかまたはマスキングする。この非生理学的なオーバーハングが、このようなコンストラクトから細胞内で産生されたタンパク質の量に影響を与えるかどうかは不明確である。
ＲＮＡは、より伝統的なプラスミドまたはウイルスアプローチを超える数々の利点を有する。ＲＮＡ源からの遺伝子発現は、転写を必要とせず、タンパク質生成物は、トランスフェクションのすぐ後に産生される。さらに、ＲＮＡは、核ではなく細胞質に侵入するだけでよいため、典型的なトランスフェクション方法は、極めて高いトランスフェクション率をもたらす。加えて、プラスミドベースアプローチは、研究中の細胞中で目的の遺伝子の発現を駆動させるプロモーターを活性にすることを必要とする。
別の態様において、ＲＮＡコンストラクトは、エレクトロポレーションによって細胞に送達することができる。例えば、米国特許出願公開第２００４／００１４６４５号明細書、米国特許出願公開第２００５／００５２６３０号明細書、米国特許出願公開第２００５／００７０８４１号明細書、米国特許出願公開第２００４／００５９２８５号明細書、米国特許出願公開第２００４／００９２９０７号明細書で教示されるような、哺乳類細胞への核酸コンストラクトのエレクトロポレーションの配合物および手法を参照されたい。あらゆる公知の細胞型のエレクトロポレーションに必要な電場強度などの様々なパラメーターは、一般的に、この分野の関連する研究文献に加えて多数の特許および出願において公知である。例えば、米国特許第６，６７８，５５６号明細書、米国特許第７，１７１，２６４号明細書、および米国特許第７，１７３，１１６号明細書を参照されたい。エレクトロポレーションの治療適用のための装置、例えば、ＭｅｄＰｕｌｓｅｒ（商標）ＤＮＡエレクトロポレーション治療システム（Ｉｎｏｖｉｏ／Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）が商業的に利用可能であり、米国特許第６，５６７，６９４号明細書；米国特許第６，５１６，２２３号明細書、米国特許第５，９９３，４３４号明細書、米国特許第６，１８１，９６４号明細書、米国特許第６，２４１，７０１号明細書、および米国特許第６，２３３，４８２号明細書などの特許に記載されており、エレクトロポレーションは、例えば米国特許出願公開第２００７０１２８７０８号明細書で記載されるように、インビトロでの細胞のトランスフェクションのためにも使用することができる。またエレクトロポレーションは、インビトロで核酸を細胞に送達することにも利用することができる。したがって、当業者公知の多くの利用可能なデバイスおよびエレクトロポレーションシステムのいずれかを利用する、発現コンストラクトを含む核酸の細胞へのエレクトロポレーション媒介投与は、標的細胞に目的のＲＮＡを送達するためのエキサイティングな新しい手段を提供する。
６．５．１．１ Ｔ細胞源
Ｔ細胞源は、増加させ遺伝学的に改変する前に、対象から得られる。用語「対象」は、免疫応答を惹起できる生物（例えば、哺乳動物）を含むことが意図される。対象の例としては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびそれらのトランスジェニック種が挙げられる。好ましくは、対象は、ヒトである。
Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸膜滲出液、脾臓組織、および腫瘍などの多数の源から得ることができる。本発明の開示の特定の実施形態において、当業界において入手可能な様々なＴ細胞株を使用することができる。本発明の開示の特定の実施形態において、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離などの当業者公知の様々な技術を使用して対象から収集された血液単位から得ることができる。好ましい一実施形態において、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスにより得られる。アフェレーシス生成物は、典型的には、Ｔ細胞を含むリンパ球、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核の白血球、赤血球、および血小板を含有する。一実施形態において、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、それに続く処理工程のために、細胞を適切な緩衝液または媒体中に入れることができる。本開示の一実施形態において、細胞は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。代替の実施形態において、洗浄溶液は、カルシウムを欠いており、マグネシウムを欠いていてもよく、または部分的であっても多くの２価カチオンを欠いていてもよい。ここでも、驚くべきことに、カルシウムの非存在下における最初の活性化工程は、一層の活性化をもたらす。当業者であれば容易に理解していると予想されるように、洗浄工程は、当業者公知の方法によって、例えば、製造元の指示に従って半自動化「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１セルプロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を使用することによって達成してもよい。洗浄後、細胞は、様々な生体適合性の緩衝液、例えば、Ｃａ非含有、Ｍｇ非含有ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、または緩衝液含有もしくは非含有の他の塩類溶液などに再懸濁してもよい。代替として、アフェレーシスサンプルの不要な成分を除去して、細胞を培養培地に直接再懸濁してもよい。
別の実施形態において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解させ、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離または対向流遠心溶出法により単球を枯渇させることによって末梢血リンパ球から単離される。Ｔ細胞の特定の部分集団、例えばＣＤ３＋、ＣＤ２８’、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋およびＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離することができる。例えば、一実施形態において、Ｔ細胞は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８個の）コンジュゲートビーズ、例えばＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔと、望ましいＴ細胞の陽性選択に十分な期間にわたりインキュベートすることによって単離される。一実施形態において、期間は、約３０分である。さらなる実施形態において、期間は、３０分から、３６時間またはそれより長い時間の範囲、その間の全ての整数値の範囲である。さらなる実施形態において、期間は、少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。さらに別の好ましい実施形態において、期間は、１０から２４時間である。好ましい一実施形態において、インキュベーション期間は、２４時間である。白血病を有する患者からのＴ細胞の単離の場合、より長いインキュベーション時間、例えば２４時間の使用は、細胞収量を上昇させることができる。より長いインキュベーション時間は、腫瘍組織または免疫不全個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する場合のように、他の細胞型と比較してＴ細胞が極めて少ないあらゆる状況でＴ細胞を単離するのに使用することができる。さらに、より長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉効率を増加させることができる。したがって、単にＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を短くするまたは長くすることによって、および／またはビーズのＴ細胞に対する比率を増加または減少させることによって（本明細書でさらに記載される通り）、培養開始のときに、またはプロセス中の他のタイムポイントで、Ｔ細胞の部分集団を、存在するかしないかにかかわらず優先的に選択することができる。加えて、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または減少させることによって、培養開始のときに、または他の望ましいタイムポイントで、Ｔ細胞の部分集団を、存在するかしないかにかかわらず優先的に選択することができる。当業者であれば、本開示の状況において複数回の選択も使用できることを認識しているものと予想される。特定の実施形態において、選択手順を実行し、活性化および増加プロセスで「選択されなかった」細胞を使用することが望ましい場合がある。「選択されなかった」細胞はまた、さらなる回数の選択に供することもできる。
陰性選択によるＴ細胞集団の濃縮は、陰性選択された細胞に固有な表面マーカーに対する抗体を併用して達成することができる。１つの方法は、陰性選択された細胞上に提示される細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫接着またはフローサイトメトリーを介したセルソーティングおよび／または選択である。例えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。特定の実施形態において、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を発現する調節性Ｔ細胞を富化する、またはそれらを陽性選択することが望ましい場合がある。代替として、特定の実施形態において、調節性Ｔ細胞は、抗Ｃ２５コンジュゲートビーズまたは他の類似の選択方法によって、枯渇される。
陽性または陰性選択による望ましい細胞集団の単離のために、細胞および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は、様々であってもよい。特定の実施形態において、ビーズおよび細胞を一緒に混合する体積を顕著に減少させ（すなわち、細胞の濃度を増加させる）、細胞およびビーズの最大の接触を確実にすることが望ましい場合がある。例えば、一実施形態において、１ｍｌ当たり細胞２０億個の濃度が使用される。一実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１０億個の濃度が使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１億個より多くが使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万、または５０００万個の細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態において、１ｍｌ当たり細胞７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億個からの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１億２５００万または１億５０００万個の濃度が使用されてもよい。高濃度の使用は、細胞収量の上昇、細胞の活性化、および細胞の増加をもたらすことができる。さらに、高い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原の発現が弱い可能性がある細胞、例えばＣＤ２８陰性Ｔ細胞のより効率的な捕捉、または多くの腫瘍細胞が存在するサンプル（すなわち、白血病の血液、腫瘍組織など）からの捕捉を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有する可能性があり、入手が望ましいと予想される。例えば、高濃度の細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が比較的弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
関連する実施形態において、より低い細胞濃度を使用することが望ましい場合がある。Ｔ細胞および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の混合物を顕著に希釈することによって、粒子と細胞との間の相互作用が最小化される。これは、粒子に結合させようとする望ましい抗原を大量に発現する細胞を選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、より高いレベルのＣＤ２８を発現し、希薄な濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕捉される。一実施形態において、使用される細胞濃度は、５×１０６／ｍｌである。他の実施形態において、使用される濃度は、約１×１０５／ｍｌから１×１０６／ｍｌ、およびその間のあらゆる整数値の範囲であってもよい。
他の実施形態において、細胞は、回転器において、様々な長さの時間にわたり、様々な速度で、２℃～１０℃または室温のいずれかでインキュベートしてもよい。
刺激のためのＴ細胞はまた、洗浄工程後に凍結してもよい。理論に縛られるつもりはないが、凍結およびそれに続く融解工程は、細胞集団中の顆粒球やある程度の単球を除去することによって、より均質な生成物を提供する。血漿および血小板を除去する洗浄工程後に、細胞を凍結溶液中に懸濁してもよい。多くの凍結溶液およびパラメーターが当業界において公知であり、この状況において有用であると予想されるが、１つの方法は、２０％ＤＭＳＯおよび８％ヒト血清アルブミンを含有するＰＢＳ、または１０％デキストラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミンおよび７．５％ＤＭＳＯ、もしくは３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ－Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０％デキストラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン、および７．５％ＤＭＳＯを含有する培養培地、または例えばＨｅｓｐａｎおよびＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを含有する他の好適な細胞凍結培地を使用することを含み、次いで細胞は、１°／分の速度で－８０℃に凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相中に貯蔵される。他の制御冷凍方法も、－２０℃で即座の、または液体窒素中の制御されていない冷凍と同様に使用することができる。
特定の実施形態において、本発明の開示の方法を使用して活性化する前に、低温保存された細胞を融解し、本明細書に記載される通り洗浄し、室温で１時間そのまま静置する。
また、本明細書に記載される増加した細胞が必要と思われるときの前の期間に、対象から血液サンプルまたはアフェレーシス生成物を収集することも本開示の状況において予期される。したがって、増加させようとする細胞の源は、必要なあらゆるタイムポイントで収集でき、望ましい細胞、例えばＴ細胞を、Ｔ細胞療法によって利益を得ると予想される様々な疾患または状態、例えば本明細書に記載される疾患または状態のためのＴ細胞療法での後の使用のために単離および凍結することができる。一実施形態において、血液サンプルまたはアフェレーシスは、全体的に健康な対象から採取される。特定の実施形態において、血液サンプルまたはアフェレーシスは、疾患を発症させるリスクがあるが疾患をまだ発症させていない全体的に健康な対象から採取され、目的の細胞は、後の使用のために単離および凍結される。特定の実施形態において、Ｔ細胞は、その後の時間で増加する、凍結する、および使用することが可能である。特定の実施形態において、サンプルは、本明細書に記載される特定の疾患の診断の直後に、ただしいずれかの処置の前に、患者から収集される。さらなる実施形態において、様々な関連する処置法、例えば、これらに限定されないが、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法剤、放射線、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノール酸塩、およびＦＫ５０６、抗体、または他の免疫除去剤、例えばＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、および放射線照射などの薬剤での処置の前に、細胞は、対象からの血液サンプルまたはアフェレーシスから単離される。これらの薬物は、カルシウム依存性ホスファターゼであるカルシニューリンを阻害するか（シクロスポリンおよびＦＫ５０６）、または増殖因子によって誘導されたシグナル伝達にとって重要なｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害するか（ラパマイシン）のいずれかである。（Liu et al., Cell 66:807-815, 1991；Henderson et al., Immun. 73:316-321, 1991；Bierer et al., Curr. Opin. Immun. 5:763-773, 1993）。さらなる実施形態において、細胞は、化学療法剤、例えばフルダラビン、体外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミドのいずれかを使用する骨髄もしくは幹細胞移植またはＴ細胞除去療法を併用する（例えば、その前の、それと同時の、またはその後の）後の使用のために、患者ごとに単離され、凍結される。
本発明の開示のさらなる実施形態において、Ｔ細胞は、処置の直後に患者から得られる。これに関して、特定のがん処置の後、特に免疫系に損傷を与える薬物での処置の後、患者が通常処置から回復すると予想される期間中の処置の直後に、得られたＴ細胞の品質は、そのエクスビボで増加する能力に関して最適であるかまたは改善されている可能性があることが観察されている。同様に、本明細書に記載される方法を使用するエクスビボでの改変の後、これらの細胞は、生着およびインビボでの増加の強化にとって好ましい状況にある可能性がある。したがって、本発明の開示の状況において、この回復期間中、Ｔ細胞、樹状細胞、または他の造血系統の細胞を含む血液細胞を収集することが予期される。さらに、特定の実施形態において、動員（例えば、ＧＭ－ＣＳＦでの動員）およびコンディショニングレジメンは、特に療法後の既定された時間枠中に特定の細胞型の再定着、再循環、再生、および／または増加にとって好ましい、対象における状態を生じさせるために使用することができる。例示的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、および他の免疫系細胞が挙げられる。
６．５．１．２ Ｔ細胞の活性化および増加
Ｔ細胞は、一般的に、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；第６，５３４，０５５号明細書；第６，９０５，６８０号明細書；第６，６９２，９６４号明細書；第５，８５８，３５８号明細書；第６，８８７，４６６号明細書；第６，９０５，６８１号明細書；第７，１４４，５７５号明細書；第７，０６７，３１８号明細書；第７，１７２，８６９号明細書；第７，２３２，５６６号明細書；第７，１７５，８４３号明細書；第５，８８３，２２３号明細書；第６，９０５，８７４号明細書；第６，７９７，５１４号明細書；第６，８６７，０４１号明細書；および米国特許公開公報第２００６０１２１００５号明細書に記載されるような方法を使用して活性化および増加される。
一般的に、本開示のＴ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤およびＴ細胞表面上の共刺激分子を刺激するリガンドが取り付けられた表面と接触させることによって増加される。特に、Ｔ細胞集団は、例えば、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または表面上に固定された抗ＣＤ２抗体と接触させることによって、またはカルシウムイオノフォアと共にプロテインキナーゼＣ活性化剤（例えば、ブリオスタチン）と接触させることによって、本明細書に記載されるように刺激することができる。Ｔ細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子と結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられ、一般的に当業界で公知の他の方法と同様に使用できる（Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998；Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999；Garland et al., J. Immunol Meth. 227(1-2):53-63, 1999）。
特定の実施形態において、Ｔ細胞に関する一次刺激シグナルおよび共刺激シグナルは、様々なプロトコールによって提供することができる。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液の形態であってもよいし、または表面にカップリングされていてもよい。表面にカップリングされる場合、薬剤は、同じ表面に（すなわち、「ｃｉｓ」構成で）または別の表面に（すなわち、「ｔｒａｎｓ」構成で）カップリングされていてもよい。代替として、一方の薬剤が表面にカップリングされ、他方の薬剤が溶液の形態であってもよい。一実施形態において、共刺激シグナルを提供する薬剤が、細胞表面に結合しており、一次活性化シグナルを提供する薬剤が、溶液の形態であるかまたは表面にカップリングされている。特定の実施形態において、両方の薬剤が、溶液の形態であってもよい。別の実施形態において、薬剤は、可溶性の形態であってもよく、次いで、Ｆｃ受容体を発現する細胞などの表面に、または薬剤に結合すると予想される抗体もしくは他の結合剤に架橋されてもよい。これに関して、例えば、本発明の開示においてＴ細胞の活性化および増加での使用に関して予期される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）に関して、米国特許出願公開公報第２００４０１０１５１９号明細書および第２００６００３４８１０号明細書を参照されたい。
一実施形態において、２つの薬剤は、同じビーズ上、すなわち「ｃｉｓ」、または別のビーズ上、すなわち「ｔｒａｎｓ」のいずれかで、ビーズ上に固定される。一例として、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントであり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメントであり、両方の薬剤は、同等の分子の量で同じビーズ共に固定される。一実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞の増加およびＴ細胞増殖のために、１：１比率のビーズに結合した各抗体が使用される。本発明の開示の特定の態様において、１：１の比率を使用して観察された増加と比較してＴ細胞増加における上昇が観察されるような、ビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比率が使用される。１つの特定の実施形態において、１：１の比率を使用して観察された増加と比較して、約１から約３倍の上昇が観察される。一実施形態において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比率は、１００：１から、１：１００の範囲、およびその間の全ての整数値の範囲である。本発明の開示の一態様において、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合しており、すなわち、ＣＤ３：ＣＤ２８の比率は、１未満である。本開示の特定の実施形態において、ビーズに結合した抗ＣＤ２８抗体の抗ＣＤ３抗体に対する比率は、２：１より大きい。１つの特定の実施形態において、１：１００のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。別の実施形態において、１：７５のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。さらなる実施形態において、１：５０のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。別の実施形態において、１：３０のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。好ましい一実施形態において、１：１０のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。別の実施形態において、１：３のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。さらに別の実施形態において、３：１のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。
１：５００から５００：１、およびその間のあらゆる整数値の粒子の細胞に対する比率が、Ｔ細胞または他の標的細胞を刺激するのに使用することができる。当業者であれば容易に理解できるように、粒子の細胞に対する比率は、標的細胞に対する粒度によって決まる可能性がある。例えば、小さいサイズのビーズは数個の細胞としか結合できないが、より大きいビーズは多くの細胞と結合できる。特定の実施形態において細胞の粒子に対する比率は、１：１００から１００：１の範囲、およびその間のあらゆる整数値であり、さらなる実施形態において、比率は、１：９から９：１の範囲、およびその間のあらゆる整数値を含み、これらもＴ細胞を刺激するのに使用することができる。Ｔ細胞刺激が起こる抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８がカップリングした粒子とＴ細胞の比率は、上述したように様々であってもよいが、特定の好ましい値としては、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、および１５：１が挙げられ、１つの好ましい比率は、少なくとも１：１の粒子のＴ細胞に対する比率である。一実施形態において、１：１またはそれより低い粒子の細胞に対する比率が使用される。１つの特定の実施形態において、好ましい粒子：細胞の比率は、１：５である。さらなる実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、刺激の日に応じて変更することができる。例えば、一実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、１日目に１：１から１０：１であり、その後、１０日まで、追加の粒子が、１：１から１：１０の最終的な比率で（添加の日の細胞数に基づく）毎日または１日おきに細胞に添加される。１つの特定の実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、刺激の１日目に１：１であり、刺激の３日目および５日目に１：５に調整される。別の実施形態において、粒子は、毎日または１日おきに添加され、１日目に１：１の最終的な比率に、刺激の３日目および５日目に１：５にする。別の実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、刺激の１日目に２：１であり、刺激の３日目および５日目に１：１０に調整される。別の実施形態において、粒子は、毎日または１日おきに添加され、１日目に１：１の最終的な比率に、刺激の３日目および５日目に１：１０にする。当業者は、様々な他の比率が、本発明の開示で使用するのに適している可能性があることを理解しているものと予想される。特に、比率は、粒度および細胞のサイズおよびタイプに応じて様々であると予想される。
本発明の開示のさらなる実施形態において、細胞、例えばＴ細胞を、薬剤でコーティングされたビーズと合わせ、その後、ビーズおよび細胞を分離し、次いで細胞を培養する。代替の実施形態において、培養の前に、薬剤でコーティングされたビーズおよび細胞を分離しないが、一緒に培養する。さらなる実施形態において、まず磁力などの力の適用によってビーズおよび細胞を濃縮し、その結果として細胞表面マーカーのライゲーションを増加させ、それによって細胞の刺激を誘導する。
一例として、細胞表面タンパク質は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８が取り付けられている常磁性ビーズ（３×２８個のビーズ）をＴ細胞と接触させることによってライゲートさせることができる。一実施形態において、細胞（例えば、１０４から１０９個のＴ細胞）およびビーズ（例えば、１：１の比率のＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔ常磁性ビーズ）を、緩衝液中で、好ましくはＰＢＳ（カルシウムおよびマグネシウムなどの２価カチオンを含まない）中で合わせる。ここでも当業者は、あらゆる細胞濃度が使用できることを容易に理解することができる。例えば、標的細胞は、サンプル中で非常に希少であってもよいし、サンプルの０．０１％を構成するだけでもよく、またはサンプル全体（すなわち、１００％）が目的の標的細胞で構成されていてもよい。したがって、あらゆる細胞数が、本発明の開示の内容に含まれる。特定の実施形態において、粒子および細胞が一緒に混合される体積を有意に減少させて（すなわち、細胞の濃度を増加させて）、細胞と粒子との最大の接触を確実にすることが望ましい場合がある。例えば、一実施形態において、１ｍｌ当たり細胞約２０億個の濃度が使用される。別の実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１億個より多くが使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり、細胞１０００万個、１５００万個、２０００万個、２５００万個、３０００万個、３５００万個、４０００万個、４５００万個、または５０００万個の細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態において、１ｍｌ当たり、細胞７５００万個、８０００万個、８５００万個、９０００万個、９５００万個、または１億個の細胞濃度が使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１億２５００万個または１億５０００万個の濃度が使用されてもよい。高濃度の使用は、細胞収量の上昇、細胞の活性化、および細胞の増加をもたらすことができる。さらに、高い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原の発現が弱い可能性がある細胞、例えばＣＤ２８陰性Ｔ細胞のより効率的な捕捉を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有する可能性があり、特定の実施形態において入手が望ましいと予想される。例えば、高濃度の細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が比較的弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
本発明の開示の一実施形態において、混合物は、数時間（約３時間）から約１４日にわたり、またはその間の整数値のいずれかの時間で培養することができる。別の実施形態において、混合物は、２１日間培養することができる。本開示の一実施形態において、ビーズおよびＴ細胞は、約８日間、一緒に培養される。別の実施形態において、ビーズおよびＴ細胞は、２～３日間、一緒に培養される。Ｔ細胞の培養時間を６０日またはそれより長くできるように、数サイクルの刺激が望ましい場合もある。Ｔ細胞培養に適切な条件としては、血清（例えば、ウシ胎児またはヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦβ、およびＴＮＦ－αなどの増殖および生存に必要な因子、または当業者公知の細胞増殖のための他のあらゆる添加剤を含有していてもよい適切な培地（例えば、最小必須培地またはＲＰＭＩ培地１６４０または、Ｘ－ｖｉｖｏ１５（Ｌｏｎｚａ））が挙げられる。細胞増殖のための他の添加剤としては、これらに限定されないが、界面活性剤、プラスマネート、ならびにＮ－アセチル－システインおよび２－メルカプトエタノールなどの還元剤が挙げられる。培地としては、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、およびビタミンが添加された、無血清か、または適切な量の血清（または血漿）または既定されたセットのホルモン、および／またはＴ細胞の増殖および増加に十分な量のサイトカインが補充されたかのいずれかの、ＲＰＭＩ１６４０、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α－ＭＥＭ、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ １５、およびＸ－Ｖｉｖｏ ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを挙げることができる。抗生物質、例えば、ペニシリンおよびストレプトマイシンは、実験培養でのみ含まれ、対象に注入しようとする細胞の培養には含まれない。標的細胞は、増殖を支持するのに必要な条件下で、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）および雰囲気（例えば、空気に加えて５％ＣＯ２）下で維持される。
様々な刺激時間に曝露されたＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。例えば、典型的な血液またはアフェレーシスを受けた末梢血単核細胞生成物は、細胞傷害性またはサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より大きいヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。エクスビボでのＣＤ３およびＣＤ２８受容体を刺激することによるＴ細胞の増加は、約８～９日目の前、主としてＴＨ細胞からなるＴ細胞の集団を産生するが、約８～９日目の後、Ｔ細胞の集団は、より一層大きいＴＣ細胞の集団を含む。したがって、処置の目的に応じて、主としてＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが、有利な場合がある。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的なサブセットが単離された場合、このサブセットをより高度に増加させることが有益な場合がある。
さらに、ＣＤ４およびＣＤ８マーカーに加えて、細胞増加プロセスの経過中、他の表現型マーカーは、顕著に、ただし大部分は再現性よく変化する。したがって、このような再現性は、活性化Ｔ細胞生成物を特定の目的に合わせる能力を可能にする。
６．６ 組成物
本開示の抗グリコＣＤ４４抗体、融合タンパク質、および／または抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣは、抗グリコＣＤ４４抗体、融合タンパク質および／またはＡＤＣ、ならびに１つまたは複数の担体、賦形剤および／または希釈剤を含む組成物の形態であってもよい。組成物は、特定の使用のために、例えば、獣医学的な使用またはヒトでの医薬的な使用のために製剤化されてもよい。使用される組成物（例えば、乾燥粉末、液体配合物など）ならびに賦形剤、希釈剤および／または担体の形態は、抗体、融合タンパク質および／またはＡＤＣの意図される使用によって、さらに治療的使用、投与様式ごとに決まると予想される。
治療的使用の場合、組成物は、医薬的に許容される担体を含む滅菌された医薬組成物の一部として供給されてもよい。この組成物は、あらゆる好適な形態であり得る（患者にそれを投与する望ましい方法に応じて）。医薬組成物は、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、クモ膜下、外用または局所などの様々な経路によって患者に投与することができる。いずれかの所与の場合における最も好適な投与経路は、特定の抗体および／またはＡＤＣ、対象、ならびに対象の疾患および身体的な状態の性質および重症度によって決まると予想される。典型的には、医薬組成物は、静脈内または皮下投与されると予想される。
医薬組成物は、１用量当たり予め決定された量の本開示の抗グリコＣＤ４４抗体および／または抗グリコＣＤ４４ ＡＤＣを含有する単位剤形で都合よく提供することができる。単位用量に含まれる抗体および／またはＡＤＣの量は、処置されている疾患、加えて当業界において周知の他の要因によって決まると予想される。このような単位投薬は、単回投与に好適な抗体および／またはＡＤＣの量を含有する凍結乾燥された乾燥粉末の形態であってもよいし、または液体の形態であってもよい。乾燥粉末の単位剤形は、キット中に、シリンジ、好適な量の希釈剤および／または投与に有用な他の成分と共にパッケージ化されていてもよい。液体形態での単位投薬は、単回投与に好適な量の抗体および／またはＡＤＣで予め充填されたシリンジの形態で都合よく供給することができる。
医薬組成物はまた、複数回投与に好適な量の抗体および／またはＡＤＣを含有するバルクの形態で供給されてもよい。
医薬組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液として貯蔵するために、望ましい純度を有する抗体、融合タンパク質、および／またはＡＤＣを、当業界において典型的に採用される任意選択の医薬的に許容される担体、賦形剤または安定剤（これらは全て、本明細書では「担体」と称される）、すなわち、緩衝剤、安定化剤、保存剤、等張化剤、非イオン性デタージェント、抗酸化剤、および他の混成の添加剤と混合することによって調製してもよい。Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed.1980)を参照されたい。このような添加剤は、受容者に対して、採用された投薬および濃度で非毒性であるべきである。
緩衝剤は、ｐＨを生理学的条件に近い範囲に維持することを助ける。緩衝剤は、様々な濃度で存在していてもよいが、典型的には約２ｍＭから約５０ｍＭの範囲の濃度で存在すると予想される。本発明の開示で使用するために好適な緩衝剤としては、例えば、クエン酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム－クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸三ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸緩衝液（例えば、コハク酸－コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸－水酸化ナトリウム混合物、コハク酸－コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸緩衝液（例えば、酒石酸－酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸－酒石酸カリウム混合物、酒石酸－水酸化ナトリウム混合物など）、フマル酸緩衝液（例えば、フマル酸－フマル酸一ナトリウム混合物、フマル酸－フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム－フマル酸二ナトリウム混合物など）、グルコン酸緩衝液（例えば、グルコン酸－グルコン酸ナトリウム（sodium glyconate）混合物、グルコン酸－水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸－グルコン酸カリウム（potassium glyuconate）混合物など）、シュウ酸緩衝液（例えば、シュウ酸－シュウ酸ナトリウム混合物、シュウ酸－水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸－シュウ酸カリウム混合物など）、乳酸緩衝液（例えば、乳酸－乳酸ナトリウム混合物、乳酸－水酸化ナトリウム混合物、乳酸－乳酸カリウム混合物など）および酢酸緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム混合物、酢酸－水酸化ナトリウム混合物など）などの、有機および無機酸の両方ならびにその塩が挙げられる。加えて、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液およびトリメチルアミン塩、例えばトリスを使用することができる。
微生物の増殖を妨害するために、保存剤が添加されていてもよく、約０．２％～１％（ｗ／ｖ）の範囲の量で添加することができる。本発明の開示で使用するために好適な保存剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ベンザルコニウムハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、およびヨウ化物）、塩化ヘキサメトニウム、ならびにアルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レソルシノール、シクロヘキサノール、および３－ペンタノールが挙げられる。等張化剤は、時には「安定剤」としても公知であり、本発明の開示の液体組成物の等張性を確実にするために添加することができ、その例としては、多価糖アルコール、例えば３水酸基またはそれより多くの水酸基を有する糖アルコール、例えばグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールが挙げられる。安定剤は、機能の点で、増量剤から、治療剤を可溶化したり、または変性もしくは容器壁への接着の防止を助けたりする添加剤に及び得る賦形剤の広範なカテゴリーを指す。典型的な安定剤は、多価糖アルコール（上記で列挙されたもの）；例えば、アルギニン、リシン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなどのアミノ酸、例えばラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイノシトール（myoinisitol）、ガラクチトール、グリセロールなど、ならびにイノシトールなどのシクリトールなどの有機糖または糖アルコール；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウムなどの硫黄を含有する還元剤；低分子量のポリペプチド（例えば、１０残基またはそれより少ない残基のペプチド）；例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；例えば、ポリビニルピロリドン単糖、例えばキシロース、マンノース、フルクトース、グルコースなどの親水性ポリマー；例えば、ラクトース、マルトース、スクロースおよびトレハロースなどの二糖；ならびにラフィノースなどの三糖（trisaccacharide）；ならびに例えば、デキストランなどの多糖であり得る。安定剤は、ＡＤＣの重量に対して０．５～１０ｗｔ％の範囲の量で存在していてもよい。
非イオン界面活性剤またはデタージェント（「湿潤剤」としても公知）は、糖タンパク質の可溶化を助けることに加えて、撹拌により誘発される凝集から糖タンパク質を保護するために添加されてもよく、それにより、タンパク質変性を引き起こすことなく配合物がストレスを受けた剪断面に曝されることも許容する。好適な非イオン界面活性剤としては、ポリソルベート（２０、８０など）、ポロキサマー（polyoxamer）（１８４、１８８など）、およびプルロニックポリオールが挙げられる。非イオン界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば約０．０７ｍｇ／ｍＬから約０．２ｍｇ／ｍＬの範囲で存在していてもよい。
追加の混成の賦形剤としては、増量剤（例えば、デンプン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、および共溶媒が挙げられる。
６．７ 使用方法
本明細書に記載される抗グリコＣＤ４４抗体または結合フラグメントは、様々な診断アッセイで使用することができる。例えば、抗体および結合フラグメントは、イムノアッセイ、例えば競合結合アッセイ、直接および間接サンドイッチアッセイ、ならびに免疫沈降アッセイ、例えば、免疫組織化学法、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、およびウェスタンブロットなどで採用することができる。
本明細書に記載される抗グリコＣＤ４４抗体または結合フラグメントはまた、インビボの放射線撮影画像化にも有用であり、その場合、放射線不透過性の薬剤または放射線同位体などの検出可能な部分で標識された抗体が、対象に、好ましくは血流に投与され、標識された抗体の宿主中の存在および位置がアッセイされる。この画像化技術は、悪性腫瘍の病期分類および処置において有用である。
本明細書に記載される抗グリコＣＤ４４抗体または結合フラグメント、融合タンパク質、ＡＤＣおよびＣＡＲは、グリコＣＤ４４を発現するがん、例えば、乳がん、肺がん、膵臓がん、結腸直腸がん、卵巣がん、胃がん、または頭頸部がん、皮膚がん、悪性黒色腫、肝臓がん、神経膠腫、甲状腺がん、腎臓がん、前立腺がんおよび他の泌尿生殖器がん、子宮頸がん、ならびに子宮内膜がんなどを処置するのに有用である。
したがって、本開示は、例えば、がん、例えば前の段落で同定されたがんのいずれかの処置で使用するための医薬として使用するための、診断アッセイで使用するための、および放射線写真のインビボにおける画像化で使用するための、本明細書に記載される抗グリコＣＤ４４抗体、結合フラグメント、融合タンパク質、ＡＤＣ、およびＣＡＲを提供する。本開示は、さらに、例えば、がん、例えば前の段落で同定されたがんのいずれかの処置のための医薬品の製造における、本明細書に記載される抗グリコＣＤ４４抗体、結合フラグメント、融合タンパク質、ＡＤＣおよびＣＡＲの使用を提供する。
療法に本開示のＣＡＲを使用する場合、本開示の治療方法は、グリコＣＤ４４を発現する腫瘍を有する対象に、本開示のＣＡＲ、例えばセクション６．３または番号付けされた実施形態３９５から４２９に記載されるＣＡＲを発現するように改変された遺伝子改変された細胞の有効量を投与することを含む。ＣＡＲを発現するように細胞、特にＴ細胞を改変する方法は、セクション６．５．１に記載されている。
療法に本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙを使用する場合、本開示の治療方法は、グリコＣＤ４４を発現する腫瘍に、治療有効量の本開示のＭｉｃＡｂｏｄｙ、例えば、セクション６．４または番号付けされた実施形態３９１～３９４に記載されるＭｉｃＡｂｏｄｙ、およびＭｉｃＡｂｏｄｙに特異的に結合することが可能なＮＫＧ２Ｄ受容体を含むＣＡＲを発現するように改変された遺伝子改変されたＴ細胞を対象に投与することを含む。
６．８ ＣＤ４４ｖ６ペプチド
アミノ酸ＧＹＲＱＴＰＫＥＤＳＨＳＴＴＧＴＡＡＡ（配列番号１６５）を含む単離されたＣＤ４４ｖ６糖ペプチド、またはそのフラグメントも本明細書で提供される。一部の実施形態において、ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドは、太字と下線の文字で示したセリンおよびスレオニン残基（すなわち、配列番号１６５のアミノ酸位置５におけるスレオニンおよび／または配列番号１６５のアミノ酸位置１２におけるセリン）においてＧａｌＮＡｃでグリコシル化されており、またはそのフラグメントである。例示的な単離されたＣＤ４４ｖ６糖ペプチドは、番号付けされた実施形態５３４～５３９に記載される。
本発明の開示は、単離されたＣＤ４４ｖ６糖タンパク質の合成的な合成および単離されたＣＤ４４ｖ６糖タンパク質を生産するための組換え方法を包含する。
特定の実施形態において、単離されたＣＤ４４ｖ６ペプチドは、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）戦略を使用して合成される。ＳＰＰＳ方法は、当業界において公知である。ＳＰＰＳは、固体支持体上でのアミノ酸誘導体の連続する反応を介したポリペプチドの迅速な集合をもたらす。交互のＮ末端脱保護およびカップリング反応の繰り返しのサイクルを介して、連続するアミノ酸誘導体がポリペプチドに付加される。他の実施形態において、単離されたＣＤ４４ｖ６ペプチドは、液相ペプチド合成戦略を使用して合成される。液相ペプチド合成方法は、当業界において公知である。
配列番号１６５のアミノ酸位置５におけるスレオニンおよび配列番号１６５のアミノ酸位置１２におけるセリンにおけるＧａｌＮＡｃでの適切なＯ結合型グリコシル化を確実にするために、セクション７．１．２．１に記載されたように、伸長反応において予備合成されたグリコシル化アミノ酸を使用してもよい。
単離されたＣＤ４４ｖ６糖ペプチドをコード化する核酸分子、このような核酸を含むベクター、および本開示の単離されたＣＤ４４ｖ６糖ペプチドを生産することが可能な宿主細胞が提供される。特定の態様において、核酸分子は、単離されたＣＤ４４ｖ６糖ペプチド、加えて、単離されたＣＤ４４ｖ６糖タンパク質を含む融合タンパク質をコードし、宿主細胞は、それを発現することが可能である。
本開示の単離されたＣＤ４４ｖ６糖ペプチドは、宿主細胞での組換え発現によって調製することができる。単離されたＣＤ４４ｖ６糖ペプチドを組換え発現させるために、宿主細胞で糖ペプチドが発現され、任意選択で宿主細胞が培養される培地に分泌されるように、宿主細胞に、糖ペプチドをコードするＤＮＡを有する組換え発現ベクターをトランスフェクトし、その培地から糖タンパク質を回収することができる。標準組換えＤＮＡ手法を使用して、ＣＤ４４ｖ６糖タンパク質遺伝子を得て、その遺伝子を組換え発現ベクターに組み込み、宿主細胞に、例えば、Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition (Sambrook, Fritsch and Maniatis (eds), Cold Spring Harbor, N. Y., 1989), Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, F. M. et al., eds., Greene Publishing Associates, 1989)および米国特許第４，８１６，３９７号明細書に記載される宿主細胞にベクターを導入する。
原核または真核宿主細胞のいずれかで本開示の抗体を発現させることが可能である。特定の実施形態において、抗体の発現は、真核細胞で、例えば、適切にフォールディングされた免疫学的に活性な抗体の最適な分泌のための哺乳類宿主細胞で実行される。本開示の単離されたＣＤ４４ｖ６糖タンパク質を生産するために、宿主細胞は、配列番号１６５のアミノ酸位置５におけるスレオニンおよび配列番号１６５のアミノ酸位置１２におけるセリンをグリコシル化するその能力に基づいて選択される。例示的な宿主細胞は、ＣＯＳＭＣ ＫＯ ＨＥＫ２９３細胞である。
６．８．１．ＣＤ４４ｖ６ペプチド組成物
本開示のＣＤ４４ｖ６ペプチドは、ＣＤ４４ｖ６ペプチドおよび１種または複数の担体、賦形剤、希釈剤および／もしくはアジュバントを含む組成物の形態であってもよい。組成物は、具体的な使用のために、例えば獣医学的な使用またはヒトにおける製薬での使用のために製剤化されてもよい。使用される組成物の形態（例えば、乾燥粉末、液体配合物など）ならびに賦形剤、希釈剤および／または担体は、抗体、融合タンパク質および／またはＡＤＣの意図した使用、さらには治療的使用、投与様式に依存すると予想される。
治療的使用の場合、組成物は、医薬的に許容される担体および／または医薬的に許容されるアジュバントを含む滅菌医薬組成物の一部として供給されてもよい。この組成物は、あらゆる好適な形態（それを患者に投与する所望の方法に応じて）であってもよい。医薬組成物は、様々な経路によって、例えば、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、クモ膜下、外用または局所的に患者に投与することができる。いずれの所与のケースにおける最も好適な投与経路は、特定のＣＤ４４ｖ６ペプチド、対象、ならびに疾患の性質および重症度、ならびに対象の身体的な状態に依存すると予想される。典型的には、医薬組成物は、静脈内または皮下に投与されると予想される。
医薬組成物は、都合のよい形態としては、１用量当たり予め決定された量の本開示のＣＤ４４ｖ６ペプチドを含有する単位剤形で存在していてもよい。単位用量に含まれるＣＤ４４ｖ６ペプチドの量は、処置されている疾患、加えて、当業界において周知の他の要因に依存すると予想される。このような単位投薬量は、単回投与に好適なＣＤ４４ｖ６ペプチドの量を含有する凍結乾燥した乾燥粉末の形態であってもよいし、または液体の形態であってもよい。乾燥粉末の単位剤形は、シリンジ、好適な量の希釈剤および／または投与に有用な他の成分と共にキット中にパッケージ化されていてもよい。液体形態での単位投薬量は、都合のよい形態としては、単回投与に好適な量のＣＤ４４ｖ６ペプチドで予め充填されたシリンジの形態で供給されてもよい。
医薬組成物はまた、複数回投与に好適な多量のＣＤ４４Ｖ６ペプチドを含有するバルクの形態で供給されてもよい。
医薬組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液として貯蔵するために、所望の純度を有するＣＤ４４ｖ６ペプチドを、当業界において典型的に採用される任意選択の医薬的に許容される担体、賦形剤、アジュバントまたは安定剤（これらは全て、本明細書では「担体」と称される）、すなわち、緩衝剤、安定化剤、保存剤、等張化剤、非イオン性デタージェント、抗酸化剤、および他の混成の添加剤と共に混合することによって調製してもよい。Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed. 1980)を参照されたい。このような添加剤は、レシピエントにとって採用された投薬量および濃度で非毒性であるべきである。
一部の実施形態において、組成物は、融合タンパク質および／またはナノ粒子に加えて、１つまたは複数の医薬的なアジュバントを含む。アジュバントとしては、例えば、アルミニウム塩（例えば、無定形ヒドロキシリン酸アルミニウム硫酸塩（amorphous aluminum hydroxyphosphate sulfate；ＡＡＨＳ）、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム（アラム））、ｄｓＲＮＡアナログ、リピドＡアナログ、フラジェリン、イミダゾキノリン、ＣｐＧ ＯＤＮ、サポニン（例えば、ＱＳ２１）、Ｃ型レクチンリガンド（例えば、ＴＤＢ）、ＣＤ１ｄリガンド（α－ガラクトシルセラミド）、ＭＦ５９、ＡＳ０１、ＡＳ０２、ＡＳ０３、ＡＳ０４、ＡＳ１５、ＡＦ０３、ＧＬＡ－ＳＥ、ＩＣ３１、ＣＡＦ０１、およびビロソームが挙げられる。また、当業界において公知の他のアジュバント、例えば化学的なアジュバント、遺伝学的なアジュバント、タンパク質アジュバント、および脂質アジュバントなども組成物に含まれていてもよい。
緩衝剤は、ｐＨを生理学的条件に近い範囲に維持することを助ける。緩衝剤は、様々な濃度で存在していてもよいが、典型的には約２ｍＭ～約５０ｍＭの範囲の濃度で存在すると予想される。本発明の開示との使用のための好適な緩衝剤としては、例えば、クエン酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム－クエン酸ニナトトリウム混合物、クエン酸－クエン酸三ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸緩衝液（例えば、コハク酸－コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸－水酸化ナトリウム混合物、コハク酸－コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸緩衝液（例えば、酒石酸－酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸－酒石酸カリウム混合物、酒石酸－水酸化ナトリウム混合物など）、フマル酸緩衝液（例えば、フマル酸－フマル酸一ナトリウム混合物、フマル酸－フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム－フマル酸二ナトリウム混合物など）、グルコン酸緩衝液（例えば、グルコン酸－グルコン酸ナトリウム（sodium glyconate）混合物、グルコン酸－水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸－グルコン酸カリウム（potassium glyuconate）混合物など）、シュウ酸緩衝液（例えば、シュウ酸－シュウ酸ナトリウム混合物、シュウ酸－水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸－シュウ酸カリウム混合物など）、乳酸緩衝液（例えば、乳酸－乳酸ナトリウム混合物、乳酸－水酸化ナトリウム混合物、乳酸－乳酸カリウム混合物など）および酢酸緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム混合物、酢酸－水酸化ナトリウム混合物など）などの、有機および無機の酸の両方、ならびにそれらの塩が挙げられる。加えて、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液およびトリメチルアミン塩、例えばトリスを使用することができる。
微生物の増殖を妨害するために、保存剤が添加されていてもよく、約０．２％～１％（ｗ／ｖ）の範囲の量で添加することができる。本発明の開示で使用するために好適な保存剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ベンザルコニウムハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、およびヨウ化物）、塩化ヘキサメトニウム、およびアルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レソルシノール、シクロヘキサノール、ならびに３－ペンタノールが挙げられる。等張化剤は、時には「安定剤」としても公知であり、本発明の開示の液体組成物の等張性を確実にするために添加することができ、その例としては、多価糖アルコール、例えば３水酸基またはそれより多くの水酸基を有する糖アルコール、例えばグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールが挙げられる。安定剤は、賦形剤の広義のカテゴリーを指し、これは、増量剤から、治療剤を可溶化したり、または変性または容器壁への接着の防止を助けたりする添加剤まで機能面で様々なものであり得る。典型的な安定剤は、多価糖アルコール（上記列挙されたもの）；例えば、アルギニン、リシン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなどのアミノ酸、例えば、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイノシトール、ガラクチトール、グリセロールなど、例えばイノシトールなどのシクリトールなどの有機糖または糖アルコール；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウムなどの硫黄を含有する還元剤；低分子量ポリペプチド（例えば、１０残基またはそれより少ない残基のペプチド）；例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；例えば、ポリビニルピロリドン単糖などの親水性ポリマー、例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース；例えば、ラクトース、マルトース、スクロースおよびトレハロースなどの二糖；ならびに例えば、ラフィノースなどの三糖；ならびに例えば、デキストランなどの多糖であり得る。安定剤は、ＣＤ４４ペプチドの重量に対して０．５～１０ｗｔ％の範囲の量で存在していてもよい。
非イオン界面活性剤またはデタージェント（「湿潤剤」としても公知）は、糖タンパク質の可溶化を助けることに加えて、撹拌により誘発される凝集から糖タンパク質を保護するために添加されてもよく、それにより、タンパク質変性を引き起こすことなく配合物がストレスを受けた剪断面に曝されることも許容する。好適な非イオン界面活性剤としては、ポリソルベート（２０、８０など）、ポロキサマー（ｐｏｌｙｏｘａｍｅｒ）（１８４、１８８など）、およびプルロニックポリオールが挙げられる。非イオン界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．０７ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬの範囲で存在していてもよい。
追加の混成の賦形剤としては、増量剤（例えば、デンプン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、および共溶媒が挙げられる。
本開示の例示的なＣＤ４４ｖ６ペプチド組成物は、番号付けされた実施形態５４０～５４１に記載される。
６．８．２．ＣＤ４４ｖ６ペプチドの使用方法
本明細書に記載されるＣＤ４４ｖ６ペプチドは、ＣＤ４４ｖ６の腫瘍関連形態に対する抗体の生産において使用することができる。ＣＤ４４ｖ６ペプチドは、動物に投与することができる。投与されるペプチドの量は、動物にペプチドに対する抗体を生産させる程度に有効であってもよい。「動物」は、本明細書で使用される場合、生物学上の動物界からの多細胞性真核生物を指す。一部の実施形態において、動物は、哺乳動物である。一部の実施形態において、動物は、マウスまたはウサギである。次いで得られた抗体は、動物から収集することができる。ＣＤ４４ｖ６ペプチドは、精製されたペプチドとして、または本明細書で提供される組成物の一部として投与することができる。
本明細書に記載されるＣＤ４４ｖ６ペプチドは、ＣＤ４４ｖ６の腫瘍関連の形態に対する免疫応答を惹起するために使用することができる。ＣＤ４４ｖ６ペプチドは、動物がペプチドに対する免疫応答を開始させる（例えば、抗体を生産する）のに有効な量で動物に投与することができる。
本開示のＣＤ４４ｖ６ペプチドを使用するための例示的な方法は、番号付けされた実施形態５４２～５４５に記載される。
７．実施例
７．１ 実施例１：抗グリコＣＤ４４抗体の同定および特徴付け
７．１．１．概要
グリカンは、必須の膜成分であり、ヒト細胞の新生物性形質転換は、実質的に常に、タンパク質および脂質の異常なグリコシル化に関連する。数種のタイプのタンパク質グリコシル化があり、その例としては、Ｎ－グリコシル化および多くのタイプのＯ－グリコシル化が挙げられるが、最も多様なタイプの１つは、ムチンタイプのＧａｌＮＡｃタイプＯ－グリコシル化（以降Ｏ－グリコシル化と称する）である。Ｏ－グリカンにおけるがんに関連する変化が特に興味深く、最も高頻度で観察される異常なグリコフェノタイプ（glycophenotype）は、Ｔｎ（ＧａｌＮＡｃα１－Ｏ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）、ＳＴｎ（ＮｅｕＡｃα２－６ＧａｌＮＡｃα１－Ｏ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）、およびＴ（Ｇａｌβ１－３ＧａｌＮＡｃα１－Ｏ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）抗原と名付けられた最も未成熟な短縮化されたＯ－グリカン構造の発現である。短縮化されたＯ－グリカンは、ほとんど全ての上皮がん細胞上で観察され、予後不良と強く相関する。加えて、グリカンもがん発生において重要な役割を有しており、癌化しやすい細胞において、短縮化されたＯ－グリカンは、分化、細胞間および細胞－マトリックス相互作用に影響を及ぼし、腫瘍形成性の特徴を直接的に誘導することが明らかになりつつある。
発明者らは、ヒトがん細胞においてＣＤ４４糖ペプチドエピトープを同定し、定義された糖ペプチドを使用して、がん特異的な抗グリコＣＤ４４モノクローナル抗体を開発した。
７．１．２．材料および方法
７．１．２．１ ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドの合成
太字と下線の文字で示したセリンおよびスレオニン残基にＯ結合型ＧａｌＮＡｃを有するＣＤ４４ｖ６糖ペプチド、ＧＹＲＱＴＰＫＥＤＳＨＳＴＴＧＴＡＡＡ（配列番号１６５）を、標準的なＦＭＯＣペプチド合成戦略を使用して合成した。予備合成されたグリコシル化アミノ酸を、段階的な様式で、固相または液相ペプチド化学を使用して、特異的な位置で伸長するペプチドにカップリングした。完全配列を仕上げ、全ての保護基を除去した後、得られた糖ペプチドを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって精製し、質量分析（ポジティブモードでのエレクトロスプレーイオン化）によって特徴付けた。
７．１．２．２ 組換えＴｎグリコシル化ＣＤ４４の合成
３０ｍＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ中の１×１０６個のＣＯＳＭＣ ＫＯ ＨＥＫ２９３細胞に、３０μｇのｈｉｓタグを有するヒトＣＤ４４をコードするプラスミドおよび６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（商標）トランスフェクション試薬（Ｇｉｂｃｏ）を使用してトランスフェクトした。４８時間の培養後、細胞を遠沈させ、ｈｉｓタグを有する組換えＣＤ４４タンパク質を、５０％のＮｉ－ＮＴＡアガローススラリーカラム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、２５０ｍＭイミダゾールで溶出させることにより、上清から精製した。純度を高めるために、この精製工程を繰り返した。組換えＳＣ－ＣＤ４４タンパク質を、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心フィルターを使用して、ＰＢＳ中で濃縮した。
７．１．２．３ 免疫化プロトコール
雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを、グルタルアルデヒドリンカーを介してＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシニアン）にコンジュゲートしたＴｎグリコシル化ＣＤ４４ｖ６糖ペプチド、または組換えＴｎグリコシル化ＣＤ４４で、皮下で免疫化した。マウスを、０、１４、および３５日目に、それぞれ５０μｇ、４５μｇ、および４５μｇのＫＬＨ－糖ペプチドで免疫化した。第１の免疫化は、フロイント完全アジュバントを使用した。全ての後続の免疫化は、フロイント不完全アジュバントを使用した。４５日目に、ポリクローナル応答のために、尾部からの採血を評価した。５６日目またはその後に、融合しようとするマウスを、ハイブリドーマ融合の３～５日前に、フロイント不完全アジュバント中の１５ｕｇのＫＬＨ－糖ペプチドでブーストした。マウスからの脾細胞を、ＢＴＸ Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓからのエレクトロセルマニピュレーター（ＥＣＭ２００１）を使用して、ＳＰ２／０－Ａｇ１４（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ－１５８１）骨髄腫細胞と融合した。ハイブリドーマを９６ウェルプレートに植え付け、培養し、かき取り、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、および免疫蛍光法を使用して、ＣＤ４４－Ｔｎに対する特異性に関して評価し選択して、ＣＤ４４－Ｔｎへの特異性を有するモノクローナル抗体を得た。
ニュージーランドホワイトウサギを、グルタルアルデヒドリンカーを介してＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシニアン）にコンジュゲートしたＴｎグリコシル化ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドで、または組換えＴｎグリコシル化ＣＤ４４で、皮下で免疫化した。マウスを、０、２８、および４７日目に、それぞれ２００μｇ、１００μｇ、および１００μｇのＫＬＨ－糖ペプチドで免疫化した。第１の免疫化は、フロイント完全アジュバントを使用した。全ての後続の免疫化は、フロイント不完全アジュバントを使用した。５８日目に、ポリクローナル応答のために試験採血を評価した。６６日目またはその後に、融合しようとするマウスを、ハイブリドーマ融合の３～５日前に、フロイント不完全アジュバント中の５０ｕｇのＫＬＨ－糖ペプチドでブーストした。ウサギからの脾細胞を、ＢＴＸ Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓからのエレクトロセルマニピュレーター（ＥＣＭ２００１）を使用して、ＳＰ２／０－Ａｇ１４（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ－１５８１）骨髄腫細胞と融合した。ハイブリドーマを９６ウェルプレートに植え付け、培養し、かき取り、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、および免疫蛍光法を使用して、ＣＤ４４－Ｔｎに対する特異性に関して評価し選択して、ＣＤ４４－Ｔｎへの特異性を有するモノクローナル抗体を得た。
７．１．２．４ ＥＬＩＳＡ
９６ウェルのＣｏｒｎｉｎｇ高結合マイクロプレート（Ｆｉｓｈｅｒ）を、０．２Ｍ重炭酸－炭酸緩衝液（ｐＨ９．４）中の様々な濃度のタンパク質、ペプチド、または糖ペプチドで、４℃で一晩コーティングした。次いでプレートを、２．５％ＢＳＡを含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）で、室温で１時間ブロックした。プレートの内容物を捨て、精製した抗体、またはハイブリドーマ上清、またはポリクローナル応答のための血清を様々な濃度で添加し、室温で２時間インキュベートした。プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０と共にトリス緩衝生理食塩水で洗浄し、次いで、ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧＦｃγ（Ｓｉｇｍａ）の１：３０００希釈物と共に、室温で１時間インキュベートした。プレートを再び洗浄し、ＴＭＢクロモゲン基質で展開した。適度に展開させた後（およそ２～３分）、反応を０．２ＮのＨ２ＳＯ４で止め、吸光度を４５０ｎｍで読んだ。データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアで分析した。
７．１．２．５ フローサイトメトリー
接着細胞をＴｒｙｐＬＥセレクト（Ｇｉｂｃｏ）で解離させ、細胞培養培地（ＲＰＭＩ ｗ／Ｌ－グルタミン、１％ＰｅｎＳｔｒｅｐ、および１０％ＦＢＳ）を用いてフラスコ表面から洗い落とした。４℃、３００×ｇで５分遠心分離し、続いて１％ＢＳＡを含むＰＢＳ（ＰＢＳ／１％ＢＳＡ）中に再懸濁することによって、細胞を数回洗浄した。細胞を、細胞５×１０５個／ｍｌ～細胞２×１０６個／ｍｌで再懸濁し、次いで９６ウェルのＵ底プレートに分配した。希釈した市販の抗体（０．２５～２ｕｇ／ｍｌ）、またはハイブリドーマ上清、またはポリクローナル応答のための血清を細胞に添加し、氷上で１時間インキュベートした。ＰＢＳ／１％ＢＳＡで数回洗浄した後、細胞を、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７コンジュゲートＦ（ａｂ）２ヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃγ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）の１：１６００希釈物と共に、氷上で３０分インキュベートした。細胞を、ＰＢＳ／１％ＢＳＡで再び洗浄し、次いでＰＢＳ／１％ＢＳＡ中の１％ホルムアルデヒド中で固定した。細胞を、２または４レーザーＡｔｔｕｎｅ ＮＸＴフローサイトメーターのいずれかで分析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアでデータを加工した。
７．１．２．６ 免疫蛍光法
細胞を、ガラスチャンバースライド（ｎｕｎｃ）に５０％の密集度に植え付け、５％ＣＯ２、３７℃で１２～１８時間インキュベートした。一晩増殖させた後、スライドからの培地を除去し、細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の４％ホルムアルデヒドで、室温で１０分固定した。スライドをＰＢＳ中で洗浄した。希釈した市販の抗体（１～４ｕｇ／ｍｌ）、またはハイブリドーマ上清、またはポリクローナル応答のための血清をスライドに添加し、スライドを４℃で一晩インキュベートした。スライドをＰＢＳ中で洗浄し、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲートＦ（ａｂ）２ウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の１：８００希釈物で、室温で４５分染色した。スライドをＰＢＳ中で洗浄し、ＤＡＰＩを備えたＰｒｏｌｏｎｇ Ｇｏｌｄ Ａｎｔｉｆａｄｅ Ｍｏｕｎｔａｎｔ（ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）を使用してマウントし、オリンパス株式会社のＦＶ３０００共焦点顕微鏡を使用して検査した。
７．１．２．７ 免疫組織化学
パラフィン包埋された組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）または組織切片のパラフィンを、キシレンおよびエタノールを用いて除去し、続いてクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で抗原を回復させ、マイクロ波で１８分加熱した。ＴＭＡを、Ｕｌｔｒａ Ｖｉｓｏｎ Ｑｕａｎｔｏ検出システムＨＲＰ ＤＡＢで染色した。簡単に言えば、ＴＭＡをＴＢＳ中で洗浄し、ｍＡｂ上清と共に２時間インキュベートした。ＴＢＳ×２で洗浄後、ＴＭＡを、一次抗体増幅器Ｑｕａｎｔｏで１０分インキュベートした。ＴＢＳ中で洗浄した後、ＴＭＡをＨＲＰポリマーｑｕａｎｔｏと共にインキュベートし（１０分）、続いてＤＡＢクロモゲンと共にインキュベートした。スライドをヘマトキシリンで対比染色し、脱水し、マウントした。
７．１．３．結果
７．１．３．１ Ｔｎ－ＣＤ４４に対する糖ペプチド特異的抗体
糖ペプチド反応性抗体は、Ｔｎグリコシル化ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドおよび組換えＴｎグリコシル化ＣＤ４４の両方を使用して生成したが、４Ｃ８、２Ｂ２、１８Ｇ９、１Ｄ１２、および１０Ｈ４を含む、ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドを使用して生成した抗体は、選択性の点で優れていることが明らかになった。さらなる特徴付けのために、抗体４Ｃ８を選択した。
７．１．３．２ ｍＡｂ ４Ｃ８結合特異性の特徴付け
４Ｃ８の結合特異性を特徴付けるために、非グリコシル化およびＴｎグリコシル化ＣＤ４４に対するＥＬＩＳＡを実行した。Ｔｎ抗原との交差反応性を評価するために、Ｔｎグリコシル化ＭＵＣ１に対するＥＬＩＳＡも実行した。ＥＬＩＳＡに関して、４Ｃ８は、Ｔｎグリコシル化ＣＤ４４のみと反応し、その非グリコシル化対応物ともＭＵＣ１とも反応しなかったことが見出された（図１Ａ）。ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに対する４Ｃ８の親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅで測定した場合、１２８ｎＭと決定された。Ｏｃｔｅｔシステムを使用して、ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに対する４Ｃ８の見かけの親和性（結合力を考慮に入れて）が、７．９ｎＭであることが測定された（図１Ｂ）。表４は、ＣＤ４４ｖ６ペプチドの異なるグリコフォーム、加えて非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６およびＭＵＣ１－Ｔｎに対する４Ｃ８の解離定数（ＫＤ）を要約する。
Figure 2023516080000073
より天然の形態の状況における４Ｃ８の特異性をさらに評価するために、４Ｃ８を使用して、フローサイトメトリーおよび免疫蛍光法のためにＨａＣａＴ細胞を染色した。ケラチノサイト由来のＨａＣａＴ細胞株は、本来的にＴｎ陰性であるが、ＣＯＳＭＣシャペロンのＫＯによってＴｎ抗原を発現するように誘導することができる。４Ｃ８を使用してフローサイトメトリーのために染色したところ、両方の細胞がＣＤ４４ｖ６に関して陽性染色されるにもかかわらず、４Ｃ８は、ＣＯＳＭＣ ＫＯ ＨａＣａＴ細胞を選択的に染色したが、その野生型対応物を染色しなかったことが見出された（図１Ｃ）。４Ｃ８の反応性は、細胞がゴルジマーカーに関して染色陽性されなかったために、分泌経路中に局在するＴｎ陽性中間ＣＤ４４タンパク質の細胞内染色によるものと考えることはできなかった。これらの結果に一致して、免疫蛍光法は、ＣＤ４４ｖ６＋Ｔｎ＋ＨａＣａＴ ＣＯＳＭＣ ＫＯ細胞のみが４Ｃ８で染色され、それに対してＣＤ４４ｖ６＋Ｔｎ－ＨａＣａＴ ＷＴ細胞は染色されなかったことを示した（図１Ｄ）。加えて、ＨａＣａＴ細胞を使用して器官型インビトロ皮膚モデルを形成したところ、４Ｃ８はＣＯＳＭＣ ＫＯ皮膚のみを染色したが、野生型皮膚を染色しなかった（図１Ｅ）。他のＣＤ４４抗体を試験する臨床治験が重度の皮膚毒性を報告しているため、健康なヒト皮膚に結合する４Ｃ８も評価した。ヒト皮膚はＣＤ４４ｖ６に関して陽性染色されたが、４Ｃ８はヒト皮膚との反応性を示さなかったことが見出された（図１Ｆ）。総合すると、これらの結果は、４Ｃ８がＴｎグリコシル化ＣＤ４４と選択的に反応し、健康なヒト皮膚と交差反応しないことを実証する。
７．１．３．３ ４Ｃ８によって認識されたＴｎグリコシル化ＣＤ４４ｖ６エピトープの組織発現
免疫蛍光法のためにホルマリン固定されたパラフィン包埋組織切片を染色したところ、７／１０の肺、７／２４の卵巣、７／１４のＨＮＳＣＣ、３／１６の結腸、９／２０の胃、３／８の腎臓、および３／１０の乳がん切片において、４Ｃ８での陽性染色が観察された。加えて組織マイクロアレイの免疫組織化学は、４Ｃ８を使用して、結腸癌において２２／８９の強い染色および３８／８９の弱い染色、膵臓癌において４／２４の強い染色および１２／２４の弱い染色、肺癌において６／２２の強い染色および８／２２の弱い染色、乳癌において６／２６の強い染色および７／２６の弱い染色、ならびに前立腺癌において２／２４の弱い染色を示した（図２Ａ～２Ｂ）。この染色パターンは、正常なＣＤ４４発現の染色と相関していたことから、これらの癌腫におけるＣＤ４４発現は４Ｃ８への反応性を予測したことが示される。重要なことに、４Ｃ８を使用して健康な隣接する組織を染色する場合、反応性は観察されなかった（図２Ａ）。結論として、４Ｃ８は、数種のがん組織切片と反応するが、それらの健康な対応物と反応しないことが肯定的に見出された。
７．２ 実施例２：４Ｃ８ベースのＣＡＲ
４Ｃ８のＶＨおよびＶＬドメインを有するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を設計した。次いで選択されたＣＡＲを、標的特異的な細胞傷害性アッセイで評価した。
７．２．１．材料および方法
７．２．１．１ ベクターの設計
４Ｃ８のＶＨおよびＶＬドメインを有するｓｃＦｖを有する様々なＣＡＲコンストラクトを設計した。一部のコンストラクトにおいて、ＶＨおよびＶＬは、１つの長いリンカー（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号１８４）で一緒に接続され、一方で他のコンストラクトは、ＶＨとＶＬとの間における１つの短いリンカーＧＧＧＧＳ（配列番号１８３）および各ｓｃＦｖ間における１つの長いリンカー（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号１８４）とのタンデムの形態で２つのｓｃＦｖを含む（図５Ａ～５Ｈを参照）。ＶＨおよびＶＬは、３つの異なるヒンジ（ＣＤ８ａ、ＩｇＧ４－短鎖、ＩｇＧ４－長鎖）に対して様々な方向で接続され、第２世代ＣＡＲ－Ｔ（ＣＤ２８細胞内シグナルドメイン、およびＣＤ３－ゼータ細胞内鎖）がそれに続いていた。ｓｃＦｖのＮ末端は、ＣＤ８ａシグナル配列に接続された。４Ｃ８ ＣＡＲ－Ｔを、ＶｉｒａｐｏｗｅｒレンチウイルスベクターｐＬＥＮＴＩ６．３－Ｖ５－ＤＥＳＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にサブクローニングした。
表５ＡにＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を示す。表５ＢにＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
Figure 2023516080000074
Figure 2023516080000075
Figure 2023516080000076
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７．２．１．２ 形質導入および拡大増殖
ＰＥＩを一晩使用してｐＧＯ－４Ｃ８、ｐＶＳＶＧ、およびｐＰＡＸ２をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞でレンチウイルスを生産した。２４時間後にレンチウイルス上清を回収した。接着細胞を取り除くために、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ比重遠心分離、続いてプラスチック接着を使用して、健康なドナーＰＢＭＣを単離した。非接着性ＰＢＭＣを、１０％ＦＢＳ、５０μＭの２－メルカプトエタノール、および２０ｎｇ／ｍｌのｒＩＬ－２を含むＲＰＭＩ－１６４０ダッチ改変中で培養し、ヒトＴ－活性化剤ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄを使用して活性化した。活性化の後、Ｔ細胞を、ウイルス上清で２回、２４時間形質導入した。形質導入されたＣＡＲ Ｔ細胞を、研究に使用されるまで、細胞０．５×１０６個／ｍＬ～細胞１×１０６個／ｍＬの密度で培養培地中で拡大増殖した。
７．２．１．３ 細胞傷害性アッセイ
ＨａＣａＴ ＷＴおよびＣＯＳＭＣ ＫＯ細胞を、９６ウェルプレート中のウェル当たり細胞２０，０００個の密度で植え付け、一晩そのまま接着させた。２日後、ＣＡＲ Ｔ細胞を、５：１または３：１のエフェクター－標的細胞の比率で添加し、６時間インキュベートした。ＣＡＲ Ｔ細胞と共培養された標的細胞の細胞傷害性を、乳酸デヒドロゲナーゼ細胞傷害性（cytoxicity）アッセイ（ａｂｃａｍ）によって、製造元の説明書に従って評価した。１００％の細胞死対照のために、全ての細胞の完全溶解のためにＰＢＳ中の１％Ｔｗｅｅｎを使用した。ＣＡＲ Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ生産を評価するために、共培養物から上清を回収し、ＥＬＩＳＡを製造元の説明書（ａｂｃａｍ）に従って実行した。
７．２．２．結果
ＨａＣａＴ ＷＴ共培養物でも約４５％の細胞傷害性が観察されたが、４Ｃ８ ＣＡＲ Ｔ細胞（コンストラクト１）は、ＣＯＳＭＣ ＫＯ ＨａＣａＴ細胞に対して、それらの野生型対応物に対する細胞傷害性よりおよそ２～３倍高い細胞傷害性を発揮したことが見出された（図３Ａ）。これと一致して、ＣＯＳＭＣ ＫＯ ＨａＣａＴ細胞との共培養物において、ＷＴ ＨａＣａＴ細胞より一層多くのＩＦＮ－γ生産が見出されたことから、ＣＯＳＭＣ ＫＯ細胞による、ＣＡＲ Ｔ細胞のより一層強い活性化が示される（図３Ｂ）。
トランスフェクトされていないＴ細胞は、ＨａＣａＴ ＷＴ細胞またはＣＯＳＭＣ ＫＯ ＨａＣａＴ細胞のいずれに対しても有意な細胞傷害性を示さなかった（図４）。加えて、ＣＡＲ－Ｔは、ＶＬがＶＨのＮ末端側に設置された場合、より機能的であることが観察された（図４）。
７．３ 実施例３：１０Ｈ４ベースのＣＡＲ
１０Ｈ４のＶＨおよびＶＬドメインを有するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を設計した。
７．３．１．材料および方法
７．３．１．１ ベクターの設計
１０Ｈ４のＶＨおよびＶＬドメインを有するｓｃＦｖを有するＣＡＲコンストラクトを設計した。ＶＨおよびＶＬを、１つの長いリンカー（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号１８４）で一緒に接続した（図６を参照）。ＶＨおよびＶＬをＣＤ８ａヒンジに接続し、第２世代ＣＡＲ－Ｔ（ＣＤ２８細胞内シグナルドメイン、およびＣＤ３－ゼータ細胞内鎖）がそれに続いていた。ｓｃＦｖのＮ末端をＣＤ８ａシグナル配列に接続した。１０Ｈ４ ＣＡＲ－Ｔを、ＶｉｒａｐｏｗｅｒレンチウイルスベクターｐＬＥＮＴＩ６．３－Ｖ５－ＤＥＳＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にサブクローニングした。
表６Ａに１０Ｈ４ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を示す。表６Ｂに１０Ｈ４ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
Figure 2023516080000088
Figure 2023516080000089
８．具体的な実施形態、参考文献の引用
様々な具体的な実施形態を例示し記載したが、本開示の本質および範囲から逸脱することなく様々な変更をなすことができることが理解されると予想される。本発明の開示は、以下に記載の番号付けされた実施形態によって例示される。
１．配列番号１６５のアミノ酸位置５におけるスレオニンおよび配列番号１６５のアミノ酸位置１２におけるセリンにおいてＧａｌＮＡｃによりグリコシル化されたＣＤ４４ｖ６ペプチドＧＹＲＱＴＰＫＥＤＳＨＳＴＴＧＴＡＡＡ（配列番号１６５）（「ＣＤ４４ｖ６糖ペプチド」）に特異的に結合する抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合に関して、配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合に関して、配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
４．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合に関して、配列番号４５の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号４６の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
５．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合に関して、配列番号６７の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号６８の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
６．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合に関して、配列番号２０６の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２０７の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
７．（ｉ）ＣＯＳＭＣノックアウトＨａＣａＴ細胞に特異的に結合するか、および／または（ｉｉ）ＣＤ４４を組換え発現するＣＯＳＭＣノックアウトＨＥＫ２９３細胞に特異的に結合する、実施形態１から６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
８．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、ＣＤ４４を組換え発現するＣＯＳＭＣノックアウトＨａＣａＴ細胞および／またはＣＯＳＭＣノックアウトＨＥＫ２９３細胞への結合に関して、配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
９．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、ＣＤ４４を組換え発現するＣＯＳＭＣノックアウトＨａＣａＴ細胞および／またはＣＯＳＭＣノックアウトＨＥＫ２９３細胞への結合に関して、配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１０．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、ＣＤ４４を組換え発現するＣＯＳＭＣノックアウトＨａＣａＴ細胞および／またはＣＯＳＭＣノックアウトＨＥＫ２９３細胞への結合に関して、配列番号４５の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号４６の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１１．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、ＣＤ４４を組換え発現するＣＯＳＭＣノックアウトＨａＣａＴ細胞および／またはＣＯＳＭＣノックアウトＨＥＫ２９３細胞への結合に関して、配列番号６７の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号６８の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１２．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、ＣＤ４４を組換え発現するＣＯＳＭＣノックアウトＨａＣａＴ細胞および／またはＣＯＳＭＣノックアウトＨＥＫ２９３細胞への結合に関して、配列番号２０６の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２０７の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１３．（ａ）配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１２５、配列番号１５３、配列番号２２８、配列番号２３２、配列番号２３６、配列番号２４６、または配列番号２５６のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１；
（ｂ）配列番号９０、配列番号９４、配列番号９８、配列番号２２９、配列番号２３３、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号１０３、配列番号１０９、配列番号１１５、配列番号１２１、配列番号１３１、配列番号１３７、配列番号１４３、配列番号１４９；配列番号２４２、または配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号１０４、配列番号１１０、配列番号１１６、配列番号１２２、配列番号１３２、配列番号１３８、配列番号１４４、配列番号１５０、配列番号２４３、または配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号９１、配列番号９５、配列番号２３０、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および
（ｆ）配列番号９２または配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、実施形態１から１２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１４．配列番号８９、配列番号９７、および配列番号１２５中のＸ１と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１５．配列番号８９、配列番号９７、および配列番号１２５中のＸ１と指定されたアミノ酸が、Ｆである、実施形態１３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１６．配列番号８９、配列番号９７、および配列番号１２５中のＸ２と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３から１５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１７．配列番号８９、配列番号９７、および配列番号１２５中のＸ２と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から１５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１８．配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１２５、および配列番号１５３中のＸ３と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３から１７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１９．配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１２５、および配列番号１５３中のＸ３と指定されたアミノ酸が、Ｆである、実施形態１３から１７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２０．配列番号８９、配列番号９３、および配列番号１２５中のＸ４と指定されたアミノ酸が、Ｗである、実施形態１３から１９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２１．配列番号８９、配列番号９３、および配列番号１２５中のＸ４と指定されたアミノ酸が、Ａである、実施形態１３から１９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２２．配列番号８９、配列番号９３、および配列番号１２５中のＸ４と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３から１９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２３．配列番号９３および配列番号１２５中のＸ５と指定されたアミノ酸が、Ｍである、実施形態１３から２２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２４．配列番号９３および配列番号１２５中のＸ５と指定されたアミノ酸が、Ｉである、実施形態１３から２２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２５．配列番号９３および配列番号１２５中のＸ６と指定されたアミノ酸が、Ｈである、実施形態１３から２４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２６．配列番号９３および配列番号１２５中のＸ６と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から２４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２７．配列番号９４中のＸ７と指定されたアミノ酸が、Ｎである、実施形態１３から２６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２８．配列番号９４中のＸ７と指定されたアミノ酸が、Ｅである、実施形態１３から２６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２９．配列番号９４中のＸ７と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３から２６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３０．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ８と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３から２９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３１．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ８と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から２９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３２．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ９と指定されたアミノ酸が、Ｐである、実施形態１３から３１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３３．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ９と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から３１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３４．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１０と指定されたアミノ酸が、Ｒである、実施形態１３から３３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３５．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１０と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３から３３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３６．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１１と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から３５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３７．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１１と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３から３５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３８．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１２と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３から３７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３９．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１２と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から３７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
４０．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１３と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３から３９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
４１．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１３と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３から３９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
４２．配列番号９０および配列番号９４中のＸ１４と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３から４１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
４３．配列番号９０および配列番号９４中のＸ１４と指定されたアミノ酸が、Ｉである、実施形態１３から４１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
４４．配列番号９４中のＸ１５と指定されたアミノ酸が、Ｎである、実施形態１３から４３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
４５．配列番号９４中のＸ１５と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３から４３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
４６．配列番号９４中のＸ１６と指定されたアミノ酸が、Ｄである、実施形態１３から４５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
４７．配列番号９４中のＸ１６と指定されたアミノ酸が、Ｐである、実施形態１３から４５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
４８．配列番号９４中のＸ１６と指定されたアミノ酸が、Ａである、実施形態１３から４５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
４９．配列番号９４中のＸ１７と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３から４８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
５０．配列番号９４中のＸ１７と指定されたアミノ酸が、Ｄである、実施形態１３から４８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
５１．配列番号９４中のＸ１８と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３から５０のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
５２．配列番号９４中のＸ１８と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３から５０のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
５３．配列番号９４中のＸ１９と指定されたアミノ酸が、Ｆである、実施形態１３から５２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
５４．配列番号９４中のＸ１９と指定されたアミノ酸が、Ｖである、実施形態１３から５２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
５５．配列番号９４中のＸ２０と指定されたアミノ酸が、Ｋである、実施形態１３から５４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
５６．配列番号９４中のＸ２０と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３から５４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
５７．配列番号９４中のＸ２１と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から５６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
５８．配列番号９４中のＸ２１と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３から５６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
５９．配列番号９１および配列番号９５中のＸ２２と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３から５８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
６０．配列番号９１および配列番号９５中のＸ２２と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から５８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
６１．配列番号９１および配列番号９５中のＸ２２と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３から５８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
６２．配列番号９１および配列番号９５中のＸ２３と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３から６１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
６３．配列番号９１および配列番号９５中のＸ２３と指定されたアミノ酸が、Ｉである、実施形態１３から６１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
６４．配列番号９１および配列番号９５中のＸ２４と指定されたアミノ酸が、Ｎである、実施形態１３から６３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
６５．配列番号９１および配列番号９５中のＸ２４と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から６３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
６６．配列番号９５中のＸ２５と指定されたアミノ酸が、Ｎである、実施形態１３から６５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
６７．配列番号９５中のＸ２５と指定されたアミノ酸が、Ｒである、実施形態１３から６５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
６８．配列番号９５中のＸ２６と指定されたアミノ酸が、Ｒである、実施形態１３から６７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
６９．配列番号９５中のＸ２６と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３から６７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
７０．配列番号９５中のＸ２７と指定されたアミノ酸が、Ａである、実施形態１３から６９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
７１．配列番号９５中のＸ２７と指定されたアミノ酸が、Ｈである、実施形態１３から６９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
７２．配列番号９５中のＸ２７と指定されたアミノ酸が、Ｆである、実施形態１３から６９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
７３．配列番号９５中のＸ２８と指定されたアミノ酸が、Ｐである、実施形態１３から７２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
７４．配列番号９５中のＸ２８と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から７２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
７５．配列番号９２中のＸ２９と指定されたアミノ酸が、Ａである、実施形態１３から７４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
７６．配列番号９２中のＸ２９と指定されたアミノ酸が、Ｑである、実施形態１３から７４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
７７．配列番号９２中のＸ２９と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３から７４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
７８．配列番号９２中のＸ３０と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３から７７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
７９．配列番号９２中のＸ３０と指定されたアミノ酸が、Ｑである、実施形態１３から７７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
８０．配列番号９２中のＸ３１と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３から７９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
８１．配列番号９２中のＸ３１と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３から７９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
８２．配列番号９２中のＸ３１と指定されたアミノ酸が、Ｗである、実施形態１３から７９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
８３．配列番号９２中のＸ３２と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３から８２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
８４．配列番号９２中のＸ３２と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から８２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
８５．配列番号９２中のＸ３２と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３から８２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
８６．配列番号９２中のＸ３３と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３から８５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
８７．配列番号９２中のＸ３３と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３から８５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
８８．配列番号９２中のＸ３３と指定されたアミノ酸が、Ｈである、実施形態１３から８５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
８９．配列番号９２中のＸ３４と指定されたアミノ酸が、Ｎである、実施形態１３から８８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
９０．配列番号９２中のＸ３４と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３から８８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
９１．配列番号９２中のＸ３４と指定されたアミノ酸が、Ｑである、実施形態１３から８８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
９２．配列番号９２中のＸ３５と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３から９１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
９３．配列番号９２中のＸ３５と指定されたアミノ酸が、Ｐである、実施形態１３から９１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
９４．配列番号９２中のＸ３６と指定されたアミノ酸が、Ｗである、実施形態１３から９３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
９５．配列番号９２中のＸ３６と指定されたアミノ酸が、Ｆである、実施形態１３から９３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
９６．配列番号９２中のＸ３７と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３から９５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
９７．配列番号９２中のＸ３７と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３から９５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
９８．配列番号２２８、配列番号２３６、および配列番号２４６中のＸ４１と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
９９．配列番号２２８、配列番号２３２、および配列番号２４６中のＸ４１と指定されたアミノ酸が、Ｆである、実施形態１３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１００．配列番号２２８、配列番号２３６、および配列番号２４６中のＸ４２と指定されたアミノ酸が、Ｆである、実施形態１３、９８、および９９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１０１．配列番号２２８、配列番号２３６、および配列番号２４６中のＸ４２と指定されたアミノ酸が、Ｉである、実施形態１３、９８、および９９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１０２．配列番号２２８、配列番号２３６、および配列番号２４６中のＸ４３と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から１０１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１０３．配列番号２２８、配列番号２３６、および配列番号２４６中のＸ４３と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１０１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１０４．配列番号２２８、配列番号２３６、および配列番号２４６中のＸ４３と指定されたアミノ酸が、Ｎである、実施形態１３および９８から１０１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１０５．配列番号２２８、配列番号２３２、配列番号２３６、配列番号２４６、および配列番号２５６中のＸ４４と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１０４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１０６．配列番号２２８、配列番号２３２、配列番号２３６、配列番号２４６、および配列番号２５６中のＸ４４と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から１０４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１０７．配列番号２２８、配列番号２３２、配列番号２３６、配列番号２４６、および配列番号２５６中のＸ４５と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３および９８から１０６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１０８．配列番号２２８、配列番号２３２、配列番号２３６、配列番号２４６、および配列番号２５６中のＸ４５と指定されたアミノ酸が、Ｆである、実施形態１３および９８から１０６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１０９．配列番号２２８、配列番号２３２、および配列番号２４６中のＸ４６と指定されたアミノ酸が、Ｗである、実施形態１３および９８から１０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１１０．配列番号２２８、配列番号２３２、および配列番号２４６中のＸ４６と指定されたアミノ酸が、Ａである、実施形態１３および９８から１０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１１１．配列番号２２８、配列番号２３２、および配列番号２４６中のＸ４６と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３および９８から１０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１１２．配列番号２２８、配列番号２３２、および配列番号２４６中のＸ４６と指定されたアミノ酸が、Ｈである、実施形態１３および９８から１０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１１３．配列番号２３２および配列番号２４６中のＸ４７と指定されたアミノ酸が、Ｍである、実施形態１３および９８から１１２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１１４．配列番号２３２および配列番号２４６中のＸ４７と指定されたアミノ酸が、Ｉである、実施形態１３および９８から１１２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１１５．配列番号２３２および配列番号２４６中のＸ４８と指定されたアミノ酸が、Ｈである、実施形態１３および９８から１１４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１１６．配列番号２３２および配列番号２４６中のＸ４８と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１１４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１１７．配列番号２３２および配列番号２４６中のＸ４８と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３および９８から１１４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１１８．配列番号２３３中のＸ４９と指定されたアミノ酸が、Ｎである、実施形態１３および９８から１１７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１１９．配列番号２３３中のＸ４９と指定されたアミノ酸が、Ｅである、実施形態１３および９８から１１７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１２０．配列番号２３３中のＸ４９と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３および９８から１１７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１２１．配列番号２３３中のＸ４９と指定されたアミノ酸が、Ｉである、実施形態１３および９８から１１７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１２２．配列番号２３３中のＸ５０と指定されたアミノ酸が、Ｉである、実施形態１３および９８から１２１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１２３．配列番号２３３中のＸ５０と指定されたアミノ酸が、Ｖである、実施形態１３および９８から１２１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１２４．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５１と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３および９８から１２３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１２５．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５１と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１２３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１２６．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５２と指定されたアミノ酸が、Ｐである、実施形態１３および９８から１２５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１２７．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５２と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１２５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１２８．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５２と指定されたアミノ酸が、Ｈである、実施形態１３および９８から１２５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１２９．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５３と指定されたアミノ酸が、Ｒである、実施形態１３および９８から１２８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１３０．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５３と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３および９８から１２８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１３１．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５３と指定されたアミノ酸が、Ｄである、実施形態１３および９８から１２８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１３２．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５４と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１３１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１３３．配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ５４と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３および９８から１３１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１３４．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５５と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３および９８から１３３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１３５．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５５と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１３３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１３６．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５６と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から１３５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１３７．配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５６と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３および９８から１３５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１３８．配列番号２２９および配列番号２３３中のＸ５７と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から１３７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１３９．配列番号２２９および配列番号２３３中のＸ５７と指定されたアミノ酸が、Ｉである、実施形態１３および９８から１３７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１４０．配列番号２２９および配列番号２３３中のＸ５７と指定されたアミノ酸が、存在しない、実施形態１３および９８から１３７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１４１．配列番号２３３中のＸ５８と指定されたアミノ酸が、Ｎである、実施形態１３および９８から１４０のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１４２．配列番号２３３中のＸ５８と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３および９８から１４０のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１４３．配列番号２３３中のＸ５９と指定されたアミノ酸が、Ｄである、実施形態１３および９８から１４２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１４４．配列番号２３３中のＸ５９と指定されたアミノ酸が、Ｐである、実施形態１３および９８から１４２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１４５．配列番号２３３中のＸ５９と指定されたアミノ酸が、Ａである、実施形態１３および９８から１４２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１４６．配列番号２３３中のＸ６０と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３および９８から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１４７．配列番号２３３中のＸ６０と指定されたアミノ酸が、Ｄである、実施形態１３および９８から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１４８．配列番号２３３中のＸ６０と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から１４５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１４９．配列番号２３３中のＸ６１と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３および９８から１４８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１５０．配列番号２３３中のＸ６１と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から１４８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１５１．配列番号２３３中のＸ６１と指定されたアミノ酸が、Ｗである、実施形態１３および９８から１４８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１５２．配列番号２３３中のＸ６２と指定されたアミノ酸が、Ｆである、実施形態１３および９８から１５１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１５３．配列番号２３３中のＸ６２と指定されたアミノ酸が、Ｖである、実施形態１３および９８から１５１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１５４．配列番号２３３中のＸ６２と指定されたアミノ酸が、Ａである、実施形態１３および９８から１５１のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１５５．配列番号２３３中のＸ６３と指定されたアミノ酸が、Ｋである、実施形態１３および９８から１５４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１５６．配列番号２３３中のＸ６３と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から１５４のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１５７．配列番号２３３中のＸ６４と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１５６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１５８．配列番号２３３中のＸ６４と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３および９８から１５６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１５９．配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６５と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３および９８から１５８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１６０．配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６５と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１５８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１６１．配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６５と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３および９８から１５８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１６２．配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６５と指定されたアミノ酸が、Ｋである、実施形態１３および９８から１５８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１６３．配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６６と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から１６２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１６４．配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６６と指定されたアミノ酸が、Ｉである、実施形態１３および９８から１６２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１６５．配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６６と指定されたアミノ酸が、Ａである、実施形態１３および９８から１６２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１６６．配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６７と指定されたアミノ酸が、Ｎである、実施形態１３および９８から１６５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１６７．配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６７と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１６５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１６８．配列番号２３４中のＸ６８と指定されたアミノ酸が、Ｎである、実施形態１３および９８から１６７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１６９．配列番号２３４中のＸ６８と指定されたアミノ酸が、Ｒである、実施形態１３および９８から１６７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１７０．配列番号２３４中のＸ６８と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から１６７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１７１．配列番号２３４中のＸ６９と指定されたアミノ酸が、Ｒである、実施形態１３および９８から１７０のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１７２．配列番号２３４中のＸ６９と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３および９８から１７０のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１７３．配列番号２３４中のＸ７０と指定されたアミノ酸が、Ａである、実施形態１３および９８から１７２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１７４．配列番号２３４中のＸ７０と指定されたアミノ酸が、Ｈである、実施形態１３および９８から１７２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１７５．配列番号２３４中のＸ７０と指定されたアミノ酸が、Ｆである、実施形態１３および９８から１７２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１７６．配列番号２３４中のＸ７１と指定されたアミノ酸が、Ｐである、実施形態１３および９８から１７５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１７７．配列番号２３４中のＸ７１と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１７５のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１７８．配列番号２３１中のＸ７２と指定されたアミノ酸が、Ａである、実施形態１３および９８から１７７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１７９．配列番号２３１中のＸ７２と指定されたアミノ酸が、Ｑである、実施形態１３および９８から１７７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１８０．配列番号２３１中のＸ７２と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３および９８から１７７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１８１．配列番号２３１中のＸ７３と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３および９８から１８０のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１８２．配列番号２３１中のＸ７３と指定されたアミノ酸が、Ｑである、実施形態１３および９８から１８０のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１８３．配列番号２３１中のＸ７３と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３および９８から１８０のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１８４．配列番号２３１中のＸ７４と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３および９８から１８３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１８５．配列番号２３１中のＸ７４と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３および９８から１８３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１８６．配列番号２３１中のＸ７４と指定されたアミノ酸が、Ｗである、実施形態１３および９８から１８３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１８７．配列番号２３１中のＸ７５と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３および９８から１８６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１８８．配列番号２３１中のＸ７５と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１８６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１８９．配列番号２３１中のＸ７５と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から１８６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１９０．配列番号２３１中のＸ７６と指定されたアミノ酸が、Ｓである、実施形態１３および９８から１８９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１９１．配列番号２３１中のＸ７６と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から１８９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１９２．配列番号２３１中のＸ７６と指定されたアミノ酸が、Ｈである、実施形態１３および９８から１８９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１９３．配列番号２３１中のＸ７６と指定されたアミノ酸が、Ｋである、実施形態１３および９８から１８９のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１９４．配列番号２３１中のＸ７７と指定されたアミノ酸が、Ｎである、実施形態１３および９８から１９３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１９５．配列番号２３１中のＸ７７と指定されたアミノ酸が、Ｌである、実施形態１３および９８から１９３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１９６．配列番号２３１中のＸ７７と指定されたアミノ酸が、Ｑである、実施形態１３および９８から１９３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１９７．配列番号２３１中のＸ７７と指定されたアミノ酸が、Ｇである、実施形態１３および９８から１９３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１９８．配列番号２３１中のＸ７８と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３および９８から１９７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
１９９．配列番号２３１中のＸ７８と指定されたアミノ酸が、Ｐである、実施形態１３および９８から１９７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２００．配列番号２３１中のＸ７８と指定されたアミノ酸が、Ｄである、実施形態１３および９８から１９７のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２０１．配列番号２３１中のＸ７９と指定されたアミノ酸が、Ｗである、実施形態１３および９８から２００のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２０２．配列番号２３１中のＸ７９と指定されたアミノ酸が、Ｆである、実施形態１３および９８から２００のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２０３．配列番号２３１中のＸ７９と指定されたアミノ酸が、Ｉである、実施形態１３および９８から２００のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２０４．配列番号２３１中のＸ８０と指定されたアミノ酸が、Ｙである、実施形態１３および９８から２０３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２０５．配列番号２３１中のＸ８０と指定されたアミノ酸が、Ｔである、実施形態１３および９８から２０３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２０６．配列番号２３１中のＸ８０と指定されたアミノ酸が、Ｈである、実施形態１３および９８から２０３のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２０７．配列番号２３１中のＸ８１と指定されたアミノ酸が、Ｐである、実施形態１３および９８から２０６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２０８．配列番号２３１中のＸ８１と指定されたアミノ酸が存在しない、実施形態１３および９８から２０６のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２０９．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号８９のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２１０．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２１１．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号９７のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２１２．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２１３．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２１４．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２２８のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２１５．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２３２のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２１６．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２３６のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２０８のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２１７．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２４６のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２０８のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２１８．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２５６のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２０８のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２１９．ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２１３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２２０．ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２１３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２２１．ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号９８のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２１３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２２２．ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２２９のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２１３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２２３．ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２１３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２２４．ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２３７のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２１３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２２５．ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２２４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２２６．ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２２４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２２７．ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２２４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２２８．ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２２４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２２９．ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２２４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２３０．ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２２４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２３１．ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２２４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２３２．ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２２４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２３３．ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号２４２のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２２４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２３４．ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号２５２のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２２４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２３５．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２３４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２３６．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２３４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２３７．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２３４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２３８．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１２２のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２３４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２３９．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２３４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２４０．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１３８のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２３４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２４１．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１４４のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２３４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２４２．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１５０のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２３２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２４３．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号２４３のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２３２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２４４．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号２５３のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２３２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２４５．ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２４４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２４６．ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２４４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２４７．ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号２３０のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２４４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２４８．ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２４４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２４９．ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２４８のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２５０．ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号２３１のアミノ酸配列を含む、実施形態１３から２４８のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２５１．配列番号３～５のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号６～８のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２５２．配列番号９～１１のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号１２～１４のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２５３．配列番号１５～１７のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号１８～２０のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２５４．配列番号２５～２７のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号２８～３０のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２５５．配列番号３１～３３のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号３４～３６のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２５６．配列番号３７～３９のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号４０～４２のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２５７．配列番号４７～４９のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号５０～５２のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２５８．配列番号５３～５５のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号５６～５８のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２５９．配列番号５９～６１のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号６２～６４のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２６０．配列番号６９～７１のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号７２～７４のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２６１．配列番号７５～７７のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号７８～８０のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２６２．配列番号８１～８３のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号８４～８６のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２６３．配列番号２０８～２１０のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号２１１～２１３のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２６４．配列番号２１４～２１６のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号２１７～２１９のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２６５．配列番号２２０～２２２のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号２２３～２２５のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２６６．配列番号１０１～１０３のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号１０４～１０６のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２６７．配列番号１０７～１０９のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号１１０～１１２のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２６８．配列番号１１３～１１５のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号１１６～１１８のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２６９．配列番号１１９～１２１のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号１２２～１２４のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２７０．配列番号２４０～２４２のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号２４３～２４５のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２７１．配列番号１２９～１３１のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号１３２～１３４のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２７２．配列番号１３５～１３７のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号１３８～１４０のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２７３．配列番号１４１～１４３のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号１４４～１４６のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２７４．配列番号１４７～１４９のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号１５０～１５２のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２７５．配列番号２５０～２５２のＣＤＲを含むＶＨおよび配列番号２５３～２５５のＣＤＲを含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２７６．キメラまたはヒト化抗体のキメラまたはヒト化抗体または抗原結合フラグメントである、実施形態１から２７５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２７７．配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２７８．配列番号１と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２７９．配列番号１と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２８０．配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２８１．配列番号２３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２８２．配列番号２３と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２４と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２８３．配列番号２３と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２４と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２８４．配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２８５．配列番号４５と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号４６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２８６．配列番号４５と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号４６と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２８７．配列番号４５と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号４６と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２８８．配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２８９．配列番号６７と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号６８と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２９０．配列番号６７と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号６８と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２９１．配列番号６７と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号６８と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２９２．配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号６８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２９３．配列番号２０６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２０７と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２９４．配列番号２０６と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２０７と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２９５．配列番号２０６と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２０７と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２９６．配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１から１２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２９７．（ｉ）配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列、（ｉｉ）配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列、（ｉｉｉ）配列番号４５の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号４６の軽鎖可変（ＶＬ）配列、（ｉｖ）配列番号６７の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号６８の軽鎖可変（ＶＬ）配列、または（ｖ）配列番号２０６の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２０７の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む参照抗体または抗原結合フラグメントと、配列番号１６５のアミノ酸位置５におけるスレオニンおよび配列番号１６５のアミノ酸位置１２におけるセリンにおいてＧａｌＮＡｃによりグリコシル化されたＣＤ４４ｖ６ペプチドＧＹＲＱＴＰＫＥＤＳＨＳＴＴＧＴＡＡＡ（配列番号１６５）（「ＣＤ４４ｖ６糖ペプチド」）への結合に関して競合する抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントであって、抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＶＨ配列内に第１、第２および第３のＣＤＲ手段を有するＶＨ配列；ならびに
（ｂ）ＶＬ配列内に第４、第５および第６のＣＤＲ手段を有するＶＬ配列
を含み、
第１、第２、第３、第４、第５、および第６のＣＤＲ手段は、協同して、抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントのＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合を生じさせる、抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２９８．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、配列番号１のＶＨ配列および配列番号２のＶＬ配列を含む参照抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態２９７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
２９９．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、配列番号２３のＶＨ配列および配列番号２３のＶＬ配列を含む参照抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態２９７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３００．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、配列番号４５のＶＨ配列および配列番号４６のＶＬ配列を含む参照抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態２９７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３０１．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、配列番号６７のＶＨ配列および配列番号６８のＶＬ配列を含む参照抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態２９７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３０２．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、配列番号２０６のＶＨ配列および配列番号２０７のＶＬ配列を含む参照抗体または抗原結合フラグメントと競合する、実施形態２９７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３０３．正常細胞と比較してがん細胞で過剰発現されるグリコＣＤ４４エピトープに優先的に結合する、実施形態１から３０２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３０４．配列番号１６５のアミノ酸位置５におけるスレオニンおよび配列番号１６５のアミノ酸位置１２におけるセリンにおいてＳＴｎでグリコシル化されているＣＤ４４ｖ６ペプチドＧＹＲＱＴＰＫＥＤＳＨＳＴＴＧＴＡＡＡ（配列番号１６５）に特異的に結合する、実施形態１から３０３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３０５．配列番号１６５のアミノ酸位置５におけるスレオニンおよび配列番号１６５のアミノ酸位置１２におけるセリンにおいてＳＴｎでグリコシル化されているＣＤ４４ｖ６ペプチドＧＹＲＱＴＰＫＥＤＳＨＳＴＴＧＴＡＡＡ（配列番号１６５）に結合するが、それに特異的には結合しない、実施形態１から３０３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３０６．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１ｎＭから２００ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３０７．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１ｎＭから１５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３０８．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１ｎＭから１００ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３０９．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１ｎＭから５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３１０．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１ｎＭから２５ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３１１．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１ｎＭから１５ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３１２．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１ｎＭから１０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３１３．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５ｎＭから２００ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３１４．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５ｎＭから１００ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３１５．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５ｎＭから５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３１６．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５ｎＭから２５ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３１７．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５ｎＭから１０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３１８．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１０ｎＭから２００ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３１９．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１０ｎＭから１００ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３２０．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１０ｎＭから１５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３２１．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１０ｎＭから１００ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３２２．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１０ｎＭから５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３２３．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１０ｎＭから２５ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３２４．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５０ｎＭから２００ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３２５．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５０ｎＭから１５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３２６．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５０ｎＭから１００ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３２７．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１００ｎＭから２００ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３２８．表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１００ｎＭから１５０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ４４ｖ６糖ペプチドに結合する、実施形態１から３０５のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３２９．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、表面プラズモン共鳴によって測定した場合のものである、実施形態３０６～３２８のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３３０．表面プラズモン共鳴による測定が、分析物としてのＣＤ４４ｖ６糖ペプチドの飽和濃度で行われ、抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントが、固定されたリガンドである、実施形態３２９に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３３１．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、バイオレイヤー干渉法によって測定した場合のものである、実施形態３０６～３２８のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３３２．バイオレイヤー干渉法による測定が、分析物として抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、および固定されたリガンドとしてＣＤ４４ｖ６糖ペプチドを用いて行われる、実施形態３３１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３３３．非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドＧＹＲＱＴＰＫＥＤＳＨＳＴＴＧＴＡＡＡ（配列番号１６５）（「非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチド」）に特異的には結合しない、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３３４．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも３倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３３５．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも５倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３３６．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも１０倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３３７．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも２０倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３３８．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも５０倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３３９．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも１００倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは非グリコシル化ＣＤ４４ｖ６ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３４０．精製された組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼＧａｌＮＡｃ－Ｔ１、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ４を使用してインビトロでグリコシル化されたＭＵＣ１タンデムリピート（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（配列番号２０５）（「第１のＭＵＣ１糖ペプチド」）に特異的には結合しない、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３４１．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第１のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも３倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第１のＭＵＣ１糖ペプチド（glycpeptide）のいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３４２．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第１のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも５倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第１のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３４３．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第１のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも１０倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第１のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３４４．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第１のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも２０倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第１のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３４５．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第１のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも５０倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第１のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３４６．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第１のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも１００倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第１のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３４７．太字と下線の文字で示したセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃｏｎを用いてインビトロでグリコシル化されたＭＵＣ１ ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号２６０）（「第２のＭＵＣ１糖ペプチド」）に特異的には結合しない、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３４８．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第２のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも３倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第２のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３４９．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第２のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも５倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第２のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３５０．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第２のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも１０倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第２のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３５１．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第２のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも２０倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第２のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３５２．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第２のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも５０倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第２のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３５３．ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、第２のＭＵＣ１糖ペプチドへの抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の少なくとも１００倍であり、任意選択で、結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、表面プラズモン共鳴は、抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは第２のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量（例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、または約２μＭの各ペプチド）の存在下で測定される、実施形態１から３３３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３５４．多価である、実施形態１から３５３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３５５．抗原結合フラグメントである、実施形態１から３５３のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３５６．抗原結合フラグメントが、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の形態である、実施形態３５５に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３５７．ｓｃＦｖが、軽鎖可変フラグメントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む、実施形態３５６に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３５８．ｓｃＦｖが、軽鎖可変フラグメントのＣ末端に重鎖可変フラグメントを含む、実施形態３５６に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３５９．ｓｃＦｖ重鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントが、リンカー配列に共有結合しおり、リンカー配列は、任意選択で４～１５アミノ酸である、実施形態３５６から３５８のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３６０．多重特異性抗体の形態である、実施形態１から３３２のいずれかに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３６１．多重特異性抗体が、第１のエピトープと異なる第２のエピトープに結合する二重特異性抗体である、実施形態３６０に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３６２．二重特異性抗体が、ボトルオープナー、ｍＡｂ－Ｆｖ、ｍＡｂ－ｓｃＦｖ、セントラルｓｃＦｖ、１アームのセントラルｓｃＦｖ、またはデュアルｓｃＦｖ様式の二重特異性抗体である、実施形態３６１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３６３．二重特異性抗体が、ボトルオープナー様式の二重特異性抗体である、実施形態３６２に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３６４．二重特異性抗体が、ｍＡｂ－Ｆｖ様式の二重特異性抗体である、実施形態３６２に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３６５．二重特異性抗体が、ｍＡｂ－ｓｃＦｖ様式の二重特異性抗体である、実施形態３６２に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３６６．二重特異性抗体が、セントラルｓｃＦｖ様式の二重特異性抗体である、実施形態３６２に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３６７．二重特異性抗体が、１アームのセントラルｓｃＦｖ様式の二重特異性抗体である、実施形態３６２に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３６８．二重特異性抗体が、デュアルｓｃＦｖ様式の二重特異性抗体である、実施形態３６２に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３６９．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂ、Ｆａｂアーム交換抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、または二重親和性リターゲティング分子（ＤＡＲＴ）である、実施形態３６１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３７０．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂである、実施形態３６９に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３７１．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢである、実施形態３７０に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３７２．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬである、実施形態３７０に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３７３．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１－ＣＬである、実施形態３７０に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３７４．二重特異性抗体が、Ｆａｂアーム交換抗体である、実施形態３６９に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３７５．二重特異性抗体が、二重親和性リターゲティング分子（ＤＡＲＴ）である、実施形態３６９に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３７６．二重特異性抗体が、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である、実施形態３６９に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３７７．第２のエピトープが、ＣＤ４４エピトープである、実施形態３６１から３７６のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３７８．第２のエピトープが、正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるＣＤ４４エピトープである、実施形態３６１から３７６のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３７９．第２のエピトープが、Ｔ細胞エピトープである、実施形態３６１から３７６のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３８０．Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープ、ＣＤ８エピトープ、ＣＤ１６エピトープ、ＣＤ２５エピトープ、ＣＤ２８エピトープ、またはＮＫＧ２Ｄエピトープを含む、実施形態３７９に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３８１．Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープを含み、ＣＤ３エピトープは、任意選択でヒトＣＤ３中に存在するエピトープである、実施形態３８０に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３８２．ＣＤ３エピトープが、ＣＤ３ガンマエピトープ、ＣＤ３デルタエピトープ、ＣＤ３イプシロンエピトープ、またはＣＤ３ゼータエピトープを含む、実施形態３８１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３８３．検出可能な部分にコンジュゲートされている、実施形態１から３８２のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３８４．検出可能な部分が、酵素、放射線同位体、または蛍光標識である、実施形態３８３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
３８５．少なくとも第２のアミノ酸配列に作動可能に連結した、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸配列を含む融合タンパク質。
３８６．第２のアミノ酸配列が、４－１ＢＢ、ＣＤ３－ゼータ、またはそのフラグメントのアミノ酸配列である、実施形態３８５に記載の融合タンパク質。
３８７．第２のアミノ酸配列が、融合ペプチドのアミノ酸配列である、実施形態３８５に記載の融合タンパク質。
３８８．融合ペプチドが、ＣＤ２８－ＣＤ３－ゼータまたは４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）－ＣＤ３－ゼータ融合ペプチドである、実施形態３８７に記載の融合タンパク質。
３８９．第２のアミノ酸配列が、Ｔ細胞の活性化のモジュレーターまたはそのフラグメントのアミノ酸配列である、実施形態３８５に記載の融合タンパク質。
３９０．Ｔ細胞の活性化のモジュレーターが、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒａである、実施形態３８９に記載の融合タンパク質。
３９１．第２のアミノ酸配列が、ＭＩＣタンパク質ドメインのものである、実施形態３８５に記載の融合タンパク質。
３９２．ＭＩＣタンパク質ドメインが、α１－α２ドメインである、実施形態３９１に記載の融合タンパク質。
３９３．α１－α２ドメインが、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、ＵＬＢＰ６、またはＯＭＣＰα１－α２ドメインである、実施形態３９２に記載の融合タンパク質。
３９４．ＭＩＣタンパク質ドメインが、改変されたＭＩＣタンパク質ドメインである、実施形態３９１から３９３のいずれか一つに記載の融合タンパク質。
３９５．実施形態３５５～３５９のいずれか一つに記載の１つまたは複数の抗原結合フラグメントを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
３９６．実施形態３５６～３５９のいずれか一つに記載の１つまたは複数のｓｃＦｖｓを含む、実施形態３９５に記載のＣＡＲ。
３９７．実施形態３５６～３５９のいずれか一つに記載の１つのｓｃＦｖを含む、実施形態３９６に記載のＣＡＲ。
３９８．実施形態３５６～３５９のいずれか一つに記載の２つのｓｃＦｖを含む、実施形態３９７に記載のＣＡＲ。
３９９．２つのｓｃＦｖが、同じアミノ酸配列を有する、実施形態３９８に記載のＣＡＲ。
４００．２つのｓｃＦｖが、リンカー配列によって共有結合で結合しており、リンカー配列は、任意選択で４～１５アミノ酸である、実施形態３９８または３９９に記載のＣＡＲ。
４０１．アミノ末端からカルボキシ末端への順で：（ｉ）１つまたは複数の抗原結合フラグメント、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態３９５から４００のいずれか一つに記載のＣＡＲ。
４０２．膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む、実施形態４０１に記載のＣＡＲ。
４０３．ＣＤ２８膜貫通ドメインが、アミノ酸配列ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号１８６）を含む、実施形態４０２に記載のＣＡＲ。
４０４．細胞内シグナル伝達ドメインが、共刺激シグナル伝達領域を含む、実施形態４０１から４０３のいずれか一つに記載のＣＡＲ。
４０５．共刺激シグナル伝達領域が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＤＡＰ１０、ＧＩＴＲ、またはそれらの組合せの細胞質内ドメインを含む、実施形態４０４に記載のＣＡＲ。
４０６．共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８の細胞質内ドメインを含む、実施形態４０５に記載のＣＡＲ。
４０７．ＣＤ２８の細胞質内ドメインが、アミノ酸配列ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号１７９）を含む、実施形態４０６に記載のＣＡＲ。
４０８．細胞内シグナル伝達ドメインが、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む、実施形態４０１から４０７のいずれか一つに記載のＣＡＲ。
４０９．Ｔ細胞シグナル伝達ドメインが、共刺激シグナル伝達領域のＣ末端にある、実施形態４０８に記載のＣＡＲ。
４１０．Ｔ細胞シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインを含む、実施形態４０８または４０９に記載のＣＡＲ。
４１１．ＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインが、アミノ酸配列ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１８０）を含む、実施形態４１０に記載のＣＡＲ。
４１２．１つまたは複数の抗体フラグメントまたは１つまたは複数のｓｃＦｖのＮ末端に、シグナルペプチドをさらに含む、実施形態４０１から４１１のいずれか一つに記載のＣＡＲ。
４１３．シグナルペプチドが、ヒトＣＤ８シグナルペプチドである、実施形態４１１に記載のＣＡＲ。
４１４．ヒトＣＤ８シグナルペプチドが、アミノ酸配列ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号１７５）を含む、実施形態４１３に記載のＣＡＲ。
４１５．１つまたは複数の抗原結合フラグメントと膜貫通ドメインとの間にヒンジをさらに含む、実施形態４０１から４１４のいずれか一つに記載のＣＡＲ。
４１６．ヒンジが、ヒトＣＤ８ａヒンジを含む、実施形態４１５に記載のＣＡＲ。
４１７．ヒトＣＤ８ａヒンジが、アミノ酸配列ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣ（配列番号２０３）を含む、実施形態４１６に記載のＣＡＲ。
４１８．ヒトＣＤ８ａヒンジが、アミノ酸配列ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号１７６）を含む、実施形態４１６に記載のＣＡＲ。
４１９．ヒンジが、アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号１７７）を含むヒトＩｇＧ４－短鎖ヒンジを含む、実施形態４１５に記載のＣＡＲ。
４２０．ヒンジが、アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＱＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＭ（配列番号１７８）を含むヒトＩｇＧ４－長鎖ヒンジを含む、実施形態４１５に記載のＣＡＲ。
４２１．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、そのアミノ酸配列は配列番号１５７のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲ。
４２２．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、そのアミノ酸配列は配列番号１５８のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲ。
４２３．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、そのアミノ酸配列は配列番号１５９のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲ。
４２４．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、そのアミノ酸配列は配列番号１６０のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲ。
４２５．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、そのアミノ酸配列は配列番号１６１のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲ。
４２６．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、そのアミノ酸配列は配列番号１６２のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲ。
４２７．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、そのアミノ酸配列は配列番号１６３のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲ。
４２８．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、そのアミノ酸配列は配列番号１６４のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲ。
４２９．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、そのアミノ酸配列は配列番号２６１のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲ。
４３０．細胞傷害性物質にコンジュゲートした、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体もしくは抗原結合フラグメント、または実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質を含む抗体－薬物コンジュゲート。
４３１．細胞傷害性物質が、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合剤、アルキル化剤、エンジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン、ドラスタチン、メイタンシノイド、またはビンカアルカロイドである、実施形態４２９に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
４３２．抗グリコＣＤ４４抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは二重特異性抗体が、リンカーを介して細胞傷害性物質にコンジュゲートされている、実施形態４３１に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
４３３．リンカーが、細胞内条件下で切断可能である、実施形態４３２に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
４３４．切断可能なリンカーが、細胞内のプロテアーゼによって切断可能である、実施形態４３３に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
４３５．リンカーが、ジペプチドを含む、実施形態４３４に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
４３６．ジペプチドが、ｖａｌ－ｃｉｔまたはｐｈｅ－ｌｙｓである、実施形態４３５に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
４３７．切断可能なリンカーが、５．５未満のｐＨで加水分解性である、実施形態４３３に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
４３８．加水分解性のリンカーが、ヒドラゾンリンカーである、実施形態４３７に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
４３９．切断可能なリンカーが、ジスルフィドリンカーである、実施形態４３３に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
４４０．実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体もしくは抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、または実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲのコード領域を含む核酸。
４４１．コード領域が、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている、実施形態４４０に記載の核酸。
４４２．実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸を含むベクター。
４４３．ウイルスベクターである、実施形態４４２に記載のベクター。
４４４．ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態４４３に記載のベクター。
４４５．実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸を発現するように改変された宿主細胞。
４４６．実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲを発現するように改変されたヒトＴ細胞である、実施形態４４５に記載の宿主細胞。
４４７．実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクターを含む宿主細胞。
４４８．宿主細胞が、Ｔ細胞であり、ベクターが、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲをコードする、実施形態４４７に記載の宿主細胞。
４４９．（ａ）実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体もしくは抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、または実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、および（ｂ）生理学的に好適な緩衝液、アジュバント、希釈剤、またはそれらの組合せを含む医薬組成物。
４５０．がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体もしくは抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
４５１．対象が、乳がん、肺がん、泌尿生殖器がん、膵臓がん、結腸直腸がん、卵巣がん、胃がん、または頭頸部がん、皮膚がん、悪性黒色腫、肝臓がん、神経膠腫、甲状腺がん、子宮頸がん、または子宮内膜がんに罹患している、実施形態４５０に記載の方法。
４５２．対象が、乳がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４５３．対象が、肺がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４５４．肺がんが、非小細胞肺がんである、実施形態４５３に記載の方法。
４５５．対象が、泌尿生殖器がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４５６．泌尿生殖器がんが、前立腺がんである、実施形態４５５に記載の方法。
４５７．泌尿生殖器がんが、腎臓がんである、実施形態４５５に記載の方法。
４５８．対象が、膵臓がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４５９．対象が、結腸直腸がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４６０．対象が、卵巣がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４６１．対象が、胃がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４６２．対象が、頭頸部がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４６３．頭頸部がんが、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）である、実施形態４６２に記載の方法。
４６４．対象が、皮膚がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４６５．対象が、悪性黒色腫に罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４６６．対象が、肝臓がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４６７．対象が、神経膠腫に罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４６８．対象が、甲状腺がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４６９．対象が、子宮頸がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４７０．対象が、子宮内膜がんに罹患している、実施形態４５１に記載の方法。
４７１．生物学的サンプルにおいてがんを検出する方法であって、サンプルを、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合を検出することを含む方法。
４７２．抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合を定量化することをさらに含む、実施形態４７１に記載の方法。
４７３．結合が、陰性／ベースライン対照としての正常な組織対照と比較される、および／または陽性対照としてのがん性組織対照と比較される、実施形態４７１または実施形態４７２に記載の方法。
４７４．がんが、乳がん、肺がん、泌尿生殖器がん、膵臓がん、結腸直腸がん、卵巣がん、胃がん、頭頸部がん、皮膚がん、悪性黒色腫、肝臓がん、神経膠腫、甲状腺がん、子宮頸がん、または子宮内膜がんである、実施形態４７１から４７３のいずれか一つに記載の方法。
４７５．がんが、乳がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４７６．がんが、肺がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４７７．肺がんが、非小細胞肺がんである、実施形態４７６に記載の方法。
４７８．がんが、泌尿生殖器がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４７９．がんが、前立腺がんである、実施形態４７８に記載の方法。
４８０．がんが、腎臓がんである、実施形態４７８に記載の方法。
４８１．がんが、膵臓がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４８２．がんが、結腸直腸がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４８３．がんが、卵巣がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４８４．がんが、胃がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４８５．がんが、頭頸部がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４８６．頭頸部がんが、ＨＮＳＣＣである、実施形態４８５に記載の方法。
４８７．がんが、皮膚がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４８８．がんが、悪性黒色腫である、実施形態４７４に記載の方法。
４８９．がんが、肝臓がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４９０．がんが、神経膠腫である、実施形態４７４に記載の方法。
４９１．がんが、甲状腺がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４９２．がんが、子宮頸がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４９３．がんが、子宮内膜がんである、実施形態４７４に記載の方法。
４９４．実施形態３９１から３９４のいずれか一つに従って、ＭＩＣタンパク質ドメインに特異的に結合することが可能なＮＫＧ２Ｄ受容体を含むＣＡＲを発現するように改変された遺伝子改変されたＴ細胞を対象に投与することをさらに含む、実施形態４５０から４９３のいずれか一つに記載の方法。
４９５．医薬として使用するための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
４９６．がんの処置における使用のためのものであり、任意選択で、がんが、乳がん、肺がん、泌尿生殖器がん（例えば、前立腺がんまたは腎臓がん）、膵臓がん、結腸直腸がん、卵巣がん、胃がん、頭頸部がん、皮膚がん、悪性黒色腫、肝臓がん、神経膠腫、甲状腺がんまたは子宮内膜がんである、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
４９７．乳がんの処置で使用するための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
４９８．肺がんの処置における使用のためのであり、任意選択で肺がんは、非小細胞肺がんである、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
４９９．泌尿生殖器がんの処置で使用するための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５００．前立腺がんの処置における使用のための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５０１．腎臓がんの処置で使用するための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５０２．膵臓がんの処置における使用のための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５０３．結腸直腸がんの処置における使用のための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５０４．卵巣がんの処置で使用するための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５０５．胃がんの処置における使用のための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５０６．頭頸部がんの処置における使用のためのものであり、任意選択で、がんが、ＨＮＳＣＣである、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５０７．皮膚がんの処置における使用のための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５０８．悪性黒色腫の処置で使用するための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５０９．肝臓がんの処置で使用するための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５１０．神経膠腫の処置における使用のための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５１１．甲状腺がんの処置における使用のための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５１２．子宮頸がんの処置における使用のための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５１３．子宮内膜がんの処置における使用のための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物。
５１４．がんの処置のための医薬を製造するための、実施形態１から３８４のいずれか一つに記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、実施形態３８５から３９４のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態３９５から４２９のいずれか一つに記載のＣＡＲ、実施形態４２９から４３９のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態４４０または実施形態４４１に記載の核酸、実施形態４４２から４４４のいずれか一つに記載のベクター、実施形態４４５から４４８のいずれか一つに記載の宿主細胞、または実施形態４４９に記載の医薬組成物の使用であって、任意選択で、がんが、乳がん、肺がん、泌尿生殖器がん（例えば、前立腺がんまたは腎臓がん）、膵臓がん、結腸直腸がん、卵巣がん、胃がん、頭頸部がん、皮膚がん、悪性黒色腫、肝臓がん、神経膠腫、甲状腺がんまたは子宮内膜がんである、使用。
５１５．がんが、乳がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５１６．がんが、肺がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５１７．がんが、非小細胞肺がんである、実施形態５１６に記載の使用。
５１８．がんが、泌尿生殖器がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５１９．がんが、前立腺がんである、実施形態５１８に記載の使用。
５２０．がんが、腎臓がんである、実施形態５１８に記載の使用。
５２１．がんが、膵臓がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５２２．がんが、結腸直腸がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５２３．がんが、卵巣がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５２４．がんが、胃がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５２５．がんが、頭頸部がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５２６．頭頸部がんが、ＨＮＳＣＣである、実施形態５２５に記載の使用。
５２７．がんが、皮膚がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５２８．がんが、悪性黒色腫である、実施形態５１４に記載の使用。
５２９．がんが、肝臓がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５３０．がんが、神経膠腫である、実施形態５１４に記載の使用。
５３１．がんが、甲状腺がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５３２．がんが、子宮頸がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５３３．がんが、子宮内膜がんである、実施形態５１４に記載の使用。
５３４．配列番号１６５のアミノ酸４～１３を含む、長さが１２～３０アミノ酸のペプチド。
５３５．長さが１５～２５アミノ酸である、実施形態５３４に記載のペプチド。
５３６．長さが１８～２０アミノ酸である、実施形態５３４に記載のペプチド。
５３７．配列番号１６５からなる、実施形態５３４に記載のペプチド。
５３８．配列番号１６５の５位に対応するスレオニンにおよび／または配列番号１６５の１２位に対応するセリンにおいてＯ－グリコシル化されている、実施形態５３４から５３７のいずれか一つに記載のペプチド。
５３９．Ｏ－グリコシル化が、ＧａｌＮＡｃを含むかまたはそれからなる、実施形態５３８に記載のペプチド。
５４０．実施形態５３８または実施形態５３９に記載のペプチドおよびアジュバントを含む組成物。
５４１．アジュバントが、フロイントアジュバントおよび／またはアルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウム）を含む、実施形態５４０に記載の組成物。
５４２．実施形態５３８もしくは実施形態５３９に記載のペプチドまたは請求項５４０もしくは実施形態５４１に記載の組成物を動物に投与することを含む、ＣＤ４４ｖ６の腫瘍関連の形態に対する抗体を生成する方法。
５４３．動物から抗体を収集することをさらに含む、実施形態５４２に記載の方法。
５４４．ＣＤ４４ｖ６の腫瘍関連の形態に対する免疫応答を惹起する方法であって、実施形態５３８もしくは実施形態５３９に記載のペプチドまたは実施形態５４０もしくは実施形態５４１に記載の組成物を対象に投与することを含む方法。
５４５．動物が、マウスまたはウサギである、実施形態５４２から５４４のいずれか一つに記載の方法。
本出願で引用された全ての公報、特許、特許出願および他の文書は、それぞれ個々の公報、特許、特許出願または他の文書があらゆる目的のために参照により組み入れられることが個々に示されたのと同程度に、あらゆる目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。本明細書に組み入れられる参考文献の１つまたは複数の教示と本発明の開示との間に不一致がある事象では、本明細書の教示が意図される。

Claims (67)

  1. （ａ）配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列；
    （ｂ）配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列；
    （ｃ）配列番号４５の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号４６の軽鎖可変（ＶＬ）配列；
    （ｄ）配列番号６７の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号６８の軽鎖可変（ＶＬ）配列；または
    （ｅ）配列番号２０６の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２０７の軽鎖可変（ＶＬ）配列
    を含む抗体または抗原結合フラグメントと、配列番号１６５のアミノ酸位置５におけるスレオニンおよび配列番号１６５のアミノ酸位置１２におけるセリンにおいてＧａｌＮＡｃによりグリコシル化されたＣＤ４４ｖ６ペプチドＧＹＲＱＴＰＫＥＤＳＨＳＴＴＧＴＡＡＡ（配列番号１６５）との結合に関して競合する、抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  2. （ａ）配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列；
    （ｂ）配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列；
    （ｃ）配列番号４５の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号４６の軽鎖可変（ＶＬ）配列；
    （ｄ）配列番号６７の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号６８の軽鎖可変（ＶＬ）配列；または
    （ｅ）配列番号２０６の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２０７の軽鎖可変（ＶＬ）配列
    を含む抗体または抗原結合フラグメントと、ｉ）ＣＯＳＭＣノックアウトＨａＣａＴ細胞および／または（ｉｉ）ＣＤ４４を組換え発現するＣＯＳＭＣノックアウトＨＥＫ２９３細胞に特異的に結合することに関して競合する、抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  3. 配列番号２５６のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１；配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；配列番号１０３、配列番号１０９、配列番号１１５、配列番号１２１、配列番号１３１、配列番号１３７、配列番号１４３、または配列番号１４９；配列番号２４２、または配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；配列番号１０４、配列番号１１０、配列番号１１６、配列番号１２２、配列番号１３２、配列番号１３８、配列番号１４４、または配列番号１５０、配列番号２４３、または配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；配列番号２５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号２５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  4. ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１２５、配列番号１５３、配列番号２２８、配列番号２３２、配列番号２３６、または配列番号２４６のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  5. （ａ）配列番号８９、配列番号９７、および配列番号１２５中のＸ１と指定されたアミノ酸が、ＹまたはＦであり；
    （ｂ）配列番号８９、配列番号９７、および配列番号１２５中のＸ２と指定されたアミノ酸が、ＴまたはＳであり；
    （ｃ）配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１２５、および配列番号１５３中のＸ３と指定されたアミノ酸が、ＹまたはＦであり；
    （ｄ）配列番号８９、配列番号９３、および配列番号１２５中のＸ４と指定されたアミノ酸が、Ｗ、Ａ、またはＧであり；
    （ｅ）配列番号９３および配列番号１２５中のＸ５と指定されたアミノ酸が、ＭまたはＩであり；
    （ｆ）配列番号９３および配列番号１２５中のＸ６と指定されたアミノ酸が、ＨまたはＳである、請求項４に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  6. （ａ）配列番号２２８、配列番号２３６、および配列番号２４６中のＸ４１と指定されたアミノ酸が、ＹまたはＦであり；
    （ｂ）配列番号２２８、配列番号２３６、および配列番号２４６中のＸ４２と指定されたアミノ酸が、ＦまたはＩであり；
    （ｃ）配列番号２２８、配列番号２３６、および配列番号２４６中のＸ４３と指定されたアミノ酸が、Ｔ、Ｓ、またはＮであり；
    （ｄ）配列番号２２８、配列番号２３２、配列番号２３６、配列番号２４６、および配列番号２５６中のＸ４４と指定されたアミノ酸が、ＳまたはＴであり；
    （ｅ）配列番号２２８、配列番号２３２、配列番号２３６、配列番号２４６、および配列番号２５６中のＸ４５と指定されたアミノ酸が、ＹまたはＦであり；
    （ｆ）配列番号２２８、配列番号２３２、および配列番号２４６中のＸ４６と指定されたアミノ酸が、Ｗ、Ａ、Ｇ、またはＨであり；
    （ｇ）配列番号２３２および配列番号２４６中のＸ４７と指定されたアミノ酸が、ＭまたはＩであり；
    （ｈ）配列番号２３２および配列番号２４６中のＸ４８と指定されたアミノ酸が、Ｈ、Ｓ、またはＧである、請求項４に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  7. ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号９０、配列番号９４、配列番号９８、配列番号２２９、配列番号２３３、または配列番号２３７のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  8. （ａ）配列番号９４中のＸ７と指定されたアミノ酸が、Ｎ、Ｅ、またはＹであり；
    （ｂ）配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ８と指定されたアミノ酸が、ＹまたはＳであり；
    （ｃ）配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ９と指定されたアミノ酸が、ＰまたはＳであり；
    （ｄ）配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１０と指定されたアミノ酸が、ＲまたはＧであり；
    （ｅ）配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１１と指定されたアミノ酸が、ＳまたはＧであり；
    （ｆ）配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１２と指定されたアミノ酸が、ＧまたはＳであり；
    （ｇ）配列番号９０、配列番号９４、および配列番号９８中のＸ１３と指定されたアミノ酸が、ＴまたはＹであり；
    （ｈ）配列番号９０および配列番号９４中のＸ１４と指定されたアミノ酸が、ＴまたはＩであり；
    （ｉ）配列番号９４中のＸ１５と指定されたアミノ酸が、ＮまたはＹであり；
    （ｊ）配列番号９４中のＸ１６と指定されたアミノ酸が、Ｄ、Ｐ、またはＡであり；
    （ｋ）配列番号９４中のＸ１７と指定されたアミノ酸が、ＧまたはＤであり；
    （ｌ）配列番号９４中のＸ１８と指定されたアミノ酸が、ＹまたはＴであり；
    （ｍ）配列番号９４中のＸ１９と指定されたアミノ酸が、ＦまたはＶであり；
    （ｎ）配列番号９４中のＸ２０と指定されたアミノ酸が、Ｋ、Ｔ、Ｓ、またはＧである、請求項７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  9. （ａ）配列番号２３３中のＸ４９と指定されたアミノ酸が、Ｎ、Ｅ、Ｙ、またはＩであり；
    （ｂ）配列番号２３３中のＸ５０と指定されたアミノ酸が、ＩまたはＶであり；
    （ｃ）配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５１と指定されたアミノ酸が、ＹまたはＳであり；
    （ｄ）配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５２と指定されたアミノ酸が、Ｐ、Ｓ、またはＨであり；
    （ｅ）配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５３と指定されたアミノ酸が、Ｒ、Ｇ、またはＤであり；
    （ｆ）配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５４と指定されたアミノ酸が、ＳまたはＧであり；
    （ｇ）配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５５と指定されたアミノ酸が、ＧまたはＳであり；
    （ｈ）配列番号２２９、配列番号２３３、および配列番号２３７中のＸ５６と指定されたアミノ酸が、ＴまたはＹであり；
    （ｉ）配列番号２２９および配列番号２３３中のＸ５７と指定されたアミノ酸が、Ｔ、Ｉであるか、または存在せず；
    （ｊ）配列番号２３３中のＸ５８と指定されたアミノ酸が、ＮまたはＹであり；
    （ｋ）配列番号２３３中のＸ５９と指定されたアミノ酸が、Ｄ、Ｐ、またはＡであり；
    （ｌ）配列番号２３３中のＸ６０と指定されたアミノ酸が、Ｇ、Ｄ、またはＴであり；
    （ｍ）配列番号２３３中のＸ６１と指定されたアミノ酸が、Ｙ、Ｔ、またはＷであり；
    （ｎ）配列番号２３３中のＸ６２と指定されたアミノ酸が、Ｆ、Ｖ、またはＡであり；
    （ｏ）配列番号２３３中のＸ６３と指定されたアミノ酸が、ＫまたはＴであり；
    （ｐ）配列番号２３３中のＸ６４と指定されたアミノ酸が、ＳまたはＧである、請求項７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  10. ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号９１、配列番号９５、配列番号２３０、または配列番号２３４のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  11. （ａ）配列番号９１および配列番号９５中のＸ２２と指定されたアミノ酸が、Ｇ、Ｓ、またはＬであり；
    （ｂ）配列番号９１および配列番号９５中のＸ２３と指定されたアミノ酸が、ＴまたはＩであり；
    （ｃ）配列番号９１および配列番号９５中のＸ２４と指定されたアミノ酸が、ＮまたはＳであり；
    （ｄ）配列番号９５中のＸ２５と指定されたアミノ酸が、ＮまたはＲであり；
    （ｅ）配列番号９５中のＸ２６と指定されたアミノ酸が、ＲまたはＬであり；
    （ｆ）配列番号９５中のＸ２７と指定されたアミノ酸が、Ａ、Ｈ、またはＦであり；
    （ｇ）配列番号９５中のＸ２８と指定されたアミノ酸が、ＰまたはＳである、請求項１０に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  12. （ａ）配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６５と指定されたアミノ酸が、Ｇ、Ｓ、Ｌ、Ｋであり；
    （ｂ）配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６６と指定されたアミノ酸が、Ｔ、Ｉ、またはＡであり；
    （ｃ）配列番号２３０および配列番号２３４中のＸ６７と指定されたアミノ酸が、ＮまたはＳであり；
    （ｄ）配列番号２３４中のＸ６８と指定されたアミノ酸が、Ｎ、Ｒ、またはＴであり；
    （ｅ）配列番号２３４中のＸ６９と指定されたアミノ酸が、ＲまたはＬであり；
    （ｆ）配列番号２３４中のＸ７０と指定されたアミノ酸が、Ａ、Ｈ、またはＦであり；
    （ｇ）配列番号２３４中のＸ７１と指定されたアミノ酸が、ＰまたはＳである、請求項１０に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  13. ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号９２、または配列番号２３１のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  14. （ａ）配列番号９２中のＸ２９と指定されたアミノ酸が、Ａ、Ｑ、またはＬであり；
    （ｂ）配列番号９２中のＸ３０と指定されたアミノ酸が、ＬまたはＱであり；
    （ｃ）配列番号９２中のＸ３１と指定されたアミノ酸が、Ｌ、Ｇ、またはＷであり；
    （ｄ）配列番号９２中のＸ３２と指定されたアミノ酸が、Ｙ、Ｓ、またはＴであり；
    （ｅ）配列番号９２中のＸ３３と指定されたアミノ酸が、Ｓ、Ｔ、またはＨであり；
    （ｆ）配列番号９２中のＸ３４と指定されたアミノ酸が、Ｎ、Ｌ、またはＱであり；
    （ｇ）配列番号９２中のＸ３５と指定されたアミノ酸が、ＹまたはＰであり；
    （ｈ）配列番号９２中のＸ３６と指定されたアミノ酸が、ＷまたはＦであり；
    （ｉ）配列番号９２中のＸ３７と指定されたアミノ酸が、ＹまたはＴである、請求項１３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  15. （ａ）配列番号２３１中のＸ７２と指定されたアミノ酸が、Ａ、Ｑ、またはＬであり；
    （ｂ）配列番号２３１中のＸ７３と指定されたアミノ酸が、Ｌ、Ｑ、またはＧであり；
    （ｃ）配列番号２３１中のＸ７４と指定されたアミノ酸が、Ｌ、Ｇ、またはＷであり；
    （ｄ）配列番号２３１中のＸ７５と指定されたアミノ酸が、Ｙ、Ｓ、またはＴであり；
    （ｅ）配列番号２３１中のＸ７６と指定されたアミノ酸が、Ｓ、Ｔ、Ｈ、またはＫであり；
    （ｆ）配列番号２３１中のＸ７７と指定されたアミノ酸が、Ｎ、Ｌ、Ｑ、またはＧであり；
    （ｇ）配列番号２３１中のＸ７８と指定されたアミノ酸が、Ｙ、Ｐ、またはＤであり；
    （ｈ）配列番号２３１中のＸ７９と指定されたアミノ酸が、Ｗ、Ｆ、またはＩであり；
    （ｉ）配列番号２３１中のＸ８０と指定されたアミノ酸が、Ｙ、Ｔ、またはＨであり；
    （ｊ）配列番号２３１中のＸ８１と指定されたアミノ酸が、Ｐであるか、または存在しない、請求項１３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  16. （ａ）配列番号３～５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号６～８のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｂ）配列番号９～１１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１２～１４のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｃ）配列番号１５～１７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１８～２０のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｄ）配列番号２５～２７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号２８～３０のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｅ）配列番号３１～３３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号３４～３６のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｆ）配列番号３７～３９の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号４０～４２のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｇ）配列番号４７～４９の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号５０～５２のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｈ）配列番号５３～５５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号５６～５８のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｉ）配列番号５９～６１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号６２～６４のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｊ）配列番号６９～７１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号７２～７４のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｋ）配列番号７５～７７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号７８～８０のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｌ）配列番号８１～８３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号８４～８６のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｍ）配列番号２０８～２１０の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号２１１～２１３のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｎ）配列番号２１４～２１６の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号２１７～２１９のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｏ）配列番号２２０～２２２の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号２２３～２２５のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｐ）配列番号１０１～１０３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１０４～１０６のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｑ）配列番号１０７～１０９の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１１０～１１２のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｒ）配列番号１１３～１１５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１１６～１１８のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｓ）配列番号１１９～１２１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１２２～１２４のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｔ）配列番号２４０～２４２の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号２４３～２４５のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｕ）配列番号１２９～１３１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１３２～１３４のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｖ）配列番号１３５～１３７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１３８～１４０のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｗ）配列番号１４１～１４３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１４４～１４６のＣＤＲを含むＶＬ；
    （ｘ）配列番号１４７～１４９の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号１５０～１５２のＣＤＲを含むＶＬ；または
    （ｙ）配列番号２５０～２５２の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよび配列番号２５３～２５５のＣＤＲを含むＶＬ
    を有する、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  17. （ａ）配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
    （ｂ）配列番号１と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
    （ｃ）配列番号１と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ
    を有する、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  18. 配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  19. （ａ）配列番号２３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
    （ｂ）配列番号２３と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２４と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
    または
    （ｃ）配列番号２３と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２４と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ
    を有する、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  20. 配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬ
    を有する、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  21. （ａ）配列番号４５と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号４６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
    （ｂ）配列番号４５と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号４６と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；または
    （ｃ）配列番号４５と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号４６と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ
    を有する、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  22. 配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  23. （ａ）配列番号６７と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号６８と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
    （ｂ）配列番号６７と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号６８と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；または
    （ｃ）配列番号６７と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号６８と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ
    を有する、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  24. 配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号６８のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  25. （ａ）配列番号２０６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２０７と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
    （ｂ）配列番号２０６と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２０７と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；または
    （ｃ）配列番号２０６と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２０７と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ
    を有する、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  26. 配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＶＬを有する、請求項３に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  27. （ｉ）配列番号１の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２の軽鎖可変（ＶＬ）配列、（ｉｉ）配列番号２３の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２４の軽鎖可変（ＶＬ）配列、（ｉｉｉ）配列番号４５の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号４６の軽鎖可変（ＶＬ）配列、（ｉｖ）配列番号６７の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号６８の軽鎖可変（ＶＬ）配列、または（ｖ）配列番号２０６の重鎖可変（ＶＨ）配列、および配列番号２０７の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む参照抗体または抗原結合フラグメントと、配列番号１６５のアミノ酸位置５におけるスレオニンおよび配列番号１６５のアミノ酸位置１２におけるセリンにおいてＧａｌＮＡｃによりグリコシル化されたＣＤ４４ｖ６ペプチドＧＹＲＱＴＰＫＥＤＳＨＳＴＴＧＴＡＡＡ（配列番号１６５）への結合に関して競合する抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントであって、前記抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、
    （ａ）ＶＨ配列内に第１、第２および第３のＣＤＲ手段を有するＶＨ配列；ならびに
    （ｂ）ＶＬ配列内に第４、第５および第６のＣＤＲ手段を有するＶＬ配列
    を含み、
    前記第１、第２、第３、第４、第５、および第６のＣＤＲ手段は、協同して、前記抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの前記ＣＤ４４ペプチドへの結合を生じさせるものであり、前記抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントは、前記参照抗体または抗原結合フラグメントと競合する、抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  28. 正常細胞と比較してがん細胞で過剰発現されるグリコＣＤ４４エピトープに優先的に結合する、請求項１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  29. 配列番号１６５のアミノ酸位置５におけるスレオニンおよび配列番号１６５のアミノ酸位置１２におけるセリンにおいてＳＴｎでグリコシル化されているＣＤ４４ｖ６ペプチドＧＹＲＱＴＰＫＥＤＳＨＳＴＴＧＴＡＡＡ（配列番号１６５）に、以下：
    （ａ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１ｎＭから２００ｎＭ；
    （ｂ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１ｎＭから１５０ｎＭ；
    （ｃ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１ｎＭから１００ｎＭ；
    （ｄ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１ｎＭから５０ｎＭ；
    （ｅ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５ｎＭから２００ｎＭ；
    （ｆ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５ｎＭから１００ｎＭ；
    （ｇ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５ｎＭから５０ｎＭ；
    （ｈ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５ｎＭから２５ｎＭ；
    （ｉ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５ｎＭから１０ｎＭ；
    （ｊ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１０ｎＭから２００ｎＭ；
    （ｋ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１０ｎＭから１５０ｎＭ；
    （ｌ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１０ｎＭから１００ｎＭ；
    （ｍ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１０ｎＭから５０ｎＭ；
    （ｎ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１０ｎＭから２５ｎＭ；
    （ｏ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５０ｎＭから２００ｎＭ；
    （ｐ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５０ｎＭから１５０ｎＭ；
    （ｑ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、５０ｎＭから１００ｎＭ；
    （ｒ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１００ｎＭから２００ｎＭ；または
    （ｓ）表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合、１００ｎＭから１５０ｎＭ
    の結合親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  30. 精製された組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼＧａｌＮＡｃ－Ｔ１、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ４を使用してインビトロでグリコシル化された配列（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（配列番号２０５）を有する第１のＭＵＣ１糖ペプチドに特異的には結合しない、請求項１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  31. 前記ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、前記第１のＭＵＣ１糖ペプチドへの前記抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも２００倍であり、任意選択で、前記結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、前記表面プラズモン共鳴は、前記抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは前記第２のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量の存在下で測定される、請求項３０に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  32. 太字と下線の文字で示したセリンおよびスレオニン残基においてＧａｌＮＡｃｏｎを用いてインビトロでグリコシル化された配列ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号２６０）を有する第２のＭＵＣ１糖ペプチドに特異的には結合しない、請求項１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  33. 前記ＣＤ４４ｖ６糖ペプチドへの結合親和性が、前記第２のＭＵＣ１糖ペプチドへの前記抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合親和性の、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも２００倍であり、任意選択で、前記結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定され、さらに任意選択で、前記表面プラズモン共鳴は、前記抗グリコＣＤ４４ｖ６ペプチドまたは前記第２のＭＵＣ１糖ペプチドのいずれかの飽和量の存在下で測定される、請求項３２に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  34. 多価である、請求項１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  35. 単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の形態である、請求項１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  36. 多重特異性抗体の形態である、請求項１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  37. 前記多重特異性抗体が、第１のエピトープと異なる第２のエピトープに結合する二重特異性抗体である、請求項３６に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  38. 前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂ、Ｆａｂ－アーム交換抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、または二重親和性リターゲティング分子（ＤＡＲＴ）である、請求項３７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  39. 前記第２のエピトープが、ＣＤ４４エピトープである、請求項３７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  40. 前記第２のエピトープが、正常細胞と比較してがん細胞で過剰発現されるＣＤ４４エピトープである、請求項３９に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  41. 前記第２のエピトープが、Ｔ細胞エピトープである、請求項３７に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  42. 前記Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープ、ＣＤ８エピトープ、ＣＤ１６エピトープ、ＣＤ２５エピトープ、ＣＤ２８エピトープ、またはＮＫＧ２Ｄエピトープを含む、請求項４１に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント。
  43. 少なくとも第２のアミノ酸配列に作動可能に連結した、請求項１から４２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸配列を含む、融合タンパク質。
  44. 請求項３５に記載のｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
  45. 配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、または配列番号２６１のアミノ酸配列を含む、請求項４４に記載のＣＡＲ。
  46. 細胞傷害性物質にコンジュゲートした、請求項１から４２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを含む抗体－薬物コンジュゲート。
  47. 請求項１から４２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントのコード領域を含む核酸。
  48. 請求項４７に記載の核酸を含むベクター。
  49. 請求項４７に記載の核酸を発現するように改変された宿主細胞。
  50. 請求項４８に記載のベクターを含む宿主細胞。
  51. （ａ）請求項１から４２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメント、および（ｂ）生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまたは希釈剤を含む医薬組成物。
  52. がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項１から４２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントを投与することを含む、方法。
  53. 前記対象が、乳がん、肺がん、泌尿生殖器がん、膵臓がん、結腸直腸がん、卵巣がん、胃がん、頭頸部がん、皮膚がん、悪性黒色腫、肝臓がん、神経膠腫、甲状腺がん、子宮頸がん、または子宮内膜がんに罹患している、請求項５２に記載の方法。
  54. 生物学的サンプルにおいてがんを検出する方法であって、サンプルを、請求項１から４２のいずれか一項に記載の抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および前記抗グリコＣＤ４４抗体または抗原結合フラグメントの結合を検出することを含む、方法。
  55. 前記がんが、乳がん、肺がん、泌尿生殖器がん、膵臓がん、結腸直腸がん、卵巣がん、胃がん、頭頸部がん、皮膚がん、悪性黒色腫、肝臓がん、神経膠腫、甲状腺がん、子宮頸がん、または子宮内膜がんである、請求項５４に記載の方法。
  56. 配列番号１６５のアミノ酸４～１３を含む、長さが１２～３０アミノ酸のペプチド。
  57. 長さが１５～２５アミノ酸である、請求項５６に記載のペプチド。
  58. 長さが１８～２０アミノ酸である、請求項５６に記載のペプチド。
  59. 配列番号１６５からなる、請求項５６に記載のペプチド。
  60. 配列番号１６５の５位に対応するスレオニンにおよび／または配列番号１６５の１２位に対応するセリンにおいてＯ－グリコシル化されている、請求項５６から５８のいずれか一項に記載のペプチド。
  61. 前記Ｏ－グリコシル化が、ＧａｌＮＡｃを含むかまたはそれからなる、請求項６０に記載のペプチド。
  62. 請求項６０または請求項６１に記載のペプチドおよびアジュバントを含む組成物。
  63. 前記アジュバントが、アルミニウム塩を含む、請求項６２に記載の組成物。
  64. ＣＤ４４ｖ６の腫瘍関連形態に対する抗体を生成する方法であって、請求項６０もしくは請求項６１に記載のペプチドまたは請求項６２もしくは請求項６３に記載の組成物を動物に投与することを含む、方法。
  65. 前記動物から抗体を収集することをさらに含む、請求項６４に記載の方法。
  66. ＣＤ４４ｖ６の腫瘍関連形態に対する免疫応答を惹起する方法であって、請求項６０もしくは請求項６１に記載のペプチドまたは請求項６２もしくは請求項６３に記載の組成物を対象に投与することを含む、方法。
  67. 前記動物が、マウスまたはウサギである、請求項６４から６６のいずれか一項に記載の方法。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022187591A1 (en) * 2021-03-05 2022-09-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses
US20230346862A1 (en) 2022-05-02 2023-11-02 Athanor Biosciences, Inc. Cancer eradicating - bio-nanoparticles (ce-bnp)
WO2023215560A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Atoosa Corporation Tumor cell/immune cell multivalent receptor engager – bio-nanoparticle (timre-bnp)
WO2024040194A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering

Family Cites Families (116)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US4510245A (en) 1982-11-18 1985-04-09 Chiron Corporation Adenovirus promoter system
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
US4968615A (en) 1985-12-18 1990-11-06 Ciba-Geigy Corporation Deoxyribonucleic acid segment from a virus
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
DE68921982T4 (de) 1988-06-14 1996-04-25 Cetus Oncology Corp Kupplungsmittel und sterisch gehinderte, mit disulfid gebundene konjugate daraus.
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
DK0463151T3 (da) 1990-01-12 1996-07-01 Cell Genesys Inc Frembringelse af xenogene antistoffer
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
DK0546073T3 (da) 1990-08-29 1998-02-02 Genpharm Int Frembringelse og anvendelse af transgene, ikke-humane dyr, der er i stand til at danne heterologe antistoffer
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
IE922437A1 (en) 1991-07-25 1993-01-27 Idec Pharma Corp Recombinant antibodies for human therapy
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
ES2227512T3 (es) 1991-12-02 2005-04-01 Medical Research Council Produccion de anticuerpos contra auto-antigenos a partir de repertorios de segmentos de anticuerpos fijados en un fago.
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5993434A (en) 1993-04-01 1999-11-30 Genetronics, Inc. Method of treatment using electroporation mediated delivery of drugs and genes
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
ES2301183T3 (es) 1996-12-03 2008-06-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpo completamente humano que se une al receptor del egfr.
US6261281B1 (en) 1997-04-03 2001-07-17 Electrofect As Method for genetic immunization and introduction of molecules into skeletal muscle and immune cells
RU2224766C2 (ru) 1997-04-14 2004-02-27 Микромет Аг Способ получения рецепторов для человеческих антигенов и их применение
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US6241701B1 (en) 1997-08-01 2001-06-05 Genetronics, Inc. Apparatus for electroporation mediated delivery of drugs and genes
US6055453A (en) 1997-08-01 2000-04-25 Genetronics, Inc. Apparatus for addressing needle array electrodes for electroporation therapy
EP2261229A3 (en) 1998-04-20 2011-03-23 GlycArt Biotechnology AG Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6678556B1 (en) 1998-07-13 2004-01-13 Genetronics, Inc. Electrical field therapy with reduced histopathological change in muscle
ATE384792T1 (de) 1998-11-18 2008-02-15 Genentech Inc Antikörpervarianten mit höheren bindungsaffinitäten im vergleich zu parentalen antikörpern
US7171264B1 (en) 1999-05-10 2007-01-30 Genetronics, Inc. Intradermal delivery of active agents by needle-free injection and electroporation
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
CA2406864A1 (en) 2000-02-24 2001-08-30 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
EP1259265B1 (en) 2000-03-03 2011-06-01 Genetronics, Inc. Nucleic acid formulations for gene delivery
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
HUP0700103A3 (en) 2001-08-03 2012-09-28 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
US7745140B2 (en) 2002-01-03 2010-06-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Activation and expansion of T-cells using an engineered multivalent signaling platform as a research tool
US8209006B2 (en) 2002-03-07 2012-06-26 Vgx Pharmaceuticals, Inc. Constant current electroporation device and methods of use
US20040014645A1 (en) 2002-05-28 2004-01-22 Advisys, Inc. Increased delivery of a nucleic acid construct in vivo by the poly-L-glutamate ("PLG") system
US7328064B2 (en) 2002-07-04 2008-02-05 Inovio As Electroporation device and injection apparatus
US20050070841A1 (en) 2002-07-04 2005-03-31 Inovio As Electroporation device and injection apparatus
EP1545613B9 (en) 2002-07-31 2012-01-25 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
WO2004019993A1 (en) 2002-08-30 2004-03-11 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Self-immolative dendrimers releasing many active moieties upon a single activating event
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7705045B2 (en) 2002-11-14 2010-04-27 Syntarga, B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
JP5425365B2 (ja) 2003-01-22 2014-02-26 グリカート バイオテクノロジー アクチェンゲゼルシャフト 増加したＦｃレセプター結合親和性およびエフェクター機能を有する抗体を作製するための融合構築物およびその使用
ATE472338T1 (de) 2003-02-20 2010-07-15 Seattle Genetics Inc Anti-cd70 antikörper-arzneimittelkonjugate und ihre verwendung zur behandlung von krebs
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
AU2005216251B2 (en) 2004-02-23 2011-03-10 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
WO2005123780A2 (en) 2004-04-09 2005-12-29 Protein Design Labs, Inc. Alteration of fcrn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
EP2295588B1 (en) 2004-05-27 2018-03-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel artificial antigen presenting cells and uses thefor
TR201808537T4 (tr) 2004-09-23 2018-07-23 Genentech Inc Sistein değiştirilmiş antikorlar ve konjugatlar.
US7632497B2 (en) 2004-11-10 2009-12-15 Macrogenics, Inc. Engineering Fc Antibody regions to confer effector function
JP5838021B2 (ja) 2005-04-15 2015-12-24 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 共有結合型ダイアボディとその使用
WO2007011968A2 (en) 2005-07-18 2007-01-25 Seattle Genetics, Inc. Beta-glucuronide-linker drug conjugates
CN101370927A (zh) 2005-12-07 2009-02-18 基因特伦尼克斯公司 可变容积电穿孔室以及其方法
BRPI0707426A2 (pt) 2006-02-02 2011-05-03 Syntarga Bv composto, conjugado, uso de um composto, composição farmacêutica, processo para preparar uma composição farmacêutica, e, métodos de tratamento de um mamìfero estando em necessidade do mesmo, e de tratamento ou prevenção de um tumor em um mamìfero
WO2008070593A2 (en) 2006-12-01 2008-06-12 Seattle Genetics, Inc. Variant target binding agents and uses thereof
SI2155783T1 (sl) 2007-04-03 2013-10-30 Amgen Research (Munich) Gmbh Medvrstno specifiäśna cd3-epsilon vezavna domena
ES2702087T3 (es) 2007-06-21 2019-02-27 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y sus usos
MX2010005857A (es) 2007-11-28 2010-11-22 Mersana Therapeutics Inc Conjugados de analogos de fumagillina biodegradables biocompatibles.
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20100152725A1 (en) 2008-12-12 2010-06-17 Angiodynamics, Inc. Method and system for tissue treatment utilizing irreversible electroporation and thermal track coagulation
SG10201407908VA (en) 2008-12-19 2015-01-29 Macrogenics Inc Covalent diabodies and uses thereof
KR20120057588A (ko) 2009-05-28 2012-06-05 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 가변 속도 방출 링커를 포함하는 폴리알 약물 접합체
EP2266593A1 (en) * 2009-06-24 2010-12-29 Karlsruher Institut für Technologie Use of CD44v6 in the treatment of ophthalmic diseases
EP2511718B1 (en) 2009-12-07 2017-07-05 Ntt Docomo, Inc. Propagation path estimation method, program, and device
US8796420B2 (en) 2009-12-31 2014-08-05 Avidbiotics Corp. Non-natural MIC proteins
US20150165065A1 (en) 2009-12-31 2015-06-18 Avidbiotics Corp. Non-natural mic proteins
US8658765B2 (en) 2009-12-31 2014-02-25 Avidbiotics Corp. Non-natural MIC proteins
WO2011120053A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
US9150663B2 (en) 2010-04-20 2015-10-06 Genmab A/S Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof
HUE041335T2 (hu) 2011-03-29 2019-05-28 Roche Glycart Ag Antitest FC-variánsok
RS56879B1 (sr) 2011-08-23 2018-04-30 Roche Glycart Ag Bispecifične molekule koje vezuju antigen za aktiviranje t ćelija
AU2012348017A1 (en) 2011-12-05 2014-07-03 Igenica Biotherapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods
KR20140121827A (ko) 2011-12-23 2014-10-16 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 퓨마질린 유도체-phf 결합체의 약제학적 제형
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
WO2014008375A1 (en) 2012-07-05 2014-01-09 Mersana Therapeutics, Inc. Terminally modified polymers and conjugates thereof
US10226535B2 (en) 2012-12-10 2019-03-12 Mersana Therapeutics, Inc. Auristatin compounds and conjugates thereof
AU2013359506B2 (en) 2012-12-10 2018-05-24 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
EP2931316B1 (en) 2012-12-12 2019-02-20 Mersana Therapeutics, Inc. Hydroxyl-polymer-drug-protein conjugates
NZ766556A (en) 2014-08-04 2024-02-23 Hoffmann La Roche Bispecific t cell activating antigen binding molecules
US11117969B2 (en) 2014-12-05 2021-09-14 Xyphos Biosciences Inc. Insertable variable fragments of antibodies and modified α1-α2 domains of NKG2D ligands
PT3227311T (pt) 2014-12-05 2022-02-23 Xyphos Biosciences Inc Fragmentos variáveis inseríveis de anticorpos e domínios a1-a2 modificados de ligandos de nkg2d
TN2017000470A1 (en) 2015-05-08 2019-04-12 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind cd3 and tumor antigens.
US10259858B2 (en) 2015-08-04 2019-04-16 Xyphos Biosciences Inc. Insertable variable fragments of antibodies and modified α1-α2 domains of NKG2D ligands, and non-natural NKG2D ligands that bind non-natural NKG2D receptors
KR20190019091A (ko) 2016-06-24 2019-02-26 사이포스 바이오사이언시스 인코포레이티드 항체의 삽입가능 가변 단편 및 nkg2d 리간드의 변형된 a1-a2 도메인
CN112074532A (zh) 2018-03-27 2020-12-11 修普霍斯生物科学有限公司 结合非天然NKG2D受体的非天然NKG2D配体的修饰的α1-α2结构域

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