CN111979299A - 一种核酸提取样本保存液及其制备方法 - Google Patents

一种核酸提取样本保存液及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111979299A
CN111979299A CN202010901050.2A CN202010901050A CN111979299A CN 111979299 A CN111979299 A CN 111979299A CN 202010901050 A CN202010901050 A CN 202010901050A CN 111979299 A CN111979299 A CN 111979299A
Authority
CN
China
Prior art keywords
nucleic acid
preservation solution
sample
acid extraction
hydroxymethyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010901050.2A
Other languages
English (en)
Inventor
不公告发明人
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jane Stone Biotechnology Beijing Co ltd
Original Assignee
Jane Stone Biotechnology Beijing Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jane Stone Biotechnology Beijing Co ltd filed Critical Jane Stone Biotechnology Beijing Co ltd
Priority to CN202010901050.2A priority Critical patent/CN111979299A/zh
Publication of CN111979299A publication Critical patent/CN111979299A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本申请提供了一种核酸提取样本保存液，其特征在于，所述病毒样本保存液包括：溶解于DEPC水中的异硫氰酸胍，乙二胺四乙酸，氯化钠，三(羟甲基)氨基甲烷；以1L计，所述各组份含量为：异硫氰酸胍10g‑20g/L，乙二胺四乙酸1g‑8g/L，IDHA1‑5g/L，氯化钠8g‑15g/L，三(羟甲基)氨基甲烷2g‑10g/L和明胶1‑5g/L；所述核酸提取样本保存液可以实现在常温下保存细胞样本21日并适应短时间的高温条件。

Description

一种核酸提取样本保存液及其制备方法
技术领域
本发明涉及医学分子检测技术领域，特别涉及一种核酸提取样本保存液及其制备方法。
背景技术
样本保存和核酸提取是现代分子生物学检测技术的基础，一般认为提取的血液、细胞等样本应保存在低温条件下才能保证其中核酸的稳定性。但由于检测、保存条件的限制，良好的低温条件在诸如落后偏远地区，野外等条件下并不容易实现或者实现程度不高，上述问题经常会影响检测的开展或者检测结果的准确性。
因此开发可常温保存病毒样本核酸的保存液，不仅可以保证样品在常温条件下保存及反复冻融后不降解，增加检出率；也可以灭活病毒以减少样本在运输过程及检测过程中的传染风险。
发明内容
本发明目的是为了解决病毒样本(各种拭子、血液的病毒样本)运输过程中的核酸降解，影响提取和检测效果的问题，提供了一种病毒样本的核酸(RNA、DNA)保存液及其制备方法。保存液可常温甚至高温保存病毒样本，常温(20～25度)保存21天不降解，高温(75度)保存24小时内不降解。病毒样本放进保存液即可常温状态下保存21天或高温下保存24小时，同时使病毒灭活。在保存液内的病毒样本冻存情况下可以反复冻融而不影响病毒核酸的完整性。
一方面，本申请提供了一种核酸提取样本保存液，其特征在于，所述病毒样本保存液包括：溶解于DEPC水中的异硫氰酸胍，乙二胺四乙酸，氯化钠，三(羟甲基)氨基甲烷；以1L计，所述各组份含量为：异硫氰酸胍10g-20g/L，乙二胺四乙酸1g-8g/L，IDHA1-5g/L，氯化钠8g-15g/L，三(羟甲基)氨基甲烷2g-10g/L。
进一步地，其中异硫氰酸胍15g/L，乙二胺四乙酸2g/L，IDHA 2g/L，氯化钠9g/L，三(羟甲基)氨基甲烷4g/L。
进一步地，其中还包含明胶1-5g/L。
进一步地，其中明胶为3g/L。
另一方面，本申请提供了使用上述核酸提取样本保存液保存核酸提取用样本的方法。
进一步地，所述保存在常温下进行。
进一步地，所述核酸提取用样本为血液、体液、拭子、组织、或细胞。
附图说明
图1为以人属细胞(HCT 116)为样本，25度条件下分别保存0、7、14、21天后进行提取，对提取的RNA进行电泳检测的结果。
图2为以人属细胞(HCT 116)为样本，75度条件下分别保存0、2、12、24小时后进行提取，对提取的RNA进行电泳检测的结果。
具体实施方式
保存液配方为异硫氰酸胍15g/L，乙二胺四乙酸2g/L，IDHA 2g/L，氯化钠9g/L，三(羟甲基)氨基甲烷4g/L，明胶为3g/L。
配制方法为：称取所需量的各成分于1L的烧杯中，用量筒量取700ml用DEPC水处理过的灭菌水，加入到烧杯中，混匀并溶解各组份试剂，调PH值至6.5～6.8，定容到1L。采用22μm一次性过滤器进行过滤灭菌，即得保存液。
实施例1：使用培养的人属细胞(HCT 116)样本，分成4份，分别加入2倍体积的核酸保存液，在常温下分别保存0天、7天、14天和21天时进行RNA提取(用ZYMOREARCH公司的Quick-DNA/RNA viral MagBead Kit货号R2140试剂盒)。按说明书进行核酸提取，对提取的RNA进行浓度、纯度测定。检测结果如表1及图1。
实施例2：使用培养的人属细胞(HCT 116)样本，分成4份，分别加入2倍体积的核酸保存液，在高温下(75度)分别保存0、2、12、24小时进行RNA提取(用ZYMOREARCH公司的Quick-DNA/RNA viral MagBead Kit货号R2140试剂盒)。按说明书进行核酸提取，对提取的RNA进行浓度、纯度测定。检测结果如表2及图2。
表1
室温放置时间 0天 7天 14天 21天
浓度(ng/ul) 399.9232 384.9276 421.8452 426.5915
OD260/280 2.0151 2.0897 2.0229 2.0189
OD260/230 1.934 1.835 2.0853 2.1101
表2
高温放置时间 0h 2h 12h 24h
浓度(ng/ul) 376.3432 367.5326 401.4582 394.9155
OD260/280 2.0511 2.0978 2.0292 2.0891
OD260/230 1.943 1.853 2.0835 2.1011
综上所述本发明的病毒样本保存液在常温(20～25度)保存21天不降解，高温(75度)保存24小时内不降解。能最大限度的保护病毒样本中的核酸完整性，有效避免核酸降解，保证病毒样本在冻存时反复冻融也影响核酸提取的质量。
使用不含IDHA，含乙二胺四乙酸5g/L(其他成分相同)的保存液时，高温试验可以基本保持类似的效果。但室温长期放置试验中，在第7日后OD260/280即下降至1.6以下且没有回升。使用不含明胶(其他成分相同)的保存液时，室温长期放置试验中第14日后OD260/280即下降至1.8以下且没有回升。高温试验中，2h后OD260/280即下降至1.5以下且没有回升。

Claims (7)

1.一种核酸提取样本保存液，其特征在于，所述病毒样本保存液包括：溶解于DEPC水中的异硫氰酸胍，乙二胺四乙酸，氯化钠，三(羟甲基)氨基甲烷；以1L计，所述各组份含量为：异硫氰酸胍10g-20g/L，乙二胺四乙酸1g-8g/L，IDHA 1-5g/L，氯化钠8g-15g/L，三(羟甲基)氨基甲烷2g-10g/L。
2.根据权利要求1所述的核酸提取样本保存液，其中异硫氰酸胍15g/L，乙二胺四乙酸2g/L，IDHA 2g/L，氯化钠9g/L，三(羟甲基)氨基甲烷4g/L。
3.根据权利要求1或2所述的核酸提取样本保存液，其中还包含明胶1-5g/L。
4.根据权利要求3所述的核酸提取样本保存液，其中明胶为3g/L。
5.使用根据权利要求1-4任一项的核酸提取样本保存液保存核酸提取用样本的方法。
6.根据权利要求5所述的方法，所述保存在常温下进行。
7.根据权利要求5或6所述的方法，所述核酸提取用样本为血液、体液、拭子、组织、或细胞。
CN202010901050.2A 2020-09-01 2020-09-01 一种核酸提取样本保存液及其制备方法 Pending CN111979299A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010901050.2A CN111979299A (zh) 2020-09-01 2020-09-01 一种核酸提取样本保存液及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010901050.2A CN111979299A (zh) 2020-09-01 2020-09-01 一种核酸提取样本保存液及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111979299A true CN111979299A (zh) 2020-11-24

Family

ID=73447256

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010901050.2A Pending CN111979299A (zh) 2020-09-01 2020-09-01 一种核酸提取样本保存液及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111979299A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112662561A (zh) * 2021-01-15 2021-04-16 中农新科(苏州)有机循环研究院有限公司 一种常温细菌核糖核酸保护剂及其制备方法与应用
CN112704062A (zh) * 2020-12-30 2021-04-27 苏州唯善生物科技有限公司 一种细胞保存液及其使用方法
CN113455495A (zh) * 2021-05-16 2021-10-01 苏州标点生物科技有限公司 一种肿瘤组织dna和rna保存液

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101979516A (zh) * 2010-10-19 2011-02-23 李海波 一种病毒采样液组合物
KR20170079023A (ko) * 2015-12-30 2017-07-10 주식회사 노블바이오 별도의 세포 용해 과정 없이 핵산을 추출하기 위한 검체 수송 배지 조성물 및 이의 용도
CN111088319A (zh) * 2020-03-25 2020-05-01 深圳市上为生物科技有限公司 一种灭活型病毒样本rna保存液及其制备方法
CN111518775A (zh) * 2020-06-18 2020-08-11 合肥铼科生物科技有限公司 一种长时间常温保存病毒样本的保存液及其应用
CN111549101A (zh) * 2020-06-09 2020-08-18 无锡市申瑞生物制品有限公司 一种用于生物样本核酸检测的保存液及应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101979516A (zh) * 2010-10-19 2011-02-23 李海波 一种病毒采样液组合物
KR20170079023A (ko) * 2015-12-30 2017-07-10 주식회사 노블바이오 별도의 세포 용해 과정 없이 핵산을 추출하기 위한 검체 수송 배지 조성물 및 이의 용도
CN111088319A (zh) * 2020-03-25 2020-05-01 深圳市上为生物科技有限公司 一种灭活型病毒样本rna保存液及其制备方法
CN111549101A (zh) * 2020-06-09 2020-08-18 无锡市申瑞生物制品有限公司 一种用于生物样本核酸检测的保存液及应用
CN111518775A (zh) * 2020-06-18 2020-08-11 合肥铼科生物科技有限公司 一种长时间常温保存病毒样本的保存液及其应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112704062A (zh) * 2020-12-30 2021-04-27 苏州唯善生物科技有限公司 一种细胞保存液及其使用方法
CN112662561A (zh) * 2021-01-15 2021-04-16 中农新科(苏州)有机循环研究院有限公司 一种常温细菌核糖核酸保护剂及其制备方法与应用
CN113455495A (zh) * 2021-05-16 2021-10-01 苏州标点生物科技有限公司 一种肿瘤组织dna和rna保存液

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111979299A (zh) 一种核酸提取样本保存液及其制备方法
US20220056504A1 (en) Stabilization of nucleic acids in urine
US6821789B2 (en) Method and device for collecting and stabilizing a biological sample
CN111088319B (zh) 一种灭活型病毒样本rna保存液及其制备方法
CN107227306A (zh) 一种具有样本保存和灭活功能的拭子洗脱液
CN108641999B (zh) 一种卵巢组织的冻存与复苏方法
CN112626169A (zh) 用于保存生物样本中核酸的样本保存液及其使用方法
CN112176025B (zh) 一种核酸保存液及其制备方法和应用
CN112779316A (zh) 一种灭活型病毒保存液及其制备方法
CN115244167A (zh) 细胞含有液用保存容器以及保存液
CN112280823A (zh) 新型冠状病毒rna样本保存液、其制备方法及应用
CN110511926B (zh) 一种质粒、假病毒的保存液及其用途
CN113186251A (zh) 一种灭活型病毒保存液配方及其制作方法
CN113966737A (zh) 一种体外分析检测用细胞保存液及其制备方法
CN108546646B (zh) 用于基因检测的微生物样本保存液及其制备方法、试剂盒与应用
CN116287122A (zh) 一种灭活型病毒保存液及其制备方法
CN117858940A (zh) 细胞含有液用保存液和细胞含有液用保存容器
CN106857502A (zh) 一种防止rna降解的样品保存液以及保存方法
CN111850095A (zh) 一种尿液中微生物核酸新型保存液
CN111139236A (zh) 一种粪便样品稳定液及其制备、使用方法
CN117165580B (zh) 一种用于稳定样本中核酸的组合物、制备方法及其应用
CN117987508A (zh) 一种病毒保存液及其制备方法
CN116790577B (zh) 一种rna保存液及其用途
US20220110314A1 (en) Nucleic acid preservation, preparation method and application thereof
CN114467919A (zh) 一种唾液保存液及使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20201124