CN106857502A - 一种防止rna降解的样品保存液以及保存方法 - Google Patents

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王华林
张涛
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids

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Abstract

本发明涉及一种防止RNA降解的样品保存液，其包含0.1‑0.5M的柠檬酸钠，质量体积比50‑100％的硫酸铵，质量体积比30‑50％的柠檬酸和质量体积比30‑50％的硫酸钠；还涉及一种保存生物样品的方法，其包括将取得的新鲜的生物样品立即浸泡于权利要求1所述的样品保存液中并于低温下储存的步骤。使用本发明的样品保存液和方法可防止样品中的RNA在短期或长期保存过程中发生降解，保持样品中的RNA的完整性，为病理或科研的分析提供良好的分析材料。

Description

一种防止RNA降解的样品保存液以及保存方法
技术领域
本发明涉及分子生物学试剂领域，更特别地，涉及一种防止RNA降解的样品保存液，以及一种保存生物样品的方法。
背景技术
生物样品保存是病理学和科学研究中的不可或缺的一环，不同的检测目的需要不同的保存环境。RNA的检测已经逐渐成为针对病理样品和科研样品的重要检测指标之一。因此，生物样品的保存除了要注意保留生物样品的形态、蛋白质和基因组之外，防止RNA的降解也成为的必要条件之一。
由于生物体内以及环境中广泛存在RNA酶，这些酶很容易降解样品中的RNA，因此需要一种新的防止RNA降解的样品保存液。
发明内容
为解决以上问题，本发明提供了一种防止RNA降解的样品保存液，其包含0.1-0.5M的柠檬酸钠，质量体积比50-100％的硫酸铵，质量体积比30-50％的柠檬酸和质量体积比30-50％的硫酸钠，以上所述质量体积比为每100毫升溶剂中所含的溶质的克数。
本发明还提供了一种保存生物样品的方法，其包括将取得的新鲜的生物样品立即浸泡于权利要求1所述的样品保存液中并于低温下储存的步骤。
进一步地，所述生物样品为组织样品，所述组织样品与所述样品保存液的量的比为每1g样品5-10ml样品保存液。
优选地，所述组织样品中的每个组织块的大小不超过1×1×1cm。
进一步地，所述生物样品为培养的细胞或微生物，所述培养的细胞或微生物样品与所述样品保存液的量的比为每1ml样品5-10ml样品保存液。
优选地，储存时间短于一周时，储存温度不高于25℃。
优选地，储存时间为7-30天时，储存温度为不高于4℃。
优选地，储存时间长于30天时，储存温度为不高于-20℃。
使用本发明的样品保存液和方法可防止样品中的RNA在短期或长期保存过程中发生降解，保持样品中的RNA的完整性，为病理或科研的分析提供良好的分析材料。
附图说明
图1为本发明的样品保存液和市售的RNAlater于18-25℃储存7天后的小鼠心脏组织和皮肤组织提取的总RNA的琼脂糖凝胶电泳图，其中泳道1和3分别为本发明的样品保存液保存的心脏组织和皮肤组织，泳道2和4分别为市售的RNAlater保存的心脏组织和皮肤组织；
图2为本发明的样品保存液和市售的RNAlater于18-25℃储存7天后的小鼠肾组织提取的总RNA的琼脂糖凝胶电泳图，泳道1为本发明的样品保存液保存的肾组织，泳道2为市售的RNAlater保存的肾组织。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
1.样品保存液
所述样品保存液包含0.1-0.5M的柠檬酸钠，质量体积比50-100％的硫酸铵，质量体积比30-50％的柠檬酸和质量体积比30-50％的硫酸钠。
2.样品保存方法
该样品保存液适用于新鲜动植物组织和培养细胞、菌体，但不适用于保存冷冻样品。
保存步骤如下：
1)将新鲜组织样本切割为不超过黄豆大小的块；培养细胞、菌体可不进行处理；
2)将处理后的样本按照1g(1ml)样本加入5～10ml样本保存液的比例完全浸入样本保存液中；
3)将保存的样本储存于适当的环境下，保存时间与使用环境关系如表1所示。
表1储存时间与储存温度的关系
储存温度 储存时间
37℃ 1天
25℃ 1周
4℃ 1个月
-20℃ 长期
提取核酸时，用消毒镊子将组织从样本保存液中取出，直接进行核酸的提取；保存的细胞取出后离心去上清，然后进行核酸的提取。
3.本发明的样品保存液与市售的RNAlater的效果比较
将新鲜的小鼠心脏组织和皮肤组织分别保存于本发明的样品保存液和市售的RNAlater中，于18-25℃中储存7天，然后用TRIzol提取RNA；将新鲜的小鼠肾脏组织分别保存于本发明的样品保存液和市售的RNAlater中，于4℃中储存30天，然后用TRIzol提取RNA，提取的RNA最终溶于相同体积的溶液中。
用分光光度计检测RNA浓度及纯度(260/280)，计算RNA提取量，并用琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性。
从分光光度计检测结果可知，室温(18℃-25℃)放置7天后，相同体积下，用RNAkeeper试剂保存的样品提取的RNA浓度比用RNAlater试剂保存的样品提取的RNA浓度高，RNA纯度两者一致。通过计算可知，用RNAkeeper试剂保存的样品提取的RNA量明显高于用RNAlater试剂保存的样品提取的RNA量(表2)。从琼脂糖凝胶电泳图上可知，两种试剂保存的样品提取的RNA都很完整(图1)。4℃放置30天后，相同体积下，用RNAkeeper试剂保存的样品提取的RNA浓度比用RNAlater试剂保存的样品提取的RNA浓度高，RNA纯度两者一致。通过计算可知，用RNAkeeper试剂保存的样品提取的RNA量明显高于用RNAlater试剂保存的样品提取的RNA量(表2)。用RNAkeeper试剂保存的样品提取的RNA完整性优于用RNAlater试剂保存的样品提取的RNA(图2)。
表2本发明的样品保存液和市售的RNAlater的保存效果比较
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种防止RNA降解的样品保存液，其特征在于，包含0.1-0.5M的柠檬酸钠，质量体积比50-100％的硫酸铵，质量体积比30-50％的柠檬酸和质量体积比30-50％的硫酸钠。
2.一种保存生物样品的方法，其特征在于，包括将取得的新鲜的生物样品立即浸泡于权利要求1所述的样品保存液中并储存的步骤。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述生物样品为组织样品，所述组织样品与所述样品保存液的量的比为每1g样品对应5-10ml样品保存液。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述组织样品中的每个组织块的大小不超过1×1×1cm。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述生物样品为培养的细胞或微生物，所述培养的细胞或微生物样品与所述样品保存液的量的比为每1ml样品对应5-10ml样品保存液。
6.根据权利要求2-5中任一项所述的方法，其特征在于，储存时间短于一周时，储存温度不高于25℃。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，储存时间为7-30天时，储存温度为不高于4℃。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，储存时间长于30天时，储存温度为-20℃。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，将所述生物样品储存于-20℃中时，先将浸没于所述样品保存液中的生物样品在4℃中孵育过夜，然后将其转移至-20℃。
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