JPS58189558A - 免疫学的測定用容器 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、生理活性物質を＃ｊ定するための免疫化学的
＃］定定容容器関する。

体液中に微量に存在する物質や、生体に投与した薬物の
血中もしくは尿中濃度を定量的に＃１定する手段として
抗原抗体反応を利用した免疫学的測定試薬が使用されて
いる。

この測定試薬にはいくつかの異なった測定原理に基づく
ものが知られているが、測定感度が高く定量性に優れて
いる放射免疫測定法（ＲｉＡ）、酵素免疫測定（ＥＩＡ
）及び蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）に基づく試薬が広く用
いられている。

しかしながら、従来これらのいずれの方法に基づく測定
試薬であっても、濃度未知の検体の測定時には、そのつ
ど、濃度既知の標準検体の測定を控］時に行なって、標
準曲線を描き、その標準曲線を利用して検体量を求めな
ければならなかった。

このことは、小規模の検査施設における＃１定あるいは
緊急検査の場合には不都合であったすなわち、わずか数
検体の測定であっても、多数の検体を測定する場合と同
じように、標準検体を測定して標準曲線を描かなければ
ならないので、１検体あたりの所賛時間が増加するとと
もに、その標準曲線を利用する回数が少ないので、高度
にＮ製した貴重な試薬の利用度が少ないという欠点があ
った。

また、一般的に標準検体の測定誤差や測定ミスは標準曲
線を不正確なものとするため、未知検体の濃度を求める
際に、その全ての値に大きな１替をおよばずものである
。） このため、測定試薬の信頼度を上けるためには標準曲線
は正確でなければならないのである。

史に、近年、臨床検査においては単項目測足による診断
よりも、種々の項目について測定を行ない、それらの結
果を総合し７て診断することがますます重要になりつつ
ある。このため、測定項目数が増加し、そねと共に検査
が１１Ｍ化してきており、各測定項目の測定値や標準曲
線を取りちがえないように、測定項目の管理が１費とな
−）できている。

本発明の免疫学的測定用容器は不溶化抗体及び１１Ａａ
抗体叫の測定試薬を１つの容器に収納するとともに、＊
準検体に関する情報及び標準曲線に関する情報すなわち
、標準物質の種類、Ｉ、ｏｔ　Ａ及びあらかじめ濃度既
知の標準検体を一１定１．て求めた標準曲線を規定する
数式の係数勢の情報を、該容器に保持せしめたものであ
る。

このようにすることにより、濃度未知の検体の測定時に
この情報を適当な手段によって読みとることにより、標
準曲線を作成することなく。

検体濃度を求めることができる　したがって、標準曲線
作成の際に生じる時間的損失や測定上の損失を避けるこ
とができるので、迅速、簡便かつ、信頼性の高い測定か
可能となる また、多数の項目についてｉｌｌ定するときは、測定項
目に関する情報をも一様に保持せしめることにより、測
定項目の堆りちがえ吟人為的ミスを完全に排除すること
ができる。不溶化抗体と榛謙抗体とを収納する容器は試
薬の保存としての′６器であるとともに試薬と検体との
反応の場を提供する反応容器を兼ね、さらに反応液の吸
光度婢を測定するだめの測定容器をも兼ねるものである
。具体的にはプラスチック又はガラス製の試験管、キュ
ベツト、マイクロタイタープレート等が用いられる。

不溶化抗体は水不溶性の担体に抗体を結合せ［７めたも
のである。水不溶性の担体としてはプラスチック又はガ
ラス製のビーズ、セルロース等の他、試薬の容器と［７
ての試験管自体を用いることができる。

標識抗体は化学的、光学的又は物理的手段で検出ｉＪ能
な標識物質と抗体とを結合せしめたものであゆ、標識物
質としては一般に酵素、放射性同位元素、蛍光物質等が
使用できる。

標準曲線叫に関する情報の記憶媒体としては、磁気テー
プなど磁性物質を含有させた物質を利用する磁気的記録
媒体、光学的マーク、光学的文字、バーコード、スポッ
トコードなど光学的マークの媒体、あるいはレーザー光
を使った光記憶などが使用ムＪ能である。

磁気的記録媒体は強磁性体をプラスチック郷に混入して
成形するか、あるいは表面に薄く被膜を施したものがあ
る。これらＫａ気ヘッドを用いて情報記録を行う。磁気
ヘッドの巻！！に電流を流すとヘッドに磁束が生じるが
この磁束がヘッドの先端から漏れるのを利用して磁化を
行い、情報を記録する。情報１．ａＦｉ磁化の仕方によ
って区別される３、情報の読出しはその情報に対応して
磁化された部分がヘッドに近づくと、ヘッドに磁束の変
化を生じ、これが巻線に電圧を訪起する。これを増幅整
形して続出し情報をうる。

記録方式にはいくつかの方法があるが、いずれの方法で
も使用しうる。代表的な例としては、情報の０と１を磁
化と無磁化に対応させるＲＺ方式（ｒｅｔｕｒｎ　ｔｏ
　ｚｅｒｏ　）、磁化方向に対応させるＮＲＺ方式（ｎ
ｏｎ　ｒｅｔｕｒｎ　ｔｏ　ｚｅｒｏ　）、磁束反転の
有無に対応させるＮＲＺＩ方式、ＰｈＭ方式（位相変調
）、およびＦＭ方式（周波数置１１Ｉ４）かどがある。

配録情報１．０はそのま１用いることもできるが、コー
ド化して用いることもできる。コードとしてけＩＳＯ／
ＣＣＩＴＴ　（国際標準化機構／国際電信電話藺間委員
会）コード、ＢＣＤ（２進化１０進）コード、ＥＢＣＤ
ＩＣ（拡張２進化１０進）コード叫が使用しつる１、 この他の磁気的記録媒体としては、磁気インクがめる。

これは磁性物質を含ませたインクで、これを用いて印刷
を行い、磁気ヘッドによ妙読み取りを行う磁気インク文
字読取装置（ＭＩＣＲ）により情報の取出しを行う、磁
気インクで印刷する文字としてけＥｌ　５Ｂ文字、ＣＭ
Ｃ７文字などが用いることができる。

光学的マークとは、情報柳体上に光の反射率の低い色（
通常黒色）でマークを施し、そのマークの位置を光学マ
ーク読取装置の読取ヘッドで断取ることにより情報を取
り出すものであり、ｍ取ヘッドは光をグラスファイバー
を通して情報媒体上に照射し２、透過光あるいけ反射光
を計。

堆用グラスファイバーを通してフォトセルで受光するよ
うになっており、マークを検知する。

バーコードとは、印刷した線の太さと数によって情報を
表わし、これに光を照射し、反射光又は透過光を検知し
て情報を散り出すものである。

コートとしてはＣ０ＤＥ３９．ＵＰＣＡ、ＥＡＮ１５お
よびＪＡＮコードなど各種のコードが知られているが、
いずれのもので本使用しつる。なお、バーの代りに他の
形状例えばスポット状のもの本使用しうる。

光学的文字は光学的文字読取装置で読み取るだめの文字
でＩＳＯ（国際標準化機構）のｐｏｎｔＡおよびＦｏｎ
ｔ　Ｂなどがあるが、光を当てて反射光を多数のフォト
セルで感知し、文字を量子化し、情報の増出しを行う。

光学的マークにおいて、その形状を円形または楕円形ま
たはそれに類する形状にしたものを特に「゛スポットコ
ード」と名づけることとする。

スポットコードを用いるにあたっては、例えば縦に８つ
のスポットを付する場所を設けて、その内の７つをＪＩ
Ｓ　７単位コードに対応させて、一つの文字情報を表し
、残りの１つを奇偶検査用とする。これらを順次横に並
べて文字列を形成する。

スポットの有無は光の反射または透過により検知する。

反射光により検知する場合はスポットを反射率の低い色
（通常黒色）で施し、その位置に光源ランプから例メは
グラスファイバー等で導いた光を照射し、反射光をやけ
り例えばグラスファイバー等を用いて導き、フォトセル
で受光する。

光を照射した位置にスポットが施されていなけｔｌば反
射光の光量は多くフォトセルに検知さＪする、この状態
を情報０に対応させる。逆に光を照射した位置にスポッ
トが施されていれば、反射光の光ｉｔは少なく、フォト
セルに検知さねにくくなる。この状態を情報１に対応さ
せる。

ＪＩＳ７単位コードのスポットと奇偶検査用のスポット
を施しである場合は、８つの照射用グラスファイバー、
８つの検知用グラスファイバーと８つのフォトセルを用
いると同時に８つのスポットを検出することができ、−
文字針の情報を得ることができる。−文字針づつ情報を
順次にスポットコードより読堆り、元の文字列を得るこ
とができる。

透過光でスポットコードを読取る場合は透明な媒体に光
を透過しない色素などでスボ７）を施す。読取では光源
から導いた光をスポットコードに照射し、透過する光を
フォトセルに導いて検知する。スポットが施されていな
い場合には透過光が検知され、これを情報０に対応させ
る。スポットが施されている場合には透過光が検知され
ない、これを情報１に対応させる。

ＪＩＳ　７卑荀コードのスポットと奇偶検査用のスポッ
トを施しである場合は、８つフォトセルを用いると、同
時に８つのスポットの有無を検知することができ、−文
字針の情報を得ることができる。−文字針づつ情報を順
次にスポットコードより読取ゆ、元の文字列を得ること
がでスポットコードに用いるもの＃′ｉ特にＪＩＳ　７
　ｊ１１位コードに限らず、他のコード系であっても使
用ｉ２Ｊ能である。

光紀憶では高エネルギーのレーザー光線等で金属薄膜に
穴をあけることにより情報を記録し、低エネルギーのレ
ーザー光線等で、穴の有無を検知して情報を取り出す。

これらの情報媒体はプラスチック成形時に混入させたり
、印刷あるいは貼付によシ容器に保持させることができ
る。

個々の容器に保持せしめる情報の内容としては、標準検
体を識別するための情報及び標準曲線を一義的に決定で
きる要素が対象となる１、例えば、標準曲線が３次曲線
に回帰できる性質をもつ場合、次式ｌの４係数すなわち
ａ、ｂ、ｃおよびｄの値が対象となる。

ｙ＝＝ａｘ３＋ｂｘ”＋ｃｘ＋ｄ　　（５次曲線）（１
）また、免疫反応けしばしばｌｏｇｉａｔｉｃ曲線に回
帰できる場合も多いことが知られているがこの場合は次
式−の４係数すなわちａ′ｂ′Ｃ′およびｄ′が対象と
なる。

これらの係数は製品となる試薬と四−ロットの試薬を用
いて標準検体を測定し、その測定値から最小二乗法によ
り求められる。

さらに、Ｘ軸およびｙ軸のきざみをコード什することに
より、座標の点を直接にコードの組みあわせで示すこと
も可能である。

これらの情報は通常、個々の試薬の容器に保持せしめる
。試薬の容器としては、例えにガラス試験管、プラスチ
ック試験管、マイクロタイタープレート、光学セル、反
応用ポリバッグなど種々の形状及び材質のものが使用で
きる。第１図〜第４図に本発明の免疫学的測定用容器の
実施例管ポす。

第１図は、試験管の上部外周に情報を保持せしめたもの
であり、Ａｔｉバーコードにより、Ｂはバーのかわりに
スポットにより、Ｃは光学的マークにより、Ｄ＃′ｉ磁
気テープにより情報を保持せしめた例を示す。

第２図は、マイクロタイタープレートの側面の一部に情
＠を保持せしめた例を示す。

第３図は、光学セルの上部側面に情報を保持せしめた例
を示す。

第４図は、プラスチック袋の口部に情報を保持せし−５
めた例を示す。

これらの容器に保持せしめた情報は磁気ヘッド、光学鯖
取装置等によって計、み取って、利用することができる
。

本発明の免疫学的ｍｌｌ定容容器次のような利点を有す
る。

標準曲線は予め厳密な操作によって作成し、その曲線を
規定する数値または数式を個々の容器に保持させである
から、 １）標準曲線を作成することに伴う不都合、即ち、蘭１
定ミス、測定誤差、作図誤差、作図のために要する時間
等をなくすことができる、２）１つの検体についての測
定項目が多くｈっても各測定項目の標準曲線を取り違え
るような人為的ミスを防止できる。

３）反応液の吸光度の測定と容器に保持せしｔた情報の
読取を同時に行なうことにより、測定値を標準曲線に当
てはめて未知検体の濃度を読取る際の誤読がなく、かつ
迅速にできる。

次に、試験例に基づいて本発明をさらに説明する。

試験例 α−フェトプロティン（ＡＦＰ）ＩＩＩ定用容器ａ）ポ
リスチレン製試験管を（ＬＯ５Ｍリン酸緩衝生理食塩液
ｐＨ１４（以下ＰＢＳと略す）にて洗浄した後、単りロ
ーン性ＡＦＰ抗体〔Ａ〕（１■／ｆｆ）２ｔ／を入れて
、３７℃５０分間放置した。

これをＰＢＳで洗浄して、抗ＡＦＰ抗体〔Ａ″ｌ感作試
験管を製造した。また中機らの方法〔ジャーナル・オブ
・ヒストケミストリー−アンド・サイトケミストリー（
Ｊ、　Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ、　Ｃｙ−ｔｏｃｈｅｍ、　
）第２２巻、第１０８４頁（１９７４年）〕より前記〔
Ａ〕とけクローンの異なる単クローン性抗体〔Ｂ〕に西
洋ワサビパーオキシダーゼ（ヘーリンガーマンハイム社
ｇｒａｄｅ　Ｉ　：　以抜ＨＲＰＯと略す）を標識した
後、ＰＢＳにて５０倍に希釈して、１′ｗＬｔづつ充填
した１次いでこの両者を凍結乾燥した稜密栓して、標準
曲線情報を保持せしめる前のＡＦＰ測定用容器を製造し
た。

ｂ）前記ａ）で製造した標準曲線情報を保持せしめる前
のＡＦ’Ｐ測定用容器にＰＢＳα９ｄを加えた後、ＡＦ
Ｐを１０００．１００．１０．１　ｎｇ／ｍｌとなるよ
うに怖常人血清で希釈した。標準液各０１ｄを加え、５
０分間反応を行った。反応終了後、ｃｔｏｏｓ％ツイー
ン２０を含む生理食塩水で洗浄し、５０〜／ｄｉの５−
アミンサリチル酸および０．０１−過酸化水素を含む酵
素基質液２ｄを加え再び、３０分間反応を行った。

反応終了後、２％アジ化ナトリウム５０μｌを加えて反
応を停止させ、分光光度計を用いて、波長５００ｎｍで
吸光度を御］定した３、得られた測定値より、最小二乗
法によ抄Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回帰曲線を求めた。

その係数のバーコード化を行い、紙ラベルに印刷し、こ
れを前配置）で製造した標準曲線情報を保持せしめる前
のＡＦＰ測定用容器に貼付して、本発明のＡＦＰ測定用
容器を製造した。

Ｃ）ＡＦＰ測定用容器の使用例 前記ｂ）で製造したＡＦＰ測定用容器Ｋ　ＰＢＳα９ｄ
を加えた彼、ＡＦＰ濃度未知の検体α１ｄを加えてＳＯ
分間反応を行った。反応終了後、α００５チツイーン２
０を含む生理食塩水で洗浄し、５０　Ｑ／ｄｉの５−ア
ミノサリチル酸およびα０１チ過酸化水素を含む酵素基
質２ｄを加え再び３０分間反応を行った。

反応終了後、２チアジ化ナトリウム５０μｌを加えて反
応を停止させ、分光光度計を用いて、波長５００ｎｒｎ
で吸光度を測定した。また試験管のバーコードをバーコ
ードリーダーにより読取り（ＹＨＰ社製ＨＥＤＳ−３ｏ
ｏｏ　）、標準曲線の前記式Ｉｎ’表わされるｌｏｇｉ
ａｔｉｃ回帰式の係数、／　、　ｂ／　、　Ｃ／および
ｄ′を断み取った。次いで、Ｌｏｇｉｓｔｉｃ式にこの
係数と、未知検体の吸光度測定餉を代入し、未知検体の
濃度を算出した。

表に標準液の測定値、求めた回帰式の係数および未知検
体の測定値とその測定値を回帰式にあてはめて読取った
該未知検体の濃度をボした。

欅　　準　　液 ０．ＬＪ　　　０．０３６ ２αυ　　（ｋｌ藝８ ４００　　　α２６０ ８０、Ｕ　　　０３６０ １６Ｕ、０　　０．５４１ ３２（Ｊ、Ｌｌ　　　　　　　住７７９６４Ｎ、０　　
　（１，’ｊ８５ （ロ）帰式係数 ａ’＝　１６４９．４６７１８４８９６ｂ’＝　−、５
ｘ９ｉｔｏｓｔｓ７ｓｓ３ｃ’＝４０枚９８８２４５７
４７藝 ｄ’＝　３９．２３４９７４０７５４５未知検体 ０．５５６　　　１６１ｇ５ ０．６３０　　　２１０．１４ Ｌ１８８１　　　４５７．０８ 住２　Ｓｊ　ｆｌ＋　　　　　５１４１４

【図面の簡単な説明】

第１図Ａ　、　Ｂ　Ｔ　Ｃ、Ｄ　、糖２図、第３図およ
び第４図はそれぞれ、標準曲線情報を保持せしめた本発
明の免疫学的測定用容器の実施例を表わす。 １、　試験管 １　バーコード 五　スポットコード ４、　光学的マーク７−ト １　磁気テープ ＆　マイクロタイタープレート Ｚ　磁気テープ ａ　光学セル ９　光学的文字シート ＩＱ、　　プラスチック袋 ％許出願人　持田製薬株式会社 ′）ｆ１図 Ａ　　　　Ｂ　　　　　　ＣＤ づ＝ 牙２図 ３４ 牙３図 ＝；＼

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１１不溶化抗体および標識抗体を収容し且つ＃１定に
   関する情報を保持してなる免疫学的測定用容器。 （２）測定に関する情報が、骸測定の標準画ｌＩＫ関す
   る情報である特許請求の範囲第１項記載の免疫学的測定
   用容器。 （３）測定に関する情報が、測定対象物質を識別するた
   めの情報である特許請求の範囲第１項または第２項記載
   の免疫学的測定用容器。 （４）情報を光学的またけ磁気的に検出［２うる情報記
   憶媒体によって保持せしめた特許請求の範囲第１項ない
   し第３項のいずれか一項に記載の免疫学的測定用容器。 （５）情報記憶媒体が、バーコード、光学的マーク磨−
   →または光学的文字である特許請求の範囲第４項記載の
   免疫学的測定用容器。 （６）　　情報記憶媒体が磁気テープまたは磁気インク
   文字である特許請求の範囲第４項記載の免疫学的測定用
   容器。 （７）不溶化抗体が、抗体を容器内壁に結合せしめたも
   のである特許請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか
   一項に記載の免疫学的測定用容器。 （８）不溶化抗体が、抗体をガラスまたはプラスチック
   製のビーズに結合して保持せしめたものである特許請求
   の範囲第１項ないし第６項のいずれか一項に記載の免疫
   学的測定用容器。 （９）標識抗体が、酵素、放射性同位元素または蛍光物
   質と抗体とを結合させたものである特許請求の範囲第１
   項ないし第８項のいずれか一項に記載の免疫学的測定用
   容器。 Ｑｌｌ　　不溶化抗体および標識抗体が、凍結乾燥状態
   で収容された特許請求の範囲第１項ないし第９墳のいず
   れか一項に記載の免疫学的測定用容器。