CN111778239A - 一种兽用采样液组合物及采样方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种兽用采样液组合物，其包括采样液和保存液，所述采样液包括以下组分：氯化钠、硫酸氢二钠、硫酸二氢钾、氯化钾、水、苯酚红；所述保存液包括以下组分：葡萄糖、海藻糖、柳硫汞钠盐、水。本发明的保存液中加入了海藻糖，可极大的减缓核酸在唾液样本中降解的速度，延长病毒在样本中存活的时间，保证检测的准确性。同时，本发明专门配置了采样液，通过采样液对采样工具进行充分浸润后进行采样，由于有采样液的润滑作用从而可避免对动物造成机械性损伤。另外，本发明的采样方法操作简单，采样方便，采样效率高。

Description

一种兽用采样液组合物及采样方法

技术领域

本发明涉及病毒检验检疫领域，尤其涉及兽用采样液组合物及采样方法。

背景技术

病毒是由一个核酸分子(DNA或RNA)与蛋白质构成的非细胞形态的营寄生生 活的生命体。病毒有高度的寄生性，完全依赖宿主细胞的能量和代谢系统，获 取生命活动所需的物质和能量。早在公元前1400年人类就有了病毒感染的记载， 但直到19世纪末病毒才开始逐渐被发现和鉴定。病毒能引起动物、植物及人类 的各种疾病，对人类的生存和健康造成极大的威胁，如人类免疫缺陷病毒、埃 博拉病毒、SARS、H1N1等，均对人类及动物造成极大威胁。

病毒感染检测有赖于病毒分离鉴定、病毒基因检测、病毒特异性抗原检测 等方法，这些都必须建立在采集到高质量的标本的基础之上。

通过对猪群唾液中的病毒检测可以如实反映猪群健康状况，并为农场主制 定合理的养殖方案，提供重要的科学依据。目前对猪群唾液中的病毒的采样中 一般采用干棉签对动物的鼻腔或口腔进行采样。因此，目前对猪群唾液中的病 毒的采样方法存在以下缺点：(1)由于目前直接采用干棉签等工具直接对猪群 鼻腔进行采样，在采样过程中可能对动物造成机械性损伤；(2)采集好的样品 在送检过程中由于保存、时间差等多种原因，样品里的核酸容易降解，造成实 验数据不准确，使养殖场在临床诊断做出错误的判定，从而给养殖场带来极大 的损失。

发明内容

为了克服现有技术不足，本发明的目的是提供一种可避免对动物造成机械 性损伤、且采集的样品保存时间长的兽用采样液组合物及采样方法。

为实现上述目的，本发明提供一种兽用采样液组合物，其包括采样液和保 存液，所述采样液包括以下重量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

进一步，将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋； 将所述保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。

目前的采样操作中，一般只设置保存液，未配置专门的采样液，这样在采 样过程中直接用干的采样工具对动物进行采样，易对动物造成机械性损伤；因 此，本发明专门配置了采样液，通过采样液对采样工具进行充分浸润后进行采 样，由于有采样液的润滑作用从而可避免对动物造成机械性损伤。

本发明的采样液中加入了苯酚红，由于采样液为酸性，所以采样液加入苯 酚红后采样液为黄色。当采样后，由于动物唾液成碱性，因此采样液由黄色转 成紫红色，从而方便判断采样工具(采样工具在采样前需先浸润采样液)是否 已经使用。

本发明的保存液中加入了海藻糖，由于海藻糖可以在高温及干燥失水等恶 劣环境条件下，在细胞表面能形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质分子不变 性失活，从而维持生命体的生命过程和生物特征。因此，本发明的保存液中加 入海藻糖可极大的减缓核酸在唾液样本中降解的速度，延长病毒在样本中存活 的时间，保证检测的准确性。经过实验对比，本发明中配置的保存液由于加入 海藻糖，可更有效的保护样本中核酸，减缓核酸的降解速度，样本保存时间增 加一周以上。

另外，本发明还将保存液及采样液配置后，按每次使用的量进行小量分装， 从而方便用户使用，提高采样效率，收集到更多样本。

优选的，本发明所述的兽用采样液组合物，其包括采样液和保存液，所述 采样液包括以下重量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

本发明还公开一种应用上述的兽用采样液组合物进行采样的方法，其包括 以下步骤：

1)、打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样工具上，充分浸润采样工具；

2)、将采样工具插入采样动物的鼻腔中，旋转采样工具3-5圈获取采样动物的 鼻腔液或将采样工具给采样动物咬10-20分钟，然后将采用工具放回自封袋中， 并加入一密封袋的保护液，在自封袋中反复揉搓采样工具；

3)、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50ml离心管中；

4)、将离心管中的液体在0-72小时内进行病原检测。

由于本发明步骤1)中，将采样液对采样工具进行充分浸润后再进行采样， 由于有采样液的润滑作用从而可避免对动物造成机械性损伤。

本发明上述采样方法，操作简单，一次采样直接采用一密封袋的采样液及 一密封袋的保存液，使用方法，采样效率高。

进一步，所述采样动物为猪。

进一步，所述采样工具为棉绳或棉签。

本发明的有益效果为：本发明的保存液中加入了海藻糖，可极大的减缓核 酸在唾液样本中降解的速度，延长病毒在样本中存活的时间，保证检测的准确 性。同时，本发明专门配置了采样液，通过采样液对采样工具进行充分浸润后 进行采样，由于有采样液的润滑作用从而可避免对采样动物造成机械性损伤。 另外，本发明的采样方法操作简单，采样方便，采样效率高。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合 实施方式详予说明。

实施例1

一种兽用采样液组合物，其包括采样液和保存液，所述采样液包括以下重 量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋；将所述 保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。

实施例2

一种兽用采样液组合物，其包括采样液和保存液，所述采样液包括以下重 量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋；将所述 保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。

实施例3

一种兽用采样液组合物，其包括采样液和保存液，所述采样液包括以下重 量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋；将所述 保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。

实施例4

应用上述实施例2的兽用采样液组合物进行采样的方法，其包括以下步骤：

1)打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样棉签上，充分浸润采样棉签；

2)、将采样棉签给采样的猪咬15分钟，然后取出采样棉签放入自封袋中，并 加入一密封袋的保存液，反复揉搓采样棉签；

3)、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50ml离心管中；

4)、将离心管中的液体在24-288小时内(采用冷链运输)进行病原检测。

实施例5

应用上述实施例1的兽用采样液组合物进行采样的方法，其包括以下步骤：

1)打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样棉绳一端上，充分浸润采样棉 绳一端；

2)、将采样棉绳浸润有采样液的一端给采样的猪咬20分钟，然后取出采样棉 绳，并将采样棉绳采样的一端放入自封袋中，再加入一密封袋的保存液，反复 揉搓采样棉绳的采样端；

3)、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50ml离心管中；

4)、将离心管中的液体在24-288时内(采用冷链运输)进行病原检测。

实施例6

应用上述实施例3的兽用采样液组合物进行采样的方法，其包括以下步骤：

1)打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样棉签上，充分浸润采样棉签；

1)将采样棉签插入采样猪的鼻腔中，旋转采样棉签4圈获取采样猪的鼻腔液； 然后取出采样棉签放入自封袋中，并加入一密封袋的保存液，反复揉搓采样棉 签；

3)、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50ml离心管中；

4)、将离心管中的液体在24-288小时内(采用冷链运输)进行病原检测。

对照实施例1

应用上述实施例2的兽用采样液进行采样的方法，其包括以下步骤：

1)打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样棉签上，充分浸润采样棉签；

2)、将采样棉签给采样的猪咬15分钟，然后取出采样棉签放入自封袋中，反 复揉搓采样棉签；

3)、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50ml离心管中；

4)、将离心管中的液体在24-288小时内(采用冷链运输)进行病原检测。

上述对照实施例1中采用采样液，未使用保存液，其他操作均与实施例4 相同。

上述实施例4-6及对照实施例1分别对同一只感染了非洲猪瘟病毒的猪进 行了采样，下面对实施例4-6及对照实施例1采集的样品进行核酸检测，检测 结果见表1。

主要试剂及仪器：检测试剂采购于美国IDEXX公司非洲猪瘟抗原检测试剂 盒；

实时荧光定量PCR检测：所有反应均在CFX Connet型实时荧光定量PCR仪 (采购于美国BIO-RAD公司)上进行。

阳性样本：感染非洲猪瘟病毒阳性猪的口鼻棉拭子，原始核酸检测 Ct＝30.504。

反应条件如下：95℃预变性1min；95℃15s，60℃30s，45个循环。

检测通道分别为FAM通道(465-510nm)和HEX(VIC)通道(515-553nm)。 结果判断：与PCR阴性对照相比，阳性样品会有Ct值和特异的扩增曲线。

表1实施例4-6及对照实施例1核酸检测结果

从上述表格可以看出，实施例4-6由于在样品中加入了保存液，且保存液中 含有海藻糖，因此，样品常温可放置12(288小时)天。对照实施例1中，由 于样品中未加入保护液，在第六天检测时，已经无法检测到核酸，检测结果不 再准确。因此，与对照实施例1相比，本发明的样品由于保护液可延长样品保 存时间近一周。

需要说明的是，尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述，但并非因 此限制本发明的专利保护范围。因此，基于本发明的创新理念，对本文所述实 施例进行的变更和修改，或利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程 变换，直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域，均包括在本 发明的专利保护范围之内。

Claims (6)

1.一种兽用采样液组合物，其特征在于：其包括采样液和保存液，所述采样液包括以下重量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

2.根据权利要求1所述的兽用采样液组合物，其特征在于：其包括采样液和保存液，所述采样液包括以下重量份数的组分：

所述保存液包括以下重量份数的组分：

3.根据权利要求1或2所述的兽用采样液组合物，其特征在于：将所述采样液各组分混合均匀后按每40-50重量份灌装一密封袋；将所述保存液各组分混合均匀后按每2-3重量份灌装一密封袋。

4.应用权利要求3的兽用采样液组合物进行采样的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

1)、打开装有采样液的密封袋，将采样液倒在采样工具上，充分浸润采样工具；

2)、将采样工具插入采样动物的鼻腔中，旋转采样工具3-5圈获取采样动物的鼻腔液或将采样工具给采样动物咬10-20分钟，然后将采用工具放回自封袋中，并加入一密封袋的保护液，在自封袋中反复揉搓采样工具；

3)、在自封袋底部剪一开口，将自封袋中液体转移到50ml离心管中；

4)、将离心管中的液体在0-288小时内进行病原检测。

5.根据权利要求4所述的采样的方法，其特征在于，所述采样动物为猪。

6.根据权利要求4所述的采样的方法，其特征在于，所述采样工具为棉绳或棉签。