CN101214374A

CN101214374A - 具有促凝血与止血功能的制剂

Info

Publication number: CN101214374A
Application number: CNA2007100000410A
Authority: CN
Inventors: 许玉贞; 李小羿; 张国辉
Original assignee: ZHAOKE PHARMACEUTICAL (HEFEI) CO Ltd
Current assignee: ZHAOKE PHARMACEUTICAL (HEFEI) CO Ltd
Priority date: 2007-01-05
Filing date: 2007-01-05
Publication date: 2008-07-09

Abstract

本发明涉及一种从蝰蛇蛇毒中提取的具有促凝血与止血功能的蛇毒血凝酶制剂，其中的生化成分由类凝血酶与类凝血激酶的层析纯化方法制备，并加入药用辅料以一定的配比配制。本发明的蛇毒血凝酶制剂包含注射剂、气雾剂、凝胶剂及敷剂等，可用于需减少流血或止血的各种医疗情况。

Description

具有促凝血与止血功能的制剂

技术领域

本发明涉及一种具有促凝血与止血功能的制剂，尤其涉及一种包含从蝰蛇蛇毒中提取的具有促凝血和止血功能的药物蛇毒血凝酶的制剂。

背景技术

立止血

(Reptilase)又名巴特罗酶(Batroxobin)，1936年由奥地利学者Klobusitzky第一个成功的从巴西矛头蝮蛇(Bothrops atrox)的毒液中分离纯化精制而得，是一种以止血作用为主的酶制剂，经数十年的临床应用，证明了该药具有显著的止血功能。目前世界上生产该药的国家有瑞士、美国、英国、意大利、法国及瑞典等少数国家，他们所用的原料基本从巴西进口，同时引进相应的酶纯化技术。我国用的立止血粉针是于1989年开始从瑞士Solco Basle Ltd公司进口的，仅此一项每年需花费几百万美元。

本发明人已公开了一种蝰蛇蛇毒血凝酶的层析纯化方法(中国专利号：ZL02153855.7)，用于从蝰蛇蛇毒中提取类凝血酶(巴曲酶)和类凝血激酶(磷脂依赖性凝血因子X激活物)。

现有技术中的蛇毒血凝酶类制剂所存在的问题在于所含辅料量较多，主要为注射剂的冻干粉针剂。如立止血

每支所含辅料量多达150mg，只能制成冻干粉针剂，使用不便。

发明内容

因此，本发明的目的在于提供包含从蝰蛇蛇毒中提取的具有促凝血和止血功能的蛇毒血凝酶的制剂。

具体说，本发明涉及包含按本发明人已经公开的方法从蝰蛇蛇毒中提取具有促凝血和止血功能的蛇毒血凝酶的制剂。

本发明还涉及提供所述药剂的不同剂型，比如注射剂、气雾剂、凝胶剂与敷剂等。

在本发明制剂中所使用的生化成分类凝血酶(巴曲酶)和类凝血激酶(磷脂依赖性凝血因子X激活物)是按照本发明人已经公开的一种蝰蛇蛇毒血凝酶的层析纯化方法(中国专利号：ZL02153855.7)制备。

类凝血酶效价测定依据降纤酶国家药品标准WS₁～XG～031～2000，要求每mg蛋白含酶活力不得少于1200单位。类凝血激酶效价测定按立止血(瑞士)质量标准，要求每mg蛋白含酶活力不得少于500ku(单位)。在所述制剂中包含的药用辅料如激活剂、蛋白保护剂、抑菌剂、赋形剂及稳定剂等，均以mg为单位。

按上述方法从蝰蛇科蛇毒中提取的具有促凝血和止血功能的蛇毒血凝酶的制剂，其中注射剂单支含量中含有0.0001mg～0.01mg的类凝血酶(巴曲酶)和0.00001mg～0.005mg的类凝血激酶(磷脂依赖性凝血因子X激活物)。所述制剂中优选含有0.001mg～0.005mg的类凝血酶和0.0001mg～0.002mg类凝血激酶。

所述制剂还进一步包含作为辅料的药用激活剂、蛋白保护剂、抑菌剂、赋形剂与稳定剂等。

上述激活剂选自氯化钙与硫酸钙；

上述蛋白保护剂选自乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘氨酸、水解明胶、人血清白蛋白与20种常见氨基酸等。所述制剂中包含的蛋白保护剂优选甘氨酸和/或水解明胶；

上述抑菌剂选自苯酚、甲酚、氯甲酚、三氯叔丁醇、苯甲醇与硫柳汞；

上述赋形剂选自甘露醇、右旋糖苷与乳糖；

此外，上述制剂还可以进一步包含作为稳定剂的氯化钠、海藻糖。

本发明的药物制剂除了可以配制成注射剂(水针剂、冻干粉针剂)之外，还可以使用本领域众所周知的方法按照上述成分的重量配比按比例配制成各种剂型，例如包括：气雾剂、凝胶剂及敷剂。以上组分在生产时可按照相应比例增大或缩小，但两种生化成分之间的效价比范围是不变的。

该注射剂可以静脉、肌肉或皮下注射，也可局部给药。

蛇毒血凝酶制剂可用于需减少流血或止血的各种医疗情况，如：外科、内科、妇产科、眼科、耳鼻喉科、口腔科等临床科室的出血及出血性疾病；也可用作手术前用药，以减少手术部位及手术后出血。

本发明的制剂的优点在于：

使用方便。本制剂的配方例如注射剂中每支所含辅料量少。因此，除了可以制成冻干粉针剂、气雾剂、凝胶剂与敷剂外，还可制成使用方便的水针剂。而现有技术中的立止血每支所含辅料量较多，只能制成冻干粉针剂，使用不方便。

安全性高。立止血中的酶系从巴西矛头蝮蛇中分离、纯化而得，其工艺陈旧，已有四十余年历史，产品经SDS-PAGE电泳分析，含有杂蛋白，故纯度较差。经安全性评价——急性毒性研究表明，小白鼠静脉注射LD₅₀为22±5ku/kg。而按照本发明人公布的方法(发明专利号ZL02153855.7)制备，产品纯度高，安全性评价——急性毒性研究表明，小白鼠静脉注射LD₅₀为712.6±191.4ku/kg，是立止血的32.4±8.7倍，较立止血具有安全性高的优势。

资源丰富。立止血的蛇毒原料为巴西矛头蝮蛇，作为一种野生动物，在世界上极其珍贵，同时国家对蛇毒的进口有严格的限制，致使蛇毒的原料来源稀缺。而本产品的蛇毒原料提取自蝰蛇科蛇，广泛分布于广东、广西、福建和台湾，蝰蛇资源十分丰富，这对利用国产资源，振兴民族的医药事业具有重要意义。

具体实施方式

下面的实施例将对本发明作进一步的解释，但是本发明并不仅局限于这些实施例，这些实施例不以任何方式限制本发明的范围。本领域的技术人员在权利要求的范围内所作的某些改变和调整也应属于本发明的范围。

实施例1：

一种从蝰蛇科蛇毒中提取的具有促凝血和止血功能的蛇毒血凝酶药物制剂，由以下配比的生化成分与辅料制成(按注射剂单支剂量计算)：

类凝血酶0.0001mg～0.01mg

类凝血激酶0.00001mg～0.005mg

甘氨酸1mg～40mg 水解明胶0.0001mg～20mg

三氯叔丁醇1mg～50mg 氯化钙1mg～20mg

甘露醇5mg～50mg 氯化钠2mg～10mg

实施例2：(优选配方)

类凝血酶0.001mg～0.005mg

类凝血激酶0.0001mg～0.002mg

甘氨酸2mg～20mg 水解明胶1mg～10mg

氯化钙1mg～10mg 甘露醇5mg～40mg

海藻糖1mg～50mg 苯甲醇1mg～20mg

实施例3：(更为优选的配方)

类凝血酶0.001mg～0.005mg

类凝血激酶0.0001mg～0.002mg

甘氨酸2mg～10mg 水解明胶0.1mg～5mg

三氯叔丁醇2mg～6mg 氯化钙1mg～5mg

氯化钠3mg～9mg 右旋糖苷1mg～10mg

上述制剂配方除了配制成注射剂(水针剂、冻干粉针剂)之外，还可以制成气雾剂、凝胶剂和敷剂。此外，按上述配方，尤其是按优选配方配制的注射剂中，辅料含量远低于立止血。

类凝血酶效价测定依据降纤酶国家药品标准WS₁～XG～031～2000，要求每mg蛋白含酶活力不得少于1200单位。类凝血激酶效价测定按立止血(瑞士)质量标准，要求每mg蛋白含酶活力不得少于500ku(单位)。按大约类凝血酶0.001mg和类凝血激酶0.0001mg的比例将两者混合，加入相应配方中的辅料，再加入注射用水配制成不同浓度，先后经过0.45μm和0.1μm孔径的醋酸纤维素膜过滤，灌装，压塞，轧铝盖，包装，即成为具有促进凝血和止血功能的蛇毒血凝酶制剂。

根据上述配方制成的水针剂举例：

按配方量取两种成分混合，即成为蛇毒血凝酶中间体；称取配方中相应辅料(按1000支为例)，先用700ml新沸冷至25℃±1℃水将辅料溶解，调节pH为5.0～8.0，加入蛇毒血凝酶中间体，重新调节pH为5.0～8.0，补水定容至1000ml；在万级洁净区域用0.45μm醋酸纤维素膜过滤；然后通过传递窗至百级洁净区域，再用0.1μm醋酸纤维素膜过滤；滤液经全自动灌装机灌入经灭菌除热源的管制西林瓶中，自动加塞，轧铝盖，成为注射用蛇毒血凝酶制剂。

根据上述配方制成的冻干粉针剂举例：

按配方量取两种成分混合，即成为蛇毒血凝酶中间体；称取配方中相应辅料(按1000支为例)，先用400ml新沸冷至25℃±1℃水，将辅料溶解，调节pH为5.0～8.0，加入蛇毒血凝酶中间体，重新调节pH为5.0～8.0，补水定容至500ml；在万级洁净区域用0.45μm醋酸纤维素膜过滤；然后经传递窗至百级洁净区域，再用0.1μm醋酸纤维素膜过滤；滤液经全自动灌装机灌入经灭菌除热源的管制西林瓶中，半加塞，移至冷冻干燥机箱内，常规法冷冻、干燥。结束后，自动压塞，然后轧铝盖，成为注射用蛇毒血凝酶制剂。

根据上述配方制成的气雾剂举例：

按配方量取两种成分混合，加入相应辅料，另加入甘油25ml、维生素C 1g与防腐剂适量，加入注射用水至500ml，分装在已准备好的容器内，安装阀门，轧紧封帽，即成为蛇毒血凝酶的气雾剂。本气雾剂可用于口腔和鼻腔创伤性止血。

根据上述配方制成凝胶剂举例：

称取羧甲基纤维素钠15g、甘油100g混匀，另取羟丙基乙酸纤维素酯2g溶于热纯化水中，然后加入羧甲基纤维素钠搅拌成凝胶，加纯化水至1000g，121℃灭菌20分钟，冷却至室温，按配方量加入两种成分的混合物与蛋白保护剂(白蛋白)2g，搅匀，即成为可用于创伤止血的蛇毒血凝酶凝胶剂。

根据上述配方制成敷剂举例：

按配方量取两种成分混合，称取配方中相应辅料(按100袋为例)，先用70ml新沸冷至25℃±1℃的水，将辅料溶解，调节pH为5.0～8.0，加入蛇毒血凝酶中间体，重新调pH为5.0～8.0，补水定容至100ml，再用生理盐水稀释至1000ml，另将药用纱布折叠成3～10cm大小，每片约4～8层。经无菌处理后，用上述稀释药液(事先用0.1微米醋酸纤维素膜过滤)浸湿，置于经无菌处理的铝铂袋中，每袋1片，密封，即成为可用于创伤止血的蛇毒血凝酶敷剂。

本发明的制剂中辅料含量低，能制成水针剂。经质量稳定性考察，在2～8℃条件下，水针剂放置36个月后其生物活性无任何变化。

经药效学试验，急性毒性试验，长期急性毒性试验与一般药理学试验，结果表明，本发明配制的蛇毒血凝酶制剂具有明显止血效果，且无毒性。试验所用药物的生化成分按中国专利：ZL02153855.7的方法制备。

1.蛇毒血凝酶制剂主要药效学试验

经与同类产品比较，阳性对照为立止血(瑞士)，阴性对照为生理盐水，在同等剂量条件(0.1ku/kg)下，给药前后下列指标均基本相当：家兔的全血凝血时间(CT)、活化凝血酶原时间(KPTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)与纤维蛋白含量(Fbg)。家兔经出血量、出血时间测定，其出血量、出血时间均减少约50％，与进口立止血基本相当。又经人体试验给药后与给药前比较，出血量明显减少，全血凝血时间缩短一半以上。

2.蛇毒血凝酶制剂急性毒性试验

蛇毒血凝酶对小白鼠一次性静脉给药，其小白鼠LD50为712±191.4ku/kg，相当于70kg体重成人最小常用剂量的49840倍，结果未出现毒性反应，证明本品在人用剂量下是安全的。

3.蛇毒血凝酶制剂长期毒性试验

3.1Beagle犬长期毒性试验

本试验采用Beagle犬连续静脉给药一个月，剂量分别为8ku/kg、4ku/kg和2ku/kg，结果均未出现明显毒性反应。

3.2大白鼠长期毒性试验

本试验采用大白鼠连续腹腔给药一个月，剂量分别为10ku/kg、5ku/kg和2.5ku/kg(分别约相当于临床人用量的300倍、150倍和75倍)。经病理学检查，各组各脏器未发现明显的病理变化。

4.蛇毒血凝酶制剂一般药理学试验

4.1过敏性试验：经常规过敏性试验研究，未发现任何速发性和迟发性过敏反应。

4.2家兔皮下及肌肉注射刺激试验

4.2.1皮下注射

给家兔每天皮下注射蛇毒血凝酶注射液1ml/只，连续3天，结果家兔皮下注射部位及周围的组织无明显的刺激反应。

4.2.2肌肉注射

给家兔每天股四头肌注射蛇毒血凝酶注射液1ml/只，连续3天，结果家兔注射部位的肌肉组织无明显的刺激反应。

5.其它毒性试验

经其他毒性试验结果表明，本品无出血毒、神经毒，也无磷脂酶A2、碱性磷酸酶、L～氨基酸氧化酶及其它异常毒性。

Claims

1.一种包含蛇毒血凝酶的制剂，含有类凝血酶、类凝血激酶及辅料，其中辅料包含下列成分：

(a)药用激活剂；

(b)药用蛋白保护剂；

(c)药用抑菌剂；

(d)药用赋形剂；

(e)药用稳定剂。

2.根据权利要求1所述的制剂，其中所述激活剂选自氯化钙与硫酸钙。

3.根据权利要求1所述的制剂，其中所述蛋白保护剂选自乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘氨酸、水解明胶、人血清白蛋白和20种常见氨基酸。

4.根据权利要求1所述的制剂，其中所述抑菌剂选自苯酚、甲酚、氯甲酚、三氯叔丁醇、苯甲醇和硫柳汞。

5.根据权利要求1所述的制剂，其中所述赋形剂选自甘露醇、右旋糖苷和乳糖。

6.根据权利要求1所述的制剂，其中所述稳定剂选自氯化钠、海藻糖。

7.根据权利要求1-6任一所述的制剂，其中每剂量单位包含以下配比的生化成分与辅料：

类凝血酶0.0001mg～0.01mg

类凝血激酶0.00001mg～0.005mg

甘氨酸1mg～40mg 水解明胶0.0001mg～20mg

三氯叔丁醇1mg～50mg 氯化钙1mg～20mg

甘露醇5mg～50mg 氯化钠2mg～10mg

8.根据权利要求7所述的制剂，其中每剂量单位包含以下配比的生化成分与辅料：

类凝血酶0.001mg～0.005mg

类凝血激酶0.0001mg～0.002mg

甘氨酸2mg～20mg 水解明胶1mg～10mg

氯化钙1mg～10mg 甘露醇5mg～40mg

海藻糖1mg～50mg 苯甲醇1mg～20mg

9.根据权利要求7所述的制剂，其中每剂量单位包含以下配比的生化成分与辅料：

类凝血酶0.001mg～0.005mg

类凝血激酶0.0001mg～0.002mg

甘氨酸2mg～10mg 水解明胶0.1mg～5mg

三氯叔丁醇2mg～6mg 氯化钙1mg～5mg

氯化钠3mg～9mg 右旋糖苷1mg～10mg

10.根据权利要求1所述的制剂，其被配制成注射剂、气雾剂、凝胶剂或敷剂形式。