HU226755B1 - Indolinone derivatives for the treatment of disease, use thereof, pharmaceutical compositions containing these compounds - Google Patents
Indolinone derivatives for the treatment of disease, use thereof, pharmaceutical compositions containing these compounds Download PDFInfo
- Publication number
- HU226755B1 HU226755B1 HU9701694A HUP9701694A HU226755B1 HU 226755 B1 HU226755 B1 HU 226755B1 HU 9701694 A HU9701694 A HU 9701694A HU P9701694 A HUP9701694 A HU P9701694A HU 226755 B1 HU226755 B1 HU 226755B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- indolinone
- methylene
- alkyl
- aryl
- group
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 173
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims description 52
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims description 20
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 14
- JYGFTBXVXVMTGB-UHFFFAOYSA-N indolin-2-one Chemical class C1=CC=C2NC(=O)CC2=C1 JYGFTBXVXVMTGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 27
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 142
- -1 2-sulfonylfuryl - Chemical class 0.000 claims description 66
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 52
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 52
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 49
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 46
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 34
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 32
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 31
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 claims description 27
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 26
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 25
- 229910004013 NO 2 Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 22
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 21
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 19
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 claims description 18
- 125000005248 alkyl aryloxy group Chemical group 0.000 claims description 17
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 17
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 17
- 125000004953 trihalomethyl group Chemical group 0.000 claims description 16
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims description 15
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 13
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 10
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 10
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 9
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 8
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 7
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000003584 mesangial cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 claims description 7
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 7
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 7
- 125000004502 1,2,3-oxadiazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000004511 1,2,3-thiadiazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000001399 1,2,3-triazolyl group Chemical group N1N=NC(=C1)* 0.000 claims description 6
- 125000004504 1,2,4-oxadiazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000004514 1,2,4-thiadiazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000004506 1,2,5-oxadiazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000001786 isothiazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000002971 oxazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 6
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000000335 thiazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000001376 1,2,4-triazolyl group Chemical group N1N=C(N=C1)* 0.000 claims description 5
- 125000004520 1,3,4-thiadiazolyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- SEZFNTZQMWJIAI-UHFFFAOYSA-N 3-(1H-pyrrol-2-ylmethylidene)-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=CC=CN1 SEZFNTZQMWJIAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- QMTIIBUDOBNABZ-UHFFFAOYSA-N 3-(thiophen-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=CC=CS1 QMTIIBUDOBNABZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- RSEXIUPHAVGKPO-UHFFFAOYSA-N 3-[(3,4-dimethyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound CC1=CNC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1C RSEXIUPHAVGKPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- WUWDLXZGHZSWQZ-UHFFFAOYSA-N 3-[(3,5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl)methylidene]-1H-indol-2-one Chemical compound N1C(C)=CC(C)=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O WUWDLXZGHZSWQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 5
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000004517 1,2,5-thiadiazolyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000001781 1,3,4-oxadiazolyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- MWBZWKJOGWKJIO-UHFFFAOYSA-N 3-[(3,5-dimethyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-5-nitro-1h-indol-2-one Chemical compound N1C(C)=CC(C)=C1C=C1C2=CC([N+]([O-])=O)=CC=C2NC1=O MWBZWKJOGWKJIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HKJUJLRPOAIDLV-UHFFFAOYSA-N 3-[(3-ethyl-4,5-dimethyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound CC1=C(C)NC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1CC HKJUJLRPOAIDLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XZLCDAKBNFQCMU-UHFFFAOYSA-N 3-[4-methyl-5-[(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-1h-pyrrol-3-yl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CNC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1C XZLCDAKBNFQCMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- YMPAGHKLHWGSGM-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-3-(1,3-thiazol-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2NC(=O)C1=CC1=NC=CS1 YMPAGHKLHWGSGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BKVUIEOPCYWYAT-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-3-[(5-methylthiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(C)=CC=C1C=C1C2=CC(Cl)=CC=C2NC1=O BKVUIEOPCYWYAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- MDHFNXSZSHUHCY-UHFFFAOYSA-N 6-(diethylamino)-3-(3h-1,2-thiazol-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C1=CN1CC=CS1 MDHFNXSZSHUHCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 claims description 4
- XLBQNZICMYZIQT-GHXNOFRVSA-N SU5614 Chemical compound N1C(C)=CC(C)=C1\C=C/1C2=CC(Cl)=CC=C2NC\1=O XLBQNZICMYZIQT-GHXNOFRVSA-N 0.000 claims description 4
- 125000005841 biaryl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 4
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 4
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 claims description 4
- FDJJGAYOTZAUHK-UHFFFAOYSA-N 3-(4-ethyl-3,5-dimethyl-1h-pyrrol-2-yl)-1,3-dihydroindol-2-one Chemical compound CCC1=C(C)NC(C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1C FDJJGAYOTZAUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WTSKCANGBVHQSV-UHFFFAOYSA-N 3-[(3-methyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound C1=CNC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1C WTSKCANGBVHQSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PLONGIHGLJAKNF-UHFFFAOYSA-N 3-[(3-methylthiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound C1=CSC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1C PLONGIHGLJAKNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QLHDFRHEOWTWQG-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-chloro-3,4-dimethyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound N1C(Cl)=C(C)C(C)=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O QLHDFRHEOWTWQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SLWNLXPWBFOSDW-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-methylthiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(C)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O SLWNLXPWBFOSDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- IHLFVHQYUBFKRU-UHFFFAOYSA-N 6-nitro-3-(1h-pyrrol-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC([N+](=O)[O-])=CC=C2C1=CC1=CC=CN1 IHLFVHQYUBFKRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GJEFYBYFHDVNIW-UHFFFAOYSA-N ethyl 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-1,3-dihydroindol-3-yl)-1h-pyrrole-3-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1=C(C)NC(C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1C GJEFYBYFHDVNIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- CNGIYKVXXNBDFW-UHFFFAOYSA-N methyl 3-[4-methyl-2-[(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-1h-pyrrol-3-yl]propanoate Chemical compound CC1=CNC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1CCC(=O)OC CNGIYKVXXNBDFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 claims description 2
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 2
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 claims description 2
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000022461 Glomerular disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000034841 Thrombotic Microangiopathies Diseases 0.000 claims 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 201000009925 nephrosclerosis Diseases 0.000 claims 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 claims 1
- 125000001113 thiadiazolyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 abstract description 15
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 abstract description 10
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 abstract description 8
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 abstract description 5
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 abstract description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 abstract description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 abstract description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 abstract description 2
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 abstract 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 240
- 238000000034 method Methods 0.000 description 181
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 122
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 92
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 88
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 74
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 62
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 61
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 60
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 59
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 47
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 44
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 44
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 41
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 41
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 41
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 41
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 41
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 38
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 38
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 37
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 37
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 37
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 37
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 35
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 32
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 30
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 30
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 28
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000463 material Substances 0.000 description 27
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 26
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 25
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 22
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 22
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 22
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 22
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 21
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 21
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 20
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 19
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 19
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 19
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 19
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 19
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- PCKPVGOLPKLUHR-UHFFFAOYSA-N OH-Indolxyl Natural products C1=CC=C2C(O)=CNC2=C1 PCKPVGOLPKLUHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 18
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 18
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 17
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 16
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 16
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 16
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 15
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 description 15
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 14
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 13
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 13
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 13
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 13
- 102000037979 non-receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 13
- 108091008046 non-receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 12
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 12
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 12
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 12
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000011161 development Methods 0.000 description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 11
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 11
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 11
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 10
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 10
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 10
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 10
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 10
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 10
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- 102000006747 Transforming Growth Factor alpha Human genes 0.000 description 9
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 9
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 8
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 8
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 8
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 8
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 8
- SXQCTESRRZBPHJ-UHFFFAOYSA-M lissamine rhodamine Chemical compound [Na+].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O SXQCTESRRZBPHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 8
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 7
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 7
- 239000002585 base Substances 0.000 description 7
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 7
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 7
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 7
- DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N phosphotyrosine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(OP(O)(O)=O)C=C1 DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000692455 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor beta Proteins 0.000 description 6
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 6
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 6
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 6
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 6
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 6
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 6
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 5
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 5
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 5
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 5
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 5
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 5
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 5
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 5
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 5
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 238000002701 cell growth assay Methods 0.000 description 5
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 5
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 5
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 5
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 5
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 5
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 5
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 5
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 5
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 5
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 5
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 5
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 5
- XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N phosphoryl trichloride Chemical compound ClP(Cl)(Cl)=O XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 5
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 5
- IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N trisodium vanadate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-][V]([O-])([O-])=O IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 5
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PGZGBDVILWVGSF-UHFFFAOYSA-N 3-(furan-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=CC=CO1 PGZGBDVILWVGSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PCDWFBFHIIKIPM-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole-2-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2N(CC)C(S(O)(=O)=O)SC2=C1 PCDWFBFHIIKIPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 4
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 4
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 4
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 4
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 4
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 4
- 102000014400 SH2 domains Human genes 0.000 description 4
- 108050003452 SH2 domains Proteins 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 4
- JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N benzonitrile Chemical compound N#CC1=CC=CC=C1 JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 4
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 4
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 4
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 4
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 4
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 4
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- YWGKOEQZKMSICW-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-4-methoxybenzaldehyde Chemical compound COC1=CC=C(C=O)C(Cl)=C1 YWGKOEQZKMSICW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 3
- 108010081589 Becaplermin Proteins 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 102000038455 IGF Type 1 Receptor Human genes 0.000 description 3
- 108010031794 IGF Type 1 Receptor Proteins 0.000 description 3
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 3
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 3
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 description 3
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 3
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- UAKWLVYMKBWHMX-RVDMUPIBSA-N (3e)-3-[[4-(dimethylamino)phenyl]methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\C=C\1C2=CC=CC=C2NC/1=O UAKWLVYMKBWHMX-RVDMUPIBSA-N 0.000 description 2
- SXJAAQOVTDUZPS-RAXLEYEMSA-N (3z)-3-benzylidene-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2\C1=C\C1=CC=CC=C1 SXJAAQOVTDUZPS-RAXLEYEMSA-N 0.000 description 2
- 125000004214 1-pyrrolidinyl group Chemical group [H]C1([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- HAIQQPXZQWDTKG-UHFFFAOYSA-N 3-(1,2-oxazol-3-ylmethylidene)-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC=1C=CON=1 HAIQQPXZQWDTKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEECDIPRACXFMN-UHFFFAOYSA-N 3-(1,2-oxazol-4-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC=1C=NOC=1 HEECDIPRACXFMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JIVFUZVQNPXLOX-UHFFFAOYSA-N 3-(1,2-oxazol-5-ylmethylidene)-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=CC=NO1 JIVFUZVQNPXLOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLMQUFCUMANLSG-UHFFFAOYSA-N 3-(1,2-thiazol-3-ylmethylidene)-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC=1C=CSN=1 NLMQUFCUMANLSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SXDNPNGCNBFDHP-UHFFFAOYSA-N 3-(1,2-thiazol-4-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC=1C=NSC=1 SXDNPNGCNBFDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XVKWAFNLZAWBGH-UHFFFAOYSA-N 3-(1,2-thiazol-5-ylmethylidene)-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=CC=NS1 XVKWAFNLZAWBGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FZNPHDINXDXTIY-UHFFFAOYSA-N 3-(1,3,4-thiadiazol-2-ylmethylidene)-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=NN=CS1 FZNPHDINXDXTIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- POMZSSDHWKFMMN-UHFFFAOYSA-N 3-(1,3-oxazol-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=NC=CO1 POMZSSDHWKFMMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCHBPWGRMRUFFA-UHFFFAOYSA-N 3-(1,3-oxazol-4-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=COC=N1 UCHBPWGRMRUFFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QYDURWADMDPDEX-UHFFFAOYSA-N 3-(1,3-oxazol-5-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=CN=CO1 QYDURWADMDPDEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDZGXEYBABCMOZ-UHFFFAOYSA-N 3-(1,3-thiazol-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=NC=CS1 ZDZGXEYBABCMOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FTEVUROINSMDTG-UHFFFAOYSA-N 3-(1,3-thiazol-4-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=CSC=N1 FTEVUROINSMDTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QJOQIQJMLGYULI-UHFFFAOYSA-N 3-(1,3-thiazol-5-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=CN=CS1 QJOQIQJMLGYULI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEEGZPWAAPPXRB-UHFFFAOYSA-N 3-(1H-imidazol-5-ylmethylidene)-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=CN=CN1 VEEGZPWAAPPXRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FTDQQAKBXJFUJU-UHFFFAOYSA-N 3-(1H-pyrazol-5-ylmethylidene)-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC=1C=CNN=1 FTDQQAKBXJFUJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVQCEOUTMUKWRM-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-imidazol-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=NC=CN1 OVQCEOUTMUKWRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCZLNHAZZFUWNS-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-imidazol-2-ylmethylidene)-5-nitro-1h-indol-2-one Chemical compound C12=CC([N+](=O)[O-])=CC=C2NC(=O)C1=CC1=NC=CN1 KCZLNHAZZFUWNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WBRPPHJZABKGEK-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-indol-3-ylmethylidene)-5-nitro-1h-indol-2-one Chemical compound C1=CC=C2C(C=C3C(=O)NC4=CC=C(C=C43)[N+](=O)[O-])=CNC2=C1 WBRPPHJZABKGEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QEXWFPCJKNJZMM-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-pyrazol-4-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC=1C=NNC=1 QEXWFPCJKNJZMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKWZMUPIAYAJFT-UHFFFAOYSA-N 3-(2H-triazol-4-ylmethylidene)-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=CNN=N1 OKWZMUPIAYAJFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YJIPMQPTUPEVAU-UHFFFAOYSA-N 3-(pyridin-4-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=CC=NC=C1 YJIPMQPTUPEVAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSUCIBGSTGQSRL-UHFFFAOYSA-N 3-[(1-methylpyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound CN1C=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O WSUCIBGSTGQSRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ACLDKHITJDWTEQ-UHFFFAOYSA-N 3-[(3,4-dibromo-5-methyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound BrC1=C(C)NC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1Br ACLDKHITJDWTEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYRBKABEACMFAW-UHFFFAOYSA-N 3-[(3,5-diiodo-4-methyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound CC1=C(I)NC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1I OYRBKABEACMFAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXOVJFPRSNHFTI-UHFFFAOYSA-N 3-[(3,5-dimethyl-4-prop-1-en-2-yl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound CC(=C)C1=C(C)NC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1C PXOVJFPRSNHFTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZGCKMTQNGWQKEN-UHFFFAOYSA-N 3-[(3-bromothiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound C1=CSC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1Br ZGCKMTQNGWQKEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BEFYIZAGJWHJAQ-UHFFFAOYSA-N 3-[(3-methyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-5-nitro-1h-indol-2-one Chemical compound C1=CNC(C=C2C3=CC(=CC=C3NC2=O)[N+]([O-])=O)=C1C BEFYIZAGJWHJAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QEFPJZAFYVTIDA-UHFFFAOYSA-N 3-[(3-methylthiophen-2-yl)methylidene]-5-nitro-1h-indol-2-one Chemical compound C1=CSC(C=C2C3=CC(=CC=C3NC2=O)[N+]([O-])=O)=C1C QEFPJZAFYVTIDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HFDLWXVSQUXMKZ-UHFFFAOYSA-N 3-[(3-phenyl-1,2,4-oxadiazol-5-yl)methylidene]-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC(ON=1)=NC=1C1=CC=CC=C1 HFDLWXVSQUXMKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FOCIUAMIIIGKCZ-UHFFFAOYSA-N 3-[(4,5-dimethylfuran-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound O1C(C)=C(C)C=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O FOCIUAMIIIGKCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONXUHKXDKGXHFK-UHFFFAOYSA-N 3-[(4-bromothiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound BrC1=CSC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1 ONXUHKXDKGXHFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GWLUGYITWVGWFU-UHFFFAOYSA-N 3-[(4-chloro-1H-pyrazol-5-yl)methylidene]-1H-indol-2-one Chemical compound ClC1=CNN=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O GWLUGYITWVGWFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CCFZIYLSHQCVQI-UHFFFAOYSA-N 3-[(4-ethyl-3,5-dimethyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound CCC1=C(C)NC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1C CCFZIYLSHQCVQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YDAYFPZUXNKISE-UHFFFAOYSA-N 3-[(4-phenyl-1,2,5-oxadiazol-3-yl)methylidene]-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC1=NON=C1C1=CC=CC=C1 YDAYFPZUXNKISE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RHCHDNMIDAELNI-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-bromofuran-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound O1C(Br)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O RHCHDNMIDAELNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBHNVADIVTWLTP-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-bromothiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(Br)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O HBHNVADIVTWLTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGYIETVHMUYWPI-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-chlorothiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(Cl)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O QGYIETVHMUYWPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZBKOXVQRICMQP-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-ethyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound N1C(CC)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O WZBKOXVQRICMQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RDCSKHKMKUBCAJ-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-ethylfuran-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound O1C(CC)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O RDCSKHKMKUBCAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MFRZHGSWQHNIEA-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-ethylthiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(CC)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O MFRZHGSWQHNIEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KPMSVLVRQPORKA-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-ethylthiophen-2-yl)methylidene]-5-nitro-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(CC)=CC=C1C=C1C2=CC([N+]([O-])=O)=CC=C2NC1=O KPMSVLVRQPORKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- COCSKAQULXSRIB-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-iodofuran-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound O1C(I)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O COCSKAQULXSRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KTBDNVGJSDOOSU-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-methyl-1,3-thiazol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(C)=CN=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O KTBDNVGJSDOOSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEJPAMFKPUVLRH-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-methyl-1H-pyrazol-3-yl)methylidene]-1H-indol-2-one Chemical compound N1N=C(C)C=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O VEJPAMFKPUVLRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PHWIHJQQBCVMOT-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-methyl-1h-imidazol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound N1C(C)=CN=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O PHWIHJQQBCVMOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DWJWWZSAYOTJGO-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-methylfuran-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound O1C(C)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O DWJWWZSAYOTJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BGEDOSZJAVSZMU-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-methylsulfanylthiophen-2-yl)methylidene]-5-nitro-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(SC)=CC=C1C=C1C2=CC([N+]([O-])=O)=CC=C2NC1=O BGEDOSZJAVSZMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNNLJUREQVEMKC-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-methylthiophen-2-yl)methylidene]-5-nitro-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(C)=CC=C1C=C1C2=CC([N+]([O-])=O)=CC=C2NC1=O PNNLJUREQVEMKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RJQPVSIFAIXZFS-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-nitrofuran-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound O1C([N+](=O)[O-])=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O RJQPVSIFAIXZFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUAHMFNEVSFPBU-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-nitrothiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound S1C([N+](=O)[O-])=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O AUAHMFNEVSFPBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OENIZUPZOVBHAU-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-phenyl-1,2,4-oxadiazol-3-yl)methylidene]-1H-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2C1=CC(N=1)=NOC=1C1=CC=CC=C1 OENIZUPZOVBHAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XVYOODYJHSTSRT-UHFFFAOYSA-N 3-[[1-(3,5-dichlorophenyl)pyrrol-2-yl]methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC(N2C(=CC=C2)C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1 XVYOODYJHSTSRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WUHSVKBOFOFECX-UHFFFAOYSA-N 3-[[4-bromo-2-[(4-chlorophenyl)methyl]pyrazol-3-yl]methylidene]-1H-indol-2-one Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1CN1C(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C(Br)C=N1 WUHSVKBOFOFECX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XFQVUKBUIOALCV-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-3-methyl-5-[(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-1h-pyrrole-2-carboxylic acid Chemical compound CC1=C(C(O)=O)NC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1CC XFQVUKBUIOALCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FOAQOAXQMISINY-UHFFFAOYSA-N 4-morpholin-4-ylbenzaldehyde Chemical compound C1=CC(C=O)=CC=C1N1CCOCC1 FOAQOAXQMISINY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ILJVPSVCFVQUAD-UHFFFAOYSA-N 4-piperidin-1-ylbenzaldehyde Chemical compound C1=CC(C=O)=CC=C1N1CCCCC1 ILJVPSVCFVQUAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PPSVYRKSANDLOY-UHFFFAOYSA-N 5-[(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]thiophene-2-carboxylic acid Chemical compound S1C(C(=O)O)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O PPSVYRKSANDLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OLWYMEPCEGWVNZ-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-3-(1h-imidazol-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2NC(=O)C1=CC1=NC=CN1 OLWYMEPCEGWVNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PPSIJEQYYHIPGX-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-3-(1h-indol-3-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound C1=CC=C2C(C=C3C(=O)NC4=CC=C(C=C43)Cl)=CNC2=C1 PPSIJEQYYHIPGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SYFAEBVHHBJQER-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-3-(1h-pyrrol-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2NC(=O)C1=CC1=CC=CN1 SYFAEBVHHBJQER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZYHHCVFJHNWKDY-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-3-(thiophen-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2NC(=O)C1=CC1=CC=CS1 ZYHHCVFJHNWKDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIZWIRTWKYRVII-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-3-[(3-methyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound C1=CNC(C=C2C3=CC(Cl)=CC=C3NC2=O)=C1C QIZWIRTWKYRVII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZKZHXQIVIEIAY-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-3-[(3-methylthiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound C1=CSC(C=C2C3=CC(Cl)=CC=C3NC2=O)=C1C WZKZHXQIVIEIAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KMAIYSRCBHKFGY-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-3-[(5-ethylthiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(CC)=CC=C1C=C1C2=CC(Cl)=CC=C2NC1=O KMAIYSRCBHKFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISBMDWPYHIUTGU-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-3-[(5-methylsulfanylthiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(SC)=CC=C1C=C1C2=CC(Cl)=CC=C2NC1=O ISBMDWPYHIUTGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFEUBHVBIVQGFC-UHFFFAOYSA-N 5-nitro-3-(thiophen-2-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound C12=CC([N+](=O)[O-])=CC=C2NC(=O)C1=CC1=CC=CS1 UFEUBHVBIVQGFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 2
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000010599 BrdU assay Methods 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 240000006497 Dianthus caryophyllus Species 0.000 description 2
- 235000009355 Dianthus caryophyllus Nutrition 0.000 description 2
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 101100268066 Mus musculus Zap70 gene Proteins 0.000 description 2
- VRWNPXGNLBHAGH-UHFFFAOYSA-N N1C(C=O)=C(C)C(C)=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O Chemical compound N1C(C=O)=C(C)C(C)=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O VRWNPXGNLBHAGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005682 Receptor kinases Proteins 0.000 description 2
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 2
- YEPFFJQULGXAAE-UHFFFAOYSA-N S(=O)(=O)=C1OC(=CC1)C=C1C(NC2=CC=CC=C12)=O Chemical compound S(=O)(=O)=C1OC(=CC1)C=C1C(NC2=CC=CC=C12)=O YEPFFJQULGXAAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 208000024330 bloating Diseases 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 2
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- FFHWGQQFANVOHV-UHFFFAOYSA-N dimethyldioxirane Chemical compound CC1(C)OO1 FFHWGQQFANVOHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- ODUUHSMGNAYWOM-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-methyl-5-[(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]furan-3-carboxylate Chemical compound O1C(C)=C(C(=O)OCC)C=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O ODUUHSMGNAYWOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFWLZNKEQZLJIO-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-acetyl-3-methyl-5-[(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-1h-pyrrole-2-carboxylate Chemical compound CC1=C(C(=O)OCC)NC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1C(C)=O UFWLZNKEQZLJIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MMDOYVVZUVZLHQ-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-methyl-1h-pyrrole-3-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1=CNC=C1C MMDOYVVZUVZLHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 102000043827 human Smooth muscle Human genes 0.000 description 2
- 108700038605 human Smooth muscle Proteins 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 2
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- LZTAFPUXTIMHDX-UHFFFAOYSA-N methyl 5-chloro-4-(2-methoxy-2-oxoethyl)-2-[(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-1h-pyrrole-3-carboxylate Chemical compound COC(=O)CC1=C(Cl)NC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1C(=O)OC LZTAFPUXTIMHDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- CQDAMYNQINDRQC-UHFFFAOYSA-N oxatriazole Chemical compound C1=NN=NO1 CQDAMYNQINDRQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 2
- DCWXELXMIBXGTH-QMMMGPOBSA-N phosphonotyrosine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(OP(O)(O)=O)C=C1 DCWXELXMIBXGTH-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 210000004694 pigment cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 2
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 2
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 2
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 2
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000338 sulforhodamine B assay Toxicity 0.000 description 2
- 238000003210 sulforhodamine B staining Methods 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 2
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000006459 vascular development Effects 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 2
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichloro-1,1,2,2-tetrafluoroethane Chemical compound FC(F)(Cl)C(F)(F)Cl DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LLSKXGRDUPMXLC-UHFFFAOYSA-N 1-phenylpiperidine Chemical compound C1CCCCN1C1=CC=CC=C1 LLSKXGRDUPMXLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYLXVQKVBXUGW-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethyl-1h-pyrrole Chemical compound CC=1C=CNC=1C OUYLXVQKVBXUGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRJDGBKOYYAJJF-UHFFFAOYSA-N 3,4-dimethyl-1h-pyrrole-2-carbaldehyde Chemical compound CC1=CNC(C=O)=C1C LRJDGBKOYYAJJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RDFZYUOHJBXMJA-UHFFFAOYSA-N 3,5-dimethyl-1h-pyrrole-2-carbaldehyde Chemical compound CC1=CC(C)=C(C=O)N1 RDFZYUOHJBXMJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYCSNJCJOVQGBC-UHFFFAOYSA-N 3-(1-cyclopropyl-2h-pyridin-4-yl)-1h-quinolin-2-one Chemical class O=C1NC2=CC=CC=C2C=C1C(C=C1)=CCN1C1CC1 RYCSNJCJOVQGBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MCUHODZCPHFFCE-UHFFFAOYSA-N 3-[(4,5-dimethyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound N1C(C)=C(C)C=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O MCUHODZCPHFFCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWXPHBALXZAFCS-UHFFFAOYSA-N 3-[(4-chloro-1-methylpyrazol-3-yl)methylidene]-1H-indol-2-one Chemical compound CN1C=C(Cl)C(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=N1 CWXPHBALXZAFCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMVNQDRMYNSLOK-UHFFFAOYSA-N 3-[(4-methylthiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound CC1=CSC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1 SMVNQDRMYNSLOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEISFUIEFYIRAS-UHFFFAOYSA-N 3-[(5-methylsulfanylthiophen-2-yl)methylidene]-1h-indol-2-one Chemical compound S1C(SC)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O FEISFUIEFYIRAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2-[(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound S1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C1=NN=C1SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBMRBLKBBVYQSD-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-1h-pyrrole-2-carbaldehyde Chemical compound CC=1C=CNC=1C=O WBMRBLKBBVYQSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSQKBHXYEKVKMN-UHFFFAOYSA-N 3-methylthiophene-2-carbaldehyde Chemical compound CC=1C=CSC=1C=O BSQKBHXYEKVKMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RLJBUQNWKLOTRV-UHFFFAOYSA-N 4-(4-formylphenyl)piperazine-1-carbaldehyde Chemical compound C1CN(C=O)CCN1C1=CC=C(C=O)C=C1 RLJBUQNWKLOTRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 4-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C1C(C(O)=O)N(C(=O)OC(C)(C)C)CC1NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVXCGIPRXBJIRK-UHFFFAOYSA-N 4-methylthiophene-2-carbaldehyde Chemical compound CC1=CSC(C=O)=C1 HVXCGIPRXBJIRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHQRDEDZJIFJAL-UHFFFAOYSA-N 4-phenylmorpholine Chemical compound C1COCCN1C1=CC=CC=C1 FHQRDEDZJIFJAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTTAIIUFVILNAC-UHFFFAOYSA-N 4-piperazin-1-ylbenzaldehyde Chemical compound C1=CC(C=O)=CC=C1N1CCNCC1 BTTAIIUFVILNAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NSPMIYGKQJPBQR-UHFFFAOYSA-N 4H-1,2,4-triazole Chemical compound C=1N=CNN=1 NSPMIYGKQJPBQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKXYTFTZODXDEF-UHFFFAOYSA-N 5-methylsulfanylthiophene-2-carbaldehyde Chemical compound CSC1=CC=C(C=O)S1 RKXYTFTZODXDEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102000007299 Amphiregulin Human genes 0.000 description 1
- 108010033760 Amphiregulin Proteins 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- OGBVRMYSNSKIEF-UHFFFAOYSA-N Benzylphosphonic acid Chemical class OP(O)(=O)CC1=CC=CC=C1 OGBVRMYSNSKIEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000056058 Betacellulin Human genes 0.000 description 1
- 101800001382 Betacellulin Proteins 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- JGLMVXWAHNTPRF-CMDGGOBGSA-N CCN1N=C(C)C=C1C(=O)NC1=NC2=CC(=CC(OC)=C2N1C\C=C\CN1C(NC(=O)C2=CC(C)=NN2CC)=NC2=CC(=CC(OCCCN3CCOCC3)=C12)C(N)=O)C(N)=O Chemical compound CCN1N=C(C)C=C1C(=O)NC1=NC2=CC(=CC(OC)=C2N1C\C=C\CN1C(NC(=O)C2=CC(C)=NN2CC)=NC2=CC(=CC(OCCCN3CCOCC3)=C12)C(N)=O)C(N)=O JGLMVXWAHNTPRF-CMDGGOBGSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F Chemical compound Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010063209 Chronic allograft nephropathy Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004338 Dichlorodifluoromethane Substances 0.000 description 1
- 101000827763 Drosophila melanogaster Fibroblast growth factor receptor homolog 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZFDIRQKJPRINOQ-HWKANZROSA-N Ethyl crotonate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\C ZFDIRQKJPRINOQ-HWKANZROSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 102100023593 Fibroblast growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710182386 Fibroblast growth factor receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100023600 Fibroblast growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710182389 Fibroblast growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100027842 Fibroblast growth factor receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710182396 Fibroblast growth factor receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100027844 Fibroblast growth factor receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000917134 Homo sapiens Fibroblast growth factor receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001005128 Homo sapiens LIM domain kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000221931 Hypomyces rosellus Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026023 LIM domain kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101000851196 Mus musculus Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- HSHXDCVZWHOWCS-UHFFFAOYSA-N N'-hexadecylthiophene-2-carbohydrazide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCNNC(=O)c1cccs1 HSHXDCVZWHOWCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000058 Neuregulin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000556 Neuregulin-1 Proteins 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000609499 Palicourea Species 0.000 description 1
- 102000001393 Platelet-Derived Growth Factor alpha Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010068588 Platelet-Derived Growth Factor alpha Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010051742 Platelet-Derived Growth Factor beta Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000018967 Platelet-Derived Growth Factor beta Receptor Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 1
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 101100496572 Rattus norvegicus C6 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000852966 Rattus norvegicus Interleukin-1 receptor-like 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 1
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 description 1
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102220497176 Small vasohibin-binding protein_T47D_mutation Human genes 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 206010047139 Vasoconstriction Diseases 0.000 description 1
- 238000005874 Vilsmeier-Haack formylation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N acetic acid trimethyl ester Natural products COC(C)=O KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 102000012740 beta Adrenergic Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010079452 beta Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004424 carbon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 210000003321 cartilage cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 108700010039 chimeric receptor Proteins 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 229940099112 cornstarch Drugs 0.000 description 1
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N dichlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Cl)Cl PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019404 dichlorodifluoromethane Nutrition 0.000 description 1
- 229940042935 dichlorodifluoromethane Drugs 0.000 description 1
- 229940087091 dichlorotetrafluoroethane Drugs 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012259 ether extract Substances 0.000 description 1
- AEOCXXJPGCBFJA-UHFFFAOYSA-N ethionamide Chemical compound CCC1=CC(C(N)=S)=CC=N1 AEOCXXJPGCBFJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMUJUSJUVIXDQC-UHFFFAOYSA-N ethyl 2,4-dimethyl-5-[(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-1h-pyrrole-3-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1=C(C)NC(C=C2C3=CC=CC=C3NC2=O)=C1C PMUJUSJUVIXDQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YXLGPOSFYVASRS-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-(2-ethoxy-2-oxoethyl)-3-(3-ethoxy-3-oxopropyl)-5-[(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-1h-pyrrole-2-carboxylate Chemical compound N1C(C(=O)OCC)=C(CCC(=O)OCC)C(CC(=O)OCC)=C1C=C1C2=CC=CC=C2NC1=O YXLGPOSFYVASRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GDISALBEIGGPER-UHFFFAOYSA-N ethyl 5-formyl-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1=C(C)NC(C=O)=C1C GDISALBEIGGPER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- NNYBQONXHNTVIJ-UHFFFAOYSA-N etodolac Chemical compound C1COC(CC)(CC(O)=O)C2=C1C(C=CC=C1CC)=C1N2 NNYBQONXHNTVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- RWTNPBWLLIMQHL-UHFFFAOYSA-N fexofenadine Chemical group C1=CC(C(C)(C(O)=O)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 RWTNPBWLLIMQHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 102000052178 fibroblast growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 108091071773 flk family Proteins 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003324 growth hormone secretagogue Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000005119 human aortic smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 108010042209 insulin receptor tyrosine kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 229960004184 ketamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 229940015418 ketaset Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000021 kinase assay Methods 0.000 description 1
- 239000004922 lacquer Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 229940063718 lodine Drugs 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 208000019420 lymphoid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000006679 metabolic signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 1
- 238000000424 optical density measurement Methods 0.000 description 1
- 239000008203 oral pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000033667 organ regeneration Effects 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003791 organic solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 208000002865 osteopetrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- YZTJYBJCZXZGCT-UHFFFAOYSA-N phenylpiperazine Chemical compound C1CNCCN1C1=CC=CC=C1 YZTJYBJCZXZGCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229940068886 polyethylene glycol 300 Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 229940116317 potato starch Drugs 0.000 description 1
- 229940069328 povidone Drugs 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000029983 protein stabilization Effects 0.000 description 1
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 description 1
- 125000003373 pyrazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940048084 pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- 125000002294 quinazolinyl group Chemical class N1=C(N=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229940100486 rice starch Drugs 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 150000003346 selenoethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 239000012439 solid excipient Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 125000005504 styryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000003419 tautomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000009772 tissue formation Effects 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- CFOAUYCPAUGDFF-UHFFFAOYSA-N tosmic Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)C[N+]#[C-])C=C1 CFOAUYCPAUGDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- ZFDIRQKJPRINOQ-UHFFFAOYSA-N transbutenic acid ethyl ester Natural products CCOC(=O)C=CC ZFDIRQKJPRINOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N trichlorofluoromethane Chemical compound FC(Cl)(Cl)Cl CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940029284 trichlorofluoromethane Drugs 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- SPOMEWBVWWDQBC-UHFFFAOYSA-K tripotassium;dihydrogen phosphate;hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].OP(O)([O-])=O.OP([O-])([O-])=O SPOMEWBVWWDQBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004862 vasculogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000025033 vasoconstriction Effects 0.000 description 1
- 230000000982 vasogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 229940100445 wheat starch Drugs 0.000 description 1
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910000166 zirconium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
- C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
- C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
- A61P5/08—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH for decreasing, blocking or antagonising the activity of the anterior pituitary hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/10—Drugs for disorders of the endocrine system of the posterior pituitary hormones, e.g. oxytocin, ADH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
- C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
- C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
- C07D209/32—Oxygen atoms
- C07D209/34—Oxygen atoms in position 2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
- C07D409/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
- C07D413/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
- C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
- C07D417/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Obesity (AREA)
- Neurology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
Description
Ez a beadvány a 08/485323 sorszámú, 1995. június 7-én iktatott amerikai szabadalmi alkalmazás folytatása, így az a hivatkozás révén teljes egészében a találmány részét képezi.
1. Bevezetés
A találmány olyan új vegyületekkel kapcsolatos, melyek képesek a tirozin-kináz jelátalakítás modulálására, szabályozására és/vagy gátlására. A találmány ezenkívül kapcsolatos olyan eljárásokkal is, melyek akár a receptorcsoportba, akár a nem receptor csoportba tartozó tirozin-kinázok szabályozására, modulálására vagy gátlására vonatkoznak, a szabályozatlan tirozin-kináz jelátalakítással kapcsolatos rendellenességek, így például a sejtburjánzásos és anyagcsere-rendellenességek megelőzése és/vagy kezelése céljából.
2. A találmány háttere
A protein-tirozin-kinázok (PTK-k) az olyan fehérjék egy nagy és szerteágazó osztályát foglalják magukban, melyek enzimatikus aktivitással rendelkeznek. A protein-tirozin-kinázok fontos szerepet játszanak a sejtek növekedésének és differenciálódásának irányításában (áttekintés céljából lásd: Schlesinger & Ullrich, 1992, Neuron 9: 383-391).
A receptor tirozin-kináz által közvetített jelátalakítást például egy specifikus növekedési faktorral (ligandummal) való extracelluláris kölcsönhatás indítja el, amit receptordimerizáció, az inherens protein-tirozin-kináz-aktivitás átmeneti stimulálása és foszforiláció követ. Ily módon kötőhelyek keletkeznek az intracelluláris jelátalakító molekulák számára, ami citoplazmikus jelzőmolekulák egy sorával való komplexképződéshez vezet, ami elősegíti a megfelelő sejtválaszt (például sejt osztódását, az extracelluláris mikrokörnyezetre tett metabolikus hatásokat). Lásd: Schlesinger & Ullrich,
1992, Neuron 9: 303-391.
A receptor tirozin-kinázokat illetőleg azt is kimutatták, hogy a tirozinfoszforilációs helyek nagy affinitású kötőhelyül szolgálnak a jelzőmolekulák SH2 (src homológia) doménjei számára. Fantl és munkatársai, 1992, Cell 69: 413-423; Songyang és munkatársai, 1994, Mól. Cell. Bioi. 14:2777-2785; Songyang és munkatársai, 1993, Cell 72: 767-778 és Koch és munkatársai, 1991, Science 252: 668-678. Több olyan intracelluláris szubsztrát proteint azonosítottak, melyek a receptor tirozin-kinázokhoz (RTK-k) kapcsolódnak. Ezek két fő csoportra oszthatók: (1) azon szubsztrátok, melyek katalitikus doménnal rendelkeznek; és (2) azon szubsztrátok, melyekből hiányzik az ilyen dómén, de amelyek adapterekként szolgálnak és katalitikusán aktív molekulákhoz kapcsolódnak. Songyang és munkatársai,
1993, Cell 72: 767-778. A receptorok vagy proteinek és a szubsztrátjaik SH2 doménjei közötti kölcsönhatások tulajdonságait a foszforilált tirozinreziduumokat azonnal körülvevő aminosavreziduumok határozzák meg. Az SH2 domének és az egyes receptorokon lévő foszfotirozinreziduumokat körülvevő aminosavszekvenciák közötti kötések közti különbségek összhangban vannak a szubsztrátjaik foszforilációs profiljai között megfigyelt különbségekkel. Songyang és munkatársai, 1993, Cell 72: 767-778. Ezek a megfigyelések azt sugallják, hogy az egyes receptor tirozin-kinázok funkcióját nemcsak expressziós formájuk és ligandumelérhetőségük határozza meg, hanem a bizonyos receptorok által aktivált jelátalakítási csatornák sora is. így a foszforiláció olyan fontos szabályozólépést jelent, ami meghatározza a specifikus növekedési faktor receptorok, valamint differenciálódási faktor receptorok által felfrissített jelátalakítási csatornák szelektivitását.
A protein-tirozin-kinázokban létrejövő rendellenes expresszióról vagy mutációkról kimutatták, hogy azok szabályozatlan sejtburjánzáshoz (például rosszindulatú tumornövekedéshez) vagy kulcsfontosságú fejlődési folyamatok defektusaihoz vezetnek. Ennek következtében az orvosi társadalom jelentős összegeket fordít a protein-tirozin-kináz család tagjainak specifikus biológiai szerepének megismerésének, a differenciálódási folyamatokban betöltött szerepük, a daganatképződésben és más betegségek kialakulásában betöltött szerepük és a ligandumstimulálás hatására aktivált jelátalakítási csatornáik alapjául szolgáló biokémiai mechanizmusaik megismerésére, valamint új gyógyszerek kifejlesztésére.
A tirozin-kináz lehet receptor típusú (extracelluláris, transzmembrán és intracelluláris doménekkel), vagy nem receptor típusú (mely teljesen intracelluláris).
A receptor tirozin-kinázok. A receptor tirozin-kinázok a transzmembrán receptorok egy változatos biológiai tulajdonságokkal rendelkező nagy családját tartalmazzák. A receptor tirozin-kinázok inherens funkciói a ligandum kötésekor aktiválódnak, ami a receptor és az összetett celluláris szubsztrátok foszforilációját, ezt követően pedig celluláris válaszreakciók sorát eredményezi. Ullrich és Schlessinger, 1990, Cell 61: 203-212.
Eddig legalább tizenkilenc (19) különböző receptor tirozin-kináz alcsaládot azonosítottak. Az egyik receptor tirozin-kináz alcsaládról, melyet HER alcsaládként jelölnek, úgy gondolják, hogy az tartalmazza az EGFR, a HER2, a HER3 és a HER4 alcsaládokat. A receptorok HER alcsaládjához tartozó ligandumok közé tartozik például az epiteliális növekedési faktor [EGF (epithelial growth factor)], a TGF-α, az amfiregulin, a ΗΒ-EGF, a betacellulin és a heregulin.
A receptor tirozin-kinázok egy másik családja, melyet inzulinalcsaládnak neveznek, az INS-R, az IGF-1R és az IR-R alcsaládokat tartalmazza. Egy harmadik család, a „PDGF” alcsalád a PDGF a- és β-receptorokat, a CSFIR-t, a c-kit-et és az FLK-ll-t tartalmazza. A receptor tirozin-kinázok egy másik alcsaládja, melyet FLK családként azonosítottak, ismereteink szerint a Kinase inser Domain-Receptor magzati máj kináz-1 -et (fetal liver kinase) (KDR/FLK—1), a magzati máj kináz 4-et (fetal liver 4) és az fms típusú tirozin-kináz 1-et (fit—1) tartalmazza. Eredetileg e receptorok mindegyikét a vérképző növekedési faktorok receptorainak gondolták. A receptor tirozin-kinázok két további alcsaládját FGF receptor családnak (FGFR1, FGFR2, FGFR3 és FGFR4), valamint Met alcsaládnak (c-met és Ron) nevezik.
HU 226 755 Β1
A PDGF és az FLK alcsaládok közötti hasonlóságok miatt e két alcsaláddal gyakran együtt foglalkoznak. Az ismert receptor tirozin-kináz alcsaládok leírása megtalálható Plowman és munkatársai cikkében [1994, DN&P 7 (6): 334-339], mely a hivatkozás révén a találmány részét képezi.
A nem receptor tirozin-kinázok. A nem receptor tirozin-kinázok olyan celluláris enzimekből állnak, melyekből hiányoznak az extracelluláris és a transzmembrán szekvenciák. Eddig tizenegy (11) alcsaládba (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes/Fps, Fák, Jak, Ack és LIMK) tartozó, több mint huszonnégy nem receptor tirozin-kinázt azonosítottak. Jelenleg a nem receptor tirozin-kinázok Ser alcsaládja tartalmazza a legtöbb protein-tirozin-kinázt; idetartozik például az Ser, a Yes, a Fyn, a Lyn, az Lek, a Blk, a Hck, az Fgr és az Yrk. Az enzimek Ser alcsaládja az onkogenezishez kapcsolódik. A nem receptor tirozin-kinázok részletesebb leírását Bólén cikke adja meg (1993, Oncogene 8: 2025-2031), mely a hivatkozás révén a találmány részét képezi.
A tirozin-kinázok közül, mind a receptor tirozin-kinázok, mind pedig a nem receptor tirozin-kinázok közül sokról kiderült, hogy kapcsolatos a celluláris jelcsatornákkal, ami celluláris jelvizsgálatokhoz vezetett, melyek során megjelölték azokat a csatornákat, melyek patogén állapotokhoz, így például rákhoz, pikkelysömörhöz és túlfokozott immunválasz-reakciókhoz vezetnek.
A protein-tirozin-kinázok modulálására szolgáló vegyületek kifejlesztése. A protein-tirozin-kinázoknak a sejtburjánzás kontrollálásában, szabályozásában és modulálásában, valamint a rendellenes sejtburjánzással kapcsolatos betegségekben és rendellenességekben gyanított fontosságának fényében nagy erőfeszítéseket tettek a receptor tirozin-kinázok és nem receptor tirozin-kinázok „inhibitorainak” azonosítására, többféle megközelítésből kiindulva, például mutáns ligandumok felhasználásával (4966849 számú amerikai szabadalmi leírás), oldható receptorok és antitestek felhasználásával (WO 94/10202 számú beadvány; Kendall & Thomas, 1994, Proc. Nat’l Acad. Sci. 90: 10705-09; Kim és munkatársai, 1993, Natúré 362: 841-844), RNS-ligandumok felhasználásával (Jelűnek és munkatársai, Biochemistry 33: 10450-56; Takano és munkatársai, 1993, Mól. Bio. Cell 4: 358A; Kinsella és munkatársai, 1992, Exp. Cell Rés. 199: 56-62; Wright és munkatársai, 1992, J. Cellular Phys. 152: 448-57) és tirozin-kináz-inhibitorok felhasználásával (WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808 és US 5330992 számú szabadalmi leírások, Mariani és munkatársai 1994, Proc. Am. Assoc. Cancer Rés. 35: 2268).
A közelmúltban több kísérletet tettek olyan kis molekulák beazonosítására, melyek tirozin-kináz-inhibitorokként viselkednek. Például a biszmonociklikus, a biciklikus és a heterociklusos arilvegyületeket (PCT WO 92/20642), a vinilén-aza-indol-származékokat (PCT WO 94/14808) és az 1-ciklopropil-4-piridilkinolonokat (5330992 számú amerikai szabadalmi leírás) írták le általánosan tirozin-kináz-inhibitorokként. A rák kezelésében alkalmazható, tirozin-kináz-inhibitorokként felhasználható vegyületekként írták le a sztirilvegyületeket (5217999 számú amerikai szabadalmi leírás), a sztiril-szubsztituált-piridil-vegyületeket (5302606 számú amerikai szabadalmi leírás), bizonyos kinazolinszármazékokat (0 566 266 A1 számú EP szabadalmi leírás), a szeleoindolokat és a szelenideket (PCT WO 94/03427), a triciklusos polihidroxilvegyületeket (PCT WO 92/21660) és a benzil-foszfonsav-vegyületeket (PCT WO 91/15495).
Ily módon kívánatos és a találmány tárgyát képezi az olyan, elegendően kis méretű vegyületek beazonosítása, melyek specifikusan gátolják a jelátalakítást a receptor tirozin-kinázok és a nem receptor tirozin-kinázok aktivitásának modulálásával, hogy szabályozzák és modulálják az abnormális és nem megfelelő sejtburjánzást.
3. A találmány összefoglalása
A találmány olyan szerves molekulákkal kapcsolatos, melyek képesek a tirozin-kináz jelátalakítás modulálására, szabályozására és/vagy gátlására. Az ilyen vegyületek hasznosak az olyan betegségek kezelésében, melyek a szabályozatlan tirozin-kináz jelátalakítással kapcsolatosak, így a sejtburjánzásos betegségek kezelésében, amilyen például a rák, az atheroszklerózis, az ízületi gyulladás vagy a resztenózis, valamint az olyan anyagcsere-betegségek kezelésében, mintamilyen például a cukorbaj.
A találmány tárgyát az (I) általános képletű vegyületek vagy azok gyógyászatilag elfogadható sói képezik, ahol
R-ι jelentése hidrogénatom;
R2 jelentése oxigénatom vagy kénatom;
R3 jelentése hidrogénatom;
R4, R5, R6 és R7 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkilcsoport, alkoxicsoport, arilcsoport, aril-oxi-csoport, alkarilcsoport, alkaril-oxi-csoport, halogénatom, trihalogén-metil-csoport, -S(O)R csoport, -SO2NRR’ csoport, -SO3R csoport, -SR csoport, -NO2 csoport, -NRR’ csoport, -OH csoport, -CN csoport, -C(O)R csoport, -OC(O)R csoport, -NHC-(O)R csoport, -(CH2)nCO2R csoport és -CONRR’ csoport;
A jelentése egy öttagú heteroarilgyűrű, amelyet a tiofenil-, pirrolil-, pirazolil-, 1,2,3-triazolil-, 1,2,4-triazolil-, oxazolil-, izoxazolil-, tiazolil-, izotiazolil-, 2-szulfonilfuril-, 4-alkil-furil-, 1,2,3-oxadiazolil-, 1,2,4-oxadiazolil-, 1,2,5-oxadiazolil-, 1,3,4-oxadiazolil-, 1,2,3,4-oxatriazoΙΪΙ-, 1,2,3,5-oxatriazolil-, 1,2,3-tiadiazolil-, 1,2,4-tiadiazoΙΪΙ-, 1,2,5-tiadiazolil-, 1,3,4-tiadiazolil-, 1,2,3,4-tiatriazolil-, 1,2,3,5-tiatriazolil- és tetrazolilcsoportot magában foglaló csoportból választjuk, melyek adott esetben egy vagy több pozícióban alkilcsoporttal, alkoxicsoporttal, arilcsoporttal, aril-oxi-csoporttal, alkarilcsoporttal, alkaril-oxi-csoporttal, halogénatommal, trihalogén-metilcsoporttal, -S(O)R csoporttal, -SO2NRR’ csoporttal, -SO3R csoporttal, -SR csoporttal, -NO2 csoporttal, -NRR’ csoporttal, -OH csoporttal, -CN csoporttal, -C(O)R csoporttal, -OC(O)R csoporttal, -NHC(O)R csoporttal, -(CH2)nCO2R csoporttal vagy -CONRR’ csoporttal vannak szubsztituálva;
HU 226 755 Β1 n értéke 0-3;
R jelentése hidrogénatom, alkilcsoport vagy arilcsoport és
R’ jelentése hidrogénatom, alkilcsoport vagy arilcsoport, ahol a fenti kifejezéseknél az alkilcsoport 1-12 szénatomot tartalmazó, egyenes vagy elágazó láncú vagy ciklusos lánccal rendelkező alifás szénhidrogéncsoport, amely adott esetben egy vagy több, az alábbi csoportból választott szubsztituenssel helyettesített: hidroxilcsoport, cianocsoport, =0, =S, NO2, halogénatom, -N(CH3)2, aminocsoport és -SH-csoport;
az arilcsoport jelentése egy olyan aromás csoport, amely legalább egy konjugált pi-elektronrendszerrel rendelkező gyűrűt tartalmaz, beleértve a karbociklusos aril-, a heterociklusos aril- és a biarilcsoportokat, és amely arilcsoport adott esetben egy vagy több, az alábbi csoportból választott szubsztituenssel helyettesített: halogénatom, trihalogén-metil-csoport, hidroxilcsoport, -SH, -OH, -NO2, -SR általános képletű csoport, ahol R jelentése alkilcsoport, arilcsoport vagy alkil-arilcsoport, cianocsoport, alkoxicsoport, alkilcsoport és aminocsoport;
az alkarilcsoport jelentése egy olyan alkilcsoport, amely kovalensen kötődik egy arilcsoporthoz; és az alkoxicsoport, az aril-oxi-csoport és az alkariloxi-csoport —Ο-alkil-, —O-aril- és -O-alkaril-csoportot jelent;
azzal a kikötéssel, hogy a vegyületek az alábbi vegyietektől eltérőek:
3-(pirrol-2-il-metilén)-2-indolinon;
3-(5-klór-3,4-dimetil-pirrol-2-il-metilén)-2-indolinon;
3-(3,5-dimetil-4-etil-pirrol-2-il)-2-indolinon;
3-(3,5-dimetil-4-etoxi-karbonil-pirrol-2-il)-2-indolinon;
2- [[[1 -etil-2,3-di hidro-2-oxo-3-(1 H-pirrol-2-il-metilén)-1H-indol-5-il]-oxi]-metil]-benzoesav;
3- (tién-2-il-metilén)-2-indolinon;
6-dietil-amino-3-[(izotiazol-2-il)-metilén]-2-indolinon;
5- klór-3-[(tiazol-2-il)-metilén]-2-indolinon; és
6- nitro-3-[(pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon.
A találmány további tárgya olyan gyógyszerkészítmények megadása, melyek a fentebb leírt, I általános képlettel jellemezhető vegyületek gyógyszerészeti szempontból hatékony mennyiségét tartalmazzák egy gyógyszerészeti szempontból elfogadható hordozó vagy oldószer mellett. Az ilyen gyógyszerkészítmények legjobb tudomásunk szerint modulálják a tirozin-kináz általi jelátalakítást, akár a katalitikus aktivitás gátlásával, az ATP felé mutatott affinitás gátlásával, vagy egy szubsztráttal való kölcsönhatásra vonatkozó képesség gátlásával.
Részletesebben, a találmány készítményei felhasználhatók olyan eljárásokban, melyek olyan betegségek kezelésére vonatkoznak, mint amilyen például a sejtburjánzás, a fibrotikus vagy anyagcsere-rendellenességek, így például a rák, a rostos elfajulás (fibrózis), a pikkelysömör, az atheroszklerózis, az ízületi gyulladás, valamint más, a rendellenes érfejlődéssel és/vagy érképződéssel kapcsolatos betegségek, mint amilyen például a diabetikus recehártya-betegség.
Szintén a találmány tárgyát képezi az (I) általános képletű vegyületek alkalmazása a tirozin-kináz jelátalakítással kapcsolatos rendellenességek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmények előállítására.
4. A találmány részletes leírása
4.1. Definíciók
A „gyógyszerészeti szempontból elfogadható sók” kifejezés olyan sókra utal, melyek megtartják a megfelelő szabad bázis biológiai hatékonyságát és tulajdonságait, és amelyeket olyan szervetlen savakkal való reakció útján kapunk meg, mint amilyen például a sósav, hidrobrómsav, a kénsav, a salétromsav, a foszforsav, a metánszulfonsav, az etánszulfonsav, a p-toluénszulfonsav, a szalicilsav, valamint más hasonló savak.
Az „alkilcsoport” kifejezés egyenes láncú, elágazásos vagy ciklikus, telített alifás szénhidrogéncsoportokra vonatkozik. Előnyösen az alkilcsoport 1-12 szénatomot tartalmaz. Még előnyösebben a kifejezés olyan kis szénatomszámú alkilcsoportokra utal, melyek
1-7 szénatomot, még előnyösebben pedig 1-4 szénatomot tartalmaznak. A jellegzetes alkilcsoportok közé tartozik például a metilcsoport, az etilcsoport, a propilcsoport, az izopropilcsoport, a butilcsoport, az izobutilcsoport, a tercier butilcsoport, a pentilcsoport, a hexilcsoport, valamint más hasonló csoportok. Az alkilcsoport adott esetben szubsztituálva lehet egy vagy több olyan szubsztituenssel, mely szubsztituensek lehetnek hidroxilcsoportok, cianocsoportok, alkoxicsoportok, =O-csoportok, =S-csoportok, NO2-csoportok, halogénatomok, N(CH3)2-csoportok, aminocsoportok vagy SH-csoportok.
Az „alkenilcsoport” kifejezés olyan egyenes láncú, elágazásos vagy ciklikus, telítetlen alifás szénhidrogéncsoportokra vonatkozik, melyek legalább egy szénszén kettős kötést tartalmaznak. Előnyösen az alkenilcsoport 1-12 szénatomot tartalmaz. Még előnyösebben a kifejezés olyan kis szénatomszámú alkenilcsoportokra utal, melyek 1-7 szénatomot, még előnyösebben pedig 1-4 szénatomot tartalmaznak. Az alkenilcsoport adott esetben szubsztituálva lehet egy vagy több olyan szubsztituenssel, mely szubsztituensek lehetnek hidroxilcsoportok, cianocsoportok, alkoxicsoportok, =O-csoportok, =S-csoportok, NO2-csoportok, halogénatomok, N(CH3)2-csoportok, aminocsoportok vagy SH-csoportok.
Az „alkinilcsoport” kifejezés olyan egyenes láncú, elágazásos vagy ciklikus, telítetlen alifás szénhidrogéncsoportokra vonatkozik, melyek legalább egy szénszén hármas kötést tartalmaznak. Előnyösen az alkinilcsoport 1-12 szénatomot tartalmaz. Még előnyösebben a kifejezés olyan kis szénatomszámú alkinilcsoportokra utal, melyek 1-7 szénatomot, még előnyösebben pedig 1-4 szénatomot tartalmaznak. Az alkinilcsoport adott esetben szubsztituálva lehet egy vagy több olyan szubsztituenssel, mely szubsztituensek lehetnek hidroxilcsoportok, cianocsoportok, alkoxicsoportok,
HU 226 755 Β1 =O-csoportok, =S-csoportok, NO2-csoportok, halogénatomok, N(CH3)2-csoportok, aminocsoportok vagy SH-csoportok.
Az „alkoxicsoport” kifejezés ,,-O-alkil-csoportokat” jelöl.
Az „arilcsoport kifejezés olyan aromás csoportokat jelöl, melyek legalább egy olyan gyűrűt tartalmaznak, melyben konjugált π-elektronrendszer van. Az ilyen csoportok közé tartoznak a karbociklusos árucsoportok, a heterociklusos arilcsoportok és a biarilcsoportok. Az arilcsoport adott esetben szubsztituálva lehet egy vagy több olyan szubsztituenssel, mely szubsztituensek lehetnek halogénatomok, trihalometilcsoportok, hidroxilcsoportok, SH-csoportok, OH-csoportok, NO2csoportok, amincsoportok, tioétercsoportok, cianocsoportok, alkoxicsoportok, alkilcsoportok vagy aminocsoportok.
Az „alkarilcsoport” kifejezés olyan alkilcsoportokat jelöl, melyek kovalens kötéssel kapcsolódnak egy árucsoporthoz. Az alkilcsoport ebben az esetben előnyösen egy kis szénatomszámú alkilcsoport.
A „karboxiciklusos arilcsoport” kifejezés olyan árucsoportokat jelöl, melyekben a gyűrű atomjai szénatomok.
A „heterociklusos arilcsoport” kifejezés olyan árucsoportokat jelöl, melyekben a gyűrű atomjai között 1-3 heteroatom található, míg a gyűrű többi atomja szénatom. A lehetséges heteroatomok közé tartozik az oxigénatom, a kénatom és a nitrogénatom. így a heterociklusos arilcsoportok közé tartozik például a furanilcsoport, a tienilcsoport, a piridilcsoport, a pirrolilcsoport, az N-kis szénatomszámú alkil-pirrolo-csoport, a pirimidilcsoport, a pirazi ni lesöpört, az imidazolilcsoport, valamint más hasonló csoportok.
Az „amidcsoport” kifejezés -C(O)-NH-R jellegű csoportokat jelöl, ahol R jelentése alkilcsoport, arilcsoport, alkil-aril-csoport vagy hidrogénatom.
A „tioamidcsoport” kifejezés -C(S)-NH-R jellegű csoportokat jelöl, ahol R jelentése alkilcsoport, arilcsoport, alkil-aril-csoport vagy hidrogénatom.
Az „amincsoport” kifejezés -N(R’)R” jellegű csoportokat jelöl, ahol R’ és R” jelentése egymástól függetlenül alkilcsoport, arilcsoport vagy alkil-aril-csoport.
A „tioéter” kifejezés -S-R jellegű csoportokat jelöl, ahol R jelentése alkilcsoport, arilcsoport vagy alkil-arilcsoport.
A „szulfonilcsoport” kifejezés S(O)2-R jellegű csoportokat jelöl, ahol R jelentése arilcsoport, C(CN)=Caril-csoport, CH2CN-csoport, alkil-aril-csoport, szulfonamidcsoport, NH-alkil-csoport, NH-alkil-aril-csoport vagy NH-aril-csoport.
4.2. A találmány
A találmány olyan vegyületekkel kapcsolatos, melyek képesek a tirozin-kináz jelátalakítás, részletesebben a receptor tirozin-kináz és a nem receptor tirozinkináz jelátalakítás szabályozására és/vagy modulálására.
A receptor tirozin-kináz által közvetített jelátalakítást például egy specifikus növekedési faktorral (ligandummal) való extracelluláris kölcsönhatás indítja el, amit receptordimerizáció, az inherens protein-tirozin-kináz-aktivitás átmeneti stimulálása és foszforiláció követ. Ily módon kötőhelyek keletkeznek az intracelluláris jelátalakító molekulák számára, ami citoplazmikus jelzőmolekulák egy sorával való komplexképzödéshez vezet, ami elősegíti a megfelelő sejtválaszt (például sejt osztódását, az extracelluláris mikrokörnyezetre tett metabolikus hatásokat). Lásd: Schlesinger & Ullrich, 1992, Neuron 9: 303-391.
Kimutatták, hogy a tirozin foszforilációs helyek nagy affinitású kötőhelyül szolgálnak a jelzőmolekulák SH2 (src homológia) doménjei számára. Fantl és munkatársai, 1992, Cell 69: 413—423; Songyang és munkatársai, 1994, Mól. Cell. Bioi. 14: 2777-2785; Songyang és munkatársai, 1993, Cell 72: 767-778 és Koch és munkatársai, 1991, Science 252: 668-678. Több olyan intracelluláris szubsztrát proteint azonosítottak, melyek a receptor tirozin-kinázokhoz (RTK-k) kapcsolódnak. Ezek két fő csoportra oszthatók: (1) azon szubsztrátok, melyek katalitikus doménnal rendelkeznek; és (2) azon szubsztrátok, melyekből hiányzik az ilyen dómén, de amelyek adapterekként szolgálnak és katalitikusán aktív molekulákhoz kapcsolódnak. Songyang és munkatársai, 1993, Cell 72: 767-778. A receptorok vagy proteinek és a szubsztrátjaik SH2 doménjei közötti kölcsönhatások tulajdonságait a foszforilált tirozinreziduumokat azonnal körülvevő aminosavreziduumok határozzák meg. Az SH2 domének és az egyes receptorokon lévő foszfotirozinreziduumokat körülvevő aminosavszekvenciák közötti kötések közti különbségek összhangban vannak a szubsztrátjaik foszforilációs profiljai között megfigyelt különbségekkel. Songyang és munkatársai, 1993, Cell 72: 767-778. Ezek a megfigyelések azt sugallják, hogy az egyes receptor tirozinkinázok funkcióját nemcsak expressziós formájuk és ligandumelérhetőségük határozza meg, hanem a bizonyos receptorok által aktivált jelátalakítási csatornák sora is. így a foszforiláció olyan fontos szabályozólépést jelent, ami meghatározza a specifikus növekedési faktor receptorok, valamint differenciálódási faktor receptorok által felfrissített jelátalakítási csatornák szelektivitását.
A tirozin-kináz jelátalakítás eredménye többek között a sejtburjánzás, a sejtdifferenciálódás és a sejtanyagcsere. Az abnormális sejtburjánzás rendellenességek és betegségek hosszú sorát idézheti elő, így például elősegítheti a kóros szövetképződést, mint amilyen például a karcinóma, a szarkóma, a leukémia, a glioblastoma, a vérérdaganat, a pikkelysömör, az arteriosderosis, az ízületi gyulladás és a diabetikus recehártya-betegség (vagy más, a szabályozatlan érképződéssel és/vagy érfejlődéssel kapcsolatos rendellenességek).
Ezért a találmány olyan vegyületekkel foglalkozik, melyek a receptor tirozin-kinázok és/vagy a nem receptor tirozin-kinázok enzimatikus aktivitására gyakorolt hatásuk révén, valamint az ilyen fehérjék által átalakított jelek megváltoztatásával szabályozzák, modulálják és/vagy gátolják a tirozin-kináz jelátalakítást. Részletesebben a találmány olyan vegyületekkel kapcsolatos,
HU 226 755 Β1 melyek szabályozzák, modulálják és/vagy gátolják a receptor tirozin-kinázok és/vagy a nem receptor tirozinkinázok által közvetített jelátalakítási csatornákat; a tömör tumor sok fajtájának a gyógyítására vonatkozó gyógyászati megközelítésként. Az itt megemlíthető betegségek közé tartozik, a rájuk való korlátozás nélkül a karcinóma, a szarkóma, a leukémia, a magvas vörösvérsejt-daganat, a glioblastoma, az agyhártyadaganat, az astrocytoma, a melanoma és az izomsejtdaganat. A tünetek közé tartoznak, a rájuk való korlátozás nélkül az agydaganatok, a hólyagdaganatok, gyomorrákok, a hasnyálmirigyrák, a petefészekrák, a vastagbélrák, a vérrákok, a tüdőrákok és a csontrákok.
4.3. A vegyületek
A találmány szerinti vegyületek az (I) általános képletű vegyületek vagy azok gyógyászatilag elfogadható sói, ahol
R1 jelentése hidrogénatom;
R2 jelentése oxigénatom vagy kénatom;
R3 jelentése hidrogénatom;
R4, R5, R6 és R7 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkilcsoport, alkoxicsoport, arilcsoport, aril-oxi-csoport, alkarilcsoport, alkaril-oxi-csoport, halogénatom, trihalogén-metil-csoport, -S(O)R csoport, -SO2NRR’ csoport, -SO3R csoport, -SR csoport, -NO2 csoport, -NRR’ csoport, -OH csoport, -CN csoport, -C(O)R csoport, -OC(O)R csoport, -NHC-(O)R csoport, -(CH2)nCO2R csoport és -CONRR’ csoport;
A jelentése egy öttagú heteroarilgyűrű, amelyet a tiofenil-, pirrolil-, pirazolil-, 1,2,3-triazolil-, 1,2,4-triazoΙΪΙ-, oxazolil-, izoxazolil-, tiazolil-, izotiazolil-, 2-szulfonilfuril-, 4-alkil-furil-, 1,2,3-oxadiazolil-, 1,2,4-oxadiazolil-, 1,2,5-oxadiazolil-, 1,3,4-oxadiazolil-, 1,2,3,4-oxatriazoΙΪΙ-, 1,2,3,5-oxatriazolil-, 1,2,3-tiadiazolil-, 1,2,4-tiadiazolil-, 1,2,5-tiadiazolil-, 1,3,4-tiadiazolil-, 1,2,3,4-tiatriazolil-, 1,2,3,5-tiatriazol i I- és tetrazolilcsoportot magában foglaló csoportból választjuk, melyek adott esetben egy vagy több pozícióban alkilcsoporttal, alkoxicsoporttal, árucsoporttal, aril-oxi-csoporttal, alkarilcsoporttal, alkaril-oxi-csoporttal, halogénatommal, trihalogén-metilcsoporttal, -S(O)R csoporttal, -SO2NRR’ csoporttal, -SO3R csoporttal, -SR csoporttal, -NO2 csoporttal, -NRR’ csoporttal, -OH csoporttal, -CN csoporttal, -C(O)R csoporttal, -OC(O)R csoporttal, -NHC(O)R csoporttal, -(CH2)nCO2R csoporttal vagy -CONRR’ csoporttal vannak szubsztituálva;
n értéke 0-3;
R jelentése hidrogénatom, alkilcsoport vagy arilcsoport és
R’ jelentése hidrogénatom, alkilcsoport vagy arilcsoport, ahol a fenti kifejezéseknél az alkilcsoport 1-12 szénatomot tartalmazó, egyenes vagy elágazó láncú vagy ciklusos lánccal rendelkező alifás szénhidrogéncsoport, amely adott esetben egy vagy több, az alábbi csoportból választott szubsztituenssel helyettesített: hidroxicsoport, cianocsoport, -0, -S, NO2, halogénatom, -N(CH3)2, aminocsoport és -SH-csoport;
az arilcsoport jelentése egy olyan aromás csoport, amely legalább egy konjugált pi-elektronrendszerrel rendelkező gyűrűt tartalmaz, beleértve a karbociklusos aril-, a heterociklusos aril- és a biarilcsoportokat, és amely arilcsoport adott esetben egy vagy több, az alábbi csoportból választott szubsztituenssel helyettesített: halogénatom, trihalogén-metil-csoport, hidroxilcsoport, -SH, -OH, -NO2, -SR általános képletű csoport, ahol R jelentése alkilcsoport, arilcsoport vagy alkil-arilcsoport, cianocsoport, alkoxicsoport, alkilcsoport és aminocsoport;
az alkarilcsoport jelentése egy olyan alkilcsoport, amely kovalensen kötődik egy árucsoporthoz; és az alkoxicsoport, az aril-oxi-csoport és az alkariloxi-csoport —Ο-alkil-, —O-aril- és -O-alkaril-csoportot jelent;
azzal a kikötéssel, hogy a vegyületek az alábbi vegyietektől eltérőek:
3-(pirrol-2-il-metilén)-2-indolinon;
3-(5-klór-3,4-dimetil-pirrol-2-il-metilén)-2-indolinon;
3-(3,5-dimetil-4-etil-pirrol-2-il)-2-indolinon;
3-(3,5-dimetil-4-etoxi-karbonil-pirrol-2-il)-2-indolinon;
2- [[[1 -etil-2,3-dihidro-2-oxo-3-( 1 H-pirrol-2-il-metilén)-1H-indol-5-il]-oxi]-metil]-benzoesav;
3- (tién-2-il-metilén)-2-indolinon;
6-dietil-amino-3-[(izotiazol-2-il)-metilén]-2-indolinon;
5- klór-3-[(tiazol-2-il)-metilén]-2-indolinon; és
6- nitro-3-[(pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon.
Előnyös találmány szerinti vegyület a 3-[(2,4-dimetil-pirrol-5-il)-metilén]-2-indolinon.
Az említett vegyületek mutathatják a tautoméria vagy a strukturális izoméria jelenségét. így például az itt leírt vegyületek fölvehetik a cisz- vagy a transz-konformációt az indolinon 3-szubsztituense és az indolinongyűrű közötti kettős kötésnél, vagy lehetnek a ciszés a transz-izomerek keverékei is. Mivel a leírásban szereplő formulák rajza csak egy lehetséges tautomer vagy strukturális izomer formációt reprezentálhat, azért világosan kell látni, hogy a találmány magában foglal minden olyan tautomer vagy strukturális izomer formát, valamint ilyenek keverékét, melyben megvan a képesség a tirozin-kináz jelátalakítás vagy a sejtburjánzás szabályozására, gátlására és/vagy modulálására; és így a találmány nem korlátozódik azon tautomer vagy strukturális izomer formációkra, melyeket a formulák megrajzolásánál alapul vettünk.
A fentebb leírt vegyületeken és azok gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóin túlmenően, ahol arra mód van, a találmány vonatkozik a vegyületek olyan szolvatált és nem szolvatált formáira is (például a hidratált formákra), melyekben megvan a képesség a sejtburjánzás szabályozására és/vagy modulálására.
Az itt leírt vegyületek minden olyan ismert módszerrel előállíthatok, mely módszerek alkalmazhatók más, kémiailag rokon vegyületek előállítására. Alkalmas eljárások bemutatása a példák között található meg. A szükséges kiindulási anyagok szokásos szerves kémiai eljárások felhasználásával állíthatók elő. Egy adott
HU 226 755 Β1 vegyület releváns aktivitása és a receptor tirozin-kinázok által közvetített jelátalakításra hatást gyakorló szerként való hatékonysága rendelkezésre álló eljárások felhasználásával határozható meg. Előnyösen a vegyületet egy sor vizsgálatnak vetjük alá, hogy meghatározzuk arra vonatkozó képességét, hogy modulálja, szabályozza és/vagy gátolja a sejtburjánzást. Ezek a vizsgálatok, a végrehajtásuk sorrendjében, biokémiai vizsgálatokból, sejtnövekedési vizsgálatokból és in vivő kísérletekből állnak.
4.4. Tünetek
Az itt leírt vegyületek hasznosak az olyan rendellenességek kezelésében, melyek a szabályozatlan tirozin-kináz jelátalakítással kapcsolatosak. Az ilyen rendellenességek közé tartoznak a sejtburjánzásos betegségek, a fibrotikus rendellenességek és az anyagcsere-rendellenességek.
Azok közé a sejtburjánzásos betegségek közé, melyek a találmány alapján kezelhetők vagy tovább vizsgálhatók, tartoznak a rákos megbetegedések, az erek burjánzásos rendellenességei, valamint a mezangiális sejtburjánzásos rendellenességek.
Az erek burjánzásos rendellenességei olyan angiogén és vaszkulogén rendellenességeket jelentenek, melyek általában az erek abnormális burjánzását eredményezik. Az erek képződése és terjeszkedése, vagy más néven a vaszkulogenezis és az angiogenezis, sok fiziológiai folyamatban játszanak fontos szerepet, így például az embrionális fejlődésben, a corpus luteum képződésben, a sebek gyógyulásában és a szervregenerálódásban. Ezenkívül kulcsfontosságú szerepet játszanak a rák kifejlődésében is. Az erek burjánzásos rendellenességeire ad további példát az ízületi gyulladás, ahol is új hajszálerek lepik el az ízületet és tönkreteszik a porcot; az olyan szembetegségek, mint amilyen például a diabetikus recehártya-betegség, ahol a retinában új hajszálerek lepik el az üvegtestet, és vérzésükkel vakságot okoznak. Ezzel szemben az erek összezsugorodásával, kontrakciójával vagy elzáródásával kapcsolatos rendellenességek, mint amilyen például a restenosis, szintén szóba jöhetnek.
A fibrotikus rendellenességek a sejtközi állomány abnormális képződését jelentik. A fibrotikus rendellenességekre ad példát a hepaticus cirrhosis és a mezangiális sejtburjánzásos rendellenességek. A hepaticus cirrhosist a sejtközi állomány alkotórészeinek elszaporodása jellemzi, ami a máj hegesedéséhez vezet. A hepaticus cirrhosis olyan betegségeket idézhet elő, mintamilyen például a máj cirrhosisos megbetegedése. A máj hegesedéséhez vezető megnövekedett sejtközi állomány eredménye lehet olyan vírusfertőzésnek is, mint amilyen például a hepatitis. Úgy tűnik, hogy a zsírsejtek fontos szerepet játszanak a hepaticus cirrhosisban. Az egyéb idetartozó fibrotikus rendellenességek közé tartozik az atheroszklerózis (lásd alább).
A mezangiális sejtburjánzásos rendellenességek olyan rendellenességeket jelentenek, melyek a mezangiális sejtek abnormális burjánzásából fakadnak. A mezagniális burjánzásos rendellenességek közé tartozik többféle humán vesebetegség, mint amilyen például a glomerulonephritis, a diabetikus vesebaj, a rosszindulatú vesezsugorodás, a trombózisos hajszálérbetegség tünetcsoport, a szervátültetéseknél megfigyelhető kilökődés és a glomerulopathiák. A mezangiális sejtburjánzás fenntartásáért a PDGF-R a felelős. Floege és munkatársai, 1993, Kidney International 43: 47S-54S.
A protein-tirozin-kinázok kapcsolatban vannak az ilyen sejtburjánzásos rendellenességekkel. így például a receptor tirozin-kináz család néhány tagja kapcsolatba hozható a rák kifejlődésével. E receptorok némelyike, így például az EGFR (Tűzi és munkatársai, 1991, Br. J. Cancer 63: 227-233; Trop és munkatársai, 1992, APMIS 100: 713-719), a HER2/neu (Slamon és munkatársai, 1989, Science 244: 707-712) és a PDGF-R (Kumabe és munkatársai, 1992, Oncogene 7: 627-633) sok tumorban túlzott mértékű és/vagy tartósan aktivált az autokrin hurkok által. Valójában a legelterjedtebb és legsúlyosabb rákok esetében ezeket a receptortúltengéseket (Akbasak és Suner-Akbasak és munkatársai, 1992, J. Neurol. Sci. 111: 119-133; Dickson és munkatársai, 1992, Cancer Treatment Rés. 61: 249-273; Köre és munkatársai, 1992, J. Clin. Invest. 90: 1352-1360) és autokrin hurkokat (Lee és Dongohue, 1992, J. Cell. Bioi. 118: 1057-1070; Köre és munkatársai, mint fentebb, Akbasak és Suner-Akbasak és munkatársai, mint fentebb) ki is mutatták. így például az EGFR receptort kapcsolatba hozták a pikkelyes sejtkarcinómával, az astrocytomával, a glioblastomával, a fej- és nyakrákkal, a tüdőrákkal és a hólyagrákkal. A HER2-t kapcsolatba hozták az emlőrákkal, a petefészekrákkal, a gyomorrákkal, a tüdőrákkal, a hasnyálmirigyrákkal és a hólyagrákkal. A PDGF-R-t kapcsolatba hozták a glioblastomával, a tüdőrákkal, a petefészekrákkal, a pigmentsejtes rákkal és a prosztatarákkal. Az RTK c-met általában a májrákképződéssel, és így a májsejtrákkal kapcsolatos. Ezen túlmenően a c-met kapcsolatos a rosszindulatú daganatképződéssel. Részletesebben, az RTK c-met más rákos megbetegedések között kapcsolatos a vastagbélrákkal, a pajzsmirigyrákkal, a hasnyálmirigyrákkal, a gyomorrákkal, a leukémiával és a nyirokszövet-daganattal. Ezen túlmenően a c-met gén túltengését megfigyelték Hodgkins-kóros és Burkitts-kóros betegeknél, valamint nyirokszövetráksejtek esetében is.
Az IGF-IR, azonkívül, hogy kapcsolatban van a tápanyagellátással és a II típusú cukorbajjal, több rákfajtával is kapcsolatba hozható. így például az IGF-I autokrin növekedés stimulátorként működik több tumortípus esetében is, így például a humán mellrákkarcinóma sejtjei (Arteaga és munkatársai, 1989, J. Clin. Invest. 84: 1418-1423) és a kis tüdőtumorsejtek (Macauley és munkatársai, 1990, Cancer Rés. 50: 2511-2517) esetében. Ezen túlmenően úgy tűnik, hogy az IGF—I, mely fontos szerepet játszik az idegrendszer normális növekedésében és differenciálódásában, egyben a humán gliomák egy autokrin stimulátora is. Sandberg-Nordqvist és munkatársai, 1993, Cancer Rés. 53: 2475-2478. Az IGF-IR és annak ligandumainak fontosságát a sejtburjánzásban alátámasztja az a tény is, hogy sejttenyészetben sokfajta sejtet [a kötőszöveti sej7
HU 226 755 Β1 teket, a hámsejteket, a simaizomsejteket, a T-limfocitákat, a csontvelősejteket, a porcsejteket, a csontképző sejteket, a csontvelő törzssejtjeit (stem cells)] is növekedésre serkent az IGF—I. Goldring és Goldring, 1991, Eukaryotic Gene Expression 1: 301-326. Mostanában megjelent publikációk sorozatában Baserga még azt is leírja, hogy az IGF-I-R központi szerepet játszik a degeneráció mechanizmusában, és mint ilyen, előnyben részesített célpont lehet a humán rosszindulatú daganatok széles spektrumú terápiás kezelésében. Baserga, 1995, Cancer Rés. 55: 249-252; Baserga, 1994, Cell 79: 927-930; Coppola és munkatársai, 1994, Mól. Cell Bioi. 14:4588-4595.
Azonban a receptor tirozin-kinázok rendellenességei és a betegségek közötti kapcsolat nem korlátozódik kizárólag a rákra. így például a receptor tirozin-kinázok kapcsolatba hozhatók olyan anyagcsere-betegségekkel is, mint amilyen például a pikkelysömör, a mellitcukorbaj, a sebgyógyulás, a gyulladás, valamint a neurodegeneratív betegségek. Az EGF-R például kapcsolatos a corneális és dermális sebgyógyulással. Az Insulin-R és az IGF—1R defektusai jelennek meg a II típusú mellitcukorbajban. Az egyes receptor tirozin-kinázok és terápiás megjelenéseik közötti teljesebb megfeleltetés megtalálható Plowman és munkatársai cikkében, 1994, DN&P 7: 334-339.
Nemcsak a receptor típusú tirozin-kinázok, hanem sok celluláris tirozin-kináz (CTK), így például az src, abl, fps, yes, fyn, lyn, lek, blk, hek, fgr, yrk (összefoglalta Bólén és munkatársai, 1992, FASEB J. 6: 3403-3409) is kapcsolatos a sejtburjánzásos és metabolikus jelátalakítási csatornával; és így ezek is kapcsolatba hozhatók a találmány keretei közé tartozó tünetekkel. így például a mutáción átesett src-ről (v-sre) kimutatták, hogy az a csirkében egy onkoprotein (pp60v_src). Ezen túlmenően a celluláris homológja, a protoonkogén pp60c_src sok receptor onkogén jelét közvetíti. Az EGF-R vagy a HER2/neu tumorokban való túltengése például a pp60c_src lényeges aktiválásához vezet, ami jellemző a rosszindulatú sejtekre, de nem figyelhető meg a normális sejtek esetében. A másik oldalon, a c-scr expressziójára nézve fogyatékos egerek márványcsont-betegséges fenotípust mutatnak, azt jelezvén, hogy a c-scr kulcsfontosságú szerepet játszik az osteoclast funkciókban, és mint ilyen, kapcsolatban állhat ezzel kapcsolatos betegségekkel. Hasonlóan, a Zap 70 kapcsolatban van a T-sejt-jelzéssel.
Ezen túlmenően a találmány célját képezi azon celluláris tirozin-kinázok modulálására alkalmas vegyületek azonosítása, melyek a receptor tirozin-kináz blokkolók hatását növelik, vagy amelyek akár együttműködnek azokkal.
Végül mind a receptor tirozin-kinázok, mind a nem receptor tirozin-kinázok kapcsolatba hozhatók hiperimmun rendellenességekkel.
4.5. Gyógyszerkészítményekés azok beadási módjai
A fent leírt vegyületek embereknek beadhatók önmagukban vagy gyógyszerkészítmények formájában, megfelelő hordozókkal vagy oldószerekkel keverve. A vegyületek közvetlen felhasználásra való formulázásának technikái megtalálhatók a „Remington’s Pharmaceutical Sciences” című könyvben (Mack Publishing Co., Easton, PA, legutóbbi kiadás).
4.5.1. Az adminisztráció útjai
Az adminisztráció alkalmas útjai közé tartozik például az orális, a rektális, a nyálkahártyán keresztül történő vagy az intesztinális adminisztráció, a parenterális beadás, ideértve az intramuszkuláris, a szubkutáns és az intramedulláris injekciókat, valamint az intratekális, a közvetlen intraventrikuláris, az intravénás, az intraperitoneális, az intranazális és az intraokuláris injekciókat.
Másik lehetőségként a vegyületek alkalmazhatók lokálisan is, így például közvetlenül a tömör tumorba injekciózva azokat, gyakran egy raktározó vagy késleltetett felszívódású készítmény formájában.
Ezen túlmenően a gyógyszerek beadhatók célzott gyógyszer-felszabadító rendszerek formájában is, így például egy tumorspecifikus antitesttel borított liposzóma formájában. A liposzómák a tumort fogják megcélozni, és ott szelektíven fognak felszívódni.
4.5.2. Összetétel/előállítás
A találmány gyógyszerkészítményei önmagukban ismert eljárások felhasználásával állíthatók elő, így például hagyományos keverési, oldási, granulálási, drazsírozási, őrlési, emulgeálási, kapszulázási, felfogási vagy liofilezési eljárások felhasználásával.
így a találmánnyal összhangban felhasználható gyógyszerkészítmények hagyományos eljárások felhasználásával állíthatók elő, egy vagy több olyan fiziológiailag elfogadható hordozó felhasználásával, melyek olyan kötőanyagokat és segédanyagokat tartalmaznak, melyek elősegítik az aktív vegyületek feldolgozását gyógyszerészetileg alkalmazható készítményekké. A megfelelő formulázás az alkalmazás választott útjától függ.
Injekciók előállításához a találmány vegyületeit vizes oldatok formájában, előnyösen fiziológiailag összeférhető kiegyenlítő oldatok formájában használjuk fel, mint amilyen például a Hank-féle oldat, a Ringer-féle oldat vagy a fiziológiás sóoldat.
A nyálkahártyán keresztül való alkalmazáshoz az átjárandó gáthoz megfelelő penetránsokat használunk a készítményekben. Az ilyen penetránsok a szakemberek számára általában ismertek.
Orális alkalmazásra a vegyületeket úgy formulázhatjuk meg könnyen, hogy az aktív vegyületeket összekeverjük a szakemberek számára jól ismert gyógyszerészeti szempontból elfogadható hordozókkal. Az ilyen hordozók lehetővé teszik, hogy a találmány vegyületeiből tablettákat, drazsékat, kapszulákat, folyadékokat, zseléket, szirupokat, szuszpenziókat, valamint más hasonló készítményeket állítsunk elő, melyet a kezelésre szoruló beteg szájon át vehet be. Orális alkalmazásra való gyógyszerkészítményeket szilárd kötőanyagok felhasználásával állíthatunk elő tabletták vagy drazséma8
HU 226 755 Β1 gok formájában, adott esetben a keletkező elegy megőrlésével, a szemcsék elegyének feldolgozásával, és amennyiben szükséges, megfelelő segédanyagok hozzáadásával. A megfelelő kötőanyagok közé tartoznak különösen az olyan töltőanyagok, mint amilyenek például a cukrok, így például a laktóz, a szacharóz, a mannitol vagy a szorbitol; olyan cellulózkészítmények, mint amilyen például a kukoricakeményítő, a búzakeményítő, a rizskeményítő, a burgonyakeményítő, a zselatin, a tragakantmézga, a metil-cellulóz, a hidroxipropil-metil-cellulóz, a nátrium-karboxi-metil-cellulóz és/vagy a poli(vinil-pirrolidon) (PVP). Amennyiben az kívánatos, a készítményekhez dezintegrálószerek is adhatók, mint amilyen például a keresztkötéses poli(vinil-pirrolidon), az agar, az alginsav vagy annak egy sója, mint amilyen például a nátrium-alginát.
A drazsémagokat megfelelő bevonattal látjuk el. Erre a célra használhatók olyan telített cukoroldatok, melyek adott esetben tartalmazhatnak gumiarábikumot, talkot, poli(vinil-pirrolidon)-t, karbopolgélt, polietilénglikolt és/vagy titánium-dioxidot, lakkoldatokat és megfelelő szerves oldószereket vagy oldószerelegyeket. A tablettákhoz vagy a drazsék bevonatához festékanyagokat vagy pigmentanyagokat is hozzáadhatunk az azonosíthatóság kedvéért, vagy a különböző mennyiségű aktív vegyületet tartalmazó készítmények megjelölésére.
Az orálisan alkalmazható gyógyszerkészítmények közé tartoznak a zselatinból készült „push-fit” kapszulák, valamint a zselatinból és egy lágyítószerből, mint amilyen például a glicerol vagy a szorbitol, készült lágy, lezárt kapszulák. A push-fit kapszulák az aktív hatóanyagukat tartalmazhatják olyan töltőanyagokkal elkeverve, mint amilyen például a laktóz, olyan kötőanyagokkal elkeverve, mint amilyenek például a keményítők, és/vagy olyan lubrikánsokkal elkeverve, mint amilyen például a talk vagy a magnézium-sztearát; adott esetben további stabilizárószerekkel együtt. A lágy kapszulákban az aktív hatóanyag megfelelő folyadékokban, így például zsíros olajokban, folyékony paraffinban vagy folyékony polietilénglikolokban van feloldva vagy szuszpendálva. Ezenkívül ezek is tartalmazhatnak más stabilizálószereket. Az orális alkalmazásra szánt készítményeket az ilyen alkalmazáshoz megfelelő dózisokban kell előállítani.
Az orális (buccal) alkalmazáshoz a készítményeket hagyományos eljárások felhasználásával készült tabletták vagy pasztillák formájában állíthatjuk elő.
A találmánnyal összhangban álló inhalálásos adminisztrációra a vegyületeket kényelmesen aeroszolspray formájában hozhatjuk forgalomba, túlnyomásos palackokban vagy egy porlasztóban, megfelelő hajtógáz, például diklór-difluor-metán, triklór-fluor-metán, diklór-tetrafluor-etán, szén-dioxid, vagy más megfelelő gáz felhasználásával. Nyomás alatt lévő aeroszol esetében a dózisegységet egy olyan szelep segítségével állíthatjuk be, ami egy adott mennyiség kibocsátását biztosítja. Inhalálókészülékben vagy befúvókészülékben való alkalmazásra a például zselatinból készült kapszulákat és patronokat úgy állíthatjuk elő, hogy azok a vegyületnek és egy alkalmas poralapnak, például laktóznak vagy keményítőnek a porkeverékét tartalmazzák.
A vegyületekből készíthetők injekciózással, például egyszeri injekciózással vagy folyamatos infúzióval parenterálisan beadható készítmények is. Az injekciózásra szolgáló készítmények forgalomba hozhatók egységadagok formájában, például ampullák alakjában, vagy több adagot tartalmazó tartályokban, tartósítószer hozzáadása mellett. A készítmények előállíthatók szuszpenziók, oldatok vagy emulziók formájában, olajos vagy vizes hordozókban, és tartalmazhatnak olyan anyagokat, mint amilyenek például a szuszpendálószerek, a stabilizálószerek és/vagy a diszpergálószerek.
A parenterális alkalmazásra szolgáló gyógyszerkészítmények közé tartoznak az aktív vegyületek vízoldható formáinak vizes oldatai. Ezen túlmenően az aktív vegyületek szuszpenziói előállíthatók megfelelő olajos, beinjekciózásra alkalmas szuszpenziókként. A megfelelő lipofil oldószerek vagy hordozók közé tartoznak az olyan zsíros olajok, mint amilyen például a szezámolaj, az olyan zsírsav-észterek, mint amilyen például az etiloleát vagy a trigliceridek, vagy a liposzómák. A beinjekciózásra alkalmas vizes szuszpenziók olyan anyagokat tartalmazhatnak, melyek fokozzák a szuszpenzió viszkozitását, így például nátrium-karboxi-metil-cellulózt, szorbitolt vagy dextránt. Adott esetben a szuszpenzió tartalmazhat megfelelő stabilizálószereket vagy olyan szereket is, melyek megnövelik a vegyületek oldhatóságát, így lehetővé téve nagy koncentrációjú oldatok előállítását.
Másik lehetőségként az aktív hatóanyag lehet olyan por formájában, melyet felhasználás előtt elkeverünk egy megfelelő hordozóval, például steril, pirogénmentes vízzel.
A vegyületeket rektális készítmények formájában is előállíthatjuk, például kúpok vagy beöntések alakjában, melyek például olyan hagyományos kúpalapokat tartalmazhatnak, mint amilyen a kakaóvaj vagy más gliceridek.
Az eddig leírt készítményeken túlmenően a vegyületek előállíthatók raktározó- („depót”) készítményekként is. Az ilyen hosszú távon ható készítmények adminisztrálhatok beültetéssel (például szubkutáns vagy intramuszkuláris beültetéssel), vagy intramuszkuláris injekciózással. Ilyenkor a vegyületeket megfelelő polimer vagy hidrofób anyagokkal formulázzuk meg (például egy alkalmas olajban lévő emulzióként), ioncserélő gyantákkal szereljük ki, vagy olyan gyengén oldódó származékokként hozzuk forgalomba, mint amilyen például egy gyengén oldódó só.
A találmány hidrofób vegyületeihez alkalmas gyógyszerészeti hordozók olyan oldószerrendszerek, melyek benzil-alkoholt, egy nem poláros felületaktív anyagot, egy vízzel elegyedő szerves polimert és egy vizes fázist tartalmaznak. Az oldószerrendszer lehet például a VPD oldószerrendszer. A VPD egy olyan oldat, mely 3% (w/v%) benzil-alkoholt, 8% (w/v%) poliszorbát 80 nem poláros felületaktív anyagot és 65% (w/v%) polietilénglikol 300-at tartalmaz, és amelynek a
HU 226 755 Β1 végső térfogatát abszolút etanollal állítjuk be. A VPD oldószerrendszer (VPD:5W) 5%-os dextrózzal 1:1 arányban felhígított VPD-t tartalmaz egy vizes oldatban. Az oldószerrendszer hidrofób vegyületeket is felold úgy, hogy közben csak alacsony toxicitási szintet idéz elő a szervezeti adminisztráció esetén. Természetesen egy oldószerrendszer összetételének arányai jelentősen megváltoztathatók anélkül, hogy oldhatósági és toxicitási jellemzőit elrontanánk. Sőt, az oldószerrendszernek még az összetevőin is változtathatunk, így például a poliszorbát 80 helyett használhatunk más kis toxicitású nem poláros felületaktív anyagot; megváltoztathatjuk a polietilénglikol-frakció méretét; a polietilénglikol helyett használhatunk más biokompatibilis polimert, például poli(vinil-pirrolidon)-t; a dextróz helyett pedig használhatunk más cukrokat vagy poliszacharidokat.
A hidrofób gyógyszerészeti vegyületekből más készítményeket is készíthetünk. A hidrofób gyógyszerekhez való hordozókra ismert például szolgálnak a liposzómák és emulziók. Bizonyos szerves oldószerek, mint amilyen például a dimetil-szulfoxid, szintén alkalmazhatók, bár általában csak a nagyobb toxicitás árán. Ezen túlmenően a vegyületek egy késleltetett felszívódású rendszer felhasználásával is bejuttathatok a szervezetbe. Az ilyen rendszerekre ad példát az aktív hatóanyagot tartalmazó tömör hidrofób polimerek féligáteresztő állománya. Sok késleltetett felszívódású anyagot azonosítottak már, melyek a szakemberek számára jól ismertek. A késleltetett felszívódású kapszulák, kémiai természetüktől függően néhány héttől több mint 100 napig terjedő időtartam alatt szabadítják fel az aktív vegyületeket. A gyógyszer kémiai természetétől és biológiai stabilitásától függően a proteinstabilizáció további módszerei is alkalmazhatók.
A gyógyszerkészítmények ezenkívül tartalmazhatnak megfelelő szilárd vagy gélfázisú hordozókat vagy kötőanyagokat is. Az ilyen hordozókra és kötőanyagokra ad példát, a rájuk való korlátozás nélkül, a kalciumkarbonát, a kalcium-foszfát, sok cukorféle, a keményítők, a cellulózszármazékok, a zselatin és az olyan polimerek, mint amilyenek például a polietilénglikolok.
A találmány protein-tirozin-kinázokat moduláló vegyületei közül sok megadható gyógyszerészeti szempontból elfogadható ionpárral rendelkező sók formájában. Gyógyszerészeti szempontból elfogadható sók képezhetők sok savval, így például, a rájuk való korlátozás nélkül, sósavval, kénsavval, ecetsavval, tejsavval, borkősavval, almasavval, szukcinsavval stb. A savak általában jobban oldódnak vízben és más protikus oldószerekben, mint a megfelelő szabad bázisok.
4.5.3. A hatékony dózis
A találmány szerinti felhasználásra alkalmas gyógyszerkészítmények közé azok a készítmények tartoznak, melyek az aktív vegyületet a kívánt célnak megfelelő mennyiségben tartalmazzák. Pontosabban megfogalmazva a gyógyszerészeti szempontból hatékony mennyiség az aktív vegyület olyan mennyiségét jelenti, mely hatékony a kezelt betegség tüneteinek megelőzésére, enyhítésére vagy javítására, vagy a kezelt beteg túlélési idejének meghosszabbítására. A gyógyszerészeti szempontból hatékony mennyiség meghatározása nem haladja meg a szakemberek képességeit, különösen az itt megadott részletes leírás fényében.
A találmány módszereiben felhasznált bármely vegyületre vonatkozó gyógyszerészeti szempontból hatékony dózis sejttenyészet-vizsgálatok alapján becsülhető meg előzetesen. Például a dózisok állatkísérletekben való alkalmazásával megállapíthatunk egy olyan körülbelüli koncentrációsávot, ami magában foglalja a sejttenyészetek alapján meghatározott IC50-értéket (vagyis azt a koncentrációját a tesztvegyületnek, mely a protein-tirozin-kináz-aktivitás maximális gátlásának a felét éri el). Az ilyen információ felhasználható az ember esetében megfelelő dózis pontosabb meghatározására.
Az itt leírt vegyületek toxicitása és terápiás hatékonysága sejttenyészeteken vagy kísérleti állatokon elvégzett standard gyógyszerészeti eljárások felhasználásával állapítható meg. így határozható meg például az LD50-érték (a populáció 50%-ára halálos dózis) és az ED50-érték (a populáció 50%-ánál gyógyszerészeti szempontból hatékony dózis). A toxikus és a terápiás hatékonyság közötti dózisarány a terápiás index, ami az LD50-érték és az ED50-érték hányadosával fejezhető ki. Azok a vegyületek az előnyösek, melyek magas terápiás indexszel rendelkeznek. Ezekből a sejttenyészet-vizsgálatokból és állatkísérletekből származó adatok felhasználhatók az emberi felhasználásra vonatkozó dózishatárok megállapítására. Az ilyen vegyületek adagolása előnyösen abba az ED50-érték körüli sávba esik, ahol a toxicitás még kicsi, vagy egyáltalán nem jelentkezik. Az adagolás ezeken a határokon belül változhat, az alkalmazott készítmény fajtájától és az alkalmazás módjától függően. A legmegfelelőbb készítményt, az alkalmazás módját és adagolását az orvos választhatja meg a beteg állapotának ismeretében (lásd például Fingl és munkatársai, 1975, „The Pharmacological Basis of Therapeutics”, 1. fejezet 1. oldal).
A dózisszintek és dózissávok minden adott esetben külön-külön állíthatók be úgy, hogy az aktív részlet plazmaszintje olyan legyen, ami elegendő a kinázmoduláló hatások vagy a minimális hatékony koncentráció (MEC, minimál effective concentration) fenntartására. A minimális hatékony koncentráció minden vegyület esetében más és más lesz, de minden esetben megbecsülhető in vitro adatok alapján; például a kináz 50-90%-os gátlásának eléréséhez szükséges koncentráció alapján, melyet az itt leírt vizsgálatok felhasználásával kaphatunk meg. A minimális hatékony koncentráció eléréséhez szükséges dózis függeni fog az egyedi jellemzőktől és az alkalmazás módjától. HPLC vizsgálatok vagy biológiai tesztek mégis használhatók a plazmakoncentráció meghatározására.
A dózisintervallumok meghatározására a minimális hatékony koncentráció értéke is felhasználható. A vegyületek olyan diéta mellett alkalmazandók, ami a plazmaszintet a minimális hatékony koncentráció felett tart10
HU 226 755 Β1 ja az idő 10-90%-ában, előnyösebben az idő 30-90%ában, legelőnyösebben pedig 50-90%-ában.
Helyi alkalmazás vagy szelektív felszívódás esetén a gyógyszer hatékony helyi koncentrációja nem biztos, hogy összefüggésben van a plazmakoncentrációval.
Az alkalmazott készítmény mennyisége természetesen függeni fog a kezelés alanyától, annak testsúlyától, a betegség súlyosságától, az alkalmazás módjától, valamint a kezelést végző orvos ítéletétől.
4.5.4. Csomagolás
A készítmény, amennyiben az kívánatos, forgalomba hozható olyan csomagolásban vagy adagolókészülékben, mely egy vagy több, aktív hatóanyagot tartalmazó egységadagot tartalmazhat. A csomagolás állhat például fém- vagy műanyag fóliából, mint amilyen például a hólyagcsomagolás (blister pack). A csomaghoz vagy az adagolókészülékhez csatolhatók az alkalmazásra vonatkozó utasítások is. A találmány vegyületeit megfelelő gyógyszerészeti hordozóban tartalmazó készítmények szintén előállíthatok, megfelelő csomagolásba helyezhetők, és elláthatók olyan címkékkel, melyeken fel van tüntetve egy megjelölt betegség kezelése. A címkén szereplő betegségek közé tartozhat valamely tumor kezelése, az érképződés gátlása, a fibrózis, a cukorbaj, valamint más hasonló betegségek kezelése.
5. Példák: A vegyületek előállítása
A találmány vegyületei ismert eljárások felhasználásával állíthatók elő. A következő példák a találmány vegyületeinek előnyben részesített előállítási módszereit adják meg.
5.1. A 3-szubsztituált-2-indolinon-analogonok általános előállítása
A találmány 3-szubsztituált-2-indolinon-vegyületeinek az előállítására az alábbi módszereket alkalmazzuk.
5.1.1. A) eljárás
A megfelelő oxindol (2-indolinon) 1 ekv. mennyiségének, a megfelelő aldehid 1,2 ekv. mennyiségének és 0,1 ekv. mennyiségű piperidin etanolban (1-2 ml/1 mmol oxindol) lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 3-5 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy megkapjuk a célvegyületet.
5.1.2. B) eljárás
A megfelelő aldehidek Vilsmeier-reakcióval történő előállítása
1,2 ekv. W,/V-dimetil-formamid 1,2-diklór-etánban (2,0 ml/1,0 mmol kiindulási anyag) lévő oldatához cseppenként hozzáadunk 1,2 ekv. foszfor(V)-oxi-kloridot 0 °C hőmérsékleten. Ezután az alkalmazott jégfürdőt eltávolítjuk, és a reakcióelegyet további 30 percen keresztül keverjük. Ezután az így keletkező oldathoz részletenként hozzáadjuk a kiindulási anyag 1,0 ekv. mennyiségét, és a reakcióelegyet 50-70 °C hőmérsékleten 5-48 órán keresztül keverjük. Ezután a reakcióelegyet 1 N jéghideg nátrium-hidroxid-oldatra öntjük (pH=9 keverés után), és az így keletkező elegyet szobahőmérsékleten 1 órán keresztül keverjük. A szerves fázist elválasztjuk, a vizes réteget pedig etil-acetáttal extraháljuk. Az összeöntött szerves fázisokat a 7-es pH eléréséig mossuk sóoldattal, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és párologtatjuk. A visszamaradó anyagot szilikagél oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként etil-acetát és hexán elegyéből álló oldatot használva, hogy megkapjuk a címvegyületet.
A 3-szubsztituált-2-indolinon-analogonok előállítása
A megfelelő oxindol (2-indolinon) 1 ekv. mennyiségének, a megfelelő aldehid 1,2 ekv. mennyiségének és 0,1 ekv. mennyiségű piperidin etanolban (1-2 ml/1 mmol oxindol) lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 3-5 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy megkapjuk a célvegyületet.
5.2. A 3-benzilidén-2-indolinon előállítása
A 3-benzilidén-2-indolinon előállítására vonatkozó előnyben részesített eljárás a következő: 2,0 ml metanolban lévő 137,0 mg oxindol oldatához hozzáadunk
123,2 μΙ benzaldehidet és 40 μΙ piperidint. A reakcióelegyet 3 órán keresztül visszafolyatjuk, majd az elegyet jeges vizes fürdőben lehűtjük. Az így keletkező csapadékot szűrjük, hideg metanollal mossuk, és egy sütőben 40 °C hőmérsékleten egy éjszakán keresztül szárítjuk. Ezt az eljárást alkalmazva hozzávetőlegesen 129,0 mg mennyiségben kapjuk meg a címvegyületet.
5.3. A 3-[(pirid-4-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(pirid-4-il)-metilén]-2-indolinon előállítására vonatkozó előnyben részesített eljárás a következő: 2,0 ml metanolban lévő 138,0 mg oxindol oldatához hozzáadunk 117,0 μΙ 4-piridil-karboxaldehidet és 40 μΙ piperidint. A reakcióelegyet 3 órán keresztül visszafolyatjuk, majd az elegyet jeges vizes fürdőben lehűtjük. Az így keletkező csapadékot szűrjük, hideg metanollal mossuk, és egy sütőben 40 °C hőmérsékleten egy éjszakán keresztül szárítjuk, hogy 134,5 mg mennyiségben megkapjuk a címvegyületet.
5.4. A 3-[4-(morfolin-4-il)-benzilidenil]-2-indolinon előállítása (B eljárás)
4-(Morfolin-4-il)-benzaldehid. 15 ml Ν,Ν-dimetilformamid 50 ml 1,2-diklór-etánban lévő oldatához cseppenként hozzáadunk 10 ml foszfor(V)-oxi-kloridot 0 °C hőmérsékleten. Ezután az alkalmazott jégfürdőt eltávolítjuk, és a reakcióelegyet további 30 percen keresztül keverjük. Az így keletkező oldathoz részletenként hozzáadunk 16,3 g 4-fenil-morfolint, és a reakcióelegyet 2 napon keresztül visszafolyatjuk. Az így keletkező reakcióelegyhez hozzáadunk 2,5 ml trietil-amint, és az elegyet 2 napon keresztül visszafolyatjuk. Ezután a reakcióelegyet 1 N jéghideg nátrium-hidroxid-oldatra öntjük (pH=9 keverés után), és az így keletkező ele11
HU 226 755 Β1 gyet szobahőmérsékleten 1 órán keresztül keverjük. A szerves fázist elválasztjuk, a vizes réteget pedig 2x20 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az összeöntött szerves fázisokat a 7-es pH eléréséig mossuk sóoldattal, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és párologtatjuk. A visszamaradó anyagot szilikagél oszlopon szeparáljuk, eluálószerként etil-acetát és hexán elegyéből álló oldatot használva, hogy 12,95 g (68%) mennyiségben megkapjuk a címvegyületet egy fehér szilárd anyag formájában.
A 3-[4-(morfolin-4-il)-benzilidenil]-2-indolinon. 6,66 g oxindol, 11,50 g 4-(morfolin-4-il)-benzaldehid és 5 ml piperidin 50 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 5 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy 15,0 g mennyiségben (98%) megkapjuk a címvegyületet egy sárga szilárd anyag formájában.
5.5. A 3-[4-(4-formil-piperazin-1-il)-benzilidenil]-2indolinon előállítása (B eljárás) 4-(4-Formil-piperazin-1-il)-benzaldehid. 2,3 ml (30 mmol) Ν,Ν-dimetil-formamid 10 ml 1,2-diklóretánban lévő oldatához cseppenként hozzáadunk 2,8 ml (30 mmol) foszfor(V)-oxi-kloridot 0 °C hőmérsékleten. Ezután az alkalmazott jégfürdőt eltávolítjuk, és a reakcióelegyet további 15 percen keresztül keverjük. Az így keletkező oldathoz részletenként hozzáadunk
3,2 ml (20 mmol) 1 -fenil-piperidint, és a reakcióelegyet egy éjszakán keresztül visszafolyatjuk. Ezután a reakcióelegyet 2 N jéghideg nátrium-hidroxid-oldatra öntjük, és az így keletkező elegyet szobahőmérsékleten 1 órán keresztül keverjük. A szerves fázist elválasztjuk, a vizes réteget pedig 2x20 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az összeöntött szerves fázisokat a 7-es pH eléréséig mossuk sóoldattal, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és párologtatjuk. A visszamaradó anyagot szilikagél oszlopon szeparáljuk, eluálószerként etil-acetátot és hexánt használva, hogy 1,5 g (40%) mennyiségben megkapjuk a címvegyületet egy fehér szilárd anyag formájában.
A 3-[4-(4-formil-piperazin-1-il)-benzilidenil]-2-indolinon. 133,15 mg oxindol, 228,3 mg 4-(piperazin-1-il)benzaldehid és 3 csepp piperidin 2 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 5 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy 199,5 mg mennyiségben (65%) megkapjuk a címvegyületet egy sárga szilárd anyag formájában.
5.6. A 3-[4-(4-piperidin-1-il)-benzilidenil]-2-indolinon előállítása (B eljárás)
4-(Piperidin-1 -il)-benzaldehid. 3,9 ml (30 mmol) Ν,Ν-dimetil-formamid 20 ml 1,2-diklór-etánban lévő oldatához cseppenként hozzáadunk 3 ml (3,9 mmol) foszfor(V)-oxi-kloridot 0 °C hőmérsékleten. Ezután az alkalmazott jégfürdőt eltávolítjuk, és a reakcióelegyet további 15 percen keresztül keverjük. Az így keletkező oldathoz részletenként hozzáadunk 16,0 g (10 mmol) 1 -fenil-piperazint, és a reakcióelegyet 50 °C hőmérsékleten 1 órán keresztül keverjük. Ezután a reakcióelegyet 1 N jéghideg nátrium-hidroxid-oldatra öntjük, és az így keletkező elegyet szobahőmérsékleten 1 órán keresztül keverjük. A szerves fázist elválasztjuk, a vizes réteget pedig 2x20 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az összeöntött szerves fázisokat a 7-es pH eléréséig mossuk sóoldattal, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és párologtatjuk. A visszamaradó anyagot szilikagél oszlopon szeparáljuk, eluálószerként etil-acetát és hexán elegyéből álló oldatot használva, hogy 9,0 g (41%) mennyiségben megkapjuk a címvegyületet egy világossárga szilárd anyag formájában.
A 3-[4-(piperidin-1-il)-benzilidenil]-2-indolinon. 134,0 mg oxindol, 226,8 mg 4-(piperidin-1-il)-benzaldehid és 3 csepp piperidin 2 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 5 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy 268,5 mg mennyiségben (88%) megkapjuk a címvegyületet egy sárga szilárd anyag formájában.
5.7. A 3-[2-klór-4-metoxi-benzilidenil]-2-indolinon előállítása
2- Klór-4-metoxi-benzaldehid. 10 ml Ν,Ν-dimetilformamidban lévő 1,0 g (6,4 mmol) 2-klór-4-hidroxibenzaldehid, 4,4 g (32 mmol) kálium-karbonát és 1,4 g (9,6 mmol) metil-jodid reakcióelegyét 70 °C hőmérsékleten 2 órán keresztül keverjük, majd jeges vízbe öntjük. Az így keletkező csapadékot szűrjük, vízzel mossuk és egy vákuumsütőben 40 °C hőmérsékleten szárítjuk egy éjszakán keresztül, hogy 750 mg (68%) mennyiségben megkapjuk a címvegyületet egy világos rózsaszín szilárd anyag formájában.
3- [2-Klór-4-metoxi-benzilidenil]-2-indolinon. 487,9 mg (3,7 mmol) oxindol, 750 mg (4,3 mmol) 2-klór-4-metoxi-benzaldehid és 4 csepp piperidin 5 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 5 órán keresztül hevítjük, majd szobahőmérsékletre hűtjük. Az így keletkező sárga csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk, és egy vákuumsütőben 40 °C hőmérsékleten szárítjuk egy éjszakán keresztül, hogy
680,2 mg mennyiségben (62%) megkapjuk a címvegyületet.
5.8. A 3-[(4-metil-tien-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
133,0 mg oxindol, 151,2 mg 4-metil-tiofén-2karboxaldehid és 3 csepp piperidin 3 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy 147,3 mg mennyiségben (61%) megkapjuk a címvegyületet egy sárga szilárd anyag formájában.
5.9. A 3-[(3-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
133,0 mg oxindol, 130,9 mg 3-metil-pirrol-2karboxaldehid és 3 csepp piperidin 2 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg eta12
HU 226 755 Β1 nollal mossuk és szárítjuk, hogy 150,9 mg mennyiségben (67%) megkapjuk a címvegyületet egy sárga szilárd anyag formájában.
5.10. A 3-[(3,4-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[(3,4-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont a J. Heterociclic Chem. 13: 1145-1147 (1976)-ban leírtak szerint állítjuk elő.
Etil-4-metil-pirrol-3-karboxilát. 11,86 g (0,1 mól) etilkrotonát és 19,50 g (0,1 mól) p-toluénszulfonil-metilizocianid-éter és dimetil-szulfoxid 2:1 arányú, 500 ml térfogatú elegyében lévő oldatát szobahőmérsékleten cseppenként hozzáadjuk 6,8 g nátrium-hidrid (60%-os ásványi olajos diszperzió, 0,17 mól) éterben lévő szuszpenziójához. A hozzáadás befejeztével a reakcióelegyet 30 percen keresztül keverjük, és felhígítjuk 400 ml vízzel. A vizes réteget 3*100 ml éterrel extraháljuk. Az összeöntött éterextraktumokat egy timföldoszlopon vezetjük át, eluálószerként diklór-metánt használva. A szerves oldószert elpárologtatjuk, és az így visszamaradó anyagot állás közben engedjük megszilárdulni. Ezt a szilárd anyagot hexánnal mossuk, és egy vákuumsütőben 40 °C hőmérsékleten szárítjuk egy éjszakán keresztül, hogy 12,38 g (80%) mennyiségben megkapjuk a címvegyületet.
3.4- Dimetil-pirrol előállítása. 23 g (80 mmoi) nátrium-dihidrobisz(2-metoxi-etoxi-aluminát) oldatához szobahőmérsékleten, nitrogénatmoszféra alatt cseppenként hozzáadjuk 5 g (34 mmoi) etil-4-metil-pirrol-3karboxilát 50 ml benzénben lévő oldatát. A reakcióelegyet 18 órán keresztül keverjük. A reakcióelegyhez hozzáadunk 100 ml vizet. A szerves fázist elválasztjuk, sóoldattal mossuk és vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk. Az oldószert eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot pedig desztilláljuk, hogy 1,2 g (44%) mennyiségben megkapjuk a címvegyület.
3.4- Dimetil-pirrol-2-karboxaldehid előállítása. 0,92 ml (12 mmoi) Ν,Ν-dimetil-formamid 10 ml 1,2-diklór-etánban lévő oldatához cseppenként hozzáadunk 1,0 ml (12 mmoi) foszfor(V)-oxi-kloridot 0 °C hőmérsékleten. Ezután az alkalmazott jégfürdőt eltávolítjuk, és a reakcióelegyet további 30 percen keresztül keverjük. Az így keletkező oldathoz részletenként hozzáadunk 960,0 mg (10 mmoi) 3,4-dimetil-pirrolt, és a reakcióelegyet 50 °C hőmérsékleten 5 órán keresztül keverjük. Ezután a reakcióelegyet 1 N jéghideg nátrium-hidroxidoldatba öntjük (pH=9 keverés után), és az így keletkező elegyet szobahőmérsékleten 1 órán keresztül keverjük. A szerves fázist elválasztjuk, a vizes réteget pedig etil-acetáttal extraháljuk. Az összeöntött szerves fázisokat a 7-es pH eléréséig mossuk sóoldattal, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és párologtatjuk. A visszamaradó anyagot szilikagél oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként etil-acetát és hexán elegyéből álló oldatot használva, hogy 610 mg (50%) mennyiségben megkapjuk a címvegyületet.
3-[(3,4-Dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon. 67,0 mg (0,5 mmoi) oxindol, 73,0 mg (0,6 mmoi) 3,4dimetil-pirrol-2-karboxaldehid és 2 csepp piperidin 2 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy 87,7 mg mennyiségben (37%) megkapjuk a címvegyületet egy sárga szilárd anyag formájában.
5.11. A 3-[(2,4-dimetil-3-etoxi-karbonil-pirrol-5-il)metilén]-2-indolinon előállítása
134,0 mg oxindol, 234,3 mg 4-etoxi-karbonil-3,5dimetil-pirrol-2-karboxaldehid és 3 csepp piperidin 3 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy
244.6 mg mennyiségben (79%) megkapjuk a címvegyületet egy sárga szilárd anyag formájában.
5.12. A 3-[(2,3-dimetil-pirrol-5-il)-metilén]-2indolinon előállítása
134,0 mg oxindol, 147,8 mg 3,5-dimetil-pirrol-2karboxaldehid és 3 csepp piperidin 2 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy 136,7 mg mennyiségben (57%) megkapjuk a címvegyületet egy sárga szilárd anyag formájában.
5.13. A 3-[(2-metil-merkapto-tien-5-il)-metilén]-2indolinon előállítása
134,0 mg oxindol, 189,9 mg 5-metil-merkaptotiofén-2-karboxaldehid és 3 csepp piperidin 2 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy
246.6 mg mennyiségben (90%) megkapjuk a címvegyületet egy narancssárga szilárd anyag formájában.
5.14. A 3-[(2-metil-tien-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
134,0 mg oxindol, 151,42 mg 5-metil-tiofén-pirrol-2karboxaldehid és 3 csepp piperidin 2 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy 237,8 mg mennyiségben (99%) megkapjuk a címvegyületet egy sárga szilárd anyag formájában.
5.15. A 3-[(3-metil-tien-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
134,0 mg oxindol, 151,4 mg 3-metil-tiofén-2karboxaldehid és 3 csepp piperidin 2 ml etanolban lévő reakcióelegyét 90 °C hőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. Hűtés után a csapadékot szűrjük, hideg etanollal mossuk és szárítjuk, hogy 157,8 mg mennyiségben (65%) megkapjuk a címvegyületet egy sárga szilárd anyag formájában.
5.16. A 3-(2,5-dimetoxi-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(2,5-dimetoxi-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
HU 226 755 Β1
5.17. A 3-(2,3-dimetoxi-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(2,3-dimetoxi-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.18. A 3-(3-bróm-6-metoxi-benzilidenil)-2indolinon előállítása
A 3-(3-bróm-6-metoxi-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.19. A 3-[4-(4-t-butil-karbonilpiperazin-1-il)-benzilidenil]-2-indolinon előállítása
A 3-[4-(4-t-butil-karbonil-piperazin-1 -il)-benzilidenil]-2-indolinont a B eljárás szerint állítjuk elő.
5.20. A 3-[(furan-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(furan-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.21. A 3-(4-acetamido-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(4-acetamido-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.22. A 3-(2-klór-4-hidroxi-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(2-klór-4-hidroxi-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.23. A 3-(4-bróm-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(4-bróm-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.24. A 3-(4-acetil-amino-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(4-acetil-amino-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.25. A 3-(2-metoxi-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(2-metoxi-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.26. A 3-(4-dimetil-amino-benzilidenil)-1-metil-2indolinon előállítása
A 3-(4-dimetil-amino-benzilidenil)-1 -metil-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.27. A 3-(4-dimetil-amino-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(4-dimetil-amino-benzilidenil)-2-indolinon a Maybridge Chemical Co. Ltd.-től szerezhető be.
5.28. A 3-(4-bróm-benzilidenil)-1-metil-2-indolinon előállítása
A 3-(4-bróm-benzilidenil)-1 -metil-2-indolinont az
A eljárás szerint állítjuk elő.
5.29. Az 5-klór-3-(4-dimetil-amino-benzilidenil)-2indolinon előállítása
Az 5-klór-3-(4-dimetil-amino-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.30. A 3-(4-bróm-benzilidenil)-5-klór-2-indolinon előállítása
A 3-(4-bróm-benzilidenil)-5-klór-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.31. A 3-(4-dietil-amino-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(4-dietil-amino-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.32. A 3-(4-di-n-butil-amino-benzilidenil)-2indolinon előállítása
A 3-(4-di-n-butil-amino-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.33. Az 1-metil-3-[4-(morfolin-4-il)-benzilidenil]-2indolinon előállítása
Az 1 -meti l-3-[4-( morfol i η-4-i I )-benzi I idén i l]-2-i ndol inont a B eljárás szerint állítjuk elő.
5.34. Az 5-klór-3-(4-(morfolin-4-il)-benzilidenil)-2indolinon előállítása
Az 5-klór-3-(4-(morfolin-4-il)-benzilidenil)-2-indolinont a B eljárás szerint állítjuk elő.
5.35. A 3-(3,4-diklór-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(3,4-diklór-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.36. A 3-(2-etoxi-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(2-etoxi-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.37. A 3-(4-fluor-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(4-fluor-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.38. A 3-[(tien-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(tien-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.39. A 3-(2-metoxi-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(2-metoxi-benzilidenil)-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.40. A 3-[2-[3,5-di(trifluor-metil)fenil]-furan-5-il]-etilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[-2[3,5-di(trifluor-metil)-fenil]-furan-5-il]-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
HU 226 755 Β1
5.41. A 2,6-di(dimetil-amino)-3,5di[(indolin-2-on-3-ilidenil)-metil]-fenil-cianid előállítása
A 2,6-di(dimetil-amino)-3,5-di[(indolin-2-on-3-ilidenil)-metil]-fenil-cianidot az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.42. A 3-[(3-(2-karboxi-etil)-4-metil-pirrol-5-il)metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(3-(2-karboxi-etil)-4-metil-pirrol-5-il)-metilén]-2indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.43. A 3-[(3,4-dibróm-5-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[(3,4-dibróm-5-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont a B eljárás szerint állítjuk elő.
5.44. A 3-[(3,4-dimetil-2-formil-pirrol-5-il)-metilénj2-indolinon előállítása
A 3-[(3,4-dimetil-2-formil-pirrol-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.45. A 3-{[4-(2-metoxi-karbonil-etil)-3-metil-pirrol5-il]-metilén}-2-indolinon előállítása
A 3-{[4-(2-metil-karbonil-etil)-2-metil-pirrol-5-il]-metilén}-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.46. A 3-[(2-jód-furan-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(2-jód-furan-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.47. A 3-[(3-etoxi-karbonil-2-metil-furan-5-il)metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(3-etoxi-karbonil-2-metil-furan-5-il)-metilén]-2indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.48. A 3-[(3-bróm-tien-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(3-bróm-tien-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.49. A 3-[(2-klór-tien-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(2-klór-tien-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.50. A 3-[(2,3-dimetil-furan-5-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[(2,3-dimetil-furan-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.51. A 3-[(5-nitro-tien-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(5-nitro-tien-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.52. A 3-[(2-karboxi-tien-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(2-karboxi-tien-5-il)-metilén]-2-indolinont az
A eljárás szerint állítjuk elő.
5.53. A 3-[(2-bróm-tien-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(2-bróm-tien-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.54. A 3-[(4-bróm-tien-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(4-bróm-tien-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.55. A 3-[(2-szulfonil-furan-5-il)metilén]-2-indolinon nátriumsójának az előállítása
A 3-[(szulfonil-furan-5-il)-metilén]-2-indolinon nátriumsóját az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.56. A 3-[(furan-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(furan-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.57. A 3-[(2-metil-furan-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(2-metil-furan-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.58. A 3-[(2-etil-furan-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(2-etil-furan-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.59. A 3-[(2-nitro-furan5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(2-nitro-furan-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.60. A 3-[(5-bróm-furan-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(5-bróm-furan-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.61. A 3-[(2-etil-tien-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(2-etil-tien-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.62. A 3-[(4,5-dimetil-3-etilpirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(4,5-dimetil-3-etil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.63. A 3-[(5-etoxi-karbonil-4etoxi-karbonil-etil-3-etoxi-karbonilmetil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(5-etoxi-karbonil-4-etoxi-karbonil-etil-3-etoxikarbonil-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
HU 226 755 Β1
5.64. A 3-[(5-karboxi-3-etil-4metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(5-karboxi-3-etil-4-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.65. A 3-[(3,5-dijód-4-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[(3,5-dijód-4-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.66. A 3-[(5-klór-3-metoxi-karbonil-4-metoxikarbonil-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(5-klór-3-metoxi-karbonil-4-metoxi-karbonilmetil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.67. A 3-[(3-acetil-5-etoxi-karbonil4-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(3-acetil-5-etoxi-karbonil-4-metil-pirrol-2-il)metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.68. A 3-[[1-(3,5-diklór-fenil)-pirrol-2-il]-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[[ 1 -(3,5-diklór-feniI)-pirrol-2-il]-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.69. A 3-[1-((4-klór-fenil)-pirrol-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[ 1 -((4-klór-feniI)-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.70. A 3-[((4-etoxi-karbonil-3-metil)-pirrol-2-il)metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[((4-etoxi-karbonil-3-metil)-pirrol-2-il)-metilén]2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.71. A 3-[(1-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(1-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.72. A 3-[(5-etoxi-karbonil-3-etoxi-karbonil-etil-4etoxi-karbonil-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(5-etoxi-karbonil-3-etoxi-karbonil-etil-4-etoxikarbonil-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.73. A 3-[4-(pirrolidin-1-il)-benzilidenil]-2-indolinon előállítása
A 3-[4-(pirrolidin-1 -il)-benzilidenil]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.74. A 3-[(5-metil-imidazol-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[(5-metil-imidazol-2-il)-metilén]-2-indolinont az
A eljárás szerint állítjuk elő.
5.75. A 3-[(5-metil-tiazol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(5-metil-tiazol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.76. A 3-[(3-metil-pirazol-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(3-metil-pirazol-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.77. A 3-[(imidazol-4-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(imidazol-4-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.78. A 3-[(4-klór-pirazol-3-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(4-klór-pirazol-3-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.79. A 3-[(4-bróm-1-(4-klór-benzil)-pirazol-5-il)metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(4-bróm-1 -(4-klór-benziI)-pirazol-5-iI)-metilénj2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.80. A 3-[(4-klór-1-metil-pirazol-3-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[(4-klőr-1 -méti l-pi razol-3-i I )-méti lén]-2-i ndol inont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.81. A 3-[(4-etil-3,5-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[(4-etil-3,5-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont a B eljárás szerint állítjuk elő.
5.82. A 3-[(5-etil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(5-etil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont a B eljárás szerint állítjuk elő.
5.83. A 3-[(3,5-dimetil-4-(propen2-il)-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(3,5-dimetil-4-(propen-2-il)-pirrol-2-il)-metilén]2-indolinont a B eljárás szerint állítjuk elő.
5.84. Az 5,6-dimetoxil-3-[2,3-dimetoxil-benzilidenil]2-indolinon előállítása
Az 5,6-dimetoxil-3-[2,3-dimetoxil-benzilidenil]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.85. A 3-[2,4,6-trimetoxi-benzilidenil]-2-indolinon előállítása
A 3-[2,4,6-trimetoxi-benzilidenil]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.86. Az 5-klór-3-[(pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
Az 5-klór-3-[(pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
HU 226 755 Β1
5.87. Az 5-klór-3-[(3-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
Az 5-klór-3-[(3-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.88. A 3-(4-izopropil-benzilidenil)-2-indolinon előállítása
A 3-(4-izopropil-benzilidenil)-2-indolinon beszerezhető a Maybridge Chemical Co. Ltd.-től.
5.89. Az 5-klór-3-[(3,5-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
Az 5-klór-3-[(3,5-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.90. A 3-[(pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon beszerezhető a Maybridge Chemical Co. Ltd.-től.
5.91. Az 5-klór-3-[(indol-3-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
Az 5-klór-3-[(indol-3-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.92. Az 5-klór-3-[(tien-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
Az 5-klór-3-[(tien-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.93. Az 5-klór-3-[(3-metil-tien-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
Az 5-klór-3-[(3-metil-tien-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.94. Az 5-klór-3-[(5-metil-tien-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
Az 5-klór-3-[(5-metil-tien-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.95. Az 5-klór-3-[(5-etil-tien-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
Az 5-klór-3-[(5-etil-tien-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.96. Az 5-klór-3-[(5-metilmerkapto-tien-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
Az 5-klór-3-[(5-metil-merkapto-tien-2-il)-metilén]-2indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.97. Az 5-klór-3-[(imidazol-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
Az 5-klór-3-[(imidazol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.98. A 3-[2,4-dimetoxi-6-metil-benzilidenil]-2indolinon előállítása
A 3-[2,4-dimetoxi-6-metil-benzilidenil]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.99. Az 3-nitro-3-[(3-pirrol-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
Az 5-nitro-3-[(3-pirro-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.100. A 3-[(3-metil-pirrol-2-il)-metilén]-5-nitro-2indolinon előállítása
A 3-[(3-metil-pirrol-2-il)-metilén]-5-nitro-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.101. A 3-[(3,5-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-5-nitro2-indolinon előállítása
A 3-[(3,5-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-5-nitro-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.102. A 3-[(indol-3-il)-metilén]-5-nitro-2-indolinon előállítása
A 3-[(indol-3-il)-metilén]-5-nitro-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.103. Az 5-nitro-3-[(tien-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
Az 5-nitro-3-[(tien-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.104. A 3-[(3-metil-tien-2-il)-metilén]-5-nitro-2indolinon előállítása
A 3-[(3-metil-tien-2-il)-metilén]-5-nitro-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.105. A 3-[(5-metil-tien-2-il)-metilén]-5-nitro-2indolinon előállítása
A 3-[(5-metil-tien-2-il)-metilén]-5-nitro-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.106. A 3-[(5-etil-tien-2-il)-metilén]-5-nitro-2indolinon előállítása
A 3-[(5-etil-tien-2-il)-metilén]-5-nitro-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.107. A 3-[(5-metil-merkaptotien-2-il)-metilén]-5-nitro-2-indolinon előállítása
A 3-[(5-metil-merkapto-tien-2-il)-metilén]-5-nitro-2indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.108. A 3-[(imidazol-2-il)-metilén]-5-nitro-2indolinon előállítása
A 3-[(imidazol-2-il)-metilén]-5-nitro-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.109. A 3-[(oxazol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(oxazol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.110. A 3-[(oxazol-4-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(oxazol-4-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
HU 226 755 Β1
5.111. A 3-[(oxazol-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(oxazol-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.112. A 3-[(tiazol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(tiazol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.113. A 3-[(tiazol-4-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(tiazol-4-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.114. A 3-[(tiazol-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(tiazol-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.115. A 3-[(imidazol-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(imidazol-2-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.116. A 3-[(pirazol-3-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(pirazol-3-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.117. A 3-[(pirazol-4-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(pirazol-4-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.118. A 3-[(izoxazol-3-2-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(izoxazol-3-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.119. A 3-[(izoxazol-4-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(izoxazol-4-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.120. A 3-[(izoxazol-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(izoxazol-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.121. A 3-[(izotiazol-3-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(izotiazol-3-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.122. A 3-[(izotiazol4-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(izotiazol-4-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.123. A 3-[(izotiazol-5-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[(izotiazol-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.124. A 3-[(1,2,3-triazol-4-il)-metilén]-2-indolinon előállítása
A 3-[( 1,2,3-triazol-4-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.125. A 3-[(1,3,4-tiadiazol-2-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[( 1,3,4-tiadiazol-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.126. A 3-[(5-fenil-1,2,4-oxadiazol-3-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[(5-feni 1-1,2,4-oxadiazol-3-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.127. A 3-[(3-fenil-1,2,4-oxadiazol-5-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[(3-feni 1-1,2,4-oxadiazol-5-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
5.128. A 3-[(3-fenil-1,2,5-oxadiazol-4-il)-metilén]-2indolinon előállítása
A 3-[(3-feni 1-1,2,5-oxadiazol-4-il)-metilén]-2-indolinont az A eljárás szerint állítjuk elő.
6. Példák: In vitro RTK vizsgálatok
A találmány különböző vegyületeinek az aktivitási szintjét és egy vagy több receptor tirozin-kinázra gyakorolt hatását a következő in vitro vizsgálatok felhasználásával állapíthatjuk meg. Ugyanezen irányelvek alapján bármely másik tirozin-kinázra is tervezhető hasonló vizsgálat, szakemberek számára jól ismert módszerek felhasználásával.
6.1. Enzimkötésű immunoszorbens vizsgálat (ELISA, Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
Az enzimkötésű immunoszorbens vizsgálatok (ELISA, Enzyme Linked Immunosorbent Assay) felhasználásával kimutatható és megmérhető a tirozin-kináz-aktivitás jelenléte. Az ELISA ismert eljárások szerint végezhető el, melyek leírása megtalálható például: Voller és munkatársai, 1980, „Enzyme-Linked Immunosorbent Assay”, a Manual of Clinical Immunology című könyvben, 2. kiadás, kiadta Rose és Friedman, 359-371. oldal, Am. Soc. of Microbiology, Washington, D.C.
A leírt eljárás adaptálható egy specifikus receptor tirozin-kináz aktivitásának a meghatározására is. Specifikus receptor tirozin-kinázokra vonatkozó ELISA kísérletek elvégzésének előnyben részesített módjait alább adjuk meg. Ezeknek az eljárásoknak az adaptálása egy vegyületnek a receptor tirozin-kináz család más tagjaival vagy nem receptor tirozin-kinázokkal szemben mutatott aktivitásának a meghatározására szakemberek számára nem okozhat nehézséget.
HU 226 755 Β1
6.1.1. FLK-1 ELISA
Az FLK-1 receptor kináz aktivitásának, pontosabban az FLK-1 receptoron megfigyelhető protein-tirozin-kináz-aktivitás gátlásának vagy aktiválásának a mérésére egy ELISA vizsgálatot végzünk el. Még pontosabban a következő vizsgálatot végezzük el FLK—1/NIH3T3 sejtekben lévő FLK-1 receptor kináz aktivitásának a kimérésére.
Anyagok és módszerek
Anyagok. A következő reagenseket és anyagokat használjuk fel:
a) 96 üregű Corning típusú ELISA lemezek (Corning katalógusszám: 25805-96);
b) Cappel gyártmányú kecske antinyúl IgG (katalógusszám: 55614);
c) PBS (Gibco katalógusszám: 450-1300EB);
d) TBSW-puffer [50 mM Tris (pH=7,2), 150 mM nátrium-klorid és 0,1% Tween 20];
e) etanol-amin-készlet [10%-os etanol-amin (pH=7,0), °C hőmérsékleten tárolva];
f) HNTG-puffer [20 mM HEPES-puffer (pH=7,5),
150 mM nátrium-klorid, 0,2% Triton X-100 és 10% glicerol];
g) EDTA [0,5 M (pH=7,0), egy 100X készletként];
h) nátrium-orto-vanadát (0,5 M, egy 100X készletként);
i) nátrium-pirofoszfát (0,2 M, egy 100X készletként);
j) NUNC 96 üregű V fenekű polipropilénlemezek (Applied Scientific katalógusszám: AS-72092);
k) NIH3T3 C7#3 sejtek (FLK-1-gyel rendelkező sejtek);
l) DMEM 1X magas glukóztartalmú L Glutamin (katalógusszám: 11965-050);
m) FBS, Gibco (katalógusszám: 16000-028);
n) L-glutamin, Gibco (katalógusszám: 25030-016);
o) VEGF, PeproTech, Inc. (katalógusszám: 100-20) (1 pg/100 μΙ készlet formájában tárolva Milli-Q dH2O-ban, -20 °C hőmérsékleten raktározva);
p) tisztított affinitású anti-FLK—1 antiszérum, Enzymology Láb, Sugen, Inc.;
q) foszfotirozinspecifikus UB40 monoklonális antitest,
Enzymology Láb, Sugen, Inc. (Lásd Fendley és munkatársai, 1990, Cancer Research 50:1550-1558);
r) EIA minőségű kecske antiegér IgG-POD (BioRad katalógusszám: 172-1011);
s) 2,2-azino-bisz(3-etil-benztiazolin)-6-szulfonsav (ABTS) oldat [100 mM (vízmentes) citromsav,
250 mM Na2HPO4 (pH=4,0), 0,5 mg/ml ABTS (Sigma katalógusszám: A-1888)], az oldatot sötétben, 4 °C hőmérsékleten kell tartani a felhasználásig;
t) hidrogén-peroxid (30%-os oldat) (Fisher katalógusszám: H325);
u) ABTS/H2O2 (15 ml ABTS-oldat, 2 μΙ hidrogén-peroxid), elkészítendő 5 perccel a felhasználás előtt, majd a felhasználásig szobahőmérsékleten tárolandó;
v) 0,2 M sósavkészlet H2O-ban;
w) dimetil-szulfoxid (100%-os) (Sigma katalógusszám: D—8418); valamint
y) Trypsin-EDTA (Gibco BRL katalógusszám: 25200049).
Az eljárás. A vizsgálat elvégzésére a következő eljárást alkalmazzuk:
1. A Corning gyártmányú 96 üregű ELISA lemezekre felhordunk üregenként 1,0 pg 0,1 M nátrium-karbonátban (pH=9,6) lévő antinyúl IgG antitestet. A végső térfogatot üregenként 150 μΙ-re állítjuk be. A bevont lemezeket egy éjszakán keresztül 4 °C hőmérsékleten tartjuk. A lemezek 4 °C hőmérsékleten tárolva maximum két hétig tarthatók el.
2. Növesztő táptalajban (Growth média) (DMEM, 2,0 mM L-glutaminnal és 10% FBS-sel kiegészítve) sejteket tenyésztünk megfelelő sejttenyészeti csészékben az összefolyásig, 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-arány mellett.
3. Tripszinizálással begyűjtjük a sejteket, és azokat Corning 25850 polisztirén 96 üregű kerek fenekű sejtlemezekbe telepítjük, 25 000 sejt/üreg mennyiségben, 200 μΙ táptalajban.
4. A sejteket legalább egy napon keresztül tenyésztjük 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett.
5. A sejteket 1X D-PBS felhasználásával mossuk.
6. A rendszerhez üregenként hozzáadunk 200 μΙ éheztető táptalajt (starvation média) (DMEM, 2,0 mM L-glutamin, 0,1% FBS). A rendszert egy éjszakán keresztül inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten, 5%-os széndioxid-tartalom mellett.
7. A vegyületeket/extraktumokat az éheztető táptalajjal 1:20 arányban felhígítjuk polipropilén 96 üregű lemezekben. A kontrollként szolgáló üregekben dimetilszulfoxidot hígítunk 1:20 arányban.
8. A 96 üregű sejttenyészeti lemezekből eltávolítjuk az éheztető táptalajt, és minden üregbe 162 μΙ friss éheztető táptalajt teszünk.
9. Minden üreghez hozzáadunk 18 μΙ mennyiséget a (7. lépésből származó) 1:20 arányban hígított vegyületből/extraktumból, a kontroliul szolgáló üregekhez (+/- VEGF) pedig az 1:20 arányban hígított dimetilszulfoxidból, és a sejtstimulálás utáni végső hígítást 1:200-ra állítjuk be. A végső dimetil-szulfoxid-tartalom 5%. A lemezt 37 °C hőmérsékleten 2 órán keresztül inkubáljuk 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett.
10. A meg nem kötött antitestet a lemezek lefordításával távolítjuk el az ELISA lemezekből, hogy a folyadék eltávozhasson. A rendszert 3-szor mossuk TBSW+0,5% etanol-aminnal (pH=7,0). A lemezt papírtörülközővel megtörölgetjük, hogy a fölösleges folyadékot és a buborékokat eltávolítsuk.
11. A lemezeket üregenként 150 μΙ TBSW+0,5% etanol-aminnal (pH=7,0) blokkoljuk. A lemezeket 30 percen keresztül inkubáljuk, egy mikrotiterlemez-rázón való rázás közben.
12. A lemezt a 10. lépésben leírtak szerint 3-szor mossuk.
13. A rendszerhez üregenként hozzáadunk 0,5 pg tisztított affinitású anti-FLU—1 poliklonális nyúl antiszérumot. A végső térfogatot TBSW+0,5% etanol-aminnal
HU 226 755 Β1 (pH=7,0) minden egyes üregben 150 μΙ-re állítjuk be. Rázás közben a lemezt 30 percen keresztül inkubáljuk.
14. A sejtekhez hozzáadunk 180 μΙ éheztető táptalajt, és a sejteket üregenként 20 μ110,0 mM nátrium-orto-vanadáttal és 500 ng/ml VEGF-fel (mely 1,0 mM nátrium-orto-vanadát és 50 ng/ml VEGF végső koncentrációt eredményez üregenként) stimuláljuk 8 percen keresztül, 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett. A negatív kontroliüregekhez csak éheztető táptalajt adunk.
15. A 8 perc elteltével a táptalajt eltávolítjuk a sejtekről, és a rendszert üregenként 200 μΙ PBS felhasználásával egyszer átmossuk.
16. A sejteket üregenként 150 μΙ HNTG felhasználásával 5 percen keresztül tartó, szobahőmérsékleten való rázás közben szétroncsoljuk. A HNTG nátrium-orto-vanadátot, nátrium-pirofoszfátot és EDTA-t tartalmaz.
17. Az ELISA lemezt a 10. lépésben leírtak szerint háromszor mossuk.
18. A sejtbomlástermékeket a sejtlemezből az ELISA lemezbe tesszük, és rázás közben 2 órán keresztül inkubáljuk. A sejtbomlástermék átvitelét fel-le pipettázással hajtjuk végre, az üregek kapargatása közben.
19. A lemezt a 10. lépésben leírtak szerint háromszor mossuk.
20. Az ELISA lemezt üregenként 0,02 pg TBSW+0,5% etanol-aminban lévő UB40-nel inkubáljuk. Az üregenként! végső térfogatot 150 μΙ-re állítjuk be. Az inkubálást rázás közben, 30 percen keresztül végezzük.
21. A lemezt a 10. lépésben leírtak szerint háromszor mossuk.
22. Az ELISA lemezt TBSW+0,5% etanol-aminban (pH=7,0) lévő 1:10 000 arányban hígított EIA minőségű kecske antiegér IgG konjugált tormaperoxidázzal inkubáljuk. Az üregenként! végső térfogatot 150 μΙ-re állítjuk be. Az inkubálást rázás közben, 30 percen keresztül végezzük.
23. A lemezt a 10. lépésben leírtak szerint mossuk.
24. Az üregekhez hozzáadunk 100 μΙ ABTS/H2O2 oldatot. A lemezt rázás közben tíz percen keresztül inkubáljuk.
25. Az elszíneződéssel járó reakció megállítására 100 μΙ 0,2 M sósavat adunk az üregekhez, hogy a sósav végső koncentrációja 0,1 M legyen. A rendszert 1 percen keresztül rázzuk szobahőmérsékleten. A buborékokat lassú légáramlattal eltávolítjuk, és az ELISA lemezt egy ELISA lemezleolvasón leolvassuk 410 nm hullámhosszon.
6.1.2. HER-2 ELISA
1. vizsgálat: EGF receptor-HER2 chimer receptor vizsgálat egész sejtekben. Egész EGFR-NIH3T3 sejtekben a HER-2 kináz aktivitást az alább leírtak szerint mérjük meg.
Anyagok és reagensek. A vizsgálat végrehajtásához a következő anyagokat és reagenseket használjuk fel:
a) EGF: szabványkoncentráció=16,5 ILM; EGF 201,
TOYOBO, Co., Ltd. Japán.
b) 05-101 (UBI) (egy EGFR extracelluláris domént felismerő monoklonális antitest).
c) Antifoszfotirozin antitest (anti-Ptyr) (poliklonális) (lásd Flendley és munkatársai, mint fentebb).
d) Detektáló antitest: kecske antinyúl IgG tormaperoxidáz konjugát, TAGO, Inc., Burlingame, CA.
e) TBST-puffer:
Tris-HCI, pH=7,2 50 mM
NaCI 150 mM
Triton X-100 0,1
f) HNTG 5X készlet:
HEPES 0,1 M
NaCI 0,75 M
Glicerol 50%
Triton X-100 1,0%
g) ABTS készlet:
Citromsav 100 mM
Na2HPO4 250 mM
Tömény HCI 0,5 pM
ABTS* 0,5 mg/ml * (2,2’-azino-bisz(3-etil-benztiazolin-szulfonsav). Az oldat felhasználásig sötétben, 4 °C hőmérsékleten tárolandó.
h) A következő szabványreagensek:
EDTA 100 mM pH=7,0
Na3VO4 0,5 M
Na4(P2O7) 0,2 M
Eljárás. A következő eljárást alkalmazzuk:
A) Az ELISA lemez előbevonása
1. Az ELISA lemezre (Corning, 96 üregű, katalógusszám: 25805-96) felhordunk 0,5 g 05-101 antitestet üregenként, PBS-ben, 100 μΙ üregenkénti végső térfogat mellett, és a rendszert egy éjszakán keresztül 4 °C hőmérsékleten tároljuk. A bevont lemezek maximum 10 napig használhatók fel, ha 4 °C hőmérsékleten tároljuk azokat.
2. A felhasználás napján eltávolítjuk a bevonópuffert, és azt 100 μΙ blokkolópufferre [PBS-ben lévő 5%-os szegfű instant zsírmentes száraz tej (Carnation Instant Non-Fat Dry Milk)] cseréljük. A lemezt rázás közben szobahőmérsékleten (körülbelül 23-25 °C hőmérsékleten) inkubáljuk 30 percen keresztül. Közvetlenül a felhasználás előtt a blokkolópuffert eltávolítjuk, és a lemezt négyszer mossuk TBST-pufferrel.
B) A sejtek telepítése
1. A vizsgálathoz olyan NIH3T3 sejtfonalat használhatunk, melyben túlzott mennyiségben van jelen egy olyan chirem receptor, mely tartalmaz EGFR extracelluláris domént és extracelluláris HER2 kináz domént.
2. A kísérlethez olyan csészéket választunk, melyek 80-90%-os összefolyással rendelkeznek. A sejteket tripszinizáljuk, majd a reakciónak 10%-os magzati szarvasmarhaszérummal vetünk véget. A sejteket DMEMtáptalajban (10% CS DMEM-táptalaj) szuszpendáljuk, és szobahőmérsékleten, 1500 percenkénti fordulatszámon egyszer 5 percen keresztül centrifugáljuk.
HU 226 755 Β1
3. A sejteket újraszuszpendáljuk telepítő táptalajban (DMEM, 0,5% szarvasmarhaszérum), majd tripánkék felhasználásával megszámoljuk. A 90% fölötti életképesség elfogadható. A sejteket DMEM-táptalajba (0,5% szarvasmarhaszérum) telepítjük, 10 000 sejt/üreg sűrűségben, 100 pl üregenkénti térfogat mellett, egy 96 üregű mikrotiterlemezben. A telepített sejteket 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett körülbelül 40 órán keresztül inkubáljuk.
C) Vizsgálati eljárások
1. A telepített sejtek szennyezettségét egy invertált mikroszkóp felhasználásával ellenőrizzük. A gyógyszerkészletet (10 mg/ml, DMSO-ban) 1:10 arányban hígítjuk DMEM-táptalajban, majd 5 I mennyiséget ebből átrakunk egy TBST üregbe, hogy végül 1:200 arányban hígított gyógyszeroldatot és 1%-os DMSO-koncentrációt kapjunk. A kontroliüregekbe csak DMSO-t teszünk. A rendszert 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxidtartalom mellett két órán keresztül inkubáljuk.
2. Elkészítjük az EGF ligandumot: a szabvány EGF-et DMEM-ben hígítjuk oly módon, hogy 10 μΙ hígított EGF átvitelekor (1:12 hígítás) 100 nM végső koncentrációt kapjunk.
3. Elkészítünk annyi friss HNTG*-t, amennyi elég az üregenkénti 100 μΙ térfogathoz; majd jégre tesszük.
HNTG* (10 ml): | |
HNTG készlet | 2,0 ml |
Milli-Q H2O | 7,3 ml |
EDTA, 100 mM, pH=7,0 | 0,5 ml |
Na3VO4, 0,5 M | 0,1 ml |
Na4(P2O7), 0,2 M | 0,1 ml |
4. 120 percen keresztül tartó, a gyógyszerrel együtt |
történő inkubálás után a sejtekhez hozzáadunk előkészített SGF ligandumot, üregenként 10 μΙ mennyiségben, hogy a végső koncentráció 100 nM legyen. A kontroliüregekbe csak DMEM-et teszünk. A rendszert szobahőmérsékleten, rázás közben 5 percen keresztül inkubáljuk.
5. A rendszerből eltávolítjuk a gyógyszert, az EGF-et és a DMEM-et. A sejteket kétszer mossuk PBS-sel. A HNTG*-t a sejtekhez adjuk, 100 μΙ üregenkénti mennyiségben. A rendszert 5 percre jégre tesszük. Ez alatt az idő alatt egy másik ELISA lemezből eltávolítjuk a blokkolópuffert, és a fentebb leírtak szerint a lemezt TBST-vel mossuk.
6. Egy pipettaheggyel, melyet biztonságosan egy mikropipettorhoz erősítünk, a sejteket lekaparjuk a lemezről, és a sejtes anyagot a HNTG* sejtoldó puffer többszöri beszívásával és kiengedésével homogenizáljuk. A sejtbomlásterméket átvisszük egy burkolt, blokkolt és mosott ELISA lemezre. A rendszert rázás közben egy órán keresztül inkubáljuk szobahőmérsékleten.
7. A sejtbomlásterméket eltávolítjuk, és négyszer mossuk TBST-vel. Az ELISA lemezre ráviszünk üregenként 100 μΙ frissen hígított anti-Ptyr antitestet. A rendszert rázás közben 30 percen keresztül inkubáljuk szobahőmérsékleten, az anti-Ptyr antiszérum jelenlétében (1:3000 hígítás TBST-ben).
8. Az anti-Ptyr antitestet eltávolítjuk, és négyszer mossuk TBST-vel. Az ELISA lemezre ráviszünk üregenként 100 μΙ frissen hígított TAGO antinyúl IgG antitestet. A rendszert rázás közben 30 percen keresztül inkubáljuk szobahőmérsékleten (antinyúl IgG antitest: 1:3000 hígítás TBST-ben).
9. A TAGO detektáló antitestet eltávolítjuk, és négyszer mossuk TBST-vel. Az ELISA lemezre ráviszünk üregenként 100 μΙ frissen hígított ABTS/H2O2 oldatot. A rendszert rázás közben 20 percen keresztül inkubáljuk szobahőmérsékleten (ABTS/H2O2 oldat: 1,0 μΙ 30%-os H2O2 10 ml ABTS készletben).
10. A reakciót 50 μΙ 5 N kénsav hozzáadásával megszakítjuk (nem kötelező), és meghatározzuk az OD-t410 nm-nél.
11. A maximális foszfotirozinjelet akkor kapjuk, ha a pozitív kontrollokra kapott értékből levonjuk a negatív kontrollokra kapott értéket. Az extraktumot tartalmazó üregekre vonatkozó százalékos foszfotirozingátlást ezután számoljuk ki, a negatív kontrollra kapott érték levonása után.
2. vizsgálat: HER-2-BT474 ELISA. Az egész sejt HER2-aktivitás mérésére egy második vizsgálatot végezhetünk. Egy ilyen vizsgálat a következőképpen végezhető el.
Anyagok és reagensek. A következő anyagokat és reagenseket használjuk fel:
a) BT-474 (ATCC HBT20), egy olyan humán mellráksejtfonal, mely magas HER2 kinázszintet mutat.
b) Növesztő táptalaj, melynek tartalma: RPMI+10%
FBS+GMS-G (Gibco készlet)+glutamin; BT-474 sej35
c)
d)
e)
g)
h) tek 37 °C hőmérsékleten való, 5%-os szén-dioxidtartalom mellett egy inkubátorban történő tenyésztésére.
Eqy monoklonális anti-HER2 antitest.
D-PBS:
KH2PO4 K2HPO4 KCI NaCI
Blokkolópuffer:
0,20 g/l 10 (GIBCO, 310-4190AJ) 2,16 g/l 0,20 g/l
8,00 g/l (pH=7,2)
TBST+5% tej (koncentrált instant zsírmentes száraz tej).
TBST-puffer:
Tris-HCI 50 mM
NaCI 150 mM (pH=7,2, HCI 10 N)
Triton X-100 0,1% ahol is a szabvány TES-oldatot (10X) készítjük el, és a Triton Χ-100-at hígítás közben adjuk hozzá a pufferhez.
HNTG-puffer (5x):
HEPES 0,1 M
NaCI 750 mM [pH=7,2 (HCI, 1 N)]
Glicerol 50%
Triton X-100 1,0%
Szabványoldatot (5x) állítunk elő, és 4 °C hőmérsékleten tároljuk.
EDTA-HCI: 0,5 M pH=7,0 (10 N HCI), 500X készlet60 ként.
HU 226 755 Β1
i) Na3VO4: 0,5 Μ, 100X készletként, részletekben
-80 °C hőmérsékleten tároljuk.
j) Na4(P2O7): 0,2 Μ, 100X készletként.
k) Poliklonális antiszérum antifoszfotirozin.
l) Kecske antinyúl IgG, tormaperoxidáz (POD) konjugát [detektáló antitest, Tago (katalógusszám: 4520; Lót No. 1802]: Tago, Inc., Burlingame, CA.
m) ABTS-oldat:
Citromsav 100 mM
Na2HPO4 250 mM
ABTS 0,5 mg/ml ahol az ABTS jelentése (2,2’-azino-bisz(3-etil-benztiazolin-szulfonsav). Ehhez a vizsgálathoz az ABTS-oldatot sötétben, 4 °C hőmérsékleten kell tárolni. Amikor az oldat megzöldül, ki kell dobni.
n) Hidrogén-peroxid: a 30%-os oldatot sötétben tároljuk, 4 °C hőmérsékleten.
Eljárás. A következő lépések mindegyikét szobahőmérsékleten, steril körülmények között hajtjuk végre, hacsak mást nem mondunk. Az ELISA lemezek mosását minden alkalommal háromszori desztillált vízzel való, és egyszeri TBST-vel való öblítéssel végezzük.
A) A sejtek telepítése
1. Szövettenyészeti csészékben (Corning 25020100) BT474 sejteket tenyésztünk, 80-90%-os összefolyásig, majd Trypsin-EDTA (0,25%, GIBCO) felhasználásával összegyűjtjük azokat.
2. A sejteket friss táptalajban újraszuszpendáljuk, majd 96 üregű szövettenyészeti lemezekbe (Corning, 25806-96) rakjuk, körülbelül 25 000-50 000 sejt/üreg (100 μΙ/üreg) sűrűségben. A sejteket 37 °C hőmérsékleten 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett egy éjszakán keresztül inkubáljuk.
B) Az ELISA lemezek beborltása és blokkolása
1. Az ELISA lemezre (Corning 25805-96) egy éjszaka alatt, 4 °C hőmérsékleten felhordunk 150 μΙ PBS-ben lévő 0,5 μg HER2 antitestet üregenként, és a lemezt parafilmmel lezárjuk. Az antitesttel borított lemezek maximum két hétig használhatók fel, amennyiben 4 °C hőmérsékleten tároljuk azokat.
2. A felhasználás napján a bevonóoldatot eltávolítjuk, azt 200 μΙ blokkolópufferre cseréljük, a lemezt rázzuk, majd eltávolítjuk a blokkolópuffert is, és a lemezt közvetlenül a sejtbomlástermék hozzáadása előtt mossuk.
C) Vizsgálati eljárások
1. A gyógyszereket szérummentes állapotban TBST-zzük. A gyógyszerek hozzáadása előtt a régi táptalajt szérummentes RPMI-re cseréljük (90 μΙ/üreg).
2. A gyógyszerkészletet (100% DMSO-ban) 1:10 arányban hígítjuk RPMI-vel, majd 10 μΙ/üreg mennyiségben az így kapott oldatot a sejtekhez adjuk, aminek eredményeképpen a végső gyógyszer DMSOkoncentráció 1 % lesz. A sejteket 37 °C hőmérsékleten 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett inkubáljuk.
3. Friss sejtoldó puffért (HNTG*) készítünk: | |
5*HNTG | 2 ml |
EDTA | 0,2 ml |
Na3VO4 | 0,1 ml |
0,1 ml | |
h2o | 7,3 ml. |
4. A gyógyszer két órán keresztül tartó preinkubá- |
ciója után az oldatot teljesen eltávolítjuk a lemezről, a sejtekhez HNTG*-t adunk (100 μΙ/üreg), és a lemezt 10 percen keresztül rázzuk.
5. Egy 12 csatornás pipetta felhasználásával a sejteket eltávolítjuk a lemezről, és a sejtbomlásterméket többszöri beszívással és kieresztéssel homogenizáljuk. Ezután a sejtbomlásterméket teljes egészében átvisszük az ELISA lemezre, és azt 1 órán keresztül rázzuk.
6. A sejtbomlásterméket eltávolítjuk, a lemezt mossuk, hozzáadunk üregenként 100 μΙ anti-pTyr-t (1:3000 arányú hígítás TBST-vel), és a rendszert 30 percen keresztül rázzuk.
7. Az anti-pTyr-t eltávolítjuk, a lemezt mossuk, hozzáadunk üregenként 100 μΙ kecske antinyúl IgG konjugált antitestet (1:5000 arányú hígítás TBST-vel), és a rendszert 30 percen keresztül rázzuk.
8. Eltávolítjuk az antinyúl IgG antitestet, a lemezt mossuk, és hozzáadunk üregenként 100 I friss ABTS/H2O2 oldatot (1,2 μΙ H2O2 10 ml ABTS-hez), hogy az elszíneződés beinduljon, ami általában 20 percet vesz igénybe.
9. OD-mérés 410 nm-en, Dynatec MR5000.
6.1.3. PDGF-R ELISA
Minden sejttenyészeti táptalajt, a glutamint és a magzati szarvasmarhaszérumot a Gibco Life Technologiestől (Gran Island, NY) szerezzük be, hacsak mást nem mondunk. Minden sejttenyészetet 90-95% levegő és 5-10% szén-dioxid összetételű nedves atmoszférában növesztünk, 37 °C hőmérsékleten. Hetente kétszer minden sejtfonalból rutinszerűen kitenyésztünk egy álkultúrát, és a tenyészeteket Mycotest módszerrel (Gibco) vizsgálva negatív mycoplazma eredményt kapunk.
Az ELISA vizsgálathoz a sejteket (U1242, beszerzési hely: Joseph Schlessinger, NY) 80-90%-os összefolyásig növesztjük növesztő táptalajban (MÉM 10% FBS-sel, NEAA, 1 mM NaPyr és 2 mM GLN), és 96 üregű szövettenyésztő lemezekbe telepítjük, 0,5% szérumban, üregenként! 25 000-30 000 sejtsűrűség mellett. Egy éjszakán keresztül tartó, 0,5% szérumtartalmú táptalajban való inkubálás után a sejteket átrakjuk szérummentes táptalajba, és 2 órán keresztül kezeljük a tesztvegyülettel, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett, 37 °C hőmérsékleten. Ezután a sejteket 5-10 percen keresztül stimuláljuk a ligandummal, majd HNTG-vel (20 mM Hepes, 150 mM nátrium-klorid, 10% glicerol, 5 mM EDTA, 5 mM Na3VO4, 0,2% Triton X-100 és 2 mM NaPyr) szétroncsoljuk. A sejtbomlásterméket (0,5 mg/üreg, PBS-ben) olyan ELISA lemezekre visszük át, melyeket előzőleg receptorspecifikus antitesttel borítottunk, és amelyeket TBST-ben (50 mM Tris-HCI pH=7,2, 150 mM NaCI és 0,1% Triton X-100)
HU 226 755 Β1 lévő 5%-os tejjel szobahőmérsékleten, 30 percen keresztül blokkolunk. A sejtbomlásterméket rázás közben egy órán keresztül inkubáljuk szobahőmérsékleten.
A lemezeket négyszer mossuk TBST-vel, majd poliklonális antifoszfotirozin antitesttel inkubáljuk szobahő- 5 mérsékleten, 30 percen keresztül. Az antifoszfotirozin antitest fölöslegét TBST-vel való négyszeri öblítéssel eltávolítjuk. Az ELISA lemezhez 30 percre kecske antinyúl IgG antitestet adunk szobahőmérsékleten, majd a lemezt négyszer öblítjük TBST-vel. Az elszíneződés 10 megindításához ABTS (100 mM citromsav, 250 mM Na2HPO4 és 0,5 mg/ml 2,2’-azino-bisz(3-etil-benztiazolin-6-szulfonsav)+H2O2 (1,2 ml 30%-os H2O2 10 ml ABTS-hez) elegyet adunk. A 410 nm hullámhosszon és a 630 nm referencia-hullámhosszon való abszorban- 15 ciát körülbelül 15-30 perccel az ABTS hozzáadása után vesszük fel.
j) Na4(P2O7): 0,2 M, 100X készletként.
k) Inzulinszerű növekedési faktor (Insuline-like growth factor-1), a Promegától (katalógusszám: G5111).
l) Poliklonális antiszérum antifoszfotirozin: az Enzymology Láb., SUGEN Inc.-től származó nyúlszérum.
m) Kecske antinyúl IgG, POD konjugát (detektáló antitest), Tago (katalógusszám: 4520; Lót No. 1802): Tago, Inc., Burlingame, CA.
n) ABTS (2,2’-azino-bisz(3-etil-benztiazolin-szulfonsav)-oldat:
Citromsav 100 mM
Na2HPO4 250 mM (pH=4,0/l N HCI)
ABTS 0,5 mg/ml
Az ABTS-oldatot sötétben, 4 °C hőmérsékleten kell tárolni. Amikor az oldat megzöldül, ki kell dobni.
o) Hidrogén-peroxid: a 30%-os oldatot sötétben tároljuk, 4 °C hőmérsékleten.
6.1.4. IGF-I ELISA
A foszfotirozin szintjét az IGF-I receptoron a követ- 20 kező eljárás felhasználásával mérhetjük meg, mely az IGF-I receptor tirozin-kináz-aktivitást adja meg.
Anyagok és reagensek. A következő anyagokat és reagenseket használjuk fel:
a) Ebben a vizsgálatban 3T3/IGF-1R sejtfonalat használunk, mely sejtfonalban túlteng az IGF-1 receptor.
b) A NIH3T3/IGF—1R sejteket egy inkubátorban növesztjük 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxidtartalom mellett. A növesztő táptalaj összetétele: DMEM+10% FBS (hővel inaktivált)+2 mM L-glutamin.
c) A 17-69 nevezetű anti-IGF—1R antitestet használjuk. Az antitesteket az Enzimology Láb., SUGEN, Inc. tisztítja.
d) D-PBS:
KH2PO4 0,20 g/l
K2HPO4 2,16 g/l
KCI 0,20 g/l
NaCI 8,00 g/l (pH=7,2)
e) Blokkolópuffer: TBST+5% tej (koncentrált instant zsírmentes száraz tej).
f) TBST-puffer:
Tris-HCI 50 mM
NaCI 150 mM (pH=7,2, HCI 10 N)
Triton X-100 0,1% ahol is a szabvány TES-oldatot (10X) készítjük el, és a Triton Χ-100-at hígítás közben adjuk hozzá a pufferhez.
g) HNTG-puffer:
h)
HEPES NaCI Glicerol Triton X-100 mM
150 mM (pH=7,2/HC11 N)
10%
0,2%
Szabványoldatot (5x) állítunk elő, és 4 °C hőmérsékleten tároljuk.
EDTA-HCI: 0,5 M pH=7,0 (NaOH), 100X készlet55 ként.
Eljárás. A következő lépések mindegyikét szobahőmérsékleten visszük végbe, hacsak mást nem mondunk. Az ELISA lemezek mosását háromszori csapvízzel való, és egyszeri TBST-vel való öblítéssel végezzük. A lemezeket papírtörülközőkkel szárazra töröljük.
A) A sejtek telepítése
1. A szövettenyészeti csészékben (Corning 25020100) 80-90%-os összefolyásig növesztett sejteket, Trypsin-EDTA (0,25%, 0,5 ml/D-100, GIBCO) felhasználásával összegyűjtjük.
2. A sejteket friss DMEM+10% FBS+2 mM L-glutamin elegyében újraszuszpendáljuk, majd 96 üregű szövettenyészeti lemezekbe (Corning, 25806-96) rakjuk, körülbelül 20 000 sejt/üreg (100 μΙ/üreg) sűrűségben. A sejteket 1 napon keresztül inkubáljuk, majd a táptalajt szérummentes táptalajra cseréljük ki (90/μΙ), és a sejteket 37 °C hőmérsékleten 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett egy éjszakán keresztül inkubáljuk.
B) Az ELISA lemezek beborítása és blokkolása
1. Az ELISA lemezre (Corning 25805-96) legalább 2 óra alatt, felhordunk 100 μΙ PBS-ben lévő 0,5 μg antiIGF—1R antitestet.
2. A bevonóoldatot eltávolítjuk, azt 100 μΙ blokkolópufferre cseréljük, és a lemezt 30 percen keresztül rázzuk. Ezután eltávolítjuk a blokkolópuffert is, és a lemezt közvetlenül a sejtbomlástermék hozzáadása előtt mossuk.
C) Vizsgálati eljárások
1. A gyógyszereket szérummentes állapotban TBST-zzük.
2. A gyógyszerkészletet (100% DMDO-ban) 1:10 arányban hígítjuk DMEM-vel egy 96 üregű polipropilénlemezen, majd 10 μΙ/üreg mennyiségben az így kapott oldatot a sejtekhez adjuk, aminek eredményeképpen a végső gyógyszerhígítási arány 1:100 lesz, a végső DMSO-koncentráció pedig 1% lesz. A sejteket 37 °C hőmérsékleten 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett 2 órán keresztül inkubáljuk.
i) Na3VO4: 0,5 Μ, 100X készletként, részletekben
-80 °C hőmérsékleten tároljuk.
HU 226 755 Β1
3. Friss sejtoldó puffért (HNTG*) készítünk: | |
HNTG | 2 ml |
EDTA | 0,1 ml |
Na3VO4 | 0,1 ml |
0,1 ml | |
h2o | 7,3 ml |
4. A gyógyszer két órán keresztül tartó inkubációja |
után a sejtekhez hozzáadunk üregenként 10 μΙ PBSben lévő 200 nM IGF-1 ligandumot (a végső koncentráció=20 nM), és a rendszert 37 °C hőmérsékleten 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett 10 percen keresztül inkubáljuk.
5. A táptalajt eltávolítjuk, a rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ HNTG*-t, és a lemezt 10 percen keresztül rázzuk. A sejteket megvizsgáljuk mikroszkóppal, hogy ellenőrizzük, megfelelő mértékben elbomlottak-e.
6. Egy 12 csatornás pipetta felhasználásával a sejteket eltávolítjuk a lemezről, és a sejtbomlásterméket többszöri beszívással és kieresztéssel homogenizáljuk. Ezután a sejtbomlásterméket teljes egészében átvisszük az antitesttel borított ELISA lemezre, és azt 1 órán keresztül rázzuk.
7. A sejtbomlásterméket eltávolítjuk, a lemezt mossuk, hozzáadunk üregenként 100 μΙ anti-pTyr-t (1:3000 arányú hígítás TBST-vel), és a rendszert 30 percen keresztül rázzuk.
8. Az anti-pTyr-t eltávolítjuk, a lemezt mossuk, hozzáadunk üregenként 100 μΙ Tagét (1:3000 arányú hígítás TBST-vel), és a rendszert 30 percen keresztül rázzuk.
9. Eltávolítjuk a detektáló antitestet, a lemezt mossuk, és hozzáadunk üregenként 100 μΙ friss ABTS/H2O2 oldatot (1,2 μΙ H2O2 10 ml ABTS-hez), hogy az elszíneződés beinduljon.
10. Az OD-t egy Ingres-hez kapcsolt Dynatec MR5000 felhasználásával mérjük.
6.1.5. EGF receptor ELISA
Egész sejtekben az EGF receptor kináz aktivitást (EGFR-NIH3T3 vizsgálat) az alább leírtak szerint mérjük meg.
Anyagok és reagensek. A vizsgálat végrehajtásához a következő anyagokat és reagenseket használjuk fel:
a) EGF ligandum: szabványkoncentráció=16,5 ILM;
EGF 201, TOYOBO, Co., Ltd., Japán.
b) 05-101 (UBI) (egy EGFR extracelluláris domént felismerő monoklonális antitest).
c) Antifoszfotirozin antitest (anti-Ptyr) (poliklonális).
d) Detektáló antitest: Kecske antinyúl IgG tormaperoxidáz konjugát, TAGO, Inc., Burlingame, CA.
e) TBST-puffer:
Tris-HCI, pH=7,2 50 mM
NaCI 150 mM
Triton X-100 0,1
f) HNTG 5X készlet:
HEPES 0,1 M
NaCI 0,75 M
Glicerol 50%
Triton X-100 1,0%
g) ABTS készlet:
Citromsav 100 mM
Na2HPO4 250 mM
Tömény HCI 4,0 pH
ABTS* 0,5 mg/ml
Az oldat felhasználásáig sötétben, 4 °C hőmérsékleten tárolandó.
h) A következő szabványreagensek:
EDTA 100 mM pH=7,0
Na3VO4 0,5 M
Na4(P2O7) 0,2 M
Eljárás. A következő eljárást alkalmazzuk:
A) Az ELISA lemez előbevonása
1. Az ELISA lemezekre (Corning, 96 üregű, katalógusszám: 25805-96) felhordunk 0,5 pg 05-101 antitestet üregenként, PBS-ben, 150 μΙ üregenként! végső térfogat mellett, és a rendszert egy éjszakán keresztül 4 °C hőmérsékleten tároljuk. A bevont lemezek maximum 10 napig használhatók fel, ha 4 °C hőmérsékleten tároljuk azokat.
2. A felhasználás napján eltávolítjuk a bevonópuffert, és azt blokkolópufferre [PBS-ben lévő 5%-os szegfű instant zsírmentes száraz tej (Carnation Instant Non-Fat Dry Milk)] cseréljük. A lemezt rázás közben, szobahőmérsékleten (körülbelül 23-25 °C hőmérsékleten) inkubáljuk 30 percen keresztül. Közvetlenül a felhasználás előtt a blokkolópuffert eltávolítjuk, és a lemezt négyszer mossuk TBST-pufferrel.
B) A sejtek telepítése
1. A vizsgálathoz használhatunk NIH 3T3/C7 sejtfonalat (Honegger és munkatársai, Cell 51: 199-209, 1987).
2. A kísérlethez olyan csészéket választunk, melyek 80-90%-os összefolyással rendelkeznek. A sejteket tripszinizáljuk, majd a reakciónak 10% CS DMEMtáptalaj hozzáadásával vetünk véget. A sejteket DMEM-táptalajban (10% CS DMEM-táptalaj) szuszpendáljuk, és egyszer 1000 percenkénti fordulatszámon, egyszer szobahőmérsékleten 5 percen keresztül centrifugáljuk.
3. A sejteket újraszuszpendáljuk telepítő táptalajban (DMEM, 0,5% szarvasmarhaszérum), és tripánkék felhasználásával megszámoljuk. A 90% fölötti életképesség elfogadható. A sejteket telepítsük DMEM-táptalajba (0,5% szarvasmarhaszérum), 10 000 sejt/üreg sűrűségben, 100 μΙ üregenként! térfogat mellett, egy 96 üregű mikrotiterlemezben. A telepített sejteket 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett körülbelül 40 órán keresztül inkubáljuk.
C) Vizsgálati eljárások
1. A telepített sejtek szennyezettségét egy invertált mikroszkóp felhasználásával ellenőrizzük. A gyógyszerkészletet (10 mg/ml, DMSO-ban) 1:10 arányban hígítjuk DMEM-táptalajjal, majd 5 μΙ mennyiséget ebből átrakunk egy vizsgálati üregbe, hogy végül 1:200 arányban
HU 226 755 Β1 hígított gyógyszeroldatot és 1%-os DMSO-koncentrációt kapjunk. A kontroliüregekbe csak DMSO-t teszünk.
A rendszert 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxidtartalom mellett két órán keresztül inkubáljuk.
2. Elkészítjük az EGF ligandumot: a szabvány 5 EGF-et DMEM-ben hígítjuk oly módon, hogy 10 μΙ hígított EGF átvitelekor (1:12 hígítás) 25 nM végső koncentrációt kapjunk.
3. Elkészítünk 10 ml friss HNTG*-t, amennyi elég az üregenként! 100 μΙ térfogathoz. 10
A HNTG* a következő összetevőket tartalmazza: | |
HNTG készlet | 2,0 ml |
Milli-Q H2O | 7,3 ml |
EDTA, 100 mM, pH=7,0 | 0,5 ml |
Na3VO4, 0,5 M | 0,1 ml |
Na4(P2O7), 0,2 M | 0,1 ml |
4. Jégre tesszük. | |
5. 120 percen keresztül tartó, a gyógyszerrel együtt |
történő inkubálás után a sejtekhez hozzáadunk előkészített EGF ligandumot, üregenként 10 μΙ mennyiség- 20 ben, hogy a végső koncentráció 25 nM legyen. A kontroliüregekbe csak DMEM-et teszünk. A rendszert szobahőmérsékleten, rázás közben 5 percen keresztül inkubáljuk.
6. A rendszerből eltávolítjuk a gyógyszert, az 25 EGF-et és a DMEM-et. A sejteket kétszer mossuk PBS-sel. A HNTG*-t a sejtekhez adjuk, 100 μΙ üregenként! mennyiségben. A rendszert 5 percre jégre tesszük. Ez alatt az idő alatt egy másik ELISA lemezből eltávolítjuk a blokkolópuffert, és a fentebb leírtak sze- 30 rint a lemezt TBST-vel mossuk.
7. Egy pipettaheggyel, melyet biztonságosan egy mikropipettorhoz erősítünk, a sejteket lekaparjuk a lemezről, és a sejtes anyagot a HNTG* sejtoldó puffer többszöri beszívásával és kiengedésével homogenizál- 35 juk. A sejtbomlásterméket átvisszük egy burkolt, blokkolt és mosott ELISA lemezre. A rendszert rázás közben egy órán keresztül inkubáljuk szobahőmérsékleten.
8. A sejtbomlásterméket eltávolítjuk, és négyszer 40 mossuk TBST-vel. Az ELISA lemezre ráviszünk üregenként 100 μΙ frissen hígított anti-Ptyr antitestet.
A rendszert rázás közben 30 percen keresztül inkubáljuk szobahőmérsékleten, az anti-Ptyr antiszérum jelenlétében (1:3000 hígítás TBST-ben). 45
9. Az anti-Ptyr antitestet eltávolítjuk, és négyszer mossuk TBST-vel. Az ELISA lemezre ráviszünk üregenként 100 μΙ frissen hígított TAGO 30 antinyúl IgG antitestet. A rendszert rázás közben 30 percen keresztül inkubáljuk szobahőmérsékleten (antinyúl IgG anti- 50 test: 1:3000 hígítás TBST-ben).
10. A detektáló antitestet eltávolítjuk, és négyszer mossuk TBST-vel. Az ELISA lemezre ráviszünk üregenként 100 μΙ frissen hígított ABTS/H2O2 oldatot.
A rendszert 20 percen keresztül inkubáljuk szobahő- 55 mérsékleten (ABTS/H2O2 oldat: 1,2 μΙ 30%-os H2O2 10 ml ABTS készletben).
11. A reakciót 50 μΙ 5 N kénsav hozzáadásával megszakítjuk (nem kötelező), és meghatározzuk az
OD-t 410 nm-nél. 60
12. A maximális foszfotirozinjelet akkor kapjuk, ha a pozitív kontrollokra kapott értékből levonjuk a negatív kontrollokra kapott értéket. Az extraktumot tartalmazó üregekre vonatkozó százalékos foszfotirozingátlást ezután számoljuk ki, a negatív kontrollra kapott érték levonása után.
6.1.6. Celluláris inzulin receptor ELISA
Annak eldöntésére, hogy a találmány vegyülete rendelkezik-e inzulinreceptor tirozin-kináz-aktivitással, a következő eljárást alkalmazzuk.
Anyagok és reagensek. A következő anyagokat és reagenseket használjuk fel az inzulinreceptoron megfigyelhető foszfotirozinszintek mérésére (ami az inzulinreceptor tirozin-kináz-aktivitását adja meg):
1. Az előnyben részesített sejtfonal egy NIH3T3 sejtfonal (ATCC No. 1658), melyben túlteng az inzulinreceptor (H25 sejtek).
2. A H25 sejteket egy inkubátorban növesztjük 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett. A növesztő táptalaj összetétele: DMEM+10% FBS (hővel inaktivált)+2 mm L-glutamin.
3. Az ELISA lemez befedésére a BBE nevezetű monoklonális anti-IR antitestet használjuk. Az antitesteket az Enzimology Láb., SUGEN, Inc. tisztítja.
4. D-PBS:
KH2PO4 0,20 g/l (GIBCO, 310-4190AJ)
K2HPO4 2,16 g/l
KCI 0,20 g/l
NaCI 8,00 g/l (pH=7,2)
5. Blokkolópuffer: TBST+5% tej (koncentrált instant zsírmentes száraz tej)
6. TBST-puffer:
Tris-HCI 50 mM
NaCI 150 mM (pH=7,2, HCI 1 N)
Triton X-100 0,1% ahol is a szabvány TBS-oldatot (10X) készítjük el, és a Triton Χ-100-at hígítás közben adjuk hozzá a pufferhez.
7. HNTG-puffer:
HEPES 20 mM
NaCI 150 mM pH=7,2 (HCI 1 N)
Glicerol 10%
Triton X-100 0,2%
Szabványoldatot (5x) állítunk elő, és azt 4 °C hőmérsékleten tároljuk.
8. EDTA-HCI: 0,5 M pH=7,0 (NaOH), 100X készletként.
9. Na3VO4: 0,5 Μ, 100X készletként, részletekben -80 °C hőmérsékleten tároljuk.
10. Na4(P2O7): 0,2 Μ, 100X készletként.
11. Inzulin a GIBCO BRL-től (katalógusszám:
18125039).
12. Poliklonális antiszérum antifoszfotirozin: az Enzymology Láb., SUGEN Inc.-től származó nyúlszérum.
13. Detektáló antitest, előnyösen kecske antinyúl IgG, POD konjugát, Tago (katalógusszám: 4520; Lót No. 1802): Tago, Inc., Burlingame, CA.
HU 226 755 Β1
14. ABTS (2,2’-azino-bisz(3-etil-benztiazolin-szulfonsav)-oldat:
Citromsav 100 mM
Na2HPO4 250 mM (pH=4,0/1 N HCI)
ABTS 0,5 mg/ml
Az ABTS-oldatot sötétben, 4 °C hőmérsékleten kell tárolni. Amikor az oldat megzöldül, ki kell dobni.
15. Hidrogén-peroxid: a 30%-os oldatot sötétben tároljuk, 4 °C hőmérsékleten.
Eljárás. A következő lépések mindegyikét szobahőmérsékleten visszük végbe, hacsak mást nem mondunk. Az ELISA lemezek mosását háromszori csapvízzel való, és egyszeri TBST-vel való öblítéssel végezzük. A lemezeket papírtörülközőkkel szárazra töröljük.
A) A sejtek telepítése
1. A szövettenyészeti csészékben (10 cm, Corning 25020-100) 80-90%-os összefolyásig növesztett sejteket Trypsin-EDTA (0,25%, 0,5 ml/D-100, GIBCO) felhasználásával összegyűjtjük.
2. A sejteket friss DMEM+10% FBS+2 mM L-glutamin elegyében újraszuszpendáljuk, majd 96 üregű szövettenyészeti lemezekbe (Corning, 25806-96) rakjuk, körülbelül 20 000 sejt/üreg (100 μΙ/üreg) sűrűségben. A sejteket ezután 1 napon keresztül inkubáljuk. Az inkubálást követően a táptalajt 0,01% szérumtartalmú táptalajra cseréljük ki (90/μΙ), és a sejteket 37 °C hőmérsékleten 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett egy éjszakán keresztül inkubáljuk.
B) Az ELISA lemezek beborítása és blokkolása
1. Az ELISA lemezre (Corning 25805-96) legalább 2 óra alatt felhordunk 100 μΙ PBS-ben lévő 0,5 μg anti-IR antitestet.
2. A bevonóoldatot eltávolítjuk, azt 100 μΙ blokkolópufferre cseréljük, és a lemezt 30 percen keresztül rázzuk. Ezután eltávolítjuk a blokkolópuffert is, és a lemezt közvetlenül a sejtbomlástermék hozzáadása előtt mossuk.
C) Vizsgálati eljárások
1. A gyógyszereket szérummentes állapotban TBST-zzük.
2. A gyógyszerkészletet (100% DMDO-ban) 1:10 arányban hígítjuk DMEM-vel egy 96 üregű polipropilénlemezen, majd 10 μΙ/üreg mennyiségben az így kapott oldatot a sejtekhez adjuk, aminek eredményeképpen a végső gyógyszerhígítási arány 1:100 lesz, a végső DMSO-koncentráció pedig 1% lesz. A sejteket 37 °C hőmérsékleten 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett 2 órán keresztül inkubáljuk.
3. Friss sejtoldó puffért (HNTG* | ) készítünk: |
HNTG (5x) | 2 ml |
EDTA | 0,1 ml |
Na3VO4 | 0,1 ml |
Na4P2O7 | 0,1 ml |
H2O | 7,3 ml |
HNTG* | 10 ml |
4. A gyógyszer két órán keresztül tartó inkubációja |
után a sejtekhez hozzáadunk üregenként 10 μΙ PBSben lévő 1 μΜ inzulint (a végső koncentráció=100 nM), és a rendszert 37 °C hőmérsékleten 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett 10 percen keresztül inkubáljuk.
5. A táptalajt eltávolítjuk, a rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ HNTG*-t, és a lemezt 10 percen keresztül rázzuk. A sejteket megvizsgáljuk mikroszkóppal, hogy ellenőrizzük, megfelelő mértékben elbomlottak-e.
6. Egy 12 csatornás pipetta felhasználásával a sejteket lekaparjuk a lemezről, és a sejtbomlásterméket többszöri beszívással és kieresztéssel homogenizáljuk. Ezután a sejtbomlásterméket teljes egészében átvisszük az antitesttel borított ELISA lemezre, és azt 1 órán keresztül rázzuk.
7. A sejtbomlásterméket eltávolítjuk, a lemezt mossuk, hozzáadunk üregenként 100 μΙ anti-pTyr-t (1:3000 arányú hígítás TBST-vel), és a rendszert 30 percen keresztül rázzuk.
8. Az anti-pTyr-t eltávolítjuk, a lemezt mossuk, hozzáadunk üregenként 100 μΙ Tagót (1:3000 arányú hígítás TBST-vel), és a rendszert 30 percen keresztül rázzuk.
9. Eltávolítjuk a detektáló antitestet, a lemezt mossuk, és hozzáadunk üregenként 100 μΙ friss ABTS/H2O2 oldatot (1,2 μΙ H2O2 10 ml ABTS-hez), hogy az elszíneződés beinduljon.
10. Az OD-t egy Ingres-hez kapcsolt Dynatec MR5000 felhasználásával mérjük. Minden további lépést az Ingres instrukciói alapján kell elvégezni.
6.1.7. Az ELISA vizsgálatokból származó kísérleti eredmények
A találmány különböző vegyületeire vonatkozó, a fent leírt eljárások alkalmazásával nyert kísérleti eredményeket az 1. táblázat tartalmazza.
1. táblázat
Az ELISA vizsgálatok eredményei
Vegyület (példa száma) | PDGFR | FLK-1 | EGFR | HER2 kináz | IGF-1R |
ICso(pM) | IC50 (μΜ) | IC5o (μΜ) | IC50 (μΜ) | IC50 (μΜ) | |
27. | 19,4 | 0,8 | |||
4313. | 14,5 | 18,8 | 11 | 16,9 | 8,0 |
1B. | 12 | 0,39 | |||
16. | 87,4 | 4,2 |
HU 226 755 Β1
1. táblázat (folytatás)
Vegyület (példa száma) | PDGFR | FLK-1 | EGFR | HER2 kináz | IGF-1R |
IC50(pM) | IC50 (μΜ) | IC50 (μΜ) | IC50 (μΜ) | IC50 (μΜ) | |
17. | 11,8 | ||||
20. | 28,8 | ||||
21. | 9 | ||||
22. | 2,2 | ||||
24. | 8,5 | ||||
26. | 22,6 | ||||
28. | 22,5 | ||||
29. | 7,9 | 11,2 | |||
32. | 20,9 | ||||
4. | 33,1 | 2,1 | |||
33. | 21,6 | 39,4 | |||
34. | 4,1 | ||||
5. | 5,8 | 1,6 | 90,2 | ||
36. | 4 | 51,5 | |||
37. | 9,6 | ||||
38. | 4,7 | ||||
39. | 14,8 | 36,7 | |||
41. | 6,4 | ||||
8. | 2,9 | 89,8 | |||
42. | 0,4 | ||||
43. | 1,8 | ||||
9. | 17 | 0,24 | |||
44. | 23,8 | ||||
10. | 0,17 | ||||
45. | 53,7 | 1,1 | |||
11. | 0,07 | ||||
12. | 10,8 | 0,11 | |||
48. | 15,4 | ||||
13. | 2,3 | ||||
50. | 4,6 | ||||
14. | 2,4 | ||||
53. | 51,4 | ||||
15. | 4,5 | 70,6 | |||
55. | 8,6 | ||||
57. | 73,4 | ||||
58. | 41,2 | ||||
59. | 22,8 | ||||
6. | 4,5 | 92,6 | |||
61. | 3,4 | 44 | |||
62. | 65,5 | 0,14 | |||
64. | 36,2 | ||||
70. | 0,18 | ||||
71. | 20,3 |
HU 226 755 Β1
1. táblázat (folytatás)
Vegyület (példa száma) | PDGFR | FLK-1 | EGFR | HER2 kináz | IGF-1R |
IC50(pM) | IC50 (μΜ) | IC50 (μΜ) | IC50 (μΜ) | IC50 (μΜ) | |
73. | 86 | 1,6 | |||
74. | 55,9 | 2,7 | |||
76. | 8,7 | ||||
77. | 14,2 | 1,5 | |||
78. | 7,4 | ||||
81. | 0,15 | ||||
7. | 5,3 | 39,6 | 30,4 |
6.2. Sejtnövekedési vizsgálatok A találmány vegyületeinek a sejtek növekedésére gyakorolt hatása, ami az adott vegyület és egy vagy több receptor tirozin-kináz kölcsönhatásának az eredménye, a következő vizsgálatok elvégzésével mérhető. Hacsak mást nem mondunk, a következő vizsgálatok általánosan alkalmazhatók egy adott vegyület tetszőleges receptor tirozin-kinázzal szemben mutatott aktivitásának a mérésére. Az alább leírt vizsgálatok mindig egy adott receptor tirozin-kinázra vonatkoznak, de szakemberek számára nem okozhat problémát, hogy a leírt eljárásokat egy másik receptor tirozin-kinázzal szembeni aktivitás mérésére adaptálja.
6.2.1. Lágy agar vizsgálat A lágy agar vizsgálatot alkalmazhatjuk az egyes anyagok sejtnövekedésre gyakorolt hatásának mérésére. Hacsak mást nem mondunk, a lágy agar vizsgálatot a következők szerint hajtjuk végre.
Anyagok és reagensek. Az alábbi anyagokat és reagenseket használjuk fel:
a) Egy 39 °C hőmérsékletű és egy 37 °C hőmérsékletű vízfürdő.
b) A 2X vizsgálati táptalaj olyan 2X Dulbecco-féle 5-módosított Eagle-féle táptalajt (DMEM, Dulbecco’s Modified Eagle’s Médium) (Gibco katalógusszám: CA400-4AN03) tartalmaz, melyet a következőkkel egészítünk ki:
- 20% magzati szarvasmarhaszérum (FBS, Fetal Bovine Serum), 2 mM nátrium-piruvát 4 mM glutamin-amin és
- 20 mM HEPES nem esszenciális aminosavak (1:50 100x készletből).
c) Az 1X vizsgálati táptalaj olyan 1X DMEM-ből készül, melyet 10% FBS-sel, 1 mM nátrium-piruváttal, 2 mM glutamin, 10 mM HEPES-sel, nem esszenciális aminosawal (1:100 arányban a 100x készletből).
d) 1,6% SeaPlaque Agarose autokláv üvegben.
e) Steril 35 mm-es Corning lemezek (FMC Bioproducts katalógusszám: 50102).
f) Steril 5 ml-es üvegpipetták (egyesével csomagolva).
g) Steril 15 ml-es és 50 ml-es kúpszerű centrifugakémcsövek.
h) Pipetták és steril hegyek.
i) Steril mikrocentrifuga-kémcsövek.
j) T75 lombikokban lévő sejtek: SKOV-3 (ATCC
HTB77).
k) 0,25%-os tripszinoldat (Gibco katalógusszám:
25200-015).
Eljárás. A lágy agar vizsgálat elvégzéséhez a következő eljárást alkalmazzuk:
A) Az alapréteg elkészítésére vonatkozó eljárás
1. Az összes táptalajt felmelegítjük a 37 °C hőmérsékletű vízfürdőben.
2. Az 1X vizsgálati táptalaj+0,8% agar elkészítése: a megolvasztott (és 39 °C hőmérsékletre hűtött) agárból a 2X vizsgálati táptalajjal 1:2 (térfogat:térfogat) arányú hígítást készítünk.
3. Amikor nem használjuk, az összes agarral együtt lévő táptalajt melegen tartjuk a 39 °C hőmérsékletű vízfürdőben.
4. Az 1X vizsgálati táptalaj+0,8% agar 1 ml mennyiségét több csészébe szétosztjuk, és a lemezt óvatosan megkeverjük, hogy egy egységes alapréteget kapjunk. A buborékképződést elkerüljük.
5. Az alapréteget hűtőszekrényben hűtjük, amíg az meg nem szilárdul (körülbelül 20 perc). Az alaprétegeket a hűtőszekrényben tarthatjuk éjszakára.
B) A sejtek összegyűjtésére vonatkozó eljárás
1. Sejtfonalanként egy lombikot kiveszünk az inkubátorból; a táptalajt leszívjuk; egyszer mossuk PBS-sel és leszívjuk; és hozzáadunk 3 ml tripszinoldatot.
2. Miután minden sejtet kimostunk a lombikból, hozzáadunk 3 ml 1X vizsgálati táptalajt, hogy legátoljuk a tripszinaktivitást. A sejteket föl-le pipettázzuk, majd a szuszpenziót egy 15 ml-es kémcsőbe rakjuk.
3. A sejtek koncentrációját egy Coulter számláló felhasználásával, életképességüket pedig tripánkék-kirekesztéssel határozzuk meg.
4. Kiveszünk a rendszerből akkora mennyiséget, ami elegendő lemezenként 3300 életképes sejt telepítésére, és azt az 1X vizsgálati táptalajjal 1,5 ml-re hígítjuk.
HU 226 755 Β1
C) A felső 0,4% „agarose”réteg elkészítésére vonatkozó eljárás
1. Hozzáadjuk a TBST-vegyületeket kétszer akkora koncentrációban, mint amilyen a kívánt végső vizsgálati koncentrációjuk; +1,5 ml 1X vizsgálati táptalaj és 10% FBS elegyben lévő sejtszuszpenziót; +1,5 ml 1X vizsgálati táptalajt+0,8% „agarose”-t*: összesen=3 ml 1X táptalaj, 10% FBS+0,4% „agarose”, 3300 életképes sejt/ml koncentráció mellett, TBST-vegyületekkel és azok nélkül.
*(A 2X táptalajnak a fent leírt alapréteg-eljáráshoz felhasznált 1,6% agar 30-cal való 1:2 arányú hígításával állítjuk elő.)
2. A vizsgálati elegy (Assay Mix) 1 ml mennyiségét felhordjuk az alapréteg 1 ml mennyiségére. A másodpéldányokat a 3 ml térfogatból borítjuk be.
3. A csészéket 2-3 héten keresztül inkubáljuk egy 100%-os nedvességtartalmú, 10% szén-dioxid-tartalmú inkubátorban.
4. A 60 mikronos és annál nagyobb kolóniákat pozitívnak értékeljük.
6.2.2. Szulforodamin B (SRB) növekedési vizsgálatok
Az SRB vizsgálatokat az egyes anyagok sejtnövekedésre kifejtett hatásának mérésére használhatjuk. A vizsgálatokat a következők szerint végezzük el:
1. vizsgálat: 3T3/E/H+TGF-a(T) sejtnövekedési
SRB vizsgálat Anyagok:
üregű, lapos fenekű steril lemezek, üregű kerek fenekű steril lemezek, steril 25 ml-es és 100 ml-es tartály, pipetták, többcsatornás pipettázó, steril pipettacsúcsok, steril 15 ml-es és 50 ml-es kémcsövek.
Reagensek:
1%-os ecetsavban lévő 0,4%-os SRB, mM Tris-bázis,
10%-os TCA, %-os ecetsav, steril DMSO (Sigma),
DMSO-ban lévő vegyület (100 mM vagy még kisebb koncentrációjú szabványoldat), sejtdisszociációs oldatban lévő 25%-os Trypsin-EDTA (Sigma).
Sejtfonal és növesztő táptalaj:
3T3/E/H+TGF-a(T) (NIH 3T3 clone 7 sejtek, melyek EGF-R/HER2 chimerát és TGF-a-t tartalmaznak, tumorból származó autokrin huroksejtek),
2%-os borjúszérum/DMEM+2 mM glutamin.
Eljárás:
0. nap: A sejtek felhordása
A vizsgálat ezen részét egy lamináris áramlási térben (laminar flow hood) visszük végbe.
1. A sejteket a szokásos módon tripszinezzük. A sejtszuszpenzióból 100 μΙ mennyiséget átteszünk 10 ml izotónba. A sejteket a Coulter számlálóval számoljuk.
2. A sejteket növesztő táptalajban 60 000 sejt/ml sűrűségűre hígítjuk. Egy 96 üregű lapos fenekű lemez minden üregébe átteszünk belőlük 100 μΙ mennyiséget, hogy 6000 sejt/üreg sűrűséget kapjunk.
3. Minden egyes vegyülethez egy fél lemezt használunk fel (4 sor), a vegyület minden egyes koncentrációjához 4 üreget használunk, 4 üreget a táptalajkontrollhoz és 4 üreget a DMSO-kontrollhoz.
4. A lemezeket óvatosan összerázzuk, hogy a sejtek egyenletesen oszoljanak el rajtuk.
5. A lemezeket 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk egy 10%-os szén-dioxid-tartalmú inkubátorban.
1. nap: A vegyületek hozzáadása
A vizsgálat ezen részét egy lamináris áramlási térben visszük végbe.
1. Egy 96 üregű kerek fenekű lemez 3-11. oszlopaiba beleteszünk 125 μΙ növesztés! táptalajt. Ezt a lemezt használjuk a vegyületek kititrálására; vegyületenként 4 sort.
2. Egy steril 15 ml-es kémcsőben, 8 μΙ mennyiségű vegyület összesen 2 ml növesztő táptalajba való vitelével elkészítjük a vegyület legmagasabb koncentrációjának 2X oldatát 1:250 arányú hígításra. Ennél a hígításnál a DMSO koncentrációja 0,4% a 2X oldat esetében vagy 0,2% az 1X oldat esetében a sejteken. A vegyület kiindulási koncentrációja általában 100 μΜ, de ez a koncentráció változhat a vegyület oldhatóságától függően.
3. A kiindulási vegyület 2X oldatát vigyük a 96 üregű kerek fenekű lemez 12. oszlopában lévő üregnégyesbe. A lemezen jobbról balra 1:2 arányú sorozathígítást végzünk oly módon, hogy a 12. oszlopból 125 μΙ mennyiséget átviszünk a 11. oszlopba, a 11. oszlopból a 10. oszlopba, és így tovább. A 96 üregű lapos fenekű lemez megfelelő üregeibe a sejteken lévő táptalaj 100 μΙ mennyiségére 100 μΙ mennyiségeket viszünk a vegyület hígításaiból. Az üregenként! teljes térfogat 200 μΙ kell legyen.
4. A vivőanyag (vehicle) kontrolihoz DMSO-ból 2X oldatot készítünk, a táptalajban lévő 0,4% DMSO-koncentráció mellett. A DMSO-oldat 100 μΙ mennyiségét a megfelelő sejtes üregekbe visszük. A DMSO végső koncentrációja 0,2%.
5. A táptalajkontroll üregei esetében a megfelelő sejtes üregekhez üregenként 100 μΙ növesztő táptalajt adunk.
6. A lemezt visszatesszük az inkubátorba, és 4 napon keresztül inkubáljuk.
5. nap: A vizsgálat végrehajtása
A vizsgálat ezen részét az asztalon visszük végbe.
1. Leszívjuk vagy leöntjük a táptalajt. A sejtek fixálására minden egyes üreghez hozzáadunk 200 μΙ hideg, 1%-os TCA-t. A lemezt legalább 60 percen keresztül inkubáljuk 4 °C hőmérsékleten.
2. A TCA-t eltávolítjuk, és az üregeket vízzel ötször mossuk. A lemezeket fejjel lefelé papírtörölközőkre téve szárítjuk.
3. A sejteket 0,4%-os SRB-vel megfestjük, 10 percen keresztül.
4. Az SRB-t leöntjük, és az üregeket ötször öblítjük 1%-os ecetsavval. A lemezeket teljesen fejjel lefelé fordítva szárítjuk papírtörölközőkön.
HU 226 755 Β1
5. Afestéket üregenként 100 μ110 mM Tris-bázissal oldhatóvá tesszük egy rázógépen, 5-10 perc alatt.
6. A lemezeket egy Dynatech ELISA lemezleolvasóval leolvassuk 570 nm hullámhosszon, 630 nm-en felvett referencia mellett.
2. vizsgálat: 3T3/EGF-R+TGF-a(T) sejtnövekedési
SRB vizsgálat
Anyagok és reagensek: ugyanaz, mint az 1. vizsgálat esetében.
Sejtfonal és növesztő táptalaj:
3T3/EGF-R+TGF-a(T) (NIH 3T3 clone 7 sejtek, melyek EGF-R és TGF-a-t tartalmaznak, tumorból származó autokrin huroksejtek),
2%-os borjúszérum/DMEM+2 mM glutamin.
Eljárás:
0. nap: A sejtek felhordása
A vizsgálat ezen részét egy lamináris áramlási térben visszük végbe.
1. A sejteket a szokásos módon tripszinezzük. A sejtszuszpenzióból 100 μΙ mennyiséget átteszünk 10 ml izotónba. A sejteket a Coulter számlálóval számoljuk.
2. A sejteket növesztő táptalajban 60 000 sejt/ml sűrűségűre hígítjuk. Egy 96 üregű lapos fenekű lemez minden üregébe ebből átteszünk 100 μΙ mennyiséget, hogy 6000 sejt/üreg sűrűséget kapjunk.
3. Minden egyes vegyülethez egy fél lemezt használunk fel (4 sor), a vegyület minden egyes koncentrációjához 4 üreget használunk, 4 üreget a táptalajkontrollhoz és 4 üreget a DMSO-kontrollhoz.
4. A lemezeket óvatosan összerázzuk, hogy a sejtek egyenletesen oszoljanak el rajtuk.
5. A lemezeket 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk egy 10%-os szén-dioxid-tartalmú inkubátorban.
1. nap: A vegyület hozzáadása: ugyanaz, mint az 1. vizsgálat esetében.
5. nap: A vizsgálat végrehajtása: ugyanaz, mint az 1. vizsgálat esetében.
3. vizsgálat: 3T3/PDGP-fiR/PDGF-BB(T) sejtnövekedési SRB vizsgálat
Sejtfonal és növesztő táptalaj:
3T3/PDGF-pR/PDGF-BB(T) (NIH 3T3 clone 7 sejtek, melyek PDGF β-receptort és PDGF-BB-t tartalmaznak, thymushiányos egerekből kimetszett tumorokból), 2%-os borjúszérum/DMEM+2 mM glutamin.
Eljárás:
0. nap: A sejtek felhordása
A vizsgálat ezen részét egy lamináris áramlási térben visszük végbe.
1. A sejteket a szokásos módon tripszinezzük. A sejtszuszpenzióból 100 μΙ mennyiséget átteszünk 10 ml izotónba. A sejteket a Coulter számlálóval számoljuk.
2. A sejteket növesztő táptalajban 60 000 sejt/ml sűrűségűre hígítjuk. Egy 96 üregű lapos fenekű lemez minden üregébe ebből átteszünk 100 μΙ mennyiséget, hogy 6000 sejt/üreg sűrűséget kapjunk.
3. Minden egyes vegyülethez egy fél lemezt használunk fel (4 sor), a vegyület minden egyes koncentrációjához 4 üreget használunk, 4 üreget a táptalajkontrollhoz és 4 üreget a DMSO-kontrollhoz.
4. A lemezeket óvatosan összerázzuk, hogy a sejtek egyenletesen oszoljanak el rajtuk.
5. A lemezeket 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk egy 10%-os szén-dioxid-tartalmú inkubátorban.
1. nap: A vegyület hozzáadása: ugyanaz, mint az 1. vizsgálat esetében.
5. nap: A vizsgálat végrehajtása: ugyanaz, mint az 1. vizsgálat esetében.
4. vizsgálat: Humán simaizomsejtek (SMC, Smooth
Muscle Cells) sejtnövekedési SRB vizsgálata Anyagok és reagensek: ugyanaz, mint az 1. vizsgálat esetében.
Sejtfonal és növesztő táptalaj:
Humán aortasimaizom-sejtek (Clonetics),
Clonetics-féle „Buliét készlet: Simaizom-alaptáptalaj (SmBM, Smooth Muscle Basal Médium), ami olyan módosított MCDB 131, mely a következő összetevőket tartalmazza: magzati szarvasmarhaszérum (5%), hFGF (2 ng/ml), hEGF (0,1 ng/ml), inzulin (5,0 pg/ml), gentamicin (50 pg/ml) és amhotericin B (50 ng/ml). Eljárás:
0. nap: A sejtek felhordása
A vizsgálat ezen részét egy lamináris áramlási térben visszük végbe.
1. A sejteket a szokásos módon tripszinezzük. A sejtszuszpenzióból 100 μΙ mennyiséget átteszünk 10 ml izotónba. A sejteket a Coulter számlálóval számoljuk.
2. A sejteket növesztő táptalajban 60 000 sejt/ml sűrűségűre hígítjuk. Egy 96 üregű lapos fenekű lemez minden üregébe ebből átteszünk 100 μΙ mennyiséget, hogy 6000 sejt/üreg sűrűséget kapjunk.
3. Minden egyes vegyülethez egy fél lemezt használunk fel (4 sor), a vegyület minden egyes koncentrációjához 4 üreget használunk, 4 üreget a táptalajkontrollhoz és 4 üreget a DMSO-kontrollhoz.
4. A lemezeket óvatosan összerázzuk, hogy a sejtek egyenletesen oszoljanak el rajtuk.
5. A lemezeket 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk egy 10%-os szén-dioxid-tartalmú inkubátorban.
1. nap: A vegyület hozzáadása: ugyanaz, mint az 1. vizsgálat esetében.
5. nap: A vizsgálat végrehajtása: ugyanaz, mint az 1. vizsgálat esetében.
6.2.3. 3T3 sejtnövekedési vizsgálat
1. vizsgálat: PDGF-indukált BrdU egyesítési vizsgálat (PDGF-Induced BrdU Incorporation Assay)
Anyagok és reagensek
1. PDGF: humán PDGF B/B; 1276-956, Boehringer
Mannheim, Németország.
2. BrdU jelzőreagens: 10 mM, PBS-ben (pH=7,4), katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
HU 226 755 Β1
3. FixDenat: fixálóoldat (felhasználásra kész állapotban), katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
4. Anti-BrdU-POD: peroxidázzal konjugált monoklonális egérantitest, katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
5. TMB-szubsztrátoldat: tetrametil-benzidin (TMB), felhasználásra kész állapotban, katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
6. PBS mosóoldat: 1X PBS, pH=7,4, helyben készített.
7. Albumin, szarvasmarha (BSA): V frakciójú por; A-8551, Sigma Chemical Co., USA.
Eljárás
1.3T3 sejtfonal: 3T3/EGFRc7.
2. A sejteket 8000 sejt/üreg sűrűségben DMEM,
10% CS és 2 mM Gin elegyébe telepítjük egy 96 üregű lemezben. A sejteket egy éjszakán keresztül inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett.
3. 24 óra elteltével a sejteket PBS-sel mossuk, majd 24 órán keresztül szérummentes táptalajban (0% CS DMEM és 0,1% BSA) a szérumra nézve kiéheztetjük.
4. A 3. napon a sejtekhez egy időben hozzáadjuk a tesztvegyületet és a ligandumot (PDGF=3,8 nM, DMEM-ben 0,1% BSA mellett állítjuk elő). A negatív kontroliüregekhez csak szérummentes DMEM+0,1% BSA-t adunk; a pozitív kontrollsejtekhez hozzáadjuk a ligandumot (PDGF), de a tesztvegyületet nem. A tesztvegyületeket szérummentes, ligandumtartalmú DMEMben állítjuk elő egy 96 üregű lemezben, és sorozathígítással 7 tesztkoncentrációt készítünk.
5. 20 óra ligandumaktiválás után a rendszerhez hígított BrdU jelzőreagenst adunk (1:100 arányú hígítás DMEM-ben, 0,1% BSA), és a sejteket a BrdU-val (végső koncentráció=10 μΜ) 1,5 órán keresztül inkubáljuk.
6. A jelzőreagenssel való inkubálás után a táptalajt dekantálással és a fejjel lefelé fordított lemez papírtörölközőhöz való érintésével eltávolítjuk. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 50 μΙ FixDenat-oldatot, és a lemezeket szobahőmérsékleten 45 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
7. A FixDenat-oldatot dekantálással és a fejjel lefelé fordított lemez papírtörölközőhöz való érintésével alaposan eltávolítjuk. Blokkolóoldatként tejet (PBS-ben lévő 5%-os dehidratált tej, 200 μΙ/üreg) adunk a rendszerhez, és a lemezt szobahőmérsékleten 30 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
8. A blokkolóoldatot dekantálással eltávolítjuk, és az üregeket egyszer mossuk PBS-sel. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ anti-BrdU-POD oldatot (1:100 arányú hígítás PBS-ben, 1% BSA), és a lemezt szobahőmérsékleten 90 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
9. Az antitestkonjugátot dekantálással és az üregek ötszöri PBS-sel való kiöblítésével alaposan eltávolítjuk, és a lemezt fejjel lefelé fordítva egy papírtörölközőre téve szárítjuk.
10. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ TMB-szubsztrátoldatot, és a lemezt szobahőmérsékleten 20 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón, amíg a színfejlődés elégséges nem lesz a fotometriás detektáláshoz.
11. A minták abszorbanciáját 410 nm hullámhosszon mérjük („duális hullámhossz” módban, ahol egy szűrő referencia-hullámhosszként 490 nm-en mér), egy Dynatech ELISA lemezleolvasó felhasználásával.
2. vizsgálat: EGF-indukált BrdU egyesítési vizsgálat
Anyagok és reagensek
1. EGF: egér EGF, 201; Toyobo, Co., Ltd. Japán.
2. BrdU jelzőreagens: 10 mM, PBS-ben (pH=7,4), katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
3. FixDenat: fixálóoldat (felhasználásra kész állapotban), katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
4. Anti-BrdU-POD: peroxidázzal konjugált monoklonális egérantitest, katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
5. TMB-szubsztrátoldat: tetrametil-benzidin (TMB), felhasználásra kész állapotban, katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
6. PBS mosóoldat: 1X PBS, pH=7,4, helyben készített.
7. Albumin, szarvasmarha (BSA): V frakciójú por; A-8551, Sigma Chemical Co., USA.
Eljárás
1.3T3 sejtfonal: 3T3/EGFRC7.
2. A sejteket 8000 sejt/üreg sűrűségben DMEM,
10% CS és 2 mM Gin elegyébe telepítjük egy 96 üregű lemezben. A sejteket egy éjszakán keresztül inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett.
3. 24 óra elteltével a sejteket PBS-sel mossuk, majd 24 órán keresztül szérummentes táptalajban (0% CS DMEM és 0,1% BSA) a szérumra nézve kiéheztetjük.
4. A 3. napon a sejtekhez egy időben hozzáadjuk a tesztvegyületet és a ligandumot (EGF=2 nM, DMEMben 0,1% BSA mellett állítjuk elő). A negatív kontroliüregekhez csak szérummentes DMEM+0,1% BSA-t adunk; a pozitív kontrollsejtekhez hozzáadjuk a ligandumot (EGF), de a tesztvegyületet nem. A tesztvegyületeket szérummentes, ligandumtartalmú DMEM-ben állítjuk elő egy 96 üregű lemezben, és sorozathígítással 7 tesztkoncentrációt készítünk.
5. 20 óra ligandumaktiválás után a rendszerhez hígított BrdU jelzőreagenst adunk (1:100 arányú hígítás DMEM-ben, 0,1% BSA), és a sejteket a BrdU-val (végső koncentráció=10 μΜ) 1,5 órán keresztül inkubáljuk.
6. A jelzőreagenssel való inkubálás után a táptalajt dekantálással és a fejjel lefelé fordított lemez papírtörölközőhöz való érintésével eltávolítjuk. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 50 μΙ FixDenat-oldatot, és a
HU 226 755 Β1 lemezeket szobahőmérsékleten 45 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
7. A FixDenat-oldatot dekantálással és a fejjel lefelé fordított lemez papírtörölközőhöz való érintésével alaposan eltávolítjuk. Blokkolóoldatként tejet (PBS-ben lévő 5%-os dehidratált tej, 200 μΙ/üreg) adunk a rendszerhez, és a lemezt szobahőmérsékleten 30 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
8. A blokkolóoldatot dekantálással eltávolítjuk, és az üregeket egyszer mossuk PBS-sel. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ anti-BrdU-POD oldatot (1:100 arányú hígítás PBS-ben, 1% BSA), és a lemezt szobahőmérsékleten 90 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
9. Az antitestkonjugátot dekantálással és az üregek ötszöri PBS-sel való kiöblítésével alaposan eltávolítjuk, és a lemezt fejjel lefelé fordítva egy papírtörölközőre téve szárítjuk.
10. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ TMB-szubsztrátoldatot, és a lemezt szobahőmérsékleten 20 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón, amíg a színfejlődés elégséges nem lesz a fotometriás detektáláshoz.
11. A minták abszorbanciáját 410 nm hullámhosszon mérjük („duális hullámhossz” módban, ahol egy szűrő referencia-hullámhosszként 490 nm-en mér), egy Dynatech ELISA lemezleolvasó felhasználásával.
3. vizsgálat: EGF-indukált HER2-hajtott BrdU egyesítési vizsgálat Anyagok és reagensek
1. EGF: egér, 201; Toyobo, Co., Ltd., Japán.
2. BrdU jelzőreagens: 10 mM, PBS-ben (pH=7,4), katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
3. FixDenat: fixálóoldat (felhasználásra kész állapotban), katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
4. Anti-BrdU-POD: peroxidázzal konjugált monoklonális egérantitest, katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
5. TMB-szubsztrátoldat: tetrametil-benzidin (TMB), felhasználásra kész állapotban, katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
6. PBS mosóoldat: 1X PBS, pH=7,4, helyben készített.
7. Albumin, szarvasmarha (BSA): V frakciójú por; A-8551, Sigma Chemical Co., USA.
Eljárás
1. 3T3 sejtfonal: 3T3/EGFr/Her2/EGFr (EGFr egy
Her2 kináz doménnel).
2. A sejteket 8000 sejt/üreg sűrűségben DMEM,
10% CS és 2 mM Gin elegyébe telepítjük egy 96 üregű lemezben. A sejteket egy éjszakán keresztül inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett.
3. 24 óra elteltével a sejteket PBS-sel mossuk, majd 24 órán keresztül szérummentes táptalajban (0%
CS DMEM és 0,1% BSA) a szérumra nézve kiéheztetjük.
4. A 3. napon a sejtekhez egy időben hozzáadjuk a tesztvegyületet és a ligandumot (EGF=2 nM, DMEMben 0,1% BSA mellett állítjuk elő). A negatív kontroliüregekhez csak szérummentes DMEM+0,1% BSA-t adunk; a pozitív kontrollsejtekhez hozzáadjuk a ligandumot (EGF), de a tesztvegyületet nem. A tesztvegyületeket szérummentes, ligandumtartalmú DMEM-ben állítjuk elő egy 96 üregű lemezben, és sorozathígítással 7 tesztkoncentrációt készítünk.
5. 20 óra ligandumaktiválás után a rendszerhez hígított BrdU jelzőreagenst adunk (1:100 arányú hígítás DMEM-ben, 0,1% BSA), és a sejteket a BrdU-val (végső koncentráció=10 μΜ) 1,5 órán keresztül inkubáljuk.
6. A jelzőreagenssel való inkubálás után a táptalajt dekantálással és a fejjel lefelé fordított lemez papírtörölközőhöz való érintésével eltávolítjuk. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 50 μΙ FixDenat-oldatot, és a lemezeket szobahőmérsékleten 45 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
7. A FixDenat-oldatot dekantálással és a fejjel lefelé fordított lemez papírtörölközőhöz való érintésével alaposan eltávolítjuk. Blokkolóoldatként tejet (PBS-ben lévő 5%-os dehidratált tej, 200 μΙ/üreg) adunk a rendszerhez, és a lemezt szobahőmérsékleten 30 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
8. A blokkolóoldatot dekantálással eltávolítjuk, és az üregeket egyszer mossuk PBS-sel. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ anti-BrdU-POD oldatot (1:100 arányú hígítás PBS-ben, 1% BSA), és a lemezt szobahőmérsékleten 90 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
9. Az antitestkonjugátot dekantálással és az üregek ötszöri PBS-sel való kiöblítésével alaposan eltávolítjuk, és a lemezt fejjel lefelé fordítva egy papírtörölközőre téve szárítjuk.
10. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ TMB-szubsztrátoldatot, és a lemezt szobahőmérsékleten 20 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón, amíg a színfejlődés elégséges nem lesz a fotometriás detektáláshoz.
11. A minták abszorbanciáját 410 nm hullámhosszon mérjük („duális hullámhossz” módban, ahol egy szűrő referencia-hullámhosszként 490 nm-en mér), egy Dynatech ELISA lemezleolvasó felhasználásával.
4. vizsgálat: IGF1-indukált BrdU egyesítési vizsgálat
Anyagok és reagensek
1. IGF1 ligandum: humán, rekombináns; G511, Promega Corp., USA.
2. BrdU jelzőreagens: 10 mM, PBS-ben (pH=7,4), katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
3. FixDenat: fixálóoldat (felhasználásra kész állapotban), katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
HU 226 755 Β1
4. Anti-BrdU-POD: peroxidázzal konjugált monoklonális egérantitest, katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
5. TMB-szubsztrátoldat: tetrametil-benzidin (TMB), felhasználásra kész állapotban, katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
6. PBS mosóoldat: 1X PBS, pH=7,4, helyben készített.
7. Albumin, szarvasmarha (BSA): V frakciójú por; A-8551, Sigma Chemical Co., USA.
Eljárás
1.3T3 sejtfonal: 3T3/IGF1r.
2. A sejteket 8000 sejt/üreg sűrűségben DMEM,
10% CS és 2 mM Gin elegyébe telepítjük egy 96 üregű lemezben. A sejteket egy éjszakán keresztül inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett.
3. 24 óra elteltével a sejteket PBS-sel mossuk, majd 24 órán keresztül szérummentes táptalajban (0% CS DMEM és 0,1% BSA) a szérumra nézve kiéheztetjük.
4. A 3. napon a sejtekhez egy időben hozzáadjuk a tesztvegyületet és a ligandumot (IGF1 =3,3 nM, DMEMben 0,1% BSA mellett állítjuk elő). A negatív kontroliüregekhez csak szérummentes DMEM+0,1% BSA-t adunk; a pozitív kontrollsejtekhez hozzáadjuk a ligandumot (IGF1), de a tesztvegyületet nem. A tesztvegyületeket szérummentes, ligandumtartalmú DMEM-ben állítjuk elő egy 96 üregű lemezben, és sorozathígítással 7 tesztkoncentrációt készítünk.
5. 16 óra ligandumaktiválás után a rendszerhez hígított BrdU jelzőreagenst adunk (1:100 arányú hígítás DMEM-ben, 0,1% BSA), és a sejteket a BrdU-val (végső koncentráció=10 μΜ) 1,5 órán keresztül inkubáljuk.
6. A jelzőreagenssel való inkubálás után a táptalajt dekantálással és a fejjel lefelé fordított lemez papírtörölközőhöz való érintésével eltávolítjuk. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 50 μΙ FixDenat-oldatot, és a lemezeket szobahőmérsékleten 45 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
7. A FixDenat-oldatot dekantálással és a fejjel lefelé fordított lemez papírtörölközőhöz való érintésével alaposan eltávolítjuk. Blokkolóoldatként tejet (PBS-ben lévő 5%-os dehidratált tej, 200 μΙ/üreg) adunk a rendszerhez, és a lemezt szobahőmérsékleten 30 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
8. A blokkolóoldatot dekantálással eltávolítjuk, és az üregeket egyszer mossuk PBS-sel. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ anti-BrdU-POD oldatot (1:100 arányú hígítás PBS-ben, 1% BSA), és a lemezt szobahőmérsékleten 90 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
9. Az antitestkonjugátot dekantálással és az üregek ötszöri PBS-sel való kiöblítésével alaposan eltávolítjuk, és a lemezt fejjel lefelé fordítva egy papírtörölközőre téve szárítjuk.
10. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ TMB-szubsztrátoldatot, és a lemezt szobahőmérsékleten 20 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón, amíg a színfejlődés elégséges nem lesz a fotometriás detektáláshoz.
11. A minták abszorbanciáját 410 nm hullámhosszon mérjük („duális hullámhossz” módban, ahol egy szűrő referencia-hullámhosszként 490 nm-en mér), egy Dynatech ELISA lemezleolvasó felhasználásával.
5. vizsgálat: Inzulinindukált BrdU egyesítési vizsgálat
Anyagok és reagensek
1. Inzulin: kristályos, szarvasmarha, cink; 13 007, Gibco BRL, USA.
2. BrdU jelzőreagens: 10 mM, PBS-ben (pH=7,4), katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
3. FixDenat: fixálóoldat (felhasználásra kész állapotban), katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
4. Anti-BrdU-POD: peroxidázzal konjugált monoklonális egérantitest, katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
5. TMB-szubsztrátoldat: tetrametil-benzidin (TMB), felhasználásra kész állapotban, katalógusszám: 1 647 229, Boehringer Mannheim, Németország.
6. PBS mosóoldat: 1X PBS, pH=7,4, helyben készített.
7. Albumin, szarvasmarha (BSA): V frakciójú por; A-8551, Sigma Chemical Co., USA.
Eljárás
1.3T3 sejtfonal: H25.
2. A sejteket 8000 sejt/üreg sűrűségben DMEM,
10% CS és 2 mM Gin elegyébe telepítjük egy 96 üregű lemezben. A sejteket egy éjszakán keresztül inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett.
3. 24 óra elteltével a sejteket PBS-sel mossuk, majd 24 órán keresztül szérummentes táptalajban (0% CS DMEM és 0,1% BSA) a szérumra nézve kiéheztetjük.
4. A 3. napon a sejtekhez egy időben hozzáadjuk a tesztvegyületet és a ligandumot (lnzulin=10 nM, DMEM-ben 0,1% BSA mellett állítjuk elő). A negatív kontroliüregekhez csak szérummentes DMEM+0,1% BSA-t adunk; a pozitív kontrollsejtekhez hozzáadjuk a ligandumot (Inzulin), de a tesztvegyületet nem. A tesztvegyületeket szérummentes, ligandumtartalmú DMEMben állítjuk egy 96 üregű lemezben, és sorozathígítással 7 tesztkoncentrációt készítünk.
5. 16 óra ligandumaktiválás után a rendszerhez hígított BrdU jelzőreagenst adunk (1:100 arányú hígítás DMEM-ben, 0,1% BSA), és a sejteket a BrdU-val (végső koncentrációul0 μΜ) 1,5 órán keresztül inkubáljuk.
6. A jelzőreagenssel való inkubálás után a táptalajt dekantálással és a fejjel lefelé fordított lemez papírtörölközőhöz való érintésével eltávolítjuk. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 50 μΙ FixDenat-oldatot, és a lemezeket szobahőmérsékleten 45 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
HU 226 755 Β1
7. A FixDenat-oldatot dekantálással és a fejjel lefelé fordított lemez papírtörölközőhöz való érintésével alaposan eltávolítjuk. Blokkolóoldatként tejet (PBS-ben lévő 5%-os dehidratált tej, 200 μΙ/üreg) adunk a rendszerhez, és a lemezt szobahőmérsékleten 30 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
8. A blokkolóoldatot dekantálással eltávolítjuk, és az üregeket egyszer mossuk PBS-sel. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ anti-BrdU-POD oldatot (1:100 arányú hígítás PBS-ben, 1% BSA), és a lemezt szobahőmérsékleten 90 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón.
9. Az antitestkonjugátot dekantálással és az üregek ötszöri PBS-sel való kiöblítésével alaposan eltávolítjuk, és a lemezt fejjel lefelé fordítva egy papírtörölközőre téve szárítjuk.
10. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 100 μΙ TMB-szubsztrátoldatot, és a lemezt szobahőmérsékleten 20 percen keresztül inkubáljuk egy lemezrázón, amíg a színfejlődés elégséges nem lesz a fotometriás detektáláshoz.
11. A minták abszorbanciáját 410 nm hullámhosszon mérjük („duális hullámhossz” módban, ahol egy szűrő referencia-hullámhosszként 490 nm-en mér), egy Dynatech ELISA lemezleolvasó felhasználásával.
6.2.4. HUV-EC-C vizsgálat
A vegyületek aktivitásának a mérésére a következő eljárást is alkalmazhatjuk:
0. nap
1. A HUV-EC-C sejteket (humán köldökvéna endotheliális sejtek) (Amerikai szövetgyűjtemény; katalógusszám: 1730 CRL) mossuk és tripszinezzük. A rendszert kétszer mossuk Dulbecco-féle foszfátpufferezett sóoldattal (D-PBS; a Gibco BRL-töl; katalógusszám: 14190-029), körülbelül 1 ml mennyiség felhasználásával a szövettenyésztő csésze 10 cm2-einként. A tripszinezést 0,05% Tripszin-EDTA felhasználásával végezzük, nem enzimatikus sejtdisszociációs oldatban (Sigma Chemical Company; katalógusszám: C—1544). A 0,05%-os tripszint 0,25%-os tripszin/1 mM EDTA (Gibco; katalógusszám: 25200-049) sejtdisszociációs oldatban való hígításával készítjük el. A tripszinezést a szövettenyésztő csésze 25-30 cm2-einként körülbelül 1 ml oldattal végezzük 37 °C hőmérsékleten, körülbelül 5 percen keresztül. Miután a sejtek leváltak a csészéről, hozzáadunk ugyanakkora mennyiségű vizsgálati táptalajt, és áttesszük egy 50 ml-es steril centrifugáló kémcsőbe (Fisher Scientific; katalógusszám: 05-539-6).
2. A sejteket 35 ml vizsgálati táptalajjal mossuk az 50 ml-es steril centrifugáló kémcsőben a vizsgálati táptalaj hozzáadásával, körülbelül 200*g-vel 10 percen keresztül centrifugálunk, a felülúszó folyadékot leszívjuk és 35 ml D-PBS-sel újraszuszpendáljuk. A D-PBSsel való mosást még kétszer megismételjük, és a sejteket a szövettenyésztő csésze 10 cm2-einként körülbelül 1 ml vizsgálati táptalajban újraszuszpendáljuk.
A vizsgálati táptalaj összetétele a következő: F12K táptalaj (Gibco BRL; katalógusszám: 21127-014)+0,5% hővel inaktivált magzati szarvasmarhaszérum. A sejteket egy Coulter Counter®v (Coulter Electronics, Inc.) felhasználásával számláljuk, majd hozzáadunk annyi vizsgálati táptalajt, hogy a sejtek koncentrációja 0,8-1,0*105 legyen ml-enként.
3. A sejteket 96 üregű lapos fenekű lemezekre visszük 100 μΙ/üreg vagy 0,8-1,0*104 sejt/üreg mennyiségben, és a lemezeket körülbelül 24 órán keresztül inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett.
1. nap
1. Különálló 96 üregű lemezekben kétszeres gyógyszerhígítási sort készítünk, általában 50 μΜ-tói lefelé 0 μΜ-ig. Ugyanazt a vizsgálati táptalajt használjuk most is, mint amit a 0. nap 2. lépésében leírtunk. A híg ítási sorokat a lemez megfelelő oszlopának felső üregéhez 90 μΙ/üreg mennyiségű, 200 μΜ koncentrációjú (4X a végső üregbeni koncentráció) gyógyszer hozzáadásával készítjük el. Mivel a szabvány-gyógyszerkoncentráció általában 20 mM DMSO-ban, így a 200 μΜ gyógyszer-koncentráció 2% DMSO-t tartalmaz.
így a gyógyszer hígítási soraihoz olyan oldószert használunk, melyet a vizsgálati táptalajban (F12K+0,5 magzati szarvasmarhaszérum) 2% DMSOtartalommal készítünk el, azért, hogy a gyógyszer felhíguljon, de a DMSO-koncentráció ne változzon. Ezt az oldószert hozzáadjuk az oszlop fennmaradó üregeihez, 60 μΙ/üreg mennyiségben. Az oszlop felső üregében lévő 120 μΙ 200 μΜ-os hígítású gyógyszerből 60 μΙ mennyiséget kiveszünk, és azt összekeverjük a következő üregben lévő 60 μΙ-rel. Ezután ebből az üregből veszünk ki 60 μΙ mennyiséget, és azt a harmadik üregben lévő 60 μΙ-rel keverjük el, és így tovább egészen addig, míg a kétszeres hígítási sor el nem készül. Amikor az utolsó előtti üreget bekevertük, az üregben lévő 120 μΙ-bői 60 μΙ-t kiveszünk, és azt eldobjuk. Az utolsó üregben meghagyjuk az eredetileg benne lévő 60 μΙ DMSO/táptalaj oldószert, mint gyógyszer nélküli kontrollt. A gyógyszer hígításaiból 9 oszlopot készítünk, ami elég ahhoz, hogy 3-3 üregünk legyen mind 1. a VEGF-hez (származási hely: Pepro Tech Inc., katalógusszám: 100-200), 2. az endoteliális sejt növekedési faktorhoz (ECGF) (mely más néven savas fibroblaszt faktorként vagy aFGF-ként is ismert) (származási hely: Boehringer Mannheim Biochemica, katalógusszám: 143 9 600) és 3. a vizsgálati táptalajkontrollhoz. Az ECGF nátrium-heparinnal való preparátumként szerezhető be.
2. A gyógyszerhígításokból üregenként 50 μΙ mennyiséget átviszünk a HUV-EC-C sejteket 0,8-1,0*104 sejt/100 μΙ/üreg mennyiségben tartalmazó, 0. napról való, 96 üregű vizsgálati lemezekbe, és azokat körülbelül 2 órán keresztül inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett.
3. Minden egyes gyógyszer-koncentrációhoz három példányban hozzáadunk üregenként 50 μΙ
HU 226 755 Β1 pg/ml koncentrációjú VEGF-et, 20 ng/ml koncentrációjú ECGF-et vagy vizsgálat táptalajt. Akárcsak a gyógyszer esetében, a növekedési faktor koncentrációja is négyszerese a kívánt végső koncentrációnak. A növekedési faktorok koncentrációinak beállítására a 0. nap 2. lépéséből származó vizsgálati táptalajt használjuk. A rendszert körülbelül 24 órán keresztül inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett. Ekkor minden egyes üregben lesz 50 pl gyógyszerhígítás, 50 μΙ növekedési faktor vagy táptalaj és 100 μΙ sejt, azaz összesen 200 μΙ mennyiség üregenként. így a gyógyszerek és a növekedési faktorok 4X koncentrációi 1X koncentrációk lesznek, amint minden összetevőt az üregekhez adunk.
2. nap
1. A rendszerhez hozzáadunk üregenként 1 pCi (10 μΙ/üreg a 100 pCi/ml oldatból, melyet RMPI táptalajban készítünk el 10% hővel inaktivált magzati szarvasmarhaszérum hozzáadásával) 3H-timidint (Amersham; katalógusszám: TRK-686), és a rendszert körülbelül 24 órán keresztül inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten, 5%-os szén-dioxid-tartalom mellett. Megjegyzés: a 3H-timidin-oldatot azért RPMI táptalajban készítjük el, mert minden más esetben, amikor a 3H-timidint használjuk, olyan kísérletekről van szó, melyeket RPMI-ben kell elvégezni. A táptalaj különbözősége ennél a lépésnél valószínűleg nem lényeges. Az RPMI származási helye a Gibco BRL, katalógusszám: 11875-051.
3. nap
1. A lemezeket egy éjszakán keresztül fagyasztjuk -20 °C hőmérsékleten.
4. nap
1. A lemezeket felolvasztjuk, és tartalmukat egy 96 üregű lemezbetakarító (Tomtec Harvester 96®) felhasználásával szűrőlapokra (Wallac; katalógusszám: 1205-401) gyűjtjük; és a beütéseket egy Wallac Betaplate™ folyadékszcintillációs számlálóval számláljuk.
6.2.5. PDGF-R celluláris vizsgálat
A PDGF celluláris kináz vizsgálatot a következők szerint végezzük el: a sejteket 0,2 M Hepes, 0,15 M NaCI, 10% VA/ glicerol, 0,04% Triton X-100, 5 mM EDTA, 5 mM nátrium-vanadát és 2 mM Na+pirofoszfát elegyében elbomlasztjuk; a sejtbomlásterméket ezután egy olyan ELISA lemezre visszük, mely anti-PDGF receptor antitesttel van borítva (Genzime); az ELISA lemezeket a sejtbomlástermék hozzáadása előtt borítjuk be üregenként 150 μΙ PBS-ben lévő 0,5 pg antitesttel 18 órán keresztül, 4 °C hőmérsékleten; a sejtbomlásterméket a beburkolt lemezekben 1 órán keresztül inkubáljuk, majd négyszer mossuk TBST-ben (35 nM Tris-HCI pH=7,0, 0,15 M NaCI, 0,1% Triton X-100); a rendszerhez 100 pl PBS-ben lévő antifoszfotirozin antitestet adunk, és az elegyet szobahőmérsékleten 30 percen keresztül inkubáljuk; ezután az üregeket négyszer mossuk TBST-ben, egy POD-hoz konjugált másodlagos antitestet adunk minden egyes üreghez, és a kezelt üregeket szobahőmérsékleten 30 percen keresztül inkubáljuk; az üregeket ezután négyszer mossuk TBST-ben, minden egyes üreghez ABTS/H2O2 oldatot adunk, és az üregeket két percen keresztül inkubáljuk; az abszorbanciát ezután 410 nm hullámhosszon mérjük.
6.2.6. A sejtnövekedési vizsgálat kísérleti eredményei
A különböző vegyületekre a fent leírt vizsgálatok felhasználásával kapott eredmények a következő táblázatokban találhatók.
2. táblázat
Endoteliális sejtekben való mitogenezis pHjtimidin egyesítés (inkorporáció)
Vegyület (példa száma) | HUV-EC VEGF (μΜ) | Vizsgálat a-FGF (μΜ) |
27. | 1,1 | 153,8 |
1B. | 0,2 | 6,0 |
16. | 6,6 | 3,4 |
17. | 4,8 | 35,7 |
4796. | 30,7 | 35,8 |
20. | 43,2 | |
21. | 19,9 | |
22. | 2,5 | 45,2 |
23. | 1,6 | 4,6 |
24. | 14,8 | |
25. | 3,4 | 3,7 |
26. | 25,6 | 19,3 |
28. | 8,0 | 13,0 |
29. | 34,3 | 16,3 |
30. | 1,0 | 1,4 |
32. | 4,4 | 4,9 |
4. | 0,6 | |
33. | 46,1 | 27,3 |
5. | 0,8 | 25,8 |
5201. | 2,5 | 2,3 |
36. | 2,3 | 0,7 |
37. | 5,1 | 11,8 |
38. | 2,9 | 130 |
5217. | 9,6 | 10,5 |
41. | 2,4 | 2,7 |
8. | 2,2 | |
42. | <0,8 | 2,0 |
9. | <0,8 | 31,1 |
44. | 0,9 | 0,6 |
10. | <0,8 | |
45. | 39,8 | 35,5 |
11. | <0,8 | 22,7 |
HU 226 755 Β1
2. táblázat (folytatás)
Vegyület (példa száma) | HUV-EC VEGF (μΜ) | Vizsgálat a-FGF (μΜ) |
5409. | 26,0 | |
12. | <0,8 | |
48. | 13,6 | 40 |
13. | 0,7 | |
50. | 11,4 | |
14. | 2,5 | |
15. | 5,7 | |
5429. | 27,6 | |
59. | 0,16 | 0,14 |
60. | 39,8 | 33,0 |
61. | 1,2 | 30,0 |
63. | 3,8 | 3,4 |
64. | 20 | 20 |
68. | <0,07 | <0,07 |
69. | 0,5 | 0,8 |
70. | 0,14 | 7,9 |
71. | 3,8 | 12,9 |
73. | 1,3 | 3,2 |
74. | 0,54 | 8,7 |
76. | 2,0 | 5,0 |
77. | 1,2 | 14,1 |
81. | 0,05 | 37,8 |
7. | 1,2 | 3,8 |
3. táblázat
Mitogenezis 3T3/EGFR sejtekben BrdU egyesítés (inkorporáció)
Vegyület (példa száma) | PDGFR PDGF ligandum | FGFR FGF ligandum | EGFR EGF ligandum |
IC50 (μΜ) | IC50 (μΜ) | IC50 (μΜ) | |
27. | 75 | ||
4313. | 6 | 5,5 | 5,5 |
1B. | 2,5 | ||
29. | 9 | 4,9 | 60 |
4. | 3 | 10 | 20 |
5402. | 50 | 40 | |
36. | 3 | 25 | |
10. | 5,2 | ||
45. | 7,5 | 70 | 100 |
12. | 2,8 | 70 | |
61. | 30 | 16 | |
5463. | 23 | ||
71. | 70 | 60 | 95 |
5465. | 40 | 25 | 50 |
73. | 18 | 15 | 17 |
74. | 8 | ||
5469. | 4 | 15 | 28 |
77. | 4 | 50 | 54 |
81. | 6,5 | 9 | 48 |
4. táblázat
Különféle sejtfonalakon elvégzett sejtnövekedési vizsgálatok SRB readout
Vegyület (példa száma) | 3T3/E/H+TGF-a(T) | 3T3/EGFR+TGF-a(T) | 3T3/PDGFR+PDGF(T) | SMC |
IC50(pM) | IC50 (μΜ) | IC50 (μΜ) | IC50 (μΜ) | |
27. | 36 | |||
4313. | 32 | 10,7 | 8,8 | |
1B. | 78 | 10 | ||
5. | 22,2 |
3T3/E/H+TGF-a(T): NIH 3T3 sejtek, melyek EGFR/HER2 chimerát és TGF-a-t tartalmaznak, tumorból származnak. 3T3/EGFR+TGF-a(T): NIH 3T3 sejtek, melyek EGFR-t és TGF-a-t tartalmaznak, tumorból származnak. 3T3/PDGFR+PDGF(T): NIH 3T3 sejtek, melyek PDGF-3R-t és PDGF-ββ-Ι tartalmaznak, tumorból származnak. SMC: humán simaizomsejtek a Cloneticstől.
6.3. A sejttoxicitás mérése A gyógyhatású vegyületeknek erősebb kell legyen a receptor tirozin-kináz-aktivitást gátló képessége, mint 55 az általa gyakorolt citotoxikus hatás. Egy vegyület hatékonyságának és sejttoxicitásának mértéke megkapható a terápiás indexének meghatározásával: IC50/LD50. Az IC50, az 50%-os gátlás eléréséhez szükséges dózis, standard eljárások felhasználásával hatá- 60 rozható meg, így például az itt leírt módon. Az LD50, az 50%-os toxicitást eredményező dózis szintén mérhető standard eljárások felhasználásával (Mossman, 1993, J. Immunoi. Methods, 65: 55-63), a felszabadított LDH mennyiségének a mérésével (Korzeniewski és Callewaert, 1983, J. Immunoi. Methods 64: 313; Decker és Lohmann-Matthes, 1988, J. Immunoi. Methods 115: 61), vagy a halálos dózis állatkísérletekben való méré36
HU 226 755 Β1 sével. Azok a vegyületek az előnyben részesítettek, melyek nagy terápiás indexszel rendelkeznek. A terápiás index értéke nagyobb kell legyen, mint 2, előnyösen azonban értéke legalább 10, még előnyösebben pedig legalább 50.
6.3. In vivő állatmodellek
6.3.1. Xenograft állatmodellek
A humán tumorok arra vonatkozó képessége, hogy xenograftokként thymushiányos egerekben (például Balb/c, nu/nu) nőjön, hasznos in vivő modellt szolgáltat a humán tumorokkal szembeni terápiákra adott biológiai válaszreakciók tanulmányozására. A humán tumorok thymushiányos egerekbe történő első sikeres xenotranszplantációja óta (Rygaard és Polvsen, 1969, Acta Pathol. Microbial. Scand. 77: 758-760) sok különböző humán tumorsejtfonalat (például emlőráksejtek, tüdőráksejtek, húgy- és ivarszervi ráksejtek, gyomor- és bélráksejtek, fej- és nyaki ráksejtek, a glioblastomasejtek, csontráksejtek és a rosszindulatú pigmentsejtes ráksejtek) ültettek át és növesztettek sikeresen „nude” egerekben. A humán emlőtumor-sejtfonalakról, ideértve az MCF-7, a ZR75-1 és az MDAMB-231 sejtfonalakat is, megállapították, hogy azok szubkutáns xenograftok a „nude” egerekben (Warri és munkatársai, 1991, Int. J. Cancer 49: 616-623; Ozzello és Sordat, 1980, Eur. J. Cancer 16: 553-559; Osborne és munkatársai, 1985, Cancer Rés. 45: 584-590; Seibert és munkatársai, 1983, Cancer Rés. 43: 2223-2239).
1. vizsgálat: HER2/xenograft állatmodell
A lehetséges tumorellenes gyógyszerek HER2-tartalmú tumorokra kifejtett hatásának vizsgálatához a tumorsejteknek képeseknek kell lenniük a növekedésre pótlólagos ösztrogén hiányában is. Sok emlősejtfonal áll függőségben az ösztrogéntől a „nude” egerekben való in vivő növekedéshez (Osborne és munkatársai, mint fentebb), azonban az exogén ösztrogén elnyomja HER2-t a „nude” egerekben (Warri és munkatársai, mint fentebb, Dati és munkatársai, 1990, Oncogene 5: 1001-1006). így például az MCF-7, a ZR-75-1 és a T47D sejtek jól nőnek in vivő körülmények között ösztrogén jelenlétében, de nagyon alacsony HER2-szinteket mutatnak (Warri és munkatársai, mint fentebb, Dati és munkatársai, mint fentebb).
A következő típusú xenograft eljárás alkalmazható:
1. Öt-hat hetes nőstény Balb/c nu/nu thymushiányos egerek hátulsó csípőjébe (szubkutánsan) beültetjük a tumorsejteket;
2. beadjuk a tumor elleni vegyületet;
3. a tumor növekedését a tumor méretének mérésével mérjük.
A tumorokat vizsgálhatjuk egyes receptorok, mint amilyen például a HER2, az EGF vagy a PDGF, jelenlétére is, Western- és immunhisztokémiai vizsgálatok felhasználásával. A fenti eljárásokat a tudomány e területén jártas szakemberek jól ismert módszerek alkalmazásával, például különféle kezelési rendszerek alkalmazásával tovább módosíthatják.
2. vizsgálat: FLK-1/xenograft állatmodell
Megvizsgáljuk a találmány vegyületeinek arra vonatkozó képességét, hogy miként gátolják az SC xenograftokként meghonosított petefészek-, melanóma-, prosztata-, tüdő- és emlőtumorsejteket. Ezeket a vizsgálatokat 1 mg/kg/nap és 75 mg/kg/nap közötti dózisok felhasználásával végezzük.
Anyagok és módszerek. A tumorsejteket szubkutánsan a megjelölt egértörzsekbe ültetjük. A kezelést az átültetést követő első napon kezdjük, hacsak mást nem mondunk (az SCID egerekben az A375 melanoma-sejtfonal kezelését például a 9. napon kezdjük el). Minden egyes vizsgálati csoport nyolc (8)—tizenhat (16) egérből áll.
Részletes leírás
Az állatok. A nőstény thymushiányos egerek (BALB/c, nu/nu), a BALB/c egerek, a Wistar-patkányok és a Fisher 344 patkányok a Simonsen Laboratoriesből (Gilroy, CA) származnak. A nőstény A/l egerek beszerzési helye a Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). A DA patkányok a B&K Universal, Inc.-ból (Fremont, CA) származnak. A thymushiányos R/Nu patkányok, a DBA/2N egerek és a BALB/c egerek származási helye a Harlan Sprague Dawley (Indianapolis, IN). A nőstény C57BL/6 egerek származási helye a Taconic (Germantown, NY). Minden állatot „clean-room” körülmények között tartunk Micro-isolator ketrecekben, Alpha-dri alommal. Steril rágcsáló-ennivalót és ad libitum vizet adunk nekik.
Minden eljárást a „NIH Guide fór the Care and Use of Laboratory Animals” útmutatásaival összhangban végzünk el.
Szubkutáns xenograft modell. A sejtfonalakat a fentebb leírtak szerint növesztjük a megfelelő táptalajban (lásd a 6. fejezetet). A sejteket összefolyásukkor vagy azt kicsivel megelőzően gyűjtjük be 0,05%-os tripszinEDTA felhasználásával, és 10 percen keresztül 450*g-n pelletezzük. Az így kapott pelleteket steril PBS-ben vagy táptalajban (FBS nélkül) újraszuszpendáljuk az ábrák magyarázó szövegében jelzett megfelelő koncentrációban, és a sejteket beültetjük az egerek hátulsó csípőjébe. A tumornövekedést 3-6 héten keresztül mérjük nóniuszos tolómérők felhasználásával; a tumor térfogatát a hossz*szélességxmagasság formula alapján számítjuk ki, hacsak mást nem mondunk. A P értékeket a Student-féle t-próbával állapítjuk meg. Az 50-100 μΙ kötőanyagban (dimetil-szulfoxid, PBTE, PBTE6C:D5w vagy PBTE:D5W) lévő vegyületet IP injekció formájában juttatjuk a helyükre, az ábrák magyarázó szövegében jelzett koncentrációban.
Intracerebrális xenograft modell. Az egér IC modellhez patkányból származó C6 gliomasejteket gyűjtünk be, és azokat steril PBS-ben szuszpendáljuk 2,5* 107 sejt/ml koncentrációban, majd jégre tesszük. A sejteket BALB/c, nu/nu egerekbe ültetjük a következők szerint: a 70%-os etanollal való mosás előtt, amennyiben szükséges, az egerek homlokfalcsonti fejbőrét egy állatszőrnyíró géppel leborotváljuk. Az állatokat izofluoránnal elaltatjuk, és a tűt a koponyacsonton keresztül behelyezzük a bal agyféltekébe. A sejteket a Hamilton-féle gáz37
HU 226 755 Β1 biztos fecskendőkből olyan 30 ga 12,7 mm-es tűk felhasználásával adagoljuk ki, melyekhez csak 3 mm-es behatolást lehetővé tévő hüvelyeket erősítünk. A 4 μΙ mennyiségű sejtszuszpenzió pontos beadása érdekében egy ismétlő kiadagolót használunk. Az állatok hogylétét naponta ellenőrizzük, és akkor öljük meg azokat, amikor súlyuknak körülbelül 40%-át már elveszítették, és/vagy idegi tüneteket kezdenek mutatni.
A patkány IC modellhez a patkányokat [Wistar, Sprague-DawIey, Fisher 344 vagy thymushiányos R/Nu patkányok; körülbelül 200-400 g testtömeggel (némelyek 300-400 g testtömeggel)] 100 mg/kg Ketaset (ketaminhidroklorid; Aveco, Fort Dodge, lowa) IP injekcióval való beadásával elaltatjuk. A narkózis beállta után a fejbőrt leborotváljuk, és az állatot behelyezzük egy sztereotaxikus készülékbe (Stoelting, Wood Dalé, IL). A bőrt a bemetszés helyén háromszor megtisztítjuk, felváltva használva 70%-os etanolos és 10%-os Povidone-lodine-os tampont. A fejbőr középső részén egy 1,0-1,5 cm hosszúságú bemetszést készítünk egy steril szike felhasználásával. A bőrt enyhén elválasztjuk és oldalirányba széthúzzuk, hogy szabaddá tegyük a koponyacsont felszínén a csontvarratot. Egy fogászati fúrógép (Stoelting, Wood Dalé, IL) felhasználásával egy kis (1-2 mm átmérőjű) lyukat készítünk a koponyacsontban, körülbelül 1 mm-re előre és 2 mm-re oldalirányban a koponyatetőtől. A sejtszuszpenziót egy 50 μΙ-es Hamilton-féle fecskendőbe szívjuk, melyre egy 23 vagy 25 ga standard vágott hegyű tűt teszünk. A fecskendőt a koponyacsonton fúrt lyukba vezetjük a pókhálóburok szintjén, és addig nyomjuk előre, amíg a tű hegye 3 mm mélyen nem hatol az agyba, ahová a sejtszuszpenziót lassan beinjekciózzuk. Miután a sejteket beinjekcióztuk, a tűt a lyukban hagyjuk még 1-2 percre, hogy időt hagyjunk a sejtek teljes bejutására. A koponyacsontot megtisztítjuk, és a bőrt 2-3 öltéssel összevarrjuk. Megvizsgáljuk, hogy az állatok rendbejönnek-e az altatás és a műtét után. A kísérlet teljes tartama alatt az állatokat legalább naponta kétszer megvizsgáljuk, hogy megjelentek-e az intracerebrális tumor fejlődésével kapcsolatos tünetek. Azokat az állatokat, melyeknél előrehaladott tüneti jelenségek figyelhetők meg (támaszkodás, egyensúlyvesztés, kiszáradás, étvágytalanság, koordinációs zavarok, az ápolási tevékenységek megszűnése és/vagy jelentős súlyveszteség), humánusan megöljük, és a kísérlet szempontjából érdekes szerveket és szöveteket kimetsszük.
Intraperitoneális modell. A sejtfonalakat a megfelelő táptalajban növesztjük. A sejteket összegyűjtjük, és steril PBS-sel vagy FBS-mentes táptalajjal mossuk, megfelelő koncentrációban újraszuszpendáljuk, és a megfelelő egértörzs egyedeinek IP üregébe injekciózzuk. Az egereket naponta megvizsgáljuk a hasvízkór kialakulásának szempontjából. Az egyes egyedeket akkor öljük meg, amikor súlygyarapodásuk elérte a 40%-ot, vagy amikor az IP tumor terhe kezd túl nagy stresszt és fájdalmat okozni az állatnak.
6.3.2. In vivő VEGFpellet modell
A következő példában a pelletmodellt alkalmazzuk egy vegyület FLK-1 receptorral szembeni aktivitásának, valamint az érképződéssel kapcsolatos rendellenességekkel szembeni aktivitásának vizsgálatára. Ebben a modellben a VEGF egy időkésleltetett pelletbe van ágyazva, és azt szubkutánsan ültetjük be a „nude” egerek hasára, hogy egy „vörösödési” reakciót, azt követően pedig egy, a pellet körüli feldagadást váltsunk ki. Ezután a potenciális FLK-1 inhibitorokat metilcellulózban beültethetjük a VEGF pellet közelébe, hogy eldönthessük, vajon az adott inhibitor használható-e a „vörösödés” és az azt követő feldagadás gátlására.
Anyagok és eljárások. A következő anyagokat használjuk fel:
1. VEGF - humán rekombináns liofilezett termék: kereskedelmi úton beszerezhető a Peprotechtől, Inc., Princeton Businness Park, G2; P.O. box 275, Rocky Hill, NJ 08553.
2. A 21 napos késleltetett pelletekbe ágyazott VEGF beszerzési helye: Innovative Research of America (Innovative Research of America, 3361 Executive Parkway, P.O. Box 2746, Toledo, Ohio 34606), „patent mátrix driven” kézbesítési rendszer felhasználásával. A pelletek VEGF-tartalma 0,20, 0,21 vagy 2,1 pg VEGF/pellet. Ezek a dózisok közelítőleg napi 10 és 100 ng VEGF-felszabadulást eredményeznek.
3. Metil-cellulóz.
4. Víz (steril).
5. Metanol.
6. A megfelelő gyógyszerek/inhibitorok.
7.10 cm-es szövettenyészeti lemezek.
8. Parafilm.
A VEGF pellet modell vizsgálat elvégzéséhez a következő eljárást követjük:
1. A Peprotechtől beszerzett VEGF-et elküldjük az Innovative Researchbe a megrendelt pellet előállítására.
2. Steril vízben 1,5%-os (w/v) metil-celIulóz-oldatot készítünk.
3. A gyógyszereket metanolban oldjuk (a szokásos koncentrációtartomány: 10-20 mg/ml).
4. A steril 10 cm-es lemezekbe steril parafilmet helyezünk.
5. Az 1,5%-os metil-cellulóz 1,35 ml mennyiségéhez 150 pg metanolban lévő gyógyszert adunk, és az elegyet erősen megkeverjük/megforgatjuk.
6. A homogenátum 25 μΙ-es részleteit a parafilmre helyezzük, és lemezekké szárítjuk.
7. Az egereket (6-10 hetes Balb/C thymushiányos nu/nu nőstény egerek) izoflurán belélegeztetésével elaltatjuk.
8. A VEGF pelleteket és a metil-cellulóz-lemezeket szubkutánsan beültetjük az egerek hasára; és
9. az egereket 24 óra és 48 óra elteltével megvizsgáljuk a vörösödés és a feldagadás szempontjából.
A kísérlet pontos kivitelezési körülményei a következők voltak:
N=4 állat/csoport
Kontrollok: VEGF pellet+gyógyszer placebo,
VEGF placebo+gyógyszerpellet.
Kísérleti eredmények. A találmány vegyületeitől e kísérlet alapján azt várjuk, hogy azok aktivitást mutatnak.
HU 226 755 Β1
6.3.3. Emlőzsírcsomó-modell
Sok receptor tirozin-kináz, így például a HER2 receptor, mellrákban igazoltan betöltött szerepe miatt az emlőzsírcsomó-modell különösen hasznos az ilyen receptor tirozin-kinázokat gátló vegyületek hatékonyságának mérésére. A tumorsejteket közvetlenül a kívánt helyre ültetve, az így kapott in situ modellek pontosabb képet adnak a tumorfejlődés biológiájáról, mint a szubkutáns modellek. Humán emlősejtfonalakat, ideértve az MCF-7-et is, már növesztettek thymushiányos egerek emlőzsírcsomójában. Shafie és Grantham, 1981, Natl. Cancer Instit. 67: 51-56; Gottardis és munkatársai, 1988, J. Steroid Biochem. 30: 311-314. Pontosabban a következő eljárás alkalmazható egy vegyület HER2 receptorra gyakorolt gátlóhatásának a mérésére:
1. Nőstény thymushiányos egerek hónalji emlőzsírcsomójába különböző koncentrációkban beültetünk olyan MDA-MB-231 és MCF-7 sejteket, melyek HER2-vel vannak transzfektálva;
2. beadjuk a vegyületet;
3. a tumor növekedését különböző időpontokban mérjük.
A tumorokat vizsgálhatjuk egyes receptorok, mint amilyen például a HER2, jelenlétére is, Western- és immunhisztokémiai vizsgálatok felhasználásával. A fenti eljárásokat a tudomány e területén jártas szakemberek jól ismert módszerek alkalmazásával, például különféle kezelési rendszerek alkalmazása révén tovább módosíthatják.
6.3.4. Tumorbehatolásos modell (Tumor Invasion
Model)
Az alábbiakban leírt, újonnan kifejlesztett tumorbehatolásos modell alkalmazható a KDR/FLK-1 receptorokkal szemben szelektív inhibitorokként azonosított vegyületek gyógyászati értékének és hatékonyságának a megbecslésére.
6.3.4.1. Eljárás
Kísérleti állatokként nyolchetes (nőstény) „nude” egereket (Simonsen Inc.) használunk. A tumorsejtek beültetését egy lamináris áramlási térben végezzük. Az altatást Xylazin/Ketamin koktél (100 mg/kg ketamin és 5 mg/kg) intraperitoneális úton való beadásával végezzük. A hasüreg feltárásához egy középvonalas vágást csinálunk (körülbelül 1,5 cm hosszúságban), 107 tumorsejt 10 μΙ térfogatú táptalajban való befecskendezéséhez. A sejteket vagy a hasnyálmirigy doudenális lebenyébe, vagy a vastagbél savóhártyája alá fecskendezzük. A hashártyát és az izmokat 6-0 selyem tovafutó varrattal zárjuk össze, a bőrt pedig kapcsok (would clips) felhasználásával zárjuk össze. Az állatokat naponta megvizsgáljuk.
6.3.4.2. A vizsgálat
2-6 hét elteltével, az állatok duzzadásos vizsgálatától függően az egereket megöljük, a különféle szerveket (tüdő, máj, agy, gyomor, lép, szív, izom) kimetsszük és megvizsgáljuk (a tumor méretének mérése, a behatolás nagysága, immunkémiai vizsgálatok és in situ hibridizáció).
6.3.5. Eredmények
A fent leírt in vivő vizsgálat alapján kapott, különböző vegyületekre vonatkozó eredmények az alábbi, 5. táblázatban találhatók meg.
5. táblázat In vivő adatok
Vegyület (példa száma) | EpH4-VEGF %-os gátlás @ mg/kg |
27. | 56% @ 75 |
22. | 50% @ 75 63% @ 50 42% @ 75 |
4942. 12. | 42% @ 50/50 46% @ 50 47% @ 25 50% @ 50 |
14. | 57% @ 37,5/37,5 45% @ 50 |
15. | 65% @ 50 47% @ 50 |
65% @ 50 |
A találmányt a példaként bemutatott megtestesülései semmi esetre sem korlátozzák érvényességi területében; a példák csupán a találmány egyes megtestesüléseinek illusztrálására szolgálnak; és így minden olyan klón, DNS vagy aminosavszekvencia, mely a példákban megadottakkal funkcionális szempontból ekvivalens, a találmány keretei közé tartozik. Az itt leírt módosítási lehetőségeken túlmenően a találmány számos más módosítási lehetősége is nyilvánvaló lesz a tudomány e területén jártas szakemberek számára a fenti leírásból és a hozzá kapcsolódó rajzokból. Az ilyen módosítások is beleértendők a csatolt igénypontok érvényességi körébe.
A megidézett összes forrásmű a hivatkozás révén teljes egészében a találmány részét képezi.
Claims (15)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Az (I) általános képletűHU 226 755 Β1 vegyületek vagy azok gyógyászatilag elfogadható sói, aholR1 jelentése hidrogénatom;R2 jelentése oxigénatom vagy kénatom;R3 jelentése hidrogénatom;R4, R5, R6 és R7 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkilcsoport, alkoxicsoport, arilcsoport, aril-oxi-csoport, alkarilcsoport, alkaril-oxi-csoport, halogénatom, trihalogén-metil-csoport, -S(O)R csoport, -SO2NRR’ csoport, -SO3R csoport, -SR csoport, -NO2 csoport, -NRR’ csoport, -OH csoport, -CN csoport, -C(O)R csoport, -OC(O)R csoport, -NHC(O)R csoport, -(CH2)nCO2R csoport és -CONRR’ csoport;A jelentése egy öttagú heteroarilcsoport, amelyet a tiofenil-, pirrolil-, pirazolil-, 1,2,3-triazolil-, 1,2,4-triazolil-, oxazolil-, izoxazolil-, tiazolil-, izotiazolil-, 2-szulfonilfuril-, 4-alkil-furil-, 1,2,3-oxadiazolil-, 1,2,4-oxadiazolil-, 1,2,5-oxadiazolil-, 1,3,4-oxadiazolil-, 1,2,3,4-oxatriazolil-, 1,2,3,5-oxatriazolil-, 1,2,3-tiadiazolil-, 1,2,4-tiadiazolil-, 1,2,5-tiadiazolil-, 1,3,4-tiadiazolilgyűrűt, 1,2,3,4tiatriazol i I-, 1,2,3,5-tiatriazol i I- és tetrazolilcsoportot magában foglaló csoportból választjuk, melyek adott esetben egy vagy több pozícióban alkilcsoporttal, alkoxicsoporttal, arilcsoporttal, aril-oxi-csoporttal, alkarilcsoporttal, alkaril-oxi-csoporttal, halogénatommal, trihalogén-metil-csoporttal, -S(O)R csoporttal, -SO2NRR’ csoporttal, -SO3R csoporttal, -SR csoporttal, -NO2 csoporttal, -NRR’ csoporttal, -OH csoporttal, -CN csoporttal, -C(O)R csoporttal, -OC(O)R csoporttal, -NHC(O)R csoporttal, -(CH2)nCO2R csoporttal vagy -CONRR’ csoporttal vannak szubsztituálva;n értéke 0-3;R jelentése hidrogénatom, alkilcsoport vagy arilcsoport ésR’ jelentése hidrogénatom, alkilcsoport vagy arilcsoport, ahol a fenti kifejezéseknél az alkilcsoport 1-12 szénatomot tartalmazó, egyenes vagy elágazó láncú vagy ciklusos alifás szénhidrogéncsoport, amely adott esetben egy vagy több, az alábbi csoportból választott szubsztituenssel helyettesített: hidroxilcsoport, cianocsoport, =0, =S, -NO2, halogénatom, -N(CH3)2, aminocsoport és -SH csoport;az arilcsoport jelentése egy olyan aromás csoport, amely legalább egy konjugált pi-elektronrendszerrel rendelkező gyűrűt tartalmaz, beleértve a karbociklusos aril-, a heterociklusos aril- és a biarilcsoportokat, és amely arilcsoport adott esetben egy vagy több, az alábbi csoportból választott szubsztituenssel helyettesített: halogénatom, trihalogén-metil-csoport, hidroxilcsoport, -SH, -OH, -NO2, -SR általános képletű csoport, ahol R jelentése alkilcsoport, arilcsoport vagy alkil-aril-csoport, cianocsoport, alkoxicsoport, alkilcsoport és aminocsoport; az alkarilcsoport jelentése egy olyan alkilcsoport, amely kovalensen kötődik egy arilcsoporthoz; és az alkoxicsoport, az aril-oxi-csoport és az alkariloxi-csoport —Ο-alkil-, -O-aril- és -O-alkaril-csoportot jelent;azzal a kikötéssel, hogy a vegyületek az alábbi vegyietektől eltérőek:3-(pirrol-2-il-metilén)-2-indolinon;3-(5-klór-3,4-dimetil-pirrol-2-il-metilén)-2-indolinon;3-(3,5-dimetil-4-etil-pirrol-2-il)-2-indolinon;3-(3,5-dimetil-4-etoxi-karbonil-pirrol-2-il)-2-indolinon;
- 2- [[[1 -etil-2,3-dihidro-2-oxo-3-( 1 /-/-pirrol-2-il-metilén)-1H-indol-5-il]-oxi]-metil]-benzoesav;
- 3- (tién-2-il-metilén)-2-indolinon; 6-dietil-amino-3-[(izotiazol-2-il)-metilén]-2-indolinon;5- klór-3-[(tiazol-2-il)-metilén]-2-indolinon; és6- nitro-3-[(pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon.2. Az (I) általános képletű vegyületek vagy azok gyógyászatilag elfogadható sói, aholR-i jelentése hidrogénatom;R2 jelentése oxigénatom vagy kénatom;R3 jelentése hidrogénatom;R4, R5, R6 és R7 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkilcsoport, alkoxicsoport, arilcsoport, aril-oxi-csoport, alkarilcsoport, alkaril-oxi-csoport, halogénatom, trihalogén-metil-csoport, -S(O)R csoport, -SO2NRR’ csoport, -SO3R csoport, -SR csoport, -NO2 csoport, -NRR’ csoport, -OH csoport, -CN csoport, -C(0)R csoport, -0C(0)R csoport, -NHC(O)R csoport, -(CH2)nCO2R csoport és -CONRR’ csoport;A jelentése egy öttagú heteroarilcsoport, amelyet a pirazolil-, 1,2,3-triazolil-, 1,2,4-triazolil-, oxazolil-, izoxazolil-, tiazolil-, izotiazolil-, 2-szulfonil-furil-, 4-alkil-furil-,1.2.3- oxadiazolil-, 1,2,4-oxadiazolil-, 1,2,5-oxadiazolil-,1.3.4- oxadiazolil-, 1,2,3,4-oxatriazolil-, 1,2,3,5-oxatriazolil-, 1,2,3-tiadiazolil-, 1,2,4-tiadiazolil-, 1,2,5-tiadiazolil-, 1,3,4-tiadiazolil-, 1,2,3,4-tiatriazolil-, 1,2,3,5-tiatriazolil- és tetrazolilcsoportot magában foglaló csoportból választjuk, amelyek adott esetben egy vagy több pozícióban alkilcsoporttal, alkoxicsoporttal, arilcsoporttal, aril-oxi-csoporttal, alkarilcsoporttal, alkaril-oxi-csoporttal, halogénatommal, trihalogén-metil-csoporttal, -S(O)R csoporttal, -SO2NRR’ csoporttal, -SO3R csoporttal, -SR csoporttal, -NO2 csoporttal, -NRR’ csoporttal, -OH csoporttal, -CN csoporttal, -C(0)R csoporttal, -0C(0)R csoporttal, -NHC(O)R csoporttal, -(CH2)nCO2R csoporttal vagy -CONRR’ csoporttal vannak szubsztituálva;n értéke 0-3;R jelentése hidrogénatom, alkilcsoport vagy arilcsoport ésR’ hidrogénatomot, alkilcsoportot vagy arilcsoportot jelent, ahol a fenti kifejezéseknél az alkilcsoport, az arilcsoport, az alkarilcsoport, az alkoxicsoport, az aril-oxi40HU 226 755 Β1 csoport és az alkaril-oxi-csoport jelentése az 1. igénypontban megadott; azzal a kikötéssel, hogy a vegyületek az alábbi vegyületektől eltérőek:6-dietil-amino-3-[(izotiazol-2-il)-metilén]-2-indolinon; és5-klór-3-[(tiazol-2-il)-metilén]-2-indolinon.3. Az 1. igénypont szerinti vegyület, amelyet az alábbi csoportból választunk: 3-[(3-metil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon; 3-[(3,4-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-2indolinon; 3-[(2-metil-tién-5-il)-metilén]-2-indolinon; 3-[(3-metil-tién-2-il)-metilén]-2-indolinon; 3-{[4-(2-metoxi-karbonil-etil)-3-metil-pirrol-5-il]-metilén}-2-indolinon; 3-[(4,5-dimetil-3-etil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon; 5-klór-3-[(5-metil-tién-2-il)-metilén]-2-indolinon; 3-[(3,5dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-5-nitro-2-indolinon; 3-[(3-(2-karboxi-etil)-4-metil-pirrol-5-il)-metilén]-2-indolinon; 5-klór-3-[(3,5-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon; és 3-[(2,4-dimetil-pirrol-5-il)-metilén]-2-indolinon vagy ezek gyógyszerészetileg elfogadható sói.
- 4. A 3. igénypont szerinti vegyület, azzal jellemezve, hogy az említett vegyület a 3-[(2,4-dimetil-pirrol5-iI)-metilén]-2-indolinon vagy ennek gyógyászatilag elfogadható sója.
- 5. Gyógyászati készítmény, amely egy gyógyászatilag elfogadható hordozót vagy kötőanyagot és egy, az1-4. igénypontok bármelyike szerinti vegyületet tartalmaz.
- 6. Az 5. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, amely gyógyászati készítmény parenterális vagy szubkután beadásra alkalmas, vagy retardkészítmény formájú.
- 7. Az (I) általános képletű vegyületeknek vagy azok gyógyászatilag elfogadható sóinak, aholR1 jelentése hidrogénatom;R2 jelentése oxigénatom vagy kénatom;R3 jelentése hidrogénatom;R4, R5, R6 és Ry jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkilcsoport, alkoxicsoport, arilcsoport, aril-oxi-csoport, alkarilcsoport, alkaril-oxi-csoport, halogénatom, trihalogén-metil-csoport, -S(O)R csoport, -SO2NRR’ csoport, -SO3R csoport, -SR csoport, -NO2 csoport, -NRR’ csoport, -OH csoport, -CN csoport, -C(O)R csoport, -OC(O)R csoport, -NHC-(O)R csoport, -(CH2)nCO2R csoport és -CONRR’ csoport;A jelentése egy öttagú heteroarilcsoport, amelyet a tiofenil-, pirrolil-, pirazolil-, 1,2,3-triazolil-, 1,2,4-triazolil-, oxazolil-, izoxazolil-, tiazolil-, izotiazolil-, 2-szulfonil-furil-, 4-alkil-furil-, 1,2,3-oxadiazolil-, 1,2,4-oxadiazolil-, 1,2,5-oxadiazolil-, 1,3,4-oxadiazolil-, 1,2,3,4oxatriazolil-, 1,2,3,5-oxatriazolil-, 1,2,3-tiadiazolil-,1,2,4-tiadiazolil-, 1,2,5-tiadiazolil-, 1,3,4-tiadiazolilgyűrűt, 1,2,3,4-tiatriazolil-, 1,2,3,5-tiatriazolil- és tetrazolilcsoportot magában foglaló csoportból választjuk, melyek adott esetben egy vagy több pozícióban alkilcsoporttal, alkoxicsoporttal, arilcsoporttal, aril-oxicsoporttal, alkarilcsoporttal, alkaril-oxi-csoporttal, halogénatommal, trihalogén-metil-csoporttal, -S(O)R csoporttal, -SO2NRR’ csoporttal, -SO3R csoporttal, -SR csoporttal, -NO2 csoporttal, -NRR’ csoporttal, -OH csoporttal, -CN csoporttal, -C(O)R csoporttal, -OC(O)R csoporttal, -NHC(O)R csoporttal, -(CH2)nCO2R csoporttal vagy -CONRR’ csoporttal vannak szubsztituálva;n értéke 0-3;R jelentése hidrogénatom, alkilcsoport vagy arilcsoport ésR’ jelentése hidrogénatom, alkilcsoport vagy arilcsoport, ahol a fenti kifejezéseknél az alkilcsoport, az arilcsoport, az alkarilcsoport, az alkoxicsoport, az aril-oxicsoport és az alkaril-oxi-csoport jelentése az 1. igénypontban megadott;alkalmazása a szabályozatlan tirozin-kináz jelátalakítással kapcsolatos rendellenességek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
- 8. Az (I) általános képletű vegyületeknek vagy azok gyógyászatilag elfogadható sóinak, aholR-i jelentése hidrogénatom;R2 jelentése oxigénatom vagy kénatom;R3 jelentése hidrogénatom;R4, R5, R6 és Ry jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkilcsoport, alkoxicsoport, arilcsoport, aril-oxi-csoport, alkarilcsoport, alkaril-oxi-csoport, halogénatom, trihalogén-metil-csoport, -S(O)R csoport, -SO2NRR’ csoport, -SO3R csoport, -SR csoport, —NO2 csoport, -NRR’ csoport, -OH csoport, -CN csoport, -C(O)R csoport, -OC(O)R csoport, -NHC(O)R csoport, -(CH2)nCO2R csoport és -CONRR’ csoport;A jelentése egy öttagú heteroarilcsoport, amelyet a pirazolil-, 1,2,3-triazolil-, 1,2,4-triazoliI-, oxazolil-, izoxazolil-, tiazolil-, izotiazolil-, 2-szulfonil-furil-, 4-alkil-furil-,1.2.3- oxadiazolil-, 1,2,4-oxadiazolil-, 1,2,5-oxadiazolil-,1.3.4- oxadiazolil-, 1,2,3,4-oxatriazolil-, 1,2,3,5-oxatriazolil-, 1,2,3-tiadiazolil-, 1,2,4-tiadiazolil-, 1,2,5-tiadiazolil-, 1,3,4-tiadiazolil-, 1,2,3,4-tiatriazolil-, 1,2,3,5-tiatriazolil- és tetrazolilcsoportot magában foglaló csoportból választjuk, amelyek adott esetben egy vagy több pozícióban alkilcsoporttal, alkoxicsoporttal, arilcsoporttal, aril-oxi-csoporttal, alkarilcsoporttal, alkaril-oxi-csoport41HU 226 755 Β1 tál, halogénatommal, trihalogén-metil-csoporttal, -S(O)R csoporttal, -SO2NRR’ csoporttal, -SO3R csoporttal, -SR csoporttal, -NO2 csoporttal, -NRR’ csoporttal, -OH csoporttal, -CN csoporttal, -C(O)R csoporttal, -OC(O)R csoporttal, -NHC(O)R csoporttal, -(CH2)nCO2R csoporttal vagy -CONRR’ csoporttal vannak szubsztituálva;n értéke 0-3;R jelentése hidrogénatom, alkilcsoport vagy arilcsoport ésR’ hidrogénatomot, alkilcsoportot vagy arilcsoportot jelent, ahol a fenti kifejezéseknél az alkilcsoport, az arilcsoport, az alkarilcsoport, az alkoxicsoport, az aril-oxicsoport és az alkaril-oxi-csoport jelentése az 1. igénypontban megadott;alkalmazása a szabályozatlan tirozin-kináz jelátalakítására, szabályozására, módosítására és gátlására szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
- 9. A 7. vagy 8. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a betegséget az alábbi csoportból választjuk: rák, véredény-proliferatív rendellenesség, fibrózisos rendellenesség, mezangiális sejtproliferatív rendellenesség és metabolikus rendellenesség.
- 10. A 9. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a véredény-proliferatív rendellenesség arthritis vagy restenosis.
- 11. A 9. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a fibrózisos rendellenesség hepatikus cirrhosis vagy atheroszklerózis.
- 12. A 9. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a mezangiális sejtproliferatív rendellenesség glomerulonephritis, diabetikus nefropátia, rosszindulatú nefroszklerózis, trombózisos mikroangiopátia szindrómák, transzplantátumkilökődés és glomerulopathiák.
- 13. A 9. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a metabolikus rendellenesség psoriasis, diabetes mellitus, sebgyógyulás, gyulladás vagy neurodegeneratív betegség.
- 14. A 7. vagy 8. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyületet az alábbi csoportból választjuk: 3-[(3-metilpirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon; 3-[(3,4-dimetil-pirrol2-il)-metilén]-2-indolinon; 3-[(2-metil-tién-5-il)-metilén]2- indolinon; 3-[(3-metil-tién-2-il)-metilén]-2-indolinon;3- {[4-(2-metoxi-karbonil-etil)-3-metil-pirrol-5-il]-metilén}2-indolinon; 3-[(4,5-dimetil-3-etil-pirrol-2-il)-metilén]-2indolinon; 5-klór-3-[(5-metil-tién-2-il)-metilén]-2-indolinon; 3-[(3,5-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-5-nitro-2-indolinon; 3-[(3-(2-karboxi-etil)-4-metil-pirrol-5-il)-metilén]-2indolinon; 5-klór-3-[(3,5-dimetil-pirrol-2-il)-metilén]-2-indolinon; és 3-[(2,4-dimetil-pirrol-5-il)-metilén]-2-indolinon vagy ezek gyógyszerészetileg elfogadható sói.
- 15. A 14. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az említett vegyület a 3-[(2,4-dimetil-pirrol-5-il)-metilén]-2indolinon vagy ennek gyógyászatilag elfogadható sója.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/485,323 US5880141A (en) | 1995-06-07 | 1995-06-07 | Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease |
PCT/US1996/008903 WO1996040116A1 (en) | 1995-06-07 | 1996-06-05 | Indolinone compounds for the treatment of disease |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUP9701694A2 HUP9701694A2 (hu) | 1999-06-28 |
HUP9701694A3 HUP9701694A3 (en) | 2004-03-01 |
HU226755B1 true HU226755B1 (en) | 2009-09-28 |
Family
ID=23927713
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9701694A HU226755B1 (en) | 1995-06-07 | 1996-06-05 | Indolinone derivatives for the treatment of disease, use thereof, pharmaceutical compositions containing these compounds |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (9) | US5880141A (hu) |
EP (2) | EP0934931A3 (hu) |
JP (2) | JP3231044B2 (hu) |
CN (1) | CN1268333C (hu) |
AR (2) | AR003088A1 (hu) |
AT (1) | ATE200863T1 (hu) |
AU (1) | AU706597C (hu) |
BR (1) | BR9606410A (hu) |
CA (1) | CA2192797C (hu) |
DE (2) | DE29623744U1 (hu) |
DK (1) | DK0769947T3 (hu) |
ES (1) | ES2159741T3 (hu) |
GR (1) | GR3036315T3 (hu) |
HK (2) | HK1001121A1 (hu) |
HU (1) | HU226755B1 (hu) |
MX (1) | MX9606401A (hu) |
NO (1) | NO311355B1 (hu) |
NZ (1) | NZ310109A (hu) |
PT (1) | PT769947E (hu) |
WO (1) | WO1996040116A1 (hu) |
Families Citing this family (465)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6177401B1 (en) | 1992-11-13 | 2001-01-23 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften | Use of organic compounds for the inhibition of Flk-1 mediated vasculogenesis and angiogenesis |
US6872699B2 (en) * | 1992-11-13 | 2005-03-29 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften, E.V. | Truncated Flk-1 receptor protein, methods of use and a recombinant vector containing a nucleotide encoding the truncated Flk-1 protein |
US5837815A (en) * | 1994-12-15 | 1998-11-17 | Sugen, Inc. | PYK2 related polypeptide products |
US6846839B1 (en) * | 1995-06-07 | 2005-01-25 | Sugen, Inc. | Methods for treating diseases and disorders related to unregulated angiogenesis and/or vasculogenesis |
US6147106A (en) * | 1997-08-20 | 2000-11-14 | Sugen, Inc. | Indolinone combinatorial libraries and related products and methods for the treatment of disease |
US6906093B2 (en) | 1995-06-07 | 2005-06-14 | Sugen, Inc. | Indolinone combinatorial libraries and related products and methods for the treatment of disease |
US5880141A (en) * | 1995-06-07 | 1999-03-09 | Sugen, Inc. | Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease |
US6316635B1 (en) * | 1995-06-07 | 2001-11-13 | Sugen, Inc. | 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity |
ATE253908T1 (de) * | 1995-08-16 | 2003-11-15 | Huntington Medical Res Inst | Rhodamin 123 zusammensetzungen für behandlung von prostatakrebs |
RU2145852C1 (ru) * | 1996-01-17 | 2000-02-27 | Тайхо Фармасьютикал Ко., Лтд | Ингибитор гипертрофии интимы, применение оксиндолового производного для получения ингибитора гипертрофии интимы, композиция для ингибирования гипертрофии интимы, способ предупреждения и лечения гипертрофии интимы |
ES2246058T3 (es) * | 1996-03-29 | 2006-02-01 | Pfizer Inc. | Derivados bencil(iden)-lactama, su preparacion y su uso como (ant)agonistas selectivos de receptores 5-ht1a y/o 5-ht1d. |
US6696448B2 (en) | 1996-06-05 | 2004-02-24 | Sugen, Inc. | 3-(piperazinylbenzylidenyl)-2-indolinone compounds and derivatives as protein tyrosine kinase inhibitors |
US6682921B1 (en) | 1996-08-21 | 2004-01-27 | New York University | Crystals of the tyrosine kinase domain of non-insulin receptor tyrosine kinases |
CA2264220A1 (en) * | 1996-08-23 | 1998-02-26 | Sugen, Inc. | Indolinone combinatorial libraries and related products and methods for the treatment of disease |
AU7622698A (en) * | 1996-12-05 | 1998-06-29 | Sugen, Inc. | Use of indolinone compounds as modulators of protein kinases |
EP0948604B1 (en) * | 1996-12-11 | 2004-07-21 | Sugen, Inc. | Screening methods for compounds binding to the Pyk2 polypeptide |
US6248771B1 (en) | 1997-03-05 | 2001-06-19 | Sugen, Inc. | Formulations for hydrophobic pharmaceutical agents |
AR012634A1 (es) | 1997-05-02 | 2000-11-08 | Sugen Inc | Compuesto basado en quinazolina, composicion famaceutica que lo comprende, metodo para sintetizarlo, su uso, metodos de modulacion de la funcion deserina/treonina proteinaquinasa con dicho compuesto y metodo in vitro para identificar compuestos que modulan dicha funcion |
US6316429B1 (en) * | 1997-05-07 | 2001-11-13 | Sugen, Inc. | Bicyclic protein kinase inhibitors |
JP2002511852A (ja) * | 1997-05-07 | 2002-04-16 | スージェン・インコーポレーテッド | 蛋白質キナーゼ活性の調節剤としての2−インドリノン誘導体 |
US6486185B1 (en) | 1997-05-07 | 2002-11-26 | Sugen, Inc. | 3-heteroarylidene-2-indolinone protein kinase inhibitors |
US6987113B2 (en) | 1997-06-11 | 2006-01-17 | Sugen, Inc. | Tyrosine kinase inhibitors |
US6313158B1 (en) | 1997-06-20 | 2001-11-06 | Sugen, Inc. | Bioavailability of 3-heteroarylidenyl-2-indolinones active as protein tyrosine kinase inhibitors |
US6114371A (en) * | 1997-06-20 | 2000-09-05 | Sugen, Inc. | 3-(cyclohexanoheteroarylidenyl)-2-indolinone protein tyrosine kinase inhibitors |
TW527355B (en) * | 1997-07-02 | 2003-04-11 | Bristol Myers Squibb Co | Inhibitors of farnesyl protein transferase |
US6235769B1 (en) * | 1997-07-03 | 2001-05-22 | Sugen, Inc. | Methods of preventing and treating neurological disorders with compounds that modulate the function of the C-RET receptor protein tyrosine kinase |
GB9716557D0 (en) | 1997-08-06 | 1997-10-08 | Glaxo Group Ltd | Benzylidene-1,3-dihydro-indol-2-one derivatives having anti-cancer activity |
US20040067531A1 (en) * | 1997-08-20 | 2004-04-08 | Sugen, Inc. | Methods of modulating protein tyrosine kinase function with substituted indolinone compounds |
WO1999010349A1 (en) | 1997-08-22 | 1999-03-04 | Zeneca Limited | Oxindolylquinazoline derivatives as angiogenesis inhibitors |
GB9718913D0 (en) | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Glaxo Group Ltd | Substituted oxindole derivatives |
US6133305A (en) * | 1997-09-26 | 2000-10-17 | Sugen, Inc. | 3-(substituted)-2-indolinones compounds and use thereof as inhibitors of protein kinase activity |
CA2305370C (en) | 1997-09-26 | 2006-11-28 | Gerald Mcmahon | Azabenzimidazole-based compounds for modulating serine/threonine protein kinase function |
UA71555C2 (en) | 1997-10-06 | 2004-12-15 | Zentaris Gmbh | Methods for modulating function of serine/threonine protein kinases by 5-azaquinoline derivatives |
US20030219380A1 (en) * | 1997-11-07 | 2003-11-27 | Annie Fong | Method of determining an efficacious dose of a drug |
US7494816B2 (en) | 1997-12-22 | 2009-02-24 | Roche Diagnostic Operations, Inc. | System and method for determining a temperature during analyte measurement |
US8071384B2 (en) * | 1997-12-22 | 2011-12-06 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Control and calibration solutions and methods for their use |
US6531502B1 (en) | 1998-01-21 | 2003-03-11 | Sugen, Inc. | 3-Methylidenyl-2-indolinone modulators of protein kinase |
WO1999048868A2 (en) * | 1998-03-26 | 1999-09-30 | Sugen, Inc. | Heterocyclic classes of compounds for the modulating tyrosine protein kinase |
US6514981B1 (en) | 1998-04-02 | 2003-02-04 | Sugen, Inc. | Methods of modulating tyrosine protein kinase function with indolinone compounds |
DE19816624A1 (de) * | 1998-04-15 | 1999-10-21 | Boehringer Ingelheim Pharma | Neue substituierte Indolinone, ihre Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel |
US6569868B2 (en) | 1998-04-16 | 2003-05-27 | Sugen, Inc. | 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity |
EP2020408B1 (en) * | 1998-05-29 | 2013-06-26 | Sugen, Inc. | Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitor |
US6319918B1 (en) | 1998-06-04 | 2001-11-20 | Boehringer Ingelheim Pharma Kg | Substituted indolinones with kinase inhibitory activity |
DE19824922A1 (de) * | 1998-06-04 | 1999-12-09 | Boehringer Ingelheim Pharma | Neue substituierte Indolinone, ihre Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel |
EP1117397A1 (en) | 1998-08-31 | 2001-07-25 | Sugen, Inc. | Geometrically restricted 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity |
EE200100184A (et) * | 1998-09-25 | 2002-08-15 | Boehringer Ingelheim Pharma Kg | Uudsed asendatud indolinoonid inhibeeriva toimegamitmesugustele kinaasidele ja tsükliin/CDK kompleksidele |
US6153634A (en) * | 1998-12-17 | 2000-11-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | 4,5-azolo-oxindoles |
KR20010087421A (ko) * | 1998-12-17 | 2001-09-15 | 프리돌린 클라우스너, 롤란드 비. 보레르 | 4- 및 5-알키닐옥신돌과 4- 및 5-알케닐옥신돌 |
WO2000035909A1 (en) * | 1998-12-17 | 2000-06-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | 4-aryloxindoles as inhibitors of jnk protein kinases |
JP2002532503A (ja) | 1998-12-17 | 2002-10-02 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | プロテインキナーゼ阻害剤としての4,5−ピラジノオキシンドール |
WO2000035908A1 (en) | 1998-12-17 | 2000-06-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | 4-alkenyl (and alkynyl) oxindoles as inhibitors of cyclin-dependent kinases, in particular cdk2 |
US20030119895A1 (en) * | 1998-12-23 | 2003-06-26 | Pharmacia Corporation | Methods using a combination of a 3-heteroaryl-2-indolinone and a cyclooxygenase-2 inhibitor for the treatment of neoplasia |
US6861442B1 (en) * | 1998-12-30 | 2005-03-01 | Sugen, Inc. | PYK2 and inflammation |
EP1630559A3 (en) * | 1998-12-30 | 2006-06-07 | Sugen, Inc. | PYK2 (RAFTK) and inflammation |
MXPA01006742A (es) * | 1998-12-31 | 2004-04-21 | Sugen Inc | Compuestos 3-heteroarilidenil-2-indolinona para modular la actividad de la quinasa de proteina y para utilizarse en la quimioterapia de cancer. |
US6656696B2 (en) * | 1999-02-26 | 2003-12-02 | Cyclacel | Compositions and methods for monitoring the phosphorylation of natural binding partners |
US6670144B1 (en) * | 1999-02-26 | 2003-12-30 | Cyclacel, Ltd. | Compositions and methods for monitoring the phosphorylation of natural binding partners |
US6828106B2 (en) * | 1999-02-26 | 2004-12-07 | Cyclacel Limited | Methods and compositions using coiled binding partners |
US6972182B1 (en) * | 1999-02-26 | 2005-12-06 | Cyclacel, Ltd. | Methods and compositions using coiled binding partners |
GB9904933D0 (en) | 1999-03-04 | 1999-04-28 | Glaxo Group Ltd | Compounds |
US6624171B1 (en) | 1999-03-04 | 2003-09-23 | Smithkline Beecham Corporation | Substituted aza-oxindole derivatives |
US6492398B1 (en) | 1999-03-04 | 2002-12-10 | Smithkline Beechman Corporation | Thiazoloindolinone compounds |
US7064114B2 (en) | 1999-03-19 | 2006-06-20 | Parker Hughes Institute | Gel-microemulsion formulations |
ATE509026T1 (de) * | 1999-03-23 | 2011-05-15 | Us Gov Health & Human Serv | Phenylalanin- derivate |
US7226991B1 (en) * | 1999-03-23 | 2007-06-05 | United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Phenylalanine derivatives |
US6689806B1 (en) | 1999-03-24 | 2004-02-10 | Sugen, Inc. | Indolinone compounds as kinase inhibitors |
CA2368041A1 (en) * | 1999-03-24 | 2000-09-28 | Sugen, Inc. | Indolinone compounds as kinase inhibitors |
US6399743B1 (en) | 1999-05-14 | 2002-06-04 | Dept. Of Veterans Affairs | Isolation and characterization of a rat epidermal growth factor related protein |
US7049410B2 (en) * | 1999-05-14 | 2006-05-23 | Majumdar Adhip P N | Antibodies to a novel EGF-receptor related protein (ERRP) |
US6762180B1 (en) | 1999-10-13 | 2004-07-13 | Boehringer Ingelheim Pharma Kg | Substituted indolines which inhibit receptor tyrosine kinases |
DE19949209A1 (de) * | 1999-10-13 | 2001-04-19 | Boehringer Ingelheim Pharma | In 5-Stellung substituierte Indolinone, ihre Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel |
UA75054C2 (uk) * | 1999-10-13 | 2006-03-15 | Бьорінгер Інгельхайм Фарма Гмбх & Ко. Кг | Заміщені в положенні 6 індолінони, їх одержання та їх застосування як лікарського засобу |
US7871981B2 (en) * | 1999-10-22 | 2011-01-18 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibition of cell motility, angiogenesis, and metastasis |
EP1223959B1 (en) | 1999-10-22 | 2007-05-23 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Inhibition of cell motility and angiogenesis by inhibitors of the grb2 sh2-domain |
US20030162223A1 (en) * | 1999-10-22 | 2003-08-28 | Lowery David E. | Drosophila G protein coupled receptors, nucleic acids, and methods related to the same |
US7364866B2 (en) * | 1999-10-22 | 2008-04-29 | Pharmacia & Upjohn Company | Drosophila G protein coupled receptors, nucleic acids, and methods related to the same |
CA2388599A1 (en) * | 1999-10-22 | 2001-05-03 | Pharmacia & Upjohn Company | Drosophila g protein coupled receptors, nucleic acids, and methods related to the same |
UA74803C2 (uk) | 1999-11-11 | 2006-02-15 | Осі Фармасьютікалз, Інк. | Стійкий поліморф гідрохлориду n-(3-етинілфеніл)-6,7-біс(2-метоксіетокси)-4-хіназолінаміну, спосіб його одержання (варіанти) та фармацевтичне застосування |
AU784543B2 (en) * | 1999-11-16 | 2006-04-27 | Pharmacia & Upjohn Company | Novel G protein-coupled receptors |
US20030082534A1 (en) * | 1999-11-16 | 2003-05-01 | Peter Lind | Novel G protein-coupled receptors |
US8682005B2 (en) | 1999-11-19 | 2014-03-25 | Gentex Corporation | Vehicle accessory microphone |
EP1103420B1 (en) | 1999-11-24 | 2006-06-21 | Donnelly Corporation | Rearview mirror assembly with utility functions |
ATE514676T1 (de) * | 1999-11-24 | 2011-07-15 | Sugen Inc | Ionisierbare indolinon derivate und deren verwendung als ptk liganden |
US6878733B1 (en) | 1999-11-24 | 2005-04-12 | Sugen, Inc. | Formulations for pharmaceutical agents ionizable as free acids or free bases |
US6313310B1 (en) | 1999-12-15 | 2001-11-06 | Hoffmann-La Roche Inc. | 4-and 5-alkynyloxindoles and 4-and 5-alkenyloxindoles |
DE60029138T2 (de) | 1999-12-22 | 2007-06-06 | Sugen, Inc., San Francisco | Verwendung von Indolinonverbindungen zur Herstellung von Pharmazeutika für die Modulation der Funktion c-kit Proteintyrosinkinase |
US6339100B1 (en) | 1999-12-29 | 2002-01-15 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods for inhibiting mastocytosis |
WO2001049287A1 (en) * | 1999-12-30 | 2001-07-12 | Sugen, Inc. | 3-heteroarylidenyl-2-indolinone compounds for modulating protein kinase activity and for use in cancer chemotherapy |
ATE369359T1 (de) | 2000-02-15 | 2007-08-15 | Sugen Inc | Pyrrol substituierte indolin-2-on protein kinase inhibitoren |
US6620818B1 (en) | 2000-03-01 | 2003-09-16 | Smithkline Beecham Corporation | Method for reducing the severity of side effects of chemotherapy and/or radiation therapy |
MY128449A (en) | 2000-05-24 | 2007-02-28 | Sugen Inc | Prodrugs of 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives |
AU2001268154A1 (en) | 2000-06-02 | 2001-12-17 | Sugen, Inc. | Indolinone derivatives as protein kinase/phosphatase inhibitors |
GB0016454D0 (en) | 2000-07-04 | 2000-08-23 | Hoffmann La Roche | Thienopyrrolidinones |
US7425537B2 (en) * | 2000-08-22 | 2008-09-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | SH2 domain binding inhibitors |
WO2002016407A2 (en) * | 2000-08-22 | 2002-02-28 | The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Sh2 domain binding inhibitors |
US20030133972A1 (en) * | 2000-10-11 | 2003-07-17 | Targesome, Inc. | Targeted multivalent macromolecules |
US20030129223A1 (en) * | 2000-10-11 | 2003-07-10 | Targesome, Inc. | Targeted multivalent macromolecules |
TWI304061B (en) * | 2000-10-20 | 2008-12-11 | Eisai R&D Man Co Ltd | Nitrogen-containing aromatic ring derivatives |
PE20020572A1 (es) | 2000-12-06 | 2002-07-31 | Centro Inmunologia Molecular | Preparaciones para potenciar la inmunogenicidad de antigenos poco inmunogenicos |
CA2432114A1 (en) * | 2000-12-20 | 2002-07-18 | Sugen, Inc. | 4-(hetero)aryl substituted indolinones |
AU2002249913A1 (en) * | 2001-01-03 | 2002-08-12 | President And Fellows Of Harvard College | Compounds regulating cell proliferation and differentiation |
DZ3494A1 (fr) * | 2001-01-05 | 2002-07-11 | Pfizer | Anticorps anti-recepteur du facteur de croissance i analogue a l'insuline |
US6504034B2 (en) | 2001-01-23 | 2003-01-07 | Hoffmann-La Roche Inc. | Naphthostyrils |
US20050069976A1 (en) * | 2001-02-14 | 2005-03-31 | Peter Lind | Protein-coupled receptor |
AR042586A1 (es) * | 2001-02-15 | 2005-06-29 | Sugen Inc | 3-(4-amidopirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de la protein quinasa; sus composiciones farmaceuticas; un metodo para la modulacion de la actividad catalitica de la proteinquinasa; un metodo para tratar o prevenir una afeccion relacionada con la proteinquinasa |
CA2994779C (en) | 2001-02-19 | 2020-08-25 | Novartis Ag | Use of 40-o-(2-hydroxyethyl)-rapamycin for inhibiting growth of a solid tumour of the brain other than lymphatic cancer |
FR2821358B1 (fr) * | 2001-02-27 | 2006-04-07 | Aventis Pharma Sa | Oxindoles inhibiteurs de cdk-1 et leur application en therapeutique |
WO2002070478A1 (en) * | 2001-03-06 | 2002-09-12 | Astrazeneca Ab | Indolone derivatives having vascular-damaging activity |
FR2822155B1 (fr) * | 2001-03-13 | 2003-12-12 | Aventis Pharma Sa | Composes derives des oxindoles et leur application therapeutique en cancerologie |
SE0101230L (sv) * | 2001-04-06 | 2002-10-07 | Innoventus Project Ab | Ny användning av en tyrosinkinasinhibitor |
WO2002081466A1 (en) * | 2001-04-09 | 2002-10-17 | Sugen, Inc. | Prodrugs of 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives |
RU2318517C2 (ru) | 2001-05-16 | 2008-03-10 | Новартис Аг | Комбинация, включающая n-{5-[4-(4-метилпиперазинометил)бензоиламидо]-2-метилфенил}-4-(3-пиридил)-2-пиримидинамин и химиотерапевтический агент |
PE20030062A1 (es) | 2001-05-30 | 2003-02-08 | Sugen Inc | Derivados aralquilsulfonil-3-(pirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de quinasas |
AU2002345792A1 (en) | 2001-06-21 | 2003-01-08 | Pfizer Inc. | Thienopyridine and thienopyrimidine anticancer agents |
WO2003002109A2 (en) * | 2001-06-29 | 2003-01-09 | Ab Science | Use of tyrosine kinase inhibitors for treating autoimmune diseases |
WO2003002108A2 (en) * | 2001-06-29 | 2003-01-09 | Ab Science | Use of tyrosine kinase inhibitors for treating inflammatory diseases |
DE60215648T2 (de) * | 2001-06-29 | 2007-08-23 | Ab Science | Die verwendung von c-kit hemmer zur behandlung von entzündlichen darmerkrankungen |
JP2004530730A (ja) * | 2001-06-29 | 2004-10-07 | アブ サイエンス | 腫瘍の血管新生を治療するための強力で選択的かつ非毒性のc−kit阻害剤の使用法 |
JP2005500041A (ja) * | 2001-06-29 | 2005-01-06 | アブ サイエンス | 強力で選択的かつ非毒性のc−kit阻害剤 |
DE60216281T2 (de) | 2001-06-29 | 2007-07-05 | Ab Science | Die verwendung von tyrosinkinasehemmer zur behandlung von allergischen erkrankungen |
DE10134196B4 (de) | 2001-07-13 | 2005-08-18 | Forschungszentrum Karlsruhe Gmbh Technik Und Umwelt | Pharmazeutische Zusammensetzung zur Hemmung der unkontrollierten Vermehrung und/oder Induzierung der Apoptose von Zellen |
TWI315982B (en) | 2001-07-19 | 2009-10-21 | Novartis Ag | Combinations comprising epothilones and pharmaceutical uses thereof |
TR201900509T4 (tr) * | 2001-08-15 | 2019-02-21 | Pharmacia & Upjohn Co Llc | Bir ilaç olarak kullanılmaya yönelik n-[2-(dietilamino)etil]-5-[(5-floro-1,2-dihidro-2-okso-3h-indol-3-iliden)metil]-2,4-dimetil-1h-pirol-3-karboksamidin l-malik asit tuzunu içeren bir kristal. |
AR038957A1 (es) * | 2001-08-15 | 2005-02-02 | Pharmacia Corp | Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer |
EP1427422A1 (en) * | 2001-09-20 | 2004-06-16 | AB Science | Use of tyrosine kinase inhibitors for whitening human skin and treating melanocyte dysfunction associated diseases |
US20040242612A1 (en) * | 2001-09-20 | 2004-12-02 | Alain Moussy | Use of tyrosine kinase inhibitors for promoting hair growth |
DE60228278D1 (de) * | 2001-09-20 | 2008-09-25 | Ab Science | Die verwendung von potenten, selektiven und nontoxischen c-kithemmern zur behandlung von interstitieller blasenentzündung |
US7005444B2 (en) | 2001-09-27 | 2006-02-28 | Allergan, Inc. | 3-(heteroarylamino)methylene-1, 3-dihydro-2H-indol-2-ones as kinase inhibitors |
EP1430048A1 (en) * | 2001-09-27 | 2004-06-23 | Allergan, Inc. | 3-(arylamino)methylene-1, 3-dihydro-2h-indol-2-ones as kinase inhibitors |
US6642232B2 (en) | 2001-10-10 | 2003-11-04 | Sugen, Inc. | 3-[4-Substituted heterocyclyl)-pyrrol-2-ylmethylidene]-2- indolinone derivatives as kinase inhibitors |
AR039067A1 (es) * | 2001-11-09 | 2005-02-09 | Pfizer Prod Inc | Anticuerpos para cd40 |
CA2466807A1 (en) * | 2001-11-21 | 2003-06-05 | Sugen, Inc. | Pharmaceutical formulations comprising indolinone derivatives |
US6797825B2 (en) | 2001-12-13 | 2004-09-28 | Abbott Laboratories | Protein kinase inhibitors |
US20030187026A1 (en) | 2001-12-13 | 2003-10-02 | Qun Li | Kinase inhibitors |
PE20030701A1 (es) | 2001-12-20 | 2003-08-21 | Schering Corp | Compuestos para el tratamiento de trastornos inflamatorios |
DK1458713T3 (da) | 2001-12-27 | 2005-10-31 | Theravance Inc | Indolinonderivater anvendelige som proteinkinaseinhibitorer |
US7314936B2 (en) * | 2002-01-07 | 2008-01-01 | Eisai Co., Ltd. | Deazapurines and uses thereof |
PT1478380E (pt) * | 2002-02-27 | 2006-12-29 | Ab Science | Utilização de inibidores de tirosina-cinases para tratar doenças do snc |
JP2005527511A (ja) * | 2002-03-01 | 2005-09-15 | ファイザー インコーポレイテッド | 抗血管形成剤として有用なチエノピリジンのインドリル−尿素誘導体およびその使用法 |
GB0206215D0 (en) | 2002-03-15 | 2002-05-01 | Novartis Ag | Organic compounds |
US6541504B1 (en) * | 2002-04-03 | 2003-04-01 | Allergan Sales, Llc | (3Z)-3-(2,3-dihydro-1H-inden-1-ylidene)-1,3-dihydro-2H-indol-2-ones as kinase inhibitors |
CN100564375C (zh) * | 2002-04-03 | 2009-12-02 | 阿勒根公司 | 作为激酶抑制剂的(3z)-3-(2,3-二氢-1h-茚-1-叉)-1,3-二氢-2h-吲哚-2-酮 |
MXPA04011384A (es) | 2002-05-16 | 2005-02-14 | Novartis Ag | Uso de agentes de union del receptor edg en cancer. |
UA77303C2 (en) * | 2002-06-14 | 2006-11-15 | Pfizer | Derivatives of thienopyridines substituted by benzocondensed heteroarylamide useful as therapeutic agents, pharmaceutical compositions and methods for their use |
US20060166982A1 (en) * | 2002-08-01 | 2006-07-27 | Danilo Giribone | Isotopically labelly indlinone derivatives and process for their preparation |
ES2294344T3 (es) | 2002-08-02 | 2008-04-01 | Ab Science | 2-(3-aminoaril)amino-4-aril-tiazoles y su utilizacion como inhibidores de c-kit. |
US8450302B2 (en) * | 2002-08-02 | 2013-05-28 | Ab Science | 2-(3-aminoaryl) amino-4-aryl-thiazoles and their use as c-kit inhibitors |
US20050032871A1 (en) * | 2002-09-03 | 2005-02-10 | Sugen, Inc. | Sulfonylated pyrrole-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors |
US7626031B2 (en) * | 2002-11-15 | 2009-12-01 | Symphony Evolution, Inc. | Substituted 3-(diarylmethylene)indolin-2-ones and methods of their use |
US20040258685A1 (en) * | 2002-11-21 | 2004-12-23 | Genentech, Inc. | Therapy of non-malignant diseases or disorders with anti-ErbB2 antibodies |
US6699863B1 (en) | 2002-11-27 | 2004-03-02 | Allergan, Inc. | Kinase inhibitors for the treatment of disease |
US6747025B1 (en) * | 2002-11-27 | 2004-06-08 | Allergan, Inc. | Kinase inhibitors for the treatment of disease |
US20040186160A1 (en) * | 2002-12-13 | 2004-09-23 | Sugen, Inc. | Hexahydro-cyclohepta-pyrrole oxindole as potent kinase inhibitors |
PT1585743E (pt) * | 2002-12-19 | 2007-07-12 | Pfizer | Compostos de 2- (1h-indazol-6-ilamin)-benzamida como inibidores de proteína-cinases úteis para o tratamento de doenças aftálmicas. |
US20040138104A1 (en) * | 2003-01-14 | 2004-07-15 | The Government Of The United States Of America Represented By The Secretary, | Peptides |
ITRM20030074A1 (it) * | 2003-02-21 | 2004-08-22 | Pharmacia Italia Spa | Formulazioni semisolide a rilascio immediato intese |
EP2476667B1 (en) | 2003-02-26 | 2014-07-16 | Sugen, Inc. | Aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors |
US20040266843A1 (en) * | 2003-03-07 | 2004-12-30 | Sugen, Inc. | Sulfonamide substituted indolinones as inhibitors of DNA dependent protein kinase (DNA-PK) |
US7157577B2 (en) * | 2003-03-07 | 2007-01-02 | Sugen Inc. | 5-sulfonamido-substituted indolinone compounds as protein kinase inhibitors |
US7994159B2 (en) * | 2003-03-10 | 2011-08-09 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | c-Kit kinase inhibitor |
JP2006522087A (ja) * | 2003-04-03 | 2006-09-28 | ファイザー・インク | Ag013736を含んでなる剤形 |
MXPA05012461A (es) | 2003-05-19 | 2006-02-22 | Irm Llc | Compuestos y composiciones inmunosupresores. |
MY150088A (en) | 2003-05-19 | 2013-11-29 | Irm Llc | Immunosuppressant compounds and compositions |
BRPI0412885A (pt) | 2003-07-18 | 2006-10-03 | Amgen Inc | polipeptìdios, agentes de ligação especìficos, moléculas de ácido nucleico e linhas de células isoladas, células hospedeiras, composições e anticorpo ou domìnio de ligação de antìgeno e métodos de tratamento de cáncer e de tumor sólido num paciente, de detecção do nìvel do fator de crescimento hepatócito (hgf) numa amostra, de obtenção de anticorpo e de inibição da ligação de hgf a met e de diminuição ou prevenção da ligação de qualquer um dos agentes de ligação especìficos ao fator de crescimento hepatócito (hgf) |
DE10334582A1 (de) * | 2003-07-28 | 2005-02-24 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von Maleinsäureanhydrid |
HN2004000285A (es) * | 2003-08-04 | 2006-04-27 | Pfizer Prod Inc | ANTICUERPOS DIRIGIDOS A c-MET |
BRPI0413281A (pt) * | 2003-08-06 | 2006-10-10 | Sugen Inc | 3-ciclopentilideno-1,3,dihidroindol-2-onas geometricamente restringidas como potentes inibidores de proteìna cinase |
JP2007502809A (ja) * | 2003-08-15 | 2007-02-15 | アブ サイエンス | II型糖尿病を治療するためのc−kit阻害剤の使用方法 |
ES2314444T3 (es) * | 2003-08-29 | 2009-03-16 | Pfizer Inc. | Tienopiridina-fenilacetaminasy sus derivados utiles como nuevos agentes antiangiogenicos. |
JP2007504121A (ja) * | 2003-08-29 | 2007-03-01 | ファイザー・インク | 新たな抗血管形成剤として有用なナフタレン・カルボキサミド及びその誘導体 |
AR045563A1 (es) * | 2003-09-10 | 2005-11-02 | Warner Lambert Co | Anticuerpos dirigidos a m-csf |
US20050119163A1 (en) * | 2003-09-18 | 2005-06-02 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, | SH2 domain binding inhibitors |
WO2005040139A2 (en) * | 2003-10-23 | 2005-05-06 | Ab Science | 2-aminoaryloxazole compounds as tyrosine kinase inhibitors |
KR20060123184A (ko) * | 2003-10-24 | 2006-12-01 | 쉐링 악티엔게젤샤프트 | 인돌리논 유도체, 및 암과 같은 질환 상태의 치료에있어서의 이들의 용도 |
JP4303726B2 (ja) * | 2003-11-11 | 2009-07-29 | エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 | ウレア誘導体およびその製造方法 |
WO2005051919A1 (en) | 2003-11-26 | 2005-06-09 | Pfizer Products Inc. | Aminopyrazole derivatives as gsk-3 inhibitors |
WO2005058309A1 (en) * | 2003-12-16 | 2005-06-30 | Leo Pharma A/S | Novel therapeutic use of indolinone derivatives |
SG141459A1 (en) * | 2003-12-23 | 2008-04-28 | Pfizer | Novel quinoline derivatives |
US7816137B2 (en) | 2004-01-30 | 2010-10-19 | Lifecord Inc. | Method for isolating and culturing multipotent progenitor cells from umbilical cord blood |
BRPI0507834A (pt) * | 2004-02-23 | 2007-07-10 | Sugen Inc | método para tratar o crescimento celular anormal usando inibidores de c-met e de m-tor |
DE102004012070A1 (de) * | 2004-03-12 | 2005-09-29 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg | Neue cycloalkyl-haltige 5-Acylindolinone, deren Herstellung und deren Verwendung als Arzneimittel |
CA2561516A1 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-13 | Pfizer Products Inc. | Combinations of signal transduction inhibitors |
WO2005107708A1 (en) | 2004-04-30 | 2005-11-17 | Allergan, Inc. | Biodegradable intravitreal tyrosine kinase inhibitors implants |
US7771742B2 (en) | 2004-04-30 | 2010-08-10 | Allergan, Inc. | Sustained release intraocular implants containing tyrosine kinase inhibitors and related methods |
US8455656B2 (en) | 2004-04-30 | 2013-06-04 | Allergan, Inc. | Kinase inhibitors |
EP1765313A2 (en) | 2004-06-24 | 2007-03-28 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Compounds for immunopotentiation |
GB0512324D0 (en) | 2005-06-16 | 2005-07-27 | Novartis Ag | Organic compounds |
EP2322217A3 (en) * | 2004-07-16 | 2011-09-28 | Pfizer Products Inc. | Combination treatment for non-hematologic malignancies using an anti-IGF-1R antibody |
WO2006021884A2 (en) * | 2004-08-26 | 2006-03-02 | Pfizer Inc. | Enantiomerically pure aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors |
EP1786777A1 (en) * | 2004-08-26 | 2007-05-23 | Pfizer, Inc. | Aminoheteroaryl compounds as protein tyrosine kinase inhibitors |
CA2577937C (en) * | 2004-08-26 | 2010-12-21 | Pfizer Inc. | Pyrazole-substituted aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors |
EP1797877A4 (en) | 2004-09-13 | 2010-12-15 | Eisai Co Ltd | JOINT USE OF A SULFONAMIDE-BASED COMPOUND AND AN ANGIOGENESIS INHIBITOR |
US8772269B2 (en) * | 2004-09-13 | 2014-07-08 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Use of sulfonamide-including compounds in combination with angiogenesis inhibitors |
DE602005013990D1 (de) * | 2004-09-17 | 2009-05-28 | Eisai R&D Man Co Ltd | Medizinische zusammensetzung mit verbesserter stabilität und reduzierten gelierungseigenschaften |
GB0423043D0 (en) * | 2004-10-16 | 2004-11-17 | Astrazeneca Ab | Compounds |
US20060107555A1 (en) * | 2004-11-09 | 2006-05-25 | Curtis Marc D | Universal snow plow adapter |
JP2008524165A (ja) * | 2004-12-17 | 2008-07-10 | ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | インドリノン及びその抗増殖薬としての使用 |
PE20060777A1 (es) * | 2004-12-24 | 2006-10-06 | Boehringer Ingelheim Int | Derivados de indolinona para el tratamiento o la prevencion de enfermedades fibroticas |
NZ561215A (en) | 2005-02-22 | 2010-12-24 | Univ Michigan | Small molecule inhibitors of MDM2 and uses thereof |
RU2413735C2 (ru) | 2005-03-31 | 2011-03-10 | Эдженсис, Инк. | Антитела и родственные молекулы, связывающиеся с белками 161p2f10b |
AU2006231929B2 (en) | 2005-04-04 | 2012-09-06 | Ab Science | Substituted oxazole derivatives and their use as tyrosine kinase inhibitors |
KR100990027B1 (ko) | 2005-04-26 | 2010-10-26 | 화이자 인코포레이티드 | P-카드헤린 항체 |
GB0510390D0 (en) | 2005-05-20 | 2005-06-29 | Novartis Ag | Organic compounds |
US7749530B2 (en) * | 2005-07-13 | 2010-07-06 | Allergan, Inc. | Kinase inhibitors |
US7309787B2 (en) * | 2005-07-13 | 2007-12-18 | Allergan, Inc. | Kinase inhibitors |
US7439371B2 (en) * | 2005-07-13 | 2008-10-21 | Allergan, Inc. | Indol kinase inhibitors |
CA2602389A1 (en) * | 2005-07-13 | 2007-01-18 | Allergan, Inc. | Kinase inhibitors |
US20100105031A1 (en) * | 2005-08-01 | 2010-04-29 | Esai R & D Management Co., Ltd. | Method for prediction of the efficacy of vascularization inhibitor |
US9006240B2 (en) | 2005-08-02 | 2015-04-14 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Method for assay on the effect of vascularization inhibitor |
CN102716490A (zh) * | 2005-09-01 | 2012-10-10 | 卫材R&D管理有限公司 | 药物组合物的崩解性的改善方法 |
PE20080035A1 (es) | 2005-09-07 | 2008-01-30 | Amgen Fremont Inc | Anticuerpos monoclonales humanos para la quinasa-1 tipo receptor de activina |
JP5055284B2 (ja) | 2005-09-20 | 2012-10-24 | オーエスアイ・フアーマシユーテイカルズ・エル・エル・シー | インシュリン様成長因子−1受容体キナーゼ阻害剤に対する抗癌応答を予測する生物学的マーカー |
GT200600430A (es) | 2005-09-27 | 2007-05-21 | Compuestos de carboxiamina y metodos de uso de los mismos | |
KR101353763B1 (ko) | 2005-11-07 | 2014-01-21 | 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 | 혈관 신생 저해 물질과 c―kit 키나아제 저해 물질의병용 |
EP1954269A2 (en) | 2005-11-21 | 2008-08-13 | Novartis AG | Neuroendocrine tumor treatment using mtor inhibitors |
US20090247576A1 (en) * | 2005-11-22 | 2009-10-01 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | Anti-tumor agent for multiple myeloma |
JO2660B1 (en) | 2006-01-20 | 2012-06-17 | نوفارتيس ايه جي | Pi-3 inhibitors and methods of use |
WO2007087419A2 (en) | 2006-01-24 | 2007-08-02 | Allergan, Inc. | Substituted 3-(5-membered unsaturated heterocyclyl) -1, 3-dihydro-indol-2-one derivatives as tyrosine kinase inhibitors for the treatment of cancer |
PE20070978A1 (es) * | 2006-02-14 | 2007-11-15 | Novartis Ag | COMPUESTOS HETEROCICLICOS COMO INHIBIDORES DE FOSFATIDILINOSITOL 3-QUINASAS (PI3Ks) |
WO2007103308A2 (en) | 2006-03-07 | 2007-09-13 | Array Biopharma Inc. | Heterobicyclic pyrazole compounds and methods of use |
US7977351B2 (en) | 2006-03-22 | 2011-07-12 | Allergan, Inc. | Heteroaryl dihydroindolones as kinase inhibitors |
CN101415409B (zh) | 2006-04-05 | 2012-12-05 | 诺瓦提斯公司 | 用于治疗癌症的治疗剂的组合 |
AR060358A1 (es) * | 2006-04-06 | 2008-06-11 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Quinazolinas para la inhibicion de pdk 1 |
MX2008013430A (es) | 2006-04-19 | 2009-01-26 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Compuestos de indazol y metodos para la inhibición de cdc7. |
WO2007128820A1 (en) | 2006-05-09 | 2007-11-15 | Novartis Ag | Combination comprising an iron chelator and an anti-neoplastic agent and use thereof |
WO2007132307A1 (en) | 2006-05-09 | 2007-11-22 | Pfizer Products Inc. | Cycloalkylamino acid derivatives and pharmaceutical compositions thereof |
US20090209580A1 (en) * | 2006-05-18 | 2009-08-20 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | Antitumor agent for thyroid cancer |
US20110053931A1 (en) * | 2006-06-08 | 2011-03-03 | John Gaudino | Quinoline compounds and methods of use |
GB0612721D0 (en) | 2006-06-27 | 2006-08-09 | Novartis Ag | Organic compounds |
JPWO2008001956A1 (ja) * | 2006-06-29 | 2009-12-03 | エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 | 肝線維症治療剤 |
PE20080403A1 (es) | 2006-07-14 | 2008-04-25 | Amgen Inc | Derivados heterociclicos fusionados y metodos de uso |
US8217177B2 (en) | 2006-07-14 | 2012-07-10 | Amgen Inc. | Fused heterocyclic derivatives and methods of use |
US8246966B2 (en) | 2006-08-07 | 2012-08-21 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Trypanosome microsome system and uses thereof |
US8034957B2 (en) | 2006-08-11 | 2011-10-11 | Allergan, Inc. | Kinase inhibitors |
US8865737B2 (en) * | 2006-08-28 | 2014-10-21 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Antitumor agent for undifferentiated gastric cancer |
KR20090073121A (ko) | 2006-09-29 | 2009-07-02 | 노파르티스 아게 | Pi3k 지질 키나제 억제제로서의 피라졸로피리미딘 |
ES2425179T3 (es) * | 2006-10-25 | 2013-10-11 | The Rockefeller University | Métodos para el tratamiento de trastornos relacionados con beta-amiloide y composiciones para los mismos |
EP2099757B1 (en) | 2006-11-16 | 2014-06-25 | Allergan, Inc. | Sulfoximines as kinase inhibitors |
US8143410B2 (en) | 2006-11-16 | 2012-03-27 | Allergan, Inc. | Kinase inhibitors |
US8558002B2 (en) | 2006-11-16 | 2013-10-15 | Allergan, Inc. | Sulfoximines as kinase inhibitors |
WO2008066755A2 (en) | 2006-11-22 | 2008-06-05 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Tyrosine kinase inhibitors as anti-kinetolastid and anti-apicomplexan agents |
US20110008347A1 (en) * | 2006-12-01 | 2011-01-13 | Agency For Science ,Technology And Research | Cancer-related protein kinases |
CN101600694A (zh) * | 2007-01-29 | 2009-12-09 | 卫材R&D管理有限公司 | 未分化型胃癌治疗用组合物 |
US9187485B2 (en) * | 2007-02-02 | 2015-11-17 | Baylor College Of Medicine | Methods and compositions for the treatment of cancer and related hyperproliferative disorders |
WO2008100985A2 (en) | 2007-02-15 | 2008-08-21 | Novartis Ag | Combination of lbh589 with other therapeutic agents for treating cancer |
US8314087B2 (en) | 2007-02-16 | 2012-11-20 | Amgen Inc. | Nitrogen-containing heterocyclyl ketones and methods of use |
US8715665B2 (en) | 2007-04-13 | 2014-05-06 | The General Hospital Corporation | Methods for treating cancer resistant to ErbB therapeutics |
WO2008127707A1 (en) * | 2007-04-13 | 2008-10-23 | Dana Farber Cancer Institute, Inc. | Receptor tyrosine kinase profiling |
US7825143B2 (en) * | 2007-07-10 | 2010-11-02 | Montana State University - Billings | Method for controlling the yeast-to-filamentous growth transition in fungi |
CN101802008B (zh) | 2007-08-21 | 2015-04-01 | 安美基公司 | 人类c-fms抗原结合蛋白 |
EP2218712B1 (en) | 2007-11-09 | 2015-07-01 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Combination of anti-angiogenic substance and anti-tumor platinum complex |
EA201000947A1 (ru) | 2007-12-20 | 2011-02-28 | Новартис Аг | Производные тиазола, применимые в качестве ингибиторов киназы pi3 |
CN101970426A (zh) | 2007-12-21 | 2011-02-09 | 大学健康网络 | 吲唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基取代的二氢吲哚酮衍生物作为癌症治疗中有用的激酶抑制剂 |
US20110104166A1 (en) * | 2008-01-18 | 2011-05-05 | Stankovic Konstantina M | Methods and Compositions for Treating Polyps |
BRPI0906576A2 (pt) * | 2008-01-29 | 2015-07-07 | Eisai R&D Man Co Ltd | Composição farmacêutica, kit, uso de um composto, e, agente terapêutico para câncer |
WO2009151683A2 (en) | 2008-03-12 | 2009-12-17 | Link Medicine Corporation | Quinolinone farnesyl transferase inhibitors for the treatment of synucleinopathies and other indications |
WO2009118305A1 (en) | 2008-03-26 | 2009-10-01 | Novartis Ag | Hydroxamate-based inhibitors of deacetylases b |
EP2285774B1 (en) * | 2008-06-05 | 2015-02-25 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Novel modulators of protein kinase signaling |
WO2010002933A1 (en) * | 2008-06-30 | 2010-01-07 | Cylene Pharmaceuticals, Inc. | Oxindole compounds |
US20100029491A1 (en) * | 2008-07-11 | 2010-02-04 | Maike Schmidt | Methods and compositions for diagnostic use for tumor treatment |
WO2010011349A2 (en) * | 2008-07-25 | 2010-01-28 | Supergen, Inc. | Pyrimidine-2,4-diamine jak2 kinase inhibiting anti-inflammation use |
US8993615B2 (en) * | 2008-08-08 | 2015-03-31 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease |
MX2011002082A (es) * | 2008-08-29 | 2011-06-20 | Genentech Inc | Diagnostico y tratamientos para los tumores independientes del vegf. |
EP2350001A4 (en) * | 2008-10-14 | 2011-11-16 | Univ Singapore | NEW BENZYLIDENE INDOLINOES AND THEIR MEDICAL AND DIAGNOSTIC USES |
EP2334701A4 (en) | 2008-10-16 | 2014-01-08 | Univ Pittsburgh | FULLY HUMAN ANTIBODIES AGAINST ANTIGENES ASSOCIATED WITH MELANOMA OF HIGH MOLECULAR WEIGHT AND USES THEREOF |
US20110223241A1 (en) | 2008-10-16 | 2011-09-15 | Celator Pharmaceuticals, Inc. | Combination methods and compositions |
AU2009313927A1 (en) | 2008-11-13 | 2010-05-20 | Astrazeneca Ab | Azaquinolinone derivatives and uses thereof |
US20100222371A1 (en) * | 2008-11-20 | 2010-09-02 | Children's Medical Center Corporation | Prevention of surgical adhesions |
EP2379499B1 (en) | 2008-12-18 | 2014-04-09 | Novartis AG | Hydrochloride salt of 1-(4-(1-((E)-4-cyclohexyl-3-trifluoromethyl-benzyloxyimino)-ethyl)-2-ethyl-benzyl)-azetidine-3-carboxylic acid |
KR20110112352A (ko) | 2008-12-18 | 2011-10-12 | 노파르티스 아게 | 1-(4-{l-[(e)-4-시클로헥실-3-트리플루오로메틸-벤질옥시이미노]-에틸}-2-에틸-벤질)-아제티딘-3-카르복실산의 신규한 다형체 형태 |
RS53041B (en) | 2008-12-18 | 2014-04-30 | Novartis Ag | 1- [4- [1- (4-CYCLOHEXYL-3-TRIFLUOROMETHYL-BENZYLOXYIMINO) -ETHYL] -2-ETHYL-BENZYL] -AZETIDINE-3-CARBOXYLIC ACID |
SI2391366T1 (sl) | 2009-01-29 | 2013-01-31 | Novartis Ag | Substituirani benzimidazoli za zdravljenje astrocitomov |
SG172857A1 (en) * | 2009-02-09 | 2011-08-29 | Supergen Inc | Pyrrolopyrimidinyl axl kinase inhibitors |
EP2400985A2 (en) | 2009-02-25 | 2012-01-04 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Combination of an either an anti-igf-1r antibody or an igf binding protein and a small molecule igf-1r kinase inhibitor |
JP2012519170A (ja) | 2009-02-26 | 2012-08-23 | オーエスアイ・ファーマシューティカルズ,エルエルシー | 生体内の腫瘍細胞のemtステータスをモニターするためのinsitu法 |
WO2010099138A2 (en) | 2009-02-27 | 2010-09-02 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the identification of agents that inhibit mesenchymal-like tumor cells or their formation |
WO2010098866A1 (en) | 2009-02-27 | 2010-09-02 | Supergen, Inc. | Cyclopentathiophene/cyclohexathiophene dna methyltransferase inhibitors |
JP2012519281A (ja) | 2009-02-27 | 2012-08-23 | オーエスアイ・ファーマシューティカルズ,エルエルシー | 間葉様腫瘍細胞またはその生成を阻害する薬剤を同定するための方法 |
US8465912B2 (en) | 2009-02-27 | 2013-06-18 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Methods for the identification of agents that inhibit mesenchymal-like tumor cells or their formation |
CA2756568C (en) | 2009-04-06 | 2018-02-13 | University Health Network | Kinase inhibitors and method of treating cancer with same |
EP2431032A4 (en) | 2009-05-12 | 2012-11-07 | Taiho Pharmaceutical Co Ltd | ANTICROBIAL AGENTS WITH A TEGAFUR GIMERACIL OTERACIL CALIUM COMBINATION AND OXALIPLATIN |
ES2475945T3 (es) | 2009-06-26 | 2014-07-11 | Novartis Ag | Derivados imidazolidin-2 -ona 1,3-disustituida como inhibidores de CYP 17 |
US8293753B2 (en) | 2009-07-02 | 2012-10-23 | Novartis Ag | Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas |
MX2012000620A (es) | 2009-07-13 | 2012-01-27 | Genentech Inc | Metodos diagnostico y composiciones para tratamiento de cancer. |
EP2459191A1 (en) | 2009-07-31 | 2012-06-06 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Mtor inhibitor and angiogenesis inhibitor combination therapy |
US8389526B2 (en) | 2009-08-07 | 2013-03-05 | Novartis Ag | 3-heteroarylmethyl-imidazo[1,2-b]pyridazin-6-yl derivatives |
AU2010283806A1 (en) | 2009-08-12 | 2012-03-01 | Novartis Ag | Heterocyclic hydrazone compounds and their uses to treat cancer and inflammation |
MX2012002066A (es) | 2009-08-17 | 2012-03-29 | Intellikine Inc | Compuestos heterociclicos y usos de los mismos. |
EP2467383A1 (en) | 2009-08-20 | 2012-06-27 | Novartis AG | Heterocyclic oxime compounds |
IN2012DN01693A (hu) | 2009-08-26 | 2015-06-05 | Novartis Ag | |
US20120157471A1 (en) | 2009-09-01 | 2012-06-21 | Pfizer Inc. | Benzimidazole derivatives |
US9340555B2 (en) | 2009-09-03 | 2016-05-17 | Allergan, Inc. | Compounds as tyrosine kinase modulators |
AU2010289353B2 (en) | 2009-09-03 | 2016-12-08 | Allergan, Inc. | Compounds as tyrosine kinase modulators |
EP2475668A1 (en) | 2009-09-10 | 2012-07-18 | Novartis AG | Ether derivatives of bicyclic heteroaryls |
AU2010292060A1 (en) | 2009-09-11 | 2012-04-12 | Genentech, Inc. | Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer agent |
CN102612566B (zh) | 2009-09-17 | 2016-02-17 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 用于癌症患者中诊断学用途的方法和组合物 |
ES2487628T3 (es) | 2009-11-04 | 2014-08-22 | Novartis Ag | Derivados de sulfonamida heterocíclica útiles como inhibidores de MEK |
JP2013512215A (ja) | 2009-11-25 | 2013-04-11 | ノバルティス アーゲー | 二環式ヘテロアリールのベンゼン縮合6員酸素含有ヘテロ環誘導体 |
AU2012265844A1 (en) | 2009-12-08 | 2013-05-02 | Novartis Ag | Heterocyclic sulfonamide derivatives |
ES2484171T3 (es) | 2009-12-08 | 2014-08-11 | Novartis Ag | Derivados de sulfonamidas heterocíclicas |
WO2011073521A1 (en) | 2009-12-15 | 2011-06-23 | Petri Salven | Methods for enriching adult-derived endothelial progenitor cells and uses thereof |
CU24130B1 (es) | 2009-12-22 | 2015-09-29 | Novartis Ag | Isoquinolinonas y quinazolinonas sustituidas |
US8440693B2 (en) | 2009-12-22 | 2013-05-14 | Novartis Ag | Substituted isoquinolinones and quinazolinones |
US8754072B2 (en) | 2010-02-12 | 2014-06-17 | Pfizer Inc. | Salts and polymorphs of 8-fluoro-2-{4-[(methylamino)methyl]phenyl}-1,3,4,5-tetrahydro-6h-azepino[5,4,3-cd]indol-6-one |
EP2542893A2 (en) | 2010-03-03 | 2013-01-09 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Biological markers predictive of anti-cancer response to insulin-like growth factor-1 receptor kinase inhibitors |
CA2783656A1 (en) | 2010-03-03 | 2011-09-09 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Biological markers predictive of anti-cancer response to insulin-like growth factor-1 receptor kinase inhibitors |
CN102892766B (zh) | 2010-04-06 | 2015-05-20 | 大学健康网络 | 激酶抑制剂和用其治疗癌症的方法 |
WO2011153224A2 (en) | 2010-06-02 | 2011-12-08 | Genentech, Inc. | Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer |
CN103068851B (zh) | 2010-06-16 | 2015-03-11 | 高等教育联邦系统-匹兹堡大学 | 内质蛋白的抗体及其用途 |
CN102947275A (zh) | 2010-06-17 | 2013-02-27 | 诺瓦提斯公司 | 哌啶基取代的1,3-二氢-苯并咪唑-2-亚基胺衍生物 |
US20130090342A1 (en) | 2010-06-17 | 2013-04-11 | Novartis Ag | Biphenyl substituted 1,3-dihydro-benzoimidazol-2-ylideneamine derivatives |
MX2012014776A (es) | 2010-06-25 | 2013-01-29 | Eisai R&D Man Co Ltd | Agente antitumoral que emplea compuestos con efecto inhibidor de cinasas combinados. |
JP2013537522A (ja) | 2010-07-19 | 2013-10-03 | エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | 抗癌治療への応答可能性の増大した患者を同定する方法 |
WO2012010549A1 (en) | 2010-07-19 | 2012-01-26 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer therapy |
JP2013538191A (ja) | 2010-07-23 | 2013-10-10 | トラスティーズ オブ ボストン ユニバーシティ | 病的血管新生および腫瘍細胞侵襲性の阻害のための治療法としてならびに分子イメージングおよび標的化送達のための抗DEsupR阻害剤 |
CN101912363A (zh) * | 2010-07-29 | 2010-12-15 | 蔡海德 | 溶解超滤-喷雾干燥-分子分散包衣-水化制粒-冷冻干燥生产脂质体组合药物 |
AR082418A1 (es) | 2010-08-02 | 2012-12-05 | Novartis Ag | Formas cristalinas de 1-(4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il)-amida de 2-amida del acido (s)-pirrolidin-1,2-dicarboxilico |
US8426418B2 (en) | 2010-08-27 | 2013-04-23 | CollabRx Inc. | Method to treat melanoma in BRAF inhibitor-resistant subjects |
JP2013537210A (ja) | 2010-09-16 | 2013-09-30 | ノバルティス アーゲー | 17α−ヒドロキシラーゼ/C17,20−リアーゼ阻害剤 |
WO2012042421A1 (en) | 2010-09-29 | 2012-04-05 | Pfizer Inc. | Method of treating abnormal cell growth |
CA2813162C (en) | 2010-10-20 | 2015-06-16 | Pfizer Inc. | Pyridine-2- derivatives as smoothened receptor modulators |
US8987257B2 (en) | 2011-01-31 | 2015-03-24 | Novartis Ag | Heterocyclic derivatives |
WO2012107500A1 (en) | 2011-02-10 | 2012-08-16 | Novartis Ag | [1, 2, 4] triazolo [4, 3 -b] pyridazine compounds as inhibitors of the c-met tyrosine kinase |
US20120214830A1 (en) | 2011-02-22 | 2012-08-23 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Biological markers predictive of anti-cancer response to insulin-like growth factor-1 receptor kinase inhibitors in hepatocellular carcinoma |
JP5808826B2 (ja) | 2011-02-23 | 2015-11-10 | インテリカイン, エルエルシー | 複素環化合物およびその使用 |
JP2014507465A (ja) | 2011-03-08 | 2014-03-27 | ノバルティス アーゲー | フルオロフェニル二環式ヘテロアリール化合物 |
DK2688887T3 (en) | 2011-03-23 | 2015-06-29 | Amgen Inc | DEHYDRATED tricyclic DUALINHIBITORER OF CDK 4/6 AND FLT3 |
US9150644B2 (en) | 2011-04-12 | 2015-10-06 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human monoclonal antibodies that bind insulin-like growth factor (IGF) I and II |
CA2828946C (en) | 2011-04-18 | 2016-06-21 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Therapeutic agent for tumor |
EP2699598B1 (en) | 2011-04-19 | 2019-03-06 | Pfizer Inc | Combinations of anti-4-1bb antibodies and adcc-inducing antibodies for the treatment of cancer |
US9896730B2 (en) | 2011-04-25 | 2018-02-20 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Use of EMT gene signatures in cancer drug discovery, diagnostics, and treatment |
EA023064B1 (ru) | 2011-04-28 | 2016-04-29 | Новартис Аг | ИНГИБИТОРЫ 17α-ГИДРОКСИЛАЗЫ/C-ЛИАЗЫ |
ES2841809T3 (es) | 2011-06-03 | 2021-07-09 | Eisai R&D Man Co Ltd | Biomarcadores para pronosticar y evaluar el grado de respuesta de sujetos con cáncer de tiroides y de riñón a compuestos de lenvatinib |
EP2721008B1 (en) | 2011-06-20 | 2015-04-29 | Novartis AG | Hydroxy substituted isoquinolinone derivatives as p53 (mdm2 or mdm4) inhibitors |
WO2012175487A1 (en) | 2011-06-20 | 2012-12-27 | Novartis Ag | Cyclohexyl isoquinolinone compounds |
EP3409278B8 (en) | 2011-07-21 | 2020-11-04 | Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. | Heterocyclic protein kinase inhibitors |
US8877946B2 (en) | 2011-08-04 | 2014-11-04 | National University Of Singapore | Benzylidene-indolinone compounds and their medical use |
WO2013025939A2 (en) | 2011-08-16 | 2013-02-21 | Indiana University Research And Technology Corporation | Compounds and methods for treating cancer by inhibiting the urokinase receptor |
MX339302B (es) | 2011-09-15 | 2016-05-19 | Novartis Ag | 3-(quinolin-6-il-tio)-[1,2,4]-triazolo-[4,3-a]-piridinas 6-sustituidas como cinasas de tirosina. |
CA2847540C (en) | 2011-09-22 | 2016-05-17 | Pfizer Inc. | Pyrrolopyrimidine and purine derivatives |
ES2654160T3 (es) | 2011-10-04 | 2018-02-12 | Igem Therapeutics Limited | Anticuerpos de IgE anti-HMW-MAA |
EP2771342B1 (en) | 2011-10-28 | 2016-05-18 | Novartis AG | Purine derivatives and their use in the treatment of disease |
US20140286959A1 (en) | 2011-11-08 | 2014-09-25 | Pfizer Inc. | Methods of Treating Inflammatory Disorders Using Anti-M-CSF Antibodies |
EP2785717B1 (en) | 2011-11-29 | 2016-01-13 | Novartis AG | Pyrazolopyrrolidine compounds |
CA2859873A1 (en) | 2011-12-23 | 2013-06-27 | Novartis Ag | Compounds for inhibiting the interaction of bcl2 with binding partners |
EP2794590A1 (en) | 2011-12-23 | 2014-10-29 | Novartis AG | Compounds for inhibiting the interaction of bcl2 with binding partners |
EP2794588A1 (en) | 2011-12-23 | 2014-10-29 | Novartis AG | Compounds for inhibiting the interaction of bcl2 with binding partners |
US9126979B2 (en) | 2011-12-23 | 2015-09-08 | Novartis Ag | Compounds for inhibiting the interaction of BCL2 with binding partners |
WO2013096060A1 (en) | 2011-12-23 | 2013-06-27 | Novartis Ag | Compounds for inhibiting the interaction of bcl2 with binding partners |
CN102491932A (zh) * | 2011-12-26 | 2012-06-13 | 天津科技大学 | 一种3-吲哚啉酮类衍生物及其制备方法及其应用 |
JO3357B1 (ar) | 2012-01-26 | 2019-03-13 | Novartis Ag | مركبات إيميدازوبيروليدينون |
AR090263A1 (es) | 2012-03-08 | 2014-10-29 | Hoffmann La Roche | Terapia combinada de anticuerpos contra el csf-1r humano y las utilizaciones de la misma |
EP2834246B1 (en) | 2012-04-03 | 2021-07-28 | Novartis AG | Combination products with tyrosine kinase inhibitors and their use |
WO2013152252A1 (en) | 2012-04-06 | 2013-10-10 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Combination anti-cancer therapy |
SG10201608469RA (en) | 2012-05-16 | 2016-11-29 | Novartis Ag | Dosage regimen for a pi-3 kinase inhibitor |
WO2013175417A1 (en) | 2012-05-24 | 2013-11-28 | Novartis Ag | Pyrrolopyrrolidinone compounds |
WO2014062838A2 (en) | 2012-10-16 | 2014-04-24 | Tolero Pharmaceuticals, Inc. | Pkm2 modulators and methods for their use |
US9260426B2 (en) | 2012-12-14 | 2016-02-16 | Arrien Pharmaceuticals Llc | Substituted 1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridine and 1H-pyrazolo [3, 4-b] pyridine derivatives as salt inducible kinase 2 (SIK2) inhibitors |
KR20150098605A (ko) | 2012-12-21 | 2015-08-28 | 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 | 퀴놀린 유도체의 비정질 형태 및 그의 제조방법 |
US9403827B2 (en) | 2013-01-22 | 2016-08-02 | Novartis Ag | Substituted purinone compounds |
EP2948453B1 (en) | 2013-01-22 | 2017-08-02 | Novartis AG | Pyrazolo[3,4-d]pyrimidinone compounds as inhibitors of the p53/mdm2 interaction |
RU2019119893A (ru) | 2013-03-14 | 2019-08-09 | Толеро Фармасьютикалз, Инк. | Ингибиторы jak2 и alk2 и способы их использования |
WO2014151147A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Intellikine, Llc | Combination of kinase inhibitors and uses thereof |
WO2014155268A2 (en) | 2013-03-25 | 2014-10-02 | Novartis Ag | Fgf-r tyrosine kinase activity inhibitors - use in diseases associated with lack of or reduced snf5 activity |
US9206188B2 (en) | 2013-04-18 | 2015-12-08 | Arrien Pharmaceuticals Llc | Substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines as ITK and JAK inhibitors |
ES2687968T3 (es) | 2013-05-14 | 2018-10-30 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Biomarcadores para pronosticar y evaluar la reactividad de sujetos con cáncer de endometrio a compuestos con lenvatinib |
EP3021944B1 (en) | 2013-07-14 | 2018-12-19 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem, Ltd. | Igf-1r signaling pathway inhibitors useful in the treatment of neurodegenerative diseases |
WO2015022664A1 (en) | 2013-08-14 | 2015-02-19 | Novartis Ag | Compounds and compositions as inhibitors of mek |
US9227969B2 (en) | 2013-08-14 | 2016-01-05 | Novartis Ag | Compounds and compositions as inhibitors of MEK |
WO2015022663A1 (en) | 2013-08-14 | 2015-02-19 | Novartis Ag | Compounds and compositions as inhibitors of mek |
WO2015051302A1 (en) | 2013-10-04 | 2015-04-09 | Aptose Biosciences Inc. | Compositions and methods for treating cancers |
MX357763B (es) | 2013-10-18 | 2018-07-23 | Univ Health Network | Tratamiento para cancer pancreatico. |
WO2015073833A1 (en) * | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Pharmacyclics, Inc. | Methods for delaying or preventing the onset of type 1 diabetes |
UA115388C2 (uk) | 2013-11-21 | 2017-10-25 | Пфайзер Інк. | 2,6-заміщені пуринові похідні та їх застосування в лікуванні проліферативних захворювань |
WO2015084804A1 (en) | 2013-12-03 | 2015-06-11 | Novartis Ag | Combination of mdm2 inhibitor and braf inhibitor and their use |
KR20160095035A (ko) | 2013-12-06 | 2016-08-10 | 노파르티스 아게 | 알파-이소형 선택성 포스파티딜이노시톨 3-키나제 억제제를 위한 투여 요법 |
EP3091982B1 (en) | 2014-01-09 | 2019-04-17 | Intra-Cellular Therapies, Inc. | Organic compounds |
MA39776A (fr) | 2014-03-24 | 2017-02-01 | Hoffmann La Roche | Traitement du cancer avec des antagonistes de c-met et corrélation de ces derniers avec l'expression de hgf |
CN106536753B (zh) | 2014-04-04 | 2020-07-21 | 中美冠科生物技术(太仓)有限公司 | 用于确定对mek/erk抑制剂的应答性的方法 |
WO2015155624A1 (en) | 2014-04-10 | 2015-10-15 | Pfizer Inc. | Dihydropyrrolopyrimidine derivatives |
CN106232598B (zh) | 2014-04-30 | 2020-03-13 | 辉瑞公司 | 环烷基-连接的二杂环衍生物 |
WO2016001789A1 (en) | 2014-06-30 | 2016-01-07 | Pfizer Inc. | Pyrimidine derivatives as pi3k inhibitors for use in the treatment of cancer |
KR20170036037A (ko) | 2014-07-31 | 2017-03-31 | 노파르티스 아게 | 조합 요법 |
EP3473271B1 (en) | 2014-07-31 | 2022-07-20 | The Government of the United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services | Human monoclonal antibodies against epha4 and their use |
KR102512940B1 (ko) | 2014-08-28 | 2023-03-23 | 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 | 고순도의 퀴놀린 유도체 및 이를 제조하는 방법 |
CN105481751A (zh) * | 2014-09-16 | 2016-04-13 | 中国科学院海洋研究所 | 一类2-吲哚酮衍生物及其制备和应用 |
CN104326964A (zh) * | 2014-09-16 | 2015-02-04 | 中国科学院海洋研究所 | 一类氟代2-吲哚酮衍生物及其制备和应用 |
EP3233829B1 (en) | 2014-12-18 | 2019-08-14 | Pfizer Inc | Pyrimidine and triazine derivatives and their use as axl inhibitors |
CN112353938A (zh) | 2015-02-05 | 2021-02-12 | 特尔诺沃有限公司 | 用于治疗癌症的irs/stat3双重调节剂与抗癌剂的组合 |
CA2976325C (en) | 2015-02-25 | 2023-07-04 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Method for suppressing bitterness of quinoline derivative |
KR102662228B1 (ko) | 2015-03-04 | 2024-05-02 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | 암을 치료하기 위한 pd-1 길항제 및 vegfr/fgfr/ret 티로신 키나제 억제제의 조합 |
AU2016252609B2 (en) | 2015-04-20 | 2022-06-30 | Sumitomo Pharma Oncology, Inc. | Predicting response to alvocidib by mitochondrial profiling |
CA2984421C (en) | 2015-05-01 | 2024-04-09 | Cocrystal Pharma, Inc. | Nucleoside analogs for treatment of the flaviviridae family of viruses and cancer |
DK3527574T3 (da) | 2015-05-18 | 2022-06-27 | Sumitomo Pharma Oncology Inc | Alvocidib-prodrugs, der har øget biotilgængelighed |
BR112017027227B1 (pt) | 2015-06-16 | 2023-12-12 | Eisai R&D Management Co., Ltd | Agente anti-câncer |
WO2017009751A1 (en) | 2015-07-15 | 2017-01-19 | Pfizer Inc. | Pyrimidine derivatives |
BR112018002427A8 (pt) | 2015-08-03 | 2022-10-18 | Tolero Pharmaceuticals Inc | Uso de alvocidib e de azacitidina ou decitabina para tratar câncer e kit e composição farmacêutica contendo as ditas substâncias |
EP3370719A1 (en) | 2015-11-02 | 2018-09-12 | Novartis AG | Dosage regimen for a phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor |
CN108601752A (zh) | 2015-12-03 | 2018-09-28 | 安吉奥斯医药品有限公司 | 用于治疗mtap缺失型癌症的mat2a抑制剂 |
WO2018060833A1 (en) | 2016-09-27 | 2018-04-05 | Novartis Ag | Dosage regimen for alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor alpelisib |
WO2018094275A1 (en) | 2016-11-18 | 2018-05-24 | Tolero Pharmaceuticals, Inc. | Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors |
JP6619519B2 (ja) | 2016-12-19 | 2019-12-11 | トレロ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | プロファイリングペプチドおよび感受性プロファイリングのための方法 |
SG10201913491PA (en) | 2016-12-22 | 2020-03-30 | Amgen Inc | Benzisothiazole, isothiazolo[3,4-b]pyridine, quinazoline, phthalazine, pyrido[2,3-d]pyridazine and pyrido[2,3-d]pyrimidine derivatives as kras g12c inhibitors for treating lung, pancreatic or colorectal cancer |
JOP20190272A1 (ar) | 2017-05-22 | 2019-11-21 | Amgen Inc | مثبطات kras g12c وطرق لاستخدامها |
WO2019051291A1 (en) | 2017-09-08 | 2019-03-14 | Amgen Inc. | KRAS G12C INHIBITORS AND METHODS OF USE |
US11497756B2 (en) | 2017-09-12 | 2022-11-15 | Sumitomo Pharma Oncology, Inc. | Treatment regimen for cancers that are insensitive to BCL-2 inhibitors using the MCL-1 inhibitor alvocidib |
WO2019075367A1 (en) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | Tolero Pharmaceuticals, Inc. | PKM2 ACTIVATORS IN COMBINATION WITH OXYGEN REACTIVE SPECIES FOR THE TREATMENT OF CANCER |
CA3079076A1 (en) | 2017-10-18 | 2019-04-25 | Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus | Methods and compounds for improved immune cell therapy |
AU2017444054B2 (en) | 2017-12-21 | 2021-10-07 | Hefei Institutes Of Physical Science, Chinese Academy Of Sciences | Class of pyrimidine derivative kinase inhibitors |
EP3788053B1 (en) | 2018-05-04 | 2024-07-10 | Amgen Inc. | Kras g12c inhibitors and methods of using the same |
MA52501A (fr) | 2018-05-04 | 2021-03-10 | Amgen Inc | Inhibiteurs de kras g12c et leurs procédés d'utilisation |
CA3099045A1 (en) | 2018-05-10 | 2019-11-14 | Amgen Inc. | Kras g12c inhibitors for the treatment of cancer |
ES2938987T3 (es) | 2018-06-01 | 2023-04-18 | Amgen Inc | Inhibidores de KRAS G12c y métodos de uso de los mismos |
MA52780A (fr) | 2018-06-11 | 2021-04-14 | Amgen Inc | Inhibiteurs de kras g12c pour le traitement du cancer |
CA3100390A1 (en) | 2018-06-12 | 2020-03-12 | Amgen Inc. | Kras g12c inhibitors encompassing piperazine ring and use thereof in the treatment of cancer |
MX2021000977A (es) | 2018-07-26 | 2021-04-12 | Sumitomo Pharma Oncology Inc | Metodos para tratar enfermedades asociadas con expresion anormal de receptor de activina a tipo 1 (acvr1) e inhibidores de acvr1 para uso en los mismos. |
JP7516029B2 (ja) | 2018-11-16 | 2024-07-16 | アムジエン・インコーポレーテツド | Kras g12c阻害剤化合物の重要な中間体の改良合成法 |
JP7377679B2 (ja) | 2018-11-19 | 2023-11-10 | アムジエン・インコーポレーテツド | がん治療のためのkrasg12c阻害剤及び1種以上の薬学的に活性な追加の薬剤を含む併用療法 |
WO2020106640A1 (en) | 2018-11-19 | 2020-05-28 | Amgen Inc. | Kras g12c inhibitors and methods of using the same |
CN109912490B (zh) * | 2018-11-30 | 2020-10-16 | 深圳大学 | 一种吲哚类化合物Plancyindole E及其制备方法 |
JP2022511029A (ja) | 2018-12-04 | 2022-01-28 | スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー, インコーポレイテッド | がんの処置のための薬剤としての使用のためのcdk9インヒビターおよびその多形 |
JP2022514268A (ja) | 2018-12-20 | 2022-02-10 | アムジエン・インコーポレーテツド | Kif18a阻害剤 |
EA202191730A1 (ru) | 2018-12-20 | 2021-08-24 | Эмджен Инк. | Ингибиторы kif18a |
US20220002311A1 (en) | 2018-12-20 | 2022-01-06 | Amgen Inc. | Kif18a inhibitors |
MA54546A (fr) | 2018-12-20 | 2022-03-30 | Amgen Inc | Amides d'hétéroaryle utiles en tant qu'inhibiteurs de kif18a |
CA3127502A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-20 | Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. | Formulations comprising heterocyclic protein kinase inhibitors |
CN113767100A (zh) | 2019-03-01 | 2021-12-07 | 锐新医药公司 | 双环杂芳基化合物及其用途 |
US20230096028A1 (en) | 2019-03-01 | 2023-03-30 | Revolution Medicines, Inc. | Bicyclic heterocyclyl compounds and uses thereof |
US11793802B2 (en) | 2019-03-20 | 2023-10-24 | Sumitomo Pharma Oncology, Inc. | Treatment of acute myeloid leukemia (AML) with venetoclax failure |
KR20210141621A (ko) | 2019-03-22 | 2021-11-23 | 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. | Pkm2 조정제를 포함하는 조성물 및 그를 사용한 치료 방법 |
EP3738593A1 (en) | 2019-05-14 | 2020-11-18 | Amgen, Inc | Dosing of kras inhibitor for treatment of cancers |
CA3225293A1 (en) | 2019-05-21 | 2020-11-26 | Amgen Inc. | Solid state forms |
US20220289724A1 (en) | 2019-08-02 | 2022-09-15 | Amgen Inc. | Kif18a inhibitors |
MX2022001302A (es) | 2019-08-02 | 2022-03-02 | Amgen Inc | Inhibidores de kif18a. |
US20220281843A1 (en) | 2019-08-02 | 2022-09-08 | Amgen Inc. | Kif18a inhibitors |
RU2734495C1 (ru) * | 2019-09-13 | 2020-10-19 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ лечения сахарного диабета |
JP2022552873A (ja) | 2019-10-24 | 2022-12-20 | アムジエン・インコーポレーテツド | がんの治療におけるkras g12c及びkras g12d阻害剤として有用なピリドピリミジン誘導体 |
WO2021091956A1 (en) | 2019-11-04 | 2021-05-14 | Revolution Medicines, Inc. | Ras inhibitors |
TW202132315A (zh) | 2019-11-04 | 2021-09-01 | 美商銳新醫藥公司 | Ras 抑制劑 |
KR20220100903A (ko) | 2019-11-08 | 2022-07-18 | 레볼루션 메디슨즈, 인크. | 이환식 헤테로아릴 화합물 및 이의 용도 |
US20220395553A1 (en) | 2019-11-14 | 2022-12-15 | Cohbar, Inc. | Cxcr4 antagonist peptides |
CA3158188A1 (en) | 2019-11-14 | 2021-05-20 | Amgen Inc. | Improved synthesis of kras g12c inhibitor compound |
MX2022005726A (es) | 2019-11-14 | 2022-06-09 | Amgen Inc | Sintesis mejorada del compuesto inhibidor de g12c de kras. |
EP4065231A1 (en) | 2019-11-27 | 2022-10-05 | Revolution Medicines, Inc. | Covalent ras inhibitors and uses thereof |
BR112022010086A2 (pt) | 2020-01-07 | 2022-09-06 | Revolution Medicines Inc | Dosagem do inibidor de shp2 e métodos de tratamento de câncer |
WO2021155006A1 (en) | 2020-01-31 | 2021-08-05 | Les Laboratoires Servier Sas | Inhibitors of cyclin-dependent kinases and uses thereof |
WO2021257736A1 (en) | 2020-06-18 | 2021-12-23 | Revolution Medicines, Inc. | Methods for delaying, preventing, and treating acquired resistance to ras inhibitors |
US11945809B2 (en) | 2020-07-19 | 2024-04-02 | King Saud University | Isatin derivatives |
AU2021344830A1 (en) | 2020-09-03 | 2023-04-06 | Revolution Medicines, Inc. | Use of SOS1 inhibitors to treat malignancies with SHP2 mutations |
PE20231207A1 (es) | 2020-09-15 | 2023-08-17 | Revolution Medicines Inc | Derivados indolicos como inhibidores de ras en el tratamiento del cancer |
AU2021409816A1 (en) | 2020-12-22 | 2023-07-06 | Qilu Regor Therapeutics Inc. | Sos1 inhibitors and uses thereof |
AR125787A1 (es) | 2021-05-05 | 2023-08-16 | Revolution Medicines Inc | Inhibidores de ras |
JP2024516450A (ja) | 2021-05-05 | 2024-04-15 | レボリューション メディシンズ インコーポレイテッド | 共有結合性ras阻害剤及びその使用 |
CR20230570A (es) | 2021-05-05 | 2024-01-22 | Revolution Medicines Inc | Inhibidores de ras |
IT202100023357A1 (it) | 2021-09-09 | 2023-03-09 | Cheirontech S R L | Peptidi con attività anti-angiogenica |
AR127308A1 (es) | 2021-10-08 | 2024-01-10 | Revolution Medicines Inc | Inhibidores ras |
AU2022379973A1 (en) | 2021-11-08 | 2024-06-27 | Progentos Therapeutics, Inc. | Platelet-derived growth factor receptor (pdgfr) alpha inhibitors and uses thereof |
WO2023114954A1 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | Genzyme Corporation | Pyrazolopyrazine compounds as shp2 inhibitors |
EP4227307A1 (en) | 2022-02-11 | 2023-08-16 | Genzyme Corporation | Pyrazolopyrazine compounds as shp2 inhibitors |
WO2023158785A1 (en) * | 2022-02-21 | 2023-08-24 | University Of Houston System | Small molecules that treat or prevent viral infections |
WO2023172940A1 (en) | 2022-03-08 | 2023-09-14 | Revolution Medicines, Inc. | Methods for treating immune refractory lung cancer |
WO2023240263A1 (en) | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Revolution Medicines, Inc. | Macrocyclic ras inhibitors |
WO2024081916A1 (en) | 2022-10-14 | 2024-04-18 | Black Diamond Therapeutics, Inc. | Methods of treating cancers using isoquinoline or 6-aza-quinoline derivatives |
WO2024206858A1 (en) | 2023-03-30 | 2024-10-03 | Revolution Medicines, Inc. | Compositions for inducing ras gtp hydrolysis and uses thereof |
CN116585307B (zh) * | 2023-05-10 | 2024-08-20 | 重庆医科大学 | 5-羟基氧吲哚在制备急性呼吸窘迫综合征治疗药物中的应用 |
Family Cites Families (78)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL230368A (hu) * | 1957-08-19 | |||
DE878539C (de) * | 1939-08-17 | 1953-06-05 | Hoechst Ag | Verfahren zur Herstellung von Methinfarbstoffen |
BE553661A (hu) * | 1955-12-23 | |||
BE558210A (hu) * | 1956-06-08 | |||
FR1398224A (fr) * | 1964-05-06 | 1965-05-07 | Ici Ltd | Procédé de teinture de matières textiles de polyacrylonitrile |
DE2159362A1 (de) * | 1971-11-30 | 1973-06-14 | Bayer Ag | Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel |
DE2159360A1 (de) * | 1971-11-30 | 1973-06-14 | Bayer Ag | Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel |
DE2159363A1 (de) * | 1971-11-30 | 1973-06-14 | Bayer Ag | Antimikrobielle mittel |
DE2159361A1 (de) * | 1971-11-30 | 1973-06-14 | Bayer Ag | Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel |
GB1384599A (en) * | 1972-05-04 | 1975-02-19 | Colgate Palmolive Co | Coloured detergent compositions |
US4002749A (en) * | 1975-08-12 | 1977-01-11 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Substituted indolinones |
US4053613A (en) | 1975-09-17 | 1977-10-11 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | 1,3,thiazolinyl and 1,3 thiazinyl substituted indolinones |
DE3310891A1 (de) * | 1983-03-25 | 1984-09-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Neue indolinon-(2)-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte |
DE3426419A1 (de) * | 1984-07-18 | 1986-01-23 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Neue oxindol-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte |
US4827847A (en) * | 1985-05-30 | 1989-05-09 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada | Short range tubular projectile |
JPS6229570A (ja) * | 1985-07-29 | 1987-02-07 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 3,5−ジイソプロピルベンジリデン複素環式化合物 |
JPH078851B2 (ja) * | 1985-07-29 | 1995-02-01 | 鐘淵化学工業株式会社 | 3−フエニルチオメチルスチレン誘導体 |
JPS6239564A (ja) * | 1985-08-13 | 1987-02-20 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | α−ベンジリデン−γ−ブチロラクトンまたはγ−ブチロラクタム誘導体 |
US4966849A (en) * | 1985-09-20 | 1990-10-30 | President And Fellows Of Harvard College | CDNA and genes for human angiogenin (angiogenesis factor) and methods of expression |
WO1993012786A1 (en) * | 1986-07-10 | 1993-07-08 | Howard Harry R Jr | Indolinone derivatives |
JPS63141955A (ja) * | 1986-12-03 | 1988-06-14 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | トリベンジルアミン誘導体 |
US4971996A (en) * | 1987-03-11 | 1990-11-20 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Hydroxystyrene compounds which are useful as tyrosine kinase inhibitors |
US5089516A (en) * | 1987-03-11 | 1992-02-18 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | 1-phenyl-3,5-pyrazolidinedione hydroxystyrene compounds which have tyrosine kinase inhibiting activity |
US5202341A (en) * | 1987-03-11 | 1993-04-13 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Hydroxystyrene compounds having tyrosine kinase inhibiting activity |
US5217999A (en) * | 1987-12-24 | 1993-06-08 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Styryl compounds which inhibit EGF receptor protein tyrosine kinase |
US4868304A (en) * | 1988-05-27 | 1989-09-19 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Synthesis of nitrogen heterocycles |
GB8816944D0 (en) * | 1988-07-15 | 1988-08-17 | Sobio Lab | Compounds |
GB8816945D0 (en) | 1988-07-15 | 1988-08-17 | Ici Plc | Polymeric foams |
DK0429685T3 (da) * | 1989-07-25 | 1997-12-15 | Taiho Pharmaceutical Co Ltd | Oxoindolderivat |
GB9004483D0 (en) * | 1990-02-28 | 1990-04-25 | Erba Carlo Spa | New aryl-and heteroarylethenylene derivatives and process for their preparation |
CA2012634A1 (en) * | 1990-03-20 | 1991-09-20 | Hassan Salari | Tyrphostins for treatment of allergic, inflammatory and cardiovascular diseases |
EP0526488B1 (en) * | 1990-04-02 | 1994-11-30 | Pfizer Inc. | Benzylphosphonic acid tyrosine kinase inhibitors |
US5302606A (en) * | 1990-04-16 | 1994-04-12 | Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. | Styryl-substituted pyridyl compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase |
US5196446A (en) | 1990-04-16 | 1993-03-23 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Certain indole compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase |
WO1992007830A2 (en) * | 1990-10-29 | 1992-05-14 | Pfizer Inc. | Oxindole peptide antagonists |
CA2102780C (en) | 1991-05-10 | 2007-01-09 | Alfred P. Spada | Bis mono-and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit egf and/or pdgf receptor tyrosine kinase |
US5480883A (en) | 1991-05-10 | 1996-01-02 | Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. | Bis mono- and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit EGF and/or PDGF receptor tyrosine kinase |
EP0586608A1 (en) * | 1991-05-29 | 1994-03-16 | Pfizer Inc. | Tricyclic polyhydroxylic tyrosine kinase inhibitors |
GB9115160D0 (en) * | 1991-07-12 | 1991-08-28 | Erba Carlo Spa | Methylen-oxindole derivatives and process for their preparation |
US5124347A (en) * | 1991-07-31 | 1992-06-23 | Warner-Lambert Co. | 3-5-ditertiarybutylphenyl-4-hydroxymethylidene derivatives of 1,3-dihydro-2H-indole-2-ones as antiinflammatory agents |
JPH0558894A (ja) * | 1991-08-27 | 1993-03-09 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 抗腫瘍剤 |
US5322950A (en) * | 1991-12-05 | 1994-06-21 | Warner-Lambert Company | Imidazole with angiotensin II antagonist properties |
EP0549348A1 (en) * | 1991-12-24 | 1993-06-30 | PHARMACIA S.p.A. | Arylidene-heterocyclic derivatives, process for their preparation and their use as tyrisine kinase inhibitors |
GB9300059D0 (en) | 1992-01-20 | 1993-03-03 | Zeneca Ltd | Quinazoline derivatives |
FR2689397A1 (fr) * | 1992-04-01 | 1993-10-08 | Adir | Utilisation des dérivés de la 3-(3,5-Ditert-Butyl-4-Hydroxybenzylidenyl) Indoline-2-one pour l'obtention de médicaments. |
EP0641204B1 (en) | 1992-05-20 | 2000-08-16 | Merck & Co. Inc. | 17-ethers and thioethers of 4-aza-steroids |
FR2694004B1 (fr) * | 1992-07-21 | 1994-08-26 | Adir | Nouvelles 3-(Hydroxybenzylidényl)-indoline-2-ones et 3-(hydroxybenzylidényl)-indoline-2-thiones, leurs procédés de préparation, et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. |
WO1994003427A1 (en) * | 1992-08-06 | 1994-02-17 | Warner-Lambert Company | 2-thioindoles (selenoindoles) and related disulfides (selenides) which inhibit protein tyrosine kinases and which have antitumor properties |
US5565324A (en) | 1992-10-01 | 1996-10-15 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags |
US5330992A (en) * | 1992-10-23 | 1994-07-19 | Sterling Winthrop Inc. | 1-cyclopropyl-4-pyridyl-quinolinones |
ATE498632T1 (de) * | 1992-10-28 | 2011-03-15 | Genentech Inc | Verwendung von vaskulären endothelwachstumsfaktor-antagonisten |
FR2698397B1 (fr) | 1992-11-20 | 1995-06-09 | Arte | Procede d'isolation et de revetement exterieur d'une construction et nouveau type de corniere destinee a sa mise en oeuvre. |
DE4239169A1 (de) * | 1992-11-21 | 1994-05-26 | Merck Patent Gmbh | Cyclobutan - Benzol - Derivate |
GB9226855D0 (en) * | 1992-12-23 | 1993-02-17 | Erba Carlo Spa | Vinylene-azaindole derivatives and process for their preparation |
JP3507124B2 (ja) * | 1993-05-26 | 2004-03-15 | 塩野義製薬株式会社 | ベンジリデン誘導体の製造法 |
EP0632102B1 (de) * | 1993-06-28 | 1997-04-02 | Bayer Ag | Massefärben von Kunststoffen |
GB9313638D0 (en) * | 1993-07-01 | 1993-08-18 | Erba Carlo Spa | Arylidene and heteroarylidene oxindole derivatives and process for their preparation |
US5502072A (en) * | 1993-11-26 | 1996-03-26 | Pfizer Inc. | Substituted oxindoles |
FR2713431B1 (fr) * | 1993-12-01 | 1996-02-16 | Dehaeze Jean Marie | Perfectionnement à l'interface "Amplificateur de puissance-enceinte acoustique". |
GB9326136D0 (en) * | 1993-12-22 | 1994-02-23 | Erba Carlo Spa | Biologically active 3-substituted oxindole derivatives useful as anti-angiogenic agents |
GB9412719D0 (en) * | 1994-06-24 | 1994-08-17 | Erba Carlo Spa | Substituted azaindolylidene compounds and process for their preparation |
GB9423997D0 (en) * | 1994-11-28 | 1995-01-11 | Erba Carlo Spa | Substituted 3-arylidene-7-azaoxindole compounds and process for their preparation |
GB9501567D0 (en) * | 1995-01-26 | 1995-03-15 | Pharmacia Spa | Hydrosoluble 3-arylidene-2-oxindole derivatives as tyrosine kinase inhibitors |
GB9507298D0 (en) * | 1995-04-07 | 1995-05-31 | Pharmacia Spa | Substituted indolylmethylene-oxindale analogues as tyrosine kinase inhibitors |
US5880141A (en) * | 1995-06-07 | 1999-03-09 | Sugen, Inc. | Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease |
RU2145852C1 (ru) * | 1996-01-17 | 2000-02-27 | Тайхо Фармасьютикал Ко., Лтд | Ингибитор гипертрофии интимы, применение оксиндолового производного для получения ингибитора гипертрофии интимы, композиция для ингибирования гипертрофии интимы, способ предупреждения и лечения гипертрофии интимы |
EP0788890A1 (en) * | 1996-02-06 | 1997-08-13 | Agfa-Gevaert N.V. | Dyes and dye-donor elements for thermal dye transfer recording |
AU2066797A (en) * | 1996-03-21 | 1997-10-10 | Sugen, Inc. | Assays for kdr/flk-1 receptor tyrosine kinase inhibitors |
ES2246058T3 (es) * | 1996-03-29 | 2006-02-01 | Pfizer Inc. | Derivados bencil(iden)-lactama, su preparacion y su uso como (ant)agonistas selectivos de receptores 5-ht1a y/o 5-ht1d. |
JP3696330B2 (ja) * | 1996-04-18 | 2005-09-14 | 大鵬薬品工業株式会社 | 3−(ジアリールメチレン)オキシインドール誘導体の製造方法 |
CA2263838A1 (en) | 1996-08-21 | 1998-02-26 | Sugen, Inc. | Crystal structures of a protein tyrosine kinase |
CA2264220A1 (en) | 1996-08-23 | 1998-02-26 | Sugen, Inc. | Indolinone combinatorial libraries and related products and methods for the treatment of disease |
AU7622698A (en) | 1996-12-05 | 1998-06-29 | Sugen, Inc. | Use of indolinone compounds as modulators of protein kinases |
US6248771B1 (en) | 1997-03-05 | 2001-06-19 | Sugen, Inc. | Formulations for hydrophobic pharmaceutical agents |
JP2002511852A (ja) | 1997-05-07 | 2002-04-16 | スージェン・インコーポレーテッド | 蛋白質キナーゼ活性の調節剤としての2−インドリノン誘導体 |
GB9716557D0 (en) | 1997-08-06 | 1997-10-08 | Glaxo Group Ltd | Benzylidene-1,3-dihydro-indol-2-one derivatives having anti-cancer activity |
WO1999048868A2 (en) | 1998-03-26 | 1999-09-30 | Sugen, Inc. | Heterocyclic classes of compounds for the modulating tyrosine protein kinase |
EP2020408B1 (en) | 1998-05-29 | 2013-06-26 | Sugen, Inc. | Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitor |
-
1995
- 1995-06-07 US US08/485,323 patent/US5880141A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-06-05 NZ NZ310109A patent/NZ310109A/en not_active IP Right Cessation
- 1996-06-05 EP EP99103667A patent/EP0934931A3/en not_active Withdrawn
- 1996-06-05 AU AU60441/96A patent/AU706597C/en not_active Expired
- 1996-06-05 US US08/655,225 patent/US5834504A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 EP EP96918093A patent/EP0769947B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 US US08/659,191 patent/US5883113A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 PT PT96918093T patent/PT769947E/pt unknown
- 1996-06-05 CN CNB961906162A patent/CN1268333C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 US US08/655,226 patent/US5886020A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 DE DE29623744U patent/DE29623744U1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 CA CA002192797A patent/CA2192797C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 DE DE69612649T patent/DE69612649T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 ES ES96918093T patent/ES2159741T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 WO PCT/US1996/008903 patent/WO1996040116A1/en active IP Right Grant
- 1996-06-05 DK DK96918093T patent/DK0769947T3/da active
- 1996-06-05 HU HU9701694A patent/HU226755B1/hu unknown
- 1996-06-05 AT AT96918093T patent/ATE200863T1/de active
- 1996-06-05 JP JP50136397A patent/JP3231044B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-05 US US08/655,223 patent/US5792783A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 US US08/655,224 patent/US5883116A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 BR BR9606410A patent/BR9606410A/pt active Search and Examination
- 1996-06-05 MX MX9606401A patent/MX9606401A/es unknown
- 1996-06-11 AR ARP960103100A patent/AR003088A1/es active IP Right Grant
- 1996-12-13 NO NO19965377A patent/NO311355B1/no not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-01-02 HK HK98100009A patent/HK1001121A1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-12-11 HK HK98113193A patent/HK1011933A1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-12-15 US US09/212,494 patent/US6225335B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-06-07 JP JP11159567A patent/JP2000026412A/ja active Pending
-
2001
- 2001-01-22 US US09/765,619 patent/US6469032B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-31 GR GR20010401166T patent/GR3036315T3/el unknown
-
2002
- 2002-08-26 US US10/227,550 patent/US20030176487A1/en not_active Abandoned
- 2002-11-19 AR ARP020104442A patent/AR037562A2/es unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HU226755B1 (en) | Indolinone derivatives for the treatment of disease, use thereof, pharmaceutical compositions containing these compounds | |
US5763470A (en) | Benzopyran compounds and methods for their use | |
KR100743287B1 (ko) | 피롤기로 치환된 2-인돌리논 단백질 인산화 효소 억제제 | |
US5886195A (en) | Thienyl compounds for inhibition of cell proliferative disorders | |
US7189721B2 (en) | Bicyclic protein kinase inhibitors | |
US6316635B1 (en) | 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity | |
JP2002511852A (ja) | 蛋白質キナーゼ活性の調節剤としての2−インドリノン誘導体 | |
US6649635B2 (en) | Heteroarylcarboxamide compounds active against protein tyrosine kinase related disorders | |
US6906093B2 (en) | Indolinone combinatorial libraries and related products and methods for the treatment of disease | |
US6130238A (en) | 3-(cyclohexanoheteroarylidenyl)-2-indolinone protein tyrosine kinase inhibitors | |
US6569868B2 (en) | 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity |