KR880003007A - 정제된 열안정성 효소 및 이를 사용한 핵산 서열의 증폭, 검출, 및/또는 클로닝 방법 - Google Patents

정제된 열안정성 효소 및 이를 사용한 핵산 서열의 증폭, 검출, 및/또는 클로닝 방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

정제된 열안정성 효소 및 이를 사용한 핵산 서열의 증폭, 검출, 및/또는 클로닝 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 플라스미드 BSM13+내로 아클로닝된 ~4.5Kb HindⅢ 써머스 익퀘이티쿠스(Thermus aquaticus) DNA 삽입부를 함유하는 플라스미드 pFC 83의 제한부위 지도에 관한 도.
제2도는 플라스미드 BSM13+내로 아클로닝된 ~2.8Kb HindⅢ : Asp 718써머스 익퀘이티쿠스 DNA 삽입부를 함유하는 플라스미드 pFC 85의 제한부위지도에 관한 도.

Claims (32)

  1. 뉴클레오티드 트리포스페이트를 결합시켜 핵산주형 본쇄에 상보적인 핵산 본쇄를 형성하는데 촉매작용을 하는 정제된 열안정성 효소.
  2. 제1항에 있어서, DNA 폴리머라제인 효소.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 분자량이 약 86,000 내지 90,000달톤인 효소.
  4. 제3항에 있어서, 써머스 익퀘이티쿠스(Thermus aquaticus)로부터 분리된 효소.
  5. 제1항 내지 4항 중의 어느 한 항에 있어서, pH 6.4에서는 pH8.0에서 갖는 활성도의 적어도 50%의 활성도를 갖는 효소.
  6. 제1항 내지 5항 중의 어느 한 항에 있어서, 천연형태인 효소.
  7. 제2항의 효소를 암호화 하는 유전자.
  8. 제7항에 있어서, 써머스 익퀘이티쿠스의 제놈으로부터 클로닝된 유전자.
  9. 제8항에 있어서, 분자량이 약 86,000 내지 90,000달톤인 효소를 암호화 하는 유전자.
  10. 제8항에 있어서, 분자량이 약 60,000 내지 65,000달톤인 효소를 암호화 하는 유전자.
  11. 제9항에 있어서, 써머스 익퀘이티쿠스 또는 박테리오파지 CH35 : Taq #4-2의 약 3.5Kb BgⅠⅡ-Asp718(부분)제한 단편 내에 함유된 유전자.
  12. 제10항에 있어서, 써머스 익퀘이티쿠스의 제놈 또는 프라스미드 pFC 85의 약 2.8Kb HindⅡ- Asp718제한 단편내에 함유된 유전자.
  13. pFC85 또는 pFC83 중에서 선택된 플라스미드.
  14. 박테리오파지 CH35 : Taq #4-2.
  15. 하나 또는 그 이상의 비-이온성 중합세제를 함유하는 완충액 중에 제1항 내지 6항 중의 어느 한 항에 따르는 효소를 함유하는 안정성 효소 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 세제가 각각 약 0.1% 내지 약 0.5% 용량/조성물 총용량의 농도로 존재하는 조성물.
  17. 제15항 내지 16항에 있어서, 세제가 폴리옥시에틸화된 솔비탄 모노라우레이트 및 에톡실화된 노닐페놀인 조성물.
  18. 제15항 내지 17항 중의 어느 한 항에 있어서, 완충액이 글리세롤, pH 8.0인 트리스-C1, 에킬렌디아민테트라이세트산, 디티오쓰리이톨 폴리옥시에틸화된 솔비탄 모노라우레이트, 에톡실화된 노닐페놀, 및 젤라틴을 함유하는 조성물.
  19. (a) 각각의 핵산 본쇄를 각각의 프라이머가 그이 상보적인 핵산 본쇄와 하이브리드화 되도록 촉진시키는 온도에서, 증폭될 상이한 특정 서열 각각에 대한 4개의 상이한 뉴클레도티드 트리포스페이트 및 1개의 올리고 뉴클레오티드 프라이머와 접촉시키고(여기에서, 각각의 프라이머는 각각의 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것으로 선정하여, 하나의 프라이머로 부터 합성된 연장 산물이 그의 상보물로부터 분리되는 경우에 다른 프라이머의 합성을 위한 주형으로 작용할 수 있도록 한다) ; (b) 각각의 핵산 본쇄를 단계 (a)와 동시에 또는 단계(a) 이후에, 뉴클레오티드 트리포스페이트를 결합시켜 각 핵산의 본쇄 각각에 대해 상보적인 프라이머 연장 산물을 생성하도록 하는 열안정성 효소와 접촉시키며 ; (c) 단계(b)에서 얻은 혼합물을, 효소의 활성을 증진시키고 증폭될 상이한 서열 각각에 대해 핵산 본쇄 주형 각각에 상보적인 프라이머 각각의 연장 산물을 합성하기에 효과적이지만 각 연장 산물이 그의 상보적인 본쇄 주형으로부터 분리될 만큼 높지 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을, 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로 부터 분리시켜 일-본쇄 분자를 생성시키기에 효과적이나, 효소를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열시키며 ;(e) 단계(d)의 혼합물을, 각 프라이머가 단계(d)에서 생성된 일-본쇄 분자 각각과 하이브리화 되도록 하기에 효과적인 온도로 냉각시키고 ; (f) 단계(e)의 혼합물을, 효소의 활성을 증진시키고 증폭될 상이한 서열 각각에 대해 단계(d)에서 생성된 핵산 본쇄 주형 각각에 상보적인 각 프라이머의 연장산물을 합성하기에 효과적이나, 각 연장 산물이 그의 상보적인 본쇄 주형으로부터 분리될 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간 동안 유지시키며 ; 이때 단계(e) 및 (f)는 동시에 수행하거나 연속적으로 수행함을 특징으로 하여, 핵산 또는 핵산의 혼합물(여기에서, 핵산은 2-본쇄일 경우에 길이가 같거나 다른 별도의 상보적인 본쇄 2개로 이루어진다)에 함유된 특정 핵산 서열 적어도 하나를 증폭시키는 방법.
  20. (a) 각각의 핵산을 증폭될 각각의 상이한 서열에 대한 하나의 올리고 뉴클레오티드 프라이머 및 4개의 상이한 뉴클레오티드 트리포스페이트의 존재하에서 각각의 핵산을 변성시키기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간동안 가열하고(여기에서, 각각의 프라이머는 각각의 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것으로 선택하여 하나의 프라이머로부터 합성된 연장 산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우에 다른 프라이머의 연장 산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 한다) ; (b) 변성된 핵산을 각각의 프라이머가 이의 상보적인 핵산 본쇄와 하이브리드화 되도록 하는 온도로 냉각시키며 ; (c) 변성된 핵산을 단계(a) 또는 (b)와 동시에 또는 단계(a) 또는 (b) 이후에, 뉴클레오티드 트리포스페이트를 결합시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성시키는 열안정성 효소와 접촉시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을 열안정성 효소의 활성을 촉진시키고 증폭될 각각의 상이한 서열에 대해 각각의 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성 시키기에 효과적이나 각각의 연장 산물을 이의 상보적인 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (e) 단계(d)의 혼합물을, 생성 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일본쇄 분자를 생성하기에 효과적이나, 효소를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열하며 ; (f) 단계(e)의 혼합물을 프라이머가 단계(e)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 시간동안, 효과적인 온도로 냉각시키고 ;(g) 단계(f)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 증폭될 각각의 상이한 서열에 대해 단계(f)에서 생성된 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각 연장 산물을 이의 상보본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서, 효과적인 시간동안 유지시키고 ; 여기에서 단계(f) 및 (g)는 동시에 수행하거나 연속적으로 수행함을 특징으로 하여, 핵산 또는 핵산의 혼합물(여기에서, 핵산은 길이가 동일하거나 상이한 두개의 상보적 본쇄로 이루어진다) 내에 함유된 적어도 하나의 특정 핵산 서열을 증폭시키는 방법.
  21. (a) 핵산 또는 핵산의 혼합물(여기에서, 핵산은 이 본쇄일 경우에 각각 길이가 같거나 다른 별도의 상보적 본쇄 2개로 이루어진다)를 함유하는 샘플을 각 프라이머가 그의 상보적인 핵산 본쇄와 하이브리드화 되도록 하는 온도에서, 검출할 각각의 상이한 특정 서열에 대한 하나의 올리고뉴클레오티드 프라이머 및 4개의 상이한 뉴클레오티드 트리포스페이트와 접촉시키고(여기에서, 각각의 프라이머는 각 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것을 선정하여, 하나의 프라이머로부터 합성된 연장 산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우 다른 프라이머의 연장산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 한다) ; (b) 상기 샘플을, 단계(a)와 동시에 또는 단계(a) 이후에, 뉴클레오티드 프리포스페이트의 결합을 촉진시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성하도록 하는 열안정성 효소와 접촉시키며 ; (c) 단계(b)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 검출할 각각의 상이한 서열에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각각의 연장산물을 이의 상보 본쇄 주형으로 분리시킬 만큼 높지는 않은온도에서 효과적인 시간 동안 유지시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을, 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일보쇄 분자를 생성시키기에 효과적이나, 열안정성 효소를 비가역적으로 변경시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간 동안 가열시키며 ; (e) 단계(d)의 혼합물을 각 프라이머가 단계(d)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간 동안 냉각시키고 ;
    (f) 단계(e)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 검출될 각각의 상이한 서열에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간 동안 유지시켜, 존재하는 경우 특정 핵산 서열(들)을 정량 증폭시키며, 이 때 단계(e) 및 (f)는 연속적으로 수행하거나 동시에 수행하고 ; (g) 단계(f)의 생성물에 언급한 서열 또는 이의 변형서열과 하이브리드화할 수 있는 검출될 각 서열에 대한 표지된 올리고뉴클레오티드 탐침을 가하며 ; (h) 언급한 하이브리드화의 발생 여부를 결정함을 특징으로 하여, 언급한 서열(들)을 함유하는 것으로 생각되는 언급한 샘플 중에서 적어도 하나의 특정 핵산 서열의 존재여부를 탐지하거나, 언급한 샘플 중에서 두개의 상이한 서열을 구별하는 방법.
  22. (a) 핵산 또는 핵산의 혼합물(여기에서, 핵산은 이-본쇄이다.)을 함유하는 샘플을 검출할 각각의 상이한 서열에 대한 하나의 올리고뉴클레오티드 프라이머 및 4개의 사이한 뉴클레오티드 트리포스페이트의 존재하에 샘플 중의 각 핵산을 변성시키기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간 동안 가열하고(여기에서, 각각의 프라이머는 각각의 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것으로 선택하여, 하나의 프라이머로부터 합성된 연장 산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우에 다른 프라이머의 연장 산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 한다) ; (b) 변성된 핵산을 각각의 프라이머가 이의 상보적인 핵산 본쇄와 하이브리드화 되도록 하느 온도로 냉각 시키며 ; (c) 변성된 핵산을 단계(a) 또는 (b)와 동시에 또는 단계(a) 또는 (b) 이후에 뉴클레오티드 트리포스페이트를 결합시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성시키는 열안정성 효소와 접촉시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을 열안정성 효소의 활성을 촉진시키고 검출할 각각의 상이한 서열에 대해 각각의 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성 시키기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보적인 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (e) 단계(d)의 혼합물을 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일본쇄 분자를 생성하기에 효과적이나, 효소를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열하며 ; (f) 단계(e)의 혼합물을 각 프라이머가 단계(e)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 시간동안, 효과적인 온도로 냉각시키고 ;
    (g) 단계(f)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 검출할 각각의 상이한 서열에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서, 효과적인 시간동안 유사시켜, 존재한다면 특정 핵산 서열(들)을 정량 증폭시키고, 여기에서 단계(f) 및 (g)는 동시에 수행하거나 연속적으로 수행하며 ; (h) 단계(g)의 생성물에 언급한 서열 또는 이의 변형서열과 하이브리드화할수 있는 검출할 각 서열에 대한 표지된 올리고뉴클레오티드탐침을 가하고;(i) 언급한 하이브리드화의 발생여부를 결정함을 특징으로 하여, 언급합 서열(들)을 함유하는 것으로 생각되는 언급한 샘플 중에서 적어도 하나의 특정핵산 서열의 존재여부를 탐지하거나, 언급한 샘플 중에서 두개의 상이한 서열을 구별하는 방법.
  23. (a) 핵산 또는 핵산의 혼합물(여기에서 핵산은 이 본쇄일 경우에 길이가 같거나 다른 별도의 상보적 본쇄 2개로 이루어진다)을 함유하는 샘플을 각 프라이머가 그의 상보적인 핵산 본쇄와 하이브리드화 되도록 하는 온도에서 핵산서열의 변이체를 함유하는 것으로 여겨지는 각 핵산의 각 본쇄에 대한 하나의 올리고뉴클레오티드 프라이머 및 4개의 상이한 뉴클레오티드 트리포스페이트와 접촉시키고(여기에서, 각각의 프라이머는 각 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것을 선정하여, 하나의 프라이머로부터 합성된 연장 산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우 다른 프라이머의 연장 산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 한다) ; (b) 상기 샘플을, 단계(a)와 동시에 또는 단계(a) 이후에, 뉴클레오티드 트리포스페이트의 결합을 촉진시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성하도록 하는 열안정성 효소와 접촉시키며 ; (c) 단계(b)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 언급한 변이체(들)을 함유하는 것으로 여겨지는 각각의 상이한 핵산에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을, 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일보쇄 분자를 생성시키기에 효과적이나, 열안정성 효소를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열시키며 ; (e) 단계(d)의 혼합물을 각 프라이머가 단계(d)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간동안 냉각시키고 ;
    (f) 단계(e)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 언급한 변이체(들)을 함유하는 것으로 여겨지는 각각의 상이한 핵산에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성 하기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키며, 이 때, 단계(d), (e) 및 (f)는 존재하는 경우 서열 변이체(들)을 함유하는 핵산이 검출가능하게 증폭되도록 충분한 회수로 반복하며, 단계(e) 및 (f)는 연속적으로 수행하거나 동시에 수행하고 ; (g) 단계 (f)의 생성물을 세포막에 부착시키며, (h) 세포막을 하이브리드화 조건하에서 탐침의 서열이 증폭된 서열의 영역에 상보적인 경우에만 증폭된 핵산 서열과 하이브리드화할 수 있는 표지된 서열-특정 올리고뉴클레오티드 탐침으로 처리하고 ; (i) 탐침이 핵산 샘플 중의 증폭된 서열에 하이브리드화 되었는지의 여부를 탐지함을 특징으로 하여, 샘플 중에 함유된 하나 또는 그 이상의 핵산의 서열에서 적어도 하나의 뉴클레오티드가 변이되었는지의 여부를 탐지하는 방법.
  24. (a) 핵산(여기에서, 핵산은 각각 길이가 같거나 상이한 상보적 본쇄 2개로 이루어진다)을 함유하는 샘플을 핵산서열의 변이체(들)을 함유하는 것으로 기대되는 각 핵산의 각 본쇄에 대한 하나의 올리고뉴클레오티드 프라이머 및 4개의 상이한 뉴클레오티드 트리포스페이트의 존재하에서 각각의 핵산을 변성시키기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간동안 가열하고(여기에서, 각각의 프라이머는 각각의 특정 핵산의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것으로 선택하여 하나의 프라이머부터 합성된 연장 산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우에 다른 프라이머의 연장 산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 한다) ; (b) 변성된 핵산을 각각의 프라이머가 이의 상보적인 핵산 본쇄와 하이브리드화 되도록 하는 온도로 냉각시키며 ; (c) 변성된 핵산을 단계(a) 또는 (b)와 동시에 또는 단계(a) 또는 (b) 이후에, 뉴클레오티드 트리포스페이트를 결합시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성시키는 열안정성 효소와 접촉시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을 열안정성 효소의 활성을 촉진시키고 언급한 변이체(들)을 함유하는 것으로 기대되는 각각의 상이한 핵산에 대해 각각의 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성시키기에 효과적이나, 각각의연장 산물을 이의 상보적인 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (e) 단계(d)의 혼합물을, 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일본쇄 분자를 생성하기에 효과적이나, 효소를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열하며 ;
    (f) 단계(e)의 혼합물을 각 프라이머가 단계(e)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 시간동안, 효과적인 온도로 냉각시키고 ; (g) 단계(f)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 언급한 변이체(들)을 함유하는 것으로 기대되는 각각의 상이한 핵산에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키며, 이 때 단계(e), (f) 및 (g)는 존재하는 경우 서열 변이체(들)을 함유하는 핵산이 검출가능하게 증폭되도록 충분한 회수로 반복하고, 단계(f) 및 (g)는 연속적으로 수행하거나 동시에 수행하고 ; (h) 단계(g)의 생성물을 세포막에 부착시킨 다음 ; (i) 세포막을 하이브리드화 조건하에서 탐침의 서열이 증폭된 서열의 영역에 상보적인 경우에만 증촉된 핵산 서열과 하이브리드화할 수 있는 표지된 서열-특정 올리고뉴클레오티드 탐침으로 처리하고 ; (j) 탐침이 핵산 샘플 중의 증폭된 서열에 하이브리드화 되었는지의 여부를 탐지함을 특징으로 하여, 샘플 중에 함유된 하나 또는 그 이상의 핵산 서열에서 적어도 하나의 뉴클레오티드가 변이되었는지의 여부를 탐지하는 방법.
  25. (a) 핵산 또는 핵산의 혼합물(여기에서 핵산은 이 본쇄일 경우에 길이가 같거나 다른 별도의 상보적 본쇄 2개로 이루어진다)을 함유하는 샘플을 각 프라이머가 그의 상보적인 핵산 본쇄와 하이브리드화 되도록 하는 온도에서 핵산 서열의 변이체를 함유하는 것으로 기대되는 각 핵산의 각 본쇄에 대한 하나의 올리고뉴클레오티드 프라이머 및 4개의 상이한 뉴클레오티드 트리포스페이트와 접촉시키고(여기에서, 각각의 프라이머는 각 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것을 선정하여, 하나의 프라이머로부터 합성된 연장 산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우 다른 프라이머의 연장 산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 한다) ; (b) 상기 샘플을, 단계(a)와 동시에 또는 단계(a) 이후에, 뉴클레오티드 트리포스페이트의 결합을 촉진시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성하도록 하는 열안정성 효소와 접촉시키며 ; (c) 단계(b)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 언급한 변이체(들)을 함유하는 것으로 기대되는 각각의 상이한 핵산에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을, 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일보쇄 분자를 생성시키기에 효과적이나, 열안정성 효소를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열시키며 ; (e) 단계(d)의 혼합물을 각 프라이머가 단계(d)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간동안 냉각시키고 ;
    (f) 단계(e)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 언급한 변이체(들)을 함유하는 것으로 기대되는 각각의 상이한 핵산에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성 하기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키며, 이 때, 단계(d), (e) 및 (f)는 존재하는 경우 서열 변이체(들)을 함유하는 핵산이 검출가능하게 증폭되도록 충분한 회수로 반복하고 적어도 하나의 프라이머 및/또는 4개의 뉴클레오티드 트리포스페이트 중 적어도 하나는 검출가능한 부위로 표지하며, 단계(e) 및 (f)는 연속적으로 수행하거나 동시에 수행하고 ; (g) 세포막에 올리고뉴클레오티드의 서열이 증폭된 서열의 영역에 상보적인 경우에만 증폭된 핵산 서열과 하이브리드화할 수 있는 서열-특정 올리고뉴클레오티드를 부착시키고 ; (h) 세포막을 하이브리드화 조건하에서 단계(f)의 생성물로 처리한 다음 (i) 핵산 샘플 중의 증폭된 서열이 세포막에 부착된 올리고뉴클레오티드에 하이브리드화 되었는지의 여부를 탐지함을 특징으로 하여, 샘플 중에 함유된 하나 또는 그 이상의 핵산의 서열에서 적어도 하나의 뉴클레도티드가 변이되었는지의 여부를 탐지하는 방법
  26. (a) 핵산(여기에서, 핵산은 각각 길이가 같거나 상이한 상보적 본쇄 2개로 이루어진다)을 함유하는 샘플을 핵산서열의 변이체(들)을 함유하는 것으로 기대되는 각 핵산의 각 본쇄에 대한 하나의 올리고뉴클레오티드 프라이머 및 4개의 상이한 뉴클레오티드 트리포스페이트의 존재하에서 각각의 핵산을 변성시키기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간동안 가열하고(여기에서, 각각의 프라이머는 각각의 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것으로 선택하여 하나의 프라이머부터 합성된 연장 산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우에 다른 프라이머의 연장 산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 한다) ; (b) 변성된 핵산을 각각의 프라이머가 이의 상보적인 핵산 본쇄와 하이브리드화 되도록 하는 온도로 냉각시키며 ; (c) 변성된 핵산을 단계(a) 또는 (b)와 동시에 또는 단계(a) 또는 (b) 이후에, 뉴클레오티드 트리포스페이트를 결합시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성시키는 열안정성 효소와 접촉시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을 열안정성 효소의 활성을 촉진시키고 언급한 변이체(들)을 함유하는 것으로 기대되는 각각의 상이한 핵산에 대해 각각의 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성시키기기에 효과적이나,각각의 연장 산물을 이의 상보적인 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (e) 단계(d)의 혼합물을, 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일본쇄 분자를 생성하기에 효과적이나, 효소를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열하며 ; (f) 단계(e)의 반응혼합물을 각 프라이머가 단계(e)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 시간동안, 효관적인 온도로 냉각시키고 ;
    (g) 단계(f)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 언급한 변이체(들)을 함유하는 것으로 기대되는 각각의 상이한 핵산에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키며, 이 때 단계(e), (f) 및 (g)는 존재하는 경우 서열 변이체(들)을 함유하는 핵산이 검출가능하게 증폭되도록 충분한 회수로 반복하고, 적어도 하나의 프라이머 및/또는 4개의 뉴클레오티드 트리포스테이트 중 적어도 하나는 탐지 가능한 잔기로 표지하며, 단계(f) 및 (g)는 연속적으로 수행하거나 동시에 수행하고 ; (h)세포막에 올리고뉴클레오티드의 서열이 증폭된 서열의 영역에 상보적인 경우에만 증폭된 핵산 서열과 하이브리드화할 수 있는 서열-특정 올리고뉴클레오티드를 부착시키고 ; (i) 세포막을 하이브리드화 조건하에서 단계(g)의 생성물로 처리한 다음, (j) 핵산 샘플 중의 증폭된 서열이 세포막에 부착된 올리고뉴클레오티드에 하이브리드화 되었는지의 여부를 탐지함을 특징으로 하여, 샘플 중에 함유된 하나 또는 그 이상의 핵산 서열에서 적어도 하나의 뉴클레오티드가 변이되었는지의 여부를 탐지하는 방법.
  27. (a) 핵산(여기에서 핵산은 이 본쇄일 경우에 길이가 같거나 다른 별도의 상보적 본쇄 2개로 이루어진다)을 함유하는 샘플을 각 프라이머가 그의 상보적인 핵산 본쇄와 하이브리드화 되도록 하는 온도에서 핵산 서열의 변이체(들)를 함유하는 것으로 기대되는 각 핵산의 각 본쇄에 대한 하나의 올리고뉴클레오티드 프라이머 및 4개의 상이한 뉴클레오티드 트리포스페이트와 접촉시키고(여기에서, 각각의 프라이머는 각 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것을 선정하여, 하나의 프라이머로부터 합성된 연장산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우 다른 프라이머의 연장 산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 한다) ; (b) 상기 샘플을, 단계(a)와 동시에 또는 단계(a) 이후에, 뉴클레오티드 트리포스페이트의 결합을 촉진시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성하도록 하는 열안정성 효소와 접촉시키며 ; (c) 단계(b)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 언급한 변이체(들)을 함유하는 것으로 기대되는 각각의 상이한 핵산에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장산물을 합성하기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을, 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일본쇄 분자를 생성시키기에 효과적이나, 열안정성 효소를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열시키며 ; (e) 단계(d)의 혼합물을 각 프라이머가 단계(d)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간동안 냉각시키고 ;
    (f) 단계(e)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 언급한 변이체(들)을 함유하는 것으로 기대되는 각각의 상이한 핵산에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성 하기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키며, 이 때, 단계(d), (e) 및 (f)는 존재하는 경우 서열 변이체(들)을 함유하는 핵산이 검출가능하게 증폭되도록 충분한 회수로 반복하고, 단계(e) 및 (f)는 연속적으로 수행하거나 동시에 수행하며 ; (g) 세포막에 올리고뉴클레오티드의 서열이 증폭된 서열의 영역에 상보적인 경우에만 증폭된 핵산 서열과 하이브리드화할 수 있는 표지된 서열-특정 올리고뉴클레오티드를 부착시키고 ; (h) 세포막을 하이브리드화 조건하에서 단계(f)의 생성물로 처리한 다음 ; (i) 탐지될 탐침 및 변이체(들) 둘다가 제한효소에 의해 인지된 제한부위를 함유한다면 형성된 어떠한 하이브리드도 절단시킬 수 있는 제한효소로 단계(h)의 생성물을 처리하고 ; (j) 필요한 길이의 표지된 제한 단편이 하이브리드화가 일어났는지를 나타내는 제한 분해물 중에 존재하는지의 여부를 탐지함을 특징으로 하여 샘플 중에 함유된 하나 또는 그 이상의 핵산의 서열에서 적어도 하나의 뉴클레오티드가 변이되었는지의 여부를 탐지하는 방법
  28. (a) 각 핵산(여기에서, 핵산은 이 본쇄일 경우에 길이가 같거나 다른 별도의 상보적 본쇄 2개로 이루어지며 클로닝전에 정량 증폭된다)을 각 프라이머가 그의 상보적인 핵산 본쇄와 하이브리드화 되도록 하는 온도에서 증폭될 각각의 상이한 특정 서열에 대한 하나의 올리고뉴클레오티드 프라이어 및 4개의 상이한 뉴클레오티드 트리포스페이트와 접촉시키고(여기에서, 각각의 프라이머는 각 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것을 선정하여, 하나의 프라이머로부터 합성된 연장 산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우 다른 프라이머의 연장 산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 한다) ; (b) 각 핵산 본쇄를, 단계(a)와 동시에 또는 단계(a) 이후에, 뉴클레오티드 트리포스페이트의 결합을 촉진시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성하도록 하는 열안정성 효소와 접촉시키며 ; (c) 단계(b)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 증폭될 각각의 상이한 서열에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일본쇄 분자를 생성시키기에 효과적이나, 열안정성 효과를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열시키며 ; (e) 단계(d)의 혼합물을 각 프라이머가 단계(d)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간동안 냉각시키고 ;
    (f) 단계(e)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 증폭될 각각의 상이한 서열에 대해 단계(d)에서 생성된 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성 하기에 효과적이나, 각각의 연장 산물을 이의 상보 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키며, 이 때, 단계(d), (e) 및 (f)는 서열(들)을 함유하는 핵산(들)이 검출 가능하게 증폭되도록 충분한 회수로 반복하고, 단계(e) 및 (f)는 연속적으로 수행하거나 동시에 수행하고 ; (g) 단계(f)의 생성물에 언급한 각각의 제한부위에 대한 제한 효소를 가하여 제한분해물 중의 절단된 생성물을 수득하고 ; (h) 특정 서열을 함유하는 단계(g)의 절단된 생성물(들)을 하나 또는 그 이상의 클로닝벡터 내로 클로닝 되도록 연결함을 특징으로 하여 핵산 또는 핵산의 혼합물 내에 함유된 하나 또는 그 이상의 특정 핵산 서열을 클로닝벡터 내로 클로닝 시키는 방법
  29. (a) 각각의 핵산을 증폭될 각각의 상이한 서열에 대한 하나의 올리고 뉴클레오티드 프라이머 및 4개의 상이한 뉴클레오티드 트리포스페이트의 존재하에서 각각의 핵산을 변성시키기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간동안 가열하고(여기에서, 각각의 프라이머는 각각의 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것으로 선택하여 하나의 프라이머로부터 합성된 연장산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우에 다른 프라이머의 연장산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 하며, 증폭될 각 서열 또는 각 프라이머는 제한부위를 함유한다) ; (b) 변성된 핵산을 각각의 프라이머가 이의 상보적인 핵산본쇄와 하이브리드화 되도록 하는 온도로 냉각시키며 ; (c) 변성된 핵산을 단계(a) 또는 (b)와 동시에 또는 단계(a) 또는 (b) 이후에, 뉴클레오티드 트리포스페이트를 결합시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성시키는 열안정성 효소와 접촉시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을 열안정성 효소의 활성을 촉진시키고 증폭될 각각의 상이한 서열에 대해 각각의 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성시키기에 효과적이나 각각의 연장 산물을 이의 상보적인 본쇄주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (e) 단계(d)의 혼합물을, 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일본쇄 분자를 생성하기에 효과적이나, 효소를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열하며 ; (f) 단계(e)의 혼합물을 프라이머가 단계(e)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 시간동안, 효과적인 온도로 냉각시키고 ;
    (g) 단계(f)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 증폭될 각각의 상이한 서열에 대해 단계(e)에서 생성된 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각 연장 산물을 이의 상보본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서, 효과적인 시간동안 유지시키고 이때, 단계(e), (f), (g)는 서열(들)을 함유하는 핵산(들)이 검출 가능하게 증폭되도록 충분한 회수로 반복하며, 단계(f) 및 (g)는 연속적으로 수행하거나 동시에 수행하고 ; (h) 단계(g)의 생성물에 언급한 제한 부위에 대한 제한효소를 가하여 제한 분해물중의 절단된 생성물에 수득한 다음 ; (i) 특정 서열(들)을 함유하는 단계(h)의 절단된 생성물(들)을 선택 가능한 표식자를 함유하는 하나 또는 그 이상의 클로닝 벡터내로 틀로닝 되도록 연결함을 특징으로 하여, 핵산 또는 핵산의 혼합물(여기에서, 핵산(들)은 길이가 동일하거나 상이한 두개의 상보 본쇄로 이루어진다) 내에 함유된 적어도 하나의 특정 핵산 서열을 클로닝 벡터내로 클로닝시키는 방법.
  30. (a) 각각의 핵산(여기에서, 핵산은 이 본쇄일 경우에 길이가 같거나 다른 별도의 상보적 본쇄 2개로 이루어지며 클로닝전에 정량 증폭된다)을 각 프라이머가 그의 상보적인 핵산 본쇄와 하이브리드화 되도록 하는 온도에서 증폭될 각각의 상이한 특정 서열에 대한 하나의 올리고뉴클레오티드 프라이어 및 4개의 상이한 뉴클레오티드 트리포스페이트와 접촉시키고(여기에서, 각각의 프라이머는 각 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것을 선정하여, 하나의 프라이머로부터 합성된 연장 산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우 다른 프라이머의 연장 산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 한다) ; (b) 각 핵산 본쇄를, 단계(a)와 동시에 또는 단계(a) 이후에, 뉴클레오티드 트리포스페이트의 결합을 촉진시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성하도록 하는 열안정성 효소와 접촉시키며 ; (c) 단계(b)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 증폭될 각각의 상이한 서열에 대해 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각각의 연장산물을 이의 상보 본쇄 주형으로 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일본쇄 분자를 생성시키기에 효과적이나, 열안정성 효과를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열시키며 ; (e) 단계(d)의 혼합물을 각 프라이머가 단계(d)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간동안 냉각시키고 ;
    (f) 단계(e)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 증폭될 각각의 상이한 서열에 대해 단계(d)에서 생성된 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성 하기에 효과적이나, 각각의 연장산물을 이의 상보 본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키며, 이 때, 단계(d), (e) 및 (f)는 하나 또는 그 이상의 클로닝 벡터내로 평활말단 연결시키기 위한 서열(들)을 함유하는 핵산(들)이 효과적으로 증폭되도록 충분한 회수로 반복하고, 단계(e)및 (f)는 연속적으로 수행하거나 동시에 수행하며; (g) 단계 (f)로부터 수득된 클로닝 될 증폭된 특정 서열(들)을 리가제의 존재하에 하나 또는 그 이상의 언급된 벡터내로(여기에서, 언급한 증폭된 서열(들) 및 벡터(들)는 연결되기에 충분한 양으로 존재한다)연결시킴을 특징으로 하여, 핵산 또는 핵산의 혼합물 내에 함유된 하나 또는 그 이상의 특정 핵산 서열을 클로닝 벡터내로 클로닝 시키는 방법
  31. (a) 각각의 핵산을 증폭될 각각의 상이한 서열에 대한 하나의 올리고 뉴클레오티드 프라이머 및 4개의 상이한 뉴클레오티드 트리포스페이트의 존재하에서 각각의 핵산을 변성시키기에 효과적인 온도에서 효과적인 시간동안 가열하고(여기에서, 각각의 프라이머는 각각의 특정 서열의 상이한 본쇄에 실질적으로 상보적인 것으로 선택하여 하나의 프라이머로부터 합성된 연장산물이 이의 상보물로부터 분리될 경우에 다른 프라이머의 연장산물을 합성하기 위한 주형으로서 제공될 수 있도록 한다) ; (b) 변성된 핵산을 각각의 프라이머가 이의 상보적인 핵산본쇄와 하이브리드화 되도록 하는 온도로 냉각시키며 ; (c) 변성된 핵산을 단계(a) 또는 (b)와 동시에 또는 단계(a) 또는 (b) 이후에, 뉴클레오티드 트리포스페이트를 결합시켜 각 핵산의 각 본쇄에 상보적인 프라이머 연장 산물을 형성시키는 열안정성 효소와 접촉시키고 ; (d) 단계(c)의 혼합물을 열안정성 효소의 활성을 촉진시키고 증폭될 각각의 상이한 서열에 대해 각각의 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성시키기에 효과적이나 각각의 연장 산물을 이의 상보적인 본쇄주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 유지시키고 ; (e) 단계(d)의 혼합물을, 프라이머 연장 산물을 이들이 합성되는 주형으로부터 분리시켜 일본쇄 분자를 생성하기에 효과적이나, 효소를 비가역적으로 변성시킬 만큼 높지는 않은 온도에서 효과적인 시간동안 가열하며 ; (f) 단계(e)의 혼합물을 프라이머가 단계(e)에서 생성된 그의 상보적인 일본쇄 분자와 하이브리드화 되도록 하기에 효과적인 시간동안, 효과적인 온도로 냉각시키고 ;
    (g) 단계(f)의 혼합물을 효소의 활성을 촉진시키고 증폭될 각각의 상이한 서열에 대해 단계(e)에서 생성된 각 핵산 본쇄 주형에 상보적인 각 프라이머의 연장 산물을 합성하기에 효과적이나, 각 연장 산물을 이의 상보본쇄 주형으로부터 분리시킬 만큼 높지는 않은 온도에서, 효과적인 시간동안 유지시키고 이때, 단계(e), (f), 및 (g)는 하나 또는 그 이상의 클로닝 벡터내로 평활 말단 연결시키기 위한 각 서열을 함유하는 핵산(들)이 검출 가능하게 증폭되도록 충분한 회수로 반복하며 단계(f) 및 (g)는 동시적으로 수행하거나 연속적으로 수행하고 ; (h) 단계(g)로부터 수득된 클로닝될 증폭된 특정 서열(들)을 리가제의 존재하에, 하나 또는 그 이상의 언급된 벡터내로(여기에서, 언급한 증폭된 서열(들) 및 벡터(들)는 연결되기에 충분한 양으로 존재한다)연결 시킴을 특징으로 하여, 핵산 또는 핵산의 혼합물 내에 함유된 적어도 하나의 특정 핵산 서열을 클로닝 벡터내로 클로닝 시키는 방법
  32. 핵산 또는 핵산의 혼합물로부터 제19항 또는 20항에 따르는 증폭방법에 의해 생성된 언급한 서열의 다수의 복제물을 함유하는 증폭된 핵산 서열.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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Families Citing this family (224)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4965188A (en) * 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
US5322770A (en) * 1989-12-22 1994-06-21 Hoffman-Laroche Inc. Reverse transcription with thermostable DNA polymerases - high temperature reverse transcription
US5352600A (en) * 1986-08-22 1994-10-04 Hoffmann-La Roche Inc. Purified thermostable enzyme
US5310652A (en) * 1986-08-22 1994-05-10 Hoffman-La Roche Inc. Reverse transcription with thermostable DNA polymerase-high temperature reverse transcription
US5618711A (en) * 1986-08-22 1997-04-08 Hoffmann-La Roche Inc. Recombinant expression vectors and purification methods for Thermus thermophilus DNA polymerase
US5079352A (en) * 1986-08-22 1992-01-07 Cetus Corporation Purified thermostable enzyme
US5795762A (en) * 1986-08-22 1998-08-18 Roche Molecular Systems, Inc. 5' to 3' exonuclease mutations of thermostable DNA polymerases
AU632857C (en) * 1986-08-22 2003-10-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Purified thermostable enzyme
CA1338457C (en) * 1986-08-22 1996-07-16 Henry A. Erlich Purified thermostable enzyme
US5407800A (en) * 1986-08-22 1995-04-18 Hoffmann-La Roche Inc. Reverse transcription with Thermus thermophilus polymerase
US6127155A (en) * 1986-08-22 2000-10-03 Roche Molecular Systems, Inc. Stabilized thermostable nucleic acid polymerase compositions containing non-ionic polymeric detergents
US5145776A (en) * 1987-01-14 1992-09-08 President & Fellows Of Harvard College Method of using T7 DNA polymerase to mutagenize and fill-in DNA
US4946786A (en) * 1987-01-14 1990-08-07 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
US5266466A (en) * 1987-01-14 1993-11-30 President And Fellows Of Harvard College Method of using T7 DNA polymerase to label the 3' end of a DNA molecule
US4942130A (en) * 1987-01-14 1990-07-17 President & Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
US4994372A (en) * 1987-01-14 1991-02-19 President And Fellows Of Harvard College DNA sequencing
US4921794A (en) * 1987-01-14 1990-05-01 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
FR2629458B2 (fr) * 1987-07-31 1991-08-09 Ire Celltarg Sa Nouvelles sondes d'acides nucleiques specifiques de differents types de virus de papillome humain
IL88923A (en) * 1988-01-12 1995-07-31 Hoffmann La Roche Gene encoding a thermostable dna polymerase from thermus aquaticus said dna polymerase and its purification
US4999290A (en) * 1988-03-31 1991-03-12 The Board Of Regents, The University Of Texas System Detection of genomic abnormalities with unique aberrant gene transcripts
US5109124A (en) * 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
WO1989012697A1 (en) * 1988-06-22 1989-12-28 The Board Of Regents Of The University Of Washingt Method for detecting abnormal genes
US4962020A (en) * 1988-07-12 1990-10-09 President And Fellows Of Harvard College DNA sequencing
US5498523A (en) * 1988-07-12 1996-03-12 President And Fellows Of Harvard College DNA sequencing with pyrophosphatase
US5763573A (en) * 1988-08-10 1998-06-09 Chiron Corporation GTPase activating protein fragments
US5760203A (en) * 1988-08-10 1998-06-02 Chiron Corporation Gap gene sequences
JP2531246B2 (ja) * 1988-08-26 1996-09-04 東洋紡績株式会社 耐熱性ｄｎａポリメラ―ゼおよびその製法
US5242818A (en) * 1988-08-26 1993-09-07 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Method of producing a thermostable DNA polymerase from Thermus thermophilus
US5091310A (en) * 1988-09-23 1992-02-25 Cetus Corporation Structure-independent dna amplification by the polymerase chain reaction
US5066584A (en) * 1988-09-23 1991-11-19 Cetus Corporation Methods for generating single stranded dna by the polymerase chain reaction
US5075216A (en) * 1988-09-23 1991-12-24 Cetus Corporation Methods for dna sequencing with thermus aquaticus dna polymerase
US5142033A (en) * 1988-09-23 1992-08-25 Hoffmann-La Roche Inc. Structure-independent DNA amplification by the polymerase chain reaction
US5389512A (en) * 1988-10-07 1995-02-14 Hoffman-La Roche Inc. Method for determining the relative amount of a viral nucleic acid segment in a sample by the polymerase chain reaction
US5077192A (en) * 1988-10-25 1991-12-31 The General Hospital Corporation Method of detecting antigenic, nucleic acid-containing macromolecular entities
GB8827167D0 (en) * 1988-11-21 1988-12-29 Apothekernes Lab In vitro mutagenesis
AU627809B2 (en) * 1988-12-16 1992-09-03 Abbott Laboratories Isolating thermostable enzymes from engineered mesophiles
DE69002826T2 (de) * 1989-02-06 1994-03-31 Eastman Kodak Co Reaktionskonzentrat zur dna-sequenzierung mit thermostabiler dna-polymerase.
CA2011818A1 (en) * 1989-03-17 1990-09-17 Fred T. Oakes Methods for purification, amplification and detection of a nucleic acid
AU638246B2 (en) * 1989-04-12 1993-06-24 President And Fellows Of Harvard College Improved primer extension reactions
CA2013317A1 (en) * 1989-04-17 1990-10-17 Fred T. Oakes Diagnostic kit, primer composition and their use for replication or detection of nucleic acids
US5091302A (en) * 1989-04-27 1992-02-25 The Blood Center Of Southeastern Wisconsin, Inc. Polymorphism of human platelet membrane glycoprotein iiia and diagnostic and therapeutic applications thereof
US5043272A (en) * 1989-04-27 1991-08-27 Life Technologies, Incorporated Amplification of nucleic acid sequences using oligonucleotides of random sequence as primers
JP3082942B2 (ja) * 1989-05-22 2000-09-04 エフ・ホフマンーラ ロシュ アーゲー 核酸による物質の標識及び追跡方法
US5683896A (en) * 1989-06-01 1997-11-04 Life Technologies, Inc. Process for controlling contamination of nucleic acid amplification reactions
US5035996A (en) * 1989-06-01 1991-07-30 Life Technologies, Inc. Process for controlling contamination of nucleic acid amplification reactions
US6589734B1 (en) 1989-07-11 2003-07-08 Gen-Probe Incorporated Detection of HIV
EP0731175A3 (en) * 1989-07-11 2004-05-26 Gen-Probe Incorporated Oligonucleotide probes for HIV nucleic acid
US5108892A (en) * 1989-08-03 1992-04-28 Promega Corporation Method of using a taq dna polymerase without 5'-3'-exonuclease activity
GB8917963D0 (en) * 1989-08-05 1989-09-20 Scras Apparatus for repeated automatic execution of a thermal cycle for treatment of biological samples
US5213961A (en) * 1989-08-31 1993-05-25 Brigham And Women's Hospital Accurate quantitation of RNA and DNA by competetitive polymerase chain reaction
GB8926269D0 (en) * 1989-11-21 1990-01-10 Dynal As Plasmid
AU656315B2 (en) * 1989-12-22 1995-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag pigh temperature reverse transcriptases
ES2121777T3 (es) * 1989-12-22 1998-12-16 Hoffmann La Roche Vectores de expresion recombinantes y metodos de purificacion de la dna polimerasa de thermus thermophilus.
DE69131891T2 (de) * 1990-02-16 2000-06-15 Hoffmann La Roche Verbesserungen in der spezifität und zweckmässigkeit der polymerase-kettenreaktion
US5049490A (en) * 1990-02-20 1991-09-17 Eastman Kodak Co. Quantitative determination of a DNA polymerase and a test kit useful in same
US5500363A (en) * 1990-04-26 1996-03-19 New England Biolabs, Inc. Recombinant thermostable DNA polymerase from archaebacteria
US5352778A (en) * 1990-04-26 1994-10-04 New England Biolabs, Inc. Recombinant thermostable DNA polymerase from archaebacteria
US5756334A (en) * 1990-04-26 1998-05-26 New England Biolabs, Inc. Thermostable DNA polymerase from 9°N-7 and methods for producing the same
US5322785A (en) 1990-04-26 1994-06-21 New England Biolabs, Inc. Purified thermostable DNA polymerase obtainable from thermococcus litoralis
US5844108A (en) * 1990-06-22 1998-12-01 Roche Molecular Systems, Inc. Primers targeted to NAT2 gene for detection of poor metabolizers of drugs
EP0463395B1 (en) * 1990-06-22 1997-05-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Detection of poor metabolizers of drugs
US5210015A (en) * 1990-08-06 1993-05-11 Hoffman-La Roche Inc. Homogeneous assay system using the nuclease activity of a nucleic acid polymerase
FR2669347A1 (fr) * 1990-11-15 1992-05-22 Inst Nat Sante Rech Med Procede permettant d'effectuer au moins deux reactions successives, en evitant les risques de contamination, notamment applicable aux techniques d'amplification de l'adn ou de l'arn.
KR100236506B1 (ko) * 1990-11-29 2000-01-15 퍼킨-엘머시터스인스트루먼츠 폴리머라제 연쇄 반응 수행 장치
US5464936A (en) * 1990-12-21 1995-11-07 Cetus Oncology Corporation Compositions for identification of papillomavirus replication inhibitors
WO1992020795A1 (en) * 1991-05-17 1992-11-26 Cetus Oncology Corporation INHIBITOR OF NF-λB TRANSCRIPTIONAL ACTIVATOR AND USES THEREOF
DE547359T1 (de) * 1991-12-18 1993-11-25 New England Biolabs Inc Gereinigte thermostabile DNS-Polymerase aus Pyrococcus-Arten.
WO1993015222A1 (fr) * 1992-01-29 1993-08-05 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Procede pour eviter les risques de contamination, notamment applicable aux techniques d'amplification de l'adn ou de l'arn
ATE231920T1 (de) * 1992-03-11 2003-02-15 Dana Farber Cancer Inst Inc Methode um mrna zu klonieren
DE4212555A1 (de) * 1992-04-15 1993-10-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zum Nachweis von Nukleinsäuren
US6207368B1 (en) 1992-08-04 2001-03-27 Beckman Coulter, Inc. Methods and reagents for controlling chain extension and ligation chain reactions
US6180338B1 (en) 1992-08-04 2001-01-30 Beckman Coulter, Inc. Method, reagent and kit for the detection and amplification of nucleic acid sequences
US5565339A (en) * 1992-10-08 1996-10-15 Hoffmann-La Roche Inc. Compositions and methods for inhibiting dimerization of primers during storage of polymerase chain reaction reagents
US5491086A (en) * 1993-05-14 1996-02-13 Hoffmann-La Roche Inc. Purified thermostable nucleic acid polymerase and DNA coding sequences from pyrodictium species
US5597694A (en) * 1993-10-07 1997-01-28 Massachusetts Institute Of Technology Interspersed repetitive element-bubble amplification of nucleic acids
DE4336266A1 (de) * 1993-10-23 1995-04-27 Boehringer Mannheim Gmbh Stabilisierte flüssige Mischungen für die Markierung von Nukleinsäuren
US6015668A (en) * 1994-09-30 2000-01-18 Life Technologies, Inc. Cloned DNA polymerases from thermotoga and mutants thereof
US5614365A (en) * 1994-10-17 1997-03-25 President & Fellow Of Harvard College DNA polymerase having modified nucleotide binding site for DNA sequencing
ATE143057T1 (de) * 1994-10-17 1996-10-15 Harvard College Dns polymerase mit veränderter nukleotid- bindungstelle
US6077664A (en) * 1995-06-07 2000-06-20 Promega Corporation Thermophilic DNA polymerases from Thermotoga neapolitana
US6001645A (en) * 1995-06-07 1999-12-14 Promega Corporation Thermophilic DNA polymerases from thermotoga neapolitana
AU7236296A (en) * 1995-09-08 1997-03-27 Life Technologies, Inc. Cloned dna polymerases from thermotoga and mutants thereof
CN1047328C (zh) * 1996-01-16 1999-12-15 中国石油化工总公司 气相加氢制1,4－丁二醇的催化剂
US6277592B1 (en) 1996-07-31 2001-08-21 Purina Mills, Inc. Porcine leptin protein, nucleic acid sequences coding therefor and uses thereof
US6297027B1 (en) 1996-07-31 2001-10-02 Purina Mills, Inc. Bovine leptin protein, nucleic acid sequences coding therefor and uses thereof
EP2264045B1 (en) 1996-08-14 2015-10-21 Life Technologies Corporation Stable compositions for nucleic acid amplification and sequencing
EP0834571A1 (en) 1996-10-03 1998-04-08 Roche Diagnostics GmbH Thermostable nucleic acid polymerase from Thermococcus gorgonarius
US6171788B1 (en) 1997-01-28 2001-01-09 The Regents Of The University Of California Methods for the diagnosis, prognosis and treatment of glaucoma and related disorders
US6475724B1 (en) 1997-01-28 2002-11-05 The Regents Of The University Of California Nucleic acids, kits, and methods for the diagnosis, prognosis and treatment of glaucoma and related disorders
US7138511B1 (en) 1997-01-28 2006-11-21 The Regents Of The University Of California Nucleic acids, kits and methods for the diagnosis, prognosis and treatment of glaucoma and related disorders
US6306588B1 (en) 1997-02-07 2001-10-23 Invitrogen Corporation Polymerases for analyzing or typing polymorphic nucleic acid fragments and uses thereof
US6103468A (en) * 1997-10-07 2000-08-15 Labatt Brewing Company Limited Rapid two-stage polymerase chain reaction method for detection of lactic acid bacteria in beer
KR20010031987A (ko) * 1997-11-12 2001-04-16 스티븐 에이. 헬렁 폴리콰터니움 및 중합체 비구아니드에 의한 콘택트 렌즈의소독
EP0921196A1 (en) 1997-12-02 1999-06-09 Roche Diagnostics GmbH Modified DNA-polymerase from carboxydothermus hydrogenoformans and its use for coupled reverse transcription and polymerase chain reaction
US6242235B1 (en) 1998-06-24 2001-06-05 Promega Corp. Polymerase stabilization by polyethoxylated amine surfactants
US6207379B1 (en) 1998-09-11 2001-03-27 One Lambda Method for amplification of DNA
US6440715B1 (en) 1999-03-12 2002-08-27 New England Biolabs, Inc. Method for cloning and expression of Rhodothermus Obamensis DNA polymerase I large fragment in E. coli
US20060275782A1 (en) 1999-04-20 2006-12-07 Illumina, Inc. Detection of nucleic acid reactions on bead arrays
US7056661B2 (en) 1999-05-19 2006-06-06 Cornell Research Foundation, Inc. Method for sequencing nucleic acid molecules
AU5882000A (en) 1999-06-22 2001-01-09 Invitrogen Corporation Improved primers and methods for the detection and discrimination of nucleic acids
US6830902B1 (en) 1999-07-02 2004-12-14 Invitrogen Corporation Compositions and methods for enhanced sensitivity and specificity of nucleic acid synthesis
US6692918B2 (en) 1999-09-13 2004-02-17 Nugen Technologies, Inc. Methods and compositions for linear isothermal amplification of polynucleotide sequences
CN102586228A (zh) 1999-09-13 2012-07-18 纽亘技术公司 用于多核苷酸序列线性等温扩增的方法及组合物
WO2001029195A1 (en) * 1999-10-20 2001-04-26 Novozymes A/S Polypeptides having glucanotransferase activity and nucleic acids encoding same
CN104531702A (zh) 1999-12-16 2015-04-22 孟山都技术有限公司 新型植物表达构建物
US6436677B1 (en) 2000-03-02 2002-08-20 Promega Corporation Method of reverse transcription
US6632645B1 (en) 2000-03-02 2003-10-14 Promega Corporation Thermophilic DNA polymerases from Thermoactinomyces vulgaris
US7846733B2 (en) 2000-06-26 2010-12-07 Nugen Technologies, Inc. Methods and compositions for transcription-based nucleic acid amplification
DE60141087D1 (de) 2000-06-26 2010-03-04 Nugen Technologies Inc Methoden und zusammensetzungen zur auf transkription basierenden vervielfältigung von nukleinsäuren
EP1354064A2 (en) 2000-12-01 2003-10-22 Visigen Biotechnologies, Inc. Enzymatic nucleic acid synthesis: compositions and methods for altering monomer incorporation fidelity
AU2002230734A1 (en) 2000-12-11 2002-06-24 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Nested oligonucleotides containing hairpin for nucleic acid amplification
US6858413B2 (en) 2000-12-13 2005-02-22 Nugen Technologies, Inc. Methods and compositions for generation of multiple copies of nucleic acid sequences and methods of detection thereof
US6794141B2 (en) 2000-12-22 2004-09-21 Arcturus Bioscience, Inc. Nucleic acid amplification
US6635451B2 (en) 2001-01-25 2003-10-21 Abbott Laboratories Desaturase genes and uses thereof
BR0205268A (pt) 2001-03-09 2004-11-30 Nugen Technologies Inc Processos e composições para a mplificação de sequências de rna
US6617136B2 (en) 2001-04-24 2003-09-09 3M Innovative Properties Company Biological sample processing methods and compositions that include surfactants
EP1950305A1 (en) 2001-05-09 2008-07-30 Monsanto Technology, LLC Tyr a genes and uses thereof
BRPI0209536B1 (pt) 2001-05-09 2016-05-10 Monsanto Technology Llc construto de dna que codifica transportador de adenilato em plantas e método para produzir planta com sementes tendo nível aumentado de tocoferol
US7668697B2 (en) 2006-02-06 2010-02-23 Andrei Volkov Method for analyzing dynamic detectable events at the single molecule level
EP1275735A1 (en) 2001-07-11 2003-01-15 Roche Diagnostics GmbH Composition and method for hot start nucleic acid amplification
WO2003025202A2 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Engineered templates and their use in single primer amplification
US7414111B2 (en) 2001-09-19 2008-08-19 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Engineered templates and their use in single primer amplification
EP1430150B1 (en) 2001-09-24 2015-08-19 One Lambda, Inc. Diagnostic probe detection system
US20030165859A1 (en) 2001-10-23 2003-09-04 Invitrogen Corporation Primers and methods for the detection and discrimination of nucleic acids
US7211656B2 (en) 2002-01-30 2007-05-01 Abbott Laboratories Desaturase genes, enzymes encoded thereby, and uses thereof
GB0205455D0 (en) 2002-03-07 2002-04-24 Molecular Sensing Plc Nucleic acid probes, their synthesis and use
ATE473281T1 (de) 2002-05-15 2010-07-15 Monsanto Technology Llc Verfahren zur erhöhung des samengewichtes in einer pflanze
US7273730B2 (en) 2002-05-24 2007-09-25 Invitrogen Corporation Nested PCR employing degradable primers
WO2004013305A2 (en) 2002-08-05 2004-02-12 Quanta Biosciences, Inc. Improved compositions for in vitro amplification of nucleic acids
US7498408B2 (en) 2002-09-23 2009-03-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Ryanodine receptor polypeptides
US7094879B2 (en) 2002-10-02 2006-08-22 Abbott Laboratories Genetically engineered P30 antigen, improved antigen cocktail, and uses thereof
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
CA2521084A1 (en) 2003-04-14 2004-10-28 Nugen Technologies, Inc. Global amplification using a randomly primed composite primer
AU2004203649B2 (en) 2003-08-12 2006-01-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Thermostable Taq polymerase fragment
EP1699926B1 (en) 2003-12-10 2014-06-18 Monsanto Technology, LLC Stress tolerant plants and methods thereof
CN101151377B (zh) * 2004-05-13 2015-04-01 纳米生物技术股份有限公司 纳米-pcr:进行核酸扩增和检测的方法及装置
CA2568689A1 (en) 2004-06-04 2005-12-15 Fluxome Sciences A/S Metabolically engineered cells for the production of polyunsaturated fatty acids
US7456270B2 (en) 2004-09-01 2008-11-25 Abbott Laboratories Δ6-desaturase genes and uses thereof
WO2006031955A2 (en) 2004-09-14 2006-03-23 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Method for treatment with bucindolol based on genetic targeting
CA2579150C (en) 2004-09-17 2014-11-25 Pacific Biosciences Of California, Inc. Apparatus and method for analysis of molecules
US7170050B2 (en) 2004-09-17 2007-01-30 Pacific Biosciences Of California, Inc. Apparatus and methods for optical analysis of molecules
US7790363B2 (en) 2005-02-07 2010-09-07 Abbott Laboratories Inc. Diagnostic test for vitamin B12
US8624027B2 (en) 2005-05-12 2014-01-07 Abbvie Inc. Combination therapy for treating cancer and diagnostic assays for use therein
AU2006279420B2 (en) 2005-08-16 2010-12-16 Merlogen, Llc Methods for identification of merle gene
WO2007030759A2 (en) 2005-09-07 2007-03-15 Nugen Technologies, Inc. Improved nucleic acid amplification procedure
AU2006319358B2 (en) 2005-11-30 2012-01-19 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Anti-Abeta globulomer antibodies, antigen-binding moieties thereof, corresponding hybridomas, nucleic acids, vectors, host cells, methods of producing said antibodies, compositions comprising said antibodies, uses of said antibodies and methods of using said antibodies
KR101439828B1 (ko) 2005-11-30 2014-09-17 애브비 인코포레이티드 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도
US7285388B1 (en) 2006-04-07 2007-10-23 Merlogen, Llc Methods for identification of alport syndrome
US8933209B2 (en) 2006-04-26 2015-01-13 Abbvie Inc. Dep2 and its uses in major depressive disorder and other related disorders
BR122015030334B8 (pt) 2006-05-25 2018-05-22 Monsanto Technology Llc processo para seleção de uma planta de soja resistente à ferrugem asiática da soja
WO2007149696A1 (en) 2006-06-23 2007-12-27 Applera Corporation Systems and methods for cooling in biological analysis instruments
JP4918409B2 (ja) 2006-07-26 2012-04-18 西川ゴム工業株式会社 核酸配列の増幅方法
JP4863138B2 (ja) * 2006-10-26 2012-01-25 アイシン・エィ・ダブリュ工業株式会社 ロックアップダンパ及びダンパスプリング間に介在する中間支持部
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
WO2008104386A2 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
US8871470B2 (en) 2007-03-21 2014-10-28 Applied Biosystems, Llc Adaptive thermal block temperature control method and system
EP2134870B1 (en) 2007-03-28 2014-02-26 Monsanto Technology, LLC Utility of snp markers associated with major soybean plant maturity and growth habit genomic regions
CA2697860C (en) 2007-08-29 2019-01-15 Monsanto Technology Llc Method and compositions for breeding for preferred traits associated with goss` wilt resistance in plants
US20090203531A1 (en) 2008-02-12 2009-08-13 Nurith Kurn Method for Archiving and Clonal Expansion
US8268981B2 (en) 2008-03-06 2012-09-18 Abbott Laboratories Plasmodium malariae and plasmodium ovale genes and uses thereof
US8030471B2 (en) 2008-03-06 2011-10-04 Abbott Laboratories Plasmodium malariae and Plasmodium ovale genes and uses thereof
WO2009117698A2 (en) 2008-03-21 2009-09-24 Nugen Technologies, Inc. Methods of rna amplification in the presence of dna
CA2991818C (en) 2008-03-28 2022-10-11 Pacific Biosciences Of California, Inc. Compositions and methods for nucleic acid sequencing
EP2108451A1 (de) 2008-04-11 2009-10-14 Eppendorf AG Vorrichtung zum Durchführen von Reaktionen in Proben
CN102098909B (zh) 2008-04-24 2014-12-31 孟山都技术有限公司 鉴定大豆中亚洲大豆锈病抗性数量性状基因座的方法和其组合物
UA106212C2 (uk) 2008-10-06 2014-08-11 Ебботт Лебораторіз Гени дельта-8-десатурази, ферменти, що ними кодуються, та їх застосування
US8288124B2 (en) 2008-11-20 2012-10-16 Abbott Laboratories Cloning, expression and purification of recombinant porcine intrinsic factor for use in diagnostic assay
US20110236900A1 (en) 2008-11-27 2011-09-29 Riken Novel muts protein and method for determing mutation using the same
EP2370568B1 (en) 2008-12-10 2017-07-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Mek mutations conferring resistance to mek inhibitors
US20100196907A1 (en) 2009-01-31 2010-08-05 Abbott Laboratories Markers to predict and monitor response to aurora kinase b inhibitor therapy
JP2012517241A (ja) 2009-02-11 2012-08-02 アボット・ラボラトリーズ Ｂｃｌ−２ファミリー阻害剤耐性腫瘍及び癌を有する被験者を同定、分類及びモニターするための方法及び組成物
US8063193B2 (en) 2009-03-27 2011-11-22 Abbott Laboratories Nucleotide and amino acid sequences encoding an exported protein 1 derived from Plasmodium vivax and uses thereof
DK2430452T3 (da) 2009-05-14 2014-10-06 Univ Arizona State Carcinom-diagnose og behandlinger, baseret på odc1-genotype
IT1394539B1 (it) 2009-05-19 2012-07-05 Sentinel Ch S P A Uso di uno stabilizzante delle polimerasi per la liofilizzazione e la preparazione di kit pronti per l'uso
EP2449381A1 (en) 2009-06-30 2012-05-09 Abbott Laboratories Markers of xmrv infection and uses thereof
US8188335B2 (en) 2009-07-17 2012-05-29 Abbott Laboratories Δ9-elongase for production of polyunsaturated fatty acid-enriched oils
WO2011032088A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Arca Biopharma, Inc. Polymorphisms in the pde3a gene
CA2822747A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Arca Biopharma, Inc. Use of s-(6-nitro-oxi-hexahydro-furo[3,2-b]thioacetate in the treatment of cardiovascular disorders associated with oxide synthase dysfunction
AU2011221227B2 (en) 2010-02-25 2015-07-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. BRAF mutations conferring resistance to BRAF inhibitors
CA2791247C (en) 2010-03-09 2019-05-14 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods of diagnosing and treating cancer in patients having or developing resistance to a first cancer therapy
CA2796339C (en) 2010-04-15 2020-03-31 Abbott Laboratories Amyloid-beta binding proteins
CA2799431A1 (en) 2010-05-14 2011-11-17 Cancer Prevention Pharmaceuticals, Inc. Cancer prevention and treatment methods based on dietary polyamine content
ES2660239T3 (es) 2010-06-09 2018-03-21 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Una mutación de MEK1 que confiere resistencia a inhibidores de RAF y de MEK
EP3533803B1 (en) 2010-08-14 2021-10-27 AbbVie Inc. Anti-amyloid-beta antibodies
US20120058462A1 (en) 2010-08-18 2012-03-08 Abbott Laboratories Molecular detection of xmrv infection
WO2012024513A2 (en) 2010-08-18 2012-02-23 Abbott Laboratories Molecular detection of xmrv infection
WO2012146260A1 (de) 2011-04-23 2012-11-01 Biolytix Ag Herstellung und verwendung von proteinen in der molekularbiologie
US10172305B2 (en) 2011-04-29 2019-01-08 Monsanto Technology Llc Diagnostic molecular markers for seed lot purity traits in soybeans
CN103547672B (zh) * 2011-05-10 2017-10-27 丹尼斯科美国公司 热稳定性碳酸酐酶及其使用方法
EP4249603A3 (en) 2011-06-08 2024-01-03 Life Technologies Corporation Design and development of novel detergents for use in pcr systems
WO2012170907A2 (en) 2011-06-08 2012-12-13 Life Technologies Corporation Polymerization of nucleic acids using proteins having low isoelectric points
WO2013033611A1 (en) 2011-08-31 2013-03-07 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for watermelon firmness
US10314253B2 (en) 2012-12-04 2019-06-11 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Methods and compositions for watermelon sex expression
US10294489B2 (en) 2013-03-15 2019-05-21 Board Of Trustees Of Southern Illinois University Soybean resistant to cyst nematodes
CN105283558B (zh) * 2013-03-15 2019-05-10 西格尼斯生物技术有限责任公司 使用热稳定的TthPrimPol扩增和测序的方法
US10059999B2 (en) 2013-06-10 2018-08-28 Monsanto Technology Llc Molecular markers associated with soybean tolerance to low iron growth conditions
CN106458885B (zh) 2013-10-25 2019-12-10 生命技术公司 用于聚合酶链式反应系统的新颖化合物及其应用
NZ728726A (en) 2013-11-27 2018-09-28 Seminis Vegetable Seeds Inc Disease resistance loci in onion
CN106231893B (zh) 2014-02-21 2019-10-18 先正达参股股份有限公司 与玉米增加的能育性相关的遗传基因座
NZ630710A (en) 2014-02-27 2016-03-31 Seminis Vegetable Seeds Inc Compositions and methods for peronospora resistance in spinach
US10316369B2 (en) 2014-06-27 2019-06-11 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Methods and assays for male sterile watermelon
EP3005862A1 (en) 2014-10-10 2016-04-13 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Melon plants with improved disease tolerance
US10448595B2 (en) 2015-09-03 2019-10-22 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Downy mildew resistant lettuce plants
EP3368896A1 (en) 2015-10-30 2018-09-05 FMC Corporation Dihydroorotate dehydrogenase inhibitor compositions effective as herbicides
EP3199642A1 (en) 2016-02-01 2017-08-02 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Plant breeding using high throughput sequencing
CN115969854A (zh) 2016-03-24 2023-04-18 科瑞华生物技术有限公司 用tg02治疗癌症
AU2017250076B2 (en) 2016-04-12 2021-07-22 The Regents Of The University Of Michigan Bet protein degraders
AU2017326175B2 (en) 2016-09-13 2022-01-27 The Regents Of The University Of Michigan Fused 1,4-diazepines as BET protein degraders
US11466028B2 (en) 2016-09-13 2022-10-11 The Regents Of The University Of Michigan Fused 1,4-oxazepines as BET protein degraders
AU2017232187B2 (en) 2016-09-30 2023-11-09 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Xanthomonas resistant brassica oleracea plants
WO2018094008A1 (en) 2016-11-21 2018-05-24 Fmc Corporation Cellulose synthase inhibitors effective as herbicides
CN108624640B (zh) * 2017-03-15 2021-09-21 中国科学院微生物研究所 一种利用嗜热引发酶扩增dna的方法
AU2018318988A1 (en) 2017-08-14 2020-04-02 Epizyme, Inc. Methods of treating cancer by inhibiting SETD2
SG11202001441WA (en) 2017-08-18 2020-03-30 Tragara Pharmaceuticals Inc Polymorphic form of tg02
WO2019055444A1 (en) 2017-09-13 2019-03-21 The Regents Of The University Of Michigan DEGRADATION AGENTS OF BROMODOMAIN BET PROTEIN WITH CLEAR BINDERS
MX2021003999A (es) 2018-10-08 2021-06-23 Univ Michigan Regents Moleculas de bajo peso molecular degradadoras de la proteina mdm2.
CA3126761C (en) 2019-01-15 2023-01-10 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Green bean plants with improved disease resistance
CN114222729A (zh) 2019-06-12 2022-03-22 范德比尔特大学 氨基酸转运抑制剂及其用途
CA3141414A1 (en) 2019-06-12 2020-12-17 Vanderbilt University Dibenzylamines as amino acid transport inhibitors
SG10202008262UA (en) 2019-09-26 2021-04-29 Seminis Vegetable Seeds Inc Lettuce plants having resistance to nasonovia ribisnigri biotype nr:1
CN110938603B (zh) * 2019-12-20 2022-11-22 阿吉安(福州)基因医学检验实验室有限公司 一种通用型病毒样本保存缓冲液及其制备方法
AU2021204717A1 (en) 2020-07-15 2022-02-03 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Green Bean Plants with Improved Disease Resistance
US20230193310A1 (en) 2021-12-10 2023-06-22 Seminis Vegetabe Seeds, Inc. Lettuce plants having resistance to downy mildew
WO2023250288A2 (en) 2022-06-21 2023-12-28 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Novel qtls conferring resistance to cucumber mosaic virus

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS51104087A (ja) * 1976-02-02 1976-09-14 Toyo Boseki Kosososeibutsunoseizohoho
US4305837A (en) * 1980-10-30 1981-12-15 The Procter & Gamble Company Stabilized aqueous enzyme composition
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4735801A (en) * 1982-09-07 1988-04-05 Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University Novel non-reverting salmonella live vaccines
US4358535A (en) 1980-12-08 1982-11-09 Board Of Regents Of The University Of Washington Specific DNA probes in diagnostic microbiology
US4419446A (en) 1980-12-31 1983-12-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant DNA process utilizing a papilloma virus DNA as a vector
CA1219824A (en) 1981-04-17 1987-03-31 David C. Ward Modified nucleotides and methods of preparing and using same
US4601978A (en) 1982-11-24 1986-07-22 The Regents Of The University Of California Mammalian metallothionein promoter system
JPS60160884A (ja) * 1984-02-01 1985-08-22 Showa Denko Kk 酵素安定化法
US4582789A (en) * 1984-03-21 1986-04-15 Cetus Corporation Process for labeling nucleic acids using psoralen derivatives
US4617261A (en) 1984-03-21 1986-10-14 Cetus Corporation Process for labeling nucleic acids and hybridization probes
JPS60224499A (ja) * 1984-04-23 1985-11-08 Toyobo Co Ltd 安定なウリカ−ゼ製剤
US4683194A (en) 1984-05-29 1987-07-28 Cetus Corporation Method for detection of polymorphic restriction sites and nucleic acid sequences
EP0196864A3 (en) 1985-03-25 1988-03-23 Cetus Corporation Alkaline phosphatase-mediated processing and secretion of recombinant proteins, dna sequences for use therein and cells transformed using such sequences
AU606043B2 (en) * 1985-03-28 1991-01-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Detection of viruses by amplification and hybridization
ES8706823A1 (es) 1985-03-28 1987-06-16 Cetus Corp Un procedimiento para detectar la presencia o ausencia de al menos una secuencia especifica de acidos nucleicos en una muestra
CA1284931C (en) * 1986-03-13 1991-06-18 Henry A. Erlich Process for detecting specific nucleotide variations and genetic polymorphisms present in nucleic acids
CA1338457C (en) * 1986-08-22 1996-07-16 Henry A. Erlich Purified thermostable enzyme

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Publication number Publication date
JPH0824570B2 (ja) 1996-03-13
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