ES2255848B1 - Derivados de isoquinolina como inhibidores de calpaina. - Google Patents
Derivados de isoquinolina como inhibidores de calpaina. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2255848B1 ES2255848B1 ES200402995A ES200402995A ES2255848B1 ES 2255848 B1 ES2255848 B1 ES 2255848B1 ES 200402995 A ES200402995 A ES 200402995A ES 200402995 A ES200402995 A ES 200402995A ES 2255848 B1 ES2255848 B1 ES 2255848B1
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- butyl
- sec
- dihydro
- isoquinolin
- ylidene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn - After Issue
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
- A61K31/472—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/12—Ophthalmic agents for cataracts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
- C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
- C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
- C07D217/24—Oxygen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
- C07K5/06052—Val-amino acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
Abstract
Derivados de isoquinolina como inhibidores de calpaina. La presente invención se refiere a compuestos derivados de isoquinolina parcialmente reducida con sustitución de un grupo sec-butilo en posición 3 con actividad como inhibidores de calpaina. Un compuesto de la presente invención es un éster o amida derivada del ácido (3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1 H-isoquinolin-4-iliden)-acético y de ácido (3-sec-butil-1-tioxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acético. Los compuestos de fórmula I o II tienen aplicación en el tratamiento preventivo o terapéutico de una enfermedad degenerativa.
Description
Derivados de isoquinolina como inhibidores de
calpaina.
La presente invención se enmarca en el campo de
los inhibidores de enzimas con actividad terapéutica, más
específicamente de los inhibidores de calpaina.
Las calpainas, o proteasas neutras activadas por
Ca^{2+} (CANP, E.C. 3.4.22.17), son una familia de proteasas con
cisteina ("cysteine proteases") con un papel metabólico muy
activo. Aunque su sustrato natural no está claramente determinado,
estas enzimas catalizan la hidrólisis de una variedad de proteínas
implicadas en la transducción de señales, en la reconstrucción del
citoesqueleto, en la regulación del ciclo celular y en la apóptosis
(Adv. Pharmacol. 1996, 37, 117). En mamíferos,
la familia de calpainas comprende diversas isoformas específicas de
tejido y dos isoenzimas ubicuas: la \mu-calpaina
(o calpaina I) y la m-calpaina (o calpaina II), que requieren
cantidades micromolares y milimolares, respectivamente, de
Ca^{2+} para su activación in vitro. Estudios
estructurales por difracción de rayos X han mostrado que cada
isoforma está compuesta por una subunidad grande (\sim 80 kDa),
que presenta un dominio de proteasa con cisteina del tipo de la
papaina, y una subunidad pequeña (\sim 30 kDa), que es común a
cada isoenzima. Los extremos C-terminales
de cada subunidad tienen dominios capaces de unirse a Ca^{2+} (dominio tipo calmodulina) (FEBS Lett. 2001, 501, 111).
de cada subunidad tienen dominios capaces de unirse a Ca^{2+} (dominio tipo calmodulina) (FEBS Lett. 2001, 501, 111).
La sobreactivación de las calpainas, lo que
puede ocurrir al aumentar la concentración intracelular de
Ca^{2+}, está implicada en numerosas enfermedades, tales como las
isquemias cerebral y cardiaca, ictus cerebral, Alzheimer, Parkinson,
Hungtinton, distrofia muscular, cataratas, enfermedades
desmielinizantes (como la esclerosis múltiple) y otras enfermedades
degenerativas (Pathophysiology 1999, 6, 91;
Brain Res. Rev. 2003, 42, 169).
La principal aplicación de inhibidores de
calpaina es como agentes neuroprotectores. En el área terapéutica
relacionada con la neuroprotección se han empleado hasta ahora
diversas estrategias. Se han usado agentes que actúan sobre la
despolarización de membrana y la entrada de Ca^{2+} en las
células, o que evitan la producción de radicales libres
(antioxidantes), o que son antagonistas de la acción de
neurotransmisores (J. Clinical Neurosci. 2002,
9, 4). Recientemente se ha prestado mucha atención a los
fármacos capaces de bloquear los receptores NMDA para el glutamato;
sin embargo, el bloqueo de receptores ionotrópicos de aminoácidos
excitatorios puede no ser un método ideal para impedir la acción
excitotóxica, ya que estos fármacos tienen efectos secundarios
psicotomiméticos (Pharmacol. Ther. 1999, 81,
163; Neurobiol. Disease 2003, 12, 82). Una
alternativa interesante para conseguir neuroprotección es el bloqueo
de fenómenos celulares "post-receptor" que
están silenciados fisiológicamente; es decir, la búsqueda de
bloqueantes selectivos de cascadas catabólicas inducidas por los
agentes excitotóxicos. Es previsible que estos fármacos potenciales
de acción intracelular, al actuar sobre rutas metabólicas que se
activan durante la neurodegeneración, podrían permitir una acción
neuroprotectora más eficaz y selectiva.
La sobreactivación de calpaina requiere un
aumento continuado de las concentraciones intracelulares de
Ca^{2+}, y esta enzima está latente en las células en reposo [es
decir, con niveles de Ca^{2+} "normales"]. Por ello, la
inhibición de calpaina se presenta como un tratamiento adecuado en
enfermedades neurodegenerativas. En base a sus características, es
previsible que la inhibición de calpaina tenga menos efectos
secundarios en terapéutica humana que el bloqueo de procesos
metabólicos previos a su activación en los procesos patológicos,
como es el caso del antagonismo del receptor NMDA de glutamato y
aspartato, debido a que la calpaina no se activa en condiciones
fisiológicas "normales" y a que la acción de aminoácidos
excitatorios es imprescindible para el funcionamiento normal del
sistema nervioso.
Además, los inhibidores potentes y selectivos de
calpaina son muy útiles como herramientas de trabajo para estudiar
el mecanismo de acción de esta proteasa, así como su papel en
ciertos procesos fisiológicos.
Por otra parte, derivados de isoquinolina
diferentemente sustituidos se han usado como farmacóforos en
compuestos con diversas actividades biológicas
(US-5576435; Eur. J. Pharmacology. 2004,
501, 111). Por otro lado, los aminoácidos y los compuestos
relacionados, tales como, los compuestos aminocarbonílicos, poseen
diversas propiedades biológicas (J. Med Chem. 2002,
45, 4762; Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000,
10, 1497).
Se han descrito inhibidores reversibles e
irreversibles de calpaina (Trends Mol. Medicine
2001, 7, 355; US-6103720;
WO-9641638; US-5541290;
ES-200301125; ES- 200401104; Bioorg. Med. Chem.
Lett. 2004, 14, 2753; Chemistry &
Biodiversity 2004, 1, 442). Los rasgos
estructurales más frecuentes de estos inhibidores es que son
péptidos o peptidomiméticos con pocos aminoácidos (entre 2 y 6)
hidrófobos y alguna funcionalidad electrófila, entre las que cabe
mencionar \alpha-cetofosfonatos,
\alpha-cetofosfinatos, óxidos de
\alpha-cetofosfinas,
\alpha-cetoésteres,
\alpha-cetoácidos,
\alpha-cetoamidas, trifluorometilcetonas,
aldehidos, sales de metilsulfonio, epóxidos, etc. Aparentemente,
estos compuestos actúan sobre el dominio tipo papaina de la
calpaina, lo que se traduce en una selectividad relativamente baja,
por lo que frecuentemente también son inhibidores de otras
proteasas con cisteina (por ejemplo, papaina) e incluso de proteasas
con serina (serine proteases). Además, el hecho de que estos
compuestos sean derivados peptídicos hace que, en algunos casos,
posean algunas propiedades farmacológicas no deseadas, tales como
transporte ineficaz a través de membranas celulares o la
degradación por peptidasa. En parte debido a estos inconvenientes,
aun no se ha encontrado un inhibidor de calpaina con utilidad
terapéutica.
Recientemente, nuestro grupo ha preparado una
variedad de inhibidores de calpaina que se caracterizan por ser
derivados de isoquinolina (Adv. Synth. Catal. 2002,
344, 855) Sin embargo, para que estos derivados de
isoquinolina sean activos como inhibidores de calpaina es necesaria
la presencia de una cadena peptídica (ejemplos ilustrativos son los
compuestos 1 y 2, a los que genéricamente denominamos híbridos
péptido-heterociclo), y la actividad biológica
es altamente dependiente de la longitud del fragmento peptídico,
como queda de manifiesto en los valores de IC_{50} de los
compuestos 1 y 2. Sin embargo, nuestros primeros resultados
indicaban que los derivados sencillos de isoquinolina, en los que
no hay cadena peptídica, no son inhibidores de calpaina, como se
ilustra para el compuesto 3.
La extensión de la investigación en derivados de
isoquinolina como inhibidores de calpaina nos ha permitido
descubrir que cuando el sustituyente en posición 3- del anillo de
isoquinolina es un grupo sec-butilo, la actividad inhibitoria
de calpaina aumenta de manera espectacular, y la presencia de
cadenas peptídicas no es absolutamente necesaria para lograr tal
actividad biológica. El hecho de que no sea necesaria la presencia
de cadenas peptídicas en este tipo de compuestos incrementa
notablemente su potencial utilidad terapéutica como inhibidores
enzimáticos: es de esperar que estos derivados de isoquinolina sin
cadena peptídica sean más estables metabólicamente y su transporte
celular sea más eficaz que los híbridos
péptido-heterociclo.
La presente invención se refiere a compuestos
derivados de isoquinolina parcialmente reducida con actividad como
inhibidores de calpaina. Un compuesto de la presente invención es
un éster o una amida derivada de los ácidos
(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acético
y
(3-sec-butil-1-tioxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetico,
incluyendo compuestos cuyo sustituyente en posición 4- del
fragmento de isoquinolina son estructuras relacionadas con los
aminoácidos, incluyendo fragmentos de compuestos aminocarbonílicos,
los cuales se unen al fragmento de isoquinolina por un grupo
carbonilmetiliden.
La presente invención se refiere a un compuesto
caracterizado porque tiene estructura de isoquinolina parcialmente
reducida con sustitución de un grupo sec-butilo en posición
3, y de fórmula I o II,
en la
que:
- el grupo X es oxígeno (O) o azufre (S),
indistintamente,
- el asterisco (*) representa un centro
estereogénico, de configuración (R) ó (S),
indistintamente,
- el grupo R^{1} está independientemente
seleccionado entre los grupos
- -
- NH_{2},
- -
- NHR^{4} en el que R^{4} está seleccionado entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido y un derivado de péptido,
- -
- NR^{5}R^{6} en el que R^{5} y R^{6} están independientemente seleccionados entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido, un derivado de péptido, y grupos R^{5} y R^{6} que forman un sistema cíclico,
- -
- OH,
- -
- OR^{7} en el que R^{7} representa un grupo arilo o alquilo,
- los grupos R^{2} y R^{3} son iguales o
distintos, y están independientemente seleccionados entre los
grupos O (oxígeno), NH, ó NR^{8}, dónde R^{8} representa un
grupo alquilo o arilo,
- Z está seleccionado entre los grupos
- -
- alquilo entre 2 y 8 átomos de carbono,
- -
- arilo,
- -
- arilalquilo,
- -
- cadena oxialquílica conteniendo independientemente entre 1 y 3 átomos de oxígeno y entre 2 y 10 átomos de carbono,
- -
- fragmento derivado de aminoácido o péptido.
Son compuestos especialmente preferidos:
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de metilo (7),
- ácido
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetico
(8),
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de iso-propilo (9),
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de 1-butilo (10),
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de bencilo (11),
-
(S,S,S,S,Z,Z,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de
4-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2-enilo
(12),
-
(S,S,S,S,Z,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de
4-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2-inilo
(13),
-
(S,S,S,S,Z,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de
4-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetoximetil]-benzilo
(14),
-
(S,S,Z)-N-bencil-2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetamida
(15),
-
(S,S,Z)-N-(3-acetil-fenil)-2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetamida
(16),
-
(S,S,Z)-N-(2'-amino-bifenil-2-il)-2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetamida
(17),
-
(S,S,S,S,Z,Z)-2,2'-bis-[(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]bifenilo
(18),
-
(S,S,S,Z)-(1-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-2-metil-propil)-carbamato
de 9H-fluoren-9-ilmetilo
(19),
-
(S,S,S,Z)-(1-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-2-fenil-etil)-carbamato
de 9H-fluoren-9-ilmetilo
(20),
-
(S,S,S,S,Z)-(1-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-ilcarba-
moil}-2-metil-butil)-carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (21),
moil}-2-metil-butil)-carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (21),
-
(S,S,S,Z)-2-amino-N-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-il}-3-metil-butiramida
(22),
-
(S,S,S,Z)-2-amino-N-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-il}-3-fenil-propionamida
(23),
-
(S,S,S,S,Z)-2-amino-N-{2'-[2-(3-sec
-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-
il}-3-metil-pentanamida (24),
il}-3-metil-pentanamida (24),
-
(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoilamino)-3-metil-pentanoato
de metilo (25),
-
(S,S,S,S,S,S,S,S,Z)-2-(2-{2-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-pen-
tanoilamino}-3-metil-pentanoilamino)-3-metil-pentanoato de metilo (26),
tanoilamino}-3-metil-pentanoilamino)-3-metil-pentanoato de metilo (26),
-
(S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-butirilamino}-3-fenil-propionato
de metilo (27),
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-tioxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de metilo (28),
-
ácido(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-tioxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acétic
(29),
y
-
(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-butil-1-tioxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-penta-
noilamino}-3-metil-pentanoato de metilo (30),
noilamino}-3-metil-pentanoato de metilo (30),
y cualquiera de sus isómeros.
Los siguientes intermedios sintéticos son
también compuestos especialmente preferidos de la presente
invención:
-
(S,S)-3-metil-2-(2-yodobenzoilamino)-pentanoato
de metilo (4),
-
(S,S)-N-[(1-hidroximetil-2-metil)-butil]-2-yodo-benzamida
(5),
y
-
(S,S,E)-5-metil-4-(2-yodobenzoilamino)-2-heptenoato
de metilo (6),
y cualquiera de sus isómeros.
La síntesis de los compuestos de fórmula general
I y II de la presente invención se ha llevado a cabo por métodos
habituales en síntesis orgánica los cuales son conocidos por los
expertos en la técnica, (Chemical Approaches to the Synthesis of
Peptides and Proteins, CRC Press, Boca Ratón, 1997;
Comprehensive Organic Synthesis, Pergamon Press, 1991,
Synlett 2000, 509; Adv. Synth. Catal.
2001, 343, 360; Topics Current Chemistry
1999, 204, 127; Bull. Soc. Chim. Belg.
1978, 87, 229). Como ejemplo ilustrativo, aunque no
limitante, los compuestos descritos en esta patente se han preparado
a partir del isómero correspondiente del ácido
(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetico
(III) o del isómero correspondiente del ácido
(3-sec-butil-1-tioxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetico
(IV). La síntesis de los compuestos III y IV se indica a
continuación usando como intermedios los compuestos, que también
son objeto de la presente invención
- cualquier isómero de
(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de metilo (A),
- cualquier isómero de
5-metil-4-(2-yodobenzoilamino)-2-heptenoato
de metilo (B),
- cualquier isómero de
N-[(1-hidroximetil-2-metil)-butil]-2-yodo-benzamida
(C),
y
- cualquier isómero de
3-metil-2-(2-yodobenzoilamino)-pentanoato
de metilo (D).
Debido a que la funcionalidad principal presente
en los compuestos I y II (como indicado por los sustituyentes
R^{1}, R^{2}, y R^{3}) es la amida o éster, la reacción
esencial en la preparación de los compuestos de los tipos I y II es
una reacción de acilación entre un ácido o derivado de ácido, como
electrófilo, y una amina o alcohol, como nucleófilo. La estrategia
sintética de los compuestos de fórmula I o II depende de la
estructura de los grupos R^{1}, R^{2}, y R^{3}, así como de si
estos grupos son iguales o diferentes. Un tipo especial de
compuestos de tipo I y II, objeto de la presente invención, son del
tipo V, en los que existen cadenas de aminoácido, péptido, y
compuesto relacionados, unidas al fragmento de isoquinolina a través
de un grupo acetilmetiliden. Estos compuestos se preparan por
transformaciones habituales en síntesis orgánica y que son
conocidas por los expertos en la técnica, usando los derivados
adecuados de aminoácido, péptido, y compuestos relacionados.
Los alcoholes, aminas, aminoácidos, péptidos, y
derivados de ellos usados en la síntesis de los compuestos de
fórmula I ó II son comerciales o se preparan por métodos habituales
en síntesis orgánica. En algunos casos, especialmente con
aminoácidos no naturales de la serie D-, y compuestos
relacionados, se han aplicado métodos biocatalíticos usando la
enzima acilasa como biocatalizador (Tetrahedron: Asymmetry
1998, 9, 1951-1965).
Cuando en la síntesis de los compuestos I ó II
se han usado péptidos como nucleófilos o electrófilos, su síntesis
se ha realizado por métodos habituales en química de aminoácidos y
péptidos. Se han usado los grupos terc-butoxicarbonil (Boc),
benciloxicarbonil (Cbz) y fluorenilmetoxicarbonil (Fmoc) como
protección de los grupos amino; los grupos carboxilo se han
protegido como ésteres alifáticos (metílico, etílico o bencílico).
La reacción de acoplamiento para la síntesis de estos péptidos
usados como nucleófilos se ha realizado usando metodologías
habituales: o por activación del grupo carbonilo como cloruro de
ácido, o por formación de ésteres activos (por ejemplo de
pentafluorofenilo), o a través del anhídrido mixto, o por la
activación "in situ" del grupo carbonilo (por
tratamiento del ácido con una combinación de carbodiimida y
1-hidroxibenzotriazol o métodos relacionados)
(Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and
Proteins, CRC Press, Boca Ratón, 1997).
Una característica esencial de los compuestos de
la presente invención es que son inhibidores de calpaina. Existen
diversas isoformas de calpaina, las cuales son muy parecidas
estructuralmente y, por lo que es conocido, comparten el mismo
mecanismo de acción. Las dos más abundantes son la
micro-calpaina (o calpaina I) y la
mili-calpaina (o calpaina-II), las
cuales se diferencian en ensayos in vitro, en la
concentración de Ca^{2+} necesaria para su activación. Como las
dos isoformas de la enzima son muy similares, se ha encontrado en
muchos ejemplos de la bibliografía que los inhibidores de calpaina
lo son de ambas isoenzimas (Adv. Synth. Catal. 2002,
344, 855). De esta forma, en la presente invención cuando
mencionemos a la calpaina, hacemos referencia a las dos isoformas
(o isoenzimas) que están incluidas en la definición de calpaína.
Por lo tanto, otro objeto de la presente invención es el uso de un
compuesto de fórmula I ó II como inhibidor de calpaína.
La capacidad de inhibición de calpaina se ha
cuantificado por el valor de IC_{50}, que se define como la
concentración de inhibidor que reduce a la mitad la actividad
catalítica de una enzima. Cuanto más bajo sea el valor de IC_{50},
más potente es el inhibidor. Resultados de inhibición de calpaina I
(la más relevante desde un punto de vista fisiológico) de algunos
compuestos de la presente invención se indican en la tabla 1 y en
la figura 1. Dado que la calpaina II, también denominada
mili-calpaina, necesita más cantidad de Ca^{2+}
para la activación, posiblemente no tenga un papel fisiológico tan
relevante; pues dicha concentración de Ca^{2+} causaría la muerte
celular antes de que se pudiera activar la
mili-calpaina. Por esta razón, los ensayos de
inhibición se han realizado para calpaina I, pero son extrapolables
para calpaina II.
| Compuestos | IC_{50} |
| 7 | 25 nM |
| 11 | 124 \muM |
| 12 | 85 \muM |
| 13 | 59 \muM |
| 14 | 5 \muM |
| 15 | 140 \muM |
| 16 | 130 \muM |
| 17 | 86 nM |
| 18 | 742 nM |
| 19 | 100 \muM |
| 20 | 48 \muM |
| 21 | 5 \muM |
| 22 | 17 \muM |
| 23 | 7 \muM |
| 24 | 50 \muM |
| 25 | 447 nM |
| 26 | 159 nM |
| 27 | 626 nM |
| 28 | 38 \muM |
Algunos de los compuestos representados en la
figura 1 son inhibidores muy potentes de calpaina y pueden ser
útiles en el diseño de compuestos con aplicaciones terapéuticas.
Debido a que se ha encontrado que la sobreactivación de la calpaina
está implicada en numerosas enfermedades degenerativas, un objeto
adicional de la presente invención es el uso de un compuesto de
fórmula I ó II para el tratamiento o prevención de enfermedades
degenerativas así como para preparar un medicamento para el
tratamiento preventivo o terapéutico de una enfermedad degenerativa,
y en especial cuando la enfermedad degenerativa está seleccionada
entre isquemia cerebral, isquemia cardíaca, ictus cerebral,
Alzheimer, Parkinson, Hungtinton, distrofia muscular, cataratas y
enfermedades desmielinizantes, y en especial si la enfermedad
desmielinizante es la esclerosis múltiple (Pathophysiology
1999, 6, 91; Brain Res. Rev. 2003,
42, 169).
La figura 1 muestra resultados del estudio de
los derivados del ácido
(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acético
del ácido
(3-sec-butil-1-tioxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acético,
objetos de la presente invención y su actividad biológica como
inhibidores de calpaína I.
Como ejemplos ilustrativos, aunque no
limitantes, se indican los procedimientos experimentales, datos
espectroscópicos y analíticos de algunos derivados de isoquinolina
de fórmulas I o II, así como ensayos de la actividad biológica de
los mismos.
A una disolución de hidrocloruro del éster
metílico de L-isoleucina (13'07 g, 72'0 mmol) en
THF (300 mL) y H_{2}O (300 mL) se añadió K_{2}CO_{3} (39'80 g,
288 mmol). La mezcla se enfrió a 0°C y tras 5 minutos de agitación
se añadió cloruro de 2-yodobenzoílo (19'18 g, 72'0
mmol). La mezcla se agitó a 0°C durante 30 minutos y posteriormente
se dejó que alcanzase temperatura ambiente lentamente durante toda
la noche. Se eliminó el THF y la fase acuosa se extrajo con AcOEt
(3 \times 50 mL). Las fases orgánicas se lavaron con salmuera y
se secaron sobre MgSO_{4}. Una vez eliminado a vacío el
disolvente se obtuvo el producto bruto, que se purificó por
recristalización de AcOEt/hexano para dar 4 (16'7 g; 62%). Sólido
blanco.
P.f.: 67-70°C.
[\alpha]_{D} = +9'2 (c = 1'0,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3436, 3294, 2964, 1743, 1644,
1585, 1525, 1463, 1201, 1015 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 7'87 (m, 1 H,
H-C(3')); 7'41 (m, 2 H,
H-C(5'), H-C(6'));
7'11 (m, 1 H, H-C(4')); 6'33 (d
ancho, J = 8'1, 1 H, NH); 4'83 (dd, J = 8'1, 4'6, 1 H,
H-C(2)); 3'78 (s, 3 H, CO_{2}Me);
2'06 (m, 1 H, H-C(3)); 1'52 (m,
1 H, H_{a}-C(4)); 1'29 (m, 1 H,
H_{b}-C(4)); 1'03 (d, J = 6'8, 3 H,
Me-C(3)); 0'97 (t, J = 7'6, 3 H,
H-C(5)) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 171'9 (CO_{2}Me); 168'7 (CONH); 141'7
(C(1')); 139'9 (C(3')); 131'2 (C(4')); 128'3,
128'0 (C(5'), C(6')); 92'2 (C(2')); 56'7
(C(2)); 52'1 (CO_{2}Me); 38'0 (C(3)); 25'2
(C(4)); 15'6 (Me-C(3)); 11'6 (C(5))
ppm.
EM-ES(ES^{+}) m/e: 376
([M + H]^{+}), 398 ([M + Na]^{+}),
773 ([2M + H]^{+}).
| AE: Calculado para C_{14}H_{18}INO_{3}: | C 44'82, H 4'84, N 3'73. |
| Encontrado: | C 45'12, H 5'10, N 4'00. |
A una disolución de 4 (8'44 g, 22'5 mmol) en THF
(50 mL) a -10ºC se añadió LiBH_{4} (1'47 g, 67'5 mmol).
Seguidamente se añadió lentamente MeOH (5 mL), la mezcla se agitó a
-10ºC durante 10 minutos y a continuación se dejó alcanzar la
temperatura ambiente. Posteriormente se añadió H_{2}O, se eliminó
el THF a vacío y la fase acuosa se extrajo con AcOEt (3 \times 50
mL). Las fases orgánicas se lavaron con salmuera y se secaron sobre
MgSO_{4}. Una vez eliminado a vacío el disolvente se obtuvo el
producto crudo, el cual se purificó por cromatografía en columna
usando como eluyente hexano/AcOEt (1:1 a 1:9) y luego AcOEt,
obteniéndose 5 (6'6 g, 85% rto). Sólido blanco.
P.f.: 125-126ºC.
[\alpha]_{D} = -27'8 (c = 1'0,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3410, 3295, 1628, 1544, 1076
cm^{-1}.
^{1}H-RMN (400 MHz,
CDCl_{3}, mezcla de confórmeros M y m, 4:1) \delta: 7'81
(m, 0'7 H, H-C(3'), M); 7'72
(m, 0'3 H, H-C(3'), m);
7'50-7'31 (m, 2 H,
H-C(5'), H-C(6'), M +
m); 7'10-7'04 (m, 1 H,
H-C(4'), M + m); 6'42 (d, J = 8'1, 0'2
H, NH, m); 6'06 (d ancho, J = 8'1, 0'8 H, NH, M);
3'99-3'85 (m, 1 H,
H-C(2), M + m); 3'85-3'72
(m, 2 H, H-C(1), M + m); 2'88 (t
ancho, J = 5'4, 0'2 H, OH, m); 2'62 (t ancho, J = 5'4,
0'8 H, OH, M); 1'80-1'50 (m, 2 H,
H-C(4), M + m); 1'28-1'14
(m, 1 H, H-C(3), M + m); 0'97 (d,
J = 6'8, 3 H, Me-C(3)); 0'92 (t, J = 7'5, 3
H, H-C(5)) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 170'0 (CONH); 142'4 (C(1')); 139'7
(C(3')); 131'1 (C(4')); 128'5, 128'1 (C(5'),
C(6')); 92'3 (C(2')); 36'2 (C(1)); 56'4
(C(2)); 35'5 (C(3)); 25'6 (C(4)); 15'6
(Me-C(3)); 11'3 (C(5)) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 348 ([M +
H]^{+}), 370 ([M + Na]^{+}), 717
([2M + Na]^{+}).
| AE: Calculado para C_{13}H_{18}INO_{2}: | C 44'97, H 5'23, N 4'03. |
| Encontrado: | C 45'11, H 5'26, N 4'18. |
A una disolución comercial de cloruro de oxalilo
2M en CH_{2}Cl_{2} anhidro (10'33 mL, 20'8 mmol) diluida con el
mismo disolvente (12 mL) a -78ºC se añadió gota a gota una
disolución de DMSO anhidro (2'9 mL, 41'0 mmol) en CH_{2}Cl_{2}
anhidro (30 mL). La mezcla se agitó durante 30 minutos a -78ºC tras
los cuales se añadió una disolución del alcohol 5 (4'44 g, 12'8
mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (25 mL) gota a gota vía cánula. La
mezcla se agitó durante 1 hora a -78ºC y a continuación se añadió
Et_{3}N (10'26 mL, 74'0 mmol) gota a gota. Después de
aproximadamente 1 hora de agitación a -78ºC, cuando la oxidación
del aldehído fue completa (ccf), se añadió Ph_{3}P=CHCO_{2}Me
(6'0 g, 19'0 mmol) dejando que la reacción alcanzase lentamente
temperatura ambiente durante toda la noche. Por último, se eliminó
el disolvente a vacío obteniéndose un producto bruto que se
purificó por cromatografía en columna usando como eluyente
hexano/AcOEt (4:1 a 1:1) proporcionando de este modo el isómero
E del N-benzoilamino éster insaturado 6 (4'1 g, 80%
rto). Sólido blanco.
P.f.: 124-125ºC.
[\alpha]_{D} = +1'7 (c = 1'0,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3347, 3275, 2958, 1721, 1640,
1531 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 7'85 (d, J = 7'8, 1 H,
H-C(3')); 7'37 (m, 2 H,
H-C(5'), H-C(6'));
7'10 (m, 1 H, H-C(4')); 6'92 (dd,
J = 15'8, 5'9, 1 H, H-C(3)); 6'05 (dd,
J = 15'8, 1'7, 1 H, H-C(2)); 5'93 (d
ancho, J = 8'8, 1 H, NH); 4'79 (m, 1 H,
H-C(4)); 3'72 (s, 3 H, CO_{2}Me);
1'79 (m, 1 H, H-C(5)); 1'54 (m,
1 H, H_{a}-C(6)); 1'22 (m, 1 H,
H_{b}-C(6)); 0'97 (m, 6 H,
Me-C(5), H-C(7)) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 168'7 (CONH); 166'5 (CO_{2}Me); 145'9
(C(3)); 142'0 (C(1')); 139'9 (C(3')); 131'2
(C(4')); 128'3, 128'2 (C(5'), C(6')); 122'0
(C(2)); 92'1 (C(2')); 54'8 (C(4)); 51'7
(CO_{2}Me); 38'7 (C(5)); 25'4 (C(6)); 15'4
(Me-C(5)), 11'6 (C(7)) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 402 ([M +
H]^{+}), 424 ([M + Na]^{+}), 803
([2M + H]^{+}), 825 ([2M +
Na]^{+}).
| AE: Calculado para C_{16}H_{20}INO_{3}: | C 47'89, H 5'02, N 3'49. |
| Encontrado: | C 48'11, H 5'13, N 3'61. |
Una mezcla del éster 6 (4'17 g, 10'4 mmol),
Pd(OAc)_{2} (80 mg, 0'035 mmol), Ph_{3}P (288 mg,
1'08 mmol) y Et_{3}N (3'2 mL, 20'6 mmol) en CH_{3}CN anhidro
(250 mL) se refluyó durante 3 días bajo argón con agitación
vigorosa. A continuación la mezcla se dejó alcanzar la temperatura
ambiente y tras posterior adición de H_{2}O (250 mL), se extrajo
con CHCl_{3} (3 \times 50 mL). Las fases orgánicas se lavaron
con salmuera y se secaron sobre MgSO_{4}. Una vez eliminado a
vacío el disolvente se obtuvo el producto bruto, que se purificó
por cromatografía en columna usando como eluyente hexano/AcOEt (4:1
a 2:3) para dar el compuesto 7 (2'4 g, 85% rto). Sólido amorfo
blanco.
[\alpha]_{D} = -365'8 (c = 0'5,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3434, 1715, 1669, 1568, 1195,
1167, 774 cm ^{-1}.
^{1}H-RMN (500 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'13 (m, 1 H;
H-C(8')); 7'57 (m, 3 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7')); 6'60 (d ancho, J = 3'4, 1 H,
NH); 6'34 (s, 1 H, H-C(2)); 5'45
(m, 1 H, H-C(3')); 3'77 (s, 3
H, CO_{2}Me); 1'61 (m, 1 H,
H-C(1'')); 1'45 (m, 1 H, H_{a}
C(2'')); 1'15 (m, 1 H,
H_{b}-C(2'')); 0'87 (d, J = 6'8, 3
H, Me-C(1'')); 0'81 (t, J = 7'6, 3 H,
H-C((3'')) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 165'4 (CONH); 164'0 (CO_{2}Me); 150'7
(C(4')); 135'3 (C(4a')); 132'7, 130'5 (C(5') o
C(6') o C(7')); 128'4 (C(8a'); 127'9
(C(8')); 123'8 (C(5') o C(6') o C(7'));
116'4 (C(2)); 55'8 (C(3')); 51'5 (CO_{2}Me);
41'5 C(1'')); 24'4 (C(2'')); 15'1
(Me-C(1')); 11'0 (C(3'') ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 274 ([M +
H]^{+}), 296 ([M + Na]^{+}), 547
([2M + H]^{+}), 569 ([2M +
Na]^{+}).
| AE: Calculado para C_{16}H_{19}NO_{3}: | C 70'31, H 7'01, N 5'12. |
| Encontrado: | C 70'15, H 7'02, N 5'04. |
A una disolución de 7 (273 mg, 1'0 mmol) en una
mezcla 1:1 de THF-H_{2}O (10 mL) a temperatura
ambiente se añadió una solución de LiOH (83'9 mg, 2'0 mmol) en
H_{2}O (2 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante
toda la noche, y a continuación se acidificó con HCl 5% hasta pH =
2. Se eliminó el THF a vacío y la fase acuosa se extrajo con AcOEt
(3 \times 50 mL). Las fases orgánicas se lavaron con salmuera y se
secaron sobre MgSO_{4}. Una vez eliminado a vacío el disolvente
se obtuvo el producto bruto, que se purificó por recristalización
de AcOEt/hexano para dar el ácido 8 (140 mg, 54% rto) como un
sólido blanco.
P.f.: 215-216ºC (con
reblandecimiento previo).
[\alpha]_{D} = -333'8 (c = 0'49,
DMF).
IR (KBr) \nu: 3435, 2966, 1674, 1306
cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 12'64 (s ancho, 1 H,
CO_{2}H); 8'60 (d, J = 4'9, 1 H, NH); 7'91 (dd, J =
7'3, 1'5, 1 H, H-C(8')); 7'75 (dd, J =
7'9, 1'3, 1 H, H-C(5'));
7'64-7'53 (m, 2 H,
H-C(6'), H-C(7'));
6'36 (s, 1 H, H-C(2)); 5'24 (dd,
J = 7'7, 4'9, 1 H, H-C(3')); 1'47
(m, 1 H, H_{a}-C(2'')); 1'45
(m, 1 H, H-C(1'')); 1'16 (m, 1
H, H_{b}-C(2'')); 0'74 (m, 6 H,
Me-C(1''), H-C(3'')) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 166'7 (CONH); 162'5 (CO_{2}H);
149'1 (C(4')); 135'1 (C(4a')); 132'6, 130'3
(C(6'), C(7')); 128'7 (C(8a')); 127'0
(C(8')); 124'4 (C(5')); 117'6 (C(2)); 53'9
(C(3')); 41'2 (C(1'')); 24'3 (C(2'')); 15'0,
10'9 (Me-C(1''), C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 260 ([M +
H]^{+}), 282 ([M + Na]^{+}), 519
([2M + H]^{+}), 541 ([2M +
Na]^{+}).
| AE: Calculado para C_{15}H_{17}NO_{3}: | C 69'48, H 6'61, N 5'40. |
| Encontrado: | C 69'25, H 7'00, N 5'41. |
A una suspensión del ácido 8 (100 mg, 0'38 mmol)
en CH_{2}Cl_{2} anhidro (2'5 mL) a 0ºC se la añadió gota a gota
SOCl_{2} (0'28 mL, 3'8 mmol), la mezcla se agitó hasta
temperatura ambiente y a continuación se calentó a reflujo durante
aproximadamente 1 h. Seguidamente se eliminó el disolvente a
presión reducida obteniéndose un aceite que se disolvió en
CH_{2}C_{12} anhidro (2'5 mL), al que se añadió bajo argón el
alcohol correspondiente (0'76 mmol para los monoalcoholes y 0'15
mmol para los dioles) disuelto en CH_{2}Cl_{2} anhidro (2'5
mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 1
hora. A continuación se diluyó la reacción con CH_{2}Cl_{2} (50
mL) y se extrajo con una disolución acuosa saturada de NaHCO_{3}
(3 \times 50 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó
sobre MgSO_{4}. Una vez eliminado a vacío el disolvente se obtuvo
el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna
usando como eluyente hexano/AcOEt (4:1 a 1:1). Los rendimientos
indicados a continuación se refieren al conjunto de las dos etapas
(formación del cloruro de ácido y síntesis de los ésteres).
Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo
el compuesto 9 como un aceite incoloro (81 mg, 71% rto).
[\alpha]_{D} = -341'8 (c = 0'25,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3429, 2968, 2876, 1708, 1672,
1372, 1181, 1107, 775 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (400 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'09 (m, 1 H; H-C(8'));
7'55 (m, 3 H, H-C(5'),
H-C(6'), H-C(7'));
6'97 (s ancho, 1 H, NH); 6'28 (s, 1 H,
H-C(2)); 5'44 (dd, J = 4'5, 2'4, 1 H,
H-C(3')); 5'07 (sep,J = 6'2 1 H,
CHMe_{2}); 1'58 (m, 1 H,
H-C(1'')); 1'43 (m, 1 H,
H_{a}-C(2'')); 1'28 (d, J = 6'2, 3
H, CO_{2}CHMe_{2}); 1'26 (d, J = 6'2, 3 H,
CO_{2}CHMe_{2}); 1'15 (m, 1 H,
H_{b}-C(2'')); 0'86 (d, J = 6'8, 3
H, Me-C(1'')); 0'78 (t, J = 7'4, 3 H,
H-C((3'')) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 165'0 (CONH); 164'0
(CO_{2}CHMe_{2}); 149'8 (C(4')); 135'5
(C(4a')); 132'6, 130'4 (C(5') ó C(6') ó
C(7')); 128'4 (C(8a')); 127'9 (C(8')); 123'8
(C(5') o C(6') o C(7')); 117'5 (C(2));
67'8 (CO_{2}CHMe_{2}); 55'8 (C(3')); 41'5
(C(1'')); 24'4 (C(2'')); 21'9
(CO_{2}CHMe_{2}); 15'1 (Me-C(1')); 11'0
(C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 302 ([M +
H]^{+}), 324 ([M + Na]^{+}), 603
([2M + H]^{+}), 625 ([2M + H +
Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo
el compuesto 10 como un aceite un sólido blanco (82 mg, 69%
rto).
P.f.: 110-112ºC.
[\alpha]_{D} = -316'6 (c = 0'5,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu 3467, 3311, 2927, 1707, 1667,
1599, 1186, 770 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'14 (m, 1 H;
H-C(8')); 7'59 (m, 3 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7')); 6'48 (s ancho, 1 H, NH);
6'35 (s, 1 H, H-C(2)); 5'46 (dd,
J = 6'8, 3'4, 1 H, H-C(3')); 4'18 (t,
J 6'7, 2 H, CO_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{3});
1'73-1'59 (m, 3 H,
H-C(1''),
CO_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{3});
1'50-1'42 (m, 3 H, H_{a} C(2''),
CO_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{3}); 1'18 (m, 1
H, H_{b}-C(2'')); 0'96 (t, J = 7'4,
CO_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{3}); 0'88 (d, J
= 6'8, 3 H, Me-C(1'')); 0'82 (t, J = 7'3, 3 H,
H-C((3'')) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 165'6 (CONH); 164'7
(CO_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{3}); 150'2
(C(4')); 135'5 (C(4a')); 132'8, 130'5 (C(5') ó
C(6') ó C(7')); 128'1 (C(8a')); 126'9
(C(8')); 123'9 (C(5') ó C(6') ó C(7'));
117'0 (C(2)); 64'4
(CO_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{3}); 55'9
(C(3')); 41'5 (C(1'')); 39'6
(CO_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{3}); 24'4
(C(2'')); 19'2
(CO_{2}CH_{2}CH_{2}
CH_{2}CH_{3}); 15'1 (Me-C(1')); 13'7 (CO_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{3}); 11'0 (C(3'')) ppm.
CH_{2}CH_{3}); 15'1 (Me-C(1')); 13'7 (CO_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{3}); 11'0 (C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 316 ([M +
H]^{+}), 338 ([M + Na]^{+}), 631
([2M + H]^{+}), 653 ([2M +
Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo
el compuesto 11 como un sólido blanco (69 mg, 50% rto).
P.f.: 53-54ºC.
[\alpha]_{D} = -178'5 (c = 0'005,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3435, 2927, 1710, 1669, 1159,
1028, 767, 695 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'14 (m, 1 H;
H-C(8')); 7'56 (m, 3 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7')); 7'39 (m, 5 H,
CO_{2}CH_{2}Ph); 6'86 (d ancho, J = 4'3, 1 H, NH);
6'40 (s, 1 H, H-C(2)); 5'46 (dd,
J = 7'1, 4'3, 1 H, H-C(3')); 5'22
(s, 2 H, CO_{2}CH_{2}Ph); 1'61 (m, 1 H,
H-C(1'')); 1'44 (m, 1 H,
H_{a}-C(2'')); 1'14 (m, 1 H,
H_{b}-C(2'')); 0'87 (d, J = 6'8, 3
H, Me-C(1'')); 0'81 (t, J = 7'3, 3 H,
H-C((3'')) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 165'2 (CONH); 163'8
(CO_{2}CH_{2}Ph); 150'9 (C(4')); 135'6
(C(4a')); 135'4 (C(Ph)); 132'7, 130'6 (C(5') o
C(6') o C(7')); 128'6, 128'5, 128'4, 128'3, 128'1 (7
C, C(8'), C(8a'), C(Ph)); 123'9 (C(5') o
C(6') o C(7')); 116'5 (C(2)); 66'3
(CO_{2}CH_{2}Ph); 55'9 (C(3')); 41'5
(C(1'')); 24'4 (C(2'')); 15'1
(Me-C(1')); 11'1 (C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 350 ([M +
H]^{+}), 372 ([M + Na]^{+}), 699
([2M + H]^{+}), 721 ([2M +
Na]^{+}.
Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo
el compuesto 12 como un sólido blanco (35 mg, 41% rto).
P.f.: 79-81ºC.
[\alpha]_{D} = -404'2 (c = 0'12,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3429, 2964, 2927, 1714, 1671,
1273, 1157, 773 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'14 (m, 2 H;
H-C(8')); 7'56 (m, 6 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7')); 6'67 (d ancho, J = 4'6, 2 H,
NH); 6'34 (s, 2 H, H-C(2)); 5'84
(t, J = 4'1, 2 H, CH=CH); 5'46 (dd, J =
7'1, 4'6, 2 H, H-C(3')); 4'81 (t, J =
4'1, 4 H, CO_{2}CH_{2}CH=CHCH_{2}CO_{2}); 1'59
(m, 2 H, H-C(1'')); 1'44 (m, 2
H, H_{a}-C(2'')); 1'16 (m, 2 H,
H_{b}-C(2'')); 0'87 (d, J = 6'8, 6
H, Me-C(1'')); 0'80 (t, J = 7'4, 6 H,
H-C((3'')) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 165'1 (CONH); 163'8
(CO_{2}CH_{2}CH=CHCH_{2}CO_{2}); 151'2
(C(4')); 135'3 (C(4a')); 132'8, 130'7 (C(5') o
C(6') o C(7')); 128'4, 128'2, 128'1 (C(8'),
C(8a'), C(CH=CH)); 123'8 (C(5') o C(6')
o C(7')); 116'2 (C(2)); 59'9
(CO_{2}CH_{2}CH=CHCH_{2}CO_{2}); 55'9
(C(3')); 41'5 (C(1'')); 24'5 (C(2'')); 15'1
(Me-C(1')); 11'0 (C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 571 ([M +
H]^{+}), 593 ([M + Na]^{+}), 1141
([2M + H]^{+}), 1163 ([2M +
Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo
el compuesto 13 como un sólido blanco (44 mg, 52% rto).
P.f.: 85-87ºC.
[\alpha]_{D} = -447'2 (c = 0'14,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3434, 2963, 2927, 1718, 1669,
1378, 1273, 1152, 771 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'12 (m, 2 H;
H-C(8')); 7'55 (m, 6 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7')); 6'67 (d ancho, J = 4'5, 2 H,
NH); 6'35 (s, 2 H, H-C(2)); 5'41
(dd, J = 7'3, 4'5, 2 H, H-C(3')); 4'82
(s, 4 H,
CO_{2}CH_{2}C\equivCCH_{2}CO_{2}); 1'59
(m, 2 H, H-C(1 '')); 1'42 (m, 2
H, H_{a}-C(2'')); 1'15 (m, 2 H,
H_{b}-C(2'')); 0'85 (d, J = 6'8, 6
H, Me-C(1'')); 0'77 (t, J = 7'3, 6 H,
H-C((3'')) ppm.
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 164'5 (CONH); 163'7
(CO_{2}CH_{2}C\equivCCH_{2}CO_{2}); 152'1
(C(4')); 135'1 (C(4a')); 132'8, 130'9 (C(5') o
C(6') o C(7')); 128'4 (C(8a')); 128'1
(C(8')); 123'9 (C(5') o C(6') o C(7'));
115'6 (C(2)); 80'8
(CO_{2}CH_{2}C\equivCCH_{2}CO_{2}); 56'1
(C(3')); 52'1
(CO_{2}CH_{2}CCH_{2}CO_{2}); 41'6
(C(1'')); 24'4 (C(2'')); 15'1
(Me-C(1')); 11'1 (C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 569 ([M +
H]^{+}), 591 ([M + Na]^{+}), 1137
([2M + H]^{+}), 1159 ([2M +
Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo
el compuesto 14 como un sólido blanco (25 mg, 27% rto).
P.f.: 213-215ºC.
[\alpha]_{D} = -391'0 (c = 0'22,
CH_{2}Cl_{2}).
IR (KBr) \nu: 3422, 2927, 1712, 1671, 1379,
1275, 1158, 775 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'14 (m, 2 H;
H-C(8')); 7'57 (m, 6 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7')); 7'43 (s, 4 H,
CO_{2}CH_{2}PhCH_{2}CO_{2}); 6'40 (s, 2 H,
H-C(2)); 6'25 (d ancho, J = 4'7, 2 H,
NH); 5'45 (dd, J = 7'1, 4'7, 2 H,
H-C(3')); 5'23 (s, 2 H,
CO_{2}CH_{2}PhCH_{2}CO_{2}); 5'22 (s, 2 H,
CO_{2}CH_{2}PhCH_{2}CO_{2}); 1'61 (m, 2 H,
H-C(1'')); 1'44 (m, 2 H,
H_{a}-C(2'')); 1'17 (m, 2 H,
H_{b}-C(2'')); 0'87 (d, J = 6'8, 6
H, Me-C(1'')); 0'81 (t, J = 7'3, 6 H,
H-C((3'')) ppm.
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 165'1 (CONH); 163'9
(CO_{2}CH_{2}PhCH_{2}CO_{2}); 151'3
(C(4')); 135'9 (C(Ph)); 135'3 (C(4a')); 132'7,
130'6 (C(5') o C(6') o C(7')); 128'5 (6 C,
C(8a'), C(Ph)); 128'0 (C(8')); 123'8
(C(5') o C(6') o C(7')); 116'3 (C(2));
65'8 (CO_{2}CH_{2}PhCH_{2}CO_{2}); 55'9
(C(3')); 41'5 (C(1'')); 24'4 (C(2'')); 15'1
(Me-C(1')); 11'0 (C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 621 ([M +
H]^{+}), 623 ([M + Na]^{+}), 1241
([2M + H]^{+}), 1264 ([2M + H +
Na]^{+}).
A una suspensión del ácido 8 (100 mg, 0'38 mmol)
en CH_{2}Cl_{2} anhidro (2'5 mL) a 0ºC se la añadió gota a gota
SOCl_{2} (0'28 mL, 3'8 mmol), la mezcla se agitó hasta
temperatura ambiente y a continuación se calentó a reflujo durante
aproximadamente 1 h. Seguidamente se eliminó el disolvente a
presión reducida obteniéndose un aceite oscuro que se disolvió en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (2'5 mL), al que se añadió bajo argón la
amina correspondiente (0'57 mmol de mono-amina ó
0'17 mmol de di-amina) disuelta en CH_{2}Cl_{2}
anhidro (2'5 mL). Seguidamente se añadió Et_{3}N (0'1 mL, 0'76
mmol) y se dejó agitando a temperatura ambiente durante toda la
noche. A continuación se diluyó la reacción con CH_{2}Cl_{2}
(50 mL) y se extrajo secuencialmente con una disolución acuosa de
HCl 5% (3 \times 50 mL) y disolución acuosa saturada de
NaHCO_{3} (3 \times 50 mL). La fase orgánica se lavó con
salmuera y se secó sobre MgSO_{4}. Una vez eliminado a vacío el
disolvente se obtuvo el producto bruto, que se purificó por
cromatografía en columna usando como eluyente hexano/AcOEt (7:3 a
1:1).
Siguiendo el Procedimiento General II, se obtuvo
el compuesto 15 como un sólido blanco (119 mg, 90% rto).
P.f.: 90-94ºC.
[\alpha]_{D} = -315'1 (c = 0'25,
CH_{3}OH).
IR (KBr) \nu: 3435, 2963, 2927, 1651, 1523,
1450 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'10 (m, 1 H;
H-C(8')); 7'49 (m, 3 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7')); 7'32 (m, 5 H,
CONHCH_{2}Ph); 6'20 (d ancho, J = 4'5, 1 H, NH);
6'17 (s, 1 H, H-C(2)); 6'02 (m,
1 H, CONHCH_{2}Ph); 5'65 (dd, J = 7'3, 4'5, 2 H,
H-C(3')); 4'53 (m, 2 H,
CONHCH_{2}Ph); 1'63 (m, 1 H,
H-C(1'')); 1'45 (m, 1 H,
H_{a}-C(2'')); 1'19 (m, 1 H,
H_{b}-C(2'')); 0'89 (d, J = 6'8, 3
H, Me-C(1'')); 0'81 (t, J = 7'3, 3 H,
H-C((3'')) ppm.
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 164'7 (CONHCH_{2}Ph); 163'9 (CONH);
147'1 (C(4a')); 137'9 (C(4')); 135'9 (C(Ph));
132'7, 129'9 (C(5') o C(6') o C(7')); 128'8,
128'4, 127'9, 127'7 (7 C, C(8'), C(8a'),
C(Ph)); 123'5 (C(5') o C(6') o C(7'));
119'2 (C(2)); 55'6 (C(3')); 43'7
(CONHCH_{2}Ph); 41'3 (C(1'')); 24'6 (C(2''));
15'2 (Me-C(1')); 11'1 (C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 349 ([M +
H]^{+}), 371 ([M + Na]^{+}), 697
([2M + H]^{+}), 719 ([2M +
Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General II, se obtuvo
el compuesto 16 como un sólido blanco (112 mg, 79% rto).
P.f.: 147-151ºC.
[\alpha]_{D} = -333'5 (c = 0'26,
CH_{3}OH).
IR (KBr) \nu: 3413, 3435, 2964, 2927, 1673,
1656, 1549, 1484, 1167, 688 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (500 MHz, 50ºC,
CDCl_{3}) \delta: 8'33 (s ancho, 1 H, CONHAr);
8'10 (m, 2 H; H-C(8'),
H-Ar); 7'98 (d, J = 7'3, 1 H,
H-Ar); 7'66 (d, J = 7'8, 1 H,
H-Ar); 7'46 (m, 4 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7'), H-Ar); 6'51 (s
ancho, 1 H, NH); 6'35 (s, 1 H,
H-C(2)); 5'60 (dd, J = 7'3, 4'8, 1 H,
H-C(3')); 2'57 (s, 3 H,
ArCOCH_{3}); 1'63 (m, 1 H,
H-C(1'')); 1'47 (m, 1 H,
H_{a}-C(2'')); 1'15 (m, 1 H,
H_{b}-C(2'')); 0'90 (d, J = 6'8, 3
H, Me-C(1'')); 0'80 (t, J = 7'3, 3 H,
H-C((3'')) ppm.
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 198'3 (ArCOCH_{3}); 164'5, 163'3
(CONH); 148'2 (C(4a')); 138'8 (C(4')); 135'9, 132'8,
130'2, 128'2, 127'8 (C(Ph), C(5') o C(6') o
C(7'), C(8')); 129'3 (C(8a')); 124'4, 123'9
(C(2), C(Ph)); 55'6 (C(3')); 41'3
(C(1'')); 29'7 (ArCOCH_{3}); 24'7 (C(2''));
15'2 (Me-C(1')); 11'2 (C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 377 ([M +
H]^{+}), 399 ([M + Na]^{+}), 753
([2M + H]^{+}), 775 ([2M +
Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General II, se obtuvo
el compuesto 17 como un sólido blanco (121 mg, 75% rto).
[\alpha]_{D} = -312'6 (c = 0'33,
CH_{3}OH).
IR (KBr) \nu: 3436, 1661, 1515, 1439, 1299,
1161, 749 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz, 30ºC,
CDCl_{3}, mezcla de conformeros M y m, 1:1) \delta: 8'24
(m, 2 H, H-Ar, M + m); 8'08 (m, 2 H;
H-C(8'), M + m); 8'00 (s ancho, 1 H,
CONHAr, M); 7'95 (s ancho, 1 H, CONHAr, m);
7'54-7'39 (m, 8 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7'), H-Ar, M + m);
7'29-7'22 (m, 6 H, H-Ar, M +
m); 7'19-7'09 (m, 2 H, H-Ar,
M + m); 6'92-6'82 (m, 4 H,
H-Ar, M + m); 6'38 (s ancho, 1 H, NH, M);
6'38 (s ancho, 1 H, NH, m); 6'10 (s, 1 H,
H-C(2), M); 6'06 (s, 1 H,
H-C(2), m); 5'59 (m, 1 H,
H-C(3'), M); 5'33 (m, 1 H,
H-C(3'), m); 3'97 (s, 2 H,
ArNH_{2}, M + m); 1'59 (m, 1 H,
H-C(1''), M + m); 1'41 (m, 1 H,
H_{a}-C(2''), M + m); 1'13 (m, 1 H,
H_{b}-C(2''), M + m); 0'85 (d, J =
4'2, 3 H, Me-C(1''), M); 0'83 (d, J = 4'2, 3 H,
Me-C(1''), m); 0'77 (t, J = 7'3, 3 H,
H-C((3'')) ppm.
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 9'32 (s ancho, 1 H,
CONHAr); 8'48 (d ancho, J = 4'6, 1 H, NH); 7'87
(m, 1 H, H-C(8')); 7'70 (m, 1
H, H-C(5')); 7'58 (m, 3 H,
H-C(6'), H-C(7'),
H-C(2)); 7'37 (m, 1 H,
H-Ar); 7'25 (m, 2 H, H-Ar);
7'06 (m, 1 H, H-Ar); 6'92 (m, 1 H,
H-Ar); 6'78 (m, 1 H, H-Ar);
6'64 (m, 1 H, H-Ar); 6'56 (m, 1 H,
H-Ar); 5'43 (m, 1 H,
H-C(3')); 4'63 (s, 2 H,
ArNH_{2}); 1'35 (m, 2 H,
H_{a}-C(2''),
H-C(1'')); 1'21 (m, 1 H,
H_{b}-C(2'')); 0'73 (m, 6 H,
Me-C(1''), H-C(3'')) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}, mezcla de conformeros M y m, 1:1) \delta: 163'9,
163'8, 163'2 (CONH, M + m); 147'5, 147'1, 150'9 137'8, 135'9,
132'7, 130'0, 128'8, 128'0, 127'9, 127'8 (19 C, (C(4'),
C(4a'), C(5'), C(6'), C(7'),
C(8'), C(8a'), C(Ph), M + m); 125'2, 125'1
(C(Ar), M + m); 123'8, 123'7 (C(5') o C(6') o
C(7'), M + m); 122'5, 122'3 (C(Ar), M + m); 120'3,
120'1, 119'7, 119'4 (C(2), C(Ar), M + m); 115'9
(C(Ar)); 55'9, 55'6 (C(3'), M + m); 41'4
(C(1'')); 24'6 (C(2'')); 15'2
(Me-C(1')); 11'2 (C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 426 ([M +
H]^{+}), 753 ([2M + H]^{+}), 851
([2M + H]^{+}), 874 ([2M + H +
Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General II, se obtuvo
el compuesto 18 como un sólido blanco (154 mg, 61% rto).
P.f.: 177-180ºC.
[\alpha]_{D} = -395'0 (c = 0'25,
CH_{3}OH).
IR (KBr) \nu: 3435, 2963, 1656, 1521, 1302,
1161, 753 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (500 MHz,
CDCl_{3}, mezcla de confórmeros M y m, 1:1) \delta: 8'10
(m, 2 H, CONH-Bif, M + m); 8'06 (m, 1 H;
H-C(8'), M); 8'01 (m, 1 H;
H-C(8'), m); 7'52-7'16
(m, 14 H; H-C(5'),
H-C(6'), H-C(7'),
H-Bif, M + m); 6'61 (d ancho, 1 H,
NH-L-Biq, M); 6'36 (d, J =
4'4, 1 H, NH-L-Biq, m); 6'07
(s, 1 H, H-C(2), M); 6'02 (s, 1
H, H-C(2), m); 5'55 (m, 1 H,
H-C(3'), M); 5'37 (m, 1 H,
H-C(3'), m); 1'61-1'52
(m, 1 H, H-C(1''), M + m); 1'38
(m, 1 H, H_{a}-C(2''), M + m); 1'12
(m, 1 H, H_{b}-C(2''), M + m);
0'86-0'71 (m, 12 H, Me-C(1''),
H-C(3''), M + m) ppm. [El acrónimo Biq se usa
para el radical acilo derivado de la isoquinolina y el acrónimo Bif
para el derivado del bifenilo].
EM (ES^{+}) m/e: 667 ([M +
H]^{+}), 689 ([M + Na]^{+}), 1356
([2M + H + Na]^{+}).
A una suspensión del
N-Fmoc-aminoácido correspondiente (0'31 mmol)
en CH_{2}Cl_{2} anhidro (2'0 mL) a 0ºC se la añadió gota a gota
SOCl_{2} (0'23 mL, 3'1 mmol), la mezcla se agitó hasta
temperatura ambiente y a continuación se calentó a reflujo durante
aproximadamente 1 h. Seguidamente se eliminó el disolvente a presión
reducida obteniéndose un sólido blanco que se disolvió en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (2'0 mL), al que se añadió bajo argón la
amina 17 (200 mg, 0'47 mmol) disuelta en CH_{2}Cl_{2} anhidro
(2'0 mL). Seguidamente se añadió Et_{3}N (80 \muL, 0'62 mmol) y
se dejó agitando a temperatura ambiente durante toda la noche. A
continuación se diluyó la reacción con CH_{2}Cl_{2} (50 mL) y
se extrajo secuencialmente con una disolución acuosa de NaHCO_{3}
(3 \times 50 mL) y disolución acuosa saturada de HCl 5% (3
\times 50 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó
sobre MgSO_{4}. Una vez eliminado a vacío el disolvente se obtuvo
el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna
usando como eluyente hexano/AcOEt (3:2 a 1:1).
Siguiendo el Procedimiento General III, el
compuesto 19 se obtuvo como un sólido blanco (172 mg, 73% rto).
P.f.: 133-135ºC.
[\alpha]_{D} = -188'0 (c = 0'25,
CH_{2}Cl_{2}).
IR (KBr): \nu: 3408, 2963, 1663, 1519, 1450,
1299, 1232, 758, 739 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz, 323 K,
CDCl_{3}, mezcla de confórmeros M y m, 1:1) \delta:
8'14-7'93 (m, 2 H, H-Ar, M +
m); 7'75-7'70 (m, 1 H; H-Ar,
M + m); 7'57-7'12 (m, 19 H,
H-Ar,
CONH-Bif-CONH, M + m); 6'18 (d,
J = 4'4, 0'5 H, NH-L-Biq, M);
6'12 (d, J = 4'4, 0'5 H,
NH-L-Biq, m); 6'03 (s, 0'5 H,
H-C(2), M); 5'98 (s, 0'5 H,
H-C(2), m); 5'45 (m, 0'5 H,
H-C(3'), M); 5'36 (m, 0'5 H,
H-C(3'), m); 5'04 (s ancho, 1 H,
NH-Fmoc, M + m); 4'42-4'26 (m, 2 H,
CH_{2}-Fmoc, M + m); 4'17-4'09
(m, 1 H,
CH_{\alpha}-L-Val, M + m);
3'87 (m, 0'5 H, CH-Fmoc, M); 3'81 (m, 0'5 H,
CH-Fmoc, m); 1'96 (m, 1 H,
CH_{\beta}-L-Val, M + m);
1'54 (m, 1 H, H-C(1''), M + m); 1'40
(m, 1 H, H_{a}-C(2''), M + m); 1'10
(m, 1 H, H_{b}-C(2''), M + m);
0'89-0'73 (m, 12 H, Me-C(1''),
H-C(3''), Me_{2} de
L-Val, M + m) ppm.
^{1}H-RMN (300 MHz, 353 K,
DMSO-d_{6}) \delta: 8'93 (s ancho, 1 H,
CONHBif); 8'75 (s ancho, 1 H, CONHBif);
8'14-6'94 (m, 22 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7'), H-C(8'),
H-Ar); 6'43 (s, 1 H,
H-C(2)); 5'34 (m, 1 H,
H-C(3')); 4'32-4'15
(m, 3 H, CH_{2}-Fmoc,
CH-Fmoc); 3'84 (m, 1 H,
CH_{\alpha}-L-Val); 1'91
(m, 1 H,
CH_{\beta}-L-Val); 1'38
(m, 2 H, H_{a}-C(2''),
H-C(1'')); 1'09 (m, 1 H,
H_{b}-C(2'')); 0'86-0'66
(m, 12 H, Me-C(1''),
H-C(3''), Me_{2} de
L-Val) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 747 ([M +
H]^{+}), 770 ([M + Na]^{+}), 1515
([2M + H + Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General III, el
compuesto 20 se obtuvo como un sólido blanco (109 mg, 45% rto).
P.f.: 108-110ºC.
[\alpha]_{D} = -181'0 (c = 0'23,
CH_{2}Cl_{2}).
IR (KBr): \nu: 3409, 2956, 1659, 1519, 1450,
1247, 1161, 1046, 758, 739 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz, 313 K,
CDCl_{3}, mezcla de confórmeros M y m, 1'5:1) \delta:
8'14-7'99 (m, 2 H, H-Ar, M +
m); 7'88-7'65 (m, 3 H; H-Ar,
M + m); 7'48-7'01 (m, 20 H,
H-Ar, M + m); 6'72 (d, J = 4'4, 0'6 H,
NH-L-Biq, M); 6'52 (d, J =
4'4, 0'4 H, NH-L-Biq, m); 6'05
(s, 0'6 H, H-C(2), M); 5'98 (s,
0'4 H, H-C(2), m); 5'46 (m, 0'4 H,
H-C(3'), m); 5'37 (m, 0'4 H,
H-C(3'), M); 5'27 (s ancho, 0'6 H,
NH-Fmoc, M); 5'02 (d ancho, 0'4 H, NH-Fmoc,
m); 4'38-4'06 (m, 4 H,
CH_{2}-Fmoc, CH-Fmoc,
CH_{\alpha}-L-Phe, M + m);
3'21 (m, 1 H,
CH_{\beta}-L-Phe, M); 2'84
(m, 1 H,
CH_{\beta}-L-Phe, m); 1'61
(m, 1 H, H-C(1''), M + m); 1'41
(m, 1 H, H_{a}-C(2''), M + m); 1'13
(m, 1 H, H_{b}-C(2''), M + m); 0'80
(d, 2 H, J = 6'8, Me-C(1''), M); 0'80
(d, 0'5 H, J = 6'8, Me-C(1''), m); 0'74
(t, 3 H, J = 7'8, H-C(3''), M +
m) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 795 ([M +
H]^{+}), 818 ([M + Na]^{+}), 1612
([2M + Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General III, el
compuesto 21 se obtuvo como un sólido blanco (101 mg, 58% rto).
P.f.: 116-120ºC.
[\alpha]_{D} = -155'1 (c = 0.12,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3406, 3282, 2963, 2920, 1662,
1516, 1450, 1233, 757, 740 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz, 318 K,
CDCl_{3}, mezcla de confórmeros M y m, 1:1) \delta:
8'12-7'01 (m, 22 H, H-Ar,
CONH-Bif-CONH, M + m); 6'33 (s
ancho, 0'5 H, NH-L-Biq, M); 6'27
(s ancho, 0'5 H, NH-L-Biq,
m); 6'05 (s, 0'5 H, H-C(2), M); 5'99
(s, 0'5 H, H-C(2), m); 5'47
(m, 0'5 H, H-C(3'), M); 5'34
(m, 0'5 H, H-C(3'), m); 5'23 (s
ancho, 1 H, NH-Fmoc, M + m); 4'44-3'88
(m, 4 H, CH_{2}-Fmoc,
CH-Fmoc, CH_{\alpha} L-Ile, M + m);
1'86 (m, 0'5 H,
CH_{\beta}-L-Ile, M); 1'72
(m, 0'5 H,
CH_{\beta}-L-Ile, m); 1'59
(m, 1 H, H-C(1''), M + m); 1'40
(m, 1 H, H_{a}-C(2''), CH_{2a}
L-Ile, M + m); 1'14 (m, 1 H,
H_{b}-C(2''),
CH_{2b}-L-Ile, M + m);
0'88-0'70 (m, 12 H, Me-C(1''),
H-C(3''),
[CH-CH_{3}] de L-Ile,
[CH_{2}-CH_{3}] de L-Ile,
M + m) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 761 ([M +
H]^{+}), 783 ([M + Na]^{+}), 1522
([2M + H]^{+}), 1545 ([2M +
Na]^{+}).
A una solución del correspondiente compuesto
N-Fmoc protegido (0'09 mmol) en 0'3 mL de DMF anhidra a 0ºC
y bajo argón se la añadió piperidina (70 \muL). A continuación la
mezcla se dejó alcanzar temperatura ambiente durante 2 h. Una vez
eliminado el disolvente a vacío se obtuvo el producto crudo, que se
purificó por cromatografía en columna usando como eluyente
hexano/AcOEt (1:1 a 1:9).
Siguiendo el Procedimiento General IV, se obtuvo
el compuesto 22 como un sólido blanco (12 mg, 24% rto).
P.f.: 110-113ºC.
[\alpha]_{D} = -35'9 (c = 0'07,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3434, 2956, 1660, 1521, 14369,
1165, 753 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (500 MHz, 313 K,
CDCl_{3}, mezcla de confórmeros M y m, 1:1) \delta: 9'31 (s
ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, M);
9'28 (s ancho, 0'5 H,
CONH-Bif-CONH, m); 8'38 (s
ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, M);
8'28 (s ancho, 0'5 H,
CONH-Bif-CONH, m); 8'09 (m,
1 H; H-C(8'), M); 8'19 (m, 1 H;
H-C(8'), m); 7'45 (m, 6 H,
H-Ar, H-Bif, M + m); 7'23
(m, 5 H, H-Ar, H-Bif, M + m);
6'25 (d, J = 4'5, 0'5 H,
NH-L-Biq, M); 6'18 (d, J =
4'5, 0'5 H, NH-L-Biq, m); 6'03
(s, 0'5 H, H-C(2), M); 5'99 (s,
0'5 H, H-C(2), m); 5'52 (m, 1 H,
H-C(3'), M + m); 3'47 (m, 1 H,
NH_{2}, M); 3'29 (m, 1 H, NH_{2}, m); 3'23 (d, J =
3'4, 0'5 H,
CH_{\alpha}-L-Val, M); 3'15
(d, J = 3'4, 0'5 H,
CH_{\alpha}-L-Val, m); 2'24
(m, 1 H,
CH_{\beta}-L-Val, M + m);
1'61 (m, 1 H, H-C(1''), M + m); 1'52
(m, 1 H, H_{a}-C(2''), M + m); 1'18
(m, 1 H, H_{b}-C(2''), M + m);
0'91-0'63 (m, 12 H, Me-C(1''),
H-C(3''), Me_{2} de
L-Val, M + m) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 525 ([M +
H]^{+}), 547 ([M + Na]^{+}), 1049
([2M + H]^{+}), 1072 ([2M +
Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General IV, se obtuvo
el compuesto 23 como un sólido blanco (32 mg, 61% rto).
P.f.: 107-110ºC.
[\alpha]_{D} = -231'0 (c = 0'06,
CH_{2}Cl_{2}).
IR (KBr) \nu: 3435, 1658, 1519, 1436, 1161,
753 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (500 MHz,
CDCl_{3}, mezcla de confórmeros M y m, 2'5:1) \delta: 9'36 (s
ancho, 0'7 H, CONH-Bif-CONH,
M); 9'32 (s ancho, 0'3 H,
CONH-Bif-CONH, m);
8'40-8'05 (m, 3 H,
H-C(8'),
CONH-Bif-CONH, M + m);
7'53-7'44 (m, 6 H, H-Ar,
H-Bif, M + m); 7'43-7'13 (m,
5 H, H-Ar, H-Bif, M + m); 6'49
(m, 1 H, NH-L-Biq, M + m);
6'07 (s, 0'7 H, H-C(2), M); 6'06
(s, 0'3 H, H-C(2), m); 5'51 (m,
1 H, H-C(3'), M + m); 3'55 (m, 1 H,
CH_{\alpha}-L-Phe, M + m);
3'18 (m, 1 H,
CH_{\beta}-L-Phe, M); 2'49
(m, 1 H,
CH_{\beta}-L-Phe, m); 1'59
(m, 1 H, H-C(1''), M + m); 1'50
(m, 1 H, H_{a}-C(2''), M + m); 1'16
(m, 1 H, H_{b}-C(2''), M + m);
0'90-0'70 (m, 6 H, Me-C(1''),
H-C(3''), M + m) ppm.
Siguiendo el Procedimiento General IV, se obtuvo
el compuesto 24 como un sólido blanco (34 mg, 71% rto).
P.f.: 93-96ºC.
[\alpha]_{D} = -215'6 (c = 0'09,
MeOH).
IR (KBr): \nu: 3413, 2962, 2920, 1666, 1580,
1521, 1436, 1302, 1164, 755 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (400 MHz,
CDCl_{3}, mezcla de confórmeros M y m, 1:1) \delta: 9'41 (s
ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, M);
9'38 (s ancho, 0'5 H,
CONH-Bif-CONH, m); 8'32 (s
ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, M);
8'22 (s ancho, 0'5 H,
CONH-Bif-CONH, m); 8'13
(m, 0'5 H, H-C(8'), M); 8'03
(m, 0'5 H, H-C(8'), m);
7'46-7'35 (m, 6 H, H-Ar,
H-Bif, M + m); 7'24-7'09 (m,
5 H, H-Ar, H-Bif, M + m); 6'77
(d, J = 4'4, 0'5 H, NH-L-Biq,
M + m); 6'70 (d, J = 4'4, 0'5 H,
NH-L-Biq, M + m); 6'04 (s,
0'5 H, H-C(2), M); 6'02 (s, 0'5 H,
H-C(2), m); 5'48 (m, 1 H,
H-C(3'), M + m); 3'26 (d, J = 3'4, 0'5
H, CH_{\alpha}-L-Ile, M);
3'17 (d, J = 3'4, 0'5 H,
CH_{\alpha}-L-Ile, m); 1'96
(m, 1 H,
CH_{\beta}-L-Ile, M); 1'88
(m, 1 H,
CH_{\beta}-L-Ile, m); 1'58
(m, 1 H, H-C(1''), M + m); 1'52
(m, 1 H, H_{a}-C(2''), M + m); 1'14
(m, 1 H, H_{b}-C(2''), M + m);
0'89-0'74 (m, 12 H, Me-C(1''),
H-C(3''), [CH-CH_{3}] de
L-Ile, [CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile, M + m) ppm.
A una disolución del ácido 8 (150 mg, 0'58 mmol)
en DMF anhidro, se añaden secuencialmente el péptido
correspondiente (como trifluoroacetato) (0'70 mmol),
1-hidroxibenzotriazol (HOBT, 92 mg, 0'70 mmol),
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(EDC, 134'4 mg, 0'70 mmol) y 4-(dimetilamino)piridina (DMAP,
7 mg, 0'058 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante
una noche. Posteriormente, el disolvente orgánico se eliminó a vacío
y el producto crudo se purificó por cromatografía en columna para
dar el híbrido péptido-isoquinolina
correspondiente.
Siguiendo el Procedimiento General V a partir
del péptido CF_{3}CO_{2}^{-}
^{+}H-L-Ile-L-Ile-OCH_{3},
y tras purificación por cromatografía (mezclas de
hexano-EtOAc 4:1 a 3:2), se obtuvo el compuesto 25
como un sólido blanco (232 mg, 80% rto).
IR (KBr) \nu: 3436, 2965, 1743, 1652, 1544
cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'26 (d, J = 5'1, 1 H,
NH-L-Iiq); 7'96 (m, 1 H,
H-C(8')); 7'38-7'21
(m, 5 H, H-C(5'),
H-C(6'), H-C(7'),
NH-L-Ile[1],
NH-L-Ile[2]); 6'09
(s, 1 H, H olefinico); 5'57 (dd, J = 7'2, 5'1, 1 H,
H-C(3')); 4'68 (m, 1 H,
CH_{\alpha}-L-Ile[2]); 4'43
(dd, J = 7'6, 5'1, 1 H, CH_{\alpha}
L-Ile[1]); 3'72 (s, 3 H, CO_{2}Me);
1'93-1'79 (m, 3 H,
[Me-CH-Et] de L-Iiq,
CH_{\beta}-L-Ile[1],
CH_{\beta}-L-Ile[2]);
1'66-1'08 (m, 6 H,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Iiq,
CH_{2}-L-Ile[1],
CH_{2}-L-Ile[2]);
1'04-0'74 (m, 18 H,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Iiq,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Iiq, [CH-CH_{3}] de
L-Ile[1],
[CH-CH_{3}] de
L-Ile[2],
[CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[1],
[CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[2]) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 172'0, 171'9 (CO_{2}Me,
CONH-L-Ile[2]); 164'8, 164'5
(=CH-CONH, CONH-L-Iiq); 147'5
(C(4')), 136'0 (C(4a')); 132'4, 129'5, 123'6
(C(5'), C(6'), C(7')); 128'3 (C(8a'));
127'5 (C(8')); 119'2 (CH olefinico); 57'3
(CH_{\alpha}-L-Ile[2]);
56'9
(CH_{\alpha}-L-Ile[1]);
54'9 (C(3')); 51'9 (CO_{2}Me); 41'3, 38'3, 37'1
([Me-CH-Et] de L-Iiq,
CH_{\beta}-L-Ile[1],
CH_{\beta}-L-Ile[2]); 25'1,
24'9 (3 C, [Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Iiq,
CH_{2}-L-Ile[1],
CH_{2}-L-Ile[2]); 15'4,
15'3, 15'0, 11'4, 11'2 (6 C,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Iiq,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Iiq, [CH-CH_{3}] de
L-Ile[1], [CH-CH_{3}] de
L-Ile[2], [CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[1], [CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[2]) ppm.
ES (MS^{+}) m/e: 500 ([M +
H]^{+}), 522 ([M + Na]^{+}), 999
([2M + H]^{+}), 1021 ([2M +
Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General V a partir
del péptido CF_{3}CO_{2}^{-}
^{+}H-L-Ile-L-Ile-L-Ile-OCH_{3},
y tras purificación por cromatografía (mezclas de
hexano-EtOAc 1:4 a 1:9), se obtuvo el compuesto 26
como un sólido blanco (234 me. 66% rto).
P.f.: 151-154ºC.
[\alpha]_{D} = -100'9 (c = 0'33,
MeOH).
IR (KBr) \nu: 3302, 2965, 1739, 1650, 1529,
1207 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
(D_{6})DMSO) \delta: 8'49 (d, J = 4'5, 1 H,
NH-L-Biq); 8'25 (d, J = 8'5,
1 H, NH-L-Ile[3]); 8'14
(d, J = 7'3, 1 H,
NH-L-Ile[1]); 7'99 (d,
J = 8'7, 1 H,
NH-L-Ile[2]); 7'88 (dd,
J = 7'3, 0'8, 1 H, H-C(8'));
7'66-7'58 (m, 2 H,
H-C(5'), H-C(6'));
7'50 (td, J = 7'6, 0'9, 1 H, H-C(7'));
6'70 (s, 1 H, H olefinico); 5'47 (dd, J = 7'3, 4'5, 1
H, H-C(3')); 4'35 (t, J = 8'5, 1 H,
CH_{\alpha}-L-Ile[3]); 4'24
(t, J = 8'7, 1 H,
CH_{\alpha}-L-Ile[2]); 4'17
(t, J = 7'3, 1 H,
CH_{\alpha}-L-Ile[1]); 3'58
(s, 3 H, CO_{2}Me); 1'84-1'62 (m, 3
H, CH_{\beta}-L-Ile[1],
CH_{\beta}-L-Ile[2],
CH_{\beta}-L-Ile[3]);
1'52-0'91 (m, 9 H,
[Me-CH-Et] de L-Biq,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq,
CH_{2}-L-Ile[1],
CH_{2}-L-Ile[2],
CH_{2}-L-Ile[3]);
0'90-0'68 (m, 24 H,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq, [CH-CH_{3}] de
L-Ile[1], [CH-CH_{3}] de
L-Ile[2],
[CH-CH_{3}] de
L-Ile[3],
[CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[1],
[CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[2],
[CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[3]) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
(D_{6})DMSO) \delta: 171'7, 171'2, 170'7
(CONH-L-Ile[1],
CONH-L-Ile[2],
=CH-CONH); 164'6, 162'6
(CONH-L-Biq, CO_{2}Me);
144'0 (C(4')); 136'0 (C(4a')); 132'4 (C(5') o
C(6')); 129'5 (C(7')); 128'6 (C(8a'); 126'9
(C(8')); 123'7 (C(5') o C(6')); 120'3
(CH olefinico); 56'5, 56'4, 56'2
(CH_{\alpha}-L-Ile[1],
CH_{\alpha}-L-Ile[2],
CH_{\alpha}-L-Ile[3]); 54'6
(C(3')); 51'5 (CO_{2}Me); 41'3
([Me-CH-Et] de L-Biq); 36'8,
36'5, 35'9
(CH_{\beta}-L-Ile[1],
CH_{\beta}-L-Ile[2],
CH_{\beta}-L-Ile[3]); 24'6,
24'2 (4 C, [Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq,
CH_{2}-L-Ile[1],
CH_{2}-L-Ile[2],
CH_{2}-L-Ile[3]); 15'3,
15'2, 15'0, 14'9, 11'0, 10'9, 10'8 (8 C,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq, [CH-CH_{3}] de
L-Ile[1], [CH-CH_{3}] de
L-Ile[2], [CH-CH_{3}] de
L-Ile[3], [CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[ 1 ], [CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[2], [CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[3]) ppm.
ES (ES^{+}) m/e: 613 ([M +
H]^{+}), 635 ([M + Na]^{+}), 1226
([2M + H]^{+}), 1247 ([2M +
Na]^{+}).
Siguiendo el Procedimiento General V a partir
del péptido CF_{3}CO_{2}^{-}
^{+}H-L-Val-L-Phe-OCH_{3},
y tras purificación por cromatografía (mezclas de
hexano-EtOAc 3:2 a 2:3), se obtuvo el compuesto 27
como un sólido blanco (217 mg, 72% rto).
P.f.: 174-176ºC.
[\alpha]_{D} = -129'0 (c = 0'5,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3436, 2964, 1743, 1655, 1538
cm^{-1}.
^{1}H-RMN (400 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'24 (d, J = 4'6, 1 H,
NH-L-Biq); 7'96 (dd, J = 7'6,
1.4, 1 H, H-C(8')); 7'37-7'03
(m, 10 H, H-C(5'),
H-C(6'), H-C(7'),
NH-L-Ile,
NH-L-Phe, aromático de
L-Phe); 6'06 (s, 1 H, H olefinico); 5'57
(dd, J = 7'3, 4'9, 1 H, H-C(3'));
4'74 (dd, J = 14'0, 6'3, 1 H, CH_{\alpha}
L-Phe); 4'48 (dd, J = 9'1, 6'6, CH_{\alpha}
L-Val); 3'66 (s, 3 H, CO_{2}Me); 2'91
(dd, J = 14'0, 6'3, 2 H,
CH_{\beta}-L-Phe); 2'11 (m,
1 H, CH_{\beta}-L-Val);
1'57-1'48 (m, 2 H,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq); 1'17-1'09 (m, 1 H,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq); 1'00 (d, J = 6'7, 3 H,
Me_{2} de L-Val); 0'96 (d, J = 6'7,
3 H, Me_{2} de L-Val); 0'85 (d, J =
6'7, 3 H, [Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq); 0'80 (t, J = 7'3, 3 H,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 172'0, 171'5
(CONH-L-Val, CO_{2}Me);
164'9, 164'6 (=CH-CONH,
CONH-L-Biq); 147'2 (C(4'));
135'9, 135'7, 132'5, 129'6, 129'2, 128'5, 128'3, 127'4, 127'0,
123'6 (12 C, C(4a'), C(5'), C(6'),
C(7'), C(8a'), C(8'), C aromático de
L-Phe); 119'1 (CH olefinico); 58'3
(CH_{\alpha} L-Phe); 55'0 (C(3')); 53'3
(CH_{\alpha} L-Val); 52'1 (CO_{2}Me);
41'3 ([Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq), 37'5
(CH_{\beta}-L-Phe), 31'6
(CH_{\beta}-L-Val); 24'7
([Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq); 19'2, 18'2 (Me_{2} de
L-Val); 15'1
([Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq); 11'3
([Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq) ppm.
ES (ES^{+}) m/e: 520 ([M +
H]^{+}), 542 ([M + Na]^{+}), 1039
([2M + H]^{+}), 1061 ([2M +
Na]^{+}).
A una disolución de la isoquinolinona 7 (273 mg,
1'0 mmol) en tolueno anhidro (9'0 mL) se añadió el reactivo de
Lawesson
([2,4-bis(4-metoxifenil)-1,3-ditia-2,4-difosfetano-2,4-disulfuro])
(445 mg, 1'1 mmol) y la mezcla se refluyó durante aproximadamente 1
h. A continuación la mezcla se dejó alcanzar temperatura ambiente y
se eliminó el disolvente a vacío obteniendo un producto crudo, que
se purificó por cromatografía en columna usando como eluyente
hexano/AcOEt (19:1 a 7:3), dando 263 mg (91% rto) de 27, como un
sólido amarillo.
P.f.: 50-53ºC.
[\alpha]_{D} = -754'2 (c = 0'5,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3436, 3432, 3170, 2665, 1713,
1637, 1368, 1215, 1195, 1172, 1013, 772 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'91 (s ancho, 1 H, NH); 8'58 (dd,
J = 7'S, 1'7, 1 H, H-C(8'));
7'55-7'43 (m, 3 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7')); 6'31 (s, 1 H,
H-C(2)); 5'48 (dd, J = 7'8, 5'1, 1 H,
H-C(3')); 3'75 (s, 3 H, CO_{2}Me);
1'66 (m, 1 H, H-C(1'')); 1'49
(m, 1 H, H_{a}-C(2'')); 1'19
(m, 1 H, H_{b}-C(2''));
0'86-0'79 (m, 6 H, Me-C(1''),
H-C((3''))
ppm.
ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 191'4 (CSNH); 165'8 (CO_{2}Me); 149'6
(C(4')); 133'1 (C(4a')); 132'3, 131'0 (C(5') o
C(6') o C(7')); 130'8 (C(8a')); 130'5
(C(8')); 123'7 (C(5') o C(6') o C(7'));
117'1 (C(2)); 57'7 (C(3')); 51'7 (CO_{2}Me);
40'8 C(1'')); 24'9 (C(2'')); 14'9, 10'9
(Me-C(1'), (C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 290 ([M +
H]^{+}), 312 ([M + Na]^{+}), 601
([2M + Na]^{+}).
A una disolución de la tiolactama 27 (231'2 mg,
0'8 mmol) en una mezcla 1:1 de THF-H_{2}O (8 mL) a
temperatura ambiente se añadió una solución de LiOH (1'6 mmol) en
H_{2}O (1'6 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante
toda la noche y a continuación se acidificó con HCl 5% hasta pH =
2. Se eliminó el THF a vacío y la fase acuosa se extrajo con AcOEt
(3 \times 50 mL). Las fases orgánicas se lavaron con salmuera y
se secaron sobre MgSO_{4}. Una vez eliminado a vacío el disolvente
se obtuvo el producto crudo, que se purificó por recristalización
de AcOEt/hexano, para dar el ácido 28 (211 mg, 96% rto) como un
sólido amarillo.
P.f.: 193-196ºC.
[\alpha]_{D} = -600'5 (c = 0'5,
CH_{3}OH).
IR (KBr) \nu: 3449, 3210, 2963, 1674, 1281,
1254, 1219, 776 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 12'77 (s ancho, 1 H,
CO_{2}H); 11'03 (d, J = 4'9, 1 H, NH); 8'39 (dd, J =
7'6, 1'1, 1 H, H-C(8'));
7'72-7'53 (m, 3 H,
H-C(5'), H-C(6'),
H-C(7')); 6'39 (s, 1 H,
H-C(2)); 5'33 (dd, J = 8'2, 4'9, 1 H,
H-C(3')); 1'56-1'46
(m, 1 H, H_{a}-C(2''));
1'44-1'38 (m, 1 H,
H-C(1'')); 1'19-1'06
(m, 1 H, H_{b}-C(2'')); 0'78 (t,
J = 7'5, 3 H, Me-C(1'')); 0'81 (d, J = 6'9,
3 H, H-C((3'')) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 189'3 (CSNH); 166'6
(CO_{2}H); 147'8 (C(4')); 133'1 (C(4a'));
131'1 (2 C, C(5') o C(6') o C(7')); 130'6
(C(8a')); 130'1 (C(8')); 124'4 (C(5') o
C(6') o C(7')); 118'8 (C(2)); 55'7
(C(3')); 40'9 (C(1'')); 24'8 (C(2'')); 14'9
(Me-C(1')); 10'9 (C(3'')) ppm.
EM (ES^{+}) m/e: 276 ([M +
H]^{+}), 298 ([M + Na]^{+}), 573
([2M + Na]^{+}).
El compuesto se obtuvo siguiendo el
Procedimiento General V a partir del ácido 29 y el péptido
CF_{3}CO_{2}^{-}
^{+}H-L-Ile-L-Ile-OCH_{3}.
Se purificó por cromatografía usando mezclas de hexano/EtOAc (4:1 a
3:2) para dar 30 como un aceite (257 mg, 86% rto).
P.f.: 178-181ºC.
[\alpha]_{D} = -366'0 (c = 0'25,
CHCl_{3}).
IR (KBr) \nu: 3435, 2964, 1739, 1631, 1525,
1212 cm^{-1}.
^{1}H-RMN (300 MHz,
(D_{6})DMSO) \delta: 10'96 (d, J = 4'9, 1 H,
NH-L-Biq); 8'38-8'28
(m, 3 H, NH-L-Ile[1],
NH-L-Ile[2],
H-C(8')); 7'65-7'48
(m, 3 H, H-C(5'),
H-C(6'), H-C(7'));
6'72 (s, 1 H, H olefinico); 5'61-5'56 (m, 1
H, H-C(3')); 4'39 (t, J = 8'1, 1 H,
CH_{\alpha}-L-Ile[2]); 4'16
(t, J = 7'1, 1 H, CH_{\alpha}
L-Ile[1]); 3'59 (s, 3 H, CO_{2}Me);
1'86-1'68 (m, 2 H,
CH_{\beta}-L-Ile[1],
CH_{\beta}-L-Ile[2]);
1'54-0'98 (m, 7 H,
[Me-CH-Et] de L-Biq,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq,
CH_{2}-L-Ile[1],
CH_{2}-L-Ile[2]);
0'86-0'65 (m, 18 H,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq, [CH-CH_{3}] de
L-Ile[1],
[CH-CH_{3}] de
L-Ile[2],
[CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[1],
[CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[2]).
^{13}C-RMN (50 MHz,
(D_{6})DMSO) \delta: 189'2 (CSNH); 171'7, 171'3
(CO_{2}Me,
CONH-L-Ile[2]); 164'5
(=CH-CONH); 142'9 (C(4')); 132'8, 130'9, 123'8
(C(5'), C(6'), C(7')); 131'4 (C(8'));
130'6 (C(8a')); 129'4 (C(4a')); 121'5 (olefinico
CH); 56'5
(CH_{\alpha}-L-Ile[2]);
56'1
(CH_{\alpha}-L-Ile[1]);
55'0 (C(3')); 51'5 (CO_{2}Me); 40'3, 36'8, 35'9
([Me-CH-Et] de L-Biq,
CH_{\beta}-L-Ile[1],
CH_{\beta}-L-Ile[2]); 24'9,
24'7, 24'2 ([Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq,
CH_{2}-L-Ile[1],
CH_{2}-L-Ile[2]); 15'3,
15'1, 14'7, 11'1, 10'8 (6 C,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq,
[Me-CH-CH_{2}CH_{3}] de
L-Biq, [CH-CH_{3}] de
L-Ile[1], [CH-CH_{3}] de
L-Ile[2], [CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[1], [CH_{2}-CH_{3}] de
L-Ile[2]).
MS (ES^{+}) m/e: 516 ([M +
H]^{+}), 583 ([M + Na]^{+}), 1031
([2M + H]^{+}), 1053 ([2M +
Na]^{+}).
La capacidad de inhibición de calpaina se ha
cuantificado por el valor de IC_{50}, que se define como la
concentración de inhibidor que reduce a la mitad la actividad
catalítica de una enzima. Cuanto más bajo sea el valor de
IC_{50}, más potente es el inhibidor. Resultados de inhibición de
calpaina I (la más relevante desde un punto de vista fisiológico)
de algunos compuestos de la presente invención se indican en la
tabla 1 y en la figura 1.
| Compuestos | IC_{50} |
| 7 | 25 nM |
| 11 | 124 \muM |
| 12 | 85 \muM |
| 13 | 59 \muM |
| 14 | 5 \muM |
| 15 | 140 \muM |
| 16 | 130 \muM |
| 17 | 86 nM |
| 18 | 742 nM |
| 19 | 100 \muM |
| 20 | 48 \muM |
| 21 | 5 \muM |
| 22 | 17 \muM |
| 23 | 7 \muM |
| 24 | 50 \muM |
| 25 | 447 nM |
| 26 | 159 nM |
| 27 | 626 nM |
| 28 | 38 \muM |
Los experimentos se realizaron
espectrofluorimétricamente usando un espectrofluorímetro
Spectrafluor Tecan Corp 93382, excitando a 485 nM y midiendo
a 530 nM. Caseina marcada con BODIPY-FL®
(Molecular Probes) se usó como sustrato y calpaina I de
eritrocito porcino (Calbiochem, Cat No 208712) se usó como
enzima. El sustrato liofilizado es el componente A del kit
de ensayo de proteasas EnzChek® green fluorescence de Molecular
Probes (referencia # E-6638; el componente B,
llamado tampón de digestión 20X, contiene 13 mL de 200 mM
Tris-HCl, pH 7'8, y 2 mM azida sódica. La calpaina
I comercial usada tiene una concentración de 1 mg en 1 mL de
disolución acuosa (la disolución es 20 mM
imidazol-HCl, pH 6'8, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 5 mM
(3-mercaptoetanol, conteniendo 30% de
glicerina).
2'5 mL del tampón dedigestión 20X (componente B
del kit de Molecular Probes) se diluyó con agua hasta
un volumen total de 50 mL.
200 \mug del sustrato liofilizado (componente
A del kit de Molecular Probes) se disolvió en 200
\muL de tampón fosfato salino. Esta disolución se trasvasó a un
matraz graduado y se diluyó con la disolución de digestión
hasta un volumen total de 40 mL.
20 \muL de la disolución comercial de calpaina
se diluyeron con disolución de digestión hasta un volumen
total de 200 \muL.
El inhibidor se disolvió en DMSO. Cada inhibidor
se ensayó a 7 concentraciones distintas entre 10 nM y 200
\muM.
Todos los datos se obtuvieron midiendo la
variación de fluorescencia con el tiempo. El uso de un dispositivo
multi-celdilla y pipetas Eppendorf
multi-canal permitió medir la variación de
fluorescencia de hasta 64 experimentos simultáneamente. De esta
manera, el experimento control y los experimentos con las distintas
concentraciones de inhibidor se llevaron a cabo en la misma tanda
de medidas. Todos los experimentos se realizaron 2 veces.
El experimento control se llevó a cabo mezclando
180 \muL de disolución de caseina y 5 \muL de
disolución de calpaina. La reacción fue iniciada por la
adición de 10 \muL de disolución 50 \muL de CaCl_{2} en agua,
y la fluorescencia se midió desde el momento de la adición de
Ca^{2+} (tiempo = 0) y durante 250-300 segundos
(midiendo durante 20 ciclos cinéticos). La variación de
fluorescencia (\DeltaF) se representó frente al tiempo (t). Para
probar el efecto del DMSO sobre la actividad enzimática, se
realizaron experimentos control adicionales añadiendo DMSO (en las
cantidades usadas en los experimentos con los inhibidores),
obteniéndose el mismo resultado que en el experimento control.
180 \muL de disolución de caseina, 5
\muL de disolución de calpaina y 5 \muL de disolución
de inhibidor (de concentración variable) se mezclaron. La
reacción fue iniciada por la adición de 10 \muL de disolución 50
\muM de CaCl_{2} en agua, y la fluorescencia se midió desde el
momento de la adición de Ca^{2+} (tiempo = 0) y durante
250-300 segundos (midiendo durante 20 ciclos
cinéticos). La variación de fluorescencia (\DeltaF) se representó
frente al tiempo, y un valor de \DeltaF/t se obtuvo de cada
experimento.
Para cada inhibidor, el valor de \DeltaF/t se
representó frente a la concentración (c) de inhicidor, desde c = 0
hasta c = 200 \muM. Los data se ajustan a una línea recta, y de la
ecuación se determina el valor de IC_{50} (como la concentración
de inhibidor que hace que la enzima tenga la mitad de
actividad).
A continuación se indica el significado de las
abreviaturas usadas.
- AcOEt: Acetato de etilo.
- AE: Análisis elemental.
- CANP: Proteasa neutra activada por calcio.
- ccf: Cromatografía en capa fina.
- DMF: N,N-Dimetilformamida.
- DMSO: Dimetilsulfóxido.
- EDTA: Ácido etilendiaminotetraacético.
- EGTA: Ácido
etilen-bis-(oxietilennitrilo)tetraacético.
- EM: Espectro de masas.
- ES: Electro-spray.
- IR: Infrarrojo.
- NMDA: N-metil-D-aspartato.
- P.f.: Punto de fusión.
- THF: Tetrahidrofurano.
- Tris:
Tris(hidroxmetil)aminometano.
- ^{1}H-RMN: Resonancia
magnética nuclear de protón.
- ^{13}C-RMN: Resonancia
magnética nuclear de carbono-13.
Claims (15)
1. Un compuesto caracterizado porque
tiene estructura de isoquinolina parcialmente reducida con
sustitución de un grupo sec-butilo en posición 3, y
de fórmula I o II,
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- -
- el grupo X es oxígeno (O) o azufre (S), indistintamente,
- -
- el asterisco (*) representa un centro estereogénico, de configuración (R) ó (S), indistintamente,
- -
- el grupo R^{1} está independientemente seleccionado entre los grupos
- -
- NH_{2},
- -
- NHR^{4} en el que R^{4} está seleccionado entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido y un derivado de péptido,
- -
- NR^{5}R^{6} en el que R^{5} y R^{6} están independientemente seleccionados entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido, un derivado de péptido, y grupos R^{5} y R^{6} que forman un sistema cíclico,
- -
- OH,
- -
- OR^{7} en el que R^{7} representa un grupo arilo o alquilo,
- -
- los grupos R^{2} y R^{3} son iguales o distintos, y están independientemente seleccionados entre los grupos O (oxígeno), NH, ó NR^{8}, dónde R^{8} representa un grupo alquilo o arilo,
- -
- Z está seleccionado entre los grupos
- -
- alquilo entre 2 y 8 átomos de carbono,
- -
- arilo,
- -
- arilalquilo,
- -
- cadena oxialquílica conteniendo independientemente entre 1 y 3 átomos de oxígeno y entre 2 y 10 átomos de carbono,
- -
- fragmento derivado de aminoácido o péptido.
2. Un compuesto según la reivindicación 1
caracterizado porque está seleccionado entre:
- (S,S,Z)-(3
-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de metilo (7),
- ácido
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetico
(8),
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de iso-propilo (9),
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de 1-butilo (10),
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de bencilo (11),
-
(S,S,S,S,Z,Z,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de
4-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2-enilo
(12),
-
(S,S,S,S,Z,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de
4-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2-inilo
(13),
-
(S,S,S,S,Z,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de
4-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetoximetil]-benzilo
(14),
-
(S,S,Z)-N-bencil-2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetamida
(15),
-
(S,S,Z)-N-(3-acetil-fenil)-2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetamida
(16),
-
(S,S,Z)-N-(2'-amino-bifenil-2-il)-2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetamida
(17),
-
(S,S,S,S,Z,Z)-2,2'-bis-[(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]bifenilo
(18),
-
(S,S,S,Z)-(1-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-2-metil-propil)-carbamato
de 9H-fluoren-9-ilmetilo
(19),
-
(S,S,S,Z)-(1-{2'-{2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-2-fenil-etil)-carbamato
de 9H-fluoren-9-ilmetilo
(20),
-
(S,S,S,S,Z)-(1-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-ilcarbamo-
il}-2-metil-butil)-carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (21),
il}-2-metil-butil)-carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (21),
-
(S,S,S,Z)-2-amino-N-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-il}-3-metil-butiramida
(22),
-
(S,S,S,Z)-2-amino-N-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-il}-3-fenil-propionamida
(23),
-
(S,S,S,S,Z)-2-amino-N-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-il}-3-metil-pentanamida
(24),
-
(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoi-
lamino}-3-metil-pentanoato de metilo (25),
lamino}-3-metil-pentanoato de metilo (25),
-
(S,S,S,S,S,S,S,S,Z)-2-(2-{2-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-pen-
tanoilamino}-3-metil-pentanoilamino)-3-metil-pentanoato de metilo (26),
tanoilamino}-3-metil-pentanoilamino)-3-metil-pentanoato de metilo (26),
-
(S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-Butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-butirilamino}-3-fenil-propionato
de metilo (27),
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-tioxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de metilo (28),
- ácido
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-tioxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acétic
(29),
y
-
(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-butil-1-tioxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoilamino
}-3-metil-pentanoato de metilo
(30),
y cualquiera de sus isómeros.
\newpage
3. Un procedimiento de síntesis de los
compuestos de fórmula I o II, definido en la reivindicación 1,
caracterizado porque un compuesto intermedio, que es
cualquier isómero del ácido
(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetico,
se transforma en amida o ester.
4. Un procedimiento de síntesis de los
compuestos de fórmula I o II, , definido en la reivindicación 1,
caracterizado porque un compuesto intermedio, que es
cualquier isómero de
(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de metilo, se transforma por hidrólisis.
5. Un procedimiento de síntesis de los
compuestos de fórmula I o II, definido en la reivindicación 1,
caracterizado porque un compuesto intermedio, que es
cualquier isómero de
5-metil-4-(2-yodobenzoilamino)-2-heptenoato
de metilo, se transforma en un derivado de isoquinolina.
6. Un compuesto que es cualquier isómero de
5-metil-4-(2-yodobenzoilamino)-2-heptenoato
de metilo.
7. Un procedimiento de síntesis de los
compuestos de fórmula I o II, definido en la reivindicación 1,
caracterizado porque un compuesto intermedio, que es
cualquier isómero de
N-[(1-hidroximetil-2-metil)-butil]-2-yodo-benzamida,
se transforma en un éster
\alpha,\beta-insaturado.
8. Un compuesto que es cualquier isómero de
N-[(1-hidroximetil-2-metil)-butil]-2-yodo-benzamida.
9. Un procedimiento de síntesis de los
compuestos de fórmula I o II, definido en la reivindicación 1,
caracterizado porque un compuesto intermedio, que es
cualquier isómero de
3-metil-2-(2-yodobenzoilamino)-pentanoato
de metilo, se reduce a alcohol.
10. Un compuesto que es cualquier isómero de
3-metil-2-(2-yodobenzoilamino)-pentanoato
de metilo.
11. Uso de un compuesto, definido en la
reivindicación 1, caracterizado porque tiene estructura de
isoquinolina parcialmente reducida con sustitución de un grupo
sec-butilo en posición 3, y de fórmula I o II,
en la
que:
- -
- el grupo X es oxígeno (O) o azufre (S), indistintamente,
- -
- el asterisco (*) representa un centro estereogénico, de configuración (R) ó (S), indistintamente,
- -
- el grupo R^{1} está independientemente seleccionado entre los grupos
- -
- NH_{2},
- -
- NHR^{4} en el que R^{4} está seleccionado entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido y un derivado de péptido,
- -
- NR^{5}R^{6} en el que R^{5} y R^{6} están independientemente seleccionados entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido, un derivado de péptido, y grupos R^{5} y R^{6} que forman un sistema cíclico,
- -
- OH,
- -
- OR^{7} en el que R^{7} representa un grupo arilo o alquilo,
- -
- los grupos R^{2} y R^{3} son iguales o distintos, y están independientemente seleccionados entre los grupos O (oxígeno), NH, ó NR^{8}, dónde R^{8} representa un grupo alquilo o arilo,
- -
- Z está seleccionado entre los grupos
- -
- alquilo entre 2 y 8 átomos de carbono,
- -
- arilo,
- -
- arilalquilo,
- -
- cadena oxialquílica conteniendo independientemente entre 1 y 3 átomos de oxígeno y entre 2 y 10 átomos de carbono,
- -
- fragmento derivado de aminoácido o péptido,
como inhibidor de calpaina.
12. Uso de un compuesto, según la reivindicación
11, caracterizado porque es de fórmula I ó II y seleccionado
entre
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de metilo (7),
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de bencilo (11),
-
(S,S,S,S,Z,Z,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de
4-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2-enilo
(12),
-
(S,S,S,S,Z,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de
4-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2-inilo
(13),
-
(S,S,S,S,Z,Z)-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de
4-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetoximetil]-benzilo
(14),
-
(S,S,Z)-N-bencil-2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetamida
(15),
-
(S,S,Z)-N-(3-acetil-fenil)-2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetamida
(16),
-
(S,S,Z)-N-(2'-amino-bifenil-2-il)-2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetamida
(17),
-
(S,S,S,S,Z,Z)-2,2'-bis-[(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]bifenilo
(18),
-
(S,S,S,Z)-(1-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-2-metil-propil)-carbamato
de 9H-fluoren-9-ilmetilo
(19),
-
(S,S,S,Z)-(1-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-2-fenil-etil)-carbamato
de 9H-fluoren-9-ilmetilo
(20),
-
(S,S,S,S,Z)-(1-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-ilcarba-
moil}-2-metil-butil)-carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (21),
moil}-2-metil-butil)-carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (21),
-
(S,S,S,Z)-2-amino-N-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-il}-3-metil-butiramida
(22),
-
(S,S,S,Z)-2-amino-N-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-il}-3-fenil-propionamida
(23),
-
(S,S,S,S,Z)-2-amino-N-{2'-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-bifenil-2-il}-3-metil-pentanamida
(24),
-
(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoila-
mino}-3-metil-pentanoato de metilo (25),
mino}-3-metil-pentanoato de metilo (25),
\newpage
-
(S,S,S,S,S,S,S,S,Z)-2-(2-{2-[2-(3-sec-butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-pen-
tanoilamino}-3-metil-pentanoilamino)-3-metil-pentanoato de metilo (26),
tanoilamino}-3-metil-pentanoilamino)-3-metil-pentanoato de metilo (26),
-
(S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-Butil-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-butirilamino}-3-fenil-propionato
de metilo (27),
y
-
(S,S,Z)-(3-sec-butil-1-tioxo-2,3-dihidro-1H-isoquinolin-4-iliden)-acetato
de metilo (28),
como inhibidor de calpaína.
13. Uso de un compuesto inhibidor de calpaína de
fórmula I o II, definido en las reivindicaciones 11 y 12, para
preparar un medicamento para el tratamiento preventivo o
terapéutico de una enfermedad degenerativa.
14. Uso de un compuesto inhibidor de calpaína de
fórmula I o II según la reivindicación 13 en el que la enfermedad
degenerativa está seleccionada entre isquemia cerebral, isquemia
cardiaca, ictus cerebral, Alzheimer, Parkinson, Hungtinton,
distrofia muscular, cataratas y enfermedades desmielinizantes.
15. Uso de un compuesto inhibidor de calpaína de
fórmula I o II según la reivindicación 14 en el que la enfermedad
degenerativa desmielinizante es la esclerosis múltiple.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200402995A ES2255848B1 (es) | 2004-12-16 | 2004-12-16 | Derivados de isoquinolina como inhibidores de calpaina. |
| US11/793,011 US7932266B2 (en) | 2004-12-16 | 2005-12-05 | Isoquinoline derivatives as calpain inhibitors |
| JP2007546091A JP2008524170A (ja) | 2004-12-16 | 2005-12-05 | カルパインインヒビターとしてのイソキノリン誘導体 |
| EP05825225A EP1829864A4 (en) | 2004-12-16 | 2005-12-05 | ISOCHINOLINE DERIVATIVES AS CALPAININHIBITORS |
| CNA2005800481674A CN101128433A (zh) | 2004-12-16 | 2005-12-05 | 作为钙蛋白酶抑制剂的异喹啉衍生物 |
| PCT/ES2005/070171 WO2006064075A1 (es) | 2004-12-16 | 2005-12-05 | Derivados de isoquinolina como inhibidores de calpaina |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200402995A ES2255848B1 (es) | 2004-12-16 | 2004-12-16 | Derivados de isoquinolina como inhibidores de calpaina. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2255848A1 ES2255848A1 (es) | 2006-07-01 |
| ES2255848B1 true ES2255848B1 (es) | 2007-07-01 |
Family
ID=36587571
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES200402995A Withdrawn - After Issue ES2255848B1 (es) | 2004-12-16 | 2004-12-16 | Derivados de isoquinolina como inhibidores de calpaina. |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7932266B2 (es) |
| EP (1) | EP1829864A4 (es) |
| JP (1) | JP2008524170A (es) |
| CN (1) | CN101128433A (es) |
| ES (1) | ES2255848B1 (es) |
| WO (1) | WO2006064075A1 (es) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4754566B2 (ja) | 2005-07-22 | 2011-08-24 | 持田製薬株式会社 | 新規なヘテロシクリデンアセトアミド誘導体 |
| PE20081692A1 (es) | 2007-01-24 | 2008-12-18 | Mochida Pharm Co Ltd | Nuevo derivado de heterocicliden acetamida |
| US9845489B2 (en) | 2010-07-26 | 2017-12-19 | Biomatrica, Inc. | Compositions for stabilizing DNA, RNA and proteins in saliva and other biological samples during shipping and storage at ambient temperatures |
| WO2012018638A2 (en) | 2010-07-26 | 2012-02-09 | Biomatrica, Inc. | Compositions for stabilizing dna, rna and proteins in blood and other biological samples during shipping and storage at ambient temperatures |
| WO2014100755A2 (en) | 2012-12-20 | 2014-06-26 | Biomatrica, Inc. | Formulations and methods for stabilizing pcr reagents |
| EP3007556B1 (en) | 2013-06-13 | 2020-05-20 | Biomatrica, INC. | Cell stabilization |
| CN106572650B (zh) | 2014-06-10 | 2021-08-31 | 生物马特里卡公司 | 在环境温度下稳定凝血细胞 |
| AU2016368265B2 (en) | 2015-12-08 | 2021-10-28 | Biomatrica, Inc. | Reduction of erythrocyte sedimentation rate |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5470978A (en) | 1992-11-18 | 1995-11-28 | Eli Lilly And Company | Process and intermediates for the preparation of excitatory amino acid receptor antagonists |
| US5541290A (en) | 1993-06-24 | 1996-07-30 | Harbeson; Scott L. | Optically pure calpain inhibitor compounds |
| EP0840614A1 (en) | 1995-06-13 | 1998-05-13 | Sanofi Winthrop, Inc. | Calpain inhibitors for the treatment of neurodegenerative diseases |
| ATE244216T1 (de) | 1996-12-11 | 2003-07-15 | Abbott Gmbh & Co Kg | Ketobenzamide als calpain-inhibitoren |
| ES2219187B1 (es) | 2003-05-14 | 2006-02-16 | Consejo Sup. Investig. Cientificas | Inhibidores de calpaina. |
| ES2243131B1 (es) | 2004-05-07 | 2007-02-01 | Consejo Sup. Investig. Cientificas | Tiamidas derivadas de bifenilo como inhibidores de calpaina. |
-
2004
- 2004-12-16 ES ES200402995A patent/ES2255848B1/es not_active Withdrawn - After Issue
-
2005
- 2005-12-05 EP EP05825225A patent/EP1829864A4/en not_active Withdrawn
- 2005-12-05 JP JP2007546091A patent/JP2008524170A/ja active Pending
- 2005-12-05 WO PCT/ES2005/070171 patent/WO2006064075A1/es active Application Filing
- 2005-12-05 US US11/793,011 patent/US7932266B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-12-05 CN CNA2005800481674A patent/CN101128433A/zh active Pending
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| MANN, E. et al.: "Novel peptide-heterocycle hybrids: Synthesis and preliminary studies on calpain Inhibition". Adv. Synth. Catal. 2002, vol. 344 (8), páginas 855-867, figura 3, esquema 1. * |
| SANCHEZ-SANCHO, F. et al.: "Efficient synthesis of chiral isoquinoline and pyrido (1,2-b)-isoquinoline derivatives via intramolecular heck reactions". Adv. Synth. Catal. 2001, vol. 343 (4) páginas 360-368, esquema 1. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1829864A4 (en) | 2010-09-15 |
| CN101128433A (zh) | 2008-02-20 |
| JP2008524170A (ja) | 2008-07-10 |
| EP1829864A1 (en) | 2007-09-05 |
| WO2006064075A1 (es) | 2006-06-22 |
| US20080090862A1 (en) | 2008-04-17 |
| US7932266B2 (en) | 2011-04-26 |
| ES2255848A1 (es) | 2006-07-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2701932B2 (ja) | タンパク質分解酵素阻害剤 | |
| FI94254C (fi) | Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten peptidijohdannaisten valmistamiseksi | |
| EP1713822B1 (en) | Hcv ns-3 serine protease inhibitors | |
| WO2006064075A1 (es) | Derivados de isoquinolina como inhibidores de calpaina | |
| WO1991015487A1 (fr) | Nouveau derive de 4-1-benzoxazine-4h-3,1 | |
| HU219224B (en) | Sulphonamido and sulphonamido-carbonyl-pyridine-2-carboxylic acid amides, pharmaceutical preparatives containing them and process for producing them | |
| EP3342779A1 (en) | Inhibitors of transglutaminases | |
| CA2687750C (en) | Substituted amino-quinazolinones, medicaments comprising said compound, their use and their method of manufacture | |
| KR100341982B1 (ko) | 프롤릴엔도펩티다제억제제 | |
| Kam et al. | Design and evaluation of inhibitors for dipeptidyl peptidase I (Cathepsin C) | |
| CN110845425B (zh) | 一种酞嗪衍生物及其制备方法和应用 | |
| NZ507696A (en) | Triazole, oxadiazole and thiadiazole derivatives useful as cysteine protease inhibitors | |
| EP0858262B1 (en) | Thrombin inhibitors | |
| ES2322263T3 (es) | Mitroxiderivados de enalapril y compuestos relacionados con inhibidores de ace, para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares. | |
| ES2243131B1 (es) | Tiamidas derivadas de bifenilo como inhibidores de calpaina. | |
| US6777403B2 (en) | Method and structure for inhibiting activity of serine elastases | |
| Zhang et al. | Novel aminopeptidase N (APN/CD13) inhibitors derived from 3-phenylalanyl-N′-substituted-2, 6-piperidinedione | |
| ES2219187B1 (es) | Inhibidores de calpaina. | |
| Liu et al. | Design, synthesis, and preliminary evaluation of 4-(6-(3-nitroguanidino) hexanamido) pyrrolidine derivatives as potential iNOS inhibitors | |
| CN102924567B (zh) | 一类肽化合物、其制备方法及用途 | |
| KR20060027789A (ko) | 프롤릴 올리고펩티다제 억제 활성을 가지는 화합물 | |
| CN101724016B (zh) | 一类肽化合物、其制备方法及用途 | |
| US4585793A (en) | Thioester inhibitors of serine proteases | |
| RU2142939C1 (ru) | Избирательно действующие ингибиторы тромбина и фармацевтическая композиция на их основе | |
| Gotz | Design, synthesis, and evaluation of irreversible peptidyl inhibitors for clan CA and clan CD cysteine proteases |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EC2A | Search report published |
Date of ref document: 20060701 Kind code of ref document: A1 |
|
| FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2255848B1 Country of ref document: ES |
|
| FA2A | Application withdrawn |
Effective date: 20080526 |