JPH0687062B2 - 血液中の解糖阻止方法 - Google Patents

血液中の解糖阻止方法

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JPH0687062B2 JP60100161A JP10016185A JPH0687062B2 JP H0687062 B2 JPH0687062 B2 JP H0687062B2 JP 60100161 A JP60100161 A JP 60100161A JP 10016185 A JP10016185 A JP 10016185A JP H0687062 B2 JPH0687062 B2 JP H0687062B2
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Description

【発明の詳細な説明】 イ．産業上の利用分野 この発明は血液中のブドー糖、乳酸、ピルビン酸を測定
するに際し採血後のそれらの成分量の変化を防止して正
確な測定値を得るための方法に関するものである。
ロ．従来技術 血液中のブドー糖、乳酸、ピルビン酸の値を測定する場
合に採血後に血液をそのまま室温に放置すると血液中の
解糖酵素群によつて解糖反応が進行してブドー糖が減少
し、解糖によつて生ずる乳酸やピルビル酸の量が増加す
る。この反応はいわゆるEmbden-Meyerhof径路として知
られているものである。すなわち本発明者の実験によつ
ても37℃で保存した血液では、第１図のＡ線に示ように
ブドー糖値は初期値の110mg/mlから３時間後には約83mg
/mlに低下する。一般に血液の試料を採血して分析作業
をする迄に少なくとも２〜３時間（病院等の自所分析の
場合）、場合によつては数十時間（他所依頼の場合）の
時間があり、従つて前記解糖反応を防止する必要があ
る。
従来この解糖反応を阻止するためには弗素化合物を主
体とした解糖阻止剤を試料を添加する、採血直後に血
漿と酸素を含む血球とを分離する、採血後すみやかに
除蛋白する、採血後試料をすみやかに低温室に入れて
低温に保持する等の方法が用いられているが、実験には
の弗素化合物を用いる方法が多用されている。それは
，，の方法はいずれも試料の採血直後の作業や試
料の輸送、保存が厄介であるからである。
これはに用いる弗素化合物、例えばNaF（弗素ナトリ
ウム）、KF（弗素カリウム）はEmbdem-Meyerhof解糖径
路の途中で作用するエノラーゼ（酵素）の働きを特異的
に阻害するといわれており、またこれらの薬物の微量粉
末を予め試料採取容器の中に入れて容易に血液試料と混
合するようにすることができるからである。この目的の
ため実際にはNaFを主体とする粉末を入れたベノジエク
トFH管（テルモ社製商品名）が試料採取管として非常に
多く用いられている。この場合にNaFによるＦイオン濃
度が高くなると浸透圧による血球からのヘモグロビンの
流出、すなわち溶血が生ずるのでNaFは1.25mg/ml程度以
下の添加としている。
ハ．発明が解決しようとする問題点 弗素化合物を解糖阻止剤に使用する場合の最適条件に関
しては多くの研究があるが、弗素化合物の解糖阻止効果
発現に時間がかかる点および解糖阻止効果の持続時間の
点で解糖阻止法として完全であるか否かが問題となつて
いる。すなわち本発明者の実験によれば第１図のＢ線に
示すようにNaF1.25mg/ml（血液当たり）（前記テルモ社
製ベノジエクトFH管に混入されている量）を添加した血
液のブドー糖値は１時間で約６％低下し、３時間後には
約８％低下する。このような事実はJ.J.M.T.衛生検査
（第33回日本臨床衛生検査学会特集号、日本臨床検査技
術師会誌Vol33No.3,1984.3,25発行）463頁「血糖測定に
おける解糖阻止作用について」永島達男他においても指
摘されている。すなわち従来の弗素化合物による解糖阻
止法は速効性と持続性に問題がある欠点がある。
これはエノラーゼ等の酵素は血液中では血球内に含まれ
ているが一方解糖阻止作用をするＦイオンは血球の細胞
膜によつて血球中に浸透するのに時間がかかるからであ
ると思われる。
ニ．問題点を解決するための手段 このような実情に鑑み本発明者らは従来の血液中の解糖
阻止方法の上記欠点を克服すべく鋭意研究を行つた結
果、解糖径路の酵素群中のホスホフルクトキナーゼに対
するpH低下（酸性化）の阻止効果を活用することにより
解糖阻止効果発現の速効性をはかることができ、さらに
pH低下用の酸としてクエン酸を用いるとクエン酸のホス
ホフルクトキナーゼに対する特異的な阻害性を利用して
阻害作用を速効的に発生させしかも持続させることがで
き、さらには弗素化合物の極微量を添加して前記酸と併
用すると解糖阻止効果の持続性を大幅に向上することを
可能ならしめ得ることを発見して本発明をなしたもので
ある。
すなわち本発明は血液中のブドー糖、乳酸、ピルビン酸
を測定する際に採取した試料血液に採取直後に各種酸を
加えて血液のpHを5.5〜6.8に調整して血液中の解糖反応
を阻止する方法であり、さらに酸としてクエン酸を用い
てpHの低下とクエン酸による血球中の解糖酵素群中のホ
スホフルクトキナーゼの活性を阻害することによつて解
糖を阻止する方法である。さらにはこれに弗素化合物の
微量を添加併用することによつて解糖阻止効果を高める
血液中の解糖阻止方法である。
例えば濱崎直孝、水上茂樹氏の「赤血球の機能と代謝」
（臨床化学、第５巻，第３号251〜259頁,1977）にある
ようにホスホフルクトキナーゼ酵素はEmbden-Meyerhof
径路（解糖径路）において初期の反応径路で働く酵素で
あり、pHによつて強い影響を受けることは公知である。
また同様に「レーニンジヤーの新生化学」小山二郎他共
訳（1984 6.25.廣川書店発行）462頁にはホスホフルク
トキナーゼに対してクエン酸が特異的に阻止効果を有す
ることが指摘されている。しかしこれらの資料は細胞内
部における現象を説明するのみであり、血清の酸性が血
球内の解糖作用に及ぼす影響については記載なく，その
効果の発現の速効性についてはなんの示唆もなく、且つ
この効果を血液のブドー糖値、乳糖、ピルビン酸の測定
に際し血液の分析試料の保存に利用することも示唆され
ていない。pHの変化による解糖阻止効果が速効性を有す
るのは、pHの変化に強く関係するイオンの受動輸送は速
く、血液中のpHがすみやかに血液の（血球細胞外）のpH
変化に追随するからであると思われる。
血液のpHは通常7.4であるが、本発明では酸を加えてpH
5.5〜6.8になるように調整する。酸は無機酸、有機酸い
ずれでもよいが、有機酸で粉末状となり試料採取管に定
量を入れておいて、採取管に血液を採取すると自動的に
血液と混合して容易に適当なpHとなるようにできるもの
が好ましい。
特にクエン酸を1.0〜5.0mg/ml（血液当たり）を用いる
と血液のpHは5.5〜6.8となり、またクエン酸のホスホフ
ルクトキナーゼに対する解糖阻止効果が生じて効果が持
続する長所がある。
さらに前記の酸を用いてpH調整しさらに弗素化合物、例
えばNaF、を添加することを併用すると解糖揺阻止効果
がさらに向上する。この場合にNaFは従来の1.25mg/mlを
使用する必要はなく、極微量の0.1〜0.5mg/ml程度の量
で十分である。
本発明を実施するには、例えば1.5〜2.0mlを採取する採
取管にクエン酸、及びNaFを主体とする水溶液を血液に
混合したとき上記の濃度になる量だけ入れて加温等して
水分を蒸発させ、成分を粉末状として採取管の底部に付
着させる。この採取管に血液を1.5〜2.0ml採取してその
まま保存してブドー糖（血糖値）あるいは乳酸、ピルビ
ン酸を定量すればよい。
ホ．実施例 実施例１ 試料採取管に血液を採取してクエン酸5mg/ml（血液当た
り）及びEDTA・2Na 2mg/ml（血液当たり）になるように
クエン酸とEDTA・2Naを添加して混合した。
血液はpH7.4であり、添加後はpH5.8となつた。
この試料を30℃に保持して３時間毎のブドー糖値を分析
測定したところ、12時間までブドー糖値（血糖値）は変
化がなかつた。24時間後では５％低下し、48時間後では
10％の低下が認められた。
実施例２ 実施例１と同様にして１規定の酢酸溶液20μl/ml、EDTA
・2Na 2mg/ml（血液当たり）を試料に混合した。血液pH
7.4は5.8となつた。
この試料を30℃に保持して３時間毎のブドー糖値（血糖
値）を測定した。その結果12時間後まで血糖値が変化し
ないことが分かつた。24時間後では５％の低下が認めら
れた。
実施例３ 実施例１と同様にしてクエン酸2mg/ml、NaF0.1mg/ml、E
DTA・2Na 2mg/ml（血液当たり）を試料に混合した。血
液のpH7.4はpH6.8となつた。
この試料を30℃に保持して３時間毎のブドー糖（血糖
値）を測定した。その結果48時間後まで血液値が変化し
ないことが分かつた。さらに72時間後まで保持したが５
％の血糖値の低下が認められた。
ヘ．発明の効果 以上に詳しく説明したように本発明は血液中のブドー
糖、乳糖、ピルビン酸を測定する際に、採取血液試料に
酸、特にクエン酸を添加して血液のpHを5.5〜6.8に調整
するだけで試料血液中での解糖反応を阻止する方法で、
試料採取後分析作業までに数十時間保持しても正確な分
析値が得られるものであり、血糖値の検査特に大量の試
料を検査する場合等に非常に有用な方法である。またこ
の方法弗素化合物の極微量を添加併用すると解糖反応の
阻止作用が持続するのでさらに有効である。
【図面の簡単な説明】
第１図は試料血液をそのまま或いは従来方法の弗素化合
物を添加して室温に保存した時のブドー糖値の時間的変
化を示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 レーニンジャー「レーニンジャーの新生 化学」（1984．６．25）廣川書店発行Ｐ. 462

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】血液中のブドー糖、乳糖、ピルビン酸の量
    を測定するに際し、血液試料を採取した直後に酸を加え
    て血液のpHを5.5〜6.8になるように調整して保存するこ
    とを特徴とする血液中の解糖阻止方法。
  2. 【請求項２】酸として酢酸を用いることを特徴とする特
    許請求の範囲第１項記載の血液中の解糖阻止方法。
  3. 【請求項３】酸としてクエン酸を用いることを特徴とす
    る特許請求の範囲第１項記載の血液中の解糖阻止方法。
  4. 【請求項４】弗素化合物を併用することを特徴とする特
    許請求の範囲第１項乃至第３項のいずれかに記載の血液
    中の解糖阻止方法。
  5. 【請求項５】弗素化合物としてNaFを血液当たり0.1〜0.
    5mg/ml混合することを特徴とする特許請求の範囲第１項
    乃至第３項のいずれかに記載の血液中の解糖阻止方法。
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