CN112608978A - 一种新型核酸免提取保存液 - Google Patents
一种新型核酸免提取保存液 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112608978A CN112608978A CN202110174195.1A CN202110174195A CN112608978A CN 112608978 A CN112608978 A CN 112608978A CN 202110174195 A CN202110174195 A CN 202110174195A CN 112608978 A CN112608978 A CN 112608978A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nucleic acid
- preservation solution
- hands
- novel nucleic
- free
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 69
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 69
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 69
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 claims abstract description 58
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 12
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 150000002357 guanidines Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 5
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 3
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 claims description 2
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 claims description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims description 2
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 claims description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 2
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 claims description 2
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 claims description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 claims description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 claims description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 2
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 claims description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 claims description 2
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 claims description 2
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 claims description 2
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 2
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 20
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 18
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 4
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 abstract description 3
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 abstract description 3
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 abstract description 2
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 abstract description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 abstract description 2
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 abstract description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 abstract 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 abstract 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 abstract 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 abstract 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 abstract 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 abstract 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 12
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 7
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 description 1
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 1
- QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N Digitonin Natural products CC1CCC2(OC1)OC3C(O)C4C5CCC6CC(OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(OC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)C%10O)C8O)C(O)C7O)C(O)CC6(C)C5CCC4(C)C3C2C QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 206010029803 Nosocomial infection Diseases 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 241000902900 cellular organisms Species 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N digitonin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO7)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@@H](CO)O5)O)C[C@@H]4CC[C@H]3[C@@H]2[C@@H]1O)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N digitonine Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CC(O)C(OC5C(C(O)C(OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)CO7)O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)C(O)C(CO)O6)O)C(CO)O5)O)CC4CCC3C2C2O)C)C2OC11CCC(C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明“一种新型核酸免提取保存液”，公开了一种无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液及其制备方法，该保存液包括如下组份：表面活性剂0.1‑2％，酸碱缓冲剂0.1‑2％，柠檬酸盐1‑5％，弱酸0.1‑5％，胍盐0‑10％，蛋白酶K0‑0.1％，螯合剂0.1‑1％，防腐剂0.1‑2％，其余为水，该保存液用于组织、细胞分析样本的保存，不仅包括冠状病毒、流感病毒、手足口病毒、麻疹风疹病毒，也包括其他类别的病毒和支原体、衣原体，鼻、咽拭子置于该保存液后其独特组份可以保护核酸RNA免受RNA酶的降解以及保护脱氧核糖核酸DNA免受DNA酶的降解，联合使用多种防腐剂使该试剂具有较强的抗细菌和抗真菌作用。
Description
技术领域：
本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种新型的无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液及其制备方法。
背景技术：
核酸是指脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的总称，是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子聚合物，为生命的最基本物质之一，是所有已知生命形式必不可少的组成物质，是所有生物分子中最重要的物质，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，核酸由核苷酸组成，而核苷酸单体由五碳糖、磷酸基和含氮碱基组成；如果五碳糖是核糖，则形成的聚合物是RNA；如果五碳糖是脱氧核糖，则形成的聚合物是DNA。病毒(Virus)是一种个体微小、结构简单、只含一种核酸(DNA或RNA)且必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物，如新型冠状病毒2019-nCoV、乙肝病毒、流感病毒等。
对于病毒的保存，传统的方法多采用磷酸盐、氯化钠等常用成份，其不足之处在于仅能用于保存，后续检测前仍需要再次提取核酸，即为传统保存-提取-检测步骤之一，操作麻烦。因此，研究一种保存与提取合二为一的试剂来替代常规保存液用于新冠病毒等样本的检测具有重要意义，目前已有部分替代物用于病毒样本的保存。发明专利“一种免核酸提取的病毒保存液(申请号为202010148767.4)”公开了一种免核酸提取的病毒保存液，虽然可以进行病毒保存，但有如下不足：1、吐温20更易起泡沫，由于一般采样管容积较小，泡沫容易溢出管外造成交叉感染，同时吐温20影响溶液外观和透光度；2、酸性蛋白酶价格较贵，较难大面积普及使用。发明专利“一种核酸免提取试剂及其使用方法(申请号为202011191934.X)”公开了一种核酸免提取试剂的技术，但有如下不足：1、Chelex-100和洋地黄皂苷价格较贵且不易获得；2、仅有Tris-Hcl单一缓冲剂，缓冲能力不强。
发明内容：
为了解决上述技术的不足，本发明“一种新型核酸免提取保存液”旨在提供一种无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液及其制备方法，该保存液包括如下组份：表面活性剂0.1-2％，酸碱缓冲剂0.1-2％，柠檬酸盐1-5％，弱酸0.1-5％，胍盐0-10％，蛋白酶K0-0.1％，螯合剂0.1-1％，防腐剂0.1-2％，其余为水，包括该核酸免提取保存液的制备方法，该病毒保存液用于组织、细胞分析样本的保存，不仅包括冠状病毒、流感病毒、手足口病毒、麻疹风疹病毒，也包括其他类别的病毒和支原体、衣原体，将采集到的具有代表性的病毒保存于该保存液，鼻、咽拭子置于该新型核酸免提取保存液后其独特组份可以保护核酸RNA免受RNA酶的降解以及保护脱氧核糖核酸DNA免受DNA酶的降解，联合使用多种防腐剂使该试剂具有较强的抗细菌和抗真菌作用。
本发明所采用的技术方案是：
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，上述保存液包括如下组份：表面活性剂0.1-2％，酸碱缓冲剂0.1-2％，柠檬酸盐1-5％，弱酸0.1-5％，胍盐0-10％，蛋白酶K0-0.1％，螯合剂0.1-1％，防腐剂0.1-2％，其余为水，包括该核酸免提取保存液的制备方法，是一种无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的表面活性剂是指曲拉通100、曲拉通114、吐温40、吐温60、吐温80、NP-40的一种或多种的混合物。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的酸碱缓冲剂是指磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、Tris的一种或多种的混合物。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的柠檬酸盐是指柠檬酸钠、柠檬酸钾一种或两种。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的弱酸是指甲酸、丙酸、丁酸的一种或两种。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的胍盐是指异硫氰酸胍、盐酸胍的一种或两种。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的蛋白酶K是指诊断试剂级以上级别的蛋白酶K。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的螯合剂是指EDTA.2Na、EDTA.2K、EGTA.2Na、EGTA.2K的一种或多种的混合物。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的防腐剂是指庆大霉素、硫柳汞钠、ProClin300、两性霉素的一种或多种的混合物。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的水是指蒸馏水、去离子水的一种或两种。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的制备方法包括如下操作步骤：取上述表面活性剂、酸碱缓冲剂、柠檬酸盐、弱酸、胍盐、蛋白酶K、螯合剂、防腐剂、水，依次加入混合混匀。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液无需进行后续核酸提取步骤，可直接用于检测。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液用于动物、植物、细菌、真菌、病毒和细胞样本的保存。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液用于RNA病毒、DNA病毒的保存。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液用于核酸检测、免疫组化检测、蛋白检测、胶体金试纸条及其他分子生物学检测。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液用于临床检测试剂和科研试剂。
本发明“一种新型核酸免提取保存液”中的新型核酸免提取保存液的制备方法包括如下操作步骤：取上述表面活性剂、酸碱缓冲剂、柠檬酸盐、弱酸、胍盐、蛋白酶K、螯合剂、防腐剂、水，依次加入混合混匀，50-300目过滤，密闭保存，即为新型核酸免提取保存液。
需要说明的是，在所述的新型核酸免提取保存液的制备过程中，各所述的试剂应分批依次加入。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述组成的用量和配比可根据具体需要进行调整，从而制备出不同特点的核酸免提取保存液。
本发明“一种新型核酸免提取保存液”与现有技术相比具有以下优点：
1、不含有毒物质，不易对人体造成危害，对人体和环境影响也极小。
2、该保存液无需进行后续核酸提取，可直接用于核酸检测。
3、该保存液与保存液相比，简便快捷。
附图说明：
图1为本发明“一种新型核酸免提取保存液”保存慢病毒的肉眼示意图，图1-1为实施例一以磷酸盐缓冲液(A管)和新型核酸免提取保存液(B管)未加入慢病毒的状态，图1-2为实施例一以磷酸盐缓冲液(A管)和新型核酸免提取保存液(B管)加入含慢病毒采样拭子后的状态；
图2为本发明“一种新型核酸免提取保存液”保存慢病毒的荧光显微镜示意图，图2-1为实施例一以磷酸盐缓冲液对慢病毒保存3分钟的荧光显微镜观察结果，图2-2为实施例一以新型核酸免提取保存液对慢病毒保存3分钟的荧光显微镜观察结果。
具体实施方式：
以下具体实施方式进一步阐明本发明“一种新型核酸免提取保存液”的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、条件、步骤及应用所做的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例一
本发明“一种新型核酸免提取保存液”用于保存慢病毒，该保存液包括如下组份：表面活性剂0.7％，酸碱缓冲剂1％，柠檬酸盐3％，弱酸2％，胍盐0％，蛋白酶K0％，螯合剂0.15％，防腐剂0.13％，其余为水。以下实施例以相同处理时间、同一病毒、相同温度的磷酸盐缓冲液作为对照。
新型核酸免提取保存液的制备方法：取上述表面活性剂7ml、酸碱缓冲剂10g、柠檬酸盐30g、弱酸20ml、胍盐0g、蛋白酶K0g、螯合剂1.5g、防腐剂1.3g，补水至1000ml，依次混合，充分混匀，100目过滤，密闭保存，即为新型核酸免提取保存液。
取3ml磷酸盐缓冲液，对同一慢病毒保存3分钟；取3ml经上述步骤配制的新型核酸免提取保存液，对同一慢病毒保存3分钟；结果见附图1、2。
实验结果显示，以同一慢病毒保存时，在同等条件下，以实施例一的磷酸盐缓冲液与新型核酸免提取保存液对比，新型核酸免提取保存液未见病毒，磷酸盐缓冲液病毒仍然存在；由此说明新型核酸免提取保存液能够完全裂解该慢病毒，磷酸盐缓冲液无法裂解该慢病毒，即新型核酸免提取保存液无需进行后续核酸提取即可直接用于检测。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述处理时间、样本、温度可根据具体需要进行调整，而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍应属于本发明创造的保护范围内。
Claims (10)
1.一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，上述保存液包括如下组份：表面活性剂0.1-2％，酸碱缓冲剂0.1-2％，柠檬酸盐1-5％，弱酸0.1-5％，胍盐0-10％，蛋白酶K0-0.1％，螯合剂0.1-1％，防腐剂0.1-2％，其余为水，包括该核酸免提取保存液的制备方法。
2.根据权利要求1所述的一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的表面活性剂是指曲拉通100、曲拉通114、吐温40、吐温60、吐温80、NP-40的一种或多种的混合物；所述的酸碱缓冲剂是指磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、Tris的一种或多种的混合物。
3.根据权利要求1所述的一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的柠檬酸盐是指柠檬酸钠、柠檬酸钾的一种或两种；所述的弱酸是指甲酸、丙酸、丁酸的一种或两种。
4.根据权利要求1所述的一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的胍盐是指异硫氰酸胍、盐酸胍的一种或两种，所述的蛋白酶K是指诊断试剂级以上级别的蛋白酶K。
5.根据权利要求1所述的一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的螯合剂是指EDTA.2Na、EDTA.2K、EGTA.2Na、EGTA.2K的一种或多种的混合物；所述的防腐剂是指庆大霉素、硫柳汞钠、ProClin300、两性霉素的一种或多种的混合物。
6.根据权利要求1所述的一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的水是指蒸馏水、去离子水的一种或两种。
7.根据权利要求1所述的一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的制备方法包括如下操作步骤：取上述表面活性剂、酸碱缓冲剂、柠檬酸盐、弱酸、胍盐、蛋白酶K、螯合剂、防腐剂、水，依次加入混合混匀；该保存液无需进行后续核酸提取步骤，可直接用于检测。
8.根据权利要求1所述的一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液用于动物、植物、细菌、真菌、病毒和细胞样本的保存。
9.根据权利要求1所述的一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液用于RNA病毒、DNA病毒的保存，该保存液用于核酸检测、免疫组化检测、蛋白检测、胶体金试纸条及其他分子生物学检测。
10.根据权利要求1所述的一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液用于临床检测试剂和科研试剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110174195.1A CN112608978A (zh) | 2021-02-09 | 2021-02-09 | 一种新型核酸免提取保存液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110174195.1A CN112608978A (zh) | 2021-02-09 | 2021-02-09 | 一种新型核酸免提取保存液 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112608978A true CN112608978A (zh) | 2021-04-06 |
Family
ID=75254538
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110174195.1A Pending CN112608978A (zh) | 2021-02-09 | 2021-02-09 | 一种新型核酸免提取保存液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112608978A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113684253A (zh) * | 2021-09-10 | 2021-11-23 | 石家庄康卫仕医疗器械有限公司 | 一种用于新型冠状病毒的灭活型保存液 |
| CN117512069A (zh) * | 2023-12-07 | 2024-02-06 | 圣湘生物科技股份有限公司 | 一种核酸检测方法 |
-
2021
- 2021-02-09 CN CN202110174195.1A patent/CN112608978A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113684253A (zh) * | 2021-09-10 | 2021-11-23 | 石家庄康卫仕医疗器械有限公司 | 一种用于新型冠状病毒的灭活型保存液 |
| CN117512069A (zh) * | 2023-12-07 | 2024-02-06 | 圣湘生物科技股份有限公司 | 一种核酸检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6793709B2 (ja) | 目的の核酸の特異的な単離方法 | |
| US20240027309A1 (en) | Simple fixation and stabilisation | |
| CN111718908B (zh) | 病毒样本保存液及其制备方法和应用 | |
| JP2023160820A (ja) | サンプルの収集、安定化、および保存のためのシステム、方法およびデバイス | |
| CN111549101A (zh) | 一种用于生物样本核酸检测的保存液及应用 | |
| CN112608978A (zh) | 一种新型核酸免提取保存液 | |
| KR20070115874A (ko) | Ｄｎａ 분석용 생물 시료를 보관 및 처리하는 시약 및 방법 | |
| CN109371008B (zh) | 一种核酸提取扩增检测试剂盒 | |
| CN103097532A (zh) | 高产量分离包括小靶核酸在内的靶核酸的方法 | |
| WO2009042457A4 (en) | Nucleic acid isolation in preserved whole blood | |
| CN105506129A (zh) | 一种rna类样本保存稀释液及其制备 | |
| CN110982876A (zh) | 病毒核酸检测的预处理方法、预处理液、试剂盒及其用途 | |
| CN111989410A (zh) | 基于pcr的病毒快速检测方法及其试剂盒 | |
| CN111378719B (zh) | 用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物和方法 | |
| CN106561631A (zh) | 一种唾液保存液及其制备方法和应用 | |
| EP3904532A1 (en) | Nucleic acid extraction composition, reagent and kit containing the same and use thereof | |
| CN111088319A (zh) | 一种灭活型病毒样本rna保存液及其制备方法 | |
| CN109679946B (zh) | 一种血液病毒rna保护剂及采血管 | |
| Ganjali et al. | Fixation in tissue processing | |
| CN105524916B (zh) | 一种dna类样本保存稀释液及其制备 | |
| CN112280823A (zh) | 新型冠状病毒rna样本保存液、其制备方法及应用 | |
| US9534214B2 (en) | Substrates and associated methods for elution of nucleic acids | |
| CN113999840B (zh) | 一种核酸样本保存液及其使用方法和应用 | |
| WO2023011162A1 (zh) | 一种生物样本核酸释放保存剂 | |
| CN112760360A (zh) | 一种rna保护剂及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |