CN103789202B - 常温保存核酸的采集容器 - Google Patents

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Abstract

本发明是一种血液采集容器，特别是一种常温保存核酸的采集容器，其包括采集管和胶塞，胶塞密封在采集管的管口上，胶塞的外面设有保护帽，采集管内设置有添加剂，所述添加剂由血液抗凝剂及其缓冲液、防腐固定剂、核酸酶抑制剂、代谢抑制剂及细胞膜稳定剂混合而成。本发明可以使采集的样本在常温条件下保持初始状态7‑14天甚至更长时间而不腐败，所以不会影响检验结果；本采集容器可用于在灾难、战争时及艰苦地区的血液样本的采集、储存、运输，还可用于科学实验中其他组织、细胞等样本的采集、储存和运输，还可用于其他临床检验项目；本发明降低了样本采集后的储存条件，从而降低了工作人员劳动量，提高了工作效率。

Description

常温保存核酸的采集容器
技术领域
本发明是一种血液采集容器，特别是一种常温保存核酸的采集容器。
背景技术
目前，分子生物学的发展日新月异，基因工程学是分子生物学最重要的一个学科，其已广泛的应用到临床检验医学、基因靶向治疗、生物制药、农业育种和法医鉴定等许多方面。基因工程学主要研究和应用的基础对象是核酸，包括DNA和RNA两大类。目前样品核酸的提取已经发展得非常成熟，但对样品的采集、运输和存储条件要求比较高，尤其是RNA。因为RNA非常不稳定，它可以迅速且显著的降解，当样本来自于临床的血液时，除了出现RNA降解的情况，有时还会出现RNA被诱导，导致低丰度信息丢失或基因转录本出错，因此要求样本必须保持低温状态，而低温状态将给样本的采集、运输和存储带来许多困难。如果能在常温下进行样本的采集、运输和存储，就能完全避免这些困难，这是目前需要认真解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有核酸的采集、运输和存储必须在低温状态下进行的缺陷，发明一种用于在常温状态下采集样本并在一定时间内保持样本初始状态而不影响检查结果的常温保存核酸的采集容器。
本发明的目的是按如下的方式来实现的：所述常温保存核酸的采集容器，包括采集管和胶塞，胶塞密封在采集管的管口上，胶塞的外面设有保护帽，采集管内设置有添加剂，所述添加剂由血液抗凝剂及其缓冲液、防腐固定剂、核酸酶抑制剂、代谢抑制剂及细胞膜稳定剂混合而成。
所述采集管是用玻璃或塑料制作；玻璃为硅硼玻璃或石英玻璃；塑料为聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBT)或聚萘二甲酸乙二醇酯(PEN)。
所述胶塞是用橡胶制作，橡胶为丁基橡胶。
所述胶塞可以用铝塑膜替代。
所述血液抗凝剂为乙二胺四乙酸盐、柠檬酸盐、肝素盐的任意一种，所述缓冲液为柠檬酸钠缓冲液；所述防腐固定剂为乙内酰脲、2-溴-2-硝基丙烷-1，3-二醇、双咪唑烷基脲、季铵盐、酒精、甲醛及其衍生物、咪唑烷基脲、二羟甲基脲、恶唑烷或羟甲基甘氨酸钠的任意一种；所述核酸酶抑制剂为焦碳酸二乙酯、乙醇、金精三羧酸(ATA)、甲酰胺、氧钒核糖核苷复合物、硅藻土、乙二胺四乙酸(EDTA)及其盐、蛋白酶K、肝素、羟胺氧铜离子、膨润土、硫酸铵、二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇、半胱氨酸或二硫赤藓糖醇的任意一种；所述代谢抑制剂为磷酸二羟丙酮、1，3-二磷酸甘油酸、甘露糖、甘油醛、氟化钠、甘油醛3-磷酸、丁酮、磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸或甘油的任意一种；所述细胞膜稳定剂为甘氨酸及其同系物或衍生物、丝氨酸、络氨酸、天冬酰胺，天冬氨酸、半胱氨酸或谷氨酰胺的任意一种；其中：血液抗凝剂乙二胺四乙酸盐按1.5-2.2mg/1ml血液添加，肝素盐按15酶活性单位/1ml血液添加，柠檬酸钠缓冲液配置浓度2％-6％，且按柠檬酸钠缓冲液与血液为1∶6-1∶11的比例添加；所述防腐固定剂添加量按抗凝剂配制量的4％-50％比例添加；所述核酸酶抑制剂按抗凝剂配制量的1％-10％添加比例；所述代谢抑制剂按抗凝剂配制量的0.5％-5％比例添加；所述细胞膜稳定剂按抗凝剂配制量2％-8％比例添加。
本发明的积极效果如下：本发明可以使采集的样本在常温条件下保持初始状态7-14天甚至更长时间而不腐败，所以不会影响检验结果；本采集容器可用于在灾难、战争时及艰苦地区的血液样本的采集、储存和运输，还可用于科学实验中其他组织、细胞等样本的采集、储存和运输，还可用于其他临床检验项目；本发明降低了样本采集后的储存条件，从而降低了工作人员劳动量，提高了工作效率。
附图说明
图1是本发明结构图
图中：1采集管 2胶塞 3保护帽 4添加剂
具体实施方式
如图1所示，所述常温保存核酸的采集容器，包括采集管1和胶塞2，胶塞2密封在采集管1的管口上，胶塞2的外面设有保护帽3，采集管1内设置有添加剂4，所述添加剂4由血液抗凝剂及其缓冲液、防腐固定剂、核酸酶抑制剂、代谢抑制剂及细胞膜稳定剂混合而成。
所述采集管1是用玻璃或塑料制作；玻璃为硅硼玻璃或石英玻璃；塑料为聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBT)或聚萘二甲酸乙二醇酯(PEN)。
所述胶塞2是用橡胶制作，橡胶为丁基橡胶。
所述胶塞2可以用铝塑膜替代。
配制添加剂时，首先将添加剂称重后加入烧杯，再加入溶剂水，用磁力搅拌机搅拌均匀，然后按添加剂的配制总量和添加比例计算其他添加剂的量，然后混合搅拌均匀，装入试剂瓶密封保存即可。
添加剂是按如下的方式来配制：所述血液抗凝剂添加量按预置真空量和添加的体积配制抗凝剂浓度(参看行业标准Y0314-2007)，即乙二胺四乙酸盐(EDTA)按1.5-2.2mg/1ml血液添加，例如：制作2ml真空的采集管，试剂添加量20微升/管，按1.8mg/1ml血液，则需要配置18％浓度的抗凝剂，假如配制500ml，则需要加入EDTA盐90g；假如试剂添加量30微升/管，按1.8mg/1ml血液，则需要配置12％浓度的抗凝剂，同样配制500ml，则需要加入EDTA盐60g)；肝素盐按15酶活性单位/1ml血液(参看行业标准YY0314-2007，例如：制作3ml肝素做抗凝剂的采集管，需要加45酶活性单位的肝素，如果肝素效价150酶活性单位/mg，试剂添加量20微升/管，则需要配置1.5％浓度的抗凝剂)；柠檬酸钠缓冲液按柠檬酸钠缓冲液与血液为1∶6-1∶11的比例添加，优选1∶9，其中柠檬酸钠缓冲液中，柠檬酸钠加量配置浓度2％-6％，(例如：制作4.5ml柠檬酸钠做抗凝剂的采集管，配制3.2％柠檬酸钠溶液，按1∶9的比例添加，即制作4.5ml柠檬酸钠采集管，需要加入0.5ml的柠檬酸钠溶液)。所述防腐固定剂添加量按抗凝剂配制量的4％-50％比例添加；所述核酸酶抑制剂按抗凝剂配制量的1％-10％添加比例；所述代谢抑制剂按抗凝剂配制量的0.5％-5％比例添加；所述细胞膜稳定剂按抗凝剂配制量2％-8％比例添加。
制作真空采集管时，按抽血量计算添加剂的添加量，然后抽真空即可。
在第一实施中，血液抗凝剂为乙二胺四乙酸盐(EDTAK2)，防腐固定剂为双咪唑烷基脲，核酸酶抑制剂为金精三羧酸，代谢抑制剂为甘油醛，细胞膜稳定剂为甘氨酸，用含有上述添加剂的采血管采集受试者血液5ml并常温放置，然后于第3天和第7天涂片观察血球变化情况，发现血球保存完好，没有可见红、白细胞碎片，证明血浆DNA和RNA没有受到因白细胞破裂引起体DNA的污染和干扰；随后进行QPCR测试血浆核酸变化，测试证明放置3天和7天的结果，与抽血后即刻测试的结果没有显著性差异。所以证明，加入此种混合添加剂能在常温下保持血浆中DNA和RNA的含量和白细胞、红细胞完整性，表明本血液采集容器可以在常温下作为血液核酸提取样本使用。
在第二实施中，血液抗凝剂为乙二胺四乙酸盐(EDTAK3)，防腐固定剂为二羟甲基脲，核酸酶抑制剂为金精三羧酸，代谢抑制剂为甘油醛，细胞膜稳定剂为天冬氨酸，用含有上述添加剂的采血管采集受试者血液各5ml并常温放置，然后于第3天和第7天涂片观察血球变化情况，发现血球保存完好，没有可见红、白细胞碎片，证明血浆DNA和RNA没有受到因白细胞破裂引起体DNA的污染和干扰。随后进行QPCR测试血浆核酸变化，测试证明，放置3天和7天的结果，与抽血后即刻测试的结果没有显著性差异。所以证明，加入此种混合添加剂能在常温保持血浆中DNA和RNA的含量和白细胞、红细胞完整性，表明本血液采集容器可以在常温下作为血液核酸提取样本使用。
本发明经测试，证明其完全适合于在常温下作为血液核酸提取样本使用。

Claims (1)

1.一种常温保存核酸的采集容器，包括采集管和胶塞，胶塞密封在采集管的管口上，胶塞的外面设有保护帽，采集管内设置有添加剂，所述添加剂由血液抗凝剂及其缓冲液、防腐固定剂、核酸酶抑制剂、代谢抑制剂及细胞膜稳定剂混合而成；其特征在于：所述血液抗凝剂为乙二胺四乙酸盐、柠檬酸盐、肝素盐的任意一种；所述缓冲液为柠檬酸钠缓冲液；所述防腐固定剂为乙内酰脲、2-溴-2-硝基丙烷-1，3-二醇、双咪唑烷基脲、季铵盐、酒精、甲醛及其衍生物、咪唑烷基脲、二羟甲基脲、恶唑烷或羟甲基甘氨酸钠的任意一种；所述核酸酶抑制剂为焦碳酸二乙酯、乙醇、金精三羧酸、甲酰胺、氧钒核糖核苷复合物、硅藻土、乙二胺四乙酸及其盐、蛋白酶K、肝素、羟胺氧铜离子、膨润土、硫酸铵、二硫苏糖醇、β-巯基乙醇、半胱氨酸或二硫赤藓糖醇的任意一种；所述代谢抑制剂为磷酸二羟丙酮、1，3-二磷酸甘油酸、甘露糖、甘油醛、氟化钠、甘油醛3-磷酸、丁酮、磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸或甘油的任意一种；所述细胞膜稳定剂为甘氨酸及其同系物或衍生物、丝氨酸、络氨酸、天冬酰胺，天冬氨酸、半胱氨酸或谷氨酰胺的任意一种；其中：血液抗凝剂乙二胺四乙酸盐按1.5-2.2mg/1ml血液添加，肝素盐按15酶活性单位/1ml血液添加，柠檬酸钠缓冲液配置浓度2％-6％，且按柠檬酸钠缓冲液与血液为1∶6-1∶11的比例添加；所述防腐固定剂添加量按抗凝剂配制量的4％-50％比例添加；所述核酸酶抑制剂按抗凝剂配制量的1％-10％添加比例；所述代谢抑制剂按抗凝剂配制量的0.5％-5％比例添加；所述细胞膜稳定剂按抗凝剂配制量2％-8％比例添加。
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