CN111690642B - 一种病毒采样液组合物及采样方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种病毒采样液组合物，其包括采样液和保存液，所述采样液包括以下组分：氯化钠、硫酸氢二钠、硫酸二氢钾、氯化钾、水、苯酚红；所述保存液包括以下组分：葡萄糖、海藻糖、枸杞多糖、芦荟多糖、柳硫汞钠盐、水。本发明的保存液中加入了海藻糖、枸杞多糖和芦荟多糖，可极大的减缓核酸在唾液样本中降解的速度，延长病毒在样本中存活的时间，保证检测的准确性。同时，本发明专门配置了采样液，通过采样液对采样工具进行充分浸润后进行采样，由于有采样液的润滑作用可提高病毒的粘附量，提高采样效率。另外，本发明的采样方法操作简单，采样方便，采样效率高。

Description

一种病毒采样液组合物及采样方法

技术领域

本发明涉及病毒检验检疫领域，尤其涉及病毒采样液组合物及采样方法。

背景技术

病毒是由一个核酸分子(DNA或RNA)与蛋白质构成的非细胞形态的营寄生生 活的生命体。病毒有高度的寄生性，完全依赖宿主细胞的能量和代谢系统，获 取生命活动所需的物质和能量。早在公元前1400年人类就有了病毒感染的记载， 但直到19世纪末病毒才开始逐渐被发现和鉴定。病毒能引起动物、植物及人类 的各种疾病，对人类的生存和健康造成极大的威胁，如人类免疫缺陷病毒、埃 博拉病毒、SARS、H1N1等，均对人类及动物造成极大威胁。

病毒感染检测有赖于病毒分离鉴定、病毒基因检测、病毒特异性抗原检测 等方法，这些都必须建立在采集到高质量的标本的基础之上。

通过对与猪群接触的猪舍环境或与猪群接触的生产工具或与猪群接触的人 等进行病毒检测可以反映与猪相关的一些类传染病病原存在的情况，为农场主 制定合理的疫病防控方案提供重要的科学依据。目前对猪群病毒的采样方法存 在以下缺点：(1)目前一般只有针对猪群进行采样设备，一般为设置专门猪群 环境进行采样的设备；(2)采集好的样品在送检过程中由于保存、时间差等多 种原因，样品里的核酸容易降解，造成实验数据不准确，使养殖场在临床诊断 做出错误的判定，从而给养殖场带来极大的损失。

发明内容

为了克服现有技术不足，本发明的目的是提供一种可对与猪群接触的猪舍 环境或生产工具进行采样、且采集的样品保存时间长的病毒采样液组合物及采 样方法。

为实现上述目的，本发明提供一种病毒采样液组合物，其包括采样液和保 存液，所述采样液包括以下重量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

进一步，将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋； 将所述保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。

目前的采样操作中，一般只设置保存液，未配置专门的采样液，这样在采 样过程中直接用干的采样工具对采样对象进行采样，不易粘附病毒样品，采集 样品少，采集效率低；因此，本发明专门配置了采样液，通过采样液对采样工 具进行充分浸润后进行采样，由于有采样液的润滑作用从而粘附更多的样品， 提高采样效率。

本发明的采样液中加入了苯酚红，由于采样液为酸性，所以采样液加入苯 酚红后采样液为黄色。当采样后，由于病毒样品成碱性，因此采样液由黄色转 成紫红色，从而方便判断采样工具(采样工具在采样前需先浸润采样液)是否 已经使用。

本发明的保存液中加入了海藻糖，由于海藻糖可以在高温及干燥失水等恶 劣环境条件下，在细胞表面能形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质分子不变 性失活，从而维持生命体的生命过程和生物特征。因此，本发明的保存液中加 入海藻糖可极大的减缓核酸在唾液样本中降解的速度，延长病毒在样本中存活 的时间，保证检测的准确性。经过实验对比，本发明中配置的保存液由于加入 海藻糖，可更有效的保护样本中核酸，减缓核酸的降解速度，样本保存时间增 加一周以上。

本发明还在保存液中加入了枸杞多糖和芦荟多糖，枸杞多糖能降低高温引 起的核酸损伤，延长病毒的存活时间；芦荟多糖可以促进核酸合成，调节核酸 生长速度，可减缓核酸的降解速度。因此，本发明的保存液中加入了枸杞多糖 和芦荟多糖，与海藻糖组合使用，可进一步保护样本中核酸，减缓核酸的降解 速度，延长样本的保存时间。

另外，本发明还将保存液及采样液配置后，按每次使用的量进行小量分装， 从而方便用户使用，提高采样效率，收集到更多样本。

优选的，本发明所述的病毒采样液组合物，其包括采样液和保存液，所述 采样液包括以下重量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

本发明还公开一种应用上述的病毒采样液组合物进行采样的方法，其包括 以下步骤：

1)、打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样工具上，充分浸润采样工具；

2)、将采样工具充分的擦拭所需要采样的采样环境或采用对象，然后将采用工 具放回自封袋中，并加入一密封袋的保护液，在自封袋中反复揉搓采样工具；

3)、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50ml离心管中；

4)、将离心管中的液体在0-288小时内进行病原检测。

本发明上述采样方法，操作简单，一次采样直接采用一密封袋的采样液及 一密封袋的保存液，使用方法，采样效率高。

进一步，所述采样环境包括猪舍环境；即猪舍内外环境，例如猪场内的道 路、猪舍内的定位栏、猪舍内的粪沟等。所述采样对象至少包括下列中的一种： 人、车辆或猪舍生产用具。具体可以是：与猪有接触的饲养人员、猪场管理者 等的头发、外表皮肤和工作服、猪场内的生产用具、运输车辆等。

进一步，所述采样工具为纱布。

本发明的有益效果为：本发明的保存液中加入了海藻糖，可极大的减缓核 酸在病毒样本中降解的速度，延长病毒在样本中存活的时间，保证检测的准确 性。同时，本发明专门配置了采样液，通过采样液对采样工具进行充分浸润后 进行采样，可提高采用效率。另外，本发明的采样方法操作简单，采样方便， 采样效率高。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合 实施方式详予说明。

实施例1

一种兽用采样液组合物，其包括采样液和保存液，所述采样液包括以下重 量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋；将所述 保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。

实施例2

一种兽用采样液组合物，其包括采样液和保存液，所述采样液包括以下重 量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋；将所述 保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。

实施例3

一种兽用采样液组合物，其包括采样液和保存液，所述采样液包括以下重 量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋；将所述 保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。

实施例4

应用实施例2的病毒采样液组合物进行采样的方法，其包括以下步骤：

1)、打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样纱布上，充分浸润采样纱布；

2)、将采样纱布充分的擦拭所需要采样的猪舍环境(即猪舍墙壁)，然后将采 用纱布放回自封袋中，并加入一密封袋的保护液，在自封袋中反复揉搓采样纱 布；

3)、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50ml离心管中；

4)、将离心管中的液体在24-288小时内进行病原检测。

5、根据权利要求4所述的采样的方法，其特征在于，所述采样环境包括猪 舍环境；所述采样对象至少包括下列中的一种：人、车辆或猪舍生产用具。

实施例5

应用实施例1的病毒采样液组合物进行采样的方法，其包括以下步骤：

1)、打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样纱布上，充分浸润采样纱布；

2)、将采样纱布充分的擦拭所需要采样的采样对象(猪舍内外环境，本实施例 用采样纱布充分擦拭猪舍内的定位栏和猪舍内的粪沟)，然后将采用纱布放回 自封袋中，并加入一密封袋的保护液，在自封袋中反复揉搓采样纱布；

3)、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50ml离心管中；

4)、将离心管中的液体在24-288小时内进行病原检测。

实施例6

应用实施例3的病毒采样液组合物进行采样的方法，其包括以下步骤：

1)、打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样纱布上，充分浸润采样纱布；

2)、将采样纱布充分的擦拭所需要采样的采样对象(本实施例采样纱布充分擦 拭与猪有接触的饲养人员的外表皮肤和工作服)，然后将采用纱布放回自封袋 中，并加入一密封袋的保护液，在自封袋中反复揉搓采样纱布；

3)、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50ml离心管中；

4)、将离心管中的液体在24-288小时内进行病原检测。

对照实施例1

应用实施例2的病毒采样液组合物进行采样的方法，其包括以下步骤：

1)、打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样纱布上，充分浸润采样纱布；

2)、将采样纱布充分的擦拭所需要采样的猪舍环境(即猪舍墙壁)，然后将采 用纱布放回自封袋中，在自封袋中反复揉搓采样纱布；

3)、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50m l离心管中；

4)、将离心管中的液体在24-288小时内进行病原检测。

上述对照实施例1中采用采样液，未使用保存液，其他操作均与实施例4 相同。

上述实施例4-6及对照实施例1分别对感染了非洲猪瘟病毒的猪的猪舍环 境或所接触的对象进行了采样，下面对实施例4-6及对照实施例1采集的样品 进行核酸检测，检测结果见表1。

主要试剂及仪器：检测试剂采购于美国IDEXX公司非洲猪瘟抗原检测试剂 盒；

实时荧光定量PCR检测：所有反应均在CFX Connet型实时荧光定量PCR仪 (采购于美国BIO-RAD公司)上进行。

阳性样本：感染非洲猪瘟病毒阳性猪的口鼻棉拭子，原始核酸检测 Ct＝30.504。

反应条件如下：95℃预变性1min；95℃15s，60℃30s，45个循环。

检测通道分别为FAM通道(465-510nm)和HEX(VIC)通道(515-553nm)。 结果判断：与PCR阴性对照相比，阳性样品会有Ct值和特异的扩增曲线。

表1实施例4-6及对照实施例1核酸检测结果

从上述表格可以看出，实施例4-6由于在样品中加入了保存液，且保存液中 含有海藻糖、枸杞多糖和芦荟多糖，因此，样品常温可放置12(288小时)天。 对照实施例1中，由于样品中未加入保护液，在第六天检测时，已经无法检测 到核酸，检测结果不再准确。因此，与对照实施例1相比，本发明的样品由于 保护液可延长样品保存时间近一周。

需要说明的是，尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述，但并非因 此限制本发明的专利保护范围。因此，基于本发明的创新理念，对本文所述实 施例进行的变更和修改，或利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程 变换，直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域，均包括在本 发明的专利保护范围之内。

Claims (4)

1.一种应用病毒采样液组合物进行采样的方法，其特征在于：所述病毒采样液组合物包括采样液和保存液，所述采样液由以下重量份数的组分组成：

氯化钠 30-35份；

硫酸氢二钠 9-10份；

硫酸二氢钾 0.5-0.1份；

氯化钾 0.5-0.1份；

水 3900-4100份；

苯酚红 1份；

所述保存液包括以下重量份数的组分：

葡萄糖 2-5份；

海藻糖 2-5份；

枸杞多糖 2-5份；

芦荟多糖 2-5份；

柳硫汞钠盐 0.02-0.05份；

水 270-320份；

将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋；将所述保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋；

所述采样的方法包括以下步骤：

1）、打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样工具上，充分浸润采样工具；

2）、将采样工具充分的擦拭所需要采样的采样环境或采用对象，然后将采用工具放回自封袋中，并加入一密封袋的保护液，在自封袋中反复揉搓采样工具；

3）、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50ml离心管中；

4）、将离心管中的液体在0-288小时内进行病原检测。

2.根据权利要求1所述的采样的方法，其特征在于：其包括采样液和保存液，所述采样液由以下重量份数的组分组成：

氯化钠 32份;

硫酸氢二钠 9.6份;

硫酸二氢钾 0.8份;

氯化钾 0.8份;

水 4000份；

苯酚红 1份；

所述保存液包括以下重量份数的组分：

葡萄糖 3份

海藻糖 3份；

枸杞多糖 3份；

芦荟多糖 3份；

柳硫汞钠盐 0.03份；

水 300份。

3.根据权利要求1所述的采样的方法，其特征在于，所述采样环境包括猪舍环境；所述采样对象至少包括下列中的一种：人、车辆或猪舍生产用具。

4.根据权利要求1所述的采样的方法，其特征在于，所述采样工具为纱布。