DE3319992A1 - Amidinverbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und pharmazeutische mittel - Google Patents

Description

PROF. DR. DR. J. REITOtOTYER ** DR* WERNER KINZEBACH DR. ING. WOLFRAM BUNTE

/IZ

REITSTÖTTER. KlNZEBACH & PARTNER POSTFACH 7βΟ. OBOOO MÜNCHEN A3

PATENTANWÄLTE ZUGELASSENE VERTRETER BEIM EUROPÄISCHEN PATENTAMT EUROPEAN PATENT ATTORNEYS

TELEFON: (OBB) 2 71 QS 83 TELEX: 0B21B2O8 ISAR D BAUERSTRASSE 22. D-βΟΟΟ MÜNCHEN AO

München, 3. Juni 1983

UNSERE AKTE: OURREF:

102

BETREFF: RE

BRISTOL-MYERS COMPANY 345 Park Avenue, New York 10154 U.S.A.

Amxdinverbindungen. Verfahren zu ihrer Herstellung und

pharmazeutische Mittel

POSTANSCHRIFT: D-BOOO MÜNCHEN 43. POSTFACH 78Ο

33Η"ι992

Μ/24 102

Die Erfindung betrifft Mitomycinanaloga, die eine oder mehrere Amidinogruppen enthalten, Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen und pharmazeutische Mittel, welche diese Verbindungen enthalten. Bei den erfindungsgemäßen Mitomycin C-Derivaten ist die 7-Aminogruppe und/ oder das Carbamido-Stickstoffatom Teil eines Amidinosubstituenten. Die erfindungsgemäßen verbindungen haben sich in Tierversuchen als wirksame Antitumormittel erwiesen.

Der systematische Chemical Abstract-Name für Mitomycin C ist:

[lalR-(laa, 8ß, 8aa, 8ba) ]-6-Amino-8-[ ((aminocarbonyl) oxy)methyl]-l,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methyl-azirino [2',3·,3,4]-pyrrolo[l,2-a] indol-4,7-dion,

<3as Azirinopyrroloindol-Ringsystem ist in folgender Weise durchnumeriert:

Eine in der Mitomycinliteratur häufig verwendete Trivialnomenclatur bezeichnet dieses Ringsystem unter Miteinbeziehung einiger charakteristischer Sübstituenten des Mitomycins als Mitosan.

Μ/?Ί

CH₂

10 J ~~ ,OCNH₂

(D

Dieses System ist zwar praktisch und für die Bezeichnung

einer Reihe einfacher Derivate, beispielsweise derjenigen, welche N-Substituenten am Azirino-Ringstickstoffatom oder in 7- oder 9a-Stellung aufweisen, geeignet, für den allgemeinen Gebrauch birgt es jedoch Unklarheiten und Nachteile in sich. Für die erfindungsgemäßen Verbindungen, von denen einige Substituenten sowohl am Azirino-Ringstickstof fato'm, als auch an dem Seitenketten-CarbamoylstLckstoffatom aufweisen, gibt es keine konventionelle Numerierung zur Unterscheidung dieser Positionen. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung werden deshalb unter Verwendung des Mitosan-Nomenklatursystems das Azirino-

Ia
Stickstoffatom als N und das Carbamoyl-Stickstoffatom als N bezeichnet. Werden die erfindungsgemäßen Verbindungen durch den Stammnamen "Mitosan" oder durch eine Strukturformel gekennzeichnet, so entspricht die stereochemische Konfiguration der so bezeichneten Verbindungen derjenigen des Mitomycin C.

Mitomycin ist ein durch Fermentation hergestelltes Antibioticum. Es ist in der Therapie disseminierter Adenocar-

zinonu des Magens oder der Bauchspeicheldrüse in Kombination mit anderen chemotherapeutischen Mitteln und bei Versagen anderer Behandlungsweisen - zur palliativen

(R*) Behandlung brauchbar (Mutamycin ^vsy Bristol Laboratories, Syracuse, New York 13201, Physicians¹ Desk Reference

35. Ausgabe, 1981, S. 717 und 718). Mitomycin C und dessen Herstellung durch Fermentierung ist in der

Jt ΐ>

<t ■· ♦ C

:' :. - 3315)992

M/24 102 _v_^5>

US-PS 3 660 578 beschrieben.

g Die Strukturen der Mitomycine A, B und C und von Porfiromycin wurden zuerst von J.S. Webb et al., Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, in J. Amer. Chem. Soc. 8_4_, 3185-3187 (1962) publiziert. Dabei war eine der chemischen Umwandlungen zur Untersuchung

,λ der strukturellen Verwandtschaft von Mitomycin A und C die Überführung von Mitomycin A, 7,9a-Dimethoxymitosan, in Mitomycin C, 7-Amino-9a-methoxymitosan, durch Umsetzung mit Ammoniak. Der Austausch der 7-Methoxygruppe des Mitomycins A hat sich als besonders Interessante Reaktion

, p- für die Herstellung von Antitumorderivaten des Mitomycins C erwiesen. Die nachfolgenden Artikel und Patente befassen sich mit der Umwandlung von Mitomycin A in ein 7-substituiertes Amino-Mitomycin C-Derivat, das Antitumoraktivität besitzt. Das Ziel dieser Arbeit war es, wirksamere und insbesondere weniger toxische Derivate als Mitomycin C herzustellen:

Matsui et al., The Journal of Antibiotics, XXI, 189-198 (1968).

₂^ Kinoshita et al. J. Med. Chem. JL4, 103-109 (1971). Iyengar et al., J. Med. Chem. 24, 975-981 (1981). Iyengar, Sami, Remers, and Bradner, Abstracts of Papers, Annual Meeting of the American Chemical Society, Las Vegas, Nevada, March 1982, Abstract No. MF]DI 72.

Die nachfolgenden Patente befassen sich mit der Herstellung von 7-substituierten Aminomitosanderivaten durch Umsetzung von Mitomycin A, Mitomycin B oder einem N - .

substituierten Derivat davon mit einem primären oder sekundären Amin:

M/24 102

Cosulich et al. US-PS 3 332 944
Matsui et al. US-PS 3 4 20 84 6
Matsui et al. US-PS 3 450 705
Matsui et al. US-PS 3 514 452
Nakano et al. US-PS 4 231 936
Renters, US-PS 4 268 676

τ Q Mitomycin C-Derivate mit einem substituierten Aminorest in 7-Stellung wurden auch durch direkte Biosynthese hergestellt, indem man die Fermentationsbrühen mit einer Reihe primärer Amine versetzte und eine übliche Mitomycinfermentation durchführte (CA. Claridge et al., Abst.

2g of the Annual Meeting of Amer» Soc. for Microbiology 1982. Abs. 028).

Mitomycin C ist das wichtigste durch Fermentation hergestellte Mitomycin und die im Handel erhältliche Form.

2Q Die gegenwärtige Methode zur überführung von Mitomycin C in Mitomycin A, das zur Herstellung der in obigen Publikationen erwähnten semisynthetischen, substituierten Aminoanaloga des Mitomycins C Verwendung findet, beinhaltet die Hydrolyse von Mitomycin C in das entsprechend

«ρ, 7-Hydroxymitosan, einer äußerst instabilen Verbindung, und die anschließende Methylierung dieser Verbindung mit dem gefährlichen Diazomethan. Es wurde versucht, die Verwendung von Diazomethan zur Methylierung des 7-O-Demethylmitomycins A, das durch Hydrolyse von Mitomycin C hergestellt wird, durch die Verwendung von 7-Acyloxymitosanen zu umgehen (Kyowa Hakko Kogyo KK JA-PS J5 6073-085, Farmdoc No. 56227 D/31).

Die Erfindung betrifft Monoguanidino oder Mono- und Bisamidinoanaloga des Mitomycins C, in denen das 7-Amino-

10
stickstoffatom und/oder das N -Carbamoyl-Stickstoffatom des Mitomycin C Teil eines Amidinosubstituenten

33 1Γ-Ι9

M/24 102

sind oder in denen das 7-Aminostjckstoffatom Teil einer Guanidinogruppe ist. Die Erfindung umfaßt auch die entsprechenden Analoga des Mitomycins A mit der Methoxygruppe in 7-Stellung und der Amidinogruppe an der N -Ste1-lung. Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen oie folgende Strukturformel I:

(D

worin

A für Amino, Methoxy, Hydroxy, (l-Niedrigalkyl-2(IH) pyridinyliden)amino oder einen Rest der Formel

3 4 I R R N-C=N-,

H₂N-C=N-,

(CH ) ²

H R ,3 ' '

R²R⁵ I I HN=C-N-,

R²R⁵

o I I
R"-N-C=N-, R-N=C-N-,

oder

steht,

R'

M/24 10 2 -f{~48

B für Amino oder die Amidinogruppe der Formel

R²
R³R⁴N-C=N-,

steht, wobei wenigstens einer der Reste A und B nicht für Amino, Methoxy oder Hydroxy steht,

η für 0, 1, 2 oder 3 steht,

R für Wasserstoff, Niedrigalkyl, Niedrigalkanoyl, Benzoyl oder substituiertes Benzoyl steht, wobei der Substituent Niedrigalkyl, Niedrigalkoxy,

Halogen, Amino oder Nitro ist,

2
R für Wasserstoff, Niedrigalkyl, Phenyl, Niedrigalkylphenyl, Niedrigalkoxyphenyl, Halophenyl, Aminophenyl, Nitrophenyl, Thienyl, Furyl, Cyano, Di-

niedrigalkylamino, Niedrigalkoxy oder Niedrigalkylthio steht,

R für Niedrigalkyl oder Niedrigalkoxy steht, oder zusammen mit R und dem Stickstoffatom an das sie

gebunden sind für Pyrrolidin, 2-, oder 3-Niedrigalkylpyrrolidin. Piperidin,. 2-,3-_r oder 4-Niedrigalkylpiperidin, 2,6-Diniedrigalkylpiperidin, Piperazin, 4-substituiertes Piperazin (wobei der 4-Substituent Alkyl oder Carbalkoxy mit jeweils

1 bis 8 Kohlenstoffatomen, Phenyl, Methylphenyl, Methoxyphenyl, Halogenphenyl, Nitrophenyl oder Benzyl ist), Azepin, 2-,3-,4-, oder 5-Niedrigalkylazepin, Morpholip Thiomorpholin, Thiomorpholin-1-

oxid oder Thiomorpholin-1,1-dioxid steht, 35

Μ/24 102

3

R für Niedrigalkyl steht oder zusammen mit R und dem Stickstoffatom an das sie gebunden sind für Pyrrolidin, 2- oder 3-Niedrigalkylpyrrolidin, Piperidin,, 2-, 3-, oder 4-Niedrigalky!.piperidin, 2,6-Diniedrigalkylpiperidin,Piperazin, 4-substituiertf:s Piperazin (wobei der 4-Substituent für Alkyl oder Carbalkoxy mit jeweils 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, Phenyl, Methylphenyl, Methoxyphenyl, Halogenphenyl, Nitrophenyl oder Benzyl steht), Azepin, 2-,3-,4- oder 5-Niedrigalkylazepin, Morpholin, Thiomorpholin, Thiomorpholin-1-oxid oder Thiomorpholin-1,1-dioxid steht.

R von tertiör-Alkyl verschiedenes C_1-18 JC. „-Alkenyl, C. .g-Alkinyl, C₁₁ „ Halogenalkyl, C_{1 1O}-Hydroxyalkyl, C. »-Cycloalkyl, Aryl oder Niedrig-

J.— J.O 4 ~~O

aralkyl mit jeweils bis zu 12 Kohlenstoffatomen oder einen heteroalicyclischen oder heteroaromatischen

Rest mit 3 bis 8 Ringatomen, von denen wenigstens 20

zwei Kohlenstoffatome sind, bedeutet,

9

R und R unabhängig voneinander für H oder Niedrigalkyl stehen,

wobei

die Niedrigalkyl-, Niedrigalkanoyl und Niedrigalkoxygruppen 1 bis 6 Kohlenstoffatome umfassen.

Einige der obigen Amidinogruppen kommen in tautomeren Formen vor, die von der Erfindung ebenfalls umfaßt sind.

M/.M I O Ii

Io

Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel I besitzen in Tierversuchen Antitumoraktivität. Darüber hinaus sind sie als Zwischenprodukte zur Herstellung weiterer Verbindungen mit Antitumoraktivität bei Tieren brauchbar. Die Erfindung betrifft auch Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemaßen Verbindungen und ihre Umwandlung in weitere brauchbare Verbindungen mit Antitumoraktivität.

Das erfindungsgemäße Verfahren, ausgehend von obigen Verbindungen als Zwischenprodukten, zur Herstellung weiterer Verbindungen mit Antitumoraktivität bei Tieren umfaßt die Reaktion einer Verbindung der Formel I, worin A oder A und B die .erwähnte Amidinogruppe bedeuten, mit einem primären Amin. Dies rührt bei Anwesenheit eines N -Aminoinethylensubstituenten zu dessen Abspaltung und Umwandlung in die bei Mitomycin A und Mitomycin C vorliegende NH_-Gruppe. Die primären Amine reagieren - mit Ausnahmen - auch in 7-Stellung, wobei die Amidinogruppe durch den dem Reaktant entsprechenden Aminosubstituenten ersetzt wird. Diese Verfahren werden durch das nachfolgende Formelschema erläutert:

O R^ R^J H I /
.CH₂OCN=C-N

L·- ^0CH3

Formel II

,N-R

Formel III

CH.

Formel IV

: ^- \ ;;-■·■■;- -33 U

M/24 102 . -J*
1

R ,das den Substituenten am Stickstoffatom verschiedener bekannter und erfindungsgemäßer 7-subst.ituierter Aminornitomycin C Verbindungen und den Stickstoffsubstituenten der primären Amine darstellt, welche in der Lage sind, die 7-Amidinogruppe der Formel II zu substituieren, ist ausgewählt unter C.-C. „-Alkyl, das von tert.-Alkyl verschieden ist, C₁-C₁₈-AIkOXy, C^C^-Alkenyl, ^ci-^c ₁₈ Alkinyl,

CT-C-Q-Halogenalkyl, C_n-C_1o-Hydroxyalkyl, C^-C₀-CyCIo-

J. lö 1 Io 4 ö

alkyl, Aryl oder Niedrigaralkyl oder Niedrigaralkoxy mit jeweils bis zu 12 Kohlenstoffatomen, oder einer heteroalicyclischen oder heteroaromatischen Gruppe mit 3 bis 8 Ringatomen von denen wenigstens zwei Kohlenstoffatome sind. R , das den Stickstof fatomsubst iituenten der primären Amine darstellt, welche lediglich in der Lage sind, den N -Amidinosubstituenten abzuspalten, steht für den Rest eines sehr schwach basischen aliphatischen Amins oder für ein sterisch stark gehindertes Alkylamin oder Aralkylamin. Beispiele sind Trifluorethylamin, Benzhydrylamin (d.h. Aminodipheny!methan) oder Tertiärbutylamin.

Die Verbindungen der Formel I werden durch Umsetzung von Mitomycin C, 7-Hydroxy-9a-methoxymitosan, oder Mitomycin A oder einem N -substituierten Analog dieser Verbindungen mit einem Amidacetal hergestellt. Diejenigen

it * *

η/Μ ι ο;»

Verbindungen der Formel I, worin A, nicht jedoch B, die erwähnte Amidinogruppe bedeutet, können auch hergestellt

p_ werden, indem man Mitomycin C oder ein N -substituiertes Analoges davon mit einer starken Base umsetzt, wobei am N ein Anion gebildet wird, das anschließend mit einem Reagenz, wie beispielsweise einem Halogenmethyleniminiumsalz, zur Reaktion gebracht wird, das zur Bildung einer Aminomethylengruppe befähigt ist.

Die bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen sind Mitomycin C-Analoga, in denen die 7-Aminogruppe in eine substituierte oder unsubstituierte Amidinogruppe mit einbezogen ist. Sie besitzen starke Antitumorwirkung gegenb

über experimentell erzeugten Tumoren bei Tieren. Diese Verbindungen werden durch Umsetzung von Mitomycin C mit einem Reagenz hergestellt, das in der Lage ist, die 7-Aminogruppe in eine 7-Amidinogruppe umzuwandeln. Bevor-

zugte Reagenzien hierzu sind die Amidacetale, die in 20

guter Ausbeute und unter milden Bedingungen mit Mitomycin C reagieren (Beispiele 1-5 und 18). Weitere Gruppen Amidin-bildender Reagenzien sind Imidoylhalogenide (Beispiel 17), Halogenmethyleniminiumsalze (Beispiel

15), 2-Halogen-l-alkylpyridiumhalogenide (Beispiel 16) 25

und Iminoäther oder Iminothioäther (Beispiele 13 und 14), welche mit der anionischen Form von Mitomycin C reagieren, die durch Deprotonierung der 7-Aminogruppe des Mitomycins C durch Behandlung mit einer starken Base

gebildet werden. Die Deprotonierung von Mitomycin C er-30

folgt beispielsweise durch Behandlung einer Lösung von Mitomycin C in Dimethylformamid mit ungefähr 1,5 Moläquivalenten Natriumhydrid bei Raumtemperatur. Die Umsetzung der so erhaltenen anionischen Form mit einem

der oben erwähnten Reagenzien führt man vorzugsweise 35

mit 1 bis 1,5 Moläquivalenten dieser Reagenzien, bezogen

J j/ :_>r-r- · · '331!

M/24 102 -JJ--^3

auf Mitomycin C, in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis ungefähr -6O⁰C durch. Als Reaktionsmedium verwendet man aprotische polare organische Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, Hexamethylphosphoramid, Dimethylsulfoxid oder Pyridin. Das erfindungsgemäße Verfahren ist jedoch nicht auf die Bildung der anionischen Form von Mitomycin C in der beschriebenen Weise beschränkt, ^q vielmehr umfaßt das Verfahren auch dem Fachmann offensichtliche Modifikationen.

Das bevorzugte Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel I, worin B oder A und B für eine Amidinogruppe nc der allgemeinen Formel

R³R⁴N-C=N-

stehen.

besteht in der Umsetzung von Mitomycin C oder Mitomycin A oder einem N -substituiertem Derivat dieser Verbindungen mit einem Amidacetal der allgemeinen Formel V:

R³

/|_fi

R OR⁸

2 3 4
worin R , R und R die oben angegebenen Bedeutungen

_ΟΛ besitzen und R₀ für Niedrigalkyl oder Cycloalkyl mit

dU O

bis zu 6 Kohlenstoffatomen steht oder worin die beiden

Reste R eine Alkylenkette bilden und zusammen mit den beiden Sauerstoffatomen und dem dazwischenliegenden Kohlenstoffatom eine cyclische Struktur mit 5 oder 6 Ring-

_OE- atomen bilden. Die Reaktion derartiger Amidacetale mit

primären Aminen ist bekannt Und dei Fachmann weiß, wie

IiL

M/24 102

die Reaktion mit Mitomycin C, Mitomycin A oder den N ^a-Alkylderivaten davon durchzuführen ist. Literaturp. beispiele für diese Reaktion sind H-E. Winberg US-PS 3 121 084 und R.F- Abdulla et al. _; The Chemistry of Formamide Acetals , Tetrahedron, 35, 1720-24(1979).

Vorzugsweise wird die Reaktion in einem flüssigen was_in serfreien Reaktionsmedium durchgeführt, in dem das Verdünnungsmittel eine unter den Reaktionsbedingungen inerte Flüssigkeit ist. Vorzugsweise verwendet man einen halogenierten niedrigaliphatischen Kohlenwasserstoff oder ein Niedrigalkanol oder, falls gewünscht, eine

. r. Mischung der beiden. Chloroform und Methanol und Mischun-Jb .

gen davon sind ebenfalls brauchbar. Die Reaktion wird bei einer Temperatur von 40° bis 65^CC so lange durchgeführt, bis die Reaktion vollständig ist.

Bei Verwendung eines großen Acetalüberschusses (ungefährer 6Ofacher Überschuß) entsteht als Hauptprodukt eine Bis-amidinoverbindung, also eine derjenigen Verbindungen der Formel I, worin A und B für eine Amidinogruppe stehen. Das N -Formylderivat fällt manchmal als Nebenprodukt an. Bei Verwendung einer begrenzten Acetalmenge (ungefähr

1Ofacher Überschuß) kommt es dagegen neben der Bildung des Bis-amidinoprodukts auch zur Bildung der Monoamidinoverbindung, also einer Verbindung der Formel I, worin A für die Aminogruppe und B für eine Amidinogruppe stehen.

Mischungen dieser Produkte können, wie in den Beispielen 30

beschrieben, leicht durch Chromatographie getrennt werden.

Einige im Handel erhältliche Amidacetale, die in diesem Verfahren zur Anwendung kommen können, sind in der Tabelle

I, die dem oben zitierten Artikel von Abdulla et al., 35

Seite 1685 entnommen ist, zusammengestellt.

M/24 102

: 331-992

Tabelle I

Handelsübliche Amddacetale

Acetal	Verbxndunq
A	(CH3) JCH (OCH3) 2
B	(CH3) 2NCH(OCH2CH3)2
C	P (CH3) 2NCH (CCH2-C-CH3) 2 CH3
D	(CH3) 2NC (CH3) (OCH3) 2

IO

(CH₃)JCH(OCH₂C

*2^3'2

(CH.

Μ/24 1OZ

Die Verbindungen der Formel I, in denen R für Cyano, Diniedrigalkylamino, Niedrigalkoxy oder Nxedrigalkylthio stehen, werden hergestellt, indem man die folgenden Orthocarbonatderivate anstelle der Amidacetale in dem oben beschriebenen Verfahren einsetzt.

CN
I

° ^ ^ ο-ζ »^w^t>^w'2^"v

(VII)

(C₂H₅O)₃C-H (CH₃) ₂ (C₂H₅S) 3C-N (CH₃) ₂

(VIII) _(IX)

Diese Verbindungen sind gemäß den in folgenden Publikationen beschriebenen Verfahren erhältlich:

Formel VI: Kantlehn€;r, et al., Liebigs Ann. Chem. , 1981, 70-84.

Formel VII, VIII und IX: H. Meerwein, et al, Liebigs Ann. Chem. 641, 1 (1961).

■ ·

Die Amidinoderivate der Formel I, worin A für

2 2 5

IT R^ZR^D

3 I 3 Il

R NHC=N- oder R N=C-N-

steht, erhält man, wie oben beschrieben, aus der anionischen Form von Mitomycin C oder einem N -substituierten ο,- Derivat davon. Geeignete Halogenmethylenimiumsalze zur Anwendung in diesem Verfahren sind in der Literatur beschrieben. Repräsentativ sind die von W. Kantlehner in

Μ/24-102

.r ·.'/··.. 33 M .7Ψ

* * β C ft

Advances in Organic Chemistry, j?» Teil 2,

Wiley Interscxence, 1979, S. 81 und 82 zusammengestellten 5 Verbindungen. Die nachfolgende Tabelle II ist dieser Publikation entnommen.

M/24 H)A

Tabelle II Halogenmethyleniminiumsalze

10 15

20

25 30

124

120 (Zers.) 178 (Zers.) 195 (Zers.)

M/24 102

331.·992

Tabelle II (Fortsetzung)

X Y Schmp., °C

Br Br

160

Vs

Vs

P-ND₂-C₆H₄

CH₃

,-CH-

CH₃

-(CH2J5-	H
CH3	H
CH3	D
CH3	D
CH3	H
CA	H
^«5	CH-
CHj

Br Br Br Br

85-95

C₂H₅

Cl	Cl	85
Cl	d	90 (Zers.)
Cl	d	117-119
Cl	Cl	103-104
Cl	Br	132-134 (Zet;;
Cl	Cl	103-105
Cl	Br	133-134 (Zero
ci	Cl	93t94
Cl	Br	151-152
Cl	Cl	181-182
Cl	Cl	99-103

M/24

3313992

Bei Verwendung eines Halogenmethyleniminiumsalzes gemäß Tabelle II benützt man zweckmäßxgerweise das entsprechende Amid, aus dem das Iminiumsalz hergestellt wurde als Lösungsmittel. Bei festen Amiden kann man, wie in den Beispielen 17 und 19 erläutert, Hexamethylphosphoramid oder Pyridin als Lösungsmittel verwenden.

Die von den N-substituierten Formamiden abgeleiteten Imidoylchloride sind ebenfalls geeignete Reagenzien. Ihre Herstellung ist bekannt, Beispiele sind in

Tabelle III zusammengestellt, die der Publikation von H. Ulrich in The Chemistry of Imidoyl Halides, Plenum Press, New York, 1968, S. 74-76 entnommen ist. Ihre Reaktion mit Aminen unter Bildung von Amidinen ist ebenfalls bekannt und beispielsweise von S.R. Sandler und W. Karo in Organic Chemistry, 12-III, A. T. Blomquist und H. Wassermann, Herausgeber, Academic Press, New York, 1972, S. 227 , beschrieben.

Tabelle III

Imidoylchloride

Cl

Sdp., ^oC/mm (Schmp./ ⁰C)

CH3	C6H11	45-56/0.04
	C6H5	(118-120)
		60/0.1
	2-BC6H4	70/0.25
	2-ClC6H4	111-114Λ4
	2-BrC6H4	142-143/12
C2^	Vn	43-44/0.02
CH3CH2CCl2	C2H5	72-75Λ4
(CH3J2CH	C6H11	40-41/0.001

	Fortsetzung)	■ · 331 ;Ί992
M/24 102	R
Tabelle 3 11 ( 2	2-CHX.H. J 6 4	Sdp., oC/mm
R	4-CH-C^H.	Schmp., °C)
	4-CH-0C..H,, J 6 4	67/0.3
		80-85/0.8
	C6HIl9	93-94/0.25
H-C4H9 (C2H5	C2H5	72-76/0.7
(CH3)3C	CH3	104-106/20
C6H10Cl		102/3
C6H5	C2H5	46-47/2
	i"C3H7	90-92Λ3
	H-C4H9	47-4 8Λ
	S13Il	52-54/1
		85-86/1
	CH2C6H5	110-112/1
		(66-67)
		128-130/1
	2,6-(^)^6Η3	175-176/12
	2-CH3OC6H4	(40-41)
	4"CH3CC6H4	153-156/1
		1B8-190/6
	2,4-(O2N)2C6H3	198-200/20
	C6H5	(61-63)
	C6H5	(122-124)
2-CH3C6H4		174-177/10
4-CH3C6H4	C6H5	141-144/1
	4-BrC6H4	(40-41)
4-ClC6H4		(66-67)
4-BrC6H4		(93-94)
4-CH3OC6H4	Vn	183-185/3
	C6H5	(73-76)
4-O2NC6H4	4-O2HC6H4	(40-42)
		(137-138)
	<2 .C6^	(132-134)
3,5-(O2N)2C6H3		(86-87)
2,4,6- (CH3) 3CgK	164-165/1
	(60-62)

Μ/24 102 -W-3Z

Die Verbindungen der Formel I, worin A für die am Stickstoffatom unsubstituierten Amidinogruppen

? 2 5

² rV

oder HN=C-N- steht,

werden hergestellt, indem man einen an der Aminogruppe ,Q geschützten Iminoäther mit Mitomycin C, einem N -substituierten Derivat davon oder einem N -Niedrigalkylderivat dieser Verbindungen in der anionischen Form in der oben beschriebenen Weise umsetzt. Die Schutzgruppe wird anschließend in üblicher Weise abgespalten. Ein geeig-,c netes Reagenz ist das Isopropylformimidat, in dem die Aminogruppe mit dem ß-Trimethylsilyläthoxycarbonylrest geschützt ist (Beispiel 13).

i (CH₃) ₃

(CH-) -chcch=nh.b:i »

Wenn A für (l-Niedrigalkyl-2(IH)-pyridinyliden)amino oder einen Rest der Formeln

"Wn

oder

I I * "

r7

steht, umfaßt das preparative Herstellungsverfahren die

Umsetzung der anionischen Form von Mitomycin C mit cycli schen Halogenmethylleniminiumsalzen oder Imidoylhalo-

2 3
geniden, xn denen R und R in der Formel

R⁷R²

zusammen einen Ring bilden.

R³-N-C=N-

•j a t

·■·■-■■ ■»" ·" 33U^:992

M/24 102 -^4-33

Geeignete Verbindungen zur Umsetzung mit dem Mitomycin C-Anion sind 2-Chlor-l-methylpyridiniumjodid (Beispiel 16), 2-Chlor-4,5-dihydro-l-methyl-l(3H)-pyrrolidiniumchlorid (Tabelle II), N,N'-Dimethyl-N,N¹-trimethylen-chlorforraamidiumchlorid (Beispiel 28) und weitere cyclische Imidoylhalogenide, die sich von 2-Azetidinonen, 2-Pyrrolidinonen, 2-Piperidinonen und 2-Azepinonen ableiten. Wenn R oder

9
R in den Endprodukten für Wasserstoff steht, verwendet man ebenfalls, wie oben erwähnt, eine Schutzgruppe bei den cyclischen Halogenmethyleniminiumsalzen.

Die Verbindungen der Formel I, worin A oder A und B eine Amidinogruppe der Formel

R²
I
R³R⁴N-C=N-

bedeuten, können mit primären Aminen der Formel

R⁵NH₂ ,

₅

worin R ausgewählt ist unter von Tertiäralkyl verschiedenen C,-C₁₈-Alkyl, C-j-C-g-Alkenyl, C₁-C,„-Alkinyl, C₁-C₁₈-Halogenalkyl, C₁-C-„-Hydroxyalkyl, C.-Cg-Cycloalkyl,oder Aryl oder Niederigaralkyl mit bis zu 12 Kohlen-

Stoffatomen oder einer heteroalicyclischen oder heteroaro-3U

matischen Gruppe mit 3 bis 8 Ringatomen von denen wenigstens zwei Kohlenstoffatome sind. Außer der erforderlichen Abwesenheit funktioneller Gruppen, die unter den Reaktionsbedingungen nicht inert sind, besteht die einzige Einschränkung bei der Wahl des primären Amins darin, 35

daß das Aminostickstoffatom an ein Kohlenstoffatom

M/24 10?.

gebunden ist, das wenigstens ein Wasserstoffatom und weniger als zwei Arylgruppen aufweist. Als Reaktionsmedium verwendet man eine wasserfreie flüssige organische Verbindung, wobei jede derartige Verbindung verwendet werden kann, solange sie mit den Reaktionsbedingungen vereinbar ist und nicht in nachteiliger Weise an der Reaktion teilnimmt. Im allgemeinen verwendet man einen Überschuß an primärem Amin auf Molbasis. Die Reaktion erfolgt vorzugsweise bei einer Temperatur im Bereich von ungefähr -15⁰C bis +50⁰C. Das Reaktionsprodukt ist ein 7-substituiertes Amino-9a-methoxymitosan, also ein Mitomycin C-Derivat mit einem der im Zusammenhang mit

2g R definierten Substituenten an der 7-Aminogruppe. Es ist bekannt, daß derartige Verbindungen in Tierversuchen Antitumoraktivität zeigen.

Es hat sich gezeigt, daß einige, durch die Formel

6

R NH₂

bezeichnete primäre Amine nicht in der Lage sind, die 7-Amidinogruppe gemäß dem in dem vorhergehenden Abschnitt

2g beschriebenen Verfahren zu ersetzen. R steht für Alkyl, Cycloalkyl, Cycloalkylalkyl, Aralkyl oder einen heteroalicyclischen Rest mit 4 bis 18 Kohlenstoffatomen, in dem das die Aminogruppe aufweisende Kohlenstoffatom ein tertiäres Kohlenstoffatom oder ein sekundäres Kohlenstoff-

„Q atom mit 2 Arylgruppen ist. Bestimmte andere schwach basische aliphatische Amine, wie Trifluorethylamin, vermögen ebenfalls die 7-Amidinogrüppe nicht zu ersetzen, diese Amine sind zur Umwandlung einer Verbindung der Formel I, worin A und B für eine Amidinogruppe der Formel ^R

I
R³R⁴N-C=N- stehen,

Μ/24 102

in eine Verbindung der Formel I, worin nur A für diese Amidinogruppe steht, brauchbar. Obwohl diese Amine die 7-Amidinogruppe nicht zu substituieren vermögen, haben sie dennoch die Fähigkeit, die Amidinogruppe B in NH_ zu überführen, wobei die für unsubstituierte Mitosane charakteristische Carbamidofunktion gebildet wird. Als Reaktionsmedium kann das Amin selbst oder ein,wie in •j^Q dem vorausgehenden Abschnitt beschriebenes, Lösungsmittelsystem dienen. Das Verfahren wird vorzugsweise in einem Temperaturbereich von 20⁰C bis 60⁰C durchgeführt.

In den nachfolgenden Beispielen wurden die Schmelzpunkte je mit Hilfe eines Thomas-Hoover-Kapillarschmelzpunkt-

apparates bestimmt, sie sind nicht korrigiert. Die Temperaturen sind in ⁰C ausgedrückt. Wenn nicht anders angegeben, wurden die Kernresonanzspektren (NMR) auf einem Varian XLlOO Spektrometer in Pyridin-d₅ gemessen. Die 2Q Infrarot-Spektren (IR) wurden mit einem Beckman 4240 Spektrophotometer bestimmt, wobei die Probe unter Verwendung von Kaliumbromid in Tabletten gepreßt wurde.

Die IR-Angaben bedeuten y in cm . Die UV und sieht-³ max

baren UV-Spektren wurden auf einem Varian-Cary 219 Spektro-2g photometer aufgenommen.

Dünnschichtchromatographische Untersuchungen (tlc) wurden mit Hilfe von 0,25 nun beschichteten Kieselgelplatten unter Verwendung von UV-Licht zur Sichtbarmachung durch-„« geführt. Die Schnellchromatographien erfolgten unter Verwendung von Silica Woelm (32-63yi/m). Die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck und unterhalb von 50"C verdampft.

„ * φ

33Ί9992

M/ PA Κ).'

B eispiel 1

Verbindung V:

7-[(Dimethylamino)methylen]amino-N -(dimethylamino)-methylen-Sa-methoxymitosan

Verbindung VI: 7-[(Dimethylamino)methylen]amino-N -(dimethylamino )-methylen-N -formyl-9 amethoxymitosan

Mitomycin C

(CH₃O₂)CHN(CH₃) ₂

CH₂CCN=CHN(CH )

OCH,

O Il

CH₂OCN=CHN(CH )

VI

ttt t»·« * * \J \j \ \_- \J \J Δ.

M/24 102

Zu einer Suspension von 500 mg (1,50 mM) Mitomycin C in 25 ml Chloroform gibt man insgesamt 9,6 ml (in 2,4 ml Portionen zu Beginn und nach 18, 21 und 23 Stunden) N,N-Dimethylformamiddimethylacetal und rührt die Suspension 41 Stunden bei ungefähr 50°. Nach Verdampfen des Lösungsmittels und des überschüssigen Reagenz unter vermindertem Druck erhält man einen dunkelgrünen Rückstand; ein Dünnschichtchromatogramm (Methylenchlorid/Methanol

ig 20:1) zeigt, daß kein Mitomycin C, aber zwei neue grüne Bestandteile (R_f - 0,16 und 0,22) vorhanden sind. Der Hauptbestandteil (R- = 0,16) wurde durch Schnellchromatographie unter Verwendung von Methylenchlorid/Methanol 20:1 als Eluierungsmittel in Form eines grünen Feststof-

"L5 fes isoliert (340 mg; 51,5 %), welcher nach dem Auflösen in Diethyläther und anschließender Zugabe von Hexan zur Verbindung V in Form eines dunkelgrünen amorphen Pulvers • führt.

NMR (Pyridin dg, g) '. 2.18 (s, 3H), 2.70 (bs, IH), 2.76 (s, 3H), 2.82 (s, 3H), 2.86 (s, 6H), 3.22 (s, 3H), 3.30 (bs, IH), 3.60 (d, J=12Hz), 4.12 (dd, IH, J=IO, 4Hz), 4.43 (d, IH, J=12Hz), 4.90 (bs, IH), 5.10 (t, IH, J=IOHz), 5.52 (dd, IH, J=IO, 4Hz), 7.85 (s, IH), 8.64 (s, IH).

IR(KBr) ν. cm"¹: 33Q0; 2930, 1675, 1620, 1545, 1230, 1060.

UV(H₀O) λ. nm: 390 und 244 30

'"* *^:* 331S992

M/24 102 -26-34?

Analyse für ^C2i^H28^N6°5^:

CHN

Berechnet: 56,71 6,08 18,90

Gefunden: 56,20 6,28 17,88

Das Nebenprodukt (R _f = 0,22), das nach dem Ausfällen g mit Diethylather und Hexan als amorpher Feststoff isoliert wird (180 mg; 25,35 %) ist die Verbindung VI.

NMR (TPyridindg, S): 2.20 (s, 3H), 2.60-3.00 (3 Singuletts

12H), 3.2 (s, 3H), 3.65 (m, 2H), 4.04 (d, IH, J=4Hz), 4.16 (dd_r IH, J*=12, 4Hz), 4.60 (d, OH, J=13Hz), 4.86 (t, IH, J=12Hz), 4.90 (s, IH), 5.48 (dd, IH, J=12, 4Hz), 7.90 (s, IH), 8.64 (s, IB), 9.06 (s, IH). 20

IR(KBr) _Vwaxt an"¹: 2490, 2860, 1698, 1630, 1600, 1540, .1250, 1060.

UV(H₂O), X_1113x, nm: 390 und244

25

Analyse für ^C ₂2^H28^N6°6^:

30

Berechnet:

Gefunden:

C	89	H	93	N	17,	78
55,	41	5,	96	16,	99
55,	5,

35

M/24 102 39

Dünnschichtchromatographische Untersuchungen der Lösungen von Verbindungen V und VI in Ethylacetat oder N,N-Dimethylformamid-Dimethylacetal, welche mehr als 10 Stunden bei Raumtemperatur gestanden haben, zeigen, daß sich die Verbindung VI (R - 0,22) in die Verbindung V (R.p = 0,16) umwandelt, so daß man eine stark an Verbindung V angereicherte Lösung erhält.

Beispiele 2 bis 7 werden gemäß den im Beispiel 1 beschriebenen Verfahren unter Berücksichtigung der nachfolgend beschriebenen Modifikationen ausgeführt, wobei man weitere erfindungsgemäße Verbindungen erhält.

Beispiel 2

Verbindung VII; 7-[(Diisopropylamino)methylen]amino-N

(diisopropylamino)-methylen-9a-methoxy-2ü ■·—

mitosan

Eine Suspension von Mitomycin C (200 mg, 0,6 mMol) in N^-Diisopropylformamiddiethyläcetal (3 ml) wird unter

Rühren 15 Stunden auf 53⁰C erhitzt.' Die Reaktionsmischung Λ Ο

wird in 50 ml Wasser gegossen und mit Ethylacetat

(3 χ 30 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte werden getrocknet (Na₇SO₄) und verdampft, wobei man einen dunkelgrünen Sirup erhält. Das tlc (Methylen-

chlorid/Methanol 10:1) zeigt einen grünen Hauptbestand-30

teil R. = 0,43 und schneller laufende Verunreinigungen (R_f = 0,45-0,50). Das Hauptprodukt VII wird als dunkelgrüner Feststoff (156 mg; 46,8 %) mittels Schnellchromatographie unter Verwendung von Methylenchlorid/Methanol

20:1 als Eluierungsmittelisoliert. 35

₉ r fi- „ * *

* t! 1 τ- Τ ^i!

* #(»♦*' C IC ft** **

'"""* 3312992 ΨΟ

Μ/24 ICKi

NMR (CDCl₃, .5): 1.10-1.50 (5 Singuletts24H), 1.-94 (s, 3H), 2.78 (dd, 3Η, J=4, 2Hz), 3.05 (d, IH, J=4Hz), 3.22 (s, 3H), 3.60 (m, 5H), 3.75 (dd, IH, J=IO, 4Hz), 4.24 (d, IH, J=12 Hz), 4.56 (t, IH, J=IO Hz), 4.88 (dd, IH, J=IO, 4Hz), 7.83 (s, IH), 8.67 (s, IH).

IR (KBr),!/ , can"¹: 3320, 2990, 2940, 1680, 1630, 1600, 1550, 1235, 1060.

UV(MeCJH) K_n . nm: 246 und 393

	Analyse für C_gH	!44N6	C	H	N
20			62,	,55 7,91	15,10
	Berechnet:		62,	,03 7,80	14,60
	Gefunden:		e i s ρ i	el 3
		B
25				(Dimethylamino)methylen	]amino-N
	Verbindung XIV:	7-[

(dimethylamino)-methylen-9a-methoxy-N ^amethylmitosan

Man verwendet Porfiromycin (N ^a-Methlmitomycin C) 130 mg (0,37 mM) als Ausgangsmaterial und setzt es mit 0,8 ml (1,5 mM) N,N-Dimethylfofmamiddimethylacetal unter Verwendung von 10 ml Chloroform und 2 ml Methanol als Lösungsmittel 50 Minuten bei 50⁰C um. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erhält man die Verbindung XIV als Sirup; die Reinigung erfolgt mittels Schnellchromatographie unter Verwendung von 20 g Silicagel .

Ti

Μ/24 102

und Methylenchlorid/Methanol (20:1) als Eluierungsmittel.

NMR (Pyridin d^, δ); 2.22 (bs, 4H), 2.28 (s, 3H), 2.70 (d, IB, J=4Hz), 2.80 (s, 3H), 2.84 (s, 3H), 2.90 (s, 6H), 3.20 (s, 3H), 3.52 (dd, IH, J*2, 12Hz), 4.10 (dd, IH, J=4, IiHz), 4.38 (d, IH, J=12 Hz), 4.92 (t, IH, J=IlHz), 4.96 (bs, IH), 5.46 (dd, IH, J=4, HHz), 7.86 (ε, IH), 8.70 (s, IH).

Rf = 0,53 dünnschichtchromatographisch mit 9:1 Methylenchlorid/Methanol

IR (KBr) V_103x, an"¹: 2930, 1680, 1620, 1545, 1230, 1115.

UV(MeOH) AjJ_13x/ nm: 386 und 243

Analyse für	C22H30N6°5:	C	,60	H	55	N	,33
		57	,11	6,	11	18	,99
Berechnet:		57		6,		17
Gefunden:

Nach diesem Verfahren erhalt man Verbindung XV 7-Amino-N -dimethylaminomethylen-ga-methoxy-N ^a-methylmitosan als Nebenprodukt in 30%iger Ausbeute; tlc R_f = 0,40 (Methylenchlorid/Methanol 9:1).

NMR (Pyridin α,-, δ): 2.02 (s, 3H), 2.16 (dd, IH, J-2, 5Hz), -⁵

2.25 (s, 3H), 2.66 (d, IH, J=5Hz), 2.76 (s, 3H), 2.86 (s, 3H), 3.18 (s, 3H), 3.51 (dd, IH, J=2, 12Hz), 4.08 (dd, IH, J=4, lOHz), 4.50 (d, IH, J=IOHz), 4.90 (t, IH, J=IO Hz), 5.05 (bs), 5.43 (dd,' IH, J=4, lOHz), 8.70 (s, IH).

1 O 2

⁰^ ^{3430/ 3330}' ³²⁷⁰' ²⁹⁴⁰' ²⁹⁶⁰' ¹⁶⁹⁰' 1625, 1553, 1230, 1125.

UV(MeGH) λ , nm: 358, 244 und 216.
max

	Analyse für	C19H25N5O5:	C	53	H	20	N	,38
10			56,	68	6,	13	17	,59
			54,		6,		16
	Berechnet:
	Gefunden:
15

Beispiel 4

2Q Verbindung IX: 9a-Methoxy-7-[(1-piperidinylamino)-

methylen]am
len)mitosan

methylen]amino-N -(1-piperidinylmethy-

ml N-(Diethoxymethyl)piperidin und 200 mg Mitomycin C läßt man in Chloroformlösung (3 ml) 2,5 Stunden bei

60⁰C reagieren. Das Produkt erhält man in 27,6 %iger Ausbeute, tlc R_£ = 0,20 (Methylenchlorid/Methanol 20:1).

NMR (Pyridine^, 5): 1.38 (bs, 12H), 2.20 (s, 3H)_# 2.80 <bs, IH), 3.24 (s, 3H), 3.00-3.40 (m, 5H), 3.40-3.80 (m, 5H), 4.13

(dd, IH, J=IO, 4Hz), 4.45 (d, IH, J=12 Hz), 4.90 (te, 2H), 5.12 (t, IH, J=IOHz), 5.56 (dd, IH, J=IO 4Hz), 7.87 (s, IH), 8.70 (s, IH).

_g5 IR(KBr) ν , cm"¹: 3300, 2950, 2870, 1680, 1630, 1610, 1550, 1200, 1070.

, nm: 394 und 246.

, .319992

Μ/24 102 /τ=3Γ-

C	79	H	87	N	02
61,	01	6,	85	16,	34
61,	6,	15,

Analyse für C._nH,,N^O₁-:

.<£ / Jo O D

Berechnet: Gefunden:

Das N -Formylderivat der vorstehenden Verbindung, Verbindung VIII,N ^a-Formyl-9a-methoxy-7-[ (1-piperidinylamino)methylen] amino-N -(l~piperidinylmethylen)mitosan erhält man als Hauptbestandteil in 43%iger Ausbeute, tlc R_f = 0,25 (Methylenchlorid/Methanol 20:1).

NMR (Pyridin V^, $): 1.38 (bs, 12H), 2.23 (s, 3H), 3.00-3.40 (n, 4H), 3.23 (s, 3H) / 3.40-3.90 (m, 6H), 4.07 (d, IH, J=4Hz), 4.18 (dd, IH, J=Il, 4Hz), 4.63 (d, IH), 4.90 (t, IH, J=IlHz), 4.94 (bs, IH), 5.54 (dd, IH, J=Il, 4Hz), 7.94 (s, IH), 8.71 (s, IH), 9.08 (s, IH).

IR(KBr) ν . cm ¹S 2490, 2860, 1698, 1630, 1600, 1540,

max 1250, 1060.

_oc UV(HJD) \ nm: 394 and 247.

25 2 max'

Analyse für C_OQH__cN,0,: 28 36 6 6

Berechnet: , 60,08

30 Gefunden: 59,99

H	52	N	21
6,	17	15,	07
6,	15,

M/24 10 2 -&1-

Beispiel 5

Verbindung X: 9a-Methoxy-7-[(1-morpholino)methylen]amino-N -(1-morpholino-methylenmitosan

Eine Suspension von Mitomycin C (200 mg, 0,6 mMol) in Chloroform (10 ml) und N-Diethoxymethylmorpholin (4 ml)

jQ erhitzt man unter Rühren 4 2 Stunden bei ungefähr 53⁰C. Die Reaktionsmischung wird unter Hochvakuum zu einem Sirup eingeengt. Zur Trennung der grünen Bestandteile von dem Überschuß der Reagenzien führt man eine Schnellchromatographie (Methylenchlorid/Methanol 25:1) durch.

_1{- Die vereinigten grünen Bestandteile löst man in 20 ml Äthylacetat und wäscht die Lösung mit Wasser (3 χ 20 ml). Die vereinigten Waschflüssigkeiten wiederum extrahiert man mit Ethylacetat (3 χ 15 ml). Man vereinigt alle Ethylacetatfraktionen, trocknet (Na₃SO₄) und verdampft

_nn das Lösungsmittel, wobei man einen dunkelgrünen Sirup erhält. Eine dünnschichtchromatographische Untersuchung des Sirups (Methylenchlorid(Methanol 10:1) zeigt bei R_-P = 0,33 einen grünen Bestandteil mit mehreren grünen Verunreinigungen (R_f = 0,35-0,40). Der Bestandteil bei R_£ 0,33 wird als dunkelgrüner, amorpher Feststoff, der als Verbindung X charakterisiert wird, mittels Schnellchromatographie isoliert.

NMR (CDCl₃, S) i 1.91 (s, 3H), 2.80 (bs, IH), 3.13 <d, IH, J=2Hz), 3.22 (S,' 3H), -3.30-3.94 (m, 18H), 4.20 (d, IH, J=12Hz), 4.40 (bs, IH), 4.54 (t, IH, J=IOHz), 4.88 (dd, 1Ή, J=IOHz, 4Hz), 7.74 (s, IB), 8.51 (s, IH).

IR(KBr) IZ_110x, on"¹: 3300, 2970, 2920, 1680, 1625, 1550, 1235, 1070.

UV(MeOH) λ. nm: 386 und 244.

*■■■■ - ·.■■■-■" J-.' 33 1 Ti992

M/24 10 2 lfS

Anlayse fur C₀₁-H₀₀N-O-:

Δ D J Δ D /

Berechnet: Gefunden:

C	,78	H	06	N	90
56	,07	6,	03	15,	37
53	6,	15,

10

Beispiel

Verbindung XVI: 7-Amino-N -dirnethylaminomethylen-^a-

methoxymitosan

15

Mitomycin C (200 mg; 0,6 Mmol löst man in 10 ml Chloroform und 2 ml Methanol, gibt N, N-Dimethylformamiddimcithylacetal (0,64 ml; 4,8 fnMol) zu und rührt die Lösung 50 Minuten bei ungefähr 50⁰C- Eine dünnschicht chrornatographische Untersuchung (Methylenchlorid(Methanol 90:10) zeigt eine Spur unumgesetzten Mitomycins C (R _f = 0,22) und zwei neue Bestandteile (R_f = 0,4 2 und 0,33). Die Lösung wird unter vermindertem Druck zu einem Sirup eingeengt, der mittels Schnellchromatographie (25 g, Silica-

gel) unter Verwendung von Methylenchlorid/Methanol Zo

(20:1) als Eluierungsmittel behandelt wird.

Der schneller laufende Bestandteil (R,- = 0,42) wird als grüner amorpher Feststoff (60 mg; 22,5 %) isoliert und anhand eines NMR-Spektrums (Pyridin- cL) als Verbindung V j

identifiziert.

Der blaue Hauptbestandteil (R^ = 0,33) wird als amorpher Feststoff (148 mg; 63,3 %) isoliert und als Verbindung XVI charakterisiert. Eine Analysenprobe davon erhält man durch Ausfällen aus Methylenchlorid mit n-Pentan.

M/24 H)?.

NMR (Pyridind^ δ): 2.02 (s, 3H), 2.76 (bs, 4H), 2.86 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 3.28 (d, IH, J=4Hz), 3.62 (dd, IH, J=2, 13Hz), 3.94 (bs), 4.14 (dd, IH, J=A, 12Hz), 4.56 (d, IH, J=13Hz), 5.12 (t, IH, J=IOHz), 5.52 (dd, IH, J=4, 10Hz).

IR (KBr) V_113x, on ^-1: 3430, 3320, 3280, 2930, 1675, 1615, 1650 1230, 1115.

UV(H₂O) A_, ran: 364, 244 und 219.

15 Analyse für

Berechnet: ■20 Gefunden:

HN

55	.48	5	,91	17,	98
54	,70	6	,14	17,	95

Beispiel 7 25

Verbindung XVII; 7,9a-Dimethoxy-N -dimethylaminomethy-

lenmitosan

Mitomycin A (170 mg) läßt man anstelle von Mitomycin C gemäß Beispiel 1 mit N,N-Dimethylformamiddimethylacetal (0,6 ml) in einer Lösung in Chloroform/Methanol (10:1) eine Stunde bei 50⁰C reagieren. Man erhält das gewünschte Produkt in 48 %iger Ausbeute; tlc R_f = 0,50 (Methylenchlorid/Methanol 9:1).
35

·..·:. ■-. ·. ■ ...-ν 331Γ992

Μ/24 102

NMR (Pyridindg, ζ) : 1.83 (s, 3H), 2.76 (bs, 4H), 2.86 (s, 3H), 3.22. (s_f 3H), 3.28 (d, IH), 3.56 (dd, IH, J=2, 13Hz), 4.02 (s, 3H), 4.10 (dd, IH, J=4, 10Hz), 4.24 (d, J=13Hz), 5.10 (t, IH, J=IOHz), 5.50 (dd, IH, J=4, 10Hz), 8.67 (s, IH).

IR (KBr) V_103x, an"¹: 3300, 2930, 1675, 1655, 1625, 1500

1235, 1120.

10

UV (H₂O)A_1113x, nm: 530, 316 und 244.

	C	H	94	N	,85
56	,39	5,	92	13	.71
56	,51	5,	13

Analyse für ^cig^H24^N4°6^:

15

Berechnet:

Gefunden:

Das N ^a-Formylderivat der Verbindung XVII, nämlich die Verbindung XVIII, 7,9a-Dimethoxy-N -dimethylaminomethylen-N -formylmitosan,erhält man in 16,5 %iger Ausbeute; tlc R_f = 0,61 (Methylenchlorxd/Methanol 9:1).

NMR ( Pyridin d^, §): 1.88 (s, 3H), 2.76 (s, 3H), 2.85 (s, 3H), 3.54 (d, IH), 3.62 (bs, IH), 4.05 (s, 3H), 4.05 (bs, IH), 4.14 (dd, IH, J=4, 12Hz), 4.40 (d, IH, J=13Hz), 4.86 (t, IH, J=l2Hz), 5.42 (dd, IH, J=4, 12Hz), 8.66 (s, OH), 9.08 (s, IH).

30

35

M/24 102 1

-3"o-

Beispiel 8 Verbindung XIX:

7-(Dimethylaminomethylen)amino-9a-methoxymitosan

Zu der in Methanol (10 ml) gelösten Verbindung V (600 mg; 1,35 mMol) gibt man Aminodiphenylmethan 2,2ml; 10,8 mMol und rührt die erhaltene Lösung 4 Stunden bei 54⁰C. Das Fortschreiten der Reaktion wird mittels Dünnschichtchromatographie verfolgt (Methylenchlorid/Methanol 90:10). Nach 4 Stunden ist das Äusgangsmaterial (R_f = 0,35) verschwunden, stattdessen ist ein neuer grüner Hauptfleck (R_f = 0,29) zu beobachten. Man engt die Lösung unter vermindertem Druck ein und unterwirft den erhaltenen Sirup einer Schnellchromatographie (25 g Silicagel) unter Verwendung von Methylenchlorid/Methanol 20:1 als Eluierungsmittel. Die den grünen Bestandteil (R^ = 0,29) enthaltenden Fraktionen werden gesammelt, getrocknet (Na-SO.) und eingeengt. Die Verbindung XIX erhält man als amorphen Feststoff (215 mg; 41 %).

NMR (Pyridine^, ): 2.18 (s, 3H), 2.70 (bs, IH), 2.80 (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 3.08 (bs, IH), 3.24 (s, 3H), 3,56 (bd, IH, J=12Hz), 4,00 (dd,IH),4,44 (d, IH, J=12Hz), 5,06 (t, IH, J=IOHz), 5,56 (dd, IH, J=IO, 4Hz)", 7,58 (bs, 2H), 7,88 (s, IH).

·,

IR (KBr)y , cm" : 3300-3450, 2960-2910, 1715, 1620, max

1535, 1050

UV (H„O)A , nm: 390 und 226

35

55	,48	5,	91	17,	98
54	,83	5.	67	16,	90

M/24 10 2 1

Analyse für Ct₀H₀₀N₁-O₁-:
Io ii b D

C HN

Berechnet:

Gefunden:

la
Bei Verwendung des N -Formylderivats, Verbindung VI,

Q als Ausgangsmaterial anstelle der Verbindung V gemäß Beispiel 8 und nach 20-stündiger Reaktion bei Raumtemperatur erhält man die Verbindung XIX im wesentlichen in der gleichen Weise und der gleichen Ausbeute.

15

Beispiel Verbindung XX:

2Q 7-(Dimethylaminomethylen)amino-9a-methoxy-N Methylmitosan

Man löst 1 g der Verbindung XIV (2,18 mMol) in Methanol (20 ml) gibt Aminodiphenylmethan (3,5 ml; 17,18 mMol und

2g rührt die erhaltene Lösung 5 Stunden bei Raumtemperatur und 5 Stunden bei 40⁰C. Ein Dünnschichtchromatogramm (CH₂Cl₂/Me0H 90:10) der Reaktionsmischung zeigt, daß beinahe das ganze Ausgangsmaterial (R_f = 0,55) abreagiert hat und daß sich ein neuer, grüner Hauptfleck (R^ =

O₀ 0,48) gebildet hat. Aufarbeiten in ähnlicher Weise gemäß Beispiel 8 liefert die Verbindung XX als amorphen Feststoff (350 mg). Die weitere Reinigung erfolgt mittels Flashchromatographie (7 g, Silicagel) unter Verwendung von CH₂Cl₂/Me0H. (250 ml, 96/4 V/V) unter Ausfällen des

_OI- erhaltenen Feststoffes (R* « 0,48) aus Methylenchlorid

(5 ml) und Hexan (50 ml) wobei man festes, analysenreines XX (314 mg; 35,7 %) erhält.

tr tV -- ti

C	53	H	20	N	36
56,	90	6,	13	17,	81
53,	5,	15,

NMR (CDC]₃, δ): 1.93, ε, 3H), 2.26 (bs, IH), 2.26 (s, 3H), 3.06 (s, 3H), 3.08 (bs, IH), 3.10 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 3.46 (bd, IH, J=12, IHz), 3.58 (dd, IH, J=4, 10Hz), 4.17 (d, IH, J=12Hz), 4.38 (t, IH, J=IOHz), 4.68 (m, 2H), 4.76 (dd, IH, J=4, 10Hz), 7.72 (s, IH).

IR (KBr) _Vjasx, an"¹: 3440, 3350, 3190, 3020, 2940, 2910, 1725, 1630, 1550, 1055.

UV (MeOH) A_1112x, nm: 386 und 231.

15

Analyse für ^C ₁₉ ^H25^N5°5^:

Berechnet:

Gefunden: 20

Beispiel 10_

Verbindung XI:
25

7-(n-Propyl)amino-9a-methoxymitosan

Verbindung V (330 mg; 0,74 mMol) löst man in wasserfreiem Methanol (10 ml) und gibt n-Propylamin (1,0 ml) zu. Die Reaktionsmischung rührt man 6 Stunden bei Raumtemperatur und 16 Stunden bei ungefähr 0-4⁰C. Das Lösungsmittel und überschüssiges Reagenz werden unter vermindertem Druck verdampft. Der Rückstand wird einer Schnellchromatographie unter Verwendung von Silicagel als Adsorptionsmittel unterworfen. Der durch Eluierung mit Methylenchlorid/Methanol 30:1 erhaltene blaue Bestandteil (R_f = 0,40) wird erneut aus Methylenchlorid mit Hexan aus-

ν ώ -.. ..· ·..■-..- 33VJ99J

Μ/24 102 -3<-

gefailt, wobei man die Verbindung XI als amorphes graues Pulver (125 mg,- 44,%) erhält.

NMR (Pyridin d₅, δ): 0.80 (t, 3H), 1.42 (xn, 2H), 2.U (s, 3H), 2.74 (bs, IH), 3.12 (bs, IH), 3.22 (s, 3H), 3.36 (q, 2H), 3.60 (d, IH, J=12Hz), 3.96 (dd, IH, J=IlHz, 4Hz), 4.54 (d, IH, J=12Hz), 5.00 (m, 3H), 5.36 (dd, IH, J=H, 4Hz), 6.90 (t, IH).

IR(KBr) V₁^_x, on"¹: 3440, 3300, 2960, 2940, 1715, 1630, 1600, 1550, 1510, 1220, 1060.

!5 UV(HO)A nm: 372 und 222
<s max'

Analyse für C₁₈H₃₄N₄O₅:
CHN

Berechnet: Gefunden:

57	,40	6,	38	■ 14	,88
57	,28	6,	41	14	,08

25

Beispiel 11

Verbindung XII
30

7-(2-Hydroxyethyl)amino-9a-methoxymitosan

Man löst die Verbindung V (330 mg; 0,74 mMol) in wasserfreiem Methanol (5 mL) und gibt Äthanolamin (2 ml) zu.
Die Reaktionsmischung, rührt man 2 Stunden bei Raumtemperatur und verdünnt dann mit Wasser (50 ml) und extrahiert mit Ethylacetat (5 χ 60 ml). Die vereinigten Ethyl·

Φ t» (' le ·- --d φ

M/24 102

acetatextrakte werden getrocknet (Na^SO.) und zu einem blau-roten Rückstand eingeengt, der nach Durchführung ■ einer SSulenchromatographie unter Verwendung von 10 % Methanol in Methylenchlorid und nach-Einengen der die blaue Verbindung enthaltenden Fraktionen 105 mg (37 %) der Verbindung XII in Form eines amorphen Feststoffes liefert.

NMR (Pyridin d , δ): 2.14 (s, 3H), 2.81 (bs, IH), 3.18 (d, IH, J=4Hz), 3.24 (s, 3H), 3.65 (dd, IH, J=2, 12Hz), 3.70-4.20 (in, 5H), 4.52 (d, IH, J=13Hz), 4.96 (t, IH, J=12Hz), 7.38 (t, IH), 7.58 (bs).

IR(KBr) ν , cm"¹: 3300-3500, 2930, 1710, 1630, 1600, 1540, 1510, 1200, 1055.

UV(HO)A , ran: 371 und 221 Z max

20

Analyse für C₁₇H N.O,:

Berechnet: Gefunden:

C	92	H	5	,82	N	,80
53,	30	5	,88	14	,80
51,		14

Beispiel 12 Verbindung XIII

7-[2-Benzylthioethyl]amino-9a-methoxymitosan

Man löst Verbindung V (200 mg; 0,45 mMol) in Methanol (2 ml) und gibt S-Benzyl 2-aminoethanethiol(0,5 ml) zu und rührt die Lösung 16 Stunden bei Raumtemperatur.

κ * ν

Μ/24 102

3310992

ίο

Der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck erhaltene Rückstand wird mittels Schnellchromatographie (40 g; Silicagel) unter Verwendung von 6 % Methanol/Methylenchlorid (400 ml) als Eluierungsmittel behandelt. Die blaue Verbindung (Rf ungefähr 0,5 in 10 % MeOH(CH_Cl_) wird als amorpher Feststoff isoliert (65 mg, 29,8 %). Die Spektraldaten dieser Verbindung (NMR, IR, UV und MS) stimmen mit der ihr zugeordneten Struktur überein.

Anlalyse für

Berechnet Gefunden:

59	,49	5,	82	11,	56
59	,72	5,	94	11,	08

20

Beispiel 13

25

30

Herstellung von

OCCNH,

35

Μ/Λ1 K).¹ SY

(A) Zu einer Lösung von Isopropylformimidathydrochlorid (1 mMol) in 2 ml Dimethylformamid (DMF) gibt man bei 0⁰C unter Stickstoffatmosphäre langsam Diisopropylethylamin (2,1 mMol). Zu der erhaltenen Lösung tropft man bei 0⁰C ß-Trimethylsilylethylchlorformat. Die erhaltene klare Lösung ist die Lösung A.

(B) Eine Lösung von Mitomycin C (1 mMol) in 5 ml ,Q DMF gibt man zu einer Suspension von Natriumhydrid (1,5 mMol) in 3 ml DMF. Man rührt die Lösung 20 Minuten bei Raumtemperatur und kühlt auf -40 bis ungefähr 50⁰C, ehe man die obige Lösung A zugibt. Man halt die Lösung eine Stunde bei -40⁰C und läßt sie ,c dann auf Raumtemperatur erwärmen. Nach ungefähr 6-18 Stunden Stehen bei Raumtemperatur wird die Reaktionsmischung mit CH-Cl- verdünnt und filtriert. Der nach dem Verdampfen des Filtrats erhaltene feste Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert, wobei „₀ man die an der Amidinogruppe geschützte Titelverbindung erhält.

(C)Die Amidinoschutzgruppe des vorstehenden Zwischenproduktes wird gemäß dem von Carpino und Tsao J. Chem. Soc. Chem. Comm. 358 (1978) publizierten Verfahren

entfernt, wobei man die unsubstituierte Amidinotitelverbindung erhält.

33Π992

M/24 102 So

Beispiel 14

KNCH₃

(A) Zu einer Lösung von Isopropylformimidathydrochlorid (1 mMol) in DMF (2 ml) gibt man bei 0⁰C unter einer Stickstoffatmosphäre langsam Diisopropylethylamin (2,1 mmMol). Zu dieser Lösung gibt man dann bei 0⁰C Methyljodid. Die erhaltene Lösung ist die Lösung B.

(B) Man wiederholt das in Beispiel 13 (B) beschriebene Verfahren unter Verwendung der Lösung B anstelle der Lösung A, wobei man die Titelverbxndung erhält.

M/24 102 -&Γ-

Beispiel 15

(1) NaH

EMF

NH2>	fl	r- CXiCKH2
		JJ;.w
	Mitomycin	C

(2)

■-"3 Π \ L- NH

0 V-^

₂N=CHC1C1

Verbindung XIX

Man stellt eine 0,5 M-Lösung von N,N-Dimethylchlormethyleniminiumchlorid her, indem man Oxalylchlorid (1,57 g; 12,5 mMol) bei 0⁰C zu einer Lösung von DMF (915 mg; 12,5 mMol) in 25 ml CHCl₃ tropft und anschließend noch 30 Minuten bei Raumtemperatur rührt. Separat davon gibt man eine Lösung von Mitomycin C (334 mg; 1 mMol) in 5 ml DMF zu einer Suspension von NaH (36 mg; 1,5 mMol) in 3 ml DMF. Die Lösung wird 20 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und auf -40 bis ungefähr -50⁰C gekühlt. Anschließend gibt man die Lösung des Ν,Ν-Dimethylchlormethylenxminiumchlorids (3 ml; 1,5 mMol) zu. Nach 10-minütigem Rühren bei -4 0⁰C gibt man weiteres Natriumhydrid (18 mg; 0,75 mMol) zu. Die Lösung wird dann eine Stunde bei -40°C gehalten und anschließend mit CH₃Cl₂ verdünnt und filtriert. Der nach dem Verdampfen des FiI-trats erhaltene Rückstand wird am Silicagel (10 % CH₃OH-CH₂Cl₂ als Eluierungsmittel) dünnschichtchromatographiert (TLC).

M/24 102

Extraktion der grünen Hauptzone ergibt 78 mg (43 %,bezogen auf wiedergewonnenes Mitomycin C) eines amorphen Feststoffes, dessen NMR-Spektrum und TLC-Verhalten mit demjenigen der Verbindung XIX, hergestellt gemäß Beispiel 8, identisch ist. Extraktion der purpurroten Zone ergibt 150 mg Mitomycin C.

Beispiel ]J3

7(l-Methyl-2-(H)-pyridinyliden)amino-9a-methoxymitosan

OCONH

(1) NaH

DHF

(2)

ca,.

r— OCONH₂

DCH.

M/24 10 2 -41?-

Zu einer Mischung von Mitomycin C (24 2 mg; 0,7 25 mMol) gibt man 4 ml DMF. Nach 15-minütigem Rühren gibt man bei Raumtemperatur 2-Chlor-l-methylpyridiniumjodid (370 mg; 1,45 mMol) zu. Die Lösung wird 1,5 Stunden gerührt und anschließend mit Ethylacetat (EtOAc) verdünnt und filtriert. Der nach dem Verdampfen des Filtrats erhaltene Rückstand wird an Silicagel (5 % CH₃OH-CH₂Cl₂ IQ als Eluierungsmittel) chromatographiert (TLC). Das Nebenprodukt (12 mg) ist Verbindung XIX (Beispiel 8). Das Hauptprodukt (75 mg) wird weiter mittels Silicagel-Dünnschichtchromatographie (10 % CH^OH-CH-Cl«) gereinigt, wobei man 6 mg (2 %) der Titelverbindung erhält.

NMR (Pyridin Ca₅, 5) 2.11 (s, 3H), 2.76 (bs, IH), 3.20 (m, IH), 3.26

(s, 3H), 3.49 (s, 3H), 3.63 (dd, IH, J « 13, 1 Hz), 4.01 (dd,, IH, J = 11,' Hz), 4.51 (d, IH, J « 13 Hz), 5.10 (t, IH, J « 10 Hz), 5.43 (dd, IH, \ J = 10, 4Hz), 5.99 (dt, IH, J « 9, 2 Hz), 6.09 (dd, IH, J «= 9, 1 Hz), !

6.95 (dd, IH, J « 9, 7, 2 Hz), 7.32 (dd, IH, J = 7, 1 Hz).

Beispiel

7- [ (Methylaminomethylen)amino]-ga-methoxymitosan

ft (1) NaH

^H2^N

(2) CH₃N=CHCa

M/24

OCONH₂

Natriumhydrid (12 mg; 0,5 mMol) gibt man unter einer Stickstoffatmosphäre zu einer Lösung von Mitomycin C (167 mg; 0,5 mMol) in 2 ml Hexamethylphosphoramid. Zu dieser Lösung gibt man N-Methylformimidoylchlorid [19 mg; 0,25 mMol, N.H. Bosshard und H. Zollinger, HeIv. Chim. Acta, 42, 1659 (1959)]. Die Lösung rührt man Minuten bei Raumtemperatur, anschließend gibt man NaH (6 mg, 0,25 mMol und N-MethylformimidoyJLchlorid (9,5 mg; 0,13 mMol) zu. Nach 6 - 12-stündigem Rühren

wird die Lösung mit Ethylacetat verdünnt und filtriert. Verdampfen des Lösungsmittels und anschließende chromatographische Reinigung des Rückstandes liefert die Titelverbindung.

Beispiel Verbindung XXI

9a-Methoxy-7-(1-morpholinomethylen)amxnomitosan

Zu in Chloroform (30 ml) suspendiertem Mitomycin C (600 mg; 1,8 mMol) gibt man 4-Diethoxymethylmorpholin (12,5 ml) und erhitzt die erhaltene Suspension 48 Stunden auf 58⁰C. Ein Dünnschichtchromatogramm (20 % MeOH in CH„C1_) nach 48 Stunden zeigt, daß die Reaktion noch nicht vollständig ist. Man engt die Lösung unter vermindertem Druck ein und gibt Wasser (100 ml) zu dem erhallt q tenen Sirup- Nach 20-minütigem Rühren wird die dunkelgrüne Lösung mit Methylenchlorid (5x50 ml) extrahiert, die vereinigten Extrakte werden getrocknet und zu einem Sirup eingeengt. Zu diesem Sirup gibt man in Methanol (20 ml) Aminodiphenylmethan (6,5 ml) und rührt die erhaltene Lösung 18 Stunden bei 30-35⁰C. Ein Dünnschichtchromatograph (20 % MeOH in CH-Cl₂) zeigt eine grüne Hauptzone und langsamer laufende, purpurrote Zone. Man engt die Lösung unter vermindertem Druck ein und reinigt den erhaltenen Sirup mittels Schnellchromatographie, _nn wobei man die Titelverbindung in Form eines dunkelgrünen, amorphen Feststoffes (75 mg; 10 %) erhält. Eine Analysenprobe erhält man durch Ausfällen aus einer Lösung in Methylenchlorid mit η-Hexan.

NMR (Pyridin ^, ξ) ι 2.16 (s, 3H), 2.76 (dd, IH, J=5 und IHz), 3.16 (d, IH, J=5 Hz), 3.24 (s, 3H), 3.28-3.80 (m, 10H), 4.02 (dd, IH, J=IO and 4Hz), 4.40 (d, IH, J=12Hz), 5.06 (t, IH, J=IOHz), 5.46 (dd, IH, J=IO und4Hz), 7.90 (s, IH)

IR(KBr) V_103x, can"¹: 3360, 3280, 2960, 2920, 1720, 1600, 1520,

1230, 1050

UV(Me(DH) λ - 384 urid234

IilcuC

Analyse für ^c ₂o^H25^N5°6^: CHN

Berechnet: :55,64 5,80 16,23

Gefunden: 55,07 5,55 15,88

M/24 10 2 · -Vf-vi

Beispiel IJi

Verbindung XXII;

7-( l-Pyrrolidinylmethylen)amino-9a-ineLhoxymitosan _fi /-OCCHH₂ (I)NaH

"η ■

U NH ! [Ji=CHClC

χ . λ OCONH₂

0 V--¹" ^NH

Eine 0,5-molare Lösung von Pyrrolidinylchlormethyleniminiumchlorid stellt man her, indem man Oxalylchlorid (3,17 g; 25 mMol) bei 0⁰C zu einer Lösung von 1-Formylpyrrolidin (2,48 g; 25 mMol) in 50 ml CHCl₃ tropft und anschließend 30 Minuten bei Raumtemperatur rührt. Separat davon gibt man Natriumhydrid (24 mg; 1 mMol) unter Stickstoff zu einer Lösung von Mitomycin C (334 mg; 1 mMol) in 3 ml 1-Formylpyrrolidin. Nach 20-minütigem Rühren bei Raumtemperatur kühlt man die Lösung auf -4 0 bis -50⁰C und gibt obige Iminiumsalzlösung zu (1 ml; 0,5 mMol). Zu dieser Mischung gibt man abwechselnd alle 10 Minuten 12 mg (0,5 mMol) NaH, 0,5 ml (0,25 mMol) der Iminiumsalzlösung, 6 mg (0,25 mMol) NaH, 0,25 ml (0,125 mMol) der Iminiumsalzlösung und schließlich 3 mg (0,125 mMol) NaH und 0,125 ml (Ό,063 mMol) der Iminiumsalzlösung. Nach 30-minütigem Rühren bei ~30°C erwärmt man die Mischung auf Raumtemperatur, verdünnt mit Ethylacetat

j » **ΐ» · **■ c-, ^b, ν!j O 1 Cj Cj Cl /\ _m

M/24 JO.' '

und iiJLrieit anorganische Salze ab. Der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand wird an

e- Silicagel dünnschichtchromatographiert. b

(10 % CH₃OH-CH₂Cl₂).

Die Extraktion der grünen Zone ergibt 120 mg (Ausbeute

15 %) der Titelverbindung.

NMR ( Pyridin O₅, S) 1.58 (m, 4H), 2.29 (s_r 3H), 2.73 (m, IH), 3.06-3.50 (m, 8H), 3.59 (dd, IH, J=13, IHz), 4.03 (dd, IH, J=IO, 4 Hz), 4.44 (d, IH, J=12 Hz), 5.05 (t, IH, J=IO Hz), 5.45 (dd, IH, J=IO, 4 Hz), 8.04 (s, IH)

IR (KBr) IZ_1113x, on"¹: 3420, 3280, 2960-2870, 1715, 1625, 1560, 1300, 1055.

Beispiel 20

7-[N-Methyl-N-(methylamino)methyl]amino-9a-methoxymitosan

(1) NaH

(2)

CH₃N=C-N

• * *■ H a . * α _{Λ lW β}. » C) iD \ \-J \J \J L·.

M/24 102

Man wiederholt das in Beispiel 17 beschriebene Verfahren, wobei man jedoch 9a-Methoxy-7-(N-methylamino)mitosan
[Matsui et al, The Journal of Antibiotics, XXI, 189-198 (1968)] anstelle von Mitomycin C in den gleichen Molverhältnissen verwendet.

Beispiel 21

.

Verbindung XXIII;

7-[l-(Dimethylamino)ethyliden]amino-N -[ 1-(dimethylamino)ethyliden]-9-methoxymitosan

CH₃

>=N Il J ^N(CH-)-

"nh

Man stellt eine Suspension von 600 mg (1,79 mMol) Mitomycin C in 2 ml Methanol her und behandelt mit 3 ml
N,N- DLmethylacetamiddimethylacetal. Die Suspension wird unter Rühren 2 Stunden auf 78-8O⁰C erhitzt. Ein Dünnschicht chromatogramm (CH₂Cl₂/Methanol 10:1) zeigt, daß

beinahe das ganze Mitomycin C abreagiert hat. Das Reaktionsprodukt bildet eine grüne Zone. Das Lösungsmittel
und flüchtige Materialien werden durch Einengen der Reaktionsmischung zur Trockene bei vermindertem Druck entfernt, wobei man einen Sirup erhält, der in Methylenchlorid gelöst und auf eine Silicagelsäure (40 g Silicagel) gegeben wird. Die Säule wird mit 1 % Methanol in Methylenchlorid (200 ml), 2 % Methanol in Methylenchlorid

M/24 102

-52-

3310992

(200 ml) und 5 % Methanol in Methylenchlorid (400 ml) entwickelt. Die die grüne Zone mit dem Produkt enthaltenen Fraktionen werden vereinigt und zu 110 mg (13 % Ausbeute) eines amorphen Feststoffes eingeengt. Dieses Material wird in 2 ml Aceton gelöst und durch Zugabe von Hexan aus der Lösung ausgefällt. Das Produkt wird abfiltriert.

Analyse für

Berechnet: Gefunden:

58	,46	6	,83	17,	70
58	,89	6	,89	17,	64

UV (MeOH) *_{max# nm}. ₂35, 364

IR (KBr)

cm

3440, 3295, 2925, 1770, 1660, 1620, 1580, 1550, 1300, 1055

Das H NMR-Spektrum in Pyridin d₅ steht in Einklang mit der Struktur der Titelverbindung

¹⁰

M/24 102 -S&&5

Beispiel 2_2

5 Verbindung XXIV:

7-[1-(Dimethylamino)ethylidenamino]-9a-methoxymitosan CH₃

:i=N

Eine Lösung von 100 mg (0,21 mMol) Verbindung XXIII in 2 ml Chloroform wird zu 2 ml Aminodiphenylmethan gegeben. Die Lösung erhitzt man mehrere Stunden auf 55-60⁰C. Zu

2Q diesem Zeitpunkt sind noch Spuren der Verbindung XXIII in der Reaktionsmischung vorhanden, die Lösung wird aber trotzdem aufgearbeitet und der Rückstand an neutralem Aluminiumoxid unter Verwendung eines Elutionsgradienten, nämlich zu Beginn mit Methylenchlorid und dann mit Methanol/Methylenchlorid 2,5:1, chromatographiert. Die

grüne Hauptzone wird in Form eines amorphen grünen Feststoffes isoliert, 25 mg (29,4 % Ausbeute). Dieses Material wird durch Auflösen in Aceton und Zugabe von Hexan zu der Acetonlösung bis zur Ausfällung gereinigt. Das Produkt wird abfiltriert und getrocknet.

Analyse für

Berechnet: Gefunden:

C	58	H	20	N	37
56,	71	6,	34	17,	23
55,	6,	15,

Μ/:-Μ

UV (Η-,0)

. nm: 374, 230 (Schulter)

IR

(KBr) _u , cm"¹: 3420, 3350, 3280, 2920/ 1710, 1610,

'max

1540, 1300, 1050

Q Das H NMR-Spektrum in Pyridin cL steht in Einklang mit der Struktur der Verbindung.

Beispiel Verbindung XXV

,10

7-[(l-Methyl-2-pyrrolidinyliden)amino]-N -[(l-methyl-2-pyrrolidinyliden)amino]-ga-methoxymitosan

2,2-Dirnethoxy-l-methylpyrrolidin [H. Eilingsfeld et al, Angew. Chem., 7_2« ⁸³⁶ (I960)], 1,5 g (10,3 mMol) und 280 mg Mitomycin C (0,34 mMol) in 20 ml Methanol erhitzt man fünf Stunden bei 55⁰C. Die Reaktionsmischung wird mittels Dünnschiehtchromatographie an Aluminiumoxidplatten unter Verwendung von Methylenchlorid/Methariol 97:3 als Laufmittel untersucht. Das Chromatogramm zeigt

33U;932

Μ/24 102 &56?

einen das Produkt darstellenden grünen Hauptfleck und einen kleineren blauen Fleck, der für das Ausgangsmaterial Mitomycin C steht. Das Lösungsmittel wird im

Vakuum bei 40⁰C abdestilliert und der Rückstand in Methylenchlorid gelöst und auf eine 4,5 cm-Säule mit 150 g Aluminiumoxid gegeben. Die Eluierung erfolgt mit 50 ml Methylenchlorid und anschließend mit 600 ml 1 %igem

,Q Methanol in Methylenchlorid. Die Hauptmenge der Verunreinigungen werden entfernt, es werden jedoch keine reinen Fraktionen isoliert. Die vereinigten Eluate werden durch Destillation bei 20⁰C zu einem öligen Rückstand konzentriert, der offensichtlich etwas 2,2-Dimethoxy-

. ρ- 1-methy!pyrrolidin enthält. Dieses Material wird erneut an einer Aluminiumoxidsäure (25 g Aluminiumoxid) unter Verwendung von 200 ml Methylenchlorid und danach unter Verwendung von 100 ml l%igem Methanol in Methylenchlorid chromatographxert. Dadurch wird das 2,2-Dimethoxy-l-

_on methy!pyrrolidin entfernt und man erhält eine Reihe von Fraktionen mit geringen Verunreinigungen und einige, gemäß TLC (ein grüner Fleck), reine Fraktionen mit dem gewünschten Produkt, Ausbeute 53 mg.

„j. Analyse für ΰ-^-Η-,-Ν-Ο,-. 0 ,85 H^O:

C HN

Berechnet: 58,66 6,64 16,4

Gefunden:. 58,63 6,46 16,50

UV (MeOH) *max. mn: 354, 239

IR (KBr)i/ , cm"¹: 3300, 3220, 2940, 1660, 1620, .1550, 1290, 1055

V* V Ψ

ο- » β

Μ/24 102

Das H NMR-Spektrum in Pyridin d₅ steht in Einklang mit der Struktur der Titelverbindung.

Beispiel 24

^-[(l-Methyl-2-pyrrolidinyliden)amino] ~9a-methoxymitosan

2Q Eine Lösung von 80 mg (0,16 mMol) Verbindung XXV und 0,48 ml n-Butylamin in 15 ml Chloroform erhitzt man 48 Stunden unter Rückfluß. Ein Dünnschichtchxomatogramm (Methanol/Methylenchlorid, 2 % an Aluminiumoxid) zeigt einen grünen Fleck sowie einen kleinen voranlaufenden blauen Fleck und einen kleinen nachhängenden roten Fleck, wobei sich diese Flecken dem Ausgangsmaterial nachschleppen. Die Reaktionslösung wird auf eine Säule gegeben, die 50 g Aluminiumoxid enthält und die mit 200 ml l%igem Methanol in Methylenchlorid und anschließend mit 400 ml 2%igem Methanol in Methylenchlorid eluiert wird. Diejenigen Fraktionen, die gemäß TLC einen einzigen grünen Bestandteil enthalten, werden vereinigt und zu 24 mg des gewünschten Produktes konzentriert.

M/24

-Jfi-

NMR (Py^idin d₅, S) 1.72 (q_r 2H), 2.04 (s, 3H) , 2.16 (q, 2H), 2.72 (be, IH), 2.84 <s, 3H), 3.12 (m, 3H), 3.24 (S, 3H), 3.60 (dd, IH, J=I₄, ₂ H₂), 4.00 (dd, IH, J=I₂, 6 H₂),

4.40 (d, IH, J=I₄ Hz), 5.04 (t, IH, J=14 H₂), 5.38 (dd, IH,

J-12, 6Hz), 7.48 (bs, 2H).

Beispiel Verbindung XXVI

7-[(Methoxyamino)methylen]amino-9a-methoxymitosan

OCONH.

CH₃ONH

CH

Man bereitet eine Lösung von 660 mg (1,7 mMol) Verbindung XIX in 10 ml Methanol und gibt dazu 170 mg (2,0 mMol) Methoxyamxnhydrochlorid. Man rührt die Lösung 3 Stunden bei 1O⁰C und 2 Stunden bei Raumtemperatur. Ein Dünnschichtchromatogramm ₂eigt nur eine Spur unumgesetzter Verbindung XIX. Beim Stehen bildet sich ein schwarzer Niederschlag, der isoliert und mit Aceton gewaschen wird und 380 mg des gewünschten Produktes (57 %) ergibt.

ο · tr e

■ ψ ·> tr

I «. i> » ι

M/24 102

Analyse für ^ci7^H21^N5°6

Berechnet: Gefunden:

52,	19	5	,40	17	,90
51,	64	5	,40	17	,83

UV (MeOH) ^Acnax. nm: 376, 242

IR (KBr)v_max, cm"¹: 3440, 3250, 3140, 2920, 1730, 1645,

1615, 1560, 1450, 1320, 1050

Das H NMR-Spektrum in Pyridin cL· steht in Einklang mit der Struktur der Titelverbindung oder deren Tautomeren am C-7

CH₃ON

SH

Beispiel Verbindung XXVII:

-[ (Benzyloxyamino)methylen]amino-9a-methoxymitosan

OCCNH.

C=N

C₆H₅CH₂ONH

M/24 102 j*9-

Man bereitet eine Lösung von 100 mg (0,26 mMol) Verbindung XIX in 2 ml Methanol, enthaltend 0,5 ml Triethylamin und gibt dazu 400 mg (2,5 mMol) O-Benzylhydroxylaminhydrochlorid. Man läßt 2,5 Stunden bei Raumtemperatur reagieren. Ein Dünnschichtchromatogramm (CH₂Cl₃/Methanol 10:1) zeig't eine orange-braune Hauptzone vor der der Verbindung XIX entsprechenden grünen Zone. Die Reaktionsmischung wird konzentriert und der Rückstand an Silicagel (20 g) unter Verwendung von CH₂C1₂/Methanol 20:1 als Eluierungsmittel einer Schnellchromatographie unterworfen. Man isoliert das gewünschte Produkt aus der braunen Zone in Form eines amorphen Feststoffes,80 mg (65,6 % Ausbeute )

Analyse für	23 25 5 6	C	,10	H	35	N	97
		59	,43	5,	48	14,	62
Berechnet:		58		5,		14,
Gefunden:

UV (MeOH) ^Amax. nm: 376, 245,

IR (KBr) 1/ , cm"¹: 3460, 3300, 2945, 2920, 1745, 1720, 1570, 1275, 1220, 1060

U -O

M/7 4 10?.

Das H NMR-Spektrum in Pyridin d^ steht in Einklang mit der Struktur der Titelverbindung oder deren Tautomeren am C-7

C₆H₅CH₂ON

10 mg an unumgesetzten Ausgangsmaterial, Verbindung XIX werden zurückgewonnen.

Beispiel Verbindung XXVIII;

7-(1,3-Dimethyl-2-imidazolinyliden)-9a-methöxymitosan

CH.

ι 3 ο

I ~ Il

CH₂OCNH₂

Man löst 0,34 g (1 mMol) Mitomycin C in 5 ml 1,3-Dimethyl-2-imidazolidon und gibt dazu bei Raumtemperatur 0,1 g Natriumhydrid (50 %ig in öl, 2,08 mMol). Die Mischung wird 20 Minuten bei Raumtemperatur gehalten und anschließend in einer Eiskochsalzmischung (-15⁰C) gekühlt. Die Mischung wird 10 Minuten bei dieser Temperatur gehalten und anschließend mit 0,65 g (2 mMol) 2-Chlor-1,3-dimethyl-4,5-dihydro-)3H)-imidazoliminiumchlorid versetzt. Man hält die Reaktionsmischung eine Stunde

<¥ * if Φ (S C -6 fc IQ « rl-

M/24 102 «

bei -15⁰C, verdünnt dann mit Äthylacetat und chromatographiert an einer Aluminiumoxidsäule. Die Säule wird mit Methylenchlorid und anschließend mit Methylenchlorid, das 2 % V/V Methanol enthält, eluiert. Die erhaltene grüne Fraktion enthält das gewünschte Produkt, das weiter mittels Chromatographie an Aluminiumoxid unter Verwendung von Methylenchlorid, das 10 % V/V Methanol enthält, gereinigt wird, Ausbeute 20 mg (5 %).

Analyse für C_0nH₀,N,O_K.1-1/4 H₀O: 20 Ib D D ί

Berechnet: 53,03

Gefunden: 52,68

NMR (Pyridin 'U₅₁S) 2.32 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.59 is, 3H), 2.74 (m, IH), 3.03-3.32 (m, 5H), 3.26 (s, 3H), 3.66 (bd, IH, J=12 Hz), 4.02 (dd, IH, J=Il, 4 Hz), 4.75 (d, IH, J=12 Hz), 5.09 (bt, IH, J=Il Hz), 5.44 (dd, IH, J=Il, 4 Hz).

IR (KBr) 3400, 3280, 2930, 1700, 1610, 1480, 1330, 1055 cm""¹.

UV (MeOH, ^λπαχ) 600, 375, 252 (sh) , 222 nm.

H	34	N	55
6,	21	18,	15
6,	18,

10

15

3313992

Beispiel 28 Verbindung XXIX:

7-[(1,3-Dimethyltetrahydropyrimidinyliden)amino-9amethoxymitosan

", NH

Man gibt Natriumhydrid (50%ige öldispersion; 200 mg; 4,2 mMol) unter Stickstoff zu einer Lösung von Mitomycin C (680 mg; 2 mMol) in 8 ml 1,3-Dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro(IH,3H)-2-pyrimidinon. Man hält die Mischung 20 Minuten bei Raumtemperatur und kühlt sie dann auf -25⁰C. Dazu gibt man 0,73 g (4 mMol) 2-Chlor-i,3-dimethyl-2,3,4,5-tetrahydro-pyrimidiniumchlorid und hält die Mischung 3 Stunden bei -25⁰C. Man verdünnt mit Ethylacetat und 2 ml Methanol. Die Mischung wird ohne weitere Behandlung auf eine trockene Alumxniumoxid-Chromatographiesäule gegeben und zuerst mit Methylenchlorid und anschließend mit 2 % V/V Methanol/Methylenchlorid eluiert, wobei man 0,35 g (39,5 % Ausbeute) des gewünschten Produktes erhält, Schmelzpunkt 138-140⁰C.

3U

Analyse für C₂₁H₃₇N₆O₅-H₂O:

Berechnet: ob

Gefunden:

C	65	6	H	18	N
54,	78	6	,33	18	,21
54,		,18	,21

M/24 102 -jft-

NMR (. Pyridin-d_5/ δ) 1.80 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.64 (s, 3H), 2.76 (m, IH), 2.90-3.30 (m, 5H), 3.26 (s, 3H), 3.74 (d_r IH-, J-12 Hz), 4.05 (dd, IH, J=Il, 4 Hz), 4.97 (d, IH, J=12 Hz), 5.09 (t, IH, J=Il Hz), 5.41 (dd, lH, J=Il, 4 Hz).

IR (KBr) 3430, 3280, 2930, 1710, 1570, 1480, 1450, 1350, 1050 cm"¹.

Beispiel 15

Verbindung XXX:

7-{Tetramethyldiaminomethylen)amino-9a-methoxymitosan 20

Man vermischt 425 mg (1,42 mMol) Mitomycin C mit 85,3 mg

einer 50%igen Natriumhydriddispersion in öl und gibt

4 ml Dimethylformamid zu. Die Mischung wird unter Argonatmosphäre 10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und anschließend auf -35⁰C gekühlt. Man gibt 289 mg (2,13 mMol) Tetramethylchlorformamidiniumchlorid zu und läßt die Mischung während zwei Stunden auf 5⁰C erwärmen. Man gibt zerstoßenes Trockeneis zu der Mischung um die Reaktion zu quenchen und destilliert das Lösungsmittel

15 20

* β 4

- tt * .

M/24 102

unter vermindertem Druck ab. Der Rückstand wird an einer AluminiumoxidsSuIe (100 g) unter Verwendung von 3 % V/V Methanol in Methylenchlorid als Eluierungsmittel chromatographiert. Dieses Material wird weiter durch Aluminiumoxiddünnschichtchromatographie (5 % V/V Methanol in Methylenchlorid) gereinigt, wobei man zwei Fraktionen von 17 mg und 76 mg erhält. Letztere wird aus Aceton-Äther kristallisiert und liefert das gewünschte Produkt, Schmelzpunkt 193-195°C (12 % Ausbeute).

Analyse für ^c ₂o^H28^N6°5^:

C HN

Berechnet: Gefunden:

55,	54	6,	53	19	,43
54,	92	6,	53	19	,29

NMR (Pyridin -^, 5) 2.26 (s_# 3H), 2.59 (s, 6H) , 2.68 (s, 6H), 2.75 (m, IH), 3.15 (d, IH), j-4 H₂), 3.26 (s, 3H), 3.65 (d, IH, j-12 H₂), 4.00 (dd, IH, J-Il, ₅ Hz), 4.62 (d, IH, J-12 Hz), 5.04 (t, IH, J=Il H₂), 4.38 (dd, IH, J=H, 5 H₂).

IR (KBr) 3430, 3280, 2920, 1710, 1610, 1495, 1335,

1055 cm"¹

UV (MeOH, Xm_ax) _{610# 380/}

35

ft β f*

t -ψ a »

V Τ

Μ/24 102 -££-

Beispiel 3J)

Verbindung XXXI;

7-(1-Piperidinylmethylen)amino-9a-methoxymitosan

-NH

Eine 0,5-molare Lösung von Piperidinylchlormethyleniminiumchlorid stellt man her, indem man Oxalylchlorid (380 mg; 3 mMol) zu 6 ml Chloroform, das 0,34 g (3 mMol) 1-Formylpiperidin enthält, tropft. Separat davon gibt man Natriumhydrid (50%ige öldispersion, 96 mg; 2 mMol) unter einer Stickstoffatmosphäre zu einer Lösung von Mitomycin C (334 mg; 1 mMol) in 3 ml 1-Formylpiperidin. Nach 15-minütigem Rühren bei Raumtemperatur wird die Lösung auf -25⁰C gekühlt und die Iminiumsalzlösung

(4 ml; 2 mMol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wird eine Stunde bei -25^PC gehalten und durch Zugabe von Trockeneis gequencht. Nach Zugabe von Methanol (1 ml) wird die Mischung an neutralem Aluminiumoxid absorbiert. Das Material wird auf eine Aluminiumoxidsäule (30 g) gegeben. Die Säule wird zuerst mit Methylenchlorid und anschließend mit 3 % V/V Methanol in Methylenchlorid eluiert, wobei man 360 mg (84 %) der Titelverbindung

„.. erhält. Schmelzpunkt 68-70"C.

Μ/24 102

ft * D «

Analyse für

1-1/4

Berechnet: Gefunden:

55	,80	6	,58	15	,49
55	,57	6	,21	15	,91

NMR ( Pyridin -Ci₅, S) 1.42 (bs, 6H) , 2.19 (s, 3H), 2.72 (m, IH), 3.06-3.30 (m, 3H), 3.25 {s, 3H), 3.48-3.70 (m, 2H), 3.57 (d, IH, J=13 Hz), 4.01 (dd, IH, J=Il, 4 Hz). 4.43 (d, IH, J=13 Hz), 5.02 (bt, IH, 3=11 Hz), 5.55 (dd, IH, J=Il, 4 Hz), 7.86 (s, IH).

IR (KBr) 3440, 3350, 3300, 2935, 2835, 1710, 1615, 1520, 1445, 1305, 1250, 1200, 1055 cm"¹.

UV (MeOH, ^Xmax) 590, 389, 262 (sh) , 234, 212 (sh) nm.

25 30 35

Beispiel 31

7-Hydroxy-N¹⁰-dimethylaminomethylen-9a-methoxymitosan

ψ 9 O

O * ■■ 9

M/24 10 2 rt

Zu einer Lösung von 7-Hydroxy-9a-methoxymitosan, (20 mg) in Methylenchlorid (3 ml) gibt man Dimethylformamiddimethylacetal (1 ml) und rührt die Lösung 30 Minuten bei ungefähr 65^CC. Der Reaktionsverlauf wird mittels TLC (10:1 CH₂CL₂/Me0H) verfolgt. Das Produkt wird durch Einengen der Mischung unter vermindertem Druck isoliert und der Rückstand an Silicagel chrömatographiert, wobei •j^q man die Titelverbindung erhält.

Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen gegenüber P-388 Murinleukämie

■yc Die Tabelle IV enthält Ergebnisse von Laborversuchen mit weiblichen CDF₁-Mäusen, denen intraperitoneal ein Tumorinoculum, bestehend aus 10 P-388 Murinleukämie-Äsciteszellen implantiert wurde und die mit verschiedenen Dosen einer Verbindung der Formel I oder Mitomycin C

2Q behandelt wurden. Die Verbindungen wurden intraperitoneal injiziert. Für jede Dosismenge verwendete man Gruppen von 6 Mäusen. Die Tiere wurden lediglich mit einer einzigen Dosis an zu testender Verbindung am ersten Tag behandelt. Parallel zu jeder Versuchsreihe behandelte man

₂g eine Gruppe von 10 Kontrolltieren mit Kochsalzlösung. Die mit Mitomycin C behandelten Gruppen dienten zu Vergleichszwecken. Die mittlere Überlebenszeit in-Tagen wurde für jede Gruppe an Mäusen über einen Zeitraum von 30 Tagen bestimmt und die Zahl an überlebenden Tieren am Ende der 30 Tage festgestellt. Die Mäuse wurden vor der Behandlung und erneut nach 6 Tagen gewogen. Der Gewichtsunterschied wurde als Maß für die Toxizität des Mittels verwendet. Man verwpndete Mäuse mit jeweils 20 g und ein Gewichtsverlust von bis zu ungefähr 2 g wurde als nicht zu hoch erachtet. Die Ergebnisse sind ausgedrückt in % T/C. Dies bedeutet das Verhältnis von mittlerer Überlebenszeit der behandelten Tiere zu mittlerer

B ϊ» -. Λ

ίο:ϊ

Überlebenszeit der mit Kochsalz behandelten Kontrolltiere mal 100. Die mit Kochsalz behandelten Kontrolltiere starben üblicherweise innerhalb von 9 Tagen. Der in der nachfolgenden Tabelle aufgeführte "maximale Effekt" ist ausgedrückt in % T/C, wobei die zu diesem Effekt führende Dosis angegeben ist. Die in Klammern angegebenen Zahlen wurden mit Mitomycin C als Vergleichsverbindung aus dem

jQ gleichen Versuch erhalten. Somit kann man die relative Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen im Vergleich zu Mitomycin C beurteilen. Ein Wert von 125, ausgedrückt in % T/C, wurde als Mindesteffekt erachtet. Die in der nachfolgenden Tabelle aufgeführte "minimale effektive

,γ Dosis" ist diejenige Dosis, die zu einem % T/C-Wert von ungefähr 125 führt. Die beiden in der Spalte "mittlere Gewichtsänderung" angegebenen Werte beziehen sich auf die mittlere Gewichtsänderung pro Maus bei der maximalen effektiven Dosis und bei der minimalen effektiven Dosis.

β- t» β τ- * ·« Λ

Μ/24 102

3310992

Tabelle IV

Inhibierung der P-388 Murin-Leukämie

Verbindung Nr. Maximaler Effekt Beispiel Nr. % T/C Dosis

Minimale	Mittlere
effektive	Gewichts-
Dosis	änderung

V	(1)	311	(244)	6.4	(3.2)	<0.2	-1.9, -0.2
		183	(272)	6.4	(3.2)	0.1	-1.0, +0.3
	U)	233	(244) .	6.4	(3.2)	<0.2	-0.1, +0.1
■mi	(2)	141	(224)	25.6	(3.2)	0.8	-1.2, +0.2
ΊΧ.	(4)	165	(224)	12.8	(3.2)	0.2	-0.7, +0.8
X	(5)	300	(224)	12.8	(3.2)	0.2	-2.1, keine
XIII	(12)	161	(211)	12.8	(3.2)	3.2	-0.3, +0.2
xrv	(3)	233	(272)	12.8	(3.2)	0.2	-3.8, +0.7
3CV -	(3)	144	(272)	25.6	(3.2)	6.4	-1.4, +0.2
	(6)	144	(272)	6.4	(3.2)	3.2	-0.4, -0.3
»SI	(7)	144	(272)	0.8	(3.2)	0.02	-0.2, -0.3
xvm	(7)	167	(272)	6.4 I	(3.2)	0.05	-1.0, +0.3
MX	(8)	333	(294)	I 1.6	(3.2)	4: 0.2	-1.9, +1.6
		200	(239)	0.8	(3.2)	<0.2	-2.7, -1.8

■α ο ν Φ *

am · ·

M/24 102

3313992

lnhibierung der P-388 Murin-Leukämie (Fortsetzung)

Verbindung Nr. Maximaler Effekt

Beispiel Nr.

Dosis

Minimale	Mittlere
effektive	Gewichts
Dosis	änderung

XX	(9)	(28)	333	(294)	3.2	(3.2)	0	.2	-2.7, +3.2
XXI	(18)	189	(183)	1.6	(3.2)	1	.025	-0.5, -0.1
XXXI	(30)	150	(144)	6.4	(4.8)	«£1	.6	-1.6, -2.3
		267	(267)	3.2	(4.8)		.6	-2.3, -1.7
XXX	(29)	206	(263)	3.2	(4.8)		.2	-1.7, -1.7
XXVI	(25)	183	(239).	0.4	(3.2)	0.	.025	-3.1, -2.3
xxvn	(26)	144	(239)	0.2	(3.2)	0.	.025	-1.3, -0.9
xxni	(21)	194	(319)	12.8	(3.2)		2	-1.2, +0.2
XXIV	(22)	313	(319)	6.4	(3.2)	0.	1	-2.8, +0.3
XXV	(23)	188	(331)	25.6	(4.8)	3.	4	-2.2, +0.1
XXVIH (27)	119	(313)	3.2	(3.2)	0.	2	+2.2, +2.2
XXIX	331	(319)	25.6	(3.2)	4	-2.8, +0.6

mg/kg Körpergewicht

2).

in Gramm pro Maus, an den Tagen 1-6, bei der maximalen und minimalen· effektiven Dosis

* » ft (t tfl-U '^

4t 0 φ D » Λ β β.

« (V Ο'» Ä 9 * t? Α«

M/24 102

Die Verbindungen XIX und XX sind von ganz besonderem Interesse, da ihre Aktivität sowohl in bezug auf den maximalen Effekt als auch in bezug auf die "Milligram-Aktivität" (diejenige Dosierung, die zu äquivalenten Effekten führen) deutlich über der von Mytomycin C liegt. Beide Verbindungen stellen Verbindungen der Formel I dar, worin A für eine Amidinogruppe und B für NH„ steht.

Q Anders ausgedrückt, diese Verbindungen sind Mitomycin C-Deriva
Formel

Derivate, die am N durch einen Aminomethylenrest der

R²

R⁵ITN-C=

2 3 4

substituiert sind, worin R , R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen.

2Q Die erfindungsgemäßen bis-Amidinoverbindungen der Formel I, worin A und B eine Amidinogruppe bedeuten, sind ebenfalls wirksame AntitumormitteX. Dazu wird auf obige Tabelle verwiesen, in der die Verbindungen V, VI, VII, IX, X und XIV Bis-Amidinover.bindungen darstellen.

Die Tabelle V enthält Ergebnisse von Antitumortests unter Verwendung von in Mäusen herangezogenen B16 Melanomen. Man benützte BDF₁-MaUSe, die intraperitoneal mit dem Tumorimplantant inoculiert wurden und beobachtete sie über einen Zeitraum von 60 Tagen. Für jede Dosierung verwendete man Gruppen von 10 Mäusen und bestimmte die mittlere Überlebenszeit für jede Gruppe. Die mittlere Überlebenszeit der Kontrolltiere, welche in der gleichen Weise wie die Versuchstiere inoculiert und mit dem Injektionsträger, aber mit keinem Arzneimittel behandelt wurden, betrug 21 Tage. Die Überlebenszeit relativ zu derjenigen

Μ/24 102

der Kontrolltiere (% T/C) wurde als Maß für die Wirksamkeit verwendet. Die maximale effektive Dosis und die minimale effektive Dosis für jede Testverbindung wurde bestimmt. Die minimale effektive Dosis wurde als diejenige Dosis definiert, die zu einem % T/C-Wert von 125 führt. Für jede Dosishöhe wurde den Versuchstieren die zu testende Verbindung an den Tagen 1, 5 und 9 intrape- IQ ritoneal verabreicht. Die mittlere Gewichtsänderung am angegebenen Tag bei der maximalen effektiven Dosis und bei der minimalen effektiven Dosis wurde als Maß für die Toxizität verwendet. Ein Gewichtsverlust von 2 g für ein 20 g Maus wurde als nicht zu hoch erachtet.

Tabelle V

Inhibierung des B16 Melanoms 20

Verbindung Nr. Maximaler Effekt Mittlere Ge-

(Beispiel Nr.) % T/C Dosis Minimale wichtsände-

Effektive Dosis rung

V (1) >298 (256)* 0.8 (3.2)* <10.2 +0.5, -0.2 (5) \

X (5) >295 (198) 2.0 (3.0) <2.0 -0.4, -0.4 (6)

XXI (18) > 295 (198) 0.4 (3.0) < 0.2 -0.2, -1.8 (6)

ι XX (9) 262(198) 0.8(3.0) < 0.2 -2.6,-1.6(6)

1 XIX (8) >235 (165) 1.2 (3.0) < 0.5 40.6, 40.8 (5)

*) Die Werte in Klammern sind Vergleichswerte für Mitomycin C

t? Q ύ

* 9 04e ΑΦ Aft 4(C

OC

M/24 102

Die Verbindung XXX (Beispiel 29) und die Verbindung XXIX (Beispiel 28) wurden gegen das B16-Murin-Melanom getestet, wobei der Tumor subeutan implantiert wurde und die Arzneimittelbehandlung intravenös erfolgte. Das Behandlungsschema und die Bewertung der Überlebenszeit (über einen Zeitraum von 40 Tagen) erfolgten wie oben. Die Gewichtsänderung am 12. Tag wurde bestimmt. Die maximale effek-

^Q tive Dosis der Verbindung XXX betrug 1 mg/kg, was zu

einem % T/C-Wert von 156 und zu einer Gewichtszunahme von I₅5 g führte. Man verwendete Gruppen von sechs Tieren, wobei bei dieser Dosis drei Tiere den gesamten Zeitraum von 40 Tagen überlebten. Dieminimale effektive

2g Dosis betrüg 0„25 mg/kg» Bei dieser Dosis betrug die Gewichtsänderung nach 12 Tagen 1,0 g. Die maximale effektive Dosis der Verbindung XXIX war 8 mg/kg bei einem % T/C-Wert von 177 und einer Gewichtsänderung von -0,6. Die minimale effektive Dosis betrug 4 mg/kg bei einer

2Q Gewichtsänderung von +0,8. Im gleichen Versuch war die maximale effektive Dosis von Mitomycin C 3 mg/kg bei einem % T/C-Wert von 195 und einer Gewichtsänderung von -0/5. Die minimale effektive Dosis für Mitomycin C wurde nicht bestimmt.

Anhand von toxikologischen Versuchen unter Verwendung von Gruppen von fünf männlichen BDF.-Mäusen pro Dosis denen eine einzige intraperitoneale Dosis an Verbindung XIX verabreicht wurde, war bei der optimal wirksamen

ο« Dosis dieser Verbindung (1,6 mg/kg i.p.) keine signifikante Reduktion der Lymphocytenzahl zu beobachten. Bei dieser Dosis war keine signifikante Erhöhung des Serumharnstoffes (blood urea nitogen; BUN) oder der Serum-Glutamylphosphortransferase (SGPT) zu beobachten. Dies

g₅ bedeutet, daß die getestete Verbindung keine nachteiligen Auswirkungen auf die Wieren- oder Leberfunktionen oder auf die Suppression d©r Lymphocytenaktiv.itat hat.

Μ/24 1

Im Hinblick auf die in Tierversuchen beobachtete ausgezeichnete Antitumoraktxvität und die im Vergleich zu _o Mitomycin C verringerte Toxizitat sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Inhibierung von Tumoren bei Säugetieren brauchbar. Zu diesem Zweck werden sie einem Säugetier mit einem Tumor in einer im wesentlichen nichttoxischen, gegen den Tumor wirksamen Dosis verabreicht.

Claims (1)

1. « * nt»

   B O ·

   331Π992

   -Χ~ München, 3. Juni 1983 M/24

   Patentansprüche

   1.)Amidinverbindungen der allgemeinen Formel I

   CH₂OC-B

   N-R

   (I)

   worin

   A für Amino, Methoxy, Hydroxy, (l-Niedrigalkyl-2(IH) pyridinyliden)amino oder einen Rest der Formel

   34

   -⁵R^

   H R² R²R⁵

   3 I I 3 I I

   R-N-C=N-, R-N=C-N-,

   R I

   R²R⁵ I

   I H₂N-C=N-, HN=C-N-,

   oder

   N—R^

   R⁷

   steht,

   ΙΟ.¹ ~2~

   B für Amino oder die Amidinogruppe der Formel

   B²

   3 4 I

   R R N-C=N-,

   steht, wobei wenigstens einer der Reste A und B nicht für Amino, Methoxy oder Hydroxy steht,

   η für 0, 1, 2 oder 3 steht,

   R für Wasserstoff, Niedrigalkyl, Niedrigalkanoyl, Benzoyl oder substituiertes Benzoyl steht, wobei der Substituent Niedrigalkyl, Niedrigalkoxy,

   Halogen, Amino oder Nitro ist,

   2
   R für Wasserstoff, Niedrigalkyl, Phenyl, Niedrigalkylphenyl, Niedrigalkoxyplienyl, Halophenyl, Aminophenyl, Nitrophenyl, Thienyl, Furyl, Cyano, Di-

   niedrigalkylamino, Niedrigalkoxy oder Niedrigalkylthio steht,

   R für Niedrigalkyl oder Niedrigalkoxy steht, oder

   4
   zusammen mit R und dem Stickstoffatom an das sie gebunden sind für Pyrrolidin, 2- oder 3-Niedrigalkylpyrrolidin. Piperidin,.2-,3- oder 4-Niedrigalkylpiperidin, 2,6-Diniedrigalkylpiperidin, Piperazin, 4-substituiertes Piperazin (wobei der 4-Substituent Alkyl oder Carbalkoxy mit jeweils

   1 bis 8 Kohlenstoffatomen, Phenyl, Methylphenyl, Methoxyphenyl, Halogenphenyl, Nitrophenyl oder Benzyl ist), Azepin, 2-,3-,4- oder 5-Niedrigalkylazepin, Morpholin Thiomorpholin, Thiomorpholin-1-

   oxid oder Thiomorpholin-1,1-dioxid steht, 35

   : : I -·.::":·:" . ": 33V3992

   Μ/24 102 -3-

   3

   R für Niedrigalkyl steht oder zusammen mit R und dem Stickstoffatom an das sie gebunden sind für

   g Pyrrolidin, 2- oder 3-Niedrigalkylpyrrölidin, Piperidin, 2-, 3- oder 4-Niedrigalkylpiperidin, 2,6-Diniedrigalkylpiperidin,Piperazin, 4-substituiertes Piperazin (wobei der 4-Substituent für Alkyl oder Carbalkoxy mit jeweils 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, ,Q Phenyl, Methylphenyl, Methoxyphenyl, Halogenphenyl, Nitrophenyl oder Benzyl steht), Azepin, 2-,3-,4- oder 5-Niedrigalkylazepin, Morpholin, Thiomorpholin, Thiomorpholin-1-oxid oder Thiomorpholin-1,1-dioxid steht,

   ,p. R von tertiär-Alkyl verschiedenes C₁ __R-Alkyl, C₁ .j „-Alkenyl, C₁ _, „-Alkinyl, C_{1 1R} Halogenalkyl, C₁_₁g-Hydroxyalkyl, C₄ „-Cycloalkyl, Aryl oder Niedrigaralkyl mit jeweils bis zu 12 Kohlenstoffatomen oder einen heteroalicyclischen oder heteroaromatischen

   __ Rest mit 3 bis 8 Ringatomen, von denen wenigstens zwei Kohlenstoffatome sind, bedeutet,

   9
   R und R unabhängig voneinander für H oder Niedrigalkyl stehen,

   wobei

   die Niedrigalkyl-, Niedrigalkanoyl und Niedrigalkoxygruppen 1 bis 6 Kohlenstoffatome umfassen.

   2. Verbindungen nach Anspruch 1, worin A und B jeweils für die Amidinogruppe der allgemeinen Formel

   R²

   34

   R^JR N-C=N-

   stehen.

   tr * *

   β 9 * ο

   ♦ * ■* ·

   Μ/24 ]()2 -4-

   1 2

   3. Verbindung nach Anspruch 2, worin R und R für

   3 4
   Wasserstoff und R und R für Methyl stehen.

   4. 7-[(Dimethylamino)methylen]amino-N . -(dimethylamino) methylen-ga-methoxymitosan.

   5. 7-[(Dimethylamino)methylen]amino-N -(dimethylamino) , _η methylen-N -formyl-Sa-methoxymitosan.

   6. 7-[(DiisopropylaminoJmethylen]amino-N -(diisopropylamino )methylen-9a-methoxymitosan.

   _n,. 7. 7-[ (Dimethylamino Jmethylen]amino-N -(dimethylamino)

   la
   methylen-9a-methoxy-N -methylmitosan.

   8. Verbindung nach Anspruch 2, worin R und R für Was-

   3 4
   serstoff stehen und R und R zusammen mit dem Stick-

   _ Stoffatom an das sie gebunden sind einen Piperidinrest bilden.

   9. N -Formyl-9a-methoxy-7-( l-piperidinyl-methylen)amino-N -(l-piperidinylmethylen)mitosan.

   · ₁₀

   10. 9a-Methoxy-7-(1-piperidinylmethylen)-amino-N -(1-

   pi peridinylmethylen)mitosan.

   1 2

   11. Verbindung nach Anspruch 2, worin R und R für

   3 4 Wc sserstoff stehen und R und R zusammen mit dem

   St ickstoffatom an das sie gebunden sind einen Mcrpholinrest bilden.

   12. 9a-Methoxy-7-(1-morpholinylmethylen)-amino-N -(1-

   morpholino-methylen)mitosan.
   35

   PP a * « a ·» ■

   ft Jf β H η* *

   } 331 399Z

   M/24 102 -5-

   13, Verbindungen nach Anspruch 1, worin A für Amino und B für den Amidinorest der allgemeinen Formel

   R²

   3 4 R R N-C=N-

   stehen.

   3

   14. Verbindungen nach Anspruch 13, worin R und R für

   Methyl stehen.

   15. 7-Amino-N -dimethylaminomethylen-9a-methoxy-N methylmitosan.

   16. 7-Amino-N -dimethylaminomethylen-ga-methoxymitosan,

   2Q 17. Verbindungen nach Anspruch 1, worin A für Methoxy und B für den Amidinorest der allgemeinen Formel

   R²

   I R³R⁴N-C=N-

   stehen.

   3

   18. Verbindungen nach Anspruch 17, worin R und R

   für Methyl stehen.

   19. 7,9a-Dimethoxy-N -dimethylamino-methylenmitosan,

   20. 7,9a-Dimethoxy-N -dimethylaminomethylen-N formylmitosan.

   M/24 102 -6-

   21. Verbindungen nach Anspruch 1, worin A für eine der Amidinogruppen und B für Amino stehen.

   22. Verbindungen nach Anspruch 21, worin A für die

   Amidinogruppe der allgemeinen Formel

   R²

   RRN -C=N- steht,
   wobei R und R Methyl bedeuten, ^g 23. 7-(Dimethylaminomethylen)amino-9a-methoxymitosan.

   24. 7-(Dimethylciminomethylen)amino-9a-methoxy-N ^amethylmitoscin.

   2Q 25. 7-( l-Methyl-2(H)-pyridinyliden)amino-9a-methoxymitosan.

   26. 9a-Methoxy-7-(1-morpholinmethylen)-aminomitosan.

   27. 7-(1-Pyrrolidinylmethylen)amino-9a-methoxymitosan.

   28. 7-[2-Benzylthioethyl]amino-9a-methoxymitosan.

   29. 7-[l-(Dimethylamxno)ethyliden]amino-N -tl-(dimethylamino)ethyliden]-9a-methoxymitosan.

   30. 7-11- (Dimethylamino)ethylidenamino] -^a-methoxymitosan.

   si 4 * ώ '« ι

   3 31 ii 9

   Μ/24 102 -7-

   31. 7-[(l-Methyl-2-pyrrolidinyliden)amino]-N¹⁰-

   [(l-methyl-2-pyrrolidinyliden)amino]-9a-methoxymitos an.

   32. 7-[(l-Methyl-2-pyrrolidinyliden)amino]-9a-methoxyrnitosan.

   Q 33. 7-[(Methoxyamino)methylen]amino-9a-metboxymitosan.

   34, 7-[ (Benzyloxyamino)methylen ]ainino-9a-methoxymii.osan.

   35. 7-(l,3-Dimethyl-2-imidazolidyliden)~9a-methoxymito-

   san.

   36. 7-[(l, 3-Dimethyltetrahydropyrimidinyliden)-amino-9a-methoxymitosan.

   37. 7-(Tetramethyldiaminomethylen )amino-9a-methoxymitos an.

   38. 7- (1-Piperidinylmethylen)amino-9a-methoxymitosan.

   39. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 38, dadurch gekennzeichnet, daß man Mitomycin C, Mitomycin A oder ein N ^a-Niedrigalkylderivat dieser Verbindungen mit einem Amidacetal der allgemeinen Formel ^R

   3 1

   N-C-OR⁸

   OR⁸
   35

   ι qqqo

   I VJ J yj /

   M/24 102 -8-

   2 3 4
   worin R , R und R die in Anspruch 1 angegebenen

   Bedeutungen besitzen und die Reste R unabhängig voneinander Niedrigalkyl oder Cycloalkyl mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen bedeuten oder zusammen einen Alkylenrest bilden, wobei zusammen mit den Sauerstoffatomen, an die sie gebunden sind und dem dazwischenliegenden Kohlenstoffatom ein Ring mit

   2Q 5 oder 6 Ringatomen gebildet wird, in Lösung in einem wasserfreien, verträglichen, flüssigen, organischen Reaktionsmedium bei 40-65⁰C bis zur Bildung eines Reaktionsproduktes, in dem die Reste B oder A und B in der Formel I nach Anspruch 1

   -,j- für die Amidinogruppe der allgemeinen Formel

   R²

   I
   R³R⁴N-C=N-

   stehen » umsetzt.

   40. Verfahren nach Anspruch 39, dadurch gekennzeichnet, daß man als flüssiges organisches Reaktionsmedium

   nc einen halogenierten,niedrigaliphatischen Kohlenwasserstoff verwendet und mehr als zwei Moläquivalente des Amidacetals, bezogen auf Mitomycin C, einsetzt, wobei eine Verbindung gebildet wird, in der A und B die erwähnte Amidinogruppe bedeuten.

   41. Verfahren nach Anspruch 40, dadurch gekennzeichnet,

   daß man als Reaktionsmedium Chloroform verwendet.

   42. Verfahren nach Anspruch 40, dadurch gekennzeichnet, daß man als Reeiktionsmedium eine Mischung aus einem halogenierten, niedrigaliphatischen Kohlenwasserstoff und einem niedrigen Alkanol verwendet.

   ■>»

   } I 'UD "OO 33TJJ992

   M/24 102 -9-

   j 43. Verfahren nach Anspruch 42, dadurch gekennzeichnet, daß man als Reaktionsmedium eine Mischung aus ChLoroform und Methanol verwendet.

   44. Verfahren zur Herstellung eines 7-(Substituiertes Amino-9a-methoxymitosans, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung nach Anspruch 1, worin B oder A und B eine Amidinogruppe der allgemeinen Formel

   ^R

   i
   R³R⁴N-C=N-

   bedeutet,

   2 3 4
   wobei R , R und R die in Anspruch 1 angegebenen

   -^g Bedeutungen besitzen, mit einem aliphatischen, alicyclischen, aromatischen, heteroaromatischen oder heteroalicyclischen primären Amin, in dem das Kohlenstoffatom, an das die Aminogruppe gebunden ist, wenigstens ein Wasserstoffatom und weniger als zwei Arylgruppen aufweist, in einem wasserfreien, verträglichen, flüssigen organischen Reaktionsmedium bei einer Temperatur von ungefähr -15⁰C bis +50⁰C umsetzt.

   45. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, worin A für die Amidinogruppe der Formel

   R²

   R³R⁴N-C=N- und B für Amino stehen,

   2 3 4

   nn wobei R , R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung nach Anspruch 1, worin A und B für eine Amidinogruppe der allgemeinen Formel

   R²

   R³R⁴N-C=N-

   stehen.

   ■* # U «ti 1> * β' · "5 <ί

   ; 33Ί9992

   Μ/24 102 -10-

   mit mehr als einem Moläquivalent Aminodiphenylmethan, Trifluorethylamin oder tert.-Butylamin bei 20-60⁰C bis zur Bildung einer Verbindung nach Anspruch 1, worin A für obige Amidinogruppe und B für Amino stehen, umsetzt.

   46. Verfahren nach Anspruch 44 oder 45, dadurch gekennzeichnet, daß man als wasserfreies, verträgliches, flüssiges organisches Reaktionsmedium Methanol, Chloroform, Methylenchlorid oder ein anderes NLedrxghalogenalkan verwendet.

   ,_e 47. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Ib

   Anspruch 1, worin B für -NH_ und A für (1-Niedrigalkyl-2(IH)-pyridinyliden)amino oder einen Rest der Formel

   2 2 2

   O₀ ^R . ^{H R R}

   I Il I

   R³R⁴N-C=N-, R³N-C=N-, H₂N-C=N- ,

   oder

   stehen, wcbei R , R , R , R , R , R und η die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Lösung von

   Mitomycin C in Dimethylformamid (oder in einem 35

   anderen kompatiblen Lösungsmittel) mit 1,0 bis 1,5 Moläquivalenten Natriumhydrid umsetzt, wobei man

   * Vt-

   ·· :ΓΊ ·:':.·: 331Π992

   a » ^ * ft 't ι?

   M/24 102 -11-

   das Mitomycin C in anionischer Form erhält, und diese anionische Form mit einem elektrophilen Reagenz, das in der Lage ist, obige Amidinogruppe zu bilden, ausgewählt unter einem Iminoäther, Iminothioäther, Halogenmethyleniminiumhalogenid und Iminohalogenidsalz, zur Reaktion bringt.

   48. Pharmazeutisches Mittel, enthaltend wenigstens eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 38, gegebenenfalls in Kombination mit üblichen pharmazeutischen Trägern und Zusatzstoffen.