CN116024388A - 鸡传染性支气管炎病毒gvi-1基因型rt-pcr检测试剂盒及其应用 - Google Patents
鸡传染性支气管炎病毒gvi-1基因型rt-pcr检测试剂盒及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116024388A CN116024388A CN202310013876.9A CN202310013876A CN116024388A CN 116024388 A CN116024388 A CN 116024388A CN 202310013876 A CN202310013876 A CN 202310013876A CN 116024388 A CN116024388 A CN 116024388A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- genotype
- gvi
- infectious bronchitis
- kit
- bronchitis virus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 title claims abstract description 47
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 18
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims abstract description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 claims description 4
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 14
- 239000013642 negative control Substances 0.000 abstract description 8
- -1 IBV nucleic acid Chemical class 0.000 abstract description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 6
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 abstract description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 2
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 2
- 210000003555 cloaca Anatomy 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 241000008920 Gammacoronavirus Species 0.000 description 1
- 244000208060 Lawsonia inermis Species 0.000 description 1
- 208000001705 Mouth breathing Diseases 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 101150027674 S1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种鸡传染性支气管炎病毒GVI‑1基因型RT‑PCR检测试剂盒及其应用。本发明针对鸡传染性支气管炎病毒GVI‑1基因型保守区域设计了一对特异性引物，还建立了含有该引物组的试剂盒。研究发现，使用本发明的引物进行RT‑PCR检测，仅GVI‑1基因型IBV毒株在目标位置出现特异性扩增条带，而阴性对照和其它基因型毒株未出现目的条带。通过紫外分光光度计测量提取的IBV核酸浓度(8.7μg/ml)，然后将IBV核酸进行10倍倍比稀释，用建立的RT‑PCR方法进行检测，验证该方法的敏感性。通过结果分析，该方法的最低检出限为106稀释核酸样品，即最低检出核酸浓度为8.7pg/ml。本发明的提出为GVI‑1基因型IBV流行病学监测和临床分离株的快速分型提供了有效的技术手段。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于检测鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型RT-PCR检测试剂盒及其应用。本发明属于生物检测技术领域。
背景技术
鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis)，二类传染病，是由传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病。其临诊特征是呼吸困难、发出罗音、咳嗽、张口呼吸、打喷嚏。产蛋鸡感染通常变现产蛋量降低，蛋的品质下降。本病广泛流行于世界各地，是养鸡业的重要疫病。传染性支气管炎病毒(Infectious BronchitisVirus，IBV)是一种以侵害鸡呼吸、泌尿和生殖系统的γ冠状病毒，该病毒在世界范围广泛流行，给养殖业带来严重经济损失。
IBV极易发生遗传变异，不断出现的血清型和基因型使得检测和预防变得日益复杂。基因分型是IBV毒株最常用的分类方法，确定野毒株的基因型对IBV的流行病学监测至关重要。目前对分离株进行基因分型需要首先克隆S1基因并进行测序，然后通过基因序列比对和遗传进化分析确定对应的基因型，操作繁琐且周期较长。
发明内容
本发明的目的是建立1种可特异性检测鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型的RT-PCR检测试剂盒及其应用。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：
本发明的一种鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型RT-PCR检测引物组，所述的引物组由上游引物和下游引物组成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
进一步的，本发明还提出了所述的引物组在制备鉴别或检测鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型试剂中的用途。
再进一步的，本发明还提出了一种鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型RT-PCR检测试剂盒，所述的试剂盒中含有权利要求1所述的鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型RT-PCR检测引物组。
其中，优选的，所述的试剂盒中还含有RNase-Free ddH2O、2×One Step Mix以及One Step Enzyme Mix。
其中，优选的，所述的试剂盒用于鉴别或检测鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型时，每个样品测试反应体系配制如下：
其中，优选的，所述的试剂盒用于鉴别或检测鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型时，RT-PCR检测循环条件设置为:
第一阶段，反转录42℃30min；
第二阶段，预变性95℃5min；
第三阶段，94℃/30s，51℃/30s，72℃/30s，35个循环；
第四阶段，72℃10min
第五阶段，4℃保存。
其中，优选的，所述的模板RNA最低检出核酸浓度为8.7pg/ml。
更进一步的，本发明还提出了所述的试剂盒在制备鉴别或检测鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型试剂中的用途。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
本发明针对鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型保守区域设计了一对特异性引物，还建立了含有该引物组的试剂盒。研究发现，使用本发明的引物进行RT-PCR检测，仅GVI-1基因型IBV毒株在目标位置出现特异性扩增条带，而阴性对照和其它基因型毒株未出现目的条带。通过紫外分光光度计测量提取的IBV核酸浓度(8.7μg/ml)，然后将IBV核酸进行10倍倍比稀释，稀释度分别为101～108,用建立的RT-PCR方法进行检测，验证该方法的敏感性。通过结果分析，该方法的最低检出限为106稀释核酸样品，即最低检出核酸浓度为8.7pg/ml。本发明的提出为GVI-1基因型IBV流行病学监测和临床分离株的快速分型提供了有效的技术手段。
附图说明
图1为鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型检测电泳图；
其中，M、DL DNAMarker 2000；1、阳性对照；2、阴性对照；3、样品1；4、样品2；
图2为本发明试剂盒的特异性检测结果；
其中，M、DLDNADNAMarker 2000；1、GVI阳性对照；2、阴性对照；3、GVI-1样品；4、GI-1样品；5、GI-7样品；6、GI-13样品；7、GI-19样品；8、GI-28样品；
图3为本发明试剂盒的敏感性检测结果。
其中，M、DL DNAMarker 2000；1、阳性对照；2、阴性对照；3、IBV-VI核酸10倍稀释；4、IBV-VIM 2100倍稀释；5、IBVVI核酸1000倍稀释；6.IBV-VI核酸10000倍稀释；7、IBV-VI核酸100000倍稀释；8、IBV-VI核酸1000000倍稀释；9、IBV-VI核酸10000000倍稀释；10、IBV-VI核酸100000000倍稀释。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型RT-PCR检测方法的建立
1材料和方法
1.1样品
1.1.1样品采集
活禽取咽喉拭子和泄殖腔拭子；肌肉或组织脏器等待检样品装入一次性塑料袋或其他灭菌容器；血清、血浆用无菌注射器直接吸取至无菌离心管中。
1.1.2样品贮运
样品采集后，放入密闭的塑料袋内(一个采样点的样品，放一个塑料袋)，于保温箱中加冰、密封，送实验室。
1.1.3样品制备
1.1.3.1咽喉、泄殖腔拭子
样品在混匀器上充分混合后，用高压灭菌镊子将拭子中的液体挤出，室温放置30min，取上清液转入无菌的2ml离心管中，编号备用。
1.1.3.2肌肉或组织脏器
用无菌的剪刀、镊子取待检样品2.0g于研钵中充分研磨，加10ml PBS混匀，3000r/min离心10min，取上清液转入2ml离心管中，编号备用。
1.1.4样品存放
制备的样本在2℃～8℃条件下保存应不超过24h，若需长期保存应置-70℃以下，但应避免反复冻融(冻融不超过三次)。
1.2试剂
One Step RT-PCRKit购买自南京诺唯赞生物科技有限公司，病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒购买自天根生化科技(北京)有限公司，其他试剂购买自湖南艾科瑞生物工程有限公司。针对鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型保守区域设计一对特异性引物，由尚亚生物公司合成，上游引物IBV-Ⅵ-175-F：5’-GGCAGTTGCGATTACTACAC-3’(SEQID NO.1所示)，下游引物IBV-Ⅵ-175-R：5’-CACAATACGAATGTCACCCT-3’(SEQ ID NO.2所示)，扩增片段长度为175bp。
1.3操作方法
1.3.1核酸提取
参照病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒操作步骤进行RNA提取。
1.3.2RT-PCR检测
1.3.2.1扩增试剂准备
根据样本数量从One Step RT-PCR Kit试剂盒中取出相应的RNase-Free ddH2O、2×One Step Mix、上游引物、下游引物，在室温下融化后，2000r/min离心5s，取出One Step Enzyme Mix放置于冰盒上。设所需RT-PCR检测总数为n，其中n为被检样品、阳性对照与阴性对照的和，每个样品测试反应体系配制见下表1：
表1反应体系配制
| 反应成分 | 体积 |
| RNase-FreedH2O | 13.5μL |
| 2×OneStepMix | 25μL |
| IBV-Ⅵ-175-F | 2μL |
| IBV-Ⅵ-175-R | 2μL |
| OneStepEnzymeMix | 2.5μL |
| Total | 45μL |
上述的Premix充分混合均匀，向每个RT-PCR管中各分装45μL，转移至样本处理区。
1.3.2.2加样
在各设定的PCR管中分别加入1.3.1中制备的RNA溶液各5μL，盖紧管盖，500r/min离心30s。
1.3.2.3RT-PCR检测
将1.3.2.2中离心后的PCR管放入PCR检测仪内，记录样本摆放顺序。
循环条件设置:
第一阶段，反转录42℃30min；
第二阶段，预变性95℃5min；
第三阶段，94℃/30s，51℃/30s，72℃/30s，35个循环；
第四阶段，72℃10min
第五阶段，4℃保存。
2结果分析及判定
2.1RT-PCR产物分析
将RT-PCR产物于1％琼脂糖凝胶中进行电泳。电泳仪参数设置为160V、50mA、30min，与DL DNAMarker 2000比较，在凝胶成像系统下观察结果并记录。阴性对照无电泳条带，阳性对照在目的片段175bp处有明显的电泳条带。以上两条应同时满足，否则此次实验视为无效。在目的片段处无电泳条带，表示样品中无鸡传染性支气管炎病毒基因Ⅵ型核酸。在目的片段175bp处有明显的电泳条带，表示样品中存在鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型核酸(图1)。
2.2特异性结果
提取不同基因型(GVI-1/GI-1/GI-7/GI-13/GI-19/GI-28)IBV毒株鸡胚尿囊液中的RNA，以其反转录获得的cDNA为模板进行PCR检测。结果显示，仅GVI-1基因型IBV毒株在目标位置出现特异性扩增条带，而阴性对照和其它基因型毒株未出现目的条带(图2)。
2.3敏感性结果
通过紫外分光光度计测量提取的IBV核酸浓度(8.7μg/ml)，然后将IBV核酸进行10倍倍比稀释，稀释度分别为101～108,用建立的RT-PCR方法进行检测，验证该方法的敏感性(图3)。通过结果分析，该方法的最低检出限为106稀释核酸样品，即最低检出核酸浓度为8.7pg/ml。
Claims (8)
1.一种鸡传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus，IBV)GVI-1基因型RT-PCR检测引物组，其特征在于，所述的引物组由上游引物和下游引物组成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.权利要求1所述的引物组在制备鉴别或检测鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型试剂中的用途。
3.一种鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有权利要求1所述的鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型RT-PCR检测引物组。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还含有RNase-FreeddH2O、2×OneStepMix以及OneStepEnzymeMix。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒用于鉴别或检测鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型时，每个样品测试反应体系配制如下：
6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒用于鉴别或检测鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型时，RT-PCR检测循环条件设置为:
第一阶段，反转录42℃30min；
第二阶段，预变性95℃5min；
第三阶段，94℃/30s，51℃/30s，72℃/30s，35个循环；
第四阶段，72℃10min
第五阶段，4℃保存。
7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的模板RNA最低检出核酸浓度为8.7pg/ml。
8.权利要求3-7任一项所述的试剂盒在制备鉴别或检测鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型试剂中的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310013876.9A CN116024388A (zh) | 2023-01-05 | 2023-01-05 | 鸡传染性支气管炎病毒gvi-1基因型rt-pcr检测试剂盒及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310013876.9A CN116024388A (zh) | 2023-01-05 | 2023-01-05 | 鸡传染性支气管炎病毒gvi-1基因型rt-pcr检测试剂盒及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116024388A true CN116024388A (zh) | 2023-04-28 |
Family
ID=86070916
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310013876.9A Pending CN116024388A (zh) | 2023-01-05 | 2023-01-05 | 鸡传染性支气管炎病毒gvi-1基因型rt-pcr检测试剂盒及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116024388A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106636457A (zh) * | 2016-09-19 | 2017-05-10 | 中国农业大学 | 一种用于检测4/91型传染性支气管炎病毒的试剂盒 |
| CN108315488A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-07-24 | 山东新希望六和集团有限公司 | 用于鉴定鸡传染性支气管炎病毒毒株类型的引物、rt-pcr检测试剂盒及方法、应用 |
| CN108950068A (zh) * | 2018-07-18 | 2018-12-07 | 浙江大学 | 一种鸡传染性支气管炎病毒qx型毒株鉴别检测试剂盒 |
| CN111471801A (zh) * | 2020-02-21 | 2020-07-31 | 扬州大学 | 检测tc07-2型鸡传染性支气管炎病毒的反转录-实时荧光定量pcr试剂盒及其应用 |
-
2023
- 2023-01-05 CN CN202310013876.9A patent/CN116024388A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106636457A (zh) * | 2016-09-19 | 2017-05-10 | 中国农业大学 | 一种用于检测4/91型传染性支气管炎病毒的试剂盒 |
| CN108315488A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-07-24 | 山东新希望六和集团有限公司 | 用于鉴定鸡传染性支气管炎病毒毒株类型的引物、rt-pcr检测试剂盒及方法、应用 |
| CN108950068A (zh) * | 2018-07-18 | 2018-12-07 | 浙江大学 | 一种鸡传染性支气管炎病毒qx型毒株鉴别检测试剂盒 |
| CN111471801A (zh) * | 2020-02-21 | 2020-07-31 | 扬州大学 | 检测tc07-2型鸡传染性支气管炎病毒的反转录-实时荧光定量pcr试剂盒及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 易继财等: "基因工程原理与实验", 北京：中国农业大学出版社, pages: 66 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113502352B (zh) | 检测具有感染性ASFV的EMA-ddPCR引物、探针及应用 | |
| CN108950068B (zh) | 一种鸡传染性支气管炎病毒qx型毒株鉴别检测试剂盒 | |
| CN107699635B (zh) | 猪流行性腹泻病毒荧光rpa检测方法 | |
| CN107034316A (zh) | 同时检测6种猪病毒的系统及其专用lamp引物 | |
| CN113564280A (zh) | 一种用于检测禽腺病毒i群12个血清型的raa引物及其检测方法 | |
| CN110438260B (zh) | 一种非洲猪瘟病毒核酸试纸条检测试剂盒 | |
| CN111676323A (zh) | 一种检测鸡星状病毒的lamp引物组、试剂盒及检测方法和应用 | |
| CN110607398B (zh) | 一种荧光可视化快速检测猪流行性腹泻病毒的rt-lamp试剂盒 | |
| CN111041128B (zh) | 一种基于实时荧光定量pcr检测鸭星状病毒3型用引物探针组、试剂盒及检测方法 | |
| CN113337643A (zh) | 检测蓝舌病病毒、动物流行性出血病病毒和帕利亚姆病毒的rt-lamp引物组及试剂盒 | |
| CN109628640B (zh) | 一种快速检测鲤春病毒血症病毒的rpa-lfd引物、方法和试剂盒 | |
| CN112941240B (zh) | 检测鹅星状病毒和鹅嵌杯病毒的引物对、试剂盒及方法 | |
| CN112877479A (zh) | 一种猪伪狂犬活疫苗中外源病毒快速检测引物及其在试剂盒中的应用 | |
| CN116024388A (zh) | 鸡传染性支气管炎病毒gvi-1基因型rt-pcr检测试剂盒及其应用 | |
| CN111719020B (zh) | 一种用于检测牛轮状病毒的试剂盒及引物和探针 | |
| CN112063757B (zh) | 一种用于检测非洲猪瘟病毒的引物、试剂盒及其应用 | |
| CN110387435A (zh) | 利用rpa技术检测寨卡病毒的方法及其专用成套试剂 | |
| CN114395643A (zh) | 非洲猪瘟病毒的双通道数字pcr检测试剂盒及方法 | |
| CN112195289A (zh) | 新型E型禽腺病毒Fiber荧光定量PCR检测试剂盒及其应用 | |
| CN114480737B (zh) | 一种FAdV-4 NP株特异性引物及其在重组酶介导等温核酸扩增检测中的应用 | |
| CN115852043B (zh) | 一种检测四种猫腹泻相关病毒的多重荧光pcr引物探针组、试剂盒及应用 | |
| CN113322350B (zh) | 一种同时检测猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型病毒的试剂盒及应用 | |
| CN113584231B (zh) | 鉴定i群禽腺病毒血清8型的方法 | |
| CN114457198B (zh) | 一种甲型流感病毒及多分型的检测试剂盒及检测方法 | |
| CN110964849B (zh) | 一种消除非洲猪瘟病毒检测假阳性的方法及检测非洲猪瘟病毒的试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20230428 |