CN111718908B - 病毒样本保存液及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种病毒样本保存液及其制备方法和应用，涉及生物技术领域，本发明提供的病毒样本保存液，包括特定浓度的缓冲化合物、离液剂、去污剂和螯合剂，通过上述特定浓度的特定组分相互配合，使得本发明提供的病毒样本保存液具有安全、稳定、高效的优点，可以在10分钟内将病毒灭活，并可稳定保存病毒样本核酸。并且，无需超低温环境即可实现对病毒样本的保存，可适用于临床及野外环境采集及运输病毒样本。

Description

病毒样本保存液及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种病毒样本保存液及其制备方法和应用。

背景技术

病毒是一种没有细胞结构的特殊生物。它们的结构非常简单，由蛋白质外壳和内部的遗传物质组成。病毒不能独立生存，必须生活在其他生物的细胞内，一旦离开活细胞壳就不表现任何生命活动迹象。病毒从结构上分为：RNA病毒和DNA病毒。

病毒核酸的检测，适用于人类疾病的早期诊断、疑难样本的辅助诊断、耐药性监测、病程监控及预测、指导抗病毒治疗及疗效判定等重要领域。因此，保存完整的病毒核酸对下游的基因分析具有重要的意义。

病毒的核酸是比较容易降解的，尤其是RNA病毒，非常容易被广泛存在的内源性或者外源性RNA酶降解。而RNA酶性质稳定，即使高温高压处理也无法使其失活，所以病毒核酸需要严格的储存条件。

现有的常规的病毒保存方法：(1)-80℃超低温保存；(2)UTM常规病毒保存液：

-80℃超低温保存，对环境设备的要求很高，如实验室没有超低温冰箱，就无法保存，而且病毒离开超低温环境也无法运输。

UTM常规病毒保存液保存病毒，无法对病毒进行灭活，活病毒可能会危及医务及操作人员的安全。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种病毒样本保存液，以至少缓解了现有技术中存在的技术问题之一。

本发明的第二个目的在于提供上述病毒样本保存液的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供上述病毒样本保存液的应用。

本发明提供了一种病毒样本保存液，所述病毒样本保存液包括：终浓度为10-50mmol/L的缓冲化合物、质量体积百分比为5％-15％的离液剂、体积百分比为0.1％-20％的去污剂和终浓度为0.1-1mmol/L的螯合剂。

进一步的，所述病毒样本保存液包括：终浓度为20-50mmol/L的缓冲化合物、质量体积百分比为10％-15％的离液剂、体积百分比为1％-10％的去污剂和终浓度为0.1-0.5mmol/L的螯合剂；

优选地，所述病毒样本保存液包括：终浓度为50mmol/L的缓冲化合物、质量体积百分比为5％的离液剂、体积百分比为10％的去污剂和终浓度为0.1mmol/L的螯合剂。

进一步的，所述缓冲化合物包括Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液或HEPES缓冲液。

进一步的，所述离液剂包括离液盐化合物；

优选地，所述离液盐化合物包括钠盐和/或胍盐；

可选地，所述钠盐包括碘化钠、氯化钠或高氯酸钠中的一种或多种；

可选地，所述胍盐包括盐酸胍、硫氰酸胍或异硫氰酸胍中的一种或多种。

进一步的，所述去污剂包括离子型表面活性剂或非离子型表面活性剂；

可选地，所述离子型表面活性剂包括十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸锂或月桂酰基肌氨酸钠中的一种或多种；

可选地，所述非离子型表面活性剂包括聚氧乙烯脂肪醇醚、吐温、聚氧乙烯(20)山梨醇酐单月桂酸酯或聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或多种。

进一步的，所述螯合剂包括EDTA·2Na、氨基三乙酸、8-羟基喹啉或酒石酸钾钠中的一种或多种。

进一步的，所述病毒样本保存液的pH为5.5-6.5。

本发明还提供了上述的病毒样本保存液的制备方法，取配方量的各组分混合均匀，得到所述病毒样本保存液。

另外，本发明还提供了上述的病毒样本保存液在保存病毒样本中的应用。

进一步的，所述病毒样本包括血液、粪便、鼻咽拭子、血清、血浆、唾液、腹腔积液、痰液或组织；

优选地，当保存鼻咽拭子时，病毒样本保存液的用量为500μL-1mL；

优选地，当保存血液、血清、血浆、唾液、腹腔积液或痰液时，病毒样本保存液的用量为样本体积的2-5倍；

优选地，当保存组织时，病毒样本保存液的用量为样本体积的至少5倍，优选为5倍；

优选地，当保存细胞时，病毒样本保存液的用量为样本体积的4-6倍，优选为5倍；

优选地，当保存粪便时，病毒样本保存液的用量为样本体积的8-12倍，优选为10倍。

本发明提供的病毒样本保存液，包括特定浓度的缓冲化合物、离液剂、去污剂和螯合剂，其中缓冲化合物能够维持病毒样本保存液pH的稳定性，离液剂和螯合剂可有效抑制DNase/RNase活性，去污剂能够灭活病毒。通过上述特定浓度的特定组分相互配合，使得本发明提供的病毒样本保存液具有安全、稳定、高效的优点，可以在10分钟内将病毒灭活，并可稳定保存病毒样本核酸，在保存病毒样本的基础上提高样本的安全性。并且，应用本发明提供的病毒样本保存液无需超低温环境即可实现对病毒样本的保存，经验证，本发明提供的病毒样本保存液在37℃条件下保存时间为7-14天，在2-8℃条件保存时间为1-2月，在-20℃条件下即可实现长期保存。因此，除实验室常规保存外，本发明提供的病毒样本保存液也能够适用于临床及野外环境采集及运输病毒样本，普适性广。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实验例3提供的对照组(1)的荧光显微镜下结果图；

图2为本发明实验例3提供的检测组(1)中实施例1的荧光显微镜下结果图；

图3为本发明实验例3提供的检测组(1)中对比例1的荧光显微镜下结果图；

图4为本发明实验例3提供的检测组(1)中对比例2的荧光显微镜下结果图；

图5为本发明实验例3提供的检测组(1)中对比例3的荧光显微镜下结果图；

图6为本发明实验例3提供的检测组(1)中对比例4的荧光显微镜下结果图；

图7为本发明实验例3提供的对照组(2)的荧光显微镜下结果图；

图8为本发明实验例3提供的检测组(2)中实施例1的荧光显微镜下结果图；

图9为本发明实验例3提供的检测组(2)中对比例1的荧光显微镜下结果图；

图10为本发明实验例3提供的检测组(2)中对比例2的荧光显微镜下结果图；

图11为本发明实验例3提供的检测组(2)中对比例3的荧光显微镜下结果图；

图12为本发明实验例3提供的检测组(2)中对比例4的荧光显微镜下结果图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

根据本发明的一个方面，提供了一种病毒样本保存液，所述病毒样本保存液包括：终浓度为10-50mmol/L的缓冲化合物、质量体积百分比为5％-15％的离液剂、体积百分比为0.1％-20％的去污剂和终浓度为0.1-1mmol/L的螯合剂。

其中，缓冲化合物能够维持病毒样本保存液pH的稳定性，其终浓度例如可以为，但不限于10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L、40mmol/L或50mmol/L。优选缓冲化合物可以包括Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液或HEPES缓冲液，当选用上述缓冲化合物时，能够使pH值稳定在5.5-6.5的弱酸性环境，保证病毒样本保存液的性能。

离液剂和螯合剂均可有效抑制DNase/RNase活性。

其中，离液剂的质量体积百分比为5％-15％，例如可以为，但不限于5％、8％、10％、12％或15％。优选离液剂可以包括离液盐化合物，离液盐化合物可变性蛋白质，可有效抑制DNase/RNase活性。优选地，所述离液盐化合物包括钠盐和/或胍盐。

当选择钠盐作为离液盐时，所述钠盐可选地包括碘化钠、氯化钠或高氯酸钠中的一种或多种；当选择胍盐作为离液盐时，所述胍盐可选地包括盐酸胍、硫氰酸胍或异硫氰酸胍中的一种或多种。

螯合剂的终浓度为0.1-1mmol/L，例如可以为，但不限于0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.5mmol/L、0.8mmol/L或1mmol/L。上述浓度下的螯合剂可高效螯合金属离子，对抑制DNase/RNase活性具有一定辅助作用。优选螯合剂包括EDTA·2Na、氨基三乙酸、8-羟基喹啉或酒石酸钾钠中的一种或多种。

去污剂能够灭活病毒，将离液剂和去污剂组合使用，更有利于裂解病毒细胞，使病毒灭活。去污剂的体积百分比例如可以为，但不限于0.1％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、14％、16％、18％或20％。在一些优选的实施方式中，所述去污剂包括离子型表面活性剂或非离子型表面活性剂。

当选择离子型表面活性剂作为去污剂时，所述离子型表面活性剂可选地包括十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸锂或月桂酰基肌氨酸钠中的一种或多种；当选择非离子型表面活性剂作为去污剂时，所述非离子型表面活性剂可选地包括聚氧乙烯脂肪醇醚、吐温、聚氧乙烯(20)山梨醇酐单月桂酸酯或聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或多种。

通过上述特定浓度的特定组分相互配合，使得本发明提供的病毒样本保存液具有安全、稳定、高效的优点，可以在10分钟内将病毒灭活，并可稳定保存病毒样本核酸，在保存病毒样本的基础上提高样本的安全性。并且，应用本发明提供的病毒样本保存液无需超低温环境即可实现对病毒样本的保存，经验证，本发明提供的病毒样本保存液在37℃条件下保存时间为7-14天，在2-8℃条件保存时间为1-2月，在-20℃条件下即可实现长期保存。因此，除实验室常规保存外，本发明提供的病毒样本保存液也能够适用于临床及野外环境采集及运输病毒样本，普适性广。

需要说明的是，在本发明中，“和/或”表示的是“和”或者“或”，例如，所述离液盐化合物包括钠盐和/或胍盐，意味着所述离液盐化合物可以只包括钠盐、或者只包括胍盐、或者同时包括钠盐和胍盐。

在本发明中“……中的一种或多种”表示的是可以为上述选择中的一种、两种、或更多种，例如，所述钠盐可选地包括碘化钠、氯化钠或高氯酸钠中的一种或多种，意味着钠盐可以选择碘化钠、或者选择氯化钠、或者选择高氯酸钠、或者同时选择碘化钠和氯化钠、或者同时选择氯化钠和高氯酸钠、或者同时选择碘化钠和高氯酸钠、或者同时选择碘化钠、氯化钠和高氯酸钠。

在一些优选的实施方式中，所述病毒样本保存液包括：终浓度为20-50mmol/L的缓冲化合物、质量体积百分比为10％-15％的离液剂、体积百分比为1％-10％的去污剂和终浓度为0.1-0.5mmol/L的螯合剂；

优选地，所述病毒样本保存液包括：终浓度为50mmol/L的缓冲化合物、质量体积百分比为5％的离液剂、体积百分比为10％的去污剂和终浓度为0.1mmol/L的螯合剂。

通过对本发明提供的病毒样本保存液的组分用量进行进一步的调整和优化，能够使得本发明提供的病毒样本保存液更安全、稳定、高效。

在一些优选的实施方式中，所述病毒样本保存液的pH为5.5-6.5，例如可以为，但不限于5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4或6.5。

本发明还提供了上述的病毒样本保存液的制备方法，所述制备方法包括：取配方量的各组分混合均匀，得到所述病毒样本保存液。

本发明提供的制备方法工艺简单，操作方便，通过简单的混合即可制备得到本发明提供的病毒样本保存液，适合广泛推广应用。

另外，基于本发明提供的病毒样本保存液对病毒的灭活作用及对病毒核酸的保护作用，本发明还提供了上述的病毒样本保存液在保存病毒样本中的应用。

在一些可选的实施方式中，所述病毒样本包括血液、粪便、鼻咽拭子、血清、血浆、唾液、腹腔积液、痰液或组织。

具体地，当应用本发明提供的病毒样本保存液进行样本的保存时，包括进行样本的前处理：

拭子样本：拭子沾取口腔液、血液、粪便、环境污水等样本后，立即转入离心管中，根据拭子棉头大小，加入适量样本保存液，以保证保存液可以完全浸没拭子棉头，一般加入500μL-1mL比较适宜。

血液、口腔液、体液等液体样本：取适量的抗凝全血、口腔液、体液等液体样本，加入到无菌离心管中，加入2-5倍体积的样本保存液，剧烈涡旋振荡。

动物组织：将组织块剪切成最大厚度不超过0.5cm(长宽高1cm×1cm×0.5cm)的组织片，将新鲜组织浸入至少5倍量的样本保存液内(如100mg组织浸入至少500μL样本保存液内)，保证组织完全浸入其中。

培养细胞样本：按照标准实验室规程收集培养细胞。使用PBS或类似的溶液洗涤细胞并除去培养基。重悬细胞后加入5倍体积的样本保存液。剧烈涡旋振荡。

粪便样本：在样本中加入10倍体积的样本保存液，充分振荡混匀。

下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

实施例1

本实施例提供了一种病毒样本保存液，包括终浓度为50mmol/L的Tris-和HCl、质量体积百分比为5％的异硫氰酸胍、体积百分比为5％的聚乙二醇对异辛基苯基醚、体积百分比为5％的月桂酰基肌氨酸钠和终浓度为0.1mmol/L的EDTA·2Na。

实施例2

本实施例提供了一种病毒样本保存液，包括终浓度为10mmol/L的Tris-和HCl、质量体积百分比为15％的异硫氰酸胍、体积百分比为0.05％的聚乙二醇对异辛基苯基醚、体积百分比为0.05％的月桂酰基肌氨酸钠和终浓度为1mmol/L的EDTA·2Na。

实施例3

本实施例提供了一种病毒样本保存液，包括终浓度为30mmol/L的Tris-和HCl、质量体积百分比为10％的异硫氰酸胍、体积百分比为10％的聚乙二醇对异辛基苯基醚、体积百分比为10％的月桂酰基肌氨酸钠和终浓度为0.5mmol/L的EDTA·2Na。

实施例4

本实施例提供了一种病毒样本保存液，与实施例1的不同之处在于，将Tris-和HCl替换为磷酸盐缓冲液。

实施例5

本实施例提供了一种病毒样本保存液，与实施例1的不同之处在于，将异硫氰酸胍替换为高氯酸钠。

实施例6

本实施例提供了一种病毒样本保存液，与实施例1的不同之处在于，将异硫氰酸胍替换为碘化钠和盐酸胍。

实施例7

本实施例提供了一种病毒样本保存液，与实施例1的不同之处在于，将体积百分比为5％的聚乙二醇对异辛基苯基醚和体积百分比为5％的月桂酰基肌氨酸钠替换为体积百分比为10％的聚氧乙烯(20)山梨醇酐单月桂酸酯。

实施例8

本实施例提供了一种病毒样本保存液，与实施例1的不同之处在于，聚乙二醇对异辛基苯基醚和月桂酰基肌氨酸钠的终浓度分别为2％。

实施例9

本实施例提供了一种病毒样本保存液，与实施例1的不同之处在于，聚乙二醇对异辛基苯基醚和月桂酰基肌氨酸钠的终浓度分别为10％。

实施例10

本实施例提供了一种病毒样本保存液，与实施例1的不同之处在于，异硫氰酸胍的质量体积百分比为10％。

实施例11

本实施例提供了一种病毒样本保存液，与实施例1的不同之处在于，异硫氰酸胍的质量体积百分比为15％。

对比例1

本对比例提供了一种病毒样本保存液，与实施例1的不同之处在于不包含异硫氰酸胍。

对比例2

本对比例提供了一种病毒样本保存液，与实施例1的不同之处在于不包含聚乙二醇对异辛基苯基醚和月桂酰基肌氨酸钠。

对比例3

本对比例提供了一种病毒样本保存液，包括终浓度为60mmol/L的Tris-和HCl、质量体积百分比为3％的异硫氰酸胍、体积百分比终浓度为12％的聚乙二醇对异辛基苯基醚、体积百分比终浓度为12％的月桂酰基肌氨酸钠和终浓度为1.2mmol/L的EDTA·2Na。

对比例4

本对比例提供了一种病毒样本保存液，包括终浓度为8mmol/L的Tris-和HCl、质量体积百分比为18％的异硫氰酸胍、体积百分比终浓度为0.03％的聚乙二醇对异辛基苯基醚、体积百分比终浓度为0.03％的月桂酰基肌氨酸钠和终浓度为0.08mmol/L的EDTA·2Na。

为能够更好的说明本发明的所提到的灭活病毒及稳定保存核酸的有效性能，进行如下实验：

实验例1

取3份不同浓度的猪流行性腹泻病毒(PEDV)样本和HBV血浆样本。

分别将3份不同浓度的猪流行性腹泻(PEDV)样本按照1：1的比例分别保存于本发明实施例1、实施例8和实施例9提供的病毒样本保存液中。同样地，分别将3份不同浓度的HBV血浆样本也按照1：1的比例分别保存于本发明实施例1、实施例8和实施例9提供的病毒样本保存液中。

将上述混合有病毒样本的混合液分别在37℃进行样本保存。保存时间见下表：

样本保存温度	检测时间点
		37℃	7天，14天

以常规方法-80℃超低温保存的病毒作为对照样品。

采用杭州博日科技MagaBio病毒DNA/RNA纯化试剂盒II(Cat#BSC71S1E)纯化病毒核酸。纯化操作参考产品使用说明。

检测试剂分别杭州博日科技采用乙型肝炎病毒核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒(Cat#BSB01)以及猪流行性腹泻病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒(Cat#BSL34)。

检测体系如下：

(1)HBV检测试剂配制反应体系：

每个反应的试剂	PCR反应液	Taq酶	UDG酶	DNA模板
					用量	37.7ul	0.3ul	0.1ul	5ul

反应程序设定如下：

(2)PEDV检测试剂配制反应体系：

试剂配制反应体系：向每个反应管中分装15μL PEDV反应液，向分装好的反应管中分别加入5μL提取产物。

反应程序设定如下：

验证结果见下表

(1)HBV

(2)PEDV

(3)超低温保存的HBV病毒

++	25.29
		+	28.55
+/-	31.57

(4)超低温保存的PEDV病毒

++	21.43
		+	28.41
+/-	35.51

荧光定量PCR检测，本发明实施例1提供的病毒样本保存液在高温环境中的保存性能最稳定。

实验例2

取3份不同浓度的猪流行性腹泻病毒(PEDV)样本和HBV血浆样本。

分别将3份不同浓度的猪流行性腹泻(PEDV)样本按照1：1的比例分别保存于本发明实施例1、实施例10和实施例11提供的病毒样本保存液中。同样地，分别将3份不同浓度的HBV血浆样本也按照1：1的比例分别保存于本发明实施例1、实施例10和实施例11提供的病毒样本保存液中。

将上述混合有病毒样本的混合液分别在37℃进行样本保存。保存时间见下表：

样本保存温度	检测时间点
		37℃	7天，14天

以常规方法-80℃超低温保存的病毒作为对照样品。

采用杭州博日科技MagaBio病毒DNA/RNA纯化试剂盒II(Cat#BSC71S1E)纯化病毒核酸。纯化操作参考产品使用说明。

检测试剂分别杭州博日科技采用乙型肝炎病毒核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒(Cat#BSB01)以及猪流行性腹泻病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒(Cat#BSL34)。

检测体系如下：

(1)HBV检测试剂配制反应体系：

每个反应的试剂	PCR反应液	Taq酶	UDG酶	DNA模板
					用量	37.7ul	0.3ul	0.1ul	5ul

反应程序设定如下：

37℃：5分钟；

94℃：2分钟；

95℃：5秒；45Cycles

60℃：40秒；

(2)PEDV检测试剂配制反应体系：

试剂配制反应体系：向每个反应管中分装15μL PEDV反应液，向分装好的反应管中分别加入5μL提取产物。

反应程序设定如下：

50℃ 10min

95℃ 1min

95℃ 10sec 40Cycles

60℃ 20sec

验证结果见下表

(1)HBV

(2)PEDV

(3)超低温保存的HBV病毒

++	25.57
		+	28.48
+/-	31.54

(4)超低温保存的PEDV病毒

++	21.43
		+	28.41
+/-	35.51

实验例3

为了节约成本，选用上述实验效果较好的实施例1及对比例1-4提供的病毒样本保存液，浸染不同MOI值细胞，验证病毒样本保存液的灭活性能。

1)病毒材料：选取带有高亮度绿色荧光蛋白的慢病毒作为感染细胞的病毒。

2)细胞材料1：Vero细胞，该细胞MOI值为80，属于较难感染病毒的一种细胞。细胞材料2：293T细胞，该细胞MOI值为10，属于较易感染病毒的一种细胞。

3)对照组(1)，直接将慢病毒感染VERO细胞，继续培养5天后，在荧光显微镜下观察，产生明显的绿色荧光(如图1所示)。说明病毒具有较强感染能力。

4)检测组(1)，在慢病毒标本中1:1分别加入本发明实施例1及对比例1-4提供的样本保存液，混匀后室温放置10min，分别取加入样本保存液的慢病毒感染VERO细胞，继续培养5天后，在荧光显微镜下观察，结果如图2-图6所示。

其中实施例1组未见绿色荧光(如图2所示)。说明病毒已经被灭活，无感染细胞的能力。根据上表中的结果显示，本发明实施例1提供的病毒样本保存液能够有效灭活病毒，而不含有离液剂、或不含有去污剂、或上述各物质的用量不在本发明范围内的对比例1-4任一项提供的病毒样本保存液，均不能够实现病毒的灭活作用。由此说明，本发明提供的病毒样本保存液是由特定的组分及特定的用量相互配合，才能够达到有效灭活病毒的效果。

5)对照组(2)，直接将慢病毒感染293T细胞，继续培养4天后，在荧光显微镜下观察，产生明显的绿色荧光(如图7所示)。说明病毒具有较强感染能力。

6)检测组(2)，在慢病毒标本中1:1分别加入本发明实施例1及对比例1-4提供的样本保存液，混匀后室温放置10min，分别取加入样本保存液的慢病毒感染293T细胞，继续培养4天后，在荧光显微镜下观察，结果如图8-图12所示。

其中实施例1组未见绿色荧光(如图8所示)。说明病毒已经被灭活，无感染细胞的能力。根据上表中的结果显示，本发明实施例1提供的病毒样本保存液能够有效灭活病毒，而不含有离液剂、或不含有去污剂或上述各物质的用量不在本发明范围内的对比例1-4任一项提供的病毒样本保存液，均不能够实现病毒的灭活作用。由此说明，本发明提供的病毒样本保存液是由特定的组分及特定的用量相互配合，才能够达到有效灭活病毒的效果。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (6)

1.一种病毒样本保存液，其特征在于，所述病毒样本保存液由以下组分组成：终浓度为50 mmol/L的Tris-HCl、质量体积百分比为5%的异硫氰酸胍、体积百分比为5%的聚乙二醇对异辛基苯基醚、体积百分比为5%的月桂酰基肌氨酸钠和终浓度为0.1 mmol/L的EDTA•2Na；

所述病毒样本保存液的pH为5.5-6.5。

2.如权利要求1所述的病毒样本保存液的制备方法，其特征在于，取配方量的各组分混合均匀，得到所述病毒样本保存液。

3.如权利要求1所述的病毒样本保存液在保存病毒样本中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述病毒样本包括血液、粪便、鼻咽拭子、血清、血浆、唾液、腹腔积液、痰液、细胞或组织。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，当保存鼻咽拭子时，病毒样本保存液的用量为500µL-1mL；

当保存血液、血清、血浆、唾液、腹腔积液或痰液时，病毒样本保存液的用量为样本体积的2-5倍；

当保存组织时，病毒样本保存液的用量为样本体积的至少5倍；

当保存细胞时，病毒样本保存液的用量为样本体积的4-6倍；

当保存粪便时，病毒样本保存液的用量为样本体积的8-12倍。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，当保存组织时，病毒样本保存液的用量为样本体积的5倍；

当保存细胞时，病毒样本保存液的用量为样本体积的5倍；

当保存粪便时，病毒样本保存液的用量为样本体积的10倍。

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