CN112176029B - 一种拭子核酸样本释放剂及其应用 - Google Patents
一种拭子核酸样本释放剂及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112176029B CN112176029B CN202010538226.2A CN202010538226A CN112176029B CN 112176029 B CN112176029 B CN 112176029B CN 202010538226 A CN202010538226 A CN 202010538226A CN 112176029 B CN112176029 B CN 112176029B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- nucleic acid
- releasing agent
- buffer solution
- swab
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种拭子核酸样本释放剂及其应用。所述样本释放剂包括1‑20mol/L的金属离子螯合剂、pH 6‑9、5‑80mmol/L的缓冲液、5%‑40%(v/v)的极性有机溶剂、0.2%‑10%(v/v)的表面活性剂、0.1‑1mol/L的核酸酶抑制剂。该样本释放剂可以集取样保存‑灭活‑核酸提取三步为一步,取样后样本可直接放入装有样本释放剂的采样管中进行保存与运输;并且在使用时将采样管上下颠倒混匀,样本与样本释放剂充分混匀后,常温静置15分钟,即可在灭活样本的同时,将样本的核酸释放出来。从取样到PCR检测之间整个操作过程不用加热及中途开盖,有效的避免了对于实验操作人员及实验室的污染,操作极简;在突发性传染病事件中,本发明有着快速、安全、稳定、高效、成本低等明显的优势。
Description
技术领域
本发明属于病原体分子检测技术领域。更具体地,涉及一种操作简单、快速释放的拭子核酸样本释放剂及其应用。
背景技术
核酸分子检测在病原体的检测筛查方面具有不可比拟的优势,应用广泛。如近期爆发的新型冠状病毒疫情,核酸检测在感染人群以及无症状人群的筛查检测工作中起到了关键性的作用,对疫情控制意义重大。目前应用于病毒等病原体检测、遗传病筛查等检测工作都主要使用的是拭子样本,包括鼻拭子、咽拭子、口腔拭子、肛门拭子等,因其采集、运输、保存较为方便,而被大量采用。但是使用拭子收集的细胞量非常有限,而且细胞的生长和保存的条件都极为严苛,经过运输、常温储存,对拭子中的细胞造成大量的损伤,导致下游实验很容易造成假阳性或假阴性。
同时核酸提取是核酸检测中必不可少的环节,核酸提取与纯化一般会经过样本的裂解-洗涤-洗脱等步骤,目前市面上主要的核酸提取试剂有柱提法和磁珠法。柱提法和磁珠法提取的核酸具有纯度高的优点,但同时存在操作繁琐及需要用到相应的提取仪器导致成本较高的缺陷。对于样本量本就较少且保存运输困难的拭子样本而言非常不适用。目前市场上对于拭子类样本的保存基本上都是基于生理盐水或样本保存液,在使用时需要取一定量的样本进行核酸提取。对于采集到的拭子类样本一般需要高温灭活,在进行高温灭活时,容易产生较多的气溶胶污染,从而使实验室和实验操作人员存在较高的被污染风险。
专利201811598212.9提供了一种用于将拭子上的细胞洗脱、裂解释放核酸的洗脱裂解液,但是该裂解液的使用方法中仍需对样本进行高温处理,而且需要两步:先将拭子样本浸泡于所述洗脱裂解液中,涡旋混匀,37℃下孵育60min;然后再次开盖取出拭子后,将取出拭子后的离心管在65℃下水浴5min,95℃下水浴10min,取上清液作为待检测液;可见方法并未如其宣称的那样简便,且耗时长,而且高温处理易一定程度上破坏核酸、损失核酸量,且易产生上文所述的气溶胶污染问题。
总之,目前的拭子类样本的核酸提取至少存在以下几类缺点:(1)需要高温灭活样本,存在对操作人员和实验室的污染风险,且会损失核酸量;(2)需要对样本进行额外的核酸提取,操作过程较复杂,临床上增加了从收集样本到出结果的时间;(3)对试验人员有一定的专业技能要求,检测结果的好坏与试验人员的操作过程有很大关系。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和不足,提供一种简单、高效、快速的拭子类样本核酸提取试剂和提取方法,是一种直接裂解法释放样本中的核酸。在本发明样本释放剂的作用下,细胞膜被迅速破坏,使核酸释放出来,释放出来的核酸即可加入到PCR体系中扩增检测。本发明样本释放剂可用于鼻咽拭子样本的核酸提取,且整个过程极其简便、快速,中间无需任何一次开盖操作,不需任何高温处理,既能最高效的释放获取样本中的核酸,不影响后续PCR扩增,又不会产生任何污染及感染风险。
本发明的目的是提供一种拭子核酸样本释放剂。
本发明另一目的是提供所述拭子核酸样本释放剂的应用。
本发明上述目的通过以下技术方案实现:
一种拭子核酸样本释放剂,包括如下组分:
(1)1-20mol/L金属离子螯合剂;
(2)pH 6-9、5-80mmol/L缓冲液;
(3)5%-40%(v/v)极性有机溶剂;
(4)0.2%-10%(v/v)表面活性剂;
(5)0.1-1mol/L核酸酶抑制剂。
其中,优选地,所述金属离子螯合剂包括但不限于EDTA、EGTA或柠檬酸中的一种或几种。
优选地,所述缓冲液包括但不限于Tris缓冲液、柠檬酸钠缓冲液、磷酸钠缓冲液或醋酸钠缓冲液。
优选地,所述极性有机溶剂包括但不限于DMSO、六甲基磷酰胺、四甲基乙二胺中的一种或几种。
优选地,所述表面活性剂包括但不限于Triton X-100、NP-40、Tween-20或SDS中的一种或几种。
优选地,所述核酸酶抑制剂包括但不限于盐酸胍、异硫氰酸胍或4,4’-羰基双(2-(1-萘酰胺)苯甲酸)。
优选地,所述金属离子螯合剂的浓度为5mol/L,所述缓冲液的浓度为50mmol/L、pH8.5。
优选地,所述极性有机溶剂的浓度为25%。
优选地,所述表面活性剂的浓度为2%。
优选地,核酸酶抑制剂的浓度为0.3mol/L。
本发明所述样本释放剂的使用方法为:将拭子放入装有所述样本释放剂的容器中,室温条件下,将所述容器上下颠倒混匀20-40秒(优选30秒),静置10-20分钟(优选15分钟),再次上下颠倒20-40秒(优选30秒),瞬时离心后,上清即为释放后的核酸溶液,所得核酸溶液即可用于PCR扩增。拭子样本在样本释放剂中保存、运输、并完成核实释放过程,全程无需开盖,安全、高效,使用操作极简,应用十分广泛。
因此,所述样本释放剂在制备拭子核酸样本释放试剂盒中的的应用,以及所开发的含有所述样本释放剂的拭子核酸样本释放试剂盒,均应在本发明的保护范围之内。
本发明具有以下有益效果:
本发明开发的样本释放剂可以集取样保存-灭活-核酸提取三步为一步。取样后可直接放入装有样本释放剂的采样管中进行保存、运输;在使用时将采样管上下颠倒混匀,样本与样本释放剂充分混匀后,常温静置15分钟,即可在灭活样本的同时,将样本的核酸释放出来。整个操作过程不用加热及中途开盖,有效的避免了对于实验操作人员及实验室的污染,最大程度上简化了核酸提取的操作。
本发明的样本释放剂至少存在以下几个方面的优势:
(1)具有样本保存功能:样本核酸释放完成后,能够持久的保护核酸不降解,常温条件下可保存核酸72小时不降解;
(2)不需预处理,直接进行样本的常温灭活、裂解,实现核酸释放:
(3)可直接用于PCR扩增,无需再预处理,不影响后续PCR效果:
(4)使用操作极其简便,不依赖任何外部仪器,无污染,核酸损失极低:采集样本后,只需要上下颠倒或振荡30秒,对于临床样本的灭活,裂解及核酸的释放均在同一管内进行;
(5)耗时短:样本采集完成后,只需15分钟即可完成对样本的核酸释放,瞬时离心后即可得到核酸溶液;
(6)对实验室和实验操作人员的污染风险小:整个核酸释放的过程均在室温下进行,可有效降低气溶胶的污染,能有效的保护实验操作人员。
因此相比于传统核酸检测,本发明是一个很好的补充和替代方案,在突发性传染病事件中,本发明的样本释放剂对于样本的采集-保存-运输-灭活-核酸提取,有着快速、安全、稳定、高效、成本低等明显的优势。
附图说明
图1为本发明样本释放剂和市购某公司释放剂提取新冠临床样本1、2上机荧光定量PCR扩增图。
图2为本发明样本释放剂和市购某公司释放剂提取新冠临床样本1、2上机荧光定量PCR扩增图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明,以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1
一种拭子核酸样本释放剂,包括如下组分:
(1)金属离子螯合剂:5mol/L EDTA;
(2)缓冲液:pH8.5、50mmol/L Tris缓冲液;
(3)极性有机溶剂:25%DMSO;
(4)表面活性剂:2%Triton X-100;
(5)核酸酶抑制剂:0.3mol/L盐酸胍。
2、上述样本释放剂的使用方法为:将采集好的鼻咽拭子放入装有样本释放剂的样本采集管中,室温条件下,将含有样本的采样管手动上下颠倒混匀30秒,静置15分钟,再次上下颠倒30秒,瞬时离心后,样本核酸即释放到样本释放剂中,上清即为释放后的核酸溶液。
所得核酸溶液可直接吸取加入PCR反应液中,上PCR扩增仪进行扩增。
实施例2
一种拭子核酸样本释放剂,包括如下组分:
(1)金属离子螯合剂:10mol/L EGTA;
(2)缓冲液:pH8、60mmol/L柠檬酸钠缓冲液;
(3)极性有机溶剂:30%DMSO;
(4)表面活性剂:5%NP-40;
(5)核酸酶抑制剂:0.5mol/L异硫氰酸胍。
实施例3
一种拭子核酸样本释放剂,包括如下组分:
(1)金属离子螯合剂:1mol/L柠檬酸;
(2)缓冲液:pH 9、40mmol/L磷酸钠缓冲液;
(3)极性有机溶剂:40%六甲基磷酰胺;
(4)表面活性剂:1%SDS;
(5)核酸酶抑制剂:1mol/L 4,4’-羰基双(2-(1-萘酰胺)苯甲酸)。
实施例4
一种拭子核酸样本释放剂,包括如下组分:
(1)金属离子螯合剂:20mol/L EDTA;
(2)缓冲液:pH 6、80mmol/L醋酸钠缓冲液;
(3)极性有机溶剂:5%四甲基乙二胺;
(4)表面活性剂:10%Tween-20;
(5)核酸酶抑制剂:1mol/L盐酸胍。
实施例5
一种拭子核酸样本释放剂,包括如下组分:
(1)金属离子螯合剂:1mol/L EDTA;
(2)缓冲液:pH 9、5mmol/L Tris缓冲液;
(3)极性有机溶剂:40%DMSO;
(4)表面活性剂:2%SDS、2%Tween-20;
(5)核酸酶抑制剂:0.1mol/L盐酸胍。
实施例6
1、实验材料
(1)实施例1-5的拭子核酸样本释放剂;
(2)市购某公司释放剂:其主要成分包括,0.1mmol/L的十二烷基硫酸锂(表面活性剂),50mmol/L的KCl,0.1%(W/V)的SDS,1%(V/V)乙醇。
2、以实施例1-5的拭子核酸样本释放剂,分别对2020年1~3月广州地区收集的新型冠状病毒临床阳性样本1、2(由云康临床检验中心提供)进行提取。所得核酸溶液作为模板,直接吸取加入PCR反应液中,上PCR扩增仪进行扩增。
同时以市购某公司释放剂为对照。取同时平行取样的拭子临床阳性样本按照厂家说明书进行核酸提取,取提取后的核酸PCR检测。
其中核酸PCR检测所使用的PCR扩增试剂盒是中山大学达安基因股份有限公司新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒(荧光PCR法)(国械准注20203400063)。
PCR体系如表1:
表1
扩增体系 | 模板量 | 总体积 |
20 | 5 | 25 |
具体PCR扩增程序如表2:
表2
2、扩增结果如表3及图1-2所示,以实施例1的扩增结果为例展示。
结果显示,本发明的样本释放剂提取新冠临床样本Ct值比市场某公司样本释放剂提取相同样本靠前约1-3个Ct,本发明样本释放剂提取效果显著优于对照释放剂。
表3
实施例7
释放剂稳定性测试(对样本的保存效果):
临床样本:2020年1~3月广州地区收集的新型冠状病毒临床阳性样本3、4(由云康临床检验中心提供)
以实施例1为例,利用本发明样本释放剂对新型冠状病毒临床样本3、4进行保存,分别在室温放置3天、4℃放置7天、-20℃放置15天,然后进行荧光定量PCR扩增,PCR检测所使用的PCR扩增试剂盒是中山大学达安基因股份有限公司新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒(荧光PCR法)(国械准注20203400063)。
Ct值数据如表4-表6所示,核酸稳定保存,表明无论是低温-20℃、4℃,还是常温,本发明样本释放剂对核酸样本的保存效果也非常好。
表4放置一段时间(室温3天)后:
表5放置一段时间(4℃7天)后:
表6放置一段时间(-20℃15天)后:
实施例8
1、临床样本
2020年1~3月广州地区收集的新型冠状病毒临床阳性样本3(由云康临床检验中心提供)
2、实验材料
(1)实验组:实施例1的样本释放剂
(2)对比组1,样本释放剂组成如下:
缓冲液:pH8.5、50mmol/L Tris缓冲液;
极性有机溶剂:25%DMSO;
表面活性剂:2%Triton X-100;
核酸酶抑制剂:0.3mol/L盐酸胍。
(3)对比组2,样本释放剂组成如下:
金属离子螯合剂:5mol/L EDTA;
缓冲液:pH8.5、50mmol/L Tris缓冲液;
核酸酶抑制剂:0.3mol/L盐酸胍。
(4)对比组3,样本释放剂组成如下:
金属离子螯合剂:5mol/L EDTA;
缓冲液:pH8.5、50mmol/L Tris缓冲液;
表面活性剂:2%Triton X-100;
核酸酶抑制剂:0.3mol/L盐酸胍。
(5)对比组4,样本释放剂组成如下:
缓冲液:pH8.5、50mmol/L Tris缓冲液;
表面活性剂:2%Triton X-100;
核酸酶抑制剂:0.3mol/L盐酸胍。
(6)对比组5,样本释放剂组成如下:
金属离子螯合剂:5mol/L EDTA;
极性有机溶剂:25%DMSO;
表面活性剂:2%Triton X-100;
核酸酶抑制剂:0.3mol/L盐酸胍。
(7)对比组6,样本释放剂组成如下:
金属离子螯合剂:5mol/L EDTA;
缓冲液:pH8.5、50mmol/L Tris缓冲液;
极性有机溶剂:25%DMSO;
核酸酶抑制剂:0.3mol/L盐酸胍。
3、实验方法
以实施例1为例,利用本发明样本释放剂处理新型冠状病毒临床样本3,然后进行荧光定量PCR扩增,PCR检测所使用的PCR扩增试剂盒是中山大学达安基因股份有限公司新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒(荧光PCR法)(国械准注20203400063)。
4、扩增结果如表7。结果显示,本发明样本释放剂提取的新冠临床样本Ct值比对比组提取相同样本靠前约3-6个Ct,本发明样本释放剂提取效果显著优于对照释放剂。
表7荧光定量PCR扩增Ct值(靶标N基因)
实验组 | 26.0 |
对比组1 | 29.0 |
对比组2 | 30.3 |
对比组3 | 30.8 |
对比组4 | 30.5 |
对比组5 | 28.7 |
对比组6 | 27.9 |
5、另外将上述利用实验组和对比组1-6释放剂提取的核酸样本在室温放置3天后进行荧光定量PCR扩增,Ct值数据如表8所示。
表8核酸样本室温放置3天后对靶标N基因的检测Ct值
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种拭子核酸样本释放剂,其特征在于,包括如下组分:
(1)1-20mol/L金属离子螯合剂;
(2)pH 6-9、5-80mmol/L缓冲液;
(3)5%-40%(v/v)极性有机溶剂;
(4)0.2%-10%(v/v)表面活性剂;
(5)0.1-1mol/L 核酸酶抑制剂;
所述金属离子螯合剂为EDTA、EGTA或柠檬酸中的一种或几种;
所述缓冲液为Tris缓冲液、柠檬酸钠缓冲液、磷酸钠缓冲液或醋酸钠缓冲液;
所述极性有机溶剂为DMSO、六甲基磷酰胺、四甲基乙二胺中的一种或几种;
所述表面活性剂为Triton X-100、NP-40、Tween-20或SDS中的一种或几种;
所述核酸酶抑制剂为盐酸胍、异硫氰酸胍或 4,4’-羰基双(2-(1-萘酰胺)苯甲酸)。
2.根据权利要求1所述样本释放剂,其特征在于,所述金属离子螯合剂的浓度为 5mol/L,所述缓冲液的浓度为 50mmol/L、pH8.5。
3.根据权利要求1所述样本释放剂,其特征在于,所述极性有机溶剂的浓度为25%,所述表面活性剂的浓度为2%,核酸酶抑制剂的浓度为0.3mol/L。
4.根据权利要求1-3任一所述样本释放剂,其特征在于,其使用方法为:
将拭子放入装有权利要求1-3任一所述样本释放剂的容器中,室温条件下将所述容器上下颠倒混匀20-40秒,静置10-20分钟,再次上下颠倒20-40秒,瞬时离心后,上清即为释放后的核酸溶液。
5.权利要求1-3任一所述样本释放剂在制备拭子核酸样本释放试剂盒中的应用。
6.一种拭子核酸样本释放试剂盒,其特征在于,含有权利要求1-3任一所述样本释放剂。
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010538226.2A CN112176029B (zh) | 2020-06-12 | 2020-06-12 | 一种拭子核酸样本释放剂及其应用 |
EP20866968.9A EP3943612A4 (en) | 2020-06-12 | 2020-10-27 | NUCLEIC ACID RELEADER FOR SWAB SAMPLE AND THEIR APPLICATION |
US17/284,476 US11753672B2 (en) | 2020-06-12 | 2020-10-27 | Swab sample nucleic acid releaser and use thereof |
PCT/CN2020/124134 WO2021248779A1 (zh) | 2020-06-12 | 2020-10-27 | 一种拭子样本核酸释放剂及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010538226.2A CN112176029B (zh) | 2020-06-12 | 2020-06-12 | 一种拭子核酸样本释放剂及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112176029A CN112176029A (zh) | 2021-01-05 |
CN112176029B true CN112176029B (zh) | 2021-05-14 |
Family
ID=73919940
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010538226.2A Active CN112176029B (zh) | 2020-06-12 | 2020-06-12 | 一种拭子核酸样本释放剂及其应用 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11753672B2 (zh) |
EP (1) | EP3943612A4 (zh) |
CN (1) | CN112176029B (zh) |
WO (1) | WO2021248779A1 (zh) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CZ309658B6 (cs) * | 2021-02-08 | 2023-06-21 | Bioinova, A.S. | Roztok pro molekulární diagnostiku virových infekcí pomocí PCR a odběrová sada |
CN113186037B (zh) * | 2021-04-23 | 2022-12-13 | 山东博弘基因科技有限公司 | 一种核酸清除剂 |
CN113832138A (zh) * | 2021-08-25 | 2021-12-24 | 苏州新海生物科技股份有限公司 | 一种生物样本保存系统及其应用 |
CN114181932B (zh) * | 2021-12-03 | 2022-12-20 | 无锡百泰克生物技术有限公司 | 核酸释放剂及其应用 |
CN115197937A (zh) * | 2021-12-29 | 2022-10-18 | 北京迈佳致和科技有限公司 | 一种样本释放剂及其制备方法和应用 |
US20230235275A1 (en) * | 2022-01-25 | 2023-07-27 | Delta Electronics Int'l (Singapore) Pte Ltd | Transport medium for microorganism |
EP4227422A1 (en) * | 2022-02-15 | 2023-08-16 | Procomcure Biotech GmbH | Composition for poc pcr |
CH719425B1 (de) * | 2022-02-15 | 2023-11-15 | Procomcure Biotech Gmbh | Zusammensetzung für POC-PCR. |
CN114410747A (zh) * | 2022-03-30 | 2022-04-29 | 北京中海生物科技有限公司 | 一种病毒免提试剂及其在病毒基因组扩增中的应用 |
CN115960988A (zh) * | 2022-12-13 | 2023-04-14 | 深圳赛陆医疗科技有限公司 | 样本前处理的溶液及方法 |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE19520398B4 (de) * | 1995-06-08 | 2009-04-16 | Roche Diagnostics Gmbh | Magnetisches Pigment |
US7001724B1 (en) * | 2000-11-28 | 2006-02-21 | Applera Corporation | Compositions, methods, and kits for isolating nucleic acids using surfactants and proteases |
JP2005524850A (ja) * | 2002-05-07 | 2005-08-18 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー | 採集装置 |
CN1871355B (zh) * | 2003-06-09 | 2011-12-14 | 惠氏 | 从cDNA中回收非节段性负链RNA病毒的改进方法 |
US20050009036A1 (en) * | 2003-07-11 | 2005-01-13 | Applera Corporation | Methods and kits for obtaining nucleic acid from biological samples |
US9683256B2 (en) * | 2007-10-01 | 2017-06-20 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Biological specimen collection and transport system |
JP5933544B2 (ja) * | 2010-07-26 | 2016-06-08 | バイオマトリカ, インコーポレーテッド | 外界温度で出荷および貯蔵中の血中dna、rnaおよびタンパク質ならびに他の生体試料を安定化させるための組成物 |
JP6301260B2 (ja) * | 2012-10-26 | 2018-03-28 | 株式会社カネカ | Rna調製法 |
JP6689251B2 (ja) * | 2014-07-17 | 2020-04-28 | キアゲン ゲーエムベーハー | Rnaを高収率で単離するための方法 |
US9976136B2 (en) * | 2015-05-14 | 2018-05-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples |
CN105463125A (zh) | 2016-02-02 | 2016-04-06 | 江苏正大天创生物工程有限公司 | 核酸扩增体系及其冻干保护剂 |
CN107034310A (zh) * | 2017-01-24 | 2017-08-11 | 南方医科大学 | 一种同时检测多种流感病毒的引物组、探针组及其试剂盒 |
CN106591488A (zh) | 2017-02-23 | 2017-04-26 | 武汉艾米森生命科技有限公司 | 一种检测粪便中具核梭杆菌的核酸组合及其应用与试剂盒 |
CN106995842B (zh) * | 2017-03-27 | 2021-01-08 | 杭州迪安医学检验中心有限公司 | 一种tma熔解曲线法联合焦磷酸测序技术检测临床常见致病细菌的试剂盒及其应用 |
CN107227345A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-10-03 | 董克海 | 一种微生物样品dna保存液 |
CN107227306B (zh) * | 2017-06-26 | 2021-01-26 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种具有样本保存和灭活功能的拭子洗脱液 |
CN109694901A (zh) * | 2018-06-15 | 2019-04-30 | 麦凯(上海)生物科技有限公司 | 一种用于外周血样中游离dna的保存剂 |
CN109486903A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-03-19 | 广州海思医疗科技有限公司 | 一种用于将拭子上的细胞洗脱、裂解释放核酸的洗脱裂解液、试剂盒和方法 |
CN109402239B (zh) * | 2018-12-29 | 2022-06-14 | 贝南生物科技(厦门)有限公司 | 一种用于实时荧光定量pcr的免提取直接扩增试剂及其应用 |
CN111172239A (zh) * | 2020-02-28 | 2020-05-19 | 上海思路迪医学检验所有限公司 | 一种病毒样本保存液、核酸提取试剂及病毒核酸提取方法 |
-
2020
- 2020-06-12 CN CN202010538226.2A patent/CN112176029B/zh active Active
- 2020-10-27 WO PCT/CN2020/124134 patent/WO2021248779A1/zh unknown
- 2020-10-27 EP EP20866968.9A patent/EP3943612A4/en active Pending
- 2020-10-27 US US17/284,476 patent/US11753672B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN112176029A (zh) | 2021-01-05 |
EP3943612A1 (en) | 2022-01-26 |
EP3943612A4 (en) | 2022-03-30 |
WO2021248779A1 (zh) | 2021-12-16 |
US20220145356A1 (en) | 2022-05-12 |
US11753672B2 (en) | 2023-09-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112176029B (zh) | 一种拭子核酸样本释放剂及其应用 | |
CN111363729B (zh) | 一种rna病毒灭活保存液及其应用 | |
CN109402240B (zh) | 核酸释放剂、核酸pcr扩增方法和pcr扩增试剂盒 | |
US20220017874A1 (en) | Virus preservation solution | |
JP6142102B2 (ja) | 細胞保存液及びその利用、並びに細胞保存液の製造方法 | |
CN111484991A (zh) | 用于病毒核酸高通量全自动化提取的试剂盒及提取方法 | |
CN102839169B (zh) | 肠道病毒rna提取试剂盒及相应提取纯化肠道病毒rna的方法 | |
CN103725796B (zh) | 一种牛病毒性腹泻病毒内标分型荧光pcr检测试剂盒及其制备 | |
CN103725672B (zh) | 一种从福尔马林固定石蜡包埋组织中共分离dna和rna的试剂盒及方法 | |
CN109306350A (zh) | 一种核酸释放剂以及核酸现场释放方法 | |
CN105368817A (zh) | 宫颈细胞保存及dna快速提取一体试剂盒和提取方法 | |
Yu et al. | Comparative evaluation of three preprocessing methods for extraction and detection of influenza A virus nucleic acids from sputum | |
Zavala-Alvarado et al. | The single-step method of RNA purification applied to Leptospira | |
CN113736748A (zh) | 一种样本保存液及其应用 | |
CN111849964A (zh) | 一种提取精液基因组dna的试剂盒及方法 | |
CN110628951A (zh) | 一种非洲猪瘟病毒荧光定量pcr现场快速检测试剂盒 | |
CN112063615A (zh) | 一种基因组dna提取液、基因组dna提取方法及其应用 | |
CN111778239B (zh) | 一种兽用采样液组合物及采样方法 | |
Nyaruaba et al. | Development of a field-deployable RT-qPCR workflow for COVID-19 detection | |
CN116083422B (zh) | 一种核酸释放剂以及试剂盒 | |
CN111088396A (zh) | 一种同时检测副猪嗜血杆菌、猪细小病毒、猪圆环病毒2型的三重实时荧光pcr方法 | |
CN108795925A (zh) | Dna胶抽提试剂及使用该试剂纯化pcr产物的方法 | |
CN117025587B (zh) | 一种痰液液化及分枝杆菌核酸提取的裂解液、试剂盒、提取方法及应用 | |
CN118360369A (zh) | 一种核酸释放剂和使用方法 | |
CN116656778A (zh) | 可消化粘蛋白的样本保存液 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CP03 | Change of name, title or address |
Address after: No.19 Xiangshan Road, Science City, high tech Zone, Guangzhou, Guangdong 510665 Patentee after: Guangzhou Da'an gene Co.,Ltd. Address before: 510665 No. 19 incense Hill Road, hi tech Industrial Development Zone, Guangdong, Guangzhou Patentee before: DA AN GENE CO., LTD. OF SUN YAT-SEN University |
|
CP03 | Change of name, title or address |