PT1478380E - Utilização de inibidores de tirosina-cinases para tratar doenças do snc - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

UTILIZAÇÃO DE INIBIDORES DE TIROSINA-CINASES PARA TRATAR

DOENÇAS DO SNC A presente invenção refere-se a um método para tratar doenças do SNC, mais particularmente doenças seleccionadas entre o grupo consistindo em depressão, esquizofrenia, ansiedade, enxaqueca, perda de memória, dor e doenças neurodegenerativas, que compreende administrar um composto capaz de reduzir o número de mastócitos a um ser humano necessitado desse tratamento. Estes compostos podem ser seleccionados entre os inibidores de tirosina-cinases e, mais particularmente, entre os inibidores potentes, selectivos e não tóxicos de c-kit. Preferencialmente, o referido inibidor é incapaz de promover a morte de células dependentes de IL-3 cultivadas na presença de IL-3.

Os neurónios propagam um sinal sob a forma de um potencial de acção ao longo do seu axónio, para outros neurónios ou para as células efectoras. Muitos sinais positivos ou negativos são trocados entre os neurónios e são integrados para produzir padrões de disparo significativos. A comunicação entre dois neurónios baseia-se na acção de numerosos neurotransmissores sobre receptores específicos localizados nas sinapses. Uma perturbação da regulação da neurotransmissão é responsável por doenças neurológicas e psiquiátricas. Além disso, a actividade dos neurotransmissores sobre o seu respectivo receptor é normalmente limitada em termos de tempo, pelo que os receptores podem responder repetidamente às ondas de estímulos seguintes. Relativamente a isto, diferentes mecanismos abolem a acção dos neurotransmissores: eles podem 1 ser devolvidos para os terminais nervosos pré-sinápticos por processos activos (recaptação), podem ser destruídos por enzimas ou simplesmente difundem-se para a área circundante.

De acordo com The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Section 14, Neurologic Disorders, alterações na síntese, no armazenamento, na libertação ou na degradação dos neurotransmissores ou alterações no número e na afinidade dos receptores podem afectar a neurotransmissão e causar perturbações clínicas.

Entre os neurotransmissores, é possível citar o glutamato e o aspartato, que são os principais neurotransmissores excitatórios, enquanto o ácido aminobutírico (GABA) é o principal neurotransmissor inibitório no cérebro. No entanto, a primeira teoria sobre a depressão dizia respeito ao sistema noradrenérgico (SN) (Shildkraut J. et al. 1965, Am J.

Psychiat. 122, 509-522). Nessa altura, observou-se que os compostos tricíclicos (ADT) e os inibidores da monoamina-oxidase modificavam o nível de noradrenalina. Mais tarde, em 1978, Sulser F. et al., Biochem Pharmacol. 27, 257-261, mostraram que estes antidepressivos conduzem a uma diminuição do número de receptores β-adrenérgicos pós-sinápticos. Assim, pensou-se que a depressão se devia à desregulação dos estímulos noradrenérgicos pré-sinápticos, bem como aos receptores pós-sinápticos (Siever LJ. et al. (1985), Am. J.

Psychiat. 142, 1017-1031). Em 1986, Rasmussen et al., Brain

Res. 385, 395-400 demonstraram a presença de receptores de serotonina (5-hidroxitriptamina, 5-HT) em neurónios NA. Em Sugrue M.F. et al, 1981, Pharmacol. Ther. 13, 219-247, demonstrou-se que os tratamentos com ADT provocavam também uma regulação negativa dos receptores 5-HT2. Como consequência, parece que os sistemas NA e 5-HT desempenham um 2 papel crucial na regulação da disposição e do comportamento. Nos anos noventa, a investigação centrou-se na descoberta de inibidores específicos da recaptação de serotonina (SSRI), como a fluoxetina, a paroxetina ou a sertralina (Pinder R.M. et al., 1993, Med. Res. Rev. 13, 259-325). Os níveis de serotonina (5-hidroxitriptamina ou 5-HT) são controlados pela captação de triptofano e pela actividade intraneuronal de monoamina-oxidase.

Entretanto, observou-se uma diminuição do nível de HVA, o principal catabolito da dopamina (DA), em doentes deprimidos (Kapur S. et al., 1992, Biol. Psychiat. 32, 1-17).

Demonstrou-se igualmente que o GABA estava envolvido na fisiopatologia da depressão uma vez que (i) os doentes unipolares apresentam um nível incrementado de GABA, (ii) alguns antidepressivos induzem a libertação de GABA in vivo e (iii) os agonistas dos receptores GABA têm efeitos antidepressivos (Lloyd K.G. et al., 1989, Prog. Neuro-Psychopharmacol. Biol. Psychiat. 13, 341-351).

Mais recentemente, foi referida a possibilidade de outros factores poderem estar envolvidos nas doenças do SNC. Por exemplo, observou-se que entre 30 a 70% dos doentes que sofrem de melancolia apresentam um nível elevado de cortisol plasmático e escapam ao teste com dexametasona descrito em Caroll B.J. et al. (1981), Arch. Gen. Psychiat. 38, 15.

Adicionalmente, os corticosteróides modificam (i) a expressão dos receptores serotoninérgicos e (ii) a actividade da triptofano-hidroxilase, que é a enzima-chave na síntese de 5-HT (Biegon A., 1990, Ann. NY Acad. Sei. 600, 427-431).

Relativamente à depressão pós-parto ou pós-menopausa, a 3 administração repetida de estrogénio induz uma regulação negativa dos receptores dopaminérgicos D2 (Munemura M. et al., 1989, Endocrinology 124, 346-355 e Roy E.J. et al., 1990, Brain. Res. Buli. 25, 221-227).

Outros neurotransmissores incluem a bem conhecida acetilcolina, a norepinefrina que interage com os receptores adrenérgicos e que é regulada pela tirosina-hidroxilase e pela monoamina-oxidase, as endorfinas que são polipéptidos que activam muitos neurónios centrais e interagem com receptores opióides, as encefalinas, as dinorfinas, a histamina, a vasopressina, o péptido intestinal vasoactivo, a carnosina, a bradiquinina, a colecistoquinina, a bombesina, a somatostatina, o factor libertador de corticotropina, a neurotensina e a adenosina.

Como referido acima, qualquer desequilíbrio nestes neurotransmissores ou qualquer desregulação dos receptores associados poderá conduzir ao desenvolvimento de perturbações do SNC que vão desde doenças psiquiátricas até enxaqueca, dor, perda de memória e degenerescência das células nervosas.

Actualmente, os tratamentos disponíveis incluem inibidores selectivos da recaptação de serotonina (SSRI) como a fluoxetina, a sertralina, a paroxetina e a fluvoxamina. Outros compostos incluem a nefazodona que bloqueia o receptor 5-HT2 e inibe a recaptação de 5-HT e de norepinef rina; a trazodona que é um bloqueador do receptor 5-HT2 e um bloqueador 1-noradrenérgico; a mirtazapina que bloqueia os auto-receptores 2-adrenérgicos, assim como os receptores 5-HT2, 5-HT3 e Hl; os compostos tricíclicos como a imipramina e a desipramina; os compostos tetracíclicos que aumentam o nível de norepinef rina livre e de 5-HT; e os inibidores da 4 monoamina-oxidase (MAOI) que inibem a desaminação oxidativa da norepinefrina, da dopamina e da 5-HT. Também podemos citar os antidepressivos à base de lítio para tratar a doença bipolar.

Contudo, estes compostos apenas são eficazes em cerca de 65% dos doentes deprimidos, o que implica uma grande população atingida pela denominada "depressão refractária". Em alguns casos, a vida dos doentes está em risco, na medida em que é necessária a hospitalização e uma terapia electroconvulsiva. Este facto mostra a gravidade destas doenças. Além disso, os compostos acima referidos apresentam numerosos efeitos secundários como taquicardia, sedação e ganho de peso. A esquizofrenia também é uma doença mental grave que afecta cerca de 1% da população dos países ocidentais. Os fármacos antipsicóticos (neurolépticos) disponíveis incluem a clorpromazina e o haloperidol, que mostram afinidade para o receptor 2 da dopamina. Contudo, normalmente observam-se efeitos secundários adversos como sedação, distonia, tremores e acatisia, e uma percentagem significativa de doentes não respondem aos tratamentos.

Assim, o problema consiste em encontrar soluções alternativas para proporcionar um alívio e uma cura para os numerosos doentes atingidos por estas doenças.

Relativamente à presente invenção, nós propomos que os mastócitos estão envolvidos ou contribuem para as doenças do SNC. Os mastócitos (MC) são elementos dos tecidos derivados de um subconjunto particular de células pluripotentes hematopoéticas, que expressam os antigénios CD34, c-kit e CD13 (Kirshenbaum et al., Blood 9 4:2333-23 42, 1999 e Ishizaka 5 et al., Curr Opin Immunol. 5:937-43, 1993). Os progenitores de MC imaturos circulam na corrente sanguínea e diferenciam-se nos tecidos. Estes processos de diferenciação e de proliferação estão sob a influência de citocinas, sendo uma das de maior importância o factor das células progenitoras (SCF), também designado por ligando Kit (KL), factor de Steel (SL) ou factor de crescimento dos mastócitos (MCGF). 0 receptor de SCF é codificado pelo protooncogene c-kit, que pertence à subfamília de receptores tirosina-cinase de tipo III (Boissan & Arock, J Leukoc Biol. 67:135-48, 2000). Este receptor também é expresso em outras células hematopoéticas ou não hematopoéticas. A ligação do receptor c-kit por SCF induz a sua dimerização, seguida da sua transfosforilação, conduzindo ao recrutamento e à activação de vários substratos intracitoplasmáticos. Estes substratos activados induzem múltiplas vias de sinalização intracelular responsáveis pela proliferação e pela activação celulares (Boissan & Arock, 2000). Os mastócitos são caracterizados pela sua heterogeneidade, não só em termos de estrutura e de localização nos tecidos, mas também ao nível funcional e histoquímico (Aldenborg & Enerback., Histochem. J. 26:587-96, 1994; Bradding et al. , J Immunol. 155:297-307, 1995; Irani et al., J Immunol. 147:247-53, 1991; Miller et al., Curr Opin Immunol. 1:637-42, 1989 e Welle et al., J Leukoc Biol. 61: 233-45, 1997).

Aqui, é postulado que a activação dos mastócitos por diferentes estímulos, como o stress, o trauma, a infecção e os neurotransmissores, participa na exacerbação do desequilíbrio químico, causando doenças do SNC.

Mais especificamente, a desgranulação dos mastócitos é estimulada por neurotransmissores comuns, como a 6 neurotensina, a somatostatina, a substância P e a acetilcolina, e por factores de crescimento ou de sobrevivência, especialmente NGF e TGFpi (consultar Figura 1). Os mastócitos envolvidos na resposta a este estimulo podem ser mastócitos cerebrais, mas também podem ser outros mastócitos que libertam o conteúdo dos seus grânulos na corrente sanguínea, o qual, em última análise, atinge os neurónios sensoriais, motores ou cerebrais. A coloração dos mastócitos cerebrais é semelhante à coloração dos mastócitos do tecido conectivo; contudo, eles apresentam o padrão secretor dos mastócitos das mucosas, implicando que constituem um subconjunto particular de mastócitos apresentando especificidades.

Após a activação dos mastócitos, os grânulos libertados liberam vários factores capazes de modular e de alterar a neurotransmissão e a sobrevivência dos neurónios. Entre estes factores, a serotonina é importante, uma vez que foi observado um aumento do nível de serotonina livre em doentes deprimidos. Em alternativa, o pico súbito de serotonina poderá ser seguido por um período de escassez de serotonina, conduzindo a dor e a enxaqueca. Como consequência, acreditamos que os mastócitos exacerbam, de forma autócrina ou parácrina, a desregulação da neurotransmissão. Por exemplo, a libertação de neurotransmissores, como a serotonina, induzida pela ansiedade ou pelo stress activa os mastócitos que, pelo seu lado, libertam o conteúdo dos seus grânulos, contribuindo subsequentemente para o desequilíbrio químico no cérebro conducente a perturbações do SNC. Outros mediadores libertados pelos mastócitos podem ser classificados em vasoactivos, nociceptivos, pró-inflamatórios e outros neurotransmissores. Em conjunto, estes factores são capazes de induzir uma grande perturbação da actividade dos 7 neurónios, independentemente de serem neurónios sensoriais, motores ou do SNC.

Também observámos que os doentes que sofrem de mastocitose são mais propensos a desenvolver doenças do SNC que a população normal. Este facto pode ser explicado pela presença de mutações activas no receptor c-kit, que induzem a desgranulação dos mastócitos e um surto de factores que contribuem para o desequilíbrio químico e para uma alteração da neurotransmissão.

Em alguns casos, os mastócitos activados também podem participar na destruição de tecidos neuronais, através da libertação de um cocktail de diferentes proteases e de mediadores classificados em três grupos: mediadores associados a grânulos pré-formados (histamina, proteoglicanos e proteases neutras), mediadores derivados de lípidos (prostaglandinas, tromboxanos e leucotrienos) e várias citocinas (IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-β, IL-8, TNF-a, GM-CSF, ΜΙΡ-la, ΜΙΡ-1β, MIP-2 e IFN-γ) . Por conseguinte, a libertação por parte de mastócitos activados de mediadores (TNF-α, histamina, leucotrienos, prostaglandinas, etc...), bem como de proteases é aqui proposta i) para induzir a inflamação e a vasodilatação e ii) para participar no processo de destruição do tecido neuronal.

Como consequência, a presente invenção propõe-se reduzir o número de mastócitos utilizando compostos que são essencialmente específicos para os mastócitos. Em relação a isto, são propostos inibidores de tirosina-cinases, mais particularmente, inibidores específicos de c-kit, para inibir a proliferação, a sobrevivência e a activação dos mastócitos. É disponibilizada uma nova via para tratar as doenças do SNC, que consiste em destruir os mastócitos que estão envolvidos e contribuem para a patogénese destas doenças. Constatou-se que os inibidores de tirosina-cinases, mais particularmente, os inibidores de c-kit são especialmente adequados para atingir este objectivo.

Descrição A presente invenção refere-se a um método de tratamento de doenças do SNC, que compreende administrar um composto capaz de reduzir o número de mastócitos a um ser humano necessitado desse tratamento. 0 referido método de tratamento de doenças do SNC pode compreender a administração de um inibidor de tirosina-cinases a um ser humano necessitado desse tratamento.

Os inibidores de tirosina-cinases são seleccionados, por exemplo, entre os compostos arilicos bis-monociclicos, biciclicos ou heterociclicos (WO 92/20642), os derivados de vinileno-azaindol (WO 94/14808) e l-ciclopropil-4-piridil-quinolonas (Patente US 5,330,992), os compostos de estirilo (Patente US 5,217,999), os compostos de piridilo substituídos com estirilo (Patente US 5,302,606), os selenoindóis e os selenietos (WO 94/03427), os compostos polihidroxílicos tricíclicos (WO 92/21660) e os compostos de ácido benzilfosfónico (WO 91/15495), os derivados de pirimidina (Patente US 5,521,184 e WO 99/03854), os derivados de indolinona e as indolinonas substituídas com pirrol (Patente US 5,792,783; EP 934 931; Patente US 5,834,504; Patente US 5,883,116; Patente US 5,883,113, Patente US 5,886,020; WO 96/40116 e WO 00/38519), assim como os compostos

heteroarílicos e arilicos bis-monociclicos ou biciclicos (EP 9 584 222; Patente US 5,656,643 e WO 92/20642), os derivados de quinazolina (EP 602 851; EP 520 722; Patente US 3, 772,295 e Patente US 4,343,940) e as quinazolinas arílicas e heteroarílicas (Patente US 5,721,237; Patente US 5,714,493; Patente US 5,710,158 e WO 95/15758).

De preferência, os referidos inibidores de tirosina-cinases são incapazes de promover a morte de células dependentes de IL-3 cultivadas na presença de IL-3.

Em outra forma de realização, a invenção refere-se a um método de tratamento de doenças do SNC, que compreende administrar um inibidor de c-kit a um ser humano necessitado desse tratamento.

Preferencialmente, o referido inibidor de c-kit é um inibidor não tóxico, selectivo e potente de c-kit. Estes inibidores podem ser seleccionados entre o grupo que consiste em indolinonas, derivados de pirimidina, derivados de pirrolopirimidina, derivados de quinazolina, derivados de quinoxalina, derivados de pirazóis, compostos arílicos bis-monociclicos, biciclicos ou heterocíclicos, derivados de vinileno-azaindol e derivados de piridilquinolonas, compostos de estirilo, compostos de piridilo substituídos com estirilo, selenoindóis, selenietos, compostos polihidroxílicos tricíclicos e compostos de ácido benzilfosfónico.

Entre os compostos preferidos, tem interesse centrar a atenção em derivados de pirimidina como sejam os derivados de N-fenil-2-pirimidino-amina (Patente US 5,521,184 e WO 99/03854), em derivados de indolinona e indolinonas substituídas com pirrol (Patente US 5,792,783; EP 934 931; Patente US 5,834,504; Patente US 5,883,116; Patente US 10 5,883,113; Patente US 5,886,020; WO 96/40116 e WO 00/38519), assim como em compostos heteroarílicos e arílicos bis-monocíclicos ou bicíclicos (EP 584 222; Patente US 5,656,643 e WO 92/20642), em derivados de quinazolinas (EP 602 851; EP 520 722; Patente US 3,772,295 e Patente US 4,343,940), em quinazolinas 4-amino-substituídas (Patente US 3,470,182), em 4-tienil-2-(1H)-quinazolonas e 6,7-dialcoxiquinazolinas (Patente US 3,800,039), em quinazolinas arilicas e heteroarílicas (Patente US 5,721,237; Patente US 5,714,493; Patente US 5,710,158 e WO 95/15758), em compostos de 4-anilinoquinazolina (Patente 4,464,375) e em 4-tienil-2-(1H)-quinazolonas (Patente US 3,551,427).

Assim, preferencialmente, a invenção refere-se a um método de tratamento de doenças do SNC, que compreende administrar um inibidor não tóxico, potente e selectivo de c-kit que é um derivado de pirimidina, mais particularmente um derivado de N-fenil-2-pirimidino—amina de fórmula I:

em que RI é pirazinilo, 1-metil-lH-pirrolilo, fenilo substituído com amino ou com alquilo inferior-amino, em que o qrupo amino, em cada caso, está livre ou encontra-se sob a forma de alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcanoilamino inferior ou benzoílamino; lH-indolilo ou lH-imidazolilo ligados a um átomo de carbono de um anel de cinco membros, ou 11 piridilo não substituído ou substituído com alquilo inferior, ligado a um átomo de carbono de um anel e não substituído ou substituído no átomo de azoto por oxigénio; R2 e R3 são, um independentemente do outro, hidrogénio ou alquilo inferior;

um ou dois dos radicais R4, R5, R6, R7 e R8 são nitro, alcoxi inferior substituído com flúor ou um radical de fórmula II -N (R9 ) -C (=X) - (Y) n-RlO (II) em que R9 é hidrogénio ou alquilo inferior; X é oxo, tio, imino, N-(alquilo inferior)imino, hidroximino ou 0-(alquilo inferior)hidroximino; Y é oxigénio ou o grupo NH; n é 0 ou 1 e RIO é um radical hidrocarboneto alifático possuindo 5-22 átomos de carbono; um radical fenilo ou naftilo, cada um deles sendo não substituído ou estando substituído com ciano, trifluorometilo, hidroxilo, alcoxi inferior, alcanoíloxi inferior, halogéneo, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcanoílamino inferior, benzoílamino, carboxi, alcoxicarbonilo inferior ou com alquilo inferior não substituído ou substituído; um radical fenilo-alquilo inferior em que o radical fenilo é não substituído ou está substituído da forma indicada acima; um radical cicloalquilo ou cicloalcenilo possuindo até 30 átomos de carbono; um 12 radical cicloalquilo-alquilo inferior ou cicloalcenilo-alquilo inferior possuindo até 30 átomos de carbono na porção cicloalquilo ou cicloalcenilo; um radical monocíclico possuindo 5 ou 6 membros no anel e 1-3 átomos do anel seleccionados entre azoto, oxigénio e enxofre, com cujo radical poderão ser fundidos um ou dois radicais benzénicos; ou alquilo inferior substituído por um radical monocíclico deste tipo; e os restantes radicais R4, R5, R6, R7 e R8 são, uns independentemente dos outros, hidrogénio, alquilo inferior não substituído ou substituído com amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo ou morfolinilo; alcanoílo inferior, trifluorometilo, hidroxilo, alcoxi inferior, alcanoíloxi inferior, halogéneo, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcanoílamino inferior, benzoílamino, carboxi ou alcoxicarbonilo inferior, o termo “inferior" designando, em cada caso, um radical que possui até, inclusive, 7 átomos de carbono, ou um sal de um composto deste tipo possuindo pelo menos um grupo que forma sais.

Preferencialmente, o derivado de N-fenil-2-pirimidino-amina é seleccionado entre os compostos correspondentes à fórmula II:

RS

R2 em que Rl, R2 e R3 são seleccionados, de forma independente, 13 entre H, F, Cl, Br, I, um grupo alquilo em C1-C5 ou um grupo cíclico ou heterocíclico, especialmente um grupo piridilo; R4, R5 e R6 são seleccionados, de forma independente, entre H, F, Cl, Br, I e um grupo alquilo em C1-C5, especialmente um grupo metilo; e R7 é um grupo fenilo transportando pelo menos um substituinte que, pelo seu lado, possui pelo menos um sítio básico, como seja uma função amino.

Preferencialmente, R7 é o seguinte grupo:

Entre estes compostos, os compostos preferidos são definidos da seguinte forma:

Rl é um grupo heterocíclico, especialmente um grupo piridilo; R2 e R3 são H; R4 é um grupo alquilo em C1-C3, especialmente um grupo metilo; R5 e R6 são H; e R7 é um grupo fenilo transportando pelo menos um substituinte que, pelo seu lado, possui pelo menos um sítio básico, como seja uma função amino; por exemplo, o grupo

Assim, numa forma de realizaçao preferida, a invenção refere- 14 se a um método de tratamento de doenças do SNC, que compreende administrar uma quantidade eficaz do composto conhecido na técnica como CGP57148B: 4-(4-metilpiperazin-l-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)-pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida, que corresponde à fórmula seguinte:

A preparaçao deste composto está descrita no Exemplo 21 de EP 564 409, e a forma β, que é particularmente útil, está descrita em WO 99/03854.

Em alternativa, o inibidor de c-kit pode ser seleccionado entre: os derivados de indolinona, mais particularmente as indolinonas substituídas com pirrol; os compostos arílicos e heteroarílicos monocíclicos e bicíclicos, derivados de quinazolina; e as quinaxolinas como os derivados de 2-fenilquinaxolina, por exemplo, 2-fenil-6,7-dimetoxiquinaxolina.

Em um aspecto preferido, a invenção contemplou o método acima referido, em que o referido inibidor de c-kit é incapaz de promover a morte de células dependentes de IL-3 cultivadas na presença de IL-3. 15

As doenças do SNC tal como aqui referidas incluem, embora não se encontrem limitadas a estas, as doenças psiquiátricas, a enxaqueca, a dor, a perda de memória e a degenerescência das células nervosas.

Mais particularmente, o método de acordo com a invenção é útil para o tratamento das seguintes perturbações: - Depressão, incluindo o transtorno distímico, o transtorno ciclotímico, a depressão bipolar, a depressão grave ou "melancólica", a depressão atípica, a depressão refractária, a depressão sazonal, a anorexia, a bulimia, a síndrome pré-menstrual e a síndrome pós-menopausa;

Outras síndromes como a lentidão mental e a perda de concentração, a preocupação pessimista, a agitação, a autodepreciação e a libido reduzida; - Dor, incluindo a dor aguda, a dor pós-operatória, a dor crónica, a dor nociceptiva, a dor provocada pelo cancro, a dor neuropática e as síndromes de dor psicogénica; - Distúrbios de ansiedade, incluindo a ansiedade associada a hiperventilação e a arritmias cardíacas, os distúrbios fóbicos, a perturbação obsessiva-compulsiva, a perturbação do stress pós-traumático, o transtorno de stress agudo e a perturbação de ansiedade generalizada;

Emergências psiquiátricas como os ataques de pânico, incluindo a psicose, as perturbações delirantes, as perturbações de conversão, as fobias, a mania, o delírio, os episódios dissociativos, incluindo a amnésia dissociativa, a fuga dissociativa e a perturbação de identidade dissociativa, a despersonalização, a catatonia e as apoplexias; 16 - Emergências psiquiátricas graves, incluindo o comportamento suicida, o autodesleixo, o comportamento violento ou agressivo, o trauma, a personalidade borderline e a psicose aguda;

Esquizofrenia, incluindo a esquizofrenia paranoica, a esquizofrenia desorganizada, a esquizofrenia catatónica e a esquizofrenia indiferenciada;

Doenças neurodegenerativas, incluindo a doença de Alzheimer, a doença de Parkinson, a doença de Huntington, as doenças priónicas, a doença dos neurónios motores (DNM) e a esclerose lateral amiotrófica (ELA).

Assim, em uma forma de realizaçao preferida, o método da invenção é aplicável ao tratamento da depressão.

Em outra forma de realizaçao preferida, o método da invenção é aplicável ao tratamento da dor.

Em outra forma de realizaçao preferida, o método da invenção é aplicável ao tratamento de perturbações da ansiedade.

Em outra forma de realização preferida, o método da invenção é aplicável ao tratamento de doenças psiquiátricas.

Em outra forma de realizaçao preferida, o método da invenção é aplicável ao tratamento da esquizofrenia.

Em outra forma de realizaçao preferida, o método da invenção é aplicável ao tratamento de doenças neurodegenerativas. 0 método, tal como descrito acima, também é útil para tratar 17 a perda de memória.

Ainda em outra forma de realização preferida, o método da invenção é aplicável ao tratamento da enxaqueca.

Em uma forma de realização adicional, os inibidores de c-kit, tal como mencionados acima, são inibidores de c-kit activado. No âmbito da invenção, a expressão "c-kit activado" designa um c-kit mutante activado constitutivamente, que inclui pelo menos uma mutação seleccionada entre mutações pontuais, deleções e inserções, mas também modificações e alterações da sequência de c-kit natural (SEQ ID N.° 1). Estas mutações, deleções, inserções, modificações e alterações podem ocorrer no domínio transfosforilase, no domínio justamembrana, bem como em qualquer domínio directa ou indirectamente responsável pela actividade de c-kit. A expressão "c-kit activado" também desiqna aqui c-kit activado por SCF. As concentrações preferidas e óptimas de SCF para activar c-kit estão compreendidas entre 5 x 1CT7 M e 5 x 1CT6 M, preferencialmente cerca de 2 x 1CT6 M. Em uma forma de realização preferida, o c-kit mutante activado, na etapa a) , possui pelo menos uma mutação proximal a Y823, mais particularmente entre os aminoácidos 800 a 850 da SEQ ID N.° 1, envolvida na autofosforilação de c-kit, particularmente os mutantes D816V, D816Y, D816F e D820G. Em outra forma de realização preferida, o c-kit mutante activado, na etapa a) , possui uma deleção no domínio justamembrana de c-kit. Esta deleção é, por exemplo, entre o codão 573 e 579 e é denominada c-kit d(573-579). A mutação pontual V559G proximal ao domínio justamembrana de c-kit também tem interesse. A este respeito, a invenção contempla um método de tratamento de doenças do SNC tal como definidas acima, que compreende 18 administrar, a um ser humano necessitado desse tratamento, um composto que é um inibidor selectivo, potente e não tóxico de c-kit activado e que é obtenível por um método de rastreio compreendendo: a) colocar em contacto (i) c-kit activado e (ii) pelo menos um composto a testar, em condições que permitam aos componentes (i) e (ii) formar um complexo; b) seleccionar os compostos que inibem c-kit activado; c) testar e seleccionar um subconjunto dos compostos identificados na etapa b) , que são incapazes de promover a morte de células dependentes de IL-3 cultivadas na presença de IL-3.

Este método de rastreio pode ainda compreender uma etapa consistindo em testar e seleccionar um subconjunto dos compostos identificados na etapa b), que são inibidores de c-kit mutante activado (por exemplo, no domínio transfosforilase) e que também são capazes de inibir c-kit selvagem activado por SCF. Em alternativa, na etapa a), c-kit activado é c-kit selvagem activado por SCF.

Uma forma melhor de realizar este método consiste em testar inibidores putativos a uma concentração superior a 10 μΜ, na etapa a) . As concentrações relevantes são, por exemplo, 10, 15, 20, 25, 30, 35 ou 40 μΜ.

Na etapa c) , IL-3 está preferencialmente presente nos meios de cultura das células dependentes de IL-3, numa concentração compreendida entre 0,5 e 10 ng/ml, preferencialmente entre 1 e 5 ng/ml. 19

Os exemplos de células dependentes de IL-3 incluem, embora não se encontrem limitados a estes: - linhas de células que expressam c-kit naturalmente e que dependem dele para o seu crescimento e sobrevivência. Entre estas células, as linhas de mastócitos humanos podem ser estabelecidas utilizando os seguintes procedimentos: os mastócitos humanos normais podem ser infectados por vectores retrovirais contendo sequências que codificam um c-kit mutante, as quais compreendem o péptido sinal de c-kit e uma sequência TAG que permite diferenciar os c-kit mutantes do c-kit selvagem expressos em células hematopoéticas, através de anticorpos.

Esta técnica é vantajosa, uma vez que não induz mortalidade celular e a transferência genética é estável e fornece rendimentos satisfatórios (cerca de 20%) . Os mastócitos humanos normais puros podem ser obtidos rotineiramente por meio de cultura das células precursoras originárias do sangue obtido da veia umbilical humana. Relativamente a isto, o sangue heparinizado proveniente da veia umbilical é centrifugado num gradiente de Ficoll, de forma a isolar as células mononucleadas de outros componentes do sangue. As células precursoras CD34+ são depois purificadas a partir das células isoladas mencionadas acima, utilizando o sistema de selecção imunomagnética MACS (Miltenyi Biotech). As células CD34+ são depois cultivadas a 37°C numa atmosfera de 5% CO2, numa concentração de 105 células por ml em meio MCCM (a-MEM suplementado com L-glutamina, penicilina, estreptomicina, β-mercaptoetanol 5 x 1CT5 M, soro fetal de vitela a 20%, albumina sérica de bovino a 1% e SCF humano recombinante 100 ng/ml) . O meio é mudado a cada 5 a 7 dias. A percentagem de 20 mastócitos presentes na cultura é avaliada semanalmente, utilizando a coloração de May-Grunwal-Giemsa ou de azul de toluidina. Os anticorpos antitriptase também podem ser utilizados para detectar mastócitos em cultura. Após 10 semanas de cultura, obtém-se uma população celular pura de mastócitos (>98%). É possível utilizar procedimentos Standard para preparar vectores expressando c-kit destinados a transfectar as linhas de células estabelecidas mencionadas acima. O ADNc de c-kit humano foi descrito em Yarden et al. (1987) EMBO J. 6(11), 3341-3351. A região codificante de c-kit (3000 pb) pode ser amplificada por PCR e clonada utilizando os seguintes oligonucleótidos: 5'-AAGAAGAGATGGTACCTCGAGGGGTGACCC-3' (SEQ ID N.° 2); senso; 5 '-CTGCTTCGCGGCCGCGTTAACTCTTCTCAACCA-3' (SEQ ID N.° 3); anti-senso.

Os produtos de PCR digeridos com Notl e Xhol foram inseridos, utilizando a ligase de T4, no vector pFlag-CMV (SIGMA), vector este que foi digerido com Notl e Xhol e desfosforilado utilizando CIP (Biolabs). A construção pFlag-CMV-c-kit é utilizada para transformar o clone bacteriano XLl-blue. A transformação dos clones é verificada utilizando os seguintes iniciadores: 5'-AGCTCGTTTAGTGAACCGTC-3' (SEQ ID N. 0 4) ; senso 5'-GT CAGACAAAAT GAT GCAAC-3' (SEQ ID N. 0 5) ; anti-senso. A mutagénese dirigida é realizada utilizando as cassetes relevantes e recorrendo a um procedimento rotineiro e comum 21 conhecido na técnica. 0 vector Migr-1 (ABC) pode ser utilizado como base para construir os vectores retrovirais utilizados para transfectar os mastócitos maduros. Este vector é vantajoso, pois contém a sequência codificante de GFP na extremidade 3' de um IRES. Estas características permitem seleccionar as células infectadas pelo retrovirus utilizando a análise directa com um fluorocitómetro. Como referido acima, a sequência N-terminal do ADNc de c-kit pode ser modificada, de forma a introduzir uma sequência Flag que será útil para distinguir o c-kit heterogéneo do c-kit endógeno.

Outras linhas de células dependentes de IL-3 que podem ser utilizadas incluem, embora não se encontrem limitadas a estas: - as células BaF3 de ratinho expressando a forma selvagem ou mutada de c-kit (nos sítios de justamembrana e catalítico), que estão descritas em Kitayama et al. (1996), Blood 88, 995-1004 e Tsujimura et al. (1999), Blood 93, 1319-1329; - as células IC-2 de ratinho expressando c-kitWT ou c-kitD814Y, que são apresentadas em Piao et al. (1996), Proc. Nat1. Acad. Sei. USA 93, 14665-14669.

As linhas de células independentes de IL-3 são: - HMC-1 - uma linha celular independente de factores derivada de um doente com leucemia de mastócitos - que expressa um polipéptido c-kit mutante ao nível da justamembrana, possuindo actividade de cinase constitutiva (Furitsu T et al., J Clin Invest. 1993, 92:1736-1744; Butterfield et al. , 22

Establishment of an immature mast cell line from a patient with mast cell leukemia. Leuk Res. 1988, 12:345-355 e Nagata et al., Proc Natl Acad Sei USA. 1995, 92:10560-10564). a linha de células P815 (mastocitoma que expressa naturalmente uma mutação de c-kit na posição 814), que foi descrita em Tsujimura et al., (1994), Blood 83, 2619-2626. A extensão em que o componente (ii) inibe o c-kit activado pode ser medida in vitro ou in vivo. No caso de ser medida in vivo, as linhas de células que expressam um c-kit mutante activado, o qual possui pelo menos uma mutação proximal a Y823, mais particularmente entre os aminoácidos 800 e 850 da SEQ ID N.° 1 envolvidos na autofosforilação de c-kit, especialmente os mutantes D816V, D816Y, D816F e D820G, são preferidas. Os exemplos de linhas de células que expressam um c-kit mutante activado são tal como referidas acima.

Em outra forma de realização preferida, o método compreende adicionalmente uma etapa que consiste em testar e seleccionar os compostos capazes de inibir c-kit selvagem, numa concentração inferior a 1 μΜ. Isto pode ser medido in vitro ou in vivo.

Assim, os compostos que são identificados e seleccionados de acordo com o método descrito acima são inibidores potentes, selectivos e não tóxicos de c-kit selvagem.

Em alternativa, o método de rastreio definido acima pode ser realizado in vitro. A este respeito, a inibição de c-kit mutante activado e/ou de c-kit selvagem pode ser medida utilizando técnicas bioquímicas Standard, como a imunoprecipitação e a transferência de Western. 23

Preferencialmente, é medida a quantidade de fosforilação de c-kit.

Ainda em outra forma de realização adicional, a invenção contempla um método para tratar doenças do SNC como descritas acima, em que o rastreio compreende: a) efectuar um ensaio de proliferação com células expressando um c-kit mutante (por exemplo, no domínio transfosforilase), mutante este que é um c-kit activado permanente, com uma pluralidade de compostos de teste, para identificar um subconjunto de compostos-candidatos que visam c-kit activado, cada um deles possuindo um IC50 < 10 μΜ, através de medição da extensão de morte celular; b) efectuar um ensaio de proliferação com células expressando c-kit selvagem e com o referido subconjunto de compostos-candidatos identificados na etapa (a) , as referidas células sendo células dependentes de IL-3 cultivadas na presença de IL-3, para identificar um subconjunto de compostos-candidatos que visam especificamente c-kit; c) efectuar um ensaio de proliferação com células expressando c-kit e com o subconjunto de compostos identificados na etapa b) , e seleccionar um subconjunto de compostos-candidatos que visam c-kit selvagem, cada um deles possuindo um IC50 < 10 μΜ, preferencialmente um IC50 < 1 μΜ, através de medição da extensão de morte celular.

Aqui, a extensão de morte celular pode ser medida por meio da incorporação de 3H-timidina, do método de exclusão do azul de tripano ou por citometria de fluxo com iodeto de propídio.

Estas são técnicas comuns praticadas rotineiramente na 24 técnica . 0 método de acordo com a invenção inclui prevenir, atrasar o começo e/ou tratar as doenças do SNC em seres humanos. Relativamente às doenças priónicas, a invenção compreende o tratamento de mamíferos como as espécies bovinas e ovinas

No método acima definido, é possível utilizar qualquer composto capaz de reduzir o número de mastócitos. Estes compostos podem pertencer, como explicado acima, aos inibidores de tirosina-cinases, por exemplo, aos inibidores de c-kit, embora não estejam limitados a qualquer família particular, desde que o referido composto mostre capacidade para reduzir o número de mastócitos. A depleção dos mastócitos pode ser avaliada utilizando, por exemplo, uma das linhas de mastócitos descritas acima e recorrendo a um procedimento de rotina.

Os melhores compostos são os compostos que apresentam a maior selectividade.

As linhas de células de controlo incluem outras células hematopoéticas que não são mastócitos nem células ou linhas de células relacionadas. Estas linhas de células de controlo incluem células normais CD34+ humanas, expandidas e independentes de SCF. Estas células de controlo também incluem, embora não se encontrem limitadas a estas, a linha de células Jurkat de linfócitos T humanos (ATCC N.° TIB-I52 e linhas de células mutantes suas derivadas), a linha de células Daudi ou Raji de linfócitos B humanos (ATCC N.° CCL-213 e CCL-86, respectivamente), a linha de células monocíticas humanas U937 (ATCC N.° CRL-1593.2), a linha de CCL-240) e as linhas de células HL-60 humanas (ATCC N. 25 células mutantes suas derivadas (CRL-2258 e CRL-2392).

Estes compostos podem ser seleccionados através de um método para identificar compostos capazes de reduzir o número de mastócitos, o referido composto sendo não tóxico para todos os tipos de células excepto os mastócitos, que compreende as etapas de: a) cultivar os mastócitos in vitro num meio de cultura adequado para mastócitos; b) adicionar ao referido meio de cultura pelo menos um composto a testar e incubar as referidas células durante um período de tempo prolongado; c) seleccionar os compostos que promovem a morte dos mastócitos; d) identificar um subconjunto dos compostos seleccionados na etapa c) que são incapazes de promover a morte de células seleccionadas entre as linhas de células de controlo acima referidas.

Desta forma, a invenção compreende a utilização dos compostos definidos acima para produzir um medicamento destinado ao tratamento de doenças do SNC, como sejam as doenças psiquiátricas, a enxaqueca, a dor, a perda de memória e a degenerescência das células nervosas. A invenção refere-se igualmente à utilização dos compostos definidos acima, para produzir um medicamento destinado ao tratamento de perturbações seleccionadas entre os subgrupos que consistem em: - Depressão, incluindo o transtorno distímico, o transtorno ciclotímico, a depressão bipolar, a depressão grave ou "melancólica", a depressão atípica, a depressão sazonal, a anorexia, a bulimia, a síndrome pré-menstrual e a síndrome 26 pós-menopausa;

Outras síndromes como a lentidão mental e a perda de concentração, a preocupação pessimista, a agitação, a autodepreciação e a libido reduzida; - Dor, incluindo a dor aguda, a dor pós-operatória, a dor crónica, a dor nociceptiva, a dor provocada pelo cancro, a dor neuropática e as síndromes de dor psicogénica; - Distúrbios de ansiedade, incluindo a ansiedade associada a hiperventilação e a arritmias cardíacas, os distúrbios fóbicos, a perturbação obsessiva-compulsiva, a perturbação do stress pós-traumático, o transtorno de stress agudo e a perturbação de ansiedade generalizada;

Emergências psiquiátricas como os ataques de pânico, incluindo a psicose, as perturbações delirantes, as perturbações de conversão, as fobias, a mania, o delírio, os episódios dissociativos, incluindo a amnésia dissociativa, a fuga dissociativa e a perturbação de identidade dissociativa, a despersonalização, a catatonia e as apoplexias; - Emergências psiquiátricas graves, incluindo o comportamento suicida, o autodesleixo, o comportamento violento ou agressivo, o trauma, a personalidade borderline e a psicose aguda;

Esquizofrenia, incluindo a esquizofrenia paranoica, a esquizofrenia desorganizada, a esquizofrenia catatónica e a esquizofrenia indiferenciada;

Doenças neurodegenerativas, incluindo a doença de 27

Alzheimer, a doença de Parkinson, a doença de Huntington, as doenças priónicas, a doença dos neurónios motores (DNM) e a esclerose lateral amiotrófica (ELA).

As composições farmacêuticas utilizadas nesta invenção poderão ser administradas por meio de diferentes vias incluindo, entre outras, as vias oral, intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intramedular, intratecal, intraventricular, transdérmica, subcutânea, intraperitoneal, intranasal, entérica, tópica, sublingual ou rectal.

Além dos ingredientes activos, estas composições farmacêuticas poderão conter veículos adequados e farmaceuticamente aceitáveis, os quais compreendem excipientes e auxiliares que facilitam o processamento dos compostos activos em preparações que podem ser utilizadas farmaceuticamente. Pormenores adicionais sobre as técnicas para formulação e administração poderão ser encontrados na última edição de Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co., Easton, Pa.)·

As composições farmacêuticas para administração oral podem ser formuladas utilizando veículos farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos na técnica, em dosagens apropriadas para administração oral. Estes veículos permitem que as composições farmacêuticas sejam formuladas como comprimidos, pílulas, drageias, cápsulas, líquidos, géis, xaropes, pastas, suspensões e formas similares, para ingestão pelo doente.

Mais particularmente, a invenção refere-se a uma composição farmacêutica destinada a administração oral.

Relativamente ao tratamento da dor, a administração tópica 28 poderá ser a mais apropriada em algumas situações. Neste caso, as composições de acordo com a invenção poderão apresentar-se sob a forma de um gel, uma pasta, um unguento, um creme, uma loção, uma suspensão líquida, soluções aquosas, hidroalcoólicas ou oleosas, dispersões do tipo loção ou soro, géis anidros ou lipofílicos, emulsões de consistência líquida ou semi-sólida do tipo leite, obtidas por dispersão de uma fase gorda numa fase aquosa ou vice-versa, suspensões ou emulsões de consistência semi-sólida e macia do tipo creme ou gel ou, em alternativa, microemulsões, microcápsulas, micropartículas ou dispersões vesiculares do tipo iónico e/ou não iónico. Estas composições são preparadas de acordo com métodos Standard. A composição de acordo com a invenção compreende qualquer ingrediente habitualmente utilizado em dermatologia e em cosmética. Ela poderá compreender pelo menos um ingrediente seleccionado entre os agentes de gelificação hidrofílicos ou lipofílicos, os agentes activos hidrofílicos ou lipofílicos, os conservantes, os emolientes, os polímeros de aumento da viscosidade, os humectantes, os tensioactivos, os conservantes, os antioxidantes, os solventes, as cargas, os antioxidantes, os solventes, os perfumes, as cargas, os agentes de protecção solar, os bactericidas, os agentes de absorção do odor e os agentes de coloração.

Na qualidade de óleos que podem ser utilizados na invenção, é possível referir os óleos minerais (parafina líquida), os óleos vegetais (fracção líquida de manteiga de karité, óleo de girassol), os óleos animais, os óleos sintéticos, os óleos de silicone (ciclometicona) e os óleos fluorados. Os álcoois gordos, os ácidos gordos (ácido esteárico) e as ceras (parafina, carnaúba, cera de abelha) também poderão ser 29 utilizados como substâncias gordas.

Na qualidade de emulsionantes que podem ser utilizados na invenção, o estearato de glicerol, o polisorbato 60 e a mistura de PEG-6/PEG-32/estearato de glicol estão contemplados.

Como agentes de gelificação hidrofilicos, é possível referir os polímeros carboxivinílicos (carbómeros) , os copolímeros acrílicos como sejam os copolímeros de acrilato/acrilato de alquilo, as poliacrilamidas, os polissacáridos como a hidroxipropilcelulose, as argilas e as gomas naturais; como agentes de gelificação lipofílicos, é possível mencionar as argilas modificadas como as bentonas, os sais metálicos de ácidos gordos como os estearatos de alumínio, e a sílica hidrofóbica ou, em alternativa, a etilcelulose e o polietileno.

Como agentes activos hidrofilicos, é possível utilizar proteínas ou hidrolisados de proteínas, aminoácidos, polióis, ureia, alantoína, açúcares e derivados de açúcares, vitaminas, amido e extractos de plantas, em particular aqueles de aloé vera.

Na qualidade de agentes activos lipofílicos, é possível utilizar o retinol (vitamina A) e seus derivados, o tocoferol (vitamina E) e seus derivados, ácidos gordos essenciais, ceramidas e óleos essenciais. Estes agentes proporcionam características adicionais de hidratação ou de suavização da pele quando são utilizados.

Adicionalmente, é possível incluir um tensioactivo na composição, de forma a proporcionar uma penetração mais 30 profunda do composto capaz de reduzir o número de mastócitos, como seja um inibidor de tirosina-cinases, preferencialmente um inibidor de c-kit.

Entre os ingredientes contemplados, a invenção compreende os agentes amplificadores da penetração seleccionados, por exemplo, entre o grupo que consiste em óleo mineral, água, etanol, triacetina, glicerina e propilenoglicol; os agentes de coesão seleccionados, por exemplo, entre o grupo que consiste em poliisobutileno, poliacetato de vinilo e álcool polivinílico; e os agentes espessantes.

Os métodos químicos para aumentar a absorção tópica de fármacos são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, os compostos com propriedades de amplificação da penetração incluem o laurilsulfato de sódio (Dugard, P.H. & Sheuplein, R.J., "Effects of Ionic Surfactants on the Permeability of Human Epidermis: An Electrometric Study", J. Ivest. Dermatol., V.60, pp. 263-69, 1973), o óxido de laurilamina (Johnson et al., Patente US 4,411,893), as azonas (Rajadhyaksha, Patentes US 4,405,616 e 3,989,816) e o sulfóxido de decilmetilo (Sekura, D.L. & Scala, J., "The Percutaneous Absorption of Alkylmethyl Sulfides", Pharmacology of the Skin, Advances In Biology of Skin, (Appleton-Century Craft) V. 12, pp. 257-69, 1972). Observou-se que o aumento da polaridade do grupo da cabeça nas moléculas anfotéricas aumenta as suas propriedades de amplificação da penetração, mas à custa de um aumento das propriedades de irritação da pele (Cooper, E.R. & Berner, B., "Interaction of Surfactants with Epidermal Tissues: Physiochemical Aspects", Surfactant Science Series, V.16, Reiger, M.M. ed. (Mareei Dekker, Inc.) pp. 195-210, 1987). 31

Uma segunda classe de amplificadores químicos são geralmente designados por co-solventes. Estes materiais são absorvidos topicamente de uma forma relativamente fácil e, através de uma variedade de mecanismos, obtêm um aumento da permeação para alguns fármacos. 0 etanol (Gale et al., Patente US N.° 4, 615, 699 e Campbell et al., Patentes US N.os 4, 460,372 e 4,379,454), o sulfóxido de dimetilo (Patentes US 3,740,420; 3,743,727 e 4,575,515) e os derivados de glicerina (Patente US 4,322,433) são alguns exemplos de compostos que mostraram capacidade para aumentar a absorção de vários compostos.

As composições farmacêuticas apropriadas para utilizar na invenção incluem composições em que os compostos para reduzir o número de mastócitos, como sejam os inibidores de tirosina-cinases e os inibidores de c-kit, estão presentes numa quantidade eficaz para alcançar o fim pretendido. A determinação de uma dose eficaz encontra-se perfeitamente dentro da perícia dos peritos. Uma dose terapeuticamente eficaz refere-se a essa quantidade de ingrediente activo que melhora os sintomas ou a condição. A eficácia terapêutica e a toxicidade poderão ser determinadas por meio de procedimentos farmacêuticos Standard, em culturas de células ou em animais experimentais; por exemplo, ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50% da população) e LD50 (a dose letal para 50% da população) . A razão dos efeitos tóxicos para os efeitos terapêuticos, em termos de dose, é o índice terapêutico, e ele pode ser expresso pela razão LD50/ED50. As composições farmacêuticas que apresentam índices terapêuticos elevados são preferidas. Como referido acima, um inibidor de tirosina-cinases e, mais particularmente, um inibidor de c-kit de acordo com a invenção é incapaz de promover a morte de células dependentes de IL-3 cultivadas na presença de IL-3. 32 A invenção também contempla um produto compreendendo pelo menos um composto capaz de reduzir o número de mastócitos, como seja um inibidor de t irosina-cinases, mais particularmente, um inibidor não tóxico, selectivo e potente de c-kit, e pelo menos um antidepressivo, um antipsicótico ou um ansiolitico, para uso simultâneo, separado ou sequencial, destinado ao tratamento de doenças do SNC tal como definidas acima. 13-10-2006 33

Claims (20)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um inibidor de c-kit para preparar um medicamento destinado ao tratamento de doenças do SNC.
2. 2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o referido inibidor é seleccionado entre o grupo que consiste em derivados de N-fenil-2-pirimidino-amina de fórmula I:

   s em que RI é pirazinilo, 1-metil-lH-pirrolilo, fenilo substituído com amino ou com alquilo inferior-amino, em que o grupo amino, em cada caso, está livre ou encontra-se sob a forma de alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcanoílamino inferior ou benzoílamino; ΙΗ-indolilo ou lH-imidazolilo ligados a um átomo de carbono de um anel de cinco membros, ou piridilo não substituído ou substituído com alquilo inferior, ligado a um átomo de carbono de um anel e não substituído ou substituído no átomo de azoto por oxigénio; R2 e R3 são, um independentemente do outro, hidrogénio ou alquilo inferior; um ou dois dos radicais R4, R5, R6, R7 e R8 são nitro, alcoxi inferior substituído com flúor ou um radical de fórmula II N(R9)-C(=X)-(Y)n-RlO (II) 1 em que R9 é hidrogénio ou alquilo inferior; X é oxo, tio, imino, N-(alquilo inferior)imino, hidroximino ou 0-(alquilo inferior)hidroximino; Y é oxigénio ou o grupo NH; n é 0 ou 1 e RIO é um radical hidrocarboneto alifático possuindo 5-22 átomos de carbono; um radical fenilo ou naftilo, cada um deles sendo não substituído ou estando substituído com ciano, trifluorometilo, hidroxilo, alcoxi inferior, alcanoíloxi inferior, halogéneo, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcanoílamino inferior, benzoílamino, carboxi, alcoxicarbonilo inferior ou com alquilo inferior não substituído ou substituído; um radical fenilo-alquilo inferior em que o radical fenilo é não substituído ou está substituído da forma indicada acima; um radical cicloalquilo ou cicloalcenilo possuindo até 30 átomos de carbono; um radical cicloalquilo-alquilo inferior ou cicloalcenilo- alquilo inferior possuindo até 30 átomos de carbono na porção cicloalquilo ou cicloalcenilo; um radical monocíclico possuindo 5 ou 6 membros no anel e 1-3 átomos do anel seleccionados entre azoto, oxigénio e enxofre, com cujo radical poderão ser fundidos um ou dois radicais benzénicos; ou alquilo inferior substituído por um radical monocíclico deste tipo; e os restantes radicais R4, R5, R6, R7 e R8 são, uns independentemente dos outros, hidrogénio, alquilo inferior não substituído ou substituído com amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, piperazinilo, piperidinilo, 2 morfolinilo; pirrolidinilo ou morfolinilo; alcanoílo inferior, trifluorometilo, hidroxilo, alcoxi inferior, alcanoiloxi inferior, halogéneo, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcanoilamino inferior, benzoilamino, carboxi ou alcoxicarbonilo inferior, o termo "inferior" designando, em cada caso, um radical que possui até, inclusive, 7 átomos de carbono, ou um sal de um composto deste tipo possuindo pelo menos um grupo que forma sais.
3. 3. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o referido inibidor é seleccionado entre o grupo que consiste em derivados de N-fenil-2-pirimidino-amina de fórmula II:

   em que Rl, R2 e R3 são seleccionados, de forma independente, entre H, F, Cl, Br, I, um grupo alquilo em C1-C5 ou um grupo ciclico ou heterocíclico, especialmente um grupo piridilo; R4, R5 e R6 são seleccionados, de forma independente, entre H, F, Cl, Br, I e um grupo alquilo em C1-C5, especialmente um grupo metilo; e R7 é um grupo fenilo transportando pelo menos um substituinte que, pelo seu lado, possui pelo menos um sitio básico, como seja uma função amino.
4. 4. Utilização de acordo com a reivindicação 3, em que R7 é 3
5. 5. Utilização de acordo com a reivindicação 3, em que o referido inibidor é a 4-(4-metilpiperazin-l-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida.
6. 6. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o inibidor de c-kit pode ser obtido por meio de um método de rastreio que compreende: a) efectuar um ensaio de proliferação com células expressando um c-kit mutante (por exemplo, no domínio transfosforilase) , mutante este que é um c-kit activado permanente, com uma pluralidade de compostos de teste, para identificar um subconjunto de compostos-candidatos que visam c-kit activado, cada um deles possuindo um IC50 < 10 μΜ, através de medição da extensão de morte celular; b) efectuar um ensaio de proliferação com células expressando c-kit selvagem e com o referido subconjunto de compostos-candidatos identificados na etapa (a) , as referidas células sendo células dependentes de IL-3 cultivadas na presença de IL-3, para identificar um subconjunto de compostos-candidatos que visam especificamente c-kit; c) efectuar um ensaio de proliferação com células expressando c-kit e com o subconjunto de compostos identificados na etapa b) , e seleccionar um subconjunto de compostos-candidatos que visam c-kit selvagem, cada um deles possuindo um IC50 < 10 μΜ, preferencialmente um IC50 < 1 μΜ, através de medição da extensão de morte celular.
7. 7. Utilização de acordo com uma das reivindicações 1 a 6 para prevenir, atrasar o começo e/ou tratar as doenças do SNC no ser humano. 4
8. 8. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para tratar as doenças psiquiátricas, a enxaqueca, a dor, a perda de memória e a degenerescência das células nervosas.
9. 9. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para tratar a depressão, incluindo o transtorno distimico, o transtorno ciclotimico, a depressão bipolar, a depressão grave ou "melancólica", a depressão atípica, a depressão refractária, a depressão sazonal, a anorexia, a bulimia, a síndrome pré-menstrual e a síndrome pós-menopausa.
10. 10. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para tratar a lentidão mental e a perda de concentração, a preocupação pessimista, a agitação, a autodepreciação e a libido reduzida.
11. 11. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para tratar a dor, incluindo a dor aguda, a dor pós-operatória, a dor crónica, a dor nociceptiva, a dor provocada pelo cancro, a dor neuropática e as síndromes de dor psicogénica.
12. 12. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para tratar os distúrbios de ansiedade, incluindo a ansiedade associada a hiperventilação e a arritmias cardíacas, os distúrbios fóbicos, a perturbação obsessiva-compulsiva, a perturbação do stress pós-traumático, o transtorno de stress agudo e a perturbação de ansiedade generalizada.
13. 13. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para tratar as perturbações psiquiátricas como os ataques de pânico, incluindo a psicose, as perturbações delirantes, as perturbações de conversão, as fobias, a mania, o delírio, os episódios dissociativos, incluindo a amnésia dissociativa, a 5 fuga dissociativa e a perturbação de identidade dissociativa, a despersonalização, a catatonia e as apoplexias.
14. 14. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para tratar as doenças psiquiátricas graves, incluindo o comportamento suicida, o autodesleixo, o comportamento violento ou agressivo, o trauma, a personalidade borderline e a psicose aguda.
15. 15. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para tratar a esquizofrenia, incluindo a esquizofrenia paranoica, a esquizofrenia desorganizada, a esquizofrenia catatónica e a esquizofrenia indiferenciada.
16. 16. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para tratar as doenças neurodegenerativas, incluindo a doença de Alzheimer, a doença de Parkinson, a doença de Huntington, as doenças priónicas, a doença dos neurónios motores (DNM) e a esclerose lateral amiotrófica (ELA).
17. 17. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para tratar a perda de memória.
18. 18. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para tratar a enxaqueca.
19. 19. Utilização de acordo com a reivindicação 7 para o tratamento da dor.
20. 20. Utilização de acordo com a reivindicação 19, em que o medicamento é apropriado para uma administração tópica. 13-10-2006 6