DE2322576A1

DE2322576A1 - Antibiotische derivate und verfahren zu deren herstellung

Info

Publication number: DE2322576A1
Application number: DE2322576A
Authority: DE
Inventors: Takayuki Naito; Susumu Nakagawa; Soichiro Toda
Original assignee: Bristol Myers Co
Current assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1972-05-04
Filing date: 1973-05-04
Publication date: 1973-11-22
Also published as: GB1400676A; FR2183236B1; DE2322576C2; BE799139A; JPS5632999B2; JPS4985048A; FR2183236A1

Description

PATENTANWÄLTE

PROF. DR. DR. J. REITSTÖTTER ? ^ ? ? ¹J 7 R

DR.-ING. WOLFRAM BUNTE ΔΟΔΔΌ Ι Ό DR. KARL GEORG LÖSCH D-800O MÜNCHEN 13, BAUERSTRASSE 22, POSTFACH 78Ο ■ FERNRUF (OSl!) 37 ββ 83 ■ TELEX S21S20S ISAR d PATENTANMELDUNG

München, den 4.Mai 1973 M/12 536

BRISTOL-MYERS COMPANY 345, Park Avenue, New York, N.Y.

Antibiotische Derivate und Verfahren zu deren Herstellung

Die vorliegende Erfindung betrifft Paromomycinderivate- mit wesentlich erhöhter antibakterieller Aktivität. Die vorliegende Erfindung betrifft insbesondere halbsynthetische, 1-substituierte Derivate von Paromomycin, welche durch Acylieren der 1-Aminofunktion von Paromomycin mit einem γ-Amino-a-hydroxybutyryl-, ß-Amino-a-hydroxypropionyl- oder /-Amino-a-hydroxyvalerylrest hergestellt werden.

Stand der Technik

(A) Paromomycin ist ein Antibiotikum, das in der USA-Patentschrift 2 916 385 beschrieben ist. Diese Patentschrift beschreibt die Herstellung und Struktur von Parpmomycin und besagt, daß der bei der Fermentierung verwendete Organismus in der

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Culture Collection des Fermentation Laboratory, Northern -Utilization Research and Development Division, U.S. Department I of Agriculture, Peoria, Illinois, unter NRRL 2455 deponiert ist.

(B) Darüber hinaus ist die Verbindung in der 8. Auflage des

■ Merck Index auf Seite 784 beschrieben.

Die vorliegende Erfindung betrifft somit semisynthetische Derivate von Paromomycin, wobei diese Derivate als l-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl]-paromomycin, l-[L-(-)- /~-Amino-ahydroxy-valeryl]-paromomycin oder l-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]-paromomycin folgender Formel

NE-»R

worin R die Bedeutungen L-(-)-Y-amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)- 6 »Amino-a-hydroxy- _; valeryl besitzt, oder als nicht-toxische,, pharmazeutisch ver- ! trägliche Säureadditionssalze davon bezeichnet werden.

Μ/α.2 536

•Die bei der Beschreibung der vorliegenden Erfindung verwendete Bezeichnung "nicht-toxische, pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze" soll Mono-, Di-, Tetra- oder Pentasalze, die durch Umsetzen von 1 Molekül Verbindung IV mit 1 bis 5 Mol einer nicht-toxischen pharmazeutisch verträglichen Säure, gebildet sind, bezeichnen. Zu diesen Säuren gehören Essigsäure, Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Maleinsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Bromwasserstoffsäure, Ascorbinsäure, Apfelsäure und Zitronensäure und die üblicherweise zur Salzbildung bei Amin Enthaltenden Pharmazeutika verwendeten Säuren.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können gemäß folgendem Schema hergestellt werden:

(1) Paromomycin

N-(Benzyloxycarbonyloxy)-succinimid

II

- 3 303847/1176

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ι N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-y-

(2) Verbindung II benzyloxycarbonylamino-q-hydroxybuttersaure

CH₂OH

CH₂-NH-C-O-CH₂-CgE-

III"

(3) Verbindung III

H₂/Pd/C

NH₂

Il ?
NH-C-C-CH₂-CH₂-NH₂

OH
IVa.

3Ö98T77T1T6

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Eine "bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist die Verbindung der Formel V

CH₂OH

HO

CH₂FHR

1 "

worin R Wasserstoff oder CgH^CH₂OC- und R Wasserstoff,

L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-0-Amino-oc-hydroxyvaleryl bedeuten, wobei

-ι ρ

wenigsten einer der Reste R oder R nicht Wasserstoff bedeuten darf, oder ein nichttoxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.

Eine höchst bevorzugte Ausführungsform ist die Verbindung der

-ι ρ

Formel V, worin R Wasserstoff und R L-(-)-Y-Amino-a-hydroxy-, butyryl bedeuten oder ein nichttoxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.

ι Ν

Eine höchst bevorzugte Ausführungsform.ist die Verbindung der Formel V, worin R¹ Wasserstoff und R L-(-)-ß-Amino-a- ; hydroxypropionyl bedeuten, oder ein nicht-toxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.

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Eine höchst bevorzugte Ausführungsform, ist die Verbindung der Formel V, worin R Wasserstoff und R L-(-)- a -Amino-αϊ hydroxyvaleryl bedeuten,· oder ein nicht-toxisches, pharmazeutisch ¹ verträgliches Säureadditionssalz davon.

j Andere höchst bevorzugte Ausführungsformen sind die Sulfat-, ! Hydrochlorid-, Acetat-, Maleat-, Citrat-, Ascorbat-, Mandelat-, J Nitrat- oder Phosphatsalze der Verbindungen der Formel V.

; Weitere höchst bevorzugte Ausführungsformen sind die Monosulfat- und Disulfatsalze einer Verbindung der Formel V.

ι Die vorliegende Erfindung schafft ein Verfahren zur Herstellung ^: von Verbindungen der Formel IV, '

worin R die Bedeutungen L-(-)-Y-Amino-a-liydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl _Od_er L-(-)r- /"-Amino-a-hydroxyvaleryl bedeutet, oder von nicht-toxischen pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzen davon, das folgende aufeinanderfolgende Stufen umfaßt:

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(A) Blockieren der Aminogruppe am 6^fl'-Kohlenstoffatom von Paromomycin mit einer herkömmlichen Aminoschutzgruppe
Y, wobei sich eine Verbindung der Formel II

CH₂OH

CH₂NH-Y

ergibt, ^;

(B) Acylieren der Aminogruppe in 1-Stellung der Verbindung der ^:

Formel II mit dem L-(-)-Isomeren eines Acylierungsmittels der '.

Formel · ;

OH j

¥ - NH - (CH₂)_n - CH - COOH j

worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 einschließlich und W eine
herkömmliche Aminoschutzgruppe bedeuten, oder mit dem funktioneilen Äquivalent davon als ein Acylierungsmittel für ein
primäres Amin, wobei sich eine Verbindung der Formel III

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CH₂OH

CH₂-NH-Y

III

ergibt, worin Y, ¥ und η die oben angegebenen Bedeutungen ι besitzen, und ι

(C) Entfernen der Aminoschutzgruppen Y und W durch an sich j bekannte Verfahren, wobei sich eine Verbindung der Formel I ; ergibt und, gegebenenfalls anschließende Umwandlung des
obigen Produkts auf an sich bekannte Weise in ein nicht-toxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon. ^:

Eine bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist
das Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel IV,
worin R die Bedeutungen L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl,
L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-tf-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt, oder von nicht-toxischen pharmazeutisch verträglichen Säureadditionsalzen davon, das folgende aufeinanerfolgende Stufen umfaßt:

(A) Umsetzung von Paromomycin mit einem Acylierungsmittel
ausgewählt unter Verbindungen der Formeln"

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TVi

CH₂-O-C-O-N

H₂-O-C-X

CHj-C-O-C-N

X-CK₂-C-X

Il

X-CHp-C-OH, (oder einer Carbodiimid-Additionsverbindung davon) oder //\ 0

Il

C-CH₂-CH₂-CO₂H (oder einer Carbodiimid-Additions- ^:

verbindung davon), worin R und R , die gleich oder verschieden: sein können, Wasserstoff, Fluor, Chlor, Brom, NO₂, OH, Niedrig- ^: alkyl oder Niedrigalkoxy bedeuten, X Chlor, Brom oder Jod bedeutet, oder mit einem fjunktionellen Äquivalent als Reaktionsteilnehmer, in einem Verhältnis von 1 Mol oder weniger Acylierungsmittel pro Mol Paromomycin in einem Lösungsmittel, vorzugsweise ausgewählt unter Dimethylformamid, Dimethy!acetamid, Tetrahydrofuran, Dioxan, 1,2-Dimethoxyäthan, Methanol, Äthanol, Wasser, Aceton, Pyridin, N- Niedrigalkylpiperidin oder Mischungen davon, aber bevorzugt einer 1 : 1 Mischung Wasser-Tetrahydrofuran, bei einer Temperatur unterhalb 50⁰C und bevorzugt unterhalb 25⁰C zur Herstellung der Verbindungen der Formel II

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JlO

CH₂OH

worin Y einen Rest der Formeln

O V-CH₂-O-C-.

-■>

oder

C-CH₂-CH₂-C-

4 5
worin R imd R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen,

bedeutet,

- 10 -

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; (B) Acylieren von Verbindung II mit dem L-(-)-Isomeren ^! eines 'Acylierungsmittels der Formel VII

OH 0

t 1!

W-NH-C CH₂)_n-CH-C-M

. worin ¥ einen Rest bedeutet, ausgewählt unter Gruppen der '■■ Formeln

X-CKo-C- -

I ^ Il cik-c-o-c-

oder

C-CH₂-CH₂-C-

■ R

jedoch bevorzugt ^S-JyC-

Il CK₂-O-C-

, worin R* und

die oben angegebenen Bedeutungen besitzen und M einen Rest darstellt, ausgewählt unter Gruppen der Formeln

- 11 -

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O,

, -0-N

-0

-0-N

-NO,

, jedoch vorzugsweise -0-N

-or

in einem Verhältnis von mindestens 0,5 Mol Verbindung VII pro Mol Verbindung II, jedoch bevorzugt in einem Verhältnis von etwa 0,5 zu etwa 1,4 und am bevorzugtesten in einem Verhältnis von etwa 0,8 zu etwa.1,1 in einem Lösungsmittel, das bevorzugt ausgewählt ist unter einer Mischung von Wasser und Athylenglycoldimethyläther, Dioxan, Dirnethylacetamid, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Propylenglycoldimethyläther oder dergleichen, bevorzugt jedoch 1 : 1 Wasser-Tetrahydrofuran, wobei sich die Verbindungen der Formel III ergeben

NH-W

30984 ??*17β

worin Y, ¥ und η die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und

(C) Entfernen der Blockierungsgruppen W und Y aus Verbindung III durch dem Fachmann bekannte Methoden und bevorzugt, wenn W und Y Reste der Formel

bedeuten, durch Hydrieren der Verbindung III mit Wasserstoff in Gegenwart eines Metallkatalysators, bevorzugt ausgewählt unter Palladium, Platin, Raney Nickel, Rhodium, Ruthenium und Nickel, vorzugsweise jedoch Palladium und am bevorzugtesten Palladium auf Aktivkohle, in einem System aus Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel, bevorzugt ausgewählt unter Wasser und Dioxan, Tetrahydrofuran, ÄthylenglycοIdimethylather, Propylenglycoldimethyläther oder dergleichen, jedoch bevorzugt 1 : 1 Wasser-Dioxan.

Für den Fachmann liegt es auf der Hand, daß bei der Acylierung der Aminfunktion der erfindungsgemäßen Zwischenverbindungen auch andere Mittel verwendet werden können. Dazu gehören alle die Acylierungsmittel, die labile Aminblockierungsgruppen ergeben, wobei diese labilen Blockierungsgruppen gewöhnlich bei der Peptidsynthese verwendet werden." Die labilen Blockierungs gruppen müssen durch Verfahren nach dem Stand der Technik leicht zu entfernen sein. Beispiele solcher labiler Blockierungs gruppen und deren Entfernung sind in dem Bericht von A. Kapoor, J. Pharm. Sciences 59, S. 1 bis 27 (1970) zu finden. Zu funktionellen Äquivalenten as Acylierungsmittel für primäre Amingruppen gehören entsprechende Carbonsäurechloride, -bromide, -säureanhydride, einschließlich gemischer Anhydride und insbesondere die

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gemischten Anhydride, die aus stärkeren Säuren, wie den niedrigaliphatisehen Monoestern der .Kohlensäure, aus Aryl- und Alkylsulfonsäuren und aus sterisch gehinderteren Säuren, wie Diphenylessigsäure hergestellt sind. Darüber hinaus kann ein Säureazid oder ein aktiver Ester oder Thioester (beispielsweise mit p-Nitrophenol, 2,4-Dinitrophenol, Thiophenol, Thioessigsäure) verwendet werden, oder man kann die freie Säure selbst mit Verbindung II kuppeln, ,nachdem man diese freie Säure zuerst mit NjN'-Dimethylchlorformiminiumchlorid umgesetzt hat [vergl. britische Patentschrift 1 008 170 und : Novak und Weichet, Experientia XXI/6, 360 (1965)], oder man verwendet Enzyme oder ein Ν,Ν'-Carbonyldiimidazol oder ein ■ Ν,Ν'-Carbonylditriazol [vergl. Sheehan und Hess", J. Amer. Chem. Soc, 77, 1067, (1955)1 oder ein Alkinylaminreagens (vergl. R. Buijile 'und H.G. Viehe, Angew., Chem., International Edition 3, 582 (1964)],.oder ein Keteniminreagehs [vergl. CL. Stevens und M.E. Monk, J. Amer. Chem. Soc, 80, 4065 (1958)] oder ein Isoxazoliumsalzreagens [vergl. R.B. Woodward, R.A. Olofson und H. Mayer, J. Amer. Chem. Soc, 83, 1010 (1961)]. Ein weiteres Äquivalent des Säurechlorids ist ein entsprechendes Azolid, nänlich ein Amid der entsprechenden Säure, deren Amidstickstoff ein Glied eines quasiaromatischen fünfgliedrigen Ringes ist, der mindestens zwei Stickstoffatome enthält, nämlich Imidazol, Pyrazol, die Triazole, Benzimidazol, Benzotriazol und deren substituierte Derivate. Als ein Beispiel für das allgemeine Verfahren zur Herstellung eines Azolids setzt man ein N,N^f-Carbonyldiimidazol mit einer Carbonsäure in äquimolaren Mengen bei Raumtemperatur in-Tetrahydrofuran, Chloroform, Dimethylformamid oder einem ähnlichen inerten Lösungsmittel um, wobei sich das Carbonsäureimidazolid in praktisch quantitativer Ausbeute unter Freisetzung von Kohlen- : dioxyd und 1 Mol Imidazol ergibt. Dicarbonsäuren ergeben ! Diimidazolide. Das Nebenprodukt, Imidazol, fallt aus und ;-kann abgetrennt und das Imidazol isoliert werden, dies ist jedoch nicht wesentlich. Diese Reaktionen sind nach dem Stand

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der Technik bekannt [vergl. USA-Patentschrift 3 079 314, -3 117 126 und 3 129 224 und ^- britische Patentschriften 932 644, 957 570 und 959 054]. -

Bei der Herstellung des Paromomycins mit in 6" '-Stellung blockierter Aminogruppe in Stufe (A) werden die Molverhältnisse an ReaktionsteqLlnehmern bevorzugt so geregelt, daß man 1 Mol oder weniger Acylierungsmittel pro Mol Paromomycin verwendet. Erhöht man den Anteil an Acylierungsmittel, so erhält man geringere Ausbeuten des gewünschten Zwischenprodukts aufgrund der Zunahme konkurrierender Nebenreaktionen, die Polyacylderivat -Verunreinigungen ergeben können.

Wie bei den meisten chemischen Reaktionen können höhere oder niedrigere Temperaturen als die speziell hierin beschriebenen verwendet werden. Verwendet man jedoch in Stufe (A) wesentlich höhere Temperaturen als die bevorzugte obere Grenze von 50°C, so entsteht die Tendenz verringerter Ausbeute aufgrund eines größeren Ausmaßes an Nebenreaktionen.

Verbindung IVa 1-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]-paromomycin, besitzt eine ausgezeichnete antibakterielle Aktivität. Die nachstehende Tabelle zeigt die minimalen Hemmkonzentrationen (MIC) von Paromomycin und Verbindung IVa (BB-K47) gegenüber einer Vielzahl grampositiver und gramnegativer Bakterien, erhalten durch, die Steers Agar-Verdünnungsmethode (Tabelle I). Nähragarmedium wurde bei den Untersuchungen von Tabelle I verwendet.

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Antimikrobielle Aktivität in vitro von BB-K47 j

MIC nach Steer's Methpde G Nähragar-Medium) j γ/ml j

Stamm	Il	■	•	Bristol Nr.	BB-K47 lot 1-2	paromomycin	i
E. coli NIHJ	It		. 1.6 *	1.6
" Juhl		' AI5II9	3.1 ' t	6.3
	AI5169	3.1 -	3.1
" _m KM-R*	A20363	1.6	>100 '
It ' ■· ' '■	A98¹!!	1.6	3.1
¹¹. "KM-R*	A20365	0.8	>100
¹¹ · K-12		1.6	. . 3.1
" " KM-R*	A20664	1.6	' 1.6
" " Ki-R*	A20665	1.6'	>100
WÖ77 '	Α20β84	1.6	■ 1.6
¹¹ JR/WÖ77	. A2O685	12.5	>100 -
" ' NIKJ KM-R*		0.8	1.6.
X. pneuconiae D-Il		. 0Λ	0.8
¹¹ * Type 22 No. 3038	Α2θ68θ	12.5	>ioq
S. ciarcescens χ	A20019	' 1.6
?. aeruginosa D-15		6.3	100
K9 D-133 KM-R*		>100	>100
A9923	• ' 50 ·	> 100
A993O	0.8	12.5
A15150	25	>100 . ;
AI519* .	. "25	>100
- 16 -	3098A7	- ' /117 6 j I :

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Stamm

ti	vulgaris *	GM-R**	aureus Smith	KM-R*
II		GM-R**	209P SM-R***	607
P.	nirabilis			" KX-R*
ti			Mycobac teriuin	" KM, SM-R**
P.	aorganii		Il	phlei. .
II		•	Il	ranae
P.		Il
Il		Il
S.
Il
Il

Bristol Nr.

A20717 , Α20718

A9520

A99OO A9553 A20031

A20239

KM -Kanamycin-resistent GM - Gentamicin-resistent SM - Streptomycin-resistent

- 17 BB-K47 lot 1-2

50

0.8 0.8 1.6 1.6 1.6 1.6 0Λ 1.6 0Λ 0.8

12.5

0.8

Paromomycin!

>100 >100 0.8 1.6 3.1 1.6 1.6 ^r 0.8 1.6 >100 1.6 '

12.5 6.3 0.8 0.8

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; Die Verbindungen der Formel IV sind als antibakterielle Mittel, j-als Futtermittelzusätze bei Tierfutter, als therapeutische ι Mittel bei Geflügel und anderen Tieren, sowie beim Menschen,

■ und insbesondere bei der Behandlung von Infektionskrankheiten,

: die durch grampositive und gramnegative Bakterien versacht

■ werden, wertvoll.

: Die Verbindungen der Formel IV sind bei oraler Verabreichung ^; brauchbar als Hilfsbehandlung bei der präoperativen Sterilisierung des Darms. Sowohl aerobe als auch anaerobe Flora,^x die auf diese Medikamente anspricht, wird im Dickdarm reduziert* In Verbindung mit einer geeigneten mechanischen Reinigung sind sie bei der Vorbereitung für Dickdarmchirurgie geeignet..

Verbindungen der Formel IV sind wirksam bei der Behandlung von systemischen bakteriellen Infektionen, wenn sie parenteral in einem Dosierungsbereich von etwa 250 mg bis etwa 3000 mg pro Tag in geteilten Dosen, drei oder viermal täglich, verabreicht werden. Im allgemeinen sind die Verbindungen wirksam, wenn sie in einer Dosierung von etwa 5,0 bis 7,5 mg/kg Körpergewicht alle 12 Stunden verabreicht werden.

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Beispiel 1

Herstellung von L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure (VI)

7,4 g (0,062 Mol) L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure gibt man zu einer Lösung von 5,2 g (0,13 Mol) Natriumhydroxyd in 50 ml Wasser. Zu der gerührten Lösung gibt man tropfenweise bei 0 bis 5⁰C während einer Zeitdauer von 0,5 Stunden 11,7 g (0,068 Mol) Carbobenzoxychlorid und rührt die Mischung 1 Stunde bei der gleichen Temperatur. Man extrahiert die Reaktionsmischung mit 5'0 ml 'Äther, stellt mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 ein und extrahiert mit vier 80 ml Anteilen Äther. Man vereinigt die ätherischen Extrakte, wäscht mit einer kleinen Menge gesättigter Natriumchloridlösung, trocknet mit wasserfreiem Natriumsulfat und filtriert ab. Das Filtrat dampft man im Vakuum ein und kristallisiert den sich ergebenden Rückstand aus Benzol, wobei sich 11,6 g (74 %) farbloser Plättchen ergeben, F 78,5.bis 79,5°C.

[a]_D -4,5° (c=2, CH₃OH). IR-Spektrum [KBr]: γ₀₌₀ 1740, 1690 cm. NMR-Spektrum (Aceton-Dg) S (in ppm aus TMS) 2,0 (2H, m), 3,29 (2H, d-d, J-6,7 und 12 Hz), 4,16 (IH,' d-d, J=4.5 und 8 Hz), 4,99 (2H, s), 6.2 (2H, breit), 7.21 (5H, s).

Analyse C₁₂H₁₅NO₅

berechnet: gefunden:

C	,91	H	,97	N	53
56	,66	5	,97	• 5,	47
56	5	5,

- 19 -

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ι ι

;

ί Beispiel 2 ί

! ι

ί !

'. N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-Y-benzyloxycarbonylamino-a- \ ; hydroxybuttersäure (VIl) ".

'■. Eine Lösung von 10,6 g (0,042 Mol) Verbindung VI und

^: 4->8 g (0,042 Mol) N-Hydroxysuccinimid (G.¥. Anderson et al., J. Am. Chem. Soc, 86, 1839 (1964)) in 200 ml Äthylacetat kühlt man auf O⁰C und gibt dann 8,6 g (0,042 Mol) N,N^f-Dicyclo-. hexylcarbodiimid zu. Man läßt die Mischung über Nacht in einem Kühlschrank. Den Dicyclohexy!harnstoff, der sich abtrennt, filtriert man ab und konzentriert das Filtrat unter verringertem Druck auf etwa 50 ml, wobei sich farblose Kristalle ' von Verbindung VII ergeben, die durch Filtrieren gesammelt werden. Die Ausbeute beträgt 6,4 g, F 121 bis 122,5°C. Das Filtrat dampft man im Vakuum zur Trockne ein und wäscht den kristallinen Rückstand mit 20 ml einer Benzol-n-Hexan-Mischung, wobei sich eine zusätzliche Menge Verbindung VII ergibt. Die Gesamtausbeute beträgt 1,34 g (92 %). [cc]_D 1,5° (c=2, CHCI3) IR (KBr) y_c=o 1810, 1755, 1740, 1680 cm"¹. NMR (Aceton-D₆) S (in ppm aus TMS) 2,0 (2H,m), 2.83 (4H, s),

, 3,37 (2H, d-d, J=6,5 und 12,5 Hz), 4,56 (IH, m), 4,99 (2H,s), 6,3 (2H, breit), 7.23 (5H,s).

Analyse C_1fiH-,pNp0₇

berechnet gefunden

C	85	H	18-	N	00 %	i
54,	79	5,	21	8,	14 %	1
54,	70	5,	20	8,	12 %	i 1
54,	5,	8,

- 20 -

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Beispiel 3 Herstellung von 6¹''-N-Benzyloxycarbonylparomomycin (II)

Zu einer gerührten Lösung von 2,413 g (3,92 mMol) Paromomycin in Form der freien Base in 55 ml 45 %-igem Tetrahydrofuran gibt man 975 mg (3,92 mMol) N-Benzyloxycarbonyloxysuccinimid bei 10⁰C. Man rührt-die Reaktionsmischung über Nacht bei Raumtemperatur und dampft unter verringertem Druck ein, um das organische Lösungsmittel zu entfernen. Die sich ergebende wässrige Lösung filtriert man ab um jegliches unlösliches Material zu entfernen und gibt das Filtrat auf eine Kolonne von CG50 Harz (NH^⁺, 70 ml) [Amberlite]. Man wäscht die Kolonne mit 350 ml H2O und eluiert mit 0,1 η ΝΗλΟΗ. Das Eluat sammelt man in 20 ml Fraktionen. Man vereinigt Fraktionen 13 bis 21, dampft bei verringertem Druck ein und lyophilisiert, wobei sich 1,19 g (40 %) rohes 6'''-Benzyloxycarbonylparomomycin (II) ergeben, die nicht Paromomycin selbst enthalten. y_c__q1700 cm" Das Produkt wird ohne weitere Reinigung für die nächste Reaktion verwendet.

Beispiel 4

Herstellung von l-[L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybutyryl]-6'''-carbobenzoxyparomomycin (III)

Zu einer gerührten Lösung von 1,16 g (1,55 mMol) 6'''-Benzyloxycarbonylparomomycin in 30 ml 50 %-igem Tetrahydrofuran und Wasser gibt man 542 mg (1,55 mMol) N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure bei 10 C. Man rührt die Reaktionsmischung 5 Stunden bei Raumtemperatur, wobei sich eine Mischung von N-acylierten-[L-(-)-y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybutyryl]-6'''-carbobenzoxyparomomycinen ergibt, wovon l-[L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybutyryl]-6'·'-carbobenzoxyparomomycin (III) ein Hauptbestandteil ist. - 21 -

3-&-9a47/t17fi

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i · Beispiel '5

Herstellung von l-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]- : paromomycin (IVa)

Das rohe Produkt III gemäß Beispiel 4 wird unter atmosphärischem Druck in Anwesenheit von 200 mg Aktivkohle mit 10 % Palladium über Nacht bei Raumtemperatur hydriert. Die Reaktionsmischung wird abfiltriert und unter verringertem Druck eingedampft, um das organische Lösungsmittel zu entfernen. Die sich ergebende wässrige Lösung wird auf einer Kolonne CG-50 (NH₄ , 37 ml) absorbiert. Die Kolonne wird mit Wasser gewaschen und nacheinander mit 600 ml 0,1 η Ammoniak, 200 ml 0,2 η Ammoniak, 300 ml 0,3 η Ammoniak, 700 ml 0,5 η Ammoniak und schließlich mit 700 ml 1 η Ammoniak gespült. Das Eluat sammelt man in 10 ml Fraktionen. Die Fraktionen werden in die folgenden Gruppen aufgeteilt durch Ninhydrin-Test, Bio-Test (B. subtilis) und Dünnschichtchromatographie (Silica Gel, CHCl₃-CH₃OH-28 ^0NH₄OH- ^0=1:4:2:1, Ninhydrin). Die Fraktionen, die zu der gleichen Gruppe gehören, werden vereinigt, unter verringertem Druck konzentriert und Lyophilisiert.

Gruppe Fraktion Nr. eluiert mit Gew. isoliert

70 - 77

93 - 101
109 - 116
129 - 133
139 - 142
197-202

0,2 η NH₄OH

0,3 η NH₄OH 0,3 ω. NH₄OH 0,5 η NH₄OH 0,5 η NH₄OH 1 η NH/. OH

39 (roh)

264

17 170

29

91

Verbindung ΒΒ-Κ49

• Paromomycin .ΒΒ-Κ50
ΒΒ-Κ47 (IV) BB-K 51 ΒΒ-Κ48

8 ml) ergibt 17 mg

Erneute Chromatographie mit CG-50 (NH₄ ⁺, reine Verbindung BB-K49.

Erneute Chromatographie mit CG-50 (NH₄ ⁺, 10 ml) ergibt 97 mg eines reinen Produkts, das BB-K47, Lot 1-2, bezeichnet wird, die gewünschte Verbindung, l-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyrylJ-paromomycin (IVa).

- 22 -

^{M/12 536} 232257B

Eigenschaften;

Code Nr.	F (Zers.) .	R *^x	γ C=O (KBr) .[a]_D (H₂O)
BB-K47 (IVa)	185 - 188⁰C	0,17	1640 cm"¹ +58°
(lot 1-2)
BB-K 48	190 - 192	0,07	1640
BB-K 49	260°	0,27	1690 *² 1640
BB-K 50	173-178	0,27	1640
BB-K 51	185-189	0,18	1640 ' :

BB-K47, Analyse C₂₇H₅₂N₆O₁₆^H₂CO₃-1/2H₂O

C	69	H	04	N	69	%
42,	69	7,	07	10,	26	%
42,	7,	10,

Herstellung von N-(Benzyloxycart)onyloxy)-succinimid

Man löst 23 g (0,2 MoI) N-Hydroxysuccinimid in einer Lösung
von 9 g (0,22 Mol) Natriumhydroxyd in 200 ml.Wasser. Zu der

- 23 309847/1176

Dünnschichtchromatographie: Silicagel-Platte, CHCl^-MeOH- !

28%NH₄0H-H₂0 (1:4:2:1). j

■χ-ρ i

Unerklärlich für zwei Carbonyl-Bande, die sich "bei wieder- ^:

holter Hydrierung nicht änderten. I

berechnet: gefunden:

Durch Dünnschichtchromatographie wird bestätigt, daß alle. ■

Produkte, BB-K47 bis BB-K51 durch Erhitzen während 1,5 Stunden |

in 0,5 η Natriumhydroxydlösung Paromomycin und a-Hydroxy-γ- j

aminobuttersäure ergeben. ' i

Beispiel

ι I

j gerührten Lösung gibt man tropfenweise 34 g (0,2 Mol) Carbo- !

j benzoxychlorid unter Wasserkühlung und rührt dann die Mischung j

·

über Nacht bei Raumtemperatur, wobei sich das Carbobenzoxyderivat abtrennt, das durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser

gewaschen und an der Luft getrocknet wird. Die Ausbeute be- ;

trägt 41,1 g (82 %). Umkristallisation aus Benzol-n-Hexan ! (10 : 1) ergibt farblose Prismen, die bei 78 bis 79°C schmelzen.

Beispiel 7 -

: Herstellung von L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure .aus ' Ambutyrosin A oder B oder Mischungen davon

5,0 g Ambutyrosin A [USA-Patentschrift 3 541 078] erhitzt man j 1 Stunde lang mit 160 ml 0,5 η Natriumhydroxyd zum Rückfluß.

■ Man neutralisiert das Hydrolysat mit 6 η HCl und chromato- .

■ graphiert auf einer Kolonne CG-50 (NH^⁺ Typ). Man isoliert die gewünschte L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure, indem man die Kolonne mit Wasser entwickelt und das Wasser durch Gefriertrocknung entfernt. Die L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure

• wird charakterisiert als ein kristallines Material mit einem F 212,5 bis 214,5°C [Spalte 2, Zeilen 31 bis 38,.USA-Patentschrift 3 541 078],

Beispiel 8

Herstellung von L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure aus DL-a-Hydroxy-Y-phthalimidobuttersäure

Dehydrοabietylammonium-L-cc-hydroxy-γ-phthalimidobutyrat

Zu einer Lösung von 25 g (0,1 Mol) a-Hydroxy-Y-phthalimidobuttersäure·(Y. Saito et al., Tetrahedron Letters, 1970, 4863) in 200 ml Äthanol gibt man eine Lösung von 29 g (0,1 Mol)

- 24 -303847/1176

C	54	H	02	N	07
69,	58	8,	08	5,	07
69,	8,	5,

Dehydroabietylamin in 130 ml Äthanol. Man schüttelt die Lösung 1 Minute lang heftig und läßt sie 5 Stunden bei Raumtemperatur stehen, während welcher Zeit feine Nadeln auskristallisieren. Man sammelt die Kristalle durch Abfiltrieren, wäscht mit 50 ml Äthanol und trocknet an der Luft, wobei man 30,1 g (56 %) eines Diastereomeren des Dehydroabietylaminsalzes erhält. F 93 bis 94⁰C, [a]²⁴ _D +15° (C. 2,5, MeOH). Umkristallisation aus 300 ml Äthanol ergibt 23,2 g (43 %) des reinen Produkts. F 94 bis 95⁰C [α]²⁴ +10,8° (C. 2.5 MeOH). Weitere Umkristallisation bewirkt keine Veränderung des Schmelz punkts und der spez. Drehung.

Analyse

berechnet
gefunden:

(B) L-(-)-γ-Amino-ce-hydroxybuttersäure

Zu einer Lösung von 1,5 g (0,014 Mol) Natriumcarbonat in 40 ml Wasser gibt man 5»3 g (0,01 Mol) Dehydroabietylammonium-L-ahydroxy-Y-phthalimidobutyrat und 60 ml Äther. Man schüttelt die Mischung heftig, bis sich die gesamten Feststoffe gelöst haben. Man trennt die Ätherschicht ab. Die wässrige Lösung wäscht man zweimal mit 20 ml-Anteilen Äther und dampft unter verringertem Druck auf 15 ml ein. Zu dem Konzentrat gibt man 10 ml konz. Chlorwasserstoffsäure und erhitzt die Mischung 10 Stunden zum Rückfluß. Nach Kühlen wird die abgetrennte Phthalsäure durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat dampft man unter verringertem Druck ein. Den Rückstand löst man in 10 ml Wasser und dampft die Lösung zur Trockne ein. Diese Verfahrensweise wiederholt man zweimal um überschüssige Chlorwasserstoffsäure zu entfernen. Den zurückbleibenden Sirup löst man in 10 ml Wasser und filtriert ab, um eine kleine Menge unlösliche Phthalsäure zu entfernen. Das Filtrat adsorbiert man auf einer Kolonne IR-120 (H⁺, 1 pm χ 35 cm), wäscht die Kolonne mit 300 ml Wasser

- 25 -

309847/1176

und eluiert mit 1 η Ammoniumhydroxydlösung. Das Eluat. wird in 15-ml Fraktionen gesammelt. Die ninhydrin-positiven Fraktionen 10 bis 16 werden vereinigt und bei verringertem Druck eingedampft, wobei sich ein Sirup ergibt, der allmählich kristallisiert. Die Kristalle werden mit Äthanol verrieben, abfiltriert und in einem Vakuumexsiccator getrocknet, wobei sich 0,78 g (66 %) L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure ergeben. F 206 bis 207⁰C [a]^⁴ -29° (C 2,5, H₂O). Das IR-Spektrum ist : identisch mit dem einer authentischen Probe, die aus Ambutyrosin erhalten wurde.

Beispiel 9

Herstellung des Mono sulf at salze s von l-[L-(-)-Y-Amino-cc-hydroxybutyryl]-paromomycin

1 Mol l-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]-paromomycin werden in 1 bis 3 Liter Wasser gelöst. Die Lösung wird abfiltriert, um jegliche unlöslichen Feststoffe zu entfernen. Zu der abgekühlten und gerührten Lösung gibt man 1 Mol Schwefelsäure, gelöst in 500 ml Wasser. Man rührt die Mischung 30 Minuten und gibt dann kaltes Äthanol zu der Mischung bis Ausfällung eintritt. Die Feststoffe werden durch Filtrieren gesammelt und als das gewünschte Monosulfatsalz bestimmt.

! Beispiel 10

! Herstellung des Disulfatsalzes von l-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]-paromomycin

1 Mol l-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]-paromomycin löst man in 1 bis 3 Liter Wasser. Diese Lösung filtriert man ab, um jegliche ungelösten Feststoffe zu entfernen. ■ Zu der abgekühlten

- 26 -

309847/1176

und gerührten Lösung gibt man 2 Mol Schwefelsäure, gelöst in 100 ml Wasser. Diese Lösung läßt man 30 Minuten rühren, dann gibt man kaltes Äthanol -zu der Mischung bis Ausfällung eintritt.! Die Feststoffe werden durch Filtrieren gesammelt und als das gewünschte Disulfatsalz bestimmt.

Beispiel 11

Herstellung von L-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionsäure

8,2 g (0,078 Mol) L-ß-Amino-a-hydroxypropionsäure (K. Freudenberg, Ber., 47, 2027 (1914)) werden in einer Lösung von 6,56 g (0,0164 Mol) Natriumhydroxyd in 60 ml Wasser gelöst. Zu der gerührten Lösung gibt man tropfenweise 14,7 g (0,086 Mol) Carbobenzoxychlorid unterhalb 5°C. Man rührt die Mischung 1 Stunde bei Raumtemperatur, wäscht mit 60 ml Äther und stellt mit verdünnter HCl auf pH 2 ,ein. Der Niederschlag wird durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und an der Luft getrocknet, wobei sich 9,65 g (52 %) des gewünschten Produkts ergeben. Das Filtrat wird mit fünf 100 ml Anteilen Äther extrahiert. Die ätherische Lösung wird mit Wasser gewaschen, "über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft, wobei sich weitere 2,0 g (11 %) Produkt ergeben. Insgesamt kristallisiert man dann 11,65 g aus 500 ml Benzol-Äthylacetat (4:1), wobei sich 9,36 g (50 %) reine L-ß-Benzyloxycarbonylamino-ahydroxypropionsäure ergeben, F 128,5 bis 129,5⁰C. IR-Spektrum (KBr): γ_Γ__η 1745, 1690 cm"¹.

+2,9 (C 5,0, MeOH)-.NMR-Spektrum [NMR (DMSO-Dg)]: c(in ppm) 3,05 - 3,45 (2H, m, CH₂N), 4,05.(IH, d-d, -O-CH-CO-),

5,03 (2H, s, CH₂Ar) 7,18 (IH, breit, NH), 7,36 (5H, s, Ring H).

- 27 -

309847/ 1178

C	23	H	48	N	86
55,	34	5,	49	5,	87
55,	5,	5,

' Analyse

i berechnet:

. gefunden: 55,34 5,49 5,87 % j

Beispiel 12
! N-Hydroxysuccinimidester von L-ß-Benzyloxycarbonylamino-α-

hydroxypropionsäure

Zu einer gekühlten und gerührten Lösung von 478 mg (2 mMol)
des Produkts von Beispiel 11 und 230 mg (2 mMol) N-Hydroxysuccinimid in 10 ml" Tetrahydrofuran gibt man 412 mg (2 mMol)
Dicyclohexylcarbodiimid. Man rührt die Mischung 1 Stunde bei
0 bis 5⁰C, zwei Stunden bei Raumtemperatur und filtriert
^: dann ab, um den Ν,Ν'-Dicyclohexylharnstoff zu entfernen. Das·
Filtrat, das das gewünschte Produkt enthält,. wird ohne
weiteres Abtrennen für die nächste Umsetzung verwendet.

Beispiel 13
Herstellung von l-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl]-paromomycin

(A) Ersetzt man in dem Verfahren gemäß Beispiel 4. den darin ver-^! wendeten N-Hydroxysuccinimidester von L-'(-)-Y-Benzyloxycarbonyl-: amino-a-hydroxybuttersäure durch eine äquimolare Menge ! N-Hydroxysuccinimdester von L-(-)-ß-Benzyloxycarbonylamino-ahydroxypropionsäure, so erhält man l-[L-(-)-ß-Benzyloxy- ' carbonylamino-a-hydroxypropionylj-e'''-carbobenzoxyparomomycin. j

(B) Ersetzt man in dem Verfahren gemäß Beispiel 5 das dabei j

verwendete rohe Produkt III durch eine äquimolare Menge der {

- 28 -

309847/1 176

j Verbindung von Beispiel 13 (A), so' erhält man l-[L-(-)-ß-Aminoa-hydroxypropionyll-paromoinycin.

Beispiel 14

; Herstellung von L-0 -Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvalerinsäure · '

Zu einer gerührten Lösung von 400 mg (3,0 mMol) L- <f-Amino-cxhydroxyvalerinsäure [S- Ohshiro et al., Yakugaku.Zasshi, 87, 1184 (1967)] und 250 mg (6,5 mMol) Natriumhydroxyd in 25 ml Wasser . gibt man tropfenweise während einer Zeitdauer von 30 Minuten
bei Null bis 5⁰C 580 mg (3,3 mMol) Carbobenzoxychlorid. Man ' rührt die Mischung 1 Stunde bei.5 bis 15⁰C, wäscht mit 25 ml
_; Äther, stellt mit Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 ein und , . extrahiert mit drei 30 ml-Anteilen Äther. Die vereinigte ; ätherische Lösung schüttelt man mit 10 ml gesättigter Natriumchloridlösung, trocknet über wasserfreiem Natriumsulfat und
dampft im Vakuum ein, wobei sich Kristalle ergeben, die aus
Benzol umkristallisiert 63I mg (78 %) des gewünschten Produkts
ergeben. F 110 bis 111° C.

IR-Spektrum [IR(KBr)]: 3450, 3350, 1725, 1685, 1535, 1280, 730,
69O cm"¹. NMR-Spektrum [NMR(Aceton-Dg)] £ (in PP^) 1,70 (4H, m) '[ 4,14 (2H, q, J=4,5 Hz), 4,19 (IH, m), 4,82 (2H, s), 6,2 (3H, _; breit), 7,25 (5H, s). . j

[a]jp + 1,6 (c 10, Methanol). _ ■ ■

ι Analyse C^H^yNO,-

CHN !

berechnet: 58,42 6,41 5,24 %

; gefunden: 58,36 6,50 5,27% |

- 29 3 0 9847/Ti 7 6

m/12 536 2322578

Beispiel 15

N-Hydroxysuccinimidester von L- Ü -Benzyloxycarbonylamino-oc- ! hydroxyvalerinsäure

\ Zu einer gerührten und gekühlten Lösung von 535 mg (2,0 mMol) ;'des Produkts gemäß Beispiel 14 und 230 mg (2,0 mMol) N-Hydroxy- ! succinimid in 55 ml Äthylacetat gibt man 412 mg (2,0 mMol) : N,N^f-Dicyclohexylcarbodiimid. Man rührt die Mischung 3 Stunden bei Raumtemperatur und filtriert ab, um ausgefällten N₅N'-Dicyclohexy!harnstoff zu entfernen. Das Filtrat wird im Vakuum eingedampft, wobei sich 780 mg (100 %) des gewünschten Produkts als ein viskoser Sirup ergeben. IR (klar): Y_c_q 1810, 1785, 1725 cm"¹. . ,

Beispiel 16

Herstellung von l-[L-(-)- ^-Amino-a-hydroxyvaleryll-paromomycin

(A) Ersetzt man in dem Verfahren gemäß Beispiel 4 den N-Hydroxy- , succinimidester von L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxy-, buttersäure der darin verwendet wird durch eine äquimolare Menge N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)- S -Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvalerinsäure, so erhält man l-[L-(-)- Q -Benzyloxy-

! carbonylamino-a-hydroxyvaleryl]-6^{l f!} -carbobenzoxyparomomycin.

(B) Ersetzt man in dem Verfahren gemäß Beispiel 5 das dabei • verwendete rohe Produkt III durch eine äquimolare Menge der Verbindung von Beispiel 16 (A), so erhält man l-[L-(-)- /-Aminoa-hydroxyvaleryl]-paromomycin.

Claims

Patent, ansprüche

OH .

IV

worin R die Bedeutungen L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)- tf-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt oder von nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzen davon,.dadurch gekennzeichnet; daß es folgende aufeinanderfolgende Verfahrensstufen umfaßt,

(A) Blockieren der Aminogruppe am 6'''-Kohlenstoffatom von Paromomycin mit einer herkömmlichen Amino-Schutzgruppe Y zur Herstellung von Verbindungen der Formel II

- 31 -

3098 47/1176

M/12 536

■ HO-

CH ΚΗ-γ

CH₂OH

NH.

II.

(B) Acylieren der Amino gruppe in 1-Stellung der Verbindungen ί

der Formel II mit dem L-(-)- Isomeren eines Acylierungsmittels ;

der Formel

-.0Hi": . j

W-NH- (CH₂)_n - CH - COOH j

worin η eine ganze Zahl von 1 bis einschließlich 3 bedeutet ,

und ¥ eine herkömmliche Aminoschutzgruppe bedeutet, oder mit > dem funktioneilen Äquivalent davon als ein Acylierungsmittel für

ein primäres Amin zur Herstellung von Verbindungen der Formel '.

in · ^;

• HO CH₀OK CH₂OH NH-Y ""Kf² 4 • • i η ■ HO" j m>
'OH Λ^ NH-C=O
KO-CH
j * (CK₂)
• j III · KH -
4 • CH₂-

/1176

M/12 536

worin Y, ¥ und η die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und

(C) Entfernen der Aminoschutzgruppen Y und ¥ mittels an sich bekannter Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel I, und gegebenenfalls anschließendes Umwandeln des obigen Produkts mittels an sich bekannter Verfahren in nicht-toxische, pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze davon.

2. Verfahren gemäß Anspruch 1 zur Herstellung von Verbindungen der Formel IV

CH₂OK

NH₂

IV

worin R die Bedeutungen L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-</-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt, oder von nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzen davon, dadurch gekennzeichnet daß es folgende aufeinanderfolgende Verfahrensstufen umfaßt:

- 33 -
3 0 9 8 477Ί17 6

M/12 536

(A) Umsetzen von Paromomycin mit einem .Acylierungsmittel
ausgewählt unter Verbindungen der Formeln

CH^-C-O-C-N

CHx

CE

N-C-O-C-CH,

.r\-u.

• ο ii

X-CH₂-C-X

X-CH₂-C-OH, (oder einer Carbodiimid-Additionsverbindung davon)
oder

-C-CH₂-CK₂-CO₂H - ^:

(oder einer Carbodiimid-Additions-

verbindung davon), worin R und R , die gleich oder, verschieden sein können, Wasserstoff, Fluor, Chlor, Brom, NO₂, OH,
Niedrigalkyl oder Niedrigalkoxy, X Chlor, Brom oder Jod be- : deuten, oder mit einem funktioneilen Äquivalentdavon als ein , Acylierungsmittel, in einem Verhältnis von 1 Mol oder weniger ! Mittel pro Mol Paromomycin in einen Lösungsmittel bei einer ;

Temperatur unterhalb 50 der Formel II

zur Herstellung von Verbindungen

ί Μ/12 536

HC CH₂OH

CH₂NH-Y NH,

worin Y Reste der Formeln

11 ·

.CH₂-O-C-

.0

k worin R und

bedeutet, ■oder

C-

-CHp-C—

Ό C

die oben angegebenen Bedeutungen besitzen,

-3-47

M/12 536

(B) Acylieren von Verbindung II mit dem L-(-)-Isomeren eines Acylierungsmittels der Formel VII

OH

It

W-NH- (CH₂)_n - CH - C - M

VII

worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 einschließlich bedeutet, ¥ einen Rest ausgewählt unter Gruppen der Formeln

CH₂-O-Cr

O₂N

- il

X-CH₂-C

oder

C-CH₂-CK₂-C-

worin R^ und R"⁵ die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und M einen Rest ausgewählt unter Gruppen der Formeln

O,

bedeuten,

- 36 -

M/12 536

oder mit einem funktioneilen Äquivalent davon als ein Acylierungsmittel in einem Verhältnis von mindestens 0,5 Mol Verbindung VII pro Mol Verbindung II in einem Lösungsmittel zur Herstellung der Verbindungen'der Formel III

CK₂OH.

NK₂

CH₂-NH-Y

IJH-C=O HO-CH

III

HH - W

worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 bedeutet und Y und W die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und

(C) Entfernen der Blockierungsgruppen W und Y aus Verbindung III durch an sich bekannte Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel IV, und gegebenenfalls anschließendes Umwandeln des Produktsauf an sich bekannte Weise in ein nicht-toxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz.

- 37 -

3tT9

17 6

'■ 3· ' Verfahren gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, ' daß man (1) in Stufe (A) das Paromomycin mit einem Acylierungsmittel der Formel

worin R und R^ die in Anspruch 2 angegebenen Bedeutungen besitzen, in einem Lösungsmittel, ausgewählt unter Dimethylformamid, Dimethy!acetamid, Tetrahydrofuran, Dioxan, 1,2-Dimethoxyäthan, Methanol, Äthanol, Wasser, Aceton, Pyridin, N-Niedrigälkylpiperidin, oder Mischungen davon, acyliert, und (2) in Stufe (B) ein Acylierungsmittel der Formel

* Zjj£" \) CH₂-O-C-KK-(CH₂)_nCH-C-G-i;

worin η eine ganze Zahl von 1 bis einschließlich 3 bedeutet

4 5

und R und R^ die in Anspruch 2 angegebenen Bedeutungen besitzen, mit Verbindung II, in einem Verhältnis von etwa 0,5 bis etwa 1,4 Mol Acylierungsmittel pro Mol Verbindung II, in einem Lösungsmittel, ausgewählt aus einer Mischung von Wasser und Athylenglycoldimethyläther, Dioxän, Dirnethylacetamid, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran oder Propylenglycoldimethyläther, umsetzt.

- 38 -

309847/1 T7 6

.
4. Verfahren gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet,

üaß (1) Stufe (A) in 1 : 1 Wasser-Tetrahydrofuran als j Lösungsmittel bei einer Temperatur unterhalb 25⁰C durchgeführt wird und (2) die Acylierungsreaktion von Stufe (B) ! in 1 : 1 Wasser-Tetrahydrofuran als Lösungsmittel in einem Verhältnis von etwa 0,8 bis 1,1 Mol Acylierungsmittel pro Mol Verbindung II erfolgt.

5. Verfahren gemäß Anspruch 3 oder 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Blockierungsgruppen W und Y in Stufe (C) durch Hydrieren von Verbindung III mit Wasserstoff in Anwesenheit eines Metallkatalysators in einem System bestehend aus Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel entfernt werden.

6. Verfahren gemäß Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, . ; daß die Blockierungsgruppen W und Y durch Hydrieren von Ver- \ bindung III mit Wasserstoff in Gegenwart eines Metallkata- i

lysators, ausgewählt unter Palladium, Platin, Raney Nickel, j Rhodium, Ruthinium oder Nickel, in einem System bestehend aus '.

Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel, ausgewählt unter Wasser und Dioxan, Tetrahydrofuran, Athylenglycoldimethyläther oder Propylenglycoldimethyläther, entfernt werden. . ,

7· Verfahren gemäß Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Biockierungsgruppen W und Y durch Hydrieren von Verbindung III mit Wasserstoff in Anwesenheit von Palladiumauf-Aktivkohle-Katalysator in 1:1 Wasser-Dioxan als Lösungsmittel entfernt werden.

- 39 - !

M/12 536

MO

8.

Verbindungen der Formel

'^v' ^H0"K CH₂OH

KK-R²

CH₂KHR¹

worin R Wasserstoff oder CgH₅-CH₂-O-G- und R Wasserstoff, L- (-) - γ-Amino-a-hydroxybutyryl, L- (-) -ß-^ Amino- a-hydroxypropionyl, L-(-)- f-Amino-a-hydroxyvaleryl, L-(-)-y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydröxybutyryl, L-(-)-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionyl, oder L-(-)-ίΤ-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvaleryl, bedeuten, wobei mindestens einer der 12

Reste R oder R nicht Wasserstoff bedeuten darf, oder nichttoxische, pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze davon.

9·' Verbindung gemäß Anspruch 8, worin R die Bedeutung 0 ■ .

"2

-O-C- besitzt und Br Wasserstoff bedeutet.

- 40 -

10. Verbindungen gemäß Anspruch 8, worin R die Bedeutung 0

₂
gp-O-C-- besitzt und R L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-a-

hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Benzyloxycarbonylamino-oc-hydroxypropionyl oder L-(-)- (f-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvaleryl bedeutet.

11. Verbindungen gemäß Anspruch 8, worin R Wasserstoff

und R L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxy·' propionyl oder L-(-)- /"-Amino-α-hydroxyvaleryl bedeuten,oder nicht-toxische, pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze davon.

12. Verbindung gemäß Anspruch 11, worin R Wasserstoff

und R L-(-)-y-Amino-a-hydroxybutyryl bedeuten, oder das Mono- oder Disulfatsalz davon.

13. Verbindung gemäß Anspruch 11, worin R Wasserstoff

und R L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl bedeuten, oder das Mono- oder Disulfatsalz davon.

14. Verbindung gemäß Anspruch 11, worin R Wasserstoff und R L-(-)- <f-Amino-oc-hydroxyvaleryl bedeuten, oder das Mono- oder Disulfatsalz davon.

- 41 -

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