CN111549101A - 一种用于生物样本核酸检测的保存液及应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用于生物样本核酸检测的保存液及应用，保存液由核酸酶抑制剂、表面活性剂、螯合剂及缓冲液组成。保存液与固体样品或液体样品混合，变性蛋白质，灭活病原体,灭活DNA及RNA核酸酶。灭活病原体大大提高了潜在高传染性临床样品的安全性，对周围人员及样品下游操作人员形成良好保护；灭活DNA及RNA核酸酶使得样品中的DNA及RNA的含量及完整性最大程度保持在采样时的状态，从而降低了对临床样品运输保存的温度及时间等方面的苛刻要求。本发明的保养液可以用于临床高传染性核酸检测生物样本，生物样本包括咽拭类、体液、灌洗液、全血、全血细胞、血清或血浆。

Description

一种用于生物样本核酸检测的保存液及应用

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种用于生物样本核酸检测的保存液及应用。

背景技术

核酸按照化学组分可分为核糖核酸(RNA)与脱氧核糖核酸(DNA)。核糖核酸(Ribonucleid acid,RNA)作为生命遗传信息的载体之一，存在于细胞生物、部分病毒、类病毒中，并参与多种生命活动，因此在科研及临床检测的分子生物学领域被广泛研究及应用，高质量、完整的RNA可用于各种分子生物学实验和检测，如核酸酶保护实验、原癌基因表达检测、用药监测等。RNA本身的单链结构既不稳定，且极易被广泛存在并极其稳定的核糖核酸酶(RNase)降解，另外，离体血液细胞的基因转录水平可能会迅速发生改变，而RNA的完整性和基因转录水平的稳定性会对检测结果的可靠性和准确性产生重要影响。

核酸保存和纯化的技术难点主要是在灭活内源性(组织或细胞内)和外源性(环境中)核酸酶的同时不影响核酸(DNA/RNA)的完整性。目前，核酸保存的方法主要有：1、组织离开生命体后立即放入液氮；2、将组织立即放入含有核酸酶抑制剂的保存管中，-20℃～-80℃的低温环境中予以冷冻。液氮保存核酸效果很好，但液氮保存需要液氮罐，组织离体后必须马上放入液氮罐。另外液氮保存的组织在纯化核酸的过程中需要在液氮中研磨，还需要额外的纯化试剂，在这些过程中操作繁琐，稍有不慎将会引起核酸保存或提取失败，并导致对生物样本核酸检测结果出现极大的偏差。

同时，采用含有核酸酶抑制剂的保存管核酸需要在保存管中加入Trizol试剂，但是Trizol试剂只可以临时保存核酸，并且毒性较大。目前，核酸保存液主要有以Qiagen为代表的RNA later和以BD为代表的PAXgene全血RNA管。Qiagen的保存液保存组织效果非常好，但保存细胞特别是白细胞的效果不佳，保存样本中核酸的提取需要额外的专用纯化试剂，价格昂贵，并不适用于临床医学的快速诊断检测。

有鉴于此，有必要对现有技术中的对生物样本核酸检测的保存液予以改进，以解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于揭示一种用于生物样本核酸检测的保存液及应用，用以克服现有技术所存在诸多缺陷，尤其是能够降低对待检测样品的保存温度及保存时间的要求，从而确保生物样本核酸检测结果的准确性及可靠性。

为实现上述第一个目的，本发明提供了一种用于生物样本核酸检测的保存液由核酸酶抑制剂、表面活性剂、螯合剂及缓冲液组成。

作为本发明的进一步改进，所述核酸酶抑制剂选自异硫氰酸胍、盐酸胍、尿素和氯化锂中的一种或几种的组合。

作为本发明的进一步改进，所述表面活性剂选自十二烷基二甲基苄基氯化铵、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵或者Triton X-100中的一种或几种的组合。

作为本发明的进一步改进，所述螯合剂选自乙二胺四乙酸钠盐或钾盐、乙二醇二乙醚二胺四乙酸钠盐或钾盐中的一种或几种的组合。

作为本发明的进一步改进，所述缓冲剂选自柠檬酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或几种的组合。

作为本发明的进一步改进，所述核酸酶抑制剂的终浓度为0.1～10M，所述表面活性剂的终浓度为0.1～6.0W/V％，所述螯合剂的终浓度为0.5～9.5mM，所述缓冲液的终浓度为20～500mM。

作为本发明的进一步改进，所述保存液的pH值为5.0～8.5。

作为本发明的进一步改进，所述保存液还包括酸碱指示剂；所述酸碱指示剂选自甲基紫、甲酚红、甲基紫、百里酚蓝、茜素华R、甲基黄、溴酚蓝、甲基橙、溴甲酚绿、甲基红、溴百里酚蓝、中性红、酚红、甲酚红或者酚酞中的一种或者几种的组合。

作为本发明的进一步改进，所述生物样本选自咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、肛门拭子、粪便拭子、皮肤拭子、创口拭子、组织块、体液、全血、血清、血浆、全血离心后的血细胞或者灌洗液中离心的细胞沉淀中的一种或者几种的组合。

作为本发明的进一步改进，所述保存液与生物样本的体积比为1:1～1:4，所述保存液的贮藏温度范围为-40℃～37℃。

基于上述发明创造所揭示的一种用于生物样本核酸检测的保存液，本申请还揭示了一种如上述任一项发明创造所述的用于生物样本核酸检测的保存液的应用，所述用于生物样本核酸检测的保存液用于对RNA病原体或者DNA病原体执行核酸检测。

作为本发明的进一步改进，所述用于生物样本核酸检测的保存液用于对非感染性疾病的RNA或者DNA执行基因检测。

作为本发明的进一步改进，所述基因检测包括融合基因检测、基因剪辑体检测、肿瘤液体活检或者唐氏综合征筛查。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

通过本发明所揭示的一种用于生物样本核酸检测的保存液及应用，基于核酸酶抑制剂、表面活性剂、螯合剂及缓冲液的共同配合，生物样本与保存液混合后能够在-40℃～37℃的范围内进行保存及运输，从而降低了对待检测的生物样本保存温度及保存时间的要求，提高了使用该保存液的生物样本核酸检测结果的准确性及可靠性。

附图说明

图1为使用本发明所揭示的一种用于生物样本核酸检测的保存液以及仅含有缓冲液的对照组在25℃及37℃两种温度环境中的细菌RNA的电泳图。

具体实施方式

下面结合附图所示的各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。

在详细阐述本发明各个实施例之前，对本申请所涉及的技术术语含义予以必要解释。

单位“M”：浓度单位，摩尔每升。

单位“mM”：浓度单位，毫摩尔每升。

单位“W/V％”：浓度单位，质量体积浓度。

单位“ml”：体积单位，毫升。

单位“IU/ml”：浓度单位，国际单位每毫升。

单位“h”：时间单位，小时。

单位“min”：时间单位，分钟。

单位“S”：时间单位，秒。

单位“r/min”：转速单位，转每分钟。

本申请各实施例公开了一种用于生物样本核酸检测的保存液(以下简称“保存液”)及其基于该保存液的应用，并通过该保存液对RNA病原体或者DNA病原体执行核酸检测。该保存液由核酸酶抑制剂、表面活性剂、螯合剂及缓冲液组成。

核酸酶抑制剂选自异硫氰酸胍、盐酸胍、尿素和氯化锂中的一种或几种的组合。表面活性剂选自十二烷基二甲基苄基氯化铵(DDBAC)、十二烷基硫酸钠(SDS)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)或者Triton X-100中的一种或几种的组合。螯合剂选自乙二胺四乙酸钠盐或钾盐、乙二醇二乙醚二胺四乙酸钠盐或钾盐中的一种或几种的组合。缓冲剂选自柠檬酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或几种的组合。

同时，为了具有显色功能并指示保存液的pH值，该保存液还可包含少量的酸碱指示剂。具体的，该酸碱指示剂选自甲基紫、甲酚红、甲基紫、百里酚蓝、茜素华R、甲基黄、溴酚蓝、甲基橙、溴甲酚绿、甲基红、溴百里酚蓝、中性红、酚红、甲酚红或者酚酞中的一种或者几种的组合。以通过上述酸碱指示剂对保存液的pH值进行检测，并起到指示保存液是否存在的作用。在本申请各个实施例中，保存液的pH值为5.0～8.5。

下文对保存液中的四种主要组分的机理予以说明。

核酸酶抑制剂能够促进组织(细胞)中所含有的蛋白质与核酸的分离，加入核酸酶抑制剂具有灭活DNA核酸酶、RNA核酸酶的作用。表面活性剂具有变性蛋白、裂解组织(细胞)及间接抑制的作用，同时起到了灭活病原体的作用，因为病原体的感染能力离不开病原体蛋白质的功能的完整性。螯合剂起辅助抑制酶活性的作用。缓冲液提供反应场所，稳定生物大分子的存在环境。灭活DNA核酸酶及RNA核酸酶，使得生物样本中的DNA及RNA的含量及完整性得以保留，这对于后期对生物样本核酸检测结果的准确性及可靠性具有决定性意义。

同时，该本申请各个实施例所揭示的保存液尤其的不含有十二烷基葡萄糖苷(APG)及二巯基乙醇等成分，基于十二烷基葡萄糖苷(APG)及二巯基乙醇化学品毒性、安全性及潜在致癌性的因素，并不适用于保存液的组分之一。

实施例一：

保存液由核酸酶抑制剂、表面活性剂、螯合剂及缓冲液组成。具体的，核酸酶抑制剂选自盐酸胍，表面活性剂选自十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，螯合剂选自乙二胺四乙酸钠盐，缓冲剂选自Tris-HCl缓冲液。核酸酶抑制剂的终浓度为1.0M，所述表面活性剂的终浓度为1.0W/V％，所述螯合剂的终浓度为2mM，所述缓冲液的终浓度为50mM。在本实施例中，在保存液中加入缓冲液，调制保存液的pH值为6.5。

实施例二：

保存液由核酸酶抑制剂、表面活性剂、螯合剂及缓冲液组成。具体的，核酸酶抑制剂选自尿素，表面活性剂选自十二烷基硫酸钠(SDS)，螯合剂选自乙二胺四乙酸钾盐，缓冲剂选自磷酸盐缓冲液，核酸酶抑制剂的终浓度为4.0M，所述表面活性剂的终浓度为0.1W/V％，所述螯合剂的终浓度为9.5mM，所述缓冲液的终浓度为500mM。在本实施例中，在保存液中加入缓冲液，调制保存液的pH值为6.0。

实施例三：

保存液由核酸酶抑制剂、表面活性剂、螯合剂及缓冲液组成。具体的，核酸酶抑制剂选自尿素胍和氯化锂任意比例的组合，表面活性剂选自十二烷基二甲基苄基氯化铵(DDBAC)与十二烷基硫酸钠(SDS)任意比例的组合，螯合剂选自乙二醇二乙醚二胺四乙酸钠盐，缓冲剂选自柠檬酸盐缓冲液。核酸酶抑制剂的终浓度为2M，所述表面活性剂的终浓度为0.1W/V％，所述螯合剂的终浓度为4.5mM，所述缓冲液的终浓度为500mM。在本实施例中，在保存液中加入缓冲液，调制保存液的pH值为5.0。

实施例四：

保存液由核酸酶抑制剂、表面活性剂、螯合剂及缓冲液组成。具体的，核酸酶抑制剂选自氯化锂，表面活性剂选自Triton X-100，螯合剂选自乙二醇二乙醚二胺四乙酸钾盐，缓冲剂选自Tris-HCl缓冲液与磷酸盐缓冲液任意比例的组合。核酸酶抑制剂的终浓度为10M，所述表面活性剂的终浓度为0.1W/V％，所述螯合剂的终浓度为9.5mM，所述缓冲液的终浓度为500mM。在本实施例中，在保存液中加入缓冲液，调制保存液的pH值为8.5。

实施例五：

保存液由核酸酶抑制剂、表面活性剂、螯合剂及缓冲液组成。具体的，核酸酶抑制剂选自异硫氰酸胍与尿素任意比例的组合，表面活性剂选自十二烷基二甲基苄基氯化铵(DDBAC)，螯合剂选自乙二胺四乙酸钾盐与乙二醇二乙醚二胺四乙酸钠盐任意比例的组合，缓冲液选自磷酸盐缓冲液。核酸酶抑制剂的终浓度为0.1M，所述表面活性剂的终浓度为6.0W/V％，所述螯合剂的终浓度为0.5mM，所述缓冲液的终浓度为20mM。在本实施例中，在保存液中加入缓冲液，调制保存液的pH值为7.0。

采用上述实施例一至实施例五中任意一种用于生物样本核酸检测的保存液(以下简称“保存液”)，加入反应管中与生物样本进行混合，并使用保存液保存生物样本。具体的，生物样本选自咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、肛门拭子、粪便拭子、皮肤拭子、创口拭子、组织块、体液、全血、血清、血浆、全血离心后的血细胞或者灌洗液中离心的细胞沉淀中的一种或者几种的组合。生物样本与保存液共同投入至反应管中，并确保该保存液充分覆盖生物样本，具体的，反应管中所述保存液与生物样本的体积比为1:1～1:4，所述保存液的贮藏温度范围为-40℃～37℃，并进一步优选为-20℃～37℃。同时，为了指示反应管中保存液的存在与否，还可将保存液中添加微量的酸碱指示剂，酸碱指示剂的使用方法是，一般配成0.1W/V％溶液，使用时每10ml溶液加指示剂1～2滴。本申请所揭示的保存液能够在较高的低温条件下，或是常温(例如高于0℃～37℃)的环境下对生物样本进行保存，降低了对待检测的生物样本保存温度及保存时间的要求，同时确保样品中核酸的稳定性。

下文通过三组实验以证明本发明所揭示的保存液对采用离体组织(细胞)的生物样本进行核酸检测时不需要依赖低温，尤其是能够在0℃以上的常温状态下，保存生物样本中DNA或者RNA的完整性，避免DNA或者RNA发生降解，从而证明该保存液能够起到有效保存作用。本领域技术人员可合理预测到，采用下述三组试验，对其他实施例所揭示的保存液，能够获得相同或者相似的数据及结论。

实施例六：

基于上述实施例一至实施例五所揭示的保存液，本申请还揭示了一种保存液的应用，所述用于生物样本核酸检测的保存液用于对RNA病原体或者DNA病原体执行核酸检测。用于生物样本核酸检测的保存液用于对非感染性疾病的RNA或者DNA执行基因检测。基因检测包括融合基因检测、基因剪辑体检测、肿瘤液体活检或者唐氏综合征筛查。例如，RNA病原体或者DNA病原体包括但不限于冠状病毒，以及呼吸道病毒或肠道病毒、HBV、HCV、HIV、结核杆菌、非结核分枝杆菌、大肠杆菌、幽门螺旋杆菌等。

在本实施例中，对样品中的的RNA病原体或者DNA病原体与保存液混合，达到快速灭活作用，并执行后续的核酸检测，确保了下游的操作人员就不会有被感染的风险，从而提高了生物样本在运输、存储及检测等环节的安全性。

保存液与生物样本混合后，贮藏及运输的温度环境可控制在-20℃～常温条件下进行保存及运输，甚至可为-20℃～37℃左右的温度下进行贮藏及运输，从而极大地提高了对生物样本进行保存及运输的简便性。同时使用本申请所揭示的保存液与生物样本混合后所执行的核酸检测，对检测环境要求不高。例如，对HIV/结核病原体的核酸检测不需要P3实验室，有利于提高核酸检测的适应性。

下文通过三组试验对本申请所揭示的保存液对不同的生物样本进行核酸检测前的保存效果予以验证。

第一组试验：保存液细胞及细菌裂解实验。

一、试验试剂

实施例一所揭示的保存液(试验组)：SS1。

保存缓冲液(对照组)：SS0。

二、实验所用的生物样本的具体类型

人全血细胞悬液(悬浮在1ml生理盐水)。

人口腔拭子悬浮液(悬浮在1ml生理盐水)。

三、实验设计布局及过程

3.1细胞裂解实验设计

按下表一所示配制细胞裂解所需实验样本，充分振荡混匀后，25℃放置30min，随后在离心机上以2000r/min的转速离心处理5min，移取上层清液，加入0.2ml无菌PBS重悬，每管各取10μl在显微镜下进行细胞计数。

表一

3.2细菌裂解实验设计

按下表二所示配制细胞裂解所需实验样本，充分振荡混匀后，25℃放置30min，随后2000r/min离心5min，弃去上层清液，加入0.2ml无菌PBS重悬，分别取两例样本进行平板涂布(巧克力平板、LB平板)，涂布完成后倒置于37℃培养箱中培养24h，随后进行细菌平板计数，计数结果参下述表二所示。试验组及对照组的样本数量至少为两个，以确保试验结果的可靠性。

表二

四、实验结果

4.1细胞裂解实验结果参下述表三所示。

表三

由上表三可知，试验组的两个样本SS1采用实施例一所揭示的保存液，细胞裂解实验结果中细胞数个均为0，从而证明实施例一所揭示的保存液对于人体细胞具有良好的裂解效果。

4.2细菌裂解实验结果参下述表四所示。

表四

由上表四试验组与对照组与的细菌数量统计数据可知，实施例一所揭示的保存液对细菌具有良好的生长抑制作用，而对生物样本中的细菌的抑制作用是由于保存液中的表面活性剂CTAB的快速变性生物样本中组织(细胞)的蛋白质所导致的。

第二组试验：保存液对血清乙肝病毒DNA保存效果实验。

一、试验试剂

保存液SS1、乙型肝炎病毒核酸分离试剂盒(制造商：艾康生物技术有限公司)、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR荧光探针法)(制造商：艾康)。

二、实验样本类型

已知的乙肝病毒阳性血清(>10E5拷贝/ml)。

三、测试环境及仪器

PCR实验室。

定量PCR仪，型号ABI7500。

四、实验设计布局及过程

1.实验样本准备

分别取人血清样本和实施例一所揭示的保存液按照1：1的比例混合制备试验样本SS1-1(0.3ml血清+0.3ml保存液)；取人血清样本和对照组保存液按照1：1的比例混合制备样本SS0-1(0.3ml血清+0.3ml对照组保存液)；对照组保存液采用第一组试验中的保存缓冲液；取人血清样本和无酶水按照1：1的比例混合制备样本0-1(0.3ml血清+0.3ml无酶水)；将样品充分振荡混匀后37℃放置72h，将样本0-1置于-80℃冰箱保存72h，随后将生物样本同时进行乙肝病毒核酸检测。实验结果参下述表五所示。

样本编号	乙肝病毒载量(IU/ml)
		SS1-1	＞1.000*10<sup>9</sup>
SS0-1	5.630*10<sup>6</sup>
		0-1	5.311*10<sup>7</sup>

表五

五、实验结论

实施例一所揭示的保存液对乙肝病毒DNA具有很好的保存作用并且对核酸提取试剂盒兼容。

第三组试验：保存液保存生物样本(细菌)RNA的稳定性实验。

一、实验样本类型

过夜培养的大肠杆菌菌液，每份1ml，离心后取细菌沉淀。

二、测试地点和环境及仪器

微生物实验室。

超微量分光光度计(型号ND2000)，电泳仪(型号DYY-6C)。

三、实验设计布局及过程

1.实验样本准备：

实验样本处理：将4个细菌样品分别采用实施例一所揭示的保存液SS1及对照组SS0(仅含缓冲液)悬浮保存，保存温度及时间如下述表六所示。

表六

RNA提取过程：

(1)在SS0样本和SS1样本中加入1ml的TRIzol(总RNA抽提试剂)，漩涡振荡30S充分混匀。

(2)25℃放置10min，使其充分裂解。

(3)加入0.2ml氯仿，闭盖，剧烈震荡15S。

(4)25℃放置5min。

(5)12000×g 4℃离心15min，样品分为三层：底层为粉红色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要存在水相中。小心吸取上层水相至另一离心管中。千万不要吸取中间界面。

(6)向离心管中加入等体积的异丙醇和1/10体积3M的醋酸钠，上下轻柔颠倒混匀，-80℃放置20min。

(7)在4℃及14000rpm转速下离心处理15min，倒掉上层清液，注意不要触到沉淀。离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在离心管的侧壁和离心管的底部形成胶状沉淀。

(8)加入200μl的70V/V％乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。4℃离心处理2～3min，尽量弃去上层清液。

(9)把离心管放置于超净台晾至约2～3min(勿完全干燥)。加入35μl的无RNase的水，振荡30S，瞬时离心。

(10)将提取的RNA立即进行下游实验，或置于-70℃环境中保存。

(11)取等量RNA样品进行1％琼脂糖电泳分析，电压150mV，电泳20～40分钟。

四、实验结果

样本核酸提取浓度测定实验结果参表七所示。

表七

样本核酸电泳结果参图1所示。

序号1及序号2是25℃处理72h试验组；序号3及序号4是37℃处理72h试验组；序号1及序号3代表SS0(对照组)，序号2及序号4代表SS1(试验组)。实验结果表明试验组中的保存液SS1在25℃和37℃，72h内对样本中RNA有非常显著的稳定作用。而37℃仅仅是加速稳定性试验，说明在高于0℃的常温情况下，生物样本中RNA的保存时间可以明显延长。

上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (13)

1.一种用于生物样本核酸检测的保存液，其特征在于，由核酸酶抑制剂、表面活性剂、螯合剂及缓冲液组成。

2.根据权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述核酸酶抑制剂选自异硫氰酸胍、盐酸胍、尿素和氯化锂中的一种或几种的组合。

3.根据权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述表面活性剂选自十二烷基二甲基苄基氯化铵、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵或者Triton X-100中的一种或几种的组合。

4.根据权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述螯合剂选自乙二胺四乙酸钠盐或钾盐、乙二醇二乙醚二胺四乙酸钠盐或钾盐中的一种或几种的组合。

5.根据权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述缓冲剂选自柠檬酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或几种的组合。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的保存液，其特征在于，所述核酸酶抑制剂的终浓度为0.1～10M，所述表面活性剂的终浓度为0.1～6.0W/V％，所述螯合剂的终浓度为0.5～9.5mM，所述缓冲液的终浓度为20～500mM。

7.根据权利要求6所述的保存液，其特征在于，所述保存液的pH值为5.0～8.5。

8.根据权利要求6所述的保存液，其特征在于，所述保存液还包括酸碱指示剂，所述酸碱指示剂选自甲基紫、甲酚红、甲基紫、百里酚蓝、茜素华R、甲基黄、溴酚蓝、甲基橙、溴甲酚绿、甲基红、溴百里酚蓝、中性红、酚红、甲酚红或者酚酞中的一种或者几种的组合。

9.根据权利要求6所述的保存液，其特征在于，所述生物样本选自咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、肛门拭子、粪便拭子、皮肤拭子、创口拭子、组织块、体液、全血、血清、血浆、全血离心后的血细胞或者灌洗液中离心的细胞沉淀中的一种或者几种的组合。

10.根据权利要求6所述的保存液，其特征在于，所述保存液与生物样本的体积比为1:1～1:4，所述保存液的贮藏温度范围为-40℃～37℃。

11.一种如权利要求1至10中任一项所述的用于生物样本核酸检测的保存液的应用，其特征在于，所述用于生物样本核酸检测的保存液用于对RNA病原体或者DNA病原体执行核酸检测。

12.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述用于生物样本核酸检测的保存液用于对非感染性疾病的RNA或者DNA执行基因检测。

13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述基因检测包括融合基因检测、基因剪辑体检测、肿瘤液体活检或者唐氏综合征筛查。

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