JP5850855B2

JP5850855B2 - 採血管、採血管の製造方法及び血液試料の調製方法

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Publication number: JP5850855B2
Application number: JP2012547886A
Authority: JP
Inventors: 瀬戸口　雄二; 雄二瀬戸口; 隆介岡本
Original assignee: Sekisui Medical Co Ltd
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Priority date: 2010-12-09
Filing date: 2011-12-07
Publication date: 2016-02-03
Anticipated expiration: 2031-12-07
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Description

本発明は、血糖値を測定するための採血管及びその製造方法に関し、より詳細には、採血管を構成する有底管内壁に塗布した薬剤により、採血後の血液試料中の血糖値を安定に保つことを可能とする採血管及びその製造方法並びに血液試料の調製方法に関する。

血液中のブドウ糖の値を測定する場合、採血後の血液をそのまま室温に放置すると、赤血球などの血液中の細胞に含まれている解糖系酵素による解糖反応が進行する。そのため、ブドウ糖の値が経時的に低下する。このような問題を回避するために、血液に解糖阻止効果を有する薬剤すなわち解糖阻止剤を添加する方法が知られている。

例えば、下記の特許文献１には、血液中のブドウ糖、乳糖及びピルビン酸の量を測定するに際し、採取された血液に酸を加え、血液のｐＨを５．０〜７．０に調整する、血液中の解糖阻止方法が開示されている。より具体的には、特許文献１では、１．５〜２．０ｍＬの血液を採取する採血管に、クエン酸及びＮａＦを主体とする水溶液を入れ、加温等により水分を蒸発させている。このようにして添加された成分を粉末状とし、採血管の底部に付着させている。

また、下記の特許文献２には、血液中のブドウ糖、１，５アンヒドログルシトールなどの糖分を測定する方法において、採取した血液試料に各種酸を添加し、ｐＨを５．０〜６．８に調整し、さらに弗酸塩をＮａＦに当量換算して血液１ｍＬ当たり３ｍｇ以上を添加する、血液試料中の糖類安定化方法が開示されている。

また、特許文献２の具体的例においては、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ＥＤＴＡ−２Ｎａ及びＮａＦを、１６：３４：２３：２７の比率で混和し、顆粒化してなる薬剤を採血管に１２ｍｇ／ｍＬ（採取される血液当たり）収容している。このような薬剤が収容された採血管に血液試料を採取し、血液試料中の糖類の安定化が図られている。

特開昭６１−２５８１７４号公報特開平５−１６４７５８号公報

しかしながら、特許文献１や特許文献２に記載の粉末状の薬剤や顆粒状の薬剤は、血液に対する溶解性が低い。そのため、採血直後に採血管を転倒混和する回数が不足すると、薬剤中に含まれる抗凝固剤や解糖阻止剤が充分に溶解し難かった。そのため、血液が凝固したり、解糖阻止効果が不充分であったりするという問題があった。

本発明の目的は、薬剤の血液に対する溶解性に優れ、採血直後の転倒混和回数が少ない場合であっても、薬剤が血液に充分に溶解し、血液抗凝固能や解糖阻止効果を充分に発現し得る採血管及びその製造方法を提供することにある。

本発明者らは、鋭意検討した結果、（１）酸乖離定数ｐＫａが３．７±１．０の範囲にある酸を含有しており、かつｐＨが３．０〜６．０に調整された第１の薬液と、（２）エチレンジアミン四酢酸塩を含有する第２の薬液（ここで第１及び第２の薬液の少なくとも一方に、採取される血液１ｍＬ当たりＮａＦに当量換算して０．２ｍｇ〜３．０ｍｇのフッ化物塩を含む）との２種の薬液をそれぞれ調製し、２種の薬液を有底管内に個別にスプレー塗布し、乾燥することにより、薬剤の血液に対する溶解性を高めることができ、血液抗凝固能及び解糖阻止効果を充分に発現させ得ることを見出し、本発明を完成さすに至ったものである。

すなわち、本発明に係る採血管は、血糖値測定用採血管であって、有底管の内壁に、酸乖離定数ｐＫａが３．７±１．０の範囲内にある酸を含有しており、かつｐＨが３．０〜６．０に調整された第１の薬液をスプレー塗布乾燥した第１の薬剤と、前記有底管の内壁にエチレンジアミン四酢酸塩を含有する第２の薬液をスプレー塗布乾燥した第２の薬剤とを備える。本発明の前記第１の薬液及び第２の薬液の少なくとも一方にフッ化物塩が含有されている。

また、本発明の有底管内壁への薬液のスプレー塗布乾燥の方法は、ａ）第１及び第２の薬液をそれぞれ個別に、どちらの薬液を先にスプレー塗布乾燥しても良い方法、ｂ）第１及び第２の薬液を同時にスプレー塗布乾燥する方法のどちらでも良い。本発明に係る採血管のある特定の態様では、前記酸が、クエン酸、グルタル酸、リンゴ酸及びコハク酸からなる群から選択される少なくとも１種の酸である。これらの酸は、酸乖離定数ｐＫａが３．７±１．０の範囲内にある。また、これらの酸は、その分子内に複数のカルボキシ基を有している。好ましくは、これらの酸の中でもクエン酸やグルタル酸が用いられる。

本発明に係る採血管の他の特定の態様では、前記第１の薬剤及び第２の薬剤が、前記採血管に採取した血液のｐＨが５．０〜７．４の範囲となるように前記有底管の内壁にスプレー塗布乾燥されている。すなわち、採取される血液量に応じ、該血液のｐＨが５．０〜７．４の範囲となるように、第１の薬剤及び第２の薬剤が有底管の内壁にスプレー塗布乾燥されている。この場合には、血糖値の測定精度をより一層高めることができ、かつ血糖値の経時的変化もより効果的に抑制することができる。

本発明に係る採血管の製造方法は、血糖値測定用採血管の製造方法であって、以下の工程からなる。

（１）第１及び第２の薬液を用意する工程
第１の薬液は、酸乖離定数ｐＫａが３．７±１．０の範囲内にある酸を含み、ｐＨが３．０〜と６．０の範囲内に調整されており、第２の薬液は、少なくともエチレンジアミン四酢酸塩を含む薬液として調製されている。また、第１及び第２の薬液には、少なくとも一方に、採取される血液１ｍＬ当たりＮａＦに当量換算して０．２ｍｇ〜３．０ｍｇのフッ化物塩が添加されている。

（２）第１及び第２の薬液をスプレー塗布する工程
有底管の内壁に各薬液をスプレー塗布する方法は、１）第１の薬液、または、第２の薬液を順番に個別にスプレー塗布する方法（最初にスプレー塗布する順番は、第１の薬液、または第２の薬液のどちらでも良い。）、２）第１及び第２の薬液を同時にスプレー塗布する方法が用いられる。

（３）スプレーされた第１及び第２の薬液を乾燥する工程
上記（２）のように第１及び／または第２の薬液をスプレー塗布した後の乾燥は、１種類の薬液をスプレー塗布した直後でも良いし、２種類の薬液がスプレー塗布された後でも良い。

本発明に係る採血管の製造方法のある特定の態様では、前記酸が、クエン酸、グルタル酸、リンゴ酸、及びコハク酸からなる群から選択される少なくとも１種の酸である。これらの酸は、酸乖離定数ｐＫａが３．７±１．０の範囲内にある。また、これらの酸は、その分子内に複数のカルボキシ基を有している。好ましくは、酸としてクエン酸やグルタル酸が用いられる。

本発明に係る血液試料の調製方法は、本発明の採血管を用いた血液試料の調製方法であって、本発明の採血管に規定量の血液を採取し、第１の薬剤及び第２の薬剤と血液とを混合し、血液のｐＨを５．０〜７．４の範囲内とすることを特徴とする。

本発明の採血管では、有底管の内壁に、第１，第２の薬液の少なくとも一方に、採取される血液１ｍＬ当たりＮａＦに当量換算して０．２ｍｇ〜３．０ｍｇのフッ化物塩が含有されており、酸乖離定数ｐＫａが３．７±１．０の範囲内にある酸を含有してｐＨが３．０〜６．０である第１の薬液とエチレンジアミン四酢酸塩を含有する第２の薬液が有底管の内壁にスプレー塗布乾燥されているため、採血管内に血液を採取し、転倒混和等により混和した場合、第１の薬剤及び第２の薬剤が血液に速やかに溶解する。従って、転倒混和回数を少なくした場合であっても、血液抗凝固能及び解糖阻止効果を確実にかつ充分に発揮させることができる。従って、採血後の血糖値を極めて簡便に安定化することができ、かつ血糖値を簡便かつ正確に測定することができる。

図１は、実施例１で用いたスプレーノズルの要部を示す略図的部分切欠斜視図である。図２は、実施例４で用いたスプレーノズル（並列２本ノズル）の要部を示す部分切欠斜視図である。図３は、実施例５で用いたスプレーノズル（独立２本ノズル）の要部を示す部分切欠斜視図である。図４は、実施例６で用いたスプレーノズル（１本ノズル）の要部を示す部分切欠斜視図である。

本発明の採血管は、ａ）有底管、ｂ）その有底管内壁にスプレー塗布乾燥された第１の薬剤及び第２の薬剤、ｃ）上記ａ）の有底管の開口部を閉塞する栓体から構成されている。

以下、本発明の詳細を説明する。

（第１の薬剤）
本発明に係る採血管では、有底管の内壁に、酸乖離定数ｐＫａが３．７±１．０の範囲内にある酸を含有して、ｐＨが３．０〜６．０である第１の薬液がスプレー塗布乾燥されている。更に、溶血を抑えて、血糖値を安定化するためには、第１の薬液のｐＨは３．２〜５．５が好ましい。

上記第１の薬液に用いられる酸としては、酸乖離定数ｐＫａが３．７±１．０の範囲内にある限り、特に限定されるものではないが、複数のカルボキシ基を有する有機化合物の酸が好ましい。このような酸としては、例えば、クエン酸、グルタル酸、リンゴ酸、及びコハク酸などが挙げられる。これらの中でも、水への溶解度が高いクエン酸、グルタル酸などが好ましい。中でもクエン酸には、酸乖離定数ｐＫａが、２．９０、４．３４、および５．６６の３つがあるため、薬液のｐＨ３．０〜６．０の間で、緩衝能が強いので、他の酸より薬液のｐＨを安定化できる。そのため、クエン酸を含む薬剤が血液に添加混和された場合、血液ｐＨを５．０〜７．４の間で、他の酸に比べて、より少ない濃度で安定化できるため、クエン酸が好ましい。尚、複数のｐＫａ値を有する酸の場合、その内の少なくとも１つが３．７±１．０の範囲内であればよい。

上記第１の薬液に用いられる酸の濃度としては、採血管に血液を採取して用いられる段階において、血液１ｍＬ当たり、１ｍｇ〜１５ｍｇが好ましい。より好ましくは、血液１ｍＬ当たり、２ｍｇ〜１０ｍｇであることが好ましい。酸の濃度が血液１ｍＬ当たり、１ｍｇ〜１５ｍｇの範囲内であれば、採取された血液のｐＨを５．０〜７．４の範囲内により一層確実に維持することができる。

第１の薬液に用いられる酸の濃度が、血液１ｍＬ当たり１ｍｇより少ないと、採取された血液のｐＨを５．０〜７．４に安定的に調製できない。また、第１の薬液に用いられる酸の濃度が、血液１ｍＬ当たり、１５ｍｇより多いと採取された血液の溶血がひどくなり、正確に血糖値を測定できない問題がある。

また、本発明の有底管の内壁にスプレー塗布乾燥される酸の量としては、上記のように、採取される血液量に応じて異なるが、採血管では、採取される血液の量が、採血管の種類に応じて予め定められている。例えば、血液２ｍＬ採取用採血管の場合、血液採取量は約２ｍＬであり、その場合には、酸の量は２ｍｇ〜３０ｍｇの範囲が好ましく、例えば４ｍＬ採取用採血管の場合には、血液採取量が約４ｍＬであるため、酸の量は４ｍｇ〜６０ｍｇの範囲が好ましい。すなわち、採血管が血液ｘｍＬ採取用採血管（ｘは整数が一般的）である場合、第１の薬剤として有底管の内壁に付着される酸の量は、好ましくは、１ｘｍｇ〜１５ｘｍｇの範囲とすればよく、より好ましくは、２ｘｍｇ〜１０ｘｍｇの範囲とすればよい。

上記第１の薬剤は、上記酸を含み、ｐＨが３．０〜６．０の範囲にある第１の薬液を乾燥させることにより得られる。この場合、クエン酸などの酸を溶解する溶媒としては、水などが用いられる。また、上記酸を水等の溶媒に溶解するだけでは前記ｐＨ範囲から外れる場合には、適宜、ｐＨ調整剤（例えば、少量のＮａＯＨ）を加えたり、同じ酸のアルカリ金属塩を用いたりすることにより、ｐＨは３．０〜６．０の範囲に制御することができる。

また、後述のように、第１の薬液及び第２の薬液の少なくとも一方にフッ化物塩が含有される。従って、第１の薬液にフッ化物塩が含有されていてもよい。

（第２の薬剤）
本発明に係る採血管では、有底管の内壁に、上記第１の薬剤とは別に、第２の薬液がスプレー塗布乾燥されている。この第２の薬剤は、少なくともエチレンジアミン四酢酸を含有する。

上記エチレンジアミン四酢酸塩としては、ＥＤＴＡ−Ｎａ塩、ＥＤＴＡ−Ｋ塩、ＥＤＴＡ−Ｃａ塩、ＥＤＴＡ−Ｌｉ塩、Ｃｕ塩などが挙げられるが、ＥＤＴＡ−Ｎａ塩、ＥＤＴＡ−Ｋ塩が好ましい。これらの好ましい塩を用いることにより、血液の凝固をより確実に抑制することができる。より好ましくは、ＥＤＴＡ−２Ｎａ、ＥＤＴＡ−２Ｋが好ましい。

上記エチレンジアミン四酢酸塩の添加量は、採血管内に採取される血液１ｍＬ当たり、１〜１０ｍｇの範囲であることが好ましい。エチレンジアミン四酢酸塩の添加量が、採血管内に採取される血液１ｍＬ当たり、１ｍｇより少ないと抗凝固作用が不足して血液が凝固するおそれがある。また、エチレンジアミン四酢酸塩の添加量が、採血管内に採取される血液１ｍＬ当たり、１０ｍｇより多いと溶血がひどくなる。

なお、エチレンジアミン四酢酸塩は、抗凝固剤として作用するものであるため、上記のように採取される血液量に応じて上記好ましい範囲のエチレンジアミン四酢酸塩を用いることが望ましい。

もっとも、前述した通り、採血管は、種類によってその血液採取量が予め定まっている。従って、血液ｘｍＬ（ｘは整数）採取用採血管の場合には、ｘｍＬ程度の血液が採取される。従って、ｘｍＬ容量の採血管に用いる場合には、第２の薬剤中に含有されるエチレンジアミン四酢酸塩の量は、ｘ〜１０ｘｍｇの範囲内とすることが望ましい。

第２の薬剤は、エチレンジアミン四酢酸塩以外の他の血液抗凝固剤を添加してもよい。このような抗凝固剤としては、ヘパリン塩、シュウ酸塩、またはクエン酸塩などを挙げることができる。

第２の薬剤は、少なくともエチレンジアミン四酢酸を含有する第２の薬液を有底管の内壁にスプレー塗布乾燥させることにより得られる。この場合、エチレンジアミン四酢酸塩を含有する第２の薬液を得るために、適宜、水などの溶媒が用いられる。

また、第２の薬剤において、前述したようにフッ化物塩が含有されていてもよい。このフッ化物塩の含有形態及び含有量については、次に説明する。

（フッ化物塩）
第１及び第２の薬剤の少なくとも一方に含有されるフッ化物塩としては、特に限定されず、フッ化ナトリウムまたはフッ化カリウムなどを挙げることができる。フッ化物塩は、解糖阻止剤として添加されている。フッ化物塩の添加量は、採取される血液１ｍＬ当たり、ＮａＦに当量換算して０．２ｍｇ〜３．０ｍｇの範囲内とすることが望ましい。フッ化物塩の添加量が０．２ｍｇ／ｍＬ（血液当たり）以上とすることにより、血糖値の安定性をより一層高めることができ、３．０ｍｇ／ｍＬ以下とすることにより、溶血をより確実に抑制しつつ、正確な血糖値を得ることができる。より好ましくは、０．２ｍｇ〜２ｍｇの範囲内とすることが望ましい。

フッ化物塩の添加量が０．２ｍｇ／ｍＬ（血液当たり）より少ないと、血糖値の安定性が悪くなる。また、フッ化物塩の添加量が３．０ｍｇ／ｍＬ（血液当たり）より多いと、溶血がひどくなり、正確な血糖値を測定できない問題がある。

前述したように、血液ｘｍＬ（ｘは整数）採取用採血管の場合、ｘｍＬ程度の血液が採取されるので、上記フッ化物塩の量は、０．２ｘｍｇ〜３．０ｘｍｇの範囲内とすることが望ましい。

（血液試料の調製方法）
本発明に係る血液試料の調製方法は、本発明の採血管に規定量の血液を採取し、上記第１の薬剤及び第２の薬剤と混合し、血液のｐＨを５．０〜７．４の範囲内とすることを特徴とする。上記血液試料のｐＨを５．０〜７．４範囲内に調整する方法は、上記第１及び第２の薬剤の量を調整する方法により調整することができる。もっとも、酸乖離定数ｐＫａが３．７±１．０の範囲内にある上記酸及びエチレンジアミン四酢酸塩以外に、他の酸や他の添加剤を含有させて血液試料のｐＨを５．０〜７．４の範囲内に調整することもできる。

更に、溶血を低減し、血糖値を安定化するためには、採取した血液と、上記第１の薬剤及び第２の薬剤とを混合した際の血液のｐＨを５．５〜７．０の範囲内とするのが好ましい。従って、上記第１の薬剤及び第２の薬剤は、規定量の血液を採取した際に、血液試料のｐＨを５．５〜７．０の範囲内に調整し得るものであることが好ましい。血液試料のｐＨを５．５以上、更に好ましくはｐＨを６．５以上とすることにより、溶血をより確実に抑制することができ、正確な血糖値を得ることができ、かつ７．０以下とすることにより、血糖値の経時的安定性を高めることができ、より一層正確な血糖値を得ることができる。

本発明に係る血液試料の調製方法では、有底管内壁にスプレー塗布乾燥された上記第１の薬剤と第２の薬剤が、血液と混合されると速やかに血液中に溶解する。これは、有底管内壁に第１の薬液と第２の薬液を微細粒子としてスプレー塗布することで、血液と接触する薬剤の表面積が大きくなり、血液が薬剤に接触した時の薬剤溶解性を高めることができるためである。これより、本発明の採血管に規定量の血液を採血した際、転倒混和回数が５回以下と少ない場合であっても、第１の薬剤及び第２の薬剤を血液に確実に溶解させることができる。よって、本発明の採血管では、充分な抗凝固能及び解糖阻止効果が得られる。

（採血管）
本発明に係る採血管における有底管は特に限定されず、市販されている公知の有底の円筒状の有底管を用いることができる。このような有底管を構成する材料についても特に限定されないが、ポリエチレンテレフタレートなどの透明性及び保形性に優れた合成樹脂からなるものが好適に用いられる。なお、採血管では、有底管の開口端を閉塞するために、適宜の栓体が取り付けられるのが普通である。このような栓体としては、ゴム栓、ゴムからなる栓本体にキャップが被せられた栓体、アルミ箔にゴムが接着されたフィルム栓などを適宜用いることができる。

本発明の採血管では、上記有底管に、栓体が取り付けられ、内部が減圧されていることが望ましい。それによって、真空採血法に従って血液を容易に採血管内に導くことができる。

（採血管の製造方法）
本発明に係る採血管の製造方法は、以下の工程からなる。

（１）各薬液を調製する工程
上記第１，第２の薬液を用意する工程。

（２）各薬液を有底管の内壁にスプレー塗布する工程
有底管の内壁に、１）第１または、第２の薬液を別々に順次スプレー塗布する工程（最初にスプレー塗布する順番は第１または第２薬液のどちらでも良い）、２）第１の薬液及び第２の薬液を同時にスプレー塗布する工程、のどちらの方法でも良い。

（３）スプレー塗布された第１及び第２の薬液を乾燥させる工程
スプレー塗布された第１及び第２の薬液を乾燥させる工程は、各薬液が別々にスプレー塗布される場合、１）「第１薬液スプレー塗布→乾燥→第２薬液スプレー塗布→乾燥」、または２）「第１薬液スプレー塗布→第２薬液スプレー塗布→乾燥」、のどちらでも良い。但し、有底管内壁にスプレー塗布された薬液が垂れやすい場合は、上記１）の如く、それぞれの液をスプレー塗布する毎に乾燥させるのが好ましい。

上記第１の薬液と第２の薬液とをスプレー塗布により有底管の内壁にスプレー塗布する工程は、好ましくは、２種類の液体をスプレー塗布することができる２液スプレーノズルを用いて行うことが望ましい。それによって、製造工程の簡略化及び短縮を図ることができる。２液スプレーノズルの形態は、特に規定されるものではない。すなわち、２重管ノズルや、２本の薬液吐出ノズルを有するスプレーノズルなどを適宜用いることができる。

もっとも、本発明の製造方法では、第１の薬液をスプレー塗布するノズルと、第２の薬液をスプレー塗布するノズルとが別体であってもよく、その場合には、第１の薬液のスプレー塗布と第２の薬液のスプレー塗布とを個別に行えばよい。この場合、第１の薬液スプレー塗布と第２の薬液スプレー塗布のいずれを先に行ってもよい。

第１の薬液及び第２の薬液を乾燥させる工程については、第１の薬液及び第２の薬液をスプレー塗布した後、常温、例えば２５℃程度の温度に放置することにより行い得る。必要に応じて、加温し、乾燥速度を高めてもよい。また、室温または加温した室内で、各薬液を有底管内にスプレー塗布した後、除湿したエアを有底管内に吹き込むことで、強制的に乾燥することもできる。この時、有底管内に吹き込むエアにより、スプレー塗布した薬剤が垂れないようにエア流量に注意が必要である。

以下、本発明の実施例及び比較例を挙げることにより、本発明の効果を明らかにする。なお、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。

（実施例１）
第１の薬液の調製：クエン酸５．８ｇ、クエン酸３Ｎａを２．２ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、クエン酸及びクエン酸３Ｎａを充分に溶解させ、第１の薬液を調製した。

第２の薬液の調製：ＥＤＴＡ−２Ｋを４．５ｇ、ＮａＦを０．３５ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、ＥＤＴＡ−２Ｋ及びＮａＦを充分に溶解させ、第２の薬液を調製した。

図１に示した２重管ノズル１を用い、有底管の内壁に第１の薬液及び第２の薬液をスプレー塗布した。図１に示す２重管ノズル１は、外管２内に、第１の液管３及び第２の液管４が挿入されている構造を有する。用いた２重管ノズル１では、外管２の長さは８６．４ｍｍ、外径は３．５ｍｍ、内径は２．５ｍｍである。また、第１の液管３の長さは１５０ｍｍ、外径は１．２５ｍｍ、内径は１．０ｍｍである。第２の液管４の長さは１５０ｍｍ、外径は０．７９ｍｍ、内径は０．５５ｍｍである。第２の液管４の先端が、第１の液管３の先端よりも０．２ｍｍ突出するように第２の液管４が第１の液管３内に挿入されている。また、第１の液管３の先端が、外管２の先端よりも０．２ｍｍ突出されている。

上記のような２重管ノズル１をエア供給用のコンプレッサーと、第１及び第２の薬液を送液するためのポンプとに接続し、長さ７５ｍｍ、外径１２．５ｍｍ、内径１０．５ｍｍの採血量２ｍＬ用有底管の内壁に第１及び第２の薬液をそれぞれ２５ｍｇずつスプレー塗布した。具体的には、２つの薬液タンクに、第１の薬液及び第２の薬液をそれぞれ収容し、０．１ＭＰａの圧力になるように空気により加圧し、第１の液管３から第１の薬液を、第２の液管４から第２の薬液を有底管の内壁にスプレー塗布し、２５℃の温度に調整された室内で、３５℃に加温されたエアを有底管内に吹き込んで乾燥した。

この時、有底管内に吹き込んだエアにより、有底管内壁にスプレー塗布された薬液が垂れ落ちないように注意した。

なお、第１の薬液及び第２の薬液の合計の塗布重量は、２５＋２５＝５０ｍｇとした。

スプレー塗布に際しては、有底管の底部から高さ３０ｍｍまでの位置の内壁部分に、第１及び第２の薬液を均一スプレー塗布することができた。この採血管において、規定量である２ｍＬの血液を採取した場合、血液面の高さ位置は、上記第１，第２の薬剤が塗布されている塗布領域の上端とほぼ一致した。

（実施例２）
第１の薬液及び第２の薬液を以下のように調製したことを除いては、実施例１と同様とし、実施例２の採血管を得た。

第１の薬液の調製：クエン酸５．８ｇ、クエン酸３Ｎａを２．２ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、クエン酸及びクエン酸３Ｎａを充分に溶解させ、第１の薬液を調製した。

第２の薬液の調製：ＥＤＴＡ−２Ｋを４．５ｇ、ＮａＦを１．２ｇに水を添加し、全量を４０ｇとし、ＥＤＴＡ−２Ｋ及びＮａＦを溶解させ、第２の薬液を調製した。

なお、第２の薬液は、２５ｍｇずつスプレー塗布乾燥する工程を２回行い、第２の薬液の合計スプレー塗布量は５０ｍｇとした。

（実施例３）
第１の薬液及び第２の薬液を以下のように調製したことを除いては、実施例１と同様とし、実施例３の採血管を得た。

第２の薬液の調製：ＥＤＴＡ−２Ｋを４．５ｇ、ＮａＦを２．４ｇに水を添加し、全量を８０ｇとし、ＥＤＴＡ−２Ｋ及びＮａＦを充分に溶解させ、第２の薬液を調製した。

なお、第２の薬液は、２５ｍｇずつスプレー塗布乾燥する工程を４回行い、第２の薬液の合計スプレー塗布量は１００ｍｇとした。

（実施例４）
実施例１で用いた２重管ノズルに代えて、図２に示す並列型２本ノズルを用いたことを除いては、実施例１と同様とした。図２の並列型２本ノズル１１では、外管２内に第１の液管１２及び第２の液管１３が挿入されている。すなわち、第１の液管１２と第２の液管１３はそれぞれ、外径０．９１ｍｍ、内径０．６０ｍｍであり、同一の形状を有する。また、第１の液管１２及び第２の液管１３は、図示のように長さ方向全長に渡り接合され一体化されている。

（実施例５）
実施例１で用いた２重管ノズルに代えて、図３に示す独立２本型スプレーノズル２１を用いたことを除いては、実施例１と同様にして、採血管を作製した。図３に示す独立２本型スプレーノズル２１では、外管２内に、第１の液管２２及び第２の液管２３が挿入されており、第１の液管２２と第２の液管２３が別体の管として外管２内に挿入されている。第１の液管２２及び第２の液管２３の先端は、外管２の先端よりも０．２ｍｍ突出させた。なお、第１の液管２２及び第２の液管２３は、外径は０．９１ｍｍ、内径は０．６０ｍｍとした。

（実施例６）
第１の薬液の調製：クエン酸５．８ｇ、クエン酸３Ｎａを２．２ｇ及びＮａＦ０．５ｇに水を添加し、全量４０ｇとし、充分にクエン酸、クエン酸３Ｎａ及びＮａＦを溶解し、第１の薬液を調製した。

第２の薬液の調製：ＥＤＴＡ−２Ｋを４．５ｇと、ＮａＦを０．７ｇに水を添加し、全量を４０ｇとした。ＥＤＴＡ−２Ｋ及びＮａＦを充分溶解させ、第２の薬液を調製した。

実施例６では、図４に示したスプレーノズル３１を２本用いた。スプレーノズル３１は、２液を塗布し得るノズルではなく、外管３２内に液管３３が挿入されている１液塗布型ノズルである。実施例６では、長さ８６．４ｍｍ、外径３ｍｍ、内径２ｍｍの外管３２に、長さ１５０ｍｍ、外径０．７９ｍｍ、内径０．５５ｍｍの液管３３を挿入し、液管３３の先端を外管３２の先端より０．２ｍｍ突出しているスプレーノズル３１を用いた。

上記スプレーノズル３１を用い、実施例１で用いた有底管の内壁に、先ず第１の薬液を２５ｍｇずつ２回に分けて、スプレー塗布乾燥した（合計第１の薬液スプレー量は５０ｍｇ）。しかる後、別のスプレーノズル３１を用い、第２の薬液を２５ｍｇずつ２回に分けてスプレー塗布乾燥した（合計第２の薬液スプレー量は５０ｍｇ）。すなわち、２本のスプレーノズル３１を用い、第１の薬液及び第２の薬液をそれぞれ合計５０ｍｇずつスプレー塗布乾燥した。スプレー塗布に際して空気の圧力は０．１５ＭＰａとした。

上記のようにして、実施例１と同様にして、有底管の底部から高さ３０ｍｍまでの領域に、第１及び第２の薬液を均一にスプレー塗布し、それぞれ乾燥させた。

（実施例７）
第１の薬液の調製を除いては、実施例１と同様にして採血管を得た。

第１の薬液の調製：クエン酸３．６ｇ、クエン酸３Ｎａを５．３ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、クエン酸及びクエン酸３Ｎａを充分に溶解させ、第１の薬液を調製した。

（実施例８）
第１の薬液及び第２の薬液の調製及び第２の薬液の塗布量を除いては、実施例１と同様にして採血管を得た。

第２の薬液の調製：ＥＤＴＡ−２Ｋを４．５ｇ、ＮａＦを１．２ｇに水を添加し、全量を４０ｇとし、ＥＤＴＡ−２Ｋ及びＮａＦを溶解させ、第２の薬液を調製した。なお、第２の薬液のスプレー塗布量は５０ｍｇとした。

（実施例９）
第１の薬液及び第２の薬液の調製及び第２の薬液の塗布量を除いては、実施例１と同様にして採血管を得た。

第１の薬液の調製：クエン酸３．６ｇ及びクエン酸３Ｎａを５．３ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、充分にクエン酸及びクエン酸３Ｎａを溶解し、第１の薬液を調製した。

第２の薬液の調製：ＥＤＴＡ−２Ｋを４．５ｇと、ＮａＦを２．４ｇに水を添加し、全量を８０ｇとした。ＥＤＴＡ−２Ｋ及びＮａＦを溶解させ、第２の薬液を調製した。なお、第２の薬液のスプレー塗布量は１００ｍｇとした。

（実施例１０）
第１の薬液及び第２の薬液の調製及び第２の薬液の塗布量を除いては、実施例１と同様にして採血管を得た。

第２の薬液の調製：ＥＤＴＡ−２Ｋを４．５ｇと、ＮａＦを２．４ｇに水を添加し、全量を４０ｇとした。ＥＤＴＡ−２Ｋ及びＮａＦを溶解均一分散させ、第２の薬液を調製した。なお、第２の薬液のスプレー塗布においては、第２の薬液をスターラーで撹拌して、ＮａＦなどの薬剤を均一分散させながら、５０ｍｇをスプレー塗布した。

（実施例１１）
実施例１で用いた第１の薬液及び第２の薬液を２重管ノズルを用いて、０．１５ＭＰａの圧力となるように空気により加圧して有底管（長さ７５ｍｍ、外径１２．５ｍｍ、内径１０．５ｍｍ、（採血量２ｍＬ用））の内壁全体にスプレー塗布乾燥した。

スプレー塗布された第１の薬液及び第２の薬液は、有底管の底部から高さ６５ｍｍまでの間に、均一にスプレー塗布乾燥されているため、血液２ｍＬを添加した場合、薬剤は、血液面より上まで塗布されている。これより、血液２ｍＬ添加した後、血液が薬剤全体と接触するように転倒混和を１回行った。

（実施例１２）
実施例１で用いた第１の薬液及び第２の薬液を２重管ノズルを用いて、０．１５Ｍｐａの圧力となるように空気により加圧して有底管（長さ７５ｍｍ、外径１２．５ｍｍ、内径１０．５ｍｍ、（採血量２ｍＬ用））の内壁全体にスプレー塗布乾燥した。

スプレー塗布された第１の薬液及び第２の薬液は、有底管の底部から高さ６５ｍｍまでの間に、均一にスプレー塗布乾燥されているため、血液２ｍＬを添加した場合、薬剤は、血液面より上まで塗布されている。これより、血液２ｍＬ添加した後、血液が薬剤全体と接触するように転倒混和を２回行った。

（比較例１）
実施例１で用意した第１及び第２の薬液を予め混合し乾燥させ、顆粒状の薬剤（粒径０．５ｍｍ〜１．０ｍｍ）を調製した。実施例１で用いた有底管に、実施例１と第１及び第２の薬剤量が同じ量となるように上記顆粒状薬剤を有底管の底部に挿入し、採血管を得た。

（比較例２）
第１の薬液及び第２の薬液を以下のように調製したことを除いては、実施例１と同様とし、比較例２の採血管を得た。

第１の薬液の調製：クエン酸７．０ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、クエン酸を充分に溶解させ、第１の薬液を調製した。

なお、第１及び第２の薬液は、それぞれ５０ｍｇ、２５ｍｇずつスプレー塗布乾燥した。

（比較例３）
第１の薬液及び第２の薬液を以下のように調製したことを除いては、実施例１と同様とし、比較例３の採血管を得た。

第１の薬液の調製：クエン酸３Ｎａ７．０ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、クエン酸３Ｎａを充分に溶解させ、第１の薬液を調製した。

（比較例４）
第１の薬液及び第２の薬液を以下のように調製したことを除いては、実施例１と同様とし、比較例４の採血管を得た。

第１の薬液の調製：クエン酸５．８ｇ、クエン酸３Ｎａ
２．２ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、クエン酸及びクエン酸３Ｎａを充分に溶解させ、第１の薬液を調製した。

第２の薬液の調製：ＥＤＴＡ−２Ｋを４．５ｇ、ＮａＦを０．１０ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、ＥＤＴＡ−２Ｋ及びＮａＦを充分に溶解させ、第２の薬液を調製した。なお、第１及び第２の薬液は、２５ｍｇずつスプレー塗布乾燥した。

（比較例５）
第１の薬液及び第２の薬液を以下のように調製したことを除いては、実施例１と同様とし、比較例５の採血管を得た。

第２の薬液の調製：ＥＤＴＡ−２Ｋを４．５ｇ、ＮａＦを５．０ｇに水を添加し、全量を１６０ｇとし、ＥＤＴＡ−２Ｋ及びＮａＦを充分に溶解させ第２の薬液を調製した。
なお、第１の薬液は、２５ｍｇスプレー塗布乾燥した。また、第２の薬液は、２５ｍｇずつスプレー塗布乾燥を８回繰り返して、採血管を作成した。

（比較例６）
比較例１で作成した採血管に、健常人の血液２ｍＬを添加し、転倒混和を２回行い、血液と薬剤とを混和した。この際、血液と薬剤が接触するように混和した。

（実施例及び比較例の評価）
（１）血糖値評価
実施例１〜１１及び比較例１〜５で得た採血管に、健常人の血液２ｍＬを添加し、転倒混和を１回行い、血液と薬剤とを混和した。また、実施例１２及び比較例６で得た採血管に、健常人の血液２ｍＬを添加し、転倒混和を２回行い、血液と薬剤とを混和した。

上記血液と薬剤を１回または２回混和する場合、いずれも、血液と全ての薬剤が接触するように混和を行った。

しかる後、１５００ｇ×１０分（室温）の条件で遠心分離を行い、採血管の底部を下に立て、試験管ラックに整列させた状態で冷蔵保存した。転倒混和直後、すなわち採血直後の血糖値と、冷蔵保存１日後の血糖値と、冷蔵保存３日後の血糖値を測定した。血糖値の測定方法は以下の通りである。

測定装置として、７１７０Ｓ形日立自動分析装置を用い、血糖値測定試薬として、ＬタイプワコーＧＬＵ２（和光純薬工業社製）を用いた。採血直後、冷蔵保存１日後、及び冷蔵保存３日後の各採血管内の血液試料の血糖値を測定し、採血直後の血液試料の血糖値を１００％とし、保存後の血糖値を相対値で示した。結果を下記の表１に示す。

（２）溶血評価
実施例１〜１２及び比較例１〜６の採血管内に採取された血液試料について、冷蔵保存３日後の血糖値を測定した後に、各血液試料の血漿の４１５ｎｍにおける吸光度を測定し、溶血の程度を評価した。結果を下記の表１に示す。

比較例１の４１５ｎｍにおける吸光度を基準（１．０）とし、実施例１〜１２及び比較例２〜６の４１５ｎｍの吸光度を相対値で示した。

各サンプルの吸光度の相対値が１．０より小さい場合は、比較例１より溶血の程度が小さい。

一方、各サンプルの吸光度の相対値が１．０より大きい場合は、比較例１より溶血の程度が大きいことを表す。

（３）薬剤の溶解性評価
実施例１〜１２及び比較例１〜６の採血管内に、蒸留水２ｍＬを添加して、薬剤が完全に溶解するまでの時間を肉眼で測定した。薬剤が完全に溶解するまでの時間が短いサンプル程、血液２ｍＬが添加された時、血液に薬剤が溶解する時間が短く、薬剤溶解性が良い。

尚、薬剤のｐＨは、実施例及び比較例で作成した血液検査用容器に蒸留水２ｍＬ添加し、転倒混和を２０回行い、薬剤を完全に溶解させた後、ｐＨメーター（Ｅｕｔｅｃｈ社、ｐＨ５１０型）で薬剤ｐＨを測定した。

また、血漿のｐＨは、実施例及び比較例で作成した血液検査用容器に全血２ｍＬを添加し、所定の転倒混和を行った後、遠心機（クボタ商事、卓上小型遠心機２４１０型）を用いて、１５００ｇ×１０分（２０℃）で遠心を行った後、各サンプルの血漿３００μＬを用いて、血漿ｐＨを小型ｐＨメーター（堀場製作所、Ｂ−２１２型ＴｗｉｎｐＨ）で測定した。

表１から明らかなように、比較例１及び６では、顆粒状薬剤（粒径０．５ｍｍ〜１．０ｍｍ）であるため、薬剤が完全に溶解性するまでの時間が１５．６分と長く、薬剤溶解性が悪い。そのため、血液を２ｍＬ添加した後に、採血管を１回、または２回転倒混和しただけでは、薬剤が充分に溶解しなかった。そのため、冷蔵保存１日後の血糖値安定性がそれぞれ８０％（比較例１）、９０％（比較例６）と低かった。また、冷蔵保存３日後の血糖値安定性もそれぞれ７５％（比較例１）、８５％（比較例６）と低かった。

また、比較例２及び比較例３では、第１の薬液のｐＨをそれぞれｐＨ２．０（比較例２）、ｐＨ９．３（比較例３）に調製した。その結果、比較例２では、薬剤のｐＨが低いため、溶血の程度が比較例１よりひどくなり、溶血の影響で、正確に血糖値が測定できず、冷蔵１日及び３日の血糖値がそれぞれ９２．０％、９１．０％と大きく低下した。

比較例３では、第１の薬剤ｐＨを９．３にしたため、血漿ｐＨが８．０となり、冷蔵１日及び３日の血糖安定性が、それぞれ９０％、８８％と低くなった。

比較例４のＮａＦは、０．１３ｍｇ／血液１ｍＬで、本発明のＮａＦ０．２ｍｇ〜３．０ｍｇ／血液１ｍＬより少ないため、血糖値の安定性は、冷蔵保存１日及び３日で、それぞれ、９２．０％、８９．０％と悪くなった。

また、比較例５のＮａＦは、３．１ｍｇ／血液１ｍＬで、本発明のＮａＦ０．２ｍｇ〜３．０ｍｇ／血液１ｍＬより多いため、比較例１より溶血がひどくなり、血糖値の安定性が、冷蔵保存１日及び３日で、それぞれ、９２．０％、９１．０％と悪くなった。

これに対して、実施例１〜１２では、第１の薬液及び第２の薬液をスプレー塗布し、乾燥させることにより、第１及び第２の薬剤が微細粒子状（粒径０．０１ｍｍ〜０．４０ｍｍ）となって有底管内壁に付着しているため、薬剤溶解時間は、０．９分〜１．２分と短く、薬剤が、比較例１及び６の顆粒状薬剤に比べて、非常に溶解しやすかった。

また、実施例１〜１０では、ほとんどの薬剤塗布位置が、採血管底部を下にして立てた場合、血液面より下にあるため、転倒混和しなくても、ほとんど全ての薬剤が血液と接触するので、１回の転倒混和を行うだけであっても、血液中に薬剤が容易に溶解するため、冷蔵保存１日後及び冷蔵保存３日後でも、血糖値の安定性がそれぞれ９８．０％、９６．０％以上といずれの実施例でも高かった。

実施例１１〜１２では、薬剤が有底管内壁全面に塗布されているため、血液２ｍＬを添加しただけでは血液面より上部の一部の薬剤が血液と接触しない。しかし、転倒混和を１回（実施例１１）、または、２回（実施例１２）行うことで、薬剤は容易に溶解した。

その結果、冷蔵保存３日後の血糖値安定性は、実施例１１で９７％、実施例１２で９８％と高かった。このように、薬剤が有底管内壁面全体にスプレー塗布されていても、血液と薬剤が接触するように、転倒混和することで、スプレー塗布後に乾燥された薬剤が血液に容易に溶解し、血糖値の安定性を高めることができた。

従って、実施例１〜１２と比較例１及び６との対比からも明らかなように、第１及び第２の薬剤を別々に調製し、それぞれの薬剤が血液と接触した際、容易に溶解するように、有底管内壁にスプレー塗布し、乾燥することで、血液添加後の転倒混和が少ない場合でも、薬剤が血液中に容易に溶解するため、血糖値の安定性を飛躍的に高め得ることがわかる。また、溶血評価においても、血漿ｐＨが６付近である実施例１〜６及び実施例１１〜１２では、比較例１に比べて、溶血評価値が相対値で０．５０〜０．５２と低くなった。これは、第１及び第２の薬液をスプレー塗布しているため、薬剤濃度が局所的に高くなり難いため、溶血が抑制されているためと考えられる。

また、実施例７〜１０では、血漿のｐＨが７付近であるため、比較例１に比べると、溶血評価の相対値で０．２５〜０．２９とより一層溶血を抑制することができている。これは、ｐＨを７付近に高めることで、溶血がより一層抑制されていると考えられる。

また、比較例２及び５の溶血評価値は、比較例１に比べて相対値でそれぞれ１．５０、１．４０と大きく、ひどく溶血した。この原因は、比較例２ではｐＨが低く、比較例５ではＮａＦ塩濃度が高いため、と考えられる。

クエン酸以外の酸を用いた場合の血糖値の安定化効果を確認するため、以下の実施例１３〜１５及び比較例７で得た採血管に、健常人の血液２ｍＬを添加し、転倒混和を１回行い、血液と薬剤とを混和した。そして、実施例１と同様に血糖値の測定を行った。

（実施例１３）
第１の薬液及び第２の薬液を以下のように調製したことを除いては、実施例１と同様とした。
第１の薬液を調製：グルタル酸を０．７５ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、グルタル酸を充分に溶解させ、第１の薬液を調製した。
第２の薬液の調製：ＥＤＴＡ−２Ｋを４．５ｇ、ＮａＦを０．３５ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、ＥＤＴＡ−２Ｋ及びＮａＦを充分に溶解させ、第２の薬液を調製した。
第１の薬液の塗布量は、２５ｍｇ×４回で合計１００ｍｇ、第２の薬液の塗布量は、２５ｍｇとした。

（実施例１４）
第１の薬液及び第２の薬液を以下のように調製したことを除いては、実施例１と同様とした。
第１の薬液の調製：コハク酸を０．６６ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、コハク酸を充分に溶解させ、第１の薬液を調製した。
第２の薬液の調製：実施例１３と同じ。
第１薬液の塗布量は、２５ｍｇ×４回で合計１００ｍｇ、第２の薬液の塗布量は、２５ｍｇとした。

（実施例１５）
第１の薬液及び第２の薬液を以下のように調製したことを除いては、実施例１と同様とした。
第１の薬液の調製：リンゴ酸を０．２７ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、リング酸を充分に溶解させ、第１の薬液を調製した。
第２の薬液の調製：実施例１３と同じ。
第１薬液の塗布量は、２５ｍｇ×８回で合計２００ｍｇ、第２の薬液の塗布量は、２５ｍｇとした。

（比較例７）
薬液を以下のように調製したことを除いては、実施例１と同様とした。
第１の薬液の調製：調製なし
第２の薬液の調製：ＥＤＴＡ−２Ｋを４．５ｇ、ＮａＦを０．３５ｇに水を添加し、全量を２０ｇとし、ＥＤＴＡ−２Ｋ及びＮａＦを充分に溶解させ、第２の薬液を調製した。
実施例６で用いたのと同じ１本ノズルを用いて、第２の薬液の塗布量は、２５ｍｇとした。

実施例１３〜１５及び比較例７の血糖値の測定結果を下記の表２に示す。

実施例１３では、第１の薬剤ｐＨが３．７で、血漿ｐＨが６．１となり、冷蔵１日及び３日の血糖安定性が、それぞれ９８．６％、９８．２％と良好であった。

実施例１４では、第１の薬剤ｐＨが３．９で、血漿ｐＨが６．３となり、冷蔵１日及び３日の血糖安定性が、それぞれ９９．２％、９７．０％と良好であった。

実施例１５では、第１の薬剤ｐＨが４．０で、血漿ｐＨが６．５となり、冷蔵１日及び３日の血糖安定性が、それぞれ９８．１％、９５．３％と良好であった。

比較例７では、第１の薬剤がなく、血漿ｐＨが７．８と高くなり、冷蔵１日及び３日の血糖安定性が、それぞれ９５．０％、９４．０％となり、実施例に比べ安定性が低下した。

１…２重管ノズル
２…外管
３…第１の液管
４…第２の液管
１１…並列型２本ノズル
１２…第１の液管
１３…第２の液管
２１…独立２本型スプレーノズル
２２…第１の液管
２３…第２の液管
３１…スプレーノズル
３２…外管
３３…液管

Claims

血糖値測定用採血管であって有底管を有し、前記有底管の内壁に付着されており、
酸乖離定数ｐＫａが３．７±１．０の範囲内にある酸を含有しており、かつｐＨが３．０〜６．０である第１の薬液の乾燥物からなる第１の薬剤と、前記有底管の内壁に付着されており、少なくともエチレンジアミン四酢酸塩を含有する第２の薬液の乾燥物からなる第２の薬剤とを備え、前記第１及び第２の薬液の少なくとも一方が、採取される血液１ｍＬ当たりＮａＦに当量換算して０．２ｍｇ〜３．０ｍｇのフッ化物塩を含む、採血管。
前記酸が、クエン酸、グルタル酸、リンゴ酸及びコハク酸からなる群から選択される少なくとも１種の酸である、請求項１に記載の採血管。
前記第１の薬剤及び第２の薬剤が、前記採血管に採取した血液のｐＨが５．０〜７．４の範囲となるように前記有底管の内壁に付着されている、請求項１または２に記載の採血管。
血糖値測定用採血管の製造方法であって、
少なくとも一方が、採取される血液１ｍＬ当たりＮａＦに当量換算して０．２ｍｇ〜３．０ｍｇのフッ化物塩を含む第１，第２の薬液であって、酸乖離定数ｐＫａが３．７±１．０の範囲内にある酸を含有しており、かつｐＨが３．０〜６．０の範囲内に調整されている第１の薬液と、少なくともエチレンジアミン四酢酸塩を含有する第２の薬液とを用意する工程と、
前記第１及び第２の薬液を予め混合することなく、有底管の内壁に別のスプレーを用いて塗布する工程と、
前記塗布された第１及び第２の薬液を乾燥させる工程とを備える、採血管の製造方法。
前記酸が、クエン酸、グルタル酸、リンゴ酸、及びコハク酸からなる群から選択される少なくとも１種の酸である、請求項４に記載の採血管の製造方法。
請求項１または２に記載の採血管を用いた血液分析試料の調製方法であって、採取された血液を、請求項１または２に記載の採血管に投入し、前記第１の薬剤及び第２の薬剤を血液と混合したとき、血液のｐＨを５．０〜７．４の範囲内とする、血液試料の調製方法。