NO20120466L - Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger, og fremgangsmater for utvelgelse og fremstilling av disse - Google Patents

Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger, og fremgangsmater for utvelgelse og fremstilling av disse

Info

Publication number
NO20120466L
NO20120466L NO20120466A NO20120466A NO20120466L NO 20120466 L NO20120466 L NO 20120466L NO 20120466 A NO20120466 A NO 20120466A NO 20120466 A NO20120466 A NO 20120466A NO 20120466 L NO20120466 L NO 20120466L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
activity
prodrug
target tissue
tissue
prodrugs
Prior art date
Application number
NO20120466A
Other languages
English (en)
Inventor
Ernest J Prisbe
Mark W Becker
Harlan H Chapman
Tomas Cihlar
Eugene J Eisenberg
Gong-Xin He
Michael R Kernan
William A Lee
John C Rohloff
Mark L Sparacino
Original Assignee
Gilead Sciences Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22821718&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO20120466(L) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Publication of NO20120466L publication Critical patent/NO20120466L/no
Application filed by Gilead Sciences Inc filed Critical Gilead Sciences Inc

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C07F9/65616—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings containing the ring system having three or more than three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members, e.g. purine or analogs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity

Abstract

En ny fremgangsmåte er tilveiebrakt for screening av prodroger av metoksyfosfonatnukleotidanalogerfor å identifisere prodroger som selektivt er målrettet mot ønskede vev, med antiviral eller antitumoraktivitet. Denne fremgangsmåten har ført til identifisering av nye blandede esteramidater av PMPA for retroviral eller hepadnaviral behandling, omfattende forbindelser ifølge struktur (5a) som har substituentgrupper som er definert heri. Preparater av disse nye forbindelsene i farmasøytisk akseptable eksipienser og deres anvendelse i terapi og profylakse er tilveiebrakt. Tilveiebrakt er også en forbedret fremgangsmåte for anvendelse av magnesiumalkoksid for fremstilling av startmaterialer og forbindelser for anvendelse heri.

Description

Denne søknaden er rettet mot prodroger av metoksyfosfonatnukleotidanaloger. Spesielt er den rettet mot forbedrede fremgangsmåter for fremstilling og identifisering av slike prodroger .
Mange metoksyfosfonatnukleotidanaloger er kjent. Generelt har slike forbindelser strukturen A-0CH2P(0) (OR) 2, hvor A er residuet til en nukleosidanalog og R uavhengig er hydrogen eller ulike beskyttende eller prodrogegrupper. Se US patentskrifter nr. 5 663 159, 5 977 061 og 5 798 340; Oliyai et al., Pharma-ceutical Research, 16( 11):1687-1693 (1999); Stella et al., J. Med. Chem., 23(12):1275-1282 (1980); Aarons, L., Boddy, A. og Petrak, K. (1989), Novel Drug Delivery and Its Therapeutic Application (Prescott, L.F. og Nimmo, W.S., red.), s. 121-126; Bundgaard, H. (1985), Design of Prodrugs (Bundgaard, H., red.), s. 70-74 og 79-92; Banerjee, P.K. og Amidon, G.L. (1985), Design of Prodrugs (Bundgaard, H., red.), s. 118-121; Notari, R.E.
(1985), Design of Prodrugs (Bundgaard, H., red.) s. 135-156; Stella, V.J. og Himmelstein, K.J. (1985), Design of Prodrugs (Bundgaard, H., red.), s. 177-198; Jones, G. (1985), Design of Prodrugs (Bundgaard, H., red.) s. 199-241; Connors, T.A. (1985), Design of Prodrugs (Bundgaard, H., red.) s. 291-316. All litte-ratur og alle patentsitater er her uttrykkelig innlemmet gjennom referanse.
Oppsummering av oppfinnelsen
Prodroger av metoksyfosfonatnukleotidanaloger ment til bruk i antiviral eller antitumorterapi er kjent og er blitt utvalgt på grunnlag av deres systemiske effekt. Slike prodroger er f.eks. blitt utvalgt på grunnlag av forsterket biotilgjengelighet, det vil si evnen til å bli absorbert fra tarmkanalen og raskt omdannes til mordrogen for å sikre at mordrogen er tilgjengelig for alle vev. Søkerne har nå imidlertid funnet at det er mulig å velge prodroger som kan bli anriket på behandlede steder, som illustrert ved studiene beskrevet her, hvor analogene er anriket i avgrensede fokale steder for HIV-infeksjon. Formålet med denne oppfinnelsen er, blant andre fordeler,
å gi mindre toksisitet til omkringliggende vev og større effekt
av mordrogen i vev som er målet for behandlingen med mor-metoksyfosfonatnukleotidanalogen.
Følgelig er det i samsvar med disse observasjoner tilveiebrakt en screeningsfremgangsmåte for å identifisere en metoksyfosfonatnukleotidanalogprodroge som gir forsterket aktivitet i et målvev, omfattende: (a) tilveiebringelse av minst én av de angitte prodrogene, (b) utvelgelse av minst ett terapeutisk målvev og
minst ett ikke-målvev,
(c) administrering av prodrogen til målvevet og til
minst ett ikke-målvev, og
(d) bestemme den relative antivirale aktiviteten
tildelt av prodrogen i vevene i trinn (c).
I foretrukne utførelsesformer er målvevet steder hvor HIV er aktivt replikert og/eller som tjener som et HIV-reser-voar, og ikke-målvevet er et intakt dyr. Uventet fant vi at valg av lymfoid vev som målvev for utførelsen av denne fremgangsmåten for HIV førte til identifisering av prodroger som forsterker leveringen av aktiv droge til slike vev.
En foretrukket forbindelse ifølge oppfinnelsen som er blitt identifisert ved denne fremgangsmåten, har strukturen (1)
hvor Ra er H eller metyl,
og kiralt anrikede preparater derav, salter, deres frie baser og solvater derav.
En foretrukket forbindelse ifølge oppfinnelsen har strukturen (2)
og dens anrikede diastereoisomerer, salter, frie baser og solvater. I tillegg fant vi uventet at kiraliteten til substituentene på fosforatomet og/eller de amiderte substituentene har innflytelse på anrikningen observert i den praktiske utførelsen av denne oppfinnelsen. Således tilveiebringes, i en annen ut-førelsesform av oppfinnelsen, diastereoisomert anrikede forbindelser ifølge oppfinnelsen som har strukturen (3) som er vesentlig fri for diastereoisomeren (4)
hvor
R<1>er en oksyester som er hydrolyserbar in vivo, eller hydroksyl,
B er en heterosyklisk base,
R<2>er hydroksyl eller et aminosyreresidu bundet til P-atomet via en aminogruppe i aminosyren og har hver karboksy- substituent på aminosyren valgfritt forestret, men ikke både R<1>eller R2 er hydroksyl<**>,
E er -CH20 (CH2) 2-, -CH2OCH (CH3) CH2-, -CH2OCH (CH2F) CH2-, -CH2OCH (CH2OH)-CH2-, -CH2OCH (CH=CH2) CH2-, -CH2OCH (CsCH) CH2-,
-CH2OCH (CH2N3) CH2-,
-CH2OCH(R<6>)OCH(R<6>')-,-CH2OCH (R<9>) CH20- eller -CH2OCH (R<8>) 0-, hvor bindingen på høyre side er knyttet til den heterosykliske basen,
den stiplede linjen representerer en valgfri dobbelt-binding,
R<4>ogR<5>er uavhengig hydrogen, hydroksy, halogen, amino eller en substituent som har 1-5 karbonatomer valgt fra acyl-oksy, alkoksy, alkyltio, alkylamino og dialkylamino,
R<6>ogR<6>' er uavhengig H, Ci_6-alkyl, Ci_6-hydroksyalkyl eller C2-C7-alkanoyl,
R<7>er uavhengig H, Ci-6-alkyl eller er satt sammen for å danne -0- eller -CH2-,
R<8>er H, Ci-6-alkyl, Ci-6-hydroksyalkyl eller Ci-C6-halo-genalkyl, og
R<9>er H, hydroksymetyl eller acyloksymetyl,
og deres salter, frie baser og solvater.
Diastereoisomerer av struktur (3) er betegnet (S)-iso-merene med fosfor som kiralt senter.
Foretrukne utførelsesformer ifølge oppfinnelsen er diastereoisomerisk anrikede forbindelser som har struktur (5a): som er vesentlig fri for diastereoisomer (5b):
hvor
R<5>er metyl eller hydrogen,
R<6>uavhengig er H, alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl eller arylalkyl, eller R6 uavhengig er alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl eller arylalkyl som er substituert med fra 1 til 3 substituenter valgt fra alkylamino, alkylaminoalkyl, dialkylaminoalkyl, dialkylamino, hydroksyl, okso, halogen, amino, alkyltio, alkoksy, alkoksyalkyl, aryloksy, aryloksyalkyl, arylalkoksy, arylalkoksy-alkyl, haloalkyl, nitro, nitroalkyl, azido, azidoalkyl, alkyl-acyl, alkylacylalkyl, karboksyl eller alkylacylamino,
R<7>er sidekjeden til enhver naturlig forekommende eller farmasøytisk akseptabel aminosyre, og dersom sidekjeden omfatter karboksyl, er karboksylgruppen valgfritt forestret med en alkyl-eller arylgruppe,
R<11>er amino, alkylamino, okso eller dialkylamino, og
R1<2>er amino eller H,
og dens salter, tautomerer, frie baser og solvater.
En foretrukket utførelsesform ifølge oppfinnelsen er forbindelsen med struktur (6), 9-[(R)-2-[[(S)-[[(S)-1-(iso-propoksykarbonyl)etyl]amino]fenoksyfosfinyl]metoksy]propyl]-adenin, også benevnt her som GS-7340
En annen foretrukket utførelsesform ifølge denne oppfinnelsen er fumaratsaltet av struktur (5) (struktur (7)), 9-[(R)-2-[[(S)-[[(S)-1-(isopropoksykarbonyl)etyl]amino]fenoksy-fosfinyl]metoksy]propyl]adeninfumarat (1:1), også benevnt her som GS-7340-2
Forbindelsene med strukturene (l)-(7) er valgfritt formulert i preparater inneholdende farmasøytisk akseptable eksipienser. Slike preparater er anvendt i effektive doser til behandlingen eller profylakse av virale (spesielt HIV eller hepadnavirale) infeksjoner.
I en videre utførelsesform er en fremgangsmåte for lettvint fremstilling av 9-[2-(fosfonometoksy)propyl]adenin (heretter "PMPA") eller 9-[2(fosfonometoksy)etyl]adenin (heretter "PMEA") tilveiebrakt gjennom anvendelse av magnesium alkoksid, som omfatter kombinasjon av 9-(2-hydroksypropyl)adenin eller 9-(2-hydroksyetyl)adenin, beskyttet p-toluensulfonyloksymetylfosfonat og magnesiumalkoksid, og gjenvinning av henholdsvis PMPA eller PMEA.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
Mordroge-metoksyfosfonatnukleotidanalogen til anvendelse i denne screeningsfremgangsmåten er forbindelser som har strukturen A-OCH2P(0) (OH)2, hvor A er residuet til en nukleosidanalog. Disse forbindelsene er kjent per se og er ikke del av denne oppfinnelsen. Nærmere bestemt omfatter morforbind-elsene en heterosyklisk base B og et aglykon E med den generelle strukturen
hvor gruppen B er definert nedenfor, og gruppen E er definert ovenfor. Eksemplene er beskrevet i US patentskrifter nr. 4 659 825, 4 808 716, 4 724 233, 5 142 051, 5 130 427, 5 650 510, 5 663 159, 5 302 585, 5 476 938, 5 696 263, 5 744 600, 5 688 778, 5 386 030, 5 733 896, 5 352 786 og 5 798 340, og EP 821 690 og 654 037.
Prodroger for anvendelse i screeningsfremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er kovalent modifiserte analoger av mor-metoksyfosfonatnukleotidanalogene beskrevet i foregående av-snitt. Generelt er fosforatomet i mordrogen det foretrukne setet for prodrogemodifikasjon, men andre seter er også funnet på den heterosykliske basen B eller aglykon E. Mange slike prodroger er allerede kjent. De er primært estere eller amider av fosforatomet, men omfatter også substitusjoner på basen og aglykonet. Ingen av disse modifikasjonene er per se del av denne oppfinnelsen, og ingen er ansett for å være begrensende for omfanget av oppfinnelsen heri.
Fosforatomet til metoksyfosfonatnukleotidanalogene inneholder to valenser for kovalent modifikasjon, slik som aminering eller forestring (med mindre ett fosforylhydroksyl er forestret med en aglykon E-substituent, hvorpå bare én fosfor- atomvalens er tilgjengelig for substitusjon). Esterne er typisk aryloksy. Amidater er vanligvis naturlig forekommende monoamino-syrer som har fri karboksylgruppe(r) forestret med en alkyl-eller arylgruppe, vanligvis fenyl, sykloalkyl eller t-, n- eller s-alkylgrupper. Egnede prodroger for anvendelse til screeningsfremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er beskrevet i f.eks.
US patentskrift nr. 5 798 340. Imidlertid er enhver prodroge som potensielt er antatt å være i stand til å bli omdannet in vivo innen målvevscellene til den frie metoksyfosfonatnukleotid-analogmordrogen, f.eks. enten ved hydrolyse, oksidasjon eller andre kovalente transformasjoner som er et resultat av eksponering overfor biologisk vev, egnet for anvendelse i fremgangsmåten ifølge denne oppfinnelsen. Det kan være at slike prodroger ikke er kjent på dette tidspunkt, men identifiseres i fremtiden og således kan være egnede kandidater som er tilgjengelige for testing i fremgangsmåten ifølge denne oppfinnelsen. Fordi prodrogene kun er kandidater for screening i fremgangsmåtene, er deres struktur ikke relevant for utførelsen eller muliggjøring av screeningsfremgangsmåten, selv om deres struktur selvfølgelig i siste instans er avgjørende for om hvorvidt en prodroge vil vise seg å være selektiv i analysen.
Pro-gruppene bundet til mordrogen kan være de samme eller forskjellige. Hver prodroge som anvendes i screeningsanalysen, vil imidlertid være strukturelt forskjellig fra de andre prodrogene som testes. Forskjellige, det vil si strukturelt forskjellige, prodroger er generelt valgt på grunnlag av enten deres stereokjemi eller deres kovalente struktur, eller disse trekkene(s)<**>variens i kombinasjon. Hver testede prodroge er imidlertid ønskelig strukturelt og stereo-kjemisk vesentlig ren, ellers vil utbyttet av screeningsanalysen være mindre nyttig. Det er selvfølgelig innen omfanget av denne oppfinnelsen å teste kun en enkelt prodroge i en individuell utførelsesform av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, selv om man typisk da vil sammenligne resultatene av tidligere studier med andre prodroger.
Vi har funnet at stereokjemien til prodrogene er i stand til å påvirke anrikningen i målvevet. Kirale seter er ved fosforatomet og er også funnet i dets substituenter. For eksempel kan aminosyrer anvendt i fremstilling av amidater ha D- eller L-former, og fosfonatesterne eller aminosyreesterne kan likeledes inneholde kirale sentre. Kirale seter er også funnet på nukleosidanalogdelen til molekylene, men disse er karakteristisk nok allerede bestemt av stereokjemien til mordrogen og vil ikke varieres som del av screeningen. For eksempel er R-isomeren til PMPA foretrukket fordi den er mer aktiv enn den tilsvarende S-isomeren. Karakteristisk vil disse diastereoisomerene eller enantiomerene være kiralt anriket, om ikke rene, ved hvert sete, slik at resultatet av screeningen vil være mer meningsfulle. Som kjent gis stereoisomerene særtrekk ved anrikning eller rensing av stereoisomerene (karakteristisk vil det være en diastereoisomer heller enn en enantiomer i tilfelle av de fleste metoksyfosfonatnukleotidanaloger), fri fra andre stereoisomerer ved det aktuelle kirale senteret, slik at hver testforbindelse er vesentlig homogen. Med vesentlig homogen eller kiralt anriket mener vi at den ønskede stereoisomer utgjør mer enn ca. 60 vekt% av forbindelsen, ordinært mer enn ca. 80 % og fortrinnsvis mer enn ca. 95 %.
Ny screeningsfremgangsmåte
Så snart minst én prodrogekandidat er blitt utvalgt, anvendes de gjenværende trinn av screeningsfremgangsmåten ifølge oppfinnelsen for å identifisere en prodroge som innehar den nødvendige selektivitet for et målvev. Det er mest beleilig at prodrogene merkes med en påvisbar gruppe, f.eks. radiomerket, for å forenkle senere påvisning i vev eller celler. En markør er imidlertid ikke påkrevd, siden andre egnede analyser for prodrogen eller dens metabolitter (omfattende mordrogen) også kan anvendes. Disse analysene kan f.eks. omfatte massespektrometri, HPLC, bioanalyser eller immunanalyser. Analysen kan påvise prodrogen eller én eller flere av dens metabolitter, men fortrinnsvis utføres analysen for å påvise kun dannelsen av mordrogen. Dette er basert på antakelsen (som ikke er berettiget i alle tilfeller) at graden og hastigheten av omdannelsen av prodrogen til antiviralt aktivt mor-difosfat er den samme i alle testede vev. Ellers kan man teste for difosfatet.
Målvevet vil fortrinnsvis være lymfoid vev når man screener for prodroger som er nyttige i behandlingen av HIV-infeksjon. Lymfoid vev vil være kjent for fagmannen og omfatter CD4-celler, lymfocytter, lymfeknuter, makrofager og makrofag-lignende celler omfattende monocytter, slik som perifere blodmonocyttceller (PBMC-er) og gliaceller. Lymfoid vev omfatter også ikke-lymfoid vev som er anriket med hensyn til lymfoide vev eller celler, f.eks. lunge, hud og milt. Andre mål for andre antivirale medikamenter vil selvfølgelig være det primære replikasjons- eller latensstedet for det aktuelle viruset det handler om, f.eks. lever for hepatitt og perifere nerver for HSV. Tilsvarende målvev for tumorer vil faktisk være tumorene selv. Disse vevene er vel kjent for fagmannen og vil ikke kreve uberettiget eksperimentering for utvelgelse. Når man screener for antivirale forbindelser, kan målvevet være infisert av viruset.
Ikke-målvev eller celler er også screenet som en del av fremgangsmåten heri. Ethvert antall eller enhver identitet til slike vev eller celler kan anvendes i dette henseende. Generelt vil vev hvor mordrogen er forventet å være toksisk, anvendes som ikke-målvev. Utvelgelse av et ikke-målvev er fullstendig av-hengig av prodrogens egenskaper og aktiviteten til mordrogen. For eksempel vil ikke-hepatisk vev utvelges for prodroger mot hepatitt, og ikke-transformerte celler fra samme vev som tumoren vil være tilstrekkelig for antitumorselektiv prodrogescreening.
Det bør bemerkes at fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er forskjellig fra studier som typisk foretas for å bestemme oral biotilgjengelighet av prodroger. I orale biotilgjengelig-hetsstudier er formålet å identifisere en prodroge som passerer inn i systemisk sirkulasjon tilstrekkelig omdannet til mordroge. I foreliggende oppfinnelse er formålet å finne prodroger som ikke er metabolisert i mage-tarmkanalen eller sirkulasjon. Således inkluderer målvevene som evalueres i fremgangsmåten ifølge denne oppfinnelsen generelt ikke tynntarmen, eller dersom tarmen er omfattet, omfatter vevene også ytterligere vev andre enn tynntarmen.
Mål- og ikke-målvevene anvendt i screeningsfremgangsmåten ifølge oppfinnelsen vil karakteristisk være i et intakt levende dyr. Det er mer ønskelig at prodroger inneholdende estere testes i hunder, aper eller andre dyr enn gnagere. Muse-og rotteplasma inneholder høye sirkulerende nivåer av esteraser som kan gi et villedende resultat dersom den ønskede tera-peutiske pasient er et menneske eller høyere dyr.
Det er ikke nødvendig å utføre denne fremgangsmåten med intakte dyr. Det er også innen omfanget av denne oppfinnelsen å anvende perfuserte organer, in vi tro-kultur av organer (f.eks. hudtransplantater) eller cellelinjer opprettholdt i ulike former for cellekultur, f.eks. rulleflasker eller nullgravitasjons-suspensjonssystemer. MT-2-celler kan f.eks. anvendes som målvev for utvelgelse av HIV-prodroger. Således skal uttrykket "vev" ikke tolkes dit hen at organiserte cellulære strukturer er nød-vendig eller strukturer av vev slik som de kan finnes i naturen, selv om slike ville være foretrukket. Uttrykket "vev" skal heller tolkes som å være synonymt med celler fra en bestemt kilde, et opphav eller differensieringsstadium.
Mål- og ikke-målvevet kan faktisk være samme vev, men vevene vil være i ulik biologisk tilstand. For eksempel kunne metoden her anvendes for å utvelge prodroger som kan gi aktivitet i antiviralt infiserte vev (målvev), men som forblir vesentlig inaktive i virus-uinfiserte celler (tilsvarende ikke-målvev) . Samme strategi kunne anvendes for å velge ut profylak-tiske prodroger, det vil si prodroger som metaboliseres til antiviralt aktive former som følge av viral infeksjon, men som forblir vesentlig ikke-metabolisert i uinfiserte celler. Tilsvarende kunne prodroger screenes i transformerte celler og det ikke-transformerte komplementærvevet. Dette vil være særlig nyttig ved sammenlignende tester for å velge ut prodroger for behandling av hematologiske kreftformer, f.eks. leukemier.
Uten å være begrenset av en bestemt teori om virkemåte, er vevsselektive prodroger antatt å være selektivt tatt opp av målcellene og/eller selektivt metabolisert innen cellen sammenlignet med andre vev eller celler. Den unike fordelen med de her beskrevne metoksyfosfonatprodrogene er at deres metabolisme til et dianion ved fysiologisk pH sikrer at de vil være ute av stand til å diffundere tilbake ut av cellen. De forblir derfor effektive over et lengre tidsrom og er opprettholdt ved forhøyede intracellulære konsentrasjoner, for derved å utvise forhøyet styrke. Mekanismene for forhøyet aktivitet i målvevet er antatt å omfatte økte opptak av målcellene, økt intracellulær retensjon eller at begge mekanismer arbeider sammen. Måten som selektivi teten eller den økte leveringen foregår på i målvevet, er imidlertid ikke viktig. Det er heller ikke viktig at all meta-bolsk omdannelse av prodrogen til morforbindelsen foregår innen målvevet. Det er kun den endelige medikamentaktivitetstildelende omdannelse som trenger å foregå i målvevet. Metabolismen i andre vev kan tilveiebringe intermediater som endelig omdannes til antivirale former i målvevet.
Graden av selektivitet eller økt leveranse som er ønsket, vil variere med mor-forbindelsen og måten det er målt på
(% dosedistribusjon eller mor-medikamentkonsentrasjon). Generelt kan, dersom mor-medikamentet allerede har et bredt terapeutisk vindu, en lav grad av selektivitet være tilstrekkelig for den aktuelle prodrogen. På den annen side kan toksiske forbindelser kreve mer vidtgående screening for å identifisere selektive prodroger. Den relative kostnad for fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan reduseres ved kun å screene i målvevet og i vev hvor mor-forbindelsen er kjent å være relativt toksisk, for f.eks. PMEA, som er nefrotoksisk ved høyere doser, vil det primære fokus være på nyrer og lymfoide vev.
Trinnet for bestemmelse av den relative antivirale aktiviteten til en prodroge i de utvalgte vevene er vanligvis oppnådd ved å analysere mål- og ikke-målvevet med hensyn til det relative nærvær av eller aktivitet til en metabolitt av prodrogen, som er kjent for å ha eller omdannes til en metabolitt som har antiviral eller antitumoraktivitet. Således vil man karakteristisk bestemme den relative mengde av mormedikamentet i vevene hovedsakelig i det samme tidsforløpet for å identifisere prodroger som er fortrinnsvis metabolisert i målvevet til en antiviral eller antitumoraktiv metabolitt eller forløper derav, som i målvevet endelig produserer den aktive metabolitt. Når det gjelder antivirale forbindelser, er den aktive metabolitt difosfatet av mor-fosfonatforbindelsene. Det er denne metabolitten som innlemmes i den virale nukleinsyren og derved avkorter forlengelsen av nukleinsyretråden og stanser viral replikasjon. Metabolitter av prodrogen kan være anabolske metabolitter, katabolske metabolitter eller produkter av både anabolisme og katabolisme. Måten som metabolitten er produsert på, er ikke viktig i utførelsen av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen.
Fremgangsmåten, ifølge oppfinnelsen, er ikke begrenset til analyser av metabolitter som per se innehar antiviral eller antitumoraktivitet. I stedet kan man analysere inaktive for-løpere til aktive metabolitter. Forløpere til antiviralt aktiv difosfatmetabolitt omfatter monofosfat fra mor-drogen, mono-fosfater av andre metabolitter av mordrogen (f.eks. en mellom-liggende modifikasjon av en substituent på den heterosykliske base), mordrogen selv og metabolitter generert av cellen ved omdannelse av prodrogen til mordrogen før fosforylering. For-løperstrukturene kan variere vesentlig, ettersom de er et resultat av cellulær metabolisme. Denne informasjonen er imidlertid allerede kjent eller kan lett bestemmes av en fagperson innen teknikken.
Dersom prodrogen som blir analysert ikke utviser anti-tumor- eller antiviral aktivitet per se, så kan justeringer i forhold til råanalyseresultatene være nødvendig. Dersom f.eks. intracellulær prosessering av den inaktive metabolitt til en aktiv metabolitt foregår ved forskjellige hastigheter i de forskjellige vevene som blir testet, vil det være nødvendig å justere råanalyseresultatene av den aktive metabolitt for å ta hensyn til forskjellene blant celletypene, fordi den relevante parameter er dannelsen av aktivitet i målvevet, og ikke akkumulering av inaktive metabolitter. Bestemmelse av korrekt justering vil være innenfor ordinære kunnskaper. Når således fremgangsmåtens trinn (d) krever bestemmelse av aktiviteten, kan aktivitet enten måles direkte eller ekstrapoleres. Det betyr ikke at fremgangsmåten her er begrenset til bare analysering av intermediater som er aktive per se. For eksempel kan også fravær eller nedgang i prodrogen i testvevet også måles. Trinn (d) krever kun vurdering av aktiviteten utøvd av prodrogen når den interagerer med det aktuelle vevet, og dette kan baseres på ekstrapolering eller andre indirekte målinger.
Trinn (d) i metoden, ifølge denne oppfinnelsen, krever bestemmelse av "den relative" aktiviteten til prodrogen. Vil det være underforstått at dette ikke krever at hver eneste analyse eller serie av analyser nødvendigvis også må inneholde kjøringer med det utvalgte ikke-målvevet. Tvert imot er det innenfor omfanget av denne oppfinnelsen å anvende historiske kontroller for ikke-målvev eller vev, eller algoritmer som representerer resultater som forventes fra slike ikke-målvev i den hensikt å tilveiebringe en standard ikke-målaktivitet.
Resultatene oppnådd i trinn (d) anvendes deretter opti-malt for å velge ut eller identifisere en prodroge som produserer større antiviral aktivitet i målvevet enn i ikke-målvevet. Det er denne prodrogen som velges for videre utvikling.
Man vil innse at en viss forhåndsvurdering av prodroge-kandidater kan gjennomføres før fremgangsmåten ifølge denne oppfinnelsen utføres. For eksempel vil det være nødvendig at prodrogen er i stand til å passere i det alt vesentlige ikke-metabolisert gjennom mage-tarmkanalen, det vil være nødvendig at den er vesentlig stabil i blod og den skal, i hvert fall til en viss grad, være i stand til å trenge inn i celler. I de fleste tilfeller vil det også være nødvendig å fullføre en første passasje i den hepatiske sirkulasjon uten vesentlig metabolisme. Slike forhåndsstudier er valgfrie, og er vel kjent for fagfolk innen området.
Den samme begrunnelsen som er beskrevet ovenfor for antiviral aktivitet, er også gyldig for antitumorprodroger av metoksyfosfonatnukleotidanaloger. Disse omfatter f.eks. prodroger av PMEG, guanylanalogen av PMEA. I dette tilfellet er cytotoksiske fosfonater, slik som PMEG, verdt å gå videre med fordi deres cytotoksisitet faktisk bidrar med antitumoraktivitet.
En forbindelse identifisert ved denne nye screeningsfremgangsmåten kan innlemmes i et tradisjonelt preklinisk eller klinisk program for å bekrefte at det ønskede formålet er blitt oppnådd. Karakteristisk er en prodroge ansett for å være selektiv dersom aktiviteten eller konsentrasjonen av mordrogen i målvevet (% dosedistribusjon) er større enn 2 x, og fortrinnsvis 5 x, aktivitetenen til morforbindelsen i ikke-målvevet. Alternativt kan en prodrogekandidat sammenlignes med en standard-prodroge. I dette tilfellet er selektiviteten relativ heller enn absolutt. Selektive prodroger vil være de som resulterer i større enn ca. 10 x konsentrasjon eller aktivitet i målvevet sammenlignet med prototypen, selv om graden av selektivitet er et spørsmål om skjønn.
Ny fremgangsmåte for fremstilling av startmaterialer eller intermediater
Også inkludert heri er en forbedret fremgangsmåte for fremstilling av foretrukne startmaterialer (mordroger) ifølge denne oppfinnelsen, PMEA og (R)-PMPA. Denne fremgangsmåten omfatter karakteristisk reaksjon av 9-(2-hydroksypropyl)adenin (HPA) eller 9-(2-hydroksyetyl)adenin (HEA) med et magnesiumalkoksid, hvorpå det beskyttede aglykonsynton-p-toluensulfonyloksymetylfosfonat(tosylat) tilsettes til reaksjonsblandingen, og gjenvinning av PMPA eller PMEA.
Fortrinnsvis er den anrikede eller isolerte HPA, R-enantiomer. Dersom en kiral HPA-blanding anvendes kan R-PMPA isoleres fra den kirale PMPA-blandingen etter at syntesen er fullført.
Typisk er tosylatet beskyttet av lavere alkylgrupper, men andre egnede grupper vil også være åpenbare for fagmannen. Det kan være praktisk å anvende forhåndssubstituert tosylat med prodrogefosfonatsubstituenter som er i stand til å virke som beskyttende grupper i tosyleringsreaksjonen, og derved tillate en å omgå avbeskyttende trinn og direkte gjenvinne prodrogen eller et intermediat for dette.
Alkylgruppen til magnesiumalkoksid er ikke avgjørende og kan være ethvert Ci_6_forgrenet eller normalt alkyl, men er fortrinnsvis t-butyl (for PMPA) eller isopropyl (for PMEA). Reaksjonsbetingelsene er heller ikke kritiske, men omfatter fortrinnsvis oppvarming av reaksjonsblandingen til ca. 70-75 °C med omrøring eller annen moderat risting.
Dersom det ikke er noen interesse for å bevare fosfo-natsubstituentene, avbeskyttes produktet (vanligvis med bromtrimetylsilan, hvor den tosylerte beskyttende gruppen er alkyl) , og produktet gjenvinnes deretter ved krystallisering eller andre vanlige fremgangsmåter som vil være åpenbare for fagmannen.
Heterosyklisk base
I forbindelsene, ifølge denne oppfinnelsen, beskrevet i strukturene (3) og (4) er den heterosykliske base B valgt fra strukturene
hvor
R<15>er H, OH, F, Cl, Br, I, OR<16>, SH, SR<16>, NH2eller NHR<17>,
R<16>er Ci-C6-alkyl eller C2-C6-alkenyl, inkludert CH3, CH2CH3, CH2CCH, CH2CHCH2og C3H7,
R<17>er Ci-C6-alkyl eller C2-C6-alkenyl, inkludert CH3, CH2CH3, CH2CCH, CH2CHCH2og C3H7,
R<18>er N, CF, CC1, CBr, CI, CR<19>, CSR<19>eller COR<19>,
R1<9>er H, Ci-Cg-alkyl, C2-C9-alkenyl, C2-C9-alkynyl, Ci-Cg-alkyl Ci-Cg-alkoksy eller C7-C9-aryl-alkyl, usubstituert eller substituert med OH, F, Cl, Br eller I, R<19>inkluderer derfor -CH3, -CH2CH3, -CHCH2, -CHCHBr, -CH2CH2C1, -CH2CH2F, -CH2-CCH, -CH2CHCH2, -C3H7, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2OC2H5, -CH2OCCH, -CH2-OCH2CHCH2, -CH2C3H7, -CH2CH2OH, -CH2CH2OCH3, -CH2CH2OC2H5, -CH2CH20-CCH, -CH2CH2OCH2CHCH2og -CH2CH2OC3H7,
R<20>er N eller CH,
R<21>er N, CH, CCN, CCF3, CC^CH eller CC(0)NH2,
R<22>er H, OH, NH2, SH, SCH3, SCH2CH3, SCH2CCH, SCH2CHCH2, SC3H7, NH(CH3), N(CH3)2, NH(CH2CH3), N(CH2CH3)2, NH(CH2CCH), NH (CH2-CHCH2), NH(C3H7), halogen (F, Cl, Br eller I) eller X, hvor X er
- (CH2)m (0) n (CH2)mN (R10) 2, hvor hver m uavhengig er 0-2, n er 0-1, ogR1<0>uavhengig er H, Ci-Ci5-alkyl, C2-Ci5-alkenyl, C6-Ci5-aryl-alkenyl, C6-Ci5-arylalkynyl, C2-Ci5-alkynyl, Ci-C6-alkylamino-Ci-C6-alkyl, Cs-Cis-aralkyl, C6-Cis-heteroaralkyl, Cs-C6-aryl, C2-C6~heterosykloalkyl, C2-Ci5-alkyl, C3-Ci5-alkenyl, C6-Ci5-arylalkenyl, C3-Ci5-alkynyl, C7-Ci5-arylalkynyl, Ci-C6-alkylamino-Ci-C6-alkyl, C5-Ci5-aralkyl, C6-Ci5-heteroalkyl eller C3-C6-heterosykloalkyl, hvor metylen i alkylgruppen som ikke er ved siden av N<6>, er erstattet med -0-, begge R<10>er valgfritt knyttet sammen med N
for å danne en mettet eller umettet C2-Cs-heteroring inneholdende 1 eller 2 N-heteroatomer og valgfritt et ytterligere 0- eller S-heteroatom, eller en av de foregående R<10->gruppene som er substi-
tuert med 1-3 halogen, CN eller N3, men valgfritt er minst énR10-gruppe ikke H,
R<23>er H, OH, F, Cl, Br, I, SCH3, SCH2CH3, SCH2CCH, SCH2-CHCH2, SC3H7, OR<16>, NH2, NHR<17>eller R22, og
R<24>er 0, S eller Se.
B omfatter også både beskyttede og ikke-beskyttede heterosykliske baser, særlig purin- og pyrimidinbaser. Beskyttende grupper for eksosykliske aminer og andre labile grupper er kjent (Greene et al., "Protective Groups in Organic Synthesis") og omfatter N-benzoyl, isobutyryl, 4,4'-dimetoksytrityl (DMT) og lignende. Valget av beskyttende gruppe vil være åpenbar for den gjennomsnittlige fagmannen og vil avhenge av egenskapene til den labile gruppen og kjemien som den beskyttende gruppen er forventet å møte, f.eks. sure, basiske, oksidative, reduktive eller andre betingelser. Eksempler på beskyttede grupper er N<4->benzoyl-cytosin, N<6->benzoyladenin, N<2->isobutyrylguanin og lignende.
Beskyttede baser har formel Xa.l, Xla.l, Xlb.l, XIIa.1 eller XIIIa.1
hvorR18, R<20>, R<21>, R<24>har betydningene som tidligere definert,R22<A>er R<39>eller R<22>, forutsatt at R<22>ikke er NH2, R<2>3AerR<39>eller R<23>, forutsatt at R<23>ikke er NH2, R<39>er NHR<40>, NHC (0) R36 eller CR<41>N(R<38>)2, hvor R<36>er Ci-Cig-alkyl, Ci-Cig-alkenyl, C3-Ci0-aryl, adamantoyl, alkylanyl eller C3-Cio-aryl substituert med 1 eller 2 atomer eller grupper valgt fra halogen, metyl, etyl, metoksy, etoksy, hydroksy og cyan, R<38>er Ci-Cio-alkyl, eller begge R<38>sammen er 1-morfolin, 1-piperidin eller 1-pyrrolidin, R<40>er Ci-Cia-alkyl, omfattende metyl, etyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, t-butyl, pentyl, heksyl, oktyl og dekanyl, og R<41>er hydrogen eller CH3.
For basene ifølge strukturene Xla.l og Xlb.l, dersom R<39>er til stede ved R eller R , vil begge R -gruppene på samme base generelt være det samme. R<36>er eksempelvis fenyl, fenyl substituert med én av de foregående R<36->arylsubstituentene, -Cio-H15(hvor Ci0H15er 2-adamantoyl) , -CH2-C6H5, -C6H5, -CH(CH3)2, -CH2-CH3, metyl, butyl, t-butyl, heptanyl, nonanyl, undekanyl eller undekenyl.
Spesifikke baser omfatter hypoxantin, guanin, adenin, cytosin, inosin, tymin, uracil, xantin, 8-azaderivater av 2-aminopurin, 2,6-diaminopurin, 2-amino-6-klorpurin, hypoxantin, inosin og xantin; 7-deaza-8-azaderivater av adenin, guanin, 2-aminopurin, 2,6-diaminopurin, 2-amino-6-klorpurin, hypoxantin, inosin og xantin; 1-deazaderivater av 2-aminopurin, 2,6-diaminopurin, 2-amino-6-klorpurin, hypoxantin, inosin og xantin; 7-deazaderivater av 2-aminopurin, 2,6-diaminopurin, 2-amino-6-klorpurin, hypoxantin, inosin og xantin; 3-deazaderivater av 2-aminopurin, 2,6-diaminopurin, 2-amino-6-klorpurin, hypoxantin, inosin og xantin; 6-azacytosine, 5-fluorcytosin, 5-klorcytosin, 5-jodcytosin, 5-bromcytosin, 5-metylcytosin, 5-bromvinyluracil, 5-fluoruracil, 5-kloruracil, 5-joduracil, 5-bromuracil, 5-tri-fluormetyluracil, 5-metoksymetyluracil, 5-etynyluracil og 5-propynyluracil.
Fortrinnsvis er B et 9-purinylresidu valgt fra guanyl, 3-deazaguanyl, 1-deazaguanyl, 8-azaguanyl, 7-deazaguanyl, adenyl, 3-deazaadenyl, 1-dezazadenyl, 8-azaadenyl, 7-deazaadenyl, 2,6-diaminopurinyl, 2-aminopurinyl, 6-klor-2-aminopurinyl og 6-tio-2-aminopurinyl eller en B' er et 1-pyrimidin-ylresidu valgt fra cytosinyl, 5-halocytosinyl og 5-(Ci-C3-alkyl)-cytosinyl.
Foretrukne B-grupper har formelen
hvor
R2<2>uavhengig er halogen, oksygen, NH2, X eller H, men valgfritt er minst én R<22>X; X er - (CH2) m (0) n (CH2) mN (R10) 2, hvor m er 0-2, n er 0-1, og R<10>uavhengig er H, Ci-Ci5-alkyl, C2-Ci5-alkenyl, C6-Cis-arylalkenyl C6-Cis-arylalkynyl, C2-Cis-alkynyl, Ci-C6-alkylamino-Ci-C6-alkyl, C5-Ci5-aralkyl, C6-Ci5-heteroaralkyl, C5-C6-aryl, C2-C6-heterosykloalkyl, C2-Ci5-alkyl, C3-Ci5-alkenyl, C6-Ci5-arylalkenyl, C3-Ci5-alkynyl, C7-Ci5-arylalkynyl, Ci-C6-alkylamino-Ci-C6-alkyl, C5-Ci5-aralkyl, C6-Ci5-heteroalkyl eller C3-C6-heterosykloalkyl, hvor metylen i alkylgruppen som ikke er i nabostilling i forhold til N6, er blitt erstattet med -0-, begge R<10>er valgfritt knyttet sammen med N for å danne en mettet eller umettet C2-C5-heteroring inneholdende 1 eller 2 N-heteroatomer og valgfritt et ytterligere 0- eller S-heteroatom, eller én av de foregående R<10->gruppene er substituert med 1-3 halogen, CN
eller N3, men valgfritt er minst én R10-gruppe ikke H, og Z er N eller CH, forutsatt at heteroringens kjerne ikke er forskjellig fra purin i mer enn én Z.
E-grupper representerer aglykonene anvendt i metoksyfosfonatnukleotidanalogene. Fortrinnsvis er E-gruppen -CH2OCH (CH3) CH2 eller -CH2OCH2CH2-. Det er også foretrukket at sidegruppene ved kirale sentre i aglykonet er i det alt vesentlige ene og alene i (R)-konfigurasjon (med unntak av hydroksymetyl, som er den anrikede (S)-enantiomer).
R1 er en in vivo hydrolyserbar oksyester som har strukturen -OR<35>eller -OR<6>, hvor R<35>er definert i kolonne 64, linje 49, i US patentskrift nr. 5 798 340, som her er innlemmet gjennom referanse, og R<6>er definert ovenfor. Fortrinnsvis er R<1>aryloksy, vanligvis usubstituert eller parasubstituert (som definert i R<6>) fenoksy.
R2 er et aminosyreresidu, eventuelt forutsatt at enhver karboksygruppe bundet med mindre enn ca. 5 atomer til amidatet N, er forestret. R<1>har karakteristisk strukturen
hvor
n er 1 eller 2,
R<11>erR<6>eller H, fortrinnsvis R<6>= C3-C9-alkyl, C3-C9-alkyl substituert uavhengig med OH, halogen, 0 eller N, C3-C6-aryl, C3-C6-aryl som er uavhengig substituert med OH, halogen, 0 eller N, eller C3-C6-arylalkyl som er uavhengig substituert med OH, halogen, 0 eller N,
R1<2>er uavhengig H eller Ci-Cg-alkyl som er usubstituert eller substituert med substituenter uavhengig valgt fra gruppen bestående av OH, 0, N, COOR<11>og halogen, C3-C6-aryl som er usubstituert eller substituert med substituenter uavhengig valgt fra gruppen bestående av OH, 0, N, COOR<11>og halogen, eller C3-C9-arylalkyl som er usubstituert eller substituert med substituenter uavhengig valgt fra gruppen bestående av OH, 0, N, COOR11 og halogen,
R<13>er uavhengig C(0)-0R<1:L>, amino, amide, guanidinyl, imidazolyl, indolyl, sulfoksid, fosforyl, Ci-C3-alkylamino, C1-C3-alkyldiamino, Ci-C6-alkenylamino, hydroksy, tiol, Ci-C3-alkoksy, Ci-C3-alktiol, (CH2) nCOOR11, d-C6-alkyl som er usubstituert eller substituert med OH, halogen, SH, NH2, fenyl, hydroksyfenyl eller C7-C10, alkoksyfenyl, C2-C6-alkenyl som er usubstituert eller substituert med OH, halogen, SH, NH2, fenyl, hydroksyfenyl eller C7-Cio-alkoksyfenyl og C6-Ci2-aryl som er usubstituert eller substituert med OH, halogen, SH, NH2, fenyl, hydroksyfenyl eller C7-Cio-alkoksyfenyl, og
R1<4>er H eller Ci-Cg-alkyl eller Ci-Cg-alkyl uavhengig substituert med OH, halogen, COOR<11>, 0 eller N, eller C3-C6~aryl, C3-C6-aryl som er uavhengig substituert med OH, halogen, COOR11,0eller N, eller C3-C6-arylalkyl som er uavhengig substituert med OH, halogen, COOR<11>, 0 eller N.
R1<1>er fortrinnsvis Ci-C6-alkyl, mest foretrukket isopropyl, R<13>er sidekjeden til en naturlig forekommende aminosyre, n = 1, R12 er H, og R<14>er H. I forbindelsen med struktur (2) omfatter oppfinnelsen metabolitter hvor fenoksy- og isopropyl-estere er blitt hydrolysert til -OH. Tilsvarende er de deforest-rede, anrikede fosfonoamidatmetabolittene til forbindelsene (5a), 5(b) og (6) inkludert av omfanget av denne oppfinnelsen.
Aryl og "0"- eller "N"-substitusjoner er definert i kolonne 16, linjer 42-58, i US patentskrift nr. 5 798 340.
Karakteristisk er aminosyrene i sin naturlige form eller 1-aminosyrer. Egnede spesifikke eksempler er utlagt frem i US patentskrift nr. 5 798 340, f.eks. i tabell 4 og kolonner 8-10 deri.
Alkyl er, når brukt her, med mindre noe annet er angitt, en normal, sekundær, tertiær eller syklisk hydrokarbon. Med mindre noe annet er angitt, er alkyl C1-C12. Eksempler er
-CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH2CH2 (CH3) , -CH2CH(CH3)2, -CH (CH3) CH2CH3, -C(CH3)3, -CH2CH2CH2CH2CH3, -CH (CH3) CH2CH2CH3, -CH(CH2CH3)2, -C(CH3)2CH2CH3) , -CH (CH3) CH (CH3)2, -CH2CH2CH (CH3)2) , -CH2CH (CH3) CH2CH3, -CH2CH2CH2CH2CH2, -CH (CH3) CH2CH2CH2CH3, -CH(CH2CH3) (CH2CH2CH3) , -C (CH3)2CH2CH2CH3, -CH (CH3) CH (CH3) CH2CH3, -CH(CH3)CH2CH(CH3)2, -C (CH3) (CH2CH3)2, -CH (CH2CH3) CH (CH3)2, _C (CH3) 2CH (CH3) 2 og -CH (CH3) C (CH3) 3. Alkenyl og alkynyl er definert på samme måte, men inneholder henholdsvis minst én dobbel- eller trippelbinding.
Der hvor enol- eller ketogrupper er vist, skal de tilsvarende tautomerer også anses for beskrevet.
Prodrogeforbindelser, ifølge denne oppfinnelsen, er tilveiebrakt i form av fri base eller de ulike saltene listet opp i US patentskrift nr. 5 798 340, og er formulert med farmasøytisk akseptable eksipienser eller løsningsfortynnere for anvendelse som farmasøytiske produkter, som også er beskrevet i US patentskrift nr. 5 798 340. Disse prodrogene har den antivirale aktivitet og anvendelsesområdet allerede fastslått for mordrogene (se US patentskrift nr. 5 798 340 og andre referanser i forbindelse med metoksyfosfonatnukleotidanaloger) . Det vil være underforstått at den diastereoisomere struktur (4) i det minste er nyttig som et intermediat i den kjemiske fremstillingen av mordrogen ved hydrolyse in vitro, uavhengig av dets relativt ikke-selektive karakter, som avdekket i under-søkelsene heri.
Oppfinnelsen vil bli mer fullstendig forstått ved hen-visning til de følgende eksempler:
Eksempel la
Adenin til PMEA ved anvendelse av magnesiumisopropoksid
Til en oppløsning av adenin (16,8 g, 0,124 mol) i DMF (41,9 ml) ble det tilsatt etylenkarbonat (12,1 g, 0,137 mol) og natriumhydroksid (0,100 g, 0,0025 mol). Blandingen ble varmet opp til 130 °C natten over. Reaksjonen ble avkjølt til under 50 °C, og toluen (62,1 ml) ble tilsatt. Vellingen ble videre av-kjølt til 5 °C i 2 timer, filtrert og renset med toluen (2 x). Det våte, faste stoffet ble tørket under vakuum ved 65 °C, hvorved man fikk 20,0 g (90 %) 9-(2-hydroksyetyl)adenin i form av et offwhite, fast stoff. Smeltepunkt: 238-240 °C.
9-(2-hydroksyetyl)adenin (HEA) (20,0 g, 0,112 mol) ble oppslemmet i DMF (125 ml) og varmet opp til 80 °C. Magnesiumisopropoksid (11,2 g, 0,0784 mol) eller alternativt magnesium-t-butoksid ble tilsatt til blandingen, etterfulgt av dietyl-p-toluensulfonyloksymetylfosfonat (66,0 g, 0,162 mol) i løpet av 1 time. Blandingen ble omrørt ved 80 °C i 7 timer. 30 ml flyktige forbindelser ble fjernet ved hjelp av vakuumdestillasjon, og reaksjonsblandingen ble tilsatt 30 ml nytt DMF. Etter avkjøling til romtemperatur ble bromtrimetylsilan (69,6 g, 0,450 mol) tilsatt, og blandingen ble varmet opp til 80 °C i 6 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, hvorved man fikk en tykk, viskøs masse. Den tykke, viskøse massen ble løst i 360 ml vann, ekstrahert med 120 ml diklormetan, pH ble justert til 3,2 med natriumhydroksid, og den resulterende vellingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Vellingen ble avkjølt til 4 °C i 1 time. De faste stoffene ble isolert ved filtrering, vasket med vann (2 x) og tørket under vakuum ved 56 °C, hvorved man fikk 20 g (65,4 %) 9-[2-(fosfonometoksy)etyl]adenin (PMEA) i form av et hvitt, fast stoff. Smeltepunkt > 200 °C, dek.<1>H-NMR (D20)»3,49 (t, 2 H) , 3,94 (t, 2 H) , 4,39 (t, 2 H) , 8,13 (s, 1 H) , 8,22 (s, 1 H) .
Eksempel lb
Adenin til PMPA ved anvendelse av magnesium- t- butoksid
Til en oppløsning av adenin (40 g, 0,296 mol) i DMF (41,9 ml) ble tilsatt (R)-propylenkarbonat (34,5 g, 0,338 mol) og natriumhydroksid (0,480 g, 0,012 mol). Blandingen ble varmet opp ved 130 °C natten over. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 100 °C, og toluen (138 ml) ble tilsatt, etterfulgt av metan-sulfonsyre (4,7 g, 0,049 mol) mens reaksjonstemperaturen ble opprettholdt mellom 100 og 110 °C. Ytterligere toluen (114 ml) ble tilsatt for å skape en homogen løsning. Løsningen ble av-kjølt til 3 °C i løpet av 7 timer og deretter opprettholdt ved 3 °C i 1 time. Det resulterende faste stoffet ble isolert ved filtrering og renset med aceton (2 x). Det våte, faste stoffet ble tørket under vakuum ved 80 °C, hvorved man fikk 42,6 g (75 %)
(R)-9-[2-(hydroksy)propyl]adenin (HPA) i form av et offwhite, fast stoff. Smeltepunkt: 188-190°C.
(R)-9-[2-(hydroksy)propyl]adenin (HPA) (20,0 g,
0,104 mol) ble oppløst i DMF (44,5 ml) og varmet opp til 65 °C.
Magnesium-t-butoksid (14,2 g, 0,083 mol) eller alternativt magnesiumisopropoksid ble tilsatt til blandingen i løpet av 1 time, etterfulgt av dietyl-p-toluensulfonyloksymetylfosfonat (66,0 g, 0,205 mol) i løpet av 2 timer mens temperaturen ble holdt ved 78 °C. Blandingen ble omrørt ved 75 °C i 4 timer. Etter avkjøling til under 50 °C ble bromtrimetylsilan (73,9 g,
0,478 mol) tilsatt, og blandingen ble varmet opp til 77 °C i 3 timer. Når den var fullstendig, ble reaksjonsblandingen varmet opp til 80 °C, og flyktige forbindelser ble fjernet ved hjelp av atmosfærisk destillasjon. Den gjenværende rest ble løst i vann (120 ml) ved 50 °C og deretter ekstrahert med etylacetat (101 ml). pH i den vandige fasen ble justert til pH 11 med natriumhydroksid, krystallisert med autentisk (R)-PMPA, og pH i det vandige laget ble rejustert til pH 2,1 med natriumhydroksid. Den resulterende vellingen ble omrørt ved romtemperatur over natten. Vellingen ble avkjølt til 4 °C i 3 timer. Det faste stoffet ble isolert ved filtrering, vasket med vann (60 ml) og tørket under vakuum ved 50 °C, hvorved man fikk 18,9 g (63,5 %) rå-(R)-9-[2(fosfonometoksy)propyl]adenin (PMPA) i form av et offwhite, fast stoff.
Rå-(R)-9-[2-(fosfonometoksy)propyl]adenin ble varmet opp med tilbakeløpskjøling i vann (255 ml) inntil alle faste stoffer var oppløst. Løsningen ble avkjølt til romtemperatur i løpet av 4 timer. Den resulterende vellingen ble avkjølt til 4 °C i 3 timer. Det faste stoffet ble isolert ved filtrering, vasket med vann (56 ml) og aceton (56 ml) og tørket under vakuum ved 50 °C, hvorved man fikk 15,0 g (50,4 %) (R)-9-[2-(fosfono-metoksy)propyl]adenin (PMPA) i form av et hvitt, fast stoff. Smeltepunkt: 278-280°C.
Eksempel 2
Fremstilling av GS- 7171 ( III)
En glasskledd reaktor ble tilsatt vannfritt PMPA, (I)
(14,6 kg, 50,8 mol), fenol (9,6 kg, 102 mol) og l-metyl-2-pyrro-lidinon (39 kg). Blandingen ble varmet opp til 85 °C, og trietylamin (6,3 kg, 62,3 mol) ble tilsatt. En løsning av 1,3-disyklo-heksylkarbodiimid (17,1 kg, 82,9 mol) i l-metyl-2-pyrrolidinon (1,6 kg) ble deretter tilsatt i løpet av 6 timer ved 100 °C. Oppvarmingen ble fortsatt i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble av-kjølt til 45 °C, vann (29 kg) ble tilsatt og avkjølt til 25 °C. Faste stoffer ble fjernet fra reaksjonsblandingen ved filtrering
og renset med vann (15,3 kg). Det kombinerte filtratet og vaskevannet ble konsentrert til en brun velling under redusert trykk, og vann (24,6 kg) ble tilsatt og justert til pH = 11 med NaOH (25 % i vann). Fine partikler ble fjernet ved filtrering gjennom diatoméjord (2 kg), etterfulgt av rensing med vann (4,4 kg). Det kombinerte filtratet og rensevannet ble ekstrahert med etylacetat (28 kg). Den vandige løsningen ble justert til pH = 3,1 med HC1 (37 % i vann) (4 kg). Rå-II ble isolert ved filtrering og vasket med metanol (12,7 kg). En våt kake av rå-II ble slemmet i metanol (58 kg). Faste stoffer ble fjernet ved filtrering, vasket med metanol (8,5 kg) og tørket under redusert trykk, hvorved man fikk 9,33 kg II i form av et hvitt pulver.<1>H-NMR (D20) 5 1,2 (d, 3 H) , 3,45 (q, 2 H) , 3,7 (q, 2 H) , 4 (m, 2 H) , 4,2 (q, 2 H) , 4,35 (dd, 2 H) , 6,6 (d, 2 H) , 7 (t, 1 H) , 7,15 (t, 2 H) , 8,15 (s, 1 H) , 8,2 (s, 1 H) ; 31P-NMR (D20) 8 15,0 (utkoblet) .
GS- 7171 ( III) ( reaksjonsskjema 1)
En glasskledd reaktor ble tilsatt monofenyl-PMPA, (II)
(9,12 kg, 25,1 mol) og acetonitril (30,7 kg). Tionylklorid (6,57 kg, 56,7 mol) ble tilsatt når temperaturen var under 50 °C. Blandingen ble varmet opp ved 75 °C inntil faste stoffer var opp-løst. Reaksjonstemperaturen ble økt til 80 °C, og flyktige forbindelser (11,4 kg) ble samlet opp ved atmosfærisk destillasjon under nitrogen. Den gjenværende rest i reaksjonsbeholderen ble avkjølt til 25 °C, diklormetan (41 kg) ble tilsatt, og det ble avkjølt til -29 °C. En løsning av (L)-alaninisopropylester (7,1 kg, 54,4 mol) i diklormetan (36 kg) ble tilsatt i løpet av 60 minutter ved -18 °C, etterfulgt av trietylamin (7,66 kg,
75,7 mol) i løpet av 30 minutter ved -18 til -11 °C. Reaksjonsblandingen ble varmet til romtemperatur og vasket fem ganger med natriumdihydrogenfosfatløsning (10 % i vann, 15,7 kg pr. vask). Den organiske løsningen ble tørket med vannfritt natriumsulfat (18,2 kg), filtrert, vasket med diklormetan (28 kg) og konsentrert til en olje under redusert trykk. Aceton (20 kg) ble tilsatt til oljen, og blandingen ble konsentrert under redusert trykk. Aceton (18,8 kg) ble tilsatt til den resulterende oljen. Halve produktløsningen ble renset ved kromatografi over en 38 x 38 cm seng med 22 kg silikagel 60, med maskestørrelse 230-400.
Kolonnen ble eluert med 480 kg aceton. Opprensingen ble gjentatt med den andre halvparten av oljen ved å benytte ny silikagel og aceton. Rene produktholdige fraksjoner ble konsentrert under redusert trykk til en olje. Acetonitril (19,6 kg) ble tilsatt til oljen, og blandingen ble konsentrert under redusert trykk. Acetonitril (66,4 kg) ble tilsatt, og løsningen ble avkjølt til 0-5 °C i 16 timer. Faste stoffer ble fjernet ved filtrering, og filtratet ble konsentrert under redusert trykk til 5,6 kg III i form av en mørk olje.<1>H-NMR (CDC13) 5 1,1 (m 12 H) , 3,7 (m, 1 H) , 4,0 (m, 5 H) , 4,2 (m, 1 H), 5,0 (m, 1 H), 6,2 (s, 2 H) , 7,05 (m, 5 H) , 8,0 (s, 1 H) , 8,25 (d, 1 H) ;31P-NMR (CDC13) 5 21,0, 22,5 (utkoblet).
Alternativ metode for GS- 7171 ( III)
Monofenyl- PMPA ( II)
En rundbunnet kolbe med tilbakeløpskondensator og nitrogeninngang ble plassert i et oljebad ved 70 °C. Kolben ble tilsatt vannfritt PMPA (I) (19,2 g, 67 mmol), N,N-dimetyl-formamid (0,29 g, 3,3 mmol) og tetrametylensulfon (40 ml). Tionylklorid (14,2 g, 119 mmol) ble tilsatt i løpet av 4 timer. Oppvarmingen ble økt til 100 °C i løpet av samme tidsrom. Resultatet ble en homogen løsning. Fenoksytrimetylsilan (11,7 g, 70 mmol) ble tilsatt til løsningen i løpet av 5 minutter. Oppvarming av oljebadet ved 100 °C fortsatte i 2 timer eller mer. Reaksjonsblandingen ble helt inn i raskt omrørt aceton (400 ml) med avkjøling til 0 °C. Faste stoffer ble isolert ved filtrering, tørket under redusert trykk og løst i metanol (75 ml). pH i løsningen ble justert til 3,0 med kaliumhydroksidløsning (45 % vandig) med avkjøling i is/vann. Det resulterende faste stoffet i form av et hvitt, pulver ble isolert ved filtrering, vasket med metanol og tørket under redusert trykk til 20,4 g II (reaksjonsskjema 2).
GS- 7171 ( III)
Monofenyl-PMPA (II) (3 g, 8,3 mmol), tetrametylensulfon (5 ml) og N,N-dimetylformamid (1 dråpe) ble slått sammen i en rundbunnet kolbe i et oljebad ved 40 °C. Tionylklorid (1,96 g, 16,5 mmol) ble tilsatt. Etter 20 minutter ble den klare løsningen fjernet fra varmen og fortynnet med diklormetan (10 ml) og tilsatt til en løsning av (L)-alaninisopropylester (5 g, 33 mmol) og diisopropyletylamin (5,33 g, 41 mmol) i diklormetan (20 ml) ved -10 °C. Reaksjonsblandingen ble varmet til romtemperatur og vasket tre ganger med natriumdihydrogenfosfat-løsning (10 % vandig, 10 ml pr. vask). Den organiske løsningen ble tørket over vannfritt natriumsulfat og konsentrert under redusert trykk til en olje. Oljen ble slått sammen med fumarsyre (0,77 g, 6,6 mmol) og acetonitril (40 ml) og varmet ved tilbake-løpskjøling for å gi en homogen løsning. Løsningen ble avkjølt i et isvannbad, og det faste stoffet ble isolert ved filtrering. Det faste stoffet, GS-7171-fumaratsalt, ble tørket under redusert trykk til 3,7 g. Saltet (3,16 g, 5,3 mmol) ble oppslemmet i diklormetan (30 ml) og ble omrørt med kaliumkarbonatløsning (5 ml, 2,5 M i vann) inntil det faste stoffet var oppløst. Det organiske sjikt ble isolert og deretter vasket med vann (5 ml), tørket over vannfritt natriumsulfat og konsentrert under redusert trykk for å gi 2,4 g III i form av et brungult skum.
Eksempel 3
A. Diastereoisomerseparasjon med
batchelueringskromatografi
Diastereoisomerer av GS-7171 (III) ble separert ved batchelueringskromatografi ved å anvende en kommersielt tilgjengelig "Chiralpak" AS, 20fom, 21 x 250 mm semipreparativ HPLC-kolonne med en "Chiralpak" AS, 20^m, 21 x 50 mm beskyttelseskolonne. "Chiralpak" AS er et patentbeskyttet pakkemateriale fremstilt av Diacel og solgt i Nord-Amerika av Chiral Technologies, Inc. (US patentskrifter nr. 5 202 433, RE 35 919, 5 434 298, 5 434 299 og 5 498 752). "Chiralpak" AS er en kiral stasjonærfase (CSP) bestående av amylosetris [ (S) -<x-metylbenzylkarbamat] belagt på et støttemateriale av silikagel.
GS-7171-diastereoisomerblandingen ble løst i mobilfase, og porsjoner på ca. lg GS-7171 ble pumpet inn i det kromatografiske systemet. Den uønskede diastereoisomeren, betegnet GS-7339, utgjorde den første brede hovedtoppen (av ca. 15 minutters varighet) som eluerte fra kolonnen. Når GS-7339-toppen var eluert ferdig, ble mobilfasen umiddelbart endret til 100 % metylalkohol, som forårsaket at den ønskede diastereoisomer, betegnet GS-7340 (IV), ble eluert som en skarp topp fra kolonnen sammen med metylalkoholløsningsfronten. Metylalkohol ble anvendt for å redusere den totale syklustiden. Etter de første par injeksjonene ble begge diastereoisomerer samlet opp som en enkelt stor fraksjon inneholdende en av de rensede diastereoisomerene (> 99,0 % enkeltdiastereoisomer). Mobilfaseløsnings-midlene ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk rensede diastereoisomer i form av et skjørt skum.
Cirka 95 % av startvekten til GS-7171 ble gjenvunnet i de to diastereoisomere fraksjonene. GS-7340-fraksjonen omfattet ca. 50 % av den totale gjenvunne vekt.
De kromatografiske betingelsene var som følger: Mobilfase (initielt): GS-7171 - acetonitril:iso- propylalkohol (90:10)
(slutt): 100 % metylalkohol Væskestrømhastighet: 10 ml/minutt
Kjøretid: ca. 45 minutter
Deteksjon: UV ved 275 nm
Temperatur: romtemperatur Elueringsprofil: GS-7339 (diastereoisomer B)
GS-7340 (diastereoisomer A,
(IV) )
B. Diastereoisomerseparasjon av GS- 7171 ved SMB-kromatografi
For en generell beskrivelse av "simulated moving bed"-(SMB)kromatografi, se Strube et al., Organic Process Research and Development, 2:305-319 (1998).
GS- 7340 ( IV)
GS-7171 (III), 2,8 kg, ble renset ved hjelp av "simulated moving bed"-kromatografi over en 10 cm x 5 cm seng av pakkemateriale (Chiral Technologies Inc., 20 mikron "Chiralpak" AS belagt på silikagel) (1,2 kg). Kolonnene ble eluert med 30 % metanol i acetonitril. Produktholdige fraksjoner ble konsentrert til en løsning av IV i acetonitril (2,48 kg). Løsningen stivnet til en krystallinsk, våt masse med acetonitril ved henstand. Den krystallinske massen ble tørket under redusert trykk til et brungult, krystallinsk pulver, 1,301 kg IV, 98,7 % diastereoisomer renhet: smp. 117-120 °C.<1>H-NMR (CDC13) 8 1,15 (m, 12 H), 3,7 (t, 1 H), 4,0 (m, 5 H), 4,2 (dd, 1 H), 5,0 (m, 1 H), 6,05 (s, 2 H) , 7,1 (m, 5 H) , 8,0 (s, 1 H) , 8,2 (s, 1 H) ;<31>P-NMR (CDC13) 5 21,0 (utkoblet<**>).
C . Diastereoisomerseparasjon ved hjelp av C18- RP- HPLC
GS-7171 (III) ble kromatografert med omvendt fase-HPLC for å separere diastereoisomerene ved å anvende den følgende sammendragsprotokoll.
Kromatografisk kolonne: "Phenomenex Luna" C18(2),
5^m, 100 Å porestørrelse
(Phenomenex, Torrance, CA), eller tilsvarende
Beskyttelseskolonne: Pellicular C18 (Alltech,
Deerfield, IL), eller ekvivalent
Mobilfase: A - 0,02 % (85 %) H3P04i vann:acetonitril (95:5)
B - 0,02 % (85 %) H3PO4i vann:acetonitril (50:50)
Mobilfasegradient:
Kjøretid: 50 minutter
Likevektsforsinkelse: 10 minutter ved 100 %
mobilfase A
Væskestrømhastighet: 1,2 ml/minutt
Temperatur: romtemperatur
Deteksjon: UV ved 260 nm
Prøveløsning: 20 mM natriumfosfatbuffer,
pH 6
Retensjonstid: GS-7339, ca. 25 minutter GS-7340, ca. 27 minutter
D. Diastereoisomerseparasjon ved krystallisering
GS- 7340 ( IV)
En løsning av GS-7171 (III) i acetonitril ble konsentrert til et gult skum (14,9 g) under redusert trykk. Skummet ble løst opp i acetonitril (20 ml) og krystallisert med en
krystall av IV. Blandingen ble omrørt natten over og avkjølt til 5 °C, og det faste stoffet ble isolert ved filtrering. Det faste stoffet ble tørket til 2,3 g IV i form av hvite krystaller, 98 % diastereoisomer renhet (31P-NMR) :<X>H NMR (CDC13) 8 1,15 (m, 12 H) , 3,7 (t, 1 H), 3,95 (m, 2 H), 4,05 (m, 2 H), 4,2 (m, 2 H) , 5,0 (m, 1 H) , 6,4 (s, 2 H) , 7,1 (m, 5 H) , 8,0 (s, 1 H) , 8,2 (s,
1 H) ;<31>P-NMR (CDCI3) 8 19,5 (utkoblet). Røntgenkrystallograf i- analyser av en enkelt krystall valgt fra dette produktet gav følgende data: Krystallfarge, form: fargeløs, kolonne Krystalldimensjoner: 0,25 x 0,12 x 0,08 mm Krystallsystem: ortorombisk
Atomnettverkstype: primitivt
Atomnettverksparametere: a = 8,352 (1) Å
b = 15, 574 (2) Å
c = 18,253 (2) Å
V = 2374,2 (5) Å<3>
Romgruppe: P2i2i2i(#19)
Z-verdi: 4
Dkaik: 1, 333 g/cm<3>
F<q>oo: 1008, 00
H(MoKa) : 1, 60 cm-<1>
Eksempel 4
Fremstilling av fumaratsalt av GS- 7340
GS- 7340- 02 ( V) ( reaksjonsskjema 1)
En glasskledd reaktor ble tilsatt GS-7340 (IV)
(1,294 kg, 2,71 mol), fumarsyre (284 g, 2,44 mol) og acetonitril (24,6 kg). Blandingen ble varmet med tilbakeløpskjøling for å løse opp det faste stoffet, filtrert mens den ennå var varm og avkjølt til 5 °C i 16 timer. Produktet ble isolert ved filtrering, vasket med acetonitril (9,2 kg) og tørket til 1329 g (V) i form av et hvitt pulver: smp. 119,7-121,1 °C; [ a]™ -41,7° (c 1,0, eddiksyre).
Eksempel 5
Fremstilling av GS- 7120 ( VI)
Reaksjonsskjema 3
En 5 1 rundbunnet kolbe ble tilsatt monofenyl-PMPA,
(II) (200 g, 0,55 mol) og acetonitril (0,629 kg). Tionylklorid (0,144 kg, 1,21 mol) ble tilsatt ved en temperatur under 27 °C. Blandingen ble varmet til 70 °C inntil faste stoffer var oppløst. Flyktige forbindelser (0,45 1) ble fjernet ved atmosfærisk destillasjon under nitrogen. Resten i reaksjonsbeholderen ble avkjølt til 25 °C, diklormetan (1,6 kg) ble tilsatt, og blandingen ble avkjølt til -20 °C. En løsning av (L) -a-aminosmør-syreetylester (0,144 kg, 1,1 mol) i diklormetan (1,33 kg) ble tilsatt i løpet av 18 minutter ved -20 til -10 °C, etterfulgt av trietylamin (0,17 kg, 1,65 mol) i løpet av 15 minutter ved -8 til -15 °C. Reaksjonsblandingen ble varmet til romtemperatur og vasket fire ganger med natriumdihydrogenfosfatløsning (10 % vandig løsning, 0,3 1 pr. vask). Den organiske løsningen ble tørket med vannfritt natriumsulfat (0,5 kg) og filtrert. De faste stoffene ble vasket med diklormetan (0,6 kg), og det sammenslåtte filtratet og vaskevannet ble konsentrert til en olje under redusert trykk. Oljen ble renset ved kromatografi over en 15 x 13 cm seng med 1,2 kg silikagel 60, maskestørrelse 230-400. Kolonnen ble eluert med en gradient av diklormetan og metanol. Produktholdige fraksjoner ble konsentrert under redusert trykk for å gi 211 g VI (reaksjonsskjema 3) i form av et brungult skum.
Eksempel 5a
Diastereoisomerseparasjon av GS- 7120 ved
batchelueringskromatografi
Den diastereoisomere blandingen ble renset ved å anvende betingelser beskrevet for GS-7171 i eksempel 3A med unntak av det følgende: Mobilfase (initiell): GS-7120 - acetonitril:iso- propylalkohol (98:2)
(slutt): 100 % metylalkohol Elueringsprofil: GS-7341 (diastereoisomer B)
GS-7342 (diastereoisomer A)
Eksempel 6
Diastereoisomerseparasjon av GS- 7120 ved krystallisasjon
En 1 1 rundbunnet kolbe ble tilsatt monofenyl-PMPA,
(II) (50 g, 0,137 mol) og acetonitril (0,2 1). Tionylklorid (0,036 kg, 0,303 mol) ble tilsatt med en temperaturøkning på
10 °C. Blandingen ble varmet ved tilbakeløpskjøling inntil faste stoffer var oppløst. Flyktige forbindelser (0,1 1) ble fjernet ved atmosfærisk destillasjon under nitrogen. Resten i reaksjonsbeholderen ble avkjølt til 25 °C, diklormetan (0,2 kg) ble tilsatt, og blandingen ble avkjølt til -20 °C. En løsning med (L)-a-aminosmørsyreetylester (0,036 kg, 0,275 mol) i diklormetan (0,67 kg) ble tilsatt i løpet av 30 minutter ved -20 til -8 °C, etterfulgt av trietylamin (0,042 kg, 0,41 mol) i løpet av 10 minutter ved opptil -6 °C. Reaksjonsblandingen ble varmet til romtemperatur og vasket fire ganger med natriumdihydrogenfosfat-løsning (10 % vandig, 0,075 1 pr. vask). Den organiske løsningen ble tørket med vannfritt natriumsulfat (0,1 kg) og filtrert. De faste stoffene ble vasket med etylacetat (0,25 1, og det sammenslåtte filtratet og vaskevannet ble konsentrert til en olje under redusert trykk. Oljen ble fortynnet med etylacetat (0,25 1), krystallisert, omrørt over natten og avkjølt til -15 °C. Det faste stoffet ble isolert ved filtrering og tørket under redusert trykk for å gi 17,7 g GS-7342 (tabell 5) i form av et brungult pulver.<1>H-NMR (CDC13) 5 0, 95 (t, 3 H) , 1,3 (m, 6 H), 1,7 (m, 2 H), 3,7 (m, 2 H), 4,1 (m, 6 H), 4,4 (dd, 1H), 5,8 (s, 2 H) , 7,1 (m, 5 H) , 8,0 (s, 1 H) , 8,4 (s, 1 H) ;<31>P-NMR (CDC13) 5 21 (utkoblet) .
Eksempel 7
Diastereoisomerseparasjon av GS- 7097
Den diastereoisomere blandingen ble renset ved å anvende betingelser beskrevet for GS-7171 i eksempel 3A med unntak av det følgende: Mobilfase (initiell): GS-7120 - acetonitril:iso- propylalkohol (95:5)
(slutt): 100 % metylalkohol Elueringsprofil: GS-7115 (diastereoisomer B)
GS-7114 (diastereoisomer A)
Eksempel 8
Alternativ fremgangsmåte for fremstilling av GS- 7097
GS- 7097: fenyl- PMPA, etyl- L- alanylamidat
Fenyl-PMPA (15,0 g, 41,3 mmol), L-alaninetylester-hydroklorid (12,6 g, 83 mmol) og trietylamin (11,5 ml, 83 mmol) ble blandet sammen i en velling i 500 ml pyridin under tørr N2. Denne suspensjonen ble kombinert med en løsning av trifenyl-fosfin (37,9 g, 145 mmol), aldritiol 2 (2,2'-dipyridyldisulfid)
(31,8 g, 145 mmol) og 120 ml pyridin. Blandingen ble varmet ved en intern temperatur på 57 °C i 15 timer. Den fullstendige reaksjonen ble konsentrert under vakuum for å gi en gul masse, 100 g. Massen ble renset ved kolonnekromatografi over en 25 x 11 cm seng med 1,1 kg silikagel 60, maskestørrelse 230-400. Kolonnen ble eluert med 8 1 2 % metanol i diklormetan, etterfulgt av en lineær gradient over et forløp av 26 1 eluent opp til en endelig sammensetning på 13 % metanol. Rene produktholdige fraksjoner ble konsentrert, hvorved man fikk 12,4 g rå-(5), teoretisk 65 %. Dette materialet var kontaminert med ca. 15 % (vekt) trietylaminhydroklorid som vist ved<1>H-NMR. Kontaminasjonen ble fjernet ved å løse opp produktet i 350 ml etylacetat, ekstrahere med 20 ml vann og tørke den organiske løsningen over vannfritt natriumsulfat og konsentrering, hvorved man fikk 11,1 g rent GS-7097 i form av et hvitt, fast stoff, utbytte 58 %. Fremgangsmåten er også anvendt for å syntetisere den diastereoisomere blandingen av GS-7003a og GS-7003b (fenyl-alanylamidatet) og blandingen av GS-7119 og GS-7335 (glysylamidatet). Disse diastereoisomerene separeres ved å anvende batchelueringsfremgangsmåten som vist i eksemplene 3A, 6 og 7.
Eksempel 9
In vi tro- studier av prodrogediastereoisomerer
In vitro-anti-HIV-l-aktiviteten og cytotoksisiteten i MT-2-celler og stabilitet i humant plasma og MT-2-celleekstrak-ter av GS-7340 (fri base) og tenofovirdisoproksilfumarat (TDF) er vist i tabell 1. GS-7340 viser en 10 gangers økning i antiviral aktivitet i forhold til TDF og en 200 gangers økning i plasmastabilitet. Denne høyere plasmastabiliteten er forventet å resultere i høyere sirkulerende nivåer av GS-7340 enn TDF etter oral administrasjon.
For å estimere den relative intracellulære PMPA-konsentrasjon som et resultat av intracellulær metabolisme av TDF, sammenlignet med GS-7340, ble begge prodroger og PMPA radiomerket og innført i intakt humant fullblod ved ekvimolare konsentrasjoner. Etter 1 time ble plasma, røde blodceller (RBC-er) og perifere blodmononukleære celler (PBMC-er) isolert og analysert ved hjelp av HPLC med radiometrisk påvisning. Resultatene er vist i tabell 2.
Etter 1 time oppnår GS-7340 henholdsvis 10 x og 30 x den totale intracellulære konsentrasjonen av PMPA-typer i PBMC-er sammenlignet med TDF og PMPA. I plasma, etter 1 time er 84 % av radioaktiviteten forårsaket av intakt GS-7340, mens ikke noe TDF er påvist ved 1 time. Siden ikke noe intakt TDF er påvist i plasma, er forskjellen på 10 x ved 1 time mellom TDF og GS-7340 minimumsforskjellen forventet in vivo. HPLC-kromatogram for alle tre forbindelsene i PBMC-er er vist i figur 1.
Met. X og Met. Y (metabolitter X og Y) er vist i tabell 5. "Lower case" "p" angir fosforylering. Disse resultatene ble oppnådd etter 1 time i humant blod. Med økende tid er forskjellene in vitro forventet å øke, siden 84 % av GS-7340 fortsatt er intakt i plasma etter 1 time. Fordi intakt GS-7340 er til stede i plasma etter oral administrasjon, burde den relative kliniske effekten være relatert til ICso-verdier observert in vitro.
I tabell 3 nedenfor er ICso-verdier av tenofovir, TDF, GS-7340, flere nukleosider og proteaseinhibitoren nelfinavir listet opp. Som vist, er nelfinavir og GS-7340 2-3 ganger mer potent enn alle andre nukleotider eller nukleosider.
Ytterligere undersøkelser av anti-HIV-1 aktiviteten i in vitro-cellekultur og CC50for separerte diastereoisomerer ifølge oppfinnelsen ble utført, og resultatene er oppført i
tabellen nedenfor.
Referanse for analyse: Arimilii, M.N. et al. (1997), Synthesis, in vitro biological evaluation and oral bioavail-bility of 9-[2-(phosphonomethoxy)propyl]adenine (PMPA) prodrugs, Antiviral Chemistry and Chemotherapy, 8(6):557-564.
"Phe-metylester" er metylfenylalaninylmonoamidat, fenylmonoester av tenofovir, "gly-metylester" er metylglysyl-monoamidat, fenylmonoester av tenofovir.
I hvert tilfelle ovenfor er isomer A antatt å ha den samme absolutte stereokjemi som GS-7340 (S), og isomer B er antatt å ha samme absolutte stereokjemi som GS-7339.
In vitro-metabolisme og stabilitet av separerte diastereoisomerer ble bestemt i PLCE, MT-2-ekstrakt og humant plasma. En biologisk prøve, 80^1, listet opp nedenfor, ble overført til et sentrifugerør med skrukork og inkubert ved 37 °C i 5 minutter. En løsning inneholdende 0,2 mg/ml av testforbindelsen i en egnet buffer, 20^1, ble tilsatt den biologiske prøven og blandet. Reaksjonsblandingen, 20 \ i±, ble umiddelbart tatt ut og blandet med 60^1 metanol inneholdende 0,015 mg/ml 2-hydroksymetylnaftalen som en intern standard for HPLC-analyse. Prøven ble tatt som nulltidsprøve. Deretter ble, ved bestemte tidspunkter, 20^1 av reaksjonsblandingen tatt ut og blandet med 60 ^1 metanol inneholdende den interne standard. Blandingen oppnådd på denne måten ble sentrifugert ved 15 000 G i 5 minutter, og supernatanten ble analysert ved HPLC under betingelsene beskrevet nedenfor.
Følgende biologiske prøver er evaluert.
(1) PLCE (griseleverkarboksyesterase fra Sigma,
160 \ i/ mg protein, 21 mg protein/ml) fortynnet
20 ganger med PBS (fosfatbufret saltvann).
(2) MT-2-celleekstrakt ble preparert fra MT-2-celler i henhold til den publiserte fremgangsmåten [A. Pompon, I. Lefebvre, J.-L. Imbach, S. Kahn og D. Farquhar, "Antiviral Chemistry&Chemotherapy", 5:91-98 (1994)], med unntak av at HEPES-buffer, som beskrevet nedenfor, ble anvendt som medium. (3) Humant plasma (sammenslått normalt humant plasma
fra George King Biomedical Systems, Inc.).
Følgende buffersystemer er anvendt i undersøkelsene.
I studien av PLCE var testforbindelsen løst i PBS. PBS (fosfatbufret saltvann, Sigma) inneholder 0,01 M fosfat,
0,0027 M kaliumklorid og 0,137 M natriumklorid, pH 7,4 ved 37 °C.
I studien av MT-2-celleekstrakter var testforbindelsen løst i HEPES-buffer. HEPES-buffer inneholder 0,010 M HEPES,
0,05 M kaliumklorid, 0,005 M magnesiumklorid og 0,005 M dl-di-tiotreitol, pH 7,4 ved 37 °C.
I studien av humant plasma var testforbindelsen løst i TBS. TBS (trisbufret saltvann, Sigma) inneholder 0,05 M Tris, 0,0027 M kaliumklorid og 0,138 M natriumklorid, pH 7,5 ved 37 °C.
HPLC-analysene ble utført under følgende betingelser.
Kolonne: Zorbax Rx-Cs, 4,6 x 250 mm, 5 \ i (MAC-MOD Analytical, Inc., Chadds Ford, PA) Deteksjon: UV ved 260 nm Væskestrømhastighet: 1,0 ml/minutt Kjøretid: 30 minutter Injeksjonsvolum: 20^1 Kolonnetemperatur: romtemperatur Mobilfase A: 50 mM kaliumfosfat
(pH 6,0)/CH3CN = 95/5 (v/v)
Mobilfase B: 50 mM kaliumfosfat
(pH 6,0)/CH3CN = 50/50 (v/v)
Gradientkjøring: 0 min 100 % mobilfase A
25 min 100 % mobilfase B 30 min 100 % mobilfase B Resultatene er vist nedenfor i tabell 5 (utvalgte IC50-resultater fra Tabell 4 er også inkludert).
Eksempel 10
Plasma- og PBMC- eksponering etter oral administrasjon av prodrogediastereoisomerer til beaglehunder
Farmakokinetikken for GS-7340 ble studert i hunder etter oral administrasjon av 10 mg-ekv./kg dose.
Formuleringer
Prodrogene ble formulert som løsninger i 50 mM sitronsyre innen 0,5 time før dosene ble gitt. Alle forbindelsene anvendt i studiene ble syntetisert av Gilead Sciences. Følgende partier ble anvendt:
Doseadministrasjon og prøveinnsamling
"In-life"-fasen av denne studien ble utført i overensstemmelse med anbefalingene fra "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals" (National Institute of Health Publication 86-23) og ble godkjent av instituttkomiteen for dyrepleie og
-anvendelse. Fastede hannbeaglehunder (10+2 kg) ble anvendt i studiene. Hvert medikament ble administrert i form av en enkelt dose ved hjelp av oral gavage (1,5-2 ml/kg). Dosen var 10 mg-
ekv. med PMPA/kg. For PBMC-er ble blodprøver samlet inn ved 0 (predose), 2,8 og 24 timer etter dose. For plasma ble blodprøver samlet inn ved 0 (predose), 5, 15 og 30 minutter, og 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 og 24 timer postdose. Blod (1,0 ml) ble prosessert umiddelbart for isolasjon av plasma ved sentrifugering ved 2000 rpm i 10 minutter. Plasmaprøver ble frosset og lagret ved -70 °C inntil de ble analysert.
Fremstilling av perifere blodmononukleære celler ( PBMC)
Fullblod (8 ml) tatt ved angitte tidspunkter ble blandet i like deler fosfatbufret saltvann (PBS), lagt på 15 ml Ficoll-Paque-løsning (Pharmacia Biotech.) og sentrifugert ved 400 x g i 40 minutter. PBMC-laget ble fjernet og vasket én gang med PBS. Den dannede PMBC-pelleten ble rekonstituert i 0,5 ml PBS, cellene ble resuspendert og talt ved å anvende hemocyto-meter, og lagret ved -70 °C inntil de ble analysert. Antallet celler multiplisert med gjennomsnittlig enkeltcellevolum ble anvendt i beregningen av intracellulære konsentrasjoner. En rapportert verdi på 200 femtoliter/celle ble anvendt som volumet til hvilende PBMC (B.L. Robins, R.V. Srinivas, C. Kim,
N. Bischofberger og A. Fridland, Antimicrob. Agents Chemother., 42, 612 (1998).
Bestemmelse av PMPA og prodroger i plasma og PBMC- er
Konsentrasjonen av PMPA i hundeplasmaprøvene ble bestemt ved derivatisering av PMPA med kloracetaldehyd for å frembringe et meget fluorescerende N<1>,N<6->etenadeninderivat (L. Naesens, J. Balzarini og E. De Clercq, Clin. Chem., 38, 480
(1992). Kort beskrevet ble 100^1 plasma blandet med 200^1 acetonitril for å felle ut protein. Prøvene ble deretter fordampet til tørrhet under redusert trykk ved romtemperatur. Tørkede prøver ble rekonstituert i 200^1 derivatiserings-cocktail (0,34 % kloracetaldehyd i 100 mM natriumacetat, pH 4,5), virvelmikset og sentrifugert. Supernatanten ble deretter overført til et rent rør med skrukork og inkubert ved 95 °C i 40 minutter. Derivatiserte prøver ble deretter fordampet til tørrhet og rekonstituert i 100^1 vann før HPLC-analyse. Før intracellulært PMPA kunne bestemmes ved hjelp av HPLC, måtte store mengder adenin forbundet med ribonukleotider som er til stede i PBMC-ekstraktene, fjernes ved selektiv oksidasjon. Vi anvendte en modifisert fremgangsmåte i henhold til Tanaka et al. (K. Tanaka, A. Yoshioka, S. Tanaka og Y. Wataya, Anal. Biochem., 139, 35 (1984)). Kort beskrevet ble PBMC-prøvene blandet 1:2 med metanol og fordampet til tørrhet under redusert trykk. De tørkede prøvene ble derivatisert som beskrevet i plasmaanalysen. Derivatiserte prøver ble blandet med 20 fil 1 M rhamnose og 30 \ i± 0,1 M natriumperjodat og inkubert ved 37 °C i 5 minutter. Etter inkubasjonen ble 40 fil 4 M metylamin og 20 \ il 0,5 M inosin tilsatt. Etter inkubasjon ved 37 °C i 30 minutter ble prøvene fordampet til tørrhet under redusert trykk og rekonstituert i vann for HPLC-analyse. Ingen intakt prodroge ble påvist i noen av PBMC-prøvene. For plasmaprøver som potensielt inneholdt intakte prodroger, ble eksperimenter utført for å bekrefte at ingen videre omdannelse til PMPA foregikk i løpet av derivatiseringen. Pro-drogestandardene ble tilsatt til medikamentfritt plasma og derivatisert som beskrevet. Det var ingen påvisbare nivåer av PMPA til stede i noen av plasmaprøvene, og den projiserte om-dannelsesprosent var mindre enn 1 %. HPLC-systemet bestod av et P4000-løsningsleverings-system med AS3000-autoinjektor og F2000-fluorescensdetektor (Thermo Separation, San Jose, CA). Kolonnen var en Inertsil ODS-2-kolonne (4,6 x 150 mm). Mobilfasene som ble anvendt, var: A, 5 % acetonitril i 25 mM kaliumfosfatbuffer med 5 mM tetrabutyl-ammoniumbromid (TBABr), pH 6,0; B, 60 % acetonitril i 25 mM kaliumfosfatbuffer med 5 mM TBABr, pH 6,0. Væskestrømhastigheten var 2 ml/minutt, og kolonnetemperaturen ble opprettholdt ved 35 °C ved hjelp av en kolonneovn. Gradientprofilen var 90 % A/10 % B i 10 minutter for PMPA og 65 % A/35 % B i 10 minutter for prodrogen. Påvisning var ved fluorescens med eksitasjon ved 236 nm og emisjon ved 420 nm, og injeksjonsvolumet var 10 \ il. Resultater ble opparbeidet og lagret på et laboratoriedata-opparbeidelsessystem (PeakPro, Beckman, Allendale, NJ).
Farmakokinetiske beregninger
PMPA- og prodrogeeksponeringer ble uttrykt som områder under konsentrasjonskurven i plasma eller PBMC fra 0 til 24 timer (AUC). AUC-verdiene ble beregnet ved å anvende trapezoidalregelen.
Plasma- og PBMC- konsentrasjoner
Resultatene av denne undersøkelsen er vist i figurene 2 og 3. Figur 2 viser tidskurven til GS-7340-2-metabolismen opp-summert for plasma- og PBMC-eksponeringer etter oral administrasjon av rene diastereoisomerer av PMPA-prodroger.
Søylediagrammet i figur 2 viser AUC (0-24 timer) for tenofovir i PBMC-er og plasma fra hund etter s.c. administrasjon av PMPA, TDF og amidatesterprodroger. Alle amidatprodrogene ut-viste økninger i PBMC-eksponering. For eksempel resulterte GS-7340 i en ca. 21 gangers økning i PBMC-eksponering sammenlignet med PMPA s.c. og TDF; og en henholdsvis 6,25 gangers og 1,2 9 gangers nedgang i plasmaeksponeringen.
Disse dataene fastslår at GS-7340 in vivo kan leveres oralt, minimaliserer systemisk eksponering til PMPA og sterkt forhøyer den intracellulære konsentrasjonen av PMPA i cellene som primært er ansvarlige for HIV-replikasjon.
Eksempel 11
Biodistribusjon av GS- 7340
Som del av den prekliniske karakteriseringen av GS-7340 ble dets biodistribusjon i hunder bestemt. Vevsdistribusjonen av GS-7340 (isopropylalaninylmonoamidat, fenylmonoester av tenofovir) ble undersøkt etter oral administrasjon til beaglehunder. To hanndyr ble gitt orale doser med<14>C=GS-7340 (8,85 mg-ekv. PMPA/kg, 33,2 fiCi/kg, 8-karbonet til adenin er merket) i en vandig løsning (50 mM sitronsyre, pH 2,2). Plasma og perifere blodmononukleære celler (PBMC-er) ble skaffet til veie i løpet av en 24 timers periode. Urin og feces ble samlet inn fra buret i løpet av 24 timer. Ved 24 timer etter dosen ble dyrene avlivet, og vev til analyse ble fjernet. Total radioaktivitet i vevene ble bestemt ved oksidasjon og væskescintillasjonstelling.
Biodistribusjonen av PMPA etter 24 timer etter en enkelt oral dose av radiomerket GS-7340 er vist i tabell 4 sammen med resultater fra en tidligere studie med TDF (GS-4331). Når det gjelder TDF, er prodrogekonsentrasjonen i plasma under analysens deteksjonsnivå, og hovedtypen observert i plasma er mordrogen. Nivåene til PMPA i de lymfatiske vev, benmarg og skjelettmuskulatur er økt 10 ganger etter administrasjon av GS-7340.
Akkumulering i lymfatiske vev er i overensstemmelse med resultatene observert fra PBMC-analysene, siden disse vevene er sammensatt primært av lymfocytter. Likeledes er akkumulering i benmargen sannsynligvis årsaken til den høye prosenten av lymfocytter (70 %) i dette vevet.

Claims (18)

1. Screeningsfremgangsmåte for identifisering av en metoksyfosfonatnukleotidanalogprodroge som utviser økt aktivitet i et målvev, karakterisert ved at den omfatter: (a) tilveiebringelse av minst én av de angitte prodrogene, (b) utvelgelse av minst ett terapeutisk målvev og minst ett ikke-målvev, (c) administrering av prodrogen til målvevet og til minst ett av nevnte ikke-målvev, og (d) bestemmelse av den relative aktiviteten utøvd av prodrogen i vevene i trinn (c).
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor aktiviteten er antiviral aktivitet eller antitumoraktivitet.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, hvor aktiviteten er antiviral aktivitet.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 3, hvor aktiviteten er anti-HIV- eller anti-HBV-aktivitet.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor prodrogen er en prodroge av PMPA eller PMEA.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 5, hvor prodrogen er et fosfonoamidat, en fosfonoester eller blandet fosfonoamidat/fosfonoester.
7. Fremgangsmåte ifølge krav 6, hvor amidatet er et amino-syreamidat.
8. Fremgangsmåte ifølge krav 6, hvor esteren er en arylester.
9. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor den videre omfatter utvelgelse av en prodroge som har en relativ aktivitet i målvevet som er større enn 10 ganger den i ikke-målvevet.
10. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor mål- og ikke-målvevet er i et dyr, prodrogen administreres til dyret, og den relative aktivitet bestemmes ved analyse av animalsk vev etter administrasjon av prodrogen.
11. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor aktiviteten i målvevet og ikke-målvevet er bestemt ved analyse av mengden av minst én metabolitt av prodrogen i vevene.
12. Fremgangsmåte ifølge krav 11, hvor metabolitten er det parenterale medikamentet.
13. Fremgangsmåte ifølge krav 12, hvor metabolitten er difosfatet av det parenterale medikamentet.
14. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor målvevet er viralt infisert vev, og at ikke-målvevet er det samme vevet som ikke er viralt infisert.
15. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor målvevet er lymfoid vev, og aktiviteten er anti-HIV-aktivitet.
16. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor målvevet er lever, og aktiviteten er anti-HBV-aktivitet.
17. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor målvevet er hematologisk, og aktiviteten er antitumoraktivitet.
18. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor målvevet er malignt, og at ikke-målvevet er det samme vevet, men ikke-malignt.
NO20120466A 2000-07-21 2012-04-23 Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger, og fremgangsmater for utvelgelse og fremstilling av disse NO20120466L (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US22002100P 2000-07-21 2000-07-21
PCT/US2001/023104 WO2002008241A2 (en) 2000-07-21 2001-07-20 Prodrugs of phosphonate nucleotide analogues and methods for selecting and making same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO20120466L true NO20120466L (no) 2003-03-20

Family

ID=22821718

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20030270A NO336718B1 (no) 2000-07-21 2003-01-20 Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger, preparat derav og dets anvendelse til terapeutisk og profylaktisk behandling av virusinfeksjoner
NO20120466A NO20120466L (no) 2000-07-21 2012-04-23 Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger, og fremgangsmater for utvelgelse og fremstilling av disse
NO20131717A NO20131717L (no) 2000-07-21 2013-12-20 Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger, og fremgangsmåter for utvelgelse og fremstilling av disse
NO20150909A NO20150909L (no) 2000-07-21 2015-07-10 Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger, og fremgangsmåter for utvelgelse og fremstilling av disse
NO2016006C NO2016006I1 (no) 2000-07-21 2016-04-19 Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger,preparat derav og dets anvendelse til terapeutisk og profylaktisk behandling av virusinfeksjoner
NO2023006C NO2023006I1 (no) 2000-07-21 2023-02-03 Tenofovir alafenamide or a salt or solvate thereof, especially tenofovir alafenamide fumarate - forlengelse

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20030270A NO336718B1 (no) 2000-07-21 2003-01-20 Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger, preparat derav og dets anvendelse til terapeutisk og profylaktisk behandling av virusinfeksjoner

Family Applications After (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20131717A NO20131717L (no) 2000-07-21 2013-12-20 Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger, og fremgangsmåter for utvelgelse og fremstilling av disse
NO20150909A NO20150909L (no) 2000-07-21 2015-07-10 Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger, og fremgangsmåter for utvelgelse og fremstilling av disse
NO2016006C NO2016006I1 (no) 2000-07-21 2016-04-19 Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger,preparat derav og dets anvendelse til terapeutisk og profylaktisk behandling av virusinfeksjoner
NO2023006C NO2023006I1 (no) 2000-07-21 2023-02-03 Tenofovir alafenamide or a salt or solvate thereof, especially tenofovir alafenamide fumarate - forlengelse

Country Status (37)

Country Link
US (10) US20020119443A1 (no)
EP (3) EP1301519B2 (no)
JP (4) JP4651264B2 (no)
KR (2) KR100749160B1 (no)
CN (2) CN100402539C (no)
AP (1) AP1466A (no)
AU (3) AU2001282941C1 (no)
BE (1) BE2016C018I2 (no)
BG (1) BG66037B1 (no)
BR (1) BRPI0112646B8 (no)
CA (3) CA2893174A1 (no)
CY (2) CY2016008I1 (no)
CZ (2) CZ304886B6 (no)
DK (2) DK2682397T3 (no)
EA (1) EA004926B1 (no)
EE (1) EE05366B1 (no)
ES (2) ES2627903T3 (no)
FR (1) FR16C0013I2 (no)
HK (2) HK1054238A1 (no)
HR (2) HRP20160074B1 (no)
HU (2) HU230960B1 (no)
IL (1) IL153658A0 (no)
IS (1) IS2985B (no)
LT (2) LT2682397T (no)
LU (1) LU93029I2 (no)
MX (1) MXPA03000587A (no)
NL (1) NL300803I2 (no)
NO (6) NO336718B1 (no)
NZ (3) NZ535408A (no)
OA (1) OA12393A (no)
PL (1) PL213214B1 (no)
PT (2) PT1301519E (no)
SI (2) SI2682397T1 (no)
TR (1) TR200300055T2 (no)
UA (1) UA75889C2 (no)
WO (1) WO2002008241A2 (no)
ZA (1) ZA200210271B (no)

Families Citing this family (217)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AP1466A (en) * 2000-07-21 2005-09-22 Gilead Sciences Inc Prodrugs of phosphonate nucleotide analogues and methods for selecting and making same.
HUP0501070A2 (en) * 2001-11-14 2006-04-28 Biocryst Pharmaceuticals Nucleosides preparation thereof and use as inhibitors of rna viral polymerases
US7388002B2 (en) * 2001-11-14 2008-06-17 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases
CA2481285A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Gilead Sciences, Inc. Non nucleoside reverse transcriptase inhibitors
US20050239054A1 (en) * 2002-04-26 2005-10-27 Arimilli Murty N Method and compositions for identifying anti-HIV therapeutic compounds
US7214668B2 (en) 2002-05-13 2007-05-08 Metabasis Therapeutics, Inc. Phosphonic acid based prodrugs of PMEA and its analogues
NZ540728A (en) 2003-01-14 2008-08-29 Gilead Sciences Inc Compositions and methods for combination antiviral therapy
WO2004096287A2 (en) 2003-04-25 2004-11-11 Gilead Sciences, Inc. Inosine monophosphate dehydrogenase inhibitory phosphonate compounds
US7470724B2 (en) * 2003-04-25 2008-12-30 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate compounds having immuno-modulatory activity
EA200501676A1 (ru) 2003-04-25 2006-04-28 Джилид Сайэнс, Инк. Фосфонатсодержащие ингибиторы киназы (варианты), способ их получения, фармацевтическая композиция, лекарственная форма на их основе и способ ингибирования киназы у млекопитающего (варианты)
US7407965B2 (en) * 2003-04-25 2008-08-05 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate analogs for treating metabolic diseases
US20090247488A1 (en) * 2003-04-25 2009-10-01 Carina Cannizzaro Anti-inflammatory phosphonate compounds
CN101410120A (zh) * 2003-04-25 2009-04-15 吉里德科学公司 抗炎的膦酸酯化合物
US7300924B2 (en) * 2003-04-25 2007-11-27 Gilead Sciences, Inc. Anti-infective phosphonate analogs
WO2005002626A2 (en) * 2003-04-25 2005-01-13 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic phosphonate compounds
US7432261B2 (en) * 2003-04-25 2008-10-07 Gilead Sciences, Inc. Anti-inflammatory phosphonate compounds
WO2004096286A2 (en) 2003-04-25 2004-11-11 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonate analogs
US20050261237A1 (en) * 2003-04-25 2005-11-24 Boojamra Constantine G Nucleoside phosphonate analogs
US7452901B2 (en) * 2003-04-25 2008-11-18 Gilead Sciences, Inc. Anti-cancer phosphonate analogs
US7432273B2 (en) 2003-10-24 2008-10-07 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate analogs of antimetabolites
WO2005044279A1 (en) 2003-10-24 2005-05-19 Gilead Sciences, Inc. Purine nucleoside phosphonate conjugates
AU2004286238A1 (en) 2003-10-24 2005-05-12 Gilead Sciences, Inc. Methods and compositions for identifying therapeutic compounds
BRPI0418031A (pt) * 2003-12-22 2007-04-17 Gilead Sciences Inc inibidores de quinase fosfonato-substituìdos
CA2548753A1 (en) * 2003-12-22 2005-07-14 Gilead Sciences, Inc. 4-substituted carbovir and abacavir-derivatives as well as related compounds with hiv and hcv antiviral activity
US20050153990A1 (en) * 2003-12-22 2005-07-14 Watkins William J. Phosphonate substituted kinase inhibitors
BRPI0418251C1 (pt) * 2003-12-30 2021-05-25 Gilead Sciences Inc fosfonatos, monofosfonamidatos, bisfosfonamidatos, e, composição farmacêutica os compreendendo
DE602005017131D1 (de) * 2004-01-21 2009-11-26 Gilead Sciences Inc Verwendung von adefovir oder tenofovir zur hemmung von mmtv-artigen viren im zusammenhang mit brustkrebs und primärer biliärer zirrhose
US7079156B1 (en) 2004-05-14 2006-07-18 Nvidia Corporation Method and system for implementing multiple high precision and low precision interpolators for a graphics pipeline
US8416242B1 (en) 2004-05-14 2013-04-09 Nvidia Corporation Method and system for interpolating level-of-detail in graphics processors
US8411105B1 (en) 2004-05-14 2013-04-02 Nvidia Corporation Method and system for computing pixel parameters
US8432394B1 (en) 2004-05-14 2013-04-30 Nvidia Corporation Method and system for implementing clamped z value interpolation in a raster stage of a graphics pipeline
CA2565966A1 (en) 2004-06-08 2005-12-29 Metabasis Therapeutics, Inc. Lewis acid mediated synthesis of cyclic esters
DK2258376T3 (en) 2004-07-27 2019-04-15 Gilead Sciences Inc Phosphonate analogues of HIV inhibitor compounds
EP1865967A4 (en) * 2005-04-08 2011-02-09 Chimerix Inc COMPOUNDS, COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING VIRAL INFECTIONS AND OTHER DISEASES
US8642577B2 (en) 2005-04-08 2014-02-04 Chimerix, Inc. Compounds, compositions and methods for the treatment of poxvirus infections
CN100359315C (zh) * 2005-05-26 2008-01-02 林维宣 兽药残留能力验证样品及制备方法
TWI375560B (en) 2005-06-13 2012-11-01 Gilead Sciences Inc Composition comprising dry granulated emtricitabine and tenofovir df and method for making the same
TWI471145B (zh) 2005-06-13 2015-02-01 Bristol Myers Squibb & Gilead Sciences Llc 單一式藥學劑量型
US8076303B2 (en) 2005-12-13 2011-12-13 Spring Bank Pharmaceuticals, Inc. Nucleotide and oligonucleotide prodrugs
CN100396689C (zh) * 2006-03-07 2008-06-25 中国医学科学院医药生物技术研究所 一组具有抑制hiv-1/hbv病毒复制活性的替诺福韦单酯化合物
EP2020996B1 (en) 2006-05-16 2011-11-23 Gilead Sciences, Inc. Method and compositions for treating hematological malignancies
ES2532502T3 (es) * 2006-07-12 2015-03-27 Mylan Laboratories Limited Proceso para la preparación de tenofovir
US20080261913A1 (en) * 2006-12-28 2008-10-23 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of liver disorders
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
US8105489B2 (en) * 2007-06-26 2012-01-31 The University Of Wyoming Research Corporation Treatment and prevention systems for acid mine drainage and halogenated contaminants
US8441497B1 (en) * 2007-08-07 2013-05-14 Nvidia Corporation Interpolation of vertex attributes in a graphics processor
US8993542B2 (en) * 2008-01-25 2015-03-31 Chimerix Inc. Methods of treating viral infections
TWI444384B (zh) 2008-02-20 2014-07-11 Gilead Sciences Inc 核苷酸類似物及其在治療惡性腫瘤上的用途
EP2937356A1 (en) 2008-04-25 2015-10-28 Cipla Limited Crystalline form of tenofovir disoproxil and a process for its preparation
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
TW201004632A (en) * 2008-07-02 2010-02-01 Idenix Pharmaceuticals Inc Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
EP2307435B1 (en) * 2008-07-08 2012-06-13 Gilead Sciences, Inc. Salts of hiv inhibitor compounds
CA2748034A1 (en) 2008-12-23 2010-07-01 Pharmasset, Inc. Purified 2'-deoxy'2'-fluoro-2'-c-methyl-nucleoside-phosphoramidate prodrugs for the treatment of viral infections
PA8855601A1 (es) 2008-12-23 2010-07-27 Forformidatos de nucleósidos
CN102325783A (zh) 2008-12-23 2012-01-18 法莫赛特股份有限公司 嘌呤核苷的合成
TWI576352B (zh) 2009-05-20 2017-04-01 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
US8614200B2 (en) 2009-07-21 2013-12-24 Chimerix, Inc. Compounds, compositions and methods for treating ocular conditions
ME01528B (me) 2009-09-21 2014-04-20 Gilead Sciences Inc POSTUPCI l INTERMEDIJERI ZA PROIZVODNJU 1'-CIJANOKARBANUKLEOZIDIH ANALOGA
EP2534150B1 (en) 2010-02-12 2017-04-05 Chimerix, Inc. Methods of treating viral infection
US8563530B2 (en) 2010-03-31 2013-10-22 Gilead Pharmassel LLC Purine nucleoside phosphoramidate
SG184323A1 (en) 2010-03-31 2012-11-29 Gilead Pharmasett Llc Stereoselective synthesis of phosphorus containing actives
MX2012011222A (es) 2010-04-01 2013-01-18 Centre Nat Rech Scient Compuestos y composiciones farmaceuticas para el tratamiento de infecciones virales.
AU2011248620B2 (en) 2010-04-26 2015-11-26 Chimerix, Inc. Methods of treating retroviral infections and related dosage regimes
JP5937073B2 (ja) * 2010-07-19 2016-06-22 ギリード・サイエンシズ・インコーポレーテッド ジアステレオマーとして純粋なホスホルアミデートプロドラッグの調製方法
MX2013000744A (es) 2010-07-22 2013-03-07 Gilead Sciences Inc Metodos y compuestos para tratar infecciones virales por paramyxoviridae.
CA2818853A1 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Gilead Pharmasset Llc 2'-spirocyclo-nucleosides for use in therapy of hcv or dengue virus
CA2819548C (en) 2010-12-10 2019-04-09 Sigmapharm Laboratories, Llc Highly stable compositions of orally active nucleotide analogues or orally active nucleotide analogue prodrugs
ZA201103820B (en) 2010-12-13 2012-01-25 Laurus Labs Private Ltd Process for the preparation of tenofovir
CA2843324A1 (en) 2011-03-31 2012-11-15 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US9550803B2 (en) 2011-05-06 2017-01-24 University Of Southern California Method to improve antiviral activity of nucleotide analogue drugs
PT2710019T (pt) 2011-05-19 2017-07-21 Gilead Sciences Inc Processos e intermediários para preparar agentes anti-hiv
AU2014271320B2 (en) * 2011-08-16 2017-02-23 Gilead Sciences, Inc. Tenofovir alafenamide hemifumarate
JP5651275B2 (ja) * 2011-08-16 2015-01-07 ギリアード サイエンシス インコーポレーテッド テノホビルアラフェナミドヘミフマレート
MX354958B (es) 2011-09-16 2018-03-27 Gilead Pharmasset Llc Metodos para el tratamiento de vhc.
AU2016228317B2 (en) * 2011-10-07 2018-07-19 Gilead Sciences, Inc. Methods for preparing anti-viral nucleotide analogs
EP3333173B1 (en) * 2011-10-07 2019-06-26 Gilead Sciences, Inc. Methods for preparing anti-viral nucleotide analogs
AU2014215976B2 (en) * 2011-10-07 2016-06-30 Gilead Sciences, Inc. Methods for preparing anti-viral nucleotide analogs
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
ES2874774T3 (es) 2011-12-22 2021-11-05 Geron Corp Análogos de guanina como sustratos de telomerasa y afectores de la longitud de los telómeros
EP2809323A1 (en) 2012-02-03 2014-12-10 Gilead Sciences, Inc. Combination therapy comprising tenofovir alafenamide hemifumarate and cobicistat for use in the treatment of viral infections
WO2013115916A1 (en) 2012-02-03 2013-08-08 Gilead Sciences, Inc. Combination therapy comprising gs-7340 and cobicistat for use in the treatment of viral infections
CN103665043B (zh) * 2012-08-30 2017-11-10 江苏豪森药业集团有限公司 一种替诺福韦前药及其在医药上的应用
GB201215696D0 (en) * 2012-09-03 2012-10-17 Ithemba Pharmaceuticals Pty Ltd A process for the preparation of (R)-9-[2-(Phosphonometh-Oxy)propyl]adenine (PMPA)
JP2015536940A (ja) * 2012-10-29 2015-12-24 シプラ・リミテッド 抗ウイルス性ホスホネート類似体及びその製造方法
CN102899327B (zh) * 2012-11-06 2014-06-11 清华大学深圳研究生院 一种抗病毒的小核酸及其温度敏感型凝胶制剂与应用
KR20150082613A (ko) * 2012-11-16 2015-07-15 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 인간 포스파티딜이노시톨 3-키나제 델타의 퓨린 억제제
CN103848868B (zh) * 2012-12-04 2017-04-12 蚌埠丰原涂山制药有限公司 制备替诺福韦的方法
CN103848869B (zh) * 2012-12-04 2016-12-21 上海医药工业研究院 制备替诺福韦的方法
PL2950786T3 (pl) 2013-01-31 2020-05-18 Gilead Pharmasset Llc Formulacja skojarzona dwóch związków przeciwwirusowych
CN104072539B (zh) * 2013-03-25 2017-03-29 安徽贝克联合制药有限公司 替诺福韦双(4‑乙酰氨基苯酚氧基)酯及其制备方法和其应用
JP6262848B2 (ja) * 2013-05-21 2018-01-17 成都先導薬物開発有限公司 薬物標的の捕獲方法
IN2013MU01967A (no) 2013-06-07 2015-06-12 Cipla Ltd
PL3038601T3 (pl) 2013-08-27 2020-08-24 Gilead Pharmasset Llc Formulacja złożona dwóch związków przeciwwirusowych
WO2015040640A2 (en) * 2013-09-20 2015-03-26 Laurus Labs Private Limited An improved process for the preparation of tenofovir alafenamide or pharmaceutically acceptable salts thereof
EP2860185A1 (en) 2013-10-09 2015-04-15 Zentiva, k.s. An improved process for the preparation of Tenofovir disoproxil and pharmaceutically acceptable salts thereof
WO2015079455A2 (en) * 2013-11-27 2015-06-04 Laurus Labs Private Limited A recycling process for preparing tenofovir alafenamide diastereomers
WO2015107451A2 (en) 2014-01-14 2015-07-23 Mylan Laboratories Ltd. Purification of tenofovir alafenamide and its intermediates
TWI660965B (zh) 2014-01-15 2019-06-01 美商基利科學股份有限公司 泰諾福韋之固體形式
CN104804042B (zh) * 2014-01-24 2018-01-19 齐鲁制药有限公司 核苷酸膦酸酯类化合物、其药物组合物、制备方法及用途
WO2015120057A1 (en) 2014-02-05 2015-08-13 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical combinations against co-infection with hiv and tuberculosis
CN106061984A (zh) 2014-02-13 2016-10-26 配体药物公司 前药化合物及其用途
WO2015127848A1 (zh) * 2014-02-27 2015-09-03 四川海思科制药有限公司 一种取代的氨基磷酸酯类衍生物、其制备方法及其应用
CN105001262B (zh) * 2014-04-18 2017-09-01 四川海思科制药有限公司 芳基取代的磷酰胺类衍生物及其在医学上的应用
WO2015161781A1 (zh) * 2014-04-21 2015-10-29 四川海思科制药有限公司 一种核苷类似物及其中间体的制备方法
CN105085571A (zh) * 2014-05-20 2015-11-25 四川海思科制药有限公司 替诺福韦艾拉酚胺复合物及其制备方法和用途
WO2015197006A1 (zh) * 2014-06-25 2015-12-30 四川海思科制药有限公司 一种取代的氨基酸硫酯类化合物、其组合物及应用
EP3164136A4 (en) 2014-07-02 2018-04-04 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Prodrug compounds and uses therof
CN106687467A (zh) * 2014-09-30 2017-05-17 韩美精密化学株式会社 高纯度（r）‑9‑[2‑（磷酰甲氧基）丙基]腺嘌呤的制备方法
KR101703257B1 (ko) 2014-09-30 2017-02-06 한미정밀화학주식회사 고순도의 (r)-9-[2-(포스포노메톡시)프로필]아데닌의 제조방법
KR101703258B1 (ko) 2014-12-30 2017-02-06 한미정밀화학주식회사 고순도의 (r)-9-[2-(포스포노메톡시)프로필]아데닌의 제조방법
WO2016057866A1 (en) 2014-10-09 2016-04-14 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Compositions and methods for the delivery of therapeutics
TWI687432B (zh) 2014-10-29 2020-03-11 美商基利科學股份有限公司 絲狀病毒科病毒感染之治療
CN105646584B (zh) * 2014-11-12 2018-09-28 四川海思科制药有限公司 替诺福韦艾拉酚胺富马酸盐晶型及其制备方法和用途
CN104558036A (zh) * 2014-12-11 2015-04-29 杭州和泽医药科技有限公司 一种替诺福韦艾拉酚胺半反丁烯二酸盐晶型及其制备方法
WO2016108205A1 (en) 2015-01-03 2016-07-07 Mylan Laboratories Limited Processes for the preparation of amorphous tenofovir alafenamide hemifumarate and a premix thereof
US20180148774A1 (en) * 2015-05-16 2018-05-31 Godx, Inc Point of need testing device and methods of use thereof
CN106188139B (zh) 2015-05-29 2020-02-18 江苏天士力帝益药业有限公司 替诺福韦单苄酯磷酸酰胺前药、其制备方法及应用
CZ2015384A3 (cs) 2015-06-05 2016-12-14 Zentiva, K.S. Pevné formy Tenofovir alafenamidu
US9777028B2 (en) 2015-06-17 2017-10-03 Gilead Sciences, Inc. Co-crystals, salts and solid forms of tenofovir alafenamide
PL4070788T3 (pl) 2015-06-30 2023-07-10 Gilead Sciences, Inc. Formulacje farmaceutyczne
CA2994720C (en) 2015-08-10 2020-11-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Antiviral beta-amino acid ester phosphodiamide compounds
TWI616452B (zh) * 2015-08-26 2018-03-01 Preparation method of nucleoside analog and intermediate thereof
TWI620754B (zh) * 2015-08-26 2018-04-11 Method for preparing amino phosphate derivative and preparation method thereof
TWI616453B (zh) * 2015-08-27 2018-03-01 Substituted amino acid thioester compounds, compositions and uses thereof
WO2017037608A1 (en) * 2015-08-28 2017-03-09 Laurus Labs Private Limited Solid forms of tenofovir alafenamide and salts thereof, processes for its preparation and pharmaceutical compositions thereof
MA52371A (fr) 2015-09-16 2021-09-22 Gilead Sciences Inc Méthodes de traitement d'infections dues aux coronaviridae
NZ741957A (en) 2015-11-09 2019-04-26 Gilead Sciences Inc Therapeutic compositions for treatment of human immunodeficiency virus
CN106800573B (zh) * 2015-11-25 2020-03-10 四川海思科制药有限公司 一种核苷酸膦酸酯一水合物及其制备方法和在医药上的应用
US10745428B2 (en) 2015-12-10 2020-08-18 Idenix Pharmaceuticals Llc Antiviral phosphodiamide prodrugs of tenofovir
CN106866737B (zh) * 2015-12-11 2020-11-20 南京圣和药物研发有限公司 膦酸衍生物及其应用
WO2017106069A1 (en) 2015-12-15 2017-06-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Antiviral oxime phosphoramide compounds
WO2017118928A1 (en) 2016-01-06 2017-07-13 Lupin Limited Process for the separation of diastereomers of tenofovir alafenamide
PT3411378T (pt) 2016-02-02 2020-07-28 Sandoz Ag Formas cristalinas de monofumarato de tenofovir alafenamida
WO2017133517A1 (zh) * 2016-02-03 2017-08-10 四川海思科制药有限公司 一种磷酰胺衍生物及制备方法和用途
WO2017148290A1 (zh) * 2016-03-01 2017-09-08 深圳市塔吉瑞生物医药有限公司 一种取代的腺嘌呤化合物及其药物组合物
CN107179355B (zh) * 2016-03-11 2021-08-10 广东东阳光药业有限公司 一种分离检测替诺福韦艾拉酚胺及其有关物质的方法
CZ2016156A3 (cs) 2016-03-17 2017-09-27 Zentiva, K.S. Způsob přípravy diastereomerně čistého Tenofoviru Alafenamidu nebo jeho solí
CN107226826A (zh) * 2016-03-25 2017-10-03 江苏奥赛康药业股份有限公司 替诺福韦艾拉酚胺富马酸盐化合物及其药物组合物
WO2017211325A1 (zh) 2016-06-05 2017-12-14 上海诚妙医药科技有限公司 富马酸替诺福韦艾拉酚胺盐的新晶型、制备方法及其用途
CN106543227B (zh) * 2016-06-20 2018-02-02 杭州和泽医药科技有限公司 一种腺嘌呤衍生物的膦酸酯前药及其在医药上的应用
WO2017221189A1 (en) * 2016-06-22 2017-12-28 Laurus Labs Limited An improved process for the preparation of tenofovir alafenamide or pharmaceutically acceptable salts thereof
CN106317116A (zh) * 2016-08-19 2017-01-11 张红利 磷酰胺核苷类化合物及其药学上可接受的盐与应用、药物组合物
WO2018039157A1 (en) 2016-08-25 2018-03-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Antiviral prodrugs of tenofovir
CN106380484A (zh) * 2016-08-29 2017-02-08 杭州百诚医药科技股份有限公司 一种替诺福韦艾拉酚胺的新晶型及其制备方法
WO2018042331A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Combinations and uses and treatments thereof
WO2018051250A1 (en) 2016-09-14 2018-03-22 Viiv Healthcare Company Combination comprising tenofovir alafenamide, bictegravir and 3tc
US10736908B2 (en) 2016-10-26 2020-08-11 Merck Sharp & Dohme Corp. Antiviral aryl-amide phosphodiamide compounds
CN106565785B (zh) * 2016-11-09 2019-11-12 周雨恬 一种具有抗hbv/hiv活性的核苷氨基磷酸酯类化合物及其盐和用途
CN108129514A (zh) * 2016-12-01 2018-06-08 北京美倍他药物研究有限公司 磷酸/膦酸衍生物的单一异构体及其医药用途
AU2017379850B2 (en) 2016-12-22 2022-03-24 Msd International Gmbh Antiviral aliphatic ester prodrugs of tenofovir
JP2020504734A (ja) 2016-12-22 2020-02-13 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． 抗ウイルス性ベンジル−アミンホスホジアミド化合物
WO2018115046A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Sandoz Ag Crystalline solid forms of tenofovir alafenamide
TWI784370B (zh) 2017-01-31 2022-11-21 美商基利科學股份有限公司 替諾福韋埃拉酚胺(tenofovir alafenamide)之晶型
WO2018153977A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Hexal Ag Stable composition of tenofovir alafenamide
RU2647576C1 (ru) * 2017-02-28 2018-03-16 Васильевич Иващенко Александр Циклобутил (S)-2-[[[(R)-2-(6-аминопурин-9-ил)-1-метил-этокси]метил-фенокси-фосфорил]амино]-пропаноаты, способ их получения и применения
RU2659388C1 (ru) 2017-02-28 2018-07-02 Васильевич Иващенко Александр Нуклеотиды, включающие N-[(S)-1-циклобутоксикарбонил]фосфорамидатный фрагмент, их аналоги и их применение
CN106866739B (zh) * 2017-03-10 2018-11-02 华东师范大学 一种(r)-1-(6-氨基-9h-嘌呤-9-基)2-苯酯的制备方法
CA3056072C (en) 2017-03-14 2022-08-23 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating feline coronavirus infections
US11191763B2 (en) 2017-03-20 2021-12-07 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services HIV post-exposure prophylaxis
CN108794530A (zh) * 2017-04-26 2018-11-13 上海医药工业研究院 一种替诺福韦丙酚酰胺盐晶型及其制备方法和用途
CN110636884B (zh) 2017-05-01 2022-10-04 吉利德科学公司 新结晶形式
KR102379965B1 (ko) * 2017-05-19 2022-03-29 주식회사 종근당 테노포비르의 효율적인 제조방법
CN107266499B (zh) * 2017-06-05 2019-07-02 珠海优润医药科技有限公司 一种抗病毒化合物及其制备方法
EP3641733A1 (en) 2017-06-30 2020-04-29 Cipla Limited Pharmaceutical compositions
WO2019014247A1 (en) 2017-07-11 2019-01-17 Gilead Sciences, Inc. COMPOSITIONS COMPRISING POLYMERASE RNA INHIBITOR AND CYCLODEXTRIN FOR THE TREATMENT OF VIRAL INFECTIONS
WO2019021319A1 (en) 2017-07-27 2019-01-31 Cipla Limited PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS
ES2892402T3 (es) 2017-08-01 2022-02-04 Gilead Sciences Inc Formas cristalinas de ((S)-((((2R,5R)-5-(6-amino-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2,5-dihidrofuran-2-il)oxi)metil)(fenoxi)fosforil)-L-alaninato de etilo para tratar infecciones virales
AR112412A1 (es) 2017-08-17 2019-10-23 Gilead Sciences Inc Formas de sal de colina de un inhibidor de la cápside del vih
CN107655987B (zh) * 2017-09-08 2020-11-03 厦门蔚扬药业有限公司 一种替诺福韦艾拉酚胺及其异构体的hplc检测方法
CN107522743A (zh) * 2017-09-30 2017-12-29 深圳科兴生物工程有限公司 一种半富马酸替诺福韦艾拉酚胺工业化连续生产方法
EP3700573A1 (en) 2017-10-24 2020-09-02 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating patients co-infected with a virus and tuberculosis
CN109942633B (zh) * 2017-12-20 2021-08-31 上海新礼泰药业有限公司 替诺福韦艾拉酚胺中间体的制备方法
CN109942632B (zh) * 2017-12-20 2021-08-31 上海博志研新药物研究有限公司 替诺福韦艾拉酚胺中间体的制备方法
US20200407382A1 (en) 2017-12-30 2020-12-31 Cipla Limited Polymorphic forms of (9-[(r)-2-[[(s)-[[(s)-1-(isopropoxycarbonyl)ethyl]amino]phenoxy phosphinyl]methoxy]propyl] adenine and pharmaceutically acceptable salts thereof
CN111836818B (zh) * 2018-01-10 2023-10-31 纽科利制药公司 氨基磷(膦)酸缩醛和磷(膦)酸缩醛化合物
WO2019140365A1 (en) * 2018-01-12 2019-07-18 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Antiviral prodrugs and formulations thereof
US10836746B2 (en) 2018-02-15 2020-11-17 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds
EP4253366A3 (en) 2018-02-16 2023-11-29 Gilead Sciences, Inc. Methods and intermediates for preparing a therapeutic compound useful in the treatment of retroviridae viral infection
CN108101943B (zh) * 2018-02-28 2020-11-24 顾世海 一种替诺福韦前药或可药用盐及其在医药上的应用
WO2019199756A1 (en) 2018-04-09 2019-10-17 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Antiviral prodrugs and formulations thereof
CN112423750A (zh) 2018-07-16 2021-02-26 吉利德科学公司 用于治疗hiv的衣壳抑制剂
EP3823629A4 (en) 2018-07-19 2022-05-04 Merck Sharp & Dohme Corp. PHOSPHINAMIDE PRODRUGS OF TENOFOVIR
EP3852761A1 (en) 2018-09-19 2021-07-28 Gilead Sciences, Inc. Integrase inhibitors for the prevention of hiv
US20220257619A1 (en) 2019-07-18 2022-08-18 Gilead Sciences, Inc. Long-acting formulations of tenofovir alafenamide
AU2020318808A1 (en) 2019-07-19 2022-02-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services HIV pre-exposure prophylaxis
EP4017476A1 (en) 2019-08-19 2022-06-29 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical formulations of tenofovir alafenamide
AU2020334152A1 (en) * 2019-08-22 2022-03-24 Emory University Nucleoside prodrugs and uses related thereto
EP4031141A4 (en) * 2019-09-20 2023-10-18 Abbott Rapid Diagnostics International Unlimited Company ANTIBODIES AGAINST TENOFOVIR AND ITS DERIVATIVES
JP2023502530A (ja) 2019-11-26 2023-01-24 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｈｉｖ予防のためのカプシド阻害剤
AU2021214911A1 (en) 2020-01-27 2022-07-21 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating SARS CoV-2 infections
WO2021165995A1 (en) 2020-02-20 2021-08-26 Cipla Limited Novel salts and/or co-crystals of tenofovir alafenamide
CA3169340A1 (en) 2020-03-12 2021-09-16 Pavel R. Badalov Methods of preparing 1'-cyano nucleosides
JP2023518433A (ja) 2020-03-20 2023-05-01 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ４’－ｃ－置換－２－ハロ－２’－デオキシアデノシンヌクレオシドのプロドラッグ並びにその製造法及び使用法
WO2021202669A2 (en) 2020-04-01 2021-10-07 Reyoung Corporation Nucleoside and nucleotide conjugate compounds and uses thereof
AU2021251689A1 (en) 2020-04-06 2022-11-17 Gilead Sciences, Inc. Inhalation formulations of 1'-cyano substituted carbanucleoside analogs
KR20210125298A (ko) 2020-04-08 2021-10-18 주식회사 파마코스텍 테노포비어 알라펜아미드 헤미타르트레이트의 신규한 제조방법
EP4143199A1 (en) 2020-04-21 2023-03-08 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Nucleotide prodrug compounds
JP2023528810A (ja) 2020-05-29 2023-07-06 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド レムデシビル治療方法
US11939347B2 (en) 2020-06-24 2024-03-26 Gilead Sciences, Inc. 1′-cyano nucleoside analogs and uses thereof
EP4172157A1 (en) 2020-06-25 2023-05-03 Gilead Sciences, Inc. Capsid inhibitors for the treatment of hiv
CN113970612B (zh) * 2020-07-22 2023-08-01 北京四环制药有限公司 一种高效液相色谱法测定丙酚替诺福韦有关物质的方法
EP4204421A2 (en) 2020-08-27 2023-07-05 Gilead Sciences, Inc. Compounds and methods for treatment of viral infections
CN112336695B (zh) * 2020-09-28 2023-01-03 华北制药华坤河北生物技术有限公司 一种富马酸丙酚替诺福韦片剂及其制备方法和有关物质的检测方法
US20220144923A1 (en) 2020-11-11 2022-05-12 Gilead Sciences, Inc. METHODS OF IDENTIFYING HIV PATIENTS SENSITIVE TO THERAPY WITH gp120 CD4 BINDING SITE-DIRECTED ANTIBODIES
US11667656B2 (en) 2021-01-27 2023-06-06 Apotex Inc. Crystalline forms of Tenofovir alafenamide
CN113214322B (zh) * 2021-04-30 2022-10-25 山东立新制药有限公司 替诺福韦绿色环保的制备方法
WO2022251594A1 (en) * 2021-05-27 2022-12-01 Antios Therapeutics, Inc. Pharmacokinetics and dose-related improvments in subjects treated with phosphoramidate clevudine prodrugs
WO2023102523A1 (en) 2021-12-03 2023-06-08 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds for hiv virus infection
TW202337439A (zh) 2021-12-03 2023-10-01 美商基利科學股份有限公司 用於ｈｉｖ病毒感染之治療性化合物
US20230203071A1 (en) 2021-12-03 2023-06-29 Zhimin Du Therapeutic compounds for hiv virus infection
CN114369120A (zh) * 2022-01-28 2022-04-19 石家庄龙泽制药股份有限公司 一种丙酚替诺福韦关键中间体的制备方法
US20230295172A1 (en) 2022-03-02 2023-09-21 Gilead Sciences, Inc. Compounds and methods for treatment of viral infections
TW202400172A (zh) 2022-04-06 2024-01-01 美商基利科學股份有限公司 橋聯三環胺甲醯基吡啶酮化合物及其用途
WO2024006982A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds useful for the prophylactic or therapeutic treatment of an hiv virus infection
WO2024044477A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Gilead Sciences, Inc. Dosing and scheduling regimen for broadly neutralizing antibodies
WO2024076915A1 (en) 2022-10-04 2024-04-11 Gilead Sciences, Inc. 4'-thionucleoside analogues and their pharmaceutical use

Family Cites Families (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CS233665B1 (en) 1983-01-06 1985-03-14 Antonin Holy Processing of isomere o-phosphonylmethylderivative of anantiomere racemic vicinal diene
CS263952B1 (en) 1985-04-25 1989-05-12 Holy Antonin Remedy with antiviral effect
CS263951B1 (en) 1985-04-25 1989-05-12 Antonin Holy 9-(phosponylmethoxyalkyl)adenines and method of their preparation
CS264222B1 (en) 1986-07-18 1989-06-13 Holy Antonin N-phosphonylmethoxyalkylderivatives of bases of pytimidine and purine and method of use them
US5650510A (en) 1986-11-18 1997-07-22 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Antiviral phosphonomethoxyalkylene purine and pyrimidine derivatives
US5057301A (en) 1988-04-06 1991-10-15 Neorx Corporation Modified cellular substrates used as linkers for increased cell retention of diagnostic and therapeutic agents
US5053215A (en) * 1988-05-26 1991-10-01 University Of Florida NMR-assayable ligand-labelled trifluorothymidine containing composition and method for diagnosis of HSV infection
US5744600A (en) 1988-11-14 1998-04-28 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Phosphonomethoxy carbocyclic nucleosides and nucleotides
US5688778A (en) 1989-05-15 1997-11-18 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Nucleoside analogs
JP2648516B2 (ja) 1989-07-27 1997-09-03 ダイセル化学工業株式会社 立体異性体の分離法
US5624898A (en) * 1989-12-05 1997-04-29 Ramsey Foundation Method for administering neurologic agents to the brain
JP2925753B2 (ja) 1990-02-23 1999-07-28 ダイセル化学工業株式会社 光学異性体の分離方法
US5302585A (en) 1990-04-20 1994-04-12 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Use of chiral 2-(phosphonomethoxy)propyl guanines as antiviral agents
PT97407B (pt) * 1990-04-20 1998-08-31 Rega Stichting Processo para a preparacao de (r)-9-{2-(fosfono-metoxi)-propil}-guanina
CZ285420B6 (cs) 1990-04-24 1999-08-11 Ústav Organické Chemie A Biochemie Avčr N-(3-Fluor-2-fosfonylmethoxypropyl)deriváty purinových a pyrimidinových heterocyklických bazí, způsoby jejich přípravy a použití
US5627165A (en) * 1990-06-13 1997-05-06 Drug Innovation & Design, Inc. Phosphorous prodrugs and therapeutic delivery systems using same
US5177064A (en) * 1990-07-13 1993-01-05 University Of Florida Targeted drug delivery via phosphonate derivatives
CS387190A3 (en) 1990-08-06 1992-03-18 Ustav Organicke Chemie A Bioch (2r)-2-/di(2-propyl)phosphonylmethoxy/-3-p-toluenesulfonyloxy -1- trimethylacetoxypropane and process for preparing thereof
ES2149157T3 (es) 1990-08-10 2000-11-01 Acad Of Science Czech Republic Nuevo procedimiento para la preparacion de nucleotidos.
DE69129650T2 (de) * 1990-09-14 1999-03-25 Acad Of Science Czech Republic Wirkstoffvorläufer von Phosphonaten
US5827819A (en) * 1990-11-01 1998-10-27 Oregon Health Sciences University Covalent polar lipid conjugates with neurologically active compounds for targeting
US5208221A (en) 1990-11-29 1993-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Antiviral (phosphonomethoxy) methoxy purine/pyrimidine derivatives
CZ284678B6 (cs) 1991-05-20 1999-01-13 Ústav Organické Chemie A Biochemie Avčr Di(2-propyl)estery 1-fluor-2-fosfonomethoxy-3-p -toluensulfonyloxypropanů, způsob jejich přípravy a použití
JP3010816B2 (ja) 1991-08-22 2000-02-21 ダイセル化学工業株式会社 光学分割における光学異性体と溶媒との回収方法、溶媒の循環使用方法、および光学異性体の再利用方法
US5498752A (en) 1991-08-22 1996-03-12 Daicel Chemical Industries, Ltd. Process for recovering optical isomers and solvent, process for using solvent by circulation and process for reusing optical isomers in optical resolution
HU225970B1 (en) 1991-10-11 2008-01-28 Acad Of Science Czech Republic Antiviral acyclic phosphonomethoxyalkyl-substituted alkenyl purine and pyrimidine derivatives, and pharmaceutical preparations containing them
US6057305A (en) 1992-08-05 2000-05-02 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Antiretroviral enantiomeric nucleotide analogs
IL106998A0 (en) * 1992-09-17 1993-12-28 Univ Florida Brain-enhanced delivery of neuroactive peptides by sequential metabolism
US6413949B1 (en) * 1995-06-07 2002-07-02 D-Pharm, Ltd. Prodrugs with enhanced penetration into cells
US5798340A (en) * 1993-09-17 1998-08-25 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
WO1995007920A1 (en) 1993-09-17 1995-03-23 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
US5656745A (en) * 1993-09-17 1997-08-12 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
JPH09506333A (ja) * 1993-09-17 1997-06-24 ギリアード サイエンシーズ，インコーポレイテッド 治療化合物の投薬方法
GB9505025D0 (en) 1995-03-13 1995-05-03 Medical Res Council Chemical compounds
US5977061A (en) 1995-04-21 1999-11-02 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic N6 - substituted nucleotide analagues and their use
JP2002500617A (ja) * 1995-05-26 2002-01-08 ジンタ・インコーポレイテッド 有機リン誘導体の合成方法および組成物
US5717095A (en) * 1995-12-29 1998-02-10 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
WO1997024361A1 (en) 1995-12-29 1997-07-10 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
US5874577A (en) * 1996-04-03 1999-02-23 Medichem Research, Inc. Method for the preparing 9-12-(Diethoxyphosphonomethoxy)ethyl!adenine and analogues thereof
US5922695A (en) * 1996-07-26 1999-07-13 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonomethyoxy nucleotide analogs having increased oral bioavarilability
WO1998004569A1 (en) 1996-07-26 1998-02-05 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
US5739314A (en) 1997-04-25 1998-04-14 Hybridon, Inc. Method for synthesizing 2'-O-substituted pyrimidine nucleosides
US5935946A (en) 1997-07-25 1999-08-10 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analog composition and synthesis method
ATE228357T1 (de) 1997-07-25 2002-12-15 Gilead Sciences Inc Nukleotid-analoge zusammensetzung
ATE305009T1 (de) * 1997-07-25 2005-10-15 Gilead Sciences Inc Nukleotid-analog zusamensetzung und synthese verfahren
CA2312975C (en) * 1997-12-17 2012-08-21 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
BR9907736A (pt) 1998-01-23 2000-10-17 Newbiotics Inc Agentes terapêuticos catalisados por enzima
US6169078B1 (en) * 1998-05-12 2001-01-02 University Of Florida Materials and methods for the intracellular delivery of substances
CA2328457A1 (en) * 1998-06-20 1999-12-29 Washington University Membrane-permeant peptide complexes for medical imaging, diagnostics, and pharmaceutical therapy
US6169879B1 (en) * 1998-09-16 2001-01-02 Webtv Networks, Inc. System and method of interconnecting and using components of home entertainment system
GB9821058D0 (en) † 1998-09-28 1998-11-18 Univ Cardiff Chemical compound
TWI230618B (en) 1998-12-15 2005-04-11 Gilead Sciences Inc Pharmaceutical compositions of 9-[2-[[bis[(pivaloyloxy)methyl]phosphono]methoxy]ethyl]adenine and tablets or capsules containing the same
CA2362662A1 (en) † 1999-02-12 2000-08-17 Glaxo Group Limited Phosphoramidate, and mono-, di-, and tri-phosphate esters of (1r, cis)-4-(6-amino-9h-purin-9-yl)-2-cyclopentene-1-methanol as antiviral agents
AP1466A (en) * 2000-07-21 2005-09-22 Gilead Sciences Inc Prodrugs of phosphonate nucleotide analogues and methods for selecting and making same.
JP4387669B2 (ja) * 2000-10-13 2009-12-16 ザイジェン エス．アー． 新規なトランスポーターペプチド配列による生物学的エフェクターの細胞内送達
US20020119433A1 (en) * 2000-12-15 2002-08-29 Callender Thomas J. Process and system for creating and administering interview or test

Also Published As

Publication number Publication date
EE05366B1 (et) 2010-12-15
JP2010174033A (ja) 2010-08-12
IS6689A (is) 2003-01-17
HRP20030047B1 (hr) 2016-02-26
HRP20160074B1 (hr) 2021-09-03
NZ523438A (en) 2005-02-25
BG66037B1 (bg) 2010-11-30
BR0112646A (pt) 2003-06-24
OA12393A (en) 2006-04-18
UA75889C2 (uk) 2006-06-15
US20080227754A1 (en) 2008-09-18
SI1301519T1 (sl) 2015-07-31
HU230960B1 (hu) 2019-06-28
CN1706855A (zh) 2005-12-14
JP4651264B2 (ja) 2011-03-16
ZA200210271B (en) 2003-12-31
FR16C0013I2 (fr) 2016-09-09
JP2004504402A (ja) 2004-02-12
HRP20160074A8 (hr) 2016-07-29
CN100402539C (zh) 2008-07-16
ES2627903T3 (es) 2017-08-01
CN1291994C (zh) 2006-12-27
KR100749160B1 (ko) 2007-08-14
IL153658A0 (en) 2003-07-06
CA2725819A1 (en) 2002-01-31
NZ536942A (en) 2006-03-31
HK1054238A1 (en) 2003-11-21
EE200300029A (et) 2004-10-15
JP2009062383A (ja) 2009-03-26
AU2005225039A1 (en) 2005-11-10
EP2682397A1 (en) 2014-01-08
HK1243711A1 (zh) 2018-07-20
US7803788B2 (en) 2010-09-28
HUS1900027I1 (hu) 2021-03-29
EP1301519A2 (en) 2003-04-16
CZ304734B6 (cs) 2014-09-10
HRP20030047A2 (en) 2007-08-31
ES2536972T5 (es) 2022-04-06
US7390791B2 (en) 2008-06-24
BG107572A (bg) 2003-11-28
KR20060105807A (ko) 2006-10-11
NO2016006I2 (no) 2016-04-19
FR16C0013I1 (fr) 2016-05-27
BRPI0112646B8 (pt) 2021-05-25
ES2536972T3 (es) 2015-06-01
US20040018150A1 (en) 2004-01-29
PL360490A1 (en) 2004-09-06
CZ2003413A3 (cs) 2003-12-17
US20050124583A1 (en) 2005-06-09
WO2002008241A3 (en) 2002-08-29
US20030219727A1 (en) 2003-11-27
EP1301519B2 (en) 2021-11-10
NO336718B1 (no) 2015-10-26
JP5111551B2 (ja) 2013-01-09
JP2011140506A (ja) 2011-07-21
CA2725819C (en) 2015-09-22
DK1301519T3 (en) 2015-05-26
CY2016008I2 (el) 2016-12-14
NZ535408A (en) 2006-09-29
CZ304886B6 (cs) 2015-01-07
PT2682397T (pt) 2017-05-31
SI2682397T1 (sl) 2017-08-31
EP1301519B1 (en) 2015-02-25
KR20030022295A (ko) 2003-03-15
AP1466A (en) 2005-09-22
LTPA2016009I1 (lt) 2016-04-25
BE2016C018I2 (no) 2020-08-20
AU2001282941C1 (en) 2016-12-22
AU2005225039B2 (en) 2008-09-25
KR100767432B1 (ko) 2007-10-17
EP2682397B1 (en) 2017-04-19
HUP0301307A3 (en) 2005-12-28
NO20131717L (no) 2003-03-20
NO2016006I1 (no) 2016-04-19
CA2416757C (en) 2011-02-15
HUP0301307A2 (hu) 2003-09-29
CA2893174A1 (en) 2002-01-31
PL213214B1 (pl) 2013-01-31
EP3235823A1 (en) 2017-10-25
NL300803I2 (no) 2016-06-30
US20050124584A1 (en) 2005-06-09
CN1443189A (zh) 2003-09-17
US20060024659A1 (en) 2006-02-02
HRP20160074A2 (hr) 2016-03-11
LTC1301519I2 (lt) 2023-02-27
DK1301519T4 (da) 2021-12-20
MXPA03000587A (es) 2004-04-05
IS2985B (is) 2017-09-15
NO20030270D0 (no) 2003-01-20
EA004926B1 (ru) 2004-10-28
AU2001282941B2 (en) 2006-04-27
LU93029I2 (fr) 2016-06-14
EA200300188A1 (ru) 2003-06-26
TR200300055T2 (tr) 2004-12-21
LT2682397T (lt) 2017-06-12
JP5063554B2 (ja) 2012-10-31
US20020119443A1 (en) 2002-08-29
AU8294101A (en) 2002-02-05
WO2002008241A2 (en) 2002-01-31
PT1301519E (pt) 2015-06-11
US20050124585A1 (en) 2005-06-09
HUS000494I2 (hu) 2021-03-29
BRPI0112646B1 (pt) 2017-10-17
CA2416757A1 (en) 2002-01-31
AP2003002724A0 (en) 2003-06-30
NO20150909L (no) 2003-03-20
US20050009043A1 (en) 2005-01-13
NO20030270L (no) 2003-03-20
CY1119411T1 (el) 2018-03-07
NO2023006I1 (no) 2023-02-03
DK2682397T3 (da) 2017-06-19
CY2016008I1 (el) 2016-12-14
US20050159392A1 (en) 2005-07-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO20120466L (no) Prodroger av fosfonatnukleotidanaloger, og fremgangsmater for utvelgelse og fremstilling av disse
AU2001282941A1 (en) Prodrugs of phosphonate nucleotide analogues and methods for selecting and making same

Legal Events

Date Code Title Description
FC2A Withdrawal, rejection or dismissal of laid open patent application