JP5933544B2 - 外界温度で出荷および貯蔵中の血中dna、rnaおよびタンパク質ならびに他の生体試料を安定化させるための組成物 - Google Patents
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Description
生命科学分野における研究は、DNA、RNA、血液、血液軟膜細胞、尿、頬側スワブ、細菌、古細菌、ウイルス、ファージ、植物、藻類、酵母、微生物、PCR産物、クローン化DNA、タンパク質、酵素、ペプチド、プリオン、真核生物(例えば、原生生物、真菌、植物界および動物界)、原核生物、細胞および組織、胚細胞(例えば、精子および卵母細胞)、幹細胞、ソートされた(例えば、免疫化学標識化に従い)もしくは選択された(例えば、積極的選択または消極的選択された)細胞、ならびにミネラルもしくは化学物質などの生体物質および試料の分析に基づいている。かかる試料は、典型的には適切な供給源から収集または取得され、さらなるプロセスおよび分析のために貯蔵庫および在庫内に置かれる。試料の輸送が必要とされて、完全性、無菌性および安定性を保持するように留意される場合が多い。生体試料は、氷、ドライアイスまたは他の冷凍設備を使用して冷蔵された環境で輸送できる。しかしながら、特に冷蔵装置のエネルギー源が不足する場合、国または大陸間の輸送に必要とされるような長時間、適切な低温を好都合に維持できない場合が多い。
(a)式(I)
の1つもしくは複数の化合物であり:
式中:
Aは、−C(R4)=C(R4)−もしくは−C(R4)=C(R4)−C(R4)2−であり;
Yは、N、SもしくはOであり;
R1は、YがNである場合に、C1〜C8アルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキルもしくは任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキルであり、YがSもしくはOである場合にはR1はなく;
R2は、水素、C1〜C8アルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキルもしくは任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキルであり;
R3は、C1〜C16アルキル、任意選択的に置換されたアリールもしくは任意選択的に置換されたアラルキルであり;
各R4は、独立して、水素、シアノ、ニトロ、−C(O)OR5、−C(O)N(R5)2、−N(R5)2、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロアリールもしくは任意選択的に置換されたヘテロアリールアルキルであり;
または2つの隣接R4はそれらが結合している炭素と一緒になって任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリルもしくは任意選択的に置換されたヘテロアリールを形成し得;
各R5は、独立して、水素、アルキル、アリールもしくはアラルキルであり;ならびに
Xは、医薬上許容可能なアニオンであり;ならびに
(b)
(i)少なくとも1つの沈殿剤、
(ii)少なくとも1つの低級アルコール、ならびに
(iii)少なくとも1つのカオトロープ
の1つ、2つ、もしくは全3つを含む、
生体試料中の核酸分子を実質的に安定的に貯蔵するための、ならびに/または生体試料中タンパク質および/もしくはポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物を提供する。
理論に束縛されず、本明細書に提供する生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物は、式(I)の化合物の1つもしくは複数、ならびに(i)少なくとも1つの沈殿剤、(ii)少なくとも1つの低級アルコール、および(iii)少なくとも1つのカオトロープの1つ、2つ、もしくは全3つ、ならびに充てん材(例えば、空間的に組織化された支点または足場)を形成することにより、生体試料の構成要素の生体物質を充てん材に関与させて立体空間を生成する分子構造を含み得る。さらに理論に束縛されず、核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物もある企図される実施形態では使用し得、生体試料(塩、糖類、阻害剤、緩衝液および/または他の安定剤など)からの核酸および/またはタンパク質分子の有益な安定化、保持、保護あるいは収集に貢献し得る1つもしくは複数のさらなる薬剤の導入を空間的に組織化する。貯蔵組成物はまた、pH調節用の成分(例えば、緩衝液)および他の変数(例えば、1つまたは複数のキレート剤および/または還元剤により)貯蔵状態の最適化のための、および本明細書に提供するように任意選択的に1つもしくは複数の検出可能な指示薬を含み得る(色ベースのpH指示薬、および/または他の化学指示薬など)を含有させる。
の化合物を1つもしくは複数含み:
式中:
Aは、−C(R4)=C(R4)−もしくは−C(R4)=C(R4)−C(R4)2−であり;
Yは、N、SもしくはOであり;
R1は、YがNである場合に、C1〜C8アルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキルもしくは任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキルであり、YがSもしくはOである場合にはR1はなく;
R2は、水素、C1〜C8アルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキルもしくは任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキルであり;
R3は、C1〜C16アルキル、任意選択的に置換されたアリールもしくは任意選択的に置換されたアラルキルであり;
各R4は、独立して、水素、シアノ、ニトロ、−C(O)OR5、−C(O)N(R5)2、−N(R5)2、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロアリールもしくは任意選択的に置換されたヘテロアリールアルキルであり;
または2つの隣接R4はそれらが結合している炭素と一緒になって任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリルもしくは任意選択的に置換されたヘテロアリールを形成し得;
各R5は、独立して、水素、アルキル、アリールもしくはアラルキルであり;ならびに
Xは、医薬上許容可能なアニオンである。
本明細書に称されるある化学基は、示した化学基に見られる炭素原子の総数を示す簡便な表記法により先行し得る。例えば、C1〜C8アルキルは、下記に定義される、総炭素原子1〜8個のアルキル基を記す。簡便な表記法における総炭素数は、記載した群の置換基に存在し得る炭素を含まない。
本明細書に記載の組成物および方法は、生体試料の液体および/または実質的に液体の貯蔵に関し、任意の適切な容器の使用を含み得る。これら、および関連した実施態様は、生体試料または生体物質の安定した長期液体貯蔵は、かかる試料または物質を式(I)の化合物(1つまたは複数)を含む本明細書に記載のものなどの安定的な貯蔵組成物中に貯蔵時に冷蔵せずに成立し得るという観察に派生する。理論に束縛されず、生体試料中に存在する生体物質は、実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物の1つまたは複数の成分と特異的もしくは非特異的結合、または非共有結合および/もしくは共有化学結合形成および/もしくは分子間連合作用(疎水性および/または親水性相互作用、水素結合形成、静電相互作用など)に関与するものを含む他の結合機序により相互作用し得る。したがって、本発明のある実施形態は、一般的な屋内環境の室温で(例えば、典型的には、20〜27℃だが、地理的、季節的および物理的植物機能により約15〜19℃または約18〜23℃から約22〜29℃または約28〜32℃に変わる)で、生体試料の液体または半液体を長期間安定的に貯蔵する装置を提供する。
検出可能な指示薬としては、生体試料における酵素(タンパク質分解性および/または核分解性など)、呼吸性、代謝性、異化性、結合性、触媒性、アロステリック、高次構造、または他の生化学的もしくは生物物理学的活性の変化が挙げられるが、これらに限定されず、ならびにかかる活性の結果として形成される中間体(代謝産物、異化産物、基質、前駆体、補因子など)の間の相互作用を含む、生体試料における、条件、プロセス、経路、誘導、活性化、阻害、制御、動的構造、状態、混入、分解、または他の活性、または機能的もしくは構造的変化に直接関連する任意の検出可能な変数の検出(例えば、当業者に知られるように適切な対照と比較して統計的有意に)、または類似した決定を可能にする組成物が挙げられる。
生体試料中に提供されるかまたは生体試料に由来する生体物質は、(例えば、試料ウェルを溶媒に溶解または解離された試料および貯蔵組成物と同時に接触させることによって)液体(液体懸濁液などの)形態の貯蔵組成物と組み合わせて、ウェルに添加しても試験管に添加してもよい。
実施例1
血液の貯蔵
本実施例は、液体貯蔵可能な生体試料の調製および特性化を記載する。この実施例および以下の実施例において、標準的な細胞および分子生物学技術を使用し、本質的に公知の方法に従った(例えば、Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York; Current Protocols, Nucleic Acid Chemistry, Molecular Biology, Wiley and Sons, 2003; Current Protocols, Protein Sciences, Cell Biology, Wiley and Sons, 2003)。この実施例および以下の実施例における試薬はすべて、別段の記載のない限り、Sigma−Aldrich製(St. Louis, Mo)であった。
室温で62日間の完全血中DNAの安定化
血液と異なる比率で混合した#1.1〜1.3製剤(表1参照)を室温で62日間貯蔵後に検討した。3つの異なる市販キットを使用して試料からDNAを単離した。Qiagen製QiaAmp(商標)ミニキットを#1.1製剤および非保護血液試料からのDNA抽出に使用した一方、やはりQiagen製のFlexigene(商標)キットを#1.2製剤中で貯蔵された血液および−20℃で貯蔵された血液試料からのDNA抽出に使用し、Life Technologies製ChargeSwitch(商標)キットを#1.3製剤中で貯蔵された血液からのDNA抽出に使用した。すべての試料を100μL溶出液中で単離した。各100μL溶出液の試料10μLのゲノムDNA単離後、臭化エチジウムを含む0.8%アガロースゲルの各レーンに適用し、120Vで40分間ゲルを電気泳動した。302nm 紫外線照明ゲル像をKODAK100ゲル系上で捕獲したので、これを図2に示す。#1.2製剤の比率4:1からの溶出液中DNA、非保護血液および−20℃対照の濃度をBiotek Synergy2プレートリーダーを使用して紫外線分光法により算出したので、複製物からのDNA平均総量を図3に示す。
血液の冷蔵せずに貯蔵後のDNA収集
1.1〜1.3製剤(表1参照)を各種比率で血液と混合して、出荷シミュレーション中に試料を移動してから、室温でさらに36日間試料を貯蔵後にDNAを抽出した。以下のプロトコル:
a)室温で2日間
b)45℃で2日間
c)室温で3日間
d)−20℃で2日間
e)室温で3日間
f)45℃で2日間
を使用して出荷シミュレーションを実施した。
室温で14日間のヒト完全血中RNAの安定化
抗凝血剤としてK2−EDTAを含むバキュテイナー中のヒトドナーから完全血を収集した。試験管を完全に混合し、Hemogard封を外して、表1に見られる指定の製剤(1.6〜1.8、図6参照)各900μlを含む2mLエッペンドルフ型試験管に血液アリコート300μlを移した。試料を完全にボルテックス混合し、室温で貯蔵した。エッペンドルフ型試験管へ血液アリコート300μlを添加することにより非保護アリコートを調製した。エッペンドルフ型試験管へ血液300μlを添加することにより冷凍対照を調製して、−80℃冷凍器内で冷凍した。14日間後、室温で試験管を14000gで5分間回転させて沈殿物および除去した上清を堆積させた。Ambion RiboPure(商標)血液キット(Ambion, Austin, TX)から800μl溶解液と50μl酢酸ナトリウム溶液を混合することによりペレットを溶解させた。RiboPure(商標)血液キットプロトコルに応じて試料をさらにプロセス化し、RNAを含む調製物を得た。−80℃対照試料を加温してから、800μl溶解緩衝液および50μl酢酸ナトリウムを添加することにより非保護対照試料とプロセス化した。対照も保護された試料と共にプロセス化し、臭化エチジウムを含む1%非変性ゲルを使用して150Vで35分間実施したアガロースゲル電気泳動によりRNAを分析した。紫外線透光を302nmで使用してゲル像(図6)をKodak Gel−100系上で視覚化した。
室温で6日間の血中RNAの安定化
実施例4に記載した様式と同様に、さらなる核酸安定化製剤をいくつか調製して、ヒト完全血と混合した。この実験に使用した製剤を表2に提示する。上記のとおりRiboPure(商標)血液キットを使用してRNA抽出後、収集した核酸含有試料をアガロースゲル電気泳動により分析した。#2.3製剤を使用して得られた代表的な結果(表2)を図7に示す。
式(I)の化合物の合成例
本実施例では、式(I)の化合物の合成例について3つ記載する。試薬はすべて、別段の記載のない限り、Sigma−Aldrich製(St. Louis, Mo)であった。
293T細胞からのゲノムDNAおよびRNAの安定化
ヒト胎児腎臓(HEK)293T細胞(ATCC, Manassas, VA)を標準的な細胞培養手順に従い培養し、収集した細胞を洗浄して、アリコートした細胞ペレット(5×105細胞/試料)を100μL核酸安定化3.5製剤もしくは3.6製剤(表3)中で再懸濁し、室温で14日間貯蔵した。第1対照細胞ペレットを保護添加物なしで−80℃で14日間貯蔵し、第2対照ペレットを添加物なしで室温で貯蔵した。貯蔵後、RNAqueous(商標)キット(Ambion, Austin, TX)を製造業者の説明書に従い使用してゲノムDNAおよび総RNAを各試料から抽出した。次いで抽出物をアガロースゲル電気泳動により分析した(1.2%アガロース、1×トリス−酢酸塩EDTA(TAE))。添加物なしで室温で貯蔵した対照細胞ペレット由来のRNAは完全に分解し、電気泳動法中、離れたバンドは産生しなかった。対照的に、複数の別々のRNAバンド(18Sおよび28S rRNAおよびその間のバンドを含む)は3.5製剤または3.6製剤中で貯蔵された電気泳動試料中において明らかであり、これらのバンドは−80℃対照の相当バンドよりはっきりと分解した。ゲノムDNAに相当する十分に分解した高分子量バンドも、3.5製剤または3.6製剤中で貯蔵された試料、および−80℃対照試料中の電気泳動図において視認できた。
室温で貯蔵したマウス脳組織試料中のRNAおよびタンパク質の安定化
確立された実験室での動物組織収集手順に従い、新規マウス脳組織断片(それぞれ約25mg)を得て、いずれの保護添加物もなしで、または100μL核酸安定化3.5製剤もしくは3.6製剤(表3)の存在下のいずれかで室温で13日間または20日間、別々のマイクロフュージ試験管に貯蔵した。対照組織断片を−80℃でいずれの保護添加物もなしで貯蔵した。貯蔵後、RNAqueous(商標)キット(Ambion, Austin, TX)を製造業者の説明書に従い使用して各試料から総RNAを抽出し、Agilent RNA 6000 NanoキットおよびAgilent 2100 Bioanalyzer(Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA)を供給元の提言に従い使用してRNA完全性を評価した。
ヒト乳癌試料中のタンパク質の安定化
前実施例に記載のとおりマウス脳組織断片(それぞれ約25mg)を調製し、ヒト乳癌組織断片(それぞれ約25mg)も室温で3.5製剤(表3)の存在下または安定剤なしで−80℃でのいずれかにて3日間貯蔵した。タンパク質抽出、タンパク質の電気泳動分離、およびニトロセルロース膜への電気ブロット移動を前実施例に記載のとおり行った。アミド黒色を用いた染色により、分解したタンパク質を検出した。3.5製剤中で室温で貯蔵した試料の電気泳動図は、安定剤なしで−80℃で貯蔵した試料に観察された電気泳動図に相当した。
長時間冷却せずに貯蔵したヒト血液試料中のRNAおよびDNAの安定化
標準手順に従い、血液試料を健常ヒト志願者から採取して、抗凝血剤を含む試験管内に収集した。未分画血液試料を添加物なしで、または3.1製剤、3.2製剤もしくは3.3製剤(表3)の1つと2:1および8:1容量:容量比で混合後のいずれかに31日間室温で貯蔵した。対照血液試料を−20℃で添加物なしで貯蔵した。貯蔵期間終了時、5 Prime Inc. (Gaithersburg, MD)製のマニュアルPCR延長系を供給元の説明書に従い使用して、ゲノムDNAを抽出して、アリコート100ngを、PLAT遺伝子を挿入した22キロベース対断片の増幅PCR鋳型として使用した。λDNA HindIII消化ラダー(New England Biolabs, Beverly, MA)を参照標準として使用してアンプリコンをアガロースゲル電気泳動(0.5%アガロース、1×TAE)により分析した。
冷蔵せずに貯蔵したヒト血液試料中のRNAおよびDNAの安定化
単独ドナーからのヒト完全血を3.4製剤中で室温で3日間または7日間(表3、製剤対血液比率3:1、図8C〜8D)または安定剤の不在下で3日間(非保護、図8A)貯蔵した。対照血液アリコートを−80℃で7日間貯蔵した。89遺伝子パネルの遺伝子発現変化を3回分析し、採血時点の遺伝子発現レベルと比較して、ΔΔCq方法ならびにハウスキーピング遺伝子としてRPL13AおよびGAPDHを使用した。0時点および特定試験時点で同じ発現レベルの遺伝子は、線形プロット上に位置した(図8A〜D)。2倍超明らかに上方制御した遺伝子が線形プロットの上に現れ(図8A〜D)、2倍超明らかに下方制御した遺伝子が線形プロットの下に現れる(図8)ように、散布プロット上の境界を2倍に設定した。遺伝子の略語を図8に示す。
RT−QPCR概要
冷蔵せずに6ヶ月超貯蔵したヒト血液試料中のDNAの安定化
単独ドナー由来の血液をマイクロフュージ試験管中に100μL/試験管でアリコートした。試験管に3.26製剤、3.27製剤、3.28製剤、3.29製剤、3.30製剤、3.31製剤および3.32製剤(表3参照)の1つを20μL入れてから、血液とボルテックス混合した(すなわち、1つの安定剤部分対5つの血液部分(v/v))。対照血液アリコート(100μL)も室温で非保護で(すなわち、安定剤を添加せず)貯蔵し、さらなる対照血液アリコートを−20℃で冷凍貯蔵した。試験管(−20℃対照群以外)を実験室の実験台上で外界室温で189日間貯蔵した。貯蔵期間後、Qiagen(Valencia, CA)製QiaAmp(商標)ミニキットを製造業者の説明書に従い使用して全試験管を抽出した。抽出したDNAを臭化エチジウムを含む0.8%アガロースゲルにて電気泳動により分析して、ゲノムDNAの完全性を評価した。3.26製剤、3.27製剤、3.31製剤および3.32製剤中で室温で貯蔵された試料において、−20℃対照試料に見られるバンドの分解度および強度と比較して有利に十分分解したバンドが観察された。室温で貯蔵された非保護試料において著しい分解が示された。
Claims (19)
- (a)式(I)
式中:
Aは、−C(R4)=C(R4)−であり;
Yは、N、SもしくはOであり;
R1は、C1〜C10アルキルであり;
R2は、水素または、C1〜C8アルキルであり;
R3は、C1〜C16アルキル、任意選択的に置換されたアリールもしくは任意選択的に置換されたアラルキルであり;
各R4は、独立して、水素、シアノ、ニトロ、−C(O)OR5、−C(O)N(R5)2、−N(R5)2、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロアリールもしくは任意選択的に置換されたヘテロアリールアルキルであり;かつ
各R5は、独立して、水素、アルキル、アリールもしくはアラルキルであり;ならびに
Xは、医薬上許容可能なアニオンであり;ならびに
(b)
(i)少なくとも1つの沈殿剤、
(ii)少なくとも1つの低級アルコール、ならびに
(iii)少なくとも1つのカオトロープ
の1つ、2つ、もしくは全3つを含む血液試料中の核酸およびポリペプチド分子を安定的に貯蔵するための組成物。 - (a)キレート剤、
(b)還元剤、
(c)pH緩衝液、および
(d)水
の1つもしくは複数をさらに含む、請求項1に記載の組成物。 - 前記医薬上許容可能なアニオンが、ブロミド、塩化物、ヨウ化物、C1〜C12アルキルスルホネート、ヘキサフルオロホスファート、メチルスルファート、エチルスルファート、テトラフルオロボラート、トリフルオロメタンスルホネートおよびビス(トリフルオロメチルスルホニル)イミドからなる群から選択される、請求項1または請求項2に記載の組成物。
- (a)前記式(I)の化合物が、
1−メチル−3−カルボキシエチル−イミダゾリウムブロミド、
1−ヘキシル−3−メチルイミダゾリウムブロミド、
1−デシル−3−メチルイミダゾリウムブロミド、
1−(2−ヒドロキシエチル)−3−メチルイミダゾリウムブロミド、および
1−ベンジル−3−ヘキシルイミダゾリウムブロミドからなる群から選択され、
(b)前記沈殿剤が、
5−(4−ジメチル)アミノベンジリデンロダニン、
スルホサリチル酸、
塩化リチウム、および
水酸化リチウムからなる群から選択され、
(c)前記低級アルコールが、メタノール、エタノール、n−プロパノール、イソプロパノール、n−ブタノール、およびイソブタノール(2−メチルプロパン−1−オール)からなる群から選択され、
(d)前記カオトロープが、
塩酸グアニジン、チオシアン酸グアニジン、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸ナトリウムおよび尿素からなる群から選択される、
組成物のうちの少なくとも一つである請求項1又は請求項2に記載の組成物。 - (a)前記キレート剤が、ジエチレントリアミンペンタ酢酸(DTPA)、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングルコール四酢酸(EGTA)、トランス−1,2−ジアミノシクロヘキサン−N,N,N′,N′−四酢酸(CDTA)、1,2−ビス(2−アミノフェノキシ)エタン−N,N,N′,N′−四酢酸(BAPTA)、1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸(DOTA)、N−(2−ヒドロキシエチル)エチレンジアミン−N,N′,N′−三酢酸、およびニトリロ三酢酸(NTA)からなる群から選択され、
(b)前記還元剤が、2−メルカプトエタノール、チオスルファート、TCEP(トリス−(2−カルボキシエチル)ホスフィン)、ジチオスレイトールおよびジチオエリトリトールからなる群から選択され、
(c)前記pH緩衝液が、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、スルホサリチル酸、スルホイソフタル酸、シュウ酸、ボラート、CAPS(3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸)、CAPSO(3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸)、EPPS(4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンプロパンスルホン酸)、HEPES(4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−エタンスルホン酸)、MES(2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸)、MOPS(3−(N−モルホリノ)プロパンスルホン酸)、MOPSO(3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸)、PIPES(1,4−ピペラジンジエタンスルホン酸)、TAPS(N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]−3−アミノプロパンスルホン酸)、TAPSO(2−ヒドロキシ−3−[トリス(ヒドロキシメチル)メチルアミノ]−1−プロパンスルホン酸)、TES(N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]−2−アミノエタンスルホン酸)、ビシン(N,N−ビス(2−ヒドロキシエチル)グリシン)、トリシン(N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]グリシン)、トリス(トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン)およびビス−トリス(2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)−1,3−プロパンジオール)からなる群から選択される、組成物のうちの少なくとも一つである請求項2に記載の組成物。 - 界面活性剤または洗剤をさらに含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記界面活性剤または洗剤が、Triton(登録商標)X−100、Nonidet(登録商標)P40およびBrij(登録商標)洗剤から選択される、請求項6に記載の組成物。
- 前記核酸分子がDNA分子およびRNA分子を1つまたは複数含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記血液試料が脊椎動物血液を含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記脊椎動物血液が未分画である、請求項9に記載の組成物。
- 前記生体血液試料がヒト血液を含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記ヒト血液が未分画である、請求項11に記載の組成物。
- 請求項1に記載の組成物と混合した血液試料を含む、血液試料由来の安定的に貯蔵された核酸分子。
- 前記血液試料は、
(a)脊椎動物血液、
(b)ヒト血液、
(c)前記核酸分子がDNA分子およびRNA分子を1つまたは複数含む(a)又は(b)の試料、からなる群から選択される、請求項13に記載の安定的に貯蔵された核酸分子。 - (a)試験混合物を得るために未分画ヒト血液の第1試料と混合し、少なくとも60日間冷蔵せずに前記試験混合物を保存した後に、前記期間中−20℃で貯蔵された前記未分画ヒト血液の第2試料から収集可能なDNAと比較して、前記試験混合物から収集可能なDNAの分解を少なくとも70%防止することが可能な組成物、または、
(b)試験混合物を得るために未分画ヒト血液の第1試料と混合し、少なくとも21日間冷蔵せずに前記試験混合物を保存した後に、前記期間中−80℃で貯蔵された前記未分画ヒト血液の第2試料から収集可能なRNAと比較して、前記試験混合物から収集可能なDNAの分解を少なくとも70%防止することが可能な組成物、から選択される、請求項1に記載の組成物。 - 血液試料中に存在する核酸もしくはポリペプチド分子の1つもしくは複数の安定化方法であり、
(a)請求項1に記載の組成物と血液試料を混合して混合物を得ること;ならびに
(b)前記混合物を冷蔵せずに少なくとも7日間維持することであって、
(i)請求項1に記載の組成物を用いずに前記期間−20℃で貯蔵時の試料から収集可能なDNAもしくはポリペプチド量と比較して、混合物中で収集可能なDNAの分解が少なくとも70%防止されること、
(ii)請求項1に記載の組成物を用いずに前記期間−80℃で貯蔵時の試料から収集可能なRNA量と比較して、混合物中で収集可能なRNAの分解が少なくとも70%防止されること、ならびに
(iii)請求項1に記載の組成物を用いずに前記期間−20℃で貯蔵時の試料から収集可能なポリペプチド分子の量と比較して、混合物中で収集可能なポリペプチド分子の分解が少なくとも70%防止されること、のうち1つ、2つもしくは全3つのいずれかであり、それにより、血液試料中に存在する前記核酸もしくはポリペプチド分子の1つもしくは複数を安定化させること、
を含む血液試料中に存在する核酸もしくはポリペプチド分子の1つもしくは複数の安定化方法。 - 前記血液試料が以下の:
(a)脊椎動物血液、
(b)前記脊椎動物血液が未分画である前記(a)の生体試料、
(c)ヒト血液、
(d)前記ヒト血液が未分画である前記(c)の生体試料、
から選択される、請求項16に記載の方法。 - 前記維持工程が少なくとも10日間、20日間、30日間、40日間、50日間、60日間または70日間の維持を含む、請求項16に記載の方法。
- 血液試料中の核酸およびポリペプチド分子を安定的に貯蔵するための組成物であって、前記組成物は:1−ベンジル−3−へキシルイミダゾリウムブロミド、モルホリノエタンスルホン酸(MES)、スルホサリチル酸、トリス(カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩、および塩酸グアニジンを含むことを特徴とする組成物。
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