CN110251468A - 凝血酶溶液及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及凝血酶溶液及其使用方法。本发明提供了用于冻干凝血酶水溶液的方法、用于此类冻干方法的凝血酶溶液，以及通过此类方法产生的固体凝血酶组合物。

Description

凝血酶溶液及其使用方法
本申请为分案申请，原申请的申请日为2013年11月28日，申请号为201380063192.4(PCT/IL2013/000088)，发明名称为“凝血酶溶液及其使用方法”。
技术领域
本发明涉及药物溶液领域，并且更具体地涉及用于冻干凝血酶水溶液的方法、用于此类冻干方法的凝血酶溶液，以及通过此类方法产生的固体凝血酶组合物。
背景技术
凝血酶是在凝血过程中由血浆中的凝血酶原形成的蛋白水解酶。
凝血酶作为凝血因子广泛用于临床应用以通过将纤维蛋白原转化成纤维蛋白而使伤口止血。它是外科敷料的常见组分，并且已与纤维蛋白原及其它凝血蛋白质组合用于二组分止血系统诸如纤维蛋白胶、粘合剂和密封剂。
已知的是，在贮存之前将凝血酶溶液冻干以产生固体凝血酶组合物，以便减少蛋白质降解，其中该固体凝血酶组合物可在使用前复原。冻干通常是指冷冻混合物以及然后降低水浓度(例如通过升华到不支持生物或化学反应的水平)的方法。由冻干方法所得的多孔海绵状固体材料称为粉饼。希望此类固体凝血酶组合物具有低水含量(例如，小于约3％)，长期(优选地在室温下)保持结构和功能稳定性，以及在复原时与在冻干之前溶液中凝血酶的活性相比保持高百分比的凝血酶活性。
背景技术凝血酶溶液的实例在EP 813598B1、US 5,605,884、US 4,877,608、US2010/0074865、US 5,733,873、EP 1766003和US 2010/0168018中有所描述。背景技术凝血酶溶液在所存在的赋形剂的数量和类型方面以及在各种赋形剂的浓度方面变化相当大。
冷冻保护剂或稳定剂通常用于凝血酶溶液以避免凝血酶因冷冻应力而变性或失活，以使蛋白质在后续生产步骤中稳定，以及延长储存寿命。冷冻保护剂的示例包括糖，诸如蔗糖、乳糖和海藻糖；糖醇，诸如甘露糖醇；以及表面活性剂，诸如聚乙二醇、TritonX-100、TWEEN-20和TWEEN-80。除了充当稳定剂以外，甘露糖醇和蔗糖(在较低程度上)还被用作膨松剂，其有助于提供具有强物理结构的粉饼。使用膨松剂对于具有低固体物质含量(单位体积)的配方是尤其重要的。
人血清白蛋白(HSA)还广泛用于生物制药配方，作为稳定剂和膨松剂(H.R.Constantino,M.J.Pikal：《生物制药的冻干》，斯普林格出版社，2004年(Lyophilization of Biopharmaceuticals,Springer,2004))。
EP 813598B1公开了用于冻干的简单凝血酶配方，其包含：40mM的葡糖酸、20mM的柠檬酸三钠和150mM的NaCl；US 5,605,884和US 4,877,608公开了包含高达10％的糖诸如蔗糖、甘露糖醇或麦芽糖的配方；US 2010/0074865公开了包含5.7％的乳糖、3.1％的海藻糖和0.001％的TWEEN-80的配方；以及US 5,733,873公开了包含0.001-0.025％的聚山梨醇酯80(TWEEN-80)且具有或不具有0.1％的PEG 4000和2％的甘露糖醇的配方。
氯化钠(NaCl)常用于减少蛋白质在生物制药配方的冻干过程中的沉淀和聚集。然而，EP 1766003公开了NaCl可能存在问题，因为其降低玻璃化转变温度，从而必须采用低初级干燥温度和延长的干燥循环时间。另外，US 2010/0168018公开了不具有NaCl或具有以微量存在的NaCl的配方。
此类冻干已知的凝血酶溶液的方法的持续时间通常非常长，这增加了方法的成本和/或产生如下固体凝血酶组合物：其具有相对高的水含量和/或在复原时与冻干前溶液中的凝血酶活性相比保持相对低百分比的凝血酶活性。
发明内容
本发明在其一些实施例中涉及用于冻干凝血酶水溶液的方法、用于此类冻干方法的凝血酶溶液，和通过此类方法产生的固体凝血酶组合物。在一些实施例中，本文所公开的溶液和方法使得能够使用比用于冻干凝血酶溶液的已知方法耗时更短(例如，短37％)的冻干方法制备固体凝血酶组合物，从而提高冻干能力和成本效益。
在一些实施例中，本文所述的冻干方法产生这样的固体凝血酶组合物：其具有相对低的水含量和/或在室温下在相对长的一段时间内高度稳定，和/或在复原时表现出高凝血酶活性恢复率。在一些实施例中，该方法包括使用最佳的含水凝血酶配方。
本发明的方面和实施例在下文的说明书和所附权利要求中描述。
根据本文所述的一些实施例的一个方面，提供了一种用于冻干凝血酶水溶液的方法，该方法包括提供包含以下成分的凝血酶水溶液：约1至低于约4.6％(w/v)的糖或糖醇、至少约0.7至低于约1.75％(w/v)的氯化钠、约0.2至约3％的白蛋白、氯化钙和乙酸钠、以及冻干该凝血酶水溶液。
在一些实施例中，在凝血酶水溶液中存在钙使凝血酶结构稳定，从而在冻干期间保持其活性。另外，还需要钙来支持凝血酶止血活性。在冻干凝血酶水溶液之后，得到称为粉饼的多孔海绵状固体材料(本文也称为固体凝血酶组合物)。
在一些实施例中，凝血酶水溶液包含约200至约2000IU/ml的凝血酶、约0.3至约1.5％(w/v)的氯化钙和约0.14至约1％(w/v)的乙酸钠。
在一些实施例中，凝血酶水溶液包含约1.6至低于约4.6％(w/v)的糖或糖醇、约0.7至约1.7％(w/v)的氯化钠、高于约0.2至低于约3％的白蛋白、约0.3至约1.2％(w/v)的氯化钙和约0.14至约0.7％(w/v)的乙酸钠。
在一些实施例中，糖或糖醇以2％(w/v)的浓度存在，白蛋白以约0.6％(w/v)的浓度存在，氯化钠以约0.76％(w/v)的浓度存在，氯化钙以约0.6％(w/v)的浓度存在，并且乙酸钠以约0.27％(w/v)的浓度存在。
在一些实施例中，凝血酶水溶液基本上由凝血酶、糖或糖醇、氯化钠、白蛋白、氯化钙和乙酸钠组成。
在一些实施例中，糖包含单糖(任选地选自葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖和核糖)和/或二糖(任选地选自蔗糖、麦芽糖和乳糖)。在一些实施例中，二糖包含蔗糖和/或麦芽糖，任选地为约2％(w/v)的浓度。
在一些实施例中，糖醇包含单糖衍生的糖醇，任选地选自甘露糖醇、山梨醇和木糖醇。
在一些实施例中，单糖衍生的糖包含甘露糖醇，任选地为约2％(w/v)的浓度。
在一些实施例中，糖醇为二糖衍生的糖醇，任选地选自麦芽糖醇、异麦芽酮糖醇和乳糖醇。
在一些实施例中，凝血酶水溶液包含单一的糖(单糖或二糖)或糖醇。在一些实施例中，凝血酶水溶液缺乏糖或糖醇中的多于一种。在一些实施例中，凝血酶水溶液缺乏聚乙二醇和组氨酸中的至少一种。
在一些实施例中，该方法还包括在冻干之前将凝血酶水溶液的pH调节到在约5.5至约9范围内的pH。
在一些实施例中，凝血酶水溶液在冻干容器中的高度(如从容器的最低点测量)不大于约10mm，诸如例如约10mm、约9mm、约8mm、约7mm或约6mm。在一些示例性实施例中，该高度为约8mm。
在一些此类实施例中，其中凝血酶水溶液的高度不大于约10mm，总冻干时间不长于约35小时，诸如例如约35小时、约34小时、约33小时、约32小时、约31小时、约30小时或约29小时。在一些示例性实施例中，总冻干时间不大于约30小时。
在一些实施例中，凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约20mm。在一些实施例中，凝血酶水溶液的高度在约15至约19mm的范围内，诸如例如15mm、16mm、17mm、18mm或19mm。在一些示例性实施例中，凝血酶水溶液在冻干容器中的高度为约17mm。
在一些此类实施例中，其中凝血酶水溶液的高度不大于约20mm，总冻干时间不长于约68小时。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液的高度不大于约20mm，总冻干时间短于使用冻干容器中相同高度的对照溶液的冻干循环的时间。“对照溶液”具有不同于本文所述的组合物的组成。对照组合物可因包含额外的或其它类型的赋形剂而不同于本发明的组合物和/或在各种赋形剂的浓度方面不同于本发明的组合物。
在一些实施例中，与使用已知的现有技术溶液相比，总冻干时间缩短约37％。
在一些实施例中，冻干包括：i)使凝血酶水溶液经受冷冻工序以产生冷冻的凝血酶溶液；ii)使步骤i)的冷冻的凝血酶溶液经受初级干燥工序；以及iii)使步骤ii)的产物经受次级干燥工序。
在一些实施例中，冷冻工序是在约-45℃至约-55℃的冷冻温度下进行的。在一些实施例中，冻干是在冻干机搁板上进行的并且冷冻工序包括将冻干机搁板维持在约-45℃至约-55℃，诸如例如约-50℃的冷冻温度(本文也称为冷冻浸泡)。
在一些实施例中，冷冻工序是在约1个大气环境的压力下进行的。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约10mm(诸如约8mm)，将冷冻温度维持不长于约5小时。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约20mm(诸如15-19mm，例如约17mm)，将冷冻温度维持不长于约6小时。
在一些实施例中，在不长于约2.5小时的时间段内达到该冷冻温度，诸如冻干机搁板的温度(本文也称为冷冻蠕变)。
在一些实施例中，初级干燥工序是在约-12℃至约-18℃下进行的。在一些实施例中，初级干燥工序包括将冻干机搁板维持在约-12℃至约-18℃诸如约-12℃、约-13℃、约-14℃、约-15℃、约-16℃、约-17℃或约-18℃的初级干燥温度和约100微巴至约160微巴的压力下。在一些示例性实施例中，初级干燥温度为约-15℃。
在一些实施例中，在约80至约90分钟的时间段内达到初级干燥温度(诸如冻干机搁板的温度)(本文也称为初级干燥蠕变)。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约10mm(诸如例如约8mm)，将初级干燥温度和压力维持不长于约13小时，诸如例如约13小时、约12小时或约11小时。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约20mm(诸如例如约15至约19mm，或约17mm)，将初级干燥温度(冷冻浸泡)和压力维持不长于约31小时。
在一些实施例中，次级干燥工序是在约20℃至约30℃进行的。在一些实施例中，次级干燥工序包括将冻干机搁板维持在约20℃至约30℃(诸如例如约25℃)的次级干燥温度(本文也称为次级干燥浸泡)和小于约50微巴(诸如例如小于约20微巴)的压力。
在一些实施例中，在约60至约90分钟的时间段内达到次级干燥温度(也称为次级干燥蠕变)。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约10mm(诸如例如约8mm)，将次级干燥温度和压力维持不长于约11小时(诸如例如约9.5至约11小时)。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约20mm(诸如约15至约19mm，例如约17mm)，将次级干燥温度和压力维持不长于约15小时。在一些此类实施例中，方法还包括在次级干燥工序前，在约5至约15℃下执行中间干燥工序。在一些实施例中，次级干燥工序包括将冻干机搁板维持在约5至约15℃(诸如例如约10℃)的中间干燥温度(本文也称为中间干燥浸泡)。在一些此类实施例中，中间干燥工序期间的压力为约120微巴。在一些此类实施例中，将中间干燥工序维持不长于约13小时。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约10mm(诸如例如约8mm)，在冻干机搁板上的冻干包括：
a)将冻干机搁板的温度在约1.5至约2.5小时范围内的时间段内带到约-50℃的冷冻温度；
b)将冷冻温度维持约4至约6小时范围内的时间段；
c)将步骤b)的冻干机搁板的温度增加到约-15℃的初级干燥温度，并将压力在约50至约90分钟范围内的时间段内带到约100至约160微巴；
d)将初级干燥温度和压力维持约11至约13小时范围内的时间段；
e)将步骤d)的冻干机搁板的温度增加到约25℃的次级干燥温度，并将压力在约60至约90分钟范围内的时间段内降低到小于约50微巴；以及
f)将步骤e)的次级干燥温度和压力维持约9.5至约11小时范围内的时间段。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约20mm(诸如约15-19mm，例如17mm)，在冻干机搁板上的冻干包括：
a)将冻干机搁板的温度在约1.5至约2.5小时范围内的时间段内带到约-50℃的冷冻温度；
b)将步骤a)的冷冻温度维持约4至约6小时范围内的时间段以产生冷冻的凝血酶溶液；
c)将步骤b)的冻干机搁板的温度增加到约-15℃的初级干燥温度，并将压力在约30至约70分钟范围内的时间段内带到约100至约160微巴；
d)将初级干燥温度和压力维持约30至约32小时范围内的时间段；
e)将步骤d)的冻干机搁板的温度增加到约25℃的次级干燥温度，并将压力在约40至约80分钟范围内的时间段内降低到小于约50微巴；以及
f)将次级干燥温度和压力维持约13至约17小时范围内的时间段。
在一些实施例中，步骤a)和b)是在大气压力下进行的。
在一些实施例中，提供了一种可根据本文所述的任何方法获得的固体凝血酶组合物。
在一些实施例中，固体凝血酶组合物具有不超过约3％(重量/重量)的水含量和至少95％的凝血酶活性恢复率。
在一些实施例中，固体凝血酶组合物具有不超过约1.5％(重量/重量)的水含量和至少98％的凝血酶活性恢复率。
在一些实施例中，固体凝血酶组合物在非冷冻贮藏条件下诸如在室温下可稳定至少2年。
在一些实施例中，固体凝血酶组合物包含约19.5％至约78％(占总组合物的重量百分比)的甘露糖醇、约1％至约20％(占总组合物的重量百分比)的乙酸钠、约2％至约53％(占总组合物的重量百分比)的白蛋白、约2.5％至约31％(占总组合物的重量百分比)的氯化钙和约6％至约45％(占总组合物的重量百分比)的氯化钠。
在一些实施例中，固体凝血酶组合物包含约22％至约66％(占总组合物的重量百分比)的甘露糖醇、约1.5％至约10％(占总组合物的重量百分比)的乙酸钠、约2.5％至约43％(占总组合物的重量百分比)的白蛋白、约4％至约17％(占总组合物的重量百分比)的氯化钙和约9.5％至约25％(占总组合物的重量百分比)的氯化钠。
根据本文所述的一些实施例的一个方面，提供了一种包含以下成分的凝血酶水溶液：约1至低于约4.6％(w/v)的糖或糖醇、至少约0.7至低于约1.75％(w/v)的氯化钠、约0.2至约3％(w/v)的白蛋白、氯化钙和乙酸钠组成。
在一些实施例中，凝血酶水溶液包含约200至约2000IU/ml的凝血酶、约0.3至约1.5％(w/v)的氯化钙和约0.14至约1％(w/v)的乙酸钠。
在一些实施例中，凝血酶水溶液包含约1.6至低于约4.6％(w/v)的糖或糖醇、约0.7至约1.7％(w/v)的氯化钠、高于约0.2至低于约3％的白蛋白、约0.3至约1.2％(w/v)的氯化钙和约0.14至约0.7％(w/v)的乙酸钠。
在凝血酶水溶液的一些实施例中，糖或糖醇以约2％(w/v)的浓度存在，白蛋白以约0.6％(w/v)的浓度存在，氯化钠以约0.76％(w/v)的浓度存在，氯化钙以约0.6％(w/v)的浓度存在，并且乙酸钠以约0.27％(w/v)的浓度存在。
在一些实施例中，凝血酶水溶液基本上由凝血酶、糖或糖醇、氯化钠、白蛋白、氯化钙和乙酸钠组成。
在一些实施例中，糖为单糖，诸如选自葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖和核糖的单糖。
在一些实施例中，糖为二糖，诸如选自蔗糖、麦芽糖和乳糖的二糖。
在一些实施例中，糖醇包含单糖衍生的糖醇，诸如单糖衍生的糖醇选自甘露糖醇、山梨醇和木糖醇。在一些实施例中，单糖衍生的糖醇包含甘露糖醇，任选地为约2％(w/v)的浓度。
在一些实施例中，凝血酶水溶液包含单一的糖或糖醇(诸如单独的蔗糖、单独的麦芽糖中的一种，或甘露糖醇)。
在一些实施例中，凝血酶水溶液缺乏糖或糖醇中的多于一种。
在一些实施例中，凝血酶水溶液缺乏聚乙二醇和组氨酸中的至少一种。
在一些实施例中，含水凝血酶具有在约5.5至约9范围内的pH。
在一些实施例中，提供了一种用于冻干凝血酶水溶液的方法，其包括提供如本文所述的凝血酶水溶液，以及冻干该凝血酶水溶液。
在一些实施例中，凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约10mm(比如约8mm)。在一些此类实施例中，总冻干时间不长于约35小时。
在一些实施例中，凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约20mm(诸如约15-19mm，例如约17mm)。在一些此类实施例中，总冻干时间不长于约68小时。
在一些实施例中，冻干包括：i)使凝血酶水溶液经受冷冻工序以产生冷冻的蛋白质溶液；ii)使步骤i)的冷冻的凝血酶溶液经受初级干燥工序；以及iii)使步骤ii)的产物经受次级干燥工序。
在一些实施例中，冷冻工序是在约-45℃至约-55℃的冷冻温度下进行的。
在一些实施例中，冻干是在冻干搁板上进行的并且冷冻工序包括将冻干机搁板维持在约-45℃至约-55℃，诸如例如约-50℃的冷冻温度。
在一些实施例中，冷冻工序是在约1个大气环境的压力下进行的。
在一些实施例中，凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约10mm(诸如例如约8mm)。在一些此类实施例中，将冷冻温度维持不长于约5小时。
在一些实施例中，凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约20mm(诸如15-19mm，例如约17mm)。在一些此类实施例中，将冷冻温度维持不长于约6小时。
在一些实施例中，将冻干机搁板的温度在不长于约2.5小时的时间段内带到冷冻温度。
在一些实施例中，初级干燥工序包括将冻干机搁板维持在约-12℃至约-18℃的初级干燥温度(诸如例如约-15℃)和约100微巴至约160微巴的压力下。
在一些实施例中，在约80至约90分钟的时间段内将冻干机搁板的温度带到初级干燥温度(本文也称为初级干燥蠕变)。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约10mm(诸如例如约8mm)，将初级干燥温度和压力维持不长于约13小时(诸如例如约11至约13小时)。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约20mm(诸如约15至约19mm，例如约17mm)，将初级干燥温度和压力维持不长于约31小时。
在一些实施例中，次级干燥工序包括将步骤ii)的冻干机搁板维持在约20℃至约30℃的次级干燥温度和小于约50微巴(比如小于约20微巴)的压力。
在一些实施例中，在约60至约90分钟的时间段内将冻干机搁板的温度带到次级干燥温度。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约10mm(诸如例如约8mm)，将次级干燥温度和压力维持不长于约11小时(诸如约9.5至约11小时)。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约20mm(诸如约15至约19mm，例如约17mm)，将次级干燥温度和压力维持不长于约15小时(诸如例如约11至约13小时)。在一些此类实施例中，在步骤iii)前，将步骤ii)的冻干机搁板维持在约5至约15℃(诸如约10℃)的中间干燥温度。
在一些实施例中，将步骤ii)的冻干机搁板维持在中间干燥温度和120微巴的压力下。
在一些实施例中，将中间干燥温度维持不长于约13小时。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约10mm(诸如例如约8mm)，在冻干机搁板的冻干包括：
a)将冻干机搁板的温度在约1.5至约2.5小时范围内的时间段内带到约-50℃的冷冻温度；
b)将步骤a)的冷冻温度维持约4至约6小时范围内的时间段以产生冷冻的凝血酶溶液；
c)将步骤b)的冻干机搁板的温度增加到约-15℃的初级干燥温度，并将压力在约50至约90分钟范围内的时间段内带到约100至约160微巴；
d)将初级干燥温度和压力维持约11至约13小时范围内的时间段；
e)将步骤d)的冻干机搁板的温度增加到约25℃的次级干燥温度，并将压力在约60至约90分钟范围内的时间段内降低到小于约50微巴；以及
f)将次级干燥温度和压力维持约9.5至约11小时范围内的时间段。
在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约20mm(诸如约15至约19mm，例如约17mm)，在冻干机搁板上的冻干包括：
a)将冻干机搁板的温度在约1.5至约2.5小时范围内的时间段内带到约-50℃的冷冻温度；
b)将冷冻温度维持约4至约6小时范围内的时间段以产生冷冻的凝血酶溶液；
c)将步骤b)的冻干机搁板的温度增加到约-15℃的初级干燥温度，并将压力在约30至约70分钟范围内的时间段内降低到约100至约160微巴；
d)将初级干燥温度和压力维持约30至约32小时范围内的时间段；
e)将步骤d)的冻干机搁板的温度增加到约25℃的次级干燥温度，并将压力在约40至约80分钟范围内的时间段内降低到小于约50微巴；以及
f)将次级干燥温度和压力维持约13至约17小时范围内的时间段。
在一些实施例中，步骤a)和b)是在大气压力下进行的。
在一些实施例中，提供了一种可根据本文所述的任何方法获得的固体凝血酶组合物。
在一些实施例中，固体凝血酶组合物具有不超过约3％(重量/重量)的水含量和至少95％的凝血酶活性恢复率。
在一些实施例中，凝血酶组合物具有不超过约1.5％(重量/重量)的水含量和至少98％的凝血酶活性恢复率。
在一些实施例中，固体凝血酶组合物在非冷冻贮藏条件下(诸如在室温下)可稳定至少2年。
在一些实施例中，固体凝血酶组合物包含约19.5％至约78％(占总组合物的重量百分比)的甘露糖醇、约1％至约20％(占总组合物的重量百分比)的乙酸钠、约2％至约53％(占总组合物的重量百分比)的白蛋白、约2.5％至约31％(占总组合物的重量百分比)的氯化钙和约6％至约45％(占总组合物的重量百分比)的氯化钠。
在一些实施例中，固体凝血酶组合物包含约22％至约66％(占总组合物的重量百分比)的甘露糖醇、约1.5％至约10％(占总组合物的重量百分比)的乙酸钠、约2.5％至约43％(占总组合物的重量百分比)的白蛋白、约4％至约17％(占总组合物的重量百分比)的氯化钙和约9.5％至约25％(占总组合物的重量百分比)的氯化钠。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。此外，描述、材料、方法和实例仅是例示性的并且不旨在是限制性的。类似于或等同于本文所述的方法和材料可用于实践本发明。
如本文所用，术语“粉饼”或“固体粉饼”是指由冻干方法产生的多孔海绵状结构状组合物。
如本文所用，相对于粉饼的术语“塌缩”是指粉饼不再能够支撑其自身结构的点。
如本文所用，术语“固体组合物”是指基于固体组合物的总重量计具有等于或小于约3％(重量/重量)诸如等于或小于1.5％的水含量的组合物。
如本文所用，术语“凝血酶活性恢复率”是指在复原时与冻干前凝血酶水溶液中的初始凝血酶活性相比的固体组合物中的凝血酶活性。通常，活性恢复率以百分比表示。
如本文所用，相对于冻干/固体凝血酶组合物的术语“稳定”是例如可基本上支撑其自身结构而无粉饼塌缩的组合物，和/或在非冷冻温度贮藏条件下(例如，在2-8℃与至高室温诸如小于25℃的温度下)保持其活性的至少80％(诸如90％、95％或更高)达至少2年的组合物。在本发明的一个实施例中，固体组合物在室温下贮存时稳定2年。通常，塌缩最明显地特征在于在干燥期间失去粉饼结构。塌缩通常产生体积明显小于用来制备粉饼的配方的体积的结构。此外，可以观察到平均孔径和孔隙度的减小以及堆积密度的增大。
术语“冻干”通常是指冷冻溶液以及然后降低水浓度(例如通过升华到不支持生物或化学反应的水平)的方法。所得的冻干组合物可贮存相对长的一段时间。在贮存后，可将冻干组合物作为粉末使用或可通过添加各种体积的水溶液而复原。在复原期间添加的体积可类似于冻干前溶液的体积，更低或更高。
如本文所用，术语“包含”、“包括”、“具有”及其语法变体应视为指定所述特征、整数、步骤或组分，但不排除一种或多种另外的特征、整数、步骤、组分或其组的添加。这些术语涵盖术语“由…组成”和“基本上由…组成”。
如本文所用，不定冠词“一个”和“一种”意指“至少一个/种”或“一个或多个/一种或多种”，除非上下文另有明确说明。
如本文所用，术语“约”是指±10％。
本文所述的溶液和方法使得能够通过与本领域当前已知的冻干方法相比更短的冻干循环得到固体凝血酶组合物，从而提高冻干能力并降低生产成本。使用本文所述的溶液和方法得到的固体凝血酶组合物在冻干后与已知的凝血酶组合物相比具有低水含量，在室温下贮存期间在相对长的时间段内稳定，并在复原时示出高百分比的凝血酶活性恢复率。
附图说明
本发明的一些实施例在本文中参考附图进行描述。说明书连同附图使得本发明的一些实施例可如何实践对于本领域普通技术人员显而易见。附图用于例示性讨论的目的，并且不试图显示比本发明的基本理解所需更详细的实施例的结构细节。为清楚起见，附图中描绘的一些物体未按比例绘制。
在附图中：
图1示出了在如本文所述的示例性短冻干循环后得到的粉饼的视觉外观。
具体实施方式
本发明在其一些实施例中涉及用于冻干凝血酶水溶液的方法、用于此类冻干方法的凝血酶溶液，和通过此类方法产生的固体凝血酶组合物。
本文教导的原理、用途和具体实施可参考所附说明书得到更好理解。在精读说明书后，本领域技术人员能够实施本发明而无需过度努力或实验。
在详细说明至少一个实施例之前，应当理解本发明不一定在其应用中限制于下述说明书中所示的组分和/或方法的构建和排列的细节。本发明能够具有以各种方式实践或实施的其它实施例。本文采用的措辞和术语用于描述性目的且不应视为限制性的。
如上所述，已知的凝血酶溶液在所存在的赋形剂的数量和类型方面以及在各种赋形剂的浓度方面变化相当大。
实例
材料和方法
凝血酶储备溶液：
用于制备以下实例中所述的凝血酶水溶液的凝血酶储备溶液包含约3,500IU/ml的凝血酶、约200mM的NaCl，和下述稳定剂：2％的甘露糖醇和0.2％的人血清白蛋白(HSA)(除非另外指明)。储备溶液由人血浆的因子II(前凝血酶)制备，该因子基本上如美国专利5143838中所述而活化并通过依次使用二乙基氨基乙基(DEAE)纤维素阴离子交换树脂和SP阳离子交换树脂而纯化，该专利据此以引用方式并入。
冻干：
A.冻干容器中高度为8mm的凝血酶溶液的冻干：
在Christ Epsilion 2-8D冻干机(德国的克里斯特公司(Christ,Germany))的冻干机搁板上在8ml的硅化玻璃小瓶(德国的肖特公司(Schott,Germany))中进行冻干。将每只小瓶灌装2ml的凝血酶水溶液。每只小瓶中溶液的高度为约8mm。
如下表1(总时间34小时)和表2(总时间30小时)中所指定，进行了两个不同的短冻干循环。所给的温度为冻干机搁板的温度。
在冻干后，得到了体积类似于冻干前水溶液的体积的固体凝血酶组合物。
表1
如本文所用，关于冷冻或干燥过程的术语“浸泡”是指将正在恒定温度和压力下进行冻干的组合物维持指定的时间段以便分别实现冷冻或干燥。
如本文所用，关于冷冻或干燥过程的术语“蠕变”是指这样一个步骤：其中使正在进行冻干的组合物的温度和压力在指定的时间段内逐渐变化，以便将组合物分别带到指定的冷冻或干燥温度和压力。
表2
B.冻干容器中高度为17mm的凝血酶溶液的冻干：
在Christ Epsilion 2-8D冻干机(德国的克里斯特公司)的冻干机搁板上在杯中进行冻干。将每只小瓶灌装52ml的凝血酶水溶液。每只小瓶中溶液的高度为约17mm。
如表3中所指定，进行短冻干循环(总时间68小时)。所给的温度为冻干机搁板的温度。
在冻干后，得到了体积类似于冻干前水溶液的体积的固体凝血酶组合物。
表3
冻干凝血酶组合物中水含量的定量：
使用基于美国药典测定法的(USP 27,<921>,P.2398-2399)的卡尔费休容量滴定法(KFT)进行了水含量测定。在滴定之前，通过将无水甲醇加入含有冻干组合物的小瓶并摇晃小瓶而将水从冻干组合物中提取出来。从上清液中取出样品进行滴定。
凝血酶活性的测定：
使用凝血时间测定法根据改良的欧洲药典测定法(0903/1997)程序通过测量不同溶液中的凝血酶凝血活性而测定凝血酶水溶液的凝血酶活性。简而言之，将凝血酶的标准溶液(4、6、8和10IU/ml)或测试溶液在37℃下温育2分钟。然后将40μl的各测试溶液或标准溶液与160μl的纤维蛋白原溶液(0.1％；Enzyme research(酶研究)；目录号FIB12800L)混合并测量凝血时间。使用标准品绘制了对数凝血时间相对于对数凝血酶浓度的校准曲线。通过所得的凝血时间(从校准曲线内推并乘以稀释因子而由凝血机(Diagnostica StagoStart Coagulation Analyzer)自动计算)确定了不同测试溶液中的凝血酶活性。
复原后的凝血酶活性恢复率(初始活性的％)：
如上所述在冻干前的测试溶液中以及在通过冻干获得的固体凝血酶组合物中在用纯化水复原至原体积之后测量凝血酶活性。通过将固体凝血酶组合物中复原后所得的活性除以凝血酶溶液中冻干前所得的活性并乘以100计算恢复的活性。
通过短冻干方法获得的固体凝血酶组合物的定性和定量评价：
通过以下参数评价了通过使不同的凝血酶水溶液经受短冻干循环而获得的固体凝血酶组合物：固体组合物的水含量、固体组合物复原后的凝血酶活性恢复率，和粉饼的结构外观(通过视觉检查)。通常，将具有“良好结构外观”的粉饼定义为体积类似于冻干前的凝血酶水溶液的体积，为一整块的，在整个固体组合物中具有均匀孔隙度，并且无明显的湿区的粉饼。
为了确定短冻干方法对不同凝血酶配方的作用，由“材料和方法”章节中所述的凝血酶储备溶液制备了以不同浓度含有不同成分(例如，不同的糖、盐和赋形剂)的若干凝血酶水溶液，然后将这些溶液使用如表1、2或3中详细描述的短冻干循环进行冻干。
实例1：在经受短冻干循环的凝血酶溶液中使用不同的糖和浓度或糖醇
将不同浓度的二糖(蔗糖和麦芽糖)和糖醇(甘露糖醇)用于制备凝血酶水溶液，并研究了通过将此类凝血酶溶液用于短冻干循环而获得的固体凝血酶组合物。
通过将甘露糖醇加入如下所述的稀释储备溶液而以1.6％、2.1％、2.6％和4.6％(w/v)的浓度测试了甘露糖醇；以及以2％(w/v)的浓度测试了蔗糖和麦芽糖。[为了制备凝血酶测试溶液，将上述凝血酶储备溶液用在水中以pH 7.0提供以下最终组成的溶液按1:3.5稀释：0.6％的人血清白蛋白、20mM的乙酸钠(0.27％)、130mM的NaCl(0.76％)和0.6％的CaCl2，然后将测试的糖或糖醇以上文列出的浓度加入该溶液中。就甘露糖醇而言，将溶液补充到所列浓度(在稀释储备溶液后，溶液含有约0.6％的甘露糖醇)。
值得注意的是，存在于凝血酶储备溶液中的人血清白蛋白也作为“背景成分”以大约0.06％的浓度存在于所有测试溶液中。另外，储备溶液含有0.6％的甘露糖醇。
将制得的凝血酶水溶液用如上表2中所述的短冻干循环来冻干，以获得固体凝血酶组合物。测量每种固体组合物的水含量，以及在将冻干的组合物复原之后的凝血酶活性恢复率。结果呈现于下表4中。
表4
结果表明，每种所测试的糖和糖醇当以2.6％或更低的浓度存在于凝血酶水溶液中时产生在短冻干循环后具有低水含量(0.4-0.6％)并在固体组合物复原后具有高凝血酶活性恢复率(95-100％)的固体凝血酶组合物。
结果还表明，凝血酶水溶液产生了维持其结构而无塌缩并且具有如上所定义的良好结构外观的粉饼。
相比之下，包含4.6％的甘露糖醇的凝血酶水溶液在经受短冻干循环时产生了具有1.7％的更高水含量的收缩粉饼。
这些结果表明，用于短冻干循环的凝血酶水溶液有利地包含约1.6％至低于约4.6％的糖或糖醇以便获得固体状且稳定的(在结构和功能上)凝血酶组合物。
实例2：在经受短冻干循环的凝血酶溶液中使用不同浓度的人血清白蛋白
将不同浓度的HSA用于制备凝血酶水溶液，并研究了通过将此类凝血酶溶液用于短冻干循环而获得的固体凝血酶组合物。
按以下浓度测试了HSA：0.2％、0.6％、3％和10％。
由凝血酶储备溶液通过用在水中以pH 7.0提供以下最终组成的溶液按1:3.5稀释而制备溶液：2.6％的甘露糖醇、20mM的乙酸钠(0.27％)、130mM的NaCl(0.76％)和0.6％的CaCl2。
值得注意的是，人血清白蛋白以大约0.06％的浓度存在于所有测试溶液中(除了上文所列出的所添加的HSA浓度之外)。
将制得的凝血酶水溶液用上表2中所述的短冻干循环来冻干，其中溶液在冻干容器中具有约8mm的高度，以获得固体凝血酶组合物。测量每种固体组合物的水含量，以及在将固体组合物复原之后的凝血酶活性恢复率。结果呈现于下表5中。
表5
结果表明，改变HSA浓度对固体凝血酶组合物中的水含量和固体组合物复原后的凝血酶活性恢复率有明显影响。
更具体地讲，已表明，含有0.6％HSA的凝血酶溶液产生了同时具有相对低的水含量和复原时的高凝血酶活性恢复率的固体组合物。相比之下，具有较低HSA浓度的凝血酶溶液产生了具有增加的水含量的固体组合物，而具有较高HSA浓度的溶液产生了复原时的较低的凝血酶活性恢复率。
因此，已表明，最佳的凝血酶溶液有利地包含高于约0.2％至低于约3％的浓度的HSA。
实例3：在经受短冻干循环的凝血酶溶液中使用不同的盐和浓度
A.氯化钠(NaCl)浓度的作用：
将不同浓度的NaCl(分别为90mM、120mM和150mM，即0.5％w/v、0.7w/v和0.9w/v)用于制备缺乏凝血酶的水溶液，并研究了通过将此类溶液用于短冻干循环而获得的固体组合物，其中溶液在冻干容器中的高度为约8mm。
溶液除了包含不同浓度的NaCl外还包含2％的甘露糖醇、0.6％的HSA、20mM的乙酸钠(0.27％)和0.6％的CaCl2，pH为7.0。
将溶液使用与上表2中所述的类似的短循环进行冻干，其中溶液在冻干容器中的高度为约8mm，其中初级干燥浸泡比表2中所述的长一小时。
在冻干后，测试了固体组合物中的水含量。结果呈现于下表6中。
表6：
如表中所示，水含量与高达150mM的NaCl浓度成反比。
在使用凝血酶溶液和缺乏凝血酶的溶液的额外的类似实验中(数据未示出)，当将NaCl浓度增大超出150mM时未发现水含量的进一步降低。
300mM(1.75％w/v)及以上的NaCl浓度对通过凝血时间测定法测量的凝血酶活性具有抑制作用(数据未示出)。
关于固体组合物的结构外观，由包含90mM的NaCl的溶液制得的粉饼具有不良的外观，与其制备溶液的体积相比发生收缩，并具有颗粒状稠度，在整个固体组合物中的孔隙度不均匀。
因此，得出结论：有利的是，最佳的凝血酶溶液包含至少120mM(0.7％w/v)至低于300mM(1.75％w/v)的浓度的NaCl。
B.用氯化钾(KCl)部分替换NaCl的作用
评估了在凝血酶溶液中KCl替代NaCl的潜在使用。由于NaCl存在于用来制备测试溶液的凝血酶储备溶液中，因此无法将其完全除去，并因而将溶液补充65mM的KCl(将溶液带到约125mM的最终盐浓度)。另外，测试了额外的凝血酶溶液，包括补充了NaCl的储备溶液(将溶液带到130mM的最终盐浓度)。
通过以下方式制备补充了NaCl或补充了KCl的溶液：将储备溶液按1:3.5稀释以提供60mM的NaCl浓度。然后将第一溶液补充到130mM的NaCl浓度；并为第二溶液补充65mM的KCl。
对储备溶液进行稀释以便以pH 7.0在水中提供以下最终组成：2.6％的甘露糖醇、20mM的乙酸钠(0.27％)和0.6％的CaCl2。
将制得的溶液用上表2中所述的短冻干循环来冻干，其中溶液在冻干容器中的高度为约8mm，并测量了固体组合物中的水含量和固体组合物复原后的凝血酶活性恢复率。结果呈现于下表7中。
表7
据发现，在溶液中用KCl部分替换NaCl对短冻干循环后获得的固体凝血酶组合物的水含量具有有害作用(包含NaCl+KCl的溶液在冻干后的固体组合物的水含量为5.2％，相比之下，含有NaCl而无KCl的溶液在冻干之后的水含量为0.6％)。通过包含130mM的NaCl的溶液和包含65mM KCl与60mM NaCl的溶液的冻干而获得的固体组合物在复原之后得到了相似的凝血酶活性恢复率，如表7中所示。
对固体组合物的结构外观的视觉检查表明，用KCl替换NaCl产生了收缩的粉饼。
因此得出结论：有利的是，为了得到具有相对低的水含量的固体组合物，优选的是KCl不存在于凝血酶溶液中。
还得出结论：使用短循环产生具有低水含量和冻干后高凝血酶活性恢复率的最佳凝血酶水溶液，除了约0.3至约1.2％的氯化钙和约0.14至约0.7％的乙酸钠之外，包含约1.6％至低于约4.6％的糖或糖醇、至少约120mM(0.7％w/v)至低于约300mM(1.75％w/v)的氯化钠以及高于约0.2％至低于约3％的白蛋白。
实例4：以冻干容器中8mm的溶液高度在短冻干循环中使用本文所述的溶液和类似 于现有技术溶液的溶液
如下制备了三种溶液：一种如本文所述的溶液，和两种类似于现有技术溶液的溶液：
1.如本文所述的凝血酶溶液，在pH 7.0的蒸馏水中包含2％的甘露糖醇、0.6％的人血清白蛋白、20mM的乙酸钠(0.27％)、130mM的氯化钠(0.76％)和40mM的CaCl2(0.6％)。
2.类似于EP 1766003B1(Jiang等人)中所公开的凝血酶溶液，在pH 6.0的蒸馏水中包含3％的蔗糖、4％的甘露糖醇、150mM的NaCl(0.9％)、0.1％的聚乙二醇3350(PEG3350)、4mM的CaCl2(0.04％)和5mM(0.08％)的组氨酸。
3.类似于EP 813598B1(MacGregor等人)中所公开的凝血酶溶液，在pH 6.5的蒸馏水中包含40mM(0.78％)的葡糖酸、20mM(0.5％)的柠檬酸三钠和150mM的NaCl(0.9％)。
溶液的组分进一步呈现在表8中。
表8
溶液1 溶液2 溶液3
甘露糖醇 2％ 4％ --
白蛋白 0.6％ -- --
乙酸钠 0.27％ -- --
氯化钠 0.76％ 0.9％ 0.9％
氯化钙 0.6％ 4mM(0.04％) --
蔗糖 -- 3％ --
PEG -- 0.1％ --
组氨酸 -- 5mM(0.08％) --
葡糖酸 -- - 40mM(0.78％)
柠檬酸三钠 -- -- 20mM(0.5％)
通过将上述凝血酶储备溶液按1:3.5用包含各溶液1-3中所列的成分的溶液稀释而制备所有三种凝血酶溶液。甘露糖醇和人血清白蛋白分别以大约0.6％和0.06％的浓度存在于所有三种测试溶液中，作为背景成分。
将溶液用上表1或表2中所述的短冻干循环进行冻干(其中溶液在冻干容器中的高度为约8mm)。如上所述，测量了固体凝血酶组合物的水含量以及固体凝血酶组合物复原后的凝血酶活性恢复率。
图1示出了本文所述的凝血酶水溶液(溶液1，图1中的#1)在短冻干后所得的固体凝血酶组合物和根据EP 1766003B1的溶液(溶液2，图1中的#2)在短冻干后所得的固体凝血酶组合物的视觉外观。图1中所示的固体组合物使用如表1中所述的循环而获得。当使用如表2中所述的循环时得到了类似的结果。
固体凝血酶组合物的外观的视觉检查表明，根据本发明的凝血酶溶液和溶液3在冻干后所得的固体组合物具有根据上述定义的“良好结构外观”。然而，在将根据EP1766003B1的凝血酶溶液(溶液2)用于短冻干循环后得到的粉饼具有颗粒状结构。
三种固体凝血酶组合物中的水含量和固体组合物的凝血酶活性恢复率呈现于下表9中。
表9
如表9中所示，据发现，在短冻干循环(如表1或表2中所述)后，最低的平均水含量存在于使用本文所述的溶液制得的冻干固体组合物中(0.7±0.14％)。
如表9中进一步所示，据发现，在短循环冻干的固体组合物复原之后，在使用本文所述的溶液根据表1或表2制得的固体组合物中得到了最高的凝血酶活性恢复率(99±1.4％)。
实例5：以冻干容器中17mm的溶液高度在短冻干循环中使用本文所述的溶液
对以下溶液进行冻干：如本文所述的第一凝血酶溶液，其在pH 7.0的蒸馏水中包含2％的甘露糖醇、0.6％的人血清白蛋白、20mM的乙酸钠(0.27％)、130mM的氯化钠(0.76％)和40mM的CaCl2(0.6％)；和第二溶液，其类似于第一溶液，但包含低于120mM(0.7％)的氯化钠(低于0.76％)的氯化钠浓度。将第一溶液溶用上表3中所述的短冻干循环来冻干；并将第二溶液(具有较低的氯化钠浓度)在持续时间为108小时的冻干循环中冻干(其中各溶液在冻干容器中的高度为约17mm)。
如上所述，测量了两种固体凝血酶组合物的水含量以及两种固体凝血酶组合物复原后的凝血酶活性恢复率。
在两种固体组合物中，水含量为1.5％并且凝血酶活性恢复率为100％。
结果表明，根据本发明的凝血酶溶液使得能够将冻干循环的持续时间缩短约37％。总之，本文所述的凝血酶溶液有利地使得能够使用短冻干循环，该短冻干循环产生与已知凝血酶溶液相比具有低水含量和高凝血酶活性恢复率的固体组合物。
应当理解，为清晰起见，在分开实施例的上下文中描述的本发明的某些特征，也可在单个实施例中组合提供。相反地，为简明起见，在单个实施例的上下文中描述的本发明的各种结构也可单独地或以任何合适的子组合形式提供，或如其所适当地提供于本发明的任何其它所述实施例中。在各个实施例的上下文中所述的某些特征不应视为这些实施例的基本特征，除非实施例如果没有这些元件将是不起作用的。
尽管本发明已与其具体实施例结合进行描述，但显而易见的是许多替代形式、修饰和变化对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，预期涵盖属于所附权利要求的范围内的所有此类替代形式、修饰和变化。
本申请中的任何参考文献的引用或鉴定不应解释为此类参考文献可用作本发明的现有技术的承认。

Claims (37)

1.一种用于冻干凝血酶水溶液的方法，所述方法包括：
提供包含以下成分的所述凝血酶水溶液：1至低于4.6% (w/v)的糖醇、至少0.7至低于1.75% (w/v)的氯化钠、0.2至3% (w/v)的白蛋白、氯化钙和乙酸钠；以及
冻干所述凝血酶水溶液，其中所述凝血酶水溶液在冻干容器中的高度在6mm至10mm的范围内；
其中所述凝血酶水溶液缺乏聚乙二醇和糖；以及
其中总冻干时间不长于35小时。
2.一种用于冻干凝血酶水溶液的方法，所述方法包括：
提供包含以下成分的所述凝血酶水溶液：1至低于4.6% (w/v)的糖、至少0.7至低于1.75% (w/v)的氯化钠、0.2至3% (w/v)的白蛋白、氯化钙和乙酸钠；以及
冻干所述凝血酶水溶液，其中所述凝血酶水溶液在冻干容器中的高度在6mm至10mm的范围内；
其中所述凝血酶水溶液缺乏聚乙二醇；以及
其中总冻干时间不长于35小时。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述凝血酶水溶液包含200至2000IU/ml的凝血酶、0.3至1.5% (w/v)的氯化钙和0.14至1% (w/v)的乙酸钠。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述凝血酶水溶液包含：1.6至低于4.6% (w/v)的糖醇或糖、0.7至1.7% (w/v)的氯化钠、高于0.2至低于3%的白蛋白(w/v)、0.3至1.2% (w/v)的氯化钙和0.14至0.7% (w/v)的乙酸钠。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述糖醇或糖以2% (w/v)的浓度存在，所述白蛋白以约0.6% (w/v)的浓度存在，所述氯化钠以约0.76% (w/v)的浓度存在，所述氯化钙以约0.6% (w/v)的浓度存在，并且所述乙酸钠以约0.27% (w/v)的浓度存在。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述凝血酶水溶液基本上由凝血酶、糖醇或糖、氯化钠、白蛋白、氯化钙和乙酸钠组成。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述糖醇包含单糖衍生的糖醇。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述单糖衍生的糖醇为甘露糖醇。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述甘露糖醇以约2% (w/v)的浓度存在。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述凝血酶水溶液包含单一的糖醇或糖。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述凝血酶水溶液缺乏组氨酸。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，还包括在所述冻干之前，将所述凝血酶水溶液的pH调节到在5.5至9范围内的pH。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述凝血酶水溶液在冻干容器中的高度为约8mm。
14.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述总冻干时间不长于30小时。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述冻干是在冻干机搁板上进行的并包括：
i. 使所述凝血酶水溶液经受冷冻工序以产生冷冻的凝血酶溶液；
ii. 使步骤i)的所述冷冻的凝血酶溶液经受初级干燥工序；以及
iii. 使步骤ii)的产物经受次级干燥工序。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述冷冻工序包括将所述冻干机搁板维持在-45℃至-55℃的冷冻温度。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中所述冷冻工序是在约1个大气环境的压力下进行的。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述冷冻温度为约-50℃。
19.根据权利要求15至18中任一项所述的方法，其中所述初级干燥工序包括将所述冻干机搁板维持在-12℃至-18℃的初级干燥温度和100微巴至160微巴的压力下。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述初级干燥温度为约-15℃。
21.根据权利要求16至20中任一项所述的方法，其中所述次级干燥工序包括将所述冻干机搁板维持在20℃至30℃的次级干燥温度和小于50微巴的压力下。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述压力小于20微巴。
23.根据权利要求21或22所述的方法，其中所述次级干燥温度为约25℃。
24.根据权利要求21至23中任一项所述的方法，还包括在步骤iii)之前，将所述冻干机搁板维持在5至15℃的中间干燥温度。
25.根据权利要求24所述的方法，其中将所述冻干机搁板维持在所述中间干燥温度是在120微巴的压力下进行的。
26.根据权利要求15所述的方法，其中所述凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于10mm，并且其中在冻干机搁板上的所述冻干包括：
a) 将所述冻干机搁板的温度在1.5至2.5小时范围内的时间段内带到约-50℃的冷冻温度；
b) 将步骤a)的所述冷冻温度维持4至6小时范围内的时间段以产生冷冻的凝血酶溶液；
c) 将步骤b)的所述冻干机搁板的温度增加到约-15℃的初级干燥温度，并将所述压力在50至90分钟范围内的时间段内带到100至160微巴；
d) 将步骤c)的所述温度和压力维持11至13小时范围内的时间段；
e) 将步骤d)的所述冻干机搁板的温度增加到约25℃的次级干燥温度，并将所述压力在60至90分钟范围内的时间段内降低到小于50微巴；以及
f) 将步骤e)的所述温度和压力在所述次级干燥温度和压力下维持9.5至11小时范围内的时间段。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述高度为约8mm。
28.一种包含凝血酶的固体组合物，其通过用于冻干凝血酶水溶液的方法而获得，所述方法包括：
提供包含以下成分的所述凝血酶水溶液：约1至低于约4.6% w/v的单一的糖或糖醇、至少0.7至低于约1.75% w/v的氯化钠、约0.2至约3% w/v的白蛋白、氯化钙和乙酸钠，其中所述凝血酶水溶液缺乏聚乙二醇；以及
冻干所述凝血酶水溶液，其中所述凝血酶水溶液在冻干容器中的高度在6mm至10mm的范围内，以及其中总冻干时间不长于约35小时；
其中所获得的固体组合物不含聚乙二醇，包含凝血酶、单一的糖或糖醇和氯化钠，并且其中所述固体组合物具有小于所述组合物总重量的3％的水含量。
29.根据权利要求28所述的固体凝血酶组合物，其中所述凝血酶水溶液包含约200至约2000 IU/ml的凝血酶；约0.3至约1.5％ w/v的氯化钙；和约0.14至约1％ w/v的乙酸钠。
30.根据权利要求29所述的固体凝血酶组合物，其中所述凝血酶水溶液包含：约1.6至低于约4.6％w/v的单一的糖或糖醇；约0.7至约1.7％ w/v的氯化钠；高于约0.2至低于约3％ w/v的白蛋白；约0.3至约1.2％ w/v的氯化钙；和约0.14至约0.7％w/v的乙酸钠。
31.根据权利要求30所述的固体凝血酶组合物，其中所述单一的糖或糖以2% w/v的浓度存在，所述白蛋白以约0.6% w/v的浓度存在，所述氯化钠以约0.76% w/v的浓度存在，所述氯化钙以约0.6% w/v的浓度存在，并且所述乙酸钠以约0.27% w/v的浓度存在。
32.根据权利要求28所述的固体凝血酶组合物，所述凝血酶水溶液基本上由凝血酶；单一的糖或糖醇；氯化钠；白蛋白；氯化钙；和乙酸钠组成。
33.根据权利要求28所述的固体凝血酶组合物，其中所述单一的糖醇是甘露糖醇。
34.根据权利要求33所述的固体凝血酶组合物，其中所述甘露糖醇以约2％ w/v的浓度存在。
35.根据权利要求28所述的固体凝血酶组合物，其中所述凝血酶水溶液缺乏组氨酸。
36.根据权利要求28所述的固体凝血酶组合物，其包含氯化钠，所述氯化钠的量为所述固体组合物重量的6％至45％。
37.一种固体凝血酶组合物，其包含：以组合物的总重量计浓度为约19.5％至约78％的甘露糖醇、以组合物的总重量计浓度为约1％至约20％的乙酸钠、以总组合物的总重量计浓度为约2％至约53％的白蛋白、以组合物的总重量计浓度为约2.5％至约31％的氯化钙和以组合物的总重量计浓度为约6％至约45％的氯化钠，并且其中所述固体组合物具有小于所述组合物总重量的3％的水含量。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9212357B2 (en) 2012-12-03 2015-12-15 Omrix Biopharmaceuticals Ltd. Thrombin solution and methods of use thereof
EP3268030A4 (en) * 2015-03-13 2018-08-01 Vitrum Biologies Inc. Method of stabilizing thrombin and composition thereof
US10159720B2 (en) 2015-12-08 2018-12-25 Omrix Biopharmaceuticals Ltd Thrombin microcapsules, preparation and uses thereof
IL242984A0 (en) * 2015-12-08 2016-02-29 Omrix Biopharmaceuticals Ltd Thrombin microcapsules, their preparation and how to use them
US10420134B2 (en) 2016-02-02 2019-09-17 Cisco Technology, Inc. System and method to facilitate subframe scheduling in a split medium access control radio access network environment
CN109010906B (zh) * 2018-08-16 2021-05-14 陈明远 一种促进术后伤口局部止血及促进术后创面上皮化的生物胶水及其工作方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1100655A (zh) * 1992-11-19 1995-03-29 迟斌元 一种含有缓冲剂和凝血酶的药物组合物
CN1711111A (zh) * 2002-11-14 2005-12-21 财团法人化学及血清疗法研究所 带有凝血酶的生物可吸收合成非织造织物
EP1927658A1 (en) * 2004-06-22 2008-06-04 Zymogenetics, Inc. Thrombin compositions
CN101214374A (zh) * 2007-01-05 2008-07-09 兆科药业（合肥）有限公司 具有促凝血与止血功能的制剂
CN101970021A (zh) * 2008-03-03 2011-02-09 奥姆里克斯生物药品有限公司 包含活性成分的明胶海绵、其制备及用途
CN102552967A (zh) * 2006-12-15 2012-07-11 生命连结有限公司 明胶-转谷氨酰胺酶止血敷料和密封材料

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS63243032A (ja) * 1987-03-27 1988-10-07 Green Cross Corp:The トロンビンの加熱処理方法
US5605884A (en) 1987-10-29 1997-02-25 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Factor VIII formulations in high ionic strength media
US4877608A (en) 1987-11-09 1989-10-31 Rorer Pharmaceutical Corporation Pharmaceutical plasma protein formulations in low ionic strength media
JP2715104B2 (ja) * 1988-08-18 1998-02-18 株式会社ミドリ十字 トロンビン乾燥製剤
DE3843126C3 (de) 1988-12-22 1994-10-06 Octapharma Ag Verfahren zur Herstellung eines hochreinen Thrombinkonzentrates
CA2124690C (en) 1992-10-02 2007-09-11 Thomas Osterberg Composition comprising coagulation factor viii formulation, process for its preparation and use of a surfactant as stabilizer
JP3028274B2 (ja) * 1994-09-30 2000-04-04 持田製薬株式会社 トロンビン固形製剤の安定化方法
GB9503750D0 (en) 1995-02-24 1995-04-12 Common Services Agency Thrombin preparation
ES2395466T3 (es) * 2004-06-22 2013-02-12 Zymogenetics, Inc. Composiciones de trombina
ES2226587B1 (es) * 2004-10-22 2005-12-16 Probitas Pharma, S.A. Composicion de trombina estable.
EP2377554A1 (en) * 2005-07-22 2011-10-19 Amgen, Inc Concentrated protein lyophilates, methods and uses
WO2007029159A1 (en) * 2005-09-05 2007-03-15 Ranbaxy Laboratories Limited A process for the preparation of lyophilized sodium bicarbonate
EA018440B1 (ru) 2006-11-24 2013-08-30 Кадила Хелзкэр Лимитед Композиции конъюгатов пэг-интерферон альфа
WO2010032246A2 (en) * 2008-09-22 2010-03-25 Omrix Biopharmaceuticals Ltd. Implantable device comprising a substrate pre-coated with stabilized fibrin
AU2009313325B2 (en) 2008-11-07 2014-05-01 Takeda Pharmaceutical Company Limited Factor VIII formulations
DK2947148T3 (en) 2010-04-20 2017-09-18 Octapharma Ag NEW STABILIZER FOR PHARMACEUTICAL PROTEINS
BR112012030457B1 (pt) * 2010-06-01 2021-03-09 Baxter International Inc. processo para fabricar uma composição hemostática seca e estável, recipiente acabado final, método para prover uma composição hemostática pronta para uso, e, kit para administrar uma composição hemostática
IL207586A0 (en) 2010-08-12 2010-12-30 Omrix Biopharmaceuticals Ltd A fibrin based therapeutic preparation and use thereof
US9212357B2 (en) 2012-12-03 2015-12-15 Omrix Biopharmaceuticals Ltd. Thrombin solution and methods of use thereof

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1100655A (zh) * 1992-11-19 1995-03-29 迟斌元 一种含有缓冲剂和凝血酶的药物组合物
CN1711111A (zh) * 2002-11-14 2005-12-21 财团法人化学及血清疗法研究所 带有凝血酶的生物可吸收合成非织造织物
EP1927658A1 (en) * 2004-06-22 2008-06-04 Zymogenetics, Inc. Thrombin compositions
CN102552967A (zh) * 2006-12-15 2012-07-11 生命连结有限公司 明胶-转谷氨酰胺酶止血敷料和密封材料
CN101214374A (zh) * 2007-01-05 2008-07-09 兆科药业（合肥）有限公司 具有促凝血与止血功能的制剂
CN101970021A (zh) * 2008-03-03 2011-02-09 奥姆里克斯生物药品有限公司 包含活性成分的明胶海绵、其制备及用途

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Publication number Publication date
US11225652B2 (en) 2022-01-18
EP2925347A1 (en) 2015-10-07
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RU2015126540A (ru) 2017-01-13
KR20150091503A (ko) 2015-08-11
US20200032239A1 (en) 2020-01-30
BR112015013071A2 (pt) 2017-07-11
US10479987B2 (en) 2019-11-19
AU2013353636A1 (en) 2015-07-16
HK1214958A1 (zh) 2016-08-12
EP3760221A1 (en) 2021-01-06
MX358132B (es) 2018-08-06
BR112015013071B1 (pt) 2023-01-17
US20140154773A1 (en) 2014-06-05
BR112015013071A8 (pt) 2019-10-08
JP2018162254A (ja) 2018-10-18
US20220098570A1 (en) 2022-03-31
JP6526565B2 (ja) 2019-06-05
US20160060614A1 (en) 2016-03-03
WO2014087394A1 (en) 2014-06-12
AU2013353636B2 (en) 2018-03-01
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