发明内容
为了克服现有技术不足,本发明的目的是提供一种可避免对动物造成机械性损伤、且采集的样品保存时间长的兽用采样液组合物及采样方法。
为实现上述目的,本发明提供一种兽用采样液组合物,其包括采样液和保存液,所述采样液包括以下重量份数的组分:
氯化钠 30-35份;
磷酸氢二钠 9-10份;
磷酸二氢钾 0.5-0.1份;
氯化钾 0.5-0.1份;
水 3800-4100份;
苯酚红 1份;
所述保存液包括以下重量份数的组分:
葡萄糖 2-5份;
海藻糖 2-5份;
柳硫汞钠盐 0.02-0.05份;
水 270-320份;
进一步,将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋;
将所述保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。
目前的采样操作中,一般只设置保存液,未配置专门的采样液,这样在采样过程中直接用干的采样工具对动物进行采样,易对动物造成机械性损伤;因此,本发明专门配置了采样液,通过采样液对采样工具进行充分浸润后进行采样,由于有采样液的润滑作用从而可避免对动物造成机械性损伤。
本发明的采样液中加入了苯酚红,由于采样液为酸性,所以采样液加入苯酚红后采样液为黄色。当采样后,由于动物唾液成碱性,因此采样液由黄色转成紫红色,从而方便判断采样工具(采样工具在采样前需先浸润采样液)是否已经使用。
本发明的保存液中加入了海藻糖,由于海藻糖可以在高温及干燥失水等恶劣环境条件下,在细胞表面能形成独特的保护膜,有效地保护蛋白质分子不变性失活,从而维持生命体的生命过程和生物特征。因此,本发明的保存液中加入海藻糖可极大的减缓核酸在唾液样本中降解的速度,延长病毒在样本中存活的时间,保证检测的准确性。经过实验对比,本发明中配置的保存液由于加入海藻糖,可更有效的保护样本中核酸,减缓核酸的降解速度,样本保存时间增加一周以上。
另外,本发明还将保存液及采样液配置后,按每次使用的量进行小量分装,从而方便用户使用,提高采样效率,收集到更多样本。
优选的,本发明所述的兽用采样液组合物,其包括采样液和保存液,
所述采样液包括以下重量份数的组分:
氯化钠 32份;
磷酸氢二钠 9.6份;
磷酸二氢钾 0.8份;
氯化钾 0.8份;
水 4000份;
苯酚红 1份;
所述保存液包括以下重量份数的组分:
葡萄糖 3份
海藻糖 3份;
柳硫汞钠盐 0.03份;
水 300份;
本发明还公开一种应用上述的兽用采样液组合物进行采样的方法,其包括以下步骤:
1)、打开装有采样液的密封袋,将采样液倒在采样工具上,充分浸润采样工具;
2)、将采样工具插入采样动物的鼻腔中,旋转采样工具3-5圈获取采样动物的鼻腔液或将采样工具给采样动物咬10-20分钟,然后将采用工具放回自封袋中,并加入一密封袋的保护液,在自封袋中反复揉搓采样工具;
3)、在自封袋底部剪一开口,将自封袋中液体转移到50ml离心管中;
4)、将离心管中的液体在0-72小时内进行病原检测。
由于本发明步骤1)中,将采样液对采样工具进行充分浸润后再进行采样,由于有采样液的润滑作用从而可避免对动物造成机械性损伤。
本发明上述采样方法,操作简单,一次采样直接采用一密封袋的采样液及一密封袋的保存液,使用方法,采样效率高。
进一步,所述采样动物为猪。
进一步,所述采样工具为棉绳或棉签。
本发明的有益效果为:本发明的保存液中加入了海藻糖,可极大的减缓核酸在唾液样本中降解的速度,延长病毒在样本中存活的时间,保证检测的准确性。同时,本发明专门配置了采样液,通过采样液对采样工具进行充分浸润后进行采样,由于有采样液的润滑作用从而可避免对采样动物造成机械性损伤。另外,本发明的采样方法操作简单,采样方便,采样效率高。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、构造特征、所实现目的及效果,以下结合实施方式详予说明。
实施例1
一种兽用采样液组合物,其包括采样液和保存液,所述采样液包括以下重量份数的组分:
优选的,本发明所述的兽用采样液组合物,其包括采样液和保存液,
所述采样液包括以下重量份数的组分:
氯化钠 30份;
磷酸氢二钠 10份;
磷酸二氢钾 0.5份;
氯化钾 0.1份;
水 4100份;
苯酚红 1份;
所述保存液包括以下重量份数的组分:
葡萄糖 2份
海藻糖 5份;
柳硫汞钠盐 0.02份;
水 320份;
将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋;将所述保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。
实施例2
一种兽用采样液组合物,其包括采样液和保存液,
所述采样液包括以下重量份数的组分:
氯化钠 32份;
磷酸氢二钠 9.6份;
磷酸二氢钾 0.8份;
氯化钾 0.8份;
水 4000份;
苯酚红 1份;
所述保存液包括以下重量份数的组分:
葡萄糖 3份
海藻糖 3份;
柳硫汞钠盐 0.03份;
水 300份;
将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋;将所述保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。
实施例3
一种兽用采样液组合物,其包括采样液和保存液,优选的,本发明所述的兽用采样液组合物,其包括采样液和保存液,
所述采样液包括以下重量份数的组分:
氯化钠 35份;
磷酸氢二钠 9份;
磷酸二氢钾 0.1份;
氯化钾 0.5份;
水 3800份;
苯酚红 1份;
所述保存液包括以下重量份数的组分:
葡萄糖 5份
海藻糖 2份;
柳硫汞钠盐 0.05份;
水 270份;
将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋;将所述保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。
实施例4
应用上述实施例2的兽用采样液组合物进行采样的方法,其包括以下步骤:
1)打开装有采样液的密封袋,将采样液倒在采样棉签上,充分浸润采样棉签;
2)、将采样棉签给采样的猪咬15分钟,然后取出采样棉签放入自封袋中,并加入一密封袋的保存液,反复揉搓采样棉签;
3)、在自封袋底部剪一开口,将自封袋中液体转移到50ml离心管中;
4)、将离心管中的液体在24-288小时内(采用冷链运输)进行病原检测。
实施例5
应用上述实施例1的兽用采样液组合物进行采样的方法,其包括以下步骤:
1)打开装有采样液的密封袋,将采样液倒在采样棉绳一端上,充分浸润采样棉绳一端;
2)、将采样棉绳浸润有采样液的一端给采样的猪咬20分钟,然后取出采样棉绳,并将采样棉绳采样的一端放入自封袋中,再加入一密封袋的保存液,反复揉搓采样棉绳的采样端;
3)、在自封袋底部剪一开口,将自封袋中液体转移到50ml离心管中;
4)、将离心管中的液体在24-288时内(采用冷链运输)进行病原检测。
实施例6
应用上述实施例3的兽用采样液组合物进行采样的方法,其包括以下步骤:
1)打开装有采样液的密封袋,将采样液倒在采样棉签上,充分浸润采样棉签;
1)将采样棉签插入采样猪的鼻腔中,旋转采样棉签4圈获取采样猪的鼻腔液;然后取出采样棉签放入自封袋中,并加入一密封袋的保存液,反复揉搓采样棉签;
3)、在自封袋底部剪一开口,将自封袋中液体转移到50ml离心管中;
4)、将离心管中的液体在24-288小时内(采用冷链运输)进行病原检测。
对照实施例1
应用上述实施例2的兽用采样液进行采样的方法,其包括以下步骤:
1)打开装有采样液的密封袋,将采样液倒在采样棉签上,充分浸润采样棉签;
2)、将采样棉签给采样的猪咬15分钟,然后取出采样棉签放入自封袋中,反复揉搓采样棉签;
3)、在自封袋底部剪一开口,将自封袋中液体转移到50ml离心管中;
4)、将离心管中的液体在24-288小时内(采用冷链运输)进行病原检测。
上述对照实施例1中采用采样液,未使用保存液,其他操作均与实施例4相同。
上述实施例4-6及对照实施例1分别对同一只感染了非洲猪瘟病毒的猪进行了采样,下面对实施例4-6及对照实施例1采集的样品进行核酸检测,检测结果见表1。
主要试剂及仪器:检测试剂采购于美国IDEXX公司非洲猪瘟抗原检测试剂盒;
实时荧光定量PCR检测:所有反应均在CFX Connet型实时荧光定量PCR仪(采购于美国BIO-RAD公司)上进行。
阳性样本:感染非洲猪瘟病毒阳性猪的口鼻棉拭子,原始核酸检测Ct=30.504。
反应条件如下:95℃预变性1min;95℃15s,60℃30s,45个循环。
检测通道分别为FAM通道(465-510nm)和HEX(VIC)通道(515-553nm)。结果判断:与PCR阴性对照相比,阳性样品会有Ct值和特异的扩增曲线。
表1实施例4-6及对照实施例1核酸检测结果
从上述表格可以看出,实施例4-6由于在样品中加入了保存液,且保存液中含有海藻糖,因此,样品常温可放置12(288小时)天。对照实施例1中,由于样品中未加入保护液,在第六天检测时,已经无法检测到核酸,检测结果不再准确。因此,与对照实施例1相比,本发明的样品由于保护液可延长样品保存时间近一周。
需要说明的是,尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述,但并非因此限制本发明的专利保护范围。因此,基于本发明的创新理念,对本文所述实施例进行的变更和修改,或利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换,直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域,均包括在本发明的专利保护范围之内。