CN106635770A - 一种保护和稳定病毒rna的采血管 - Google Patents

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刘淑园
陈华云
肖湘文
丁渭
张天海
陆同山
邓利琼
刘孝礼
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    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
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Abstract

本发明公开了一种保护和稳定病毒RNA的采血管，该采血管是由试管、密封胶塞和保护剂组成的。本发明将血液采集到管中后，上下颠倒10次充分混合均匀，室温保存。在常温条件下能够保护病毒RNA长达3天，可用于病毒RNA的保护和储存。

Description

一种保护和稳定病毒RNA的采血管
技术领域
本发明涉及一种保护和稳定病毒RNA的采血管。
背景技术
自然界的病毒种类数不胜数，其中绝大多数为RNA病毒，如艾滋病病毒，乙肝肝炎病毒，SARS 病毒，MERS病毒，埃博拉病毒（EBV），丙肝肝炎病毒，甲型H1N1流感病毒，禽流感病毒等。病毒体积非常微小，结构及其简单，但具有高度的寄生性，完全依赖宿主细胞的能量和代谢系统。当它接触到宿主细胞时，便脱去蛋白质外套，它的核酸(基因)侵入宿主细胞内，借助后者的复制系统，按照病毒基因的指令复制新的病毒，最后造成宿主细胞死亡。
人被病毒感染后，病毒借着人的细胞的能量和代谢系统，进行大量的繁殖。当宿主细胞破裂后，病毒就暴露在细胞外，故可通过对血液进行核酸提取，再对核酸进行相关病毒检测便可确认是否感染了病毒，以及感染的病毒类型。所以，血液病毒RNA的检测及其在基因诊断等方面的应用对于RNA病毒等的诊断和监测具有十分重要的意义。
但在血液中的病毒RNA浓度非常低，而血液中RNA酶含量多，病毒RNA在没有保护的状态下很容易被RNA酶降解。在临床上，大多数是采用采血管采集人的血液，再对血液进行检测。
而目前，市面上存在着各种各样的采血管，这些采血管大多数都只是起到防止血液凝固的作用，而没有起到保护病毒RNA的作用。而且在临床过程中，由于条件或时间的限制，常常无法在得到血液后第一时间就进行病毒RNA的提取。细胞破裂，产生更多的RNA酶，在短短的几个小时内就将大部分的病毒RNA降解了，对后续实验造成极大的障碍，实验结果容易产生假阴性，从而无法为临床提供有价值的信息。
因此，一种可以保护和稳定病毒RNA的采血管是很有必要的。
发明内容
本发明的目的在于制备一种保护和稳定病毒RNA的采血管，该采血管不仅能防止血液凝固，而且能够保护和稳定、富集其中病毒的RNA。该采血管是由试管、密封胶塞和保护剂组成的。将血液采集到管中后，上下颠倒10次充分混合均匀。在室温下，血液中的病毒RNA可保存3天，-20℃至-80℃可长期保存。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
一种保护和稳定病毒RNA的采血管，其特征在于，所述的试管是由疏水性质的聚对苯二甲酸醇酯材质制造而成，所述的密封胶塞是由丁基橡胶材质制造而成。
一种病毒RNA保护剂，其特征在于，所述保护剂是由EDTA-3K、IDU、bestain、glycine、AEBSF、核糖核苷复合物、异硫氰酸胍、磁珠按照一定的比例溶解于DEPC水，再进行冻干而成，其中各组分在所述溶液中的浓度分别为：EDTA-3K（20g-80g/L）、IDU（250-700g/L）、bestain（0.06-0.38g/L）、glycine（15-68g/L）、AEBSF（0.01-0.34g/L）、核糖核苷复合物（0.2ml-1ml/L）、异硫氰酸胍（30-100g/L）、磁珠（0.5-4mg/ml）。
作为优选，本发明所述的病毒RNA保护剂的EDTA-3K、IDU、bestain、glycine、AEBSF、核糖核苷复合物、异硫氰酸胍、磁珠的浓度分别为55g/L、600g/L、0.31g/L、45g/L、0.262g/L、0.2ml/L、40g/L、1mg/ml。
附图说明
图1为全血样本于本发明所述的一种保护和稳定病毒RNA的采血管中分别保存0、1、2、3天后进行核酸提取，提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果。
图2为全血样本于常规EDTA-Na2采血管中分别保存0、1、2、3天后进行核酸提取，提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果。
具体实施方法
以下实施案例仅用于解释本发明，而不用于限制本发明。
实例：
随机抽取4份感染HIV的人全血样本，分别按5ml/人份分成8人份，其中4人份为1组，分成2组。其中1组置于常规EDTA-Na2采血管中，另1组置于本发明所述的保护病毒RNA的采血管中，分别常温放置0天、1天、2天、3天后进行核酸提取（Qiagen公司的RNeasy Mini Kit(50) -货号74104试剂盒），以提取的核酸为样本进行人HIV基因的实时荧光PCR检测。
检测结果：
置于常规EDTA-Na2采血管和本发明所述的保护病毒RNA采血管的中的感染了HIV的全血样本，在常温放置不同时间后，分别进行核酸提取，提取的核酸进行HIV基因的实时荧光PCR检测，其检测结果的Ct值如表1。
表1
由表1可知，本发明所述的保护病毒RNA采血管能够在3天内有效地保护血液中病毒RNA，只有极其轻微的降解；而常规EDTA-Na2采血管对病毒RNA的稳定性维持时间不到1天且降解情况比较严重。
图1~图2为表1对应的HIV基因的实时荧光PCR检测结果图，其中图1为全血置于本文所述的保护病毒RNA的采血管中保存不同时间后进行核酸提取，提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果图，由图可知，在0~3天的检测时间内，所有检测样本都被正确检出，且稳定性良好，血液中病毒RNA得到了有效的保护；图2为全血置于常规EDTA-Na2采血管中保存不同时间后进行核酸提取，提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果图，检测结果显示，常规EDTA-Na2采血管中的病毒RNA连1天的稳定性都不能维持，降解情况十分严重。
本发明所述保护病毒RNA的采血管是一种能够高效保护病毒RNA的试剂。

Claims (6)

1.一种保护和稳定病毒RNA的采血管，其特征在于，所述采血管是由试管、密封胶塞和保护剂组成的。
2. 根据权利要求1 所述的采血管，其特征在于，所述的试管是由疏水性质的聚对苯二甲酸醇酯材质制造而成。
3. 根据权利要求1 所述的采血管，其特征在于，所述的密封胶塞是由丁基橡胶材质制造而成。
4. 根据权利要求1 所述的采血管，其特征在于，所述的保护剂是由EDTA-3K、IDU、bestain、glycine、AEBSF、核糖核苷复合物、异硫氰酸胍、磁珠按照一定的比例溶解于DEPC水，再进行冻干而成的，浓度分别为55g/L、600g/L、0.31g/L、45g/L、0.262g/L、0.2ml/L、40g/L、1mg/ml。
5. 根据权利要求1 所述的采血管，其特征在于，所述保护剂中的磁珠可以富集血液中的病毒RNA。
6.根据权利要求1~5所述的采血管，其特征在于，在应用中，将血液采集到管中后，上下颠倒10次充分混合均匀，室温保存。
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